特表 2024-534034 抗ＶＥＧＦＲ１抗体及びそれらの使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-18

(54)【発明の名称】抗ＶＥＧＦＲ１抗体及びそれらの使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20240910BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240910BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20240910BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240910BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28

C12N15/13 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61K39/395 Y

A61K47/68

A61K31/7088

A61K48/00

A61K35/12

A61P43/00 105

A61P13/12

A61P3/10

A61K39/395 N

A61K39/395 L

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024508965

(86)(22)【出願日】2022-08-12

(85)【翻訳文提出日】2024-04-01

(86)【国際出願番号】 US2022074891

(87)【国際公開番号】W WO2023023465

(87)【国際公開日】2023-02-23

(31)【優先権主張番号】63/233,343

(32)【優先日】2021-08-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/322,273

(32)【優先日】2022-03-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】509087759

【氏名又は名称】ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100093676

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 純子

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100209037

【弁理士】

【氏名又は名称】猪狩 俊博

(72)【発明者】

【氏名】ブレイヤー，マシュー ディー．

(72)【発明者】

【氏名】ゴンザレス ヴィラロボス，ロメール エー．

(72)【発明者】

【氏名】リ，ジンジュン

(72)【発明者】

【氏名】ラトコスキ，トーマス ジェイ．

(72)【発明者】

【氏名】スワンソン，ロナルド ヴィー．

(72)【発明者】

【氏名】ゼン，ガン

(72)【発明者】

【氏名】ゼン，ソンマオ

(72)【発明者】

【氏名】ゼン，シロン

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA90X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC17

4C076CC41

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF70

4C084AA02

4C084AA13

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZA81

4C084ZC01

4C084ZC35

4C085AA14

4C085AA25

4C085BB11

4C085DD33

4C085DD62

4C085EE01

4C085HH01

4C085KA04

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA13

4C086NA14

4C086ZA81

4C086ZC01

4C086ZC35

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB65

4C087BC83

4C087CA12

4C087NA13

4C087NA14

4C087ZA81

4C087ZC01

4C087ZC35

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045BA72

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA72

4H045FA74

4H045GA15

4H045GA26

(57)【要約】

本明細書では、血管内皮増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１）に結合する抗体又はその抗原結合断片、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、及びそれらを使用して慢性腎疾患を治療する方法が開示される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号１７３又は配列番号４のアミノ酸配列内のエピトープに結合する単離された抗体又はその抗原結合断片であって、ＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合を防止する、抗体又はその抗原結合断片。

【請求項2】

前記抗体又はその抗原結合断片が、アミノ酸配列ＦＰＬＤＴＬ（配列番号１４３）若しくはＥＩＧＬ（配列番号１４４）を有するＶＥＧＦＲ１上のエピトープに結合するか、又はアミノ酸配列ＦＰＬＤＴＬ（配列番号１４３）及びＥＩＧＬ（配列番号１４４）を有するエピトープに結合する、請求項１に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項3】

前記抗体又はその抗原結合断片が、ヒト、マウス、ラット及び／又はカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合する、請求項１又は２に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項4】

前記抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＶＥＧＦＲ１に結合する、請求項３に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項5】

前記抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＶＥＧＦＲ１、並びにカニクイザル、マウス及びラットからなる群から選択される少なくとも１つの種に由来するＶＥＧＦＲ１に結合する、請求項４に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項6】

前記抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＶＥＧＦＲ１、並びにカニクイザル、マウス及びラットからなる群から選択される少なくとも２つの種に由来するＶＥＧＦＲ１に結合する、請求項５に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項7】

前記抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＶＥＧＦＲ１、並びにカニクイザル、マウス及びラットに由来するＶＥＧＦＲ１に結合する、請求項６に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項8】

前記抗体又はその抗原結合断片が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用することで決定される、６×１０^－８Ｍ以下、特に１×１０^－８Ｍ以下、より具体的には５×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－１０Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫ_Ｄで、ヒトＶＥＧＦＲ１、マウスＶＥＧＦＲ１、及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合する、請求項１～７のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項9】

配列番号３１、３３、３４、３６、３８又は３９のＶＨの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）、及び配列番号３２、３５、３７又は４０のＶＬの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項10】

ａ．配列番号３１のアミノ酸配列を有する前記ＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を有する前記ＶＬのＬＣＤＲ、
ｂ．配列番号３３のアミノ酸配列を有する前記ＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を有する前記ＶＬのＬＣＤＲ、
ｃ．配列番号３４のアミノ酸配列を有する前記ＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３５のアミノ酸配列を有する前記ＶＬのＬＣＤＲ、
ｄ．配列番号３６のアミノ酸配列を有する前記ＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を有する前記ＶＬのＬＣＤＲ、
ｅ．配列番号３８のアミノ酸配列を有する前記ＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を有する前記ＶＬのＬＣＤＲ、又は
ｆ．配列番号３９のアミノ酸配列を有する前記ＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号４０のアミノ酸配列を有する前記ＶＬのＬＣＤＲ、
を含む、請求項９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項11】

ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有するＶＨと、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有するＶＬとを含み、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が、
ａ．それぞれ配列番号７、１７５、９、１０、１１、及び１２、
ｂ．それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、及び１２、
ｃ．それぞれ配列番号１３、１４、１５、１６、１７、及び１８、
ｄ．それぞれ配列番号１９、２０、２１、２２、２３、及び２４、
ｅ．それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０、
ｆ．それぞれ配列番号７１、１７６、７３、７４、７５、及び７６、
ｇ．それぞれ配列番号７１、７２、７３、７４、７５、及び７６、
ｈ．それぞれ配列番号７７、７８、７９、８０、８１、及び８２、
ｉ．それぞれ配列番号８３、８４、８５、８６、８７、及び８８、
ｊ．それぞれ配列番号８９、９０、９１、９２、９３、及び９４、
ｋ．それぞれ配列番号９５、１７７、９７、９８、９９、及び１００、
ｌ．それぞれ配列番号９５、９６、９７、９８、９９、及び１００、
ｍ．それぞれ配列番号１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、及び１０６、
ｎ．それぞれ配列番号１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、及び１１２、
ｏ．それぞれ配列番号１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、及び１１８、
ｐ．それぞれ配列番号１１９、１７８、１２１、１２２、アミノ酸配列ＬＮＳ、及び配列番号１２４、
ｑ．それぞれ配列番号１１９、１２０、１２１、１２２、アミノ酸配列ＬＮＳ、及び配列番号１２４、
ｒ．それぞれ配列番号１２５、１２６、１２７、１２８、アミノ酸配列ＦＮＦ、及び配列番号１３０、
ｓ．それぞれ配列番号１３１、１３２、１３３、１３４、アミノ酸配列ＹＤ、及び配列番号１３６、又は
ｔ．それぞれ配列番号１３７、１３８、１３９、１４０、アミノ酸配列ＦＮＳ、及び配列番号１４２、
のアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項12】

前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７、１７５、９、１０、１１及び１２のアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項13】

前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１３、１４、１５、１６、１７及び１８のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項14】

前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９及び３０のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項15】

前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１及び１２のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項16】

前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１９、２０、２１、２２、２３及び２４のアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項17】

配列番号３１、３３、３４、３６、３８、又は３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号３２、３５、３７、又は４０のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項18】

ａ．それぞれ配列番号３１及び３２、
ｂ．それぞれ配列番号３３及び３２、
ｃ．それぞれ配列番号３４及び３５、
ｄ．それぞれ配列番号３６及び３７、
ｅ．それぞれ配列番号３８及び３７、又は
ｆ．それぞれが配列番号３９及４０、
のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含む、請求項１７に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項19】

配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である前記ＶＨと、配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である前記ＶＬとを含む、請求項１８に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項20】

配列番号３９のアミノ酸配列を有する前記ＶＨと、配列番号４０のアミノ酸配列を有する前記ＶＬとを含む、請求項１９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項21】

配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である前記ＶＨと、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬとを含む、請求項１８に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項22】

配列番号３３のアミノ酸配列を含む前記ＶＨと、配列番号３２のアミノ酸配列を含む前記ＶＬとを含む、請求項２１に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項23】

配列番号３８のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である前記ＶＨと、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である前記ＶＬとを含む、請求項１８に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項24】

配列番号３８のアミノ酸配列を含む前記ＶＨと、配列番号３７のアミノ酸配列を含む前記ＶＬとを含む、請求項２３に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項25】

配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である前記ＶＨと、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である前記ＶＬとを含む、請求項１８に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項26】

配列番号３１のアミノ酸配列を含む前記ＶＨと、配列番号３２のアミノ酸配列を含む前記ＶＬとを含む、請求項２５に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項27】

配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である前記ＶＨと、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である前記ＶＬとを含む、請求項１８に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項28】

配列番号３６のアミノ酸配列を含む前記ＶＨと、配列番号３７のアミノ酸配列を含む前記ＶＬとを含む、請求項２７に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項29】

配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である前記ＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である前記ＶＬとを含む、請求項１８に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項30】

配列番号３４のアミノ酸配列を含む前記ＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を含む前記ＶＬとを含む、請求項２９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項31】

配列番号５１、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、又は配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）と、配列番号５２、配列番号５５、配列番号５７、又は配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）とを含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項32】

配列番号５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５９、及び６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３１に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項33】

ａ．配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む前記ＨＣ、及び配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む前記ＬＣ、
ｂ．配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む前記ＨＣ、及び配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む前記ＬＣ、
ｃ．配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む前記ＨＣ、及び配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む前記ＬＣ、
ｄ．配列番号５６のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む前記ＨＣ、及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む前記ＬＣ、
ｅ．配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む前記ＨＣ、及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む前記ＬＣ、又は
ｆ．配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む前記ＨＣ、及び配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む前記ＬＣ、
を含む、請求項３２に記載の単離された抗体。

【請求項34】

配列番号５１のアミノ酸配列を含む前記ＨＣと、配列番号５２のアミノ酸配列を含む前記ＬＣとを含む、請求項３３に記載の単離された抗体。

【請求項35】

配列番号５３のアミノ酸配列を含む前記ＨＣと、配列番号５２のアミノ酸配列を含む前記ＬＣとを含む、請求項３３に記載の単離された抗体。

【請求項36】

配列番号５４のアミノ酸配列を含む前記ＨＣと、配列番号５５のアミノ酸配列を含む前記ＬＣとを含む、請求項３３に記載の単離された抗体。

【請求項37】

配列番号５６のアミノ酸配列を含む前記ＨＣと、配列番号５７のアミノ酸配列を含む前記ＬＣとを含む、請求項３３に記載の単離された抗体。

【請求項38】

配列番号５８のアミノ酸配列を含む前記ＨＣと、配列番号５７のアミノ酸配列を含む前記ＬＣとを含む、請求項３３に記載の単離された抗体。

【請求項39】

配列番号５９のアミノ酸配列を含む前記ＨＣと、配列番号６０のアミノ酸配列を含む前記ＬＣとを含む、請求項３３に記載の単離された抗体。

【請求項40】

単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、
ｂ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を有するＶＨ、並びにそれぞれ配列番号１０、１１、及び１２のアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有するＶＬ、
ｃ．配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び／又は、
ｄ．配列番号５３のアミノ酸配列を有するＨＣ、及び配列番号５２のアミノ酸配列を有するＬＣ、
を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項41】

単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、
ｂ．それぞれ配列番号１３、１４、及び１５のアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を有するＶＨ、並びにそれぞれ配列番号１６、１７、及び１８のアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有するＶＬ、
ｃ．配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び／又は、ｄ．配列番号５４のアミノ酸配列を有するＨＣ及び配列番号５５のアミノ酸配列を有するＬＣ、
を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項42】

単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲを有するＶＨ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣＤＲを有するＶＬ、
ｂ．それぞれ配列番号１９、２０、及び２１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含むＶＨ、並びにそれぞれ配列番号２２、２３、及び２４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含むＶＬ、
ｃ．配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び／又は、
ｄ．配列番号５８のアミノ酸配列を有するＨＣ、及び配列番号５７のアミノ酸配列を有するＬＣ、
を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項43】

単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲを有するＶＨ、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣＤＲを有するＶＬ、
ｂ．それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含むＶＨ、並びにそれぞれ配列番号２８、２９、及び３０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含むＶＬ、
ｃ．配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び／又は、
ｄ．配列番号５９のアミノ酸配列を有するＨＣ、及び配列番号６０のアミノ酸配列を有するＬＣ、
を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項44】

単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲを有するＶＨ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣＤＲを有するＶＬ、
ｂ．それぞれ配列番号７、１７５、及び９のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含むＶＨ、並びにそれぞれ配列番号１０、１１、及び１２のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含むＶＬ、
ｃ．配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び／又は、
ｄ．配列番号５１のアミノ酸配列を有するＨＣ、及び配列番号５２のアミノ酸配列を有するＬＣ、
を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項45】

単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲを有するＶＨ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣＤＲを有するＶＬ、
ｂ．それぞれ配列番号１９、２０、及び２１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３含むＶＨ、並びにそれぞれ配列番号２２、２３、及び２４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含むＶＬ、
ｃ．配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び／又は、
ｄ．配列番号５６のアミノ酸配列を有するＨＣ、及び配列番号５７のアミノ酸配列を有するＬＣ、
を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項46】

前記抗原結合断片が、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）_２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、ｄＡｂ、ＶＨＨ又は一本鎖抗体である、請求項１～４５のいずれか一項に記載の単離された抗原結合断片。

【請求項47】

前記抗体又はその抗原結合断片が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである、請求項１～４６のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項48】

前記抗体又はその抗原結合断片が、ＩｇＧ１アイソタイプである、請求項４７に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項49】

Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片を含む、請求項４８に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項50】

前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の断片が、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）への前記単離された抗体又はその抗原結合断片の低減された結合をもたらす少なくとも１つの変異を含む、請求項４９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項51】

前記抗体又はその抗原結合断片のＦｃγＲへの低減された結合をもたらす少なくとも１つの変異が、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ、及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基番号付けがＥＵインデックスに従う、請求項５０に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項52】

前記Ｉｇ定常領域又は前記定常領域の断片が、Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓの変異を含む、請求項５１に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項53】

前記ＦｃγＲが、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ若しくはＦｃγＲＩＩＩ、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項５２に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項54】

前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の断片が、前記抗体又はその抗原結合断片の半減期を調節する少なくとも１つの変異を更に含む、請求項５３に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項55】

前記抗体又はその抗原結合断片の半減期を調節する少なくとも１つの変異が、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ、及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基番号付けが、ＥＵインデックスに従う、請求項５４に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【請求項56】

治療剤又は造影剤にコンジュゲートされた、請求項１～５５のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片を含む、イムノコンジュゲート。

【請求項57】

請求項１～５５のいずれか一項に記載の単離された抗体若しくはその抗原結合断片又は請求項５６に記載のイムノコンジュゲート、及び医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【請求項58】

請求項１～５５のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離されたポリヌクレオチド。

【請求項59】

配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９又は７０のポリヌクレオチド配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるポリヌクレオチド配列を含む、請求項５８に記載の単離されたポリヌクレオチド。

【請求項60】

請求項５８又は５９に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。

【請求項61】

請求項６０に記載のベクターを含む宿主細胞などの、請求項１～５５のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片を発現する宿主細胞。

【請求項62】

請求項１～５５のいずれか一項に記載の単離された抗体若しくはその抗原断片、請求項５６に記載のイムノコンジュゲート、請求項５７に記載の医薬組成物、請求項５８若しくは５９に記載の単離されたポリヌクレオチド、請求項６０に記載のベクター又は請求項６１に記載の宿主細胞の有効量を被験者に投与し、それによってＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合を防止することを含む、それを必要とする前記被験者においてＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合を防止する方法。

【請求項63】

前記被験者が、慢性腎疾患（ＣＫＤ）の治療を必要としているか、タンパク尿を減少させる必要があるか、進行した４期若しくは５期の慢性腎疾患を有するか、又はタンパク尿、アルブミン尿若しくは糖尿病を伴うＣＫＤを有する、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

治療を必要とする被験者における慢性腎疾患（ＣＫＤ）を治療する方法であって、請求項１～５５のいずれか一項に記載の単離された抗体若しくはその抗原断片、請求項５６に記載のイムノコンジュゲート、請求項５７に記載の医薬組成物、請求項５８若しくは５９に記載の単離されたポリヌクレオチド、請求項６０に記載のベクター又は請求項６１に記載の宿主細胞の治療有効量を、ＣＫＤを治療するのに十分な時間にわたり前記被験者に投与することを含む、方法。

【請求項65】

前記被験者が進行した４期又は５期の慢性腎疾患を有する、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

前記被験者が３期の慢性腎疾患を有する、請求項６４に記載の方法。

【請求項67】

前記被験者が、タンパク尿、アルブミン尿又は糖尿病を伴うＣＫＤを有する、請求項６４に記載の方法。

【請求項68】

タンパク尿の減少を必要とする被験者におけるタンパク尿を減少する方法であって、請求項１～５５のいずれか一項に記載の単離された抗体若しくはその抗原断片、請求項５６に記載のイムノコンジュゲート、請求項５７に記載の医薬組成物、請求項５８若しくは５９に記載の単離されたポリヌクレオチド、請求項６０に記載のベクター又は請求項５９に記載の宿主細胞の治療有効量を、前記被験者のタンパク尿を減少するのに十分な時間にわたり前記被験者に投与することを含む、方法。

【請求項69】

請求項１～５５のいずれか一項に記載の単離された抗体若しくはその抗原結合断片、請求項５６に記載のイムノコンジュゲート、請求項５７に記載の医薬組成物、請求項５８若しくは５９に記載の単離されたポリヌクレオチド、請求項６０に記載のベクター又は請求項６１に記載の宿主細胞を含む、キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本出願は、「抗ＶＥＧＦＲ１抗体及びそれらの使用」と題する２０２１年８月１６日に出願された米国特許仮出願第６３／２３３，３４３号、及び２０２２年３月２２日に出願された米国特許仮出願第６３／３２２，２７３号に対する優先権を主張するものであり、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

（電子的に提出された配列表の参照）
本出願は、ＸＭＬファイルフォーマットで電子的に提出済みである、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。当該ＸＭＬコピーは、２０２２年７月２２日に作成され、名称はＪＢＩ６５１２ＷＯＰＣＴ１＿ＳＬ．ｘｍｌであり、サイズは１８１，６８１バイトである。

【0003】

（発明の分野）
血管内皮増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１）に結合する抗原結合ドメイン又はその断片を含むタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、及びそれらを使用して慢性腎疾患を治療する方法が提供される。

【背景技術】

【0004】

慢性腎疾患（ＣＫＤ）は、老年人口及び糖尿／肥満の流行とともに増大し続ける世界的な公衆衛生問題である。ＣＫＤは、全死因及び心血管死亡率、並びに生存のために透析又は腎臓移植を必要とする末期腎疾患のリスクを増加させる。ＣＫＤ４～５期の患者は、腎不全のリスクが最も高く、５年死亡率は約４０％である。糖尿病（３８％）及び高血圧（２５％）は、後期及び末期腎疾患の主な原因である。最も一般的なＣＫＤである糖尿病性腎疾患は、診断から１０年以内に２型糖尿病患者の約２５％に生じる。レニン－アンジオテンシン－アルドステロン系阻害剤、すなわち、アンジオテンシン変換酵素阻害剤若しくはアンジオテンシン受容体遮断薬の標準治療、又はＳＧＬＴ２阻害剤の最近の導入にもかかわらず、ほとんどの「リスクのある」患者又は不十分な反応者は、依然として末期腎疾患に進行する。米国だけでも、年間１００，０００人を超える患者が透析に進んでいる。透析中の患者の７０％が５年以内に死亡する。

【0005】

後期ＣＫＤ患者における腎臓保護又は機能回復によって末期腎疾患を予防又は治療する療法に対する医学的必要性は、非常に高いままである。

【0006】

腎臓において、糸球体足細胞及び尿細管上皮細胞によって作られる血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）は、糸球体の完全性、腎臓の微小血管系、及び機能を維持するのに不可欠である。ＣＫＤ患者において、患者の腎生検のｍＲＮＡマイクロアレイ分析は、減少したＶＥＧＦＡ発現を示し、糸球体及び尿細管間質におけるＶＧＦＡ発現のレベルは、ｅＧＦＲ、タンパク尿又は血管希薄化と相関する（Ｂｏｒｔｏｌｏｓｏ，Ｄｅｌ Ｐｒｅｔｅ ｅｔ ａｌ．２００４，Ｍａｒｔｉｎｉ，Ｎａｉｒ ｅｔ ａｌ．２０１４，Ｐａｎ，Ｊｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１８）。健康な腎臓において、局所的に生成されたＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ２を介したシグナル伝達は、内皮の健康を保護する糸球体濾過バリアを促進する。ＣＫＤにおいて、ＶＥＧＦＡ欠損は、そのデコイ受容体ＶＥＧＦＲ１による隔離と共に、ＶＥＧＦＲ２シグナル伝達の抑制をもたらす。抗ＶＥＧＦＲ１遮断抗体は、ＶＥＧＦＡ隔離を遮断し、局所ＶＥＧＦＡ利用可能性を増加させ、内皮保護、糸球体濾過バリアの保存及び腎機能回復を可能にするために開発された。

【発明の概要】

【0007】

本明細書では、ＶＥＧＦＲ１の配列番号１７３内のエピトープに結合し、ＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合を防止する単離された抗体又はその抗原結合断片が提供される。

【0008】

いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸配列ＦＰＬＤＴＬ（配列番号１４３）又はＥＩＧＬ（配列番号１４４）を有するＶＥＧＦＲ１上のエピトープにＶＥＧＦＲ１を結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸配列ＦＰＬＤＴＬ（配列番号１４３）及びＥＩＧＬ（配列番号１４４）を有するＶＥＧＦＲ１上のエピトープにＶＥＧＦＲ１を結合する。

【0009】

いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合断片が、ヒト、マウス、ラット及び／又はカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合する。

【0010】

いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＶＥＧＦＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＶＥＧＦＲ１並びにカニクイザル、マウス及びラットからなる群より選択される少なくとも１つの種に由来するＶＥＧＦＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＶＥＧＦＲ１並びにカニクイザル、マウス及びラットからなる群から選択される少なくとも２つの種に由来するＶＥＧＦＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合断片が、ヒト、カニクイザル、マウス及びラットＶＥＧＦＲ１に結合する。

【0011】

いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用することで決定される、６×１０^－８Ｍ以下、特に１×１０^－８Ｍ以下、より具体的には５×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－１０Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫＤで、ヒトＶＥＧＦＲ１、マウスＶＥＧＦＲ１、及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合する。

【0012】

いくつかの実施形態では、本出願の単離された抗体又はその抗原結合断片が、配列番号３１、３３、３４、３６、３８又は３９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）を有するＶＨと、配列番号３２、３５、３７又は４０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を有するＶＬと、を含む。

【0013】

特定の実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合断片が、
ａ．配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、
ｂ．配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、
ｃ．配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、
ｄ．配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、
ｅ．配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、又は
ｆ．配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、を含む。

【0014】

本明細書では、単離された抗体又はその抗原結合断片が提供され、単離された抗体又はその抗原結合断片は、
それぞれ配列番号７、１７５、９、１０、１１、及び１２、
それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、及び１２、
それぞれ配列番号１３、１４、１５、１６、１７、及び１８、
それぞれ配列番号１９、２０、２１、２２、２３、及び２４、
それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０、
それぞれ配列番号７１、１７６、７３、７４、７５、及び７６、
それぞれ配列番号７１、７２、７３、７４、７５、及び７６、
それぞれ配列番号７７、７８、７９、８０、８１、及び８２、
それぞれ配列番号８３、８４、８５、８６、８７、及び８８、
それぞれ配列番号８９、９０、９１、９２、９３、及び９４、
それぞれ配列番号９５、１７７、９７、９８、９９、及び１００、
それぞれ配列番号９５、９６、９７、９８、９９、及び１００、
それぞれ配列番号１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、及び１０６、
それぞれ配列番号１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、及び１１２、
それぞれ配列番号１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、及び１１８、
それぞれ配列番号１１９、１７８、１２１、１２２、アミノ酸配列ＬＮＳ、及び配列番号１２４、
それぞれ配列番号１１９、１２０、１２１、１２２、アミノ酸配列ＬＮＳ、及び配列番号１２４、
それぞれ配列番号１２５、１２６、１２７、１２８、アミノ酸配列ＦＮＦ、及び配列番号１３０、
それぞれ配列番号１３１、１３２、１３３、１３４、アミノ酸配列ＹＤ、及び配列番号１３６、又は
それぞれ配列番号１３７、１３８、１３９、１４０、アミノ酸配列ＦＮＳ、及び配列番号１４２、
のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又はその抗原結合断片は、ＶＥＧＦＲ１に結合する。

【0015】

本開示は更に、ＶＥＧＦＲ１に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
配列番号３１のＶＨ及び配列番号３２のＶＬ、
配列番号３３のＶＨ及び配列番号３２のＶＬ、
配列番号３４のＶＨ及び配列番号３５のＶＬ、
配列番号３６のＶＨ及び配列番号３７のＶＬ、
配列番号３８のＶＨ及び配列番号３７のＶＬ、又は
配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬ、を含む。

【0016】

本開示は更に、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号３９のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨと配列番号４０のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬとを含む。

【0017】

本開示は更に、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号３１のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨと配列番号３２のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬとを含む。

【0018】

本開示は更に、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号３３のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨと配列番号３２のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬとを含む。

【0019】

本開示は更に、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号３４のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨと配列番号３５のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬとを含む。

【0020】

本開示は更に、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号３６のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨと配列番号３７のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬとを含む。

【0021】

本開示は更に、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号３８のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨと配列番号３７のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬとを含む。

【0022】

本開示は更に、ＶＥＧＦＲ１に結合し、配列番号５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、及び６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0023】

本開示は更に、ＶＥＧＦＲ１に結合し、配列番号５１又は５２のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0024】

本開示は更に、ＶＥＧＦＲ１に結合し、配列番号５３又は５２のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0025】

本開示は更に、ＶＥＧＦＲ１に結合し、配列番号５４又は５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0026】

本開示は更に、ＶＥＧＦＲ１に結合し、配列番号５６又は５７のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0027】

本開示は更に、ＶＥＧＦＲ１に結合し、配列番号５８又は５７のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0028】

本開示は更に、ＶＥＧＦＲ１に結合し、配列番号５９又は６０のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0029】

いくつかの実施形態では、本出願の単離された抗体は、
ａ．配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ、
ｂ．配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ、
ｃ．配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ、
ｄ．配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号５７のアミノ酸配列を含むＬＣ、
ｅ．配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号５７のアミノ酸配列を含むＬＣ、又は
ｆ．配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ、を含む。

【0030】

本開示は更に、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
それぞれ配列番号７、１７５、９、１０、１１、及び１２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
配列番号３１のＶＨ及び配列番号３２のＶＬ、並びに／又は
配列番号５１のＨＣ及び配列番号５２のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片、を含む。

【0031】

本開示は更に、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、及び１２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
配列番号３３のＶＨ及び配列番号３２のＶＬ、並びに／又は
配列番号５３のＨＣ及び配列番号５２のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片。

【0032】

本開示は更に、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
それぞれ配列番号１３、１４、１５、１６、１７、及び１８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
配列番号３４のＶＨ及び配列番号３５のＶＬ、並びに／又は
配列番号５４のＨＣ及び配列番号５５のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片、を含む。

【0033】

本開示は更に、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
それぞれ配列番号１９、２０、２１、２２、２３、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
配列番号３６のＶＨ及び配列番号３７のＶＬ、並びに／又は
配列番号５６のＨＣ及び配列番号５７のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片、を含む。

【0034】

本開示は更に、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
それぞれ配列番号１９、２０、２１、２２、２３、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
配列番号３８のＶＨ及び配列番号３７のＶＬ、並びに／又は
配列番号５８のＨＣ及び配列番号５７のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片、を含む。

【0035】

本開示は更に、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬ、並びに／又は
配列番号５９のＨＣ及び配列番号６０のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片、を含む。

【0036】

いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合断片が、半減期延長部分にコンジュゲートされる。任意選択で、半減期延長部分は、免疫グロブリン（immunoglobulin、Ｉｇ）、Ｉｇの断片、Ｉｇ定常領域、Ｉｇ定常領域の断片、Ｆｃ領域、トランスフェリン、アルブミン、アルブミン結合ドメイン、又はポリエチレングリコールである。任意選択で、Ｉｇ定常領域の断片は、Ｆｃ領域を含む。任意選択で、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＣ末端にコンジュゲートされる。

【0037】

任意選択で、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである。任意選択で、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１アイソタイプである。任意選択で、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ４アイソタイプである。任意選択で、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、タンパク質のＦｃγ受容体（Fcγ receptor、ＦｃγＲ）への低減された結合をもたらす少なくとも１つの変異を含む。任意選択で、ＦｃγＲへの低減された結合をもたらす少なくとも１つの変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ、及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基番号付けはＥＵインデックスに従う。任意選択で、ＦｃγＲへのタンパク質の結合の低減をもたらす変異は、Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓである。任意選択で、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、タンパク質の半減期を調節する少なくとも１つの変異を含む。任意選択で、タンパク質の半減期を調節する少なくとも１つの変異は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ、及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基番号付けは、ＥＵインデックスに従う。

【0038】

本開示は更に、治療剤又はイメージング剤にコンジュゲートされた単離された抗体又はその抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートを提供する。

【0039】

本発明は更に、ＶＥＧＦＲ１に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される担体と、を含む、医薬組成物を提供する。

【0040】

本開示は更に、ＶＥＧＦＲ１に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを提供する。

【0041】

任意選択で、ＶＥＧＦＲ１に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６１、６２、６３、７４、６５、６６、６７、６８、６９、又は７０のポリヌクレオチド配列を含む。

【0042】

任意選択で、ＶＥＧＦＲ１に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドは、配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、又は７０のポリヌクレオチド配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるポリヌクレオチドを含む。

【0043】

本開示はまた、本開示のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。

【0044】

本発明は更に、本開示のポリヌクレオチド又はベクターを含む、宿主細胞を提供する。

【0045】

本開示は更に、単離された抗体若しくはその抗原結合断片を発現し、及び／又は本開示のポリヌクレオチド若しくはベクターを含む宿主細胞を提供する。

【0046】

本開示は更に、それを必要とする被検者においてＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合を防止する方法であって、本開示の単離された抗体若しくはその抗原結合断片のいずれか、本開示のイムノコンジュゲートのいずれか、本開示の医薬組成物のいずれか、本開示の単離されたポリヌクレオチド若しくはベクターのいずれか、又は本開示の宿主細胞のいずれかの有効量を被検者に投与し、それによってＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合を防止することを含む方法を提供する。

【0047】

本開示は更に、被検者における慢性腎疾患（ＣＫＤ）を治療し、その進行を遅延させる方法であって、本開示の単離された抗体若しくはその抗原結合断片のいずれか、本開示のイムノコンジュゲートのいずれか、又は本開示の医薬組成物のいずれか、本開示の単離されたポリヌクレオチド若しくはベクターのいずれか、又は本開示の宿主細胞のいずれか、の治療有効量を、ＣＫＤを治療するのに十分な時間にわたり、被検者に投与することを含む方法を提供する。任意選択で、被検者は、進行した４期又は５期の慢性腎疾患を有する。任意選択で、被検者は、初期慢性腎疾患を有する。

【0048】

本開示は更に、本開示の単離された抗体若しくはその抗原結合断片のいずれか、本開示のイムノコンジュゲートのいずれか、本開示の医薬組成物のいずれか、本開示の単離されたポリヌクレオチド若しくはベクターのいずれか、又は本開示の宿主細胞のいずれか、を含むキットを提供する。

【0049】

本開示は更に、それを必要とする被検者においてＣＫＤを治療する方法であって、本開示の単離された抗体若しくはその抗原結合断片のいずれか、本開示のイムノコンジュゲートのいずれか、本開示の医薬組成物のいずれか、本開示の単離されたポリヌクレオチド若しくはベクターのいずれか、又は本開示の宿主細胞のいずれか、の治療有効量を、被検者においてタンパク尿を減少させるのに十分な時間にわたり、被検者に投与することを含む方法を提供する。

【0050】

本開示は更に、それを必要とする被検者においてタンパク尿を減少させる方法であって、本開示の単離された抗体若しくはその抗原結合断片のいずれか、本開示のイムノコンジュゲートのいずれか、本開示の医薬組成物のいずれか、本開示の単離されたポリヌクレオチド若しくはベクターのいずれか、又は本開示の宿主細胞のいずれか、の治療有効量を、被検者においてタンパク尿を減少させるのに十分な時間にわたり、被検者に投与することを含む方法を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0051】

上述の「発明の概要」及び以降の「発明を実施するための形態」は、添付の図面と併せて読むことでより良好に理解されるであろう。本発明は、図面に示される正確な実施形態に限定されない点を理解する必要がある。

【図1】種々の種由来のＶＥＧＦＲ１（ドメイン２－ドメイン３）のリガンド結合領域のアミノ酸配列アラインメントを示す。ヒト配列と同一の残基をドットで示す。同一でない残基を明示的に示す。図１は、出現順に配列番号１７９～１８４をそれぞれ開示する。

【図2】ヒト、カニクイザル、及びマウスＶＥＧＦＲ１に対するＶＥＧＦＲ１抗体（ＶＧＦＢ５４、ＶＧＦＢ７１、ＶＧＦＢ７８及びＶＧＦＢ８２）の種交差反応性を示すが、ＶＥＧＦＲ２又はＶＥＧＦＲ３よりもＶＥＧＦＲ１に対する特異性を保持する、代表的なＦＡＣＳ結合データを示す。ヒトＶＥＧＲ１、カニクイザルＶＥＧＦＲ１、マウスＶＥＧＦＲ１、ヒトＶＥＧＦＲ２、及びヒトＶＥＧＦＲ３は、細胞の表面上で過剰発現された。該当ＶＥＧＦＲタンパク質を過剰発現する細胞株を用いて、平均蛍光強度をプロットする。

【図3】ＶＧＦＢ７８ ＶＨの１０５位におけるグルタミン（Ｑ）と比較したＳＨＭロイシン（Ｌ）の相対頻度の評価を示す。

【図4A】ＶＥＧＦＲ１（ＶＧＦＷ１）に対する４つの抗ＶＥＧＦＲ１抗体（ＶＧＦＢ５４、ＶＧＦＢ７１、ＶＧＦＢ７８及びＶＧＦＢ８２）の重鎖可変ドメインのパラトープマップを示す。図４Ａは、出現順に配列番号３１、３４、３６及び３９をそれぞれ開示する。

【図4B】ＶＥＧＦＲ１（ＶＧＦＷ１）に対する４つの抗ＶＥＧＦＲ１抗体軽鎖（ＶＧＦＢ５４、ＶＧＦＢ７１、ＶＧＦＢ７８及びＶＧＦＢ８２）の軽鎖可変ドメインのパラトープマップを示す。強調された残基は、ＩＭＴＧ描写に基づくＨＣＤＲ及びＬＣＤＲを表す。ＶＥＧＦＲ１への結合時に－１．０ｋｃａｌ／ｍｏｌ以下の自由エネルギー変化を有する残基は、スケールに示されるように、中灰色から暗灰色への勾配色で示される。ＶＥＧＦＲ１への結合時に安定化されなかった残基は、明灰色で示された。交換が速すぎるか又は遅すぎて結合時の摂動が見られない残基を灰色で示す。色のない残基は、残基をカバーするペプチドが存在しないか、又は残基がペプチドの最初の２つの残基であるため、ＨＤＸ挙動がモニタされなかったことを示す。図４Ｂは、出現順に配列番号３２、３５、３７及び４０をそれぞれ開示する。

【図5】カニクイザルにおける単回ＩＶ／ＳＣ投与後の経時的な総ＶＧＦＢ５４及び遊離ＶＧＦＢ５４の血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。

【図6】カニクイザルにおける単回ＩＶ／ＳＣ投与後の経時的な総ＶＧＦＢ７８及び遊離ＶＧＦＢ７８の血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。

【図7】カニクイザルにおける単回ＩＶ／ＳＣ投与後の経時的な総ＶＧＦＢ８２及び遊離ＶＧＦＢ８２の血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。

【図8】カニクイザルにおける単回ＩＶ／ＳＣ投与後の経時的な総ＶＧＦＢ８０及び遊離ＶＧＦＢ８０の血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。

【図9】カニクイザルにおけるＶＧＦＢ５４の単回ＩＶ／ＳＣ投与後の経時的な総ＰｌＧＦ血漿濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示す。

【図10】カニクイザルにおけるＶＧＦＢ７８の単回ＩＶ／ＳＣ投与後の経時的な総ＰｌＧＦ血漿濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示す。

【図11】カニクイザルにおけるＶＧＦＢ８２の単回ＩＶ／ＳＣ投与後の経時的な総ＰｌＧＦ血漿濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示す。

【図12】カニクイザルにおけるＶＧＦＢ８０の単回ＩＶ／ＳＣ投与後の経時的な総ＰｌＧＦ血漿濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示す。

【発明を実施するための形態】

【0052】

定義
本開示の単離抗ＶＥＧＦＲ１抗体、その抗原結合断片、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、組成物、キット、及び方法は、本開示の一部を形成する添付図面に関してなされる以下の詳細な説明を参照することで、より容易に理解することができる。開示される抗体、抗原結合ドメイン、抗体断片、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、組成物、キット及び方法は、本明細書に具体的に記載及び／又は図示した単離された抗体、抗原結合ドメイン、抗体断片、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、組成物、キット及び方法に限定されず、また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を例によって説明するためだけのものであり、特許請求される抗体、抗原結合ドメイン、抗体断片、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、組成物、キット及び方法を限定することを意図しないことを理解されたい。

【0053】

別段の具体的な指定がない限り、可能な機序若しくは作用様式、又は改善のための理由についてのあらゆる記載は、説明のみを意図したものであり、開示される抗体、抗原結合ドメイン、抗体断片、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、組成物、キット及び方法は、いかなるかかる提案された機序若しくは作用様式、又は改善のための理由の是非によっても制限されない。

【0054】

本明細書通して、説明は、抗体、その抗原結合断片、及び抗原結合ドメインを使用する方法に言及する。本開示が抗原結合ドメインに関連する特徴又は実施形態について説明する、又は特許請求する場合、かかる特徴又は実施形態は、抗原結合ドメインの使用法にも等しく適用可能である。同様に、本開示が抗原結合ドメインの使用法に関連する特徴又は実施形態について説明する、又は特許請求する場合、かかる特徴又は実施形態は、抗原結合ドメインにも等しく適用可能である。

【0055】

数値の範囲が本明細書で列挙又は確立される場合、この範囲は、その端点、並びにその範囲内の全ての個々の整数及び有理数を含み、更に、これらの端点及び内部整数及び有理数の全ての種々の可能な組み合わせによって形成される、その中のより狭い範囲のそれぞれを含み、それらのより狭い範囲のそれぞれが明示的に列挙されたかのように、記載の範囲内の値のより大きい群の小群を形成する。数値の範囲が、記載される値よりも大きいと本明細書に記載される場合、その範囲はそれにもかかわらず有限であり、本明細書に記載される本発明の文脈内で動作可能である値によって、その上限が画定される。数値の範囲が、記載される値よりも小さいと本明細書に記載される場合、その範囲は、それにもかかわらず、ゼロでない値によって、その下限が画定される。本発明の範囲が、範囲を定義する際に列挙される特定の値に限定されることを意図しない。範囲はいずれも境界値を含み、組み合わせが可能である。

【0056】

値が、先行詞「約」を用いて近似値として表現される場合、その特定の値は、別の実施形態を形成すると、理解されたい。特定の数値に関する言及は、文脈上その他に明記されない限り、少なくともその特定の値を含むものとする。

【0057】

別個の実施形態に照らして明確にするために本明細書に記載される、本発明の特定の特徴はまた、単一の実施形態において組み合わされて提供されてもよいことが理解される。すなわち、明白に不適合であるか又は具体的に除外されない限り、各個々の実施形態は、任意の他の実施形態と組み合わせ可能であるとみなされ、このような組み合わせは、別の実施形態であるとみなされる。逆に、単一の実施形態に照らして簡潔にするために記載される本発明の異なる特徴は、別々に又は任意の部分的組み合わせとして提供されてもよい。最後に、実施形態は、一連の工程の一部として又はより全般的な構造の一部として記載されてもよいが、その各工程は、他と組み合わせ可能である、独立する実施形態であるとみなされてもよい。

【0058】

特別な記述がない限り、動作に関する可能なメカニズム又は形態、あるいは改善の理由についての記載は、説明のみを意図したものであり、本開示の方法は、提案されている動作に関するメカニズム又は形態、あるいは改善の理由の是非によって制限されない。

【0059】

本明細書の態様に関する様々な用語が、本明細書及び特許請求の範囲を通して使用される。別段の指示がない限り、このような用語には、当該技術分野におけるそれらの通常の意味が与えられるものとする。他の具体的に定義される用語は、本明細書で提供される定義と一致する様式で解釈されるものとする。

【0060】

本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用されるとき、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、その内容に別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を包含する。したがって、例えば、「細胞（a cell）」という言及には、２つ又は３つ以上の細胞の組み合わせ等が含まれる。

【0061】

移行句「備える／含む（comprising）」、「から本質的になる（consisting essentially of）」、及び「からなる（consisting of）」は、特許用語において一般的に受け入れられている意味を含意することを意図している、すなわち、（ｉ）「備える／含む（comprising）」は、「含む」、「含有する」、又は「特徴とする」と同義であり、包括的又は非制限的なものであり、その他の列挙されていない要素又は方法工程を除外するものではなく、（ｉｉ）「からなる（consisting of）」は、特許請求の範囲において指定されていない、あらゆる要素、工程、又は成分を除外し、かつ、（ｉｉｉ）「から本質的になる（consisting essentially of）」は、指定の材料又は工程、及び特許請求される開示の「基本的かつ新規の特徴に実質的に影響を与えないもの」に、特許請求の範囲の範囲を制限する。「備える／含む」という語句（又はその同義語）を伴って記載される実施形態はまた、「からなる」及び「から本質的になる」を伴って独立して記載される実施形態として提供する。「から本質的になる」という語句（又はその同義語）を伴って記載される実施形態は更に、「からなる」を伴って独立して記載される実施形態として提供する。

【0062】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用するとき、語句「並びにその断片」は、リストに付け加えられている場合、関連するリストのうちの１つ以上のメンバーの断片を含む。リストは、一例として、語句「ペプチドＡ、Ｂ、及びＣ、並びにその断片からなる群」が、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ａの断片、Ｂの断片、及び／又はＣの断片を含むマーカッシュ群を指定又は列挙するように、マーカッシュ群を含み得る。

【0063】

「単離された（Isolated）」とは、組換え細胞などにおける分子が産生される系のその他の成分から離して実質的に分離及び／又は精製された分子の均質な集団（例えば、合成ポリヌクレオチド又はポリペプチド）、並びに少なくとも１つの精製工程又は単離工程に供されたタンパク質を指す。「単離された」とは、その他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に含まない分子を指し、より高い純度、例えば８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の純度まで単離された分子を包含する。

【0064】

「ポリヌクレオチド」とは、糖－リン酸骨格鎖又は他の同等の共有結合化学によって共有結合されたヌクレオチド鎖を含む、合成分子を指す。ｃＤＮＡは、ポリヌクレオチドの典型例である。

【0065】

「ポリペプチド」又は「タンパク質」とは、ペプチド結合によって連結されてポリペプチドを形成する少なくとも２つのアミノ酸残基を含む、分子を指す。５０個未満のアミノ酸からなる小分子ポリペプチドは、「ペプチド」と称され得る。

【0066】

本明細書で使用される場合、「Ｔａｇｇ」は、タンパク質が二量体化又はオリゴマー化のいずれかによって凝集し始める温度を指す。凝集温度は、凝集の開始を検出し、タンパク質が凝集する傾向を示す温度である。Ｔａｇｇは、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、示差走査蛍光測定（ＤＳＦ）、又は円二色性（ＣＤ）によって測定することができる。これらの技術は、タンパク質のコンホメーションの小さな変化を検出することができ、したがって凝集の開始点を検出することができる。Ｔａｇｇ値は、Ｔｍよりも低くても高くてもよい。ＴａｇｇがＴｍよりも低い場合、タンパク質は、最初に二量体化及び／又はオリゴマー化し、次いで、Ｔａｇｇよりも高い温度で後にアンフォールディングを開始する。ＴａｇｇがＴｍよりも高い場合、タンパク質は最初にアンフォールディングし始め、次いでＴｍよりも高い温度で凝集する。いずれの事象も、一般に観察され、アミノ酸組成及びタンパク質コンホメーションに依存する。

【0067】

本明細書で使用される場合、「Ｔｍ」又は「中間点温度」は、熱変性曲線の温度中間点である。これは、アミノ酸配列の５０％がその自然のコンホメーションにあり、他の５０％が変性されている温度を指す。熱変性曲線は、典型的には温度の関数としてプロットされる。Ｔｍは、タンパク質の安定性を測定するために使用される。概して、より高いＴｍは、より安定なタンパク質の指標である。Ｔｍは、当業者に周知の方法、例えば、円偏光二色性分光法、示差走査熱量測定、示差走査蛍光測定（内因性及び外因性色素ベースの両方）、ＵＶ分光法、ＦＴ－ＩＲ及び等温熱量測定（ＩＴＣ）を用いて容易に測定することができる。

【0068】

「相補性決定領域（ＣＤＲ）」とは、抗原に結合する抗体の領域である。ＶＨには３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）が存在し、ＶＬには３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）が存在する。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．（１９７０）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １３２：２１１－５０、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－１７）、ＩＭＧＴ（Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７：５５－７７）、及びＡｂＭ（Ｍａｒｔｉｎ ａｎｄ Ｔｈｏｒｎｔｏｎ Ｊ Ｂｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６３：８００－１５，１９９６）などの様々な記述を使用して定義することができる。様々な記述と可変領域の付番との間の対応関係が記載されている（例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７：５５－７７、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（２００１），Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３０９：６５７－７０；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース、Ｗｏｒｌｄ Ｗｉｄｅ Ｗｅｂ：ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）。ＵＣＬ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ ＰＬＣによるａｂＹｓｉｓなどの利用可能なプログラムを使用して、ＣＤＲを記述することができる。本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」、「ＨＣＤＲ１」、「ＨＣＤＲ２」、「ＨＣＤＲ３」、「ＬＣＤＲ１」、「ＬＣＤＲ２」、及び「ＬＣＤＲ３」という用語は、明細書で別途明示的に記載のない限り、上述したＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、又はＡｂＭの方法のいずれかにより定義されるＣＤＲを含む。例えば、Ｋａｂａｔ番号付け及びＩＭＧＴ固有の番号付けシステムを含む番号付けシステム間の対応関係は、当業者に周知である（例えば、上記のＫａｂａｔ、上記のＣｈｏｔｈｉａ、上記のＭａｒｔｉｎ、上記のＬｅｆｒａｎｃらを参照されたい）。

【0069】

【表1】

【0070】

「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する重鎖ドメイン又は軽鎖ドメインを指す。重鎖又は軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。

【0071】

「被検者」は、任意のヒト又は非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」としては、あらゆる脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの哺乳類及び非哺乳類が挙げられる。「被検者」及び「患者」という用語は、本明細書において互換的に使用され得る。

【0072】

「キット」及び「製造物品」という用語は、同義語として使用される。

【0073】

本明細書に引用される、特許及び特許出願を含むがそれらに限定されない全ての刊行物は、完全に記載されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。

【0074】

ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体
本開示は、単離された抗ＶＥＧＦＲ１抗体及びその抗原結合断片に関する。「単離された抗体」、「その抗原結合断片」及び「抗ＶＥＧＦＲ１抗体」という用語などは、互換的に使用され、ＶＥＧＦＲ１に結合し、ＶＥＧＦＲ１に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメインを含む抗体を指す。

【0075】

本開示の抗体は、ＶＥＧＦＲ１への高親和性結合、ＶＥＧＦＲ１へのＶＥＧＦＡ結合の遮断、及び慢性腎疾患（ＣＫＤ）を治療する能力を含み、これらに限定されない、１つ以上の機能的特性を有する。いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＥＧＦＲ１に特異的に結合する単離された抗体又はその抗原結合断片に関する。

【0076】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、広義の意味を有し、モノクローナル抗体（マウス、ヒト、ヒト化、及びキメラモノクローナル抗体を含む）、抗原結合断片、二重特異性、三重特異性、四重特異性などの多重特異性抗体、二量体、四量体、又は多量体抗体、一本鎖抗体、ドメイン抗体、並びに必要とされる特異性の抗原結合部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された形態を含む免疫グロブリン分子を含む。抗体という用語は、完全長抗体、全抗体、インタクトな抗体、抗体断片、抗原結合断片及び抗原結合ドメインを含む。

【0077】

一般に、抗体は、特定の抗原に対する結合特異性を示すタンパク質又はペプチド鎖である。抗体の構造は、周知である。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて５つの主なクラス（すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ）に割り当てることができる。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。したがって、本発明の抗体は、５つの主要なクラス又は対応する下位クラスのいずれかのものであることができる。好ましくは、本発明の抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である。脊椎動物種の抗体軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、すなわちカッパ及びラムダのうちの一方に割り当てることができる。したがって、本発明の抗体は、κ又はλ軽鎖定常ドメインを含有することができる。いくつかの実施形態によれば、本発明の抗体は、ラット又はヒト抗体由来の重鎖及び／又は軽鎖定常領域を含む。重定常ドメイン及び軽定常ドメインに加えて、抗体は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域からなる抗原結合領域を含有し、これらのそれぞれは３つのドメイン（すなわち相補性決定領域１～３、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含有する。軽鎖可変領域ドメインは、代替的にＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３と称され、重鎖可変領域ドメインは、代替的にＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と称される。

【0078】

本明細書で使用するとき、用語「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す（例えば、ＶＥＧＦＲ１に特異的に結合する単離された抗体は、ＶＥＧＦＲ１に結合しない抗体を実質的に含まない）。加えて、単離された抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まない。「単離抗体」は、純度が８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の抗体など、高純度に単離された抗体を包含する。

【0079】

本明細書で使用するとき、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量に存在する可能性のある自然発生変異を除いて同一である。本発明のモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、ファージディスプレイ技術、単一リンパ球遺伝子クローニング技術、又は組換えＤＮＡ法によって作製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウス又はラットから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマによって生成され得、ヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する。

【0080】

本明細書で使用される場合、「ＶＥＧＦＲ１」又は「ＶＥＧＦＲ－１」は、血管内皮増殖因子受容体１と呼ばれる公知のタンパク質を指す。ＶＥＧＦＲ１は、ＦＬＴ１遺伝子によってコードされる。特定されない限り、本明細書で使用される場合、ＶＥＧＦＲ１は、ヒトＶＥＧＦＲ１を指す。ヒトＶＥＧＦＲ１のアミノ酸配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ（アクセッション番号Ｐ１７９４８）から検索可能である。完全長ヒトＶＥＧＦＲ１のアミノ酸配列を配列番号１７０に示す。ＶＥＧＦＲ１の配列は、７つの免疫グロブリン（Ｉｇ）様モチーフを含む細胞外リガンド結合ドメイン（アミノ酸残基２７～７５８）からなる（ドメインＤ１－ドメインＤ７：Ｄ１残基３２～１２３、Ｄ２残基１５１～２１４、Ｄ３残基２３０～３２７、Ｄ４残基３３５～４２１、Ｄ５残基４２８～５５３、Ｄ６残基５５６～６５４、Ｄ７残基６６１～７４７）、キナーゼインサート（アミノ酸残基８２７～１１５８）によって分割されたキナーゼドメインを含む単一膜貫通ドメイン及び細胞質ドメイン、並びにカルボキシル末端を含む。ヒトＶＥＧＦＲ１ Ｄ２ドメインのアミノ酸配列は、配列番号１７１に示される。ヒトＶＥＧＦＲ１ Ｄ３ドメインのアミノ酸配列は、配列番号１７２に示される。ヒトＶＥＧＦＲ１ Ｄ２－Ｄ３ドメインのアミノ酸配列は、配列番号１７３に示される。ＶＥＧＦＲ１は、膜受容体及び可溶性タンパク質の両方として産生される。可溶性ＶＥＧＦＲ１は、この因子に結合し、その膜受容体との相互作用を防止することによって、ＶＥＧＦＡの活性の負の調節因子として作用する。

【0081】

配列番号１７０、ヒトＶＥＧＦＲ１（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ１７９４８）
ＭＶＳＹＷＤＴＧＶＬＬＣＡＬＬＳＣＬＬＬＴＧＳＳＳＧＳＫＬＫＤＰＥＬＳＬＫＧＴＱＨＩＭＱＡＧＱＴＬＨＬＱＣＲＧＥＡＡＨＫＷＳＬＰＥＭＶＳＫＥＳＥＲＬＳＩＴＫＳＡＣＧＲＮＧＫＱＦＣＳＴＬＴＬＮＴＡＱＡＮＨＴＧＦＹＳＣＫＹＬＡＶＰＴＳＫＫＫＥＴＥＳＡＩＹＩＦＩＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＱＩＳＴＰＲＰＶＫＬＬＲＧＨＴＬＶＬＮＣＴＡＴＴＰＬＮＴＲＶＱＭＴＷＳＹＰＤＥＫＮＫＲＡＳＶＲＲＲＩＤＱＳＮＳＨＡＮＩＦＹＳＶＬＴＩＤＫＭＱＮＫＤＫＧＬＹＴＣＲＶＲＳＧＰＳＦＫＳＶＮＴＳＶＨＩＹＤＫＡＦＩＴＶＫＨＲＫＱＱＶＬＥＴＶＡＧＫＲＳＹＲＬＳＭＫＶＫＡＦＰＳＰＥＶＶＷＬＫＤＧＬＰＡＴＥＫＳＡＲＹＬＴＲＧＹＳＬＩＩＫＤＶＴＥＥＤＡＧＮＹＴＩＬＬＳＩＫＱＳＮＶＦＫＮＬＴＡＴＬＩＶＮＶＫＰＱＩＹＥＫＡＶＳＳＦＰＤＰＡＬＹＰＬＧＳＲＱＩＬＴＣＴＡＹＧＩＰＱＰＴＩＫＷＦＷＨＰＣＮＨＮＨＳＥＡＲＣＤＦＣＳＮＮＥＥＳＦＩＬＤＡＤＳＮＭＧＮＲＩＥＳＩＴＱＲＭＡＩＩＥＧＫＮＫＭＡＳＴＬＶＶＡＤＳＲＩＳＧＩＹＩＣＩＡＳＮＫＶＧＴＶＧＲＮＩＳＦＹＩＴＤＶＰＮＧＦＨＶＮＬＥＫＭＰＴＥＧＥＤＬＫＬＳＣＴＶＮＫＦＬＹＲＤＶＴＷＩＬＬＲＴＶＮＮＲＴＭＨＹＳＩＳＫＱＫＭＡＩＴＫＥＨＳＩＴＬＮＬＴＩＭＮＶＳＬＱＤＳＧＴＹＡＣＲＡＲＮＶＹＴＧＥＥＩＬＱＫＫＥＩＴＩＲＤＱＥＡＰＹＬＬＲＮＬＳＤＨＴＶＡＩＳＳＳＴＴＬＤＣＨＡＮＧＶＰＥＰＱＩＴＷＦＫＮＮＨＫＩＱＱＥＰＧＩＩＬＧＰＧＳＳＴＬＦＩＥＲＶＴＥＥＤＥＧＶＹＨＣＫＡＴＮＱＫＧＳＶＥＳＳＡＹＬＴＶＱＧＴＳＤＫＳＮＬＥＬＩＴＬＴＣＴＣＶＡＡＴＬＦＷＬＬＬＴＬＦＩＲＫＭＫＲＳＳＳＥＩＫＴＤＹＬＳＩＩＭＤＰＤＥＶＰＬＤＥＱＣＥＲＬＰＹＤＡＳＫＷＥＦＡＲＥＲＬＫＬＧＫＳＬＧＲＧＡＦＧＫＶＶＱＡＳＡＦＧＩＫＫＳＰＴＣＲＴＶＡＶＫＭＬＫＥＧＡＴＡＳＥＹＫＡＬＭＴＥＬＫＩＬＴＨＩＧＨＨＬＮＶＶＮＬＬＧＡＣＴＫＱＧＧＰＬＭＶＩＶＥＹＣＫＹＧＮＬＳＮＹＬＫＳＫＲＤＬＦＦＬＮＫＤＡＡＬＨＭＥＰＫＫＥＫＭＥＰＧＬＥＱＧＫＫＰＲＬＤＳＶＴＳＳＥＳＦＡＳＳＧＦＱＥＤＫＳＬＳＤＶＥＥＥＥＤＳＤＧＦＹＫＥＰＩＴＭＥＤＬＩＳＹＳＦＱＶＡＲＧＭＥＦＬＳＳＲＫＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＳＥＮＮＶＶＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＹＫＮＰＤＹＶＲＫＧＤＴＲＬＰＬＫＷＭＡＰＥＳＩＦＤＫＩＹＳＴＫＳＤＶＷＳＹＧＶＬＬＷＥＩＦＳＬＧＧＳＰＹＰＧＶＱＭＤＥＤＦＣＳＲＬＲＥＧＭＲＭＲＡＰＥＹＳＴＰＥＩＹＱＩＭＬＤＣＷＨＲＤＰＫＥＲＰＲＦＡＥＬＶＥＫＬＧＤＬＬＱＡＮＶＱＱＤＧＫＤＹＩＰＩＮＡＩＬＴＧＮＳＧＦＴＹＳＴＰＡＦＳＥＤＦＦＫＥＳＩＳＡＰＫＦＮＳＧＳＳＤＤＶＲＹＶＮＡＦＫＦＭＳＬＥＲＩＫＴＦＥＥＬＬＰＮＡＴＳＭＦＤＤＹＱＧＤＳＳＴＬＬＡＳＰＭＬＫＲＦＴＷＴＤＳＫＰＫＡＳＬＫＩＤＬＲＶＴＳＫＳＫＥＳＧＬＳＤＶＳＲＰＳＦＣＨＳＳＣＧＨＶＳＥＧＫＲＲＦＴＹＤＨＡＥＬＥＲＫＩＡＣＣＳＰＰＰＤＹＮＳＶＶＬＹＳＴＰＰＩ

【0082】

配列番号１７１（Ｉｇ様Ｄ２ドメイン）
ＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨ

【0083】

配列番号１７２（Ｉｇ様Ｄ３ドメイン）
ＩＤＶＱＩＳＴＰＲＰＶＫＬＬＲＧＨＴＬＶＬＮＣＴＡＴＴＰＬＮＴＲＶＱＭＴＷＳＹＰＤＥＫＮＫＲＡＳＶＲＲＲＩＤＱＳＮＳＨＡＮＩＦＹＳＶＬＴＩＤＫＭＱＮＫＤＫＧＬＹＴＣＲＶＲＳＧＰＳＦＫＳＶＮＴＳＶＨ

【0084】

配列番号１７３（Ｉｇ様Ｄ２－Ｄ３）
ＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＩＤＶＱＩＳＴＰＲＰＶＫＬＬＲＧＨＴＬＶＬＮＣＴＡＴＴＰＬＮＴＲＶＱＭＴＷＳＹＰＤＥＫＮＫＲＡＳＶＲＲＲＩＤＱＳＮＳＨＡＮＩＦＹＳＶＬＴＩＤＫＭＱＮＫＤＫＧＬＹＴＣＲＶＲＳＧＰＳＦＫＳＶＮＴＳＶＨ

【0085】

「特異的に結合する（specifically binds）」、「特異的結合（specific binding）」、「特異的に結合している（specifically binding）」、又は「結合する（binds）」とは、タンパク質性分子が、抗原又は抗原内のエピトープに、その他の抗原に対する親和性よりも高い親和性で結合することを指す。典型的には、タンパク質性分子は、約１×１０^－７Ｍ以下、例えば約５×１０^－８Ｍ以下、約１×１０^－８Ｍ以下、約１×１０^－９Ｍ以下、約１×１０^－１０Ｍ以下、約１×１０^－１１Ｍ以下、又は約１×１０^－１２Ｍ以下の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）で抗原又は抗原内のエピトープに結合し、典型的には、Ｋ_Ｄは、非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合についてのＫ_Ｄよりも少なくとも１００倍小さい。「Ｋ_Ｄ」という用語は、Ｋｄ対Ｋａ（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）の比から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指す。抗体のＫ_Ｄ値は、本開示を考慮して当該技術分野における方法を用いて決定することができる。例えば、抗体のＫ_Ｄは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用することによって、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムのバイオセンサシステムを使用することなどによって、又はＯｃｔｅｔ ＲＥＤ９６システムなどのバイオレイヤインターフェロメトリー技術を使用することによって、求めることができる。抗体のＫ_Ｄの値が小さいほど、抗体が標的抗原に結合する親和性が高い。

【0086】

本明細書で使用される場合、「ＶＥＧＦＲ１に結合する」又は「ＶＥＧＦＲ１に特異的に結合する」抗体は、１×１０^－７Ｍ以下、好ましくは、１×１０^－８Ｍ以下、より好ましくは５×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－１０Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫ_Ｄで、ＶＥＧＦＲ１、好ましくはヒトＶＥＧＦＲ１に結合する抗体を指す。

【0087】

いくつかの実施形態では、「ＶＥＧＦＲ１に結合する」又は「ＶＥＧＦＲ１に特異的に結合する」抗体又はその抗原結合断片は、１×１０^－７Ｍ以下のＫ_ＤでＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片を指す。特定の実施形態において、抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片は、好ましくは１×１０^－８Ｍ以下、より好ましくは５×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－１０Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫ_Ｄで、ヒトＶＥＧＦＲ１に特異的に結合する。

【0088】

本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、全抗体、ＶＥＧＦＲ１に特異的に結合する抗体断片、及びＶＥＧＦＲ１に特異的に結合するその抗原結合断片を含む。

【0089】

いくつかの実施形態では、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、全抗体又は全長抗体、Ｆｖ断片、一本鎖ｓｃＦｖ断片（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）_２、又は一本鎖抗体を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、全抗体又は全長抗体である。

【0090】

いくつかの実施形態では、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、ＶＥＧＦＲ１に特異的に結合する抗体断片又は抗原結合ドメインである。

【0091】

「全長抗体」、「全抗体」及び「インタクトな抗体」という用語は、本明細書において互換的に使用され、天然抗体に類似した構造を有する抗体を指す。「インタクト抗体」は、ジスルフィド結合により相互接続された、２本の重鎖（heavy chain、ＨＣ）及び２本の軽鎖（light chain、ＬＣ）、並びにこれらの多量体（例えばＩｇＭ）で構成される。各重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）、及び重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３からなる）で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（light chain constant region、ＣＬ）で構成される。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（framework region、ＦＲ）が散在しており相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）と呼称される超可変領域に更に細分化され得る。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲセグメントで構成される。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、５つの主要なクラス、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。どのような脊椎動物種の抗体軽鎖も、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの明確に異なるタイプ、すなわち、カッパ（κ）及びラムダ（λ）のうちの一方に割り当てることができる。

【0092】

本明細書で使用される場合、「抗体断片」及び「抗原結合断片」という用語は、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗原結合断片は、合成の、酵素的に入手可能な、又は遺伝子操作されたポリペプチドであってもよく、抗原に結合する免疫グロブリンの部分、例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ及びＦｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）_２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄａｂ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部から形成される多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、１つのＶＨドメイン又は１つのＶＬドメインからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）、サメ可変ＩｇＮＡＲドメイン、ラクダ化ＶＨドメイン、ＶＨＨドメイン、抗体のＣＤＲを模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位、例えば、ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４部分、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／又はＨＣＤＲ３並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３、抗原に結合する代替足場、二価ドメイン抗体、抗原結合断片を含む多重特異性タンパク質、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体断片を含む。

【0093】

「ｄＡｂ」又は「ｄＡｂ断片」は、ＶＨドメインで構成される抗体断片を指す（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４ ５４６（１９８９））。

【0094】

「Ｆａｂ」又は「Ｆａｂ断片」は、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、及びＣＬドメインで構成される抗体断片を指す。

【0095】

「Ｆ（ａｂ’）２」又は「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、ヒンジ領域内のジスルフィド架橋によって接続された２つのＦａｂ断片を含有する抗体断片を指す。

【0096】

「Ｆｄ」又は「Ｆｄ断片」は、ＶＨ及びＣＨ１ドメインで構成される抗体断片を指す。

【0097】

「Ｆｖ」又は「Ｆｖ断片」は、抗体の単一のアーム由来のＶＨドメイン及びＶＬドメインで構成される抗体断片を指す。Ｆｖ断片は、Ｆａｂ（ＣＨ１及びＣＬ）領域の定常領域を欠いている。Ｆｖ断片におけるＶＨ及びＶＬは、非共有結合性相互作用によって一緒に保持される。

【0098】

抗原結合断片（ＶＨ及びＶＬなど）は、合成リンカーを介して互いに連結して、ＶＨ／ＶＬドメインが分子内又は分子間で対合して一価の抗原結合ドメイン、例えば一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はダイアボディを形成し得る、様々な種類の一本鎖抗体設計を形成してもよい。組換え発現系にて、リンカーはペプチドリンカーであり、任意の天然に存在するアミノ酸を含み得る。リンカーに含まれ得る例示的なアミノ酸は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、及びＴｈｅである。リンカーは、ＶＥＧＦＲ１への結合などの所望の活性を保持するように、互いに対して正確な高次構造を形成するような方式でＶＨ及びＶＬを連結させるのに適切である長さを有している必要がある。リンカーは、約５～５０個のアミノ酸長であり得る。

【0099】

「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」は、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む少なくとも１つの抗体断片と、重鎖可変領域（ＶＨ）を含む少なくとも１つの抗体断片と、を含む融合タンパク質であり、ＶＬ及びＶＨは、ポリペプチドリンカーを介して連続的に連結され、一本鎖ポリペプチドとして発現することができる。本明細書で使用される場合、ｓｃＦｖは、ＶＬ及びＶＨ可変領域を、例えばポリペプチドのＮ末端及びＣ末端を基準として、いずれの順序で有してもよく、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含んでも、ＶＨ－リンカー－ＶＬを含んでもよい。

【0100】

二価又は二価一本鎖可変断片（ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｂｉ－ｓｃＦｖ）は、２つのｓｃＦｖを連結することによって操作され得る。「（ｓｃＦｖ）_２」又は「タンデムｓｃＦｖ」又は「ビスｓｃＦｖ」断片は、２つの軽鎖可変領域（ＶＬ）及び２つの重鎖可変領域（ＶＨ）を含む融合タンパク質を指し、２つのＶＬ領域及び２つのＶＨ領域は、ポリペプチドリンカーを介して連続的に連結されており、一本鎖ポリペプチドとして発現することができる。２つのＶＬ及び２つのＶＨは、ペプチドリンカーによって融合されて、二価分子ＶＬ_Ａ－リンカー－ＶＨ_Ａ－リンカー－ＶＬ_Ｂ－リンカー－ＶＨ_Ｂを形成して、２つの異なる抗原又はエピトープに同時に結合することができる２つの結合部位を形成する。（ｓｃＦｖ）２は、一本鎖ポリペプチドとして発現され得る。

【0101】

ＶＥＧＦＲ１に結合する本明細書で同定されたＶＨドメイン及びＶＬドメインのいずれも、ＶＨ－リンカー－ＶＬ又はＶＬ－リンカー－ＶＨ配向のいずれかのｓｃＦｖフォーマットで遺伝子操作され得る。本明細書において同定されるＶＨドメイン及びＶＬドメインのいずれも、ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨ、ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬ、ＶＨ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＬ、ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬ、ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨ、又はＶＬ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＨなどのｓｃ（Ｆｖ）_２構造を生成するために使用することができる。

【0102】

「ダイアボディ」は、それぞれがＶＨ及びＶＬドメインを含有する２つの鎖から形成される二価の二量体である。鎖内の２つのドメインは、鎖内二量体化を促進するには短すぎるリンカーによって分離されており、頭－尾配置で二量体化する２つの鎖をもたらす。リンカーは、五量体グリシンリッチリンカー（Ｇ４Ｓ）であり得る。

【0103】

「ＶＨＨ」は、重鎖の抗原結合ドメインで排他的に構成される単一ドメイン抗体又はナノボディを指す。ＶＨＨ単一ドメイン抗体は、従来のＦａｂ領域の重鎖のＣＨ１ドメイン及び軽鎖を欠いている。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、Ｆｖ断片、一本鎖ｓｃＦｖ断片（ｓｃＦｖ）、（ｓｃＦｖ）_２、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）_２、ダイアボディ、ＶＨＨ、ｄＡｂ、Ｆｄ、Ｆｖ、又は他の一本鎖抗体を含む。

【0104】

本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、ＶＥＧＦＲ１に特異的に結合するキメラ抗体、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体を含む。

【0105】

「ヒト抗体」とは、ヒト被検体に投与される場合に、最小の免疫応答を有するように最適化された抗体を指す。ヒト抗体の可変領域は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体が定常領域又は定常領域の一部を含む場合、その定常領域もヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト抗体の可変領域がヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られた場合、ヒト起源の配列に「由来する」重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。このような例示的な系は、ファージにディスプレイされたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するトランスジェニック非ヒト動物、例えばマウス又はラットである。「ヒト抗体」は、典型的には、ヒト抗体及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を得るために使用した系の違い、フレームワーク若しくはＣＤＲへの体細胞変異の導入若しくは置換の意図的な導入、又はこれらの両方により、ヒトで発現した免疫グロブリンと比較したときにアミノ酸の違いを含有する。

【0106】

典型的には、「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされているアミノ酸配列に対して、アミノ酸配列が少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である。場合によっては、「ヒト抗体」は、例えばＫｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７－８６に記載されるヒトフレームワーク配列分析に由来するコンセンサスフレームワーク配列、又は例えばＳｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７：３８５－９６及び国際公開第２００９／０８５４６２号に記載される、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれた合成ＨＣＤＲ３を含有し得る。少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種に由来する抗体は、「ヒト抗体」の定義には含まれない。

【0107】

自身のゲノムにヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座を保有するマウス、ラット、又はニワトリなどのトランスジェニック動物を使用して、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗原結合断片を作製することができ、これらは例えば、米国特許第６，１５０，５８４号、国際公開第１９９９／４５９６２号、国際公開第２００２／０６６６３０号、同第２００２／４３４７８号、同第２００２／０４３４７８号、及び同第１９９０／０４０３６号に記載されている。このような動物の内因的な免疫グロブリン遺伝子座を破壊又は欠失させてもよく、相同又は非相同組換えを使用して、導入染色体（transchromosome）を使用して、又はミニ遺伝子を使用して、少なくとも１つの完全な又は部分的なヒト免疫グロブリン遺伝子座を動物のゲノムに挿入してもよい。Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ（Ｗｏｒｌｄ Ｗｉｄｅ Ｗｅｂ：ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ．ｃｏｍ）、Ｈａｒｂｏｕｒ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｗｏｒｌｄ Ｗｉｄｅ Ｗｅｂ：ｈａｒｂｏｕｒａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．ｃｏｍ）、Ｏｐｅｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（ＯＭＴ）（Ｗｏｒｌｄ Ｗｉｄｅ Ｗｅｂ：ｏｍｔｉｎｃ．ｎｅｔ）、ＫｙＭａｂ（Ｗｏｒｌｄ Ｗｉｄｅ Ｗｅｂ：ｋｙｍａｂ．ｃｏｍ）、Ｔｒｉａｎｎｉ（Ｗｏｒｌｄ Ｗｉｄｅ Ｗｅｂ：ｔｒｉａｎｎｉ．ｃｏｍ）及びＡｂｌｅｘｉｓ（Ｗｏｒｌｄ Ｗｉｄｅ Ｗｅｂ：ａｂｌｅｘｉｓ．ｃｏｍ）などの会社は、選択された抗原に対するヒト抗体を提供することに携わり得る。

【0108】

非ヒト動物を免疫することによって生成されたＶＥＧＲＦ１に結合する抗体又はその抗原結合断片をヒト化してもよい。ヒトアクセプタフレームワークの選択を含む例示的なヒト化技術としては、ＣＤＲ移植（米国特許第５，２２５，５３９号）、ＳＤＲ移植（米国特許第６，８１８，７４９号）、リサーフェシング（Ｐａｄｌａｎ，（１９９１）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２８：４８９－４９９）、特異性決定残基リサーフェシング（米国特許出願公開第２０１０／０２６１６２０号）、ヒトフレームワーク適合（米国特許第８，７４８，３５６号）、又は超ヒト化（米国特許第７，７０９，２２６号）が挙げられる。これらの方法では、ＣＤＲの長さの類似性若しくはカノニカル構造の同一性、又はそれらの組み合わせに基づいて、親フレームワークに対する全体的な相同性に基づき選択され得るヒトフレームワークに、親抗体のＣＤＲ又はＣＤＲ残基のサブセットを移植する。

【0109】

ヒト化抗原結合ドメインは、国際公開第１０９０／００７８６１号及び同第１９９２／２２６５３号に記載されているものなどの技術により、変化させたフレームワーク支持残基を組み込んで結合親和性を保持することによって（復帰変異）、又はＣＤＲのいずれかに多様性を導入して、例えば抗原結合ドメインの親和性を改善することによって、所望の抗原に対するその選択性又は親和性を改善するように更に最適化してもよい。

【0110】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片が提供され、単離された抗体又はその抗原結合断片は、ＶＥＧＦＲ１に結合し、
ａ．それぞれ配列番号７、１７５、９、１０、１１、及び１２、
ｂ．それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、及び１２、
ｃ．それぞれ配列番号１３、１４、１５、１６、１７、及び１８、
ｄ．それぞれ配列番号１９、２０、２１、２２、２３、及び２４、
ｅ．それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０、
ｆ．それぞれ配列番号７１、１７６、７３、７４、７５、及び７６、
ｇ．それぞれ配列番号７１、７２、７３、７４、７５、及び７６、
ｈ．それぞれ配列番号７７、７８、７９、９０、８１、及び８２、
ｉ．それぞれ配列番号８３、８４、８５、８６、８７、及び８８、
ｊ．それぞれ配列番号８９、９０、９１、９２、９３、及び９４、
ｋ．それぞれ配列番号９５、１７７、９７、９８、９９、及び１００、
ｌ．それぞれ配列番号９５、９６、９７、９８、９９、及び１００、
ｍ．それぞれ配列番号１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、及び１０６、
ｎ．それぞれ配列番号１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、及び１１２、
ｏ．それぞれ配列番号１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、及び１１８、
ｐ．それぞれ配列番号１１９、１７８、１２１、１２２、アミノ酸配列ＬＮＳ、及び配列番号１２４、
ｑ．それぞれ配列番号１１９、１２０、１２１、１２２、アミノ酸配列ＬＮＳ、及び配列番号１２４、
ｒ．それぞれ配列番号１２５、１２６、１２７、１２８、アミノ酸配列ＦＮＦ、及び配列番号１３０、
ｓ．それぞれ配列番号１３１、１３２、１３３、１３４、アミノ酸配列ＹＤ、及び配列番号１３６、又は
ｔ．それぞれ配列番号１３７、１３８、１３９、１４０、アミノ酸配列ＦＮＳ、及び配列番号１４２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0111】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ配列番号７、１７５、９、１０、１１、及び１２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0112】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、及び１２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0113】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ配列番号１３、１４、１５、１６、１７、及び１８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0114】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ配列番号１９、２０、２１、２２、２３、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0115】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0116】

いくつかの実施形態では、本開示は、ＶＥＧＦＲ１に結合し、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0117】

本開示は更に、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
配列番号３１の重鎖可変領域（heavy chain variable region、ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（heavy chain complementarity determining region、ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号３２の軽鎖可変領域（light chain variable region、ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（light chain complementarity determining region、ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は配列番号３３のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号３２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は配列番号３４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号３５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は配列番号３６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号３７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は配列番号３８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号３７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は配列番号３９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号４０のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合断片が、配列番号３９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、配列番号４０のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含み、抗体又はその抗原結合断片は、ＶＥＧＦＲ１に結合する。

【0118】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号３１のＶＨ及び配列番号３２のＶＬ、
ｂ．配列番号３３のＶＨ及び配列番号３２のＶＬ、
ｃ．配列番号３４のＶＨ及び配列番号３５のＶＬ、
ｄ．配列番号３６のＶＨ及び配列番号３７のＶＬ、
ｅ．配列番号３８のＶＨ及び配列番号３７のＶＬ、
ｆ．配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬ、を含み、又は
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0119】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３１のＶＨ及び配列番号３２のＶＬを含む。

【0120】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号３３のＶＨ及び配列番号３２のＶＬを含む。

【0121】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号３４のＶＨ及び配列番号３５のＶＬを含む。

【0122】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号３６のＶＨ及び配列番号３７のＶＬを含む。

【0123】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号３８のＶＨ及び配列番号３７のＶＬを含む。

【0124】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬを含む。

【0125】

いくつかの実施形態では、本開示は更に、配列番号５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、及び６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0126】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５１のアミノ酸配列を含む単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0127】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５２のアミノ酸配列を含む単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0128】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５３のアミノ酸配列を含む単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0129】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0130】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５５のアミノ酸配列を含む単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0131】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0132】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0133】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0134】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0135】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0136】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ、
ｂ．配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ、
ｃ．配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ、
ｄ．配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号５７のアミノ酸配列を含むＬＣ、
ｅ．配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号５７のアミノ酸配列を含むＬＣ、又は
ｆ．配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＣ及び配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0137】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
それぞれ配列番号７、１７５、９、１０、１１、及び１２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
配列番号３１のＶＨ及び配列番号３２のＶＬ、並びに／又は
配列番号５１のＨＣ及び配列番号５２のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0138】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、及び１２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
配列番号３３のＶＨ及び配列番号３２のＶＬ、並びに／又は
配列番号５３のＨＣ及び配列番号５２のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0139】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
それぞれ配列番号１３、１４、１５、１６、１７、及び１８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
配列番号３４のＶＨ及び配列番号３５のＶＬ、並びに／又は
配列番号５４のＨＣ及び配列番号５５のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0140】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
それぞれ配列番号１９、２０、２１、２２、２３、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
配列番号３６のＶＨ及び配列番号３７のＶＬ、並びに／又は
配列番号５６のＨＣ及び配列番号５７のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0141】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
それぞれ配列番号１９、２０、２１、２２、２３、及び２４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
配列番号３８のＶＨ及び配列番号３７のＶＬ、並びに／又は
配列番号５８のＨＣ及び配列番号５７のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0142】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬ、並びに／又は
配列番号５９のＨＣ及び配列番号６０のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0143】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
配列番号３１のＶＨ及び配列番号３２のＶＬ、
配列番号５１のＨＣ及び配列番号５２のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0144】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
配列番号３３のＶＨ及び配列番号３２のＶＬ、
配列番号５３のＨＣ及び配列番号５２のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0145】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
配列番号３４のＶＨ及び配列番号３５のＶＬ、
配列番号５４のＨＣ及び配列番号５５のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0146】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
配列番号３６のＶＨ及び配列番号３７のＶＬ、
配列番号５６のＨＣ及び配列番号５７のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0147】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
配列番号３８のＶＨ及び配列番号３７のＶＬ、
配列番号５８のＨＣ及び配列番号５７のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0148】

いくつかの実施形態では、本開示は、単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬ、
配列番号５９のＨＣ及び配列番号６０のＬＣ、を含み、
ＶＥＧＦＲ１に結合する、抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0149】

いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合断片が、全長抗体である。いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその単離抗原結合ドメインは、抗体断片又は抗原結合断片である。

【0150】

保存的置換を有する相同抗体及びその抗原結合断片
抗体又はその抗原結合断片の誘導体、相同抗原結合ドメイン、機能的等価物、又はバリアントも、本開示の目的である。本開示の抗体は更に、本開示の抗体の可変ドメイン若しくは超可変ドメインのアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を有するポリペプチド、又は保存的置換を有するポリペプチドを含む、ＶＥＧＦＲ１に結合する開示された抗体又はその抗原結合断片の相同抗体、相同抗原結合ドメイン、機能的等価物又はバリアントを含む。本開示の相同抗体及び抗原結合ドメイン、機能的等価物又はバリアントは、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片の配列と十分な相同性を有し、ＶＥＧＦＲ１への結合を保持するか又は未改変抗体の活性の少なくとも１つを保持するために未改変抗ＶＥＧＦＲ１抗体と機能的に類似する。

【0151】

「抗体誘導体」、「相同抗原結合ドメイン」、「機能的等価物」又は「バリアント」という用語は、１つ以上のアミノ酸残基の１つ以上の変異、置換、欠失及び／又は付加を含む抗体を指す。このような付加、置換又は欠失は、分子中の任意の場所に位置し得る。いくつかのアミノ酸が添加、置換又は欠失されている場合、得られる抗体が少なくとも本発明の抗体の有利な特性を依然として有するという条件で、添加、置換又は欠失の任意の組み合わせを考慮することができる。

【0152】

本開示の配列は、上記の配列に対して少なくとも８０％の同一性又は相同性を有するアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施形態では、配列同一性は、本開示のＶＥＧＦＲ１に結合する抗原結合ドメインに対して約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％であってよい。ＶＥＧＦＲ１に結合する抗原結合ドメインのバリアントは、親抗原結合ドメインと比較したときに改善された機能的特性を保持するか又は有する限り、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗原結合ドメインに１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、又は２９個のアミノ酸置換を含み、本開示の範囲内である。ＶＥＧＦＲ１に結合する抗原結合ドメインの機能的等価物又はバリアントは、１つ以上のアミノ酸残基の１つ以上の欠失及び／又は付加を含む。このような付加、置換又は欠失は、分子中の任意の場所に位置し得る。いくつかのアミノ酸が添加、置換又は欠失されている場合、得られる抗体が少なくとも本発明の抗体の有利な特性を依然として有するという条件で、添加、置換又は欠失の任意の組み合わせを考慮することができる。

【0153】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３１のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号３２のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。

【0154】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３３のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号３２のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。

【0155】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３４のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号３５のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。

【0156】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３６のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号３７のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。

【0157】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３８のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号３７のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。

【0158】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号４０のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。

【0159】

本開示は更に、配列番号３９のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨ及び配列番号４０のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬを含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0160】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号４０のＶＬを含む。

【0161】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。

【0162】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨ及び配列番号４０のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬを含む。

【0163】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨ及び配列番号４０のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬを含む。

【0164】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号４０のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬを含む。

【0165】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号４０のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬを含む。

【0166】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨと、配列番号４０のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬとを含み、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0167】

本開示は更に、配列番号３９のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨ及び配列番号４０のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬを含み、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0168】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨと、配列番号４０のＶＬとを含み、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0169】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと、配列番号４０のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％）同一であるＶＬとを含み、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0170】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨと、配列番号４０のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬとを含み、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0171】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨと、配列番号４０のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬとを含み、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0172】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨと、配列番号４０のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬとを含み、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0173】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨと、配列番号４０のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬとを含み、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0174】

一部の実施形態において、本開示は更に、配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供し、抗体又はその抗原結合断片はＶＥＧＦＲ１に結合する。

【0175】

一部の実施形態では、本開示は更に、配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供し、抗体又はその抗原結合断片はＶＥＧＦＲ１に結合する。

【0176】

いくつかの実施形態では、本出願の単離された抗体又はその抗原結合断片が、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、又は配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）と、配列番号５２、配列番号５５、配列番号５７、又は配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）を含む。

【0177】

本開示は更に、配列番号５９のＨＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＨＣ及び配列番号６０のＬＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＬＣを含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0178】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５９のＨＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＨＣ及び配列番号６０のＬＣを含む。

【0179】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５９のＨＣ及び配列番号６０のＬＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＬＣを含む。

【0180】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５９のＨＣと少なくとも９５％同一であるＨＣ及び配列番号６０のＬＣと少なくとも９５％同一であるＬＣを含む。

【0181】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５９のＨＣと少なくとも９５％同一であるＨＣ及び配列番号６０のＬＣと少なくとも９９％同一であるＬＣを含む。

【0182】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５９のＨＣと少なくとも９９％同一であるＨＣ及び配列番号６０のＬＣと少なくとも９９％同一であるＬＣを含む。

【0183】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５９のＨＣと少なくとも９９％同一であるＨＣ及び配列番号６０のＬＣと少なくとも９５％同一であるＬＣを含む。

【0184】

本開示は更に、配列番号５９のＨＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＨＣ及び配列番号６０のＬＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＬＣを含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供し、抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。

【0185】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、配列番号５９のＨＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣとを含み、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0186】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、配列番号５９のＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％）同一であるＬＣとを含み、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む。

【0187】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、配列番号５９のＨＣと少なくとも９５％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９５％同一であるＬＣとを含み、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0188】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、配列番号５９のＨＣと少なくとも９５％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９９％同一であるＬＣとを含み、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0189】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、配列番号５９のＨＣと少なくとも９９％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９９％同一であるＬＣとを含み、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0190】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、配列番号５９のＨＣと少なくとも９９％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９５％同一であるＬＣとを含み、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。

【0191】

本開示は更に、配列番号５９のＨＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＨＣ及び配列番号６０のＬＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＬＣを含む、単離された抗体を提供し、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬを含む。

【0192】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、配列番号５９のＨＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣを含み、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬを含む。

【0193】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、配列番号５９のＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％）同一であるＬＣとを含み、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬを含む。

【0194】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、配列番号５９のＨＣと少なくとも９５％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９５％同一であるＬＣとを含み、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬを含む。

【0195】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、配列番号５９のＨＣと少なくとも９５％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９９％同一であるＬＣとを含み、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬを含む。

【0196】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、配列番号５９のＨＣと少なくとも９９％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９９％同一であるＬＣとを含み、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬを含む。

【0197】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、配列番号５９のＨＣと少なくとも９９％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９５％同一であるＬＣとを含み、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬを含む。

【0198】

「同一である」又は「同一性」パーセントという用語は、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列（例えば、抗ＶＥＧＦＲ１抗体及びそれをコードしているポリヌクレオチド）の文脈において、以下の配列比較アルゴリズムのうちの１つを使用して又は目視検査によって測定した場合、比較し、対応が最大になるようにアラインメントしたときに同じであるか、又は指定の百分率のアミノ酸残基若しくはヌクレオチドが同じである２つ以上の配列又はサブ配列を指す。参照ポリペプチドに対するパーセント（％）アミノ酸配列同一性は、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である所与の配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。２つの配列間の同一性パーセント（％）は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮した、配列により共有される同一の位置の数の関数（すなわち、同一性％＝同一の位置の数／位置の総数×１００）である。２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＢＬＡＳ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮなどの公的に利用可能なソフトウェアを使用して、当技術分野の技能の範囲内である様々なアルゴリズムを使用して決定することができる。ＧＣＧソフトウェアパッケージで利用可能なＧＡＰプログラム又はＭｅｇａｌｉｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）。

【0199】

ポリペプチドは、典型的には、第２ポリペプチドと実質的に同一であり、例えば、２つのペプチドは保存的置換によってのみ異なる。本開示の抗体は更に、結合特性、機能的特性又は物理的特性が直接変異によって改善されたものを含む。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗原結合ドメインのバリアントは、ＶＥＧＦＲ１に結合する親抗原結合断片の所望の機能的特性を保持しながら、ＣＤＲ領域のいずれかに１つ又は２つの保存的置換を含む。

【0200】

「保存的改変」は、アミノ酸修飾を含む抗体の結合特性に著しく影響を与えることも変化させることもないアミノ酸修飾を指す。保存的改変は、アミノ酸の置換、付加、及び欠失を含む。保存的アミノ酸置換は、あるアミノ酸が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられる置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、明確に定義されており、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン、トリプトファン）、芳香族側鎖（例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン、チロシン）、脂肪族側鎖（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン）、アミド（例えば、アスパラギン、グルタミン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び含硫黄側鎖（システイン、メチオニン）を有するアミノ酸を含む。更に、ポリペプチド中の任意の天然残基はまた、アラニンスキャニング変異誘発（ＭａｃＬｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｓｃａｎｄ Ｓｕｐｐｌ ６４３：５５－６７；Ｓａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ａｄｖ Ｂｉｏｐｈｙｓ ３５：１－２４）について以前に記載されているように、アラニンで置換され得る。本発明の抗体に対するアミノ酸置換は、既知の方法、例えばＰＣＲ突然変異誘発（米国特許第４，６８３，１９５号）により行うことができる。代替的に、バリアントのライブラリは、例えば、ランダムコドン（ＮＮＫ）又は非ランダムコドン（例えば、１１個のアミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）をコードするＤＶＫコドン）を用いて生成することもできる。得られるバリアントは、本明細書に記載のアッセイを用いて、その特徴について試験することができる。

【0201】

種交差反応性
いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片は、ヒト、マウス、ラット及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片は、本明細書に開示される抗ＶＥＧＦＲ１抗体に有意な価値を提供する同様の親和性でヒト、マウス、ラット及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合することができる種交差反応性抗体である。

【0202】

いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片は、ヒト及びマウスＶＥＧＦＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片は、ヒト及びラットＶＥＧＦＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片は、ヒト、マウス及びラットＶＥＧＦＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片は、ヒト、マウス、及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片は、ヒト、ラット及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＶＥＧＦＲ１に結合する。

【0203】

抗体の種交差反応性の程度を定量化する１つの方法は、別の種の抗原と比較した１つの種の抗原に対するその親和性の倍数差、例えば、ヒトＶＥＧＦＲ１対マウスＶＥＧＦＲ１、対ラットＶＥＧＦＲ１、又は対カニクイザルＶＥＧＦＲ１に対する親和性の倍数差である。親和性は、本明細書の他の箇所に記載されるように、ＳＰＲによって決定される抗体－抗原反応の平衡解離定数を指すＫ_Ｄとして定量化され得る。種交差反応性抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、５００倍以下、２５０倍以下、１００倍以下、５０倍以下、２５倍以下、１０倍以下、又は５倍以下である、ヒト及びマウスＶＥＧＦＲ１、ヒト及びラットＶＥＧＦＲ１、又はヒト及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１への結合に対する親和性の倍数差を有し得る。別の言い方をすれば、ヒトＶＥＧＦＲ１への結合のＫ_Ｄは、マウス、ラット、又はカニクイザルＶＥＧＦＲ１への結合のＫ_Ｄの５００倍、２５０倍、１００倍、５０倍、２５倍、１０倍、又は５倍以内であり得る。いくつかの実施形態では、ヒトＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、ヒトに対する親和性よりも５００倍弱い親和性以下（例えばヒトＶＥＧＦＲ１に対する親和性よりも５００倍、２５０倍、１００倍、５０倍、２５倍、１０倍又は５倍弱い親和性以下）で、マウス、ラット又はカニクイザルに結合し得る。いくつかの実施形態では、ヒトＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、ヒトに対する親和性よりも５００倍強い親和性以下（例えばヒトＶＥＧＦＲ１に対する親和性よりも５００倍、２５０倍、１００倍、５０倍、２５倍、１０倍又は５倍強い親和性以下）で、マウス、ラット又はカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合し得る。抗体は更に、２つの異なる種の抗原への結合についてＫ_Ｄが閾値を満たす場合（例えば、ヒトＶＥＧＦＲ１への結合のＫ_Ｄ及びマウス、ラット又はカニクイザルＶＥＧＦＲ１への結合のＫ_Ｄが１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下である場合）、交差反応性であるとみなすことができる。Ｋ_Ｄは、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、２ｎＭ以下又は１ｎＭ以下であってもよい。Ｋ_Ｄは、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、又は０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、０．００１ｎＭ以下であってもよい。

【0204】

ヒトＶＥＧＦＲ１及びマウス、ラット又はカニクイザルＶＥＧＦＲ１への結合について交差反応性の代替的尺度は、ＶＥＧＦＡ結合又はＰｌＧＦ結合などのＶＥＧＲ１へのリガンド結合を遮断する抗体の能力である。種交差反応性抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、マウス、ラット又はカニクイザルへのＶＥＧＦＡの結合又はＰｌＧＦの結合を遮断するためのＩＣ５０の２５倍、２０倍、１５倍、１０倍又は５倍以内である、ヒトＶＥＧＦＲ１へのＶＥＧＦＡ結合又はＰｌＧＦ結合を遮断するためのＩＣ５０を有し得る。別の代替として、種交差反応性抗体は、動物における循環若しくは組織ＶＥＧＦＡ又は循環若しくは組織ＰｌＧＦレベルを調節する能力を有し得る。例えば、ヒトＶＥＧＦＲ１に結合する抗体は、マウス、ラット及び／又はカニクイザルにおける循環若しくは組織ＶＥＧＦＡ又はＰｌＧＦレベルを調節し得る。

【0205】

種交差反応性抗体は、いくつかの種にわたる翻訳研究を可能にし、開発段階において代替抗体を必要とせずに、確立された前臨床疾患モデルにおいて有効性及び薬力学特性を実証するのに役立ち得る。報告された初期の抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、ヒト又はマウスのいずれかに特異的であり、不十分な種交差反応性を示した。

【0206】

種交差反応性であり、ヒトと他種との間で保存されているエピトープに結合するモノクローナル抗体を生成することは困難である。本開示の種交差反応性抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、（１）ＶＥＧＦＲ１ Ｄ２及びＤ３ドメインを含むヒト及びマウスＶＥＧＦＲ１抗原の両方の選択、（２）系統発生学的に離れた免疫化種であるニワトリの選択、（３）ヒトＶＥＧＦＲ１ Ｄ２－Ｄ３とマウスＶＥＧＦＲ１ Ｄ２－Ｄ３との間で交互に行う免疫化ブースト、並びに（４）ヒト及びマウスＶＥＧＦＲ１の両方に対する反応性を示す血清力価の注意深いモニタリング及び選択を含む固有の免疫化アプローチを介して生成された。

【0207】

いくつかの実施形態では、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、ヒトＶＥＧＦＲ１（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ１７９４８）のアミノ酸残基１３０～３３１の配列内のエピトープに結合することができる。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＶＥＧＦＲ １抗体は、配列番号１７３内のエピトープを認識して結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＶＥＧＦＲ １抗体は、配列番号４内のエピトープを認識して結合する。

【0208】

いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦＲ１は、配列番号１４３（ＦＰＬＤＴＬ）及び配列番号１４４（ＥＩＧＬ）に記載のＶＥＧＦＲ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、配列番号１４４に記載のＶＥＧＦＲ１上のエピトープに結合する。

【0209】

いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＶＥＧＦＲ１に特異的に結合し、カニクイザル、マウス、及びラットからなる群から選択される少なくとも１つの非ヒト種由来のＶＥＧＦＲ１に特異的に結合することもできる。特定の実施形態では、本出願の単離された抗体又はその抗原結合断片が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用することで決定される、６×１０^－８Ｍ以下、特に１×１０^－８Ｍ以下、より具体的には５×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－１０Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫ_Ｄで、ヒトＶＥＧＦＲ１、マウスＶＥＧＦＲ１、及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１に特異的に結合する。

【0210】

「エピトープ」とは、抗体が特異的に結合する抗原の一部分を指す。エピトープは、典型的には、化学的に活性な（極性、非極性、又は疎水性など）部分の表面集団、例えばアミノ酸又は多糖側鎖からなり、特定の三次元構造特性並びに特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、立体配座的な空間単位を形成する連続的な、かつ／又は不連続的なアミノ酸で構成され得る。不連続なエピトープでは、抗原の直鎖配列の異なる部分にあるアミノ酸が、タンパク質分子の折り畳みにより三次元空間でごく近接するようになる。

【0211】

「パラトープ」は、抗原に特異的に結合する抗体の部分を指す。パラトープは元来線状であっても又は不連続であってもよく、一つながりの線状のアミノ酸よりも、抗体の隣接していないアミノ酸同士の空間関係によって形成されてよい。「軽鎖パラトープ」及び「重鎖パラトープ」又は「軽鎖パラトープのアミノ酸残基」及び「重鎖パラトープのアミノ酸残基」はそれぞれ、抗原と接触する抗体の軽鎖残基及び重鎖残基を指し、あるいは概して「抗体パラトープ残基」は、抗原と接触するこれらの抗体アミノ酸を指す。

【0212】

抗体が結合するｈＶＥＧＦＲ１内の残基の決定は、通常の当業者に公知の任意の技術によって決定され得る。いくつかの実施形態では、抗体が結合するｈＶＥＧＦＲ１内の残基は、Ｈ／Ｄ交換アッセイによって決定される。Ｈ／Ｄ交換アッセイでは、組換え的に発現させたｈＶＥＧＦＲ１を、抗体の存在又は非存在下、重水素化水中で、所定の時間にわたってインキュベートすると、抗体によって保護されていない交換可能な水素原子で重水素の組み込みが生じ、続いて、タンパク質のプロテアーゼ消化及びＬＣ－ＭＳを使用するペプチド断片の分析を行う。Ｈ／Ｄ交換アッセイは、既知のプロトコルを使用して行うことができる。いくつかの実施形態では、クエンチング緩衝液（例えば、８Ｍ尿素、１Ｍ ＴＣＥＰ、ｐＨ３．０）の添加によってＨ／Ｄ交換混合物をクエンチした後、室温で、平衡化された固定化ペプシン／ＦＰＸＩＩＩカラムに通す（例えば、６００μＬ／分）。次いで、消化性断片を逆相トラップカラムにロードし（例えば、６００μＬ／分）し、脱塩し（例えば、６００μＬで１分間）し、分離し（例えば、Ｃ１８カラム）、質量分析によって分析する（例えば、キャピラリー温度２７５℃、分解能１５０，０００、及び質量範囲（ｍ／ｚ）３００～１，８００で、ＬＴＱ（商標）Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｆｕｓｉｏｎ Ｌｕｍｏｓ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いる）。

【0213】

ＶＥＧＦＲ１へのＶＥＧＦＡ結合を遮断する抗体
いくつかの実施形態では、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、ＶＥＧＦＲ１のＤ２－Ｄ３ドメイン中のエピトープを認識して結合し、血管内皮増殖因子Ａ（ＶＥＧＦＡ）の結合を防止することができる。

【0214】

腎臓において、糸球体足細胞及び尿細管上皮細胞によって作られるＶＥＧＦＡは、糸球体の完全性、腎臓の微小血管系、及び機能を維持するのに不可欠である。腎臓の発達、構造及び機能におけるＶＥＧＦＡの重要な役割は、条件的又は誘導性ＶＥＧＦＡノックアウト（ＫＯ）マウスにおいて観察される重篤な表現型において明らかにされる。慢性腎疾患（ＣＫＤ）患者において、患者の腎生検のｍＲＮＡマイクロアレイ分析は、減少したＶＥＧＦＡ発現を示し、糸球体及び尿細管間質におけるＶＧＦＡ発現のレベルは、ｅＧＦＲ、タンパク尿症又は血管希薄化と相関する（Ｂｏｒｔｏｌｏｓｏ，Ｄｅｌ Ｐｒｅｔｅ ｅｔ ａｌ．２００４，Ｍａｒｔｉｎｉ，Ｎａｉｒ ｅｔ ａｌ．２０１４，Ｐａｎ，Ｊｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１８）。ＶＥＧＦＡは、２つの内皮制限受容体：１）主要シグナル伝達受容体ＶＥＧＦＲ２、及び２）デコイ受容体ＶＥＧＦＲ１を介して機能し、デコイ受容体ＶＥＧＦＲ１は、１０倍高い結合親和性でＶＥＧＦＲ２からＶＥＧＦＡを隔離するが、弱い又は検出不可能なチロシンキナーゼ活性（ＴＫ）を有する。本開示の抗ＶＥＧＦＲ１は、そのデコイ受容体ＶＥＧＦＲ１によるＶＥＧＦＡの隔離を遮断することによって、腎臓における損なわれたＶＥＧＦＡレベル及びＶＥＧＦＡ活性を回復させることを目的とする。本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、ＶＥＧＦＡ隔離を遮断し、局所ＶＥＧＦＡ利用可能性を増加させ、これは次に、内皮保護、糸球体濾過バリア（ＧＦＢ）の保存及び腎機能回復を可能にする。

【0215】

コンジュゲーション及びＦｃ操作
上記の改変に加えて、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片及びそれらの機能的等価物は、他の抗体、タンパク質、抗原結合断片又は代替足場にコンジュゲートされてもよい。

【0216】

本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体、その抗原結合断片、及び機能的等価物は、半減期延長部分にコンジュゲートされてもよい。例示的な半減期延長部分は、アルブミン、アルブミンバリアント、アルブミン結合タンパク質及び／又はドメイン、トランスフェリン並びにその断片及び類似体、免疫グロブリン（Ｉｇ）又はその断片、例えばＦｃ領域である。前述の半減期延長部分のアミノ酸配列は既知である。本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体、その抗原結合断片、及び機能的等価物にコンジュゲートさせることができる追加の半減期延長部分としては、所望の特性のための、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子、例えば、ＰＥＧ５０００又はＰＥＧ２０，０００、異なる鎖長の脂肪酸及び脂肪酸エステル、例えば、ラウリン酸エステル、ミリスチン酸エステル、ステアリン酸エステル、アラキジン酸エステル、ベヘン酸エステル、オレイン酸エステル、アラキドン酸エステル、オクタン二酸、テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサン二酸など、ポリリジン、オクタン、炭水化物（デキストラン、セルロース、オリゴ糖又は多糖類）が挙げられる。これらの部分は、本開示の抗体又は抗原結合断片と直接融合させてもよく、標準的なクローニング及び発現技術によって生成されてもよい。代替的に、周知の化学的カップリング方法を使用して、組換えで産生された本開示の抗体又は抗原結合断片にその部分を結合させてもよい。

【0217】

例えば、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又は抗原結合断片のＣ末端にシステイン残基を組み込むか、又は遺伝子操作してシステインをＶＥＧＦＲ１結合部位から離れる方向に面する残基位置にし、周知の方法を用いてペギル基をシステインに結合させることによって、ＶＥＧＦＲ１を結合する抗体又はその抗原結合断片にペギル部分をコンジュゲートさせることができる。

【0218】

いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、アルブミンである。

【0219】

いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、アルブミン結合ドメインである。

【0220】

いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、トランスフェリンである。

【0221】

いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、ポリエチレングリコールである。

【0222】

いくつかの実施形態では、コンジュゲーションは、検出可能な受容体分子へのコンジュゲーションを更に含むが、これらに限定されない。

【0223】

いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片である。

【0224】

いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、Ｉｇである。

【0225】

いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、Ｉｇの断片である。

【0226】

いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、Ｉｇ定常領域である。

【0227】

いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、Ｉｇ定常領域の断片である。

【0228】

いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、Ｆｃ領域である。

【0229】

本開示の抗体又はその抗原結合断片中に存在するＦｃ領域などのＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、任意のアロタイプ又はアイソタイプ（すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＥ）のものであり得る。

【0230】

いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１アイソタイプである。

【0231】

いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ２アイソタイプである。

【0232】

いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ３アイソタイプである。

【0233】

いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ４アイソタイプである。

【0234】

アロタイプは結合又はＦｃ媒介性エフェクター機能などのＩｇ定常領域の特性に影響を与えないことが予想される。断片のＩｇ定常領域を含む治療用タンパク質の免疫原性は、輸注反応のリスク増大及び治療応答の期間短縮と関連している（Ｂａｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３４８：６０２－０８）。断片のＩｇ定常領域を含む治療用タンパク質が宿主において免疫応答を誘導する程度は、Ｉｇ定常領域のアロタイプによってある程度決定され得る（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １２：２１３－２１）。Ｉｇ定常領域のアロタイプは、抗体の定常領域配列における特定の位置のアミノ酸配列の変異に関連する。

【0235】

本開示の抗体又はその抗原結合断片及びそれらの機能的等価物は、抗体又は抗原結合断片のエフェクター機能、例えばＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及び／若しくはＡＤＣＰ並びに／又は薬物動態特性を調節するために、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートされてもよい。これは、変異したＦｃの活性化ＦｃγＲｓ（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩ）、ＦｃγＲＩＩｂ、及び／又はＦｃＲｎへの結合を制御する変異をＦｃに導入することによって達成可能である。

【0236】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片に少なくとも１つの変異を含むＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートされる。

【0237】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの変異は、Ｆｃ領域にある。

【0238】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ領域に少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の変異を含むＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートされる。

【0239】

新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、ＩｇＧの細胞輸送及び血清半減期において中心的な役割を果たす。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、抗体又は抗原結合断片のＦｃＲｎへの結合を調節し、抗体又は抗原結合断片の半減期を調節するＦｃ領域における少なくとも１つの変異を含むＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートされる。

【0240】

いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片は、単離された抗体又はその抗原結合断片の半減期を調節する少なくとも１つの変異を含む。

【0241】

半減期（例えば、ＦｃＲｎへの結合）を調節するために変異させることが可能なＦｃの位置としては、位置２５０、２５２、２５３、２５４、２５６、２５７、３０７、３７６、３８０、４２８、４３４、及び４３５が挙げられる。単独で、又は組み合わせで行われ得る例示的な変異は、変異Ｔ２５０Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、Ｉ２５３Ａ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｐ２５７Ｉ、Ｔ３０７Ａ、Ｄ３７６Ｖ、Ｅ３８０Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｈ４３３Ｋ、Ｎ４３４Ｓ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、Ｈ４３５Ａ、及びＨ４３５Ｒである。抗体の半減期を増加させるように行われ得る例示的な単独で又は組み合わせでの変異は、変異Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ及びＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａである。いくつかの実施形態では、本開示の抗体又はその抗原結合断片及びそれらの機能的等価物の半減期を調節する少なくとも１つの変異は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ、及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基番号付けは、ＥＵインデックスに従う。

【0242】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ変異を含むＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートされる。

【0243】

いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片及びそれらの機能的等価物は、活性化Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）へのタンパク質の結合を低減し、及び／又はＣ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、若しくは貪食作用（ＡＤＣＰ）などのＦｃエフェクター機能を低減する、Ｆｃ領域における少なくとも１つの変異を含むＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートされる。

【0244】

活性化ＦｃγＲへのタンパク質の結合を低減させ、続いて、エフェクター機能を低減させるために変異させ得るＦｃ位置としては、位置２１４、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２６５、２６７、２６８、２７０、２９５、２９７、３０９、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、及び３６５が挙げられる。単独で、又は組み合わせで行われ得る例示的な変異は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４における、変異Ｋ２１４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｇ２３６の欠失、Ｖ２３４Ａ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｑ２６８Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ｐ３２９Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｑ２９５Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３２７Ｓ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓである。ＡＤＣＣが低減したタンパク質をもたらす例示的な組み合わせの変異は、ＩｇＧ１におけるＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、ＩｇＧ１におけるＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、ＩｇＧ２におけるＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ４におけるＦ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、ＩｇＧ４におけるＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、全てのＩｇアイソタイプにおけるＮ２９７Ａ、ＩｇＧ２におけるＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、ＩｇＧ１におけるＫ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、ＩｇＧ２におけるＨ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ１におけるＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、ＩｇＧ１におけるＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、ＩｇＧ１におけるＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ４におけるＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ、及び、ＩｇＧ４におけるＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓの変異である。また、ＩｇＧ２由来の残基１１７～２６０及びＩｇＧ４由来の残基２６１～４４７を有するＦｃなどのハイブリッドＩｇＧ２／４ Ｆｃドメインを使用してもよい。

【0245】

いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１重鎖定常領域又はＩｇＧ１重鎖定常領域の断片にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、ＦｃγＲに対する抗体の結合の低減をもたらす少なくとも１つの変異を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲへの低減された抗体結合をもたらす少なくとも１つの変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ、及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基番号付けは、ＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む。いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、若しくはＦｃγＲＩＩＩ、又はそれらの任意の組み合わせである。

【0246】

いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片及びそれらの機能的等価物は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）へのタンパク質の結合を増強し、並びに／又はＣ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び／若しくは貪食作用（ＡＤＣＰ）などのＦｃエフェクター機能を増強する、Ｆｃ領域における少なくとも１つの変異を含むＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートされる。

【0247】

タンパク質の活性化ＦｃγＲへの結合を増加させる、及び／又はＦｃエフェクター機能を増強するために変異させ得るＦｃ位置としては、位置２３６、２３９、２４３、２５６，２９０，２９２、２９８、３００、３０５、３１２、３２６、３３０、３３２、３３３、３３４、３４５、３６０、３３９、３７８、３９６、又は４３０（ＥＵインデックスに従う残基番号付け）が挙げられる。単一で又は組み合わせて行われ得る例示的な変異は、Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ｆ２４３Ｌ、Ｔ２５６Ａ、Ｋ２９０Ａ、Ｒ２９２Ｐ、Ｓ２９８Ａ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｌ、Ｋ３２６Ａ、Ａ３３０Ｋ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ａ３３９Ｔ及びＰ３９６Ｌである。ＡＤＣＣ又はＡＤＣＰが増加したタンパク質をもたらす例示的な組み合わせの変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅである。

【0248】

ＣＤＣを増強させるように変異され得るＦｃ位置としては、位置２６７、２６８、３２４、３２６、３３３、３４５及び４３０が挙げられる。単一で又は組み合わせで行われ得る例示的な変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｆ１２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｋ３２６Ａ、Ｋ３２６Ｗ、Ｅ３３３Ａ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ及びＥ４３０Ｔである。ＣＤＣが増加したタンパク質をもたらす例示的な組み合わせの変異は、Ｋ３２６Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ａ、Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ、Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ、Ｓ２６７Ｅ／Ｓ３２４Ｔ、及びＳ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔである。

【0249】

いくつかの実施形態では、本開示は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む単離された抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えばＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0250】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬを含む単離された抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0251】

いくつかの実施形態では、配列番号３９のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨと配列番号４０のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0252】

本開示は更に、配列番号３９のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるＶＨ及び配列番号４０のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるＶＬを含む単離された抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0253】

いくつかの実施形態では、配列番号３９のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％）同一であるＶＨと、配列番号４０のＶＬとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0254】

いくつかの実施形態では、配列番号３９のＶＨと、配列番号４０のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％）同一であるＶＬとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0255】

いくつかの実施形態では、配列番号３９のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨと、配列番号４０のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0256】

いくつかの実施形態では、配列番号３９のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨと、配列番号４０のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0257】

いくつかの実施形態では、配列番号３９のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨと、配列番号４０のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0258】

いくつかの実施形態では、配列番号３９のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨと、配列番号４０のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0259】

いくつかの実施形態では、本開示は更に、配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む単離された抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又はその抗原結合断片がＶＥＧＦＲ１に結合し、抗体又はその抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0260】

いくつかの実施形態では、本開示は更に、配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む単離された抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又はその抗原結合断片がＶＥＧＦＲ１に結合し、抗体又はその抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0261】

本開示は更に、配列番号５９のＨＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるＨＣと配列番号６０のＬＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるＬＣとを含む単離された抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0262】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％）同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0263】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％）同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0264】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも９５％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９５％同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0265】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも９５％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９９％同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0266】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも９９％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９９％同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0267】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも９９％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９５％同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0268】

本開示は更に、配列番号５９のＨＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるＨＣ及び配列番号６０のＬＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるＬＣを含む単離された抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0269】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％）同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0270】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％）同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0271】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも９５％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９５％同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0272】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも９５％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９９％同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0273】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも９９％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９９％同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0274】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも９９％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９５％同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0275】

本開示は更に、配列番号５９のＨＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるＨＣ及び配列番号６０のＬＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるＬＣを含む単離された抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬを含み、抗体又は抗原結合断片は、ＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、単離された抗体又はその抗原結合断片を提供する。

【0276】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％）同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと配列番号４０のＶＬとを含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0277】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％）同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと配列番号４０のＶＬとを含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0278】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも９５％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９５％同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと配列番号４０のＶＬとを含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0279】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも９５％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９９％同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと配列番号４０のＶＬとを含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0280】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも９９％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９９％同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと配列番号４０のＶＬとを含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0281】

いくつかの実施形態では、配列番号５９のＨＣと少なくとも９９％同一であるＨＣと、配列番号６０のＬＣと少なくとも９５％同一であるＬＣとを含み、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片であって、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９のＶＨと配列番号４０のＶＬとを含み、抗体又は抗原結合断片がＩｇＧ１（例えば、ＩｇＧ１λ）であり、任意選択で、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含み、例えば、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片が以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む、抗体又はその抗原結合断片である。

【0282】

ポリヌクレオチド
本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又は抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド及びそれらの機能的等価物も提供される。本開示は、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片のいずれかをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0283】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３１のＶＨをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0284】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３３のＶＨをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0285】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３４のＶＨをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0286】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３６のＶＨをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0287】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３８のＶＨをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0288】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３９のＶＨをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0289】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３２のＶＬをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0290】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３５のＶＬをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0291】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３７のＶＬをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0292】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号４０のＶＬをコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0293】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５１の重鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0294】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５３の重鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0295】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５４の重鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0296】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５６の重鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0297】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５８の重鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0298】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５９の重鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0299】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５２の軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0300】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５５の軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0301】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５７の軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0302】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号６０の軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0303】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号５９及び６０のポリヌクレオチド配列をコードする、単離されたポリヌクレオチド配列を提供する。

【0304】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、又は７０の単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0305】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、又は７０のポリヌクレオチド配列と少なくとも８０％（例えば少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるポリヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0306】

本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又は抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドは、本開示のポリヌクレオチドの核酸配列と実質的に同じ核酸配列を有するポリヌクレオチドを含む。「実質的に同じ」核酸配列は、本明細書において、２つの配列を整列させた場合に別の核酸配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列として本明細書で定義される。第１核酸によりコード化されるポリペプチドが、第２核酸によりコード化されるポリペプチドと免疫学的に交差反応性である場合、２つの核酸配列は実質的に同一である。２つの核酸配列が実質的に同一である別の指標は、２つの分子がストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることである。

【0307】

修飾ヌクレオチドを使用して、本開示のポリヌクレオチドを生成することができる。例示的な修飾ヌクレオチドは、５－フルオロウラシル、５－ブロモウラシル、５－クロロウラシル、５－ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４－アセチルシトシン、５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン、５－カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、Ｎ^６－置換アデニン、７－メチルグアニン、５－メチルアミノメチルウラシル、５－メトキシアミノメチル－２－チオウラシル、ベータ－Ｄ－マンノシルキューオシン、５”－メトキシカルボキシメチルウラシル、５－メトキシウラシル、２－メチルチオ－Ｎ^６－イソペンテニルアデニン、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトシン、シュードウラシル、キューオシン、ベータ－Ｄ－ガラクトシルキューオシン、イノシン、Ｎ^６－イソペンテニルアデニン、１－メチルグアニン、１－メチルイノシン、２，２－ジメチルグアニン、２－メチルアデニン、２－メチルグアニン、３－メチルシトシン、５－メチルシトシン、２－チオシトシン、５－メチル－２－チオウラシル、２－チオウラシル、４－チオウラシル、５－メチルウラシル、ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル、３－（３－アミノ－３－Ｎ－２－カルボキシプロピル）ウラシル、及び２，６－ジアミノプリンである。

【0308】

抗ＶＥＧＦＲ１抗体をコードするポリヌクレオチドを含むベクター
本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又は抗原結合断片をコードするＤＮＡを含むベクターも提供される。開示されるベクターは、例えば、上記で開示される抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片のいずれかを作製するために使用することができる。本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片のいずれかをコードするポリヌクレオチドは、標準的な分子生物学的方法を使用してベクターに組み込まれてもよい。

【0309】

いくつかの実施形態では、本開示は、本発明のポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。このようなベクターは、プラスミドベクター、ウイルスベクター、バキュロウイルス発現用ベクター、トランスポゾンベースのベクター、又は任意の手段によって所与の生物又は遺伝的バックグラウンドに本発明の合成ポリヌクレオチドを導入するのに好適な任意の他のベクターであってよい。本開示のベクターは、ＶＥＧＦＲ１抗体ポリペプチドの効率的な合成、並びに酵母及び哺乳動物細胞培養を含むがこれらに限定されない原核生物系及び真核生物系における本開示のＶＥＧＦＲ１抗体ポリペプチドの発現のための発現ベクターであってもよい。

【0310】

使用され得る例示的なベクターは、細菌：ｐＢｓ、ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔ、ＰｓｉＸ１７４、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ、ｐＢｓ ＫＳ、ｐＮＨ８ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８ａ、ｐＮＨ４６ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）；ｐＴｒｃ９９Ａ、ｐＫＫ２２３－３、ｐＫＫ２３３－３、ｐＤＲ５４０、及びｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）。真核生物：ｐＷＬｎｅｏ、ｐＳＶ２ｃａｔ、ｐＯＧ４４、ＰＸＲ１、ｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ及びｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｐＥＥ６．４（Ｌｏｎｚａ）並びにｐＥＥ１２．４（Ｌｏｎｚａ）である。追加のベクターとしては、ｐＵＣシリーズ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｌｅｎ Ｂｕｒｎｉｅ，Ｍｄ．）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔシリーズ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、ＬａＪｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．）、ｐＥＴシリーズ（Ｎｏｖａｇｅｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、ｐＧＥＸシリーズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、及びｐＥＸシリーズ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．）が挙げられる。λＧＴ１０、λＧＴ１１、λＥＭＢＬ４、及びλＮＭ１１４９、λＺａｐＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）などのバクテリオファージベクターを使用することができる。例示的な植物発現ベクターとしては、ｐＢＩ０１、ｐＢＩ０１．２、ｐＢＩ１２１、ｐＢＩ１０１．３、及びｐＢＩＮ１９（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。例示的な動物発現ベクターとしては、ｐＥＵＫ－Ｃｌ、ｐＭＡＭ、及びｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。発現ベクターは、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクター、例えば、ガンマレトロウイルスベクターであり得る。

【0311】

本開示のベクターは、プロモータ及びエンハンサ配列を含有し得る。本開示のＶＥＧＦＲ１結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、ＶＥＧＦＲ１結合タンパク質の発現を確実にする発現ベクター中の制御配列に動作可能に連結され得る。そのような調節エレメントとしては、転写プロモータ、好適なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、並びに転写及び翻訳の終了を制御する配列を挙げることができる。発現ベクターは更に、１つ以上の非転写エレメント、例えば、複製起点、発現する遺伝子に連結された好適なプロモータ及びエンハンサ、他の５’若しくは３’隣接非転写配列、５’若しくは３’非翻訳配列（例えば、必須リボソーム結合部位）、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプタ部位、又は転写終結配列を含んでもよい。宿主において複製する能力を付与する複製の起点もまた、組み込まれ得る。

【0312】

本開示のベクターはまた、１つ又は２つ以上の内部リボソーム侵入部位（Internal Ribosome Entry Site、ＩＲＥＳ）を含有してもよい。ＩＲＥＳ配列を融合ベクターに含めることは、一部のタンパク質の発現を増強させるのに有益であり得る。いくつかの実施形態では、ベクター系は、１つ又は２つ以上のポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０）を含み、その部位は、前述の核酸配列のうちいずれかの上流又は下流にあってもよい。ベクターの成分は、近接して連結されてもよいか、又は遺伝子産物を発現させるのに最適な間隔を提供するように（すなわち、ＯＲＦ間に「スペーサー」ヌクレオチドを導入することにより）配置されてもよいか、又は別の方式で位置付けられてもよい。また、調節エレメント、例えば、ＩＲＥＳモチーフが、発現に最適な間隔を提供するように配置されてもよい。

【0313】

本開示のベクターは、環状であっても線形であってもよい。これらは、原核生物又は真核生物の宿主細胞において機能的な複製系を含有するように調製され得る。複製系は、例えば、ＣｏｌＥ１、ＳＶ４０、２μプラスミド、λ、ウシパピローマウイルスなどに由来してもよい。

【0314】

組換え発現ベクターは、一過性の発現のため、安定な発現のためのいずれか、又はその両方のために設計され得る。また、組換え発現ベクターは、構成的発現又は誘導性発現のために作製され得る。

【0315】

ベクターはまた、当技術分野において周知の選択マーカーを含んでいてもよい。選択マーカーは、陽性及び陰性選択マーカーを含む。マーカー遺伝子は、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質、重金属などに対する耐性）、栄養要求性宿主における原栄養を提供するための補完などを含む。例示的なマーカー遺伝子としては、抗生物質耐性遺伝子（例えば、ネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、カナマイシン耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、ペニシリン耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、ヒスチジノール×耐性遺伝子）、グルタミン合成酵素遺伝子、ガンシクロビル選択用のＨＳＶ－ＴＫ、ＨＳＶ－ＴＫ誘導体、又は６－メチルプリン選択用の細菌プリンヌクレオシドホスホリラーゼ遺伝子が挙げられる（Ｇａｄｉ ｅｔ ａｌ．，７ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１７３８－１７４３（２０００））。選択マーカーをコードする核酸配列又はクローニング部位は、目的のポリペプチドをコードする核酸配列又はクローニング部位の上流にあっても下流にあってもよい。

【0316】

宿主細胞
本開示は更に、本開示のベクターのいずれかを含む宿主細胞を提供する。「宿主細胞」は、ベクターが導入されている細胞を指す。宿主細胞という用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の後代、また特定の対象細胞から生成された安定な細胞株も指すことを意図すると理解される。変異又は環境による影響のいずれかにより、後続世代においてある特定の改変が生じることがあるため、そのような後代は親細胞と同一ではないことがあるが、本明細書で使用される「宿主細胞」という用語の範囲内には依然として含まれる。そのような宿主細胞は、真核細胞、原核細胞、植物細胞、又は古細菌細胞であってもよい。原核宿主細胞の例は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓなどの桿菌、及びサルモネラ、セラチア、及び様々なシュードモナス種などの他の腸内細菌科である。酵母などの他の微生物も発現に有用である。好適な酵母宿主細胞の例は、サッカロミセス（Saccharomyces）（例えば、Ｓ．セレビジアエ（S．cerevisiae））及びピキア（Pichia）である。例示的な真核細胞は、哺乳動物、昆虫、鳥類、又は他の動物由来のものであってもよい。哺乳類真核細胞としては、ＳＰ２／０（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＣＲＬ－１５８１）、ＮＳ０（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ），Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ，ＵＫ，ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．８５１１０５０３）、ＦＯ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６４６）、及びＡｇ６５３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８０）ネズミ細胞株などのハイブリドーマ又は骨髄腫の細胞株などの不死化細胞株が挙げられる。例示的なヒト骨髄腫細胞株は、Ｕ２６６（ＡＴＴＣ ＣＲＬ－ＴＩＢ－１９６）である。他の有用な細胞株としては、ＣＨＯ－Ｋ１ＳＶ（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ））、ＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－６１）、又はＤＧ４４などの、チャイニーズハムスターの卵巣（Chinese Hamster Ovary、ＣＨＯ）細胞に由来するものが挙げられる。

【0317】

本開示は更に、本開示の発現ベクターのいずれかを含む組換え宿主細胞を提供する。ＶＥＧＦＲ１結合タンパク質又はその断片のいずれかをコードする核酸は、適切な哺乳動物宿主細胞の形質転換に使用することができる。宿主細胞の形質転換、培養、抗体発現、及び精製は、周知の方法を使用して行われる。

【0318】

細胞株は、目的のＶＥＧＦＲ１抗体の高レベルの発現及び宿主細胞タンパク質からの最小限の混入に基づいて選択され得る。発現のための宿主細胞として利用可能な哺乳動物細胞株は、当該分野で周知であり、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯ－Ｋ１ＳＶ（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）、ＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－６１）、又はＣＨＯ ＤＧ４４）、及びベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞由来が挙げられるが、これらに限定されない。これらの細胞株は、抗体の発現に適した条件下で細胞を培養し、宿主細胞又は宿主細胞周辺の培地から抗体を精製することによって、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又は抗体断片のいずれかを産生するために使用することができる。

【0319】

本開示は更に、抗ＶＥＧＦＲ１結合タンパク質が発現する条件下で本開示の宿主細胞を培養することと、当技術分野で周知の方法を使い宿主細胞によって生成された抗ＶＥＧＦＲ１結合タンパク質を回収することと、を含む、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１結合タンパク質の産生方法も提供する。対象タンパク質は、実質的に純粋、例えば、純度が少なくとも約８０％～８５％、純度が少なくとも約８５％～９０％、純度が少なくとも約９０％～９５％、又は純度が少なくとも約９８％～９９％、若しくはそれ以上であってよく、例えば、細胞残屑、対象タンパク質以外の巨大分子などの夾雑物を含んでいなくてよい。

【0320】

いくつかの実施形態では、本開示は、本開示の単離された抗体又はその抗原結合断片のいずれかを発現する宿主細胞を提供する。

【0321】

いくつかの実施形態では、本開示は、本開示のベクターを含む宿主細胞を提供する。

【0322】

医薬組成物
慢性腎疾患を治療するための医薬の調製のための、開示される抗体のいずれかの使用も提供される。

【0323】

慢性腎疾患を治療するための医薬組成物の調製のための、開示される抗体のいずれかの使用も提供される。

【0324】

更に、本開示の抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物が提供される。

【0325】

治療用途では、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体及びその抗原結合断片は、医薬的に許容される担体中に活性成分として有効量の抗体を含有する医薬組成物として調製することができる。

【0326】

「担体」は、本発明の抗体が共に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルを指す。このようなビヒクルは、水、及び石油、動物、植物、又は合成物由来のものを含む油、例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの液体であってもよい。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３％グリシンを用いてよい。これらの溶液は滅菌され、概して粒子状物質を含まない。これらは、従来周知の滅菌技術（例えば、濾過）によって滅菌することができる。組成物は、生理学的条件に近づけるために必要とされる医薬的に許容される補助物質、例えば、ｐＨ調節剤及び緩衝剤、安定剤、増粘剤、潤滑剤及び着色剤などを含み得る。そのような医薬製剤中の本発明の抗体の濃度は、約０．５重量％未満から通常少なくとも約１重量％まで、最大で１５又は２０重量％まで変動し得、また、選択される投与方法に従って、必要とされる用量、流体体積、粘度などに主に基づいて選択され得る。好適なビヒクル及び製剤（他のヒトタンパク質、例えばヒト血清アルブミンを含む）は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｒｏｙ，Ｄ．Ｂ．ｅｄ．，Ｌｉｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ ２００６，Ｐａｒｔ ５，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ ｐｐ ６９１－１０９２に記載されており、特にｐｐ．９５８－９８９を参照されたい。

【0327】

医薬的に許容される担体としては、バッファ、賦形剤、安定剤、又は防腐剤を挙げることができる。医薬的に許容される担体の例は、生理学的に適合性の溶剤、分散媒体、コーティング剤、抗菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤などであり、例えば、塩、緩衝液、抗酸化剤、糖類、水性若しくは非水性担体、防腐剤、湿潤剤、界面活性剤、若しくは乳化剤、又はこれらの組み合わせである。医薬組成物中の医薬的に許容される担体の量は、担体の活性及び製剤の所望の特性、例えば安定性及び／又は最小酸化に基づいて実験的に決定され得る。

【0328】

医薬組成物は、酢酸、クエン酸、ギ酸、コハク酸、リン酸、炭酸、リンゴ酸、アスパラギン酸、ヒスチジン、ホウ酸、トリス緩衝液、ＨＥＰＰＳＯ、ＨＥＰＥＳ、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液、グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなどの炭水化物、タンパク質、グリシンなどのポリペプチド又はアミノ酸、抗酸化剤、ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤、補助剤（例えば、水酸化アルミニウム）、抗菌剤及び抗真菌剤；並びに防腐剤を含み得る。

【0329】

本開示の医薬組成物は、非経口投与又は経口投与の様々な手段のために製剤化することができる。一実施形態では、組成物は、注入又は静脈内投与向けに製剤化され得る。本明細書に開示される医薬組成物は、例えば、無菌液体調製物、例えば、等張水溶液、エマルション、懸濁液、分散液、又は粘性組成物として提供することができ、これらは、所望のｐＨに緩衝され得る。経口投与に好適な製剤としては、液体溶液、カプセル剤、サッシェ剤、タブレット剤、ドロップ剤、及びトローチ剤、適切な液体及び乳剤中の粉末液体懸濁液を挙げることができる。

【0330】

医薬組成物に関して本明細書で使用される場合、「医薬的に許容される」という用語は、動物及び／又はヒトにおける使用について、連邦政府若しくは州政府の規制機関によって承認されているか、又は米国薬局方若しくは他の一般に認められている薬局方に列挙されていることを意味する。

【0331】

治療及び使用方法
慢性腎疾患を治療するための、開示される抗体、その抗原結合断片又は医薬組成物のいずれかの使用も提供される。

【0332】

慢性腎疾患などの疾患若しくは障害を「治療する」、「治療すること」、又は「治療」とは、以下、障害の重篤度及び／若しくは期間を低減する、障害の進行を遅延する、障害の進行を減速する、治療される障害に特徴的な症状の悪化を抑制する、以前に障害を有していた被検者における障害の再発を制限若しくは予防する、又は障害について以前に症候性であった被検者における症状の再発を制限若しくは予防する、のうちの１つ以上を達成することを指す。本明細書で使用されるとき、「その進行を遅延させる」又は「その進行を緩徐化する」という用語は、（ａ）疾患、状態若しくは障害の１つ以上の症状若しくは合併症の発症を遅延させる若しくは減速させること、（ｂ）疾患、状態若しくは障害の１つ以上の新しい／更なる症状若しくは合併症の発症を遅延させる若しくは減速させること、及び／又は（ｃ）疾患、状態若しくは障害の当該疾患、状態若しくは障害の後期若しくはより深刻な形態への進行を遅延させる若しくは減速させること、を含むものとする。

【0333】

「被検者」は、任意のヒト又は非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」は、全ての脊椎動物、例えば哺乳動物及び非哺乳動物を含む。本明細書で使用される場合、用語「哺乳動物」は、あらゆる哺乳動物を包含する。哺乳動物の例としては、非ヒト霊長類、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、ヒトなどが挙げられるが、これらに限定されない。「被検者」及び「患者」という用語は、本明細書において互換的に使用することができる。いくつかの実施形態では、被検者又は患者は、ヒトである。

【0334】

本出願の単離された単離された抗体又はその抗原断片は、それを必要とする被検者においてＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合を防止することができる。したがって、本出願の別の一般的な態様は、それを必要とする被験者においてＶＥＧＦＲ１へのＶＥＧＦＡの結合を防止する方法であって、本出願の単離された抗体若しくはその抗原断片、イムノコンジュゲート、医薬組成物、単離されたポリヌクレオチド、ベクター又は宿主細胞の有効量を被験者に投与し、それによってＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合を防止することを含む方法に関する。被検者は、ＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合に関連する疾患、障害又は医学的状態の治療を必要とし得る。

【0335】

いくつかの実施形態では、被検者は、慢性腎疾患（ＣＫＤ）の治療を必要としているか、タンパク尿を減少させる必要があるか、進行した４期若しくは５期の慢性腎疾患を有するか、又はタンパク尿、アルブミン尿、若しくは糖尿病を伴うＣＫＤを有する。

【0336】

いくつかの実施形態では、それを必要とする被検者においてＶＥＧＦＲ１へのＶＥＧＦＡの結合を防止する方法は本開示の単離された抗体若しくはその抗原断片のいずれか、本開示のイムノコンジュゲートのいずれか、本開示の医薬組成物のいずれか、本開示の単離されたポリヌクレオチドのいずれか、本開示のベクターのいずれか、又は本開示の宿主細胞のいずれかの有効量を被験者に投与し、それによってＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合を防止することを含む。

【0337】

抗ＶＥＧＦＲ １抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を、それを必要とする被検者に投与することによって医学的状態を治療する方法も提供される。いくつかの実施形態では、医学的状態は慢性腎疾患である。「治療有効量」とは、必要な用量及び期間で所望の治療結果を得るための有効量を指す。治療有効量は、個々の疾患状態、年齢、性別、及び体重などの要因に応じて変化し得る。

【0338】

いくつかの実施形態では、医学的状態は慢性腎疾患である。いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患を治療する方法であって、被検者に開示されている医薬組成物の治療有効量を投与することを含む、方法を提供する。

【0339】

「慢性腎疾患」は、任意の病因の、又は慢性腎疾患に関連する任意のタイプの状態によって引き起こされ、慢性腎疾患に関連する全てのタイプの症状を生じる全てのタイプの慢性腎疾患（ＣＫＤ）を含むことを意味する。ＣＫＤには、一次糸球体疾患（腎症及び巣状分節性糸球体硬化症を含むが、これらに限定されない）、二次糸球体疾患（ループス腎炎を含むが、これらに限定されない）、血栓性微小血管症、尿細管間質性疾患、虚血性腎症、糖尿病性腎症、多発性嚢胞腎、高血圧性腎症、巣状分節性糸球体硬化症、ネフローゼ症候群、及び閉塞性尿路疾患（逆流性腎症を含むが、これらに限定されない）が含まれる。

【0340】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における糖尿病性腎疾患を治療する方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体若しくはその抗原結合断片のいずれか又は本開示の開示されている医薬組成物のいずれかの治療有効量を投与することを含む方法を提供する。

【0341】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患を治療する方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含み、慢性腎疾患が糖尿病性腎症である、方法を提供する。

【0342】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患の進行を遅延させる又は進行を減速させる方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含み、慢性腎疾患が糖尿病性腎症である、方法を提供する。

【0343】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患を治療する方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体の治療有効量を投与することを含み、慢性腎疾患が巣状分節性糸球体硬化症である、方法を提供する。

【0344】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患の進行を遅延させる又は進行を減速させる方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体の治療有効量を投与することを含み、慢性腎疾患が巣状分節性糸球体硬化症である、方法を提供する。

【0345】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患を治療する方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含み、慢性腎疾患が高血圧性腎症である、方法を提供する。

【0346】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患の進行を遅延させる又は進行を減速させる方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含み、慢性腎疾患が高血圧性腎症である、方法を提供する。

【0347】

いくつかの実施形態では、被検者は、慢性腎疾患（ＣＫＤ）を有する。慢性腎疾患は、腎疾患の５つの病期に分類されている。腎臓疾患の病期は、腎臓が血液から老廃物及び余分な流体を濾過することができる速度に基づいて分類される。推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）数は、血液中のクレアチン及び老廃物のレベルに基づき、１期の非常に軽度の損傷から５期の腎不全までの腎臓損傷の５つの病期を分類するために使用されている。

【0348】

いくつかの実施形態では、それを必要とする被検者において、慢性腎疾患（ＣＫＤ）を治療する方法は、本開示の単離された抗体若しくはその抗原断片のいずれか、本開示のイムノコンジュゲートのいずれか、本開示の医薬組成物のいずれか、本開示の単離されたポリヌクレオチドのいずれか、本開示のベクターのいずれか、又は本開示の宿主細胞のいずれかの治療有効量を、ＣＫＤを治療するのに十分な時間にわたり、被検者に投与することを含む。

【0349】

いくつかの実施形態では、本開示は、糸球体濾過量（ＧＦＲ）の喪失の減少で使用するためのＶＥＧＦＲ１抗体を提供する。

【0350】

いくつかの実施形態では、本開示は、糸球体濾過量（ＧＦＲ）の喪失を減少させるための方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又は抗原結合断片の治療有効量を投与することを含む方法を提供する。

【0351】

いくつかの実施形態では、被検者は、６０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２未満のｅＧＦＲ（推定糸球体濾過量）を伴う進行した３期、４期、又は５期の慢性腎疾患を有する。いくつかの実施形態では、被検者は、３０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２以下の測定されたｅＧＦＲを伴う進行した４期又は５期の慢性腎疾患を有する。いくつかの実施形態では、被検者は、３０～６０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２の測定されたｅＧＦＲを伴う３期の慢性腎疾患を有する。いくつかの実施形態では、被検者は、３０～４５ｍＬ／分／１．７３ｍ^２の測定されたｅＧＦＲを伴う３ｂ期の慢性腎疾患を有する。いくつかの実施形態では、被検者は、進行した４期又は５期の慢性腎疾患を有し、透析中ではない。いくつかの実施形態では、被検者は、進行した４期又は５期の慢性腎疾患を有し、透析中である。

【0352】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患を治療する方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含み、被検者が、３０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２以下の測定されたｅＧＦＲを伴う４期又は５期の慢性腎疾患を有する、方法を提供する。

【0353】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患の進行を遅延させる又は進行を減速させる方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含み、被検者が、３０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２以下の測定されたｅＧＦＲを伴う４期又は５期の慢性腎疾患を有する、方法を提供する。

【0354】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患を治療する方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含み、被検者が、３０～６０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２の測定されたｅＧＦＲを伴う３期の慢性腎疾患を有する、方法を提供する。

【0355】

いくつかの実施形態は、本開示は、被検者における慢性腎疾患の進行を遅延させる又は進行を減速させる方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含み、被検者が、３０～６０ｍＬ／分／１．７３ｍ^２の測定されたｅＧＦＲを伴う３期の慢性腎疾患を有する、方法を提供する。

【0356】

いくつかの実施形態では、被検者は、タンパク尿を伴う慢性腎疾患を有する。いくつかの実施形態では、被検者は、アルブミン尿を伴う慢性腎疾患を有する。いくつかの実施形態では、被検者は、糖尿病を伴う慢性腎疾患を有する。

【0357】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患を治療する方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含み、被検者が、タンパク尿を伴う慢性腎疾患を有する、方法を提供する。

【0358】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患の進行を遅延させる又は進行を減速させる方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含み、被検者が、タンパク尿を伴う慢性腎疾患を有する、方法を提供する。

【0359】

いくつかの実施形態では、本開示は、それを必要とする被検者において、タンパク尿を減少させる方法であって、本開示の単離された抗体若しくはその抗原断片のいずれか、本開示のイムノコンジュゲートのいずれか、本開示の医薬組成物のいずれか、本開示の単離されたポリヌクレオチドのいずれか、本開示のベクターのいずれか、又は本開示の宿主細胞のいずれかの治療有効量を、被検者においてタンパク尿を減少させるのに十分な時間にわたり、被検者に投与することを含む方法を提供する。

【0360】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患を治療する方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含み、被検者が、アルブミン尿を伴う慢性腎疾患を有する、方法を提供する。

【0361】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患の進行を遅延させる又は進行を減速させる方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含み、被検者が、アルブミン尿を伴う慢性腎疾患を有する、方法を提供する。

【0362】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患を治療する方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含み、被検者が、糖尿病を伴う慢性腎疾患を有する、方法を提供する。

【0363】

いくつかの実施形態では、本開示は、被検者における慢性腎疾患の進行を遅延させる又は進行を減速させる方法であって、それを必要とする被検者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含み、被検者が、糖尿病を伴う慢性腎疾患を有する、方法を提供する。

【0364】

「タンパク尿」は、尿中のタンパク質増量の存在を指す。タンパク尿症は、ａ）高分子量タンパク質に対する糸球体透過性の増加（アルブミン尿又は糸球体タンパク尿症）、ｂ）正常に濾過された低分子量タンパク質の不完全な尿細管再吸収（尿細管性タンパク尿）、又はｃ）低分子量タンパク質の血漿中濃度の増加（免疫グロブリン軽鎖などの過剰産生タンパク尿症）による血漿タンパク質の異常な喪失を反映し得る。タンパク尿は更に、腎臓（尿細管損傷による腎尿細管細胞構成要素）及び下部尿路に由来するタンパク質の異常な喪失を反映し得る。

【0365】

「アルブミン尿症」は、アルブミンが尿中に存在する状態である。健康な個体において、アルブミンは、腎臓によって濾過される。腎臓が尿から大きい分子（アルブミン等）を適切に濾過しない場合、アルブミンは、尿中に排出され、典型的には、腎臓損傷の兆候である。アルブミン尿は、ＣＫＤ患者において一般的であるが一様ではない状態である。アルブミン尿は、糖尿病性腎硬化症を含む糸球体疾患の最も初期のマーカーであり、一般的にｅＧＦＲの減少の前に現れる。アルブミン尿は、高血圧性腎硬化症のマーカーであるが、ｅＧＦＲの減少後まで現れない可能性がある。

【0366】

糖尿病性腎症は、糖尿病の細小血管合併症のうちの１つであり、持続性アルブミン尿症及び腎機能の進行性の低下によって特徴付けられる。

【0367】

いくつかの実施形態では、本開示は、慢性腎疾患を有する患者においてタンパク尿を減少させる方法であって、それを必要とする患者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含む方法を提供する。

【0368】

いくつかの実施形態では、本開示は、タンパク尿を減少させる方法であって、それを必要とする患者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又は抗原結合断片の治療有効量を患者に投与するステップを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、タンパク尿は、慢性腎疾患によって引き起こされる。他の実施形態において、タンパク尿は、糖尿病性腎症によって引き起こされる。

【0369】

いくつかの実施形態では、本開示は、慢性腎疾患を有する患者においてアルブミン尿を減少させる方法であって、それを必要とする患者に、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片の治療有効量を投与することを含む方法を提供する。

【0370】

更に、サンプル中のＶＥＧＦＲ１を検出する方法であって、サンプルを入手することと、サンプルを本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又はその抗原結合断片と接触させることと、サンプル中の結合したＶＥＧＦＲ１を検出することと、を含む、方法を提供する。

【0371】

いくつかの実施形態では、サンプルは、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、滑液、循環細胞、組織に会合していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（例えば、外科的に切除された組織、穿刺吸引を含む生検材料）、組織プレパラートなどに由来し得る。ＶＥＧＦＲ１は、既知の方法を用いて検出することができる。例示的な方法としては、蛍光若しくは化学発光標識、又は放射線標識を使用して抗体を直接標識すること、あるいは本発明の抗体に、ビオチン、酵素、又はエピトープタグなどの容易に検出可能な部分を結合させることが挙げられる。例示的な標識及び部分は、ルテニウム、^１１１Ｉｎ－ＤＯＴＡ、^１１１Ｉｎ－ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びベータガラクトシダーゼ、ポリ－ヒスチジン（ＨＩＳタグ）、アクリジン染料、シアニン染料、フルオロン染料、オキサジン染料、フェナントリジン染料、ローダミン染料、及びＡｌｅｘａｆｌｕｏｒ（登録商標）染料である。

【0372】

本開示の抗体又はその抗原結合断片は、サンプル中のＶＥＧＦＲ１を検出するための様々なアッセイで使用してもよい。例示的なアッセイは、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散、電気化学発光（electrochemiluminescence、ＥＣＬ）イムノアッセイ、免疫組織化学的検査、蛍光活性化細胞選別（fluorescence-activated cell sorting、ＦＡＣＳ）、又はＥＬＩＳＡアッセイである。

【0373】

キット
本開示の抗体若しくは抗原結合断片又はそれらの機能的等価物を含むキットが本明細書に記載される。

【0374】

本発明は更に、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片を含むキットも提供する。

【0375】

キットは、治療用途のために、及び診断キットとして使用することができる。

【0376】

キットを使用して、サンプル中のＶＥＧＦＲ１の存在を検出することができる。

【0377】

いくつかの実施形態では、キットは、本開示の抗ＶＥＧＦＲ１抗体又は抗原結合断片と、ＶＥＧＦＲ１結合タンパク質を検出するための試薬とを含む。キットは、使用説明書、他の試薬、例えば、標識、治療剤、又はキレート化若しくは別の方法のカップリングに有用な薬剤、標識若しくは治療剤に対する抗体、又は放射線防護組成物、投与するために抗体を調製するためのデバイス又は他の材料、医薬的に許容される担体、及び被検者に投与するためのデバイス又は他の材料を含む、１つ以上の他の要素を含み得る。

【0378】

いくつかの実施形態では、キットは、容器中のＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片と、キットの使用説明書とを含む。

【0379】

いくつかの実施形態では、本開示は、本開示の単離された抗体又は抗原結合断片のいずれか、本開示のイムノコンジュゲートのいずれか、本開示の医薬組成物のいずれか、本開示の単離されたポリヌクレオチドのいずれか、本開示のベクターのいずれか、本開示の宿主細胞のいずれかを含むキットを備える。

【0380】

いくつかの実施形態では、キット中のＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片は、標識される。

【0381】

いくつかの実施形態では、キットは、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片を含み、
配列番号３１のＶＨ及び配列番号３２のＶＬ、
配列番号３３のＶＨ及び配列番号３２のＶＬ、
配列番号３４のＶＨ及び配列番号３５のＶＬ、
配列番号３６のＶＨ及び配列番号３７のＶＬ、
配列番号３８のＶＨ及び配列番号３７のＶＬ、又は
配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬ、を含む。

【0382】

いくつかの実施形態では、キットは、配列番号３９のＶＨ及び配列番号４０のＶＬを含む、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む。

【0383】

いくつかの実施形態では、キットは、配列番号５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５９、又は６０のアミノ酸配列を含む、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片を含む。

【0384】

いくつかの実施形態では、キットは、ＶＥＧＦＲ１に結合する抗体又はその抗原結合断片を含み、（ａ）配列番号５１及び配列番号５２、（ｂ）それぞれ配列番号５３及び配列番号５２、（ｃ）それぞれ配列番号５４及び配列番号５５、（ｄ）それぞれ配列番号５６及び配列番号５７、（ｅ）配列番号５８及び配列番号５７、並びに配列番号５９及び配列番号６０、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0385】

実施形態
以下の実施形態のリストは、前述の説明を置き換え又は取って代わるものではなく、補完することを意図している。

【0386】

実施形態１．配列番号１７３又は配列番号４のアミノ酸配列内のエピトープに結合する単離された抗体又はその抗原結合断片であって、ＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合を防止する、抗体又はその抗原結合断片。

【0387】

実施形態２．配列番号１７３のアミノ酸配列内のエピトープに結合する単離された抗体又はその抗原結合断片であって、ＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合を防止する、抗体又はその抗原結合断片。

【0388】

実施形態３．配列番号４のアミノ酸配列内のエピトープに結合する単離された抗体又はその抗原結合断片であって、ＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合を防止する、抗体又はその抗原結合断片。

【0389】

実施形態４．アミノ酸配列ＦＰＬＤＴＬ（配列番号１４３）若しくはＥＩＧＬ（配列番号１４４）を有するＶＥＧＦＲ１上のエピトープに結合するか、又はアミノ酸配列ＦＰＬＤＴＬ（配列番号１４３）及びＥＩＧＬ（配列番号１４４）を有するエピトープに結合する、実施形態１～３のいずれか１つに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0390】

実施形態５．抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸配列ＦＰＬＤＴＬ（配列番号１４３）を有するＶＥＧＦＲ１上のエピトープに結合する、実施形態４に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0391】

実施形態６．抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸配列ＥＩＧＬ（配列番号１４４）を有するＶＥＧＦＲ１上のエピトープに結合する、実施形態４に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0392】

実施形態７．抗体又はその抗原結合断片が、ヒト、マウス、ラット及び／又はカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合する、実施形態４に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0393】

実施形態８．抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＶＥＧＦＲ１に結合する、請求項７に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0394】

実施形態９．抗体又はその抗原結合断片が、ヒトＶＥＧＦＲ１、並びにカニクイザル、マウス及びラットからなる群から選択される少なくとも１つの種に由来するＶＥＧＦＲ１に結合する、実施形態８に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0395】

実施形態１０．抗体又はその抗原結合断片が、ヒト及びマウスＶＥＧＦＲ１に結合する、実施形態９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0396】

実施形態１１．抗体又はその抗原結合断片が、ヒト及びラットＶＥＧＦＲ１に結合する、実施形態９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0397】

実施形態１２．抗体又はその抗原結合断片が、ヒト、マウス及びラットＶＥＧＦＲ１に結合する、実施形態９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0398】

実施形態１３．抗体又はその抗原結合断片が、ヒト及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合する、実施形態９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0399】

実施形態１４．抗体又はその抗原結合断片が、ヒト、マウス、ラット及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合する、実施形態９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0400】

実施形態１５．抗体又はその抗原結合断片が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用することで決定される、６×１０^－８Ｍ以下、特に１×１０^－８Ｍ以下、より具体的には５×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－１０Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫ_Ｄで、ヒトＶＥＧＦＲ１、マウスＶＥＧＦＲ１、ラットＶＥＧＦＲ１及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合する、実施形態９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0401】

実施形態１６．抗体又はその抗原結合断片が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用することで決定される、６×１０^－８Ｍ以下、特に１×１０^－８Ｍ以下、より具体的には５×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－１０Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫ_Ｄで、ヒトＶＥＧＦＲ１、マウスＶＥＧＦＲ１、及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合する、実施形態９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0402】

実施形態１７．抗体又はその抗原結合断片が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用することで決定される、６×１０^－８Ｍ以下、特に１×１０^－８Ｍ以下、より具体的には５×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－１０Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＶＥＧＦＲ１及びマウスＶＥＧＦＲ１に結合する、実施形態９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0403】

実施形態１８．抗体又はその抗原結合断片が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用することで決定される、６×１０^－８Ｍ以下、特に１×１０^－８Ｍ以下、より具体的には５×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－１０Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＶＥＧＦＲ１及びラットＶＥＧＦＲ１に結合する、実施形態９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0404】

実施形態１９．抗体又はその抗原結合断片が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用することで決定される、６×１０^－８Ｍ以下、特に１×１０^－８Ｍ以下、より具体的には５×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、５×１０^－１０Ｍ以下、又は１×１０^－１０Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＶＥＧＦＲ１及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１に結合する、実施形態９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0405】

実施形態２０．配列番号３１、３３、３４、３６、３８又は３９のＶＨの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）、及び配列番号３２、３５、３７又は４０のＶＬの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0406】

実施形態２１．
ａ．配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、
ｂ．配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、
ｃ．配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、
ｄ．配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、
ｅ．配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、又は
ｆ．配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、を含む、実施形態２０に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0407】

実施形態２２．ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有するＶＨと、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有するＶＬとを含み、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が、
ａ．それぞれ配列番号７、１７５、９、１０、１１、及び１２、
ｂ．それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１、及び１２、
ｃ．それぞれ配列番号１３、１４、１５、１６、１７、及び１８、
ｄ．それぞれ配列番号１９、２０、２１、２２、２３、及び２４、
ｅ．それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０、
ｆ．それぞれ配列番号７１、１７６、７３、７４、７５、及び７６、
ｇ．それぞれ配列番号７１、７２、７３、７４、７５、及び７６、
ｈ．それぞれ配列番号７７、７８、７９、８０、８１、及び８２、
ｉ．それぞれ配列番号８３、８４、８５、８６、８７、及び８８、
ｊ．それぞれ配列番号８９、９０、９１、９２、９３、及び９４、
ｋ．それぞれ配列番号９５、１７７、９７、９８、９９、及び１００、
ｌ．それぞれ配列番号９５、９６、９７、９８、９９、及び１００、
ｍ．それぞれ配列番号１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、及び１０６、
ｎ．それぞれ配列番号１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、及び１１２、
ｏ．それぞれ配列番号１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、及び１１８、
ｐ．それぞれ配列番号１１９、１７８、１２１、１２２、アミノ酸配列ＬＮＳ、及び配列番号１２４、
ｑ．配列番号１１９、１２０、１２１、１２２、アミノ酸配列ＬＮＳ、及び配列番号１２４、
ｒ．それぞれ配列番号１２５、１２６、１２７、１２８、アミノ酸配列ＦＮＦ、及び配列番号１３０、
ｓ．それぞれ配列番号１３１、１３２、１３３、１３４、アミノ酸配列ＹＤ、及び配列番号１３６、又は
ｔ．それぞれ配列番号１３７、１３８、１３９、１４０、アミノ酸配列ＦＮＳ、及び配列番号１４２を含む、実施形態２１に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0408】

実施形態２３．ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７、１７５、９、１０、１１及び１２のアミノ酸配列を含む、実施形態２２に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0409】

実施形態２４．ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１３、１４、１５、１６、１７及び１８のアミノ酸配列を含む、実施形態２２に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0410】

実施形態２５．ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が、それぞれ配列番号２５、２６、２７、２８、２９、及び３０のアミノ酸配列を含む、実施形態２２に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0411】

実施形態２６．ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が、それぞれ配列番号７、８、９、１０、１１及び１２のアミノ酸配列を含む、実施形態２２に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0412】

実施形態２７．ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３が、それぞれ配列番号１９、２０、２１、２２、２３及び２４のアミノ酸配列を含む、実施形態２２に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0413】

実施形態２８．配列番号３１、３３、３４、３６、３８、又は配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号３２、３５、３７、又は４０のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0414】

実施形態２９．
ａ．それぞれが配列番号３１及び配列番号３２、
ｂ．それぞれが配列番号３３及び配列番号３２、
ｃ．それぞれが配列番号３４及び配列番号３５、
ｄ．それぞれが配列番号３６及び配列番号３７、
ｅ．それぞれが配列番号３８及び配列番号３７、又は
ｆ．それぞれが配列番号３９及び４０、のアミノ酸配列を含むＶＨ及びＶＬを含む、実施形態２８に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0415】

実施形態３０．配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又１００％）同一であるＶＨと、配列番号４０のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬとを含む、実施形態２９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0416】

実施形態３１．配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨと、配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＬとを含む、実施形態３０に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0417】

実施形態３２．配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨと、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬとを含む、実施形態２９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0418】

実施形態３３．配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む、実施形態３２に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0419】

実施形態３４．配列番号３８のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨと、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬとを含む、実施形態２９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0420】

実施形態３５．配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む、実施形態３４に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0421】

実施形態３６．配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨと、配列番号３２のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬとを含む、実施形態２９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0422】

実施形態３７．配列番号３１のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む、実施形態３６に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0423】

実施形態３８．配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨと、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬとを含む、実施形態２９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0424】

実施形態３９．配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む、実施形態３８に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0425】

実施形態４０．配列番号３４のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬとを含む、実施形態２９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0426】

実施形態４１．配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＨと、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＶＬとを含む、実施形態４０に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0427】

実施形態４２．配列番号５１、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８、又は配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）と、配列番号５２、配列番号５５、配列番号５７、又は配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）とを含む、実施形態１～４１のいずれか１つに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0428】

実施形態４３．配列番号５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５９、及び６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態４２に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0429】

実施形態４４．単離された抗体であって、
ａ．配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は少１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＨＣ、及び配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＬＣ、
ｂ．配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＨＣ、及び配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＬＣ、
ｃ．配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＨＣ、及び配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＬＣ、
ｄ．配列番号５６のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＨＣ、及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＬＣ、
ｅ．配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＨＣ、及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＬＣ、又は
ｆ．配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＨＣ、及び配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＬＣ、を含む、実施形態４３に記載の単離された抗体。

【0430】

実施形態４５．配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣと、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣとを含む、実施形態４４に記載の単離された抗体。

【0431】

実施形態４６．配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＣと、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣとを含む、実施形態４４に記載の単離された抗体。

【0432】

実施形態４７．配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＣと、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣとを含む、実施形態４４に記載の単離された抗体。

【0433】

実施形態４８．配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＣと、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＬＣとを含む、実施形態４４に記載の単離された抗体。

【0434】

実施形態４９．配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＣと、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＬＣとを含む、実施形態４４に記載の単離された抗体。

【0435】

実施形態５０．配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＣと、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣとを含む、実施形態４４に記載の単離された抗体。

【0436】

実施形態５１．単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号３３のアミノ酸配列を含むＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、
ｂ．それぞれ配列番号７、８、及び９のアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含むＶＨ、並びにそれぞれ配列番号１０、１１、及び１２のアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含むＶＬ、
ｃ．配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び／又は、
ｄ．配列番号５３のアミノ酸配列を有するＨＣ、及び配列番号５２のアミノ酸配列を有するＬＣ、を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0437】

実施形態５２．単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号３４のアミノ酸配列を含むＶＨのＨＣＤＲ、及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ、
ｂ．それぞれ配列番号１３、１４、及１５のアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含むＶＨ、並びにそれぞれ配列番号１６、１７、及び１８のアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含むＶＬ、
ｃ．配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び／又は、ｄ．配列番号５４のアミノ酸配列を有するＨＣ及び配列番号５５のアミノ酸配列を有するＬＣ、を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0438】

実施形態５３．単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲを有するＶＨ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣＤＲを有するＶＬ、
ｂ．それぞれ配列番号１９、２０、及び２１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含むＶＨ、並びにそれぞれ配列番号２２、２３、及び２４のアミノ酸配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含むＶＬ、
ｃ．配列番号３８のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び／又は、
ｄ．配列番号５８のアミノ酸配列を有するＨＣ、及び配列番号５７のアミノ酸配列を有するＬＣ、を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0439】

実施形態５４．単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲを有するＶＨ、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣＤＲを有するＶＬ、
ｂ．それぞれ配列番号２５、２６、及び２７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含むＶＨ、並びにそれぞれ配列番号２８、２９、及び３０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含むＶＬ、
ｃ．配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号４０のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び／又は、
ｄ．配列番号５９のアミノ酸配列を有するＨＣ、及び配列番号６０のアミノ酸配列を有するＬＣ、を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0440】

実施形態５５．単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲを有するＶＨ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣＤＲを有するＶＬ、
ｂ．それぞれ配列番号７、１７５、及び９のアミノ酸配列有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含むＶＨ、並びにそれぞれ配列番号１０、１１、及び１２のアミノ酸配列有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３含むＶＬ、
ｃ．配列番号３１のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び／又は、
ｄ．配列番号５１のアミノ酸配列を有するＨＣ、及び配列番号５２のアミノ酸配列を有するＬＣ、を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0441】

実施形態５６．単離された抗体又はその抗原結合断片であって、
ａ．配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）のＨＣＤＲを有するＶＨ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）のＬＣＤＲを有するＶＬ、
ｂ．それぞれ配列番号１９、２０、及び２１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含むＶＨ、並びにそれぞれ配列番号２２、２３、及び２４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含むＶＬ、
ｃ．配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＨ、及び配列番号３７のアミノ酸配列を有するＶＬ、及び／又は、
ｄ．配列番号５６のアミノ酸配列を有するＨＣ、及び配列番号５７のアミノ酸配列を有するＬＣ、を含む、単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0442】

実施形態５７．抗原結合断片が、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）_２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、ｄＡｂ、ＶＨＨ又は一本鎖抗体である、実施形態１～５６のいずれか一項に記載の単離された抗原結合断片。

【0443】

実施形態５８．抗体又はその抗原結合断片が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプである、実施形態１～５７のいずれか一項に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0444】

実施形態５９．抗体又はその抗原結合断片が、ＩｇＧ１アイソタイプである、実施形態５８に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0445】

実施形態６０．Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片を含む、実施形態５９に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0446】

実施形態６１．Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片が、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）への単離された抗体又はその抗原結合断片の低減された結合もたらす少なくとも１つの変異を含む、実施形態６０に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0447】

実施形態６２．単離された抗体又はその抗原結合断片のＦｃγＲへの低減された結合をもたらす少なくとも１つの変異が、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ、及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基番号付けがＥＵインデックスに従う、実施形態６１に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0448】

実施形態６３．Ｉｇ定常領域又は定常領域の断片が、Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓの変異を含む、実施形態６２に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0449】

実施形態６４．ＦｃγＲが、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ若しくはＦｃγＲＩＩＩ、又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態６２に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0450】

実施形態６５．Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片が、抗体又はその抗原結合断片の半減期を調節する少なくとも１つの変異を更に含む、実施形態６４に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0451】

実施形態６６．抗体又はその抗原結合断片の半減期を調節する少なくとも１つの変異が、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ、及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基番号付けが、ＥＵインデックスに従う、実施形態６５に記載の単離された抗体又はその抗原結合断片。

【0452】

実施形態６７．治療剤又は造影剤にコンジュゲートされた、実施形態１～６６のいずれか一つに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片を含む、イムノコンジュゲート。

【0453】

実施形態６８．実施形態１～６６のいずれか１つに記載の単離された抗体若しくは抗原結合断片、又は実施形態６７に記載のイムノコンジュゲート、及び医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【0454】

実施形態６９．実施形態１～６６のいずれか１つに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離されたポリヌクレオチド。

【0455】

実施形態７０．配列番号４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９又は７０のポリヌクレオチド配列と少なくとも８０％（例えば少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は１００％）同一であるポリヌクレオチド配列を含む、実施形態６９の単離されたポリヌクレオチド。

【0456】

実施形態７１．実施形態６９又は７０に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。

【0457】

実施形態７２．実施形態７１に記載のベクターを含む宿主細胞などの、実施形態１～７０のいずれか１つに記載の単離された抗体又はその抗原結合断片を発現する宿主細胞。

【0458】

実施形態７３．実施形態１～６６のいずれか１つに記載の単離された抗体若しくはその抗原断片、実施形態６７に記載のイムノコンジュゲート、実施形態６８に記載の医薬組成物、実施形態６９若しくは７０に記載の単離されたポリヌクレオチド、実施形態７１に記載のベクター又は実施形態７２に記載の宿主細胞の有効量を被験者に投与し、それによってＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合を防止することを含む、それを必要とする被験者においてＶＥＧＦＡのＶＥＧＦＲ１への結合を防止する方法。

【0459】

実施形態７４．被検者が、慢性腎疾患（ＣＫＤ）の治療を必要としているか、タンパク尿を減少させる必要があるか、進行した４期若しくは５期の慢性腎疾患を有するか、又はタンパク尿、アルブミン尿若しくは糖尿病を伴うＣＫＤを有する、実施形態７３に記載の方法。

【0460】

実施形態７５．治療を必要とする被検者における慢性腎疾患（ＣＫＤ）を治療する方法であって、実施形態１～６６のいずれか１つに記載の単離された抗体若しくはその抗原断片、実施形態６７に記載のイムノコンジュゲート、実施形態６８に記載の医薬組成物、実施形態６９若しくは７０に記載の単離されたポリヌクレオチド、実施形態７１に記載のベクター又は実施形態７２に記載の宿主細胞の治療有効量を、ＣＫＤを治療するのに十分な時間にわたり被検者に投与することを含む、方法。

【0461】

実施形態７６．被検者が進行した４期又は５期の慢性腎疾患を有する、実施形態７５に記載の方法。

【0462】

実施形態７７．被検者が３期の慢性腎疾患を有する、実施形態７５に記載の方法。

【0463】

実施形態７８．被検者が、タンパク尿、アルブミン尿又は糖尿病を伴うＣＫＤを有する、実施形態７５に記載の方法。

【0464】

実施形態７９．タンパク尿の減少を必要とする被検者におけるタンパク尿を減少する方法であって、実施形態１～６６のいずれか１つに記載の単離された抗体若しくはその抗原断片、実施形態６７に記載のイムノコンジュゲート、実施形態６８に記載の医薬組成物、実施形態６９若しくは７０に記載の単離されたポリヌクレオチド、実施形態７１に記載のベクター又は実施形態７２に記載の宿主細胞の治療有効量を、被検者のタンパク尿を減少するのに十分な時間にわたり被検者に投与することを含む、方法。

【0465】

実施形態８０．アルブミン尿の減少を必要とする被検者におけるアルブミン尿を減少する方法であって、実施形態１～６６のいずれか１つに記載の単離された抗体若しくはその抗原断片、実施形態６７に記載のイムノコンジュゲート、実施形態６８に記載の医薬組成物、実施形態６９若しくは７０に記載の単離されたポリヌクレオチド、実施形態７１に記載のベクター又は実施形態７２に記載の宿主細胞の治療有効量を、被検者のタンパク尿を減少するのに十分な時間にわたり被検者に投与することを含む、方法。

【0466】

実施形態８１．実施形態１～６６のいずれか１つに記載の単離された抗体若しくはその抗原結合断片、実施形態６７に記載のイムノコンジュゲート、実施形態６８に記載の医薬組成物、実施形態６９若しくは７０に記載の単離されたポリヌクレオチド、実施形態７１に記載のベクター、又は実施形態７２に記載の宿主細胞を含む、キット。

【実施例】

【0467】

実施例１．抗原の生成
血管内皮増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１）は、７つの細胞外免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン、単一の膜貫通ドメイン、及び細胞質キナーゼドメインからなる受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のＶ型サブファミリーのメンバーである。構造研究では、ＶＥＧＦＲ１へのリガンド結合が、Ｉｇドメイン２及びドメイン３（Ｄ２及びＤ３）によって媒介され、２つのドメインが、それぞれ、結合界面に約８００及び７００Å^２寄与することが以前に実証された（Ｍａｒｋｏｖｉｃ－Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｓ．ｅｔ ａｌ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，２５（２），３４１－３５２，２０１７）。このことは、ヒトＶＥＧＦ１６５（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）に対する組換えヒトＶＥＧＦＲ１（Ｄ１－Ｄ３）及びヒトＶＥＧＦＲ１（Ｄ２－Ｄ３）の親和性がＳＰＲによってそれぞれ＜４５ｐＭ及び＜３０ｐＭであると決定された結合分析によって確証された。ｈＶＥＧＦＲ１単独のドメイン２は、２２ｎＭの有意に低い親和性（親和性において約１，０００倍の減少）を示し、これは、ＶＥＧＦＲ１単独のＤ２（Ｆｌｔ－１（２）－ＩｇＧ）がＶＥＧＦ１６５に対して実質的に減少した親和性を示すことを実証する以前に公開された生化学データと一致した（Ｄａｖｉｓ－Ｓｍｙｔｈ，Ｔ．ｅｔ ａｌ，ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ，１５（１８），４９１９－４９２７，１９９６）。

【0468】

したがって、ＶＥＧＦＲ１へのリガンド結合を遮断することができる抗体を同定するために、Ｄ２－Ｄ３又はＤ１－Ｄ３のみを含むＶＥＧＦＲ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の切断型バージョンを、抗体発見中の一次免疫原として使用した。ヒトＶＥＧＦＲ１の第２及び第３の免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメインのＦｃキメラ（ｈＶＥＧＦＲ１ Ｄ２－Ｄ３－Ｆｃ－６ｘＨｉｓ）は、アミノ酸残基１３０－３３１（ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ１７９４８）を、ＨＲＶ３Ｃプロテアーゼ認識配列「ＬＥＶＬＦＱＧＰ」（配列番号１７４）を介してヒト免疫グロブリン重鎖定常ガンマ１（ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ０１８５７）の残基１００－３３０に融合することによって作製した。柔軟な精製オプションのために、６ＸＨｉｓタグを構築物のＣ末端に添加した（構築物ＶＧＦＷ８、配列番号１）。更に、マウスＶＥＧＦＲ１の第１～第３の免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメインのＦｃキメラ（ｍＶＥＧＦＲ１ Ｄ１－Ｄ３－Ｆｃ－６ｘＨｉｓ）は、残基２３－３３２（ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ３５９６９）を、ＨＲＶ３Ｃプロテアーゼ認識配列「ＬＥＶＬＦＱＧＰ」（配列番号１７４）を介してヒト免疫グロブリン重鎖定常ガンマ１（ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｐ０１８５７）の残基１００－３３０に連結することによって作製した。

【0469】

類似の構築物（ｍＦｌｔ（１－３－ＩｇＧ）は、ＶＥＧＦ及び／又はＰｌＧＦ活性の強力な阻害剤として以前に記載された（Ｆｅｒｒａｒａ，Ｎ．ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，４（３），３３６－３４０ １９９８）。更に、柔軟な精製方法のために、６ＸＨｉｓタグを構築物のＣ末端に添加した（構築物ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ＶＧＦＷ９、配列番号２）。追加の構築物を設計し、ヒト、マウス、又はカニクイザル由来のＶＥＧＦＲ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（カニクイザル）の一部又は全体を、Ａｖｉタグ及び６×Ｈｉｓタグ配列を有するＣ末端に付加した。これらは、ヒトＶＥＧＦＲ１のＩｇ様ドメイン２（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ１７９４８の残基１３０－２２５、構築物ＶＧＦＷ２、配列番号３）、ヒトＶＥＧＦＲ１のＩｇ様ドメイン２及びドメイン３（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ１７９４８の残基１３０－３３１、構築物ＶＧＦＷ３、配列番号４）、マウスＶＥＧＦＲ１のＩｇ様ドメイン１～３（Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ３５９６９の残基２３－３３２、構築物ＶＧＦＷ４、配列番号５）、及びサルＶＥＧＦＲ１の全細胞外ドメイン（アクセッション番号ＸＰ＿００５５８５６１２．１の残基２７－７５８、構築物ＶＧＦＷ５、配列番号６）。

【0470】

ポリエチレンイミンを使用して、ＶＥＧＦＲ１ ＥＣＤ発現構築物をＨＥＫ ２９３－６Ｅ細胞に一過性にトランスフェクションした。培養物の生存率が＜８０％に低下した場合、収集前に、バッチ供給Ｗａｖｅバッグ（Ｃｕｌｔｉバッグ）２０Ｌ［Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、Ｆｌｅｘｓａｆｅ（登録商標）ＲＭ ２０Ｌ ｏｐｔｉｃａｌ Ｃａｔ＃ＤＦＯ０２０Ｌ］中で５％ＣＯ_２を用いて細胞を３７℃で６日間インキュベートした。細胞を遠心分離により除去し、Ｎｉ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ ｒｅｓｉｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する固定化金属親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、続いて、ダルッベッコリン酸生理食塩水緩衝液ｐＨ７．２（１×ＤＰＢＳ）中における分取サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で平衡化されたＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、Ｈｉｓタグを有する可溶性ＶＥＧＦＲ１タンパク質を培地から精製した。代替的に、ＶＧＦＷ８及びＶＧＦＷ９については、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅプロテインＡクロマトグラフィー樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）への適用及びそれからの溶出によって、使用済み上清から組換えタンパクを捕捉した。生成された抗原のアミノ酸配列を表２に示す。

【0471】

【表2-1】

【0472】

【表2-2】

【0473】

実施例２．ｓｃＦｖ－ＦｃフォーマットにおけるＶＥＧＦＲ１抗体の生成及び予備的特徴付け
免疫方法
糖尿病性腎疾患（ＤＫＤ）の十分に確立されたげっ歯類モデルにおける非臨床的安全性及び薬理学／有効性研究の両方を可能にするために、カニクイザル並びにげっ歯類を含む様々な種（ヒトに加えて）にわたって広範な交差反応性を示すリガンド遮断抗ＶＥＧＦＲ１抗体を同定することが強く好まれた。発見キャンペーンの開始時に種交差反応性抗体を作製する能力は、生物学の複雑性を考慮すると、目的の抗体の挙動を模倣していない可能性がある代替抗体を開発する必要性を排除した。

【0474】

広範な種交差反応性（げっ歯類を含む）を有する抗体を得ることは、ストリンジェントな設計要件を表し得る。実際、以前に報告された抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、厳密にマウス特異的又は厳密にヒト特異的のいずれかであり、異種間反応性が乏しいか又は全くないことを示した。参照として本明細書で使用されるＶＧＦＢ８０は、強力なヒトＶＥＧＦＲ１結合剤であるが、げっ歯類由来ＶＥＧＦＲ１への結合を示さない。広く交差反応性の抗体の生成は、抗体発見のために典型的に使用される哺乳動物種（例えば、マウス、ラット、及びウサギ）にわたって保存されているエピトープに対する免疫学的寛容による妨害が多いことが十分に確立されている。典型的な抗体発見種（すなわち、マウス及びラット）にわたるＶＥＧＦＲ１のリガンド結合ドメインの保存は、図１及び表３に示されるアミノ酸配列同一性によって証明される。ＶＥＧＦＲ１ドメイン２及びドメイン３について、ヒトとマウス／ラットとの間で、それぞれ約８０％及び６７％の配列同一性が観察される。

【0475】

【表3】

【0476】

代替的に、ニワトリなどのより系統発生的に遠い種の免疫化は、「汎哺乳動物」エピトープに対する免疫寛容を克服することができる場合がある（Ｃｈｉｎｇ，Ｋ．Ｈ．ｅｔ ａｌ，ＭＡｂｓ，１０（１），７１－８０，２０１８）。マウス及びラットと比較して系統発生的にヒトから離れているトランスジェニックＯｍｎｉｃｈｉｃｋｅｎは、保存されたヒトタンパク質に対する強固な免疫応答を実証した。しかしながら、Ｏｍｎｉｃｈｉｃｋｅｎ単独の使用は、高親和性種交差反応性抗体を保証しない。

【0477】

本明細書に記載される高親和性及び種交差反応性抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、（１）特有の抗原（ＶＥＧＦＲ１のリガンド結合サブドメイン）の選択及び設計、（２）免疫のための系統発生的に遠い種（ニワトリ）の選択、（３）固有の免疫手順、及び（４）広範な種反応性を有する抗ＶＥＧＦＲ１抗体を同定する綿密な血清力価スクリーニングプロセスを含む固有の抗体産生方法を使用して作製された。ヒト化免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックニワトリ（ｎ＝１２）（ＯｍｎｉＣｈｉｃｋｅｎ；Ｌｉｇａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ ａｎｄ Ｓｃｈｕｓｓｅｒ，Ｂ．ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１０，２０１７０－２０１７５，２０１３）を、ｈＶＥＧＦＲ１ Ｄ２－Ｄ３－Ｆｃ－６ｘＨｉｓ（ＶＧＦＷ８）又はＶＧＦＷ８及びｍＶＥＧＦＲ１ Ｄ１－Ｄ３－Ｆｃ－６ｘＨｉｓ（ＶＧＦＷ９）の交互ブーストのいずれかで免疫化した。トリの血清中力価を、ＶＧＦＷ２（ｈＶＥＧＦＲ１＿Ｄ２－Ａｖｉ－Ｈｉｓ）、ＶＧＦＷ３（ｈＶＥＧＦＲ１＿Ｄ２－３ Ａｖｉ Ｈｉｓ）、ＶＧＦＷ４（ｍＶＥＧＦＲ１＿Ｄ１－３＿Ａｖｉ－６ｘＨｉｓ）、及びＶＧＦＷ５（ｃｙｎｏＶＥＧＦＲ１＿ＥＣＤ＿Ａｖｉ－６ｘＨｉｓ）精製組換えタンパク質を使用するＥＬＩＳＡによってモニタした。ヒト及びマウスＶＥＧＦＲ１組換えタンパク質の両方に対して最良の力価を有するトリから脾臓を採取した。リンパ球を脾臓から単離し、ＶＧＦＷ４並びにＶＧＦＷ３及び／又はＶＧＦＷ２でコーティングした両方のビーズへの陽性結合について調べた。ｖ遺伝子配列を回収するために、リンパ球に対して単一細胞逆転写酵素ＰＣＲを行った。ＶＨ配列及びＶＬ配列を、哺乳動物発現ベクター中でｓｃＦｖ－Ｆｃ（ヒトＩｇＧ１）分子として組み立てた。哺乳動物発現構築物を使用して、一過性トランスフェクションによって小規模（９６ウェルフォーマット）で抗体を産生した。小規模発現からの上清を、精製抗原を使用するＥＬＩＳＡによって、ＶＥＧＦＲ１に対する特異性を有する組換え抗体の存在についてスクリーニングした。再確認された陽性クローンを６ウェルプレート（２ｍＬ）に増殖させ、上清の連続希釈を使用してＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳ分析を繰り返して、ヒト、カニクイザル、及びマウスＶＥＧＦＲ１への結合を、細胞外ドメインの可溶性精製組換えタンパク質として、及びヒト、カニクイザル、又はマウスＶＥＧＦＲ１のいずれかを過剰発現するように操作されたＨＥＫ細胞上の全長細胞表面結合受容体としての両方で確認した。更に、増殖したクローンを、それぞれｈＶＥＧＦＲ２及びｈＶＥＧＦＲ３を過剰発現するように操作されたＨＥＫ及びＫ５６２細胞上でカウンタースクリーニングした（図２）。

【0478】

ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳによってヒト、カニクイザル、及びマウスＶＥＧＦＲ１への特異的結合を提示したクローンのサブセットを配列決定し、ヒトモノクローナルＩｇＧ１（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ）分子（２Ｈ：２Ｌ）として再フォーマットして、ＦｃＲｎ親和性を保存しながら任意のＦｃ受容体エフェクター機能を無効にした。最初に調べた約８００個のリンパ球のうち、４３個の固有の分子が、上記の基準を満たした結果となった（５．６％）。残りのクローンは、一般に、マウスＶＥＧＦＲ１に対する交差反応性を欠くか、又はＶＥＧＦＲ１に対する特異的結合を示さなかった（すなわち、細胞上のヒトＶＥＧＦＲ２又はヒトＶＥＧＦＲ３にも結合した）。対照的に、より従来的なげっ歯類免疫化キャンペーンを並行して行い（ｎ＝４２動物を免疫化した）、約２，２００のＭＳＤ一次ヒットを細胞に対してスクリーニングしたところ、Ｈｕ／Ｃｙ／Ｍｏ ＶＥＧＦＲ１の広範な種交差反応性（０．１８％ヒット率）を実証したクローンは４つしかなく、これらの分子は最終的に、リガンド結合の遮断において有効性が低いことが証明されたか、又は望ましくない配列障害を有していた。

【0479】

ヒトモノクローナルＩｇＧ１（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ）分子として再フォーマットされた４３個の固有のＯｍｎｉｃｈｉｃｋｅｎ由来クローンを発現させ、小規模（２ｍＬ）で精製し、（１）ＳＰＲによるヒト、カニクイザル、及びマウスＶＥＧＦＲ１に対する親和性決定、（２）リガンド遮断効力（生化学及び細胞ベースの両方）、（３）温度安定性、（４）表面疎水性、（５）非特異的結合、（６）ストレス／強制分解試験後の改変の欠如を含む広範な追加の特徴付けに供した。４３個の分子のうち２８個（約６５％）が、１０～１１個の配列ファミリーに相当する強力なリガンド遮断薬として同定された。８つの抗ＶＥＧＦＲ１ｍＡｂを、ｄｂ／ｄｂマウスにおける単回投与ＰＫ－ＴＥ－ＰＤ試験において評価した。ＶＧＦＢ５４、ＶＧＦＢ７１、ＶＧＦＢ７８及びＶＧＦＢ８２をカニクイザルにおける単回投与ＰＫ－ＴＥ試験において評価し、固有の特性及び構造的特徴付けの広範なパネルに供した。

【0480】

ＶＧＦＢ８８３及びＶＧＦＢ４００の設計
ＶＧＦＢ５４は、重鎖ＣＤＲ２において「ＮＧ」脱アミド化配列障害を含有することが観察され、ペプチドマッピングによって、ｐＨ８．５（４０Ｃ）で１週間維持した場合に有意な脱アミド化（１４．７％）を受けることが観察された。このリスクに対処するために、Ｎ５４又はＧ５５のいずれかがあらゆる可能な代替アミノ酸（Ｃｙｓ又はＴｒｐを除く）で置換されたバリアントの小さなライブラリを作製した。次いで、バリアントのライブラリを、生化学的リガンド遮断アッセイ及び細胞結合アッセイの両方において、標的への保持された結合について評価した。ほぼ全てのバリアントが、ＶＥＧＦＲ１への結合の保持又はわずかな改善を示した。ＶＧＦＢ５４のＮ５４Ｑバリアント（ＶＧＦＢ８８３）は、最も化学的に保存的なアミノ酸置換の１つであり、翻訳後改変リスクを解決し、標的への結合の保持を示したので、更なる開発のために選択した（表４）。

【0481】

【表4】

【0482】

トランスジェニック動物から得られた抗体配列は、フレームワーク領域及びＣＤＲ領域に体細胞超変異を含有し得る。体細胞超変異は、ヒトフレームワーク領域において異常な又は低頻度の残基をもたらし、生物学的治療薬の安定性及び免疫原性に影響を与える可能性がある。親抗ＶＥＧＦＲ１抗体ＶＧＦＢ７８重鎖可変領域は、フレームワーク領域内の１１０位（１０５Ｃｈｏｔｈｉａ描写）に体細胞超変異を含有した。１１０位のロイシン残基（１０５Ｃｈｏｔｈｉａ）は、典型的には、その位置で最も頻繁に見出されるグルタミン（Ｑ）残基（頻度７６％）と比較して、典型的に低頻度の残基（頻度１％未満）である（図３）。したがって、Ｌ１１Ｑ変異をＶＧＦＢ７８の重鎖において操作して、ＶＧＦＢ４００をもたらし、この位置における生殖系列同一性への復帰を表す。この置換は、この位置における最も一般的な同一性を反映するように選択された。

【0483】

ＥｘｐｉＣＨＯ小規模トランスフェクション及び精製
免疫化キャンペーンから同定された抗体をクローニングし、ＩｇＧ１－ＡＡＳ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ）として２ｍｌスケールで発現させ、精製した。ＥｘｐｉＣＨＯ（商標）細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、３７℃、７％ＣＯ２でＥｘｐｉＣＨＯ（商標）発現培地中で培養した。細胞を継代培養し、この場合、生存率９８～９９％で、密度が４－６ × １０^６生存細胞／ｍＬで対数増殖に達した。トランスフェクションの日に、生存細胞密度及び生存率を求めた。細胞を、製造業者のトランスフェクションプロトコル（２４及び９６ディープウェルブロック及びミニバイオリアクタチューブのためのＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＥｘｐｉＣＨＯ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎシステムプロトコル）に従って、６×１０^６生存細胞／ｍＬの密度でトランスフェクトした。トランスフェクション後７日目に８５０×ｇで１５分間遠心分離することによって培養上清を収集した後、精製した。ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ｒｅｓｉｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して清澄化した上清から抗体を精製し、ＰＢＳに透析した。ＤｒｏｐＳｅｎｓｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｔｒｉｎｅａｎ ＮＶ／ＳＡ）を使用して、濾液に対する２８０ｎｍの吸収度測定により、タンパク質濃度を求めた。

【0484】

抗ＶＥＧＦＲ１抗体の配列
表５は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＫａｂａｔ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を示す。表６は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＫａｂａｔ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を示す。表７は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を示す。表８は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＣｈｏｔｈｉａ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を示す。表９は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＡＢＭ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を示す。表１０は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＡＢＭ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を示す。表１１は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＩＭＴＧ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を示す。表１２は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＩＭＴＧ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を示す。表１３は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。表１４は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＶＨ核酸配列を示す。表１５は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＶＬ核酸配列を示す。

【0485】

表１６は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＨＣアミノ酸配列を示す。表１７は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＬＣアミノ酸配列を示す。表１８は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＨＣヌクレオチド配列を示す。表１９は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体のＬＣヌクレオチド配列を示す。表２０は、選択された抗ＶＥＧＦＲ１抗体に割り当てられた配列番号を要約する。

【0486】

【表5】

【0487】

【表6】

【0488】

【表7】

【0489】

【表8】

【0490】

【表9】

【0491】

【表10】

【0492】

【表11】

【0493】

【表12】

ＮＡ＝該当なし

【0494】

【表13】

【0495】

【表14-1】

【0496】

【表14-2】

【0497】

【表15-1】

【0498】

【表15-2】

【0499】

【表16-1】

【0500】

【表16-2】

【0501】

【表17】

【0502】

【表18-1】

【0503】

【表18-2】

【0504】

【表18-3】

【0505】

【表19-1】

【0506】

【表19-2】

【0507】

【表20】

【0508】

実施例３．抗ＶＥＧＦＲ１抗体の生物物理学的特徴付け及びインビトロ活性プロファイリング
ＶＥＧＦＲ１を過剰発現する細胞への結合の確認
親ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ヒトＶＥＧＦＲ１を安定的に発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞、Ｂａ／Ｆ３親細胞、及びマウスＶＥＧＦＲ１を安定に発現するＢａ／Ｆ３細胞を、それぞれ染色なし、ＣＳＦＥ、ＣＴＶ、又はＣＴＶ＋ＣＳＦＥのいずれかで４℃で１０分間染色した。続いて、細胞を熱不活性化ＦＢＳを含有する培地で洗浄し、遠心分離によって収集し、組み合わせ、染色緩衝液中に再懸濁し、プレーティングした（９５μＬ／ウェル、ウェル当たり２００，０００の各細胞型）。抗体サンプルを１０ｎＭの最終濃度まで添加し（５μＬ／ウェル）、遮光して４℃で６０分間インキュベートした。細胞を１５０μＬ／ウェルの染色緩衝液で２回洗浄した。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ１二次抗体を添加し（１００μＬ／ウェル）、遮光して４℃で３０分間インキュベートした。細胞を１５０μＬの染色緩衝液で２回洗浄し、最終的に３０μＬのランニング緩衝液に再懸濁し、ｉＱｕｅフローサイトメーターで読み取った。この単一濃度アッセイを、細胞上のヒト及びマウスＶＥＧＦＲ１への結合の迅速な確認として使用した。１０ｎＭの単一濃度でカニクイザルＶＥＧＦＲ１を安定的に過剰発現するＨＥＫ２９３細胞への候補抗体の結合を確認するために、同様のアッセイを行った。更に、ＶＥＧＦＲ１に対する特異性を実証するために、同様のカウンタースクリーニングアッセイも実施して、単一の高濃度（１０ｎＭ）でヒトＶＥＧＦＲ２を安定的に発現するＨＥＫ２９３細胞又はヒトＶＥＧＦＲ３を安定的に発現するＫ５６２細胞のいずれかに対する抗ＶＥＧＦＲ１抗体の結合の欠如を確認した（表２１）。

【0509】

【表21】

ＣｙＶＥＧＦＲ１についての陽性の閾値は、Ｓ／Ｂ＞３であった
ＮＤ＝決定されず
ヤギ抗ヒトＶＥＧＦＲ２＝Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号ＡＦ３５７
ヤギ抗ヒトＶＥＧＦＲ２＝Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号ＡＦ３４９

【0510】

細胞上のＶＥＧＦＲ１に対する抗ＶＥＧＦＲ１抗体の結合についての完全な用量反応曲線も作成した。親ＣＨＯ－Ｋ１細胞及びヒトＶＥＧＦＲ１を安定的に発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞（ＣＨＯ－Ｋ１＼ｈＶＥＧＦＲ１）をａＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ及び１０μｇ／ｍＬピューロマイシンを含有するａＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ中でそれぞれ培養した。ＣＨＯＫ１／ｈＶＥＧＦＲ１を上記のようにＣＳＦＥで染色し、親ＣＨＯ－Ｋ１細胞を未染色のままにした。細胞を洗浄し、合わせて（約０．５×１０^６細胞／ｍＬ）、ウェル当たり約４０，０００細胞（７５μＬ／ウェル）でプレーティングした。次いで、連続希釈した抗体サンプルを細胞に添加し、３７℃で１時間インキュベートした。細胞を染色緩衝液で２回洗浄し、次いでＡＦ６４７コンジュゲート二次抗体で４℃にて３０分間染色した。プレーティングした細胞を２回洗浄し、続いてＳｙｔｏｘ Ｂｌｕｅ（１：１０００）を含有するリード緩衝液を添加し、ｉＱｕｅフローサイトメーターで読み取った。データをフィットさせてＥＣ_５０値を得た（表２２）。

【0511】

【表22】

【0512】

リガンド遮断：生化学的及び細胞ベース
ＶＥＧＦＡ又は胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）リガンドのＶＥＧＦＲ１への結合を防止する抗ＶＥＧＦＲ１抗体の能力を、生化学的電気化学発光（ＥＣＬ）アッセイ及び細胞ベースのアッセイフォーマットの両方で決定した。

【0513】

簡潔には、ＭＳＤ ＭＡ６０００ ３８４プレートを、冷室で１６時間、ＴＢＳ中の０．５ｕｇ／ｍｌのプロテインＡ／Ｇ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）又は抗Ｈｉｓ ｍＡｂ（Ｒ＆Ｄ）でコーティングした。プレートを１×ＴＢＳで２回洗浄し、３５μｌ／ウェルのブロッカーＡで室温にて１時間遮断した。組換えヒト若しくはマウスＶＥＧＦＲ１－Ｆｃタンパク質（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、又はＨｉｓタグ化カニクイザルＶＥＧＦＲ１を０．５ｕｇ／ｍｌでプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。未結合のＶＥＧＦＲ１タンパク質を、７０ｕｌ／ウェルの１×ＭＳＤ Ｔｒｉｓ Ｗａｓｈ緩衝液を使用して洗い流した。半対数連続希釈の非標識ＶＥＧＦＲ１リガンド又は抗ＶＥＧＦＲ１抗体を、結合したＶＥＧＦＲ１と共に室温で３０分間プレインキュベートし、次いで、希釈したビオチン標識ヒトＶＥＧＦＡ１６５（０．２ｎＭ）、マウスＶＥＧＦＡ１６４（０．２ｎＭ）又はＰＬＧＦ（２ｎＭ）を結合のために添加した。注目すべきことに、カニクイザル及びヒトＶＥＧＦＡ及びＰｌＧＦのアミノ酸配列は同一であり、ビオチン標識ヒトＶＥＧＦ－Ａ及びＰｌＧＦをカニクイザルＶＥＧＦＲ１競合アッセイのリガンドとして使用した。結合したリガンドを、１μｇ／ｍｌのスルホタグ化ストレプトアビジンを添加することによって検出した。シグナルを生成し、３５μｌ／ウェルの２×ＭＳＤリード緩衝液Ｔの存在下でＭＳＤ Ｉｍａｇｅｒ、ＳＥＣＴＯＲ Ｓ ６００（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｃ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、シリアル番号１２０１１８０６２６６２０）で検出した。ＥＣＬ読み取り値を使用して、結合％、ＩＣ５０及び最大阻害％を計算した。
●％結合＝（（（サンプル－平均（バックグラウンド））÷（平均（総結合）－平均（バックグラウンド）））×１００
○総結合＝ビオチンリガンドのみ
○バックグラウンド＝ブロッカーもビオチンリガンドもない
●非線形回帰ログ（阻害剤）対応答－可変勾配（４つのパラメータ）を使用して曲線をフィットさせた。
○式：Ｙ＝底値＋（頂点－底値）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０－Ｘ）×ヒル勾配））
○Ｐｒｉｓｍ ８ソフトウェアからＩＣ５０を抽出した。
●最大阻害％＝１００－平均（最高濃度での結合％）

【0514】

ヒト、カニクイザル、マウスＶＥＧＦＲ１への結合からＶＥＧＦＡ／ＰｌＧＦを置換する際のＶＥＧＦＲ１ ｍＡｂのインビトロ有効性（最大阻害％）及び効力（ＩＣ５０）を表２３及び表２４に要約する。抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、約１００％の最大阻害でヒト及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１への結合において強力なリガンド遮断活性を示した。ＩＣ５０値はナノモル以下の範囲であり、そのリガンドに匹敵した。ＶＧＦＢ８０はマウスＶＥＧＦＲ１に対する結合もリガンド競合も有さなかったが、他のＶＥＧＦＲ１ ｍＡｂは、このアッセイにおいてマウスＶＥＧＦＲ１に対して高い遮断効力及び効力を示した。

【0515】

【表23】

【0516】

【表24】

【0517】

細胞上のリガンド遮断を以下のように決定した。Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ ＣＳＦＥ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で染色した細胞を、ＦＡＣＳ染色緩衝液中で、ウェル当たり１５，０００細胞（３０μＬ／ウェル、ＣＨＯ親細胞又はヒトＶＥＧＦＲ１を過剰発現するように操作されたＣＨＯ細胞）。等量の段階希釈した試験抗体を細胞に適用し、４℃で１時間インキュベートした。細胞を２００μＬ／ウェルの染色緩衝液で２回洗浄し、続いて１００μＬ／ウェルのビオチン化ＶＥＧＦ Ａリガンド（５００ｐＭ）を添加した。細胞を４℃で更に１時間インキュベートした後、５０μＬ／ウェルのＡＦ６４７コンジュゲートストレプトアビジン（３ｎＭ）を添加した。プレートを遮光して４℃で３０分間インキュベートし、２００μＬ／ウェルの染色緩衝液で２回洗浄し、遠心分離によって収集し、Ｓｙｔｏｘ Ｂｌｕｅ生／死染色を含有するランニング緩衝液に再懸濁し、次いでＩｎｔｅｌｌｉｃｙｔ ｉＱｕｅ Ｐｌｕｓフローサイトメーターで読み取った。データをフィットさせてＩＣ_５０値を得た。リガンド遮断パーセントを各試験抗体の各濃度について計算し、ＩＣ５０値を決定した（表２５）。

【0518】

【表25】

【0519】

熱安定性の決定
各抗体の熱安定性を、Ｎａｎｏｔｅｍｐｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓからの自動化Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ機器を使用してＮａｎｏＤＳＦ法によって決定した。濃度０．２５ｍｇ／ｍＬでサンプルを３８４ウェルサンプルプレートから２４ウェルキャピラリーにロードすることによって、測定を行った。各試料について２回測定が行われる。Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ＮａｎｏＤＳＦユーザインターフェース（Ｍｅｌｔｉｎｇ Ｓｃａｎタブ）を使用して、実施のための実験パラメータを設定する。典型的なＩｇＧサンプルのサーマルスキャンは、１．０℃／分の速度で２０℃～９５℃にわたって行われる。ＮＩＳＴ ｍＡｂ（及び／又はＣＮＴＯ３９３０、ＣＮＴＯ５８２５）を対照として含め、二連で実行した。３３０及び３５０ｎｍにおける分子固有の蛍光を使用して、温度ランプ中のアンフォールディングをモニタし、経時的な蛍光強度の変化として記録する。Ｔ_開始は、アンフォールディングが始まる温度である。

【0520】

【表26】

【0521】

選択された候補の熱安定性も、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって行った。ＭｉｃｒｏＣａｌ ＶＰ－Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ＤＳＣ装置を使用した。サンプルを１×ＤＰＢＳ又は別の適切な緩衝液中に一晩透析した。サーマルスキャンは、サンプル細胞及び参照細胞の温度を２５～９５℃まで６０℃／時間の速度で上昇させることによって行った。サーモグラムは、「非２状態」パラメータを用いてフィットさせた。全てのサンプルについてのＴｍ１は、Ｆａｂアンフォールディングを表し得、６８～７３℃の範囲である。Ｔｍ２及びＴｍ３は、バリアントＩｇＧ１ Ｆｃアンフォールディングに関連する。

【0522】

【表27】

【0523】

動力学的排除アッセイによる親和性測定
動力学的排除アッセイ（ＫＥＡ、ＫｉｎＥｘＡ）を使用して、ヒト、マウス及びカニクイザルＶＥＧＦＲ１への抗ＶＥＧＦＲ１抗体の結合を分析した。ＫＥＡは蛍光ベースの溶液法であり、文献（Ｄａｒｌｉｎｇ ａｎｄ Ｂｒａｕｌｔ，２００４）に詳細に記載されている。相互作用の親和性を測定するために、固定濃度の１つの相互作用体（Ａ）及び様々な濃度の別の相互作用体（Ｂ）を有する一連の溶液を調製し、平衡に到達させる。平衡化後、遊離Ａの濃度は、平衡化された混合物を、反応物Ｂで修飾されたビーズを充填したカラムに流すことによって決定される。遊離Ａはビーズに結合し、次いで蛍光標識ポリクローナル抗体を使用して検出される。平衡が破壊されない（置き換えられない）こと、すなわち、ＢがＡＢ複合体から解離しないこと（動力学的排除）を確実にするために、混合物とビーズとの間の短い接触時間を達成するために、サンプルを速い流速でカラムにロードする。

【0524】

簡潔には、固定濃度（３００ｐＭ、６０ｐＭ、１２ｐＭ、２．４ｐＭ又は０．５ ｐＭ）のＡｂを使用して、抗原の連続希釈物（２ｎＭ～０．５２ｐＭ、又は８００ｐＭ～５．３７ｆＭ）を調製した。複合体滴定物を室温でインキュベートして、少なくとも２日間結合平衡に到達させた。インキュベーション後、サンプルをＫｉｎＥｘＡ３２００又はＫｉｎＥｘＡ４０００装置にかけて、反応中の遊離抗体を評価した。これらの研究の間、実験が不合格であったか、合格基準に不合格であったので、データの一部は拒絶された。マウスＶＥＧＦＲ１について、６０及び３００ｐＭ濃度は、高い滴定剤関連ＮＳＢに起因して拒絶された。ＫｉｎＥｘＡ Ｐｒｏソフトウェアのｎ曲線分析機能を用いて、解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）を決定した。このプログラムは、１：１結合モデルに全体的に適合させたデータの非線形最小二乗回帰分析を使用する。（ＣＩ＝信頼区間）。

【0525】

【表28】

^ａマウスＶＥＧＦＲ１特異的抗体。ヒト、カニクイザル又はラットＶＥＧＦＲ１に結合しない

【0526】

５つのｍＡｂに対するＶＥＧＦＲのＨＤＸエピトープマッピング
５つのｍＡｂ、ＶＧＦＢ５４、ＶＧＦＢ７１、ＶＧＦＢ７８、ＶＧＦＢ８０、及びＶＧＦＢ８２に対するＶＥＧＦＲ１のエピトープを、ＨＤＸ－ＭＳによってマッピングした。ＶＧＦＢ８０は、本明細書に記載される抗体生成の試みにおいて発見されなかった参照分子であった。ｍＡｂへの結合時に２ｋｃａｌ／ｍｏｌを超えて自由エネルギーを減少させたセグメントは、ＨＤＸ－ＭＳによって定義された「強い」エピトープである。ｍＡｂへの結合時に自由エネルギーを１～２ｋｃａｌ／ｍｏｌ減少させたセグメントは、「弱い」エピトープと考えられる。試験した全てのｍＡｂに対するＶＥＧＦＲ１のエピトープは非常に類似している。ＶＧＦＢ５４に対するＶＥＧＦＲ１の強いエピトープは、セグメント１７２～１７７（ＦＰＬＤＴＬ、配列番号１４３）及び２０１～２０４（ＥＩＧＬ、配列番号１４４）である。ＶＧＦＢ７１に対するＶＥＧＦＲ１の強いエピトープは、セグメント１７２～１７７（ＦＰＬＤＴＬ、配列番号１４３）、２００（Ｋ）、及び２０１～２０４（ＥＩＧＬ、配列番号１４４）である。ＶＧＦＢ７８に対するＶＥＧＦＲ１の強いエピトープは、セグメント１７２～１７７（ＦＰＬＤＴＬ、配列番号１４３）、２００（Ｋ）、及び２０１～２０４（ＥＩＧＬ、配列番号１４４）である。ＶＧＦＢ８２に対するＶＥＧＦＲ１の強いエピトープは、セグメント２０１～２０４（ＥＩＧＬ、配列番号１４４）である。ＶＧＦＷ１の配列カバー率は、０．４ｍＭ ＦＣ－１４、８Ｍ尿素、１Ｍ ＴＣＥＰ、ｐＨ３．０でクエンチした後にペプシン／ＦＰＸＩＩＩ混合床カラムによって消化した場合、８８％（＝２８５／３２６）であった。５つの潜在的な糖鎖付加部位のうち、Ｎ１９６は非糖ペプチドによってカバーされ、他の４つの部位はカバーされなかった。

【0527】

【表29】

【0528】

ＶＥＧＦＲ１に対する４つのｍＡｂのＨＤＸパラトープマッピング
ＶＥＧＦＲ１に対する４つのｍＡｂのパラトープをＨＤＸ－ＭＳによってマッピングした（図４Ａ及び図４Ｂ）。ｍＡｂへの結合の際に１ｋｃａｌ／ｍｏｌを超えて自由エネルギーを減少させたセグメントは、ＨＤＸ－ＭＳ規定エピトープである。ＶＥＧＦＲ１に対するＶＧＦＢ５４のパラトープは、重鎖セグメント３２～３５（ＹＧＭＮ、ＨＣＤＲ１、配列番号１４５）、３８～４６（ＲＱＡＰＧＫＧＬＤ、配列番号１４６）、４９～５４（ＳＳＩＮＲＮ、ＨＣＤＲ２、配列番号１４７）、５５～５９（ＧＤＩＳＴ、ＨＣＤＲ２、配列番号１４８）、６９～７７（ＦＴＩＳＲＤＮＳＫ、配列番号１４９）及び９７～１０４（ＣＴＫＮＨＤＹＨ、ＨＣＤＲ３、配列番号１５０）並びに軽鎖セグメント１～３２（ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＲＳＮＩＧＮＮ、ＬＣＤＲ１、配列番号１５１）及び５１～７４（ＬＮＳＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬ、ＬＣＤＲ２、配列番号１５２）である。ＶＥＧＦＲ１に対するＶＧＦＢ７１のパラトープは、重鎖セグメント３０～３４（ＲＤＹＮＭ、ＨＣＤＲ１、配列番号１５３）、３９～４７（ＱＡＰＧＫＧＥＷ、配列番号１５４）及び４９～６８（ＳＩＩＴＮＤＧＳＳＴＡＹＳＤＳＶＫＧＲＦ、ＨＣＤＲ２、配列番号１５５）並びに軽鎖セグメント１～３４（ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＧＳＳＮＩＧＳＮＹＶ、ＬＣＤＲ１、配列番号１５６）、５０～５１（ＹＦ、ＬＣＤＲ２）、５４～７４（ＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬ、配列番号１５８）及び９４～９８（ＤＲＶＮＶ、ＬＣＤＲ３、配列番号１５９）である。ＶＥＧＦＲ１に対するＶＧＦＢ７８のパラトープは、軽鎖セグメント５０～７３（ＹＹＤ－ＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬ、ＬＣＤＲ２、配列番号１６０）である。ＶＥＧＦＲ１に対するＶＧＦＢ８２のパラトープは、重鎖セグメント７～１８（ＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬ、配列番号１６１）、２３～２８（ＥＡＳＧＦＤ、ＨＣＤＲ１、配列番号１６２）、３１～３３（ＴＹＡ、ＨＣＤＲ１）、３８～４６（ＲＱＡＰＧＫＧＬＥ、配列番号１６３）、５１～６８（ＩＮＳＥＧＴＩＴＳＨＡＰＡＶＫＧＲＦＴ、ＨＣＤＲ２、配列番号１６４）及び９６～１１６（ＣＳＳＴＴＧＴＴＨＧＭＤＶＷＧ、ＨＣＤＲ３、配列番号１６５）並びに軽鎖セグメント１～３４（ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡ ＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＱＮＮＹＶ、ＬＣＤＲ１、配列番号１６６）、５０～５１（ＹＦ、ＬＣＤＲ２）、５２～７４（ＮＳＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬ、ＬＣＤＲ２、配列番号１６７）及び９５～１００（ＳＬＮＧＷＶ、ＬＣＤＲ３、配列番号１６８）である。

【0529】

チロシンキナーゼ活性化アッセイ
抗ＶＥＧＦＲ１抗体を試験して、それらがＶＥＧＦＲ１シグナル伝達を活性化できないことを確認した。ＶＥＧＦＲ１の本質的に弱いシグナル伝達活性のために、以前に記載された細胞ベースのバイオアッセイを使用した（Ｍａｋｉｎｅｎ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０（１７），４７６２－４７７３，２００１）。キメラ受容体を安定的に発現するＢａ／Ｆ３細胞で、ヒトＶＥＧＦＲ１の細胞外ドメイン（残基１～７５８、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ１７９４８）を、マウスエリスロポエチン受容体（ＥｐｏＲ、残基２５０～５０７、Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ１４７５３）の膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインに融合）に融合し、これらの細胞のＩＬ－３非依存性増殖を、抗ＶＥＧＦＲ１抗体又は陽性対照としてのｈＶＥＧＦＲ１の存在下又は非存在下で決定した。簡潔には、約２０，０００細胞／ウェルを、マウスＩＬ－３を欠く培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋０．５μｇ／ｍｌピューロマイシン）中にプレーティングした。マウスＩＬ－３を最終濃度１０ｎｇ／ｍＬで対照ウェルに添加した。他のウェルは、抗ＶＥＧＦＲ１抗体（最終濃度１０ｎＭ若しくは５０ｎＭ）、ｈＶＥＧＦＡ１６５（５ｎＭ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、又は基本培地（ｍＩＬ－３を含まない）のいずれかを受領した。細胞を３７℃、５％ＣＯ_２で７２時間インキュベートした。増殖を５０μＬ／ウェルのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）の添加、室温で１０分間のインキュベーションによって測定した。最後に、プレートをＥｎｖｉｓｉｏｎ ２１０５プレートリーダーでＵｌｔｒａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅプロトコールを用いて読み取った。ＢａＦ３＼ｈＶＥＧＦＲ１－ｍＥｐｏＲ細胞の増殖をｍＩＬ－３依存性条件と比較した。ｍＩＬ－３の非存在下で細胞の生存率をレスキューすることが実証されたｈＶＥＧＦ（５ｎＭ）とは異なり、試験した抗ＶＥＧＦＲ１抗体はいずれも、試験した濃度のいずれにおいてもＩＬ－３非依存性増殖を促進することができなかった（表３０）。この結果は、抗ＶＥＧＦＲ１抗体がチロシンキナーゼ活性化又は更に下流のシグナル伝達を刺激できないことと一致する。

【0530】

【表30】

【0531】

特異性細胞表面－ｏｍｅ
広範な種の交差反応性抗体に関連する１つのリスクは、オフターゲット障害の増加である。細胞マイクロアレイ技術を実施して（Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ Ｌｔｄ．）、ＶＥＧＦＲ１に対する抗ＶＥＧＦＲ１抗体の特異性及び任意の「オフターゲット」障害の非存在を確認した。

【0532】

このヒト細胞マイクロアレイ方法論は、以前に文献に記載されている（Ｆｒｅｅｔｈ，Ｊ．ｅｔ ａｌ，ＳＬＡＳ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，２５（２），２２３－２３０，２０２０）。一次スクリーニングを、固定されたＨＥＫ２９３細胞と共にアレイ化されたスライド上で実施し、ＨＥＫ２９３細胞の各スポットは、細胞表面－ｏｍｅ由来の固有なタンパク質、細胞表面係留ヒト分泌タンパク質、又はヘテロ二量体ヒト細胞表面受容体のいずれかを発現した。合計で、５，５２８の固有の遺伝子産物が、この一次スクリーニングにおいて表された（４，１０３のヒト原形質膜タンパク質（＋いくつかの非係留分泌タンパク質）＋１，４２５の細胞表面係留ヒト分泌タンパク質）。簡潔には、固定されたトランスフェクトＨＥＫ２９３細胞を含有するスライドに、試験抗体（２μｇ／ｍＬ）の溶液を重層し、インキュベートし、洗浄した。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ検出抗体及びＩｍａｇｅＱｕａｎｔでの蛍光定量を使用して結合を評価した。予想されるように、試験した全ての抗ＶＥＧＦＲ１分子は、ヒトＶＥＧＦＲ１のアイソフォーム（ＦＬＴ１アイソフォーム１、２及び３）への結合を示した（表３１～３４）。ＶＧＦＢ５４、ＶＧＦＢ８０、及びＶＧＦＢ８２は、このスクリーニングによって捕捉された任意の他の表面－ｏｍｅタンパク質への結合を示さなかった。抗ＶＥＧＦＲ１抗体のうちの２つ（ＶＧＦＢ７１及びＶＧＦＢ７８）は、無関係な細胞表面タンパク質（表３２）ネクチン１、ＦＧＦＲ２（線維芽細胞増殖因子受容体２）、ＩＳＬＲ（ロイシンリッチリピートタンパク質を含有する免疫グロブリンスーパーファミリー）及びＣＲＥＬＤ２（タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＣＲＥＬＤ２）への予想外の結合を示した。ＥＲに位置して、ＣＲＥＬＤ２へのオフターゲット結合はあまり重要ではなかった。一方、ネクチン－１、ＦＧＦＲ２、及びＩＳＬＲは、広範な組織発現プロファイルを提示する。これらのタンパク質に対する交差反応性は、これらの標的への結合が分子の薬物動態及び生体内分布プロファイルに著しい影響を及ぼす可能性があるため、望ましくない。続いて、このオフターゲット結合を、一次スクリーニングにおいて同定されたこれらの「オフターゲット」タンパク質を一過性に発現する生ＨＥＫ２９３細胞に対するフローサイトメトリーによって確認した。これらのデータを使用して、知られていないオフターゲット障害を有する抗ＶＥＧＦＲ１抗体を更に選択した。

【0533】

【表31】

【0534】

【表32】

【0535】

【表33】

【0536】

【表34】

【0537】

実施例４．カニクイザルにおける抗ＶＥＧＦＲ１抗体の全身薬物動態及び標的関与バイオマーカープロファイル
抗ＶＥＧＦＲ１抗体の生物物理学的及びインビトロ活性プロファイリングに加えて、全身性薬物動態（ＰＫ）及び標的関与（ＴＥ）バイオマーカープロファイルをカニクイザルにおいて特徴付けた。

【0538】

ナイーブ雄カニクイザル（Ｍａｃａｃａ Ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ、年齢２～７歳、Ｅｎｖｉｇｏ ＲＭＳ）を、体重によってそれぞれ２匹の動物の群に無作為化した。０．３ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、及び１０ｍｇ／ｋｇのＶＧＦＢ５４、ＶＧＦＢ７８、ＶＧＦＢ８２及びＶＧＦＢ８０を、１日目に約２分間かけて静脈内（ＩＶ）投与し、その後１５日目に皮下（ＳＣ）投与した。投与前、並びにＩＶ投与の１時間、６時間、２４時間、４８時間、９６時間及び１６８時間後、並びにＳＣ投与の１時間、６時間、２４時間、４８時間、９６時間、１６８時間及び３３６時間後の時点で、各動物からのＫ２ ＥＤＴＡを含有するチューブに大腿静脈を介して血液サンプル（合計０．５～２ｍＬ）を採取した。血液サンプルを２～８℃で維持した後、遠心分離して血漿を得た（採取から１時間以内）。血漿サンプルをＰＫ及びＴＥアリコートに採取し、サンプル分析まで－７０℃で保存した。

【0539】

抗ＶＥＧＦＲ１抗体のイムノアッセイ生体分析
カニクイザル血漿中の抗ＶＥＧＦＲ１ ｍＡｂの「総」及び「遊離」ｍＡｂ濃度を、電気化学発光検出による典型的なサンドイッチフォーマットを用いたイムノアッセイ法を使用して決定した。簡潔に述べると、ＭＳＤ Ｇｏｌｄストレプトアビジンプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）をブロッキング緩衝液で予め湿らせ、軽く叩いて乾燥させた。最終作業濃度の捕捉及び検出試薬を含有するマスターミックス溶液を、希釈標準、品質管理（ＱＣ）及びサンプル（１５μＬ／ウェル）と共にプレートに添加し（３５μＬ／ウェル）、６０分間インキュベートした。洗浄後、１×ＭＳＤ－Ｔリード緩衝液を全てのウェルに添加した。その後すぐ、プレートをＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ６００ Ｉｍａｇｅｒで読み取った。「総」及び「遊離」ＶＥＧＦＲ１ ｍＡｂについての定量可能な範囲は、それぞれ０．０１０～２５６０μｇ／ｍＬ及び０．０２０～５１２０μｇ／ｍＬと定義され、血漿サンプルについては１０×最小必要希釈であった。「総」ｍＡｂの測定のために、ビオチン化及びルテニウム標識抗ヒトＦｃ ｍＡｂ（Ｒ１０Ｚ８Ｅ９）を捕捉／検出試薬として使用した。「遊離」ｍＡｂの測定のために、ビオチン化組換えカニクイザルＶＥＧＦＲ１［Ｄ１－Ｄ３］－Ａｖｉ６ｘＨｉｓ、及びルテニウム標識抗ヒトＦｃ ｍＡｂ（Ｒ１０Ｚ８Ｅ９）を捕捉／検出試薬として使用した。

【0540】

生のＥＣＬカウントを含有するＭＳＤ出力ファイルをＣｙｂｅｒｌａｂ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｍａｎａｇｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ）に掃引し、分析のためにＷａｔｓｏｎ ＬＩＭＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）回帰ソフトウェアにインポートした。Ｗａｔｓｏｎ研究回帰は、アッセイ認定の間に予め定義され、１／Ｙ２重み付け係数を用いた５パラメータロジスティック（自動推定）フィットを使用した。

【0541】

血漿中薬物濃度－時間プロファイルを図５～図８で説明する。総濃度及び遊離濃度は、４つ全ての分子について全ての時点にわたって同様であった。非コンパートメント解析を使用して推定した血漿ＰＫパラメータを表３５に示す。１つの投与間隔の終末相半減期（Ｔ_１／２、最大血漿薬物濃度（Ｃ_ｍａｘ）、及び薬物血清濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、用量に比例する様式よりも大きく用量とともに増加した。非線形ＰＫプロファイル、及び低用量でのより短い半減期は、標的媒介性薬物動態（ＴＭＤＤ）を示唆する。ＶＧＦＢ５４、ＶＧＦＢ８２、及びＶＧＦＢ８０の１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶの平均半減期は、それぞれ約４．９日、５．７日、４．５日であった（総ＰＫの非コンパートメント分析に基づく）。しかしながら、有意なＴＭＤＤ、短いサンプリング時間、及び終末相が完全に特徴付けられていない可能性があるため、Ｔ_１／２及びクリアランス（ＣＬ）は慎重に解釈されるべきである。ＶＧＦＢ８２、ＶＧＦＢ５４、及びＶＧＦＢ８０のサルＰＫプロファイルは更に、最小の生理学的に基づくＰＫモデルを使用して特徴付けられた。ＶＧＦＢ５４、ＶＧＦＢ８２、及びＶＧＦＢ８０のＳＣバイオアベイラビリティは、約８３．７％、９５．４％、及び８７．７％であった。

【0542】

【表35】

【0543】

Ｃ_ｍａｘ、最大（ピーク）濃度、ＡＵＣ_ｌａｓｔ、最後のサンプリング点までの濃度－時間曲線下面積、ＡＵＣ_ｉｎｆ、無限大に外挿された濃度－時間曲線下面積、ＣＬ、総クリアランス、Ｔ_１／２、半減期、ＮＡ、該当なし

【0544】

ＶＥＧＦＲ１ ｍＡｂの投与に応答した血漿ＰｌＧＦ
ＶＥＧＦＡに加えて、ＶＥＧＦＲ１は胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）にも結合する。ＶＥＧＦＲ１及びＶＥＧＦＲ２の両方に結合するＶＥＧＦＡとは異なり、ＰｌＧＦはＶＥＧＦＲ１の選択的リガンドである。ＰｌＧＦ及びＶＥＧＦＡは、同等の結合親和性を有するＶＥＧＦＲ１（Ｄ２－Ｄ３）上の重複した結合ドメインを共有するので、ＶＥＧＦＡ結合を遮断する抗ＶＥＧＦＲ１抗体は、ＰｌＧＦのＶＥＧＦＲ１への結合を競合的に遮断し、ＰｌＧＦのレベルの増加をもたらす。

【0545】

カニクイザルにおける未結合及び結合ＶＥＧＦＲ１の両方を含む総血漿ＰｌＧＦレベルを、段階的電気化学発光アッセイ（ヒトＰｌＧＦ Ｖプレックスキット、ＭＳＤ Ｋ１５１ＭＥＤ－４）を使用して決定した。捕捉抗体でコーティングしたプレートを遮断し、１時間インキュベートした。ＰｌＧＦキャリブレーター（ヒトＰｌＧＦ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、品質管理（ＱＣ）、及び血漿サンプルを、抗ＶＥＧＦＲ１抗体（１６７μｇ／ｍＬ）を含有する緩衝液で１：１０に希釈した。抗ＶＥＧＦＲ１抗体は可溶性ＶＥＧＦＲ１に結合し、したがってＶＥＧＦＲ１がＰｌＧＦに結合することによって引き起こされるシグナル抑制を緩和する。室温で少なくとも１５分間インキュベートした後、遮断後の洗浄したＭＳＤプレートに混合物を添加し、４℃で一晩インキュベートした。洗浄後、ＳｕｌｆｏＴａｇとコンジュゲートした検出抗体を添加し、室温で２時間インキュベートした。ＭＳＤプレートを洗浄し、１×ＭＳＤ－Ｔリード緩衝液を全てのウェルに添加した。その後すぐ、プレートをＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ６００ Ｉｍａｇｅｒで読み取った。

【0546】

生のＥＣＬカウントを含むＭＳＤ出力ファイルを、分析のためにＷａｔｓｏｎ ＬＩＭＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）回帰ソフトウェアにインポートした。Ｗａｔｓｏｎ研究回帰は、アッセイ認定の間に予め定義され、１／Ｙ２重み付け係数を有する４パラメータロジスティックフィットを使用した。

【0547】

ＶＥＧＦＲ１ ｍＡｂのＩＶ又はＳＣ投与後、全身ＰｌＧＦレベルは用量及びＰＫ関連様式で増加した（図９～図１２）。ＰｌＧＦレベルの増加は、ＶＧＦＢ８２とＶＧＦＢ５４との間で同等であり、ＶＧＦＢ８０及びＶＧＦＢ７８よりも高い傾向にある。

【0548】

実施例５．ｄｂ／ｄｂマウスにおけるマウス再フォーマット抗ＶＥＧＦＲ１リードの標的関与バイオマーカープロファイル
マウスにおけるヒト抗ＶＥＧＦＲ１ ｍＡｂの免疫原性を低下させて、マウスにおける長期投薬及び有効性研究を可能にするために、ヒト抗ＶＥＧＦＲ１抗体のマウス再フォーマットバージョンを作製し、ここで、ヒト抗ＶＥＧＦＲ１ ｍＡｂ（ＶＨ／ＶＬ）の可変領域を、重鎖についてはサイレントマウスＩｇＧ１＿Ｄ２６５Ａ（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）から構成されるマウス定常領域、及び軽鎖についてはマウスラムダの定常領域に移植した。対照は、ＶＥＧＦＲ１に結合しない同じアイソタイプの対照抗体である。

【0549】

マウスＰｌＧＦの測定には、マウスＰｌＧＦ－２ Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ Ｃａｔａｌｏｇ ＭＰ２００）を用いた。アッセイの線形検出範囲（１．８４ｐｇ／ｍＬの感度で２３．４～１５００ｐｇ／ｍＬのアッセイ範囲）内に読み出しを維持するために、用量レベル及び時点に従って、試験血漿サンプルをキャリブレーター希釈剤ＲＤ ５～１７で１：４～１：１５に希釈した。４５０ｎｍに設定したＳｐｅｃｔｒａＭａｘプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｍｏｄｅｌ Ｐａｒａｄｉｇｍ）でプレートを読み取り、マウス血漿サンプル中のＰＬＧＦ－２の濃度をＳｏｆｔＭａｘ（登録商標）Ｐｒｏ ７．１を使用して計算した。

【0550】

ｄｂ／ｄｂ雌マウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｓｔｏｃｋ Ｎｏ．０００６４２）に０日目、７日目及び１４日目に１ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇで週１回反復皮下投与すると、マウス再フォーマットＶＧＦＢ５４、ＶＧＦＢ７８及びＶＧＦＢ８２は、同じ用量レベルで異なるレベルのＰｌＧＦ応答を誘発した（表３６及び表３７）。再フォーマットＶＧＦＢ７８は、３つのリードの中で血漿ＰｌＧＦの最も強い増加を誘導した。再フォーマットＶＧＦＢ８２もＰＬＧＦの増加をもたらした。しかしながら、ＶＧＦＢ７８と比較して、ＶＧＦＢ８２は、マウスにおいて有意に低いレベルでＰｌＧＦ応答を誘導した（１０ｍｇ／ｋｇでのＶＧＦＢ７８よりも約４倍低い）。再フォーマットＶＧＦＢ５４は、マウスにおいてＴＥバイオマーカーの増加が最小限であった。

【0551】

【表36】

【0552】

【表37】

【0553】

実施例６．高血圧性一側性腎摘出ｄｂ／ｄｂマウスにおけるアルブミン尿減少に対するＶＧＦＢ８２及びＶＧＦＢ７８の効果
抗ＶＥＧＦＲ１リードｍＡｂの有効性を評価するために、本明細書においてＲｅｎｉｎＡＡＶ ｕＮｘ ｄｂ／ｄｂモデルにちなんで名付けられた重度の進行性糖尿病性腎疾患マウスモデルを使用した（Ｈａｒｌａｎ ＳＭ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ ２０１８；２９：４７７－９１；Ｈａｒｌａｎ ＳＭ，ｅｔ ａｌ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｇｕｌ Ｉｎｔｅｇｒ Ｃｏｍｐ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２０１５；３０９：Ｒ４６７－７４）。このモデルにおいて、レニン発現アデノ随伴ウイルスの送達によって誘導された持続性高血圧は、一側性腎摘出ｄｂ／ｄｂマウスにおける疾患進行及び腎傷害を更に加速する。ＲｅｎｉｎＡＡＶ ｕＮｘ ｄｂ／ｄｂマウスは、尿中アルブミン対クレアチニン比（ＵＡＣＲ）の有意な上昇、糸球体濾過量（ＧＦＲ）の低下、及び血清クレアチニンの増加を特徴とする重度の腎機能障害を示す。組織病理学的特徴付けは、メサンギウム拡大、糸球体硬化症、尿細管変性並びに尿細管間質炎症及び線維症を含む、進行したヒト糖尿病性腎疾患の類似の特徴を示した。

【0554】

雌ｄｂ／ｄｂマウスを７～８週齢で一側性腎摘出し（Ｊａｃｋｓｏｎ ＬａｂｏｒａｔｏｒｙからのＳｕｒｇ ３０４１）、１２～１３週齢でレニン発現アデノ随伴ウイルス（１×１０^１０ゲノムコピー）に感染させた。６週間後、マウスを、それらのＵＡＣＲ、収縮期血圧、及び体重に基づいて、ＩＲＩＮＩソフトウェアでそれぞれ０．８、０．１、０．１の加重を用いて、それぞれ９～１５匹の動物の群に無作為化した。血中グルコース＞３００ｍｇ／ｄＬ及びＵＡＣＲ＞５０００ｍｇ／ｇを無作為化に入るための包含基準として使用した。マウスに、ビヒクル、リシノプリル（飲料水中１０ｍｇ／ｋｇ）、アイソタイプ対照、低用量又は高用量のマウス再フォーマットＶＧＦＢ８２又はＶＧＦＢ７８のいずれかを、皮下注射によって、指定された投与頻度で４～６週間投与した。尿サンプルは、治療の２時間前、及び投与後２週間毎に、代謝ケージ（ＭＭＣ１００、Ｈａｔｔｅｒａｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）にマウスを個々に収容することによって収集した。アルブミン及びクレアチニンの尿中濃度を、Ｓｅｋｉｓｕｉ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｍｉｃｒｏａｌｂｕｍｉｎアッセイキット（カタログ番号２５２－２０）、酵素クレアチニンアッセイキット（カタログ番号２６５－３０）及びＶｅｔ Ａｘｃｅｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｌｆａ Ｗａｓｓｅｒｍａｎｎ）を使用して測定した。血漿サンプルをＰｌＧＦ測定のために収集した。

【0555】

データは、平均±ＳＥとして提示された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（Ｖｅｒ ８．０ ＧｒａｐｈＰａｄ）及び二元配置反復測定ＡＮＯＶＡ又は／及び線形混合効果モデルを治療比較のために使用した。

【0556】

３ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇのマウス再フォーマットＶＧＦＢ８２（ＶＧＦＢ８７７）を週１回（ＱＷ）４週間、続いて３０ｍｇ／ｋｇを週３回（ＴＷ）及び９０ｍｇ／ｋｇを週１回、それぞれ更に２週間にわたり、ＳＣ投与した。表３８は、投与後２週目、４週目及び６週目におけるＵＡＣＲ及びベースラインからの変化率を示した。表３９は、投与後４週目及び６週目の血漿ＰｌＧＦレベルを示した。ビヒクル治療群は、治療を通して継続的かつ持続的なＵＡＣＲ増加を提示した。リシノプリル、アンジオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥｉ、標準治療）は、４週目にビヒクル対照と比較して、ＵＡＣＲをそのベースラインから約２６％まで有意に減少させた。３ｍｇ／ｋｇ ＱＷのＶＧＦＢ８７７で４週間にわたり治療したマウスは、ビヒクル群と比較した場合、ＵＡＣＲの識別可能な変化を示さなかった。３０ｍｇ／ｋｇ／ＱＷでの高用量のＶＧＦＢ８７７は、４週目にビヒクル治療マウスと比較した場合、ＵＡＣＲ進行を部分的に停止させた（ベースラインからの％変化、ＶＧＦＢ８７７について＋１５％対ビヒクルについて＋８３％）。用量及び投与頻度が３ｍｇ／ｋｇ ＱＷから３０ｍｇ／ｋｇ ＴＷに増加した場合、ベースラインからのＵＡＣＲ％変化は、６週目に＋６３％から＋２８％に減少した。用量を３０ｍｇ／ｋｇ ＱＷから９０ｍｇ／ｋｇ ＱＷに調整した場合、ベースラインからのＵＡＣＲ％変化は、６週目に＋１５％から＋６％に減少した。改善されたＵＡＣＲ低下と一致して、血漿中ＰｌＧＦレベルは、ＶＧＦＢ８２の用量レベル又は頻度が増加した場合に上昇した。

【0557】

【表38】

【0558】

【表39】

【0559】

マウス再フォーマットＶＧＦＢ７８（ＶＧＦＢ８７６）の有効性研究のために、ＲｅｎｉｎＡＡＶ ｕＮｘ ｄｂ／ｄｂマウスに３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇ ＴＷ ＳＣを４週間投与した。表４０～４１は、投与後２週目及び４週目におけるＵＡＣＲ及びベースラインからの変化率を示した。表３９は、投与後４週目の血漿ＰｌＧＦレベルを示した。ビヒクル及びアイソタイプ治療マウスにおけるＵＡＣＲの漸進的増加とは対照的に、ＶＧＦＢ８７６は、対照群と比較して４週目にＵＡＣＲを有意に減少させた。３ｍｇ／ｋｇの低用量はＵＡＣＲをベースラインから約９％低下させ、１０ｍｇ／ｋｇの高用量を約２０％低下させ、これはＡＣＥｉに匹敵する。有意なＰＤ効果（ＵＡＣＲ低下）と一致して、ＶＧＦＢ８７６は、マウスＶＥＧＦＲ１に対するその高い結合効力と一致して、血漿ＰｌＧＦレベルの強い用量依存的増加を誘導した。

【0560】

【表40】

【0561】

【表41】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【配列表】

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【国際調査報告】