特表 2024-534118 抗ＨＥＲ２抗体及びその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-18

(54)【発明の名称】抗ＨＥＲ２抗体及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20240910BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240910BHJP

   C12P 21/08 20060101ALN20240910BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C12N15/13

C12N15/63 Z

C12N5/10

C12N1/21

C12N1/19

C12N1/15

A61P35/00

A61P35/04

A61K39/395 N

C12P21/08

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024511975

(86)(22)【出願日】2022-08-25

(85)【翻訳文提出日】2024-03-29

(86)【国際出願番号】 US2022075438

(87)【国際公開番号】W WO2023028543

(87)【国際公開日】2023-03-02

(31)【優先権主張番号】63/237,104

(32)【優先日】2021-08-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】518086619

【氏名又は名称】デナリ セラピューティクス インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】Ｄｅｎａｌｉ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(74)【代理人】

【識別番号】100221741

【弁理士】

【氏名又は名称】酒井 直子

(74)【代理人】

【識別番号】100114926

【弁理士】

【氏名又は名称】枝松 義恵

(72)【発明者】

【氏名】ボンドパッダエ アビラ

(72)【発明者】

【氏名】クレメンス アリサ ジェーン

(72)【発明者】

【氏名】キム ド ジン

(72)【発明者】

【氏名】ピゾ ミシェル イー．

(72)【発明者】

【氏名】シャン ルー

(72)【発明者】

【氏名】セオリス ジュニア リチャード

(72)【発明者】

【氏名】トン レイモンド カ ハン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064CE10

4B064CE12

4B064DA01

4B065AA90X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C085AA14

4C085BB01

4C085BB11

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG01

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA09

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA22

4H045GA26

(57)【要約】

一態様では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する抗体が提供される。別の態様では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するための重鎖ポリペプチド及びヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するための重鎖ポリペプチドの両方と対になる軽鎖ポリペプチドを含む抗体が提供される。さらなる態様では、共通の軽鎖ポリペプチドを含む、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ及びサブドメインＩＶの両方に結合する抗体が提供される。これらの抗体を使用した、がんを処置するまたはがんの脳転移を処置する方法も提供される。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下：
（ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９０のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、単離された抗体であって、
以下：
配列番号８９のＸ_１は、Ｔではない；
配列番号８９のＸ_２は、Ｆではない；
配列番号８９のＸ_３は、Ｔではない；
配列番号９０のＸ_１は、Ｎではない；
配列番号９０のＸ_２は、Ｎではない；
配列番号９０のＸ_３は、Ｓではない；
配列番号９０のＸ_４は、Ｇではない；
配列番号９０のＸ_５は、Ｇではない；
配列番号９０のＸ_６は、Ｑではない；
配列番号９１のＸ_１は、Ｌではない；
配列番号９１のＸ_２は、Ｇではない；
配列番号９１のＸ_３は、Ｐではない；及び
配列番号９１のＸ_４は、Ｓではない、
のうちの少なくとも１つである、前記単離された抗体。

【請求項2】

前記重鎖ＣＤＲ１が、配列番号８９のアミノ酸配列を含み、Ｘ_１がＮ、Ｋ、Ｍ、またはＨである、請求項１に記載の単離された抗体。

【請求項3】

前記重鎖ＣＤＲ２が、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、Ｘ_５がＱである、請求項１に記載の単離された抗体。

【請求項4】

前記重鎖ＣＤＲ２が、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、Ｘ_６がＲ、Ｈ、またはＴである、請求項１に記載の単離された抗体。

【請求項5】

前記重鎖ＣＤＲ３が、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、Ｘ_４がＷ、Ｆ、Ｄ、Ｌ、またはＹである、請求項１に記載の単離された抗体。

【請求項6】

前記重鎖ＣＤＲ３が、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、Ｘ_４がＬである、請求項１に記載の単離された抗体。

【請求項7】

以下：
（ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９０のアミノ酸配列を含み、Ｘ_５はＱである、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含み、Ｘ_４はＬである、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、請求項１に記載の単離された抗体。

【請求項8】

以下：
（ａ）配列番号４及び４９～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号４及び４９～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５～６及び５３～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号５～６及び５３～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７～８及び５６～５９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号７～８及び５６～５９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、請求項１に記載の単離された抗体。

【請求項9】

以下：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号４のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、請求項８に記載の単離された抗体。

【請求項10】

以下：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７または配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、請求項９に記載の単離された抗体。

【請求項11】

以下：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、請求項１０に記載の単離された抗体。

【請求項12】

以下：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、請求項１０に記載の単離された抗体。

【請求項13】

以下：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、請求項１０に記載の単離された抗体。

【請求項14】

配列番号１～３のいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項８に記載の単離された抗体。

【請求項15】

配列番号１～３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項８に記載の単離された抗体。

【請求項16】

以下：
（ａ）配列番号１３または１４のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３
を含む、単離された抗体。

【請求項17】

以下：
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１；及び
（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲをさらに含む、請求項１６に記載の単離された抗体。

【請求項18】

以下：
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ１；及び
（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ２
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲをさらに含む、請求項１６に記載の単離された抗体。

【請求項19】

前記軽鎖ＣＤＲ３が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の単離された抗体。

【請求項20】

前記軽鎖ＣＤＲ３が、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の単離された抗体。

【請求項21】

配列番号９～１０のいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１７に記載の単離された抗体。

【請求項22】

配列番号９～１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１７に記載の単離された抗体。

【請求項23】

以下：
（ａ）配列番号４及び４９～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号４及び４９～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５～６及び５３～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号５～６及び５３～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７～８及び５６～５９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号７～８及び５６～５９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｆ）配列番号１３または１４のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３
を含む、抗原結合部位
を含む、単離された抗体。

【請求項24】

前記抗原結合部位が、以下：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号４のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｆ）配列番号１３または１４のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３
を含む、請求項２３に記載の単離された抗体。

【請求項25】

前記抗原結合部位が、配列番号１～３のいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号９～１０のいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項２４に記載の単離された抗体。

【請求項26】

前記抗原結合部位が、配列番号１～３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号９～１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項２４に記載の単離された抗体。

【請求項27】

以下：
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１６のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１７のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１８のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む第２の抗原結合部位をさらに含む、請求項２３に記載の単離された抗体。

【請求項28】

前記第２の抗原結合部位が、配列番号１５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項２７に記載の単離された抗体。

【請求項29】

前記第２の抗原結合部位が、以下：
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１３または１４のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲをさらに含む、請求項２７に記載の単離された抗体。

【請求項30】

前記第２の抗原結合部位が、配列番号９～１０のいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項２９に記載の単離された抗体。

【請求項31】

第１の抗原結合部位と第２の抗原結合部位とが、同じ軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む、請求項２９に記載の単離された抗体。

【請求項32】

表１に列挙される組み合わせから選択される重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む、請求項３１に記載の単離された抗体。

【請求項33】

表２に列挙される組み合わせから選択される重鎖及び軽鎖を含む、単離された抗体。

【請求項34】

以下：
（ａ）ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）サブドメインＩＶに対する第１の抗原結合部位；
（ｂ）ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する第２の抗原結合部位；及び
（ｃ）ＴｆＲ結合部位を作り出す修飾を含有する第１のＦｃポリペプチドを含む、修飾されたＦｃポリペプチド二量体
を含む、単離された抗体であって、
前記第１の抗原結合部位の軽鎖ポリペプチド配列が、前記第２の抗原結合部位の軽鎖ポリペプチド配列と同一である、
前記単離された抗体。

【請求項35】

前記第１のＦｃポリペプチドが、前記ＴｆＲ結合部位を含む修飾されたＣＨ３ドメインを含む、請求項３４に記載の単離された抗体。

【請求項36】

前記修飾されたＣＨ３ドメインが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の、ＣＨ３ドメインに由来する、請求項３５に記載の単離された抗体。

【請求項37】

前記修飾されたＣＨ３ドメインが、ＥＵナンバリングに従って、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１位を含むアミノ酸位置のセットにおいて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１個の置換を含む、請求項３５に記載の単離された抗体。

【請求項38】

前記修飾されたＣＨ３ドメインが、ＥＵナンバリングに従って、３８０位にＧｌｕ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、もしくはＧｌｎ；３８４位にＬｅｕ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、もしくはＶａｌ；３８６位にＬｅｕ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ａｓｎ、Ｖａｌ、もしくはＰｈｅ；３８７位にＶａｌ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、もしくは酸性アミノ酸；３８８位にＴｒｐ；３８９位に脂肪族アミノ酸、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、もしくはＡｓｎ；３９０位にＧｌｙ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、もしくはＴｈｒ；４１３位に酸性アミノ酸、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、もしくはＨｉｓ；４１５位にＧｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、もしくはＡｒｇ；４１６位にＴｈｒ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、もしくは酸性アミノ酸；及び／または４２１位に芳香族アミノ酸、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓを含む、請求項３５に記載の単離された抗体。

【請求項39】

前記ＴｆＲ結合部位を作り出す修飾を含有する前記第１のＦｃポリペプチドが、ＴｆＲの頂端ドメインに結合する、請求項３４に記載の単離された抗体。

【請求項40】

前記第１のＦｃポリペプチド及び第２のＦｃポリペプチドが各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含む、請求項３４に記載の単離された抗体。

【請求項41】

ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｗの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含む、請求項４０に記載の単離された抗体。

【請求項42】

ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｗの置換を含む、請求項４０に記載の単離された抗体。

【請求項43】

前記第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドが、独立して、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾を含む、請求項３４に記載の単離された抗体。

【請求項44】

エフェクター機能を低下させる前記修飾が、ＥＵナンバリングに従ってＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換である、請求項４３に記載の単離された抗体。

【請求項45】

前記第１のＦｃポリペプチドが、ＴｆＲに特異的に結合し、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む、請求項４４に記載の単離された抗体。

【請求項46】

前記第１のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従ってＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換をさらに含む、請求項４５に記載の単離された抗体。

【請求項47】

前記第２のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位及び２３５位にＬｅｕを含み、かつ３２９位にプロリンを含む、請求項４６に記載の単離された抗体。

【請求項48】

前記第２のＦｃポリペプチドが、ＴｆＲに特異的に結合し、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む、請求項４４に記載の単離された抗体。

【請求項49】

前記第２のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従ってＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換をさらに含む、請求項４８に記載の単離された抗体。

【請求項50】

前記第１のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位及び２３５位にＬｅｕを含み、かつ３２９位にプロリンを含む、請求項４９に記載の単離された抗体。

【請求項51】

ヒンジ領域またはその一部分が、前記第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドのＮ末端に連結されている、請求項３４に記載の単離された抗体。

【請求項52】

前記第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドが、独立して、配列番号７１～８６及び９８～１００からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項３４に記載の単離された抗体。

【請求項53】

前記第１のＦｃポリペプチドまたは前記第２のＦｃポリペプチドが、配列番号７１～７３、８５、及び９９～１００からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項５２に記載の単離された抗体。

【請求項54】

前記第１のＦｃポリペプチドまたは前記第２のＦｃポリペプチドが、配列番号７４～８４、８６及び９８からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項５２に記載の単離された抗体。

【請求項55】

前記第１の抗原結合部位が、配列番号１５のアミノ酸配列を含み；
前記第２の抗原結合部位が、配列番号１～３及び６０～７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記ＴｆＲ結合部位を作り出す修飾を含有する前記第１のＦｃポリペプチドが、配列番号７４～８４、８６、及び９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；かつ
前記軽鎖ポリペプチド配列が、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を含む、
請求項３４に記載の単離された抗体。

【請求項56】

配列番号７１～７３、８５、及び９９～１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第２のＦｃポリペプチドをさらに含む、請求項５５に記載の単離された抗体。

【請求項57】

前記第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドが、独立して、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む、請求項３４に記載の単離された抗体。

【請求項58】

前記Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を独立して含む前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強することができる、請求項５７に記載の単離された抗体。

【請求項59】

（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｇ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｈ）ＥＵナンバリングに従って、前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；
（ｊ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；
（ｋ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；
（ｌ）ＥＵナンバリングに従って、前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；
（ｍ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｎ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；または
（ｏ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
請求項５７に記載の単離された抗体。

【請求項60】

（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
請求項５９に記載の単離された抗体。

【請求項61】

（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む；
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む；
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む；
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む；
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含む、
請求項６０に記載の単離された抗体。

【請求項62】

２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む、請求項３４に記載の単離された抗体。

【請求項63】

表２に列挙される組み合わせから選択される重鎖及び軽鎖を含む、請求項６２に記載の単離された抗体。

【請求項64】

第１の重鎖が、表３の組み合わせから選択されるＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含み、かつ第２の重鎖が、表４の組み合わせから選択されるＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含む、請求項６２に記載の単離された抗体。

【請求項65】

第１の重鎖が、表５の組み合わせから選択されるＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含み、かつ第２の重鎖が、表６の組み合わせから選択されるＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含む、請求項６２に記載の単離された抗体。

【請求項66】

請求項１に記載の単離された抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。

【請求項67】

請求項１に記載の単離された抗体をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。

【請求項68】

請求項６７に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。

【請求項69】

請求項６７に記載のポリヌクレオチドまたは請求項６８に記載のベクターを含む、宿主細胞。

【請求項70】

対象におけるがんを処置するまたはがんの脳転移を処置するための方法であって、前記対象に対して、治療有効量の請求項１に記載の単離された抗体または請求項６６に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項71】

前記単離された抗体が、化学療法または放射線療法と組み合わせて投与される、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

前記がんが、転移性がんである、請求項７０に記載の方法。

【請求項73】

前記がんが、乳がんである、請求項７０に記載の方法。

【請求項74】

前記がんが、ＨＥＲ２陽性がんである、請求項７０に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年８月２５日に出願された米国仮出願第６３／２３７，１０４号に対する優先権を主張し、この開示は、すべての目的のため、参照により全体として本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

背景
乳がん等のがんの脳転移の処置は、現在のところ、大変な臨床的難題となっている。乳がん患者では、脳転移の発生率は、５０％の高さである。臨床データにより、ＨＥＲ２陽性乳がんは、脳に転移する傾向があることが示されている。特に、抗ＨＥＲ２療法は、頭蓋外腫瘍の制御に有用であることが証明されているが、頭蓋内病変についてはそうではない。ＨＥＲ２陽性乳がんの脳転移等の転移性病変を制御するこれらの療法の失敗は、主に、治療薬が血液脳関門（ＢＢＢ）を越えて脳実質にアクセスできないことに起因する。

【発明の概要】

【0003】

概要
一態様では、本開示は、以下：
（ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９０のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２、及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、単離された抗体であって、
以下：
配列番号８９のＸ_１は、Ｔではない；
配列番号８９のＸ_２は、Ｆではない；
配列番号８９のＸ_３は、Ｔではない；
配列番号９０のＸ_１は、Ｎではない；
配列番号９０のＸ_２は、Ｎではない；
配列番号９０のＸ_３は、Ｓではない；
配列番号９０のＸ_４は、Ｇではない；
配列番号９０のＸ_５は、Ｇではない；
配列番号９０のＸ_６は、Ｑではない；
配列番号９１のＸ_１は、Ｌではない；
配列番号９１のＸ_２は、Ｇではない；
配列番号９１のＸ_３は、Ｐではない；及び
配列番号９１のＸ_４は、Ｓではない
のうちの少なくとも１つである、単離された抗体を提供する。

【0004】

いくつかの実施形態では、重鎖ＣＤＲ１は、配列番号８９のアミノ酸配列を含み、Ｘ_１は、Ｎ、Ｋ、Ｍ、またはＨである。いくつかの実施形態では、重鎖ＣＤＲ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、Ｘ_５はＱである。いくつかの実施形態では、重鎖ＣＤＲ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、Ｘ_６は、Ｒ、ＨまたはＴである。いくつかの実施形態では、重鎖ＣＤＲ３は、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、Ｘ_４は、Ｗ、Ｆ、Ｄ、Ｌ、またはＹである。いくつかの実施形態では、重鎖ＣＤＲ３は、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、Ｘ_４はＬである。

【0005】

いくつかの実施形態では、この抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１、２、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９０のアミノ酸配列を含み、Ｘ_５はＱである、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含み、Ｘ_４はＬである、重鎖ＣＤＲ３。

【0006】

いくつかの実施形態では、この抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１、２、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４及び４９～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号４及び４９～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５～６及び５３～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号５～６及び５３～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；ならびに
（ｃ）配列番号７～８及び５６～５９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号７～８及び５６～５９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３。

【0007】

いくつかの実施形態では、この抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１、２、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号４のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３。

【0008】

いくつかの実施形態では、この抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１、２、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７または配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３。

【0009】

いくつかの実施形態では、この抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１、２、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３。

【0010】

いくつかの実施形態では、この抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１、２、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３。

【0011】

いくつかの実施形態では、この抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１、２、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３。

【0012】

いくつかの実施形態では、この抗体は、配列番号１～３のいずれか１つに対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、この抗体は、配列番号１～３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0013】

関連する態様では、本開示は、上記のＣＤＲの１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）を含む単離された抗体重鎖を提供する。いくつかの実施形態では、この抗体重鎖は、配列番号１～３のいずれか１つに対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、この抗体重鎖は、配列番号１～３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0014】

別の態様では、本開示は、以下を含む単離された抗体を提供する：
（ａ）配列番号１３または１４のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３。

【0015】

いくつかの実施形態では、この抗体はさらに、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つまたは両方）のＣＤＲを含む：
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１；及び
（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２。

【0016】

いくつかの実施形態では、この抗体はさらに、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つまたは両方）のＣＤＲを含む：
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ１；及び
（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ２。

【0017】

いくつかの実施形態において、軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、この抗体は、配列番号９～１０のいずれか１つに対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、この抗体は、配列番号９～１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0019】

関連する態様では、本開示は、上記のＣＤＲの１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）を含む単離された抗体軽鎖を提供する。いくつかの実施形態では、この抗体軽鎖は、配列番号９～１０のいずれか１つに対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、この抗体軽鎖は、配列番号９～１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0020】

さらに別の態様では、本開示は、以下を含む抗原結合部位を含む単離された抗体を提供する：
（ａ）配列番号４及び４９～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号４及び４９～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５～６及び５３～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号５～６及び５３～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７～８及び５６～５９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号７～８及び５６～５９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２、及び
（ｆ）配列番号１３または１４のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３。

【0021】

いくつかの実施形態では、抗原結合部位は以下を含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号４のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｆ）配列番号１３または１４のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３。

【0022】

いくつかの実施形態では、この抗原結合部位は、配列番号１～３のいずれか１つに対して少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号９～１０のいずれか１つに対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、この抗原結合部位は、配列番号１～３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号９～１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。

【0023】

いくつかの実施形態では、この抗体はさらに、以下からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む第２の抗原結合部位を含む：
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１６のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号１７のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号１８のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３。

【0024】

いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部位は、配列番号１５に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部位は、配列番号１５の配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0025】

いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部位はさらに、以下からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１３または１４のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３。

【0026】

いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部位は、配列番号９～１０のいずれか１つに対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部位は、配列番号９～１０のいずれか１つの配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0027】

いくつかの実施形態では、第１の抗原結合部位と第２の抗原結合部位とが、同じ軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、この抗体は、表１に列挙される組み合わせから選択される重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む。

【0028】

関連する態様では、本開示は、表２に列挙される組み合わせから選択される重鎖及び軽鎖を含む単離された抗体を提供する。

【0029】

さらなる態様では、本開示は、以下：
（ａ）ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）サブドメインＩＶに対する第１の抗原結合部位；
（ｂ）ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する第２の抗原結合部位；及び
（ｃ）ＴｆＲ結合部位を作り出す修飾を含有する第１のＦｃポリペプチドを含む、修飾されたＦｃポリペプチド二量体
を含む、単離された抗体であって、
この第１の抗原結合部位の軽鎖ポリペプチド配列が、第２の抗原結合部位の軽鎖ポリペプチド配列と同一である、
単離された抗体を提供する。

【0030】

別の態様では、本開示は、以下：
（ａ）ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する第１の抗原結合部位；
（ｂ）ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＶに対する第２の抗原結合部位；及び
（ｃ）ＴｆＲ結合部位を作り出す修飾を含有する第１のＦｃポリペプチドを含む、修飾されたＦｃポリペプチド二量体
を含む、単離された抗体であって、
第１の抗原結合部位の軽鎖ポリペプチド配列が、第２の抗原結合部位の軽鎖ポリペプチド配列と同一である、
単離された抗体を提供する。

【0031】

いくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位を含む修飾されたＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＨ３ドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の、ＣＨ３ドメインに由来する。

【0032】

いくつかの実施形態では、修飾されたＣＨ３ドメインは、ＥＵナンバリングに従って、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１位を含むアミノ酸位置のセットにおいて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１個の置換を含む。いくつかの実施形態では、修飾されたＣＨ３ドメインは、ＥＵナンバリングに従って、３８０位にＧｌｕ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、もしくはＧｌｎを、３８４位にＬｅｕ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、もしくはＶａｌを、３８６位にＬｅｕ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ａｓｎ、Ｖａｌ、もしくはＰｈｅを、３８７位にＶａｌ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、もしくは酸性アミノ酸を、３８８位にＴｒｐを、３８９位に脂肪族アミノ酸、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、もしくはＡｓｎを、３９０位にＧｌｙ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、もしくはＴｈｒを、４１３位に酸性アミノ酸、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、もしくはＨｉｓを、４１５位にＧｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、もしくはＡｒｇを、４１６位にＴｈｒ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、もしくは酸性アミノ酸を、及び／または４２１位に芳香族アミノ酸、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓを含む。

【0033】

いくつかの実施形態では、ＴｆＲ結合部位を作り出す修飾を含有する第１のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲの頂端ドメインに結合する。

【0034】

いくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチド及び第２のＦｃポリペプチドは各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含む。他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含む。

【0035】

いくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、独立して、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾を含む。いくつかの実施形態では、このエフェクター機能を低下させる修飾は、ＥＵナンバリングに従って、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換である。特定の実施形態では、第１のＦｃポリペプチドはＴｆＲに特異的に結合し、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む。特定の実施形態では、第１のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換をさらに含む。特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第２のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕを含み、かつ３２９位にプロリンを含む。他の実施形態では、第２のＦｃポリペプチドはＴｆＲに特異的に結合し、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む。特定の実施形態では、第２のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換をさらに含む。特定の実施形態では、第１のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、２３４位及び２３５位にＬｅｕを含み、かつ３２９位にプロリンを含む。

【0036】

いくつかの実施形態では、ヒンジ領域またはその一部分は、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドのＮ末端に連結される。

【0037】

いくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、独立して、配列番号７１～８６及び９８～１００からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチドまたは第２のＦｃポリペプチドは、配列番号７１～７３、８５及び９９～１００からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。他の実施形態では、第１のＦｃポリペプチドまたは第２のＦｃポリペプチドは、配列番号７４～８４、８６及び９８からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。

【0038】

この抗体のいくつかの実施形態では、第１の抗原結合部位は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み；第２の抗原結合部位は、配列番号１～３及び６０～７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；ＴｆＲ結合部位を作り出す修飾を含有する第１のＦｃポリペプチドは、配列番号７４～８４、８６、及び９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；かつ、軽鎖ポリペプチド配列は、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、この抗体は、配列番号７１～７３、８５及び９９～１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第２のＦｃポリペプチドをさらに含む。

【0039】

この抗体の他の実施形態では、第１の抗原結合部位は、配列番号１～３及び６０～７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；第２の抗原結合部位は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み；ＴｆＲ結合部位を作り出す修飾を含有する第１のＦｃポリペプチドは、配列番号７４～８４、８６、及び９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；かつ、軽鎖ポリペプチド配列は、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、この抗体は、配列番号７１～７３、８５、及び９９～１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第２のＦｃポリペプチドをさらに含む。

【0040】

いくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、独立してＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を独立して含む第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強することが可能である。

【0041】

この抗体のいくつかの実施形態では、
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、第２のＦｃポリペプチドはＳ２３９Ｄの置換を含む；
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｇ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｈ）ＥＵナンバリングに従って、第２のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；
（ｊ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；
（ｋ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；
（ｌ）ＥＵナンバリングに従って、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；
（ｍ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｎ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドはＩ３３２Ｅの置換を含む；または
（ｏ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。

【0042】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、第２のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドはＩ３３２Ｅの置換を含む。

【0043】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドはＩ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ第２のＦｃポリペプチドはＳ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む；
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む；
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドはＳ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ第２のＦｃポリペプチドはＩ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む；
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ第２のＦｃポリペプチドはＩ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む；
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドはＩ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含む。

【0044】

いくつかの実施形態では、抗体は２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む。特定の実施形態では、抗体は、表２に列挙される組み合わせから選択される重鎖及び軽鎖を含む。特定の実施形態では、第１の重鎖は、表３の組み合わせから選択されるＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含み、第２の重鎖は、表４の組み合わせから選択されるＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含む。特定の実施形態では、第１の重鎖は、表５の組み合わせから選択されるＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含み、第２の重鎖は、表６の組み合わせから選択されるＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含む。

【0045】

別の態様では、本開示は、本明細書に記載の任意の抗体と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。

【0046】

別の態様では、本開示は、本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0047】

別の態様では、本開示は、先行する態様のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。

【0048】

別の態様では、本開示は、このポリヌクレオチドまたはベクターを含む宿主細胞を提供する。

【0049】

別の態様では、本開示は、対象におけるがんを処置するまたはがんの脳転移を処置するための方法を提供し、この方法は、この対象に対して、治療有効量の本明細書に記載の抗体またはその医薬組成物を投与することを含む。

【0050】

いくつかの実施形態では、この抗体は、化学療法または放射線療法と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、このがんは、転移性がんである。いくつかの実施形態では、このがんは、乳がんである。いくつかの実施形態では、このがんは、ＨＥＲ２陽性がんである。

【図面の簡単な説明】

【0051】

【図1】ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＶに対する第１の抗原結合部位（「抗ＨＥＲ２＿Ｄ４」）及びヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する第２の抗原結合部位（「抗ＨＥＲ２＿Ｄ２」）を有する例示的な二重特異性抗体を示す概略図であり、この第１及び第２の抗原結合部位には、同一の軽鎖ポリペプチド、ならびにＴｆＲ結合部位及びノブ変異を有する第１のＦｃポリペプチドと、ホール変異を有する第２のＦｃポリペプチドとを含むＦｃポリペプチド二量体が含まれる。

【図2】ＺＲ－７５－３０細胞に対する増殖阻害アッセイの結果、ならびに表１２の異なる抗体のＩＣ５０及び最大％増殖阻害値を示す。

【図3】Ａ及びＢは、２つのヒト細胞株由来異種移植片モデルにおけるＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体を用いた単回用量研究におけるインビボ抗腫瘍活性腫瘍を示す。Ａ：ＢＴ－４７４；Ｂ：ＯＥ１９。

【図4】Ａ及びＢは、２つのヒト細胞株由来異種移植片モデルにおけるＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体を用いた単回用量研究におけるインビボ抗腫瘍活性腫瘍を示す。Ａ：ＢＴ－４７４；Ｂ：ＯＥ１９。

【図5】Ａ及びＢは、２つのヒト細胞株由来異種移植片モデルにおけるＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体を用いた多用量研究におけるインビボ抗腫瘍活性腫瘍を示す。Ａ：ＢＴ－４７４；Ｂ：ＯＥ１９。

【図6】ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体の脳への取り込みを示す。

【図7】Ａ及びＢは、ＣＬＣ二重特異性抗体のＩＨＣ脳分布を示す。

【図8】カニクイザルにおけるＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体を用いた単回用量研究における血漿ＰＫを示す。

【図9】ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体のＡＤＣＣを示す。

【発明を実施するための形態】

【0052】

詳細な説明
Ｉ．序文
共通の軽鎖アプローチ、すなわち、同一の軽鎖と対を成すが依然として別個の特異性を保持する２つの抗原結合ドメインを利用する抗ＨＥＲ２二重特異性抗体が本明細書に記載される。共通の軽鎖を使用すると、軽鎖のミスペアリングが防止され、その結果、これらの二重特異性抗体の製造が容易になる。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＶに対する第１の抗原結合部位と、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する第２の抗原結合部位とを含み、第１の抗原結合部位の軽鎖ポリペプチド配列は、第２の抗原結合部位における軽鎖ポリペプチド配列と同一である。別の実施形態では、二重特異性抗体は、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する第１の抗原結合部位と、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＶに対する第２の抗原結合部位とを含み、この第１の抗原結合部位の軽鎖ポリペプチド配列は、第２の抗原結合部位における軽鎖ポリペプチド配列と同一である。

【0053】

さらに、主には治療薬が血液脳関門（ＢＢＢ）を通過すること及び脳実質にアクセスすることができないせいで、先行する治療は、ＨＥＲ２陽性乳がんの脳転移の制御に失敗した。したがって、ＢＢＢを越え、脳実質においてＨＥＲ２を標的とし得る新しい治療薬の必要性がある。本発明者らは、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）の発現が脳内皮細胞で高度に発現され、受容体を介したトランスサイトーシスによってＢＢＢ送達を可能にすることができることから、ＢＢＢ送達が脳内皮を通過することを可能にする方法として、ＴｆＲ結合の使用は以前に記載した。興味深いことに、ＴｆＲは、ＨＥＲ２陽性乳がんを含めた様々ながんで高度に発現している。がん細胞が増大したＴｆＲ発現を獲得するメカニズムは、腫瘍細胞増殖、及び鉄の取り込み等の代謝要求の増大に関連する可能性がある。実際、公開されているマイクロアレイデータセットにより、ＴｆＲの発現と乳がんの予後の相関関係が実証された（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７１：６７２８，２０１１）。様々なタイプのがんの薬理学的標的としてのＴｆＲの使用に関するいくつかの報告も存在する。

【0054】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２二重特異性抗体は、ＢＢＢ受容体、例えば、ＴｆＲに特異的に結合する１つ以上の修飾Ｆｃポリペプチド（すなわち、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２二重特異性抗体は、ＢＢＢを横断して輸送することが可能である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＨＥＲ２及びＴｆＲの両方に結合する抗ＨＥＲ２二重特異性抗体は、高レベルのＴｆＲも発現するＨＥＲ２陽性腫瘍細胞に結合する際に、ＨＥＲ２のみに結合する他の治療薬と比較して、さらなる抗腫瘍効果をもたらし得る。具体的には、これらの抗体は、ＴｆＲとＨＥＲ２の両方に同時に結合し得るので、その効力及び／または有効性を高めることができる。

【0055】

ＩＩ．定義
本明細書で使用される、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、内容が別段明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「抗体」への言及は、２つ以上のかかる分子等の組み合わせを任意選択で含む。

【0056】

本明細書で使用する場合、「約」及び「およそ」という用語は、数値または範囲で既定された量を修飾するために使用される場合、その数値及び当業者に公知の値からの合理的な差、例えば、±２０％、±１０％、または±５％は、記載された値の意図する意味の範囲内であることを示す。

【0057】

「ヒト上皮成長因子受容体２」、「ＨＥＲ２」、「ＨＥＲ２／ｎｅｕ」、及び「ＥＲＢＢ２」（ＣＤ３４０、受容体チロシン－タンパク質キナーゼｅｒｂＢ－２、がん原遺伝子及びＮｅｕとしても知られる）という用語は、ヒト上皮成長因子受容体（ＨＥＲ／ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ）ファミリーのメンバーであるヒトにおけるＥＲＢＢ２遺伝子によってコードされたチロシン受容体キナーゼタンパク質を指す。ＨＥＲ２の増幅または過剰発現は、乳がんを含むある特定の攻撃的な型のがんの発症及び進行において顕著な役割を果たす。ヒトＨＥＲ２ヌクレオチド配列の非限定的な例は、ＧｅｎＢａｎｋ参照番号ＮＰ＿００１００５８６２、ＮＰ＿００１２８９９３６、ＮＰ＿００１２８９９３７、ＮＰ＿００１２８９９３８、及びＮＰ＿００４４４８に定められる。ヒトＨＥＲ２ペプチド配列の非限定的な例は、ＧｅｎＢａｎｋ参照番号ＮＰ＿００１００５８６２、ＮＰ＿００１２７６８６５、ＮＰ＿００１２７６８６６、ＮＰ＿００１２７６８６７、及びＮＰ＿００４４３９に定められる。

【0058】

およそ６００のアミノ酸を含むＨＥＲ２の細胞外ドメインは、４つのサブドメイン（サブドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶ）を含む。サブドメインＩ及びＩＩＩは、リガンド結合部位を形成する。システインに富むサブドメインＩＩ及びＩＶは、受容体のホモ二量体化及びヘテロ二量体化に関わる。抗ＨＥＲ２抗体は、特定のサブドメイン（例えば、サブドメインＩＩ及び／またはサブドメインＩＶ）に結合し得る。

【0059】

本明細書で使用される場合、「抗ＨＥＲ２＿Ｄ２」、または「抗ＨＥＲ２＿Ｄ４」という用語は、それぞれ、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ、またはＩＶに結合する抗体を指す。

【0060】

本明細書で使用される、「抗体」という用語は、免疫グロブリン折り畳みを有するタンパク質であって、その可変領域を介して抗原と特異的に結合するタンパク質を指す。この用語は、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、一本鎖抗体、二重特異性抗体等の多重特異性抗体、単一特異性抗体、一価抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、及びヒト抗体を包含する。本明細書で使用される、「抗体」という用語はまた、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び二価ｓｃＦｖが挙げられるがこれらに限定されない抗原結合特異性を保持する抗体断片も含む。抗体は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される軽鎖を含み得る。抗体は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類される重鎖を含む場合があり、これらは同様に、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥという免疫グロブリンクラスを定義する。

【0061】

例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。各四量体は、各対が１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）及び１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤ）を有する、２つの同一の対のポリペプチド鎖から構成される。各鎖のＮ末端は、抗原認識を主に担う約１００～１１０個またはそれを超えるアミノ酸の可変領域を画定する。「可変軽鎖」（Ｖ_Ｌ）及び「可変重鎖」（Ｖ_Ｈ）という用語は、それぞれ、これらの軽鎖及び重鎖を指す。

【0062】

「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、生殖系列可変（Ｖ）遺伝子、多様性（Ｄ）遺伝子、または結合（Ｊ）遺伝子に由来し（かつ定常（Ｃμ及びＣδ）遺伝子セグメントには由来しない）、抗体に抗原と結合する特異性を与える、抗体重鎖または軽鎖中のドメインを指す。通常、抗体の可変領域は、３つの超可変「相補性決定領域」が散在する４つの保存された「フレームワーク」領域を含む。

【0063】

「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、軽鎖及び重鎖可変領域によって確立された４つのフレームワーク領域を中断する各鎖における３つの超可変領域を指す。ＣＤＲは、抗原のエピトープへの抗体結合を主として担う。各鎖のＣＤＲは、通常、Ｎ末端から開始して順番にナンバリングしてＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と称され、通常、特定のＣＤＲが位置する鎖によっても識別される。したがって、Ｖ_Ｈ ＣＤＲ３またはＣＤＲ－Ｈ３は、それが見出される抗体重鎖の可変領域に位置する一方、Ｖ_Ｌ ＣＤＲ１またはＣＤＲ－Ｌ１は、それが見出される抗体軽鎖の可変領域に由来するＣＤＲ１である。

【0064】

異なる軽鎖または重鎖の「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、種内で比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域、すなわち、構成要素である軽鎖及び重鎖のフレームワーク領域を組み合わせたものは、ＣＤＲを３次元空間に配置し整列させるように機能する。フレームワーク配列は、生殖系列抗体の遺伝子配列を含む公共のＤＮＡデータベースまたは公開されている参照文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、ヒト及びマウス配列に関する「ＶＢＡＳＥ２」生殖系列可変遺伝子配列データベースに見出すことができる。

【0065】

ＣＤＲ及びフレームワーク領域のアミノ酸配列は、当技術分野で周知の様々な定義、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）、ＡｂＭ、及び観察された抗原接触（「Ｃｏｎｔａｃｔ」）を使用して決定され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔの定義に従って決定される。ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２－７４５，１９９６を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及び／またはＣｏｎｔａｃｔのＣＤＲ定義の組み合わせによって決定される。

【0066】

「エピトープ」という用語は、分子、例えば、抗体のＣＤＲが特異的に結合する抗原の領域（ａｒｅａ）または領域（ｒｅｇｉｏｎ）を指し、数個のアミノ酸、または数個のアミノ酸の部分、例えば、５個もしくは６個、もしくはそれより多く、例えば、２０個以上のアミノ酸、またはそれらのアミノ酸の部分を含み得る。場合によっては、このエピトープは、例えば、炭水化物、核酸、または脂質に由来する非タンパク質成分を含む。場合によっては、このエピトープは、３次元部分である。したがって、例えば、この標的がタンパク質の場合、このエピトープは、連続するアミノ酸からなることもあれば（例えば、線状エピトープ）、タンパク質フォールディングによって近接した状態になるタンパク質の異なる部分のアミノ酸からなることもある（例えば、不連続または高次構造エピトープ）。

【0067】

本明細書で使用される、「エピトープを認識する」という表現は、抗体に関して使用する場合、抗体のＣＤＲが、その抗原と、そのエピトープもしくはそのエピトープを含む抗原の一部分で相互作用するか、または特異的に結合することを意味する。

【0068】

「ヒト化抗体」は、ＣＤＲ外の非ヒト免疫グロブリンに由来する最低限の配列を含む非ヒト供給源（例えば、マウス）に由来するキメラ免疫グロブリンである。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ（例えば、２つ）の可変ドメインを含み、そのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に実質的に相当し、そのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域に実質的に相当する。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのある特定のフレームワーク領域の残基を、例えば、特異性、親和性、及び／または血清半減期を改善するために、非ヒト種由来の対応する残基に置き換えることができる。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、通常はヒト免疫グロブリン配列のものを含み得る。抗体のヒト化方法は、当技術分野で公知である。

【0069】

「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」は、ヒト重鎖配列及び軽鎖配列を有する抗体であり、通常は、ヒト生殖細胞系列遺伝子に由来する。いくつかの実施形態では、この抗体は、ヒト細胞によって、ヒト抗体レパートリーを利用した非ヒト動物（例えば、ヒト抗体配列を発現するように遺伝子操作されたトランスジェニックマウス）によって、またはファージディスプレイプラットフォームによって産生される。

【0070】

「特異的に結合する」という用語は、試料中のエピトープまたは標的に対して、別のエピトープまたは非標的化合物（例えば、構造的に異なる抗原）に結合するよりも、より高い親和性で、より高い結合力で、及び／またはより長い持続時間、エピトープまたは標的に結合する分子（例えば、本明細書に記載されるような抗体）を指す。いくつかの実施形態では、エピトープまたは標的に特異的に結合する分子とは、他のエピトープまたは非標的化合物よりも少なくとも５倍高い親和性、例えば、少なくとも６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２５倍、５０倍、１００倍、１，０００倍、または１０，０００倍以上の親和性で、エピトープまたは標的に結合する分子である。本明細書で使用される、特定のエピトープまたは標的に対する「特異的結合」、「特異的に結合する」、または「特異的である」という用語は、例えば、それが結合するエピトープまたは標的に対する平衡解離定数Ｋ_Ｄが、例えば、１０^－４Ｍ以下、例えば、１０^－５Ｍ、１０^－６Ｍ、１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍ、または１０^－１２Ｍである分子によって示され得る。当業者には、１つの種に由来する標的に特異的に結合する分子はまた、その標的のオルソログにも特異的に結合し得ることが認識されよう。

【0071】

「結合親和性」という用語は、本明細書では、２つの分子間、例えば、本明細書に記載の抗体と抗原との間の非共有結合相互作用の強度を指すものとして使用される。したがって、例えば、別途示さない限り、または文脈から明らかでない限り、この用語は、抗体と抗原との間の１：１の相互作用を指し得る。結合親和性は、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を測定することにより定量化してもよく、これは、結合速度定数（ｋ_ａ、時間^－１Ｍ^－１）で除した解離速度定数（ｋ_ｄ、時間^－１）を指す。Ｋ_Ｄは、複合体形成及び解離の反応速度を、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）システム）；ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）等の結合平衡除外法、及びＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）Ｏｃｔｅｔプラットフォームを使用するもの）を使用して測定することにより決定され得る。本明細書で使用する場合、「結合親和性」は、抗体と抗原との間の１：１の相互作用を反映するような正式な結合親和性のみならず、強力な結合を反映し得るＫ_Ｄが算出される見かけの親和性をも含む。

【0072】

本明細書で使用される、「トランスフェリン受容体」または「ＴｆＲ」とは、トランスフェリン受容体タンパク質１を指す。ヒトトランスフェリン受容体１ポリペプチド配列は、配列番号１５０で規定される。他の種に由来するトランスフェリン受容体タンパク質１の配列も公知である（例えば、チンパンジー、アクセッション番号ＸＰ＿００３３１０２３８．１、アカゲザル、ＮＰ＿００１２４４２３２．１、イヌ、ＮＰ＿００１００３１１１．１、ウシ、ＮＰ＿００１１９３５０６．１、マウス、ＮＰ＿０３５７６８．１、ラット、ＮＰ＿０７３２０３．１、及びニワトリ、ＮＰ＿９９０５８７．１）。「トランスフェリン受容体」という用語は、トランスフェリン受容体タンパク質１染色体遺伝子座にある遺伝子によってコードされる例示的な参照配列、例えば、ヒト配列のアレルバリアントも包含する。完全長トランスフェリン受容体タンパク質は、短いＮ末端細胞内領域、膜貫通領域、及び大きな細胞外ドメインを含む。この細胞外ドメインは、３つのドメイン、すなわち、プロテアーゼ様ドメイン、ヘリカルドメイン、及び頂端ドメインによって特徴づけられる。

【0073】

本明細書で使用される、「Ｆｃポリペプチド」という用語は、構造ドメインとしてのＩｇフォールドを特徴とする天然に存在する免疫グロブリン重鎖ポリペプチドのＣ末端領域を指す。Ｆｃポリペプチドは、少なくともＣＨ２ドメイン及び／またはＣＨ３ドメインを含む定常領域配列を含み、ヒンジ領域の少なくとも一部を含んでもよいが、可変領域は含まない。

【0074】

「修飾Ｆｃポリペプチド」とは、野生型免疫グロブリン重鎖Ｆｃポリペプチド配列に照らして、少なくとも１つの変異、例えば、置換、欠失、または挿入を有するが、天然のＦｃポリペプチドの全般的なＩｇフォールドまたは構造を保持するＦｃポリペプチドを指す。

【0075】

本明細書で使用される、「ＦｃＲｎ」とは、胎児性Ｆｃ受容体を指す。ＦｃポリペプチドのＦｃＲｎへの結合は、Ｆｃポリペプチドのクリアランスを低下させ、血清半減期を延長する。ヒトＦｃＲｎタンパク質は、主要組織適合（ＭＨＣ）クラスＩタンパク質と同様のサイズ約５０ｋＤａのタンパク質及びサイズ約１５ｋＤａのβ２－ミクログロブリンからなるヘテロ二量体である。

【0076】

本明細書で使用される、「ＦｃＲｎ結合部位」とは、ＦｃＲｎに結合するＦｃポリペプチドの領域を指す。ヒトＩｇＧでは、ＥＵインデックスでナンバリングされるＦｃＲｎ結合部位には、Ｌ２５１、Ｍ２５２、Ｉ２５３、Ｓ２５４、Ｒ２５５、Ｔ２５６、Ｍ４２８、Ｈ４３３、Ｎ４３４、Ｈ４３５、及びＹ４３６が含まれる。これらの位置は、配列番号９５の２１～２６、１９８、及び２０３～２０６位に対応する。

【0077】

本明細書で使用される、「天然のＦｃＲｎ結合部位」とは、ＦｃＲｎに結合するＦｃポリペプチドの領域でありかつＦｃＲｎに結合する天然に存在するＦｃポリペプチドの領域と同じアミノ酸配列を有するＦｃポリペプチドの領域を指す。

【0078】

本明細書で使用する場合、「ＣＨ３ドメイン」及び「ＣＨ２ドメイン」という用語は、免疫グロブリン定常領域ドメインポリペプチドを指す。本出願の目的で、ＣＨ３ドメインのポリペプチドとは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングされるほぼ３４１位からほぼ４４７位のアミノ酸のセグメントを指し、ＣＨ２ドメインのポリペプチドとは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングされるほぼ２３１位からほぼ３４０位のアミノ酸のセグメントを指し、ヒンジ領域の配列を含まない。ＣＨ２及びＣＨ３ドメインのポリペプチドはまた、ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）ナンバリングスキームによってもナンバリングされる場合があり、この場合、ＩＭＧＴ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｃｈａｒｔのナンバリング（ＩＭＧＴウェブサイト）によれば、ＣＨ２ドメインのナンバリングは１～１１０であり、ＣＨ３ドメインのナンバリングは１～１０７である。ＣＨ２及びＣＨ３ドメインは、免疫グロブリンのＦｃ領域の一部である。Ｆｃ領域とは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングされるほぼ２３１位からほぼ４４７位のアミノ酸のセグメントを指すが、本明細書で使用される場合、抗体のヒンジ領域の少なくとも一部を含んでもよい。例示的なヒンジ領域配列は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号９６）である。

【0079】

ＣＨ３またはＣＨ２ドメインに関して使用される、「野生型」、「天然」、及び「天然に存在する」という用語は、天然に存在する配列を有するドメインを指す。

【0080】

本明細書で使用される、変異ポリペプチドまたは変異ポリヌクレオチドに関して使用される場合の「変異体」という用語は、「バリアント」と交換可能に使用される。所与の野生型ＣＨ３またはＣＨ２ドメインの参照配列に関するバリアントは、天然に存在するアレルバリアントを含むことができる。「非天然」のＣＨ３またはＣＨ２ドメインは、天然の細胞には存在しないものであり、遺伝子修飾によって、例えば、遺伝子工学技術または変異導入技術を使用して作製された、天然のＣＨ３ドメインまたはＣＨ２ドメインのポリヌクレオチドまたはポリペプチドのバリアントまたは変異体ドメインを指す。「バリアント」には、野生型に関して少なくとも１つのアミノ酸の変異を含む任意のドメインが含まれる。変異には、置換、挿入、及び欠失が含まれ得る。

【0081】

核酸またはタンパク質に関して使用される、「単離された」という用語は、この核酸またはタンパク質が、自然状態でそれが会合している他の細胞成分が本質的にないことを示す。それは均質状態であることが好ましい。純度及び均一性は、通常、分析化学技術、例えば、電気泳動（例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、高速液体クロマトグラフィー）を用いて測定される。いくつかの実施形態では、単離された核酸またはタンパク質は、少なくとも８５％の純度、少なくとも９０％の純度、少なくとも９５％の純度、または少なくとも９９％の純度である。

【0082】

「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸及び合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を指す。天然に存在するのは、遺伝暗号によってコードされるもの、ならびに後に修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸、及びＯ－ホスホセリンである。天然に存在するα－アミノ酸としては、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、及びそれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。天然に存在するα－アミノ酸の立体異性体としては、Ｄ－アラニン（Ｄ－Ａｌａ）、Ｄ－システイン（Ｄ－Ｃｙｓ）、Ｄ－アスパラギン酸（Ｄ－Ａｓｐ）、Ｄ－グルタミン酸（Ｄ－Ｇｌｕ）、Ｄ－フェニルアラニン（Ｄ－Ｐｈｅ）、Ｄ－ヒスチジン（Ｄ－Ｈｉｓ）、Ｄ－イソロイシン（Ｄ－Ｉｌｅ）、Ｄ－アルギニン（Ｄ－Ａｒｇ）、Ｄ－リジン（Ｄ－Ｌｙｓ）、Ｄ－ロイシン（Ｄ－Ｌｅｕ）、Ｄ－メチオニン（Ｄ－Ｍｅｔ）、Ｄ－アスパラギン（Ｄ－Ａｓｎ）、Ｄ－プロリン（Ｄ－Ｐｒｏ）、Ｄ－グルタミン（Ｄ－Ｇｌｎ）、Ｄ－セリン（Ｄ－Ｓｅｒ）、Ｄ－トレオニン（Ｄ－Ｔｈｒ）、Ｄ－バリン（Ｄ－Ｖａｌ）、Ｄ－トリプトファン（Ｄ－Ｔｒｐ）、Ｄ－チロシン（Ｄ－Ｔｙｒ）、及びそれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。「アミノ酸類似体」とは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合したα炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。かかる類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。「アミノ酸模倣体」とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様に機能する化合物を指す。アミノ酸は、本明細書では、一般に知られている３文字記号またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎが推奨する１文字記号のいずれかで言及され得る。

【0083】

「ポリペプチド」及び「ペプチド」という用語は、本明細書では交換可能に使用され、一本の鎖におけるアミノ酸残基のポリマーを指す。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学的模倣体であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマー及び非天然に生じるアミノ酸ポリマーに適用される。アミノ酸ポリマーは、完全にＬ－アミノ酸、完全にＤ－アミノ酸、またはＬアミノ酸及びＤアミノ酸の混合物を含み得る。

【0084】

本明細書で使用する「タンパク質」という用語は、一本鎖ポリペプチドのポリペプチドまたは二量体（すなわち、２つ）または多量体（すなわち、３つ以上）のいずれかを指す。タンパク質の一本鎖ポリペプチドは、共有結合、例えば、ジスルフィド結合によって、または非共有相互作用によって結合され得る。

【0085】

「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、任意の長さのヌクレオチドの鎖を互換的に指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。このヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、及び／またはそれらの類似体、あるいは、ＤＮＡまたはＲＮＡポリメラーゼによって鎖の中に組み込むことができる任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。本明細書で企図されるポリヌクレオチドの例としては、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖ならびに二本鎖ＤＮＡ及びＲＮＡの混合物を有するハイブリッド分子が挙げられる。

【0086】

「保存的置換」または「保存的変異」という用語は、あるアミノ酸を、同様の特徴を有するとして分類され得る別のアミノ酸で置換することになる変更を指す。このようにして定義される保存的アミノ酸群の分類の例としては、Ｇｌｕ（グルタミン酸またはＥ）、Ａｓｐ（アスパラギン酸またはＤ）、Ａｓｎ（アスパラギンまたはＮ）、Ｇｌｎ（グルタミンまたはＱ）、Ｌｙｓ（リジンまたはＫ）、Ａｒｇ（アルギニンまたはＲ）、及びＨｉｓ（ヒスチジンまたはＨ）を含めた「荷電／極性群」、Ｐｈｅ（フェニルアラニンまたはＦ）、Ｔｙｒ（チロシンまたはＹ）、Ｔｒｐ（トリプトファンまたはＷ）、及び（ヒスチジンまたはＨ）を含めた「芳香族群」、ならびにＧｌｙ（グリシンまたはＧ）、Ａｌａ（アラニンまたはＡ）、Ｖａｌ（バリンまたはＶ）、Ｌｅｕ（ロイシンまたはＬ）、Ｉｌｅ（イソロイシンまたはＩ）、Ｍｅｔ（メチオニンまたはＭ）、Ｓｅｒ（セリンまたはＳ）、Ｔｈｒ（トレオニンまたはＴ）、及びＣｙｓ（システインまたはＣ）を含めた「脂肪族群」を挙げることができる。各群内で、下位群もまた識別され得る。例えば、荷電または極性アミノ酸の群は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ及びＨｉｓで構成される「正に荷電した下位群」、Ｇｌｕ及びＡｓｐで構成される「負に荷電した下位群」、ならびにＡｓｎ及びＧｌｎで構成される「極性下位群」を含む下位群に細分することができる。別の例では、芳香族または環状の群は、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ及びＴｒｐから構成される「窒素環下位群」、ならびにＰｈｅ及びＴｙｒから構成される「フェニル下位群」を含む下位群に細分することができる。さらなる別の例では、脂肪族群は、下位群、例えば、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ及びＡｌａから構成される「脂肪族非極性下位群」、ならびにＭｅｔ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ及びＣｙｓから構成される「脂肪族微極性下位群」に細分することができる。保存的突然変異の分類の例としては、前述の下位群内のアミノ酸のアミノ酸置換、例えば、限定されないが、正電荷を維持することができるような、Ａｒｇの代わりにＬｙｓまたはその逆；負電荷を維持することができるような、Ａｓｐの代わりにＧｌｕまたはその逆；遊離－ＯＨを維持することができるような、Ｔｈｒの代わりにＳｅｒまたはその逆；及び遊離－ＮＨ_２を維持することができるような、Ａｓｎの代わりにＧｌｎまたはその逆、が挙げられる。いくつかの実施形態では、疎水性アミノ酸は、天然に存在する疎水性アミノ酸と、例えば、活性部位で置き換わり、疎水性を保存する。

【0087】

２つ以上のポリペプチド配列との関連で「同一」または「同一性」パーセントという用語は、同じであるか、または特定のパーセンテージのアミノ酸残基を有する、例えば、比較ウィンドウ上で最大の一致が得られるように比較及び整列させた場合に特定の領域にわたって、または指定された領域にわたって、配列比較アルゴリズムを用いて、または手作業でのアラインメントと目視検査によって測定して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％、またはそれ以上同一である、２つ以上の配列または部分列を指す。

【0088】

ポリペプチドの配列比較では、通常、１つのアミノ酸配列が参照配列として機能し、これを候補配列と比較する。アラインメントは、当業者に利用可能な様々な方法、例えば、視覚によるアラインメントを用いて、または公知のアルゴリズムを用いた公開されているソフトウェアを用いて行い、最大のアラインメントを達成することができる。そのようなプログラムとしては、ＢＬＡＳＴプログラム、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．）またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）が挙げられる。最大のアラインメントを達成するためにアラインメントに使用されるパラメータは、当業者によって決定され得る。本出願の目的で、ポリペプチド配列の配列比較に関しては、２種のタンパク質配列をデフォルトのパラメータで整列させるためのＢＬＡＳＴＰアルゴリズム標準タンパク質ＢＬＡＳＴが使用される。

【0089】

ポリペプチド配列における所与のアミノ酸残基の特定との関連で使用される場合の「～に対応する」、「～に準拠して決められる」、または「～に準拠してナンバリングされる」という表現は、所与のアミノ酸配列が最大に整列され、当該参照配列と比較される場合の特定の参照配列の残基の位置を指す。したがって、例えば、修飾Ｆｃポリペプチドにおけるアミノ酸残基は、この残基が、配列番号９５に対して最適に整列された際に配列番号９５のアミノ酸と一致した場合に、配列番号９５のアミノ酸「に対応する」。参照配列に整列されるポリペプチドは、この参照配列と同じ長さである必要はない。

【0090】

本明細書において交換可能に使用される、「対象」、「個体」、及び「患者」という用語は、哺乳類を指し、これに含まれるのは、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、ラット、マウス、及びモルモット）、ウサギ、ウシ、ブタ、ウマ、及び他の哺乳類種であるが、これらに限定されない。１つの実施形態では、この患者はヒトである。

【0091】

「処置」、「処置する」などの用語は、一般に、所望の薬理学的及び／または生理学的効果を得ることを意味するために本明細書で使用される。「処置すること」または「処置」は、軽減、寛解、患者生存の改善、生存時間もしくは率の増大、症状の減衰または疾患を患者にとってより耐えられるようにすること、変性もしくは衰退の率における減速、または患者の肉体的もしくは精神的健康を改善することなどの、任意の客観的または主観的パラメータを含む、がん（例えば、ＨＥＲ２陽性及び／または転移性がん）の処置または改善の成功の任意の兆候を指す場合がある。症状の処置または改善は、客観的または主観的パラメータに基づくことができる。処置の効果は、その処置を受けていない個体もしくは個体のプールと、または、処置前もしくは処置中の異なる時点での同じ患者と比較することができる。

【0092】

「医薬的に許容される賦形剤」という用語は、ヒトまたは動物での使用に対して生物学的に、または薬理学的に適合する非活性薬剤成分、例えば、限定されないが、緩衝剤、担体、または保存料を指す。

【0093】

本明細書で使用する場合、分子（例えば、本明細書に記載の抗体）の「治療量」または「治療有効量」は、対象における疾患の症状を処置するか、軽減させるか、緩和するか、またはその重症度を低減させる分子の量である。

【0094】

「投与する」という用語は、所望の生物作用点に分子、または組成物を送達する方法を指す。これらの方法としては、局所送達、非経口送達、静脈内送達、皮内送達、筋肉内送達、髄腔内送達、結腸送達、直腸送達、または腹腔内送達が挙げられるがこれらに限定されない。一実施形態では、本明細書に記載される抗体は、静脈内投与される。

【0095】

ＩＩＩ．抗ＨＥＲ２抗体
一態様では、共通の軽鎖ポリペプチドを含む、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ及びサブドメインＩＶの両方に結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態では、この抗体のＦｃポリペプチドの一方または両方は、修飾Ｆｃポリペプチド（例えば、ＴｆＲ結合を促進する及び／またはＦｃポリペプチドのヘテロ二量体化を向上するように修飾されたもの）である。このような二重特異性抗体の模式図を図１に示す。

【0096】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、以下：
（ａ）ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＶに対する第１の抗原結合部位；
（ｂ）ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する第２の抗原結合部位；及び
（ｃ）ＴｆＲ結合部位を作り出す修飾を含有する第１のＦｃポリペプチドを含む、修飾されたＦｃポリペプチド二量体
を含み、
第１の抗原結合部位の軽鎖ポリペプチド配列は、第２の抗原結合部位の軽鎖ポリペプチド配列と同一である。

【0097】

他の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、以下：
（ａ）ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する第１の抗原結合部位；
（ｂ）ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＶに対する第２の抗原結合部位；及び
（ｃ）ＴｆＲ結合部位を作り出す修飾を含有する第１のＦｃポリペプチドを含む、修飾されたＦｃポリペプチド二量体
を含み、
この第１の抗原結合部位の軽鎖ポリペプチド配列は、第２の抗原結合部位の軽鎖ポリペプチド配列と同一である。

【0098】

いくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位を含む修飾されたＣＨ３ドメインを含む。特定の実施形態では、修飾されたＣＨ３ドメインは、ＴｆＲ結合部位を作り出す本明細書に記載のアミノ酸位置のセットにおける置換を含む。

【0099】

いくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチド及び第２のＦｃポリペプチドは各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含む。例えば、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含んでもよく、第２のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含んでもよい。別の例では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含んでもよく、第２のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含んでもよい。さらに、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、独立して、ＴｆＲ媒介性のエフェクター機能を低下させる修飾、すなわち、ＴｆＲ結合の際にエフェクター機能を低下させる修飾を含み得る。例えば、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾は、ＥＵナンバリングに従って、（ｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換、または（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換、ならびにＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換である。

【0100】

いくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、独立してＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドまたは第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を独立して含む第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強することが可能であり、すなわち、ＨＥＲ２結合時のエフェクター機能を増強することが可能である。

【0101】

いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第２のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。

【0102】

特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む。

【0103】

特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む。

【0104】

特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む。

【0105】

特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第２のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む。

【0106】

特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、第２のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。

【0107】

特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、第２のＦｃポリペプチドは、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含む。

【0108】

いくつかの実施形態では、第１のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従い、ＴｆＲ結合部位、Ｔ３６６Ｗの置換、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換（必要に応じてＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含む）、ならびに必要に応じてＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ第２のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換、ならびに任意選択でＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。例えば、第１のＦｃポリペプチドは、配列番号７４～８４、８６及び９８のいずれか１つの配列に対する少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含んでもよく、かつ第２のＦｃポリペプチドは、配列番号７１～７３、８５、及び９９～１００のいずれか１つの配列に対する少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み得る。

【0109】

特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位を含み、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含み（任意選択で、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含む）、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換（または第１のＦｃポリペプチドに存在する場合、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換）を含まない。特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位を含み、かつＬ２３４ＡまたはＬ３２５Ａの置換（または第２のＦｃポリペプチドに存在する場合、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換）を含まず、かつ第２のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む（任意選択で、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含む）。

【0110】

いくつかの実施形態では、このＦｃポリペプチドの一方または両方は、そのＣ末端のリジン（例えば、ＥＵナンバリングに従って、このＦｃポリペプチドの４４７位のＬｙｓ残基）が除去されていてもよい。いくつかの実施形態では、このＦｃポリペプチドのＣ末端のリジンの除去により、抗体の安定性が改善され得る。

【0111】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する抗原結合部位は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９０のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３。

【0112】

特定の実施形態では、以下のうちの少なくとも１つである：配列番号８９のＸ_１は、Ｔではない；配列番号８９のＸ_２は、Ｆではない；配列番号８９のＸ_３は、Ｔではない；配列番号９０のＸ_１は、Ｎではない；配列番号９０のＸ_２は、Ｎではない；配列番号９０のＸ_３は、Ｓではない；配列番号９０のＸ_４は、Ｇではない；配列番号９０のＸ_５は、Ｇではない；配列番号９０のＸ_６は、Ｑではない；配列番号９１のＸ_１は、Ｌではない；配列番号９１のＸ_２は、Ｇではない；配列番号９１のＸ_３は、Ｐではない；及び配列番号９１のＸ_４は、Ｓではない。

【0113】

いくつかの実施形態では、重鎖ＣＤＲ１は、配列番号８９のアミノ酸配列を含み、Ｘ_１は、Ｎ、Ｋ、Ｍ、またはＨである。いくつかの実施形態では、重鎖ＣＤＲ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、Ｘ_５はＱである。いくつかの実施形態では、重鎖ＣＤＲ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、Ｘ_６は、Ｒ、ＨまたはＴである。いくつかの実施形態では、重鎖ＣＤＲ３は、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、Ｘ_４は、Ｗ、Ｆ、Ｄ、Ｌ、またはＹである。いくつかの実施形態では、重鎖ＣＤＲ３は、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、Ｘ_４はＬである。

【0114】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する抗原結合部位は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９０のアミノ酸配列を含み、Ｘ_５はＱである、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含み、Ｘ_４はＬである、重鎖ＣＤＲ３。

【0115】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する抗原結合部位は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４及び４９～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号４及び４９～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５～６及び５３～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号５～６及び５３～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７～８及び５６～５９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号７～８及び５６～５９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３。

【0116】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する抗原結合部位は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号４のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３。

【0117】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する抗原結合部位は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７または配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３。

【0118】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する抗原結合部位は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３。

【0119】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する抗原結合部位は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３。

【0120】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する抗原結合部位は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３。

【0121】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する抗原結合部位は、配列番号１～３及び６０～７０のいずれか１つに対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する抗原結合部位は、配列番号１～３及び６０～７０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0122】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＶに対する抗原結合部位は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１６のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号１７のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号１８のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３。

【0123】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＶに対する抗原結合部位は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３。

【0124】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＶに対する抗原結合部位は、配列番号１５に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＶに対する抗原結合部位は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0125】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体における、第１及び第２の抗原結合部位における軽鎖ポリペプチド配列、すなわち、一方はＨＥＲ２サブドメインＩＩ用であり、他方はＨＥＲ２サブドメインＩＶ用の軽鎖ポリペプチド配列は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１３または１４のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３。

【0126】

いくつかの実施形態では、軽鎖ポリペプチド配列は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１３または１４のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３。

【0127】

いくつかの実施形態では、軽鎖ポリペプチド配列は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３。

【0128】

いくつかの実施形態では、軽鎖ポリペプチド配列は、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つ、２つ、または３つすべて）のＣＤＲを含む：
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３。

【0129】

特定の実施形態では、軽鎖ポリペプチド配列は、配列番号１３または１４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含み、任意選択でさらに、以下からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つまたは両方）のＣＤＲを含む：配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１；ならびに配列番号１２のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２。特定の実施形態では、軽鎖ポリペプチド配列は、配列番号１３または１４のアミノ酸配列を含み、かつ任意選択でさらに、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２からなる群から選択される１つ以上（例えば、１つまたは両方）のＣＤＲを含む。

【0130】

いくつかの実施形態では、軽鎖ポリペプチド配列は、配列番号９～１０のいずれか１つに対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖ポリペプチド配列は、配列番号９～１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0131】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、表１に列挙される組み合わせ、すなわち、組み合わせ（Ｃｏｍｂｏ）＃Ａ～ＡＣのいずれか１つから選択される重鎖及び軽鎖ＣＤＲを含む。

【0132】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）第１の重鎖は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３を含み；
（ｂ）第２の重鎖は、配列番号４及び４９～５２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号５～６及び５３～５５のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号７～８及び５６～５９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを含み；かつ
（ｃ）軽鎖は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１３～１４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0133】

この抗ＨＥＲ２抗体の特定の実施形態では、第１の抗原結合部位は、配列番号１５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；第２の抗原結合部位は、配列番号１～３及び６０～７０のアミノ酸配列を含み；第１のＦｃポリペプチドは、配列番号７４～８４、８６、及び９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；かつ、軽鎖ポリペプチド配列は、配列番号９～１０及び１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、この抗体は、配列番号７１～７３、８５、及び９９～１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第２のＦｃポリペプチドをさらに含む。

【0134】

抗ＨＥＲ２抗体の特定の他の実施形態では、第１の抗原結合部位は、配列番号１～３及び６０～７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；第２の抗原結合部位は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み；第１のＦｃポリペプチドは、配列番号７４～８４、８６、及び９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；かつ、軽鎖ポリペプチド配列は、配列番号９～１０及び１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、この抗体は、配列番号７１～７３、８５及び９９～１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第２のＦｃポリペプチドをさらに含む。

【0135】

いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩまたはＩＶに結合するための第１の重鎖、他のＨＥＲ２サブドメインに結合するための第２の重鎖、及び２つの同一の軽鎖を含む。

【0136】

特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、表２に列挙される組み合わせ、すなわち、組み合わせ（Ｃｏｍｂｏ）＃Ａ－ＡＴのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対してそれぞれ少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有する重鎖及び軽鎖を含む。

【0137】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）第１の重鎖は配列番号３７を含み、第２の重鎖は配列番号２５を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｂ）第１の重鎖は配列番号３１を含み、第２の重鎖は配列番号３０を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｃ）第１の重鎖は配列番号３１を含み、第２の重鎖は配列番号２９を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｄ）第１の重鎖は配列番号３８を含み、第２の重鎖は配列番号３０を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｅ）第１の重鎖は配列番号３２を含み、第２の重鎖は配列番号３０を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｆ）第１の重鎖は配列番号３２を含み、第２の重鎖は配列番号２９を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｇ）第１の重鎖は配列番号３９を含み、第２の重鎖は配列番号３０を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｈ）第１の重鎖は配列番号３７を含み、第２の重鎖は配列番号２６を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｉ）第１の重鎖は配列番号３１を含み、第２の重鎖は配列番号３４を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｊ）第１の重鎖は配列番号３１を含み、第２の重鎖は配列番号３３を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｋ）第１の重鎖は配列番号３８を含み、第２の重鎖は配列番号３４を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｌ）第１の重鎖は配列番号３２を含み、第２の重鎖は配列番号３４を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｍ）第１の重鎖は配列番号３２を含み、第２の重鎖は配列番号３３を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｎ）第１の重鎖は配列番号３９を含み、第２の重鎖は配列番号３４を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｏ）第１の重鎖は配列番号３７を含み、第２の重鎖は配列番号２７を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｐ）第１の重鎖は配列番号３１を含み、第２の重鎖は配列番号３６を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｑ）第１の重鎖は配列番号３１を含み、第２の重鎖は配列番号３５を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｒ）第１の重鎖は配列番号３８を含み、第２の重鎖は配列番号３６を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｓ）第１の重鎖は配列番号３２を含み、第２の重鎖は配列番号３６を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｔ）第１の重鎖は配列番号３２を含み、第２の重鎖は配列番号３５を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｕ）第１の重鎖は配列番号３９を含み、第２の重鎖は配列番号４６を含み、かつ軽鎖は配列番号９を含む；
（ｖ）第１の重鎖は配列番号３７を含み、第２の重鎖は配列番号２５を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ｗ）第１の重鎖は配列番号３１を含み、第２の重鎖は配列番号３０を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ｘ）第１の重鎖は配列番号３１を含み、第２の重鎖は配列番号２９を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ｙ）第１の重鎖は配列番号３８を含み、第２の重鎖は配列番号３０を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ｚ）第１の重鎖は配列番号３２を含み、第２の重鎖は配列番号３０を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａａ）第１の重鎖は配列番号３２を含み、第２の重鎖は配列番号２９を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｂ）第１の重鎖は配列番号３９を含み、第２の重鎖は配列番号３０を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｃ）第１の重鎖は配列番号３７を含み、第２の重鎖は配列番号２６を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｄ）第１の重鎖は配列番号３１を含み、第２の重鎖は配列番号３４を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｅ）第１の重鎖は配列番号３１を含み、第２の重鎖は配列番号３３を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｆ）第１の重鎖は配列番号３８を含み、第２の重鎖は配列番号３４を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｇ）第１の重鎖は配列番号３２を含み、第２の重鎖は配列番号３４を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｈ）第１の重鎖は配列番号３２を含み、第２の重鎖は配列番号３３を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｉ）第１の重鎖は配列番号３９を含み、第２の重鎖は配列番号３４を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｊ）第１の重鎖は配列番号３７を含み、第２の重鎖は配列番号２７を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｋ）第１の重鎖は配列番号３１を含み、第２の重鎖は配列番号３６を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｌ）第１の重鎖は配列番号３１を含み、第２の重鎖は配列番号３５を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｍ）第１の重鎖は配列番号３８を含み、第２の重鎖は配列番号３６を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｎ）第１の重鎖は配列番号３２を含み、第２の重鎖は配列番号３６を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｏ）第１の重鎖は配列番号３２を含み、第２の重鎖は配列番号３５を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｐ）第１の重鎖は配列番号３９を含み、第２の重鎖は配列番号４６を含み、かつ軽鎖は配列番号１０を含む；
（ａｑ）第１の重鎖は配列番号２０を含み、第２の重鎖は配列番号２４を含み、かつ軽鎖は配列番号１９を含む；
（ａｒ）第１の重鎖は配列番号２１を含み、第２の重鎖は配列番号２４を含み、かつ軽鎖は配列番号１９を含む；
（ａｓ）第１の重鎖は配列番号２２を含み、第２の重鎖は配列番号２４を含み、かつ軽鎖は配列番号１９を含む；または
（ａｔ）第１の重鎖は配列番号２３を含み、第２の重鎖は配列番号２４を含み、かつ軽鎖は配列番号１９を含む。

【0138】

特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、それぞれ少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を、表３の組み合わせ、すなわち、組み合わせ（Ｃｏｍｂｏ）＃Ａ－Ｌのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して有するＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含む第１の重鎖と、それぞれ少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を、表４の組み合わせ、すなわち、組み合わせ（Ｃｏｍｂｏ）＃Ａ－Ｌのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して有するＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含む第２の重鎖とを含む。これらの重鎖の組み合わせのいずれにおいても、軽鎖ポリペプチド配列は、配列番号９～１０及び１９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有する。

【0139】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）第１の重鎖は配列番号１及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８６を含む；
（ｂ）第１の重鎖は配列番号１及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７４を含む；
（ｃ）第１の重鎖は配列番号１及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７５を含む；
（ｄ）第１の重鎖は配列番号１及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７６を含む；
（ｅ）第１の重鎖は配列番号１及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７７を含む；
（ｆ）第１の重鎖は配列番号１及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７８を含む；
（ｇ）第１の重鎖は配列番号１及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７９を含む；
（ｈ）第１の重鎖は配列番号１及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８０を含む；
（ｉ）第１の重鎖は配列番号１及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８１を含む；
（ｊ）第１の重鎖は配列番号１及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８２を含む；
（ｋ）第１の重鎖は配列番号１及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８３を含む；または
（ｌ）第１の重鎖は配列番号１及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８４を含む。

【0140】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）第１の重鎖は配列番号２及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８６を含む；
（ｂ）第１の重鎖は配列番号２及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７４を含む；
（ｃ）第１の重鎖は配列番号２及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７５を含む；
（ｄ）第１の重鎖は配列番号２及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７６を含む；
（ｅ）第１の重鎖は配列番号２及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７７を含む；
（ｆ）第１の重鎖は配列番号２及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７８を含む；
（ｇ）第１の重鎖は配列番号２及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７９を含む；
（ｈ）第１の重鎖は配列番号２及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８０を含む；
（ｉ）第１の重鎖は配列番号２及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８１を含む；
（ｊ）第１の重鎖は配列番号２及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８２を含む；
（ｋ）第１の重鎖は配列番号２及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８３を含む；または
（ｌ）第１の重鎖は配列番号２及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８４を含む。

【0141】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）第１の重鎖は配列番号３及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８６を含む；
（ｂ）第１の重鎖は配列番号３及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７４を含む；
（ｃ）第１の重鎖は配列番号３及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７５を含む；
（ｄ）第１の重鎖は配列番号３及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７６を含む；
（ｅ）第１の重鎖は配列番号３及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７７を含む；
（ｆ）第１の重鎖は配列番号３及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７８を含む；
（ｇ）第１の重鎖は配列番号３及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７９を含む；
（ｈ）第１の重鎖は配列番号３及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８０を含む；
（ｉ）第１の重鎖は配列番号３及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８１を含む；
（ｊ）第１の重鎖は配列番号３及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８２を含む；
（ｋ）第１の重鎖は配列番号３及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８３を含む；または
（ｌ）第１の重鎖は配列番号３及び７１を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８４を含む。

【0142】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）第１の重鎖は配列番号１及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８６を含む；
（ｂ）第１の重鎖は配列番号１及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７４を含む；
（ｃ）第１の重鎖は配列番号１及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７５を含む；
（ｄ）第１の重鎖は配列番号１及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７６を含む；
（ｅ）第１の重鎖は配列番号１及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７７を含む；
（ｆ）第１の重鎖は配列番号１及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７８を含む；
（ｇ）第１の重鎖は配列番号１及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７９を含む；
（ｈ）第１の重鎖は配列番号１及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８０を含む；
（ｉ）第１の重鎖は配列番号１及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８１を含む；
（ｊ）第１の重鎖は配列番号１及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８２を含む；
（ｋ）第１の重鎖は配列番号１及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８３を含む；または
（ｌ）第１の重鎖は配列番号１及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８４を含む。

【0143】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）第１の重鎖は配列番号２及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８６を含む；
（ｂ）第１の重鎖は配列番号２及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７４を含む；
（ｃ）第１の重鎖は配列番号２及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７５を含む；
（ｄ）第１の重鎖は配列番号２及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７６を含む；
（ｅ）第１の重鎖は配列番号２及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７７を含む；
（ｆ）第１の重鎖は配列番号２及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７８を含む；
（ｇ）第１の重鎖は配列番号２及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７９を含む；
（ｈ）第１の重鎖は配列番号２及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８０を含む；
（ｉ）第１の重鎖は配列番号２及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８１を含む；
（ｊ）第１の重鎖は配列番号２及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８２を含む；
（ｋ）第１の重鎖は配列番号２及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８３を含む；または
（ｌ）第１の重鎖は配列番号２及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８４を含む。

【0144】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）第１の重鎖は配列番号３及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８６を含む；
（ｂ）第１の重鎖は配列番号３及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７４を含む；
（ｃ）第１の重鎖は配列番号３及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７５を含む；
（ｄ）第１の重鎖は配列番号３及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７６を含む；
（ｅ）第１の重鎖は配列番号３及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７７を含む；
（ｆ）第１の重鎖は配列番号３及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７８を含む；
（ｇ）第１の重鎖は配列番号３及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７９を含む；
（ｈ）第１の重鎖は配列番号３及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８０を含む；
（ｉ）第１の重鎖は配列番号３及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８１を含む；
（ｊ）第１の重鎖は配列番号３及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８２を含む；
（ｋ）第１の重鎖は配列番号３及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８３を含む；または
（ｌ）第１の重鎖は配列番号３及び７２を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８４を含む。

【0145】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）第１の重鎖は配列番号１及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８６を含む；
（ｂ）第１の重鎖は配列番号１及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７４を含む；
（ｃ）第１の重鎖は配列番号１及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７５を含む；
（ｄ）第１の重鎖は配列番号１及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７６を含む；
（ｅ）第１の重鎖は配列番号１及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７７を含む；
（ｆ）第１の重鎖は配列番号１及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７８を含む；
（ｇ）第１の重鎖は配列番号１及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７９を含む；
（ｈ）第１の重鎖は配列番号１及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８０を含む；
（ｉ）第１の重鎖は配列番号１及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８１を含む；
（ｊ）第１の重鎖は配列番号１及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８２を含む；
（ｋ）第１の重鎖は配列番号１及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８３を含む；または
（ｌ）第１の重鎖は配列番号１及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８４を含む。

【0146】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）第１の重鎖は配列番号２及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８６を含む；
（ｂ）第１の重鎖は配列番号２及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７４を含む；
（ｃ）第１の重鎖は配列番号２及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７５を含む；
（ｄ）第１の重鎖は配列番号２及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７６を含む；
（ｅ）第１の重鎖は配列番号２及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７７を含む；
（ｆ）第１の重鎖は配列番号２及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７８を含む；
（ｇ）第１の重鎖は配列番号２及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７９を含む；
（ｈ）第１の重鎖は配列番号２及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８０を含む；
（ｉ）第１の重鎖は配列番号２及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８１を含む；
（ｊ）第１の重鎖は配列番号２及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８２を含む；
（ｋ）第１の重鎖は配列番号２及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８３を含む；または
（ｌ）第１の重鎖は配列番号２及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８４を含む。

【0147】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）第１の重鎖は配列番号３及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８６を含む；
（ｂ）第１の重鎖は配列番号３及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７４を含む；
（ｃ）第１の重鎖は配列番号３及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７５を含む；
（ｄ）第１の重鎖は配列番号３及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７６を含む；
（ｅ）第１の重鎖は配列番号３及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７７を含む；
（ｆ）第１の重鎖は配列番号３及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７８を含む；
（ｇ）第１の重鎖は配列番号３及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７９を含む；
（ｈ）第１の重鎖は配列番号３及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８０を含む；
（ｉ）第１の重鎖は配列番号３及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８１を含む；
（ｊ）第１の重鎖は配列番号３及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８２を含む；
（ｋ）第１の重鎖は配列番号３及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８３を含む；または
（ｌ）第１の重鎖は配列番号３及び７３を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８４を含む。

【0148】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）第１の重鎖は配列番号１及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８６を含む；
（ｂ）第１の重鎖は配列番号１及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７４を含む；
（ｃ）第１の重鎖は配列番号１及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７５を含む；
（ｄ）第１の重鎖は配列番号１及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７６を含む；
（ｅ）第１の重鎖は配列番号１及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７７を含む；
（ｆ）第１の重鎖は配列番号１及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７８を含む；
（ｇ）第１の重鎖は配列番号１及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７９を含む；
（ｈ）第１の重鎖は配列番号１及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８０を含む；
（ｉ）第１の重鎖は配列番号１及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８１を含む；
（ｊ）第１の重鎖は配列番号１及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８２を含む；
（ｋ）第１の重鎖は配列番号１及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８３を含む；または
（ｌ）第１の重鎖は配列番号１及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８４を含む。

【0149】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）第１の重鎖は配列番号２及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８６を含む；
（ｂ）第１の重鎖は配列番号２及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７４を含む；
（ｃ）第１の重鎖は配列番号２及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７５を含む；
（ｄ）第１の重鎖は配列番号２及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７６を含む；
（ｅ）第１の重鎖は配列番号２及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７７を含む；
（ｆ）第１の重鎖は配列番号２及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７８を含む；
（ｇ）第１の重鎖は配列番号２及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７９を含む；
（ｈ）第１の重鎖は配列番号２及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８０を含む；
（ｉ）第１の重鎖は配列番号２及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８１を含む；
（ｊ）第１の重鎖は配列番号２及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８２を含む；
（ｋ）第１の重鎖は配列番号２及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８３を含む；または
（ｌ）第１の重鎖は配列番号２及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８４を含む。

【0150】

この抗体の特定の実施形態では、
（ａ）第１の重鎖は配列番号３及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８６を含む；
（ｂ）第１の重鎖は配列番号３及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７４を含む；
（ｃ）第１の重鎖は配列番号３及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７５を含む；
（ｄ）第１の重鎖は配列番号３及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７６を含む；
（ｅ）第１の重鎖は配列番号３及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７７を含む；
（ｆ）第１の重鎖は配列番号３及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７８を含む；
（ｇ）第１の重鎖は配列番号３及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び７９を含む；
（ｈ）第１の重鎖は配列番号３及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８０を含む；
（ｉ）第１の重鎖は配列番号３及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８１を含む；
（ｊ）第１の重鎖は配列番号３及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８２を含む；
（ｋ）第１の重鎖は配列番号３及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８３を含む；または
（ｌ）第１の重鎖は配列番号３及び８５を含み、かつ第２の重鎖は配列番号１５及び８４を含む。

【0151】

特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、それぞれ少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を、表５の組み合わせ、すなわち、組み合わせ（Ｃｏｍｂｏ）＃Ａ－ＡＪのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して有するＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含む第１の重鎖と、それぞれ少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を、表６の組み合わせ、すなわち、組み合わせ（Ｃｏｍｂｏ）＃Ａ－Ｄのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に対して有するＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含む第２の重鎖とを含む。これらの重鎖の組み合わせのいずれにおいても、軽鎖ポリペプチド配列は、配列番号９～１０及び１９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有する。

【0152】

ＩＶ．Ｆｃポリペプチド及びその修飾
いくつかの態様では、本明細書に記載の抗体のいずれかは、Ｆｃポリペプチド二量体を含み、この二量体の一方または両方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチドと比較してアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチド（例えば、修飾Ｆｃポリペプチド）におけるアミノ酸修飾により、Ｆｃポリペプチド二量体のＢＢＢ受容体（例えば、ＴｆＲ）への結合をもたらすこと、この二量体の２つのＦｃポリペプチドのヘテロ二量体化を促進すること、エフェクター機能を調節すること、血清半減期を延長すること、グリコシル化に影響を与えること、及び／またはヒトにおける免疫原性を低下させることができる。いくつかの実施形態では、この抗体に存在するＦｃポリペプチドは、独立して、対応する野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＦｃポリペプチド）に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸配列同一性を有する。修飾Ｆｃポリペプチド（例えば、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド）の例及び説明は、例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれる国際特許公開第ＷＯ２０１８／１５２３２６号に見出すことができる。

【0153】

ＢＢＢ受容体結合のためのＦｃポリペプチド修飾
本明細書に提供するのは、ＢＢＢを横断して輸送することが可能な抗ＨＥＲ２抗体である。かかるタンパク質は、ＢＢＢ受容体に結合する、修飾Ｆｃポリペプチドを含む。ＢＢＢ受容体は、ＢＢＢ内皮、ならびに他の細胞型及び組織型で発現される。いくつかの実施形態では、このＢＢＢ受容体は、ＴｆＲである。ＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位を有するとも表現される。

【0154】

様々なＦｃ修飾において指定されるアミノ酸残基は、ＢＢＢ受容体、例えば、ＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチド中に導入されるものを含め、本明細書において、ＥＵインデックスナンバリングを使用してナンバリングされる。任意のＦｃポリペプチド、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＦｃポリペプチドは、本明細書に記載の１つ以上の位置に、修飾、例えば、アミノ酸置換を有し得る。いくつかの実施形態では、ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合活性のために修飾されるドメインは、ヒトＩｇのＣＨ３ドメイン、例えば、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインである。このＣＨ３ドメインは、任意のＩｇＧサブタイプ、すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４由来のものであってもよい。ＩｇＧ１抗体との関連において、ＣＨ３ドメインとは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングして、ほぼ３４１位～ほぼ４４７位のアミノ酸のセグメントを指す。

【0155】

いくつかの実施形態では、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＴｆＲの頂端ドメインに結合し、かつトランスフェリンのＴｆＲへの結合を遮断することも阻害することもなく、ＴｆＲに結合し得る。いくつかの実施形態では、トランスフェリンのＴｆＲへの結合は、実質的に阻害されない。いくつかの実施形態では、トランスフェリンのＴｆＲへの結合は、約５０％未満（例えば、約４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、または５％未満）阻害される。

【0156】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体に存在するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、１つ以上の、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングスキームに従って、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２９５、２９７、２９８及び２９９位を含むアミノ酸位置で、少なくとも４、５、６、７、８、９、または１０個の置換を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体に存在するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み；いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングスキームに従って、２７４、２７６、２８３、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、及び２９０位を含むアミノ酸位置で、少なくとも４、５、６、７、８、または９個の置換を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体に存在するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングスキームに従って、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２９２、２９３、２９４、２９６、及び３００位を含むアミノ酸位置で、少なくとも４、５、６、７、８、９、または１０個の置換を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体に存在するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングスキームに従って、２７２、２７４、２７６、３２２、３２４、３２６、３２９、３３０、及び３３１位を含むアミノ酸位置で、少なくとも４、５、６、７、８、または９個の置換を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体に存在するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングスキームに従って、３４５、３４６、３４７、３４９、４３７、４３８、４３９、及び４４０位を含むアミノ酸位置で、少なくとも４、５、６、または７個の置換を含む。

【0157】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体に存在するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングスキームに従って、アミノ酸位置３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び４２１位に、少なくとも４、５、６、７、８、または９個の置換を含む。

【0158】

いくつかの実施形態では、ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、以下の通り、配列番号９５と比較して置換を有する位置を少なくとも１つ含む：３８４位でのＬｅｕ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、もしくはＶａｌ、３８６位でのＬｅｕ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、もしくはＰｒｏ、３８７位でのＶａｌ、Ｐｒｏ、もしくは酸性アミノ酸、３８８位での芳香族アミノ酸、例えば、ＴｒｐもしくはＧｌｙ（例えば、Ｔｒｐ）、３８９位でのＶａｌ、Ｓｅｒ、もしくはＡｌａ、４１３位での酸性アミノ酸、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、もしくはＰｒｏ、４１６位でのＴｈｒもしくは酸性アミノ酸、または４２１位でのＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、もしくはＰｈｅ。いくつかの実施形態では、ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、このセットの１つ以上の位置における特定のアミノ酸の保存的置換、例えば、同じ荷電分類、疎水性分類、側鎖環構造分類（例えば、芳香族アミノ酸）、もしくはサイズ分類、及び／または極性もしくは非極性分類のアミノ酸を含み得る。したがって、例えば、Ｉｌｅは、３８４位、３８６位、及び／または４１３位に存在し得る。いくつかの実施形態では、３８７、４１３、及び４１６位の１つ、２つまたは各々の位置における酸性アミノ酸は、Ｇｌｕである。他の実施形態では、３８７、４１３、及び４１６位の１つ、２つまたは各々の酸性アミノ酸は、Ａｓｐである。いくつかの実施形態では、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、４１３、４１６、及び４２１位の２、３、４、５、６、７、または８個すべては、本段落に規定されるアミノ酸置換を有する。

【0159】

いくつかの実施形態では、アミノ酸位置３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び／または４２１位に修飾を有するＦｃポリペプチドは、３９０位に天然のＡｓｎを含む。いくつかの実施形態では、このＦｃポリペプチドは、３９０位にＧｌｙ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、またはＡｓｐを含む。いくつかの実施形態では、このＦｃポリペプチドは、さらに、３８０、３９１、３９２、及び４１５位を含む位置に、１つ、２つ、３つ、または４つの置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、またはＧｌｎが３８０位に存在し得る。いくつかの実施形態では、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、またはＰｈｅが３９１位に存在し得る。いくつかの実施形態では、Ｇｌｎ、Ｐｈｅ、またはＨｉｓが３９２位に存在し得る。いくつかの実施形態では、Ｇｌｕが４１５位に存在し得る。

【0160】

特定の実施形態では、このＦｃポリペプチドは、以下から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の位置を含む：３８０位のＴｒｐ、ＬｅｕもしくはＧｌｕ、３８４位のＴｙｒもしくはＰｈｅ、３８６位のＴｈｒ、３８７位のＧｌｕ、３８８位のＴｒｐ、３８９位のＳｅｒ、Ａｌａ、ＶａｌもしくはＡｓｎ、３９０位のＳｅｒもしくはＡｓｎ、４１３位のＴｈｒもしくはＳｅｒ、４１５位のＧｌｕもしくはＳｅｒ、４１６位のＧｌｕ、及び／または４２１位のＰｈｅ。いくつかの実施形態では、このＦｃポリペプチドは、以下の１１個の位置すべてを含む：３８０位のＴｒｐ、ＬｅｕもしくはＧｌｕ、３８４位のＴｙｒもしくはＰｈｅ、３８６位のＴｈｒ、３８７位のＧｌｕ、３８８位のＴｒｐ、３８９位のＳｅｒ、Ａｌａ、ＶａｌもしくはＡｓｎ、３９０位のＳｅｒもしくはＡｓｎ、４１３位のＴｈｒもしくはＳｅｒ、４１５位のＧｌｕもしくはＳｅｒ、４１６位のＧｌｕ、及び／または４２１位のＰｈｅ。

【0161】

特定の実施形態では、このＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、３８４位にＬｅｕもしくはＭｅｔ；３８６位にＬｅｕ、Ｈｉｓ、もしくはＰｒｏ；３８７位にＶａｌ；３８８位にＴｒｐ；３８９位にＶａｌもしくはＡｌａ；４１３位にＰｒｏ；４１６位にＴｈｒ；及び／または４２１位にＴｒｐを含む。いくつかの実施形態では、このＦｃポリペプチドは、さらに、３９１位にＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、またはＰｈｅを含む。いくつかの実施形態では、このＦｃポリペプチドは、さらに、３８０位にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、もしくはＧｌｎ及び／または３９２位にＧｌｎ、Ｐｈｅ、もしくはＨｉｓを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｐが３８０位に存在し、及び／またはＧｌｎが３９２位に存在する。いくつかの実施形態では、ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、３８０位にＴｒｐを有さない。

【0162】

他の実施形態では、ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕもしくはＶａｌ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒもしくはＴｈｒ、４１６位にＧｌｕ、及び／または４２１位にＰｈｅを含む。いくつかの実施形態では、このＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、３９０位に天然のＡｓｎを含む。特定の実施形態では、このＦｃポリペプチドは、さらに、３８０位にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、もしくはＧｌｎを及び／または４１５位にＧｌｕを含む。いくつかの実施形態では、このＦｃポリペプチドは、さらに、３８０位にＴｒｐを及び／または４１５位にＧｌｕを含む。

【0163】

いくつかの実施形態では、このＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、以下の置換の１つ以上を含む：３８０位にＴｒｐ、３８６位にＴｈｒ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＶａｌ、４１３位にＳｅｒもしくはＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、及び／または４２１位にＰｈｅ。

【0164】

さらなる実施形態では、このＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、さらに、以下から選択される１、２、または３つの位置を含む：４１４位がＬｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、またはＰｒｏであり、４２４位がＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、またはＬｙｓであり、４２６位がＳｅｒ、Ｔｒｐ、またはＧｌｙである。

【0165】

いくつかの実施形態では、このＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、配列番号９７の配列を有する。本明細書に記載の抗体のいくつかの実施形態では、このＦｃポリペプチド二量体の２つのＦｃポリペプチドの一方は、配列番号９７の配列を有するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドであり得ると同時に、このＦｃポリペプチド二量体の他方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９５）の配列を有し得る。本明細書に記載の抗体の他の実施形態では、このＦｃポリペプチド二量体のＦｃポリペプチドは両方とも、配列番号９７の配列を有するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドであってもよい。

【0166】

本明細書に記載の抗体のいくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、独立して、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号７４～８４、８６、及び９７～１０１から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。

【0167】

本明細書に記載の抗体のいくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、このＦｃポリペプチド二量体の２つのＦｃポリペプチドの一方は、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含みかつ配列番号９７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドであり得ると同時に、このＦｃポリペプチド二量体の他方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９５）の配列を有し得る。

【0168】

本明細書に記載の抗体のいくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドは、独立して、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＡｌａ、４１３位にＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１０１～１０５から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。

【0169】

本明細書に記載の抗体のいくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、このＦｃポリペプチド二量体の２つのＦｃポリペプチドの一方は、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＡｌａ、４１３位にＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含みかつ配列番号１０１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドであり得ると同時に、このＦｃポリペプチド二量体の他方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９５）の配列を有し得る。

【0170】

いくつかの実施形態では、このＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、配列番号１０１の配列を有する。本明細書に記載の抗体のいくつかの実施形態では、このＦｃポリペプチド二量体の２つのＦｃポリペプチドの一方は、配列番号１０１の配列を有するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドであり得ると同時に、このＦｃポリペプチド二量体の他方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号９５）の配列を有し得る。本明細書に記載の抗体の他の実施形態では、このＦｃポリペプチド二量体のＦｃポリペプチドは両方とも、配列番号１０１の配列を有するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドであってもよい。

【0171】

いくつかの実施形態では、ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、以下の表Ａに列挙される以下の置換（ＥＵナンバリングによる）を含む。

【0172】

【表A】

【0173】

ヘテロ二量体化のためのＦｃポリペプチド修飾
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の抗体に存在するＦｃポリペプチドは、ノブ及びホールの変異を含んで、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を妨げる。一般に、この修飾は、突起が空洞内に配置されてヘテロ二量体形成を促進し、ひいてはホモ二量体形成を妨げることができるように、第１のポリペプチドの界面で突起（「ノブ」）を導入し、第２のポリペプチドの界面で対応する空洞（「ホール」）を導入する。突起は、第１のポリペプチドの界面の小さいアミノ酸側鎖をより大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えることによって構築される。この突起と等しいまたは同様のサイズの埋め合わせとなる空洞は、第２のポリペプチドの界面に、大きなアミノ酸側鎖をより小さいもの（例えば、アラニンまたはトレオニン）と置き換えることによって形成される。いくつかの実施形態では、かかるさらなる変異は、ＢＢＢ受容体、例えば、ＴｆＲへのこのポリペプチドの結合に悪影響を与えないＦｃポリペプチドの位置である。

【0174】

二量体化のためのノブ・アンド・ホールアプローチの例示的な一実施形態では、抗体に存在するＦｃポリペプチドのうちの一方の３６６位（ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングした）は、天然のトレオニンの代わりにトリプトファンを含む。この二量体の他方のＦｃポリペプチドは、４０７位（ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングされる）に天然のチロシンの代わりにバリンを有する。他方のＦｃポリペプチドはさらに置換を含んでよく、この場合、３６６位（ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングされる）の天然のトレオニンがセリンで置換され、３６８位（ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングされる）の天然のロイシンがアラニンで置換される。したがって、本明細書に記載の抗体のＦｃポリペプチドのうちの一方は、Ｔ３６６Ｗノブ変異を有し、他方のＦｃポリペプチドは、Ｙ４０７Ｖ変異を有しており、これは通常、Ｔ３６６Ｓ及びＬ３６８Ａホール変異を伴う。

【0175】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体に存在するＦｃポリペプチドの一方または両方はまた、ヘテロ二量体化のための他の修飾、例えば、天然に荷電したＣＨ３－ＣＨ３界面内の接触残基の静電的操作または疎水性パッチ修飾を含むように操作されてもよい。

【0176】

例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、Ｆｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、Ｔ３６６Ｗのノブの変異及び配列番号１０７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有する１つのＦｃポリペプチドならびにＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖのホールの変異ならびに配列番号８５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する他のＦｃポリペプチドを有する。特定の実施形態では、このＦｃポリペプチド二量体の一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、Ｆｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）配列番号８５の配列を有する第１のＦｃポリペプチド、及び（ｉｉ）配列番号９８の配列を有する第２のＦｃポリペプチド、を有する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、Ｆｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）配列番号８５の配列を有する第１のＦｃポリペプチド、及び（ｉｉ）配列番号１０２の配列を有する第２のＦｃポリペプチドを有する。

【0177】

エフェクター機能を調節するためのＦｃポリペプチド修飾
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の抗体に存在するＦｃポリペプチドの一方または両方は、ＴｆＲ結合の際にＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる、すなわち、エフェクター機能を媒介するエフェクター細胞で発現するＦｃ受容体に結合した後、特定の生物学的機能を誘導する能力を低下させる修飾を含み得る。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、及びＢ細胞活性化が挙げられるがこれらに限定されない。エフェクター機能は、抗体のクラスによって異なる場合がある。例えば、天然のヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３抗体は、免疫系細胞に存在する適切なＦｃ受容体に結合するとＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性を誘発することができ、天然のヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４は、免疫細胞に存在する適切なＦｃ受容体に結合すると、ＡＤＣＰ機能を誘発し得る。

【0178】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体に存在する一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させるか、または除去する修飾を含み得る。ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる例示的なＦｃポリペプチド変異としては、ＣＨ２ドメインにおける、例えば、ＥＵナンバリングスキームに従う２３４位及び２３５位での置換が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にアラニン残基を含んでもよい。したがって、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（本明細書では「ＬＡＬＡ」とも呼ばれる）置換を有し得る。

【0179】

エフェクター機能を調節するさらなるＦｃポリペプチドの変異としては、以下が挙げられるがこれに限定されない：３２９位は、プロリンがグリシン、アラニン、セリン、もしくはアルギニン、または、Ｆｃのプロリン３２９と、ＦｃγＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｔｒｐ８７及びＴｒｐ１１０との間に形成されるＦｃ／Ｆｃγ受容体界面を破壊するのに十分な大きさのアミノ酸残基で置換される変異を有し得る。さらなる例示的な置換としては、ＥＵナンバリングスキームに従うＳ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、及びＰ３３１Ｓが挙げられる。複数の置換もまた存在する場合がある。例えば、ＥＵナンバリングスキームに従って、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域のＬ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域のＶ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域のＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＥ３１８Ａ、ならびにヒトＩｇＧ４のＦｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３６Ｅ。いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＡＤＣＣを調節する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、ＥＵナンバリングスキームに従う２９８、３３３、及び／または３３４位での置換を有し得る。いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従って、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を有し得る。

【0180】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体に存在するＦｃポリペプチドの一方または両方は、ＨＥＲ２結合の際にＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強することができる、すなわち、エフェクター機能を媒介するエフェクター細胞で発現するＦｃ受容体に結合した後、特定の生物学的機能を誘導する能力を増強することができる修飾を含んでもよい。抗体エフェクター機能の例は、上記である。ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強することができる例示的なＦｃポリペプチド変異としては、ＣＨ２ドメインにおける、ＥＵナンバリングスキームに従う、例えば、２３９位及び／または３３２位での置換が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、２３９位にアスパラギン酸及び／または３３２位にグルタミン酸を含んでもよい。したがって、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を有し得る。

【0181】

「ｃｉｓ－ＬＡＬＡ」コンフィギュレーション
本明細書に記載の任意の抗体のいくつかの実施形態では、この抗体の２つのＦｃポリペプチドの一方のみ（Ｆｃポリペプチドの両方ではない）が、ＴｆＲ結合の際に、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させるように修飾される。他方のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位もエフェクター機能を低下させる修飾も含まない。この２つのＦｃポリペプチドのうちの一方のみが、ＴｆＲ結合部位及びＴｆＲに結合する際にＦｃγＲ結合を低下させる修飾（例えば、ＬＡＬＡ置換）の両方を含み、他方のＦｃポリペプチドがＴｆＲ結合部位もＦｃγＲ結合を低下させるいかなる修飾も含まない抗体におけるＦｃポリペプチド二量体は、ｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有すると表現される。

【0182】

例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、このｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有するＦｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）ＴｆＲ結合部位及びＬＡＬＡ置換の両方、ならびにノブの修飾を有する配列番号８６の配列を有する第１のＦｃポリペプチド、ならびに（ｉｉ）配列番号８５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する、ホールの修飾のみを有する第２のＦｃポリペプチド、を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、このｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有するＦｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）ＴｆＲ結合部位及びＬＡＬＡ置換の両方、ならびにノブの修飾を有する配列番号１０３の配列を有する第１のＦｃポリペプチド、ならびに（ｉｉ）配列番号８５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する、ホールの修飾のみを有する第２のＦｃポリペプチド、を有する。

【0183】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、このｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有するＦｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号８６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第１のＦｃポリペプチド、ならびに（ｉｉ）ＥＵナンバリングに従って、３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号８５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第２のＦｃポリペプチドを有する。

【0184】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、このｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有するＦｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号８５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第１のＦｃポリペプチド、ならびに（ｉｉ）ＥＵナンバリングに従って、２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号８６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第２のＦｃポリペプチドを有する。

【0185】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、このｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有するＦｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＡｌａ、４１３位にＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１０３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第１のＦｃポリペプチド、ならびに（ｉｉ）ＥＵナンバリングに従って、３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号８５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第２のＦｃポリペプチドを有する。

【0186】

特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、このｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有するＦｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号８５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第１のＦｃポリペプチド、ならびに（ｉｉ）ＥＵナンバリングに従って、２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＡｌａ、４１３位にＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１０３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第２のＦｃポリペプチドを有する。

【0187】

血清半減期を延長するためのＦｃポリペプチド修飾
いくつかの実施形態では、血清半減期を延長するための修飾が、本明細書に記載の任意の抗体に導入され得る。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体に存在する一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングした２５２位にチロシン、２５４位にトレオニン及び２５６位にグルタミン酸を含んでもよい。したがって、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅの置換を有し得る。あるいは、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングしたＭ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓの置換を有し得る。代替的に、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｎ４３４ＳまたはＮ４３４Ａの置換を有し得る。

【0188】

Ｃ末端リジン残基が除去されたＦｃポリペプチド
本明細書に記載の抗体のいくつかの実施形態では、このＦｃポリペプチドの一方または両方は、そのＣ末端のリジン（例えば、ＥＵナンバリングに従って、このＦｃポリペプチドの４４７位のＬｙｓ残基）が除去されてもよい。このＣ末端のリジン残基は多くの種にわたる免疫グロブリンで高度に保存されており、タンパク質産生の過程で細胞機構によって完全にまたは部分的に除去される場合がある。いくつかの実施形態では、このＦｃポリペプチドのＣ末端のリジンの除去により、この抗体の安定性が改善され得る。

【0189】

Ｖ．抗体の調製
本明細書に記載の抗体の調製については、当技術分野で公知の多くの技術を使用し得る。いくつかの実施形態では、目的の抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子は、細胞、例えば、ハイブリドーマからクローニングし得る。モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子ライブラリも、ハイブリドーマまたは形質細胞から作成することができる。別の方法として、ファージまたは酵母提示技術を用いて、選択された抗原に特異的に結合する抗体及びＦａｂ断片を特定し得る。

【0190】

抗体は、原核生物発現系及び真核生物発現系を含む、任意数の発現系を使用して産生され得る。いくつかの実施形態では、この発現系は、哺乳類細胞の発現系、例えば、ハイブリドーマ、またはＣＨＯ細胞の発現系である。多くのかかる系が商業的な業者から広く入手可能である。いくつかの実施形態では、この抗体を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、単一のベクターを用いて、例えば、ジシストロニックな発現単位で、または、異なるプロモーターの制御下で発現され得る。他の実施形態では、この抗体を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、別々のベクターを用いて発現され得る。

【0191】

いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の抗体を含むポリペプチドのいずれかをコードする核酸配列を含む単離された核酸、かかる核酸を含むベクター、ならびに核酸の複製及び／または抗体の発現に使用される核酸が導入された宿主細胞を提供する。

【0192】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、単離されたポリヌクレオチド）は、本明細書に開示する抗体（例えば、上記セクションＩＩＩに記載されているもの）を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、このポリヌクレオチドは、以下の非公式配列表に開示する１つ以上のアミノ酸配列（例えば、重鎖配列、軽鎖配列及び／またはＦｃポリペプチド配列）をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、このポリヌクレオチドは、以下の非公式配列表に開示する配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、異種核酸、例えば、異種プロモーターに作動可能に連結される。

【0193】

本開示の抗体、またはその断片をコードするポリヌクレオチドを含む適切なベクターとしては、クローニングベクター及び発現ベクターが挙げられる。選択されるクローニングベクターは、使用される予定の宿主細胞によって異なり得るが、有用なクローニングベクターは一般に、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一の標的を有することがあり、及び／またはこのベクターを含むクローンの選択に使用することができるマーカーの遺伝子を有することがある。例としては、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにシャトルベクター、例えば、ｐＳＡ３及びｐＡＴ２８が挙げられる。これら及び他の多くのクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ等の商業的業者から入手可能である。

【0194】

発現ベクターは一般に、本開示の核酸を含む複製可能なポリヌクレオチド構築物である。この発現ベクターは、宿主細胞において、エピソームとして、または染色体ＤＮＡの不可欠な部分として複製し得る。適切な発現ベクターとしては、限定されないが、プラスミド、ウイルスベクターが挙げられ、これにはアデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、及び任意の他のベクターが含まれる。

【0195】

本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはベクターをクローニングまたは発現するために適切な宿主細胞としては、原核細胞または真核細胞が挙げられる。いくつかの実施形態では、この宿主細胞は、原核細胞である。いくつかの実施形態では、この宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞である。いくつかの実施形態では、この宿主細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞である。

【0196】

別の態様では、本明細書に記載の抗体を作製する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、抗体の発現に適した条件下で本明細書に記載の宿主細胞（例えば、本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはベクターを発現する宿主細胞）を培養することを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、その後宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収される。いくつかの実施形態では、この抗体は、例えば、クロマトグラフィーによって精製される。

【0197】

ＶＩ．治療方法
いくつかの態様では、本明細書に提供するのは、対象に対して、治療有効量の本明細書に記載の任意の抗体またはその医薬組成物を投与することによる、対象におけるがん（例えば、ＨＥＲ２陽性がん）を処置するまたはがん（例えば、ＨＥＲ２陽性がん）の脳転移を処置するための方法である。同様に本明細書に提供するのは、内皮を横切ってＨＥＲ２（例えば、ヒトＨＥＲ２）またはその抗原結合断片に結合することができる抗体可変領域のトランスサイトーシスの方法である。いくつかの実施形態では、この方法は、この内皮を、本明細書に記載の抗体を含む組成物と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、この内皮は、血液脳関門（ＢＢＢ）である。

【0198】

本明細書に提供する方法に従って処置され得るＨＥＲ２陽性がんの非限定的な例としては、ＨＥＲ２陽性乳がん、卵巣がん、膀胱がん、唾液腺がん、子宮内膜がん、膵臓がん、及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、ならびにＨＥＲ２陽性胃腺癌及び／またはＨＥＲ２陽性食道胃接合部腺癌が挙げられる。いくつかの実施形態では、このＨＥＲ２陽性がんは、ＨＥＲ２陽性乳がんである。いくつかの実施形態では、このＨＥＲ２陽性がんは、ＨＥＲ２陽性胃腺癌及び／またはＨＥＲ２陽性食道胃接合部腺癌である。いくつかの実施形態では、このＨＥＲ２陽性がんは、転移性がんである。

【0199】

さらに他の態様では、本明細書に提供するのは、がん（例えば、ＨＥＲ２陽性がん）の転移を処置するための方法である。いくつかの実施形態では、この方法は、本明細書に記載の治療有効量の抗体をこの対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、この転移は、上記のＨＥＲ２陽性がんの脳転移である。いくつかの実施形態では、この転移は、ＨＥＲ２陽性乳がんの脳転移である。いくつかの実施形態では、この転移は、ＨＥＲ２陽性胃腺癌及び／またはＨＥＲ２陽性食道胃接合部腺癌の脳転移である。

【0200】

いくつかの実施形態では、その治療的有用性は、腫瘍増殖の減少もしくは減速、腫瘍サイズ（例えば、体積）の減少、腫瘍細胞生存率の減少、転移性病変の数の減少、がん（例えば、ＨＥＲ２陽性がん）の１つ以上の徴候もしくは症状の改善、及び／または患者の生存率の増大を含み得る。いくつかの実施形態では、腫瘍細胞生存率、腫瘍増殖、腫瘍サイズ、及び／または転移性病変の数は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上減少する。

【0201】

いくつかの実施形態では、この抗体は、ＨＥＲ２活性に拮抗する。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２活性は阻害される（例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上）。

【0202】

本明細書に記載の抗体の投与経路は、経口、腹腔内、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、髄腔内、吸入、局所、病巣内、直腸、気管支内、経鼻、経粘膜、腸内、眼もしくは耳への送達、または当該技術分野で公知の他の任意の方法であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、経口投与、静脈内投与、または腹腔内投与される。

【0203】

ＶＩＩ．医薬組成物及びキット
他の態様では、本開示による抗体を含む医薬組成物及びキットが提供される。

【0204】

医薬組成物
本開示に使用するための製剤を調製するための指針は、当業者に公知の医薬品及び製剤についての多くのハンドブックに見出だすことができる。

【0205】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の抗体を含み、１つ以上の薬学的に許容可能な担体及び／または賦形剤をさらに含む。医薬的に許容される担体としては、任意の溶媒、分散媒、またはコーティングが挙げられ、これらは、当該活性薬剤と生理学的に適合し、該活性薬剤の活性を妨害しないか、または阻害しない。

【0206】

いくつかの実施形態では、この抗体は、注射による非経口投与用に製剤化され得る。通常、インビボ投与に使用する医薬組成物は、例えば、加熱滅菌、蒸気滅菌、滅菌濾過、または照射滅菌等の無菌である。

【0207】

本明細書に記載の医薬組成物の用量及び所望の薬物濃度は、想定される特定の使用に応じて異なり得る。

【0208】

キット
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体を含む、がん（例えば、ＨＥＲ２陽性がん）の処置に使用するためのキットを提供する。いくつかの実施形態では、このキットはさらに、１つ以上のさらなる治療薬を含む。例えば、いくつかの実施形態では、このキットは、本明細書に記載の抗体を含み、さらに、がんの処置に使用するための１つ以上のさらなる治療剤を含む。いくつかの実施形態では、このキットはさらに、本明細書に記載の方法を実施するための指示（すなわち、プロトコル）を含む説明資料（例えば、抗体を投与するためのキットの使用説明書）を備える。この説明資料は通常、書かれた資料または印刷物を含むが、それに限定されない。そのような説明書を保管することができ、それらをエンドユーザーに伝達することができる任意の媒体が、本開示により企図される。そのような媒体としては、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、磁気テープ、磁気カートリッジ、磁気チップ）、光学媒体（例えば、ＣＤ－ＲＯＭ）などが挙げられるが、これらに限定されない。かかる媒体は、かかる説明資料を提供するインターネットサイトのアドレスを含む場合がある。

【実施例】

【0209】

ＶＩＩＩ．実施例
本発明を、具体例を通してより詳細に説明する。以下の実施例は、例示の目的で提供するに過ぎず、いかなる方法によっても本発明を限定することを意図するものではない。

【0210】

実施例１．抗ＨＥＲ２二重特異性抗体の生成
組換え二重特異性抗体バリアントの発現及び精製
（ｉ）ＴｆＲ結合部位及びノブ（Ｔ３６６Ｗ）変異を含む重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）ホール（Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）変異を含む重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）表２の組み合わせによる軽鎖、からなる発現プラスミドは、Ｅｘｐｉ２９３細胞またはＥｘｐｉＣＨＯ細胞に同時トランスフェクトされる。続いて、上清をプロテインＡカラム（ＧＥ Ｍａｂ Ｓｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ）にロードすることにより、組換え二重特異性抗体バリアントを馴化培地から精製する。そのカラムを、１０カラム容量のＰＢＳ、ｐＨ７．４で洗浄する。そのタンパク質を、１５０ｍＭのＮａＣｌを含む５０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ３．０で溶出し、直ちに２００ｍＭのアルギニン、１３７ｍＭのコハク酸、ｐＨ５．０で中和した。このタンパク質を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００）により、２００ｍＭのアルギニン、１３７ｍＭのコハク酸、ｐＨ５．０をランニング緩衝液として使用してさらに精製する。精製したタンパク質を、インタクトマスＬＣ／ＭＳで確認し、９５％を超える純度を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及び分析用ＨＰＬＣ－ＳＥＣで確認する。

【0211】

重鎖ポリペプチドは、Ｃ末端リジン残基が除去されるように、細胞培養生産中にさらに処理され得る。したがって、表２に列挙される二重特異性抗体は、プロセシングされていない（すなわち、Ｃ末端リジン残基を含む）重鎖を含むタンパク質分子；プロセシングされた（すなわち、Ｃ末端のリジン残基が存在しない）１つ以上の重鎖を含むタンパク質分子；または、プロセシングされた重鎖及び／またはプロセシングされてない重鎖を有するタンパク質分子の混合物、を指し得る。

【0212】

実施例２．Ｂｉａｃｏｒｅによる抗ＨＥＲ２抗体の評価
操作された抗ＨＥＲ２抗体のＨＥＲ２細胞外ドメイン（ＥＣＤ）結合親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用するＳＰＲによって測定した。マウス抗ヒト Ｆａｂ（ＧＥ ＨｅａｌｔｈｃａｒｅのヒトＦａｂ捕捉キット）で固定化されたＢｉａｃｏｒｅ（商標）シリーズＳ ＣＭ５センサーチップ上に抗体を捕捉し、続いて組換えＨＥＲ２ ＥＣＤの３倍連続希釈液を３０μＬ／分の流量で注入した。各サンプルは、３分間の結合とそれに続く１０分間の解離を使用して分析された。各注入後、５０ｍＭグリシン（ｐＨ２．０）再生緩衝液を使用してセンサーチップを再生した。ｋ_ｏｎ及びｋ_ｏｆｆの同時フィッティングの１：１Ｌａｎｇｕｉｒモデルを、反応速度分析に用いた。

【0213】

抗ＨＥＲ２＿Ｄ４軽鎖対照（配列番号８７）及び抗ＨＥＲ２＿Ｄ２軽鎖対照（配列番号９４）のコンセンサス配列を分析した。構造解析により、９１位のＹ残基は、効率的なＨＥＲ２ Ｄ４結合のためのＣＤＲループの構造構成に関与しているが、同じ位置のＨ残基は、ＨＥＲ２ Ｄ２結合にはあまり関与していないことが示唆された。９１位の単一アミノ酸置換をスクリーニングした後、この位置のＹ及びＦ残基をさらなる試験のために選択した。

【0214】

親和性成熟抗ＨＥＲ２軽鎖配列（配列番号９及び１０）を、ＨＥＲ２結合Ｋ_Ｄ測定のために、抗ＨＥＲ２＿Ｄ２重鎖対照（配列番号９２）及び抗ＨＥＲ２＿Ｄ４重鎖対照（配列番号９３）と対にした。結果を表７に示す。

【0215】

【表7】

【0216】

配列番号９及び１０の軽鎖は、抗ＨＥＲ２＿Ｄ２及びＤ４重鎖対照の両方と対にした場合、ＨＥＲ２結合を示した。配列番号９及び１０の軽鎖は、抗ＨＥＲ２＿Ｄ２重鎖対照と対にした場合、抗ＨＥＲ２＿Ｄ２軽鎖対照（２．９Ｋ_Ｄ）と比較して、より低いＨＥＲ２結合親和性（それぞれ１３Ｋ_Ｄ及び１４Ｋ_Ｄ）を示した。対照的に、配列番号９及び１０の軽鎖は、抗ＨＥＲ２＿Ｄ４重鎖対照と対にした場合、抗ＨＥＲ２＿Ｄ４軽鎖対照（３Ｋ_Ｄ）と比較して、より高いＨＥＲ２結合親和性（それぞれ１．５Ｋ_Ｄ及び１．７Ｋ_Ｄ）を示した。

【0217】

抗ＨＥＲ２＿Ｄ２重鎖対照（配列番号９２）のＣＤＲ Ｈ１、Ｈ２、またはＨ３における１３個のアミノ酸位置は、構造分析に基づいて選択された。選択された残基をランダム化し、ＨＥＲ２ ＥＣＤドメインＩＩ結合が改善された単一アミノ酸置換バリアントを見出した。これらの単一点変異を有する抗体を、抗ＨＥＲ２＿Ｄ４軽鎖対照（配列番号８７）と組み合わせてＥｘｐｉ２９３細胞で発現させ、細胞培養上清中の抗体を、ＳＰＲを使用して組換えＨＥＲ２ ＥＣＤ結合についてスクリーニングした。改良されたＨＥＲ２ ＥＣＤドメインＩＩを有するバリアントを選択し、Ｅｘｐｉ２９３細胞において配列番号１０の軽鎖とともに発現させ、さらなるＳＰＲ結合評価のために精製した。

【0218】

配列番号１～２及び６０～７０のＶ_Ｈ領域を含む親和性成熟抗ＨＥＲ２＿Ｄ２重鎖配列を、ＨＥＲ２結合Ｋ_Ｄ測定のために抗ＨＥＲ２＿Ｄ４軽鎖対照（配列番号８７）と対にした。結果を表８に示す。

【0219】

【表8】

【0220】

抗ＨＥＲ２＿Ｄ４軽鎖対照（配列番号８７）と対になった配列番号１～２及び６０～７０のＶ_Ｈ領域を含む親和性成熟抗ＨＥＲ２＿Ｄ２重鎖配列は、ＨＥＲ２結合を示し、すべてが抗ＨＥＲ２＿Ｄ２重鎖対照と比較してＨＥＲ２結合の向上を示した。

【0221】

親和性成熟抗ＨＥＲ２軽鎖配列（配列番号１０）を、ＨＥＲ２結合Ｋ_Ｄ測定のために、配列番号１～３のＶ_Ｈ領域を含む親和性成熟抗ＨＥＲ２＿Ｄ２重鎖配列と対にした。結果を表９に示す。

【0222】

【表9】

【0223】

配列番号１～３のＶ_Ｈ領域を含む親和性成熟抗ＨＥＲ２＿Ｄ２重鎖配列と対になった配列番号１０の軽鎖は、改善されたＨＥＲ２結合親和性（それぞれ４．２、６．２、２．１Ｋ_Ｄ）を示した。上記で考察し、表７に示すように、抗ＨＥＲ２＿Ｄ２重鎖対照と対になった抗ＨＥＲ２＿Ｄ２軽鎖対照軽鎖は、２．９Ｋ_ＤのＨＥＲ２結合親和性を有した。したがって、配列番号３のＶ_Ｈ領域を含む親和性成熟抗ＨＥＲ２＿Ｄ２重鎖配列と対になった配列番号１０の軽鎖は、対照よりも高い親和性でＨＥＲ２に結合する。

【0224】

実施例３．抗ＨＥＲ２二重特異性抗体のインビトロＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ
ヒトＡＤＣＣレポーターバイオアッセイ、Ｖバリアントキット（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ７０１８）を使用して、ヒトＦｃγＲＩＩＩａの活性化を評価し、一方でヒトＦｃｇＲＩＩａ ＡＤＣＰレポーターバイオアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ９９９５）を使用して表１０の組み合わせによる二重特異性抗体のヒトＦｃγＲＩＩａレポーターの活性化を測定した。キットには、以下に説明するすべての構成要素が含まれている。ＨＥＲ２及びＴｆＲの発現レベルが異なるいくつかの細胞株を試験した。細胞ＳＫＢＲ３（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－３０）、ＺＲ－７５－３０（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５０４）、ＢＴ－４７４（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２０）、ＯＥ－１９（Ｓｉｇｍａ ９６０７１７２１）、ＣＨＯ－ＫＩ＋ＨｕｍａｎＴｆＲ（ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒ ＣＲＯ ａｇｒｅｅｍｅｎｔ）を、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅウシ血清ＳＨ３００８０．０３）及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １５１４０－１２２）を補充したＲＰＭＩ（Ｌｉｆｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ６１８７０－０３６）中で対数期まで培養し、ＰＢＳで２回洗浄し、１０％ＦＢＳ及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ中１．０×１０^６細胞／ｍＬで再懸濁した。白色の９６ウェル高結合Ｎｕｎｃプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、５０，０００細胞／ウェルを含む培地２５μＬでコーティングした。

【0225】

抗体のタイトレーションは、４％低ＩｇＧ血清を含むＲＰＭＩ中で調製し、細胞をオプソニン化するためにウェル当たり２５μｌをプレートに添加し、次いでカバーして、３７℃、５％ＣＯ_２で３０分間インキュベートした。抗体オプソニン化中、３．５ｍＬの培地を３７℃に予熱し、ＦｃγＲレポーター細胞を反転せずに３７℃のウォーターバスで素早く解凍し、１５ｍＬコニカルチューブ内の予熱した培地に穏やかに混合しながら加えた。３０分間のオプソニン化後、ＦｃγＲレポーター細胞株を各プレートにウェル当たり２５μｌで添加し、６時間（ＳＫＢＲ３、ＺＲ－７５－３０、ＢＴ－４７４のｈＦｃγＲＩＩＩａ及びｈＦｃγＲＩＩａの活性化）または１６時間（ＣＨＯ－ＫＩ＋ｈｕＴｆＲのｈＦｃγＲＩＩＩａ及びｈＦｃγＲＩＩａ）を３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートした。インキュベーション後、プレートを室温に順応させ、ウェル当たり７５μＬのＢｉｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼ基質懸濁液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎリーダーで発光を測定した。結果を表１１に示す。

【0226】

【表10】

【0227】

【表11】

【0228】

目的は、対照及び／またはＦｃ１と比較してＴｆＲ媒介ＡＤＣＣを増大させず、また対照と同等のレベルのＨＥＲ２媒介ＡＤＣＣ及び／またはＦｃ１と比較して改善されたＨＥＲ２媒介ＡＤＣＣレベルを有するＦｃバリアントを開発することであった。上記の表１１に示すように、Ｆｃ１、Ｆｃ４１、Ｆｃ５、Ｆｃ４５、Ｆｃ４２、Ｆｃ５２、Ｆｃ４４、Ｆｃ５０、Ｆｃ６８、Ｆｃ７、Ｆｃ８、Ｆｃ２、Ｆｃ３４、及びＦｃ４はすべて、ＴｆＲ過剰発現ＣＨＯ細胞において対照と同等のレベルのＴｆＲ媒介ＡＤＣＣを有していた。Ｆｃ５０及びＦｃ５２は、ＴｆＲ媒介ＡＤＣＣ活性化を増大させることなく、試験したすべてのＨＥＲ２過剰発現細胞株にわたって最高レベルのＨＥＲ２媒介ＡＤＣＣを示した。

【0229】

ＨＥＲ２過剰発現細胞株、すなわち、ＯＥ１９、ＺＲ－７５－３０、及びＳＫＢＲ３にわたる対照と比較した、Ｆｃ１、Ｆｃ４１、Ｆｃ５、Ｆｃ４５、Ｆｃ４２、Ｆｃ５２、Ｆｃ４４、及びＦｃ５０バリアントのＡＤＣＰレベルも表１１に示す。

【0230】

実施例４．抗ＨＥＲ２二重特異性抗体のインビトロ増殖阻害
増殖阻害アッセイを使用して、異なる抗体で異なる期間処置した後の細胞の生存率を測定した。ＨＥＲ２及びＴｆＲの発現レベルが異なるいくつかの細胞株を試験した。細胞ＳＫＢＲ３（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－３０）、ＺＲ－７５－３０（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５０４）、ＢＴ－４７４（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２０）、ＯＥ－１９（Ｓｉｇｍａ ９６０７１７２１）、ＣＨＯ－ＫＩ＋ＨｕｍａｎＴｆＲ（ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒ ＣＲＯ ａｇｒｅｅｍｅｎｔ）を、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ Ｂｏｖｉｎｅ血清ＳＨ３００８０．０３）及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １５１４０－１２２）を補充したＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ６１８７０－０３６）中で対数期まで培養した。ＰＢＳで洗浄した後、細胞を１０％ＦＢＳ及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ中に１．０×１０^５細胞／ｍＬで再懸濁した。黒色ポリ－Ｄ－リジンプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３５４６４０）を、１０，０００細胞／ウェルを含む１００μｌの細胞培養培地でコーティングした。プレートを３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーター内で２４時間インキュベートした。

【0231】

抗体のタイトレーションは、１０％ＦＢＳ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ中で調製した。抗体を、各プレートにウェル当たり６５μｌで添加し、次いでカバーして３７℃、５％ＣＯ_２で７２時間（ＯＥ－１９細胞株のみ）インキュベートした。ＢＴ－４７４及びＺＲ－７５－３０細胞株の場合、７２時間後にさらに６５μｌの抗体を添加し、３７℃、５％ＣＯ_２でさらに７２時間インキュベートした。

【0232】

７日目に、細胞増殖を、５０μＬの増殖培地において５μＬのＷＳＴ－１試薬（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して測定した。このプレートをＷＳＴ－１試薬の存在下で４時間インキュベートし、４４０ｎｍの吸光度を測定した。増殖阻害／増殖のパーセントを、Ａ４４０ｎＭに基づいて算出し、未処置の対照に対して正規化した。

【0233】

表１２の異なる抗体についてのＺＲ－７５－３０細胞に対する増殖阻害アッセイの結果、ならびにＩＣ５０及び最大％増殖阻害値を、図２に示す。二重特異性抗体＃２、＃３、＃４、及び＃５のそれぞれは、対照と比較してＥＣ５０値／有効性の向上を示した。二重特異性抗体＃４及び５は、対照と同等の最大％の増殖阻害／有効性を示した。

【0234】

【表12】

【0235】

実施例５．ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体を用いたインビボ異種移植片研究
２つのヒトＨＥＲ２＋細胞株を使用して、免疫不全（ＮＯＤ／ＳＣＩＤ）マウスの皮下異種移植モデルにおけるＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃１の応答を評価した。購入及び説明書に従って調製するか、及び／またはさらにＰＢＳもしくは生理食塩水で希釈したトラスツズマブ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）及びペルツズマブ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｅｒｊｅｔａ）を除き、すべての分子は同じ配合緩衝液（１０ｍＭ酢酸ナトリウム、６％スクロース、ｐＨ５．５）またはＰＢＳ／生理食塩水で調製した。

【0236】

【表13】

【0237】

ＢＴ－４７４乳がん細胞株由来異種移植片（ＣＤＸ）モデルについては、雌性ＮＳＧ（ＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ）マウス（６～７週齢）の腋窩にＢＴ－４７４細胞を皮下注射し、腫瘍の体積が１００～２００ｍｍ^３のとき、接種６日後で処置を開始した。マウスは、平均腫瘍体積に基づいて処置群に無作為に割り当てられ、１群当たりｎ＝１１匹のマウスであった。４０＋４０ｍｇ／ｋｇのトラスツズマブとペルツズマブの併用処置、または８０ｍｇ／ｋｇのＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃１を腹腔内（ＩＰ）注射によって投与した。腫瘍体積は、キャリパーを使用して週に３回測定した。

【0238】

比較的トラスツズマブ感受性のＢＴ－４７４異種移植片モデルにおいて、ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃１は、単回投与後にトラスツズマブ及びペルツズマブと比較して同等の腫瘍増殖阻害を示し、２１日後の処置群全体で腫瘍が完全に退縮した（図３Ａ）。

【0239】

ＯＥ１９胃食道接合部ＣＤＸモデルについては、雌性ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（６～８週齢）の右上脇腹領域にＯＥ１９細胞を皮下注射し、接種後１週間、腫瘍が１００～２００ｍｍ^３の間の体積にあるときに処置を開始した。マウスは、対応する分布／階層化方法に基づいて、１群当たりｎ＝１１匹のマウスで処置群に無作為に割り当てた。５０＋５０ｍｇ／ｋｇのＡＴＶ：トラスツズマブ及びＡＴＶ：ペルツズマブの併用処置または１００ｍｇ／ｋｇのＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃１をＩＰ注射により投与した。腫瘍体積は、キャリパーを使用して週に３回測定した。

【0240】

トラスツズマブ及びペルツズマブの併用処置に対して相対的な耐性を示すＯＥ１９異種移植モデルでは、ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃１及びＡＴＶｃｉｓ－ＬＡＬＡ：トラスツズマブとＡＴＶｃｉｓ－ＬＡＬＡ：ペルツズマブの併用は両方とも、対照群と比較して有意な腫瘍増殖遅延を示した（図３Ｂ）。すべての群は、１群当たりｎ＝１１匹のマウスから開始する。グラフ上の数字は、動物のサブセットが人道的エンドポイントに到達した後に対照群に残った動物の数を表す。１７日目に、ＡＴＶ組み合わせ（ｃｏｍｂｏ）群で１頭の動物が明らかな原因なく死亡しているのが発見された。ＡＴＶ：トラスツズマブ及びＡＴＶ：ペルツズマブは、ＴｆＲ（「ＴＶ」）及びｃｉｓ－ＬＡＬＡ変異に結合するＦｃ修飾を含むトラスツズマブ及びペルツズマブ抗体である。これらのｉｎ ｖｉｖｏ結果は、ＴｆＲ結合Ｆｃ修飾を欠く抗ＨＥＲ２分子と比較して、ＯＥ１９細胞株におけるＡＴＶ：ＨＥＲ２（ＴＶを含む抗ＨＥＲ２分子）の効力の増大と最大効果の増大を実証したｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖阻害データと一致している。

【0241】

フォローアップの低用量研究では、ＴｆＲ結合の効果を研究するために、ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃１を、ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃１と同一のＦａｂを有するが、ＴｆＲ結合Ｆｃ修飾を欠くＣＬＣ二重特異性抗体対照と比較した。ＢＴ－４７４乳がんＣＤＸモデルでは、腫瘍接種の１日前に雌性ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（６～８週齢）にエストロゲンペレット（０．３６ｍｇ、１７Ｂ－エストラジオール、６０日ペレット）を移植した。次いで、ＢＴ－４７４細胞を乳房脂肪体に皮下注射し、接種８日後、腫瘍の体積が１００～２００ｍｍ^３になったときに処置を開始した。マウスは、対応する分布／階層化方法に基づいて、１群当たりｎ＝１１匹のマウスで処置群に無作為に割り当てた。腫瘍体積は、キャリパーを使用して週に２回測定した。

【0242】

単回２０ｍｇ／ｋｇ用量のＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃１を腹腔内投与すると、感受性ＢＴ－４７４異種移植モデルにおいて、ＣＬＣ二重特異性抗体対照（ＴｆＲ結合なし）と同様の腫瘍増殖遅延が示された（図４Ａ）。ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃１は、ＣＬＣ二重特異性抗体対照と比較して、２０ｍｇ／ｋｇの等用量でより耐性の高いＯＥ１９異種移植モデルにおいて応答の改善を示し、４倍低い用量（５ｍｇ／ｋｇ）で同等の抗腫瘍応答を示した（図４Ｂ）。

【0243】

さらなる架橋研究において、ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃１及び＃２を複数用量異種移植研究において比較した。ＢＴ－４７４モデルでは、マウス（各群ｎ＝１１）にＩＰ経由でＱ１Ｗ投与した、すなわち、マウスに１週間に１回の用量を３週間投与した。ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃１及びＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃２は、腫瘍増殖の同等の阻害及び遅延を示した（図５Ａ）。さらに、同じ群に毎日５０ｍｇ／ｋｇのツカチニブを組み合わせて２１日間経口投与したが、ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃１または＃２ではさらなる改善は見られなかった。

【0244】

最後に、ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃２、ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃３（追加のＦｃ修飾、例えば、Ｐ３２９Ｓ、Ｉ３３２Ｅ、及びＳ２３９Ｄを含む）のＦｃ改変バリアントをまた、複数回投与ＯＥ１９異種移植片研究においてＴｆＲ結合を欠く抗ＨＥＲ２分子とも比較した。マウスにＩＰ経由でＱ２Ｗ投与した、すなわち、マウスに２週間ごとに１回の投与を６週間投与した。ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃３は、トラスツズマブとペルツズマブの組み合わせ、またはＣＬＣ二重特異性抗体対照と比較して、腫瘍増殖遅延の増大及び生存の増大を示した（図５Ｂ）。すべての群は、１群当たりｎ＝１１匹のマウスから開始する。グラフ上の数字は、動物のサブセットが人道的エンドポイントに到達した後に群に残った動物の数を表す。

【0245】

実施例６．ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体の脳への取り込み及び分布
ＴｆＲ^{ｍｕ／ｈｕ}ＫＩマウス（例えば、国際公開第ＷＯ２０１８／１５２２８５号を参照）に、ＣＬＣ二重特異性抗体対照またはＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃３の単回２５ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量を投与した（ｎ＝４／群）。生前血液を３０分及び６時間で採取し、終末期血液及び新鮮凍結脳を投与後１、４、７、及び１０日目に採取して、血漿及び脳溶解物中のｈｕＩｇＧ濃度をＥＬＩＳＡによって評価した。

【0246】

ＴｆＲ^{ｍｕ／ｈｕ}ＫＩマウスにおける二重特異性ＣＬＣ二重特異性抗体対照またはＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃３の単回投与後に血漿及び脳濃度を測定した。ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃３の脳濃度は、ＣＬＣ二重特異性抗体対照と比較して、投与後２４時間で約６．５倍高かった（図６）。これは、ＴｆＲを介したＡＴＶ分子の脳送達を示している。同様に、経時的研究では、ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃２、＃３、及び＃７は、ＩＶ投与後２４時間で約４～５倍高い脳内濃度を示し、４日後には最大約２倍高い脳内濃度を示した。

【0247】

さらに、脳内に投与された分子の免疫組織化学を行った。動物当たり１つの新鮮な脳半球を免疫組織化学のために４℃で約２４時間浸漬固定し、その後スクロース中で凍結保護し、凍結ミクロトームで切片にした。各動物の冠状脳切片（４０μｍ）を選択し、ブロッキング緩衝液（ＰＢＳ中に１％のＢＳＡ＋１×魚ゼラチン＋０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００＋０．０１％アジ化ナトリウム）中で、室温で３時間インキュベートすることによって染色した。次いで、一次／二次抗体（ＮｅｕＮ、Ａｂｃａｍ、ａｂ１７７４８７及びロバ抗ｈｕＩｇＧ、Ｊａｃｋｓｏｎ、７０９－６０６－１４９）を含む希釈緩衝液（１％ＢＳＡ＋０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００＋０．０１％アジ化ナトリウムを含むＰＢＳ）中で切片を４℃で一晩インキュベートし、０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含むＰＢＳで各１５分間３回洗浄し、二次抗体（ロバ抗ウサギ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａ２１２０６）及びＤＡＰＩ（５μｇ／ｍＬ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｄ１３０６）を含む希釈緩衝液中で３時間インキュベートし、０．３％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含むＰＢＳで各１５分間３回洗浄し、その後、Ｐｒｏｌｏｎｇ Ｇｌａｓｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｐ３６９８４）でマウント及びカバースリッピングを行った。Ｌｅｉｃａ ＳＰ８共焦点顕微鏡を使用して２０倍の倍率でスライドを画像化し、Ｉｍａｒｉｓを使用してセグメント化と視覚化を実行した。

【0248】

投与された分子のｈｕＩｇＧ骨格の免疫組織化学により、ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃３が正常脳全体に広範囲に分布し、実質内の拡散シグナルとともに血管及びＮｅｕＮ＋ニューロン内に局在していることが明らかになった（図７Ａ）。対照的に、ＣＬＣ二重特異性抗体対照は、脳組織内への限られた侵入または分布を示した（図７Ｂ）。これは、非ＴＶ抗ＨＥＲ２分子、すなわち、ＴｆＲ結合を持たない分子で観察された有意に低い脳内濃度と一致している。同様の結果、すなわち、血管及び神経／実質局在が、ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃２及びＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃７で観察された。

【0249】

実施例７．カニクイザルにおけるＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体の血漿ＰＫ
全身クリアランスに対するＦｃ修飾の影響を評価するために、Ｆｃ修飾バリアントを比較した。ＴＶ３５．２３．４（すなわち、ＣＨ３Ｃ．３５．２３．４）は、カニクイザル交差反応性を持たない、すなわち、カニクイザルＴｆＲに結合しないので、ＴＶ３５．２３．４の代わりにＴＶ３５．２１を含む二重特異性ＨＥＲ２ ＡＴＶ（上記の表ＡのＣＨ３Ｃ．３５．２１を参照）を使用した。以下の表１４に示すように、これらの分子は、上記のマウス研究で使用したＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃２、＃３、及び＃７と同じＦａｂを使用する。

【0250】

ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃４、＃５、及び＃６をＣｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（臨床ハーセプチン）（トラスツズマブ）と比較し、雌性カニクイザルにおける単回５０ｍｇ／ｋｇ静脈内投与後の様々な時点でｈｕＩｇＧの血清濃度を測定した（ｎ＝３／群）。

【0251】

【表14】

【0252】

すべてのＡＴＶ：ＨＥＲ２分子は、ＴｆＲ媒介クリアランスに起因して予想されるように、ハーセプチン（トラスツズマブ）と比較して、体循環からのより迅速なクリアランスを示した（図８）。

【0253】

実施例８．ＮＫ細胞における抗ＨＥＲ２二重特異性抗体のインビトロＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ
細胞ベースの抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）アッセイを使用して、異なるＦｃ変異体に対するＦｃガンマ受容体結合親和性の差異が、単離されたヒトＮＫ細胞を使用したＨＥＲ２媒介腫瘍細胞またはＴｆＲ媒介細胞死滅に影響を与えるか否かを評価した。

【0254】

ＮＫ細胞を全血から単離し、ヒトＦｃγＲＩＩＩａの活性化を評価するために使用した。Ｔｒｉｚｍａで採血した。細胞は、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐヒトＮＫ細胞濃縮プロトコル（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ １５０６５）に従って単離した。ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ ＣｏｃｋｔａｉｌをＳｅｐＭａｔｅチューブ内の血液サンプルに加え、室温で１５分間放置した。インキュベーション後、サンプルを等量のＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ １００１０－０３１０）及び１０％ ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ Ｂｏｖｉｎｅ血清ＳＨ３００８０．０３）で希釈した。次に、希釈したサンプルを、密度勾配培地 Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ ０７８０１）に加え、１０分間遠心分離する。次いで、濃縮された細胞を収集し、ＰＢＳで２回洗浄する。最後に、２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－２１を細胞に添加し、次いで翌日使用するために一晩放置する。

【0255】

ＨＥＲ２及びＴｆＲの発現レベルが異なるいくつかの細胞株を試験した。細胞ＳＫＢＲ３（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－３０）及びＣＨＯ－ＫＩ＋ＨｕｍａｎＴｆＲ（ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒ ＣＲＯ ａｇｒｅｅｍｅｎｔ）を、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅウシ血清ＳＨ３００８０．０３）及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １５１４０－１２２）を補充したＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ６１８７０－０３６）中で対数期まで培養し、ＰＢＳで２回洗浄し、１０％ ＦＢＳ及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ中１．０×１０^６細胞／ｍＬで再懸濁した。

【0256】

透明な９６ウェル未処置Ｖ底プレート（Ｃｏｓｔａｒ ３８９７）を、５０，０００細胞／ウェルを含む２５μＬの培地でコーティングした。抗体のタイトレーションは、１０％ＦＢＳ血清を含むＲＰＭＩ中で調製し、細胞をオプソニン化するために１ウェル当たり２５μｌをプレートに添加し、次いでカバーして、３７℃、５％ＣＯ_２で３０分間インキュベートした。抗体のオプソニン化中に、ＲＰＭＩ及び１０％ＦＢＳを含む培地でＮＫ細胞を１回洗浄した。細胞を計数し、細胞密度として２５：１のＥ：Ｔ比を使用した。３０分間のオプソニン化後、ＮＫ細胞を各プレートに１ウェル当たり２５μｌで添加し、４時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを室温に順応させ、３００ｘｇで５分間遠心沈降させた。５０μＬの上清を、白色９６ウェル透明底プレート（Ｔｈｅｒｍｏ １６５３０６）に移した。５０μｌのＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）アッセイ試薬を、上清を含むプレートの各ウェルに添加した。プレートを光から保護するためにカバーし、室温で３０分間インキュベートした。停止液を添加し、プレートリーダーで、４９０ｎｍで吸光度シグナルを測定する。培養上清中に放出されたＬＤＨを３０分間の共役酵素アッセイで測定すると、テトラゾリウム塩（ヨードニトロテトラゾリウムバイオレット；ＩＮＴ）が赤色のホルマザン生成物に変換される。形成される色の量は、溶解した細胞の数に比例する。

【0257】

興味深いことに、ＨＥＲ２を発現する腫瘍細胞に対するこのアッセイにおいて、ｃｉｓ－ＬＡＬＡ修飾は、効力のわずかな減少を示す曲線のわずかな右方向へのシフトのみをもたらしたが、非ＴＶ抗ＨＥＲ２二重特異性、すなわち、ＣＬＣ二重特異性抗体対照＃２及びトラスツズマブと比較して、細胞殺滅の同等の最大効果が観察された（図９）。

【0258】

ｃｉｓ－ＬＡＬＡまたはさらなるＦｃ変異を有するＴｆＲ発現（ＨＥＲ２－）細胞については、細胞死滅は観察されず、これらの分子がＴｆＲ発現細胞に悪影響を及ぼさないことが示唆された。

【0259】

ＦｃｇＲＩＩａ活性化を測定するためのＡＤＣＰレポーターアッセイはまた、ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性＃２及びＦｃバリアント（ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性＃３及び＃７）が互いに同様の受容体活性化を示し、これはトラスツズマブよりも大きく、ＣＬＣ二重特異性抗体対照＃２よりわずかに低いことを示した。

【0260】

実施例９．ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体のＦｃｇＲ結合アッセイ
操作された抗ＨＥＲ２抗体のＦｃガンマ受容体結合親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器を使用するＳＰＲによって測定した。ビオチン化組換えＦｃガンマ受容体をＢｉａｃｏｒｅ（商標）シリーズＳＡセンサーチップ上に捕捉し、続いてＦｃ操作抗Ｈｅｒ２抗体の３倍連続希釈液を３０μＬ／分の流速で注入した。各サンプルは、抗体濃度を増大させながら６０秒間の注入を５回行い、その後５分間の解離を行って分析した。ｋ ｏｎ及びｋ ｏｆｆの同時フィッティングの１：１Ｌａｎｇｕｉｒモデルを反応速度分析に用いた。

【0261】

【表15】

【0262】

ＦｃｇＲ親和性の増大は、ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃４及びトラスツズマブと比較して、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅで操作されたＦｃバリアント、すなわち、ＡＴＶ：ＣＬＣ二重特異性抗体＃５及び＃６において観察される。しかし、上記のＡＤＣＣアッセイの結果と併せて考えると、この親和性の増大は、抗体がＦａｂ標的、すなわち、ＨＥＲ２に結合している場合にのみ適用され得る。

【0263】

ＩＸ．例示的な実施形態
本開示の主題に従って提供される例示的な実施形態としては、限定するものではないが、特許請求の範囲及び以下の実施形態が挙げられる。

【0264】

１．以下：
（ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９０のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、単離された抗体であって、
以下：
配列番号８９のＸ_１は、Ｔではない；
配列番号８９のＸ_２は、Ｆではない；
配列番号８９のＸ_３は、Ｔではない；
配列番号９０のＸ_１は、Ｎではない；
配列番号９０のＸ_２は、Ｎではない；
配列番号９０のＸ_３は、Ｓではない；
配列番号９０のＸ_４は、Ｇではない；
配列番号９０のＸ_５は、Ｇではない；
配列番号９０のＸ_６は、Ｑではない；
配列番号９１のＸ_１は、Ｌではない；
配列番号９１のＸ_２は、Ｇではない；
配列番号９１のＸ_３は、Ｐではない；及び
配列番号９１のＸ_４は、Ｓではない、
のうちの少なくとも１つである、前記単離された抗体。

【0265】

２．前記重鎖ＣＤＲ１が、配列番号８９のアミノ酸配列を含み、Ｘ_１がＮ、Ｋ、Ｍ、またはＨである、実施形態１に記載の単離された抗体。

【0266】

３．前記重鎖ＣＤＲ２が、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、Ｘ_５がＱである、実施形態１に記載の単離された抗体。

【0267】

４．前記重鎖ＣＤＲ２が、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、Ｘ_６がＲ、Ｈ、またはＴである、実施形態１に記載の単離された抗体。

【0268】

５．前記重鎖ＣＤＲ３が、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、Ｘ_４がＷ、Ｆ、Ｄ、Ｌ、またはＹである、実施形態１に記載の単離された抗体。

【0269】

６．前記重鎖ＣＤＲ３が、配列番号９１のアミノ酸配列を含み、Ｘ_４がＬである、実施形態１に記載の単離された抗体。

【0270】

７．以下：
（ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号９０のアミノ酸配列を含み、Ｘ_５はＱである、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号９１のアミノ酸配列を含み、Ｘ_４はＬである、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、実施形態１に記載の単離された抗体。

【0271】

８．以下：
（ａ）配列番号４及び４９～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号４、及び４９～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５～６及び５３～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号５～６及び５３～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７～８及び５６～５９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号７～８及び５６～５９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、実施形態１に記載の単離された抗体。

【0272】

９．以下：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号４のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、実施形態８に記載の単離された抗体。

【0273】

１０．以下：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５または配列番号６のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７または配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、実施形態９に記載の単離された抗体。

【0274】

１１．以下：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、実施形態１０に記載の単離された抗体。

【0275】

１２．以下：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、実施形態１０に記載の単離された抗体。

【0276】

１３．以下：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含む、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む、実施形態１０に記載の単離された抗体。

【0277】

１４．配列番号１～３のいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、実施形態８に記載の単離された抗体。

【0278】

１５．配列番号１～３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、実施形態８に記載の単離された抗体。

【0279】

１６．以下：
（ａ）配列番号１３または１４のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３
を含む、単離された抗体。

【0280】

１７．以下：
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１；及び
（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲをさらに含む、実施形態１６に記載の単離された抗体。

【0281】

１８．以下：
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ１；及び
（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ２
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲをさらに含む、実施形態１６に記載の単離された抗体。

【0282】

１９．前記軽鎖ＣＤＲ３が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、実施形態１６～１８のいずれか１つに記載の単離された抗体。

【0283】

２０．前記軽鎖ＣＤＲ３が、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、実施形態１６～１８のいずれか１つに記載の単離された抗体。

【0284】

２１．配列番号９～１０のいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態１７に記載の単離された抗体。

【0285】

２２．配列番号９～１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態１７に記載の単離された抗体。

【0286】

２３．以下：
（ａ）配列番号４及び４９～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号４及び４９～５２からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５～６及び５３～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号５～６及び５３～５５からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号７～８及び５６～５９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号７～８及び５６～５９からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｆ）配列番号１３または１４のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３
を含む、抗原結合部位
を含む、単離された抗体。

【0287】

２４．前記抗原結合部位が、以下：
（ａ）配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号４のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号５もしくは配列番号６のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号７もしくは配列番号８のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｆ）配列番号１３または１４のアミノ酸配列を含む、軽鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態２３に記載の単離された抗体。

【0288】

２５．前記抗原結合部位が、配列番号１～３のいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号９～１０のいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、実施形態２４に記載の単離された抗体。

【0289】

２６．前記抗原結合部位が、配列番号１～３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号９～１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、実施形態２４に記載の単離された抗体。

【0290】

２７．以下：
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１６のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１７のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１８のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、重鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲを含む第２の抗原結合部位をさらに含む、実施形態２３～２６のいずれか１つに記載の単離された抗体。

【0291】

２８．前記第２の抗原結合部位が、配列番号１５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、実施形態２７に記載の単離された抗体。

【0292】

２９．前記第２の抗原結合部位が、以下：
（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するか、または配列番号１１のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ２；及び
（ｃ）配列番号１３または１４のアミノ酸配列に対して最大２つのアミノ酸置換を有する、軽鎖ＣＤＲ３
からなる群から選択される１つ以上のＣＤＲをさらに含む、実施形態２７または２８に記載の単離された抗体。

【0293】

３０．前記第２の抗原結合部位が、配列番号９～１０のいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態２９に記載の単離された抗体。

【0294】

３１．第１の抗原結合部位と第２の抗原結合部位とが、同じ軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む、実施形態２９または３０に記載の単離された抗体。

【0295】

３２．表１に列挙される組み合わせから選択される重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む、実施形態３１に記載の単離された抗体。

【0296】

３３．表２に列挙される組み合わせから選択される重鎖及び軽鎖を含む、単離された抗体。

【0297】

３４．以下：
（ａ）ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）サブドメインＩＶに対する第１の抗原結合部位；
（ｂ）ヒトＨＥＲ２サブドメインＩＩに対する第２の抗原結合部位；及び
（ｃ）ＴｆＲ結合部位を作り出す修飾を含有する第１のＦｃポリペプチドを含む、修飾されたＦｃポリペプチド二量体
を含む、単離された抗体であって、
前記第１の抗原結合部位の軽鎖ポリペプチド配列が、前記第２の抗原結合部位の軽鎖ポリペプチド配列と同一である、
前記単離された抗体。

【0298】

３５．前記第１のＦｃポリペプチドが、前記ＴｆＲ結合部位を含む修飾されたＣＨ３ドメインを含む、実施形態３４に記載の単離された抗体。

【0299】

３６．前記修飾されたＣＨ３ドメインが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の、ＣＨ３ドメインに由来する、実施形態３５に記載の単離された抗体。

【0300】

３７．前記修飾されたＣＨ３ドメインが、ＥＵナンバリングに従って、３８０、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１５、４１６、及び４２１位を含むアミノ酸位置のセットにおいて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１個の置換を含む、実施形態３５または３６に記載の単離された抗体。

【0301】

３８．前記修飾されたＣＨ３ドメインが、ＥＵナンバリングに従って、３８０位にＧｌｕ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、もしくはＧｌｎ；３８４位にＬｅｕ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、もしくはＶａｌ；３８６位にＬｅｕ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、Ｐｒｏ、Ａｓｎ、Ｖａｌ、もしくはＰｈｅ；３８７位にＶａｌ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、もしくは酸性アミノ酸；３８８位にＴｒｐ；３８９位に脂肪族アミノ酸、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、もしくはＡｓｎ；３９０位にＧｌｙ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、もしくはＴｈｒ；４１３位に酸性アミノ酸、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｉｌｅ、もしくはＨｉｓ；４１５位にＧｌｕ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、もしくはＡｒｇ；４１６位にＴｈｒ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、もしくは酸性アミノ酸；及び／または４２１位に芳香族アミノ酸、Ｈｉｓ、もしくはＬｙｓを含む、実施形態３５～３７のいずれか１つに記載の単離された抗体。

【0302】

３９．前記ＴｆＲ結合部位を作り出す修飾を含有する前記第１のＦｃポリペプチドが、ＴｆＲの頂端ドメインに結合する、実施形態３４～３８のいずれか１つに記載の単離された抗体。

【0303】

４０．前記第１のＦｃポリペプチド及び第２のＦｃポリペプチドが各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含む、実施形態３４～３９のいずれか１つに記載の単離された抗体。

【0304】

４１．ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｗの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含む、実施形態４０に記載の単離された抗体。

【0305】

４２．ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｗの置換を含む、実施形態４０に記載の単離された抗体。

【0306】

４３．前記第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドが、独立して、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾を含む、実施形態３４～４２のいずれか１つに記載の単離された抗体。

【0307】

４４．エフェクター機能を低下させる前記修飾が、ＥＵナンバリングに従ってＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換である、実施形態４３に記載の単離された抗体。

【0308】

４５．前記第１のＦｃポリペプチドが、ＴｆＲに特異的に結合し、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む、実施形態４４に記載の単離された抗体。

【0309】

４６．前記第１のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従ってＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換をさらに含む、実施形態４５に記載の単離された抗体。

【0310】

４７．前記第２のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位及び２３５位にＬｅｕを含み、かつ３２９位にプロリンを含む、実施形態４６に記載の単離された抗体。

【0311】

４８．前記第２のＦｃポリペプチドが、ＴｆＲに特異的に結合し、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む、実施形態４４に記載の単離された抗体。

【0312】

４９．前記第２のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従ってＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換をさらに含む、実施形態４８に記載の単離された抗体。

【0313】

５０．前記第１のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位及び２３５位にＬｅｕを含み、かつ３２９位にプロリンを含む、実施形態４９に記載の単離された抗体。

【0314】

５１．ヒンジ領域またはその一部分が、前記第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドのＮ末端に連結されている、実施形態３４～５０のいずれか１つに記載の単離された抗体。

【0315】

５２．前記第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドが、独立して、配列番号７１～８６及び９８～１００からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、実施形態３４～５１のいずれか１つに記載の単離された抗体。

【0316】

５３．前記第１のＦｃポリペプチドまたは前記第２のＦｃポリペプチドが、配列番号７１～７３、８５、及び９９～１００からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、実施形態５２に記載の単離された抗体。

【0317】

５４．前記第１のＦｃポリペプチドまたは前記第２のＦｃポリペプチドが、配列番号７４～８４、８６及び９８からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、実施形態５２に記載の単離された抗体。

【0318】

５５．前記第１の抗原結合部位が、配列番号１５のアミノ酸配列を含み；
前記第２の抗原結合部位が、配列番号１～３及び６０～７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記ＴｆＲ結合部位を作り出す修飾を含有する前記第１のＦｃポリペプチドが、配列番号７４～８４、８６、及び９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；かつ
前記軽鎖ポリペプチド配列が、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を含む、
実施形態３４に記載の単離された抗体。

【0319】

５６．配列番号７１～７３、８５、及び９９～１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む第２のＦｃポリペプチドをさらに含む、実施形態５５に記載の単離された抗体。

【0320】

５７．前記第１のＦｃポリペプチド及び／または第２のＦｃポリペプチドが、独立して、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む、実施形態３４～５６のいずれか１つに記載の単離された抗体。

【0321】

５８．前記Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を独立して含む前記第１のＦｃポリペプチド及び／または前記第２のＦｃポリペプチドが、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強することができる、実施形態５７に記載の単離された抗体。

【0322】

５９．（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｇ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｈ）ＥＵナンバリングに従って、前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；
（ｊ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；
（ｋ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；
（ｌ）ＥＵナンバリングに従って、前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；
（ｍ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｎ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；または
（ｏ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
実施形態５７または５８に記載の単離された抗体。

【0323】

６０．（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む；
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む；
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
実施形態５９に記載の単離された抗体。

【0324】

６１．（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む；
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む；
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む；
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む；
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む；または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第１のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ前記第２のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含む、
実施形態６０に記載の単離された抗体。

【0325】

６２．２つの重鎖及び２つの軽鎖を含む、実施形態３４～６１のいずれか１つの実施形態に記載の単離された抗体。

【0326】

６３．表２に列挙される組み合わせから選択される重鎖及び軽鎖を含む、実施形態６２に記載の単離された抗体。

【0327】

６４．第１の重鎖が、表３の組み合わせから選択されるＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含み、かつ第２の重鎖が、表４の組み合わせから選択されるＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含む、実施形態６２に記載の単離された抗体。

【0328】

６５．第１の重鎖が、表５の組み合わせから選択されるＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含み、かつ第２の重鎖が、表６の組み合わせから選択されるＶ_Ｈ及びＦｃ配列を含む、実施形態６２に記載の単離された抗体。

【0329】

６６．実施形態１～６５のいずれか１つに記載の単離された抗体と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。

【0330】

６７．実施形態１～６５のいずれか１つに記載の単離された抗体をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。

【0331】

６８．実施形態６７に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。

【0332】

６９．実施形態６７に記載のポリヌクレオチドまたは実施形態６８に記載のベクターを含む、宿主細胞。

【0333】

７０．対象におけるがんを処置するまたはがんの脳転移を処置するための方法であって、前記対象に対して、治療有効量の実施形態１～６５のいずれか１つに記載の単離された抗体または実施形態６６に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。

【0334】

７１．前記単離された抗体が、化学療法または放射線療法と組み合わせて投与される、実施形態７０に記載の方法。

【0335】

７２．前記がんが、転移性がんである、実施形態７０または７１に記載の方法。

【0336】

７３．前記がんが、乳がんである、実施形態７０～７２のいずれか１つに記載の方法。

【0337】

７４．前記がんが、ＨＥＲ２陽性がんである、実施形態７０～７３のいずれか１つに記載の方法。

【0338】

本明細書に記載の実施例及び実施形態は、例示目的のためのみであり、それらを考慮した様々な修正または変更が当業者に提案され、本出願の趣旨及び範囲ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれるべきであることが理解される。本明細書に引用される配列アクセッション番号の配列は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0339】

【表1】

【0340】

【表2】

【0341】

【表3】

【0342】

【表4】

【0343】

【表5】

【0344】

【表6】

【0345】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【配列表】

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【国際調査報告】