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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-18
(54)【発明の名称】新規抗ＭＵＣ１抗体およびその用途
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20240910BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240910BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20240910BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20240910BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240910BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20240910BHJP
C12N 5/0783 20100101ALI20240910BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240910BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240910BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240910BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20240910BHJP
A61K 35/17 20150101ALI20240910BHJP
A61K 49/00 20060101ALI20240910BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
C12N15/13
C07K19/00
C07K16/46
C12N5/10
C12P21/08
C12N5/0783
C12N15/63 Z
A61P35/00
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61K47/68
A61K35/17
A61K49/00
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024512218
(86)(22)【出願日】2022-08-25
(85)【翻訳文提出日】2024-02-22
(86)【国際出願番号】 KR2022012764
(87)【国際公開番号】W WO2023027534
(87)【国際公開日】2023-03-02
(31)【優先権主張番号】10-2021-0113712
(32)【優先日】2021-08-27
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(31)【優先権主張番号】10-2022-0106864
(32)【優先日】2022-08-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】505404220
【氏名又は名称】ペプトロン インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110003007
【氏名又は名称】弁理士法人謝国際特許商標事務所
(72)【発明者】
【氏名】チョイ、ホイル
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C076
4C085
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA10
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B064DA13
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA44
4B065CA46
4C076AA95
4C076EE41
4C076EE59
4C085AA13
4C085AA14
4C085AA16
4C085BB11
4C085CC01
4C085DD62
4C085EE01
4C085KA03
4C085LL18
4C087AA01
4C087BB37
4C087BB65
4C087NA14
4C087ZB26
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA09
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA50
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、新規抗体およびその用途に関するものであって、より詳しくは、従来の抗体配列を置換して、生産過程で発生するｇｌｙｃａｔｉｏｎ－ｒｅｌａｔｅｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅがないことを特徴とする、前記抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物複合体または二重特異性抗体、これを含む癌の予防または治療用薬学的組成物および前記抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸、該核酸を含むベクターおよび宿主細胞、また抗体またはその抗原結合断片の製造方法に関するものである。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＭＵＣ１のＣ－末端細胞外ドメイン内の連続するアミノ酸配列を含むポリペプチドに特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２または重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域および；軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２または軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域のうち、一つ以上を含み、前記軽鎖ＣＤＲ配列に含まれるリジン（Ｋ）残基が他のアミノ酸に置換されたことを特徴とする、抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片。
【請求項2】
前記軽鎖ＣＤＲ配列に含まれるリジン（Ｋ）残基は、軽鎖ＣＤＲのＫ２４またはＫ３０であることを特徴とする、請求項１に記載の抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片。
【請求項3】
前記軽鎖ＣＤＲ配列に含まれるリジン（Ｋ）残基は、アルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン酸（Ｄ）またはグルタミン酸（Ｇ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ロイシン（Ｌ）およびイソロイシン（Ｉ）からなる群より選択されるアミノ酸に置換されることを特徴とする、請求項１に記載の抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片。
【請求項4】
前記重鎖可変領域は、配列番号１の重鎖ＣＤＲ１、配列番号２の重鎖ＣＤＲ２、または配列番号３の重鎖ＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５の軽鎖ＣＤＲ２、または配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３を含むものである、請求項１に記載の抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片。
【請求項5】
請求項１に記載の抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む、抗体－薬物複合体。
【請求項6】
請求項１に記載の抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む、二重特異性抗体。
【請求項7】
請求項１に記載の抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む、キメラ抗原受容体（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＣＡＲ）。
【請求項8】
請求項７に記載のキメラ抗原受容体を含む、免疫細胞。
【請求項9】
前記免疫細胞は、ＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ－ＮＫ、およびＣＡＲ－ＭＡの中から選択されることを特徴とする、請求項８に記載の免疫細胞。
【請求項10】
請求項５～８のいずれか一項に記載の抗体－薬物複合体、二重特異性抗体、キメラ抗原受容体およびこれを含む免疫細胞のうち、一つ以上を含む、癌の予防または治療用組成物。
【請求項11】
前記癌は、黒色腫などの皮膚癌、肝臓癌、肝細胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肝細胞性癌、胃癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、気管支癌、鼻咽頭癌、喉頭癌、膵臓癌、膀胱癌、大腸癌、結腸癌、胆嚢癌、子宮頸癌、脳癌、前立腺癌、骨癌、皮膚癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、腎臓癌、食道癌、胆道癌、精巣癌、直腸癌、頭頸部癌、頸椎癌、尿管癌、骨肉腫、神経芽細胞腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、星状細胞腫、神経芽腫、神経膠腫、急性骨髄系白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、成人Ｔ－細胞白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、骨髄異形成、骨髄増殖性障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄形成異常症候群（ＭＤＳ）、ヒト白血病ウイルス－１型（ＨＴＬＶ－１）白血病、肥満細胞症、急性リンパ芽球性白血病、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫または孤立性骨髄腫からなる群より選択されるものである、請求項１０に記載の癌の予防または治療用組成物。
【請求項12】
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、癌の診断用組成物。
【請求項13】
請求項１に記載の抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を含む発現ベクターを宿主細胞で発現させる段階を含む、抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＭＵＣ１（Ｍｕｃｉｎ １）に特異的に結合する抗－ＭＵＣ１抗体およびその用途に関するものであって、前記抗ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、作製時、純度を高めるためのアミノ酸配列を含む。また、本発明は、前記抗体またその抗原結合断片を含む抗体－薬物複合体または二重特異性抗体、これを含む癌の予防または治療用薬学的組成物並びに前記抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸、該核酸を含むベクターおよび宿主細胞、これを用いた抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の製造方法に関するものである。
【背景技術】
【0002】
ムチン１（ＭＵＣ１、Ｍｕｃｉｎ １）は、多数の糖化した細胞外ドメインを含む膜貫通糖タンパク質である。ＭＵＣ１の長さは、細胞表面から２００～５００ｎｍであり、ＭＵＣ１は、正常上皮細胞の頂端膜に位置する。ＭＵＣ１は、乳房、胃、食道、膵臓、尿道、肺、腎臓および胆嚢のような多くの臓器の腺上または内腔上皮において発現する。正常組織においてＭＵＣ１の負に帯電した炭水化物は、脱水、ｐＨ変化、花粉および微生物から基底上皮を保護する物理的な障壁を形成する。ＭＵＣ１遺伝子は、単一転写物を暗号化する。翻訳後、ＭＵＣ１は、ウニの精子タンパク質エンテロキナーゼおよびアグリン（ＳＥＡ）ドメイン内に位置するＧＳＶＶＶモチーフで自己切断（ａｕｔｏｃｌｅａｖｅｄ）される。これらはＮ－末端サブユニット（ＭＵＣ１－Ｎ）およびＣ末端サブユニット（ＭＵＣ１－Ｃ）の２個のペプチド断片からなる。
初めてＭＵＣ１が生成された後、ＭＵＣ１は、細胞に結合している部分と細胞外に放出（ｒｅｌｅａｓｅ）され得る部分が非共有相互作用（ｎｏｎｃｏｖａｌｅｎｔ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）によって結合し、このとき、開裂（ｃｌｅａｖａｇｅ）は、Ｓｈｅｄｄａｓｅという酵素によって起こる。ＭＵＣ１複合体は、ＩＦＮ－γおよびＴＮＦ－αのようなサイトカインの刺激によって分離される。ＭＵＣ１－Ｎ放出は、ＴＮＦ－α変換酵素（ＴＡＣＥ：ＴＮＦ－α Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ）およびマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ：Ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏ－ｐｒｏｔｅａｓｅ）を含む酵素によって起こる。これらの酵素は、ＭＵＣ１－Ｃの細胞外ドメインを切断して、２つの切片に分割し、癌が進行するにつれて、この細胞外切片は癌細胞から離れて身体の血液内に浮遊し、細胞と結合している切片は、癌細胞と共に持続的に結合した状態で存在する。
ＭＵＣ１は、癌細胞の成長に重要であるが、その理由は、他の癌細胞に存在する癌細胞増殖に関連している細胞膜タンパク質との結合によって持続的な細胞増殖シグナルを送り、癌細胞増殖に決定的な役割するからである。また、この部分は、癌細胞の成長から消滅時まで常に一緒にその運命を共にするため、癌検出の良い標的となり、また、癌を除去することができる決定的なバイオマーカー（Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ）となる。また、ＭＵＣ１の他の部分と違い、この部分は唯一グリコシル化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）されない部分として知られており、癌と正常細胞におけるＭＵＣ１を区別することができる明確な差をみせる部分であると考えられた。そこで、本発明者らは、ＭＵＣ１の細胞に結合した部分が癌と運命を共にし、正常細胞のＭＵＣ１と癌細胞のＭＵＣ１を区別できる切片を抗体の最適の抗原とみなし、ＭＵＣ１－Ｃ末端を標的とする抗体を開発した。
この背景技術の部分に記載された情報は、単に本発明の背景に関する理解を向上させるためのものである。よって、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者にとって既に知られた先行技術を形成する情報を含まなくてもよい。
初めてＭＵＣ１が生成された後、ＭＵＣ１は、細胞に結合している部分と細胞外に放出（ｒｅｌｅａｓｅ）され得る部分が非共有相互作用（ｎｏｎｃｏｖａｌｅｎｔ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）によって結合し、このとき、開裂（ｃｌｅａｖａｇｅ）は、Ｓｈｅｄｄａｓｅという酵素によって起こる。ＭＵＣ１複合体は、ＩＦＮ－γおよびＴＮＦ－αのようなサイトカインの刺激によって分離される。ＭＵＣ１－Ｎ放出は、ＴＮＦ－α変換酵素（ＴＡＣＥ：ＴＮＦ－α Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅ）およびマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ：Ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏ－ｐｒｏｔｅａｓｅ）を含む酵素によって起こる。これらの酵素は、ＭＵＣ１－Ｃの細胞外ドメインを切断して、２つの切片に分割し、癌が進行するにつれて、この細胞外切片は癌細胞から離れて身体の血液内に浮遊し、細胞と結合している切片は、癌細胞と共に持続的に結合した状態で存在する。
ＭＵＣ１は、癌細胞の成長に重要であるが、その理由は、他の癌細胞に存在する癌細胞増殖に関連している細胞膜タンパク質との結合によって持続的な細胞増殖シグナルを送り、癌細胞増殖に決定的な役割するからである。また、この部分は、癌細胞の成長から消滅時まで常に一緒にその運命を共にするため、癌検出の良い標的となり、また、癌を除去することができる決定的なバイオマーカー（Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ）となる。また、ＭＵＣ１の他の部分と違い、この部分は唯一グリコシル化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）されない部分として知られており、癌と正常細胞におけるＭＵＣ１を区別することができる明確な差をみせる部分であると考えられた。そこで、本発明者らは、ＭＵＣ１の細胞に結合した部分が癌と運命を共にし、正常細胞のＭＵＣ１と癌細胞のＭＵＣ１を区別できる切片を抗体の最適の抗原とみなし、ＭＵＣ１－Ｃ末端を標的とする抗体を開発した。
この背景技術の部分に記載された情報は、単に本発明の背景に関する理解を向上させるためのものである。よって、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者にとって既に知られた先行技術を形成する情報を含まなくてもよい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0003】
本発明の目的は、ＭＵＣ１の「細胞に結合している部分」に特異的に結合し、特定の残基において糖化（ｇｌｙｃａｔｉｏｎ）が減少された、抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を提供することである。本発明の目的は、ＭＵＣ１の「細胞に結合している部分」に特異的に結合し、特定の残基において糖化（ｇｌｙｃａｔｉｏｎ）が減少された、抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を提供することである。
本発明の他の目的は、前記抗体またはその抗原結合断片に薬物がコンジュゲートした抗体－薬物複合体および前記抗体、その抗原結合断片を含む二重特異性抗体または前記抗体またはその抗原結合断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ））を含む免疫細胞として、ＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ－ＮＫ（ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ）および／またはＣＡＲ－ＭＡ（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）を提供することである。
本発明のまた他の目的は、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片、前記抗体－薬物複合体または二重特異性抗体を含む癌の予防または治療用組成物および治療方法を提供することである。
本発明のまた他の目的は、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む癌の診断用組成物および診断方法を提供することである。
また、本発明のまた他の目的は、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸、該核酸を含むベクターおよび宿主細胞、これを用いた抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の製造方法を提供することである。
本発明の他の目的は、前記抗体またはその抗原結合断片に薬物がコンジュゲートした抗体－薬物複合体および前記抗体、その抗原結合断片を含む二重特異性抗体または前記抗体またはその抗原結合断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ））を含む免疫細胞として、ＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ－ＮＫ（ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ）および／またはＣＡＲ－ＭＡ（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）を提供することである。
本発明のまた他の目的は、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片、前記抗体－薬物複合体または二重特異性抗体を含む癌の予防または治療用組成物および治療方法を提供することである。
本発明のまた他の目的は、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む癌の診断用組成物および診断方法を提供することである。
また、本発明のまた他の目的は、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸、該核酸を含むベクターおよび宿主細胞、これを用いた抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の製造方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0004】
前記目的を達成するために、本発明は、ＭＵＣ１のＣ－末端細胞外ドメイン内の連続する５個以上のアミノ酸を含むポリペプチドを認識する抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片であって、一部のアミノ酸残基が置換された抗体または抗原結合断片を提供する。
好ましくは、抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１（ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨ）の重鎖ＣＤＲ１；配列番号２（ＹＩＮＰＧＴＧＹＩＥＹＮＱＫＦＫＤ）の重鎖ＣＤＲ２；配列番号３（ＳＴＡＰＦＤＹ）の重鎖ＣＤＲ３；配列番号４（ＸＡＳＱＤＩＸＳＹＬＳ）の軽鎖ＣＤＲ１；配列番号５（ＹＡＴＲＬＡＤ）の軽鎖ＣＤＲ２；および配列番号６（ＬＱＹＤＥＳＰＹＴ）の軽鎖ＣＤＲ３からなる群より選択されるいずれか一つ以上の配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ配列に含まれるリジン（Ｋ）残基が他のアミノ酸に置換されたことを特徴とすることができる。
本発明はまた、前記抗－ＭＵＣ１抗体を産生するためのハイブリドーマを提供する。
本発明はまた、抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物複合体、二重特異性抗体またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ））を含む免疫細胞であるＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ－ＮＫおよび／またはＣＡＲ－ＭＡを提供する。
本発明はまた、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片、前記抗体－薬物複合体または二重特異性抗体を含む癌の予防または治療用組成物および治療方法を提供する。
本発明はまた、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む癌の診断用組成物および診断方法を提供する。
本発明はまた、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸、該核酸を含むベクターおよび宿主細胞、これを用いた抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の製造方法を提供する。
ＭＵＣ１（ムチン１、Ｍｕｃｉｎ １）は、一般的に正常上皮細胞の一面（頂端膜：ａｐｉｃａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ）で発現し、また、多様な癌腫において高いレベルで異常に発現する。癌で発現するＭＵＣ１は、糖化程度が減少し、細胞の全表面で均一に発現し、癌細胞の増殖、侵襲、転移および血管形成を促進させることに関与するため、癌細胞で発現するＭＵＣ１は、癌特異的ＭＵＣ１（ムチン１、Ｍｕｃｉｎ １）は、一般的に正常上皮細胞の一面（頂端膜：ａｐｉｃａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ）で発現し、また、多様な癌腫瘍で高いレベルで異常に発現する。癌で発現するＭＵＣ１は、糖化程度が減少し、細胞の全表面で均一に発現し、癌細胞の増殖、侵襲、転移および血管形成を促進させることに関与するため、癌細胞で発現するＭＵＣ１は、癌特異性治療のための標的となる。
特に、ＭＵＣ１－Ｃ（ＭＵＣ１のＣ－末端サブユニット）ドメインは、膜貫通または細胞質に位置し、ＭＵＣ１の細胞外ドメインが酵素によって切り離された後、ＭＵＣ１－Ｃ末端部位（細胞外ドメイン）が細胞表面に残るようになる。本発明は、これを標的とする新規なＭＵＣ１Ｃ末端に特異的に結合する抗体であって、特に前記抗体のＣＤＲに含まれる一部のリジン（Ｌｙｓｉｎｅ、Ｋ）残基が置換され、当該部分の糖化（ｇｌｙｃａｔｉｏｎ）が減少しているＭＵＣ１－Ｃ抗体またはその抗原結合分子を提供する。
すなわち、本発明は、一観点において、ＭＵＣ１に特異的に結合する抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片に関するものである。
より詳しくは、本発明の抗体または抗原結合断片は、ＭＵＣ１のＣ－末端細胞外ドメイン内の連続する５個以上のアミノ酸を含むポリペプチドを認識する抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片であり、前記抗体または抗原結合断片のＣＤＲ配列内に一つ以上のアミノ酸残基の置換を含むことができる。
本明細書における「抗体」とは、免疫系内において抗原の刺激によって作られる物質を総称し、その種類は特に制限されない。前記抗体は、特定の抗原と疫学的に反応性である免疫グロブリン分子であって、抗原を特異的に認識する受容体としての役割をするタンパク質分子を意味し、ポリクロナール抗体（ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）およびモノクローナル抗体（単一クロナール抗体、ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）と全抗体および抗体断片のいずれをも含むことができる。前記抗体は、非自然的に生成されたもの、例えば、組換え的にまたは合成的に生成されたものであってもよい。前記抗体は、動物抗体（例えば、マウス抗体など）、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体であってもよい。前記抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。また、抗体は、特に断りがない限り、抗原結合能を保有した抗体の抗原結合断片も含むものと理解できよう。
本明細書において「相補性決定領域（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ、ＣＤＲ）」とは、抗体の可変領域のうち、抗原との結合特異性を付与する部位を意味する。前述した抗体の抗原結合断片は、前記相補性決定領域を一つ以上含む抗体断片であってもよい。
本発明において、前記抗－ＭＵＣ１抗体は、ハイブリドーマから産生されたものであってもよい。
また、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、前記ハイブリドーマから産生された抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３）または重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むものであることを特徴とすることができる。
一側面において、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。前記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１（ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨ）の重鎖ＣＤＲ１；配列番号２（ＹＩＮＰＧＴＧＹＩＥＹＮＱＫＦＫＤ）の重鎖ＣＤＲ２；配列番号３（ＳＴＡＰＦＤＹ）の重鎖ＣＤＲ３；配列番号４（ＸＡＳＱＤＩＸＳＹＬＳ）の軽鎖ＣＤＲ１；配列番号５（ＹＡＴＲＬＡＤ）の軽鎖ＣＤＲ２；および配列番号６（ＬＱＹＤＥＳＰＹＴ）の軽鎖ＣＤＲ３からなる群より選択されるいずれか一つ以上の配列を含み、前記抗体ＣＤＲのアミノ酸残基のうちの一つ以上が他のアミノ酸に置換されたものであってもよい。
より具体的には、本発明の抗体または抗原結合分子で置換されたアミノ酸の位置は、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ配列のうち１番目および７番目のアミノ酸残基である。すなわち、前記置換されるアミノ酸残基は、本発明の抗－ＭＵＣ１抗体の軽鎖ＣＤＲのリジン（Ｋ２４またはＫ３０）から置換されたものであり、置換されるアミノ酸は、その種類に制限されるものではないが、好ましくは、電気的に極性側鎖を含むアミノ酸であるアルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン酸（Ｄ）またはグルタミン酸（Ｇ）であるか、疎水性側鎖を含むアミノ酸であるグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）のいずれかであることができ、より好ましくは、アルギニン（Ｒ）またはグリシン（Ｇ）であってもよい。上記のように、ＣＤＲにおけるリジン残基の置換によって前記残基の糖化（ｇｌｙｃａｔｉｏｎ）による翻訳語後修飾(Ｐｏｓｔ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ)が起きないことによって、ｐｒｏｔｅｏｍｅ ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙが減少するため、高純度の抗体または抗原結合断片を製造することができる効果を有する。
本発明において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、ＭＵＣ１タンパク質、具体的には、ＭＵＣ１タンパク質のＣ－末端細胞外ドメイン内の５個、７個、１０個、１２個以上または好ましくは１５個以上のアミノ酸を含むポリペプチド（エピトープ）を認識するか、特異的に結合することを特徴とすることができる。前記抗体またはその抗原結合断片は、ＭＵＣ１タンパク質の細胞外ドメイン、ＭＵＣ１タンパク質のＳＥＡドメインまたはＭＵＣ１タンパク質のＣ－末端細胞外ドメインを認識するか、および／またはここに特異的に結合することを特徴とすることができる。本明細書における用語「ＭＵＣ１特異的抗体」または「ＭＵＣ１に特異的に結合する抗体」とは、ＭＵＣ１に結合し、ＭＵＣ１の生物学的活性の抑制をもたらす抗体を意味し、「抗－ＭＵＣ１抗体」と混用して使用される。本発明における「抗－ＭＵＣ１抗体」とは、動物抗体（例えば、マウス抗体）、キメラ抗体（例えば、マウス－ヒトキメラ抗体）またはヒト化抗体であってもよく、モノクローナル抗体またはポリクロナール抗体であってもよく、例えば、モノクローナル抗体であってもよい。ポリクロナール抗体（ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）およびモノクローナル抗体（単一クロナール抗体、ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）をいずれも含む概念であって、好ましくは、モノクローナル抗体であり、無傷の全抗体（ｗｈｏｌｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）の形態を有することができる。全抗体は、２個の全長の軽鎖および２個の全長の重鎖を有する構造であって、不変領域を含む構造であり、それぞれの軽鎖は、重鎖とジスルフィド結合によって連結している。
本発明による抗－ＭＵＣ１抗体の全抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭおよびＩｇＧ形態を含む概念であって、ＩｇＧは、サブタイプ（ｓｕｂｔｙｐｅ）であって、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む。
無傷のＩｇＧ形態の抗体は、２個の全長（ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ）軽鎖および２個の全長重鎖を有する構造であり、それぞれの軽鎖は、重鎖と二硫化結合によって連結している。抗体の不変領域は、重鎖不変領域と軽鎖不変領域に分けられ、重鎖不変領域は、ガンマ（γ）、ミュー、アルファ（α）、デルタ（δ）およびイプシロン（ε）型を有し、サブクラスとしてガンマ１（γ１）、ガンマ２（γ２）、ガンマ３（γ３）、ガンマ４（γ４）、アルファ１（α１）およびアルファ２（α２）を有する。軽鎖の不変領域は、カッパ（κ）およびラムダ（λ）型を有する。
本発明において、用語「重鎖（ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ）」は、抗原に特異性を付与するため、十分な可変領域配列を有するアミノ酸配列を含む可変領域ドメインＶＨおよび３個の不変領域ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３とヒンジ（ｈｉｎｇｅ）を含む全長重鎖およびその断片をいずれも含むものと解釈される。また、用語「軽鎖（ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ）」は、抗原に特異性を付与するための十分な可変領域配列を有するアミノ酸配列を含む可変領域ドメインＶＬおよび不変領域ドメインＣＬを含む全長軽鎖およびその断片をいずれも含む意味に解釈される。
本発明において、「ＣＤＲ（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ）」は、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の高可変領域（ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ）のアミノ酸配列を意味する。重鎖および軽鎖は、それぞれ３個のＣＤＲを含むことができる（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３およびＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）。前記ＣＤＲは、抗体が抗原またはエピトープに結合するにあたって主要な接触残基を提供することができる。
なお、用語「特異的に結合」または「特異的に認識」とは、当業者に通常公知されている意味と同様のものであって、抗原および抗体が特異的に相互作用して免疫学的反応をすることを意味する。
本発明による抗－ＭＵＣ１抗体の「抗原結合断片」とは、抗－ＭＵＣ１抗体の抗原、すなわち、ＭＵＣ１と結合しうる機能を保有した断片を意味し、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、およびＦｖなどを含む概念であって、本明細書では、「抗体断片」と同じ意味で混用して使用される。抗原結合断片は、例えば、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’）２であってもよいが、これらに限定されるものではない。前記抗原結合断片のうち、Ｆａｂは、軽鎖および重鎖の可変領域と軽鎖の不変領域および重鎖の第一の不変領域（ＣＨ１）を有する構造として１個の抗原結合部位を有する。Ｆａｂ’は、重鎖ＣＨ１ドメインのＣ－末端に一つ以上のシステイン残基を含むヒンジ領域（ｈｉｎｇｅ ｒｅｇｉｏｎ）を有する点でＦａｂと差がある。Ｆ（ａｂ’）２抗体は、Ｆａｂ’のヒンジ領域のシステイン残基がジスルフィド結合をなしながら生成される。Ｆｖは、重鎖可変部位および軽鎖可変部位のみを有する最小の抗体片であって、Ｆｖ断片を生成する組み換え技術は、当業者に広く公知されている。二本鎖Ｆｖ（ｔｗｏ－ｃｈａｉｎ Ｆｖ）は、非共有結合によって重鎖可変部位と軽鎖可変部位とが結合しており、単鎖Ｆｖ（ｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎ Ｆｖ）は、一般的にペプチドリンカーを介して重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域とが共有結合によって連結する、またはＣ－末端で直接結合しており、二本鎖Ｆｖのように、ダイマーのような構造をなすことができる。前記抗原結合断片は、タンパク質加水分解酵素を用いて得られ（例えば、全抗体をパパインで制限切断すればＦａｂが得られ、ペプシンで切断すれば、Ｆ（ａｂ’）２断片が得られる）、遺伝子組み換え技術を用いて作製することができる。
本発明において、用語「ヒンジ領域（ｈｉｎｇｅ ｒｅｇｉｏｎ）」は、抗体の重鎖に含まれている領域であって、ＣＨ１およびＣＨ２領域の間に存在し、抗体内抗原結合部位の柔軟性（ｆｌｅｘｉｂｉｌｉｔｙ）を提供する機能を果たす領域を意味する。
前記抗－ＭＵＣ１抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。モノクローナル抗体は、当業界に周知の方法で製造することができる。例えば、ファージディスプレイ（ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ）法を用いて製造することができる。または、抗－ＭＵＣ１抗体を用いて通常の方法によってマウス由来のモノクローナル抗体として製造することができる。
一方、典型的なＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ）フォーマットを用いてＭＵＣ１との結合能に基づいて個別のモノクローナル抗体をスクリーニングすることができる。結合体に対して分子的相互作用を検定するための競争的ＥＬＩＳＡ（Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ＥＬＩＳＡ）のような機能性分析またはセル－ベースアッセイ（ｃｅｌｌ－ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙ）のような機能性分析を通じて阻害活性に対して検定することができる。それから強い阻害活性に基づいて選択されたモノクローナル抗体メンバーに対してＭＵＣ１に対するそれぞれの親和性（Ｋｄ ｖａｌｕｅｓ）を検定する。
本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の権利範囲には、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片に含まれた軽鎖および重鎖のＣＤＲ１～ＣＤＲ３のいずれか一つ以上を有し、且つ実施的に同じＭＵＣ１抗原に対する結合能および特異性を有するペプチド（ｐｅｐｔｉｄｅ）およびアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）も含まれる。
本発明は他の観点において、前記抗－ＭＵＣ１抗体を産生するハイブリドーマに関するものである。本発明は、前記ハイブリドーマが産生する抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を提供する。他の例は、前記ハイブリドーマが産生する抗－ＭＵＣ１抗体の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、またはそれらの組み合わせ）、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、またはそれらの組み合わせ）、またはそれらの組み合わせ；または前記ハイブリドーマが産生する抗－ＭＵＣ１抗体の重鎖可変領域、軽鎖可変領域、またはそれらの組み合わせを含む抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を提供する。
このとき、前記相補性決定領域は、通常のいずれの方法によって決定されてもよく、例えば、ＩＭＧＴの定義（ＩＭＧＴ ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ）または Ｋａｂａｔの定義（Ｋａｂａｔ ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ）によって決定されることができるが、これに制限されるものではない。
本発明において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、ＭＵＣ１－Ｃ末端細胞外ドメインを特異的に認識することによって、ＭＵＣ１－Ｃ 末端細胞外ドメインが正常細胞に比べて高いレベルで発現し、少なく糖化された癌または腫瘍細胞において特異的に作用でき、かつ細胞の一面だけでなく全表面に発現したＭＵＣ１タンパク質を認識／結合させることができる。また、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、ＭＵＣ１タンパク質、特に、ＭＵＣ１－Ｃ末端細胞外ドメインと結合するだけでなく、細胞内に内在化（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）されることによって、ＭＵＣ１媒介の伝達経路(ｐａｔｈｗａｙ)を効果的に阻害して薬理的効果を極大化させることができる。また、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の内在化（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）特性は、抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）として適用される場合に、コンジュゲートした薬物を効果的に細胞内に伝達させることができるという利点を有する。
本発明はまた他の観点において、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ））を含む免疫細胞に関するものであって、より具体的には、ＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ－ＮＫ（ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ）および／またはＣＡＲ－ＭＡ（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）細胞およびこれを含む治療剤に関するものである。前記ＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ－ＮＫ、ＣＡＲ－ＭＡまたはこれに含まれる抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の形態は、ｓｃＦｖが好ましいが、これに限定されるものではない。
本発明はまた他の観点において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片に薬物がコンジュゲートした抗体－薬物複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、ＡＤＣ）に関するものである。
抗体－薬物複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、ＡＤＣ）は、標的癌細胞へ抗癌薬物が伝達される前まで抗癌薬物が抗体に安定的に結合されていなければならない。標的に伝達された薬物は、抗体から遊離し、標的細胞のアポートシスを誘導しなければならない。これのためには、薬物が抗体に安定的に結合すると同時に標的細胞から遊離されるときは、標的細胞のアポートシスを誘導する十分な細胞毒性を有しなければならない。
本発明において、前記抗体－薬物複合体は、本発明が属する技術分野で公然知られた技術によるものであることができる。
本発明において、前記抗体－薬物複合体は、前記抗体またはその抗原結合断片がリンカーを介して薬物と結合されることを特徴とすることができる。
本発明はまた他の観点において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む二重特異性抗体（Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）に関するものである。前記二重特異性抗体は、抗体の２個のアーム（ａｒｍ）のうち、一つのアーム（ａｒｍ）は、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含み、残りの他のアーム（ａｒｍ）は、ＭＵＣ１以外の他の抗原、好ましくは癌関連抗原または免疫チェックポイントタンパク質抗原に特異的な抗体または免疫効能細胞関連抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む形態を意味する。
本発明による二重抗体に含まれる抗－ＭＵＣ１抗体以外の抗体が結合する抗原は、好ましくは癌関連抗原または免疫チェックポイントタンパク質抗原として、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ－Ｒ、ＣＤ－２０、ＭＵＣ１６、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＢＴＬＡ４、ＥｐｈＢ２、Ｅ－セレクチン（ｓｅｌｅｃｔｉｎ）、ＥｐＣａｍ、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＡ、ＥＲＢ３、ｃ－ＭＥＴなどから選択されることができ、免疫効能細胞関連抗原としては、ＴＣＲ／ＣＤ３、ＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩａ）ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６９、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ８９およびＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８（ＣＲ３）などが選択されることができるが、これらに限定されるものではない。
本発明はまた他の観点において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片、前記抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物複合体、二重特異性抗体、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む免疫細胞を含むＭＵＣ１関連疾病の予防および／または治療用薬学的組成物に関するものである。
前記ＭＵＣ１関連疾病は、ＭＵＣ１の発現または過発現、ＭＵＣ１の細胞の全表面に発現し、および／または正常細胞に比べてＭＵＣ１タンパク質の糖化減少と関連した疾病であってもよく、例えば、癌であってもよい。前記正常細胞は非－腫瘍細胞であってもよい。これによって前記ＭＵＣ１関連疾病は、好ましくは癌または腫瘍であるが、これらに限定されるものではない。
用語「癌」または「腫瘍」は、典型的に調節されない細胞成長／増殖を特徴とする哺乳動物の生理学的状態を意味する。
本発明における組成物で治療可能な癌または癌腫は特に限定されず、固形癌および血液癌を全部含む。このような癌の例には、黒色腫などの皮膚癌、肝臓癌、肝細胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肝細胞性癌、胃癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、気管支癌、鼻咽頭癌、喉頭癌、膵臓癌、膀胱癌、大腸癌、結腸癌、 胆嚢癌、子宮頸癌、脳癌、前立腺癌、骨癌、皮膚癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、腎臓癌、食道癌、胆道癌、精巣癌、直腸癌、頭頸部癌、頸椎癌、尿管癌、骨肉腫、神経芽細胞腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、星状細胞腫、神経芽腫、神経膠腫、急性骨髄系白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、成人Ｔ－細胞白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、骨髄異形成、骨髄増殖性障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄形成異常症候群（ＭＤＳ）、ヒト白血病ウイルス－１型（ＨＴＬＶ－１）白血病、肥満細胞症、急性リンパ芽球性白血病、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫または孤立性骨髄腫からなる群より選択されることができるが、これらに限定されるものではない。
より好ましくは、前記癌は、ＭＵＣ１タンパク質が発現されたことを特徴とし、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、肺癌、甲状腺癌、胃癌、卵巣癌、大腸癌、肝臓癌、胆嚢癌、腎臓癌、子宮頸癌、または膀胱癌であってもよいが、これらに制限されるものではない。前記癌は、原発性癌または転移性癌であってもよい。
前記ＭＵＣ１関連疾病は、ＮＡＳＨ（Ｎｏｎ－Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ＳｔｅａｔｏＨｅｐａｔｉｔｉｓ）またはＴＧＦ－β－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅであってもよいが、これに制限されるものではない。本発明の一実施例において、前記癌の予防および／または治療用薬学的組成物、方法および用途において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、単独有効成分として提供されるか、抗癌剤などの細胞毒性物質と併用投与されうるか、或いは抗癌剤などの細胞毒性物質とコンジュゲートした複合体（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ；ＡＤＣ）の形態で提供され得る。
また、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片、およびこれを含む薬学的組成物は、従来の治療剤と併用して使用する用途に用いることができる。すなわち、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片、およびこれを含む薬学的組成物は、従来の抗癌剤などの治療剤と同時に投与するまたは順次に投与する用途に用いることができる。
本発明はまた他の観点において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片または前記抗体－薬物複合体の治療的有効量をＭＵＣ１関連疾病の予防および／または治療を必要とする患者に投与する段階を含む、ＭＵＣ１関連疾病の予防および／または治療方法に関するものである。前記予防および／または治療方法は、前記投与段階以前に前記疾病の予防および／または治療を必要とする患者を確認する段階をさらに含むことができる。
前記組成物において薬物の局所的に伝達するための抗体複合体の使用により、薬物を抗－ＭＵＣ１抗体で標的化された抗原を示す細胞に伝達することができる。
前記薬学的組成物は、薬学的に許容可能な担体をさらに含むことができる。前記薬学的に許容可能な担体は、薬物の製剤化に通常用いられるものとして、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、滑石、ステアリン酸マグネシウム、ミネラルオイルなどからなる群より選択された１種以上であってもよいが、これらに限定されるものではない。前記薬学的組成物はまた、薬学的組成物の製造に通常用いられる希釈剤、賦形剤、潤滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤などからなる群より選択された１種以上をさらに含むことができる。
前記薬学的組成物は、経口または非経口で投与することができる。非経口投与の場合には、静脈内注入、皮下注入、筋肉注入、腹腔注入、内皮投与、鼻内投与、肺内投与、直腸内投与、または病変部位局所投与などで投与することができる。
経口投与時、タンパク質またはペプチドは消化されるため、経口用組成物は活性薬剤をコーティンするか、或いは胃内での分解から保護されるように剤形化することができる。また、前記組成物は、活性物質が標的細胞に移動することができる任意の装置によって投与することができる。
前記薬学的組成物内の抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の含有量または投与量は、製剤化方法、投与方式、患者の年齢、体重、性別、病態、食餌、投与時間、投与間隔、投与経路、排泄速度、および反応感受性などの要因によって多様に処方することができる。例えば、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の１日投与量は、０．００１～１０００ｍｇ／ｋｇ、具体的には０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ、より具体的には０．１～５０ｍｇ／ｋｇ、さらに具体的には０．１～２０ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよいが、これに制限されるものではない。前記１日の投与量は、単位用量の形態で１つの製剤として製剤化するか、適宜に分量して製剤化するか、或いは多用量容器内に内入させて製造され得る。
前記薬学的組成物は、オイルまたは水性媒質中の溶液、懸濁液、シロップ剤または乳化液の形態である、またはエキス剤、散剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、またはカプセル剤などの形態で剤形化することができ、剤形化のための分散剤または安定化剤をさらに含むことができる。
前記薬学的組成物の投与対象患者は、ヒト、サルなどを含む霊長類、マウス、ラットなどを含む齧歯類などを含む哺乳類であってもよい。
本明細書において癌の治療は、癌細胞の増殖阻害、癌細胞アポトーシス、転移抑制などのように癌の症状の悪化を防止したり、緩和する若しくは好転させたり、または癌を部分的に或いは全部消滅させたりする全ての抗癌作用を意味するものであることができる。
前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、ＭＵＣ１タンパク質、特に、ＭＵＣ１－Ｃ－末端細胞外ドメインに特異的に結合するため、これを用いてＭＵＣ１タンパク質またはＭＵＣ１－Ｃ－末端細胞外ドメインを検出または確認することができる。したがって、本発明はまた他の観点において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含むＭＵＣ１タンパク質、例えば、ＭＵＣ１－Ｃ－末端細胞外ドメインの検出用組成物および生物試料に前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を処理する段階を含むＭＵＣ１の検出方法に関するものである。
前記検出方法は、前記処理する段階以後に、抗原－抗体反応の有無を確認する段階をさらに含むことができる。前記検出方法において、抗原－抗体反応が探知される場合、前記生物試料にＭＵＣ１、例えば、ＭＵＣ１－Ｃ－末端細胞外ドメインが存在すると決定（判断）することができる。したがって、前記検出方法は、前記確認する段階以後に、抗原－抗体反応が探知される場合、前記生物試料にＭＵＣ１が存在すると決定する段階をさらに含むことができる。前記生物試料は、哺乳類、例えば、ヒト（例えば、癌患者）から得た（分離された）細胞、組織、体液、それらの培養物などからなる群より選択されたものであることができる。
ＭＵＣ１タンパク質、例えば、ＭＵＣ１タンパク質のＣ－末端部位（またはＭＵＣ１タンパク質のＳＥＡドメインまたはＭＵＣ１－Ｃ－末端細胞外ドメイン）の発現は、いろいろな疾病、例えば、癌と関連しているので、本発明はまた他の観点において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含むＭＵＣ１タンパク質関連疾病、例えば、癌の検出または診断用組成物および対象から分離された生物試料に前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を処理（投与）する段階を含む、癌の検出或いは診断方法、または検出或いは診断に情報を提供する方法に関するものである。
前記検出または診断方法は、前記処理する段階後に、抗原－抗体反応の有無を確認する段階をさらに含むことができる。前記方法において、抗原－抗体反応が探知される場合、前記生物試料または前記生物試料が由来した患者にＭＵＣ１関連疾病、例えば、癌が存在すると決定（判断）することができる。したがって、前記方法は、前記確認する段階後に、抗原－抗体反応が探知される場合、前記生物試料または前記患者をＭＵＣ１関連疾病患者、例えば、癌患者と決定する段階をさらに含むことができる。前記生物試料は、哺乳類、例えば、ヒト（例えば、癌患者）から得た（分離された）細胞、組織、体液、それらの培養物などからなる群より選択されたものであってもよい。
前記抗原－抗体反応の有無を確認する段階は、当業界に公知された多様な方法により行うことができる。例えば、通常の酵素反応、蛍光、発光および／または放射線検出を通じて測定することができ、具体的には、免疫クロマトグラフィー（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、免疫組織化学染色（Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、酵素結合免疫吸着分析（ｅｎｚｙｍｅ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ：ＥＬＩＳＡ）、放射線免疫測定法（ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＲＩＡ）、酵素免疫分析（ｅｎｚｙｍｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＥＩＡ）、蛍光免疫分析（Ｆｌｏｒｅｓｅｎｃｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＦＩＡ）、発光免疫分析（ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＬＩＡ）、ウエスタンブロッティング（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、マイクロアレイ、免疫沈降分析などからなる群より選択された方法によって測定することができるが、これに制限されるものではない。
このとき、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、標識物質をさらに含むことができる。前記標識物質は、放射線同位元素、蛍光物質、クロモゲン（ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ）、染色物質などからなる群より選択された１種以上であることができる。
前記標識物質は、前記抗体または抗原結合断片に通常の方法（例えば、共有結合、配位結合、イオン結合などの化学結合）により結合（連結）されたものであることができる。前記抗体（または抗原結合断片）と標識物質との結合は、本発明が属する技術分野で公然知られた技術によるものであることができる。
本発明はまた他の観点において、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体をコードする核酸に関するものである。本明細書において用いられる核酸は、細胞、細胞溶解液（ｌｙｓａｔｅ）中に存在するか、或いは部分的に精製された形態または実施的に純粋な形態で存在することもできる。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド化（ｂａｎｄｉｎｇ）、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動および当該技術分野に公然知られたその他のものを含む標準技術による他の細胞成分またはその他の汚染物質、例えば、他の細胞の核酸またはタンパク質から精製されて出る場合、「分離」または「実施的に純粋になった」ものである。本発明の核酸は、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡであってもよく、イントロン配列を含んでも含まなくてもよい。本発明はまた他の観点において、前記核酸を含む組み換え発現ベクターに関するものである。本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の発現のために、部分的または全長の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡを標準分子生物学技術（例えば、ＰＣＲ増幅または目的抗体を発現するハイブリドーマを用いたｃＤＮＡクローニング）により得ることができ、ＤＮＡが転写および翻訳制御配列に「作用するように結合」して発現ベクターに挿入することができる。
本明細書において使用される用語「作動するように結合」とは、ベクター内の転写および翻訳制御配列が抗体遺伝子の転写および翻訳を調節するという意図した機能をするように抗体をコードする遺伝子がベクターにライゲーションされることを意味することができる。
発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現用宿主細胞と適合するように選択される。抗体の軽鎖遺伝子および抗体の重鎖遺伝子は、別個のベクター内に挿入されるか、或いは両遺伝子ともに同じ発現ベクター内に挿入される。
抗体は、標準方法（例えば、抗体遺伝子断片およびベクター上の相補性制限酵素部位のライゲーション、または制限酵素部位が全く存在しない場合、鈍（ｂｌｕｎｔ）端ライゲーション）により発現ベクター内に挿入される。場合によって、前記組み換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードすることができる。抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドがフレームに適合するように抗体鎖遺伝子のアミノ末端に結合するようにベクター内にクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種性シグナルペプチド（すなわち、免疫グロブリンの外、タンパク質由来のシグナルペプチド）であることができる。また、前記組み換え発現ベクターは、宿主細胞において、抗体鎖遺伝子の発現を制御する調節配列を有する。「調節配列」とは、抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御するプロモーター、エンハンサーおよびその他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことができる。通常の技術者は、形質転換させる宿主細胞の選択、タンパク質の発現レベルなどのような因子によって調節配列を異に選択して、発現ベクターのデザインが変わり得ることを認識することができる。
本発明はまた他の観点において、前記核酸または前記ベクターを含む宿主細胞に関するものである。本発明による宿主細胞は、動物細胞、植物細胞、酵母、原核細胞および昆虫細胞からなる群より選択されることが好ましいが、これらに限定されるものではない。
具体的には、本発明による宿主細胞は、大腸菌、バチルス・サブチリス （Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）またはスタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）のような原核細胞であってもよい。また、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．）のような真菌、ピキアパストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、シゾサッカロミケス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）およびニューロスポラ・クラサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）のような酵母、その他の下等真核細胞、および昆虫からの細胞のような高等真核生物の細胞のような真核細胞であることができる。
また、植物や哺乳動物に由来することができる。好ましくは、サル腎臓細胞７（ＣＯＳ７：ｍｏｎｋｅｙ ｋｉｄｎｅｙ ｃｅｌｌｓ）細胞、ＮＳＯ細胞、ＳＰ２／０、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ：Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒ ｏｖａｒｙ）細胞、Ｗ１３８、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ：ｂａｂｙ ｈａｍｓｔｅｒ ｋｉｄｎｅｙ）細胞、ＭＤＣＫ、骨髄腫細胞株、ＨｕＴ ７８細胞およびＨＥＫ２９３細胞などを用いることが可能であるが、これらに限定されるものではない。特に好ましくは、ＣＨＯ細胞を用いることができる。
前記核酸または前記ベクターは、宿主細胞に形質転換またはトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）される。「形質転換」または「トランスフェクション」させるために原核または真核宿主細胞内に外因性核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）を導入することに通常用いられる種々の多様な技術、例えば、電気泳動法、リン酸カルシウム沈殿法、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクションまたはリポフェクション（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｏｎ）などを用いることができる。本発明による抗－グリピカン３抗体を発現させるために、多様な発現宿主／ベクターの組み合わせを用いることができる。真核宿主に適した発現ベクターには、これらに限定されるものではないが、ＳＶ４０、牛パピローマウイルス、アデノウイルス、アデノ－随伴ウイルス（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）、サイトメガロウイルスおよびレトロウイルスに由来する発現調節配列が含まれる。細菌宿主に用いられ得る発現ベクターには、ｐＥＴ、ｐＲＳＥＴ、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＧＥＸ２Ｔ、ｐＵＣベクター、ｃｏｌ Ｅ１、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９およびそれらの誘導体のように大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）から得られる細菌性プラスミド、ＲＰ４のようにより広い宿主範囲を有するプラスミド、λｇｔ１０とλｇｔ１１、ＮＭ９８９といった非常に多様なファージラムダ（ｐｈａｇｅ ｌａｍｂｄａ）誘導体として例示され得るファージＤＮＡ、およびＭ１３とフィラメント性一本鎖ＤＮＡファージのようなその他異なるＤＮＡファージが含まれる。酵母細胞に有用な発現ベクターは、２℃プラスミドおよびその誘導体である。昆虫細胞に有用なベクターはｐＶＬ９４１である。
本発明はまた他の観点において、宿主細胞を培養して、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を発現させる段階を含む、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の製造方法に関するものである。
前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を発現することができる組み換え発現ベクターが哺乳類宿主細胞内に導入される場合、抗体は宿主細胞において抗体が発現するには十分な期間、またはより好ましくは宿主細胞が培養される培養培地内に抗体を分泌させるに十分な期間の間、宿主細胞を培養することによって製造することができる。
場合によって、発現した抗体は、宿主細胞から分離し、均一になるように精製することができる。前記抗体の分離または精製は、通常のタンパク質にて用いられている分離、精製方法、例えば、クロマトグラフィーによって行うことができる。前記クロマトグラフィーは、例えば、プロテインＡカラム、プロテインＧカラムを含む親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーまたは疎水性クロマトグラフィーを含むことができる。前記クロマトグラフィーに加えて、追加でろ過、超ろ過、塩析、透析などを組み合わせることによって、抗体を分離、精製することができる。
好ましくは、抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、前記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１（ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨ）の重鎖ＣＤＲ１；配列番号２（ＹＩＮＰＧＴＧＹＩＥＹＮＱＫＦＫＤ）の重鎖ＣＤＲ２；配列番号３（ＳＴＡＰＦＤＹ）の重鎖ＣＤＲ３；配列番号４（ＸＡＳＱＤＩＸＳＹＬＳ）の軽鎖ＣＤＲ１；配列番号５（ＹＡＴＲＬＡＤ）の軽鎖ＣＤＲ２；および配列番号６（ＬＱＹＤＥＳＰＹＴ）の軽鎖ＣＤＲ３からなる群より選択されるいずれか一つ以上の配列を含み、前記軽鎖ＣＤＲ配列に含まれるリジン（Ｋ）残基が他のアミノ酸に置換されたことを特徴とすることができる。
本発明はまた、前記抗－ＭＵＣ１抗体を産生するためのハイブリドーマを提供する。
本発明はまた、抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物複合体、二重特異性抗体またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ））を含む免疫細胞であるＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ－ＮＫおよび／またはＣＡＲ－ＭＡを提供する。
本発明はまた、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片、前記抗体－薬物複合体または二重特異性抗体を含む癌の予防または治療用組成物および治療方法を提供する。
本発明はまた、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む癌の診断用組成物および診断方法を提供する。
本発明はまた、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸、該核酸を含むベクターおよび宿主細胞、これを用いた抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の製造方法を提供する。
ＭＵＣ１（ムチン１、Ｍｕｃｉｎ １）は、一般的に正常上皮細胞の一面（頂端膜：ａｐｉｃａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ）で発現し、また、多様な癌腫において高いレベルで異常に発現する。癌で発現するＭＵＣ１は、糖化程度が減少し、細胞の全表面で均一に発現し、癌細胞の増殖、侵襲、転移および血管形成を促進させることに関与するため、癌細胞で発現するＭＵＣ１は、癌特異的ＭＵＣ１（ムチン１、Ｍｕｃｉｎ １）は、一般的に正常上皮細胞の一面（頂端膜：ａｐｉｃａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ）で発現し、また、多様な癌腫瘍で高いレベルで異常に発現する。癌で発現するＭＵＣ１は、糖化程度が減少し、細胞の全表面で均一に発現し、癌細胞の増殖、侵襲、転移および血管形成を促進させることに関与するため、癌細胞で発現するＭＵＣ１は、癌特異性治療のための標的となる。
特に、ＭＵＣ１－Ｃ（ＭＵＣ１のＣ－末端サブユニット）ドメインは、膜貫通または細胞質に位置し、ＭＵＣ１の細胞外ドメインが酵素によって切り離された後、ＭＵＣ１－Ｃ末端部位（細胞外ドメイン）が細胞表面に残るようになる。本発明は、これを標的とする新規なＭＵＣ１Ｃ末端に特異的に結合する抗体であって、特に前記抗体のＣＤＲに含まれる一部のリジン（Ｌｙｓｉｎｅ、Ｋ）残基が置換され、当該部分の糖化（ｇｌｙｃａｔｉｏｎ）が減少しているＭＵＣ１－Ｃ抗体またはその抗原結合分子を提供する。
すなわち、本発明は、一観点において、ＭＵＣ１に特異的に結合する抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片に関するものである。
より詳しくは、本発明の抗体または抗原結合断片は、ＭＵＣ１のＣ－末端細胞外ドメイン内の連続する５個以上のアミノ酸を含むポリペプチドを認識する抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片であり、前記抗体または抗原結合断片のＣＤＲ配列内に一つ以上のアミノ酸残基の置換を含むことができる。
本明細書における「抗体」とは、免疫系内において抗原の刺激によって作られる物質を総称し、その種類は特に制限されない。前記抗体は、特定の抗原と疫学的に反応性である免疫グロブリン分子であって、抗原を特異的に認識する受容体としての役割をするタンパク質分子を意味し、ポリクロナール抗体（ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）およびモノクローナル抗体（単一クロナール抗体、ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）と全抗体および抗体断片のいずれをも含むことができる。前記抗体は、非自然的に生成されたもの、例えば、組換え的にまたは合成的に生成されたものであってもよい。前記抗体は、動物抗体（例えば、マウス抗体など）、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体であってもよい。前記抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。また、抗体は、特に断りがない限り、抗原結合能を保有した抗体の抗原結合断片も含むものと理解できよう。
本明細書において「相補性決定領域（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ、ＣＤＲ）」とは、抗体の可変領域のうち、抗原との結合特異性を付与する部位を意味する。前述した抗体の抗原結合断片は、前記相補性決定領域を一つ以上含む抗体断片であってもよい。
本発明において、前記抗－ＭＵＣ１抗体は、ハイブリドーマから産生されたものであってもよい。
また、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、前記ハイブリドーマから産生された抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３）または重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むものであることを特徴とすることができる。
一側面において、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。前記抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１（ＧＹＴＦＴＳＹＷＭＨ）の重鎖ＣＤＲ１；配列番号２（ＹＩＮＰＧＴＧＹＩＥＹＮＱＫＦＫＤ）の重鎖ＣＤＲ２；配列番号３（ＳＴＡＰＦＤＹ）の重鎖ＣＤＲ３；配列番号４（ＸＡＳＱＤＩＸＳＹＬＳ）の軽鎖ＣＤＲ１；配列番号５（ＹＡＴＲＬＡＤ）の軽鎖ＣＤＲ２；および配列番号６（ＬＱＹＤＥＳＰＹＴ）の軽鎖ＣＤＲ３からなる群より選択されるいずれか一つ以上の配列を含み、前記抗体ＣＤＲのアミノ酸残基のうちの一つ以上が他のアミノ酸に置換されたものであってもよい。
より具体的には、本発明の抗体または抗原結合分子で置換されたアミノ酸の位置は、配列番号４の軽鎖ＣＤＲ配列のうち１番目および７番目のアミノ酸残基である。すなわち、前記置換されるアミノ酸残基は、本発明の抗－ＭＵＣ１抗体の軽鎖ＣＤＲのリジン（Ｋ２４またはＫ３０）から置換されたものであり、置換されるアミノ酸は、その種類に制限されるものではないが、好ましくは、電気的に極性側鎖を含むアミノ酸であるアルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン酸（Ｄ）またはグルタミン酸（Ｇ）であるか、疎水性側鎖を含むアミノ酸であるグリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ロイシン（Ｌ）またはイソロイシン（Ｉ）のいずれかであることができ、より好ましくは、アルギニン（Ｒ）またはグリシン（Ｇ）であってもよい。上記のように、ＣＤＲにおけるリジン残基の置換によって前記残基の糖化（ｇｌｙｃａｔｉｏｎ）による翻訳語後修飾(Ｐｏｓｔ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ)が起きないことによって、ｐｒｏｔｅｏｍｅ ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙが減少するため、高純度の抗体または抗原結合断片を製造することができる効果を有する。
本発明において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、ＭＵＣ１タンパク質、具体的には、ＭＵＣ１タンパク質のＣ－末端細胞外ドメイン内の５個、７個、１０個、１２個以上または好ましくは１５個以上のアミノ酸を含むポリペプチド（エピトープ）を認識するか、特異的に結合することを特徴とすることができる。前記抗体またはその抗原結合断片は、ＭＵＣ１タンパク質の細胞外ドメイン、ＭＵＣ１タンパク質のＳＥＡドメインまたはＭＵＣ１タンパク質のＣ－末端細胞外ドメインを認識するか、および／またはここに特異的に結合することを特徴とすることができる。本明細書における用語「ＭＵＣ１特異的抗体」または「ＭＵＣ１に特異的に結合する抗体」とは、ＭＵＣ１に結合し、ＭＵＣ１の生物学的活性の抑制をもたらす抗体を意味し、「抗－ＭＵＣ１抗体」と混用して使用される。本発明における「抗－ＭＵＣ１抗体」とは、動物抗体（例えば、マウス抗体）、キメラ抗体（例えば、マウス－ヒトキメラ抗体）またはヒト化抗体であってもよく、モノクローナル抗体またはポリクロナール抗体であってもよく、例えば、モノクローナル抗体であってもよい。ポリクロナール抗体（ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）およびモノクローナル抗体（単一クロナール抗体、ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ）をいずれも含む概念であって、好ましくは、モノクローナル抗体であり、無傷の全抗体（ｗｈｏｌｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ）の形態を有することができる。全抗体は、２個の全長の軽鎖および２個の全長の重鎖を有する構造であって、不変領域を含む構造であり、それぞれの軽鎖は、重鎖とジスルフィド結合によって連結している。
本発明による抗－ＭＵＣ１抗体の全抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭおよびＩｇＧ形態を含む概念であって、ＩｇＧは、サブタイプ（ｓｕｂｔｙｐｅ）であって、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む。
無傷のＩｇＧ形態の抗体は、２個の全長（ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ）軽鎖および２個の全長重鎖を有する構造であり、それぞれの軽鎖は、重鎖と二硫化結合によって連結している。抗体の不変領域は、重鎖不変領域と軽鎖不変領域に分けられ、重鎖不変領域は、ガンマ（γ）、ミュー、アルファ（α）、デルタ（δ）およびイプシロン（ε）型を有し、サブクラスとしてガンマ１（γ１）、ガンマ２（γ２）、ガンマ３（γ３）、ガンマ４（γ４）、アルファ１（α１）およびアルファ２（α２）を有する。軽鎖の不変領域は、カッパ（κ）およびラムダ（λ）型を有する。
本発明において、用語「重鎖（ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ）」は、抗原に特異性を付与するため、十分な可変領域配列を有するアミノ酸配列を含む可変領域ドメインＶＨおよび３個の不変領域ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３とヒンジ（ｈｉｎｇｅ）を含む全長重鎖およびその断片をいずれも含むものと解釈される。また、用語「軽鎖（ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ）」は、抗原に特異性を付与するための十分な可変領域配列を有するアミノ酸配列を含む可変領域ドメインＶＬおよび不変領域ドメインＣＬを含む全長軽鎖およびその断片をいずれも含む意味に解釈される。
本発明において、「ＣＤＲ（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ）」は、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の高可変領域（ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ）のアミノ酸配列を意味する。重鎖および軽鎖は、それぞれ３個のＣＤＲを含むことができる（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３およびＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３）。前記ＣＤＲは、抗体が抗原またはエピトープに結合するにあたって主要な接触残基を提供することができる。
なお、用語「特異的に結合」または「特異的に認識」とは、当業者に通常公知されている意味と同様のものであって、抗原および抗体が特異的に相互作用して免疫学的反応をすることを意味する。
本発明による抗－ＭＵＣ１抗体の「抗原結合断片」とは、抗－ＭＵＣ１抗体の抗原、すなわち、ＭＵＣ１と結合しうる機能を保有した断片を意味し、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、およびＦｖなどを含む概念であって、本明細書では、「抗体断片」と同じ意味で混用して使用される。抗原結合断片は、例えば、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’）２であってもよいが、これらに限定されるものではない。前記抗原結合断片のうち、Ｆａｂは、軽鎖および重鎖の可変領域と軽鎖の不変領域および重鎖の第一の不変領域（ＣＨ１）を有する構造として１個の抗原結合部位を有する。Ｆａｂ’は、重鎖ＣＨ１ドメインのＣ－末端に一つ以上のシステイン残基を含むヒンジ領域（ｈｉｎｇｅ ｒｅｇｉｏｎ）を有する点でＦａｂと差がある。Ｆ（ａｂ’）２抗体は、Ｆａｂ’のヒンジ領域のシステイン残基がジスルフィド結合をなしながら生成される。Ｆｖは、重鎖可変部位および軽鎖可変部位のみを有する最小の抗体片であって、Ｆｖ断片を生成する組み換え技術は、当業者に広く公知されている。二本鎖Ｆｖ（ｔｗｏ－ｃｈａｉｎ Ｆｖ）は、非共有結合によって重鎖可変部位と軽鎖可変部位とが結合しており、単鎖Ｆｖ（ｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎ Ｆｖ）は、一般的にペプチドリンカーを介して重鎖の可変領域と軽鎖の可変領域とが共有結合によって連結する、またはＣ－末端で直接結合しており、二本鎖Ｆｖのように、ダイマーのような構造をなすことができる。前記抗原結合断片は、タンパク質加水分解酵素を用いて得られ（例えば、全抗体をパパインで制限切断すればＦａｂが得られ、ペプシンで切断すれば、Ｆ（ａｂ’）２断片が得られる）、遺伝子組み換え技術を用いて作製することができる。
本発明において、用語「ヒンジ領域（ｈｉｎｇｅ ｒｅｇｉｏｎ）」は、抗体の重鎖に含まれている領域であって、ＣＨ１およびＣＨ２領域の間に存在し、抗体内抗原結合部位の柔軟性（ｆｌｅｘｉｂｉｌｉｔｙ）を提供する機能を果たす領域を意味する。
前記抗－ＭＵＣ１抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。モノクローナル抗体は、当業界に周知の方法で製造することができる。例えば、ファージディスプレイ（ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ）法を用いて製造することができる。または、抗－ＭＵＣ１抗体を用いて通常の方法によってマウス由来のモノクローナル抗体として製造することができる。
一方、典型的なＥＬＩＳＡ（Ｅｎｚｙｍｅ－Ｌｉｎｋｅｄ ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ）フォーマットを用いてＭＵＣ１との結合能に基づいて個別のモノクローナル抗体をスクリーニングすることができる。結合体に対して分子的相互作用を検定するための競争的ＥＬＩＳＡ（Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ＥＬＩＳＡ）のような機能性分析またはセル－ベースアッセイ（ｃｅｌｌ－ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙ）のような機能性分析を通じて阻害活性に対して検定することができる。それから強い阻害活性に基づいて選択されたモノクローナル抗体メンバーに対してＭＵＣ１に対するそれぞれの親和性（Ｋｄ ｖａｌｕｅｓ）を検定する。
本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の権利範囲には、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片に含まれた軽鎖および重鎖のＣＤＲ１～ＣＤＲ３のいずれか一つ以上を有し、且つ実施的に同じＭＵＣ１抗原に対する結合能および特異性を有するペプチド（ｐｅｐｔｉｄｅ）およびアプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）も含まれる。
本発明は他の観点において、前記抗－ＭＵＣ１抗体を産生するハイブリドーマに関するものである。本発明は、前記ハイブリドーマが産生する抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を提供する。他の例は、前記ハイブリドーマが産生する抗－ＭＵＣ１抗体の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、またはそれらの組み合わせ）、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、またはそれらの組み合わせ）、またはそれらの組み合わせ；または前記ハイブリドーマが産生する抗－ＭＵＣ１抗体の重鎖可変領域、軽鎖可変領域、またはそれらの組み合わせを含む抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を提供する。
このとき、前記相補性決定領域は、通常のいずれの方法によって決定されてもよく、例えば、ＩＭＧＴの定義（ＩＭＧＴ ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ）または Ｋａｂａｔの定義（Ｋａｂａｔ ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ）によって決定されることができるが、これに制限されるものではない。
本発明において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、ＭＵＣ１－Ｃ末端細胞外ドメインを特異的に認識することによって、ＭＵＣ１－Ｃ 末端細胞外ドメインが正常細胞に比べて高いレベルで発現し、少なく糖化された癌または腫瘍細胞において特異的に作用でき、かつ細胞の一面だけでなく全表面に発現したＭＵＣ１タンパク質を認識／結合させることができる。また、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、ＭＵＣ１タンパク質、特に、ＭＵＣ１－Ｃ末端細胞外ドメインと結合するだけでなく、細胞内に内在化（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）されることによって、ＭＵＣ１媒介の伝達経路(ｐａｔｈｗａｙ)を効果的に阻害して薬理的効果を極大化させることができる。また、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の内在化（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）特性は、抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）として適用される場合に、コンジュゲートした薬物を効果的に細胞内に伝達させることができるという利点を有する。
本発明はまた他の観点において、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ））を含む免疫細胞に関するものであって、より具体的には、ＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ－ＮＫ（ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ）および／またはＣＡＲ－ＭＡ（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）細胞およびこれを含む治療剤に関するものである。前記ＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ－ＮＫ、ＣＡＲ－ＭＡまたはこれに含まれる抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の形態は、ｓｃＦｖが好ましいが、これに限定されるものではない。
本発明はまた他の観点において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片に薬物がコンジュゲートした抗体－薬物複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、ＡＤＣ）に関するものである。
抗体－薬物複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、ＡＤＣ）は、標的癌細胞へ抗癌薬物が伝達される前まで抗癌薬物が抗体に安定的に結合されていなければならない。標的に伝達された薬物は、抗体から遊離し、標的細胞のアポートシスを誘導しなければならない。これのためには、薬物が抗体に安定的に結合すると同時に標的細胞から遊離されるときは、標的細胞のアポートシスを誘導する十分な細胞毒性を有しなければならない。
本発明において、前記抗体－薬物複合体は、本発明が属する技術分野で公然知られた技術によるものであることができる。
本発明において、前記抗体－薬物複合体は、前記抗体またはその抗原結合断片がリンカーを介して薬物と結合されることを特徴とすることができる。
本発明はまた他の観点において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む二重特異性抗体（Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）に関するものである。前記二重特異性抗体は、抗体の２個のアーム（ａｒｍ）のうち、一つのアーム（ａｒｍ）は、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含み、残りの他のアーム（ａｒｍ）は、ＭＵＣ１以外の他の抗原、好ましくは癌関連抗原または免疫チェックポイントタンパク質抗原に特異的な抗体または免疫効能細胞関連抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む形態を意味する。
本発明による二重抗体に含まれる抗－ＭＵＣ１抗体以外の抗体が結合する抗原は、好ましくは癌関連抗原または免疫チェックポイントタンパク質抗原として、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ－Ｒ、ＣＤ－２０、ＭＵＣ１６、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＢＴＬＡ４、ＥｐｈＢ２、Ｅ－セレクチン（ｓｅｌｅｃｔｉｎ）、ＥｐＣａｍ、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＡ、ＥＲＢ３、ｃ－ＭＥＴなどから選択されることができ、免疫効能細胞関連抗原としては、ＴＣＲ／ＣＤ３、ＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩａ）ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６９、ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ８９およびＣＤ１１ｂ／ＣＤ１８（ＣＲ３）などが選択されることができるが、これらに限定されるものではない。
本発明はまた他の観点において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片、前記抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物複合体、二重特異性抗体、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む免疫細胞を含むＭＵＣ１関連疾病の予防および／または治療用薬学的組成物に関するものである。
前記ＭＵＣ１関連疾病は、ＭＵＣ１の発現または過発現、ＭＵＣ１の細胞の全表面に発現し、および／または正常細胞に比べてＭＵＣ１タンパク質の糖化減少と関連した疾病であってもよく、例えば、癌であってもよい。前記正常細胞は非－腫瘍細胞であってもよい。これによって前記ＭＵＣ１関連疾病は、好ましくは癌または腫瘍であるが、これらに限定されるものではない。
用語「癌」または「腫瘍」は、典型的に調節されない細胞成長／増殖を特徴とする哺乳動物の生理学的状態を意味する。
本発明における組成物で治療可能な癌または癌腫は特に限定されず、固形癌および血液癌を全部含む。このような癌の例には、黒色腫などの皮膚癌、肝臓癌、肝細胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肝細胞性癌、胃癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、気管支癌、鼻咽頭癌、喉頭癌、膵臓癌、膀胱癌、大腸癌、結腸癌、 胆嚢癌、子宮頸癌、脳癌、前立腺癌、骨癌、皮膚癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、腎臓癌、食道癌、胆道癌、精巣癌、直腸癌、頭頸部癌、頸椎癌、尿管癌、骨肉腫、神経芽細胞腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、星状細胞腫、神経芽腫、神経膠腫、急性骨髄系白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、成人Ｔ－細胞白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、骨髄異形成、骨髄増殖性障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄形成異常症候群（ＭＤＳ）、ヒト白血病ウイルス－１型（ＨＴＬＶ－１）白血病、肥満細胞症、急性リンパ芽球性白血病、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫または孤立性骨髄腫からなる群より選択されることができるが、これらに限定されるものではない。
より好ましくは、前記癌は、ＭＵＣ１タンパク質が発現されたことを特徴とし、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、肺癌、甲状腺癌、胃癌、卵巣癌、大腸癌、肝臓癌、胆嚢癌、腎臓癌、子宮頸癌、または膀胱癌であってもよいが、これらに制限されるものではない。前記癌は、原発性癌または転移性癌であってもよい。
前記ＭＵＣ１関連疾病は、ＮＡＳＨ（Ｎｏｎ－Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ＳｔｅａｔｏＨｅｐａｔｉｔｉｓ）またはＴＧＦ－β－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅであってもよいが、これに制限されるものではない。本発明の一実施例において、前記癌の予防および／または治療用薬学的組成物、方法および用途において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、単独有効成分として提供されるか、抗癌剤などの細胞毒性物質と併用投与されうるか、或いは抗癌剤などの細胞毒性物質とコンジュゲートした複合体（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ；ＡＤＣ）の形態で提供され得る。
また、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片、およびこれを含む薬学的組成物は、従来の治療剤と併用して使用する用途に用いることができる。すなわち、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片、およびこれを含む薬学的組成物は、従来の抗癌剤などの治療剤と同時に投与するまたは順次に投与する用途に用いることができる。
本発明はまた他の観点において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片または前記抗体－薬物複合体の治療的有効量をＭＵＣ１関連疾病の予防および／または治療を必要とする患者に投与する段階を含む、ＭＵＣ１関連疾病の予防および／または治療方法に関するものである。前記予防および／または治療方法は、前記投与段階以前に前記疾病の予防および／または治療を必要とする患者を確認する段階をさらに含むことができる。
前記組成物において薬物の局所的に伝達するための抗体複合体の使用により、薬物を抗－ＭＵＣ１抗体で標的化された抗原を示す細胞に伝達することができる。
前記薬学的組成物は、薬学的に許容可能な担体をさらに含むことができる。前記薬学的に許容可能な担体は、薬物の製剤化に通常用いられるものとして、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、滑石、ステアリン酸マグネシウム、ミネラルオイルなどからなる群より選択された１種以上であってもよいが、これらに限定されるものではない。前記薬学的組成物はまた、薬学的組成物の製造に通常用いられる希釈剤、賦形剤、潤滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤などからなる群より選択された１種以上をさらに含むことができる。
前記薬学的組成物は、経口または非経口で投与することができる。非経口投与の場合には、静脈内注入、皮下注入、筋肉注入、腹腔注入、内皮投与、鼻内投与、肺内投与、直腸内投与、または病変部位局所投与などで投与することができる。
経口投与時、タンパク質またはペプチドは消化されるため、経口用組成物は活性薬剤をコーティンするか、或いは胃内での分解から保護されるように剤形化することができる。また、前記組成物は、活性物質が標的細胞に移動することができる任意の装置によって投与することができる。
前記薬学的組成物内の抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の含有量または投与量は、製剤化方法、投与方式、患者の年齢、体重、性別、病態、食餌、投与時間、投与間隔、投与経路、排泄速度、および反応感受性などの要因によって多様に処方することができる。例えば、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の１日投与量は、０．００１～１０００ｍｇ／ｋｇ、具体的には０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ、より具体的には０．１～５０ｍｇ／ｋｇ、さらに具体的には０．１～２０ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよいが、これに制限されるものではない。前記１日の投与量は、単位用量の形態で１つの製剤として製剤化するか、適宜に分量して製剤化するか、或いは多用量容器内に内入させて製造され得る。
前記薬学的組成物は、オイルまたは水性媒質中の溶液、懸濁液、シロップ剤または乳化液の形態である、またはエキス剤、散剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、またはカプセル剤などの形態で剤形化することができ、剤形化のための分散剤または安定化剤をさらに含むことができる。
前記薬学的組成物の投与対象患者は、ヒト、サルなどを含む霊長類、マウス、ラットなどを含む齧歯類などを含む哺乳類であってもよい。
本明細書において癌の治療は、癌細胞の増殖阻害、癌細胞アポトーシス、転移抑制などのように癌の症状の悪化を防止したり、緩和する若しくは好転させたり、または癌を部分的に或いは全部消滅させたりする全ての抗癌作用を意味するものであることができる。
前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、ＭＵＣ１タンパク質、特に、ＭＵＣ１－Ｃ－末端細胞外ドメインに特異的に結合するため、これを用いてＭＵＣ１タンパク質またはＭＵＣ１－Ｃ－末端細胞外ドメインを検出または確認することができる。したがって、本発明はまた他の観点において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含むＭＵＣ１タンパク質、例えば、ＭＵＣ１－Ｃ－末端細胞外ドメインの検出用組成物および生物試料に前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を処理する段階を含むＭＵＣ１の検出方法に関するものである。
前記検出方法は、前記処理する段階以後に、抗原－抗体反応の有無を確認する段階をさらに含むことができる。前記検出方法において、抗原－抗体反応が探知される場合、前記生物試料にＭＵＣ１、例えば、ＭＵＣ１－Ｃ－末端細胞外ドメインが存在すると決定（判断）することができる。したがって、前記検出方法は、前記確認する段階以後に、抗原－抗体反応が探知される場合、前記生物試料にＭＵＣ１が存在すると決定する段階をさらに含むことができる。前記生物試料は、哺乳類、例えば、ヒト（例えば、癌患者）から得た（分離された）細胞、組織、体液、それらの培養物などからなる群より選択されたものであることができる。
ＭＵＣ１タンパク質、例えば、ＭＵＣ１タンパク質のＣ－末端部位（またはＭＵＣ１タンパク質のＳＥＡドメインまたはＭＵＣ１－Ｃ－末端細胞外ドメイン）の発現は、いろいろな疾病、例えば、癌と関連しているので、本発明はまた他の観点において、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含むＭＵＣ１タンパク質関連疾病、例えば、癌の検出または診断用組成物および対象から分離された生物試料に前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を処理（投与）する段階を含む、癌の検出或いは診断方法、または検出或いは診断に情報を提供する方法に関するものである。
前記検出または診断方法は、前記処理する段階後に、抗原－抗体反応の有無を確認する段階をさらに含むことができる。前記方法において、抗原－抗体反応が探知される場合、前記生物試料または前記生物試料が由来した患者にＭＵＣ１関連疾病、例えば、癌が存在すると決定（判断）することができる。したがって、前記方法は、前記確認する段階後に、抗原－抗体反応が探知される場合、前記生物試料または前記患者をＭＵＣ１関連疾病患者、例えば、癌患者と決定する段階をさらに含むことができる。前記生物試料は、哺乳類、例えば、ヒト（例えば、癌患者）から得た（分離された）細胞、組織、体液、それらの培養物などからなる群より選択されたものであってもよい。
前記抗原－抗体反応の有無を確認する段階は、当業界に公知された多様な方法により行うことができる。例えば、通常の酵素反応、蛍光、発光および／または放射線検出を通じて測定することができ、具体的には、免疫クロマトグラフィー（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、免疫組織化学染色（Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、酵素結合免疫吸着分析（ｅｎｚｙｍｅ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ：ＥＬＩＳＡ）、放射線免疫測定法（ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＲＩＡ）、酵素免疫分析（ｅｎｚｙｍｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＥＩＡ）、蛍光免疫分析（Ｆｌｏｒｅｓｅｎｃｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＦＩＡ）、発光免疫分析（ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＬＩＡ）、ウエスタンブロッティング（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、マイクロアレイ、免疫沈降分析などからなる群より選択された方法によって測定することができるが、これに制限されるものではない。
このとき、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片は、標識物質をさらに含むことができる。前記標識物質は、放射線同位元素、蛍光物質、クロモゲン（ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ）、染色物質などからなる群より選択された１種以上であることができる。
前記標識物質は、前記抗体または抗原結合断片に通常の方法（例えば、共有結合、配位結合、イオン結合などの化学結合）により結合（連結）されたものであることができる。前記抗体（または抗原結合断片）と標識物質との結合は、本発明が属する技術分野で公然知られた技術によるものであることができる。
本発明はまた他の観点において、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体をコードする核酸に関するものである。本明細書において用いられる核酸は、細胞、細胞溶解液（ｌｙｓａｔｅ）中に存在するか、或いは部分的に精製された形態または実施的に純粋な形態で存在することもできる。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド化（ｂａｎｄｉｎｇ）、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動および当該技術分野に公然知られたその他のものを含む標準技術による他の細胞成分またはその他の汚染物質、例えば、他の細胞の核酸またはタンパク質から精製されて出る場合、「分離」または「実施的に純粋になった」ものである。本発明の核酸は、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡであってもよく、イントロン配列を含んでも含まなくてもよい。本発明はまた他の観点において、前記核酸を含む組み換え発現ベクターに関するものである。本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の発現のために、部分的または全長の軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡを標準分子生物学技術（例えば、ＰＣＲ増幅または目的抗体を発現するハイブリドーマを用いたｃＤＮＡクローニング）により得ることができ、ＤＮＡが転写および翻訳制御配列に「作用するように結合」して発現ベクターに挿入することができる。
本明細書において使用される用語「作動するように結合」とは、ベクター内の転写および翻訳制御配列が抗体遺伝子の転写および翻訳を調節するという意図した機能をするように抗体をコードする遺伝子がベクターにライゲーションされることを意味することができる。
発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現用宿主細胞と適合するように選択される。抗体の軽鎖遺伝子および抗体の重鎖遺伝子は、別個のベクター内に挿入されるか、或いは両遺伝子ともに同じ発現ベクター内に挿入される。
抗体は、標準方法（例えば、抗体遺伝子断片およびベクター上の相補性制限酵素部位のライゲーション、または制限酵素部位が全く存在しない場合、鈍（ｂｌｕｎｔ）端ライゲーション）により発現ベクター内に挿入される。場合によって、前記組み換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードすることができる。抗体鎖遺伝子は、シグナルペプチドがフレームに適合するように抗体鎖遺伝子のアミノ末端に結合するようにベクター内にクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種性シグナルペプチド（すなわち、免疫グロブリンの外、タンパク質由来のシグナルペプチド）であることができる。また、前記組み換え発現ベクターは、宿主細胞において、抗体鎖遺伝子の発現を制御する調節配列を有する。「調節配列」とは、抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を制御するプロモーター、エンハンサーおよびその他の発現制御要素（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことができる。通常の技術者は、形質転換させる宿主細胞の選択、タンパク質の発現レベルなどのような因子によって調節配列を異に選択して、発現ベクターのデザインが変わり得ることを認識することができる。
本発明はまた他の観点において、前記核酸または前記ベクターを含む宿主細胞に関するものである。本発明による宿主細胞は、動物細胞、植物細胞、酵母、原核細胞および昆虫細胞からなる群より選択されることが好ましいが、これらに限定されるものではない。
具体的には、本発明による宿主細胞は、大腸菌、バチルス・サブチリス （Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）、プロテウス・ミラビリス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）またはスタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）のような原核細胞であってもよい。また、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ．）のような真菌、ピキアパストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、シゾサッカロミケス属（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）およびニューロスポラ・クラサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ）のような酵母、その他の下等真核細胞、および昆虫からの細胞のような高等真核生物の細胞のような真核細胞であることができる。
また、植物や哺乳動物に由来することができる。好ましくは、サル腎臓細胞７（ＣＯＳ７：ｍｏｎｋｅｙ ｋｉｄｎｅｙ ｃｅｌｌｓ）細胞、ＮＳＯ細胞、ＳＰ２／０、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ：Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈａｍｓｔｅｒ ｏｖａｒｙ）細胞、Ｗ１３８、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ：ｂａｂｙ ｈａｍｓｔｅｒ ｋｉｄｎｅｙ）細胞、ＭＤＣＫ、骨髄腫細胞株、ＨｕＴ ７８細胞およびＨＥＫ２９３細胞などを用いることが可能であるが、これらに限定されるものではない。特に好ましくは、ＣＨＯ細胞を用いることができる。
前記核酸または前記ベクターは、宿主細胞に形質転換またはトランスフェクション（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）される。「形質転換」または「トランスフェクション」させるために原核または真核宿主細胞内に外因性核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）を導入することに通常用いられる種々の多様な技術、例えば、電気泳動法、リン酸カルシウム沈殿法、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクションまたはリポフェクション（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｏｎ）などを用いることができる。本発明による抗－グリピカン３抗体を発現させるために、多様な発現宿主／ベクターの組み合わせを用いることができる。真核宿主に適した発現ベクターには、これらに限定されるものではないが、ＳＶ４０、牛パピローマウイルス、アデノウイルス、アデノ－随伴ウイルス（ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）、サイトメガロウイルスおよびレトロウイルスに由来する発現調節配列が含まれる。細菌宿主に用いられ得る発現ベクターには、ｐＥＴ、ｐＲＳＥＴ、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＧＥＸ２Ｔ、ｐＵＣベクター、ｃｏｌ Ｅ１、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９およびそれらの誘導体のように大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）から得られる細菌性プラスミド、ＲＰ４のようにより広い宿主範囲を有するプラスミド、λｇｔ１０とλｇｔ１１、ＮＭ９８９といった非常に多様なファージラムダ（ｐｈａｇｅ ｌａｍｂｄａ）誘導体として例示され得るファージＤＮＡ、およびＭ１３とフィラメント性一本鎖ＤＮＡファージのようなその他異なるＤＮＡファージが含まれる。酵母細胞に有用な発現ベクターは、２℃プラスミドおよびその誘導体である。昆虫細胞に有用なベクターはｐＶＬ９４１である。
本発明はまた他の観点において、宿主細胞を培養して、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を発現させる段階を含む、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の製造方法に関するものである。
前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を発現することができる組み換え発現ベクターが哺乳類宿主細胞内に導入される場合、抗体は宿主細胞において抗体が発現するには十分な期間、またはより好ましくは宿主細胞が培養される培養培地内に抗体を分泌させるに十分な期間の間、宿主細胞を培養することによって製造することができる。
場合によって、発現した抗体は、宿主細胞から分離し、均一になるように精製することができる。前記抗体の分離または精製は、通常のタンパク質にて用いられている分離、精製方法、例えば、クロマトグラフィーによって行うことができる。前記クロマトグラフィーは、例えば、プロテインＡカラム、プロテインＧカラムを含む親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーまたは疎水性クロマトグラフィーを含むことができる。前記クロマトグラフィーに加えて、追加でろ過、超ろ過、塩析、透析などを組み合わせることによって、抗体を分離、精製することができる。
【発明の効果】
【0005】
本発明によれば、ＭＵＣ１に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、ＭＵＣ１に対する優れた親和性および結合力を示すため、前記抗体、その抗原結合断片を含む抗体－薬物複合体、二重特異性抗体またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、ＭＵＣ１発現細胞に特異的に結合することによって、薬物を効果的且つ特異的または選択的に伝達することができる。また、抗体ＣＤＲ配列に含まれる一部のアミノ酸残基の置換によって、前記残基が糖化（ｇｌｙｃａｔｉｏｎ）される翻訳語後修飾（Ｐｏｓｔ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）が起こらないため、ｐｒｏｔｅｏｍｅ ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙが減少するので、高純度の抗体または抗原結合断片を製造することができる効果を有する。したがって、本発明による抗－ＭＵＣ１抗体および抗体－薬物複合体は、ＭＵＣ１関連疾病、例えば、癌の治療に有用に適用され得る。
【図面の簡単な説明】
【0006】
【図1】点突然変異が起こらないＰＡｂ００１のｏｒｉｇｉｎａｌ ｆｏｒｍの糖化（ｇｌｙｃａｔｉｏｎ）ピークを確認した結果である。
【図2】ＰＡｂ００１の軽鎖Ｋ３０においてリジンがアルギニンに置換される点突然変異誘発時、糖化(ｇｌｙｃａｔｉｏｎ)ピークを確認した結果である。
【図3】ＰＡｂ００１の軽鎖Ｋ２４およびＫ３０においてリジンがアルギニンに置換される点突然変異誘発時、糖化(ｇｌｙｃａｔｉｏｎ)ピークを確認した結果である。
【図4】ＰＡｂ００１の軽鎖Ｋ３０においてリジンがアルギニンに、軽鎖Ｋ２４のリジンがグリシンに置換される点突然変異誘発時、糖化(ｇｌｙｃａｔｉｏｎ)ピークを確認した結果である。
【図5】点突然変異が起こったＰＡｂ００１の抗原結合能を確認した結果である。
【発明を実施するための形態】
【0007】
以下、本明細書を具体的に説明するために実施例を挙げて詳細に説明する。 ただし、本明細書による実施例は、多様な異なる形態に変形することができ、本明細書の範囲は、以下に詳述する実施例に限定されるものとして解釈されない。本明細書の実施例は、当業界で平均的な知識を有する者に本明細書をより完全に説明するために提供されるものである。
実施例１．抗－ＭＵＣ１抗体変異体のＢＡＣ分析
韓国特許第１０－２１２７４２１号にて作製した抗ＭＵＣ１抗体（ＰＡｂ００１）を用いて、純度に影響を及ぼす糖化(ｇｌｙｃａｔｉｏｎ)を引き起こす残基を確認するために、ＰＡｂ００１のｏｒｉｇｉｎａｌ ｆｏｒｍおよび変異体を対象にＢＡＣ分析を進めた。ＰＡｂ００１の軽鎖ＣＤＲ中、Ｋ２４およびＫ３０の残基をアルギニン（Ｒ）またはグリシン（Ｇ）に置換し、それぞれのサンプルに対して、３回実験を行って確認した。
その結果、図１に示すように、ＰＡｂ００１のｏｒｉｇｉｎａｌ ｆｏｒｍ（ＫＫ）では、ｎｏｎ－ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｆｏｒｍおよびｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｆｏｒｍのピークが全部観察された。しかし、図２～図４に示すように、Ｋ３０がアルギニン（Ｒ）またはグリシン（Ｇ）に置換された場合、糖化(ｇｌｙｃａｔｉｏｎ)ピークが観察されなかった。これはＫ３０のアミノ酸置換によってＰＡｂ００１の糖化(ｇｌｙｃａｔｉｏｎ)が変化されることを示すものである。
実施例２．抗－ＭＵＣ１抗体変異体の抗原結合力の分析
前記ＰＡｂ００１のｏｒｉｇｉｎａｌ ｆｏｒｍおよび前記変異体の抗原結合力を確認した結果、図５に示すように、傾向が類似しており、有意な差がみられなかった。このことはＫ３０の点突然変異誘発によって抗体の抗原結合能には影響を与えなかったことを示すものである。
これを通じて、ＰＡｂ００１の軽鎖Ｋ３０をＲまたはＧに置換する点突然変異誘発時、ＰＡｂ００１の機能的な差異なく前記抗体の糖化（ｇｌｙｃａｔｉｏｎ）が減少し、高純度の抗体を生産することができることがわかる。
これまで本発明に対して、その好ましい実施例を中心に見てみた。本発明が属する技術分野で通常の知識を有する者は、本発明が本発明の本質的な特性から逸脱しない範囲で変形された形態で具現され得ることを理解できるであろう。したがって、開示された実施例は、限定的な観点ではなく説明的な観点から考慮すべきである。本発明の範囲は、前述した説明ではなく請求の範囲に示されており、それと同等の範囲内にある全ての差異点は本発明に含まれるものと解釈されるべきである。
実施例１．抗－ＭＵＣ１抗体変異体のＢＡＣ分析
韓国特許第１０－２１２７４２１号にて作製した抗ＭＵＣ１抗体（ＰＡｂ００１）を用いて、純度に影響を及ぼす糖化(ｇｌｙｃａｔｉｏｎ)を引き起こす残基を確認するために、ＰＡｂ００１のｏｒｉｇｉｎａｌ ｆｏｒｍおよび変異体を対象にＢＡＣ分析を進めた。ＰＡｂ００１の軽鎖ＣＤＲ中、Ｋ２４およびＫ３０の残基をアルギニン（Ｒ）またはグリシン（Ｇ）に置換し、それぞれのサンプルに対して、３回実験を行って確認した。
その結果、図１に示すように、ＰＡｂ００１のｏｒｉｇｉｎａｌ ｆｏｒｍ（ＫＫ）では、ｎｏｎ－ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｆｏｒｍおよびｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｆｏｒｍのピークが全部観察された。しかし、図２～図４に示すように、Ｋ３０がアルギニン（Ｒ）またはグリシン（Ｇ）に置換された場合、糖化(ｇｌｙｃａｔｉｏｎ)ピークが観察されなかった。これはＫ３０のアミノ酸置換によってＰＡｂ００１の糖化(ｇｌｙｃａｔｉｏｎ)が変化されることを示すものである。
実施例２．抗－ＭＵＣ１抗体変異体の抗原結合力の分析
前記ＰＡｂ００１のｏｒｉｇｉｎａｌ ｆｏｒｍおよび前記変異体の抗原結合力を確認した結果、図５に示すように、傾向が類似しており、有意な差がみられなかった。このことはＫ３０の点突然変異誘発によって抗体の抗原結合能には影響を与えなかったことを示すものである。
これを通じて、ＰＡｂ００１の軽鎖Ｋ３０をＲまたはＧに置換する点突然変異誘発時、ＰＡｂ００１の機能的な差異なく前記抗体の糖化（ｇｌｙｃａｔｉｏｎ）が減少し、高純度の抗体を生産することができることがわかる。
これまで本発明に対して、その好ましい実施例を中心に見てみた。本発明が属する技術分野で通常の知識を有する者は、本発明が本発明の本質的な特性から逸脱しない範囲で変形された形態で具現され得ることを理解できるであろう。したがって、開示された実施例は、限定的な観点ではなく説明的な観点から考慮すべきである。本発明の範囲は、前述した説明ではなく請求の範囲に示されており、それと同等の範囲内にある全ての差異点は本発明に含まれるものと解釈されるべきである。
【0008】
本発明の一態様において、本発明は、ＭＵＣ１のＣ－末端細胞外ドメイン内の連続するアミノ酸配列を含むポリペプチドに特異的に結合し、重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２または重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域および；軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２または軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域のうち、一つ以上を含み、前記軽鎖ＣＤＲ配列に含まれるリジン（Ｋ）残基が他のアミノ酸に置換されたことを特徴とする、抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片に対するものである。
一側面において、本発明の前記軽鎖ＣＤＲ配列に含まれるリジン（Ｋ）残基は、軽鎖ＣＤＲのＫ２４またはＫ３０のものである。
他の一側面において、本発明の前記軽鎖ＣＤＲ配列に含まれるリジン（Ｋ）残基は、アルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン酸（Ｄ）またはグルタミン酸（Ｇ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ロイシン（Ｌ）およびイソロイシン（Ｉ）からなる群より選択されるアミノ酸に置換されるものである。
また他の一側面において、本発明の前記重鎖可変領域は、配列番号１の重鎖ＣＤＲ１、配列番号２の重鎖ＣＤＲ２または配列番号３の重鎖ＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５の軽鎖ＣＤＲ２、または配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３を含む。
本発明のまた他の態様において、本発明は前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物複合体に対するものである。
本発明の他の態様において、本発明は前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む二重特異性抗体に対するものである。
本発明の他の態様において、本発明は前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含むキメラ抗原受容体（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＣＡＲ）に対するものである。
本発明の他の態様において、本発明は前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含むキメラ抗原受容体を含む、免疫細胞に対するものである。
本発明の一側面において、前記免疫細胞は、ＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ－ＮＫおよびＣＡＲ－ＭＡの中から選択されるものである。
本発明の他の態様において、本発明は前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物複合体、二重特異性抗体、キメラ抗原受容体およびこれを含む免疫細胞のうち、一つ以上を含む癌の予防または治療用組成物に対するものである。
本発明の一側面において、前記癌は、黒色腫などの皮膚癌、肝臓癌、肝細胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肝細胞性癌、胃癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、気管支癌、鼻咽頭癌、喉頭癌、膵臓癌、膀胱癌、大腸癌、結腸癌、胆嚢癌、子宮頸癌、脳癌、前立腺癌、骨癌、皮膚癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、腎臓癌、食道癌、胆道癌、精巣癌、直腸癌、頭頸部癌、頸椎癌、尿管癌、骨肉腫、神経芽細胞腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、星状細胞腫、神経芽腫、神経膠腫、急性骨髄系白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、成人Ｔ－細胞白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、骨髄異形成、骨髄増殖性障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄形成異常症候群（ＭＤＳ）、ヒト白血病ウイルス－１型（ＨＴＬＶ－１）白血病、肥満細胞症、急性リンパ芽球性白血病、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫または孤立性骨髄腫からなる群より選択されるものである。
本発明の他の態様において、本発明は、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む、癌の診断用組成物に対するものである。
本発明の他の態様において、本発明は前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を含む発現ベクターを宿主細胞で発現させる段階を含む抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の製造方法に対するものである。
一側面において、本発明の前記軽鎖ＣＤＲ配列に含まれるリジン（Ｋ）残基は、軽鎖ＣＤＲのＫ２４またはＫ３０のものである。
他の一側面において、本発明の前記軽鎖ＣＤＲ配列に含まれるリジン（Ｋ）残基は、アルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ）、アスパラギン酸（Ｄ）またはグルタミン酸（Ｇ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、メチオニン（Ｍ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）、ロイシン（Ｌ）およびイソロイシン（Ｉ）からなる群より選択されるアミノ酸に置換されるものである。
また他の一側面において、本発明の前記重鎖可変領域は、配列番号１の重鎖ＣＤＲ１、配列番号２の重鎖ＣＤＲ２または配列番号３の重鎖ＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５の軽鎖ＣＤＲ２、または配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３を含む。
本発明のまた他の態様において、本発明は前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物複合体に対するものである。
本発明の他の態様において、本発明は前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む二重特異性抗体に対するものである。
本発明の他の態様において、本発明は前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含むキメラ抗原受容体（Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＣＡＲ）に対するものである。
本発明の他の態様において、本発明は前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含むキメラ抗原受容体を含む、免疫細胞に対するものである。
本発明の一側面において、前記免疫細胞は、ＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ－ＮＫおよびＣＡＲ－ＭＡの中から選択されるものである。
本発明の他の態様において、本発明は前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む抗体－薬物複合体、二重特異性抗体、キメラ抗原受容体およびこれを含む免疫細胞のうち、一つ以上を含む癌の予防または治療用組成物に対するものである。
本発明の一側面において、前記癌は、黒色腫などの皮膚癌、肝臓癌、肝細胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肝細胞性癌、胃癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、気管支癌、鼻咽頭癌、喉頭癌、膵臓癌、膀胱癌、大腸癌、結腸癌、胆嚢癌、子宮頸癌、脳癌、前立腺癌、骨癌、皮膚癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、腎臓癌、食道癌、胆道癌、精巣癌、直腸癌、頭頸部癌、頸椎癌、尿管癌、骨肉腫、神経芽細胞腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、星状細胞腫、神経芽腫、神経膠腫、急性骨髄系白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、成人Ｔ－細胞白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、骨髄異形成、骨髄増殖性障害、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄形成異常症候群（ＭＤＳ）、ヒト白血病ウイルス－１型（ＨＴＬＶ－１）白血病、肥満細胞症、急性リンパ芽球性白血病、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫または孤立性骨髄腫からなる群より選択されるものである。
本発明の他の態様において、本発明は、前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片を含む、癌の診断用組成物に対するものである。
本発明の他の態様において、本発明は前記抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を含む発現ベクターを宿主細胞で発現させる段階を含む抗－ＭＵＣ１抗体またはその抗原結合断片の製造方法に対するものである。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【配列表】
【国際調査報告】