特表 2024-534178 結核ワクチン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-18

(54)【発明の名称】結核ワクチン

(51)【国際特許分類】

   C07K 19/00 20060101AFI20240910BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20240910BHJP

   C12N 15/86 20060101ALI20240910BHJP

   C12N 15/869 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240910BHJP

   A61P 31/06 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240910BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20240910BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20240910BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240910BHJP

   C07K 14/35 20060101ALN20240910BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00 ZNA

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N5/0783

C12N15/86 Z

C12N15/869 Z

A61P37/04

A61P31/06

A61K35/17

A61K35/76

A61K38/16

A61K48/00

C07K14/35

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024513275

(86)(22)【出願日】2022-08-30

(85)【翻訳文提出日】2024-02-27

(86)【国際出願番号】 US2022075645

(87)【国際公開番号】W WO2023034783

(87)【国際公開日】2023-03-09

(31)【優先権主張番号】63/239,278

(32)【優先日】2021-08-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/392,778

(32)【優先日】2022-07-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521268130

【氏名又は名称】ヴィア・バイオテクノロジー・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】Ｖｉｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｉｎｃ．

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100122301

【弁理士】

【氏名又は名称】冨田 憲史

(74)【代理人】

【識別番号】100170520

【弁理士】

【氏名又は名称】笹倉 真奈美

(74)【代理人】

【識別番号】100221545

【弁理士】

【氏名又は名称】白江 雄介

(72)【発明者】

【氏名】アービン，アン エム

(72)【発明者】

【氏名】ディ イウリオ，ジュリア

(72)【発明者】

【氏名】ダグラス，ジャネット エル

(72)【発明者】

【氏名】マーシャル，エミリー

(72)【発明者】

【氏名】ソリアガ，リー ビー

(72)【発明者】

【氏名】バージン，ハーバート ダブリュー

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA36Y

4B065AA95X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4C084AA01

4C084AA02

4C084AA07

4C084AA13

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA22

4C084BA23

4C084BA41

4C084MA16

4C084MA17

4C084MA22

4C084MA23

4C084MA52

4C084MA55

4C084MA56

4C084MA59

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZB091

4C084ZB092

4C084ZB351

4C084ZB352

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB64

4C087CA12

4C087MA16

4C087MA17

4C087MA22

4C087MA23

4C087MA52

4C087MA55

4C087MA56

4C087MA59

4C087MA66

4C087NA14

4C087ZB09

4C087ZB35

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA11

4H045DA86

4H045EA31

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、結核抗原及び抗原を送達するためのベクターに関する。本開示はまた、それを含む免疫原性組成物、及びそれらの使用に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

融合タンパク質であって、
（ａ）Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、Ｒａ１２、ＴｂＨ９、Ｒａ３５、及びＲｐｆＤ、若しくはそれらの断片、
（ｂ）Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－Ｒａ１２－ＴｂＨ９－Ｒａ３５－ＲｐｆＤ、
（ｃ）配列番号４２に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｄ）配列番号４２に記載のアミノ酸配列、
（ｅ）Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＡ、ＲｐｆＤ、Ｒａ１２、ＴｂＨ９、及びＲａ３５、若しくは
それらの断片、
（ｆ）Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－ＲｐｆＡ－ＲｐｆＤ－Ｒａ１２－ＴｂＨ９－Ｒａ３５、
（ｇ）（ｉ）配列番号９～１０のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号１８～２２のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｈ）（ｉ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｉ）（ｉ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号２２に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｊ）（ｉ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列、
（ｋ）（ｉ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号２２に記載のアミノ酸配列、
（ｌ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｍ）配列番号２８に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｎ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｏ）配列番号３０に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｐ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列、
（ｑ）配列番号２８に記載のアミノ酸配列、
（ｒ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列、
（ｓ）配列番号３０に記載のアミノ酸配列、
（ｔ）Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＡ、ＲｐｆＤ、及びＴｂＨ９、若しくはそれらの断片、
（ｕ）Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－ＲｐｆＡ－ＲｐｆＤ－ＴｂＨ９、
（ｖ）（ｉ）配列番号９～１０のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｗ）（ｉ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｘ）（ｉ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号２４に記載のアミノ酸配列、
（ｙ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｚ）配列番号３２に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ａａ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列、
（ｂｂ）配列番号３２に記載のアミノ酸配列、
（ｃｃ）Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＤ、Ｒａ１２、ＴｂＨ９、及びＲａ３５、若しくはそれらの断片、
（ｄｄ）Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－ＲｐｆＤ－Ｒａ１２－ＴｂＨ９－Ｒａ３５、
（ｅｅ）（ｉ）配列番号１及び１１～１２のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号２又は１３に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｉｉ）配列番号３又は１４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｖ）配列番号４又は１５に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｖ）配列番号６又は１７に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｖｉ）配列番号２３に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｖｉｉ）配列番号８又は２４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｖｉｉｉ）配列番号２５～２６のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｆｆ）配列番号３３に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｇｇ）配列番号３４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｈｈ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号３６に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｊｊ）配列番号３３に記載のアミノ酸配列、
（ｋｋ）配列番号３４に記載のアミノ酸配列、
（ｌｌ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列、
（ｍｍ）配列番号３６に記載のアミノ酸配列、
（ｎｎ）Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＤ、及びＴｂＨ９、若しくはそれらの断片、
（ｏｏ）Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－ＲｐｆＤ－ＴｂＨ９、
（ｐｐ）（ｉ）配列番号１及び１１～１２のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号２又は１３に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｉｉ）配列番号３又は１４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｖ）配列番号４又は１５に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｖ）配列番号６又は１７に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｖｉ）配列番号８又は２４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｑｑ）配列番号３７に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｒｒ）配列番号３８に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｓｓ）配列番号３７に記載のアミノ酸配列、又は
（ｔｔ）配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる、融合タンパク質。

【請求項2】

配列番号４１に記載の核酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有する配列を含む核酸によってコードされる、融合タンパク質。

【請求項3】

配列番号４１に記載の核酸配列を含む核酸によってコードされる、融合タンパク質。

【請求項4】

ポリＨｉｓタグを更に含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項5】

前記ポリＨｉｓタグが、２～６個のＨｉｓ残基を含むか又はそれらからなる、請求項４に記載の融合タンパク質。

【請求項6】

前記ポリＨｉｓタグが、前記融合タンパク質のＮ末端に位置する、請求項１～５のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項7】

前記ポリＨｉｓタグが、最初のＭｅｔ残基の後に挿入される、請求項６に記載の融合タンパク質。

【請求項8】

ＨＡタグを更に含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項9】

前記ＨＡタグが、前記融合タンパク質のＣ末端に位置する、請求項８に記載の融合タンパク質。

【請求項10】

前記融合タンパク質が、Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＡ、ＲｐｆＤ、Ｒａ１２、ＴｂＨ９、及びＲａ３５のうちの１つ以上を接続する１つ以上のリンカーを更に含み、前記１つ以上のリンカーの各々が、１つ以上のアミノ酸残基を含むか、又はそれらからなる、請求項１～９のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項11】

請求項１～１０のいずれか一項に記載の融合タンパク質をコードする、核酸分子。

【請求項12】

請求項１１に記載の核酸分子を含む、ベクター。

【請求項13】

プロモーターを更に含み、プロモーターが、前記融合タンパク質をコードする前記核酸分子に作動可能に連結されている、請求項１２に記載のベクター。

【請求項14】

前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項１２又は１３に記載のベクター。

【請求項15】

前記ウイルスベクターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ベクターである、請求項１４に記載のベクター。

【請求項16】

配列番号４４に記載の核酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有する核酸配列を含む、ベクター。

【請求項17】

配列番号４４に記載の核酸配列を含む、ベクター。

【請求項18】

配列番号４４に記載の核酸配列から本質的になる、ベクター。

【請求項19】

配列番号４４に記載の核酸配列からなる、ベクター。

【請求項20】

前記ウイルスベクターが、ＲｈＣＭＶベクター、ＨＣＭＶベクター、又は組換えＨＣＭＶベクターである、請求項１５～１９のいずれか一項に記載のベクター。

【請求項21】

前記プロモーターが、前記融合タンパク質をコードする前記核酸分子に作動可能に連結されており、前記プロモーターが、ＵＬ７８プロモーター、又はそのオーソログである、請求項１５～２０のいずれか一項に記載のベクター。

【請求項22】

前記融合タンパク質をコードする前記核酸分子が、ＵＬ７８の全部又は一部分を置き換える、請求項２１に記載のベクター。

【請求項23】

前記ベクターが、配列番号４４に記載の核酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有する核酸配列を含む、請求項２２に記載のベクター。

【請求項24】

前記プロモーターが、前記融合タンパク質をコードする前記核酸分子に作動可能に連結されており、前記プロモーターが、ＵＬ８２プロモーター、又はそのオーソログである、請求項１５又は２０に記載のベクター。

【請求項25】

前記融合タンパク質をコードする前記核酸分子が、ＵＬ８２の全部又は一部分を置き換える、請求項２４に記載のベクター。

【請求項26】

前記ＲｈＣＭＶベクター又はＨＣＭＶベクターが、ＵＬ１２８若しくはＵＬ１３０、又はそれらのオーソログを発現しない、請求項１５～２５のいずれか一項に記載のベクター。

【請求項27】

ＴＲ３骨格及び配列番号４２に記載の異種抗原をコードする核酸配列を含む組換えＨＣＭＶベクターであって、
（ａ）前記ベクターが、ＵＬ１２８若しくはＵＬ１３０、又はそれらのオーソログを発現せず、
（ｂ）前記ベクターが、ＵＬ１４６、ＵＬ１４７、ＵＬ１８、及びＵＬ８２、又はそれらのオーソログをコードする核酸配列を含み、
（ｃ）前記異種抗原が、ＵＬ７８の全部又は一部分を置き換え、かつ
ＵＬ７８プロモーターに作動可能に連結されている、組換えＨＣＭＶベクター。

【請求項28】

前記組換えＨＣＭＶベクターが、配列番号４４に記載の核酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有する核酸配列を含む、請求項２７に記載の組換えＨＣＭＶベクター。

【請求項29】

前記ＲｈＣＭＶ又はＨＣＭＶベクターが、（ｉ）ＵＬ１４６をコードする核酸配列及びＵＬ１４７をコードする核酸配列、又はそれらのオーソログを含み、かつ（ｉｉ）ＵＬ１２８若しくはＵＬ１３０、又はそれらのオーソログを発現しない、請求項１５～２８のいずれか一項に記載のベクター。

【請求項30】

前記ベクターが、ＵＬ１２８及びＵＬ１３０をコードする核酸配列における１つ以上の変異の存在からもたらされる、ＵＬ１２８タンパク質又はＵＬ１３０タンパク質を発現しない、請求項２６～２９のいずれか一項に記載のベクター。

【請求項31】

前記ＵＬ１２８及びＵＬ１３０をコードする核酸配列における前記変異が、点変異、フレームシフト変異、切断変異、又はウイルスタンパク質をコードする前記核酸配列の全ての欠失である、請求項３０に記載のベクター。

【請求項32】

前記ベクターが、ＴＲ３骨格を含むＨＣＭＶベクターである、請求項１５～３１のいずれか一項に記載のベクター。

【請求項33】

前記ベクターが、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）認識エレメント（ＭＲＥ）をコードする核酸配列を更に含み、前記ＭＲＥが、内皮細胞において発現されるｍｉＲＮＡの標的部位を含有する、請求項１５～３２のいずれか一項に記載のベクター。

【請求項34】

前記ベクターが、ＭＲＥをコードする核酸配列を更に含み、前記ＭＲＥが、骨髄細胞において発現されるｍｉＲＮＡの標的部位を含有する、請求項１５～３３のいずれか一項に記載のベクター。

【請求項35】

（ｉ）（ａ）請求項１～１０のいずれか一項に記載の融合タンパク質、（ｂ）請求項１１に記載の核酸、又は（ｃ）請求項１２～３４のいずれか一項に記載のベクターと、（ｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。

【請求項36】

（ｉ）（ａ）請求項１～１０のいずれか一項に記載の融合タンパク質、（ｂ）請求項１１に記載の核酸、又は（ｃ）請求項１２～３４のいずれか一項に記載のベクターと、（ｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、免疫原性組成物。

【請求項37】

対象において免疫応答を生成する方法であって、前記対象に、請求項１～３６のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物を投与することを含む、方法。

【請求項38】

対象における免疫応答の生成における使用のための薬剤の製造における、請求項１～３６のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物の使用。

【請求項39】

対象における免疫応答の生成における使用のための、請求項１～３６のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。

【請求項40】

対象における結核を治療又は予防する方法であって、前記対象に、請求項１～３６のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物を投与することを含む、方法。

【請求項41】

対象における結核の治療又は予防における使用のための薬剤の製造における、請求項１～３６のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物の使用。

【請求項42】

対象における結核の治療又は予防における使用のための、請求項１～３６のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。

【請求項43】

対象における結核の治療又は予防における使用のための、請求項１～３６のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、前記対象が、ＣＭＶ陽性である、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。

【請求項44】

対象における結核の治療又は予防における使用のための、請求項１～３６のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、前記対象が、ＣＭＶ陰性である、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。

【請求項45】

対象における結核の治療又は予防における使用のための、請求項１～３６、４３、又は４４のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、前記対象が、インターフェロンγ放出アッセイにおいて陽性の検査結果が出る、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。

【請求項46】

対象における結核の治療又は予防における使用のための、請求項１～３６、４３、又は４４のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、前記対象が、インターフェロンγ放出アッセイにおいて陰性の検査結果が出る、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。

【請求項47】

対象における結核の治療又は予防における使用のための、請求項１～３６又は４３～４６のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、前記対象が、以前にｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎワクチン（ＢＣＧ）を投与されている、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。

【請求項48】

対象における結核の治療又は予防における使用のための、請求項１～３６又は４３～４７のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、前記対象が、ＨＩＶ陽性である、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。

【請求項49】

対象における結核の治療又は予防における使用のための、請求項１～３６又は４３～４８のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、前記対象が、ＨＩＶ陽性であり、現在抗レトロウイルス治療薬を服用している、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。

【請求項50】

対象における結核の治療又は予防における使用のための、請求項１～３６又は４３～４９のいずれか一項に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、前記対象が、第２の療法を投与される、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。

【請求項51】

前記結核が、潜在性結核感染症である、請求項４０～５０のいずれか一項に記載の方法、製造における使用、又は使用。

【請求項52】

前記結核が、肺結核感染症である、請求項４０～５１のいずれか一項に記載の方法、製造における使用、又は使用。

【請求項53】

前記結核が、再発性結核感染症である、請求項４０～５２のいずれか一項に記載の方法、製造における使用、又は使用。

【請求項54】

前記ベクターが、ＣＭＶベクターであり、前記ＣＭＶベクターが、Ｍｔｂ抗原に対するＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘発するのに有効な量で投与される、請求項３７～５３のいずれか一項に記載の方法、製造における使用、又は使用。

【請求項55】

前記組換えＨＣＭＶベクターによって誘発されたＣＤ４＋Ｔ細胞のうちの少なくとも１０％が、ＭＨＣ－ＩＩ又はそのオーソログによって拘束される、請求項５４に記載の方法、製造における使用、又は使用。

【請求項56】

前記組換えＨＣＭＶベクターによって誘発された前記ＣＤ４＋Ｔ細胞のうちの少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％が、ＭＨＣ－ＩＩ又はそのオーソログによって拘束される、請求項５５に記載の方法、製造における使用、又は使用。

【請求項57】

前記ベクターが、ＣＭＶベクターであり、前記ＣＭＶベクターが、Ｍｔｂ抗原に対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発するのに有効な量で投与される、請求項３７～５６のいずれか一項に記載の方法、製造における使用、又は使用。

【請求項58】

前記ＣＭＶベクターによって誘発されたＣＤ８＋Ｔ細胞のうちの少なくとも１０％が、ＭＨＣ－Ｉａ又はそのオーソログによって拘束される、請求項５７に記載の方法、製造における使用、又は使用のためのベクター若しくは組成物。

【請求項59】

前記ＣＭＶベクターによって誘発された前記ＣＤ８＋Ｔ細胞のうちの少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％が、ＭＨＣ－Ｉａ又はそのオーソログによって拘束される、請求項５８に記載の方法、製造における使用、又は使用のためのベクター若しくは組成物。

【請求項60】

ＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体を認識するＣＤ４＋Ｔ細胞を生成する方法であって、前記方法が、
（ａ）ＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体を認識するＣＤ４＋Ｔ細胞のセットを生成するのに有効な量の請求項１５～３４のいずれか一項に記載のＣＭＶベクターを第１の対象に投与することと、
（ｂ）前記ＣＤ４＋Ｔ細胞のセットから第１のＣＤ４＋ＴＣＲを特定することであって、前記第１のＣＤ４＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－ＩＩ／融合タンパク質由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
（ｃ）第２の対象から１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を単離することと、
（ｄ）前記第２の対象から単離された前記１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を発現ベクターでトランスフェクトすることであって、前記発現ベクターが、第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、前記第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、前記第２のＣＤ４＋ＴＣＲが、前記第１のＣＤ４＋ＴＣＲのＣＤＲ３α及びＣＤＲ３βを含み、それによって、ＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、を含む、方法。

【請求項61】

ＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体を認識するＣＤ４＋Ｔ細胞を生成する方法であって、前記方法が、
（ａ）ＣＤ４＋Ｔ細胞のセットから第１のＣＤ４＋ＴＣＲを特定することであって、前記ＣＤ４＋Ｔ細胞のセットが、請求項１５～３４のいずれか一項に記載のＣＭＶベクターを投与された対象から単離され、前記第１のＣＤ４＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－ＩＩ／融合タンパク質由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
（ｂ）第２の対象から１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を単離することと、
（ｃ）前記第２の対象から単離された前記１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を発現ベクターでトランスフェクトすることであって、前記発現ベクターが、第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、前記第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、前記第２のＣＤ４＋ＴＣＲが、前記第１のＣＤ４＋ＴＣＲのＣＤＲ３α及びＣＤＲ３βを含み、それによって、ＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体を認識する１つ以上のＴＣＲトランスジェニックＣＤ４＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、を含む、方法。

【請求項62】

ＭＨＣ－Ｉａ／ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する方法であって、前記方法が、
（ａ）ＭＨＣ－Ｉａ／ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞のセットを生成するのに有効な量の請求項１５～３４のいずれか一項に記載のＣＭＶベクターを第１の対象に投与することと、
（ｂ）前記ＣＤ８＋Ｔ細胞のセットから第１のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－Ｉａ／融合タンパク質由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
（ｃ）第２の対象から１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することと、
（ｄ）前記第２の対象から単離された前記１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を発現ベクターでトランスフェクトすることであって、前記発現ベクターが、第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ３α及びＣＤＲ３βを含み、それによって、ＭＨＣ－Ｉａ／ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、を含む、方法。

【請求項63】

ＭＨＣ－Ｉａ／ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する方法であって、前記方法が、
（ａ）ＣＤ８＋Ｔ細胞のセットから第１のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、前記ＣＤ８＋Ｔ細胞のセットが、請求項１５～３４のいずれか一項に記載のＣＭＶベクターを投与された対象から単離され、前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－Ｉａ／融合タンパク質由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
（ｂ）第２の対象から１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することと、
（ｃ）前記第２の対象から単離された前記１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を発現ベクターでトランスフェクトすることであって、前記発現ベクターが、第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、前記第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ３α及びＣＤＲ３βを含み、それによって、ＭＨＣ－Ｉａ／ペプチド複合体を認識する１つ以上のＴＣＲトランスジェニックＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、を含む、方法。

【請求項64】

前記第１のＣＤ４＋ＴＣＲ又は前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＤＮＡ又はＲＮＡ配列決定によって特定される、請求項６０～６３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

前記第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列又は前記第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列が、前記第１のＣＤ４＋ＴＣＲ又は前記第１のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする前記核酸配列と同一である、請求項６０～６４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項66】

前記第１の対象が、ヒトである、請求項６０～６５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項67】

前記第２の対象が、ヒトである、請求項６０～６６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項68】

請求項６０、６１及び６４～６７のいずれか一項に記載の方法によって生成される、ＣＤ４＋Ｔ細胞。

【請求項69】

対象における疾患を治療又は予防する方法であって、前記方法が、請求項６８に記載のＣＤ４＋Ｔ細胞を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項70】

対象における疾患の治療又は予防における使用のための薬剤の製造における、請求項６８に記載のＣＤ４＋Ｔ細胞の使用。

【請求項71】

対象における疾患の治療又は予防における使用のための、請求項６８に記載のＣＤ４＋Ｔ細胞。

【請求項72】

請求項６２～６７のいずれか一項に記載の方法によって生成されるＣＤ８＋Ｔ細胞。

【請求項73】

対象における疾患を治療又は予防する方法であって、前記方法が、請求項７２に記載のＣＤ８＋Ｔ細胞を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項74】

対象における疾患の治療又は予防における使用のための薬剤の製造における、請求項７２に記載のＣＤ８＋Ｔ細胞の使用。

【請求項75】

対象における疾患の治療又は予防における使用のための、請求項７２に記載のＣＤ８＋Ｔ細胞。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表に関する声明
本出願に関連する配列表は、ハードコピーの代わりにＸＭＬ形式で提供され、参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含有するＸＭＬファイルの名称は、９３０４８５＿４３９ＷＯ＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｘｍｌである。ＸＭＬファイルは、５５８，７７０バイトであり、２０２２年８月２２日に作成され、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。

【背景技術】

【0002】

結核は、依然として世界的に疾患及び死亡の主要な原因であり続けている（Ｓｃｈｉｔｏ，Ｍ ｅｔ ａｌ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｏｎ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ Ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．６１ Ｓｕｐｐｌ ３，Ｓ１０２－１１８（２０１５））。したがって、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染症のための効果的な予防又は治療用ワクチンが依然として必要とされている。

【0003】

サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ベースのワクチンベクターは、伝統的に自然免疫を回避し、反復又は慢性感染を引き起こすことができる病原体に対してさえも、送達された抗原に対する強い免疫応答をもたらすことが見出されている。例えば、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）抗原をコードするように修飾されたアカゲザルサイトメガロウイルス（ＲｈＣＭＶ）の６８－１株は、ＳＩＶチャレンジに対する長期的な防御に関連している（Ｈａｎｓｅｎ，ＳＧ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｅ ｃｌｅａｒａｎｃｅ ｏｆ ｈｉｇｈｌｙ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ＳＩＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ５０２，１００－１０４（２０１３）、Ｈａｎｓｅｎ，ＳＧ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｆｏｕｎｄ ｅａｒｌｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｈｉｇｈｌｙ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ＳＩＶ ｂｙ ａｎ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ－ｃｅｌｌ ｖａｃｃｉｎｅ．Ｎａｔｕｒｅ ４７３，５２３－５２７（２０１１）、Ｈａｎｓｅｎ，ＳＧ ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｈｅｓｕｓ ｍｏｎｋｅｙｓ ｆｒｏｍ ｍｕｃｏｓａｌ ｓｉｍｉａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．１５，２９３－２９９（２００９））。ＣＭＶベクターを用いたその後の研究は、異なる免疫応答が、ＣＭＶ骨格の特定の遺伝的構成要素に応じて誘発され得ることを明らかにした（Ｆｒｕｅｈ，Ｋ ｅｔ ａｌ．，ＣＤ８＋ Ｔ ｃｅｌｌ ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ ｂｙ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ： ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４７，５２－５６（２０１７）、Ｈａｎｓｅｎ，ＳＧ ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ｖｉｏｌａｔｅ ＣＤ８＋Ｔ ｃｅｌｌ ｅｐｉｔｏｐｅ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｐａｒａｄｉｇｍｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４０，１２３７８７４（２０１３））。

【0004】

アカゲザルサイトメガロウイルス（ＲｈＣＭＶ）の６８－１は、従来のＭＨＣ－Ｉの代わりに、ＭＨＣ－ＩＩ及びＭＨＣ－Ｅによって提示されるペプチドを認識するＣＤ８＋Ｔ細胞を誘発することが示されている。この効果は、カニクイザルＣＭＶ（ＣｙＣＭＶ）においても観察されており、ＨＣＭＶ ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６、及びＵＬ１４７のＲｈＣＭＶ及びＣｙＣＭＶホモログの欠失が、ＭＨＣ－Ｅ拘束ＣＤ８＋Ｔ細胞の誘導を可能にすることを実証している（国際出願公開第２０１６／１３０６９３Ａ１号、同第２０１８／０７５５９１Ａ１号）。更に、これらのベクターは、ＭＨＣ－ＩＩ拘束ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘発する。ＭＨＣ－ＩＩ拘束ＣＤ８＋Ｔ細胞の誘導は、これらのベクターの必須ウイルス遺伝子への内皮細胞特異的マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）１２６の標的化部位の挿入によって排除され、ＭＨＣ－Ｅ拘束ＣＤ８＋Ｔ細胞を専ら誘発する「ＭＨＣ－Ｅのみ（ＭＨＣ－Ｅ ｏｎｌｙ）」ベクターをもたらす（国際出願公開第２０１８／０７５５９１Ａ１号）。対照的に、６８－１ ＲｈＣＭＶへの骨髄細胞特異的ｍｉＲ１４２－３ｐの挿入は、ＭＨＣ－Ｅ拘束ＣＤ８＋Ｔ細胞の誘導が妨げられ、ＭＨＣ－ＩＩによって専ら拘束されるＣＤ８＋Ｔ細胞を誘発するベクターをもたらすことが示されている（国際出願公開第２０１７／０８７９２１Ａ１号）。ＵＬ４０ホモログＲｈ６７の欠失はまた、ＭＨＣ－Ｅ拘束ＣＤ８＋Ｔ細胞の誘導を防止し、「ＭＨＣ－ＩＩのみベクター」をもたらすことも示されている（国際出願公開第２０１６／１３０６９３Ａ１号）。したがって、特定の遺伝子欠失を有するようにＣＭＶベクターをデザインすることによって、ＣＭＶを使用して抗原を送達し、それらの抗原に対する免疫応答を「プログラム」することができる。

【発明の概要】

【0005】

Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｍｔｂ）抗原を含む融合タンパク質及びその融合タンパク質をコードする核酸が、本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、本開示は、Ｍｔｂ Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＡ、ＲｐｆＤ、Ｒａ１２、ＴｂＨ９、及びＲａ３５、又はそれらの一部分若しくは断片のうちの１つ以上を含む融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、上記の融合タンパク質をコードするベクターを提供する。

【図面の簡単な説明】

【0006】

【図1】Ｍｔｂ抗原を含む融合タンパク質の例を示す。

【図2】Ｍｔｂ抗原を含む融合タンパク質融合体６、融合体７、及び融合体８を示す。図中の「Ｍ７２」は、Ｍ７２－融合体－２を指す。

【図3】Ｍｔｂ抗原及びＲｐｆＡバリアントのタンパク質保存を要約する。合計４８８４個の株／単離株が、全てのＭｔｂ抗原及びＲｐｆＡバリアントにわたる分析に含まれた。アミノ酸位置ごとのアラインメントされた単離株の数を図に示す。「Ｒｖ０８６７ｃ」として注釈付けされた単離株は、ＲｐｆＡバリアントの分析に含まれた。

【図4】Ｍｔｂ単離株にわたって分布する可変性のＲｐｆＡタンパク質長を示す。丸で囲まれた領域は、切断及び／又は欠失の異なるカテゴリを有する単離株の群を示す。

【図5】完全長ＲｐｆＡバリアントの地理的分布を示す。図４から「完全長タンパク質を有する単離株」と標識された単離株の群に対して分析を実施した。完全長ＲｐｆＡ遺伝子を有する単離株の最大割合を有する上位２０の地理的位置を示す。完全長ＲｐｆＡは、４００アミノ酸よりも長いとして定義された。ｙ軸ラベル「欠落」は、位置情報が不明な単離株を指す。

【図6A】ＵＬ７８又はＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体６を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、６、８、及び１０週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図６Ａ～６Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図６Ｃ～６Ｄ）、ＲｐｆＡ（図６Ｅ～６Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図６Ｇ～６Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図６Ｉ～６Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図６Ｋ～６Ｌ））において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図6B】ＵＬ７８又はＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体６を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、６、８、及び１０週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図６Ａ～６Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図６Ｃ～６Ｄ）、ＲｐｆＡ（図６Ｅ～６Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図６Ｇ～６Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図６Ｉ～６Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図６Ｋ～６Ｌ））において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図6C】ＵＬ７８又はＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体６を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、６、８、及び１０週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図６Ａ～６Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図６Ｃ～６Ｄ）、ＲｐｆＡ（図６Ｅ～６Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図６Ｇ～６Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図６Ｉ～６Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図６Ｋ～６Ｌ））において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図6D】ＵＬ７８又はＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体６を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、６、８、及び１０週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図６Ａ～６Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図６Ｃ～６Ｄ）、ＲｐｆＡ（図６Ｅ～６Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図６Ｇ～６Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図６Ｉ～６Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図６Ｋ～６Ｌ））において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図6E】ＵＬ７８又はＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体６を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、６、８、及び１０週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図６Ａ～６Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図６Ｃ～６Ｄ）、ＲｐｆＡ（図６Ｅ～６Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図６Ｇ～６Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図６Ｉ～６Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図６Ｋ～６Ｌ））において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図6F】ＵＬ７８又はＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体６を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、６、８、及び１０週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図６Ａ～６Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図６Ｃ～６Ｄ）、ＲｐｆＡ（図６Ｅ～６Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図６Ｇ～６Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図６Ｉ～６Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図６Ｋ～６Ｌ））において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図6G】ＵＬ７８又はＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体６を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、６、８、及び１０週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図６Ａ～６Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図６Ｃ～６Ｄ）、ＲｐｆＡ（図６Ｅ～６Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図６Ｇ～６Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図６Ｉ～６Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図６Ｋ～６Ｌ））において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図6H】ＵＬ７８又はＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体６を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、６、８、及び１０週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図６Ａ～６Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図６Ｃ～６Ｄ）、ＲｐｆＡ（図６Ｅ～６Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図６Ｇ～６Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図６Ｉ～６Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図６Ｋ～６Ｌ））において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図6I】ＵＬ７８又はＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体６を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、６、８、及び１０週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図６Ａ～６Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図６Ｃ～６Ｄ）、ＲｐｆＡ（図６Ｅ～６Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図６Ｇ～６Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図６Ｉ～６Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図６Ｋ～６Ｌ））において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図6J】ＵＬ７８又はＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体６を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、６、８、及び１０週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図６Ａ～６Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図６Ｃ～６Ｄ）、ＲｐｆＡ（図６Ｅ～６Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図６Ｇ～６Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図６Ｉ～６Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図６Ｋ～６Ｌ））において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図6K】ＵＬ７８又はＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体６を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、６、８、及び１０週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図６Ａ～６Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図６Ｃ～６Ｄ）、ＲｐｆＡ（図６Ｅ～６Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図６Ｇ～６Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図６Ｉ～６Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図６Ｋ～６Ｌ））において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図6L】ＵＬ７８又はＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体６を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、６、８、及び１０週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図６Ａ～６Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図６Ｃ～６Ｄ）、ＲｐｆＡ（図６Ｅ～６Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図６Ｇ～６Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図６Ｉ～６Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図６Ｋ～６Ｌ））において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図7A】ＵＬ７８若しくはＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体７を、又はＵＬ８２プロモーターの制御下で融合体８を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、及び６週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図７Ａ～７Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図７Ｃ～７Ｄ）、ＲｐｆＡ（図７Ｅ～７Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図７Ｇ～７Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図７Ｉ～７Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図７Ｋ～７Ｌ））及びＭ７２－融合体－２（図７Ｍ～７Ｎにおいて「Ｍ７２」と標識される）において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図7B】ＵＬ７８若しくはＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体７を、又はＵＬ８２プロモーターの制御下で融合体８を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、及び６週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図７Ａ～７Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図７Ｃ～７Ｄ）、ＲｐｆＡ（図７Ｅ～７Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図７Ｇ～７Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図７Ｉ～７Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図７Ｋ～７Ｌ））及びＭ７２－融合体－２（図７Ｍ～７Ｎにおいて「Ｍ７２」と標識される）において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図7C】ＵＬ７８若しくはＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体７を、又はＵＬ８２プロモーターの制御下で融合体８を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、及び６週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図７Ａ～７Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図７Ｃ～７Ｄ）、ＲｐｆＡ（図７Ｅ～７Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図７Ｇ～７Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図７Ｉ～７Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図７Ｋ～７Ｌ））及びＭ７２－融合体－２（図７Ｍ～７Ｎにおいて「Ｍ７２」と標識される）において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図7D】ＵＬ７８若しくはＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体７を、又はＵＬ８２プロモーターの制御下で融合体８を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、及び６週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図７Ａ～７Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図７Ｃ～７Ｄ）、ＲｐｆＡ（図７Ｅ～７Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図７Ｇ～７Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図７Ｉ～７Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図７Ｋ～７Ｌ））及びＭ７２－融合体－２（図７Ｍ～７Ｎにおいて「Ｍ７２」と標識される）において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図7E】ＵＬ７８若しくはＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体７を、又はＵＬ８２プロモーターの制御下で融合体８を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、及び６週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図７Ａ～７Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図７Ｃ～７Ｄ）、ＲｐｆＡ（図７Ｅ～７Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図７Ｇ～７Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図７Ｉ～７Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図７Ｋ～７Ｌ））及びＭ７２－融合体－２（図７Ｍ～７Ｎにおいて「Ｍ７２」と標識される）において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図7F】ＵＬ７８若しくはＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体７を、又はＵＬ８２プロモーターの制御下で融合体８を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、及び６週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図７Ａ～７Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図７Ｃ～７Ｄ）、ＲｐｆＡ（図７Ｅ～７Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図７Ｇ～７Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図７Ｉ～７Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図７Ｋ～７Ｌ））及びＭ７２－融合体－２（図７Ｍ～７Ｎにおいて「Ｍ７２」と標識される）において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図7G】ＵＬ７８若しくはＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体７を、又はＵＬ８２プロモーターの制御下で融合体８を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、及び６週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図７Ａ～７Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図７Ｃ～７Ｄ）、ＲｐｆＡ（図７Ｅ～７Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図７Ｇ～７Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図７Ｉ～７Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図７Ｋ～７Ｌ））及びＭ７２－融合体－２（図７Ｍ～７Ｎにおいて「Ｍ７２」と標識される）において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図7H】ＵＬ７８若しくはＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体７を、又はＵＬ８２プロモーターの制御下で融合体８を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、及び６週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図７Ａ～７Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図７Ｃ～７Ｄ）、ＲｐｆＡ（図７Ｅ～７Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図７Ｇ～７Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図７Ｉ～７Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図７Ｋ～７Ｌ））及びＭ７２－融合体－２（図７Ｍ～７Ｎにおいて「Ｍ７２」と標識される）において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図7I】ＵＬ７８若しくはＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体７を、又はＵＬ８２プロモーターの制御下で融合体８を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、及び６週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図７Ａ～７Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図７Ｃ～７Ｄ）、ＲｐｆＡ（図７Ｅ～７Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図７Ｇ～７Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図７Ｉ～７Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図７Ｋ～７Ｌ））及びＭ７２－融合体－２（図７Ｍ～７Ｎにおいて「Ｍ７２」と標識される）において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図7J】ＵＬ７８若しくはＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体７を、又はＵＬ８２プロモーターの制御下で融合体８を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、及び６週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図７Ａ～７Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図７Ｃ～７Ｄ）、ＲｐｆＡ（図７Ｅ～７Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図７Ｇ～７Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図７Ｉ～７Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図７Ｋ～７Ｌ））及びＭ７２－融合体－２（図７Ｍ～７Ｎにおいて「Ｍ７２」と標識される）において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図7K】ＵＬ７８若しくはＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体７を、又はＵＬ８２プロモーターの制御下で融合体８を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、及び６週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図７Ａ～７Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図７Ｃ～７Ｄ）、ＲｐｆＡ（図７Ｅ～７Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図７Ｇ～７Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図７Ｉ～７Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図７Ｋ～７Ｌ））及びＭ７２－融合体－２（図７Ｍ～７Ｎにおいて「Ｍ７２」と標識される）において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図7L】ＵＬ７８若しくはＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体７を、又はＵＬ８２プロモーターの制御下で融合体８を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、及び６週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図７Ａ～７Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図７Ｃ～７Ｄ）、ＲｐｆＡ（図７Ｅ～７Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図７Ｇ～７Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図７Ｉ～７Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図７Ｋ～７Ｌ））及びＭ７２－融合体－２（図７Ｍ～７Ｎにおいて「Ｍ７２」と標識される）において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図7M】ＵＬ７８若しくはＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体７を、又はＵＬ８２プロモーターの制御下で融合体８を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、及び６週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図７Ａ～７Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図７Ｃ～７Ｄ）、ＲｐｆＡ（図７Ｅ～７Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図７Ｇ～７Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図７Ｉ～７Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図７Ｋ～７Ｌ））及びＭ７２－融合体－２（図７Ｍ～７Ｎにおいて「Ｍ７２」と標識される）において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図7N】ＵＬ７８若しくはＵＬ８２プロモーターのいずれかの制御下で融合体７を、又はＵＬ８２プロモーターの制御下で融合体８を発現するウイルスベクターを投与されたアカゲザルから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）中の（示されるように）「応答」（サイトカイン発現）ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示す。ＰＢＭＣを、投薬の０、２、４、及び６週間後に収集し、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６（Ａｇ５８Ａ（図７Ａ～７Ｂ）、Ｒｖ２６２６（図７Ｃ～７Ｄ）、ＲｐｆＡ（図７Ｅ～７Ｆ）、ＥＳＡＴ６（図７Ｇ～７Ｈ）、Ｒｖ３４０７（図７Ｉ～７Ｊ）、又はＲｐｆＤ（図７Ｋ～７Ｌ））及びＭ７２－融合体－２（図７Ｍ～７Ｎにおいて「Ｍ７２」と標識される）において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。実線は、１０^６ｐｆｕのウイルスベクター用量を示し、点線は、１０^５ｐｆｕのウイルスベクター用量を示す。

【図8】ベクター４（配列番号４４）の潜在的適応症を要約する。「ＴＢ」は結核を指す。「ＮＨＰ」は、非ヒト霊長類を指す。

【図9】青年及び成人における肺結核の予防における使用のためのベクター４（配列番号４４）を評価するための開発計画を示す。

【図10】青年及び成人におけるＭｔｂ感染の予防及び結核再発の予防における使用のためのベクター４（配列番号４４）を評価するための開発計画を示す。

【発明を実施するための形態】

【0007】

Ｉ．用語集
以下のセクションは、結核抗原、及び関連する医薬組成物、並びに抗Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ応答などの免疫応答を誘導する方法、及び結核を治療又は予防する方法の詳細な説明を提供する。本開示をより詳細に説明する前に、本明細書で使用される特定の用語の定義を提供することは、その定義を理解することに役立ち得る。追加の定義は、本開示全体を通して記載されている。

【0008】

文脈が別途必要としている場合を除き、本明細書及び特許請求の範囲全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という文言並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などのその変形は、開放的、包括的な意味で、すなわち、「含むがこれらに限定されない」と解釈されるべきである。「～からなる」とは、本明細書に開示される他の成分の微量要素及び実質的な方法工程を超えるものを除外することを意味し、アミノ酸又は核酸配列の場合、それぞれ、追加のアミノ酸又はヌクレ：オチドを除外することを意味するものとする。「から本質的になる」という用語は、特許請求の範囲を、特定の材料若しくは工程、又は特許請求された発明の基本的な特徴に実質的に影響を与えないものに限定する。例えば、本明細書に定義される構成要素から本質的になる組成物は、単離及び精製方法からの微量汚染物質、並びに薬学的に許容される担体、例えば、リン酸緩衝食塩水、防腐剤などを除外しない。同様に、タンパク質が、該タンパク質の長さの最大２０％に寄与し、かつ、タンパク質の活性に実質的に影響を与えない（例えば、タンパク質の活性を５０％以下変化させる）追加のアミノ酸を含む場合、タンパク質は、本質的に特定のアミノ酸配列からなる。移行用語のそれぞれによって定義される実施形態は、本発明の範囲内である。

【0009】

本発明の記載において、「約」という用語は、別途指示されない限り、示される範囲、値、又は構造の±２０％を意味する。

【0010】

本明細書で使用される「ａ」及び「ａｎ」という用語は、明記されない限り、列挙される構成要素のうちの「１つ以上」を含むと理解されるべきである。選択肢（例えば、「又は」）の使用は、選択肢のうちの１つ、両方、又はそれらの任意の組み合わせのいずれかを意味すると理解されるべきであり、「及び／又は」と同義に使用され得る。本明細書で使用される場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」及び「有する」という用語は、同義に使用され、その用語及び変形は、非限定的なものとして解釈されることが意図される。

【0011】

「実質的に」という文言は、「完全に」を除外するものではない。例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まなくてもよい。必要に応じて、「実質的に」という文言は、本明細書で提供される定義から省略されてもよい。

【0012】

本明細書で使用される場合、「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語、並びにこれらの用語の変形は、例えば、等配性のペプチドの場合など、正常なペプチド結合、又は修飾されたペプチド結合によって互いに結合された少なくとも２つのアミノ酸を含む分子、特に、融合タンパク質を含むペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質をそれぞれ指す。例えば、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、遺伝コードによって定義される２０個のアミノ酸から選択されるアミノ酸で構成されてもよく、通常のペプチド結合によって互いに連結されてもよい（「古典的な」ポリペプチド）。ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、Ｌ－アミノ酸及び／又はＤ－アミノ酸から構成され得る。特に、「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語にはまた、そのペプチドが天然の親ペプチドの生物学的作用（複数可）を模倣又は拮抗することができる、非ペプチド構造エレメントを含有するペプチド類似体として定義される「ペプチド模倣物」も含まれる。ペプチド模倣物は、酵素的に切断しやすいペプチド結合などの古典的なペプチド特性を欠いている。具体的には、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、これらのアミノ酸に加えて、遺伝コードによって定義される２０個のアミノ酸以外のアミノ酸を含み得るか、又は遺伝コードによって定義される２０個のアミノ酸以外のアミノ酸で構成され得る。具体的には、本開示の文脈におけるペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質は、翻訳後成熟プロセスなどの自然プロセスによって、又は当業者に周知の化学プロセスによって修飾されたアミノ酸から等しく構成され得る。そのような修飾は、文献に十分に詳述されている。これらの修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸鎖、又はカルボキシ末端若しくはアミノ末端でさえも、ポリペプチドにおける任意の場所に現れ得る。具体的には、ペプチド又はポリペプチドは、ユビキチン化後に分岐され得るか、又は分岐の有無にかかわらず環状であり得る。この種類の修飾は、当業者に周知の天然又は合成の翻訳後プロセスの結果であり得る。本開示の文脈における「ペプチド」、「ポリペプチド」、又は「タンパク質」という用語には、特に、修飾されたペプチド、ポリペプチド、及びタンパク質も含まれる。例えば、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質修飾には、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、ヌクレオチド若しくはヌクレオチド誘導体の共有結合固定、脂質若しくは脂質誘導体の共有結合固定、ホスファチジルイノシトールの共有結合固定、共有結合若しくは非共有結合の架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、ペグ化を含むグリコシル化、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロセス、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セネロイル化、硫酸化、アルギニル化などのアミノ酸付加、又はユビキチン化が含まれ得る。そのような修飾は、文献に十分に詳述されている（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９３）、Ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｖａｌｅｎｔ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８３）、Ｓｅｉｆｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｎｏｎｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｆａｃｔｏｒｓ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：６２６－４６（１９９０）、及びＲａｔｔａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ： Ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ａｇｉｎｇ，Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ６６３：４８－６２（１９９２））。したがって、「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語には、例えば、リポペプチド、リポタンパク質、糖ペプチド、糖タンパク質などが含まれる。

【0013】

タンパク質の「オーソログ」は、典型的には、アラインメントアルゴリズム、例えば、デフォルトパラメータに設定されたＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）を使用して、特定のタンパク質のアミノ酸配列との完全長アラインメントにわたって計数された７５％超の配列同一性を有することによって特徴付けられる。参照配列と更に大きな類似性を有するタンパク質は、この方法によって評価したときに、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性などの増加した同一性パーセンテージを示す。更に、配列同一性は、本開示のペプチドの特定のドメインの完全長にわたって比較することができる。

【0014】

本明細書で使用される場合、「（ポリ）ペプチド」は、上で説明されたように、ペプチド結合によって連結されたアミノ酸単量体の一本鎖を含む。本明細書で使用される場合、「タンパク質」は、１つ以上、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の（ポリ）ペプチド、すなわち、上で説明されたように、ペプチド結合によって連結されたアミノ酸単量体の１つ以上の鎖を含む。特定の実施形態では、本開示によるタンパク質は、１、２、３、又は４個のポリペプチドを含む。

【0015】

本明細書で使用される場合、「核酸」、「核酸分子」、「核酸配列」、及び「ポリヌクレオチド」という用語は、互換的に使用され、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、又は合成核酸を含むがこれらに限定されないＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含むことが意図されている。核酸は、一本鎖、又は部分的若しくは完全に二本鎖（二重鎖）であり得る。二重鎖核酸は、ホモ二重鎖又はヘテロ二重鎖であり得る。核酸分子は、一本鎖又は二本鎖であり得る。

【0016】

本明細書で使用される場合、「コード配列」という用語は、タンパク質産物のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド分子を指すよう意図されている。コード配列の境界は、概して、通常、ＡＴＧ開始コドンで始まるオープンリーディングフレームによって決定される。

【0017】

本明細書で使用される「発現」という用語は、転写、転写後修飾、翻訳、翻訳後修飾、分泌などを含む、ポリペプチドの産生に関与する任意の工程を指す。

【0018】

本明細書で使用される場合、「配列バリアント」という用語は、参照配列と比較して１つ以上の変化を有する任意の配列を指し、参照配列は、配列表に列挙される配列、すなわち、配列番号１～配列番号４０のうちのいずれかである。したがって、「配列バリアント」という用語は、ヌクレオチド配列バリアント及びアミノ酸配列バリアントを含む。ヌクレオチド配列の文脈における配列バリアントについて、参照配列は、ヌクレオチド配列でもあるが、アミノ酸配列の文脈における配列バリアントについて、参照配列は、アミノ酸配列でもある。本明細書で使用される「配列バリアント」は、参照配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一である。配列同一性は、別途指定されない限り、通常、参照配列の完全長（すなわち、本出願に記載されている配列）に関して計算される。本明細書で言及されるような同一性パーセンテージは、例えば、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ； ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）［Ｂｌｏｓｕｍ６２マトリックス、ギャップオープンペナルティ＝１ １及びギャップ拡張ペナルティ＝１］によって指定された既定パラメータを使用するＢＬＡＳＴなどの、当該技術分野で既知の様々なアラインメント方法を使用して決定され得る。核酸（ヌクレオチド）配列の文脈における「配列バリアント」は、参照配列におけるヌクレオチドのうちの１つ以上が欠失若しくは置換されているか、又は１つ以上のヌクレオチドが参照ヌクレオチド配列の配列に挿入されている、変化された配列を有する。ヌクレオチドは、本明細書では、標準的な１文字の指定（Ａ、Ｃ、Ｇ、又はＴ）によって言及される。遺伝コードの縮重に起因して、ヌクレオチド配列の「配列バリアント」は、それぞれの参照アミノ酸配列、すなわち、アミノ酸「配列バリアント」の変化をもたらし得るか否かのいずれかであり得る。ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列バリアントは、アミノ酸配列バリアントをもたらさないバリアントである（すなわち、サイレント変異）。しかしながら、「非サイレント」変異をもたらすヌクレオチド配列バリアント、特に、参照アミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列をもたらす、そのようなヌクレオチド配列バリアントもまた、その範囲内にある。アミノ酸配列の文脈における「配列バリアント」は、参照アミノ酸配列と比較して、アミノ酸のうちの１つ以上が、欠失、置換、又は挿入される変化された配列を有する。変化の結果、そのような配列バリアントは、参照アミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有する。例えば、参照配列の１００アミノ酸当たり、１０個以下の変化、すなわち、欠失、挿入、又は置換の任意の組み合わせを有するバリアント配列は、参照配列と「少なくとも９０％同一」である。

【0019】

非保存的アミノ酸置換を有することは、可能であるが、ある特定の実施形態では、置換は、保存的アミノ酸置換であり、置換されたアミノ酸は、参照配列における対応するアミノ酸と同様の構造又は化学的特性を有する。例えば、保存的アミノ酸置換には、１つの脂肪族又は疎水性アミノ酸、例えば、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンの別のアミノ酸での置換、１つのヒドロキシル含有アミノ酸、例えば、セリン及びスレオニンの別のアミノ酸での置換、１つの酸性残基、例えば、グルタミン酸又はアスパラギン酸の別のアミノ酸での置換、１つのアミド含有残基、例えば、アスパラギン及びグルタミンの別のアミノ酸での置き換え、１つの芳香族残基、例えば、フェニルアラニン及びチロシンの別のアミノ酸での置き換え、１つの塩基性残基、例えば、リジン、アルギニン、及びヒスチジンの別のアミノ酸での置き換え、１つの小アミノ酸、例えば、アラニン、セリン、スレオニン、メチオニン、及びグリシンの別のアミノ酸での置き換えが含まれる。

【0020】

アミノ酸配列挿入には、１つの残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さのアミノ末端及び／又はカルボキシル末端の融合、並びに単一若しくは複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、アミノ酸配列のＮ末端又はＣ末端へのレポーター分子又は酵素への融合が挙げられる。

【0021】

別段明記されない限り、配列バリアントの変化は、それぞれの参照配列の機能性、例えば、本場合では、本明細書に開示される抗原又はベクターの機能性を消失させない。そのような機能性を消失させることなく、どのヌクレオチド及びアミノ酸残基が、それぞれ、置換、挿入、又は欠失され得るかを決定する際のガイダンスは、当該技術分野で周知のコンピュータプログラムを使用することによって見出され得る。

【0022】

本開示のヌクレオチド配列は、コドン最適化され得、例えば、コドンは、ヒト細胞での使用のために最適化され得る。例えば、任意のウイルス又は細菌配列がそのように変化され得る。ＨＩＶ及び他のレンチウイルスを含む多くのウイルスは、多数の希少コドンを使用しており、Ａｎｄｒｅ，Ｓ ｅｔ ａｌ．（Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｌｉｃｉｔｅｄ ｂｙ ＤＮＡ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｇｐ１２０ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗｉｔｈ Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ Ｃｏｄｏｎ Ｕｓａｇｅ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ．７２，１４９７－１５０３（１９９８））に記載のように、これらのコドンを変化させて所望の対象において一般的に使用されるコドンに対応させることによって、抗原の発現の増強が達成される場合がある。

【0023】

本明細書で使用される場合、指定された核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質「に由来する」核酸配列又はアミノ酸配列は、核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質の起源を指す。いくつかの実施形態では、特定の配列に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、それが由来するその配列又はその一部分に本質的に同一であるアミノ酸配列を有し、それによって「本質的に同一」には、上で定義される配列バリアントが含まれる。ある特定の実施形態では、特定のペプチド又はタンパク質に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、特定のペプチド又はタンパク質における対応するドメインに由来する。それによって、「対応する」は、特に、同じ機能性を指す。例えば、「細胞外ドメイン」は、（別のタンパク質の）別の「細胞外ドメイン」に対応するか、又は「膜貫通ドメイン」は、（別のタンパク質の）別の「膜貫通ドメイン」に対応する。したがって、ペプチド、タンパク質、及び核酸の「対応する」部分は、当業者には識別可能である。同様に、他の配列「に由来する」配列は、通常、その配列においてその起源を有するものとして当業者には特定可能である。

【0024】

いくつかの実施形態では、別の核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、（それが由来する）出発核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質と同一であり得る。しかしながら、別の核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に由来する核酸配列又はアミノ酸配列はまた、（それが由来する）出発核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に対して１つ以上の変異を有し得、特に、別の核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、（それが由来する）出発核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質の上記の機能的配列バリアントであり得る。例えば、ペプチド／タンパク質において、１つ以上のアミノ酸残基が他のアミノ酸残基で置換され得るか、又は１つ以上のアミノ酸残基の挿入若しくは欠失が生じ得る。

【0025】

本明細書で使用される場合、「変異」という用語は、参照配列、例えば、対応するゲノム配列と比較した核酸配列及び／又はアミノ酸配列における変化に関する。変異は、例えば、ゲノム配列と比較して、例えば、（天然に生じる）体細胞変異、自然発生変異、例えば、酵素、化学物質、若しくは放射線によって誘導される誘導変異、又は部位指向性変異誘発（核酸配列及び／又はアミノ酸配列において特異的かつ意図的な変化を行うための分子生物学的方法）によって得られる変異であり得る。したがって、「変異」又は「変異させること」という用語は、例えば、核酸配列又はアミノ酸配列において、物理的に変異を行うことも含むと理解される必要がある。変異は、１つ以上のヌクレオチド又はアミノ酸の置換、欠失、及び挿入、並びにいくつかの連続したヌクレオチド又はアミノ酸の逆位を含む。コード配列変異のいくつかの種類には、点変異（個々のヌクレオチド又はアミノ酸の差異）、サイレント変異（アミノ酸変化をもたらさないヌクレオチドの差異）、欠失（１つ以上のヌクレオチド又はアミノ酸を失う差異、最大で遺伝子のコード配列全体の欠失を含む）、フレームシフト変異（３によって割ることができない多くのヌクレオチドの欠失がアミノ酸配列の変化をもたらす差異）が含まれる。アミノ酸の差異をもたらす変異は、アミノ酸置換変異とも呼ばれ得る。アミノ酸置換変異は、アミノ酸配列中の特定の位置における野生型に対するアミノ酸変化によって説明され得る。アミノ酸配列における変異を達成するために、変異は、（組換え）変異型ポリペプチドを発現するために、当該アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に導入され得る。変異は、例えば、１つのアミノ酸をコードする核酸分子のコドンを変化させ、例えば、部位指向性変異誘発し、異なるアミノ酸をコードするコドンをもたらすことによって、又は配列バリアントを合成することによって、例えば、ポリペプチドをコードする核酸分子のヌクレオチド配列を知り、核酸分子の１つ以上のヌクレオチドを変異させる必要なしに、ポリペプチドのバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子の合成をデザインすることによって、達成され得る。

【0026】

「組換え」という用語は、本明細書で使用される場合（例えば、組換えタンパク質、組換え核酸、組換え抗体など）、組換え手段によって調製、発現、作製、又は単離され、天然に生じない任意の分子（タンパク質、核酸、抗体など）を指す。核酸又はポリペプチドに関して、「組換え」は、天然に生じない配列を有するものか、又はそうでなければ２つ以上の分離された配列のセグメントの人工的な組み合わせによって作製された配列、例えば、異種抗原を含むＣＭＶベクターを有するものを指す。この人工的な組み合わせは、多くの場合、化学合成によって達成され、又はより一般的には、単離された核酸セグメントの人工的な操作、例えば、遺伝子工学技術によって達成される。組換えポリペプチドは、ポリペプチドの天然供給源ではない宿主生物に転写される組換え核酸（例えば、異種抗原を含むＣＭＶベクターを形成するポリペプチドをコードする核酸）を含む組換え核酸を使用して作製されたポリペプチドも指し得る。

【0027】

本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、特定の配列の核酸分子が組み込まれ、次いで、宿主細胞に導入され、それによって形質転換された宿主細胞を産生し得る担体を指す。ベクターは、宿主細胞においてその複製を可能にする核酸配列、例えば、複製起点を含み得る。ベクターはまた、１つ以上の選択可能なマーカー遺伝子、及び核酸発現を指示するプロモーターエレメントを含む当該技術分野で既知の他の遺伝子エレメントを含み得る。ベクターは、ＣＭＶベクターなどのウイルスベクターであり得る。ウイルスベクターは、野生型ウイルス又は複製欠損ウイルスを含む減弱ウイルスから構築され得る。

【0028】

「作動可能に連結された」という用語が本明細書で使用される場合、第１の核酸配列が第２の核酸配列に影響を及ぼすような様式で配置される場合、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に連結される。作動可能に連結されたＤＮＡ配列は、連続であり得、又は離れて作動し得る。

【0029】

本明細書で使用される場合、「プロモーター」という用語は、核酸の転写を指示する多くの核酸制御配列のうちのいずれかを指し得る。典型的には、真核生物プロモーターは、ポリメラーゼＩＩ型プロモーターの場合などの転写の開始部位近くに必要な核酸配列、ＴＡＴＡエレメント、又は１つ以上の転写因子によって認識される任意の他の特異的ＤＮＡ配列が含まれる。プロモーターによる発現は、エンハンサー又はリプレッサーエレメントによって更に調節され得る。プロモーターの多数の例が利用可能であり、当業者に周知である。特定のポリペプチドをコードする核酸配列と作動可能に連結されたプロモーターを含む核酸は、発現ベクターと称され得る。プロモーターは、ＵＬ８２及びＵＬ７８を含むが、これらに限定されないＣＭＶ遺伝子由来であり得る。

【0030】

本明細書中で使用される場合、「細胞」、「細胞株」、及び「細胞培養物」という用語は、互換的に使用され、全てのそのような指定には、子孫が含まれる。したがって、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」という文言は、移入の数に関係なく、それが由来する初代対象細胞及び培養物を含む。また、全ての子孫は、故意又は不注意の変異により、ＤＮＡの内容において正確に同一ではない場合があることを理解されたい。元の形質転換された細胞においてスクリーニングされたものと同じ機能又は生物学的活性を有するバリアント子孫が含まれる。別個の指定が意図される場合、文脈から明らかであろう。

【0031】

本明細書で使用される場合、「マイクロＲＮＡ」という用語は、遺伝子発現の制御に関与する生体分子の主要なクラスを指す。例えば、ヒトの心臓、肝臓、又は脳において、ｍｉＲＮＡは、組織の特定又は細胞系列の決定において役割を果たす。更に、ｍｉＲＮＡは、早期発達、細胞増殖、及び細胞死、並びにアポトーシス及び脂肪代謝を含む様々なプロセスに影響を与える。多数のｍｉＲＮＡ遺伝子、多様な発現パターン、及び潜在的なｍｉＲＮＡ標的が豊富であることは、ｍｉＲＮＡが遺伝的多様性の重要な供給源であり得ることを示唆している。成熟ｍｉＲＮＡは、典型的には、ｍｉＲＮＡに相補的な配列を含むｍＲＮＡの発現を調節する８～２５ヌクレオチドの非コードＲＮＡである。これらの小さなＲＮＡ分子は、ｍＲＮＡの安定性及び／又は翻訳を調節することによって遺伝子発現を制御することが既知である。例えば、ｍｉＲＮＡは、標的ｍＲＮＡの３’ＵＴＲに結合し、翻訳を抑制する。ｍｉＲＮＡはまた、標的ｍＲＮＡに結合し、ＲＮＡｉ経路を介して遺伝子サイレンシングを媒介し得る。ｍｉＲＮＡはまた、クロマチン凝縮を引き起こすことによって遺伝子発現を調節し得る。

【0032】

ｍｉＲＮＡは、ｍＲＮＡ転写産物上のどこかでｍｉＲＮＡと直接塩基対を形成してｍｉＲＮＡと相互作用する任意の配列として定義されるｍｉＲＮＡ認識エレメント（ＭＲＥ）に結合することによって、１つ以上の特異的ｍＲＮＡ分子の翻訳をサイレンシングする。ＭＲＥは、多くの場合、ｍＲＮＡの３’非翻訳領域（ＵＴＲ）に存在するが、ＭＲＥは、コード配列又は５’ＵＴＲにも存在し得る。ＭＲＥは、必ずしもｍｉＲＮＡに対して完全な相補体ではなく、通常、ｍｉＲＮＡに対して相補性であるいくつかの塩基のみしか有さず、多くの場合、それらの相補性の塩基内に１つ以上のミスマッチを含む。ＭＲＥは、ＭＲＥが作動可能に連結されている遺伝子（インビボでの増殖に必須であるか又はそれを増強するＣＭＶ遺伝子など）の翻訳がＲＩＳＣなどのｍｉＲＮＡサイレンシング機序によって抑制されるように、ｍｉＲＮＡによって十分に結合可能な任意の配列であり得る。

【0033】

本明細書で使用される「ワクチン」という用語は、典型的には、少なくとも１つの抗原又は免疫原を提供する予防的又は治療的材料であると理解される。抗原又は免疫原は、ワクチン接種に好適な任意の材料に由来し得る。例えば、抗原又は免疫原は、細菌又はウイルス粒子などの病原体、又は腫瘍若しくはがん性組織に由来し得る。抗原又は免疫原は、身体の適応免疫系を刺激して、適応免疫応答を提供する。特に、「抗原」又は「免疫原」は、典型的には、免疫系（例えば、適応免疫系）によって認識され得、例えば、適応免疫応答の一部分としての抗体及び／又は抗原特異的Ｔ細胞の形成によって、抗原特異的免疫応答を誘発することができる物質を指す。典型的には、抗原は、ＭＨＣによってＴ細胞に提示され得るペプチド又はタンパク質であり得るか、又はそれらを含み得る。ワクチンは、予防的又は治療的に使用することができる。したがって、ワクチンは、疾患（腫瘍若しくは病的感染症など）を発症する可能性を低減するか、又は疾患若しくは状態の症状の重症度を低減するか、又は疾患若しくは状態（腫瘍若しくは病的感染症など）の進行を制限するか、又は疾患若しくは状態（腫瘍など）の再発を制限するために使用することができる。特定の実施形態では、ワクチンは、異種抗原を発現する複製欠損ＣＭＶを含む。特定の実施形態では、ワクチンは、Ｍｔｂ抗原を含む融合タンパク質を発現する複製欠損ＣＭＶを含む。本明細書で使用される場合、「抗原」又は「免疫原」という用語は、対象における免疫応答を誘導することができる物質、典型的にはタンパク質を指すために互換的に使用される。この用語はまた、対象に投与したときに（対象に、直接投与するか、又はタンパク質をコードするヌクレオチド配列若しくはベクターを対象に投与することによるいずれか）、タンパク質がタンパク質に対して指向される体液性及び／又は細胞性免疫応答を誘発することができるという意味で、免疫学的に活性であるタンパク質を指す。

【0034】

本明細書で使用される場合、「異種」又は「外因性」の核酸分子、構築物、又は配列は、文脈に応じて、第２の核酸分子又は宿主細胞に対して天然ではないが、第２の核酸分子又は宿主細胞の核酸分子又は一部分に相同であり得る核酸分子又は核酸分子の一部分を指す。異種又は外因性核酸分子、構築物、又は配列の供給源は、異なる属若しくは種に由来し得るか、又は合成であり得る。特定の実施形態では、異種又は外因性核酸分子は、例えば、コンジュゲーション、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーションなどによって宿主細胞又は宿主ゲノムに添加され（すなわち、内因性又は天然ではない）、添加された分子は、宿主ゲノムに組み込まれてもよく、又は染色体外の遺伝物質として（例えば、プラスミド又は他の形態の自己複製ベクターとして）存在してもよく、複数のコピーで存在してもよい。更に、「異種」という用語は、第２の核酸分子又は宿主細胞が相同タンパク質又は活性をコードする場合でさえ、第２の核酸分子又は宿主細胞に導入される外因性核酸分子によってコードされる非天然酵素、タンパク質、又は他の活性を含む。

【0035】

本明細書で使用される場合、「異種抗原」という用語は、それが挿入されるベクターに由来しない任意のタンパク質又はその断片を指す。例えば、いくつかの実施形態では、「異種抗原」は、ＣＭＶに由来しない任意のタンパク質又はその断片である。異種抗原は、病原体特異的抗原、腫瘍ウイルス抗原、腫瘍抗原、宿主自己抗原、又は任意の他の抗原であり得る。

【0036】

本明細書で使用される場合、「抗原特異的Ｔ細胞」とは、特定の抗原を認識するＣＤ８＋又はＣＤ４＋リンパ球を指す。一般に、抗原特異的Ｔ細胞は、ＭＨＣ分子によって提示される特定の抗原に特異的に結合するが、同じＭＨＣによって提示される他の抗原には特異的に結合しない。

【0037】

本明細書で使用される場合、「免疫原性ペプチド」とは、ペプチドがＭＨＣ分子に結合して、細胞傷害性Ｔリンパ球（「ＣＴＬ」）応答又は免疫原性ペプチドが由来する抗原に対するＢ細胞応答（例えば、抗体産生）を誘導するような対立遺伝子特異的モチーフ又はＮ末端反復などの他の配列を含むペプチドを指す。いくつかの実施形態では、免疫原性ペプチドは、配列モチーフ、又はニューラルネット若しくは多項式決定などの当該技術分野で既知の他の方法を使用して特定される。典型的には、特定の親和性で結合する高い可能性を与えるスコアを有し、かつ、免疫原性であるペプチドを選択するためのペプチドの「結合閾値」を決定するために、アルゴリズムが使用される。アルゴリズムは、特定の位置での特定のアミノ酸のＭＨＣ結合に対する効果、特定の位置での特定のアミノ酸の抗体結合に対する効果、又はモチーフ含有ペプチド中の特定の置換の結合に対する効果のいずれかに基づく。免疫原性ペプチドの関連内で、「保存された残基」は、ランダム分布によって予想されるよりも有意に高い頻度で、ペプチド中の特定の位置に現れる残基である。いくつかの実施形態では、保存された残基は、ＭＨＣ構造が免疫原性ペプチドとの接触点を提供し得る残基である。

【0038】

本明細書で使用される場合、「投与」という用語は、任意の有効な経路により、有効量の抗原を含む組成物又は外因性抗原を含む医薬組成物などの薬剤を対象に提供又は与えることを意味する。例示的な投与経路には、注射（例えば、皮下、筋肉内、皮内、腹腔内、及び静脈内）、経口、舌下、直腸、経皮、鼻腔内、膣、及び吸入経路が含まれるが、これらに限定されない。

【0039】

本明細書で使用される場合、使用の「薬学的に許容される担体」は、従来のものである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５は、本明細書に開示される組成物の薬学的送達に好適な組成物及び製剤を記載している。一般に、担体の性質は、使用される特定の投与様式に依存する。例えば、非経口製剤は、通常、ビヒクルとして、水、生理食塩水、平衡塩溶液、水性デキストロース、グリセロールなどの薬学的及び生理学的に許容される流体を含む、注射可能な流体を含む。固体組成物（散剤、丸剤、錠剤、又はカプセル形態など）のために、従来の非毒性固体担体は、例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、又はステアリン酸マグネシウムを含み得る。生物学的に中性の担体に加えて、投与される医薬組成物は、少量の非毒性補助物質、例えば、湿潤剤又は乳化剤、防腐剤、及びｐＨ緩衝剤など、例えば、酢酸ナトリウム又はソルビタンモノラウレートを含み得る。

【0040】

用量は、多くの場合、体重に関連して表される。したがって、［ｇ、ｍｇ、又は他の単位］／ｋｇ（又はｇ、ｍｇなど）として表される用量は、通常、「体重」という用語が明示的に言及されていなくても、「ｋｇ（又はｇ、ｍｇなど）体重当たり」の［ｇ、ｍｇ、又は他の単位］を指す。

【0041】

本明細書で使用される「疾患」という用語は、概して、「障害」及び「状態」（医学的状態として）という用語と同義であることが意図され、互換的に使用され、つまり、全てが、正常な機能を損なうヒト及び動物の身体、又はその部分のうちの１つの異常な状態を反映しており、典型的には、特徴的な徴候及び症状によって明らかにされ、ヒト又は動物の生活の期間又は質の低減を引き起こす。

【0042】

本明細書で使用される場合、「結核」は、概して、通常、肺に感染するＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって引き起こされる疾患を意味する。しかしながら、Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉなどの他の「非定型」マイコバクテリアは、疾患の同様の臨床的及び病理学的外観を産生する可能性がある。Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの伝播は、換気の悪い閉鎖された領域で空気感染経路によって生じる。症例の９０％超において、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの感染の後、免疫系は、多くの場合、活動性結核と呼ばれるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓからの疾患の発症を予防する。しかしながら、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの全てが殺されるわけではなく、したがって、小さな硬いカプセルが形成される。「一次結核」は、通常は小児を中心に初期感染後に発症する疾患とみなされている。感染症の初期の病巣は、肉芽腫性肺門リンパ節感染症を伴う小さな胸膜下肉芽腫である。まとめると、これらが、Ｇｈｏｎ複合体を構成する。ほぼ全ての場合では、これらの肉芽腫は、解消し、感染の更なる拡大はない。「二次結核」は、主に成人において、特に、健康状態が低下した場合に、以前の感染（又は再感染）の再活性化として見られる。肉芽腫性炎症は、はるかに派手で広範囲に広がる。典型的には、上肺葉が、最も影響を受け、キャビテーションが生じる場合がある。肺の外側への結核の拡散は、骨格結核、生殖器結核、尿路結核、中枢神経系（ＣＮＳ）結核、胃腸結核、副腎結核、瘰癧、及び心臓結核を含む特徴的なパターンを伴う多くの珍しい所見の出現をもたらす場合がある。「潜在性」結核は、ツベルクリン皮膚検査（ＴＳＴ）などであるがこれらに限定されない診断アッセイによって検出することができ、感染がその個体において症状を生じない、個体におけるＭｔｂ感染症である。「活動性」結核は、対象における症候性Ｍｔｂ感染症である。顕微鏡的には、ＴＢ感染で産生される炎症は、肉芽腫性であり、リンパ球、形質細胞、おそらくいくつかの多形核細胞、コラーゲンを有する線維芽細胞、及び中心に特徴的なチーズ状壊死とともに上皮様マクロファージ及びラングハンス巨細胞を有する。炎症応答は、ＩＶ型過敏症性反応によって媒介され、皮膚検査は、この反応に基づいている。いくつかの例では、結核は、皮膚検査、抗酸染色、オーラミン染色、又はそれらの組み合わせによって診断され得る。スクリーニングされる最も一般的な検体は、痰であるが、組織学的染色はまた、組織又は他の体液上で実施され得る。「肺」結核は、肺実質及び／又は気管気管支樹を含む、肺を含む任意の結核の細菌学的に確認されたか、又は臨床的に診断された症例を指す。「肺外」結核は、胸膜、リンパ節、腹部、尿生殖路、皮膚、関節、骨、及び／又は髄膜を含むがこれらに限定されない、肺以外の臓器を含む任意の結核の細菌学的に確認されたか、又は臨床的に診断された症例を指す。

【0043】

本明細書で使用される場合、「再発性」結核は、内因性の一次Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染症の再活性化、又はＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによる最近の外因性再感染症を指す。再発性結核はまた、一次感染の後、何年もして生じる可能性のある「一次後結核」を指す。

【0044】

本明細書で使用される場合、「補助」は、一次治療とともに使用される治療を指し、補助治療の目的は、一次治療を支援することである。

【0045】

ＩＩ．結核抗原
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｍｔｂ）抗原を含む融合タンパク質及びそれをコードする核酸が、本明細書に開示される。

【0046】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ｍｔｂ Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＡ、ＲｐｆＤ、Ｒａ１２、ＴｂＨ９、及びＲａ３５、又はそれらの一部分若しくは断片のうちの１つ以上を含む融合タンパク質を提供する。

【0047】

Ａｇ８５Ａは、Ａｇ８５Ｂ及びＡｇ８５Ｃと複合体を形成するＭｔｂアセチルトランスフェラーゼ酵素であり、マイコバクテリア細胞エンベロープの成分の合成に関与する（例えば、Ｅｌａｍｉｎ，ＡＡ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ａｇ８５Ａ ｉｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｌｉｐｉｄ ｂｏｄｙ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ８１，１５７７－１５９２（２０１１）を参照されたい）。本明細書で使用される場合、「Ａｇ８５Ａ」は、文脈に応じて、酵素、又はＡｇ８５Ａタンパク質若しくはペプチドをコードするアミノ酸配列、又はそれらの一部分を指し得る。いくつかの実施形態では、Ａｇ８５Ａは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ９ＷＱＰ３（Ａ８５Ａ＿ＭＹＣＴＵ）（配列番号１）に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ａｇ８５Ａは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の断片を指す。いくつかの実施形態では、Ａｇ８５Ａは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ａｇ８５Ａは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ａｇ８５Ａは、配列番号１に記載のアミノ酸配列又はその断片に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ａｇ８５Ａは、配列番号１１に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ａｇ８５Ａは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。

【0048】

ＥＳＡＴ－６は、病原性毒性及び宿主免疫応答の調節に関連する分泌型Ｍｔｂタンパク質である（Ｓｒｅｅｊｉｔ，Ｇ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ＥＳＡＴ－６ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ｉｎｔｅｒａｃｔｓ ｗｉｔｈ Ｂｅｔａ－２－Ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ（β２Ｍ）Ａｆｆｅｃｔｉｎｇ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ．ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ １０，ｅ１００４４４６（２０１４））。本明細書で使用される場合、「ＥＳＡＴ－６」は、文脈に応じて、タンパク質若しくはペプチド、又はＥＳＡＴ－６タンパク質若しくはペプチドをコードするアミノ酸配列、又はそれらの一部分を指し得る。いくつかの実施形態では、ＥＳＡＴ－６は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ９ＷＮＫ７（ＥＳＸＡ＿ＭＹＣＴＵ）（配列番号２）に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、ＥＳＡＴ－６は、配列番号２に記載のアミノ酸配列の断片を指す。いくつかの実施形態では、ＥＳＡＴ－６は、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、ＥＳＡＴ－６は、配列番号２に記載のアミノ酸配列又はその断片に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、ＥＳＡＴ－６は、配列番号１３に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。

【0049】

Ｒｖ３４０７は、Ｍｔｂ抗原である（Ｍｏｌｌｅｎｋｏｐｆ，ＨＪ ｅｔ ａｌ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ｔｏ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ： Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ ＢＣＧ Ｐｒｉｍｅ－Ｒｖ３４０７ ＤＮＡ Ｂｏｏｓｔ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ７２，６４７１－６４７９（２００４））。本明細書で使用される場合、「Ｒｖ３４０７」は、文脈に応じて、抗原性タンパク質若しくはペプチド、又はＲｖ３４０７タンパク質若しくはペプチドをコードするアミノ酸配列、又はそれらの一部分を指し得る。いくつかの実施形態では、Ｒｖ３４０７は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ９ＷＦ２３（ＶＰＢ４７＿ＭＹＣＴＵ）（配列番号３）に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ｒｖ３４０７は、配列番号３に記載のアミノ酸配列の断片を指す。いくつかの実施形態では、Ｒｖ３４０７は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ｒｖ３４０７は、配列番号３に記載のアミノ酸配列又はその断片に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ｒｖ３４０７は、配列番号１４に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。

【0050】

Ｒｖ２６２６ｃは、Ｍｔｂ潜在抗原として特定されている（Ａｍｉａｎｏ，ＮＯ ｅｔ ａｌ．ＩＦＮ－γ ａｎｄ ＩｇＧ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｌａｔｅｎｃｙ ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｖ２６２６ｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ ｒｅｍｏｔｅ ｆｒｏｍ ｒｅｃｅｎｔ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｓｃｉ Ｒｅｐ １０，７４７２（２０２０））。本明細書で使用される場合、「Ｒｖ２６２６ｃ」は、文脈に応じて、抗原性タンパク質若しくはペプチド、又はＲｖ２６２６ｃタンパク質若しくはペプチドをコードするアミノ酸配列、又はそれらの一部分を指し得る。いくつかの実施形態では、Ｒｖ２６２６ｃは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ９ＷＪＡ３（ＨＲＰ１＿ＭＹＣＴＵ）（配列番号４）に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ｒｖ２６２６ｃは、配列番号４に記載のアミノ酸配列の断片を指す。いくつかの実施形態では、Ｒｖ２６２６ｃは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ｒｖ２６２６ｃは、配列番号４に記載のアミノ酸配列又はその断片に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ｒｖ２６２６ｃは、配列番号１５に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。

【0051】

ＲｐｆＡ及びＲｐｆＤは、毒性及び休眠状態からの蘇生に関与するが、概してインビトロ成長に必要ではないＭｔｂタンパク質のファミリーに属する（Ｋａｎａ，ＢＤ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ－ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ａｒｅ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ａｎｄ ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｄｏｒｍａｎｃｙ ｂｕｔ ａｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ ｆｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｍｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６７，６７２－６８４（２００８））。本明細書で使用される場合、「ＲｐｆＡ」は、文脈に応じて、タンパク質若しくはペプチド、又はＲｐｆＡタンパク質若しくはペプチドをコードするアミノ酸配列、又はそれらの一部分を指し得る。ＲｐｆＡは、Ｍｔｂ株において可変性の発現を有する。Ｍｔｂ株におけるＲｐｆＡは、完全長であり得るか、又はＣ末端のみ、Ｎ末端のみ、及び／若しくはタンパク質の中心部分を欠くものを含み得る。いくつかの実施形態では、ＲｐｆＡは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ９ＷＧ３１（ＲＰＦＡ＿ＭＹＣＴＵ）（配列番号５）に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、ＲｐｆＡは、配列番号５に記載のアミノ酸配列の断片を指す。いくつかの実施形態では、ＲｐｆＡは、配列番号１６に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、ＲｐｆＡは、配列番号５に記載のアミノ酸配列又はその断片に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、ＲｐｆＡは、配列番号１６に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。

【0052】

本明細書で使用される場合、「ＲｐｆＤ」は、文脈に応じて、タンパク質若しくはペプチド、又はＲｐｆＤタンパク質若しくはペプチドをコードするアミノ酸配列、又はそれらの一部分を指し得る。いくつかの実施形態では、ＲｐｆＤは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ９ＷＧ２７（ＲＰＦＤ＿ＭＹＣＴＵ）（配列番号６）に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、ＲｐｆＤは、配列番号６に記載のアミノ酸配列の断片を指す。いくつかの実施形態では、ＲｐｆＤは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、ＲｐｆＤは、配列番号６に記載のアミノ酸配列又はその断片に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、ＲｐｆＤは、配列番号１７に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。

【0053】

Ｒａ１２は、典型的には、Ｍｔｂ３２Ａの最後の約１３２アミノ酸を含む、Ｍｔｂ３２ＡのＣ末端部分を指す（国際出願公開第２００６／１１７２４０Ａ２号、Ｒａ１２及びＲａ３５抗原並びにそれらを含む融合体に関する教示について参照により本明細書に組み込まれる）。Ｍｔｂ３２Ａは、Ｍｔｂセリンプロテアーゼである（Ｓｋｅｉｋｙ，ＹＡＷ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｗｏ Ｐｕｔａｔｉｖｅ Ｓｅｃｒｅｔｅｄ Ｓｅｒｉｎｅ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ６７，３９９８－４００７（１９９９））。実施例は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｏ０７１７５（Ｏ０７１７５＿ＭＹＣＴＵ）（配列番号７）に対応するＭｔｂ３２Ａ配列である。本明細書で使用される場合、「Ｒａ１２」は、文脈に応じて、タンパク質若しくはペプチド、又はＲａ１２タンパク質若しくはペプチドをコードするアミノ酸配列、又はそれらの一部分を指し得る。いくつかの実施形態では、Ｒａ１２は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ｒａ１２は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列の断片を指す。いくつかの実施形態では、Ｒａ１２は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。

【0054】

Ｒａ３５は、Ｍｔｂ３２ＡのＮ末端部分を指す（国際出願公開第２００６／１１７２４０Ａ２号）。本明細書で使用される場合、「Ｒａ３５」は、文脈に応じて、タンパク質若しくはペプチド、又はＲａ３５タンパク質若しくはペプチドをコードするアミノ酸配列、又はそれらの一部分を指し得る。いくつかの実施形態では、Ｒａ３５は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ｒａ３５は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列の断片を指す。いくつかの実施形態では、Ｒａ３５は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。

【0055】

いくつかの実施形態では、Ｒａ３５は、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ｒａ３５は、配列番号２６に記載のアミノ酸配列の断片を指す。いくつかの実施形態では、Ｒａ３５は、配列番号２６に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。

【0056】

ＴｂＨ９（Ｍｔｂ３９ａ又はＰＰＥ１８としても知られる）は、タンパク質のマイコバクテリアプロリン－プロリン－グルタミン酸（ＰＰＥ）ファミリーのメンバーであり、Ｍｔｂの細胞内生存に関与しているようである（Ｂｈａｔ，ＫＨ ｅｔ ａｌ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ＰＰＥ１８ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｉｎ Ｍｉｃｅ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ ７，ｅ５２６０１（２０１２））。ＴｂＨ９（Ｍｔｂ３９ａ）は、Ｍｔｂ３９ｂ及びＭｔｂ３９ｃに非常に相同であり、これらはともに、Ｍｔｂ３９遺伝子ファミリーを含む。本明細書で使用される場合、「ＴｂＨ９」は、文脈に応じて、タンパク質若しくはペプチド、又はＴｂＨ９タンパク質若しくはペプチドをコードするアミノ酸配列、又はそれらの一部分を指し得る。いくつかの実施形態では、ＴｂＨ９は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｌ７Ｎ６７５（ＰＰＥ１８＿ＭＹＣＴＵ）（配列番号８）に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、ＴｂＨ９は、配列番号８に記載のアミノ酸配列の断片を指す。いくつかの実施形態では、ＴｂＨ９は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、ＴｂＨ９は、配列番号８に記載のアミノ酸配列又はその断片に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、ＴｂＨ９は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。

【0057】

Ｍｔｂ７２ｆは、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓタンパク質Ｍｔｂ３２ａ及びＴｂＨ９を含む融合タンパク質である。Ｍｔｂ７２ｆを、以下のようにＴｂＨ９をＭｔｂ３２ａのＣ末端及びＮ末端部分と融合させることによって構築した：Ｍｔｂ３２Ｃ末端－Ｍｔｂ３９－Ｍｔｂ３２Ｎ末端。Ｍｔｂ３２ａの約１４ｋＤａのＣ末端断片をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は、ＴｂＨ９の完全長ＯＲＦ、続いてＭｔｂ３２ａの約２０ｋＤａのＮ末端部分に続けて連結された。本明細書で使用される場合、「Ｍｔｂ７２ｆ」は、文脈に応じて、抗原性融合タンパク質若しくはペプチド、又はＭｔｂ７２ｆタンパク質若しくはペプチドをコードするアミノ酸配列、又はそれらの一部分を指し得る。いくつかの実施形態では、Ｍｔｂ７２ｆは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ｍｔｂ７２ｆは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列の断片を指す。いくつかの実施形態では、Ｍｔｂ７２ｆは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列又はその断片に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。

【0058】

Ｍｔｂ７２ｆはまた、配列番号１９に記載の、アミノ酸位置１のメチオニンが除去されたＭｔｂ７２ｆを指し得る。いくつかの実施形態では、Ｍｔｂ７２ｆは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列の断片を指す。いくつかの実施形態では、Ｍｔｂ７２ｆは、配列番号１９に記載のアミノ酸配列又はその断片に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。

【0059】

Ｍ７２は、Ｎ末端に２残基ヒスチジンタグ、及びアミノ酸位置７１０にセリンからアラニンへの置換を含むＭｔｂ７２ｆのバリアントである。Ｍｔｂ３２ａのＣ末端部分及びＴｂＨ９の完全長ＯＲＦは、それ以外、Ｍｔｂ７２ｆ（配列番号１８）と同じ配列である。Ｍｔｂ３２ａのＮ末端部分は、Ｓ７１０Ａ置換を含有する。本明細書で使用される場合、「Ｍ７２」は、文脈に応じて、抗原性融合タンパク質若しくはペプチド、又はＭ７２タンパク質若しくはペプチドをコードするアミノ酸配列、又はそれらの一部分を指し得る。いくつかの実施形態では、Ｍ７２は、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ｍ７２は、配列番号２１に記載のアミノ酸配列の断片を指す。いくつかの実施形態では、Ｍ７２は、配列番号２１に記載のアミノ酸配列又はその断片に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。

【0060】

「Ｍ７２－融合体－２」は、Ｎ末端に３アミノ酸欠失を有するＭ７２のバリアントであり、アミノ酸位置１のメチオニン及び２残基ヒスチジンタグの両方が除去されている。いくつかの実施形態では、Ｍ７２－融合体－２は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、Ｍ７２－融合体－２は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列の断片を指す。いくつかの実施形態では、Ｍ７２－融合体－２は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列又はその断片に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を指す。

【0061】

図１及び２は、本明細書に記載の融合タンパク質の非限定的な例を示す。

【0062】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、Ｒａ１２、ＴｂＨ９、Ｒａ３５、及びＲｐｆＤ、又はそれらの断片を含むか、それらからなるか、又はそれらから本質的になる融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－Ｒａ１２－ＴｂＨ９－Ｒａ３５－ＲｐｆＤ融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４２に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含む。

【0063】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＡ、及びＲｐｆＤ、又はそれらの断片を含むか、それらからなるか、又はそれらから本質的になる融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－ＲｐｆＡ－ＲｐｆＤ融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号９～１０のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号９に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１０に記載のアミノ酸配列を含む。

【0064】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＡ、ＲｐｆＤ、Ｒａ１２、ＴｂＨ９、及びＲａ３５、又はそれらの断片を含むか、それらからなるか、又はそれらから本質的になる融合タンパク質を提供する。別途指定されない限り、個々のＭｔｂ抗原は、融合タンパク質中に任意の順序で存在し得る。更に、それらは、本明細書に記載のリンカーを有するか又は有さず、Ｃ末端からＮ末端からＣ末端へ接続され得る。いくつかの実施形態では、本開示は、Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－ＲｐｆＡ－ＲｐｆＤ－Ｒａ１２－ＴｂＨ９－Ｒａ３５融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（ｉ）配列番号９～１０のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号１８～２２のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２９に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む。

【0065】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＡ、ＲｐｆＤ、及びＴｂＨ９、又はそれらの断片を含むか、それらからなるか、又はそれらから本質的になる融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－ＲｐｆＡ－ＲｐｆＤ－ＴｂＨ９融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（ｉ）配列番号９～１０のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む。

【0066】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＤ、Ｒａ１２、ＴｂＨ９、及びＲａ３５、又はそれらの断片を含むか、それらからなるか、又はそれらから本質的になる融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－ＲｐｆＤ－Ｒａ１２－ＴｂＨ９－Ｒａ３５融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（ｉ）配列番号１及び１１～１２のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号２又は１３に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｉｉ）配列番号３又は１４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｖ）配列番号４又は１５に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｖ）配列番号６又は１７に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｖｉ）配列番号２３に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｖｉｉ）配列番号８又は２４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｖｉｉｉ）配列番号２５～２６のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３６に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含む。

【0067】

いくつかの実施形態では、本開示は、Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＤ、及びＴｂＨ９、又はそれらの断片を含むか、それらからなるか、又はそれらから本質的になる融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－ＲｐｆＤ－ＴｂＨ９融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（ｉ）配列番号１及び１１～１２のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号２又は１３に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｉｉ）配列番号３又は１４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｖ）配列番号４又は１５に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｖ）配列番号６又は１７に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｖｉ）配列番号８又は２４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３７に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３８に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４２及び１～３８のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0068】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４２に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４２に記載のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４２に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0069】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0070】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２８に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0071】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２９に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２９に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２９に記載のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２９に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0072】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0073】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0074】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３２に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0075】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0076】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0077】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３５に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0078】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３６に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３６に記載のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３６に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0079】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３７に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３７に記載のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３７に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0080】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３８に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３８に記載のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３８に記載のアミノ酸配列から本質的になる。

【0081】

前述の実施形態のうちのいずれかでは、融合タンパク質は、タグを更に含み得る。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、ポリＨｉｓタグを更に含み得る。いくつかの実施形態では、ポリＨｉｓタグは、２～６個のＨｉｓ残基を含むか又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、ポリＨｉｓタグは、融合タンパク質のＮ末端に位置するか、又はＮ末端の最初のＭｅｔ残基の後に挿入される。前述の実施形態のうちのいずれかでは、融合タンパク質は、アミノ酸配列ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号４０）を含むヒトインフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）タグを更に含み得る。いくつかの実施形態では、ＨＡタグは、融合タンパク質のＣ末端に位置する。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、タグ又はビオチン、蛍光部分、放射性部分、若しくは他のペプチドタグなどの他の撮像剤にコンジュゲートされ得る。

【0082】

個々のＭｔｂ抗原は、任意のリンカーなしで、Ｃ末端からＮ末端又はＮ末端からＣ末端に一緒に連結され得る。あるいは、リンカーは、本明細書に開示される融合タンパク質のうちのいずれか内の任意の２つのＭｔｂ抗原の間に存在し得る。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＡ、ＲｐｆＤ、Ｒａ１２、ＴｂＨ９、及びＲａ３５のうちの１つ以上を接続する１つ以上のリンカーを更に含み得る。例えば、リンカーは、２つのＭｔｂ抗原の接合部に含まれる１つ以上のアミノ酸残基を含むか、又はそれからなり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、任意選択で、１つ以上の制限部位を含有するＤＮＡのセグメントによってコードされ、ＤＮＡのセグメントは、本明細書に開示される融合タンパク質のうちのいずれかの２つのＭｔｂ抗原をコードする核酸分子の間に挿入される。いくつかの実施形態では、制限部位は、ＥｃｏＲＩ制限部位又はＥｃｏＲＶ制限部位を含む。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、Ｒａ１２とＴｂＨ９との間にリンカーを含み、ＥｃｏＲＩ制限部位をもたらす。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、ＴｂＨ９とＲａ３５との間にリンカーを含み、ＥｃｏＲＶ制限部位をもたらす。

【0083】

いくつかの態様では、本開示は、本明細書に開示される融合タンパク質のうちのいずれかをコードする核酸分子を提供する。

【0084】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４１に記載の核酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有する配列を含む核酸によってコードされる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４１に記載の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４１に記載の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列から本質的になる。

【0085】

ＩＩＩ．ベクター
いくつかの実施形態では、本開示は、上記の融合タンパク質をコードするベクターを提供する。

【0086】

ベクターは、当該技術分野で既知の任意の発現ベクターであり得る。抗原が発現されるためには、融合タンパク質のタンパク質コード配列は、タンパク質の転写及び翻訳を指示する調節配列又は核酸制御配列に「作動可能に連結」されている必要がある。コード配列及び核酸制御配列又はプロモーターは、それらが、コード配列の発現又は転写及び／又は翻訳を核酸制御配列の影響又は制御下に置くような様式で共有結合されている場合、「作動可能に連結されている」と言われる。「核酸制御配列」は、核酸エレメントに作動可能に連結された核酸配列又はコード配列の発現を指示する、プロモーター、エンハンサー、ＩＲＥＳ、イントロン、及び本明細書に記載の他のエレメントなどであるがこれらに限定されない任意の核酸エレメントであり得る。「プロモーター」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩの開始部位の周りでクラスター化され、かつ、本開示のタンパク質コード配列に作動可能に連結された場合にコードタンパク質の発現をもたらす、転写制御モジュールの群を指す。本開示の異種抗原及び融合タンパク質の発現は、限定されないが、テトラサイクリンなどの抗生物質、エクジソンなどのホルモン、又は重金属などのいくつかの特定の外部刺激に曝露されたときにのみ転写を開始する構成的プロモーター又は誘導性プロモーターの制御下にあり得る。プロモーターはまた、特定の細胞型、組織、又は臓器に特異的であり得る。多くの好適なプロモーター及びエンハンサーが当該技術分野で既知であり、任意のそのような好適なプロモーター又はエンハンサーが、本開示の導入遺伝子の発現のために使用され得る。例えば、好適なプロモーター及び／又はエンハンサーは、真核生物プロモーターデータベース（ＥＰＤＢ）から選択され得る。

【0087】

いくつかの実施形態では、融合タンパク質をコードするベクターは、プラスミド、コスミド、ファージ、細菌ベクター、又はウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、ポックスウイルス、アデノウイルス、風疹、センダイウイルス、ラブドウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス、又はアデノ随伴ウイルスなどのウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、融合タンパク質をコードするベクターは、細菌人工染色体（ＢＡＣ）である。いくつかの実施形態では、融合タンパク質をコードするベクターは、ＣＭＶベクター、例えば、ＲｈＣＭＶ又はＨＣＭＶベクターである。いくつかの実施形態では、融合タンパク質をコードするベクターは、ＴＲ３骨格を含む組換えＨＣＭＶベクターである。

【0088】

いくつかの実施形態では、組換えＣＭＶベクターは、ＨＣＭＶ ＴＲ３であるか、又はそれに由来する。本明細書で言及される場合、「ＨＣＭＶ ＴＲ３」又は「ＴＲ３」は、Ｃａｐｏｓｉｏ，Ｐ ｅｔ ａｌ．（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｌｉｖｅ ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ＨＣＭＶ－ｂａｓｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ ｐｌａｔｆｏｒｍ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ９，１９２３６（２０１９））に記載されているように、臨床分離株ＨＣＭＶ ＴＲに由来するＨＣＭＶ－ＴＲ３ベクター骨格を指す。

【0089】

本明細書に記載される場合、組換えＣＭＶベクターは、１つ以上のＣＭＶ遺伝子の存在又は非存在によって特徴付けられ得る。ＣＭＶベクターはまた、１つ以上のＣＭＶ遺伝子によってコードされる１つ以上のタンパク質の存在又は非存在によって特徴付けられ得る。ＣＭＶ遺伝子によってコードされるタンパク質は、ＣＭＶ遺伝子をコードする核酸配列における変異の存在により、非存在であり得る。いくつかの実施形態では、ベクターは、ＣＭＶ遺伝子のオーソログ又はホモログを含み得る。ＣＭＶ遺伝子の例としては、ＵＬ８２、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６、ＵＬ１４７、ＵＬ１８、及びＵＬ７８が挙げられるが、これらに限定されない。

【0090】

ヒトサイトメガロウイルスＵＬ８２遺伝子は、ウイルス粒子の外皮ドメインに局在されるタンパク質であるｐｐ７１をコードする。例えば、ＣＭＶ ＴＲ株のＵＬ８２遺伝子は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＫＦ０２１６０５．１の１１８８１１～１２０４９０である。

【0091】

ｐｐ７１は、ウイルス遺伝子転写のＤａｘｘ抑制の阻害、ＳＴＩＮＧの負の調節、及び細胞抗ウイルス応答の回避を含む１つ以上の機能を果たし得る（Ｋａｌｅｊｔａ ＲＦ，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ ｔｈｅ Ｋｎｏｗｎ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｐｐ７１ Ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｆｒｏｎｔ Ｃｅｌｌ Ｉｎｆｅｃｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０２０ Ｍａｒ １２；１０：９５）。ＵＬ８２遺伝子座での外来遺伝子の挿入によるＵＬ８２の欠失又はＵＬ８２の破壊は、ｐｐ７１タンパク質の非存在をもたらし、その結果、線維芽細胞、内皮細胞、上皮細胞、及び星状細胞における複製を低減する（Ｃａｐｏｓｉｏ Ｐ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｌｉｖｅ－ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ＨＣＭＶ－ｂａｓｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ ｐｌａｔｆｏｒｍ．Ｓｃｉ Ｒｅｐ．２０１９ Ｄｅｃ １７；９（１）：１９２３６）。ＵＬ８２の欠失又は破壊の効果は、細胞キナーゼ阻害剤によって可逆的である。アカゲザルサイトメガロウイルス（ＲｈＣＭＶ）遺伝子ＲｈＣＭＶ１１０は、ヒトＣＭＶ ＵＬ８２と相同である（Ｈａｎｓｅｎ ＳＧ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｇｅｎｏｍｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｈｅｓｕｓ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ．２００３ Ｊｕｎ；７７（１２）：６６２０－３６）。

【0092】

ヒトサイトメガロウイルス遺伝子ＵＬ１２８及びＵＬ１３０は、ウイルスエンベロープの構成要素をコードする（Ｐａｔｒｏｎｅ，Ｍ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ＵＬ１３０ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ａ ｐｒｏｄｕｃｅｒ ｃｅｌｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｖｉｒｉｏｎ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ．７９（１３）：８３６１－７３（２００５）、Ｒｙｃｋｍａｎ，ＢＪ ｅｔ ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｇＨ／ｇＬ／ＵＬ１２８－１３１ ｃｏｍｐｌｅｘ ｔｈａｔ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｅｎｔｒｙ ｉｎｔｏ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ａｎｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ．８２（１）：６０－７０（２００８）、Ｗａｎｇ，Ｄ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｖｉｒｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ａｎｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｔｒｏｐｉｓｍ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１０２（５０）：１８１５３－８（２００５））。例えば、ＣＭＶ ＴＲ株のＵＬ１２８遺伝子は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＫＦ０２１６０５．１の１７６２０６～１７６９６４であり、ＣＭＶ ＴＲ株のＵＬ１３０遺伝子は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＫＦ０２１６０５．１の１７７００４～１７７６４８である。

【0093】

ヒトサイトメガロウイルス遺伝子ＵＬ１４６及びＵＬ１４７は、それぞれ、ＣＸＣケモカインｖＣＸＣ－１及びｖＣＸＣ－２をコードする（Ｐｅｎｆｏｌｄ，ＭＥ ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ｐｏｔｅｎｔ ａｌｐｈａ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．９６（１７）：９８３９－４４（１９９９））。例えば、ＣＭＶ ＴＲ株のＵＬ１４６遺伝子は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＫＦ０２１６０５．１の１８０９５４～１８１３０７であり、ＣＭＶ ＴＲ株のＵＬ１４７遺伝子は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＫＦ０２１６０５．１の１８０４１０～１８０８８９である。

【0094】

ヒトサイトメガロウイルスＵＬ１８遺伝子は、β２－ミクログロブリンと会合し、内因性ペプチドに結合し得るＩ型膜糖タンパク質をコードする（Ｐａｒｋ，Ｂ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔａｐａｓｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｅｐｔｉｄｅ ｌｏａｄｉｎｇ ａｎｄ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃａｒｇｏ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｅ ｅｖａｓｉｏｎ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０（１）：７１－８５（２００４）、Ｂｒｏｗｎｅ，Ｈ ｅｔ ａｌ．Ａ ｃｏｍｐｌｅｘ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ａｎｄ ｂｅｔａ ２ ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ．Ｎａｔｕｒｅ．３４７（６２９５）：７７０－２（１９９０）、Ｆａｈｎｅｓｔｏｃｋ，ＭＬ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ Ｉ ｈｏｍｏｌｏｇ ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｂｉｎｄｓ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．３（５）：５８３－９０（１９９５））。例えば、ＣＭＶ ＴＲ株のＵＬ１８遺伝子は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＫＦ０２１６０５．１の２４００５～２５１１１である。

【0095】

ヒトサイトメガロウイルスＵＬ７８遺伝子は、推定上のＧタンパク質共役受容体をコードし（Ｃｈｅｅ，ＭＳ ｅｔ ａｌ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｄｉｎｇ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ｓｔｒａｉｎ ＡＤ１６９．Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１５４：１２５－６９（１９９０））、ウイルス複製にも役割を有し得る（Ｍｉｃｈｅｌ，Ｄ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ ＵＬ７８ ｇｅｎｅ ｉｓ ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ａｍｏｎｇ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｓｏｌａｔｅｓ，ｂｕｔ ｉｓ ｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ ｆｏｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ａｎｄ ａ ｒｅｎａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｒｇａｎ－ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ．Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．８６（Ｐｔ ２）：２９７－３０６（２００５））。例えば、ＣＭＶ ＴＲ株のＵＬ７８遺伝子は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＫＦ０２１６０５．１の１１４２４７～１１５５４２である。

【0096】

いくつかの実施形態では、組換えＣＭＶベクターは、ＵＬ１２８若しくはＵＬ１３０、又はそれらのオーソログを発現する。いくつかの実施形態では、組換えＣＭＶベクターは、ＵＬ１４６若しくはＵＬ１４７、又はそれらのオーソログを発現する。いくつかの実施形態では、組換えＣＭＶベクターは、ＵＬ１２８、ＵＬ１３０、ＵＬ１４６、及びＵＬ１４７を発現する。

【0097】

いくつかの実施形態では、組換えＣＭＶベクター（例えば、組換えＨＣＭＶベクター又はＴＲ３骨格を含む組換えＨＣＭＶベクター）は、ＵＬ１２８及びＵＬ１３０、又はそれらのオーソログをコードする核酸配列における変異の存在により、ＵＬ１２８若しくはＵＬ１３０、又はそれらのオーソログを発現しない。いくつかの実施形態では、ＣＭＶベクターは、ＵＬ１４６、ＵＬ１４７、ＵＬ１８、ＵＬ７８、若しくはＵＬ８２、又はそれらのオーソログをコードする核酸配列における変異の存在により、ＵＬ１４６、ＵＬ１４７、ＵＬ１８、ＵＬ７８、及びＵＬ８２、並びにそれらのオーソログのうちの１つ以上が欠損している。いくつかの実施形態では、ＣＭＶベクターは、ＵＳ１１又はそのオーソログをコードする核酸配列における変異の存在により、ＵＳ１１及びそのオーソログが欠損している。前述の実施形態では、１つ以上の変異は、活性タンパク質の発現の欠如をもたらす任意の変異であり得る。そのような変異には、例えば、点変異、フレームシフト変異、タンパク質をコードする配列の全て未満の欠失（切断変異）、又はタンパク質をコードする核酸配列の全ての欠失が含まれる。いくつかの実施形態では、組換えＣＭＶベクター（例えば、組換えＨＣＭＶベクター又はＴＲ３骨格を含む組換えＨＣＭＶベクター）は、ＵＬ４０及びＵＳ２８、又はそれらのオーソログを発現する。

【0098】

いくつかの実施形態では、組換えＣＭＶベクター（例えば、組換えＨＣＭＶベクター又はＴＲ３骨格を含む組換えＨＣＭＶベクター）は、ＵＬ７８、ＵＬ１２８、及びＵＬ１３０、又はそれらのオーソログをコードする核酸配列における変異の存在により、ＵＬ７８、ＵＬ１２８、若しくはＵＬ１３０、又はそれらのオーソログを発現しない。いくつかの更なる実施形態では、本明細書に開示される融合タンパク質をコードする核酸分子は、ＵＬ７８を置き換えるである。いくつかの更なる実施形態では、融合タンパク質は、ＵＬ７８プロモーターに作動可能に連結され、ＵＬ７８プロモーターによって発現される。

【0099】

いくつかの実施形態では、組換えＣＭＶベクター（例えば、組換えＨＣＭＶベクター又はＴＲ３骨格を含む組換えＨＣＭＶベクター）は、ＵＬ７８、ＵＬ１２８、及びＵＬ１３０、又はそれらのオーソログをコードする核酸配列における変異の存在により、ＵＬ７８、ＵＬ１２８、若しくはＵＬ１３０、又はそれらのオーソログを発現しない。いくつかの更なる実施形態では、組換えＣＭＶベクターは、ＵＬ１８、ＵＬ８２、ＵＬ１４６、及びＵＬ１４７、又はそれらのオーソログを発現する。いくつかの更なる実施形態では、本明細書に開示される融合タンパク質をコードする核酸分子は、ＵＬ７８を置き換えるである。いくつかの更なる実施形態では、融合タンパク質は、ＵＬ７８プロモーターに作動可能に連結され、ＵＬ７８プロモーターによって発現される。

【0100】

いくつかの実施形態では、組換えＣＭＶベクター（例えば、組換えＨＣＭＶベクター又はＴＲ３骨格を含む組換えＨＣＭＶベクター）は、ＵＬ８２、ＵＬ１２８、及びＵＬ１３０、又はそれらのオーソログをコードする核酸配列における変異の存在により、ＵＬ８２、ＵＬ１２８、若しくはＵＬ１３０、又はそれらのオーソログを発現しない。いくつかの更なる実施形態では、本明細書に開示される融合タンパク質をコードする核酸分子は、ＵＬ８２を置き換えるである。いくつかの更なる実施形態では、融合タンパク質は、ＵＬ８２プロモーターに作動可能に連結され、ＵＬ８２プロモーターによって発現される。

【0101】

ワクチンのために望ましい特性を有するＨＣＭＶベクターを製造するための課題は、ベクターが、多くの場合、ウイルス複製又は増殖が低減するようにデザインされることである。例えば、いくつかの生減弱ＨＣＭＶ－ＨＩＶワクチンベクターは、ＨＣＭＶ遺伝子ＵＬ８２（外皮タンパク質ｐｐ７１をコードする）の欠失によって成長が欠損するように操作され、より低いウイルス収率をもたらす。ｐｐ７１は、この外皮タンパク質が、細胞Ｄａｘｘ機能を抑制する核に転座され、したがって、複製サイクルを誘発するＣＭＶ前初期（ＩＥ）遺伝子発現を可能にするため、野生型ＨＣＭＶ感染にとって重要である。いくつかの製造プロセスは、ＨＣＭＶ ｐｐ７１の機能のうちの１つを模倣する、Ｄａｘｘを標的とするｓｉＲＮＡでのＭＲＣ－５細胞の一過性トランスフェクションを使用する機能的相補性に依存する。別のアプローチは、宿主細胞が必須ウイルス遺伝子を発現することを可能にするために、ｐｐ７１をコードするｍＲＮＡのトランスフェクションを使用することである。必須ウイルス遺伝子を発現させるためのｍＲＮＡのトランスフェクションは、細胞周期刺激、効率的なビリオンパッケージング、及びウイルス安定性など、感染プロセスを強化する可能性が高い遺伝子の全ての機能を提供することが可能であり得る。更に、感染の後半に存在するタンパク質は、子孫ウイルスにパッケージングされる可能性を有し、これは、より効率的な第１のラウンドの感染及び持続的な感染の確立によって、ワクチンの必要な用量を低下させることができる。したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、組換えＣＭＶウイルスベクターを産生する方法であって、（ａ）ｐｐ７１タンパク質をコードするｍＲＮＡを細胞に導入することと、（ｂ）細胞を組換えＣＭＶで感染させることと、（ｃ）細胞をインキュベーションすることと、（ｄ）組換えＣＭＶウイルスベクターを収集することと、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ｐｐ７１タンパク質をコードする核酸は、トランスフェクションを使用して細胞に送達される。いくつかの実施形態において、細胞は、ＭＲＣ－５細胞である。いくつかの実施形態では、組換えＣＭＶは、本明細書に記載の組換えＨＣＭＶ（例えば、ＴＲ３骨格に由来する組換えＨＣＭＶベクター）である。いくつかの実施形態では、組換えＣＭＶ及び組換えＣＭＶウイルスベクターは、本明細書に記載のＭｔｂ抗原などの異種病原体特異的抗原をコードする核酸を含む。そのような方法によって作製されるＣＭＶウイルスベクターもまた、本開示の範囲内である。

【0102】

いくつかの実施形態では、組換えＣＭＶベクター（例えば、組換えＨＣＭＶベクター又はＴＲ３骨格を含む組換えＨＣＭＶベクター）は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）認識エレメント（ＭＲＥ）をコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＭＶベクターは、内皮細胞において発現されるマイクロＲＮＡの標的部位を含有するＭＲＥをコードする核酸配列を含む。内皮細胞において発現されるｍｉＲＮＡの例は、ｍｉＲ１２６、ｍｉＲ－１２６－３ｐ、ｍｉＲ－１３０ａ、ｍｉＲ－２１０、ｍｉＲ－２２１／２２２、ｍｉＲ－３７８、ｍｉＲ－２９６、及びｍｉＲ－３２８である。いくつかの実施形態では、組換えＣＭＶベクター（例えば、組換えＨＣＭＶベクター又はＴＲ３骨格を含む組換えＨＣＭＶベクター）は、骨髄細胞において発現されるマイクロＲＮＡの標的部位を含有するＭＲＥをコードする核酸配列を含む。骨髄細胞において発現されるｍｉＲＮＡの例は、ｍｉＲ－１４２－３ｐ、ｍｉＲ－２２３、ｍｉＲ－２７ａ、ｍｉＲ－６５２、ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－１４６ａ、ｍｉＲ－１３２、ｍｉＲ－２１、ｍｉＲ－１２４、及びｍｉＲ－１２５である。

【0103】

本明細書に開示されるベクターに含まれ得るＭＲＥは、内皮細胞によって発現されるｍｉＲＮＡ又は骨髄細胞によって発現されるｍｉＲＮＡの存在下で発現をサイレンシングする任意のｍｉＲＮＡ認識エレメントであり得る。そのようなＭＲＥは、ｍｉＲＮＡの正確な相補体であり得る。あるいは、他の配列を所与のｍｉＲＮＡのためのＭＲＥとして使用し得る。例えば、ＭＲＥは、公的に利用可能なデータベースを使用して配列から予測され得る。一例では、ｍｉＲＮＡは、ウェブサイトｍｉｃｒｏＲＮＡ．ｏｒｇ（ｗｗｗ．ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｏｒｇ）で検索され得る。次いで、ｍｉＲＮＡのｍＲＮＡ標的のリストが列挙される。そのページの列挙された各標的について、「アラインメントの詳細」にアクセスし、推定ＭＲＥにアクセスし得る。当業者は、文献から、マクロファージなどの骨髄細胞で発現されるｍｉＲＮＡの存在下でサイレンシングを誘導すると予測される妥当な、推定の、又は変異したＭＲＥ配列を選択し得る。一例には、上記の参照のウェブサイトが含まれる。次いで、当業者は、レポーター遺伝子（蛍光タンパク質、酵素、又は他のレポーター遺伝子など）が、構成的に活性なプロモーター又は細胞特異的プロモーターなどのプロモーターによって駆動される発現を有する、発現構築物を取得し得る。次いで、ＭＲＥ配列を発現構築物に導入し得る。発現構築物を適切な細胞にトランスフェクトし、細胞を関心のあるｍｉＲＮＡでトランスフェクトし得る。レポーター遺伝子の発現の欠如は、ＭＲＥがｍｉＲＮＡの存在下で遺伝子発現をサイレンシングしていることを示す。

【0104】

いくつかの実施形態では、ＣＭＶベクターは、任意のＭＲＥをコードしない核酸配列を含む。

【0105】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＭＶベクターは、宿主から宿主への拡散を妨げ、それによって、ウイルスが、免疫不全の対象又はＣＭＶ感染の結果として合併症に直面し得る他の対象に感染できなくし得る変異を含有する。本明細書に記載のＣＭＶベクターはまた、免疫優性及び非免疫優性エピトープの提示並びに非典型的なＭＨＣ拘束をもたらす変異を含み得る。しかしながら、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＭＶベクターにおける変異は、以前にＣＭＶに感染した対象を再感染させるベクターの能力に影響を及ぼさない。そのようなＣＭＶ変異は、例えば、米国特許出願公開第２０１３／０１３６７６８Ａ１号、同第２０１３／０１４２８２３Ａ１号、同第２０１４／０１４１０３８Ａ１号、及び国際出願公開第２０１４／１３８２０９Ａ１号に記載され、これらは、これらの変異に関する教示について、参照により本明細書に組み込まれる。

【0106】

本明細書に開示されるＣＭＶベクターは、Ｍｔｂ抗原（例えば、本明細書に開示される融合タンパク質）をコードする配列を含むＤＮＡをＣＭＶゲノムの必須又は非必須領域に挿入することによって調製され得る。方法は、ＣＭＶゲノムから１つ以上の領域を欠失させることを更に含み得る。この方法は、インビボでの組換えを含み得る。したがって、方法は、ＣＭＶゲノムの部分と相同なＤＮＡ配列に隣接する異種ＤＮＡを含むドナーＤＮＡの存在下で、細胞適合培地中で細胞をＣＭＶ ＤＮＡでトランスフェクトし、それによって、異種ＤＮＡをＣＭＶのゲノムに導入することと、任意選択で、次いでインビボ組換えによって修飾されたＣＭＶを回収することと、を含み得る。方法は、ＣＭＶ ＤＮＡを切断して切断型ＣＭＶ ＤＮＡを得ることと、異種ＤＮＡを切断型ＣＭＶ ＤＮＡに連結してハイブリッドＣＭＶ－異種ＤＮＡを得ることと、細胞をハイブリッドＣＭＶ－異種ＤＮＡでトランスフェクトすることと、任意選択で、次いで異種ＤＮＡの存在によって修飾されたＣＭＶを回収することと、を含み得る。インビボ組換えが含まれるため、方法はまた、ＣＭＶに対して外来性であるポリペプチドをコードする、ＣＭＶ中に天然では存在しないドナーＤＮＡを含むプラスミドを提供し、ドナーＤＮＡは、さもなくばＣＭＶゲノムの必須又は非必須領域と共直鎖状である（ｃｏ－ｌｉｎｅａｒ）ＣＭＶ ＤＮＡのセグメント内にあり、したがって、ＣＭＶの必須又は非必須領域由来のＤＮＡがドナーＤＮＡに隣接している。異種ＤＮＡは、そのＤＮＡの安定的な組み込み及び所望する場合にはその発現を生じさせる任意の配向で組換えＣＭＶを生成するように、ＣＭＶに挿入され得る。

【0107】

組換えＣＭＶベクターにおけるＭｔｂ抗原（例えば、本明細書に開示される融合タンパク質）をコードするＤＮＡはまた、プロモーターを含み得る。プロモーターは、内因性サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、例えば、ヒトＣＭＶ（ＨＣＭＶ）、アカゲザルＣＭＶ（ＲｈＣＭＶ）、マウス、又は他のＣＭＶプロモーターを含む、ヘルペスウイルスなどの任意の供給源に由来し得る。プロモーターはまた、ＥＦ１αプロモーターなどの非ウイルスプロモーターであり得る。プロモーターは、ウイルスによって提供されるトランス活性化タンパク質でトランス活性化された領域と、切断型転写活性プロモーターが由来する完全長プロモーターの最小プロモーター領域と、を含む、切断型転写活性プロモーターであり得る。プロモーターは、最小限のプロモーター及び上流の調節配列に対応するＤＮＡ配列の結合からなり得る。最小限のプロモーターは、ＣＡＰ部位及びＡＴＡボックス（転写の非調節レベルである、転写の基本レベルのための最小配列）からなり、「上流の調節配列」は、上流のエレメント（複数可）及びエンハンサー配列（複数可）からなる。更に、「切断型の（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）」という用語は、完全長プロモーターが完全には存在しないこと、すなわち、完全長プロモーターのある部分が除去されていることを示す。切断型プロモーターは、ＭＣＭＶ又はＨＣＭＶ、例えばＨＣＭＶ－ＩＥ又はＭＣＭＶ－ＩＥなどのヘルペスウイルスに由来し得る。塩基対に基づいて、完全長プロモーターから最大４０％、更には最大９０％のサイズ縮小があり得る。プロモーターはまた、修飾された非ウイルスプロモーターであり得る。ＨＣＭＶプロモーターに関して、米国特許第５，１６８，０６２号及び同第５，３８５，８３９号を参照されたい。細胞からの発現のためにプラスミドＤＮＡで細胞をトランスフェクトすることに関しては、Ｆｅｌｇｎｅｒ，ＪＨ ｅｔ ａｌ．が参照される（Ｅｎｈａｎｃｅｄ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｓｔｕｄｉｅｓ ｗｉｔｈ ａ ｎｏｖｅｌ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｃａｔｉｏｎｉｃ ｌｉｐｉｄ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９，２５５０－２５６１（１９９４））。様々な感染症に対するワクチン接種の簡単かつ効果的な方法としてのプラスミドＤＮＡの直接注射に関しては、Ｕｌｍｅｒ，ＪＢ ｅｔ ａｌ．が参照される（Ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｂｙ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ａ ｖｉｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５９，１７４５－１７４９（１９９３））。したがって、ベクターＤＮＡの直接注射によってベクターを使用し得ることは本開示の範囲内である。切断型転写活性プロモーターを含む組換えウイルス又はプラスミドに挿入され得る発現カセットもまた開示される。発現カセットは、機能的な切断型ポリアデニル化シグナル、例えば、切断されているがなおも機能的であるＳＶ４０ポリアデニル化シグナルを更に含み得る。切断型ポリアデニル化シグナルは、ＣＭＶなどの組換えウイルスの挿入サイズ制限の問題に対処する。発現カセットはまた、異種ＤＮＡが挿入されるウイルス又はシステムに関連して、異種ＤＮＡを含み得、ＤＮＡは本明細書に記載の異種ＤＮＡであり得る。

【0108】

融合タンパク質をコードする配列を含むＤＮＡがそれ自体、発現を駆動するためのプロモーターをＣＭＶベクター中に含み得るか、又はＤＮＡが、融合タンパク質のコードＤＮＡに限定され得ることに留意されたい。この構築物は、プロモーターに作動可能に連結され、それによって発現されるように、内因性ＣＭＶプロモーターに対する配向で配置され得る。更に、融合タンパク質をコードするＤＮＡの複数コピー、又は強力若しくは早期プロモーター若しくは早期及び後期プロモーターの使用、又はそれらの任意の組み合わせは、発現を増幅又は増加させるために行われ得る。したがって、融合タンパク質をコードするＤＮＡは、ＣＭＶ内因性プロモーターに関して好適に配置され得るか、又はそれらのプロモーターは、融合タンパク質をコードするＤＮＡとともに別の位置に挿入されるように転座され得る。２つ以上の融合タンパク質、又は融合タンパク質及び追加の抗原をコードする核酸は、ＣＭＶベクターにパッケージングされ得る。

【0109】

いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号４４に記載の核酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有する核酸配列を含む、組換えＨＣＭＶベクターを提供する。いくつかの実施形態では、組換えＨＣＭＶベクターは、配列番号４４に記載の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組換えＨＣＭＶベクターは、配列番号４４に記載の核酸配列からなる。

【0110】

ＩＶ．医薬組成物
本開示は、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の融合タンパク質と、薬学的に許容される担体又は希釈剤と、を含む、医薬組成物（例えば、免疫原性又はワクチン組成物）を提供する。本開示はまた、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の融合タンパク質をコードするベクター（例えば、本明細書に開示される組換えＣＭＶベクター）を含む医薬組成物（例えば、免疫原性又はワクチン組成物）を提供する。組換えＣＭＶウイルス又はベクター（又はその発現産物）を含有する免疫原性又はワクチン組成物は、（局所又は全身的に）免疫応答を誘発する。応答は、保護用であってもよいが、保護用である必要はない。換言すれば、免疫原性又はワクチン組成物は、局所又は全身の防御又は治療応答を誘発する。

【0111】

そのような医薬組成物は、医薬分野において当業者に周知の標準的な技術に従って調製され得る。そのような組成物は、特定の患者の種（ｂｒｅｅｄ）又は種（ｓｐｅｃｉｅｓ）、年齢、性別、体重、及び状態、並びに投与経路などの要因を考慮して、医学分野の当業者に周知の投与量で及び技術により投与され得る。組成物は、単独で投与され得るか、他のタンパク質若しくはペプチドとともに、他のベクター（例えば、ＣＭＶベクター）とともに、あるいは他の免疫、抗原、もしくワクチン、又は治療組成物とともに、同時に又は順次投与され得る。そのような他の組成物は、精製された天然抗原若しくはエピトープ、又は組換えＣＭＶ若しくは別のベクター系による発現からの抗原若しくはエピトープを含み得る。

【0112】

本明細書に開示される医薬組成物は、当該技術分野で既知の任意の投与手順で使用されるように製剤化され得る。そのような医薬組成物は、非経口経路（皮内、腹腔内、筋肉内、皮下、静脈内、又はその他）を介し得る。投与はまた、経口、鼻、生殖器などの粘膜経路を介し得る。

【0113】

組成物の例には、オリフィス、例えば、経口、鼻、肛門、生殖器、例えば、膣などの投与のための液体調製物、例えば、懸濁液、シロップ剤、又はエリキシル剤、並びに非経口、皮下、腹腔内、皮内、筋肉内、又は静脈内投与（例えば、注射可能な投与）のための調製物、例えば、滅菌懸濁液又は乳剤が含まれる。そのような組成物において、組換え体は、滅菌水、生理食塩水、グルコース、トレハロースなどの好適な担体、希釈剤、又は賦形剤との混合物中にあってもよい。

【0114】

本明細書に開示される医薬組成物は、典型的には、所望の応答を誘発するために、アジュバント及びある量の抗原（例えば、融合タンパク質）又は抗原をコードするベクターを含むか、又は含有し得る。ヒト用途では、ミョウバン（リン酸アルミニウム又は水酸化アルミニウム）が典型的なアジュバントである。サポニン及びその精製成分であるＱｕｉｌ Ａ、完全フロイントアジュバント、並びに研究及び獣医学的用途で使用される他のアジュバントは、ヒトワクチンにおけるそれらの潜在的な使用を制限する毒性を有する。Ｇｏｏｄｍａｎ－Ｓｎｉｔｋｏｆｆ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．（Ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ／ｉｎｔｅｒｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｈｅｌｐ ｉｎ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｅｐｔｉｄｅ－ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７，４１０－４１５ （１９９１））によって記載されているものなど、ムラミルジペプチド、モノホスホリル脂質Ａ、リン脂質コンジュゲートなどの化学的に定義された調製物、Ｍｉｌｌｅｒ，ＭＤ ｅｔ ａｌ．（Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｈｅｓｕｓ ｍｏｎｋｅｙｓ ｗｉｔｈ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ａ ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｏｌｉｐｏｓｏｍｅ ｅｌｉｃｉｔｓ ｓｉｍｉａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＣＤ８＋ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１７３９－１７４４（１９９２））によって記載されるようなプロテオリポソーム内のタンパク質のカプセル化、及びノバソーム（Ｎｏｖａｓｏｍｅ）脂質小胞などの脂質小胞中のタンパク質のカプセル化（Ｍｉｃｒｏ Ｖｅｓｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．、Ｎａｓｈｕａ，Ｎ．Ｈ．）もまた、使用され得る。

【0115】

組成物は、非経口（例えば、筋肉内、皮内、又は皮下）投与又はオリフィスでの投与、例えば、舌下（例えば、経口）、胃内、口腔内、肛門内、膣内などを含む粘膜の投与による免疫化のために、単一の剤形でパッケージングされ得る。有効な投与量及び投与経路は、組成物の性質、発現産物の性質、ベクターが直接使用される場合の発現レベル、並びに対象の種（ｂｒｅｅｄ）又は種（ｓｐｅｃｉｅｓ）、年齢、性別、体重、状態、及び性質などの既知の因子、並びにＬＤ５０及び既知で過度の実験を必要としない他のスクリーニング手順によって決定される。発現される生成物の投与量は、数マイクログラム～数百マイクログラム、例えば、５～５００μｇの範囲であり得る。抗原又は抗原をコードするベクターは、これらの投与量レベルの発現を達成するために、任意の好適な量で投与され得る。非限定的な例では、本明細書に開示される融合タンパク質をコードするＣＭＶベクターは、少なくとも１０_２ｐｆｕの量、又は約１０_２ｐｆｕ～約１０_７ｐｆｕの範囲で投与され得る。他の好適な担体又は希釈剤は、防腐剤を含むか又は含まない、水又は緩衝生理食塩水であり得る。組成物は、投与時に再懸濁のために凍結乾燥され得るか、又は溶液中にあり得る。

【0116】

Ｖ．治療方法及び他の使用
本明細書に開示される融合タンパク質及びベクター（組換えＣＭＶベクターなど）は、融合タンパク質、ベクター、又は組換えＣＭＶウイルス若しくはベクターと、薬学的に許容される担体又は希釈剤と、を含む組成物を対象に投与することを含む、対象において免疫学的又は免疫応答を誘導する方法において使用され得る。

【0117】

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、ヒト及び非ヒト哺乳動物の両方を含むカテゴリである、生きている多細胞脊椎動物を指す。対象は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに感染され得る任意の哺乳動物、例えば、霊長類（ヒト、非ヒト霊長類、例えば、サル、又はチンパンジーなど）を含む哺乳動物、又は結核感染の許容される臨床モデルとみなされる動物であり得る。

【0118】

いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。更なる実施形態では、対象は、１８歳以上の成人である。なお更なる実施形態では、対象は、１３～１７歳の青年である。

【0119】

いくつかの実施形態では、対象は、結核が風土性ではない地理的位置に居住している。いくつかの実施形態では、対象は、結核が風土性である地理的位置（例えば、南アフリカ）に居住している。本明細書で使用される場合、「風土性」は、ある特定の地理的領域又は特定の群の人々に常に存在する疾患を説明するために使用される。

【0120】

いくつかの実施形態では、対象は、ＣＭＶに対して陽性の検査結果が出たことがある。いくつかの実施形態では、患者は、ＣＭＶに対して陰性の検査結果が出たことがある。ＣＭＶ検査は、尿、唾液、血液、痰、又は他の体液中のウイルスの存在を決定するアッセイを指す。ＣＭＶ検査の非限定的な例としては、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、例えば、ＣＭＶサリバリーＰＣＲ検査が挙げられる。

【0121】

いくつかの実施形態では、対象は、インターフェロンγ放出アッセイ（ＩＧＲＡ）からの陽性の結果を有する。いくつかの実施形態では、対象は、インターフェロンγ放出アッセイからの陰性の結果を有する。インターフェロンγ放出アッセイを使用して、結核を診断する。Ｔリンパ球は、特定のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原に曝露すると、インターフェロンγを放出し、これは検査されたＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原への以前の曝露を示す。

【0122】

いくつかの実施形態では、対象は、ＣＭＶに対して陽性の検査結果が出たことがあり、インターフェロンγ放出アッセイからの陽性の結果を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ＣＭＶに対して陰性の検査結果が出たことがあり、インターフェロンγ放出アッセイからの陰性の結果を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ＣＭＶに対して陰性の検査結果が出たことがあり、インターフェロンγ放出アッセイからの陽性の結果を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ＣＭＶに対して陽性の検査結果が出たことがあり、インターフェロンγ放出アッセイからの陰性の結果を有する。更なる実施形態では、対象は、以前に、ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎワクチン（ＢＣＧ）を投与されている。なお更なる実施形態では、対象は、ＣＭＶに対して陽性の検査結果が出たことがあり、インターフェロンγ放出アッセイからの陽性の結果を有し、更に、以前に、ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎワクチン（ＢＣＧ）を投与されている。

【0123】

いくつかの実施形態では、対象は、ＨＩＶ陽性である。更なる実施形態では、対象は、ＨＩＶ陽性であり、現在、抗レトロウイルス療法（ＡＲＴ）を受けている。

【0124】

本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、疾患又は病的状態の徴候又は症状を改善する介入を指す。本明細書で使用される場合、疾患、病的状態又は症状に関する「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔ）」、及び「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語はまた、治療の任意の観察可能な有益な効果を指す。有益な効果は、例えば、罹患しやすい対象における疾患の臨床症状の発症の遅延、いくつか又は全ての疾患臨床症状の重症度の低減、疾患の進行の遅延、疾患の再発数の低減、対象の全体的な健康又は福祉の改善、又は特定の疾患に特異的な当該技術分野で周知の他のパラメータによって証明付けされ得る。予防的治療は、病状を発症するリスクを低下させる目的で、疾患の徴候を示さない、又は初期徴候のみを示す対象に施される治療である。療法的治療（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）は、疾患の徴候及び症状が発現した後に対象に施される治療である。

【0125】

本明細書で使用される場合、「予防すること」又は「予防」は、疾患、障害、又は状態を発症させないか、あるいは、そのような疾患、障害、若しくは状態に関連する徴候若しくは症状の発症の低減（例えば、臨床的に関連する量）、又は徴候若しくは症状の発現の遅延の表示（例えば、数日、数週間、数か月、又は数年）を指す。予防は、１用量超の投与を必要とし得る。

【0126】

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、状態若しくは疾患の徴候若しくは症状を低減若しくは排除するか、又は抗原に対する免疫応答を誘導するなどの所望の応答を生成するのに十分である、薬剤（例えば、融合タンパク質又は融合タンパク質をコードするベクター）の量を指す。いくつかの例では、「有効量」は、障害又は疾患のいずれかの１つ以上の症状及び／又は根本的な原因を治療する（予防を含む）ものである。有効量は、感染症又はがんに関連する１つ以上の徴候又は症状などの特定の疾患又は状態の１つ以上の徴候又は症状が発症することを防止する量を含む、治療有効量であり得る。

【0127】

開示される融合タンパク質又はベクターは、例えば、目的が、ＣＤ４＋Ｔ細胞／免疫及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞／免疫を含む免疫原性応答を産生することである場合、インビボで投与され得る。例えば、いくつかの例では、アカゲザルなどの実験動物において、ＲｈＣＭＶを使用した免疫原性組成物及びワクチンの前臨床試験のために、開示される融合タンパク質又はベクターを使用することが所望され得る。他の例では、臨床試験などのヒト対象において、ＨＣＭＶを使用する免疫原性組成物の実際の臨床使用のために、開示される融合タンパク質又はベクターを使用することが望ましい。

【0128】

そのようなインビボ用途のために、開示される融合タンパク質又はベクターは、薬学的に許容される担体を更に含む免疫原性組成物又は医薬組成物の構成要素として投与され得る。いくつかの実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、融合タンパク質に対する免疫応答を刺激するのに有用であり、予防又は治療用ワクチンの１つ以上の構成要素として使用され得る。本開示の核酸及びベクターは、遺伝子ワクチン、すなわち、本開示の抗原をコードする核酸をヒトなどの対象に送達し、それによって、次いで抗原が対象において発現され、免疫応答を誘発するためのワクチンを提供するために特に有用である。

【0129】

免疫化スケジュール（又はレジメン）は、動物（ヒトを含む）について周知であり、特定の対象及び免疫原性組成物について容易に決定され得る。したがって、免疫原は、対象に１回以上投与されてもよい。好ましくは、免疫原性組成物の別々の投与間における設定時間間隔が存在する。この間隔は、対象ごとで異なるが、典型的には、１０日から数週間の範囲であり、多くの場合、２、４、６、又は８週間である。ヒトの場合、間隔は、典型的には２～６週間である。本開示の特に有利な実施形態では、間隔は、より長く、有利には、約１０週間、１２週間、１４週間、１６週間、１８週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、２８週間、３０週間、３２週間、３４週間、３６週間、３８週間、４０週間、４２週間、４４週間、４６週間、４８週間、５０週間、５２週間、５４週間、５６週間、５８週間、６０週間、６２週間、６４週間、６６週間、６８週間、又は７０週間である。免疫化レジームは、典型的には、免疫原性組成物の１～６回の投与を有するが、１回、２回、又は４回と少なくてもよい。免疫応答を誘導する方法はまた、免疫原とともにアジュバントを投与することを含んでもよい。いくつかの場合では、毎年、年２回、又は他の長い間隔（５～１０年）のブースター免疫化により、初期の免疫化プロトコルが補完されてもよい。本発明方法はまた、様々なプライム－ブーストレジメンを含む。これらの方法では、１つ以上のプライミング免疫化の後に、１つ以上のブースト免疫化が行われる。実際の免疫原性組成物は、各免疫化について同じでも又は異なっていてもよく、免疫原性組成物（例えば、タンパク質又は発現ベクターを含む）の種類、経路、及び免疫原の製剤も変動してもよい。例えば、発現ベクターがプライミング及びブースト工程に使用される場合、それは同じ又は異なる種類（例えば、ＤＮＡ又は細菌又はウイルス発現ベクター）のいずれかであってもよい。１つの有用なプライムブーストレジメンは、４週間離れた２つのプライミング免疫化、続いて最後のプライミング免疫化後の４週間目及び８週目における２つのブースト免疫化を提供する。プライミング及びブースティングレジメンを提供するために、本開示のＤＮＡ、細菌、及びウイルス発現ベクターを使用して包含されるいくつかの並び替え及び組み合わせがあることも当業者に容易に明らかである必要がある。異なる病原体に由来する異なる抗原を発現しながら、ＣＭＶベクターを繰り返し使用し得る。

【0130】

したがって、本開示は、いくつかの実施形態では、対象において免疫応答を生成する方法であって、前述の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物のうちのいずれかを対象に投与することを含む、方法を提供する。対象における免疫応答の生成における使用のための医薬の製造における、前述の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物のうちのいずれかの使用もまた本明細書に提供される。

【0131】

いくつかの実施形態では、本開示は、対象における結核を治療又は予防する方法であって、本明細書に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物は、対象における結核の治療又は予防における使用のための医薬品の製造において使用される。いくつかの実施形態では、結核は、潜在性結核感染症である。いくつかの実施形態では、本開示は、対象における結核疾患を予防する方法を提供する。更なる実施形態では、対象は、インターフェロンγ放出アッセイからの陽性の結果を有したことがある。いくつかの実施形態では、本開示は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染症を予防する方法を提供する。更なる実施形態では、対象は、インターフェロンγ放出アッセイからの陰性の結果を有したことがある。

【0132】

いくつかの実施形態では、本開示は、対象における結核及び／又はＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染症の再発を予防する方法を提供する。更なる実施形態では、再発の予防は、結核の以前の治療の後に生じる。

【0133】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される融合タンパク質及びベクター（例えば、組換えＣＭＶベクター）は、第２の結核治療の前に、同時に、又はそれに続いて投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される融合タンパク質及びベクターは、第２の治療に補助的である。いくつかの実施形態では、補助治療を受ける対象は、薬物耐性Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに感染している。

【0134】

いくつかの実施形態では、本開示は、対象における肺結核を予防する方法を提供する。

【0135】

前述の方法、使用、又は使用のための組成物のうちのいくつかでは、ベクターは、ＣＭＶベクターであり、ＣＭＶベクターは、Ｍｔｂ抗原に対するＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘発するのに有効な量で投与される。いくつかの実施形態では、組換えＨＣＭＶベクターによって誘発されるＣＤ４＋Ｔ細胞の少なくとも１０％は、ＭＨＣ－ＩＩ又はそのオーソログによって拘束される。いくつかの更なる実施形態では、組換えＨＣＭＶベクターによって誘発されるＣＤ４＋Ｔ細胞のうちの少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％は、ＭＨＣ－ＩＩ又はそのオーソログによって拘束される。

【0136】

前述の方法、使用、又は使用のための組成物のうちのいくつかでは、ベクターは、ＣＭＶベクターであり、ＣＭＶベクターは、Ｍｔｂ抗原に対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発するのに有効な量で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＭＶベクターによって誘発されるＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも１０％は、ＭＨＣ－Ｉａ又はそのオーソログによって拘束される。いくつかの更なる実施形態では、ＣＭＶベクターによって誘発されるＣＤ８＋Ｔ細胞のうちの少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％は、ＭＨＣ－Ｉａ又はそのオーソログによって拘束される。

【0137】

いくつかの更なる態様では、本開示は、本明細書に記載の融合タンパク質をコードするＣＭＶベクターを投与することによって、ＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体を認識するＣＤ４＋Ｔ細胞を生成する方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、
（ａ）ＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体を認識するＣＤ４＋Ｔ細胞のセットを生成するのに有効な量の本明細書に記載のＣＭＶベクターを第１の対象に投与することと、
（ｂ）ＣＤ４＋Ｔ細胞のセットから第１のＣＤ４＋ＴＣＲを特定することであって、第１のＣＤ４＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－ＩＩ／融合タンパク質由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
（ｃ）第２の対象から１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を単離することと、
（ｄ）第２の対象から単離された１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を発現ベクターでトランスフェクトすることであって、発現ベクターが、第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、第２のＣＤ４＋ＴＣＲが、第１のＣＤ４＋ＴＣＲのＣＤＲ３α及びＣＤＲ３βを含み、それによって、ＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、を含む。

【0138】

いくつかの実施形態では、方法は、
（ａ）ＣＤ４＋Ｔ細胞のセットから第１のＣＤ４＋ＴＣＲを特定することであって、ＣＤ４＋Ｔ細胞のセットが、本明細書に記載のＣＭＶベクターを投与された対象から単離され、第１のＣＤ４＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－ＩＩ／融合タンパク質由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
（ｂ）第２の対象から１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を単離することと、
（ｃ）第２の対象から単離された１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を発現ベクターでトランスフェクトすることであって、発現ベクターが、第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、第２のＣＤ４＋ＴＣＲが、第１のＣＤ４＋ＴＣＲのＣＤＲ３α及びＣＤＲ３βを含み、それによって、ＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体を認識する１つ以上のＴＣＲトランスジェニックＣＤ４＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、を含む。

【0139】

いくつかの更なる態様では、本開示は、本明細書に記載の融合タンパク質をコードするＣＭＶベクターを投与することによって、ＭＨＣ－Ｉａ／ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、
（ａ）ＭＨＣ－Ｉａ／ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞のセットを生成するのに有効な量の本明細書に開示されるＣＭＶベクターを第１の対象に投与することと、
（ｂ）ＣＤ８＋Ｔ細胞のセットから第１のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－Ｉａ／融合タンパク質由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
（ｃ）第２の対象から１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することと、
（ｄ）第２の対象から単離された１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を発現ベクターでトランスフェクトすることであって、発現ベクターが、第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、第１のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ３α及びＣＤＲ３βを含み、それによって、ＭＨＣ－Ｉａ／ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、を含む。

【0140】

いくつかの実施形態では、方法は、
（ａ）ＣＤ８＋Ｔ細胞のセットから第１のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、ＣＤ８＋Ｔ細胞のセットが、本明細書に開示されるＣＭＶベクターを投与された対象から単離され、第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－Ｉａ／融合タンパク質由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
（ｂ）第２の対象から１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することと、
（ｃ）第２の対象から単離された１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を発現ベクターでトランスフェクトすることであって、発現ベクターが、第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、第１のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ３α及びＣＤＲ３βを含み、それによって、ＭＨＣ－Ｉａ／ペプチド複合体を認識する１つ以上のＴＣＲトランスジェニックＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、を含む。

【0141】

Ｔ細胞を生成する方法のいくつかの実施形態では、第１のＣＤ４＋ＴＣＲ又は第１のＣＤ８＋ＴＣＲは、ＤＮＡ又はＲＮＡ配列決定によって特定される。いくつかの実施形態では、第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする核酸配列又は第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする核酸配列は、第１のＣＤ４＋ＴＣＲ又は第１のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と同一である。いくつかの実施形態では、第１及び第２の対象は、ヒトである。

【0142】

本開示はまた、前述の方法によって生成されたＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞も提供する。いくつかの更なる実施形態では、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞は、対象における疾患を治療又は予防する方法において使用される。ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞は、対象における疾患の治療又は予防における使用のための薬剤の製造における、なお更なる実施形態で使用され得る。

【0143】

ＶＩ．例示的実施形態
いくつかの実施形態では、本開示は、以下を提供する：
１．融合タンパク質であって、
（ａ）Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、Ｒａ１２、ＴｂＨ９、Ｒａ３５、及びＲｐｆＤ、若しくはそれらの断片、
（ｂ）Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－Ｒａ１２－ＴｂＨ９－Ｒａ３５－ＲｐｆＤ、
（ｃ）配列番号４２に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｄ）配列番号４２に記載のアミノ酸配列、
（ｅ）Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＡ、ＲｐｆＤ、Ｒａ１２、ＴｂＨ９、及びＲａ３５、若しくはそれらの断片、
（ｆ）Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－ＲｐｆＡ－ＲｐｆＤ－Ｒａ１２－ＴｂＨ９－Ｒａ３５、
（ｇ）（ｉ）配列番号９～１０のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号１８～２２のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｈ）（ｉ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｉ）（ｉ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号２２に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｊ）（ｉ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号１９に記載のアミノ酸配列、
（ｋ）（ｉ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号２２に記載のアミノ酸配列、
（ｌ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｍ）配列番号２８に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｎ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｏ）配列番号３０に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｐ）配列番号２７に記載のアミノ酸配列、
（ｑ）配列番号２８に記載のアミノ酸配列、
（ｒ）配列番号２９に記載のアミノ酸配列、
（ｓ）配列番号３０に記載のアミノ酸配列、
（ｔ）Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＡ、ＲｐｆＤ、及びＴｂＨ９、若しくはそれらの断片、
（ｕ）Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－ＲｐｆＡ－ＲｐｆＤ－ＴｂＨ９、
（ｖ）（ｉ）配列番号９～１０のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｗ）（ｉ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｘ）（ｉ）配列番号１０に記載のアミノ酸配列、及び（ｉｉ）配列番号２４に記載のアミノ酸配列、
（ｙ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｚ）配列番号３２に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ａａ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列、
（ｂｂ）配列番号３２に記載のアミノ酸配列、
（ｃｃ）Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＤ、Ｒａ１２、ＴｂＨ９、及びＲａ３５、若しくはそれらの断片、
（ｄｄ）Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－ＲｐｆＤ－Ｒａ１２－ＴｂＨ９－Ｒａ３５、
（ｅｅ）（ｉ）配列番号１及び１１～１２のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号２又は１３に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｉｉ）配列番号３又は１４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｖ）配列番号４又は１５に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｖ）配列番号６又は１７に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｖｉ）配列番号２３に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｖｉｉ）配列番号８又は２４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｖｉｉｉ）配列番号２５～２６のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｆｆ）配列番号３３に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｇｇ）配列番号３４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｈｈ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｉｉ）配列番号３６に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｊｊ）配列番号３３に記載のアミノ酸配列、
（ｋｋ）配列番号３４に記載のアミノ酸配列、
（ｌｌ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列、
（ｍｍ）配列番号３６に記載のアミノ酸配列、
（ｎｎ）Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＤ、及びＴｂＨ９、若しくはそれらの断片、
（ｏｏ）Ａｇ８５Ａ－ＥＳＡＴ－６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ－ＲｐｆＤ－ＴｂＨ９、
（ｐｐ）（ｉ）配列番号１及び１１～１２のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｉ）配列番号２又は１３に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｉｉ）配列番号３又は１４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｉｖ）配列番号４又は１５に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、（ｖ）配列番号６又は１７に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｖｉ）配列番号８又は２４に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｑｑ）配列番号３７に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｒｒ）配列番号３８に記載のアミノ酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、
（ｓｓ）配列番号３７に記載のアミノ酸配列、又は
（ｔｔ）配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる、融合タンパク質。
２．配列番号４１に記載の核酸配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有する配列を含む核酸によってコードされる、融合タンパク質。
３．配列番号４１に記載の核酸配列を含む核酸によってコードされる、融合タンパク質。
４．ポリＨｉｓタグを更に含む、実施形態１～３のうちのいずれか１つの融合タンパク質。
５．ポリＨｉｓタグが、２～６個のＨｉｓ残基を含むか又はそれらからなる、実施形態４の融合タンパク質。
６．ポリＨｉｓタグが、融合タンパク質のＮ末端に位置する、実施形態１～５のうちのいずれか１つの融合タンパク質。
７．ポリＨｉｓタグが、最初のＭｅｔ残基の後に挿入される、実施形態６の融合タンパク質。
８．ＨＡタグを更に含む、実施形態１～７のうちのいずれかの融合タンパク質。
９．ＨＡタグが、融合タンパク質のＣ末端に位置する、実施形態８の融合タンパク質。
１０．融合タンパク質が、Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ－６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＡ、ＲｐｆＤ、Ｒａ１２、ＴｂＨ９、及びＲａ３５のうちの１つ以上を接続する１つ以上のリンカーを更に含み、１つ以上のリンカーの各々が、１つ以上のアミノ酸残基を含むか、又はそれらからなる、実施形態１～９のうちのいずれか１つの融合タンパク質。
１１．実施形態１～１０のうちのいずれか１つの融合タンパク質をコードする、核酸分子。
１２．実施形態１１の核酸分子を含む、ベクター。
１３．プロモーターを更に含み、プロモーターが、融合タンパク質をコードする核酸分子に作動可能に連結されている、実施形態１２のベクター。
１４．ベクターが、ウイルスベクターである、実施形態１２又は実施形態１３のベクター。
１５．ウイルスベクターが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）ベクターである、実施形態１４のベクター。
１６．配列番号４４に記載の核酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有する核酸配列を含む、ベクター。
１７．配列番号４４に記載の核酸配列を含む、ベクター。
１８．配列番号４４に記載の核酸配列から本質的になる、ベクター。
１９．配列番号４４に記載の核酸配列からなる、ベクター。
２０．ウイルスベクターが、ＲｈＣＭＶベクター、ＨＣＭＶベクター、又は組換えＨＣＭＶベクターである、実施形態１５～１９のうちのいずれか１つのベクター。
２１．プロモーターが、融合タンパク質をコードする核酸分子に作動可能に連結されており、プロモーターが、ＵＬ７８プロモーター、又はそのオーソログである、実施形態１５～２０のうちのいずれか１つのベクター。
２２．融合タンパク質をコードする核酸分子が、ＵＬ７８の全部又は一部分を置き換える、実施形態２１のベクター。
２３．ベクターが、配列番号４４に記載の核酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有する核酸配列を含む、実施形態２２のベクター。
２４．プロモーターが、融合タンパク質をコードする核酸分子に作動可能に連結されており、プロモーターが、ＵＬ８２プロモーター、又はそのオーソログである、実施形態１５又は実施形態２０のベクター。
２５．融合タンパク質をコードする核酸分子が、ＵＬ８２の全部又は一部分を置き換える、実施形態２４のベクター。
２６．ＲｈＣＭＶベクター又はＨＣＭＶベクターが、ＵＬ１２８若しくはＵＬ１３０、又はそれらのオーソログを発現しない、実施形態１５～２５のうちのいずれか１つのベクター。
２７．ＴＲ３骨格及び配列番号４２に記載の異種抗原をコードする核酸配列を含む組換えＨＣＭＶベクターであって、
（ａ）ベクターが、ＵＬ１２８若しくはＵＬ１３０、又はそれらのオーソログを発現せず、
（ｂ）ベクターが、ＵＬ１４６、ＵＬ１４７、ＵＬ１８、及びＵＬ８２、又はそれらのオーソログをコードする核酸配列を含み、
（ｃ）異種抗原が、ＵＬ７８の全部又は一部分を置き換え、かつＵＬ７８プロモーターに作動可能に連結されている、組換えＨＣＭＶベクター。
２８．組換えＨＣＭＶベクターが、配列番号４４に記載の核酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有する核酸配列を含む、実施形態２７の組換えＨＣＭＶベクター。
２９．ＲｈＣＭＶ又はＨＣＭＶベクターが、（ｉ）ＵＬ１４６をコードする核酸配列及びＵＬ１４７をコードする核酸配列、又はそれらのオーソログを含み、かつ（ｉｉ）ＵＬ１２８若しくはＵＬ１３０、又はそれらのオーソログを発現しない、実施形態１５～２８のうちのいずれか１つのベクター。
３０．ベクターが、ＵＬ１２８及びＵＬ１３０をコードする核酸配列における１つ以上の変異の存在からもたらされる、ＵＬ１２８タンパク質又はＵＬ１３０タンパク質を発現しない、実施形態２６～２９のうちのいずれか１つのベクター。
３１．ＵＬ１２８、及びＵＬ１３０をコードする核酸配列における変異が、点変異、フレームシフト変異、切断変異、又はウイルスタンパク質をコードする核酸配列の全ての欠失である、実施形態３０のベクター。
３２．ベクターが、ＴＲ３骨格を含むＨＣＭＶベクターである、実施形態１５～３１のうちのいずれか１つのベクター。
３３．ベクターが、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）認識エレメント（ＭＲＥ）をコードする核酸配列を更に含み、ＭＲＥが、内皮細胞において発現されるｍｉＲＮＡの標的部位を含有する、実施形態１５～３２のうちのいずれか１つのベクター。
３４．ベクターが、ＭＲＥをコードする核酸配列を更に含み、ＭＲＥが、骨髄細胞において発現されるｍｉＲＮＡの標的部位を含有する、実施形態１５～３３のうちのいずれか１つのベクター。
３５．（ｉ）（ａ）実施形態１～１０のうちのいずれか１つの融合タンパク質、（ｂ）実施形態１１の核酸、又は（ｃ）実施形態１２～３４のうちのいずれか１つのベクターと、（ｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
３６．薬学的に許容される担体が、ヒスチジントレハロース（ＨＴ）緩衝液である、実施形態３５の医薬組成物。
３７．薬学的に許容される担体が、約２０ｍＭのＬ－ヒスチジン及び約１０％（ｗ／ｖ）のトレハロースを含むヒスチジントレハロース（ＨＴ）緩衝液である、実施形態３５又は３６の医薬組成物。
３８．薬学的に許容される担体が、２０ｍＭのＬ－ヒスチジン及び１０％（ｗ／ｖ）のトレハロースを含むヒスチジントレハロース（ＨＴ）緩衝液である、実施形態３５～３７のうちのいずれか１つの医薬組成物。
３９．薬学的に許容される担体が、２０ｍＭのＬ－ヒスチジン及び１０％（ｗ／ｖ）のトレハロースを含むｐＨ７．２を有するヒスチジントレハロース（ＨＴ）緩衝液である、実施形態３５～３８のうちのいずれか１つの医薬組成物。
４０．（ｉ）（ａ）実施形態１～１０のうちのいずれか１つの融合タンパク質、（ｂ）実施形態１１の核酸、又は（ｃ）実施形態１２～３４のうちのいずれか１つのベクターと、（ｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、免疫原性組成物。
４１．対象において免疫応答を生成する方法であって、対象に、実施形態１～４０のうちのいずれか１つの融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物を投与することを含む、方法。
４２．対象における免疫応答の生成における使用のための薬剤の製造における、実施形態１～４０のうちのいずれか１つの融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物の使用。
４３．対象における免疫応答の生成における使用のための、実施形態１～４０のうちのいずれか１つの融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。
４４．対象における結核を治療又は予防する方法であって、対象に、実施形態１～４０のうちのいずれか１つの融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物を投与することを含む、方法。
４５．対象における結核の治療又は予防における使用のための薬剤の製造における、実施形態１～４０のうちのいずれか１つの融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物の使用。
４６．対象における結核の治療又は予防における使用のための、実施形態１～４０のうちのいずれか１つの融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。
４７．対象における結核の治療又は予防における使用のための、実施形態１～４０のうちのいずれか１つの融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、対象が、ＣＭＶ陽性である、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。
４８．対象における結核の治療又は予防における使用のための、実施形態１～４０のうちのいずれか１つの融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、対象が、ＣＭＶ陰性である、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。
４９．対象における結核の治療又は予防における使用のための、実施形態１～４０、４７、又は４８のうちのいずれか１つの融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、対象が、インターフェロンγ放出アッセイにおいて陽性の検査結果が出る、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。
５０．対象における結核の治療又は予防における使用のための、実施形態１～４０、４７、又は４８のうちのいずれか１つの融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、対象が、インターフェロンγ放出アッセイにおいて陰性の検査結果が出る、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。
５１．対象における結核の治療又は予防における使用のための、実施形態１～４０又は４７～５０のうちのいずれか１つの融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、対象が、以前にｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎワクチン（ＢＣＧ）を投与されている、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。
５２．対象における結核の治療又は予防における使用のための、実施形態１～４０又は４７～５１のうちのいずれか１つの融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、対象が、ＨＩＶ陽性である、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。
５３．対象における結核の治療又は予防における使用のための、実施形態１～４０又は４７～５２のうちのいずれか１つの融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、対象が、ＨＩＶ陽性であり、現在抗レトロウイルス治療薬を服用している、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。
５４．対象における結核の治療又は予防における使用のための、実施形態１～４０又は４７～５３のうちのいずれか１つの融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物であって、対象が、第２の療法を投与される、融合タンパク質、核酸、ベクター、又は組成物。
５５．結核が、潜在性結核感染症である、実施形態４４～５４のうちのいずれか１つの方法、製造における使用、又は使用。
５６．結核が、肺結核感染症である、実施形態４４～５５のうちのいずれか１つの方法、製造における使用、又は使用。
５７．結核が、再発性結核感染症である、実施形態４４～５６のうちのいずれか１つの方法、製造における使用、又は使用。
５８．ベクターが、ＣＭＶベクターであり、ＣＭＶベクターが、Ｍｔｂ抗原に対するＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘発するのに有効な量で投与される、実施形態４１～５７のうちのいずれか１つの方法、製造における使用、又は使用。
５９．ベクターが、ＣＭＶベクターであり、ＣＭＶベクターが、約１０^２ｐｆｕ～約１０^７ｐｆｕの量で投与される、実施形態４１～５８のうちのいずれか１つの方法、製造における使用、又は使用。
６０．組換えＨＣＭＶベクターによって誘発されたＣＤ４＋Ｔ細胞のうちの少なくとも１０％が、ＭＨＣ－ＩＩ又はそのオーソログによって拘束される、実施形態５８又は実施形態５９の方法、製造における使用、又は使用。
６１．組換えＨＣＭＶベクターによって誘発されたＣＤ４＋Ｔ細胞のうちの少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％が、ＭＨＣ－ＩＩ又はそのオーソログによって拘束される、実施形態６０の方法、製造における使用、又は使用。
６２．ベクターが、ＣＭＶベクターであり、ＣＭＶベクターが、Ｍｔｂ抗原に対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発するのに有効な量で投与される、実施形態４１～６１のうちのいずれか１つの方法、製造における使用、又は使用。
６３．ＣＭＶベクターによって誘発されたＣＤ８＋Ｔ細胞のうちの少なくとも１０％が、ＭＨＣ－Ｉａ又はそのオーソログによって拘束される、実施形態６２の方法、製造における使用、又は使用のためのベクター若しくは組成物。
６４．ＣＭＶベクターによって誘発されたＣＤ８＋Ｔ細胞のうちの少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％が、ＭＨＣ－Ｉａ又はそのオーソログによって拘束される、実施形態６３の方法、製造における使用、又は使用のためのベクター若しくは組成物。
６５．ＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体を認識するＣＤ４＋Ｔ細胞を生成する方法であって、方法が、
（ａ）ＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体を認識するＣＤ４＋Ｔ細胞のセットを生成するのに有効な量の実施形態１５～３４のうちのいずれか１つのＣＭＶベクターを第１の対象に投与することと、
（ｂ）ＣＤ４＋Ｔ細胞のセットから第１のＣＤ４＋ＴＣＲを特定することであって、第１のＣＤ４＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－ＩＩ／融合タンパク質由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
（ｃ）第２の対象から１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を単離することと、
（ｄ）第２の対象から単離された１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を発現ベクターでトランスフェクトすることであって、発現ベクターが、第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、第２のＣＤ４＋ＴＣＲが、第１のＣＤ４＋ＴＣＲのＣＤＲ３α及びＣＤＲ３βを含み、それによって、ＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、を含む、方法。
６６．ＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体を認識するＣＤ４＋Ｔ細胞を生成する方法であって、方法が、
（ａ）ＣＤ４＋Ｔ細胞のセットから第１のＣＤ４＋ＴＣＲを特定することであって、ＣＤ４＋Ｔ細胞のセットが、実施形態１５～３４のうちのいずれか１つのＣＭＶベクターを投与された対象から単離され、第１のＣＤ４＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－ＩＩ／融合タンパク質由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
（ｂ）第２の対象から１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を単離することと、
（ｃ）第２の対象から単離された１つ以上のＣＤ４＋Ｔ細胞を発現ベクターでトランスフェクトすることであって、発現ベクターが、第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、第２のＣＤ４＋ＴＣＲが、第１のＣＤ４＋ＴＣＲのＣＤＲ３α及びＣＤＲ３βを含み、それによって、ＭＨＣ－ＩＩ／ペプチド複合体を認識する１つ以上のＴＣＲトランスジェニックＣＤ４＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、を含む、方法。
６７．ＭＨＣ－Ｉａ／ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する方法であって、方法が、
（ａ）ＭＨＣ－Ｉａ／ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞のセットを生成するのに有効な量の実施形態１５～３４のうちのいずれか１つのＣＭＶベクターを第１の対象に投与することと、
（ｂ）ＣＤ８＋Ｔ細胞のセットから第１のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－Ｉａ／融合タンパク質由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
（ｃ）第２の対象から１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することと、
（ｄ）第２の対象から単離された１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を発現ベクターでトランスフェクトすることであって、発現ベクターが、第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、第１のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ３α及びＣＤＲ３βを含み、それによって、ＭＨＣ－Ｉａ／ペプチド複合体を認識する１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、を含む、方法。
６８．ＭＨＣ－Ｉａ／ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する方法であって、方法が、
（ａ）ＣＤ８＋Ｔ細胞のセットから第１のＣＤ８＋ＴＣＲを特定することであって、ＣＤ８＋Ｔ細胞のセットが、実施形態１５～３４のうちのいずれか１つのＣＭＶベクターを投与された対象から単離され、第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＭＨＣ－Ｉａ／融合タンパク質由来ペプチド複合体を認識する、特定することと、
（ｂ）第２の対象から１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を単離することと、
（ｃ）第２の対象から単離された１つ以上のＣＤ８＋Ｔ細胞を発現ベクターでトランスフェクトすることであって、発現ベクターが、第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と、第２のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーターと、を含み、第２のＣＤ８＋ＴＣＲが、第１のＣＤ８＋ＴＣＲのＣＤＲ３α及びＣＤＲ３βを含み、それによって、ＭＨＣ－Ｉａ／ペプチド複合体を認識する１つ以上のＴＣＲトランスジェニックＣＤ８＋Ｔ細胞を生成する、トランスフェクトすることと、を含む、方法。
６９．第１のＣＤ４＋ＴＣＲ又は第１のＣＤ８＋ＴＣＲが、ＤＮＡ又はＲＮＡ配列決定によって特定される、実施形態６５～６８のうちのいずれか１つの方法。
７０．第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする核酸配列又は第２のＣＤ４＋ＴＣＲをコードする核酸配列が、第１のＣＤ４＋ＴＣＲ又は第１のＣＤ８＋ＴＣＲをコードする核酸配列と同一である、実施形態６５～６９のうちのいずれか１つの方法。
７１．第１の対象が、ヒトである、実施形態６５～７０のうちのいずれか１つの方法。
７２．第２の対象が、ヒトである、実施形態６５～７１のうちのいずれか１つの方法。
７３．実施形態６５、６６及び６９～７２のうちのいずれか１つの方法によって生成される、ＣＤ４＋Ｔ細胞。
７４．対象における疾患を治療又は予防する方法であって、方法が、実施形態７３のＣＤ４＋Ｔ細胞を対象に投与することを含む、方法。
７５．対象における疾患の治療又は予防における使用のための薬剤の製造における、実施形態７３のＣＤ４＋Ｔ細胞の使用。
７６．対象における疾患の治療又は予防における使用のための、実施形態７３のＣＤ４＋Ｔ細胞。
７７．実施形態６７～７２のうちのいずれか１つの方法によって生成されるＣＤ８＋Ｔ細胞。
７８．対象における疾患を治療又は予防する方法であって、方法が、実施形態７７のＣＤ８＋Ｔ細胞を対象に投与することを含む、方法。
７９．対象における疾患の治療又は予防における使用のための薬剤の製造における、実施形態７７のＣＤ８＋Ｔ細胞の使用。
８０．対象における疾患の治療又は予防における使用のための、実施形態７７のＣＤ８＋Ｔ細胞。

【実施例】

【0144】

実施例１：Ｍｔｂ抗原カセットの構築
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｍｔｂ）抗原を含む融合タンパク質をコードするヒトＣＭＶベクターをデザインした。融合体６、融合体７（ＲｐｆＡの欠失及びＲｐｆＡ部位での融合タンパク質Ｍ７２のバリアント「Ｍ７２－融合体－２」の挿入を伴う融合体６）、及び融合体８（融合体６に加えてＣ末端でのＭ７２－融合体－２の付加）を含む３つのＭｔｂ抗原カセットを評価した（図２）。融合体７及び融合体８に含まれるＭ７２のバリアント「Ｍ７２－融合体－２」は、Ｍ７２であり、Ｎ末端の２残基ヒスチジンタグ及びアミノ酸位置１のメチオニンの両方が除去されている（配列番号２２）。Ｍｔｂ抗原及びＲｐｆＡバリアントの保存をまとめた表を図３に示す。

【0145】

融合体６の構成要素
融合体６は、Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ６、Ｒｖ３４０７、Ｒｖ２６２６ｃ、ＲｐｆＡ、及びＲｐｆＤを含むＭｔｂ融合タンパク質である。

【0146】

融合体７のデザイン
融合体７は、融合体６に基づいて構築された。融合体７を作成するために、まず、ＲｐｆＡを削除した。ＲｐｆＡは、Ｍｔｂ株において可変性の発現を有する（図４）。例えば、多くのＭｔｂ株におけるＲｐｆＡは、融合体６のアイソフォームのＣ末端（ＲｐｆＡにおいて３２１ｂｐで開始する）のみを含有する。更に、Ｍｔｂ株のサブセットは、ＲｐｆＡのＮ末端のみを有し、他のものは、Ｎ末端及び中間部分の両方を欠く。最も短いＲｐｆＡ（Ｃ末端のみ、１００アミノ酸未満）を有するＭｔｂ単離株は、主に英国及びオランダ由来である。南アフリカ由来のＭｔｂ単離株は、可変性のＲｐｆＡを有し、Ｃ末端のみ、Ｎ末端のみ、又は完全長ＲｐｆＡを含む場合がある（図５）。次いで、Ｍ７２－融合体－２をＲｐｆＡ部位に挿入した。Ｍ７２－融合体－２は、ワクチン抗原として機能する２つのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原、Ｍｔｂ３２ａ及びＴｂＨ９に由来する融合タンパク質であるＭ７２に由来する。Ｍｔｂ３２ａは、毒性及び無毒性のＭｔｂ株で保存されたセリンプロテアーゼである。ＴｂＨ９（Ｍｔｂ３９ａとしても知られている）は、Ｒｖ１１９６／ｐｐｅ１８によってコードされるＰＰＥ／ＰＥファミリータンパク質である。ＰＰＥ／ＰＥタンパク質は、Ｍｔｂ免疫の主要な標的であることが知られている。ＴｂＨ９は、Ｍｔｂにおける「コントローラー」対「プログレッサー」のＴＣＲプロファイリングによって特定された抗原の１つである。ＲｐｆＡを欠失させて、遺伝的に安定なベクターを維持しながら、Ｍ７２抗原の発現を調節した。ＴｂＨ９は、潜在におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞標的である。最終的な融合体７構築物（配列番号４２）は、Ａｇ８５Ａ、ＥＳＡＴ６－Ｒｖ３４０７－Ｒｖ２６２６ｃ、Ｍ７２－融合体－２（Ｍｔｂ３２Ａ及びＴｂＨ９）、及びＲｐｆＤを含む。

【0147】

融合体８のデザイン
融合体８は、融合体６のＣ末端にＭ７２－融合体－２が付加され、ＲｐｆＡが削除されなかったことを除いて、融合体７の構築と同様に、融合体６に基づいて構築された。

【0148】

実施例２：抗原発現、遺伝的安定性、及び免疫原性についてのＭｔｂ抗原カセットの評価
Ｍｔｂ抗原カセットを、ＵＬ８２又はＵＬ７８プロモーターのいずれかと対形成させた。（アカゲザルにおける）抗原発現、遺伝的安定性、及び免疫原性を評価した。

【表1】

【0149】

６つの抗原カセット及びプロモーターの組み合わせ（表１）の抗原発現を、ＥＳＡＴ－６抗体を用いたウェスタンブロットによって細菌人工染色体（ＢＡＣ）において検査した。６つのＢＡＣ全てが、予想されるサイズ範囲のバンドを有するＭｔｂ抗原発現を有した。

【0150】

同じＢＡＣを使用して遺伝的安定性を評価した。構築物当たりの３つのクローンを継代して、各継代で次世代配列決定（ＮＧＳ）を用いて、薬物産生プロセスを模倣した（３つの追加の継代を伴う研究シードストック（ＲＳＳ＋３）、合計４つの継代）。ＵＬ７８含有構築物については０．００３のＭＯＩで、又はＵＬ８２含有構築物については０．０１のＭＯＩで、Ｔ－１５０フラスコ内で継代を実施した。遺伝的安定性は、継代とともに増加する重大な修飾（すなわち、導入遺伝子又はＵ_Ｌ／１ｂ’領域に関与する欠失及び／又は再配列）を観察しないこととして定義された。融合体６＋ＵＬ７８プロモーター及び融合体６＋ＵＬ８２プロモーターを発現するＢＡＣは、ＲＳＳ＋３を通して安定であることが見出された。融合体８＋ＵＬ７８プロモーターを発現するＢＡＣは、挿入物及びベクター骨格の不安定性を示した。融合体７＋ＵＬ７８プロモーター及び融合体７＋ＵＬ８２プロモーターを発現するＢＡＣは、ＲＳＳ＋２及びＲＳＳ＋３を通じて安定していた。融合体８＋ＵＬ８２プロモーターを発現するＢＡＣは、ＲＳＳ＋２及びＲＳＳ＋３を通して安定であった。

【0151】

免疫原性を、アカゲザルモデルにおいて評価した。１０^６ｐｆｕの用量で、６つの抗原カセット及びプロモーターの組み合わせ（表１）を発現するＨＣＭＶウイルスベクターをアカゲザルに投与した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、２週間単位で最大１０週間単離し、次いで、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）の前に、融合体６、又は融合体６及びＭ７２において発現された遺伝子由来のペプチドを含有するＭｔｂペプチドプールで刺激した。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度、ＩＦＮγ＋及び／又はＴＮＦα＋細胞の頻度、並びにメモリー／エフェクターＴ細胞表現型を決定した。融合体６＋ＵＬ７８プロモーター又は融合体６＋ＵＬ８２プロモーターを発現するウイルスベクターを投与された動物では、融合体６ペプチドに対するＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答を投薬の６週間後に検出した（図６Ａ～６Ｌ）。融合体７＋ＵＬ７８プロモーター、融合体７＋ＵＬ８２プロモーター、又は融合体８＋ＵＬ８２プロモーターを発現するウイルスベクターを投与された動物では、ペプチドプールに対するＴ細胞応答を６週間で検出した（図７Ａ～７Ｎ）。Ｔ細胞応答は、ＩＦＮγ＋及び／又はＴＮＦα＋ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞の検出によって示された。

【0152】

３つのＭｔｂ抗原デザインは全て、機能的であった。融合体７抗原カセットは、アカゲザルにおいてＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発した。ＲｐｆＡは、Ｍｔｂ株において可変性の発現を有し、ヒトの試験におけるＣＭＶに対する保護を与えるＭ７２－融合体－２での置き換えを正当化する。融合体６抗原カセットは、感染サイクルの異なるステージ（活動性／潜在性／再活性化ステージ）から組み込まれる広範囲のＭｔｂ抗原を組み込んでおり、アカゲザル試験において保護的であることが示されている。融合体８抗原カセットは、融合体６カセット及びＭ７２－融合体－２を含むが、遺伝的不安定性と関連付けられる可能性がある。

【0153】

実施例３：ｈＣＭＶ－ＴＢベクター骨格及びＴＢ抗原プロモーターの選択
ベクター骨格選択
Ｍｔｂ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞よりも感染制御にとってより重要であるとみなされている。静脈内ＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）ワクチン接種の非ヒト霊長類試験は、抗原特異的Ｔ細胞の頻度の重要性を示唆する。更に、ＧＳＫ Ｍ７２－ＡＳＯ１Ｅワクチンは、抗体及びＣＤ４＋Ｔ細胞を誘発するが、ＣＤ８＋Ｔ細胞はほとんど又は全く誘発しない（Ｐｅｎｎ－Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｖａｃｃｉｎｅ Ｍ７２／ＡＳ０１Ｅ ｉｎ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｓ ｉｎ ａ Ｍｔｂ ｅｎｄｅｍｉｃ ｓｅｔｔｉｎｇ．Ｖａｃｃｉｎｅ．２０１５ Ｊｕｌ ３１；３３（３２）：４０２５－３４）。したがって、Ｍｔｂ特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を誘発することは、ＣＭＶ－ＴＢワクチンデザインにとって重要であり、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答を費やしてＣＤ８＋Ｔ細胞を誘発することよりも好ましい。更に、従来のクラスＩ拘束ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘発することは、クラスＩＩ／ＭＨＣ－Ｅ拘束ＣＤ８＋Ｔ細胞を誘発することよりも好ましく、クラスＩＩ／ＭＨＣ拘束は、Ｒｈ－ＣＭＶ Ｍｔｂの保護に必要でないことが示された。

【0154】

本明細書に記載のＣＭＶベクター骨格は、堅牢なＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘発することが知られている。更に、骨格は、クラスＩ拘束ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘導すると予想される、無傷なＵＬ１４６－１４７を含む。骨格は、ＭＲＣ－５線維芽細胞における遺伝的安定性を促進することが知られるＵＬ１２８－１３０の欠失を含む。

【0155】

ＣＭＶ－ＴＢベクターを、表２に示す特徴で構築した。

【表2】

【0156】

Ｍｔｂ抗原カセットプロモーター選択
融合タンパク質が、欠失された遺伝子のプロモーターに作動可能に連結され、それによって発現されるように、Ｍｔｂ融合タンパク質をＣＭＶベクター骨格に挿入して、遺伝子（例えば、ＵＬ８２又はＵＬ７８）を置き換え得る。ＵＬ７８プロモーターは、融合体７又は融合体６の発現を効果的に駆動することが見出され、ＵＬ８２プロモーターは、融合体８の発現を効果的に駆動することが見出された。ＨＣＭＶ遺伝子ＵＬ８２（外皮タンパク質ｐｐ７１をコードする）の欠失は、増殖欠損を引き起こし、より低いウイルス収率をもたらすことが知られている。更に、外因性ｐｐ７１の発現は、ＵＬ８２欠失ＣＭＶベクターからの導入遺伝子発現を増加させることも知られている（Ｃａｐｏｓｉｏ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｌｉｖｅ－ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ＨＣＭＶ－ｂａｓｅｄ ｖａｃｃｉｎｅ ｐｌａｔｆｏｒｍ．Ｓｃｉ Ｒｅｐ．２０１９ Ｄｅｃ １７；９（１）：１９２３６）。したがって、ＵＬ８２プロモーターの使用は、導入遺伝子発現及びウイルス収率の最も高いレベルを達成するために外因性ｐｐ７１発現を必要とする。対照的に、ＵＬ７８プロモーターの使用は、産生中のｐｐ７１ ｍＲＮＡの外因性発現の必要性を排除する。

【0157】

実施例４：ベクター４の安全性、反応原性、忍容性、及び免疫原性を評価するための第１ａ／１ｂ相試験
第１ａ／１ｂ相試験は、ベクター４（配列番号４４）の安全性、反応原性、忍容性、及び免疫原性を評価するようにデザインされている。４つの群の患者は、ＣＭＶ状態（陽性又は陰性）、インターフェロンγ放出アッセイの結果（陽性又は陰性）、及び以前のＢＣＧ（ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）ワクチン接種の受領（陽性又は陰性）に基づいて評価される。「パートＡ」には、ＣＭＶ＋／ＩＧＲＡ－対象が含まれ、「パートＢ」には、ＣＭＶ－／ＩＧＲＡ－対象が含まれ、「パートＣ」には、ＣＭＶ＋／ＩＧＲＡ－／ＢＣＧ＋対象が含まれ、「パートＤ」には、ＣＭＶ＋／ＩＧＲＡ＋／ＢＣＧ＋対象が含まれる。試験は、米国内の複数の現地（パートＡ及びパートＢ群）及びＭｔｂが風土性である国（例えば、南アフリカなど）の１～２か所の現地で実施される。各コホートは、１０（１０）人の患者で構成され、８（８）人が薬物を受け、２（２）人がプラセボを受ける。

【0158】

実施例５：複数の結核関連適応症における使用のためのベクター４を評価するための開発計画
図９は、青年及び成人における肺結核の予防における使用のためのベクター４（配列番号４４）を評価するための開発計画を示す。図１０は、青年及び成人におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染症の予防及び結核再発の予防における使用のためのベクター４（配列番号４４）を評価するための開発計画を示す。

【0159】

特定の実施形態が示し、説明してきたが、上記の様々な実施形態は、更なる実施形態を提供するために組み合わされ得、上記の様々な実施形態は、更なる実施形態を提供するために組み合わされ得ることは容易に理解されるであろう。

【0160】

２０２１年８月３１日に出願された米国仮出願第６３／２３９，２７８号及び２０２２年７月２７日に出願された同第６３／３９２，７７８号を含む、本明細書で参照され、及び／又は出願データシートに記載されている全ての米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、及び非特許出版物は、別段明示的に記載されない限り、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。必要に応じて、様々な特許、出願、及び刊行物の概念を採用して、なお更なる実施形態を提供するために、実施形態の態様を修正することができる。

【0161】

上記の詳細な記載を考慮して、これら及び他の変更が実施形態に対して行われ得る。一般に、以下の特許請求の範囲において、使用される用語は、特許請求の範囲を、明細書及び特許請求の範囲に開示される特定の実施形態に限定すると解釈されるべきではなく、そのような特許請求の範囲が権利を有する等価物の全範囲とともに、全ての可能な実施形態を含むと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図6E】

【図6F】

【図6G】

【図6H】

【図6I】

【図6J】

【図6K】

【図6L】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図7F】

【図7G】

【図7H】

【図7I】

【図7J】

【図7K】

【図7L】

【図7M】

【図7N】

【図8】

【図9】

【図10】

【配列表】

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【国際調査報告】