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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-20
(54)【発明の名称】抗ＳＩＧＬＥＣ－６抗体およびその使用方法
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20240912BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20240912BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20240912BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240912BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20240912BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240912BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240912BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240912BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20240912BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240912BHJP
A61P 21/02 20060101ALI20240912BHJP
A61P 1/14 20060101ALI20240912BHJP
A61P 1/08 20060101ALI20240912BHJP
A61P 1/12 20060101ALI20240912BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20240912BHJP
A61P 3/02 20060101ALI20240912BHJP
A61P 11/02 20060101ALI20240912BHJP
A61P 25/06 20060101ALI20240912BHJP
A61P 17/04 20060101ALI20240912BHJP
A61P 9/02 20060101ALI20240912BHJP
A61P 25/22 20060101ALI20240912BHJP
A61P 19/10 20060101ALI20240912BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20240912BHJP
A61P 19/00 20060101ALI20240912BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20240912BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20240912BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240912BHJP
A61P 19/08 20060101ALI20240912BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20240912BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20240912BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240912BHJP
A61P 25/04 20060101ALI20240912BHJP
A61P 17/02 20060101ALI20240912BHJP
A61P 13/10 20060101ALI20240912BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20240912BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20240912BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20240912BHJP
A61P 1/06 20060101ALI20240912BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20240912BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240912BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20240912BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
C07K16/46
C12P21/08
C12N15/13
C12N15/62 Z
C12N15/63 Z
C12N5/10
A61K39/395 U
A61K39/395 L
A61K47/68
A61P25/00
A61P21/02
A61P1/14
A61P1/08
A61P1/12
A61P27/02
A61P3/02
A61P11/02
A61P25/06
A61P17/04
A61P9/02
A61P25/22
A61P19/10
A61P19/02
A61P19/00
A61P9/00
A61P11/00
A61P35/02
A61P19/08
A61P25/28
A61P37/08
A61P37/02
A61P25/04
A61P17/02
A61P13/10
A61P17/06
A61P11/06
A61P1/04
A61P1/06
A61P1/16
A61P29/00 101
A61P31/12
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024516853
(86)(22)【出願日】2022-09-15
(85)【翻訳文提出日】2024-05-14
(86)【国際出願番号】 US2022076497
(87)【国際公開番号】W WO2023044390
(87)【国際公開日】2023-03-23
(31)【優先権主張番号】63/245,164
(32)【優先日】2021-09-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/310,012
(32)【優先日】2022-02-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/352,964
(32)【優先日】2022-06-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】516166030
【氏名又は名称】アラコス インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ヤングブラッド， ブラッドフォード エー．
(72)【発明者】
【氏名】シャニン， ジュリア
(72)【発明者】
【氏名】レオン， ジョン
(72)【発明者】
【氏名】コーバー， ウォウテル
(72)【発明者】
【氏名】ルウ， トゥイ
(72)【発明者】
【氏名】ブロック， エミリー シー．
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C076
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA10
4B064CA19
4B064CC24
4B064DA01
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AA91Y
4B065AA93Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065BA21
4B065CA25
4B065CA44
4C076AA95
4C076BB11
4C076CC41
4C076EE59
4C076FF70
4C085AA14
4C085AA21
4C085BB36
4C085BB41
4C085BB43
4C085BB44
4C085CC01
4C085CC05
4C085DD62
4C085EE01
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045BA53
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体ならびに肥満細胞媒介性障害の処置および予防におけるその使用、ならびに抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体を含む組成物およびキットを提供する。本開示の他の特定の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインのドメイン２に結合する抗体に関する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインのドメイン２は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒト化またはヒト抗体である。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合するヒト化抗体であって、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインのドメイン１に結合するヒト化抗体。
【請求項2】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインのドメイン１が、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項3】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインのドメイン２に結合する抗体。
【請求項4】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインのドメイン２が、配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載の抗体。
【請求項5】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインのドメイン３に結合する抗体。
【請求項6】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインのドメイン３が、配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体。
【請求項7】
ヒト化またはヒト抗体である、請求項３から６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項8】
ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインに結合する、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項9】
ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、前記細胞表面におけるＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導く、請求項８に記載の抗体。
【請求項10】
前記抗体が、Ｆｃ領域を含み、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、Ｆｃ受容体を発現する細胞の存在下で、前記ヒト肥満細胞表面におけるＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導く、請求項９に記載の抗体。
【請求項11】
ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、Ｓｉｇｌｅｃ－６の二量体化および内部移行を誘導する、請求項９に記載の抗体。
【請求項12】
ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、前記細胞表面におけるＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導かない、請求項８に記載の抗体。
【請求項13】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、前記肥満細胞の活性化を阻害する、請求項８から１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項14】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、前記肥満細胞によるＣＤ６３の発現を阻害する、請求項８から１３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項15】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、前記肥満細胞によるＩＬ－１３の放出を阻害する、請求項８から１４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項16】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、前記肥満細胞によるＩＬ－８の放出を阻害する、請求項８から１５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項17】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、前記肥満細胞によるＣＣＬ４の放出を阻害する、請求項８から１６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項18】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、前記肥満細胞によるＣＣＬ２の放出を阻害する、請求項８から１７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項19】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、前記肥満細胞による活性トリプターゼの放出を阻害する、請求項８から１８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項20】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、前記肥満細胞によるＩＬ－６の放出を阻害する、請求項８から１９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項21】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、前記肥満細胞によるヒスタミンの放出を阻害する、請求項８から２０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項22】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、前記肥満細胞によるキマーゼの放出を阻害する、請求項８から２１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項23】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、ｉｎ ｖｉｖｏでヒトＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞を枯渇させる、請求項８から２２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項24】
約２５０ｐＭまたはそれ未満の平衡解離定数（ＫＤ）でヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインに結合する、請求項１から２３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項25】
約１００ｐＭまたはそれ未満のＫＤでヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインに結合する、請求項２４に記載の抗体。
【請求項26】
約１０ｐＭまたはそれ未満のＫＤでヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインに結合する、請求項２４に記載の抗体。
【請求項27】
約１ｐＭのＫＤでヒトＳｉｇｌｅｃ－６の前記細胞外ドメインに結合する、請求項２４に記載の抗体。
【請求項28】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項29】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項30】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項31】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項32】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項33】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項34】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項35】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項36】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項37】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項38】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項39】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項40】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項41】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項42】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項43】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項44】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項45】
前記抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、前記ＶＨ領域が、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬ領域が、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、請求項１から２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項46】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する、請求項１から３０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項47】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する、請求項１から２７、３１および３２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項48】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する、請求項１から２７、３３および３４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項49】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する、請求項１から２７、３５および３６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項50】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する、請求項１から２７および３７から４２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項51】
Ｆｃ領域を含む、請求項１から５０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項52】
前記Ｆｃ領域が、ヒトＦｃ領域である、請求項５１に記載の抗体。
【請求項53】
前記Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域である、請求項５２に記載の抗体。
【請求項54】
前記Ｆｃ領域が、ＥＵインデックスに従って番号付けしたアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域である、請求項５３に記載の抗体。
【請求項55】
配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項５４に記載の抗体。
【請求項56】
配列番号１０１または１０２のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項５３に記載の抗体。
【請求項57】
前記Ｆｃ領域が、エフェクター機能を低減させる１個または複数の変異を含む、請求項５１から５３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項58】
ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の変異：（ａ）Ｌ２３４Ａおよび／もしくはＬ２３５Ａ；
（ｂ）Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓおよび／もしくはＰ３３１Ｓ；
（ｃ）Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａおよび／もしくはＧ２３６ｄｅｌ；
（ｄ）Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、および／またはＬ２３５Ａ；
（ｅ）Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６ｄｅｌ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、および／またはＰ３３１Ｓ；
（ｆ）Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、および／またはＰ３３１Ｓ；
（ｇ）Ｎ２９７Ａ；
（ｈ）Ｎ２９７Ｇ；
（ｉ）Ｎ２９７Ｑ；
（ｊ）Ｌ２４２Ｃ、Ｎ２９７Ｃ、および／またはＫ３３４Ｃ；
（ｋ）Ａ２８７Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、および／またはＬ３０６Ｃ；
（ｌ）Ｒ２９２Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、および／またはＶ３０２Ｃ；
（ｍ）Ｎ２９７Ｇ、Ｖ３２３Ｃ、および／またはＩ３３２Ｃ；
（ｎ）Ｖ２５９Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、および／またはＬ３０６Ｃ；
（ｏ）Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｑ、Ｋ３２２Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、および／またはＴ２５６Ｅ；
（ｐ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、および／またはＰ３２９Ｇ；または
（ｑ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｑ、およびＫ３２２Ｑ
のうち１個または複数を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む、請求項５７に記載の抗体。
【請求項59】
ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の変異：（ａ）Ａ３３０Ｓおよび／またはＰ３３１Ｓ；
（ｂ）Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、および／またはＰ３３１Ｓ；または
（ｃ）Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、および／またはＴ２５６Ｅ
のうち１個または複数を有するヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域を含む、請求項５７に記載の抗体。
【請求項60】
ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の変異：（ａ）Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａおよび／もしくはＧ２３６ｄｅｌ；
（ｂ）Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、および／またはＬ２３５Ａ；
（ｃ）Ｓ２２８Ｐおよび／またはＬ２３５Ｅ；または
（ｄ）Ｓ２２８Ｐおよび／またはＬ２３５Ａ
のうち１個または複数を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む、請求項５７に記載の抗体。
【請求項61】
前記Ｆｃ領域が、エフェクター機能を増強する１個または複数の変異を含む、請求項５１から５３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項62】
ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の変異：（ａ）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、および／またはＰ３９６Ｌ；
（ｂ）Ｓ２３９Ｄおよび／またはＩ３３２Ｅ；
（ｃ）Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、および／またはＡ３３０Ｌ；
（ｄ）Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、および／またはＫ３３４Ａ；
（ｅ）Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、および／またはＩ３３２Ｅ；
（ｆ）Ｋ３２６Ｗおよび／またはＥ３３３Ｓ；
（ｇ）Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、および／またはＳ３２４Ｔ；または
（ｈ）Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、および／またはＳ４４０Ｙ
のうち１個または複数を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む、請求項６１に記載の抗体。
【請求項63】
前記抗体の前記重鎖のうち少なくとも１または２個が、フコシル化されていない、請求項５１から６２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項64】
アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ（Ｆｕｔ８）ノックアウトを有する細胞系において産生される、請求項６３に記載の抗体。
【請求項65】
β１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴ－ＩＩＩ）を過剰発現する細胞系において産生される、請求項６３に記載の抗体。
【請求項66】
前記細胞系が、ゴルジμ－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）をその上過剰発現する、請求項６５に記載の抗体。
【請求項67】
Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’－ＳＨ、ＦｖおよびｓｃＦｖ断片からなる群から選択される抗体断片である、請求項１から９および１１から５０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項68】
軽鎖定常（ＣＬ）ドメインを含む、請求項１から６７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項69】
前記ＣＬドメインが、ヒトカッパーＣＬドメインである、請求項６８に記載の抗体。
【請求項70】
前記軽鎖が、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む、請求項６８に記載の抗体。
【請求項71】
モノクローナル抗体である、請求項１から７０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項72】
多重特異性抗体である、請求項１から７１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項73】
薬剤にコンジュゲートされている、請求項１から７２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項74】
前記薬剤が、細胞傷害剤または標識である、請求項７３に記載の抗体。
【請求項75】
請求項１から７４のいずれか一項に記載の抗体を含む組成物。
【請求項76】
前記抗体が、Ｆｃ領域および前記Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖を含み、前記Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する、請求項７５に記載の組成物。
【請求項77】
前記Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的にいずれも、フコース残基を含有しない、請求項７６に記載の組成物。
【請求項78】
請求項１から７４のいずれか一項に記載の抗体をコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項79】
請求項７８に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項80】
請求項７８に記載のポリヌクレオチドまたは請求項７９に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項81】
哺乳動物または昆虫細胞である、請求項８０に記載の宿主細胞。
【請求項82】
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項８１に記載の宿主細胞。
【請求項83】
Ｆｕｔ８ノックアウトを含む、請求項８１または請求項８２に記載の宿主細胞。
【請求項84】
ＧｎＴ－ＩＩＩを過剰発現する、請求項８１または請求項８２に記載の宿主細胞。
【請求項85】
ＭａｎＩＩをその上過剰発現する、請求項８４に記載の宿主細胞。
【請求項86】
抗体を産生する方法であって、前記抗体を産生する条件下で、請求項８０から８５のいずれか一項に記載の宿主細胞を培養するステップを含む方法。
【請求項87】
前記宿主細胞によって産生された前記抗体を回収するステップをさらに含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項88】
請求項８６または請求項８７に記載の方法によって産生された抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体。
【請求項89】
請求項１から７４のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項90】
対象におけるＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の活性および／または数の増加によって特徴付けされる疾患または状態を処置する方法であって、有効量の請求項１から７４のいずれか一項に記載の抗体または請求項７５から７７および８９のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項91】
Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の活性化の阻害を必要とする対象におけるＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の活性化を阻害する方法であって、有効量の請求項１から７４のいずれか一項に記載の抗体または請求項７５から７７および８９のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項92】
Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の枯渇を必要とする対象におけるＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞を枯渇させる方法であって、有効量の請求項１から７４のいずれか一項に記載の抗体または請求項７５から７７および８９のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項93】
前記抗体または組成物の投与が、前記投与に先立ち前記個体から得られる試料における活性トリプターゼのレベルと比較して、前記個体から得られる試料における活性トリプターゼのレベルの減少をもたらす、請求項９０から９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項94】
前記抗体または組成物の投与が、前記投与に先立ち前記個体から得られる試料におけるＣＣＬ２のレベルと比較して、前記個体から得られる試料におけるＣＣＬ２のレベルの減少をもたらす、請求項９０から９３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項95】
前記抗体または組成物の投与が、前記投与に先立ち前記個体から得られる試料におけるＩＬ－１３のレベルと比較して、前記個体から得られる試料におけるＩＬ－１３のレベルの減少をもたらす、請求項９０から９４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項96】
前記抗体または組成物の投与が、前記投与に先立ち前記個体から得られる試料におけるＩＬ－８のレベルと比較して、前記個体から得られる試料におけるＩＬ－８のレベルの減少をもたらす、請求項９０から９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項97】
前記抗体または組成物の投与が、前記投与に先立ち前記個体から得られる試料におけるＣＣＬ４のレベルと比較して、前記個体から得られる試料におけるＣＣＬ４のレベルの減少をもたらす、請求項９０から９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項98】
前記抗体または組成物の投与が、前記投与に先立ち前記個体から得られる試料におけるＩＬ－６のレベルと比較して、前記個体から得られる試料におけるＩＬ－６のレベルの減少をもたらす、請求項９０から９７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項99】
前記抗体または組成物の投与が、前記投与に先立ち前記個体から得られる試料におけるヒスタミンのレベルと比較して、前記個体から得られる試料におけるヒスタミンのレベルの減少をもたらす、請求項９０から９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項100】
前記抗体または組成物の投与が、前記投与に先立ち前記個体から得られる試料におけるキマーゼのレベルと比較して、前記個体から得られる試料におけるキマーゼのレベルの減少をもたらす、請求項９０から９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項101】
前記抗体または組成物の投与が、前記投与に先立ち前記個体から得られる試料におけるＣＰＡ３のレベルと比較して、前記個体から得られる試料におけるＣＰＡ３のレベルの減少をもたらす、請求項９０から１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項102】
前記抗体または組成物の投与が、前記投与に先立ち前記個体から得られる試料におけるプロスタグランジンまたはロイコトリエンのレベルと比較して、前記個体から得られる試料におけるプロスタグランジンまたはロイコトリエンのレベルの減少をもたらす、請求項９０から１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項103】
前記抗体または組成物の投与が、前記投与に先立ち前記個体から得られる試料におけるＣＤ６３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ２０３ｃ、ＩｇＥまたはＭＲＧＰＲＸ２のレベルと比較して、前記個体から得られる試料におけるＣＤ６３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ２０３ｃ、ＩｇＥまたはＭＲＧＰＲＸ２のレベルの減少をもたらす、請求項９０から１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項104】
前記試料が、生検試料である、請求項９３から１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項105】
前記試料が、血清、血漿または尿試料である、請求項９３から１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項106】
前記抗体または組成物の投与が、前記投与に先立つ前記個体における１種または複数の症状と比較して、前記個体における１種または複数の症状の減少をもたらす、請求項９０から１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項107】
前記１種または複数の症状が、悪心、筋痙攣、便秘、腹痛、腹部膨満、嘔吐、下痢、疲労、眼痛、光過敏症、発赤、眼脂、鼻汁、頭痛、眩暈、ブレインフォグ、そう痒、潮紅、発汗、じん麻疹、低血圧、息切れ、骨痛、関節痛、体重減少、骨粗鬆症、血管浮腫、胸痛、不安、鬱、頻拍、気管支収縮および全身痛からなる群から選択される、請求項１０６に記載の方法。
【請求項108】
前記疾患または状態が、肥満細胞症、肥満細胞白血病、肥満細胞活性化症候群、胃不全麻痺、骨粗鬆症、骨減少症、腎性骨ジストロフィー、骨折、アルツハイマー病、慢性神経障害性疼痛、痛覚過敏、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、移植片対宿主病（ＧＶＨ）、大腸炎、遺伝性アルファトリプターゼ血症、神経線維腫、コーニス症候群、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、血管浮腫、結節性痒疹、胆管炎、乾癬、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、機能性ディスペプシア、喘息、アレルギー、ケロイド、慢性副鼻腔炎、アスピリン増悪呼吸器疾患（ＡＥＲＤ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、水疱性類天疱瘡、特発性肺線維症、全身性硬化症、間質性膀胱炎、化膿性汗腺炎、円形脱毛症、白斑、肥満細胞胃腸疾患、クローン病、関節リウマチ、胃食道逆流症、ウイルス感染症、アカラシア、体位性頻拍症候群、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、複合性局所疼痛症候群またはエーラス・ダンロス症候群である、請求項９０および９３から１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項109】
前記個体が、肥満細胞症、肥満細胞白血病、肥満細胞活性化症候群、胃不全麻痺、骨粗鬆症、骨減少症、腎性骨ジストロフィー、骨折、アルツハイマー病、慢性神経障害性疼痛、痛覚過敏、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、移植片対宿主病（ＧＶＨ）、大腸炎、遺伝性アルファトリプターゼ血症、神経線維腫、コーニス症候群、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、血管浮腫、結節性痒疹、胆管炎、乾癬、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、機能性ディスペプシア、喘息、アレルギー、ケロイド、慢性副鼻腔炎、アスピリン増悪呼吸器疾患（ＡＥＲＤ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、水疱性類天疱瘡、特発性肺線維症、全身性硬化症、間質性膀胱炎、化膿性汗腺炎、円形脱毛症、白斑、肥満細胞胃腸疾患、クローン病、関節リウマチ、胃食道逆流症、ウイルス感染症、アカラシア、体位性頻拍症候群、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、複合性局所疼痛症候群またはエーラス・ダンロス症候群を有するかまたはそうであると診断された、請求項９０から１０７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願への相互参照
本願は、各々の全体がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、２０２１年９月１６日に出願した米国仮出願第６３／２４５，１６４号、２０２２年２月１４日に出願した同第６３／３１０，０１２号および２０２２年６月１６日に出願した同第６３／３５２，９６４号に基づく利益を主張する。
本願は、各々の全体がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、２０２１年９月１６日に出願した米国仮出願第６３／２４５，１６４号、２０２２年２月１４日に出願した同第６３／３１０，０１２号および２０２２年６月１６日に出願した同第６３／３５２，９６４号に基づく利益を主張する。
【0002】
電子配列表への参照
電子配列表（７０１７１２００１５４０ｓｅｑｌｉｓｔ．ｘｍｌ；サイズ：１４３，３６５バイト；および作成日：２０２２年９月１３日）の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
電子配列表（７０１７１２００１５４０ｓｅｑｌｉｓｔ．ｘｍｌ；サイズ：１４３，３６５バイト；および作成日：２０２２年９月１３日）の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0003】
発明の分野
本発明は、抗ヒトＳｉｇｌｅｃ－６抗体、およびＳｉｇｌｅｃ－６を発現する細胞によって媒介される疾患を処置または予防する方法に関する。
本発明は、抗ヒトＳｉｇｌｅｃ－６抗体、およびＳｉｇｌｅｃ－６を発現する細胞によって媒介される疾患を処置または予防する方法に関する。
【背景技術】
【0004】
背景
Ｓｉｇｌｅｃ（シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン）は、主に白血球上に見られる１回膜貫通細胞表面タンパク質であり、細胞表面複合糖質に結合しているシアル酸に対するそれらの特異性を特徴とする。Ｓｉｇｌｅｃファミリーは、哺乳動物に見られる少なくとも１５のメンバーを有する（Pillai et al., Annu Rev Immunol., 2012, 30:357-392）。これらのメンバーは、シアロアドヘシン（Ｓｉｇｌｅｃ－１）、ＣＤ２２（Ｓｉｇｌｅｃ－２）、ＣＤ３３（Ｓｉｇｌｅｃ－３）、ミエリン関連糖タンパク質（Ｓｉｇｌｅｃ－４）、Ｓｉｇｌｅｃ－５、ＯＢＢＰ１（Ｓｉｇｌｅｃ－６）、ＡＩＲＭ１（Ｓｉｇｌｅｃ－７）、ＳＡＦ－２（Ｓｉｇｌｅｃ－８）、およびＣＤ３２９（Ｓｉｇｌｅｃ－９）を含む。
Ｓｉｇｌｅｃ（シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン）は、主に白血球上に見られる１回膜貫通細胞表面タンパク質であり、細胞表面複合糖質に結合しているシアル酸に対するそれらの特異性を特徴とする。Ｓｉｇｌｅｃファミリーは、哺乳動物に見られる少なくとも１５のメンバーを有する（Pillai et al., Annu Rev Immunol., 2012, 30:357-392）。これらのメンバーは、シアロアドヘシン（Ｓｉｇｌｅｃ－１）、ＣＤ２２（Ｓｉｇｌｅｃ－２）、ＣＤ３３（Ｓｉｇｌｅｃ－３）、ミエリン関連糖タンパク質（Ｓｉｇｌｅｃ－４）、Ｓｉｇｌｅｃ－５、ＯＢＢＰ１（Ｓｉｇｌｅｃ－６）、ＡＩＲＭ１（Ｓｉｇｌｅｃ－７）、ＳＡＦ－２（Ｓｉｇｌｅｃ－８）、およびＣＤ３２９（Ｓｉｇｌｅｃ－９）を含む。
【0005】
Ｓｉｇｌｅｃ－６（ＣＤ３２７としても公知）は、肥満細胞、例えば、ヒト組織肥満細胞、ＨＭＣ－１細胞およびＣＤ３４＋由来ヒト肥満細胞において選択的に発現される阻害性受容体である。肥満細胞は、食物アレルギー、肥満細胞活性化症候群、肥満細胞症、ＩＰＦ、ＣＯＰＤおよびその他を含むがこれらに限定されない、多数の自己免疫性および炎症性疾患の病原性ドライバーであると考えられる。例えば、Yu, Y. et al. (2018) Front. Immunol. 9:2138；Yokoi, H. et al. (2006) Allergy 61:769-76；ＷＯ２００５１２４３５８；ならびに米国特許公開番号（US PG Pub. No）ＵＳ２００６０２６９５５６Ａ１およびＵＳ２００８０２６７９７３Ａ１を参照されたい。Ｓｉｇｌｅｃ－６と抗体との結合は、ＩｇＥ媒介性肥満細胞活性化を阻害すると考えられる。
依然として、高い親和性でヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合し、強力な肥満細胞阻害活性を示す抗体の必要がある。そのｉｎ ｖｉｖｏ特性に影響を与え得る、Ｓｉｇｌｅｃ－６表面発現および肥満細胞活性化／阻害のモジュレートに関して異なる特徴を有するヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体の必要もある。
特許出願、特許公報および科学文献を含む、本明細書で言及されるすべての参考文献は、個々の参考文献各々が参照により組み込まれると具体的かつ個々に示されているかのごとく、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。
依然として、高い親和性でヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合し、強力な肥満細胞阻害活性を示す抗体の必要がある。そのｉｎ ｖｉｖｏ特性に影響を与え得る、Ｓｉｇｌｅｃ－６表面発現および肥満細胞活性化／阻害のモジュレートに関して異なる特徴を有するヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体の必要もある。
特許出願、特許公報および科学文献を含む、本明細書で言及されるすべての参考文献は、個々の参考文献各々が参照により組み込まれると具体的かつ個々に示されているかのごとく、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0006】
【特許文献1】国際公開第２００５／１２４３５８号
【特許文献2】米国特許出願公開第２００６／０２６９５５６号明細書
【特許文献3】米国特許出願公開第２００８／０２６７９７３号明細書
【非特許文献】
【0007】
【非特許文献1】Pillai et al., Annu Rev Immunol., 2012, 30:357-392
【非特許文献2】Yu, Y. et al. (2018) Front. Immunol. 9:2138
【非特許文献3】Yokoi, H. et al. (2006) Allergy 61:769-76
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0008】
簡単な概要
この必要および他の必要を満たすために、本開示は、とりわけ、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体、ならびにそれに関する組成物、使用および方法を提供する。
この必要および他の必要を満たすために、本開示は、とりわけ、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体、ならびにそれに関する組成物、使用および方法を提供する。
【0009】
したがって、本開示のある特定の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合するヒト化抗体であって、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインのドメイン１に結合する抗体に関する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインのドメイン１は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。
【0010】
本開示の他の特定の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインのドメイン２に結合する抗体に関する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインのドメイン２は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒト化またはヒト抗体である。
【0011】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインのドメイン３に結合する抗体に関する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインのドメイン３は、配列番号４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒト化またはヒト抗体である。
【0012】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0013】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0014】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0015】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0016】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0017】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0018】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0019】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0020】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0021】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0022】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0023】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0024】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0025】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0026】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0027】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0028】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体に関する。
【0029】
本開示の他の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体であって、抗体が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域が、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域が、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、抗体に関する。
【0030】
本明細書に記載されている実施形態のいずれかに係る一部の実施形態では、抗体は、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインに結合する。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、細胞表面におけるＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導く。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域を含み、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、Ｆｃ受容体を発現する細胞の存在下でヒト肥満細胞表面におけるＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導く。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、Ｓｉｇｌｅｃ－６の二量体化および内部移行を誘導する。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、細胞表面におけるＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導かない。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、肥満細胞の活性化を阻害する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、肥満細胞によるＣＤ６３の発現を阻害する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、肥満細胞によるＩＬ－１３の放出を阻害する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、肥満細胞によるＩＬ－８の放出を阻害する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、肥満細胞によるＣＣＬ４の放出を阻害する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、肥満細胞によるＣＣＬ２の放出を阻害する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、肥満細胞による活性トリプターゼの放出を阻害する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、肥満細胞によるＩＬ－６の放出を阻害する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、肥満細胞によるヒスタミンの放出を阻害する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、肥満細胞によるキマーゼの放出を阻害する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞を枯渇させる。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで、例えば、エフェクター細胞の存在下で、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインを発現する（例えば、その細胞表面において）細胞を標的化する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または抗体依存性細胞媒介性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）を誘導する。
【0031】
本明細書に記載されている実施形態のいずれかに係る一部の実施形態では、抗体は、約２５０ｐＭもしくはそれ未満、約１００ｐＭもしくはそれ未満、約１０ｐＭもしくはそれ未満または約１ｐＭの平衡解離定数（ＫＤ）でヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインに結合する。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１０５のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、および／または配列番号１０６のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１５のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１５のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１０７のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１０８のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１４のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１４のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１０９のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１０のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１３のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１３のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１１のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１２のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１２のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１２のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１３のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１４のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１１のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１１のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１５のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１６のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１０のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１０のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１７のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１８のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０９のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０９のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１９のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１２０のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０８のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０８のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２１のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１２２のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０７のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０７のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２３のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイ
ン、ならびに／あるいは配列番号１２４のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０６のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０６のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２５のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１２６のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０５のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０５のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２７のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１２８のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０４のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０４のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２９のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１３０のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０３のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０３のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１３１のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１３２のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０２のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０２のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１３３のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１３４のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０１のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０１のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１５３のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１５４のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１６のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１６のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１５５のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１５６のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１７のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１７のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１５７のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１５８のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１８のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１８のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１０５のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、および／または配列番号１０６のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１５のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１５のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１０７のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１０８のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１４のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１４のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１０９のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１０のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１３のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１３のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１１のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１２のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１２のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１２のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１３のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１４のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１１のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１１のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１５のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１６のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１０のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１０のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１７のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１８のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０９のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０９のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１９のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１２０のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０８のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０８のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２１のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１２２のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０７のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０７のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２３のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイ
ン、ならびに／あるいは配列番号１２４のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０６のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０６のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２５のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１２６のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０５のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０５のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２７のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１２８のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０４のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０４のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２９のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１３０のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０３のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０３のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１３１のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１３２のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０２のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０２のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１３３のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１３４のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０１のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０１のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１５３のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１５４のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１６のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１６のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１５５のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１５６のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１７のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１７のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１５７のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１５８のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１８のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１８のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【0032】
本明細書に記載されている実施形態のいずれかに係る一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに従って番号付けしたアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域である。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号１０１または１０２のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、エフェクター機能を低減させる１個または複数の変異を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の位置のうち１個または複数における置換または欠失を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む：（ａ）Ｌ２３４および／もしくはＬ２３５；（ｂ）Ａ３２７、Ａ３３０および／もしくはＰ３３１；（ｃ）Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５および／もしくはＧ２３６；（ｄ）Ｅ２３３、Ｌ２３４および／もしくはＬ２３５；（ｅ）Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３６、Ａ３２７、Ａ３３０および／もしくはＰ３３１；（ｆ）Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ａ３２７、Ａ３３０および／もしくはＰ３３１；（ｇ）Ｎ２９７；（ｈ）Ｌ２４２、Ｎ２９７および／もしくはＫ３３４；（ｉ）Ａ２８７、Ｎ２９７および／もしくはＬ３０６；（ｊ）Ｒ２９２、Ｎ２９７および／もしくはＶ３０２；（ｋ）Ｎ２９７、Ｖ３２３および／もしくはＩ３３２；（ｌ）Ｖ２５９、Ｎ２９７および／もしくはＬ３０６；（ｍ）Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｋ３２２、Ｍ２５２、Ｓ２５４および／もしくはＴ２５６；（ｎ）Ｌ２３４、Ｌ２３５および／もしくはＰ３２９；または（ｏ）Ｌ２３４、Ｌ２３５および／もしくはＫ３２２。一部の実施形態では、抗体は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の変異：（ａ）Ｌ２３４Ａおよび／もしくはＬ２３５Ａ；（ｂ）Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓおよび／もしくはＰ３３１Ｓ；（ｃ）Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａおよび／もしくはＧ２３６ｄｅｌ；（ｄ）Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、および／またはＬ２３５Ａ；（ｅ）Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６ｄｅｌ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、および／またはＰ３３１Ｓ；（ｆ）Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、および／またはＰ３３１Ｓ；（ｇ）Ｎ２９７Ａ；（ｈ）Ｎ２９７Ｇ；（ｉ）Ｎ２９７Ｑ；（ｊ）Ｌ２４２Ｃ、Ｎ２９７Ｃ、および／またはＫ３３４Ｃ；（ｋ）Ａ２８７Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、および／またはＬ３０６Ｃ；（ｌ）Ｒ２９２Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、および／またはＶ３０２Ｃ；（ｍ）Ｎ２９７Ｇ、Ｖ３２３Ｃ、および／またはＩ３３２Ｃ；（ｎ）Ｖ２５９Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、および／またはＬ３０６Ｃ；（ｏ）Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｑ、Ｋ３２２Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、および／またはＴ２５６Ｅ；（ｐ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、および／またはＰ３２９Ｇ；または（ｑ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｑ、および／もしくはＫ３２２Ｑのうち１個または複数を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の位置のうち１個または複数における置換または欠失を有するヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域を含む：（ａ）Ａ３３０および／もしくはＰ３３１；（ｂ）Ｖ２３４、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｈ２６８、Ｖ３０９、Ａ３３０および／もしくはＰ３３１；または（ｃ）Ｖ２３４、Ｇ２３７、Ｈ２６８、Ｖ３０９、Ａ３３０、Ｐ３３１、Ｃ２３２、Ｃ２３３、Ｓ２６７、Ｌ３２８、Ｍ２５２、Ｓ２５４および／もしくはＴ２５６。一部の実施形態では、抗体は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の変異：（ａ）Ａ３３０Ｓおよび／またはＰ３３１Ｓ；（ｂ）Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、および／またはＰ３３１Ｓ；または（ｃ）Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、および／またはＴ２５６Ｅのうち１個または複数を有するヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の位置のうち１個または複数における置換または欠失を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む：（ａ）Ｅ２３３、Ｆ２３４、Ｌ２３５および／もしくはＧ２３６；（ｂ）Ｅ２３３、Ｆ２３４および／もしくはＬ２３５；または（ｃ）Ｓ２２８および／もしくはＬ２３５。一部の実施形態では、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の変異：（ａ）Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａおよび／もしくはＧ２３６ｄｅｌ；（ｂ）Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、および／またはＬ２３５Ａ；（ｃ）Ｓ２２８Ｐおよび／またはＬ２３５Ｅ；または（ｄ）Ｓ２２８Ｐおよび／またはＬ２３５Ａのうち１個または複数を有するヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、エフェクター機能を増強する１個または複数の変異を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の位置のうち１個または複数における置換または欠失を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む：（ａ）Ｆ２４３、Ｒ２９２、Ｙ３００、Ｖ３０５および／もしくはＰ３９６；（ｂ）Ｓ２３９および／もしくはＩ３３２；（ｃ）Ｓ２３９、Ｉ３３２および／もしくはＡ３３０；（ｄ）Ｓ２９８、Ｅ３３３および／もしくはＫ３３４；（ｅ）Ｇ２３６、Ｓ２３９および／もしくはＩ３３２；（ｆ）Ｋ３２６および／もしくはＥ３３３；（ｇ）Ｓ２６７、Ｈ２６８および／もしくはＳ３２４；または（ｈ）Ｅ３４５、Ｅ４３０および／もしくはＳ４４０。一部の実施形態では、抗体は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の変異のうち１個または複数を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む：（ａ）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉおよび／もしくはＰ３９６Ｌ；（ｂ）Ｓ２３９Ｄおよび／もしくはＩ３３２Ｅ；（ｃ）Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅおよび／もしくはＡ３３０Ｌ；（ｄ）Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａおよび／もしくはＫ３３４Ａ；（ｅ）Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄおよび／もしくはＩ３３２Ｅ；（ｆ）Ｋ３２６Ｗおよび／もしくはＥ３３３Ｓ；（ｇ）Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆおよび／もしくはＳ３２４Ｔ；または（ｈ）Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇおよび／もしくはＳ４４０Ｙ。
【0033】
本明細書に記載されている実施形態のいずれかに係る一部の実施形態では、抗体の重鎖のうち少なくとも１または２個は、フコシル化されていない。一部の実施形態では、抗体は、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ（Ｆｕｔ８）ノックアウトを有する細胞系において産生される。一部の実施形態では、抗体は、β１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴ－ＩＩＩ）を過剰発現する細胞系において産生される。一部の実施形態では、抗体は、β１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴ－ＩＩＩ）を過剰発現する細胞系であって、ゴルジμ－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）をその上過剰発現する細胞系において産生される。
【0034】
本明細書に記載されている実施形態のいずれかに係る一部の実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’－ＳＨ、ＦｖおよびｓｃＦｖ断片からなる群から選択される抗体断片である。一部の実施形態では、抗体は、軽鎖定常（ＣＬ）ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＬドメインは、ヒトカッパーＣＬドメインである。一部の実施形態では、軽鎖は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。一部の実施形態では、抗体は、多重特異性抗体である。一部の実施形態では、抗体は、二重特異性抗体である。一部の実施形態では、抗体は、薬剤にコンジュゲートされる。一部の実施形態では、薬剤は、細胞傷害剤または標識である。
【0035】
本開示の他の態様は、上述の実施形態のうちいずれか１種に係る抗体を含む組成物に関する。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域およびＦｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖を含み、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する。一部の実施形態では、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的にいずれも、フコース残基を含有しない。
【0036】
本開示の他の態様は、上述の実施形態のうちいずれか１種に係る抗体をコードするポリヌクレオチドに関する。本開示の他の態様は、上述の実施形態のうちいずれか１種に係る抗体をコードする１種または複数のポリヌクレオチドを含むベクターに関する。本開示の他の態様は、上述の実施形態のうちいずれか１種に係るポリヌクレオチドおよび／またはベクターを含む宿主細胞に関する。一部の実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物または昆虫細胞である。一部の実施形態では、宿主細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。一部の実施形態では、宿主細胞は、Ｆｕｔ８ノックアウトを含む。一部の実施形態では、宿主細胞は、ＧｎＴ－ＩＩＩを過剰発現する。一部の実施形態では、宿主細胞は、ＧｎＴ－ＩＩＩを過剰発現し、ＭａｎＩＩをその上過剰発現する。本開示の他の態様は、抗体を産生する方法であって、抗体を産生する条件下で、上述の実施形態のうちいずれか１種に係る宿主細胞を培養するステップを含む方法に関する。一部の実施形態では、方法は、宿主細胞によって産生された抗体を回収するステップをさらに含む。本開示の他の態様は、上述の実施形態のうちいずれか１種に係る方法によって産生された抗体に関する。本開示の他の態様は、上述の実施形態のうちいずれか１種に係る抗体と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。本開示の他の態様は、上述の実施形態のうちいずれか１種に係る組成物または抗体を含む医薬を含むキットまたは製造物品に関する。一部の実施形態では、キットまたは製造物品は、例えば、本明細書に開示されている方法のうちいずれか１種に従った、医薬の投与を必要とする個体における医薬の投与のための指示を含む添付文書をさらに含む。
【0037】
本開示の他の態様は、対象におけるＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の活性および／または数の増加によって特徴付けされる疾患または状態を処置する方法であって、有効量の上述の実施形態のうちいずれか１種に係る抗体または組成物を対象に投与するステップを含む方法に関する。本開示の他の態様は、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の活性化の阻害を必要とする対象におけるＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の活性化を阻害する方法であって、有効量の上述の実施形態のうちいずれか１種に係る抗体または組成物を対象に投与するステップを含む方法に関する。本開示の他の態様は、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の枯渇を必要とする対象におけるＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞を枯渇させる方法であって、有効量の上述の実施形態のうちいずれか１種に係る抗体または組成物を対象に投与するステップを含む方法に関する。本開示の他の態様は、例えば、それを必要とする対象における、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の活性および／もしくは数の増加によって特徴付けされる疾患もしくは状態を処置するため、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の活性化を阻害するため、および／またはＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞を枯渇させるための、医薬の製造における、上述の実施形態のうちいずれか１種に係る抗体または組成物の使用に関する。本開示の他の態様は、医薬としての使用のための、上述の実施形態のうちいずれか１種に係る抗体または組成物に関する。本開示の他の態様は、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の活性および／もしくは数の増加によって特徴付けされる疾患もしくは状態の処置、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の活性化の阻害、および／またはＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の枯渇を必要とする対象における、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の活性および／もしくは数の増加によって特徴付けされる疾患もしくは状態の処置、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の活性化の阻害、および／またはＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の枯渇における使用のための、上述の実施形態のうちいずれか１種に係る抗体または組成物に関する。
【0038】
本明細書に記載の実施形態のうちのいずれかに係る一部の実施形態において、 抗体または組成物の投与は、投与に先立ち個体から得られる試料における活性トリプターゼのレベルと比較して、個体から得られる試料における活性トリプターゼのレベルの減少をもたらす。一部の実施形態では、抗体または組成物の投与は、投与に先立ち個体から得られる試料におけるＣＣＬ２のレベルと比較して、個体から得られる試料におけるＣＣＬ２のレベルの減少をもたらす。一部の実施形態では、抗体または組成物の投与は、投与に先立ち個体から得られる試料におけるＩＬ－１３のレベルと比較して、個体から得られる試料におけるＩＬ－１３のレベルの減少をもたらす。一部の実施形態では、抗体または組成物の投与は、投与に先立ち個体から得られる試料におけるＩＬ－８のレベルと比較して、個体から得られる試料におけるＩＬ－８のレベルの減少をもたらす。一部の実施形態では、抗体または組成物の投与は、投与に先立ち個体から得られる試料におけるＣＣＬ４のレベルと比較して、個体から得られる試料におけるＣＣＬ４のレベルの減少をもたらす。一部の実施形態では、抗体または組成物の投与は、投与に先立ち個体から得られる試料におけるＩＬ－６のレベルと比較して、個体から得られる試料におけるＩＬ－６のレベルの減少をもたらす。一部の実施形態では、抗体または組成物の投与は、投与に先立ち個体から得られる試料におけるヒスタミンのレベルと比較して、個体から得られる試料におけるヒスタミンのレベルの減少をもたらす。一部の実施形態では、抗体または組成物の投与は、投与に先立ち個体から得られる試料におけるキマーゼのレベルと比較して、個体から得られる試料におけるキマーゼのレベルの減少をもたらす。一部の実施形態では、抗体または組成物の投与は、投与に先立ち個体から得られる試料におけるＣＰＡ３のレベルと比較して、個体から得られる試料におけるＣＰＡ３のレベルの減少をもたらす。一部の実施形態では、抗体または組成物の投与は、投与に先立ち個体から得られる試料におけるプロスタグランジンまたはロイコトリエンのレベルと比較して、個体から得られる試料におけるプロスタグランジンまたはロイコトリエンのレベルの減少をもたらす。一部の実施形態では、抗体または組成物の投与は、投与に先立ち個体から得られる試料（例えば、生検試料）におけるＣＤ６３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ２０３ｃ、ＩｇＥまたはＭＲＧＰＲＸ２のレベルと比較して、個体から得られる試料におけるＣＤ６３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ２０３ｃ、ＩｇＥまたはＭＲＧＰＲＸ２のレベルの減少をもたらす。一部の実施形態では、試料は、生検試料である。一部の実施形態では、試料は、血清、血漿または尿試料である。一部の実施形態では、抗体または組成物の投与は、投与に先立つ個体における１種または複数の症状と比較して、個体における１種または複数の症状の減少をもたらす。一部の実施形態では、１種または複数の症状は、悪心、筋痙攣、便秘、腹痛、腹部膨満、嘔吐、下痢、疲労、眼痛、光過敏症、発赤、眼脂、鼻汁、頭痛、眩暈、ブレインフォグ、そう痒、潮紅、発汗、じん麻疹、低血圧、息切れ、骨痛、関節痛、体重減少、骨粗鬆症、血管浮腫、胸痛、不安、鬱、頻拍、気管支収縮および全身痛からなる群から選択される。一部の実施形態では、疾患または状態は、肥満細胞症、肥満細胞白血病、肥満細胞活性化症候群、胃不全麻痺、骨粗鬆症、骨減少症、腎性骨ジストロフィー、骨折、アルツハイマー病、慢性神経障害性疼痛、痛覚過敏、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、移植片対宿主病（ＧＶＨ）、大腸炎、遺伝性アルファトリプターゼ血症、神経線維腫、コーニス症候群、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、血管浮腫、結節性痒疹、胆管炎、乾癬、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、機能性ディスペプシア、喘息、アレルギー、ケロイド、慢性副鼻腔炎、アスピリン増悪呼吸器疾患（ＡＥＲＤ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、水疱性類天疱瘡、特発性肺線維症、全身性硬化症、間質性膀胱炎、化膿性汗腺炎、円形脱毛症、白斑、肥満細胞胃腸疾患、クローン病、関節リウマチ、胃食道逆流症、ウイルス感染症、アカラシア、体位性頻拍症候群、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、複合性局所疼痛症候群またはエーラス・ダンロス症候群である。一部の実施形態では、個体は、肥満細胞症、肥満細胞白血病、肥満細胞活性化症候群、胃不全麻痺、骨粗鬆症、骨減少症、腎性骨ジストロフィー、骨折、アルツハイマー病、慢性神経障害性疼痛、痛覚過敏、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、移植片対宿主病（ＧＶＨ）、大腸炎、遺伝性アルファトリプターゼ血症、神経線維腫、コーニス症候群、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、血管浮腫、結節性痒疹、胆管炎、乾癬、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、機能性ディスペプシア、喘息、アレルギー、ケロイド、慢性副鼻腔炎、アスピリン増悪呼吸器疾患（ＡＥＲＤ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、水疱性類天疱瘡、特発性肺線維症、全身性硬化症、間質性膀胱炎、化膿性汗腺炎、円形脱毛症、白斑、肥満細胞胃腸疾患、クローン病、関節リウマチ、胃食道逆流症、ウイルス感染症、アカラシア、体位性頻拍症候群、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、複合性局所疼痛症候群またはエーラス・ダンロス症候群を有するかまたはそうであると診断された。
【0039】
本明細書に記載の様々な実施形態の特性の１つ、一部またはすべてを組み合わせて本開示の他の実施形態を形成することができることは理解されよう。本開示のこれらのおよび他の態様は、当業者に明らかになる。本開示のこれらのおよび他の実施形態は、後続の詳細な説明によってさらに説明される。
【図面の簡単な説明】
【0040】
【0041】
【0042】
【0043】
【図3A】図３Ａ～図３Ｃは、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂが、ヒト肥満細胞からのサイトカイン、ケモカインおよびプロテアーゼの産生を阻害することを示す。ＩＬ－８（図３Ａ）、ＣＣＬ４（図３Ｂ）および活性トリプターゼ（図３Ｃ）の産生が示されている。
【0044】
【0045】
【0046】
【0047】
【0048】
【0049】
【図8A】図８Ａ～図８Ｆは、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂが、ヒト化マウスにおいてｉｎ ｖｉｖｏで全身性アナフィラキシーおよび肥満細胞メディエーター産生を阻害することを示す。データは、平均＋／－ＳＤとしてプロットされる；ｎ＝６～７匹のマウス／群。
【0050】
【0051】
【図10A】図１０Ａ～図１０Ｃは、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体ＡＫ０５（図１０Ａ）、ＡＫ０４（図１０Ｂ）およびＭＡＢ２８５９（図１０Ｃ）に関するエピトープマッピングの結果を示す。図１０Ａ～図１０Ｃにおいて、指し示される抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体と相互作用することが決定されるアミノ酸の番号付けは、配列番号１に示されるＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤ配列に従う。
【0052】
【図11A】図１１Ａおよび図１１Ｂは、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ処置が、ｉｎ ｖｉｖｏでＫＩＴ（ＣＤ１１７）媒介性肥満細胞活性化を阻害したことを示す。腹膜肥満細胞におけるＣＤ６３発現は、フローサイトメトリーによって評価された（図１１Ａ、左パネル）。ＩＬ－６（図１１Ａ、中央パネル）、ＣＣＬ２／ＭＣＰ－１（図１１Ａ、右パネル）、ＴＮＦ（図１１Ｂ、左パネル）およびＣＸＣＬ１／ＧＲＯ－α（図１１Ｂ、右パネル）を含むサイトカインおよびケモカインレベルは、メソスケールディスカバリー（Meso Scale Discovery）（ＭＳＤ）により腹膜洗浄物において測定された。＊ｐ＜０．０１；ｎ＝７～８匹のマウス／群。全パネルについて、ＰＢＳ処置由来のデータを左に示し、アイソタイプｍＡｂ＋マウス幹細胞因子（ＳＣＦ）処置由来のデータを中央に示し、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ＋ＳＣＦ処置由来のデータを右に示す。
【図11B】図１１Ａおよび図１１Ｂは、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ処置が、ｉｎ ｖｉｖｏでＫＩＴ（ＣＤ１１７）媒介性肥満細胞活性化を阻害したことを示す。腹膜肥満細胞におけるＣＤ６３発現は、フローサイトメトリーによって評価された（図１１Ａ、左パネル）。ＩＬ－６（図１１Ａ、中央パネル）、ＣＣＬ２／ＭＣＰ－１（図１１Ａ、右パネル）、ＴＮＦ（図１１Ｂ、左パネル）およびＣＸＣＬ１／ＧＲＯ－α（図１１Ｂ、右パネル）を含むサイトカインおよびケモカインレベルは、メソスケールディスカバリー（Meso Scale Discovery）（ＭＳＤ）により腹膜洗浄物において測定された。＊ｐ＜０．０１；ｎ＝７～８匹のマウス／群。全パネルについて、ＰＢＳ処置由来のデータを左に示し、アイソタイプｍＡｂ＋マウス幹細胞因子（ＳＣＦ）処置由来のデータを中央に示し、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ＋ＳＣＦ処置由来のデータを右に示す。
【0053】
【0054】
【0055】
【0056】
【図12A】図１２Ａおよび図１２Ｂは、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ処置が、ハプテン誘導性の接触性皮膚炎のモデルにおける皮膚炎症を阻害したことを示す。耳の腫脹のパーセント変化は、ジニトロクロロベンゼン（ＤＮＦＢ）負荷の２４時間後に決定された（図１２Ａ、左パネル）。サイトカインおよびケモカインレベル（図１２Ａ、中央および右パネル、指し示される通り）は、メソスケールディスカバリー（ＭＳＤ）によって、３時間にわたりｅｘ ｖｉｖｏで培養された耳において測定された。肥満細胞（図１２Ｂ、左パネル）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（図１２Ｂ、右パネル）の計数によって測定される皮膚炎症も測定された。＊ｐ＜０．０１；ｎ＝６～７匹のマウス／群。全パネルについて、シャム処置由来のデータを左に示し、アイソタイプｍＡｂ＋ＤＮＦＢ（ハプテン）処置由来のデータを中央に示し、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ＋ＤＮＦＢ（ハプテン）処置由来のデータを右に示す。
【図12B】図１２Ａおよび図１２Ｂは、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ処置が、ハプテン誘導性の接触性皮膚炎のモデルにおける皮膚炎症を阻害したことを示す。耳の腫脹のパーセント変化は、ジニトロクロロベンゼン（ＤＮＦＢ）負荷の２４時間後に決定された（図１２Ａ、左パネル）。サイトカインおよびケモカインレベル（図１２Ａ、中央および右パネル、指し示される通り）は、メソスケールディスカバリー（ＭＳＤ）によって、３時間にわたりｅｘ ｖｉｖｏで培養された耳において測定された。肥満細胞（図１２Ｂ、左パネル）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（図１２Ｂ、右パネル）の計数によって測定される皮膚炎症も測定された。＊ｐ＜０．０１；ｎ＝６～７匹のマウス／群。全パネルについて、シャム処置由来のデータを左に示し、アイソタイプｍＡｂ＋ＤＮＦＢ（ハプテン）処置由来のデータを中央に示し、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ＋ＤＮＦＢ（ハプテン）処置由来のデータを右に示す。
【0057】
【0058】
【0059】
【0060】
【0061】
【0062】
【図16B】図１６Ｂは、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂが、アイソタイプ対照と比較して、感作され、その後にオボアルブミンペプチドを負荷されたマウスにおけるアレルギー性胃腸疾患を阻害したことを示す。活性化のマーカーとしての肥満細胞におけるＣＤ６３発現のレベルのように、胃浸潤肥満細胞および好酸球は、アイソタイプ対照を与えたマウスと比較して、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂを与えた抗原刺激マウスにおいて低減された。ＯＶＡ処置マウスの胃内腔由来の肥満細胞は、フローサイトメトリーを使用して、ＣＤ６３発現について解析された。＊ｐ＜０．０１；ｎ＝６～７匹のマウス／群。全パネルについて、ＰＢＳ無刺激対照由来のデータを左に示し、刺激されたアイソタイプ対照由来のデータを中央に示し、刺激された抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ由来のデータを右に示す。ＭＣ、肥満細胞；Ｅｏｓ、好酸球。
【0063】
【0064】
【図18A】図１８Ａ～図１８Ｃは、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂが、ＭＲＧＰＲＸ２アゴニストＬＬ３７によって駆動される炎症を阻害することを示す。図１８Ａは、ＰＢＳ単独（「ＰＢＳ」）、ＬＬ３７およびアイソタイプ対照抗体（「アイソタイプ」）ならびにＬＬ３７および抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（「Ｓｉｇｌｅｃ－６」）で処置されたマウスの皮膚を示す。矢印は、皮膚炎症を指し示す。図１８Ｂは、ＰＢＳ単独（全グラフにおいて左のバー）、ＬＬ３７およびアイソタイプ対照抗体（全グラフにおいて中間のバー）またはＬＬ３７および抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（全グラフにおいて右のバー）で処置されたマウスにおける病変性皮膚から得られる好酸球（左上）、単球（右上）および肥満細胞（左下）の計数を示す。図１８Ｃは、ＰＢＳ単独（左のバー）、ＬＬ３７およびアイソタイプ対照抗体（中間のバー）またはＬＬ３７および抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（右のバー）で処置されたマウスにおける非病変性皮膚から得られる肥満細胞の計数を示す。
【図18B】図１８Ａ～図１８Ｃは、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂが、ＭＲＧＰＲＸ２アゴニストＬＬ３７によって駆動される炎症を阻害することを示す。図１８Ａは、ＰＢＳ単独（「ＰＢＳ」）、ＬＬ３７およびアイソタイプ対照抗体（「アイソタイプ」）ならびにＬＬ３７および抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（「Ｓｉｇｌｅｃ－６」）で処置されたマウスの皮膚を示す。矢印は、皮膚炎症を指し示す。図１８Ｂは、ＰＢＳ単独（全グラフにおいて左のバー）、ＬＬ３７およびアイソタイプ対照抗体（全グラフにおいて中間のバー）またはＬＬ３７および抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（全グラフにおいて右のバー）で処置されたマウスにおける病変性皮膚から得られる好酸球（左上）、単球（右上）および肥満細胞（左下）の計数を示す。図１８Ｃは、ＰＢＳ単独（左のバー）、ＬＬ３７およびアイソタイプ対照抗体（中間のバー）またはＬＬ３７および抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（右のバー）で処置されたマウスにおける非病変性皮膚から得られる肥満細胞の計数を示す。
【図18C】図１８Ａ～図１８Ｃは、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂが、ＭＲＧＰＲＸ２アゴニストＬＬ３７によって駆動される炎症を阻害することを示す。図１８Ａは、ＰＢＳ単独（「ＰＢＳ」）、ＬＬ３７およびアイソタイプ対照抗体（「アイソタイプ」）ならびにＬＬ３７および抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（「Ｓｉｇｌｅｃ－６」）で処置されたマウスの皮膚を示す。矢印は、皮膚炎症を指し示す。図１８Ｂは、ＰＢＳ単独（全グラフにおいて左のバー）、ＬＬ３７およびアイソタイプ対照抗体（全グラフにおいて中間のバー）またはＬＬ３７および抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（全グラフにおいて右のバー）で処置されたマウスにおける病変性皮膚から得られる好酸球（左上）、単球（右上）および肥満細胞（左下）の計数を示す。図１８Ｃは、ＰＢＳ単独（左のバー）、ＬＬ３７およびアイソタイプ対照抗体（中間のバー）またはＬＬ３７および抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（右のバー）で処置されたマウスにおける非病変性皮膚から得られる肥満細胞の計数を示す。
【発明を実施するための形態】
【0065】
詳細な説明
Ｉ．定義
本開示が特定の組成物にも生物システムにも限定されず、そのような組成物または生物システムは、当然のことながら変わることがあることを理解すべきである。本明細書で使用される専門用語が特定の実施形態の説明を目的にしたものに過ぎず、限定を意図したものでないことも理解されたい。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、内容によるそうでない旨の明白な指示がない限り、複数の言及対象を含む。したがって、例えば、「１つの分子（ａ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」への言及は、必要に応じて、２つまたはそれより多くのそのような分子の組合せ、およびこれに類するものを含む。
Ｉ．定義
本開示が特定の組成物にも生物システムにも限定されず、そのような組成物または生物システムは、当然のことながら変わることがあることを理解すべきである。本明細書で使用される専門用語が特定の実施形態の説明を目的にしたものに過ぎず、限定を意図したものでないことも理解されたい。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、内容によるそうでない旨の明白な指示がない限り、複数の言及対象を含む。したがって、例えば、「１つの分子（ａ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」への言及は、必要に応じて、２つまたはそれより多くのそのような分子の組合せ、およびこれに類するものを含む。
【0066】
用語「約」は、本明細書で使用される場合、本技術分野における当業者には容易に分かるそれぞれの値についての通常の誤差範囲を指す。本明細書での「約」ある値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体に関する実施形態を含む（および記載する）。
【0067】
本開示の態様および実施形態が、態様および実施形態を「含むこと」、それら「からなること」、およびそれら「から本質的になること」を包含することは理解されよう。
【0068】
用語「抗体」は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する完全長抗体を含む）、多重エピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、および一本鎖分子）、および抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ）を含む。用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書では「抗体」と同義で使用される。
【0069】
基本４本鎖抗体単位は、２本の同一の軽（Ｌ）鎖および２本の同一の重（Ｈ）鎖で構成されているヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれる追加のポリペプチドとともに５つの基本ヘテロ四量体単位からなり、１０の抗原結合部位を含有するが、ＩｇＡ抗体は、Ｊ鎖と組み合わせて多価集合体を形成するように重合され得る２～５つの基本４本鎖単位を含む。ＩｇＧの場合、４本鎖単位は、一般に、約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つの共有結合性ジスルフィド結合によりＨ鎖に連結されており、一方、２本のＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに依存して１つまたは複数のジスルフィド結合により互いに連結されている。Ｈ鎖およびＬ鎖各々は、規則的な間隔で配置された鎖間ジスルフィド架橋も有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、このドメインに、αおよびγ鎖の各々については３つの定常ドメイン（ＣＨ）、μおよびεアイソタイプについては４つのＣＨドメインが続く。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、このドメインの反対側の末端に定常ドメインが続く。ＶＬは、ＶＨと整列しており、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖の可変ドメインとの間の界面を形成すると考えられている。ＶＨおよびＶＬが一緒に対合することにより、単一の抗原結合部位が形成される。異なる抗体クラスの構造および特性については、例えば、Basic and Clinical Immunology, 8th Edition, Daniel P. Sties, Abba I. Terr and Tristram G. Parsolw (eds), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6を参照されたい。
【0070】
任意の脊椎動物種からのＬ鎖を、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパおよびラムダと呼ばれる２つの明確に異なるタイプの一方に割り当てることができる。それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンを異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる重鎖をそれぞれ有する、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭという５つのクラスがある。γおよびαクラスは、ＣＨの配列および機能の比較的わずかな差異に基づいてサブクラスにさらに分けられ、例えば、ヒトは、次のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、アロタイプと呼ばれる複数の多型バリアントで存在することができ（Jefferis and Lefranc 2009. mAbs Vol 1 Issue 4 1-7において概説されている）、これらのバリアントのいずれも、本開示における使用に好適である。ヒト集団における一般的なアロタイプバリアントは、文字ａ、ｆ、ｎ、ｚで表記されるものである。
【0071】
「単離された」抗体は、その産生環境の成分から（例えば、天然にまたは組換えにより）同定、分離および／または回収されたものである。一部の実施形態では、単離されたポリペプチドには、その産生環境からの他の成分が一切付随していない。その産生環境の夾雑成分、例えば、組換えトランスフェクト細胞に起因する夾雑成分は、抗体の研究での使用、診断上の使用、または治療上の使用に概して干渉することになる物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質様または非タンパク質様溶質を含み得る。一部の実施形態では、ポリペプチドは、（１）例えばローリー法により決定して抗体の９５重量％より高くまで、一部の実施形態では９９重量％より高くまで、（１）スピニングカップシークエネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｃｕｐ ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）の使用によりＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度に、または（３）クーマシーブルー染色もしくは銀染色を使用する非還元もしくは還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥにより均一になるまで、精製される。単離された抗体は、その抗体の天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないことになるため、組換え細胞内のｉｎ ｓｉｔｕの抗体を含む。しかし、通常は、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製ステップにより調製される。
【0072】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書において使用される場合、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、わずかな量で存在し得る天然で生じる変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて、同一である。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＣ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５アミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＣ末端で切断されている。一部の実施形態では、Ｃ末端切断により、重鎖からＣ末端リシンが除去される。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＮ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５アミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＮ末端で切断されている。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。一部の実施形態では、モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、複数の抗原部位に対するもの（例えば、二重特異性抗体または多重特異性抗体）である。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られる場合の抗体の特徴を示すものであり、この修飾語を、いずれかの特定の方法による抗体の産生を求めるものと解釈すべきではない。例えば、本開示に従って使用されるモノクローナル抗体を様々な技法により作製することができ、そのような技法には、例えば、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ技術、およびヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座または遺伝子の一部またはすべてを有するヒト抗体またはヒト様抗体を動物において産生するための技術が含まれる。
【0073】
用語「ネイキッド抗体」は、細胞傷害性部分または放射性標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。
【0074】
用語「全長抗体」、「インタクト抗体」、または「抗体全体」は、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態の抗体を指すために同義で使用される。具体的には、抗体全体は、Ｆｃ領域を含む重鎖および軽鎖を有するものを含む。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。一部の場合には、インタクト抗体は、１つまたは複数のエフェクター機能を有し得る。
【0075】
「抗体断片」は、インタクト抗体の一部分、インタクト抗体の抗原結合領域および／または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]を参照されたい）；抗体断片から形成される一本鎖抗体分子および多重特異性抗体が挙げられる。
【0076】
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合性断片と、残りの「Ｆｃ」断片（この名称は、容易に結晶化できることを表す）とを生じさせた。Ｆａｂ断片は、全Ｌ鎖に加えてＨ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）および一方の重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片を生じさせ、この断片は、ジスルフィドにより連結された異なる抗原結合活性を有する２つのＦａｂ断片にほぼ相当し、依然として抗原を架橋させることができる。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つまたは複数のシステインを含む少数の追加の残基をＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に有することによって、Ｆａｂ断片と異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を有するＦａｂ’についての本明細書での名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、その間にヒンジシステインを有する対のＦａｂ’断片として、そもそも生成された。抗体断片の他の化学的カップリングもまた公知である。
【0077】
Ｆｃ断片は、ジスルフィドにより一緒に保持されている両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域における配列によって決定され、この領域もまた、ある特定のタイプの細胞上に見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）により認識される。
【0078】
「Ｆｖ」は、完全抗原認識および結合部位を含有する最小抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインとが密接に非共有結合的に会合している二量体からなる。これら２つのドメインのフォールディングから６つの超可変ループ（Ｈ鎖およびＬ鎖から各々３つのループ）が生じ、これらの超可変ループが、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体よりは低い親和性でだが、抗原を認識し、抗原に結合する能力を有する。
【0079】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」と略記されもする「一本鎖Ｆｖ」は、接続されて単一ポリペプチド鎖になっているＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。一部の実施形態では、ｓＦｖポリペプチドは、ｓＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをＶＨドメインとＶＬドメインとの間にさらに含む。ｓＦｖの概説については、PluckthunのThe Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)を参照されたい。
【0080】
本開示の抗体の「機能性断片」は、インタクト抗体の抗原結合領域もしくは可変領域を一般に含むインタクト抗体の一部分を含むか、または改良されたＦｃＲ結合能力を保持するもしくは有する抗体のＦｖ領域を含む。抗体断片の例としては、線状抗体、抗体断片から形成される一本鎖抗体分子および多重特異性抗体が挙げられる。
【0081】
本明細書におけるモノクローナル抗体には、具体的には、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同であるが、鎖の残部が、別の種に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）および、そのような抗体の断片も、それらが所望される生物学的活性を呈するのであれば、含まれる（米国特許第４，８１６，５６７号；Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)）。本明細書における目的のキメラ抗体は、抗体の抗原結合領域が、例えば、マカクザルを目的の抗原で免疫化することにより産生された抗体に由来する、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体を含む。本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。
【0082】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲからの残基が、所望の特異性、親和性および／または能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲからの残基に置き換えられている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の事例では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基が、対応する非ヒト残基に置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことがある。これらの修飾は、結合親和性などの抗体の性能をさらに洗練するために行われ得る。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものに対応するが、ＦＲ領域が、抗体の性能、例えば、結合親和性、異性化、免疫原性などを改善する１つまたは複数の個々のＦＲ残基置換を含み得る、少なくとも１つの、および典型的には２つの、可変ドメインの実質的にすべてを含むことになる。一部の実施形態では、ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、Ｈ鎖内に６以下、およびＬ鎖内に３以下である。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも、必要に応じて含むことになる。さらなる詳細については、例えば、Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)；Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)；およびPresta, Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596 (1992)を参照されたい。例えば、Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115 (1998)；Harris, Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038 (1995)；Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech. 5:428-433 (1994)；ならびに米国特
許第６，９８２，３２１号および同第７，０８７，４０９号も参照されたい。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、単一の抗原部位に対するものである。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、複数の抗原部位に対するものである。代替ヒト化方法は、米国特許第７，９８１，８４３号および米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号に記載されている。
許第６，９８２，３２１号および同第７，０８７，４０９号も参照されたい。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、単一の抗原部位に対するものである。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、複数の抗原部位に対するものである。代替ヒト化方法は、米国特許第７，９８１，８４３号および米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号に記載されている。
【0083】
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「ＶＨ」および「ＶＬ」と呼ばれ得る。これらのドメインは、一般に、抗体の最も可変性の高い部分であり（同じクラスの他の抗体と比較して）、抗原結合部位を含有する。
【0084】
用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」は、本明細書で使用される場合、配列が超可変性である、および／または構造的に定義されるループを形成する、抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）およびＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の、６つのＨＶＲを含む。天然抗体の場合、Ｈ３およびＬ３は、６つのＨＶＲの中で最も大きい多様性を示し、Ｈ３は、特に、抗体に対する優れた特異性を付与する固有の役割を果たすと考えられている。例えば、Xu et al. Immunity 13:37-45 (2000)；Johnson and Wu in Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)を参照されたい。実際に、重鎖のみからなる天然に存在するラクダ科動物抗体は、軽鎖の非存在下でも機能的であり、安定している。例えば、Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-448 (1993)およびSheriff et al., Nature Struct.Biol.3:733-736 (1996)を参照されたい。
【0085】
いくつかのＨＶＲ描写が使用されており、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列可変性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)）。Ｃｈｏｔｈｉａ ＨＶＲは、その代わりに、構造的ループの位置を参照する（Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。「ｃｏｎｔａｃｔ」ＨＶＲは、入手可能な複合体結晶構造の分析に基づく。これらのＨＶＲの各々からの残基が下に記述される。
【表6】
【0086】
別段の指示がない限り、可変ドメインの残基（ＨＶＲ残基およびフレームワーク領域の残基）は、上掲のＫａｂａｔらに従って番号付けされている。
【0087】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されたＨＶＲ残基以外の可変ドメインの残基である。
【0088】
「Ｋａｂａｔにおける可変ドメイン残基番号付け」または「Ｋａｂａｔにおけるアミノ酸位置番号付け」という表現、およびこれらの変形表現は、上掲のＫａｂａｔらにおける抗体の編集の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用された番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用すると、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＨＶＲの短縮または可変ドメインのＦＲもしくはＨＶＲへの挿入に対応する、より少ないまたは追加のアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸インサート（Ｋａｂａｔによれば残基５２ａ）、および重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔによれば残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔ番号付けは、所与の抗体について、その抗体の配列と「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列との相同領域でのアラインメントにより決定され得る。
【0089】
「アクセプターヒトフレームワーク」は、本明細書では、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含む、フレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークもしくはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含むこともあり、または既存のアミノ酸配列変化を含有することもある。一部の実施形態では、既存のアミノ酸変化の数は、１０もしくはそれ未満、９もしくはそれ未満、８もしくはそれ未満、７もしくはそれ未満、６もしくはそれ未満、５もしくはそれ未満、４もしくはそれ未満、３もしくはそれ未満、または２もしくはそれ未満である。
【0090】
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアラインし、必要に応じて、最大配列同一性パーセントを達成するようにギャップを導入した後の、いずれの保存的置換も配列同一性の一部と見なさない、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当技術分野における技能の範囲内である様々な手法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインメントするための適切なパラメーターを決定することができる。例えば、所与のアミノ酸配列Ｂに対する（ｔｏ）、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂを対照とする（ａｇａｉｎｓｔ）、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（その代わりに、所与のアミノ酸配列Ｂに対する（ｔｏ）、所与のアミノ酸配列Ｂとの、または所与のアミノ酸配列Ｂを対照とする（ａｇａｉｎｓｔ）、ある特定のアミノ酸配列同一性％を有するまたは含む、所与のアミノ酸配列Ａと、表現されることもある）は、以下：
１００×分数Ｘ／Ｙ
（式中、Ｘは、そのプログラムのアラインメントで配列によるＡとＢとの同一マッチとしてのスコアを獲得したアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である）として算出される。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％が、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％と等しくならないことは、理解されるであろう。
１００×分数Ｘ／Ｙ
（式中、Ｘは、そのプログラムのアラインメントで配列によるＡとＢとの同一マッチとしてのスコアを獲得したアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である）として算出される。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％が、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％と等しくならないことは、理解されるであろう。
【0091】
特定のポリペプチドにまたは特定のポリペプチド上のエピトープ「に結合する」、「に特異的に結合する」、または「に特異的である」抗体は、いずれの他のポリペプチドにも、いずれの他のポリペプチドエピトープにも、実質的に結合することなく、その特定のポリペプチドにまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合するものである。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体）の、無関係の非Ｓｉｇｌｅｃ－６ポリペプチドへの結合は、当技術分野において公知の方法（例えば、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ））により測定して、抗体のＳｉｇｌｅｃ－６への結合の約１０％未満である。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体）は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．７ｎＭ、≦０．６ｎＭ、≦０．５ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍまたはそれ未満、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）、約２５０ｐＭまたはそれ未満、約１００ｐＭまたはそれ未満、約１０ｐＭまたはそれ未満、あるいは約１ｐＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。
【0092】
用語「抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体」または「ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体」は、いずれの他のポリペプチドにも、無関係の非Ｓｉｇｌｅｃ－６ポリペプチドのエピトープにも、実質的に結合することなく、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６のポリペプチドまたはエピトープに結合する抗体を指す。
【0093】
用語「Ｓｉｇｌｅｃ－６」は、本明細書で使用される場合、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質を指す。この用語は、スプライスバリアントまたはアレルバリアントを含む、Ｓｉｇｌｅｃ－６の天然に存在するバリアントも含む。Ｓｉｇｌｅｃ－６、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン６は、ＣＤ３２７、ＣＤ３３Ｌ、ＯＢＢＰ１、ＣＤ３３Ｌ１、ＣＤ３３Ｌ２およびＣＤＷ３２７としても公知である。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質は、ヒトＳＩＧＬＥＣ６遺伝子によって発現されるいずれかのタンパク質またはポリペプチドである。例示的なヒトＳＩＧＬＥＣ６遺伝子は、ＮＣＢＩ Ｒｅｆ．Ｓｅｑ．Ｇｅｎｅ ＩＤ Ｎｏ．９４６によって表される。例示的なヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質およびそのドメインのアミノ酸配列は、本明細書に記載されている。例えば、一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質は、アミノ酸配列ＱＥＲＲＦＱＬＥＧＰＥＳＬＴＶＱＥＧＬＣＶＬＶＰＣＲＬＰＴＴＬＰＡＳＹＹＧＹＧＹＷＦＬＥＧＡＤＶＰＶＡＴＮＤＰＤＥＥＶＱＥＥＴＲＧＲＦＨＬＬＷＤＰＲＲＫＮＣＳＬＳＩＲＤＡＲＲＲＤＮＡＡＹＦＦＲＬＫＳＫＷＭＫＹＧＹＴＳＳＫＬＳＶＲＶＭＡＬＴＨＲＰＮＩＳＩＰＧＴＬＥＳＧＨＰＳＮＬＴＣＳＶＰＷＶＣＥＱＧＴＰＰＩＦＳＷＭＳＡＡＰＴＳＬＧＰＲＴＴＱＳＳＶＬＴＩＴＰＲＰＱＤＨＳＴＮＬＴＣＱＶＴＦＰＧＡＧＶＴＭＥＲＴＩＱＬＮＶＳＹＡＰＱＫＶＡＩＳＩＦＱＧＮＳＡＡＦＫＩＬＱＮＴＳＳＬＰＶＬＥＧＱＡＬＲＬＬＣＤＡＤＧＮＰＰＡＨＬＳＷＦＱＧＦＰＡＬＮＡＴＰＩＳＮＴＧＶＬＥＬＰＱＶＧＳＡＥＥＧＤＦＴＣＲＡＱＨＰＬＧＳＬＱＩＳＬＳＬＦＶＨＷＫＰＥＧＲＡＧＧＶ（配列番号１）を含む細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。
【0094】
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に起因するその生物活性を指し、抗体のアイソタイプによって異なる。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；ファゴサイトーシス；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；およびＢ細胞活性化が挙げられる。
【0095】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合している分泌されたＩｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合すること、およびその後に、その標的細胞を細胞毒素で死滅させることを可能にする、細胞傷害の一形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞に「武器を持たせる」ものであり、この機序により標的細胞を死滅させるために必要である。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃ発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991)の４６４頁の表３にまとめられている。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体）は、ＡＤＣＣを増強する。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイ、例えば、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているものを、行うことができる。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、または加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性を、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、Clynes et al., PNAS USA 95:652-656 (1998)で開示されているものなどの動物モデルにおいて、評価することができる。ＡＤＣＣ活性および他の抗体特性を変える他のＦｃバリアントとしては、Ghetie et al., Nat Biotech.15:637-40, 1997；Duncan et al, Nature 332:563-564, 1988；Lund et al., J. Immunol 147:2657-2662, 1991；Lund et al, Mol Immunol 29:53-59, 1992；Alegre et al, Transplantation 57:1537-1543, 1994；Hutchins et al., Proc Natl. Acad Sci USA 92:11980-11984, 1995；Jefferis et al, Immunol Lett.44:111-117, 1995；Lund et al., FASEB J9:115-119, 1995；Jefferis et al, Immunol Lett 54:101-104, 1996；Lund et al, J Immunol 157:4963-4969, 1996；Armour et al., Eur J Immunol 29:2613-2624, 1999；Idusogie et al, J Immunol 164:4178-4184, 200；Reddy et al, J Immunol 164:1925-1933, 2000；Xu et al., Cell Immunol 200:16-26, 2000；Idusogie et al, J Immunol 166:2571-2575, 2001；Shields et al., J Biol Chem 276:6591-6604, 2001；Jefferis et al, Immunol Lett 82:57-65.2002；Presta et al., Biochem Soc Trans 30:487-490, 2002；Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005-4010, 2006；米国特許第５，６２４，８２１号、同第５，８８５，５７３号、同第５，６７７，４２５号、同第６，１６５，７４５号、同第６，２７７，３７５号、同第５，８６９，０４６号、同第６，１２１，０２２号、同第５，６２４，８２１号、同第５，６４８，２６０号、同第６，１９４，５５１号、同第６，７３７，０５６号、同第６，８２１，５０５号、同第６，２７７，３７５号、同第７，３３５，７４２号、および同第７，３１７，０９１号により開示されているものが挙げられる。
【0096】
用語「Ｆｃ領域」は、本明細書では、天然配列Ｆｃ領域およびバリアントＦｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端に及ぶように通常は定義される。本開示の抗体における使用に好適な天然配列Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む。組換えＩｇＧ４抗体において観察される不均一性をなくすために、単一のアミノ酸置換（Ｋａｂａｔの番号付けによればＳ２２８Ｐ；ＩｇＧ４Ｐｒｏと呼ばれる）を導入することができる。Angal, S. et al.(1993) Mol Immunol 30, 105-108を参照されたい。
【0097】
「非フコシル化」抗体または「フコース欠損」抗体は、Ｆｃ領域に結合している炭水化物構造のフコースが低減されたか、またはフコースが欠如している、Ｆｃ領域を含む、グリコシル化抗体バリアントを指す。一部の実施形態では、フコースが低減されたか、またはフコースが欠如している抗体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。非フコシル化抗体またはフコース欠損抗体は、細胞系において産生された同じ抗体におけるフコースの量と比較してフコースが低減されている。一部の実施形態では、本明細書で企図される非フコシル化抗体組成物またはフコース欠損抗体組成物は、組成物中の抗体のＦｃ領域に結合しているＮ結合型グリカンの約５０％未満がフコースを含む、組成物である。
【0098】
用語「フコシル化」または「フコシル化された」は、抗体のペプチド骨格に結合しているオリゴ糖内にフコース残基が存在することを指す。具体的には、フコシル化抗体は、抗体Ｆｃ領域に結合しているＮ結合型オリゴ糖の一方または両方における最も内側のＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）残基に、例えば、ヒトＩｇＧ１ ＦｃドメインのＡｓｎ２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に、α（１，６）結合型フコースを含む。Ａｓｎ２９７は、免疫グロブリンのわずかな配列変動に起因して、２９７位の約＋３アミノ酸上流または下流に、すなわち、２９４～３００位の間に、位置することもある。
【0099】
「フコシル化度（ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ ｆｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）」は、当技術分野において公知の方法によって特定される、例えば、マトリックス支援レーザー脱離－イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ）により評価されるＮ－グリコシダーゼＦで処理された抗体組成物中の、すべてのオリゴ糖に対するフコシル化オリゴ糖のパーセンテージである。「完全フコシル化抗体」の組成物では、本質的にすべてのオリゴ糖が、フコース残基を含む、すなわち、フコシル化されている。一部の実施形態では、完全フコシル化抗体の組成物は、少なくとも約９０％のフコシル化度を有する。したがって、そのような組成物中の個々の抗体は、Ｆｃ領域内の２つのＮ結合型オリゴ糖の各々にフコース残基を概して含む。逆に、「完全非フコシル化」抗体の組成物には、フコシル化されているオリゴ糖が本質的になく、そのような組成物中の個々の抗体は、Ｆｃ領域内の２つのＮ結合型オリゴ糖のいずれにもフコース残基を含有しない。一部の実施形態では、完全非フコシル化抗体の組成物は、約１０％未満のフコシル化度を有する。「部分フコシル化抗体」の組成物では、オリゴ糖の一部のみがフコースを含む。そのような組成物中の個々の抗体は、フコース残基を、Ｆｃ領域内のＮ結合型オリゴ糖のいずれにも含まないこともあり、Ｆｃ領域内のＮ結合型オリゴ糖の一方または両方に含むこともあるが、ただし、組成物が、Ｆｃ領域内のＮ結合型オリゴ糖内のフコース残基が欠如している本質的にすべての個々の抗体を含むわけでも、Ｆｃ領域内のＮ結合型オリゴ糖の両方にフコース残基を含有する本質的にすべての個々の抗体を含むわけでもないことを条件とする。一実施形態では、部分フコシル化抗体の組成物は、約１０％～約８０％（例えば、約５０％～約８０％、約６０％～約８０％、または約７０％～約８０％）のフコシル化度を有する。
【0100】
「結合親和性」は、本明細書で使用される場合、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の強度を指す。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－６ポリペプチドまたはそのサブドメイン（例えば、本明細書に記載されている、例えば、ＥＣＤ、ドメイン１、ドメイン２またはドメイン３）に対する抗体の結合親和性は一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載のものを含む、当技術分野において公知の一般的な方法により測定することができる。
【0101】
「結合アビディティー」は、本明細書で使用される場合、分子（例えば、抗体）の複数の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との結合強度を指す。
【0102】
本明細書における抗体をコードする「単離された」核酸分子は、同定され、それが産生された環境では通常それに付随している少なくとも１つの夾雑核酸分子から分離されている、核酸分子である。一部の実施形態では、単離された核酸には、産生環境に付随するいかなる成分も付随していない。本明細書におけるポリペプチドおよび抗体コードする単離された核酸分子は、それが自然界に見られる形態または状況のもの以外の形態のものである。したがって、単離された核酸分子は、細胞内に天然に存在する本明細書におけるポリペプチドおよび抗体をコードする核酸と区別される。
【0103】
用語「医薬製剤」は、活性成分の生物活性が有効であることを可能にするような形態である調製物であって、製剤が投与されることになる個体にとって許容できないほど毒性である追加の成分を含有しない調製物を指す。そのような製剤は、無菌である。
【0104】
「担体」は、本明細書で使用される場合、用いられる投薬量および濃度でそれに曝露される細胞または哺乳動物にとって非毒性である、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を含む。多くの場合、生理学的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に許容される担体の例としては、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸；抗酸化剤（アスコルビン酸を含む）；低分子量（例えば、約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンもしくはリシン；単糖類、二糖類および他の炭水化物（グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む）；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、例えば、マンニトールまたはソルビトール；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム；ならびに／または非イオン性表面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）が挙げられる。
【0105】
本明細書で使用される場合、用語「処置」または「処置すること」は、臨床病理の過程で処置を受けている個体または細胞の自然経過を変えるように計画された臨床介入を指す。処置の望ましい効果としては、疾患進行速度の低下、病状の改善または緩和、および寛解または予後の改善が挙げられる。例えば、疾患（例えば、ウイルス感染）に関連する１つまたは複数の症状が軽減または消失した場合、個体は、成功裏に「処置」されている。例えば、処置が、罹患者の生活の質の向上、疾患を処置するために必要とされる他の投与薬の用量の減少、疾患の再発頻度の低減、疾患の重症度の低下、疾患の発症もしくは進行の遅延、および／または個体の生存の延長をもたらした場合、個体は、成功裏に「処置」されている。
【0106】
本明細書で使用される場合、「と併せて」または「と組み合わせて」は、１つの処置モダリティを別の処置モダリティに加えて投与することを指す。したがって、「と併せて」または「と組み合わせて」は、１つの処置モダリティを、他の処置モダリティの個体への投与前、投与中または投与後に投与することを指す。
【0107】
本明細書で使用される場合、用語「予防」または「予防すること」は、個体における疾患の発生または再発に対する予防法を提供することを含む。個体は、疾患があるとまだ診断されていないが、疾患にかかりやすい素因を有すること、疾患に罹患しやすいこと、または疾患を発症するリスクがあることがある。
【0108】
「有効量」は、少なくとも、治療的または予防的結果を含む所望のまたは示される効果を必要な投薬量で必要な期間にわたって得るために有効な量を指す。有効量を１回または複数の投与で提供することができる。「治療有効量」は、少なくとも、特定の疾患の測定可能な改善を果たすのに必要な最低濃度である。本明細書における治療有効量は、患者の病状、年齢、性別および体重、ならびに個体において所望の応答を誘起する抗体の能力などの、因子によって変わり得る。治療有効量は、抗体のいかなる毒性または有害効果よりも、治療に有益な効果のほうが上回る量でもあり得る。「予防有効量」は、必要な投薬量で必要な期間にわたって所望の予防的結果を達成するのに有効な量を指す。必ずしもそうとは限らないが、通常は、予防用量は疾患の前にまたはより早期に個体に使用されるので、予防有効量は、治療有効量より少ない量であり得る。
【0109】
「慢性」投与は、初期の治療効果（活性）を長期間にわたって維持するような、急性方式とは対照的な連続方式での医薬の投与を指す。「間欠」投与は、中断することなく連続的に行われる処置ではなく、むしろ事実上周期的である処置である。
【0110】
用語「添付文書」は、治療製品の市販のパッケージ内に通例含まれている指示であって、そのような治療製品の使用に関する適応症、用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌および／または警告についての情報を含む指示を指すために使用される。
【0111】
本明細書で使用される場合、「個体」または「被験体」は、哺乳動物である。処置を目的として「哺乳動物」は、ヒト、飼育動物および家畜、ならびに動物園、競技用または愛玩用の動物、例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどを含む。一部の実施形態では、個体または被験体は、ヒトである。
【0112】
ＩＩ．抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体および組成物
本開示のある特定の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体、すなわち、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体に関する。
本開示のある特定の態様は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する抗体、すなわち、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体に関する。
【0113】
一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、例えば、アミノ酸配列ＱＥＲＲＦＱＬＥＧＰＥＳＬＴＶＱＥＧＬＣＶＬＶＰＣＲＬＰＴＴＬＰＡＳＹＹＧＹＧＹＷＦＬＥＧＡＤＶＰＶＡＴＮＤＰＤＥＥＶＱＥＥＴＲＧＲＦＨＬＬＷＤＰＲＲＫＮＣＳＬＳＩＲＤＡＲＲＲＤＮＡＡＹＦＦＲＬＫＳＫＷＭＫＹＧＹＴＳＳＫＬＳＶＲＶＭＡＬＴＨＲ（配列番号２）を含む、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインのドメイン１に結合するヒト化抗体である。
【0114】
一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、例えば、アミノ酸配列ＰＮＩＳＩＰＧＴＬＥＳＧＨＰＳＮＬＴＣＳＶＰＷＶＣＥＱＧＴＰＰＩＦＳＷＭＳＡＡＰＴＳＬＧＰＲＴＴＱＳＳＶＬＴＩＴＰＲＰＱＤＨＳＴＮＬＴＣＱＶＴＦＰＧＡＧＶＴＭＥＲＴＩＱＬＮＶＳＹＡ（配列番号３）を含む、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインのドメイン２に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒト化またはヒト抗体である。
【0115】
一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、例えば、アミノ酸配列ＰＱＫＶＡＩＳＩＦＱＧＮＳＡＡＦＫＩＬＱＮＴＳＳＬＰＶＬＥＧＱＡＬＲＬＬＣＤＡＤＧＮＰＰＡＨＬＳＷＦＱＧＦＰＡＬＮＡＴＰＩＳＮＴＧＶＬＥＬＰＱＶＧＳＡＥＥＧＤＦＴＣＲＡＱＨＰＬＧＳＬＱＩＳＬＳＬＦＶＨＷＫＰＥＧＲＡＧＧＶ（配列番号４）を含む、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインのドメイン３に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒト化またはヒト抗体である。
【0116】
一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、表２に示される単一の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の１、２、３、４、５または全６個のＨＶＲ配列を含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、表２に示される単一の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体のＶＨ領域の１、２または全３個のＨＶＲ配列を含むＶＨ領域を含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、表２に示される単一の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体のＶＬ領域の１、２または全３個のＨＶＲ配列を含むＶＬ領域を含む。
【表2-1】
【表2-2】
【表2-3】
【0117】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0118】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0119】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0120】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0121】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0122】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0123】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0124】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0125】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0126】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0127】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0128】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0129】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0130】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0131】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0132】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0133】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0134】
一部の実施形態では、抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨ領域は、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、ＶＬ領域は、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
【0135】
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質のＥＣＤまたはそのサブドメイン）への結合について、参照抗体、例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体と競合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質のＥＣＤまたはそのサブドメイン）への結合について、本明細書に記載されている次の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体：ＡＫ０４、ＡＫ０５、ＡＫ０２、ＡＫ１４、ＡＫ１１、ＡＫ１５、ＡＫ１３、ＡＫ１２、ＡＫ１０、ＡＫ０９、ＡＫ０８、ＡＫ０７、ＡＫ０６、ＡＫ０３、ＡＫ０１、ＡＫ１６、ＡＫ１７およびＡＫ１８のうち１種または複数と競合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６のドメイン１への結合について、本明細書に記載されている次の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体：ＡＫ０４、ＡＫ０５、ＡＫ０２、ＡＫ０７、ＡＫ０６、ＡＫ０３およびＡＫ０１のうち１種または複数と競合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６のドメイン２への結合について、本明細書に記載されている次の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体：ＡＫ１０およびＡＫ１１のうち１種または複数と競合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６のドメイン３への結合について、本明細書に記載されている次の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体：ＡＫ０９、ＡＫ０８、ＡＫ１２、ＡＫ１３、ＡＫ１４およびＡＫ１５のうち１種または複数と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合について、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２および配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含むＶＨ領域、ならびに配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２および配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含むＶＬ領域を含む参照抗体と競合する。
【0136】
一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に結合する。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤは、アミノ酸配列ＱＥＲＲＦＱＬＥＧＰＥＳＬＴＶＱＥＧＬＣＶＬＶＰＣＲＬＰＴＴＬＰＡＳＹＹＧＹＧＹＷＦＬＥＧＡＤＶＰＶＡＴＮＤＰＤＥＥＶＱＥＥＴＲＧＲＦＨＬＬＷＤＰＲＲＫＮＣＳＬＳＩＲＤＡＲＲＲＤＮＡＡＹＦＦＲＬＫＳＫＷＭＫＹＧＹＴＳＳＫＬＳＶＲＶＭＡＬＴＨＲＰＮＩＳＩＰＧＴＬＥＳＧＨＰＳＮＬＴＣＳＶＰＷＶＣＥＱＧＴＰＰＩＦＳＷＭＳＡＡＰＴＳＬＧＰＲＴＴＱＳＳＶＬＴＩＴＰＲＰＱＤＨＳＴＮＬＴＣＱＶＴＦＰＧＡＧＶＴＭＥＲＴＩＱＬＮＶＳＹＡＰＱＫＶＡＩＳＩＦＱＧＮＳＡＡＦＫＩＬＱＮＴＳＳＬＰＶＬＥＧＱＡＬＲＬＬＣＤＡＤＧＮＰＰＡＨＬＳＷＦＱＧＦＰＡＬＮＡＴＰＩＳＮＴＧＶＬＥＬＰＱＶＧＳＡＥＥＧＤＦＴＣＲＡＱＨＰＬＧＳＬＱＩＳＬＳＬＦＶＨＷＫＰＥＧＲＡＧＧＶ（配列番号１）を含む。
【0137】
一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質のＥＣＤ）のドメイン１、ドメイン２またはドメイン３に結合する。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質のＥＣＤ）のドメイン１に結合する。一部の実施形態では、ドメイン１は、アミノ酸配列ＱＥＲＲＦＱＬＥＧＰＥＳＬＴＶＱＥＧＬＣＶＬＶＰＣＲＬＰＴＴＬＰＡＳＹＹＧＹＧＹＷＦＬＥＧＡＤＶＰＶＡＴＮＤＰＤＥＥＶＱＥＥＴＲＧＲＦＨＬＬＷＤＰＲＲＫＮＣＳＬＳＩＲＤＡＲＲＲＤＮＡＡＹＦＦＲＬＫＳＫＷＭＫＹＧＹＴＳＳＫＬＳＶＲＶＭＡＬＴＨＲ（配列番号２）を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質のＥＣＤ）のドメイン２に結合する。一部の実施形態では、ドメイン２は、アミノ酸配列ＰＮＩＳＩＰＧＴＬＥＳＧＨＰＳＮＬＴＣＳＶＰＷＶＣＥＱＧＴＰＰＩＦＳＷＭＳＡＡＰＴＳＬＧＰＲＴＴＱＳＳＶＬＴＩＴＰＲＰＱＤＨＳＴＮＬＴＣＱＶＴＦＰＧＡＧＶＴＭＥＲＴＩＱＬＮＶＳＹＡ（配列番号３）を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質のＥＣＤ）のドメイン３に結合する。一部の実施形態では、ドメイン３は、アミノ酸配列ＰＱＫＶＡＩＳＩＦＱＧＮＳＡＡＦＫＩＬＱＮＴＳＳＬＰＶＬＥＧＱＡＬＲＬＬＣＤＡＤＧＮＰＰＡＨＬＳＷＦＱＧＦＰＡＬＮＡＴＰＩＳＮＴＧＶＬＥＬＰＱＶＧＳＡＥＥＧＤＦＴＣＲＡＱＨＰＬＧＳＬＱＩＳＬＳＬＦＶＨＷＫＰＥＧＲＡＧＧＶ（配列番号４）を含む。
【0138】
一部の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６タンパク質のＥＣＤまたはそのサブドメイン）における、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６ドメイン１、２または３における、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ＡＫ０５と同じエピトープに結合する（例えば、図１０Ａを参照）。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－６における次のアミノ酸：２９、３０、３４、３８、６３、６４、６８、７４、７６、９９、１００、１０３、１０４、１０６および１１４（配列番号１に示される通りＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤに従って番号付け）に結合する。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ＡＫ０４と同じエピトープに結合する（例えば、図１０Ｂを参照）。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－６における次のアミノ酸：２６、２９、３０、５２、６４、７４、７５、７９、９８、１００、１０４、１０６および１０７（配列番号１に示される通りＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤに従って番号付け）に結合する。エピトープマッピングのための例示的なアッセイは、当技術分野で公知かつ本明細書に例証されている。例えば、エピトープマッピングは、例えば、本明細書に例証されている通り、クロスリンキング質量分析（ＸＬ－ＭＳ）を使用して行うことができる。他のアッセイは、Ｘ線結晶学およびアラニンスキャニング変異誘発を限定することなく含む。
【表5-1】
【表5-2】
【表5-3】
【表5-4】
【0139】
抗体可変ドメインのＣＤＲまたはＨＶＲ配列に関する多くの定義が、当技術分野で公知であり、例えば、ＣＤＲ／ＨＶＲ配列によって本開示の抗体を表すために使用することができる。一部の実施形態では、抗体ＣＤＲ／ＨＶＲ配列は、Ｋａｂａｔと同様に定義される（例えば、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)を参照）。一部の実施形態では、抗体ＣＤＲ／ＨＶＲ配列は、Ｃｈｏｔｈｉａと同様に定義される（例えば、Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)を参照）。一部の実施形態では、抗体ＣＤＲ／ＨＶＲ配列は、ＩＭＧＴと同様に定義される（例えば、Lefranc, M.P. (1999) The Immunologist 7:132-136を参照）。一部の実施形態では、単一の 抗体のＣＤＲ／ＨＶＲ配列は、２種またはそれよりも多い定義、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａおよび／またはＩＭＧＴを混合することにより定義される。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号105のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶHドメイン、ならびに／あるいは配列番号１０６のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１５のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１５のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１０７のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１０８のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１４のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１４のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１０９のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１０のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１３のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１３のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１１のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１２のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１２のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１２のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１３のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１４のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１１のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１１のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１５のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１６のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１０のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１０のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１７のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１１８のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０９のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０９のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１１９のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１２０のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０８のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０８のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２１のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１２２のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０７のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０７のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２３のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１２４のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０６のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０６のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２５のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１２６のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０５のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０５のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２７のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１２８のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０４のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０４のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１２９のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１３０のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０３のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０３のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１３１のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１３２のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０２のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０２のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１３３のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１３４のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０１のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０１のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１５３のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１５４のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１６のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１６のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１５５のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１５６のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１７のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１７のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１５７のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１５８のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１８のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１８のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。本明細書に記載されている実施形態のいずれかに係る一部の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。
一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１３３のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１３４のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ０１のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ０１のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１５３のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１５４のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１６のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１６のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１５５のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１５６のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１７のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１７のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、配列番号１５７のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、ならびに／あるいは配列番号１５８のアミノ酸配列に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、本明細書に記載されるＡＫ１８のＶＨドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＨドメインならびに／あるいは本明細書に記載されるＡＫ１８のＶＬドメイン配列（例えば、表５を参照のこと）に存在する１、２もしくは全３個のＣＤＲもしくはＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。本明細書に記載されている実施形態のいずれかに係る一部の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。
【0140】
一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインに結合する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、肥満細胞の活性化を阻害する。肥満細胞活性化を査定するためのアッセイは、当技術分野で公知かつ本明細書に例証されている。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、例えば、ヒト肥満細胞のＣＤ６３発現を阻害する。一部の態様では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、１種または複数の肥満細胞媒介性活性を阻害する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、次の：ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１３、ＣＣＬ２、ＣＣＬ４、ヒスタミン、キマーゼおよびトリプターゼ（例えば、活性トリプターゼ）のうち１種または複数の発現および／または放出（例えば、ヒト肥満細胞による）を阻害する。一部の実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、次の炎症性メディエーター：プロテアーゼ（例えば、汎トリプターゼ、活性またはベータ－トリプターゼ、キマーゼ、ＣＰＡ３、ヘパリン等）、ロイコトリエン（例えば、ロイコトリエンＣ４またはＢ４、血小板活性化因子、プロスタグランジンＤ２またはＥ２等）、アミン（例えば、ヒスタミン、セロトニン、ドーパミン、ポリアミン等）、増殖因子（例えば、ＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦＧ－ＣＳＦ、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ等）、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－３１、ＩＬ－３６等）、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２６、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８等）、エキソソームおよび細胞外トラップのうち１種または複数の発現および／または放出（例えば、ヒト肥満細胞による）を阻害する。例えば、総トリプターゼおよび活性トリプターゼ、ならびにヒスタミン、Ｎ－メチルヒスタミンおよび１１－ベータ－プロスタグランジンＦ２を、血液または尿において測定して、肥満細胞の低減を評価することができる。例示的な肥満細胞活性アッセイについては、例えば米国特許出願公開番号ＵＳ２０１１０２９３６３１を参照されたい。
【0141】
一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、細胞表面（すなわち、ヒト肥満細胞の）におけるＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導く。抗体の結合は、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６内部移行、エンドサイトーシス、シェディング、切断等を介して、細胞膜におけるＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導くことができる。Ｓｉｇｌｅｃ－６表面発現のレベルを査定するためのアッセイは、当技術分野で公知かつ本明細書に例証されている。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－６表面発現は、例えば、検出可能（例えば、蛍光）タグを有する抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体を使用した、フローサイトメトリーによって測定される。例えば、本明細書に実証される通り、肥満細胞を、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体と接触させることができ、表面発現を、Ｓｉｇｌｅｃ－６における検査抗体とは異なるエピトープに結合する蛍光をタグ付けされた抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体によるフローサイトメトリーによって測定することができる。検査抗体の存在下で低減された蛍光は、Ｓｉｇｌｅｃ－６表面発現のレベル低減を指し示すことができる。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、抗体Ｆｃ領域の存在／非存在に関係なく、またはＦｃ受容体（例えば、エフェクター細胞において発現された）に結合する抗体Ｆｃ領域の能力に関係なく、Ｓｉｇｌｅｃ－６表面発現のレベル低減を導く。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、例えば、抗体の非存在下におけるまたはＳｉｇｌｅｃ－６に結合しない抗体の非存在下におけるＳｉｇｌｅｃ－６の表面発現と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％または少なくとも約１００％低減された細胞膜におけるＳｉｇｌｅｃ－６の発現レベルを導く。
【0142】
他の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、細胞膜（すなわち、ヒト肥満細胞の）におけるＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導かない。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、抗体Ｆｃ領域の存在／非存在に関係なく、またはＦｃ受容体（例えば、エフェクター細胞において発現された）に結合する抗体Ｆｃ領域の能力に関係なく、細胞膜におけるＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導かない。
【0143】
一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、Ｆｃ受容体を発現する細胞（例えば、エフェクター細胞）の存在下で、細胞膜（すなわち、ヒト肥満細胞の）におけるＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導く。一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域（例えば、活性Ｆｃ領域）を含む。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、抗体Ｆｃ領域（例えば、活性Ｆｃ領域）と、Ｆｃ受容体または例えばＦｃ受容体を発現するエフェクター細胞との間の相互作用に依存した、表面発現されたＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導く。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、例えば、Ｆｃ受容体またはエフェクター細胞（例えば、Ｆｃ受容体を発現している）の存在下で、抗体が、Ｆｃ領域（例えば、活性Ｆｃ領域）を含む全長抗体である場合にのみ、表面発現されたＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導く。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、抗体が、例えば、Ｆｃ領域を欠如する抗体断片である場合に、表面発現されたＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導く。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、抗体が、Ｆｃ受容体に結合しないＦｃ領域（例えば、エフェクター機能を欠如する不活性または死んだＦｃ領域）を含む全長抗体である場合に、表面発現されたＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導く。一部の実施形態では、例えば、Ｆｃ受容体またはエフェクター細胞（例えば、Ｆｃ受容体を発現している）の存在下で、抗体が、Ｆｃ領域（例えば、活性Ｆｃ領域）を含む全長抗体である場合に、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、表面発現されたＳｉｇｌｅｃ－６のレベル低減を導くが、抗体が、Ｆｃ領域を欠如するかまたはＦｃ受容体に結合しないＦｃ領域（例えば、不活性または死んだＦｃ領域）を含む抗体断片である場合には導かない。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、例えば、Ｆｃ領域を含まないかまたは活性Ｆｃ領域を含まない抗体を使用したＳｉｇｌｅｃ－６の表面発現と比較して、抗体が活性Ｆｃ領域を含む場合、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％または少なくとも約１００％低減された細胞膜におけるＳｉｇｌｅｃ－６の発現レベルを導く。
【0144】
一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、Ｓｉｇｌｅｃ－６の二量体化および／または内部移行を誘導する。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、Ｓｉｇｌｅｃ－６の二量体化および内部移行を誘導する。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、Ｓｉｇｌｅｃ－６のエンドサイトーシスを誘導する。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、Ｓｉｇｌｅｃ－６（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤ）のシェディングを誘導する。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、Ｓｉｇｌｅｃ－６（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤ）の切断を誘導する。
【0145】
一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、例えば、エフェクター細胞の存在下、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏで、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞を枯渇させる。一部の実施形態では、ヒト肥満細胞の表面に発現された場合のヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインへの抗体の結合は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、エフェクター細胞の存在下、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ活性を誘導する。一部の他の態様では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏで、ＡＤＣＣ活性によってＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞を死滅させる。一部の他の態様では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏで、ＡＤＣＰ活性によりＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞のファゴサイトーシスを誘導する。一部の実施形態では、組成物は、フコシル化されていない（すなわち、脱フコシル化（afucosylated））抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されているフコシル化されていない抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体を含む組成物は、部分的にフコシル化された抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体を含む組成物と比較して、ＡＤＣＣ活性を増強する。
【0146】
ＡＤＣＣ活性を査定するためのアッセイは、当技術分野で周知かつ本明細書に記載されている。例示的なアッセイにおいて、ＡＤＣＣ活性を測定するために、エフェクター細胞および標的細胞は、評価されるべき抗体の存在下、例えば、特異的な比（例えば、１：５０標的細胞：エフェクター細胞）で使用される。エフェクター細胞の例としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、大顆粒リンパ球（ＬＧＬ）、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、ならびにＮＫおよびＬＧＬを含むＰＢＭＣ、または細胞表面にＦｃ受容体を有する白血球、例えば、好中球、好酸球およびマクロファージが挙げられる。標的細胞は、評価すべき抗体が認識し得る抗原を細胞表面に発現する任意の細胞である。そのような標的細胞の例は、細胞表面にＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞である。標的細胞は、細胞溶解の検出を可能にする試薬で標識される。標識のための試薬の例は、放射性物質、例えば、クロム酸ナトリウム（Ｎａ２ ５１ＣｒＯ４）およびカルボキシフルオレセインサクシニミジルエステルを含む。例えば、Immunology, 14, 181 (1968)；J. Immunol. Methods, 172, 227 (1994)；およびJ. Immunol. Methods, 184, 29 (1995)を参照されたい。次に、残っている標的細胞の数は、共インキュベーション後に査定し（例えば、フローサイトメトリーによって）、正規化することができる（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６に結合しない抗体で処置されたかまたは抗体なしで処置されたエフェクター細胞と共インキュベートされた残っている標的細胞の数に対して）。
【0147】
ＡＤＣＰ活性を査定するためのアッセイは、当技術分野で周知かつ本明細書に記載されている。例えば、標的細胞は、評価されるべき抗体の存在下、マクロファージ（例えば、ヒト単球由来マクロファージ）、単球またはＰＢＭＣと、特異的な比（例えば、１：５０標的細胞：マクロファージ）で共培養することができる。次に、残っている標的細胞の数は、共インキュベーション後に査定し（例えば、フローサイトメトリーによって）、正規化することができる（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６に結合しない抗体で処置されたかまたは抗体なしで処置されたマクロファージと共インキュベートされた残っている標的細胞の数に対して）。
【0148】
一態様では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、モノクローナル抗体である。一態様では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、抗体断片（抗原結合性断片を含む）、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖまたは（Ｆａｂ’）２断片である。一態様では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、キメラ、ヒト化またはヒト抗体である。一態様では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体のいずれかは精製されている。
【0149】
本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、いかなる適したフレームワーク可変ドメイン配列を含むこともできるが、ただし、抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ－６に結合する能力を保持することを条件とする。本明細書で使用される場合、重鎖フレームワーク領域は、「ＨＣ－ＦＲ１－ＦＲ４」と命名され、軽鎖フレームワーク領域は、「ＬＣ－ＦＲ１－ＦＲ４」と命名される。
【0150】
免疫グロブリンには、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる重鎖をそれぞれ有する、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭという５つのクラスがある。γおよびαクラスは、サブクラスにさらに分けられ、例えば、ヒトは、次のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、アロタイプと呼ばれる複数の多型バリアントで存在することができ（Jefferis and Lefranc 2009. mAbs Vol 1 Issue 4 1-7において概説されている）、これらのバリアントのいずれも、本明細書の実施形態の一部における使用に好適である。ヒト集団における一般的なアロタイプバリアントは、文字ａ、ｆ、ｎ、ｚまたはこれらの組合せで表記されるものである。
【0151】
本明細書における実施形態のいずれかでは、抗体は、重鎖Ｆｃ領域、例えば、ヒトＦｃ領域またはヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含むことができる。さらなる実施形態では、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、アミノ酸残基は、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスに従って番号付けされる。一部の実施形態では、ヒトＦｃ領域は、エフェクター機能を低減させる１個または複数の変異を含む。
【0152】
一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、エフェクター機能を低減させる１個または複数の変異を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の位置のうち１個または複数における置換または欠失を含む：（ａ）Ｌ２３４および／もしくはＬ２３５；（ｂ）Ａ３２７、Ａ３３０および／もしくはＰ３３１；（ｃ）Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５および／もしくはＧ２３６；（ｄ）Ｅ２３３、Ｌ２３４および／もしくはＬ２３５；（ｅ）Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３６、Ａ３２７、Ａ３３０および／もしくはＰ３３１；（ｆ）Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ａ３２７、Ａ３３０および／もしくはＰ３３１；（ｇ）Ｎ２９７；（ｈ）Ｌ２４２、Ｎ２９７および／もしくはＫ３３４；（ｉ）Ａ２８７、Ｎ２９７および／もしくはＬ３０６；（ｊ）Ｒ２９２、Ｎ２９７および／もしくはＶ３０２；（ｋ）Ｎ２９７、Ｖ３２３および／もしくはＩ３３２；（ｌ）Ｖ２５９、Ｎ２９７および／もしくはＬ３０６；（ｍ）Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｋ３２２、Ｍ２５２、Ｓ２５４および／もしくはＴ２５６；または（ｎ）Ｌ２３４、Ｌ２３５および／もしくはＰ３２９。一部の実施形態では、抗体は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の変異：（ａ）Ｌ２３４Ａおよび／もしくはＬ２３５Ａ；（ｂ）Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓおよび／もしくはＰ３３１Ｓ；（ｃ）Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａおよび／もしくはＧ２３６ｄｅｌ；（ｄ）Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、および／またはＬ２３５Ａ；（ｅ）Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６ｄｅｌ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、および／またはＰ３３１Ｓ；（ｆ）Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、および／またはＰ３３１Ｓ；（ｇ）Ｎ２９７Ａ；（ｈ）Ｎ２９７Ｇ；（ｉ）Ｎ２９７Ｑ；（ｊ）Ｌ２４２Ｃ、Ｎ２９７Ｃ、および／またはＫ３３４Ｃ；（ｋ）Ａ２８７Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、および／またはＬ３０６Ｃ；（ｌ）Ｒ２９２Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、および／またはＶ３０２Ｃ；（ｍ）Ｎ２９７Ｇ、Ｖ３２３Ｃ、および／またはＩ３３２Ｃ；（ｎ）Ｖ２５９Ｃ、Ｎ２９７Ｇ、および／またはＬ３０６Ｃ；（ｏ）Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｑ、Ｋ３２２Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、および／またはＴ２５６Ｅ；（ｐ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、および／またはＰ３２９Ｇ；または（ｑ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｑ、およびＫ３２２Ｑのうち１個または複数を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。例えば、Schlothauer, T. et al. (2016) Protein Eng. Des. Sel. 29:457-466；Armour, K.L. et al. (2003) Mol. Immunol. 40:585-593；Jacobsen, F.W. et al. (2017) J. Biol. Chem. 292:1865-1875；およびBorrok, M.J. et al. (2017) J. Pharm. Sci. 106:1008-1017を参照されたい。一部の実施形態では、抗体重鎖は、配列番号１０１または１０２のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。
【0153】
一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、エフェクター機能を増加または増強する１個または複数の変異を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の位置（ａ）Ｆ２４３、Ｒ２９２、Ｙ３００、Ｖ３０５および／もしくはＰ３９６；（ｂ）Ｓ２３９および／もしくはＩ３３２；（ｃ）Ｓ２３９、Ｉ３３２および／もしくはＡ３３０；（ｄ）Ｓ２９８、Ｅ３３３および／もしくはＫ３３４；（ｅ）Ｇ２３６、Ｓ２３９および／もしくはＩ３３２；（ｆ）Ｋ３２６および／もしくはＥ３３３；（ｇ）Ｓ２６７、Ｈ２６８および／もしくはＳ３２４；または（ｈ）Ｅ３４５、Ｅ４３０および／もしくはＳ４４０のうち１個または複数における置換または欠失を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の変異（ａ）Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉおよび／もしくはＰ３９６Ｌ；（ｂ）Ｓ２３９Ｄおよび／もしくはＩ３３２Ｅ；（ｃ）Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅおよび／もしくはＡ３３０Ｌ；（ｄ）Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａおよび／もしくはＫ３３４Ａ；（ｅ）Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄおよび／もしくはＩ３３２Ｅ；（ｆ）Ｋ３２６Ｗおよび／もしくはＥ３３３Ｓ；（ｇ）Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆおよび／もしくはＳ３２４Ｔ；または（ｈ）Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇおよび／もしくはＳ４４０Ｙのうち１個または複数を含む。例えば、Stavenhagen, J.B. et al. (2007) Cancer Res. 67:8882-8890；Lazar, G.A. et al. (2006) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005-4010；Shields, R.L. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604；Richards, J.O. et al. (2008) Mol. Cancer Ther. 7:2517-2527；Idusogie, E.E. et al. (2001) J. Immunol. 166:2571-2575；Moore, G.L. et al. (2010) MAbs 2:181-189；およびDiebolder, C.A. et al. (2014) Science 343:1260-1263を参照されたい。
【0154】
一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域は、エフェクター機能を低減させる１個または複数の変異を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の位置のうち１個または複数における置換または欠失を含む：（ａ）Ａ３３０および／もしくはＰ３３１；（ｂ）Ｖ２３４、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｈ２６８、Ｖ３０９、Ａ３３０および／もしくはＰ３３１；または（ｃ）Ｖ２３４、Ｇ２３７、Ｈ２６８、Ｖ３０９、Ａ３３０、Ｐ３３１、Ｃ２３２、Ｃ２３３、Ｓ２６７、Ｌ３２８、Ｍ２５２、Ｓ２５４および／もしくはＴ２５６。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の変異：（ａ）Ａ３３０Ｓおよび／またはＰ３３１Ｓ；（ｂ）Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、および／またはＰ３３１Ｓ；または（ｃ）Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、および／またはＴ２５６Ｅのうち１個または複数を含む。例えば、Armour, K.L. et al. (2003) Mol. Immunol. 40:585-593ならびに米国特許公開番号（US PG Pub. No）２０１７０２０４１９３および２０１７０２４０６３１を参照されたい。
【0155】
一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、エフェクター機能を低減させる１個または複数の変異を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の位置のうち１個または複数における置換または欠失を含む：（ａ）Ｅ２３３、Ｆ２３４、Ｌ２３５および／もしくはＧ２３６；（ｂ）Ｅ２３３、Ｆ２３４および／もしくはＬ２３５；または（ｃ）Ｓ２２８および／もしくはＬ２３５。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、ＥＵインデックスに基づいて番号付けした次の変異：（ａ）Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａおよび／もしくはＧ２３６ｄｅｌ；（ｂ）Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、および／またはＬ２３５Ａ；（ｃ）Ｓ２２８Ｐおよび／またはＬ２３５Ｅ；または（ｄ）Ｓ２２８Ｐおよび／またはＬ２３５Ａのうち１個または複数を含む。例えば、Schlothauer, T. et al. (2016) Protein Eng. Des. Sel. 29:457-466；およびArmour, K.L. et al. (2003) Mol. Immunol. 40:585-593を参照されたい。一部の実施形態では、抗体重鎖は、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。
【0156】
一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、表３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む抗体重鎖を含む。
【表3】
【0157】
一部の実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、軽鎖定常（ＣＬ）ドメイン、例えば、ヒトカッパーまたはラムダＣＬドメインを含む抗体軽鎖を含む。一部の実施形態では、ＣＬドメインは、ヒトカッパーＣＬドメインである。一部の実施形態では、ＣＬドメインは、ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０４）のアミノ酸配列を含む。
【0158】
一態様では、本開示は、例えば、下文に記載されている通り、フコシル化が低減または排除された抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体を提供する。例えば、一部の実施形態では、抗体の重鎖のうち少なくとも１または２個は、フコシル化されていない。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、フコシル化されていない。一部の実施形態では、抗体は、フコシル化されていないヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。抗体フコシル化を測定するための例示的なアッセイ、ならびにフコシル化が変更、低減または排除された抗体を産生するための方法および細胞系が本明細書に提供される。
【0159】
一態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体をコードするポリヌクレオチドが提供される。ある特定の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。ある特定の実施形態では、そのようなベクターを含む宿主細胞が提供される。本発明の別の態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体または抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体をコードするポリヌクレオチドを含む組成物が提供される。ある特定の実施形態では、本開示の組成物は、肥満細胞媒介性障害、例えば、本明細書に列挙されている障害の処置のための医薬製剤である。
【0160】
１．抗体親和性
一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、約２５０ｐＭもしくはそれ未満、約２２５ｐＭもしくはそれ未満、約２００ｐＭもしくはそれ未満、約１７５ｐＭもしくはそれ未満、約１５０ｐＭもしくはそれ未満、約１２５ｐＭもしくはそれ未満、約１００ｐＭもしくはそれ未満、約９０ｐＭもしくはそれ未満、約８０ｐＭもしくはそれ未満、約７０ｐＭもしくはそれ未満、約６０ｐＭもしくはそれ未満、約５０ｐＭもしくはそれ未満、約４０ｐＭもしくはそれ未満、約３０ｐＭもしくはそれ未満、約２０ｐＭもしくはそれ未満、約１０ｐＭもしくはそれ未満または約１ｐＭの平衡解離定数（ＫＤ）でヒトＳｉｇｌｅｃ－６のＥＣＤに結合する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、約２５０ｐＭもしくはそれ未満、約２２５ｐＭもしくはそれ未満、約２００ｐＭもしくはそれ未満、約１７５ｐＭもしくはそれ未満、約１５０ｐＭもしくはそれ未満、約１２５ｐＭもしくはそれ未満、約１００ｐＭもしくはそれ未満、約９０ｐＭもしくはそれ未満、約８０ｐＭもしくはそれ未満、約７０ｐＭもしくはそれ未満、約６０ｐＭもしくはそれ未満、約５０ｐＭもしくはそれ未満、約４０ｐＭもしくはそれ未満、約３０ｐＭもしくはそれ未満、約２０ｐＭもしくはそれ未満、約１０ｐＭもしくはそれ未満または約１ｐＭの平衡解離定数（ＫＤ）でヒトＳｉｇｌｅｃ－６のＥＣＤのドメイン１に結合する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、約２５０ｐＭもしくはそれ未満、約２２５ｐＭもしくはそれ未満、約２００ｐＭもしくはそれ未満、約１７５ｐＭもしくはそれ未満、約１５０ｐＭもしくはそれ未満、約１２５ｐＭもしくはそれ未満、約１００ｐＭもしくはそれ未満、約９０ｐＭもしくはそれ未満、約８０ｐＭもしくはそれ未満、約７０ｐＭもしくはそれ未満、約６０ｐＭもしくはそれ未満、約５０ｐＭもしくはそれ未満、約４０ｐＭもしくはそれ未満、約３０ｐＭもしくはそれ未満、約２０ｐＭもしくはそれ未満、約１０ｐＭもしくはそれ未満または約１ｐＭの平衡解離定数（ＫＤ）でヒトＳｉｇｌｅｃ－６のＥＣＤのドメイン２に結合する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、約２５０ｐＭもしくはそれ未満、約２２５ｐＭもしくはそれ未満、約２００ｐＭもしくはそれ未満、約１７５ｐＭもしくはそれ未満、約１５０ｐＭもしくはそれ未満、約１２５ｐＭもしくはそれ未満、約１００ｐＭもしくはそれ未満、約９０ｐＭもしくはそれ未満、約８０ｐＭもしくはそれ未満、約７０ｐＭもしくはそれ未満、約６０ｐＭもしくはそれ未満、約５０ｐＭもしくはそれ未満、約４０ｐＭもしくはそれ未満、約３０ｐＭもしくはそれ未満、約２０ｐＭもしくはそれ未満、約１０ｐＭもしくはそれ未満または約１ｐＭの平衡解離定数（ＫＤ）でヒトＳｉｇｌｅｃ－６のＥＣＤのドメイン３に結合する。
一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、約２５０ｐＭもしくはそれ未満、約２２５ｐＭもしくはそれ未満、約２００ｐＭもしくはそれ未満、約１７５ｐＭもしくはそれ未満、約１５０ｐＭもしくはそれ未満、約１２５ｐＭもしくはそれ未満、約１００ｐＭもしくはそれ未満、約９０ｐＭもしくはそれ未満、約８０ｐＭもしくはそれ未満、約７０ｐＭもしくはそれ未満、約６０ｐＭもしくはそれ未満、約５０ｐＭもしくはそれ未満、約４０ｐＭもしくはそれ未満、約３０ｐＭもしくはそれ未満、約２０ｐＭもしくはそれ未満、約１０ｐＭもしくはそれ未満または約１ｐＭの平衡解離定数（ＫＤ）でヒトＳｉｇｌｅｃ－６のＥＣＤに結合する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、約２５０ｐＭもしくはそれ未満、約２２５ｐＭもしくはそれ未満、約２００ｐＭもしくはそれ未満、約１７５ｐＭもしくはそれ未満、約１５０ｐＭもしくはそれ未満、約１２５ｐＭもしくはそれ未満、約１００ｐＭもしくはそれ未満、約９０ｐＭもしくはそれ未満、約８０ｐＭもしくはそれ未満、約７０ｐＭもしくはそれ未満、約６０ｐＭもしくはそれ未満、約５０ｐＭもしくはそれ未満、約４０ｐＭもしくはそれ未満、約３０ｐＭもしくはそれ未満、約２０ｐＭもしくはそれ未満、約１０ｐＭもしくはそれ未満または約１ｐＭの平衡解離定数（ＫＤ）でヒトＳｉｇｌｅｃ－６のＥＣＤのドメイン１に結合する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、約２５０ｐＭもしくはそれ未満、約２２５ｐＭもしくはそれ未満、約２００ｐＭもしくはそれ未満、約１７５ｐＭもしくはそれ未満、約１５０ｐＭもしくはそれ未満、約１２５ｐＭもしくはそれ未満、約１００ｐＭもしくはそれ未満、約９０ｐＭもしくはそれ未満、約８０ｐＭもしくはそれ未満、約７０ｐＭもしくはそれ未満、約６０ｐＭもしくはそれ未満、約５０ｐＭもしくはそれ未満、約４０ｐＭもしくはそれ未満、約３０ｐＭもしくはそれ未満、約２０ｐＭもしくはそれ未満、約１０ｐＭもしくはそれ未満または約１ｐＭの平衡解離定数（ＫＤ）でヒトＳｉｇｌｅｃ－６のＥＣＤのドメイン２に結合する。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、約２５０ｐＭもしくはそれ未満、約２２５ｐＭもしくはそれ未満、約２００ｐＭもしくはそれ未満、約１７５ｐＭもしくはそれ未満、約１５０ｐＭもしくはそれ未満、約１２５ｐＭもしくはそれ未満、約１００ｐＭもしくはそれ未満、約９０ｐＭもしくはそれ未満、約８０ｐＭもしくはそれ未満、約７０ｐＭもしくはそれ未満、約６０ｐＭもしくはそれ未満、約５０ｐＭもしくはそれ未満、約４０ｐＭもしくはそれ未満、約３０ｐＭもしくはそれ未満、約２０ｐＭもしくはそれ未満、約１０ｐＭもしくはそれ未満または約１ｐＭの平衡解離定数（ＫＤ）でヒトＳｉｇｌｅｃ－６のＥＣＤのドメイン３に結合する。
【0161】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６、そのＥＣＤまたはそのサブドメインに対する抗体の結合親和性を決定するための例示的なアッセイは、当技術分野で公知かつ本明細書に例証されている。一実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の結合親和性は、表面プラズモン共鳴アッセイにより決定することができる。例えば、ＫｄまたはＫｄ値は、２５℃で固定化抗原ＣＭ５チップを用いて約１０応答単位（ＲＵ）でＢＩＡｃｏｒｅ（商標）－２０００またはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用することにより、測定することができる。簡単に言うと、カルボキシメチル化 デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従ってＮ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。捕捉抗体（例えば、抗ヒトＦｃ）を１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で希釈した後、３０μｌ／分の流量で注入し、さらに、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体を固定化する。動態測定のために、二量体Ｓｉｇｌｅｃ－６の２倍段階希釈物を、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ２０（ＰＢＳＴ）を含有するＰＢＳに、２５℃で、おおよそ２５μｌ／分の流量で注入する。単純１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、結合および解離センソグラムの同時フィッティングにより、結合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出する。例えば、Chen, Y., et al., (1999) J. Mol. Biol. 293:865-881を参照されたい。
【0162】
別の実施形態では、バイオレイヤー干渉法を使用して、Ｓｉｇｌｅｃ－６に対する抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の親和性を決定することができる。例示的なアッセイでは、Ｓｉｇｌｅｃ－６－Ｆｃタグ付きタンパク質を、抗ヒト捕捉センサー上に固定化し、漸増濃度のマウス、キメラ、またはヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ Ｆａｂ断片とともにインキュベートして、例えばＯｃｔｅｔ Ｒｅｄ ３８４ Ｓｙｓｔｅｍ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）などの計器を使用して親和性測定値を得る。
【0163】
抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の結合親和性は、例えば、関連技術分野では周知の標準的な技法を使用してMunson et al., Anal. Biochem., 107:220 (1980) に記載されているスキャッチャード解析により、決定することもできる。Scatchard, G., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660 (1947)も参照されたい。
【0164】
２．競合アッセイ
競合アッセイを使用して、２つの抗体が、同一のもしくは立体的にオーバーラップしているエピトープを認識することにより同じエピトープに結合するか、または一方の抗体が、別の抗体の抗原への結合を競合的に阻害するかを決定することができる。これらのアッセイは、当技術分野において公知である。典型的には、抗原または抗原発現細胞をマルチウェルプレート上に固定化し、標識抗体の結合を遮断する非標識抗体の能力を測定する。そのような競合アッセイの一般的な標識は、放射性標識または酵素標識である。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、例えば、細胞（例えば、肥満細胞）の細胞表面に発現されたＳｉｇｌｅｃ－６ポリペプチドまたはそのＥＣＤもしくはドメインへの結合について本明細書に記載されている参照抗体と競合する。
競合アッセイを使用して、２つの抗体が、同一のもしくは立体的にオーバーラップしているエピトープを認識することにより同じエピトープに結合するか、または一方の抗体が、別の抗体の抗原への結合を競合的に阻害するかを決定することができる。これらのアッセイは、当技術分野において公知である。典型的には、抗原または抗原発現細胞をマルチウェルプレート上に固定化し、標識抗体の結合を遮断する非標識抗体の能力を測定する。そのような競合アッセイの一般的な標識は、放射性標識または酵素標識である。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、例えば、細胞（例えば、肥満細胞）の細胞表面に発現されたＳｉｇｌｅｃ－６ポリペプチドまたはそのＥＣＤもしくはドメインへの結合について本明細書に記載されている参照抗体と競合する。
【0165】
ＩＩＩ．抗体調製
本明細書に記載の抗体は、抗体を生成するための当技術分野で利用可能な技法を使用して調製され、その例示的な方法は、より詳細に以下の節で説明される。
本明細書に記載の抗体は、抗体を生成するための当技術分野で利用可能な技法を使用して調製され、その例示的な方法は、より詳細に以下の節で説明される。
【0166】
１．抗体断片
本発明は、抗体断片を包含する。抗体断片は、酵素消化などの旧来の手段により、または組換え技術により、生成することができる。ある特定の状況では、抗体全体ではなく、抗体断片を使用することに利点がある。ある特定の抗体断片の総説については、Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9:129-134を参照されたい。
本発明は、抗体断片を包含する。抗体断片は、酵素消化などの旧来の手段により、または組換え技術により、生成することができる。ある特定の状況では、抗体全体ではなく、抗体断片を使用することに利点がある。ある特定の抗体断片の総説については、Hudson et al. (2003) Nat. Med. 9:129-134を参照されたい。
【0167】
様々な技法が、抗体断片の産生のために開発されてきた。伝統的には、これらの断片は、インタクト抗体のタンパク質分解性消化によって得られた（例えば、Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)；およびBrennan et al., Science, 229:81 (1985)を参照されたい）。しかし、これらの断片を今では組換え宿主細胞により直接的に産生することができる。Ｆａｂ、ＦｖおよびＳｃＦｖ抗体断片は、すべて、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現され得、Ｅ．ｃｏｌｉから分泌され得るため、大量のこれらの断片の容易な産生が可能である。抗体断片を上述の抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’－ＳＨ断片を、Ｅ．ｃｏｌｉから直接的に回収し、化学的にカップリングしてＦ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Carter et al., Bio/Technology 10: 163-167 (1992)）。別のアプローチによれば、Ｆ（ａｂ’）２断片を組換え宿主細胞培養物から直接的に単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期が延長されたＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片は、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体断片の産生のための他の技法は、当業者には明らかであろう。ある特定の実施形態では、抗体は、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５、米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号を参照されたい。ＦｖおよびｓｃＦｖは、定常領域がないインタクト結合部位を有する唯一の種であり、したがって、これらは、ｉｎ ｖｉｖｏでの使用中の非特異的結合の低減に好適であり得る。ｓｃＦｖのアミノ末端またはカルボキシ末端のどちらかでエフェクタータンパク質の融合を生じさせるように、ｓｃＦｖ融合タンパク質を構築することができる。例えば、上掲のAntibody Engineering, ed. Borrebaeckを参照されたい。抗体断片は、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に例えば記載されているような、「線状抗体」であることもある。そのような線状抗体は、単一特異性であることもあり、または二重特異性であることもある。
【0168】
２．ヒト化抗体
本開示は、ヒト化抗体を包含する。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法は、当技術分野において公知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から導入された１つまたは複数のアミノ酸残基を有することができる。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、「移入」残基と呼ばれ、これらの残基は、通常は「移入」可変ドメインから得られる。ヒト化は、本質的には、Ｗｉｎｔｅｒの方法（Jones et al. (1986) Nature 321:522-525；Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327；Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536）に従って、超可変領域配列でヒト抗体の対応する配列を置換することにより、行うことができる。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインより実質的に少ない可変ドメインが非ヒト種からの対応する配列により置換されている、キメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）である。実際には、ヒト化抗体は、通常は、一部の超可変領域残基およびことによると一部のＦＲ残基がげっ歯類抗体の類似の部位からの残基により置換されたヒト抗体である。
本開示は、ヒト化抗体を包含する。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法は、当技術分野において公知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から導入された１つまたは複数のアミノ酸残基を有することができる。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、「移入」残基と呼ばれ、これらの残基は、通常は「移入」可変ドメインから得られる。ヒト化は、本質的には、Ｗｉｎｔｅｒの方法（Jones et al. (1986) Nature 321:522-525；Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327；Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536）に従って、超可変領域配列でヒト抗体の対応する配列を置換することにより、行うことができる。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインより実質的に少ない可変ドメインが非ヒト種からの対応する配列により置換されている、キメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）である。実際には、ヒト化抗体は、通常は、一部の超可変領域残基およびことによると一部のＦＲ残基がげっ歯類抗体の類似の部位からの残基により置換されたヒト抗体である。
【0169】
ヒト化抗体の作製に使用されることになる、軽鎖および重鎖両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低減させるために重要であり得る。いわゆる「ベストフィット」法に従って、げっ歯類（例えば、マウス）抗体の可変ドメインの配列を公知ヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングする。次に、げっ歯類のものに最も近いヒト配列を、ヒト化抗体のためのヒトフレームワークとして受入れる（Sims et al.(1993) J. Immunol. 151:2296；Chothia et al.(1987) J. Mol. Biol. 196:901）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークをいくつかの異なるヒト化抗体に使用することができる（Carter et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285；Presta et al. (1993) J. Immunol., 151:2623）。
【0170】
さらに、一般に、抗原に対する高度な親和性および他の好ましい生物学的特性を保持したまま抗体をヒト化することが望ましい。この目標を達成するために、１つの方法によれば、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化配列の三次元モデルを使用する親配列および様々な概念上のヒト化産物の解析の過程によって調製される。三次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の推定三次元コンフォメーション構造を図示および表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の調査により、候補免疫グロブリン配列が機能する上での残基の可能性の高い役割の解析、すなわち、候補免疫グロブリンのその抗原への結合能力に影響を与える残基の解析が、可能になる。このようにして、所望の抗体特性、例えば標的抗原に対する親和性増加が達成されるように、ＦＲ残基をレシピエント配列および移入配列から選択し、組み合わせることができる。一般に、抗原結合に影響を与えることに直接かつ最も大きく関与するのは、超可変領域残基である。
【0171】
３．ヒト抗体
本発明のヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を公知のヒト定常ドメイン配列と組み合わせることにより構築することができる。あるいは、本発明のヒトモノクローナル抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体をハイブリドーマ法により作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロミエローマ細胞系は、例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984)；Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；およびBoerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)により記載されている。
本発明のヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を公知のヒト定常ドメイン配列と組み合わせることにより構築することができる。あるいは、本発明のヒトモノクローナル抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体をハイブリドーマ法により作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロミエローマ細胞系は、例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984)；Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；およびBoerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)により記載されている。
【0172】
免疫化によって内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の全レパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を、産生することができる。例えば、キメラおよび生殖細胞系変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合性欠失は、内因性抗体産生の完全阻害をもたらすことが記載されている。そのような生殖細胞系変異体マウスへのヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原チャレンジ時にヒト抗体の産生を生じる。例えば、Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 2551 (1993)；Jakobovits et al., Nature,
362: 255 (1993)；Bruggermann et al., Year in Immunol., 7: 33 (1993)を参照されたい。
362: 255 (1993)；Bruggermann et al., Year in Immunol., 7: 33 (1993)を参照されたい。
【0173】
遺伝子シャフリングを使用して、非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体からヒト抗体を得ることができ、このヒト抗体は、出発非ヒト抗体に類似した親和性および特異性を有する。「エピトープインプリンティング」とも呼ばれるこの方法に従って、本明細書に記載されるようにファージディスプレイ法により得られた非ヒト抗体断片の重鎖可変領域または軽鎖可変領域のどちらかをヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーで置き換え、それによって、非ヒト鎖／ヒト鎖のｓｃＦｖまたはＦａｂキメラの集団を作出する。抗原での選択によって、ヒト鎖が、一次ファージディスプレイクローンにおける対応する非ヒト鎖が除去されて破壊された抗原結合部位を修復する非ヒト鎖／ヒト鎖のキメラｓｃＦｖまたはＦａｂが単離されることになる、すなわち、エピトープがヒト鎖パートナーの選択を支配する。残存する非ヒト鎖を置き換えるためにこのプロセスを繰り返すと、ヒト抗体が得られる（１９９３年４月１日に公開されたＰＣＴ ＷＯ９３／０６２１３を参照されたい）。ＣＤＲグラフティングによる非ヒト抗体の旧来のヒト化とは異なり、この技法により、非ヒト起源のＦＲ残基もＣＤＲ残基も有さない完全ヒト抗体が得られる。
【0174】
４．多重特異性抗体
多重特異性抗体は、少なくとも２種の異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。二重特異性抗体は、２種の異なる抗原、または同じ抗原における２種の異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体を指すことができる。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性の一方は、Ｓｉｇｌｅｃ－６に対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－６の２つの異なるエピトープと結合することができる。二重特異性抗体を使用して、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する細胞に細胞傷害性剤を局在させることもできる。二重特異性抗体を完全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製することができる。
多重特異性抗体は、少なくとも２種の異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。二重特異性抗体は、２種の異なる抗原、または同じ抗原における２種の異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体を指すことができる。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性の一方は、Ｓｉｇｌｅｃ－６に対するものであり、他方は、任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－６の２つの異なるエピトープと結合することができる。二重特異性抗体を使用して、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する細胞に細胞傷害性剤を局在させることもできる。二重特異性抗体を完全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製することができる。
【0175】
二重特異性抗体を作製するための方法は、当技術分野において公知である。Milstein and Cuello, Nature, 305: 537 (1983)、１９９３年５月１３日に公開されたＷＯ９３／０８８２９、およびTraunecker et al., EMBO J., 10: 3655 (1991)を参照されたい。二重特異性抗体の生成に関するさらなる詳細については、例えば、Suresh et al., Methods in Enzymology, 121:210 (1986)を参照されたい。二重特異性抗体は、架橋抗体または「ヘテロコンジュゲート」抗体を含む。例えば、ヘテロコンジュゲートにおける抗体の一方をアビジンとカップリングさせることができ、他方をビオチンとカップリングさせることができる。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の好都合な架橋方法を使用して作製することができる。好適な架橋剤は、当技術分野において周知であり、いくつかの架橋技法とともに米国特許第４，６７６，９８０号において開示されている。
【0176】
５．単一ドメイン抗体
一部の実施形態では、本発明の抗体は、単一ドメイン抗体である。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべてもしくは一部分または軽鎖可変ドメインのすべてもしくは一部分を含む、単一のポリペプチド鎖である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓ．；例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照されたい）。一実施形態では、単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべてまたは一部分からなる。
一部の実施形態では、本発明の抗体は、単一ドメイン抗体である。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべてもしくは一部分または軽鎖可変ドメインのすべてもしくは一部分を含む、単一のポリペプチド鎖である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓ．；例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照されたい）。一実施形態では、単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべてまたは一部分からなる。
【0177】
６．抗体バリアント
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のアミノ酸配列の改変が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましいことがある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な変化を導入することにより、またはペプチド合成により、調製することができる。そのような改変としては、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、および／または抗体のアミノ酸配列への残基の挿入、および／または抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が挙げられる。最終構築物に達するために欠失と挿入と置換とのいかなる組合せを行ってもよいが、ただし、最終構築物が、所望の特性を有することを条件とする。アミノ酸の変更を、配列を作製する時点で対象抗体のアミノ酸配列に導入してもよい。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体のアミノ酸配列の改変が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましいことがある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な変化を導入することにより、またはペプチド合成により、調製することができる。そのような改変としては、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、および／または抗体のアミノ酸配列への残基の挿入、および／または抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が挙げられる。最終構築物に達するために欠失と挿入と置換とのいかなる組合せを行ってもよいが、ただし、最終構築物が、所望の特性を有することを条件とする。アミノ酸の変更を、配列を作製する時点で対象抗体のアミノ酸配列に導入してもよい。
【0178】
変異誘発に好ましい位置である、抗体のある特定の残基または領域の同定に有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085により記載されているように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、残基、または標的残基の群（例えば、荷電残基、例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕ）が同定され、アミノ酸と抗原との相互作用に影響を及ぼすために中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）に置き換えられる。次いで、置換に対する機能的感受性を示すこれらのアミノ酸の位置が、置換部位でのまたは置換部位に対するさらなるまたは他のバリアントの導入により洗練される。このようにして、アミノ酸配列変動を導入するための部位は事前に決定されるが、変異自体の性質を事前に決定する必要はない。例えば、所与の部位における変異の性能を解析するために、アラニンスキャニングまたはランダム変異誘発が標的コドンまたは領域において行われ、発現された免疫グロブリンが所望される活性についてスクリーニングされる。
【0179】
アミノ酸配列挿入は、単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入ばかりでなく、１残基から１００またはそれより多くの残基を含有するポリペプチドまで長さに幅があるアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合も含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントは、抗体のＮまたはＣ末端に、抗体の血清半減期を延長させる酵素またはポリペプチドが融合したものを含む。
【0180】
ある特定の実施態様では、本発明の抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変更される。ポリペプチドのグリコシル化は、通常は、Ｎ結合型またはＯ結合型のどちらかである。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン－Ｘ－セリンおよびアスパラギン－Ｘ－トレオニン（ここで、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的結合の認識配列である。したがって、ポリペプチド内のこれらのどちらかのトリペプチド配列の存在は、潜在的グリコシル化部位を生じさせる。Ｏ結合型グリコシル化は、糖であるＮ－アセチルガラクトサミン（N-aceylgalactosamine）、ガラクトースまたはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸への結合を指し、ヒドロキシアミノ酸は、最も一般的にはセリンまたはトレオニンであるが、５－ヒドロキシプロリンまたは５－ヒドロキシリシンが使用されることもある。
【0181】
抗体に対するグリコシル化部位の付加または欠失は、上記トリペプチド配列（Ｎ結合型グリコシル化部位についての）の１つまたは複数が作製または除去されるようにアミノ酸配列を変更することにより、好都合に果たされる。元の抗体の（Ｏ結合型グリコシル化部位についての）配列に対する１つまたは複数のセリンまたはトレオニン残基の付加、欠失、または置換により、変更を加えることもできる。
【0182】
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合されている炭水化物を変更することができる。例えば、フコースが欠如している成熟炭水化物構造が抗体のＦｃ領域に結合されている抗体が、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）に記載されている。ＵＳ２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）も参照されたい。抗体のＦｃ領域に結合された炭水化物内にバイセクティングＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）がある抗体は、Ｊｅａｎ－ＭａｉｒｅｔらのＷＯ２００３／０１１８７８およびＵｍａｎａらの米国特許第６，６０２，６８４号において言及されている。抗体のＦｃ領域に結合されたオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基がある抗体は、ＰａｔｅｌらのＷＯ１９９７／３００８７において報告されている。変更された炭水化物がそのＦｃ領域に結合されている抗体に関するＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）およびＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）も、参照されたい。改変されたグリコシル化を有する抗原結合分子についてのＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）も、参照されたい。
【0183】
ある特定の実施形態では、グリコシル化バリアントは、Ｆｃ領域を含み、このＦｃ領域に結合している炭水化物構造は、フコースが欠如しているかまたはフコースが減少している。そのようなバリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。必要に応じて、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣをさらに改善する１つまたは複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位および／または３３４位（残基のＥｕ番号付け）における置換をさらに含む。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体に関する刊行物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２；Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004)；Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生する細胞系の例としては、タンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；Ｐｒｅｓｔａ，Ｌの米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８Ａ１号；およびＡｄａｍｓらのＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１、特に、実施例１１）、およびノックアウト細胞系、例えば、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004））、ならびにβ１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴ－ＩＩＩ）およびゴルジμ－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）を過剰発現する細胞が挙げられる。
【0184】
野生型ＣＨＯ細胞において産生される同じ抗体上のフコースの量と比較して低減されたフコースを有する抗体が、本明細書で企図される。例えば、抗体は、天然ＣＨＯ細胞（例えば、天然グリコシル化パターンを生じさせるＣＨＯ細胞、例えば、天然ＦＵＴ８遺伝子を含有するＣＨＯ細胞）により他に産生された場合に有することになる量よりも少ない量のフコースを有する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、抗体上のＮ結合型グリカンの約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％または１％未満がフコースを含む、抗体である。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、抗体上のいずれのＮ結合型グリカンもフコースを含まない抗体、すなわち、抗体は、完全にフコースなしであるか、またはフコースを有さないか、またはフコシル化されていないか、または脱フコシル化されている。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析により測定してＡｓｎ２９７に結合されているすべての糖構造（例えば、複合構造、ハイブリッド構造、または高マンノース構造）の総和に対する、糖鎖内のＡｓｎ２９７におけるフコースの平均量を算出することにより決定することができる。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、抗体のわずかな配列変動に起因して２９７位の約±３アミノ酸上流または下流に、すなわち、２９４～３００位の間に位置することもある。一部の実施形態では、抗体の重鎖の少なくとも１つまたは２つは、フコシル化されていない。
【0185】
一実施形態では、抗体は、その血清半減期を改善するために変更される。抗体の血清半減期を延長させるために、例えば米国特許第５，７３９，２７７号に記載されるように、サルベージ受容体結合エピトープを抗体（特に、抗体断片）に組み込むことができる。本明細書で使用される場合、用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のｉｎ ｖｉｖｏ血清半減期の延長を担う、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す（ＵＳ２００３／０１９０３１１、米国特許第６，８２１，５０５号、米国特許第６，１６５，７４５号、米国特許第５，６２４，８２１号、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第６，１６５，７４５号、米国特許第５，８３４，５９７号）。
【0186】
別のタイプのバリアントは、アミノ酸置換バリアントである。これらのバリアントは、抗体分子中の少なくとも１つのアミノ酸残基が、異なる残基に置き換えられている。置換変異誘発のための目的の部位は、超可変領域を含むが、ＦＲ変更も企図される。保存的置換は、表１に「好ましい置換」という見出しで示される。そのような置換が生物活性の望ましい変化をもたらす場合には、表１で「例示的置換」と表示される、またはアミノ酸クラスに関連して下記でさらに説明されるような、より実質的な変化を導入することができ、その産物をスクリーニングすることができる。
表１。
表１。
【表1】
【0187】
抗体の生物学的特性の実質的な改変は、（ａ）置換領域におけるポリペプチド骨格の構造、例えば、シートもしくはヘリックスコンフォメーションのような構造の維持、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性の維持、またはｃ）側鎖の嵩の維持に対するそれらの効果が有意に異なる置換を選択することにより、果たされる。アミノ酸は、それらの側鎖の特性の類似性によって分類することができる（A. L. Lehninger, in Biochemistry, second ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)にお
いて）：
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）
いて）：
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）
【0188】
あるいは、天然に存在する残基を、共通の側鎖特性に基づいて群に分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【0189】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのクラスのメンバーを別のクラスと交換することを必然的に伴うことになる。そのように置換された残基を、保存的置換部位に、または残りの（非保存）部位に導入することもできる。
【0190】
１つのタイプの置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１つまたは複数の超可変領域残基の置換を含む。一般に、さらなる開発に選択される、結果として生じるバリアントは、それらが生成される親抗体と比較して改変された（例えば、改善された）生物学的特性を有することになる。そのような置換バリアントを生成するための好都合な手法は、ファージディスプレイを使用する親和性成熟を含む。手短に述べると、いくつかの超可変領域部位（例えば、６～７部位）を変異させて、可能なあらゆるアミノ酸置換を部位毎に生じさせる。このようにして生成された抗体は、各粒子内にパッケージングされたファージコーティングタンパク質（例えば、Ｍ１３の遺伝子ＩＩＩ産物）の少なくとも一部との融合体として、繊維状ファージ粒子により提示される。次いで、ファージにより提示されたバリアントを、それらの生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。改変のための候補超可変領域部位を特定するために、スキャニング変異誘発（例えば、アラニンスキャニング）を行って、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基を同定することができる。あるいは、または加えて、抗体と抗原との間の接点を特定するために抗原－抗体複合体の結晶構造を分析することは有益であり得る。そのような接触残基および隣接残基は、本明細書で詳述されるものをはじめとする当技術分野において公知の技法による置換の候補である。そのようなバリアントが生成されたら、バリアントのパネルを、本明細書に記載のものを含む当技術分野において公知の技法を使用するスクリーニングに供し、１つまたは複数の関連するアッセイにおいて優れた特性を有した抗体を、さらなる開発のために選択することができる。
【0191】
抗体のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、当技術分野において公知の様々な方法により調製される。これらの方法としては、天然供給源（天然に存在するアミノ酸配列バリアントの場合）からの単離；または抗体の前に調製されたバリアントもしくは非バリアントバージョンのオリゴヌクレオチド媒介（または部位特異的）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発およびカセット変異誘発による調製が挙げられるが、これらに限定されない。
【0192】
本開示の抗体のＦｃ領域に１つまたは複数のアミノ酸修飾を導入することによって、Ｆｃ領域バリアントを生成することが、望ましいことがある。Ｆｃ領域バリアントは、ヒンジシステインの修飾を含む１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。一部の実施形態では、Ｆｃ領域バリアントは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。例示的なＦｃ領域バリアントは、本明細書に提供される。
【0193】
この説明、および当技術の教示に従って、一部の実施形態では、本発明の抗体は、野生型対応物抗体と比較して、例えばＦｃ領域に、１つまたは複数の変更を含み得ると考えられる。それにもかかわらず、これらの抗体は、それらの野生型対応物と比較して、治療的有用性のために求められる同じ特性を実質的に保持することになる。例えば、ＷＯ９９／５１６４２に例えば記載されているように、Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の変更（すなわち、改善または減少のどちらか）をもたらすことになる、ある特定の変更をＦｃ領域に行うことができると考えられる。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Duncan & Winter Nature 322:738-40 (1988)、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、およびＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。ＷＯ００／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）およびＷＯ２００４／０５６３１２（Ｌｏｗｍａｎ）には、ＦｃＲへの結合が改善または減少した抗体バリアントが記載されている。これらの特許公報の内容は、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。例えば、Shields et al. J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)も参照されたい。半減期が延長された抗体、および胎児への母性ＩｇＧの伝達を担う新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976)、およびKim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）への結合が改善された抗体が、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つまたは複数の置換を有するＦｃ領域を含む。Ｆｃ領域アミノ酸配列が変更されたおよびＣ１ｑ結合能力が増加または減少されたポリペプチドバリアントは、米国特許第６，１９４，５５１Ｂ１号、ＷＯ９９／５１６４２に記載されている。これらの特許公報の内容は、特に、参照により本明細書に組み込まれる。Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)も参照されたい。
【0194】
７．ベクター、宿主細胞、および組換え方法
本発明の抗体の組換え産生のために、本開示の抗体をコードする核酸が単離され、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）のためにまたは発現のために複製可能なベクターに挿入される。抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、容易に単離され、シーケンシングされる。多くのベクターが利用可能である。ベクターの選択は、一部で、使用される宿主細胞に依存する。一般に、宿主細胞は、原核生物または真核生物（一般に、哺乳動物）のどちらかの起源である。ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥ定常領域を含む、任意のアイソタイプの定常領域を、このために使用することができること、ならびにそのような定常領域を任意のヒトまたは動物種から得ることができることは、理解されるであろう。
本発明の抗体の組換え産生のために、本開示の抗体をコードする核酸が単離され、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）のためにまたは発現のために複製可能なベクターに挿入される。抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、容易に単離され、シーケンシングされる。多くのベクターが利用可能である。ベクターの選択は、一部で、使用される宿主細胞に依存する。一般に、宿主細胞は、原核生物または真核生物（一般に、哺乳動物）のどちらかの起源である。ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥ定常領域を含む、任意のアイソタイプの定常領域を、このために使用することができること、ならびにそのような定常領域を任意のヒトまたは動物種から得ることができることは、理解されるであろう。
【0195】
原核生物宿主細胞を使用する抗体の生成
ａ）ベクター構築
本発明の抗体のポリペプチド成分をコードするポリヌクレオチド配列は、標準的な組換え技術を使用して得ることができる。所望のポリヌクレオチド配列をハイブリドーマ細胞などの抗体産生細胞から単離し、シーケンシングすることができる。あるいは、ポリヌクレオチドを、ヌクレオチド合成装置またはＰＣＲ技法を使用して合成することができる。得られたら、ポリペプチドをコードする配列は、原核生物宿主において異種ポリヌクレオチドを複製することおよび発現することができる組換えベクターに挿入される。当技術分野において利用可能かつ公知である多数のベクターを、本発明のために使用することができる。適切なベクターの選択は、主として、ベクターに挿入される核酸のサイズ、およびベクターで形質転換される特定の宿主細胞に依存することになる。各ベクターは、その機能（異種ポリヌクレオチドの増幅もしくは発現、または両方）、およびそれが存在する特定の宿主細胞との適合性に依存して、様々な成分を含有する。ベクター成分としては、一般に、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、シグナル配列、異種核酸インサート、および転写終結配列が挙げられるが、これらに限定されない。
ａ）ベクター構築
本発明の抗体のポリペプチド成分をコードするポリヌクレオチド配列は、標準的な組換え技術を使用して得ることができる。所望のポリヌクレオチド配列をハイブリドーマ細胞などの抗体産生細胞から単離し、シーケンシングすることができる。あるいは、ポリヌクレオチドを、ヌクレオチド合成装置またはＰＣＲ技法を使用して合成することができる。得られたら、ポリペプチドをコードする配列は、原核生物宿主において異種ポリヌクレオチドを複製することおよび発現することができる組換えベクターに挿入される。当技術分野において利用可能かつ公知である多数のベクターを、本発明のために使用することができる。適切なベクターの選択は、主として、ベクターに挿入される核酸のサイズ、およびベクターで形質転換される特定の宿主細胞に依存することになる。各ベクターは、その機能（異種ポリヌクレオチドの増幅もしくは発現、または両方）、およびそれが存在する特定の宿主細胞との適合性に依存して、様々な成分を含有する。ベクター成分としては、一般に、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、シグナル配列、異種核酸インサート、および転写終結配列が挙げられるが、これらに限定されない。
【0196】
一般に、宿主細胞に適合する種に由来するレプリコンおよび制御配列を含有するプラスミドベクターが、これらの宿主に関連して使用される。ベクターは、通常、複製部位、および形質転換された細胞において表現型選択を生じさせることができるマーキング配列も有する。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉは、典型的には、Ｅ．ｃｏｌｉ種に由来するプラスミドであるｐＢＲ３２２を使用して形質転換される。ｐＢＲ３２２は、アンピシリン（Ａｍｐ）およびテトラサイクリン（Ｔｅｔ）耐性をコードする遺伝子を含有し、したがって、形質転換細胞を同定するための容易な手段を提供する。ｐＢＲ３２２、その誘導体、または他の微生物プラスミドもしくはバクテリオファージはまた、微生物により内在性タンパク質の発現のために使用され得るプロモーターを含有し得るか、またはそのようなプロモーターを含有するように改変され得る。特定の抗体の発現に使用されるｐＢＲ３２２誘導体の例は、Ｃａｒｔｅｒらの米国特許第５，６４８，２３７号に詳細に記載されている。
【0197】
加えて、宿主微生物に適合するレプリコンおよび制御配列を含有するファージベクターを、これらの宿主に関連して形質転換ベクターとして使用することができる。例えば、λＧＥＭ．ＴＭ．－１１などのバクテリオファージは、Ｅ．ｃｏｌｉ ＬＥ３９２などの感受性宿主細胞を形質転換するために使用することができる組換えベクターの作製に利用され得る。
【0198】
本発明の発現ベクターは、ポリペプチド成分の各々をコードする２つまたはそれより多くのプロモーター－シストロン対を含み得る。プロモーターは、シストロンに対して上流（５’）に位置し、その発現をモジュレートする非翻訳制御配列である。原核生物プロモーターは、典型的には、誘導性プロモーターおよび構成プロモーターという２つのクラスに分類される。誘導性プロモーターは、その制御下にあるシストロンの転写を培養条件の変化、例えば、栄養素の存在もしくは非存在または温度の変化に応じて増加したレベルで開始させる、プロモーターである。
【0199】
可能性のある様々な宿主細胞により認識される多数のプロモーターが周知である。選択されたプロモーターを、軽鎖または重鎖をコードするシストロンＤＮＡに、制限酵素消化によって供給源のＤＮＡからプロモーターを除去することおよび単離されたプロモーター配列を本発明のベクターに挿入することにより、作動可能に連結させることができる。天然プロモーター配列も、多数の異種プロモーターも、標的遺伝子の増幅および／または発現を導くために使用することができる。一部の実施形態では、異種プロモーターは、一般に、天然標的ポリペプチドプロモーターと比較して発現標的遺伝子のより多くの転写、およびより高い収量を可能にするので、異種プロモーターが利用される。
【0200】
原核生物宿主での使用に好適なプロモーターとしては、ＰｈｏＡプロモーター、β－ガラクタマーゼおよびラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ならびにハイブリッドプロモーター、例えば、ｔａｃまたはｔｒｃプロモーターが挙げられる。しかし、細菌において機能する他のプロモーター（例えば、他の公知の細菌プロモーターまたはファージプロモーター）もまた好適である。それらのヌクレオチド配列は、公開されており、それによって、当業者は、それらを、標的軽鎖および重鎖をコードするシストロンに、任意の必要な制限部位を供給するためにリンカーまたはアダプターを使用して作動可能にライゲーションすることができる（Siebenlist et al. (1980) Cell 20: 269）。
【0201】
本発明の一態様では、組換えベクター内の各シストロンは、膜を横断する発現されたポリペプチドのトランスロケーションを導く分泌シグナル配列成分を含む。一般に、シグナル配列は、ベクターの成分であり得るか、またはシグナル配列は、ベクターに挿入される標的ポリペプチドＤＮＡの一部であり得る。本発明のために選択されるシグナル配列は、宿主細胞により認識され、プロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼにより切断される）ものでなければならない。異種ポリペプチドに本来備わっているシグナル配列を認識およびプロセシングしない原核生物宿主細胞については、シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐ、または熱安定性エンテロトキシンＩＩ（ＳＴＩＩ）リーダー、ＬａｍＢ、ＰｈｏＥ、ＰｅｌＢ、ＯｍｐＡおよびＭＢＰからなる群より選択される、原核生物シグナル配列により置換される。本発明の一実施形態では、発現系の両方のシストロンにおいて使用されるシグナル配列は、ＳＴＩＩシグナル配列またはそのバリアントである。
【0202】
別の態様では、本発明による免疫グロブリンの産生は、宿主細胞の細胞質において起こり得るものであり、したがって、各シストロン内の分泌シグナル配列の存在を必要としない。その関連で、免疫グロブリン軽鎖および重鎖は、細胞質内で、発現され、フォールディングされ、組み立てられて、機能性免疫グロブリンが形成される。ある特定の宿主株（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ ｔｒｘＢ株）は、ジスルフィド結合の形成に好ましい細胞質条件を提供し、それによって、発現されたタンパク質サブユニットの正しいフォールディングおよび組立てを可能にする。Proba and Pluckthun Gene, 159:203 (1995)。
【0203】
本発明の、分泌され正しく組み立てられた抗体の収量を最大にするために、発現されるポリペプチド成分の定量的な比をモジュレートすることができる発現系を使用することにより、本発明の抗体を産生することもできる。そのようなモジュレーションは、少なくとも一部において、ポリペプチド成分の翻訳強度を同時にモジュレートすることにより果たされる。
【0204】
翻訳強度をモジュレートするための１つの技法は、Ｓｉｍｍｏｎｓらの米国特許第５，８４０，５２３号において開示されている。この技法は、シストロン内の翻訳開始領域（ＴＩＲ）のバリアントを利用する。所与のＴＩＲについて、一連のアミノ酸または核酸配列バリアントをある範囲の翻訳強度で作出することができ、それによって、この因子を特定の鎖の所望の発現レベルに調整するための好都合な手段が得られる。ＴＩＲバリアントは、アミノ酸配列を変更し得るコドン変化を生じさせる結果となる従来の変異誘発技術により生成することができる。ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列の変化は、サイレントである。ＴＩＲの変更は、例えば、シャイン・ダルガーノ配列の数または間隔の変更に加えてシグナル配列の変更も含み得る。変異体シグナル配列を生成するための１つの方法は、シグナル配列のアミノ酸配列を変化させない（すなわち、変化がサイレントである）、コード配列の出発点における「コドンバンク」の生成である。この方法は、各コドンの３番目のヌクレオチド位置を変化させることにより遂行され得る。加えて、一部のアミノ酸、例えば、ロイシン、セリンおよびアルギニンには、複数の１番目および２番目の位置を有し、このことがバンク作製に複雑性を追加し得る。この変異誘発方法は、Yansura et al. (1992) METHODS: A Companion to Methods in Enzymol. 4:151-158に詳細に記載されている。
【0205】
一実施形態では、ベクター内の各シストロンに対してある範囲のＴＩＲ強度を有する、１セットのベクターが、生成される。この限られたセットにより、各鎖の発現レベルの比較、および様々なＴＩＲ強度の組合せのもとで所望の抗体産物の収量ももたらす。ＴＩＲ強度は、Ｓｉｍｍｏｎｓらの米国特許第５，８４０，５２３号に詳細に記載されているようにレポーター遺伝子の発現レベルを定量することにより決定することができる。翻訳強度の比較に基づいて、所望の個々のＴＩＲを選択して、本発明の発現ベクター構築物において組み合わせる。
【0206】
本発明の抗体の発現に好適な原核生物宿主細胞は、古細菌および真正細菌、例えば、グラム陰性またはグラム陽性生物を含む。有用な細菌の例としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｂａｃｉｌｌｉ（例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種（例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｒｈｉｚｏｂｉａ、Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌｌａ、またはＰａｒａｃｏｃｃｕｓが挙げられる。一実施形態では、グラム陰性細胞が使用される。一実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞が、本発明のための宿主として使用される。Ｅ．ｃｏｌｉ株の例としては、Ｗ３１１０株（Bachmann, Cellular and Molecular Biology, vol. 2 (Washington, D.C.: American Society for Microbiology, 1987), pp. 1190-1219;ATCC Deposit No. 27,325）およびその派生株が挙げられ、派生株には、遺伝子型Ｗ３１１０ ΔｆｈｕＡ（ΔｔｏｎＡ）ｐｔｒ３ ｌａｃ Ｉｑ ｌａｃＬ８ ΔｏｍｐＴΔ（ｎｍｐｃ－ｆｅｐＥ）ｄｅｇＰ４１ ｋａｎＲを有する３３Ｄ３株（米国特許第５，６３９，６３５号）が含まれる。他の株およびそれらの派生株、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ ２９４（ＡＴＣＣ ３１，４４６）、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉλ １７７６（ＡＴＣＣ ３１，５３７）、およびＥ．ｃｏｌｉ ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ ３１，６０８）も、好適である。これらの例は、制限するものではなく例示的なものである。定義された遺伝子型を有する上述の細菌のいずれかについての派生株を構築するための方法は、当技術分野において公知であり、例えば、Bass et al., Proteins, 8:309-314 (1990)に記載されている。一般に、細菌の細胞におけるレプリコンの複製能を考慮に入れて適切な細菌を選択する必要がある。例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＡＣＹＣ１７７またはｐＫＮ４１０などの周知のプラスミドを使用してレプリコンを供給する際には、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種を宿主として好適に使用することができる。通常は、宿主細胞は、分泌するタンパク質分解酵素の量が最小限であるべきであり、追加のプロテアーゼ阻害剤が、望ましくは細胞培養に組み込まれ得る。
【0207】
ｂ）抗体産生
宿主細胞は、上記の発現ベクターで形質転換され、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適宜改変された従来の栄養培地で培養される。
宿主細胞は、上記の発現ベクターで形質転換され、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適宜改変された従来の栄養培地で培養される。
【0208】
形質転換とは、染色体外エレメントとしてまたは染色体組込み体によりＤＮＡを複製できるように、ＤＮＡを原核生物宿主に導入することを意味する。使用される宿主細胞に依存して、形質転換は、そのような細胞に適した標準的な技法を使用して行われる。実質的な細胞壁バリアを含有する細菌細胞には、一般に、塩化カルシウムを用いるカルシウム処置が使用される。形質転換のための別の方法は、ポリエチレングリコール／ＤＭＳＯを用いる。使用されるさらに別の技法は、電気穿孔である。
【0209】
本発明のポリペプチドを産生するために使用される原核生物細胞は、当技術分野において公知であり、選択された宿主細胞の培養に好適な培地で増殖される。好適な培地の例としては、必要な栄養サプリメントを加えたルリアブロス（ＬＢ）が挙げられる。一部の実施形態では、培地は、発現ベクターを含有する原核生物細胞の増殖を選択的に可能にするために発現ベクターの構築に基づいて選ばれた選択剤も含有する。例えば、アンピシリン耐性遺伝子を発現する細胞の増殖のために、アンピシリンが培地に添加される。
【0210】
炭素、窒素および無機リン酸塩供給源の他に、任意の必要なサプリメントも、単独で導入して、または複合窒素供給源などの別のサプリメントもしくは培地との混合物として導入して、適切な濃度で含まれ得る。必要に応じて、培養培地は、グルタチオン、システイン、シスタミン、チオグリコレート、ジチオエリトリトールおよびジチオトレイトールからなる群より選択される１つまたは複数の還元剤を含有することができる。
【0211】
原核生物宿主細胞は、好適な温度で培養される。ある特定の実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉ増殖について、増殖温度は、約２０℃～約３９℃、約２５℃～約３７℃、または約３０℃の範囲である。培地のｐＨは、主として宿主生物に依存して、約５～約９の範囲の任意のｐＨであり得る。ある特定の実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉについて、ｐＨは、約６．８～約７．４、または約７．０である。
【0212】
誘導性プロモーターが本発明の発現ベクターにおいて使用される場合、タンパク質の発現は、プロモーターの活性化に好適な条件下で誘導される。本発明の一態様では、ポリペプチドの転写を制御するためにＰｈｏＡプロモーターが使用される。したがって、形質転換宿主細胞は、誘導のためにリン酸制限培地で培養される。ある特定の実施形態では、リン酸制限培地は、Ｃ．Ｒ．Ａ．Ｐ．培地である（例えば、Simmons et al., J. Immunol. Methods (2002), 263:133-147を参照されたい）。当技術分野において公知であるように、用いられるベクター構築物に応じて、様々な他の誘導因子を使用することができる。
【0213】
一実施形態では、本発明の発現されたポリペプチドは、宿主細胞のペリプラズムに分泌され、そのペリプラズムから回収される。タンパク質回収は、一般に浸透圧ショック、超音波処理または溶解などの手段により、微生物を破壊することを典型的には伴う。細胞が破壊されると、細胞デブリまたは細胞全体を遠心分離または濾過により除去することができる。タンパク質を、例えば親和性樹脂クロマトグラフィーにより、さらに精製することができる。あるいは、タンパク質は、培養培地に輸送し、それをそこで単離することができる。細胞を培養物から除去し、産生されたタンパク質のさらなる精製のために培養上清を濾過し、濃縮することができる。発現されたポリペプチドを、一般に公知の方法、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）およびウェスタンブロットアッセイを使用して、さらに単離し、同定することができる。
【0214】
本発明の一態様では、抗体の産生は、発酵プロセスにより大量に行われる。様々な大規模流加発酵手順が、組換えタンパク質の産生に利用可能である。大規模発酵は、少なくとも１０００リットルの容量を有し、ある特定の実施形態では、約１，０００～１００，０００リットルの容量を有する。これらの発酵槽は、酸素および栄養素、特にグルコース、を分配するために攪拌翼を使用する。小規模発酵は、容積容量（volumetric capacity）がおおよそ１００リットル以下であり、約１リットル～約１００リットルの範囲であり得る発酵槽における、発酵を一般に指す。
【0215】
発酵プロセスでは、タンパク質発現の誘導は、細胞が好適な条件下で所望の密度、例えば約１８０～２２０のＯＤ５５０まで増殖した後に典型的には開始され、この段階で、細胞は、初期定常期にある。当技術分野において公知であるように、および上記の通り、利用されるベクター構築物に応じて、様々な誘導因子を使用することができる。誘導前に細胞を増殖させる期間は、より短くてもよい。細胞を通常は約１２～５０時間誘導するが、より長いまたは短い誘導時間を使用してもよい。
【0216】
本発明のポリペプチドの産生収量および品質を改善するために、様々な発酵条件を修正することができる。例えば、分泌される抗体ポリペプチドの正しい組立ておよびフォールディングを改善するために、シャペロンタンパク質、例えば、Ｄｓｂタンパク質（ＤｓｂＡ、ＤｓｂＢ、ＤｓｂＣ、ＤｓｂＤ、および／またはＤｓｂＧ）、またはＦｋｐＡ（シャペロン活性を有するペプチジルプロリルシス，トランスイソメラーゼ）を過剰発現する追加のベクターを使用して、宿主原核生物細胞を同時形質転換することができる。シャペロンタンパク質は、細菌宿主細胞において産生される異種タンパク質の正しいフォールディングおよび溶解度を助長することが実証されている。Chen et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:19601-19605；Ｇｅｏｒｇｉｏｕらの米国特許第６，０８３，７１５号；Ｇｅｏｒｇｉｏｕらの米国特許第６，０２７，８８８号；Bothmann and Pluckthun (2000) J. Biol. Chem. 275:17100-17105；Ramm and Pluckthun (2000) J. Biol. Chem. 275:17106-17113；Arie et al. (2001) Mol. Microbiol. 39:199-210。
【0217】
発現された異種タンパク質（特に、タンパク質分解感受性のもの）のタンパク質分解を最小限に抑えるために、タンパク質分解酵素が欠損しているある特定の宿主株を本発明に使用することができる。例えば、宿主細胞株を、公知の細菌プロテアーゼ、例えば、プロテアーゼＩＩＩ、ＯｍｐＴ、ＤｅｇＰ、Ｔｓｐ、プロテアーゼＩ、プロテアーゼＭｉ、プロテアーゼＶ、プロテアーゼＶＩおよびこれらの組合せをコードする遺伝子の遺伝的変異を生じさせるように、改変することができる。一部のＥ．ｃｏｌｉプロテアーゼ欠損株が利用可能であり、例えば、上掲のJoly et al. (1998)；Ｇｅｏｒｇｉｏｕらの米国特許第５，２６４，３６５号；Ｇｅｏｒｇｉｏｕらの米国特許第５，５０８，１９２号；Hara et al., Microbial Drug Resistance, 2:63-72 (1996)に記載されている。
【0218】
一実施形態では、タンパク質分解酵素が欠損しており、１つまたは複数のシャペロンタンパク質を過剰発現するプラスミドで形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ株が、本発明の発現系において宿主細胞として使用される。
【0219】
ｃ）抗体精製
一実施形態では、本明細書において産生される抗体タンパク質は、さらなるアッセイおよび使用のための実質的に均一である調製物を得るために、さらに精製される。当技術分野において公知の標準的なタンパク質精製方法を用いることができる。以下の手順は、好適な精製手順の例示となるものである：免疫親和性カラムまたはイオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿法、逆相ＨＰＬＣ、シリカでの、またはカチオン交換樹脂、例えばＤＥＡＥでのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿法、および例えばＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５を使用するゲル濾過。
一実施形態では、本明細書において産生される抗体タンパク質は、さらなるアッセイおよび使用のための実質的に均一である調製物を得るために、さらに精製される。当技術分野において公知の標準的なタンパク質精製方法を用いることができる。以下の手順は、好適な精製手順の例示となるものである：免疫親和性カラムまたはイオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿法、逆相ＨＰＬＣ、シリカでの、またはカチオン交換樹脂、例えばＤＥＡＥでのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿法、および例えばＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５を使用するゲル濾過。
【0220】
一態様では、固相に固定化されたプロテインＡが、本発明の抗体産物の免疫親和性精製に使用される。プロテインＡは、抗体のＦｃ領域に高い親和性で結合する、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅａｓからの４１ｋＤ細胞壁タンパク質である。Lindmark et al (1983) J. Immunol. Meth. 62:1-13。プロテインＡが固定化される固相は、ガラスもしくはシリカ表面を含むカラム、または制御細孔ガラス（controlled pore glass）カラム、またはケイ酸カラムであり得る。一部の適用では、カラムは、ことによると夾雑物の非特異的な付着を防止するために、グリセロールなどの試薬でコーティングされる。
【0221】
精製の第１のステップとして、上記の細胞培養に由来する調製物を、プロテインＡが固定化された固相に適用して、目的の抗体をプロテインＡに特異的に結合させる。次いで、固相を洗浄して、固相に非特異的に結合した夾雑物を除去する。最後に、目的の抗体を、溶出により固相から回収する。
【0222】
真核生物宿主細胞を使用する抗体の生成：
真核生物宿主細胞において使用するためのベクターは、一般に、次の非限定的な成分の１つまたは複数を含む：シグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。
真核生物宿主細胞において使用するためのベクターは、一般に、次の非限定的な成分の１つまたは複数を含む：シグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。
【0223】
ａ）シグナル配列成分
真核生物宿主細胞において使用するためのベクターは、成熟タンパク質または目的のポリペプチドのＮ末端に特定の切断部位を有する、シグナル配列または他のポリペプチドも含有し得る。選択される異種シグナル配列は、宿主細胞により認識され、プロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼにより切断される）ものであり得る。哺乳動物細胞における発現では、哺乳動物シグナル配列、およびウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルも、利用可能である。そのような前駆体領域のＤＮＡは、リーディングフレーム内で、抗体をコードするＤＮＡにライゲーションされる。
真核生物宿主細胞において使用するためのベクターは、成熟タンパク質または目的のポリペプチドのＮ末端に特定の切断部位を有する、シグナル配列または他のポリペプチドも含有し得る。選択される異種シグナル配列は、宿主細胞により認識され、プロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼにより切断される）ものであり得る。哺乳動物細胞における発現では、哺乳動物シグナル配列、およびウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルも、利用可能である。そのような前駆体領域のＤＮＡは、リーディングフレーム内で、抗体をコードするＤＮＡにライゲーションされる。
【0224】
ｂ）複製起点
一般に、複製起点成分は、哺乳動物発現ベクターには必要ない。例えば、ＳＶ４０起点は、単に初期プロモーターを含有するという理由で、典型的には使用され得る。
一般に、複製起点成分は、哺乳動物発現ベクターには必要ない。例えば、ＳＶ４０起点は、単に初期プロモーターを含有するという理由で、典型的には使用され得る。
【0225】
ｃ）選択遺伝子成分
発現およびクローニングベクターは、選択可能なマーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含有し得る。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサートもしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）関連する場合、栄養要求性欠損を補完するタンパク質、または（ｃ）複合培地から入手できない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。
発現およびクローニングベクターは、選択可能なマーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含有し得る。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサートもしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）関連する場合、栄養要求性欠損を補完するタンパク質、または（ｃ）複合培地から入手できない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。
【0226】
選択スキームの一例は、宿主細胞の増殖を停止する薬物を利用する。異種遺伝子で成功裏に形質転換される細胞は、薬物耐性を付与するタンパク質を産生し、したがって選択レジメンに生き残る。そのような優性選択の例は、薬物ネオマイシン、ミコフェノール酸およびハイグロマイシンを使用する。
【0227】
哺乳動物細胞の好適な選択可能マーカーの別の例は、抗体核酸を取り込む能力のある細胞の同定を可能にするもの、例えば、ＤＨＦＲ、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン－ＩおよびＩＩ、霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなどである。
【0228】
例えば、一部の実施形態では、ＤＨＦＲ選択遺伝子で形質転換された細胞が、ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストであるメトトレキサート（Ｍｔｘ）を含有する培養培地においてすべての形質転換体を培養することにより、先ず同定される。一部の実施形態では、野生型ＤＨＦＲが用いられる場合に適切な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性が欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系（例えば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－９０９６）である。
【0229】
あるいは、抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質、および別の選択可能なマーカー、例えばアミノグリコシド３’－ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）をコードするＤＮＡ配列で形質転換または同時形質転換された宿主細胞（特に、内在性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）を、選択可能なマーカーの選択剤、例えば、アミノグリコシド系抗生物質、例えばカナマイシン、ネオマイシンまたはＧ４１８を含有する培地における細胞増殖により、選択することができる。米国特許第４，９６５，１９９号を参照されたい。宿主細胞としては、ＮＳ０、ＣＨＯＫ１、ＣＨＯＫ１ＳＶまたは派生株を挙げることができ、派生株には、グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）が欠損した細胞系が含まれる。哺乳動物細胞のために選択可能なマーカーとしてＧＳを使用するための方法は、米国特許第５，１２２，４６４号および米国特許第５，８９１，６９３号に記載されている。
【0230】
ｄ）プロモーター成分
発現ベクターおよびクローニングベクターは、宿主生物により認識され、目的のポリペプチド（例えば、抗体）をコードする核酸に作動可能に連結されているプロモーターを、通常含有する。真核生物についてのプロモーター配列は公知である。例えば、事実上すべての真核生物遺伝子は、転写が開始される部位からおおよそ２５～３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写の開始部から７０～８０塩基上流に見出される別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域（ここで、Ｎは任意のヌクレオチドであり得る）である。ほとんどの真核生物遺伝子の３’末端には、ＡＡＴＡＡＡ配列があり、この配列は、コーディング配列の３’末端へのポリＡ尾部の付加のためのシグナルであり得る。ある特定の実施形態では、これらの配列のいずれかまたはすべてを、真核生物発現ベクターに好適に挿入することができる。
発現ベクターおよびクローニングベクターは、宿主生物により認識され、目的のポリペプチド（例えば、抗体）をコードする核酸に作動可能に連結されているプロモーターを、通常含有する。真核生物についてのプロモーター配列は公知である。例えば、事実上すべての真核生物遺伝子は、転写が開始される部位からおおよそ２５～３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写の開始部から７０～８０塩基上流に見出される別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域（ここで、Ｎは任意のヌクレオチドであり得る）である。ほとんどの真核生物遺伝子の３’末端には、ＡＡＴＡＡＡ配列があり、この配列は、コーディング配列の３’末端へのポリＡ尾部の付加のためのシグナルであり得る。ある特定の実施形態では、これらの配列のいずれかまたはすべてを、真核生物発現ベクターに好適に挿入することができる。
【0231】
哺乳動物宿主細胞におけるベクターからの転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスおよびシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）などのウイルスのゲノムから、異種哺乳動物プロモーター、例えば、アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーターから、熱ショックプロモーターから得られるプロモーターにより制御されるが、ただし、このようなプロモー
ターが、宿主細胞系に適合することを条件とする。
ターが、宿主細胞系に適合することを条件とする。
【0232】
ＳＶ４０ウイルスの初期および後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含有するＳＶ４０制限断片として好都合に得られる。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ Ｅ制限断片として好都合に得られる。ウシパピローマウイルスをベクターとして使用して哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現させるための系は、米国特許第４，４１９，４４６号において開示されている。この系の改変は、米国特許第４，６０１，９７８号に記載されている。単純ヘルペスウイルスからのチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのマウス細胞におけるヒトβ－インターフェロンｃＤＮＡの発現を記載している、Reyes et al., Nature 297:598-601 (1982)も、参照されたい。あるいは、ラウス肉腫ウイルスの長い末端反復配列を、プロモーターとして使用することができる。
【0233】
ｅ）エンハンサーエレメント成分
高等真核生物による本発明の抗体をコードするＤＮＡの転写は、多くの場合、エンハンサー配列をベクターに挿入することにより増加される。哺乳動物遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、およびインスリン）からの多くのエンハンサー配列が、今では公知である。しかし、典型的には、真核生物細胞ウイルスからのエンハンサーを使用することになる。例としては、複製起点の後期側（塩基対１００～２７０）のＳＶ４０エンハンサー、ヒトサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、マウスサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。真核生物プロモーターの活性化のためのエンハンサーエレメントを記載しているYaniv, Nature 297:17-18 (1982)も、参照されたい。エンハンサーは、ベクター内の抗体ポリペプチドをコードする配列の５’または３’側の位置にスプライシングされ得るが、一般的にプロモーターから５’側の部位に位置する。
高等真核生物による本発明の抗体をコードするＤＮＡの転写は、多くの場合、エンハンサー配列をベクターに挿入することにより増加される。哺乳動物遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、およびインスリン）からの多くのエンハンサー配列が、今では公知である。しかし、典型的には、真核生物細胞ウイルスからのエンハンサーを使用することになる。例としては、複製起点の後期側（塩基対１００～２７０）のＳＶ４０エンハンサー、ヒトサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、マウスサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。真核生物プロモーターの活性化のためのエンハンサーエレメントを記載しているYaniv, Nature 297:17-18 (1982)も、参照されたい。エンハンサーは、ベクター内の抗体ポリペプチドをコードする配列の５’または３’側の位置にスプライシングされ得るが、一般的にプロモーターから５’側の部位に位置する。
【0234】
ｆ）転写終結成分
真核生物宿主細胞において使用される発現ベクターは、転写に終結のためにおよびｍＲＮＡを安定させるために必要な配列も含有し得る。そのような配列は、一般に、真核生物またはウイルスＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’非翻訳領域から、および低頻度に３’非翻訳領域から入手可能である。これらの領域は、抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分に、ポリアデニル化断片として転写されたヌクレオチドセグメントを含有する。１つの有用な転写終結成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。ＷＯ９４／１１０２６およびそこで開示されている発現ベクターを参照されたい。
真核生物宿主細胞において使用される発現ベクターは、転写に終結のためにおよびｍＲＮＡを安定させるために必要な配列も含有し得る。そのような配列は、一般に、真核生物またはウイルスＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’非翻訳領域から、および低頻度に３’非翻訳領域から入手可能である。これらの領域は、抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分に、ポリアデニル化断片として転写されたヌクレオチドセグメントを含有する。１つの有用な転写終結成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。ＷＯ９４／１１０２６およびそこで開示されている発現ベクターを参照されたい。
【0235】
ｇ）宿主細胞の選択および形質転換
本明細書におけるベクターでのＤＮＡのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞は、昆虫または脊椎動物宿主細胞を含む本明細書に記載の高等真核生物細胞を含む。培養（組織培養）での昆虫または脊椎動物細胞の増殖は、慣例的な手順となっている。有用な昆虫細胞系の例は、Spodoptera frugiperdaのＳｆ－９およびＳｆ－２１、Drosophila melanogasterのＤＳ２細胞、またはTrichoplusia niのＨｉｇｈ Ｆｉｖｅ細胞（ＢＴＩ－ＴＮ－５Ｂ１－４）である。例えば、Frenzel, A. et al. (2013) Front. Immunol. 4:217を参照されたい。有用な哺乳動物宿主細胞系の例は、ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系統（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胚性腎臓系統（２９３細胞、もしくは懸濁培養での増殖のためにサブクローニングされた２９３細胞、Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)）；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)）；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞；ＣＨＯＫ１細胞、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞または派生株、およびヒト肝細胞癌系統（Ｈｅｐ Ｇ２）である。
本明細書におけるベクターでのＤＮＡのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞は、昆虫または脊椎動物宿主細胞を含む本明細書に記載の高等真核生物細胞を含む。培養（組織培養）での昆虫または脊椎動物細胞の増殖は、慣例的な手順となっている。有用な昆虫細胞系の例は、Spodoptera frugiperdaのＳｆ－９およびＳｆ－２１、Drosophila melanogasterのＤＳ２細胞、またはTrichoplusia niのＨｉｇｈ Ｆｉｖｅ細胞（ＢＴＩ－ＴＮ－５Ｂ１－４）である。例えば、Frenzel, A. et al. (2013) Front. Immunol. 4:217を参照されたい。有用な哺乳動物宿主細胞系の例は、ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系統（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胚性腎臓系統（２９３細胞、もしくは懸濁培養での増殖のためにサブクローニングされた２９３細胞、Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)）；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)）；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞；ＣＨＯＫ１細胞、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞または派生株、およびヒト肝細胞癌系統（Ｈｅｐ Ｇ２）である。
【0236】
宿主細胞は、抗体産生のために上記発現またはクローニングベクターで形質転換され、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適宜改変された従来の栄養培地で培養される。
【0237】
ｈ）宿主細胞の培養
本発明の抗体を産生するために使用される宿主細胞は、様々な培地で培養することができる。市販の培地、例えば、ハムＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）は、宿主細胞の培養に好適である。加えて、Ham et al., Meth. Enz. 58:44 (1979)、Barnes et al., Anal. Biochem. 102:255 (1980)、米国特許第４，７６７，７０４号、同第４，６５７，８６６号、同第４，９２７，７６２号、同第４，５６０，６５５号もしくは同第５，１２２，４６９号、ＷＯ９０／０３４３０、ＷＯ８７／００１９５、または米国特許再発行第３０，９８５号に記載されている培地のいずれかを、宿主細胞の培養培地として使用することができる。これらのいずれの培地にも、ホルモンおよび／または他の増殖因子（例えば、インスリン、トランスフェリン、または上皮増殖因子）、塩（例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩）、緩衝液（例えば、ＨＥＰＥＳ）、ヌクレオチド（例えば、アデノシンおよびチミジン）、抗生物質（例えば、ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬）、微量元素（マイクロモル濃度範囲の最終濃度で通常は存在する無機化合物と定義される）、ならびにグルコースまたは同等のエネルギー源を、必要に応じて追加補充することができる。任意の他のサプリメントも、当業者には公知であろう適切な濃度で含まれ得る。培養条件、例えば、温度、ｐＨおよび同様のものは、発現に選択される宿主細胞に関して以前に使用されたものであり、当業者には明らかであろう。
本発明の抗体を産生するために使用される宿主細胞は、様々な培地で培養することができる。市販の培地、例えば、ハムＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）は、宿主細胞の培養に好適である。加えて、Ham et al., Meth. Enz. 58:44 (1979)、Barnes et al., Anal. Biochem. 102:255 (1980)、米国特許第４，７６７，７０４号、同第４，６５７，８６６号、同第４，９２７，７６２号、同第４，５６０，６５５号もしくは同第５，１２２，４６９号、ＷＯ９０／０３４３０、ＷＯ８７／００１９５、または米国特許再発行第３０，９８５号に記載されている培地のいずれかを、宿主細胞の培養培地として使用することができる。これらのいずれの培地にも、ホルモンおよび／または他の増殖因子（例えば、インスリン、トランスフェリン、または上皮増殖因子）、塩（例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩）、緩衝液（例えば、ＨＥＰＥＳ）、ヌクレオチド（例えば、アデノシンおよびチミジン）、抗生物質（例えば、ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬）、微量元素（マイクロモル濃度範囲の最終濃度で通常は存在する無機化合物と定義される）、ならびにグルコースまたは同等のエネルギー源を、必要に応じて追加補充することができる。任意の他のサプリメントも、当業者には公知であろう適切な濃度で含まれ得る。培養条件、例えば、温度、ｐＨおよび同様のものは、発現に選択される宿主細胞に関して以前に使用されたものであり、当業者には明らかであろう。
【0238】
ｉ）抗体の精製
組換え技術を使用する場合、抗体は、細胞内で産生され得るか、または培地内に直接的に分泌され得る。抗体が細胞内で産生された場合、第一のステップとして、宿主細胞または溶解断片のどちらかである微粒子状デブリを、例えば遠心分離または限外濾過により、除去することができる。抗体が培地内に分泌された場合、そのような発現系からの上清を、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎの限外濾過ユニットを使用して、先ず濃縮することができる。前述のステップのいずれかにタンパク質分解を阻害するためにＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤を含めることができ、偶発的な夾雑物の増殖を防止するために抗生物質を含めることができる。
組換え技術を使用する場合、抗体は、細胞内で産生され得るか、または培地内に直接的に分泌され得る。抗体が細胞内で産生された場合、第一のステップとして、宿主細胞または溶解断片のどちらかである微粒子状デブリを、例えば遠心分離または限外濾過により、除去することができる。抗体が培地内に分泌された場合、そのような発現系からの上清を、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎの限外濾過ユニットを使用して、先ず濃縮することができる。前述のステップのいずれかにタンパク質分解を阻害するためにＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤を含めることができ、偶発的な夾雑物の増殖を防止するために抗生物質を含めることができる。
【0239】
細胞から調製された抗体組成物を、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、および親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができ、親和性クロマトグラフィーが好都合な技法である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡを使用して、ヒトγ１、γ２、またはγ４重鎖に基づく抗体を精製することができる（Lindmark et al., J. Immunol. Methods 62:1-13 (1983)）。プロテインＧは、すべてのマウスアイソタイプにおよびヒトγ３に推奨されている（Guss et al., EMBO J. 5:15671575 (1986)）。親和性リガンドが結合されるマトリックスは、アガロースであり得るが、他のマトリックスも利用可能である。機械的に安定なマトリックス、例えば、制御細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンは、アガロースで達成され得るものより速い流量およびより短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎ．Ｊ．）が精製に有用である。タンパク質精製のための他の技法、例えば、イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿法、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンでのクロマトグラフィー、アニオン交換樹脂またはカチオン交換樹脂（例えば、ポリアスパラギン酸カラム）でのＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈殿法も、回収すべき抗体に依存して利用可能である。
【0240】
任意の予備的な精製ステップの後、目的の抗体と夾雑物とを含む混合物を、例えば、低い塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍの塩）で行われる、約２．５～４．５の間のｐＨの溶出緩衝液を使用する低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーによる、さらなる精製に供すことができる。
【0241】
一般に、上記の方法論と整合する、および／または当業者により目的の特定の抗体に適切であると判断されるような、研究、試験および臨床用途に使用される抗体を調製するための様々な方法論は、当技術分野において十分に確立されている。
【0242】
非フコシル化抗体の産生
低減したフコシル化度を有する抗体を調製するための方法が、本明細書で提供される。例えば、本明細書で企図される方法としては、タンパク質フコシル化が欠損している細胞系（例えば、Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ノックアウトＣＨＯ細胞、β１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩを過剰発現し、さらにゴルジμ－マンノシダーゼＩＩを過剰発現する細胞など）の使用、および抗体の産生に使用される細胞培養培地におけるフコースアナログの添加が挙げられるが、これらに限定されない。Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；Ｐｒｅｓｔａ，Ｌの米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８Ａ１号；ＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１；Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)；および米国特許第８，５７４，９０７号を参照されたい。抗体のフコース含有量を低減させるためのさらなる技法は、米国特許出願公開第２０１２／０２１４９７５号に記載されているＧｌｙｍａｘｘ技術を含む。抗体のフコース含有量を低減させるためのさらなる技法は、抗体の産生に使用される細胞培養培地における１つまたは複数のグリコシダーゼ阻害剤の添加も含む。グリコシダーゼ阻害剤としては、α－グルコシダーゼＩ、α－グルコシダーゼＩＩ、およびα－マンノシダーゼＩが挙げられる。一部の実施形態では、グリコシダーゼ阻害剤は、α－マンノシダーゼＩの阻害剤（例えば、キフネシン）である。
低減したフコシル化度を有する抗体を調製するための方法が、本明細書で提供される。例えば、本明細書で企図される方法としては、タンパク質フコシル化が欠損している細胞系（例えば、Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞、アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ノックアウトＣＨＯ細胞、β１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩを過剰発現し、さらにゴルジμ－マンノシダーゼＩＩを過剰発現する細胞など）の使用、および抗体の産生に使用される細胞培養培地におけるフコースアナログの添加が挙げられるが、これらに限定されない。Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；Ｐｒｅｓｔａ，Ｌの米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８Ａ１号；ＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１；Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)；および米国特許第８，５７４，９０７号を参照されたい。抗体のフコース含有量を低減させるためのさらなる技法は、米国特許出願公開第２０１２／０２１４９７５号に記載されているＧｌｙｍａｘｘ技術を含む。抗体のフコース含有量を低減させるためのさらなる技法は、抗体の産生に使用される細胞培養培地における１つまたは複数のグリコシダーゼ阻害剤の添加も含む。グリコシダーゼ阻害剤としては、α－グルコシダーゼＩ、α－グルコシダーゼＩＩ、およびα－マンノシダーゼＩが挙げられる。一部の実施形態では、グリコシダーゼ阻害剤は、α－マンノシダーゼＩの阻害剤（例えば、キフネシン）である。
【0243】
本明細書で使用される場合、「コアフコシル化」は、Ｎ結合型グリカンの還元末端におけるＮ－アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）へのフコースの付加（「フコシル化」）を指す。そのような方法により産生される抗体およびそれらの組成物も、提供される。
【0244】
一部の実施形態では、Ｆｃ領域（またはドメイン）に結合している複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖のフコシル化が、低減される。本明細書で使用される場合、「複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は、典型的にはアスパラギン２９７（Ｋａｂａｔの番号による）に結合されるが、複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖が他のアスパラギン残基に連結されることもある。「複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は、マンノースのみがコア構造の非還元末端に組み込まれている高マンノース型の糖鎖が除外されるが、１）コア構造の非還元末端側にガラクトース－Ｎ－アセチルグルコサミン（「ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ」とも呼ばれる）の１つまたは複数の枝があり、Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側に、必要に応じて、シアル酸、バイセクティングＮ－アセチルグルコサミン、もしくはこれらに類するものがある、複合型、または２）コア構造の非還元末端側に、高マンノースＮ－グリコシド結合型糖鎖と複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖との両方の枝がある、ハイブリッド型を含む。
【0245】
一部の実施形態では、「複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は、コア構造の非還元末端側に、ガラクトース－Ｎ－アセチルグルコサミン（「ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ」とも呼ばれる）の枝が全くないか、または１つもしく複数あり、Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側に、必要に応じて、シアル酸、バイセクティングＮ－アセチルグルコサミンまたはこれらに類するものなどの構造がさらにある、複合型を含む。
【0246】
本方法によれば、典型的にはごくわずかな量のフコースしか複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖に組み込まれない。例えば、様々な実施形態では、組成物中、抗体の約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満が、フコースによるコアフコシル化を有する。一部の実施形態では、組成物中、抗体の実質的にいずれも（すなわち、約０．５％未満）、フコースによるコアフコシル化を有さない。一部の実施形態では、組成物中、抗体の約４０％より多く、約５０％より多く、約６０％より多く、約７０％より多く、約８０％より多く、約９０％より多く、約９１％より多く、約９２％より多く、約９３％より多く、約９４％より多く、約９５％より多く、約９６％より多く、約９７％より多く、約９８％より多く、また約９９％より多くが、フコシル化されていない。
【0247】
一部の実施形態では、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的にいずれも（すなわち、約０．５％未満）フコース残基を含有しない抗体が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、抗体の重鎖の少なくとも１つまたは２つがフコシル化されていない抗体が、本明細書で提供される。
【0248】
上記のように、様々な哺乳動物宿主発現ベクター系を、抗体を発現させるために利用することができる。一部の実施形態では、培養培地にフコースが追加補充されない。一部の実施形態では、有効量のフコースアナログが、培養培地に添加される。この文脈での「有効量」は、抗体の複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖へのフコースの組込みを、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％減少させるのに十分である、アナログの量を指す。一部の実施形態では、本方法により産生された抗体は、フコースアナログの非存在下で培養された宿主細胞から産生された抗体と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％非コアフコシル化（例えば、コアフコシル化が欠如している）タンパク質を含む。
【0249】
フコースが糖鎖の還元末端におけるＮ－アセチルグルコサミンに結合していない糖鎖の、フコースが糖鎖の還元末端におけるＮ－アセチルグルコサミンに結合している糖鎖に対する含有量（例えば、比）は、例えば、実施例で説明するように、決定することができる。他の方法としては、ヒドラジン分解または酵素消化（例えば、Biochemical Experimentation Methods 23: Method for Studying Glycoprotein Sugar Chain (Japan Scientific Societies Press), edited by Reiko Takahashi (1989)を参照されたい）、放出された糖鎖の蛍光標識または放射性同位体標識および次いで標識された糖鎖のクロマトグラフィーによる分離が挙げられる。また、放出された糖鎖の組成を、ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ法（例えば、J. Liq Chromatogr. 6:1557 (1983)を参照されたい）により鎖を解析することによって決定することができる。（一般に、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号を参照されたい）。
【0250】
ＩＶ．組成物
一部の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体のいずれかを含む組成物（例えば、医薬組成物）も、本明細書で提供される。一部の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の約５０％未満がフコース残基を含有する、組成物が本明細書で提供される。一部の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的にいずれもフコース残基を含有しない、組成物が本明細書で提供される。
一部の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体のいずれかを含む組成物（例えば、医薬組成物）も、本明細書で提供される。一部の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の約５０％未満がフコース残基を含有する、組成物が本明細書で提供される。一部の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的にいずれもフコース残基を含有しない、組成物が本明細書で提供される。
【0251】
治療用製剤は、所望の程度の純度を有する活性成分と必要に応じた薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤とを混合することにより、保管用に調製される（Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed., Lippincott Williams & Wiklins, Pub., Gennaro Ed., Philadelphia, Pa. 2000）。許容される担体、賦形剤または安定剤は、用いられる投薬量および濃度でレシピエントにとって非毒性であり、これらには、緩衝液、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、ピロ亜硫酸ナトリウムを含む、抗酸化剤、保存剤、等張剤、安定剤、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；キレート剤、例えばＥＤＴＡならびに／または非イオン性表面活性剤が含まれる。
【0252】
緩衝液は、特に、安定性がｐＨ依存性である場合、治療有効性を最適化する範囲内にｐＨを制御するために使用することができる。緩衝液は、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭの範囲の濃度で存在し得る。本発明での使用に好適な緩衝化剤には、有機酸と無機酸の両方、およびそれらの塩が含まれる。例えば、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩。加えて、緩衝液は、ヒスチジンおよびトリメチルアミン塩、例えばＴｒｉｓ、から構成されることもある。
【0253】
保存剤は、微生物の増殖を防止するために添加することができ、通常は約０．２％～１．０％（ｗ／ｖ）の範囲で存在する。本発明での使用に好適な保存剤としては、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；ハロゲン化ベンザルコニウム（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール、３－ペンタノール、およびｍ－クレゾールが挙げられる。
【0254】
「安定剤」として知られていることもある張度剤(tonicity agent)は、組成物中の液体の張度を調整または維持するために存在し得る。タンパク質および抗体などの大きい荷電生体分子とともに使用される場合、それらは、アミノ酸側鎖の荷電基と相互作用し、それによって分子間相互作用および分子内相互作用の可能性を低下させることができるため、「安定剤」と呼ばれることが多い。張度剤は、他の成分の相対量を考慮して、約０．１重量％～約２５重量％の間または約１～約５重量％の間の任意の量で存在し得る。一部の実施形態では、張度剤は、多価糖アルコール、三価またはそれより高い価数の糖アルコール、例えば、グリセリン、エリトリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトールを含む。
【0255】
追加の賦形剤には、次のうちの１つまたは複数としての機能を果たすことができる作用物質が含まれる：（１）増量剤、（２）溶解度向上剤、（３）安定剤、および（４）変性または容器壁への付着を防止する作用物質。そのような賦形剤としては、多価糖アルコール（上記に列挙されている）；アミノ酸、例えば、アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リシン、オルニチン、ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、トレオニンなど；有機糖または糖アルコール、例えば、スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース（myoinisitose）、ミオイノシトール（myoinisitol）、ガラクトース、ガラクシトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコール；硫黄含有還元剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウム；低分子量タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは他の免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；単糖類（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース）；二糖類（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）；三糖類、例えば、ラフィノース；ならびに多糖類、例えば、デキストリンまたはデキストランが挙げられる。
【0256】
非イオン性表面活性剤または界面活性物質（「湿潤剤」としても公知）は、治療剤の可溶化を助けるためばかりでなく、治療用タンパク質を撹拌により誘導される凝集から保護するためにも存在することがあり、これらによって、活性治療用タンパク質または抗体の変性を引き起こすことなく製剤をせん断表面応力に曝露することも可能になる。非イオン性表面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ～約１．０ｍｇ／ｍｌまたは約０．０７ｍｇ／ｍｌ～約０．２ｍｇ／ｍｌの範囲で存在する。一部の実施形態では、非イオン性表面活性剤は、約０．００１％～約０．１％ｗ／ｖまたは約０．０１％～約０．１％ｗ／ｖまたは約０．０１％～約０．０２５％ｗ／ｖの範囲で存在する。
【0257】
好適な非イオン性表面活性剤としては、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０など）、ポロキサマー（polyoxamer）（１８４、１８８など）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０など）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン水添ヒマシ油１０、５０および６０、モノステアリン酸グリセロール、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースが挙げられる。使用することができるアニオン性界面活性物質としては、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウムおよびスルホン酸ジオクチルナトリウムが挙げられる。カチオン性界面活性物質としては、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムが挙げられる。
【0258】
製剤をｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用するためには、製剤は、無菌でなければならない。製剤を、滅菌濾過膜による濾過によって無菌にすることができる。本明細書における治療用組成物は、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、静脈内溶液バッグ、または皮下注射針により穴を開けることができるストッパーを有するバイアルに、一般に入れられる。
【0259】
投与経路は、公知の、受入れられている方法、例えば、単回もしくは複数回のボーラス、または好適な様式での長期間にわたる注入、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内もしくは関節内経路による注射もしくは注入、局所投与、吸入、または持続放出もしくは延長放出手段による方法に従う。
【0260】
本明細書における製剤は、処置されることになる特定の適応症のために活性化合物、好ましくは、互いに有害に作用しない補完的活性を有するものを、必要に応じて１つより多く含有することもできる。その代わりにまたはそれに加えて、組成物は、細胞傷害剤、サイトカインまたは成長阻害性薬剤を含むことができる。そのような分子は適宜、意図される目的に有効な量で組み合わせて存在する。
【0261】
Ｖ．処置方法
対象における肥満細胞（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞）の活性および／または数の増加によって特徴付けされる疾患または状態を処置するための方法が本明細書に提供される。一部の実施形態では、方法は、有効量の本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体またはその組成物を対象に投与するステップを含む。肥満細胞（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞）の活性および／または数の増加によって特徴付けされる例示的な疾患または状態、すなわち、肥満細胞媒介性障害または状態は、下文に記載されている。
対象における肥満細胞（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞）の活性および／または数の増加によって特徴付けされる疾患または状態を処置するための方法が本明細書に提供される。一部の実施形態では、方法は、有効量の本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体またはその組成物を対象に投与するステップを含む。肥満細胞（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞）の活性および／または数の増加によって特徴付けされる例示的な疾患または状態、すなわち、肥満細胞媒介性障害または状態は、下文に記載されている。
【0262】
肥満細胞（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞）の活性化の阻害を必要とする対象における肥満細胞の活性化を阻害するための方法がさらに本明細書に提供される。一部の実施形態では、方法は、有効量の本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体またはその組成物を対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、例えば、処置前のベースラインレベルにおいて対象から得られる試料におけるＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の活性化と比較して、肥満細胞の活性化を少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％阻害する。
【0263】
肥満細胞（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞）の枯渇を必要とする対象における肥満細胞を枯渇させるための方法がさらに本明細書に提供される。一部の実施形態では、方法は、有効量の本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体またはその組成物を対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、処置前のベースラインレベルと比較して、対象から得られる試料におけるＳｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％を枯渇させる。
【0264】
一部の実施形態では、肥満細胞の枯渇または低減は、抗体による処置後の対象由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞集団数を、抗体による処置前の対象由来の試料における肥満細胞集団数と比較することにより測定される。一部の実施形態では、肥満細胞の枯渇または低減は、抗体による処置後の対象由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞集団数を、参照数または試料、例えば、抗体処置なしの別の対象由来の試料における肥満細胞集団数、または抗体処置なしの対象由来の試料における平均肥満細胞集団数と比較することにより測定される。一部の実施形態では、肥満細胞の枯渇または低減は、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰによるものである。
【0265】
一部の実施形態では、肥満細胞の枯渇もしくは低減および／または肥満細胞活性化の阻害は、１種または複数の肥満細胞産物、例えば、肥満細胞から産生される予め形成されたまたは新たに形成された炎症性メディエーターの低減または予防によって測定される。例示的な炎症性メディエーターは、プロテアーゼ（例えば、汎トリプターゼ、活性またはベータ－トリプターゼ、キマーゼ、ＣＰＡ３、ヘパリン等）、ロイコトリエン（例えば、ロイコトリエンＣ４またはＢ４、血小板活性化因子、プロスタグランジンＤ２またはＥ２等）、アミン（例えば、ヒスタミン、セロトニン、ドーパミン、ポリアミン等）、増殖因子（例えば、ＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦＧ－ＣＳＦ、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ等）、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－３１、ＩＬ－３６等）、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２６、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８等）、エキソソームおよび細胞外トラップを含むがこれらに限定されない。
【0266】
一部の実施形態では、抗体または組成物の投与は、例えば、参照数または試料における炎症性メディエーターまたは肥満細胞産物のレベルと比較して、対象から得られる試料における炎症性メディエーターまたは肥満細胞産物のレベルの減少をもたらす。例えば、抗体または組成物による処置後に得られる個体由来の試料における炎症性メディエーターまたは肥満細胞産物のレベルは、抗体もしくは組成物による処置に先立つ対象から得られる試料における炎症性メディエーターもしくは肥満細胞産物のレベル、抗体もしくは組成物で処置されていない対象から得られる試料における炎症性メディエーターもしくは肥満細胞産物のレベル、抗体もしくは組成物で処置されていない対象から得られる試料における炎症性メディエーターもしくは肥満細胞産物の平均レベル、または対応する型の試料における炎症性メディエーターもしくは肥満細胞産物のレベルに関する参照もしくは正常検査値と比較することができる。例示的な炎症性メディエーターは、プロテアーゼ（例えば、汎トリプターゼ、活性またはベータ－トリプターゼ、キマーゼ、ＣＰＡ３、ヘパリン等）、ロイコトリエン（例えば、ロイコトリエンＣ４またはＢ４、血小板活性化因子、プロスタグランジンＤ２またはＥ２等）、アミン（例えば、ヒスタミン、セロトニン、ドーパミン、ポリアミン等）、増殖因子（例えば、ＳＣＦ、ＧＭ－ＣＳＦＧ－ＣＳＦ、ＦＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ等）、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－３１、ＩＬ－３６等）、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２６、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８等）、エキソソームおよび細胞外トラップを含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、炎症性メディエーターまたは肥満細胞産物は、活性トリプターゼ、ＣＣＬ２、ＩＬ－１３、ＩＬ－８、ＣＣＬ４、ＩＬ－６、ヒスタミン、キマーゼ、ＣＰＡ３、プロスタグランジン（例えば、プロスタグランジンＤ２またはＥ２）、ロイコトリエン（例えば、ロイコトリエンＣ４またはＢ４）または肥満細胞マーカー（例えば、ＣＤ６３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ２０３ｃ、ＩｇＥまたはＭＲＧＰＲＸ２）のうち１種または複数である。一部の実施形態では、炎症性メディエーターまたは肥満細胞産物は、肥満細胞によって分泌される物質であり、試料は、固体試料（例えば、生検試料）または液体試料（例えば、血清、血漿または尿試料）である。一部の実施形態では、炎症性メディエーターまたは肥満細胞産物は、肥満細胞によって発現されるが分泌されない物質またはマーカーであり、試料は、固体試料（例えば、生検試料）である。
【0267】
例えば、一部の実施形態では、抗体または組成物の投与は、例えば、参照数または試料における肥満細胞マーカーのレベルと比較して、対象から得られる試料（例えば、１個または複数の肥満細胞を含む生検試料等、生検試料）における肥満細胞マーカーのレベルの減少をもたらす。一部の実施形態では、抗体または組成物による処置後に得られる個体由来の試料における肥満細胞マーカーのレベルは、抗体もしくは組成物による処置に先立つ対象から得られる試料における肥満細胞マーカーのレベル、抗体もしくは組成物で処置されていない対象から得られる試料における肥満細胞マーカーのレベル、抗体もしくは組成物で処置されていない対象から得られる試料における肥満細胞マーカーの平均レベル、または対応する型の試料における肥満細胞マーカーのレベルに関する参照もしくは正常検査値と比較することができる。例示的な肥満細胞マーカーは、当技術分野で公知であり、ＣＤ６３、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ２０３ｃ、ＩｇＥおよびＭＲＧＰＲＸ２を限定することなく含む。
【0268】
一部の実施形態では、試料は、組織試料（例えば、生検試料、皮膚試料、肺試料、骨髄試料、鼻ポリープ症試料等）である。一部の実施形態では、試料は、生体液試料（例えば、血液試料、血清試料、血漿試料、尿試料、気管支肺胞洗浄試料、鼻洗浄試料等）である。
【0269】
一部の実施形態では、対象は、肥満細胞媒介性障害または状態を有する。一部の実施形態では、対象は、肥満細胞媒介性障害または状態を発症するリスクがある。例示的な肥満細胞媒介性障害および状態は、当技術分野で公知かつ本明細書に記載されている。例えば、肥満細胞媒介性障害または状態は、肥満細胞症（例えば、無痛性全身性肥満細胞症、ＩＳＭ；または侵襲性全身性肥満細胞症、ＡＳＭ）、肥満細胞白血病、肥満細胞活性化症候群、胃不全麻痺、骨粗鬆症、骨減少症、腎性骨ジストロフィー、骨折、アルツハイマー病、慢性神経障害性疼痛、痛覚過敏、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、移植片対宿主病（ＧＶＨ）、大腸炎（例えば、顕微鏡的大腸炎または潰瘍性大腸炎）、遺伝性アルファトリプターゼ血症（tryptasemia）、神経線維腫、コーニス症候群、蕁麻疹（例えば、慢性自発性（spontaneous）蕁麻疹または刺激誘発性（inducible）蕁麻疹）、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、血管浮腫、結節性痒疹（pruigo nodularis）、胆管炎、乾癬、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、機能性ディスペプシア、喘息（例えば、好酸球性または非好酸球性喘息）、アレルギー（例えば、食物アレルギーまたは仮性アレルギー）、ケロイド、慢性副鼻腔炎（例えば、鼻ポリープを伴うまたは伴わない）、アスピリン増悪呼吸器疾患（ＡＥＲＤ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、水疱性類天疱瘡、特発性肺線維症、全身性硬化症、間質性（interstitital）膀胱炎、化膿性汗腺炎、円形脱毛症、白斑、肥満細胞胃腸疾患、クローン病、関節リウマチ、胃食道逆流症、ウイルス感染症、アカラシア、体位性頻拍症候群、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、複合性局所疼痛症候群またはエーラス・ダンロス症候群を含むことができるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、対象は、肥満細胞症（例えば、無痛性全身性肥満細胞症、ＩＳＭ；または侵襲性全身性肥満細胞症、ＡＳＭ）、肥満細胞白血病、肥満細胞活性化症候群、胃不全麻痺、骨粗鬆症、骨減少症、腎性骨ジストロフィー、骨折、アルツハイマー病、慢性神経障害性疼痛、痛覚過敏、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、移植片対宿主病（ＧＶＨ）、大腸炎（例えば、顕微鏡的大腸炎または潰瘍性大腸炎）、遺伝性アルファトリプターゼ血症、神経線維腫、コーニス症候群、蕁麻疹（例えば、慢性自発性蕁麻疹または刺激誘発性蕁麻疹）、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、血管浮腫、結節性痒疹、胆管炎、乾癬、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、機能性ディスペプシア、喘息（例えば、好酸球性または非好酸球性喘息）、アレルギー（例えば、食物アレルギーまたは仮性アレルギー）、ケロイド、慢性副鼻腔炎（例えば、鼻ポリープを伴うまたは伴わない）、アスピリン増悪呼吸器疾患（ＡＥＲＤ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、水疱性類天疱瘡、特発性肺線維症、全身性硬化症、間質性膀胱炎、化膿性汗腺炎、円形脱毛症、白斑、肥満細胞胃腸疾患、クローン病、関節リウマチ、胃食道逆流症、ウイルス感染症、アカラシア、体位性頻拍症候群、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、複合性局所疼痛症候群またはエーラス・ダンロス症候群を有するかまたはそうであると診断された。
【0270】
一部の実施形態では、本開示の方法（例えば、有効量の本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体またはその組成物の投与を含む）は、個体における１種または複数の症状の減少をもたらす。例えば、処置後の個体における１種または複数の症状のレベル、量または存在は、ベースライン時の、例えば、処置に先立つ個体における１種または複数の症状のレベル、量または存在と比較することができる。一部の実施形態では、１種または複数の症状は、悪心、筋痙攣、便秘、腹痛、腹部膨満、嘔吐、下痢、疲労、眼痛、光過敏症（light sensitivity）、発赤、眼脂（discharge）、鼻汁、頭痛、眩暈、ブレインフォグ、そう痒、潮紅、発汗、じん麻疹、低血圧、息切れ、骨痛、関節痛、体重減少、骨粗鬆症、血管浮腫、胸痛、不安、鬱、頻拍、気管支収縮および全身痛を限定することなく含むことができる。
【0271】
疾患の予防または処置のため、活性薬剤の適切な投薬量は、上に定義される通り、処置されるべき疾患の型、疾患の重症度および経過、薬剤が予防目的で投与されるか治療目的で投与されるか、以前の治療法、対象の臨床歴および薬剤に対する応答、ならびに担当医の裁量に依存するであろう。薬剤は、一度にまたは一連の処置にわたって対象に適宜投与される。本明細書に記載されている方法の一部の実施形態では、記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の投与間の間隔は、約１カ月間またはそれよりも長い。一部の実施形態では、投与間の間隔は、約２カ月間、約３カ月間、約４カ月間、約５カ月間、約６カ月間またはそれよりも長い。本明細書で使用される場合、投与間の間隔は、ある抗体投与と次の抗体投与との間の期間を指す。本明細書で使用される場合、約１カ月間の間隔は、４週間を含む。したがって、一部の実施形態では、投与間の間隔は、約４週間、約８週間、約１２週間、約１６週間、約２０週間、約２４週間またはそれよりも長い。一部の実施形態では、処置は、抗体の複数投与を含み、投与間の間隔は、変動し得る。例えば、第１の投与および第２の投与の間の間隔は、約１カ月間であり、その後の投与間の間隔は、約３カ月間である。一部の実施形態では、第１の投与および第２の投与の間の間隔は、約１カ月間であり、第２の投与および第３の投与の間の間隔は、約２カ月間であり、その後の投与間の間隔は、約３カ月間である。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、一定用量で投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、用量当たり約１５０～約４５０ｍｇの投薬量で対象に投与される。一部の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、用量当たり１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇおよび４５０ｍｇのいずれかのおおよその投薬量で対象に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、体重に基づく用量で投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇまたは約１．０ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの投薬量で対象に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇまたは１０．０ｍｇ／ｋｇのいずれかのおおよその投薬量で対象に投与される。上に記載されている投薬頻度のいずれを使用してもよい。
【0272】
ＶＩ．製造物品またはキット
別の態様では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体を含む製造物品またはキットが提供される。製造物品またはキットは、本開示の方法における抗体の使用のための指示をさらに含むことができる。よって、ある特定の実施形態では、製造物品またはキットは、例えば、それを必要とする対象における、肥満細胞（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞）の活性および／もしくは数の増加によって特徴付けされる疾患もしくは状態を処置するため、肥満細胞（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞）の活性化を阻害するため、ならびに／または肥満細胞（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞）を枯渇させるための方法における抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の使用のための指示を含む。ある特定の実施形態では、個体は、ヒトである。一部の実施形態では、個体は、肥満細胞媒介性障害または状態を有するかまたはそれを発症するリスクがある。一部の実施形態では、対象は、肥満細胞症（例えば、無痛性全身性肥満細胞症、ＩＳＭ；または侵襲性全身性肥満細胞症、ＡＳＭ）、肥満細胞白血病、肥満細胞活性化症候群、胃不全麻痺、骨粗鬆症、骨減少症、腎性骨ジストロフィー、骨折、アルツハイマー病、慢性神経障害性疼痛、痛覚過敏、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、移植片対宿主病（ＧＶＨ）、大腸炎（例えば、顕微鏡的大腸炎または潰瘍性大腸炎）、遺伝性アルファトリプターゼ血症、神経線維腫、コーニス症候群、蕁麻疹（例えば、慢性自発性蕁麻疹または刺激誘発性蕁麻疹）、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、血管浮腫、結節性痒疹、胆管炎、乾癬、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、機能性ディスペプシア、喘息（例えば、好酸球性または非好酸球性喘息）、アレルギー（例えば、食物アレルギーまたは仮性アレルギー）、ケロイド、慢性副鼻腔炎（例えば、鼻ポリープを伴うまたは伴わない）、アスピリン増悪呼吸器疾患（ＡＥＲＤ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、水疱性類天疱瘡、特発性肺線維症、全身性硬化症、間質性膀胱炎、化膿性汗腺炎、円形脱毛症、白斑、肥満細胞胃腸疾患、クローン病、関節リウマチ、胃食道逆流症、ウイルス感染症、アカラシア、体位性頻拍症候群、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、複合性局所疼痛症候群またはエーラス・ダンロス症候群を有するかまたはそうであると診断された。
別の態様では、本明細書に記載されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体を含む製造物品またはキットが提供される。製造物品またはキットは、本開示の方法における抗体の使用のための指示をさらに含むことができる。よって、ある特定の実施形態では、製造物品またはキットは、例えば、それを必要とする対象における、肥満細胞（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞）の活性および／もしくは数の増加によって特徴付けされる疾患もしくは状態を処置するため、肥満細胞（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞）の活性化を阻害するため、ならびに／または肥満細胞（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－６を発現する肥満細胞）を枯渇させるための方法における抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の使用のための指示を含む。ある特定の実施形態では、個体は、ヒトである。一部の実施形態では、個体は、肥満細胞媒介性障害または状態を有するかまたはそれを発症するリスクがある。一部の実施形態では、対象は、肥満細胞症（例えば、無痛性全身性肥満細胞症、ＩＳＭ；または侵襲性全身性肥満細胞症、ＡＳＭ）、肥満細胞白血病、肥満細胞活性化症候群、胃不全麻痺、骨粗鬆症、骨減少症、腎性骨ジストロフィー、骨折、アルツハイマー病、慢性神経障害性疼痛、痛覚過敏、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、移植片対宿主病（ＧＶＨ）、大腸炎（例えば、顕微鏡的大腸炎または潰瘍性大腸炎）、遺伝性アルファトリプターゼ血症、神経線維腫、コーニス症候群、蕁麻疹（例えば、慢性自発性蕁麻疹または刺激誘発性蕁麻疹）、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、血管浮腫、結節性痒疹、胆管炎、乾癬、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、機能性ディスペプシア、喘息（例えば、好酸球性または非好酸球性喘息）、アレルギー（例えば、食物アレルギーまたは仮性アレルギー）、ケロイド、慢性副鼻腔炎（例えば、鼻ポリープを伴うまたは伴わない）、アスピリン増悪呼吸器疾患（ＡＥＲＤ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、水疱性類天疱瘡、特発性肺線維症、全身性硬化症、間質性膀胱炎、化膿性汗腺炎、円形脱毛症、白斑、肥満細胞胃腸疾患、クローン病、関節リウマチ、胃食道逆流症、ウイルス感染症、アカラシア、体位性頻拍症候群、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、複合性局所疼痛症候群またはエーラス・ダンロス症候群を有するかまたはそうであると診断された。
【0273】
製造物品またはキットは、容器をさらに含むことができる。好適な容器としては、例えば、瓶、バイアル（例えば、二室式バイアル）、シリンジ（例えば、一室または二室シリンジ）および試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器により製剤が保持される。
【0274】
製造物品またはキットは、容器上にあるかまたは容器に付随し、製剤の再構成および／または使用に関する指示を示すことができる、ラベルまたは添付文書をさらに含むことができる。ラベルまたは添付文書は、製剤が、個体における肥満細胞媒介性障害を処置または予防するための皮下、静脈内または他の投与機序に有用であるまたは意図されることをさらに示すことができる。製剤を保持する容器は、単回使用バイアルであることもあり、または再構成された製剤の反復投与を可能にする複数回使用バイアルであることもある。製造物品またはキットは、好適な希釈剤を含む第二の容器をさらに含むことができる。製造物品またはキットは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用のための指示を伴う添付文書を含む、商業上の、治療上の、および使用者の観点から望ましい他の材料を、さらに含むことができる。
【0275】
特定の実施形態では、本発明は、単回用量投与単位のためのキットを提供する。そのようなキットは、一室式充填済みシリンジまたは多室式充填済みシリンジの両方を含む、治療用抗体の水性製剤の容器を含む。例示的な充填済みシリンジは、Ｖｅｔｔｅｒ ＧｍｂＨ、Ｒａｖｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙから入手可能である。
【0276】
本明細書における製造物品またはキットは、必要に応じて、第２の医薬を含む容器をさらに含み、この場合、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体が第１の医薬であり、この製造物品（article）またはキットは、標識または添付文書上に、有効量における第２の医薬による対象の処置に関する指示をさらに含む。
【0277】
別の実施形態では、オートインジェクターデバイスでの投与のための本明細書に記載の製剤を含む製造物品またはキットが、本明細書で提供される。オートインジェクターは、作動させると患者または管理者による追加の必要な行動なしにその内容物を送達することになる注射デバイスであると説明され得る。これらは、送達速度が一定でなければならず、送達時間がしばらくかかる場合の、治療用製剤の自己投薬に特に適している。
【0278】
本発明は、次の実施例を参照することにより、さらに十分に理解されるであろう。しかし、実施例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に記載の実施例および実施形態が、例示を目的としたものに過ぎないこと、ならびにそれらを考慮して様々な修飾または変更が当業者に示唆されることになり、そのような修飾または変更が本願の趣旨および権限内に含まれ、添付の特許請求の範囲の範囲に含まれることになることは、理解されよう。
【実施例】
【0279】
本発明は、次の実施例を参照することにより、さらに十分に理解されるであろう。しかし、実施例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に記載の実施例および実施形態が、例示を目的としたものに過ぎないこと、ならびにそれらを考慮して様々な修飾または変更が当業者に示唆されることになり、そのような修飾または変更が本願の趣旨および権限内に含まれ、添付の特許請求の範囲の範囲に含まれることになることは、理解されよう。
【0280】
（実施例１）
抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の生成および特徴付け
Ｓｉｇｌｅｃ－６（ＣＤ３２７としても公知）は、肥満細胞において選択的に発現される阻害性受容体である。肥満細胞は、食物アレルギー、肥満細胞活性化症候群、肥満細胞症、ＩＰＦ、ＣＯＰＤおよびその他を含むがこれらに限定されない、多数の自己免疫性および炎症性疾患の病原性ドライバーであると考えられる。例えば、Yu, Y. et al. (2018) Front. Immunol. 9:2138；Yokoi, H. et al. (2006) Allergy 61:769-76；ならびに米国特許公開番号（US PG Pub. No）ＵＳ２００６０２６９５５６Ａ１およびＵＳ２００８０２６７９７３Ａ１を参照されたい。
抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の生成および特徴付け
Ｓｉｇｌｅｃ－６（ＣＤ３２７としても公知）は、肥満細胞において選択的に発現される阻害性受容体である。肥満細胞は、食物アレルギー、肥満細胞活性化症候群、肥満細胞症、ＩＰＦ、ＣＯＰＤおよびその他を含むがこれらに限定されない、多数の自己免疫性および炎症性疾患の病原性ドライバーであると考えられる。例えば、Yu, Y. et al. (2018) Front. Immunol. 9:2138；Yokoi, H. et al. (2006) Allergy 61:769-76；ならびに米国特許公開番号（US PG Pub. No）ＵＳ２００６０２６９５５６Ａ１およびＵＳ２００８０２６７９７３Ａ１を参照されたい。
【0281】
本実施例は、高い親和性でヒトＳｉｇｌｅｃ－６の様々なエピトープに結合し、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで強力な肥満細胞阻害活性を示す抗体の生成および特徴付けについて記載する。
【0282】
材料と方法
抗体の生成
マウスをＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤ－Ｆｃで免疫化し、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤでブーストした（例えば、配列番号１を参照）。免疫化に続いて、尾出血が高力価であったマウスを選択し、脾臓およびリンパ節を収集し、骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマを生成した。ハイブリドーマ（hydridoma）クローン由来の上清を、ＥＬＩＳＡを使用してＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤに対してスクリーニングし、可変領域配列決定のために高い親和性のクローンを選択した。次に、可変領域を、マウスＩｇＧ１プラスミドにクローニングし、組換えにより発現させ、生化学的および機能的特徴付けのために精製した。
抗体の生成
マウスをＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤ－Ｆｃで免疫化し、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤでブーストした（例えば、配列番号１を参照）。免疫化に続いて、尾出血が高力価であったマウスを選択し、脾臓およびリンパ節を収集し、骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマを生成した。ハイブリドーマ（hydridoma）クローン由来の上清を、ＥＬＩＳＡを使用してＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤに対してスクリーニングし、可変領域配列決定のために高い親和性のクローンを選択した。次に、可変領域を、マウスＩｇＧ１プラスミドにクローニングし、組換えにより発現させ、生化学的および機能的特徴付けのために精製した。
【0283】
抗体の特徴付け
Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂに対するＩｇＧの二価結合親和性を、固定化されたＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質を使用して、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ ３８４装置を使用したバイオレイヤーインターフェロメトリーによって測定した。
Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂに対するＩｇＧの二価結合親和性を、固定化されたＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質を使用して、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ ３８４装置を使用したバイオレイヤーインターフェロメトリーによって測定した。
【0284】
ドメインマッピングを、完全ＥＣＤ、ドメイン１および２、またはドメイン１を含有するヒトＦｃに融合された組換えにより発現されたＳｉｇｌｅｃ－６細胞外ドメインを使用したＥＬＩＳＡによって査定した。Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂを、これらのドメイン融合タンパク質のそれぞれへの結合について検査し、それらの特異的結合特性に基づきドメインを割り当てた。３種の融合タンパク質全てに結合したＳｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂをドメイン１結合剤に割り当て、完全ＥＣＤならびにドメイン１および２に結合したｍＡｂをドメイン２結合剤に割り当て、完全ＥＣＤタンパク質のみに結合したｍＡｂをドメイン３結合剤に割り当てた。
【0285】
エピトープビニングを、固定化されたＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤ Ｆｃタンパク質を使用して、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ ３８４装置を使用したバイオレイヤーインターフェロメトリーによって査定した。ある１種のＳｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂでＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤを飽和させ、続いて第２のＳｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂの結合評価を行うことにより、１６種のＳｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂのパネルを、ペア毎の様式で検査した。結合が低減または遮断された場合、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂを同じビンに割り当てた。遮断が生じなかった場合、ｍＡｂを異なるビンに割り当てた。
【0286】
Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂのエピトープマッピングをクロスリンキング質量分析（ＸＬ－ＭＳ）により行った。ＸＬ－ＭＳは、高質量ＭＡＬＤＩ解析を使用して、非共有結合相互作用の直接的解析を可能にする。手短に説明すると、特別に開発された架橋混合物（Bich, C et al. Anal. Chem., 2010, 82(1), pp 172-179）を使用して、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂをＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤに架橋した。架橋に続いて、ｍＡｂ－抗原相互作用残基を特徴付ける質量分析を使用して試料を解析した。
【0287】
Ｓｉｇｌｅｃ－６の発現
新鮮なヒト皮膚、肺および胃腸組織を正常なドナーから調達し、酵素および機械的方法を使用して単一細胞となるまで消化した。組織消化に続いて、主要な免疫細胞をフローサイトメトリーによって同定し、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＡＢ２８５９）で染色して、発現を評価した。
新鮮なヒト皮膚、肺および胃腸組織を正常なドナーから調達し、酵素および機械的方法を使用して単一細胞となるまで消化した。組織消化に続いて、主要な免疫細胞をフローサイトメトリーによって同定し、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＡＢ２８５９）で染色して、発現を評価した。
【0288】
肥満細胞活性化アッセイ
ヒト肥満細胞は、健康なドナー由来の末梢血から得た。抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照（５μｇ／ｍＬ）の存在下、２０分間３７Ｃで、肥満細胞を抗ＦｃεＲＩ（２５０ｎｇ／ｍＬ）で刺激した。
ヒト肥満細胞は、健康なドナー由来の末梢血から得た。抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照（５μｇ／ｍＬ）の存在下、２０分間３７Ｃで、肥満細胞を抗ＦｃεＲＩ（２５０ｎｇ／ｍＬ）で刺激した。
【0289】
活性化マーカーＣＤ６３をフローサイトメトリーによって査定した。メソスケールディスカバリーを使用して、上清におけるサイトカインおよびケモカインを測定した。無細胞上清における活性トリプターゼをＥＬＩＳＡによって測定した。
【0290】
ＩＬ－１３アッセイのために、ヒト肥満細胞は、健康なドナー由来の末梢血から得た。抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照（５μｇ／ｍＬ）の存在下、一晩３７Ｃで肥満細胞を培養し、続いて、抗ＦｃεＲＩ（２５０ｎｇ／ｍｌ）による刺激を行った。無細胞上清におけるＩＬ－１３をＭＳＤによって測定した。
【0291】
Ｓｉｇｌｅｃ－６内部移行
ヒト末梢血由来肥満細胞を、変動する濃度のＳｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ ＭＡＢ２８５９（ＨＶＲ配列については下の表４を参照；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓクローン＃７６７３２９）、ＡＫ０４（ＨＶＲ配列については配列番号５～１０を参照）およびＡＫ０２（ＨＶＲ配列については配列番号１７～２２を参照）またはアイソタイプ対照と共に、１８時間３７Ｃで培養した。Ｓｉｇｌｅｃ－６における異なるエピトープに結合する蛍光をタグ付けされたＳｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂを使用したＦＡＣＳによって、内部移行を測定した。
ヒト末梢血由来肥満細胞を、変動する濃度のＳｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ ＭＡＢ２８５９（ＨＶＲ配列については下の表４を参照；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓクローン＃７６７３２９）、ＡＫ０４（ＨＶＲ配列については配列番号５～１０を参照）およびＡＫ０２（ＨＶＲ配列については配列番号１７～２２を参照）またはアイソタイプ対照と共に、１８時間３７Ｃで培養した。Ｓｉｇｌｅｃ－６における異なるエピトープに結合する蛍光をタグ付けされたＳｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂを使用したＦＡＣＳによって、内部移行を測定した。
【表4】
【0292】
Ｓｉｇｌｅｃ－６マウスアッセイ
アゴニスト抗ＦｃεＲＩ ｍＡｂ（ＣＲＡ－１）を使用して、ヒト肥満細胞を含有するヒト化マウス（ＮＳＧ－ＳＧＭ３）において全身性アナフィラキシーを誘導した。例えば、Bryce PJ et al. J Allergy Clin Immunol. 2016 Sep;138(3):769-779を参照されたい。ＣＲＡ－１を受ける２４時間前に、ヒト化マウスに、アイソタイプ対照ｍＡｂまたは抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（ＡＫ０４）のいずれかを投薬した。ＣＲＡ－１投与の１０分後から始めて、直腸体温の変化として全身性アナフィラキシーを測定し、肥満細胞活性トリプターゼ、ＣＣＬ２、ＩＬ－６、ヒスタミンおよびキマーゼの血清レベルを評価した。
アゴニスト抗ＦｃεＲＩ ｍＡｂ（ＣＲＡ－１）を使用して、ヒト肥満細胞を含有するヒト化マウス（ＮＳＧ－ＳＧＭ３）において全身性アナフィラキシーを誘導した。例えば、Bryce PJ et al. J Allergy Clin Immunol. 2016 Sep;138(3):769-779を参照されたい。ＣＲＡ－１を受ける２４時間前に、ヒト化マウスに、アイソタイプ対照ｍＡｂまたは抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（ＡＫ０４）のいずれかを投薬した。ＣＲＡ－１投与の１０分後から始めて、直腸体温の変化として全身性アナフィラキシーを測定し、肥満細胞活性トリプターゼ、ＣＣＬ２、ＩＬ－６、ヒスタミンおよびキマーゼの血清レベルを評価した。
【0293】
結果
フローサイトメトリーを使用して、正常なヒト組織からのＳｉｇｌｅｃ－６発現を査定した。Ｓｉｇｌｅｃ－６は、肥満細胞（例えば、ヒト一次組織肥満細胞）において高度にかつ選択的に発現され、他の主要な免疫細胞型、例えば、好酸球、好中球、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞またはＴ細胞においては発現されないマーカーであることが確認された（図１Ａ）。
フローサイトメトリーを使用して、正常なヒト組織からのＳｉｇｌｅｃ－６発現を査定した。Ｓｉｇｌｅｃ－６は、肥満細胞（例えば、ヒト一次組織肥満細胞）において高度にかつ選択的に発現され、他の主要な免疫細胞型、例えば、好酸球、好中球、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞またはＴ細胞においては発現されないマーカーであることが確認された（図１Ａ）。
【0294】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－６の細胞外ドメインにわたる様々なエピトープに結合する抗体（図１Ｂ；図４も参照）を生成した。新たに生成された抗体を、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから得た以前の抗体ＭＡＢ２８５９（クローン＃７６７３２９）と共に特徴付けた。新たな抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体それぞれのエピトープをヒトＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤのドメイン１、２または３にマッピングし、ビンへと分類した（表Ａ）。表Ａに示される通り、融解温度およびヒトＳｉｇｌｅｃ－６への結合の親和性も抗体毎に決定した。
【表A】
【0295】
次に、肥満細胞活性化における抗体結合の効果を試験した。肥満細胞活性化は、活性化マーカーＣＤ６３を使用したフローサイトメトリーによって査定した。検査した全てのＳｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂは、アイソタイプ対照と比較して、肥満細胞活性化を阻害することが見出された（図２）。加えて、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂは、ヒト肥満細胞からのサイトカイン、ケモカインおよび活性プロテアーゼの産生を阻害することが見出された。検査した全てのＳｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂは、活性化された肥満細胞からのサイトカイン（例えば、図３Ａに示す通りＩＬ－８）およびケモカイン（例えば、図３Ｂに示す通りＣＣＬ４）を低減させた。検査した全てのＳｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂは、活性化された肥満細胞からのトリプターゼ放出も低減させた（図３Ｃ）。
【0296】
Ｓｉｇｌｅｃ－６阻害は、エピトープの配置に依存することが見出された。例えば、ＣＤ６３およびＣＤ１０７ａの発現によって査定される通り、ドメイン１、ビンＡに結合した抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂは、肥満細胞の最も強い阻害を誘導し、一方、ドメイン３、ビンＤに結合したｍＡｂは、最も弱い阻害を示した（図４Ａ）。各エピトープビン由来の代表的なＳｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂを使用して、ＦｃεＲＩ媒介性肥満細胞阻害に対するＳｉｇｌｅｃ－６阻害を検査した。ヒト肥満細胞は、健康なドナー由来の末梢血から得た。抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂまたはアイソタイプ対照（５μｇ／ｍＬ）の存在下、２０分間３７℃で、肥満細胞を滴定濃度の抗ＦｃεＲＩで刺激した。肥満細胞活性化は、表面マーカーＣＤ６３を使用したフローサイトメトリーによって査定された。Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ阻害は、エピトープビンに依存し、ドメイン１、ビンＡ結合剤が、最もロバストな肥満細胞阻害を示した（図４Ｂ）。
【0297】
Ｓｉｇｌｅｃ－６内部移行における抗体結合の効果も検査した。抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ ＡＫ０２は、ヒト肥満細胞における用量依存性Ｓｉｇｌｅｃ－６内部移行を誘導することが見出され、一方、ＡＫ０４およびＭＡＢ２８５９は、そのような誘導は見出されなかった（図５Ａ）。異なる抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体による処置は、Ｓｉｇｌｅｃ－６の完全な内部移行から内部移行なしに及ぶアウトカムの範囲を導いた（図５Ｂ）。
【0298】
Ｆｃ相互作用が、抗体誘導性Ｓｉｇｌｅｃ－６内部移行に要求されたかについて試験するために、ヒト組織肥満細胞を、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ ＡＫ０４およびＡＫ０２またはアイソタイプ対照の５ｕｇ／ｍＬ ＩｇＧまたはＦａｂ２断片の存在下でエフェクター細胞（ヒト単球由来マクロファージ）と１８時間３７℃で共培養した。異なるエピトープに結合する蛍光をタグ付けされたＳｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂを使用したフローサイトメトリーによって、内部移行を測定した。ＡＫ０４ ＩｇＧ１（Ｆａｂ２はそうではない）は、ヒト肥満細胞におけるＳｉｇｌｅｃ－６の内部移行を誘導し、Ｆｃ－相互作用が、ＡＫ０４によって誘導される受容体内部移行に必要とされることを実証する（図６）。対照的に、ＡＫ０２のＩｇＧおよびＦａｂ２フォーマットの両方が、ヒト肥満細胞におけるＳｉｇｌｅｃ－６受容体の内部移行を誘導し、Ｆｃ－相互作用が、ＡＫ０２によって誘導される内部移行に要求されないことを指し示す。
【0299】
活性化されたヒト肥満細胞からのＩＬ－１３産生における抗体結合の効果も試験した。無細胞上清におけるＩＬ－１３をＭＳＤによって測定し、絶対濃度（図７Ａ）またはパーセント阻害（図７Ｂ）として示した。ＭＡＢ２８５９ではなく、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ ＡＫ０４およびＡＫ０２が、活性化された肥満細胞からのＩＬ－１３の産生を阻害した。
【0300】
上に記載されているヒト化マウスモデルにおける抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂの活性も検査した。図８Ａにおいて、ＣＲＡ－１を受けているマウス（四角）は、ＰＢＳ対照マウス（丸）と比較して、重度アナフィラキシーを起こした。抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（菱形）は、体温によって測定される通り、アイソタイプ対照処置マウスと比較して、ＩｇＥ媒介性全身性アナフィラキシーを完全に阻害した。ＣＲＡ－１を投与されたマウスは、活性トリプターゼ（図８Ｂ）、ＣＣＬ２（図８Ｃ）、ＩＬ－６（図８Ｄ）、ヒスタミン（図８Ｅ）およびキマーゼ（図８Ｆ）のレベルの増加も呈し、これらは肥満細胞活性化を指し示す。抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ処置は、これらのメディエーターの全身性レベルを低減させ、肥満細胞阻害を強く示唆する。
【0301】
抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ ＡＫ０４は、ヒト肥満細胞に対する抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）活性についても検査した。５ｕｇ／ｍＬ ＡＫ０４またはアイソタイプ対照の存在下、１８時間３７℃で、ヒト組織肥満細胞をヒト単球由来マクロファージと共培養した（それぞれ１：５０比）。一晩インキュベーションに続いて、フローサイトメトリーを使用して肥満細胞数を決定し、アイソタイプ対照処置細胞における肥満細胞の数に対して正規化して、残っている肥満細胞のパーセンテージを得た。ＡＫ０４は、ＡＤＣＰ活性と一致して、マクロファージの存在下でのみ組織肥満細胞を低減させた（図９）。
【0302】
選択された抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体のエピトープも上に記載されている通りにマッピングした。図１０Ａに示す通り、ＡＫ０５は、Ｓｉｇｌｅｃ－６における次のアミノ酸：２９、３０、３４、３８、６３、６４、６８、７４、７６、９９、１００、１０３、１０４、１０６および１１４（配列番号１に示される通りＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤに従って番号付け）と相互作用することが決定された。図１０Ｂに示す通り、ＡＫ０４は、Ｓｉｇｌｅｃ－６における次のアミノ酸：２６、２９、３０、５２、６４、７４、７５、７９、９８、１００、１０４、１０６および１０７（配列番号１に示される通りＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤに従って番号付け）と相互作用することが決定された。図１０Ｃに示す通り、ＭＡＢ２８５９は、Ｓｉｇｌｅｃ－６における次のアミノ酸：１００、１０３、１０４、１０６、１０７、１０９、１１０および１１２（配列番号１に示される通りＳｉｇｌｅｃ－６ ＥＣＤに従って番号付け）と相互作用することが決定された。
【0303】
まとめると、これらの結果は、Ｓｉｇｌｅｃ－６におけるある範囲の特有のエピトープを網羅する高い親和性結合と、Ｓｉｇｌｅｃ－６表面発現および肥満細胞活性化／阻害のモジュレートに関する差次的な特性とを有する、新たな抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の生成を実証する。
【0304】
（実施例２）
Ｓｉｇｌｅｃ－６トランスジェニックマウスモデルにおける抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の特徴付け
ｉｎ ｖｉｖｏで肥満細胞活性化を試験するために、Ｓｉｇｌｅｃ－６トランスジェニックマウスに、ＰＢＳまたは５００ｎｇの組換えマウス幹細胞因子（ＳＣＦ）を腹腔内注射した。３時間後に、ＲＰＭＩによる洗浄によって腹膜腔内の細胞を採取した。抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（ＡＫ０４クローン）またはアイソタイプ適合対照ｍＡｂを、ＳＣＦ投与の１時間前に５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。
Ｓｉｇｌｅｃ－６トランスジェニックマウスモデルにおける抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の特徴付け
ｉｎ ｖｉｖｏで肥満細胞活性化を試験するために、Ｓｉｇｌｅｃ－６トランスジェニックマウスに、ＰＢＳまたは５００ｎｇの組換えマウス幹細胞因子（ＳＣＦ）を腹腔内注射した。３時間後に、ＲＰＭＩによる洗浄によって腹膜腔内の細胞を採取した。抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（ＡＫ０４クローン）またはアイソタイプ適合対照ｍＡｂを、ＳＣＦ投与の１時間前に５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。
【0305】
抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ処置は、このマウスモデルにおけるＫＩＴ（ＣＤ１１７）媒介性肥満細胞活性化を阻害することが見出された。Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体処置は、アイソタイプ対照よりも有意に低いＣＤ６３発現（図１１Ａ、左）、ならびに有意により低いサイトカインおよびケモカインレベル（例えば、ＩＬ－６、ＣＣＬ２、ＴＮＦおよびＣＸＣＬ１；図１１Ａ、中央および右ならびに図１１Ｂ）を導いた。これらのデータは、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体処置が、Ｓｉｇｌｅｃ－６トランスジェニックマウスにおけるＫＩＴおよびＩｇＥ媒介性肥満細胞活性化を阻害したことを実証する。
【0306】
さらなる実験に着手して、一次ＭＣにおけるＳｉｇｌｅｃ－６阻害をもたらすタンパク質相互作用およびシグナル伝達経路を調べ、アゴニストＳｉｇｌｅｃ－６モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の阻害の幅を評価した。Ｓｉｇｌｅｃ－６と活性化受容体およびシグナル伝達分子との相互作用を、一次ＭＣを使用して生化学的におよび共焦点顕微鏡により評価した。上に記載されているマウスＭＣにおいてＳｉｇｌｅｃ－６を発現するトランスジェニックマウスにおけるＳＣＦ媒介性炎症の急性モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏでアゴニスト抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂの活性を評価した。
【0307】
Ｓｉｇｌｅｃ－６は、ＭＣにおいてＫＩＴ／ＣＤ１１７と直接的に相互作用および共局在することが見出された（図１１Ｃ）。加えて、非受容体阻害性ホスファターゼＳｈｐ－１およびＳｈｐ－２は、リン酸化後にＳｉｇｌｅｃ－６ ＩＴＩＭと会合した（図１１Ｄ、右）。近位および遠位ＩＴＩＭの両方の変異が、Ｓｈｐホスファターゼのリン酸化およびリクルートメントを低減させた。重要なことに、Ｓｉｇｌｅｃ－６とアゴニストｍＡｂとの結合は、免疫調節性シナプスを指し示す、阻害性ホスファターゼおよびＫＩＴ／ＣＤ１１７を含有するマイクロクラスターを誘導した。Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂによる処置は、Ｓｉｇｌｅｃ－６トランスジェニックマウスにおけるＳＣＦ媒介性炎症およびＭＣ特異的プロテアーゼの放出を阻害した。これらの知見は、Ｓｉｇｌｅｃ－６によるＭＣ阻害の理解を広げ、炎症性疾患におけるＭＣを幅広く阻害するための魅力的な治療標的としての受容体に光を当てる（図１１Ｅ）。
【0308】
ハプテン誘導性の接触性皮膚炎のマウスモデルにおけるＳｉｇｌｅｃ－６抗体処置の効果も試験した。Ｓｉｇｌｅｃ－６トランスジェニックマウスを６日間にわたり０．５％ＤＮＦＢで感作し、続いて、１．０％ＤＮＦＢ局所的負荷を行った。ＤＮＦＢ負荷の２４時間前に、マウスに、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（ＡＫ０４クローン）またはアイソタイプ適合対照ｍＡｂを投薬した。ＤＮＦＢ局所的負荷の２４時間後に皮膚炎症を査定した。
【0309】
抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ処置は、このマウスモデルにおけるアレルギー性接触性皮膚炎を阻害することが見出された。Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体処置は、耳の腫脹（図１２Ａ、左）、耳組織における肥満細胞の計数（図１２Ｂ、左）および耳組織におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の計数（図１２Ｂ、右）によって測定される通り、アイソタイプ対照よりも有意に低い皮膚炎症を導いた。ｅｘ ｖｉｖｏで培養された耳組織におけるサイトカインレベルも査定した。ＩＬ－４（図１２Ａ、中央）およびＴＮＦ（図１２Ａ、右）のレベルもまた、アイソタイプ対照と比較して、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６処置群において有意により低かった。これらの結果は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体処置が、肥満細胞阻害を介して、この接触性皮膚炎モデルにおける皮膚炎症を低減させたことを実証する。
【0310】
（実施例３）
ヒト肺組織およびヒト化マウスにおける抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の特徴付け
ヒト肺組織由来の肥満細胞の活性化におけるＳｉｇｌｅｃ－６抗体の効果を検査した。ヒト肺組織（ｎ＝３）を、単一細胞となるまで酵素および機械的に消化した。単一細胞懸濁液を、無刺激でまたはアゴニスト抗ＦｃεＲＩ抗体（ＣＲＡ－１クローン、１０μｇ／ｍＬ）と共に、漸増濃度の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（クローンＡＫ０４）の存在下、３０分間３７℃でインキュベートした。インキュベーションに続いて、フローサイトメトリーを使用してＣＤ６３発現によって肥満細胞活性化を評価した。
ヒト肺組織およびヒト化マウスにおける抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の特徴付け
ヒト肺組織由来の肥満細胞の活性化におけるＳｉｇｌｅｃ－６抗体の効果を検査した。ヒト肺組織（ｎ＝３）を、単一細胞となるまで酵素および機械的に消化した。単一細胞懸濁液を、無刺激でまたはアゴニスト抗ＦｃεＲＩ抗体（ＣＲＡ－１クローン、１０μｇ／ｍＬ）と共に、漸増濃度の抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（クローンＡＫ０４）の存在下、３０分間３７℃でインキュベートした。インキュベーションに続いて、フローサイトメトリーを使用してＣＤ６３発現によって肥満細胞活性化を評価した。
【0311】
図１３に示す通り、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂは、ヒト組織肥満細胞のＩｇＥ媒介性活性化を強力に阻害した。
【0312】
次に、ヒト組織肥満細胞の低減における抗体Ｆｃ領域の重要性を、ヒト化マウスを使用してｉｎ ｖｉｖｏで試験した。ヒト化マウス（ＳＧＭ３－ＢＬＴ）に、１４日間にわたりアイソタイプ対照ｍＡｂ、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（クローンＡＫ０４）または等モル当量のＳｉｇｌｅｃ－６ Ｆ（ａｂ’）２（クローンＡＫ０４）を３日毎に投薬した（ｎ＝５～６匹のマウス／群）。１４日目に、マウスを解体し、フローサイトメトリーを使用して腹膜腔および肺における肥満細胞を解析した。
【0313】
図１４は、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂで処置されたマウスが、アイソタイプ対照処置マウスと比較して低減された肥満細胞数を示したことを示す。Ｓｉｇｌｅｃ－６ Ｆ（ａｂ’）２処置マウスは、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ処置マウスと比較して正常レベルの肥満細胞を示し、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂのＦｃ領域が、肥満細胞低減活性に必要とされることを示唆する。
【0314】
（実施例４）
ＩＬ－３３駆動急性皮膚炎症のマウスモデルにおける抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の特徴付け
急性皮膚炎症におけるＳｉｇｌｅｃ－６抗体の効果を検査した。ＩＬ－３３駆動モデルのマウスにおける急性皮膚炎症を誘導した（図１５Ａ）。マウスに、静脈内注射により１０ｍｇ／ｋｇ Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（クローンＡＫ０４）またはアイソタイプ対照を投与した。翌日、マウスは、皮内注射により左耳に２５０ｎｇ組換えマウスＩＬ－３３を、右耳にＰＢＳを（シャム）受けた。フローサイトメトリーによって２４時間後に耳における免疫細胞浸潤を定量化することにより、耳における局所炎症を測定した。
ＩＬ－３３駆動急性皮膚炎症のマウスモデルにおける抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の特徴付け
急性皮膚炎症におけるＳｉｇｌｅｃ－６抗体の効果を検査した。ＩＬ－３３駆動モデルのマウスにおける急性皮膚炎症を誘導した（図１５Ａ）。マウスに、静脈内注射により１０ｍｇ／ｋｇ Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（クローンＡＫ０４）またはアイソタイプ対照を投与した。翌日、マウスは、皮内注射により左耳に２５０ｎｇ組換えマウスＩＬ－３３を、右耳にＰＢＳを（シャム）受けた。フローサイトメトリーによって２４時間後に耳における免疫細胞浸潤を定量化することにより、耳における局所炎症を測定した。
【0315】
抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ処置は、ＩＬ－３３媒介性炎症を阻害し、肥満細胞（ＭＣ）数を低減させた（図１５Ｂ）。抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂを投薬されたマウスは、有意に低減された好中球（図１５Ｃ）および単球（図１５Ｄ）も示した。抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ処置は、ＩＬ－３３を受けた耳において特異的にＭＣ数を低減させたが、ＰＢＳ注射シャム対照耳においては低減させず、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ処置が、局所炎症の部位のみでＭＣ数を低減させたことを実証する。
【0316】
（実施例５）
Ｓｉｇｌｅｃ－６トランスジェニックマウスにおけるアレルギー性胃腸疾患のマウスモデルにおける抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の特徴付け
アレルギー性胃腸疾患におけるＳｉｇｌｅｃ－６抗体の効果を検査した。オボアルブミン（ＯＶＡ）ペプチド投与により、マウスモデルにおいてアレルギー性胃腸疾患を誘導した（図１６Ａ）。マウスを、皮下注射により１ｍｇの硫酸アルミニウムカリウムアジュバントの存在下、２週間置いて２回、１００μｇのＯＶＡで感作した。２８日目に、１週間に３回（１日置きに）仰臥位でマウスを保持し、最大５０ｍｇのＯＶＡを含有する２５０μＬの無菌食塩水を経口投与した。各胃内負荷前に、マウスは、胃内の抗原分解を限定する目的で、３～４時間食物を欠乏させた。マウスは、２８および３４日目に、１０ｍｇ／ｋｇの抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（ｍＩｇＧ１ Ｆｃを有するクローンＡＫ０４）またはアイソタイプ適合対照（ｍＩｇＧ１）ｍＡｂのいずれかの腹腔内（ＩＰ）注射を受けた。３９日目にマウスを解体した。フローサイトメトリーによって免疫細胞数および肥満細胞活性化を決定し、メソスケールディスカバリー（ＭＳＤ）を使用して血清中のメディエーターを定量化した。
Ｓｉｇｌｅｃ－６トランスジェニックマウスにおけるアレルギー性胃腸疾患のマウスモデルにおける抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体の特徴付け
アレルギー性胃腸疾患におけるＳｉｇｌｅｃ－６抗体の効果を検査した。オボアルブミン（ＯＶＡ）ペプチド投与により、マウスモデルにおいてアレルギー性胃腸疾患を誘導した（図１６Ａ）。マウスを、皮下注射により１ｍｇの硫酸アルミニウムカリウムアジュバントの存在下、２週間置いて２回、１００μｇのＯＶＡで感作した。２８日目に、１週間に３回（１日置きに）仰臥位でマウスを保持し、最大５０ｍｇのＯＶＡを含有する２５０μＬの無菌食塩水を経口投与した。各胃内負荷前に、マウスは、胃内の抗原分解を限定する目的で、３～４時間食物を欠乏させた。マウスは、２８および３４日目に、１０ｍｇ／ｋｇの抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（ｍＩｇＧ１ Ｆｃを有するクローンＡＫ０４）またはアイソタイプ適合対照（ｍＩｇＧ１）ｍＡｂのいずれかの腹腔内（ＩＰ）注射を受けた。３９日目にマウスを解体した。フローサイトメトリーによって免疫細胞数および肥満細胞活性化を決定し、メソスケールディスカバリー（ＭＳＤ）を使用して血清中のメディエーターを定量化した。
【0317】
ＯＶＡ感作され負荷されたマウスは、胃における増加した肥満細胞（ＭＣ）浸潤および脱顆粒、ならびに胃における増加した数の浸潤好酸球を示した。しかし、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ（ＡＫ０４）で処置されたマウスは、ＯＶＡ誘導性炎症のこれらの測定基準の有意な低減を実証した（図１６Ｂ）。ＡＫ０４処置は、サイトカインＩＬ－４およびＩＬ－１３ならびにケモカインＭＩＰ－２およびＣＣＬ４を含む、血清において測定される炎症性メディエーターの産生の低減も導いた（図１７）。まとめると、これらの結果は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂが、慢性抗原曝露によって引き起こされる胃腸炎症の尺度を有効に低減させることができることを指し示す。
【0318】
（実施例６）
抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体処置は、ＭＲＧＰＲＸ２アゴニストＬＬ３７によって媒介される皮膚炎症を低減させる
ＭＲＧＰＲＸ２アゴニストＬＬ３７モデルにおける皮膚炎症におけるＳｉｇｌｅｃ－６抗体（ＡＫ０４）の効果を検査した。ＭＲＧＰＲＸ２は、肥満細胞脱顆粒に関与するＭＡＳ関連ＧＰＲファミリーメンバーＸ２をコードし、ＬＬ３７は、ＭＲＧＰＲＸ２の多機能性抗菌ペプチドアゴニストである。
抗Ｓｉｇｌｅｃ－６抗体処置は、ＭＲＧＰＲＸ２アゴニストＬＬ３７によって媒介される皮膚炎症を低減させる
ＭＲＧＰＲＸ２アゴニストＬＬ３７モデルにおける皮膚炎症におけるＳｉｇｌｅｃ－６抗体（ＡＫ０４）の効果を検査した。ＭＲＧＰＲＸ２は、肥満細胞脱顆粒に関与するＭＡＳ関連ＧＰＲファミリーメンバーＸ２をコードし、ＬＬ３７は、ＭＲＧＰＲＸ２の多機能性抗菌ペプチドアゴニストである。
【0319】
アイソタイプ対照抗体と組み合わされたＬＬ３７処置は、皮膚炎症および病変の出現を導いた（図１８Ａ、「アイソタイプ」）が、ＰＢＳのみによる処置は、導かなかった（図１８Ａ、「ＰＢＳ」）。細胞計数は、病変性皮膚における好酸球および単球の増加を明らかにした（図１８Ｂ）が、非病変性皮膚において増加は明らかとならなかった（図１８Ｃ）。しかし、ＬＬ３７誘導性皮膚病変は、Ｓｉｇｌｅｃ－６ ｍＡｂ処置マウスにおいて出現が低減され（図１８Ａ、「Ｓｉｇｌｅｃ－６」）、ＭＣ、好酸球および単球数の付随する減少を伴った（図１８Ｂ）。
【図1A】
【図1B】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図4A】
【図4B】
【図5A】
【図5B】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図8A】
【図8B-C】
【図8D-F】
【図9】
【図10A】
【図10B】
【図10C】
【図11A】
【図11B】
【図11C】
【図11D】
【図11E】
【図12A】
【図12B】
【図13】
【図14】
【図15A】
【図15B】
【図15C-D】
【図16A】
【図16B】
【図17】
【図18A】
【図18B】
【図18C】
【配列表】
【国際調査報告】