特表 2024-534506 治療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-20

(54)【発明の名称】治療法

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/17 20150101AFI20240912BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240912BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240912BHJP

   A61K 35/545 20150101ALI20240912BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240912BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALN20240912BHJP

   C12N 5/10 20060101ALN20240912BHJP

【ＦＩ】

A61K35/17

A61P37/06

A61P29/00

A61K35/545

A61K48/00

C12N5/0783 ZNA

C12N5/10

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024517444

(86)(22)【出願日】2022-09-21

(85)【翻訳文提出日】2024-05-16

(86)【国際出願番号】 AU2022051136

(87)【国際公開番号】W WO2023044530

(87)【国際公開日】2023-03-30

(31)【優先権主張番号】2021903030

(32)【優先日】2021-09-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】501249191

【氏名又は名称】モナッシュ ユニバーシティ

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】オーイ，ジョシュア・ダニエル

(72)【発明者】

【氏名】エッゲンハイゼン，ピーター・ジェームズ

(72)【発明者】

【氏名】モラン，エリク

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA94X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4C084AA13

4C084NA06

4C084NA14

4C084ZB081

4C084ZB082

4C084ZB111

4C084ZB112

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087BB63

4C087CA04

4C087CA12

4C087NA06

4C087NA14

4C087ZB08

4C087ZB11

(57)【要約】

本発明は、Ｒｏ６０タンパク質、ＭＰＯタンパク質及びスミスタンパク質のうちの１つ以上に対する、異常な若しくは不適切な免疫応答により特徴付けられる、自己免疫疾患又は炎症性疾患を治療するための方法、並びに組成物に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

自己免疫疾患又は炎症性疾患を治療する方法であって、
自己免疫疾患又は炎症性疾患の治療を必要とする対象に、細胞表面において結合性タンパク質を発現する制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の集団を投与して、これにより、自己免疫疾患又は炎症性疾患を治療するステップを含み、
前記結合性タンパク質が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメインを含み、
前記Ｖαドメインが、配列番号１３に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１３に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
前記Ｖβドメインが、配列番号１６に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１６に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
前記自己免疫疾患又は炎症性疾患が、
・ Ｒｏ６０タンパク質；
・ ＭＰＯタンパク質；
・ Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質；
・ スミスタンパク質及びＲｏ６０タンパク質；
・ スミスタンパク質及びＭＰＯタンパク質又は
・ スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質
に対する異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、方法。

【請求項2】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、スミスタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、Ｒｏ６０タンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、スミスタンパク質に対する及びＲｏ６０タンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、ＭＰＯタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、Ｒｏ６０タンパク質に対する及びＭＰＯタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、スミスタンパク質に対する、Ｒｏ６０タンパク質に対する及びＭＰＯタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、請求項１に記載の方法。

【請求項8】

スミスタンパク質に対する、Ｒｏ６０タンパク質に対する及び／又はＭＰＯタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答が、スミスタンパク質に対する、Ｒｏ６０タンパク質に対する及び／又はＭＰＯタンパク質に対する自己抗体の形成を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、シェーグレン症候群、全身性硬化症、炎症性筋炎、炎症性リウマチ、自己免疫性血管炎及び顕微鏡的多発血管炎からなる群から選択される１つ以上の自己免疫疾患又は炎症性疾患である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、ＳＬＥ又はループス腎炎である、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、シェーグレン症候群、好ましくは、原発性シェーグレン症候群である、請求項９に記載の方法。

【請求項12】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、血管炎、好ましくは、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）である、請求項９に記載の方法。

【請求項13】

対象が、ＳＬＥ及びシェーグレン症候群、又はＳＬＥ及びＭＰＡ、又はシェーグレン症候群及びＭＰＡ、又はＳＬＥ、シェーグレン症候群及びＭＰＡの３つ全てのための治療を必要とする、請求項９に記載の方法。

【請求項14】

対象における全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）又はループス腎炎を治療する方法であって、
ＳＬＥ又はループス腎炎の治療を必要とする対象に、細胞表面において結合性タンパク質を発現するＴｒｅｇ細胞の集団を投与して、これにより、ＳＬＥ又はループス腎炎を治療するステップであって、
前記結合性タンパク質が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメインを含み、
前記Ｖαドメインが、配列番号１３に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１３に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
前記Ｖβドメインが、配列番号１６に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１６に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
前記ＳＬＥ又はループス腎炎は、
・ Ｒｏ６０タンパク質又は
・ スミスタンパク質及びＲｏ６０タンパク質
に対する異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、方法。

【請求項15】

対象におけるシェーグレン症候群を治療する方法であって、
シェーグレン症候群の治療を必要とする対象に、細胞表面において結合性タンパク質を発現するＴｒｅｇ細胞の集団を投与するステップであって、これにより、対象におけるシェーグレン症候群を治療するステップを含み、
前記結合性タンパク質が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメインを含み、
前記Ｖαドメインが、配列番号１３に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１３に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
前記Ｖβドメインが、配列番号１６に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１６に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含む、
方法。

【請求項16】

対象における自己免疫性血管炎、好ましくは、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）を治療する方法であって、
自己免疫性血管炎、好ましくは、顕微鏡的多発血管炎の治療を必要とする対象に、細胞表面において結合性タンパク質を発現するＴｒｅｇ細胞の集団を投与して、対象における自己免疫性血管炎、好ましくは、顕微鏡的多発血管炎を治療するステップであって、
前記結合性タンパク質が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメインを含み、
前記Ｖαドメインが、配列番号１３に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１３に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
前記Ｖβドメインが、配列番号１６に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１６に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含む、
方法。

【請求項17】

対象におけるシェーグレン症候群及び／又はＭＰＡを治療するステップもまた含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項18】

対象におけるＳＬＥ、ループス腎炎及び／又はＭＰＡを治療するステップもまた含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項19】

対象におけるＳＬＥ、ループス腎炎及び／又はシェーグレン症候群を治療するステップもまた含む、請求項１６に記載の方法。

【請求項20】

シェーグレン症候群又はＭＰＡが、対象におけるスミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質のうちの１つ以上に対する異常な免疫応答により特徴付けられる、請求項１５～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

異常な免疫応答が、対象におけるスミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質のうちの１つ以上に対する自己抗体の形成を含む、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

結合性タンパク質が、
配列番号１１に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１１に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ１を含むＶαドメイン；及び
配列番号１２に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１２に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ２を含むＶαドメイン；及び
配列番号１４に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１４に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ１を含むＶβドメイン；及び
配列番号１５に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１５に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％又は少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ２を含むＶβドメイン
を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン、並びに、配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン、並びに、配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項25】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン、並びに、配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含む、請求項２に記載の方法。

【請求項26】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン、並びに、配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含む、請求項３に記載の方法。

【請求項27】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン、並びに、配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含む、請求項４に記載の方法。

【請求項28】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン、並びに、配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含む、請求項５に記載の方法。

【請求項29】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン、並びに、配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含む、請求項６に記載の方法。

【請求項30】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン、並びに、配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含む、請求項７に記載の方法。

【請求項31】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン、並びに、配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含み、
スミスタンパク質に対する、Ｒｏ６０タンパク質に対する、及びＭＰＯタンパク質に対する異常な又は不適切な免疫応答が、スミスタンパク質に対する、Ｒｏ６０タンパク質に対する、及びＭＰＯタンパク質に対する自己抗体の形成を含む、請求項８に記載の方法。

【請求項32】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン、並びに、配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項33】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン、並びに、配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項34】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン、並びに、配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含む、請求項１６に記載の方法。

【請求項35】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン並びに配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含み、
シェーグレン症候群が、対象における、スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質のうちの１つ以上に対する異常な免疫応答により特徴付けられる、請求項１５に記載の方法。

【請求項36】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン、並びに、配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含み、
ＭＰＡが、対象における、スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質のうちの１つ以上に対する、異常な免疫応答により特徴付けられる、請求項１６に記載の方法。

【請求項37】

結合性タンパク質が、示されたＣＤＲ配列の外側に、１～１０アミノ酸の挿入、欠失、置換、付加又はこれらの組合せを伴う、配列番号２３に示すアミノ酸配列を含む、又はこれからなるＴＣＲα鎖を含む、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

結合性タンパク質が、示されたＣＤＲ配列の外側に、１～１０アミノ酸の挿入、欠失、置換、付加又はこれらの組合せを伴う、配列番号２４に示すアミノ酸配列を含む、又はこれからなるＴＣＲβ鎖を含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

結合性タンパク質が、配列番号２３に示すアミノ酸配列を含む、又は配列番号２３に示すアミノ酸配列からなるＴＣＲα鎖及び配列番号２４に示すアミノ酸配列を含む、又は配列番号２４に示すアミノ酸配列からなるＴＣＲβ鎖を含む、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

結合性タンパク質が、スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質又はＭＰＯタンパク質の断片と、ＨＬＡ－ＤＲ３分子又はＨＬＡ－ＤＲ４分子との複合体に結合することが可能である、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

結合性タンパク質が、スミスタンパク質の断片と、ＨＬＡ－ＤＲ３分子との複合体に結合することが可能であり、前記スミスタンパク質の断片が、ＳｍＤ１タンパク質の残基７８～９２若しくはＳｍＢ／Ｂ’タンパク質の残基７～２１（それぞれ、配列番号１及び３に示す）のアミノ酸配列、若しくは、前記アミノ酸と同等であるアミノ酸配列を含む、又はこれらからなる、請求項１～４０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

結合性タンパク質が、Ｒｏ６０タンパク質の断片と、ＨＬＡ－ＤＲ３分子との複合体に結合することが可能であり、Ｒｏ６０タンパク質の断片が、それぞれ、配列番号５及び６に示す、Ｒｏ６０の残基２２５～２３９若しくは残基３６９～３８３のアミノ酸配列、若しくは、前記アミノ酸配列と同等であるアミノ酸配列を含む、又はこれらからなる、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

結合性タンパク質が、ＭＰＯタンパク質の断片と、ＨＬＡ－ＤＲ４分子との複合体に結合することが可能であり、ＭＰＯタンパク質の断片が、それぞれ、配列番号８及び９に示す、ＭＰＯの残基４５３～４６７若しくは残基７２４～７３８のアミノ酸配列、若しくは、前記アミノ酸配列と同等であるアミノ酸配列を含む、又はこれらからなる、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

ＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖が、さらなる鎖間ジスルフィド結合の形成を可能とするシステイン残基を含むように修飾されている、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

ＴＣＲα鎖上のＴｈｒ４８における残基又はこれと同等である残基、及びＴＣＲβ鎖上のＳｅｒ５７における残基又はこれと同等である残基が、ＴＣＲ定常領域の間のさらなるジスルフィド結合の創出を容易とするように、システインにより置換されている、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

Ｔｒｅｇ細胞の集団が、治療を必要とする対象に由来する、請求項１～４５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

Ｔｒｅｇ細胞の集団が、幹細胞に由来し、任意選択的に、前記幹細胞が、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）又は胚性幹細胞である、請求項１～４６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項48】

Ｔｒｅｇ細胞の集団が、請求項１～４６のいずれか一項に規定された結合性タンパク質をコードする核酸が導入されたＴ細胞の混合集団に由来する、請求項１～４６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

対象における自己免疫疾患又は炎症性疾患を治療するための医薬の製造における、細胞表面において結合性タンパク質を発現する制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の集団の使用であって、
前記Ｔｒｅｇ細胞の表面における前記結合性タンパク質が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメインを含み、
前記Ｖαドメインが、配列番号１３に示すアミノ酸配列又は配列番号１３に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
前記Ｖβドメインが、配列番号１６に示すアミノ酸配列又は配列番号１６に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
前記自己免疫疾患又は炎症性疾患が、
・ Ｒｏ６０タンパク質；
・ ＭＰＯタンパク質；
・ Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質；
・ スミスタンパク質及びＲｏ６０タンパク質；
・ スミスタンパク質及びＭＰＯタンパク質又は
・ スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質
に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、使用。

【請求項50】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、スミスタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、請求項４９に記載の使用。

【請求項51】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、Ｒｏ６０タンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、請求項４９に記載の使用。

【請求項52】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、スミスタンパク質に対する及びＲｏ６０タンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、請求項４９に記載の使用。

【請求項53】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、ＭＰＯタンパク質に対する異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、請求項４９に記載の使用。

【請求項54】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、Ｒｏ６０タンパク質に対する及びＭＰＯタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、請求項４９に記載の使用。

【請求項55】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、スミスタンパク質に対する、Ｒｏ６０タンパク質に対する、及びＭＰＯタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、請求項４９に記載の使用。

【請求項56】

スミスタンパク質に対する、Ｒｏ６０タンパク質に対する、及び／又はＭＰＯタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答が、スミスタンパク質に対する、Ｒｏ６０タンパク質に対する及び／又はＭＰＯタンパク質に対する、自己抗体の形成を含む、請求項４９～５５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項57】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、シェーグレン症候群、全身性硬化症、炎症性筋炎、炎症性リウマチ、自己免疫性血管炎及び顕微鏡的多発血管炎からなる群から選択される１つ以上の自己免疫疾患又は炎症性疾患である、請求項４９～５６のいずれか一項に記載の使用。

【請求項58】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、ＳＬＥ又はループス腎炎である、請求項５７に記載の使用。

【請求項59】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、シェーグレン症候群、好ましくは、原発性シェーグレン症候群である、請求項５７に記載の使用。

【請求項60】

自己免疫疾患又は炎症性疾患が、血管炎、好ましくは、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）である、請求項５７に記載の使用。

【請求項61】

対象が、ＳＬＥ及びシェーグレン症候群又はＳＬＥ及びＭＰＡ又はシェーグレン症候群及びＭＰＡ又はＳＬＥ、シェーグレン症候群及びＭＰＡの３つ全てのための治療を必要とする、請求項５７に記載の使用。

【請求項62】

対象における全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）又はループス腎炎を治療するための医薬の製造における、細胞表面において結合性タンパク質を発現するＴｒｅｇ細胞の集団の使用であって、
前記Ｔｒｅｇ細胞の表面における前記結合性タンパク質が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメインを含み、
前記Ｖαドメインが、配列番号１３に示すアミノ酸配列又はこれと、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％又は少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
前記Ｖβドメインが、配列番号１６に示すアミノ酸配列又はこれと、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％又は少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
前記ＳＬＥ又はループス腎炎が、
・ Ｒｏ６０タンパク質又は
・ スミスタンパク質及びＲｏ６０タンパク質
に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、使用。

【請求項63】

対象におけるシェーグレン症候群を治療するための医薬の製造における、細胞表面において結合性タンパク質を発現するＴｒｅｇ細胞の集団の使用であって、
前記Ｔ細胞の表面における前記結合性タンパク質が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメインを含み、
前記Ｖαドメインが、配列番号１３に示すアミノ酸配列又はこれと、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％又は少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み；
前記Ｖβドメインが、配列番号１６に示すアミノ酸配列又はこれと、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％又は少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含む、
使用。

【請求項64】

対象における自己免疫性血管炎、好ましくは、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）を治療するための医薬の製造における、細胞表面において結合性タンパク質を発現するＴｒｅｇ細胞の集団の使用であって、
前記Ｔｒｅｇ細胞の表面における前記結合性タンパク質が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメインを含み、
前記Ｖαドメインが、配列番号１３に示すアミノ酸配列又はこれと、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％又は少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み；
前記Ｖβドメインが、配列番号１６に示すアミノ酸配列又はこれと、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％又は少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含む、
使用。

【請求項65】

医薬がまた、対象におけるシェーグレン症候群及び／又はＭＰＡを治療するための医薬でもある、請求項６２に記載の使用。

【請求項66】

医薬がまた、対象におけるＳＬＥ、ループス腎炎及び／又はＭＰＡを治療するための医薬でもある、請求項６３に記載の使用。

【請求項67】

医薬がまた、対象におけるＳＬＥ、ループス腎炎及び／又はシェーグレン症候群を治療するための医薬でもある、請求項６４に記載の使用。

【請求項68】

シェーグレン症候群又はＭＰＡが、対象における、スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質のうちの１つ以上に対する、異常な免疫応答により特徴付けられる、請求項６３～６７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項69】

異常な免疫応答が、対象における、スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質のうちの１つ以上に対する自己抗体の形成を含む、請求項６８に記載の使用。

【請求項70】

結合性タンパク質が、
配列番号１１に示すアミノ酸配列、又は配列番号１１に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％又は少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ１を含むＶαドメイン；及び
配列番号１２に示すアミノ酸配列、又は配列番号１２に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％又は少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ２を含むＶαドメイン；及び
配列番号１４に示すアミノ酸配列、又は配列番号１４に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％又は少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ１を含むＶβドメイン；及び
配列番号１５に示すアミノ酸配列、又は配列番号１５に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも９７％、少なくとも約９８％又は少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ２を含むＶβドメイン
を含む、請求項４９～６９のいずれか一項に記載の使用。

【請求項71】

結合性タンパク質が、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン並びに配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含む、請求項４９～７０のいずれか一項に記載の使用。

【請求項72】

結合性タンパク質が、示されたＣＤＲ配列の外側に、１～１０アミノ酸の挿入、欠失、置換、付加又はこれらの組合せを伴う、配列番号２３に示すアミノ酸配列を含む、又はこれからなるＴＣＲα鎖を含む、請求項４９～７１のいずれか一項に記載の使用。

【請求項73】

結合性タンパク質が、示されたＣＤＲ配列の外側に、１～１０アミノ酸の挿入、欠失、置換、付加又はこれらの組合せを伴う、配列番号２４に示すアミノ酸配列を含む、又はこれからなるＴＣＲβ鎖を含む、請求項４９～７２のいずれか一項に記載の使用。

【請求項74】

結合性タンパク質が、配列番号２３に示すアミノ酸配列を含む、又は配列番号２３に示すアミノ酸配列からなるＴＣＲα鎖、及び配列番号２４に示すアミノ酸配列を含む、又は配列番号２４に示すアミノ酸配列からなるＴＣＲβ鎖を含む、請求項４９～７３のいずれか一項に記載の使用。

【請求項75】

結合性タンパク質が、スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質又はＭＰＯタンパク質の断片と、ＨＬＡ－ＤＲ３分子との複合体に結合することが可能である、請求項４９～７４のいずれか一項に記載の使用。

【請求項76】

結合性タンパク質が、スミスタンパク質の断片と、ＨＬＡ－ＤＲ３分子との複合体に結合することが可能であり、スミスタンパク質の断片が、ＳｍＤ１タンパク質の残基７８～９２又はＳｍＢ／Ｂ’タンパク質の残基７～２１（それぞれ、配列番号１及び３に示す）のアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列と同等であるアミノ酸配列を含む、又はこれらかなる、請求項４９～７５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項77】

結合性タンパク質が、Ｒｏ６０タンパク質の断片と、ＨＬＡ－ＤＲ３分子との複合体に結合することが可能であり、Ｒｏ６０タンパク質の断片が、それぞれ、配列番号５及び６に示す、Ｒｏ６０の残基２２５～２３９又は残基３６９～３８３のアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列と同等であるアミノ酸配列を含む、又はこれらかなる、請求項４９～７６のいずれか一項に記載の使用。

【請求項78】

結合性タンパク質が、ＭＰＯタンパク質の断片と、ＨＬＡ－ＤＲ４分子との複合体に結合することが可能であり、ＭＰＯタンパク質の断片が、それぞれ、配列番号８及び９に示す、ＭＰＯの残基４５３～４６７又は残基７２４～７３８のアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列と同等であるアミノ酸配列を含む、又はこれらかなる、請求項４９～７７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項79】

Ｔｒｅｇ細胞の集団が、治療を必要とする対象に由来する、請求項４９～７８のいずれか一項に記載の使用。

【請求項80】

Ｔｒｅｇ細胞の集団が、幹細胞に由来し、任意選択的に、前記幹細胞が、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）又は胚性幹細胞である、請求項４９～７８のいずれか一項に記載の使用。

【請求項81】

Ｔｒｅｇ細胞の集団が、請求項１～４５のいずれか一項に規定される結合性タンパク質をコードする核酸が導入されたＴ細胞の混合集団に由来する、請求項４９～７９のいずれか一項に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、自己免疫疾患又は炎症性疾患、特に、スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質のうちの１つ以上に対する、不適切な又は異常な免疫応答により特徴付けられる自己免疫疾患の治療のための組成物、並びに方法に関する。

【0002】

本出願は、その内容の全体が、参照により本明細書に組み込まれた、豪州特許仮出願第２０２１９０３０３０号に対する優先権を主張する。

【背景技術】

【0003】

自己免疫疾患は、健常な細胞、組織及び臓器に対する、異常な免疫応答から生じる。ヒトにおいて、８０を超える自己免疫疾患が認知されており、米国単独において、のべ２４００万人を超える個体が、これらの疾患に罹患している。

【0004】

一部の症例において、個体は、１つを超える自己免疫疾患を有する場合があり、単一の「自己抗原」に対する自己抗体が、１つを超える状態と関連しうる。代替的に、個体は、明らかな共通自己抗原又は自己免疫の原因が存在しない、複数の自己免疫疾患を呈しうる。

【0005】

自己免疫疾患に対する重要な調査研究にもかかわらず、有効なターゲティング療法は欠如している。コルチコステロイド剤、メトトレキサート、ヒドロキシクロロキン、他の免疫抑制剤（例えば、少数を挙げれば、シクロスポリン、レフルナミド、アザチオプリン）及び非ステロイド系抗炎症薬など、現行の治療は、障害と関連する特異的自己免疫を、正確に阻害するのではなく、免疫系の活性化を、非特異的に阻害する。

【0006】

多くの患者が、上記において列挙された標準医療に対して応答しないか、又は応答が部分的にとどまる一方、高用量のコルチコステロイド剤及び細胞傷害性療法の、長期にわたる使用は、骨髄抑制、日和見菌による感染症の増大、不可逆的卵巣不全、禿頭及び悪性腫瘍の危険性の増大など、深刻な副作用をもたらしうる。活動性自己免疫疾患及び免疫抑制性医薬によるその治療と同時に発生する感染性合併症は、自己免疫疾患を伴う患者における、最も一般的な死因のうちの１つである。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

自己免疫疾患のための、新たな治療又は改善された治療、特に、疾患関連自己抗原をターゲティングする治療が必要とされている。

【0008】

本明細書における、任意の先行技術への言及は、この先行技術が、任意の法的権限における、共通の一般的知見の一部を形成する、又はこの先行技術が、当業者により、関連すると理解され、関連すると考えられること、かつ／若しくは先行技術の他の断片と組み合わされることが妥当に予測されうることの承認又は示唆ではない。

【課題を解決するための手段】

【0009】

（発明の要旨）
本発明は、本発明者らによる、複数の自己エピトープに結合することが可能であり、多様な自己免疫疾患を治療するために有用である無差別型自己エピトープ特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）についての、驚くべき発見に基づく。

【0010】

したがって、第１の態様において、本発明は、自己免疫疾患又は炎症性疾患を治療する方法であって、
・ 自己免疫疾患又は炎症性疾患の治療を必要とする対象に、細胞表面において結合性タンパク質を発現する制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の集団を投与して、これにより、自己免疫疾患又は炎症性疾患を治療するステップを含み、
上記結合性タンパク質が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメインを含み、
上記Ｖαドメインが、配列番号１３に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１３に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
上記Ｖβドメインが、配列番号１６に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１６に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
上記自己免疫疾患又は炎症性疾患が、
Ｒｏ６０タンパク質；ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）タンパク質；Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質；スミスタンパク質及びＲｏ６０タンパク質；スミスタンパク質及びＭＰＯタンパク質；又はスミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、
方法を提供する。

【0011】

本発明の第１の態様の、ある実施形態において、自己免疫疾患又は炎症性疾患を治療するための医薬の製造における、上記において記載されたＴｒｅｇ細胞の集団の使用であって、好ましくは、自己免疫疾患又は炎症性疾患が、Ｒｏ６０タンパク質；ＭＰＯタンパク質；Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質；スミスタンパク質及びＲｏ６０タンパク質；スミスタンパク質及びＭＰＯタンパク質；又はスミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、使用もまた提供される。

【0012】

本発明の第１の態様の、さらなる実施形態において、自己免疫疾患又は炎症性疾患の治療における使用のための、上記において記載されたＴｒｅｇ細胞の集団であって、好ましくは、自己免疫疾患又は炎症性疾患が、Ｒｏ６０タンパク質；ＭＰＯタンパク質；Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質；スミスタンパク質及びＲｏ６０タンパク質；スミスタンパク質及びＭＰＯタンパク質；又はスミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、Ｔｒｅｇ細胞の集団が提供される。

【0013】

任意の実施形態において、自己免疫疾患又は炎症性疾患は、スミスタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられうる。

【0014】

任意の実施形態において、自己免疫疾患又は炎症性疾患は、Ｒｏ６０タンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられうる。

【0015】

任意の実施形態において、自己免疫疾患又は炎症性疾患は、スミスタンパク質に対する及びＲｏ６０タンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられうる。

【0016】

任意の実施形態において、自己免疫疾患又は炎症性疾患は、ＭＰＯタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられうる。

【0017】

任意の実施形態において、自己免疫疾患又は炎症性疾患は、Ｒｏ６０タンパク質に対する及びＭＰＯタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられうる。

【0018】

任意の実施形態において、自己免疫疾患又は炎症性疾患は、スミスタンパク質に対する、Ｒｏ６０タンパク質に対する及びＭＰＯタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられうる。

【0019】

任意の実施形態において、スミスタンパク質に対する、Ｒｏ６０タンパク質に対する及び／又はＭＰＯタンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答は、スミスタンパク質に対する、Ｒｏ６０タンパク質に対する及び／又はＭＰＯタンパク質に対する、自己抗体の形成を含む。

【0020】

本明細書において、ＭＰＯタンパク質に対する自己抗体はまた、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）、とりわけ、抗ＭＰＯ ＡＮＣＡとも称される。

【0021】

任意の実施形態において、自己免疫疾患又は炎症性疾患は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ループス腎炎、シェーグレン症候群、全身性硬化症、炎症性筋炎、炎症性リウマチ、自己免疫性血管炎及び顕微鏡的多発血管炎からなる群から選択される１つ以上の自己免疫疾患又は炎症性疾患である。好ましくは、自己免疫疾患又は炎症性疾患は、ＳＬＥ又はループス腎炎でありうる。代替的に、自己免疫疾患又は炎症性疾患は、シェーグレン症候群、好ましくは、原発性シェーグレン症候群でありうる。なおさらに、自己免疫疾患又は炎症性疾患は、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）でありうる。

【0022】

任意の実施形態において、治療を必要とする対象は、ＳＬＥ及びシェーグレン症候群、又はＳＬＥ及びＭＰＡ、又はシェーグレン症候群及びＭＰＡ、又はＳＬＥ、シェーグレン症候群及びＭＰＡの３つ全てのための治療を必要としうる。

【0023】

第２の態様において、対象における全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）又はループス腎炎を治療する方法であって、
ＳＬＥ又はループス腎炎の治療を必要とする対象に、細胞表面において結合性タンパク質を発現するＴｒｅｇ細胞の集団を投与して、これにより、ＳＬＥ又はループス腎炎を治療するステップであって、
上記結合性タンパク質が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメインを含み、
上記Ｖαドメインが、配列番号１３に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１３に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
上記Ｖβドメインが、配列番号１６に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１６に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
上記ＳＬＥ又はループス腎炎は、
Ｒｏ６０タンパク質；又はスミスタンパク質及びＲｏ６０タンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、
方法が提供される。好ましくは、方法はまた、対象におけるシェーグレン症候群及び／又はＭＰＡを治療するステップも含む。

【0024】

本発明の第２の態様の、ある実施形態において、対象におけるＳＬＥ又はループス腎炎を治療するための医薬の製造における、上記において記載されたＴｒｅｇ細胞の集団の使用であって、好ましくは、ＳＬＥ又はループス腎炎が、Ｒｏ６０タンパク質；又はスミスタンパク質及びＲｏ６０タンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、使用もまた提供される。好ましくは、医薬はまた、対象におけるシェーグレン症候群及び／又はＭＰＡを治療するための医薬でもある。

【0025】

本発明の第２の態様の、さらなる実施形態において、ＳＬＥ又はループス腎炎の治療における使用のための、上記において記載されたＴｒｅｇ細胞の集団であって、好ましくは、ＳＬＥ又はループス腎炎が、Ｒｏ６０タンパク質；又はスミスタンパク質及びＲｏ６０タンパク質に対する、異常な又は不適切な免疫応答により特徴付けられる、Ｔｒｅｇ細胞の集団が提供される。好ましくは、使用はまた、対象におけるシェーグレン症候群及び／又はＭＰＡを治療するステップも含む。

【0026】

さらなる第３の態様において、対象におけるシェーグレン症候群を治療する方法であって、
・ シェーグレン症候群の治療を必要とする対象に、細胞表面において結合性タンパク質を発現するＴｒｅｇ細胞の集団を投与するステップであって、これにより、対象におけるシェーグレン症候群を治療するステップを含み、
上記結合性タンパク質が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメインを含み、
上記Ｖαドメインが、配列番号１３に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１３に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み、
上記Ｖβドメインが、配列番号１６に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１６に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含む、
方法が提供される。好ましくは、方法はまた、対象におけるＳＬＥ、ループス腎炎及び／又は自己免疫性血管炎（好ましくは、ＭＰＡ）を治療するステップも含みうる。

【0027】

本発明の第３の態様の、ある実施形態において、対象におけるシェーグレン症候群を治療するための医薬の製造における、上記において記載されたＴｒｅｇ細胞の集団の使用もまた提供される。好ましくは、医薬はまた、対象におけるＳＬＥ、ループス腎炎及び／又はＭＰＡを治療するための医薬でもある。

【0028】

本発明の第３の態様の、さらなる実施形態において、対象における、シェーグレン症候群の治療における使用のための、上記において記載されたＴｒｅｇ細胞の集団が提供される。好ましくは、使用はまた、対象におけるＳＬＥ、ループス腎炎及び／又はＭＰＡを治療するステップも含む。

【0029】

第４の態様において、対象における自己免疫性血管炎を治療する方法であって、
・ 自己免疫性血管炎の治療を必要とする対象に、細胞表面において結合性タンパク質を発現するＴｒｅｇ細胞の集団を投与して、対象における自己免疫性血管炎を治療するステップであって、
上記結合性タンパク質が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメインを含み、
上記Ｖαドメインが、配列番号１３に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１３に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含み；
上記Ｖβドメインが、配列番号１６に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１６に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ３を含む、
方法が提供される。好ましくは、血管炎は、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）；多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）又は好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（ＥＧＰＡ）、最も好ましくは、ＭＰＡである。方法はまた、対象におけるＳＬＥ、ループス腎炎及び／又はシェーグレン症候群を治療するステップも含みうる。

【0030】

本発明の第４の態様の、ある実施形態において、対象における顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）を治療するための医薬の製造における、上記において記載されたＴｒｅｇ細胞の集団の使用もまた提供される。好ましくは、医薬はまた、対象におけるＳＬＥ、ループス腎炎及び／又はシェーグレン症候群を治療するための医薬でもある。

【0031】

本発明の第４の態様の、さらなる実施形態において、対象における、ＭＰＡの治療における使用のための、上記において記載されたＴｒｅｇ細胞の集団が提供される。好ましくは、使用はまた、対象におけるＳＬＥ、ループス腎炎及び／又はシェーグレン症候群を治療するステップも含む。

【0032】

本発明の任意の態様において、シェーグレン症候群又はＭＰＡは、対象における、スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質のうちの１つ以上に対する、異常な免疫応答により特徴付けられる。

【0033】

本発明の任意の態様において、異常な免疫応答は、対象における、スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質のうちの１つ以上に対する自己抗体の形成を含む。

【0034】

本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、結合性タンパク質は、好ましくは、
配列番号１３に示すアミノ酸配列又は配列番号１３の配列と比較して、１つ以下、２つ以下若しくは３つ以下、４つ以下、５つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有するＣＤＲ３を含むＶαドメイン；及び
配列番号１６に示すアミノ酸配列又は配列番号１６の配列と比較して、１つ以下、２つ以下若しくは３つ以下、４つ以下、５つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有するＣＤＲ３を含むＶβドメインを含む。

【0035】

本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、結合性タンパク質は、好ましくは、
配列番号１１に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１１に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ１を含むＶαドメイン；及び
配列番号１２に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１２に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ２を含むＶαドメイン；及び
配列番号１４に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１４に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ１を含むＶβドメイン；及び
配列番号１５に示すアミノ酸配列、又は、配列番号１５に示すアミノ酸配列に少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％若しくは少なくとも約９９％同一である配列を有するＣＤＲ２を含むＶβドメインを含む。

【0036】

本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、結合性タンパク質は、好ましくは、
配列番号１１に示すアミノ酸配列又は配列番号１１の配列と比較して、１つ以下、２つ以下若しくは３つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有するＣＤＲ１を含むＶαドメイン；
配列番号１２に示すアミノ酸配列又は配列番号１２の配列と比較して、１つ以下、２つ以下若しくは３つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有するＣＤＲ２を含むＶαドメイン；
配列番号１４に示すアミノ酸配列又は配列番号１４の配列と比較して、１つ以下、２つ以下若しくは３つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有するＣＤＲ１を含むＶβドメイン；及び／又は
配列番号１５に示すアミノ酸配列又は配列番号１５の配列と比較して、１つ以下、２つ以下若しくは３つ以下のアミノ酸置換を有する配列を有するＣＤＲ２を含むＶβドメインを含む。

【0037】

本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、結合性タンパク質は、配列番号１１、１２及び１３に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶαドメイン、並びに、配列番号１４、１５及び１６に示すアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を有するＶβドメインを含みうる。

【0038】

上記において記載された、本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、ＣＤＲは、ＩＭＧＴ法に従い決定される。

【0039】

本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、結合性タンパク質は、示されるＣＤＲ配列の外側に、少なくとも１アミノ酸、少なくとも２アミノ酸、少なくとも３アミノ酸、少なくとも４アミノ酸、少なくとも５アミノ酸、少なくとも６アミノ酸であり、かつ、約１０アミノ酸以下である、挿入、欠失、置換、付加又はこれらの組合せを伴う、配列番号２３に示すアミノ酸配列を含む、又はこれからなるＴＣＲα鎖を含みうる。

【0040】

本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、結合性タンパク質は、示されるＣＤＲ配列の外側に、少なくとも１アミノ酸、少なくとも２アミノ酸、少なくとも３アミノ酸、少なくとも４アミノ酸、少なくとも５アミノ酸、少なくとも６アミノ酸であり、かつ、約１０アミノ酸以下である、挿入、欠失、置換、付加又はこれらの組合せを伴う、配列番号２４に示すアミノ酸配列を含む、又はこれからなるＴＣＲβ鎖を含みうる。

【0041】

本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、結合性タンパク質は、配列番号２３に示すアミノ酸配列を含む、又は配列番号２３に示すアミノ酸配列からなるＴＣＲα鎖及び配列番号２４に示すアミノ酸配列を含む、又は配列番号２４に示すアミノ酸配列からなるＴＣＲβ鎖を含みうる。

【0042】

本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、スミスタンパク質は、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ又は本明細書において記載された他の任意のスミスタンパク質でありうる。したがって、任意の態様において、結合性タンパク質は、ＳｍＢ／Ｂ’及び／又はＳｍＤに結合することが可能である。一実施形態において、結合性タンパク質は、ＳｍＤ１タンパク質の残基７８～９２若しくはＳｍＢ／Ｂ’タンパク質の残基７～２１（それぞれ、配列番号１及び３に示す）のアミノ酸配列若しくはこれと同等であるアミノ酸配列を含む、又はこれらからなる、スミスタンパク質の断片に結合することが可能である。

【0043】

本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、結合性タンパク質は、スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質又はＭＰＯタンパク質の断片と、ＨＬＡ－ＤＲ３分子及び／又はＨＬＡ－ＤＲ４．５分子との複合体に結合することが可能である。好ましくは、結合性タンパク質は、ＳｍＤ１タンパク質の残基７８～９２若しくはＳｍＢ／Ｂ’タンパク質の残基７～２１（それぞれ、配列番号１及び３に示す）のアミノ酸配列、若しくは、上記アミノ酸と同等であるアミノ酸配列を含む、又はこれらからなる、スミスタンパク質の断片に結合することが可能である。

【0044】

本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、結合性タンパク質は、Ｒｏ６０タンパク質の断片と、ＨＬＡ－ＤＲ３分子との複合体に結合することが可能であり、Ｒｏ６０タンパク質の断片は、それぞれ、配列番号５及び６に示す、Ｒｏ６０の残基２２５～２３９若しくは残基３６９～３８３のアミノ酸配列、若しくは、上記アミノ酸配列と同等であるアミノ酸配列を含む、又はこれらからなる。

【0045】

本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、結合性タンパク質は、ＭＰＯタンパク質の断片と、ＨＬＡ－ＤＲ３分子及び／又はＨＬＡ－ＤＲ４．５分子との複合体に結合することが可能であり、ＭＰＯタンパク質の断片は、それぞれ、配列番号８及び９に示す、ＭＰＯの残基４５３～４６７若しくは残基７２４～７３８のアミノ酸配列、若しくは、上記アミノ酸配列と同等であるアミノ酸配列を含む、又はこれらからなる。

【0046】

本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、結合性タンパク質のＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖は、さらなる鎖間ジスルフィド結合の形成を可能とするシステイン残基を含むように修飾されている。好ましくは、ＴＣＲα鎖上のＴｈｒ４８における残基又はこれと同等な残基、及びＴＣＲβ鎖上のＳｅｒ５７における残基又はこれと同等な残基は、ＴＣＲの定常領域の間における、さらなるジスルフィド結合の創出を容易とするように、システインにより置換される。

【0047】

本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、Ｔｒｅｇ細胞の集団は、治療を必要とする対象に由来する場合もあり、組織適合性ドナーに由来する場合もある。代替的に、Ｔｒｅｇ細胞の集団は、幹細胞に由来する場合があり、任意選択的に、この場合、上記幹細胞は、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）又は胚性幹細胞である。任意の態様において、Ｔｒｅｇ細胞の集団は、本明細書において規定された結合性タンパク質をコードする核酸が導入されたＴ細胞の混合集団に由来しうる。

【0048】

本発明の任意の方法、使用又は使用のための組成物において、Ｔｒｅｇの集団は、
・ 通常型Ｔ細胞の、少なくとも１つの特性を呈するＴ細胞の集団を用意し、任意選択的に、Ｔ細胞の集団が、Ｔ細胞の混合集団であること；
・ 本発明の核酸又はベクターを、Ｔ細胞の集団へと導入し、核酸又はベクターが、本明細書において記載された結合性タンパク質をコードすること；
・ Ｔ細胞の表面における、結合性タンパク質の発現を可能とする条件をもたらすこと；
・ Ｔ細胞の集団の、制御性Ｔ細胞への転換を可能とする条件をもたらすこと；
これらにより、制御性Ｔ細胞の少なくとも１つの特性を呈するＴ細胞であって、タンパク質である、Ｓｍ／Ｂ’、ＳｍＤ、Ｒｏ６０又はＭＰＯのうちの１つ以上に特異的であるＴ細胞の集団を、エクスビボにおいて調製すること
により得られうる。

【0049】

別の態様では、本発明は、本明細書において記載された自己免疫疾患の治療における使用のための制御性Ｔ細胞の集団を調製する方法であって、
・ 制御性Ｔ細胞の集団を用意するステップ；
・ 本明細書において記載されたＴＣＲをコードする核酸又はベクターを、制御性Ｔ細胞の集団へと導入するステップ；
・ 制御性Ｔ細胞の表面における、ＴＣＲの発現を可能とする条件をもたらすステップ
を含み、
これにより、本明細書において記載された自己免疫疾患の治療における使用のための制御性Ｔ細胞の集団を調製する
方法を提供する。

【0050】

文脈が、そうでないことを必要としない限りにおいて、本明細書において使用された、「～を含む」という用語並びに「～を含むこと」、「～を含む」及び「含まれた」など、この用語の変化形は、さらなる添加物、成分、整数又はステップを除外することが意図されない。

【0051】

本発明のさらなる態様及び先行する段落に記載された態様についてのさらなる実施形態は、例を目的として、付属の図面を参照しながら与えられる、以下の記載から明らかとなる。

【図面の簡単な説明】

【0052】

【図1】無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲによる優勢な反応性。健常ヒトに由来するＴ細胞を、６つの異なる自己ペプチドによりパルスされた単球由来樹状細胞（ＤＣ）と共に共培養した。各グラフは、ペプチド１つ当たりの反応性クローンの数を示す。無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲ配列だけが、全てのペプチド刺激にわたり、クローン拡大されることが見出されることに留意されたい。クローン拡大された、他のＴＣＲ配列に関して述べると、いずれのＴＣＲ配列も、他のペプチドと交差反応しない、例えば、ＳｍＤ１：７８－９２と反応する、他のＴＣＲ配列は、ＳｍＢ／Ｂ’：７－２１、Ｒｏ６０：２２５－２３９、Ｒｏ６０：３６９－３８３、ＭＰＯ：４５３－４６７又はＭＰＯ：７２４－７３８と反応しない。黒色バー＝無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲ配列。白色バー＝他のＴＣＲ配列。

【図2】シェーグレン症候群についての、新たなヒト化モデルにおける、疾患進行の停止における、Ｒｏ６０－Ｔｒｅｇの有効性を裏付ける実験プロトコール。

【図3】抗原特異的ＴＣＲの活性化と関連する上方制御されたＴｒｅｇ遺伝子。ＴＣＲの活性化と関連して上方制御された遺伝子は、ＦＯＸＰ３、ＣＴＬＡ４、ＩＬ１Ｒ２、ＣＣＲ１０、ＴＩＧＩＴ、ＩＫＺＦ２、ＩＴＧＡＭ、ＬＧＡＬＳ１、ＬＧＡＬＳ３、ＰＩ１６、ＩＬ２ＲＡであった。Ｔｒｅｇの活性化と関連して下方制御された遺伝子は、ＩＬ１３、ＩＦＮＧ、ＩＬ７Ｒであった。これらのデータは、各エピトープが、無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲエンゲージメント及びＴｒｅｇの活性化を誘導しうることを裏付ける。黒ドット：上方制御された遺伝子；グレードット／影を付したドット：下方制御された遺伝子。

【図4】ヒトＴｒｅｇ上における、無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲの発現。形質導入プロトコールは、ヒトＴｒｅｇの表面上における、無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲの発現の成功を可能とする。Ａ＝モックを形質導入されたヒトＴｒｅｇ；Ｂ＝無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを形質導入されたＴｒｅｇ。染色は、ＧＦＰの発現及びＶβ１４ＴＣＲの発現についての染色である。

【図5】無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲ Ｔｒｅｇが、ペプチド－ＨＬＡ デキストラマー（Ｄｅｘｔｒａｍｅｒ）に結合する。無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを形質導入されたＴｒｅｇは、ＳｍＤ１：７８－２１／ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０３：０１ デキストラマー、Ｒｏ６０：３６９－３８３／ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０３：０１ デキストラマー及びＭＰＯ：４５３－５６７／ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０４：０５ デキストラマーへの結合を呈する。黒四角＝無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを形質導入されたＴｒｅｇ。白四角＝モックを形質導入されたＴｒｅｇ。

【図6】無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲ Ｔｒｅｇが、ペプチド刺激の後に活性化される。ＳｍＤ１：７８－９２、Ｒｏ６０：３６９－３８３及びＭＰＯ：４５３－４６７による刺激は、無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを形質導入されたＴｒｅｇの活性化を、ペプチド刺激なしと比較して誘導した。黒四角＝無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを形質導入されたＴｒｅｇ。白四角＝モックを形質導入されたＴｒｅｇ。

【図7】無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲ Ｔｒｅｇが、ペプチド特異的Ｔｃｏｎｖ細胞の増殖を抑制する。無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを形質導入されたＴｒｅｇは、３つの自己エピトープ全てにわたり、Ｔｃｏｎｖ細胞の増殖の、より強力な抑制を裏付けた。黒四角＝無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを形質導入されたＴｒｅｇ。白四角＝モックを形質導入されたＴｒｅｇ。

【図8】無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲが、Ｓｍペプチドにエンゲージする。Ｂリンパ芽球様細胞株（Ｂ－ＬＣＬ）を、Ｓｍエピトープによりパルスしたところ、免疫シナプスにおける、ＣＤ３及びファロイジンの平均値ピクセル強度が増大した。これらのデータは、無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲが、いずれのＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０３：０１拘束Ｓｍエピトープにもエンゲージしうることを指し示す。矢印は、免疫シナプス；ＢＦ＝明視野；ＭＰＩ＝平均値ピクセル強度を指し示す。

【0053】

配列情報

【0054】

【表1】

【発明を実施するための形態】

【0055】

本明細書において開示及び規定された本発明は、言及された、又は本文又は図面から明らかな、２つ以上の個々の特色の、全ての代替的組合せへと拡張することが理解される。これらの異なる組合せの全ては、本発明の多様な代替的態様を構成する。

【0056】

本発明のさらなる態様及び先行する段落に記載された態様についてのさらなる実施形態は、例を目的として、付属の図面を参照しながら与えられる、以下の記載から明らかとなる。

【0057】

ここにおいて、本発明のある特定の実施形態に対する、詳細な言及がなされる。本発明は、実施形態と共に記載されるが、その意図は、本発明を、これらの実施形態に限定することではないことが理解される。逆に、本発明は、特許請求の範囲により規定された本発明の範囲内に含まれうる、全ての代替法、改変及び均等物を対象とすることが意図される。

【0058】

本発明者らは、自己免疫疾患と関連する、多数の自己抗原、特に、スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）タンパク質に結合することが可能である無差別型自己エピトープ性Ｔ細胞受容体（ｓｅｌｆ－ＴＣＲ）を同定した。

【0059】

スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質及びＭＰＯタンパク質に対する自己抗体は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群及び自己免疫性血管炎、とりわけ、顕微鏡的多発血管炎及び好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（チャーグ・シュトラウス症候群）を含む、多様な自己免疫疾患と関連する。したがって、本発明は、多数の自己免疫疾患の治療における使用のための、単一のＴＣＲに関する。

【0060】

本発明の特定の利点は、本発明が、自己免疫疾患を患う、広範にわたる個体群の治療における使用のための生成物であるが、それらの疾患と関連する特定の自己抗原に特異的である単一の生成物（例えば、無差別型ＴＣＲを発現するＴｒｅｇ細胞の集団）を提供することである。これは、患者群にわたり適用された既存の治療であって、非特異的であるため、それほど効果的でない可能性が高く、潜在的に、副作用の増大を結果としてもたらす治療と対照的である。本発明の手法は、１つを超える疾患集団内における、自己免疫疾患の発生源の特異的ターゲティングを可能とする。

【0061】

全般
本明細書を通して、そうでないことが詳細に言明されない限り又は文脈がそうでないことを必要としない限りにおいて、単一のステップ、組成物、ステップの群又は組成物の群への言及は、これらのステップ、組成物、ステップの群又は組成物の群のうちの、１つ及び複数（すなわち、１つ以上の）を包含するように理解されるものとする。したがって、本明細書において使用された、単数形の「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」及び「その」は、文脈が、明確にそうでないことを明確に指示しない限りにおいて、複数の側面を含む。例えば、「ある（ａ）」に対する言及は、単一並びに２つ以上を含み；「ある（ａｎ）」に対する言及は、単一並びに２つ以上を含み；「その」に対する言及は、単一並びに２つ以上を含むなどである。

【0062】

当業者は、本発明は、詳細に記載された変動及び改変以外の変動及び改変を受けることを理解する。本発明は、全てのこのような変動及び改変を含むことが理解されるものとする。本発明はまた、本明細書において言及された、又は指し示された、ステップ、特色、組成物及び化合物の全ても、個別に又は総称的に含み、前記ステップ又は前記特色の任意の組合せ、及び全ての組合せ、又はこれらのうちの任意の２つ以上も含む。

【0063】

当業者は、本明細書において記載された方法及び材料と、同様又は均等であり、本発明の実施において使用されうる、多くの方法及び材料を認識する。本発明は、いかなる形においても、記載された方法及び材料に限定されない。

【0064】

本明細書において言及された特許及び刊行物の全ては、参照によりそれらの全体において組み込まれる。

【0065】

本発明は、例示のためだけに意図された、本明細書において記載された詳細な例により、ある範囲内に限定されないものとする。機能的に同等な生成物、組成物及び方法は、明確に、本発明の範囲内にある。

【0066】

そうでないことが詳細に言明されない限り、本明細書における、本発明の任意の例又は実施形態は、改変すべき部分は改変して、本発明の、任意の他の例又は実施形態へと適用されることが理解されるものとする。

【0067】

そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書において使用される技術用語及び学術用語は、当業者（例えば、細胞培養法、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学及び生化学における当業者）により一般に理解される意味と同じ意味を有するように理解されるものとする。

【0068】

そうでないことが指し示されない限りにおいて、本開示において活用される、組換えタンパク質法、細胞培養法及び免疫学法は、当業者に周知の標準的手順である。このような技法については、Ｊ． Ｐｅｒｂａｌ、「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９８４）；Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）；Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（編）、「Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」、１及び２巻、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９１）；Ｄ．Ｍ．Ｇｌｏｖｅｒ及びＢ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（編）、「ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」、１～４巻、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９５及び１９９６）並びにＦ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８；現在までの全ての改訂を含む）；Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ及びＤａｖｉｄ Ｌａｎｅ（編）「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）並びにＪ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら（編）、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（現在までの全ての改訂を含む）などの出典における文献全体を通して、記載及び説明されている。

【0069】

本明細書における、可変領域及びその部分、Ｔ細胞受容体及びその断片についての記載及び規定は、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９８７及び１９９１；Ｂｏｒｋら、Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２４２、３０９～３２０、１９９４；Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１～９１７、１９８７；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２、８７７～８８３、１９８９；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、２７３、９２７～９４８、１９９７における議論；又はＧｉｕｄｉｃｅｌｌｉら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２５：２０６～２１１、１９９７において論じられているＩＭＧＴシステムによりさらに明確化されうる。

【0070】

好ましい実施形態において、本明細書において規定されたＣＤＲは、ＩＭＧＴ法に従い規定される。

【0071】

「及び／又は」という用語、例えば、「Ｘ及び／又はＹ」とは、「Ｘ及びＹ」又は「Ｘ又はＹ」を意味するように理解されるものとし、両方の意味又は一方の意味に対する明示的な裏付けを与えるように理解されるものとする。

【0072】

本明細書において使用された「～から導出された」という用語は、指定された整数が、必ずしも、この供給源に直接由来するわけではないが、特定の供給源から得られうることを指し示すように理解されるものとする。

【0073】

本明細書における、例えば、残基の範囲に対する言及は、包含的であるように理解される。例えば、「アミノ酸１～１５を含む領域」に対する言及は、包含的に理解される、すなわち、領域は、指定された配列内の、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４及び１５と番号付けされたアミノ酸の配列を含む。

【0074】

「～から本質的になること」という用語は、特許請求の範囲を、指定された材料若しくはステップ又は特許請求される発明の基本特徴に、材料的に影響を及ぼさない、材料若しくはステップに限定する。例えば、タンパク質ドメイン、領域又はモジュール（例えば、結合性ドメイン、ヒンジ領域、リンカーモジュール）又はタンパク質（１つ以上のドメイン、領域又はモジュールを有しうる）は、ドメイン、領域、モジュール又はタンパク質のアミノ酸配列が、組合せにおいて、ドメイン、領域、モジュール又はタンパク質の長さのうちの２０％以下（例えば、１５％以下、１０％、８％、６％、５％、４％、３％、２％又は１％）に寄与し、ドメイン（複数可）、領域（複数可）、モジュール（複数可）又はタンパク質の活性（例えば、結合性タンパク質の標的結合アフィニティー）に実質的に影響を及ぼさない（すなわち、活性の低減が４０％以下、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％又は１％であるなど、活性を、５０％を超えて低減しない）、伸長、欠失、突然変異又はこれらの組合せ（例えば、アミノ末端若しくはカルボキシ末端又はドメイン間におけるアミノ酸）を含む場合に、特定のアミノ酸配列「から本質的になる」。

【0075】

本明細書において使用された、「核酸」又は「核酸分子」とは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、オリゴヌクレオチド、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により、又はインビトロにおける翻訳により作出される断片及びライゲーション、切断、エンドヌクレアーゼ作用又はエクソヌクレアーゼ作用のうちのいずれかにより作出される断片のうちのいずれかを指す。ある特定の実施形態において、本開示の核酸は、ＰＣＲにより作製される。核酸は、天然に存在するヌクレオチドである単量体（デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドなど）から構成される場合もあり、天然に存在するヌクレオチドの類似体（例えば、天然に存在するヌクレオチドのα－光学異性形態）から構成される場合もあり、これらの両方の組合せから構成される場合もある。修飾ヌクレオチドは、糖部分又はピリミジン塩基部分若しくはプリン塩基部分の修飾又は置換を有しうる。核酸の単量体は、ホスホジエステル結合又はこのような連結の類似物により連結されうる。ホスホジエステル連結の類似物は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホルアニリデート、ホスホルアミデートなどを含む。核酸分子は、一本鎖の場合もあり、二本鎖の場合もある。

【0076】

本明細書において使用された、「組換え」という用語は、人為的介入により遺伝子操作された（すなわち、外因性核酸分子若しくは異種核酸分子の導入により改変された）細胞、微生物、核酸分子若しくはベクターを指す、又は内因性核酸分子若しくは内因性遺伝子の発現が、制御される、脱調節される、又は構成的とされるように、変更された細胞若しくは微生物を指す。人為的に作出された遺伝子変更は、例えば、１つ以上のタンパク質若しくは酵素をコードする核酸分子（プロモーターなどの発現制御エレメントを含みうる）を導入する改変、又は他の核酸分子の付加、欠失、置換、又は細胞の遺伝物質に対する、他の機能的な破壊若しくは付加を含みうる。例示的な改変は、参照分子又は親分子に由来する異種ポリペプチド又は相同ポリペプチドのコード領域内又はその機能的断片内の改変を含む。

【0077】

結合性タンパク質
本明細書において使用された、「結合性タンパク質」とは、標的（例えば、スミスタンパク質又はこれの断片、スミスタンパク質断片：ＭＨＣ複合体）と、特異的に、かつ、非共有結合的に、会合する、一体化する、又は組み合わされる能力を保有するタンパク質性分子又はその一部（例えば、ペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質）を指す。結合性タンパク質は、精製される場合もあり、実質的に精製される場合もあり、合成の場合もあり、組換えの場合もある。例示的な結合性タンパク質は、単鎖免疫グロブリン可変領域（例えば、ｓｃＴＣＲ、ｓｃＦｖ）を含む。

【0078】

ある特定の実施形態において、本発明の結合性タンパク質のうちのいずれかは、それらのうちのいずれかが、キメラＴＣＲの場合もあり、ヒト化ＴＣＲの場合もあり、ヒトＴＣＲの場合もある、各Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体又はＴＣＲの抗原結合断片である。さらなる実施形態において、ＴＣＲの抗原結合断片は、単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。ある特定の実施形態において、結合性タンパク質は、ＴＣＲである。

【0079】

「Ｔ細胞受容体」（ＴＣＲ）とは、ＭＨＣ受容体に結合した抗原ペプチドに特異的に結合することが可能な、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー（可変結合性ドメイン、定常ドメイン、膜貫通領域及び短い細胞質テールを有する；例えば、Ｊａｎｅｗａｙら、「Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ」、３版、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、４～３３頁、１９９７を参照されたい）を指す。ＴＣＲは、細胞の表面上に見出される場合もあり、可溶性形態において見出される場合もあり、一般に、α（アルファ）鎖及びβ（ベータ）鎖（それぞれ、ＴＣＲα及びＴＣＲβとしてもまた公知である）又はγ鎖及びδ鎖（それぞれ、ＴＣＲγ及びＴＣＲδとしてもまた公知である）を有するヘテロ二量体から構成される。免疫グロブリンと同様に、ＴＣＲ鎖の細胞外部分（例えば、α鎖、β鎖）は、Ｎ末端における可変ドメイン（例えば、α鎖可変ドメイン又はＶα、β鎖可変ドメイン又はＶβ；典型的に、Ｋａｂａｔによる番号付けに基づく、アミノ酸１～１１６；Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、ＵＳ Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、１９９１、５版）及び細胞膜に隣接する、１つの定常ドメイン（例えば、α鎖定常ドメイン又はＣα、典型的に、Ｋａｂａｔに基づく、アミノ酸１１７～２５９、β鎖定常ドメイン又はＣβ、典型的に、Ｋａｂａｔに基づく、アミノ酸１１７～２９５）である、２つの免疫グロブリンドメインを含有する。これもまた、免疫グロブリンと同様に、可変ドメインは、フレームワーク領域（ＦＲ）により隔てられた相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有する（例えば、Ｊｏｒｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、５７：９１３８、１９９０；Ｃｈｏｔｈｉａら、ＥＭＢＯ Ｊ．、７：３７４５、１９８８を参照されたい；また、Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２７：５５、２００３も参照されたい）。ある特定の実施形態において、ＴＣＲは、Ｔ細胞（又はＴリンパ球）の表面上に見出され、ＣＤ３複合体と会合する。本開示において使用されたＴＣＲの供給源は、ヒト、マウス、ラット、ウサギ又は他の哺乳動物など、多様な動物種に由来しうる。

【0080】

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、本開示は、アルファ鎖（α鎖）及びベータ鎖（β鎖）を含み、ＴＣＲが、スミスタンパク質、Ｒｏ６０タンパク質又はＭＰＯタンパク質の断片と、ＨＬＡ－ＤＲ３又はＨＬＡ－ＤＲ４分子との複合体に結合し、高アフィニティー操作Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の使用を提示する。ある特定の実施形態において、Ｖベータ鎖は、ＴＲＢＶ３、ＴＲＢＶ４、ＴＲＢＶ５、ＴＲＢＶ６、ＴＲＢＶ７、ＴＲＢＶ１１、ＴＲＢＶ１９、ＴＲＢＶ２０、ＴＲＢＶ２４若しくはＴＲＢＶ２８の対立遺伝子を含む、又はこれに由来する。さらなる実施形態において、Ｖアルファ鎖は、ＴＲＡＶ１、ＴＲＡＶ２、ＴＲＡＶ３、ＴＲＡＶ４、ＴＲＡＶ８、ＴＲＡＶ９、ＴＲＡＶ１２、ＴＲＡＶ１４、ＴＲＡＶ１７、ＴＲＡＶ２１、ＴＲＡＶ２３、ＴＲＡＶ２５、ＴＲＡＶ２６、ＴＲＡＶ２７、ＴＲＡＶ２９、ＴＲＡＶ３８、ＴＲＡＶ３９若しくはＴＲＡＶ４０の対立遺伝子を含む、又はこれに由来する。特定の実施形態において、本発明に従う使用のための結合性タンパク質は、（ａ）ＴＲＢＶ１１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ１１－２）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ９の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ９－２）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｂ）ＴＲＢＶ６の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ６－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ２５の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｃ）ＴＲＢＶ７の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ７－９）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ２９の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｄ）ＴＲＢＶ２８の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ２３の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｅ）ＴＲＢＶ７の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ７－９）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ２６の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ２６－１）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｆ）ＴＲＢＶ７の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ７－３）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ８の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ８－６）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｇ）ＴＲＢＶ２０の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ２０－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ９の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ９－２）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｈ）ＴＲＢＶ３の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ３－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ２の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｉ）ＴＲＢＶ４の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ４－２）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ１７の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｊ）ＴＲＢＶ４の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ４－２）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ２７の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｋ）ＴＲＢＶ６の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ６－５）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ２の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖を含む。

【0081】

さらなる実施形態において、本発明に従う使用のための結合性タンパク質は、（ａ）ＴＲＢＶ２０の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ２０－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ３８の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ３８－１）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｂ）ＴＲＢＶ６の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ６－４）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ１－２）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｃ）ＴＲＢＶ６の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ６－４）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ４の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｄ）ＴＲＢＶ４の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ４－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ１７の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｅ）ＴＲＢＶ５の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ５－４）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ２１の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｆ）ＴＲＢＶ２８の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ２７の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｇ）ＴＲＢＶ２４の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ２４－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ１－１）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖を含む。

【0082】

任意の態様又は実施形態において、本発明に従う使用のための結合性タンパク質は、（ａ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－７）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４７の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｂ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－３）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ５４の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｃ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４８の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｄ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４４の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｅ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－５）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ３８の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｆ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ２２の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｇ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－７）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ１１の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｈ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ８の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｉ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－３）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４５の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｊ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－３）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４９の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｋ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－２）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ７の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖を含む。

【0083】

任意の態様又は実施形態において、本発明に従う使用のための結合性タンパク質は、（ａ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－４）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４８の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｂ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－５）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４８の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｃ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４８の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｄ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－７）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４８の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｅ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ８８の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｆ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－２）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ１２の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｇ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－２）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ３の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｈ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－３）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ９の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｉ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ２８の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｊ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－２）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４１の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｋ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ９の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖を含む。

【0084】

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、本開示は、アルファ鎖（α鎖）及びベータ鎖（β鎖）を含み、ＴＣＲが、スミスタンパク質又はＲｏ６０タンパク質の断片と、ＨＬＡ－ＤＲ３分子との複合体に結合し、好ましくは、ＨＬＡ－ＤＲ３分子が、ＨＬＡ－ＤＲＡ^＊０１：０１分子及びＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０３：０１分子である、高アフィニティー操作Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を提示する。ある特定の実施形態において、Ｖベータ鎖は、ＴＲＢ２、ＴＲＢＶ４、ＴＲＢＶ５、ＴＲＢ６、ＴＲＢ７、ＴＲＢＶ９、ＴＲＢ１０、ＴＲＢＶ１１、ＴＲＢ１２、ＴＲＢＶ２０、ＴＲＢＶ２４、ＴＲＢ２７若しくはＴＲＢＶ２９の対立遺伝子を含む、又はこれに由来する。さらなる実施形態において、Ｖアルファ鎖は、ＴＲＡＶ１、ＴＲＡＶ２、ＴＲＡＶ８、ＴＲＡＶ９、ＴＲＡＶ１０、ＴＲＡＶ１２、ＴＲＡＶ２０、ＴＲＡＶ２６、ＴＲＡＶ３０若しくはＴＲＡＶ３６の対立遺伝子を含む、又はこれに由来する。

【0085】

特定の実施形態において、本発明に従う使用のための結合性タンパク質は、（ａ）ＴＲＢＶ５の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ５－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ２０の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｂ）ＴＲＢＶ２９の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ２９－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ１２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ１２－１）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｃ）ＴＲＢＶ４の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ４－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ２６の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ２６－２）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｄ）ＴＲＢＶ４の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ４－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ３０の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｅ）ＴＲＢＶ４の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ４－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ３６の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ３６ＤＶ７）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｆ）ＴＲＢＶ２４の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ２４－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ１２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ１２－１）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｇ）ＴＲＢＶ１１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ１１－２）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ１２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ１２－３）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｈ）ＴＲＢＶ２０の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ２０－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ９の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ９－２）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｉ）ＴＲＢＶ９の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ９の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ９－２）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｊ）ＴＲＢＶ２０の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ２０－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ１２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ１２－１）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖を含む。

【0086】

さらなる実施形態において、本発明に従う使用のための結合性タンパク質は、（ａ）ＴＲＢＶ２７の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ１２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ１２－１）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｂ）ＴＲＢＶ６の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ６－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ１－２）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｃ）ＴＲＢＶ７の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ７－９）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ１２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ１２－２）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｄ）ＴＲＢＶ２の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ８の対立遺伝子（ＴＲＡＶ８－３）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｅ）ＴＲＢＶ８の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ８－３）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ５の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＡＶ５－１）を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｆ）ＴＲＢＶ７の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ７－９）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ１０の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｇ）ＴＲＢＶ７の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ７－９）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ１９の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｈ）ＴＲＢＶ１０の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ１０－３）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ２の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｉ）ＴＲＢＶ１２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＶ１２－４）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＶ２０の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖を含む。

【0087】

ある特定の実施形態において、Ｖベータ鎖は、ＴＲＢＪ１若しくはＴＲＢＪ２の対立遺伝子を含む、又はこれに由来する。さらなる実施形態において、Ｖアルファ鎖は、ＴＲＡＪ３、ＴＲＡＪ６、ＴＲＡＪ９、ＴＲＡＪ１３、ＴＲＡＪ１７、ＴＲＡＪ２３、ＴＲＡＪ２７、ＴＲＡＪ２８、ＴＲＡＪ３１、ＴＲＡＪ３３、ＴＲＡＪ３７、ＴＲＡＪ４２、ＴＲＡＪ４５、ＴＲＡＪ４７、ＴＲＡＪ４８、ＴＲＡＶ４９若しくはＴＲＡＶ５４の対立遺伝子を含む、又はこれに由来する。

【0088】

特定の実施形態において、本発明に従う使用のための結合性タンパク質は、（ａ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ６の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｂ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－５）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４５の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｃ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－２）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ５４の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｄ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ２８の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｅ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４９の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｆ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－２）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４８の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｇ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－２）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ１７の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｈ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－７）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ２７の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｉ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ３７の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｊ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ３の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖を含む。

【0089】

特定の実施形態において、本発明に従う使用のための結合性タンパク質は、（ａ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－２）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ９の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｂ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－７）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ３３の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｃ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４９の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｄ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－６）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ１３の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｅ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ２３の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｆ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４７の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｇ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－７）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４２の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｈ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－１）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４７の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｉ）ＴＲＢＪ２の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ２－５）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ３１の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖；（ｊ）ＴＲＢＪ１の対立遺伝子（好ましくは、ＴＲＢＪ１－４）を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＪ４７の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖を含む。

【0090】

任意の態様又は実施形態において、本発明の結合性タンパク質は、ＴＲＢＤ１若しくはＴＲＢＤ２の対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶベータ鎖を含む。

【0091】

任意の態様又は実施形態において、本発明の結合性タンパク質は、ＴＲＣ１若しくはＴＲＢＣ２の対立遺伝子を含む、若しくはこれに由来するＶベータ鎖及びＴＲＡＣの対立遺伝子を含む、又はこれに由来するＶアルファ鎖を含む。

【0092】

本発明の任意の態様において、結合性タンパク質は、Ｖαドメインを含むＶα鎖及びＶβドメインを含むＶβ鎖を含む。好ましくは、Ｖα鎖及びＶβ鎖は、さらなる鎖間ジスルフィド結合の形成を可能とするシステイン残基を含むように修飾される。Ｖα鎖及びＶβ鎖の各々へと導入されたシステインは、細胞内において発現された場合に、内因性ＴＣＲ Ｖα鎖及び内因性ＴＣＲ Ｖβ鎖を発現させる、Ｖα鎖とＶβ鎖との優先的対合を可能とする。好ましくは、ＴＣＲα鎖上のＴｈｒ４８における残基又はこれと同等な残基、及びＴＣＲβ鎖上のＳｅｒ５７における残基又はこれと同等な残基は、ＴＣＲの定常領域の間における、さらなるジスルフィド結合の創出を容易とするように、システインにより置換される。この修飾は、導入されたＴＣＲの優先的対合を可能とし、内因性ＴＣＲとの誤対合を低減する。これは、制御性Ｔ細胞が、外因性ＴＣＲを発現するように改変される養子細胞療法に、特に有益である。

【0093】

例を目的として述べると、組換えにより作製された可溶性ＴＣＲを分離及び精製するために有用な方法は、組換え可溶性ＴＣＲを培養培地へと分泌する、適切な宿主細胞／ベクター系から上清を得て、次いで、市販のフィルターを使用して培地を濃縮するステップを含みうる。濃縮の後、濃縮物は、アフィニティーマトリックス又はイオン交換樹脂など、単一の適切な精製マトリックス又は一連の適切なマトリックスへと適用されうる。組換えポリペプチドをさらに精製するのに、１つ以上の逆相ＨＰＬＣステップが利用されうる。これらの精製法はまた、免疫原を、その天然環境から分離する場合にも利用されうる。本明細書において記載される単離／組換え可溶性ＴＣＲのうちの１つ以上の、大スケールにおける作製のための方法は、適切な培養条件を維持するようにモニタリング及び制御される、バッチ式細胞培養法を含む。可溶性ＴＣＲの精製は、本明細書において記載され、当技術分野において公知である方法に従い実施されうる。

【0094】

本明細書において記載される、ＳｍＢ／Ｂ’特異的結合性タンパク質又はＳｍＢ／Ｂ’特異的結合性ドメイン（例えば、配列番号１１～２４及びこれらの変異体）は、Ｔ細胞活性についてアッセイするための、当技術分野において許容された多数の方法であって、Ｔ細胞の結合、活性化又は誘導の決定を含み、また、抗原特異的であるＴ細胞応答の決定も含む方法のうちのいずれかに従い、機能的に特徴付けられうる。例は、Ｔ細胞の増殖、Ｔ細胞によるサイトカインの放出、抗原特異的Ｔ細胞の刺激、Ｔ細胞のＭＨＣ拘束性刺激、ＣＴＬ活性（例えば、プレロードされた標的細胞からのＣｒの放出を検出することによる）、Ｔ細胞表現型マーカー発現の変化及びＴ細胞機能についての他の尺度の決定を含む。これらのアッセイ及び同様のアッセイを実施するための手順は、例えば、Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ（「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍａｎｕａｌ：Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｓｏｕｒｃｅｂｏｏｋ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、１９９８）において見出されうる。また、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」；Ｗｅｉｒ、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ（１９８６）；Ｍｉｓｈｅｌｌ及びＳｈｉｇｉｉ（編）、「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ（１９７９）；Ｇｒｅｅｎ及びＲｅｅｄ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８１：１３０９（１９９８）並びにこれらの中で引用されている参考文献も参照されたい。

【0095】

Ｓｍ（スミス）タンパク質及び類縁の核内リボ核タンパク質（ｎＲＮＰ）は、ＳＬＥにおける自己抗体のための標的である。これらの抗原は、低分子ＲＮＡを含有するペプチドから構成された、スプライセオソームと呼ばれた、細胞内の細胞小器官内に存在する。抗Ｓｍ抗体は、ＳＬＥを伴う患者のうちの１５～３０％において存在するが、ＳＬＥに高度に特異的である。Ｓｍタンパク質の多くは、ＳＬＥを伴う、若齢の黒人女性において、高頻度（６０％）により生じる。健常個体又は他の疾患を伴う患者において、Ｓｍタンパク質は、ほぼ全く生じない。抗Ｓｍ抗体は、自己免疫性肝疾患において検出された、抗平滑筋抗体と混同されるべきではない。

【0096】

Ｓｍ抗原及び核内リボ核タンパク質（ＲＮＰ）抗原は、核内低分子ＲＮＡ（Ｕ－ＲＮＡ）及びタンパク質から構成された、粒子状複合体である。この複合体はまた、生理食塩液中において可溶性であるので、ＥＮＡ（ｅｘｔｒａｃｔａｂｌｅ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎｓ）とも称されている。全身性エリテマトーデス及び混合性結合組織疾患において、これらの抗原に対する自己抗体が生じる。複合体内に存在するタンパク質の中に、タンパク質である、「ＳｍＢ／Ｂ’」及び「ＳｍＤ」がある。

【0097】

本明細書において使用された、ＳｍＢ／Ｂ’とは、ヒトにおいて、ＳＮＲＰＢ遺伝子によりコードされるタンパク質である、「核内低分子リボヌクレオタンパク質関連タンパク質Ｂ及びＢ’」と称するリボヌクレオタンパク質を指す。ＳｍＢ／Ｂ’はまた、別称：ＣＯＤ、ＳＮＲＰＢ１、ｓｎＲＮＰ－Ｂ、ＣＣＭＳ並びに低分子核内リボ核タンパク質ポリペプチドＢ及びＢ１によっても言及されうる。

【0098】

ＳＮＲＰＢ遺伝子によりコードされたタンパク質は、低分子リボ核タンパク質粒子（ｓｎＲＮＰ）Ｕ１、Ｕ２、Ｕ４／Ｕ６及びＵ５の間において共通に見出された、いくつかの核内タンパク質のうちの１つである。これらのｓｎＲＮＰは、プレｍＲＮＡのスプライシングに関与し、コードされたタンパク質もまた、プレｍＲＮＡのスプライシング又はｓｎＲＮＰの構造において、役割を果たしうる。この遺伝子について、異なるアイソフォーム（Ｂ及びＢ’）をコードする、２つの転写物変異体が見出されている。

【0099】

Ｓｍ複合体の９つのコアタンパク質の全てが、抗Ｓｍ自己免疫応答の標的であるが、最も高頻度において、Ｂポリペプチド及びＤポリペプチドがこの標的である。

【0100】

本明細書において使用された、「Ｒｏ６０」とは、ＲＮＡ結合性タンパク質である、６０ｋＤａのＳＳ－Ａ／Ｒｏリボヌクレオタンパク質を指す。６０ｋＤａの自己抗原であるＲｏは、２つの全身性リウマチ性疾患である全身性エリテマトーデス及びシェーグレン症候群を患う患者における免疫応答の主要な標的である。ループス患者において、抗Ｒｏ抗体は、光過敏性皮膚病変並びに抗Ｒｏ抗体を伴う母体が、光過敏性皮膚病変及び心伝導障害である、第３度心ブロックを伴う小児を出産する症候群である、新生児性ループスと関連する。脊椎動物細胞内において、Ｒｏタンパク質は、Ｙ ＲＮＡとして公知である、機能が未詳の低分子ＲＮＡに結合する。Ｒｏの細胞内における機能は、長期にわたり謎であったが、近年における研究は、Ｒｏが、２つの顕著に異なる過程：低分子ＲＮＡの品質管理及び紫外線照射への曝露の後における細胞生存の増強に関与すると示唆している。極めて興味深いことに、Ｒｏタンパク質を欠くマウスが、患者における全身性エリテマトーデスと一部の特徴を共有する自己免疫症候群を発症することは、Ｒｏの正常機能が、この自己免疫疾患の予防のために重要でありうることを示唆する。

【0101】

本明細書において使用された、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）は、ヒトにおいて、第１７染色体上におけるＭＰＯ遺伝子によりコードされる酵素であるペルオキシダーゼである。ＭＰＯは、好中性顆粒球内において最も豊富に発現し、次亜塩素酸を含む次亜ハロゲン酸をもたらす。ＭＰＯは、好中球のアズール顆粒内に貯蔵され、分解時に、細胞外腔へと放出されるリソソームタンパク質である。ＭＰＯに対する抗体は、多様な種類の血管炎、最も顕著には、臨床的に、かつ、病理学的に認知された、３つの形態：多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）及び好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（ＥＧＰＡ）に関与する。

【0102】

養子細胞療法を含む投与のための細胞
本発明は、細胞、特に、本明細書において記載されたＴＣＲを発現するＴｒｅｇ細胞を投与するステップを含む治療法を提供する。Ｔｒｅｇ細胞は、Ｔ細胞の集団により施される場合もあり、細胞の混合集団により施される場合もある。

【0103】

ある特定の実施形態において、本明細書において記載された結合性タンパク質をコードする核酸分子は、養子移入療法における使用のための宿主細胞（例えば、Ｔｒｅｇ細胞）にトランスフェクトする／これへと形質導入するのに使用される。本文献の別の箇所において、前記結合性タンパク質をコードする核酸について記載されている。

【0104】

本発明は、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ、Ｒｏ６０及びＭＰＯのうちの１つ以上に対する異常な免疫応答により特徴付けられる自己免疫疾患の治療における使用のための制御性Ｔ細胞の集団を調製する方法であって、
・ 制御性Ｔ細胞の集団を用意するステップ；
・ 本明細書において記載されたＴＣＲをコードする核酸又はベクターを、制御性Ｔ細胞の集団へと導入するステップ；
・ 制御性Ｔ細胞の表面における、ＴＣＲの発現を可能とする条件をもたらすステップ
を含み、
これにより、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ、Ｒｏ６０及びＭＰＯのうちの１つ以上に対する異常な免疫応答により特徴付けられる自己免疫疾患の治療における使用のための制御性Ｔ細胞の集団を調製する
方法を提供する。

【0105】

本発明はまた、対象におけるＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ、Ｒｏ６０及びＭＰＯのうちの１つ以上に対する異常な免疫応答により特徴付けられる自己免疫疾患を治療するための方法であって、
対象に、細胞表面においてＴ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα又はＶアルファ）ドメイン及びＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ又はＶベータ）ドメインを含む結合性タンパク質であって、本明細書において記載された通りである結合性タンパク質を発現する、有効量の制御性Ｔ細胞を投与するステップ
を含み、
これにより、対象におけるＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ、Ｒｏ６０及びＭＰＯのうちの１つ以上に対する異常な免疫応答により特徴付けられる自己免疫疾患を治療する
方法も提供する。

【0106】

さらに、本発明は、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ、Ｒｏ６０及びＭＰＯに特異的であり、かつ、制御性Ｔ細胞の少なくとも１つの特性を呈するＴ細胞の集団を、エクスビボにおいて調製する方法であって、
・ 制御性Ｔ細胞の少なくとも１つの特性を呈するＴ細胞の集団を用意するステップ；
・ 本明細書において記載された核酸又はベクターを、Ｔ細胞の集団へと導入するステップであって、核酸又はベクターが、本明細書において記載された結合性タンパク質をコードする、ステップ；
・ Ｔ細胞の表面における、結合性タンパク質の発現を可能とする条件をもたらすステップ
を含み、
これにより、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ、Ｒｏ６０及びＭＰＯに特異的であり、かつ、制御性Ｔ細胞の少なくとも１つの特性を呈するＴ細胞の集団を、エクスビボにおいて調製する
方法に関する。好ましくは、制御性Ｔ細胞の、少なくとも１つの特性を呈するＴ細胞は、ＳＬＥを有する対象に由来する生物学的試料に由来する。

【0107】

本発明の方法又は使用において使用された、制御性Ｔ細胞の少なくとも１つの特性を呈するＴ細胞は、健常対象から選択されうる。Ｔ細胞は、組織適合性ドナーから分離されうる。

【0108】

Ｔ細胞は、体細胞から再プログラム化される場合もあり、ｉＰＳＣ又は他の幹細胞から分化する場合もある。

【0109】

別の態様では、本発明は、対象における、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ、Ｒｏ６０又はＭＰＯタンパク質に対する、異常な、望ましくない、又は他の形において不適切な免疫応答と関連する状態を治療又は予防する方法であって、
・ 制御性Ｔ細胞の少なくとも１つの特性を呈するＴ細胞の集団を用意するステップ；
・ 本明細書において記載された結合性タンパク質をコードする核酸又はベクターを、Ｔ細胞の集団へと導入するステップ；
・ Ｔ細胞の表面における、結合性タンパク質の発現を可能とする条件をもたらすステップ；
・ それらの表面において結合性タンパク質を発現するＴ細胞を投与するステップ
を含み、
これにより、対象における状態を治療又は予防する
方法を提供する。

【0110】

代替的実施形態において、本発明は、タンパク質である、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ、Ｒｏ６０及びＭＰＯに特異的であり、かつ、制御性Ｔ細胞の少なくとも１つの特性を呈するＴ細胞の集団を、エクスビボにおいて調製する方法であって、
・ 通常型Ｔ細胞の、少なくとも１つの特性を呈するＴ細胞の集団を用意するステップであって、任意選択的に、Ｔ細胞の集団が、Ｔ細胞の混合集団である、ステップ；
・ 核酸又はベクターを、Ｔ細胞の集団へと導入するステップであって、核酸又はベクターが、本明細書において記載された結合性タンパク質をコードする、ステップ；
・ Ｔ細胞の表面における、結合性タンパク質の発現を可能とする条件をもたらすステップ；
・ Ｔ細胞の集団の、制御性Ｔ細胞への転換を可能とする条件をもたらすステップ
を含み、
これにより、制御性Ｔ細胞の少なくとも１つの特性を呈し、かつ、タンパク質である、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ、Ｒｏ６０及びＭＰＯに特異的であるＴ細胞の集団を、エクスビボにおいて調製する
方法を提供する。

【0111】

任意の実施形態において、通常型Ｔ細胞又は混合Ｔ細胞集団の、制御性Ｔ細胞への転換を可能とするための条件は、通常型Ｔ細胞若しくは混合Ｔ細胞集団を、１つ以上の薬剤と接触させること又は通常型Ｔ細胞の、制御性Ｔ細胞への転換に適する、１つ以上の因子の発現を増大させることを含みうる。１つ以上の薬剤又は因子は、ＴＧＦ－β、Ｆｏｘｐ３又はこれらの発現を増大させるための薬剤を含みうる。

【0112】

ある特定の実施形態において、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ、Ｒｏ６０及びＭＰＯに由来し、表１において列挙された、本明細書において記載された１つ以上のペプチドは、ペプチドに対する特異性を有するＴ細胞（例えば、Ｔｒｅｇ細胞）を作出するために、Ｔ細胞の集団を活性化させ、かつ／又はこれらを拡大するのに使用されうる。例えば、本発明は、本明細書において記載された自己免疫疾患の治療における使用のための制御性Ｔ細胞の集団を調製する方法であって、
ｉ）制御性Ｔ細胞の集団を、本明細書の表１において列挙されたペプチドである、ＳｍＤ、ＳｍＢ／Ｂ’、Ｒｏ６０又はＭＰＯから選択される、第１のペプチドの存在下、第１のペプチドにより活性化される亜集団の拡大を可能とする条件下において、これに十分な時間にわたり培養するステップ；
ｉｉ）ｉ）において得られた制御性Ｔ細胞の亜集団を、本明細書の表１において列挙されたペプチドである、ＳｍＤ、ＳｍＢ／Ｂ’、Ｒｏ６０又はＭＰＯから選択される、第２のペプチドの存在下、第１のペプチド及び第２のペプチドにより活性化される亜集団の拡大を可能とする条件下において、これに十分な時間にわたり培養するステップ
を含み、
これにより、本明細書において記載された自己免疫疾患の治療における使用のための制御性Ｔ細胞の集団を調製する
方法を提供する。任意選択的に、方法は、第１のペプチド及び第２のペプチドにより活性化された、制御性Ｔ細胞の亜集団を、本明細書の表１において列挙された、ペプチドである、ＳｍＤ、ＳｍＢ／Ｂ’、Ｒｏ６０又はＭＰＯから選択される、第３のペプチド又は第４のペプチドの存在下において培養し、これにより、４つのペプチド全てにより活性化されるＴｒｅｇの亜集団を得ることを含むステップをさらに含む。第１のペプチドと、第２のペプチドとは、異なる、例えば、異なるタンパク質に由来する（そして、方法が、第３のペプチド又は第４のペプチドを含む場合、これらは、第１のペプチド及び第２のペプチドが由来するタンパク質と異なるタンパク質に由来する。）。

【0113】

一実施形態において、第１のペプチドは、Ｒｏ６０タンパク質に由来し（例えば、ペプチドは、配列番号５、６若しくは７に示すアミノ酸配列を含みうる、又はこれからなりうる）、第２のペプチドは、スミスタンパク質に由来する（例えば、ペプチドは、配列番号１、２、３若しくは４に示すアミノ酸配列を含みうる、又はこれからなりうる）。任意選択的に、第３のペプチドは、ＭＰＯタンパク質に由来する（例えば、ペプチドは、配列番号８、９若しくは１０に示すアミノ酸配列を含みうる、又はこれからなりうる）、又は第２のペプチドが、ＳｍＤ１に由来する（例えば、ペプチドは、配列番号１若しくは２に示すアミノ酸配列を含みうる、又はこれからなりうる）場合、第３のペプチドは、ＳｍＢ／Ｂ’に由来しうる（例えば、ペプチドは、配列番号３若しくは４に示すアミノ酸配列を含みうる、又はこれからなりうる）。

【0114】

一実施形態において、第１のペプチドは、Ｒｏ６０タンパク質に由来し（例えば、ペプチドは、配列番号５、６若しくは７に示すアミノ酸配列を含みうる、又はこれからなりうる）、第２のペプチドは、ＭＰＯタンパク質に由来する（例えば、ペプチドは、配列番号８、９若しくは１０に示すアミノ酸配列を含みうる、又はこれからなりうる）。任意選択的に、第３のペプチドは、スミスタンパク質である（例えば、ペプチドは、配列番号１、２、３若しくは４に示すアミノ酸配列を含みうる、又はこれからなりうる）。

【0115】

一実施形態において、第１のペプチドは、スミスタンパク質に由来し（例えば、ペプチドは、配列番号１、２、３若しくは４に示すアミノ酸配列を含みうる、又はこれからなりうる）、第２のペプチドは、ＭＰＯタンパク質に由来する（例えば、ペプチドは、配列番号８、９若しくは１０に示すアミノ酸配列を含みうる、又はこれからなりうる）。任意選択的に、第３のペプチドは、Ｒｏ６０タンパク質に由来する（例えば、ペプチドは、配列番号５、６若しくは７に示すアミノ酸配列を含みうる、又はこれからなりうる）、又は第１のペプチドが、ＳｍＤ１に由来する（例えば、ペプチドは、配列番号１若しくは２に示すアミノ酸配列を含みうる、又はこれからなりうる）場合、第３のペプチドは、ＳｍＢ／Ｂ’に由来しうる（例えば、ペプチドは、配列番号３若しくは４に示すアミノ酸配列を含みうる、又はこれからなりうる）。

【0116】

ＴＣＲシーケンシングの進歩については、記載されており（例えば、Ｒｏｂｉｎｓら、Ｂｌｏｏｄ、１１４：４０９９、２００９；Ｒｏｂｉｎｓら、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌａｔ．Ｍｅｄ．、２：４７～６４、２０１０；Ｒｏｂｉｎｓら（９月１０日）、Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈ．、Ｅｐｕｂ速報版、２０１１；Ｗａｒｒｅｎら、Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．、２、１：７９０、２０１１）、本開示に従う実施形態の実施の過程において利用されうる。同様に、Ｔ細胞に所望の核酸をトランスフェクトする方法／所望の核酸をＴ細胞へと形質導入する方法については、所望の抗原特異性を有するＴ細胞を使用する養子移入手順（例えば、Ｓｃｈｍｉｔｔら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎ．、２０：１２４０、２００９；Ｄｏｓｓｅｔｔら、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．、７７：７４２、２００９；Ｔｉｌｌら、Ｂｌｏｏｄ、７７２：２２６１、２００８；Ｗａｎｇら、Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．、７５：７１２、２００７；Ｋｕｂａｌｌら、Ｂｌｏｏｄ、７０９：２３３１、２００７；ＵＳ２０１１／０２４３９７２；ＵＳ２０１１／０１８９１４１；Ｌｅｅｎら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２５：２４３、２００７）と同様に、記載されており（例えば、米国特許出願公開第２００４／００８７０２５号）、したがって、これらの方法の、本明細書において開示された実施形態への適応が、本発明の結合性タンパク質を対象とする教示を含む、本明細書における教示に基づき想定される。

【0117】

制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞を含む細胞集団は、末梢血、胸腺、リンパ節、脾臓及び骨髄など、Ｔｒｅｇ細胞が存在する、任意の供給源に由来しうる。

【0118】

Ｔｒｅｇ細胞を含む細胞集団はまた、混合Ｔ細胞集団又は通常型Ｔ細胞の集団にも由来しうる。本明細書において記載された通り、混合集団又は通常型Ｔ細胞は、Ｔ細胞内のＳｍ抗原特異性をエンリッチするように、本発明のペプチドと接触されうる。代替的に、本発明の結合性タンパク質をコードする核酸が、混合集団又は通常型Ｔ細胞へと形質導入される場合もある。次いで、Ｔ細胞は、Ｔｒｅｇ細胞の作出のための、当業者に公知の標準的技法を使用して、Ｔｒｅｇ細胞へと転換されうる。ある特定の実施形態において、混合Ｔ細胞集団又は通常型Ｔ細胞は、ＴＧＦ－ベータ、Ｆｏｘｐ３の発現の増大を可能とする条件下において培養される。これは、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体を伴う細胞の培養、高用量のＩＬ－２、ＴＧＦ－ベータ及びラパマイシンによる、ＣＤＫ８／１９の阻害を含む。さらなる実施形態において、転換又はエンリッチされたＴｒｅｇ細胞集団は、安定化される（例えば、細胞を、ビタミンＣ又はＴｒｅｇを安定化させるための他の薬剤と接触させることにより）。

【0119】

注入のために使用されたＴｒｅｇ細胞（又は、実際に、Ｔｒｅｇを作出するのに使用された、Ｔｃｏｎｖ若しくは混合Ｔ細胞集団）は、同種ドナー、好ましくは、ＨＬＡマッチドナーから分離される場合もあり、スミスタンパク質に対する、異常な、望ましくない、又は他の形において不適切な免疫応答と関連する状態を伴うと診断された対象から分離される場合もある。好ましくは、状態は、ＳＬＥである。

【0120】

Ｔ細胞はまた、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）又は胚性幹細胞、好ましくは、胚性幹細胞系の分化からも作出されうる。当業者は、ｉＰＳＣを含む幹細胞から、Ｔｒｅｇ細胞を作出するための標準的技法に精通している。これらの技法の例については、Ｈａｇｕｅら（２０１２）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１８９：２３３８～３６；及びＨａｇｕｅら、（２０１９）ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ、４：ｐｉｉ １２６４７１において記載されている。

【0121】

さらになお、混合Ｔ細胞集団の文脈において、当業者は、ＣＤ４＋ ＣＤ２５＋ Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）であるＴ細胞の亜集団を分離するための標準的技法に精通している。例えば、ＣＤ４＋ ＣＤ２５＋ Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）は、陰性免疫選択及び陽性免疫選択並びに細胞分取により、対象に由来する生物学的試料から得られうる。

【0122】

本発明の任意の方法において、核酸又はベクターの存在下において培養されたＴｒｅｇ細胞は、細胞が得られた、同じ対象へと移入されうる。言い換えると、本発明の方法において使用された細胞は、自家細胞でありうる、すなわち、医学的状態が治療又は予防される対象から得られうる。代替的に、細胞は、別の対象へと、同種移入される場合もある。好ましくは、細胞は、対象における医学的状態を治療又は予防する方法における対象に対して、自家細胞である。

【0123】

本明細書において使用された、「エクスビボ」又は「エクスビボ療法」という用語は、細胞が、患者又は適切な同種ドナーなど、適切な代替的供給源から得られ、改変細胞が、改変細胞によりもたらされる治療的利益により改善される疾患を治療するのに使用されうるように、改変された治療を指す。治療は、改変細胞の、患者への投与又は再導入を含む。エクスビボ療法の利益は、患者を、治療に由来する、所望されない副作用へと曝露せずに、患者に、治療の利益をもたらす能力である。

【0124】

「投与された」という用語は、治療有効用量の、それぞれの細胞を含む前述の組成物の、個体への投与を意味する。「治療有効量」とは、それが投与された目的の効果をもたらす用量を意味する。正確な用量は、治療の目的に依存し、公知の技法を使用して、当業者により確認可能である。当技術分野において公知であり、上記において記載された通り、局所送達と対比した全身送達、年齢、体重、全般的健康状態、性別、食餌、投与回数、薬物の相互作用及び状態の重症度についての補正が必要な場合があり、規定の実験を伴い、当業者により確認可能である。

【0125】

「エンリッチされた」又は「精製された」細胞集団とは、特定の細胞の、他の細胞に対する比、例えば、対象の体内において見出された細胞と比較した比又は本発明のペプチド、核酸若しくはベクターへの曝露の前における比と比較した比の増大である。一部の実施形態の、エンリッチ又は精製された細胞集団内において、特定の細胞は、全細胞集団のうちの、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％又は９９％を含む。細胞集団は、１つ以上の細胞表面マーカー及び／又は特性により規定されうる。

【0126】

本明細書において記載された結合性タンパク質を発現するＴｒｅｇ細胞は、例えば、注入（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、ｉｎｆｕｓｉｏｎ）、沈着、植込み、経口摂取若しくは局所投与又はこれらの任意の組合せを含む、任意の方法により、対象へと投与されうる。注入（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）は、例えば、静脈内注入、筋内注入、皮内注入、皮下注入又は腹腔内注入、好ましくは、静脈内注入でありうる。単回投与又は複数回投与は、不要な実験を伴わずに、当業者により決定されうる通り、状態、その重症度及び対象の全般的な健康状態に応じて、所与の時間にわたり投与されうる。注入（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）は、複数の位置において施されうる。

【0127】

Ｔｒｅｇ細胞の投与は、単独の場合もあり、他の治療剤と組み合わされる場合もある。各用量は、ＣＤ８＋ Ｔｒｅｇ細胞約１０×１０^３個、細胞２０×１０^３個、細胞５０×１０^３個、細胞１００×１０^３個、細胞２００×１０^３個、細胞５００×１０^３個、細胞１×１０^６個、細胞２×１０^６個、細胞２０×１０^６個、細胞５０×１０^６個、細胞１００×１０^６個、細胞２００×１０^６個、細胞５００×１０^６個、細胞１×１０^９個、細胞２×１０^９個、細胞５×１０^９個、細胞１０×１０^９個などを含みうる。投与頻度は、例えば、毎週１回、毎週２回、２週ごとに１回、３週ごとに１回、４週ごとに１回、毎月１回、２カ月ごとに１回、３カ月ごとに１回、４カ月ごとに１回、５カ月ごとに１回、６カ月ごとに１回などでありうる。投与が行われる総日数は、１日間、２日間又は３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０日間などでありうる。施される任意の投与は、同じ日における、２回以上の注入を伴いうることが理解される。投与のために、投与されるＴｒｅｇ細胞のうちの、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％は、Ｔｒｅｇ細胞の、少なくとも１つの特性を呈する。

【0128】

本明細書において記載されたＴｒｅｇは、自己抗原、特に、ＳｍＤ、ＳｍＢ／Ｂ’、Ｒｏ６０又はＭＰＯタンパク質に対する、異常な免疫応答を抑制するために有用である。Ｔｒｅｇ又は混合Ｔｒｅｇの集団は、ＳｍＤ、ＳｍＢ／Ｂ’、Ｒｏ６０又はＭＰＯタンパク質のうちの１つ以上に対する、異常な免疫応答により特徴付けられる自己免疫疾患を治療するための、任意の許容されたプロトコールに加えて投与される場合もあり、これらの代わりに投与される場合もある。

【0129】

ある特定の症例において、免疫抑制剤の投与は、Ｔｒｅｇの投与の後において減量される。免疫抑制剤の用量は、Ｔｒｅｇ又は混合Ｔｒｅｇの集団の投与の後において、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％減少されうる。一部の例において、免疫抑制剤の用量は、Ｔｒｅｇ又は混合Ｔｒｅｇの集団による治療の後において、約５０％減量される。別の例において、免疫抑制剤の投与は、Ｔｒｅｇ又は混合Ｔｒｅｇの集団の投与の後において停止される。

【0130】

本明細書において記載されたＴｒｅｇは、他の公知の薬剤及び療法と組み合わせて使用されうる。本明細書において使用された、「組合せ」投与とは、対象の障害（例えば、疾患又は状態）への罹患の経過中に、２つ（以上）の異なる治療が、対象へと送達されることを意味する、例えば、２つ以上の治療は、対象が、障害を伴うと診断された後において、かつ、障害が治癒若しくは消失する、又は治療が他の理由のために停止される前において送達される。一部の実施形態において、投与に関して重複が存在するように、１つの治療の送達がなおもなされつつある時点において、第２の治療の送達が始まる。本明細書において、これは、場合によって、「同時的」送達又は「共時的」送達と称される。他の実施形態において、１つの治療の送達は、他の治療の送達が始まる前に終了する。いずれの場合についても、一部の実施形態において、治療は、組合せ投与のためにより有効である。例えば、第２の治療は、より有効である、例えば、より少量の第２の治療により、同等の効果が見られる、若しくは第２の治療が、第１の治療の非存在下において投与された場合に見られるより、大きな程度において症状を軽減する、又は第１の治療に関しても、類似の状況が見られる。一部の実施形態において、送達は、症状の軽減又は障害と関連する他のパラメータが、他の治療の非存在下において送達された１つの治療により観察される場合より増大するような送達である。２つの治療の効果は、部分的相加効果の場合もあり、完全な相加効果の場合もあり、相加効果より大きい場合もある。送達は、送達された第１の治療の効果が、第２の治療が送達された時点において、なおも検出可能であるような送達であり得る。本明細書において記載されたＴｒｅｇと、少なくとも１つのさらなる治療剤とは、同じ組成物又は個別の組成物により、同時に投与される場合もあり、又は逐次的に投与される場合もある。逐次的投与のために、Ｔｒｅｇが、第１に投与され、さらなる薬剤が、第２に投与される場合もある。代替的に、投与の順序が逆の順序にされ、さらなる薬剤が、第１に投与され、Ｔｒｅｇが、第２に投与される場合もある。Ｔｒｅｇ及び／又は他の治療剤、治療手順若しくは治療モダリティーは、障害の活動時に投与される場合もあり、疾患の寛解時に投与される場合もあり、疾患活動の低下時に投与される場合もある。Ｔｒｅｇ細胞療法は、別の治療の前に投与される場合もあり、治療と共時的に投与される場合もあり、治療後に投与される場合もあり、障害の寛解時に投与される場合もある。

【0131】

組み合わせて投与された場合、本明細書において記載されたＴｒｅｇ及びさらなる薬剤（例えば、第２の薬剤若しくは第３の薬剤）又はこれらの全ては、個別に、例えば、単剤療法として使用された各薬剤の量又は投与量より高量又は高用量において投与される場合もあり、これらより低量又は低用量において投与される場合もあり、これらと同量又は同投与量において投与される場合もある。ある特定の実施形態において、投与されたＴｒｅｇ、さらなる薬剤（例えば、第２の薬剤若しくは第３の薬剤）又はこれらの全ての量若しくは投与量は、個別に使用された各薬剤の量又は投与量より低量又は低用量（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％若しくは少なくとも５０％低量又は低用量）である。他の実施形態において、所望の効果（例えば、がんの治療）を結果としてもたらす、Ｔｒｅｇ、さらなる薬剤（例えば、第２の薬剤若しくは第３の薬剤）又はこれらの全ての量若しくは投与量は、同じ治療効果を達成するのに、個別に必要とされた各薬剤の量又は投与量より低量又は低用量（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％若しくは少なくとも５０％低量又は低用量）である。

【0132】

例えば、さらなる治療剤（複数可）は、自己免疫疾患（ＳＬＥ、シェーグレン症候群、ＡＰＡ及び本明細書において記載された他の疾患）の治療のために一般に施される、１つ以上の免疫抑制剤を含みうる。免疫抑制剤（複数可）は、急性拒絶を予防するように、移植の直後に施される薬剤（例えば、メチルプレドニゾロン、アトガム、サイモグロブリン、バシリキシマブ若しくはアレムツズマブ）又は維持のために使用される免疫抑制剤（複数可）（例えば、プレドニゾン、カルシニューリン阻害剤（例えば、シクロスポリン若しくはタクロリムス）、ミコフェノール酸モフェチル、アザチオプリン、シロリムス若しくはエベロリムス）でありうる。臓器移植の後において施される、他の免疫抑制剤は、ＣＴＬＡ－４融合タンパク質（例えば、ベラタセプト又はアバタセプト）、コルチコステロイド（例えば、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン、又はプレドニゾロン）、細胞傷害性免疫抑制剤（例えば、アザチオプリン、クロランブシル、シクロホスファミド、メルカプトプリン、又はメトトレキサート）、免疫抑制性抗体（例えば、抗胸腺細胞グロブリン、バシリキシマブ、又はインフリキシマブ）、シロリムス誘導体（例えば、エベロリムス又はシロリムス）及び抗増殖薬剤（例えば、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸ナトリウム又はアザチオプリン）を含む。本明細書において記載された、本発明の使用に適する、さらなる免疫抑制剤は、当業者に公知であり、本発明は、この点において限定的ではない。

【0133】

自己免疫障害の治療又は予防のための、本明細書において記載された、有効量の治療剤（例えば、ドナーのアロ抗原又は自己抗原に特異的なＴｒｅｇ又は混合Ｔｒｅｇの集団）は、標準的方法により、対象へと投与されうる。例えば、薬剤は、例えば、静脈内経路、腹腔内経路、筋内経路、皮内経路、皮下経路、経皮注射、経口経路、経皮（局所）経路、経動脈経路、腫瘍内経路、リンパ節内経路、髄内経路又は経粘膜経路を含む、多数の異なる経路のうちのいずれかにより投与されうる。

【0134】

一部の実施形態において、薬剤（例えば、Ｔｒｅｇ又は自己抗原に特異的なＴｒｅｇを含む混合Ｔｒｅｇの集団）は、罹患組織へと、直接投与されうる（例えば、注射又は注入により）。一実施形態において、本明細書において記載された組成物は、体腔又は体液（例えば、腹水（ａｓｃｉｔｅｓ）、胸水、腹水（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｆｌｕｉｄ）若しくは脳脊髄液）へと投与される。例えば、治療剤（例えば、ドナーのアロ抗原若しくは自己抗原に特異的なＴｒｅｇ又は混合Ｔｒｅｇの集団）は、注射又は注入、例えば、筋内注射若しくは筋内注入、皮下注射若しくは皮下注入、腹腔内注射若しくは腹腔内注入又は静脈内注射若しくは静脈内注入により投与されうる。所与の任意の症例における投与に最も適する経路は、投与される特定の薬剤、患者、治療される特定の疾患又は状態、医薬の製剤法、投与法（例えば、投与回数及び投与経路）、患者の年齢、体重、性別、治療される疾患の重症度、患者の食餌及び患者の排泄率に依存する。薬剤（例えば、ドナーのアロ抗原若しくは自己抗原に特異的なＴｒｅｇ又は混合Ｔｒｅｇの集団）は、選び出された部位への送達のために、カプセル化される場合もあり、例えば、粘性形態において、注射される場合もある。薬剤は、薬剤を、選び出された部位へと送達することが可能なマトリックスにより施されうる。マトリックスは、薬剤の徐放をもたらし、細胞浸潤に適正な提示及び適切な環境をもたらす。マトリックスは、他のインプラント医療適用のために、現在使用されている材料から形成されうる。マトリックス材料の選出しは、生体適合性、生体分解性、力学的特性及び美容上の外見、並びに界面特性のうちのいずれか１つ以上に基づく。１つの例は、コラーゲンマトリックスである。

【0135】

治療剤（例えば、ドナーのアロ抗原若しくは自己抗原に特異的なＴｒｅｇ又は混合Ｔｒｅｇの集団）は、対象、例えば、ヒトへの投与に適する医薬組成物へと組み込まれうる。このような組成物は、典型的に、薬剤と、薬学的に許容される担体とを含む。本明細書において使用された、「薬学的に許容される担体」という用語は、医薬の投与に適合性である担体など、任意の溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、並びに全てのこれらを含むことが意図される。

【0136】

薬学的活性物質のための、このような媒体及び薬剤の使用は、公知である。そのような媒体は、任意の常套的な媒体及び薬剤が、活性化合物と不適合である場合を除き、本明細書において記載された使用において使用されうる。補充活性化合物もまた、組成物へと組み込まれうる。

【0137】

本明細書において使用された、「単位剤形」という用語とは、適切な１回の投与のための投与量を指す。例として述べると、単位剤形は、送達デバイス内、例えば、シリンジ内又は静注バッグ内に留置された治療剤の量でありうる。例えば、単位剤形は、単回投与において投与される。別の例において、１つを超える単位剤形が、同時に投与される場合もある。

【0138】

一部の実施形態において、Ｔｒｅｇ又は混合Ｔｒｅｇの集団は、単剤療法として投与される、すなわち、状態のための別の治療は、対象へと、共時的に投与されない。Ｔｒｅｇ又は混合Ｔｒｅｇの集団の組成物は、患者へと、１回投与されうる。必要な場合、Ｔｒｅｇ細胞組成物はまた、複数回にわたり投与される場合もある。Ｔｒｅｇ又は混合Ｔｒｅｇの集団は、免疫療法において一般に公知である注入法（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．、３１９：１６７６（１９８８）を参照されたい。）を使用することにより投与されうる。

【0139】

患者へと投与される、上記の治療の投与量は、治療される状態及び治療のレシピエントの正確な性格により変動する。ヒト投与のための投与量のスケーリングは、当技術分野において許容された慣行に従い実施されうる。

【0140】

一部の実施形態において、単一の治療レジメンが必要とされる。他の実施形態において、１回以上の後続の投与用量又は治療レジメンの投与が実施されうる。例えば、隔週において３カ月間にわたる治療の後、治療は、毎月１回、６カ月間又は１年間以上にわたり繰り返される。一部の実施形態において、初期治療の後、さらなる治療は実施されない。

【0141】

本明細書において記載された組成物の投与量は、医師により決定され、必要に応じて、観察された治療効果に適するように調整されうる。治療の持続期間及び頻度に関して、いつ、治療が治療利益をもたらしつつあるのかを決定し、さらなる細胞を投与するのか、治療を中断するのか、治療を再開するのか、治療レジメンに対して、他の変更を行うのかを決定するために、熟練した医師は、対象をモニタリングすることが典型的である。投与量は、サイトカイン放出症候群など、有害な副作用を引き起こすほど大きな投与量とすべきではない。一般に、投与量は、患者の年齢、状態及び性別と共に変動し、当業者により決定されうる。投与量はまた、万一、合併症が生じた場合に、個々の医師によっても調整されうる。

【0142】

核酸及びベクター
別の態様において、本発明は、本明細書において記載された結合性タンパク質又はこれらの相同体若しくは類似体をコードする配列をコードする、又はこれと相補的である、１つ以上の核酸分子を含む核酸分子、構築物又は組成物の使用を提供する。核酸分子は、本明細書において記載された結合性タンパク質を作製するのに使用される場合もあり、本明細書において記載された疾患又は状態を治療する細胞療法のために使用される場合もある。

【0143】

「構築物」という用語は、組換え核酸分子を含有する、任意のポリヌクレオチドを指す。構築物は、ベクター内に存在する場合（例えば、細菌性ベクター、ウイルスベクター）もあり、ゲノムへと組み込まれる場合もある。「ベクター」とは、別の核酸を運ぶことが可能な核酸分子である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス、ＲＮＡベクター、又は染色体核酸、非染色体核酸、半合成核酸若しくは合成核酸を含みうる、直鎖状若しくは環状のＤＮＡ分子若しくはＲＮＡ分子でありうる。例示的なベクターは、自己複製が可能なベクター（エピソームベクター）又はそれらが連結された核酸分子の発現が可能なベクター（発現ベクター）である。

【0144】

ウイルスベクターは、レトロウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス）、コロナウイルス、オルトミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス及び水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹ウイルス及びセンダイウイルス）などのマイナス鎖ＲＮＡウイルス、ピコルナウイルス及びアルファウイルスなどのプラス鎖ＲＮＡウイルス、並びにアデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、１型単純ヘルペスウイルス及び２型単純ヘルペスウイルス、エプスタイン－バーウイルス、サイトメガロウイルス）を含む、二本鎖ＤＮＡウイルス並びにポックスウイルス（例えば、ワクシニアウイルス、鶏痘ウイルス及びカナリア痘ウイルス）を含む。他のウイルスは、例えば、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポバウイルス、ヘパドナウイルス及び肝炎ウイルスを含む。レトロウイルスの例は、トリ白血病肉腫ウイルス、哺乳動物Ｃ型レトロウイルス、哺乳動物Ｂ型レトロウイルス、哺乳動物Ｄ型レトロウイルス、ＨＴＬＶ－ＢＬＶ群レトロウイルス、レンチウイルス、スプマウイルスを含む（Ｃｏｆｆｉｎ，Ｊ．Ｍ．、「Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ：Ｔｈｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ」、「Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ」、３版、Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓら編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、１９９６）。

【0145】

本明細書において使用された、「レンチウイルスベクター」とは、組込型の場合もあり、非組込型の場合もあり、パッケージング容量が比較的大きな場合もあり、ある範囲にわたる、異なる細胞型へと形質導入しうる、遺伝子送達のための、ＨＩＶベースのレンチウイルスベクターを意味する。レンチウイルスベクターは、通例、３つ以上のプラスミド（パッケージングプラスミド、エンベローププラスミド及びトランスファープラスミド）の、産生細胞への一過性のトランスフェクションの後に作出される。ＨＩＶと同様に、レンチウイルスベクターも、ウイルス表面の糖タンパク質の、細胞表面上の受容体との相互作用を介して標的細胞に侵入する。侵入すると、ウイルスＲＮＡは、逆転写を経るが、これは、ウイルス逆転写酵素複合体により媒介される。逆転写の産物は、二本鎖直鎖状のウイルスＤＮＡであり、これは、感染細胞のＤＮＡへのウイルスの組込みのための基質である。

【0146】

任意の態様において、本発明の方法に従う使用のためのベクターは、以下：
・ ＥＦ１α（アルファ）プロモーター；
・ ２Ａリボソームスキッピング配列；
・ ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）；
・ （ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα又はＶα）ドメインの前に、ＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ又はＶベータ）ドメインを翻訳するような配置；又は
・ （ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα又はＶα）鎖の前に、ＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ又はＶベータ）鎖を翻訳するような配置
のうちの任意の１つ以上又は全てを含みうる。

【0147】

好ましくは、ベクターは、レンチウイルスベクターである。

【0148】

「作動可能に連結された」という用語は、一方の機能が、他方の影響を受けるような、単一の核酸断片上における、２つ以上の核酸分子の会合を指す。例えば、プロモーターは、このコード配列の発現に影響を及ぼすことが可能である場合に、コード配列と作動可能に連結されている（すなわち、コード配列はプロモーターの転写制御下にある）。「連結されていない」とは、会合した遺伝子エレメントが、互いと緊密に関連せず、一方の機能が、他方に影響を及ぼさないことを意味する。

【0149】

本明細書において使用された、「発現ベクター」は、適切な宿主における核酸分子の発現をもたらすことが可能な、適切な制御配列に、作動可能に連結された核酸分子を含有する核酸構築物を指す。このような制御配列は、転写をもたらすプロモーター、このような転写を制御する、任意選択的なオペレーター配列、適切なｍＲＮＡのリボソーム結合性部位をコードする配列並びに転写及び翻訳の終結を制御する配列を含む。ベクターは、プラスミド、ファージ粒子、ウイルス又は、単に、潜在的なゲノムインサートでありうる。適切な宿主を形質転換したら、ベクターは、宿主ゲノムと独立に、複製され、機能する場合もあり、場合によって、ゲノム自体へと組み込まれる場合もある。本明細書において、「プラスミド」、「発現プラスミド」、「ウイルス」及び「ベクター」は、互換的に使用されることが多い。

【0150】

本明細書において使用された、「発現」という用語は、ポリペプチドが、遺伝子など、核酸分子のコード配列に基づき産生される過程を指す。過程は、転写、転写後制御、転写後修飾、翻訳、翻訳後制御、翻訳後修飾又はこれらの任意の組合せを含みうる。

【0151】

核酸分子を、細胞へと挿入する文脈における、「導入された」という用語は、「トランスフェクション」又は「形質転換」若しくは「形質導入」を意味し、核酸分子の、真核細胞又は原核細胞への組込みに対する言及を含み、この場合、核酸分子は、細胞のゲノム（例えば、染色体ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、プラスチドＤＮＡ又はミトコンドリアＤＮＡ）へと組み込まれる場合もあり、自律性レプリコンへと転換される場合もあり、一過性に発現される（例えば、トランスフェクトされたｍＲＮＡ）場合もある。

【0152】

本明細書において使用された、「異種」核酸分子、「異種」構築物若しくは「異種」配列又は「外因性」核酸分子、「外因性」構築物若しくは「外因性」配列とは、宿主細胞に対して天然ではない核酸分子若しくは核酸分子の部分を指すが、宿主細胞に由来する核酸分子若しくは核酸分子の部分と相同でありうる。異種核酸分子、異種構築物若しくは異種配列又は外因性核酸分子、外因性構築物若しくは外因性配列の供給源は、異なる属又は種に由来しうる。ある特定の実施形態において、異種核酸分子又は外因性核酸分子は、例えば、コンジュゲーション、形質転換、トランスフェクション、電気穿孔などにより、宿主細胞又は宿主ゲノムへと付加される（すなわち、内因性又は天然ではない）が、この場合、付加された分子は、宿主ゲノムへと組み込まれる場合もあり、染色体外遺伝物質として（例えば、プラスミド又は他の形態の自己複製型ベクターとして）存在する場合もあり、複数のコピーにおいて存在しうる。加えて、「異種」とは、宿主細胞が、相同なタンパク質又は活性をコードする場合であってもなお、宿主細胞へと導入された外因性核酸分子によりコードされる、非天然の酵素、タンパク質又は他の活性を指す。

【0153】

本明細書において記載された通り、１つを超える異種核酸分子又は外因性核酸分子は、宿主細胞へと、別個の核酸分子として導入される場合もあり、個別に制御される複数の遺伝子として導入される場合もあり、ポリシストロニックの核酸分子として導入される場合もあり、融合タンパク質をコードする単一の核酸分子として導入される場合もあり、これらの任意の組合せとして導入される場合もある。例えば、本明細書において開示された通り、宿主細胞は、本明細書において記載されたペプチドに特異的な、所望のＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及びＴＣＲβ）をコードする、２つ以上の異種核酸分子又は外因性核酸分子を発現するように改変されうる。２つ以上の外因性核酸分子が、宿主細胞へと導入される場合、２つ以上の外因性核酸分子は、単一の核酸分子（例えば、単一のベクター上の）として導入される場合もあり、別個のベクター上に導入される場合もあり、単一の部位又は複数の部位において、宿主染色体へと組み込まれる場合もあり、これらの任意の組合せの場合もある。言及された異種核酸分子又は異種タンパク質の活性の数とは、コード核酸分子の数又はタンパク質活性の数を指すものであり、宿主細胞へと導入された、別個の核酸分子の数を指すものではない。

【0154】

本明細書において使用された、「内因性」又は「天然」という用語は、宿主細胞内に通常存在する、遺伝子、タンパク質又は活性を指す。さらに、親の遺伝子、タンパク質又は活性と比較して、突然変異した、過剰発現された、シャフリングされた、重複した、若しくは他の形において変更された遺伝子、タンパク質又は活性もやはり、この特定の宿主細胞に内因性又は天然であると考えられる。例えば、第１の遺伝子に由来する内因性制御配列（例えば、プロモーター、翻訳抑制配列）は、第２の天然の遺伝子又は核酸分子の発現を変更又は調節するのに使用される場合があり、この場合、第２の天然の遺伝子又は核酸分子の発現又は調節は、親細胞内の正常な発現又は調節と異なる。

【0155】

「相同」又は「相同体」という用語は、宿主細胞、宿主種若しくは宿主株において見出される、又はこれらに由来する、分子又は活性を指す。例えば、異種核酸分子又は外因性核酸分子は、天然の宿主細胞遺伝子と相同な場合があり、任意選択的に、発現レベルが変更されている場合もあり、配列が異なる場合もあり、活性が変更されている場合もあり、これらの任意の組合せである場合もある。

【0156】

宿主細胞は、リン酸カルシウム若しくは塩化カルシウム共沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション又は電気穿孔など、常套的な技法を使用して、本発明の核酸を発現するように形質転換されうる。宿主細胞を形質転換するために適する方法は、Ｓａｍｂｒｕｃｋら（１９８９）及び他の実験教科書において見出されうる。本発明の核酸配列はまた、標準的技法を使用して、化学合成される場合もある。

【0157】

本明細書において使用された、「宿主」という用語は、目的のポリペプチド（例えば、アフィニティーが高い又は増強されたＴＣＲ）を産生するように、異種核酸分子又は外因性核酸分子による遺伝子改変のためにターゲティングされた細胞（例えば、Ｔｒｅｇ細胞）又は微生物を指す。ある特定の実施形態において、宿主細胞は、任意選択的に、異種タンパク質若しくは外因性タンパク質の生合成と関連する、又は関連しない、所望の特性（例えば、検出用マーカーの組入れ；内因性ＴＣＲの欠失、変更又は切断；共刺激因子の発現の増大）を付与する、他の遺伝子改変を、既に保有する場合もあり、これらを含むように改変される場合もある。一部の実施形態において、宿主細胞は、本明細書において記載された結合性タンパク質を発現するように遺伝子改変される。

【0158】

治療の条件
本発明は、多様な自己免疫疾患、特に、タンパク質である、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ、Ｒｏ６０及びＭＰＯのうちの１つ以上に対する、異常な免疫応答（自己抗体の形成など）により特徴付けられる自己免疫疾患を治療するための方法に関する。方法は、典型的に、治療を必要とする個体において、Ｔｒｅｇ細胞の集団を施すステップを伴い、この場合、Ｔｒｅｇ細胞が、本明細書において記載された結合性タンパク質であるＴＣＲを発現する。

【0159】

「治療有効量」という語句は、一般に、（ｉ）特定の疾患、状態若しくは障害を治療する、（ｉｉ）特定の疾患、状態若しくは障害の１つ以上の症状を、緩和する、改善する、若しくは消失させる又は（ｉｉｉ）本明細書において記載された、特定の疾患、状態若しくは障害の１つ以上の症状の発生を遅延させる、本発明の結合性タンパク質又はペプチドを発現する細胞の量を指す。

【0160】

本明細書において使用された、「～を予防すること」又は「予防」は、少なくとも、疾患若しくは障害に罹患する可能性又は危険性（又はこれに対する感受性）の低減（すなわち、疾患へと曝露されている場合もあり、これに対する素因がある場合もあるが、未だ疾患の症状を経ていない、又はこれを提示していない個体において、疾患の臨床症状のうちの少なくとも１つを発症させないこと）を指すことが意図される。本明細書において、このような患者を同定するための生物学的パラメータ及び生理学的パラメータは提示されており、また、医師にも周知である。

【0161】

特に好ましい実施形態において、本発明の方法は、本明細書において記載された疾患若しくは状態を予防する、若しくはこれらの重症度を低減する、又はこれらの進行若しくは再燃若しくは症状を阻害若しくは最小化することでありうる。このように、本発明の方法は、治療としての有用性のほか、予防としての有用性も有する。

【0162】

対象の「治療」又は「～を治療すること」という用語は、疾患若しくは状態、疾患若しくは状態の症状又は疾患若しくは状態の危険性（又はこれらに対する感受性）の、遅延、緩徐化、安定化、治癒（ｃｕｒｉｎｇ、ｈｅａｌｉｎｇ）、緩和、軽減、変更、修復、増悪の軽減、改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｎｇ、ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ）又は働きかけの目的を含む。「～を治療すること」という用語とは、緩和；寛解；増悪速度の鈍化；状態の重症度の低下；症状の安定化、減少若しくは状態を個体により忍容可能とすること；変性速度若しくは衰弱速度の緩徐化；変性終点の消耗性を低下させること；又は対象の身体的福利若しくは精神的福利を改善することなど、任意の客観的又は主観的パラメータを含む、本明細書に記載された自己免疫疾患（例えば、ＳＬＥ、シェーグレン症候群、血管炎、顕微鏡的多発血管炎又は硬化症）の治療又は改善の成功についての任意の徴候を指す。

【0163】

本明細書において記載された方法はまた、治療を必要とする対象とする自己免疫疾患のための、既存の標準治療処置／標準治療法と組み合わせても使用されうることが理解される。当業者は、ステロイド、抗マラリア剤（ヒドロキシクロロキン、クロロキン）、免疫抑制剤（アザチオプリン、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、ミコフェノール酸、タクロリムス、ボクロスポリン、シクロスポリン）、キナーゼ阻害剤（バリシチニブ、トファシチニブ、ウパダシチニブ）及び生物製剤（ベリムマブ、リツキシマブ、アニフロルマブ、ウステキヌマブ、オビヌツズマブ）の使用を含むがこれらに限定されない治療を必要とする、自己免疫疾患の治療のための、既存の標準治療法に精通している。本発明は、既存の標準治療法の、本発明の特異的方法との組合せを含む。

【0164】

本明細書における「対象」は、好ましくは、ヒト対象である。本発明は、ヒトにおいて適用されるが、本発明はまた、獣医科的目的のためにも有用である。本発明は、ウシ、ヒツジ、ウマ及び家禽などの家畜又は農場動物；ネコ及びイヌなどの愛玩動物；並びに動物園動物に有用である。「対象」及び「個体」という用語は、本発明に従う治療を必要とする個体であることが理解される。

【0165】

全身性エリテマトーデス
本発明は、特に、タンパク質である、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ若しくはＲｏ６０のうちの１つ以上又はＭＰＯタンパク質に対する、異常な免疫応答と関連する場合における、全身性エリテマトーデスを治療するための方法を含む。

【0166】

全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、多系統自己免疫疾患である。世界中における、少なくとも５００万人が、ＳＬＥを有し、診断された人々のうちの９０％は、女性であり、多くは１５～４４歳の間にＳＬＥを発症する。オーストラリアにおいて、ＳＬＥは、１０００人中約１人において診断され、オーストラリア原住民及びアジア系オーストラリア人においてより高頻度かつ重度である。ＳＬＥ患者は、脳、腎臓、心臓、肺、関節、皮膚及び他の臓器において、３を上回る標準化死亡率により例示された、平均寿命の顕著な短縮を結果としてもたらす、慢性の免疫媒介型炎症性損傷を患っている。英国コホートにおいて、患者のうちの１４％である、追跡期間中に死亡した患者の平均死亡年齢は、わずか５２歳であった。臨床経過は、不可逆的臓器損傷の増加及びこれによる死亡と関連する、挿間的再燃により特徴付けられることが多い。

【0167】

ループスの他の形態は、円板状ループス、薬物誘導性ループス及び新生児ループスを含む。これらのうち、全身性エリテマトーデス（また、ＳＬＥとしても公知である）は、最も一般的かつ重篤な形態である。ループスについての、より完全な類別は、以下種類：急性皮膚エリテマトーデス、亜急性皮膚エリテマトーデス、円板状エリテマトーデス（慢性皮膚）、小児円板状エリテマトーデス、汎発型円板状エリテマトーデス、局所型円板状エリテマトーデス、凍瘡状エリテマトーデス（ハッチンソン病）、エリテマトーデス－扁平苔癬重複症候群、エリテマトーデス性脂肪織炎（深在性エリテマトーデス）、腫脹性エリテマトーデス、疣贅状エリテマトーデス（肥厚性エリテマトーデス）、皮膚ループスムチン沈着症、補体欠損症候群、薬物誘導性エリテマトーデス、新生児エリテマトーデス、全身性エリテマトーデスを含む。

【0168】

皮膚エリテマトーデス（ＣＬＥ）は、ＳＬＥ症例の大部分においてみられ、日光へと曝露された皮膚において観察されることが多く、様々な重度の皮膚紅斑及び、場合によって、外観を損なう皮膚紅斑として現れる。ループスはまた、また、不完全エリテマトーデスとしても公知である、純粋な皮膚形態としても顕在化しうる。ＳＬＥの発症及びその間欠的再燃のパターンをもたらす、全ての因子が公知であるわけではないが、太陽光への曝露が、全身性疾患の増悪のほか、皮膚疾患の増悪においても重要であることは明らかである。

【0169】

ループスを伴うと診断された患者に共通の症状のうち、ほぼ全ての患者は、関節痛及び／又は関節腫脹（すなわち、関節炎）を有する。高頻度の罹患関節は、指、手掌、手首及び膝の関節である。他の一般的な症状は、胸膜炎性胸部疼痛、口腔内潰瘍及び鼻腔内潰瘍、疲労感、他の原因を伴わない発熱、全般的な不快感、不安感又は病感（倦怠感）、脱毛、太陽光への過敏性、ＳＬＥ罹患者のうちの約半数における皮膚紅斑（「蝶形」紅斑）を含み、また、瘢痕性「円板状」病変及びリンパ節の腫脹も含む。当業者は、腎炎、ＣＮＳ病変、血液病変、消化器病変及び血管炎を含むがこれらに限定されない、ループスの他の多様な重要症状に精通している。

【0170】

本明細書において使用された、ＣＬＥ又はＳＬＥを伴う個体における、光感受性又は光感受性の異常は、太陽光に対する、異例の反応から生じる皮膚紅斑を含む。日光への曝露は、皮膚紅斑の発症を越えて、ループスとの共存者に、関節痛、衰弱、疲労感及び発熱などの症状を伴う、疾患活動の増大を経させる場合がある。ループス罹患者のうちの３分の２は、太陽光からの紫外線若しくは蛍光灯など、人工の室内光からの紫外線又はこれらの両方に対する感受性を増大させている。

【0171】

シェーグレン症候群
本発明は、特に、タンパク質である、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ若しくはＲｏ６０のうちの１つ以上又はＭＰＯタンパク質に対する、異常な免疫応答と関連する場合における、シェーグレン症候群を治療するための方法を含む。

【0172】

シェーグレン症候群は、母集団のうちの０．５％～１％の間が罹患すると推定される自己免疫障害であり、特に、原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ）は、このような自己免疫障害であり、シェーグレン症候群の患者１０例中９例は、女性である。ｐＳＳを伴う女性の大部分は、疲労感、関節痛並びに眼及び／又は口の乾きを症状とする、軽度～中程度の疾患により特徴付けられる。疾患は、ドライアイ及び口渇を引き起こす、その後における唾液腺及び涙腺の炎症、損傷及び機能喪失を伴う、唾液腺及び涙腺に対するリンパ球浸潤により特徴付けられる。肺、腎臓及び肝臓を含む、主要な臓器系の病変は、ｐＳＳの共通の全身症状である。生化学レベルにおいて、ｐＳＳは、免疫グロブリンレベルの上昇及びＳＳＡ／Ｒｏ及びＳＳＢ／Ｌａなどのリボヌクレオタンパク質複合体に対する抗核抗体の産生と関連する。

【0173】

疲労感は、シェーグレン症候群の、最も一般的な腺外症状のうちの１つであり、永続的な全身疲労により規定される。ｐＳＳ患者のうち、推定７０％が、深甚な疲労感を患い、これは、生活の質に対して、負の影響を及ぼすことが報告されている。血清学的に、これらの患者のうちの約８０％は、低分子非コードＲＮＡ分子を含有する自己抗原に結合する抗Ｒｏ／ＳＳＡ自己抗体を有する。疲労感は、強度、持続期間及び日常的機能に対する影響の点において特徴付けられうる。とりわけ、一次治療状況において、疲労感は、うつ病と強く関連する。したがって、シェーグレン症候群などの自己免疫疾患を伴う患者における疲労感を改善する手段が必要とされている。

【0174】

本明細書において使用された、「原発性シェーグレン症候群（ｐＳＳ）」、「シェーグレン症候群」、「シェーグレン病」及び「シェーグレン」という用語は、互換的に使用されうる。

【0175】

任意の実施形態において、シェーグレン症候群の治療は、治療を必要とする対象における疲労感の軽減又は減少を含みうる。多様なＰＲＯ（ｐａｔｉｅｎｔ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｏｕｔｃｏｍｅ）尺度が、慢性疾患を伴う対象における疲労感の測定において、使用及び検証されている。当技術分野において、このようなＰＲＯは公知であり、本明細書において記載された、Ｔｒｅｇ細胞の集団による治療の有効性について評価するのに使用されうる。原発性シェーグレン症候群を伴う患者の症状について評価するために、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｌｅａｇｕｅ Ａｇａｉｎｓｔ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（ＥＵＬＡＲ）Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＳＳ） Ｐａｔｉｅｎｔ Ｒｅｐｏｒｔｅｄ Ｉｎｄｅｘ（ＥＳＳＰＲＩ）が開発された（Ｓｅｒｏｒら、Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．、２０１１、７０：９６８～９７２）。ＥＳＳＰＲＩは、原発性シェーグレン症候群の全ての重要な症状及び機能障害をもたらす症状：乾き、四肢疼痛並びに疲労感を測定するための世界的スコアとして開発された。ＥＳＳＰＲＩは、内容の妥当性を失わずに、症状の各々を測定するのに十分であることが示されており、スコアは、計算が容易である。ＥＳＳＰＲＩとは、原発性シェーグレン症候群を伴う患者の症状について評価する、患者実施型の問診票である。問診票は、以下の症状：（１）乾き、（２）四肢疼痛及び（３）疲労感の各々について、１つずつの、３つのスケールを含む。ＥＳＳＰＲＩの各構成要素は、０～１０にわたる単一の数値スケールにより測定され、グローバルＥＳＳＰＲＩスコアは、３つのスケールの平均値：（乾き＋四肢疼痛＋疲労感）／３である。ＥＳＳＰＲＩスコアの、少なくとも１ポイントの減少が、臨床的に有意味である。

【0176】

Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｉｌｌｎｅｓｓ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｆａｔｉｇｕｅ ｓｃａｌｅ（ＦＡＣＩＴ－Ｆａｔｉｇｕｅ）による機能評価は、過去一週間にわたる、それらの通常の日常的活動における、個体の疲労感レベルについて評価するのに使用される。ＦＡＣＩＴ－Ｆａｔｉｇｕｅ問診票及びＳｃｏｒｉｎｇ ＆ Ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ Ｍａｔｅｒｉａｌｓは、ＦＡＣＩＴ．ｏｒｇ（Ｅｌｍｈｕｒｓｔ、Ｉｌｌ．、ＵＳＡ）から入手可能である。ＦＡＣＩＴ－Ｆａｔｉｇｕｅ問診票は、一連の総合尺度及び標的尺度を提供する。ＦＡＣＩＴ－Ｆａｔｉｇｕｅスケールは、高度の内的妥当性、高度の検査－再検査間信頼度、様々な慢性健康状態を伴う患者における変化に対する信頼度及び感度、使用の容易さ並びに様々な状況における使用を含む、多くの利益を有する（Ｋ．Ｆ．Ｔｅｎｎａｎｔ、Ｔｒｙ Ｔｈｉｓ：ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ、Ｎｕｒｓｉｎｇ Ｃａｒｅ ｔｏ Ｏｌｄｅｒ Ａｄｕｌｔｓ、３０号、２０１２；Ｃｈａｎｄｒａｎら、Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．、２００７、６６：９３６～９３９）。ＦＡＣＩＴ－Ｆａｔｉｇｕｅは、元来、がんを伴う患者における疲労感を測定するのに開発された１３項目の問診票であり、現在、シェーグレン病を伴う患者において、疲労感を測定するのに使用されている。患者は、０～４（０＝全く感じない、１＝若干、２＝ある程度感じる、３＝かなり強く感じる、４＝極めて強く感じる）に評定された、１３の質問に回答するように求められる。疲労感スケールは、可能な最高のスコアを５２とする、１３項目を有する。疲労感スケールの高スコアは、低レベルの疲労感に対応し、生活の質の向上を指し示す。ＦＡＣＩＴ－Ｆａｔｉｇｕｅスコアを計算するために、否定的な表現の質問に対する応答スコアは、反転され、次いで、１３項目についての応答が足し合わされる。応答を伴う１１項目は、それらのスコアが反転され（応答が欠測していない場合、項目のスコア＝４－応答とする。）、２項目（項目７～８）は、それらの応答を不変とする。全ての項目は、高スコアが、より低い疲労感に対応するように足し合わされる。個々の質問が省略された場合、スコアは、スケール内の他の回答の平均を使用して按分される。ＦＡＣＩＴ－Ｆａｔｉｇｕｅ＝１３×［合計（反転項目）＋合計（項目７～８）］／回答された項目の数である。

【0177】

ＰｒｏＦ（ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ｆａｔｉｇｕｅ）は、原発性シェーグレン症候群と関連する疲労感の特徴付けにおいて有効な評価ツールを確立するために開発された。ＰｒｏＦは、原発性シェーグレン症候群を伴う患者における疲労感及び全体的な不快感の重症度を測定するための、信頼できる、妥当な尺度であることが示されている。ＰｒｏＦとは、身体的疲労感についての１つのドメイン及び精神的疲労感についての１つのドメインである、２つのドメインへと分けられた、１６項目にわたる自己記入式の問診票である。身体的疲労感についてのドメインは、４つの側面へと分けられた、１２の項目：（ａ）休息を要する（４項目）、（ｂ）始動不良（３項目）、（ｃ）スタミナの低下（３項目）及び（ｄ）筋肉低下（２項目）を含む。精神的疲労感についてのドメインは、２つの側面へと分けられた、４つの項目：（ａ）集中力の低下（２項目）及び（ｂ）記憶力の低下（２項目）を含む。患者は、過去２週間の間の、それらの最悪の状態において、患者がどのように感じたのかに基づき、各項目を、０～７のスケール（０＝「全く問題なし」～７＝「想定しうる最悪の状態」）により評定する。各側面についてのスコアは、各側面内の項目のスコアを足し合わせ、合計を、各側面内の項目の数により除することにより得られうる。各ドメイン（例えば、身体ドメイン、精神ドメイン）についてのスコアは、各ドメイン内の側面のスコアを足し合わせ、合計を、各ドメイン内の側面の数により除することにより得られうる。高スコアは、疲労感の増大を指し示す（Ｂｏｗｍａｎら、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、２００４、４３：７５８～７６４；Ｓｔｒｏｍｂｅｃｋら、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ． ２００５、３４：４５５～４５９；Ｓｅｇａｌら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ． ２００８年１２月１５日、５９（１２）：１７８０～１７８７）。

【0178】

一部の実施形態において、患者の状態は、１つ以上の患者報告型指数（例えば、ＥＳＳＰＲＩ、ＰＲＯＦ、ＦＡＣＩＴ）を介して、患者における疲労感を、治療前の患者における疲労感のレベルと比較して、又は同様に罹患した非治療患者又は対照患者における疲労感のレベルと比べて測定することにより査定される。

【0179】

例えば、治療を必要とするヒト対象は、選択又は同定される（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ＳＬＥを満たす患者又はＡｍｅｒｉｃａｎ－Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａを満たす患者）。対象は、例えば、疲労感など、ＳＬＥ又はシェーグレン症候群の原因又は症状の軽減を必要としうる。対象の同定は、臨床状況においてなされる場合もあり、別の場所、例えば、対象自身による、自己検査キットの使用を介して、対象の自宅においてなされる場合もある。患者の状態は、ベースライン（１日目）及び初回投与に続くある期間の後において、例えば、８日目、１５日目、２９日目、４３日目、５７日目、７１日目、８５日目、９９日目又は研究の終了時において、例えば、ＥＳＳＰＲＩ指数、ＰＲＯＦ及び／又はＦＡＣＩＴ－Ｆａｔｉｇｕｅスケールにより査定される。妥当な他の基準もまた、測定されうる。投与の回数及び強度は、対象の必要に従い調整される。治療の後において、以下の転帰：（１）ＥＳＳＰＲＩ指数の、治療前におけるＥＳＳＰＲＩ指数と比べた改善又は同様に罹患したが治療されていない対象／対照対象と比べた改善、（２）ＰＲＯＦの、治療前におけるＰＲＯＦと比べた改善又は同様に罹患したが治療されていない対象／対照対象と比べた改善、（３）ＦＡＣＩＴ－Ｆａｔｉｇｕｅスケールの、治療前におけるＦＡＣＩＴ－Ｆａｔｉｇｕｅスケールと比べた改善又は同様に罹患したが治療されていない対象／対照対象と比べた改善のうちの１つ以上の改善が認められる。一部の実施形態において、ＥＳＳＰＲＩ指数の改善は、臨床的に有意味な改善である。臨床的に有意味なＥＳＳＰＲＩ指数の改善は、ＥＳＳＰＲＩスコアの、少なくとも１ポイントの減少である。

【0180】

当技術分野で公知である、多様な神経心理学的アッセイもまた、シェーグレン症候群関連認知機能の改善についての評価を含む、本明細書において開示された治療法の有効性について評価するために使用されうる。例えば、ＤＳＳＴ（ｄｉｇｉｔ ｓｙｍｂｏｌ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｔｅｓｔ）は、多くのドメインの影響を受ける認知機能不全を測定するための、妥当であり、かつ、高感度である検査を提供する。ＤＳＳＴは、認知機能不全の存在並びにシェーグレン症候群を伴う患者を含む臨床集団の範囲にわたる認知機能の変化のいずれに対しても、高感度である。この神経心理学的検査は、実行機能関連インプットについての、広く使用され、高度に検証され、極めて高感度である検査リードアウトである。

【0181】

ＤＳＳＴは、一枚の用紙上においてなされる、時間制限付きの筆記による認知検査である。検査は、用紙上部の凡例に従い、患者が、記号を、数とマッチさせることを必要とする。患者は、記号を、数列の下方の空間へと転記し、許容時間（例えば、９０又は１２０秒間）内における、正しい記号の数が計算される。検査は、課題を実施する正確さ及び速度についてのデータを提供する。患者のＤＳＳＴ成績は、日常の仕事をこなす能力など、実生活における機能的転帰及び精神科的状態の範囲にある、機能的な無力状態からの回復と相関する。ＤＳＳＴ検査は、患者における注意力及び／又は集中力について評価するのに使用されうる。

【0182】

ＤＳＳＴは、認知の実行範囲を測定し、時間経過にわたり認知機能をモニタリングするための、実践的であり、かつ、有効な方法を提供する、多因子検査である。ＤＳＳＴにおいて成績良好であるために、患者は、完全な運動速度、走査又は筆記能力若しくは描画能力（すなわち、基本的な機転）を含む、注意機能及び視知覚機能を有さなければならない。ＤＳＳＴは、認知機能障害を検出するための高感度をもたらし、簡潔さ、信頼性、変化に対する感度並びに言語、文化及び教育の、検査成績に対する影響が最小限であることを含む、多くの利益を有する（Ｊａｅｇｅｒ，Ｊ．、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｓｙｃｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、３８（５）、５１３～５１８、２０１８年１０月）。

【0183】

全身性硬化症
本発明は、特に、タンパク質である、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ若しくはＲｏ６０のうちの１つ以上又はＭＰＯタンパク質に対する、異常な免疫応答と関連する場合における、全身性硬化症を治療するための方法を含む。

【0184】

全身性硬化症（Ｓｓｃ；強皮症としてもまた公知である）は、皮膚及び／又は内臓の進行性線維症を結果としてもたらしうる、非遺伝性、非感染性、多臓器系の自己免疫疾患である。状態は、過剰なコラーゲン沈着により特徴付けられる。ＣＲＥＳＴ症候群（限局性強皮症ともまた称される）として公知の状態の一形態は、以下の特徴：石灰沈着症、レイノー現象、食道運動障害、手指硬化及び毛細血管拡張症を結果としてもたらしうる。

【0185】

ＳＳｃは、皮膚線維症を結果としてもたらす、真皮内における細胞外マトリックスの過剰な沈着により誘発される、多種多様な症状を有する。後期において、ＳＳｃは、胃、肺又は腎臓など、他の内臓に影響を及ぼす、進行性の組織線維症により特徴付けられる。したがって、強皮症は、例えば、肺線維症、腎線維症、心臓、胃又は血管の線維症もまた含む疾患の特徴である。炎症、自己免疫障害又は血管損傷は、線維芽細胞を活性化させることが示唆される。線維増殖は、Ｉ型コラーゲンに支配された、過剰な細胞外マトリックス産生を伴う結果として、進行性の組織線維症もたらし、これは、末端臓器不全を引き起こし、末期ＳＳｃを伴う患者において、高罹患率及び高死亡率をもたらしうる。

【0186】

本発明は、全身性硬化症（ＳＳｃ）、びまん性全身性硬化症（ｄＳＳｃ）、限局性全身性硬化症（ｌＳＳｃ）、重複型全身性硬化症、未分化型全身性硬化症、ｓｓＳＳｃ（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｓｉｎｅ ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、皮膚線維症、強皮症、腎性線維化性皮膚症（ＮＦＤ）及び／又はケロイド形成の治療を想定する。

【0187】

一部の実施形態において、強皮症のための治療を必要とする個体は、炎症、線維症、血管症及び／又は自己免疫について評価される。一部の実施形態において、個体は、以下のうちの少なくとも１つ：皮膚の肥厚、中手指節（ＭＣＰ）関節に近位における皮膚肥厚、手指の皮膚肥厚、手指腫脹、手指硬化、手指先端部における病変、指先端部における潰瘍、圧痕性瘢痕、毛細血管拡張症、爪廓部毛細血管の異常、石灰沈着症、食道拡張、強皮症腎クリーゼ、間質性肺疾患、肺動脈性高血圧症及び／又は間質性肺疾患、レイノー現象、関連抗体（例えば、抗セントロメア抗体、抗Ｓｃｌ－７０抗体／抗トポイソメラーゼ抗体、抗フィブラリン自己抗体、抗ＩＩＩ型ＲＮＡポリメラーゼ自己抗体、抗Ｔｈ／Ｔｏ、ＰＭ－Ｓｃｌ、抗Ｒｏ、抗Ｕｌ－リボヌクレオタンパク質など）及び皮膚内のコラーゲンｍＲＮＡレベルについて評価される。一部の実施形態において、強皮症は、皮膚に限局される。一部の実施形態において、強皮症は、皮膚以外の、少なくとも１つの臓器に関与する。一部の実施形態において、強皮症は、全身性硬化症と称される。一部の実施形態において、強皮症は、ＣＲＥＳＴ症候群である。

【0188】

一部の実施形態において、状態は、血漿試料を使用して評価される。一部の実施形態において、状態は、血液試料を使用して評価される。一部の実施形態において、状態は、皮膚生検試料を使用して評価される。一部の実施形態において、状態は、線維性バイオマーカーを使用して評価される。一部の実施形態において、状態は、状態特異的自己抗体の検出を使用して評価される。

【0189】

一部の実施形態において、状態は、ＭＲＳＳ（ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｒｏｄｎａｎ ｓｋｉｎ ｓｃｏｒｅ）を使用して評価される。一部の実施形態において、各身体部位についてのＭＲＳＳスコアは、以下の通り：０＝皮膚病変なし；１＝軽度の肥厚；２＝中程度の肥厚及び３＝重度の肥厚である。一部の実施形態において、身体部位におけるＭＲＳＳは、少なくとも２である。一部の実施形態において、個体は、中程度の皮膚の肥厚を有する。一部の実施形態において、皮膚の厚さは、１７の異なる身体部位において測定される。一部の実施形態において、個体は、少なくとも１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０又は５１の全身ＭＲＳＳスコアを有する。

【0190】

一部の実施形態において、状態は、触診を使用して評価される。一部の実施形態において、状態は、１７の異なる身体領域における触診を使用して評価される。一部の実施形態において、身体領域は、以下：手指、手掌、前腕部、腕部、足部、脚部及び大腿部（両側）並びに顔面、胸部及び腹部（単独）のうちの少なくとも１つを含む。

【0191】

一部の実施形態において、状態は、ＬｏＳＣＡＴ（ｌｏｃａｌｉｚｅｄ Ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｔｏｏｌ）を使用して評価される。一部の実施形態において、ＬｏＳＣＡＴは、１８の皮膚解剖学的部位について評価する。

【0192】

一部の実施形態において、ＬｏＳＣＡＴは、疾患活動性（ｍＬｏＳＳＩ）パラメータ及び損傷（ＬｏＳＤＩ）パラメータを捕捉する。一部の実施形態において、ＬｏＳＣＡＴは、疾患の不活動期において、疾患である限局性強皮症から生じる皮膚病変について検討する。一部の実施形態において、各部位についてのスコアは、各パラメータについて、最重度のスコアに基づく。一部の実施形態において、皮膚の変化は、対象間のばらつきを最小化するように、反対側又は同側の皮膚領域と比較される。

【0193】

一部の実施形態において、Ｌｅｒｏｙ／Ｍｅｄｓｇｅｒ基準が使用される。一部の実施形態において、１９８８年版Ｌｅｒｏｙ／Ｍｅｄｓｇｅｒ基準が使用される。一部の実施形態において、２００１年版Ｌｅｒｏｙ／Ｍｅｄｓｇｅｒ基準が使用される。一部の実施形態において、状態は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（ＡＣＲ）基準を使用して評価される。一部の実施形態において、状態は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｌｅａｇｕｅ Ａｇａｉｎｓｔ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（ＥＵＬＡＲ）基準を使用して評価される。一部の実施形態において、２０１３年版ＡＣＲ／ＥＵＬＡＲ診断的基準が使用される。一部の実施形態において、個体は、２０１３年版ＡＣＲ／ＥＵＬＡＲ診断的基準を使用して、少なくとも９の総スコアを有する場合に、全身性硬化症を伴うと診断される。

【0194】

一部の実施形態において、治療は、本明細書において記載されたスコアの変化を使用して評価される。一部の実施形態において、治療は、本明細書において記載された測定値のパーセント変化を使用して評価される。一部の実施形態において、治療は、治療の後における、皮膚病変についての、遠隔型サーモグラフィープロファイルの変化を使用して評価される。一部の実施形態において、治療は、治療の後における、標的皮膚病変についての超音波プロファイルの変化を使用して評価される。

【0195】

一部の実施形態において、状態は、肺についてのコンピューター断層撮影（ＣＴ）走査を使用して評価される。一部の実施形態において、状態は、腎機能を測定することにより評価される。一部の実施形態において、状態は、血中クレアチニンレベルを測定することにより評価される。一部の実施形態において、状態は、肺機能検査を使用して評価される。一部の実施形態において、状態は、肺活量の尺度である、努力肺活量（ＦＶＣ）を使用して評価される。一部の実施形態において、状態は、肺胞内における酸素交換の尺度である、拡散能（ＤＬＣＯ）を使用して評価される。

【0196】

一部の実施形態において、状態は、ＤＬＱＩ（Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ Ｌｉｆｅ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ）を使用して評価される。一部の実施形態において、状態は、ＨＡＱ－ＤＩ（Ｈｅａｌｔｈ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ－Ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ）を使用して評価される。一部の実施形態において、状態は、ＰＧＡ（ｐｈｙｓｉｃｉａｎ ｇｌｏｂａｌ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）を使用して評価される。

【0197】

炎症性筋炎
本発明は、特に、タンパク質である、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ若しくはＲｏ６０のうちの１つ以上又はＭＰＯタンパク質に対する、異常な免疫応答と関連する場合における、炎症性筋炎を治療するための方法を含む。

【0198】

炎症性筋炎とは、筋肉の炎症により特徴付けられる、全身性自己免疫疾患である。本明細書において記載された通りに治療されうる炎症性筋炎状態の例は、限定せずに述べると、多発性筋炎、皮膚筋炎、封入体筋炎及び若年性筋炎を含む。

【0199】

任意の適切な方法は、対象が、炎症性筋炎状態を有するのかどうかを決定するのに使用されうる。例えば、対象（例えば、ヒト）は、標準的診断法を使用して、炎症性筋炎状態を有する対象として同定されうる。場合によって、対象が、炎症性筋炎状態を有するのかどうかを決定するように、組織生検が、回収され、解析されうる。

【0200】

本発明の方法に従う治療の後に、炎症性筋炎状態の重症度が低減されるのかどうかを決定するのに、任意の適切な方法が使用されうる。例えば、炎症性筋炎状態の重症度は、目視、診断法又は患者問診により評価されうる。

【0201】

顕微鏡的多発血管炎を含む、自己免疫性血管炎 本発明は、特に、ＭＰＯタンパク質、又はタンパク質である、ＳｍＢ／Ｂ’、ＳｍＤ若しくはＲｏ６０のうちの１つ以上に対する、異常な免疫応答と関連する場合における、顕微鏡的多発血管炎を含む、自己免疫性血管炎を治療するための方法を含む。

【0202】

自己免疫性血管炎とは、血管（動脈、静脈及び毛細血管）の炎症及び狭窄を引き起こす自己免疫疾患である。重度の症例において、状態は、臓器損傷又は死を引き起こしうる。血管炎の種類は、罹患血管のサイズに従い群分けされる。大半の種類の血管炎は、稀少であり、大血管（リウマチ性多発筋痛症、高安動脈炎、側頭動脈炎（巨細胞性動脈炎））、中血管（バージャー病、皮膚血管炎、川崎病、結節性多発動脈炎）、小血管（ベーチェット症候群、チャーグ－ストラウス症候群、皮膚血管炎、ヘノッホ－シェーンライン紫斑病、顕微鏡的多発血管炎、多発血管炎性肉芽腫症、ゴルフ血管炎、寒冷グロブリン血症）を含む。血管炎の症状は、数年間にわたり、１回又は数回生じうる。疾患は、全ての年齢、人種及び性別の人々に影響を及ぼす。

【0203】

血管炎の徴候及び症状は、変動し、軽度～致死性の範囲にわたりうる。血管炎の徴候及び症状は、血管炎の種類、罹患臓器及び状態がどのくらい重度であるのかに依存する。一部の人々は、徴候及び症状がほとんどないのに対し、他の人々は、極めて重篤となりうる。ある場合において、症状は、数カ月間の間に、緩徐に発症するのに対し、他の場合において、徴候及び症状は、数日間又は数週間の間に、急速に始まる。

【0204】

一般的な症状は、発熱、食欲不振、体重の減少、疲労感、全身の痛み及び疼痛を含む。血管炎は、多様な臓器系及び体組織に影響を及ぼし、皮膚（紫斑若しくは紅斑又は突起；小斑点のクラスター、しみ、あざ又は蕁麻疹；掻痒）、関節（１つ以上の関節における痛み又は関節炎）、肺（息切れ；喀血）、消化管（口内痛；胃痛；重度の症例において、腸の衰弱又は破断を引き起こしうる、腸への血流の遮断）、洞、鼻、咽頭及び耳（洞感染又は慢性中耳感染；鼻腔痛；場合によって、難聴）、眼（眼の充血、眼のかゆみ、眼の痛み；光過敏性；かすみ目；稀に、失明）、脳（頭痛；思考の乱れ；精神機能の変化；筋力低下及び麻痺などの脳卒中様症状）、神経（しびれ、身体の多様な部分におけるうずき及び衰弱；手掌及び足部における感覚又は筋力の喪失；腕部及び脚部における電撃痛）を含む範囲の徴候及び症状を引き起こしうる。重度の症例において、血管炎は、おそらく、動脈瘤をもたらす、血管内の閉塞を引き起こしうる。

【0205】

顕微鏡的多発血管炎とは、小内径血管に関与する壊死性血管炎であり、血管炎と関連する全身症状に加えて、肺腎症候群の一因となる、糸球体及び肺の毛細血管の損傷の一因となりうる。

【0206】

抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）とは、好中性顆粒球及び単球の細胞質内の抗原に対して形成される自己抗体である。これらは、多数の自己免疫障害、特に、全身性血管炎及びＡＮＣＡ関連血管炎（ＡＡＶ）と関連する。ＡＮＣＡは、免疫蛍光法（ＩＦ）により視覚化された場合、４つのパターン：細胞質ＡＮＣＡ（ｃ－ＡＮＣＡ）、Ｃ－ＡＮＣＡ（非定型）、核周囲ＡＮＣＡ（ｐ－ＡＮＣＡ）及びｘ－ＡＮＣＡとしてもまた公知である、非定型ＡＮＣＡ（ａ－ＡＮＣＡ）へと分けられる。ｃ－ＡＮＣＡは、中心部に小葉間の強調を伴う、細胞質内の顆粒状蛍光を示す。Ｃ－ＡＮＣＡ（非定型）は、通例一様であり、小葉間の強調を有さない細胞質染色を示す。ｐ－ＡＮＣＡは、３つの亜型である、古典的ｐ－ＡＮＣＡ、核内への拡張を伴わないｐ－ＡＮＣＡ及び顆粒球特異的抗核抗体（ＧＳ－ＡＮＡ）を有する。古典的ｐ－ＡＮＣＡは、核内への拡張を伴う核周囲染色を示し、核内への拡張を伴わないｐ－ＡＮＣＡは、核内への拡張を伴わない核周囲染色を有し、ＧＳ－ＡＮＡは、顆粒球上だけにおける核内染色を示し、ａ－ＡＮＣＡは、細胞質染色及び核周囲染色の両方の組合せを示すことが多い。

【0207】

ｐ－ＡＮＣＡ抗原は、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）を含む。現在のところ、ＡＮＣＡ陽性血管炎の診断は、それが、皮膚生検であれ、腎生検であれ、神経筋生検などであれ、生検にさらに基づく。ＡＮＣＡは、全身性血管炎についての診断の、重要な一助を構成する。こうして、抗ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）ＡＮＣＡは、顕微鏡的多発血管炎を患う患者のうちの６０～７５％及びチャーグ－ストラウス症候群を患う患者のうちの３８％において存在する。

【0208】

本発明の好ましい実施形態において、自己免疫性血管炎の治療は、抗ＭＰＯ ＡＮＣＡを有する患者の治療を含む。抗ＭＰＯ ＡＮＣＡ陽性血管炎の例は、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（チャーグ・シュトラウス症候群）を含み、稀少な症例において、多発血管炎を伴う肉芽腫症（ウェゲナー肉芽腫症）を含む。

【実施例】

【0209】

実施例１：無差別型ＴＣＲの同定
本発明者らは、健常個体に由来するＴ細胞を、３つの公知の異なる自己抗原に由来する、６つの異なる自己ペプチド（スミス自己抗原２つ；Ｒｏ６０自己抗原２つ及びＭＰＯ自己抗原２つ）と共に共培養した。６つの培養物全てにおいて、反応性が最も大きなＴ細胞クローン（すなわち、ＴＣＲ）は、同じであることが見出された。より詳細において、以下の通りである：

【0210】

方法 約５０ｍｌの全血液は、静脈穿刺を介して、ＥＤＴＡ－ｃｏａｔｅｄ Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ ｔｕｂｅｓ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）へと得た。単核細胞（ＭＮＣ）は、製造元のプロトコールに従い、密度遠心分離を、５０ｍｌのＳｅｐＭａｔｅ ｔｕｂｅｓ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）でＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐと共に使用して分離した。次いで、ＥａｓｙＳｅｐ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ＭＮＣに対して、単球の分離を実施した。

【0211】

分離された単球は、増殖染料であるＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｆａｒ Ｒｅｄ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）により染色し、カウントし、ＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ ＤＣ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｕｍ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中、１ｍｌ当たりの細胞１０^６個において再懸濁させた。細胞は、９６ウェルポリスチレン製平底プレート（Ｉｎ－Ｖｉｔｒｏ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中、ウェル１つ当たりの細胞１０^５個において播種した。培地の交換は、培養の３日目に実施し、樹状細胞成熟用サプリメント（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）は、製造元の指示書に従い、培養の５日目に添加した。

【0212】

単球培養の７日目に、ＨＬＡ－ＤＲ３及びＨＬＡ－ＤＲ４．５の両方を発現する、同じ健常個体から、静脈穿刺を介して、別の５０ｍｌの全血液を得た。ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ Ｈｕｍａｎ ＣＤ４＋ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｋｉｔ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して分離した。結果として得られるＣＤ４＋ Ｔ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により標識化し、温熱補充ＲＰＭＩ培地（１０％ヒト男性ＡＢ型血清、２％のペニシリン／ストレプトマイシン、４ｍＭのＬ－グルタミン及び５０μＭの２－メルカプトエタノール）中に再懸濁させ、樹状細胞１に対するＣＤ４＋ Ｔ細胞の比を１とする樹状細胞を含有するウェルへと移した。

【0213】

共培養物に、１００μｇ／ｍｌのペプチド及び８０単位／ｍｌのＩＬ－２（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充した。

【0214】

使用されたペプチドは、
ＳｍＤ１：７８－９２、ＳｍＢ／Ｂ’：７－２１（ＨＬＡ－ＤＲ３（ＤＲＡ１^＊０１：０１＋ＤＲＢ１^＊０３：０１）に拘束された）、Ｒｏ６０：２２５－２３９、Ｒｏ６０：３６９－３８３（ＨＬＡ－ＤＲ３（ＤＲＡ１^＊０１：０１＋ＤＲＢ１^＊０３：０１）に拘束された）；ＭＰＯ：４５３－４６７及びＭＰＯ：７２４－７３８（ＨＬＡ－ＤＲ４．５（ＤＲＡ１^＊０１：０１＋ＤＲＢ１^＊０４：０５）に拘束された）
であった。被験ペプチドの配列は、本明細書の表１に提示する。

【0215】

培養の６日目に、細胞を採取し、ＢＵＶ４９６標識化抗ヒトＣＤ４（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＡＰＣ－Ｈ７標識化抗ヒトＣＤ８（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＢＶ７１１標識化抗ヒトＣＤ６９（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＡＦ４８８標識化抗ヒトＨＬＡ－ＤＲ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及びヨウ化プロピジウム（Ｓｉｇｍａ）により表面染色した。

【0216】

染色後、２０μｍのフィルターを通して、細胞を、滅菌ポリプロピレン製チューブ内の氷冷滅菌ＭＡＣＳ緩衝液へと濾過し、次いで、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製のＦＡＣＳ Ａｒｉａ細胞分取器を使用して、ＣＤ４＋ ＣＴＶｌｏ細胞を分取した。次いで、分取された細胞を、単一細胞ＴＣＲ１０×シーケンシングに送った。

【0217】

健常個体の全ＨＬＡ型：ＨＬＡ－Ａ^＊１１：０１／３３：０３；ＨＬＡ－Ｂ^＊５８：０１；ＨＬＡ－Ｃ^＊０３：０２；ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０３：０１／０４：０５；ＨＬＡ－ＤＲＢ３^＊０２：０２；ＨＬＡ－ＤＲＢ４^＊０１：０３；ＨＬＡ－ＤＰＢ１^＊０４：０１／０５：０１；ＨＬＡ－ＤＰＡ１^＊０１：０３／０２：０２；ＤＱＢ１^＊０２：０１／０４：０１；ＤＱＡ１^＊０３：０３／０５：０１である。

【0218】

培養は、異なるペプチド（すなわち、Ｓｍペプチド、Ｒｏ６０ペプチド及びＭＰＯペプチド）について、異なる日に行った。

【0219】

結果
単一細胞ＴＣＲシーケンシングは、同じＴｒｅｇ由来ＴＣＲ（本明細書の表１に規定されたＴＣＲと同じＴＣＲ）が、全ての対象において、ドミナントのクローン型であることを明らかにした（図１を参照されたい。）。結果は、単一のＴＣＲが、６つの異なる自己ペプチド－ＭＨＣコンフォメーションを認識し、優勢に拡大することを指し示す。

【0220】

実施例２
ＴＣＲの無差別性を裏付けるために、ＴＣＲを、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞系へと形質導入し、抗原提示細胞としての、ＤＲ３／ＤＲ４．５を発現するＢ－ＬＣＬの存在下において、Ｓｍペプチド、Ｒｏ６０ペプチド及びＭＰＯペプチドにより、個別に刺激した。陽性応答は、形質導入されたＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞上において、Ｔ細胞活性化マーカーであるＣＤ６９、上清中のＩＬ－２の産生及び／又は増殖の上方制御を測定することにより決定する。

【0221】

抗Ｒｏ６０特異的炎症促進性応答の抑制における、実施例１において同定されたＴＣＲの有効性を決定するために、増殖アッセイを使用して、炎症促進性Ｒｏ６０特異的通常型Ｔ細胞（Ｔｃｏｎｖ）の拡大に対する、ＴＣＲを発現するＴｒｅｇの効果を測定する。結果は、Ｒｏ６０－Ｔｒｅｇの存在下において、Ｒｏ６０特異的Ｔｃｏｎｖに対するＴｒｅｇの数が、顕著に増大することを示すことが予測される。この結果は、Ｒｏ６０－Ｔｒｅｇが、Ｒｏ６０特異的Ｔｃｏｎｖ細胞の拡大を強力に抑制することを意味する。

【0222】

次に、サイトカインの産生が測定され、結果は、Ｒｏ６０－Ｔｒｅｇの存在下において、抗炎症性応答、すなわち、高ＩＬ－１０、低ＩＦＮ－ｇ及びＩＬ－１７Ａがドミナントである（健常個体と同様に）のに対し、Ｔｒｅｇを伴わない、又はｐＴｒｅｇだけを伴う場合、炎症促進性応答がドミナントである、すなわち、低ＩＬ－１０、高ＩＦＮ－γ及びＩＬ－１７Ａである（自己免疫疾患患者において予測される通り）ことを示すことが予測される。これらのデータは、Ｒｏ６０－Ｔｒｅｇが、異常な免疫応答をリセットし、ターゲティングされた自己エピトープに対する寛容を回復させることを裏付ける。

【0223】

実施例３：ＨＬＡ－ＤＲ３拘束Ｒｏ６０－Ｔｒｅｇは、シェーグレン症候群の進行を停止させる
疾患進行の停止における、Ｒｏ６０－Ｔｒｅｇの有効性を裏付けるために、本発明者らは、公表されている類似のモデル（Ｙｏｕｎｇ ＮＡら、Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１５年１月１５６（１）：１～８）に基づき、シェーグレン症候群についての、新たなヒト化モデルを考案する。

【0224】

このモデルにおいて、抗Ｒｏ６０抗体を伴う患者に由来するＰＢＭＣの、免疫障害ＮＳＧ－ＭＨＣ^ｎｕｌｌマウスへの養子移入は、涙腺及び唾液腺において、ヒトＴ細胞の浸潤、及び正常組織の構造的完全性の喪失により組織学的に測定された組織損傷をもたらす。疾患の発症時に、マウスに、Ｔｒｅｇを施さない、ポリクローナルＴｒｅｇ（ｐＴｒｅｇ）又はＲｏ６０－Ｔｒｅｇを施す。図２は、実験プロトコールについての概略を提示する。

【0225】

Ｔｒｅｇを施されなかったマウス、又はｐＴｒｅｇを施されたマウスは、涙腺及び唾液腺の破壊へと進行する涙腺炎及び唾液腺炎を発症するが、Ｒｏ６０－Ｔｒｅｇにより処理されたマウスは、最小限の疾患だけを提示する。

【0226】

このモデルにおいて見られた疾患が、抗Ｒｏ６０免疫応答により媒介されたことを裏付けるために、シェーグレン症候群患者から分離された単球由来ＤＣを、Ｒｏ６０ペプチドによりパルスし、ＰＢＭＣ移入の７日後に、マウスへと注射する。このようにして、抗Ｒｏ６０特異的Ｔ細胞は、優先的に拡大され、抗Ｒｏ６０Ｔ細胞媒介性疾患を加速化させる。

【0227】

実施例４：抗原特異的ＴＣＲの活性化と関連するＴｒｅｇ遺伝子の上方制御
方法：ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０３：０１／ＤＲＢ１^＊０４：０５健常ドナーに由来するＣＤ４＋ Ｔ細胞を、以下の個別の自己エピトープ：ＳｍＤ１：７８－９２、ＳｍＢ／Ｂ’：７－２１、Ｒｏ６０：３６９－３８３、ＭＰＯ：４５３－４６７、ＭＰＯ：７２４－７３８の存在下において、単球由来樹状細胞（ＤＣ）と共に共培養した。増殖Ｔ細胞は、単一細胞シーケンシング解析（１０× Ｇｅｎｏｍｉｃｓ）にかけた。無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲのクローン的拡大が、ＴＣＲの活性化と連関するのかどうかを決定するために、本発明者らは、単一細胞トランスリプトームデータを解析して、遺伝子発現プロファイルを、他のＴ細胞と比較し、ＴＣＲの活性化と関連する遺伝子を同定した。加えて、同定された無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲは、Ｔｒｅｇに由来するため、本発明者らはまた、Ｔｒｅｇの活性化と関連する遺伝子も同定した。

【0228】

結果：図３に示される通り、ＴＣＲの活性化と関連して上方制御された遺伝子は、ＦＯＸＰ３、ＣＴＬＡ４、ＩＬ１Ｒ２、ＣＣＲ１０、ＴＩＧＩＴ、ＩＫＺＦ２、ＩＴＧＡＭ、ＬＧＡＬＳ１、ＬＧＡＬＳ３、ＰＩ１６、ＩＬ２ＲＡであった。Ｔｒｅｇの活性化と関連して下方制御された遺伝子は、ＩＬ１３、ＩＦＮＧ、ＩＬ７Ｒであった。

【0229】

結論：これらのデータは、各エピトープが、無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲエンゲージメント及びＴｒｅｇの活性化を誘導しうることを裏付ける。

【0230】

実施例５：ヒトＴｒｅｇ上における、無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲの発現
方法：無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを、ヒトＴｒｅｇに付加することの、有利な免疫抑制効果について研究するために、本発明者らは、ヒトＴｒｅｇの表面上における無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲの発現を可能とする、レンチウイルス形質導入工程を開発した。まず、無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲのＴＣＲ配列を、レンチウイルスベクターへとクローニングし、レンチウイルスストックを得た。次いで、磁気分離及び流動分取により、ヒトＴｒｅｇを、ＰＢＭＣから分離し、抗ＣＤ２、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２８及びＩＬ－２の存在下において拡大し、次いで、ＭＯＩを３０として、レンチウイルスを形質導入した。形質導入効率は、フローサイトメトリーにより測定した。ＧＦＰの発現は、形質導入効率を反映し、Ｖβ１４の発現は、細胞の表面上に、無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを発現するＴｒｅｇの百分率を反映する。

【0231】

結果：図４に示される通り、Ｔｒｅｇ形質導入プロトコールの形質導入効率は、３０．８％であった。形質導入されたＧＦＰ＋ Ｔｒｅｇのうち、３２．３％は、Ｖβ１４について陽性であった。非形質導入ＧＦＰ－細胞において、内因性のＶβ１４発現は、３．８４％であった。

【0232】

結論：本発明者らは、ヒトＴｒｅｇの表面上において、本発明の無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを発現させることが可能であることを裏付けた。

【0233】

実施例６：無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲ Ｔｒｅｇは、ペプチド－ＨＬＡ デキストラマーに結合する
方法：Ｔｒｅｇ上の無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲが、Ｓｍ自己抗原、Ｒｏ自己抗原及びＭＰＯ自己抗原に結合しうることを裏付けるために、本発明者らは、以下のペプチド－ＨＬＡ デキストラマー－ＳｍＤ１：７８－２１／ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０３：０１、Ｒｏ６０：３６９－３８３／ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０３：０１及びＭＰＯ：４５３－５６７／ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０４：０５を作出し、次いで、フローサイトメトリーにより、結合を測定した。

【0234】

結果：図５に示される通り、無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを形質導入されたＴｒｅｇは、ＳｍＤ１：７８－２１／ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０３：０１ デキストラマー、Ｒｏ６０：３６９－３８３／ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０３：０１ デキストラマー及びＭＰＯ：４５３－５６７／ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０４：０５ デキストラマーへの結合を呈する。

【0235】

結論：無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを形質導入されたＴｒｅｇは、Ｓｍ自己抗原、Ｒｏ６０自己抗原及びＭＰＯ自己抗原に無差別に結合することが可能である。

【0236】

実施例７：無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲ Ｔｒｅｇは、ペプチド刺激の後に活性化される
方法：無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲ Ｔｒｅｇが、ペプチドにより刺激されると活性化されることを裏付けるために、無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを形質導入されたＴｒｅｇを、Ｂ－ＬＣＬを発現するＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０３：０１／ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０４：０５及びＳｍＤ１：７８－９２、Ｒｏ６０：３６９－３８３又はＭＰＯ：４５３－４６７と共に共培養し、次いで、早期Ｔ細胞活性化マーカーであるＣＤ６９及びＴｒｅｇ特異的活性化マーカーであるＧＡＲＰを、フローサイトメトリーにより測定した。ＣＤ６９又はＧＡＲＰの上方制御を、モックを形質導入されたＴｒｅｇと比較した。

【0237】

結果：図６に示される通り、ＳｍＤ１：７８－９２、Ｒｏ６０：３６９－３８３及びＭＰＯ：４５３－４６７による刺激は、無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを形質導入されたＴｒｅｇの活性化を、ペプチド刺激なしと比較して誘導した。

【0238】

結論：無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを形質導入されたＴｒｅｇは、Ｓｍ自己抗原、Ｒｏ６０自己抗原及びＭＰＯ自己抗原により刺激されると活性化される。

【0239】

実施例８：無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲは、Ｓｍペプチドにエンゲージする
方法：無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲが、Ｓｍペプチド－ＨＬＡ複合体にエンゲージしうることを裏付けるために、本発明者らは、イメージングフローサイトメトリーを使用して、Ｊ７６ Ｔ細胞を発現する無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲと、Ｂ－ＬＣＬを抗原提示細胞として発現するＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０３：０１との間の免疫シナプスを視覚化した。ＢＬＣＬを、ペプチドを伴わずに、ＳｍＤ１：７８－９２又はＳｍＢ／Ｂ’：７－２１により、無血清ＲＰＭＩ中、３７℃において、２時間にわたりパルスした。次いで、無血清ＲＰＭＩ中の比を、１：１として、パルスされたＢ－ＬＣＬを、無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲを形質導入されたＪ７６細胞と混合し、３７℃において、２時間にわたりインキュベートした。次いで、細胞を固定し、透過化緩衝液中に、抗ＨＬＡ－ＤＲ ＢＶ４２１（クローンＧ４６－６；ＢＤ）、抗ＣＤ３ｅ ＰＥ（クローンＯＫＴ３；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びファロイジンＡＦ６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する抗体／ファロイジンカクテルにより染色した。細胞を、Ａｍｎｉｓ Ｉｍａｇｅｓｔｒｅａｍ Ｘ Ｍａｒｋ ＩＩ ｉｍａｇｉｎｇ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｌｕｍｉｎｅｘ）上の収集に続く、Ｉｄｅａｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖｅｒ．６．２（Ｌｕｍｉｎｅｘ）を使用して、Ｂ－ＬＣＬ－Ｊ７６ダブレットの免疫シナプスの蛍光を同定及び定量する解析の直前に添加された、ＰＢＳ／ヨウ化プロピジウム中に再懸濁させた。免疫シナプスにおける、ＣＤ３又はファロイジンの平均値ピクセル強度の増大は、ＴＣＲへの結合及び活性化を表す。

【0240】

結果：図８に示される通り、Ｂ－ＬＣＬを、Ｓｍエピトープによりパルスしたところ、免疫シナプスにおける、ＣＤ３及びファロイジンの平均値ピクセル強度が増大した。

【0241】

結論：無差別型ｓｅｌｆ－ＴＣＲは、いずれのＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０３：０１拘束Ｓｍエピトープにもエンゲージしうる。

【0242】

本明細書において開示及び規定された本発明は、言及された、又は本文若しくは図面から明らかな、２つ以上の個々の特色の、全ての代替的組合せへと拡張されることが理解される。これらの異なる組合せの全ては、本発明の多様な代替的態様を構成する。

【図1】

【図2】

【図3-1】

【図3-2】

【図3-3】

【図4-1】

【図4-2】

【図5】

【図6-1】

【図6-2】

【図7】

【図8】

【配列表】

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【国際調査報告】