特表 2024-534567 自己免疫疾患の処置のためのピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-20

(54)【発明の名称】自己免疫疾患の処置のためのピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン化合物

(51)【国際特許分類】

   C07D 471/04 20060101AFI20240912BHJP

   A61K 31/496 20060101ALI20240912BHJP

   A61K 31/497 20060101ALI20240912BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20240912BHJP

   A61K 31/44 20060101ALI20240912BHJP

   A61K 31/4545 20060101ALI20240912BHJP

   C07D 519/00 20060101ALI20240912BHJP

   A61K 31/553 20060101ALI20240912BHJP

   A61K 31/498 20060101ALI20240912BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20240912BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240912BHJP

【ＦＩ】

C07D471/04 106C

C07D471/04 CSP

A61K31/496

A61K31/497

A61K31/506

A61K31/44

A61K31/4545

C07D519/00 301

A61K31/553

A61K31/498

A61P13/12

A61P37/02

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024518351

(86)(22)【出願日】2022-09-22

(85)【翻訳文提出日】2024-03-22

(86)【国際出願番号】 EP2022076306

(87)【国際公開番号】W WO2023046806

(87)【国際公開日】2023-03-30

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/120406

(32)【優先日】2021-09-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2022/089033

(32)【優先日】2022-04-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】591003013

【氏名又は名称】エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー

【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ－ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ

(74)【代理人】

【識別番号】110001508

【氏名又は名称】弁理士法人 津国

(72)【発明者】

【氏名】チェン，ドンドン

(72)【発明者】

【氏名】デイ，ファビアン

(72)【発明者】

【氏名】ホン，シン

(72)【発明者】

【氏名】ワン，シャオチン

(72)【発明者】

【氏名】チャン，ジーセン

(72)【発明者】

【氏名】ジュ，ウェイ

(72)【発明者】

【氏名】ゾウ，ジェ

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086AA04

4C086CB05

4C086CB22

4C086GA07

4C086GA08

4C086GA09

4C086GA12

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA81

4C086ZB07

(57)【要約】

本発明は、式（Ｉ）

（式中、Ｒ^１～Ｒ^３、Ａ、Ｍ、Ｗ、及びＱは、本明細書に記載されるとおりである）
の化合物及びその薬学的に許容され得る塩、並びに該化合物を含む組成物及び該化合物を使用する方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）

【化1】

（式中、
Ｒ^１は、

【化2】

（式中、Ｒ^４は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルであり、Ｒ^５は、Ｃ_１～６アルキルである）であり、
Ｒ^２は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルであり、
Ｒ^３は、ピペラジニル、（Ｃ_１～６アルコキシＣ_１～６アルキル）ピペラジニル、３，４，４ａ，５，７，７ａ－ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］［１，４］オキサジニル、４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタニル、５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナニル、アミノ－１，４－オキサゼパニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピペリジニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピロリジニル、アミノ（Ｃ_１～６アルキル）アゼチジニル又はアミノハロピペリジニルであり、
Ａは、Ｎ又はＣＲ^６（ここで、Ｒ^６は、Ｈ、Ｃ_１～６アルキル又はＣ_１～６アルコキシである）であり、
Ｍは、Ｎ又はＣＲ^７（ここで、Ｒ^７は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルである）であり、
Ｗは、Ｎ又はＣＨであり、
Ｑは、Ｎ又はＣＨであり、
ただし、Ａ、Ｍ、Ｗ及びＱのうちの２つ以下が同時にＮである）
の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩。

【請求項2】

式（Ｉａ）

【化3】

（式中、
Ｒ^１は、

【化4】

（式中、Ｒ^４は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルであり、Ｒ^５は、Ｃ_１～６アルキルである）であり、
Ｒ^２は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルであり、
Ｒ^３は、ピペラジニル、（Ｃ_１～６アルコキシＣ_１～６アルキル）ピペラジニル、３，４，４ａ，５，７，７ａ－ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］［１，４］オキサジニル、４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタニル、５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナニル、アミノ－１，４－オキサゼパニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピペリジニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピロリジニル、アミノ（Ｃ_１～６アルキル）アゼチジニル又はアミノハロピペリジニルであり、
Ａは、Ｎ又はＣＲ^６（ここで、Ｒ^６は、Ｈ、Ｃ_１～６アルキル又はＣ_１～６アルコキシである）であり、
Ｍは、Ｎ又はＣＲ^７（ここで、Ｒ^７は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルである）であり、
Ｗは、Ｎ又はＣＨであり、
Ｑは、Ｎ又はＣＨであり、
ただし、Ａ、Ｍ、Ｗ及びＱのうちの２つ以下が同時にＮである）
の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩。

【請求項3】

Ｒ^１が、

【化5】

（式中、Ｒ^４は、Ｃ_１～６アルキルであり、Ｒ^５は、Ｃ_１～６アルキルである）である、請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ^４が、メチルであり、Ｒ^５が、メチルである、請求項３に記載の化合物。

【請求項5】

Ａが、ＣＲ^６であり、Ｒ^６が、Ｈ又はＣ_１～６アルキルである、請求項３に記載の化合物。

【請求項6】

Ａが、ＣＲ^６であり、Ｒ^６が、Ｈ又はメチルである、請求項５に記載の化合物。

【請求項7】

Ｍが、ＣＲ^７であり、Ｒ^７が、Ｈである、請求項５に記載の化合物。

【請求項8】

Ｗが、ＣＨである、請求項７に記載の化合物。

【請求項9】

Ｑが、Ｎである、請求項８に記載の化合物。

【請求項10】

Ｒ^３が、アミノ－１，４－オキサゼパニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピロリジニル又はピペラジニルである、請求項９に記載の化合物。

【請求項11】

Ｒ^３が、６－アミノ－１，４－オキサゼパン－４－イル、３－アミノ－４－メトキシ－ピロリジン－１－イル又はピペラジン－１－イルである、請求項１０に記載の化合物。

【請求項12】

Ｒ^１が、

【化6】

（式中、Ｒ^４は、Ｃ_１～６アルキルであり、Ｒ^５は、Ｃ_１～６アルキルである）であり、
Ｒ^２が、Ｈ又はＣ_１～６アルキルであり、
Ｒ^３が、アミノ－１，４－オキサゼパニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピロリジニル又はピペラジニルであり、
Ａが、ＣＲ^６（ここで、Ｒ^６は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルである）であり、
Ｍが、ＣＲ^７（ここで、Ｒ^７は、Ｈである）であり、
Ｗが、ＣＨであり、
Ｑが、Ｎである、
請求項１若しくは２に記載の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩。

【請求項13】

Ｒ^１が、

【化7】

（式中、Ｒ^４は、メチルであり、Ｒ^５は、メチルである）であり、
Ｒ^２が、Ｈ又はメチルであり、
Ｒ^３が、６－アミノ－１，４－オキサゼパン－４－イル、３－アミノ－４－メトキシ－ピロリジン－１－イル又はピペラジン－１－イルであり、
Ａが、ＣＲ^６（ここで、Ｒ^６は、Ｈ又はメチルである）であり、
Ｍが、ＣＲ^７（ここで、Ｒ^７は、Ｈである）であり、
Ｗが、ＣＨであり、
Ｑが、Ｎである、
請求項１３に記載の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩。

【請求項14】

式（Ｉｂ）

【化8】

（式中、
Ｒ^１は、

【化9】

（式中、Ｒ^４は、Ｃ_１～６アルキルであり、Ｒ^５は、Ｃ_１～６アルキルである）であり、
Ｒ^２は、Ｃ_１～６アルキルであり、
Ｒ^３は、ピペラジニル、（Ｃ_１～６アルコキシＣ_１～６アルキル）ピペラジニル、４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタニル、５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナニル、アミノ－１，４－オキサゼパニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピペリジニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピロリジニル、アミノ（Ｃ_１～６アルキル）アゼチジニル又はアミノハロピペリジニルであり、
Ａは、ＣＨであり、
Ｍは、ＣＨであり、
Ｗは、ＣＨであり、
Ｑは、Ｎである）
の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩。

【請求項15】

Ｒ^４が、メチルであり、Ｒ^５が、メチルであり、Ｒ^２が、メチルである、請求項１４に記載の化合物。

【請求項16】

Ｒ^３が、アミノ－１，４－オキサゼパニルである、請求項１４又は１５に記載の化合物。

【請求項17】

Ｒ^３が、６－アミノ－１，４－オキサゼパン－４－イルである、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項18】

Ｒ^１が、

【化10】

（式中、Ｒ^４は、Ｃ_１～６アルキルであり、Ｒ^５は、Ｃ_１～６アルキルである）であり、
Ｒ^２が、Ｃ_１～６アルキルであり、
Ｒ^３が、アミノ－１，４－オキサゼパニルであり、
Ａが、ＣＨであり、
Ｍが、ＣＨであり、
Ｗが、ＣＨであり、
Ｑが、Ｎである、
請求項１４に記載の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩。

【請求項19】

Ｒ^１が、

【化11】

（式中、Ｒ^４は、メチルであり、Ｒ^５は、メチルである）であり、
Ｒ^２が、メチルであり、
Ｒ^３が、６－アミノ－１，４－オキサゼパン－４－イルであり、
Ａが、ＣＨであり、
Ｍが、ＣＨであり、
Ｗが、ＣＨであり、
Ｑが、Ｎである、
請求項１８に記載の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩。

【請求項20】

１，６－ジメチル－４－［４－（４－ピペラジン－１－イルフェニル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（５－ピペラジン－１－イルピラジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（５－ピペラジン－１－イルピリミジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１－メチル－４－［４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１－メチル－４－［４－（４－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（４－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（４－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（２－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（４－メチル－２－ピペラジン－１－イル－ピリミジン－５－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－ピラジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
４－［４－（３－エチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
４－［４－（３－メトキシ－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
（３Ｓ，４Ｒ）－１－［６－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３－フルオロ－ピペリジン－４－アミン；
４－［４－［５－［（３Ｒ）－３－（メトキシメチル）ピペラジン－１－イル］－３－メチル－２－ピリジル］－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
（３Ｓ，４Ｓ）－１－［６－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３－メトキシ－ピペリジン－４－アミン；
１－メチル－４－［シス－３－メチル－４－（６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１－メチル－４－［トランス－３－メチル－４－（６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［シス－３－メチル－４－（４－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［トランス－３－メチル－４－（４－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［シス－３－メチル－４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－ピラジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［トランス－３－メチル－４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－ピラジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［シス－３－メチル－４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［トランス－３－メチル－４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
（３Ｒ，４Ｒ）－１－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－４－メトキシ－ピロリジン－３－アミン；
２－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナン；
（６Ｓ）－４－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－１，４－オキサゼパン－６－アミン；
４－［（３Ｓ，４Ｒ）－４－［５－［（３Ｒ）－３－（メトキシメチル）ピペラジン－１－イル］－３－メチル－２－ピリジル］－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
４－［（３Ｓ，４Ｒ）－４－［５－（４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタン－７－イル）－３－メチル－２－ピリジル］－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
（３Ｒ，４Ｒ）－１－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３－フルオロ－ピペリジン－４－アミン；
１－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３－メチル－アゼチジン－３－アミン；
（４ａＲ，７ａＲ）－６－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３，４，４ａ，５，７，７ａ－ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］［１，４］オキサジン；
１，６－ジメチル－４－［（３Ｒ，４Ｓ）－３－メチル－４－（５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－４－（５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
（３Ｒ，４Ｒ）－１－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－４－メトキシ－ピロリジン－３－アミン；
４－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－［５－［（３Ｒ）－３－（メトキシメチル）ピペラジン－１－イル］－２－ピリジル］－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
２－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナン；
（３Ｓ，４Ｓ）－１－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－３－メトキシ－ピペリジン－４－アミン；
（６Ｓ）－４－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－１，４－オキサゼパン－６－アミン；
（３Ｒ，４Ｒ）－１－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－３－フルオロ－ピペリジン－４－アミン；
４－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－［５－（４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタン－７－イル）－２－ピリジル］－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；及び
１－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－３－メチル－アゼチジン－３－アミン；
から選択される化合物、又はその薬学的に許容され得る塩。

【請求項21】

以下：
ａ）触媒及び塩基の存在下での、式（ＩＶ）

【化12】

の化合物と、Ｒ^３－Ｈとの間のバックワルド・ハートウィッグＣ－Ｎ結合形成反応の工程、
ｂ）触媒及び塩基の存在下での、式（ＶＩ）

【化13】

の化合物と、式（ＩＩ）

【化14】

の化合物との間のバックワルド・ハートウィッグＣ－Ｎ結合形成反応の工程、
ｃ）塩基の存在下での、式（ＶＩ）の化合物と式（ＩＩ）の化合物との間の直接置換反応の工程
を含み、
式中、
Ｘが、ハロゲンであり、
工程ａ）及びｂ）において、前記触媒が、ＲｕＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２又はＰｄ_２（ｄｂａ）_３／キサントホスであり、前記塩基が、Ｃｓ_２ＣＯ_３又はｔ－ＢｕＯＮａであり、
工程ｃ）において、前記塩基が、ＤＩＰＥＡ又はＣｓＦであり、
Ｒ^１～Ｒ^５、Ａ、Ｍ、Ｗ及びＱが、請求項１～１９のいずれか一項に記載されるとおりである、
請求項１～２０のいずれか一項に記載の化合物の調製のための方法。

【請求項22】

治療活性物質としての使用のための、請求項１～２０のいずれか一項に記載の化合物又は薬学的に許容され得る塩。

【請求項23】

請求項１～２０のいずれか一項に記載の化合物と、治療上不活性な担体とを含む、医薬組成物。

【請求項24】

全身性エリテマトーデス又はループス腎炎の処置又は予防のための、請求項１～２０のいずれか一項に記載の化合物の使用。

【請求項25】

全身性エリテマトーデス又はループス腎炎の処置又は予防のための医薬の調製のための、請求項１～２０のいずれか一項に記載の化合物の使用。

【請求項26】

ＴＬＲ７及びＴＬＲ８及びＴＬＲ９のアンタゴニストのための医薬の調製のための、請求項１～２０のいずれか一項に記載の化合物の使用。

【請求項27】

全身性エリテマトーデス又はループス腎炎の処置又は予防のための、請求項１～２０のいずれか一項に記載の化合物又は薬学的に許容され得る塩。

【請求項28】

請求項２１に記載の方法に従って製造された場合の、請求項１～２０のいずれか一項に記載の化合物又は薬学的に許容され得る塩。

【請求項29】

全身性エリテマトーデス又はループス腎炎の処置又は予防のための方法であって、治療有効量の請求項１～２０のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む、方法。

【請求項30】

上に記載したとおりの発明。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、哺乳動物における処置及び／又は予防に有用な有機化合物、特に、全身性エリテマトーデス又はループス腎炎の処置に有用なＴＬＲ７及びＴＬＲ８及びＴＬＲ９のアンタゴニストに関する。

【背景技術】

【0002】

自己免疫性結合組織病（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｄｉｓｅａｓｅ：ＣＴＤ）には、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ：ＳＬＥ）、原発性シェーグレン症候群（ｐｒｉｍａｒｙ Ｓｊｏｅｇｒｅｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ｐＳｊＳ）、混合性結合組織病（ｍｉｘｅｄ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｄｉｓｅａｓｅ：ＭＣＴＤ）、皮膚筋炎／多発性筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ／ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ：ＤＭ／ＰＭ）、関節リウマチ（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ＲＡ）、及び全身性硬化症（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：ＳＳｃ）等のプロトタイプの自己免疫症候群が含まれる。ＲＡを除いて、患者が利用可能である実際に効果的で安全な治療法はない。ＳＬＥは、１００，０００人あたり２０～１５０人の有病率を有するプロトタイプのＣＴＤであり、皮膚や関節で一般的に観察される症状から腎不全、肺不全、又は心不全に至るまで、様々な臓器において広範な炎症や組織損傷を引き起こす。従来、ＳＬＥは、非特異的な抗炎症薬又は免疫抑制薬で処置されてきた。しかしながら、免疫抑制薬、例えばコルチコステロイドの長期使用は、部分的にしか効果がなく、望ましくない毒性及び副作用を伴う。ベリムマブは、過去５０年間にＦＤＡが承認した唯一の狼瘡薬であるが、ＳＬＥ患者のごく一部にしか効果がなく、それも控えめで遅れがある（Ｎａｖａｒｒａ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ ａｌ Ｌａｎｃｅｔ ２０１１，３７７，７２１．）。抗ＣＤ２０ ｍＡｂ、特定のサイトカインに対するｍＡｂ又は可溶性受容体等の他の生物学的製剤は、ほとんどの臨床研究で失敗している。したがって、より多くの患者群で持続的な改善を提供し、多くの自己免疫疾患及び自己炎症疾患で慢性的に使用しても安全性がより高い、新規治療法が必要とされている。

【0003】

Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、幅広い種類の免疫細胞における広範な免疫応答を開始することができるパターン認識受容体（ＰＲＲ）の重要なファミリーである。自然宿主防御センサとして、エンドソームＴＬＲ７、８、及び９は、ウイルス、細菌に由来する核酸を認識し、具体的には、ＴＬＲ７／８及びＴＬＲ９は、それぞれ一本鎖ＲＮＡ（ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ：ｓｓＲＮＡ）及び一本鎖ＣｐＧ－ＤＮＡを認識する。しかしながら、ＴＲＬ７、８、９の異常な核酸感知は、幅広い自己免疫疾患及び自己炎症性疾患の重要なノードと見なされている（Ｋｒｉｅｇ，Ａ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２００７，２２０，２５１．Ｊｉｍeｎｅｚ－Ｄａｌｍａｒｏｎｉ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ ａｌ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ Ｒｅｖ．２０１６，１５，１．Ｃｈｅｎ，Ｊ．Ｑ．，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ａｌｌｅｒｇｙ＆Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０１６，５０，１．）。抗ＲＮＡ抗体及び抗ＤＮＡ抗体は十分に確立されたＳＬＥの診断マーカーであり、自己ＲＮＡ及び自己ＤＮＡの両方をエンドソームへ送達することができる。自己ＲＮＡ複合体はＴＬＲ７及びＴＬＲ８によって認識され得るが、自己ＤＮＡ複合体はＴＬＲ９活性化をトリガーし得る。実際、血液及び／又は組織からの自己ＲＮＡ及び自己ＤＮＡのクリアランスの欠陥は、ＳＬＥ（全身性エリテマトーデス）患者において明白である。ＴＬＲ７及びＴＬＲ９は、ＳＬＥ組織において上方調節され、それぞれループス腎炎の慢性化及び活性と相関していると報告されてきた。ＳＬＥ患者のＢ細胞において、ＴＬＲ７発現は抗ＲＮＰ抗体産生と相関しているのに対し、ＴＬＲ９発現はＩＬ－６レベル及び抗ｄｓＤＮＡ抗体レベルと相関している。一貫して、ループスマウスモデルでは、ＴＬＲ７は抗ＲＮＡ抗体に必要であり、ＴＬＲ９は、抗ヌクレオソーム抗体に必要である。その一方で、マウスにおけるＴＬＲ７又はヒトＴＬＲ８の過剰発現は、自己免疫及び自己炎症を促進する。そのうえ、ＴＬＲ８の活性化は、ｍＤＣ／マクロファージの炎症性サイトカイン分泌、好中球ネトーシス、Ｔｈ１７細胞の誘導、及びＴｒｅｇ細胞の抑制に特異的に寄与する。Ｂ細胞の自己抗体産生の促進におけるＴＬＲ９の役割について述べたことに加えて、ｐＤＣにおける自己ＤＮＡによるＴＬＲ９の活性化もまた、Ｉ型ＩＦＮ及び他の炎症性サイトカインの誘導をもたらす。ｐＤＣとＢ細胞の両方においてＴＬＲ９が自己免疫疾患の病因にこのような重要な役割を果たしていることと、自己免疫疾患の多くの患者においてＴＬＲ９を容易に活性できる自己ＤＮＡ複合体が広範囲に存在することとを考えると、ＴＬＲ７及びＴＬＲ８の経路の阻害に加えて、自己ＤＮＡを介したＴＬＲ９経路を更に遮断することには特別な利点があり得る。まとめると、ＴＬＲ７、８、９経路は、有効なステロイド非含有及び非細胞毒性の経口薬が存在しない自己免疫疾患及び自己炎症疾患の処置用の新たな治療標的であり、これらの経路全てをまさに上流から阻害することにより、満足な治療効果が得られる可能性がある。したがって、本発明者らは、自己免疫疾患及び自己炎症疾患の処置のために、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８及びＴＬＲ９を標的とし、抑制する経口化合物を発明した。

【発明の概要】

【0004】

本発明は、式（Ｉ）

【化1】

（式中、
Ｒ^１は、

【化2】

（式中、Ｒ^４は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルであり、Ｒ^５は、Ｃ_１～６アルキルである）であり、
Ｒ^２は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルであり、
Ｒ^３は、ピペラジニル、（Ｃ_１～６アルコキシＣ_１～６アルキル）ピペラジニル、３，４，４ａ，５，７，７ａ－ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］［１，４］オキサジニル、４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタニル、５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナニル、アミノ－１，４－オキサゼパニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピペリジニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピロリジニル、アミノ（Ｃ_１～６アルキル）アゼチジニル又はアミノハロピペリジニルであり、
Ａは、Ｎ又はＣＲ^６（ここで、Ｒ^６は、Ｈ、Ｃ_１～６アルキル又はＣ_１～６アルコキシである）であり、
Ｍは、Ｎ又はＣＲ^７（ここで、Ｒ^７は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルである）であり、
Ｗは、Ｎ又はＣＨであり、
Ｑは、Ｎ又はＣＨであり、
ただし、Ａ、Ｍ、Ｗ及びＱのうちの２つ以下が同時にＮである）
の新規化合物、又はその薬学的に許容され得る塩に関する。

【0005】

本発明の他の目的は、式（Ｉ）又は（Ｉａ）の新規化合物に関する。それら製造、本発明による化合物に基づく医薬及びその製造、並びにＴＬＲ７及びＴＬＲ８及びＴＬＲ９アンタゴニストとしての式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物の使用、並びに全身性エリテマトーデス又はループス腎炎の処置又は予防のための使用。式（Ｉ）又は式（Ｉａ）の化合物は、優れたＴＬＲ７及びＴＬＲ８及びＴＬＲ９のアンタゴニズム活性を示す。加えて、式（Ｉ）又は式（Ｉａ）の化合物はまた、良好な細胞毒性、可溶性、ｈＰＢＭＣ、ヒトミクロソーム安定性、及びＳＤＰＫプロファイル、並びに低いＣＹＰ阻害も示す。

【0006】

ノバルティス特許の国際公開第２０１８０４７０８１号は、本発明の化合物と同じピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジニル部分を有する化合物を開示したが、４，５，６，７－テトラヒドロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］ピリジンの中心二環式コア及びビシクロ［２，２，２］オクタン／ビシクロ［１，１，１］ペンタン部分による末端置換は、ノバルティス特許に開示されている情報に基づいてＴＬＲ７／８／９活性に必須であり、これもまた本発明の化合物と比較して主な構造的差異と考えられた。一方、国際公開第２０１８０４７０８１号の化合物のほとんどは、ＴＬＲ９活性が低かった。残念なことに、最良のＴＬＲ９活性を有するＮ７９（実施例７９として）等の比較的改善されたＴＬＲ９活性を有する化合物はほとんどなく、依然としてヒト肝臓ミクロソーム安定性が悪く（表５を参照）、したがって不十分なＰＫプロフィールを有する。

【0007】

別のノバルティス特許国際公開第２０１９２２０３９０号は、化合物Ｎ８の多形（国際公開第２０１８０４７０８１号の実施例８として）を開示し、これは、そのシリーズのリード化合物と考えられ、ＴＬＲ９活性がはるかに低く、ヒト肝臓ミクロソーム安定性が同様に低いことが判明した（表５を参照）。

【化3】

化合物Ｎ８（ｈＰＢＭＣ ＴＬＲ７／８／９アンタゴニストＩＦＮαアッセイＩＣ_５０（μＭ）：０．００４／０．１６６／４．２８）

【化4】

化合物Ｎ７９（ｈＰＢＭＣ ＴＬＲ７／８／９アンタゴニストＩＦＮαアッセイＩＣ_５０（μＭ）：０．００４／０．１３６／０．０６４）

【発明を実施するための形態】

【0008】

定義
「Ｃ_１～６アルキル」という用語は、１～６個、特に１～４個の炭素原子を含有する飽和直鎖又は分枝鎖アルキル基、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル等を示す。特定の「Ｃ_１～６アルキル」基は、メチル、エチル、及びｎ－プロピルである。

【0009】

「Ｃ_１－６アルコキシ」という用語は、Ｃ_１－６アルキル－Ｏ－を表す。

【0010】

「ハロゲン」及び「ハロ」という用語は、本明細書で互換的に使用され、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを示す。

【0011】

「ハロピペリジニル」という用語は、ピペリジニル基の水素原子のうちの少なくとも１個が、同じ又は異なるハロゲン原子、特にフルオロ原子によって置き換えられたピペリジニル基を表す。ハロピペリジニルの例としては、フルオロピロリジニル及びジフルオロピロリジニルが挙げられる。

【0012】

「シス」及び「トランス」という用語は、分子又は部分の相対的な立体化学を示す。例えば、シス異性体としての実施例１８は、

【化5】

の混合物を指し、同様に、トランス異性体としての実施例１９は、

【化6】

の混合物を指す。

【0013】

「薬学的に許容され得る塩」という用語は、生物学的に又は他の点で望ましくないものではない塩を意味する。薬学的に許容され得る塩には、酸付加塩及び塩基付加塩の両方が含まれる。

【0014】

「薬学的に許容され得る酸性付加塩」という用語は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、炭酸、リン酸等の無機酸と、蟻酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸（ｍａｌｏｎｅｉｃ ａｃｉｄ）、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、アントラニル酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、エンボン酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、及びサリチル酸等の有機酸の脂肪族、脂環式、芳香族、芳香脂肪族（ａｒａｌｉｐｈａｔｉｃ）、複素環式、カルボン酸、及びスルホン酸類から選択される有機酸とで形成されるような薬学的に許容され得る塩を意味する。

【0015】

「薬学的に許容され得る塩基付加塩」という用語は、有機塩基又は無機塩基で形成される薬学的に許容され得る塩を意味する。許容され得る無機塩基の例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、マンガン塩、及びアルミニウム塩が挙げられる。薬学的に許容され得る有機非毒性塩基から誘導される塩としては、天然の置換アミン、環状アミン、及び塩基性イオン交換樹脂、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２－ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペリジン、ピペリジン、Ｎ－エチルピペリジン、及びポリアミン樹脂を含む、第一級、第二級、及び第三級アミン、置換アミンの塩が挙げられる。

【0016】

「薬学的に活性な代謝物」という用語は、特定の化合物又はその塩の体内での代謝を通じて産生される薬理学的に活性な生成物を示す。体内に入った後、ほとんどの薬物は化学反応の基質となり、それらの物理的特性及び生物学的効果を変化させ得る。これらの代謝変換は、通常、本発明の化合物の極性に影響を与え、薬物が体内に分配されて体内から排泄される方法を変える。しかしながら、場合によっては、治療効果のために薬物の代謝が必要になる。

【0017】

「治療有効量」という用語は、対象に投与された場合に、（ｉ）特定の疾患、状態若しくは障害を処置若しくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患、状態若しくは障害の１若しくは複数の症状を軽減、改善若しくは排除する、又は（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、状態若しくは障害の１若しくは複数の症状の発症を予防若しくは遅延させる、本発明の化合物若しくは分子の量を意味する。治療有効量は、化合物、処置される病状、処置される疾患の重症度、対象の年齢及び相対的な健康状態、投与の経路及び形態、主治医又は獣医師の判断、並びにその他の要因に応じて異なる。

【0018】

「医薬組成物」という用語は、それを必要とする哺乳動物（例えばヒト）に投与される、治療有効量の有効活性成分を薬学的に許容され得る添加物と共に含む混合物又は溶液を示す。

【0019】

ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９のアンタゴニスト

【0020】

本発明は、（ｉ）式（Ｉ）

【化7】

（式中、
Ｒ^１は、

【化8】

（式中、Ｒ^４は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルであり、Ｒ^５は、Ｃ_１～６アルキルである）であり、
Ｒ^２は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルであり、
Ｒ^３は、ピペラジニル、（Ｃ_１～６アルコキシＣ_１～６アルキル）ピペラジニル、３，４，４ａ，５，７，７ａ－ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］［１，４］オキサジニル、４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタニル、５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナニル、アミノ－１，４－オキサゼパニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピペリジニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピロリジニル、アミノ（Ｃ_１～６アルキル）アゼチジニル又はアミノハロピペリジニルであり、
Ａは、Ｎ又はＣＲ^６（ここで、Ｒ^６は、Ｈ、Ｃ_１～６アルキル又はＣ_１～６アルコキシである）であり、
Ｍは、Ｎ又はＣＲ^７（ここで、Ｒ^７は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルである）であり、
Ｗは、Ｎ又はＣＨであり、
Ｑは、Ｎ又はＣＨであり、
ただし、Ａ、Ｍ、Ｗ及びＱのうちの２つ以下が同時にＮである）
の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩に関する。

【0021】

本発明の別の実施形態は、（ｉｉ）式（Ｉａ）

【化9】

（式中、
Ｒ^１は、

【化10】

（式中、Ｒ^４は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルであり、Ｒ^５は、Ｃ_１～６アルキルである）であり、
Ｒ^２は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルであり、
Ｒ^３は、ピペラジニル、（Ｃ_１～６アルコキシＣ_１～６アルキル）ピペラジニル、３，４，４ａ，５，７，７ａ－ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］［１，４］オキサジニル、４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタニル、５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナニル、アミノ－１，４－オキサゼパニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピペリジニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピロリジニル、アミノ（Ｃ_１～６アルキル）アゼチジニル又はアミノハロピペリジニルであり、
Ａは、Ｎ又はＣＲ^６（ここで、Ｒ^６は、Ｈ、Ｃ_１～６アルキル又はＣ_１～６アルコキシである）であり、
Ｍは、Ｎ又はＣＲ^７（ここで、Ｒ^７は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルアルキルである）であり、
Ｗは、Ｎ又はＣＨであり、
Ｑは、Ｎ又はＣＨであり、
ただし、Ａ、Ｍ、Ｗ及びＱのうちの２つ以下が同時にＮである）
の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩に関する。

【0022】

本発明の更なる実施形態は、（ｉｉｉ）（ｉ）若しくは（ｉｉ）による式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩であり、Ｒ^１は、

【化11】

であり、Ｒ^４はＣ_１～６アルキルであり、Ｒ^５は、Ｃ_１～６アルキルである。

【0023】

本発明の更なる実施形態は、（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）のいずれか１つに記載の式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩であり、Ｒ^４は、メチルであり、Ｒ^５は、メチルである。

【0024】

本発明の更なる実施形態は、（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）のいずれか１つに記載の式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物であり、Ａは、ＣＲ^６であり、Ｒ^６は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルである。

【0025】

本発明の更なる実施形態は、（ｖｉ）（ｉ）～（ｖ）のいずれか１つに記載の式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩であり、Ａは、ＣＲ^６であり、Ｒ^６は、Ｈ又はメチルである。

【0026】

本発明の更なる実施形態は、（ｖｉｉ）（ｉ）～（ｖｉ）のいずれか１つに記載の式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩であり、Ｍは、ＣＲ^７であり、Ｒ^７はＨである。

【0027】

本発明の更なる実施形態は、（ｖｉｉｉ）（ｉ）～（ｖｉｉ）のいずれか１つに記載の式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩であり、Ｗは、ＣＨである。

【0028】

本発明の更なる実施形態は、（ｉｘ）（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のいずれか１つに記載の式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩であり、Ｑは、Ｎである。

【0029】

本発明の更なる実施形態は、（ｘ）（ｉ）～（ｉｘ）のいずれか１つに記載の式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩であり、Ｒ^３は、アミノ－１，４－オキサゼパニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピロリジニル又はピペラジニルである。

【0030】

本発明の更なる実施形態は、（ｘ）（ｉ）～（ｘｉ）のいずれか１つに記載の式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩であり、Ｒ^３は、６－アミノ－１，４－オキサゼパン－４－イル、３－アミノ－４－メトキシ－ピロリジン－１－イル、又はピペラジン－１－イルである。

【0031】

本発明の更なる実施形態は、（ｘｉｉ）（ｉ）～（ｘｉ）のいずれか１つに記載の式（Ｉ）若しくは式（Ｉａ）の化合物であって、
Ｒ^１は、

【化12】

（式中、Ｒ^４は、Ｃ_１～６アルキルであり、Ｒ^５は、Ｃ_１～６アルキルである）であり、
Ｒ^２は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルであり、
Ｒ^３は、アミノ－１，４－オキサゼパニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピロリジニル又はピペラジニルであり、
Ａは、ＣＲ^６（ここで、Ｒ^６は、Ｈ又はＣ_１～６アルキルである）であり、
Ｍは、ＣＲ^７（ここで、Ｒ^７は、Ｈである）であり、
Ｗは、ＣＨであり、
Ｑは、Ｎである、式（Ｉ）若しくは式（Ｉａ）化合物、又はその薬学的に許容され得る塩である。

【0032】

本発明の更なる実施形態は、（ｘｉｉｉ）（ｉ）～（ｘｉｉ）のいずれか１つに記載の式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）の化合物であって、
Ｒ^１は、

【化13】

（式中、Ｒ^４は、メチルであり、Ｒ^５は、メチルである）であり、
Ｒ^２は、Ｈ又はメチルであり、
Ｒ^３は、６－アミノ－１，４－オキサゼパン－４－イル、３－アミノ－４－メトキシ－ピロリジン－１－イル又はピペラジン－１－イルであり、
Ａは、ＣＲ^６（ここで、Ｒ^６は、Ｈ又はメチルである）であり、
Ｍは、ＣＲ^７（ここで、Ｒ^７は、Ｈである）であり、
Ｗは、ＣＨであり、
Ｑは、Ｎである、式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩である。

【0033】

本発明の別の実施形態は、（ｘｉｖ）式（Ｉｂ）

【化14】

（式中、
Ｒ^１は、

【化15】

（式中、Ｒ^４は、Ｃ_１～６アルキルであり、Ｒ^５は、Ｃ_１～６アルキルである）であり、
Ｒ^２は、Ｃ_１～６アルキルであり、
Ｒ^３は、ピペラジニル、（Ｃ_１～６アルコキシＣ_１～６アルキル）ピペラジニル、４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタニル、５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナニル、アミノ－１，４－オキサゼパニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピペリジニル、アミノ（Ｃ_１～６アルコキシ）ピロリジニル、アミノ（Ｃ_１～６アルキル）アゼチジニル又はアミノハロピペリジニルであり、
Ａは、ＣＨであり、
Ｍは、ＣＨであり、
Ｗは、ＣＨであり、
Ｑは、Ｎである）
の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩である。

【0034】

本発明の更なる実施形態は、（ｘｖ）（ｘｉｖ）による式（Ｉｂ）の化合物であり、Ｒ^４は、メチルであり、Ｒ^５は、メチルであり、Ｒ^２は、メチルである。

【0035】

本発明の更なる実施形態は、（ｘｖｉ）（ｘｉｖ）又は（ｘｖ）による式（Ｉｂ）の化合物であり、Ｒ^３は、アミノ－１，４－オキサゼパニルである。

【0036】

本発明の更なる実施形態は、（ｘｖｉｉ）（ｘｉｖ）～（ｘｖｉ）のいずれか１つによる式（Ｉｂ）の化合物であり、Ｒ^３は、６－アミノ－１，４－オキサゼパン－４－イルである。

【0037】

本発明の更なる実施形態は、（ｘｖｉｉｉ）（ｘｉｖ）～（ｘｖｉｉ）のいずれか１つに記載の式（Ｉｂ）の化合物であって、
Ｒ^１は、

【化16】

（式中、Ｒ^４は、Ｃ_１～６アルキルであり、Ｒ^５は、Ｃ_１～６アルキルである）であり、
Ｒ^２は、Ｃ_１～６アルキルであり、
Ｒ^３は、アミノ－１，４－オキサゼパニルであり、
Ａは、ＣＨであり、
Ｍは、ＣＨであり、
Ｗは、ＣＨであり、
Ｑは、Ｎである、式（Ｉｂ）の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩である。

【0038】

本発明の更なる実施形態は、（ｘｉｘ）（ｘｉｖ）～（ｘｖｉｉｉ）のいずれか１つに記載の式（Ｉｂ）の化合物であって、
Ｒ^１は、

【化17】

（式中、Ｒ^４は、メチルであり、Ｒ^５は、メチルである）であり、
Ｒ^２は、メチルであり、
Ｒ^３は、６－アミノ－１，４－オキサゼパン－４－イルであり、
Ａは、ＣＨであり、
Ｍは、ＣＨであり、
Ｗは、ＣＨであり、
Ｑは、Ｎである、式（Ｉｂ）の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩である。

【0039】

本発明の他の実施形態は、以下：
１，６－ジメチル－４－［４－（４－ピペラジン－１－イルフェニル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（５－ピペラジン－１－イルピラジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（５－ピペラジン－１－イルピリミジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１－メチル－４－［４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１－メチル－４－［４－（４－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（４－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（４－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（２－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（４－メチル－２－ピペラジン－１－イル－ピリミジン－５－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－ピラジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
４－［４－（３－エチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
４－［４－（３－メトキシ－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
（３Ｓ，４Ｒ）－１－［６－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３－フルオロ－ピペリジン－４－アミン；
４－［４－［５－［（３Ｒ）－３－（メトキシメチル）ピペラジン－１－イル］－３－メチル－２－ピリジル］－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
（３Ｓ，４Ｓ）－１－［６－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３－メトキシ－ピペリジン－４－アミン；
１－メチル－４－［シス－３－メチル－４－（６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１－メチル－４－［トランス－３－メチル－４－（６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［シス－３－メチル－４－（４－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［トランス－３－メチル－４－（４－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［シス－３－メチル－４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－ピラジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［トランス－３－メチル－４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－ピラジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［シス－３－メチル－４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［トランス－３－メチル－４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
（３Ｒ，４Ｒ）－１－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－４－メトキシ－ピロリジン－３－アミン；
２－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナン；
（６Ｓ）－４－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－１，４－オキサゼパン－６－アミン；
４－［（３Ｓ，４Ｒ）－４－［５－［（３Ｒ）－３－（メトキシメチル）ピペラジン－１－イル］－３－メチル－２－ピリジル］－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
４－［（３Ｓ，４Ｒ）－４－［５－（４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタン－７－イル）－３－メチル－２－ピリジル］－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
（３Ｒ，４Ｒ）－１－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３－フルオロ－ピペリジン－４－アミン；
１－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３－メチル－アゼチジン－３－アミン；
（４ａＲ，７ａＲ）－６－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３，４，４ａ，５，７，７ａ－ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］［１，４］オキサジン；
１，６－ジメチル－４－［（３Ｒ，４Ｓ）－３－メチル－４－（５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
１，６－ジメチル－４－［（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－４－（５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
（３Ｒ，４Ｒ）－１－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－４－メトキシ－ピロリジン－３－アミン；
４－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－［５－［（３Ｒ）－３－（メトキシメチル）ピペラジン－１－イル］－２－ピリジル］－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；
２－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナン；
（３Ｓ，４Ｓ）－１－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－３－メトキシ－ピペリジン－４－アミン；
（６Ｓ）－４－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－１，４－オキサゼパン－６－アミン；
（３Ｒ，４Ｒ）－１－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－３－フルオロ－ピペリジン－４－アミン；
４－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－［５－（４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタン－７－イル）－２－ピリジル］－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン；及び
１－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－３－メチル－アゼチジン－３－アミン
から選択される、式（Ｉ）若しくは（Ｉａ）若しくは（Ｉｂ）の化合物、又はその薬学的に許容され得る塩である。

【0040】

医薬組成物及び投与
別の実施形態は、本発明の化合物と、治療上不活性な担体、希釈剤又は添加物とを含有する医薬組成物又は医薬、並びにこのような組成物及び医薬を調製するために本発明の化合物を使用する方法を提供する。一例では、式（Ｉ）の化合物が、周囲温度で、適切なｐＨで、及び所望の程度の純度で、生理学的に許容され得る担体、すなわち、使用される投与量及び濃度においてレシピエントに対して非毒性である担体と混合することによって、生薬投与形態に製剤化され得る。製剤のｐＨは、特定の用途及び化合物の濃度に主に依存するが、好ましくは約３～約８の範囲である。一例では、式（Ｉ）の化合物は、ｐＨ５の酢酸緩衝剤中で製剤化される。別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は無菌である。化合物は、例えば、固体若しくは非晶質組成物として、凍結乾燥製剤として、又は水溶液として保管され得る。

【0041】

組成物は、良好な医療行為と一致した様式で製剤化、投薬、及び投与される。これに関連して考慮すべき因子には、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療施術者に知られている他の因子が含まれる。投与される化合物の「有効量」は、このような検討事項によって支配され、それぞれの刺激リガンドとのＴＬＲ７、８、９相互作用、ＭＹＤ８８、ＩＲＦ７、ＩＲＦ５、ＮＦκＢ等によって媒介され、Ｉ型インターフェロン及び炎症促進性サイトカイン（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ－６）の産生をもたらす下流シグナル伝達、及びあらゆる種類の免疫細胞の活性化を阻害するのに必要な最小量である。例えば、このような量は、正常な細胞、又は全体として哺乳動物に毒性である量を下回ってもよい。

【0042】

一例では、１回の投薬当たり非経口投与される本発明の化合物の薬学的有効量は、１日当たり約０．００１～１０００ｍｇ／患者の体重ｋｇ、あるいは約０．００１～１０００ｍｇ／患者の体重ｋｇの範囲となり、使用される化合物の典型的な初期範囲は、０．３～１５ｍｇ／ｋｇ／日となる。別の実施形態では、錠剤及びカプセル剤等の経口単位剤形は、好ましくは、約０．１～約１０００ｍｇの本発明の化合物を含有する。

【0043】

本発明の化合物は、経口、局所（頬側及び舌下を含む）、直腸、膣、経皮、非経口、皮下、腹腔内、肺内、皮内、髄腔内及び硬膜外及び鼻腔内、並びに局所処置が所望される場合、病巣内投与を含む任意の適切な手段によって投与され得る。非経口輸液には、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、又は皮下投与が含まれる。

【0044】

本発明の化合物は、任意の好都合な投与形態、例えば、錠剤、散剤、カプセル剤、液剤、分散剤、懸濁剤、シロップ剤、スプレー剤、坐剤、ゲル剤、乳剤、パッチ剤等で投与され得る。そのような組成物は、医薬品の調製における従来の成分、例えば希釈剤、担体、ｐＨ調整剤、甘味料、充填剤及び更なる活性剤を含有することができる。

【0045】

典型的な製剤は、本発明の化合物及び担体又は添加物を混合することによって調製される。適切な担体及び賦形剤は当業者によく知られており、例えば、Ａｎｓｅｌ，Ｈｏｗａｒｄ Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｓｅｌ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００４；Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．，ｅｔ ａｌ．Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００；及びＲｏｗｅ，Ｒａｙｍｏｎｄ Ｃ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ．Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２００５に詳述されている。製剤はまた、薬物（すなわち、本発明の化合物又はその医薬組成物）の優れた見栄えを提供、又は医薬品（すなわち、医薬）の製造を補助するために、１種以上の緩衝剤、安定化剤、界面活性剤、湿潤剤、滑沢剤、乳化剤、懸濁化剤、保存剤、抗酸化剤、乳白剤、流動促進剤、加工助剤、着色剤、甘味剤、芳香剤、香味剤、希釈剤及び他の既知の添加剤も含み得る。

【0046】

好適な経口剤形の例は、約０．１～１０００ｍｇの無水ラクトース、約０．１～１０００ｍｇのクロスカルメロースナトリウム、約０．１～１０００ｍｇのポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）Ｋ３０、及び約０．１～１０００ｍｇのステアリン酸マグネシウムを配合された約０．１～１０００ｍｇの本発明の化合物を含有する錠剤である。粉末化成分は、最初に一緒に混合され、その後、ＰＶＰの溶液と混合される。その結果得られた組成物は、乾燥させ、顆粒化し、ステアリン酸マグネシウムと混合し、一般的な装置を使用して錠剤の形態に圧縮することができる。エアゾール製剤の例は、例えば０．１～１０００ｍｇの本発明の化合物を好適な緩衝溶液、例えばリン酸緩衝液に溶解し、所望であれば、等張化剤、例えば塩化ナトリウム等の塩を添加することによって調製され得る。溶液は、不純物及び汚染物を除去するために、例えば、０．２ミクロンのフィルタを使用してフィルタにかけ得る。

【0047】

したがって、一実施形態は、式（Ｉ）の化合物、又はその立体異性体又は薬学的に許容され得る塩を含む医薬組成物を含む。更なる実施形態は、式（Ｉ）の化合物、又はその立体異性体又は薬学的に許容され得る塩を、薬学的に許容され得る担体又は賦形剤と共に含む医薬組成物を含む。

【0048】

別の実施形態は、自己免疫疾患の処置に使用するための式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を含む。別の実施形態は、自己免疫疾患の処置に使用するための式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物を含む。

【0049】

以下の実施形態は、本発明の典型的な組成物を例示するが、単にその代表としての役割を持つ。

【0050】

組成物Ａ
本発明の化合物は、有効成分として、以下の組成の錠剤を生産するために、それ自体公知の様式で使用することができる。

【0051】

錠剤あたり
有効成分 ２００ｍｇ
微結晶セルロース １５５ｍｇ
コーンスターチ ２５ｍｇ
タルク ２５ｍｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース ２０ｍｇ
４２５ｍｇ

【0052】

組成物Ｂ
本発明の化合物は、有効成分として、以下の組成のカプセル剤を生産するために、それ自体公知の様式で使用することができる。

【0053】

カプセルあたり
有効成分 １００．０ｍｇ
コーンスターチ ２０．０ｍｇ
ラクトース ９５．０ｍｇ
タルク ４．５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ０．５ｍｇ
２２０．０ｍｇ

【0054】

合成
本発明の化合物は、任意の従来の手段によって調製することができる。これらの化合物及びその出発物質を合成するための好適な方法は、以下のスキーム及び実施例に示されている。全ての置換基、特にＲ^１～Ｒ^５、Ａ、Ｍ、Ｗ、及びＱは、特に明記しない限り、上記で定義したとおりである。さらに、別段の明白な記述がない限り、全ての反応、反応条件、略語及び記号は、有機化学の当業者に周知の意味を有する。

【0055】

式（Ｉ）又は（Ｉａ）若しくは（Ｉｂ）の化合物を調製するための一般的な合成経路を以下に示す。

【0056】

スキーム１

【化18】

式中、Ｘはハロゲンである。

【0057】

式（ＩＩ）の化合物と（ＩＩＩ）とのカップリングは、ＤＩＰＥＡ若しくはＣｓＦ等の塩基の存在下での高温での直接置換によって、又はバックワルド・ハートウィッグＣ－Ｎ結合形成（参照：Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．１９９８，３１，８０５－８１８；Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１６，１１６，１２５６４－１２６４９；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，２１９，１３１－２０９のトピック；及びそこに引用されている参考文献）とＲｕＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３／ＸａｎｔＰｈｏｓ等の触媒及びＣｓ_２ＣＯ_３又はｔ－ＢｕＯＮａ等の塩基とのカップリング反応を介して達成して、式（ＩＶ）の化合物を提供することができる。続いて、式（ＩＶ）の化合物とＲ^３－Ｈとのカップリングは、バックワルド・ハートウィッグＣ－Ｎ結合形成条件下で、ＲｕＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３／ＸａｎｔＰｈｏｓ等の触媒及びＣｓ_２ＣＯ_３又はｔ－ＢｕＯＮａ等の塩基と直接カップリングさせて、式（Ｉ）の化合物を得ることによって達成することができる。いくつかの実施形態では、式（ＩＶ）の化合物とＲ^３－Ｈとのカップリングは、Ｒ^３－Ｈに由来する保護基、例えばＢｏｃ又はＣｂｚを含有する生成物を与えてもよく、保護基は式（Ｉ）の最終化合物を与える前に除去される。

【0058】

スキーム２

【化19】

式中、Ｘはハロゲンである。

【0059】

式（ＶＩ）の化合物は、水素雰囲気下、Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃ、Ｐｄ／Ｃ又はウィルキンソン触媒等の触媒の存在下で、式（Ｖ）の化合物からの水素化反応によって達成することができる。Ｃｂｚ基も同じ条件下で脱保護され得る。その後、式（ＶＩ）の化合物と（ＩＩ）とのカップリングは、ＤＩＰＥＡ若しくはＣｓＦ等の塩基の存在下での高温での直接置換によって、又はＲｕＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３／ＸａｎｔＰｈｏｓ等の触媒及びＣｓ_２ＣＯ_３若しくはｔ－ＢｕＯＮａ等の塩基との条件でのバックワルド・ハートウィッグＣ－Ｎ結合形成によって達成して、式（Ｉ）の化合物を提供することができる。いくつかの実施形態では、式（ＶＩ）の化合物と（ＩＩ）とのカップリングは、（ＶＩ）に由来する保護基、例えばＢｏｃを含有する生成物を与えてもよく、保護基は、式（Ｉ）の最終化合物を与える前に除去される。

【0060】

本発明の化合物は、ジアステレオマー又はエナンチオマーの混合物として得ることができ、これらは、当該技術分野で周知の方法、例えば、（キラル）ＨＰＬＣ又はＳＦＣによって分離することができる。

【0061】

本発明はまた、式（Ｉ）又は式（Ｉａ）の化合物を調製する方法に関し、本方法は、
ａ）触媒及び塩基の存在下での、式（ＩＶ）

【化20】

の化合物と、Ｒ^３－Ｈとの間のバックワルド・ハートウィッグＣ－Ｎ結合形成反応の工程、
ｂ）触媒及び塩基の存在下での、式（ＶＩ）

【化21】

の化合物と、式（ＩＩ）

【化22】

の化合物との間のバックワルド・ハートウィッグＣ－Ｎ結合形成反応の工程、
ｃ）塩基の存在下での、式（ＶＩ）の化合物と式（ＩＩ）の化合物との間の直接置換反応の工程
を含み、
式中、
工程ａ）及びｂ）において、触媒は、例えば、ＲｕＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３／キサントホスであり得、塩基は、例えば、Ｃｓ_２ＣＯ_３又はｔ－ＢｕＯＮａであり得、
工程ｃ）において、塩基は、ＤＩＰＥＡ又はＣｓＦであり得る。

【0062】

上記製造方法に従って製造された場合の式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物もまた、本発明の対象である。

【0063】

適応症及び処置法
本発明は、ＴＬＲ７及びＴＬＲ８及びＴＬＲ９のアンタゴニストとして使用することができ、ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８及び／又はＴＬＲ９を介した経路活性化、並びにあらゆる種類のサイトカイン及びあらゆる形態の自己抗体の産生を通じて媒介される自然免疫応答及び適応免疫応答を含むがこれらに限定されない、それぞれの下流の生物学的イベントを阻害する化合物を提供する。したがって、本発明の化合物は、形質細胞様樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、単球、好中球、ケラチノサイト、上皮細胞を含むがこれらに限定されない、そのような受容体（複数可）を発現するあらゆる種類の細胞において、ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８及び／又はＴＬＲ９をブロックするのに有用である。このように、化合物は、全身性エリテマトーデス及びループス腎炎の治療薬又は予防薬として使用することができる。

【0064】

本発明は、処置又は予防を必要とする患者における全身性エリテマトーデス及びループス腎炎の処置又は予防のための方法を提供する。

【0065】

別の実施形態は、処置又は予防を必要とする哺乳動物における全身性エリテマトーデス及びループス腎炎を処置又は予防する方法を含み、該方法は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、立体異性体、互変異性体、プロドラッグ、又はその薬学的に許容され得る塩を該哺乳動物に投与することを含む。

【実施例】

【0066】

本発明は、以下の実施例を参照することによってより十分に理解される。しかしながら、これらは、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。

【0067】

略語
本発明は、以下の実施例を参照することによってより十分に理解される。しかしながら、これらは、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。

【0068】

本明細書で使用される略語は、以下のとおりである。
ＡＣＮ：アセトニトリル
ＡＩＢＮ：アゾビスイソブチロニトリル
Ｂｏｃ_２Ｏ：ジ－ｔｅｒｔブチルジカーボネート
ＣｂｚＣｌ：クロロギ酸ベンジル
ＣｙＰＦ－ｔ－Ｂｕ：［（Ｒ）－１－［（Ｓ）－２－（ジシクロヘキシルホスフィノ）フェロセニル］エチル］ジ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィン
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＥＡ：ジエチルアミン
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ：ジメチルアセトアミド
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＦＤＭＡ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドジメチルアセタール
ｄｔｂｂｐｙ：４，４’－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－２，２’－ジピリジル
ＥｔＯＡｃ又はＥＡ：酢酸エチル
ＦＡ：ギ酸
ＨＬＭ ヒト肝ミクロソーム
ＩＣ_５０：５０％阻害濃度
Ｉｒ［ｄＦ（ＣＦ_３）ｐｐｙ］_２（ｄｔｂｐｙ）（ＰＦ_６）：［４，４’－ビス（１，１－ジメチルエチル）－２，２’－ビピリジン－Ｎ１，Ｎ１’］ビス［３，５－ジフルオロ－２－［５－（トリフルオロメチル）－２－ピリジニル－Ｎ］フェニル－Ｃ］イリジウム（ＩＩＩ）ヘキサフルオロホスフェート
ＪａｃｋｉｅＰｈｏｓ：ビス（３，５－ビス（トリフルオロメチル）フェニル）（２’，４’，６’－トリイソプロピル－３，６－ジメトキシビフェニル－２－イル）ホスフィン
ＬＣＭＳ 液体クロマトグラフィ質量分析
ＭＳ：質量分析法
［Ｐｄ（アリル）Ｃｌ］_２：アリルパラジウム（ＩＩ）クロリド二量体
Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３：トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム
Ｐｄ［Ｐ（ｏ－ｔｏｌ）_３］_２：ビス（トリ－ｏ－トリルホスフィン）パラジウム
ＰＥ：石油エーテル
ｐｒｅｐ－ＨＰＬＣ：分取高速液体クロマトグラフィ
ｒｔ：室温
ＲｕＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２：第２世代のクロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，６’－ジイソプロポキシ－１，１’－ビフェニル）［２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）
ＳＦＣ：超臨界流体クロマトグラフィ
ＴＣＤＩ：１，１’－チオカルボニルジイミダゾール
ＴＥＡ：トリメチルアミン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
Ｔｆ_２Ｏ：トリフルオロメタンスルホン酸無水物
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＴＭＳＳ：１，１，１，３，３，３－ヘキサメチル－２－トリメチルシリル－トリシラン
ｖ／ｖ：体積比
キサントホス：４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン

【0069】

一般的な実験条件
中間体及び最終化合物を、次の機器のいずれか１つを用いて、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した：ｉ）Ｂｉｏｔａｇｅ ＳＰ１システム及びＱｕａｄ １２／２５カートリッジモジュール、ｉｉ）ＩＳＣＯ ｃｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈクロマトグラフィ機器。シリカゲルのブランド及び細孔径：ｉ）ＫＰ－ＳＩＬ ６０Å、粒径：４０～６０μｍ；ｉｉ）ＣＡＳ登録番号：シリカゲル：６３２３１－６７－４、粒径：４７～６０ミクロン シリカゲル；ｉｉｉ）Ｑｉｎｇｄａｏ Ｈａｉｙａｎｇ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ製のＺＣＸ、細孔：２００～３００又は３００～４００。

【0070】

中間体及び最終化合物を、ＸＢｒｉｄｇｅ（商標）Ｐｒｅｐ－Ｃ１８（５μｍ、ＯＢＤ（商標）３０×１００ｍｍ）カラム、ＳｕｎＦｉｒｅ（商標）Ｐｒｅｐ－Ｃ１８（５μｍ、ＯＢＤ（商標）３０×１００ｍｍ）カラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ－Ｃ１８（１０μｍ、２５×１５０ｍｍ）又はＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－Ｃ１８（１０μｍ、２５×１５０ｍｍ）を使用する逆相カラムでの分取ＨＰＬＣによって精製した。Ｗａｔｅｒｓ ＡｕｔｏＰ精製システム（サンプルマネージャー２７６７、ポンプ２５２５、検出器：Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱ及びＵＶ ２４８７、溶媒系：アセトニトリル及び水中０．１％水酸化アンモニウム；アセトニトリル及び水中０．１％ＦＡ又はアセトニトリル及び水中０．１％ＴＦＡ）。又はＧｉｌｓｏｎ－２８１精製システム（ポンプ３２２、検出器：ＵＶ １５６、溶媒系：アセトニトリル及び水中０．０５％水酸化アンモニウム；アセトニトリル及び水中０．２２５％ＦＡ；アセトニトリル及び水中０．０５％ＨＣｌ；アセトニトリル及び水中０．０７５％ＴＦＡ；又はアセトニトリル及び水）。

【0071】

ＳＦＣキラル分離について、中間体を、キラルカラム（Ｄａｉｃｅｌ ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣ、５μｍ、３０×２５０ｍｍ）、ＡＳ（１０μｍ、３０×２５０ｍｍ）又はＡＤ（１０μｍ、３０×２５０ｍｍ）によって、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ Ｍｕｌｔｉｇｒａｍ ＩＩＩシステムＳＦＣ、Ｗａｔｅｒｓ ８０Ｑ分取ＳＦＣ又はＴｈａｒ８０分取ＳＦＣ、溶媒系：ＣＯ_２及びＩＰＡ（ＩＰＡ中の０．５％ＴＥＡ）又はＣＯ_２及びＭｅＯＨ（ＭｅＯＨ中の０．１％ＮＨ_３・Ｈ_２Ｏ）、背圧１００バール、２５４又は２２０ｎｍの検出紫外線を用いて分離した。

【0072】

化合物のＬＣ／ＭＳスペクトルを、ＬＣ／ＭＳ（Ｗａｔｅｒｓ（商標）Ａｌｌｉａｎｃｅ ２７９５－Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱ、Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ａｌｌｉａｎｃｅ ２０２０－Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱ、又はＡｇｉｌｅｎｔ Ａｌｌｉａｎｃｅ ６１１０－Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＺＱ）を用いて得た。ＬＣ／ＭＳ条件は以下のとおりであった（実行時間３分又は１．５分）：
酸性条件Ｉ：Ａ：Ｈ_２Ｏ中０．１％ＴＦＡ；Ｂ：アセトニトリル中０．１％ ＴＦＡ；
酸性条件ＩＩ：Ａ：Ｈ_２Ｏ中０．０３７５％ＴＦＡ；Ｂ：アセトニトリル中０．０１８７５％ＴＦＡ；
基本条件Ｉ：Ａ：Ｈ_２Ｏ中０．１％ＮＨ_３・Ｈ_２Ｏ；Ｂ：アセトニトリル；
塩基性条件ＩＩ：Ａ：Ｈ_２Ｏ中０．０２５％ＮＨ_３・Ｈ_２Ｏ；Ｂ：アセトニトリル；
中性条件：Ａ：Ｈ_２Ｏ；Ｂ：アセトニトリル。
マススペクトル（ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒａ：ＭＳ）：一般的には親核の質量（ｐａｒｅｎｔ ｍａｓｓ）を示すイオンのみが報告され、特に明記しない限り、引用された質量イオン（ｍａｓｓ ｉｏｎ）は正の質量イオン（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｍａｓｓ ｉｏｎ）（ＭＨ）^＋である。

【0073】

ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ４００ＭＨｚを使用して取得した。

【0074】

マイクロ波支援反応は、Ｂｉｏｔａｇｅ Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ Ｓｉｘｔｙマイクロ波合成装置で行った。空気に敏感な試薬を含む全ての反応を、アルゴン又は窒素雰囲気下で行った。試薬は、特に明記しない限り、市販のものをそのまま使用し、更に精製することなく使用した。

【0075】

調製実施例
以下の実施例は、本発明の意味を説明することを意図しているが、決して本発明の意味の範囲内での限定を表すものではない。

【0076】

中間体Ａ
４－［（３Ｓ，４Ｒ）－４－（５－クロロ－２－ピリジル）－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化23】

【0077】

表題化合物を、以下のスキームによって調製した。

【化24】

【0078】

工程１：ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－３－（８－キノリルカルバモイル）ピぺリジン－１－カルボキシレート（化合物Ａ３）の調製

【0079】

ＤＭＦ（１０００ｍＬ）中の８－アミノキノリン（化合物Ａ２、ＣＡＳ：５７８－６６－５、Ｖｅｎｄｏｒ：Ａｃｃｅｌａ、６９．１７ｇ、４７９．７８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（１９０．６０ｇ、５０１．５９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２３３ｍＬ、１３０９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を０℃で１時間撹拌した。次いで、（３Ｓ）－１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルピペリジン－３－カルボン酸（化合物Ａ１、：８８４９５－５４－９、Ｖｅｎｄｏｒ：Ａｃｃｅｌａ、１００．００ｇ、４３６．１７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を０℃で１５時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）及び氷水（５０ｍＬ）を添加し、分離した。水相をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機層をブライン（３００ｍＬ）で４回洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、真空下で濃縮した。その残渣を、ＥＡ／ＰＥ（１：５）の勾配で溶出するフラッシュカラムにより精製して、化合物Ａ３（１２０ｇ）を黄色固体として得た。ＭＳ：計算値３５６（ＭＨ^＋）、測定値３５６（ＭＨ^＋）。

【0080】

工程２：ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，４Ｒ）－４－（５－クロロ－２－ピリジル）－３－（８－キノリルカルバモイル）ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ａ５）及びｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，４Ｓ）－４－（５－クロロ－２－ピリジル）－３－（８－キノリルカルバモイル）ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ａ１３）の調製

【0081】

ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－３－（８－キノリルカルバモイル）ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ａ３、５０．００ｇ、１４０．６７ｍｍｏｌ）、５－クロロ－２－ヨード－ピリジン（化合物Ａ４，ＣＡＳ：２４４２２１－５７－６、ベンダー：Ｂｉｄｅ Ｐｈａｒｍａｔｅｃｈ、７７．００ｇ、３２２．１８ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＯＡｃ）_２（３．１５ｇ、１４．０７ｍｍｏｌ）、ＡｇＯＡｃ（４６．７０ｇ、２８１．３５ｍｍｏｌ）の混合物をＮ_２で脱気し、次いで、Ｎ_２雰囲気下、１１０℃で４８時間撹拌した。室温まで冷却した後、濾過した。濾液を真空下で濃縮した。残渣を、ＥＡ／ＰＥ（１／１０～１／１）の勾配で溶出するフラッシュカラムにより更に精製して、化合物Ａ５（２０．００ｇ）及び化合物Ａ１３（１５．００ｇ）を黄色油状物として得た。ＭＳ：計算値４６７（ＭＨ^＋）、測定値４６７（ＭＨ^＋）。

【0082】

工程３：（３Ｓ，４Ｒ）－１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－（５－クロロ－２－ピリジル）ピペリジン－３－カルボン酸（化合物Ａ６）の調製

【0083】

エタノール（２００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，４Ｒ）－４－（５－クロロ－２－ピリジル）－３－（８－キノリルカルバモイル）ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ａ５、１７．００ｇ、３６．４１ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化ナトリウム（１４．５７ｇ、３６４．２２ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、８５℃で１６時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＨＣｌ（３Ｍ）でｐＨ６に中和した。混合物をＤＣＭ（３００ｍＬ）で３回抽出した。有機相を真空で濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥＡ（５／１～１／１）の勾配で溶出するフラッシュカラムにより精製して、化合物Ａ６（１１．５０ｇ）を黄色油状物として得た。ＭＳ：計算値３４１（ＭＨ^＋）、測定値２８５（Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ^＋）。

【0084】

工程４：ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，４Ｒ）－４－（５－クロロ－２－ピリジル）－３－（ヒドロキシメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ａ７）の調製

【0085】

ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の（３Ｓ，４Ｒ）－１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－（５－クロロ－２－ピリジル）ピペリジン－３－カルボン酸（化合物Ａ６、１１．５０ｇ、３３．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＢＨ_３．Ｍｅ_２Ｓ（１３．５ｍＬ、１３４．９８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。添加後、反応混合物をＮ_２雰囲気下、２５℃で１６時間更に撹拌した。揮発性物質を除去して白色固体残渣を得、次いで、メタノール（５０ｍＬ）を添加した。３０分間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、メタノール（５０ｍＬ）を再び添加した。次いで、残渣を１０％クエン酸を滴下して処理した。混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥＡ（３／１）の勾配で溶出するフラッシュカラムにより精製して、化合物Ａ７（８．００ｇ）を無色ゴム状物として得た。ＭＳ：計算値３２７ ［（Ｍ＋Ｈ）^＋］、実測値２７１（Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ^＋）。

【0086】

工程５：ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，４Ｒ）－４－（５－クロロ－２－ピリジル）－３－（イミダゾール－１－カルボチオイルオキシメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ａ８）の調製

【0087】

ＴＨＦ（６０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，４Ｒ）－４－（５－クロロ－２－ピリジル）－３－（ヒドロキシメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ａ７、４．００ｇ、１２．２４ｍｍｏｌ）及びＴＣＤＩ（４．３６ｇ、２４．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＡＰ（２９９ｍｇ、２．４５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で３時間撹拌した。次いで、反応混合物を濃縮し、残渣をＰＥ／ＥＡ（１／１）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、化合物Ａ８（５．００ｇ）を黄色油状物として得た。ＭＳ：計算値４３７（ＭＨ^＋）、測定値４３７（ＭＨ^＋）。

【0088】

工程６：ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，４Ｒ）－４－（５－クロロ－２－ピリジル）－３－メチル－ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ａ９）の調製

【0089】

トルエン（２５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，４Ｒ）－４－（５－クロロ－２－ピリジル）－３－（イミダゾール－１－カルボチオイルオキシメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ａ８、５．００ｇ、１１．４４ｍｍｏｌ）の混合物に、トリス（トリメチルシリル）シラン（１７ｍＬ、４７．５６ｍｍｏｌ）及びＡＩＢＮ（１８７７ｍｇ、１１．４４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ_２で１０分間脱気し、８５℃で５時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物を真空下で濃縮した。その残渣を、ＰＥ／ＥＡ（５／１）の勾配で溶出するフラッシュカラム及び分取ＨＰＬＣによって精製して、化合物Ａ９（二つのバッチの組み合わせ、４．００ｇ）を黄色油状物として得た。ＭＳ：計算値３１１（ＭＨ^＋）、測定値２５５（Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ^＋）。

【0090】

工程７：５－クロロ－２－［（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－４－ピペリジル］ピリジン（化合物Ａ１０）の調製

【0091】

ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ，４Ｒ）－４－（５－クロロ－２－ピリジル）－３－メチル－ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ａ９、４．００ｇ、１２．８７ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＴＦＡ（３１ｍＬ、１２３．０８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣによって精製し、化合物Ａ１０（２．７０ｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値２１１（ＭＨ^＋）、測定値２１１（ＭＨ^＋）。

【0092】

工程８：４－フルオロ－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（化合物Ａ１１）の調製

【0093】

ＤＭＳＯ（６０ｍＬ）中の４－クロロ－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（化合物Ａ１２、ＣＡＳ：１９８６７－７８－８、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ、４．６０ｇ、２５．３３ｍｍｏｌ）及びフッ化セシウム（１９．２４ｍｇ、１２６．６４ｍｍｏｌ）の混合物を１２０℃で１８時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物を水（１００ｍＬ）に添加し、ＥＡ（１００ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層をブライン（２００ｍＬ）で２回洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮した。その残渣をフラッシュカラムにより精製して、化合物Ａ１１（４．００ｇ、いくらかの化合物Ａ１２を含有していた）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値１６６（ＭＨ^＋）、測定値１６６（ＭＨ^＋）。

【0094】

工程９：４－［（３Ｓ，４Ｒ）－４－（５－クロロ－２－ピリジル）－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（中間体Ａ）の調製

【0095】

ＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中の４－フルオロ－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（化合物Ａ１１、２．１２ｇ、１２．８１ｍｍｏｌ）及び５－クロロ－２－［（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－４－ピペリジル］ピリジン（化合物Ａ１０、２．７０ｇ、１２．８１ｍｍｏｌ）の混合物にＣｓＦ（３．７２ｍｇ、６４．０７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物をＮ_２雰囲気下、１２０℃で１２時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を氷水（２００ｍＬ）に注ぎ、ＥＡ（２５０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、真空下で濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥＡ（１／１）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、粗生成物を得、これをＳＦＣ（勾配：ＣＯ_２中５５％ＭｅＯＨ（０．０５％ＤＥＡ）、カラム：ＤａｉｃｅｌＣｈｉｒａｌｐａｋＩＣ、２５０×３０ｍｍ、１０μｍ）によって更に精製して、中間体Ａ（２．５２ｇ、よりゆっくりと溶出）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値３５６（ＭＨ^＋）、測定値３５６（ＭＨ^＋）。

【0096】

中間体Ｂ
４－［（３Ｓ，４Ｒ）－４－（５－クロロ－３－メチル－２－ピリジル）－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化25】

【0097】

表題化合物を、以下のスキームによって調製した。

【化26】

【0098】

工程１：ｔｅｒｔ－ブチル４－ヒドロキシ－３－メチル－ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｂ２）の調製

【0099】

メタノール（５００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル３－メチル－４－オキソピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｂ１、ＣＡＳ：１８１２６９－６９－２、Ｖｅｎｄｏｒ：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ、５０．００ｇ、２３４．４４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ_４（１３．３０ｇ、３５１．６７ｍｍｏｌ）を分割して０℃で添加した。０℃で１時間、次いで２０℃で２．５時間撹拌した後、反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、メタノールを除去するために減圧下で濃縮した。次いで、混合物をジクロロメタンで抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮して、化合物Ｂ２（５０．４０ｇ）を淡黄色油状物として得た。

【0100】

工程２：ｔｅｒｔ－ブチル４－ブロモ－３－メチル－ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｂ３）の調製

【0101】

ＤＣＥ（５００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－ヒドロキシ－３－メチル－ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｂ２、４５．００ｇ、２０９．０２ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｐｈ_３Ｐ（７１．２７ｇ、２７１．７３ｍｍｏｌ）を２０℃で添加し、引き続いてＣＢｒ_４（１１０．９１ｇ、３３４．４３ｍｍｏｌ）を２０℃で添加した。フラスコを脱気し、Ｎ_２で４回パージした。Ｎ_２雰囲気下、２５℃で１５時間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、残渣をＰＥ／ＥＡ（１００／０～１００／５）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、化合物Ｂ３（３５．００ｇ）を淡黄色油状物として得た。

【0102】

工程３：ｔｅｒｔ－ブチル－４－（５－クロロ－３－メチル－２－ピリジル）－３－メチル－ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｂ５）の調製

【0103】

撹拌棒を装備した１０００ｍＬバイアルに、２－ブロモ－５－クロロ－３－メチル－ピリジン（化合物Ｂ４、ＣＡＳ：６５５５０－７７－８、Ｖｅｎｄｏｒ：Ａｃｃｅｌａ、２２．００ｇ、１０６．５５ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル４－ブロモ－３－メチル－ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｂ３、３８．５３ｇ、１３８．５２ｍｍｏｌ）、Ｉｒ［ｄＦ（ＣＦ_３）ｐｐｙ］_２（ｄｔｂｐｙ）（ＰＦ_６）（０．８５ｇ、１．０７ｍｍｏｌ）、ＮｉＣｌ_２・ｄｔｂｂｐｙ（０．２１ｇ、０．５３０ｍｍｏｌ）、ＴＴＭＳＳ（２６．５０ｇ、１０６．５５ｍｍｏｌ）、Ｎａ_２ＣＯ_３（２２．５９ｇ、２１３．１１ｍｍｏｌ）及びＤＭＥ（５００ｍＬ）を添加した。バイアルを密封し、窒素でパージした。混合物を撹拌し、冷却ファンを用いて３４Ｗ青色ＬＥＤランプ（７ｃｍ離れて）で照射して、反応温度を２５℃で１４時間維持した。反応物をフィルタにかけ、溶媒（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１、５ｍＬ）の混合物で３回洗浄した。濾液を濃縮し、残渣を、ＰＥ／ＥＡ（５／１）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、化合物Ｂ５（７．００ｇ）を淡黄色油状物として得た。ＭＳ：計算値３２５（ＭＨ^＋）、実測値２６９（Ｍ－Ｃ_４Ｈ_８＋Ｈ^＋）。

【0104】

工程４：５－クロロ－３－メチル－２－（３－メチル－４－ピペリジル）ピリジン（化合物Ｂ６）の調製

【0105】

ＤＣＭ（３０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル－４－（５－クロロ－３－メチル－２－ピリジル）－３－メチル－ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｂ５、７．００ｇ、２１．５５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（１０ｍＬ）を０℃で滴下した。２０℃で２時間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、残渣をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で塩基性化した。混合物をＤＣＭ（４０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を５０ｍＬのブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮して、化合物Ｂ６（４．８０ｇ）を淡黄色油状物として得た。ＭＳ：計算値２２５（ＭＨ^＋）、測定値２２５（ＭＨ^＋）。

【0106】

工程５：４－［（３Ｓ，４Ｒ）－４－（５－クロロ－３－メチル－２－ピリジル）－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（中間体Ｂ）の調製

【0107】

ＤＭＳＯ（４０ｍＬ）中５－クロロ－３－メチル－２－（３－メチル－４－ピペリジル）ピリジン（化合物Ｂ６、４．６０ｇ、２０．４７ｍｍｏｌ）及び４－フルオロ－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（化合物Ａ１１、３．７２ｇ、２２．５２ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＩＰＥＡ（２．３７ｇ、４０．９４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物をＮ_２雰囲気下、１２０℃で３時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物を氷水（４００ｍＬ）に注ぎ、ＥＡ（８０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、真空下で濃縮した。残渣を、ＥＡ／ＰＥ（１／１）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、混合物（５．４０ｇ）を淡褐色固体として得た。混合物をＳＦＣ（グラジエント：ＣＯ_２中４０％ＥｔＯＨ（０．１％ＮＨ_３Ｈ_２Ｏ）、カラム：Ｄａｉｃｅｌ Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ、２５０×３０ｍｍ、１０μｍ）によって精製し続けて、中間体Ｂ（２．１０ｇ）を淡黄色固体として得た。ＭＳ：計算値３７０（ＭＨ^＋）、測定値３７０（ＭＨ^＋）。

【0108】

中間体Ｃ
４－［４－（６－ブロモ－３－ピリジル）－３－メチル－１－ピペリジル］－１－メチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化27】

【0109】

表題化合物を、以下のスキームによって調製した。

【化28】

【0110】

工程１：ｔｅｒｔ－ブチル－３－メチル－４－（ｐ－トリルスルホニルヒドラゾノ）ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｃ２）の調製

【0111】

エタノール（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル－３－メチル－４－オキソピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｂ１、ＣＡＳ：１８１２６９－６９－２、Ｖｅｎｄｏｒ：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ、３００ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）の溶液に、４－メチルベンゼンスルホノヒドラジド（化合物Ｃ１、３４１ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を７０℃で３時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物を濃縮して粗生成物化合物Ｃ２（５３７ｍｇ）を得て、これを更に精製することなく次の工程に使用した。ＭＳ：計算値３８２（ＭＨ^＋）、測定値３８２（ＭＨ^＋）。

【0112】

工程２：ｔｅｒｔ－ブチル４－（６－ブロモ－３－ピリジル）－３－メチル－ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｃ４）の調製

【0113】

１，４－ジオキサン（５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル－３－メチル－４－（ｐ－トリルスルホニルヒドラゾノ）ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｃ２、５３７ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）の溶液に、（６－ブロモピリジン－３－イル）ボロン酸（化合物Ｃ３、ＣＡＳ：２２３４６３－１４－７、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ、３６９ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）及びＣｓ_２ＣＯ_３（１．３８ｇ、４．２２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ_２下、１２０℃で１６時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物をフィルタにかけ、固体をＥＡ（１０ｍＬ）で２回洗浄した。合わせた有機層を濃縮し、ＥＡ／ＰＥ（０％～７０％）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、所望の生成物Ｃ４（５０ｍｇ）を無色の油状物として得た。ＭＳ：計算値３５５（ＭＨ^＋）、測定値３５５（ＭＨ^＋）。

【0114】

工程３：２－ブロモ－５－（３－メチル－４－ピペリジル）ピリジン（化合物Ｃ５）の調製

【0115】

ＨＣｌ（ＥＡ中１Ｍ、１０ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－（６－ブロモ－３－ピリジル）－３－メチル－ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｃ４、５０ｍｇ、１４１μｍｏｌ）の混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を濃縮して、白色固体として所望の生成物Ｃ５（４１ｍｇ）を得た。ＭＳ：計算値２５５（ＭＨ^＋）、測定値２５５（ＭＨ^＋）。

【0116】

工程４：４－［４－（６－ブロモ－３－ピリジル）－３－メチル－１－ピペリジル］－１－メチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（中間体Ｃ）の調製

【0117】

ＤＭＳＯ（１５ｍＬ）中の４－クロロ－１－メチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（化合物Ｃ６、ＣＡＳ：１２６８５２０－９２－８、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ、３５ｍｇ、２１１μｍｏｌ）及び２－ブロモ－５－（３－メチル－４－ピペリジル）ピリジン（化合物Ｃ５、４１ｍｇ、１４１μｍｏｌ）の溶液に、ＣｓＦ（１０７ｍｇ、７０３μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１３０℃で一晩撹拌した。室温に冷却した後、反応物をＥＡで希釈し、水（３０ｍＬ）で４回洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、真空下で濃縮した。残渣を、ＥＡ（１０％ＭｅＯＨを含む）／ＰＥ（０％～７０％）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、中間体Ｃ（４２ｍｇ）を得た。ＭＳ：計算値３８６（ＭＨ^＋）、測定値３８６（ＭＨ^＋）。

【0118】

中間体Ｄ
４－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－（５－クロロ－２－ピリジル）－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化29】

【0119】

中間体Ａの調製と同様に、化合物Ａ５の代わりに化合物Ａ１３を使用することにより表題化合物を調製した。中間体Ｄを白色固体として得た。ＭＳ：計算値３５６（ＭＨ^＋）、測定値３５６（ＭＨ^＋）。（注：中間体Ａ１３をエタノール中水酸化ナトリウムで処理すると、ピペリジン環の３位の立体中心はＳ配置からＲ配置にエピマー化され、（３Ｒ，４Ｓ）－１－ブトキシカルボニル－４－（５－クロロ－２－ピリジル）ピペリジン－３－カルボン酸が得られる。）

【0120】

中間体Ｅ
４－［４－（５－クロロ－３－メチル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化30】

【0121】

表題化合物を、以下のスキームによって調製した。

【化31】

【0122】

工程１：ｔｅｒｔ－ブチル４－（５－クロロ－３－メチル－２－ピリジル）－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｅ３）の調製

【0123】

１，４－ジオキサン（４００ｍＬ）中の２－ブロモ－５－クロロ－３－メチル－ピリジン（化合物Ｅ１、１５．００ｇ、７２．６５ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチル４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｅ２、２４．７１ｇ、７９．９１ｍｍｏｌ）の混合物に、水（４０ｍＬ）中の炭酸ナトリウム（１５．４０ｇ、１４５．３０ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２．ＣＨ_２Ｃｌ_２（５．９３ｇ、７．２６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ_２雰囲気下、９５℃で１６時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物をフィルタにかけ、１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）で３回洗浄した。濾液を濃縮し、粗生成物をＰＥ／ＥＡ（５／１～３／１）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、化合物Ｅ３（９．４０ｇ）を黄色油状物として得た。ＭＳ：計算値３０９（ＭＨ^＋）、測定値３０９（ＭＨ^＋）。

【0124】

工程２：ｔｅｒｔ－ブチル４－（５－クロロ－３－メチル－２－ピリジル）ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｅ４）の調製

【0125】

テトラヒドロフラン（１２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－（５－クロロ－３－メチル－２－ピリジル）－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｅ３、６．００ｇ、１９．４３ｍｍｏｌ）の溶液に、トリス（トリフェニルホスフィン）ロジウム（Ｉ）クロリド（４．４９ｇ、４．８６ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコを脱気し、Ｈ_２で４回パージした。混合物を水素雰囲気下（４５ｐｓｉ）にて６０℃で３６時間撹拌した。混合物をセライトでフィルタにかけ、固体をメタノール（５ｍＬ）で洗浄した。溶媒を真空下で除去し、粗生成物をＰＥ／ＥＡ（５／１～３／１）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、化合物Ｅ４（４．５０ｇ）を灰白色の固体として得た。ＭＳ：計算値３１１（ＭＨ^＋）、測定値３１１（ＭＨ^＋）。

【0126】

工程３：５－クロロ－３－メチル－２－（４－ピペリジル）ピリジン（化合物Ｅ５）の調製

【0127】

ＤＣＭ（５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－（５－クロロ－３－メチル－２－ピリジル）ピペリジン－１－カルボキシレート（化合物Ｅ４、４．５０ｇ、１４．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、ジオキサン中ＨＣｌ（１０ｍＬ）を０℃で添加した。２５℃で１６時間撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮して、化合物Ｅ５（３．５６ｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値２１１（ＭＨ^＋）、測定値２１１（ＭＨ^＋）。

【0128】

工程４：４－［４－（５－クロロ－３－メチル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（中間体Ｅ）の調製

【0129】

ＤＭＳＯ（３０ｍＬ）中の４－クロロ－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（１．１５ｇ、６．３３ｍｍｏｌ）及び５－クロロ－３－メチル－２－（４－ピペリジル）ピリジン（化合物Ｅ５、１．７２ｇ、６．９７ｍｍｏｌ）の混合物に、ＫＦ（３．６７ｇ、６３．３２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物をＮ_２雰囲気下、１２０℃で１５時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物を氷水（２００ｍＬ）及びＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）水溶液に注ぎ、ＥＡ（２５０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、真空下で濃縮した。粗生成物を、ＰＥ／ＥＡ（５／１～０／１）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、中間体Ｅ（８１９ｍｇ）を淡黄色固体として得た。ＭＳ：計算値３５６（ＭＨ^＋）、測定値３５６（ＭＨ^＋）。

【0130】

実施例１
１，６－ジメチル－４－［４－（４－ピペラジン－１－イルフェニル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化32】

【0131】

表題化合物を、以下のスキームによって調製した。

【化33】

【0132】

工程１：ｔｅｒｔ－ブチル４－［４－（１－ベンジルオキシカルボニル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル）フェニル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物１ｃ）の調製

【0133】

１，４－ジオキサン（５ｍＬ）及び水（１ｍＬ）中のベンジル４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３，６－ジヒドロピリジン－１（２Ｈ）－カルボキシレート（化合物１ａ、ＣＡＳ：２８６９６１－１５－７、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ、１００ｍｇ、２９１μｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル４－（４－ブロモフェニル）ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物１ｂ、ＣＡＳ：３５２４３７－０９－３、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ、９９．４ｍｇ、２９１μｍｏｌ）の混合物に、Ｋ_２ＣＯ_３（１２１ｍｇ、８７４μｍｏｌ）及びＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ_２Ｃｌ_２（２４ｍｇ、２９μｍｏｌ）を添加した。混合物にＮ_２を投入し、１００℃で一晩撹拌した。室温に冷却した後、混合物をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、固体をＥＡ（１０ｍＬ）で２回洗浄した。合わせた有機相を濃縮し、ＥＡ／ＰＥ（０％～６０％）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、化合物１ｃ（８３ｍｇ）を得た。ＭＳ：計算値４７８（ＭＨ^＋）、測定値４７８（ＭＨ^＋）。

【0134】

工程２：ｔｅｒｔ－ブチル４－［４－（４－ピペリジル）フェニル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物１ｄ）の調製

【0135】

ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－［４－（１－ベンジルオキシカルボニル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル）フェニル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物１ｃ、８３ｍｇ、１７４μｍｏｌ）の混合物に、Ｐｄ（ＯＨ）_２（炭素中１０重量％、１２ｍｇ、８７μｍｏｌ）を添加した。懸濁液をＨ_２で３回パージし、次いで、水素バルーン下、室温で一晩撹拌した。混合物をフィルタにかけ、濃縮して粗生成物化合物１ｄ（６０ｍｇ）を得て、これを更に精製することなく次の工程に使用した。ＭＳ：計算値３４６（ＭＨ^＋）、測定値３４６（ＭＨ^＋）。

【0136】

工程３：ｔｅｒｔ－ブチル４－［４－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－４－ピペリジル］フェニル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物１ｆ）の調製

【0137】

１，４－ジオキサン（２ｍＬ）中の４－クロロ－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（化合物１ｅ、ＣＡＳ：１９８６７－７８－８、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ、２４ｍｇ、１３０μｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチル４－［４－（４－ピペリジル）フェニル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物１ｄ、３０ｍｇ、８７μｍｏｌ）の混合物に、ＲｕＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２（７ｍｇ、９μｍｏｌ）及びＣｓ_２ＣＯ_３（８５ｍｇ、２６１μｍｏｌ）を添加した。混合物にＮ_２を投入し、１１０℃で一晩撹拌した。室温に冷却した後、混合物をフィルタにかけ、固体をＥＡ（１０ｍＬ）で２回洗浄した。合わせた有機相を濃縮し、ＥＡ（１０％ＭｅＯＨを含む）／ＰＥ（０％～６０％）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製すると、所望の生成物１ｆが得られた。ＭＳ：計算値４９１（ＭＨ^＋）、測定値４９１（ＭＨ^＋）。

【0138】

工程４：１，６－ジメチル－４－［４－（４－ピペラジン－１－イルフェニル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジンの調製

【0139】

化合物１ｆをＤＣＭ（１０ｍＬ）及びＴＦＡ（２ｍＬ）に溶解し、室温で２時間撹拌した。混合物を濃縮し、ＡＣＮ／水（０．５％ＴＦＡを含む）（０～３０％）の勾配で溶出する逆フラッシュカラムによって精製して、実施例１（３６ｍｇ）を黄色固体として得た。ＭＳ：計算値３９１（ＭＨ^＋）、測定値３９１（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．３６（ｓ，１Ｈ），７．２３－７．１８（ｍ，２Ｈ），７．０１－６．９６（ｍ，２Ｈ），６．７０（ｓ，１Ｈ），４．６０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．３ Ｈｚ，２Ｈ），４．０７（ｓ，３Ｈ），３．５６（ｂｒ ｔ，Ｊ＝１２．７ Ｈｚ，２Ｈ），３．３９－３．３３（ｍ，８Ｈ），３．０１（ｔｔ，Ｊ＝３．８，１１．９ Ｈｚ，１Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ），２．１４－２．０７（ｍ，２Ｈ），１．８４（ｄｑ，Ｊ＝３．９，１２．７ Ｈｚ，２Ｈ）．

【0140】

実施例２
１，６－ジメチル－４－［４－（５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化34】

【0141】

実施例１の調製と同様に、化合物１ｃの代わりにｔｅｒｔ－ブチル４－［６－（１－ベンジルオキシカルボニル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル）３－ピリジル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２ｂ）を使用することにより表題化合物を調製した。実施例２（４４ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値３９２（ＭＨ^＋）、測定値３９２（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．２２（ｄ，Ｊ＝２．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｄｄ，Ｊ＝２．６，８．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝８．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．２１（ｓ，１Ｈ），４．２３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．１ Ｈｚ，２Ｈ），４．０４（ｓ，３Ｈ），３．２５－３．０９（ｍ，６Ｈ），３．０５－２．８９（ｍ，５Ｈ），２．５３（ｓ，３Ｈ），２．０９－２．０１（ｍ，２Ｈ），１．９８－１．８６（ｍ，３Ｈ）．

【0142】

化合物２ｂを以下のスキームに従って調製した：

【化35】

【0143】

工程１：ベンジル４－（５－クロロ－２－ピリジル）－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－カルボキシレート（化合物２ａ）の調製

【0144】

１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）及び水（１ｍＬ）中の２－ブロモ－５－クロロピリジン（ＣＡＳ：４０４７３－０１－６、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ、１．００ｇ、５．２ｍｍｏｌ）、ベンジル４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３、６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－カルボキシレート（化合物１ａ、１．８０ｇ、５．２４ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（１．２０ｇ、１１．３２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ_２Ｃｌ_２（３８０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）をＮ_２下で添加した。混合物をＮ_２下、８０℃で１６時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物をフィルタにかけ、濾液を減圧下で濃縮して溶媒を除去し、残渣をＥＡ／ＰＥ（１／５～１／０）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、化合物２ａ（１．５０ｇ）を褐色油状物として得た。ＭＳ：計算値３２９（ＭＨ^＋）、測定値３２９（ＭＨ^＋）。

【0145】

工程２：ｔｅｒｔ－ブチル４－［６－（１－ベンジルオキシカルボニル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル）－３－ピリジル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２ｂ）の調製

【0146】

１，４－ジオキサン（５ｍＬ）中のベンジル４－（５－クロロ－２－ピリジル）－３、６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－カルボキシレート（化合物２ａ、５００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチルピペラジン－１－カルボキシレート（５６６ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（２２５ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｘｐｈｏｓ－Ｐｄ－Ｇ３（１２９ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）をＮ_２下で添加した。混合物をＮ_２下、１００℃で３時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物をセライトでフィルタにかけ、濾液を減圧下で濃縮して溶媒を除去し、粗生成物をＥＡ／ＰＥ（１／５～１／０）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、化合物２ｂ（２２３ｍｇ）を黄色固体として得た。ＭＳ：計算値４７９（ＭＨ^＋）、測定値４７９（ＭＨ^＋）。

【0147】

実施例３
１，６－ジメチル－４－［４－（５－ピペラジン－１－イルピラジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化36】

【0148】

実施例１の調製と同様に、化合物１ｃの代わりにｔｅｒｔ－ブチル４－［５－（１－ベンジルオキシカルボニル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル）ピラジン－２－イル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物３ｂ）を使用することにより表題化合物を調製した。実施例３（２３ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値３９３（ＭＨ^＋）、測定値３９３（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．０９－８．０６（ｍ，１Ｈ），８．０１－７．９８（ｍ，１Ｈ），７．９３－７．９１（ｍ，１Ｈ），６．２４－６．２２（ｍ，１Ｈ），４．２９－４．２１（ｍ，２Ｈ），４．０７－４．０４（ｍ，３Ｈ），３．５５－３．５０（ｍ，４Ｈ），３．２７－３．１８（ｍ，２Ｈ），３．０２－２．９７（ｍ，４Ｈ），２．９７－２．８９（ｍ，１Ｈ），２．５７－２．５４（ｍ，３Ｈ），２．０７－１．９３（ｍ，４Ｈ）．

【0149】

化合物３ｂを以下のスキームに従って調製した：

【化37】

【0150】

工程１：ｔｅｒｔ－ブチル４－（５－クロロピラジン－２－イル）ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物３ａ）の調製

【0151】

ＡＣＮ（２０ｍＬ）中の２，５－ジクロロピラジン（ＣＡＳ：１９７４５－０７－４、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ、２．００ｇ、１３．４２ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチルピペラジン－１－カルボキシレート（２．７５ｇ、１４．７７ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（２．７８ｇ、２０．１４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を８０℃で１６時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物をフィルタにかけ、濾液を減圧下で濃縮して溶媒を除去し、残渣をＰＥ／ＥＡ（１０／１～３／１）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、化合物３ａ（１．５０ｇ、５．０２ｍｍｏｌ）を淡黄色固体として得た。ＭＳ：計算値２９９（ＭＨ^＋）、測定値２９９（ＭＨ^＋）。

【0152】

工程２：ｔｅｒｔ－ブチル４－［５－（１－ベンジルオキシカルボニル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル）ピラジン－２－イル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物３ｂ）の調製

【0153】

１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）及び水（１ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－（５－クロロピラジン－２－イル）ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物３ａ、１．４５ｇ、４．８５ｍｍｏｌ）及びベンジル４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３，６－ジヒドロ２Ｈ－ピリジン－１－カルボキシレート（化合物１ａ、１．８３ｇ、５．３４ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｋ_２ＣＯ_３（１．３４ｇ、９．７１ｍｍｏｌ）及びＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ_２Ｃｌ_２（１９８ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコを脱気し、Ｎ_２で４回パージした。混合物をＮ_２雰囲気下、９０℃で１６時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、ＥＡ（２０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮して粗生成物を得、これをＰＥ／ＥＡ（５／１～３／１）の勾配で溶出するフラッシュカラムにより精製して、化合物３ｂ（１．５０ｇ）を黄色固体として得た。ＭＳ：計算値４８０（ＭＨ^＋）、測定値４８０（ＭＨ^＋）。

【0154】

実施例４
１，６－ジメチル－４－［４－（５－ピペラジン－１－イルピリミジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化38】

【0155】

実施例２の調製と同様に、２－ブロモ－５－クロロピリジンの代わりに５－ブロモ－２－ヨードピリミジン（ＣＡＳ：１８３４３８－２４－６、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ）を使用することにより表題化合物を調製した。実施例４（３．５ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値３９３（ＭＨ^＋）、測定値３９３（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．４０（ｓ，２Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ），６．４０（ｓ，１Ｈ），５．０２－４．９０（ｍ，２Ｈ），４．３３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．２ Ｈｚ，２Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ），３．２６－３．２０（ｍ，４Ｈ），３．１８－３．１１（ｍ，１Ｈ），３．０３－２．９５（ｍ，４Ｈ），２．５２（ｓ，３Ｈ），２．１３－１．９４（ｍ，４Ｈ）．

【0156】

実施例５
１－メチル－４－［４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化39】

【0157】

実施例２の調製と同様に、２－ブロモ－５－クロロピリジン及び化合物１ｅの代わりに２－ブロモ－５－クロロ－３－メチル－ピリジン（ＣＡＳ：６５５５０－７７－８、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ）及び４－クロロ－１－メチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（ＣＡＳ：１２６８５２０－９２－８、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）を用使用することにより表題化合物を調製した。実施例５（２９ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値３９２（ＭＨ^＋）、測定値３９２（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．１６（ｓ，１Ｈ），８．１０（ｄ，Ｊ＝５．９ Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝２．７ Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝２．７ Ｈｚ，１Ｈ），６．５０（ｄ，Ｊ＝５．９ Ｈｚ，１Ｈ），４．４１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．７ Ｈｚ，２Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ），３．４１－３．３３（ｍ，２Ｈ），３．２９－３．２２（ｍ，１Ｈ），３．１８－３．１０（ｍ，４Ｈ），３．０４－２．９３（ｍ，４Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ），２．１０－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．８８（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝１．５，１２．５ Ｈｚ，２Ｈ）．

【0158】

実施例６
１－メチル－４－［４－（４－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化40】

【0159】

実施例１の調製と同様に、化合物１ｅ及び化合物１ｂの代わりに４－クロロ－１－メチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（ＣＡＳ：１２６８５２０－９２－８、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及びｔｅｒｔ－ブチル４－（５－ブロモ－４－メチル－２－ピリジル）ピペラジン－１－カルボキシレート（ＣＡＳ：９４４５８２－９２－７、ベンダー：Ｂｉｄｅ Ｐｈａｒｍａｔｅｃｈ）を使用することにより表題化合物を調製した。実施例６（３５ｍｇ）を淡黄色の固体として得た。ＭＳ：計算値３９２（ＭＨ^＋）、測定値３９２（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．４５（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｓ，１Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝７．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．７０－４．６２（ｍ，２Ｈ），４．０８（ｓ，３Ｈ），３．９４－３．８４（ｍ，４Ｈ），３．６５（ｂｒ ｔ，Ｊ＝１２．１ Ｈｚ，２Ｈ），３．４４－３．３６（ｍ，４Ｈ），３．３５－３．２４（ｍ，１Ｈ），２．５６（ｓ，３Ｈ），２．１４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．３ Ｈｚ，２Ｈ），１．９０（ｄｑ，Ｊ＝３．５，１２．６ Ｈｚ，２Ｈ）．

【0160】

実施例７
１，６－ジメチル－４－［４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化41】

【0161】

実施例２の調製と同様に、２－ブロモ－５－クロロピリジンの代わりに２－ブロモ－５－クロロ－３－メトキシ－ピリジン（ＣＡＳ：６５５５０－７７－８、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ）を使用することにより表題化合物を調製した。実施例７（６１ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４０６（ＭＨ^＋）、測定値４０６（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．０７（ｓ，１Ｈ），７．９６（ｄ，Ｊ＝２．９ Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝２．７ Ｈｚ，１Ｈ），６．４０（ｓ，１Ｈ），４．３７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．４ Ｈｚ，２Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ），３．３５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝２．０ Ｈｚ，１Ｈ），３．２９－３．２１（ｍ，２Ｈ），３．１５（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝３．９，６．１ Ｈｚ，４Ｈ），３．０２－２．９４（ｍ，４Ｈ），２．５２（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ），２．０８－１．９６（ｍ，２Ｈ），１．８９－１．８０（ｍ，２Ｈ）．

【0162】

実施例８
１，６－ジメチル－４－［４－（４－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化42】

【0163】

実施例１の調製と同様に、化合物１ｅ及び化合物１ｂの代わりに４－ブロモ－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（ＣＡＳ：１７８３４０７－５５－５、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ）及びｔｅｒｔ－ブチル４－（５－ブロモ－４－メチル－２－ピリジル）ピペラジン－１－カルボキシレート（ＣＡＳ：９４４５８２－９２－７、ベンダー：Ｂｉｄｅ Ｐｈａｒｍａｔｅｃｈ）を使用することにより表題化合物を調製した。実施例８（３２ｍｇ）を黄色固体として得た。ＭＳ：計算値４０６（ＭＨ^＋）、測定値４０６（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．２７（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ），６．６２（ｓ，１Ｈ），４．５４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．４ Ｈｚ，２Ｈ），３．９８（ｓ，３Ｈ），３．８２－３．７３（ｍ，４Ｈ），３．５１（ｂｒ ｔ，Ｊ＝１２．６ Ｈｚ，２Ｈ），３．３５－３．２５（ｍ，４Ｈ），３．１９－３．１２（ｍ，１Ｈ），２．５３（ｓ，３Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．０３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．３ Ｈｚ，２Ｈ），１．７７（ｄｑ，Ｊ＝３．５，１２．６ Ｈｚ，２Ｈ）．

【0164】

実施例９
１，６－ジメチル－４－［４－（４－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化43】

【0165】

実施例３の調製と同様に、２，５－ジクロロピラジンの代わりに５－ブロモ－２－クロロ－４－メチルピリジン（ＣＡＳ：７７８６１１－６４－６、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ）を使用し、工程１においてＳ_ＮＡｒ反応（Ｋ_２ＣＯ_３、ＣＡＮ）をバックワルドカップリング反応（ＸａｎｔＰｈｏｓ、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３、ｔ－ＢｕＯＮａ、トルエン）に置き換えることによって、表題化合物を調製した。実施例９（６１ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４０６（ＭＨ^＋）、測定値４０６（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．０９（ｄ，Ｊ＝３．４ Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），６．４１（ｓ，１Ｈ），４．３７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．２ Ｈｚ，２Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ），３．３０－３．２３（ｍ，２Ｈ），３．０６－３．０１（ｍ，４Ｈ），３．０２－２．９９（ｍ，１Ｈ），３．００－２．９３（ｍ，４Ｈ），２．５２（ｓ，３Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），２．０５－１．９７（ｍ，２Ｈ），１．９７－１．８５（ｍ，２Ｈ）．

【0166】

実施例１０
１，６－ジメチル－４－［４－（２－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化44】

【0167】

実施例３の調製と同様に、２，５－ジクロロピラジンの代わりに３－ブロモ－６－フルオロ－２－メチルピリジン（ＣＡＳ：３７５３６８－８３－５、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ）を用い、工程１においてＳ_ＮＡｒ反応条件Ｋ_２ＣＯ_３、ＣＡＮ）を（ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ）に置き換えることにより、表題化合物を調製した。実施例１０（７ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４０６（ＭＨ^＋）、測定値４０６（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．１０（ｓ，１Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，１Ｈ），６．６１（ｄ，Ｊ＝８．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｓ，１Ｈ），４．３８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．１ Ｈｚ，２Ｈ），４．０１（ｓ，３Ｈ），３．４９－３．４３（ｍ，４Ｈ），３．３２－３．２６（ｍ，２Ｈ），３．１１－３．０１（ｍ，１Ｈ），２．９９－２．９２（ｍ，４Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ），２．５０（ｓ，３Ｈ），１．９７－１．８９（ｍ，２Ｈ），１．８６－１．７５（ｍ，２Ｈ）．

【0168】

実施例１１
１，６－ジメチル－４－［４－（４－メチル－２－ピペラジン－１－イル－ピリミジン－５－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化45】

【0169】

実施例３の調製と同様に、２，５－ジクロロピラジンの代わりに５－ブロモ－２－クロロ－４－メチルピリミジン（ＣＡＳ：６３３３２８－９５－７、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ）を使用することにより表題化合物を調製した。実施例１１（３４ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４０７（ＭＨ^＋）、測定値４０７（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ＝８．１０（ｓ，１Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），６．２４（ｓ，１Ｈ），４．２７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．８ Ｈｚ，２Ｈ），４．０７（ｓ，３Ｈ），３．８１－３．７４（ｍ，４Ｈ），３．１８（ｄｔ，Ｊ＝２．６，１２．５ Ｈｚ，２Ｈ），２．９５－２．８１（ｍ，５Ｈ），２．５７（ｓ，３Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），１．９７－１．８２（ｍ，４Ｈ）．

【0170】

実施例１２
１，６－ジメチル－４－［４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－ピラジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化46】

【0171】

実施例３の調製と同様に、２，５－ジクロロピラジンの代わりに２，５－ジクロロ－３－メチル－ピラジン（ＣＡＳ：１０７３７８－４１－６、ベンダー：Ｂｉｄｅ）を使用することにより表題化合物を調製した。実施例１２（１６ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４０７（ＭＨ^＋）、測定値４０７（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．０９（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ），６．４１（ｓ，１Ｈ），４．３７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．３ Ｈｚ，２Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ），３．５９－３．５０（ｍ，４Ｈ），３．３９－３．３４（ｍ，１Ｈ），３．３２－３．２８（ｍ，１Ｈ），３．２８－３．１７（ｍ，１Ｈ），３．００－２．８８（ｍ，４Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ），２．５１（ｓ，３Ｈ），２．０７－１．９４（ｍ，２Ｈ），１．９３－１．８２（ｍ，２Ｈ）．

【0172】

実施例１３
４－［４－（３－エチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化47】

【0173】

実施例１の調製と同様に、化合物１ｃの代わりにｔｅｒｔ－ブチル４－［６－（１－ベンジルオキシカルボニル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル）－５－ビニル－３－ピリジル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物１３ｃ）を使用することにより表題化合物を調製した。実施例１３（５ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４２０（ＭＨ^＋）、測定値４２０（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．１０（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｄ，Ｊ＝２．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝２．８ Ｈｚ，１Ｈ），６．４２（ｓ，１Ｈ），４．３９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．４ Ｈｚ，２Ｈ），４．０１（ｓ，３Ｈ），３．３９－３．３４（ｍ，１Ｈ），３．３２－３．２３（ｍ，２Ｈ），３．２０－３．１２（ｍ，４Ｈ），３．０４－２．９５（ｍ，４Ｈ），２．７７（ｑ，Ｊ＝７．５ Ｈｚ，２Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ），２．１８－２．０２（ｍ，２Ｈ），１．８５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１．１ Ｈｚ，２Ｈ），１．２８（ｔ，Ｊ＝７．５ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0174】

化合物１３ｃを以下のスキームに従って調製した：

【化48】

【0175】

工程１：ベンジル４－（３－ブロモ－５－クロロ－２－ピリジル）－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－カルボキシレート（化合物１３ａ）の調製

【0176】

１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）及び水（１ｍＬ）中のベンジル４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－カルボキシレート（化合物１ａ、２．５３ｇ、７．３７ｍｍｏｌ）及び２，３－ジブロモ－５－クロロピリジン（ＣＡＳ：１３７６２８－１７－２、Ｖｅｎｄｏｒ：Ａｃｃｅｌａ、２．００ｇ、７．３７ｍｍｏｌ）の混合物に、ＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）．ＣＨ_２Ｃｌ_２（３０１ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）及びＮａ_２ＣＯ_３（１．５６ｇ、１４．７４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ_２雰囲気下、８０℃で０．５時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物をフィルタにかけ、固体を１，４－ジオキサン（１５ｍＬ）で３回洗浄し、濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥＡ（３／１）の勾配で溶出するフラッシュカラムにより精製して、化合物１３ａ（６８０ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）を淡黄色固体として得た。ＭＳ：計算値４０７（ＭＨ^＋）、測定値４０７（ＭＨ^＋）。

【0177】

工程２：ベンジル４－（５－クロロ－３－ビニル－２－ピリジル）－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－カルボキシレート（化合物１３ｂ）の調製

【0178】

トルエン（１ｍＬ）、エタノール（０．５ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）中のベンジル４－（３－ブロモ－５－クロロ－２－ピリジル）－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－カルボキシレート（化合物１３ａ、１００ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、ビニルボロン酸ピナコールエステル（９４ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）及びＮａ_２ＣＯ_３（２０ｍｇ、０．４９０ｍｍｏｌ）の混合物に、ＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）．ＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ_２雰囲気下にて１００℃で１時間撹拌した。この反応を４回繰り返した（それぞれ１００ｍｇの化合物１３ｃに対して）。合わせた反応混合物をフィルタにかけ、ＥｔＯＨで洗浄した。濾液を濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥＡ（５／１～０／１）の勾配で溶出するフラッシュカラムにより精製して、化合物１３ｂ（２６０ｍｇ）を淡黄色油状物として得た。ＭＳ：計算値３５５（ＭＨ^＋）、測定値３５５（ＭＨ^＋）。

【0179】

工程３：ｔｅｒｔ－ブチル４－［６－（１－ベンジルオキシカルボニル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル）－５－ビニル－３－ピリジル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物１３ｃ）の調製

【0180】

ｔｅｒｔ－ブチルピペラジン－１－カルボキシレート（１０５ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）及びベンジル４－（５－クロロ－３－ビニル－２－ピリジル）－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－カルボキシレート（化合物１３ｂ、１００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を含む１，４－ジオキサン（２．５ｍＬ）の混合物に、Ｘｐｈｏｓ－Ｐｄ－Ｇ３（２４ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）及びｔ－ＢｕＯＮａ（６７ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を添加した。Ｎ_２下、１００℃で１．５時間撹拌した後、反応混合物を別の同じバッチと合わせ、後処理し、次いで混合物をフィルタにかけ、ＥｔＯＨで洗浄し、濃縮した。残渣を、ＰＥ／ＥＡ（１／０～１／８）の勾配で溶出するフラッシュカラムにより精製して、化合物１３ｃ（９０ｍｇ）を淡黄色固体として得た。ＭＳ：計算値５０５（ＭＨ^＋）、測定値５０５（ＭＨ^＋）。

【0181】

実施例１４
４－［４－（３－メトキシ－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化49】

【0182】

実施例９の調製と同様に、５－ブロモ－２－クロロ－４－メチルピリジンの代わりに５－ブロモ－２－クロロ－３－メトキシ－ピリジン（ＣＡＳ：２８６９４７－０３－３、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ）を使用することにより表題化合物を調製した。実施例１４（３７ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４２２（ＭＨ^＋）、測定値４２２（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．０９（ｓ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝２．３ Ｈｚ，１Ｈ），６．９９（ｄ，Ｊ＝２．３ Ｈｚ，１Ｈ），６．４１（ｓ，１Ｈ），４．３７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．２ Ｈｚ，２Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．４４（ｔｔ，Ｊ＝３．９，１１．７ Ｈｚ，１Ｈ），３．３２－３．２５（ｍ，２Ｈ），３．２０（ｄｄ，Ｊ＝４．０，６．２ Ｈｚ，４Ｈ），３．０３－２．９４（ｍ，４Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ），２．０７－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９４－１．８５（ｍ，２Ｈ）．

【0183】

実施例１５
（３Ｓ，４Ｒ）－１－［６－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３－フルオロ－ピペリジン－４－アミン

【化50】

【0184】

表題化合物を、以下のスキームによって調製した。

【化51】

【0185】

工程１：ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－［６－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３－フルオロ－４－ピペリジル］カルバメート（化合物１５ｂ）の調製

【0186】

１，４－ジオキサン中の４－［４－（５－クロロ－３－メチル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（中間体Ｅ、５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（３Ｓ，４Ｒ）－３－フルオロ－４－ピペリジル］カルバメート（化合物１５ａ、ＣＡＳ：１４３４１２６－９９－４、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ、４０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の混合物に、ＲｕＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２（１１ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（９２ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１１０℃に一晩加熱した。室温に冷却した後、固体を濾別し、ＥＡ（１０ｍＬ）で２回洗浄した。合わせた有機層を濃縮し、ＥＡ（１０％ＭｅＯＨを含む）／ＰＥ（０％～８０％）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製すると、所望の生成物１５ｂが得られ、これを次の工程で直接使用した。ＭＳ：計算値５３８（ＭＨ^＋）、測定値５３８（ＭＨ^＋）。

【0187】

工程２：（３Ｓ，４Ｒ）－１－［６－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３－フルオロ－ピペリジン－４－アミン（実施例１５）の調製

【0188】

ＤＣＭ（５ｍＬ）及びＴＦＡ（２ｍＬ）中の化合物１５ｂの混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を濃縮し、ＡＣＮ／水（０．０５％ＴＦＡを含む）（０～３０％）の勾配で溶出する逆フラッシュカラムによって精製して、実施例１５（５６ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４３８（ＭＨ^＋）、測定値４３８（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．３７（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝２．９ Ｈｚ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝２．７ Ｈｚ，１Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ），５．０８（ｄ，Ｊ＝４９．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．７６－４．６１（ｍ，２Ｈ），４．４８－４．３４（ｍ，１Ｈ），４．１６－４．０３（ｍ，４Ｈ），３．７６－３．５９（ｍ，４Ｈ），３．４３－３．２５（ｍ，１Ｈ），３．２４－３．０９（ｍ，１Ｈ），２．６４（ｓ，３Ｈ），２．５９（ｓ，３Ｈ），２．２２－２．０９（ｍ，４Ｈ），２．０９－２．００（ｍ，２Ｈ）．

【0189】

実施例１６
４－［４－［５－［（３Ｒ）－３－（メトキシメチル）ピペラジン－１－イル］－３－メチル－２－ピリジル］－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化52】

【0190】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａの代わりにｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－（メトキシメチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（ＣＡＳ：１０２３３０１－７３－６、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）を使用することにより、表題化合物を調製した。実施例１６（５８ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４５０（ＭＨ^＋）、測定値４５０（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．３７（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝２．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝２．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｓ，１Ｈ），４．７０－４．６２（ｍ，２Ｈ），４．０８（ｓ，３Ｈ），３．９８－３．９０（ｍ，２Ｈ），３．７２－３．５７（ｍ，６Ｈ），３．５２－３．４６（ｍ，１Ｈ），３．４５（ｓ，３Ｈ），３．３６－３．２７（ｍ，１Ｈ），３．２０－３．０６（ｍ，２Ｈ），２．６３（ｓ，３Ｈ），２．５３（ｓ，３Ｈ），２．１４－２．０３（ｍ，４Ｈ）．

【0191】

実施例１７
（３Ｓ，４Ｓ）－１－［６－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３－メトキシ－ピペリジン－４－アミン

【化53】

【0192】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａの代わりにｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（３Ｓ，４Ｓ）－３－メトキシ－４－ピペリジル］カルバメート（ＣＡＳ：９０７５４４－１９－８、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）を使用することにより表題化合物を調製した。実施例１７（５０ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４５０（ＭＨ^＋）、測定値４５０（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．３７（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝２．９ Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝２．８ Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），４．７４－４．６５（ｍ，２Ｈ），４．３９－４．２９（ｍ，１Ｈ），４．０８（ｓ，３Ｈ），４．０３－３．９１（ｍ，１Ｈ），３．７５－３．６０（ｍ，３Ｈ），３．５５（ｓ，３Ｈ），３．４１－３．３２（ｍ，１Ｈ），３．２６－３．１４（ｍ，１Ｈ），３．００（ｄｔ，Ｊ＝２．７，１２．８ Ｈｚ，１Ｈ），２．７２（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，１２．５ Ｈｚ，１Ｈ），２．６４（ｓ，３Ｈ），２．６０（ｓ，３Ｈ），２．２１－２．０９（ｍ，５Ｈ），１．７９（ｄｑ，Ｊ＝４．６，１２．５ Ｈｚ，１Ｈ）．

【0193】

実施例１８及び実施例１９
１－メチル－４－［シス－３－メチル－４－（６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（実施例１８）及び１－メチル－４－［トランス－３－メチル－４－（６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（実施例１９）

【化54】

【0194】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチルピペラジン－１－カルボキシレート及び中間体Ｃを使用することにより表題化合物を調製した。実施例１８及び実施例１９を分取ＨＰＬＣによって分離した。

【0195】

実施例１８（６ｍｇ）を淡黄色の固体として得た。ＭＳ：計算値３９２（ＭＨ^＋）、測定値３９２（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．５０（ｓ，１Ｈ），８．０７－７．９９（ｍ，２Ｈ），７．６９（ｄｄ，Ｊ＝２．３，８．９ Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝８．９ Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝７．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．７０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｓ，３Ｈ），３．８５－３．７７（ｍ，５Ｈ），３．６８－３．５４（ｍ，１Ｈ），３．３９－３．３３（ｍ，５Ｈ），２．４６－２．２８（ｍ，２Ｈ），１．９８（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝２．８，１３．８ Ｈｚ，１Ｈ），０．７２（ｄ，Ｊ＝７．０ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0196】

実施例１９（８ｍｇ）を淡黄色の固体として得た。ＭＳ：計算値３９２（ＭＨ^＋、測定値３９２（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．４１（ｓ，１Ｈ），８．０８－８．０２（ｍ，２Ｈ），７．７０（ｄｄ，Ｊ＝２．３，９．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝９．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝７．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．８ Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．８ Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｓ，３Ｈ），３．８５－３．７８（ｍ，４Ｈ），３．６６－３．５３（ｍ，１Ｈ），３．３８－３．３３（ｍ，４Ｈ），３．２８－３．２３（ｍ，１Ｈ），２．６５（ｄｔ，Ｊ＝４．０，１１．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．０９－１．８６（ｍ，３Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝６．５ Ｈｚ，３Ｈ）．２Ｄ－ＮＭＲにより２分子の相対配置を確認した。

【0197】

実施例２０及び実施例２１
１，６－ジメチル－４－［シス－３－メチル－４－（４－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（実施例２０）及び１，６－ジメチル－４－［トランス－３－メチル－４－（４－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（実施例２１）

【化55】

【0198】

表題化合物を、以下のスキームによって調製した。

【化56】

【0199】

工程１：ｔｅｒｔ－ブチル４－［４－メチル－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－２－ピリジル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２０ｂ）の調製

【0200】

１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－（５－ブロモ－４－メチルピリジン－２－イル）ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２０ａ、ＣＡＳ：９４４５８２－９２－７、ベンダー：Ｂｉｄｅ Ｐｈａｒｍａｔｅｃｈ、１００ｍｇ、２８１μｍｏｌ）及び４，４，４’，４’，５，５，５’，５’－オクタメチル－２，２’－ビ（１，３，２ジオキサボロラン）（１０７ｍｇ、４２１μｍｏｌ）の混合物に、酢酸カリウム（８３ｍｇ、８４２μｍｏｌ）及びＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ_２Ｃｌ_２（２３ｍｇ、２８μｍｏｌ）を添加した。混合物にＮ_２を投入し、１１０℃で一晩撹拌した。室温に冷却した後、混合物を濾別し、固体をＥＡ（１０ｍＬ）で２回洗浄した。合わせた有機層を濃縮すると、粗生成物化合物２０ｂ（１１３ｍｇ）が得られ、これを更に精製することなく次の工程に使用した。ＭＳ：計算値４０４（ＭＨ^＋）、測定値４０４（ＭＨ^＋）。

【0201】

工程２：１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－ピペリジン－４－オン（化合物２０ｅ）の調製

【0202】

１，４－ジオキサン（２０ｍＬ）中の４－クロロ－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（化合物２０ｃ、ＣＡＳ：１９８６７－７８－８、ベンダー：Ｐｈａｒｍａ Ｂｌｏｃｋ、５１１ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）及び３－メチルピペリジン－４－オン塩酸塩（化合物２０ｄ、ＣＡＳ：４６２９－７８－１、ベンダー：Ｐｈａｒｍａ Ｂｌｏｃｋ、３５１ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ）の混合物に、ＲｕＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２（１８２ｍｇ、２３５μｍｏｌ）及びＣｓ_２ＣＯ_３（２．２９ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物にＮ_２を投入し、１１０℃で一晩撹拌した。室温に冷却した後、固体を濾別し、ＥＡ（１０ｍＬ）で２回洗浄した。合わせた混合物を濃縮し、ＥＡ（１０％ＭｅＯＨを含む）／ＰＥ（０％～８０％）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製すると、黄色油状物として所望の生成物２０ｅ（２７２ｍｇ）が得られた。ＭＳ：計算値２５９（ＭＨ^＋）、測定値２５９（ＭＨ^＋）。

【0203】

工程３：［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－５－メチル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル］トリフルオロメタンスルホネート（化合物２０ｆ）の調製

【0204】

ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－ピペリジン－４－オン（化合物２０ｅ、２００ｍｇ、７７４μｍｏｌ）の溶液に、－７８℃のＫＨＭＤＳ（ＴＨＦ中０．５Ｍ、２．３２ｍＬ、１．１６ｍｍｏｌ）を添加し、０．５時間撹拌した。次いで、１，１，１－トリフルオロ－Ｎ－フェニル－Ｎ－（トリフルオロメチルスルホニル）メタンスルホンアミド（４１５ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を－７８℃で更に２時間撹拌した。室温に加温した後、ＥＡ（１０％ＭｅＯＨを含む）／ＰＥ（０％～６０％）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって混合物を直接精製すると、所望の生成物化合物２０ｆ（２３０ｍｇ）が得られた。ＭＳ：計算値３９１（ＭＨ^＋）、測定値３９１（ＭＨ^＋）。

【0205】

工程４：ｔｅｒｔ－ブチル４－［５－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－５－メチル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル］－４－メチル－２－ピリジル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２０ｇ）の調製

【0206】

１，４－ジオキサン（５ｍＬ）及び水（１ｍＬ）中の［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－５－メチル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル］トリフルオロメタンスルホネート（化合物２０ｆ、５０ｍｇ、１２８μｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチル４－［４－メチル－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－２－ピリジル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２０ｂ、１１３ｍｇ、２８０μｍｏｌ）の混合物に、Ｋ_２ＣＯ_３（５３ｍｇ、３８４μｍｏｌ）及びＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ_２Ｃｌ_２（２１ｍｇ、２６μｍｏｌ）を添加した。混合物にＮ_２を投入し、１００℃で２時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾別し、固体をＥＡ（１０ｍＬ）で２回洗浄した。合わせた有機層を濃縮すると、粗生成物化合物２０ｇ（６６ｍｇ）が得られ、これを更に精製することなく次の工程に使用した。ＭＳ：計算値５１８（ＭＨ^＋）、測定値５１８（ＭＨ^＋）。

【0207】

工程５：ｔｅｒｔ－ブチル４－［５－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－４－メチル－２－ピリジル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２０ｈ）の調製

【0208】

ｔｅｒｔ－ブチル４－［５－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－５－メチル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル］－４－メチル－２－ピリジル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２０ｇ、６６ｍｇ、１２８μｍｏｌ）を含むフラスコに、Ｐｄ（ＯＨ）_２（炭素中１０重量％、８．９９ｍｇ、６４μｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（１０ｍＬ）を添加した。懸濁液をＨ_２で３回パージし、次いで、水素バルーン下、室温で一晩撹拌した。混合物をフィルタにかけ、濃縮した。残渣を、ＥＡ（１０％ＭｅＯＨを含む）／ＰＥ（０％～８０％）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、所望の生成物２０ｈ（２５ｍｇ）を得た。ＭＳ：計算値５２０（ＭＨ^＋）、測定値５２０（ＭＨ^＋）。

【0209】

工程６：１，６－ジメチル－４－［シス－３－メチル－４－（４－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（実施例２０）及び１，６－ジメチル－４－［トランス－３－メチル－４－（４－メチル－６－ピペラジン－１－イル－３－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（実施例２１）の調製

【0210】

ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－［５－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－４－メチル－２－ピリジル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２０ｈ、２５ｍｇ、４８μｍｏｌ）の混合物に、ＴＦＡ（２ｍＬ）を添加した。室温で２時間撹拌した後、混合物を濃縮し、ＡＣＮ／水（０．５％ＴＦＡを含む）（０％～３０％）の勾配で溶出する逆フラッシュカラムによって精製して、所望の生成物を得た。実施例２０及び実施例２１の構造は、２Ｄ－ＮＭＲにより確認した。

【0211】

実施例２０（９ｍｇ）を淡黄色の固体として得た。ＭＳ：計算値４２０（ＭＨ^＋）、測定値４２０（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．４５（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｓ，１Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），４．７１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｓ，３Ｈ），３．９７－３．８７（ｍ，４Ｈ），３．８３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１．９ Ｈｚ，１Ｈ），３．６２（ｂｒ ｔ，Ｊ＝１２．４ Ｈｚ，１Ｈ），３．５３（ｔｄ，Ｊ＝３．６，１２．９ Ｈｚ，１Ｈ），３．４６－３．３９（ｍ，４Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ），２．５６（ｓ，３Ｈ），２．５４－２．４１（ｍ，２Ｈ），１．９３－１．８４（ｍ，１Ｈ），０．７６（ｄ，Ｊ＝７．０ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0212】

実施例２１（２ｍｇ）を淡黄色の固体として得た。ＭＳ：計算値４２０（ＭＨ^＋）、測定値４２０（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．２４（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），６．６５（ｓ，１Ｈ），４．５６－４．４３（ｍ，２Ｈ），３．９８（ｓ，３Ｈ），３．７３－３．６８（ｍ，４Ｈ），３．５４－３．４３（ｍ，１Ｈ），３．２８－３．２３（ｍ，４Ｈ），３．２０－３．１３（ｍ，１Ｈ），２．８３（ｄｔ，Ｊ＝３．９，１１．５ Ｈｚ，１Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），２．１０－１．９９（ｍ，１Ｈ），１．９９－１．９２（ｍ，１Ｈ），１．７６－１．６５（ｍ，１Ｈ），０．８１（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0213】

実施例２２及び実施例２３
１，６－ジメチル－４－［シス－３－メチル－４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－ピラジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（実施例２２）及び１，６－ジメチル－４－［トランス－３－メチル－４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－ピラジン－２－イル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（実施例２３）

【化57】

【0214】

実施例２４及び実施例２５の調製と同様に、化合物２４ｃの代わりにｔｅｒｔブチル４－［５－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル］－６－メチル－ピラジン－２－イル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２２ｂ）を使用することにより表題化合物を調製した。実施例２２及び実施例２３の構造は、２Ｄ－ＮＭＲにより確認した。

【0215】

実施例２２（１ｍｇ）を黄色固体として得た。ＭＳ：計算値４２１（ＭＨ^＋）、測定値４２１（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．３０（ｓ，１Ｈ），８．０７（ｓ，１Ｈ），６．７１（ｓ，１Ｈ），４．６０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．８ Ｈｚ，１Ｈ），４．５０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．３ Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｓ，３Ｈ），３．８７－３．８０（ｍ，５Ｈ），３．５９（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．３５－３．３３（ｍ，４Ｈ），３．０７－３．００（ｍ，１Ｈ），２．６４－２．６０（ｍ，４Ｈ），２．５２（ｓ，４Ｈ），１．９６（ｂｒ ｓ，１Ｈ），０．８５（ｄ，Ｊ＝６．５ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0216】

実施例２３（１ｍｇ）を黄色固体として得た。ＭＳ：計算値４２１（ＭＨ^＋）、測定値４２１（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．３７（ｓ，１Ｈ），８．０９（ｓ，１Ｈ），６．７０（ｓ，１Ｈ），４．５１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．８ Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．０９－４．０６（ｍ，３Ｈ），３．９０－３．８０（ｍ，５Ｈ），３．７９－３．６８（ｍ，１Ｈ），３．６０－３．５３（ｍ，１Ｈ），３．３６－３．３５（ｍ，１Ｈ），３．３４－３．３２（ｍ，３Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ），２．５６－２．４３（ｍ，５Ｈ），１．９３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．９ Ｈｚ，１Ｈ），０．７２（ｄ，Ｊ＝７．０ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0217】

化合物２２ｂを以下のスキームに従って調製した：

【化58】

【0218】

工程１：ｔｅｒｔ－ブチル４－（５－ブロモ－６－メチル－ピラジン－２－イル）ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２２ａ）の調製

【0219】

ＤＭＦ（３ｍＬ）中の２－ブロモ－５－クロロ－３－メチル－ピラジン（２００ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）の溶液に、ｔｅｒｔ－ブチルピペラジン－１－カルボキシレート（１８０ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（３１４ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を９０℃で１５時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物をフィルタにかけ、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を、ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（０％～１０％）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、化合物２２ａ（７７ｍｇ）を黄色油状物として得た。ＭＳ：計算値３５７（ＭＨ^＋）、測定値３５７（ＭＨ^＋）。

【0220】

工程２：ｔｅｒｔ－ブチル４－［５－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－５－メチル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル］－６－メチル－ピラジン－２－イル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２２ｂ）の調製

【0221】

１，４－ジオキサン（５ｍＬ）及び水（１ｍＬ）中の１，６－ジメチル－４－［５－メチル－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－イル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（化合物２４ａ、９５ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の溶液に、ｔｅｒｔ－ブチル４－（５－ブロモ－６－メチル－ピラジン－２－イル）ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２２ａ、７７ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２．ＣＨ_２Ｃｌ_２（１８ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）及びＫ_２ＣＯ_３（４５ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をＮ_２雰囲気下にて９０℃で２時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をＭｅＯＨ／ＤＣＭ（０％～１０％）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、化合物２２ｂ（１３０ｍｇ）を褐色油状物として得た。ＭＳ：計算値５１９（ＭＨ^＋）、測定値５１９（ＭＨ^＋）。実施例２２及び実施例２３の構造は、２Ｄ－ＮＭＲにより確認した。

【0222】

実施例２４及び実施例２５
１，６－ジメチル－４－［シス－３－メチル－４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（実施例２４）及び１，６－ジメチル－４－［トランス－３－メチル－４－（３－メチル－５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（実施例２５）

【化59】

【0223】

実施例２０及び実施例２１の調製と同様に、化合物２０ｇの代わりにｔｅｒｔブチル４－［６－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－５－メチル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル］－５－メチル－３－ピリジル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２４ｃ）を使用することにより表題化合物を調製した。実施例２４及び実施例２５の構造は、２Ｄ－ＮＭＲにより確認した。

【0224】

実施例２４（１６ｍｇ）を淡黄色の固体として得た。ＭＳ：計算値４２０（ＭＨ^＋）、測定値４２０（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．４２（ｓ，１Ｈ），８．２０－８．１４（ｍ，１Ｈ），７．９９－７．９１（ｍ，１Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），４．７０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．５３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．３ Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｓ，３Ｈ），３．８６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．６ Ｈｚ，２Ｈ），３．７３－３．６０（ｍ，５Ｈ），３．４９－３．３３（ｍ，４Ｈ），２．７６－２．６１（ｍ，４Ｈ），２．６０－２．５２（ｍ，４Ｈ），２．０３－１．９３（ｍ，１Ｈ），０．７６（ｄ，Ｊ＝７．０ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0225】

実施例２５（８ｍｇ）を淡黄色の固体として得た。ＭＳ：計算値４２０（ＭＨ^＋）、測定値４２０（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．３３（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝２．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），４．６７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１４．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｓ，３Ｈ），３．６９－３．５３（ｍ，６Ｈ），３．４４－３．３６（ｍ，４Ｈ），３．３６－３．２４（ｍ，１Ｈ），２．６３（ｓ，３Ｈ），２．５３（ｓ，３Ｈ），２．４５－２．３５（ｍ，１Ｈ），２．１２－２．００（ｍ，２Ｈ），０．８８（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0226】

化合物２４ｃを以下のスキームに従って調製した：

【化60】

【0227】

工程１：１，６－ジメチル－４－［５－メチル－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－イル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（化合物２４ａ）の調製

【0228】

１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）中の［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－５－メチル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル］トリフルオロメタンスルホネート（化合物２０ｆ、３００ｍｇ、０．７６８ｍｍｏｌ）及び４，４，４’，４’，５，５，５’，５’－オクタメチル－２，２’－ビ（１，３，２ジオキサボロラン）（２９２．７２ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）の混合物に、ＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ_２Ｃｌ_２（６３ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）及び酢酸カリウム（２２６ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物にＮ_２を投入し、９０℃で２時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物をフィルタにかけ、固体をＥＡ（１０ｍＬ）で２回洗浄した。合わせた有機層を濃縮すると、粗生成物化合物２４ａ（２８３ｍｇ）が得られ、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。ＭＳ：計算値３６９（ＭＨ^＋）、測定値３６９（ＭＨ^＋）。

【0229】

工程２：４－［４－（５－クロロ－３－メチル－２－ピリジル）－５－メチル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－イル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（化合物２４ｂ）の調製

【0230】

１，４－ジオキサン（１０ｍＬ）及び水（２ｍＬ）中の１，６－ジメチル－４－［５－メチル－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－１－イル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（化合物２４ａ、２８３ｍｇ、０．７６８ｍｍｏｌ）及び２－ブロモ－５－クロロ－３－メチル－ピリジン（ＣＡＳ：６５５５０－７７－８、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ、１７５ｍｇ、０．８４５ｍｍｏｌ）の混合物に、ＰｄＣｌ_２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ_２Ｃｌ_２（３１ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）及びＫ_２ＣＯ_３（２１２ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物にＮ_２を投入し、９０℃で一晩撹拌した。室温に冷却した後、混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で３回抽出し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮し、ＥＡ／ＰＥ（０％～３０％）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製して、所望の生成物である化合物２４ｂ（２６０ｍｇ）を得た。ＭＳ：計算値３６８（ＭＨ^＋）、測定値３６８（ＭＨ^＋）。

【0231】

工程３：ｔｅｒｔ－ブチル４－［６－［１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－５－メチル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピリジン－４－イル］－５－メチル－３－ピリジル］ピペラジン－１－カルボキシレート（化合物２４ｃ）の調製

【0232】

１，４－ジオキサン（５ｍＬ）中の４－［４－（５－クロロ－３－メチル－２－ピリジル）－５－メチル－３，６－ジヒドロ－２Ｈ－ピりジン－１－イル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン（化合物２４ｂ、１３０ｍｇ、０．３５３ｍｍｏｌ）及び１－Ｂｏｃ－ピペラジン（９９ｍｇ、０．５３０ｍｍｏｌ）の混合物に、炭酸セシウム（２３０ｍｇ、０．７０７ｍｍｏｌ）及びＲｕＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２（２７ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物にＮ_２を投入し、１１０℃で一晩撹拌した。室温に冷却した後、固体を濾別し、ＥＡ（１０ｍＬ）で２回洗浄した。合わせた有機層を濃縮し、ＥＡ（１０％ＭｅＯＨを含む）／ＰＥ（０％～８０％）の勾配で溶出するフラッシュカラムによって精製すると、所望の生成物２４ｃ（１３６ｍｇ）が得られた。ＭＳ：計算値５１８（ＭＨ^＋）、測定値５１８（ＭＨ^＋）。

【0233】

実施例２６
（３Ｒ，４Ｒ）－１－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－４－メトキシ－ピロリジン－３－アミン

【化61】

【0234】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（３Ｒ，４Ｒ）－４－メトキシピロリジン－３－イル］カルバメート（ＣＡＳ：１９３２０６６－５２－８、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｂを使用することにより表題化合物を調製した。実施例２６（７５ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４５０（ＭＨ^＋）、測定値４５０（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．３４（ｓ，１ Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝２．５０ Ｈｚ，１ Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝２．５０ Ｈｚ，１ Ｈ），６．７７（ｓ，１ Ｈ），４．６９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１４．０１ Ｈｚ，１ Ｈ），４．５９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．０１ Ｈｚ，１ Ｈ），４．１９（ｄｔ，Ｊ＝５．６３，２．９４ Ｈｚ，１ Ｈ），４．０９（ｓ，３ Ｈ），３．９９（ｄｔ，Ｊ＝６．２５，３．３８ Ｈｚ，１ Ｈ），３．８７（ｄｄ，Ｊ＝１１．５１，５．５０ Ｈｚ，１ Ｈ），３．８０（ｄｄ，Ｊ＝１１．２６，６．２５ Ｈｚ，１ Ｈ），３．６８－３．５８（ｍ，１ Ｈ），３．５５（ｄｄ，Ｊ＝１１．２６，３．２５ Ｈｚ，１ Ｈ），３．５１－３．４２（ｍ，４ Ｈ），３．４０－３．３２（ｍ，２ Ｈ），２．６４（ｓ，３ Ｈ），２．５７（ｓ，３ Ｈ），２．４４－２．３３（ｍ，１ Ｈ），２．１４－２．０４（ｍ，２ Ｈ）０．９０（ｄ，Ｊ＝６．５０ Ｈｚ，３ Ｈ）．

【0235】

実施例２７
２－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナン

【化62】

【0236】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチル５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナン－８－カルボキシレート（ＣＡＳ：１２５１００５－６１－４、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｂを使用することにより、表題化合物を調製した。実施例２７（６５ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４６２（ＭＨ^＋）、測定値４６２（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．０６（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝２．５ Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝２．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．４１（ｓ，１Ｈ），４．３８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．８ Ｈｚ，１Ｈ），４．２９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１．９ Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｓ，３Ｈ），３．９１（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，２Ｈ），３．７４－３．６３（ｍ，４Ｈ），３．０２（ｓ，３Ｈ），２．９９－２．９６（ｍ，１Ｈ），２．９２－２．８７（ｍ，１Ｈ），２．８４－２．８０（ｍ，２Ｈ），２．５３（ｓ，３Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ），２．３１（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝６．５，１１．０ Ｈｚ，１Ｈ），１．９８－１．８８（ｍ，１Ｈ），１．８４－１．７５（ｍ，１Ｈ），０．７７（ｄ，Ｊ＝６．５ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0237】

実施例２８
（６Ｓ）－４－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－１，４－オキサゼパン－６－アミン

【化63】

【0238】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（６Ｓ）－１，４－オキサゼパン－６－イル］カルバメート（ＣＡＳ：２３０６２４７－１１－８、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｂを使用することにより、表題化合物を調製した。実施例２８（７５ｍｇ）を淡黄色の固体として得た。ＭＳ：計算値４５０（ＭＨ^＋）、測定値４５０（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．３９（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝３．１ Ｈｚ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝２．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），４．７３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．６３（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．２０－４．０９（ｍ，５Ｈ），４．０５－３．９８（ｍ，１Ｈ），３．９５－３．８０（ｍ，５Ｈ），３．７５－３．６２（ｍ，２Ｈ），３．４７－３．３４（ｍ，２Ｈ），２．６８（ｓ，３Ｈ），２．６３（ｓ，３Ｈ），２．５４－２．４５（ｍ，１Ｈ），２．２３－２．１２（ｍ，２Ｈ），０．９５（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0239】

実施例２９
４－［（３Ｓ，４Ｒ）－４－［５－［（３Ｒ）－３－（メトキシメチル）ピペラジン－１－イル］－３－メチル－２－ピリジル］－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化64】

【0240】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－（メトキシメチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（ＣＡＳ：１０２３３０１－７３－６、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｂを使用することにより、表題化合物を調製した。実施例２９（１４７ｍｇ）を黄色固体として得た。ＭＳ：計算値４６４（ＭＨ^＋）、測定値４６４（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．３７（ｓ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝２．９ Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｄ，Ｊ＝２．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），４．７１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．６５－４．５８（ｍ，１Ｈ），４．１５－４．０４（ｍ，５Ｈ），３．７７－３．７０（ｍ，１Ｈ），３．７０－３．６２（ｍ，３Ｈ），３．５４－３．４９（ｍ，１Ｈ），３．４８－３．４１（ｍ，４Ｈ），３．３８－３．３１（ｍ，３Ｈ），３．２５（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝１０．３，１３．７ Ｈｚ，１Ｈ），２．６６（ｓ，３Ｈ），２．６４－２．５９（ｍ，３Ｈ），２．５３－２．４４（ｍ，１Ｈ），２．２０－２．１１（ｍ，２Ｈ），０．９２（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0241】

実施例３０
４－［（３Ｓ，４Ｒ）－４－［５－（４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタン－７－イル）－３－メチル－２－ピリジル］－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン、

【化65】

【0242】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチル４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタン－４－カルボキシレート（ＣＡＳ：６７４７９２－０８－６、ベンダー：Ａｃｃｅｌａ）及び中間体Ｂを使用することにより、表題化合物を調製した。実施例３０（４２ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４４６（ＭＨ^＋）、測定値４４６（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．３４（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝２．３ Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），４．７３－４．６５（ｍ，１Ｈ），４．５９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．３ Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｓ，３Ｈ），３．７４－３．６９（ｍ，２Ｈ），３．６８－３．５９（ｍ，１Ｈ），３．５８－３．４９（ｍ，４Ｈ），３．４５－３．３３（ｍ，２Ｈ），２．６４（ｓ，３Ｈ），２．５８（ｓ，３Ｈ），２．４８－２．３５（ｍ，１Ｈ），２．２０－２．０３（ｍ，２Ｈ），１．２２－１．０３（ｍ，４Ｈ），０．９０（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0243】

実施例３１
（３Ｒ，４Ｒ）－１－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３－フルオロ－ピペリジン－４－アミン

【化66】

【0244】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（３Ｒ，４Ｒ）－３－フルオロピペリジン－４－イル］カルバメート（ＣＡＳ：１５２３５３０－２９－１、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｂを使用することにより表題化合物を調製した。実施例３１（４４ｍｇ）を淡黄色の固体として得た。ＭＳ：計算値４５２（ＭＨ^＋）、測定値４５２（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．３３（ｓ，１Ｈ），８．１９（ｄ，Ｊ＝２．７ Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝２．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），４．７８－４．６３（ｍ，２Ｈ），４．５７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．３５－４．２７（ｍ，１Ｈ），４．０８（ｓ，３Ｈ），３．９８－３．８８（ｍ，１Ｈ），３．６６－３．５７（ｍ，１Ｈ），３．５７－３．４６（ｍ，１Ｈ），３．３７－３．３１（ｍ，２Ｈ），３．０８－２．９７（ｍ，２Ｈ），２．６３（ｓ，３Ｈ），２．５５（ｓ，３Ｈ），２．４４－２．３４（ｍ，１Ｈ），２．２８－２．１９（ｍ，１Ｈ），２．１３－２．０２（ｍ，２Ｈ），１．８２（ｄｑ，Ｊ＝４．３，１２．６ Ｈｚ，１Ｈ），０．８８（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0245】

実施例３２
１－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３－メチル－アゼチジン－３－アミン

【化67】

【0246】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチルＮ－（３－メチルアゼチジン－３－イル）カルバメートヒドロクロリデカルバメート（ＣＡＳ：１４０８０７６－３７－８、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｂを使用することにより、表題化合物を調製した。実施例３２（６６ｍｇ）を淡黄色の固体として得た。ＭＳ：計算値４２０（ＭＨ^＋）、測定値４２０（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．３３（ｓ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝２．７ Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝２．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），４．６７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．５８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｄ，Ｊ＝８．９ Ｈｚ，２Ｈ），４．１２－４．０６（ｍ，５Ｈ），３．６７－３．５８（ｍ，１Ｈ），３．３７－３．３１（ｍ，２Ｈ），２．６３（ｓ，３Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ），２．４３－２．３４（ｍ，１Ｈ），２．１２－２．０５（ｍ，２Ｈ），１．６９（ｓ，３Ｈ），０．８８（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0247】

実施例３３
（４ａＲ，７ａＲ）－６－［６－［（３Ｓ，４Ｒ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－５－メチル－３－ピリジル］－３，４，４ａ，５，７，７ａ－ヘキサヒドロ－２Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］［１，４］オキサジン

【化68】

【0248】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチル（４ａＲ，７ａＲ）－オクタヒドロピロロ［３，４－ｂ］モルホリン－４－カルボキシレート（ＣＡＳ：１９３２３３７－６８－２、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｂを使用することにより、表題化合物を調製した。実施例３３（６６ｍｇ）を淡黄色の固体として得た。ＭＳ：計算値４６２（ＭＨ^＋）、測定値４６２（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．３３（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝２．９ Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝２．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），４．６８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．３ Ｈｚ，１Ｈ），４．６４－４．５２（ｍ，１Ｈ），４．２５（ｄｄ，Ｊ＝３．７，１３．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．２１－４．１２（ｍ，１Ｈ），４．０８（ｓ，３Ｈ），４．０４－３．９７（ｍ，１Ｈ），３．８９－３．８０（ｍ，２Ｈ），３．６３（ｄｔ，Ｊ＝７．６，１０．１ Ｈｚ，２Ｈ），３．５２（ｄｄ，Ｊ＝２．１，１３．３ Ｈｚ，１Ｈ），３．４９－３．４４（ｍ，１Ｈ），３．４０（ｄｄ，Ｊ＝４．２，１２．９ Ｈｚ，１Ｈ），３．３７－３．３２（ｍ，３Ｈ），２．６３（ｓ，３Ｈ），２．５６（ｓ，３Ｈ），２．４３－２．３４（ｍ，１Ｈ），２．１４－２．０７（ｍ，２Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0249】

実施例３５
１，６－ジメチル－４－［（３Ｒ，４Ｓ）－３－メチル－４－（５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化69】

【0250】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチルピペラジン－１－カルボキシレート及び中間体Ｄを使用することにより表題化合物を調製した。実施例３５（５ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４０６（ＭＨ^＋）、測定値４０６（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．３５（ｓ，２Ｈ），８．０５－７．８５（ｍ，１Ｈ），７．７７－７．６２（ｍ，１Ｈ），６．７７（ｓ，１Ｈ），４．６７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．６０－４．５１（ｍ，１Ｈ），４．０９（ｓ，３Ｈ），３．６６－３．５６（ｍ，５Ｈ），３．４４－３．３６（ｍ，４Ｈ），３．３０－３．１９（ｍ，１Ｈ），３．０９－２．９５（ｍ，１Ｈ），２．６４（ｓ，３Ｈ），２．３３－２．１９（ｍ，１Ｈ），２．１７－１．９９（ｍ，２Ｈ），０．９０（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0251】

実施例３４
１，６－ジメチル－４－［（３Ｓ，４Ｒ）－３－メチル－４－（５－ピペラジン－１－イル－２－ピリジル）－１－ピペリジル］ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化70】

【0252】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチルピペラジン－１－カルボキシレート及び中間体Ａを使用することにより表題化合物を調製した。実施例３４（２０ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４０６（ＭＨ^＋）、測定値４０６（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．３５（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝２．９ Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｄｄ，Ｊ＝２．９，９．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），４．６９－４．６２（ｍ，１Ｈ），４．５５（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝２．２，１３．９ Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｓ，３Ｈ），３．６３－３．５３（ｍ，５Ｈ），３．４７－３．３６（ｍ，４Ｈ），３．２９－３．２２（ｍ，１Ｈ），２．９５（ｄｔ，Ｊ＝４．４，１１．２ Ｈｚ，１Ｈ），２．６４（ｓ，３Ｈ），２．３０－２．１７（ｍ，１Ｈ），２．１５－１．９８（ｍ，２Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0253】

実施例３６
（３Ｒ，４Ｒ）－１－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－４－メトキシ－ピロリジン－３－アミン

【化71】

【0254】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（３Ｒ，４Ｒ）－４－メトキシピロリジン－３－イル］カルバメート（ＣＡＳ：１９３２０６６－５２－８、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｄを使用することにより表題化合物を調製した。実施例３６（２８ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４３６（ＭＨ^＋）、測定値４３６（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．３５（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｄ，Ｊ＝２．７５ Ｈｚ，１ Ｈ），７．７３－７．６７（ｍ，１Ｈ），７．６７－７．６０（ｍ，１Ｈ），６．７７（ｓ，１Ｈ），４．７１－４．６３（ｍ，１Ｈ），４．６１－４．５３（ｍ，１Ｈ），４．２４－４．１５（ｍ，１Ｈ），４．０９（ｓ，３Ｈ），４．００（ｔｄ，Ｊ＝３．２，６．３ Ｈｚ，１Ｈ），３．８９（ｄｄ，Ｊ＝５．６，１１．１ Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｄｄ，Ｊ＝６．３，１１．３ Ｈｚ，１Ｈ），３．６２－３．５４（ｍ，２Ｈ），３．５０－３．４３（ｍ，４Ｈ），３．２９－３．２２（ｍ，１Ｈ），３．０１（ｄｔ，Ｊ＝４．３，１１．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．６４（ｓ，３Ｈ），２．２８－２．０２（ｍ，３Ｈ），０．９０（ｄ，Ｊ＝６．５ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0255】

実施例３７
４－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－［５－［（３Ｒ）－３－（メトキシメチル）ピペラジン－１－イル］－２－ピリジル］－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化72】

【0256】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチル（２Ｒ）－２－（メトキシメチル）ピペラジン－１－カルボキシレート（ＣＡＳ：１０２３３０１－７３－６、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｄを使用することにより、表題化合物を調製した。実施例３７（５ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４５０（ＭＨ^＋）、測定値４５０（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．０５（ｄ，Ｊ＝２．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．９６（ｓ，１Ｈ），７．３３－７．２７（ｍ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．７ Ｈｚ，１Ｈ），６．３１（ｓ，１Ｈ），４．２７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．１８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．５５（ｂｒ ｔ，Ｊ＝１２．７ Ｈｚ，２Ｈ），３．４６－３．３４（ｍ，２Ｈ），３．３１（ｓ，３Ｈ），３．１７－３．０９（ｍ，３Ｈ），３．０１－２．９２（ｍ，１Ｈ），２．８８－２．７２（ｍ，２Ｈ），２．６２－２．４７（ｍ，２Ｈ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．０９－１．９８（ｍ，１Ｈ），１．８６－１．７５（ｍ，２Ｈ），０．６９（ｄ，Ｊ＝６．５ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0257】

実施例３８
２－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナン

【化73】

【0258】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチル５－オキサ－２，８－ジアザスピロ［３．５］ノナン－８－カルボキシレート（ＣＡＳ：１２５１００５－６１－４、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｄを使用することにより、表題化合物を調製した。実施例３８（１１ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４４８（ＭＨ^＋）、測定値４４８（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．０７（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝２．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄｄ，Ｊ＝２．８，８．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．４２（ｓ，１Ｈ），４．３８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．８ Ｈｚ，１Ｈ），４．２９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．０１（ｓ，３Ｈ），３．９４（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，２Ｈ），３．７０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．８ Ｈｚ，４Ｈ），３．３１－３．２２（ｍ，１Ｈ），３．０２（ｓ，２Ｈ），２．９９－２．８９（ｍ，１Ｈ），２．８５－２．７７（ｍ，２Ｈ），２．６３－２．５６（ｍ，１Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ），２．２０－２．０４（ｍ，１Ｈ），１．９８－１．８７（ｍ，２Ｈ），０．８１（ｄ，Ｊ＝６．５ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0259】

実施例３９
（３Ｓ，４Ｓ）－１－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－３－メトキシ－ピペリジン－４－アミン

【化74】

【0260】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（３Ｓ，４Ｓ）－３－メトキシ－４－ピペリジル］カルバメート（ＣＡＳ：９０７５４４－１９－８、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｄを使用することにより表題化合物を調製した。実施例３９（１９ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４５０（ＭＨ^＋）、測定値４５０（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）δ＝８．３７－８．３６（ｍ，１Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ），８．０７（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．９ Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝９．３ Ｈｚ，１Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），４．６７（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１４．３ Ｈｚ，１Ｈ），４．６１－４．５２（ｍ，１Ｈ），４．３５（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝１２．２，３．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｓ，３Ｈ），３．９８（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．２ Ｈｚ，１Ｈ），３．６４－３．５７（ｍ，１Ｈ），３．５５（ｓ，３Ｈ），３．４０（ｔｄ，Ｊ＝１０．０，４．４ Ｈｚ，１Ｈ），３．２９－３．１４（ｍ，２Ｈ），２．９５－３．１０（ｍ，２Ｈ），２．７４（ｄｄ，Ｊ＝１２．２，１０．３ Ｈｚ，１Ｈ），２．６４（ｓ，３Ｈ），２．２９－２．０４（ｍ，４Ｈ），１．８１（ｑｄ，Ｊ＝１２．６，４．７ Ｈｚ，１Ｈ），０．９１（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0261】

実施例４０
（６Ｓ）－４－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－１，４－オキサゼパン－６－アミン

【化75】

【0262】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（６Ｓ）－１，４－オキサゼパン－６－イル］カルバメート（ＣＡＳ：２３０６２４７－１１－８、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｄを使用することにより、表題化合物を調製した。実施例４０（７０ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４３６（ＭＨ^＋）、測定値４３６（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．２８（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝２．７ Ｈｚ，１Ｈ），８．００（ｄｄ，Ｊ＝２．８，９．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝９．３ Ｈｚ，１Ｈ），６．７１（ｓ，１Ｈ），４．６０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．８ Ｈｚ，１Ｈ），４．１０－３．９７（ｍ，５Ｈ），３．９５－３．８８（ｍ，１Ｈ），３．８４－３．７８（ｍ，２Ｈ），３．７７－３．６８（ｍ，３Ｈ），３．６４－３．４７（ｍ，２Ｈ），３．２７－３．２１（ｍ，１Ｈ），３．０１（ｄｔ，Ｊ＝３．８，１１．５ Ｈｚ，１Ｈ），２．５６（ｓ，３Ｈ），２．２５－２．１４（ｍ，１Ｈ），２．１４－２．０７（ｍ，１Ｈ），２．０６－１．９４（ｍ，１Ｈ），０．８５（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0263】

実施例４１
（３Ｒ，４Ｒ）－１－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－３－フルオロ－ピペリジン－４－アミン

【化76】

【0264】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（３Ｒ，４Ｒ）－３－フルオロピペリジン－４－イル］カルバメート（ＣＡＳ：１５２３５３０－２９－１、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｄを使用することにより表題化合物を調製した。実施例４１（１０ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４３８（ＭＨ^＋）、測定値４３８（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．０９－８．０３（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｓ，１Ｈ），７．３０（ｄｄ，Ｊ＝３．０，８．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝８．５ Ｈｚ，１Ｈ），６．２９（ｓ，１Ｈ），４．３８－４．２１（ｍ，２Ｈ），４．１８－４．１３（ｍ，１Ｈ），３．９４－３．８２（ｍ，４Ｈ），３．５５（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝１．３，１２．７ Ｈｚ，１Ｈ），３．２４－３．１９（ｍ，２Ｈ），３．１８－３．０９（ｍ，１Ｈ），２．９２－２．７８（ｍ，２Ｈ），２．７７－２．６６（ｍ，２Ｈ），２．４９（ｄｔ，Ｊ＝４．７，１１．１ Ｈｚ，１Ｈ），２．０９－１．８９（ｍ，２Ｈ），１．８６－１．７６（ｍ，２Ｈ），１．５２（ｂｒ ｄｄ，Ｊ＝４．１，１２．４ Ｈｚ，１Ｈ），１．２４－１．１４（ｍ，１Ｈ），０．６８（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0265】

実施例４２
４－［（３Ｒ，４Ｓ）－４－［５－（４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタン－７－イル）－２－ピリジル］－３－メチル－１－ピペリジル］－１，６－ジメチル－ピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン

【化77】

【0266】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔブチル４，７－ジアザスピロ［２．５］オクタン－４－カルボキシレート（ＣＡＳ：６７４７９２－０８－６、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｄを使用することにより、表題化合物を調製した。実施例４２（１９ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４３２（ＭＨ^＋）、測定値４３２（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝７．９９（ｄ，Ｊ＝２．７ Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｓ，１Ｈ），７．２４（ｄｄ，Ｊ＝２．９，８．７ Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝８．７ Ｈｚ，１Ｈ），６．３０（ｓ，１Ｈ），４．２６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．２０－４．１１（ｍ，１Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．１９－３．０８（ｍ，３Ｈ），３．０１－２．９６（ｍ，２Ｈ），２．９５（ｓ，２Ｈ），２．８６－２．７８（ｍ，１Ｈ），２．５３－２．４５（ｍ，１Ｈ），２．４２（ｓ，３Ｈ），２．０７－１．９７（ｍ，１Ｈ），１．８９－１．７５（ｍ，２Ｈ），０．６８（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ），０．５９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，４Ｈ）．

【0267】

実施例４３
１－［６－［（３Ｒ，４Ｓ）－１－（１，６－ジメチルピラゾロ［３，４－ｂ］ピリジン－４－イル）－３－メチル－４－ピペリジル］－３－ピリジル］－３－メチル－アゼチジン－３－アミン

【化78】

【0268】

実施例１５の調製と同様に、化合物１５ａ及び中間体Ｅの代わりにｔｅｒｔ－ブチルＮ－（３－メチルアゼチジン－３－イル）カルバメートヒドロクロリデカルバメート（ＣＡＳ：１４０８０７６－３７－８、ベンダー：ＰｈａｒｍａＢｌｏｃｋ）及び中間体Ｄを使用することにより、表題化合物を調製した。実施例４３（３３ｍｇ）を白色固体として得た。ＭＳ：計算値４０６（ＭＨ^＋）、測定値４０６（ＭＨ^＋）。^１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）δ＝８．２４（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝２．７ Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．９ Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄｄ，Ｊ＝２．９，８．９ Ｈｚ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），４．５６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１３．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．４６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｄ，Ｊ＝９．０ Ｈｚ，２Ｈ），４．０３－３．９５（ｍ，５Ｈ），３．４８（ｂｒ ｔ，Ｊ＝１２．０ Ｈｚ，１Ｈ），３．１９－３．１１（ｍ，１Ｈ），２．９１（ｄｔ，Ｊ＝４．２，１１．５ Ｈｚ，１Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ），２．１９－１．９０（ｍ，３Ｈ），１．６０（ｓ，３Ｈ），０．７９（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ）．

【0269】

実施例４４

【0270】

以下の試験は、ＨＥＫ２９３－Ｂｌｕｅ－ｈＴＬＲ－７／８／９細胞アッセイにおいて式（Ｉ）及び式（Ｉａ）の化合物の活性を決定するために行った。

【0271】

ＨＥＫ２９３－Ｂｌｕｅ－ｈＴＬＲ－７細胞アッセイ：
安定したＨＥＫ２９３－Ｂｌｕｅ－ｈＴＬＲ－７細胞株を、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（カタログ番号：ｈｋｂ－ｈｔｌｒ７、米国カリフォルニア州サンディエゴ）から購入した。これらの細胞は本来、ＮＦ－κＢの活性化をモニタリングすることによってヒトＴＬＲ７の刺激を研究するために設計された。ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を、５つのＮＦ－κＢ及びＡＰ－１結合部位に融合したＩＦＮ－β最小プロモータの制御下に置いた。ＳＥＡＰは、ＴＬＲ７リガンドでＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ７細胞を刺激することによってＮＦ－κＢ及びＡＰ－１を活性化することによって誘導した。したがって、レポーターの発現は、２０時間のインキュベーションの間、Ｒ８４８（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）等のリガンドの刺激下でＴＬＲ７アンタゴニストによって低下した。細胞培養上清のＳＥＡＰレポーター活性を、アルカリホスファターゼの存在下で紫色又は青色に変色する検出媒体であるＱＵＡＮＴＩ－ｂｌｕｅ（商標）キット（カタログ番号：ｒｅｐ－ｑｂ１、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州サンディエゴ）を使用して波長６４０ｎｍで測定した。

【0272】

ＨＥＫ２９３－Ｂｌｕｅ－ｈＴＬＲ７細胞を、４．５ｇ／Ｌグルコース、５０Ｕ／ｍＬペニシリン、５０ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン、１００ｍｇ／ｍＬノルモシン、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１０％（ｖ／ｖ）熱不活化ウシ胎児血清を含み、１％の最終ＤＭＳＯ及び１０μＬの上記ＤＭＥＭ中の２０ｕＭ Ｒ８４８の存在下で連続希釈した２０μＬの試験化合物を加えたダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ：ＤＭＥＭ）の９６ウェルプレートに、１７０μＬの体積で２５０，０００～４５０，０００細胞／ｍＬの密度にてインキュベートして、ＣＯ_２インキュベータ内で３７℃の下で２０時間インキュベーションを行った。次に、各ウェルの上清２０μＬを１８０μＬのＱｕａｎｔｉ－ｂｌｕｅ基質溶液と３７℃で２時間インキュベートし、分光光度計を使用して６２０～６５５ｎｍで吸光度を読み取った。ＴＬＲ７の活性化が下流のＮＦ－κＢの活性化につながるシグナル伝達経路は広く受け入れられているため、ＴＬＲ７アンタゴニストを評価するために同様のレポーターアッセイを改良した。

【0273】

ＨＥＫ２９３－Ｂｌｕｅ－ｈＴＬＲ－８細胞アッセイ：
安定したＨＥＫ２９３－Ｂｌｕｅ－ｈＴＬＲ－８細胞株を、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（カタログ番号：ｈｋｂ－ｈｔｌｒ８、米国カリフォルニア州サンディエゴ）から購入した。これらの細胞はもともと、ＮＦ－κＢの活性化をモニタリングすることによってヒトＴＬＲ８の刺激を研究するために設計された。ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を、５つのＮＦ－κＢ及びＡＰ－１結合部位に融合したＩＦＮ－β最小プロモータの制御下に置いた。ＳＥＡＰは、ＴＬＲ８リガンドでＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ８細胞を刺激することによりＮＦ－κＢ及びＡＰ－１を活性化することによって誘導した。したがって、レポーターの発現は、２０時間のインキュベーションの間、Ｒ８４８等のリガンドの刺激下でＴＬＲ８アンタゴニストによって低下した。細胞培養上清のＳＥＡＰレポーター活性を、アルカリホスファターゼの存在下で紫色又は青色に変色する検出媒体であるＱＵＡＮＴＩ－ｂｌｕｅ（商標）キット（カタログ番号：ｒｅｐ－ｑｂ１、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州サンディエゴ）を使用して波長６４０ｎｍで測定した。

【0274】

ＨＥＫ２９３－Ｂｌｕｅ－ｈＴＬＲ８細胞を、４．５ｇ／Ｌグルコース、５０Ｕ／ｍＬペニシリン、５０ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン、１００ｍｇ／ｍＬノルモシン、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１０％（ｖ／ｖ）熱不活化ウシ胎児血清を含み、１％の最終ＤＭＳＯ及び１０μＬの上記ＤＭＥＭ中の６０ｕＭ Ｒ８４８の存在下で連続希釈した２０μＬの試験化合物を加えたダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ：ＤＭＥＭ）の９６ウェルプレートに、１７０μＬの体積で２５０，０００～４５０，０００細胞／ｍＬの密度にてインキュベートして、ＣＯ_２インキュベータ内で３７℃の下で２０時間インキュベーションを行った。次に、各ウェルの上清２０μＬを１８０μＬのＱｕａｎｔｉ－ｂｌｕｅ基質溶液と３７℃で２時間インキュベートし、分光光度計を使用して６２０～６５５ｎｍで吸光度を読み取った。ＴＬＲ８の活性化が下流のＮＦ－κＢの活性化につながるシグナル伝達経路は広く受け入れられているため、ＴＬＲ８アンタゴニストを評価するために同様のレポーターアッセイを改良した。

【0275】

ＨＥＫ２９３－Ｂｌｕｅ－ｈＴＬＲ－９細胞アッセイ：
安定したＨＥＫ２９３－Ｂｌｕｅ－ｈＴＬＲ－９細胞株を、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（カタログ番号：ｈｋｂ－ｈｔｌｒ９、米国カリフォルニア州サンディエゴ）から購入した。これらの細胞はもともと、ＮＦ－κＢの活性化をモニタリングすることによってヒトＴＬＲ９の刺激を研究するために設計された。ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子を、５つのＮＦ－κＢ及びＡＰ－１結合部位に融合したＩＦＮ－β最小プロモータの制御下に置いた。ＳＥＡＰは、ＴＬＲ９リガンドでＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ｈＴＬＲ９細胞を刺激することによりＮＦ－κＢとＡＰ－１を活性化することによって誘導した。したがって、レポーターの発現は、ＯＤＮ２００６（カタログ番号：ｔｌｒｌ－２００６－１、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州サンディエゴ）等のリガンドの刺激下で２０時間のインキュベーションの間、ＴＬＲ９アンタゴニストによって低下した。細胞培養上清のＳＥＡＰレポーター活性を、アルカリホスファターゼの存在下で紫色又は青色に変色する検出媒体であるＱＵＡＮＴＩ－ｂｌｕｅ（商標）キット（カタログ番号：ｒｅｐ－ｑｂ１、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州サンディエゴ）を使用して波長６４０ｎｍで測定した。

【0276】

ＨＥＫ２９３－Ｂｌｕｅ－ｈＴＬＲ９細胞を、４．５ｇ／Ｌグルコース、５０Ｕ／ｍＬペニシリン、５０ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン、１００ｍｇ／ｍＬノルモシン、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１０％（ｖ／ｖ）熱不活化ウシ胎児血清を含み、１％の最終ＤＭＳＯ及び１０μＬの上記ＤＭＥＭ中の２０ｕＭ ＯＤＮ２００６の存在下で連続希釈した２０μＬの試験化合物を加えたダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ：ＤＭＥＭ）の９６ウェルプレートに、１７０μＬの体積で２５０，０００～４５０，０００細胞／ｍＬの密度にてインキュベートして、ＣＯ_２インキュベータ内で３７℃の下で２０時間インキュベーションを行った。次に、各ウェルの上清２０μＬを１８０μＬのＱｕａｎｔｉ－ｂｌｕｅ基質溶液と３７℃で２時間インキュベートし、分光光度計を使用して６２０～６５５ｎｍで吸光度を読み取った。ＴＬＲ９の活性化が下流のＮＦ－κＢの活性化につながるというシグナル伝達経路は広く受け入れられているため、同様のレポーターアッセイをＴＬＲ９アンタゴニストの評価用に改良した。

【0277】

式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物は、ヒトＴＬＲ７及びＴＬＲ８阻害活性（ＩＣ_５０値）が０．５μＭ未満である。そのうえ、いくつかの化合物はまた、ヒトＴＬＲ９阻害活性が０．５μＭ未満である。本発明の化合物の活性データを表２に示した。

【表1】

【0278】

実施例４５
ｈＥＲＧチャネル阻害アッセイ：
ｈＥＲＧチャネル阻害アッセイは、ｉｎ ｖｉｖｏでの心臓毒性に関連するｈＥＲＧ阻害を呈する化合物を同定する非常に高感度な測定である。ｈＥＲＧ Ｋ^＋チャネルは、ヒトにおいてクローン化されており、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞株において安定して発現した。ＣＨＯ_ｈＥＲＧ細胞をパッチクランプ（電圧クランプ、細胞全体）実験に使用した。細胞を電圧パターンで刺激して、ｈＥＲＧチャネルを活性化し、Ｉ_{ＫｈＥＲＧ}電流（ｈＥＲＧチャネルの急速遅延外向き整流器カリウム電流（ｒａｐｉｄ ｄｅｌａｙｅｄ ｏｕｔｗａｒｄ ｒｅｃｔｉｆｉｅｒ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｕｒｒｅｎｔ））を伝導した。細胞を数分間安定させた後、Ｉ_{ＫｈＥＲＧ}の振幅及び動態を刺激周波数０．１Ｈｚ（６ｂｐｍ）で記録した。その後、試験化合物を、漸増濃度で調製物に添加した。各濃度について、定常状態の効果に到達するための試みを行い、これは、通常３～１０分以内に達成され、その時点で、次に高い濃度が適用された。Ｉ_{ＫｈＥＲＧ}の振幅及び動態は、薬剤の各濃度において記録して、これを対照値（１００％とする）と比較した。（参考文献：Ｒｅｄｆｅｒｎ ＷＳ，Ｃａｒｌｓｓｏｎ Ｌ，Ｄａｖｉｓ ＡＳ，Ｌｙｎｃｈ ＷＧ，ＭａｃＫｅｎｚｉｅ Ｉ，Ｐａｌｅｔｈｏｒｐｅ Ｓ，Ｓｉｅｇｌ ＰＫ，Ｓｔｒａｎｇ Ｉ，Ｓｕｌｌｉｖａｎ ＡＴ，Ｗａｌｌｉｓ Ｒ，Ｃａｍｍ ＡＪ，Ｈａｍｍｏｎｄ ＴＧ．２００３；Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｃａｒｄｉａｃ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ｃｌｉｎｉｃａｌ ＱＴ ｉｎｔｅｒｖａｌ ｐｒｏｌｏｎｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｏｒｓａｄｅ ｄｅ ｐｏｉｎｔｅｓ ｆｏｒ ａ ｂｒｏａｄ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｄｒｕｇｓ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａ ｐｒｏｖｉｓｉｏｎａｌ ｓａｆｅｔｙ ｍａｒｇｉｎ ｉｎ ｄｒｕｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．５８：３２－４５，Ｓａｎｇｕｉｎｅｔｔｉ ＭＣ，Ｔｒｉｓｔａｎｉ－Ｆｉｒｏｕｚｉ Ｍ．２００６；ｈＥＲＧ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ ａｎｄ ｃａｒｄｉａｃ ａｒｒｈｙｔｈｍｉａ．Ｎａｔｕｒｅ ４４０：４６３－４６９，Ｗｅｂｓｔｅｒ Ｒ，Ｌｅｉｓｈｍａｎ Ｄ，Ｗａｌｋｅｒ Ｄ．２００２；Ｔｏｗａｒｄｓ ａ ｄｒｕｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｆｏｒ ＱＴ ｐｒｏｌｏｎｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｏｒｓａｄｅｓ ｄｅ ｐｏｉｎｔｅｓ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｄｅｖｅｌ．５：１１６－２６）。

【0279】

ｈＥＲＧの結果を表３に示す。３０よりも大きな安全比（ｈＥＲＧ ＩＣ_２０／ＥＣ_５０）は、潜在的なｈＥＲＧ関連心臓毒性からＴＬＲ７／８／９経路を阻害することによって、薬理学を識別するのに十分なウィンドウを示唆している。ｈＥＲＧ易罹病性を評価するために早期選択性指数として機能する、以下のｈＥＲＧ ＩＣ_２０／ＴＬＲ７／８／９ ＩＣ_５０の計算によると_、明確に参照化合物ＥＲ－８８７２５８、ＥＲ－８８８２８５、ＥＲ－８８８２８６、Ｒ１、及びＲ２は、本発明の化合物と比較して安全性ウィンドウが非常に狭い。

【表2】

【0280】

実施例４６
ヒトＰＢＭＣ細胞ベースのアッセイ
ＨＥＫレポーター細胞株とは異なり、ヒト末梢血単核細胞（ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ：ＰＢＭＣ）は、主にリンパ球、単球、樹状細胞からなる血液中の初代ヒト免疫細胞を表す。これらの細胞は、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、又はＴＬＲ９を発現するため、それぞれのリガンド刺激に対する天然のレスポンダである。これらのＴＬＲが活性化すると、ＰＢＭＣはｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで同様のサイトカイン及びケモカインを分泌するため、ヒトＰＢＭＣにおけるＴＬＲ７／８／９アンタゴニストのｉｎ ｖｉｔｒｏの効力は、ｉｎ ｖｉｖｏでの薬力学的応答に容易に変換可能である。

【0281】

新たに採取したリチウムヘパリン化（リチウムヘパリンプラス採血管、ＢＤ Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標））健康ドナー全血から、密度勾配（Ｆｉｃｏｌｌ－ＰａｑｕｅＴＭ ＰＬＵＳ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）によってヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）が単離された。簡単に説明すると、５０ｍＬの血液を、多孔質バリア付きの５０ｍＬ円すい管（Ｌｅｕｃｏｓｅｐ ｔｕｂｅ，Ｇｒｅｉｎｅｒ ｂｉｏ－ｏｎｅ）において、２５ｍＬ ＰＢＳ（Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋非含有）で希釈し、回転後に１５．５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅを水平に寝かせた。ブレーキをオフ位置にした状態で、管を８００×ｇ（１９４６ｒｐｍ）で２０分間遠心分離し、ＰＢＭＣをバフィーコートから収集した。次に、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、赤血球を２ｍＬの懸濁液（Ｒｅｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ、Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ）によって室温で５～１０分間溶解させた。ＰＢＳでの最終洗浄後、１０％ウシ胎児血清（Ｓｉｇｍａ）を補充したＧｌｕｔａＭＡＸＴＭ（Ｇｉｂｃｏ）を含むＲＰＭＩ－１６４０培地において、最終濃度２×１０^６細胞／ｍＬでＰＢＭＣを再懸濁させ、組織培養処理した丸底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ）において、１５０μＬ／ウェル（３×１０^５細胞／ウェル）でプレーティングした。

【0282】

可溶化され、１００％ＤＭＳＯにおいて連続希釈されたアンタゴニスト化合物（本発明の化合物）を細胞に２回添加して、１％ＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）の最終濃度を得た。ＰＢＭＣを、アンタゴニスト化合物と共に３７℃、５％ＣＯ_２で３０分間インキュベートした後、（最終濃度を示す）以下のように、ウェルあたり４８μＬの完全培地に多様なＴＬＲアゴニスト試薬を添加した。ＴＬＲ９の場合、１μＭのＣｐＧ ＯＤＮ ２２１６（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）、ＴＬＲ８の場合、１μｇ／ｍＬのＯＲＮ ０６／ＬｙｏＶｅｃ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）、ＴＬＲ７及びＴＬＲ８の場合、１μｇ／ｍＬのＲ８４８（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）。ＰＢＭＣを、５％ＣＯ_２で３７℃で一晩インキュベートした。細胞培養上清を収集し、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（ＰｒｏｃａｒｔａＰｌｅｘＴＭ Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）又は製造元の推奨プロトコル（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に従ったＥＬＩＳＡ手順によって様々なヒトサイトカインのレベルを評価した。細胞の生存率もまたＣｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ，Ｐｒｏｍｅｇａ）によって確認された。

【表3】

【0283】

実施例４７
ヒトミクロソーム安定性アッセイ
ヒトミクロソーム安定性アッセイを用いて、ヒト肝ミクロソームにおける試験化合物の代謝安定性の早期評価を行う。

【0284】

ヒト肝ミクロソーム（カタログ番号：４５２１１７、Ｃｏｒｎｉｎｇ（ＵＳＡ）；カタログ番号：Ｈ２６１０、Ｘｅｎｏｔｅｃｈ（ＵＳＡ））を１００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中で３７℃にて１０分間、試験化合物と共にプレインキュベートした。ＮＡＤＰＨ再生システムを加えて反応を開始した。最終的なインキュベーション混合物は、１００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中に１μＭの試験化合物、０．５ｍｇ／ｍＬの肝臓ミクロソームタンパク質、１ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ ＮＡＤＰ、１ユニット／ｍＬのイソクエン酸脱水素酵素及び６ｍＭイソクエン酸を含有していた。３７℃で、０、３、６、９、１５、及び３０分のインキュベーション時間後に、３００μＬの冷アセトニトリル（内部標準物質を含む）を１００μＬのインキュベーション混合物に加えて、この反応を終止させた。沈殿及び遠心分離の後、試料中に残存している化合物の量を、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって測定した。また、ＮＡＤＰＨ再生系なしの対照も０分及び３０分で調製し、分析した。本発明の化合物は、上述のアッセイにおいて測定された良好なヒト肝ミクロソーム安定性を示した。結果を以下の表５に示す。

【表4】

【0285】

実施例４８
３Ｔ３ｉｎ ｖｉｔｒｏ光毒性アッセイ
光毒性は、特定の化学物質を皮膚に最初に曝露し、その後に光に曝露した後に誘発される毒性反応、又は化学物質を全身に投与した後に皮膚照射することで同様に誘発される毒性反応として定義されている。本研究で使用したアッセイは、Ｂａｌｂ／ｃ ３Ｔ３マウス線維芽細胞を用いた簡便なｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイを使用して、化学物質の光毒性の可能性を検出するように設計されている。この試験の原理は、非毒性用量のＵＶＡ光に曝露した場合とそうでない場合に試験した、化学物質の細胞毒性を比較することである。細胞毒性は、処置の１日後に生体色素であるニュートラルレッドの取り込みによって決定される、細胞の増殖率の用量依存性の低下として表される。

【0286】

１． 方法
試験項目のストック溶液の調製及び投与量
細胞の曝露を開始する直前に、少量の物質を秤量し、ＤＭＳＯに新たに配合した。このストック溶液又はＤＭＳＯによる適切な希釈液を細胞懸濁液に加えて、必要な最終濃度を得た。全ての溶液は、一般的にエッペンドルフキャップ中で調製し、使用後に廃棄した。

【0287】

参照物質
クロルプロマジン（ＨＣＬ）（Ｓｉｇｍａ、バッチ／ロット番号：１２０Ｍ １３２８Ｖ）、試験濃度：３００μｇ／ｍＬ、溶媒：ＰＢＳ／３％ ＤＭＳＯ

【0288】

ＵＶ吸収スペクトルの測定
それ自体での、又はＵＶ－Ａ若しくはＵＶ－Ｂの事前照射による吸収スペクトルを、Ｌａｍｂｄａ－２スペクトル光度計（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて２４０ｎｍ～４００ｎｍの間で記録した。

【表5】

【0289】

光毒性の決定
この試験では、ＩＮＶＩＴＴＯＸプロトコルＮｏ ７８（ＥＲＧＡＴＴ／ＦＲＡＭＥ ｄａｔａ ｂａｎｋ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ．ＩＮＶＩＴＴＯＸ ＰＲＯＴＯＣＯＬ Ｎｏ ７８．３Ｔ３ ＮＲＵ Ｐｈｏｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ Ａｓｓａｙ．Ｍａｒｃｈ １９９４）に従って修正したＢｏｒｅｎｆｒｅｕｎｄ ａｎｄ Ｐｕｅｒｎｅｒ（Ｂｏｒｅｎｆｒｅｕｎｄ，Ｅ，Ｐｕｅｒｎｅｒ ＪＡ．Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｂｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｎｅｕｔｒａｌ Ｒｅｄ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔ．１９８５；２４：１１９－１２４．）のニュートラルレッド取り込み（ＮＲＵ）アッセイを、試験項目の可能性のある光毒性の可能性を調べるために適合させた。このアッセイは、培養マウス線維芽細胞のリソソームへのニュートラルレッド色素の能動的取り込みに基づいている。リソソーム膜は多くの光毒性化合物の作用部位であることが知られているため、このアッセイは光毒性損傷の可能性の測定値を提供することができる。

【0290】

細胞培養の調製
マウス線維芽細胞クローンＡ３１（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１６３－継代番号１０８）を、ｓＤＭＥＭ（１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１００単位／ｍｌペニシリン及び１００μｇ／ｍｌストレプトアビジンを補充した、ダルベッコの最小必須培地）を含む１７５ｃｍ^２の組織培養グレードフラスコ中で６％ＣＯ_２の加湿雰囲気において３７℃で培養した。細胞がコンフルエンスに近づく前に、トリプシン処理によってフラスコから取り出した。アッセイで使用する前に、細胞を１００μｌの容量のｓＤＭＥＭ中で１×１０^４細胞／ウェルの濃度で９６ウェルマイクロタイタープレートに移し、２４時間付着させた。

【0291】

試験項目への曝露
マウス線維芽細胞とのインキュベーションのために、試験項目をＰＢＳ／３％ＤＭＳＯで希釈した（詳細な濃度は結果を参照）。

【0292】

培養培地（ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ Ｒｅｆ ２１８８５－０２５）、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ Ｒｅｆ １０２７０－１０６）、１００ＩＵ／ｍｌペニシリン及び１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ Ｒｅｆ １５１４０－１２２））をウェルから除き、マウス線維芽細胞をＰＢＳで洗浄した。その後、試験項目を含む１００μＬのＰＢＳ／３％ＤＭＳＯを添加し、標的細胞を６％ＣＯ_２で３７℃にて１時間インキュベーションした。

【0293】

ＵＶ曝露
各試験項目について、マイクロタイタープレートを表６に従って調製した。「ＵＶＡプレート」は、約５Ｊ／ｃｍ^２のＵＶＡ光に曝露し、「ダークプレート」は暗所に保管し、細胞毒性対照として機能した。塩酸クロルプロマジンを含むプレートは、陽性対照として機能した。ＵＶフラックスを、ＵＶメーター（Ｄｒ．Ｇｒｏｅｂｅｌ ＲＭ２１）で測定した。

【0294】

ＵＶ照射後、試験項目をウェルから除き（ＰＢＳによる１回の洗浄工程）、ｓＤＭＥＭと交換した。次いで、標的細胞を６％ＣＯ_２中で３７℃にて一晩インキュベーションした。

【表6】

【0295】

９６ウェルマイクロタイタープレートを以下のように調製した。

【0296】

各プレートは、標準細胞生存率曲線の算出のため、ニュートラルレッド溶液（０％標準－Ｓ１）でインキュベートされていないか、又はニュートラルレッド（１００％標準－Ｓ２）で染色された細胞と溶媒を含むウェルを含んでいたが、試験項目は含んでいなかった。Ｕ０１～Ｕ０８でラベル付けされたウェルには、異なる試験項目の濃度が含まれていた。

【0297】

ニュートラルレッドの取り込み
すぐに使用できるニュートラルレッド（ＮＲ）染色溶液を以下のように新たに調製した：
● ０．４％のストック水溶液を遮光し、使用前にフィルタにかけてＮＲ結晶を除去した。
● 次いで、１：４０希釈のストック溶液をｓＤＭＥＭ中で調製し、細胞に添加した。

【0298】

インキュベーション後、アッセイするウェルにニュートラルレッドを含むｓＤＭＥＭを１００μＬ充填した。標的細胞をＮＲと共に６％ＣＯ_２中で３７℃にて３時間インキュベーションした。

【0299】

ニュートラルレッドの取り込みの測定
混入しなかったニュートラルレッドを標的細胞から除去し、少なくとも１００μＬのＰＢＳでウェルを洗浄した。次いで、１５０μＬのニュートラルレッド脱着溶液（１％氷酢酸、ａｑｕａ ｂｉｄｅｓｔ中５０％エタノール）を添加し、混入した色素を定量的に抽出した。ニュートラルレッドが細胞から抽出されて均一な溶液を形成するまで、マイクロタイタープレートシェーカー上でプレートを少なくとも１０分間激しく振とうした後、得られる着色溶液の吸光度を、５４０ｎｍでＳＰＥＣＴＲＡｍａｘ ＰＬＵＳマイクロタイタープレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて測定した。

【0300】

細胞生存率の算出
細胞生存率は、ＳＯＦＴｍａｘ Ｐｒｏソフトウェアパッケージ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて算出した。最初に、次の式に基づいて、プログラムの線形曲線フィットオプションを用いて２点標準曲線（０％及び１００％の生存率）を算出した：
Ｙ＝Ａ＋（Ｂ×Ｘ）
（Ａ＝直線のｙ切片；Ｂ＝直線の傾き；
０％の細胞生存率＝溶媒を含むが、試験項目とニュートラルレッドを含まない細胞。
１００％の細胞生存率＝溶媒とニュートラルレッドを含むが、試験項目を含まない細胞）

【0301】

これにより、試験化学物質の濃度を上昇させながらインキュベーションした細胞の生存率を算出した。クロルプロマジン（ＨＣｌ）は、実験の陽性対照として機能した。

【0302】

ＩＣ_５０値の算出
全ての計算を、ＳＯＦＴｍａｘ Ｐｒｏ分析ソフトウェアパッケージを使用して行った
（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ－詳細については、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｂｌ．ｅｄｕ／ｊｂｐｃ／ｆｉｌｅｓ／２０１４／０５／ＳｏｆｔＭａｘ＿Ｐｒｏ＿Ｕｓｅｒ＿Ｇｕｉｄｅ．ｐｄｆを参照）。

【0303】

光毒性の判別係数の算出
光毒性の可能性を評価するために、ＵＶ曝露を行った場合とそうでない場合に決定したＩＣ_５０値を比較した。
係数＝ＩＣ_５０（－ＵＶ）／ＩＣ_５０（＋ＵＶ）

【0304】

光毒性試験化学物質と非光毒性試験化学物質とを区別するため、＞５のカットオフ係数を適用した（Ｌｉｅｂｓｃｈ Ｍ，Ｓｐｉｅｌｍａｎｎ Ｈ，Ｂａｌｌｓ Ｍ，Ｂｒａｎｄ Ｍ，Ｄｏｅｒｉｎｇ Ｂ，Ｄｕｐｕｉｓ Ｊ，Ｈｏｌｚｈｕｅｔｅｒ ＨＧ，Ｋｌｅｃａｋ Ｇ，Ｌ．Ｅｐｌａｔｔｅｎｉｅｒ Ｈ，Ｌｏｖｅｌｌ Ｗ，Ｍａｕｒｅｒ Ｔ，Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ Ｆ，Ｍｏｏｒｅ Ｌ，Ｐａｐｅ Ｗ，Ｐｆａｎｎｅｎｂｅｃｋｅｒ Ｕ，Ｐｏｔｔｈａｓｔ ＪＭ，Ｄｅ Ｓｉｌｖａ Ｏ，Ｓｔｅｉｌｉｎｇ Ｗ，Ｗｉｌｌｓｈａｗ Ａ．Ｆｉｒｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＥＣ／ＣＯＬＩＰＡ Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ Ｐｒｏｊｅｃｔ．Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｐｈｏｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｔｅｓｔｉｎｇ．Ｉｎ：Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｓｋｉｎ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ：Ｉｒｒｉｔａｔｉｏｎ，Ｐｈｏｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，Ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ；Ｖｏｌ．１０．Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，－Ｅｄｓ．Ｒｏｕｇｉｅｒ Ａ，Ｍａｉｂａｃｈ ＨＩ，Ｇｏｌｄｂｅｒｇ ＡＭ；Ｍａｒｙ Ａｎｎ Ｌｉｅｂｅｒｔ Ｐｕｂｌ．：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ １９９４，ｐｐ．２４３－２５１）。

【0305】

試験した最高濃度であってもマウス線維芽細胞に対して細胞毒性はないが、ＵＶ曝露後に細胞生存率の用量依存性の強い低下を示す試験項目も光毒性と見なされる（Ｓｐｉｅｌｍａｎｎ Ｈ，Ｂａｌｌｓ Ｍ，Ｄｕｐｕｉｓ Ｊ，Ｐａｐｅ ＷＪＷ，Ｐｅｃｈｏｖｉｔｃｈ Ｇ，Ｓｉｌｖａ ＤｅＯ，Ｈｏｌｚｈｕｅｔｔｅｒ，ＨＧ，Ｃｌｏｔｈｉｅｒ Ｒ，Ｄｅｓｏｌｌｅ Ｐ，Ｇｅｒｂｅｒｉｃｋ Ｆ，Ｌｉｅｂｓｃｈ Ｍ，Ｌｏｗｅｌｌ ＷＷ，Ｍａｕｒｅｒ Ｔ，Ｐｆａｎｎｅｎｂｅｃｋｅｒ Ｕ，Ｐｏｔｔｈａｓｔ ＪＭ，Ｃｓａｔｏ Ｍ，Ｓｌａｄｏｗｓｋｉ Ｄ，Ｓｔｅｉｌｉｎｇ Ｗ，Ｂｒａｎｔｏｍ Ｐ．Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＥＵ／ＣＯＬＩＰＡ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｐｈｏｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ：Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｐｈａｓｅ ＩＩ（ｂｌｉｎｄ ｔｒｉａｌ）．Ｐａｒｔ １：Ｔｈｅ ３Ｔ３ ＮＲＵ ｐｈｏｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｔｅｓｔ．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ ｉｎ Ｖｉｔｒｏ １９９８，１２：３０５－３２７）。

【0306】

試験結果を以下に示すが、本発明の化合物は非常に良好な光毒性プロファイルを示した。

【表7】

【0307】

実施例４９
胚性幹細胞試験
ｉｎ ｖｉｔｒｏマウス胚性幹細胞試験（ｍＥＳＴ）アッセイは、Ｒｏｃｈｅで実施される日常的アッセイである。最初のＥＳＴは、マウス１２９株に由来する胚盤胞由来の永久胚性マウスＥＳＣ（ｍＥＳＣ）Ｄ３細胞株に基づいて、胚毒性をスクリーニングするためのｉｎ ｖｉｔｒｏモデルとして１９９７年にＨｏｒｓｔ Ｓｐｉｅｌｍａｎｎ及び彼のグループによって開発され、欧州動物実験代替法評価センター（ＥＣＶＡＭ）によって検証された。

【0308】

本発明者らは、医薬化合物へのアッセイの適用を可能にするアプローチを更に最適化及び修正した。

【0309】

生物学的エンドポイント及びエンドポイント測定：
１０日間の物質処置後の分化細胞を表す３Ｔ３線維芽細胞の細胞傷害性（成長の阻害）及び未分化胚性幹細胞（Ｄ３）の細胞傷害性が、２つのアッセイエンドポイントとして役立つ。これは、生細胞の無傷のミトコンドリアに存在して黄色可溶性基質３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を暗青の不溶性ホルマザン生成物に変換するデヒドロゲナーゼ酵素の使用によって決定され、これは細胞内に捕捉され、細胞膜を可溶化した後に吸光度リーダー（５７０ｎｍ）を使用して定量的に検出される。

【0310】

３番目のエンドポイントは、１０日間の処置後の心筋細胞である心筋へのＥＳ細胞の分化の阻害である。この細胞の拍動を顕微鏡法によって評価する。

【0311】

材料及び試薬
ｍＥＳＣ細胞：ＥＳ－Ｄ３［Ｄ３］（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１９３４（商標））
マウス線維芽細胞：ＢＡＬＢ／３Ｔ３クローンＡ３１（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ－１６３（商標））
Ｂａｌｂ／ｃ ３Ｔ３細胞クローンＡ３１：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）カタログ番号ＣＣＬ－１６３
ＥＳ－Ｄ３（Ｄ３）：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）カタログ番号ＣＲＬ－１９３４
ｍ－ＬＩＦ：Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｌ５１５８－５ＵＧ
ＮＥＡＡ（１００倍）：Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１１１４０－０３５
トリパンブルー０．０４％：Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号Ｔ１０２８２
ＭＴＴ：Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号５２２４／５００
５－フルオロウラシル：Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ｆ－６６２７－５Ｇ
ペニシリン／ストレプトマイシン：Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１５１４０－１２２
ＰＢＳ（－ＣａＣｌ_２／－ＭｇＣｌ_２）：Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１４１９０－０９４
ＦＣＳ：Ｈｙｃｌｏｎｅ、カタログ番号ＳＨ３００７０．０３
グルコース、グルタミン、ＮａＨＣＯ_３を含むＤＭＥＭ：Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号４１９６６－０２９

【0312】

方法
調製
培地及びエンドポイントアッセイ溶液
培養培地：

【表8】

アッセイ培地：

【表9】

細胞を凍結するための培地：

【表10】

β－メルカプトエタノール（β－ＭＥ）（１０ｍＭ）
１７．５μＬのβ－ＭＥを２５ｍＬのＰＢＳに添加
４℃で最大１週間保存
ＦＣＳ
水浴（３７℃）によってＦＣＳを一度解凍し、１００ｍＬ、５０ｍＬ及び２５ｍＬのアリコートを作製する。
多重解凍を回避する
－２０℃で保存
ＭＴＴ溶液
５ｍｇ ＭＴＴ／ｍｌ ＰＢＳ
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ製の滅菌フィルタを使用し、８ｍＬ及び４ｍＬのアリコートを作製する
－２０℃で保存
ＭＴＴ－脱着溶液
水／ＤＭＦに溶解した２０％ＳＤＳ、１：１、酢酸でｐＨを４．５に調整
試験化合物
原液：２００ｍＭ
溶媒：１００％ＤＭＳＯ

【0313】

分化アッセイ
０日目
１）Ｄ３細胞のためのトリプシン０．０５％ＥＤＴＡによる細胞継代。
２）細胞懸濁液のアセンブリ：５０ｍＬファルコンチューブ中１８ｍｌ培地（各試験について）で細胞を２．５×１０^４／ｍＬに希釈する。
３）ペトリ皿（ＰＤ）を調製する：５～１０ｍＬの滅菌ダルベッコのＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を各皿底部に添加し、皿全体に分散させる。
４）エッペンドルフチューブにおける試験化合物の希釈系列：５μＬの化合物（１：４００希釈）及び５μＬの対照溶液（ＤＭＳＯ）を２ｍＬの細胞懸濁液に添加し、ボルテックスする。
５）ペトリ皿中の懸滴の調製：ボルテックスチューブ、自動ピペットを用いた吸引懸濁液及びペトリ皿の蓋上への２０μｌの液滴のマルチ分注、液滴の同心円内に合計２ｍｌを添加する（約１００滴）；カバーを素早く、しかし滑らかに回転させてＰＤを装着する；３７℃／５％ＣＯ_２で３日間インキュベートする。

【0314】

３日目
１）１４ｍＬ ＰＰチューブにおける化合物の希釈系列
濃度用の６本のチューブ；５ｍＬアッセイ培地で満たす
ＤＭＳＯ（溶媒対照）用の１本のチューブに５ｍＬアッセイ培地を充填する。
２）エッペンドルフチューブにおける化合物の希釈系列
１２．５μＬの化合物（１：４００希釈）及び１２．５μＬの対照溶液を添加し、ボルテックスする
３）細菌ペトリ皿における胚様体の移植
ＰＤの蓋を慎重に回し、液滴の真菌汚染をチェックする
調製した溶液５ｍＬで液滴を数回すすぐ
細菌ペトリ皿への移動
３７℃／５％ＣＯ_２で３日間インキュベートする

【0315】

５日目
１）５０ｍＬチューブにおける化合物の希釈
濃度用の６本のチューブ；２５ｍＬアッセイ培地で満たす
ＤＭＳＯ（溶媒対照）用の１本のチューブに２５ｍＬ培地を充填する。
２）１．５ｍＬチューブにおける化合物の希釈
６２．５μＬの化合物（１：４００希釈）及び対照溶液（ＤＭＳＯ）を添加し、ボルテックスする
３）９６ウェルプレートの調製
各化合物について２つのプレート、化合物プレートのレイアウトを参照されたい。
９６ウェル全てに２２０μＬの培地／化合物／溶媒混合物を添加する
低濃度で開始
４）胚様体のピペット操作
ペトリ皿内の胚様体を視覚的に制御する
２５μＬチップを用いて、各ウェル中の胚様体を１つピペットで移す。
プレートを視覚的にチェックして、各ウェルに少なくとも１つの胚様体が存在することを確実にする
３７℃／５％ＣＯ_２で３日間インキュベートする

【0316】

１０日目
心筋細胞を拍動させるために顕微鏡で各ウェルを可視化する
アッセイ培地及びＤＭＳＯ対照は、拍動している心筋細胞の少なくとも８０％を示すべきである（合格基準を参照）。

【0317】

細胞傷害性アッセイ
全ての物質について０．２ｍｏｌ／Ｌの濃度の原液を作成する。試験物質をＤＭＳＯ溶液に希釈する。

【0318】

０日目
１）Ｄ３及び３Ｔ３細胞株のための細胞懸濁液を作製する
２）３Ｔ３については２．５×１０^４個／ｍＬ、Ｄ３細胞については１．５×１０^４個／ｍＬ
３）９６ウェルマルチウェルプレートの外側ウェル（ブランク）への２００μＬ培地のピペット操作
４）５０μＬ細胞懸濁液を９６ウェルマルチウェルプレートの残りの内側ウェルに添加する（試料）
５）３７℃／５％ＣＯ_２で２時間インキュベートして、細胞を接着させる
６）試験物質又はＤＭＳＯ対照のピペット操作５ｍＬチューブ中に２ｍＬ培地及び６．６７μＬ試験物質の濃度を作成する
７）１５０μＬ／ウェルの溶液を試料ウェルに添加（合計２００μＬ／ウェル）
８）３７℃／５％ＣＯ_２で３日間インキュベートする

【0319】

３日目、５日目及び７日日目
１）２ｍＬの培地（３Ｔ３又はＤ３細胞培地）を希釈し、５μＬの試験物質（又はＤＭＳＯ対照）（１：４００）をｍＬチューブに添加する
２）底部の細胞層を損傷することなく、真空ポンプで培地を除去する。
３）２００μＬの希釈した試験物質（及びＤＭＳＯ対照）を適切な試料ウェルに添加する
インキュベーション
３日目３７℃／５％ＣＯ_２で２日
５日目３７℃／５％ＣＯ_２で２日
７日目３７℃／５％ＣＯ_２で３日

【0320】

１０日目
細胞の変化、物質の沈殿、又はその他の効果を光学顕微鏡下で視覚的に予備的に観察する
ＭＴＴ測定：
１）４ｍＬのＭＴＴを４０ｍＬのＤＭＥＭに添加し、３７℃まで加温して最終的なＭＴＴ溶液を作成する
２）培地を慎重に廃棄することによって９６ウェルプレートから培地を除去する
３）マルチウェルピペットを用いて、２００μＬのＭＴＴ溶液を各ウェルに添加する。
４）プレートを３７℃／５％ＣＯ_２で３時間インキュベートする
５）ＭＴＴ－脱着溶液を３７℃に加温する
６）ＭＴＴ溶液を慎重に除去する
７）１３０μＬのＭＴＴ－脱着溶液を各ウェルに添加し、プレートをインキュベータ内で３７℃で３０分間インキュベートし、次いでプレートをプレートシェーカー上に少なくとも２～３時間置く。
８）プレートリーダーで５７０ｎｍの吸光度を測定する。

【0321】

合否基準
分化エンドポイント：有効なアッセイの受け入れに必要な全アッセイにおいて拍動している心筋細胞の少なくとも８０％
細胞傷害性エンドポイント：
ＤＭＳＯ制御及びＰＯＳ制御の許容範囲並びにＤ３（約１．８～２．２）及び３Ｔ３（０．８～１．０）のＯＤ値の決定は、それらの適切な範囲内にあるべきである。

【0322】

データ分析
分化エンドポイント：
拍動している心筋細胞の総数（１ウェルあたり少なくとも１つの拍動心筋細胞＝１つの陽性数、１ウェルあたり拍動心筋細胞なし＝陰性数）の決定、陽性ＤＭＳＯ対照への正規化
細胞傷害性エンドポイント：

【0323】

ブランクのＯＤ５７０の平均値の決定（値は、プラスチック材料への染料の付着及び媒体の残留量を示す）。サンプル値からこの値を減算し、補正された値で計算を続ける。

【0324】

処理された試料ウェルのＯＤ５７０の平均値の決定。溶媒対照ウェルのＯＤ５７０の平均値の決定は１００％に設定される。生存率は、ＤＭＳＯ溶媒対照に対して正規化された％で計算される。

【0325】

予測モデル
マイクロプレートリーダーによって生成された光学密度（ＯＤ５７０）のデータファイルをＥＸＣＥＬスプレッドシートにコピーした。平均ＯＤ値、標準偏差及び生存率を自動的に計算した。アッセイからの以下のエンドポイントは、スプレッドシートの濃度応答曲線からグラフで計算することができた。
ＩＣ５０ Ｄ３－Ｄ３細胞の５０％が死滅した試験物質の濃度
ＩＣ５０ ３Ｔ３－３Ｔ３細胞の５０％が死滅した試験物質の濃度。
ＩＤ５０ Ｄ３－Ｄ３細胞の収縮心筋細胞への分化が５０％減少する試験物質の濃度。

【0326】

細胞傷害性アッセイからのＤ３細胞及び３Ｔ３細胞のＩＣ５０値及びＤ３分化アッセイのＩＤ５０を、Ｓｃｈｏｌｚ ｅｔ ａｌ．１９９９ａによって使用された改変予測モデルから開発された統計的評価に入れた：

【数1】

Ｄ１２＿３＜０．５は「ネガティブ」を意味する。
Ｄ１２＿３＞０．６は「ポジティブ」を意味する。
０．５～０．６の間の予測スコアは、境界線の結果とラベル付けされている。

【0327】

例えば、溶解度が、１つ又はそれを超える用量応答曲線についてＩＣ５０又はＩＤ５０値を決定することができない程度に試験された用量範囲を制限する場合（Ｗｉｔｈｌｏｗ ｅｔ ａｌ．２００７）、決定的でない結果も可能である。

【表11】

【0328】

実施例５０
雄性Ｗｉｓｔｅｒ－Ｈａｎラットにおける単回用量薬物動態（ＰＫ）研究
選択した化合物の薬物動態特性を、雄性Ｗｉｓｔｅｒ－Ｈａｎラット（販売業者：Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）における単回用量ＰＫ試験によって評価した。簡潔には、２群の動物に、単回用量のそれぞれの化合物を２ｍｇ／ｋｇで静脈内投与（ＩＶ、ボーラス）又は１０ｍｇ／ｋｇで経口投与（ＰＯ、強制投与）した。血液試料（約１５０μＬ）を、投与の５分後（ＩＶの場合のみ）、１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、４時間後、７時間後及び２４時間後に頸静脈を介して収集した。血液試料をＥＤＴＡ－Ｋ２抗凝固剤を含むチューブに入れ、４℃で１５分間３０００ｒｐｍで遠心分離して、試料から血漿を分離した。遠心分離後、得られた血漿をＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる生物分析のために清浄なチューブに移した。薬物動態パラメータは、非コンパートメント解析を使用して計算した。分布容積（Ｖｓｓ）、半減期（Ｔ_１／２）及びクリアランス（ＣＬ）を、ＩＶ投与後の血漿濃度－時間曲線に基づいて得た。ピーク濃度（Ｃ_ｍａｘ）は、ＰＯ投与後の実験観察から直接記録した。血漿濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ_{０－ｌａｓｔ}）は、最後の検出可能な濃度まで線形台形則を使用して計算した。バイオアベイラビリティ（Ｆ）は、ＩＶ及びＰＯ投薬後の用量正規化ＡＵＣ_{０－ｌａｓｔ}に基づいて計算した。

【0329】

薬物のＶｓｓは、薬物が血漿ではなく体組織に分布する程度を表す。Ｖｓｓは、組織に分布する薬物の量に正比例する。Ｖｓｓが高いほど、組織分布の量が多いことを示す。

【0330】

ＩＶ及びＰＯ投与後のＰＫパラメータの結果を表９に示す。

【表12】

【国際調査報告】