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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-20
(54)【発明の名称】シアノ化合物、その製造方法及び使用
(51)【国際特許分類】
C07D 495/10 20060101AFI20240912BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20240912BHJP
A61K 31/407 20060101ALI20240912BHJP
A61K 31/4439 20060101ALI20240912BHJP
C07D 491/113 20060101ALI20240912BHJP
A61K 31/427 20060101ALI20240912BHJP
【ＦＩ】
C07D495/10 CSP
A61P31/14
A61K31/407
A61K31/4439
C07D491/113
A61K31/427
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024518875
(86)(22)【出願日】2022-09-29
(85)【翻訳文提出日】2024-03-26
(86)【国際出願番号】 CN2022122384
(87)【国際公開番号】W WO2023051657
(87)【国際公開日】2023-04-06
(31)【優先権主張番号】202210973184.4
(32)【優先日】2022-08-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】202111168232.4
(32)【優先日】2021-09-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】507388845
【氏名又は名称】中国科学院上海薬物研究所
(71)【出願人】
【識別番号】520266513
【氏名又は名称】中国科学院武漢病毒研究所
(71)【出願人】
【識別番号】522052107
【氏名又は名称】海南先声薬業有限公司
(74)【代理人】
【識別番号】110001210
【氏名又は名称】弁理士法人ＹＫＩ国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】蒋 翔鋭
(72)【発明者】
【氏名】許 葉春
(72)【発明者】
【氏名】張 磊▲可▼
(72)【発明者】
【氏名】蘇 海霞
(72)【発明者】
【氏名】張 秋萌
(72)【発明者】
【氏名】趙 文峰
(72)【発明者】
【氏名】尚 衛娟
(72)【発明者】
【氏名】沈 敬山
(72)【発明者】
【氏名】肖 庚富
(72)【発明者】
【氏名】蒋 華良
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086AA04
4C086BC82
4C086CB27
4C086GA10
4C086GA16
4C086MA01
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZB33
4C086ZC20
(57)【要約】
式Ｉで示す化合物、そのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー及びその薬学的に許容される塩、ならびにコロナウイルス及び／又はピコルナウィルス感染に起因する関連疾患の予防又は治療におけるそれらの使用を提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
一般式（Ｉ）で示すシアノ化合物又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又は薬学的に許容される塩。【化1】
Ｒ１は、－ＣＯＲ８及び－ＳＯ２Ｒ９から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、アダマンチル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、３～８員の炭素環を形成し、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、
Ｙは存在しないか、又はＯ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルコキシ基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、及びハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基から選択され、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、
又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣ２～Ｃ６アルキレン基を形成し、それによりＸとＹを連結し、
Ｒ６は、
【化2】
Ｒ７は、ＨとＤから選択され、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ１～Ｃ１０アルコキシ基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、５～２０員ヘテロアリール基、及びハロゲン化５～２０員ヘテロアリール基から選択され、
Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、５～２０員ヘテロアリール基及びハロゲン化５～２０員ヘテロアリール基から選択され、
Ｒ１３及びＲ１４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基から選択され、
Ｒ１５及びＲ１６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基から選択される。）
【請求項2】
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、アダマンチル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、３～８員の炭素環を形成し、又は、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｈ、イソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、シクロペンチル基及びアダマンチル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、シクロプロピル基及びシクロペンチル基を形成し、又は、
Ｒ２及びＲ３のうちの一方がＨから選択され、他方がイソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、シクロペンチル基及びアダマンチル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、シクロプロピル基及びシクロペンチル基を形成する、請求項１に記載のシアノ化合物、又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー又は薬学的に許容される塩。
【請求項3】
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６～Ｃ１０アリール基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、及びハロゲン化Ｃ６～Ｃ１０アリール基から選択され、Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、
又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣ２～Ｃ６アルキレン基を形成し、それによりＸとＹを連結し、又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣＨ２ＣＨ２及びＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２を形成し、それによりＸとＹを連結する、請求項１又は２に記載のシアノ化合物、又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー又は薬学的に許容される塩。
【請求項4】
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ６～Ｃ１０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ１０アリール基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、５～１０員ヘテロアリール基及びハロゲン化５～１０員ヘテロアリール基から選択され、Ｒ１３及びＲ１４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基から選択され、又は、Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基、－ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、フェニル基、ハロゲン化フェニル基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたフェニル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたフェニル基及び５～６員ヘテロアリール基から選択され、Ｒ１３及びＲ１４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基から選択され、又は、
Ｒ８は、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３、ＣＦ２ＣＦ３、メトキシ基、
【化3】
【化4】
【化5】
Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ６～Ｃ１０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ１０アリール基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、５～１０員ヘテロアリール基及びハロゲン化５～１０員ヘテロアリール基から選択され、Ｒ１５及びＲ１６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基から選択され、又は、
Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、フェニル基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたフェニル基、及びハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたフェニル基から選択され、又は、
Ｒ９は、ＣＨ３、シクロプロピル基、フェニル基、ｐ－メチルフェニル基及びｐ－トリフルオロメチルフェニル基から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載のシアノ化合物又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又は薬学的に許容される塩。
【請求項5】
Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、Ｙは存在しないか、又はＯ、Ｓ及びＳ＝Ｏから選択され、Ｒ４は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基及びＣ６～Ｃ１０アリール基から選択され、Ｒ５はＨから選択され、又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣ２～Ｃ６アルキレン基を形成し、それによりＸとＹを連結し、又は、Ｘ、Ｙはそれぞれ独立して、Ｏ、Ｓ及びＳ＝Ｏから選択され、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣＨ２ＣＨ２及びＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２を形成し、それによりＸとＹを連結し、又は、
Ｘ、Ｙはそれぞれ独立して、Ｏ、Ｓから選択され、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣＨ２ＣＨ２を形成し、それによりＸとＹを連結する、請求項１～４のいずれか一項に記載のシアノ化合物又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又は薬学的に許容される塩。
【請求項6】
一般式Ｉで示すシアノ化合物は、一般式ＩＡで示すシアノ化合物から選択され、【化6】
【請求項7】
一般式Ｉで示すシアノ化合物は、下記一般式で示すシアノ化合物から選択され、【化7】
【請求項8】
一般式Ｉで示す化合物は、以下の化合物から選択される、請求項１に記載のシアノ化合物又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又は薬学的に許容される塩。【化8】
【化9】
【化10】
【化11】
【請求項9】
一般式Ｉで示す化合物の製造方法であって、方法ｉと方法ｉｉのうちの１つであり、前記方法ｉでは、
【化12】
好ましくは、前記ステップｉａ）において、式ＩＩで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、溶媒において、縮合剤及び塩基の作用下で、式ＩＩＩで示す化合物と０．１～１２ｈ反応させることにより、式ＩＶで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、酢酸エチル及び１，４－ジオキサンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ－メチルモルホリンであり、
ｉｂ）式ＩＶで示す化合物を脱水することにより一般式Ｉで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｂ）において、式ＩＶで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、無水溶媒において、脱水剤と１～２４ｈ反応させることにより、一般式Ｉで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記無水溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、トルエン、１，４－ジオキサン及びピリジンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記脱水剤は、無水トリフルオロ酢酸又はＮ－（トリエチルアンモニオスルホニル）カルバミン酸メチルであり、
前記方法ｉｉでは、
【化13】
好ましくは、前記ステップｉｉａ）おいて、式Ｖで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、溶媒において、縮合剤及び塩基の作用下で、式ＩＩＩで示す化合物と０．１～１２ｈ反応させることにより、式ＶＩで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、酢酸エチル及び１，４－ジオキサンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン及びＮ－メチルモルホリンであり、
任意選択的に、前記アミノ基の保護基ＰＧは、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジル基及びｐ－メトキシベンジル基であり、
ｉｉｂ）式ＶＩで示す化合物を脱保護して式ＶＩＩで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｂ）において、－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩで示す化合物を、トリフルオロ酢酸又は塩化水素の有機溶液又はＰｄ／Ｃ／Ｈ２と反応させて、式ＶＩＩで示す化合物を取得し、
ｉｉｃ）式ＶＩＩで示す化合物から、アミノアシル化、スルホニル化又は縮合反応により式ＩＶで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｃ）において、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、塩基の添加下でアシルクロリド又は酸無水物とアミノアシル化反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、スルホニルクロリド又はスルホン酸無水物と、塩基の条件下でスルホニル化反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、カルボキシ化合物と、縮合剤及び塩基の条件下で縮合反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン及びＮ－メチルモルホリンであり、
任意選択的に、前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
ｉｉｄ）式ＩＶで示す化合物を脱水することにより一般式Ｉで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｄ）において、式ＩＶで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、無水溶媒において、脱水剤と１～２４ｈ反応させることにより、一般式Ｉで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記無水溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、トルエン、１，４－ジオキサン及びピリジンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記脱水剤は、無水トリフルオロ酢酸又はＮ－（トリエチルアンモニオスルホニル）カルバミン酸メチルであり、
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｘ及びＹの定義は、請求項１～８のいずれか一項に記載の通りである、一般式Ｉで示す化合物の製造方法。
【請求項10】
請求項１～８のいずれか一項に記載のシアノ化合物、又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される補助材料とを含み、任意選択的に、さらにリトナビル又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項11】
請求項１～８のいずれか一項に記載のシアノ化合物、又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又は薬学的に許容される塩と、リトナビル又はその薬学的に許容される塩とを含む医薬組み合わせ。
【請求項12】
薬物の製造における請求項１～８のいずれか一項に記載のシアノ化合物、そのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー又はその薬学的に許容される塩、又は請求項１０に記載の医薬組成物又は請求項１１に記載の医薬組成物もしくは医薬組み合わせの使用であって、前記薬物は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ活性を阻害するための薬物、コロナウイルス感染を予防及び／又は治療するための薬物、ピコルナウィルスの３ＣＬプロテアーゼ活性を阻害するための薬物、及びピコルナウィルス感染を予防及び／又は治療するための薬物から選択され、任意選択的に、前記コロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、Ｈ２２９Ｅ－ＣｏＶ、ＨＫＵ１－ＣｏＶ、ＮＬ６３－ＣｏＶ、ＯＣ４３－ＣｏＶ及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２から選択される、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、２０２１年９月３０日に中国国家知識産権局に提出された、出願番号が２０２１１１１６８２３２．４であり、発明の名称が「シアノ化合物、その製造方法及び使用」である中国特許出願及び２０２２年の８月１５日に中国国家知的財産局に提出された、出願番号が２０２２１０９７３１８４．４であり、発明の名称が「シアノ化合物、その製造方法及び使用」である中国特許出願の優先権を主張する。上記先願の完全な開示は参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【0002】
本発明は、薬物化学及び化学合成の分野に属し、具体的には、本発明は、シアノ化合物、その製造方法及び使用に関する。
【背景技術】
【0003】
コロナウイルスは、一本鎖プラス鎖ＲＮＡウイルスであり、コロナウイルスの一部は、幅広い範囲で伝播し、重篤な症状を引き起こすことができる。現在知られているヒトに感染し得るコロナウイルスは７種類あり、それぞれＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。コロナウイルスの大多数の機能タンパク質は、ＯＲＦ １ａｂ遺伝子によってコードされ、まず１つのポリタンパク質に翻訳され、さらに３ＣＬプロテアーゼ及びＰＬプロテアーゼによって複数の活性タンパク質に切断されるため、３ＣＬプロテアーゼ活性を阻害すると、ウイルスの複製を効果的に阻害することができる。異なるコロナウイルス３ＣＬプロテアーゼは高度な構造相同性を有するため、３ＣＬプロテアーゼ阻害剤は広域スペクトル抗コロナウイルス活性を有する。
【0004】
コロナウイルス以外に、３ＣＬプロテアーゼは、ピコルナウィルスによってコードされるポリタンパク質の加水分解においても重要な役割を果たし、３ＣＬプロテアーゼ阻害剤は、ピコルナウィルスの複製を効果的に阻害することができる。エンテロウイルス７１は、ピコルナウィルスの一種であり、手足口病を引き起す一般的なウイルスの１つであり、髄膜炎、脳幹脳炎、心筋炎などの様々な疾患を引き起こす可能性もある。近年、エンテロウイルス７１は、乳幼児の集団において複数も急激に発生し、臨床的にも効率的な治療薬がまだない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
したがって、コロナウイルス／エンテロウイルス７１などのＲＮＡウイルス／ピコルナウィルスを阻害可能な化合物は依然として必要である。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本発明は、一般式（Ｉ）で示すシアノ化合物又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又は薬学的に許容される塩である。
（ここで、
Ｒ１は、－ＣＯＲ８及び－ＳＯ２Ｒ９から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、アダマンチル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、３～８員の炭素環を形成し、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、
Ｙは存在しないか、又はＯ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルコキシ基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、及びハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基から選択され、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、
又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣ２～Ｃ６アルキレン基を形成し、それによりＸとＹを連結し、
Ｒ６は、
から選択され、
Ｒ７は、ＨとＤから選択され、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ１～Ｃ１０アルコキシ基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、５～２０員ヘテロアリール基、及びハロゲン化５～２０員ヘテロアリール基から選択され、
Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、５～２０員ヘテロアリール基及びハロゲン化５～２０員ヘテロアリール基から選択され、
Ｒ１３及びＲ１４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基から選択され、
Ｒ１５及びＲ１６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基から選択される。）
【化1】
Ｒ１は、－ＣＯＲ８及び－ＳＯ２Ｒ９から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、アダマンチル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、３～８員の炭素環を形成し、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、
Ｙは存在しないか、又はＯ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルコキシ基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、及びハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基から選択され、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、
又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣ２～Ｃ６アルキレン基を形成し、それによりＸとＹを連結し、
Ｒ６は、
【化2】
Ｒ７は、ＨとＤから選択され、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ１～Ｃ１０アルコキシ基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、５～２０員ヘテロアリール基、及びハロゲン化５～２０員ヘテロアリール基から選択され、
Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、５～２０員ヘテロアリール基及びハロゲン化５～２０員ヘテロアリール基から選択され、
Ｒ１３及びＲ１４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基から選択され、
Ｒ１５及びＲ１６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基から選択される。）
【0007】
本発明は、一般式Ｉで示す化合物の製造方法であって、方法ｉと方法ｉｉのうちの１つであり、
前記方法ｉでは、
ｉａ）式ＩＩで示す化合物と式ＩＩＩで示す化合物から縮合反応により式ＩＶで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉａ）において、式ＩＩで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、溶媒において、縮合剤及び塩基の作用下で、式ＩＩＩで示す化合物と０．１～１２ｈ反応させることにより、式ＩＶで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、酢酸エチル及び１，４－ジオキサンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ－メチルモルホリンであり、
ｉｂ）式ＩＶで示す化合物を脱水することにより一般式Ｉで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｂ）において、式ＩＶで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、無水溶媒において、脱水剤と１～２４ｈ反応させることにより、一般式Ｉで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記無水溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、トルエン、１，４－ジオキサン及びピリジンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記脱水剤は、無水トリフルオロ酢酸又はＮ－（トリエチルアンモニオスルホニル）カルバミン酸メチルであり、
前記方法ｉｉでは、
ｉｉａ）式Ｖで示す化合物と式ＩＩＩで示す化合物を縮合させることで、式ＶＩで示す化合物を取得し、ここで、式Ｖで示す化合物中のＰＧはアミノ基の保護基であり、
好ましくは、前記ステップｉｉａ）おいて、式Ｖで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、溶媒において、縮合剤及び塩基の作用下で、式ＩＩＩで示す化合物と０．１～１２ｈ反応させることにより、式ＶＩで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、酢酸エチル及び１，４－ジオキサンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン及びＮ－メチルモルホリンであり、
任意選択的に、前記アミノ基の保護基ＰＧは、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジル基及びｐ－メトキシベンジル基であり、
ｉｉｂ）式ＶＩで示す化合物を脱保護して式ＶＩＩで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｂ）において、－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩで示す化合物を、トリフルオロ酢酸又は塩化水素の有機溶液又はＰｄ／Ｃ／Ｈ２と反応させて、式ＶＩＩで示す化合物を取得し、
ｉｉｃ）式ＶＩＩで示す化合物から、アミノアシル化、スルホニル化又は縮合反応により式ＩＶで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｃ）において、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、塩基の添加下でアシルクロリド又は酸無水物とアミノアシル化反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、スルホニルクロリド又はスルホン酸無水物と、塩基の条件下でスルホニル化反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、カルボキシ化合物と、縮合剤及び塩基の条件下で縮合反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン及びＮ－メチルモルホリンであり、
任意選択的に、前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
ｉｉｄ）式ＩＶで示す化合物を脱水することにより一般式Ｉで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｄ）において、式ＩＶで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、無水溶媒において、脱水剤と１～２４ｈ反応させることにより、一般式Ｉで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記無水溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、トルエン、１，４－ジオキサン及びピリジンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記脱水剤は、無水トリフルオロ酢酸又はＮ－（トリエチルアンモニオスルホニル）カルバミン酸メチルであり、
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｘ及びＹの定義は、上記に記載の通りである、一般式Ｉで示す化合物の製造方法である。
前記方法ｉでは、
【化3】
好ましくは、前記ステップｉａ）において、式ＩＩで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、溶媒において、縮合剤及び塩基の作用下で、式ＩＩＩで示す化合物と０．１～１２ｈ反応させることにより、式ＩＶで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、酢酸エチル及び１，４－ジオキサンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ－メチルモルホリンであり、
ｉｂ）式ＩＶで示す化合物を脱水することにより一般式Ｉで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｂ）において、式ＩＶで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、無水溶媒において、脱水剤と１～２４ｈ反応させることにより、一般式Ｉで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記無水溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、トルエン、１，４－ジオキサン及びピリジンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記脱水剤は、無水トリフルオロ酢酸又はＮ－（トリエチルアンモニオスルホニル）カルバミン酸メチルであり、
前記方法ｉｉでは、
【化4】
好ましくは、前記ステップｉｉａ）おいて、式Ｖで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、溶媒において、縮合剤及び塩基の作用下で、式ＩＩＩで示す化合物と０．１～１２ｈ反応させることにより、式ＶＩで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、酢酸エチル及び１，４－ジオキサンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン及びＮ－メチルモルホリンであり、
任意選択的に、前記アミノ基の保護基ＰＧは、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジル基及びｐ－メトキシベンジル基であり、
ｉｉｂ）式ＶＩで示す化合物を脱保護して式ＶＩＩで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｂ）において、－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩで示す化合物を、トリフルオロ酢酸又は塩化水素の有機溶液又はＰｄ／Ｃ／Ｈ２と反応させて、式ＶＩＩで示す化合物を取得し、
ｉｉｃ）式ＶＩＩで示す化合物から、アミノアシル化、スルホニル化又は縮合反応により式ＩＶで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｃ）において、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、塩基の添加下でアシルクロリド又は酸無水物とアミノアシル化反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、スルホニルクロリド又はスルホン酸無水物と、塩基の条件下でスルホニル化反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、カルボキシ化合物と、縮合剤及び塩基の条件下で縮合反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン及びＮ－メチルモルホリンであり、
任意選択的に、前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
ｉｉｄ）式ＩＶで示す化合物を脱水することにより一般式Ｉで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｄ）において、式ＩＶで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、無水溶媒において、脱水剤と１～２４ｈ反応させることにより、一般式Ｉで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記無水溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、トルエン、１，４－ジオキサン及びピリジンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記脱水剤は、無水トリフルオロ酢酸又はＮ－（トリエチルアンモニオスルホニル）カルバミン酸メチルであり、
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｘ及びＹの定義は、上記に記載の通りである、一般式Ｉで示す化合物の製造方法である。
【0008】
本発明は、上記に記載のシアノ化合物、又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される補助材料とを含み、任意選択的に、さらにリトナビル又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物である。
【0009】
本発明は、上記に記載のシアノ化合物、又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又は薬学的に許容される塩と、リトナビル又はその薬学的に許容される塩とを含む医薬組み合わせである。
【0010】
本発明は、薬物の製造における上記に記載のシアノ化合物、そのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー又はその薬学的に許容される塩、又は上記に記載の医薬組成物又は上記に記載の医薬組成物もしくは医薬組み合わせの使用であって、前記薬物は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ活性を阻害するための薬物、コロナウイルス感染を予防及び／又は治療するための薬物、ピコルナウィルスの３ＣＬプロテアーゼ活性を阻害するための薬物、及びピコルナウィルス感染を予防及び／又は治療するための薬物から選択され、任意選択的に、前記コロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、Ｈ２２９Ｅ－ＣｏＶ、ＨＫＵ１－ＣｏＶ、ＮＬ６３－ＣｏＶ、ＯＣ４３－ＣｏＶ及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２から選択される、使用である。
【図面の簡単な説明】
【0011】
【図1】化合物２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＷＩＶ０４株に対するインビトロ活性阻害率－濃度を示す図である。
【図2】化合物２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＢ．１．３５１株に対するインビトロ活性阻害率－濃度を示す図である。
【図4】実施例２６におけるマウスの体重変化図である。
【図5】実施例２６における感染４日後のマウスの脳のウイルス力価に対する化合物２による阻害効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0012】
発明者らは、３ＣＬプロテアーゼの結晶構造に基づいて、コロナウイルス及び／又はピコルナウィルスの３ＣＬプロテアーゼ活性を効果的に阻害することができ、インビトロで、エンテロウイルス７１を含む複数種類のピコルナウィルスの３ＣＬプロテアーゼ活性を効果的に阻害でき、細胞レベルでピコルナウィルスの複製を効果的に阻害でき、コロナウイルス及び／又はピコルナウィルスにより誘発される疾患の薬物の製造に使用できるシアノ化合物を合理的に設計した。発明者はこれに基き本開示を完成するに至った。
【0013】
本発明の第１の目的は、一般式Ｉで示すシアノ化合物、そのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー及びその薬学的に許容される塩を提供することである。
【0014】
本発明の第２の目的は、このような化合物の製造方法を提供することである。
【0015】
本発明の第３の目的は、このような化合物を含む医薬組成物を提供することである。
【0016】
本発明の第４の目的は、３ＣＬプロテアーゼ阻害剤の製造におけるこのような化合物の使用である。
【0017】
本発明の第５の目的は、コロナウイルス及び／又はピコルナウィルスにより誘発される疾患を予防又は治療する薬物の製造におけるこのような化合物の使用である。
【0018】
上記目的を達成するために、本発明の技術的解決手段は以下のとおりである。
【0019】
一態様では、本発明は、一般式Ｉで示すシアノ化合物、そのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー及びその薬学的に許容される塩を提供する。
【化5】
【0020】
別の態様では、本発明は、一般式Ｉの化合物の製造方法を提供する。
【0021】
本発明の技術的解決手段は、少なくとも以下の技術的効果を有する。
【0022】
本発明の化合物は、３ＣＬプロテアーゼ阻害活性を有し、コロナウイルス及びピコルナウィルスの遺伝子によって発現されるタンパク質複合体の加水分解を阻害し、さらにウイルスの複製及び進行を阻害し、コロナウイルス又はピコルナウィルス感染による疾患の予防及び治療に用いることができる。
【0023】
本発明は、一般式Ｉで示すシアノ化合物、そのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー又は薬学的に許容される塩に関し、
ここで、
Ｒ１は、－ＣＯＲ８及び－ＳＯ２Ｒ９から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、アダマンチル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、３～８員の炭素環を形成し、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、
Ｙは存在しないか、又はＯ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルコキシ基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、及びハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基から選択され、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、
又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣ２－Ｃ６アルキレン基を形成し、それによりＸとＹを連結し、
Ｒ６は、
から選択され、
Ｒ７は、ＨとＤから選択され、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ１～Ｃ１０アルコキシ基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、５～２０員ヘテロアリール基、及びハロゲン化５～２０員ヘテロアリール基から選択され、
Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、５～２０員ヘテロアリール基及びハロゲン化５～２０員ヘテロアリール基から選択され、
Ｒ１３及びＲ１４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基から選択され、
Ｒ１５及びＲ１６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基から選択される。
【化6】
Ｒ１は、－ＣＯＲ８及び－ＳＯ２Ｒ９から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、アダマンチル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、３～８員の炭素環を形成し、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、
Ｙは存在しないか、又はＯ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルコキシ基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、及びハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基から選択され、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、
又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣ２－Ｃ６アルキレン基を形成し、それによりＸとＹを連結し、
Ｒ６は、
【化7】
Ｒ７は、ＨとＤから選択され、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ１～Ｃ１０アルコキシ基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、５～２０員ヘテロアリール基、及びハロゲン化５～２０員ヘテロアリール基から選択され、
Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、５～２０員ヘテロアリール基及びハロゲン化５～２０員ヘテロアリール基から選択され、
Ｒ１３及びＲ１４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基から選択され、
Ｒ１５及びＲ１６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基から選択される。
【0024】
いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、アダマンチル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、３～８員の炭素環を形成する。
【0025】
いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｈ、イソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、シクロペンチル基及びアダマンチル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、シクロプロピル基及びシクロペンチル基を形成する。
【0026】
いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ３のうちの一方がＨから選択され、他方がイソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、シクロペンチル基及びアダマンチル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、シクロプロピル基及びシクロペンチル基を形成する。
【0027】
いくつかの実施形態において、Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６～Ｃ１０アリール基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、及びハロゲン化Ｃ６～Ｃ１０アリール基から選択され、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、
又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣ２～Ｃ６アルキレン基を形成し、それによりＸとＹを連結する。
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、
又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣ２～Ｃ６アルキレン基を形成し、それによりＸとＹを連結する。
【0028】
いくつかの実施形態において、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、Ｙは存在しないか、又はＯ、Ｓ及びＳ＝Ｏから選択され、Ｒ４は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基及びＣ６～Ｃ１０アリール基から選択され、Ｒ５はＨから選択され、又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣ２～Ｃ６アルキレン基を形成し、それによりＸとＹを連結する。
【0029】
いくつかの実施形態において、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣＨ２ＣＨ２及びＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２を形成し、それによりＸとＹを連結する。
【0030】
いくつかの実施形態において、Ｘ、Ｙはそれぞれ独立して、Ｏ、Ｓ及びＳ＝Ｏから選択され、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣＨ２ＣＨ２及びＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２を形成し、それによりＸとＹを連結する。
【0031】
いくつかの実施形態において、Ｘ、Ｙはそれぞれ独立して、Ｏ、Ｓから選択され、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣＨ２ＣＨ２を形成し、それによりＸとＹを連結する。
【0032】
いくつかの実施形態において、Ｘ、ＹはいずれもＳから選択され、又は、Ｘ、ＹはいずれもＯから選択され、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣＨ２ＣＨ２を形成し、それによりＸとＹを連結する。
【0033】
いくつかの実施形態において、ＸはＳから選択され、Ｙは存在せず、Ｒ４はフェニル基及びイソプロピル基から選択され、Ｒ５はＨから選択される。
【0034】
いくつかの実施形態において、Ｒ６は
から選択される。
【化8】
【0035】
いくつかの実施形態において、Ｒ７はＨから選択される。
【0036】
いくつかの実施形態において、Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ６～Ｃ１０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ１０アリール基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、５～１０員ヘテロアリール基及びハロゲン化５～１０員ヘテロアリール基から選択される。
【0037】
いくつかの実施形態において、Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基、－ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、フェニル基、ハロゲン化フェニル基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたフェニル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたフェニル基、及び５～６員ヘテロアリール基から選択される。
【0038】
いくつかの実施形態において、Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ６～Ｃ１０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ１０アリール基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、５～１０員ヘテロアリール基、及びハロゲン化５～１０員ヘテロアリール基から選択される。
【0039】
いくつかの実施形態において、Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、フェニル基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたフェニル基、及びハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたフェニル基から選択される。
【0040】
いくつかの実施形態において、Ｒ１３及びＲ１４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基から選択される。
【0041】
いくつかの実施形態において、Ｒ１５及びＲ１６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基から選択される。
【0042】
いくつかの実施形態において、Ｒ８は、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３、ＣＦ２ＣＦ３、メトキシ基、
シクロプロピル基、
フェニル基、
及びピリジン－３－イルから選択される。
【化9】
【化10】
【化11】
【0043】
いくつかの実施形態において、Ｒ９は、ＣＨ３、シクロプロピル基、フェニル基、ｐ－メチルフェニル基及びｐ－トリフルオロメチルフェニル基から選択される。
【0044】
いくつかの実施形態において、一般式Ｉで示すシアノ化合物は、一般式ＩＡで示すシアノ化合物から選択され、
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｘ及びＹは、上記で定義されたとおりである。
【化12】
【0045】
いくつかの実施形態において、一般式Ｉで示すシアノ化合物は一般式ＩＢで示すシアノ化合物から選択され、
ここで、各置換基の定義は上記のとおりである。
【化13】
【0046】
いくつかの実施形態において、一般式Ｉで示すシアノ化合物は、以下の一般式で示すシアノ化合物から選択されるいずれか１つであり、
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ６は、上記で定義されたとおりである。
【化14】
【0047】
いくつかの実施形態において、本発明の一般式Ｉで示す化合物は、以下の化合物から選択される。
【化15】
【化16】
【化17】
【化18】
【0048】
本発明は、一般式Ｉで示す化合物を製造する方法を提供し、前記方法は、以下の方法ｉと方法ｉｉのうちの１つである。
【0049】
方法ｉ：
ｉａ）式ＩＩで示す化合物と式ＩＩＩで示す化合物から縮合反応により式ＩＶで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉａ）において、式ＩＩで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、溶媒において、縮合剤及び塩基の作用下で、式ＩＩＩで示す化合物と０．１～１２ｈ反応させることにより、式ＩＶで示す化合物を取得し、
ここで、前記溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、酢酸エチル及び１，４－ジオキサンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン及びＮ－メチルモルホリンであり、
ｉｂ）式ＩＶで示す化合物を脱水することにより一般式Ｉで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｂ）において、式ＩＶで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、無水溶媒において、脱水剤と１～２４ｈ反応させることにより、一般式Ｉで示す化合物を取得し、
ここで、前記無水溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、トルエン、１，４－ジオキサン及びピリジンのうちの１種又は複数種の混合であり、
前記脱水剤は、無水トリフルオロ酢酸、Ｎ－（トリエチルアンモニオスルホニル）カルバミン酸メチルであり、
方法ｉｉ：
ｉｉａ）式Ｖで示す化合物と式ＩＩＩで示す化合物を縮合させることで、式ＶＩで示す化合物を取得し、ここで、式Ｖで示す化合物中のＰＧはアミノ基の保護基であり、
好ましくは、前記ステップｉｉａにおいて、式Ｖで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、溶媒において、縮合剤及び塩基の作用下で、式ＩＩＩで示す化合物と０．１～１２ｈ反応させることにより、式ＶＩで示す化合物を取得し、
ここで、前記溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、酢酸エチル及び１，４－ジオキサンのうちの１種又は複数種の混合であり、
前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン及びＮ－メチルモルホリンであり、
前記アミノ基の保護基ＰＧは、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジル基及びｐ－メトキシベンジル基であり、
ｉｉｂ）式ＶＩで示す化合物を脱保護して式ＶＩＩで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｂ）において、－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩで示す化合物を、トリフルオロ酢酸又は塩化水素の有機溶液又はＰｄ／Ｃ／Ｈ２と反応させて、式ＶＩＩで示す化合物を取得し、
ｉｉｃ）式ＶＩＩで示す化合物から、アミノアシル化、スルホニル化又は縮合反応により式ＩＶで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｃ）において、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、塩基の添加下でアシルクロリド又は酸無水物とアミノアシル化反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、又は、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、スルホニルクロリド又はスルホン酸無水物と、塩基の条件下でスルホニル化反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、又は、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、カルボキシ化合物と、縮合剤及び塩基の条件下で縮合反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン及びＮ－メチルモルホリンであり、
任意選択的に、前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
ｉｉｄ）式ＩＶで示す化合物を脱水することにより一般式Ｉで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｄ）において、式ＩＶで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、無水溶媒において、脱水剤と１～２４ｈ反応させることにより、一般式Ｉで示す化合物を取得し、
ここで、前記無水溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、トルエン、１，４－ジオキサン及びピリジンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記脱水剤は、無水トリフルオロ酢酸、Ｎ－（トリエチルアンモニオスルホニル）カルバミン酸メチルであり、
ここで、各置換基の定義は上記のとおりである。
【化19】
好ましくは、前記ステップｉａ）において、式ＩＩで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、溶媒において、縮合剤及び塩基の作用下で、式ＩＩＩで示す化合物と０．１～１２ｈ反応させることにより、式ＩＶで示す化合物を取得し、
ここで、前記溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、酢酸エチル及び１，４－ジオキサンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン及びＮ－メチルモルホリンであり、
ｉｂ）式ＩＶで示す化合物を脱水することにより一般式Ｉで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｂ）において、式ＩＶで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、無水溶媒において、脱水剤と１～２４ｈ反応させることにより、一般式Ｉで示す化合物を取得し、
ここで、前記無水溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、トルエン、１，４－ジオキサン及びピリジンのうちの１種又は複数種の混合であり、
前記脱水剤は、無水トリフルオロ酢酸、Ｎ－（トリエチルアンモニオスルホニル）カルバミン酸メチルであり、
方法ｉｉ：
【化20】
好ましくは、前記ステップｉｉａにおいて、式Ｖで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、溶媒において、縮合剤及び塩基の作用下で、式ＩＩＩで示す化合物と０．１～１２ｈ反応させることにより、式ＶＩで示す化合物を取得し、
ここで、前記溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド、酢酸エチル及び１，４－ジオキサンのうちの１種又は複数種の混合であり、
前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン及びＮ－メチルモルホリンであり、
前記アミノ基の保護基ＰＧは、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、ベンジル基及びｐ－メトキシベンジル基であり、
ｉｉｂ）式ＶＩで示す化合物を脱保護して式ＶＩＩで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｂ）において、－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩで示す化合物を、トリフルオロ酢酸又は塩化水素の有機溶液又はＰｄ／Ｃ／Ｈ２と反応させて、式ＶＩＩで示す化合物を取得し、
ｉｉｃ）式ＶＩＩで示す化合物から、アミノアシル化、スルホニル化又は縮合反応により式ＩＶで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｃ）において、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、塩基の添加下でアシルクロリド又は酸無水物とアミノアシル化反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、又は、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、スルホニルクロリド又はスルホン酸無水物と、塩基の条件下でスルホニル化反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、又は、
－２０℃～５０℃の温度下で、式ＶＩＩで示す化合物を、カルボキシ化合物と、縮合剤及び塩基の条件下で縮合反応させて、式ＩＶで示す化合物を取得し、
任意選択的に、前記塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン及びＮ－メチルモルホリンであり、
任意選択的に、前記縮合剤は、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、２－ヒドロキシピリジンＮ－オキシド、プロピルホスホン酸無水物、１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロりん酸塩、１，１’－カルボニルジイミダゾール及びＯ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩のうちの１種又は複数種の混合であり、
ｉｉｄ）式ＩＶで示す化合物を脱水することにより一般式Ｉで示す化合物を取得し、
好ましくは、前記ステップｉｉｄ）において、式ＩＶで示す化合物を、－２０℃～５０℃の温度下で、無水溶媒において、脱水剤と１～２４ｈ反応させることにより、一般式Ｉで示す化合物を取得し、
ここで、前記無水溶媒は、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、トルエン、１，４－ジオキサン及びピリジンのうちの１種又は複数種の混合であり、
任意選択的に、前記脱水剤は、無水トリフルオロ酢酸、Ｎ－（トリエチルアンモニオスルホニル）カルバミン酸メチルであり、
ここで、各置換基の定義は上記のとおりである。
【0050】
本発明の別の態様は、一般式Ｉのシアノ化合物、そのラセミ体、エナンチオマー及びジアステレオマー、並びにそれらの薬学的に許容される塩のうちの１種又は複数種を含む医薬組成物をさらに提供する。前記医薬組成物は、１種又は複数種の薬学的に許容される補助材料、希釈剤、担体、賦形剤又はアジュバントをさらに含んでもよい。
【0051】
本発明の別の態様は、一般式Ｉのシアノ化合物、又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される補助材料とを含む医薬組成物をさらに提供し、任意選択的に、前記医薬組成物は、さらにリトナビル又はその薬学的に許容される塩を含む。
【0052】
本発明の別の態様は、一般式Ｉのシアノ化合物、そのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー又は薬学的に許容される塩と、リトナビル又はその薬学的に許容される塩と、を含む医薬組み合わせをさらに提供する。
【0053】
本発明の別の態様は、一般式Ｉのシアノ化合物又はその薬学的に許容される塩、リトナビル又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される補助材料を含む医薬組成物をさらに提供する。
【0054】
実験により、本発明の化合物はコロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ及びピコルナウィルス３ＣＬプロテアーゼに対する阻害活性を有することが証明された。
【0055】
したがって、本発明のさらに別の態様は、一般式Ｉのシアノ化合物、そのラセミ体、エナンチオマー及びジアステレオマー、並びにそれらの薬学的に許容される塩から選択される１種又は複数種、又は上記医薬組成物を含むコロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ阻害剤及び／又はピコルナウィルス３ＣＬプロテアーゼ阻害剤を提供する。
【0056】
本発明はさらに、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ活性を阻害するための薬物、コロナウイルス感染を予防及び／又は治療するための薬物、ピコルナウィルスの３ＣＬプロテアーゼ活性を阻害するための薬物、及びピコルナウィルス感染を予防及び／又は治療するための薬物の製造における上記シアノ化合物、そのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、その薬学的に許容される塩、又はそれらの混合物、又は上記医薬組成物の使用を提供する。
【0057】
本発明はさらに、本発明による一般式Ｉのシアノ化合物、そのラセミ体、エナンチオマー及びジアステレオマー、並びにそれらの薬学的に許容される塩から選択される１種又は複数種、又は本発明による医薬組成物を、処置が必要な対象に投与することを含む、３ＣＬプロテアーゼを阻害する方法を提供する。
【0058】
本発明はさらに、疾患又は病症を予防及び／又は治療する方法であって、本発明による一般式Ｉのシアノ化合物、そのラセミ体、エナンチオマー及びジアステレオマー、並びにそれらの薬学的に許容される塩から選択される１種又は複数種、又は本発明による医薬組成物を、治療が必要な対象に投与すること含み、前記疾患又は病症は、３ＣＬプロテアーゼ媒介性疾患又は病症、特にコロナウイルス感染及び／又はピコルナウィルス感染に関連する疾患又は病症である、方法を提供する。
【0059】
本発明はさらに、コロナウイルス及び／又はピコルナウィルス感染に起因する関連疾患を予防又は治療する薬物の製造における、上記一般式Ｉで示すシアノ化合物、そのラセミ体、エナンチオマー及びジアステレオマー、並びにそれらの薬学的に許容される塩のうちの１種又は複数種、又はその医薬組成物の使用を提供する。
【0060】
本発明はさらに、コロナウイルス及び／又はピコルナウィルス感染に起因する関連疾患を予防又は治療する方法であって、本発明の一般式Ｉで示すシアノ化合物、そのラセミ体、エナンチオマー及びジアステレオマー、並びにそれらの薬学的に許容される塩のうちの１種又は複数種を含む医薬製剤を治療有効量で患者に投与することを含む、方法を提供する。
【0061】
いくつかの実施形態において、前記コロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、Ｈ２２９Ｅ－ＣｏＶ、ＨＫＵ１－ＣｏＶ、ＮＬ６３－ＣｏＶ、ＯＣ４３－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２から選択される。
【0062】
いくつかの実施形態において、前記コロナウイルス感染に起因する関連疾患は、気道感染、肺炎又はその合併症から選択される。
【0063】
［用語の定義及び説明］
「Ｃ１～Ｃ１０アルキル基」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖飽和炭化水素基を表す。前記アルキル基の具体的な例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、イソペンチル基、２－メチルブチル基、１－メチルブチル基、１－エチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、ネオペンチル基、１，１－ジメチルプロピル基、４－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、１－メチルペンチル基、２－エチルブチル基、１－エチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、１，１－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基又は１，２－ジメチルブチル基などが挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ１～Ｃ６アルキル基」は、１～６個の炭素原子を含有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基を表し、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基などを含むが、これらに限定されない。
「Ｃ１～Ｃ１０アルキル基」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖飽和炭化水素基を表す。前記アルキル基の具体的な例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、イソペンチル基、２－メチルブチル基、１－メチルブチル基、１－エチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、ネオペンチル基、１，１－ジメチルプロピル基、４－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、１－メチルペンチル基、２－エチルブチル基、１－エチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、１，１－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基又は１，２－ジメチルブチル基などが挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ１～Ｃ６アルキル基」は、１～６個の炭素原子を含有する直鎖又は分岐鎖のアルキル基を表し、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基などを含むが、これらに限定されない。
【0064】
「アルキレン基」とは、直鎖又は分岐鎖の二価の飽和炭化水素基を表すと理解してもよい。「Ｃ２～Ｃ６アルキレン基」は、２～６個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖の二価の飽和炭化水素基と理解してもよく、ＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２又はＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２などを含むが、これらに限定されない。
【0065】
「Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基」は、３～８個の環炭素原子を含有する環状アルキル基を表す。「Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基」は、３～７個の環炭素原子を含有する環状アルキル基を表し、本開示のシクロアルキル基は、シクロプロピル基、メチルシクロプロピル基、エチルシクロプロピル基、ジメチルシクロプロピル基、シクロブチル基、メチルシクロブチル基、エチルシクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基などを含むが、これらに限定されない。
【0066】
「Ｃ１～Ｃ１０アルコキシ基」は、１～１０個の炭素原子を含有する直鎖、分岐鎖又は環状のアルコキシ基を表す。「Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基」は、１～６個の炭素原子を含有する直鎖、分岐鎖又は環状のアルコキシ基を表し、本開示のアルコキシ基は、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、イソブトキシ基、ｔｅｒｔ－ブトキシ基、ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、シクロペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基などを含むが、これらに限定されない。
【0067】
「アリール基」という用語は、共役π電子系を有し、且つ全ての環原子が炭素である、単環式又は縮合多環式芳香族環式基を指す。アリール基は、６～２０個の炭素原子、６～１４個の炭素原子又は６～１２個の炭素原子を有することがある。「Ｃ６～Ｃ２０アリール基」は、６～２０個の炭素原子を有するアリール基と理解してもよい。特に、６個の炭素原子を有する環（「Ｃ６アリール基」）、例えば、フェニル基、又は、９個の炭素原子を有する環（「Ｃ９アリール基」）、例えば、インダニル基又はインデニル基、又は１０個の炭素原子を有する環（「Ｃ１０アリール基」）、例えば、テトラリニル基、ジヒドロナフチル基又はナフチル基、又は、１３個の炭素原子を有する環（「Ｃ１３アリール基」）、例えば、フルオレニル基、又は、１４個の炭素原子を有する環（「Ｃ１４アリール基」）、例えば、アントリル基である。「Ｃ６～Ｃ１０アリール基」は、６～１０個の炭素原子を有するアリール基と理解してもよい。特に、６個の炭素原子を有する環（「Ｃ６アリール基」）、例えば、フェニル基、又は、９個の炭素原子を有する環（「Ｃ９アリール基」）、例えば、インダニル基又はインデニル基、又は１０個の炭素原子を有する環（「Ｃ１０アリール基」）、例えば、テトラリニル基、ジヒドロナフチル基又はナフチル基である。
【0068】
「ヘテロアリール基」は、芳香性を有する環基であり、５～２０個の環原子を含有し、そのうち１つ又は複数の環原子は、Ｎ、Ｏ又はＳから選ばれるヘテロ原子であり、残りの環原子は炭素である。「５～２０員ヘテロアリール基」は、５～２０個の環原子を有し、特に５又は６又は９又は１０又は１３又は１４個の環原子を有し、かつ、独立してＮ、Ｏ及びＳから選択される１～７個のヘテロ原子を含むヘテロアリール基として理解してもよい。「５～１０員ヘテロアリール基」は、５～１０個の環原子を有し、特に５又は６又は９又は１０個の環原子を有し、かつ、独立してＮ、Ｏ及びＳから選択される１～５個のヘテロ原子を含むヘテロアリール基として理解してもよい。「５～６員ヘテロアリール基」は、５又は６個の環原子を有し、かつ、独立してＮ、Ｏ及びＳから選択される１～３個のヘテロ原子を含むヘテロアリール基として理解してもよい。本発明に係るヘテロアリール基は、チエニル基、フリル基、ピロリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、イソオキサゾリル基、イソチアゾリル基、オキサジアゾリル基、トリアゾリル基又はチアジアゾリル基など及びこれらのベンゾ誘導体、例えばベンゾフリル基、ベンゾチエニル基、ベンゾチアゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、ベンゾイソオキサゾリル基、ベンズイミダゾリル基、ベンゾトリアゾリル基、インダゾリル基、インドリル基又はイソインドリル基などから選択され、又は、ピリジル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基若しくはトリアジニル基など、及びそれらのベンゾ誘導体、例えば、キノリル基、キナゾリニル基、若しくはイソキノリル基などから選択され、又は、アゾシニル基、インドリジニル基、プリニル基など及びそれらのベンゾ誘導体から選択され、又は、シンノリニル基、フタラジニル基、キナゾリニル基、キノキサリニル基、ナフチリジニル基、プテニジニル基、カルバゾリル基、アクリジニル基、フェノキサジニル基、フェノチアジニル基又はフェノキサジニル基などから選択される。
【0069】
「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素から選択される。
【0070】
「ハロゲン化」は、モノハロゲン化、ポリハロゲン化又はペルハロゲン化、すなわち、１つ、複数又は全ての水素原子がハロゲンで置換されていることを含む。
【0071】
「置換」とは、基上の１又は複数の水素原子が１又は複数の置換基で置換されることを意味する。
【0072】
「任意選択」又は「任意選択的に」という用語は、その後に記載する事項又は状況が発生する場合も発生しない場合もあるということを意味し、該記載には、上記事項又は状況が発生する場合と、上記事象又は状況が発生しない場合とが含まれる。
【0073】
「治療有効量」は、（ｉ）特定の疾患、病態又は障害を治療し、（ｉｉ）特定の疾患、病態又は障害の１種又は複数種の症状を軽減、改善又は解消し、又は（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、病態又は障害の１種又は複数種の症状の発症を遅延させる本発明の化合物の使用量を意味する。「治療有効量」となる本発明化合物の量は、当該化合物、疾患状態及びその重篤性、投与形態及び治療される哺乳動物の年齢によって変わるが、当業者が常例のようにそれ自体の知識及び本開示の内容に基づいて決定することができる。
【0074】
「薬学的に許容される塩」とは、薬学的に許容される酸又は塩基の塩であり、化合物と無機酸又は有機酸とで形成した塩、及び化合物と無機塩基又は有機塩基とで形成した塩を含む。
【0075】
「医薬組み合わせ」という用語は、２種以上の活性成分又はその薬学的に許容される塩を含む組み合わせである。本発明のいくつかの実施形態において、前記医薬組み合わせ中の活性成分又はその薬学的に許容される塩は、同時に投与されてもよく、本発明のいくつかの実施形態において、前記医薬組成物中の活性成分又はその薬学的に許容される塩は、個別に又は連続的に投与されてもよい。
【0076】
「医薬組成物」とは、本発明の１種又は複数種の化合物又はその塩と、薬学的に許容される補助材料との混合物を指す。医薬組成物の目的は、有機体に本発明の化合物を与えることを容易にすることである。
【0077】
「薬学的に許容される補助材料」とは、有機体に対して明らかな刺激作用がなく、かつ、該活性化合物の生物学的活性及び性能を損なうことがない補助材料を指す。適切な補助材料は、当業者に周知の、例えば、炭水化物、ワックス、水溶性及び／又は水で膨張可能なポリマー、親水性又は疎水性材料、ゼラチン、油、溶媒、水等である。
【実施例】
【0078】
以下、実施例により本開示をさらに説明する。以下の実施例において、原料は市販から購入可能であり、又は文献に記載されている方法／本分野で知られている有機合成方法で作製することができる。
【0079】
＜実施例１＞
化合物１－１の調製：
化合物１－１の調製：
【化21】
【0080】
ステップ１：出発原料ＳＭＡ（２．７４ｇ、１１．８５ｍｍｏｌ）、３５ｍｌのジクロロメタン及び３５ｍｌのＤＭＦを反応フラスコに入れ、０℃まで降温し、出発原料ＳＭＢ（３．５６ｇ、１１．８６ｍｍｏｌ）、ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリ（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ、６．２９ｇ、１４．２２ｍｍｏｌ）及びＮ－メチルモルホリン（ＮＭＭ、３．９１ｍｌ、３５．５６ｍｍｏｌ）を順次添加し、室温まで昇温して１０ｈ反応させ、反応終了後、適量のジクロロメタンを添加し、有機相を順に１Ｎ塩酸水溶液、飽和食塩水で洗浄し、洗浄終了後、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、有機相を乾燥まで濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより３．７１ｇのＩＮＴ－１を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：４３３．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δＨ：６．７５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２５（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），４．１１（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．９３（ｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），３．４０－３．３１（ｍ，４Ｈ），２．７０（ｄｄ，Ｊ＝１３．１，７．９Ｈｚ，１Ｈ），２．３７（ｄｄ，Ｊ＝１３．２，８．４Ｈｚ，１Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ），０．９４（ｓ，９Ｈ）。
【0081】
ステップ２：ＩＮＴ－１（３．７１ｇ、８．５８ｍｍｏｌ）、３７ｍｌのＴＨＦ、３７ｍｌの精製水及び水酸化リチウム一水和物（０．７２ｇ、１７．１６ｍｍｏｌ）を反応フラスコに加え、室温で２ｈ反応させ、反応終了後、濃塩酸でｐＨ＝４に調整し、ろ過し、３．４ｇの化合物１－１を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：４１９．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δＨ：１２．６８（ｓ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３８－４．１９（ｍ，２Ｈ），４．１１（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．４１－３．２９（ｍ，４Ｈ），２．６９（ｄｄ，Ｊ＝１３．１，７．９Ｈｚ，１Ｈ），２．３４（ｄｄ，Ｊ＝１３．２，８．９Ｈｚ，１Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ），０．９４（ｓ，９Ｈ）。
【0082】
化合物１－２の製造：
【化22】
【0083】
アンモニア・メタノール溶液（７００ｍｌ、７ｍｏｌ／Ｌ）、出発原料ＳＭＤ（１００ｇ、０．３４９ｍｏｌ）を反応フラスコに入れ、撹拌して透明になるまで溶解させ、２５±５℃で保温し、３６ｈ反応させ、反応終了後、反応液を約２５０ｍｌの反応液が残るまで濃縮し、イソプロパノールを３００ｍｌ添加し、反応液が約２５０ｍｌ残るまでさらに減圧濃縮し（３回繰り返し）、窒素置換し、１０±５℃に降温し、５００ｍｌの塩化水素－イソプロパノール溶液（４ｍｏｌ／Ｌ）を反応釜に添加し、添加終了後、２５±５℃に昇温し、２５±５℃で保温して９ｈ反応させた。反応終了後、反応液を約２５０ｍｌの反応液が残るまで減圧濃縮し、３００ｍｌのイソプロパノールを添加して、反応液が約２５０ｍｌ残るまでさらに減圧濃縮し（２回繰り返し）、１００ｍｌのイソプロパノールを添加し、３０±５ｍｉｎ撹拌し、ろ過し、ろ過ケーキを５０ｍｌのイソプロパノールでリンスし、湿品を取得し、４５±５℃で真空乾燥させ、６６．７ｇの化合物１－２を取得した。収率：９２％；１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δＨ：８．４５（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，３Ｈ），８．２５－８．０４（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｓ，１Ｈ），７．６７－７．４９（ｍ，１Ｈ），３．８５－３．８０（ｍ，１Ｈ），３．１９－３．１３（ｍ，２Ｈ），２．５９－２．５１（ｍ，１Ｈ），２．３２－２．２７（ｍ，１Ｈ），２．０５－１．９８（ｍ，１Ｈ），１．８２－１．６６（ｍ，２Ｈ）；ＥＳＩ－ＭＳ：１７２．１ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0084】
化合物１の製造：
【化23】
【0085】
化合物１－１（４１９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を二つ口フラスコに入れ、窒素ガスの保護下で５ｍＬのジクロロメタンを添加した後、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩（４００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を添加して室温で１ｈ撹拌した。化合物１－２（１ｍｍｏｌ）を１ｍＬのジクロロメタンに溶解させて以上の系に入れた後、氷水浴でＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．５ｍＬ、１ｍｍｏｌ）を添加し、氷水浴を外し、系を室温で一晩撹拌した。後処理して、ジクロロメタンを５０ｍＬ添加し、その後、１Ｍ塩酸水溶液で３回洗浄し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で３回洗浄し、飽和食塩水で有機相を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過して回転乾燥して化合物１－３（白色固体、４６９ｍｇ、収率８２％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ５７２．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0086】
化合物１－３（１１４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）とバージェス試薬（１．５ｅｑ）を二つ口フラスコに入れて、窒素ガスを３回充填した後、分子篩で乾燥させたジクロロメタンを添加し、室温で一晩撹拌し、原料が基本的に完全に反応したことが薄層クロマトグラフィーによって示された。後処理して、カラムクロマトグラフィーにより化合物１（白色固体、５２ｍｇ、収率４７％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：５５４．３ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0087】
＜実施例２＞
【化24】
【0088】
化合物１－３（５７２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を３ｍＬの４Ｍ塩化水素／１，４－ジオキサン溶液に溶解させ、又は２ｍＬのジクロロメタンに溶解させた後、２ｍＬのトリフルオロ酢酸を滴下添加し、環境温度で撹拌し、原料が基本的に完全に反応したことが薄層クロマトグラフィーによって示された後、溶媒を十分に回転乾燥した。得られた粗生成物を２ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、窒素ガスで保護し、トリエチルアミン（３ｍｍｏｌ）を添加した後、系を氷水浴に置き、無水トリフルオロ酢酸（１．２ｍｍｏｌ）を滴下添加し、原料が基本的に完全に反応したことが薄層クロマトグラフィーによって示された後、ジクロロメタンを５０ｍＬ添加し、その後、１Ｍ塩酸水溶液で３回洗浄し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で３回洗浄し、飽和食塩水で有機相を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、カラムクロマトグラフィーにより化合物２－１（白色固体、２６５ｍｇ、収率４６％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ５６８．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0089】
化合物２－１（１１３ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）とバージェス試薬（１．５ｅｑ）を二つ口フラスコに入れて、窒素ガスを３回充填した後、分子篩で乾燥させたジクロロメタンを添加し、室温で一晩撹拌し、原料が基本的に完全に反応したことが薄層クロマトグラフィーによって示された。後処理して、カラムクロマトグラフィーにより化合物２（白色固体、４１ｍｇ、収率４７％）を取得した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ９．４６（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），９．０５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ），４．９７（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．０，８．５，５．０Ｈｚ，１Ｈ），４．５３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｄｄ，Ｊ＝９．９，７．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２６－４．１４（ｍ，１Ｈ），３．９２（ｄ，Ｊ＝１０．９Ｈｚ，１Ｈ），３．５０－３．３４（ｍ，４Ｈ），３．２２－３．１１（ｍ，１Ｈ），３．０６（ｔｄ，Ｊ＝９．３，７．１Ｈｚ，１Ｈ），２．６８－２．５８（ｍ，１Ｈ），２．５０－２．４３（ｍ，１Ｈ），２．３１（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，１０．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２３－２．０７（ｍ，２Ｈ），１．７１（ｔｄｄ，Ｊ＝１４．９，１０．３，７．４Ｈｚ，２Ｈ），０．９９（ｓ，９Ｈ）．ＥＳＩ－ＭＳ：５５０．３ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0090】
＜実施例３＞
【化25】
【0091】
無水トリフルオロ酢酸の代わりに無水酢酸を用いたことを除き、実施例２と同様の方法を使用し、化合物３（白色固体、４５ｍｇ、収率４５％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：４９６．３ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0092】
＜実施例４＞
【化26】
【0093】
無水トリフルオロ酢酸の代わりにシクロプロパンカルボン酸無水物を用いたことを除き、実施例２と同様の方法を使用し、化合物４（白色固体、３２ｍｇ、収率３１％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：５２２．３ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0094】
＜実施例５＞
【化27】
【0095】
１－１の代わりに５－１を用いたことを除き、実施例１と同様の方法を使用し、化合物５（白色固体、２２ｍｇ、収率２０％）を取得した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ９．０３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ），７．４１（ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．６Ｈｚ，１Ｈ），４．９６（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．６，８．４，５．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５８－４．５０（ｍ，１Ｈ），４．３４（ｄｄ，Ｊ＝９．８，７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２６－４．２１（ｍ，１Ｈ），３．８９（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．４５－３．３３（ｍ，４Ｈ），３．２２－３．０３（ｍ，２Ｈ），２．６４－２．５７（ｍ，１Ｈ），２．４５（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．１，８．５，４．５Ｈｚ，１Ｈ），２．３１（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，９．８Ｈｚ，１Ｈ），２．２０－２．１０（ｍ，２Ｈ），１．８４－１．６７（ｍ，２Ｈ），１．３９－１．３１（ｍ，２Ｈ），１．２４（ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，２Ｈ），０．９７（ｓ，９Ｈ）．ＥＳＩ－ＭＳ：５４０．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0096】
＜実施例６＞
【化28】
【0097】
１－１の代わりに６－１を用いたことを除き、実施例１と同様の方法を使用し、化合物６（白色固体、３８ｍｇ、収率３７％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：５１２．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0098】
＜実施例７＞
【化29】
【0099】
１－１の代わりに７－１を用いたことを除き、実施例１と同様の方法を使用し、化合物７（白色固体、４９ｍｇ、収率４４％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：５５３．３ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0100】
＜実施例８＞
【化30】
【0101】
無水トリフルオロ酢酸の代わりに無水安息香酸を用いたことを除き、実施例２と同様の方法を使用し、化合物８（白色固体、４４ｍｇ、収率３９％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：５５８．３ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0102】
＜実施例９＞
【化31】
【0103】
無水トリフルオロ酢酸の代わりに３，５－ビス（トリフルオロメチル）ベンゾイルクロリドを用いたことを除き、実施例２と同様の方法を使用し、化合物９（白色固体、３９ｍｇ、収率２８％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：６９４．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0104】
＜実施例１０＞
【化32】
【0105】
無水トリフルオロ酢酸の代わりに３，５－ジメチルベンゾイルクロリドを用いたことを除き、実施例２と同様の方法を使用し、化合物１０（白色固体、３１ｍｇ、収率２６％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：５８６．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0106】
＜実施例１１＞
【化33】
【0107】
無水トリフルオロ酢酸の代わりに３，３，３－トリフルオロプロピオン酸無水物を用いたことを除き、実施例２と同様の方法を使用し、化合物１１（白色固体、２８ｍｇ、収率２５％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：５６４．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0108】
＜実施例１２＞
【化34】
【0109】
無水トリフルオロ酢酸の代わりに３－ピリジンカルボン酸クロリドを用いたことを除き、実施例２と同様の方法を使用し、化合物１２（白色固体、３９ｍｇ、収率３５％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：５５９．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0110】
＜実施例１３＞
【化35】
【0111】
無水トリフルオロ酢酸の代わりにペンタフルオロプロパノイルクロリドを用いたことを除き、実施例２と同様の方法を使用し、化合物１３（白色固体、４１ｍｇ、収率３４％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：６００．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0112】
＜実施例１４＞
【化36】
【0113】
１－１の代わりに１４－１を用いたことを除き、実施例１と同様の方法を使用し、化合物１４（白色固体、３２ｍｇ、収率２９％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：５５０．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0114】
＜実施例１５＞
【化37】
【0115】
無水トリフルオロ酢酸の代わりにメタンスルホン酸無水物を用いたことを除き、実施例２と同様の方法を使用し、無水トリフルオロ酢酸の代わりにメタンスルホン酸無水物を用いて、化合物１５（白色固体、３８ｍｇ、収率３６％）を取得した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ４）δ５．０６（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，４．５Ｈｚ，１Ｈ），４．４６（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，７．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．０２－３．８９（ｍ，２Ｈ），３．４５（ｑｔ，Ｊ＝８．６，４．７Ｈｚ，４Ｈ），３．３０－３．２３（ｍ，１Ｈ），２．９２（ｓ，３Ｈ），２．７８（ｔｄｄ，Ｊ＝１０．３，８．５，４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．６８（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．０，７．２，１．６Ｈｚ，１Ｈ），２．５１（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），２．４５－２．２７（ｍ，２Ｈ），１．９４－１．７７（ｍ，２Ｈ），１．０５（ｓ，９Ｈ）．ＥＳＩ－ＭＳ：５３２．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0116】
＜実施例１６＞
【化38】
【0117】
無水トリフルオロ酢酸の代わりにシクロプロパンスルホニルクロリドを用いたことを除き、実施例２と同様の方法を使用し、無水トリフルオロ酢酸の代わりにシクロプロパンスルホニルクロリドを用いて、化合物１６（白色固体、２９ｍｇ、収率２６％）を取得した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ４）δ５．０６（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，４．５Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，７．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．００－３．９４（ｍ，２Ｈ），３．５２－３．３８（ｍ，４Ｈ），３．３１－３．２１（ｍ，１Ｈ），２．７９（ｔｄｄ，Ｊ＝１０．４，８．５，４．１Ｈｚ，１Ｈ），２．７２－２．６５（ｍ，１Ｈ），２．５７（ｄｄｄ，Ｊ＝７．９，６．２，３．９Ｈｚ，１Ｈ），２．５１（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，１０．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４３－２．２９（ｍ，２Ｈ），１．９２－１．７４（ｍ，２Ｈ），１．３４－１．２９（ｍ，１Ｈ），１．１４（ｑｔ，Ｊ＝６．４，３．８Ｈｚ，１Ｈ），１．０６（ｓ，９Ｈ），１．０１（ｄｄｔ，Ｊ＝７．９，５．８，２．７Ｈｚ，２Ｈ），０．９７－０．８７（ｍ，１Ｈ）．ＥＳＩ－ＭＳ：５５８．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0118】
＜実施例１７＞
【化39】
【0119】
無水トリフルオロ酢酸の代わりにベンゼンスルホニルクロリドを用いたことを除き、実施例２と同様の方法を使用し、化合物１７（白色固体、３５ｍｇ、収率２９％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：５９４．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0120】
＜実施例１８＞
【化40】
【0121】
１－１の代わりに１８－１を用いたことを除き、実施例１と同様の方法を使用し、化合物１８（白色固体、４４ｍｇ、収率４２％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：５１８．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0122】
＜実施例１９＞
【化41】
【0123】
１－１の代わりに１９－１を用いたことを除き、実施例１と同様の方法を使用し、化合物１９（白色固体、４１ｍｇ、収率３６％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：５６８．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0124】
＜実施例２０＞
【化42】
【0125】
１－１の代わりに２０－１を用いたことを除き、実施例１と同様の方法を使用し、化合物２０（白色固体、４５ｍｇ、収率３５％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：６４８．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0126】
＜実施例２１＞
【化43】
【0127】
１－１の代わりに２１－１を用いたことを除き、実施例１と同様の方法を使用し、化合物２１（白色固体、３４ｍｇ、収率３１％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：６４０．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0128】
＜実施例２２＞
【化44】
【0129】
１－１の代わりに２２－１を用いて、１－２の代わりに２２－１を用いたことを除き、実施例１と同様の方法を使用し、化合物２２（白色固体、２２ｍｇ、収率１８％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：６１４．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0130】
＜実施例２３＞
【化45】
【0131】
化合物２３－１（４９７ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を二つ口フラスコに入れ、窒素ガスの保護下で５ｍＬのジクロロメタンを添加した後、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロりん酸塩（４００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を添加して室温で１ｈ撹拌した。化合物１－２（又はそれに対応する塩、１ｍｍｏｌ）を１ｍＬのジクロロメタンに溶解させて以上の系に入れた後、氷水浴でＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．５ｍＬ、１ｍｍｏｌ）を添加し、氷水浴を外し、系を室温で一晩撹拌した。後処理して、ジクロロメタンを５０ｍＬ添加し、その後、１Ｍ塩酸水溶液で３回洗浄し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で３回洗浄し、飽和食塩水で有機相を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過して回転乾燥して化合物２３－２（白色固体、４２１ｍｇ、収率６５％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ６５０．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0132】
化合物２３－２（３２５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を１．５の４Ｍ塩化水素／１，４－ジオキサン溶液に溶解させ、又は１ｍＬのジクロロメタンに溶解させた後、１ｍＬのトリフルオロ酢酸を滴下添加し、環境温度で撹拌し、原料が基本的に完全に反応したことが薄層クロマトグラフィーによって示された後、溶媒を十分に回転乾燥した。得られた粗生成物を２ｍＬのジクロロメタンに溶解させ、窒素ガスで保護し、トリエチルアミン（１．５ｍｍｏｌ）を添加した後、系を氷水浴に置き、無水トリフルオロ酢酸（０．６ｍｍｏｌ）を滴下添加し、原料が基本的に完全に反応したことが薄層クロマトグラフィーによって示された後、ジクロロメタンを２５ｍＬ添加し、その後、１Ｍ塩酸水溶液で３回洗浄し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で３回洗浄し、飽和食塩水で有機相を洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、カラムクロマトグラフィーにより化合物２３－３（白色固体、１６７ｍｇ、収率５２％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ６４６．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0133】
化合物２３－３（１３０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）とバージェス試薬（１．５ｅｑ）を二つ口フラスコに入れて、窒素ガスを３回充填した後、分子篩で乾燥させたジクロロメタンを添加し、室温で一晩撹拌し、原料が基本的に完全に反応したことが薄層クロマトグラフィーによって示された。後処理して、カラムクロマトグラフィーにより化合物２３（白色固体、３７ｍｇ、収率２９％）を取得した。ＥＳＩ－ＭＳ：６２８．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0134】
＜実施例２４：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の３ＣＬｐｒｏに対する化合物の阻害活性の測定＞
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬｐｒｏ酵素活性に対する化合物の阻害活性を蛍光共鳴エネルギー移動法により測定して評価した。酵素反応系全体の体積は１２０μＬであり、プロテアーゼの最終濃度は３０ｎＭであり、基質の最終濃度は２０μＭであった。反応系の緩衝液は、５０ｍＭのＴｒｉｓ ｐＨ７．３、１ｍＭのＥＤＴＡを含む。９６ウェルプレートにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬｐｒｏプロテアーゼ及び異なる濃度の化合物を入れて、３０℃で１０ｍｉｎインキュベートし、基質を添加して迅速にマイクロプレートリーダーに入れてデータを読み取る。励起光及び放射光はそれぞれ３２０ｎＭ、４０５ｎＭであった。測定時間は３．５ｍｉｎであり、蛍光値を３５ｓ毎に読み取った。最終結果のうちから前の２ｍｉｎに読み取った値からフィッティングして反応速度を取得し、対照群（ＤＭＳＯ）と比較して、阻害率を計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８というソフトウェアでフィッティングしてＩＣ５０値及び阻害率曲線を取得した。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬｐｒｏ酵素活性に対する化合物の阻害活性を蛍光共鳴エネルギー移動法により測定して評価した。酵素反応系全体の体積は１２０μＬであり、プロテアーゼの最終濃度は３０ｎＭであり、基質の最終濃度は２０μＭであった。反応系の緩衝液は、５０ｍＭのＴｒｉｓ ｐＨ７．３、１ｍＭのＥＤＴＡを含む。９６ウェルプレートにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬｐｒｏプロテアーゼ及び異なる濃度の化合物を入れて、３０℃で１０ｍｉｎインキュベートし、基質を添加して迅速にマイクロプレートリーダーに入れてデータを読み取る。励起光及び放射光はそれぞれ３２０ｎＭ、４０５ｎＭであった。測定時間は３．５ｍｉｎであり、蛍光値を３５ｓ毎に読み取った。最終結果のうちから前の２ｍｉｎに読み取った値からフィッティングして反応速度を取得し、対照群（ＤＭＳＯ）と比較して、阻害率を計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８というソフトウェアでフィッティングしてＩＣ５０値及び阻害率曲線を取得した。
【0135】
実験結果は表１に示すとおり通りである。結果は、本発明の化合物がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３ＣＬｐｒｏに対して強力な阻害作用を有することを示している。ＩＣ５０値の範囲として、Ａは＜０．１μＭ、Ｂは０．１－１μＭ、Ｃは１－１０μＭと意味する。
【0136】
【表1】
【0137】
【表2】
【0138】
【表3】
【0139】
【表4】
【0140】
＜実施例２４－２：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２オミクロン株変異型３ＣＬプロテアーゼに対する化合物２の阻害活性の試験＞
試験原理：酵素と基質との反応によって蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）を発生させるという方法を応用して、本発明化合物によるオミクロン株変異型３ＣＬプロテアーゼ（Ｐ１３２Ｈ）活性の阻害効果を研究した。
試験原理：酵素と基質との反応によって蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）を発生させるという方法を応用して、本発明化合物によるオミクロン株変異型３ＣＬプロテアーゼ（Ｐ１３２Ｈ）活性の阻害効果を研究した。
【0141】
実験材料は以下の表に示すとおりである。
【0142】
【表5】
【0143】
［実験機器及び装置］
【0144】
【表6】
【0145】
実験ステップ：
２０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、０．０１％のＢＳＡ、１ｍＭのＤＴＴ及び１００ｍＭのＮａＣｌを含む反応緩衝液を調製する。Ｅｃｈｏ分注システムを用いて、測定対象化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で異なる濃度に希釈し、３８４ウェルプレートに移した。変異型３ＣＬプロテアーゼを反応緩衝液で希釈し、１０μＬ／ウェルの量で３８４ウェルプレートに入れ、１０００ｒｐｍで１ｍｉｎ遠心分離し、その後室温で３０分間インキュベートした。その後、基質を１０μＬ／ウェル入れて、１０００ｒｐｍで３０ｓ遠心分離して酵素反応を開始させた。反応系において、酵素の最終濃度は５０ｎＭであり、基質の最終濃度は２０μＭであり、化合物の濃度範囲は１００００ｎＭから０．５１ｎＭであった。次に、Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎ ３マイクロプレートリーダーでＫｉｎｅｔｉｃ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ Ｖｍａｘモードを選択し、７５秒ごとに４９０ｎｍの波長の蛍光値を連続的に合計３５回読み取り、反応速度値（Ｖ）を取得し、阻害率を計算し、ＸＬｆｉｔソフトウェアを用いて４パラメータフィッティングを行って半数阻害濃度（ＩＣ５０）を取得する。阻害率の計算方法は以下の通りである。
２０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、０．０１％のＢＳＡ、１ｍＭのＤＴＴ及び１００ｍＭのＮａＣｌを含む反応緩衝液を調製する。Ｅｃｈｏ分注システムを用いて、測定対象化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で異なる濃度に希釈し、３８４ウェルプレートに移した。変異型３ＣＬプロテアーゼを反応緩衝液で希釈し、１０μＬ／ウェルの量で３８４ウェルプレートに入れ、１０００ｒｐｍで１ｍｉｎ遠心分離し、その後室温で３０分間インキュベートした。その後、基質を１０μＬ／ウェル入れて、１０００ｒｐｍで３０ｓ遠心分離して酵素反応を開始させた。反応系において、酵素の最終濃度は５０ｎＭであり、基質の最終濃度は２０μＭであり、化合物の濃度範囲は１００００ｎＭから０．５１ｎＭであった。次に、Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎ ３マイクロプレートリーダーでＫｉｎｅｔｉｃ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ Ｖｍａｘモードを選択し、７５秒ごとに４９０ｎｍの波長の蛍光値を連続的に合計３５回読み取り、反応速度値（Ｖ）を取得し、阻害率を計算し、ＸＬｆｉｔソフトウェアを用いて４パラメータフィッティングを行って半数阻害濃度（ＩＣ５０）を取得する。阻害率の計算方法は以下の通りである。
【0146】
【数1】
【0147】
実験結果：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２オミクロン株中の、Ｐ１３２Ｈ変異を有する３ＣＬプロテアーゼに対して、化合物２は有意な阻害活性を維持した（３回の独立実験によるＩＣ５０は０．０２２±０．０００９０μＭであった）。
【0148】
【表7】
【0149】
＜実施例２４－３：異なるコロナウイルスから由来する３ＣＬプロテアーゼに対する化合物２の阻害活性の実験＞
実験目的：ヒトに感染可能な他の６種類のコロナウイルスから由来する３ＣＬプロテアーゼ活性に対する化合物２の阻害効果を研究する。６種類のウイルスはそれぞれ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＯＣ４３－ＣｏＶ、Ｈ２２９Ｅ－ＣｏＶ、ＮＬ６３－ＣｏＶ及びＨＫＵ１－ＣｏＶであった。
実験目的：ヒトに感染可能な他の６種類のコロナウイルスから由来する３ＣＬプロテアーゼ活性に対する化合物２の阻害効果を研究する。６種類のウイルスはそれぞれ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＯＣ４３－ＣｏＶ、Ｈ２２９Ｅ－ＣｏＶ、ＮＬ６３－ＣｏＶ及びＨＫＵ１－ＣｏＶであった。
【0150】
実験材料：
３ＣＬプロテアーゼコロナウイルスのゲノム配列により組換え全長コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼを自製し、使用されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、Ｈ２２９Ｅ－ＣｏＶ、ＨＫＵ１－ＣｏＶ、ＮＬ６３－ＣｏＶ及びＯＣ４３－ＣｏＶゲノムのＧｅｎＢａｎｋ番号は、それぞれＡＡＰ１３４４２．１、ＭＴ３８７２０２．１、ＡＦ３０４４６０．１、ＡＹ５９７０１１．２、ＡＹ５６７４８７．２及びＡＹ９０３４５９．１であり、６種類のコロナウイルス３ＣＬプロテアーゼのタンパク質発現に必要なＤＮＡ配列は、南京ジェンスクリプト・バイオテクノロジー社から購入した。
３ＣＬプロテアーゼコロナウイルスのゲノム配列により組換え全長コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼを自製し、使用されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、Ｈ２２９Ｅ－ＣｏＶ、ＨＫＵ１－ＣｏＶ、ＮＬ６３－ＣｏＶ及びＯＣ４３－ＣｏＶゲノムのＧｅｎＢａｎｋ番号は、それぞれＡＡＰ１３４４２．１、ＭＴ３８７２０２．１、ＡＦ３０４４６０．１、ＡＹ５９７０１１．２、ＡＹ５６７４８７．２及びＡＹ９０３４５９．１であり、６種類のコロナウイルス３ＣＬプロテアーゼのタンパク質発現に必要なＤＮＡ配列は、南京ジェンスクリプト・バイオテクノロジー社から購入した。
【0151】
３ＣＬプロテアーゼの基質は、南京ジェンスクリプト・バイオテクノロジー社から購入した。
【0152】
キモトリプシン基質は、ＧＬＢｉｏｃｈｅｍ社から購入した。
【0153】
その他の試薬は以下の表に示すとおりである。
【0154】
【表8】
【0155】
実験ステップ：
反応緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ及び１ｍＭのＥＤＴＡを含有する）を調製した。測定対象化合物をＤＭＳＯで１００ｍＭの母液になるように溶解し、さらに反応緩衝液で２倍段階希釈を行い、合計１１個の濃度を作製した。９６ウェルプレートに３ＣＬプロテアーゼ及び異なる濃度の化合物を入れて、室温で１０分間インキュベートし、基質を添加して迅速にマイクロプレートリーダーに入れてデータを読み取る。酵素反応系全体の体積は１２０μＬであり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、Ｈ２２９Ｅ－ＣｏＶ、ＨＫＵ１－ＣｏＶ、ＮＬ６３－ＣｏＶ及びＯＣ４３－ＣｏＶプロテアーゼの最終濃度はそれぞれ３０ｎＭ、８０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ及び１０ｎＭであり、基質の最終濃度は１０μＭであった。データを読み取るときに励起光及び放射光の波長はそれぞれ３４０ｎｍ、４９０ｎｍであった。試験時間は１０分間であり、１分間おきに蛍光値を読み取り、最終結果のうちから前の５分間に読み取った値に対してフィッティングして反応速度を取得し、以下の計算式で阻害率を計算した。
反応緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ及び１ｍＭのＥＤＴＡを含有する）を調製した。測定対象化合物をＤＭＳＯで１００ｍＭの母液になるように溶解し、さらに反応緩衝液で２倍段階希釈を行い、合計１１個の濃度を作製した。９６ウェルプレートに３ＣＬプロテアーゼ及び異なる濃度の化合物を入れて、室温で１０分間インキュベートし、基質を添加して迅速にマイクロプレートリーダーに入れてデータを読み取る。酵素反応系全体の体積は１２０μＬであり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、Ｈ２２９Ｅ－ＣｏＶ、ＨＫＵ１－ＣｏＶ、ＮＬ６３－ＣｏＶ及びＯＣ４３－ＣｏＶプロテアーゼの最終濃度はそれぞれ３０ｎＭ、８０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、３０ｎＭ及び１０ｎＭであり、基質の最終濃度は１０μＭであった。データを読み取るときに励起光及び放射光の波長はそれぞれ３４０ｎｍ、４９０ｎｍであった。試験時間は１０分間であり、１分間おきに蛍光値を読み取り、最終結果のうちから前の５分間に読み取った値に対してフィッティングして反応速度を取得し、以下の計算式で阻害率を計算した。
【0156】
【数2】
【0157】
実験結果：その結果、表３に示すように、他の６種類のコロナウイルス由来の３ＣＬプロテアーゼに対して、化合物２が良好な阻害効果を示し、化合物２が広域スペクトル抗コロナウイルス活性を有することが示された。
【0158】
【表9】
【0159】
＜実施例２５－１：化合物２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＷＩＶ０４、Ｂ．１．３５１株に対する細胞レベルの阻害作用＞
試験ではＶｅｒｏ Ｅ６細胞を使用し、４８ウェルプレートにＶｅｒｏ Ｅ６細胞（５００００細胞／ウェル）を入れて、勾配濃度の化合物を含有する培地を１００μＬ／ウェルで添加し、１時間後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を添加し、感染多重度（ＭＯＩ）は０．０１であった。１時間共インキュベートした後、上清を吸い取って、洗浄して、勾配濃度の化合物を含有する培地を２００μＬ／ウェルで添加し、３７℃で２４時間培養した。２４時間後、細胞上清を収集し、上清ウイルスＲＮＡを抽出し、リアルタイム蛍光定量ＰＣＲの方法で上清ウイルスコピー数を測定し、ウイルスコピー数に基づいて化合物の阻害率を算出し、ｐｒｉｓｍ ６．０を用いて化合物のＥＣ５０を計算した。
試験ではＶｅｒｏ Ｅ６細胞を使用し、４８ウェルプレートにＶｅｒｏ Ｅ６細胞（５００００細胞／ウェル）を入れて、勾配濃度の化合物を含有する培地を１００μＬ／ウェルで添加し、１時間後にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を添加し、感染多重度（ＭＯＩ）は０．０１であった。１時間共インキュベートした後、上清を吸い取って、洗浄して、勾配濃度の化合物を含有する培地を２００μＬ／ウェルで添加し、３７℃で２４時間培養した。２４時間後、細胞上清を収集し、上清ウイルスＲＮＡを抽出し、リアルタイム蛍光定量ＰＣＲの方法で上清ウイルスコピー数を測定し、ウイルスコピー数に基づいて化合物の阻害率を算出し、ｐｒｉｓｍ ６．０を用いて化合物のＥＣ５０を計算した。
【0160】
試験結果は、化合物２がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＷＩＶ０４株を阻害する半数効果濃度ＥＣ５０は０．５７＋／－０．０４μＭであり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｂ．１．３５１株を阻害するＥＣ５０は０．７３＋／－０．０６μＭであり、ＥＣ５０曲線が図１及び図２に示すとおりである。
【0161】
＜実施例２５－２：化合物２のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｖｅｒｏ Ｅ６原株（ＷＩＶ０４）、デルタ株（Ｂ．１．６１７．２）、オミクロン株（Ｂ．１．１．５２９）に対する細胞レベルの阻害作用＞
実験目的：本試験は、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞において、リアルタイム蛍光定量ＰＣＲ法により、培養上清中のウイルスコピー数を検出する方法により、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２原株（ＷＩＶ０４株）、デルタ株（Ｂ．１．６１７．２）及びオミクロン株（Ｂ．１．１．５２９）の細胞中複製に対する化合物２の阻害作用を検討した。Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞は外排出輸送タンパク質Ｐ－ｇｐを高発現させるため、０．５μＭのＰ－ｇｐ阻害剤ＣＰ－１００３５６を添加して化合物と共インキュベートした。
実験目的：本試験は、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞において、リアルタイム蛍光定量ＰＣＲ法により、培養上清中のウイルスコピー数を検出する方法により、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２原株（ＷＩＶ０４株）、デルタ株（Ｂ．１．６１７．２）及びオミクロン株（Ｂ．１．１．５２９）の細胞中複製に対する化合物２の阻害作用を検討した。Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞は外排出輸送タンパク質Ｐ－ｇｐを高発現させるため、０．５μＭのＰ－ｇｐ阻害剤ＣＰ－１００３５６を添加して化合物と共インキュベートした。
【0162】
実験材料：
Ｖｅｒｏ Ｅ６はＡＴＣＣ（品番ＣＲＬ－１５８６）から購入され、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２原株（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＷＩＶ０４株）、Ｄｅｌｔａ株（Ｂ．１．６１７．２）、Ｏｍｉｃｒｏｎ株（Ｂ．１．１．５２９）ウイルスは、中国科学院武漢ウイルス研究所微生物菌（毒）種保存センターから供給された。
Ｖｅｒｏ Ｅ６はＡＴＣＣ（品番ＣＲＬ－１５８６）から購入され、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２原株（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＷＩＶ０４株）、Ｄｅｌｔａ株（Ｂ．１．６１７．２）、Ｏｍｉｃｒｏｎ株（Ｂ．１．１．５２９）ウイルスは、中国科学院武漢ウイルス研究所微生物菌（毒）種保存センターから供給された。
【0163】
その他の試薬は以下の表に示すとおりである。
【0164】
【表10】
【0165】
実験器具：
バイオハザードセフティキャビネット（ＡＣ２－３Ｓ１、ＥＳＣＯ社、シンガポール）
二酸化炭素インキュベーター（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＨＥＲＡｃｅｌｌ １５０ｉ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、米国）
純水装置（滲源ＳＹＳ 超純水装置，成都）
ＳｔｅｐＯｎｅ Ｐｌｕｓ Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ（４３７６６００、ＡＢＩ、米国）
ＴＣ２０TM全自動セルカウンター（１４５０１０２、ＢＩＯ－ＲＡＤ、米国）
Ｔ１００TM Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ（１８６１０９６、ＢＩＯ－ＲＡＤ、米国）
遠心分離機（Ｍｉｃｒｏ２１／２１Ｒサーモフィッシャーサイエンティフィック社、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国）
バイオハザードセフティキャビネット（ＡＣ２－３Ｓ１、ＥＳＣＯ社、シンガポール）
二酸化炭素インキュベーター（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＨＥＲＡｃｅｌｌ １５０ｉ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、米国）
純水装置（滲源ＳＹＳ 超純水装置，成都）
ＳｔｅｐＯｎｅ Ｐｌｕｓ Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ（４３７６６００、ＡＢＩ、米国）
ＴＣ２０TM全自動セルカウンター（１４５０１０２、ＢＩＯ－ＲＡＤ、米国）
Ｔ１００TM Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ（１８６１０９６、ＢＩＯ－ＲＡＤ、米国）
遠心分離機（Ｍｉｃｒｏ２１／２１Ｒサーモフィッシャーサイエンティフィック社、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国）
【0166】
実験ステップ：
トリプシンでＶｅｒｏ Ｅ６細胞を消化し、培地（９０％ＤＭＥＭ、１０％ウシ胎仔血清）に入れ、４８ウェルプレートに播種し、１ウェルあたり５００００細胞で一晩培養した。測定対象化合物をＤＭＳＯに溶解させて４０ｍＭ母液を取得し、さらに０．５μＭのＰｇｐ阻害剤を含む培地で段階希釈し、試験に必要な濃度を取得し、実験における測定対象化合物の最終濃度の範囲は１μＭ～０．００４μＭであった。細胞上清を除去し、希釈した化合物（０．５μＭのＰｇｐ阻害剤を含む）を各ウェルに添加し、１時間インキュベートし、バイオセーフティーレベル３（ＢＳＬ－３）の実験室でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株を入れ、感染多重度（ＭＯＩ）が０．０１又は０．００１であり、１時間インキュベートした後、上清を除去し、ＰＢＳで洗浄し、希釈した化合物（０．５μＭのＰｇｐ阻害剤を含む）を２００μＬ／ウェルで添加し、感染した２４時間又は７２時間後に上清を収集した。上清ウイルスＲＮＡを抽出し、リアルタイム蛍光定量ＰＣＲの方法で上清ウイルスコピー数を測定し、ウイルスコピー数に基づいて化合物の阻害率を算出し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８を用いて化合物のＩＣ５０を計算した。
トリプシンでＶｅｒｏ Ｅ６細胞を消化し、培地（９０％ＤＭＥＭ、１０％ウシ胎仔血清）に入れ、４８ウェルプレートに播種し、１ウェルあたり５００００細胞で一晩培養した。測定対象化合物をＤＭＳＯに溶解させて４０ｍＭ母液を取得し、さらに０．５μＭのＰｇｐ阻害剤を含む培地で段階希釈し、試験に必要な濃度を取得し、実験における測定対象化合物の最終濃度の範囲は１μＭ～０．００４μＭであった。細胞上清を除去し、希釈した化合物（０．５μＭのＰｇｐ阻害剤を含む）を各ウェルに添加し、１時間インキュベートし、バイオセーフティーレベル３（ＢＳＬ－３）の実験室でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の異なる株を入れ、感染多重度（ＭＯＩ）が０．０１又は０．００１であり、１時間インキュベートした後、上清を除去し、ＰＢＳで洗浄し、希釈した化合物（０．５μＭのＰｇｐ阻害剤を含む）を２００μＬ／ウェルで添加し、感染した２４時間又は７２時間後に上清を収集した。上清ウイルスＲＮＡを抽出し、リアルタイム蛍光定量ＰＣＲの方法で上清ウイルスコピー数を測定し、ウイルスコピー数に基づいて化合物の阻害率を算出し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８を用いて化合物のＩＣ５０を計算した。
【0167】
細胞毒性試験において、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞を消化して培地（９０％ＤＭＥＭ、１０％ウシ胎児血清）に置き、９６ウェルプレートに播種し、１ウェルあたり２００００細胞で一晩培養した。測定対象化合物をＤＭＳＯに溶解させて４０ｍＭ母液を取得し、さらに培地又は０．５μＭのＰｇｐ阻害剤を含む培地で段階希釈し、試験に必要な濃度を取得し、実験における測定対象化合物の最終濃度の範囲は５００μＭ～１．９５μＭであった。９６ウェルプレート中の細胞上清を除去し、測定対象化合物（単剤又はＰｇｐ阻害剤を０．５μＭ含む）の培地を１００μＬ／ウェルで添加し、２４時間インキュベートした後、ＣＣＫ８アッセイキットを用いて細胞生存率を測定し、阻害率及び半数細胞毒性濃度（ＣＣ５０）を算出した。
【0168】
試験結果：表４に示すように、Ｐ－ｇｐ阻害剤ＣＰ－１００３５６と併用した後、化合物２は、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞におけるデルタ株の複製を用量依存的に阻害することができ、ＩＣ５０は０．０４０μＭであった。原株においても化合物２とＰ－ｇｐ阻害剤の併用は高い阻害作用を果たし、ＩＣ５０は０．０２７μＭであった。また、化合物２の共同Ｐ－ｇｐ阻害剤は、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞におけるオミクロン株の複製を顕著に阻害でき、ＩＣ５０は０．１２μＭである。化合物２単剤も、Ｐ－ｇｐ阻害剤の併用も、ＶｅｒｏＥ６細胞に対して明らかな細胞毒性がなく、ＣＣ５０＞５００μＭであった。
【0169】
【表11】
【0170】
＜実施例２６：ｈＡＣＥ ２－Ｋ １８トランスジェニックマウスにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２デルタ株に対する化合物２の生体内抗ウイルス作用＞
実験目的：本研究は、ヒトアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を安定的に発現するＫ１８トランスジェニックマウス（Ｋ１８－ｈＡＣＥ ２）におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２デルタ株に対する化合物２の抗ウイルス活性を評価した。
実験目的：本研究は、ヒトアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）を安定的に発現するＫ１８トランスジェニックマウス（Ｋ１８－ｈＡＣＥ ２）におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２デルタ株に対する化合物２の抗ウイルス活性を評価した。
【0171】
実験材料：
７～８週齢のＫ１８－ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスは、江蘇集萃薬康生物医薬有限公司から購入した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄｅｌｔａ株ウイルスは、中国科学院武漢ウイルス研究所微生物菌（毒）種保存センターから供給された。
７～８週齢のＫ１８－ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスは、江蘇集萃薬康生物医薬有限公司から購入した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｄｅｌｔａ株ウイルスは、中国科学院武漢ウイルス研究所微生物菌（毒）種保存センターから供給された。
【0172】
リトナビルは、上海迪賽諾化学製薬有限公司から購入した。
【0173】
Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞はＡＴＣＣから購入した（品番ＣＲＬ－１５８６）。
【0174】
その他の試薬は、以下の表に示すとおりである。
【0175】
【表12】
【0176】
実験器具：
バイオハザードセフティキャビネット（ＡＣ２－３Ｓ１、ＥＳＣＯ社、シンガポール）
二酸化炭素インキュベーター（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＨＥＲＡｃｅｌｌ １５０ｉ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国）
純水装置（滲源ＳＹＳ 超純水装置、成都）
ＳｔｅｐＯｎｅ Ｐｌｕｓ Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ（４３７６６００、ＡＢＩ、米国）
ＴＣ２０TM全自動セルカウンター（１４５０１０２、ＢＩＯ－ＲＡＤ、米国）
Ｔ１００TMＴｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ（１８６１０９６、ＢＩＯ－ＲＡＤ、米国）
遠心分離機（Ｍｉｃｒｏ２１／２１Ｒサーモフィッシャーサイエンティフィック社、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国）
組織グラインダー（ＪＸＦＳＴＰＲＰ－ＣＬ、上海浄信社、中国）
バイオハザードセフティキャビネット（ＡＣ２－３Ｓ１、ＥＳＣＯ社、シンガポール）
二酸化炭素インキュベーター（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＨＥＲＡｃｅｌｌ １５０ｉ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国）
純水装置（滲源ＳＹＳ 超純水装置、成都）
ＳｔｅｐＯｎｅ Ｐｌｕｓ Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ（４３７６６００、ＡＢＩ、米国）
ＴＣ２０TM全自動セルカウンター（１４５０１０２、ＢＩＯ－ＲＡＤ、米国）
Ｔ１００TMＴｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ（１８６１０９６、ＢＩＯ－ＲＡＤ、米国）
遠心分離機（Ｍｉｃｒｏ２１／２１Ｒサーモフィッシャーサイエンティフィック社、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国）
組織グラインダー（ＪＸＦＳＴＰＲＰ－ＣＬ、上海浄信社、中国）
【0177】
実験ステップ：点鼻によりＫ１８－ｈＡＣＥ２トランスジェニックマウスにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２デルタ株に感染させ、感染当日は０日目とする。感染から２時間後、胃内投与により、それぞれ溶媒、５０ｍｇ／ｋｇ又は２００ｍｇ／ｋｇの化合物２（チトクロムＰ４５０阻害剤のリトナビルを５０ｍｇ／ｋｇで併用）、ＢＩＤで２日間（０日目は１回、１日目は２回、２日目は１回）又は４日間（０日目は１回、１回目、２回目及び３日目はそれぞれ２回）投与した。マウスの体重変化を記録し、終点で肺組織と脳組織を収集した。そのうち、左肺をホルムアルデヒドで固定し、その後に包埋、スライス及びＨ＆Ｅ染色を行って組織病理学的検査に用いた。右肺と脳組織をそれぞれ２部に分け、１部は粉砕後にホモジネートを得てＲＮＡを抽出し逆転写を行い、リアルタイム蛍光定量ＰＣＲによりウイルスコピー数を測定した。もう１部は粉砕後にホモジネートを用いてプラーク法によりウイルス力価を測定した。プラーク試験の方法は以下のとおりである。Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞を、１ウェルあたり１２０００細胞で２４ウェルプレートに接種し、一晩培養した。組織ホモジネート原液をＤＭＥＭ培地で１０倍段階希釈して使用に備えた。細胞上清を除去し、希釈した組織ホモジネートを添加して１時間インキュベートした後、上清を除去し、１％のメチルセルロースナトリウムと２％のＦＢＳを含有する培地を添加し、４日間培養した。その後、培地を除去し、パラホルムアルデヒドで固定した後、１％（ｗ／ｖ）のクリスタルバイオレットで染色し、各ウェル内のプラーク数を統計した。
【0178】
試験結果：表５に示すように、感染２日後、モデル群（ウイルス平均コピー数が９．１９±０．３０ｌｏｇ１０ ｃｏｐｉｅｓ／ｇ）に比べて、リトナビルを併用することで、化合物２の５０ｍｇ／ｋｇと２００ｍｇ／ｋｇの投与量では、いずれも肺部のウイルス量を著しく減少させ、平均コピー数がそれぞれ７．６６±０．２７ｌｏｇ１０ ｃｏｐｉｅｓ／ｇと６．７９±０．３０ｌｏｇ１０ ｃｏｐｉｅｓ／ｇであり、そのうち、２００ｍｇ／ｋｇの投与量でのウイルスコピー数は２．４ｌｏｇ１０ ｃｏｐｉｅｓ／ｇだけ低減した。感染４日後、ウイルスコピー数に対する化合物２の持続的阻害作用が認められた。ウイルス力価の面について、図３に示すように、化合物２に顕著な阻害作用が認められ、感染２日後、２００ｍｇ／ｋｇ投与量ではウイルス複製が完全に阻害され、ウイルス力価は検出できず、５０ｍｇ／ｋｇでは、モデル群と比較してウイルス力価３ｌｏｇ１０ ＰＦＵ／ｇ超ほど低下し、感染４日後、化合物２はウイルス力価への持続的な阻害効果を示した。体重について、図４に示すように、感染４日後、モデル群のマウスの体重は約１０％減少し、化合物２投与群の体重には明らかな低減がなく、継続投与による化合物２の明らかな毒性が認められなかった。我々は、マウスの脳内のウイルス量をさらに測定したが、感染２日後、各群に明らかな感染はなかった。感染４日後、モデル群と比較して、化合物２は、５０ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇの投与量のいずれにおいても、マウスの脳のウイルスコピー数を顕著に低下させることができ、特に２００ｍｇ／ｋｇの投与量では脳のウイルスコピー数が感染のない正常群に相当する。我々は、感染４日後の脳のウイルス力価をさらに測定した結果、図５に示すように、モデル群と比較して、化合物２は、２つの投与量でウイルス力価が検出できず、化合物２の強力な阻害作用が示された。また、肺の組織病理学的分析から明らかなように、モデル群に比べて、化合物２は、２００ｍｇ／ｋｇの投与量では、肺損傷を顕著に改善し、肺胞の虚脱又は膨張の程度及び肺胞膜の厚くなる程度を低減することを含む。
【0179】
【表13】
【0180】
＜実施例２７：キナーゼに対する化合物２の選択性＞
実験目的：キナーゼに対する化合物２の選択性を研究するために、４１３種類のキナーゼに対する化合物２の阻害活性をＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅ実験プラットフォームで測定した。
実験目的：キナーゼに対する化合物２の選択性を研究するために、４１３種類のキナーゼに対する化合物２の阻害活性をＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅ実験プラットフォームで測定した。
【0181】
実験材料：
Ｆｕｌｌ Ｈｕｍａｎ Ｐａｎｅｌ［１０ｕＭ ＡＴＰ］ＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒは、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ社によって提供されたテスト製品であり、品番は、５０－００５ＫＰ１０であり、この製品は４１３種のキナーゼを含む。
Ｆｕｌｌ Ｈｕｍａｎ Ｐａｎｅｌ［１０ｕＭ ＡＴＰ］ＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒは、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ社によって提供されたテスト製品であり、品番は、５０－００５ＫＰ１０であり、この製品は４１３種のキナーゼを含む。
【0182】
実験ステップ：
Ｅｕｒｏｆｉｎｓ標準のＫｉｎａｓｅｄＰｒｏｆｉｌｅｒ分析方法を用いて、関連標準に準じた操作プロセスで、選択した各キナーゼに対して化合物測定を行った。タンパク質キナーゼは放射法により検出し、脂質キナーゼはＨＴＲＦ法により検出した。実験ではＡＴＰ濃度は１０μＭであった。各キナーゼの詳細な情報は、Ｅｕｒｏｆｉｎｓのウェブサイト上で取得することができ、ネットワークアドレスは以下の通りである。ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｅｕｒｏｆｉｎｓｄｉｓｃｏｖｅｒｙｓｅｒｖｉｃｅｓ．ｃｏｍ／ｃａｔａｌｏｇｍａｎａｇｅｍｅｎｔ／ｖｉｅｗＩｔｅｍ／Ｆｕｌｌ－Ｈｕｍａｎ－Ｐａｎｅｌ－１０－ｕＭ－ＡＴＰ－ＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ／５０－００５ＫＰ１０。
Ｅｕｒｏｆｉｎｓ標準のＫｉｎａｓｅｄＰｒｏｆｉｌｅｒ分析方法を用いて、関連標準に準じた操作プロセスで、選択した各キナーゼに対して化合物測定を行った。タンパク質キナーゼは放射法により検出し、脂質キナーゼはＨＴＲＦ法により検出した。実験ではＡＴＰ濃度は１０μＭであった。各キナーゼの詳細な情報は、Ｅｕｒｏｆｉｎｓのウェブサイト上で取得することができ、ネットワークアドレスは以下の通りである。ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｅｕｒｏｆｉｎｓｄｉｓｃｏｖｅｒｙｓｅｒｖｉｃｅｓ．ｃｏｍ／ｃａｔａｌｏｇｍａｎａｇｅｍｅｎｔ／ｖｉｅｗＩｔｅｍ／Ｆｕｌｌ－Ｈｕｍａｎ－Ｐａｎｅｌ－１０－ｕＭ－ＡＴＰ－ＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ／５０－００５ＫＰ１０。
【0183】
実験結果：４１３種類のキナーゼに対して、化合物２は、１０μＭの濃度で阻害率がいずれも３０％未満であり、顕著な阻害作用がなく、化合物２に優れた選択性を有することが示された。
【0184】
＜実施例２８：安全性標的に対する化合物２の選択性＞
実験目的：Ｓａｆｅｔｙｓｃａｎ実験プラットフォームで、４７個の安全性関連標的に対する化合物２の影響を測定した。
実験目的：Ｓａｆｅｔｙｓｃａｎ実験プラットフォームで、４７個の安全性関連標的に対する化合物２の影響を測定した。
【0185】
実験材料：
Ｓａｆｅｔｙ ４７ Ｐａｎｅｌ Ｄｏｓｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ＳＡＦＥＴＹｓｃａｎは、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ社によって提供されたテスト製品であり、品番は、８７－１００３ＤＲである。この製品は、４７個の安全性標的に関する７８個の試験を含む。
Ｓａｆｅｔｙ ４７ Ｐａｎｅｌ Ｄｏｓｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ＳＡＦＥＴＹｓｃａｎは、Ｅｕｒｏｆｉｎｓ社によって提供されたテスト製品であり、品番は、８７－１００３ＤＲである。この製品は、４７個の安全性標的に関する７８個の試験を含む。
【0186】
実験ステップ：
４７個の安全性標的に関する７８個の試験が用いる実験方法は、ｃＡＭＰアッセイ、カルシウムフラックスアッセイ、ホルモン核内受容体アッセイ、キナーゼ結合アッセイ、酵素活性アッセイ、神経伝達物質トランスポーターアッセイ、イオンチャネルアッセイ及びトランスポーターアッセイを含む。各アッセイの具体的な方法は、ｅｕｒｏｆｉｎｓのウェブサイトから取得することができ、ネットワークアドレスは、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｅｕｒｏｆｉｎｓｄｉｓｃｏｖｅｒｙｓｅｒｖｉｃｅｓ．ｃｏｍ／ｃａｔａｌｏｇｍａｎａｇｅｍｅｎｔ／ｖｉｅｗＩｔｅｍ／Ｓａｆｅｔｙ４７－Ｐａｎｅｌ－Ｄｏｓｅ－Ｒｅｓｐｏｎｓｅ－ＳＡＦＥＴＹｓｃａｎ－ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ／８７－１００３ＤＲである。
４７個の安全性標的に関する７８個の試験が用いる実験方法は、ｃＡＭＰアッセイ、カルシウムフラックスアッセイ、ホルモン核内受容体アッセイ、キナーゼ結合アッセイ、酵素活性アッセイ、神経伝達物質トランスポーターアッセイ、イオンチャネルアッセイ及びトランスポーターアッセイを含む。各アッセイの具体的な方法は、ｅｕｒｏｆｉｎｓのウェブサイトから取得することができ、ネットワークアドレスは、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｅｕｒｏｆｉｎｓｄｉｓｃｏｖｅｒｙｓｅｒｖｉｃｅｓ．ｃｏｍ／ｃａｔａｌｏｇｍａｎａｇｅｍｅｎｔ／ｖｉｅｗＩｔｅｍ／Ｓａｆｅｔｙ４７－Ｐａｎｅｌ－Ｄｏｓｅ－Ｒｅｓｐｏｎｓｅ－ＳＡＦＥＴＹｓｃａｎ－ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ／８７－１００３ＤＲである。
【0187】
実験結果：４７個の安全な関連標的に対して、化合物２は、１００μＭ濃度で顕著な阻害又は活性化作用がなく（ＥＣ５０はいずれも１００μＭより大きい）、化合物２が優れた選択性を有することが示された。
【0188】
＜実施例２９：化合物２のヒト血漿タンパク質結合試験＞
実験材料：
ヒト血漿は、ＢｉｏＩＶＴ社から購入し、ＥＤＴＡ Ｋ２で抗凝固し、－８０℃で保存した。９６ウェルの平衡透析プレートは、ＨＴＤｉａｌｙｓｉｓ ＬＬＣ社から購入した。平衡透析膜は、Ｇａｌｅｓ Ｆｅｒｒｙ社から購入した。
実験材料：
ヒト血漿は、ＢｉｏＩＶＴ社から購入し、ＥＤＴＡ Ｋ２で抗凝固し、－８０℃で保存した。９６ウェルの平衡透析プレートは、ＨＴＤｉａｌｙｓｉｓ ＬＬＣ社から購入した。平衡透析膜は、Ｇａｌｅｓ Ｆｅｒｒｙ社から購入した。
【0189】
実験ステップ：
濃度１４．２ｇ／Ｌのリン酸水素二ナトリウムと８．７７ｇ／Ｌの塩化ナトリウムの塩基溶液を超純水で調製し、この塩基溶液を４℃で７日間保存できる。濃度１２．０ｇ／Ｌのリン酸二水素ナトリウムと８．７７ｇ／Ｌの塩化ナトリウムの酸性溶液を超純水で調製し、この酸性溶液を４℃で７日間保存できる。塩基性溶液を酸性溶液でｐＨ ７．４に滴定し、該緩衝液は４℃で７日間保存することができる。実験当日に緩衝液のｐＨ値を測定し、７．４±０．１の範囲を超えると、そのｐＨ値を調整する。
濃度１４．２ｇ／Ｌのリン酸水素二ナトリウムと８．７７ｇ／Ｌの塩化ナトリウムの塩基溶液を超純水で調製し、この塩基溶液を４℃で７日間保存できる。濃度１２．０ｇ／Ｌのリン酸二水素ナトリウムと８．７７ｇ／Ｌの塩化ナトリウムの酸性溶液を超純水で調製し、この酸性溶液を４℃で７日間保存できる。塩基性溶液を酸性溶液でｐＨ ７．４に滴定し、該緩衝液は４℃で７日間保存することができる。実験当日に緩衝液のｐＨ値を測定し、７．４±０．１の範囲を超えると、そのｐＨ値を調整する。
【0190】
透析膜を超純水に６０分間浸漬して２枚に分離した後、２０％エタノールで２０分間浸漬し、最後に透析用緩衝液で２０分間浸漬した。
【0191】
凍結した血漿を速やかに室温で解凍した。
【0192】
血漿を４℃、３，２２０ｇの遠心力で１０分間遠心分離して凝塊を除去し、上澄みを新しい遠心管に収集した。血漿のｐＨ値を測定及び記録した。
【0193】
１０ｍＭの測定対象のＤＭＳＯストック液を調製した。９８μＬのＤＭＳＯで２μＬのストック液（１０ｍＭ）を希釈して作動液（２００μＭ）を取得した。３μＬの作動液を、５９７μＬのヒト血漿を添加し、最終濃度は１μＭ（０．５％ＤＭＳＯ）であった。旋回撹拌して十分に均一化する。
【0194】
透析膜の片側に１２０μＬの薬剤含有血漿サンプルを添加し、他側に等体積の透析液（リン酸塩緩衝液）を添加した。実験は並行群間比較試験である。透析プレートを封止し、インキュベート装置に入れ、３７℃、５％ＣＯ２で、約１００ｒｐｍの回転数で６時間インキュベートした。インキュベート終了後、ブロッキング膜を剥がし、各ウェルの緩衝液及び血漿側から５０μＬ吸い取って新しいプレートの異なるウェルに移した。
【0195】
リン酸塩緩衝液サンプルに５０μＬのブランク血漿を添加し、血漿サンプルに等体積のブランクリン酸塩緩衝液を添加した。３００μＬの室温用クエンチャー（内部標準アセトニトリル（ＩＳ、５００ｎＭラベタロール、１００ｎＭアルプラゾラム及び２μＭケトプロフェン）を含有する）添加してタンパク質を沈殿させた。５分間旋回撹拌した。４℃で、３２２０ｇで３０分間遠心分離した。１００μＬの上清液を新しいプレートに移す。測定対象物のＬＣ／ＭＳ応答信号及びピーク形状に基づいて、１００μＬ又は２００μＬの水で上清液を希釈した。均一に混合し、液質を用いて検体分析を行った。
【0196】
全ての計算はＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌで行った。被検物質の緩衝液側及び血漿側のピーク面積を確定した。被検物質及び対照薬の血漿タンパク質結合率の計算式は以下のとおりである。
【0197】
【数3】
【0198】
サンプルピーク面積と内部標準ピーク面積との比の緩衝液側は、化合物の遊離濃度を表し、サンプルピーク面積と内部標準ピーク面積の比の血漿側は、化合物の遊離濃度と結合濃度との和を表し、サンプルピーク面積と内部標準ピーク面積の比の初期血漿サンプルは、サンプルのインキュベートを開始した時の化合物の総濃度を表す。
【0199】
試験結果：
表６に示す。１μＭの化合物２を、３７℃で６時間インキュベートし、平均遊離率は４６．６３％、結合率は５３．３７％、回収率は８８．０２％であった。
表６に示す。１μＭの化合物２を、３７℃で６時間インキュベートし、平均遊離率は４６．６３％、結合率は５３．３７％、回収率は８８．０２％であった。
【0200】
【表14】
【0201】
＜実施例３０：化合物２の単回胃内投与の組織分布試験＞
実験材料：
Ｂａｌｂ／ｃマウス（上海旻敞生物科技有限公司から購入）、合計６０匹、雌雄各３０匹、体重は１８～２５ｇである。
実験材料：
Ｂａｌｂ／ｃマウス（上海旻敞生物科技有限公司から購入）、合計６０匹、雌雄各３０匹、体重は１８～２５ｇである。
【0202】
実験ステップ：
Ｂａｌｂ／ｃマウスに化合物２を１００ｍｇ／ｋｇの投与量、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積で単回胃内投与した。
Ｂａｌｂ／ｃマウスに化合物２を１００ｍｇ／ｋｇの投与量、１０ｍＬ／ｋｇの投与体積で単回胃内投与した。
【0203】
投与前、投与後５ｍｉｎ、０．２５ｈ、１．０ｈ、２．０ｈ、３．０ｈ、５．０ｈ、７．０ｈ及び１０ｈ（各時点では６匹のマウス、雌雄各３匹）以上の時点で眼窩静脈叢から０．２ｍｌ採血し、ＥＤＴＡ－Ｋ ２試験管に入れ、１１０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離し、血漿を分離し、－７０℃の冷蔵庫で凍結させ、０．２５ｈ、１．０ｈ、３．０ｈ及び７．０ｈの時点で全血を採血した後、直ちに解剖して肺組織を採取し、冷生理食塩水で組織の表面に残された血液及び内容物を冷洗浄し、吸引乾燥した後にラベルを貼付し、－７０℃で保存して測定に備えた。ＬＣ／ＭＳ－ＭＳ法により血漿と肺組織中の化合物２の含有量を測定し、血漿中の含有量に対する肺組織中の含有量の比率を算出した。
【0204】
試験結果：
Ｂａｌｂ／ｃマウスに化合物２を単回胃内投与した後、肺組織曝露と血漿曝露との比率が０．６２であり、化合物２の肺組織曝露が高い。
Ｂａｌｂ／ｃマウスに化合物２を単回胃内投与した後、肺組織曝露と血漿曝露との比率が０．６２であり、化合物２の肺組織曝露が高い。
【0205】
＜実施例３１：化合物２の胃内投与によるカニクイザルの心血管系への影響に関する安全性薬理試験＞
カニクイザルの２周間反復投与毒性研究において、化合物２による心血管系への影響を同時に調査した。
カニクイザルの２周間反復投与毒性研究において、化合物２による心血管系への影響を同時に調査した。
【0206】
実験材料：
カニクイザル３２匹、雌雄各１６匹、投与時の年齢は２．５～５歳である。
カニクイザル３２匹、雌雄各１６匹、投与時の年齢は２．５～５歳である。
【0207】
動物供給源：雲南英茂生物科技有限公司、広西雄森霊長類実験動物養殖開発有限公司、中科霊瑞（湛江）生物技術有限公司。
【0208】
インテリジェント非侵襲性血圧計ＢＰ－９８Ｅで、すべての意識のある動物の収縮期血圧（ＳＢＰ）、弛緩期血圧（ＤＢＰ）及び平均動脈圧（ＭＢＰ）を測定し、Ｐｒｏｖａｎｔｉｓ／ｖ１０．２．３．１という電子データ収集システム（ＰＶ－０２）を使用した。
【0209】
実験ステップ：３２匹のカニクイザル（第１群及び第４群は５匹／性別／群、第２群及び第３群は３匹／性別／群、合計４群）を無作為に群分けし、経鼻投与により、化合物２（４０、１６０及び６００ｍｇ／ｋｇ／日）又は、対照製剤（９８．９％の溶媒製剤＋１．１％のＭＴＢＥ、０ｍｇ／ｋｇ／日）を、１日に２回、合計１４日間投与し、投与終了後１４日間の回復期間を設けた。すべての動物をこの研究の対象とし、薬物の投与がＥＣＧパラメータ（心拍数、ＰＲ間隔、ＱＲＳ持続時間、ＱＴ間隔、ＱＴｃＦを含む）、投与前、投与期間及び回復期間中の血圧に対する影響を評価した。
【0210】
試験結果：この試験の条件で、カニクイザルに化合物２を（４０、１６０、６００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）１４日間、１日に２回経鼻胃内投与した結果、被験品に関連する心血管系の変化が認められず、被験品に関連する不整脈が認められず、試験全過程にわたって、被験品に関するＥＣＧパラメータ又は血圧の変化が認められなかった。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【手続補正書】
【提出日】2024-07-24
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
一般式（Ｉ）で示すシアノ化合物又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又は薬学的に許容される塩。【化1】
Ｒ１は、－ＣＯＲ８及び－ＳＯ２Ｒ９から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、アダマンチル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、３～８員の炭素環を形成し、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、
Ｙは存在しないか、又はＯ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルコキシ基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、及びハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基から選択され、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、
又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣ２～Ｃ６アルキレン基を形成し、それによりＸとＹを連結し、
Ｒ６は、
【化2】
Ｒ７は、ＨとＤから選択され、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ１～Ｃ１０アルコキシ基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、５～２０員ヘテロアリール基、及びハロゲン化５～２０員ヘテロアリール基から選択され、
Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ２０アリール基、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ１０アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ２０アリール基、５～２０員ヘテロアリール基及びハロゲン化５～２０員ヘテロアリール基から選択され、
Ｒ１３及びＲ１４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基から選択され、
Ｒ１５及びＲ１６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基から選択される。）
【請求項2】
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｄ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、アダマンチル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、３～８員の炭素環を形成し、又は、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、Ｈ、イソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、シクロペンチル基及びアダマンチル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、シクロプロピル基及びシクロペンチル基を形成し、又は、
Ｒ２及びＲ３のうちの一方がＨから選択され、他方がイソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、シクロペンチル基及びアダマンチル基から選択され、又は、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、シクロプロピル基及びシクロペンチル基を形成する、請求項１に記載のシアノ化合物、又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー又は薬学的に許容される塩。
【請求項3】
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ６～Ｃ１０アリール基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、及びハロゲン化Ｃ６～Ｃ１０アリール基から選択され、Ｒ５は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基及びＣ３～Ｃ７シクロアルキル基から選択され、
又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣ２～Ｃ６アルキレン基を形成し、それによりＸとＹを連結し、又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣＨ２ＣＨ２及びＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２を形成し、それによりＸとＹを連結する、請求項１に記載のシアノ化合物、又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー又は薬学的に許容される塩。
【請求項4】
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ６～Ｃ１０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ１０アリール基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、５～１０員ヘテロアリール基及びハロゲン化５～１０員ヘテロアリール基から選択され、Ｒ１３及びＲ１４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基から選択され、又は、Ｒ８は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ基、－ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、フェニル基、ハロゲン化フェニル基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたフェニル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたフェニル基及び５～６員ヘテロアリール基から選択され、Ｒ１３及びＲ１４は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基から選択され、又は、
Ｒ８は、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３、ＣＦ２ＣＦ３、メトキシ基、
【化3】
【化4】
【化5】
Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基、ハロゲン化Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、－ＮＲ１５Ｒ１６、Ｃ６～Ｃ１０アリール基、ハロゲン化Ｃ６～Ｃ１０アリール基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、ハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基、５～１０員ヘテロアリール基及びハロゲン化５～１０員ヘテロアリール基から選択され、Ｒ１５及びＲ１６は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基から選択され、又は、
Ｒ９は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル基、フェニル基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたフェニル基、及びハロゲン化Ｃ１～Ｃ６アルキル基で置換されたフェニル基から選択され、又は、
Ｒ９は、ＣＨ３、シクロプロピル基、フェニル基、ｐ－メチルフェニル基及びｐ－トリフルオロメチルフェニル基から選択される、請求項１に記載のシアノ化合物又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又は薬学的に許容される塩。
【請求項5】
Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｓ（＝Ｏ）２及びＳ＝Ｏから選択され、Ｙは存在しないか、又はＯ、Ｓ及びＳ＝Ｏから選択され、Ｒ４は、Ｃ１～Ｃ６アルキル基及びＣ６～Ｃ１０アリール基から選択され、Ｒ５はＨから選択され、又は、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣ２～Ｃ６アルキレン基を形成し、それによりＸとＹを連結し、又は、Ｘ、Ｙはそれぞれ独立して、Ｏ、Ｓ及びＳ＝Ｏから選択され、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣＨ２ＣＨ２及びＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２を形成し、それによりＸとＹを連結し、又は、
Ｘ、Ｙはそれぞれ独立して、Ｏ、Ｓから選択され、Ｒ４及びＲ５は互いに連結してＣＨ２ＣＨ２を形成し、それによりＸとＹを連結する、請求項１に記載のシアノ化合物又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又は薬学的に許容される塩。
【請求項6】
一般式Ｉで示すシアノ化合物は、一般式ＩＡで示すシアノ化合物から選択され、【化6】
【請求項7】
一般式Ｉで示すシアノ化合物は、下記一般式で示すシアノ化合物から選択され、【化7】
【請求項8】
一般式Ｉで示す化合物は、以下の化合物から選択される、請求項１に記載のシアノ化合物又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又は薬学的に許容される塩。【化8】
【化9】
【化10】
【化11】
【請求項9】
一般式Ｉで示す化合物の製造方法であって、方法ｉと方法ｉｉのうちの１つであり、前記方法ｉでは、
【化12】
ｉｂ）式ＩＶで示す化合物を脱水することにより一般式Ｉで示す化合物を取得し、
前記方法ｉｉでは、
【化13】
ｉｉｂ）式ＶＩで示す化合物を脱保護して式ＶＩＩで示す化合物を取得し、
ｉｉｃ）式ＶＩＩで示す化合物から、アミノアシル化、スルホニル化又は縮合反応により式ＩＶで示す化合物を取得し、
ｉｉｄ）式ＩＶで示す化合物を脱水することにより一般式Ｉで示す化合物を取得し、
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｘ及びＹの定義は、請求項１～８のいずれか一項に記載の通りである、一般式Ｉで示す化合物の製造方法。
【請求項10】
請求項１～８のいずれか一項に記載のシアノ化合物、又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、もしくは薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される補助材料とを含み、任意選択的に、さらにリトナビル又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項11】
請求項１～８のいずれか一項に記載のシアノ化合物、又はそのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又は薬学的に許容される塩と、リトナビル又はその薬学的に許容される塩とを含む医薬組み合わせ。
【請求項12】
薬物の製造における請求項１～８のいずれか一項に記載のシアノ化合物、そのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー又はその薬学的に許容される塩の使用であって、前記薬物は、コロナウイルス３ＣＬプロテアーゼ活性を阻害するための薬物、コロナウイルス感染を予防及び／又は治療するための薬物、ピコルナウィルスの３ＣＬプロテアーゼ活性を阻害するための薬物、及びピコルナウィルス感染を予防及び／又は治療するための薬物から選択される、使用。
【請求項13】
前記コロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、Ｈ２２９Ｅ－ＣｏＶ、ＨＫＵ１－ＣｏＶ、ＮＬ６３－ＣｏＶ、ＯＣ４３－ＣｏＶ及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２から選択される、請求項１２に記載の使用。
【国際調査報告】