▶ シュテルナ バイオロジカルズ ゲーエムベーハー ウント コー， カーゲーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-20
(54)【発明の名称】ＤＮＡザイムヒドロゲル製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 9/00 20060101AFI20240912BHJP
A61K 47/34 20170101ALI20240912BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20240912BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20240912BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20240912BHJP
A61K 31/711 20060101ALI20240912BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20240912BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240912BHJP
A61K 47/10 20170101ALI20240912BHJP
C12N 15/113 20100101ALI20240912BHJP
C12N 5/10 20060101ALN20240912BHJP
【ＦＩ】
A61K9/00
A61K47/34
A61K47/26
A61K47/18
A61K47/02
A61K31/711
A61P1/04
A61P29/00
A61K47/10
C12N15/113 Z ZNA
C12N5/10
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024519243
(86)(22)【出願日】2022-09-28
(85)【翻訳文提出日】2024-05-23
(86)【国際出願番号】 EP2022076980
(87)【国際公開番号】W WO2023052422
(87)【国際公開日】2023-04-06
(31)【優先権主張番号】21200083.0
(32)【優先日】2021-09-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520221604
【氏名又は名称】シュテルナ バイオロジカルズ ゲーエムベーハー
【氏名又は名称原語表記】ＳＴＥＲＮＡ ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬＳ ＧｍｂＨ
(74)【代理人】
【識別番号】100133503
【弁理士】
【氏名又は名称】関口 一哉
(72)【発明者】
【氏名】ルップ， トマス
(72)【発明者】
【氏名】ボック， ダニエル
(72)【発明者】
【氏名】クラッテンマッハー， ロルフ
(72)【発明者】
【氏名】サリギアニス， ゲオルギオス
(72)【発明者】
【氏名】プラータ， カーラ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C076
4C086
【Ｆターム（参考）】
4B065AA93X
4B065AB01
4B065BA01
4C076AA11
4C076BB29
4C076CC16
4C076DD23
4C076DD26Z
4C076DD67Q
4C076EE23A
4C076EE41Q
4C076FF35
4C076FF36
4C076FF61
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA10
4C086EA16
4C086MA03
4C086MA05
4C086MA16
4C086MA27
4C086MA60
4C086NA03
4C086NA20
4C086ZA66
4C086ZB11
(57)【要約】
本発明は、ａ）高分子量ポロキサマーと、ｂ）低分子量ポロキサマーと、ｃ）ＤＮＡザイムと、ｄ）薬学的に許容され得る緩衝液と、を含む医薬組成物であって、組成物が、室温で液体であり、３６℃以上の温度で固体又は半固体である、医薬組成物を提供する。組成物は、腸疾患、特に炎症性腸疾患の治療に特に適している。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ａ）高分子量ポロキサマーと、ｂ）低分子量ポロキサマーと、
ｃ）ＤＮＡザイムと、
ｄ）薬学的に許容され得る緩衝液と、を含む医薬組成物であって、
前記組成物が、室温で液体であり、３６℃以上の温度で固体又は半固体である、医薬組成物。
【請求項2】
前記ＤＮＡザイムの含有量が４ｍｇ／ｍＬ～２０ｍｇ／ｍＬの範囲である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
前記高分子量ポロキサマーがポロキサマー４０７であり、及び／又は前記低分子量ポロキサマーがポロキサマー１８８である、請求項１又は２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記組成物が約１８～３０％ｗ／ｗのポロキサマー４０７を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項5】
前記組成物が約１～１０％ｗ／ｗのポロキサマー１８８を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項6】
ポロキサマー１８８対ポロキサマー４０７の重量比が１：５～１：２０の範囲内である、請求項１から５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項7】
安定剤を更に含み、場合により、前記安定剤がトレハロース又はジグリシンである、請求項１から６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項8】
前記ＤＮＡザイムが、配列番号１～配列番号７０から選択され、好ましくは前記ＤＮＡザイムがｈｇｄ４０（配列番号４０）である、請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項9】
前記薬学的に許容され得る緩衝液が、ｐＨ７～８のリン酸緩衝液である、請求項１から８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項10】
前記組成物が、ａ）２０～２５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７と、
ｂ）２～５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８と、
ｃ）２～１６ｍｇ／ｍＬのＤＮＡザイムと、
ｄ）ｐＨ７～８のリン酸緩衝液と、
ｅ）最大１０％ｗ／ｗの安定剤とを含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項11】
前記組成物が、ａ）２０～２５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７と、
ｂ）２～５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８と、
ｃ）２～１６ｍｇ／ｍＬのＤＮＡザイムと、
ｄ）ｐＨ７～８のリン酸緩衝液とを含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項12】
前記組成物が、ａ）２２．５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７と、
ｂ）２．５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８と、
ｃ）１６ｍｇ／ｍＬのｈｇｄ４０と、
ｄ）ｐＨ７．４のリン酸緩衝液とを含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項13】
前記組成物のゲル化時間が５分未満である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項14】
前記組成物のゲル化時間が２０秒～５分である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項15】
前記組成物のゲル化時間が１分以下である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項16】
前記組成物のゲル化時間が３０～６０秒である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項17】
医薬品として使用するための、請求項１から１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項18】
前記医薬品が腸疾患の治療用である、請求項１７に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項19】
前記医薬品が炎症性腸疾患の治療用である、請求項１７又は１８に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項20】
前記組成物が直腸投与される、請求項１７から１９のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【0001】
ＤＮＡザイムは、天然には存在しない触媒的に活性な一本鎖合成ＤＮＡ分子である。合成の触媒活性ＤＮＡ分子は、酵素と同様の触媒的様式で疾患関連ｍＲＮＡに特異的に結合して切断するための新規な治療部分として設計される（Ｇａｒｎ＆Ｒｅｎｚ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４７，（２０１７）２２－３０）。したがって、これらの部分は酵素活性を有するＤＮＡ分子であり、したがってＤＮＡザイムと呼ばれる。
【0002】
新規のクラスのアンチセンス分子を表す１０－２３ファミリーのＤＮＡザイムが１９９０年に開発された。「１０－２３ファミリー」という用語は、一般的なＤＮＡザイムモデルを指す（Ｓｏｎｔｏｒｏ＆Ｊｏｙｃｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９４（１９９７）４２６２－４２６６）。１０－２３モデルのＤＮＡザイムは、「１０－２３ＤＮＡザイム」とも呼ばれ、２つの基質結合ドメインに隣接する１５個のデオキシリボヌクレオチドの触媒ドメインを有する（例えば、国際公開第２００５／０３３３１４号パンフレット）。
【0003】
ＤＮＡザイムの潜在的な利点としては、標的ｍＲＮＡに結合した際の化学的又は酵素的分解に対する比較的高い安定性、高い標的特異性及び細胞内酵素に依存しないことが挙げられる。
【0004】
未修飾ＤＮＡザイムを活性物質として使用する場合に生じ得る問題は、標的ｍＲＮＡに結合せず、不適切に製剤化された場合の酵素分解に対する一本鎖核酸の感受性に起因することが多い。ＤＮＡザイムが生理学的に好ましい製剤中に存在しない限り、核酸は、例えば酵素分解又は物理的ストレスによって急速に分解する傾向がある。更に、ＤＮＡザイムは、それらの特異性、したがって活性薬剤としてのそれらの有効性において異なり得る。加えて、ＤＮＡザイムの安定性は、特にＤＮＡザイム含有溶液のｐＨの変化によって影響され得る。例えば、低いｐＨ（酸性環境）は、ＤＮＡザイム分子の脱プリンをもたらす可能性がある。高いｐＨ値（塩基性環境）はまた、例えば分子の二次構造を変化させることによって、ＤＮＡザイムの安定性、したがって機能性に影響を及ぼし得る。
【0005】
ＤＮＡザイムを含む適切な医薬組成物の調製は困難である。例えば、ＧＡＴＡ－３ｍＲＮＡの触媒的切断によってＧＡＴＡ－３転写因子の発現を阻害するように特に設計されたＤＮＡザイムであるＤＮＡザイムｈｇｄ４０を含む組成物は、より高濃度のＤＮＡザイムで粘度が指数関数的に増加することを示し、いくつかの組成物が特定の用途に適さなくなり、例えば、欧州特許第３５０１６０７号明細書を参照されたい。したがって、水性組成物以外でより高濃度のＤＮＡザイムを含む組成物を提供することは困難である。
【0006】
ｈｇｄ４０などのＤＮＡザイムは、慢性炎症性腸疾患の治療に使用することができ、欧州特許第３５１４２３５号明細書を参照されたい。この場合、ＤＮＡザイムは、水溶液の浣腸の形態で直腸投与される。液体浣腸としての薬物の投与は、炎症性腸疾患の処置のための通常の方法である。しかしながら、液体浣腸には、面倒な投与、薬物漏出及び患者のコンプライアンス不良などの制限がある。
【0007】
したがって、本発明の目的は、適切なＤＮＡザイム濃度を可能にしながら問題点を緩和することができる、ＤＮＡザイムのための新しい製剤を提供することであった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0008】
【特許文献1】国際公開第２００５／０３３３１４号パンフレット
【特許文献2】欧州特許第３５０１６０７号明細書
【特許文献3】欧州特許第３５１４２３５号明細書
【非特許文献】
【0009】
【非特許文献1】Ｇａｒｎ＆Ｒｅｎｚ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４７，（２０１７）２２－３０
【非特許文献2】Ｓｏｎｔｏｒｏ＆Ｊｏｙｃｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９４（１９９７）４２６２－４２６６
【発明の概要】
【0010】
第１の態様では、本発明は、
ａ）高分子量ポロキサマーと、
ｂ）低分子量ポロキサマーと、
ｃ）ＤＮＡザイムと、
ｄ）薬学的に許容され得る緩衝液と、を含む医薬組成物であって、
当該組成物が、室温以下で液体であり、３６℃以上の温度で固体又は半固体である、医薬組成物に関する。
ａ）高分子量ポロキサマーと、
ｂ）低分子量ポロキサマーと、
ｃ）ＤＮＡザイムと、
ｄ）薬学的に許容され得る緩衝液と、を含む医薬組成物であって、
当該組成物が、室温以下で液体であり、３６℃以上の温度で固体又は半固体である、医薬組成物に関する。
【0011】
更なる態様では、本発明は、腸疾患、特に炎症性腸疾患の治療に使用するための上記で定義した組成物に関する。
【図面の簡単な説明】
【0012】
【図1】異なる時点でヒドロゲル組成物から放出されたｈｇｄ４０の吸光度スペクトルを示す図である。
【図2A】ｈｇｄ４０ストック溶液のＡＥＸクロマトグラフィープロファイルを示す図である。
【図2B】ヒドロゲル放出後のｈｇｄ４０溶液のＡＥＸクロマトグラフィープロファイルを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0013】
本発明の発明者らは、短いゲル化時間、十分に高い濃度の活性医薬成分（ＡＰＩ）及び適切に調整されたＴｓｏｌ－ｇｅｌ温度を有するヒドロゲル組成物中にＤＮＡザイムを製剤化することが可能であることを見出した。更に、形成されたゲルは、所望の期間にわたってその完全性を更に維持している。したがって、これらの製剤は、液体浣腸製剤に有利である。したがって、本発明は、第１の態様において、直腸投与に適したＤＮＡザイムを含む医薬組成物に関する。組成物は、室温以下で液体であり、約３６℃以上で固体又は半固体ゲルであるヒドロゲル組成物である。
【0014】
本発明の文脈において、室温という用語は、１６～２５℃、特に１６～２１℃の温度を指す。いくつかの実施形態では、室温は、２１℃の温度を指す。
【0015】
本発明者らは、ポロキサマーベースのヒドロゲルを使用して、室温以下で液体であり、３６℃以上で固体又は半固体ゲルであるヒドロゲル組成物中にＤＮＡザイムを製剤化できることを見出した。
【0016】
したがって、第１の態様では、本発明は、
ａ）高分子量ポロキサマーと、
ｂ）低分子量ポロキサマーと、
ｃ）ＤＮＡザイムと、
ｄ）薬学的に許容され得る緩衝液と、を含む医薬組成物であって、
組成物が、室温で液体であり、３６℃以上の温度で固体又は半固体である、医薬組成物に関する。
ａ）高分子量ポロキサマーと、
ｂ）低分子量ポロキサマーと、
ｃ）ＤＮＡザイムと、
ｄ）薬学的に許容され得る緩衝液と、を含む医薬組成物であって、
組成物が、室温で液体であり、３６℃以上の温度で固体又は半固体である、医薬組成物に関する。
【0017】
組成物は、他の薬学的に許容され得る化合物、特に賦形剤及び／又は安定剤を含み得る。
【0018】
ポロキサマーという用語は、ポリオキシエチレン（ポリ（エチレンオキシド））の２つの親水性鎖が隣接するポリオキシプロピレン（ポリ（プロピレンオキシド））の中央疎水性鎖から構成される非イオン性トリブロックコポリマーのクラスを指す。ポロキサマーの一般構造は以下の通りである。
【0019】
高分子量ポロキサマーという用語は、３０００ｇ／ｍｏｌ以上のポリオキシプロピレン質量を有するポロキサマーを指す。低分子量ポロキサマーという用語は、３０００ｇ／ｍｏｌ未満のポリオキシプロピレン質量を有するポロキサマーを指す。
【0020】
好ましい高分子量ポロキサマーはポロキサマー４０７であり、商品名ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ１２７で呼ばれることもあり、好ましい低分子量ポロキサマーはポロキサマー１８８であり、商品名ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８で呼ばれることもある。
【0021】
一般に、ポロキサマーの名前の３桁の数字は、当該ポロキサマーを定義するために使用される。最初の二桁に１００を乗じた数はポリオキシプロピレンコアのおおよその分子量を示し、最後の桁に１０を乗じた数はポリオキシエチレン含有率を示す。ポロキサマー４０７は、４０００ｇ／ｍｏｌのポリオキシプロピレン分子質量及び７０％のポリオキシエチレン含有量を有するポロキサマーを指す。ポロキサマー１８８は、１８００ｇ／ｍｏｌのポリオキシプロピレン分子質量及び８０％のポリオキシエチレン含有量を有するポロキサマーを指す。
【0022】
したがって、好ましい実施形態では、本発明は、
ａ）ポロキサマー４０７と、
ｂ）ポロキサマー１８８と、
ｃ）ＤＮＡザイムと、
ｄ）薬学的に許容され得る緩衝液と、を含む医薬組成物であって、
組成物が、室温で液体であり、３６℃以上の温度で固体又は半固体である、医薬組成物に関する。
ａ）ポロキサマー４０７と、
ｂ）ポロキサマー１８８と、
ｃ）ＤＮＡザイムと、
ｄ）薬学的に許容され得る緩衝液と、を含む医薬組成物であって、
組成物が、室温で液体であり、３６℃以上の温度で固体又は半固体である、医薬組成物に関する。
【0023】
本発明者らは、高濃度のＤＮＡザイムを含むゲル形成組成物を提供することが特に困難であることを見出した。本発明者らは、特に、ＧＡＴＡ－３転写因子の発現を特異的に阻害するＤＮＡザイムが、これらのＤＮＡザイムの独特の特性のために製剤化が困難であることを見出した。
【0024】
したがって、好ましい実施形態では、組成物は、ＧＡＴＡ－３発現を特異的に阻害するＤＮＡザイムを含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＡザイムは、以下を含む群から選択される。
配列番号１ ｈｇｄ１ ５’－ＴＣＧＧＴＣＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＧＣＧＴＴＧＣＴ－３’
配列番号２ ｈｇｄ２ ５’－ＧＧＣＧＴＡＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＧＣＴＣＧＧＴ－３’
配列番号３ ｈｇｄ３ ５’－ＧＧＣＧＧＣＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＣＣＴＧＣＴＣ－３’
配列番号４ ｈｇｄ４ ５’－ＣＴＣＧＧＧＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＧＧＧＴＡＧＣ－３’
配列番号５ ｈｇｄ５ ５’－ＴＣＣＴＣＴＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＧＧＧＴＣＣＴ－３’
配列番号６ ｈｇｄ６ ５’－ＡＣＴＣＴＧＣＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＴＧＣＧＡＧＣ－３’
配列番号７ ｈｇｄ７ ５’－ＧＧＧＣＧＡＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＴＧＣＡＡＴＴ－３’
配列番号８ ｈｇｄ８ ５’－ＡＡＧＧＧＧＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＣＴＣＴＧＣＡ－３’
配列番号９ ｈｇｄ９ ５’－ＡＡＡＡＣＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＡＧＧＴＴＧＴＡ－３’
配列番号１０ ｈｇｄ１０ ５’－ＡＧＡＡＴＡＡＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＡＣＣＡＧＧ－３’
配列番号１１ ｈｇｄ１１ ５’－ＡＴＧＧＣＡＧＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＡＡＡＣＧＧＧＡ－３’
配列番号１２ ｈｇｄ１２ ５’－ＡＡＣＴＧＧＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＣＡＧＡＡＴＡ－３’
配列番号１３ ｈｇｄ１３ ５’－ＡＴＣＣＡＡＡＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＧＧＧＴＡＴＧＧ－３’
配列番号１４ ｈｇｄ１４ ５’－ＡＧＧＧＧＡＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＡＡＡＡＴＣＣＡ－３’
配列番号１５ ｈｇｄ１５ ５’－ＴＴＴＴＡＡＡＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＡＴＣＴＴＧＧＡ－３’
配列番号１６ ｈｇｄ１６ ５’－ＧＴＧＧＧＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＡＡＧＧＣＴ－３’
配列番号１７ ｈｇｄ１７ ５’－ＧＴＴＧＡＡＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＴＧＣＴＴＴＣＧ－３’
配列番号１８ ｈｇｄ１８ ５’－ＧＴＣＧＴＴＧＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＴＴＴＧＣＴＴ－３’
配列番号１９ ｈｇｄ１９ ５’－ＧＧＣＣＣＧＧＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＧＣＧＣＧＣＧ－３’
配列番号２０ ｈｇｄ２０ ５’－ＴＣＡＣＣＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＣＣＴＣＧＧＣ－３’
配列番号２１ ｈｇｄ２１ ５’－ＣＣＧＣＣＧＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＣＡＴＧＧＣ－３’
配列番号２２ ｈｇｄ２２ ５’－ＧＧＴＧＧＣＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＡＧＣＧＣＧＧ－３’
配列番号２３ ｈｇｄ２３ ５’－ＣＧＴＴＧＡＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＣＧＧＧＧＴＧ－３’
配列番号２４ ｈｇｄ２４ ５’－ＣＣＧＣＧＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＡＧＧＡＧＴＧ－３’
配列番号２５ ｈｇｄ２５ ５’－ＣＡＧＣＧＧＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＧＣＧＣＣＧＣＧ－３’
配列番号２６ ｈｇｄ２６ ５’－ＧＣＡＣＡＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＣＴＣＣＧＧ－３’
配列番号２７ ｈｇｄ２７ ５’－ＡＡＡＡＧＣＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＡＣＣＴＣＣＴ－３’
配列番号２８ ｈｇｄ２８ ５’－ＴＡＡＡＡＡＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＴＣＣＡＣＣＴＣ－３’
配列番号２９ ｈｇｄ２９ ５’－ＧＡＣＣＧＴＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＴＡＡＡＡＡＧ－３’
配列番号３０ ｈｇｄ３０ ５’－ＴＴＧＣＣＴＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＴＣＧＡＴＧＴ－３’
配列番号３１ ｈｇｄ３１ ５’－ＡＧＧＧＣＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＧＧＴＴＧＣＣ－３’
配列番号３２ ｈｇｄ３２ ５’－ＴＧＧＣＣＣＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＡＧＴＴＴＣＣ－３’
配列番号３３ ｈｇｄ３３ ５’－ＡＣＣＴＣＴＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＴＧＧＣＣＣＴ－３’
配列番号３４ ｈｇｄ３４ ５’－ＣＧＧＡＧＧＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＴＧＣＡＣＣ－３’
配列番号３５ ｈｇｄ３５ ５’－ＧＧＣＧＧＣＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＧＧＣＴＣＣＣ－３’
配列番号３６ ｈｇｄ３６ ５’－ＣＧＧＧＣＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＣＣＴＧＧＣＴＣ－３’
配列番号３７ ｈｇｄ３７ ５’－ＡＧＧＧＡＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＡＧＣＡＧＡＧ－３’
配列番号３８ ｈｇｄ３８ ５’－ＧＧＧＴＡＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＡＴＧＡＡＧＣ－３’
配列番号３９ ｈｇｄ３９ ５’－ＧＧＧＣＴＧＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＣＡＧＧＧＧＧ－３’
配列番号４０ ｈｇｄ４０ ５’－ＧＴＧＧＡＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＴＴＧＧＡＧ－３’
配列番号４１ ｈｇｄ４１ ５’－ＣＧＴＧＧＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＡＣＧＴＣＴＴ－３’
配列番号４２ ｈｇｄ４２ ５’－ＧＧＧＧＧＴＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＡＧＡＧＧＧＧ－３’
配列番号４３ ｈｇｄ４３ ５’－ＧＧＡＧＧＡＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＧＧＣＣＧＧＧ－３’
配列番号４４ ｈｇｄ４４ ５’－ＧＣＣＣＣＣＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＡＧＧＡＧＧＡＧ－３’
配列番号４５ ｈｇｄ４５ ５’－ＣＣＧＧＧＧＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＣＴＴＣＧＧ－３’
配列番号４６ ｈｇｄ４６ ５’－ＧＧＡＣＡＧＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＴＣＣＧＧＧ－３’
配列番号４７ ｈｇｄ４７ ５’－ＴＧＧＧＧＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＣＧＡＴＧＧＧ－３’
配列番号４８ ｈｇｄ４８ ５’－ＣＴＴＧＡＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＴＴＴＣＴＣＧ－３’
配列番号４９ ｈｇｄ４９ ５’－ＣＡＣＣＴＧＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＴＧＡＧＧＣＡＣ－３’
配列番号５０ ｈｇｄ５０ ５’－ＧＣＡＧＧＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＧＧＴＡＣＴＴ－３’
配列番号５１ ｈｇｄ５１ ５’－ＣＣＡＧＣＴＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＴＧＴＣＧＧＧ－３’
配列番号５２ ｈｇｄ５２ ５’－ＧＴＧＧＧＡＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’
配列番号５３ ｈｇｄ５３ ５’－ＧＧＡＧＴＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＣＴＣＣＡＧＣ－３’
配列番号５４ ｈｇｄ５４ ５’－ＡＴＧＣＴＧＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＡＧＴＧＧＧ－３’
配列番号５５ ｈｇｄ５５ ５’－ＧＧＧＣＧＧＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＴＧＣＣＡＣＧ－３’
配列番号５６ ｈｇｄ５６ ５’－ＧＡＧＧＣＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＡＧＧＧＣＧＧ－３’
配列番号５７ ｈｇｄ５７ ５’－ＧＴＧＧＧＴＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＧＧＡＧＧＣＴ－３’
配列番号５８ ｈｇｄ５８ ５’－ＡＧＧＴＧＧＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＧＴＧＧＴＧ－３’
配列番号５９ ｈｇｄ５９ ５’－ＡＣＴＣＧＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＡＧＧＧＣＧＧ－３’
配列番号６０ ｈｇｄ６０ ５’－ＧＧＡＧＣＴＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＧＧＧＣＡＣＧ－３’
配列番号６１ ｈｇｄ６１ ５’－ＧＧＡＣＴＴＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＧＡＡＧＣＣＧ－３’
配列番号６２ ｈｇｄ６２ ５’－ＧＧＧＣＣＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＴＧＣＡＴＣＣＧ－３’
配列番号６３ ｈｇｄ６３ ５’－ＴＧＴＧＣＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＧＧＣＣＴＴＧ－３’
配列番号６４ ｈｇｄ６４ ５’－ＧＴＴＣＡＣＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＣＣＴＧＣＣＴ－３’
配列番号６５ ｈｇｄ６５ ５’－ＣＡＧＴＴＣＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＣＴＣＣＣＴＧＣ－３’
配列番号６６ ｈｇｄ６６ ５’－ＣＡＣＡＧＴＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＣＡＣＴＣＣＣＴ－３’
配列番号６７ ｈｇｄ６７ ５’－ＧＴＴＧＣＣＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＴＴＣＡＣＡＣ－３’
配列番号６８ ｈｇｄ６８ ５’－ＴＣＧＣＣＧＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＴＧＧＧＧＴＣ－３’
配列番号６９ ｈｇｄ６９ ５’－ＣＣＣＧＴＧＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＧＣＣＧＣＣ－３’
配列番号７０ ｈｇｄ７０ ５’－ＧＧＣＧＴＴＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＧＴＡＧＴＧＴ－３’
配列番号１ ｈｇｄ１ ５’－ＴＣＧＧＴＣＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＧＣＧＴＴＧＣＴ－３’
配列番号２ ｈｇｄ２ ５’－ＧＧＣＧＴＡＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＧＣＴＣＧＧＴ－３’
配列番号３ ｈｇｄ３ ５’－ＧＧＣＧＧＣＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＣＣＴＧＣＴＣ－３’
配列番号４ ｈｇｄ４ ５’－ＣＴＣＧＧＧＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＧＧＧＴＡＧＣ－３’
配列番号５ ｈｇｄ５ ５’－ＴＣＣＴＣＴＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＧＧＧＴＣＣＴ－３’
配列番号６ ｈｇｄ６ ５’－ＡＣＴＣＴＧＣＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＴＧＣＧＡＧＣ－３’
配列番号７ ｈｇｄ７ ５’－ＧＧＧＣＧＡＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＴＧＣＡＡＴＴ－３’
配列番号８ ｈｇｄ８ ５’－ＡＡＧＧＧＧＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＣＴＣＴＧＣＡ－３’
配列番号９ ｈｇｄ９ ５’－ＡＡＡＡＣＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＡＧＧＴＴＧＴＡ－３’
配列番号１０ ｈｇｄ１０ ５’－ＡＧＡＡＴＡＡＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＡＣＣＡＧＧ－３’
配列番号１１ ｈｇｄ１１ ５’－ＡＴＧＧＣＡＧＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＡＡＡＣＧＧＧＡ－３’
配列番号１２ ｈｇｄ１２ ５’－ＡＡＣＴＧＧＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＣＡＧＡＡＴＡ－３’
配列番号１３ ｈｇｄ１３ ５’－ＡＴＣＣＡＡＡＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＧＧＧＴＡＴＧＧ－３’
配列番号１４ ｈｇｄ１４ ５’－ＡＧＧＧＧＡＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＡＡＡＡＴＣＣＡ－３’
配列番号１５ ｈｇｄ１５ ５’－ＴＴＴＴＡＡＡＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＡＴＣＴＴＧＧＡ－３’
配列番号１６ ｈｇｄ１６ ５’－ＧＴＧＧＧＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＡＡＧＧＣＴ－３’
配列番号１７ ｈｇｄ１７ ５’－ＧＴＴＧＡＡＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＴＧＣＴＴＴＣＧ－３’
配列番号１８ ｈｇｄ１８ ５’－ＧＴＣＧＴＴＧＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＴＴＴＧＣＴＴ－３’
配列番号１９ ｈｇｄ１９ ５’－ＧＧＣＣＣＧＧＡＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＧＣＧＣＧＣＧ－３’
配列番号２０ ｈｇｄ２０ ５’－ＴＣＡＣＣＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＣＣＴＣＧＧＣ－３’
配列番号２１ ｈｇｄ２１ ５’－ＣＣＧＣＣＧＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＣＡＴＧＧＣ－３’
配列番号２２ ｈｇｄ２２ ５’－ＧＧＴＧＧＣＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＡＧＣＧＣＧＧ－３’
配列番号２３ ｈｇｄ２３ ５’－ＣＧＴＴＧＡＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＣＧＧＧＧＴＧ－３’
配列番号２４ ｈｇｄ２４ ５’－ＣＣＧＣＧＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＡＧＧＡＧＴＧ－３’
配列番号２５ ｈｇｄ２５ ５’－ＣＡＧＣＧＧＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＧＣＧＣＣＧＣＧ－３’
配列番号２６ ｈｇｄ２６ ５’－ＧＣＡＣＡＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＣＴＣＣＧＧ－３’
配列番号２７ ｈｇｄ２７ ５’－ＡＡＡＡＧＣＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＡＣＣＴＣＣＴ－３’
配列番号２８ ｈｇｄ２８ ５’－ＴＡＡＡＡＡＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＴＣＣＡＣＣＴＣ－３’
配列番号２９ ｈｇｄ２９ ５’－ＧＡＣＣＧＴＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＴＡＡＡＡＡＧ－３’
配列番号３０ ｈｇｄ３０ ５’－ＴＴＧＣＣＴＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＴＣＧＡＴＧＴ－３’
配列番号３１ ｈｇｄ３１ ５’－ＡＧＧＧＣＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＧＧＴＴＧＣＣ－３’
配列番号３２ ｈｇｄ３２ ５’－ＴＧＧＣＣＣＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＡＧＴＴＴＣＣ－３’
配列番号３３ ｈｇｄ３３ ５’－ＡＣＣＴＣＴＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＴＧＧＣＣＣＴ－３’
配列番号３４ ｈｇｄ３４ ５’－ＣＧＧＡＧＧＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＴＧＣＡＣＣ－３’
配列番号３５ ｈｇｄ３５ ５’－ＧＧＣＧＧＣＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＧＧＣＴＣＣＣ－３’
配列番号３６ ｈｇｄ３６ ５’－ＣＧＧＧＣＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＣＣＴＧＧＣＴＣ－３’
配列番号３７ ｈｇｄ３７ ５’－ＡＧＧＧＡＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＡＧＣＡＧＡＧ－３’
配列番号３８ ｈｇｄ３８ ５’－ＧＧＧＴＡＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＡＴＧＡＡＧＣ－３’
配列番号３９ ｈｇｄ３９ ５’－ＧＧＧＣＴＧＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＣＡＧＧＧＧＧ－３’
配列番号４０ ｈｇｄ４０ ５’－ＧＴＧＧＡＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＴＴＧＧＡＧ－３’
配列番号４１ ｈｇｄ４１ ５’－ＣＧＴＧＧＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＡＣＧＴＣＴＴ－３’
配列番号４２ ｈｇｄ４２ ５’－ＧＧＧＧＧＴＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＡＧＡＧＧＧＧ－３’
配列番号４３ ｈｇｄ４３ ５’－ＧＧＡＧＧＡＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＧＧＣＣＧＧＧ－３’
配列番号４４ ｈｇｄ４４ ５’－ＧＣＣＣＣＣＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＡＧＧＡＧＧＡＧ－３’
配列番号４５ ｈｇｄ４５ ５’－ＣＣＧＧＧＧＡＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＣＣＴＴＣＧＧ－３’
配列番号４６ ｈｇｄ４６ ５’－ＧＧＡＣＡＧＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＴＣＣＧＧＧ－３’
配列番号４７ ｈｇｄ４７ ５’－ＴＧＧＧＧＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＣＧＡＴＧＧＧ－３’
配列番号４８ ｈｇｄ４８ ５’－ＣＴＴＧＡＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＴＴＴＣＴＣＧ－３’
配列番号４９ ｈｇｄ４９ ５’－ＣＡＣＣＴＧＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＴＧＡＧＧＣＡＣ－３’
配列番号５０ ｈｇｄ５０ ５’－ＧＣＡＧＧＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＧＧＴＡＣＴＴ－３’
配列番号５１ ｈｇｄ５１ ５’－ＣＣＡＧＣＴＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＴＧＴＣＧＧＧ－３’
配列番号５２ ｈｇｄ５２ ５’－ＧＴＧＧＧＡＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’
配列番号５３ ｈｇｄ５３ ５’－ＧＧＡＧＴＧＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＣＴＣＣＡＧＣ－３’
配列番号５４ ｈｇｄ５４ ５’－ＡＴＧＣＴＧＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＡＧＴＧＧＧ－３’
配列番号５５ ｈｇｄ５５ ５’－ＧＧＧＣＧＧＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＣＴＧＣＣＡＣＧ－３’
配列番号５６ ｈｇｄ５６ ５’－ＧＡＧＧＣＴＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＡＧＧＧＣＧＧ－３’
配列番号５７ ｈｇｄ５７ ５’－ＧＴＧＧＧＴＣＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＡＧＧＡＧＧＣＴ－３’
配列番号５８ ｈｇｄ５８ ５’－ＡＧＧＴＧＧＴＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＧＧＧＴＧＧＴＧ－３’
配列番号５９ ｈｇｄ５９ ５’－ＡＣＴＣＧＧＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＧＴＡＧＧＧＣＧＧ－３’
配列番号６０ ｈｇｄ６０ ５’－ＧＧＡＧＣＴＧＴＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＧＧＧＣＡＣＧ－３’
配列番号６１ ｈｇｄ６１ ５’－ＧＧＡＣＴＴＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＣＧＡＡＧＣＣＧ－３’
配列番号６２ ｈｇｄ６２ ５’－ＧＧＧＣＣＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＴＧＣＡＴＣＣＧ－３’
配列番号６３ ｈｇｄ６３ ５’－ＴＧＴＧＣＴＧＧＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＧＧＧＣＣＴＴＧ－３’
配列番号６４ ｈｇｄ６４ ５’－ＧＴＴＣＡＣＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＴＣＣＣＴＧＣＣＴ－３’
配列番号６５ ｈｇｄ６５ ５’－ＣＡＧＴＴＣＡＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＣＴＣＣＣＴＧＣ－３’
配列番号６６ ｈｇｄ６６ ５’－ＣＡＣＡＧＴＴＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＣＡＣＴＣＣＣＴ－３’
配列番号６７ ｈｇｄ６７ ５’－ＧＴＴＧＣＣＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＴＴＣＡＣＡＣ－３’
配列番号６８ ｈｇｄ６８ ５’－ＴＣＧＣＣＧＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＴＧＧＧＧＴＣ－３’
配列番号６９ ｈｇｄ６９ ５’－ＣＣＣＧＴＧＣＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＣＴＣＧＣＣＧＣＣ－３’
配列番号７０ ｈｇｄ７０ ５’－ＧＧＣＧＴＴＧＣＡｇｇｃｔａｇｃｔａｃａａｃｇａＡＧＧＴＡＧＴＧＴ－３’
【0025】
特定の実施形態では、組成物は、ＤＮＡザイムｈｇｄ４０（配列番号４０）を含む。
【0026】
本発明により、医療用途に適したより高い濃度のＤＮＡザイムを含むヒドロゲル製剤が可能となる。したがって、組成物中のＤＮＡザイム濃度は少なくとも４ｍｇ／ｍＬであることが好ましい。したがって、いくつかの実施形態では、ＤＮＡザイム濃度は少なくとも４ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＤＮＡザイム濃度は４ｍｇ／ｍＬ～２０ｍｇ／ｍＬの範囲である。
【0027】
本発明のいくつかの実施形態では、ＤＮＡザイム濃度は少なくとも８ｍｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＤＮＡザイム濃度は、８～２０ｍｇ／ｍＬの範囲、好ましくは８～１６ｍｇ／ｍＬの範囲である。
【0028】
いくつかの実施形態では、ＤＮＡザイム濃度は４、８又は１６ｍｇ／ｍＬである。特定の実施形態では、ＤＮＡザイム濃度は約１６ｍｇ／ｍＬである。他の実施形態では、ＤＮＡザイム濃度は８ｍｇ／ｍＬであり、更なる実施形態では、ＤＮＡザイム濃度は約４ｍｇ／ｍＬである。
【0029】
特定の組成及び２つの異なるポロキサマーの比は、ＤＮＡザイムの濃度に加えて、組成物のゲル形成挙動に影響を及ぼす可能性がある。
【0030】
したがって、一実施形態では、組成物は、合計で最大５０％ｗ／ｗの軽い分子量及び重い分子量ポロキサマーの組み合わせを含む。特に、組成物は、ポロキサマー４０７とポロキサマー１８８との合計５０％ｗ／ｗまでの混合物を含む。いくつかの実施形態では、ポロキサマーの総含有量は、１０％～５０％ｗ／ｗの範囲である。
【0031】
特に明記しない限り、パーセンテージ値は重量パーセント、すなわちｗ／ｗを指す。
【0032】
特定の実施形態では、高分子量ポロキサマー及び低分子量ポロキサマーの総含有量は、２０～３５％ｗ／ｗの範囲である。特定の実施形態では、ポロキサマーは、ポロキサマー４０７及びポロキサマー１８８であり、ポロキサマー１８８及びポロキサマー４０７の総含有量は、２０～３５％ｗ／ｗの範囲である。
【0033】
低分子量ポロキサマーと高分子量ポロキサマーとの重量比は、任意の適切な範囲であってもよい。いくつかの実施形態では、低分子量ポロキサマーの比は、１：５～１：２０の範囲である。
【0034】
いくつかの実施形態では、組成物は、最大３０％ｗ／ｗの高分子量ポロキサマー、特にポロキサマー４０７を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、１８～３０％ｗ／ｗの高分子量ポロキサマー、特にポロキサマー４０７を含む。
【0035】
本発明のいくつかの実施形態では、組成物は、約２０～２５％ｗ／ｗの高分子量ポロキサマーを含み、好ましい実施形態では、組成物は、約２０～２５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７を含む。
【0036】
特定の実施形態では、組成物は、２２．５％ｗ／ｗの高分子量ポロキサマー、特に約２２．５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７を含む。
【0037】
一般に、低分子量ポロキサマーの量は２０％ｗ／ｗ未満であることが好ましい。いくつかの実施形態では、組成物は、最大２０％の低分子量ポロキサマーを含み、好ましい実施形態では最大２０％のポロキサマー１８８を含む。
【0038】
本発明のいくつかの実施形態では、組成物は、約１～１０％ｗ／ｗの低分子量ポロキサマーを含み、特に約１～１０％ｗ／ｗのポロキサマー１８８を含む。
【0039】
本発明の特定の実施形態では、組成物は、約２～５％ｗ／ｗの低分子量ポロキサマーを含み、特に、組成物は、約２～５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８を含む。
【0040】
本発明のいくつかの実施形態では、組成物は、約２．５％ｗ／ｗの低分子量ポロキサマーを含み、特に、いくつかの実施形態では、組成物は、約２．５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８を含む。
【0041】
組成物は、安定剤、賦形剤又は他の薬学的に許容され得る化合物を更に含み得る。
【0042】
使用することができる適切な安定剤としては、トレハロース又はジグリシンが挙げられる。
【0043】
組成物が安定剤を含む場合、組成物は最大２０％ｗ／ｗの安定剤を含むことが好ましい。
【0044】
したがって、本発明のいくつかの実施形態では、組成物は、最大２０％の安定剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約２～１６％ｗ／ｗの安定剤を含む。特定の実施形態では、組成物は、約５％ｗ／ｗの安定剤を含む。
【0045】
組成物は、薬学的に許容され得る緩衝液を含む。当該緩衝液は、任意の薬学的に許容され得る緩衝液であってもよい。薬学的に許容され得る緩衝液は、例えば、ＴＲＩＳ、ＨＥＰＥＳ、リン酸、酢酸又はクエン酸に基づく。任意の適切な緩衝液を組成物に使用してもよい。
【0046】
本発明の好ましい実施形態では、緩衝液はリン酸系緩衝液、例えばＰＢＳ緩衝液である。緩衝液のｐＨは、好ましくは生理学的及び薬学的に許容され得るｐＨである。いくつかの実施形態では、緩衝液のｐＨは７～８であり、特定の実施形態ではｐＨは７．４である。いくつかの実施形態では、ｐＨは、７．２～７．６である。いくつかの実施形態では、ｐＨは、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９及び８．０から選択される。
【0047】
いくつかの実施形態では、本発明は、
ａ）２０～２５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７と、
ｂ）２～５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８と、
ｃ）２～１６ｍｇ／ｍＬのＤＮＡザイムと、
ｄ）ｐＨ７．４のリン酸緩衝液と、
ｅ）場合により最大１０％ｗ／ｗの安定剤とを含む組成物に関する。
ａ）２０～２５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７と、
ｂ）２～５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８と、
ｃ）２～１６ｍｇ／ｍＬのＤＮＡザイムと、
ｄ）ｐＨ７．４のリン酸緩衝液と、
ｅ）場合により最大１０％ｗ／ｗの安定剤とを含む組成物に関する。
【0048】
好ましい実施形態では、本発明は、
ａ）２２．５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７と、
ｂ）５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８と、
ｃ）８ｍｇ／ｍＬのｈｇｄ４０と、
ｄ）ｐＨ７．４のリン酸緩衝液とを含む組成物に関する。
ａ）２２．５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７と、
ｂ）５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８と、
ｃ）８ｍｇ／ｍＬのｈｇｄ４０と、
ｄ）ｐＨ７．４のリン酸緩衝液とを含む組成物に関する。
【0049】
本発明の特定の実施形態では、組成物は、
ａ）２０％ｗ／ｗのポロキサマー４０７と、
ｂ）２．５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８と、
ｃ）８ｍｇ／ｍＬのｈｇｄ４０と、
ｄ）ｐＨ７．４のリン酸緩衝液とを含む。
ａ）２０％ｗ／ｗのポロキサマー４０７と、
ｂ）２．５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８と、
ｃ）８ｍｇ／ｍＬのｈｇｄ４０と、
ｄ）ｐＨ７．４のリン酸緩衝液とを含む。
【0050】
本発明の特定の更なる実施形態では、組成物は、
ａ）２２．５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７と、
ｂ）２．５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８と、
ｃ）８ｍｇ／ｍＬのｈｇｄ４０と、
ｄ）ｐＨ７．４のリン酸緩衝液と、
ｅ）５％ｗ／ｗのトレハロースとを含む。
ａ）２２．５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７と、
ｂ）２．５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８と、
ｃ）８ｍｇ／ｍＬのｈｇｄ４０と、
ｄ）ｐＨ７．４のリン酸緩衝液と、
ｅ）５％ｗ／ｗのトレハロースとを含む。
【0051】
なお更なる実施形態では、組成物は、
ａ）２２．５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７と、
ｂ）２．５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８と、
ｃ）１６ｍｇ／ｍＬのｈｇｄ４０と、
ｄ）ｐＨ７．４のリン酸緩衝液とを含む。
ａ）２２．５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７と、
ｂ）２．５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８と、
ｃ）１６ｍｇ／ｍＬのｈｇｄ４０と、
ｄ）ｐＨ７．４のリン酸緩衝液とを含む。
【0052】
特許請求される組成物の利点は、組成物のゲル化時間が短いことである。したがって、一実施形態では、本発明は、組成物のゲル化時間が５分未満である、上記で定義した医薬組成物に関する。いくつかの実施形態では、組成物は、ゲル化時間が２０秒～５分である。好ましい実施形態では、組成物はゲル化時間が１分以下である。特定の実施形態では、組成物はゲル化時間が３０～６０秒である。
【0053】
本発明の更なる態様では、本発明は、医薬品としての本発明の化合物の使用に関する。したがって、一態様では、本発明は、医薬品として使用するための上記で定義した組成物に関する。
【0054】
医薬組成物は、医薬品として使用され得る。前述のように、組成物は、直腸適用に適しており、液体水性組成物を用いた正常な浣腸と比較して、薬剤の漏れを減少させ、治療中の患者の快適さを改善する。本発明の医薬組成物の主な利点は、組成物が室温で液体であり、約３７℃で固体又は半固体ゲルであることである。
【0055】
特に、ＧＡＴＡ－３発現を特異的に阻害するＤＮＡザイム、例えばｈｇｄ４０、又は配列番号１～配列番号７０のいずれか１つを含む場合の本発明による医薬組成物。
【0056】
したがって、本発明は更に、腸疾患、特に炎症性腸疾患の治療に使用するための上記で定義した組成物に関する。一実施形態では、本発明は、炎症性腸疾患の治療に使用するための上記で定義した医薬組成物に関し、当該当該疾患は大腸炎である。
【0057】
本発明は更に、医薬品の製造における上記で定義した医薬組成物の使用に関する。いくつかの実施形態では、当該医薬品は、腸疾患、特に炎症性腸疾患のための医薬品である。特定の実施形態では、本発明は、大腸炎、特に潰瘍性大腸炎のための医薬品の製造における上記で定義した医薬組成物の使用に関する。
【0058】
本発明の更なる態様では、本発明は、腸疾患を治療する方法であって、上記で定義した医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む方法に関する。
【0059】
以下の実施例は、本発明を説明するのに役立つが、本発明の範囲を限定するものとして理解されるべきではない。
【実施例】
【0060】
実施例１－ゲル形成製剤の試験
第１の工程では、本発明者らは、ＤＮＡザイムを含まないヒドロゲル製剤を調製して、ＤＮＡザイムヒドロゲル製剤の基礎として機能する潜在的なヒドロゲル組成物を同定した。
第１の工程では、本発明者らは、ＤＮＡザイムを含まないヒドロゲル製剤を調製して、ＤＮＡザイムヒドロゲル製剤の基礎として機能する潜在的なヒドロゲル組成物を同定した。
【0061】
ヒドロゲル製剤を、１２０ｍＭ ＮａＣｌ又は１４０ｍＭ ＮａＣｌを含むＰＢＳ緩衝液のいずれかでポロキサマー４０７及び１８８を使用して調製した。
【0062】
ゲル化時間及びゲル転移温度（Ｔｓｏｌ－ｇｅｌ）を測定した。全ての製剤を緩衝液１（１２０ｍＭ ＮａＣｌ）及び緩衝液２（１４０ｍＭ ＮａＣｌ）中で調製し、結果は各緩衝液についてほぼ同等であった。結果を表１に示す。
【表1】
【0063】
製剤４、１３及び１４は、所望の挙動、すなわち室温で液体あり、３７℃で適切なＴｓｏｌ－ｇｅｌを有するゲル形成を示すと考えられた。したがって、これらの製剤を更なる分析のために選択した。
【0064】
実施例２：ｈｇｄ４０を含むゲル製剤
初期試験のために、製剤１３をｈｄｇ４０製剤の初期分析に使用した。２５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７及び１０％ｗ／ｗのポロキサマー１８８を含む１ｍＬのＰＢＳ緩衝液（１２０ｍＭ ＮａＣｌ）中で、４、８、１６及び３２ｍｇのｈｇｄ４０を調製した。
初期試験のために、製剤１３をｈｄｇ４０製剤の初期分析に使用した。２５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７及び１０％ｗ／ｗのポロキサマー１８８を含む１ｍＬのＰＢＳ緩衝液（１２０ｍＭ ＮａＣｌ）中で、４、８、１６及び３２ｍｇのｈｇｄ４０を調製した。
【0065】
ｈｇｄ４０は、４ｍｇ／ｍＬの濃度でさえ製剤に溶解せず、全ての製剤が室温で濁っていることが見出された。したがって、製剤４を更に調査した。
【0066】
新規製剤は、１２０ｍＭ ＮａＣｌを含むＰＢＳ緩衝液中に１７．５％ｗ／ｗのポロキサマー４０７．０％のポロキサマー１８８及び４ｍｇのｈｇｄ４０を含んでいた。ＤＮＡザイムは製剤に可溶性であった。しかしながら、ｈｇｄ４０を含まない製剤とは対照的に、製剤はヒドロゲルを形成しなかった。
【0067】
２０％ｗ／ｗのポロキサマー４０７及び２．５％ｗ／ｗのポロキサマー１８８を含む製剤は、４ｍｇ／ｍＬのｈｇｄ４０を含むゲルを形成することができた。
【0068】
製剤の概要を表２に示す。
【表2】
【0069】
実施例３：ｈｇｄ４０ヒドロゲル放出試験
上記ヒドロゲル組成物１７からのｈｇｄ４０の放出を分析するために、１００ｍＬの緩衝液（ＰＢＳ、１２０ｍＭ ＮａＣｌ）をガラスバイアル内で３７℃で撹拌した。１ｍＬのヒドロゲル製剤を透析チューブ（ＭＷＣＯ３００ｋＤ、Ｆｌｏａｔ－Ａ－ＬｙｚｅｒＧ２、ｓｐｒｅｃｔｒｕｍｌａｂｓ）に入れ、ガラスバイアルに入れた。緩衝液中に４ｍｇのｈｇｄ４０を含む組成物を対照として使用した。
上記ヒドロゲル組成物１７からのｈｇｄ４０の放出を分析するために、１００ｍＬの緩衝液（ＰＢＳ、１２０ｍＭ ＮａＣｌ）をガラスバイアル内で３７℃で撹拌した。１ｍＬのヒドロゲル製剤を透析チューブ（ＭＷＣＯ３００ｋＤ、Ｆｌｏａｔ－Ａ－ＬｙｚｅｒＧ２、ｓｐｒｅｃｔｒｕｍｌａｂｓ）に入れ、ガラスバイアルに入れた。緩衝液中に４ｍｇのｈｇｄ４０を含む組成物を対照として使用した。
【0070】
３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間及び２４時間後、試料を緩衝液から採取し、２３０～３３０ｎｍでＵＶ分光法によって分析した。ｈｇｄ４０試料について得られたスペクトルを図１に示す。
【0071】
緩衝液中のｈｇｄ４０の濃度は、２６０ｎｍでの吸光度を使用し、ランベルト・ベールの法則を適用して決定した。組成物から放出された濃度を表３に列挙する。
【表3】
【0072】
ｈｇｄ４０は、対照及び製剤３４の両方からほぼ同等の放出速度で放出されることが見出された。したがって、ヒドロゲル製剤は、水性組成物とほぼ同等の放出が可能である。
【0073】
放出前の緩衝液中のｈｇｄ４０及び放出されたｈｇｄ４０をＡＥＸクロマトグラフィーを使用して分析して、ヒドロゲル製剤がＤＮＡザイムの変性をもたらすかどうかを分析した。
【0074】
ＡＥＸクロマトグラフィーの条件は以下の通りであった。
カラムＤＮＡＰａｃ（商標）ＰＡ２００、８μｍ、４×２５０ｍｍ
緩衝液：
Ａ：２５ｍＭ ＴＲＩＳ／ＨＣｌ（ｐＨ８）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、３０％ＡＣＮ
Ｂ｛２５ｍＭ ＴＲＩＳ／ＨＣｌ（ｐＨ８）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、３０％ＡＣＮ、５００ｍＭＬｉＣｌＯ４
カラム温度４０℃
流速１ｍＬ／分
検出：２６０／２８０ｎｍ
カラムＤＮＡＰａｃ（商標）ＰＡ２００、８μｍ、４×２５０ｍｍ
緩衝液：
Ａ：２５ｍＭ ＴＲＩＳ／ＨＣｌ（ｐＨ８）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、３０％ＡＣＮ
Ｂ｛２５ｍＭ ＴＲＩＳ／ＨＣｌ（ｐＨ８）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、３０％ＡＣＮ、５００ｍＭＬｉＣｌＯ４
カラム温度４０℃
流速１ｍＬ／分
検出：２６０／２８０ｎｍ
【0075】
図２Ａ及び２Ｂに見られるように、ヒドロゲルからの放出後のＨＰＬＣのクロマトグラフィープロファイルはストック溶液のプロファイルとほぼ同等であり、変性が生じず、ｈｇｄ４０ＤＮＡザイムがヒドロゲル製剤中で安定であることを示している。
【0076】
実施例４：ＤＮＡザイム濃度の上昇
次の工程として、本発明者らは、組成物中のｈｇｄ４０濃度を８ｍｇ／ｍＬに高めた。異なるｐＨの１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中で製剤を調製した。製剤中のｈｇｄ４０の濃度は８ｍｇ／ｍＬである。
次の工程として、本発明者らは、組成物中のｈｇｄ４０濃度を８ｍｇ／ｍＬに高めた。異なるｐＨの１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中で製剤を調製した。製剤中のｈｇｄ４０の濃度は８ｍｇ／ｍＬである。
【0077】
異なる比率の２００ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４及び２００ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４ストック溶液を混合し、水で希釈して１００ｍＭ緩衝液を得ることによって、異なるｐＨ緩衝液を得た。
【0078】
試験した製剤の概要を表４に示す。
【表4】
【0079】
８ｍｇ／ｍＬのｈｇｄ４０を含む組成物は、３７℃でゲルを形成しないことが見出された。
【0080】
したがって、本発明者らは、８ｍｇ／ｍＬのｈｄｇ４０を含む製剤を最適化しようと試みた。新規製剤の概要を表５で見ることができる。
【0081】
緩衝液として、ｐＨ７．４の１００ｍＭリン酸ナトリウムを使用した。
【表5】
【0082】
組成物２５を１６ｍｇ／ｍＬのｈｇｄ４０で更に試験すると、ｈｇｄ４０が沈殿し、濁った溶液が得られた。溶液は３７℃に加温すると透明になり、冷却すると濁った溶液に戻る。更に、Ｔｓｏｌ－ｇｅｌは、１６ｍｇ／ｍＬのｈｇｄ４０で４１℃に上昇した。
【0083】
更なる製剤を調製して、より高いｈｄｇ４０濃度を可能にする組成物を提供した。塩及び他の化合物の影響を低減するために、ＳＥＣカラムを使用して脱塩することによってｈｄｇ４０を精製し、続いて凍結乾燥し、１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７．４に溶解した。
【0084】
表６は、調製した組成物の概要を示す。
【表6】
【0085】
実施例５：安定剤トレハロース及びｄｉｇｙｌｃｉｎの効果
１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中、２つの異なるポロキサマー４０７濃度で製剤を調製した。各ポロキサマー４０７の濃度について、２つの異なるトレハロース濃度（５及び１５％）で製剤を調製した。
１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）中、２つの異なるポロキサマー４０７濃度で製剤を調製した。各ポロキサマー４０７の濃度について、２つの異なるトレハロース濃度（５及び１５％）で製剤を調製した。
【表7】
【0086】
低トレハロース濃度（５％）及びポロキサマー４０７の量の増加で、ヒドロゲルを３７℃で形成することができた（製剤２９）。この製剤は、Ｔｓｏｌ－ｇｅｌが約３５℃である。ポロキサマー４０７の量とは無関係に、高トレハロース濃度では、製剤は３７℃で液体であった。
【0087】
比較としてジグリシドを含む製剤を調製した。
【表8】
【0088】
安定剤としてジグリシドを含む組成物は、トレハロースを含む組成物又は安定剤を含まない組成物と比較して、Ｔｓｏｌ－ｇｅｌが上昇したことを示した。
【0089】
実施例６：ゲル化時間
ｐＨ７．４の１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中で製剤を調製した。ポロキサマーＦ１２７、Ｆ６８及びＨｇｄ４０をガラスバイアルに秤量し（表１参照）、混合物に１ｇの１００ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４／ＮａＨ２ＰＯ４緩衝液ｐＨ７．４を添加した。透明な溶液が得られるまで４℃で溶解を行い、２４～４８時間連続してゆっくり撹拌しながら行った。
ｐＨ７．４の１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液中で製剤を調製した。ポロキサマーＦ１２７、Ｆ６８及びＨｇｄ４０をガラスバイアルに秤量し（表１参照）、混合物に１ｇの１００ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４／ＮａＨ２ＰＯ４緩衝液ｐＨ７．４を添加した。透明な溶液が得られるまで４℃で溶解を行い、２４～４８時間連続してゆっくり撹拌しながら行った。
【0090】
ゾルゲル転移温度（Ｔｓｏｌ－ｇｅｌ）：
ゾルゲル転移温度は、「マグネチックスターラー法」によって決定した。ポロキサマー製剤を、室温の恒温水槽中でマグネットバーを含む透明バイアルに入れ、デジタル熱センサを製剤に浸漬した。マグネチックスターラー（ＩＫＡ（登録商標）ＲＣＴｂａｓｉｃ）で連続攪拌（１００ｒｐｍ／分）しながら徐々に加熱（２℃／分）した。ゲル化によりマグネットバーが動かなくなったとき、熱センサに表示された温度をゲル化温度とした。
ゾルゲル転移温度は、「マグネチックスターラー法」によって決定した。ポロキサマー製剤を、室温の恒温水槽中でマグネットバーを含む透明バイアルに入れ、デジタル熱センサを製剤に浸漬した。マグネチックスターラー（ＩＫＡ（登録商標）ＲＣＴｂａｓｉｃ）で連続攪拌（１００ｒｐｍ／分）しながら徐々に加熱（２℃／分）した。ゲル化によりマグネットバーが動かなくなったとき、熱センサに表示された温度をゲル化温度とした。
【0091】
ゲル化時間：
ポロキサマー製剤を、３７℃の恒温水槽中でマグネットバーを含む透明バイアルに入れ、デジタル熱センサを製剤に浸漬した。試料をマグネチックスターラー（ＩＫＡ（登録商標）ＲＣＴｂａｓｉｃ）で撹拌（１００ｒｐｍ／分）しながら３７℃まで加温した。ゲル化によりマグネットバーが動かなくなったときに、入れてからからゲル化するまでの時間をゲル化時間とした。
ポロキサマー製剤を、３７℃の恒温水槽中でマグネットバーを含む透明バイアルに入れ、デジタル熱センサを製剤に浸漬した。試料をマグネチックスターラー（ＩＫＡ（登録商標）ＲＣＴｂａｓｉｃ）で撹拌（１００ｒｐｍ／分）しながら３７℃まで加温した。ゲル化によりマグネットバーが動かなくなったときに、入れてからからゲル化するまでの時間をゲル化時間とした。
【0092】
結果を表９に示す。
【表9】
【図1】
【図2A】
【図2B】
【配列表】
【国際調査報告】