特表2024-534675 | 知財ポータル「IP Force」

知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」

青山学院大学 (神奈川県相模原市中央区淵野辺)

▶ アストンエスシーアイ．インコーポレイテッドの特許一覧 ▶ チャワクチンリサーチインスティチュートカンパニーリミテッドの特許一覧

特表2024-534675ＨＳＰ９０抗原性ペプチドを含む抗癌用ワクチン組成物及びその用途

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

目に優しい文字サイズ小中大 PDF Top

< >

1
2
3
4
5

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-20

(54)【発明の名称】ＨＳＰ９０抗原性ペプチドを含む抗癌用ワクチン組成物及びその用途

(51)【国際特許分類】

A61K 39/00 20060101AFI20240912BHJP

A61K 39/39 20060101ALI20240912BHJP

A61P 15/00 20060101ALI20240912BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20240912BHJP

A61P 37/04 20060101ALI20240912BHJP

A61K 45/00 20060101ALI20240912BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20240912BHJP

C07K 7/08 20060101ALI20240912BHJP

C07K 7/06 20060101ALI20240912BHJP

C12N 15/117 20100101ALI20240912BHJP

C07K 14/47 20060101ALI20240912BHJP

C12N 15/12 20060101ALI20240912BHJP

C07K 14/195 20060101ALI20240912BHJP

C07K 14/30 20060101ALI20240912BHJP

【ＦＩ】

A61K39/00 H

A61K39/39

A61P15/00

A61P35/00

A61P37/04

A61K45/00

A61P43/00 111

C07K7/08 ZNA

C07K7/06

C12N15/117 Z

C07K14/47

C12N15/12

C07K14/195

C07K14/30

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024519689

(86)(22)【出願日】2022-09-28

(85)【翻訳文提出日】2024-03-28

(86)【国際出願番号】 KR2022014566

(87)【国際公開番号】W WO2023055078

(87)【国際公開日】2023-04-06

(31)【優先権主張番号】10-2021-0128516

(32)【優先日】2021-09-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521548308

【氏名又は名称】アストンエスシーアイ．インコーポレイテッド

(71)【出願人】

【識別番号】524120620

【氏名又は名称】チャワクチンリサーチインスティチュートカンパニーリミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】姜鎭鎬

(72)【発明者】

【氏名】朴 ▲ヒョ▼賢

(72)【発明者】

【氏名】鄭憲

(72)【発明者】

【氏名】廉晶善

(72)【発明者】

【氏名】安秉▲チョル▼

(72)【発明者】

【氏名】鄭銀貞

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB091

4C084ZB092

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC411

4C084ZC412

4C084ZC751

4C084ZC752

4C085AA03

4C085BB11

4C085EE03

4C085EE06

4C085FF13

4C085FF14

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG06

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA13

4H045BA17

4H045BA50

4H045CA11

4H045CA40

4H045DA86

4H045EA31

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、ＨＳＰ９０のエピトープである、配列番号１のペプチド、及び配列番号２のペプチドを含む抗癌用ワクチン組成物に係り、本発明によるワクチン組成物は、腫瘍細胞株移植動物モデルにおいて、深刻な副作用なしに、腫瘍の成長を効果的に抑制しうるので、癌を治療するか、あるいはその再発を予防するのに有用に使用されうる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドによって構成された群のうちから選択された１以上のペプチドと、
アジュバントとして、トル様受容体（ＴＬＲ）２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストと、を含む、抗癌用ワクチン組成物。

【請求項2】

前記ＴＬＲ２アゴニストは、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、ＰＨＣ－ＳＫＫＫＫ、Ｏｌｅ２ＰａｍＣｙｓ－ＳＫＫＫＫ、Ｐａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、ＰａｍＣｙｓ（Ｐａｍ）－ＳＫＫＫＫ、Ｏｌｅ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、Ｍｙｒ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、ＰａｍＤｈｃ－ＳＫＫＫＫ、ＰａｍＣＳＫＫＫＫ、Ｄｈｃ－ＳＫＫＫＫのうちから選択される１以上である、請求項１に記載の抗癌用ワクチン組成物。

【請求項3】

前記ＴＬＲ２アゴニストは、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫである、請求項２に記載の抗癌用ワクチン組成物。

【請求項4】

前記ＴＬＲ３アゴニストは、ポリイノシン酸・ポリシチジル酸（Poly（Ｉ：Ｃ））である、請求項１に記載の抗癌用ワクチン組成物。

【請求項5】

前記Poly（Ｉ：Ｃ）は、その長さが、５０ないし２，０００ｂｐである、請求項４に記載の抗癌用ワクチン組成物。

【請求項6】

配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドの暗号化配列を含む核酸、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドの暗号化配列を含む核酸によって構成された群のうちから選択された１以上の核酸と、
アジュバントとして、ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストを含む、抗癌用ワクチン組成物。

【請求項7】

【請求項8】

前記ＴＬＲ２アゴニストは、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫである、請求項７に記載の抗癌用ワクチン組成物。

【請求項9】

前記ＴＬＲ３アゴニストは、ポリイノシン酸・ポリシチジル酸（Poly（Ｉ：Ｃ））である、請求項６に記載の抗癌用ワクチン組成物。

【請求項10】

前記Poly（Ｉ：Ｃ）は、その長さが、５０ないし２，０００ｂｐである、請求項９に記載の抗癌用ワクチン組成物。

【請求項11】

前記ワクチン組成物は、対象体において、癌を治療し、かつ／あるいは再発を予防する、請求項１ないし１０のうちいずれか１項に記載の抗癌用ワクチン組成物。

【請求項12】

前記対象体は、乳癌患者である、請求項１１に記載の抗癌用ワクチン組成物。

【請求項13】

前記ワクチン組成物は、リポソームを含まない、請求項１ないし１０のうちいずれか１項に記載の抗癌用ワクチン組成物。

【請求項14】

前記ワクチン組成物は、免疫調節剤、化学抗癌剤、標的抗癌剤及び免疫抗癌剤のうちから選択される１以上を追加して含む、請求項１ないし１０のうちいずれか１項に記載の抗癌用ワクチン組成物。

【請求項15】

前記免疫抗癌剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ及びＶＩＳＴＡによって構成された群のうちから選択されたいずれか１以上に対する免疫チェックポイント抑制剤である、請求項１４に記載の抗癌用ワクチン組成物。

【請求項16】

配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドによって構成された群のうちから選択された１以上のペプチドと、ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストのアジュバントと、を個体に投与する段階を含むことを特徴とする、癌の予防、改善または治療の方法。

【請求項17】

癌の予防、改善または治療のための薬剤の製造に使用するための、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドによって構成された群のうちから選択された１以上のペプチドと、
ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストのアジュバントとの用途。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０２１年９月２９日付け韓国特許出願第１０－２０２１－０１２８５１６号に基づく優先権の利益を主張し、当該韓国特許出願の文献に開示された全ての内容は、本明細書の一部として含む。

【0002】

本発明は、癌の治療及び再発防止のためのＨＳＰ９０（Heat Shock Protein 90）抗原性ペプチドを含む抗癌用ワクチン組成物及びその用途に関する。

【背景技術】

【0003】

現在、癌は、心臓疾患などと共に、人類の最大疾病のうち一つであり、大韓民国国民の死亡原因において１位であるが、まだ発病原因が明確に知られていない。癌を治療するために、手術療法、放射線療法及び化学療法のような多様な治療方法が考案され、癌の種類により、それぞれの治療方法を、単独または複合させて適用しているが、抗癌剤に対する耐性獲得などにより、完治されない患者が存在するだけではなく、場合によっては、転移及び再発率が高く、治療に困難が伴う。

【0004】

ワクチンは、身体が、有害な成分及び疾病にかかった細胞を認知して破壊するように、免疫系を訓練させることにより、疾患と争うことの一助とする。ワクチンは、大きく見て、２種類型、すなわち、予防用ワクチン及び治療用ワクチンに分類される。予防ワクチンは、伝統的なワクチンの形態であり、健康人に特定疾患の発生を予防するように提供される一方、免疫療法とも呼ばれる治療用ワクチンは、疾患があると診断された者に、疾患が成長して発展することを抑制するか、あるいは予防する方法として提供される。治療用ワクチンの代表的な形態は、抗癌用ワクチン（または、癌ワクチンと呼ばれたりもする）である。

【0005】

抗癌用ワクチンは、細胞毒性Ｔ細胞（cytotoxic T cell）を活性化させ、活性化されたＴ細胞が特定類型の癌細胞を認知し、それに対立して作用するか、あるいは癌細胞表面に存在する抗原と結合する抗体の生産を誘導するようにデザインされる。該抗癌用ワクチンの基本的な治療目標は、癌患者にすでに存在する癌組織の大きさを小さくしたり、癌患者の癌組織を、外科的手術または化学療法などで除去したりした後、再発を抑制するのである。

【0006】

これまでの数年間癌、治療のために、あるいは再発を防ぐために、ワクチン研究が広範囲になされたが、前立腺癌ワクチンであるシプリューセルＴ（sipuleucel-T（Provenge(R)））を除いては、まだ成果を収めたという事例が存在しない。そのような低い成功率については、特定類型の腫瘍細胞に抗原が特異的に発現されても、各個人によっては、低いレベルで抗原を発現するか、あるいは転移性腫瘍の場合、最初発生腫瘍と転移性腫瘍との間に、抗原プロファイルが変化され、腫瘍細胞の免疫回避メカニズムも、一部低い成功率の原因と説明されている。

【0007】

望ましいワクチン抗原は、腫瘍細胞において、排他的となったり、少なくとも増大されたレベルとなったりして発現されなければならない。ＨＳＰ９０（Heat Shock Protein 90）は、多くの癌腫において過発現するということが知られており、実際、ＨＳＰ９０の特定抗原性領域（エピトープ）にワクチン接種を行う場合、動物モデルで抗腫瘍効果を示すということが知られている。

【0008】

アジュバントは、ワクチン用組成物に、抗原と共に含まれる成分であり、抗原に反応する免疫反応を調節したり増強させたりする用途に開発されてきた。該アジュバントは、単独に投与されたときには、それ自体でもっては、免疫性を有していないが、抗原と共に投与される場合、抗原に対する免疫反応を増進させて持続させることができる。典型的なアジュバントの例は、カリウムミョウバン（potassium alum）、水酸化アルミニウム（aluminium hydroxide）のようなアルミニウム系の無機物、パラフィンオイルのようなオイル類、サポニン（saponin）の界面活性剤、フロインド補強剤（ＣＦＡ／ＩＦＡ：Freund's complete adjuvant/Freund's incomplete adjuvant）などがある。

【0009】

最近では、トル様受容体（ＴＬＲ：toll-like receptor）が活性化される場合、先天性免疫系（innate immune system）が活性化されるということが知られることにより、前記ＴＬＲを活性化させるＴＬＲアゴニスト（agonist）をアジュバントとして利用する試みがなされてきた。該ＴＬＲは、細胞膜通過受容体（transmembrane receptor）タンパク質であり、先天性免疫細胞（innate immune cell）において主に発現されると知られている。該ＴＬＲのサブタイプとして、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＲＬ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６は、細胞表面で発現し、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９は、細胞内エンドソームの細胞膜（endosomal membrane）で発現すると知られている。

【0010】

最近、最適化された免疫反応を示すワクチン製造のために、抗原とアルミニウム基盤アジュバントとの最適化された組み合わせを導き出すための研究が試みられている。しかしながら、ＨＳＰ９０抗原性ペプチドを利用した癌ワクチンにおいて、最適化されたアジュバントについては、確認されていない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0011】

【特許文献1】大韓民国登録特許第１０－１５０１５８３号（公告日：２０１５．０３．１２．）

【特許文献2】大韓民国登録特許第１０－２０９８０９７号（公告日：２０２０．０５．２６．）

【特許文献3】大韓民国登録特許第１０－２２５６２６７号（公告日：２０２１．０５．２６．）

【非特許文献】

【0012】

【非特許文献1】npj Vaccines 3, Article number: 51 (2018. 10. 10.)

【非特許文献2】Pharmaceutics 13, 142 (2021. 01. 21.)

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0013】

そのために、本発明者らは、前記問題を解決すべく研究を行った結果、ＨＳＰ９０（Heat Shock Protein 90）抗原性ペプチド、及びアジュバントとして、トル様受容体（ＴＬＲ）アゴニストを含む抗癌用ワクチン組成物が、癌細胞を移植した腫瘍マウスモデルにおいて、腫瘍成長を効果的に抑制しうることを確認し、本発明の完成に至った。

【0014】

本発明は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドで構成された群のうちから選択された１以上のペプチドと、アジュバントとして、ＴＬＲ２アゴニスト（agonist）及びＴＬＲ３アゴニストを含む抗癌用ワクチン組成物を提供することを目的とする。

【0015】

【0016】

前記ＴＬＲ２アゴニストは、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫでもある。

【0017】

前記ＴＬＲ３アゴニストは、ポリイノシン酸・ポリシチジル酸（Poly（Ｉ：Ｃ）：polyinosinic: polycytidylic acid）でもある。

【0018】

前記Poly（Ｉ：Ｃ）は、その長さが５０ないし２，０００ｂｐでもある。

【0019】

前記抗癌用ワクチン組成物は、対象体において、癌を治療し、かつ／あるいは再発を予防するためのものでもある。

【0020】

前記対象体は、乳癌患者でもある。

【0021】

前記抗癌用ワクチン組成物は、リポソームを含まないものでもある。

【0022】

前記抗癌用ワクチン組成物は、免疫調節剤、化学抗癌剤、標的抗癌剤及び免疫抗癌剤のうちから選択される１以上を追加して含むものでもある。

【0023】

前記免疫抗癌剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ及びＶＩＳＴＡによって構成された群のうちから選択されたいずれか１以上に対する免疫チェックポイント抑制剤（immune checkpoint inhibitor）でもある。

【0024】

本発明は、１）配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドの暗号化配列を含む核酸、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドの暗号化配列を含む核酸によって構成された群のうちから選択された１以上の核酸と、アジュバントとして、ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストを含む、抗癌用ワクチン組成物を提供することを目的とする。

【0025】

【0026】

前記ＴＬＲ２アゴニストは、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫでもある。

【0027】

前記ＴＬＲ３アゴニストは、ポリイノシン酸・ポリシチジル酸（Poly（Ｉ：Ｃ）：polyinosinic: polycytidylic acid）でもある。

【0028】

前記Poly（Ｉ：Ｃ）は、その長さが５０ないし２，０００ｂｐでもある。

【0029】

前記抗癌用ワクチン組成物は、対象体において、癌を治療し、かつ／あるいは再発を予防するためのものでもある。

【0030】

前記対象体は、乳癌患者でもある。

【0031】

前記抗癌用ワクチン組成物は、リポソームを含まないものでもある。

【0032】

前記抗癌用ワクチン組成物は、免疫調節剤、化学抗癌剤、標的抗癌剤及び免疫抗癌剤のうちから選択される１以上を追加して含むものでもある。

【0033】

前記免疫抗癌剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ及びＶＩＳＴＡによって構成された群のうちから選択されたいずれか１以上に対する免疫チェックポイント抑制剤でもある。

【0034】

本発明は、前記抗癌用ワクチン組成物を含む、癌治療用途または癌予防用途の薬学組成物を提供することを目的とする。

【0035】

本発明は、前記抗癌用ワクチン組成物を含む癌治療用キットを提供することを目的とする。

【0036】

本発明は、前記抗癌用ワクチン組成物、癌治療用または予防用の薬学組成物、またはそのキットを対象体に投与し、癌進行及び／または再発を抑制する方法を提供することを目的とする。

【0037】

本発明は、前記抗癌用ワクチン組成物、癌治療用または予防用の薬学組成物、またはそのキットを対象体に投与する段階を含むことを特徴とする、癌を予防、改善または治療する方法を提供することを目的とする。

【0038】

本発明は、癌の予防、改善または治療のための医薬品の製造において、前記抗癌用ワクチン組成物、癌治療用または予防用の薬学組成物、またはそのキットの用途を提供することを目的とする。

【課題を解決するための手段】

【0039】

前記目的を達成するために、本発明は、ＨＳＰ９０（Heat Shock Protein 90）抗原性ペプチドであり、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドによって構成された群のうちから選択された１以上のペプチド；並びにアジュバントとして、トル様受容体（ＴＬＲ）２アゴニスト（agonist）及びＴＬＲ３アゴニストを含む抗癌用ワクチン組成物を提供する。

【0040】

また、本発明は、ＨＳＰ９０抗原性ペプチドを暗号化する配列を含む核酸であり、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドの暗号化配列を含む核酸、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドの暗号化配列を含む核酸によって構成された群のうちから選択された１以上の核酸；並びに及びアジュバントとして、ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストを含む抗癌用ワクチン組成物を提供する。

【0041】

また、本発明は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドによって構成された群のうちから選択された１以上のペプチド；並びにＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストのアジュバントを個体に投与する段階を含むことを特徴とする、癌の予防、改善または治療の方法を提供する。

【0042】

また、本発明は、癌の予防、改善または治療のための薬剤の製造に使用するための、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドによって構成された群のうちから選択された１以上のペプチド；並びにＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストのアジュバントの用途を提供する。

【0043】

本発明の一具現例により、前記抗癌用ワクチン組成物は、ＨＳＰ９０抗原性ペプチドとして、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチド；並びにアジュバントとして、ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストを含むものでもある。

【0044】

本発明の一具現例により、前記ＴＬＲ２アゴニストは、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、ＰＨＣ－ＳＫＫＫＫ、Ｏｌｅ２ＰａｍＣｙｓ－ＳＫＫＫＫ、Ｐａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、ＰａｍＣｙｓ（Ｐａｍ）－ＳＫＫＫＫ、Ｏｌｅ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、Ｍｙｒ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、ＰａｍＤｈｃ－ＳＫＫＫＫ、ＰａｍＣＳＫＫＫＫ、Ｄｈｃ－ＳＫＫＫＫのうちから選択される１以上でもある。

【0045】

本発明の一具現例により、前記ＴＬＲ３アゴニストは、ポリイノシン酸・ポリシチジル酸（Poly（Ｉ：Ｃ）：polyinosinic: polycytidylic acid）でもある。

【0046】

本発明の一具現例によって、前記抗癌用ワクチン組成物は、リポソームを含まないのである。

【0047】

本発明の一具現例により、前記抗癌用ワクチン組成物は、対象体において、癌を治療するか、あるいはその再発を予防するのに使用されうる。

【0048】

本発明の一具現例により、前記癌は、固形癌でもある。

【0049】

本発明の一具現例により、前記癌は、乳癌でもある。

【0050】

本発明の一具現例により、前記癌患者群は、固形癌患者群でもある。

【0051】

本発明の一具現例により、前記癌患者群は、乳癌患者群でもある。

【0052】

本発明の一具現例により、前記抗癌用ワクチン組成物を利用（投与）し、癌患者を治療または予防する方法を提供する。

【発明の効果】

【0053】

本発明によるワクチン組成物は、ＨＳＰ９０抗原性ペプチド；並びにアジュバントとして、ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストを含む抗癌用ワクチン組成物であり、ＴＬＲ４アゴニストのような他種類のＴＬＲアゴニストをアジュバントとして使用する場合より、高い免疫原性を示し、癌細胞を移植した腫瘍マウスモデルにおいて、腫瘍成長を効果的に抑制することができ、癌の治療及び再発防止に有用に使用されうる。

【図面の簡単な説明】

【0054】

【図1】ＨＳＰ９０抗原性ペプチドと、多様な種類のアジュバントと、を含むワクチン組成物のＴｈ１免疫反応を分析した結果である。

【図2】ＨＳＰ９０抗原性ペプチドと、多様な種類のアジュバントと、を含むワクチン組成物のＴｈ２免疫反応を分析した結果である。

【図3】ＨＳＰ９０抗原性ペプチドと、アジュバントして、多様なサブタイプのＴＬＲアゴニストとを含むワクチン組成物の免疫原性を分析した結果である。

【図4】ＨＳＰ９０抗原性ペプチドと、アジュバントとして、ＴＬＲ２／３アゴニストと、を含むワクチン組成物の抗癌効果を分析した結果である。

【図5】ＨＳＰ９０抗原性ペプチドと、アジュバントとして、ＴＬＲ２／３アゴニストと、を含むワクチン組成物を腫瘍モデルマウスに投与したとき、実際の腫瘍サイズ及び脾臓（spleen）サイズを示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0055】

以下、本発明についてさらに詳細に説明する。

【0056】

本開示内容を記述して請求するにおいて、以下の用語は、それとは異なって指定されない限り、以下に記述された定義によって使用される。

【0057】

本願において、ある部分がある構成要素を「含む」とするとき、それは、特にそうではないとする記載がない限り、他の構成要素を除くものではなく、他の構成要素をさらに含むものでもあることを意味する。

【0058】

本願において、ある態様が、「～を含む」という用語と共に記述されても、「によって構成された」及び／または「本質的に～によって構成された」という観点から記述された他の類似態様も、また提供されるということが理解されなければならない。

【0059】

用語「治療する」及び用語「抗癌効果」は、本発明の組成物の投与により、癌疾患の症状が好転するか、あるいは良好に変更される全ての行為を意味し、具体的には、癌患者に、本発明の抗癌用ワクチン組成物を接種した後、患者を、放射線または物理的方法などによって検査したとき、腫瘍成長を防いだり、減少させたりする結果、または結果の徴候を意味するだけではなく、癌患者に対する手術を行ったり、抗癌剤を投与したりして癌組織を除去した後、患者に、本発明のワクチン組成物を接種した後、放射線または物理的方法などによって検査したとき、癌再発（recurrence／relapse）を防いだ結果、または結果の徴候を意味する。

【0060】

用語「患者」または用語「対象体」というのは、本発明のワクチン組成物の投与により、疾患が予防されたり治療されたりしうる病態、例えば、癌、具体的には、固形癌を病んでいるにしても、治療されているにしても、そのような病態にかかりやすいにしても、生きている有機体を称し、ヒトと動物とをいずれも含む。該対象体としては、哺乳動物（例えば、マウス、猿、馬、牛、豚、犬、猫など）を含むが、それらに限定されるものではなく、望ましくは、ヒトである。また、本発明における「患者」または「対象体」は、区分されずに、癌患者、固形癌患者、乳癌患者、またはＨＥＲ２を発現する乳癌患者を含む。

【0061】

用語「投与すること」というのは、本発明が属する技術分野において公知された多様な方法と伝達システム都のうち、任意のものを使用し、ワクチン組成物を対象体に導入することを称する。例示的投与経路は、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊髄、またはその他非経口投与経路、例えば、注射または注入による投与経路を含む。本発明の明細書に使用された「投与」というのは、一般的に、注射による、皮下（subcutaneous）または皮内（intradermal）の投与方式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、脊髄腔内またはリンパ内への注射及び注入を含むが、それらに限定されるものではない。その他非経口経路は、局所、上皮または粘膜への投与経路、例えば、鼻内、膣、直腸または舌下への経路を含む。本明細書においては、対象体にワクチンを投与する行為である「ワクチン投与（vaccine injection）」、「処置（treatment）」及び「接種（vaccination）」は、区分されずに使用される。

【0062】

用語「抗原性ペプチド（antigenic peptide）」は、特定抗体によって認識される抗原結合部位のアミノ酸残基セット、あるいはＴ細胞におけるＴ細胞受容体（ＴＣＲ：T cell receptor）、及び／または主要組織的合成複合体（ＭＨＣ：major histocompatibility complex）受容体によって認識されるエピトープ（epitope）を意味する。

【0063】

本発明において用語「免疫抗癌剤」は、癌自体を攻撃する既存抗癌剤とは異なり、人工免疫タンパク質を体内に注入し、免疫体系を刺激することにより、免疫細胞が選択的に癌細胞のみを攻撃するように誘導する治療薬剤であり、癌細胞が獲得した免疫抑制または免疫回避メカニズムを克服するために、免疫体系の腫瘍認知能または破壊能を回復または強化させるメカニズムの抗癌剤である。前記免疫抗癌剤は、免疫チェックポイント抑制剤、免疫細胞治療剤及び免疫ウイルス治療剤を含むが、それらに制限されるものではない。

【0064】

本発明において、用語「免疫チェックポイント抑制剤」は、一部癌細胞が、体内免疫細胞であるＴ細胞の免疫チェックポイントを活用しながら、免疫を回避する場合、Ｔ細胞抑制に関与する免疫チェックポイントタンパク質（immune checkpoint protein）の活性化を遮断し、Ｔ細胞を活性化させ、癌細胞を攻撃する作用を行う免疫抗癌剤の一種であり、ＣＴＬＡ－４抑制剤、ＰＤ－１抑制剤、ＬＡＧ－３抑制剤、ＴＩＭ－３抑制剤、ＴＩＧＩＴ抑制剤及びＶＩＳＴＡ抑制剤を含むが、それらに制限されるものではない。また、前記免疫チェックポイント抑制剤は、拮抗剤でもり、拮抗剤抗体または小分子化合物でもある。

【0065】

熱衝撃タンパク質９０（ＨＳＰ９０：Heat Shock Protein 90）は、細胞内で合成される全てのペプチド鎖が、完全な構造形成のために、タンパク質フォールディング、成熟及び立体形態安定化のために作用するシャペロン（chaperone）タンパク質の一種である。ＨＳＰ９０タンパク質または遺伝子の発現様相は、悪性腫瘍細胞（malignant cell）において、正常細胞に比べ、２～１０倍ほど高く、ＨＳＰ９０は、癌細胞の生存及び成長に主な役割を行うのに予測され、効果的な薬物ターゲットとしてクローズアップされている。

【0066】

また、既存研究によっても、癌患者群の血清において、対照群（normal individual＋陽性乳癌患者）に比べ、ＨＳＰ９０に対する自己抗体（auto-antibody）（抗ＨＳＰ抗体）の濃度が高いということが報告されている（Lancet, 1995: 345, 126）。

【0067】

本発明の抗癌用ワクチン組成物は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド（第１ペプチド）、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチド（第２ペプチド）によって構成された群のうちから選択された１以上のペプチド；並びにアジュバントとして、トル様受容体（ＴＬＲ：toll-like receptor）２アゴニスト及びトル様受容体（ＴＬＲ）３アゴニストを含むものでもある。

【0068】

一具現例によれば、前記抗癌用ワクチン組成物は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド（第１ペプチド）、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチド（第２ペプチド）；並びにアジュバントとして、ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストを含むものでもある。

【0069】

前記第１ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドでもあり、具体的には、配列番号１のアミノ酸配列によって構成されたペプチドでもある。また、前記第２ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドでもあり、具体的には、配列番号２のアミノ酸配列によって構成されたペプチドでもある。

【0070】

本発明の配列番号１のアミノ酸配列によって表示されるペプチド、及び配列番号２のアミノ酸配列によって表示されるペプチドのＨＳＰ９０抗原性ペプチドは、ＨＳＰ９０フルシーケンスを、５個のアルゴリズムプログラムを利用し、ＭＨＣ class II対立遺伝子（allele）に、結合親和度（binding affinity）が良好であると予想される１５－ｍｅｒペプチドシーケンス１２個のうちから選定されたものである（大韓民国登録特許第１０－２２５６２６７号）。

【0071】

本発明の明細書に記載された、「配列番号Ｘのアミノ酸配列によって表示されるペプチド」、「配列番号Ｘのアミノ酸配列によって構成されたペプチド」、及び「配列番号Ｘのペプチド」は、同じ意味として区分されずに使用される。

【0072】

本発明の一部実施例においては、配列番号１のアミノ酸配列によって表示されるペプチド（ＬＹＶＲＲＶＦＩＭＤＮＣＥＥＬ）、及び配列番号２のアミノ酸配列によって表示されるペプチド（ＰｙｒｏＧｌｕ－ＳＫＩＬＫＶＩＲＫＮＬＶＫＫ）は、それぞれ化学的に合成して使用されうる。

【0073】

本発明のワクチン組成物は、前記配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド（第１ペプチド）、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチド（第２ペプチド）を、それぞれ別個に分離したペプチドの形態で含むか、あるいは互いに直間接的に連結された形態で含むものでもある。前記第１ペプチド及び前記第２ペプチドが、互いに直間接的に連結された形態で含まれる場合、前記第２ペプチドは、第１ペプチドのＮ末端またはＣ末端に、直接、またはリンカを介して間接的に連結されうる。前記リンカは、前記ペプチドが抗癌ワクチン活性を示させる限り、特にそれに制限されるものではなく、例えば、１個ないし５０個のアミノ酸によって構成されたものでもある。

【0074】

本明細書に開示されたワクチン組成物は、ペプチドワクチン、ＤＮＡワクチンまたはｍＲＮＡワクチンとして製造されうる。

【0075】

本発明の一実施例において、前記抗癌用ワクチン組成物は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド（第１ペプチド）の暗号化配列を含む核酸、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチド（第２ペプチド）の暗号化配列を含む核酸によって構成された群のうちから選択された１以上の核酸；並びにアジュバントとして、ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストを含むものでもある。

【0076】

一具現例によれば、前記抗癌用ワクチン組成物は、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド（第１ペプチド）の暗号化配列を含む核酸、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチド（第２ペプチド）の暗号化配列を含む核酸；並びにアジュバントとして、ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストを含むものでもある。

【0077】

前記第１ペプチドの暗号化配列を含む核酸は、第１核酸と命名することができ、前記第１核酸は、第１ペプチドの暗号化配列を含む核酸でもあり、具体的には、第１ペプチドの暗号化配列によって構成された核酸でもある。また、前記第２ペプチドの暗号化配列を含む核酸は、第２核酸と命名することができ、前記第２核酸は、第２ペプチドの暗号化配列を含む核酸でもあり、具体的には、第２ペプチドの暗号化配列によって構成された核酸でもある。

【0078】

前記核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡ（ｍＲＮＡ）でもある。

【0079】

本発明の一部実施例において、前記抗癌用ワクチン組成物が、ＤＮＡワクチンの形態に製造される場合、例えば、前記ＤＮＡワクチンは、プローモーター（promoter）、適切な転写制御要素及び翻訳制御要素、並びに本発明の配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドの暗号化配列を含む核酸配列（第１核酸）、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドの暗号化配列を含む核酸配列（第２核酸）のうち１以上を有する１以上のＤＮＡ分子（例えば、プラスミド）を含むものでもあり、前記プラスミドは、さらには、増強（enhance）配列、例えば、発現レベル、細胞内標的化などを増強する配列を含むものでもある。

【0080】

また、前記ＤＮＡワクチンにおいて、第１核酸及び第２核酸は、それぞれ別個に分離されたプラスミドに含まれる形態であるか、あるいは互いに直間接的に連結され、１つのプラスミドに含まれる形態でもある。前記第１核酸及び前記第２核酸が互いに連結され、１つのプラスミドに含まれる形態である場合、前記第２核酸は、第１核酸の５’末端または３’末端に、直接、またはリンカを介して間接的に連結されうる。前記リンカは、前記核酸が暗号化するペプチドが、抗癌ワクチン活性を示させる限り、特にそれに制限されるものではなく、例えば、１個ないし１５０個のヌクレオチドによって構成されたものでもある。また、該第１核酸及び該第２核酸が１つのプラスミドに含まれる形態である場合、そこから翻訳される第１ペプチド及び第２ペプチドは、それぞれ別個の分離されたペプチドに翻訳されるか、あるいは該第１ペプチド及び該第２ペプチドが、互いに直間接的に連結された形態に翻訳されうる。

【0081】

本発明の一部実施例において、前記抗癌用ワクチン組成物が、ｍＲＮＡワクチンの形態に製造される場合、例えば、前記ｍＲＮＡワクチンは、本発明の配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドの暗号化配列を含む核酸配列（第１核酸）、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドの暗号化配列を含む核酸配列（第２核酸）のうち１以上を有する１以上のｍＲＮＡ分子を含むものでもあり、前記ｍＲＮＡ分子は、５’キャップ（cap）、５’非翻訳部位（ＵＴＲ：untranslated region）、３’非翻訳部位、及びポリ（Ａ）テール（Poly(A) tail）によって構成された群のうちから選択された１以上を追加して含むものでもある。

【0082】

また、前記ｍＲＮＡワクチンにおいて、第１核酸及び第２核酸は、それぞれ別個に分離されたｍＲＮＡ分子に含まれる形態でもあり、互いに直間接的に連結され、１つのｍＲＮＡ分子に含まれる形態でもある。前記第１核酸及び前記第２核酸が互いに連結され、１つのｍＲＮＡ分子に含まれる形態である場合、前記第２核酸は、第１核酸の５’末端または３’末端に、直接、またはリンカを介して間接的に連結されうる。前記リンカは、前記核酸が暗号化するペプチドが、抗癌ワクチン活性を示させる限り、特にそれに制限されるものではなく、例えば、１個ないし１５０個のヌクレオチドによって構成されたものでもある。また、該第１核酸及び該第２核酸が１つのｍＲＮＡ分子に含まれる形態である場合、そこから翻訳される第１ペプチド及び第２ペプチドは、それぞれ別個の分離されたペプチドに翻訳されるか、あるいは該第１ペプチド及び該第２ペプチドが互いに直間接的に連結された形態に翻訳されうる。

【0083】

本発明のワクチン組成物が、ＤＮＡワクチンまたはｍＲＮＡワクチンである場合、前記ワクチンは、Ａ（アデニン（adenine））、Ｔ（チミン（thymine））、Ｇ（グアニン（guanine））、Ｃ（シトシン（cytosine））、Ｕ（ウリジン（uridine））、及び／またはそれらの変形された形態を含む核酸によって構成されたものでもある。例えば、前記変形された形態は、５－メチルシチジン（５ｍＣ）、Ｎ６－メチルアデノシン（ｍ６Ａ）、３，２’－Ｏ－ジメチルウリジン（ｍ４Ｕ）、２－チオウリジン（ｓ２Ｕ）、２’－フルオロウリジン、シュードウリジン、２’－Ｏ－メチルウリジン（Ｕｍ）、２’－デオキシウリジン（２’ｄＵ）、４－チオウリジン（ｓ４Ｕ）、５－メチルウリジン（ｍ５Ｕ）、２’－Ｏ－メチルアデノシン（ｍ６Ａ）、Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’－Ｏ－トリメチルアデノシン（ｍ６２Ａｍ）、２’－Ｏ－メチルシチジン（Ｃｍ）、７－メチルグアノシン（ｍ７Ｇ）、２’－Ｏ－メチルグアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２，７－ジメチルグアノシン（ｍ－２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７－トリメチルグアノシン（ｍ－２，２，７Ｇ）及びＮ１－メチル－シュードウリジンによって構成された群のうちから選択された１以上を含むものでもある。

【0084】

本発明のワクチン組成物は、前述の抗原性ペプチド（配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチド）だけではなく、ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストを含むアジュバント（大韓民国登録特許第１０－１５０１５８３号）を含む。

【0085】

アジュバントは、一般的に、ワクチン抗原と組み合わせされたとき、抗原だけで誘導された免疫反応に比べ、ワクチン抗原に対する免疫反応を増大させる任意の化合物または物質である。アジュバントは、体液性免疫反応、細胞性免疫反応、またはそれら２つの免疫反応のレベルを上昇させる機能を行いながら、さらには、それら反応を持続させる機能を行う。

【0086】

一般的に使用されるアジュバントは、カリウムミョウバン（potassium alum）、水酸化アルミニウム（aluminium hydroxide）のようなアルミニウム系の無機物；パラフィンオイルのようなオイル類；サポニン（saponin）系の界面活性剤類；フロインド補強剤（Freund’s complete adjuvant/Freund’s incomplete adjuvant）などがあり、最近研究が進行中であるトル様受容体（ＴＬＲ）を活性化させるリガンドであるＴＬＲアゴニストが利用されている。

【0087】

ＴＬＲ２アゴニストは、バクテリアとマイコプラズマとに由来するリポペプチド合成類似体であり、ａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、ＰＨＣ－ＳＫＫＫＫ、Ｏｌｅ２ＰａｍＣｙｓ－ＳＫＫＫＫ、Ｐａｍ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、ＰａｍＣｙｓ（Ｐａｍ）－ＳＫＫＫＫ、Ｏｌｅ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、Ｍｙｒ２Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ、ＰａｍＤｈｃ－ＳＫＫＫＫ、ＰａｍＣＳＫＫＫＫ、Ｄｈｃ－ＳＫＫＫＫのような多様なリポペプチド類似体が合成されている。また、前記リポペプチドの脂肪酸及びアミノ酸は、化学的に変形されうる。本発明においては、「ＴＬＲ２アゴニスト」及び「ＴＬＲ２Ｌ」は、区分されずに混用されて使用される。

【0088】

本発明の一実施例においては、ワクチン組成物に、前記ＴＬＲ２アゴニストとして、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫを含むが、それに制限されるものではない。

【0089】

ＴＬＲ３アゴニストは、Poly（Ｉ：Ｃ）は、二本鎖ＲＮＡの合成類似体であり、試験管内（in vitro）または生体内（in vivo）の研究において、Ｔｈ１免疫反応を誘導すると知られている。さらに、Poly（Ｉ：Ｃ）は、抗原提示細胞（ＡＰＣ：antigen presenting cell）である樹枝状細胞（ＤＣ：dendritic cell）を安定して成熟させると知られている。本発明においては、「ＴＬＲ３アゴニスト」及び「ＴＬＲ３Ｌ」は、区分されずに混用されて使用される。

【0090】

本発明の一実施例においては、ワクチン組成物に、前記ＴＬＲ３アゴニストとして、その長さが５０ないし２，０００ｂｐであるPoly（Ｉ：Ｃ）を含むが、それに制限されるものではない。

【0091】

従来の研究においては、リポペプチド（lipopeptide）由来のＴＬＲ２アゴニストとリポソームとを混合した後、ＴＬＲ３アゴニストを混合したアジュバントが、Ｔｈ１免疫反応を増進させるという結果が報告されている（大韓民国登録特許第１０－２０９８０９７号）。

【0092】

リポソームは、リン脂質二重層のマトリックス形態を備えている細胞膜と最も類似している形態の単層または多層の脂質二重膜構造を有する。前記脂質は、陽イオン性、陰イオン性脂質または中性脂質でもある。一例として、前記脂質は、ＤＯＴＡＰ（1, 2-dioleoyl-3-trimethylammonium-propane）、ＤＯＰＥ（1, 2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine）、ＤＤＡ（dimethyldioctadecylammonium）、ＤＣ－ｃｈｏｌ（3β-[N-(N', N'-dimethylaminoethane)-carbamoyl]cholesterol)、ＤＯＰＧ（1, 2-dioleoyl-sn-glycero-3-[phospho-rac-(1-glycerol)]）、ＤＰＰＣ（1,2- dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine), DOPC(1, 2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine）及び／またはコレステロールを含む。

【0093】

リポソームは、構造的特性として、親水性物質も疎水性物質もいずれも伝達するのに効果的であり、選択的に使用することができるという長所がある。従って、徐々に分解される間、徐々に薬物が放出されるので、ワクチンの薬物伝達体として利用されており、薬物量を減らすことができるという長所があるので、ワクチン組成物の製造時、必須な考慮事項のうち一つである。

【0094】

しかしながら、本発明のワクチン組成物は、前述のＨＳＰ９０抗原性ペプチドに、アジュバントとして、ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストをいずれも含む場合、ＴＬＲ２アゴニスト（ＴＬＲ２Ｌ）またはＴＬＲ３アゴニスト（ＴＬＲ３Ｌ）を単独で含む場合よりも、さらに高レベルのＴｈ１免疫反応が起こることを確認しただけではなく、驚くべきことに、アジュバントとして、リポソームをさらに含む場合、増大されたＴｈ１免疫反応は、ほとんどなくなることを確認することができた。

【0095】

従って、従来のＴＬＲ２／３アゴニスト（ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニスト）、及びリポソームを混合してアジュバントとして使用する場合、ＴＬＲ２／３アゴニストに比べ、免疫効果を増大させると知られていたが、本発明のワクチン組成物において、リポソームは、相乗効果ではなく、否定的な役割を行うということが分かる。

【0096】

その結果を勘案すれば、本発明の一実施例のワクチン組成物は、リポソームを含まないことが望ましい。

【0097】

本発明においては、「ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニスト」及び「ＴＬＲ２／３Ｌ」は区分されずに混用されて使用される。

【0098】

一実施例によれば、本発明のＨＳＰ９０抗原性ペプチドである配列番号１及び配列番号２のペプチドは、他種類のＴＬＲアゴニストであるＴＬＲ４アゴニスト（ＴＬＲ４）またはＴＬＲ７アゴニスト、及びＴＬＲ８アゴニスト（ＴＬＲ７／８Ｌ）をアジュバントとして使用する場合、Ｔｈ１免疫反応をほとんど誘導することができない一方、先に相乗効果を確認したＴＬＲ２アゴニスト及びＴＲＬ３アゴニスト（ＴＬＲ２／３Ｌ）において、有意にＴｈ１免疫反応を誘導することを確認した。そのような免疫反応は、マウス種とは関係ないと確認された。

【0099】

また、本発明のワクチン組成物は、腫瘍移植モデルにおいて、腫瘍の成長を効果的に抑制する結果を示した。そのような結果は、本発明のワクチン組成物を投与された対象体（マウス）内に移植された癌細胞に対する細胞毒性Ｔ細胞反応を誘導または維持し、移植された癌細胞の増殖を抑制したと見ることができる。

【0100】

従って、本発明のワクチン組成物は、腫瘍の成長または再発を効果的に抑制しうる抗癌用ワクチンとして使用されうる。

【0101】

本発明のワクチン組成物は、癌の成長または再発に対し、治療効果を誘導及び／または維持することが目的であるので、本発明においては、ＨＳＰ９０に対する細胞毒性Ｔ細胞反応を、誘導及び／または維持するのに適する任意のスケジュールでもって、本発明のワクチン組成物を患者に投与しうる。例えば、一次接種として、本明細書で記述されて例示されるようなワクチン組成物を、一定スケジュールで患者に投与した後、免疫を誘導及び／または維持するためにブースターを投与しうる。

【0102】

本発明の一部実施例において、ワクチン組成物は、１ヵ月当たり１回、２回、またはそれ以上の回数で患者に投与されうる。該ブースターは、接種スケジュールを終えた後、一定間隔で、例えば、１ヵ月間隔で、単回または複数回投与され、６ヵ月以上の期間を有し、単回または複数回投与されうる。本発明の一部実施例において、一次接種として、毎月１回ずつ、３回ワクチン組成物を投与し、６ヵ月後または１年後のような任意の期間経過後、さらなるブースターを接種しうる。

【0103】

このとき、ブースターは、一次接種時に使用されたワクチン組成物と同一の用量及び構成でもあり、用量及び／または構成が変更されもする。

【0104】

本発明の明細書に記載されたワクチン組成物は、ＨＳＰ９０抗原性ペプチド及びＴＬＲ２／３アゴニスト以外に、薬学的に許容される賦形剤（excipient）、担体、希釈剤、バッファ、安定剤（stabilizer）、保存剤、または本発明が属する技術分野において周知のその他物質を含むものでもある。しかしながら、別途にリポソームは、含まない。そのような物質は、非毒性であり、有効成分の薬学的活性を妨害しない。薬剤学的な担体または希釈制は、例えば、水溶液でもある。本発明のワクチン組成物に含まれうる担体または他物質は、投与経路（例えば、経口、静脈、皮膚または皮下、鼻、筋肉、皮内及び腹腔への投与）により、異なるように選択されうる。

【0105】

本発明のワクチン組成物は、１、またはそれ以上の「薬剤学的に許容される担体」を含むものでもある。それらは、典型的に、タンパク質、糖類（saccharides）、ポリ乳酸（polylactic acids）、ポリグリコール酸（polyglycolic acids）、ポリメリック（polymeric）アミノ酸、アミノ酸共重合体、スクロース（sucrose）、トレハロース（trehalose）などが属する。そのような担体は、本発明が属する技術分野に周知されている。ワクチン組成物は、また水、食塩水、グリセロールのような希釈剤を含むものでもある。また、湿潤剤または乳化剤、ｐＨバッファ物質のような補助物質が存在しうる。無菌発熱源がないリン酸塩バッファ生理食塩水（ＰＢＳ）、トロメタミン（トリス）が代表的な担体である。

【0106】

本発明のワクチン組成物には、免疫調節剤が追加して含まれうる。前記免疫調節剤として使用するのに適するサイトカインは、インターロイキン（interleukin）（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１２など）、大食細胞コロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ：macrophage colony stimulating factor）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ：tumor necrosis factor）、顆粒球大食細胞コロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ：granulocyte macrophage colony stimulating factor）などのうちから選択されうるが、それらに制限されるものではない。

【0107】

本発明のワクチン組成物は、化学抗癌剤、標的抗癌剤及び免疫抗癌剤のうちから選択される１以上の抗癌剤と併用投与しうる。本発明のワクチン組成物と併用投与されうる化学抗癌剤、標的抗癌剤及び免疫抗癌剤のうちから選択される１以上の抗癌剤は、互に同時または時間差を置いて順次に投与され、適切な時間及び周期によって選択されうる。

【0108】

本発明において、化学抗癌剤は、細胞毒性抗癌剤、化学薬物抗癌剤とも呼ばれる。前記化学抗癌剤は、例えば、ゲムシタビン（gemcitabine）（ゲムシタビン注射）、シタラビン（cytarabine）、カルボプラチン（carboplatin）（パラプラチン）、シスプラチン（cisplatin）（プラチノール、プラチノール－ＡＱ）、クリゾチニブ（crizotinib）（ザーコリ）、シクロホスファミド（cyclophosphamide）（シトキクサン、ネオサール）、ドセタキセル（docetaxel）（タキソテール）、ドキソルビシン（doxorubicin）（アドリアマイシン）、エトポシド（etoposide）（ベフシド）、フルオロウラシル（５－ＦＵ：5-fluorouracil）、イリノテカン（irinotecan）（カンプトサール）、リポソームカプセル化されたドキソルビシン（ドキシル）、メトトレキサート（methotrexate）（フォーレックス、Maxate、アメトプテリン）、パクリタキセル（paclitaxel）（タキソール、アブラキサン）、トポテカン（topotecan）（ハイカムチン）、トラベクチジン（trabectedin）（ヨンデリス）、ビンクリスチン（vincristine）（オンコビン、ビンカサールＰＦＳ）またはビンブラスチン（vinbrastine）（ベルバン）、カペシタビン（capecitabine）またはオキサリプラチン（oxaliplatin）などがあるが、それらに制限されるものではない。

【0109】

本発明において、標的抗癌剤は、小分子標的抗癌剤、抗体標的抗癌剤及び抗体・薬物結合物質であるＡＤＣ（antibody-drug conjugate）のうちから選択されるものでもある。

【0110】

前記小分子標的抗癌剤は、トラメチニブ（trametinib）、ベムラフェニブ（vemurafenib）、アルペリシブ（alpelisib）、ダクトリシブ（dactolisib）、ゲフィチニブ（gefitinib）、エルロチニブ（erlotinib）、ラパチニブ（lapatinib）、スニチニブ（sunitinib）、ソラフェニブ（sorafenib）、クリゾチニブ（crizotinib）、ダブラフェニブ（dabrafenib）、トラスツズマブ（trastuzumab）、セツキシマブ（cetuximab）、ベバシズマブ（bevacizumab）、パニツムマブ（panitumumab）、イピリムマブ（ipilimumab）、ペルツズマブ（pertuzumab）、トファシチニブ（tofacitinib）、イマチニブ（imatinib）及びボルテゾミブ（bortezomib）によってなる群のうちから選択される１以上でもあるが、それらに制限されるものではない。

【0111】

前記抗体標的抗癌剤は、ムロモナブ－ＣＤ３アブシキシマブ（muromonab-CD3 abciximab）、リツキシマブ（rituximab）、ダクリズマブ（daclizumab）、パリビズマブ（palivizumab）、インフリキシマブ（infliximab）、トラスツズマブ（trastuzumab）、エタネルセプト（etanercept）、バシリキシマブ（basiliximab）、ゲムツズマブ（gemtuzumab）、アレムツズマブ（alemtuzumab）、イブリツモマブ（ibritumomab）、アダリムマブ（adalimumab）、アレファセプト（alefacept）、オマリズマブ（omalizumab）、エファリズマブ（efalizumab）、トシツモマブ（tositumomab）、ベバシズマブ（bevacizumab）、ナタリズマブ（natalizumab）、ラニビズマブ（ranibizumab）、パニツムマブ（panitumumab）、エクリズマブ（eculizumab）、リロナセブト（rilonacept）、セルトリズマブ（certolizumab）、ロミプロスチム（romiplostim）、ＡＭＧ－５３１、ゴリムマブ（golimumab）、ウステキヌマブ（ustekinumab）、ＡＢＴ－８７４、ベラタセブト（belatacept）、ベリムマブ（belimumab）、アタシセブト（atacicept）、抗ＣＤ２０抗体、カナキヌマブ（canakinumab）、トシリズマブ（tocilizumab）、アトリズマブ（atlizumab）、メポリズマブ（mepolizumab）、ペルツズマブ（pertuzumab）、ヒュメックスＣＤ２０（HuMax CD20）、トレメルリムマブ(tremelimumab)、ティシルリムマブ(ticilimumab)、イピリムマブ(ipilimumab)、ＩＤＥＣ－１１４、イノツズマブ(inotuzumab)、アフリベルセプト(aflibercept)、ヒューマックス－ＣＤ４（ＨｕＭａｘ－ＣＤ４）、テプリズマブ（teplizumab）、オテリキシズマブ（otelixizumab）、カツマキソマブ（catumaxomab）、抗ＥｐＣＡＭ抗体ＩＧＮ１０１（anti-EpCAM antibody IGN101）、アデカツムマブ（adecatumumab）、オレゴボマブ（oregovomab）、ジヌツキシマブ（dinutuximab）、ジレンツキシマブ（girentuximab）、デノスマブ（denosumab）、バピネウズマブ（bapineuzumab）、モタビズマブ（motavizumab）、エファングマブ（efumgumab）、ラキシバクマブ（raxibacumab）、ＬＹ２４６９２９８及びベルツズマブ（veltuzumab）によってなる群のうちから選択される１以上でもあるが、それらに制限されるものではない。

【0112】

前記ＡＤＣは、ゲムツズマブオゾガマイシン（gemtuzumabozogamicin）、ブレンツキシマブベドチン（brentuximabvedotin）、トラスツズマブエムタンシン（trastuzumabemtansine）、イノツズマブオゾガマイシン（inotuzumabozogamicin）、ポラツズマブベドチン（polatuzumabvedotin）、エンホルツマブベドチン（enfortumabvedotin）、トラスツズマブデルクステカン（trastuzumabderuxtecan）、サシツズマブゴビテカン（sacituzumabgovitecan）、ベランタマブマフォドチン（belantamabmafodotin）、モキセツモマブパスドトックス（moxetumomabpasudotox）、ロンカスツキシマブテシリン（loncastuximabtesirine）及びチソツマブベドチン－ｔｆｔｖ（tisotumabvedotin-tftv)によってなる群のうちから選択される１以上でもあるが、それらに制限されるものではない。

【0113】

本発明において、前記免疫抗癌剤は、ＣＴＬＡ－４（cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4）、ＰＤ－１（programmed cell death protein 1）、ＰＤ－Ｌ１（programmed death-ligand 1）、ＬＡＧ－３（lymphocyte activation gene-3）、ＴＩＭ－３（T-cell immunoglobulin and mucin-domain containing-3）、ＴＩＧＩＴ（T-cell immunoreptor with IG and ITIM domain）及びＶＩＳＴＡ（V-domain Ig suppressor of T cell activation）によって構成された群のうちから選択されたいずれか一つに係わる免疫チェックポイント抑制剤（immune checkpoint inhibitor）でもあるが、それらに制限されるものではない。

【0114】

本発明において、前記組成物は、抗癌補助剤を追加して含むものでもあり、さらに望ましくは、前記抗癌補助剤は、ＳＴＩＮＧ（stimulator of interferon gene）アゴニストでもあるが、それに制限されるものではない。

【0115】

本発明のワクチン組成物は、対象に免疫反応を誘導するか、あるいは治療、ワクチン接種（vaccinating）または免疫療法を提供する方法に使用するためのものでもあり、ワクチン組成物は、ワクチンまたは免疫治療組成物でもある。

【0116】

本発明において、前記癌は、固形癌でもある。

【0117】

本発明において、前記癌は、例えば、扁平細胞癌（squamous cell cancer）（例：上皮扁平細胞癌）、小型細胞肺癌、非小型細胞肺癌、肺癌、腹膜癌、結腸癌、胆道腫瘍、鼻咽喉癌、喉頭癌、気管支癌、口腔癌、骨肉腫、胆嚢癌、腎臓癌、白血病、膀胱癌、黒色腫、脳癌、神経膠腫、脳腫瘍、皮膚癌、膵臓癌、乳癌、肝臓癌、骨髄癌、食道癌、大腸癌、胃癌、子宮頸部癌、前立腺癌、卵巣癌、頭頚部癌及び直腸癌によってなる群のうちから選択された１種以上であることを特徴とするものであるが、それらに限定されるものではない。

【0118】

本発明のワクチン組成物は、凍結乾燥されるか、あるいは水性形態（aqueous form）でもある。凍結乾燥されたワクチン組成物の場合、患者投与前、全ての成分を適切な水性媒質（aqueous medium）において再構成（reconstitution）する。水性形態のワクチン組成物は、水溶液または懸濁液でもある。そのような類型の液体製剤（liquid formulations）は、組成物を水性媒質において再構成する必要なしに包装された形態でもって、直接投与しうるので、注射に理想的である。ワクチン組成物は、バイアル（vials）でもって提供されるか、あるいは事前に充填された注射器でもって提供されうる。該注射器は、針と共に、または針なしに供給されうる。該注射器は、単一用量を含む一方、バイアルは、単一用量、または多数の（multiple）用量を含むものでもある。また、本発明のワクチン組成物は、マイクロニードルを利用して投与されうる。

【0119】

本発明のワクチン組成物は、多数の投与フォーマット（multiple dose format）に包装されるとき、抗菌剤（antimicrobial）を含むものでもある。該抗菌剤としては、２－フェノキシエタノール（2-phenoxyethanol）またはパラベン（parabens）（メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン）などのうちから選択されうる。任意の保存剤は、望ましくは、低レベルで存在する。該保存剤は、外因性によって添加され、かつ／あるいは組成物を形成するために混合されるバルク抗原の成分でもある。

【0120】

本発明のワクチン組成物は、マニュアルなどを含むキット形態で提供されうる。

【0121】

本発明において、有効成分と結合されて使用された「治療学的で有効な量」という用語は、対象疾患を予防または治療するのに有効な量を意味し、本発明の組成物の治療的に有効な量は、さまざまな要素、例えば、投与方法、目的部位、患者の状態などによっても異なる。従って、人体に使用するとき、投与量は、安全性及び効率性を共に考慮し、適正量に決定されなければならない。動物実験を介して決定された有効量から、ヒトに使用される量を推定することも可能である。

【0122】

異なって示されない限り、本明細書、及び特許請求の範囲に使用された全ての数は、言及されているにしても、言及されていないにしても、全ての場合、用語「約」によって修飾されうると理解されなければならない。また、本明細書、及び特許請求の範囲に使用された精密な数値は、本開示内容のさらなる実施態様を形成すると理解されなければならない。実施例に開示された数値の正確性を保証するために努力を傾けた。しかしながら、測定された全ての数値は、内在的に、そのそれぞれの測定技法で実測された標準偏差から生成された特定誤差値を含むものでもある。

【0123】

以下、実施例を介し、本発明についてさらに詳細に説明する。それら実施例は、ただ本発明についてさらに具体的に説明するためのものであり、本発明の要旨により、本発明の範囲が、それら実施例によって制限されるものではないということは、当業界で通常の知識を有する者において、自明であろう。

【実施例】

【0124】

ＨＳＰ９０抗原性ペプチドの免疫原性測定、及び抗癌効果分析を行うための動物は、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（メス、７週齢）、ＦＶＢマウス（メス、６週齢）及びＭＭＴＶｎｅｕ形質転換マウス（メス、６週齢）を、実験の目的によって選択し、それぞれの群当たり４匹ずつ使用した。

【0125】

実施例１の動物試験は、Cha医科学大学校実験動物運営委員会（ＩＡＣＵＣ（Institutional Animal Care and Use Committee）、承認番号：＃２０００８１）の承認下において、実施例２，３の動物実験は、高麗大学校実験動物運営委員会（ＩＡＣＵＣ、承認番号：ＫＯＲＥＡ－２０１９－１２９）の承認下において倫理的に実施した。

【0126】

実験において使用されたＨＳＰ９０抗原性ペプチドの配列情報は、表１に記載されている。

【0127】

【表1】

【0128】

［実施例１］
ＨＳＰ９０のうちから選別された抗原性ペプチド（表１参照）、多様なアジュバント、及びリポソームによる効能を分析するために、表２及び表３の組成でもって、試験ワクチンを製造した。Ｇ６剤形とＧ７剤形との場合、リポソームを含んでいるために、薬物の放出速度が遅くなるので、抗原性ペプチドの量を２０％に減らし、試験ワクチンを製造した。製造された試験ワクチンＧ１剤形ないしＧ７剤形は、Ｃ５７ＢＬ／Ｂ６マウス（メス、７週齢）を使用し、各群当たり４匹ずつ免疫化させた。ＣＦＡ／ＩＦＡは、フロインドアジュバント（Complete Freund’s adjuvant/Incomplete Freund’s adjuvant）を使用し、ＴＬＲ２アゴニスト（ＴＬＲ２Ｌ）としては、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫリポポリペブチドを使用し、ＴＬＲ３アゴニスト（ＴＬＲ３Ｌ）としては、Poly（Ｉ：Ｃ）を使用した。リポソームは、陽イオン性リポソーム使用した。

【0129】

試験ワクチンは、既出願の登録特許第１０－０９００８３７号または第１０－２０９８０９７に記述されているように、本発明の抗原性ペプチドを、Ｐａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫ（Ｇ３）またはPoly（Ｉ：Ｃ）（Ｇ４）とそれぞれ常温で混ぜるか、あるいはＰａｍ３Ｃｙｓ－ＳＫＫＫＫとPoly（Ｉ：Ｃ）とを共に含むＬ－pampo剤形（Ｇ５、Ｇ６、Ｇ７）に製造した。ＴＬＲ２アゴニスト及び／またはＴＬＲ３アゴニストを含むＧ３、Ｇ４、Ｇ５、Ｇ６、Ｇ７の試験ワクチンは、表２または表３の含量が、全体体積である２００μｌに含まれるように製造した。また、Ｇ３、Ｇ４、Ｇ５、Ｇ６、Ｇ７の試験ワクチンは、１５０ｍＭＮａＣｌと１０ｍＭリン酸ナトリウムとが含まれ、ｐＨは、７．０に合わされた水溶液状態の剤形に製造した。

【0130】

試験ワクチンは、各群当たり４匹ずつ、１０日ごとに３回ずつ、皮下注射でもって各ワクチン剤形を接種し、最後の接種から１０日後に犠牲にしたマウスの脾臓から、脾臓細胞（splenocytes）を分離した後、以前に公知されたDisisらの方法（J Clin Oncol. 2009 Oct 1; 27(28): 4685-92）により、配列番号１または配列番号２のＨＳＰ９０抗原性ペプチド（刺激剤）によって刺激されたＩＦＮ－γまたはＩＬ－１０ ELISpot法を介し、それぞれのＨＳＰ９０抗原性ペプチドに係わる特異的な反応を測定した。

【0131】

試験ワクチン接種後、ELISpot法で測定された脾臓細胞において、ＨＳＰ９０抗原性ペプチド特異的なＩＦＮ－γ生産量が増加した場合、Ｔｈ１免疫反応が活性化されたと見なし、ＨＳＰ９０抗原性ペプチド特異的なＩＬ－１０生産量が増加した場合、Ｔｈ２免疫反応が活性化されたと見なした。

【0132】

【表2】

【0133】

【表3】

【0134】

配列番号１及び２の各抗原性ペプチドを含むＧ１ないしＧ７の試験ワクチンに係わるELISpot結果は、図１及び図２に示されている。

【0135】

図１ａ）においては、配列番号１のＨＳＰ９０抗原性ペプチドを抗原として使用する場合、Ｇ３剤形（ＴＬＲ２アゴニスト単独含む）においては、Ｔｈ１免疫反応をほとんど示しておらず、Ｇ４剤形（ＴＬＲ３アゴニスト単独含む）においては、対照群であるＣＦＡ／ＩＦＡと類似した程度のＨＳＰ９０特異的なＴｈ１免疫反応を示した。しかしながら、ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストをいずれも含むＧ５剤形において、Ｇ３剤形及びＧ４剤形に比べ、相乗効果（シナジー効果）を示すことを確認することができ、Ｇ５剤形にリポソームを追加する場合、ＨＳＰ９０特異的なＴｈ１免疫反応が急激に低減される傾向を示した。ＴＬＲ３アゴニストを、さらに多量で含むＧ７剤形の場合、ＨＳＰ９０特異的なＴｈ１免疫反応が、Ｇ６剤形よりさらに低減される傾向を示した。

【0136】

配列番号２のＨＳＰ９０抗原性ペプチドを抗原として使用する場合、アジュバントの種類、及びリポソーム含有いかんとはかかわらず、ＨＳＰ９０特異的なＴｈ１免疫反応がほとんど観察されていない（図１ｂ））。

【0137】

図２ａ）においては、配列番号１のＨＳＰ９０抗原性ペプチドを使用する場合、Ｇ２剤形（ＣＦＡ／ＩＦＡ）の場合、Ｔｈ２免疫反応が最も高く、ＴＬＲ２アゴニスト及び／またはＴＬＲ３アゴニストを使用する場合、Ｔｈ２免疫反応は、ほとんど観察されていない（Ｇ３～Ｇ５剤形）。しかしながら、ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストを含みながら、リポソームを含む場合、それ自体でもって、Ｔｈ２免疫反応性が増大する傾向は見られたが、統計的に有意ではなかった。

【0138】

配列番号２のＨＳＰ９０抗原性ペプチドを使用する場合、Ｔｈ１免疫反応よりは、Ｔｈ２免疫反応様相を観察することができたが、各剤形間に、統計的に有意な結果を得ることができなかった（図２ｂ））。

【0139】

まとめれば、本実験においては、配列番号１のＨＳＰ９０抗原性ペプチドが、癌ワクチンとして要求される効果であるＨＳＰ９０特異的なＴ細胞免疫反応を効果的に誘導することが分かり、このとき、アジュバントとして、ＴＬＲ２アゴニスト、ＴＲＬ３アゴニストの混合使用が、相乗効果（synergic effect）を有するということが分かる（Ｇ５剤形）。しかしながら、そのような相乗効果は、剤形にリポソームを添加する場合、完全に消える傾向を確認した。従って、ＨＳＰ９０抗原性ペプチドを含む抗癌用ワクチン組成物には、アジュバントとして、ＴＬＲ２アゴニスト及びＴＬＲ３アゴニストを含み、リポソームは、別途に含まないことが、ＨＳＰ９０特異的なＴ細胞免疫反応のためには、望ましい剤形であるということが分かる。

【0140】

［実施例２］
マウスモデルにおいて、多様なＴＬＲアゴニストのアジュバントとしての活性を分析するために、配列番号１及び２のＨＳＰ９０抗原性ペプチド混合物（以下、「ＨＳＰ９０ペプチド」または「ＨＳＰ９０peptide」とする）と、アジュバントとして使用されると知られているＴＬＲ４アゴニスト（ＴＬＲ４Ｌ）、ＴＬＲ２／３アゴニスト（ＴＬＲ２アゴニストとＴＲＬ３アゴニストとの混合（ＴＬＲ２／３Ｌ））、及びＴＬＲ７／８アゴニスト（ＴＬＲ７アゴニストとＴＬＲ８アゴニストとの混合（ＴＬＲ７／８Ｌ））を剤形化し、ＦＶＢマウス（メス、６週齢）に対し、各群当たり４匹ずつ、１０日ごとに３回ずつ、皮下注射でもって各ワクチン剤形を接種し、最後の接種から１０日後にマウスの脾臓細胞を分離した後、ＩＦＮ－γ ELISpot法を利用し、ＨＳＰ９０特異的なＴ細胞反応を測定した。

【0141】

本実験で使用したＣＦＡ／ＩＦＡは、シグマ社から購入し、ＴＬＲ４アゴニストは、Quratis社のＧＬＡ－ＳＥを使用した。ＴＬＲ２／３アゴニストは、Chaワクチン研究所で提供され、ＴＬＲ７／８アゴニスト３Ｍ－０５２は、３Ｍ社から購入した。陰性対照群として使用したＴＴペプチドは、破傷風毒素（tetanus toxin）ペプチドであり、コンカナバリンＡは、陽性対照群として使用した。ワクチン剤形に含まれる各成分の量として、ＣＦＡ／ＩＦＡは、１００μｇ、ＴＬＲ２アゴニストは、１２５μｇ、ＴＬＲ３アゴニストは、１００μｇ、ＨＳＰ９０ペプチドは、配列番号１で表示されるペプチド、及び配列番号２で表示されるペプチドそれぞれ５０μｇずつ組み合わせた１００μｇを使用し、残量は、ＰＢＳでもって全体体積を２００μｌに調節した。

【0142】

図３に示されているように、ＨＳＰ９０抗原性ペプチドと、アジュバントとして、ＴＬＲ４アゴニストまたはＴＬＲ７／８アゴニストと、を含む剤形は、いずれもＨＳＰ９０特異Ｔ細胞反応を誘導することができなかった。ＨＳＰ９０抗原性ペプチドと、アジュバントとして、ＣＦＡ／ＩＦＡと、を使用する場合、及びＨＳＰ９０抗原性ペプチドと、アジュバントとして、ＴＬＲ２／３アゴニストと、を使用する場合のいずれにおいても、ＨＳＰ９０特異Ｔ細胞反応を誘導したが、ＴＬＲ２／３アゴニストを使用する場合、一般的に、抗癌ワクチンにおいて、強力な免疫反応を誘導すると知られているＣＦＡ／ＩＦＡよりも、２倍以上さらに高いＨＳＰ９０特異Ｔ細胞反応を誘導した。それにより、ＴＬＲ２／３アゴニストが、ＨＳＰ９０抗原性ペプチドにさらに適するアジュバントであることを確認した。

【0143】

従って、配列番号１及び２のＨＳＰ９０抗原性ペプチドを免疫原性抗原として使用する場合、多様なＴＬＲアゴニストにおいて、ＴＬＲ２／３アゴニストが、特異的にＨＳＰ９０特異Ｔ細胞反応を誘導するということを確認し、そのような結果は、ＨＳＰ９０抗原性ペプチドを免疫源にする場合、アジュバントとして、ＴＬＲ２／３アゴニストを使用する場合、癌ワクチンにおいて、目的とする免疫原性特異的なＴ細胞反応が誘導されるであろうということを反映させる。

【0144】

［実施例３］
腫瘍移植モデルは、マウス乳癌細胞株をマウスに移植するモデルを使用した。腫瘍生成のためのマウス乳癌細胞株は、mouse mammary cancer cell-FVB/N-Tg (MMTVneu)-202Mulマウス由来ＨＥＲ－２過発現乳癌細胞株を使用し、前記乳癌細胞株を移植するマウスは、ＭＭＴＶｎｅｕ形質転換マウスのメス６週齢を使用した。

【0145】

各群当たり４匹ずつ、生理食塩水（ＰＢＳ）とアジュバント（ＴＬＲ２／３アゴニスト）との群（以下、「対照群」とする）、または配列番号１及び配列番号２のＨＳＰ９０抗原性ペプチドと、アジュバント（ＴＬＲ２／３アゴニスト）との群（以下、「試験群」とする）に分けた。１０日ごとに、３回ずつ皮下注射を、対照群または試験群のワクチンを接種し、最後の接種から１０日後、生理食塩水とマトリゲルとを１：１に混ぜたゲルにおいて、一匹当たり５Ｘ１０^５個のマウス乳癌細胞株を、マウスわき腹に皮下注射し、腫瘍の成長を３～４日間隔で観察し、腫瘍の大きさを測定し、ＨＳＰ９０抗原性ペプチドワクチンの腫瘍形成を抑制する効果を確認した。ワクチン接種及び腫瘍細胞移植の同一期間の間、各マウスの体重は、対照群と試験群との間に差がなかった。

【0146】

癌細胞移植後３５日になる日に各マウスを犠牲にし、癌組織及び脾臓を摘出し、大きさを測定した。

【0147】

図４に示されているように、試験群（ＨＳＰ９０抗原性ペプチドとＴＬＲ２／３アゴニストとのワクチン剤形投与群）のマウスは、対照群に比べ、統計学的に有意に腫瘍成長が抑制された。具体的には、対照群の平均平均腫瘍体積が、１，０３１±４５０ｍｍ^３である一方、試験群の平均腫瘍体積は、１７０±１０８ｍｍ^３であり、試験群の平均腫瘍体積は、対照群の１７％に過ぎず、ＴＬＲ２／３アゴニストワクチン剤形が、抗原特異的な腫瘍モデルにおいて、効果的に腫瘍生成を抑制しうるということを確認することができた。このとき、各群の体重差はなく、毒性反応による差ではないと確認した。

【0148】

このとき、犠牲にした対照群及び試験群から摘出した腫瘍及び脾臓の大きさは、図５に示されている。試験群は、対照群に比べ、脾臓の大きさが確実に肥大したおり、それにより、試験群において、免疫反応が活性化されたことを確認することができた。

【配列表フリーテキスト】

【0149】

１．配列番号１（ＨＳＰ９０全体配列におけるｐ４８５－４９９領域）
ＬＹＶＲＲＶＦＩＭＤＮＣＥＥＬ
２．配列番号２（ＨＳＰ９０全体配列におけるｐ５２７－５４１領域）
ＸＳＫＩＬＫＶＩＲＫＮＬＶＫＫ（Ｘは、pyroglutamateである）

【図1】