特表 2024-534706 二重特異性抗体及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-20

(54)【発明の名称】二重特異性抗体及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/46 20060101AFI20240912BHJP

   C07K 16/24 20060101ALI20240912BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240912BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240912BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240912BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240912BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240912BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240912BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240912BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240912BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240912BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240912BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240912BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240912BHJP

【ＦＩ】

C07K16/46 ZNA

C07K16/24

C07K16/28

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N5/10

C12N1/21

C12N1/19

C12N1/15

C12P21/08

A61P35/00

A61P37/02

A61K39/395 T

A61K39/395 U

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024542232

(86)(22)【出願日】2022-09-29

(85)【翻訳文提出日】2024-03-26

(86)【国際出願番号】 CN2022122367

(87)【国際公開番号】W WO2023051656

(87)【国際公開日】2023-04-06

(31)【優先権主張番号】202111162303.X

(32)【優先日】2021-09-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519311260

【氏名又は名称】▲貝▼▲達▼▲薬▼▲業▼股▲フン▼有限公司

【氏名又は名称原語表記】ＢＥＴＴＡ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＣＯ．， ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100138911

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻井 陽子

(72)【発明者】

【氏名】徐 ▲ウェン▼新

(72)【発明者】

【氏名】房 雪菲

(72)【発明者】

【氏名】徐 ▲徳▼雨

(72)【発明者】

【氏名】胥 階英

(72)【発明者】

【氏名】丁 列明

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG26

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA90X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C085AA14

4C085BB31

4C085CC23

4C085DD61

4C085EE01

4C085GG01

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA09

4H045BA41

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

二重特異性抗体及びその使用を提供する。提供される二重特異性抗体は、特異的にＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と単一に又は同時に結合することができ、また、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合することもできる。提供される二重特異性抗体は、抗原との高い親和性、特異性を示し、腫瘍殺傷効果を有するため、腫瘍の治療に使用することができる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、
前記第１抗原結合部分は重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、
配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
前記第１抗原結合部分は軽鎖可変領域をさらに含み、前記軽鎖可変領域は、
配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
前記第１抗原結合部分はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができ、
前記ＨＣＤＲ配列及び前記ＬＣＤＲ配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とする二重特異性抗体。

【請求項2】

前記第１抗原結合部分が、以下から選ばれ、
（１）配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（２）配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（３）配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（４）配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（５）配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（６）配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有することを特徴とする請求項１に記載の二重特異性抗体。

【請求項3】

第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、
前記第１抗原結合部分は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、ただし、
ＨＣＤＲ１は配列番号１又は４又は７又は１０又は１３又は１６で示される配列を含み、
ＨＣＤＲ２は配列番号２又は５又は８又は１１又は１４又は１７で示される配列を含み、
ＨＣＤＲ３は配列番号３又は６又は９又は１２又は１５又は１８で示される配列を含み、
ＬＣＤＲ１は配列番号１９又は２２又は２５又は２７又は３０又は３３で示される配列を含み、
ＬＣＤＲ２は配列番号２０又は２３又は２８又は３１又は３４で示される配列を含み、
ＬＣＤＲ３は配列番号２１又は２４又は２６又は２９又は３２又は３５で示される配列を含み、
前記第１抗原結合部分はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができ、
前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３配列及び前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とする二重特異性抗体。

【請求項4】

前記第１抗原結合部分が、
配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される配列と少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域と、
配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される配列と少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含むことを特徴とする請求項１～３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。

【請求項5】

前記第１抗原結合部分が、
（１）配列番号３６若しくは３７若しくは３８若しくは３９若しくは４０若しくは４１で示される重鎖可変領域と、配列番号４８若しくは４９若しくは５０若しくは５１若しくは５２若しくは５３で示される軽鎖可変領域と、又は
（２）配列番号４２若しくは４３若しくは４４若しくは４５若しくは４６若しくは４７で示される重鎖可変領域と、配列番号５４若しくは５５若しくは５６若しくは５７若しくは５８若しくは５９で示される軽鎖可変領域とを含むことを特徴とする請求項４に記載の二重特異性抗体。

【請求項6】

前記第２抗原結合部分が、単一ドメイン抗体であり、
前記二重特異性抗体は、リンカーによってＩｇＧ型抗体及び第２抗原結合部分がそれぞれ接続された構造であり、ただし、ＩｇＧ型抗体は第１抗原結合部分を含むことを特徴とする請求項１～５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。

【請求項7】

前記第２抗原結合部分が、
（ａ）次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６０、６３及び６６、又は配列番号６０、６３及び６６と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含むＣＤＲ１と、
（ｂ）次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６１、６４及び６７、又は配列番号６１、６４及び６７と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含むＣＤＲ２と、
（ｃ）次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６２、６５、６８及び６９、又は配列番号６２、６５、６８及び６９と比べて、１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含むＣＤＲ３とを含み、
前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とする請求項１～５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。

【請求項8】

前記第２抗原結合部分が、以下から選ばれ、
（１）配列番号６０で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６１で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６２で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（２）配列番号６３で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６４で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６５で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（３）配列番号６６で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６７で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６８で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（４）配列番号６０で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６１で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６９で示されるＣＤＲ３配列を有することを特徴とする請求項７に記載の二重特異性抗体。

【請求項9】

前記第２抗原結合部分がフレームワーク領域をさらに含み、前記フレームワーク領域はＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４を含み、前記ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４は、それぞれ、次に示すアミノ酸配列を含み、
（１）ＦＲ１は、配列番号７０若しくは７４若しくは７７若しくは８０で示される配列、又は配列番号７０若しくは７４若しくは７７若しくは８０で示される配列と比べて、１つ、２つ若しくは３つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（２）ＦＲ２は、配列番号７１若しくは７５若しくは７８で示される配列、又は配列番号７１若しくは７５若しくは７８で示される配列と比べて、１つ、２つ若しくは３つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（３）ＦＲ３は、配列番号７２若しくは７６若しくは７９若しくは８１で示される配列、又は配列番号７２若しくは７６若しくは７９若しくは８１で示される配列と比べて、１つ、２つ、３つ若しくは４つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（４）ＦＲ４は、配列番号７３で示される配列、又は配列番号７３で示される配列と比べて、１つ若しくは２つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれることを特徴とする請求項７又は８に記載の二重特異性抗体。

【請求項10】

前記第２抗原部分がフレームワーク領域ＦＲをさらに含み、前記フレームワーク領域ＦＲは、
（１）配列番号７０で示されるＦＲ１配列、配列番号７１で示されるＦＲ２配列、配列番号７２で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、又は
（２）配列番号７４で示されるＦＲ１配列、配列番号７５で示されるＦＲ２配列、配列番号７６で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、又は
（３）配列番号７７で示されるＦＲ１配列、配列番号７８で示されるＦＲ２配列、配列番号７９で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、又は
（４）配列番号８０で示されるＦＲ１配列、配列番号７８で示されるＦＲ２配列、配列番号７９で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、又は
（５）配列番号７０で示されるＦＲ１配列、配列番号７１で示されるＦＲ２配列、配列番号８１で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、から選ばれることを特徴とする請求項７又は８に記載の二重特異性抗体。

【請求項11】

前記第２抗原結合部分が、
（ａ）配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示されるアミノ酸配列、
（ｂ） （ａ）と比べて、配列同一性が８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、又は９９％以上であるアミノ酸配列から選ばれることを特徴とする請求項７又は８に記載の二重特異性抗体。

【請求項12】

第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、
前記第１抗原結合部分はＧＡＲＰ、ＴＧＦ－β及び／又はＧＡＰＲ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができ、
前記第２抗原結合部分はＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、ただし、
（ａ）前記ＣＤＲ１は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６０、６３及び６６、又は配列番号６０、６３及び６６と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲ２は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６１、６４及び６７、又は配列番号６１、６４及び６７と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲ３は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６２、６５、６８及び６９、又は配列番号６２、６５、６８及び６９と比べて、１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とする二重特異性抗体。

【請求項13】

前記第２抗原結合部分が、
（１）配列番号６０で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６１で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６２で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（２）配列番号６３で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６４で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６５で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（３）配列番号６６で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６７で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６８で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（４）配列番号６０で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６１で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６９で示されるＣＤＲ３配列を有することを特徴とする請求項１２に記載の二重特異性抗体。

【請求項14】

前記第２抗原結合部分がフレームワーク領域をさらに含み、前記フレームワーク領域はＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４を含み、前記ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４は、それぞれ、次に示すアミノ酸配列を含み、
（１）ＦＲ１は、配列番号７０若しくは７４若しくは７７若しくは８０で示される配列、又は配列番号７０若しくは７４若しくは７７若しくは８０で示される配列と比べて、１つ、２つ若しくは３つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（２）ＦＲ２は、配列番号７１若しくは７５若しくは７８で示される配列、又は配列番号７１若しくは７５若しくは７８で示される配列と比べて、１つ、２つ若しくは３つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（３）ＦＲ３は、配列番号７２若しくは７６若しくは７９若しくは８１で示される配列、又は配列番号７２若しくは７６若しくは７９若しくは８１で示される配列と比べて、１つ、２つ、３つ若しくは４つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（４）ＦＲ４は、配列番号７３で示される配列、又は配列番号７３で示される配列と比べて、１つ若しくは２つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれることを特徴とする請求項１２又は１３に記載の二重特異性抗体。

【請求項15】

前記第２抗原部分がフレームワーク領域ＦＲをさらに含み、前記フレームワーク領域ＦＲは、それぞれ、以下を含み、
（１）ＦＲ１は配列番号７０で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７１で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号７２で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列であり、又は
（２）ＦＲ１は配列番号７４で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７５で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号７６で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列であり、又は
（３）ＦＲ１は配列番号７７で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７８で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号７９で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列であり、又は
（４）ＦＲ１は配列番号８０で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７８で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号７９で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列であり、又は
（５）ＦＲ１は配列番号７０で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７１で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号８１で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列であることを特徴とする請求項１２又は１３に記載の二重特異性抗体。

【請求項16】

前記第２抗原結合部分が、
（ａ）配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示されるアミノ酸配列、
（ｂ） （ａ）と比べて、配列同一性が８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、又は９９％以上であるアミノ酸配列から選ばれることを特徴とする請求項１２～１５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。

【請求項17】

前記第１抗原結合部分は、重鎖第１定常ドメインＣＨ１、軽鎖定常ドメインＶＬ及びＦｃ領域とＩｇＧ型構造を形成し、
前記第２抗原結合部分はリンカーによって前記ＩｇＧ型構造に接続されることを特徴とする請求項１２～１６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。

【請求項18】

第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、前記第１抗原結合部分はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができ、
前記第１抗原結合部分は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、
配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
前記軽鎖可変領域は、
配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
前記第２抗原結合部分はＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
前記ＣＤＲ１は配列番号６０又は６３又は６６で示される配列を含み、
前記ＣＤＲ２は配列番号６１又は６４又は６７で示される配列を含み、
前記ＣＤＲ３は配列番号６２又は６５又は６８又は６９で示される配列を含み、
前記ＨＣＤＲ配列及び前記ＬＣＤＲ配列並びに前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とする二重特異性抗体。

【請求項19】

前記第１抗原結合部分が、以下から選ばれ、
（１）配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（２）配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（３）配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（４）配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（５）配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（６）配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列を有し、
前記第２抗原結合部分が、以下から選ばれ、
（１）ＣＤＲ１が配列番号６０で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２が配列番号６１で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３が配列番号６２で示されるアミノ酸配列であり、又は
（２）ＣＤＲ１が配列番号６３で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２が配列番号６４で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３が配列番号６５で示されるアミノ酸配列であり、又は
（３）ＣＤＲ１が配列番号６６で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２が配列番号６７で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３が配列番号６８で示されるアミノ酸配列であり、又は
（４）ＣＤＲ１が配列番号６０で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２が配列番号６１で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３が配列番号６９で示されるアミノ酸配列であり、
前記第１抗原結合部分は、重鎖第１定常ドメインＣＨ１、軽鎖定常ドメインＶＬ及びＦｃ領域とＩｇＧ型構造を形成し、前記第２抗原結合部分はリンカーによってＩｇＧ型構造に接続されることを特徴とする請求項１８に記載の二重特異性抗体。

【請求項20】

前記第１抗原結合部分が、
（１）配列番号３６若しくは３７若しくは３８若しくは３９若しくは４０若しくは４１で示される重鎖可変領域と、配列番号４８若しくは４９若しくは５０若しくは５１若しくは５２若しくは５３で示される軽鎖可変領域と、又は
（２）配列番号４２若しくは４３若しくは４４若しくは４５若しくは４６若しくは４７で示される重鎖可変領域と、配列番号５４若しくは５５若しくは５６若しくは５７若しくは５８若しくは５９で示される軽鎖可変領域とを含み、
前記第２抗原結合部分が、
配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする請求項１９に記載の二重特異性抗体。

【請求項21】

第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、
前記第１抗原結合部分は、
配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含み、
前記第１抗原結合部分はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができることを特徴とする二重特異性抗体。

【請求項22】

前記第２抗原結合部分が、
配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示されるアミノ酸のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含むことを特徴とする請求項２１に記載の二重特異性抗体。

【請求項23】

ＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ及び／又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と特異的に結合する第１抗原結合部分と、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する第２抗原結合部分とを含み、
重鎖第１定常ドメインＣＨ１と軽鎖定常ドメインＣＬとをさらに含み、前記第１抗原結合部分は、重鎖第１定常ドメインＣＨ１、軽鎖定常ドメインＣＬとそれぞれ共有結合され、
Ｆｃ領域をさらに含み、前記Ｆｃ領域はヒンジ領域によって重鎖第１定常ドメインＣＨ１に接続され、前記第２抗原結合部分はリンカーによってＦｃ領域に及び／又は軽鎖定常ドメインＣＬに接続されることを特徴とする二重特異性抗体。

【請求項24】

（ｉ）前記第２抗原結合部分がリンカーによって前記Ｆｃ領域のカルボキシ末端（Ｃ末端）に接続されたもの、
（ｉｉ）前記第２抗原結合部分がリンカーによって軽鎖定常ドメインのカルボキシ末端（Ｃ末端）に接続されたもの、
（ｉｉｉ）前記第２抗原結合部分の少なくとも一部が第１リンカーによってＦｃ領域のカルボキシ末端（Ｃ末端）に接続され、少なくとも一部が第２リンカーによって軽鎖定常ドメインのカルボキシ末端（Ｃ末端）に接続されたものから少なくとも１種選ばれることを特徴とする請求項２３に記載の二重特異性抗体。

【請求項25】

少なくとも、下記の特性、即ち、
（ａ）ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合すること、
（ｂ）糖タンパク質Ａ反復優勢配列（ＧＡＲＰ）と特異的に結合すること、
（ｃ）ＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と特異的に結合すること、
（ｄ）ＴＧＦ－βと特異的に結合すること、
（ｅ）制御性Ｔ細胞の免疫抑制機能に対する阻害活性を有すること、
（ｆ）抗腫瘍活性を有すること
の１つを有することを特徴とする請求項２３に記載の二重特異性抗体。

【請求項26】

重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ただし、
配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
前記ＨＣＤＲ配列及び前記ＬＣＤＲ配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とするモノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項27】

重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ただし、
（１）配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（２）配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（３）配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（４）配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（５）配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（６）配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列を有することを特徴とするモノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項28】

重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、ただし、
ＨＣＤＲ１は配列番号１又は４又は７又は１０又は１３又は１６で示される配列を含み、
ＨＣＤＲ２は配列番号２又は５又は８又は１１又は１４又は１７で示される配列を含み、
ＨＣＤＲ３は配列番号３又は６又は９又は１２又は１５又は１８で示される配列を含み、
ＬＣＤＲ１は配列番号１９又は２２又は２５又は２７又は３０又は３３で示される配列を含み、
ＬＣＤＲ２は配列番号２０又は２３又は２８又は３１又は３４で示される配列を含み、
ＬＣＤＲ３は配列番号２１又は２４又は２６又は２９又は３２又は３５で示される配列を含むことを特徴とするモノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項29】

配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含むことを特徴とするモノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項30】

配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される配列と少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域と、
配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される配列と少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含むことを特徴とする請求項２６～２９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項31】

配列番号３６で示される重鎖可変領域及び配列番号４８で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号３７で示される重鎖可変領域及び配列番号４９で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号３８で示される重鎖可変領域及び配列番号５０で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号３９で示される重鎖可変領域及び配列番号５１で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４０で示される重鎖可変領域及び配列番号５２で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４１で示される重鎖可変領域及び配列番号５３で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４２で示される重鎖可変領域及び配列番号５４で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４３で示される重鎖可変領域及び配列番号５５で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４４で示される重鎖可変領域及び配列番号５６で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４５で示される重鎖可変領域及び配列番号５７で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４６で示される重鎖可変領域及び配列番号５８で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４７で示される重鎖可変領域及び配列番号５９で示される軽鎖可変領域から選ばれることを特徴とする請求項２６～３０のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項32】

Ｆｃ領域をさらに含むことを特徴とする請求項２６～３１のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項33】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体をコードし又は請求項２６～３２のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片をコードすることを特徴とするポリヌクレオチド。

【請求項34】

請求項３３に記載のポリヌクレオチドを含むことを特徴とする構築物。

【請求項35】

請求項３３に記載のポリヌクレオチド又は請求項３４に記載の構築物を含有することを特徴とする宿主細胞。

【請求項36】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は請求項２６～３２のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片と、
薬学的に許容される担体とを含むことを特徴とする医薬組成物。

【請求項37】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は請求項２６～３２のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片と、
前記二重特異性抗体又は前記モノクローナル抗体若しくは抗原結合断片に接続された機能性小分子とを含むことを特徴とする抗体複合体。

【請求項38】

請求項１～２５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体又は請求項２６～３２のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を含むことを特徴とするキット。

【請求項39】

請求項３５に記載の宿主細胞を培養することと、
培養物から二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を回収することとを含むことを特徴とする請求項１～２５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体を生産し又は請求項２６～３２のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を生産する方法。

【請求項40】

必要とする被験者に有効量の請求項１～２５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は請求項２６～３２のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項３６に記載の医薬組成物、又は請求項３７に記載の抗体複合体を投与することを含むことを特徴とする疾患を予防及び／又は治療する方法。

【請求項41】

前記疾患は、がん又は自己免疫疾患から選ばれることを特徴とする請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

薬物又はキット又は抗体複合体の製造における請求項１～２５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は請求項２６～３２のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片の用途。

【発明の詳細な説明】

【関連出願の相互参照】

【0001】

本願は、２０２１年９月３０日に提出された、出願番号が２０２１１１１６２３０３．Ｘである中国特許出願の優先権を主張し、それは全体として又はその一部が本明細書に組み込まれる。

【技術分野】

【0002】

本願は、バイオ医薬品の分野に関し、具体的には、二重特異性抗体及びその使用に関する。

【背景技術】

【0003】

トランスフォーミング増殖因子－β（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－β、ＴＧＦ－β）は、ＴＧＦ－βスーパーファミリーのメンバーとして、様々な免疫細胞、例えば、制御性Ｔ細胞（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ、Ｔｒｅｇｓ）、ＤＣ細胞、ＣＤ３^＋Ｔ細胞、Ｍ２マクロファージなどで発現され、細胞の増殖及び分化を制御する。腫瘍微小環境では、免疫細胞の活性が一般的に環境中のＴＧＦ－βに影響を受けるため、免疫抑制が示される。ＴＧＦ－βの発揮する効力及び多様性により、ファミリーのメンバーのうち、ＴＧＦ－β１、β２、β３などのアイソフォームは不活性な潜在型として産生され、しかも厳密に制御される細胞外活性化ステップがないとその受容体と結合する能力は得られない（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ．２０１６；８（ａ０２２１０３），Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．２０１３；２４：３５５－３７２）。ＴＧＦ－β１は、免疫細胞、例えば、Ｔｒｅｇｓによって発現される主なアイソフォームである。Ｔｒｅｇ細胞は、活性ＴＧＦ－βを産生して免疫抑制効果を媒介することによって、自己免疫疾患などの発生を防止するのである。しかし、悪性腫瘍は、当該メカニズムを利用して大量のＴＧＦ－βを放出し、がん細胞を迅速に分裂させると同時に、Ｔｒｅｇ細胞に頼ってがん細胞に対する他の免疫細胞の殺傷効果を阻害する。

【0004】

糖タンパク質Ａ反復優勢配列（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ａ ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎｓ ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ、ＧＡＲＰ）は、潜在型トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ－β）と結合するＩ型膜貫通細胞表面受容体であり、主にＴｒｅｇ、Ｂ細胞の表面及び血小板で活性化され、ヒトの乳腺、肺及び結腸の腫瘍で高発現される。ＧＡＲＰは、潜在型ＴＧＦ－β（ｌａｔｅｎｃｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ、ＬＡＰ、潜在関連ペプチド）と複合体を形成することができ（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００９；１０６（３２）：１３４４５－５０）、膜の潜在型ＴＧＦ－βと結合する能力を制御し、αＶβ８インテグリン又はαＶβ６インテグリンと結合して、細胞の表面からＴＧＦ－βを放出させてそれを活性化させることができる。

【0005】

ＧＡＲＰの高発現は腫瘍の増殖に必要なＴＧＦ－βの活性化及び貯蔵を提供し、Ｔｒｅｇの抑制性表現型を向上させＴｒｅｇの媒介する末梢性免疫寛容を維持することに鑑みて、ＧＡＲＰ阻害剤は腫瘍治療で徐々に頭角を現している。ＧＡＲＰを標的とする抗体の開発も早く進められており、例えば、初めて臨床で使用されているＧＡＲＰ阻害剤ＡＲＧＸ－１１５は、ＧＡＲＰを標的とし、活性ＴＧＦ－βの放出及びＴｒｅｇの免疫抑制活性を阻害することによって、がん細胞の免疫応答を再活性化し、疾患の進行を抑制する。第一三共によって開発されたＤＳ－１０５５（ＧＡＲＰに対して設計されたモノクローナル抗体）の方も、再発／難治性の末期又は転移性頭頸部がん、胃がん及び食道がんに関する臨床試験が行われている。

【0006】

二重特異性抗体（Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ、ＢｓＡｂ）は、２つの抗原又はエピトープと同時に特異的に結合することのできる抗体である。１９６０年にＮｉｓｏｎｏｆｆ氏及び共同研究者が初めてＢｓＡｂの概念を初めて打ち出して以来、二重特異性抗体は、遺伝子組み換え抗体技術が徐々に成熟するのにつれて、早く発展されてきている。ＢｓＡｂは複数の抗原又はエピトープを標的とすることができるため、モノクローナル抗体よりも多くの優位性を示しており、しかもモノクローナル抗体併用療法を上回る効果を徐々に示すようになる。例えば、特異的免疫エフェクター細胞を近くの腫瘍細胞にリダイレクトして、腫瘍の殺傷を向上させることができ、また、２つの異なる細胞表面抗原の相互作用によって結合の特異性を高めることができ、また、単一の抗体の併用よりも、開発コストを低減させ、臨床試験を減らすことができる。今や二重特異性抗体は、抗体工学分野で研究のホットスポットとなっており、腫瘍治療や自己免疫疾患などの分野で幅広く使用される見込みがある。中国国内と海外の複数の製薬会社が、異なる標的に対して二重特異性抗体の研究を行っている。

【0007】

しかし、二重特異性抗体は、２つ又はそれ以上の実体の相互作用に関わるため、モノクローナル抗体よりも複雑なものである。異なる標的に対する二重特異性抗体の開発にはさらに改善する必要がある。

【発明の概要】

【0008】

本願は、二重特異性抗体及び疾患の治療におけるその用途を提供する。本願は、ＧＡＲＰ、ＴＧＦ－β及び／又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体を標的とすることによって活性ＴＧＦ－βの放出及びＴｒｅｇの免疫抑制機能を阻害し、これによってがん細胞の免疫応答を再活性化し、疾患の進行を抑制する。また、提供される二重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合することができ、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１耐性の場合に抗腫瘍活性を向上させることができる。

【0009】

本願の第１態様は、二重特異性抗体を提供し、前記二重特異性抗体は第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、前記第１抗原結合部分は重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、前記第１抗原結合部分は軽鎖可変領域をさらに含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
前記第１抗原結合部分はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができ、前記ＨＣＤＲ配列及び前記ＬＣＤＲ配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られる。

【0010】

提供される二重特異性抗体は第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を有し、第１抗原結合部分は、特異的にＧＡＲＰ、ＴＧＦ－β又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体のうちの１種、２種又は３種を標的とし、免疫細胞の応答を活性化することができ、第２抗原結合部分は、特異的にＰＤ－Ｌ１を標的とし、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達経路を遮断し、免疫抑制を解除し、体の免疫殺傷能力を回復させることができる。提供される二重特異性抗体は優れた腫瘍治療効果を示していることが確認された。

【0011】

本願の第２態様は、第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含む二重特異性抗体を提供し、前記第１抗原結合部分は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、ただし、ＨＣＤＲ１は配列番号１又は４又は７又は１０又は１３又は１６で示される配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２又は５又は８又は１１又は１４又は１７で示される配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３又は６又は９又は１２又は１５又は１８で示される配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号１９又は２２又は２５又は２７又は３０又は３３で示される配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２０又は２３又は２８又は３１又は３４で示される配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２１又は２４又は２６又は２９又は３２又は３５で示される配列を含み、前記第１抗原結合部分はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができ、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３配列及び前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られる。

【0012】

本願の第３態様は、第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含む二重特異性抗体を提供し、前記第１抗原結合部分はＧＡＲＰ、ＴＧＦβ及び／又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、
前記第２抗原結合部分はＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、ただし、
（ａ）前記ＣＤＲ１は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６０、６３及び６６、又は配列番号６０、６３及び６６と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲ２は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６１、６４及び６７、又は配列番号６１、６４及び６７と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲ３は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６２、６５、６８及び６９、又は配列番号６２、６５、６８及び６９と比べて、１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られる。

【0013】

本願の第４態様は、第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含む二重特異性抗体を提供し、前記第１抗原結合部分は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列を含み、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列を含み、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列を含み、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列を含み、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列を含み、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列を含み、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列を含み、又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列を含み、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列を含み、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列を含み、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列を含み、前記第２抗原結合部分はＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、前記ＣＤＲ１は配列番号６０又は６３又は６６で示される配列を含み、前記ＣＤＲ２は配列番号６１又は６４又は６７で示される配列を含み、前記ＣＤＲ３は配列番号６２又は６５又は６８又は６９で示される配列を含む。

【0014】

本願の第５態様は、第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含む二重特異性抗体を提供し、前記第１抗原結合部分は、配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含み、前記第１抗原結合部分はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができる。

【0015】

本願の第６態様は、二重特異性抗体を提供し、当該二重特異性抗体はＴＧＦβ、ＧＡＲＰ及び／又はＧＡＲＰ－ＴＧＦβ複合体と特異的に結合する第１抗原結合部分と、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する第２抗原結合部分とを含み、当該二重特異性抗体は重鎖第１定常ドメインＣＨ１と軽鎖定常ドメインＣＬとをさらに含み、前記第１抗原結合部分は、重鎖第１定常ドメインＣＨ１、軽鎖定常ドメインＣＬとそれぞれ共有結合され、当該二重特異性抗体はＦｃ領域をさらに含み、前記Ｆｃ領域はヒンジ領域によって重鎖第１定常ドメインＣＨ１に接続され、前記第２抗原結合部分はリンカーによってＦｃ領域と及び／又は軽鎖定常ドメインＣＬと共有結合される。

【0016】

本願の第７態様は、重鎖可変領域を含むモノクローナル抗体又は抗原結合断片を提供し、前記重鎖可変領域は、配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含む。

【0017】

本願の第８態様は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体又は抗原結合断片を提供し、ただし、（１）配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は（２）配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は（３）配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は（４）配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は（５）配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は（６）配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列を有する。

【0018】

本願の第９態様は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体又は抗原結合断片を提供し、前記重鎖可変領域は相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、ただし、ＨＣＤＲ１は配列番号１又は４又は７又は１０又は１３又は１６で示される配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２又は５又は８又は１１又は１４又は１７で示される配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３又は６又は９又は１２又は１５又は１８で示される配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号１９又は２２又は２５又は２７又は３０又は３３で示される配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２０又は２３又は２８又は３１又は３４で示される配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２１又は２４又は２６又は２９又は３２又は３５で示される配列を含む。

【0019】

本願の第１０態様は、配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含むモノクローナル抗体又は抗原結合断片を提供する。

【0020】

本願の第１１態様は、上記の第１態様～第６態様のいずれか一項に記載の二重特異性抗体をコードし、又は第７態様～第１０態様のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを提供する。

【0021】

本願の第１２態様は、上記の第１１態様に記載のポリヌクレオチドを含む構築物を提供する。

【0022】

本願の第１３態様は、上記の第１１態様に記載のポリヌクレオチド又は第１２態様に記載の構築物を含有する宿主細胞を提供する。

【0023】

本願の第１４態様は、上記の第１態様～第６態様のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は第７態様～第１０態様のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。

【0024】

本願の第１５態様は、上記の第１態様～第６態様のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は第７態様～第１０態様のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片と、二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片に接続された機能性小分子とを含む抗体複合体を提供する。

【0025】

本願の第１６態様は、上記の第１態様～第６態様のいずれかの実施例に記載の二重特異性抗体、又は第７態様～第１０態様のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を含むキットを提供する。

【0026】

本願の第１７態様は、第１３態様に記載の宿主細胞を培養することと、培養物から二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を回収することとを含む上記の二重特異性抗体を生産し又は上記のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を生産する方法を提供する。

【0027】

本願の第１８態様は、必要とする被験者に有効量の上記の第１態様～第６態様のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は上記の第７態様～第１０態様のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片、又は第１４態様に記載の医薬組成物、又は第１５態様に記載の抗体複合体を投与することを含む疾患を予防及び／又は治療する方法を提供する。

【0028】

本願の第１９態様は、薬物若しくはキットの製造又は抗体複合体の製造における上記の第１態様～第６態様のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は上記の第７態様～第１０態様のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片の用途を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0029】

【図1】図１は、本願の実施例によって提供される二重特異性抗体の構造模式図である。

【図2】図２は、本願の実施例によって提供される二重特異性抗体の構造模式図である。

【図3】図３は、本願の実施例によって提供される二重特異性抗体の構造模式図である。

【図4】図４は、本願の実施例によって提供される二重特異性抗体の構造模式図である。

【図5】図５は、本願の実施例によって提供されるＦＡＣＳを利用して検出したＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体に対する抗体の結合活性の結果である。

【図6】図６は、ＴＧＦ－βに対する本願の実施例によって提供される抗体の結合活性の結果である。

【図7】図７は、ＴＧＦ－βに対する本願の実施例によって提供される抗体の中和活性の結果である。

【図8】図８は、動物モデルにおける本願の実施例によって提供される抗体の有効性試験の結果である。

【発明を実施するための形態】

【0030】

以下、具体例を挙げて本願の技術的解決手段を詳細に説明する。また、当業者が理解しやすくなるよう、本願のいくつかの用語について解釈及び説明する。なお、これらの解釈及び説明は、当業者が理解しやすくするためのもので、本願の保護範囲に対する制限と見なすべきではない。

【0031】

用語「二重特異性抗体」は、少なくとも２種の異なる生体分子のエピトープと特異的に結合する抗原結合部分を含むもので、また区別するために、それぞれ、「第１抗原結合部分」「第２抗原結合部分」と呼ぶ。以下、「第１抗原結合部分」及び「第２抗原結合部分」についても解釈及び説明する。特に説明がない限り、列挙された二重特異性抗体で抗原と結合する順序に制限はない。当然ながら、異なる生体分子と特異的に結合する時に、二重特異性抗体は当該特定の生体分子の１つ以上のエピトープと結合する可能性がある。

【0032】

本明細書で、用語「抗体」は、無傷抗体の形態又は抗体の抗原結合断片を含むがそれらに限定されない様々な構造の天然抗体及び人工抗体をカバーし、抗原結合部位を含むタンパク質又はポリペプチドを指すと最も広い意味で使用される。

【0033】

本明細書で、「無傷抗体」又は「完全抗体」などはどちらも同じ意味であり、ジスルフィド結合によって互いに接続された少なくとも２つの重鎖（Ｈ）及び２つの軽鎖（Ｌ）を含むタンパク質を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（略記ＶＨ）及び重鎖定常領域（略記ＣＨ）からなる。重鎖定常領域は重鎖第１定常ドメイン（ＣＨ１）、重鎖第２定常ドメイン（ＣＨ２）及び重鎖第３定常ドメイン（ＣＨ３）を含む。各軽鎖は軽鎖可変領域（略記ＶＬ）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、即ち、軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）である。ＶＨ及びＶＬ領域は、さらに相補性決定領域（超可変領域又は高度可変領域とも呼ばれ、略記はＣＤＲである）に分けられ、間には保存的なフレームワーク領域（ＦＲ）が挿入されている。ＶＨ及びＶＬのそれぞれは、アミノ末端（Ｎ末端）からカルボキシ末端（Ｃ末端）まで配列ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４として配置される３つのＣＤＲ及び４つのＦＲを含む。重鎖可変領域のＣＤＲは、重鎖のアミノ酸配列のアミノ末端から、それぞれ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と呼ばれ、軽鎖可変領域のＣＤＲは、軽鎖のアミノ酸配列のアミノ末端から、それぞれ、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と呼ばれる。

【0034】

「抗原結合断片」、又は「抗原結合部分」（例えば、第１抗原結合部分、第２抗原結合部分）とは、全長抗体の一部を含み、一般的に抗原と結合する可変ドメイン又は可変領域を含むものを指す。用語「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖又は軽鎖に対する抗原の結合に関わるドメインを指す。上記で言及されたように、無傷抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域は、一般的に、各ドメインが４つの保存的なフレームワーク領域及び３つの高度可変領域を含むと類似する構成を有する。抗原結合断片又は抗原結合部分の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、二重特異性Ｆａｂ’及びＦｖ断片、直線状抗体、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体などであってもよい。無傷抗体をパパインで消化して産生された２つの完全に同じ抗原結合断片は、Ｆａｂ断片と呼ばれ、それぞれ、重鎖及び軽鎖可変領域と軽鎖定常ドメイン及び重鎖第１定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ’断片は、重鎖第１定常ドメインＣＨ１のカルボキシ末端に、抗体ヒンジ領域に由来する１つ又は複数のシステインを含む少数の残基が付加されているためＦａｂ断片と異なる。無傷抗体をペプシンで消化してＦ（ａｂ’）_２断片が得られる。Ｆ（ａｂ’）_２断片はジスルフィド結合によって接続された２つの抗原結合部分Ｆ（ａｂ）を有し、Ｆ（ａｂ’）_２断片は２価抗体である。一本鎖抗体は、抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域が約１０～２５個のアミノ酸からなる柔軟な短いペプチド鎖によって接続された融合タンパク質である。単一ドメイン抗体は、１つのモノマーの可変領域からなる抗体断片である。単一ドメイン抗体は、一般的にラクダ科動物抗体又はサメ科動物抗体の重鎖の可変領域に由来するため、一般にナノボディと呼ばれる。

【0035】

例えば、ナノボディは、重鎖ＣＤＲ領域だけを含有し、完全な機能を有する最小の抗原結合断片である。ナノボディは、３つのＣＤＲ領域（ＣＤＲ１～ＣＤＲ３）及び４つのフレームワーク領域ＦＲ（ＦＲ１～ＦＲ４）を含む。フレームワーク領域ＦＲ１、フレームワーク領域ＦＲ２、フレームワーク領域ＦＲ３及びフレームワーク領域ＦＲ４は、それぞれ、相補性決定領域ＣＤＲ１、相補性決定領域ＣＤＲ２及び相補性決定領域ＣＤＲ３によって隔てられる。

【0036】

用語「及び／又は」は、２つ又は複数のオプションをつなげて使用される場合に、オプションのうちのいずれか１つ又はオプションのうちの２つ若しくはそれ以上を意味すると理解される。

【0037】

用語「含み」又は「含む」とは、言及される要素又はステップを含むが、他の要素又はステップは除外しないことを意味する。当然ながら、特に説明がない限り、含み又は含むは、言及される要素又はステップからなるものをもカバーしている。例えば、特定の具体的な配列の抗体可変領域を含むと言及される場合に、当該具体的な配列からなる抗体可変領域をカバーすることも意図される。

【0038】

本明細書で言及される「親和性」又は「結合親和性」は、抗原と抗体又は抗原結合断片上の結合部位との間の強度及び／又は安定性を反映すると当分野の一般的な意味で理解される。

【0039】

特定の抗原又はエピトープ「に特異的に結合する」若しくは「と特異的に結合する」「と結合する」、「特異的に…を標的とする」、又は特定の抗原若しくはエピトープに対して「特異性を有する」若しくは「結合できる」とは、非特異性相互作用と区別され、このような特異的な結合は当分野でよく用いられるいくつかの方法で測定してもよい。抗体の抗原と結合する能力は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）又は当業者に熟知されている他の技術によって計測してもよい。例えば、フローサイトメーター測定によって、抗原を担持した細胞を検出し、細胞の陽性率指標を測定することによって標識抗体に対する被測抗体の競合的結合の状況を検出してもよい。細胞表面の抗原の空間構造が体内に存在する形態により近いため、当該方法を利用するのは実際の状況をより反映することができる。本願の具体的な実施形態によれば、提供される抗体は、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０５ｎＭ以下のＥＣ_５０値を有する。また、表面プラズモン共鳴技術（ＳＰＲ）又はバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって抗原に対する抗体の結合活性を測定してもよい。

【0040】

本明細書で提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片であれ、二重特異性抗体であれ、ポリヌクレオチドであれ、一般的には単離可能なもの又は組み換えられたものである。「単離可能な」とは、ポリペプチド又はタンパク質を発現する細胞又は細胞培養物から同定し、且つ単離及び／又は回収することができることを指す。一般的に、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製ステップによって作製される。「単離された抗体」とは、実質的に異なる抗原を有しないものを指す。「組換え」とは、遺伝子組換え技術を利用して外因性宿主細胞で抗体を産生できることを意味する。

【0041】

「ヒト化」抗体とは、一般的に、非ヒト種に由来する抗原結合部分と、ヒトの免疫グロブリン分子の部分構造及び配列とからなる抗体を指す。例えば、ヒト化抗体で、ＣＤＲ以外の抗体全体は、ヒトに由来するポリヌクレオチドによってコードされ、抗原結合活性が保持されているとともに、免疫原性は低減される。

【0042】

本明細書で示される第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分のＣＤＲ配列は、既存のスキームに基づいて分析して得られるもので、例えば、第１抗原結合部分のＣＤＲ配列、及び、第２抗原結合部分のＣＤＲ配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られる。また、Ｋａｂａｔ（例えば、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｅｓ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”（１９８３）を参照）、Ｃｈｏｔｈｉａ（例えば、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）を参照）などのスキームによって得てもよい。当業者が知っていることだろうが、定義方法の差異によってできた差異化ＣＤＲも、本願の保護範囲に含まれる。

【0043】

「二重特異性抗体」
本願は、第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含む二重特異性抗体を提供し、第１抗原結合部分、第２抗原結合部分は、それぞれ、異なる標的抗原を標的とする。本明細書で、第１抗原結合部分は、特異的にＴＧＦβ、ＧＡＲＰ及びＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体のうちの１つ、２つ又は３つを標的とすることができ、第２抗原結合部分は、特異的にＰＤ－Ｌ１を標的とする。第１抗原結合部分は、特異的にＴＧＦβを標的とする場合であれ、ＧＡＲＰを標的とする場合であれ、又はＧＡＲＰ－ＴＧＦβ複合体を標的とする場合であれ、又はこの三者のうちの２つ又は３つを標的とする場合であれ、いずれも、ＴＧＦ－βに対する制御を直接又は間接的に実現し、がん細胞の免疫応答を活性化し、疾患の進行を抑制することができる。なお、本明細書で使用される用語「第１」「第２」は、記述の目的で使用されるもので、相対的な重要性を指示若しくは暗示し又は対象技術特徴の数を暗黙的に示すものと捉えることができず、順序を表すものでもない。用語「第１抗原結合部分」「第２抗原結合部分」とは、それぞれ、異なる標的抗原と結合することのできる部分を意味し、無傷抗体であってもよいし、無傷抗体の一部であってもよく、例えば、重鎖可変領域、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、一本鎖抗体（ＳｃＦｖ）、又は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）などである。

【0044】

本願は、二重特異性抗体を提供し、当該二重特異性抗体はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ及び／又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と特異的に結合する第１抗原結合部分と、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する第２抗原結合部分とを含み、当該二重特異性抗体は重鎖第１定常ドメインＣＨ１と軽鎖定常ドメインＣＬとをさらに含み、前記第１抗原結合部分は、重鎖第１定常ドメインＣＨ１、軽鎖定常ドメインＣＬとそれぞれ共有結合され、当該二重特異性抗体はＦｃ領域をさらに含み、前記Ｆｃ領域はヒンジ領域によって重鎖第１定常ドメインＣＨ１に接続され、前記第２抗原結合部分はリンカーによってＦｃ領域と及び／又は軽鎖定常ドメインＣＬと共有結合される。形成されたＩｇＧ型構造は、言及された重鎖可変領域及び軽鎖可変領域配列の他に、他の配列として哺乳動物に由来する天然配列（例えば、ヒトに由来する天然配列であってもよい）が用いられてもよい。具体的な実施形態で、重鎖第１定常ドメイン、重鎖第２定常ドメイン及び重鎖第３定常ドメインによって形成された配列は、配列番号９２に示すとおりである。
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９２）

【0045】

具体的な実施形態で、軽鎖定常ドメインの配列は、配列番号９３に示すとおりである。
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９３）

【0046】

提供される二重特異性抗体で、Ｆｃ領域配列に制限はなく、天然由来のＦｃ領域であってもよいし、例えば、ヒトに由来するＦｃ領域であり、改変されたＦｃ領域であってもよい。改変されたＦｃ領域は、変異の起きたＦｃ領域であってもよく、例えば、抗体のＡＤＣＣエフェクター機能を制御するよう、Ｆｃ領域のいくつかの部位に変異を起こしてもよい。

【0047】

提供される二重特異性抗体は、少なくとも、下記の特性、即ち、（ａ）ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合すること、（ｂ）糖タンパク質Ａ反復優勢配列（ＧＡＲＰ）と特異的に結合すること、（ｃ）ＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と特異的に結合すること、（ｄ）ＴＧＦ－βと特異的に結合すること、（ｅ）免疫細胞に対する活性制御機能を有し、制御性Ｔ細胞の免疫抑制機能に対する阻害活性を有するなどを含むがそれらに限定されないこと、（ｆ）抗腫瘍活性を有すること、の１つを有する。

【0048】

本願で提供される二重特異性抗体は、ＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ及び／又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と特異的に結合する活性、及び、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する活性を同時に示す。ＴＧＦ－βレポーター遺伝子アッセイ、Ｔｒｅｇ放出ＴＧＦ－β中和試験などの検出方法によって、二重特異性抗体は、ＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β１複合体と結合することもできれば、微小環境に放出されたＴＧＦ－β１の差別化分子を捕捉することもできるということが決定した。また、提供される二重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合して、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１及びＴＧＦ－βシグナル伝達経路を同時に遮断することによって、免疫抑制を解除し、ＰＤ－Ｌ１（ＰＤ－１）軸とＴＧＦ－β軸経路の間に存在し得る補完効果を避け、体の免疫能力を倍単位で回復させ、相乗的な殺傷効果を果たすことができる。

【0049】

少なくともいくつかの実施形態で、図１及び図２に示すように、前記第２抗原結合部分は、リンカーによってＦｃ領域のカルボキシ末端（Ｃ末端）に接続される。なお、提供されている図面には、ジスルフィド結合が特に描かれてない。図１は、第２抗原結合部分が、それぞれ、Ｆｃ領域のカルボキシ末端（Ｃ末端）に接続されていることを示す。第２抗原結合部分は、場合によってＴｒａｐ構造、ナノボディ、一本鎖抗体として設定されてもよいし、又はＰＤ－Ｌ１と結合できる他の融合タンパク質であってもよい。具体的な実施形態によれば、第２抗原結合部分は抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディであってもよい。Ｆｃ領域のＣ末端にナノボディが接続された場合に、同じナノボディが接続されてもよいし、異なるナノボディがそれぞれ接続されてもよい。また、場合によってＦｃのいずれか１つのＣ末端だけにナノボディが接続されてもよい。図２は、Ｆｃ領域のＣ末端にそれぞれ２つの第２抗原結合部分が接続されていることを示す。具体的な実施形態によれば、ＦｃのＣ末端にそれぞれ２つのＰＤ－Ｌ１ナノボディが接続されている。同様に、Ｆｃ領域のＣ末端にそれぞれ同じナノボディが接続されてもよいし、異なるナノボディが接続されてもよい。また、Ｆｃ領域のＣ末端にそれぞれ接続されたナノボディの数は同じでもよいし（例えば、２つ又はそれ以上であってもよい）、異なってもよい（例えば、２つ又はそれ以上であってもよい）。Ｆｃ領域のいずれか１つのカルボキシ末端を例とすると、接続された２つ又はそれ以上のナノボディは同じでもよいし異なってもよい。抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディは、開示又は市販されているナノボディであってもよいし、抗体ライブラリーのスクリーニングによって得られてもよい。例えば、出願番号が２０２１１０９０３２９３．４である中国特許出願には、アルパカ免疫により抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディライブラリーを得て、スクリーニング及び同定をして、親和性及び特異的結合及び腫瘍殺傷効果が良好なナノボディを得ると記載されている。ここで、場合によって、出願番号がＰＣＴ／ＣＮ２０２２／１１０４２３である国際特許出願書面（優先権出願番号２０２１１０９０３２９３．４）に記載されている内容が全体として又はその一部が本明細書に組み込まれる。具体的な実施形態によれば、ＦｃのＣ末端にはそれぞれ１つの一本鎖抗体が接続されてもよい。ＰＤ－Ｌ１一本鎖抗体は、開示又は市販されている一本鎖抗体であってもよい。ＦｃのＣ末端に接続された一本鎖抗体は、同じでもよいし異なってもよく、Ｆｃのいずれか１つのＣ末端だけに一本鎖抗体が接続されてもよい。

【0050】

少なくともいくつかの実施形態で、前記第２抗原結合部分はリンカーによって軽鎖定常ドメインのカルボキシ末端（Ｃ末端）に接続される。少なくともいくつかの具体的な実施形態で、図３に示すように、前記第２抗原結合部分は、それぞれ、リンカーによって軽鎖定常ドメインのカルボキシ末端に接続される。第２抗原結合部分は、場合によって、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、又は他の形態の融合タンパク質などが選択されてもよい。軽鎖定常ドメインのカルボキシ末端に接続された第２抗原結合部分は同じでもよいし、異なってもよく、又は軽鎖定常ドメインのいずれか１つのカルボキシ末端に第２抗原結合部分が接続される。いくつかの具体的な実施形態で、軽鎖定常ドメインのカルボキシ末端（Ｃ末端）にそれぞれ２つの抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディが接続される。同様に、場合によって、軽鎖定常ドメインのＣ末端にも、それぞれ、１つの抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディが接続され又は２つの以上の抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディなどが接続されてもよい。軽鎖定常ドメインのいずれか１つのカルボキシ末端を例とすると、それに接続された抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディの数は同じでもよいし、異なってもよい。

【0051】

少なくともいくつかの実施形態で、図４に示すように、前記第２抗原結合部分は、第１リンカーによってＦｃ領域のＣ末端に接続され、第２リンカーによって軽鎖定常ドメインのＣ末端に接続される。同様に、Ｆｃ領域のＣ末端に接続された第２抗原結合部分又は軽鎖定常ドメインに接続された第２抗原結合部分は同じでもよいし、異なってもよい。第２抗原結合部分は、場合によって、Ｔｒａｐ構造、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、又は他の形態の融合タンパク質が選択されてもよい。第１リンカーと第２リンカーは同じでもよいし、異なってもよい。

【0052】

本明細書で、使用可能なリンカーは、当分野でよく用いられるリンカーであり、いくつかのオリゴペプチド又はポリペプチドであってもよい。これらのオリゴペプチド又はポリペプチドは、柔軟性を提供することのできるいかなるアミノ酸配列であってもよい。リンカーは、次からなる群、ＧＳ、ＳＧ、ＧＧＳ、ＧＳＧ、ＳＧＧ、ＧＧＧ、ＧＧＧＳ、ＳＧＧＧ、ＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＧＳＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳなどを含むがそれらに限定されない。

【0053】

提供される二重特異性抗体は、ＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦβ複合体と結合し、及びＰＤ－Ｌ１と結合することによって、がん細胞の免疫応答を活性化し、疾患の進行を抑制する。

【0054】

本願は、第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含む二重特異性抗体を提供し、第１抗原結合部分は、配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含み、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができる。示される重鎖可変領域及び軽鎖可変領域配列のＣＤＲ配列は、上記で言及されたように、古典的なＫａｂａｔ ＣＤＲスキーム、ＩＭＧＴスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａスキームなどと抗体配列の分析方法が異なるため、ＣＤＲ配列に若干差異がある。分析で得た異なるＣＤＲ配列が、全て本願の保護範囲に含まれる。

【0055】

本願は、また、第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含む二重特異性抗体を提供し、第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができ、前記第１抗原結合部分は重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含む。

【0056】

いくつかの実施形態で、前記第１抗原結合部分は軽鎖可変領域をさらに含んでもよく、前記軽鎖可変領域は、配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含む。

【0057】

各配列は、次に示すとおりである。言及される二重特異性抗体の第１抗原結合部分又は第２抗原結合部分は、異なる標的抗原を標的とすることができるものであえあれば、場合によって無傷抗体又はその一部の断片だけが選択されてもよい。第１抗原結合部分又は第２抗原結合部分は、重鎖可変領域、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、一本鎖抗体（ＳｃＦｖ）、又は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）などだけであってもよい。

【0058】

提供される二重特異性抗体の第１抗原結合部分は、ＧＡＲＰ、ＴＧＦβ、又はＧＡＲＰ－ＴＧＦβ複合体と結合することができ、又はこの三者のうちの２種又は３種と特異的に結合することができる。また、ＰＤ－Ｌ１と結合し、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路を遮断して、腫瘍細胞に対する免疫細胞の殺傷効果を向上させることができる。

【0059】

いくつかの具体的な実施形態で、提供される二重特異性抗体は、配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列を有する。いくつかの具体的な実施形態で、提供される二重特異性抗体は、配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列を有する。いくつかの実施形態で、提供される二重特異性抗体は、配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列を有する。いくつかの実施形態で、提供される二重特異性抗体は、配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列を有する。いくつかの具体的な実施形態で、提供される二重特異性抗体は、配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列を有する。いくつかの具体的な実施形態で、提供される二重特異性抗体は、配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列を有する。示されるＨＣＤＲ配列及びＬＣＤＲ配列は、二重特異性抗体の第１抗原結合部分として、標的抗原と特異的に結合する。

【0060】

いくつかの実施形態で、提供される二重特異性抗体は、配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される配列と少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域、及び、配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される配列と少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域のうちの少なくとも１種を含む。ただし、配列番号４２、４３、４４、４５、４６及び４７は、それぞれ、ヒト化重鎖可変領域配列である。配列番号５４、５５、５６、５７、５８及び５９は、それぞれ、ヒト化軽鎖可変領域配列である。示される重鎖可変領域及び軽鎖可変領域配列は、二重特異性抗体の第１抗原結合部分として、標的抗原と特異的に結合する。第１抗原結合部分の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の配列は、ヒト化を経て、免疫原性が低減され、しかも標的抗原（例えば、ＧＡＲＰ、ＴＧＦβ、及び／又はＧＡＲＰ－ＴＧＦβ複合体）との結合活性が保持されている。当分野でよく用いられる方法（例えば、相補性決定領域移植法）によってヒト化抗体配列を得ることができる。いくつかの実施形態で、提供されるヒト化抗体配列にはＣＤＲ領域配列が保持されており、フレームワーク領域配列はヒトに由来するフレームワーク領域配列に置き換えられる。ヒトに由来するフレームワーク領域配列は、公開されているヒト由来配列によって得られる。例えば、データベース比較及びコンピュータ相同モデリングによって、相同性最大のヒトのＦＲ領域鋳型を見つけ出し、総合的に検討してＦＲ領域の回復変異の要否及び回復変異の重要な残基を決定して、高親和性のヒト化抗体を得る。これらの配列は、一般に、よく用いられるデータベースに、例えば、ＰＤＢタンパク質構造データベース、ＩＭＧＴ、Ｇｅｎｅｂａｎｋなどのデータベースに記載されている。

【0061】

本明細書で言及される「配列同一性」とは、アミノ酸又はヌクレオチド配列を１つずつ比較して、配列がどれくらい同じなのかを指す。配列同一性の比の決定は、当分野で知られている様々な方式で実現できる。例えば、一般利用が可能なソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、ＢＬＡＳＴ－２などを使用して得てもよい。いくつかの具体的な実施形態で、配列同一性は、保存的なアミノ酸の置換によるものである。「保存的なアミノ酸の置換」とは、類似する生理学的及び化学的特性の側鎖を有する異なるアミノ酸残基で別のアミノ酸残基を置き換えることを指す。例えば、疎水性側鎖を有するアミノ酸残基同士（例えば、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ）で保存的なアミノ酸の置換を起こしてもよく、中性の親水性側鎖を有する残基同士（例えば、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ）で保存的なアミノ酸の置換を起こしてもよく、酸性側鎖を有する残基同士（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）で保存的なアミノ酸の置換を起こしてもよく、塩基性側鎖を有するアミノ酸同士（例えば、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ）で保存的なアミノ酸の置換を起こしてもよく、又は芳香族側鎖を有する残基同士（例えば、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ）で保存的なアミノ酸の置換を行ってもよい。当分野で知られるように、保存的なアミノ酸の置換は、一般的に、タンパク質の立体構造の顕著な変化を引き起こさないため、タンパク質の生物学的活性が保持できる。言及される保存的なアミノ酸の置換は、１つの保存的なアミノ酸の置換、２つの保存的なアミノ酸の置換、３つの保存的なアミノ酸の置換、４つの保存的なアミノ酸の置換、５つの保存的なアミノ酸の置換、６つの保存的なアミノ酸の置換、７つの保存的なアミノ酸の置換、８つの保存的なアミノ酸の置換、９つの保存的なアミノ酸の置換又は１０の保存的なアミノ酸の置換などであってもよい。本明細書で用いられるアミノ酸の名称は、当分野で通用する標準的な１文字又は３文字コードで表記される。

【0062】

示される各配列が、それぞれ、次のとおりである。

【0063】

いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号３６で示される重鎖可変領域及び配列番号４８で示される軽鎖可変領域を含む。いくつかの具体的な実施形態で、前記第１抗原結合部分は配列番号３７で示される重鎖可変領域及び配列番号４９で示される軽鎖可変領域を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号３８で示される重鎖可変領域及び配列番号５０で示される軽鎖可変領域を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号３９で示される重鎖可変領域及び配列番号５１で示される軽鎖可変領域を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４０で示される重鎖可変領域及び配列番号５２で示される軽鎖可変領域を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４１で示される重鎖可変領域及び配列番号５３で示される軽鎖可変領域を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４２で示される重鎖可変領域及び配列番号５４で示される軽鎖可変領域を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４３で示される重鎖可変領域及び配列番号５５で示される軽鎖可変領域を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４４で示される重鎖可変領域及び配列番号５６で示される軽鎖可変領域を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４５で示される重鎖可変領域及び配列番号５７で示される軽鎖可変領域を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４６で示される重鎖可変領域及び配列番号５８で示される軽鎖可変領域を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４７で示される重鎖可変領域及び配列番号５９で示される軽鎖可変領域を含む。

【0064】

第２抗原結合部分は、特異的にＰＤ－Ｌ１を標的とすることができる。上記で言及されるように、第２抗原結合部分は、特異的にＰＤ－Ｌ１を標的とすることができるものでさえあれば、その形態に制限はない。例えば、無傷抗体であってもよいし、無傷抗体の一部であってもよく、重鎖可変領域、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、一本鎖抗体又はナノボディなどを含むがそれらに限定されない。第２抗原結合部分は、場合によって、抗体ライブラリーのスクリーニングによって得られてもよいし、市販又は開示されている抗体配列であってもよい。いくつかの具体的な実施形態で、前記第２抗原結合部分は単一ドメイン抗体である。いくつかの好ましい実施形態で、形成された二重特異性抗体の構造は、リンカーによってＩｇＧ型抗体と第２抗原結合部分が接続された構造であり、ＩｇＧ型抗体は第１抗原結合部分を含む。第１抗原結合部分がＦｃとＩｇＧ型抗体を形成し、第２抗原結合部分がリンカーによってＩｇＧ型抗体に接続されることで、二重特異性抗体構造は形成される。

【0065】

いくつかの具体的な実施形態で、提供される第２抗原結合部分はＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、前記ＣＤＲ１は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６０、６３及び６６、又は配列番号６０、６３及び６６と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、ＣＤＲ２は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６１、６４及び６７、又は配列番号６１、６４及び６７と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、ＣＤＲ３は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６２、６５、６８及び６９、又は配列番号６２、６５、６８及び６９と比べて、１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含む。

【0066】

いくつかの具体的な実施形態で、前記第２抗原結合部分は配列番号６０で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６１で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６２で示されるＣＤＲ３配列を有する。いくつかの具体的な実施形態で、前記第２抗原結合部分は配列番号６３で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６４で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６５で示されるＣＤＲ３配列を有する。いくつかの具体的な実施形態で、前記第２抗原結合部分は配列番号６６で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６７で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６８で示されるＣＤＲ３配列を有する。いくつかの具体的な実施形態で、第２抗原結合部分は配列番号６０で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６１で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６９で示されるＣＤＲ３配列を有する。示されるＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列及びＣＤＲ３配列は、フレームワーク領域ＦＲと単一ドメイン抗体を形成できる。フレームワーク領域ＦＲ配列は特に制限がなく、ネズミに由来するものであってもよいし、ヒトに由来するものであってもよいし、又は一部がネズミに由来し、一部がヒトに由来するものであってもよい。

【0067】

本願は、また、二重特異性抗体を提供し、前記二重特異性抗体は第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、前記第１抗原結合部分はＧＡＲＰ、ＴＧＦ－β及び／又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と特異的に結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と特異的に結合することができる。いくつかの具体的な実施形態で、第２抗原結合部分は抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディである。

【0068】

いくつかの実施形態で、第２抗原結合部分はＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、ただし、ＣＤＲ１は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６０、６３及び６６、又は配列番号６０、６３及び６６と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、ＣＤＲ２は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６１、６４及び６７、又は配列番号６１、６４及び６７と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、ＣＤＲ３は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６２、６５、６８及び６９、又は配列番号６２、６５、６８及び６９と比べて、１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含む。本願の具体的な実施形態によれば、言及されるアミノ酸の置換、欠失又は付加は、保存的なアミノ酸の置換によるものであってもよいし、異なるスキームでＣＤＲ領域を表示する時の差異によるものであってもよい。異なるスキームを利用してＣＤＲ領域を表示する場合には、表示されたＣＤＲ領域配列に差異があり、これらの差異も本願の保護範囲に含まれるべきであるということは当業者に知られているはずである。

【0069】

いくつかの具体的な実施形態で、前記第２抗原結合部分は次のものを有する。（１）ＣＤＲ１は配列番号６０で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２は配列番号６１で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３は配列番号６２で示されるアミノ酸配列であり、又は（２）ＣＤＲ１は配列番号６３で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２は配列番号６４で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３は配列番号６５で示されるアミノ酸配列であり、又は（３）ＣＤＲ１は配列番号６６で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２は配列番号６７で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３は配列番号６８で示されるアミノ酸配列であり、又は（４）ＣＤＲ１は配列番号６０で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２は配列番号６１で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３は配列番号６９で示されるアミノ酸配列である。

【0070】

少なくともいくつかの実施形態で、前記第２抗原結合部分はフレームワーク領域ＦＲをさらに含み、前記フレームワーク領域はＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４を含み、前記ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４は、それぞれ、次に示すアミノ酸配列を含む。（１）ＦＲ１は、配列番号７０、配列番号７４、配列番号７７、配列番号８０、又は配列番号７０、７４、７７若しくは８０と比べて、１つ、２つ若しくは３つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、（２）ＦＲ２は、配列番号７１、配列番号７５、配列番号７８、又は配列番号７１、７５若しくは７８と比べて、１つ、２つ若しくは３つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、（３）ＦＲ３は、配列番号７２、配列番号７６、配列番号７９、配列番号８１、又は配列番号７２、７６、７９若しくは８１と比べて、１つ、２つ、３つ又は４つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、（４）ＦＲ４は、配列番号７３、又は配列番号７３と比べて、１つ若しくは２つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれる。

【0071】

いくつかの具体的な実施形態で、前記フレームワーク領域に含まれるＦＲ１は配列番号７０で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７１で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号７２で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列である。いくつかの具体的な実施形態で、前記フレームワーク領域に含まれるＦＲ１は配列番号７４で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７５で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号７６で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列である。いくつかの具体的な実施形態で、前記フレームワーク領域に含まれるＦＲ１は配列番号７７で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７８で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号７９で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列である。いくつかの具体的な実施形態で、前記フレームワーク領域に含まれるＦＲ１は配列番号８０で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７８で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号７９で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列である。いくつかの具体的な実施形態で、前記フレームワーク領域に含まれるＦＲ１は配列番号７０で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７１で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号８１で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列である。

【0072】

いくつかの実施形態で、前記第２抗原結合部分は配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示される配列から選ばれる。いくつかの実施形態で、前記第２抗原結合部分は、配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示されるアミノ酸配列と比べて、配列同一性が８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、又は９９％以上である。提供される配列番号８８、８９、９０、９１又は９２で示されるアミノ酸配列はヒト化後の抗体配列である。提供されるヒト化配列は、低い免疫原性を有し、且つ標的タンパク質との高い親和性を有する。

【0073】

本願は、また、二重特異性抗体を提供し、前記二重特異性抗体は第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、前記第１抗原結合部分はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ及び／又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができる。

【0074】

いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列を含み、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列を含み、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列を含み、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列を含み、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列を含み、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列を含み、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列を含み、又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列を含み、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列を含み、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列を含み、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列を含む。第２抗原結合部分はＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、前記ＣＤＲ１は配列番号６０又は６３又は６６で示される配列を含み、前記ＣＤＲ２は配列番号６１又は６４又は６７で示される配列を含み、前記ＣＤＲ３は配列番号６２又は６５又は６８又は６９で示される配列を含む。

【0075】

いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号３６で示される重鎖可変領域と、配列番号４８で示される軽鎖可変領域とを含み、前記第２抗原結合部分は配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示される配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号３７で示される重鎖可変領域と、配列番号４９で示される軽鎖可変領域とを含み、前記第２抗原結合部分は配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示される配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号３８で示される重鎖可変領域と配列番号５０で示される軽鎖可変領域とを含み、前記第２抗原結合部分は配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示される配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号３９で示される重鎖可変領域と配列番号５１で示される軽鎖可変領域とを含み、前記第２抗原結合部分は配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示される配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４０で示される重鎖可変領域と配列番号５２で示される軽鎖可変領域とを含み、前記第２抗原結合部分は配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示される配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４１で示される重鎖可変領域と配列番号５３で示される軽鎖可変領域とを含み、前記第２抗原結合部分は配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示される配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４２で示される重鎖可変領域と配列番号５４で示される軽鎖可変領域とを含み、前記第２抗原結合部分は配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示される配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４３で示される重鎖可変領域と配列番号５５で示される軽鎖可変領域とを含み、前記第２抗原結合部分は配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示される配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４４で示される重鎖可変領域と配列番号５６で示される軽鎖可変領域とを含み、前記第２抗原結合部分は配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示される配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４５で示される重鎖可変領域と配列番号５７で示される軽鎖可変領域とを含み、前記第２抗原結合部分は配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示される配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４６で示される重鎖可変領域と配列番号５８で示される軽鎖可変領域とを含み、前記第２抗原結合部分は配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示される配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、第１抗原結合部分は配列番号４７で示される重鎖可変領域と配列番号５９で示される軽鎖可変領域とを含み、前記第２抗原結合部分は配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示される配列を含む。

【0076】

「モノクローナル抗体又は抗原結合断片」
本願は、配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含むモノクローナル抗体又は抗原結合断片を提供する。

【0077】

本願は、また、重鎖可変領域を含むモノクローナル抗体又は抗原結合断片を提供し、前記重鎖可変領域は、配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含む。いくつかの実施形態で、ＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する提供される配列は、異なるデータベースでＣＤＲ配列を計算する時の差異によるものであってもよい。

【0078】

いくつかの実施形態で、提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は軽鎖可変領域をさらに含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含む。

【0079】

本願は、また、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体又は抗原結合断片を提供し、前記重鎖可変領域は相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、ただし、ＨＣＤＲ１は配列番号１又は４又は７又は１０又は１３又は１６で示される配列を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号２又は５又は８又は１１又は１４又は１７で示される配列を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号３又は６又は９又は１２又は１５又は１８で示される配列を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号１９又は２２又は２５又は２７又は３０又は３３で示される配列を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号２０又は２３又は２８又は３１又は３４で示される配列を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号２１又は２４又は２６又は２９又は３２又は３５で示される配列を含む。

【0080】

いくつかの具体的な実施形態で、提供されるモノクローナル抗体は、配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列を含み、そして配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、提供されるモノクローナル抗体は、配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列を含み、そして配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、提供されるモノクローナル抗体は、配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列を含み、そして配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、提供されるモノクローナル抗体は、配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列を含み、そして配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、提供されるモノクローナル抗体は、配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列を含み、そして配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列を含む。いくつかの具体的な実施形態で、提供されるモノクローナル抗体は、配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列を含み、そして配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列を含む。

【0081】

いくつかの具体的な実施形態で、提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１で示される配列と少なくとも、８０％、８５％、９０％の配列同一性を有する重鎖可変領域と、配列番号４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される配列と少なくとも、８０％、８５％、９０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含む。

【0082】

いくつかの具体的な実施形態で、提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、配列番号３６で示される重鎖可変領域と配列番号４８で示される軽鎖可変領域とを含むｍ２１２抗体である。いくつかの実施形態で、提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、配列番号３７で示される重鎖可変領域と配列番号４９で示される軽鎖可変領域とを含むｍ３０５抗体である。いくつかの実施形態で、提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、配列番号３８で示される重鎖可変領域と配列番号５０で示される軽鎖可変領域とを含むｍ１０７抗体である。いくつかの実施形態で、提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９で示される重鎖可変領域と配列番号５１で示される軽鎖可変領域とを含むｍ２０２抗体である。いくつかの実施形態で、提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、配列番号４０で示される重鎖可変領域と配列番号５２で示される軽鎖可変領域とを含むｍ３０１抗体である。いくつかの実施形態で、提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、配列番号４１で示される重鎖可変領域と配列番号５３で示される軽鎖可変領域とを含むｍ１０９抗体である。示される抗体は、ＧＡＲＰ／ＴＧＦβ複合体との特異的結合、例えば、哺乳動物のヒトＧＡＲＰ／ＴＧＦβ複合体又はカニクイザルＧＡＲＰ／ＴＧＦβ複合体などとの強い特異的結合活性を示す。示される抗体は、ＧＡＲＰ又はＴＧＦβとの特異的結合を示し、例えば、ヒト、カニクイザルなどのＧＡＲＰ又はＴＧＦβとの強い特異的結合を示す。

【0083】

提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、ヒト化改変を経たものであってもよい。ヒト化により、抗体又は抗原結合断片の免疫原性が低減されるとともに、標的抗原との結合活性は保持される。いくつかの実施形態で、提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、配列番号４２で示される重鎖可変領域と配列番号５４で示される軽鎖可変領域とを含むｍ２１２－ｈｕ抗体である。いくつかの実施形態で、提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、配列番号４３で示される重鎖可変領域と配列番号５５で示される軽鎖可変領域とを含むｍ３０５－ｈｕ抗体である。いくつかの実施形態で、提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、配列番号４４で示される重鎖可変領域と配列番号５６で示される軽鎖可変領域とを含むｍ１０７－ｈｕ抗体である。いくつかの実施形態で、提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、配列番号４５で示される重鎖可変領域と配列番号５７で示される軽鎖可変領域とを含むｍ２０２－ｈｕ抗体である。いくつかの実施形態で、提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、配列番号４６で示される重鎖可変領域と配列番号５８で示される軽鎖可変領域とを含むｍ３０１－ｈｕ抗体である。いくつかの実施形態で、提供されるモノクローナル抗体又は抗原結合断片は、配列番号４７で示される重鎖可変領域と配列番号５９で示される軽鎖可変領域とを含むｍ１０９－ｈｕ抗体である。

【0084】

「ポリヌクレオチド」
本願は、また、前記二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを提供する。言及されるポリヌクレオチドは、単離可能なもので、ＤＮＡ、ＲＮＡ又はｃＤＮＡなどを含むがそれらに限定されない。当分野の通常の方法を用いて、二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチド配列を得てもよい。

【0085】

「構築物」
本願で言及される抗体を作製するために、抗体をコードするポリヌクレオチド配列を複製可能な発現ベクターに挿入し、宿主細胞又は無細胞発現系で発現させてもよい。本願は、また、上記のポリヌクレオチドを含む構築物を提供する。構築物を得るために、インビトロ組換えＤＮＡ技術、ＤＮＡ合成技術、インビボ組換え技術などを含む当分野でよく用いられる様々な方法を利用することができ、例えば、ポリヌクレオチドを発現ベクターのマルチクローニングサイトに挿入して構築物を形成させてもよい。構築物は、場合によって、プロモーター、ターミネーター、マーカー遺伝子などの様々な作動因子を含有してもよく、これらの作動因子がポリヌクレオチドに作動可能に接続される。プロモーターは、一般的に、転写を開始するシグナルを提供するためのものであり、プロモーターは、場合によって、ラクトースオペロン（Ｌａｃ）、Ｔｒｐプロモーター、Ｔａｃプロモーター、ファージのＰＬ及びＰＲプロモーターが選択されてもよく、ターミネーターを転写する過程で転写を停止させるシグナルは提供され、構築物上のマーカー遺伝子は、よくスクリーニングのために用いられる。当然ながら、場合によって、タンパク質の発現を向上させるエンハンサーがあってもよい。発現ベクターには特に制限がなく、市販されているいくつかの発現ベクターであってもよいし、場合によって人為的に改変された発現ベクター、例えば、プラスミド、ファージ、ウイルスなどであってもよい。ウイルスは、植物細胞ウイルス、哺乳動物細胞ウイルスなどであってもよい。構築物は、インビトロで抗体又はタンパク質を発現することもできれば、細胞に導入されて抗体又はタンパク質を発現することもできる。

【0086】

「宿主細胞」
本願は、また、上記のポリヌクレオチド又は上記の構築物を含有する宿主細胞を提供する。ポリヌクレオチド又は構築物による抗体又はタンパク質の発現に適する細胞のいずれも宿主細胞としてよい。宿主細胞は、原核細胞、例えば、細菌細胞であってもよいし、真核細胞、例えば、酵母細胞、哺乳動物細胞などであってもよい。よく用いられる宿主細胞は、酵母細胞、ＣＨＯ、ＨＥＫ－２９３細胞、ＣＯＳ細胞、ショウジョウバエＳ２又はＳｆ９なる昆虫細胞であってもよい。当分野でよく用いられる方法、例えば、マイクロインジェクション法、電気穿孔法、化学的なトランスフェクション、ウイルス媒介性形質転換などを利用して、ポリヌクレオチド又は構築物を含有する宿主細胞を得ることができる。

【0087】

「医薬組成物」
本願は、また、上記の第１態様のいずれかの前記二重特異性抗体、又は上記のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。

【0088】

言及される薬学的に許容される担体は、使用された用量又は濃度では被験者において許容される。薬学的に許容される担体は、緩衝剤又は塩、例えば、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化ナトリウム、酢酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、クエン酸塩、トリス（Ｔｒｉｓ）；糖質、例えば、トレハロース、ポリソルビトール、スクロース、マンニトール；界面活性剤、例えば、ポリソルベート；防腐剤、例えば、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；アミノ酸、例えば、ヒスチジン、ヒスチジン塩酸塩、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリシンなどを含むがそれらに限定されない。当分野でよく用いられる方法によって無菌の医薬製剤を得ることができ、例えば、無菌膜濾過の方法で得る。当業者は、場合によって、医薬組成物に対して異なる薬学的に許容される担体を選択して、異なる剤形、例えば、凍結乾燥剤形、注射剤などの様々な剤形として製造してもよい。製造された異なる薬物剤形は、静脈内、皮内、筋肉内、腹腔内、皮下、経鼻、経口、経直腸、局所、吸入、経皮などを含むがそれらに限定されない、適切な投与経路のいずれかで被験者に投与するように製剤化されたものであってもよい。

【0089】

「抗体複合体」
本願は、また、抗体複合体を提供し、前記抗体複合体は、前記二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片と、前記二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片に接続された機能性小分子又はプロテアーゼとを含む。言及される機能性小分子は、開発が済んだ又は開発が始まらない小分子薬であってもよく、小分子薬は、二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片と化学的カップリングすることによって、抗腫瘍薬の治療効果を向上させるとともに、有害事象を減らすことができる。また、リンカーによって毒素、化学療法薬、光増感剤などの小分子を言及される抗体にカップリングさせてもよい。当然ながら、抗体をｐｒｏｔａｃ分子などにカップリングさせることによって、抗体Ｐｒｏｔａｃ複合体を得てもよく、例えば、リンカーによって抗体とプロテアーゼを標的とするリガンド（例えば、Ｅ３リガーゼリガンド）を接続させることによって、標的タンパク質を細胞内のＥ３ユビキチンリガーゼに近づけて、ユビキチン－プロテアソーム経路を利用して標的タンパク質を特異的に分解する。

【0090】

「キット」
本願は、また、キットを提供し、前記キットは、上記の二重特異性抗体又は上記のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を含む。キットは、場合によって、容器、緩衝試薬、対照、例えば、陽性対照及び陰性対照を含んでもよい。当業者は、場合によって、これを適宜選択してもよい。これに応じて、キットは、当業者が操作及び使用できるよう、使用説明書を含んでもよい。

【0091】

「抗体の生産方法」
本願は、また、上記の宿主細胞を培養することと、培養物から二重特異性抗体を回収することとを含む上記の二重特異性抗体の生産方法を提供する。

【0092】

本願は、また、上記の宿主細胞を培養することと、培養物からモノクローナル抗体又は抗原結合断片を回収することとを含むモノクローナル抗体又は抗原結合断片の生産方法を提供する。

【0093】

培養物から回収された二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を精製して実質的に純粋な生成物を得ることができる。「実質的に純粋な」とは、二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片の純度が９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、９９％以上、あるいは９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％又は以上に達していることを指す。

【0094】

「疾患を予防及び／又は治療する方法」
また、本願は、必要とする被験者に有効量の上記の二重特異性抗体、又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を投与することを含む疾患を予防及び／又は治療する方法を提供する。

【0095】

言及される「治療有効量」は、疾患の症状の重症度の低下、疾患の無症状期間の頻度及び持続時間の増加を起こし、疾患によって引き起こされる痛みを低減又は防止することができる。「予防有効量」は、一般的に治療有効量を下回る。二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片で治療した後、抗体治療を受けていない被験者と比べると、被験者の体内細胞の抑制率は、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、あるいは９０％以上又は９５％以上に達する。言及される被験者は、動物であってもよいし、ヒトであってもよい。例えば、哺乳動物であってもよく、ウシ、ヤギ、マウス、ウマなどを含む。

【0096】

提供される二重特異性抗体又はモノクローナル抗体又はその抗原結合断片で治療することのできる疾患は、がん、自己免疫疾患を含むがそれらに限定されない。いくつかの実施形態で、本願で提供される方法は、ＴＧＦ－β関連疾患、ＧＡＲＰ関連疾患を治療するために用いられてもよいし、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１関連疾患を治療するために用いられてもよい。ＴＧＦ－β関連疾患は、炎症性疾患、慢性感染症、がん、線維症、心血管疾患、脳血管疾患、神経変性疾患などを含むがそれらに限定されない。いくつかの実施形態で、言及されるがんは、肺がん、結腸がん、腎がん、尿路上皮がん、前立腺がん、多形膠芽腫、卵巣がん、膵臓がん、乳がん、黒色腫、肝がん、膀胱がん、胃がん、食道がん、血液がんなどを含むがそれらに限定されない。

【0097】

本願は、また、薬物又はキットの製造における二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片の用途を提供する。前記薬物は、がんを治療するために用いられる。提供される二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を使用して、様々な疾患を治療するための薬物を製造することができる。免疫診断試薬として使用されるキットを製造するために用いられてもよい。

【0098】

以下、実施例を踏まえて本願の技術的解決手段を詳細に説明する。なお、これらの実施例は、当業者が理解しやすくするためのもので、本願の保護範囲に対する制限と見なすべきではない。以下、本願の実施例を詳細に記述し、記述される実施例は例示的なもので、本願を解釈するためのものであり、本願に対する制限と捉えることができない。第２抗原結合部分に由来するＰＤ－Ｌ１結合部分、配列の作製及び取得方式は、出願番号がＰＣＴ／ＣＮ２０２２／１１０４２３である国際特許出願書面（優先権出願番号が２０２１１０９０３２９３．４である中国特許出願書面）に記載されている。場合によって、出願番号がＰＣＴ／ＣＮ２０２２／１１０４２３である国際特許出願（優先権出願番号２０２１１０９０３２９３．４）に記載の内容は全体として又はその一部が本願に組み込まれる。ＰＤ－Ｌ１ナノボディからアルパカ免疫により抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディライブラリーを得て、スクリーニング及び同定をして、候補ナノボディを得る。ヒトに由来するＰＤ－Ｌ１タンパク質細胞外ドメイン配列及びヒト免疫グロブリンＦｃ領域配列によって構成された融合タンパク質及びフロイントアジュバントを混合し、乳化し、健康的なアルパカを免疫し、Ｂ細胞を刺激して抗原特異的なナノボディを発現させる。次にアルパカから採血し、リンパ球を単離し、Ｔｒｉｚｏｌ法を用いてトータルＲＮＡを抽出し、逆転写によりｃＤＮＡを得て、逆転写されたｃＤＮＡからＰＣＲ増幅でＶＨＨ抗体遺伝子断片を得る。ＶＨＨ遺伝子断片及び酵母ディスプレイ用ベクターを酵母のコンピテントセルに同時電気的形質転換し、酵母相同リコンビナーゼで断片をベクターに接続させて完全なプラスミドを形成し、挿入率が高く多様性に優れた酵母形質転換体ライブラリーを確立し、栄養要求性培地で安定的な継代を保つ。抗体を発現する酵母細胞と標的タンパク質抗原が富化された磁気ビーズを共インキュベートし、複数回の富化培養後、フローサイトメーターで磁気ビーズ富化生成物を同定し、選別する。複数ラウンドのスクリーニングを経て、５つの高発現陽性クローンがスクリーニングされ、それぞれ、抗体Ａ～抗体Ｅと命名する。抗体Ａのアミノ酸配列は配列番号８２で示され、抗体Ｂのアミノ酸配列は配列番号８３で示され、抗体Ｃのアミノ酸配列は配列番号８４で示され、抗体Ｄのアミノ酸配列は配列番号８５で示され、抗体Ｅのアミノ酸配列は配列番号８６で示される。ヒト化を経た抗体は、アミノ酸配列が配列番号８７で示される抗体Ａｈｕ、アミノ酸配列が配列番号８８で示される抗体Ｂｈｕ、アミノ酸配列が配列番号８９で示される抗体Ｃｈｕ、アミノ酸配列が配列番号９０で示される抗体Ｄ１ｈｕ、アミノ酸配列が配列番号９１で示される抗体Ｄ２ｈｕである。

【0099】

これらの抗体及びヒト化後の抗体は、ＦＡＣＳ及びＥＬＩＳＡ試験によって、ｈＰＤ－Ｌ１、カニクイザルＰＤ－Ｌ１と高い結合活性を有することが確認された。また、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に対する遮断活性及びＣＤ８０／ＰＤ－Ｌ１に対する遮断活性が示される。

【0100】

例えば、ＦＡＣＳによってヒトに由来するＰＤ－Ｌ１に対する抗体の結合活性を検出した。試験手順は次のとおりであった。フローサイトメーターを用いて異なる抗体の抗原に対する親和性を検出した。ＰＤ－Ｌ１抗原を内因的に発現するＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を１×１０^５個／ウェルで９６ウェルプレートに加えた。次に異なる濃度のサンプルを加え、４℃で３０分間インキュベートした。次に、細胞の表面に結合した抗体を検出するために、蛍光標識したヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体（メーカー：Ａｂｃａｍ）を加えた。幾何学的値を利用して抗体－抗原結合用量反応曲線を生成し、ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ６．０を利用して４パラメーター曲線をプロットして、抗体の抗原と結合するＥＣ_５０結果を決定した。試験結果が、抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、抗体Ｄ及び抗体ＥのＥＣ_５０値は、それぞれ、０．０８９ｎＭ、０．０３１ｎＭ、０．０４２ｎＭ、０．０３９ｎＭ、０．０５３ｎＭであり、陽性対照（アテゾリズマブ、０．０５９ｎＭ）と似ており、高い結合活性を示すということを示した。類似する方法を用いてヒト化抗体の結合活性を測定し、抗体Ａｈｕ、抗体Ｂｈｕ、抗体Ｃｈｕ、抗体Ｄ１ｈｕ及び抗体Ｄ２ｈｕのＥＣ_５０値は、それぞれ、０．０５１ｎＭ、０．１８ｎＭ、０．０２５Ｍ、０．１８ｎＭ、０．２９ｎＭであった。

【0101】

また、例えば、ＦＡＣＳによってＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１に対する抗体の遮断活性を測定した。試験手順は次のとおりであった。フローサイトメトリーに基づく方法を用いて、ＰＤ－１とそのリガンドＰＤ－Ｌ１に対する抗体の遮断作用を検出した。ＰＤ－１を過剰発現する２９３Ｔ－ＰＤ－１細胞株（メーカー：康源博創生物科技（北京）有限公司）を蘇生させ、細胞を１×１０^５個／ウェルで９６ウェルプレートにプレーティングし、異なる濃度の抗体希釈液（初期濃度２００ｎＭ、４倍希釈）及びＰＤ－Ｌ１－ビオチン（Ｂｉｏｔｉｎ）希釈液（２μｇ／ｍＬ、５０μＬ／ウェル）を混合し、室温で３０分間インキュベートした。次に、混合液を１００μＬ／ウェルで細胞に加えて、均一に混合し、４℃で６０分間インキュベートし、次にＦＡＣＳ緩衝液（２％のＦＢＳを含むＰＢＳ）で洗浄し、１２００ｒｐｍで４分間遠心分離して、上清を捨てた。１００μＬ／ウェルでＰＥ標識したストレプトアビジンを加えて、暗所で３０分間インキュベートし、インキュベーションの終了後にＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。１２０μＬのＦＡＣＳ緩衝液を加えて細胞を再懸濁させ、装置で検出した。ＦＳＣ／ＳＳＣに基づいて生細胞をゲーティングし、その平均蛍光値を計測した。幾何学的値で抗体－抗原遮断反応曲線を生成し、ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ６．０を利用して４パラメーター曲線をプロットして、ＩＣ_５０値を決定した。試験結果が、抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、抗体Ｄ及び抗体ＥのＩＣ_５０値は、それぞれ、１．０２４ｎＭ、２．０７７ｎＭ、１．６７８ｎＭ、２．１０３ｎＭ、２．５３６ｎＭであり、いずれも抗体は抗原とそのリガンドの結合を遮断できるということを示した。類似する方法を用いてヒト化抗体の遮断活性を測定し、抗体Ａｈｕ、抗体Ｂｈｕ、抗体Ｃｈｕ、抗体Ｄ１ｈｕ及び抗体Ｄ２ｈｕのＩＣ_５０値は、それぞれ、４．０ｎＭ、３．４ｎＭ、１．０ｎＭ、２．６ｎＭ、１２ｎＭであった。

【0102】

ＦＡＣＳによってＣＤ－８０／ＰＤ－Ｌ１に対する抗体の遮断活性を測定した。試験手順は次のとおりであった。フローサイトメトリーに基づく方法を用いて、ＰＤ－Ｌ１とＣＤ－８０に対する抗体の遮断作用を検出した。ＰＤ－Ｌ１を過剰発現する２９３Ｔ－ＰＤ－Ｌ１細胞株（メーカー：康源博創生物科技（北京）有限公司）を蘇生させ、細胞を１×１０^５／ウェルで９６ウェルプレートにプレーティングし、異なる濃度の抗体希釈液（初期濃度２００ｎＭ、４倍希釈）を細胞に加えて、４℃で６０分間インキュベートした。インキュベーションの終了後にＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、１２００ｒｐｍで４分間遠心分離して、上清を捨てた。次に１００μＬ／ウェルでｈｕｍａｎ－ＣＤ８０－ｍＦｃ（２μｇ／ｍＬ）を加えて、４℃の暗所で３０分間インキュベートした。インキュベーションの終了後にＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。各ウェルに１００μＬの１：２００希釈の蛍光標識したヤギ抗マウス二次抗体（メーカー：Ａｂｃａｍ）を加えて、４℃の暗所で３０分間インキュベートした。インキュベーションの終了後にＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、フローサイトメーターで検出した。その平均蛍光値を計測した。幾何学的値で抗体－抗原遮断反応曲線を生成し、ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ６．０を利用して４パラメーター曲線をプロットして、ＩＣ_５０値を決定した。試験結果が、抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、抗体Ｄ及び抗体ＥのＩＣ_５０値は、それぞれ、３．９５４ｎＭ、３．３５５ｎＭ、４．１４６ｎＭ、４．７５７ｎＭ、２．９７９ｎＭであり、いずれも抗体は抗原とそのリガンドの結合を遮断できるということを示した。類似する方法でヒト化抗体の遮断活性を測定し、抗体Ａｈｕ、抗体Ｂｈｕ、抗体Ｃｈｕ及び抗体Ｄ１ｈｕのＩＣ_５０値は、それぞれ、約１．８ｎＭ、約１．７ｎＭ、約３．２ｎＭ、約１．５ｎＭであった。

【0103】

実施例１：モノクローナル抗体の作製及び取得
ハイブリドーマによってスクリーニングすることでモノクローナル抗体を得た。ヒト抗原（ＧＡＲＰ、ＴＧＦ－β及びＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体）を利用してマウスを免疫することで、マウスの体内に特異性抗体を産生させた。マウス骨髄腫細胞とマウス脾臓細胞を融合させ、融合後の細胞でプレーティングした。次にＨＡＴ選択培地を加えてスクリーニングし、骨髄腫細胞は生存できず、脾臓細胞の生存時間も非常に短かった。最終的に、リンパ球と融合した骨髄腫細胞だけが生存し、即ち、ハイブリドーマ細胞がスクリーニングされた。

【0104】

次にクローナル細胞を限界希釈する方法で特定の抗体を産生できるハイブリドーマ細胞を選択した。ハイブリドーマ細胞を複数倍希釈して、マルチウェル細胞培養プレートに接種し、各ウェルの細胞が１個以下であるように培養増殖し、クローンが所定の大きさに成長したら、ＥＬＩＳＡ法を利用して各ウェルの上清で細胞によって分泌された抗体を検出し、特定の抗原（ＧＡＲＰ、ＴＧＦ－β、及び／又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体）と結合できる培養ウェルが陽性ウェルであり、モノクローナル細胞を得るまで、引き続き希釈した。

【0105】

上記の方法でスクリーニングして、１００個以上の陽性クローンが得られ、それらから差別化スクリーニングで活性の高いクローンを得た。最終的に１５の候補クローンが選択されて配列決定し、そのうち６つのクローンが選択された。次に哺乳動物細胞株を利用して前記異なる抗体を発現させて精製し、純度が少なくとも９０％以上である異なる抗体を得て、それぞれ、ｍ２１２抗体、ｍ３０５抗体、ｍ１０７抗体、ｍ２０２抗体、ｍ３０１抗体及びｍ１０９抗体と命名した。

【0106】

（実施例２）
実施例２では、ＧＡＲＰ、ＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体に対する抗体の結合活性をテストした。ＧＡＲＰ、ＴＧＦ－βを発現するプラスミドを２９３細胞株に同時に導入して、ＧＡＲＰ－ＴＧＦβ複合体を過剰発現する２９３－ＧＡＲＰ／ＴＧＦβ安定導入細胞株を構築した。

【0107】

２９３－ＧＡＲＰ／ＴＧＦβ細胞を１００μＬ／ウェルで９６ウェルプレートに加え、細胞濃度は１～２×１０^６個／ｍＬであった。ＦＡＣＳ緩衝液（即ち、２％のＦＢＳを含むＰＢＳ溶液）で洗浄し、次に１００μＬ／ウェルで異なる被測抗体を加えて（それぞれ、ｍ２１２抗体、ｍ３０５抗体、ｍ１０７抗体、ｍ２０２抗体、ｍ３０１抗体、ｍ１０９抗体であった。抗体初期濃度２００ｎＭ、４倍勾配希釈）、４℃で３０分間インキュベートした。緩衝液で洗浄し、蛍光標識したヤギ抗ヒト二次抗体（メーカー：Ａｂｃａｍ）を加えて、４℃で３０分間インキュベートした。緩衝液を使用して洗浄し、緩衝液を加えて細胞を再懸濁させ、フローサイトメーターで蛍光シグナルを検出した。データ処理ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を用いて被測サンプルのＥＣ_５０値を算出し、次の表１及び図５に示すとおりであった。

【表1】

【0108】

表１及び図５の結果から分かるように、ｍ２１２抗体、ｍ３０５抗体、ｍ１０７抗体、ｍ２０２抗体、ｍ３０１抗体及びｍ１０９抗体は、いずれも、ＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができる。

【0109】

ＧＡＲＰを発現するプラスミドをＣＨＯ－Ｋ１細胞株に導入して、ＧＡＲＰを過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１－ＧＡＲＰ細胞株を構築した。ＣＨＯ－Ｋ１－ＧＡＲＰ細胞を１００μＬ／ウェルで９６ウェルプレートに加え、細胞濃度は１～２×１０^６個／ｍＬであった。ＦＡＣＳ緩衝液（即ち、２％のＦＢＳを含むＰＢＳ溶液）で洗浄し、次に１００μＬ／ウェルで異なる被測抗体を加えて（それぞれ、ｍ２１２抗体、ｍ３０５抗体、ｍ１０７抗体を例とした。抗体初期濃度２００ｎＭ、４倍勾配希釈）、４℃で３０分間インキュベートした。緩衝液で洗浄し、蛍光標識したヤギ抗ヒト二次抗体（メーカー：Ａｂｃａｍ）を加えて、４℃で３０分間インキュベートした。緩衝液を使用して洗浄し、緩衝液を加えて細胞を再懸濁させ、フローサイトメーターで蛍光シグナルを検出した。データ処理ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を用いて被測サンプルのＥＣ_５０値を算出し、次の表２に示すとおりであった。

【表2】

【0110】

表２から分かるように、ｍ２１２抗体、ｍ３０５抗体、ｍ１０７抗体は、いずれも、ＧＡＲＰタンパク質と特異的に結合することができる。

【0111】

（実施例３）
実施例３では、ＴＧＦ－βに対する抗体の結合活性を同定した。ヒトトランスフォーミング増殖因子β１（ｈＴＧＦ－β１、メーカー：ＡＣＲＯ）を使用して細胞培養プレートをコーティングし、１００ｎｇ／ウェルで、４℃で一晩インキュベートした。次にＰＢＳＴを使用して洗浄し、各ウェルに２００μＬのＢＳＡを加えて、３７℃で１時間ブロックした。ＰＢＳＴを使用して洗浄し、１００μＬ／ウェルで異なる濃度の被測抗体を加えて（それぞれ、ｍ１０７抗体、ｍ２０２抗体、ｍ３０１抗体、ｍ１０９抗体を例とした。各抗体の初期濃度３１．２５ｎＭ、４倍勾配希釈）、３７℃で２時間インキュベートした。ＰＢＳＴを使用して洗浄し、１００μＬ／ウェルでヤギ抗ヒト二次抗体を加えて（１％のＢＳＡで１：１００００希釈、メーカー：Ｊａｃｋｓｏｎ）、３７℃で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴを使用して洗浄し、１００μＬのＴＭＢ発色溶液を加えて１０～１５分間発色させた後、５０μＬの２Ｍの硫酸を加えて反応を停止させた。マイクロプレートリーダーでＯＤ４５０値を読み取り、データ処理ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を用いて被測抗体のＥＣ_５０値を算出し、次の表３及び図６に示すとおりであった。

【表3】

【0112】

試験結果が、ｍ１０７抗体、ｍ２０２抗体、ｍ３０１抗体、ｍ１０９抗体は、いずれも、ＴＧＦ－βと特異的に結合することができるということを示した。

【0113】

実施例４：ＴＧＦ－β分泌中和試験
抗ＣＤ３抗体は、ＴＣＲ複合体と結合し、Ｔリンパ球を活性化し、Ｔリンパ球によるＴＧＦ－βの分泌を媒介することができ、抗ＣＤ２８抗体は、抗ＣＤ３抗体と相乗的にインビトロでＴリンパ球を活性化及び増幅させることができる。抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体を使用すると、相乗的に免疫細胞を刺激して活性化させることができる。

【0114】

濃度が１μｇ／ｍＬである抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体（メーカー：Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を調製し、１００μＬ／ウェルで９６ウェルプレートに加えて、４℃で一晩コーティングした。次に１００μＬ／ウェルでＴｒｅｇ細胞を加えた（細胞濃度５×１０^５個／ｍＬ）。１００μＬ／ウェルで異なる濃度の被測抗体を加えて（それぞれ、２６６ｎＭ、６６ｎＭ）、インキュベーターに入れて９６時間培養した。最後にＴＧＦ－β ＥＬＩＳＡ検出キット（メーカー：ＢＤ）を用いて上清中のＴＧＦ－βの含有量を検出した。データ処理ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０で分析して試験結果を得て、試験結果は図７に示すとおりであった。

【0115】

図７から分かるように、ｍ２０２抗体、ｍ３０１抗体、ｍ１０９抗体及びｍ１０７抗体を例とすると、これらの抗体は、いずれも、Ｔｒｅｇ細胞によって産生されたＴＧＦ－βを阻害又は中和することができる。

【0116】

（実施例５）
相補性決定領域移植法（ＣＤＲ－Ｇｒａｆｔｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ）を用いてヒト化抗体を得て、抗体及び鋳型のアミノ酸配列を一律ＦＲ領域及びＣＤＲ領域に分け、次にＣＤＲ領域を鋳型のＦＲ領域に移植することによって、抗体の特異性を決めるＣＤＲ領域とヒトに由来する抗体のフレームワーク領域を互いに組み合わせて、ヒト化の目的を達成する。また、抗体の親和性の低下を避けるために、コンピュータ・シミュレーションなどの技術で重要なアミノ酸残基部位を算出し、回復変異の方法を利用してヒト化抗体の親和性を確保した。設計すると、ｍ２１２ヒト化後の抗体番号はｍ２１２－ｈｕであり、ｍ３０５ヒト化後の抗体番号はｍ３０５－ｈｕであり、ｍ１０７ヒト化後の抗体番号はｍ１０７－ｈｕであり、ｍ２０２ヒト化後の抗体番号はｍ２０２－ｈｕであり、ｍ３０１ヒト化後の抗体番号はｍ３０１－ｈｕであり、１０９ヒト化後の抗体番号はｍ１０９－ｈｕであった。次にこれらのヒト化抗体に対してそれぞれ活性を検出した。

【0117】

２９３－ＧＡＲＰ／ＴＧＦβ細胞株及びＣＨＯ－Ｋ１－ＧＡＲＰ細胞株をそれぞれ１００μＬ／ウェルで９６ウェル細胞プレートに加え、ただし細胞濃度は１～２×１０^６個／ｍＬであった。ＦＡＣＳ緩衝液（２％のＦＢＳ）を使用して洗浄した。次に１００μＬ／ウェルで異なる濃度の被測抗体を加えて（初期濃度２００ｎＭ、４～５倍勾配希釈）、４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液を使用して洗浄し、蛍光標識したヤギ抗ヒト二次抗体を加えて、４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液を使用して洗浄し、１５０～２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液を加えて細胞を再懸濁させ、フローサイトメーターで蛍光シグナルを検出した。データ処理ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を用いて被測サンプルのＥＣ_５０値を算出し、次の表４及び表５に示すとおりであった。

【表4】

【0118】

上記の抗体を例とすると、ヒト化を経た抗体は、ＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体との強い特異的結合活性を示す。

【表5】

【0119】

試験結果が、上記の抗体を例とすると、ＧＡＲＰタンパク質との強い結合活性を示すということを示した。

【0120】

ｈＴＧＦ－β１（メーカー：ＡＣＲＯ）を使用してＥＬＩＳＡ用マイクロプレートをコーティングし、１００ｎｇ／ウェルで、４℃で一晩インキュベートした。次にＰＢＳＴを使用して洗浄し、各ウェルに２００μＬのＢＳＡを加えて、３７℃で１時間ブロックした。ＰＢＳＴを使用して洗浄し、１００μＬ／ウェルで異なる濃度の被測抗体を加えて（初期濃度３１．２５ｎＭ、１％のＢＳＡで４倍勾配希釈）、３７℃で２時間インキュベートした。ＰＢＳＴを使用して洗浄し、次に１００μＬ／ウェルでヤギ抗ヒト二次抗体を加えて（１：１００００、１％のＢＳＡで希釈）、３７℃で１時間インキュベートした。ＰＢＳＴを使用して洗浄し、１００μＬのＴＭＢ発色溶液を加えて１０～１５分間発色させ、５０μＬの２Ｍの硫酸を加えて反応を停止させた。マイクロプレートリーダーでＯＤ４５０値を読み取り、データ処理ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を用いて被測抗体のＥＣ_５０値を算出し、次の表６に示すとおりであった。

【表6】

【0121】

試験結果が、上記の抗体を例とすると、ヒト化を経た抗体も、ＴＧＦ－βとの特異的結合活性を示すということを示した。また、実施例４で言及された方法を参照してＴＧＦ－βに対するヒト化後抗体の中和活性を検出し、結果が、各抗体は、いずれも、ＴＧＦ－βと特異的に結合し、ＴＧＦ－βを中和することができるということを示した。

【0122】

（実施例６）
当実施例では、主に、抗ヒトＧＡＲＰ又は抗ＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体抗体及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体に対して遺伝子工学改変を行って、抗ＧＡＲＰ及びＰＤ－Ｌ１又は抗ＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体及びＰＤ－Ｌ１を発現する二重特異性抗体を構築することを記述した。二重特異性抗体を命名する時は、ｍで始まるモノクローナル抗体と区別するためにｂで始まり、二重特異性抗体は（Ｇ_４Ｓ）_４リンカーによって接続されている。図１に示すように、接続させる過程で、抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディとＩｇＧ型構造の重鎖第３定常ドメインを接続させ、命名する時は２つの抗原結合部分をＨでつなげ（区切りを示す）、２つの抗原結合部分は以前の番号を保持した。例えば、「ｂ２１２－ｈｕ－Ｈ－Ｄ２ｈｕ」で表す二重特異性抗体は、ｍ２１２－ｈｕの抗体配列及び抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディＤ２ｈｕの抗体配列を接続させて完成したものであり、且つ、ナノボディがＩｇＧ型構造の重鎖第３定常ドメインに接続される。ナノボディとＩｇＧ型構造の重鎖第３定常ドメインを接続させる時に、ナノボディ部分を１つの番号だけで表す場合に、カルボキシ末端に接続された１つだけのナノボディは同じであり、且つ重鎖第３定常ドメインの２つの対称なカルボキシ末端に接続された１つのナノボディは同じであることを示し、接続されたナノボディが異なる場合は、接続された全てのナノボディの番号を示さなければならない。例えば、「ｂ３０１－Ｈ－Ｂｈｕ－Ｄ２ｈｕ」で表す二重特異性抗体は、ｍ３０１－ｈｕの抗体配列と抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディＢｈｕ及びＤ２ｈｕの抗体配列を接続させて完成したものであり、Ｂｈｕ、Ｄ２ｈｕは、それぞれ、ＩｇＧ型構造の重鎖第３定常ドメインのカルボキシ末端に接続される。

【0123】

図３に示すように、接続させる過程で、抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディをＩｇＧ型構造の軽鎖定常ドメインにそれぞれ接続させ（軽鎖定常ドメインのＣ末端にそれぞれ１つの抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディを接続させていることで図３と異なる）、命名する時は２つの抗原結合部分をＬでつなげた（区切りを示す）。図２に示すように、接続させる過程で、ＩｇＧ型構造の重鎖定常ドメインのカルボキシ末端にそれぞれ２つの抗ＰＤ－Ｌ１ナノボディを対称に接続させてもよく、重鎖定常ドメインのいずれか１つのカルボキシ末端を例とすると、それに接続させた２つのナノボディが異なる場合は、命名する時は２つのナノボディを「－」でつなげ、接続させた２つのナノボディをそれぞれナノボディの番号で示し、接続させた２つのナノボディを（Ｇ_４Ｓ）_３でつなげてもよい。

【0124】

次にＣＨＯ－Ｓ細胞への一過性トランスフェクションにより二重特異性抗体タンパク質を生産し、上清を回収してプロテインＡアフィニティーカラムで前記抗体を精製し、精製抗体の純度をＨＰＬＣ及びＳＤＳ－ＰＡＧＥで測定し、二重特異性抗体の純度は９０％以上であった。

【0125】

実施例７：二重特異性抗体の結合活性
２９３－ＧＡＲＰ／ＴＧＦβ細胞株、ＣＨＯ－Ｋ１－ＧＡＲＰ細胞株及びＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１（メーカー：康源博創生物科技（北京）有限公司）細胞株を培養し、細胞濃度を１～２×１０^６個／ｍＬに調整し、１００μＬ／ウェルで９６ウェル細胞プレートに加えた。次に１００μＬ／ウェルで異なる濃度の被測抗体を加えて（初期濃度２００ｎＭ、４～５倍勾配希釈）、４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液を使用して洗浄し、蛍光標識したヤギ抗ヒト二次抗体を加えて、４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液を使用して洗浄し、１５０～２００μＬのＦＡＣＳバッファーを加えて細胞を再懸濁させ、フローサイトメーターで蛍光シグナルを検出した。データ処理ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を用いて被測抗体のＥＣ_５０値を算出し、次の表７～表９に示すとおりである。

【表7】

【表8】

【表9】

【0126】

実施例８：ＴＧＦβレポーター遺伝子遮断活性
２９３Ｆ－ＧＡＰＲ／ＴＧＦβ／αｖβ６細胞を培養し、細胞を（細胞密度０．６×１０^６個／ｍＬ）５０μＬ／ウェルで細胞培養プレートに加え、引き続き２９３－ＳＢＥ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ細胞（細胞密度１．８×１０^６個／ｍＬ）を５０μＬ／ウェルで細胞培養プレートに加えた。次に異なる濃度の被測抗体（初期濃度４００ｎＭ又は１３３．３３ｎＭ、３倍勾配希釈）を１００μＬ／ウェルで細胞培養プレートに加え、均一に混合した後にインキュベーターに入れて１８～２４時間培養した。各ウェルに１００μＬのルシフェラーゼ基質ＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標） Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ ｓｙｓｔｅｍを加えて、暗所で５分間インキュベートし、次にマイクロプレートリーダーで発光シグナル値を読み取った。データ処理ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を用いて被測サンプルのＩＣ_５０値を算出し、次の表１０に示すとおりであった。

【表10】

【0127】

上記の二重特異性抗体を例として結果から分かるように、上記の二重特異性抗体はＴＧＦ－βに対する遮断活性を示している。

【0128】

実施例９：ＰＤ－Ｌ１抗体レポーター遺伝子遮断系
実施例９では、レポーター遺伝子アッセイによってＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１経路に対する抗体の遮断作用を研究した。当該試験は、２種の細胞株を用いて行った。Ｊｕｒｋａｔ－ＰＤ１－ＣＤ３ζ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ２細胞株（メーカー：康源博創生物技術（北京）有限公司）は、Ｊｕｒｋａｔ細胞でＰＤ－１ ＥＣＤ及びＣＤ３ζからなる融合タンパク質を安定発現し、また、ＮＦ－ＡＴ駆動型ルシフェラーゼレポーター遺伝子が挿入されている。２９３Ｔ－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（メーカー：康源博創生物技術（北京）有限公司）は、ヒトＰＤ－Ｌ１を発現する２９３Ｔ細胞であった。２種の細胞を共培養する場合に、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用が第１シグナルとなり、細胞内のＣＤ３ζ鎖が第２シグナルとなって内部に活性化シグナルを伝達し、ＮＦＡＴ駆動型ルシフェラーゼレポーター遺伝子が発現されて、蛍光が発せられる。ＰＤ－Ｌ１抗体を加える場合に、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の結合が遮断され、活性化シグナルの伝達が阻害され、ルシフェラーゼレポーター遺伝子は発現できない。

【0129】

２９３Ｔ－ｈＰＤ－Ｌ１細胞を２×１０^４個／ウェルで９６ウェルプレートにプレーティングし、引き続きＪｕｒｋａｔ－ＰＤ１－ＣＤ３ζ－ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ２エフェクター細胞を２×１０^４／ウェルで９６ウェルプレートに加え、次に異なる濃度の被測抗体を加えて（初期濃度６０μｇ／ｍＬ、４倍勾配希釈）、３７℃で１８～２４時間インキュベートした。各ウェルに１００μＬのルシフェラーゼ基質ＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標） Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ ｓｙｓｔｅｍ検出試薬を加えて、暗所で５分間インキュベートし、マイクロプレートリーダーで９６ウェルプレートの蛍光シグナルを読み取った。相対蛍光値をｙ軸、抗体サンプルの濃度をｘ軸として、４パラメーター曲線をプロットした。ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を用いて当該曲線を分析して二重特異性抗体のＩＣ_５０値を得て、次の表１１に示した。示される抗体を例とすると、モノクローナル抗体はＰＤ－Ｌ１遮断活性を示さず、二重特異性抗体はＰＤ－Ｌ１遮断活性を示す。また、実施例５の方法を参照し、これらの抗体はＴＧＦ－β中和活性をも示す。

【表11】

【0130】

実施例１０：インビボ活性評価
ＭＣ３８－ｈＰＤ－Ｌ１ＫＬ＃３細胞を構築し、当該細胞からネズミに由来するＰＤ－Ｌ１がノックアウトされ、また、ヒトＰＤ－Ｌ１遺伝子が挿入されている。試験では、ＭＣ－３８－ｈＰＤ－Ｌ１ ＫＬ＃３細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６－ｈＧＡＲＰ遺伝子組換え雌マウス（メーカー：集萃薬康）の右肩甲骨に皮下接種し、１匹の接種量は０．１ｍＬであり、細胞密度は１×１０^６／匹であり、腫瘍体積が７５～１００ｍｍ^３に達していると、表１２に示すとおりに、マウスを群分けした。試験マウスを５群に分け、１群が６匹であり、週２回で４回腹腔内投与した。投与後に３～４日おきにマウスの体重及び腫瘍体積を計測した。

【表12】

【0131】

動物試験の結果は図８に示され、結果が、示される抗体は、いずれも抗腫瘍効果を示すことを示し、腫瘍の大きさ及び体積が抑制され、例えば、腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ）結果は４５～６０％であった。また、二重特異性抗体の抗腫瘍効果は、モノクローナル抗体よりも明らかに優れており、腫瘍増殖抑制率は７５％以上に達している。

【0132】

本願の記述で、「複数」の意味は、特に明確で具体的な限定がない限り、少なくとも２つ、例えば、２つ、３つなどである。

【0133】

本明細書の記述で、用語「一実施例」「いくつかの実施例」「例」「具体例」又は「いくつかの例」などが使用された記述は、当該実施例又は例で記述された具体的な特徴、構造、材料又は特色が本願の少なくとも１つの実施例又は例に含まれるということを意味する。本明細書で、上記の用語が使用された例示的な説明は、必ずしも同じ実施例又は例が対象になるとは限らない。また、記述された具体的な特徴、構造、材料又は特色は、いずれか１つ又は複数の実施例又は例で適切な方式で組み合わせてもよい。また、互いに矛盾がない限り、当業者は本明細書で記述された異なる実施例又は例及び異なる実施例又は例の特徴を組み合わせてもよい。

【0134】

上記で本願の実施例を示しそれを記述しているが、上記の実施例は例示的なものに過ぎず、本願に対する制限と捉えることができず、当業者は、本願の範囲内で上記の実施例に変更、補正、置換及び変形を行ってもよいということを理解されたい。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【配列表】

2024534706000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2024-03-26

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、
前記第１抗原結合部分は重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、
配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
前記第１抗原結合部分は軽鎖可変領域をさらに含み、前記軽鎖可変領域は、
配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
前記第１抗原結合部分はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができ、
前記ＨＣＤＲ配列及び前記ＬＣＤＲ配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とし、
好ましくは、
前記第１抗原結合部分が、以下から選ばれ、
（１）配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（２）配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（３）配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（４）配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（５）配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（６）配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有することを特徴とする二重特異性抗体。

【請求項2】

前記第１抗原結合部分が、
配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される配列と少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域と、
配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される配列と少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含むことを特徴とし、
好ましくは、
前記第１抗原結合部分が、
（１）配列番号３６若しくは３７若しくは３８若しくは３９若しくは４０若しくは４１で示される重鎖可変領域と、配列番号４８若しくは４９若しくは５０若しくは５１若しくは５２若しくは５３で示される軽鎖可変領域と、又は
（２）配列番号４２若しくは４３若しくは４４若しくは４５若しくは４６若しくは４７で示される重鎖可変領域と、配列番号５４若しくは５５若しくは５６若しくは５７若しくは５８若しくは５９で示される軽鎖可変領域とを含むことを特徴とする請求項１に記載の二重特異性抗体。

【請求項3】

前記第２抗原結合部分が、単一ドメイン抗体であり、
前記二重特異性抗体は、リンカーによってＩｇＧ型抗体及び第２抗原結合部分がそれぞれ接続された構造であり、ただし、ＩｇＧ型抗体は第１抗原結合部分を含むことを特徴とする請求項１に記載の二重特異性抗体。

【請求項4】

前記第２抗原結合部分が、
（ａ）次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６０、６３及び６６、又は配列番号６０、６３及び６６と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含むＣＤＲ１と、
（ｂ）次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６１、６４及び６７、又は配列番号６１、６４及び６７と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含むＣＤＲ２と、
（ｃ）次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６２、６５、６８及び６９、又は配列番号６２、６５、６８及び６９と比べて、１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含むＣＤＲ３とを含み、
前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とし、
好ましくは、
前記第２抗原結合部分が、以下から選ばれ、
（１）配列番号６０で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６１で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６２で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（２）配列番号６３で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６４で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６５で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（３）配列番号６６で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６７で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６８で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（４）配列番号６０で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６１で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６９で示されるＣＤＲ３配列を有することを特徴とする請求項１に記載の二重特異性抗体。

【請求項5】

前記第２抗原結合部分がフレームワーク領域をさらに含み、前記フレームワーク領域はＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４を含み、前記ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４は、それぞれ、次に示すアミノ酸配列を含み、
（１）ＦＲ１は、配列番号７０若しくは７４若しくは７７若しくは８０で示される配列、又は配列番号７０若しくは７４若しくは７７若しくは８０で示される配列と比べて、１つ、２つ若しくは３つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（２）ＦＲ２は、配列番号７１若しくは７５若しくは７８で示される配列、又は配列番号７１若しくは７５若しくは７８で示される配列と比べて、１つ、２つ若しくは３つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（３）ＦＲ３は、配列番号７２若しくは７６若しくは７９若しくは８１で示される配列、又は配列番号７２若しくは７６若しくは７９若しくは８１で示される配列と比べて、１つ、２つ、３つ若しくは４つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（４）ＦＲ４は、配列番号７３で示される配列、又は配列番号７３で示される配列と比べて、１つ若しくは２つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれることを特徴とし、
好ましくは、
前記第２抗原部分がフレームワーク領域ＦＲをさらに含み、前記フレームワーク領域ＦＲは、
（１）配列番号７０で示されるＦＲ１配列、配列番号７１で示されるＦＲ２配列、配列番号７２で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、又は
（２）配列番号７４で示されるＦＲ１配列、配列番号７５で示されるＦＲ２配列、配列番号７６で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、又は
（３）配列番号７７で示されるＦＲ１配列、配列番号７８で示されるＦＲ２配列、配列番号７９で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、又は
（４）配列番号８０で示されるＦＲ１配列、配列番号７８で示されるＦＲ２配列、配列番号７９で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、又は
（５）配列番号７０で示されるＦＲ１配列、配列番号７１で示されるＦＲ２配列、配列番号８１で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、から選ばれることを特徴とし、
さらに好ましくは、
前記第２抗原結合部分が、
（ａ）配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示されるアミノ酸配列、
（ｂ） （ａ）と比べて、配列同一性が８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、又は９９％以上であるアミノ酸配列から選ばれることを特徴とする請求項４に記載の二重特異性抗体。

【請求項6】

第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、前記第１抗原結合部分はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができ、
前記第１抗原結合部分は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、
配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
前記軽鎖可変領域は、
配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
前記第２抗原結合部分はＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
前記ＣＤＲ１は配列番号６０又は６３又は６６で示される配列を含み、
前記ＣＤＲ２は配列番号６１又は６４又は６７で示される配列を含み、
前記ＣＤＲ３は配列番号６２又は６５又は６８又は６９で示される配列を含み、
前記ＨＣＤＲ配列及び前記ＬＣＤＲ配列並びに前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とし、
好ましくは、
前記第１抗原結合部分が、以下から選ばれ、
（１）配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（２）配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（３）配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（４）配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（５）配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（６）配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列を有し、
前記第２抗原結合部分が、以下から選ばれ、
（１）ＣＤＲ１が配列番号６０で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２が配列番号６１で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３が配列番号６２で示されるアミノ酸配列であり、又は
（２）ＣＤＲ１が配列番号６３で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２が配列番号６４で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３が配列番号６５で示されるアミノ酸配列であり、又は
（３）ＣＤＲ１が配列番号６６で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２が配列番号６７で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３が配列番号６８で示されるアミノ酸配列であり、又は
（４）ＣＤＲ１が配列番号６０で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２が配列番号６１で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３が配列番号６９で示されるアミノ酸配列であり、
前記第１抗原結合部分は、重鎖第１定常ドメインＣＨ１、軽鎖定常ドメインＶＬ及びＦｃ領域とＩｇＧ型構造を形成し、前記第２抗原結合部分はリンカーによってＩｇＧ型構造に接続されることを特徴とし、
さらに好ましくは、
前記第１抗原結合部分が、
（１）配列番号３６若しくは３７若しくは３８若しくは３９若しくは４０若しくは４１で示される重鎖可変領域と、配列番号４８若しくは４９若しくは５０若しくは５１若しくは５２若しくは５３で示される軽鎖可変領域と、又は
（２）配列番号４２若しくは４３若しくは４４若しくは４５若しくは４６若しくは４７で示される重鎖可変領域と、配列番号５４若しくは５５若しくは５６若しくは５７若しくは５８若しくは５９で示される軽鎖可変領域とを含み、
前記第２抗原結合部分が、
配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする二重特異性抗体。

【請求項7】

重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ただし、
配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
前記ＨＣＤＲ配列及び前記ＬＣＤＲ配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とし、
好ましくは、
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ただし、
（１）配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（２）配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（３）配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（４）配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（５）配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（６）配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列を有することを特徴とし、
好ましくは、
配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される配列と少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域と、
配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される配列と少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含むことを特徴とし、
さらに好ましくは、
配列番号３６で示される重鎖可変領域及び配列番号４８で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号３７で示される重鎖可変領域及び配列番号４９で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号３８で示される重鎖可変領域及び配列番号５０で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号３９で示される重鎖可変領域及び配列番号５１で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４０で示される重鎖可変領域及び配列番号５２で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４１で示される重鎖可変領域及び配列番号５３で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４２で示される重鎖可変領域及び配列番号５４で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４３で示される重鎖可変領域及び配列番号５５で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４４で示される重鎖可変領域及び配列番号５６で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４５で示される重鎖可変領域及び配列番号５７で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４６で示される重鎖可変領域及び配列番号５８で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４７で示される重鎖可変領域及び配列番号５９で示される軽鎖可変領域から選ばれることを特徴とし、
場合により、
Ｆｃ領域をさらに含むことを特徴とするモノクローナル抗体又は抗原結合断片。

【請求項8】

請求項１～６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体をコードし又は請求項７に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片をコードすることを特徴とするポリヌクレオチド。

【請求項9】

請求項８に記載のポリヌクレオチドを含むことを特徴とする構築物。

【請求項10】

請求項１～６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体をコードし又は請求項７に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片をコードすることを特徴とするポリヌクレオチド、又は前記ポリヌクレオチドを含む構築物を含有することを特徴とする宿主細胞。

【請求項11】

請求項１～６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は請求項７に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片と、
薬学的に許容される担体とを含むことを特徴とする医薬組成物。

【請求項12】

がん又は自己免疫疾患を予防及び／又は治療するための、請求項１１に記載の医薬組成物。

【請求項13】

請求項１～６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は請求項７に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片と、
前記二重特異性抗体又は前記モノクローナル抗体若しくは抗原結合断片に接続された機能性小分子とを含むことを特徴とする抗体複合体。

【請求項14】

請求項１～６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体又は請求項７に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を含むことを特徴とするキット。

【請求項15】

請求項１０に記載の宿主細胞を培養することと、
培養物から二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を回収することとを含むことを特徴とする請求項１～６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体を生産し又は請求項７に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を生産する方法。

【請求項16】

抗体複合体の製造における請求項１～６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は請求項７に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片の使用。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５２

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0052】

本明細書で、使用可能なリンカーは、当分野でよく用いられるリンカーであり、いくつかのオリゴペプチド又はポリペプチドであってもよい。これらのオリゴペプチド又はポリペプチドは、柔軟性を提供することのできるいかなるアミノ酸配列であってもよい。リンカーは、次からなる群、ＧＳ、ＳＧ、ＧＧＳ、ＧＳＧ、ＳＧＧ、ＧＧＧ、ＧＧＧＳ（配列番号９４）、ＳＧＧＧ（配列番号９５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号９６）、ＧＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号９７）、ＧＧＧＧＳＧＳ（配列番号９８）、ＧＧＧＧＳＧＧＳ（配列番号９９）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１００）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０１）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１０４）などを含むがそれらに限定されない。

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１３４

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0134】

上記で本願の実施例を示しそれを記述しているが、上記の実施例は例示的なものに過ぎず、本願に対する制限と捉えることができず、当業者は、本願の範囲内で上記の実施例に変更、補正、置換及び変形を行ってもよいということを理解されたい。
本開示は、例えば、以下に関する。
［１］
第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、
前記第１抗原結合部分は重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、
配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
前記第１抗原結合部分は軽鎖可変領域をさらに含み、前記軽鎖可変領域は、
配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
前記第１抗原結合部分はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができ、
前記ＨＣＤＲ配列及び前記ＬＣＤＲ配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とする二重特異性抗体。
［２］
前記第１抗原結合部分が、以下から選ばれ、
（１）配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（２）配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（３）配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（４）配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（５）配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、又は
（６）配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有し、そして配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を有することを特徴とする前記［１］に記載の二重特異性抗体。
［３］
第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、
前記第１抗原結合部分は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、ただし、
ＨＣＤＲ１は配列番号１又は４又は７又は１０又は１３又は１６で示される配列を含み、
ＨＣＤＲ２は配列番号２又は５又は８又は１１又は１４又は１７で示される配列を含み、
ＨＣＤＲ３は配列番号３又は６又は９又は１２又は１５又は１８で示される配列を含み、
ＬＣＤＲ１は配列番号１９又は２２又は２５又は２７又は３０又は３３で示される配列を含み、
ＬＣＤＲ２は配列番号２０又は２３又は２８又は３１又は３４で示される配列を含み、
ＬＣＤＲ３は配列番号２１又は２４又は２６又は２９又は３２又は３５で示される配列を含み、
前記第１抗原結合部分はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができ、
前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３配列及び前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とする二重特異性抗体。
［４］
前記第１抗原結合部分が、
配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される配列と少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域と、
配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される配列と少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含むことを特徴とする前記［１］～［３］のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
［５］
前記第１抗原結合部分が、
（１）配列番号３６若しくは３７若しくは３８若しくは３９若しくは４０若しくは４１で示される重鎖可変領域と、配列番号４８若しくは４９若しくは５０若しくは５１若しくは５２若しくは５３で示される軽鎖可変領域と、又は
（２）配列番号４２若しくは４３若しくは４４若しくは４５若しくは４６若しくは４７で示される重鎖可変領域と、配列番号５４若しくは５５若しくは５６若しくは５７若しくは５８若しくは５９で示される軽鎖可変領域とを含むことを特徴とする前記［４］に記載の二重特異性抗体。
［６］
前記第２抗原結合部分が、単一ドメイン抗体であり、
前記二重特異性抗体は、リンカーによってＩｇＧ型抗体及び第２抗原結合部分がそれぞれ接続された構造であり、ただし、ＩｇＧ型抗体は第１抗原結合部分を含むことを特徴とする前記［１］～［５］のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
［７］
前記第２抗原結合部分が、
（ａ）次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６０、６３及び６６、又は配列番号６０、６３及び６６と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含むＣＤＲ１と、
（ｂ）次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６１、６４及び６７、又は配列番号６１、６４及び６７と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含むＣＤＲ２と、
（ｃ）次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６２、６５、６８及び６９、又は配列番号６２、６５、６８及び６９と比べて、１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含むＣＤＲ３とを含み、
前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とする前記［１］～［５］のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
［８］
前記第２抗原結合部分が、以下から選ばれ、
（１）配列番号６０で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６１で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６２で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（２）配列番号６３で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６４で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６５で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（３）配列番号６６で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６７で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６８で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（４）配列番号６０で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６１で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６９で示されるＣＤＲ３配列を有することを特徴とする前記［７］に記載の二重特異性抗体。
［９］
前記第２抗原結合部分がフレームワーク領域をさらに含み、前記フレームワーク領域はＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４を含み、前記ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４は、それぞれ、次に示すアミノ酸配列を含み、
（１）ＦＲ１は、配列番号７０若しくは７４若しくは７７若しくは８０で示される配列、又は配列番号７０若しくは７４若しくは７７若しくは８０で示される配列と比べて、１つ、２つ若しくは３つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（２）ＦＲ２は、配列番号７１若しくは７５若しくは７８で示される配列、又は配列番号７１若しくは７５若しくは７８で示される配列と比べて、１つ、２つ若しくは３つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（３）ＦＲ３は、配列番号７２若しくは７６若しくは７９若しくは８１で示される配列、又は配列番号７２若しくは７６若しくは７９若しくは８１で示される配列と比べて、１つ、２つ、３つ若しくは４つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（４）ＦＲ４は、配列番号７３で示される配列、又は配列番号７３で示される配列と比べて、１つ若しくは２つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれることを特徴とする前記［７］又は［８］に記載の二重特異性抗体。
［１０］
前記第２抗原部分がフレームワーク領域ＦＲをさらに含み、前記フレームワーク領域ＦＲは、
（１）配列番号７０で示されるＦＲ１配列、配列番号７１で示されるＦＲ２配列、配列番号７２で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、又は
（２）配列番号７４で示されるＦＲ１配列、配列番号７５で示されるＦＲ２配列、配列番号７６で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、又は
（３）配列番号７７で示されるＦＲ１配列、配列番号７８で示されるＦＲ２配列、配列番号７９で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、又は
（４）配列番号８０で示されるＦＲ１配列、配列番号７８で示されるＦＲ２配列、配列番号７９で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、又は
（５）配列番号７０で示されるＦＲ１配列、配列番号７１で示されるＦＲ２配列、配列番号８１で示されるＦＲ３配列及び配列番号７３で示されるＦＲ４配列、から選ばれることを特徴とする前記［７］又は［８］に記載の二重特異性抗体。
［１１］
前記第２抗原結合部分が、
（ａ）配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示されるアミノ酸配列、
（ｂ） （ａ）と比べて、配列同一性が８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、又は９９％以上であるアミノ酸配列から選ばれることを特徴とする前記［７］又は［８］に記載の二重特異性抗体。
［１２］
第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、
前記第１抗原結合部分はＧＡＲＰ、ＴＧＦ－β及び／又はＧＡＰＲ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができ、
前記第２抗原結合部分はＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、ただし、
（ａ）前記ＣＤＲ１は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６０、６３及び６６、又は配列番号６０、６３及び６６と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲ２は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６１、６４及び６７、又は配列番号６１、６４及び６７と比べて、１つ若しくは２つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
（ｃ）前記ＣＤＲ３は、次の群から選ばれる配列、即ち、配列番号６２、６５、６８及び６９、又は配列番号６２、６５、６８及び６９と比べて、１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列を含み、
前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とする二重特異性抗体。
［１３］
前記第２抗原結合部分が、
（１）配列番号６０で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６１で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６２で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（２）配列番号６３で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６４で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６５で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（３）配列番号６６で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６７で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６８で示されるＣＤＲ３配列を有し、又は
（４）配列番号６０で示されるＣＤＲ１配列、配列番号６１で示されるＣＤＲ２配列及び配列番号６９で示されるＣＤＲ３配列を有することを特徴とする前記［１２］に記載の二重特異性抗体。
［１４］
前記第２抗原結合部分がフレームワーク領域をさらに含み、前記フレームワーク領域はＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４を含み、前記ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４は、それぞれ、次に示すアミノ酸配列を含み、
（１）ＦＲ１は、配列番号７０若しくは７４若しくは７７若しくは８０で示される配列、又は配列番号７０若しくは７４若しくは７７若しくは８０で示される配列と比べて、１つ、２つ若しくは３つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（２）ＦＲ２は、配列番号７１若しくは７５若しくは７８で示される配列、又は配列番号７１若しくは７５若しくは７８で示される配列と比べて、１つ、２つ若しくは３つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（３）ＦＲ３は、配列番号７２若しくは７６若しくは７９若しくは８１で示される配列、又は配列番号７２若しくは７６若しくは７９若しくは８１で示される配列と比べて、１つ、２つ、３つ若しくは４つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれ、
（４）ＦＲ４は、配列番号７３で示される配列、又は配列番号７３で示される配列と比べて、１つ若しくは２つの保存的なアミノ酸の置換を有する配列から選ばれることを特徴とする前記［１２］又は［１３］に記載の二重特異性抗体。
［１５］
前記第２抗原部分がフレームワーク領域ＦＲをさらに含み、前記フレームワーク領域ＦＲは、それぞれ、以下を含み、
（１）ＦＲ１は配列番号７０で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７１で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号７２で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列であり、又は
（２）ＦＲ１は配列番号７４で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７５で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号７６で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列であり、又は
（３）ＦＲ１は配列番号７７で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７８で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号７９で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列であり、又は
（４）ＦＲ１は配列番号８０で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７８で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号７９で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列であり、又は
（５）ＦＲ１は配列番号７０で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ２は配列番号７１で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ３は配列番号８１で示されるアミノ酸配列であり、ＦＲ４は配列番号７３で示されるアミノ酸配列であることを特徴とする前記［１２］又は［１３］に記載の二重特異性抗体。
［１６］
前記第２抗原結合部分が、
（ａ）配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示されるアミノ酸配列、
（ｂ） （ａ）と比べて、配列同一性が８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、又は９９％以上であるアミノ酸配列から選ばれることを特徴とする前記［１２］～［１５］のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
［１７］
前記第１抗原結合部分は、重鎖第１定常ドメインＣＨ１、軽鎖定常ドメインＶＬ及びＦｃ領域とＩｇＧ型構造を形成し、
前記第２抗原結合部分はリンカーによって前記ＩｇＧ型構造に接続されることを特徴とする前記［１２］～［１６］のいずれか一項に記載の二重特異性抗体。
［１８］
第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、前記第１抗原結合部分はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができ、
前記第１抗原結合部分は重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、
配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列を含み、
前記軽鎖可変領域は、
配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列を含み、
前記第２抗原結合部分はＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含み、
前記ＣＤＲ１は配列番号６０又は６３又は６６で示される配列を含み、
前記ＣＤＲ２は配列番号６１又は６４又は６７で示される配列を含み、
前記ＣＤＲ３は配列番号６２又は６５又は６８又は６９で示される配列を含み、
前記ＨＣＤＲ配列及び前記ＬＣＤＲ配列並びに前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とする二重特異性抗体。
［１９］
前記第１抗原結合部分が、以下から選ばれ、
（１）配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（２）配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（３）配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（４）配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（５）配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（６）配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列を有し、
前記第２抗原結合部分が、以下から選ばれ、
（１）ＣＤＲ１が配列番号６０で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２が配列番号６１で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３が配列番号６２で示されるアミノ酸配列であり、又は
（２）ＣＤＲ１が配列番号６３で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２が配列番号６４で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３が配列番号６５で示されるアミノ酸配列であり、又は
（３）ＣＤＲ１が配列番号６６で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２が配列番号６７で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３が配列番号６８で示されるアミノ酸配列であり、又は
（４）ＣＤＲ１が配列番号６０で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ２が配列番号６１で示されるアミノ酸配列であり、ＣＤＲ３が配列番号６９で示されるアミノ酸配列であり、
前記第１抗原結合部分は、重鎖第１定常ドメインＣＨ１、軽鎖定常ドメインＶＬ及びＦｃ領域とＩｇＧ型構造を形成し、前記第２抗原結合部分はリンカーによってＩｇＧ型構造に接続されることを特徴とする前記［１８］に記載の二重特異性抗体。
［２０］
前記第１抗原結合部分が、
（１）配列番号３６若しくは３７若しくは３８若しくは３９若しくは４０若しくは４１で示される重鎖可変領域と、配列番号４８若しくは４９若しくは５０若しくは５１若しくは５２若しくは５３で示される軽鎖可変領域と、又は
（２）配列番号４２若しくは４３若しくは４４若しくは４５若しくは４６若しくは４７で示される重鎖可変領域と、配列番号５４若しくは５５若しくは５６若しくは５７若しくは５８若しくは５９で示される軽鎖可変領域とを含み、
前記第２抗原結合部分が、
配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする前記［１９］に記載の二重特異性抗体。
［２１］
第１抗原結合部分及び第２抗原結合部分を含み、
前記第１抗原結合部分は、
配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含み、
前記第１抗原結合部分はＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と結合することができ、前記第２抗原結合部分はＰＤ－Ｌ１と結合することができることを特徴とする二重特異性抗体。
［２２］
前記第２抗原結合部分が、
配列番号８２又は８３又は８４又は８５又は８６又は８７又は８８又は８９又は９０又は９１で示されるアミノ酸のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含むことを特徴とする前記［２１］に記載の二重特異性抗体。
［２３］
ＴＧＦ－β、ＧＡＲＰ及び／又はＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と特異的に結合する第１抗原結合部分と、ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合する第２抗原結合部分とを含み、
重鎖第１定常ドメインＣＨ１と軽鎖定常ドメインＣＬとをさらに含み、前記第１抗原結合部分は、重鎖第１定常ドメインＣＨ１、軽鎖定常ドメインＣＬとそれぞれ共有結合され、
Ｆｃ領域をさらに含み、前記Ｆｃ領域はヒンジ領域によって重鎖第１定常ドメインＣＨ１に接続され、前記第２抗原結合部分はリンカーによってＦｃ領域に及び／又は軽鎖定常ドメインＣＬに接続されることを特徴とする二重特異性抗体。
［２４］
（ｉ）前記第２抗原結合部分がリンカーによって前記Ｆｃ領域のカルボキシ末端（Ｃ末端）に接続されたもの、
（ｉｉ）前記第２抗原結合部分がリンカーによって軽鎖定常ドメインのカルボキシ末端（Ｃ末端）に接続されたもの、
（ｉｉｉ）前記第２抗原結合部分の少なくとも一部が第１リンカーによってＦｃ領域のカルボキシ末端（Ｃ末端）に接続され、少なくとも一部が第２リンカーによって軽鎖定常ドメインのカルボキシ末端（Ｃ末端）に接続されたものから少なくとも１種選ばれることを特徴とする前記［２３］に記載の二重特異性抗体。
［２５］
少なくとも、下記の特性、即ち、
（ａ）ＰＤ－Ｌ１と特異的に結合すること、
（ｂ）糖タンパク質Ａ反復優勢配列（ＧＡＲＰ）と特異的に結合すること、
（ｃ）ＧＡＲＰ－ＴＧＦ－β複合体と特異的に結合すること、
（ｄ）ＴＧＦ－βと特異的に結合すること、
（ｅ）制御性Ｔ細胞の免疫抑制機能に対する阻害活性を有すること、
（ｆ）抗腫瘍活性を有すること
の１つを有することを特徴とする前記［２３］に記載の二重特異性抗体。
［２６］
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ただし、
配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列、又は配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列と、配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列、又は配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列に対して１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加を有する配列とを含み、
前記ＨＣＤＲ配列及び前記ＬＣＤＲ配列はＩＭＧＴスキームに基づいて得られることを特徴とするモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［２７］
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ただし、
（１）配列番号１、２及び３で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号１９、２０及び２１で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（２）配列番号４、５及び６で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２２、２３及び２４で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（３）配列番号７、８及び９で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２５、２０及び２６で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（４）配列番号１０、１１及び１２で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号２７、２８及び２９で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（５）配列番号１３、１４及び１５で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３０、３１及び３２で示されるＬＣＤＲ配列を有し、又は
（６）配列番号１６、１７及び１８で示されるＨＣＤＲ配列を有し、そして配列番号３３、３４及び３５で示されるＬＣＤＲ配列を有することを特徴とするモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［２８］
重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域は相補性決定領域ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、ただし、
ＨＣＤＲ１は配列番号１又は４又は７又は１０又は１３又は１６で示される配列を含み、
ＨＣＤＲ２は配列番号２又は５又は８又は１１又は１４又は１７で示される配列を含み、
ＨＣＤＲ３は配列番号３又は６又は９又は１２又は１５又は１８で示される配列を含み、
ＬＣＤＲ１は配列番号１９又は２２又は２５又は２７又は３０又は３３で示される配列を含み、
ＬＣＤＲ２は配列番号２０又は２３又は２８又は３１又は３４で示される配列を含み、
ＬＣＤＲ３は配列番号２１又は２４又は２６又は２９又は３２又は３５で示される配列を含むことを特徴とするモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［２９］
配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３配列と、配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３配列とを含むことを特徴とするモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［３０］
配列番号３６又は３７又は３８又は３９又は４０又は４１又は４２又は４３又は４４又は４５又は４６又は４７で示される配列と少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域と、
配列番号４８又は４９又は５０又は５１又は５２又は５３又は５４又は５５又は５６又は５７又は５８又は５９で示される配列と少なくとも、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域とを含むことを特徴とする前記［２６］～［２９］のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［３１］
配列番号３６で示される重鎖可変領域及び配列番号４８で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号３７で示される重鎖可変領域及び配列番号４９で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号３８で示される重鎖可変領域及び配列番号５０で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号３９で示される重鎖可変領域及び配列番号５１で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４０で示される重鎖可変領域及び配列番号５２で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４１で示される重鎖可変領域及び配列番号５３で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４２で示される重鎖可変領域及び配列番号５４で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４３で示される重鎖可変領域及び配列番号５５で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４４で示される重鎖可変領域及び配列番号５６で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４５で示される重鎖可変領域及び配列番号５７で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４６で示される重鎖可変領域及び配列番号５８で示される軽鎖可変領域、又は
配列番号４７で示される重鎖可変領域及び配列番号５９で示される軽鎖可変領域から選ばれることを特徴とする前記［２６］～［３０］のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［３２］
Ｆｃ領域をさらに含むことを特徴とする前記［２６］～［３１］のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片。
［３３］
前記［１］～［２５］のいずれか一項に記載の二重特異性抗体をコードし又は前記［２６］～［３２］のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片をコードすることを特徴とするポリヌクレオチド。
［３４］
前記［３３］に記載のポリヌクレオチドを含むことを特徴とする構築物。
［３５］
前記［３３］に記載のポリヌクレオチド又は前記［３４］に記載の構築物を含有することを特徴とする宿主細胞。
［３６］
前記［１］～［２５］のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は前記［２６］～［３２］のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片と、
薬学的に許容される担体とを含むことを特徴とする医薬組成物。
［３７］
前記［１］～［２５］のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は前記［２６］～［３２］のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片と、
前記二重特異性抗体又は前記モノクローナル抗体若しくは抗原結合断片に接続された機能性小分子とを含むことを特徴とする抗体複合体。
［３８］
前記［１］～［２５］のいずれか一項に記載の二重特異性抗体又は前記［２６］～［３２］のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を含むことを特徴とするキット。
［３９］
前記［３５］に記載の宿主細胞を培養することと、
培養物から二重特異性抗体又はモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を回収することとを含むことを特徴とする前記［１］～［２５］のいずれか一項に記載の二重特異性抗体を生産し又は前記［２６］～［３２］のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片を生産する方法。
［４０］
必要とする被験者に有効量の前記［１］～［２５］のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は前記［２６］～［３２］のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片、又は前記［３６］に記載の医薬組成物、又は前記［３７］に記載の抗体複合体を投与することを含むことを特徴とする疾患を予防及び／又は治療する方法。
［４１］
前記疾患は、がん又は自己免疫疾患から選ばれることを特徴とする前記［４０］に記載の方法。
［４２］
薬物又はキット又は抗体複合体の製造における前記［１］～［２５］のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、又は前記［２６］～［３２］のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体若しくは抗原結合断片の用途。

【国際調査報告】