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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-20
(54)【発明の名称】４員縮合環式化合物、並びにその調製方法及び使用
(51)【国際特許分類】
C07D 498/16 20060101AFI20240912BHJP
C07D 498/06 20060101ALI20240912BHJP
A61K 31/395 20060101ALI20240912BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240912BHJP
【ＦＩ】
C07D498/16 CSP
C07D498/06
A61K31/395
A61P35/02
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024543428
(86)(22)【出願日】2022-09-29
(85)【翻訳文提出日】2024-05-07
(86)【国際出願番号】 CN2022122536
(87)【国際公開番号】W WO2023051681
(87)【国際公開日】2023-04-06
(31)【優先権主張番号】202111161691.X
(32)【優先日】2021-09-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518402015
【氏名又は名称】江▲蘇▼豪森▲薬▼▲業▼集▲団▼有限公司
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100156144
【弁理士】
【氏名又は名称】落合 康
(72)【発明者】
【氏名】王 霄
(72)【発明者】
【氏名】丁 小華
(72)【発明者】
【氏名】陳 国輝
(72)【発明者】
【氏名】孫 運棟
(72)【発明者】
【氏名】王 小雷
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086AA04
4C086CB22
4C086GA13
4C086GA14
4C086MA01
4C086MA04
4C086ZB27
(57)【要約】
本発明は、４員縮合環式化合物、並びに、その調製方法及び使用に関し、特に、４員縮合環式化合物、その調製方法、及び治療的有効量の該化合物を含有する医薬組成物、並びに、チロシンキナーゼ阻害剤として、特に、ＡＢＬ１タンパク質、ＡＢＬ２関連タンパク質及びキメラタンパク質ＢＣＲ－ＡＢＬ１からなる群から選択されるタンパク質のチロシンキナーゼ活性を阻害する薬剤の調製における、その使用に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）で表される化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩であって、【化1】
環Ａは、Ｃ３～６シクロアルキル、４～７員ヘテロシクリル、Ｃ６～１０アリールまたは５～７員ヘテロアリールから選択され、
Ｒ１は、水素、重水素、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオまたはＣ１～６ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、ＮまたはＣＲａから選択され、
Ｍ２は、ＮＲａまたはＣ（Ｒａ）２から選択され、
Ｍ３は、ＮまたはＣＲａから選択され、
Ｒａは、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオまたはＣ１～６ハロアルコキシから選択され、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ３～６シクロアルキル、４～７員ヘテロシクリル、Ｃ６～１０アリールまたは５～７員ヘテロアリールから選択され、
ｎは、０、１、または２である、
前記化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
式中、環Ａは、Ｃ６～１０アリールまたは５～６員ヘテロアリールであり、
Ｒ１は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３重水素化アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３ヒドロキシアルキル、Ｃ１～３アルコキシ、Ｃ１３アルキルチオまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、ＮまたはＣＨから選択され、
Ｍ２は、ＮＨまたはＣＨ２から選択され、
Ｍ３は、ＮまたはＣＨから選択され、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３重水素化アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３ヒドロキシアルキル、Ｃ１～３アルコキシ、Ｃ１～３アルキルチオまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択される、
請求項１に記載の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項3】
式（Ｉ）がさらに、一般式（ＩＩ）または（ＩＩ－ａ）に記載のとおりである、請求項１または２に記載の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩：【化2】
【請求項4】
式中、環Ａは、フェニルまたはピリジルであり、
Ｒ１は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３アルコキシまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、Ｎであり、
Ｍ２は、ＮＨであり、
Ｍ３は、Ｎであり、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～３アルキルまたはＣ１～３ハロアルキルから選択される、
請求項３に記載の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項5】
式中、Ｒ１は、－ＣＦ２、－ＣＦ３、－ＣＦ２Ｃｌ、－ＯＣＦ２、－ＯＣＦ３または－ＯＣＦ２Ｃｌから選択され、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＦ２、－ＣＦ３または－ＣＦ２Ｃｌから選択される、
請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項6】
前記化合物の具体的な構造が以下のとおりである、請求項１に記載の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩：【化3】
【請求項7】
前記薬学的に許容される塩が、硫酸塩、塩酸塩、エチルスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、イセチオン酸塩または１，５－ナフタレンジスルホン酸塩から選択され、好ましくは、ｐ－トルエンスルホン酸塩である、請求項１～６のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項8】
治療的有効量の請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩、及び１つ以上の薬学的に許容される担体または賦形剤を含有する、医薬組成物。
【請求項9】
ＡＢＬ１及び／またはＢＣＲ－ＡＢＬ１チロシンキナーゼ阻害剤の調製における、請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩、及び請求項８に記載の医薬組成物の使用。
【請求項10】
白血病関連疾患の治療のための薬剤の調製における、請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩、及び請求項８に記載の医薬組成物の使用であって、好ましくは、前記白血病は、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、または急性リンパ芽球性白血病から選択される、前記使用。
【請求項11】
式（ＩＩ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を調製するための方法であって、【化4】
Ｘは、ハロゲンから選択され、
環Ａ、Ｒ１～Ｒ３及びＭ１～Ｍ３は、請求項３に定義されたとおりであるか、
または、
【化5】
任意に、化合物（ＩＩ）を、酸と反応させて塩化合物を調製し、
Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は、それぞれ独立してハロゲンから選択され、
環Ａ、Ｒ１～Ｒ３及びＭ１～Ｍ３の定義は、一般式（ＩＩ）で定義したとおりであり、好ましくは、Ｍ３は、Ｎであり、
前記酸は、好ましくは、ｐ－トルエンスルホン酸である、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、医学生物学の分野に属し、具体的には、４員縮合環式化合物、並びにその調製方法及び使用に関する。本発明はさらに、がん及び他の関連疾患の治療における薬学的に許容されるその塩及びその薬学的組成物の使用に関する。
【背景技術】
【0002】
ＡＢＬ１タンパク質のチロシンキナーゼ活性は、通常厳密に制御されており、ここではＳＨ３ドメインのＮ末端キャッピング領域が重要な役割を果たしている。制御機構の１つは、Ｎ末端キャッピンググリシン２残基のミリストイル化に関与しており、これは次にＳＨ１触媒ドメインのミリスチン酸結合部位と相互作用する。慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）のマーカーは、造血幹細胞のｔ（９，２２）染色体の相互転座によって形成されるフィラデルフィア染色体（Ｐｈ）である。この染色体は、Ｎ末端キャップを欠き、構成的に活性なチロシンキナーゼドメインを有するキメラＢＣＲ－ＡＢＬ１タンパク質をコードする、ＢＣＲ－ＡＢＬ１発がん遺伝子を保有している。ＢＣＲ－ＡＢＬ１タンパク質のチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）はＣＭＬ患者の標準治療法であり、イマチニブ、ニロチニブ、ダサチニブは、新たにＣＭＬと診断された患者の治療として承認されている。
【0003】
しかし、一部の患者は、ＳＨＩドメインの変異により阻害剤の結合が損なわれる薬剤耐性クローンを発生する。ニロチニブ及びダサチニブは両方とも、ＢＣＲ－ＡＢＬ１の多くのイマチニブ耐性変異型に対して有効性を保持しているが、スレオニン３１５残基がイソロイシンに置換される変異（Ｔ３１５Ｉ）は、３つの薬剤すべてに対して非感受性であり、ＣＭＬ患者に治療耐性が生じる原因となり得る。したがって、Ｔ３１５ＩなどのＢＣＲ－ＡＢＬ１変異の阻害は、依然として医学的ニーズを満たしていない。ＣＭＬに加えて、ＢＣＲ－ＡＢＬ１融合タンパク質は、一定の割合で急性リンパ芽球性白血病の原因ともなる。ＡＢＬキナーゼ活性を標的とする薬剤も、この適応症に使用することができる。したがって、臨床的にはさらに多くのＢＣＲ－ＡＢＬ１阻害剤が必要とされている。
【発明の概要】
【0004】
本発明の目的は、式（Ｉ）で表される化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を提供することであり、
式中、
環Ａは、Ｃ３～６シクロアルキル、４～７員ヘテロシクリル、Ｃ６～１０アリールまたは５～７員ヘテロアリールから選択され、
Ｒ１は、水素、重水素、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオまたはＣ１～６ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、ＮまたはＣＲａから選択され、
Ｍ２は、ＮＲａまたはＣ（Ｒａ）２から選択され、
Ｍ３は、ＮまたはＣＲａから選択され、
Ｒａは、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオまたはＣ１～６ハロアルコキシから選択され、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ３～６シクロアルキル、４～７員ヘテロシクリル、Ｃ６～１０アリールまたは５～７員ヘテロアリールから選択され、
ｎは、０、１、または２である。
【化1】
環Ａは、Ｃ３～６シクロアルキル、４～７員ヘテロシクリル、Ｃ６～１０アリールまたは５～７員ヘテロアリールから選択され、
Ｒ１は、水素、重水素、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオまたはＣ１～６ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、ＮまたはＣＲａから選択され、
Ｍ２は、ＮＲａまたはＣ（Ｒａ）２から選択され、
Ｍ３は、ＮまたはＣＲａから選択され、
Ｒａは、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオまたはＣ１～６ハロアルコキシから選択され、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ３～６シクロアルキル、４～７員ヘテロシクリル、Ｃ６～１０アリールまたは５～７員ヘテロアリールから選択され、
ｎは、０、１、または２である。
【0005】
本発明の好ましい実施形態では、式（Ｉ）で表される化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩が提供され、式中、
環Ａは、Ｃ６～１０アリールまたは５～６員ヘテロアリールであり、
Ｒ１は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３重水素化アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３ヒドロキシアルキル、Ｃ１～３アルコキシ、Ｃ１３アルキルチオまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、ＮまたはＣＨから選択され、
Ｍ２は、ＮＨまたはＣＨ２から選択され、
Ｍ３は、ＮまたはＣＨから選択され、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３重水素化アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３ヒドロキシアルキル、Ｃ１～３アルコキシ、Ｃ１～３アルキルチオまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択される。
環Ａは、Ｃ６～１０アリールまたは５～６員ヘテロアリールであり、
Ｒ１は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３重水素化アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３ヒドロキシアルキル、Ｃ１～３アルコキシ、Ｃ１３アルキルチオまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、ＮまたはＣＨから選択され、
Ｍ２は、ＮＨまたはＣＨ２から選択され、
Ｍ３は、ＮまたはＣＨから選択され、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３重水素化アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３ヒドロキシアルキル、Ｃ１～３アルコキシ、Ｃ１～３アルキルチオまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択される。
【0006】
本発明の好ましい実施形態では、式（Ｉ）で表される化合物はさらに、一般式（ＩＩ）で説明される通りである。
【化2】
【0007】
本発明の好ましい実施形態では、式（Ｉ）で表される化合物はさらに、一般式（ＩＩ－ａ）で説明される通りである。
【化3】
【0008】
本発明の好ましい実施形態では、式（Ｉ）で表される化合物はさらに、一般式（ＩＩ－ｂ）で説明される通りである。
【化4】
【0009】
本発明のより好ましい実施形態では、環Ａは、フェニルまたはピリジルであり、
Ｒ１は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３アルコキシまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、Ｎであり、
Ｍ２は、ＮＨであり、
Ｍ３は、Ｎであり、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～３アルキルまたはＣ１～３ハロアルキルから選択される。
Ｒ１は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３アルコキシまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、Ｎであり、
Ｍ２は、ＮＨであり、
Ｍ３は、Ｎであり、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～３アルキルまたはＣ１～３ハロアルキルから選択される。
【0010】
本発明のさらに好ましい実施形態では、Ｒ１は、－ＣＦ２、－ＣＦ３、－ＣＦ２Ｃｌ、－ＯＣＦ２、－ＯＣＦ３または－ＯＣＦ２Ｃｌから選択され、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、－ＣＨ３、－ＣＦ２、－ＣＦ３または－ＣＦ２Ｃｌから選択される。
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、－ＣＨ３、－ＣＦ２、－ＣＦ３または－ＣＦ２Ｃｌから選択される。
【0011】
本発明のさらに好ましい実施形態では、以下の特定の化合物が含まれる：
【化5】
【0012】
本発明の好ましい実施形態では、薬学的に許容される塩は、硫酸塩、塩酸塩、エチルスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ヒドロキシエチルスルホン酸塩または１，５－ナフタレンジスルホン酸塩から選択され、より好ましくはｐ－トルエンスルホン酸塩である。
【0013】
別の態様では、本発明は、式（ＩＩＩ）で表されるトルエンスルホン酸塩化合物を提供し、
式中、
環Ａは、Ｃ３～６シクロアルキル、４～７員ヘテロシクリル、Ｃ６～１０アリールまたは５～７員ヘテロアリールから選択され、
Ｒ１は、水素、重水素、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオまたはＣ１～６ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、ＮまたはＣＲａから選択され、
Ｍ２は、ＮＲａまたはＣ（Ｒａ）２から選択され、
Ｍ３は、ＮまたはＣＲａから選択され、
Ｒａは、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオまたはＣ１～６ハロアルコキシから選択され、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ３～６シクロアルキル、４～７員ヘテロシクリル、Ｃ６～１０アリールまたは５～７員ヘテロアリールから選択され、
ｎは、０、１、または２である。
【化6】
環Ａは、Ｃ３～６シクロアルキル、４～７員ヘテロシクリル、Ｃ６～１０アリールまたは５～７員ヘテロアリールから選択され、
Ｒ１は、水素、重水素、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオまたはＣ１～６ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、ＮまたはＣＲａから選択され、
Ｍ２は、ＮＲａまたはＣ（Ｒａ）２から選択され、
Ｍ３は、ＮまたはＣＲａから選択され、
Ｒａは、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオまたはＣ１～６ハロアルコキシから選択され、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ３～６シクロアルキル、４～７員ヘテロシクリル、Ｃ６～１０アリールまたは５～７員ヘテロアリールから選択され、
ｎは、０、１、または２である。
【0014】
本発明の好ましい実施形態では、環Ａは、Ｃ６～１０アリールまたは５～６員ヘテロアリールであり、
Ｒ１は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３重水素化アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３ヒドロキシアルキル、Ｃ１～３アルコキシ、Ｃ１３アルキルチオまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、ＮまたはＣＨから選択され、
Ｍ２は、ＮＨまたはＣＨ２から選択され、
Ｍ３は、ＮまたはＣＨから選択され、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３重水素化アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３ヒドロキシアルキル、Ｃ１～３アルコキシ、Ｃ１～３アルキルチオまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択される。
Ｒ１は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３重水素化アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３ヒドロキシアルキル、Ｃ１～３アルコキシ、Ｃ１３アルキルチオまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、ＮまたはＣＨから選択され、
Ｍ２は、ＮＨまたはＣＨ２から選択され、
Ｍ３は、ＮまたはＣＨから選択され、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３重水素化アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３ヒドロキシアルキル、Ｃ１～３アルコキシ、Ｃ１～３アルキルチオまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択される。
【0015】
本発明の好ましい実施形態では、式（ＩＩＩ）はさらに、一般式（ＩＶ）または（ＩＶ－ａ）で説明される通りである：
【化7】
【0016】
本発明の好ましい実施形態では、環Ａは、フェニルまたはピリジルであり、
Ｒ１は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３アルコキシまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、Ｎであり、
Ｍ２は、ＮＨであり、
Ｍ３は、Ｎであり、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～３アルキルまたはＣ１～３ハロアルキルから選択される。
Ｒ１は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ１～３ハロアルキル、Ｃ１～３アルコキシまたはＣ１～３ハロアルコキシから選択され、
Ｍ１は、Ｎであり、
Ｍ２は、ＮＨであり、
Ｍ３は、Ｎであり、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１～３アルキルまたはＣ１～３ハロアルキルから選択される。
【0017】
本発明の好ましい実施形態では、Ｒ１は、－ＣＦ２、－ＣＦ３、－ＣＦ２Ｃｌ、－ＯＣＦ２、－ＯＣＦ３または－ＯＣＦ２Ｃｌから選択され、
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＦ２、－ＣＦ３または－ＣＦ２Ｃｌから選択される。
Ｒ２またはＲ３は、それぞれ独立して、－ＣＨ３、－ＣＨ２ＣＨ３、－ＣＦ２、－ＣＦ３または－ＣＦ２Ｃｌから選択される。
【0018】
本発明の好ましい実施形態では、ｐ－トルエンスルホン酸塩は、以下の化合物から選択される：
【化8-1】
【化8-2】
【0019】
本発明のさらなる目的は、式（ＩＩ）で表される化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を調製する方法を提供することであり、
式中、化合物１及び化合物２は、置換を受けて化合物３を調製し、化合物５は、ホウ酸化合物４の作用下で調製され、化合物５を酸性条件下で環式化合物６に調整し、これを化合物７との縮合に供して化合物（ＩＩ）、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を調製し、
任意に、化合物（ＩＩ）を、酸と反応させて塩化合物を調製し、
Ｘは、ハロゲンから選択され、
環Ａ、Ｒ１～Ｒ３及びＭ１～Ｍ３の定義は、一般式（ＩＩ）で定義したとおりであり、
酸は、好ましくは、ｐ－トルエンスルホン酸である。
【化9】
任意に、化合物（ＩＩ）を、酸と反応させて塩化合物を調製し、
Ｘは、ハロゲンから選択され、
環Ａ、Ｒ１～Ｒ３及びＭ１～Ｍ３の定義は、一般式（ＩＩ）で定義したとおりであり、
酸は、好ましくは、ｐ－トルエンスルホン酸である。
【0020】
本発明のさらなる目的は、式（ＩＩ）で表される化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩を調製する方法を提供することであり、
化合物１－ａは、化合物２で置換されて化合物３－ａが調製され、これが３－ｂと反応して化合物５－ａが調製され、化合物６－ａは、ホウ酸化合物４の作用下で化合物５－ａから調製され、化合物６－ａ及び化合物７が縮合して化合物（ＩＩ）が調製され、
任意に、化合物（ＩＩ）を、酸と反応させて塩化合物を調製し、
Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は、それぞれ独立してハロゲンから選択され、
環Ａ、Ｒ１～Ｒ３及びＭ１～Ｍ３の定義は、一般式（ＩＩ）で定義したとおりであり、好ましくは、Ｍ３は、Ｎであり、
酸は、好ましくは、ｐ－トルエンスルホン酸である。
【化10】
任意に、化合物（ＩＩ）を、酸と反応させて塩化合物を調製し、
Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は、それぞれ独立してハロゲンから選択され、
環Ａ、Ｒ１～Ｒ３及びＭ１～Ｍ３の定義は、一般式（ＩＩ）で定義したとおりであり、好ましくは、Ｍ３は、Ｎであり、
酸は、好ましくは、ｐ－トルエンスルホン酸である。
【0021】
本出願のさらなる目的は、治療的有効量の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩、及び１つ以上の薬学的に許容される担体または賦形剤を含有する医薬組成物を提供することである。
【0022】
本発明はさらに、エーベルソンタンパク質（ＡＢＬ１）、エーベルソン関連タンパク質（ＡＢＬ２）及びキメラタンパク質ＢＣＲ－ＡＢＬ１から選択されるタンパク質のチロシンキナーゼ酵素活性を阻害するための薬剤の調製における、式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩、及び医薬組成物の使用を提供する。
【0023】
本発明はさらに、白血病関連疾患の薬剤の調製における、式（Ｉ）の化合物、その立体異性体またはその薬学的に許容される塩、及びその医薬組成物の使用を提供する。
【0024】
本発明の好ましい実施形態では、白血病は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、または急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である。
【0025】
本発明のより好ましい実施形態では、ＣＭＬは、イマチニブ、ニロチニブ及びダサチニブなどの１つ以上の標準治療による治療に抵抗性であり、ＡＭＬは、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）または骨髄増殖性疾患（ＭＰＮ）の後に発症する続発性ＡＭＬである。
【0026】
（発明の詳細な説明）
本明細書及び特許請求の範囲において使用される用語は、別段断りがない限り、以下の意味を有する。
本明細書及び特許請求の範囲において使用される用語は、別段断りがない限り、以下の意味を有する。
【0027】
「アルキル」という用語は、飽和脂肪族炭化水素基を指し、これは、１～２０個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖の基であり、好ましくは、１～８個の炭素原子を含むアルキル、より好ましくは、１～６個の炭素原子のアルキル、最も好ましくは、１～３個の炭素原子のアルキルである。非限定的な例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルプロピル、１，２－ジメチルプロピル、２，２－ジメチルプロピル、１－エチルプロピル、２－メチルブチル、３－メチルブチル、ｎ－ヘキシル、１－エチル－２－メチルプロピル、１，１，２－トリメチルプロピル、１，１－ジメチルブチル、１，２－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、１，３－ジメチルブチル、２－エチルブチル、２－メチルペンチル、３－メチルペンチル、４－メチルペンチル、２，３－ジメチルブチル、ｎ－ヘプチル、２－メチルヘキシル、３－メチルヘキシル、４－メチルヘキシル、５－メチルヘキシル、２，３－ジメチルペンチル、２，４－ジメチルペンチル、２，２－ジメチルペンチル、３，３－ジメチルペンチル、２－エチルペンチル、３－エチルペンチル、ｎ－オクチル、２，３－ジメチルヘキシル、２，４－ジメチルヘキシル、２，５－ジメチルヘキシル、２，２－ジメチルヘキシル、３，３－ジメチルヘキシル、４，４－ジメチルヘキシル、２－エチルヘキシル、３－エチルヘキシル、４－エチルヘキシル、２－メチル－２－エチルペンチル、２－メチル－３－エチルペンチル、ｎ－ノニル、２－メチル－２－エチルヘキシル、２－メチル－３－エチルヘキシル、２，２－ジエチルペンチル、ｎ－デシル、３，３－ジエチルヘキシル、２，２－ジエチルヘキシル、及びそれらの様々な分岐異性体等が挙げられる。より好ましいものは、１～６個の炭素原子を含む低級アルキルであり、非限定的な例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルプロピル、１，２－ジメチルプロピル、２，２－ジメチルプロピル、１－エチルプロピル、２－メチルブチル、３－メチルブチル、ｎ－ヘキシル、１－エチル－２－メチルプロピル、１，１，２－トリメチルプロピル、１，１－ジメチルブチル、１，２－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、１，３－ジメチルブチル、２－エチルブチル、２－メチルペンチル、３－メチルペンチル、４－メチルペンチル、２，３－ジメチルブチル等が挙げられる。アルキルは、置換されていても置換されていなくてもよく、置換される場合、置換基は、可能な任意の結合点で置換され得る。置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、メルカプト、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、オキソ、カルボキシルまたはカルボキシレートから独立して選択される１つ以上の基である。本発明においては、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ－ブチル、ハロアルキル、重水素化アルキル、アルコキシ置換アルキル、及びヒドロキシル置換アルキルが好ましい。
【0028】
「シクロアルキル」という用語は、飽和または部分不飽和の単環式または多環式の環式炭化水素置換基を指す。シクロアルキル環は、３～２０個の炭素原子、好ましくは、３～１２個の炭素原子、より好ましくは、３～８個の炭素原子、最も好ましくは、３～６個の炭素原子を含む。単環式シクロアルキルの非限定的な例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロヘプタトリエニル、シクロオクチル等が挙げられ、多環式シクロアルキルとしては、スピロ、縮合及び架橋シクロアルキル、好ましくは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロヘキシル、シクロペンチル及びシクロヘプチルが挙げられる。
【0029】
「スピロシクロアルキル」という用語は、単環が単一の炭素原子（スピロ原子と呼ばれる）を共有する５～２０員の多環式基を指し、その炭素原子には１つ以上の二重結合が含まれる場合があるが、どの環も完全に共役したπ電子系を持たない。好ましくは、それは６～１４員であり、より好ましくは、７～１０員である。スピロシクロアルキルは、環間で共有されるスピロ原子の数に応じて、モノスピロシクロアルキル、ビスピロシクロアルキルまたはポリスピロシクロアルキルに分けられ、好ましくは、モノスピロシクロアルキル及びビスピロシクロアルキルである。より好ましくは、３員／６員、３員／５員、４員／４員、４員／５員、４員／６員、５員／５員または５員／６員モノスピロシクロアルキルである。スピロシクロアルキルの非限定的な例としては以下が挙げられる：
【化11】
【0030】
また、モノスピロシクロアルキル及びヘテロシクロアルキルがスピロ原子を共有するスピロシクロアルキルも含まれ、非限定的な例としては以下が挙げられる：
【化12】
【0031】
「縮合シクロアルキル」という用語は、５～２０員の全炭素多環式基を指し、系内の各環は、系内の他の環と隣接する一対の炭素原子を共有しており、１つ以上の環が、１つ以上の二重結合を含み得るが、どの環も完全に共役したπ電子系を持っていない。好ましくは、それは６～１４員であり、より好ましくは、７～１０員である。構成環の数に応じて、二環式、三環式、四環式または多環式縮合シクロアルキルに分けることができ、好ましくは、二環式または三環式、より好ましくは、５員／５員または５員／６員の二環式アルキルである。縮合シクロアルキルの非限定的な例としては以下が挙げられる：
【化13】
【0032】
「架橋シクロアルキル」という用語は、５～２０員の全炭素多環式基を指し、任意の２つの環が、直接結合していない２つの炭素原子を共有しており、１つ以上の二重結合を含み得るが、どの環も完全に共役したπ電子系を持っていない。好ましくは、それは６～１４員であり、より好ましくは、７～１０員である。構成環の数に応じて、二環式、三環式、四環式または多環式架橋シクロアルキルに分けることができ、好ましくは二環式、三環式または四環式、より好ましくは、二環式または三環式である。架橋シクロアルキルの非限定的な例としては以下が挙げられる：
【化14】
【0033】
「ヘテロシクリル」という用語は、３～２０個の環式原子を含む飽和または部分的に不飽和の単環式または多環式炭化水素置換基を指し、１つ以上の環式原子が、窒素、酸素、Ｃ（Ｏ）またはＳ（Ｏ）ｍ（ｍは０～２の整数）から選択されるヘテロ原子であるが、－Ｏ－Ｏ－、－Ｏ－Ｓ－、または－Ｓ－Ｓ－の環式部分を除き、残りの環式原子は炭素である。好ましくは、３～１２個の環原子を含み、そのうち１～４個はヘテロ原子であり、より好ましくは、３～８個の環原子を含み、最も好ましくは、３～８個の環原子を含み、さらに好ましくは、１～３個の窒素原子を含む３～８員ヘテロシクリルであり、任意に、１～２個の酸素原子、硫黄原子、またはオキソ基で置換されている。窒素含有単環式ヘテロシクリル、窒素含有スピロヘテロシクリル、または窒素含有縮合ヘテロシクリルが含まれる。
【0034】
単環式ヘテロシクリルの非限定的な例としては、オキセタニル、アゼチジニル、チエタニル、ピロリジニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロフラニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピロリル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ホモピペラジニル、アゼパニル、１，４－ジアゼパニル、ピラニル、またはテトラヒドロチオピラニルジオキシド等；好ましくは、オキセタニル、アゼチジニル、チエタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロチオピラニルジオキシド、ピロリジニル、モルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ヘキサヒドロピラジニル、ヘキサヒドロピリミジニル、アゼパニル、１，４－ジアゼパニル及びピペラジニル；及び、より好ましくは、ピペリジニル、ピペラジニル、ピロリジニル、モルホリニル、オキセタニルまたはアゼチジニルが挙げられる。多環式ヘテロシクリルには、スピロ、縮合及び架橋ヘテロシクリルが含まれ、関与するスピロ、縮合及び架橋ヘテロシクリルは、任意に、単結合を介して他の基に接続されるか、または環上の任意の２つ以上の原子を介して他のシクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール及びヘテロアリールにさらに接続される。
【0035】
「スピロヘテロシクリル」という用語は、単環が１つの原子（スピロ原子と呼ばれる）を共有する５～２０員多環式ヘテロ環基を指し、環原子の１つ以上が、窒素、酸素、またはＳ（Ｏ）ｍ（ｍは０～２の整数）から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は、炭素である。１つ以上の二重結合を含み得るが、どの環も完全に共役したπ電子系を持っていない。好ましくは、それは５～１２員であり、より好ましくは、７～１０員である。スピロヘテロシクリルは、環間で共有されるスピロ原子の数に応じて、モノスピロヘテロシクリル、ビスピロヘテロシクリルまたはポリスピロヘテロシクリルに分けられ、好ましくは、モノスピロヘテロシクリル及びビスピロヘテロシクリルである。より好ましくは、３員／５員、３員／６員、４員／４員、４員／５員、４員／６員、５員／５員または５員／６員モノスピロヘテロシクリルである。スピロヘテロシクリルの非限定的な例としては以下が挙げられる：
【化15】
【0036】
「縮合ヘテロシクリル」という用語は、５～２０員の多環式ヘテロ環基を指し、系内の各環は系内の他の環と隣接する一対の原子を共有しており、１つ以上の環が、１つ以上の二重結合を含み得るが、どの環も完全に共役したπ電子系を持たず、１つ以上の環原子が、窒素、酸素、またはＳ（Ｏ）ｍ（ｍは０～２の整数）から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は、炭素である。好ましくは、それは６～１４員であり、より好ましくは、７～１０員である。構成環の数に応じて、二環式、三環式、四環式または多環式縮合ヘテロシクリルに分けることができ、好ましくは、二環式または三環式、より好ましくは、５員／５員または５員／６員の二環式縮合ヘテロシクリルである。縮合ヘテロシクリルの非限定的な例としては以下が挙げられる：
【化16】
【0037】
「架橋ヘテロシクリル」という用語は、５～１４員の多環式ヘテロ環基を指し、任意の２つの環は、直接接続されていない２つの原子を共有しており、１つ以上の二重結合を含み得るが、どの環も完全に共役したπ電子系を持たず、１つ以上の環原子が、窒素、酸素、またはＳ（Ｏ）ｍ（ｍは０～２の整数）から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は、炭素である。好ましくは、それは６～１４員であり、より好ましくは、６～１０員である。構成環の数に応じて、二環式、三環式、四環式または多環式架橋ヘテロシクリルに分けることができ、好ましくは二環式、三環式または四環式、より好ましくは、二環式または三環式である。架橋ヘテロシクリルの非限定的な例としては以下が挙げられる：
【化17】
【0038】
ヘテロシクリル環は、アリール、ヘテロアリール、またはシクロアルキル環に縮合していてもよく、親構造に接続している環はヘテロシクリルであり、その非限定的な例には、以下が挙げられる：
【化18】
【0039】
ヘテロシクリルは、任意に、置換されていても、置換されていなくてもよい。置換されている場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、メルカプト、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、オキソ、カルボキシルまたはカルボキシレートから独立して選択される１つ以上の基である。
【0040】
「アリール」という用語は、フェニル及びナフチルなど、共役したπ電子系を有する、６員～１４員、好ましくは、６員～１０員全炭素単環式または縮合多環式（すなわち、隣接する一対の炭素原子を共有する環）基である。より好ましくは、フェニルである。アリール環は、ベンゾ－３～８員シクロアルキル、ベンゾ－３～８員ヘテロアルキル、好ましくは、ベンゾ－３～６員シクロアルキル、ベンゾ－３～６員ヘテロアルキルを含む、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはシクロアルキル環に縮合することができ、ヘテロシクリルは、１～３個の窒素原子、酸素原子、及び硫黄原子を含むか、または、ベンゼン環を含む３員窒素含有縮合環も含む、ヘテロ環基であり、親構造に接続している環は、アリール環である。
【0041】
アリールは、置換されていても非置換であってもよい。置換されている場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、メルカプト、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、カルボキシルまたはカルボキシレートから独立して選択される１つ以上の基である。
【0042】
「ヘテロアリール」という用語は、１～４個のヘテロ原子及び５～１４個の環原子を含むヘテロ芳香族系を指し、ヘテロ原子は、酸素、硫黄及び窒素から選択される。ヘテロアリールは、好ましくは、５～１０員、より好ましくは、５員または６員であり、例えばイミダゾリル、フリル、チエニル、チアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、ピロリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジニル、チアジアゾリル、ピラジニル等であり、好ましくは、トリアゾリル、チエニル、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、ピリミジニルまたはチアゾリル、より好ましくは、ピラゾリル及びオキサゾリルである。ヘテロアリール環は、アリール、ヘテロシクリル、またはシクロアルキル環に縮合していてもよく、親構造に接続している環は、ヘテロアリール環であり、その非限定的な例には、以下が挙げられる：
【化19】
【0043】
「アルコキシ」という用語は、－Ｏ－（アルキル）及び－Ｏ－（非置換シクロアルキル）を指し、アルキルは上で定義したとおりである。アルコキシの非限定的な例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、シクロプロポキシ、シクロブトキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシが挙げられる。アルコキシは、任意に、置換されていても、置換されていなくてもよい。置換されている場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、メルカプト、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、カルボキシルまたはカルボキシレートから独立して選択される１つ以上の基である。
【0044】
「ハロアルキル」という用語は、１つ以上のハロゲンで置換されたアルキルを指し、アルキルは、上で定義したとおりである。
【0045】
「ハロアルコキシ」という用語は、１つ以上のハロゲンで置換されたアルコキシを指し、アルコキシは、上で定義したとおりである。
【0046】
「ヒドロキシアルキル」という用語は、ヒドロキシルで置換されたアルキルを指し、アルキルは、上で定義したとおりである。
【0047】
「アルキルチオ」という用語は、－Ｓ－（アルキル）及び－Ｓ－（非置換シクロアルキル）を指し、アルキルは、上で定義したとおりである。アルキルチオの非限定的な例としては、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、ブチルチオ、シクロプロピルチオ、シクロブチルチオ、シクロペンチルチオ、及びシクロヘキシルチオが挙げられる。アルキルチオは、任意に、置換されていても、置換されていなくてもよく、置換されている場合、置換基は、好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、メルカプト、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、カルボキシルまたはカルボキシレートから独立して選択される１つ以上の基である。
【0048】
「アルケニル」とは、アルキレン基としても知られるアルケニルを指し、２～２０個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖基であり、好ましくは、２～８個の炭素原子を含むアルケニル、より好ましくは、２～６個の炭素原子を含むアルケニル、最も好ましくは、２～４個の炭素原子を含むアルケニルである。アルケニルは、さらに他の関連する基、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、メルカプト、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、カルボキシルまたはカルボキシレートで置換されていてもよい。
【0049】
「アルキニル」という用語は、２～２０個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖の基を指し、好ましくは、２～８個の炭素原子を含むアルキニル、より好ましくは、２～６個の炭素原子を含むアルキニル、最も好ましくは、２～４個の炭素原子を含むアルキニルである。アルキニルは、さらに他の関連する基、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、メルカプト、ヒドロキシル、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、カルボキシルまたはカルボキシレートで置換されていてもよい。
【0050】
「ヒドロキシル」は、－ＯＨ基を指す。
【0051】
「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を指す。
【0052】
「アミノ」は、－ＮＨ２を示す。
【0053】
「シアノ」は、－ＣＮを指す。
【0054】
「Ｘは、Ａ、Ｂ、またはＣから選択される」、「Ｘは、Ａ、Ｂ、及びＣから選択される」、「Ｘは、Ａ、Ｂ、またはＣである」、及び「Ｘは、Ａ、Ｂ、及びＣである」は、異なる表現で同じことを意味しており、それは、Ｘは、Ａ、Ｂ、及びＣのいずれか１つ以上であるということである。
【0055】
本発明に記載の水素原子は、その同位体重水素で置き換えることができ、本発明に関与する例示的な化合物中の任意の水素原子も重水素原子で置き換えることができる。
【0056】
「任意の」または「任意に」とは、続いて記載される事象または状況が発生する場合があるが必ずしも発生せず、その記載が、事象または状況が発生する場合と発生しない場合とを含むことを意味する。例えば、「アルキルで任意に置換されるヘテロ環基」とは、アルキルが存在してもよいが、存在する必要はないことを意味し、ヘテロ環基がアルキルで置換されている場合とヘテロ環基がアルキルで置換されていない場合を含めて記載される。
【0057】
「置換される」とは、基中の１つ以上の水素原子、好ましくは、最大５個、より好ましくは、１～３個の水素原子が、対応する数の置換基で独立して置換されることを意味する。言うまでもなく、置換基は可能な化学位置にのみ存在し、当業者は過度の努力をせずに（実験的または理論的に）可能な置換または不可能な置換を決定することができる。例えば、遊離水素を有するアミノまたはヒドロキシルは、不飽和結合（オレフィン結合など）で炭素原子に結合すると不安定になる可能性がある。任意の置換基としては、重水素、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、シアノ、オキソ、チオ、アルキル、アルケニル、アルキニル、重水素化アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ハロアルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール及びヘテロアリールのうちの１つ以上が挙げられ、好ましくは、重水素、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシル、シアノ、オキソ、チオ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ２～６アルキニル、Ｃ１～６重水素化アルキル、Ｃ１～６ハロアルキル、Ｃ１～６ヒドロキシアルキル、Ｃ１～６アルコキシ、Ｃ１～６アルキルチオ、Ｃ１～６ハロアルコキシ、Ｃ３～１２シクロアルキル、３～１２員ヘテロシクリル、Ｃ６～１４アリール及び５～１４員ヘテロアリールである。
【0058】
「医薬組成物」とは、本明細書に記載される１つ以上の化合物またはその生理学的／薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグと、他の化学成分、及び生理学的／薬学的に許容される担体及び賦形剤などの他の成分との混合物を意味する。医薬組成物の目的は、生体への投与を容易にし、活性成分の吸収を促進して生物活性を発揮することである。
【0059】
「薬学的に許容される塩」とは、哺乳動物に使用した場合に安全かつ有効であり、望ましい生物学的活性を有する本発明の化合物の塩を指す。
【発明を実施するための形態】
【0060】
実施例を参照して本発明を以下にさらに説明するが、これらの実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。
【0061】
実施例１（３Ｒ）－Ｎ－（４－（クロロジフルオロメトキシ）フェニル）－２－（ジフルオロメチル）－３－メチル－３，４，５ａ，６－テトラヒドロ－５－オキサ－１，２ａ，６，８－テトラアザベンゾ［４，５］シクロオクチル［１，２，３－ｃｄ］インデン－１１－カルボキサミドｐ－トルエンスルホン酸塩
方法１：
ステップ１：メチル７－ブロモ－２－（ジフルオロメチル）－１Ｈ－ジフルオロメチル－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－５－カルボキシレートの合成
１００ｍＬの反応フラスコに、２０ｇのメチル３，４－ジアミノ－５－ブロモ安息香酸、６０ｍＬのジフルオロ酢酸を加え、１０～３０分間撹拌し、３回の窒素置換に供した。温度を７０℃に加熱し、反応物を１８～２０時間撹拌した。反応終了後、１００ｍＬの酢酸エチルを加え、重炭酸ナトリウム水溶液で有機相をｐＨ＝７に調整し、混合物を５～１０分間撹拌した。有機相を収集し、水相を廃棄した。有機相を、５０ｍＬの塩化ナトリウム溶液を添加して洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。系を濾過し、濃縮乾固し、カラムクロマトグラフィーに供し、２２．３ｇの生成物を、収率９０％で得た。
【化20】
ステップ１：メチル７－ブロモ－２－（ジフルオロメチル）－１Ｈ－ジフルオロメチル－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－５－カルボキシレートの合成
【化21】
【0062】
ステップ２：メチル（Ｒ）－７－ブロモ－２－（ジフルオロメチル）－１－［１－ヒドロキシプロパ－２－イル］－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－５－カルボキシレートの合成
５００ｍＬの反応フラスコに、２０ｇのメチル７－ブロモ－２－（ジフルオロメチル）－１Ｈ－ジフルオロメチル－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－５－カルボキシレート、４．８ｇのセチルトリメチルアンモニウムブロミド、１８．１ｇの炭酸カリウム、及び２００ｍＬのアセトニトリルを加え、室温で撹拌しながら９．３ｇ／５０ｍＬの（Ｓ）－２－クロロ－１－プロパノール／アセトニトリル溶液を滴加した。滴加終了後、混合物を加熱して還流させ８時間反応させた。反応終了後、反応混合物を室温まで冷却し、氷水に注いで固体を沈殿させ、カラムクロマトグラフィーで精製して、１６．３ｇの生成物を、収率６０％で得た。
【化22】
【0063】
ステップ３：メチル（Ｒ）－２－（ジフルオロメチル）－１－［１－ヒドロキシプロパ－２－イル］－７－（ピリミジン－５－イル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－５－カルボキシレートの合成
２５０ｍＬの三口フラスコに、１５ｇのメチル（Ｒ）－７－ブロモ－２－（ジフルオロメチル）－１－［１－ヒドロキシプロパ－２－イル］－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－５－カルボキシレート、１６．２ｇの酢酸カリウム、７．９ｇのフッ化カリウム、１０５ｍＬの１，４－ジオキサン、及び１５ｍＬの水を加え、系を３回窒素置換に供した。２．４ｇのＰｄ（ＰＰｈ３）４を加え、窒素置換を３回行い、系を８０℃に加熱し、テトラヒドロフラン中の５－ピリミジンボロン酸の溶液（６．１ｇ／１５ｍＬ）を滴加した。滴加終了後、反応物をさらに５時間撹拌し、ＴＬＣモニタリングにより原料が完全に反応したことが示された後、系を室温まで冷却した。２５０ｍＬの水、１２０ｍＬの酢酸エチル、及び３ｇのＮ－アセチルシステインを反応系に加え、系を０．５時間撹拌した後、３Ｌの飽和重炭酸ナトリウム溶液を加えた。系を相分離させ、水相を１２０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、５Ｌの飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、濃縮乾固し、カラムクロマトグラフィーで精製して、１０．３ｇの生成物を、収率６９％で得た。
【化23】
【0064】
ステップ４：メチル（３Ｒ）－２－（ジフルオロメチル）－３－メチル－３，４，５ａ，６－テトラヒドロ－５－オキサ－１，２ａ，６，８－テトラアザベンゾ［４，５］シクロオクチル［１，２，３－ｃｄ］インデン－１１－カルボキシレートの合成
２５０ｍＬの反応フラスコに、１０ｇのメチル（Ｒ）－２－（ジフルオロメチル）－１－［１－ヒドロキシプロピル－２－イル］－７－（ピリミジン－５－イル）－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－５－カルボキシレート、２．６ｇのメタンスルホン酸、及び１５０ｍＬの塩化メチレンを加え、室温で１時間撹拌し、濾過し、乾燥させて、１１．５ｇの生成物を、収率９１％で得た。
【化24】
【0065】
ステップ５：（３Ｒ）－Ｎ－（４－（クロロジフルオロメトキシ）フェニル）－２－（ジフルオロメチル）－３－メチル－３，４，５ａ，６－テトラヒドロ－５－オキサ－１，２ａ，６，８－テトラアザベンゾ［４，５］シクロオクチル［１，２，３－ｃｄ］インデン－１１－カルボキサミドの合成
２５０ｍＬの反応フラスコに、１０ｇの化合物１－８、５．８ｇの４－（クロロジフルオロメトキシ）アニリン、及び１００ｍＬのテトラヒドロフランを加え、４４ｍＬのリチウムビストリメチルシリルアミド（ＴＨＦ中１．０Ｍ）を５～１０℃で滴加した。滴加が完了した後、反応物を室温で１５時間撹拌した。反応混合物に１００ｍＬの飽和塩化アンモニウム水溶液を滴加して反応をクエンチし、２００ｍＬの酢酸エチルを加えて抽出し、有機相を濃縮乾固した。濃縮物に１００ｍＬの酢酸エチルを加え、濃縮物を５０℃に加熱し、０．５時間撹拌し、５０ｍＬのｎ－ヘプタンをゆっくり滴加した。系をさらに０．５時間撹拌し、次いで２０～３０℃に冷却し、３時間撹拌し、濾過し、真空下で乾燥させて、９．１ｇのオフホワイトの固体を、収率８２％で得た。
【化25】
【0066】
ステップ６：（３Ｒ）－Ｎ－（４－（クロロジフルオロメトキシ）フェニル）－２－（ジフルオロメチル）－３－メチル－３，４，５ａ，６－テトラヒドロ－５－オキサ－１，２ａ，６，８－テトラアザベンゾ［４，５］シクロオクチル［１，２，３－ｃｄ］インデン－１１－カルボキサミド４－メチルベンゼンスルホン酸塩の合成
９ｇの化合物１－１０を秤量し、９０ｍＬのアセトニトリルを加え、混合物を５０℃に加熱し、３０分間加熱撹拌した。エタノール中のｐ－トルエンスルホン酸の溶液（４ｇ／２０ｍＬ）を加え、次いで、系をインキュベートして２２～２４時間反応させた。混合物を濾過し、濾過ケーキを５０℃で２４時間真空乾燥して、１０．１ｇの生成物を、収率８４％で得た。
【化26】
【0067】
１ＨＮＭＲ（４００Ｈｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１０．５１（ｓ，１Ｈ），８．６８（ｓ，１Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ），８．５８－８．５９（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．９２－７．９５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．８４－７．８５（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５８－７．６２（ｍ，１Ｈ），７．５６（ｔ，Ｊ＝５２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４８－７．５０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．３６－７．３８（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．１１－７．１３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），６．９３（ｂｒ，１Ｈ），５．０５（ｓ，１Ｈ），４．３４－４．３９（ｍ，１Ｈ），３．４７－３．６０（ｍ，２Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），１．３６－１．３８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【0068】
ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：５２４．２［Ｍ－Ｃ７Ｈ８Ｏ３Ｓ＋Ｈ］＋。
【0069】
方法２：
５００ｍＬの反応フラスコに、２０ｇのメチル４－アミノ－３－ブロモ－５－ニトロ安息香酸（化合物１）、５．３０ｇのセチルトリメチルアンモニウムブロミド、２０．０７ｇの炭酸カリウム、及び２００ｍＬのアセトニトリルを加えた。１０．３ｇ／５０ｍＬの（Ｓ）－２－クロロ－１－プロパノール／アセトニトリル溶液を、室温で撹拌しながら滴加した。滴加終了後、混合物を加熱して還流させ８時間反応させた。反応終了後、反応混合物を濃縮乾固し、残渣に酢酸エチル及び水を加え、混合物を抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウムで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。系を濾過し、濾液をカラムクロマトグラフィーで精製して、１３．３２ｇの化合物３を、収率５５％で得た。
【化27】
【0070】
１００ｍＬの反応フラスコに、１０ｇのメチル（Ｒ）－３－ブロモ－４－［（１－ヒドロキシイソプロパン－２－イル）アミノ］－５－ニトロ安息香酸（化合物３）及び３８ｍＬのジフルオロ酢酸を加え、１６．７６ｇの鉄粉を室温で加え、混合物を４０～５０℃に加熱して３時間反応させた。反応系を冷却し、酢酸エチルをそこに加えた。反応物系を濾過した。濾液を水及び飽和塩化ナトリウムでそれぞれ１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を濃縮し、次の反応工程に直接入れた。
【0071】
２５０ｍＬの三口フラスコに、１５ｇのメチル（Ｒ）－７－ブロモ－２－（ジフルオロメチル）－１－［１－ヒドロキシプロパ－２－イル］－１Ｈ－ベンゾ［ｄ］イミダゾール－５－カルボキシレート（化合物４）、１６．２ｇの酢酸カリウム、７．９ｇのフッ化カリウム、１０５ｍＬの１，４－ジオキサン、及び１５ｍＬの水を加え、系を３回窒素置換に供した。２．４ｇのＰｄ（ＰＰｈ３）４を加え、窒素置換を３回行い、系を８０℃に加熱し、テトラヒドロフラン中の５－ピリミジンボロン酸の溶液（６．１ｇ／１５ｍＬ）を滴加した。滴加終了後、反応物をさらに５時間撹拌し、ＴＬＣモニタリングにより原料が完全に反応したことが示された後、系を室温まで冷却した。２５０ｍＬの水、１２０ｍＬの酢酸エチル、及び３ｇのＮ－アセチルシステインを反応系に加え、系を０．５時間撹拌した後、３Ｌの飽和重炭酸ナトリウム溶液を加えた。系を相分離させ、水相を１２０ｍＬの酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、５Ｌの飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、濃縮乾固し、カラムクロマトグラフィーで精製して、１０．３ｇの化合物６を、収率６９％で得た。
【0072】
２５０ｍＬの反応フラスコに、１０ｇの化合物６、５．８ｇの４－（クロロジフルオロメトキシ）アニリン、及び１００ｍＬのテトラヒドロフランを加え、４４ｍＬのリチウムビストリメチルシリルアミド（ＴＨＦ中１．０Ｍ）を５～１０℃で滴加した。滴加が完了した後、系を室温で１５時間撹拌し、反応させた。反応混合物に１００ｍＬの飽和塩化アンモニウム水溶液を滴加して反応をクエンチし、２００ｍＬの酢酸エチルを加えて抽出し、有機相を濃縮乾固した。濃縮物に１００ｍＬの酢酸エチルを加え、濃縮物を５０℃に加熱し、０．５時間撹拌し、５０ｍＬのｎ－ヘプタンをゆっくり滴加した。系をさらに０．５時間撹拌し、次いで２０～３０℃に冷却し、３時間撹拌し、濾過し、真空下で乾燥させて、９．１ｇのオフホワイトの固体を、収率８２％で得た。
【0073】
１ＨＮＭＲ（４００Ｈｚ，アセトン－ｄ６）δ１０．１３（ｓ，１Ｈ），９．５１（ｓ，１Ｈ），９．３７（ｓ，１Ｈ），９．０９－９．１０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９０－７．９２（ｍ，３Ｈ），７．７．８１（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｔ，Ｊ＝５２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２７－７．２９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．０４（ｓ，１Ｈ），４．６６－４．６７（ｍ，１Ｈ），３．９８－４．０４（ｍ，１Ｈ），３．７３－３．７７（ｍ，１Ｈ），１．５６－１．５８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【0074】
他の例の調製については、実施例１を参照のこと。
【表1】
【0075】
生物学的試験の評価
試験実施例を参照して本発明を以下にさらに記載し説明するが、これらの実施例は、本発明の範囲を限定することを企図していない。
試験実施例を参照して本発明を以下にさらに記載し説明するが、これらの実施例は、本発明の範囲を限定することを企図していない。
【0076】
Ｉ．ＡＢＬ１ＷＴキナーゼに対する本発明の化合物の阻害活性に関する研究
１．試験目的
ＡＢＬ１ＷＴキナーゼに対する本発明の化合物のインビトロ阻害活性を評価する。
１．試験目的
ＡＢＬ１ＷＴキナーゼに対する本発明の化合物のインビトロ阻害活性を評価する。
【0077】
２．試験方法
キャピラリー電気泳動を使用して基質ペプチドのリン酸化変換率を検出し、キナーゼ（ＡＢＬ１－ＷＴ）を阻害する試験化合物のＩＣ５０値を決定した。本試験で試験された化合物の最大濃度は１０００ｎＭ、３倍希釈であり、合計１２の濃度（１０００～０．００５６ｎＭ）であった。最初に、酵素反応系（酵素ＡＢＬ１－ＷＴの濃度は１．３ｎＭ、基質ＦＬＰｅｐｔｉｄｅ２の濃度は１．５μＭ、反応因子は１０ｍＭ ＭｇＣｌ２であった）を調製した。室温で３０分間インキュベートした後、５μＬの４×ＡＴＰ溶液を加えて酵素反応を開始させた。室温で９０分間反応させた後、停止緩衝液（０．５Ｍ ＥＤＴＡ含有）を加えて反応を停止させた。サンプルを、ＥＺリーダーを使用して分析した（分析条件：圧力－１．５ＰＳＩ、最大電圧電流－２２５０Ｖ、最小電圧電流－５００Ｖ、分離時間４０秒、及びシステム遅延１００．０秒）。
キャピラリー電気泳動を使用して基質ペプチドのリン酸化変換率を検出し、キナーゼ（ＡＢＬ１－ＷＴ）を阻害する試験化合物のＩＣ５０値を決定した。本試験で試験された化合物の最大濃度は１０００ｎＭ、３倍希釈であり、合計１２の濃度（１０００～０．００５６ｎＭ）であった。最初に、酵素反応系（酵素ＡＢＬ１－ＷＴの濃度は１．３ｎＭ、基質ＦＬＰｅｐｔｉｄｅ２の濃度は１．５μＭ、反応因子は１０ｍＭ ＭｇＣｌ２であった）を調製した。室温で３０分間インキュベートした後、５μＬの４×ＡＴＰ溶液を加えて酵素反応を開始させた。室温で９０分間反応させた後、停止緩衝液（０．５Ｍ ＥＤＴＡ含有）を加えて反応を停止させた。サンプルを、ＥＺリーダーを使用して分析した（分析条件：圧力－１．５ＰＳＩ、最大電圧電流－２２５０Ｖ、最小電圧電流－５００Ｖ、分離時間４０秒、及びシステム遅延１００．０秒）。
【0078】
３．データ処理
ＥＺ Ｒｅａｄｅｒで読み取った変換率から、以下の式に従って残存活性を算出した。
ＩＣ５０を、ＸＬｆｉｔを用いて計算し、ＩＣ５０を、フィッティング式として式２０１により計算した。
ＥＺ Ｒｅａｄｅｒで読み取った変換率から、以下の式に従って残存活性を算出した。
【数1】
【0079】
４．試験結果
インビトロ酵素試験は、本発明の化合物が、ＡＢＬ１ＷＴキナーゼに対して良好な阻害活性を呈することを示している。
【表2】
【0080】
ＩＩ．異なるＢＣＲ－ＡＢＬ１融合変異を過剰発現するＢａＦ３細胞株の増殖に対する阻害活性に関する研究
１．試験目的
一次Ｂ細胞をインビトロで培養したマウスのＢａ／Ｆ３ ＢＣＲ－ＡＢＬ１－Ｔ３１５Ｉ、Ｂａ／Ｆ３ ＢＣＲ－ＡＢＬ１－Ｅ２５５Ｋ、Ｂａ／Ｆ３ ＢＣＲ－ＡＢＬ１－Ｅ２５５Ｖ、及びＢａ／Ｆ３ ＢＣＲ－ＡＢＬ１－Ｇ２５０Ｅ変異モデルの増殖に対する本発明の化合物の阻害活性を評価する。
１．試験目的
一次Ｂ細胞をインビトロで培養したマウスのＢａ／Ｆ３ ＢＣＲ－ＡＢＬ１－Ｔ３１５Ｉ、Ｂａ／Ｆ３ ＢＣＲ－ＡＢＬ１－Ｅ２５５Ｋ、Ｂａ／Ｆ３ ＢＣＲ－ＡＢＬ１－Ｅ２５５Ｖ、及びＢａ／Ｆ３ ＢＣＲ－ＡＢＬ１－Ｇ２５０Ｅ変異モデルの増殖に対する本発明の化合物の阻害活性を評価する。
【0081】
２．細胞株
【表3】
【0082】
３．試験方法
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを、腫瘍細胞の増殖及び成長に対する薬物の阻害効果を検出するために使用した。一晩培養した対数増殖期の細胞を直接採取し、吹き込み、混合して計数し、さまざまな細胞密度要件に従って細胞密度を調整し、細胞を細胞懸濁液に調製し、９６ウェルプレートに播種した。異なる濃度の薬物を加え、各濃度に対して３つの複製ウェルを設定し、対応するビヒクル対照を設定した。Ｂａ／Ｆ３ ＢＣＲ－ＡＢＬ１－Ｔ３１５Ｉ細胞及びＢａ／Ｆ３ ＢＣＲ－ＡＢＬ１－Ｅ２５５Ｋ細胞における最大試験濃度は、１００００ｎＭであり、３．１６倍の勾配希釈、合計９つの濃度（１００００～１．００５８ｎＭ）であった。他の細胞で検出された化合物の最大濃度は５００ｎＭ、３．１６倍の勾配希釈、合計９つの濃度（５００～０．０５０３ｎＭ）であった。化合物が添加された細胞を、３７℃及び５％のＣＯ２でさらに７２時間培養した。培養プレート及びその内容物を室温に平衡化し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬を加え、内容物をシェーカー上で５分間混合して細胞溶解を誘導し、培養プレートを暗所で室温でさらに２０分間インキュベートし、発光をマイクロプレートリーダーで読み取った。
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを、腫瘍細胞の増殖及び成長に対する薬物の阻害効果を検出するために使用した。一晩培養した対数増殖期の細胞を直接採取し、吹き込み、混合して計数し、さまざまな細胞密度要件に従って細胞密度を調整し、細胞を細胞懸濁液に調製し、９６ウェルプレートに播種した。異なる濃度の薬物を加え、各濃度に対して３つの複製ウェルを設定し、対応するビヒクル対照を設定した。Ｂａ／Ｆ３ ＢＣＲ－ＡＢＬ１－Ｔ３１５Ｉ細胞及びＢａ／Ｆ３ ＢＣＲ－ＡＢＬ１－Ｅ２５５Ｋ細胞における最大試験濃度は、１００００ｎＭであり、３．１６倍の勾配希釈、合計９つの濃度（１００００～１．００５８ｎＭ）であった。他の細胞で検出された化合物の最大濃度は５００ｎＭ、３．１６倍の勾配希釈、合計９つの濃度（５００～０．０５０３ｎＭ）であった。化合物が添加された細胞を、３７℃及び５％のＣＯ２でさらに７２時間培養した。培養プレート及びその内容物を室温に平衡化し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬を加え、内容物をシェーカー上で５分間混合して細胞溶解を誘導し、培養プレートを暗所で室温でさらに２０分間インキュベートし、発光をマイクロプレートリーダーで読み取った。
【0083】
４．試験結果
本発明の化合物は、Ｂａ／Ｆ３ ＢＣＲ－ＡＢＬ１－Ｔ３１５Ｉ、Ｅ２５５Ｋ、Ｅ２５５Ｖ、及びＧ２５０Ｅ変異細胞の増殖を有意に阻害することができる。
【表4】
【0084】
ＩＩＩ．ＢＣＲ－ＡＢＬ１融合変異を有する腫瘍細胞株の増殖に対する阻害活性に関する研究
１．試験目的
インビトロで培養したヒト赤白血病細胞Ｋ５６２、ヒト末梢血好塩基性白血病細胞Ｋｕ８１２、並びにヒト慢性骨髄性白血病細胞ＫＣＬ２２－ｓ及びＫＣＬ２２－ｒの増殖に対する本発明の化合物の阻害活性を評価する。
１．試験目的
インビトロで培養したヒト赤白血病細胞Ｋ５６２、ヒト末梢血好塩基性白血病細胞Ｋｕ８１２、並びにヒト慢性骨髄性白血病細胞ＫＣＬ２２－ｓ及びＫＣＬ２２－ｒの増殖に対する本発明の化合物の阻害活性を評価する。
【0085】
２．細胞株
【表5】
【0086】
３．試験方法
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを、腫瘍細胞の増殖及び成長に対する薬物の阻害効果を検出するために使用した。一晩培養した対数増殖期の細胞を直接採取し、吹き込み、混合して計数し、さまざまな細胞密度要件に従って細胞密度を調整し、細胞を細胞懸濁液に調製し、９６ウェルプレートに播種した。異なる濃度の薬物を加え、各濃度に対して３つの複製ウェルを設定し、対応する溶媒対照を設定した。検出された化合物の最大濃度は５００ｎＭ、３倍の勾配希釈、合計９つの濃度（５００～０．０７６ｎＭ）であった。化合物が添加された細胞を、３７℃及び５％のＣＯ２でさらに７２時間培養した。培養プレート及びその内容物を室温に平衡化し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬を加え、内容物をシェーカー上で３分間混合して細胞溶解を誘導し、培養プレートを暗所で室温でさらに１０分間インキュベートし、化学発光シグナル値をマイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ ＳｙｎｅｒｇｙＨ１）で決定した。
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを、腫瘍細胞の増殖及び成長に対する薬物の阻害効果を検出するために使用した。一晩培養した対数増殖期の細胞を直接採取し、吹き込み、混合して計数し、さまざまな細胞密度要件に従って細胞密度を調整し、細胞を細胞懸濁液に調製し、９６ウェルプレートに播種した。異なる濃度の薬物を加え、各濃度に対して３つの複製ウェルを設定し、対応する溶媒対照を設定した。検出された化合物の最大濃度は５００ｎＭ、３倍の勾配希釈、合計９つの濃度（５００～０．０７６ｎＭ）であった。化合物が添加された細胞を、３７℃及び５％のＣＯ２でさらに７２時間培養した。培養プレート及びその内容物を室温に平衡化し、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬を加え、内容物をシェーカー上で３分間混合して細胞溶解を誘導し、培養プレートを暗所で室温でさらに１０分間インキュベートし、化学発光シグナル値をマイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ ＳｙｎｅｒｇｙＨ１）で決定した。
【0087】
４．試験結果
試験結果は、本発明の化合物が、ＢＣＲ－ＡＢＬ１融合変異を有する腫瘍細胞の増殖を有意に阻害できることを示している。
【表6】
【0088】
ＩＶ．ヒト慢性骨髄性白血病細胞株ＫＣＬ２２－ｓ異種移植腫瘍モデルにおける薬効に関する研究
１ 実験目的：
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス皮下異種移植腫瘍モデルにおけるヒト慢性骨髄性白血病細胞株ＫＣＬ２２－ｓに対する試験化合物の有効性を評価する。
１ 実験目的：
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス皮下異種移植腫瘍モデルにおけるヒト慢性骨髄性白血病細胞株ＫＣＬ２２－ｓに対する試験化合物の有効性を評価する。
【0089】
２ 実験操作とデータ処理：
２．１ 動物
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス、８～１０週。
２．２ 細胞培養液及び細胞懸濁液の調製
ａ、ＫＣＬ２２－ｓ細胞株を細胞バンクから取り出し、ＲＰＭＩ－１６４０培地（ＲＰＭＩ－１６４０＋１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ）で細胞を蘇生させた。蘇生させた細胞を、細胞培養フラスコ（フラスコ壁に細胞の種類、日付、培養者名などを記入）に入れ、次いで、ＣＯ２インキュベーターに置き（インキュベーター温度は３７℃、ＣＯ２濃度は５％であった）、インキュベートした。
ｂ、細胞を継代した。継代後、細胞をＣＯ２インキュベーター内で引き続き培養した。このプロセスは、細胞数がインビボでの薬効要件を満たすまで繰り返した。
ｃ、培養細胞を収集し、全自動セルカウンターで計数した。計数結果に従って細胞をＰＢＳに再懸濁して細胞懸濁液（５×１０７／ｍＬの密度）を作製し、後で使用するためにアイスボックスに置いた。
２．３ 細胞接種
ａ、接種前に、ヌードマウスにマウス及びラット用の使い捨て耳タグでラベル付けした。
ｂ、接種の際、細胞懸濁液を均一に混合し、１ｍＬシリンジで、０．１～１ｍＬの細胞懸濁液を採取し、気泡を取り除いた後、後で使用するためにシリンジをアイスパック上に置いた。
ｃ、ヌードマウスを左手で固定し、ヌードマウスの背中の右側の右肩付近（接種部位）を７５％アルコールで消毒し、３０秒後に接種を開始した。
ｄ、実験用ヌードマウスに順番に接種した（各マウスに対して０．１ｍＬの細胞懸濁液を接種）。
２．４ 腫瘍担持マウスの腫瘍測定、グループ分け及び投与
ａ、腫瘍の成長に基づいて、接種後１５日目に腫瘍を測定し、腫瘍サイズを計算した。
腫瘍体積の計算：腫瘍体積（ｍｍ３）＝長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）×幅（ｍｍ）／２
ｂ、腫瘍担持マウスの体重と腫瘍サイズに基づいて、ランダムグループ分け法を使用してマウスをグループ分けした。
ｃ．グループ分けの結果に基づいて、試験薬の投与を開始した（投与経路：経口投与；用量：１．５、３、７．５ｍｇ／ｋｇ；投与量：１０ｍＬ／ｋｇ；投与頻度：１～２回／日；投与サイクル：１５日；溶媒：０．５％ＨＰＭＣ Ｋ４Ｍ）。
ｄ、試験薬の投与開始後、週に２回、腫瘍の計測及び重量を測定した。
ｅ、動物を実験後に安楽死させた。
ｆ、データはＥｘｃｅｌ及びその他のソフトウェアを使用して処理した。化合物腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）の計算：腫瘍退縮が認められない場合、ＴＧＩ（％）＝［１－（治療群における投与終了時の平均腫瘍体積－その治療群における投与開始時の平均腫瘍体積）／（溶媒対照群における治療終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群における治療開始時の平均腫瘍体積）］×１００％。腫瘍退縮が存在する場合、ＴＧＩ（％）＝［１－（特定治療群における投与終了時の平均腫瘍体積－その治療群における投与開始時の平均腫瘍体積）／その治療群における投与開始時の平均腫瘍体積］×１００％。
２．１ 動物
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス、８～１０週。
２．２ 細胞培養液及び細胞懸濁液の調製
ａ、ＫＣＬ２２－ｓ細胞株を細胞バンクから取り出し、ＲＰＭＩ－１６４０培地（ＲＰＭＩ－１６４０＋１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ）で細胞を蘇生させた。蘇生させた細胞を、細胞培養フラスコ（フラスコ壁に細胞の種類、日付、培養者名などを記入）に入れ、次いで、ＣＯ２インキュベーターに置き（インキュベーター温度は３７℃、ＣＯ２濃度は５％であった）、インキュベートした。
ｂ、細胞を継代した。継代後、細胞をＣＯ２インキュベーター内で引き続き培養した。このプロセスは、細胞数がインビボでの薬効要件を満たすまで繰り返した。
ｃ、培養細胞を収集し、全自動セルカウンターで計数した。計数結果に従って細胞をＰＢＳに再懸濁して細胞懸濁液（５×１０７／ｍＬの密度）を作製し、後で使用するためにアイスボックスに置いた。
２．３ 細胞接種
ａ、接種前に、ヌードマウスにマウス及びラット用の使い捨て耳タグでラベル付けした。
ｂ、接種の際、細胞懸濁液を均一に混合し、１ｍＬシリンジで、０．１～１ｍＬの細胞懸濁液を採取し、気泡を取り除いた後、後で使用するためにシリンジをアイスパック上に置いた。
ｃ、ヌードマウスを左手で固定し、ヌードマウスの背中の右側の右肩付近（接種部位）を７５％アルコールで消毒し、３０秒後に接種を開始した。
ｄ、実験用ヌードマウスに順番に接種した（各マウスに対して０．１ｍＬの細胞懸濁液を接種）。
２．４ 腫瘍担持マウスの腫瘍測定、グループ分け及び投与
ａ、腫瘍の成長に基づいて、接種後１５日目に腫瘍を測定し、腫瘍サイズを計算した。
腫瘍体積の計算：腫瘍体積（ｍｍ３）＝長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）×幅（ｍｍ）／２
ｂ、腫瘍担持マウスの体重と腫瘍サイズに基づいて、ランダムグループ分け法を使用してマウスをグループ分けした。
ｃ．グループ分けの結果に基づいて、試験薬の投与を開始した（投与経路：経口投与；用量：１．５、３、７．５ｍｇ／ｋｇ；投与量：１０ｍＬ／ｋｇ；投与頻度：１～２回／日；投与サイクル：１５日；溶媒：０．５％ＨＰＭＣ Ｋ４Ｍ）。
ｄ、試験薬の投与開始後、週に２回、腫瘍の計測及び重量を測定した。
ｅ、動物を実験後に安楽死させた。
ｆ、データはＥｘｃｅｌ及びその他のソフトウェアを使用して処理した。化合物腫瘍阻害率ＴＧＩ（％）の計算：腫瘍退縮が認められない場合、ＴＧＩ（％）＝［１－（治療群における投与終了時の平均腫瘍体積－その治療群における投与開始時の平均腫瘍体積）／（溶媒対照群における治療終了時の平均腫瘍体積－溶媒対照群における治療開始時の平均腫瘍体積）］×１００％。腫瘍退縮が存在する場合、ＴＧＩ（％）＝［１－（特定治療群における投与終了時の平均腫瘍体積－その治療群における投与開始時の平均腫瘍体積）／その治療群における投与開始時の平均腫瘍体積］×１００％。
【0090】
３ 実験結果：
本発明の化合物は、ヒト慢性骨髄性白血病細胞株ＫＣＬ２２－ｓ異種移植腫瘍モデルに対して有意な腫瘍阻害効果を有する。
【表7】
【国際調査報告】