知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
▶ レジェンド バイオテック アイルランド リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-26
(54)【発明の名称】ＴＬＲ受容体を発現する改変された免疫細胞
(51)【国際特許分類】
C12N 5/10 20060101AFI20240918BHJP
C12N 5/0783 20100101ALI20240918BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20240918BHJP
A61K 35/17 20150101ALI20240918BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240918BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20240918BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20240918BHJP
C12N 15/86 20060101ALN20240918BHJP
C12N 15/861 20060101ALN20240918BHJP
C12N 15/864 20060101ALN20240918BHJP
C12N 15/869 20060101ALN20240918BHJP
C12N 15/867 20060101ALN20240918BHJP
【ＦＩ】
C12N5/10 ZNA
C12N5/0783
C12N15/62 Z
A61K35/17
A61P35/00
C12N15/13
C12N15/12
C12N15/86 Z
C12N15/861 Z
C12N15/864 Z
C12N15/869 Z
C12N15/867 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024509014
(86)(22)【出願日】2022-08-18
(85)【翻訳文提出日】2024-03-22
(86)【国際出願番号】 CN2022113170
(87)【国際公開番号】W WO2023020558
(87)【国際公開日】2023-02-23
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/113239
(32)【優先日】2021-08-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/122129
(32)【優先日】2021-09-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/133061
(32)【優先日】2021-11-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2022/112578
(32)【優先日】2022-08-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
(71)【出願人】
【識別番号】524009059
【氏名又は名称】レジェンド バイオテック アイルランド リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100102978
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 初志
(74)【代理人】
【識別番号】100205707
【弁理士】
【氏名又は名称】小寺 秀紀
(74)【代理人】
【識別番号】100160923
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 裕孝
(74)【代理人】
【識別番号】100119507
【弁理士】
【氏名又は名称】刑部 俊
(74)【代理人】
【識別番号】100142929
【弁理士】
【氏名又は名称】井上 隆一
(74)【代理人】
【識別番号】100148699
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 利光
(74)【代理人】
【識別番号】100188433
【弁理士】
【氏名又は名称】梅村 幸輔
(74)【代理人】
【識別番号】100128048
【弁理士】
【氏名又は名称】新見 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100129506
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 智彦
(74)【代理人】
【識別番号】100114340
【弁理士】
【氏名又は名称】大関 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100214396
【弁理士】
【氏名又は名称】塩田 真紀
(74)【代理人】
【識別番号】100121072
【弁理士】
【氏名又は名称】川本 和弥
(74)【代理人】
【識別番号】100221741
【弁理士】
【氏名又は名称】酒井 直子
(74)【代理人】
【識別番号】100114926
【弁理士】
【氏名又は名称】枝松 義恵
(72)【発明者】
【氏名】シュ ヤンリャン
(72)【発明者】
【氏名】ジャン チンリン
(72)【発明者】
【氏名】トゥ ジョンユアン
(72)【発明者】
【氏名】ジャン ヤーフェン
(72)【発明者】
【氏名】ウー シュウ
(72)【発明者】
【氏名】ファン シャオフ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C087
【Ｆターム（参考）】
4B065AA90X
4B065AB01
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB37
4C087BB65
4C087NA14
4C087ZB26
(57)【要約】
本出願は、ＴＬＲ受容体を発現する改変された免疫細胞を提供する。改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をさらに含む。本出願は、改変された免疫細胞を癌の治療に使用する方法及び薬学的組成物も提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
改変された免疫細胞であって、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び
ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチド
を含み、
ここで、前記第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、前記第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び前記第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する、
改変された免疫細胞。
【請求項2】
前記第１の標的結合ドメイン及び前記第２の標的結合ドメインは、多量体標的分子のサブユニットにそれぞれ結合する、請求項１に記載の改変された免疫細胞。
【請求項3】
前記多量体標的分子のサブユニットは同じである、請求項２に記載の改変された免疫細胞。
【請求項4】
前記多量体標的分子のサブユニットは異なっている、請求項２に記載の改変された免疫細胞。
【請求項5】
前記第１の標的結合ドメイン及び前記第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合する、請求項１又は２に記載の改変された免疫細胞。
【請求項6】
前記第１の標的結合ドメイン及び前記第２の結合ドメインは、前記標的分子上の同じ標的部位にそれぞれ結合する、請求項５に記載の改変された免疫細胞。
【請求項7】
前記第１の標的結合ドメインと前記第２の標的結合ドメインは同じである、請求項１～３及び５～６のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項8】
前記第１の標的結合ドメイン及び前記第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合する、請求項５に記載の改変された免疫細胞。
【請求項9】
前記第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び前記第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインは同じＴＬＲ分子に由来する、請求項１～８のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項10】
前記第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び前記第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは同じＴＬＲ分子に由来する、請求項１～９のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項11】
前記第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと前記第２のＴＬＲ膜貫通ドメインは同じである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項12】
前記第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと前記第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは同じである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項13】
前記第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ４に由来する、請求項１１又は請求項１２に記載の改変された免疫細胞。
【請求項14】
前記第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと前記第２のＴＬＲ膜貫通ドメインは異なっている、請求項１～１０のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項15】
前記第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと前記第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは異なっている、請求項１～１１及び１４のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項16】
前記第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ２に由来する、請求項１４又は請求項１５に記載の改変された免疫細胞。
【請求項17】
前記第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ６に由来する、請求項１４又は請求項１５に記載の改変された免疫細胞。
【請求項18】
前記第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ１に由来する、請求項１４～１７のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項19】
前記第１の標的結合ドメイン及び／又は前記第２の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項20】
前記第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインはｓｃＦｖ又はｓｄＡｂである、請求項１９に記載の改変された免疫細胞。
【請求項21】
前記ｓｃＦｖ又はｓｄＡｂは、ＣＤ３３、ＣＬＬ１、ＣＤ１２３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＧＰＣ３に特異的に結合する、請求項２０に記載の改変された免疫細胞。
【請求項22】
前記標的分子は免疫チェックポイントタンパク質である、請求項５～１８のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項23】
前記標的分子は、ＰＤ－１、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＳＩＲＰα及びＴＩＧＩＴからなる群から選択される、請求項２２に記載の改変された免疫細胞。
【請求項24】
前記標的分子は、免疫細胞上に発現する天然タンパク質である、請求項５～１８のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項25】
前記標的分子はＮＫＧ２Ｄである、請求項２４に記載の改変された免疫細胞。
【請求項26】
前記標的分子はＮＫＧ２Ｄの全長配列である、請求項２４又は２５に記載の改変された免疫細胞。
【請求項27】
前記標的分子は突然変異ＮＫＧ２Ｄである、請求項２４又は２５に記載の改変された免疫細胞。
【請求項28】
前記突然変異ＮＫＧ２Ｄは、短縮された配列及び／又はアミノ酸の置換、突然変異、付加及び／又は欠失を含む、請求項２７に記載の改変された免疫細胞。
【請求項29】
前記標的分子は、ＮＫＧ２Ｄの細胞外抗原結合ドメインである、請求項２４又は２５に記載の改変された免疫細胞。
【請求項30】
細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される、請求項１～２９のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項31】
ＮＫ細胞である、請求項３０に記載の改変された免疫細胞。
【請求項32】
細胞傷害性Ｔ細胞である、請求項３０に記載の改変された免疫細胞。
【請求項33】
操作された受容体を含む、請求項１～３２のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項34】
前記操作された受容体はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項３３に記載の改変された免疫細胞。
【請求項35】
前記操作された受容体は、改変されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項３３に記載の改変された免疫細胞。
【請求項36】
前記操作された受容体はＴ細胞抗原カプラ（Ｔ－ｃｅｌｌ ａｎｔｉｇｅｎ ｃｏｕｐｌｅｒ）（ＴＡＣ）受容体である、請求項３３に記載の改変された免疫細胞。
【請求項37】
前記操作された受容体は、前記第１のポリペプチド及び／又は前記第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含む、請求項３３～３６のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項38】
前記操作された受容体は、前記第１のポリペプチド及び／又は前記第２のポリペプチドと同じである標的分子上の非重複標的部位を特異的に認識する細胞外ドメインを含む、請求項３７に記載の改変された免疫細胞。
【請求項39】
前記操作された受容体は、ＣＤ１９、ＣＬＬ１、ＢＣＭＡ及びＧＰＣ３のうちのいずれかを特異的に認識する細胞外ドメインを含む、請求項３３～３８のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項40】
前記操作された受容体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、３、５７～６０、６１～６５、７１～７３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列と少なくとも約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、３、５７～６０、６１～６５、７１～７３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載の改変された免疫細胞。
【請求項41】
前記第１のポリペプチドをコードする第１の核酸と、前記第２のポリペプチドをコードする第２の核酸とを含む、請求項１～４０のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項42】
前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドは同じであり、且つここで、前記改変された免疫細胞は、前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドをコードする第１の核酸を含む、請求項１～３、５～７、９～１３及び１９～３２のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項43】
前記操作された受容体をコードする第３の核酸を含む、請求項３３～４２のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項44】
前記第１の核酸及び前記第２の核酸は、同一のプロモーターに操作可能に連結されている、請求項４１～４３のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項45】
前記第１の核酸及び前記第２の核酸は、個別のプロモーターに操作可能に連結されている、請求項４１又は４３に記載の改変された免疫細胞。
【請求項46】
前記第１の核酸及び前記第３の核酸は、同一のプロモーターに操作可能に連結されている、請求項４３～４５のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項47】
前記第１の核酸及び前記第３の核酸は、個別のプロモーターに操作可能に連結されている、請求項４３～４５のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項48】
前記第１の核酸、前記第２の核酸、及び前記第３の核酸は、同一のプロモーターに操作可能に連結されている、請求項４３、４４及び４６のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項49】
前記第１の標的結合ドメイン及び前記第２の標的結合ドメインは、ＣＤ２０のサブユニットを特異的に認識する、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項50】
（１）前記第１の標的結合ドメインはＣＤ３３のＣ２サブユニットを特異的に認識し、且つ前記第２の標的結合ドメインはＣＤ３３のＶサブユニットを特異的に認識する、又は、（２）前記第１の標的結合ドメインはＣＤ３３のＶサブユニットを特異的に認識し、且つ前記第２の標的結合ドメインはＣＤ３３のＣ２サブユニットを特異的に認識する、
請求項８～４８のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項51】
前記第１のポリペプチドは第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は前記第２のポリペプチドは第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインをさらに含む、請求項１～５０のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項52】
前記第１の細胞内ドメインと前記第２の細胞内ドメインは同じである、請求項５１に記載の改変された免疫細胞。
【請求項53】
前記第１の細胞内ドメインと前記第２の細胞内ドメインは異なっている、請求項５１に記載の改変された免疫細胞。
【請求項54】
前記第１のサイトカイン受容体及び／又は前記第２のサイトカイン受容体は、ＧＭ－ＣＳＦ受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＩＬ－１５受容体及びＩＬ－２３受容体からなる群から選択される、請求項５１～５３のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項55】
前記第１のサイトカイン受容体の前記第１の細胞内ドメイン及び／又は前記第２のサイトカイン受容体の前記第２の細胞内ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む、請求項５１～５３のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項56】
前記第１のサイトカイン受容体の前記第１の細胞内ドメインのＣ末端は前記第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインのＮ末端と融合しており、且つ／又は前記第２のサイトカイン受容体の前記第２の細胞内ドメインのＣ末端は前記第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインのＮ末端と融合している、請求項５１～５５のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項57】
前記第１のサイトカイン受容体の前記第１の細胞内ドメインのＮ末端は前記ＴＬＲシグナル伝達ドメインのＣ末端と融合しており、且つ／又は前記第２のサイトカイン受容体の前記第２の細胞内ドメインのＮ末端は前記ＴＬＲシグナル伝達ドメインのＣ末端と融合している、請求項５１～５５のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞。
【請求項58】
請求項１～５７のいずれか一項に記載の改変された免疫細胞を産生する方法であって、前記第１のポリペプチドをコードする第１の核酸と、任意で、前記第２のポリペプチドをコードする第２の核酸とを、前駆体免疫細胞に導入することを含む、方法。
【請求項59】
前記前駆体免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項60】
前記前駆体免疫細胞は、操作された受容体を含む、請求項５８又は５９に記載の方法。
【請求項61】
操作された受容体をコードする第３の核酸を前記前駆体免疫細胞に導入することをさらに含む、請求項５８又は５９に記載の方法。
【請求項62】
前記操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、改変されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体である、請求項６０又は６１に記載の方法。
【請求項63】
前記第１の核酸、前記第２の核酸及び／又は前記第３の核酸は同一のベクター上にある、請求項５８～６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項64】
前記ベクターはウイルスベクターである、請求項６３に記載の方法。
【請求項65】
前記ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター及びそれらの派生物からなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。
【請求項66】
前記第１の核酸、前記第２の核酸及び／又は前記第３の核酸を含む免疫細胞を単離又は濃縮することをさらに含む、請求項５８～６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項67】
請求項５８～６６のいずれか一項に記載の方法によって産生された、改変された免疫細胞。
【請求項68】
請求項１～５７及び６７に記載の改変された免疫細胞及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【請求項69】
個体の疾患を治療する方法であって、有効量の請求項６８に記載の薬学的組成物を個体に投与することを含む、方法。
【請求項70】
前記疾患は癌である、請求項６９に記載の方法。
【請求項71】
前記個体はヒトである、請求項６９又は７０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年８月１８日に提出された国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１１３２３９号、２０２１年９月３０日に提出された国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１２２１２９号、２０２１年１１月２５日に提出された国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１３３０６１号及び２０２２年８月１５日に提出された国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２２／１１２５７８号の優先権を主張し、それらの内容を全体として参照により本明細書に組み込む。
本出願は、２０２１年８月１８日に提出された国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１１３２３９号、２０２１年９月３０日に提出された国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１２２１２９号、２０２１年１１月２５日に提出された国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１３３０６１号及び２０２２年８月１５日に提出された国際出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２２／１１２５７８号の優先権を主張し、それらの内容を全体として参照により本明細書に組み込む。
【0002】
ＡＳＣＩＩテキストファイルによる配列表の提出
以下のＡＳＣＩＩテキストファイルで提出された内容は、その全体として参照により本明細書に組み込まれる。つまりコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：Ｐ１１２３４－ＰＣＴ．２２０８１７．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｌｉｓｔｉｎｇ．ｘｍｌ、記録日：２０２２年８月１７日、サイズ：１１７ＫＢ）。
以下のＡＳＣＩＩテキストファイルで提出された内容は、その全体として参照により本明細書に組み込まれる。つまりコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：Ｐ１１２３４－ＰＣＴ．２２０８１７．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｌｉｓｔｉｎｇ．ｘｍｌ、記録日：２０２２年８月１７日、サイズ：１１７ＫＢ）。
【0003】
分野
本出願は、ＴＬＲ受容体を発現する改変された免疫細胞、及びそれを癌のような疾患又は病症の治療に使用する方法に関する。
本出願は、ＴＬＲ受容体を発現する改変された免疫細胞、及びそれを癌のような疾患又は病症の治療に使用する方法に関する。
【背景技術】
【0004】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞は、すでに、操作されたＴ細胞受容体を産生することによって免疫応答を誘発するように改変された細胞である。例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、癌療法を改善するために、癌細胞をより有効に認識するように設計され得る。ＣＡＲ－Ｔ療法が成功したが、これらの方法は、インビボＴ細胞拡大及び疲弊が悪いという問題を抱えているため、血液悪性腫瘍（例えば、急性骨髄性白血病）に罹患している患者の臨床寛解の持続性の低下をもたらすことが多い。効率的な細胞ベースの癌免疫療法が依然として必要とされている。
【0005】
ＮＫＧ２Ｄは、膜貫通タンパク質であり、Ｃ型レクチン様受容体のＮＫＧ２ファミリーに属する。ヒトにおいて、それはＮＫ細胞、γδＴ細胞及びＣＤ８＋ αβＴ細胞により発現される。ＮＫＧ２Ｄリガンドは、ＭＩＣ及びＲＡＥＴ１／ＵＬＢＰファミリーからの誘導自己タンパク質であり、正常な細胞の表面上には全く存在しないか又は低いレベルで存在するが、感染、形質転換、老化、ストレス細胞によって過剰発現される（Ｚｉｎｇｏｎｉ，Ａら，２０１８，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４７６（非特許文献1））。
【0006】
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、侵入した病原体を検出し、先天性及び適応性免疫応答を活性化するパターン認識受容体である。ＴＬＲは、Ｔ細胞における有効な共刺激分子として機能し、活性化されたＴ細胞（例えば、記憶ＣＤ４＋及びＣＤ８＋ Ｔ細胞）の細胞表面上に発現する。そのため、Ｔ細胞におけるＴＬＲの活性化は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナルにより誘導されたＴ細胞活性化、機能及び生存を直接増強した（Ｇｅｌｍａｎ，ＡＥら，２００４，１７２（１０）：６０６５－６０７３（非特許文献2））。免疫系におけるそれらの重要な役割を考慮して、ＴＬＲ活性化は免疫応答を増強するために用いられてきた。逆に、ＴＬＲ活性化の阻害剤は、自己免疫及び他の望ましくない免疫応答を減少させることができる（Ｌｕ，Ｈ，２０１４，Ｆｒｏｎｔ． ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ５：８３（非特許文献3））。研究によると、Ｔ細胞のような、ＣＡＲを発現する操作された免疫細胞は、ｔｏｌｌ／インターロイキン－１（ＩＬ－１）受容体（ＴＩＲ）ドメインで武装化することによって、増強された抗腫瘍活性を提供することができる。例えば、Ｍａｎａｖａｌａｎ，Ｂら，２０１１，Ｆｒｏｎｔ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ２：４１（非特許文献4）を参照されたい。
【0007】
本明細書で言及した全ての刊行物、特許、特許出願及び開示された特許出願の開示内容は、全体として参照により本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0008】
【非特許文献1】Ｚｉｎｇｏｎｉ，Ａら，２０１８，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４７６
【非特許文献2】Ｇｅｌｍａｎ，ＡＥら，２００４，１７２（１０）：６０６５－６０７３
【非特許文献3】Ｌｕ，Ｈ，２０１４，Ｆｒｏｎｔ． ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ５：８３
【非特許文献4】Ｍａｎａｖａｌａｎ，Ｂら，２０１１，Ｆｒｏｎｔ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ２：４１
【発明の概要】
【0009】
本出願は、ＴＬＲ受容体を発現する改変された免疫細胞、及びそれを癌のような疾患又は病症の治療に使用する方法を提供する。
【0010】
本出願の一局面において、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含む、改変された免疫細胞を提供し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。
【0011】
改変された免疫細胞によるいくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、多量体標的分子のサブユニットにそれぞれ結合する。いくつかの態様において、多量体標的分子のサブユニットは同じである。いくつかの態様において、多量体標的分子のサブユニットは異なっている。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは、標的分子上の同じ標的部位にそれぞれ結合する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインは同じである。
【0012】
本出願の別の局面において、改変された免疫細胞による改変された免疫細胞を提供し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは上記同じ標的分子に結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合する。
【0013】
上記改変された免疫細胞のうちのいずれか一つによるいくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインは同じＴＬＲ分子に由来する。いくつかの態様において、第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは同じＴＬＲ分子に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと第２のＴＬＲ膜貫通ドメインは同じである。いくつかの態様において、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは同じである。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ４に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと第２のＴＬＲ膜貫通ドメインは異なっている。いくつかの態様において、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは異なっている。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ２に由来する。いくつかの態様において、第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ６に由来する。いくつかの態様において、第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ１に由来する。
【0014】
上記改変された免疫細胞のうちのいずれか一つによるいくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインは抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインはｓｃＦｖ又はｓｄＡｂである。いくつかの態様において、ｓｃＦｖ又はｓｄＡｂは、ＣＤ３３、ＣＬＬ１、ＣＤ１２３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＧＰＣ３に特異的に結合する。
【0015】
上記改変された免疫細胞のうちのいずれか一つによるいくつかの態様において、標的分子は免疫チェックポイントタンパク質である。いくつかの態様において、標的分子は、ＰＤ－１、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＳＩＲＰα及びＴＩＧＩＴからなる群から選択される。
【0016】
上記改変された免疫細胞のうちのいずれか一つによるいくつかの態様において、標的分子は、免疫細胞上に発現する天然タンパク質である。いくつかの態様において、標的分子はＮＫＧ２Ｄである。いくつかの態様において、標的分子は突然変異ＮＫＧ２Ｄである。いくつかの態様において、突然変異ＮＫＧ２Ｄは、短縮された配列及び／又はアミノ酸の置換、突然変異、付加及び／又は欠失を含む。
【0017】
いくつかの態様において、標的分子は、ＮＫＧ２Ｄの細胞外抗原結合ドメインである。いくつかの態様において、標的分子はＮＫＧ２Ｄの全長配列である。
【0018】
上記改変された免疫細胞のうちのいずれか一つによるいくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はＮＫ細胞である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は細胞傷害性Ｔ細胞である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体を含む。いくつかの態様において、操作された受容体はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの態様において、操作された受容体は、改変されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの態様において、操作された受容体はＴ細胞抗原カプラ（T-ｃｅｌｌ ａｎｔｉｇｅｎ ｃｏｕｐｌｅｒ）（ＴＡＣ）受容体である。
【0019】
本出願の別の局面において、上記改変された免疫細胞のうちのいずれか一つによる改変された免疫細胞を提供し、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子上の非重複標的部位を特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、ＣＤ１９、ＣＬＬ１、ＢＣＭＡ及びＧＰＣ３のうちのいずれかを特異的に認識する細胞外ドメインを含む。
【0020】
上記改変された免疫細胞のうちのいずれか一つによるいくつかの態様において、改変された免疫細胞は、第１のポリペプチドをコードする第１の核酸と、第２のポリペプチドをコードする第２の核酸とを含む。
【0021】
上記改変された免疫細胞のうちのいずれか一つによるいくつかの態様において、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは同じであり、且つ改変された免疫細胞は、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードする第１の核酸を含む。
【0022】
上記改変された免疫細胞のうちのいずれか一つによるいくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体をコードする第３の核酸を含む。いくつかの態様において、第１の核酸及び第２の核酸は、同一のプロモーターに操作可能に連結されている。いくつかの態様において、第１の核酸及び第２の核酸は、個別のプロモーターに操作可能に連結されている。いくつかの態様において、第１の核酸及び第３の核酸は、同一のプロモーターに操作可能に連結されている。いくつかの態様において、第１の核酸及び第３の核酸は、個別のプロモーターに操作可能に連結されている。いくつかの態様において、第１の核酸、第２の核酸、及び第３の核酸は、同一のプロモーターに操作可能に連結されている。
【0023】
上記改変された免疫細胞のうちのいずれか一つによるいくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＣＤ２０のサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＣＤ３３のサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインはＣＤ３３のＶサブユニットを特異的に認識し、且つ第２の標的結合ドメインはＣＤ３３のＣ２サブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＢＣＭＡのサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＧＰＲＣ５Ｄのサブユニットを特異的に認識する。
【0024】
上記改変された免疫細胞のうちのいずれか一つによるいくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ第２のポリペプチドは第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、第１の細胞内ドメインと第２の細胞内ドメインは同じである。いくつかの態様において、第１の細胞内ドメインと第２の細胞内ドメインは異なっている。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体は、ＧＭ－ＣＳＦ受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＩＬ－１５受容体及びＩＬ－２３受容体からなる群から選択される。いくつかの態様において、第２のサイトカイン受容体は、ＧＭ－ＣＳＦ受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＩＬ－１５受容体及びＩＬ－２３受容体からなる群から選択される。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。いくつかの態様において、第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメイン及び第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインのＣ末端は、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインのＮ末端と融合している。いくつかの態様において、第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインのＣ末端は、第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインのＮ末端と融合している。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインのＣ末端は、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインのＮ末端と融合し、且つ、第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインのＣ末端は、第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインのＮ末端と融合している。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインのＮ末端は、ＴＬＲシグナル伝達ドメインのＣ末端と融合している。いくつかの態様において、第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインのＮ末端は、ＴＬＲシグナル伝達ドメインのＣ末端と融合している。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインのＮ末端は、ＴＬＲシグナル伝達ドメインのＣ末端と融合し、且つ、第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインのＮ末端は、ＴＬＲシグナル伝達ドメインのＣ末端と融合している。
【0025】
本出願の一局面において、改変された免疫細胞を産生する方法を提供し、該方法は、第１のポリペプチドをコードする第１の核酸と、任意で、第２のポリペプチドをコードする第２の核酸とを、前駆体免疫細胞に導入する。
【0026】
上記産生方法のうちのいずれか一つによるいくつかの態様において、前駆体免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの態様において、前駆体免疫細胞は、操作された受容体を含む。いくつかの態様において、該産生方法は、操作された受容体をコードする第３の核酸を前駆体免疫細胞に導入することをさらに含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、改変されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体である。
【0027】
上記産生方法のうちのいずれか一つによるいくつかの態様において、第１の核酸、第２の核酸及び／又は第３の核酸は同一のベクター上にある。いくつかの態様において、ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの態様において、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター及びそれらの派生物からなる群から選択される。
【0028】
上記産生方法のうちのいずれか一つによるいくつかの態様において、該方法は、第１の核酸、第２の核酸及び／又は第３の核酸を含む免疫細胞を単離又は濃縮することをさらに含む。
【0029】
上記産生方法のうちのいずれか一つによる方法によって産生された、改変された免疫細胞をさらに提供する。
【0030】
上記改変された免疫細胞のうちのいずれか一つによる改変された免疫細胞及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物をさらに提供する。
【0031】
本出願の別の局面において、個体の疾患を治療する方法を提供し、該方法は、有効量の上記薬学的組成物のうちのいずれか一つによる薬学的組成物を該個体に投与することを含む。いくつかの態様において、該疾患は癌である。いくつかの態様において、該個体はヒトである。
【0032】
改変された免疫細胞のうちのいずれか一つを含む組成物、用途、キット及び製品をさらに提供する。
【図面の簡単な説明】
【0033】
【図1】抗ＣＤ１９－ＣＡＲと抗ＣＤ２０ ＴＬＲポリペプチドとを含むＣＡＲ融合コンストラクト（ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のバイシストロン発現設計を示した図である。ＣＡＲ骨格の配列は、Ｎ末端からＣ末端までの以下のパターンに従う：シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分、及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）。ＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｎ末端からＣ末端に向かって以下を含む誘導性共刺激分子に、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介して連結されている：シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）、及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）。
【図2】ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞、及びＴＬＲ４により武装化されたＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ細胞傷害性作用を示した図である。特に、図２は、ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ及びＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ Ｔ細胞がＲａｊｉ標的細胞の溶解をインビトロで投与量依存的に誘導することを示している。この実験では、形質導入されていないＴ細胞（即ち、「ｕｎＴ」）を対照として使用した。
【図3】Ｒａｊｉ標的細胞と共培養された、ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞、及びＴＬＲ４により武装化されたＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロＩＦＮγサイトカインセクションを示した図である。この実験では、形質導入されていないＴ細胞（即ち、「ｕｎＴ」）を対照として使用した。
【図4】Ｒａｊｉ標的細胞と共培養された、ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞、及びＴＬＲ４により武装化されたＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロＴＮＦαサイトカインセクションを示した図である。この実験では、形質導入されていないＴ細胞（即ち、「ｕｎＴ」）を対照として使用した。
【図5】Ｒａｊｉ標的細胞による反復腫瘍刺激アッセイにおける、ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞、及びＴＬＲ４により武装化されたＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ殺傷効果を示した図である。この実験では、形質導入されていないＴ細胞（即ち、「ＵＮＴ」）を対照として使用した。
【図6】Ｒａｊｉ標的細胞と共にインキュベートした後の、ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞、及びＴＬＲ４により武装化されたＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ増殖（例えば、拡大倍率）を示した図である。
【図7】抗ＣＬＬ１－ＣＡＲと抗ＣＤ３３ ＴＬＲポリペプチドとを含むＣＡＲ融合コンストラクト（ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１）のバイシストロン発現設計を示した図である。
【図8】ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＬＲ２及びＴＬＲ１により武装化されたＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、並びにＴＬＲ４により武装化されたＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ細胞傷害性作用を示した図である。特に、図８は、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ及びＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔ細胞がＵ９３７標的細胞の溶解をインビトロで投与量依存的に誘導することを示している。この実験では、形質導入されていないＴ細胞（即ち、「ｕｎＴ」）を対照として使用した。
【図9】Ｕ９３７標的細胞と共培養された、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＬＲ２及びＴＬＲ１により武装化されたＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、並びにＴＬＲ４により武装化されたＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－ＴのインビトロＩＦＮγサイトカインセクションを示した図である。この実験では、形質導入されていないＴ細胞（即ち、「ｕｎＴ」）を対照として使用した。
【図10】Ｕ９３７標的細胞と共培養された、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＬＲ２及びＴＬＲ１により武装化されたＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、並びにＴＬＲ４により武装化されたＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－ＴのインビトロＴＮＦαサイトカインセクションを示した図である。この実験では、形質導入されていないＴ細胞（即ち、「ｕｎＴ」）を対照として使用した。
【図11】Ｕ９３７標的細胞による反復腫瘍刺激アッセイにおける、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＬＲ２及びＴＬＲ１により武装化されたＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、並びにＴＬＲ４により武装化されたＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔのインビトロ殺傷効果を示した図である。この実験では、形質導入されていないＴ細胞（即ち、「ＵＮＴ」）を対照として使用した。
【図12】Ｕ９３７標的細胞と共にインキュベートした後の、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＬＲ２及びＴＬＲ１により武装化されたＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞、並びにＴＬＲ４により武装化されたＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔのインビトロ増殖（例えば、拡大倍率）を示した図である。
【図13】Ｕ９３７－Ｌｕｃ異種移植マウスモデルにおける、例示的ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ αβＴ及びＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ γδＴ治療のインビボ有効性研究を示した概略図である。
【図14】Ｕ９３７－Ｌｕｃ異種移植マウスモデルにおける、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ αβＴ細胞のインビボ有効性を示した図である。
【図15】Ｕ９３７－Ｌｕｃ異種移植マウスモデルにおける、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ γδＴ細胞及びＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ γδＴ細胞のインビボ有効性を示した図である。
【図16A】図１６Ａ～１６Ｂは、ＮＫＧ２Ｄ又は突然変異ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲキメラ受容体により武装化されたＣＡＲ又はＴＣＲの例示的コンストラクトを示した図である。図１６Ａは、ＮＫＧ２Ｄ又は突然変異ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲキメラ受容体により武装化されたＣＡＲの概略図を示す。図１６Ｂは、ＮＫＧ２Ｄ又は突然変異ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲキメラ受容体により武装化されたＴＣＲの概略図を示す。
【図17A】図１７Ａ～１７Ｂは、ＮＫＧ２Ｄリガンドを標的とする結合ドメイン、ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及び細胞内エフェクタードメインを含むキメラ受容体により武装化されたＣＡＲ又はＴＣＲの例示的コンストラクトを示した図である。図１７Ａは、ＮＫＧ２Ｄリガンドを標的とする結合ドメイン、ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及び細胞内エフェクタードメインを含むキメラ受容体により武装化されたＣＡＲの概略図を示す。図１７Ｂは、ＮＫＧ２Ｄリガンドを標的とする結合ドメイン、ＴＬＲ膜貫通ドメイン、及び細胞内エフェクタードメインを含むキメラ受容体により武装化されたＴＣＲの概略図を示す。
【図18】図１８Ａ～１８Ｂは、ＮＫＧ２Ｄ又は突然変異ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化されたＣＡＲ又はＴＣＲの例示的コンストラクトを示した図である。図１８Ａは、ＮＫＧ２Ｄ又は突然変異ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された第２世代ＣＡＲを示す。図１８Ｂは、ＮＫＧ２Ｄ又は突然変異ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化されたＴＣＲを示す。
【図19】Ｈｕｈ７標的細胞による反復腫瘍刺激アッセイにおける、ＮＫＧ２Ｄ－ＴＬＲ４又はＮＫＧ２Ｄ－ＣＤ８－ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ及び抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ殺傷効果を示した図である。この実験では、形質導入されていないＴ細胞（即ち、「ＵＮＴ」）を対照として使用した。
【図20】Ｈｕｈ７標的細胞と共にインキュベートした後の、ＮＫＧ２Ｄ－ＴＬＲ４又はＮＫＧ２Ｄ－ＣＤ８－ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ及び抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ増殖を示した図である。
【図21】Ｈｕｈ７標的細胞と共培養された、ＮＫＧ２Ｄ－ＴＬＲ４又はＮＫＧ２Ｄ－ＣＤ８－ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ及び抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロＩＦＮγサイトカインセクションを示した図である。この実験では、形質導入されていないＴ細胞（即ち、「ＵＮＴ」）を対照として使用した。
【図22】Ｒａｊｉ標的細胞による反復腫瘍刺激アッセイにおける、ＮＫＧ２Ｄ－ＴＬＲ４又はＮＫＧ２Ｄ－ＣＤ８－ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ及び抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ殺傷効果を示した図である。この実験では、形質導入されていないＴ細胞（即ち、「ＵＮＴ」）を対照として使用した。
【図23】Ｒａｊｉ標的細胞と共にインキュベートした後の、ＮＫＧ２Ｄ－ＴＬＲ４又はＮＫＧ２Ｄ－ＣＤ８－ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ及び抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ増殖を示した図である。
【図24】Ｈｕｈ７異種移植モデルにおける、ＮＫＧ２Ｄ－ＣＤ８－ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビボ有効性を示した図である。
【図25】タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１）又は単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２）、単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＤ８ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３）、単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＤ２８ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４）に加えて、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５）、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ－ＣＤ８ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２）、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ－ＣＤ２８ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３）を含むＣＡＲ融合コンストラクトのバイシストロン発現設計を示した図である。
【図26】ＴＬＲ４細胞内シグナル伝達により武装化された抗ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－γδＴ及び抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－γδＴ細胞のインビトロ細胞傷害性作用を示した図である。この実験では、形質導入されていないγδＴ細胞（即ち、「Ｕｎ－γδＴ」）を対照として使用した。
【図27】ＢＣＭＡ陽性ＮＣＩ－Ｈ９２９標的腫瘍細胞と共培養される、ＴＬＲ４細胞内シグナル伝達により武装化された抗ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－γδＴ及び抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－γδＴ細胞のインビトロＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＧＭ－ＣＳＦサイトカイン分泌を示した図である。この実験では、形質導入されていないγδＴ細胞（即ち、「Ｕｎ－γδＴ」）を対照として使用した。
【図28】ＢＣＭＡ陽性ＮＣＩ－Ｈ９２９標的腫瘍細胞による反復腫瘍刺激アッセイにおける、タンデム抗ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－γδＴ、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＡＲ γδＴ、単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ γδＴ、単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＤ８ ＣＡＲ γδＴ、単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＤ２８ ＣＡＲ γδＴ、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ－ＣＡＲ γδＴ及びタンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ－ＣＤ８ ＣＡＲ－γδＴ細胞のインビトロ殺傷効果及び持続性を示した図である。この実験では、形質導入されていないγδＴ細胞（即ち、「Ｕｎ－γδＴ」）を対照として使用した。
【図29】ＴＬＲ４細胞内シグナル伝達により武装化されたタンデム抗ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－γδＴ及びタンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－γδＴ細胞の同種異系環境での持続性を示した図であり、ここで、γδＴ細胞、同種異系ＰＢＭＣ及びＢＣＭＡ陽性ＮＣＩ－Ｈ９２９標的腫瘍細胞は１：６０：１の比で共インキュベートされる。
【図30】ＢＣＭＡ陽性ＲＰＭＩ－８２２６腫瘍負荷異種移植モデルにおける、ＴＬＲ４細胞内シグナル伝達により武装化されたタンデム抗ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－γδＴ、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－γδＴ細胞及びタンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ－ＣＤ８－γδＴ細胞のインビボ殺傷効果及び持続性を示した図である。この実験では、形質導入されていないγδＴ細胞（即ち、「Ｕｎ－γδＴ」）及びビヒクルＨＢＳＳを対照として使用した。
【発明を実施するための形態】
【0034】
詳細な説明
本出願は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）共刺激分子（例えば、ＴＬＲポリペプチド）を含む改変された免疫細胞、及びそれを癌の治療に使用する方法を提供する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、第１のＴＬＲポリペプチド及び第２のＴＬＲポリペプチドを含有するＴＬＲベースの多量体を含み、前記ポリペプチドを発現しない改変された免疫細胞に比べて、これらの改変された免疫細胞は、有効で持続的な腫瘍溶解活性及び改善された疲弊特性を有する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲポリペプチドは、ｉ）第１の標的結合ドメイン（例えば、抗体部分又はその断片）と、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含み、且つ第２のＴＬＲポリペプチドは、ｉ）第２の標的結合ドメイン（例えば、抗体部分又はその断片）と、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む。第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは、互いに会合することによって、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はＴ細胞である。
本出願は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）共刺激分子（例えば、ＴＬＲポリペプチド）を含む改変された免疫細胞、及びそれを癌の治療に使用する方法を提供する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、第１のＴＬＲポリペプチド及び第２のＴＬＲポリペプチドを含有するＴＬＲベースの多量体を含み、前記ポリペプチドを発現しない改変された免疫細胞に比べて、これらの改変された免疫細胞は、有効で持続的な腫瘍溶解活性及び改善された疲弊特性を有する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲポリペプチドは、ｉ）第１の標的結合ドメイン（例えば、抗体部分又はその断片）と、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含み、且つ第２のＴＬＲポリペプチドは、ｉ）第２の標的結合ドメイン（例えば、抗体部分又はその断片）と、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む。第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは、互いに会合することによって、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はＴ細胞である。
【0035】
いくつかの態様において、改変された細胞は、関心のある標的抗原を特異的に認識するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をさらに発現する。本明細書に記載のＴＬＲポリペプチドは、ＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖を増加させ、抗腫瘍活性を増強する。
【0036】
ＴＬＲポリペプチドにおけるＴＬＲシグナル伝達の活性化は、標的依存的であり、且つ二量体化又は多量体化されたＴＬＲポリペプチド、及びＴＬＲポリペプチドが対応する標的分子に結合した後のＴＬＲシグナル伝達部分の形成によって開始される。本出願は、ＴＬＲシグナル伝達部分の形成を誘導するための複数の戦略を提供する。第１の戦略では、第１のポリペプチドの第１の標的結合ドメイン及び第２のポリペプチドの第２の結合ドメインは、多量体標的分子のサブユニットにそれぞれ結合する。標的結合ドメインがその相同標的サブユニットに結合する場合、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは、互いに会合することによって、ＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。第２の戦略では、第１のポリペプチドの第１の標的結合ドメイン及び第２のポリペプチドの第２の結合ドメインは、標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合する。標的結合ドメインがその相同標的分子に結合する場合、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは、互いに会合することによって、ＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。第３の戦略では、免疫細胞が、細胞外ドメインを含有する操作された受容体を含む場合、細胞外ドメイン及び第１又は第２の標的結合ドメインは、同一の標的分子上の異なる非重複標的側にそれぞれ結合する。理論に束縛されるものではないが、操作された受容体の細胞外ドメインが標的分子に結合する場合、操作された受容体の周囲には免疫シナプスが形成されると考えられる。第１及び第２のポリペプチドは、同じ免疫シナプスに動員され、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインが、互いに会合することによって、ＴＬＲシグナル伝達部分を形成することを可能にする。別の戦略では、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、同じモノマー標的分子（例えば、同じ標的部位にある）にそれぞれ結合し、且つ第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインと標的分子との結合は、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインが、互いに会合することによって、ＴＬＲシグナル伝達部分を形成することを可能にする。
【0037】
そのため、本出願の一局面において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメイン（例えば、抗体部分又はその断片）と、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメイン（例えば、抗体部分又はその断片）と、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、多量体標的分子のサブユニットにそれぞれ結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは、標的分子上の同じ標的部位にそれぞれ結合する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体、改変されたＴ細胞受容体又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。
【0038】
本出願の別の局面において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメイン（例えば、抗体部分又はその断片）と、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメイン（例えば、抗体部分又はその断片）と、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合し、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、改変されたＴ細胞受容体又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。
【0039】
本出願の別の局面において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメイン（例えば、抗体部分又はその断片）と、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメイン（例えば、抗体部分又はその断片）と、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチド、及び、ｃ）操作された受容体（例えば、ＣＡＲ）を含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子上の非重複標的部位を特異的に認識する細胞外ドメインを含む。
【0040】
さらに、改変された免疫細胞を含む組成物（例えば、薬学的組成物）、キット及び製品、並びに本明細書に記載の改変された免疫細胞で疾患又は病症（例えば、癌）を治療する方法は提供される。
【0041】
Ｉ．定義
本明細書に使用されるように、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ又はｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、有益又は所望の結果（臨床結果を含む）を得るための方法である。本開示の目的のために、有益又は所望の臨床結果は、疾患によって引き起こされる一つ又は複数の症状を軽減すること、疾患の程度を減少させること、疾患を安定させること（例えば、疾患の悪化を予防又は遅延させること）、疾患の拡散（例えば、転移）を予防又は遅延させること、疾患の再発を予防又は遅延させること、疾患の進行を遅延させるか又は緩めること、疾患の状態を改善すること、疾患の緩和（一部又は全部）を提供し、疾患の治療に必要な一つ又は複数の他の薬物の投与量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、生活の質を向上させること、及び／又は生存期間を延長することのうちの一つ又は複数を含むが、それらに限らない。「治療」は、疾患（例えば、癌）の病理的結果を減少させることをさらにカバーする。本出願の方法は、これらの治療の局面のうちのいずれか一つ又は複数を考慮する。
本明細書に使用されるように、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ又はｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、有益又は所望の結果（臨床結果を含む）を得るための方法である。本開示の目的のために、有益又は所望の臨床結果は、疾患によって引き起こされる一つ又は複数の症状を軽減すること、疾患の程度を減少させること、疾患を安定させること（例えば、疾患の悪化を予防又は遅延させること）、疾患の拡散（例えば、転移）を予防又は遅延させること、疾患の再発を予防又は遅延させること、疾患の進行を遅延させるか又は緩めること、疾患の状態を改善すること、疾患の緩和（一部又は全部）を提供し、疾患の治療に必要な一つ又は複数の他の薬物の投与量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、生活の質を向上させること、及び／又は生存期間を延長することのうちの一つ又は複数を含むが、それらに限らない。「治療」は、疾患（例えば、癌）の病理的結果を減少させることをさらにカバーする。本出願の方法は、これらの治療の局面のうちのいずれか一つ又は複数を考慮する。
【0042】
「予防（ｐｒｅｖｅｎｔ）」及び「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｅｄ、ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」などの類似用語は、疾患又は病症（例えば、癌）の再発の可能性を予防、阻害又は低下させるための方法を表す。それは、疾患もしくは病症の再発を遅延させるか又は疾患もしくは病症の症状の再発を遅延させることをさらに指す。本明細書で使用されるように、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」及び類似用語は、疾患又は病症の再発前に疾患又は病症の強度、作用を低下させ、症状及び／又は負荷を減少させることをさらに含む。
【0043】
本明細書で使用されるように、癌の進行を「遅延」させるとは、疾患の進行を遅らせ、阻害し、減速させ、延ばし、安定させ及び／又は遅くすることを指す。このような遅延は、疾患の歴史及び／又は治療される個体に応じて、異なる時間長を有してもよい。該方法を用いない場合に比べて、癌の進行を「遅延」させる方法は、所与の時間範囲内で疾患進行の確率を低減し、及び／又は所与の時間範囲内で疾患の程度を低減する方法である。このような比較は、通常、統計学的に有意な数の個体を使用した臨床試験に基づく。癌の進行は、標準的な方法を用いて検出することができ、これらの標準的な方法は、コンピュータ体軸断層撮影（ＣＡＴスキャン）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、腹部超音波検査、凝固検査、動脈造影法又は生検を含むが、それらに限らない。進行は、最初に検出不能であり得る癌の進行を指してもよく、且つ発生、再発及び発作を含む。
【0044】
本明細書で使用される「有効量」という用語は、特定の障害、病症又は疾患を治療して、例えば、その一つ又は複数の症状を改善、軽減、減少及び／又は遅延させるのに十分な薬剤又は薬剤の組み合わせの量を指す。癌については、有効量は、腫瘍の縮小を引き起こし、及び／又は腫瘍の増殖速度を低下させる（例えば、腫瘍成長を阻害する）か又は他の望ましくない細胞増殖を予防又は遅延させるのに十分な量を含む。いくつかの態様において、有効量は、疾患の進行を遅延させるのに十分な量である。いくつかの態様において、有効量は、再発を予防又は遅延させるのに十分な量である。有効量は、一回又は複数回の投与で投与され得る。薬物又は組成物の有効量は、（ｉ）癌細胞の数を減少させ、（ｉｉ）腫瘍サイズを小さくし、（ｉｉｉ）周囲の臓器への癌細胞の浸潤をある程度阻害し、減速させ、緩め、且つ好ましくは阻止し、（ｉｖ）腫瘍の転移を阻害し（即ち、ある程度減速させ、且つ好ましくは阻止し）、（ｖ）腫瘍成長を阻害し、（ｖｉ）腫瘍の発生及び／又は再発を予防又は遅延させ、及び／又は（ｖｉｉ）癌に関連する一つ又は複数の症状をある程度緩和することができる。
【0045】
本明細書で使用されるように、「個体」又は「被験体」は、哺乳動物を指し、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、げっ歯動物又は霊長類動物を含むが、それらに限らない。いくつかの態様において、該個体はヒトである。
【0046】
「単離された」核酸は、その天然環境の成分から単離された核酸分子を指す。単離した核酸は、核酸分子を通常含む細胞に含まれる該核酸分子を含むが、該核酸分子は、染色体外又はその天然染色体位置と異なる染色体位置に存在する。
【0047】
本明細書に使用されるように、「ベクター」という用語は、それに連結される別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。該用語は、自己複製核酸構造とするベクター、及びベクターが導入された宿主細胞ゲノムに組み込まれたベクターを含む。いくつかのベクターは、それに操作可能に連結される核酸の発現を誘導することができる。このようなベクターは、本明細書において、「発現ベクター」と呼ばれる。
【0048】
本明細書で使用されるように、「トランスフェクトした」又は「形質転換した」又は「形質導入した」という用語は、異種核酸を宿主細胞に転移又は導入するプロセスを指す。「トランスフェクトした」又は「形質転換した」又は「形質導入した」細胞は、既に異種核酸でトランスフェクト、形質転換又は形質導入した細胞である。この細胞は、初代標的細胞及びその子孫を含む。
【0049】
本明細書によって同定されるポリペプチド配列に関わる「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」を、配列のアラインメント（任意の保存的置換を配列同一性の一部とする）の後、候補配列における、比較されるポリペプチドにおけるアミノ酸残基と同じであるアミノ酸残基のパーセントと定義する。アミノ酸配列同一性パーセントを確定するという目的のために、当分野の技術における種々の方法により、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）又はＭＵＳＣＬＥソフトウェアのような公衆に取得可能なコンピュータソフトウェアを用いてアラインメントを実現してもよい。当業者は、比較される配列の全長範囲内に最大整列を実現させる任意のアルゴリズムを含み、測定整列に用いられる適当なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的のために、配列比較コンピュータプログラムＭＵＳＣＬＥを用いて、アミノ酸配列同一性％の値を生成する（Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２（５）：１７９２－１７９７，２００４、Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ５（１）：１１３，２００４）。
【0050】
本明細書で使用されるように、「キメラ抗原受容体」又は「ＣＡＲ」は、一つ又は複数の抗原をＴ細胞のような細胞に特異的に移植する遺伝子操作された受容体を指す。ＣＡＲは、「人工Ｔ細胞受容体」、「キメラＴ細胞受容体」又は「キメラ免疫受容体」とも呼ばれる。いくつかの態様において、ＣＡＲは、腫瘍抗原に対して特異性を有する抗体の細胞外可変ドメイン、及びＴ細胞又は他の受容体の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、一つ又は複数の共刺激ドメインを含む。「ＣＡＲ－Ｔ」は、ＣＡＲを発現するＴ細胞を指す。本明細書で使用されるように、「ＣＬＬ１ ＣＡＲ」は、ＣＬＬ１を特異的に認識するＣＡＲを指し、「ＣＤ１９ ＣＡＲ」は、ＣＤ１９を特異的に認識するＣＡＲを指し、「ＧＰＣ３ ＣＡＲ」は、ＧＰＣ３を特異的に認識するＣＡＲを指し、且つ「ＢＣＭＡ ＣＡＲ」は、ＢＣＭＡを特異的に認識するＣＡＲを指す。
【0051】
本明細書で使用されるように、「Ｔ細胞受容体」又は「ＴＣＲ」は、細胞外抗原結合ドメインを含む内因性又は改変されたＴ細胞受容体を指し、該細胞外抗原結合ドメインは、ＭＨＣ分子に結合する特異性抗原ペプチドに結合する。いくつかの態様において、ＴＣＲは、ＴＣＲαポリペプチド鎖とＴＣＲβポリペプチド鎖とを含む。いくつかの態様において、ＴＣＲは、ＴＣＲγポリペプチド鎖とＴＣＲδポリペプチド鎖とを含む。いくつかの態様において、ＴＣＲは腫瘍抗原に特異的に結合する。「ＴＣＲ－Ｔ」は、組換えＴＣＲを発現するＴ細胞を指す。
【0052】
本明細書で使用されるように、「Ｔ細胞抗原カプラ受容体」又は「ＴＡＣ受容体」は、特異性抗原に結合する細胞外抗原結合ドメイン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び共受容体分子の細胞内ドメインを含む操作された受容体を指す。ＴＡＣ受容体は、ＴＡＣ受容体を発現するＴ細胞の内因性ＴＣＲを特定して、標的細胞に対する抗原特異性Ｔ細胞応答を誘発する。
【0053】
本明細書において、「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、且つ様々な抗体構造をカバーし、これらの抗体構造は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及び抗体断片を含むが、それらに限らず、それらが所望の抗原結合活性を示せばよい。抗体という用語は、抗原に結合できる断片、例えば、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及び（Ｆａｂ’）２を含むが、それらに限らない。抗体という用語は、従来の四鎖抗体及び単一ドメイン抗体、例えば、重鎖のみを有する抗体又はその断片、例えば、ＶＨＨを含む。
【0054】
本明細書で使用されるように、「結合」、「特異的に結合」又は「……に対して特異性を有する」という用語は、測定と再現が可能である相互作用を指し、例えば、標的と抗体との結合であり、これは、ヘテロ分子（生体分子を含む）群が存在する時の標的の存在を決定する。例えば、標的（エピトープであってもよい）に結合又は特異的に結合する抗体は、この標的に結合する抗体であり、その親和性、アビディティ（ａｖｉｄｉｔｙ）、レディー及び／又は持続時間は、他の標的との結合よりも優れている。一態様において、抗体と関係のない標的との結合程度は、例えば、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される抗体と標的との結合の約１０％より小さい。いくつかの態様において、標的に特異的に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ又は≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。いくつかの態様において、抗体は、異なる種からのタンパク質の中で保存されているタンパク質エピトープに特異的に結合する。別の態様において、特異的結合は、排他的結合を含んでもよいが、これに限定しない。
【0055】
「細胞」という用語は、初代標的細胞及びその子孫を含む。
【0056】
理解すべきこととして、本明細書に記載の本開示の態様は、態様「からなる」及び／又は「から本質的になる」を含む。
【0057】
本明細書において、「約」値又はパラメータに対する言及は、該値又はパラメータ自体に対する変化を含む（且つ記述する）。例えば、「約Ｘ」に関する記述は、「Ｘ」の記述を含む。
【0058】
本明細書で使用されるように、「ではない」値又はパラメータに対する言及は、通常、「異なる」値又はパラメータを意味し且つ記述する。例えば、Ｘ型癌を治療するための方法ではないことは、該方法がＸ型と異なる癌の治療に用いられることを意味する。
【0059】
本明細に用いられる「約Ｘ～Ｙ」という用語は、「約Ｘから約Ｙ」と同じ意味を有する。
【0060】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「一つ／種（ａ／ａｎ）」及び「これら／該（ｔｈｅ）」は、文脈が他の状況を明確に示さない限り、複数の指示対象を含む。
【0061】
理解すべきこととして、明確にするために、個別の態様の文脈で説明された本開示のいくつかの特徴は、単一の態様において組み合わせて提供されてもよい。逆に、簡潔さのために、単一の態様の文脈で説明された本開示の異なる特徴は、単独で、又は任意の適切な部分的組み合わせで提供されてもよい。本明細書に記載の改変された免疫細胞及び治療方法に関する態様の全ての組み合わせは、いずれも本出願に明確に包含され、且つ各組み合わせが個別で明確に開示されているように、本明細書に開示されている。なお、このような変数を説明する態様において列挙される改変された免疫細胞の全ての部分的組み合わせも、いずれも本出願に明確に包含され、且つタンパク質のこのような各部分的組み合わせが本明細書において個別で明確に開示されているように、本明細書に開示されている。
【0062】
ＩＩ．改変された免疫細胞
本出願の一局面において、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを含む改変された免疫細胞を提供し、ここで、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、ＴＬＲシグナル伝達ドメインを含むＴＬＲポリペプチド（例えば、ＴＬＲ共刺激ポリペプチド）をコードする。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドがそれらの対応する標的に結合したら、第１及び第２のポリペプチドのＴＬＲシグナル伝達ドメインは、互いに会合することによって、ＴＬＲシグナル伝達部分を形成し、ここで、ＴＬＲシグナル伝達部分は、ＴＬＲシグナル伝達を誘導することによって、強い抗腫瘍効果をもたらす。第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、同じであってもよく、又は異なっていてもよい。
本出願の一局面において、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを含む改変された免疫細胞を提供し、ここで、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、ＴＬＲシグナル伝達ドメインを含むＴＬＲポリペプチド（例えば、ＴＬＲ共刺激ポリペプチド）をコードする。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドがそれらの対応する標的に結合したら、第１及び第２のポリペプチドのＴＬＲシグナル伝達ドメインは、互いに会合することによって、ＴＬＲシグナル伝達部分を形成し、ここで、ＴＬＲシグナル伝達部分は、ＴＬＲシグナル伝達を誘導することによって、強い抗腫瘍効果をもたらす。第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、同じであってもよく、又は異なっていてもよい。
【0063】
いくつかの態様において、前記ＴＬＲポリペプチドを含まない改変された免疫細胞に比べて、第１及び第２のＴＬＲポリペプチドを含む改変された免疫細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナルにより誘導された、増加したＴ細胞活性化、機能及び／又は生存を有する。いくつかの態様において、前記ＴＬＲポリペプチドを含まない改変された免疫細胞に比べて、ＴＬＲポリペプチドは、改変された免疫細胞により、腫瘍細胞殺傷効果の増加を誘導する。いくつかの態様において、前記ＴＬＲポリペプチドを含まない改変された免疫細胞に比べて、ＴＬＲポリペプチド誘導は、腫瘍細胞殺傷効果の増加を誘導し、例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１２倍、１４倍、１６倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍又はそれ以上のうちのいずれか一つ増加する。いくつかの態様において、前記ＴＬＲポリペプチドを含まない改変された免疫細胞に比べて、ＴＬＲポリペプチドは、改変された免疫細胞に持続的有効性を付与し、例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、１０００倍又はそれ以上のうちのいずれか一つ増加する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＴＬＲポリペプチドを含む改変された免疫細胞に比べて、個体に投与される場合に、低下したインビボ毒性を有する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＴＬＲポリペプチドを含む改変された免疫細胞に比べて、個体に投与される場合にインビボ疲弊を減少させる。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは共刺激分子である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0064】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインは同じＴＬＲ分子に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインは異なるＴＬＲ分子に由来する。いくつかの態様において、第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは同じＴＬＲ分子に由来する。いくつかの態様において、第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは異なるＴＬＲ分子に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと第２のＴＬＲ膜貫通ドメインは同じである。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと第２のＴＬＲ膜貫通ドメインは異なっている。いくつかの態様において、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは異なっている。いくつかの態様において、該一つ又は複数のＴＬＲ分子は、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８及びＴＬＲ９、例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４又はＴＬＲ６からなる群から選択される。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0065】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成し、且つここで、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン、第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ４に由来する。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0066】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成し、ここで、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ２に由来し、且つここで、第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ１に由来し、又はここで、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ１に由来し、且つここで、第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ２に由来する。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0067】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成し、ここで、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ６に由来し、且つここで、第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ２に由来し、又はここで、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ２に由来し、且つここで、第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ６に由来する。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0068】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成し、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインはｓｃＦｖ又はｓｄＡｂである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインは、ＣＤ３３、ＣＬＬ１、ＣＤ１２３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＮＫＧ２Ｄ又はＧＰＣ３に特異的に結合する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインは同じである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインは異なっている。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドの標的分子は、免疫チェックポイントタンパク質である。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドの標的分子は、ＰＤ－１、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＳＩＲＰα及びＴＩＧＩＴからなる群から選択される。上記改変された免疫細胞のうちのいずれか一つによるいくつかの態様において、標的分子は、免疫細胞上に発現する天然タンパク質である。いくつかの態様において、標的分子はＮＫＧ２Ｄである。いくつかの態様において、標的分子は突然変異ＮＫＧ２Ｄである。いくつかの態様において、突然変異ＮＫＧ２Ｄは、短縮された配列及び／又はアミノ酸の置換、突然変異、付加及び／又は欠失を含む。いくつかの態様において、標的分子は、ＮＫＧ２Ｄの細胞外抗原結合ドメインである。いくつかの態様において、標的分子はＮＫＧ２Ｄの全長配列である。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0069】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成し、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、多量体標的分子のサブユニットにそれぞれ結合する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、多量体標的分子のサブユニットは異なっている。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインはＣＤ３３のＶサブユニットを特異的に認識し、且つ第２の標的結合ドメインはＣＤ３３のＣ２サブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、多量体標的分子のサブユニットは同じである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＣＤ２０のサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＣＤ３３のサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＢＣＭＡのサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＮＫＧ２Ｄのサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＧＰＲＣ５Ｄのサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＮＫＧ２Ｄのサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体をさらに含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、ＣＤ１９、ＣＬＬ１、ＢＣＭＡ又はＧＰＣ３のうちのいずれかを特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、ＣＡＲ、例えば、ＣＤ１９ ＣＡＲ、ＣＬＬ１ ＣＡＲ、ＧＰＣ３ ＣＡＲ又はＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデムＢＣＭＡ ＣＡＲ）である。いくつかの態様において、操作された受容体は操作されたＴＣＲである。いくつかの態様において、操作された受容体はＴＡＣ受容体である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0070】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成し、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは、標的分子上の同じ標的部位にそれぞれ結合する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＣＤ２０のサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＣＤ３３のサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＢＣＭＡのサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＮＫＧ２Ｄのサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＧＰＲＣ５Ｄのサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＮＫＧ２Ｄのサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体をさらに含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、ＣＤ１９、ＣＬＬ１、ＧＰＣ３及びＢＣＭＡのうちのいずれか一つを特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、ＣＡＲ、例えば、ＣＤ１９ ＣＡＲ、ＣＬＬ１ ＣＡＲ、ＧＰＣ３ ＣＡＲ又はＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデムＢＣＭＡ ＣＡＲ）である。いくつかの態様において、操作された受容体は操作されたＴＣＲである。いくつかの態様において、操作された受容体はＴＡＣ受容体である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0071】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ４膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ４膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、多量体標的分子のサブユニットにそれぞれ結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＮＫＧ２Ｄの細胞外ＮＫＧ２Ｄ結合ドメインである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインはｓｃＦｖ又はｓｄＡｂである。いくつかの態様において、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは同じである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＣＤ２０に特異的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＣＤ３３のサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＢＣＭＡに特異的に結合するｓｄＡｂである。いくつかの態様において、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは異なっている。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0072】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ２膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲ２シグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ１膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲ１シグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、多量体標的分子のサブユニットにそれぞれ結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ１シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインはｓｃＦｖ又はｓｄＡｂである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインはＣＤ３３のＶサブユニットを特異的に認識し、且つ第２の標的結合ドメインはＣＤ３３のＣ２サブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0073】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0074】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0075】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0076】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0077】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0078】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン及びＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１の細胞質部分）を含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0079】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合し、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＮＫＧ２Ｄの細胞外ＮＫＧ２Ｄ結合ドメインである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインはｓｃＦｖ又はｓｄＡｂである。いくつかの態様において、多量体標的分子のサブユニットは同じである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＣＤ２０のサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＢＣＭＡに特異的に結合するｓｄＡｂである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＣＤ３３に特異的に結合するｓｄＡｂである。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体をさらに含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、ＣＤ１９、ＣＬＬ１、ＧＰＣ３及びＢＣＭＡのうちのいずれか一つを特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、ＣＡＲ、例えば、ＣＤ１９ ＣＡＲ、ＣＬＬ１ ＣＡＲ、ＧＰＣ３ ＣＡＲ又はＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデムＢＣＭＡ ＣＡＲ）である。いくつかの態様において、操作された受容体は操作されたＴＣＲである。いくつかの態様において、操作された受容体はＴＡＣ受容体である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0080】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ４膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ４膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＮＫＧ２Ｄの細胞外ＮＫＧ２Ｄ結合ドメインである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインはｓｃＦｖ又はｓｄＡｂである。いくつかの態様において、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは同じである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＣＤ２０に特異的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＢＣＭＡに特異的に結合するｓｄＡｂである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＣＤ３３に特異的に結合するｓｄＡｂである。いくつかの態様において、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは異なっている。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0081】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ２膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲ２シグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ１膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲ１シグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ１シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインはｓｃＦｖ又はｓｄＡｂである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインはＣＤ３３のＶサブユニットを特異的に認識し、且つ第２の標的結合ドメインはＣＤ３３のＣ２サブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0082】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合し、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0083】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合し、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0084】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合し、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0085】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合し、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0086】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合し、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0087】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合し、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン及びＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0088】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチド、及び、ｃ）操作された受容体を含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、第１のポリペプチドと同じである標的分子（第２のポリペプチドの標的分子と異なっている）を特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、第２のポリペプチドと同じである標的分子（第１のポリペプチドの標的分子と異なっている）を特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、多量体標的分子のサブユニットにそれぞれ結合する。いくつかの態様において、多量体標的分子のサブユニットは異なっている。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインはＣＤ３３のＶサブユニットを特異的に認識し、且つ第２の標的結合ドメインはＣＤ３３のＣ２サブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、多量体標的分子のサブユニットは同じである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、ＣＤ２０のサブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子上の非重複標的部位を特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、ＣＤ１９、ＣＬＬ１、ＧＰＣ３及びＢＣＭＡのうちのいずれか一つを特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、ＣＡＲ、例えば、ＣＤ１９ ＣＡＲ、ＣＬＬ１ ＣＡＲ、ＧＰＣ３ ＣＡＲ又はＢＣＭＡ ＣＡＲである。いくつかの態様において、操作された受容体は操作されたＴＣＲである。いくつかの態様において、操作された受容体はＴＡＣ受容体である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0089】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ４膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ４膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチド、及び、ｃ）操作された受容体を含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＮＫＧ２Ｄの細胞外ＮＫＧ２Ｄ結合ドメインである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインはｓｃＦｖ又はｓｄＡｂである。いくつかの態様において、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは同じである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＣＤ２０に特異的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合するｓｃＦｖである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＢＣＭＡに特異的に結合するｓｄＡｂである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインはそれぞれ、ＣＤ３３に特異的に結合するｓｄＡｂである。いくつかの態様において、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは異なっている。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0090】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ２膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲ２シグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ１膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲ１シグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチド、及び、ｃ）操作された受容体を含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ１シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメインはｓｃＦｖ又はｓｄＡｂである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインは、抗体部分又はその抗原結合断片である。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインはＣＤ３３のＶサブユニットを特異的に認識し、且つ第２の標的結合ドメインはＣＤ３３のＣ２サブユニットを特異的に認識する。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0091】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチド、及び、ｃ）操作された受容体を含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0092】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチド、及び、ｃ）操作された受容体を含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0093】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチド、及び、ｃ）操作された受容体を含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0094】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチド、及び、ｃ）操作された受容体を含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0095】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチド、及び、ｃ）操作された受容体を含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0096】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチド、及び、ｃ）操作された受容体を含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン及びＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１の細胞質部分）を含み、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0097】
いくつかの態様において、ＣＡＲを発現する免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、多量体標的分子のサブユニットにそれぞれ結合する。いくつかの態様において、多量体標的分子のサブユニットは異なっている。いくつかの態様において、多量体標的分子のサブユニットは同じである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは、標的分子上の同じ標的部位にそれぞれ結合する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインは同じである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合し、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合する。いくつかの態様において、ＣＡＲは、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲは、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子上の非重複標的部位を特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲは、ＣＤ１９、ＣＬＬ１、ＧＰＣ３及びＢＣＭＡのうちのいずれか一つを特異的に認識する細胞外ドメイン（例えば、単一ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデムＢＣＭＡ ＣＡＲ）を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0098】
いくつかの態様において、ＴＣＲを発現する免疫細胞（例えば、ＴＣＲ－Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、多量体標的分子のサブユニットにそれぞれ結合する。いくつかの態様において、多量体標的分子のサブユニットは異なっている。いくつかの態様において、多量体標的分子のサブユニットは同じである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは、標的分子上の同じ標的部位にそれぞれ結合する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインは同じである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合し、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合する。いくつかの態様において、ＴＣＲは、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、ＴＣＲは、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子上の非重複標的部位を特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、ＴＣＲは、ＣＤ１９、ＣＬＬ１、ＧＰＣ３及びＢＣＭＡのうちのいずれか一つを特異的に認識する細胞外ドメイン（例えば、単一ＢＣＭＡ ＴＣＲ又はタンデムＢＣＭＡ ＴＣＲ）を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0099】
いくつかの態様において、ＴＡＣを発現する免疫細胞（例えば、ＴＡＣ－Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、多量体標的分子のサブユニットにそれぞれ結合する。いくつかの態様において、多量体標的分子のサブユニットは異なっている。いくつかの態様において、多量体標的分子のサブユニットは同じである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは、標的分子上の同じ標的部位にそれぞれ結合する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインは同じである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合し、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合する。いくつかの態様において、ＴＡＣは、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、ＴＡＣは、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子上の非重複標的部位を特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、ＴＡＣは、ＣＤ１９、ＣＬＬ１、ＧＰＣ３及びＢＣＭＡのうちのいずれか一つを特異的に認識する細胞外ドメイン（例えば、単一ＢＣＭＡ ＴＡＣ又はタンデムＢＣＭＡ ＴＡＣ）を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0100】
いくつかの態様において、ＣＡＲを発現する免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメイン（例えば、抗体部分又はその抗原結合断片）と、ｉｉ）第１のＴＬＲ４膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメイン（例えば、抗体部分又はその抗原結合断片）と、ｉｉ）第２のＴＬＲ４膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲ４シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲ４シグナル伝達を誘導できるＴＬＲ４シグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、シグナルペプチド（例えば、リーダー配列）をさらに含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは同じである。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲを発現する。いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲを発現する。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＣＤ２８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）を発現する。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０を含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲを発現する。いくつかの態様において、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトは、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＣＤ２０ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲ及び抗ＣＤ３３ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
いくつかの態様において、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトは、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＣＤ２０ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲ及び抗ＣＤ３３ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0101】
いくつかの態様において、ＣＡＲを発現する免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）を提供し、それは、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメイン（例えば、抗体部分又はその抗原結合断片）と、ｉｉ）ＴＬＲ２膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲ２シグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメイン（例えば、抗体部分又はその抗原結合断片）と、ｉｉ）ＴＬＲ１膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）ＴＬＲ１シグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、ＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン及びＴＬＲ２シグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドは、シグナルペプチド（例えば、リーダー配列）をさらに含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン及びＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲを発現する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、抗ＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲを発現する。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１を含む。いくつかの態様において、第２のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第２のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲ及び抗ＣＤ３３（例えば、抗ＣＤ３３ Ｖドメイン及び／又は抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメイン）ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＣＤ２８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲの細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0102】
免疫細胞
改変された免疫細胞は、様々な細胞型及び細胞供給源に由来し得る。本明細書では、任意の哺乳動物種からの細胞が考慮され、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、サル及びヒトを含むが、それらに限らない。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はヒト細胞である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞とレシピエント個体は同種異系である（即ち、同じ種に由来するが、ドナーが異なっている）。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は自家由来である（即ち、ドナーとレシピエントは同じである）。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は同質遺伝子である（即ち、ドナーとレシピエントは、異なる個体であるが、一卵性双生児である）。
改変された免疫細胞は、様々な細胞型及び細胞供給源に由来し得る。本明細書では、任意の哺乳動物種からの細胞が考慮され、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、サル及びヒトを含むが、それらに限らない。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はヒト細胞である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞とレシピエント個体は同種異系である（即ち、同じ種に由来するが、ドナーが異なっている）。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は自家由来である（即ち、ドナーとレシピエントは同じである）。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は同質遺伝子である（即ち、ドナーとレシピエントは、異なる個体であるが、一卵性双生児である）。
【0103】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、初代細胞に由来する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、個体から単離された初代細胞である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、個体から単離された初代細胞から増殖（例えば、増殖及び／又は分化）する。いくつかの態様において、初代細胞は造血系細胞である。いくつかの態様において、初代細胞は胸腺から得られる。いくつかの態様において、初代細胞はリンパ又はリンパ節（例えば、腫瘍流入領域リンパ節）から得られる。いくつかの態様において、初代細胞は脾臓から得られる。いくつかの態様において、初代細胞は骨髄から得られる。いくつかの態様において、初代細胞は血液、例えば、末梢血から得られる。いくつかの態様において、初代細胞は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。いくつかの態様において、初代細胞は血漿に由来する。いくつかの態様において、初代細胞は腫瘍に由来する。いくつかの態様において、初代細胞は粘膜免疫系から得られる。いくつかの態様において、初代細胞は生検試料から得られる。
【0104】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞は細胞株に由来する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は商用細胞株から得られる。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、個体から単離された初代細胞から確立された細胞株である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞株から増殖（例えば、増殖及び／又は分化）する。いくつかの態様において、細胞株は非不死化（ｍｏｒｔａｌ）細胞株である。いくつかの態様において、細胞株は不死化細胞株である。いくつかの態様において、細胞株は、腫瘍細胞株、例えば、白血病又はリンパ腫細胞株である。いくつかの態様において、細胞株は、ＰＢＭＣに由来する細胞株である。いくつかの態様において、細胞株は幹細胞株である。いくつかの態様において、細胞株は、ＨＥＫ２９３－６Ｅ細胞、ＮＫ－９２細胞及びＪｕｒｋａｔ細胞からなる群から選択される。
【0105】
本出願に用いられ得る例示的な免疫細胞は、樹状細胞（未熟樹状細胞と成熟樹状細胞とを含む）、Ｔリンパ球（例えば、初期Ｔ細胞、エフェクターＴ細胞、記憶Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）及びリンフォカインが活性化されたキラー（ＬＡＫ）細胞）、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、好中球、顆粒球、及びそれらの組み合わせを含むが、それらに限らない。免疫細胞サブグループは、当分野の既知の一つ又は複数の細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２３、ＣＤ５６、ＣＤ３４、ＣＤ１４、ＣＤ３３など）の存在又は非存在によって定義され得る。薬学的組成物が複数の改変された免疫細胞を含む場合、これらの改変された免疫細胞は、免疫細胞型の特定のサブグループ、免疫細胞型のサブグループの組み合わせ、又は二つもしくはそれ以上の免疫細胞型の組み合わせであってもよい。いくつかの態様において、免疫細胞は、均一な細胞集団に存在する。いくつかの態様において、免疫細胞は、免疫細胞における、増強されたヘテロ細胞集団に存在する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はリンパ球である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はリンパ球ではない。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、養子免疫療法に適する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はＰＢＭＣである。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＰＢＭＣに由来する免疫細胞である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はＣＤ４＋ Ｔ細胞である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はＣＤ８＋ Ｔ細胞である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はＢ細胞である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はＮＫ細胞である。
【0106】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞は幹細胞に由来する。いくつかの態様において、幹細胞は全能性幹細胞である。いくつかの態様において、幹細胞は多能性幹細胞である。いくつかの態様において、幹細胞は単能性幹細胞である。いくつかの態様において、幹細胞は前駆細胞である。いくつかの態様において、幹細胞は胚性幹細胞である。いくつかの態様において、幹細胞は造血幹細胞である。いくつかの態様において、幹細胞は間葉系幹細胞である。いくつかの態様において、幹細胞は人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）である。
【0107】
改変された免疫細胞は、任意の数（例えば、１、２、３、４、５、１０、５０、１００、１０００又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の異種核酸配列（第１及び第２の核酸配列を含む）を含んでもよい。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、シングルコピー第１及び／又は第２の異種核酸配列を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、マルチコピー第１及び／又は第２の異種核酸配列を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、少なくとも一つの別の異種核酸配列、例えば、サイトカイン、ケモカインのような免疫調節剤及び／又は免疫チェックポイント阻害剤をコードする異種核酸配列をさらに含む。
【0108】
本明細書に記載の一つ又は複数の異種核酸配列を含む一つ又は複数の核酸は、改変された免疫細胞に瞬間的又は安定的に組み込まれてもよい。いくつかの態様において、一つ又は複数の核酸は、改変された免疫細胞において瞬間的に発現する。例えば、一つ又は複数の核酸は、染色体外アレイの形態で、改変された免疫細胞の細胞核に存在することができる。一つ又は複数の核酸は、当分野の既知の任意のトランスフェクション又は形質導入方法（ウイルス又は非ウイルス方法を含む）を用いて、改変された免疫細胞に導入され得る。例示的非ウイルストランスフェクション方法は、リン酸カルシウム、デンドリマー、リポソーム、又はカチオン性ポリマー（例えば、ＤＥＡＥ－デキストラン又はポリエチレンイミン）の使用のような化学物質ベースのトランスフェクション、エレクトロポレーション、細胞スクイージング、ソノポレーション、光学的トランスフェクション、インペールフェクション、プロトプラスト融合、流体力学的送達又はトランスポゾンのような非化学的方法、遺伝子銃、マグネトフェクション又は磁石補助トランスフェクション、パーティクルボンバードメントの使用のような粒子ベースの方法、及びヌクレオフェクションのような混合方法を含むが、それらに限らない。
【0109】
いくつかの態様において、一つ又は複数の異種核酸配列は、改変された免疫細胞のゲノムに存在する。例えば、一つ又は複数の異種核酸配列を含む一つ又は複数の核酸は、当分野の既知の任意の方法により、改変された免疫細胞のゲノムに組み込まれ得、これらの方法は、部位特異性リコンビナーゼ又はインテグラーゼ、トランスポザーゼ、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ（登録商標））、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９及びジンクフィンガーヌクレアーゼの使用のようなウイルス媒介性組み込み、ランダム組み込み、相同組換え方法及び部位特異的組み込み方法を含むが、それらに限らない。いくつかの態様において、一つ又は複数の異種核酸配列を、改変された免疫細胞ゲノムの特別に設計された遺伝子座に組み込む。いくつかの態様において、一つ又は複数の異種核酸配列を、改変された免疫細胞ゲノムの組み込みホットポイントに組み込む。いくつかの態様において、異種核酸（配列）を、改変された免疫細胞ゲノムのランダム遺伝子座に組み込む。単一の改変された免疫細胞に一つ又は複数のマルチコピー異種核酸配列が存在する場合、異種核酸配列を、改変された免疫細胞ゲノムの複数の遺伝子座に組み込んでもよい。
【0110】
ＴＬＲポリペプチド
本明細書に記載の改変された免疫細胞は、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ポリペプチド（例えば、第１のＴＬＲポリペプチド及び第２のＴＬＲポリペプチド、本明細書において、それぞれ第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドとも呼ばれる）を発現する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、少なくとも一つのＴＬＲポリペプチドを発現する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、二つのＴＬＲポリペプチドを発現する。本出願は、ＴＬＲポリペプチド及びその組成物をさらに提供する。いくつかの態様において、本明細書によるＴＬＲポリペプチドは、抗原刺激後にＴＬＲシグナル伝達を誘導することによって強い共刺激抗腫瘍効果を提供する。
本明細書に記載の改変された免疫細胞は、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ポリペプチド（例えば、第１のＴＬＲポリペプチド及び第２のＴＬＲポリペプチド、本明細書において、それぞれ第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドとも呼ばれる）を発現する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、少なくとも一つのＴＬＲポリペプチドを発現する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、二つのＴＬＲポリペプチドを発現する。本出願は、ＴＬＲポリペプチド及びその組成物をさらに提供する。いくつかの態様において、本明細書によるＴＬＲポリペプチドは、抗原刺激後にＴＬＲシグナル伝達を誘導することによって強い共刺激抗腫瘍効果を提供する。
【0111】
ＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ分子に由来する。ＴＬＲは、Ｉ型膜貫通糖タンパク質であり、その特徴が、ロイシンリッチ反復配列（ＬＲＲ）を含有する細胞外ドメインが存在することであり、該細胞外ドメインがリガンド認識の媒介を担う。細胞外ドメインの後には、単一膜貫通ヘリックス及び細胞内Ｔｏｌｌ様／インターロイキン－１（ＩＬ－１）受容体（ＴＩＲ）ドメインが続いている。いくつかの態様において、ＴＩＲドメインは、下流シグナル伝達を担う（例えば、ＴＬＲシグナル伝達を誘導する）。ＴＬＲのドメイン及び機能は当分野に周知のものである。例えば、Ｊｉｎら，２００８ ２９（２）：１８２－９１を参照されたい。
【0112】
いくつかの態様において、これらのＴＬＲ分子は、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９及びＴＬＲ１０である。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ１に由来する。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ２に由来する。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ４に由来する。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ６に由来する。
【0113】
いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら二量体化し、その結果、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインが会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ホモ二量体（例えば、二つの同じＴＬＲ分子の二量体化）を形成する。ホモ二量体は、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５又はＴＬＲ９に由来するＴＬＲポリペプチドと形成され得る。いくつかの態様において、第１及び第２のＴＬＲポリペプチドは、それぞれＴＬＲ３膜貫通ドメイン及びＴＬＲ３シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、第１及び第２のＴＬＲポリペプチドは、それぞれＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、第１及び第２のＴＬＲポリペプチドは、それぞれＴＬＲ５膜貫通ドメイン及びＴＬＲ５シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、第１及び第２のＴＬＲポリペプチドは、それぞれＴＬＲ９膜貫通ドメイン及びＴＬＲ９シグナル伝達ドメインを含む。
【0114】
いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ヘテロ二量体（例えば、二つの異なるＴＬＲポリペプチドの二量体化）を形成する。ヘテロ二量体は、ＴＬＲ１／ＴＬＲ２、ＴＬＲ１／ＴＬＲ４、ＴＬＲ２／ＴＬＲ６、ＴＬＲ２／ＴＬＲ１０又はＴＬＲ４／ＴＬＲ５からのＴＬＲポリペプチドと形成され得る。いくつかの態様において、第１のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメインを含み、且つ第２のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ２膜貫通ドメイン及びＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含み、又は第１のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ２膜貫通ドメイン及びＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含み、且つ第２のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、第１のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメインを含み、且つ第２のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含み、又は第１のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含み、且つ第２のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、第１のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ２膜貫通ドメイン及びＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含み、且つ第２のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ６膜貫通ドメイン及びＴＬＲ６シグナル伝達ドメインを含み又は第１のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ６膜貫通ドメイン及びＴＬＲ６シグナル伝達ドメインを含み、且つ第２のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ２膜貫通ドメイン及びＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、第１のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ２膜貫通ドメイン及びＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含み、且つ第２のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ１０膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１０シグナル伝達ドメインを含み、又は第１のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ１０膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１０シグナル伝達ドメインを含み、且つ第２のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ２膜貫通ドメイン及びＴＬＲ２シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、第１のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含み、且つ第２のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ５膜貫通ドメイン及びＴＬＲ５シグナル伝達ドメインを含み、又は第１のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ５膜貫通ドメイン及びＴＬＲ５シグナル伝達ドメインを含み、且つ第２のＴＬＲポリペプチドはＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメインを含む。
【0115】
例示的ＴＬＲ分子は、以下の表１にリストされている。
【0116】
（表１）例示的Ｔｏｌｌ様受容体配列
【0117】
いくつかの態様において、前記ＴＬＲ受容体ドメインを含まない改変された免疫細胞に比べて、ＴＬＲポリペプチドは、改変された免疫細胞により、標的細胞に対する細胞傷害性の増加、例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、２倍、４倍、６倍又はそれ以上のうちのいずれか一つの増加を誘導する。いくつかの態様において、前記ＴＬＲ受容体ドメインを含まない改変された免疫細胞に比べて、ＴＬＲ受容体ドメインは、改変された免疫細胞により、標的細胞に対する細胞傷害性の増加、例えば、約６倍以下、４倍以下、２倍以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１０％以下、又はそれ以下のうちのいずれか一つの増加を誘導する。いくつかの態様において、細胞傷害性は、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）細胞傷害性アッセイ及び／又は標的腫瘍細胞との共培養アッセイによって測定される。いくつかの態様において、細胞傷害性及び腫瘍細胞殺傷能力は、細胞ベースのアッセイにおいて測定される。いくつかの態様において、細胞傷害性及び腫瘍細胞殺傷能力はインビボで測定される。
【0118】
いくつかの態様において、前記ＴＬＲ受容体ドメインを含まない改変された免疫細胞に比べて、ＴＬＲポリペプチドは、改変された免疫細胞により、炎症性サイトカイン分泌レベルの低下、例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、２倍、４倍、６倍、８倍、１０倍、１２倍、１４倍、１６倍、１８倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、１０００倍又はそれ以上のうちのいずれか一つの低下を誘導する。いくつかの態様において、前記ＴＬＲポリペプチドを含まない改変された免疫細胞に比べて、ＴＬＲポリペプチドは、改変された免疫細胞により、炎症性サイトカイン分泌レベルの低下、例えば、約１０００倍以下、５００倍以下、２００倍以下、１００倍以下、５０倍以下、３０倍以下、２０倍以下、１８倍以下、１６倍以下、１４倍以下、１２倍以下、１０倍以下、８倍以下、６倍以下、４倍以下、５０％以下、４０％以下、３０％以下、２０％以下、１０％以下又はそれ以下のうちのいずれか一つの低下を誘導する。いくつかの態様において、前記ＴＬＲポリペプチドを含まない改変された免疫細胞に比べて、ＴＬＲポリペプチドは、改変された免疫細胞により、炎症性サイトカイン分泌レベルの低下、例えば、約１０％～５０％、２～１０００倍、２～５０倍、５０～１００倍、１００～１０００倍、５０～５００倍、１０～１００倍、１０～５０倍又は５０～２００倍のうちのいずれか一つ内の低下を誘導する。例示的な炎症性サイトカインは、例えば、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＧＭ－ＣＳＦを含むが、それらに限らない。いくつかの態様において、炎症性サイトカインの分泌レベルは、血清免疫アッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、化学発光免疫アッセイ（ＣＩＡ）又はフローサイトメトリー）において測定される。いくつかの態様において、炎症性サイトカイン分泌レベルは、細胞ベースのアッセイにおいて測定される。いくつかの態様において、炎症性サイトカイン分泌レベルはインビボで測定される。
【0119】
いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは共刺激分子である。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチド共刺激分子は誘導性共刺激分子であり、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは、互いに会合することによって、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。
【0120】
いくつかの態様において、誘導性共刺激分子は、自己切断ペプチド（例えば、Ｐ２Ａ）を介して、操作された受容体（例えば、本明細書に記載の操作された受容体のうちのいずれか一つ）に連結される。いくつかの態様において、操作された受容体はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、膜貫通ドメインとシグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、共刺激分子であり、且つＴＬＲ膜貫通ドメインとＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの態様において、シグナル伝達ドメインは、細胞内ドメイン、例えば、細胞内シグナル伝達ドメインである。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、（ａ）標的結合ドメインと、（ｂ）膜貫通ドメインと、（ｃ）シグナル伝達ドメイン（例えば、細胞内シグナル伝達ドメイン）とを含む。任意選択的に、ＴＬＲポリペプチドは、シグナル伝達ペプチドをさらに含む。
【0121】
いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲｄシグナル伝達ドメインと直接又は間接的に融合している膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、標的結合ドメイン（例えば、第１の標的結合ドメイン及び／又は第２の標的結合ドメイン）と直接又は間接的に融合している膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、標的結合ドメイン及びＴＬＲシグナル伝達ドメインと同時に直接又は間接的に融合している膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲ分子からのＴＬＲ膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様において、ＴＬＲ分子は、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９及びＴＬＲ１０からなる群から選択される。いくつかの態様において、ＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ１に由来する。いくつかの態様において、ＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ２に由来する。いくつかの態様において、ＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ４に由来する。いくつかの態様において、ＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ６に由来する。
【0122】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１の標的結合ドメインと、第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの態様において、第２のポリペプチドは、第２の標的結合ドメインと、第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む。
【0123】
いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインは同じＴＬＲ分子に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９及びＴＬＲ１０からなる群に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４及びＴＬＲ６からなる群に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ１に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ４に由来する。
【0124】
いくつかの態様において、第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは同じＴＬＲ分子に由来する。いくつかの態様において、第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９及びＴＬＲ１０からなる群に由来する。いくつかの態様において、第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４及びＴＬＲ６に由来する。いくつかの態様において、第２のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又は第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ２に由来する。
【0125】
いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと第２のＴＬＲ膜貫通ドメインは同じである。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ１に由来し、且つ第２のＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ１に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ２に由来し、且つ第２のＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ２に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ４に由来し、且つ第２のＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ４に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ６に由来し、且つ第２のＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ６に由来する。
【0126】
いくつかの態様において、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは同じである。いくつかの態様において、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ１に由来し、且つ第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ１に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ２に由来し、且つ第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ２に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ４に由来し、且つ第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ４に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ６に由来し、且つ第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ６に由来する。
【0127】
いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと第２のＴＬＲ膜貫通ドメインは異なっている。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ２に由来し、且つ第２のＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ１に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは異なっている。いくつかの態様において、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ２に由来し、且つ第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ１に由来する。いくつかの態様において、第１のＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ２に由来し、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ２に由来し、第２のＴＬＲ膜貫通ドメインはＴＬＲ１に由来し、且つ第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインはＴＬＲ１に由来する。
【0128】
いくつかの態様において、本明細書に記載のＴＬＲポリペプチドは標的結合ドメインを含む。いくつかの態様において、標的結合ドメインは受容体又はリガンドに由来するものではない。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはＴＧＦβに由来するものではない。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはＴＧＦβではない。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはＴＧＦβ細胞外ドメインを含まない。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＴＧＦβの細胞外ＴＧＦβ結合ドメイン（例えば、ＴＧＦβＲ１及び／又はＴＧＦβＲ２）を含まない。いくつかの態様において、標的結合ドメインは、ＴＧＦβＲ１の細胞外ＴＧＦβ結合ドメインを含まない。いくつかの態様において、標的結合ドメインは、ＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ結合ドメインを含まない。いくつかの態様において、標的結合ドメインは細胞外ＴＧＦβ結合ドメインではない。いくつかの態様において、標的結合ドメインはＴＧＦβＲ２の細胞外ＴＧＦβ結合ドメインではない。いくつかの態様において、標的結合ドメインはＴＧＦβＲｌの細胞外ＴＧＦβ結合ドメインではない。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチド（例えば、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチド）は、ＷＯ ２０１８／０９４２４４ Ａ１に記述されるキメラＴＧＦβ受容体ＣＴＢＲシグナルコンバーターではなく、該文献が全体として参照により本明細書に組み込まれる。
【0129】
いくつかの態様において、本明細書による改変された免疫細胞は、第１及び第２のＴＬＲポリペプチドを含み、ここで、第１のＴＬＲポリペプチドは第１の標的結合ドメインを含み、且つ第２のＴＬＲポリペプチドは第２の標的結合ドメインを含む。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインは同じである。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメインと第２の標的結合ドメインは異なっている。
【0130】
いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドの標的結合ドメインは、抗体又は抗体断片、例えば、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、又はＶＨＨドメインである。いくつかの態様において、該ポリペプチドは、標的分子の受容体のリガンド又は細胞外部分である。いくつかの態様において、標的分子は腫瘍抗原である。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドの標的結合ドメインは、単一腫瘍抗原に特異的に結合する。いくつかの態様において、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＬＬ１、ＣＤ３８、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ（例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＷＴ１、及び臨床的に重要な他の腫瘍抗原、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＮＫＧ２Ｄ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＢＣＭＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＡＦＰ、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ７０、ＣＤ１２３、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ（例えばＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＧＤ２、ＧＰＣ－２、ＧＰＣ３、ＣＬＤＮ１８．２、ＨＥＲ２、ＬＩＬＲＢ４、ＩＬ－１３Ｒα２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＷＴ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＬＬ１、ＴＧＦａＲＩＩ、ＴＧＦｂＲＩＩ、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ４、ＨＰＶ関連抗原及びＥＢＶ関連抗原（例えば、ＬＭＰ１又はＬＭＰ２）からなる群から選択される標的抗原に特異的に結合する。いくつかの態様において、標的結合ドメインは、ＣＤ３３、ＣＬＬ１、ＣＤ１２３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＢＣＭＡ、ＮＫＧ２Ｄ、ＧＰＲＣ５Ｄ又はＧＰＣ３に特異的に結合する。
【0131】
いくつかの態様において、標的分子は免疫チェックポイントタンパク質である。いくつかの態様において、標的分子は、ＰＤ－１、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＳＩＲＰα及びＴＩＧＩＴからなる群から選択される。
【0132】
いくつかの態様において、標的分子は、免疫細胞上に発現する天然タンパク質である。いくつかの態様において、標的分子はＮＫＧ２Ｄである。いくつかの態様において、標的分子は突然変異ＮＫＧ２Ｄである。いくつかの態様において、突然変異ＮＫＧ２Ｄは、短縮された配列及び／又はアミノ酸の置換、突然変異、付加及び／又は欠失を含む。いくつかの態様において、標的分子は、ＮＫＧ２Ｄの細胞外抗原結合ドメインである（本明細書において「ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ」とも呼ばれる）。いくつかの態様において、標的分子はＮＫＧ２Ｄの全長配列である。いくつかの態様において、ＮＫＧ２Ｄは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第２のポリペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４を含む。いくつかの態様において、ＮＫＧ２Ｄは、ＮＫＧ２ＤのＥＣＤ全長配列の８１～２１６位置におけるアミノ酸（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４）を含む。いくつかの態様において、ＮＫＧ２Ｄは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第２のポリペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１を含む。いくつかの態様において、ＮＫＧ２Ｄは、ＮＫＧ２ＤのＥＣＤ全長配列の８９～２１６位置におけるアミノ酸（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４）を含む。いくつかの態様において、ＮＫＧ２Ｄは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第２のポリペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２を含む。いくつかの態様において、ＮＫＧ２Ｄは、ＮＫＧ２ＤのＥＣＤ全長配列の９８～２１６位置におけるアミノ酸（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４）を含む。いくつかの態様において、ＮＫＧ２Ｄは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第２のポリペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３を含む。
【0133】
いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、シグナルペプチドをさらに含み、該シグナルペプチドは、ＴＬＲポリペプチドを細胞（例えば、ＥＲ）の分泌経路に標的化し、宿主細胞の脂質二重層へのＴＬＲポリペプチドの組み込み及び固着を可能にする。本明細書に記載のＴＬＲポリペプチドに適し、天然に存在するタンパク質のシグナル配列又は天然に存在しない合成のシグナル配列を含むシグナルペプチドは、当業者には明らかであろう。いくつかの態様において、シグナルペプチドは、ＣＤ８α、ＧＭ－ＣＳＦ受容体α、ＩＬ－３、及びＩｇＧ１重鎖からなる群から選択される分子からのものである。いくつかの態様において、シグナルペプチドはＣＤ８αからのものである。
【0134】
ＴＬＲポリペプチドは、異なるドメインの間に位置する一つ又は複数のペプチドリンカーを含んでもよい。例えば、標的結合ドメイン及びＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又はＴＬＲ膜貫通ドメイン及びＴＬＲシグナル伝達ドメインは、ペプチド結合又はペプチドリンカーを介して互いに融合していることができる。異なるドメインを連結するペプチドリンカーは、同じであってもよく、又は異なってもよい。各ペプチドリンカーは、個別に最適化され得る。ペプチドリンカーは、任意の適切な長さを有してもよい。いくつかの態様において、ペプチドリンカーの長さは、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０個又はそれ以上のアミノ酸のうちのいずれか一つである。いくつかの態様において、ペプチドリンカーの長さは、約５０、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５個又はそれ以下のアミノ酸のうちのいずれか一つ以下である。いくつかの態様において、ペプチドリンカーの長さは、約１個のアミノ酸～約１０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約２０個のアミノ酸、約１個のアミノ酸～約３０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約１５個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約２５個のアミノ酸、約５個のアミノ酸～約３０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸～約３０個のアミノ酸、約３０個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸、又は約１個のアミノ酸～約５０個のアミノ酸のうちのいずれか一つである。
【0135】
ペプチドリンカーは、天然に存在する配列又は天然に存在しない配列を有してもよい。いくつかの態様において、ペプチドリンカーは、柔軟なリンカーである。例示的柔軟なリンカーは、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）及び（ＧＧＧＳ）ｎ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）を含み、ここで、ｎは少なくとも１の整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー及び当分野の既知の他の柔軟リンカーを含む。いくつかの態様において、ペプチドリンカーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５又は２６のアミノ酸配列を有する。
【0136】
いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、同じＴＬＲ分子に由来する膜貫通ドメイン及びシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲ１膜貫通ドメインとＴＬＲ１シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲ２膜貫通ドメインとＴＬＲ２シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲ４膜貫通ドメインとＴＬＲ４シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲ６膜貫通ドメインとＴＬＲ６シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、シグナルペプチド（例えば、リーダー配列）をさらに含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、サイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。
【0137】
いくつかの態様において、同じＴＬＲ分子に由来する膜貫通ドメイン及びシグナル伝達ドメインを含むＴＬＲポリペプチドは、標的結合ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、標的結合ドメインは、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３３、ＣＬＬ１、ＣＤ１２３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ又はＧＰＣ３に特異的に結合するｓｃＦｖ又はｓｄＡｂである。いくつかの態様において、同じＴＬＲ分子に由来する膜貫通ドメイン及びシグナル伝達ドメインを含むＴＬＲポリペプチドは、ＣＤ３３に特異的に結合する標的結合ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、同じＴＬＲ分子に由来する膜貫通ドメイン及びシグナル伝達ドメインを含むＴＬＲポリペプチドは、ＣＤ３３のＶドメインに特異的に結合する標的結合ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲ２膜貫通ドメインと、誘導されたＴＬＲ２シグナル伝達ドメインと、ＣＤ３３のＶドメインに特異的に結合する標的結合ドメインとを含む。いくつかの態様において、同じＴＬＲ分子に由来する膜貫通ドメイン及びシグナル伝達ドメインを含むＴＬＲポリペプチドは、ＣＤ３３のＣ２ドメインに特異的に結合する標的結合ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲ１膜貫通ドメインと、誘導されたＴＬＲ１シグナル伝達ドメインと、ＣＤ３３のＣ２ドメインに特異的に結合する標的結合ドメインとを含む。いくつかの態様において、同じＴＬＲ分子に由来する膜貫通ドメイン及びシグナル伝達ドメインを含むＴＬＲポリペプチドは、ＣＤ２０に特異的に結合する標的結合ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲ４膜貫通ドメインと、誘導されたＴＬＲ４シグナル伝達ドメインと、ＣＤ２０に特異的に結合する標的結合ドメインとを含む。いくつかの態様において、同じＴＬＲ分子に由来する膜貫通ドメイン及びシグナル伝達ドメインを含むＴＬＲポリペプチドは、ＣＤ３３に特異的に結合する標的結合ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲ４膜貫通ドメインと、誘導されたＴＬＲ４シグナル伝達ドメインと、ＣＤ３３に特異的に結合する標的結合ドメインとを含む。いくつかの態様において、同じＴＬＲ分子に由来する膜貫通ドメイン及びシグナル伝達ドメインを含むＴＬＲポリペプチドは、ＮＫＧ２Ｄに特異的に結合する標的結合ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲ４膜貫通ドメインと、誘導されたＴＬＲ４シグナル伝達ドメインと、ＮＫＧ２Ｄに特異的に結合する標的結合ドメインとを含む。いくつかの態様において、同じＴＬＲ分子に由来する膜貫通ドメイン及びシグナル伝達ドメインを含むＴＬＲポリペプチドは、ＢＣＭＡに特異的に結合する標的結合ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲ４膜貫通ドメインと、誘導されたＴＬＲ４シグナル伝達ドメインと、ＢＣＭＡに特異的に結合する標的結合ドメインとを含む。いくつかの態様において、同じＴＬＲ分子に由来する膜貫通ドメイン及びシグナル伝達ドメインを含むＴＬＲポリペプチドは、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する標的結合ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲ４膜貫通ドメインと、誘導されたＴＬＲ４シグナル伝達ドメインと、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する標的結合ドメインとを含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、シグナルペプチド（例えば、リーダー配列）をさらに含む。
【0138】
いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、サイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、一つ又は複数のサイトカイン受容体の二つ又はそれ以上の細胞内ドメインを含む。いくつかの態様において、サイトカイン受容体の細胞内ドメインのＣ末端は、ＴＬＲシグナル伝達ドメインのＮ末端と融合している。いくつかの態様において、サイトカイン受容体の細胞内ドメインのＣ末端は、ＴＬＲドメインのＮ末端と直接的に融合している。いくつかの態様において、サイトカイン受容体の細胞内ドメインのＣ末端は、例えば、リンカー（例えば、柔軟なペプチドリンカー）又は別のドメインを介して、ＴＬＲドメインのＮ末端と間接的に融合している。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ｉ）標的結合ドメインと、ｉｉ）サイトカイン受容体の細胞内ドメインと、ｉｉｉ）ＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｖ）ＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む。
【0139】
いくつかの態様において、サイトカイン受容体の細胞内ドメインのＮ末端は、ＴＬＲシグナル伝達ドメインのＣ末端と融合している。いくつかの態様において、サイトカイン受容体の細胞内ドメインのＮ末端は、ＴＬＲシグナル伝達ドメインのＣ末端と直接的に融合している。いくつかの態様において、サイトカイン受容体の細胞内ドメインのＮ末端は、例えば、リンカー（例えば、柔軟なペプチドリンカー）又は別のドメインを介して、ＴＬＲシグナル伝達ドメインのＣ末端と間接的に融合している。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ｉ）標的結合ドメインと、ｉｉ）ＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）ＴＬＲシグナル伝達ドメインと、ｉｖ）サイトカイン受容体の細胞内ドメインとを含む。
【0140】
いくつかの態様において、サイトカイン受容体由来の細胞内ドメインは、改善されたＴＬＲシグナル伝達（例えば、抗腫瘍作用）を一つ又は複数のＴＬＲポリペプチドに付与する。いくつかの態様において、サイトカイン受容体由来の細胞内ドメインは、ＧＭ－ＣＳＦ受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＩＬ－１５受容体及びＩＬ－２３受容体からなる群から選択される。いくつかの態様において、サイトカイン受容体由来の細胞内ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。
【0141】
本明細書に記載の改変された免疫細胞は、第１のＴＬＲポリペプチドと第２のＴＬＲポリペプチドとを含む。いくつかの態様において、第１のＴＬＲポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインをさらに含み、且つ第２のポリペプチドは第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインと第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインは同じである。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインと第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインは異なっている。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体は、ＧＭ－ＣＳＦ受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＩＬ－１５受容体及びＩＬ－２３受容体からなる群から選択される。いくつかの態様において、第２のサイトカイン受容体は、ＧＭ－ＣＳＦ受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＩＬ－１５受容体及びＩＬ－２３受容体からなる群から選択される。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体と第２のサイトカイン受容体はそれぞれ、ＧＭ－ＣＳＦ受容体、ＩＬ－１８受容体、ＩＬ－２１受容体、ＩＬ－１５受容体及びＩＬ－２３受容体からなる群から選択される。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。いくつかの態様において、第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメイン及び第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインのＣ末端は、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインのＮ末端と融合している。いくつかの態様において、第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインのＣ末端は、第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインのＮ末端と融合している。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインのＣ末端は、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインのＮ末端と融合し、且つ、第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインのＣ末端は、第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインのＮ末端と融合している。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインのＮ末端は、ＴＬＲシグナル伝達ドメインのＣ末端と融合している。いくつかの態様において、第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインのＮ末端は、ＴＬＲシグナル伝達ドメインのＣ末端と融合している。いくつかの態様において、第１のサイトカイン受容体の第１の細胞内ドメインのＮ末端は、ＴＬＲシグナル伝達ドメインのＣ末端と融合し、且つ、第２のサイトカイン受容体の第２の細胞内ドメインのＮ末端は、ＴＬＲシグナル伝達ドメインのＣ末端と融合している。
【0142】
いくつかの態様において、本明細書に記載のＴＬＲポリペプチドは、改変された免疫細胞に含まれている。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ分子及び抗ＣＤ２０ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲを発現する。いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドコーディング配列は、推定された上流開始コドンの一部又は全部の配列を欠いている。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲシグナル伝達の誘導に影響を与えないように、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとの間にＴＬＲシグナル伝達部分の会合を形成することに影響を与えることなく、いくつかのアミノ酸突然変異を含んでもよい。
【0143】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ分子及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲを発現する。いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０を含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドコーディング配列は、推定された上流開始コドンの一部又は全部の配列を欠いている。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲシグナル伝達の誘導に影響を与えないように、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとの間にＴＬＲシグナル伝達部分の会合を形成することに影響を与えることなく、いくつかのアミノ酸突然変異を含んでもよい。
【0144】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ分子及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲを発現する。いくつかの態様において、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８を含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドコーディング配列は、推定された上流開始コドンの一部又は全部の配列を欠いている。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲシグナル伝達の誘導に影響を与えないように、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとの間にＴＬＲシグナル伝達部分の会合を形成することに影響を与えることなく、いくつかのアミノ酸突然変異を含んでもよい。
【0145】
いくつかの態様において、本明細書に記載のＴＬＲポリペプチドは、改変された免疫細胞に含まれている。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲ分子及び抗ＣＤ３３ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲを発現する。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１を含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドコーディング配列は、推定された上流開始コドンの一部又は全部の配列を欠いている。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲシグナル伝達の誘導に影響を与えないように、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとの間にＴＬＲシグナル伝達部分の会合を形成することに影響を与えることなく、いくつかのアミノ酸突然変異を含んでもよい。
【0146】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ分子（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７を含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１を含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドコーディング配列は、推定された上流開始コドンの一部又は全部の配列を欠いている。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲシグナル伝達の誘導に影響を与えないように、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとの間にＴＬＲシグナル伝達部分の会合を形成することに影響を与えることなく、いくつかのアミノ酸突然変異を含んでもよい。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ分子（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドコーディング配列は、推定された上流開始コドンの一部又は全部の配列を欠いている。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲシグナル伝達の誘導に影響を与えないように、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとの間にＴＬＲシグナル伝達部分の会合を形成することに影響を与えることなく、いくつかのアミノ酸突然変異を含んでもよい。
いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１を含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドコーディング配列は、推定された上流開始コドンの一部又は全部の配列を欠いている。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲシグナル伝達の誘導に影響を与えないように、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとの間にＴＬＲシグナル伝達部分の会合を形成することに影響を与えることなく、いくつかのアミノ酸突然変異を含んでもよい。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ分子（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドコーディング配列は、推定された上流開始コドンの一部又は全部の配列を欠いている。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲシグナル伝達の誘導に影響を与えないように、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとの間にＴＬＲシグナル伝達部分の会合を形成することに影響を与えることなく、いくつかのアミノ酸突然変異を含んでもよい。
【0147】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲ及び抗ＣＤ３３（例えば、抗ＣＤ３３ Ｖドメイン及び／又は抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメイン）ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン及びＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲを発現する。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＣＤ２８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、抗ＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲを発現する。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１を含む。いくつかの態様において、第２のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第２のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲ及び抗ＣＤ３３（例えば、抗ＣＤ３３ Ｖドメイン及び／又は抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメイン）ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＣＤ２８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドコーディング配列は、推定された上流開始コドンの一部又は全部の配列を欠いている。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、ＴＬＲシグナル伝達の誘導に影響を与えないように、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインと第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとの間にＴＬＲシグナル伝達部分の会合を形成することに影響を与えることなく、いくつかのアミノ酸突然変異を含んでもよい。
【0148】
本明細書に記載のＴＬＲドメイン（例えば、ＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又はＴＬＲシグナル伝達ドメイン）のうちのいずれかのバリアントも本開示の範囲内であり、それによりＴＬＲドメインは免疫細胞の免疫応答を調節することができる。いくつかの態様において、野生型対照物に比べて、共刺激シグナル伝達ドメインは、１０個まで（例えば、１、２、３、４、５又は８個）のアミノ酸残基変化を含む。一つ又は複数のアミノ酸変化を含むこのようなＴＬＲドメインは、バリアントと呼ばれてもよい。突然変異を含まない共刺激シグナル伝達ドメインに比べて、ＴＬＲシグナル伝達ドメインのアミノ酸残基の突然変異は、シグナル形質導入の増加及び免疫応答に対する刺激の増強をもたらすことができる。突然変異を含まない共刺激シグナル伝達ドメインに比べて、ＴＬＲシグナル伝達ドメインのアミノ酸残基の突然変異は、シグナル形質導入の減少及び免疫応答に対する刺激の低下をもたらすことができる。
【0149】
いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、本明細書に記載のＴＬＲドメイン（例えば、ＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又はＴＬＲシグナル伝達ドメイン）のアミノ酸配列バリアントを含む。いくつかの態様において、ＴＬＲポリペプチドは、本明細書に記載のＴＬＲ分子（例えば、ＴＬＲ分子のＴＬＲ膜貫通ドメイン及び／又はＴＬＲシグナル伝達ドメイン）のアミノ酸配列バリアントを含む。例えば、ＴＬＲポリペプチドの生物学的特性を調節することが望ましい場合がある。そのＴＬＲ分子（例えば、そのＴＬＲ分子の膜貫通ドメイン及び／又はシグナル伝達ドメイン）のアミノ酸配列バリアントは、ＴＬＲ分子をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入すること又はペプチド合成によって調製され得る。このような改変は、例えば、ＴＬＲ分子のアミノ酸配列内の残基の欠失及び／又は挿入及び／又は置換を含む。欠失、挿入及び置換の任意の組み合わせを行うことによって最終的なコンストラクトを得ることができ、その条件として、最終的なコンストラクトは、所望の特徴、例えば、ＴＬＲ結合及び／又は炎症誘発活性を有する。
【0150】
いくつかの態様において、本明細書に記載のＴＬＲ分子のうちのいずれか一つの配列に比べて、ＴＬＲ分子は、一つ又は複数（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０個のアミノ酸又はそれ以上）の保存的置換を含む。いくつかの態様において、ＴＬＲ分子は、本明細書に記載のＴＬＲ分子のうちのいずれか一つの配列と少なくとも約８０％の配列同一性、例えば、少なくとも約８５％、８７％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上の配列同一性のうちのいずれか一つを有する。本明細書に記載のＴＬＲポリペプチドと同様に、改変ＴＬＲ分子を含むＴＬＲポリペプチドバリアントは、類似する抗腫瘍活性及び低い毒性を有する。
【0151】
保存的置換は以下の表Ａに示されている。
【0152】
（表Ａ）保存的置換
アミノ酸は、共通の側鎖特性に応じて異なるクラスに分類することができる。
ａ．疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
ｂ．中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
ｃ．酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
ｄ．塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
ｅ．鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
ｆ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスにおける一つのメンバーを別のクラスに交換する必要がある。
ａ．疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
ｂ．中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
ｃ．酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
ｄ．塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
ｅ．鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
ｆ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスにおける一つのメンバーを別のクラスに交換する必要がある。
【0153】
当業者であれば、変異誘発、ポリメラーゼ連鎖反応、相同組換え又は当業者に周知の任意の他の遺伝子工学技術を含む任意の適切な方法を用いて、目的遺伝子において突然変異を発生させ得ることを認識することであろう。突然変異は、単一ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ配列内の単一ヌクレオチド塩基の除去、付加又は置換に関する点突然変異）に関してもよく、又は大量のヌクレオチドの挿入又は欠失に関してもよい。突然変異は、ＤＮＡ複製のような忠実度の誤りなどの事象で自発的に発生し得るか、又は化学的もしくは物理的変異誘発剤に曝露した後に誘導され得る。また、部位特異的突然変異は、当業者によく知られる特定標的化方法を用いて行われ得る。
【0154】
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ及びＷｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載のように、変異誘発の標的となり得るポリペプチドの残基又は領域を同定するための有用な方法は「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法において、標的残基の残基又は残基群（例えば、荷電残基、例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕ）を同定し、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）で置換することによって、ポリペプチド試薬とその標的（例えば、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメイン）との相互作用が影響を受けるか否かを確定する。アミノ酸の位置に別の置換を導入することで、初期置換に対する機能的感受性を実証することができる。バリアントは、所望の特性を含むか否かを確定するためにスクリーニングされてもよい。
【0155】
アミノ酸配列の挿入は、長さが一つの残基から百個又はそれ以上の残基を含むポリペプチドの範囲内にあるアミノ末端及び／又はカルボキシ末端の融合と、単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入とを含む。
【0156】
いくつかの態様において、ペプチドタグ（通常、入手可能な抗血清又は化合物により認識され得るショートペプチド配列である）は、ＴＬＲポリペプチドのその後の発現及び輸送のために含まれてもよい。様々なタグペプチドは、本明細書に記載のＴＬＲポリペプチドに用いられてもよいが、ＰＫタグ、ＦＬＡＧオクタペプチド、ＭＹＣタグ、ＨＩＳタグ（通常、４～１０個のヒスチジン残基のセグメントである）及びｅ－タグ（ＵＳ ６，６８６，１５２）に限定されるものではない。複数のタグが使用される場合、一つ又は複数のタグペプチドは、独立して、タンパク質のＮ末端、そのＣ末端、内部又はこれらの位置のうちのいずれか一つに位置してもよい。タグペプチドは、抗タグ抗体を用いて、免疫検出アッセイにより検出され得る。
【0157】
操作された受容体
上記任意の改変された免疫細胞は、操作された受容体をさらに発現することができる。例示的な操作された受容体は、ＣＡＲ、操作されたＴＣＲ及びＴＡＣ受容体を含むが、それらに限らない。いくつかの態様において、操作された受容体は、抗原（例えば、腫瘍抗原）に特異的に結合する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメイン及び／又は共刺激ドメインを含む。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ共受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、プロモーター（例えば、構成型プロモーター又は誘導性プロモーター）に操作可能に連結されている第３の核酸によりコードされる。いくつかの態様において、タンパク質を細胞膜に挿入すると共に細胞をマイクロ流体システム（例えば、ＣＥＬＬ ＳＱＵＥＥＺＥ（登録商標））に通すことによって、改変された免疫細胞に操作された受容体を導入する（例えば、米国特許出願公開番号２０１４０２８７５０９を参照されたい）。操作された受容体は、例えば、改変された免疫細胞を標的化し、シグナルを形質導入し、及び／又は改変された免疫細胞の細胞傷害性を増強することによって、改変された免疫細胞の機能を増強することができる。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ又はＴＡＣ受容体を発現しない。
上記任意の改変された免疫細胞は、操作された受容体をさらに発現することができる。例示的な操作された受容体は、ＣＡＲ、操作されたＴＣＲ及びＴＡＣ受容体を含むが、それらに限らない。いくつかの態様において、操作された受容体は、抗原（例えば、腫瘍抗原）に特異的に結合する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメイン及び／又は共刺激ドメインを含む。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ共受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、プロモーター（例えば、構成型プロモーター又は誘導性プロモーター）に操作可能に連結されている第３の核酸によりコードされる。いくつかの態様において、タンパク質を細胞膜に挿入すると共に細胞をマイクロ流体システム（例えば、ＣＥＬＬ ＳＱＵＥＥＺＥ（登録商標））に通すことによって、改変された免疫細胞に操作された受容体を導入する（例えば、米国特許出願公開番号２０１４０２８７５０９を参照されたい）。操作された受容体は、例えば、改変された免疫細胞を標的化し、シグナルを形質導入し、及び／又は改変された免疫細胞の細胞傷害性を増強することによって、改変された免疫細胞の機能を増強することができる。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ又はＴＡＣ受容体を発現しない。
【0158】
いくつかの態様において、操作された受容体は、少なくとも一つの腫瘍抗原を標的化する一つ又は複数の特異的結合ドメイン、及び一つ又は複数の細胞内エフェクタードメイン、例えば、一つ又は複数の一次細胞内シグナル伝達ドメイン及び／又は共刺激ドメインを含む。
【0159】
いくつかの態様において、操作された受容体はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。多くのキメラ抗原受容体は、当分野の既知のものであり、本出願の改変された免疫細胞に適用され得る。ＣＡＲは、例えば、抗体分子の抗原結合断片又は抗体可変ドメインを使用することによって、任意の細胞表面マーカーに対して特異性を有するように構築されてもよい。本明細書は、ＣＡＲを産生する任意の方法を使用してもよい。例えば、ＵＳ ６，４１０，３１９、ＵＳ ７，４４６，１９１、ＵＳ ７，５１４，５３７、ＵＳ ９７６５３４２ Ｂ２、ＷＯ ２００２／０７７０２９、ＷＯ ２０１５／１４２６７５、ＵＳ ２０１０／０６５８１８、ＵＳ ２０１０／０２５１７７、ＵＳ ２００７／０５９２９８、ＷＯ ２０１７０２５０３８ Ａ１及びＢｅｒｇｅｒ Ｃ．ら，Ｊ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ １１８：１ ２９４－３０８（２００８）を参照されたく、これらの文献を参照により組み込む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はＣＡＲ－Ｔ細胞である。
【0160】
本出願のＣＡＲは、細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、該細胞外ドメインは、少なくとも一つの腫瘍抗原に特異的に結合する少なくとも一つ標的化ドメインを含む。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを産生する。「免疫エフェクター機能又は免疫エフェクター応答」は、例えば、免疫エフェクター細胞の、標的細胞の免疫攻撃を増強又は促進する機能又は応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能又は応答は、標的細胞を殺傷するか又はその生育もしくは増殖を阻害するＴ又はＮＫ細胞の特性を指す。免疫エフェクター機能の例としては、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞において、細胞溶解活性（例えば、抗体依存性細胞傷害性、又はＡＤＣＣ）及びヘルパー活性（例えば、サイトカインの分泌）が挙げられる。いくつかの態様において、ＣＡＲは、免疫エフェクター機能が低下した細胞内シグナル伝達ドメインを有する。いくつかの態様において、全長及び野生型ＣＤ３ζと、任意で一つ又は複数の共刺激ドメインとを有するＣＡＲに比べて、該ＣＡＲは、約９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％又はそれ以下のうちのいずれか一つ以下の免疫エフェクター機能（例えば、標的細胞に対する細胞溶解機能）を有する細胞内シグナル伝達ドメインを有する。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞の増殖及び／又は生存を促進するシグナルを産生する。いくつかの態様において、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ３、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ及びＯＸ４０のシグナル伝達ドメインから選択される一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。天然に存在する分子のシグナル伝達ドメインは、分子又はその断片もしくは派生物の細胞内（即ち細胞質）部分全体又は天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体を含んでもよい。
【0161】
いくつかの態様において、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「一次細胞内シグナル伝達ドメイン」は、刺激的に作用して免疫エフェクターを機能するように誘導する細胞質シグナル伝達配列を指す。いくつかの態様において、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭと呼ばれるシグナル伝達モチーフを含有する。いくつかの態様において、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、一般的なＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲβ（ＦｃεＲｉｂ）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＦｃγＲＩＩａ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ １２からなる群から選択されるタンパク質の機能的シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、一般的なＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲβ（ＦｃεＲｉｂ）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＦｃγＲＩＩａ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ １２からなる群から選択されるタンパク質の非機能的又は低下したシグナル伝達ドメインを含む。非機能的又は低下したシグナル伝達ドメインは、一つ又は複数の免疫エフェクター機能（例えば、細胞溶解活性又はヘルパー活性であり、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を含む）を低下させるか又は除去する点突然変異、挿入又は欠失を有する突然変異シグナル伝達ドメインであってもよい。いくつかの態様において、ＣＡＲは、非機能的又は低下したＣＤ３ζ（即ち、ＣＤ３ζ又はＣＤ３ｚ）シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。同じコンストラクトを有するが、野生型一次細胞内シグナル伝達ドメインを有するＣＡＲに比べて、低下した一次細胞内シグナル伝達ドメインは、約９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％又はそれ以下のうちのいずれか一つ以下の免疫エフェクター機能（例えば、標的細胞に対する細胞溶解機能）を誘導することができる。
【0162】
いくつかの態様において、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、一つ又は複数の（例えば、１、２、３個又はそれ以上のうちのいずれか一つ）共刺激ドメインを含む。「共刺激ドメイン」は、共刺激分子の細胞内部分であってもよい。「共刺激分子」という用語は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）における相同結合パートナーを指し、それは、共刺激リガンドに特異的に結合することによって、免疫細胞の共刺激応答、例えば、限定されないが、増殖及び生存を媒介する。共刺激分子は、抗原受容体又はそのリガンド以外の、有効な免疫応答に役立つ細胞表面分子を指す。共刺激分子は、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）及び活性化ＮＫ細胞受容体というタンパク質ファミリーとして表され得る。共刺激分子は、ＭＨＣ クラスＩ分子、ＢＴＬＡ及びＴｏｌｌリガンド受容体、並びにＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）を含むが、それらに限らない。このような共刺激分子の別の例としては、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＧＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが挙げられる。
【0163】
いくつかの態様において、ＣＡＲは、単一の共刺激ドメインを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲは、二つ又はそれ以上の共刺激ドメインを含む。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、機能的一次細胞内シグナル伝達ドメインと、一つ又は複数の共刺激ドメインとを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲは、機能的一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）を含まない。いくつかの態様において、ＣＡＲは、一つ又は複数の共刺激ドメインからなるか又は本質的になる細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲは、非機能的又は低下した一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、突然変異ＣＤ３ζ）及び一つ又は複数の共刺激ドメインからなるか又は本質的になる細胞内シグナル伝達ドメインを含む。標的化ドメインが腫瘍抗原と結合した後、ＣＡＲの共刺激ドメインは、シグナルを形質導入することによって、ＣＡＲを有する操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の増殖、生存及び分化を増強し、活性化誘導細胞死を阻害することができる。いくつかの態様において、該一つ又は複数の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（即ちＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドからなる群から選択される一つ又は複数の分子に由来する。
【0164】
いくつかの態様において、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインと、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの態様において、本出願のキメラ受容体における細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ（即ちＣＤ１３７）に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインと、４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメインとを含む。
【0165】
いくつかの態様において、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインと、４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインと、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインと、４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ポリペプチドを含み、該ポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインと、４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメインと、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインとを含む。
【0166】
いくつかの態様において、ＣＡＲの標的化ドメインは、抗体又は抗体断片、例えば、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、又はＶＨＨドメインである。いくつかの態様において、ＣＡＲの標的化ドメインは、腫瘍抗原の受容体に特異的に結合するリガンド又は細胞外部分である。いくつかの態様において、ＣＡＲの一つ又は複数の標的化ドメインは、単一腫瘍抗原に特異的に結合する。いくつかの態様において、ＣＡＲは、二つ又はそれ以上の腫瘍抗原に結合する標的化ドメインを有する二重特異性又は多重特異性ＣＡＲである。いくつかの態様において、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＮＫＧ２Ｄ、ＢＣＭＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ（例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＷＴ１、及び臨床的に重要な他の腫瘍抗原、並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様において、ＣＡＲは、ＢＣＭＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＡＦＰ、ＣＤ４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ７０、ＣＤ１２３、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ（例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＧＤ２、ＧＰＣ－２、ＧＰＣ３、ＣＬＤＮ１８．２、ＨＥＲ２、ＬＩＬＲＢ４、ＩＬ－１３Ｒα２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＷＴ１、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＬＬ１、ＴＧＦａＲＩＩ、ＴＧＦｂＲＩＩ、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ４、ＨＰＶ関連抗原及びＥＢＶ関連抗原（例えば、ＬＭＰ１又はＬＭＰ２）からなる群から選択される標的抗原に特異的に結合する。
【0167】
いくつかの態様において、ＣＡＲは抗ＣＤ１９ ＣＡＲである。様々な抗原結合ドメイン配列は、ＣＡＲの標的化ドメインとして用いられ得る。例えば、ＷＯ ２０１２／０７９０００を参照されたく、この文献をその全体として本明細書に組み込む。いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を含む。
【0168】
いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）の一部であり、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ分子及び抗ＣＤ２０ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含む。
【0169】
いくつかの態様において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）の一部であり、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ分子及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０を含む。
【0170】
いくつかの態様において、ＣＡＲは抗ＣＬＬ１ ＣＡＲである。様々な抗原結合ドメイン配列は、ＣＡＲの標的化ドメインとして用いられ得る。例えば、ＷＯ ２０１２／０７９０００を参照されたく、この文献をその全体として本明細書に組み込む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＣＤ２８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を含む。
【0171】
いくつかの態様において、ＣＡＲは抗ＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲである。様々な抗原結合ドメイン配列は、ＣＡＲの標的化ドメインとして用いられ得る。例えば、ＷＯ ２０１２／０７９０００を参照されたく、この文献をその全体として本明細書に組み込む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３を含む。
【0172】
いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲは、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）の一部であり、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲ及び抗ＣＤ３３ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通ドメイン及びＴＬＲ４シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ４の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドはそれぞれ、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１を含む。
【0173】
いくつかの態様において、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲは、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）の一部であり、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲ及び抗ＣＤ３３（例えば、抗ＣＤ３３ Ｖドメイン及び／又は抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメイン）ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン及びＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）を含み、且つ第２のポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１を含む。いくつかの態様において、第２のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第２のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＣＤ２８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0174】
いくつかの態様において、ＣＡＲは抗ＧＰＣ３ ＣＡＲである。様々な抗原結合ドメイン配列は、ＣＡＲの標的化ドメインとして用いられ得る。例えば、その全体を本明細書に組み込んだものとするＷＯ２０１２／０７９０００を参照されたい。いくつかの態様において、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６を含む。
【0175】
いくつかの態様において、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲは、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）の一部であり、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８を含む。
【0176】
いくつかの態様において、ＣＡＲは、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）である。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、単一の抗ＢＣＭＡ ＣＡＲである。いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲである。様々な抗原結合ドメイン配列は、ＣＡＲの標的化ドメインとして用いられ得る。例えば、その全体を本明細書に組み込んだものとするＷＯ ２０１２／０７９０００を参照されたい。いくつかの態様において、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７を含む。いくつかの態様において、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６を含む。
【0177】
いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）の一部であり、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１を含む。
【0178】
いくつかの態様において、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）の一部であり、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む。
【0179】
いくつかの態様において、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－７Ｒａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＧＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（触覚）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ及び／又はＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ８α又はＣＤ２８膜貫通ドメインである。いくつかの態様において、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８αの膜貫通ドメインを含む。
【0180】
いくつかの態様において、細胞外ドメインは、ヒンジ領域を介して膜貫通ドメインに連結されている。一態様において、ヒンジ領域は、ＣＤ８αのヒンジ領域を含む。
【0181】
いくつかの態様において、ＣＡＲは、シグナルペプチド、例えば、ＣＤ８αＳＰを含む。
【0182】
いくつかの態様において、操作された受容体は、改変されたＴ細胞受容体である。いくつかの態様において、操作されたＴＣＲは、腫瘍抗原に対して特異性を有する。いくつかの態様において、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＣＬＬ１、ＧＰＣ３、ＢＣＭＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ（例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＷＴ１及び臨床的に重要な他の腫瘍抗原からなる群から選択される。いくつかの態様において、腫瘍抗原は、腫瘍細胞の細胞内タンパク質に由来する。例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１癌－精巣抗原、ｐ５３腫瘍阻害抗原、黒色腫（例えば、ＭＡＲＴＩ、ｇｐ１００）、白血病（例えば、ＷＴ１、マイナー組織適合抗原）及び乳癌（例えば、ＨＥＲ２、ＮＹ－ＢＲ１）における腫瘍抗原に対するＴＣＲを含む、腫瘍抗原（腫瘍関連抗原を含む）に対して特異性を有する多くのＴＣＲが記述されている。当分野の既知の任意のＴＣＲは本出願に用いられ得る。いくつかの態様において、ＴＣＲは、腫瘍抗原に対して、増強された親和性を有する。例えば、ＵＳ ５８３０７５５及びＫｅｓｓｅｌｓらＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｔｈｒｏｕｇｈ ＴＣＲ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ． Ｎａｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２，９５７－９６１（２００１）において、例示的なＴＣＲ及びこれらのＴＣＲを免疫細胞に導入するための方法が記述されている。いくつかの態様において、改変された免疫細胞はＴＣＲ－Ｔ細胞である。
【0183】
ＴＣＲ受容体複合体は、可変ＴＣＲ受容体α及びβ鎖（γδＴ細胞の場合に、γ及びδ鎖である）並びに三つの二量体シグナル伝達モジュールＣＤ３δ／ε、ＣＤ３γ／ε及びＣＤ２４７（Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ζ鎖）ζ／ζ又はζ／ηから形成された８量体複合体である。各サブユニットの膜貫通ドメインにおけるイオン化可能な残基は、複合体を一緒に保持する相互作用の極性ネットワークを形成する。ＴＣＲ複合体は、Ｔ細胞におけるシグナル伝達カスケードを活性化する機能を有する。
【0184】
いくつかの態様において、操作された受容体は、一つ又は複数のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）を含む、操作されたＴＣＲである。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ ２０１７０１６６６２２ Ａ１において例示的なＴＦＰが記述されている。いくつかの態様において、ＴＦＰは、ＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを含み、該細胞外ドメインは、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δＴＣＲサブユニット、それらの機能的断片、及び、少なくとも１個だが２０個は超えない改変を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメイン又はその部分を含む。いくつかの態様において、ＴＦＰは、膜貫通ドメインを含み、該膜貫通ドメインは、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δＴＣＲサブユニット、その機能的断片、及び、少なくとも１個だが２０個は超えない改変を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様において、ＴＦＰは、膜貫通ドメインを含み、該膜貫通ドメインは、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＴＣＲζ鎖、ＣＤ３εＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δＴＣＲサブユニット、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ２８、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、それらの機能的断片、及び、少なくとも１個だが２０個は超えない改変を有するそれらのアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む。
【0185】
いくつかの態様において、ＴＦＰは、ＴＣＲサブユニットと抗原結合ドメインとを含み、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部と、含有ＣＤ３εの細胞内シグナル伝達ドメインからの刺激ドメインを含有するＴＣＲ細胞内ドメインとを含み、ここで、該ＴＣＲサブユニットは、該抗原結合ドメインに操作可能に連結され、且つここで、Ｔ細胞で発現するとき、該ＴＦＰはＴＣＲに組み込む。
【0186】
いくつかの態様において、ＴＦＰは、ＴＣＲサブユニットと抗原結合ドメインとを含み、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部と、含有ＣＤ３γの細胞内シグナル伝達ドメインからの刺激ドメインを含有するＴＣＲ細胞内ドメインとを含み、ここで、該ＴＣＲサブユニットは、該抗原結合ドメインに操作可能に連結され、且つここで、Ｔ細胞で発現するとき、該ＴＦＰはＴＣＲに組み込む。
【0187】
いくつかの態様において、ＴＦＰは、ＴＣＲサブユニットと抗原結合ドメインとを含み、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部と、含有ＣＤ３δの細胞内シグナル伝達ドメインからの刺激ドメインを含有するＴＣＲ細胞内ドメインとを含み、ここで、該ＴＣＲサブユニットは、該抗原結合ドメインに操作可能に連結され、且つここで、Ｔ細胞で発現するとき、該ＴＦＰはＴＣＲに組み込む。
【0188】
いくつかの態様において、ＴＦＰは、ＴＣＲサブユニットと抗原結合ドメインとを含み、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部と、ＴＣＲαの細胞内シグナル伝達ドメインからの刺激ドメインを含有するＴＣＲ細胞内ドメインとを含み、ここで、該ＴＣＲサブユニットは、該抗原結合ドメインに操作可能に連結され、且つここで、Ｔ細胞で発現するとき、該ＴＦＰはＴＣＲに組み込む。
【0189】
いくつかの態様において、ＴＦＰは、ＴＣＲサブユニットと抗原結合ドメインとを含み、該ＴＣＲサブユニットは、ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部と、ＴＣＲβの細胞内シグナル伝達ドメインからの刺激ドメインを含有するＴＣＲ細胞内ドメインとを含み、ここで、該ＴＣＲサブユニットは、該抗原結合ドメインに操作可能に連結され、且つここで、Ｔ細胞で発現するとき、該ＴＦＰはＴＣＲに組み込む。
【0190】
いくつかの態様において、操作された受容体はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ ２０１６０３６８９６４ Ａ１において例示的なＴＡＣ受容体が記述されている。いくつかの態様において、ＴＡＣは、標的化ドメインと、ＴＣＲ複合体に関連するタンパク質に特異的に結合するＴＣＲ結合ドメインと、Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの態様において、標的化ドメインは、腫瘍抗原に特異的に結合する抗体断片、例えば、ｓｃＦｖ又はＶＨＨである。いくつかの態様において、標的化ドメインは、設計されたアンキリン反復配列（ＤＡＲＰｉｎ）ポリペプチドである。いくつかの態様において、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＧＰＣ３、ＣＬＬ１、ＢＣＭＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ（例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＷＴ１及び臨床的に重要な他の腫瘍抗原からなる群から選択される。いくつかの態様において、ＴＣＲ複合体に関連するタンパク質は、ＣＤ３、例えば、ＣＤ３εである。いくつかの態様において、ＴＣＲ結合ドメインは、単鎖抗体、例えば、ｓｃＦｖ又はＶＨＨである。いくつかの態様において、ＴＣＲ結合ドメインはＵＣＨＴ１に由来する。いくつかの態様において、ＴＡＣ受容体は、細胞質ドメインと膜貫通ドメインとを含む。いくつかの態様において、Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ共受容体に由来する細胞質ドメインを含む。例示的なＴＣＲ共受容体は、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７及びＣＤ１５４を含むが、それらに限らない。いくつかの態様において、ＴＡＣ受容体は、膜貫通ドメインと、ＣＤ４に由来する細胞質ドメインとを含む。いくつかの態様において、ＴＡＣ受容体は、膜貫通ドメインと、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８α）に由来する細胞質ドメインとを含む。
【0191】
Ｔ細胞共受容体は、膜タンパク質としてＴ細胞上に発現する。それらは、ＴＣＲ：ペプチド：ＭＨＣ複合体の安定性を提供し、シグナル形質導入を促進することができる。Ｔ細胞共受容体の二つのサブタイプＣＤ４及びＣＤ８は、特定のＭＨＣタイプに対して強い特異性を示す。ＣＤ４共受容体はＴＣＲ：ＭＨＣ ＩＩ複合体のみを安定化することができる一方、ＣＤ８共受容体はＴＣＲ：ＭＨＣ Ｉ複合体のみを安定化することができる。ＣＤ４及びＣＤ８の異なるＴ細胞型上の差次的発現は、Ｔ細胞の機能的サブグループの違いをもたらす。ＣＤ８＋Ｔ細胞は細胞傷害性Ｔ細胞である。
【0192】
ＣＤ４は、免疫細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞、単球、マクロファージ及び樹状細胞）の表面上に発現する糖タンパク質である。ＣＤ４は、細胞外細胞表面に曝露する四つの免疫グロブリンドメイン（Ｄ１～Ｄ４）を有する。ＣＤ４は、その短い細胞質／細胞内尾部に特定のアミノ酸配列を含有し、それは、ＣＤ４尾部がチロシンキナーゼＬｃｋを動員し、該チロシンキナーゼＬｃｋと相互作用することを可能にする。ＴＣＲ複合体及びＣＤ４がそれぞれＭＨＣ ＩＩ分子の異なる領域に結合する場合、ＴＣＲ複合体とＣＤ４との間の緊密な接近は、ＣＤ４の細胞質尾部に結合するＬｃｋが、ＣＤ３の細胞質ドメインにおける免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）に対してチロシンリン酸化を行うことによって、ＴＣＲによって生成されたシグナルを増幅させることを可能にする。
【0193】
ＣＤ８は、二本のα鎖からなるホモ二量体（一般的ではない）又は一本のα鎖及び一本のβ鎖からなるヘテロ二量体（一般的）の糖タンパク質であり、それらは、それぞれ、細いストーク（ｔｈｉｎ ｓｔａｌｋ）を介して膜に連結される免疫グロブリン可変（ＩｇＶ）様細胞外ドメイン及び細胞内尾部を含む。ＣＤ８は、主に細胞傷害性Ｔ細胞の表面上に発現するが、ナチュラルキラー細胞、皮質胸腺細胞及び樹状細胞上にも見出され得る。ＣＤ８細胞質尾部は、Ｌｃｋと相互作用し、ＴＣＲがその特異性抗原に結合すると、ＴＣＲ複合体の細胞質ＣＤ３及びζ鎖をリン酸化する。細胞質ＣＤ３及びζ鎖におけるチロシンリン酸化は、リン酸化カスケードを誘発し、最終的には、遺伝子転写をもたらす。
【0194】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、一つよりも多い操作された受容体、例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、ＴＡＣ受容体の任意の組み合わせに発現する。
【0195】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞により発現される操作された受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ又はＴＡＣ）は、一つ又は複数の腫瘍抗原を標的化する。腫瘍抗原は、免疫応答、特にＴ細胞媒介性免疫応答の腫瘍細胞により産生されたタンパク質である。本開示の標的化抗原の選択は、治療される癌の特定のタイプに依存する。例示的な腫瘍抗原は、例えば、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、β－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、甲状腺グロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸管カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺酵素、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－ｌａ、ｐ５３、ＣＬＬ１、ＢＣＭＡ、ＧＰＣ３、ＣＤ１９、プロスタグランジン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、サバイビン及びテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２（ｅｐｈｒｉｎＢ２）、ＣＤ２２、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体及びメソテリンを含む。
【0196】
いくつかの態様において、腫瘍抗原は、悪性腫瘍に関連する一つ又は複数の抗原癌エピトープである。悪性腫瘍は、免疫攻撃として用いられ得る標的抗原の多くのタンパク質を発現する。これらの分子は、組織特異性抗原、例えば、黒色腫におけるＭＡＲＴ－１、チロシナーゼ及びｇｐ１００、並びに前立腺癌における前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）及び前立腺特異抗原（ＰＳＡ）を含むが、それらに限らない。他の標的分子は、癌遺伝子ＨＥＲ２／Ｎｅｕ／ＥｒｂＢ－２のような形質転換に関連する分子群に属する。別のグループの標的抗原は、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）のような癌胎児性抗原である。Ｂ細胞リンパ腫において、腫瘍特異性イディオタイプ免疫グロブリンは、個体腫瘍に特有の真の腫瘍特異性免疫グロブリン抗原を構成する。Ｂ細胞分化抗原（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０及びＣＤ３７）は、Ｂ細胞リンパ腫における標的抗原の他の候補物である。
【0197】
いくつかの態様において、腫瘍抗原は、腫瘍特異性抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。ＴＳＡは、腫瘍細胞に特有のものであり、且つ体内の他の細胞には存在しない。ＴＡＡ関連抗原は、腫瘍細胞に特有のものではなく、逆に抗原に対する免疫寛容状態を誘導できない条件下で正常な細胞で発現することもできる。腫瘍での抗原の発現は、免疫系による抗原に対する応答を可能にする条件下で発生し得る。ＴＡＡは、免疫系が未熟で応答不能な胚発生中に正常な細胞で発現する抗原であり得るか、又は正常細胞で通常極めて低いレベルで存在するが、腫瘍細胞ではるかに高いレベルで発現する抗原であり得る。
【0198】
ＴＳＡ又はＴＡＡ抗原の非限定的例としては、ＭＡＲＴ－１／ＭｅｌａｎＡ（ＭＡＲＴ－Ｉ）、ｇｐ １００（Ｐｍｅｌ １７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２のような分化抗原、及びＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐｌ５のような腫瘍特異性多重系統抗原、ＣＥＡのような過剰発現の胎児性抗原、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ２／ｎｅｕのような過剰発現の癌遺伝子及び突然変異的した腫瘍抑制遺伝子、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲのような染色体転座により産生された独特の腫瘍抗原、並びにエプスタイン－バールウイルス抗原ＥＢＶＡ及びヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６とＥ７のようなウイルス抗原が挙げられる。タンパク質に基づく他の大抗原は、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ＮＹ－ＥＳＯ、ｐｌ８５ｅｒｂＢ２、ｐｌ８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３ＨＩ、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ １９－９、ＣＡ ７２－４、ＣＡＭ １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ １５、ｐ １６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ １２５、ＣＡ １５－３＼ＣＡ ２７．２９＼ＢＣＡＡ、ＣＡ １９５、ＣＡ ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３＼ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ １、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０＼Ｍａｃ－２結合タンパク質＼シクロフィリンＣ関連タンパク質、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ及びＴＰＳを含む。
【0199】
核酸
本明細書に記載の改変された免疫細胞は、本明細書に記載のＴＬＲポリペプチド（例えば、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチド）及び／又は操作された受容体のうちのいずれか一つをコードする一つ又は複数の異種核酸配列を含む。
本明細書に記載の改変された免疫細胞は、本明細書に記載のＴＬＲポリペプチド（例えば、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチド）及び／又は操作された受容体のうちのいずれか一つをコードする一つ又は複数の異種核酸配列を含む。
【0200】
いくつかの態様において、単離された核酸を提供し、それは、本明細書に記載のポリペプチド（例えば、ＴＬＲポリペプチド）のうちのいずれか一つをコードする核酸配列を含む。いくつかの態様において、単離された核酸を提供し、それは、本明細書に記載の操作された受容体のうちのいずれか一つをコードする核酸配列を含む。いくつかの態様において、核酸はＤＮＡである。いくつかの態様において、核酸はＲＮＡである。いくつかの態様において、核酸は線状である。いくつかの態様において、核酸は環状である。
【0201】
第１のポリペプチド、第２のポリペプチドをコードする核酸配列及び／又は操作された受容体をコードする核酸は、一つ又は複数の調節配列に操作可能に連結され得る。コーディング配列の転写及び／又は翻訳を制御する例示的な調節配列は、当分野の既知のものであり、且つプロモーターと、転写の適切な開始、調節及び／又は終結（例えば、ポリＡ転写終結配列）、ｍＲＮＡ転移（例えば、核局在化シグナル配列）、プロセシング（例えば、スプライシングシグナル）、安定性（例えば、イントロン並びにノンコーディング５’及び３’配列）、翻訳（例えば、開始Ｍｅｔ、トリプレットリーダー配列、ＩＲＥＳリボソーム結合部位、シグナルペプチドなど）のための別のエレメントと、挿入物をウイルスベクターに導入するための挿入部位とを含んでもよいが、それらに限らない。いくつかの態様において、調節配列は、プロモーター、転写エンハンサー、及び／又はＴＬＲポリペプチド及び／又は操作された受容体の正確な発現を可能にする配列である。
【0202】
「調節配列」又は「制御配列」という用語は、それに操作可能に連結されるコーディング配列の発現に影響を与えるＤＮＡ配列を指す。このような調節配列の性質は宿主生物によって異なる。原核生物において、調節配列は、通常、プロモーターと、リボソーム結合部位と、ターミネーターとを含む。真核生物において、調節配列は、プロモーター、ターミネーター、及び場合によってはエンハンサー、トランス活性化因子又は転写因子を含む。
【0203】
「操作可能に連結される」という用語は、並列を指し、ここで、前記成分は、それらが意図された方法で機能することを可能にする関係にある。コーディング配列に「操作可能に連結される」調節配列は、このような方式で連結することによって、調節配列に適応する条件でコーディング配列の発現を完了する。
【0204】
本明細書で使用されるように、「プロモーター」又は「プロモーター領域」は、それに操作可能に連結されるＤＮＡ又はＲＮＡの転写を制御するＤＮＡ又はＲＮＡセグメントを指す。プロモーター領域は、ＲＮＡポリメラーゼ認識、結合及び転写開始に関する特定の配列を含む。なお、プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼの認識、結合及び転写開始活性（即ち、一つ又は複数の転写因子の結合）を調節する配列を含む。これらの配列は、シスに作用してもよく、又はトランス作用因子に応答してもよい。プロモーターは、調節の性質に応じて、構成型プロモーター又は調節型プロモーターであり得る。調節型プロモーターは、誘導的であってもよく、又は環境に応答（例えば、ｐＨ、嫌気性条件、浸透圧調節剤、温度、光又は細胞密度などの誘因に応答）してもよい。多くのこのようなプロモーター配列は当分野の既知のものである。例えば、米国特許第４，９８０，２８５号、５，６３１，１５０号、５，７０７，９２８号、５，７５９，８２８号、５，８８８，７８３号、５，９１９，６７０号及びＳａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）を参照されたい。
【0205】
いくつかの態様において、第１のポリペプチドをコードする核酸配列は、第１のプロモーターに操作可能に連結される。いくつかの態様において、第２のポリペプチドをコードする核酸配列は、第２のプロモーターに操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドは同じであり、且つ第１の核酸は第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを同時にコードする。いくつかの態様において、第１のポリペプチドをコードする核酸配列、及び第２のポリペプチドをコードする核酸配列は、同一のプロモーターに操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１のポリペプチドをコードする核酸配列、及び第２のポリペプチドをコードする核酸配列は、個別のプロモーターに操作可能に連結される。
【0206】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体をコードする第３の核酸を含む。いくつかの態様において、第１の核酸及び第３の核酸は、同一のプロモーターに操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の核酸及び第３の核酸は、個別のプロモーターに操作可能に連結される。いくつかの態様において、第２の核酸及び第３の核酸は、同一のプロモーターに操作可能に連結される。いくつかの態様において、第２の核酸及び第３の核酸は、個別のプロモーターに操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の核酸、第２の核酸、及び第３の核酸は、同一のプロモーターに操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の核酸、第２の核酸、及び第３の核酸は、個別のプロモーターに操作可能に連結される。
【0207】
いくつかの態様において、プロモーターは内因性プロモーターである。例えば、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド及び／又は操作された受容体をコードする核酸は、当分野の既知の任意の方法（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９法）を用いて、内因性プロモーター下流の改変された免疫細胞のゲノムにノックインされ得る。いくつかの態様において、内因性プロモーターは、β－アクチンのような豊富なタンパク質のプロモーターである。いくつかの態様において、内因性プロモーターは、誘導性プロモーターであり、例えば、改変された免疫細胞の内因性活性化シグナルにより誘導され得る。いくつかの態様において、ここで、改変された免疫細胞はＴ細胞であり、プロモーターはＴ細胞活性化依存性プロモーター（例えば、ＩＬ－２プロモーター、ＮＦＡＴプロモーター又はＮＦκＢプロモーター）である。いくつかの態様において、プロモーターは異種プロモーターである。
【0208】
哺乳動物細胞における遺伝子発現のために様々なプロモーターが探索されており、且つ本出願では、当分野に既知のプロモーターのいずれも使用し得る。プロモーターは、構成型プロモーター又は調節型プロモーター、例えば、誘導性プロモーターに大別され得る。いくつかの態様において、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド及び／又は操作された受容体をコードする異種核酸配列は、構成型プロモーターに操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド及び／又は操作された受容体をコードする異種核酸配列は、誘導性プロモーターに操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の構成型プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、第２の構成型プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ誘導性プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の構成型プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、第２の構成型プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ第３の構成型プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の構成型プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、第２の構成型プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ誘導性プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の構成型プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、第２の構成型プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ誘導性プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の構成型プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、第２の構成型プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ誘導性プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の構成型プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、第１の誘導性プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ第２の誘導性プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の構成型プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、第１の誘導性プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ第２の誘導性プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の構成型プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結され、第１の誘導性プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ第２の誘導性プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結される。
【0209】
いくつかの態様において、第１の誘導性プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、第２の誘導性プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ第３の誘導性プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の誘導性プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、第２の誘導性プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ構成型プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の誘導性プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、第２の誘導性プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ構成型プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の誘導性プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、第２の誘導性プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ構成型プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の誘導性プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、第１の構成型プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ第２の構成型プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の誘導性プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、第１の構成型プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ第２の構成型プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の誘導性プロモーターは、操作された受容体をコードする核酸配列に操作可能に連結され、第１の構成型プロモーターは、第２のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結され、且つ第２の構成型プロモーターは、第１のポリペプチドをコードする核酸配列に操作可能に連結される。
【0210】
いくつかの態様において、第１の誘導性プロモーターは第１の誘導条件により誘導され得、第２の誘導性プロモーターは第２の誘導条件により誘導され得、且つ第３の誘導性プロモーターは第３の誘導条件により誘導され得る。いくつかの態様において、第１の誘導条件と第２の誘導条件は同じである。いくつかの態様において、第１の誘導条件と第３の誘導条件は同じである。いくつかの態様において、第２の誘導条件と第３の誘導条件は同じである。いくつかの態様において、第１の誘導条件、第２の誘導条件及び第３の誘導条件はいずれも同じである。いくつかの態様において、第１の誘導性プロモーター及び第２の誘導性プロモーターは同時に誘導される。いくつかの態様において、第１の誘導性プロモーター及び第３の誘導性プロモーターは同時に誘導される。いくつかの態様において、第２の誘導性プロモーター及び第３の誘導性プロモーターは同時に誘導される。いくつかの態様において、第１の誘導性プロモーター、第２の誘導性プロモーター及び第３の誘導性プロモーターは同時に誘導される。いくつかの態様において、第１の誘導性プロモーター、第２の誘導性プロモーター及び第３の誘導性プロモーターを順に誘導し、例えば、第２の誘導性プロモーターの前に第１の誘導性プロモーターを誘導し、且つ第３の誘導性プロモーターの前に第２の誘導性プロモーターを誘導し、第２の誘導性プロモーターの後に第１の誘導性プロモーターを誘発し、且つ第３の誘導性プロモーターの前に第２の誘導性プロモーターを誘導し、又は第２の誘導性プロモーターの後に第１の誘導性プロモーターを誘導し、且つ第３の誘導性プロモーターの後に第２の誘導性プロモーターを誘導する。
【0211】
構成型プロモーターは、異種遺伝子（トランスジェニックとも呼ばれる）の宿主細胞での構成的発現を可能にする。本明細書で考慮される例示的な構成型プロモーターは、サイトメガロウイルスウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ヒト伸長因子－１α（ｈＥＦ１α）、ユビキチンＣプロモーター（ＵｂｉＣ）、ホスホグリセロキナーゼプロモーター（ＰＧＫ）、シミアンウイルス４０初期プロモーター（ＳＶ４０）及びＣＭＶ初期エンハンサーにカップリングされるニワトリβ－アクチンプロモーター（ＣＡＧＧ）を含むが、それらに限らない。このような構成型プロモーターのトランスジェニック発現ドライブに対する効率は、多くの研究において広く比較されている。いくつかの態様において、プロモーターはｈＥＦ１αプロモーターである。
【0212】
いくつかの態様において、プロモーターは誘導性プロモーターである。誘導性プロモーターは、調節型プロモーターのクラスに属する。誘導性プロモーターは、一つ又は複数の条件、例えば、物理的条件、改変された免疫細胞の微小環境もしくは改変された免疫細胞の生理学的状態、誘導物（即ち、誘導剤）又はそれらの組み合わせにより誘導され得る。いくつかの態様において、誘導条件は、改変された免疫細胞及び／又は薬学的組成物を受けた被験体における内因性遺伝子の発現を誘導しない。いくつかの態様において、誘導条件は、誘導物、放射線（例えば、電離放射線、光）、温度（例えば、熱）、酸化還元状態、腫瘍環境及び改変された免疫細胞の活性化状態からなる群から選択される。
【0213】
いくつかの態様において、プロモーターは、誘導物により誘導され得る。いくつかの態様において、誘導物は、小分子、例えば、化学化合物である。いくつかの態様において、小分子は、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、アルコール、金属又はステロイドからなる群から選択される。化学的誘導されるプロモーターは最も広く探索された。このようなプロモーターは、その転写活性が、小分子化学物質（例えば、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、アルコール、ステロイド、金属及び他の化合物）の存在又は不存在により調節されるプロモーターを含む。リバーステトラサイクリン調節性トランス活性化因子（ｒｔＴＡ）及びテトラサイクリン応答エレメントプロモーター（ＴＲＥ）を有するドキシサイクリン誘導性システムは、現在最も成熟したシステムである。テトラサイクリン応答プロモーターによる真核細胞における遺伝子発現に対する厳密な制御はＷＯ ９４２９４４２において記述されている。テトラサイクリン調節される転写調節剤はＷＯ ９６０１３１３に開示されている。また、Ｔｅｔ技術（例えば、Ｔｅｔ－Ｏｎシステム）は、例えば、ＴｅｔＳｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍのウェブサイトに記述されている。任意の既知の化学調節のプロモーターは、本出願の治療タンパク質の発現を駆動することに用いられ得る。
【0214】
いくつかの態様において、誘導物は、増殖因子、ホルモン又は細胞表面受容体のリガンドのようなポリペプチド、例えば、腫瘍抗原に特異的に結合するポリペプチドである。いくつかの態様において、該ポリペプチドは、改変された免疫細胞により発現される。いくつかの態様において、該ポリペプチドは、異種核酸における核酸によりコードされる。多くのポリペプチド誘導物は、当分野の既知のものであり、且つ本出願に適用され得る。例えば、エクジソン受容体ベースの遺伝子スイッチ、プロゲステロン受容体ベースの遺伝子スイッチ及びエストロゲン受容体ベースの遺伝子スイッチは、ステロイド受容体由来のトランス活性化因子を使用した遺伝子スイッチに属する（ＷＯ ９６３７６０９及びＷＯ ９７３８１１７など）。
【0215】
いくつかの態様において、誘導物は、低分子成分及び一つ又は複数のポリペプチドを同時に含む。例えば、ポリペプチド二量体化に依存する誘導性プロモーターは、当分野の既知のものであり、且つ本出願に適用され得る。１９９３に開発された一番目の低分子ＣＩＤシステムは、ＦＫ１０１２（薬物ＦＫ５０６の誘導体）を用いて、ＦＫＢＰのホモ二量体化を誘導する。類似している戦略により、Ｗｕらは、Ｒａｐａｌｏｇ／ＦＫＰＢ－ＦＲＢ＊及びジベレリン（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎｅ）／ＧＩＤ１－ＧＡＩ二量体化依存性遺伝子スイッチを用いて、ＣＡＲ－Ｔ細胞をオンスイッチ（ＯＮ－ｓｗｉｔｃｈ）方式で滴定可能にすることに成功した（Ｃ．－Ｙ． Ｗｕら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３５０，ａａｂ４０７７（２０１５））。他の二量体化依存性スイッチシステムは、クーママイシン／ＧｙｒＢ－ＧｙｒＢ（Ｎａｔｕｒｅ ３８３（６５９６）：１７８－８１）とＨａＸＳ／Ｓｎａｐ－ｔａｇ－ＨａｌｏＴａｇ（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０（４）：５４９－５７）とを含む。
【0216】
いくつかの態様において、プロモーターは、光誘導性プロモーターであり、且つ誘導条件が光である。哺乳動物細胞において遺伝子発現を調節するための光誘導性プロモーターも当分野に周知のものである（例えば、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３２，１５６５－１５６８（２０１１）、Ｎａｔ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ９，２６６－２６９（２０１２）、Ｎａｔｕｒｅ ５００：４７２－４７６（２０１３）、Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １８：１２０２－１２１２（２０１５）を参照されたい）。このような遺伝子調節システムは、（１）ＤＮＡ結合又は（２）転写活性化ドメインの動員からＤＮＡ結合タンパク質の調節という２つのクラスに大別され得る。例えば、哺乳動物細胞において、メラノプシンに基づく合成哺乳動物青色光制御性転写システムを開発し試験し、該システムは、青色光（４８０ｎｍ）に応答して細胞内のカルシウム増加を誘発することによって、カルシニューリンにより媒介されたＮＦＡＴの動員をもたらす。最近、Ｍｏｔｔａ－Ｍｅｎａらは、天然に存在するＥＬ２２２転写因子から開発された、ヒト細胞株及びゼブラフィッシュ胚において転写開始に対する高レベルの青色光感受性制御を付与する新規誘導性遺伝子発現システムを記述した（Ｎａｔ． Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ． １０（３）：１９６－２０２（２０１４））。また、シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）の光受容体であるフィトクロムＢ（ＰｈｙＢ）とフィトクロム相互作用因子６（ＰＩＦ６）との赤色光誘導性相互作用を利用して、赤色光誘発性遺伝子発現調節を行う。なお、紫外線Ｂ（ＵＶＢ）誘導性遺伝子発現システムを開発し、哺乳動物細胞における標的遺伝子転写に有効であることを明らかにした（Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，第２５章，第４版，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，２０１５年１月２０日）。本明細書に記載の任意の光誘導性プロモーターは、本出願の治療タンパク質の発現を駆動することに用いられ得る。
【0217】
いくつかの態様において、プロモーターは、光誘導性分子と光との組み合わせにより誘導される光誘導性プロモーターである。例えば、化学誘導物における光切断可能なフォトケージド基（ｐｈｏｔｏｃａｇｅｄ ｇｒｏｕｐ）は、照射又は他の手段によって除去されない限り、誘導物を不活性のままにする。このような光誘導性分子は、低分子化合物、オリゴヌクレオチド及びタンパク質を含む。例えば、ケージドエクジソン、ｌａｃオペロンと共に使用されるケージドＩＰＴＧ、リボザイム媒介性遺伝子発現のためのケージドトヨカマイシン、Ｔｅｔ－オンシステムと共に使用されるケージドドキシサイクリン及び光媒介性ＦＫＢＰ／ＦＲＢ二量体化のためのケージドＲａｐａｌｏｇは既に開発された（例えば、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ． １６（３－４）：２９２－２９９（２０１２）を参照されたい）。
【0218】
いくつかの態様において、プロモーターは、放射線誘導性プロモーターであり、且つ誘導条件が、電離放射線のような放射線である。放射線誘導性プロモーターは、当分野の既知のものであり、トランスジェニック発現を制御するために用いられる。遺伝子発現の変化は細胞照射後に発生する。例えば、「最初期遺伝子（ｉｍｍｅｄｉａｔｅ ｅａｒｌｙ ｇｅｎｅ）」と呼ばれる遺伝子群は、電離放射線後に迅速に反応することができる。例示的な最初期遺伝子は、Ｅｒｇ－１、ｐ２１／ＷＡＦ－１、ＧＡＤＤ４５α、ｔ－ＰＡ、ｃ－Ｆｏｓ、ｃ－Ｊｕｎ、ＮＦ－κＢ及びＡＰ１を含むが、それらに限らない。最初期遺伝子は、そのプロモーター領域に放射線応答配列を含む。共有配列ＣＣ（Ａ／Ｔ）６ＧＧは、Ｅｒｇ－１プロモーターに見出され、且つ血清応答エレメント又はＣＡｒＧエレメントと呼ばれる。放射線誘導性プロモーターとトランスジェニックとの組み合わせは、鋭意研究され、効率的な治療上の利点を有することが証明されている。例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ． ６（７）：１００５－１２（２００７）及びＧｅｎｅ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，第２５章，第４版，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，２０１５年１月２０日を参照されたい。
【0219】
いくつかの態様において、プロモーターは、熱誘導性プロモーターであり、且つ誘導条件が熱である。当分野では、トランスジェニック発現を駆動する熱誘導性プロモーターは広く研究されている。Ｈｓｐ９０、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ６０、Ｈｓｐ４０、Ｈｓｐ１０などを含む熱ショック又はストレスタンパク質（ＨＳＰ）は、熱又は他の物理的及び化学的ストレス下で細胞を保護する上で重要な役割を果たしている。前臨床研究において、熱誘導性プロモーターをいくつか試み、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）プロモーター並びに増殖停止及びＤＮＡ損傷（ＧＡＤＤ）１５３プロモーターを含む。１９８５年に初めて記述されたヒトｈｓｐ７０Ｂ遺伝子のプロモーターは、最も効率的な熱誘導性プロモーターの一つであると思われる。Ｈｕａｎｇらは、ｈｓｐ７０Ｂ－ＥＧＦＰ、ｈｓｐ７０Ｂ－ＴＮＦα及びｈｓｐ７０Ｂ－ＩＬ１２コーディング配列の導入後、腫瘍細胞が熱処理後に極めて高いトランスジェニック発現を発現するが、熱処理なしではトランスジェニックの発現が検出されていないことを報告した。ＩＬ１２トランスジェニック加熱処理されたマウス群において、インビボでの腫瘍成長は有意に遅延した（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６０：３４３５（２０００））。別の科学者グループは、ＨＳＶ－ｔｋ自殺遺伝子をｈｓｐ７０Ｂプロモーターと連結し、マウス乳癌を有するヌードマウスで該システムを試験する。熱処理されていない対照に比べて、その腫瘍にｈｓｐ７０Ｂ－ＨＳＶｔｋコーディング配列を投与し、熱処理を行ったマウスは、腫瘍の消退及び有意な生存率を示す（Ｈｕｍ． Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１１：２４５３（２０００））。当分野の既知の別の熱誘導性プロモーターは、例えばＧｅｎｅ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，第２５章，第４版，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，２０１５年１月２０日から見出すことができる。本明細書で論じられる任意の誘導性プロモーターは、本出願の治療タンパク質の発現を駆動することに用いられ得る。
【0220】
いくつかの態様において、プロモーターは、酸化還元状態から誘導され得る。酸化還元状態から誘導され得る例示的プロモーターは、誘導性プロモーターと低酸素誘導性プロモーターとを含む。例えば、Ｐｏｓｔ ＤＥらは、ＨＩＦ活性腫瘍細胞におけるトランスジェニック発現を特異的で強力に誘導する低酸素誘導性因子（ＨＩＦ）応答プロモーターを開発した（Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ８：１８０１－１８０７（２００１）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６７：６８７２－６８８１（２００７））。
【0221】
いくつかの態様において、プロモーターは、改変された免疫細胞の生理学的状態（例えば、内因性活性化シグナル）により誘導され得る。いくつかの態様において、ここで、改変された免疫細胞はＴ細胞であり、プロモーターはＴ細胞活性化依存性プロモーターであり、改変されたＴ細胞の内因性活性化シグナルにより誘導され得る。いくつかの態様において、改変されたＴ細胞は、誘導物（例えば、ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、イオノマイシン又は植物レクチン）により活性化される。いくつかの態様において、改変されたＴ細胞は、操作された受容体（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ又はＴＡＣ）により腫瘍細胞における腫瘍抗原を認識することによって活性化される。いくつかの態様において、Ｔ細胞活性化依存性プロモーターはＩＬ－２プロモーターである。いくつかの態様において、Ｔ細胞活性化依存性プロモーターはＮＦＡＴプロモーターである。いくつかの態様において、Ｔ細胞活性化依存性プロモーターはＮＦκＢプロモーターである。
【0222】
本明細書に記載の一つ又は複数の異種核酸配列は、異種遺伝子発現カセットに存在し得、該異種遺伝子発現カセットは、一つ又は複数のタンパク質コーディング配列と、任意で一つ又は複数のプロモーターとを含む。いくつかの態様において、異種遺伝子発現カセットは、単一のタンパク質コーディング配列を含む。いくつかの態様において、異種遺伝子発現カセットは、単一のプロモーターにより駆動される二つ又はそれ以上のタンパク質コーディング配列（即ち、ポリシストロニック）を含む。いくつかの態様において、異種遺伝子発現カセットは、一つ又は複数の調節配列（例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、エンハンサー配列、ＩＲＥＳ、転写終結配列）、組換え部位、一つ又は複数の選択マーカー（例えば、抗生物質耐性遺伝子、レポーター遺伝子など）、シグナル配列又はそれらの組み合わせをさらに含む。
【0223】
いくつかの態様において、本明細書に記載の第１のポリペプチド及び／又は操作された受容体をコードする核酸のうちのいずれか一つを含むベクターを提供する。いくつかの態様において、本明細書に記載の第１のポリペプチドのうちのいずれか一つをコードする第１の核酸配列と、本明細書に記載の操作された受容体のうちのいずれか一つをコードする第２の核酸配列とを含むベクターを提供する。いくつかの態様において、第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列は、自己切断可能なリンカー（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ又はＦ２Ａペプチド）をコードする第３の核酸配列を介して、操作された受容体をコードする第２の核酸配列と融合している。いくつかの態様において、Ｐ２Ａ配列は、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）である。いくつかの態様において、第１のベクターと第２のベクターとを含む組成物を提供し、該第１のベクターは、本明細書に記載の第１のポリペプチドのうちのいずれか一つをコードする第１の核酸配列を含み、該第２のベクターは、本明細書に記載の操作された受容体のうちのいずれか一つをコードする第２の核酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９ ＣＡＲ又はＣＬＬ１ ＣＡＲ）をコードする第１の核酸配列と第１のポリペプチドをコードする第２の核酸配列とを含むベクターを提供し、ここで、該第１の核酸配列は、自己切断可能なリンカー（例えば、Ｐ２Ａ）をコードする第３の核酸配列を介して、該第２の核酸配列と融合している。いくつかの態様において、ベクターは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。
【0224】
いくつかの態様において、本明細書に記載の第１のポリペプチド、第２のポリペプチド及び／又は操作された受容体をコードする核酸のうちのいずれか一つを含むベクターを提供する。いくつかの態様において、本明細書に記載の第１のポリペプチドのうちのいずれか一つをコードする第１の核酸配列と、本明細書に記載の第２のポリペプチドのうちのいずれか一つをコードする第２の核酸配列と、本明細書に記載の操作された受容体のうちのいずれか一つをコードする第３の核酸配列とを含むベクターを提供する。いくつかの態様において、第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列は、自己切断可能なリンカー（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ又はＦ２Ａペプチド）をコードする第４の核酸配列を介して、操作された受容体をコードする第２の核酸配列と融合している。いくつかの態様において、第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列は、自己切断可能なリンカー（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ又はＦ２Ａペプチド）をコードする第５の核酸配列を介して、第２のポリペプチドをコードする第３の核酸配列とさらに融合している。いくつかの態様において、Ｐ２Ａ配列は、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）である。いくつかの態様において、第１のベクターと、第２のベクターと、第３のベクターとを含む組成物を提供し、該第１のベクターは、本明細書に記載の第１のポリペプチドのうちのいずれか一つをコードする第１の核酸配列を含み、該第２のベクターは、本明細書に記載の第２のポリペプチドのうちのいずれか一つをコードする第２の核酸配列を含み、該第３のベクターは、本明細書に記載の操作された受容体のうちのいずれか一つをコードする第３の核酸配列を含む。いくつかの態様において、ベクターを提供し、それは、ＣＡＲ（例えば、ＣＤ１９ ＣＡＲ又はＣＬＬ１ ＣＡＲ）をコードする第１の核酸配列と、第１のポリペプチドをコードする第２の核酸配列と、第２のポリペプチドをコードする第３の核酸配列とを含み、ここで、第１の核酸配列は、自己切断可能なリンカー（例えば、Ｐ２Ａ）をコードする第４の核酸配列を介して、第２の核酸配列と融合し、且つここで、第２の核酸配列は、自己切断可能なリンカー（例えば、Ｐ２Ａ）をコードする第５の核酸配列を介して、第３の核酸配列と融合している。いくつかの態様において、ベクターは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。
【0225】
「ベクター」は、物質組成物であり、単離された核酸を含み、単離された核酸を細胞内部に送達することに用いられ得る。当分野の既知の多くのベクターは、線状ポリヌクレオチド、イオン又は両親媒化合物に関連するポリヌクレオチド、プラスミド及びウイルスを含むが、それらに限らない。通常、適切なベクターは、少なくとも一つの生物において機能する複製始点、プロモーター配列、都合のいい制限エンドヌクレアーゼ部位及び一つ又は複数の選択可能なマーカーを含有する。「ベクター」という用語は、核酸の細胞への転移を促進する非プラスミド及び非ウイルス化合物、例えば、ポリリジン化合物、リポソームなどを含むと解釈されるべきである。
【0226】
いくつかの態様において、ベクターは、ウイルスベクターである。ウイルスベクターの例は、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、牛痘ベクター、単純ヘルペスウイルスベクター及びその派生物を含むが、それらに限らない。ウイルスベクター技術は、当分野に周知のものであり、且つ例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）並びに他のウイルス学及び分子生物学的マニュアルに記載されている。
【0227】
哺乳動物細胞に遺伝子を移入するための多くのウイルスベースのシステムが開発されている。例えば、逆転写ウイルスは遺伝子送達システムのために便利なプラットフォームを提供する。当分野の既知の技術を用いて異種核酸をベクターに挿入し、逆転写ウイルス粒子にパッケージングすることができる。そして、組換えウイルスを単離し、改変された免疫細胞にそれをインビトロ又はエクスビボ送達することができる。多くの逆転写ウイルス系は、当分野に既知のものである。いくつかの態様において、アデノウイルスベクターを用いる。いくつかの態様において、レンチウイルスベクターを用いる。いくつかの態様において、自己不活性化型レンチウイルスベクターを用いる。例えば、自己不活性化型レンチウイルスベクターは、当分野の既知のプロトコルでパッケージされ得る。当分野の既知の方法を用いて、得られたレンチウイルスベクターを哺乳動物細胞（例えば、ヒトＴ細胞）の形質導入に用いられてもよい。
【0228】
いくつかの態様において、ベクターは、非ウイルスベクター（例えば、プラスミド）又はエピソーム発現ベクターである。
【0229】
いくつかの態様において、ベクターは発現ベクターである。「発現ベクター」は、選択された宿主を形質転換し、選択された宿主におけるコーディング配列の発現を提供するために使用され得るコンストラクトである。発現ベクターは、例えば、クローニングベクター、バイナリーベクター又は組み込みベクターであってもよい。発現は、好ましくは、核酸分子を翻訳可能なｍＲＮＡに転写することを含む。真核細胞に発現する調節エレメントが当業者に周知のものであることを確保する。真核細胞の場合に、それらは、通常、転写開始を確保するプロモーターと、任意で、転写終結及び転写物安定性を確保するポリＡシグナルとを含む。真核宿主細胞における発現を可能にする調節エレメントの例としては、酵母におけるＡＯＸ１もしくはＧＡＬ１プロモーター、又は哺乳動物及び他の動物細胞におけるＣＭＶ－、ＳＶ４０－、ＲＳＶ－プロモーター（ラウス肉腫ウイルス（Ｒｏｕｓ ｓａｒｃｏｍａ ｖｉｒｕｓ））、ＣＭＶ－エンハンサー、ＳＶ４０－エンハンサーもしくはグロビンイントロンが挙げられる。なお、使用される発現系に応じて、ポリペプチドを細胞区画に誘導するか又は媒質に分泌することができるシグナルペプチド（例えば、リーダー配列）を前記核酸配列のコーディング配列に付加してもよく、且つこれらのシグナルペプチドは当分野に周知のものである。適切な段階で、一つ又は複数のシグナルペプチドを翻訳、開始及び終結配列とアッセンブリし、且つ好ましくは、翻訳タンパク質又はその一部の分泌をペリプラズム空間又は細胞外媒質におけるシグナルペプチドに誘導することができる。任意選択的に、核酸配列は融合タンパク質をコードすることができ、該融合タンパク質は、所望の特性（例えば、発現の組換え生成物の安定化又は精製の簡略化）を付与するＮ末端同定ペプチドを含む。適切な発現ベクターは、当分野の既知のものであり、例えば、Ｏｋａｙａｍａ－Ｂｅｒｇ ｃＤＮＡ発現ベクターｐｃＤＶ１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｐＥＦ－Ｎｅｏ、ｐＣＤＭ８、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐｃＤＮＡ１、ｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＥＦ－ＤＨＦＲ及びｐＥＦ－ＡＤＡ（Ｒａｕｍら，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２００１）５０（３），１４１－１５０）又はｐＳＰＯＲＴ１（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ）である。
【0230】
調製方法
本出願は、本明細書に記載の改変された免疫細胞のうちのいずれか一つを調製する方法をさらに提供する。
本出願は、本明細書に記載の改変された免疫細胞のうちのいずれか一つを調製する方法をさらに提供する。
【0231】
いくつかの態様において、改変された免疫細胞を産生する方法を提供し、該方法は、第１のポリペプチドをコードする第１の核酸と、任意で、第２のポリペプチドをコードする第２の核酸とを、前駆体免疫細胞に導入する。いくつかの態様において、前駆体免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの態様において、前駆体免疫細胞は細胞傷害性Ｔ細胞である。いくつかの態様において、前駆体免疫細胞はγδＴ細胞である。いくつかの態様において、前駆体免疫細胞は、腫瘍浸潤Ｔ細胞又はＤＣ活性化されたＴ細胞である。いくつかの態様において、前駆体免疫細胞は、本明細書に記載の操作された受容体のうちのいずれか一つを含む。いくつかの態様において、該方法は、本明細書に記載の操作された受容体のうちのいずれか一つをコードする第３の核酸を前駆体免疫細胞に導入することをさらに含む。
【0232】
いくつかの態様において、操作された受容体はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの態様において、操作された受容体は、改変されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの態様において、操作された受容体はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体である。いくつかの態様において、第１の核酸配列と、任意選択的な第２の核酸配列と、第３の核酸配列とは、同一のプロモーターに操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の核酸配列と、任意選択的な第２の核酸配列と、第３の核酸配列とは、個別のプロモーターに操作可能に連結される。いくつかの態様において、第１の核酸及び任意選択的な第２の核酸、ならびに／又は第３の核酸配列は、同一のベクター上にある。いくつかの態様において、第１の核酸及び任意選択的な第２の核酸、ならびに／又は第３の核酸配列は、個別のベクター上にある。いくつかの態様において、ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの態様において、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター及びそれらの派生物からなる群から選択される。いくつかの態様において、ベクターは非ウイルスベクターである。いくつかの態様において、ベクターはエピソーム発現ベクターである。いくつかの態様において、該方法は、第１の核酸配列及び／又は第２の核酸配列を含む免疫細胞を単離又は濃縮することをさらに含む。いくつかの態様において、該方法は、少なくとも一つの薬学的に許容される担体と共に、改変された免疫細胞を製剤化することをさらに含む。
【0233】
いくつかの態様において、本明細書に記載の核酸又はベクターのうちのいずれか一つを含む単離された宿主細胞を提供する。宿主細胞は、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド及び／又は操作された受容体、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド及び／又は操作された受容体をコードする核酸又はベクターの発現又はクローニングに用いられ得る。適切な宿主細胞は、原核細胞、真菌細胞、酵母細胞又は高等真核細胞（例えば、哺乳動物細胞）を含んでもよいが、それらに限らない。いくつかの態様において、宿主細胞は、第１のポリペプチドをコードする第１のベクターと、第２のポリペプチドをコードする第２のベクターと、第３のポリペプチド（例えば、操作された受容体）をコードする第３のベクターとを含む。いくつかの態様において、宿主細胞は、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド及び第３のポリペプチドをコードする単離された核酸を含有する単一ベクターを含む。
【0234】
前駆体免疫細胞は、当分野の既知の様々な方法で調製され得る。例えば、初代免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、様々な供給源から得ることができ、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織及び腫瘍を含む。いくつかの態様において、当分野の既知の様々な技術（例えば、ＦＩＣＯＬＬ（商標）単離）を用いて、個体から採取した血液単位から免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を得ることができる。いくつかの態様において、個体の循環血液からの細胞はアフェレーシス（ａｐｈｅｒｅｓｉｓ）によって入手される。アフェレーシス生成物は、典型的に、リンパ球を含み、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球及び血小板を含む。いくつかの態様において、アフェレーシスにより採取された細胞を洗浄して血漿部分を除去し、細胞を適切な緩衝液又は培地において後続の処理ステップに用いてもよい。いくつかの態様において、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）又は二価カチオン（例えば、カルシウム及びマグネシウム）が欠ける洗浄溶液で細胞を洗浄する。当業者であれば容易に理解できるように、洗浄ステップは、例えば、メーカーの指示に従って半自動化「フロースルー（ｆｌｏｗ－ｔｈｒｏｕｇｈ）」遠心機（例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１細胞プロセッサ、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ又はＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ ５）を使用するような当業者に周知の方法によって完了され得る。洗浄後、例えば、Ｃａ２＋なし、Ｍｇ２＋なしのＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ又は緩衝液を含むかもしくは含まない他の生理食塩水のような様々な生体適合性緩衝液に細胞を再懸濁してもよい。代替的に、アフェレーシスサンプルの望ましくない成分を除去し、細胞を培地に直接再懸濁してもよい。
【0235】
いくつかの態様において、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配遠心分離又は向流遠心エルトリエーションによって赤血球を溶解させ、単球を消費して、末梢血リンパ球から初代Ｔ細胞を単離する。ポジティブ又はネガティブ選択技術によって、ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ及びＣＤ４５ＲＯ細胞のような、Ｔ細胞の特定のサブグループをさらに単離することができる。例えば、一態様において、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞に対してポジティブ選択を行うのに十分な時間にわたって、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（即ち、３×２８）コンジュゲーションビーズ、例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔと共にインキュベートすることによって単離される。
【0236】
いくつかの態様において、Ｔ細胞集団は、ネガティブ選択された細胞に特有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせを用いて、ネガティブ選択によってさらに濃縮され得る。例えば、一つの方法は、ネガティブ磁気免疫付着又はフローサイトメトリーによって細胞選別及び／又は選択を行うことに関し、該方法は、ネガティブ選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体の混合物を用いる。例えば、ネガティブ選択によってＣＤ４＋細胞を濃縮させるために、モノクローナル抗体混合物は、通常、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１ｌｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ及びＣＤ８に対する抗体を含む。いくつかの態様において、通常ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋及びＦｏｘＰ３＋を発現する調節Ｔ細胞を濃縮させるか又はポジティブ選択することが望ましい場合がある。代替的に、いくつかの態様において、抗Ｃ２５コンジュゲーションビーズ又は他の類似している選択方法によってＴ調節細胞を消費する。
【0237】
ベクター又は核酸を宿主細胞（例えば、前駆体免疫細胞）に導入する方法は、当分野の既知のものである。ベクター又は核酸は、物理的、化学的又は生物学的方法によって宿主細胞に移入され得る。
【0238】
一つ又は複数のベクター又は一つ又は複数の核酸を宿主細胞に導入するための物理的方法としては、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、パーティクルボンバードメント、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどが挙げられる。ベクター及び／又は外因性核酸を含む細胞の産生方法は、当分野において周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。いくつかの態様において、エレクトロポレーションによってベクターを細胞に導入する。
【0239】
一つ又は複数のベクター又は一つ又は複数の核酸を宿主細胞に導入するための生物学的方法は、ＤＮＡ及びＲＮＡベクターを使用することを含む。ウイルスベクターは、遺伝子を哺乳動物、例えば、ヒトの細胞に挿入するための最も広く使用されている方法となっている。
【0240】
一つ又は複数のベクター又は一つ又は複数の核酸を宿主細胞に導入するための化学的方法は、高分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズなどのコロイド分散系と、水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル及びリポソームを含む脂質ベースの系とを含む。インビトロ送達ビヒクルとしての例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。
【0241】
いくつかの態様において、形質導入又はトランスフェクトされた前駆体免疫細胞を、一つ又は複数の異種核酸を導入した後にエキソビボで増殖させる。いくつかの態様において、形質導入又はトランスフェクトされた前駆体免疫細胞を培養して、少なくとも約１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１０日間、１２日間又は１４日間のいずれかにわたって増殖させる。いくつかの態様において、形質導入又はトランスフェクトされた前駆体免疫細胞を培養して、約１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１０日間、１２日間又は１４日間のいずれか以下にわたって増殖させる。いくつかの態様において、形質導入又はトランスフェクトされた前駆体免疫細胞は、改変された免疫細胞を選択するために、さらに評価又はスクリーニングされる。
【0242】
レポーター遺伝子は、トランスフェクト可能な細胞の同定及び調節配列の機能の評価に用いられ得る。通常、レポーター遺伝子は、受容体生物又は組織に不存在しないか又は発現しない遺伝子であり、該レポーター遺伝子はポリペプチドをコードし、該ポリペプチドの発現は、いくつかの容易に検出可能な特性（例えば、酵素活性）によって表される。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡが受容体細胞に導入された後の適切な時間に検出される。適切なレポーター遺伝子は、ルシフェラーゼ、β－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼをコードする遺伝子、又は緑色蛍光タンパク質遺伝子を含んでもよい（例えば、Ｕｉ－ＴｅｉらＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４７９：７９－８２（２０００））。
【0243】
前駆体免疫細胞に一つ又は複数の異種核酸が存在することを確認するための他の方法は、例えば、ＤＮＡブロット法及びＲＮＡブロット法、ＲＴ－ＰＣＲ及びＰＣＲのような当業者に周知の分子生物学的アッセイと、免疫学方法（例えば、ＥＬＩＳＡ及びウエスタンブロット）によって特定のペプチドの有無を検出する生物化学的アッセイとを含む。
【0244】
ＩＩＩ．治療方法
本出願の一局面は、個体の疾患又は病症（例えば、癌）を治療する方法に関し、これらの方法は、有効量の本明細書に記載の改変された免疫細胞のうちのいずれか一つを該個体に投与することを含む。本出願は、改変された免疫細胞を考慮し、それは、単独で投与されるか、又は別の療法と任意に組み合わせて投与されてもよく、且つ少なくともいくつかの局面では、薬学的に許容される担体又は賦形剤と共に投与される。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、投与前に、当分野に周知の適切な薬物担体及び賦形剤と組み合わせてもよい。
本出願の一局面は、個体の疾患又は病症（例えば、癌）を治療する方法に関し、これらの方法は、有効量の本明細書に記載の改変された免疫細胞のうちのいずれか一つを該個体に投与することを含む。本出願は、改変された免疫細胞を考慮し、それは、単独で投与されるか、又は別の療法と任意に組み合わせて投与されてもよく、且つ少なくともいくつかの局面では、薬学的に許容される担体又は賦形剤と共に投与される。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、投与前に、当分野に周知の適切な薬物担体及び賦形剤と組み合わせてもよい。
【0245】
いくつかの態様において、個体（例えば、ヒト）における癌（例えば、固形癌）を治療する方法を提供し、該方法は、該個体に有効量の薬学的組成物を投与することを含み、該薬学的組成物は、改変された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）と薬学的に許容される担体とを含み、ここで、改変された免疫細胞は、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成し、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、多量体標的分子のサブユニットにそれぞれ結合する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合する。いくつかの態様において、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは、標的分子上の同じ標的部位にそれぞれ結合する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、ＣＡＲとＴＬＲポリペプチド（例えば、ＣＡＲと融合している二つ又はそれ以上のＴＬＲポリペプチド）とを含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＣＤ２０ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含む。
いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲと抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドとを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲと抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドとを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。
いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲ及び抗ＣＤ３３（例えば、抗ＣＤ３３ Ｖドメイン及び／又は抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメイン）ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＣＤ２８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲと抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドとを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲと抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドとを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。
いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲ及び抗ＣＤ３３（例えば、抗ＣＤ３３ Ｖドメイン及び／又は抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメイン）ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＣＤ２８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0246】
いくつかの態様において、個体（例えば、ヒト）における癌（例えば、固形癌）を治療する方法を提供し、該方法は、該個体に有効量の薬学的組成物を投与することを含み、該薬学的組成物は、改変された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）と薬学的に許容される担体とを含み、ここで、改変された免疫細胞は、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、及び、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチドを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の結合ドメインは同じ標的分子に結合し、且つここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインは、単一標的分子上の異なる非重複標的部位にそれぞれ結合し、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、操作された受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体をさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、ＣＡＲとＴＬＲポリペプチド（例えば、ＣＡＲと融合している二つ又はそれ以上のＴＬＲポリペプチド）とを含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＣＤ２０ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。
いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲと抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドとを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲと抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドとを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲ及び抗ＣＤ３３（例えば、抗ＣＤ３３ Ｖドメイン及び／又は抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメイン）ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＣＤ２８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。
いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲと抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドとを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲと抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドとを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲ及び抗ＣＤ３３（例えば、抗ＣＤ３３ Ｖドメイン及び／又は抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメイン）ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＣＤ２８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。
いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0247】
いくつかの態様において、個体（例えば、ヒト）における癌（例えば、固形癌）を治療する方法を提供し、該方法は、該個体に有効量の薬学的組成物を投与することを含み、該薬学的組成物は、改変された免疫細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）と薬学的に許容される担体とを含み、ここで、改変された免疫細胞は、ａ）ｉ）第１の標的結合ドメインと、ｉｉ）第１のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第１のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第１のポリペプチド、ｂ）ｉ）第２の標的結合ドメインと、ｉｉ）第２のＴＬＲ膜貫通ドメインと、ｉｉｉ）第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインとを含む第２のポリペプチド、及び、ｃ）操作された受容体を含み、ここで、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子を特異的に認識する細胞外ドメインを含み、ここで、第１の標的結合ドメイン及び第２の標的結合ドメインがそれらの対応する標的に結合したら、第１のＴＬＲシグナル伝達ドメイン及び第２のＴＬＲシグナル伝達ドメインは互いに会合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導できるＴＬＲシグナル伝達部分を形成する。いくつかの態様において、操作された受容体は、第１のポリペプチド及び／又は第２のポリペプチドと同じである標的分子上の非重複標的部位を特異的に認識する細胞外ドメインを含む。いくつかの態様において、操作された受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、操作されたＴＣＲ又はＴ細胞抗原カプラ（ＴＡＣ）受容体である。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、ＣＡＲとＴＬＲポリペプチド（例えば、ＣＡＲと融合している二つ又はそれ以上のＴＬＲポリペプチド）とを含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＣＤ２０ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ及び抗ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲと抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドとを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲと抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドとを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲ及び抗ＣＤ３３（例えば、抗ＣＤ３３ Ｖドメイン及び／又は抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメイン）ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＣＤ２８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲと抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドとを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲと抗ＢＣＭＡ ＴＬＲポリペプチドとを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（例えば、単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ又はタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）及び抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３を含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、ＣＡＲ系（例えば、ＣＡＲ融合コンストラクト）を含み、ここで、ＣＡＲ融合コンストラクトが、抗ＣＬＬ１ ＣＡＲ及び抗ＣＤ３３（例えば、抗ＣＤ３３ Ｖドメイン及び／又は抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメイン）ＴＬＲポリペプチドを含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域及びＴＬＲ４の細胞質部分（例えば、ＴＬＲ４一次細胞内シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、シグナルペプチド、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ、ＣＤ２８αヒンジドメイン、ＣＤ２８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインの細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ２膜貫通ドメイン、ＴＬＲ２シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ２の細胞質部分）、Ｐ２Ａ切断部位、シグナルペプチド、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ、ＴＬＲ１膜貫通ドメイン及びＴＬＲ１シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＬＲ１の細胞質部分）を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と少なくとも約８５％（例えば、少なくとも約８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のうちのいずれか一つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＣＡＲ融合コンストラクトは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含む。いくつかの態様において、第１のポリペプチドは、第１のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含み、且つ／又は第２のポリペプチドは、第２のサイトカイン受容体の細胞内ドメインをさらに含む。いくつかの態様において、改変された免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、αβＴ細胞及びγδＴ細胞からなる群から選択される。
【0248】
いくつかの態様において、癌を治療する方法は、（１）癌細胞の殺傷、（２）癌細胞増殖の阻害、（３）末梢Ｔ細胞の再分布の誘導、（４）腫瘍における免疫応答の誘導、（５）腫瘍サイズの低減、（６）癌を有する個体の一つ又は複数の症状の軽減、（７）腫瘍転移の阻害、（８）生存の延長、（９）癌の進行までの時間の延長、（１０）癌再発の可能性の予防、阻害又は低下（１１）個体の生活の質の改善、（１２）腫瘍におけるＴ細胞浸潤の促進及び（１３）既存の腫瘍転移（例えば、リンパ節への転移）の発生率又は負荷の低減のうちの一つ又は複数の生物学的活性を有する。いくつかの態様において、該方法は、少なくとも約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又はそれ以上のうちのいずれか一つの腫瘍細胞死亡率を実現する。いくつかの態様において、該方法は、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％のうちのいずれか一つを含む）の腫瘍サイズを減少させる。いくつかの態様において、該方法は、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、３０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％のうちのいずれか一つを含む）の転移を阻害する。いくつかの態様において、該方法は、個体の生存を少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４ヶ月又はそれ以上のうちのいずれか一つ延長させる。いくつかの態様において、該方法は、癌の進行までの時間を少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４ヶ月又はそれ以上のうちのいずれか一つ延長させる。
【0249】
本明細書に記載の方法は、固形癌及び液体癌の両方を含む様々な癌の治療に用いられ得る。これらの方法は、初期癌、非転移性癌、原発性癌、進行癌、局所進行癌、転移性癌又は寛解癌を含む全ての段階の癌に適用され得る。本明細書に記載の方法は、補助治療又は新規な補助治療において、第１の療法、第２の療法、第３の療法又は当分野の既知の他のタイプの癌療法（例えば、化学療法、手術、ホルモン療法、放射線、遺伝子療法、免疫療法（例えば、Ｔ細胞療法）、骨髄移植、幹細胞移植、標的療法、凍結療法、超音波療法、光線力学療法、ラジオ波焼灼など）との組み合わせ療法として用いられてもよい（即ち、該方法は、一次療法／標的療法の前に行われ得る）。いくつかの態様において、該方法は、以前に治療された個体を治療するためのものである。いくつかの態様において、癌は以前の療法に難治性である。いくつかの態様において、該方法は、以前に治療されていない個体を治療するためのものである。
【0250】
いくつかの態様において、該個体は、低い腫瘍負荷を有する。固形腫瘍の腫瘍負荷は、固形腫瘍（ＲＥＣＩＳＴ）１．１ガイドラインにおける応答評価基準に基づいて測定され得る。Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ＥＡら，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ４５（２００９）２２８－２４７を参照されたい。例えば、治療ベースラインでの測定可能な腫瘍の腫瘍負荷は、（１）腫瘍病変（例えば、ＣＴスキャン、臨床検査のノギス測定及び／又は胸部Ｘ線による）及び（２）悪性リンパ節に基づいて評価され得る。例えば、固形癌の腫瘍負荷は、５つの標的病変（１臓器につき２つまで）の直径の和として定量化され得る。液体癌の腫瘍負荷は、放射線科医によって評価されるＣｈｅｓｏｎ ２００７基準に基づいて、最大６つの指数病変の生成物直径の和として測定され得る。Ｃｈｅｓｏｎ ＢＤら，Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ．，２００７；２５（５）：５７９－５８６を参照されたい。いくつかの態様において、低い腫瘍負荷を有する個体の腫瘍負荷は、約４×１０３、３×１０３、２×１０３、１×１０３、５×１０２、２×１０２、１×１０２又はそれ以下のｍｍ２のうちのいずれか一つ以下である。
【0251】
いくつかの態様において、該個体は、治療を受けた後にグレード３又はグレード４の有害な副作用を経験していない。有害事象の分類は、有害事象共通用語規準ｖ３．０（ＣＴＣＡＥ）に基づいて行われる。いくつかの態様において、該個体は、治療を受けた後にサイトカインストームを経験していない。
【0252】
本明細書に記載の方法において投与される、改変された免疫細胞の有効量は、例えば、治療される癌の具体的なタイプ及び段階、投与経路、第１のポリペプチド、第２のポリペプチド及び／又は操作された受容体の活性などのような多くの要因に依存する。適切な投与量プロトコルは、臨床的要因に基づいて医師によって確定され得、これらの臨床的要因は、患者の体型、体表面積、年齢、投与される特定の化合物、性別、投与時期及び経路、一般的な健康状態、並びに同時に投与される他の薬物を含む。いくつかの態様において、薬学的組成物の該有効量は、毒理学的効果（即ち、臨床的に許容される毒性レベルより高い効果）を誘導するレベルより低く、又は薬学的組成物を個体に投与する時に、潜在的な副作用を制御又は寛容できるレベルにある。いくつかの態様において、薬学的組成物の有効量は、約１０５～約１０１０個の改変された免疫細胞を含む。
【0253】
いくつかの態様において、薬学的組成物を一回投与（例えば、ボーラス注入）する。いくつかの態様において、薬学的組成物を複数回（例えば、２、３、４、５、６又はそれ以上のうちのいずれか一つ）投与する。複数回投与の場合、それらは、同じ又は異なる経路で行われ得、且つ同じ部位又は代替部位で行われ得る。薬学的組成物は、毎日から年に１回のような適切な頻度で投与され得る。患者の疾患徴候をモニタリングし、それに応じて治療を調整することによって、医学分野の当業者は、特定の患者に対する最適な投与量及び治療プロトコルを容易に確定することができる。
【0254】
いくつかの態様において、治療される個体は哺乳動物である。哺乳動物の例は、ヒト、サル、ラット、マウス、ハムスター、モルモット、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウシなどを含むが、それらに限らない。いくつかの態様において、該個体はヒトである。
【0255】
薬学的組成物
本出願は、本明細書に記載の改変された免疫細胞のうちのいずれか一つ及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物をさらに提供する。
本出願は、本明細書に記載の改変された免疫細胞のうちのいずれか一つ及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物をさらに提供する。
【0256】
本出願者の薬学的組成物は、任意の数の改変された免疫細胞を含んでもよい。いくつかの態様において、薬学的組成物は、改変された免疫細胞のシングルコピーを含む。いくつかの態様において、薬学的組成物は、改変された免疫細胞の少なくとも約１、１０、１００、１０００、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８又はそれ以上のコピーのうちのいずれか一つを含む。いくつかの態様において、薬学的組成物は、単一のタイプの改変された免疫細胞を含む。いくつかの態様において、薬学的組成物は、少なくとも二つのタイプの改変された免疫細胞を含み、ここで、異なるタイプの改変された免疫細胞は、その細胞供給源、細胞型、発現するキメラ受容体及び／又はプロモーターなどによって区別される。
【0257】
本明細書で使用されるように、「担体」は、使用される投与量及び濃度下でそれに曝露する細胞又は個体に対して無毒性である薬学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤を含む。生理学的に許容される担体は、通常、ｐＨ緩衝水溶液である。適切な薬物担体の例は、当分野に周知のものであり、且つリン酸緩衝生理食塩水溶液、水、油／水エマルジョンのようなエマルジョン、様々なタイプの湿潤剤、無菌溶液などを含む。許容される担体、賦形剤又は安定剤は、用いられる投与量及び濃度下でレシピエントに対して無毒性である。
【0258】
このような担体を含む薬学的組成物は、周知の一般的な方法によって製剤化され得る。溶媒又は希釈剤は、好ましくは、等張、低張又は弱高張性であり、且つ相対的に低いイオン強度を有する。代表的な例としては、滅菌水、生理食塩水（例えば、塩化ナトリウム）、リンゲル液、グルコース、トレハロース又はサッカロース溶液、ハンクス溶液（Ｈａｎｋ’ｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）及び他の生理学的に平衡化した食塩水溶液が挙げられる（例えば、最新版のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ａ． Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓを参照されたい）。
【0259】
本明細書に記載の薬学的組成物は、任意の適切な経路を経て投与され得る。いくつかの態様において、薬学的組成物を非経口、経皮（真皮に入る）、腔内、動脈内（動脈に入る）、筋肉内（筋肉に入る）、髄腔内又は静脈内投与する。いくつかの態様において、薬学的組成物を皮下（皮膚の下で）投与する。いくつかの態様において、薬学的組成物を静脈内投与する。いくつかの態様において、薬学的組成物を注入又は注射によって個体に投与する。いくつかの態様において、薬学的組成物を標的部位に直接投与し、例えば、微粒子銃によって内部もしくは外部標的部位に送達するか又はカテーテルによって動脈における部位に投与する。いくつかの態様において、薬学的組成物を局所（例えば、腫瘍内）投与する。投与は、一般的なシリンジ及び針、又は被験体における一つ又は複数の活性化剤の送達を促進又は改善することができる当分野で入手可能な任意の化合物又は装置を使用してもよい。
【0260】
非経口投与のための製剤は、滅菌水溶液又は非水溶液、懸濁液及びエマルジョンを含む。非水性溶媒の例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（例えば、オリーブ油）及び注射可能な有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）が挙げられる。水性担体は、水、アルコール／水溶液、エマルジョン又は食塩水及び緩衝媒体を含む懸濁液を含む。非経口ビヒクルは、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸化リンゲル液又は不揮発性油を含む。静脈内ビヒクルは、液体及び栄養素補充液、電解質補充液（例えば、リンゲルデキストロースに基づくもの）などを含む。防腐剤及び他の添加剤、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、不活性ガスなども存在してもよい。なお、本開示の薬学的組成物は、例えば、好ましくはヒト起源の血清アルブミン又は免疫グロブリンのようなタンパク質担体を含んでもよい。当分野では、凍結、液体形態又は凍結乾燥形態の様々なウイルス製剤（例えば、ＷＯ ９８／０２５２２、ＷＯ ０１／６６１３７、ＷＯ ０３／０５３４６３、ＷＯ ２００７／０５６８４７及びＷＯ ２００８／１１４０２１など）を得ることができる。固体（例えば、乾燥粉末固体又は凍結乾燥固体）組成物は、真空乾燥及び凍結乾燥に関する方法により得られ得る（例えば、ＷＯ ２０１４／０５３５７１を参照されたい）。本開示の薬学的組成物は、本明細書に記載の改変された免疫細胞の他に、薬学的組成物の意図される使用に応じて、他の生物学的活性化剤を含んでもよいと考えられる。
【0261】
いくつかの態様において、薬学的組成物は、ヒトで使用するために適切に緩衝される。適切な緩衝液は、リン酸塩緩衝液（例えば、ＰＢＳ）、炭酸水素塩緩衝液及び／又は生理学的又は弱塩基性ｐＨ（例えば、約ｐＨ７～約ｐＨ９）を維持できるＴｒｉｓ緩衝液を含むが、それらに限らない。いくつかの態様において、薬学的組成物はまた、適切な張力調整剤（例えば、グリセロール）を添加することによって血液と等張化することができる。
【0262】
いくつかの態様において、薬学的組成物は、単回使用バイアル（例えば、密封された単回使用バイアル）に収容されている。いくつかの態様において、薬学的組成物は、複数回使用バイアルに収容されている。いくつかの態様において、薬学的組成物は、バルク状態で容器に収容されている。
【0263】
いくつかの態様において、薬学的組成物は、個体に投与するための特定の規格を満たさなければならない。例えば、米国食品医薬品局は、既に細胞ベースの免疫治療製品の規格を確立するための管理ガイドラインを発表し、２１ ＣＦＲ ６１０及び２１ ＣＦＲ ６１０．１３を含む。薬学的組成物の外観、特性、純度、安全性及び／又は有効性を評価する方法は当分野の既知のものである。いくつかの態様において、薬学的組成物は、アレルギー作用を引き起こし得る外来タンパク質、例えば、細胞培養に使用される、改変された免疫細胞以外の動物起源のタンパク質を実質的に含まない。いくつかの態様において、「実質的に含まない」とは、薬学的組成物の総体積又は重量の約１０％、５％、１％、０．１％、０．０１％、０．００１％、１ｐｐｍ又はそれ以下のうちのいずれか一つより小さいことを指す。いくつかの態様において、薬学的組成物は、ＧＭＰレベルワークショップ（ＧＭＰ－ｌｅｖｅｌ ｗｏｒｋｓｈｏｐ）で調製される。いくつかの態様において、非経口投与の場合、薬学的組成物は、約５ＥＵ／ｋｇ体重／時間未満のエンドトキシンを含む。いくつかの態様において、静脈内投与の場合、薬学的組成物における少なくとも約７０％の改変された免疫細胞は生きている。いくつかの態様において、米国薬局方（ＵＳＰ）に記載の１４日間の直接接種試験方法を用いて評価する場合、薬学的組成物は、「増殖なし」の結果を有する。いくつかの態様において、薬学的組成物を投与する前、改変された免疫細胞と薬学的に許容される賦形剤の両方を含む試料は、最終的な採取の約４８～７２時間前に（又は培養物の最後の再供給（ｒｅ－ｆｅｅｄｉｎｇ）と同時に）滅菌試験のために取り出されるべきである。いくつかの態様において、薬学的組成物は、マイコプラズマ汚染を含まない。いくつかの態様において、薬学的組成物は、検出可能な微生物薬剤を含まない。いくつかの態様において、薬学的組成物は、ＨＩＶ Ｉ型、ＨＩＶ ＩＩ型、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ヒトＴリンパ球向性ウイルスＩ型、及びヒトＴリンパ球向性ウイルスＩＩのような感染症病原を含まない。
【0264】
ＩＶ．キット及び製品
本明細書に記載の改変された免疫細胞のうちのいずれか一つ又は組成物（例えば、薬学的組成物）を含むキット、単位投与量及び製品をさらに提供する。いくつかの態様において、本明細書に記載の薬学的組成物のうちのいずれか一つを含有するキットを提供し、且つ好ましくは、その取扱説明書を提供した。いくつかの態様において、改変された免疫細胞の他に、キットは、第２の癌療法、例えば、化学療法、ホルモン療法及び／又は免疫療法をさらに含む。一つ又は複数のキットは、個体の特定の癌に合わせてカスタマイズすることができ、個体に対する対応する第２の癌療法を含む。
本明細書に記載の改変された免疫細胞のうちのいずれか一つ又は組成物（例えば、薬学的組成物）を含むキット、単位投与量及び製品をさらに提供する。いくつかの態様において、本明細書に記載の薬学的組成物のうちのいずれか一つを含有するキットを提供し、且つ好ましくは、その取扱説明書を提供した。いくつかの態様において、改変された免疫細胞の他に、キットは、第２の癌療法、例えば、化学療法、ホルモン療法及び／又は免疫療法をさらに含む。一つ又は複数のキットは、個体の特定の癌に合わせてカスタマイズすることができ、個体に対する対応する第２の癌療法を含む。
【0265】
キットは、改変された免疫細胞の増殖又は誘導を可能にするために、容器、試薬、培地、誘導物、サイトカイン、緩衝液、抗体などのような一つ又は複数の別の構成要素を含んでもよい。キットは、薬学的組成物を腫瘍部位に局所投与（例えば、腫瘍内注射）する装置をさらに含んでもよい。
【0266】
本出願のキットは、適切な包装内にある。適切な包装は、バイアル、ボルト、缶、フレキシブル包装（例えば、密封されたポリエステルフィルム又はプラスチック袋）などを含むが、それらに限らない。キットは、緩衝液及び説明的情報のような他の構成部分を任意に提供することができる。そのため、本出願は製品をさらに提供し、それは、バイアル（例えば、密封されたバイアル）、ボトル、ジャー、フレキシブル包装などを含む。キットのいくつかの構成要素は、水性媒体又は凍結乾燥の形式で包装されてもよい。
【0267】
該製品は、容器、及び該容器にあるか又は該容器に関連するラベルもしくは包装インサートを含んでもよい。適切な容器は、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどを含む。容器は、様々な材料（例えば、ガラス又はプラスチック）により形成され得る。通常、容器は、本明細書に記載の疾患又は病症（例えば、癌）を有効に治療する組成物を収容し、且つ無菌の入り口を有してもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ、又は皮下注射針によって穿刺可能なストッパを有するバイアルであってもよい）。ラベル又は包装インサートは、組成物が個体の特定の病態の治療に使用されることを指示する。ラベル又は包装インサートは、組成物を個体に投与するための説明書をさらに含む。ラベルは、再構成及び／又は使用に関する指図を指示し得る。薬学的組成物を収容する容器は、複数回使用のバイアルであってもよく、それは、再構築製剤の反復投与（例えば、２～６回の投与）を可能にする。包装インサートは、通常治療製品の商業用パッケージに含まれる説明書を指し、これらの説明書には、このような治療製品の使用の適応症、使用法、投与量、投与、禁忌及び／又は警告に関する情報が含まれる。付加的に、製品は、第２の容器をさらに含んでもよく、該容器は、薬学的に許容される緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液を含む。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及びユーザの観点から望ましい他の材料を含んでもよい。
【0268】
キット又は製品は、複数の単位投与量の薬学的組成物及び取扱説明書を含んでもよく、それは、薬局（例えば、院内薬局及び調剤薬局）での貯蔵及び使用に十分な量で包装される。
【実施例】
【0269】
以下の実施例は、本開示の例に過ぎないため、本開示を少しも限定するものと見なされるべきではない。以下の実施例と詳細な記述は、説明として提供されるものであり、限定として提供されるものではない。
【0270】
実施例１：外因的に導入されたＣＤ１９及びＣＤ２０ ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ドメインを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の調製
この実施例は、外因的に導入されたｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ドメインを発現する例示的な武装化ＣＡＲ－Ｔ細胞の構築を示す。特に、この実施例は、ＣＤ１９及び／又はＣＤ２０を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の構築を示す。
この実施例は、外因的に導入されたｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ドメインを発現する例示的な武装化ＣＡＲ－Ｔ細胞の構築を示す。特に、この実施例は、ＣＤ１９及び／又はＣＤ２０を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の構築を示す。
【0271】
１．１ キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の構築
ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。また、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含む誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。このコンストラクトは図１に示されている。ＣＡＲ骨格及び共刺激分子は、レンチウイルスベクター（例えば、第２世代レンチウイルスベクター）にクローニングされ、インビトロ転写のために構成型ｈＥＦ１αプロモーターの下流にかつ操作可能に連結される。Ｂｌｏｏｄ（２００６）１０８（１２）：３８９０－３８９７に例示されるように、一過性レトロウイルス上清を産生した。
ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。また、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ２０ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含む誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。このコンストラクトは図１に示されている。ＣＡＲ骨格及び共刺激分子は、レンチウイルスベクター（例えば、第２世代レンチウイルスベクター）にクローニングされ、インビトロ転写のために構成型ｈＥＦ１αプロモーターの下流にかつ操作可能に連結される。Ｂｌｏｏｄ（２００６）１０８（１２）：３８９０－３８９７に例示されるように、一過性レトロウイルス上清を産生した。
【0272】
シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含む、４－１ＢＢを共刺激ドメインとして含む第２のＣＤ１９ ＣＡＲ骨格（「ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ」）を上記のように調製し、比較分析のために使用した。
【0273】
１．２ ＣＡＲ－Ｔ細胞の構築
ウイルス調製
ｐＣＭＶ－ΔＲ－８．４７とｐＭＤ２．Ｇとを含むレンチウイルス包装プラスミド混合物は、Ａｄｄｇｅｎｅから購入され、且つポリエチレンイミンとの予め最適化された比で適切なＣＡＲコードプラスミドと混合した。ＨＥＫ２９３細胞をレンチウイルスとＣＡＲコンストラクトとの混合物でトランスフェクトし、且つ一晩培養した。一晩培養した後、上清を収集した。上清を遠心分離して細胞破片をさらに除去し、０．４５μｍ ＰＥＳフィルターによって濾過した。ウイルス粒子を沈澱させ、且つ予冷されたＤＰＢＳで洗浄した。ウイルスを等分し、－８０℃で直ちに保存し、且つフローサイトメトリーアッセイを用いてｓｕｐＴ１細胞株の形質導入効率を測定することによってウイルス力価を確定した。
ウイルス調製
ｐＣＭＶ－ΔＲ－８．４７とｐＭＤ２．Ｇとを含むレンチウイルス包装プラスミド混合物は、Ａｄｄｇｅｎｅから購入され、且つポリエチレンイミンとの予め最適化された比で適切なＣＡＲコードプラスミドと混合した。ＨＥＫ２９３細胞をレンチウイルスとＣＡＲコンストラクトとの混合物でトランスフェクトし、且つ一晩培養した。一晩培養した後、上清を収集した。上清を遠心分離して細胞破片をさらに除去し、０．４５μｍ ＰＥＳフィルターによって濾過した。ウイルス粒子を沈澱させ、且つ予冷されたＤＰＢＳで洗浄した。ウイルスを等分し、－８０℃で直ちに保存し、且つフローサイトメトリーアッセイを用いてｓｕｐＴ１細胞株の形質導入効率を測定することによってウイルス力価を確定した。
【0274】
Ｔ細胞のウイルス形質導入
アフェレーシスにより健常なドナーから白血球を収集した。ＦＩＣＯＬＬ－ＰＡＱＵＥ（商標）ＰＬＵＳ培地を用いて末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を分離し、且つＰａｎ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いてＰＭＢＣからヒトＴ細胞を精製した。その後、精製されたＴ細胞をヒトＴ細胞活性化／拡大キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で４８時間プレ活性化した。プレ活性化後、Ｔ細胞を拡大させるように、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ ＭＡＣＳｉＢｅａｄ（商標）粒子を１：２のビーズ対細胞比で添加した。
アフェレーシスにより健常なドナーから白血球を収集した。ＦＩＣＯＬＬ－ＰＡＱＵＥ（商標）ＰＬＵＳ培地を用いて末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を分離し、且つＰａｎ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いてＰＭＢＣからヒトＴ細胞を精製した。その後、精製されたＴ細胞をヒトＴ細胞活性化／拡大キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で４８時間プレ活性化した。プレ活性化後、Ｔ細胞を拡大させるように、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ ＭＡＣＳｉＢｅａｄ（商標）粒子を１：２のビーズ対細胞比で添加した。
【0275】
８μｇ／ｍＬのポリブレンの存在下で、プレ活性化されたＴ細胞をレンチウイルスで形質導入した。６ウェルの組織培養用プレートにおいて、細胞を、４×１０６個のＴ細胞／ウェルで、３７℃で約４８時間培養した。形質導入された細胞を遠心分離し、上清を除去し、沈澱した細胞を、培養のために３００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２が補充された新鮮な培地中に０．５×１０６個の細胞／ｍＬで再懸濁した。細胞濃度を、２～３日ごとに０．５×１０６個の細胞／ｍＬに調節した。
【0276】
Ｌタンパク質及びウサギ抗ｓｄＡｂをＣＡＲ培養細胞と混合することによって、Ｔ細胞上のＣＡＲ発現を検出し、細胞表面ｓｃＦｖ及びｓｄＡｂをそれぞれ検出した。
【0277】
実施例２：ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ細胞傷害性評価
この実施例は、ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ抗腫瘍活性を示す。
この実施例は、ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ抗腫瘍活性を示す。
【0278】
２．１ 乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の細胞傷害性
操作されたＴ細胞（例えば、ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ及びＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞）の抗腫瘍活性をインビトロで迅速に評価するために、細胞傷害性について乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）アッセイを行った。形質導入後の５日目又は９日目に、ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）を回収し、１：１、１：０．３のＥ／Ｔ比（エフェクター：ＣＡＲ－Ｔ／標的比）で標的細胞（ＣＤ１９及びＣＤ２０を発現するＢＬＬ腫瘍Ｒａｊｉ細胞）とそれぞれ２０時間インキュベートした。ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）を陽性対照として、同じロットからの形質導入されていないＴ細胞（「ＵｎＴ」）を陰性対照として用いた。製造業者によるマニュアル（Ｒｏｃｈｅ）に従ってアッセイを行った。
操作されたＴ細胞（例えば、ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ及びＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞）の抗腫瘍活性をインビトロで迅速に評価するために、細胞傷害性について乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）アッセイを行った。形質導入後の５日目又は９日目に、ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）を回収し、１：１、１：０．３のＥ／Ｔ比（エフェクター：ＣＡＲ－Ｔ／標的比）で標的細胞（ＣＤ１９及びＣＤ２０を発現するＢＬＬ腫瘍Ｒａｊｉ細胞）とそれぞれ２０時間インキュベートした。ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）を陽性対照として、同じロットからの形質導入されていないＴ細胞（「ＵｎＴ」）を陰性対照として用いた。製造業者によるマニュアル（Ｒｏｃｈｅ）に従ってアッセイを行った。
【0279】
以下の式でインビトロ細胞傷害性を計算した（［ＬＤＨ］Ｅ＋Ｔ：Ｅ／Ｔ共インキュベートから放出されたＬＤＨ、［ＬＤＨ］Ｅ：エフェクターのみから放出されたＬＤＨ、［ＬＤＨ］ｍａｘ：Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で処理した標的細胞から放出されたＬＤＨ、［ＬＤＨ］ｍｉｎ：処理されていない標的細胞から放出されたＬＤＨ）。
【0280】
試験された全てのＣＡＲコンストラクト（例えば、ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ、ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ及びＵｎＴ細胞）は、いずれもヒトＴ細胞に有効に形質導入し、ＣＡＲ発現率が２５％～６０％である。形質導入された細胞は、同じロットの実験において、形質導入されていないＴ細胞に比べて、細胞増殖及び生存能力が影響されなかった。図２に示すように、ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ及びＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、標的細胞の溶解をインビトロで投与量依存的に誘導した。なお、低いＥ／Ｔ比下で、ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔよりも高い、標的細胞に対する細胞傷害性を示した。
【0281】
２．２ 均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）によるサイトカイン分泌
エフェクターＴ細胞活性化及び増殖の別の尺度は、ＩＦＮγ及びＴＮＦαのようなエフェクターサイトカインの産生である。インビトロ細胞傷害性アッセイからの上清を収集して、ＣＡＲにより誘導されたサイトカインの放出を評価し、且つ製造業者によるマニュアルに従ってＩＦＮ－γの均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイ（Ｃｉｓｂｉｏ）を行った。
エフェクターＴ細胞活性化及び増殖の別の尺度は、ＩＦＮγ及びＴＮＦαのようなエフェクターサイトカインの産生である。インビトロ細胞傷害性アッセイからの上清を収集して、ＣＡＲにより誘導されたサイトカインの放出を評価し、且つ製造業者によるマニュアルに従ってＩＦＮ－γの均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイ（Ｃｉｓｂｉｏ）を行った。
【0282】
ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ、ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ及び形質導入されていない「ｕｎＴ」ＣＡＲ－Ｔ細胞）をＲａｊｉ標的細胞と共培養した。２４ｈ後に、培養上清を収集して、ＩＦＮγ及びＴＮＦαの放出をＴ細胞活性化の尺度として評価した。図３及び４に示すように、標的細胞と共培養されたＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、有意量のＴＮＦα及びＩＦＮγを分泌した。さらに、ＴＮＦαの分泌レベルは、陽性対照ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞より高かった。
【0283】
２．３ 長期的な共培養アッセイ
ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞の長期的な殺傷効果を評価するために、インビボでの動的殺傷プロセスを模擬するための長期的な共培養アッセイを行った。外因性サイトカイン（例えば、ＩＬ－２）の非存在下で、形質導入された（例えば、ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ又はＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ）又は形質導入されていない（例えば、ｕｎＴ）Ｔ細胞（１×１０５個／ウェル）を、２４ウェルプレートにおいて１：４のＥ：Ｔ比でＲａｊｉ標的細胞（４×１０５個／ウェル）と共培養した。２又は３日間共培養した後、これらの細胞の一部を回収し、ＣＤ３を染色した。ＣＤ３及びＣＡＲシグナルによってＣＡＲ－Ｔ細胞を同定した。連続共培養アッセイのために、残っているＴ細胞をその後、新鮮なＲａｊｉ標的細胞を用いて同じＥ：Ｔ比で再チャレンジした。腫瘍細胞がウェル体積を超えて成長する（ｏｕｔｇｒｏｗ）まで、共培養を行った。各時点のＴ細胞増殖率は、該時点のＴ細胞数をＴ細胞の初期数で割ることにより計算した。
ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞の長期的な殺傷効果を評価するために、インビボでの動的殺傷プロセスを模擬するための長期的な共培養アッセイを行った。外因性サイトカイン（例えば、ＩＬ－２）の非存在下で、形質導入された（例えば、ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ又はＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ）又は形質導入されていない（例えば、ｕｎＴ）Ｔ細胞（１×１０５個／ウェル）を、２４ウェルプレートにおいて１：４のＥ：Ｔ比でＲａｊｉ標的細胞（４×１０５個／ウェル）と共培養した。２又は３日間共培養した後、これらの細胞の一部を回収し、ＣＤ３を染色した。ＣＤ３及びＣＡＲシグナルによってＣＡＲ－Ｔ細胞を同定した。連続共培養アッセイのために、残っているＴ細胞をその後、新鮮なＲａｊｉ標的細胞を用いて同じＥ：Ｔ比で再チャレンジした。腫瘍細胞がウェル体積を超えて成長する（ｏｕｔｇｒｏｗ）まで、共培養を行った。各時点のＴ細胞増殖率は、該時点のＴ細胞数をＴ細胞の初期数で割ることにより計算した。
【0284】
様々なＣＡＲ－Ｔ細胞の、反復腫瘍刺激アッセイでの殺傷効果は図５に示されている。ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞は５ラウンドの腫瘍刺激後に疲弊した（例えば、ＣＤ３％により測定されたように、さらなる標的腫瘍細胞を殺傷することができなかった）が、ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、７ラウンドの腫瘍刺激まで、標的腫瘍細胞を殺傷し続けた。さらに、ＣＤ１９－ｃｏ－ＣＤ２０ ＣＡＲ－Ｔ細胞はインビトロで、増殖し、ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも優れた長期的な拡大を示した（図６）。これらの結果は、ＴＬＲ４シグナル伝達の活性化が、ＣＡＲ－Ｔ細胞を疲弊に対して耐性にし、標的腫瘍細胞をインビトロで殺傷する能力を増強し、それにより、このクラスの治療剤の進歩に対する主要な障害を解決することを示した。
【0285】
実施例３：外因的に導入されたＣＬＬ１及びＣＤ３３ ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ドメインを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の調製
この実施例は、外因的に導入されたｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ドメインを発現する例示的な武装化ＣＡＲ－Ｔ細胞の構築を示す。特に、この実施例は、ＣＬＬ１及び／又はＣＤ３３を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の構築を示す。
この実施例は、外因的に導入されたｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ドメインを発現する例示的な武装化ＣＡＲ－Ｔ細胞の構築を示す。特に、この実施例は、ＣＬＬ１及び／又はＣＤ３３を発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の構築を示す。
【0286】
３．１ キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の構築
この実施例は、二種類のＣＡＲコンストラクトを含む。第１のＣＡＲコンストラクトをＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）と命名した、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、ＣＤ２８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、ＣＤ２８膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、ＣＤ２８分子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。また、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、ＴＬＲ２膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）及びＴＬＲ２の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）をＮ末端からＣ末端に向かって含む第１の誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、ＴＬＲ１膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）及びＴＬＲ１の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）をＮ末端からＣ末端に向かって含む第２の誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介して第１の誘導性共刺激分子に連結した。このコンストラクトは図７に示されている。
この実施例は、二種類のＣＡＲコンストラクトを含む。第１のＣＡＲコンストラクトをＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）と命名した、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、ＣＤ２８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、ＣＤ２８膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、ＣＤ２８分子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。また、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ３３ ＶドメインｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、ＴＬＲ２膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）及びＴＬＲ２の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）をＮ末端からＣ末端に向かって含む第１の誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ３３ Ｃ２ドメインｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、ＴＬＲ１膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）及びＴＬＲ１の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）をＮ末端からＣ末端に向かって含む第２の誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介して第１の誘導性共刺激分子に連結した。このコンストラクトは図７に示されている。
【0287】
第２のＣＡＲコンストラクトをＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１）と命名した、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＬＬ１ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）分子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ３３ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含む誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。このコンストラクトは図７に示されている。
【0288】
ＣＡＲ骨格及び共刺激分子は、レンチウイルスベクター（例えば、第２世代レンチウイルスベクター）にクローニングされ、インビトロ転写のために構成型ｈＥＦ１αプロモーターの下流にかつ操作可能に連結された。Ｂｌｏｏｄ（２００６）１０８（１２）：３８９０－３８９７に例示されるように、一過性レトロウイルス上清を産生した。
【0289】
さらに、比較分析のために、抗ＣＬＬ１ベンチマークＣＡＲ（ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ）をコードするコンストラクトを上記のように調製した（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）。
【0290】
さらに、比較分析のために、抗ＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲ（ＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲ）をコードするコンストラクトを上記のように調製した（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）。
【0291】
３．２ Ｔ細胞のウイルス調製及び形質導入
レンチウイルスを実施例１に記載のように調製した。実施例１に記述されている方法に従って、Ｔ細胞リンパ球を収集し、レンチウイルスで形質導入した。
レンチウイルスを実施例１に記載のように調製した。実施例１に記述されている方法に従って、Ｔ細胞リンパ球を収集し、レンチウイルスで形質導入した。
【0292】
実施例４：ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ細胞傷害性アッセイ
この実施例は、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ及びＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ抗腫瘍活性を示す。
この実施例は、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ及びＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ抗腫瘍活性を示す。
【0293】
４．１ 乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の細胞傷害性
実施例２．１に記載のように、２４ｈ培養した後に、ＬＤＨアッセイを行って、細胞傷害性を測定した。ＣＬＬ１及びＣＤ３３を発現するＡＭＬ細胞株Ｕ９３７を標的細胞として用いた。図８に示すように、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ及びＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｕ９３７標的細胞に対して同等なインビトロ細胞傷害性を示した。
実施例２．１に記載のように、２４ｈ培養した後に、ＬＤＨアッセイを行って、細胞傷害性を測定した。ＣＬＬ１及びＣＤ３３を発現するＡＭＬ細胞株Ｕ９３７を標的細胞として用いた。図８に示すように、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ及びＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｕ９３７標的細胞に対して同等なインビトロ細胞傷害性を示した。
【0294】
４．２ 均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）によるサイトカイン分泌
インビトロ細胞傷害性アッセイからの上清を収集して、ＣＡＲにより誘導されたサイトカインの放出を評価し、且つ製造業者によるマニュアル及び実施例２．２に従ってＩＦＮ－γの均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイ（Ｃｉｓｂｉｏ）を行った。
インビトロ細胞傷害性アッセイからの上清を収集して、ＣＡＲにより誘導されたサイトカインの放出を評価し、且つ製造業者によるマニュアル及び実施例２．２に従ってＩＦＮ－γの均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイ（Ｃｉｓｂｉｏ）を行った。
【0295】
ＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ及びＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔ並びに形質導入されていない「ｕｎＴ」ＣＡＲ－Ｔ細胞）をＵ９３７標的細胞と共培養した。２４ｈ後に、培養上清を収集して、ＩＦＮγ及びＴＮＦαの放出をＴ細胞活性化の尺度として評価した。図９及び１０に示すように、標的細胞と共培養されたＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ及びＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、有意量のＴＮＦα及びＩＦＮγを分泌した。さらに、ＴＮＦα及びＩＦＮγの分泌レベルは、いずれも陽性対照ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞より高かった。
【0296】
４．３ 長期的な共培養アッセイ
ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞の長期的な殺傷効果を評価するために、長期的な共培養アッセイを行って、インビボでの動的殺傷プロセスを模擬した。外因性サイトカイン（例えば、ＩＬ－２）の非存在下で、形質導入された（例えば、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ又はＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔ）又は形質導入されていない（例えば、ｕｎＴ）Ｔ細胞（１×１０５個／ウェル）を、２４ウェルプレートにおいて１：４のＥ：Ｔ比でＵ９３７標的細胞（４×１０５個／ウェル）と共培養した。２又は３日間共培養した後、これらの細胞の一部を回収し、ＣＤ３を染色した。ＣＤ３及びＣＡＲシグナルによってＣＡＲ－Ｔ細胞を同定した。連続共培養アッセイのために、残っているＴ細胞をその後、新鮮なＵ９３７標的細胞を用いて同じＥ：Ｔ比で再チャレンジした。腫瘍細胞がウェル体積を超えて成長するまで、共培養を行った。各時点のＴ細胞増殖率は、該時点のＴ細胞数をＴ細胞の初期数で割ることにより計算した。
ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ細胞の長期的な殺傷効果を評価するために、長期的な共培養アッセイを行って、インビボでの動的殺傷プロセスを模擬した。外因性サイトカイン（例えば、ＩＬ－２）の非存在下で、形質導入された（例えば、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ又はＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔ）又は形質導入されていない（例えば、ｕｎＴ）Ｔ細胞（１×１０５個／ウェル）を、２４ウェルプレートにおいて１：４のＥ：Ｔ比でＵ９３７標的細胞（４×１０５個／ウェル）と共培養した。２又は３日間共培養した後、これらの細胞の一部を回収し、ＣＤ３を染色した。ＣＤ３及びＣＡＲシグナルによってＣＡＲ－Ｔ細胞を同定した。連続共培養アッセイのために、残っているＴ細胞をその後、新鮮なＵ９３７標的細胞を用いて同じＥ：Ｔ比で再チャレンジした。腫瘍細胞がウェル体積を超えて成長するまで、共培養を行った。各時点のＴ細胞増殖率は、該時点のＴ細胞数をＴ細胞の初期数で割ることにより計算した。
【0297】
様々なＣＡＲ－Ｔ細胞の、反復腫瘍刺激アッセイでの殺傷効果は図１１に示されている。ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞は再チャレンジしてから１５日後に標的腫瘍細胞を殺傷することができないが、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ及びＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、腫瘍刺激の２０日目まで標的腫瘍細胞を殺傷し続けた。さらに、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔ及びＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ－Ｔ細胞はインビトロで、増殖し、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも優れた長期的な拡大を示した（図１２）。これらの結果は、キメラＴＬＲが、有効な共刺激シグナルを提供し、ＣＡＲシグナル伝達との関連において、Ｔ細胞の生存を増強し、Ｔ細胞の増殖を増加させ得ることを示した。
【0298】
実施例５：ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔインビボマウスモデルの評価
図１３に示されるプロトコルにより、Ｕ９３７－Ｌｕｃ異種移植マウスモデルにおいて、武装化されたＴＬＲ ＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍活性をインビボで評価した。０日目に、ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子発現を有する２×１０６個のＵ９３７－Ｌｕｃ細胞をＮＯＤ／ＳＣＩＤ ＩＬ－２ＲγＣｎｕｌｌ（ＮＳＧ）マウスに皮下移植した。腫瘍接種後、生物発光イメージング（ＢＬＩ）を毎週又は二週間ごとに行って、モデルの発症をモニタリングした。ＢＬＩ光子数及び動物体重に基づいて動物をランダムにグループ分けした。ランダムにグループ分けした後、単一投与量のＣＡＲ－Ｔ細胞又はＵｎＴ細胞を静脈内注入した。ＢＬＩイメージングを毎週行って、腫瘍成長を記録した。生物発光イメージング（ＢＬＩ）は、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ Ｔ及びＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲ Ｔ細胞に比べて、ＴＬＲにより武装化されたＣＡＲ Ｔ細胞が注入されたマウスにおいて腫瘍負荷が低下したことを示した（図１４）。一貫して、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ及びＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲ Ｔ細胞に比べて、ＴＬＲにより武装化されたＣＡＲ Ｔ細胞で処理したマウスにおいて、ＣＡＲ Ｔ細胞の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）におけるパーセントは有意に高かった（図１４）。そのため、Ｕ９３７－ＧＬ細胞をインビボで殺傷する際、ＣＬＬ１ ＢＭ又はＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲ Ｔ細胞よりもＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔの方が強力であった。
図１３に示されるプロトコルにより、Ｕ９３７－Ｌｕｃ異種移植マウスモデルにおいて、武装化されたＴＬＲ ＣＡＲ－Ｔ細胞の抗腫瘍活性をインビボで評価した。０日目に、ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子発現を有する２×１０６個のＵ９３７－Ｌｕｃ細胞をＮＯＤ／ＳＣＩＤ ＩＬ－２ＲγＣｎｕｌｌ（ＮＳＧ）マウスに皮下移植した。腫瘍接種後、生物発光イメージング（ＢＬＩ）を毎週又は二週間ごとに行って、モデルの発症をモニタリングした。ＢＬＩ光子数及び動物体重に基づいて動物をランダムにグループ分けした。ランダムにグループ分けした後、単一投与量のＣＡＲ－Ｔ細胞又はＵｎＴ細胞を静脈内注入した。ＢＬＩイメージングを毎週行って、腫瘍成長を記録した。生物発光イメージング（ＢＬＩ）は、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ Ｔ及びＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲ Ｔ細胞に比べて、ＴＬＲにより武装化されたＣＡＲ Ｔ細胞が注入されたマウスにおいて腫瘍負荷が低下したことを示した（図１４）。一貫して、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ及びＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲ Ｔ細胞に比べて、ＴＬＲにより武装化されたＣＡＲ Ｔ細胞で処理したマウスにおいて、ＣＡＲ Ｔ細胞の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）におけるパーセントは有意に高かった（図１４）。そのため、Ｕ９３７－ＧＬ細胞をインビボで殺傷する際、ＣＬＬ１ ＢＭ又はＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲ Ｔ細胞よりもＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－Ｔの方が強力であった。
【0299】
実施例６：ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ－γδＴの評価
γδＴ（γδＴ）リンパ球は、主に胸腺で発達し、Ｖ（Ｄ）Ｊ組換えによりそのγδＴ細胞受容体を産生し、且つ癌細胞に対する細胞傷害性を含む迅速な機能のために準備された。γδＴ細胞の別の潜在的な優位性は、αβＴ細胞とは異なりＭＨＣに限定されないことであり、そのため、ＣＡＲトランスジェニックを発現する操作された同種異系ドナー起源のγδＴ細胞を、理論上、既製の汎用品として使用することができるが、このような使用は免疫機能が非常に低い患者に限定される。そのため、本発明者らはまた、ＴＬＲにより武装化されたＣＡＲ（例えば、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３及びＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２）がγδＴを改変する効果を評価した。
γδＴ（γδＴ）リンパ球は、主に胸腺で発達し、Ｖ（Ｄ）Ｊ組換えによりそのγδＴ細胞受容体を産生し、且つ癌細胞に対する細胞傷害性を含む迅速な機能のために準備された。γδＴ細胞の別の潜在的な優位性は、αβＴ細胞とは異なりＭＨＣに限定されないことであり、そのため、ＣＡＲトランスジェニックを発現する操作された同種異系ドナー起源のγδＴ細胞を、理論上、既製の汎用品として使用することができるが、このような使用は免疫機能が非常に低い患者に限定される。そのため、本発明者らはまた、ＴＬＲにより武装化されたＣＡＲ（例えば、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３及びＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２）がγδＴを改変する効果を評価した。
【0300】
実施例５に記載のように、Ｕ９３７－Ｌｕｃ異種移植マウスモデルにおいて、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ γδＴ細胞のインビボ有効性を評価した。図１５に示すように、全てのマウスにおいて、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３ ＣＡＲ γδＴで処理したマウスは持続的なＵ９３７腫瘍除去を示した。しかしながら、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ及びＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲ γδＴ群は、いずれも腫瘍再発を経験した。一貫して、ＣＬＬ１ ＢＭ ＣＡＲ及びＣＬＬ１／ＣＤ３３デュアルＣＡＲ γδＴ細胞に比べて、ＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３又はＣＬＬ１－ｃｏ－ＣＤ３３－２ ＣＡＲ γδＴ細胞で処理したマウスにおいて、ＣＡＲ γδＴ細胞の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）におけるパーセントは有意に高かった。
【0301】
実施例７：外因的に導入されたＧＰＣ３及びＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体を発現するＣＡＲ γδＴ細胞の調製
この実施例は、外因的に導入されたＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体を発現する例示的な武装化ＣＡＲ γδＴ細胞の構築を示す。特に、この実施例は、ＧＰＣ３を発現するＣＡＲ γδＴ細胞の構築を示す。
この実施例は、外因的に導入されたＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体を発現する例示的な武装化ＣＡＲ γδＴ細胞の構築を示す。特に、この実施例は、ＧＰＣ３を発現するＣＡＲ γδＴ細胞の構築を示す。
【0302】
７．１ キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の構築
抗ＧＰＣ３武装化ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲ４キメラ受容体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ分子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲ４キメラ受容体の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。
抗ＧＰＣ３武装化ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲ４キメラ受容体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ分子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲ４キメラ受容体の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。
【0303】
抗ＧＰＣ３武装化ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＧＰＣ３ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ分子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１）、ＣＤ８αヒンジ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。このコンストラクトは図１６Ａに示されている。
【0304】
ＣＡＲ骨格及びＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲ４／ ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体は、レンチウイルスベクター（例えば、第２世代レンチウイルスベクター）にクローニングされ、インビトロ転写のために構成型ｈＥＦ１αプロモーターの下流にかつ操作可能に連結される。Ｂｌｏｏｄ（２００６）１０８（１２）：３８９０－３８９７に例示されるように、一過性レトロウイルス上清を産生した。
【0305】
さらに、比較分析のために、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ（ＧＰＣ３ ＣＡＲ）をコードするコンストラクトを上記のように調製した（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６）。
【0306】
７．２ ウイルス調製
レンチウイルスを実施例１に記載のように調製した。
レンチウイルスを実施例１に記載のように調製した。
【0307】
７．３ γδＴ細胞の形質導入
ＰＢＭＣに５μＭゾレドロン酸塩及び１０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を添加することによってγδＴ細胞を調製し、１０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２が補充された培地を定期的に交換して９日間培養した。代替的に、ＰＢＭＣ又は臍帯血（ＵＣＢ）からγδＴ細胞を単離し、そして抗γδＴＣＲ抗体及び抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で刺激し、その後、１：２の比で、Ｋ５６２ベースの人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）と共に少なくとも１０日間インキュベートした。密度遠心分離法（ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ）により、白血球除去材料からＰＢＭＣを単離し、凍結保存した。ＰＢＭＣを蘇生させ、ＩＬ－２（１０００ＩＵ／ｍｌ）及び５％ヒトＡＢ血清が補充された細胞培地ＡＩＭ－Ｖにおいて、ゾレドロン酸（５μΜ）で活性化し、且つ加湿室（３７℃、５％ＣＯ２）に保存した。活性化の４８時間後、ＭＯＩ ５で、５ｐｇ／ｍｌポリブレンを伴って、実施例１の系をコードするレンチウイルスベクターで細胞を形質導入した。翌日にこのような形質導入手順を繰り返した後、形質導入の翌日に、ＩＬ－２（１０００ＩＵ／ｍｌ）を含有する新鮮な培地を補充した。加湿室において、ＩＬ－２（１０００ＩＵ／ｍｌ）が補充されたＡＩＭ－Ｖ中で細胞を培養し、さらに拡大させるために、培地のｐＨに応じて培地を定期的に交換した。形質導入の１０日後、細胞を回収し、細胞の総数、純度及び形質導入効率を確定した。将来の応用又は凍結保存の前に、陰性ＴＣＲγ／δ＋ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）で細胞をさらに濃縮した。
ＰＢＭＣに５μＭゾレドロン酸塩及び１０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を添加することによってγδＴ細胞を調製し、１０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２が補充された培地を定期的に交換して９日間培養した。代替的に、ＰＢＭＣ又は臍帯血（ＵＣＢ）からγδＴ細胞を単離し、そして抗γδＴＣＲ抗体及び抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で刺激し、その後、１：２の比で、Ｋ５６２ベースの人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）と共に少なくとも１０日間インキュベートした。密度遠心分離法（ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ）により、白血球除去材料からＰＢＭＣを単離し、凍結保存した。ＰＢＭＣを蘇生させ、ＩＬ－２（１０００ＩＵ／ｍｌ）及び５％ヒトＡＢ血清が補充された細胞培地ＡＩＭ－Ｖにおいて、ゾレドロン酸（５μΜ）で活性化し、且つ加湿室（３７℃、５％ＣＯ２）に保存した。活性化の４８時間後、ＭＯＩ ５で、５ｐｇ／ｍｌポリブレンを伴って、実施例１の系をコードするレンチウイルスベクターで細胞を形質導入した。翌日にこのような形質導入手順を繰り返した後、形質導入の翌日に、ＩＬ－２（１０００ＩＵ／ｍｌ）を含有する新鮮な培地を補充した。加湿室において、ＩＬ－２（１０００ＩＵ／ｍｌ）が補充されたＡＩＭ－Ｖ中で細胞を培養し、さらに拡大させるために、培地のｐＨに応じて培地を定期的に交換した。形質導入の１０日後、細胞を回収し、細胞の総数、純度及び形質導入効率を確定した。将来の応用又は凍結保存の前に、陰性ＴＣＲγ／δ＋ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）で細胞をさらに濃縮した。
【0308】
実施例８：ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ γδＴ細胞のインビトロ細胞傷害性アッセイ
この実施例は、ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ γδＴ細胞のインビトロ抗腫瘍活性を示す。
この実施例は、ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ γδＴ細胞のインビトロ抗腫瘍活性を示す。
【0309】
８．１ 長期的な共培養アッセイ
ＣＡＲ γδＴ細胞の長期的な殺傷効果を評価するために、本発明者らは、インビボでの動的殺傷プロセスを模擬する長期的な共培養アッセイを行った。外因性サイトカイン（ＩＬ－２）の非存在下で、形質導入された又は形質導入されていないＴ細胞（１×１０５個／ウェル）を、２４ウェルプレートにおいて１：１のＥ：Ｔ比で腫瘍細胞株（Ｈｕｈ７細胞、１×１０５個／ウェル）と共培養した。２又は３日間共培養した後、これらの細胞の一部を回収し、ＣＤ３を染色した。連続共培養アッセイのために、残っているＴ細胞をその後、新鮮なＨｕｈ７細胞を用いて同じＥ：Ｔ比で再チャレンジした。腫瘍細胞が超えて成長するまで、共培養を行った。各時点のＴ細胞増殖率は、該時点のＴ細胞数を前の時点のＴ細胞数で割ることにより計算した。
ＣＡＲ γδＴ細胞の長期的な殺傷効果を評価するために、本発明者らは、インビボでの動的殺傷プロセスを模擬する長期的な共培養アッセイを行った。外因性サイトカイン（ＩＬ－２）の非存在下で、形質導入された又は形質導入されていないＴ細胞（１×１０５個／ウェル）を、２４ウェルプレートにおいて１：１のＥ：Ｔ比で腫瘍細胞株（Ｈｕｈ７細胞、１×１０５個／ウェル）と共培養した。２又は３日間共培養した後、これらの細胞の一部を回収し、ＣＤ３を染色した。連続共培養アッセイのために、残っているＴ細胞をその後、新鮮なＨｕｈ７細胞を用いて同じＥ：Ｔ比で再チャレンジした。腫瘍細胞が超えて成長するまで、共培養を行った。各時点のＴ細胞増殖率は、該時点のＴ細胞数を前の時点のＴ細胞数で割ることにより計算した。
【0310】
ＦＡＣＳ検出による長期的な共培養アッセイの代表的な結果は図１９に示されている。同じ実験からの計算されたＴ細胞増殖は図２０に示されている。データによると、ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ γδＴ細胞は、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ γδＴ細胞よりも優れた細胞傷害性及びインビトロ増殖を有する。
【0311】
８．２ ＨＴＲＦにより検出されたＩＦＮ－γ分泌
エフェクターＴ細胞活性化及び増殖の別の尺度は、ＩＦＮ－γのようなエフェクターサイトカインの産生である。ＣＡＲにより誘導されたサイトカインの放出を評価するために、ラウンド１～ラウンド３のインビトロ細胞傷害性アッセイからの上清を収集した。製造業者によるマニュアルに従って、ＩＦＮ－γのＨＴＲＦアッセイ（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＨＩＦＮＧＰＥＨ）を行った。
エフェクターＴ細胞活性化及び増殖の別の尺度は、ＩＦＮ－γのようなエフェクターサイトカインの産生である。ＣＡＲにより誘導されたサイトカインの放出を評価するために、ラウンド１～ラウンド３のインビトロ細胞傷害性アッセイからの上清を収集した。製造業者によるマニュアルに従って、ＩＦＮ－γのＨＴＲＦアッセイ（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＨＩＦＮＧＰＥＨ）を行った。
【0312】
対応するサイトカインの放出結果は図２１に示されている。二種類の抗ＧＰＣ３ γδ ＣＡＲ Ｔ細胞は、いずれもＨｕｈ７細胞に対する有効な殺傷活性を示し、Ｈｕｈ７細胞に応答してＩＦＮ－γを放出した。ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化されたＣＡＲ Ｔ細胞は、ヌードＣＡＲ Ｔ細胞よりも高いレベルのＩＦＮ－γ分泌を示した。
【0313】
実施例９：外因的に導入されたＣＤ１９及びＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体を発現するＣＡＲ αβＴ細胞の調製
この実施例は、外因的に導入されたＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体を発現する例示的な武装化ＣＡＲ αβＴ細胞の構築を示す。特に、この実施例は、ＣＤ１９を発現するＣＡＲ αβＴ細胞の構築を示す。
この実施例は、外因的に導入されたＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体を発現する例示的な武装化ＣＡＲ αβＴ細胞の構築を示す。特に、この実施例は、ＣＤ１９を発現するＣＡＲ αβＴ細胞の構築を示す。
【0314】
９．１ キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の構築
抗ＣＤ１９武装化ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲ４キメラ受容体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ分子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲ４キメラ受容体の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。
抗ＣＤ１９武装化ＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲ４キメラ受容体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ分子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲ４キメラ受容体の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。
【0315】
抗ＣＤ１９武装化ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ分子（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、ＮＫＧ２Ｄ ＥＣＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１）、ＣＤ８αヒンジ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。このコンストラクトは図１６Ａに示されている。
【0316】
ＣＡＲ骨格及びＮＫＧ２Ｄ ＴＬＲ４／ ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体は、レンチウイルスベクター（例えば、第２世代レンチウイルスベクター）にクローニングされ、インビトロ転写のために構成型ｈＥＦ１αプロモーターの下流にかつ操作可能に連結される。Ｂｌｏｏｄ（２００６）１０８（１２）：３８９０－３８９７に例示されるように、一過性レトロウイルス上清を産生した。
【0317】
さらに、比較分析のために、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ（ＣＤ１９ ＢＭ ＣＡＲ）をコードするコンストラクトを上記のように調製した（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）。
【0318】
９．２ Ｔ細胞のウイルス調製及び形質導入
レンチウイルスを実施例１に記載のように調製した。実施例１に記述されている方法に従って、Ｔ細胞リンパ球を収集し、レンチウイルスで形質導入した。
レンチウイルスを実施例１に記載のように調製した。実施例１に記述されている方法に従って、Ｔ細胞リンパ球を収集し、レンチウイルスで形質導入した。
【0319】
実施例１０：ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＣＤ１９ ＣＡＲ αβＴ細胞のインビトロ細胞傷害性アッセイ
この実施例は、ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＣＤ１９ ＣＡＲ αβＴ細胞のインビトロ抗腫瘍活性を示す。
この実施例は、ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＣＤ１９ ＣＡＲ αβＴ細胞のインビトロ抗腫瘍活性を示す。
【0320】
長期的な共培養アッセイ
ＣＡＲ αβＴ細胞の長期的な殺傷効果を評価するために、本発明者らは長期的な共培養アッセイを行った。外因性サイトカイン（ＩＬ－２）の非存在下で、形質導入された又は形質導入されていないＴ細胞（１×１０５個／ウェル）を、２４ウェルプレートにおいて１：１のＥ：Ｔ比で腫瘍細胞株（Ｒａｊｉ細胞、１×１０５個／ウェル）と共培養した。２又は３日間共培養した後、これらの細胞の一部を回収し、ＣＤ３を染色した。
ＣＡＲ αβＴ細胞の長期的な殺傷効果を評価するために、本発明者らは長期的な共培養アッセイを行った。外因性サイトカイン（ＩＬ－２）の非存在下で、形質導入された又は形質導入されていないＴ細胞（１×１０５個／ウェル）を、２４ウェルプレートにおいて１：１のＥ：Ｔ比で腫瘍細胞株（Ｒａｊｉ細胞、１×１０５個／ウェル）と共培養した。２又は３日間共培養した後、これらの細胞の一部を回収し、ＣＤ３を染色した。
【0321】
連続共培養アッセイのために、残っているＴ細胞をその後、新鮮なＲａｊｉ細胞を用いて同じＥ：Ｔ比で再チャレンジした。腫瘍細胞が超えて成長するまで、共培養を行った。各時点のＴ細胞増殖率は、該時点のＴ細胞数を前の時点のＴ細胞数で割ることにより計算した。
【0322】
ＦＡＣＳ検出による長期的な共培養アッセイの代表的な結果は図２２に示されている。同じ実験からの計算されたＴ細胞増殖は図２３に示されている。データによると、ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体の武装化は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ αβＴ細胞の細胞傷害性及び増殖を向上させた。
【0323】
実施例１１：ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ γδＴ細胞のインビボ有効性評価
この実施例は、ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ γδＴ細胞のインビボ抗腫瘍活性を示す。
この実施例は、ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ γδＴ細胞のインビボ抗腫瘍活性を示す。
【0324】
Ｈｕｈ７異種移植モデルにおいて、例示的な抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ－γδＴ細胞のインビボ抗腫瘍活性を評価した。簡単に言えば、０日目に、３００万（３×１０６）個のＨｕｈ７細胞をＮＯＤ／ＳＣＩＤ ＩＬ－２ＲγＣ ｎｕｌｌ（ＮＳＧ）マウスに皮下移植した。腫瘍接種後の１０日目に、マウスを以下のように処理した：１×１０６個の武装化されたＣＡＲ－γδＴ又はモックＴ細胞又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を静脈内注射した。腫瘍サイズをノギスで週２回測定し、式Ｖ＝１／２（長さ×幅２）で腫瘍容積を計算した。対照マウスの平均腫瘍負荷が２，０００ｍｍ３に達したら、マウスを安楽死させた。
【0325】
Ｈｕｈ７異種移植モデルにおいて、抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ γδＴ細胞又はＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化された抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ γδＴ細胞の抗腫瘍効果の結果は図２４に示されている。武装化されていないＣＡＲ－γδＴ細胞は、ＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化されたＣＡＲ－γδＴ細胞と共に腫瘍成長を阻害した。具体的には、武装化されていないＣＡＲ－γδＴ細胞で処理したマウスは、腫瘍フリー（ｔｕｍｏｒ ｆｒｅｅ）に達したが、ゆっくりと拒絶反応を起こし、それに対してＮＫＧ２Ｄ ＣＤ８ ＴＬＲ４キメラ受容体により武装化されたＣＡＲ－γδＴ細胞で処理したマウスは、腫瘍フリーに達し、実験観察が終わるまで健常かつ腫瘍フリーを維持した。
【0326】
実施例１２：タンデム、単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ又は抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖを有する、外因的に導入されたｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）細胞内ドメインを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞の調製
この実施例は、外因的に導入されたｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ドメインを発現する例示的な武装化ＣＡＲ－Ｔ細胞の構築を示す。特に、この実施例は、タンデム、単一ｓｄＡｂ又は抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖを有する抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞の構築を示す。
この実施例は、外因的に導入されたｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）ドメインを発現する例示的な武装化ＣＡＲ－Ｔ細胞の構築を示す。特に、この実施例は、タンデム、単一ｓｄＡｂ又は抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖを有する抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞の構築を示す。
【0327】
１２．１ キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の構築
タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含む、誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。
タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含む、誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。
【0328】
単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含む誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。
【0329】
単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＤ８ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含む誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐｄ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。
【0330】
単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＤ２８ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９）、ＣＤ２８ヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含む誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。
【0331】
タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含む誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。
【0332】
タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ－ＣＤ８ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含む誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。
【0333】
タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ－ＣＤ２８ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３）を構築するために、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）の細胞質部分及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含むＣＡＲ骨格ポリペプチドをコードするＣＡＲ骨格配列を、コドン最適化して化学的合成した。さらに、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０）、ＣＤ２８ヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、ＴＬＲ４膜貫通（ＴＭ）領域（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）及びＴＬＲ４の細胞質部分（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）をＮ末端からＣ末端に向かって含む誘導性共刺激分子の配列を、コドン最適化して化学的合成し、Ｐ２Ａ切断部位（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）を介してＣＡＲ骨格配列に連結した。
【0334】
ＣＡＲ骨格及び共刺激分子は、レンチウイルスベクター（例えば、第２世代レンチウイルスベクター）にクローニングされ、インビトロ転写のために構成型ｈＥＦ１αプロモーターの下流にかつ操作可能に連結された。Ｂｌｏｏｄ（２００６）１０８（１２）：３８９０－３８９７に例示されるように、一過性レトロウイルス上清を産生した。
【0335】
それぞれ、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６）及び単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７）は、シグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、タンデム抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）又は第１の単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８）、ＣＤ８αヒンジドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、ＣＤ８α膜貫通（ＴＭ）ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）及びＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）をＮ末端からＣ末端に向かって含んで構築され、上記のように調製され、比較分析のために使用された。
【0336】
１２．２ ＣＡＲ－Ｔ細胞の構築
ウイルス調製
レンチウイルスを実施例１に記載のように調製した。
ウイルス調製
レンチウイルスを実施例１に記載のように調製した。
【0337】
γδＴ細胞の活性化
ＰＢＭＣに５μＭゾレドロン酸塩及び１０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を添加することによってγδＴ細胞を調製し、１０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２が補充された培地を定期的に交換して１４日間培養した。代替的に、ＰＢＭＣ又は臍帯血（ＵＣＢ）からγδＴ細胞を単離し、そして抗γδＴＣＲ抗体及び抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で刺激し、その後、１：２の比で、Ｋ５６２ベースの人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）と共に少なくとも１０日間インキュベートした。
ＰＢＭＣに５μＭゾレドロン酸塩及び１０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を添加することによってγδＴ細胞を調製し、１０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２が補充された培地を定期的に交換して１４日間培養した。代替的に、ＰＢＭＣ又は臍帯血（ＵＣＢ）からγδＴ細胞を単離し、そして抗γδＴＣＲ抗体及び抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で刺激し、その後、１：２の比で、Ｋ５６２ベースの人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）と共に少なくとも１０日間インキュベートした。
【0338】
密度遠心分離法（ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ）により、白血球除去材料からＰＢＭＣを単離し、凍結保存した。ＰＢＭＣを蘇生させ、ＩＬ－２（１０００ＩＵ／ｍｌ）及び５％ヒトＡＢ血清が補充された細胞培地ＡＩＭ－Ｖにおいて、ゾレドロン酸（５μΜ）で活性化し、且つ加湿室（３７℃、５％ＣＯ２）に保存した。活性化の４８時間後、ＭＯＩ ２で、５ｐｇ／ｍｌポリブレンを伴って、この実施例の系をコードするレンチウイルスベクターで細胞を形質導入した。加湿室において、ＩＬ－２（１０００ＩＵ／ｍｌ）が補充されたＡＩＭ－Ｖ中で細胞を培養し、さらに拡大させるために、培地のｐＨに応じて培地を定期的に交換した。形質導入の１０日後、細胞を回収し、細胞の総数、純度及び形質導入効率を確定した。将来の応用又は凍結保存の前に、陰性ＴＣＲγ／δ＋ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）で細胞をさらに濃縮した。
【0339】
Ｔ細胞のウイルス形質導入
アフェレーシスにより健常なドナーから白血球を収集した。ＦＩＣＯＬＬ－ＰＡＱＵＥ（商標）ＰＬＵＳ培地を用いて末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を分離し、且つＰａｎ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いてＰＭＢＣからヒトＴ細胞を精製した。その後、精製されたＴ細胞をヒトＴ細胞活性化／拡大キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で４８時間プレ活性化した。プレ活性化後、Ｔ細胞を拡大させるように、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ ＭＡＣＳｉＢｅａｄ（商標）粒子を１：２のビーズ対細胞比で添加した。
アフェレーシスにより健常なドナーから白血球を収集した。ＦＩＣＯＬＬ－ＰＡＱＵＥ（商標）ＰＬＵＳ培地を用いて末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を分離し、且つＰａｎ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いてＰＭＢＣからヒトＴ細胞を精製した。その後、精製されたＴ細胞をヒトＴ細胞活性化／拡大キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で４８時間プレ活性化した。プレ活性化後、Ｔ細胞を拡大させるように、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ ＭＡＣＳｉＢｅａｄ（商標）粒子を１：２のビーズ対細胞比で添加した。
【0340】
８μｇ／ｍＬのポリブレンの存在下で、プレ活性化されたＴ細胞をレンチウイルスで形質導入した。６ウェルの組織培養用プレートにおいて、細胞を、４×１０６個のＴ細胞／ウェルで、３７℃で約４８時間培養した。形質導入された細胞を遠心分離し、上清を除去し、沈澱した細胞を、培養のために３００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２が補充された新鮮な培地中に０．５×１０６個の細胞／ｍＬで再懸濁した。細胞濃度を、２～３日ごとに０．５×１０６個の細胞／ｍＬに調節した。
【0341】
ウサギ抗ｓｄＡｂ及びＣＡＲ培養細胞によって、Ｔ細胞上のＣＡＲ発現を検出して、細胞表面ｓｄＡｂを検出した。
【0342】
実施例１３：インビトロ細胞傷害性
この実施例は、抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ抗腫瘍活性を示した。
この実施例は、抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビトロ抗腫瘍活性を示した。
【0343】
１３．１ 乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の細胞傷害性
操作されたＴ細胞（例えば、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ及び抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞）の抗腫瘍活性をインビトロで迅速に評価するために、細胞傷害性について乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）アッセイを行った。形質導入後の７日目に、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１）及び単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２）により形質導入されたγδＴ細胞を回収し、それぞれ０．２５：１、０．１２５：１、０．０６２５：１、０．０３１２５：１及び０：１のＥ／Ｔ比（エフェクター：ＣＡＲ－Ｔ／標的比）で標的細胞（ＢＣＭＡを発現するＮＣＩ－Ｈ９２９又はＲＰＭＩ－８２２６腫瘍細胞）と共に２０時間インキュベートした。タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６）及び単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７）により形質導入されたγδＴ細胞を陽性対照として、同じロットからの形質導入されていないγδＴ細胞（「Ｕｎ－γδＴ」）を陰性対照として用いた。製造業者によるマニュアル（Ｒｏｃｈｅ）に従ってアッセイを行った。
操作されたＴ細胞（例えば、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ及び抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞）の抗腫瘍活性をインビトロで迅速に評価するために、細胞傷害性について乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）アッセイを行った。形質導入後の７日目に、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１）及び単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２）により形質導入されたγδＴ細胞を回収し、それぞれ０．２５：１、０．１２５：１、０．０６２５：１、０．０３１２５：１及び０：１のＥ／Ｔ比（エフェクター：ＣＡＲ－Ｔ／標的比）で標的細胞（ＢＣＭＡを発現するＮＣＩ－Ｈ９２９又はＲＰＭＩ－８２２６腫瘍細胞）と共に２０時間インキュベートした。タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６）及び単一抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７）により形質導入されたγδＴ細胞を陽性対照として、同じロットからの形質導入されていないγδＴ細胞（「Ｕｎ－γδＴ」）を陰性対照として用いた。製造業者によるマニュアル（Ｒｏｃｈｅ）に従ってアッセイを行った。
【0344】
以下の式でインビトロ細胞傷害性を計算した（［ＬＤＨ］Ｅ＋Ｔ：Ｅ／Ｔ共インキュベートから放出されたＬＤＨ、［ＬＤＨ］Ｅ：エフェクターのみから放出されたＬＤＨ、［ＬＤＨ］ｍａｘ：Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００で処理した標的細胞から放出されたＬＤＨ、［ＬＤＨ］ｍｉｎ：処理されていない標的細胞から放出されたＬＤＨ）。
【0345】
試験された全てのＣＡＲコンストラクトは、いずれもヒトγδＴ細胞に有効に形質導入し、ＣＡＲ発現率が２５％～８０％である。形質導入された細胞は、同じロットの実験において、形質導入されていないＴ細胞に比べて、細胞増殖及び生存能力が影響されなかった。図２６に示すように、対照のタンデム又は単一ＣＡＲ－γδＴ及びタンデム又は単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－γδＴ細胞は、試験されたＮＣＩ－Ｈ９２９及びＲＰＭＩ－８２２６腫瘍細胞に対して、いずれも標的細胞の溶解をインビトロで投与量依存的に誘導した。なお、タンデム及び単一の設計に対して、抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－γδＴ細胞は、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴよりも高い、標的細胞に対する細胞傷害性を示した。
【0346】
１３．２ 均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）によるサイトカイン分泌
エフェクターγδＴ細胞活性化の別の尺度は、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＧＭ－ＣＳＦのようなエフェクターサイトカインの産生である。インビトロ細胞傷害性アッセイからの上清を収集して、ＣＡＲにより誘導されたサイトカインの放出を評価し、且つ製造業者によるマニュアルに従ってＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＧＭ－ＣＳＦの均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイ（Ｃｉｓｂｉｏ）を行った。
エフェクターγδＴ細胞活性化の別の尺度は、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＧＭ－ＣＳＦのようなエフェクターサイトカインの産生である。インビトロ細胞傷害性アッセイからの上清を収集して、ＣＡＲにより誘導されたサイトカインの放出を評価し、且つ製造業者によるマニュアルに従ってＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＧＭ－ＣＳＦの均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイ（Ｃｉｓｂｉｏ）を行った。
【0347】
ＣＡＲ－γδＴ細胞（例えば、単一／タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ及び単一／タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞並びに形質導入されていないγδＴ細胞）を、ＮＣＩ－Ｈ９２９又はＲＰＭＩ－８２２６標的細胞と共培養した。２０ｈ後に、培養上清を収集して、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＧＭ－ＣＳＦの放出をγδＴ細胞活性化の尺度として評価した。図２７に示すように、標的腫瘍細胞と共培養された単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞及びタンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞は、単一及びタンデムｓｄＡｂ設計の抗ＢＣＭＡ－ＣＡＲ－γδＴ細胞と類似して、有意量のＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＧＭ－ＣＳＦを分泌した。これは、抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－ＣＡＲの添加が、ＣＡＲ媒介性抗腫瘍細胞傷害性に影響を及ぼさないことを示した。最も可能性の高いこととして、ＴＬＲ４シグナル伝達は、標的結合後のＣＡＲ－γδＴ細胞の持続性の増強に役立つ。この仮説を試験するために、これらの細胞を、以下に記載の長期的な共培養アッセイに供した。
【0348】
１３．３ 長期的な共培養アッセイ
抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ及び抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＡＲ－γδＴ細胞の長期的な殺傷効果及び持続性を評価するために、長期的な共培養アッセイを行ってインビボでの動的殺傷プロセスを模擬した。外因性サイトカイン（例えば、ＩＬ－２）の非存在下で、形質導入された（例えば、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞、単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞、単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＤ８ ＣＡＲ－γδＴ細胞、単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＤ２８ ＣＡＲ－γδＴ細胞及びタンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＡＲ－γδＴ細胞）又は形質導入されていない（例えば、Ｕｎ－γδＴ）Ｔ細胞（１×１０５個／ウェル）を、２４ウェルプレートにおいて１：３のＥ：Ｔ比でＮＣＩ－Ｈ９２９標的細胞（４×１０５個／ウェル）と共培養した。２又は３日間共培養した後、これらの細胞の一部を回収し、ＣＤ３を染色した。ＣＤ３及びＣＡＲシグナルによってＣＡＲ－γδＴ細胞を同定した。連続共培養アッセイのために、残っているγδＴ細胞をその後、新鮮なＮＣＩ－Ｈ９２９標的細胞を用いて同じＥ：Ｔ比で再チャレンジした。腫瘍細胞がウェル体積を超えて成長するまで、共培養を行った。各時点のγδＴ細胞増殖率は、該時点のγδＴ細胞数をγδＴ細胞の初期数で割ることにより計算した。
抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ及び抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＡＲ－γδＴ細胞の長期的な殺傷効果及び持続性を評価するために、長期的な共培養アッセイを行ってインビボでの動的殺傷プロセスを模擬した。外因性サイトカイン（例えば、ＩＬ－２）の非存在下で、形質導入された（例えば、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞、単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞、単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＤ８ ＣＡＲ－γδＴ細胞、単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＤ２８ ＣＡＲ－γδＴ細胞及びタンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＡＲ－γδＴ細胞）又は形質導入されていない（例えば、Ｕｎ－γδＴ）Ｔ細胞（１×１０５個／ウェル）を、２４ウェルプレートにおいて１：３のＥ：Ｔ比でＮＣＩ－Ｈ９２９標的細胞（４×１０５個／ウェル）と共培養した。２又は３日間共培養した後、これらの細胞の一部を回収し、ＣＤ３を染色した。ＣＤ３及びＣＡＲシグナルによってＣＡＲ－γδＴ細胞を同定した。連続共培養アッセイのために、残っているγδＴ細胞をその後、新鮮なＮＣＩ－Ｈ９２９標的細胞を用いて同じＥ：Ｔ比で再チャレンジした。腫瘍細胞がウェル体積を超えて成長するまで、共培養を行った。各時点のγδＴ細胞増殖率は、該時点のγδＴ細胞数をγδＴ細胞の初期数で割ることにより計算した。
【0349】
様々なＣＡＲ－Ｔ細胞の、反復腫瘍刺激アッセイでの殺傷効果は図２８に示されている。タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞は４ラウンドの腫瘍刺激後に疲弊した（例えば、ＣＤ３％により測定されたように、さらなる標的腫瘍細胞を殺傷させることができなかった）が、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞、単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞、単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＤ８ ＣＡＲ－γδＴ細胞、単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＤ２８ ＣＡＲ－γδＴ細胞、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＡＲ－γδＴ細胞及びタンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ－ＣＤ８ ＣＡＲ－γδＴ細胞は、８ラウンドの腫瘍刺激まで、標的腫瘍細胞を殺傷し続けた。さらに、本発明者らは、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＡＲ－γδＴ細胞がインビトロで、増殖し、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞よりも優れた長期的な持続性を示すことを発見した。さらに、８ラウンドの反復刺激後、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＡＲ－γδＴ細胞、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ－ＣＤ８ ＣＡＲ－γδＴ細胞及び単一抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ－ＣＤ２８ ＣＡＲ－γδＴ細胞は、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞よりもはるかに良好な増殖を示した（図２８）。
【0350】
以上のように、これらの結果は、ＴＬＲ４シグナル伝達の活性化が、ＣＡＲ－Ｔ細胞を疲弊に対して耐性にし、標的腫瘍細胞をインビトロで殺傷する能力を増強し、それにより、このクラスの治療剤の進歩に対する主要な障害を解決することを示す。具体的には、本発明者らは、タンデム又は単一抗ＢＣＭＡ ｓｄＡｂにより誘発されたＴＬＲ４シグナル伝達が、ＣＡＲ－γδＴ細胞の抗腫瘍細胞傷害性及び持続性の増強において、同様に良好な効果を有することを証明した。なお、細胞傷害性及び持続性は、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ又は異なるヒンジ設計（ＣＤ２８が挙げられるが、それに限定されない）によりさらに改善され得る。
【0351】
実施例１４：同種異系環境におけるインビトロ持続性
この実施例は、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞の、同種異系環境におけるインビトロ持続性を示した。
この実施例は、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞の、同種異系環境におけるインビトロ持続性を示した。
【0352】
１４．１ 三方向性混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ
タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞の、同種異系細胞治療の「既製の」製品としての可能性を試験するために、本発明者らは、同一の系においてＣＡＲ－γδＴ、ＨＣＩ－Ｈ９２９腫瘍細胞と同種異系ＰＢＭＣ（自己ＰＢＭＣを対照として用いた）との共培養を用いて三方向性ＭＬＲアッセイを行うことによってインビトロ同種異系環境を模擬した。具体的には、これらの細胞をγδＴ：ＰＢＭＣ：腫瘍＝１：６０：１の比で共培養し、初期γδＴ細胞の数は１ウェルあたり４×１０５個の細胞である。共培養の３、６及び９日後に、γδＴ細胞の数を記録して、同種異系ＰＢＭＣの存在下での増殖を確定した。他方、９日目に、αβＴ及びＮＫ細胞の数を記録して、同種異系性質を有するこれらの主なエフェクター細胞がγδＴ細胞の刺激を受けたか否かを確定した。図２９に示すように、同種異系ＰＢＭＣの存在下で、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞に比べて、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴはより高い増殖レベルを示した。他方、対照のタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞に比べて、この系における、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞の同種異系αβＴ及びＮＫ細胞の増殖は、はるかに少ないことが非常に明らかである。
タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞の、同種異系細胞治療の「既製の」製品としての可能性を試験するために、本発明者らは、同一の系においてＣＡＲ－γδＴ、ＨＣＩ－Ｈ９２９腫瘍細胞と同種異系ＰＢＭＣ（自己ＰＢＭＣを対照として用いた）との共培養を用いて三方向性ＭＬＲアッセイを行うことによってインビトロ同種異系環境を模擬した。具体的には、これらの細胞をγδＴ：ＰＢＭＣ：腫瘍＝１：６０：１の比で共培養し、初期γδＴ細胞の数は１ウェルあたり４×１０５個の細胞である。共培養の３、６及び９日後に、γδＴ細胞の数を記録して、同種異系ＰＢＭＣの存在下での増殖を確定した。他方、９日目に、αβＴ及びＮＫ細胞の数を記録して、同種異系性質を有するこれらの主なエフェクター細胞がγδＴ細胞の刺激を受けたか否かを確定した。図２９に示すように、同種異系ＰＢＭＣの存在下で、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞に比べて、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴはより高い増殖レベルを示した。他方、対照のタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞に比べて、この系における、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞の同種異系αβＴ及びＮＫ細胞の増殖は、はるかに少ないことが非常に明らかである。
【0353】
そのため、本発明者らは、リガンドにより誘導されたＴＬＲ４シグナル伝達を備えるタンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞が、同種異系細胞の存在下でも優れた持続性を示すため、「既製の」同種異系細胞治療剤の利用可能な候補であることを証明した。
【0354】
実施例１５：インビボ有効性及び安全性
この実施例は、例示的なタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びタンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞の、同種異系環境におけるインビボ有効性及び安全性を示した。
この実施例は、例示的なタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞及びタンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ細胞の、同種異系環境におけるインビボ有効性及び安全性を示した。
【0355】
１５．１ ＲＰＭＩ－８２２６異種移植モデルにおけるインビボ有効性及び安全性
ＲＰＭＩ－８２２６異種移植モデルにおいて、例示的なタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔの抗腫瘍活性に対してインビボ評価を行った。簡単に言えば、０日目に、ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子を安定的に発現する１００万（１×１０６）個のＲＰＭＩ－８２２６細胞をＮＯＤ／ＳＣＩＤ ＩＬ－２ＲγＣｎｕｌｌ（ＮＳＧ）マウスに皮下／静脈内移植した。腫瘍接種後の１４日目に、マウスを以下のように処理した：１×１０６個の武装化されたＣＡＲ－γδＴもしくはモックＴ細胞又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を静脈内注射した。腫瘍進行を生物発光イメージング（ＢＬＩ）により週１回モニタリングした。なお、血液から採取した血漿をＦＡＣＳ分析することによってＴ細胞増殖をモニタリングした。
ＲＰＭＩ－８２２６異種移植モデルにおいて、例示的なタンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔの抗腫瘍活性に対してインビボ評価を行った。簡単に言えば、０日目に、ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子を安定的に発現する１００万（１×１０６）個のＲＰＭＩ－８２２６細胞をＮＯＤ／ＳＣＩＤ ＩＬ－２ＲγＣｎｕｌｌ（ＮＳＧ）マウスに皮下／静脈内移植した。腫瘍接種後の１４日目に、マウスを以下のように処理した：１×１０６個の武装化されたＣＡＲ－γδＴもしくはモックＴ細胞又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を静脈内注射した。腫瘍進行を生物発光イメージング（ＢＬＩ）により週１回モニタリングした。なお、血液から採取した血漿をＦＡＣＳ分析することによってＴ細胞増殖をモニタリングした。
【0356】
傷害性評価のために、臨床症状を毎日観察するとともに、毎週、動物の体重及び腫瘍－Ｌｕｃ細胞により誘発された蛍光強度を測定した。マウスのヒト化サイトカインプロファイル（ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＧＭ－ＣＳＦ）を検出するために、血液（０．２ｍＬ）を毎週採取した。
【0357】
低腫瘍負荷及びマウスあたり１ＭのＣＡＲ－γδＴ細胞投与量の１番目の実験において、本発明者らは、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ及びタンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞がいずれも腫瘍成長を阻害できることを発見した。しかしながら、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴは、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞よりも優れた抗腫瘍活性を示すことが明らかであり、その理由は、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞で処理したマウスのみが腫瘍フリーを維持し、別の実験群が実験の終わり頃に再発したことである（図３０）。なお、マウス血液のＦＡＣＳ分析からの薬物動態学的結果は、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ群の末梢血におけるＣＡＲ－γδＴ細胞の拡大が、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ群よりはるかに高いことを示し、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞のより優れたインビボ有効性をさらに証明した（図３０）。
【0358】
高い初期腫瘍負荷及びマウスあたり０．３ＭのＣＡＲ－γδＴ細胞の低い投与量を伴う別の実験では、本発明者らは、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＧＰＲＣ５Ｄ－ＣＤ８ ＣＡＲ－γδＴ細胞が、依然として多発性骨髄腫の腫瘍細胞を分化させ得ることを発見し、これによりＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄの二重標的化の実現可能性及び異なるヒンジ設計（ＣＤ８が挙げられるが、それに限定されない）の潜在的有用性を確立した（図３０）。
【0359】
なお、全ての試験群間で有意な体重変化は見られなかった。なお、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴで処理したマウス末梢血におけるＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及びＧＭ－ＣＳＦレベルは、タンデム抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴで処理したマウスに類似している。これらの発見は、インビトロ共培養アッセイで得られた観察結果に相当する（図３１Ａ及びＢ）。これらの結果は、タンデム抗ＢＣＭＡ－ｃｏ－抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ療法がインビボで安全であることを示した。
【0360】
要するに、本発明者らは、インビボ多発性骨髄腫モデルにおいて、抗ＢＣＭＡにより誘発されたＴＬＲ４シグナル伝達を備える抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴ細胞が、安全であり、且つ単純な第２世代抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ－γδＴよりも有効であったことを確定した。
【0361】
配列表
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16A】
【図16B】
【図17A】
【図17B】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【図31A】
【図31B】
【配列表】
【国際調査報告】