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▶ デナリ セラピューティクス インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-09-26
(54)【発明の名称】操作された抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質
(51)【国際特許分類】
C07K 16/46 20060101AFI20240918BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20240918BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240918BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20240918BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240918BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240918BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240918BHJP
A61K 38/02 20060101ALI20240918BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240918BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240918BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20240918BHJP
A61P 15/00 20060101ALI20240918BHJP
A61K 47/64 20170101ALI20240918BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240918BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240918BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20240918BHJP
【ＦＩ】
C07K16/46 ZNA
C12N15/62 Z
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
A61K38/02
A61P35/00
A61P43/00 121
A61P35/04
A61P15/00
A61K47/64
A61K39/395 V
A61K45/00
A61K39/395 T
C12N15/13
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024511978
(86)(22)【出願日】2022-08-25
(85)【翻訳文提出日】2024-03-29
(86)【国際出願番号】 US2022041471
(87)【国際公開番号】W WO2023038803
(87)【国際公開日】2023-03-16
(31)【優先権主張番号】63/237,071
(32)【優先日】2021-08-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518086619
【氏名又は名称】デナリ セラピューティクス インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｄｅｎａｌｉ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｉｎｃ．
(74)【代理人】
【識別番号】100102978
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 初志
(74)【代理人】
【識別番号】100205707
【弁理士】
【氏名又は名称】小寺 秀紀
(74)【代理人】
【識別番号】100160923
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 裕孝
(74)【代理人】
【識別番号】100119507
【弁理士】
【氏名又は名称】刑部 俊
(74)【代理人】
【識別番号】100142929
【弁理士】
【氏名又は名称】井上 隆一
(74)【代理人】
【識別番号】100148699
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 利光
(74)【代理人】
【識別番号】100188433
【弁理士】
【氏名又は名称】梅村 幸輔
(74)【代理人】
【識別番号】100128048
【弁理士】
【氏名又は名称】新見 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100129506
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 智彦
(74)【代理人】
【識別番号】100114340
【弁理士】
【氏名又は名称】大関 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100214396
【弁理士】
【氏名又は名称】塩田 真紀
(74)【代理人】
【識別番号】100121072
【弁理士】
【氏名又は名称】川本 和弥
(74)【代理人】
【識別番号】100221741
【弁理士】
【氏名又は名称】酒井 直子
(74)【代理人】
【識別番号】100114926
【弁理士】
【氏名又は名称】枝松 義恵
(72)【発明者】
【氏名】ボンドパッダエ アビラ
(72)【発明者】
【氏名】クレメンス アリサ ジェーン
(72)【発明者】
【氏名】キム ド ジン
(72)【発明者】
【氏名】ピゾ ミシェル イー．
(72)【発明者】
【氏名】シャン ルー
(72)【発明者】
【氏名】セオリス ジュニア リチャード
(72)【発明者】
【氏名】トン レイモンド カ ハン
【テーマコード（参考）】
4B065
4C076
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA90X
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C076AA95
4C076CC27
4C076CC41
4C076EE41
4C076EE59
4C084AA02
4C084AA19
4C084BA41
4C084NA13
4C084NA14
4C084ZA81
4C084ZB26
4C084ZC75
4C085AA14
4C085BB11
4C085CC22
4C085DD62
4C085EE01
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
１つの態様では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ及びヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶの両方に特異的に結合する能力を有する二重特異性タンパク質を提供する。別の態様では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ及びサブドメインＩＶに特異的に結合する二重特異性タンパク質を使用した、がんを処置するまたはがんの脳転移を処置する方法を提供する。
【選択図】図２Ａ
【選択図】図２Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
以下：（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、前記第一及び前記第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、前記第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために前記（ａ）に記載のＦｄ部分と対になる軽鎖ポリペプチド
を含む、タンパク質であって、
前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、または、前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ
前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む、
前記タンパク質。
【請求項2】
前記Ｓ２３９Ｄ及び／または前記Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強することが可能である、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項3】
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｇ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｈ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｊ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｋ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｌ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｍ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｎ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｏ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
請求項１に記載のタンパク質。
【請求項4】
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
請求項３に記載のタンパク質。
【請求項5】
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含む、
請求項４に記載のタンパク質。
【請求項6】
前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項7】
前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項8】
前記第二のＦｃポリペプチドが、第一のリンカーを介して前記ｓｃＦｖと融合している、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項9】
前記第一のリンカーが、１～２０アミノ酸長を有する、請求項８に記載のタンパク質。
【請求項10】
前記第一のリンカーが、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む、請求項８に記載のタンパク質。
【請求項11】
前記ｓｃＦｖが、第二のリンカーを介して接続されているＶＬ領域及びＶＨ領域を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項12】
前記第二のリンカーが、１～２０アミノ酸長を有する、請求項１１に記載のタンパク質。
【請求項13】
前記第二のリンカーが、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む、請求項１１に記載のタンパク質。
【請求項14】
前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に特異的に結合する、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項15】
前記第一のＦｃポリペプチド及び前記第二のＦｃポリペプチドが各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項16】
ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｗの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含む、請求項１５に記載のタンパク質。
【請求項17】
ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｗの置換を含む、請求項１５に記載のタンパク質。
【請求項18】
前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾を含む、請求項１４に記載のタンパク質。
【請求項19】
前記エフェクター機能を低下させる修飾が、ＥＵナンバリングに従ってＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換である、請求項１８に記載のタンパク質。
【請求項20】
前記第一のＦｃポリペプチドが、ＴｆＲに特異的に結合し、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む、請求項１９に記載のタンパク質。
【請求項21】
前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従ってＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換をさらに含む、請求項２０に記載のタンパク質。
【請求項22】
前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位及び２３５位にＬｅｕ、ならびに３２９位にプロリンを含む、請求項２１に記載のタンパク質。
【請求項23】
前記第二のＦｃポリペプチドが、ＴｆＲに特異的に結合し、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む、請求項１９に記載のタンパク質。
【請求項24】
前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従ってＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換をさらに含む、請求項２３に記載のタンパク質。
【請求項25】
前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位及び２３５位にＬｅｕ、ならびに３２９位にプロリンを含む、請求項２４に記載のタンパク質。
【請求項26】
ヒンジ領域またはその一部分が、前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドのＮ末端に連結されている、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項27】
前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、配列番号１３１～１４９及び１８３～１９６からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項28】
前記第一のＦｃポリペプチドまたは前記第二のＦｃポリペプチドが、配列番号１３３及び１８３～１８５から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項２７に記載のタンパク質。
【請求項29】
前記第一のＦｃポリペプチドまたは前記第二のＦｃポリペプチドが、配列番号１３７及び１８６～１９６から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項２７に記載のタンパク質。
【請求項30】
前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、ＥＵナンバリングに従って３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３５～１３９及び１８６～１９６から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項31】
前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、
請求項１に記載のタンパク質。
【請求項32】
前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、
請求項１に記載のタンパク質。
【請求項33】
以下：（ａ）（ｉ）配列番号１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１５９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｂ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｃ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｄ）（ｉ）配列番号１６６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｅ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｆ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｇ）（ｉ）配列番号１６７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｈ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｉ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｊ）（ｉ）配列番号１６６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｋ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｌ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｍ）（ｉ）配列番号１６７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド
を含む、タンパク質。
【請求項34】
（ａ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１５９の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または（ｂ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６４の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７３の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｃ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６４の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７４の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｄ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６６の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７３の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｅ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６５の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７３の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｆ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６５の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７４の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｇ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６７の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７３の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｈ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６４の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７５の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｉ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６４の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７６の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｊ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６６の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７５の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｋ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６５の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７５の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｌ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６５の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７６の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｍ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６７の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７５の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、
請求項３３に記載のタンパク質。
【請求項35】
以下：（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、前記第一及び前記第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、前記第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド
を含む、タンパク質であって、
前記（ａ）及び／または前記（ｂ）におけるＦｄ部分が、ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、
前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、または、前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ
前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む、
前記タンパク質。
【請求項36】
前記Ｓ２３９Ｄ及び／または前記Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強することが可能である、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項37】
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｇ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｈ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｊ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｋ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｌ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｍ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｎ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｏ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項38】
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
請求項３７に記載のタンパク質。
【請求項39】
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含む、
請求項３８に記載のタンパク質。
【請求項40】
前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項41】
前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項42】
前記（ａ）または前記（ｂ）におけるＦｄ部分が、前記ｓｃＦｖとＮ末端で融合している、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項43】
前記（ａ）及び／または前記（ｂ）におけるＦｄ部分が、第一のリンカーを介して前記ｓｃＦｖと融合している、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項44】
前記第一のリンカーが、１～２０アミノ酸長を有する、請求項４３に記載のタンパク質。
【請求項45】
前記第一のリンカーが、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む、請求項４３に記載のタンパク質。
【請求項46】
前記ｓｃＦｖが、第二のリンカーを介して接続されているＶＬ領域及びＶＨ領域を含む、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項47】
前記第二のリンカーが、１～２０アミノ酸長を有する、請求項４６に記載のタンパク質。
【請求項48】
前記第二のリンカーが、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む、請求項４６に記載のタンパク質。
【請求項49】
前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に特異的に結合する、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項50】
前記第一のＦｃポリペプチド及び前記第二のＦｃポリペプチドが各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含む、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項51】
ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｗの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含む、請求項５０に記載のタンパク質。
【請求項52】
ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｗの置換を含む、請求項５０に記載のタンパク質。
【請求項53】
前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾を含む、請求項４９に記載のタンパク質。
【請求項54】
前記エフェクター機能を低下させる修飾が、ＥＵナンバリングに従ってＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換である、請求項５３に記載のタンパク質。
【請求項55】
前記第一のＦｃポリペプチドが、ＴｆＲに特異的に結合し、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む、請求項５４に記載のタンパク質。
【請求項56】
前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従ってＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換をさらに含む、請求項５５に記載のタンパク質。
【請求項57】
前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位及び２３５位にＬｅｕ、ならびに３２９位にプロリンを含む、請求項５６に記載のタンパク質。
【請求項58】
前記第二のＦｃポリペプチドが、ＴｆＲに特異的に結合し、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む、請求項５４に記載のタンパク質。
【請求項59】
前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従ってＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換をさらに含む、請求項５８に記載のタンパク質。
【請求項60】
前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位及び２３５位にＬｅｕ、ならびに３２９位にプロリンを含む、請求項５９に記載のタンパク質。
【請求項61】
ヒンジ領域またはその一部分が、前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドのＮ末端に連結されている、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項62】
前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、配列番号１３１～１４９及び１８３～１９６からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項63】
前記第一のＦｃポリペプチドまたは前記第二のＦｃポリペプチドが、配列番号１３３及び１８３～１８５から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項６２に記載のタンパク質。
【請求項64】
前記第一のＦｃポリペプチドまたは前記第二のＦｃポリペプチドが、配列番号１３７及び１８６～１９６から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項６２に記載のタンパク質。
【請求項65】
前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、ＥＵナンバリングに従って３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３５～１３９及び１８６～１９６から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項66】
前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、
請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項67】
前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、
請求項３５に記載のタンパク質。
【請求項68】
以下：（ａ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｂ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｃ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｄ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｅ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７８の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｆ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｇ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｈ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７８の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｉ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｊ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｋ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｌ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｍ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｎ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｏ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｐ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｑ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｒ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｓ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｔ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｕ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド
を含む、タンパク質。
【請求項69】
（ａ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号６の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６０の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または（ｂ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号６の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｃ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号６の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６２の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｄ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７７の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｅ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７８の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｆ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７１の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７７の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｇ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７７の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｈ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７８の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｉ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７２の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７７の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｊ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７９の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｋ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８０の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｌ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７１の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７９の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｍ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７９の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｎ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８０の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｏ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７２の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７９の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｐ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｑ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８２の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｒ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７１の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｓ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｔ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８２の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｕ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７２の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、
請求項６８に記載のタンパク質。
【請求項70】
請求項１に記載のタンパク質と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項71】
請求項１に記載のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項72】
請求項７１に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項73】
請求項７１に記載のポリヌクレオチドまたは請求項７２に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項74】
対象におけるがんを処置するまたはがんの脳転移を処置するための方法であって、前記対象に対して、治療有効量の請求項１に記載のタンパク質または請求項７０に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項75】
前記タンパク質が、化学療法または放射線療法と組み合わせて投与される、請求項７４に記載の方法。
【請求項76】
前記がんが、転移がんである、請求項７４に記載の方法。
【請求項77】
前記がんが、乳がんである、請求項７４に記載の方法。
【請求項78】
前記がんが、ＨＥＲ２陽性がんである、請求項７４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年８月２５日に出願された米国仮特許出願第６３／２３７，０７１号に対する優先権を主張する。当該仮出願の開示は、すべての目的のため、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年８月２５日に出願された米国仮特許出願第６３／２３７，０７１号に対する優先権を主張する。当該仮出願の開示は、すべての目的のため、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
背景
乳がん等のがんの脳転移の処置は、現在のところ、大変な臨床的難題となっている。乳がん患者では、脳転移の発生率は、５０％の高さである。臨床データにより、ＨＥＲ２陽性乳がんは、脳に転移する傾向があることが示されている。特に、抗ＨＥＲ２療法は、頭蓋外腫瘍の制御に有用であることが証明されているが、頭蓋内病変についてはそうではない。ＨＥＲ２陽性乳がんの脳転移等の転移性病変を制御するこれらの療法の失敗は、主に、治療薬が血液脳関門（ＢＢＢ）を越えて脳実質にアクセスできないことに起因する。
乳がん等のがんの脳転移の処置は、現在のところ、大変な臨床的難題となっている。乳がん患者では、脳転移の発生率は、５０％の高さである。臨床データにより、ＨＥＲ２陽性乳がんは、脳に転移する傾向があることが示されている。特に、抗ＨＥＲ２療法は、頭蓋外腫瘍の制御に有用であることが証明されているが、頭蓋内病変についてはそうではない。ＨＥＲ２陽性乳がんの脳転移等の転移性病変を制御するこれらの療法の失敗は、主に、治療薬が血液脳関門（ＢＢＢ）を越えて脳実質にアクセスできないことに起因する。
【発明の概要】
【0003】
概要
１つの態様では、本開示は、以下を含むタンパク質を提供する：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために該（ａ）に記載のＦｄ部分と対になる軽鎖ポリペプチド、
ここで、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、または、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ
該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。
１つの態様では、本開示は、以下を含むタンパク質を提供する：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために該（ａ）に記載のＦｄ部分と対になる軽鎖ポリペプチド、
ここで、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、または、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ
該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。
【0004】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強することが可能である。
【0005】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。
【0006】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｇ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｈ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｊ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｋ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｌ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｍ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｎ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｏ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｇ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｈ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｊ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｋ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｌ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｍ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｎ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｏ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。
【0007】
本タンパク質のある特定の実施形態では、
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0008】
本タンパク質の特定の実施形態では、
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含む。
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含む。
【0009】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する。他の実施形態では、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。
【0010】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第二のＦｃポリペプチドは、第一のリンカーを介して該ｓｃＦｖと融合している。該第一のリンカーは、１～２０アミノ酸長、例えば、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を有することができる。
【0011】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖは、第二のリンカーを介して接続されているＶＬ領域及びＶＨ領域を含む。該第二のリンカーは、１～２０アミノ酸長、例えば、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を有し得る。
【0012】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に特異的に結合し、例えば、ＴｆＲ結合部位を創出する本明細書に記載の配列修飾のいずれかを含む。いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び該第二のＦｃポリペプチドは各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従ってＴ３６６Ｗの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含む。他の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従ってＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含む。
【0013】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾を含む。ある特定の実施形態では、該エフェクター機能を低下させる修飾は、ＥＵナンバリングに従ってＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換である。一例として、該第一のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲに特異的に結合しかつＥＵナンバリングに従ってＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含んでもよく、該第一のＦｃポリペプチドはさらに、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含んでもよく、該第二のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕならびに３２９位にプロリンを含んでもよい。別の例として、該第二のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲに特異的に結合しかつＥＵナンバリングに従ってＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含んでもよく、該第二のＦｃポリペプチドはさらに、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含んでもよく、該第一のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕならびに３２９位にプロリンを含んでもよい。
【0014】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、ヒンジ領域またはその一部分は、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドのＮ末端に連結される。
【0015】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、配列番号１３１～１４９及び１８３～１９６からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、配列番号１３３及び１８３～１８５から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。ある特定の他の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、配列番号１３７及び１８６～１９６から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0016】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３５～１３９及び１８６～１９６から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0017】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0018】
本タンパク質の他の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0019】
別の態様では、本開示は、以下を含むタンパク質を提供する：
（ａ）（ｉ）配列番号１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１５９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｂ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｃ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｄ）（ｉ）配列番号１６６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｅ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｆ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｇ）（ｉ）配列番号１６７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｈ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｉ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｊ）（ｉ）配列番号１６６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｋ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｌ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｍ）（ｉ）配列番号１６７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド。
（ａ）（ｉ）配列番号１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１５９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｂ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｃ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｄ）（ｉ）配列番号１６６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｅ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｆ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｇ）（ｉ）配列番号１６７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｈ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｉ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｊ）（ｉ）配列番号１６６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｋ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｌ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｍ）（ｉ）配列番号１６７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド。
【0020】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一の重鎖ポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位、ヘテロ二量体化を促進する修飾、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強する修飾、及び／または第一の重鎖ポリペプチド配列に存在するＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾を含み、該第一の重鎖ポリペプチド配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。本タンパク質の他の実施形態では、該第二の重鎖ポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位、ヘテロ二量体化を促進する修飾、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強する修飾、及び／または第二の重鎖ポリペプチド配列に存在するＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾を含み、該第二の重鎖ポリペプチド配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0021】
さらに別の態様では、本開示は、以下を含むタンパク質を提供する：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び／または（ｂ）におけるＦｄ部分が、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、
ここで、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、または、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ
該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び／または（ｂ）におけるＦｄ部分が、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、
ここで、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、または、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ
該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。
【0022】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強することが可能である。
【0023】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。
【0024】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｇ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｈ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｊ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｋ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｌ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｍ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｎ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｏ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｇ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｈ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｊ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｋ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｌ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｍ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｎ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｏ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。
【0025】
本タンパク質のある特定の実施形態では、
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0026】
本タンパク質の特定の実施形態では、
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含む。
（ａ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、該第二のＦｃポリペプチドは、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含む。
【0027】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する。他の実施形態では、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。
【0028】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該（ａ）及び／または（ｂ）におけるＦｄ部分は、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
【0029】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該（ａ）及び／または（ｂ）におけるＦｄ部分は、第一のリンカーを介して該ｓｃＦｖと融合している。ある特定の実施形態では、該第一のリンカーは、１～２０アミノ酸長、例えば、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を有する。
【0030】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖは、第二のリンカーを介して接続されているＶＬ領域及びＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、該第二のリンカーは、１～２０アミノ酸長、例えば、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を有する。
【0031】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に特異的に結合し、例えば、ＴｆＲ結合部位を創出する本明細書に記載の配列修飾のいずれかを含む。いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び該第二のＦｃポリペプチドは各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従ってＴ３６６Ｗの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含む。他の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従ってＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含む。
【0032】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾を含む。ある特定の実施形態では、該エフェクター機能を低下させる修飾は、ＥＵナンバリングに従ってＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換である。一例として、該第一のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲに特異的に結合しかつＥＵナンバリングに従ってＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含んでもよく、該第一のＦｃポリペプチドはさらに、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含んでもよく、該第二のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕならびに３２９位にプロリンを含んでもよい。別の例として、該第二のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲに特異的に結合しかつＥＵナンバリングに従ってＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含んでもよく、該第二のＦｃポリペプチドはさらに、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含んでもよく、該第一のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕならびに３２９位にプロリンを含んでもよい。
【0033】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、ヒンジ領域またはその一部分は、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドのＮ末端に連結される。
【0034】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、配列番号１３１～１４９及び１８３～１９６からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、配列番号１３３及び１８３～１８５から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。ある特定の他の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、配列番号１３７及び１８６～１９６から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0035】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３５～１３９及び１８６～１９６から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0036】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0037】
本タンパク質の他の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0038】
さらなる態様では、本開示は、以下を含むタンパク質を提供する：
（ａ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｂ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｃ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｄ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｅ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｆ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｇ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｈ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｉ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｊ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｋ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｌ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｍ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｎ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｏ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｐ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｑ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｒ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｓ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｔ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｕ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド。
（ａ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｂ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｃ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｄ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｅ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｆ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｇ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｈ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｉ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｊ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｋ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｌ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｍ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｎ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｏ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｐ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｑ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｒ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｓ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｔ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｕ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド。
【0039】
本タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一の重鎖ポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位、ヘテロ二量体化を促進する修飾、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強する修飾、及び／または第一の重鎖ポリペプチド配列に存在するＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾を含み、該第一の重鎖ポリペプチド配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。本タンパク質の他の実施形態では、該第二の重鎖ポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位、ヘテロ二量体化を促進する修飾、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強する修飾、及び／または第二の重鎖ポリペプチド配列に存在するＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾を含み、該第二の重鎖ポリペプチド配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0040】
本開示の別の態様では、本開示は、本明細書に記載のタンパク質のいずれかと、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。
【0041】
本開示の別の態様では、本開示は、本明細書に記載のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチドを提供する。
【0042】
本開示の別の態様では、本開示は、先行する態様のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
【0043】
本開示の別の態様では、本開示は、該ポリヌクレオチドまたは該ベクターを含む宿主細胞を提供する。
【0044】
本開示の別の態様では、本開示は、対象におけるがんを処置するまたはがんの脳転移を処置するための方法を提供し、該方法は、該対象に対して、治療有効量の本明細書に記載のタンパク質またはその医薬組成物を投与することを含む。
【0045】
該方法のいくつかの実施形態では、該タンパク質は、化学療法または放射線療法と組み合わせて投与される。
【0046】
該方法のいくつかの実施形態では、該がんは、転移がんである。いくつかの実施形態では、該がんは、乳がんである。いくつかの実施形態では、該がんは、ＨＥＲ２陽性がんである。
【図面の簡単な説明】
【0047】
【図1A】「Ｆａｂ－Ｆｃポリペプチド／ｓｃＦｖ－Ｆｃポリペプチド」構造を有する例示的な二重特異性タンパク質を示す概略図であり、ここでは、ｓｃＦｖは、ＴｆＲ結合部位（星印）及びノブの変異を有するＦｃポリペプチドのＮ末端とヒンジまたは部分的なヒンジ領域を介して融合しており、他方のＦｃポリペプチドは、ホールの変異を有する。
【図1B】「Ｆａｂ－Ｆｃポリペプチド／ｓｃＦｖ－Ｆｃポリペプチド」構造を有する例示的な二重特異性タンパク質を示す概略図であり、ここでは、ｓｃＦｖは、Ｆｃポリペプチドのホールの変異のＮ末端とヒンジまたは部分的なヒンジ領域を介して融合しており、他方のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位（星印）及びノブの変異を有する。
【図2A】「ｍＡｂ／ＨＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」構造を有する例示的な二重特異性タンパク質を示す概略図であり、ここでは、ｓｃＦｖは、ホールの変異を有するＦｃポリペプチドのＣ末端と融合しており、他方のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位（星印）及びノブの変異を有する。
【図2B】「ｍＡｂ／ＨＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」構造を有する例示的な二重特異性タンパク質を示す概略図であり、ここでは、ｓｃＦｖは、Ｆｄ部分のＮ末端とリンカーを介して融合している。該ｓｃＦｖは、ホールの変異を有するＦｃポリペプチドを含む重鎖のＦｄ部分と融合しており、他方のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位（星印）及びノブの変異を有する。
【図2C】「ｍＡｂ／ＨＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」構造を有する例示的な二重特異性タンパク質を示す概略図であり、ここでは、２つのｓｃＦｖは各々、重鎖のＦｄ部分のＮ末端とリンカーを介して融合している。ＦｃポリペプチドのＴｆＲ結合部位は、星印で示されている。
【図2D】「ｍＡｂ／ＨＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」構造を有する例示的な二重特異性タンパク質を示す概略図であり、ここでは、２つのｓｃＦｖは各々、重鎖のＦｃポリペプチドのＣ末端とリンカーを介して融合している。ＦｃポリペプチドのＴｆＲ結合部位は、星印で示されている。
【図3A】「ｍＡｂ／ＬＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」構造を有する例示的な二重特異性タンパク質を示す概略図であり、ここでは、ｓｃＦｖは、軽鎖のＣ末端とリンカーを介して融合している。ＦｃポリペプチドのＴｆＲ結合部位は、星印で示されている。
【図3B】「ｍＡｂ／ＬＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」構造を有する例示的な二重特異性タンパク質を示す概略図であり、ここでは、ｓｃＦｖは、軽鎖のＮ末端とリンカーを介して融合している。ＦｃポリペプチドのＴｆＲ結合部位は、星印で示されている。
【図3C】「ｍＡｂ／ＬＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」構造を有する例示的な二重特異性タンパク質を示す概略図であり、ここでは、２つのｓｃＦｖは各々、軽鎖のＮ末端とリンカーを介して融合している。ＦｃポリペプチドのＴｆＲ結合部位は、星印で示されている。
【図3D】「ｍＡｂ／ＬＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」構造を有する例示的な二重特異性タンパク質を示す概略図であり、ここでは、２つのｓｃＦｖは各々、軽鎖のＣ末端とリンカーを介して融合している。ＦｃポリペプチドのＴｆＲ結合部位は、星印で示されている。
【図4】「ｍＡｂ／ＨＣ及びＬＣのＮ末端ＶＨ ＶＬ」構造を有する例示的な二重特異性タンパク質を示す概略図であり、ここでは、２つのＶＨ領域は、各々、重鎖のＦｄ部分のＮ末端と融合しており、２つのＶＬ領域は、各々、軽鎖のＮ末端と融合している。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、Ｆｖ断片を形成する。ＦｃポリペプチドのＴｆＲ結合部位は、星印で示されている。
【図5】「ｍＡｂ／ＨＣのＣ末端ＶＨ ＶＬ」構造を有する例示的な二重特異性タンパク質を示す概略図であり、ここでは、ＶＨ領域は、ホールの変異を有するＦｃポリペプチドのＣ末端と融合しており、ＶＬ領域は、ＴｆＲ結合部位（星印）及びノブの変異を有するＦｃポリペプチドのＣ末端と融合している。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、Ｆｖ断片を形成する。
【図6A】「Ｆａｂ－Ｆｃポリペプチド／ｓｃＦｖ－Ｆｃポリペプチド」構造を有する二重特異性タンパク質による、ＢＴ４７４細胞の増殖阻害アッセイにおける６日目のがん細胞の増殖阻害を示す。
【図6B】「Ｆａｂ－Ｆｃポリペプチド／ｓｃＦｖ－Ｆｃポリペプチド」構造を有する二重特異性タンパク質による、ＯＥ１９細胞の増殖阻害アッセイにおける３日目のがん細胞の増殖阻害を示す。
【図7】Ｃ５７／ＢＬ６マウスにおける抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照の血漿ＰＫプロファイルを示すプロットである。
【図8A】抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質または抗ＨＥＲ２対照を静脈内投与したＴｆＲｍｕ／ｈｕＫＩマウスにおける網状赤血球の定量化を示すプロットである。
【図8B】ＴｆＲｍｕ／ｈｕＫＩマウスにおける抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照の血漿ＰＫプロファイルを示すプロットである。
【図8C】ＴｆＲｍｕ／ｈｕＫＩマウスにおける抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照の脳内ＰＫプロファイルを示すプロットである。
【図8D】ＴｆＲｍｕ／ｈｕＫＩマウスにおける抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照の脳対血漿濃度のパーセンテージを示すプロットである。
【図9A】抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照によるＮＲＧ１を用いたＢＴ４７４細胞の増殖阻害アッセイを示す。
【図9B】抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照によるＮＲＧ１を用いたＢＴ４７４細胞の増殖阻害アッセイを示す。
【図9C】抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照によるＮＲＧ１を用いたＢＴ４７４細胞の増殖阻害アッセイを示す。
【図9D】抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照によるＮＲＧ１を用いないＢＴ４７４細胞の増殖阻害アッセイを示す。
【図9E】抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照によるＮＲＧ１を用いないＢＴ４７４細胞の増殖阻害アッセイを示す。
【図9F】抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照によるＮＲＧ１を用いないＢＴ４７４細胞の増殖阻害アッセイを示す。
【図9G】抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照によるＯＥ１９細胞の増殖阻害アッセイを示す。
【図9H】抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照によるＯＥ１９細胞の増殖阻害アッセイを示す。
【図9I】抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照によるＯＥ１９細胞の増殖阻害アッセイを示す。
【図9J】抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照によるＺＲ７５細胞の増殖阻害アッセイを示す。
【図9K】抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照によるＺＲ７５細胞の増殖阻害アッセイを示す。
【図9L】抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照によるＺＲ７５細胞の増殖阻害アッセイを示す。
【発明を実施するための形態】
【0048】
詳細な説明
Ｉ．緒言
１つの態様では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ及びヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶの両方に結合することができる二重特異性タンパク質を提供する。該二重特異性タンパク質は、一般に、軽鎖の誤対合やステアリングなしで生成され得る。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、ヒトＨＥＲ２の各標的サブドメインに、一価様に結合する。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、ヒトＨＥＲ２の１つの標的サブドメインに一価様に結合し、ヒトＨＥＲ２の他の標的サブドメインに二価様に結合する（例えば、サブドメインＩＩに一価様に及びサブドメインＩＶに二価様に、またはサブドメインＩＶに一価様に及びサブドメインＩＩに二価様に）。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、ヒトＨＥＲ２の各標的サブドメインに二価様に結合する。二重特異性タンパク質の様々な構造は、本明細書でさらに詳細に説明されている。
Ｉ．緒言
１つの態様では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ及びヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶの両方に結合することができる二重特異性タンパク質を提供する。該二重特異性タンパク質は、一般に、軽鎖の誤対合やステアリングなしで生成され得る。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、ヒトＨＥＲ２の各標的サブドメインに、一価様に結合する。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、ヒトＨＥＲ２の１つの標的サブドメインに一価様に結合し、ヒトＨＥＲ２の他の標的サブドメインに二価様に結合する（例えば、サブドメインＩＩに一価様に及びサブドメインＩＶに二価様に、またはサブドメインＩＶに一価様に及びサブドメインＩＩに二価様に）。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、ヒトＨＥＲ２の各標的サブドメインに二価様に結合する。二重特異性タンパク質の様々な構造は、本明細書でさらに詳細に説明されている。
【0049】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ（またはサブドメインＩＶ）に結合するｓｃＦｖ及びヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶ（またはサブドメインＩＩ）に結合するＦａｂを含む（例えば、セクションＩＩＩの「Ｆａｂ－Ｆｃポリペプチド／ｓｃＦｖ－Ｆｃポリペプチド」構造参照）。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、該二重特異性タンパク質の重鎖のＮ末端またはＣ末端に接続された１つ以上のｓｃＦｖを含み、該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ（またはサブドメインＩＶ）に結合し、該二重特異性タンパク質のＦａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶ（またはサブドメインＩＩ）に結合する（例えば、セクションＩＩＩの「ｍＡｂ／ＨＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」構造参照）。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、該二重特異性タンパク質の軽鎖のＮ末端またはＣ末端に接続された１つ以上のｓｃＦｖを含み、該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ（またはサブドメインＩＶ）に結合し、該二重特異性タンパク質のＦａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶ（またはサブドメインＩＩ）に結合する（例えば、セクションＩＩＩの「ｍＡｂ／ＨＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ ｍＡｂ／ＬＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」構造参照）。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、該重鎖のＮ末端に接続されたＦｖ断片のＶＨ領域（またはＶＬ領域）及び該軽鎖のＮ末端に接続されたＦｖ断片のＶＬ領域（またはＶＨ領域）を含み、該Ｆｖ断片は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ（またはサブドメインＩＶ）に結合し、該二重特異性タンパク質のＦａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶ（またはサブドメインＩＩ）に結合する（例えば、セクションＩＩＩの「ｍＡｂ／ＨＣ及びＬＣのＮ末端ＶＨ ＶＬ」構造参照）。さらに他の実施形態では、該二重特異性タンパク質は、該二重特異性タンパク質の２つの重鎖のうちの１つのＣ末端に接続されたＦｖ断片のＶＨ領域（またはＶＬ領域）及び該２つ重鎖のうちの他方のＣ末端に接続されたＦｖ断片のＶＬ領域（またはＶＨ領域）を含み、該Ｆｖ断片は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ（またはサブドメインＩＶ）に結合し、該二重特異性タンパク質のＦａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶ（またはサブドメインＩＩ）に結合する（例えば、セクションＩＩＩの「ｍＡｂ／ＨＣのＣ末端ＶＨ ＶＬ」構造参照）。
【0050】
主に治療薬が血液脳関門（ＢＢＢ）を通過すること及び脳実質にアクセスすることができないことから、先行する治療は、ＨＥＲ２陽性乳がんの脳転移の制御に失敗した。従って、ＢＢＢを越え、脳実質においてＨＥＲ２を標的とすることができる新しい治療薬に対する必要性がある。本発明者らは、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）の発現が脳内皮細胞で高度に発現され、受容体を介したトランスサイトーシスによってＢＢＢ送達を可能にすることができることから、脳内皮を通過するＢＢＢ送達を可能にする方法として、ＴｆＲ結合の使用をすでに記載した。興味深いことに、ＴｆＲは、ＨＥＲ２陽性乳がんを含めた様々ながんで高度に発現している。がん細胞が増加したＴｆＲ発現を獲得するメカニズムは、腫瘍細胞増殖と、鉄の取り込み等の代謝要求の増加に関連する可能性がある。実際、公開されているマイクロアレイデータセットにより、ＴｆＲの発現と乳がんの予後の相関関係が実証された（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７１：６７２８，２０１１）。様々なタイプのがんの薬理学的標的としてのＴｆＲの使用に関するいくつかの報告も存在する。
【0051】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、ＢＢＢ受容体、例えば、ＴｆＲに特異的に結合する１つ以上の修飾Ｆｃポリペプチド（すなわち、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド）を含む。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、ＢＢＢを横断して輸送することが可能である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＨＥＲ２及びＴｆＲの両方に結合する抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質は、高レベルのＴｆＲも発現するＨＥＲ２陽性腫瘍細胞に結合する際に、ＨＥＲ２のみに結合する他の治療薬と比較して、さらなる抗腫瘍効果をもたらし得る。具体的には、これらのタンパク質は、ＴｆＲとＨＥＲ２の両方に同時に結合することができるため、その効力及び／または有効性を高めることができる。
【0052】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチド二量体を含み、ＴｆＲに結合した際にエフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣもしくはＣＤＣ）が低下するが、ＨＥＲ２に結合した際にはエフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣもしくはＣＤＣ）を維持するか、または増強する。
【0053】
ＩＩ．定義
本明細書で使用される、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、内容が別段明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。従って、例えば、「抗体」への言及は、２つ以上のかかる分子等の組み合わせを任意に含む。
本明細書で使用される、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、内容が別段明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。従って、例えば、「抗体」への言及は、２つ以上のかかる分子等の組み合わせを任意に含む。
【0054】
本明細書で使用される、「約」及び「およそ」という用語は、数値または範囲で指定された量を修正するために使用される場合、その数値及び当業者に公知の値からの妥当な偏差、例えば、±２０％、±１０％または±５％が、記載された値の意図する意味の範囲内であることを示す。
【0055】
本明細書で使用される、「抗体」という用語は、免疫グロブリンフォールドを有するタンパク質を指し、その可変領域を介して抗原と特異的に結合する。該用語は、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、一本鎖抗体、二重特異性抗体等の多重特異性抗体、単一特異性抗体、一価抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、及びヒト抗体を包含する。本明細書で使用される、「抗体」という用語はまた、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び二価ｓｃＦｖが挙げられるがこれらに限定されない抗原結合特異性を保持する抗体断片も含む。抗体は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される軽鎖を含み得る。抗体は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類される重鎖を含む場合があり、これらは同様に、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥという免疫グロブリンクラスを定義する。
【0056】
例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。各四量体は、各対が１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）及び１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤ）を有する、２つの同一の対のポリペプチド鎖から構成される。各鎖のＮ末端は、抗原認識を主に担う約１００～１１０個またはそれを超えるアミノ酸の可変領域を画定する。「可変軽鎖」（ＶＬ）及び「可変重鎖」（ＶＨ）という用語は、それぞれ、これらの軽鎖及び重鎖を指す。
【0057】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、生殖系列可変（Ｖ）遺伝子、多様性（Ｄ）遺伝子、または結合（Ｊ）遺伝子に由来し（かつ定常（Ｃμ及びＣδ）遺伝子セグメントには由来しない）、抗体に抗原と結合する特異性を与える、抗体重鎖または軽鎖中のドメインを指す。通常、抗体の可変領域は、３つの超可変「相補性決定領域」が散在する４つの保存された「フレームワーク」領域を含む。
【0058】
「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、軽鎖及び重鎖可変領域によって確立された４つのフレームワーク領域を中断する各鎖における３つの超可変領域を指す。ＣＤＲは、抗原のエピトープへの抗体結合を主として担う。各鎖のＣＤＲは、通常、Ｎ末端から順番にナンバリングしてＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と称され、通常、特定のＣＤＲが位置する鎖によっても識別される。従って、ＶＨ ＣＤＲ３またはＣＤＲ－Ｈ３は、それが見出される抗体重鎖の可変領域に位置する一方、ＶＬ ＣＤＲ１またはＣＤＲ－Ｌ１は、それが見出される抗体軽鎖の可変領域に由来するＣＤＲ１である。
【0059】
異なる軽鎖または重鎖の「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、種内で比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域、すなわち、構成要素である軽鎖及び重鎖のフレームワーク領域を組み合わせたものは、ＣＤＲを３次元空間に配置し整列させるように機能する。フレームワーク配列は、生殖系列抗体の遺伝子配列を含む公共のＤＮＡデータベースまたは公開されている参照文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、ヒト及びマウス配列に関する「ＶＢＡＳＥ２」生殖系列可変遺伝子配列データベースに見出すことができる。
【0060】
ＣＤＲ及びフレームワーク領域のアミノ酸配列は、当技術分野で周知の様々な定義、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース（ＩＭＧＴ）、ＡｂＭ、及び観察された抗原接触（「Ｃｏｎｔａｃｔ」）を使用して決定され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｏｎｔａｃｔの定義に従って決定される。ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２－７４５，１９９６を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、及び／またはＣｏｎｔａｃｔのＣＤＲ定義の組み合わせによって決定される。
【0061】
「Ｆｄ部分」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＮ末端部分を指す。通常、Ｆｄ部分は、重鎖可変（ＶＨ）領域及び重鎖定常（ＣＨ１）領域を含む。
【0062】
「Ｆａｂ」という用語は、軽鎖可変領域、軽鎖定常領域、重鎖可変領域、及び重鎖ＣＨ１定常領域からなる抗原結合断片を指す。
【0063】
「単鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」という用語は、ペプチドリンカーを介して連結された重鎖可変領域及び軽鎖可変領域からなる抗原結合断片を指す。ｓｃＦｖは、定常領域を欠く。
【0064】
「Ｆｖ断片」という用語は、一緒になって抗原に対する結合部位を形成する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域からなる抗原結合断片を指す。
【0065】
「エピトープ」という用語は、分子、例えば、抗体のＣＤＲが特異的に結合する抗原の領域（ａｒｅａ）または領域（ｒｅｇｉｏｎ）を指し、数個のアミノ酸、または数個のアミノ酸の部分、例えば、５個もしくは６個、もしくはそれより多く、例えば、２０個以上のアミノ酸、またはそれらのアミノ酸の部分を含み得る。場合によっては、該エピトープは、例えば、炭水化物、核酸、または脂質に由来する非タンパク質成分を含む。場合によっては、該エピトープは、３次元部分である。従って、例えば、該標的がタンパク質の場合、該エピトープは、連続するアミノ酸からなることもあれば（例えば、線状エピトープ）、タンパク質フォールディングによって近接した状態になるタンパク質の異なる部分のアミノ酸からなることもある（例えば、不連続または高次構造エピトープ）。
【0066】
本明細書で使用される、「エピトープを認識する」という表現は、抗体に関して使用する場合、抗体のＣＤＲが、その抗原と、そのエピトープもしくはそのエピトープを含む抗原の一部分で相互作用するか、または特異的に結合することを意味する。
【0067】
「ヒト化抗体」は、ＣＤＲ外の非ヒト免疫グロブリンに由来する最低限の配列を含む非ヒト供給源（例えば、マウス）に由来するキメラ免疫グロブリンである。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ（例えば、２つ）の可変ドメインを含み、そのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に実質的に相当し、そのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域に実質的に相当する。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのある特定のフレームワーク領域の残基を、例えば、特異性、親和性、及び／または血清半減期を改善するために、非ヒト種由来の対応する残基に置き換えることができる。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、通常はヒト免疫グロブリン配列のものを含み得る。抗体のヒト化方法は、当技術分野で既知である。
【0068】
「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」は、ヒト重鎖配列及び軽鎖配列を有する抗体であり、通常は、ヒト生殖細胞系列遺伝子に由来する。いくつかの実施形態では、該抗体は、ヒト細胞によって、ヒト抗体レパートリーを利用した非ヒト動物（例えば、ヒト抗体配列を発現するように遺伝子操作されたトランスジェニックマウス）によって、またはファージディスプレイプラットフォームによって産生される。
【0069】
「特異的に結合する」という用語は、分子（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、または修飾Ｆｃポリペプチド（またはその標的結合部分）が、サンプル中のエピトープまたは標的に対して、別のエピトープまたは非標的化合物（例えば、構造的に異なる抗原）に結合するよりも、高い親和性で、高い結合力で、及び／または長い期間、当該エピトープまたは標的に結合することを指す。いくつかの実施形態では、エピトープまたは標的に特異的に結合するＦａｂ、ｓｃＦｖ、または修飾Ｆｃポリペプチド（またはその標的結合部分）とは、他のエピトープまたは非標的化合物よりも、少なくとも５倍高い親和性で、例えば、少なくとも６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２５倍、５０倍、１００倍、１０００倍、１０，０００倍、またはそれを超える親和性で、当該エピトープまたは標的に結合する、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、または修飾Ｆｃポリペプチド（またはその標的結合部分）である。本明細書で使用される、特定のエピトープまたは標的に対する「特異的結合」、「特異的に結合する」、または「特異的である」という用語は、例えば、それが結合するエピトープまたは標的に対する平衡解離定数ＫＤが、例えば、１０－４Ｍ以下、例えば、１０－５Ｍ、１０－６Ｍ、１０－７Ｍ、１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、または１０－１２Ｍである分子によって示され得る。当業者には、１つの種に由来する標的に特異的に結合するＦａｂまたはｓｃＦｖはまた、その標的のオルソログにも特異的に結合し得ることが認識されよう。
【0070】
「結合親和性」という用語は、本明細書では、２つの分子間、例えば、ＦａｂもしくはｓｃＦｖと抗原との間、または修飾Ｆｃポリペプチド（もしくはその標的結合部分）と標的との間の非共有結合性相互作用の強さを指すために使用される。従って、例えば、該用語は、特に指定のない限り、または文脈から明らかな場合を除き、ＦａｂもしくはｓｃＦｖと抗原間、または修飾Ｆｃポリペプチド（もしくはその標的結合部分）と標的間の１：１の相互作用を指し得る。結合親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）を測定することにより定量化することができ、これは、結合速度定数（ｋａ、時間－１Ｍ－１）で除した解離速度定数（ｋｄ、時間－１）を指す。ＫＤは、複合体形成及び解離の反応速度を、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）システム）、ＫｉｎＥｘＡ（登録商標）等の結合平衡除外法、及びＢｉｏＬａｙｅｒ干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）Ｏｃｔｅｔプラットフォームを使用するもの）を使用して測定することにより決定され得る。本明細書で使用される、「結合親和性」には、正式な結合親和性、例えば、ＦａｂもしくはｓｃＦｖと抗原間、または修飾Ｆｃポリペプチド（もしくはその標的結合部分）と標的間の１：１相互作用を反映するものだけでなく、強い結合を反映し得るＫＤが計算される見かけの親和性も含まれる。
【0071】
本明細書で使用される、「トランスフェリン受容体」または「ＴｆＲ」とは、トランスフェリン受容体タンパク質１を指す。ヒトトランスフェリン受容体１ポリペプチド配列は、配列番号１５０で規定される。他の種に由来するトランスフェリン受容体タンパク質１の配列も知られている（例えば、チンパンジー、アクセッション番号ＸＰ＿００３３１０２３８．１、アカゲザル、ＮＰ＿００１２４４２３２．１、イヌ、ＮＰ＿００１００３１１１．１、畜牛、ＮＰ＿００１１９３５０６．１、マウス、ＮＰ＿０３５７６８．１、ラット、ＮＰ＿０７３２０３．１、及びニワトリ、ＮＰ＿９９０５８７．１）。「トランスフェリン受容体」という用語はまた、例示的な参照配列、例えば、トランスフェリン受容体タンパク質１染色体座における遺伝子によってコードされるヒト配列の対立遺伝子バリアントも包含する。完全長トランスフェリン受容体タンパク質は、短いＮ末端細胞内領域、膜貫通領域、及び大きな細胞外ドメインを含む。該細胞外ドメインは、３つのドメイン、すなわち、プロテアーゼ様ドメイン、ヘリカルドメイン、及びアピカルドメインによって特徴づけられる。
【0072】
本明細書で使用される、「Ｆｃポリペプチド」という用語は、構造ドメインとしてのＩｇフォールドを特徴とする天然に存在する免疫グロブリン重鎖ポリペプチドのＣ末端領域を指す。Ｆｃポリペプチドは、少なくともＣＨ２ドメイン及び／またはＣＨ３ドメインを含む定常領域配列を含み、ヒンジ領域の少なくとも一部を含んでもよいが、可変領域は含まない。
【0073】
「修飾Ｆｃポリペプチド」とは、野生型免疫グロブリン重鎖Ｆｃポリペプチド配列に照らして、少なくとも１つの変異、例えば、置換、欠失、または挿入を有するが、天然のＦｃポリペプチドの全般的なＩｇフォールドまたは構造を保持するＦｃポリペプチドを指す。
【0074】
本明細書で使用される、「ＦｃＲｎ」とは、胎児性Ｆｃ受容体を指す。ＦｃポリペプチドのＦｃＲｎへの結合は、Ｆｃポリペプチドのクリアランスを低下させ、血清半減期を延長する。ヒトＦｃＲｎタンパク質は、主要組織適合（ＭＨＣ）クラスＩタンパク質と同様のサイズ約５０ｋＤａのタンパク質及びサイズ約１５ｋＤａのβ２－ミクログロブリンからなるヘテロ二量体である。
【0075】
本明細書で使用される、「ＦｃＲｎ結合部位」とは、ＦｃＲｎに結合するＦｃポリペプチドの領域を指す。ヒトＩｇＧでは、ＥＵインデックスでナンバリングされるＦｃＲｎ結合部位には、Ｌ２５１、Ｍ２５２、Ｉ２５３、Ｓ２５４、Ｒ２５５、Ｔ２５６、Ｍ４２８、Ｈ４３３、Ｎ４３４、Ｈ４３５、及びＹ４３６が含まれる。これらの位置は、配列番号１３０の２１～２６、１９８、及び２０３～２０６位に相当する。
【0076】
本明細書で使用される、「天然のＦｃＲｎ結合部位」とは、ＦｃＲｎに結合するポリペプチドの領域でありかつＦｃＲｎに結合する天然に存在するＦｃポリペプチドの領域と同じアミノ酸配列を有するＦｃポリペプチドの領域を指す。
【0077】
本明細書で使用される、「ＣＨ３ドメイン」及び「ＣＨ２ドメイン」という用語は、免疫グロブリン定常領域ドメインのポリペプチドを指す。本出願の目的で、ＣＨ３ドメインのポリペプチドとは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングされるほぼ３４１位からほぼ４４７位のアミノ酸のセグメントを指し、ＣＨ２ドメインのポリペプチドとは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングされるほぼ２３１位からほぼ３４０位のアミノ酸のセグメントを指し、ヒンジ領域の配列を含まない。ＣＨ２及びＣＨ３ドメインのポリペプチドはまた、ＩＭＧＴ（ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ）ナンバリングスキームによってもナンバリングされる場合があり、この場合、ＩＭＧＴ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｃｈａｒｔのナンバリング（ＩＭＧＴウェブサイト）によれば、ＣＨ２ドメインのナンバリングは１～１１０であり、ＣＨ３ドメインのナンバリングは１～１０７である。ＣＨ２及びＣＨ３ドメインは、免疫グロブリンのＦｃ領域の一部である。Ｆｃ領域とは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングされるほぼ２３１位からほぼ４４７位のアミノ酸のセグメントを指すが、本明細書で使用される場合、抗体のヒンジ領域の少なくとも一部を含むことができる。例示的なヒンジ領域の配列は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２７）である。
【0078】
ＣＨ３またはＣＨ２ドメインに関して使用される、「野生型」、「天然」、及び「天然に存在する」という用語は、天然に存在する配列を有するドメインを指す。
【0079】
本明細書で使用される、変異ポリペプチドまたは変異ポリヌクレオチドに関して使用される場合の「変異体」という用語は、「バリアント」と交換可能に使用される。所与の野生型ＣＨ３またはＣＨ２ドメインの参照配列に関するバリアントは、天然に存在する対立遺伝子バリアントを含むことができる。「非自然」発生ＣＨ３またはＣＨ２ドメインとは、細胞に天然には存在せず、天然のＣＨ３ドメインもしくはＣＨ２ドメインポリヌクレオチドまたはポリペプチドの、例えば、遺伝子操作技術または突然変異誘発技術を用いた遺伝子改変によって産生されるバリアントまたは変異体ドメインを指す。「バリアント」には、野生型に関して少なくとも１つのアミノ酸の変異を含む任意のドメインが含まれる。変異には、置換、挿入、及び欠失が含まれ得る。
【0080】
核酸またはタンパク質に関して使用される、「単離された」という用語は、該核酸またはタンパク質が、自然状態でそれが会合している他の細胞成分が本質的にないことを示す。それは均質状態であることが好ましい。純度及び均一性は、通常、分析化学技術、例えば、電気泳動（例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、高速液体クロマトグラフィー）を用いて測定される。いくつかの実施形態では、単離された核酸またはタンパク質は、少なくとも８５％の純度、少なくとも９０％の純度、少なくとも９５％の純度、または少なくとも９９％の純度である。
【0081】
「アミノ酸」という用語は、天然に存在するアミノ酸及び合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を指す。天然に存在するのは、遺伝暗号によってコードされるもの、ならびに後に修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸、及びＯ－ホスホセリンである。天然に存在するα－アミノ酸としては、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リジン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、及びそれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。天然に存在するα－アミノ酸の立体異性体としては、Ｄ－アラニン（Ｄ－Ａｌａ）、Ｄ－システイン（Ｄ－Ｃｙｓ）、Ｄ－アスパラギン酸（Ｄ－Ａｓｐ）、Ｄ－グルタミン酸（Ｄ－Ｇｌｕ）、Ｄ－フェニルアラニン（Ｄ－Ｐｈｅ）、Ｄ－ヒスチジン（Ｄ－Ｈｉｓ）、Ｄ－イソロイシン（Ｄ－Ｉｌｅ）、Ｄ－アルギニン（Ｄ－Ａｒｇ）、Ｄ－リジン（Ｄ－Ｌｙｓ）、Ｄ－ロイシン（Ｄ－Ｌｅｕ）、Ｄ－メチオニン（Ｄ－Ｍｅｔ）、Ｄ－アスパラギン（Ｄ－Ａｓｎ）、Ｄ－プロリン（Ｄ－Ｐｒｏ）、Ｄ－グルタミン（Ｄ－Ｇｌｎ）、Ｄ－セリン（Ｄ－Ｓｅｒ）、Ｄ－トレオニン（Ｄ－Ｔｈｒ）、Ｄ－バリン（Ｄ－Ｖａｌ）、Ｄ－トリプトファン（Ｄ－Ｔｒｐ）、Ｄ－チロシン（Ｄ－Ｔｙｒ）、及びそれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。「アミノ酸類似体」とは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造、すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基、及びＲ基に結合したα炭素を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。かかる類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。「アミノ酸模倣体」とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様に機能する化合物を指す。アミノ酸は、本明細書では、一般に知られている３文字記号またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎが推奨する１文字記号のいずれかで言及され得る。
【0082】
「ポリペプチド」及び「ペプチド」という用語は、本明細書では交換可能に使用され、一本の鎖におけるアミノ酸残基のポリマーを指す。該用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学的模倣体であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマー及び非天然に生じるアミノ酸ポリマーに適用される。アミノ酸ポリマーは、完全にＬ－アミノ酸、完全にＤ－アミノ酸、またはＬアミノ酸及びＤアミノ酸の混合物を含み得る。
【0083】
本明細書で使用される、「タンパク質」という用語は、ポリペプチドまたは一本鎖ポリペプチドの二量体（すなわち、２つ）もしくは多量体（すなわち、３つ以上）のいずれかを指す。タンパク質の一本鎖ポリペプチドは、共有結合、例えば、ジスルフィド結合によって、または非共有相互作用によって結合され得る。
【0084】
本明細書で使用される、「リンカー」という用語は、２つのペプチドまたはポリペプチド（例えば、ＦｃポリペプチドとｓｃＦｖ間）を連結して（例えば、共有結合的に連結して）、ペプチドまたはポリペプチドを接続または融合させる部分を指す。いくつかの実施形態では、リンカーは、化学結合を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のアミノ酸残基の長さを有するペプチドを含む。ペプチドまたはポリペプチドを接続または融合させるのに適したリンカーは、リンカーの特性、例えば、リンカーの長さ、疎水性、柔軟性、剛性、または開裂性に基づいて選択され得る。
【0085】
「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、交換可能に、任意の長さのヌクレオチド鎖を指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。該ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、及び／またはそれらの類似体、あるいは、ＤＮＡまたはＲＮＡポリメラーゼによって鎖の中に組み込むことができる任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド、例えば、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体を含み得る。本明細書で企図されるポリヌクレオチドの例としては、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖ならびに二本鎖ＤＮＡ及びＲＮＡの混合物を有するハイブリッド分子が挙げられる。
【0086】
「保存的置換」または「保存的変異」という用語は、あるアミノ酸を、同様の特徴を有するとして分類され得る別のアミノ酸で置換することになる変更を指す。このようにして定義される保存的アミノ酸群の分類の例としては、Ｇｌｕ（グルタミン酸またはＥ）、Ａｓｐ（アスパラギン酸またはＤ）、Ａｓｎ（アスパラギンまたはＮ）、Ｇｌｎ（グルタミンまたはＱ）、Ｌｙｓ（リジンまたはＫ）、Ａｒｇ（アルギニンまたはＲ）、及びＨｉｓ（ヒスチジンまたはＨ）を含めた「荷電／極性群」、Ｐｈｅ（フェニルアラニンまたはＦ）、Ｔｙｒ（チロシンまたはＹ）、Ｔｒｐ（トリプトファンまたはＷ）、及び（ヒスチジンまたはＨ）を含めた「芳香族群」、ならびにＧｌｙ（グリシンまたはＧ）、Ａｌａ（アラニンまたはＡ）、Ｖａｌ（バリンまたはＶ）、Ｌｅｕ（ロイシンまたはＬ）、Ｉｌｅ（イソロイシンまたはＩ）、Ｍｅｔ（メチオニンまたはＭ）、Ｓｅｒ（セリンまたはＳ）、Ｔｈｒ（トレオニンまたはＴ）、及びＣｙｓ（システインまたはＣ）を含めた「脂肪族群」を挙げることができる。各群内で、下位群もまた識別され得る。例えば、荷電または極性アミノ酸の群は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＨｉｓを含む「正に荷電した下位群」、Ｇｌｕ及びＡｓｐを含む「負に荷電した下位群」、ならびにＡｓｎ及びＧｌｎを含む「極性下位群」を含めた下位群に分割され得る。別の例では、該芳香族または環状群は、Ｐｒｏ、Ｈｉｓ、及びＴｒｐを含む「窒素環下位群」、ならびにＰｈｅ及びＴｙｒを含む「フェニル下位群」を含めた下位群に分割され得る。別のさらなる例では、該脂肪族群は、下位群、例えば、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｇｌｙ、及びＡｌａを含む「脂肪族非極性下位群」ならびにＭｅｔ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＣｙｓを含む「脂肪族微極性下位群」に分割され得る。保存的変異の分類の例としては、上記下位群内のアミノ酸、例えば、限定されないが、正の荷電が維持され得るようにＬｙｓをＡｒｇで、またはその逆、負の荷電が維持され得るように、ＧｌｕをＡｓｐで、またはその逆、遊離の－ＯＨが維持され得るように、ＳｅｒをＴｈｒで、またはその逆、及び遊離の－ＮＨ２が維持され得るように、ＧｌｎをＡｓｎで、またはその逆のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、疎水性アミノ酸は、天然に存在する疎水性アミノ酸と、例えば、活性部位で置き換わり、疎水性を保存する。
【0087】
２つ以上のポリペプチド配列との関連で「同一」または「同一性」パーセントという用語は、同じであるか、または特定のパーセンテージのアミノ酸残基を有する、例えば、比較ウィンドウ上で最大の一致が得られるように比較及び整列させた場合に特定の領域にわたって、または指定された領域にわたって、配列比較アルゴリズムを用いて、または手作業でのアラインメントと目視検査によって測定して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、もしくは少なくとも９５％、またはそれ以上同一である、２つ以上の配列または部分列を指す。
【0088】
ポリペプチドの配列比較の場合、通常は１つのアミノ酸配列が参照配列の役割を果たし、それに対して候補配列が比較される。アラインメントは、当業者に利用可能な様々な方法、例えば、視覚によるアラインメントを用いて、または既知のアルゴリズムを用いた公開されているソフトウェアを用いて行い、最大のアラインメントを達成することができる。かかるプログラムとしては、ＢＬＡＳＴプログラム、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．）、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）が挙げられる。最大のアラインメントを達成するためにアラインメントに使用されるパラメータは、当業者によって決定され得る。本出願の目的で、ポリペプチド配列の配列比較に関しては、２種のタンパク質配列をデフォルトのパラメータで整列させるためのＢＬＡＳＴＰアルゴリズム標準タンパク質ＢＬＡＳＴが使用される。
【0089】
ポリペプチド配列における所与のアミノ酸残基の特定との関連で使用される場合の「～に対応する」、「～に準拠して決められる」、または「～に準拠してナンバリングされる」という表現は、該所与のアミノ酸配列が最大に整列され、当該参照配列と比較される場合の特定の参照配列の残基の位置を指す。従って、例えば、修飾Ｆｃポリペプチドにおけるアミノ酸残基は、該残基が配列番号１３０に対して最適に整列された際に配列番号１３０のアミノ酸と一致した場合に、配列番号１３０のアミノ酸「に対応する」。参照配列に整列されるポリペプチドは、該参照配列と同じ長さである必要はない。
【0090】
本明細書において交換可能に使用される、「対象」、「個体」、及び「患者」という用語は、哺乳類を指し、これに含まれるのは、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、ラット、マウス、及びモルモット）、ウサギ、ウシ、ブタ、ウマ、及び他の哺乳類種であるが、これらに限定されない。１つの実施形態では、該患者はヒトである。
【0091】
「処置」、「処置すること」等の用語は、本明細書では、一般に所望の薬理作用及び／または生理作用を得ることを意味するために使用される。「処置すること」または「処置」は、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病もしくは本明細書に記載の別の神経変性疾患）の処置または改善における成功の任意の徴候を指す場合があり、これに含まれるのは、任意の客観的または主観的なパラメータ、例えば、軽減、緩和、患者生存率の改善、生存期間もしくは生存率の増加、症状の軽減もしくは患者が疾患をより許容できるようにすること、悪化もしくは低下速度の減速、または患者の心身の健康の改善である。症状の処置または改善は、客観的または主観的パラメータに基づくことができる。処置の効果は、その処置を受けていない個体もしくは個体のプールと、または、処置前もしくは処置中の異なる時点での同じ患者と比較することができる。
【0092】
「医薬的に許容される賦形剤」という用語は、ヒトまたは動物での使用に対して生物学的に、または薬理学的に適合する非活性薬剤成分、例えば、限定されないが、緩衝剤、担体、または保存料を指す。
【0093】
本明細書で使用される、薬剤（例えば、本明細書に記載のタンパク質のいずれか）の「治療量」または「治療有効量」とは、対象における疾患を処置する該薬剤の量である。
【0094】
「投与する」という用語は、所望の生物作用点に薬剤、化合物、または組成物を送達する方法を指す。これらの方法としては、局所送達、非経口送達、静脈内送達、皮内送達、筋肉内送達、髄腔内送達、結腸送達、直腸送達、または腹腔内送達が挙げられるがこれらに限定されない。１つの実施形態では、本明細書に記載のタンパク質は、静脈内投与される。
【0095】
ＩＩＩ．抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質
１つの態様では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ及びヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶの両方に特異的に結合する能力を有する二重特異性タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質のＦｃポリペプチドの一方または両方は、修飾Ｆｃポリペプチド（例えば、ＴｆＲ結合を促進する及び／またはＦｃポリペプチドのヘテロ二量体化を向上するように修飾されたもの）である。
１つの態様では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ及びヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶの両方に特異的に結合する能力を有する二重特異性タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質のＦｃポリペプチドの一方または両方は、修飾Ｆｃポリペプチド（例えば、ＴｆＲ結合を促進する及び／またはＦｃポリペプチドのヘテロ二量体化を向上するように修飾されたもの）である。
【0096】
Ｆａｂ－Ｆｃポリペプチド／ｓｃＦｖ－Ｆｃポリペプチド
いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、Ｆａｂ及びｓｃＦｖの一部分と融合しているＦｃポリペプチドを含む。かかる二重特異性タンパク質の概略図を図１Ａ及び１Ｂに示す。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために該（ａ）に記載のＦｄ部分と対になる軽鎖ポリペプチド、
ここで、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する、または、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。いくつかの実施形態では、該タンパク質のＦａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する。他の実施形態では、該タンパク質のＦａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。
いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、Ｆａｂ及びｓｃＦｖの一部分と融合しているＦｃポリペプチドを含む。かかる二重特異性タンパク質の概略図を図１Ａ及び１Ｂに示す。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために該（ａ）に記載のＦｄ部分と対になる軽鎖ポリペプチド、
ここで、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する、または、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。いくつかの実施形態では、該タンパク質のＦａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する。他の実施形態では、該タンパク質のＦａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。
【0097】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0098】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。
【0099】
該Ｆａｂは、該第一のＦｃポリペプチドのＮ末端と融合しているＦａｂのＦｄ部分の軽鎖との対合から形成される。いくつかの実施形態では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに特異的に結合するＦａｂは、配列番号１０８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有するＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに特異的に結合するＦａｂは、配列番号１０９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有するＶＨ領域を含む。
【0100】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質の第二のＦｃポリペプチドは、Ｎ末端でｓｃＦｖ断片と融合している。いくつかの実施形態では、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｎ末端で該ｓｃＦｖ断片と第一のリンカーを介して融合している。いくつかの実施形態では、該第一のリンカーは、約１～約５０アミノ酸、例えば、約１～約４０、約１～約３０、約１～約２５、約１～約２０、約１～約１５、約１～約１０、約２～約４０、約２～約３０、約２～約２０、約２～約１０、約５～約４０、約５～約３０、約５～約２５、または約５～約２０アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態では、該第一のリンカーは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長を有する。様々なリンカーが本明細書でさらに詳細に記載されている。いくつかの実施形態では、該第一のリンカーは、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む。
【0101】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質のｓｃＦｖは、第二のリンカーを介して接続されているＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域の配向は、（Ｎ末端）－ＶＬ領域－ＶＨ領域－（Ｃ末端）であり、該ｓｃＦｖのＣ末端は、該ＦｃポリペプチドのＮ末端に該第一のリンカーを介して結合される。他の実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域の配向は、（Ｎ末端）－ＶＨ領域－ＶＬ領域－（Ｃ末端）であり、該ｓｃＦｖのＣ末端は、該ＦｃポリペプチドのＮ末端に該第一のリンカーを介して結合される。
【0102】
いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域は、第二のリンカーを介して接続される。いくつかの実施形態では、該第二のリンカーは、約１０～約２５アミノ酸、例えば、約１０～約２０、約１２～約２５、約１２～約２０、約１４～約２５、または約１４～約２０アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態では、該第二のリンカーは、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態では、該第二のリンカーは、柔軟性リンカーを含む。様々なリンカーが本明細書でさらに詳細に記載されている。いくつかの実施形態では、該第二のリンカーは、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む。
【0103】
いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域は、両方ともＣｙｓ置換を含む。いくつかの実施形態では、該ＶＬ領域及び該ＶＨ領域におけるＣｙｓ置換は、ジスルフィド結合を形成して、該ｓｃＦｖの構造の安定化に役立ち得る。いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖは、Ｋａｂａｔの可変ドメインナンバリングに従って、ＶＨ４４及びＶＬ１００位の各々でシステインを含む。いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖは、ＶＨ４４及びＶＬ１００位のシステイン間にジスルフィド結合を含む。
【0104】
例えば、抗ＨＥＲ２ＤＩＩのＶＬ領域は、配列番号１１０の１００位でＧｌｎからＣｙｓへの置換を有し得る。特定の実施形態では、該Ｃｙｓ置換を含む抗ＨＥＲ２ＤＩＩのＶＬ領域は、配列番号１１４の配列を有し得る。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＬ領域は、配列番号１１１の１００位でＧｌｎからＣｙｓへの置換を有し得る。特定の実施形態では、該Ｃｙｓ置換を含む抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＬ領域は、配列番号１１５の配列を有し得る。
【0105】
例えば、抗ＨＥＲ２ＤＩＩのＶＨ領域は、配列番号１０８の４４位でＧｌｙからＣｙｓへの置換を有し得る。特定の実施形態では、該Ｃｙｓ置換を含む抗ＨＥＲ２ＤＩＩのＶＨ領域は、配列番号１１２の配列を有し得る。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＨ領域は、配列番号１０９の４４位でＧｌｙからＣｙｓへの置換を有し得る。特定の実施形態では、該Ｃｙｓ置換を含む抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＨ領域は、配列番号１１３の配列を有し得る。
【0106】
いくつかの実施形態では、「Ｆａｂ－Ｆｃポリペプチド／ｓｃＦｖ－Ｆｃポリペプチド」の構造を有する二重特異性タンパク質の（ａ）部分では、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｎ末端で該ＦａｂのＦｄ部分とヒンジ領域または部分的なヒンジ領域を介して融合している。いくつかの実施形態では、「Ｆａｂ－Ｆｃポリペプチド／ｓｃＦｖ－Ｆｃポリペプチド」の構造を有する二重特異性タンパク質の（ｂ）部分では、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｎ末端で該ｓｃＦｖとヒンジ領域または部分的なヒンジ領域を介して融合している。例示的なヒンジ領域の配列は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２７）である。部分的なヒンジ領域とは、配列番号１２７の配列の一部分、例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２８）の配列を有する部分的なヒンジ領域を指す。
【0107】
さらなる実施形態では、「Ｆａｂ－Ｆｃポリペプチド／ｓｃＦｖ－Ｆｃポリペプチド」の構造を有する二重特異性タンパク質の（ｂ）部分では、ヒンジ領域（例えば、配列番号１２７）または部分的なヒンジ領域（例えば、配列番号１２８）は、該第二のＦｃポリペプチドのＮ末端で融合している。ある特定の実施形態では、ヒンジ領域が該第二のＦｃポリペプチドのＮ末端で融合している場合、該ヒンジ領域は、配列番号１２７の配列に対して、５位でＣｙｓからＳｅｒへの変異を含み得る。例えば、ＣｙｓからＳｅｒへの変異を有するヒンジ領域は、ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２９）の配列を有し得る。
【0108】
「Ｆａｂ－Ｆｃポリペプチド／ｓｃＦｖ－Ｆｃポリペプチド」の構造を有する二重特異性タンパク質では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、トランスフェリン受容体に特異的に結合することができる（例えば、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド）。異なるＦｃポリペプチド及びその修飾を、本明細書でさらに詳細に記載する。いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び該第二のＦｃポリペプチドは各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含み得る。例えば、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含むことができる。別の例では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含むことができる。さらに、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる、すなわち、ＴｆＲの結合によりエフェクター機能を低下させる修飾を含み得る。例えば、該ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾は、ＥＵナンバリングに従って、（ｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換または（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換ならびにＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換である。
【0109】
「Ｆａｂ－Ｆｃポリペプチド／ｓｃＦｖ－Ｆｃポリペプチド」の構造を有する二重特異性タンパク質の特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド（または該第二のＦｃポリペプチド）は、ＥＵナンバリングに従って、Ｔ３６６Ｗの置換、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含む）、ならびに任意に、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含むＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、該第二のＦｃポリペプチド（または該第一のＦｃポリペプチド）は、ＥＵナンバリングに従って、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換ならびに任意に、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。例えば、該第一のＦｃポリペプチド（または該第二のＦｃポリペプチド）は、配列番号１３７及び１８６～１９６のいずれか１つの配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチド（または該第一のＦｃポリペプチド）は、配列番号１３３及び１８３～１８５のいずれか１つの配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含むことができる。
【0110】
ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、かつＥＵナンバリングに従って、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含み（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含み）、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａの置換もＬ３２５Ａの置換も（または、該第一のＦｃポリペプチドに存在する場合は、Ｐ３２９Ｇの置換もＰ３２９Ｓの置換も）含まない。ある特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａの置換もＬ３２５Ａの置換も（または、該第二のＦｃポリペプチドに存在する場合は、Ｐ３２９Ｇの置換もＰ３２９Ｓの置換も）含まず、該第二のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含む）。
【0111】
例示的な二重特異性「Ｆａｂ－Ｆｃポリペプチド／ｓｃＦｖ－Ｆｃポリペプチド」タンパク質
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために該（ａ）に記載のＦｄ部分と対になる軽鎖ポリペプチド。
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために該（ａ）に記載のＦｄ部分と対になる軽鎖ポリペプチド。
【0112】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0113】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0114】
１つの例では、（ａ）は、配列番号１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１５９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0115】
別の例では、（ａ）は、配列番号１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号２１または２２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号２０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号４または５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0116】
さらに別の例では、（ａ）は、配列番号１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号２３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。さらに別の例では、（ａ）は、配列番号５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号２４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。これらの例の両方において、該ｓｃＦｖ部分は、ＧｌｎからＣｙｓへの置換を有する抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＬ領域（配列番号１１５）及びＧｌｙからＣｙｓへの置換を有する抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＨ領域（配列番号１１３）を含む。また、両構築物において、（ｂ）のヒンジ領域は、５位でＣｙｓからＳｅｒへの変異を有する（ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２９））。
【0117】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために該（ａ）に記載のＦｄ部分と対になる軽鎖ポリペプチド。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために該（ａ）に記載のＦｄ部分と対になる軽鎖ポリペプチド。
【0118】
１つの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0119】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0120】
１つの例では、（ａ）は、配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１５、１６、または１７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号９または１０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１１または１２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0121】
上記二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕを含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕを含む。ある特定の実施形態では、該タンパク質は、以下に記載のｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを含む。
【0122】
上記二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、そのＣ末端のリジン（例えば、ＥＵナンバリングに従って、該Ｆｃポリペプチドの４４７位のＬｙｓ残基）が除去され得る。いくつかの実施形態では、該ＦｃポリペプチドのＣ末端のリジンの除去により、該二重特異性タンパク質の安定性が改善され得る。
【0123】
ｍＡｂ／ＨＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ
いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩまたはＩＶに特異的に結合するＦａｂと各Ｎ末端で融合しているＦｃポリペプチドを含み、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩまたはＩＶに特異的に結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩまたはＩＶに特異的に結合するＦａｂと各Ｎ末端で融合しているＦｃポリペプチドを含み、一方または両方のＦａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩまたはＩＶに特異的に結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。かかる二重特異性タンパク質の概略図を図２Ａ～２Ｄに示す。いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は以下を含む：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、ｓｃＦｖとＣ末端で融合しているか、または
該（ａ）及び／または（ｂ）におけるＦｄ部分は、ｓｃＦｖとＮ末端で融合しているか、または
該第一のＦｃポリペプチドもしくは該第二のＦｃポリペプチドは、ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、該（ａ）もしくは（ｂ）におけるＦｄ部分は、ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、
該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する、または、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。いくつかの実施形態では、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する。他の実施形態では、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。
いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩまたはＩＶに特異的に結合するＦａｂと各Ｎ末端で融合しているＦｃポリペプチドを含み、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩまたはＩＶに特異的に結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩまたはＩＶに特異的に結合するＦａｂと各Ｎ末端で融合しているＦｃポリペプチドを含み、一方または両方のＦａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩまたはＩＶに特異的に結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。かかる二重特異性タンパク質の概略図を図２Ａ～２Ｄに示す。いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は以下を含む：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、ｓｃＦｖとＣ末端で融合しているか、または
該（ａ）及び／または（ｂ）におけるＦｄ部分は、ｓｃＦｖとＮ末端で融合しているか、または
該第一のＦｃポリペプチドもしくは該第二のＦｃポリペプチドは、ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、該（ａ）もしくは（ｂ）におけるＦｄ部分は、ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、
該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する、または、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。いくつかの実施形態では、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する。他の実施形態では、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。
【0124】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0125】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。
【0126】
いくつかの実施形態では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに特異的に結合するＦａｂは、配列番号１０８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有するＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに特異的に結合するＦａｂは、配列番号１０９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有するＶＨ領域を含む。
【0127】
ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合している。特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合している。特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び該第二のＦｃポリペプチドの各々は、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合している。ある特定の実施形態では、該（ａ）及び／または（ｂ）におけるＦｄ部分は、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合している。特定の実施形態では、該（ａ）または（ｂ）におけるＦｄ部分は、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合している。特定の実施形態では、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合している。さらなる実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、該（ａ）または（ｂ）におけるＦｄ部分は、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
【0128】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び該第二のＦｃポリペプチドが該ｓｃＦｖと各々Ｃ末端で融合している場合、該２つのｓｃＦｖは、同一の配列を含み得る。いくつかの実施形態では、該（ａ）におけるＦｄ部分及び該（ｂ）におけるＦｄ部分が該ｓｃＦｖと各々Ｎ末端で融合している場合、該２つのｓｃＦｖは、同一の配列を含み得る。いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドが、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、該（ａ）または（ｂ）におけるＦｄ部分が、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合している場合、該２つのｓｃＦｖは、同一の配列を含み得る。
【0129】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、Ｃ末端で該ｓｃＦｖと第一のリンカーを介して融合している。他の実施形態では、該（ａ）におけるＦｄ部分及び／または該（ｂ）におけるＦｄ部分は、Ｎ末端で該ｓｃＦｖと第一のリンカーを介して融合している。いくつかの実施形態では、該第一のリンカーは、約１～約５０アミノ酸、例えば、約１～約４０、約１～約３０、約１～約２５、約１～約２０、約１～約１５、約１～約１０、約２～約４０、約２～約３０、約２～約２０、約２～約１０、約５～約４０、約５～約３０、約５～約２５、または約５～約２０アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態では、該第一のリンカーは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長を有する。様々なリンカーが本明細書でさらに詳細に記載されている。ある特定の実施形態では、該第一のリンカーは、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む。
【0130】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質のｓｃＦｖは、第二のリンカーを介して接続されているＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域の配向は、（Ｎ末端）－ＶＬ領域－ＶＨ領域－（Ｃ末端）であり、該ｓｃＦｖのＣ末端は、該（ａ）または（ｂ）におけるＦｄ部分のＮ末端に該第一のリンカーを介して結合される。他の実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域の配向は、（Ｎ末端）－ＶＨ領域－ＶＬ領域－（Ｃ末端）であり、該ｓｃＦｖのＣ末端は、該（ａ）または（ｂ）におけるＦｄ部分のＮ末端に該第一のリンカーを介して結合される。いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域の配向は、（Ｎ末端）－ＶＬ領域－ＶＨ領域－（Ｃ末端）であり、該ｓｃＦｖのＮ末端は、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドのＣ末端に該第一のリンカーを介して結合される。他の実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域の配向は、（Ｎ末端）－ＶＨ領域－ＶＬ領域－（Ｃ末端）であり、該ｓｃＦｖのＮ末端は、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドのＣ末端に該第一のリンカーを介して結合される。
【0131】
いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域を接続する第二のリンカーは、約１０～約２５アミノ酸、例えば、約１０～約２０、約１２～約２５、約１２～約２０、約１４～約２５、または約１４～約２０アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態では、該第二のリンカーは、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態では、該第二のリンカーは、柔軟性リンカーを含む。様々なリンカーが本明細書でさらに詳細に記載されている。いくつかの実施形態では、該第二のリンカーは、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む。
【0132】
いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域は、両方ともＣｙｓ置換を含む。いくつかの実施形態では、該ＶＬ領域及び該ＶＨ領域におけるＣｙｓ置換は、ジスルフィド結合を形成して、該ｓｃＦｖの構造の安定化に役立ち得る。いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖは、Ｋａｂａｔの可変ドメインナンバリングに従って、ＶＨ４４及びＶＬ１００位の各々でシステインを含む。いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖは、ＶＨ４４及びＶＬ１００位のシステイン間にジスルフィド結合を含む。
【0133】
例えば、抗ＨＥＲ２ＤＩＩのＶＬ領域は、配列番号１１０の１００位でＧｌｎからＣｙｓへの置換を有し得る。特定の実施形態では、該Ｃｙｓ置換を含む抗ＨＥＲ２ＤＩＩのＶＬ領域は、配列番号１１４の配列を有し得る。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＬ領域は、配列番号１１１の１００位でＧｌｎからＣｙｓへの置換を有し得る。特定の実施形態では、該Ｃｙｓ置換を含む抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＬ領域は、配列番号１１５の配列を有し得る。
【0134】
例えば、抗ＨＥＲ２ＤＩＩのＶＨ領域は、配列番号１０８の４４位でＧｌｙからＣｙｓへの置換を有し得る。特定の実施形態では、該Ｃｙｓ置換を含む抗ＨＥＲ２ＤＩＩのＶＨ領域は、配列番号１１２の配列を有し得る。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＨ領域は、配列番号１０９の４４位でＧｌｙからＣｙｓへの置換を有し得る。特定の実施形態では、該Ｃｙｓ置換を含む抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＨ領域は、配列番号１１３の配列を有し得る。
【0135】
いくつかの実施形態では、「ｍＡｂ／ＨＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」の構造を有する二重特異性タンパク質の（ａ）部分では、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｎ末端で該ＦａｂのＦｄ部分とヒンジ領域または部分的なヒンジ領域を介して融合している。いくつかの実施形態では、「ｍＡｂ／ＨＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」の構造を有する二重特異性タンパク質の（ｂ）部分では、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｎ末端で該ＦａｂのＦｄ部分とヒンジ領域または部分的なヒンジ領域を介して融合している。例示的なヒンジ領域の配列は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２７）である。部分的なヒンジ領域とは、配列番号１２７の配列の一部分、例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２８）の配列を有する部分的なヒンジ領域を指す。
【0136】
「ｍＡｂ／ＨＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」の構造を有する二重特異性タンパク質では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、トランスフェリン受容体に特異的に結合することができる（例えば、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド）。異なるＦｃポリペプチド及びその修飾を、本明細書でさらに詳細に記載する。いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び該第二のＦｃポリペプチドは各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含み得る。例えば、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含むことができる。別の例では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含むことができる。さらに、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる、すなわち、ＴｆＲの結合によりエフェクター機能を低下させる修飾を含み得る。例えば、該ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾は、ＥＵナンバリングに従って、（ｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換または（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換ならびにＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換である。
【0137】
「ｍＡｂ／ＨＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」の構造を有する二重特異性タンパク質の特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド（または該第二のＦｃポリペプチド）は、ＥＵナンバリングに従って、Ｔ３６６Ｗの置換、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含む）、ならびに任意に、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含むＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、該第二のＦｃポリペプチド（または該第一のＦｃポリペプチド）は、ＥＵナンバリングに従って、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換ならびに任意に、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。例えば、該第一のＦｃポリペプチド（または該第二のＦｃポリペプチド）は、配列番号１３７及び１８６～１９６のいずれか１つの配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチド（または該第一のＦｃポリペプチド）は、配列番号１３３及び１８３～１８５のいずれか１つの配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含むことができる。
【0138】
ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、かつＥＵナンバリングに従って、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含み（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含み）、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａの置換もＬ３２５Ａの置換も（または、該第一のＦｃポリペプチドに存在する場合は、Ｐ３２９Ｇの置換もＰ３２９Ｓの置換も）含まない。ある特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａの置換もＬ３２５Ａの置換も（または、該第二のＦｃポリペプチドに存在する場合は、Ｐ３２９Ｇの置換もＰ３２９Ｓの置換も）含まず、該第二のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含む）。
【0139】
例示的な二重特異性「ｍＡｂ／ＨＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」タンパク質
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
【0140】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0141】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0142】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号２７または２８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号４または５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号２９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号３０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。さらに別の例では、（ａ）は、配列番号３１または３２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0143】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
【0144】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0145】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0146】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号３３または３４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号９または１０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号３５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号３６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。さらに別の例では、（ａ）は、配列番号３７、３８、または３９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0147】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該第一のＦｃポリペプチド及び該第二のＦｃポリペプチドの各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該第一のＦｃポリペプチド及び該第二のＦｃポリペプチドの各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
【0148】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0149】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0150】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号２７または２８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３１または３２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号２９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0151】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該第一のＦｃポリペプチド及び該第二のＦｃポリペプチドの各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該第一のＦｃポリペプチド及び該第二のＦｃポリペプチドの各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
【0152】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0153】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0154】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号３３または３４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３７、３８、または３９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号３５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0155】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）または（ｂ）におけるＦｄ部分は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）または（ｂ）におけるＦｄ部分は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
【0156】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0157】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0158】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号４０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号４または５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号４１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号４２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。さらに別の例では、（ａ）は、配列番号４３または４４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0159】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）または（ｂ）におけるＦｄ部分は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）または（ｂ）におけるＦｄ部分は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
【0160】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0161】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0162】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１６０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１６１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１６２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１８０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１８０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１８２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を
含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１８２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１８２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0163】
該二重特異性タンパク質の別の例では、（ａ）は、配列番号４５または４６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号９または１０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号４７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号４８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。さらに別の例では、（ａ）は、配列番号４９または５０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0164】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
【0165】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0166】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0167】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号４０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号４３または４４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号４１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号４２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0168】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
【0169】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0170】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0171】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号４５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号４９または５０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号４７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号４８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0172】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、該（ａ）または（ｂ）におけるＦｄ部分は、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、該（ａ）または（ｂ）におけるＦｄ部分は、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
【0173】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0174】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0175】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号４０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３１または３２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号４１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号４２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号２９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号４３または４４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号２７または２８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0176】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、該（ａ）または（ｂ）におけるＦｄ部分は、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、該（ａ）または（ｂ）におけるＦｄ部分は、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
【0177】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0178】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0179】
１つの例では、（ａ）は、配列番号４５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３７、３８、または３９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号４７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号４８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。さらに別の例では、（ａ）は、配列番号４９または５０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３３または３４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0180】
上記二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕを含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕを含む。ある特定の実施形態では、該タンパク質は、以下に記載のｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを含む。
【0181】
上記二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、そのＣ末端のリジン（例えば、ＥＵナンバリングに従って、該Ｆｃポリペプチドの４４７位のＬｙｓ残基）が除去され得る。いくつかの実施形態では、該ＦｃポリペプチドのＣ末端のリジンの除去により、該二重特異性タンパク質の安定性が改善され得る。
【0182】
ｍＡｂ／ＬＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ
いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩまたはＩＶに特異的に結合するｓｃＦｖとＮ末端及び／またはＣ末端で融合している軽鎖を含む。かかる二重特異性タンパク質の概略図を図３Ａ～３Ｄに示す。いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は以下を含む：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該軽鎖ポリペプチドの一方もしくは両方は、ｓｃＦｖとＮ末端で融合しているか、または
該軽鎖ポリペプチドの一方もしくは両方は、ｓｃＦｖとＣ末端で融合しているか、または
第一の軽鎖ポリペプチドは、ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、第二の軽鎖ポリペプチドは、ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、
該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する、または、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。
いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩまたはＩＶに特異的に結合するｓｃＦｖとＮ末端及び／またはＣ末端で融合している軽鎖を含む。かかる二重特異性タンパク質の概略図を図３Ａ～３Ｄに示す。いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は以下を含む：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該軽鎖ポリペプチドの一方もしくは両方は、ｓｃＦｖとＮ末端で融合しているか、または
該軽鎖ポリペプチドの一方もしくは両方は、ｓｃＦｖとＣ末端で融合しているか、または
第一の軽鎖ポリペプチドは、ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、第二の軽鎖ポリペプチドは、ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、
該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する、または、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ該ｓｃＦｖは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。
【0183】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0184】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。
【0185】
いくつかの実施形態では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに特異的に結合するＦａｂは、配列番号１０８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有するＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに特異的に結合するＦａｂは、配列番号１０９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有するＶＨ領域を含む。
【0186】
ある特定の実施形態では、該軽鎖ポリペプチドの一方または両方は、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合している。特定の実施形態では、該軽鎖ポリペプチドの一方は、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合している。特定の実施形態では、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合している。ある特定の実施形態では、該軽鎖ポリペプチドの一方または両方は、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合している。特定の実施形態では、該軽鎖ポリペプチドの一方は、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合している。特定の実施形態では、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合している。さらなる実施形態では、第一の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、第二の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
【0187】
いくつかの実施形態では、軽鎖ポリペプチドの両方が各々、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合している場合、該２つのｓｃＦｖは、同一の配列を含み得る。いくつかの実施形態では、軽鎖ポリペプチドの両方が各々、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合している場合、該２つのｓｃＦｖは、同一の配列を含み得る。
【0188】
いくつかの実施形態では、該軽鎖ポリペプチドの一方または両方は、該ｓｃＦｖと第一のリンカーを介して融合している。いくつかの実施形態では、該第一のリンカーは、約１～約５０アミノ酸、例えば、約１～約４０、約１～約３０、約１～約２５、約１～約２０、約１～約１５、約１～約１０、約２～約４０、約２～約３０、約２～約２０、約２～約１０、約５～約４０、約５～約３０、約５～約２５、または約５～約２０アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態では、該第一のリンカーは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長を有する。様々なリンカーが本明細書でさらに詳細に記載されている。ある特定の実施形態では、該第一のリンカーは、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む。
【0189】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質のｓｃＦｖは、第二のリンカーを介して接続されているＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域の配向は、（Ｎ末端）－ＶＬ領域－ＶＨ領域－（Ｃ末端）であり、該ｓｃＦｖのＣ末端は、該軽鎖ポリペプチドのＮ末端に該第一のリンカーを介して結合される。他の実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域の配向は、（Ｎ末端）－ＶＨ領域－ＶＬ領域－（Ｃ末端）であり、該ｓｃＦｖのＣ末端は、該軽鎖ポリペプチドのＮ末端に該第一のリンカーを介して結合される。いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域の配向は、（Ｎ末端）－ＶＬ領域－ＶＨ領域－（Ｃ末端）であり、該ｓｃＦｖのＮ末端は、該軽鎖ポリペプチドのＣ末端に該第一のリンカーを介して結合される。他の実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域の配向は、（Ｎ末端）－ＶＨ領域－ＶＬ領域－（Ｃ末端）であり、該ｓｃＦｖのＮ末端は、該軽鎖ポリペプチドのＣ末端に該第一のリンカーを介して結合される。
【0190】
いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域を接続する第二のリンカーは、約１０～約２５アミノ酸、例えば、約１０～約２０、約１２～約２５、約１２～約２０、約１４～約２５、または約１４～約２０アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態では、該第二のリンカーは、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態では、該第二のリンカーは、柔軟性リンカーを含む。様々なリンカーが本明細書でさらに詳細に記載されている。いくつかの実施形態では、該第二のリンカーは、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む。
【0191】
いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖのＶＬ領域及びＶＨ領域は、両方ともＣｙｓ置換を含む。いくつかの実施形態では、該ＶＬ領域及び該ＶＨ領域におけるＣｙｓ置換は、ジスルフィド結合を形成して、該ｓｃＦｖの構造の安定化に役立ち得る。いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖは、Ｋａｂａｔの可変ドメインナンバリングに従って、ＶＨ４４及びＶＬ１００位の各々でシステインを含む。いくつかの実施形態では、該ｓｃＦｖは、ＶＨ４４及びＶＬ１００位のシステイン間にジスルフィド結合を含む。
【0192】
例えば、抗ＨＥＲ２ＤＩＩのＶＬ領域は、配列番号１１０の１００位でＧｌｎからＣｙｓへの置換を有し得る。特定の実施形態では、該Ｃｙｓ置換を含む抗ＨＥＲ２ＤＩＩのＶＬ領域は、配列番号１１４の配列を有し得る。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＬ領域は、配列番号１１１の１００位でＧｌｎからＣｙｓへの置換を有し得る。特定の実施形態では、該Ｃｙｓ置換を含む抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＬ領域は、配列番号１１５の配列を有し得る。
【0193】
例えば、抗ＨＥＲ２ＤＩＩのＶＨ領域は、配列番号１０８の４４位でＧｌｙからＣｙｓへの置換を有し得る。特定の実施形態では、該Ｃｙｓ置換を含む抗ＨＥＲ２ＤＩＩのＶＨ領域は、配列番号１１２の配列を有し得る。いくつかの実施形態では、抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＨ領域は、配列番号１０９の４４位でＧｌｙからＣｙｓへの置換を有し得る。特定の実施形態では、該Ｃｙｓ置換を含む抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＨ領域は、配列番号１１３の配列を有し得る。
【0194】
いくつかの実施形態では、「ｍＡｂ／ＬＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」の構造を有する二重特異性タンパク質の（ａ）部分では、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｎ末端で該ＦａｂのＦｄ部分とヒンジ領域または部分的なヒンジ領域を介して融合している。いくつかの実施形態では、「ｍＡｂ／ＬＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」の構造を有する二重特異性タンパク質の（ｂ）部分では、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｎ末端で該ＦａｂのＦｄ部分とヒンジ領域または部分的なヒンジ領域を介して融合している。例示的なヒンジ領域の配列は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２７）である。部分的なヒンジ領域とは、配列番号１２７の配列の一部分、例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２８）の配列を有する部分的なヒンジ領域を指す。
【0195】
「ｍＡｂ／ＬＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」の構造を有する二重特異性タンパク質では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、トランスフェリン受容体に特異的に結合することができる（例えば、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド）。異なるＦｃポリペプチド及びその修飾を、本明細書でさらに詳細に記載する。いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び該第二のＦｃポリペプチドは各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含み得る。例えば、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含むことができる。別の例では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含むことができる。さらに、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる、すなわち、ＴｆＲの結合によりエフェクター機能を低下させる修飾を含み得る。例えば、該ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾は、ＥＵナンバリングに従って、（ｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換または（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換ならびにＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換である。
【0196】
「ｍＡｂ／ＨＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」の構造を有する二重特異性タンパク質の特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド（または該第二のＦｃポリペプチド）は、ＥＵナンバリングに従って、Ｔ３６６Ｗの置換、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含む）、ならびに任意に、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含むＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、該第二のＦｃポリペプチド（または該第一のＦｃポリペプチド）は、ＥＵナンバリングに従って、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換ならびに任意に、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。例えば、該第一のＦｃポリペプチド（または該第二のＦｃポリペプチド）は、配列番号１３７及び１８６～１９６のいずれか１つの配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチド（または該第一のＦｃポリペプチド）は、配列番号１３３及び１８３～１８５のいずれか１つの配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含むことができる。
【0197】
ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、かつＥＵナンバリングに従って、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含み（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含み）、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａの置換もＬ３２５Ａの置換も（または、該第一のＦｃポリペプチドに存在する場合は、Ｐ３２９Ｇの置換もＰ３２９Ｓの置換も）含まない。ある特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａの置換もＬ３２５Ａの置換も（または、該第二のＦｃポリペプチドに存在する場合は、Ｐ３２９Ｇの置換もＰ３２９Ｓの置換も）含まず、該第二のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含む）。
【0198】
例示的な二重特異性「ｍＡｂ／ＬＣのＮ末端またはＣ末端ｓｃＦｖ」タンパク質
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該軽鎖ポリペプチドの一方は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該軽鎖ポリペプチドの一方は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
【0199】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0200】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0201】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号４または５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第一の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第二の軽鎖ポリペプチドは、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第一の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第二の軽鎖ポリペプチドは、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0202】
いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該軽鎖ポリペプチドの一方は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該軽鎖ポリペプチドの一方は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
【0203】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0204】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0205】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号９または１０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第一の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５３または５４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第二の軽鎖ポリペプチドは、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含む。さらに別の例では、（ａ）は、配列番号７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第一の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５３または５４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第二の軽鎖ポリペプチドは、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0206】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
【0207】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0208】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0209】
１つの例では、（ａ）は、配列番号１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号４または５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0210】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
【0211】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0212】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0213】
１つの例では、（ａ）は、配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号９または１０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５３または５４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。さらに別の例では、（ａ）は、配列番号７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５３または５４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0214】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該軽鎖ポリペプチドの一方は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該軽鎖ポリペプチドの一方は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
【0215】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0216】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0217】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号４または５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第一の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、配列番号５５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第二の軽鎖ポリペプチドは、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第一の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、配列番号５５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第二の軽鎖ポリペプチドは、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0218】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該軽鎖ポリペプチドの一方は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該軽鎖ポリペプチドの一方は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
【0219】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0220】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0221】
１つの例では、（ａ）は、配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号９または１０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第一の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、配列番号５６または５７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第二の軽鎖ポリペプチドは、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第一の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、配列番号５６または５７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第二の軽鎖ポリペプチドは、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0222】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
【0223】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0224】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0225】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号４または５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0226】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合している。
【0227】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0228】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0229】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号９または１０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５６または５７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５６または５７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0230】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、第一の軽鎖ポリペプチドは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、第二の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、第一の軽鎖ポリペプチドは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、第二の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
【0231】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0232】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0233】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号４または５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第一の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、配列番号５５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第二の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第一の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、配列番号５５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第二の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0234】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、第一の軽鎖ポリペプチドは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、第二の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、第一の軽鎖ポリペプチドは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、第二の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合している。
【0235】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0236】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0237】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号９または１０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第一の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、配列番号５６または５７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含み、第二の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５３または５４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。さらに別の例では、（ａ）は、配列番号７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第一の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、配列番号５６または５７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは１００％）の同一性を有する配列を含み、第二の軽鎖ポリペプチドは、該ｓｃＦｖとＣ末端で融合しており、配列番号５３または５４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0238】
上記二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕを含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕを含む。ある特定の実施形態では、該タンパク質は、以下に記載のｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを含む。
【0239】
上記二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、そのＣ末端のリジン（例えば、ＥＵナンバリングに従って、該Ｆｃポリペプチドの４４７位のＬｙｓ残基）が除去され得る。いくつかの実施形態では、該ＦｃポリペプチドのＣ末端のリジンの除去により、該二重特異性タンパク質の安定性が改善され得る。
【0240】
ｍＡｂ／ＨＣ及びＬＣのＮ末端ＶＨ ＶＬ
いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、２つの重鎖の各々のＮ末端で融合したＶＨ領域（またはＶＬ領域）及び２つの軽鎖の各々のＮ末端で融合したＶＬ領域（またはＶＨ領域）を含む。かかる二重特異性タンパク質の概略図を図４に示す。いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、Ｎ末端でＦｖ断片のＶＨ領域またはＶＬ領域と融合しており、
該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域またはＶＬ領域の他方と融合しており、
該ＶＨ領域及び該ＶＬ領域は、一緒になって該Ｆｖ断片を形成し、
該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ該Ｆｖ断片は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する、または、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ該Ｆｖ断片は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。
いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、２つの重鎖の各々のＮ末端で融合したＶＨ領域（またはＶＬ領域）及び２つの軽鎖の各々のＮ末端で融合したＶＬ領域（またはＶＨ領域）を含む。かかる二重特異性タンパク質の概略図を図４に示す。いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、Ｎ末端でＦｖ断片のＶＨ領域またはＶＬ領域と融合しており、
該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域またはＶＬ領域の他方と融合しており、
該ＶＨ領域及び該ＶＬ領域は、一緒になって該Ｆｖ断片を形成し、
該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ該Ｆｖ断片は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する、または、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ該Ｆｖ断片は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。
【0241】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0242】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。
【0243】
該二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、Ｎ末端でＦｖ断片のＶＨ領域と融合しており、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域と融合している。他の実施形態では、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、Ｎ末端でＦｖ断片のＶＬ領域と融合しており、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合している。
【0244】
いくつかの実施形態では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに特異的に結合するＦａｂは、配列番号１０８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有するＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに特異的に結合するＦａｂは、配列番号１０９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有するＶＨ領域を含む。
【0245】
いくつかの実施形態では、第一のリンカーは、ＶＨ領域またはＶＬ領域を、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々のＮ末端に接続する。いくつかの実施形態では、第二のリンカーは、ＶＨ領域またはＶＬ領域を、該２つの軽鎖ポリペプチドの各々のＮ末端に接続する。いくつかの実施形態では、該第一のリンカーまたは該第二のリンカーは、約１～約５０アミノ酸、例えば、約１～約４０、約１～約３０、約１～約２５、約１～約２０、約１～約１５、約１～約１０、約２～約４０、約２～約３０、約２～約２０、約２～約１０、約５～約４０、約５～約３０、約５～約２５、または約５～約２０アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態では、該第一のリンカーは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長を有する。様々なリンカーが本明細書でさらに詳細に記載されている。ある特定の実施形態では、該第一のリンカーは、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦ（配列番号１２５）の配列を含む。ある特定の実施形態では、該第二のリンカーは、ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩ（配列番号１２６）の配列を含む。
【0246】
いくつかの実施形態では、「ｍＡｂ／ＨＣ及びＬＣのＮ末端ＶＨ ＶＬ」の構造を有する二重特異性タンパク質の（ａ）部分では、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｎ末端で該ＦａｂのＦｄ部分とヒンジ領域または部分的なヒンジ領域を介して融合している。いくつかの実施形態では、「ｍＡｂ／ＨＣ及びＬＣのＮ末端ＶＨ ＶＬ」の構造を有する二重特異性タンパク質の（ｂ）部分では、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｎ末端で該ＦａｂのＦｄ部分とヒンジ領域または部分的なヒンジ領域を介して融合している。例示的なヒンジ領域の配列は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２７）である。部分的なヒンジ領域とは、配列番号１２７の配列の一部分、例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２８）の配列を有する部分的なヒンジ領域を指す。
【0247】
「ｍＡｂ／ＨＣ及びＬＣのＮ末端ＶＨ ＶＬ」の構造を有する二重特異性タンパク質では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、トランスフェリン受容体に特異的に結合することができる（例えば、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド）。異なるＦｃポリペプチド及びその修飾を、本明細書でさらに詳細に記載する。いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び該第二のＦｃポリペプチドは各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含み得る。例えば、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含むことができる。別の例では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含むことができる。さらに、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる、すなわち、ＴｆＲの結合によりエフェクター機能を低下させる修飾を含み得る。例えば、該ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾は、ＥＵナンバリングに従って、（ｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換または（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換ならびにＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換である。
【0248】
「ｍＡｂ／ＨＣ及びＬＣのＮ末端ＶＨ ＶＬ」の構造を有する二重特異性タンパク質の特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド（または該第二のＦｃポリペプチド）は、ＥＵナンバリングに従って、Ｔ３６６Ｗの置換、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含む）、ならびに任意に、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含むＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、該第二のＦｃポリペプチド（または該第一のＦｃポリペプチド）は、ＥＵナンバリングに従って、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換ならびに任意に、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。例えば、該第一のＦｃポリペプチド（または該第二のＦｃポリペプチド）は、配列番号１３７及び１８６～１９６のいずれか１つの配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチド（または該第一のＦｃポリペプチド）は、配列番号１３３及び１８３～１８５のいずれか１つの配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含むことができる。
【0249】
ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、かつＥＵナンバリングに従って、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含み（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含み）、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａの置換もＬ３２５Ａの置換も（または、該第一のＦｃポリペプチドに存在する場合は、Ｐ３２９Ｇの置換もＰ３２９Ｓの置換も）含まない。ある特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａの置換もＬ３２５Ａの置換も（または、該第二のＦｃポリペプチドに存在する場合は、Ｐ３２９Ｇの置換もＰ３２９Ｓの置換も）含まず、該第二のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含む）。
【0250】
例示的な二重特異性「ｍＡｂ／ＨＣ及びＬＣのＮ末端ＶＨ ＶＬ」タンパク質
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦｖ断片のＶＨ領域とＮ末端で融合しており、
該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域の他方と融合しており、
該ＶＨ領域及び該ＶＬ領域は、一緒になって該Ｆｖ断片を形成する。
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦｖ断片のＶＨ領域とＮ末端で融合しており、
該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域の他方と融合しており、
該ＶＨ領域及び該ＶＬ領域は、一緒になって該Ｆｖ断片を形成する。
【0251】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0252】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0253】
１つの例では、該二重特異性タンパク質は、Ｎ末端で、該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合した（ａ）及び配列番号５８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む第一のポリペプチド、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合した（ｂ）及び配列番号６１または６２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む第二のポリペプチド、ならびにＮ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域と融合した軽鎖ポリペプチドを各々含みかつ配列番号７８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を各々含む第三及び第四のポリペプチドを含む。別の例では、該二重特異性タンパク質は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合した（ａ）及び配列番号５９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む第一のポリペプチド、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合した（ｂ）及び配列番号６０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む第二のポリペプチド、ならびにＮ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域と融合した軽鎖ポリペプチドを各々含みかつ配列番号７８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を各々含む第三及び第四のポリペプチドを含む。
【0254】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦｖ断片のＶＨ領域とＮ末端で融合しており、
該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域の他方と融合しており、
該ＶＨ領域及び該ＶＬ領域は、一緒になって該Ｆｖ断片を形成する。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦｖ断片のＶＨ領域とＮ末端で融合しており、
該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域の他方と融合しており、
該ＶＨ領域及び該ＶＬ領域は、一緒になって該Ｆｖ断片を形成する。
【0255】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0256】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0257】
１つの例では、該二重特異性タンパク質は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合した（ａ）及び配列番号６３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む第一のポリペプチド、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合した（ｂ）及び配列番号６６または６７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む第二のポリペプチド、ならびにＮ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域と融合した軽鎖ポリペプチドを各々含みかつ配列番号７９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を各々含む第三及び第四のポリペプチドを含む。別の例では、第一のポリペプチドは、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合した（ａ）及び配列番号６４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第二のポリペプチドは、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合した（ｂ）及び配列番号６５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、第三及び第四のポリペプチドは、各々が、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域と融合した軽鎖ポリペプチドを含み、かつ各々が、配列番号７９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0258】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦｖ断片のＶＬ領域とＮ末端で融合しており、
該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域の他方と融合しており、
該ＶＨ領域及び該ＶＬ領域は、一緒になって該Ｆｖ断片を形成する。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦｖ断片のＶＬ領域とＮ末端で融合しており、
該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域の他方と融合しており、
該ＶＨ領域及び該ＶＬ領域は、一緒になって該Ｆｖ断片を形成する。
【0259】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0260】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0261】
１つの例では、該二重特異性タンパク質は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域と融合した（ａ）及び配列番号６８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む第一のポリペプチド、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域と融合した（ｂ）及び配列番号７１または７２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む第二のポリペプチド、ならびにＮ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合した軽鎖ポリペプチドを各々含みかつ配列番号８０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を各々含む第三及び第四のポリペプチドを含む。別の例では、該二重特異性タンパク質は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域と融合した（ａ）及び配列番号６９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む第一のポリペプチド、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域と融合した（ｂ）及び配列番号７０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む第二のポリペプチド、ならびにＮ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合した軽鎖ポリペプチドを各々含みかつ配列番号８０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を各々含む第三及び第四のポリペプチドを含む。
【0262】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦｖ断片のＶＬ領域とＮ末端で融合しており、
該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域の他方と融合しており、
該ＶＨ領域及び該ＶＬ領域は、一緒になって該Ｆｖ断片を形成する。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、該第一及び第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該（ａ）及び（ｂ）におけるＦｄ部分の各々は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦｖ断片のＶＬ領域とＮ末端で融合しており、
該２つの軽鎖ポリペプチドの各々は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域の他方と融合しており、
該ＶＨ領域及び該ＶＬ領域は、一緒になって該Ｆｖ断片を形成する。
【0263】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0264】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0265】
１つの例では、該二重特異性タンパク質は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域と融合した（ａ）及び配列番号７３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む第一のポリペプチド、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域と融合した（ｂ）及び配列番号７６または７７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む第二のポリペプチド、ならびにＮ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合した軽鎖ポリペプチドを各々含みかつ配列番号８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を各々含む第三及び第四のポリペプチドを含む。別の例では、該二重特異性タンパク質は、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域と融合した（ａ）及び配列番号７４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む第一のポリペプチド、Ｎ末端で該Ｆｖ断片のＶＬ領域と融合した（ｂ）及び配列番号７５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む第二のポリペプチド、ならびにＮ末端で該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合した軽鎖ポリペプチドを各々含みかつ配列番号８１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を各々含む第三及び第四のポリペプチドを含む。
【0266】
上記二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕを含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕを含む。ある特定の実施形態では、該タンパク質は、以下に記載のｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを含む。
【0267】
上記二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、そのＣ末端のリジン（例えば、ＥＵナンバリングに従って、該Ｆｃポリペプチドの４４７位のＬｙｓ残基）が除去され得る。いくつかの実施形態では、該ＦｃポリペプチドのＣ末端のリジンの除去により、該二重特異性タンパク質の安定性が改善され得る。
【0268】
ｍＡｂ／ＨＣのＣ末端ＶＨ ＶＬ
いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、該２つのＦｃポリペプチドの一方のＣ末端で融合したＶＨ（またはＶＬ領域）及び該２つのＦｃポリペプチドの他方のＣ末端で融合したＶＬ領域（またはＶＨ領域）を含む。かかる二重特異性タンパク質の概略図を図５に示す。いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合しており、Ｆｖ断片のＶＨ領域またはＶＬ領域とＣ末端で融合している、第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合しており、（ａ）に記載のＶＨ領域またはＶＬ領域の他方とＣ末端で融合している、第二のＦｃポリペプチドであって、
該ＶＨ領域及び該ＶＬ領域は、一緒になって該Ｆｖ断片を形成し、該第一及び第二のＦｃポリペプチドが、Ｆｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ該Ｆｖ断片は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する、または、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ該Ｆｖ断片は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。
いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、該２つのＦｃポリペプチドの一方のＣ末端で融合したＶＨ（またはＶＬ領域）及び該２つのＦｃポリペプチドの他方のＣ末端で融合したＶＬ領域（またはＶＨ領域）を含む。かかる二重特異性タンパク質の概略図を図５に示す。いくつかの実施形態では、二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合しており、Ｆｖ断片のＶＨ領域またはＶＬ領域とＣ末端で融合している、第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合しており、（ａ）に記載のＶＨ領域またはＶＬ領域の他方とＣ末端で融合している、第二のＦｃポリペプチドであって、
該ＶＨ領域及び該ＶＬ領域は、一緒になって該Ｆｖ断片を形成し、該第一及び第二のＦｃポリペプチドが、Ｆｃ二量体を形成する、該第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド、
ここで、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ該Ｆｖ断片は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する、または、該Ｆａｂは、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ該Ｆｖ断片は、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する。
【0269】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0270】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。
【0271】
該二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合しており、該第二のＦｃポリペプチドは、該Ｆｖ断片のＶＬ領域と融合している。いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、該Ｆｖ断片の ＶＬ領域と融合しており、該第二のＦｃポリペプチドは、該Ｆｖ断片のＶＨ領域と融合している。
【0272】
いくつかの実施形態では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに特異的に結合するＦａｂは、配列番号１０８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有するＶＨ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに特異的に結合するＦａｂは、配列番号１０９の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有するＶＨ領域を含む。
【0273】
いくつかの実施形態では、第一のリンカーは、該ＶＨ領域またはＶＬ領域を、該ＦｃポリペプチドのＣ末端に接続する。いくつかの実施形態では、該第一のリンカーまたは該第二のリンカーは、約１～約５０アミノ酸、例えば、約１～約４０、約１～約３０、約１～約２５、約１～約２０、約１～約１５、約１～約１０、約２～約４０、約２～約３０、約２～約２０、約２～約１０、約５～約４０、約５～約３０、約５～約２５、または約５～約２０アミノ酸長を有する。いくつかの実施形態では、該第一のリンカーは、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長を有する。様々なリンカーが本明細書でさらに詳細に記載されている。いくつかの実施形態では、該第一のリンカーは、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む。
【0274】
いくつかの実施形態では、「ｍＡｂ／ＨＣのＣ末端ＶＨ ＶＬ」の構造を有する二重特異性タンパク質の（ａ）部分では、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｎ末端で該ＦａｂのＦｄ部分とヒンジ領域または部分的なヒンジ領域を介して融合している。いくつかの実施形態では、「ｍＡｂ／ＨＣのＣ末端ＶＨ ＶＬ」の構造を有する二重特異性タンパク質の（ｂ）部分では、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｎ末端で該ＦａｂのＦｄ部分とヒンジ領域または部分的なヒンジ領域を介して融合している。例示的なヒンジ領域の配列は、ヒトＩｇＧ１ヒンジ配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２７）である。部分的なヒンジ領域とは、配列番号１２７の配列の一部分、例えば、ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２８）の配列を有する部分的なヒンジ領域を指す。
【0275】
「ｍＡｂ／ＨＣのＣ末端ＶＨ ＶＬ」の構造を有する二重特異性タンパク質では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、トランスフェリン受容体に特異的に結合することができる（例えば、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド）。異なるＦｃポリペプチド及びその修飾を、本明細書でさらに詳細に記載する。いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び該第二のＦｃポリペプチドは各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含み得る。例えば、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含むことができる。別の例では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｔ３６６Ｗの置換を含むことができる。さらに、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる、すなわち、ＴｆＲの結合によりエフェクター機能を低下させる修飾を含み得る。例えば、該ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾は、ＥＵナンバリングに従って、（ｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換または（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換ならびにＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換である。
【0276】
「ｍＡｂ／ＨＣのＮ末端ＶＨ ＶＬ」の構造を有する二重特異性タンパク質の特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド（または該第二のＦｃポリペプチド）は、ＥＵナンバリングに従って、Ｔ３６６Ｗの置換、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含む）、ならびに任意に、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含むＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、該第二のＦｃポリペプチド（または該第一のＦｃポリペプチド）は、ＥＵナンバリングに従って、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換ならびに任意に、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。例えば、該第一のＦｃポリペプチド（または該第二のＦｃポリペプチド）は、配列番号１３７及び１８６～１９６のいずれか１つの配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含むことができ、該第二のＦｃポリペプチド（または該第一のＦｃポリペプチド）は、配列番号１３３及び１８３～１８５のいずれか１つの配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含むことができる。
【0277】
ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、かつＥＵナンバリングに従って、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含み（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含み）、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａの置換もＬ３２５Ａの置換も（または、該第一のＦｃポリペプチドに存在する場合は、Ｐ３２９Ｇの置換もＰ３２９Ｓの置換も）含まない。ある特定の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａの置換もＬ３２５Ａの置換も（または、該第二のＦｃポリペプチドに存在する場合は、Ｐ３２９Ｇの置換もＰ３２９Ｓの置換も）含まず、該第二のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む（任意に、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を含む）。
【0278】
例示的な二重特異性「ｍＡｂ／ＨＣのＣ末端ＶＨ ＶＬ」タンパク質
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合しており、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦｖ断片のＶＨ領域とＣ末端で融合している、第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合しており、該Ｆｖ断片のＶＬ領域とＣ末端で融合している、第二のＦｃポリペプチド。
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合しており、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦｖ断片のＶＨ領域とＣ末端で融合している、第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合しており、該Ｆｖ断片のＶＬ領域とＣ末端で融合している、第二のＦｃポリペプチド。
【0279】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0280】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0281】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号８２または８３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号９９、１００、または１０１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖の各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号８４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号９８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖の各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号８５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号９７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖の各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。さらに別の例では、（ａ）は、配列番号８６、８７、または８８の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号９５または９６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖の各々は、配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0282】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、以下を含む：
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合しており、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦｖ断片のＶＨ領域とＣ末端で融合している、第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合しており、該Ｆｖ断片のＶＬ領域とＣ末端で融合している、第二のＦｃポリペプチド。
（ａ）ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合するＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合しており、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合するＦｖ断片のＶＨ領域とＣ末端で融合している、第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合しており、該Ｆｖ断片のＶＬ領域とＣ末端で融合している、第二のＦｃポリペプチド。
【0283】
いくつかの実施形態では、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の実施形態では、該第一のＦｃポリペプチドまたは該第二のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。ある特定の他の実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む。特定の実施形態では、該Ｓ２３９Ｄ及び／または該Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む第一のＦｃポリペプチド及び／または第二のＦｃポリペプチドは、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強すること、すなわち、ＨＥＲ２の結合によりエフェクター機能を増強することが可能である。
【0284】
いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、該第二のＦｃポリペプチドは、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、Ｉ３３２Ｅの置換を含む。
【0285】
該二重特異性タンパク質の１つの例では、（ａ）は、配列番号８９または９０の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１０５、１０６、または１０７の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖の各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号９１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１０４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖の各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。別の例では、（ａ）は、配列番号９２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１０３の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖の各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。さらに別の例では、（ａ）は、配列番号９３または９４の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｂ）は、配列番号１０２の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含み、（ｃ）の２つの軽鎖の各々は、配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0286】
上記二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕを含む。いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第二のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にＬｅｕを含む。ある特定の実施形態では、該タンパク質は、以下に記載のｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを含む。
【0287】
上記二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、そのＣ末端のリジン（例えば、ＥＵナンバリングに従って、該Ｆｃポリペプチドの４４７位のＬｙｓ残基）が除去され得る。いくつかの実施形態では、該ＦｃポリペプチドのＣ末端のリジンの除去により、該二重特異性タンパク質の安定性が改善され得る。
【0288】
ＩＶ．Ｆｃポリペプチド及びその修飾
いくつかの態様では、本明細書に記載の抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質のいずれかは、Ｆｃポリペプチド二量体を含み、該二量体の一方または両方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチドと比較してアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチド（例えば、修飾Ｆｃポリペプチド）におけるアミノ酸修飾により、Ｆｃポリペプチド二量体のＢＢＢ受容体（例えば、ＴｆＲ）への結合をもたらすこと、該二量体の２つのＦｃポリペプチドのヘテロ二量体化を促進すること、エフェクター機能を調節すること、血清半減期を延長すること、グリコシル化に影響を与えること、及び／またはヒトにおける免疫原性を低下させることができる。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質に存在するＦｃポリペプチドは、独立して、対応する野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＦｃポリペプチド）に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸配列同一性を有する。修飾Ｆｃポリペプチド（例えば、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド）の例及び説明は、例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれる国際特許公開第ＷＯ２０１８／１５２３２６号に見出すことができる。
いくつかの態様では、本明細書に記載の抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質のいずれかは、Ｆｃポリペプチド二量体を含み、該二量体の一方または両方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチドと比較してアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチド（例えば、修飾Ｆｃポリペプチド）におけるアミノ酸修飾により、Ｆｃポリペプチド二量体のＢＢＢ受容体（例えば、ＴｆＲ）への結合をもたらすこと、該二量体の２つのＦｃポリペプチドのヘテロ二量体化を促進すること、エフェクター機能を調節すること、血清半減期を延長すること、グリコシル化に影響を与えること、及び／またはヒトにおける免疫原性を低下させることができる。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質に存在するＦｃポリペプチドは、独立して、対応する野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＦｃポリペプチド）に対して少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のアミノ酸配列同一性を有する。修飾Ｆｃポリペプチド（例えば、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチド）の例及び説明は、例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれる国際特許公開第ＷＯ２０１８／１５２３２６号に見出すことができる。
【0289】
ＢＢＢ受容体結合のためのＦｃポリペプチド修飾
本明細書に提供するのは、ＢＢＢを横断して輸送することが可能な抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質である。かかるタンパク質は、ＢＢＢ受容体に結合する、修飾Ｆｃポリペプチドを含む。ＢＢＢ受容体は、ＢＢＢ内皮、ならびに他の細胞型及び組織型で発現される。いくつかの実施形態では、該ＢＢＢ受容体は、ＴｆＲである。ＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位を有するとも表現される。
本明細書に提供するのは、ＢＢＢを横断して輸送することが可能な抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質である。かかるタンパク質は、ＢＢＢ受容体に結合する、修飾Ｆｃポリペプチドを含む。ＢＢＢ受容体は、ＢＢＢ内皮、ならびに他の細胞型及び組織型で発現される。いくつかの実施形態では、該ＢＢＢ受容体は、ＴｆＲである。ＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位を有するとも表現される。
【0290】
様々なＦｃ修飾において指定されるアミノ酸残基は、ＢＢＢ受容体、例えば、ＴｆＲに結合する修飾Ｆｃポリペプチド中に導入されるものを含め、本明細書において、ＥＵインデックスナンバリングを使用してナンバリングされる。任意のＦｃポリペプチド、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＦｃポリペプチドは、本明細書に記載の１つ以上の位置に、修飾、例えば、アミノ酸置換を有し得る。いくつかの実施形態では、ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合活性のために修飾されるドメインは、ヒトＩｇのＣＨ３ドメイン、例えば、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインである。該ＣＨ３ドメインは、任意のＩｇＧサブタイプ、すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４からのものであり得る。ＩｇＧ１抗体との関連において、ＣＨ３ドメインとは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングして、ほぼ３４１位～ほぼ４４７位のアミノ酸のセグメントを指す。
【0291】
いくつかの実施形態では、ＴｆＲに特異的に結合する修飾Ｆｃポリペプチドは、ＴｆＲのアピカルドメインに結合し、かつトランスフェリンのＴｆＲへの結合を遮断することも阻害することもなく、ＴｆＲに結合し得る。いくつかの実施形態では、トランスフェリンのＴｆＲへの結合は、実質的に阻害されない。いくつかの実施形態では、トランスフェリンのＴｆＲへの結合は、約５０％未満（例えば、約４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、または５％未満）阻害される。
【0292】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質に存在するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、１つ以上の、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングスキームに従って、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２９５、２９７、２９８及び２９９位を含むアミノ酸位置で、少なくとも４、５、６、７、８、９、または１０個の置換を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質に存在するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングスキームに従って、２７４、２７６、２８３、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、及び２９０位を含むアミノ酸位置で、少なくとも４、５、６、７、８、または９個の置換を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質に存在するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングスキームに従って、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２９２、２９３、２９４、２９６、及び３００位を含むアミノ酸位置で、少なくとも４、５、６、７、８、９、または１０個の置換を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質に存在するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングスキームに従って、２７２、２７４、２７６、３２２、３２４、３２６、３２９、３３０、及び３３１位を含むアミノ酸位置で、少なくとも４、５、６、７、８、または９個の置換を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質に存在するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングスキームに従って、３４５、３４６、３４７、３４９、４３７、４３８、４３９、及び４４０位を含むアミノ酸位置で、少なくとも４、５、６、または７個の置換を含む。
【0293】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質に存在するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、少なくとも１つ、２つ、または３つの置換を含み、いくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングスキームに従って、アミノ酸位置３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び４２１で、少なくとも４、５、６、７、８、または９個の置換を含む。
【0294】
いくつかの実施形態では、ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、以下の通り、配列番号１３０と比較して置換を有する位置を少なくとも１つ含む：３８４位でのＬｅｕ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、もしくはＶａｌ、３８６位でのＬｅｕ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、もしくはＰｒｏ、３８７位でのＶａｌ、Ｐｒｏ、もしくは酸性アミノ酸、３８８位での芳香族アミノ酸、例えば、ＴｒｐもしくはＧｌｙ（例えば、Ｔｒｐ）、３８９位でのＶａｌ、Ｓｅｒ、もしくはＡｌａ、４１３位での酸性アミノ酸、Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、もしくはＰｒｏ、４１６位でのＴｈｒもしくは酸性アミノ酸、または４２１位でのＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、もしくはＰｈｅ。いくつかの実施形態では、ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、当該組の１つ以上の位置における特定のアミノ酸の保存的置換、例えば、同じ荷電分類、疎水性分類、側鎖環構造分類（例えば、芳香族アミノ酸）、もしくはサイズ分類、及び／または極性もしくは非極性分類のアミノ酸を含み得る。従って、例えば、Ｉｌｅは、３８４位、３８６位、及び／または４１３位に存在し得る。いくつかの実施形態では、３８７、４１３、及び４１６位の１つ、２つまたは各々の位置における酸性アミノ酸は、Ｇｌｕである。他の実施形態では、３８７、４１３、及び４１６位の１つ、２つまたは各々の酸性アミノ酸は、Ａｓｐである。いくつかの実施形態では、３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、４１３、４１６、及び４２１位の２、３、４、５、６、７、または８個すべては、本段落に規定されるアミノ酸置換を有する。
【0295】
いくつかの実施形態では、アミノ酸位置３８４、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４１３、４１６、及び／または４２１に修飾を有するＦｃポリペプチドは、３９０位に天然のＡｓｎを含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチドは、３９０位にＧｌｙ、Ｈｉｓ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、またはＡｓｐを含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチドは、さらに、３８０、３９１、３９２、及び４１５位を含む位置に、１つ、２つ、３つ、または４つの置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、またはＧｌｎが３８０位に存在し得る。いくつかの実施形態では、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、またはＰｈｅが３９１位に存在し得る。いくつかの実施形態では、Ｇｌｎ、Ｐｈｅ、またはＨｉｓが３９２位に存在し得る。いくつかの実施形態では、Ｇｌｕが４１５位に存在し得る。
【0296】
ある特定の実施形態では、該Ｆｃポリペプチドは、以下から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の位置を含む：３８０位のＴｒｐ、ＬｅｕもしくはＧｌｕ、３８４位のＴｙｒもしくはＰｈｅ、３８６位のＴｈｒ、３８７位のＧｌｕ、３８８位のＴｒｐ、３８９位のＳｅｒ、Ａｌａ、ＶａｌもしくはＡｓｎ、３９０位のＳｅｒもしくはＡｓｎ、４１３位のＴｈｒもしくはＳｅｒ、４１５位のＧｌｕもしくはＳｅｒ、４１６位のＧｌｕ、及び／または４２１位のＰｈｅ。いくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチドは、以下の１１個の位置すべてを含む：３８０位のＴｒｐ、ＬｅｕもしくはＧｌｕ、３８４位のＴｙｒもしくはＰｈｅ、３８６位のＴｈｒ、３８７位のＧｌｕ、３８８位のＴｒｐ、３８９位のＳｅｒ、Ａｌａ、ＶａｌもしくはＡｓｎ、３９０位のＳｅｒもしくはＡｓｎ、４１３位のＴｈｒもしくはＳｅｒ、４１５位のＧｌｕもしくはＳｅｒ、４１６位のＧｌｕ、及び／または４２１位のＰｈｅ。
【0297】
ある特定の実施形態では、該ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、３８４位にＬｅｕもしくはＭｅｔ、３８６位にＬｅｕ、Ｈｉｓ、もしくはＰｒｏ、３８７位にＶａｌ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＶａｌもしくはＡｌａ、４１３位にＰｒｏ、４１６位にＴｈｒ、及び／または４２１位にＴｒｐを含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチドは、さらに、３９１位にＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｎ、またはＰｈｅを含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチドは、さらに、３８０位にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、もしくはＧｌｎ及び／または３９２位にＧｌｎ、Ｐｈｅ、もしくはＨｉｓを含む。いくつかの実施形態では、Ｔｒｐが３８０位に存在し、及び／またはＧｌｎが３９２位に存在する。いくつかの実施形態では、ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、３８０位にＴｒｐを有さない。
【0298】
他の実施形態では、ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕもしくはＶａｌ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒまたはＴｈｒ、４１６位にＧｌｕ、及び／または４２１位にＰｈｅを含む。いくつかの実施形態では、該ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、３９０位に天然のＡｓｎを含む。ある特定の実施形態では、該Ｆｃポリペプチドは、さらに、３８０位にＴｒｐ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、もしくはＧｌｎ及び／または４１５位にＧｌｎを含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチドは、さらに、３８０位にＴｒｐ及び／または４１５位にＧｌｕを含む。
【0299】
いくつかの実施形態では、該ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、以下の置換の１つ以上を含む：３８０位にＴｒｐ、３８６位にＴｈｒ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＶａｌ、４１３位にＳｅｒまたはＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、及び／または４２１位にＰｈｅ。
【0300】
さらなる実施形態では、該ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、さらに、以下から選択される１、２、または３つの位置を含む：４１４位がＬｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｌｙ、またはＰｒｏであり、４２４位がＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、またはＬｙｓであり、４２６位がＳｅｒ、Ｔｒｐ、またはＧｌｙである。
【0301】
いくつかの実施形態では、該ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、配列番号１３５の配列を有する。本明細書に記載の二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチド二量体の２つのＦｃポリペプチドの一方は、配列番号１３５の配列を有するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドであり得ると同時に、該Ｆｃポリペプチド二量体の他方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号１３０）の配列を有し得る。本明細書に記載の二重特異性タンパク質の他の実施形態では、該Ｆｃポリペプチド二量体のＦｃポリペプチドは両方とも、配列番号１３５の配列を有するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドであり得る。
【0302】
本明細書に記載の二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３５～１３９及び１８６～１９６から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0303】
本明細書に記載の二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該Ｆｃポリペプチド二量体の２つのＦｃポリペプチドの一方は、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含みかつ配列番号１３５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドであり得ると同時に、該Ｆｃポリペプチド二量体の他方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号１３０）の配列を有し得る。
【0304】
本明細書に記載の二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該第一のＦｃポリペプチド及び／または該第二のＦｃポリペプチドは、独立して、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＡｌａ、４１３位にＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１４０～１４４から選択される配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の同一性を有する配列を含む。
【0305】
本明細書に記載の二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、ＥＵナンバリングに従って、該Ｆｃポリペプチド二量体の２つのＦｃポリペプチドの一方は、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＡｌａ、４１３位にＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含みかつ配列番号１４０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドであり得ると同時に、該Ｆｃポリペプチド二量体の他方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号１３０）の配列を有し得る。
【0306】
いくつかの実施形態では、該ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、配列番号１４０の配列を有する。本明細書に記載の二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチド二量体の２つのＦｃポリペプチドの一方は、配列番号１４０の配列を有するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドであり得ると同時に、該Ｆｃポリペプチド二量体の他方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号１３０）の配列を有し得る。本明細書に記載の二重特異性タンパク質の他の実施形態では、該Ｆｃポリペプチド二量体のＦｃポリペプチドは両方とも、配列番号１４０の配列を有するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドであり得る。
【0307】
いくつかの実施形態では、該ＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドは、配列番号１４５の配列を有する。本明細書に記載の二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチド二量体の２つのＦｃポリペプチドの一方は、配列番号１４５の配列を有するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドであり得ると同時に、該Ｆｃポリペプチド二量体の他方のＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号１３０）の配列を有し得る。本明細書に記載の二重特異性タンパク質の他の実施形態では、該Ｆｃポリペプチド二量体のＦｃポリペプチドは両方とも、配列番号１４５の配列を有するＢＢＢ（例えば、ＴｆＲ）受容体結合Ｆｃポリペプチドであり得る。
【0308】
ヘテロ二量体化のためのＦｃポリペプチド修飾
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の二重特異性タンパク質に存在するＦｃポリペプチドは、ノブとホールの変異を含んで、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を妨げる。一般に、該修飾は、突起が空洞内に配置されてヘテロ二量体形成を促進し、ひいてはホモ二量体形成を妨げることができるように、第一のポリペプチドの界面で突起（「ノブ」）を導入し、第二のポリペプチドの界面で対応する空洞（「ホール」）を導入する。突起は、該第一のポリペプチドの界面の小さいアミノ酸側鎖をより大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えることによって構築される。該突起と等しいまたは同様のサイズの埋め合わせとなる空洞は、該第二のポリペプチドの界面に、大きなアミノ酸側鎖をより小さいもの（例えば、アラニンまたはトレオニン）と置き換えることによって形成される。いくつかの実施形態では、かかるさらなる変異は、ＢＢＢ受容体、例えば、ＴｆＲへの該ポリペプチドの結合に悪影響を与えないＦｃポリペプチドの位置である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の二重特異性タンパク質に存在するＦｃポリペプチドは、ノブとホールの変異を含んで、ヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を妨げる。一般に、該修飾は、突起が空洞内に配置されてヘテロ二量体形成を促進し、ひいてはホモ二量体形成を妨げることができるように、第一のポリペプチドの界面で突起（「ノブ」）を導入し、第二のポリペプチドの界面で対応する空洞（「ホール」）を導入する。突起は、該第一のポリペプチドの界面の小さいアミノ酸側鎖をより大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えることによって構築される。該突起と等しいまたは同様のサイズの埋め合わせとなる空洞は、該第二のポリペプチドの界面に、大きなアミノ酸側鎖をより小さいもの（例えば、アラニンまたはトレオニン）と置き換えることによって形成される。いくつかの実施形態では、かかるさらなる変異は、ＢＢＢ受容体、例えば、ＴｆＲへの該ポリペプチドの結合に悪影響を与えないＦｃポリペプチドの位置である。
【0309】
二量体化のためのノブとホールの方法の１つの例示的な実施形態では、該二重特異性タンパク質に存在するＦｃポリペプチドの一方の３６６位（ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングされる）は、天然のトレオニンの代わりにトリプトファンを含む。当該二量体の他方のＦｃポリペプチドは、４０７位（ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングされる）に天然のチロシンの代わりにバリンを有する。他方のＦｃポリペプチドはさらに置換を含んでよく、この場合、３６６位（ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングされる）の天然のトレオニンがセリンで置換され、３６８位（ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングされる）の天然のロイシンがアラニンで置換される。従って、本明細書に記載の二重特異性タンパク質のＦｃポリペプチドの一方は、Ｔ３６６Ｗのノブの変異を有し、他方のＦｃポリペプチドは、Ｙ４０７Ｖの変異を有し、これは、通常、Ｔ３６６Ｓ及びＬ３６８Ａのホールの変異を伴う。
【0310】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質に存在するＦｃポリペプチドの一方または両方はまた、ヘテロ二量体化のための他の修飾、例えば、天然に荷電したＣＨ３－ＣＨ３界面内の接触残基の静電的操作または疎水性パッチ修飾を含むように操作される場合がある。
【0311】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質は、Ｆｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、Ｔ３６６Ｗのノブの変異及び配列番号１３１の配列に対して少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％）の同一性を有する１つのＦｃポリペプチドならびにＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖのホールの変異ならびに配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する他のＦｃポリペプチドを有する。ある特定の実施形態では、該Ｆｃポリペプチド二量体の一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合Ｆｃポリペプチドであり得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質は、Ｆｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）配列番号１３３の配列を有する第一のＦｃポリペプチド、及び（ｉｉ）配列番号１３６の配列を有する第二のＦｃポリペプチドを有する。特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質は、Ｆｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）配列番号１３３の配列を有する第一のＦｃポリペプチド、及び（ｉｉ）配列番号１４１の配列を有する第二のＦｃポリペプチドを有する。特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質は、Ｆｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する第一のＦｃポリペプチド、及び（ｉｉ）配列番号１４６の配列を有する第二のＦｃポリペプチドを有する。
【0312】
エフェクター機能を調節するためのＦｃポリペプチド修飾
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の二重特異性タンパク質に存在するＦｃポリペプチドの一方または両方は、ＴｆＲの結合によりＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる、すなわち、エフェクター機能を媒介するエフェクター細胞で発現するＦｃ受容体に結合した後、ある特定の生物学的機能を誘導する能力を低下させる修飾を含み得る。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、及びＢ細胞活性化が挙げられるがこれらに限定されない。エフェクター機能は、抗体のクラスによって異なる場合がある。例えば、天然のヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３抗体は、免疫系細胞に存在する適切なＦｃ受容体に結合するとＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性を誘発することができ、天然のヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４は、免疫細胞に存在する適切なＦｃ受容体に結合すると、ＡＤＣＰ機能を誘発することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の二重特異性タンパク質に存在するＦｃポリペプチドの一方または両方は、ＴｆＲの結合によりＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる、すなわち、エフェクター機能を媒介するエフェクター細胞で発現するＦｃ受容体に結合した後、ある特定の生物学的機能を誘導する能力を低下させる修飾を含み得る。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、及びＢ細胞活性化が挙げられるがこれらに限定されない。エフェクター機能は、抗体のクラスによって異なる場合がある。例えば、天然のヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３抗体は、免疫系細胞に存在する適切なＦｃ受容体に結合するとＡＤＣＣ及びＣＤＣ活性を誘発することができ、天然のヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４は、免疫細胞に存在する適切なＦｃ受容体に結合すると、ＡＤＣＰ機能を誘発することができる。
【0313】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質に存在するＦｃポリペプチドの一方または両方は、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる、または除去する修飾を含んでもよい。ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる例示的なＦｃポリペプチド変異としては、ＣＨ２ドメインにおける、例えば、ＥＵナンバリングスキームに従う２３４位及び２３５位での置換が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、２３４位及び２３５位にアラニン残基を含むことができる。従って、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（本明細書では「ＬＡＬＡ」とも呼ばれる）置換を有し得る。
【0314】
エフェクター機能を調節するさらなるＦｃポリペプチドの変異としては、以下が挙げられるがこれに限定されない：３２９位は、プロリンがグリシン、アラニン、セリン、もしくはアルギニン、または、Ｆｃのプロリン３２９とＦｃγＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｔｒｐ８７及びＴｒｐ１１０の間に形成されるＦｃ／Ｆｃγ受容体界面を破壊するのに十分な大きさのアミノ酸残基で置換される変異を有し得る。さらなる例示的な置換としては、ＥＵナンバリングスキームに従うＳ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、及びＰ３３１Ｓが挙げられる。複数の置換もまた存在する場合がある。例えば、ＥＵナンバリングスキームに従って、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅ、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域のＬ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域のＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域のＶ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域のＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＥ３１８Ａ、ならびにヒトＩｇＧ４のＦｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３６Ｅ。いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＡＤＣＣを調節する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、ＥＵナンバリングスキームに従う２９８、３３３、及び／または３３４位での置換を有し得る。いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従って、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換を有し得る。
【0315】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質に存在するＦｃポリペプチドの一方または両方は、ＨＥＲ２の結合によりＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強することが可能な、すなわち、エフェクター機能を媒介するエフェクター細胞で発現するＦｃ受容体に結合した後、ある特定の生物学的機能を誘導する能力を向上させる修飾を含み得る。抗体エフェクター機能の例は、上に記載されている。ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強することが可能な例示的なＦｃポリペプチド変異としては、ＣＨ２ドメインにおける、例えば、ＥＵナンバリングスキームに従う２３９位及び／または３３２位での置換が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、いくつかの実施形態では、一方または両方のＦｃポリペプチドは、２３９位にアスパラギン酸及び／または３３２位にグルタミン酸を含むことができる。従って、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を有し得る。
【0316】
「ｃｉｓ－ＬＡＬＡ」コンフィギュレーション
本明細書に記載の任意の二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質の２つのＦｃポリペプチドの一方のみ（Ｆｃポリペプチドの両方ではない）が、ＴｆＲの結合によりＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させるように修飾される。他方のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位もエフェクター機能を低下させる修飾も含まない。該２つのＦｃポリペプチドのうちの一方のみが、ＴｆＲ結合部位及びＴｆＲに結合した際にＦｃγＲ結合を低下させる修飾（例えば、ＬＡＬＡ置換）の両方を含み、他方のＦｃポリペプチドがＴｆＲ結合部位もＦｃγＲ結合を低下させるいかなる修飾も含まない二重特異性タンパク質におけるＦｃポリペプチド二量体は、ｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有すると表現される。
本明細書に記載の任意の二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質の２つのＦｃポリペプチドの一方のみ（Ｆｃポリペプチドの両方ではない）が、ＴｆＲの結合によりＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させるように修飾される。他方のＦｃポリペプチドは、ＴｆＲ結合部位もエフェクター機能を低下させる修飾も含まない。該２つのＦｃポリペプチドのうちの一方のみが、ＴｆＲ結合部位及びＴｆＲに結合した際にＦｃγＲ結合を低下させる修飾（例えば、ＬＡＬＡ置換）の両方を含み、他方のＦｃポリペプチドがＴｆＲ結合部位もＦｃγＲ結合を低下させるいかなる修飾も含まない二重特異性タンパク質におけるＦｃポリペプチド二量体は、ｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有すると表現される。
【0317】
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質は、該ｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有するＦｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）ＴｆＲ結合部位及びＬＡＬＡ置換の両方、ならびにノブの修飾を有する配列番号１３７の配列を有する第一のＦｃポリペプチド、ならびに（ｉｉ）配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する、ホールの修飾のみを有する第二のＦｃポリペプチドを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質は、該ｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有するＦｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）ＴｆＲ結合部位及びＬＡＬＡ置換の両方、ならびにノブの修飾を有する配列番号１４２の配列を有する第一のＦｃポリペプチド、ならびに（ｉｉ）配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する、ホールの修飾のみを有する第二のＦｃポリペプチドを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質は、該ｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有するＦｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）ＴｆＲ結合部位及びＬＡＬＡ置換の両方、ならびにノブの修飾を有する配列番号１４７の配列を有する第一のＦｃポリペプチド、ならびに（ｉｉ）配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する、ホールの修飾のみを有する第二のＦｃポリペプチドを有する。
【0318】
特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質は、該ｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有するＦｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第一のＦｃポリペプチド、ならびに（ｉｉ）ＥＵナンバリングに従って、３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第二のＦｃポリペプチドを有する。
【0319】
特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質は、該ｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有するＦｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第一のＦｃポリペプチド、ならびに（ｉｉ）ＥＵナンバリングに従って、２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第二のＦｃポリペプチドを有する。
【0320】
特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質は、該ｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有するＦｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＡｌａ、４１３位にＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１４２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第一のＦｃポリペプチド、ならびに（ｉｉ）ＥＵナンバリングに従って、３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第二のＦｃポリペプチドを有する。
【0321】
特定の実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質は、該ｃｉｓ－ＬＡＬＡコンフィギュレーションを有するＦｃポリペプチド二量体を含む場合があり、これは、（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第一のＦｃポリペプチド、ならびに（ｉｉ）ＥＵナンバリングに従って、２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＡｌａ、４１３位にＴｈｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１４２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、第二のＦｃポリペプチドを有する。
【0322】
血清半減期を延長するためのＦｃポリペプチド修飾
いくつかの実施形態では、血清半減期を延長するための修飾が、本明細書に記載の任意の二重特異性タンパク質に導入され得る。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質に存在するＦｃポリペプチドの一方または両方は、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングして、２５２位にチロシン、２５４位にトレオニン、及び２５６位にグルタミン酸を含み得る。従って、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅの置換を有し得る。代替的に、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングして、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓの置換を有し得る。代替的に、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｎ４３４ＳまたはＮ４３４Ａの置換を有し得る。
いくつかの実施形態では、血清半減期を延長するための修飾が、本明細書に記載の任意の二重特異性タンパク質に導入され得る。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質に存在するＦｃポリペプチドの一方または両方は、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングして、２５２位にチロシン、２５４位にトレオニン、及び２５６位にグルタミン酸を含み得る。従って、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅの置換を有し得る。代替的に、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＥＵナンバリングスキームに従ってナンバリングして、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓの置換を有し得る。代替的に、一方または両方のＦｃポリペプチドは、Ｎ４３４ＳまたはＮ４３４Ａの置換を有し得る。
【0323】
Ｃ末端リジン残基が除去されたＦｃポリペプチド
本明細書に記載の二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、そのＣ末端のリジン（例えば、ＥＵナンバリングに従って、該Ｆｃポリペプチドの４４７位のＬｙｓ残基）が除去され得る。該Ｃ末端のリジン残基は多くの種にわたる免疫グロブリンで高度に保存されており、タンパク質産生の過程で細胞機構によって完全にまたは部分的に除去される可能性がある。いくつかの実施形態では、該ＦｃポリペプチドのＣ末端のリジンの除去により、該二重特異性タンパク質の安定性が改善され得る。
本明細書に記載の二重特異性タンパク質のいくつかの実施形態では、該Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、そのＣ末端のリジン（例えば、ＥＵナンバリングに従って、該Ｆｃポリペプチドの４４７位のＬｙｓ残基）が除去され得る。該Ｃ末端のリジン残基は多くの種にわたる免疫グロブリンで高度に保存されており、タンパク質産生の過程で細胞機構によって完全にまたは部分的に除去される可能性がある。いくつかの実施形態では、該ＦｃポリペプチドのＣ末端のリジンの除去により、該二重特異性タンパク質の安定性が改善され得る。
【0324】
Ｖ．リンカー
本明細書に記載の通り、二重特異性タンパク質は、１つ以上のリンカーを含み得る。リンカーとは、該二重特異性タンパク質の２つの要素間（すなわち、ＶＨ領域とＶＬ領域間、ｓｃＦｖとＦｃポリペプチド間、ｓｃＦｖとＦｄ部分間、ｓｃＦｖと軽鎖間、ＶＨ領域またはＶＬ領域とＦｄ部分間、ＶＨ領域またはＶＬ領域と軽鎖間、またはＶＨ領域またはＶＬ領域とＦｃポリペプチド間）の結合を指す。いくつかの実施形態では、リンカーは、空間及び／または柔軟性を提供するために該二重特異性タンパク質の２つの要素を連結することができるペプチドリンカーであり得る。
本明細書に記載の通り、二重特異性タンパク質は、１つ以上のリンカーを含み得る。リンカーとは、該二重特異性タンパク質の２つの要素間（すなわち、ＶＨ領域とＶＬ領域間、ｓｃＦｖとＦｃポリペプチド間、ｓｃＦｖとＦｄ部分間、ｓｃＦｖと軽鎖間、ＶＨ領域またはＶＬ領域とＦｄ部分間、ＶＨ領域またはＶＬ領域と軽鎖間、またはＶＨ領域またはＶＬ領域とＦｃポリペプチド間）の結合を指す。いくつかの実施形態では、リンカーは、空間及び／または柔軟性を提供するために該二重特異性タンパク質の２つの要素を連結することができるペプチドリンカーであり得る。
【0325】
いくつかの実施形態では、リンカーは、１～１００アミノ酸（例えば、１～９０、１～８０、１～７０、１～９０、１～６０、１～５０、１～４０、１～３０、１～２０、１～１０、１～８、１～６、１～４、５～１００、１０～１００、１５～１００、２０～１００、３０～１００、４０～１００、５０～１００、６０～１００、７０～１００、８０～１００、９０～１００、１０～９０、１０～８０、１０～７０、１０～６０、１０～５０、１０～４０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、または１０～１５アミノ酸）を含み得る。いくつかの実施形態では、２つのＦｃドメインモノマー間のリンカーは、１～３０アミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０アミノ酸）を含むアミノ酸スペーサである。リンカーは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、またはそれらの組み合わせを含むことができる。いくつかの実施形態では、該リンカーは、例えば、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｌａ等のアミノ酸を含む柔軟性リンカーであり得る。かかるリンカーは、既知のパラメータを使用して設計することが可能であり、任意の長さのものでよく、任意の長さの繰り返し単位（例えば、Ｇｌｙ及びＳｅｒ残基の繰り返し単位）を任意の数含み得る。例えば、該リンカーは、リピート、例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上のＧＧＧＧＳ（配列番号１１７）、ＧＧＳＧ（配列番号１５１）、ＧＳＧＧ（配列番号１５２）、もしくはＳＧＧＧ（配列番号１５３）リピートまたは単一のＧＧＧＧＳ（配列番号１１７）、ＧＧＳＧ（配列番号１５１）、ＧＳＧＧ（配列番号１５２）、もしくはＳＧＧＧ（配列番号１５３）を有し得る。Ｇｌｙ及びＳｅｒ残基を含む柔軟性リンカーの例としては、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）が挙げられるがこれらに限定されない。
【0326】
いくつかの実施形態では、リンカーはまた、グリシン及びセリン以外のアミノ酸、例えば、ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳ（配列番号１２４）、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦ（配列番号１２５）、またはＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩ（配列番号１２６）を含み得る。他のリンカーの例もまた、当技術分野で説明されている。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９，２０１３を参照されたい。
【0327】
ＶＩ．二重特異性タンパク質の調製
本明細書に記載の二重特異性タンパク質の調製については、当技術分野で既知の多くの技術を使用することができる。いくつかの実施形態では、目的の抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子は、細胞、例えば、ハイブリドーマからクローニングすることができる。モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子ライブラリも、ハイブリドーマまたは形質細胞から作成することができる。別の方法として、ファージまたは酵母提示技術を用いて、選択された抗原に特異的に結合する抗体及びＦａｂ断片を特定することができる。
本明細書に記載の二重特異性タンパク質の調製については、当技術分野で既知の多くの技術を使用することができる。いくつかの実施形態では、目的の抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子は、細胞、例えば、ハイブリドーマからクローニングすることができる。モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子ライブラリも、ハイブリドーマまたは形質細胞から作成することができる。別の方法として、ファージまたは酵母提示技術を用いて、選択された抗原に特異的に結合する抗体及びＦａｂ断片を特定することができる。
【0328】
二重特異性タンパク質は、原核細胞及び真核細胞発現系を含めたいくつもの発現系を用いて産生することができる。いくつかの実施形態では、該発現系は、哺乳類細胞の発現系、例えば、ハイブリドーマ、またはＣＨＯ細胞の発現系である。多くのかかる系が商業的な業者から広く入手可能である。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、単一のベクターを用いて、例えば、ジシストロニックな発現単位で、または、異なるプロモーターの制御下で発現され得る。他の実施形態では、該二重特異性タンパク質を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、別々のベクターを用いて発現され得る。
【0329】
いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の二重特異性タンパク質を含むポリペプチドのいずれかをコードする核酸配列を含む単離された核酸、かかる核酸を含むベクター、ならびに核酸の複製及び／または二重特異性タンパク質の発現に使用される核酸が導入された宿主細胞を提供する。
【0330】
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、単離されたポリヌクレオチド）は、本明細書に開示する二重特異性タンパク質（例えば、上記セクションＩＩＩに記載されているもの）を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、以下の非公式配列表に開示する１つ以上のアミノ酸配列（例えば、重鎖配列、軽鎖配列及び／またはＦｃポリペプチド配列）をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、該ポリヌクレオチドは、以下の非公式配列表に開示する配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、異種核酸、例えば、異種プロモーターに作動可能に連結される。
【0331】
本開示の抗体、またはその断片をコードするポリヌクレオチドを含む適切なベクターとしては、クローニングベクター及び発現ベクターが挙げられる。選択されるクローニングベクターは、使用される予定の宿主細胞によって異なり得るが、有用なクローニングベクターは一般に、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一の標的を有することがあり、及び／または該ベクターを含むクローンの選択に使用することができるマーカーの遺伝子を有することがある。例としては、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにシャトルベクター、例えば、ｐＳＡ３及びｐＡＴ２８が挙げられる。これら及び他の多くのクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ等の商業的業者から入手可能である。
【0332】
発現ベクターは一般に、本開示の核酸を含む複製可能なポリヌクレオチド構築物である。該発現ベクターは、宿主細胞において、エピソームとして、または染色体ＤＮＡの不可欠な部分として複製し得る。適切な発現ベクターとしては、限定されないが、プラスミド、ウイルスベクターが挙げられ、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、及び任意の他のベクターが含まれる。
【0333】
本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはベクターをクローニングまたは発現するために適切な宿主細胞としては、原核細胞または真核細胞が挙げられる。いくつかの実施形態では、該宿主細胞は、原核細胞である。いくつかの実施形態では、該宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞である。いくつかの実施形態では、該宿主細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞である。
【0334】
別の態様では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質の作製方法を提供する。いくつかの実施形態では、該方法は、本明細書に記載の宿主細胞（例えば、本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはベクターを発現する宿主細胞）を当該二重特異性タンパク質の発現に適した条件下で培養することを含む。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、その後、該宿主細胞（または宿主細胞の培地）から回収される。いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、例えば、クロマトグラフィーによって精製される。
【0335】
ＶＩＩ．治療方法
いくつかの態様では、本明細書に提供するのは、対象に対して、治療有効量の本明細書に記載の任意の二重特異性タンパク質またはそれを含む医薬組成物を投与することを含む、該対象におけるがん（例えば、ＨＥＲ２陽性がん）を処置するまたはがん（例えば、ＨＥＲ２陽性がん）の脳転移を処置するための方法である。同様に本明細書に提供するのは、内皮を横切ってＨＥＲ２（例えば、ヒトＨＥＲ２）またはその抗原結合断片に結合することができる抗体可変領域のトランスサイトーシスの方法である。いくつかの実施形態では、該方法は、該内皮を、本明細書に記載の二重特異性タンパク質を含む組成物と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、該内皮は、血液脳関門（ＢＢＢ）である。
いくつかの態様では、本明細書に提供するのは、対象に対して、治療有効量の本明細書に記載の任意の二重特異性タンパク質またはそれを含む医薬組成物を投与することを含む、該対象におけるがん（例えば、ＨＥＲ２陽性がん）を処置するまたはがん（例えば、ＨＥＲ２陽性がん）の脳転移を処置するための方法である。同様に本明細書に提供するのは、内皮を横切ってＨＥＲ２（例えば、ヒトＨＥＲ２）またはその抗原結合断片に結合することができる抗体可変領域のトランスサイトーシスの方法である。いくつかの実施形態では、該方法は、該内皮を、本明細書に記載の二重特異性タンパク質を含む組成物と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、該内皮は、血液脳関門（ＢＢＢ）である。
【0336】
本明細書に提供する方法に従って処置され得るＨＥＲ２陽性がんの非限定的な例としては、ＨＥＲ２陽性乳がん、卵巣がん、膀胱がん、唾液腺がん、子宮内膜がん、膵臓がん、及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、ならびにＨＥＲ２陽性胃腺癌及び／またはＨＥＲ２陽性食道胃接合部腺癌が挙げられる。いくつかの実施形態では、該ＨＥＲ２陽性がんは、ＨＥＲ２陽性乳がんである。いくつかの実施形態では、該ＨＥＲ２陽性がんは、ＨＥＲ２陽性胃腺癌及び／またはＨＥＲ２陽性食道胃接合部腺癌である。いくつかの実施形態では、該ＨＥＲ２陽性がんは、転移がんである。
【0337】
さらに他の態様では、本明細書に提供するのは、がん（例えば、ＨＥＲ２陽性がん）の転移を処置するための方法である。いくつかの実施形態では、該方法は、本明細書に記載の治療有効量の抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質を該対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、該転移は、上記のＨＥＲ２陽性がんの脳転移である。いくつかの実施形態では、該転移は、ＨＥＲ２陽性乳がんの脳転移である。いくつかの実施形態では、該転移は、ＨＥＲ２陽性胃腺癌及び／またはＨＥＲ２陽性食道胃接合部腺癌の脳転移である。
【0338】
いくつかの実施形態では、その治療的有用性は、腫瘍増殖の減少もしくは減速、腫瘍サイズ（例えば、体積）の減少、腫瘍細胞生存率の減少、転移性病変の数の減少、がん（例えば、ＨＥＲ２陽性がん）の１つ以上の徴候もしくは症状の改善、及び／または患者の生存率の増加を含み得る。いくつかの実施形態では、腫瘍細胞生存率、腫瘍増殖、腫瘍サイズ、及び／または転移性病変の数は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上減少する。
【0339】
いくつかの実施形態では、該抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質は、ＨＥＲ２活性に拮抗する。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２活性は阻害される（例えば、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上）。
【0340】
本明細書に記載の抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質の投与経路は、経口、腹腔内、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、髄腔内、吸入、局所、病巣内、直腸、気管支内、経鼻、経粘膜、腸内、眼もしくは耳への送達、または当技術分野で既知の任意の他の方法であり得る。いくつかの実施形態では、該抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質は、経口投与、静脈内投与、または腹腔内投与される。
【0341】
ＶＩＩＩ．医薬組成物及びキット
他の態様では、本開示による抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質を含む医薬組成物及びキットを提供する。
他の態様では、本開示による抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質を含む医薬組成物及びキットを提供する。
【0342】
医薬組成物
本開示に使用するための製剤を調製するための指針は、当業者に既知の医薬品及び製剤についての多くのハンドブックに見出すことができる。
本開示に使用するための製剤を調製するための指針は、当業者に既知の医薬品及び製剤についての多くのハンドブックに見出すことができる。
【0343】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質を含み、さらに、１つ以上の医薬的に許容される担体及び／または賦形剤を含む。医薬的に許容される担体としては、任意の溶媒、分散媒、またはコーティングが挙げられ、これらは、当該活性薬剤と生理学的に適合し、該活性薬剤の活性を妨害しないか、または阻害しない。
【0344】
いくつかの実施形態では、該二重特異性タンパク質は、注射による非経口投与用に製剤化され得る。通常、インビボ投与に使用する医薬組成物は、例えば、加熱滅菌、蒸気滅菌、滅菌濾過、または照射滅菌等の無菌である。
【0345】
本明細書に記載の医薬組成物の用量及び所望の薬物濃度は、想定される特定の使用に応じて異なり得る。
【0346】
キット
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質を含む、がん（例えば、ＨＥＲ２陽性がん）の処置に使用するためのキットを提供する。いくつかの実施形態では、該キットはさらに、１つ以上のさらなる治療薬を含む。例えば、いくつかの実施形態では、該キットは、本明細書に記載の二重特異性タンパク質を含み、さらに、がんの処置に使用するための１つ以上のさらなる治療薬を含む。いくつかの実施形態では、該キットはさらに、本明細書に記載の方法を実施するための指示（すなわち、プロトコル）を含む説明資料（例えば、二重特異性タンパク質を投与するためのキットの使用説明書）を含む。該説明資料は通常、書かれた資料または印刷物を含むが、それに限定されない。かかる説明を保存し、それらをエンドユーザーに伝えることが可能な任意の媒体が、本開示によって企図される。かかる媒体としては、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（例えば、ＣＤ－ＲＯＭ）等が挙げられるがこれらに限定されない。かかる媒体は、かかる説明資料を提供するインターネットサイトのアドレスを含む場合がある。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の二重特異性タンパク質を含む、がん（例えば、ＨＥＲ２陽性がん）の処置に使用するためのキットを提供する。いくつかの実施形態では、該キットはさらに、１つ以上のさらなる治療薬を含む。例えば、いくつかの実施形態では、該キットは、本明細書に記載の二重特異性タンパク質を含み、さらに、がんの処置に使用するための１つ以上のさらなる治療薬を含む。いくつかの実施形態では、該キットはさらに、本明細書に記載の方法を実施するための指示（すなわち、プロトコル）を含む説明資料（例えば、二重特異性タンパク質を投与するためのキットの使用説明書）を含む。該説明資料は通常、書かれた資料または印刷物を含むが、それに限定されない。かかる説明を保存し、それらをエンドユーザーに伝えることが可能な任意の媒体が、本開示によって企図される。かかる媒体としては、電子記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学媒体（例えば、ＣＤ－ＲＯＭ）等が挙げられるがこれらに限定されない。かかる媒体は、かかる説明資料を提供するインターネットサイトのアドレスを含む場合がある。
【実施例】
【0347】
ＩＸ．実施例
本発明を、具体例を通してより詳細に説明する。以下の実施例は、例示の目的で提供するに過ぎず、いかなる方法によっても本発明を限定することを意図するものではない。
本発明を、具体例を通してより詳細に説明する。以下の実施例は、例示の目的で提供するに過ぎず、いかなる方法によっても本発明を限定することを意図するものではない。
【0348】
実施例１．二重特異性タンパク質の生成
本明細書に記載の二重特異性タンパク質の構造を有し、図１～５に示す操作されたタンパク質を、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ及びヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶを標的とするために生成した。いくつかの構築物では、ＦｃポリペプチドのＣ末端のリジンを除去した。いくつかの構築物では、Ｆｄ部分（ＶＨ＋ＣＨ１）を、Ｆｃポリペプチドをコードする配列を含む発現ベクターにクローニングした。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドを、ＴｆＲ結合部位を有するように操作した。これら構築物のいくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドの一方は、ＴｆＲ結合部位及び「ノブ」（Ｔ３６６Ｗ）の変異（例えば、配列番号１３７）を含み、他方のＦｃポリペプチドは、「ホール」（Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）の変異（例えば、配列番号１３３）を含んでいた。さらに、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＦｃγＲ結合を減弱するＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａの変異も含んでいた。
本明細書に記載の二重特異性タンパク質の構造を有し、図１～５に示す操作されたタンパク質を、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩ及びヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶを標的とするために生成した。いくつかの構築物では、ＦｃポリペプチドのＣ末端のリジンを除去した。いくつかの構築物では、Ｆｄ部分（ＶＨ＋ＣＨ１）を、Ｆｃポリペプチドをコードする配列を含む発現ベクターにクローニングした。いくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドを、ＴｆＲ結合部位を有するように操作した。これら構築物のいくつかの実施形態では、Ｆｃポリペプチドの一方は、ＴｆＲ結合部位及び「ノブ」（Ｔ３６６Ｗ）の変異（例えば、配列番号１３７）を含み、他方のＦｃポリペプチドは、「ホール」（Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）の変異（例えば、配列番号１３３）を含んでいた。さらに、一方または両方のＦｃポリペプチドは、ＦｃγＲ結合を減弱するＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａの変異も含んでいた。
【0349】
ベクターを、ＥｘｐｉＣＨＯまたはＥｘｐｉ２９３細胞に、対応する軽鎖ベクターとともに、ノブ：ホール：軽鎖比１：１：２で共トランスフェクトした。発現されたタンパク質を馴化培地から、プロテインＡカラムに上清をロードすることによって精製した。そのカラムを、１０カラム容量のＰＢＳ、ｐＨ７．４で洗浄した。そのタンパク質を、１５０ｍＭのＮａＣｌを含む５０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ３．０で溶出し、直ちに２００ｍＭのアルギニン、１３７ｍＭのコハク酸、ｐＨ５．０で中和した。このタンパク質を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）（ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００）により、２００ｍＭのアルギニン、１３７ｍＭのコハク酸、ｐＨ５．０をランニング緩衝液として使用してさらに精製した。精製したタンパク質を、インタクトマスＬＣ／ＭＳで確認し、９５％を超える純度を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及び分析用ＨＰＬＣ－ＳＥＣで確認した。未修飾のヒトＩｇＧ１定常領域を含む抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質が生成された。以下の表１は、これらの抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び２つの対照抗ＨＥＲ２抗体の配列を示す。
【0350】
【表1】
【0351】
実施例２．二重特異性タンパク質のＢｉａｃｏｒｅ評価
二重特異性タンパク質の親和性を、ＳＰＲにより、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００またはＢｉａｃｏｒｅ ８Ｋを使用して測定した。Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）シリーズＳ ＣＭ５センサーチップは、ＨＥＲ２の親和性測定用のモノクローナルマウス抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体、またはＴｆＲの親和性測定用のマウス抗ヒトＦａｂ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製ヒト抗体またはＦａｂキャプチャーキット）で固定化した。連続３倍希釈の分析物（組み換えＨＥＲ２細胞外ドメインまたは組み換えＴｆＲアピカルドメイン）を、流量３０μＬ／分で注入した。各サンプルを、ＨＥＲ２細胞外ドメイン結合に関しては、３分間の結合及び１０分間の解離を使用し、ヒトＴｆＲアピカルドメイン結合に関しては、４０秒間の結合及び３分間の解離で分析した。各注入後、チップを３ＭのＭｇＣｌ２または５０ｍＭのグリシンをｐＨ２．０で使用して再生した。結合反応は、無関係のＩｇＧを同様の密度でキャプチャーしたフローセルからＲＵを差し引くことで補正した。ｋｏｎ及びｋｏｆｆの同時フィッティングの１：１Ｌａｎｇｕｉｒモデルを反応速度分析に用いた。構築物「抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ＿１」のＫＤは２．３ｎＭであり、構築物「抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ＿２」のＫＤは１．９ｎＭである。これら２つの構築物を以下に説明する。
二重特異性タンパク質の親和性を、ＳＰＲにより、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００またはＢｉａｃｏｒｅ ８Ｋを使用して測定した。Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）シリーズＳ ＣＭ５センサーチップは、ＨＥＲ２の親和性測定用のモノクローナルマウス抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体、またはＴｆＲの親和性測定用のマウス抗ヒトＦａｂ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製ヒト抗体またはＦａｂキャプチャーキット）で固定化した。連続３倍希釈の分析物（組み換えＨＥＲ２細胞外ドメインまたは組み換えＴｆＲアピカルドメイン）を、流量３０μＬ／分で注入した。各サンプルを、ＨＥＲ２細胞外ドメイン結合に関しては、３分間の結合及び１０分間の解離を使用し、ヒトＴｆＲアピカルドメイン結合に関しては、４０秒間の結合及び３分間の解離で分析した。各注入後、チップを３ＭのＭｇＣｌ２または５０ｍＭのグリシンをｐＨ２．０で使用して再生した。結合反応は、無関係のＩｇＧを同様の密度でキャプチャーしたフローセルからＲＵを差し引くことで補正した。ｋｏｎ及びｋｏｆｆの同時フィッティングの１：１Ｌａｎｇｕｉｒモデルを反応速度分析に用いた。構築物「抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ＿１」のＫＤは２．３ｎＭであり、構築物「抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ＿２」のＫＤは１．９ｎＭである。これら２つの構築物を以下に説明する。
【0352】
両構築物「抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ＿１」及び「抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ＿２」は、「Ｆａｂ－Ｆｃポリペプチド／ｓｃＦｖ－Ｆｃポリペプチド」構造を有する。構築物「抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ＿１」では、（ａ）は、配列番号１の配列（ノブＬＡＬＡを有するＣＨ３Ｃ．３５．２３．４のＮ末端とヒンジ領域を介して融合した抗ＨＥＲ２ＤＩＩのＦａｂ）を含み、（ｂ）は、配列番号２３の配列（ホールの変異を有するＦｃポリペプチドのＮ末端とヒンジ領域を介して融合した抗ＨＥＲ２ＤＩＶのｓｃＦｖ）を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列を含む。構築物「抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ＿２」では、（ａ）は、配列番号５の配列（ホールの変異を有するＦｃポリペプチドのＮ末端とヒンジ領域を介して融合した抗ＨＥＲ２ＤＩＩのＦａｂ）を含み、（ｂ）は、配列番号２４の配列（ノブＬＡＬＡを有するＣＨ３Ｃ．３５．２３．４のＮ末端とヒンジ領域を介して融合した抗ＨＥＲ２ＤＩＶのｓｃＦｖ）を含み、（ｃ）は、配列番号２５の配列を含む。両構築物において、そのｓｃＦｖ部分は、１００位でＧｌｎからＣｙｓへの置換を有する抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＬ領域（配列番号１１５）及び４４位でＧｌｙからＣｙｓへの置換を有する抗ＨＥＲ２ＤＩＶのＶＨ領域（配列番号１１３）を含む。また、両構築物において、（ｂ）のヒンジ領域は、５位でＣｙｓからＳｅｒへの変異を有する（ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２９））。
【0353】
以下の表２は、抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質のＨＥＲ２結合に関するＫＤ及びＴｆＲ結合に関するＫＤをさらに示す。
【0354】
【表2】
【0355】
実施例３．ＴｆＲならびにＨＥＲ２サブドメインＩＩ及びＩＶの同時標的指向
多くの腫瘍細胞及び腫瘍細胞株、例えば、ＢＴ４７４及びＯＥ１９は、ＨＥＲ２及びＴｆＲの両方を発現する。ＨＥＲ２サブドメインＩＶを標的とする抗体が、いくつかのＨＥＲ２＋細胞株において腫瘍細胞の増殖を阻害し腫瘍細胞の生存を低減することができることは、十分に確立されている一方で、本発明者らは、ＨＥＲ２サブドメインＩＶ及びＴｆＲを同時標的指向することにより、細胞の殺傷が高まるかどうかを理解しようとした。
多くの腫瘍細胞及び腫瘍細胞株、例えば、ＢＴ４７４及びＯＥ１９は、ＨＥＲ２及びＴｆＲの両方を発現する。ＨＥＲ２サブドメインＩＶを標的とする抗体が、いくつかのＨＥＲ２＋細胞株において腫瘍細胞の増殖を阻害し腫瘍細胞の生存を低減することができることは、十分に確立されている一方で、本発明者らは、ＨＥＲ２サブドメインＩＶ及びＴｆＲを同時標的指向することにより、細胞の殺傷が高まるかどうかを理解しようとした。
【0356】
「Ｆａｂ－Ｆｃポリペプチド／ｓｃＦｖ－Ｆｃポリペプチド」構造を有する２つの構築物を使用した。構築物「抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ＿１」及び構築物「抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ＿２」は、先の実施例に記載されている。
【0357】
本発明者らは、最初に、抗ＨＥＲ２療法に感受性のあるＨＥＲ２＋腫瘍細胞株ＢＴ４７４を用いた増殖阻害アッセイにおいて両構築物と対照のモノクローナル抗ＨＥＲ２抗体を比較した。ＢＴ４７４細胞を、９６ウェルプレートにて１０，０００細胞／ウェルで終夜プレーティングし、目的の分子の１６６ｎＭ（２５，０００ｎｇ／ｍＬ）で始まる１：３段階希釈液６０μＬで処置した。培地（ＲＰＭＩ）及び薬物を３日目に補充した。６日目に、細胞増殖を、５０μＬの増殖培地において５μＬのＷＳＴ－１試薬（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して測定した。このプレートをＷＳＴ－１試薬の存在下で４時間インキュベートし、４４０ｎｍの吸光度を測定した。増殖阻害／増殖のパーセントを、Ａ４４０ｎＭに基づいて算出し、未処置の対照に対して正規化した。図６Ａに示す通り、抗ＨＥＲ２－ＤＩＶ及び抗ＨＥＲ２－ＤＩＩの組み合わせは、対照と比較してＢＴ４７４細胞の生存率を低下させ、最大阻害は約８７％であった。同様に、抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ＿１及び抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ＿２は、抗ＨＥＲ２－ＤＩＶ及び抗ＨＥＲ２－ＤＩＩと比較して、同様の最大増殖阻害を示した（図６Ａ）。
【0358】
次に、本発明者らは、これら２つの構築物及び対照のモノクローナル抗ＨＥＲ２抗体を、抗ＨＥＲ２処置に耐性がある別のＨＥＲ２＋がん細胞株ＯＥ１９と比較した。図６Ｂに示すように、２つの抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ構築物及び抗ＨＥＲ２－ＤＩＶと抗ＨＥＲ２－ＤＩＩの組み合わせの最大増殖阻害効果に差がなかったＢＴ４７４とは異なり、ＯＥ１９細胞株は、抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ＿１及び抗ＨＥＲ２＿ＤＩＶ／ＤＩＩ＿ｓｃＦｖ＿２処置後に約８０％の最大阻害を有した一方、これらの細胞は、抗ＨＥＲ２－ＤＩＶと抗ＨＥＲ２－ＤＩＩの組み合わせに最小限に反応した。これらの結果は、ＨＥＲ２サブドメインＩＶ、ＨＥＲ２サブドメインＩＩ、及びＴｆＲを標的指向することにより、ＨＥＲ２サブドメインのみを標的指向することと比較して、抗ＨＥＲ２耐性細胞株において細胞増殖阻害の向上をもたらすことができたことを示唆する。注目すべきことに、細胞株がすでに抗ＨＥＲ２療法に感受性がある場合、いかなる向上もマスクされる可能性がある。
【0359】
実施例４．抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質のインビボ薬物動態特性
ＴｆＲ結合がない場合の抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質のインビボ血漿薬物動態を評価するため、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質を静脈内投与した。血液を、単回投与後３０分、１日、４日、及び７日で採取し、血漿まで処理し、分析まで－８０℃で保存した。血漿中の二重特異性タンパク質の全治療濃度を、抗ヒトＩｇＧサンドイッチＥＬＩＳＡ（図７）を使用し、標準として適切な投与溶液を使用して定量化した。プレートを抗ヒトＩｇＧで終夜コーティングした後、洗浄緩衝液で３回洗浄した。標準及び適切に希釈したサンプルを、室温で２時間撹拌しながらインキュベートした。インキュベーション後、プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄した。検出抗体をブロッキング緩衝液で希釈し、プレートを室温で１時間撹拌しながらインキュベートした。最後の３回の洗浄後、ＴＭＢ基質を添加してプレートを発色させ、５～１０分間インキュベートした。反応をクエンチし、４５０ｎＭの吸光度（Ｂｉｏｔｅｋプレートリーダー）を使用して読み取った。すべての抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質は、正常なＩｇＧの範囲内のクリアランス値を示した。
ＴｆＲ結合がない場合の抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質のインビボ血漿薬物動態を評価するため、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１０ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質を静脈内投与した。血液を、単回投与後３０分、１日、４日、及び７日で採取し、血漿まで処理し、分析まで－８０℃で保存した。血漿中の二重特異性タンパク質の全治療濃度を、抗ヒトＩｇＧサンドイッチＥＬＩＳＡ（図７）を使用し、標準として適切な投与溶液を使用して定量化した。プレートを抗ヒトＩｇＧで終夜コーティングした後、洗浄緩衝液で３回洗浄した。標準及び適切に希釈したサンプルを、室温で２時間撹拌しながらインキュベートした。インキュベーション後、プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄した。検出抗体をブロッキング緩衝液で希釈し、プレートを室温で１時間撹拌しながらインキュベートした。最後の３回の洗浄後、ＴＭＢ基質を添加してプレートを発色させ、５～１０分間インキュベートした。反応をクエンチし、４５０ｎＭの吸光度（Ｂｉｏｔｅｋプレートリーダー）を使用して読み取った。すべての抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質は、正常なＩｇＧの範囲内のクリアランス値を示した。
【0360】
実施例５．抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質のインビボでの脳への取り込み
抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質のインビボでの脳への取り込みを評価するため、ＴｆＲｍｕ／ｈｕＫＩマウスに、５０ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質を静脈内投与した。投与の約２４時間後、心穿刺により全血をＥＤＴＡ被覆チューブに採取し、次いで動物を氷冷ＰＢＳで灌流した。臨床血液化学及び網状赤血球の定量化（図８Ａ）を、新鮮な全血を使用して評価し、別のアリコートを血漿まで処理した。ほとんどの抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質は、対照で処置したマウスと比較して、正常範囲内の網状赤血球値を示した。
抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質のインビボでの脳への取り込みを評価するため、ＴｆＲｍｕ／ｈｕＫＩマウスに、５０ｍｇ／ｋｇの抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質を静脈内投与した。投与の約２４時間後、心穿刺により全血をＥＤＴＡ被覆チューブに採取し、次いで動物を氷冷ＰＢＳで灌流した。臨床血液化学及び網状赤血球の定量化（図８Ａ）を、新鮮な全血を使用して評価し、別のアリコートを血漿まで処理した。ほとんどの抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質は、対照で処置したマウスと比較して、正常範囲内の網状赤血球値を示した。
【0361】
その血漿及び新鮮な脳をドライアイス上で急速冷凍し、－８０℃で保存した。Ｑｉａｇｅｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｌｙｓｅｒ ＩＩを使用して、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤を含むＰＢＳの１％ＮＰ４０緩衝液の組織重量の１０倍体積で脳をホモジナイズした。上清を－８０℃で保存した。抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質の血漿（図８Ｂ）及び脳溶解物（図８Ｃ）濃度を、サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して定量化した。血漿濃度は、予想されるＴｆＲを介した薬物動態を示した。抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質の脳内濃度は、脳内で約１５ｎＭ～５２ｎＭに及び、これらの分子が血液脳関門のＴｆＲに結合し、脳に輸送される能力を実証した。得られた脳対血漿濃度のパーセンテージは、約１～２％（図８Ｄ）であり、ＴｆＲまたは他の受容体媒介トランスサイトーシス標的指向化を欠く抗体に関して予想されるより約１０倍高かった。このデータは、本明細書に記載の異なる構造の多数の抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質が脳浸透性であることを実証し、裏付ける。
【0362】
実施例６．抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質のインビトロ増殖阻害
抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び既存の抗ＨＥＲ２療法のインビトロ増殖阻害効果を、抗ＨＥＲ２療法に対して感受性がある様々なＨＥＲ２＋腫瘍細胞株（ＢＴ４７４（図９Ａ～９Ｆ）、ＯＥ１９（図９Ｇ～９Ｉ）、及びＺＲ７５（図９Ｊ～９Ｌ））で評価した。腫瘍細胞を、９６ウェルプレートにて１０，０００細胞／ウェルで終夜プレーティングし、目的の分子の１６６ｎＭ（２５，０００ｎｇ／ｍＬ）で始まる１：３段階希釈液６０μＬで処置した。培地（ＲＰＭＩ）及び薬物を３日目に補充した。ニューレグリン１（ＮＲＧ１）処置ＢＴ４７４群（図９Ｄ～９Ｆ）に関しては、細胞を５０ｎｇ／ｍｌのＮＲＧ１の存在下でインキュベートした。６日目に、細胞増殖を、５０μＬの増殖培地において５μＬのＷＳＴ－１試薬（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して測定した。このプレートをＷＳＴ－１試薬の存在下で４時間インキュベートし、４４０ｎｍの吸光度を測定した。増殖阻害／増殖のパーセントを、Ａ４４０ｎＭに基づいて算出し、未処置の対照に対して正規化した。以下の表３は、３つの異なるＨＥＲ２＋細胞株における抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照の増殖阻害効果をさらに示す。図９Ａ～９Ｌ及び表３は、全体的な抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質が、野生型Ｆｃを用いた抗ＨＥＲ２ＤＩＶ対照及び抗ＨＥＲ２ＤＩＩ対照と同等またはそれらより優れた増殖阻害を示すことを示している。ある特定の抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質によるいくつかの細胞株では、おそらくはある特定のコンフィギュレーションでの結合部位の競合が原因で、野生型Ｆｃを使用した抗ＨＥＲ２ＤＩＶ対照または抗ＨＥＲ２ＤＩＩ対照と比較して増殖阻害が減少した。
抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び既存の抗ＨＥＲ２療法のインビトロ増殖阻害効果を、抗ＨＥＲ２療法に対して感受性がある様々なＨＥＲ２＋腫瘍細胞株（ＢＴ４７４（図９Ａ～９Ｆ）、ＯＥ１９（図９Ｇ～９Ｉ）、及びＺＲ７５（図９Ｊ～９Ｌ））で評価した。腫瘍細胞を、９６ウェルプレートにて１０，０００細胞／ウェルで終夜プレーティングし、目的の分子の１６６ｎＭ（２５，０００ｎｇ／ｍＬ）で始まる１：３段階希釈液６０μＬで処置した。培地（ＲＰＭＩ）及び薬物を３日目に補充した。ニューレグリン１（ＮＲＧ１）処置ＢＴ４７４群（図９Ｄ～９Ｆ）に関しては、細胞を５０ｎｇ／ｍｌのＮＲＧ１の存在下でインキュベートした。６日目に、細胞増殖を、５０μＬの増殖培地において５μＬのＷＳＴ－１試薬（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して測定した。このプレートをＷＳＴ－１試薬の存在下で４時間インキュベートし、４４０ｎｍの吸光度を測定した。増殖阻害／増殖のパーセントを、Ａ４４０ｎＭに基づいて算出し、未処置の対照に対して正規化した。以下の表３は、３つの異なるＨＥＲ２＋細胞株における抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質及び抗ＨＥＲ２対照の増殖阻害効果をさらに示す。図９Ａ～９Ｌ及び表３は、全体的な抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質が、野生型Ｆｃを用いた抗ＨＥＲ２ＤＩＶ対照及び抗ＨＥＲ２ＤＩＩ対照と同等またはそれらより優れた増殖阻害を示すことを示している。ある特定の抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質によるいくつかの細胞株では、おそらくはある特定のコンフィギュレーションでの結合部位の競合が原因で、野生型Ｆｃを使用した抗ＨＥＲ２ＤＩＶ対照または抗ＨＥＲ２ＤＩＩ対照と比較して増殖阻害が減少した。
【0363】
【表3】
【0364】
実施例７．さらなる二重特異性タンパク質の生成
組み換え二重特異性タンパク質バリアントの発現及び精製
（ｉ）ＴｆＲ結合部位及びノブ（Ｔ３６６Ｗ）の変異を含む重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）ホール（Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）の変異を含む重鎖ポリペプチド、ならびに（ｉｉｉ）表４及び表５における組み合わせに従う軽鎖からなる発現プラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３またはＥｘｐｉＣＨＯ細胞に共トランスフェクトする。続いて、組み換え二重特異性タンパク質バリアントを馴化培地から、プロテインＡカラム（ＧＥ Ｍａｂ Ｓｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ）に上清をロードすることによって精製する。そのカラムを、１０カラム容量のＰＢＳ、ｐＨ７．４で洗浄する。そのタンパク質を、１５０ｍＭのＮａＣｌを含む５０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ３．０で溶出し、直ちに２００ｍＭのアルギニン、１３７ｍＭのコハク酸、ｐＨ５．０で中和する。このタンパク質を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００）により、２００ｍＭのアルギニン、１３７ｍＭのコハク酸、ｐＨ５．０をランニング緩衝液として使用してさらに精製する。精製したタンパク質を、インタクトマスＬＣ／ＭＳで確認し、９５％を超える純度を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及び分析用ＨＰＬＣ－ＳＥＣで確認する。
組み換え二重特異性タンパク質バリアントの発現及び精製
（ｉ）ＴｆＲ結合部位及びノブ（Ｔ３６６Ｗ）の変異を含む重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）ホール（Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）の変異を含む重鎖ポリペプチド、ならびに（ｉｉｉ）表４及び表５における組み合わせに従う軽鎖からなる発現プラスミドを、Ｅｘｐｉ２９３またはＥｘｐｉＣＨＯ細胞に共トランスフェクトする。続いて、組み換え二重特異性タンパク質バリアントを馴化培地から、プロテインＡカラム（ＧＥ Ｍａｂ Ｓｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ）に上清をロードすることによって精製する。そのカラムを、１０カラム容量のＰＢＳ、ｐＨ７．４で洗浄する。そのタンパク質を、１５０ｍＭのＮａＣｌを含む５０ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ３．０で溶出し、直ちに２００ｍＭのアルギニン、１３７ｍＭのコハク酸、ｐＨ５．０で中和する。このタンパク質を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００）により、２００ｍＭのアルギニン、１３７ｍＭのコハク酸、ｐＨ５．０をランニング緩衝液として使用してさらに精製する。精製したタンパク質を、インタクトマスＬＣ／ＭＳで確認し、９５％を超える純度を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及び分析用ＨＰＬＣ－ＳＥＣで確認する。
【0365】
【表4】
【0366】
【表5】
【0367】
重鎖を、細胞培養の産生の過程で、そのＣ末端のリジン残基が除去されるようにさらに処理してもよい。従って、上記の表４及び表５に列挙した二重特異性タンパク質は、未処理の（すなわち、Ｃ末端のリジン残基を含む）重鎖を含むタンパク質分子を指す場合も、処理された（すなわち、Ｃ末端のリジン残基を含まない）１つ以上の重鎖を含むタンパク質分子を指す場合も、処理された及び／または未処理の重鎖を有するタンパク質分子の混合物を指す場合もある。
【0368】
実施例８．抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質のインビトロＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ
表６における組み合わせに従う二重特異性抗体のヒトＦｃγＲＩＩＩａの活性化を評価するためにヒトＡＤＣＣレポーターバイオアッセイ、Ｖバリアントキット（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ７０１８）を使用し、ヒトＦｃγＲＩＩａレポーターの活性化を測定するためにヒトＦｃｇＲＩＩａ ＡＤＣＰレポーターバイオアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ９９９５）を使用した。このキットは、以下に記載の成分のすべてを含む。ＨＥＲ２及びＴｆＲの発現レベルが異なるいくつかの細胞株を試験した。細胞ＳＫＢＲ３（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－３０）、ＺＲ－７５－３０（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５０４）、ＢＴ－４７４（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２０）、ＯＥ－１９（Ｓｉｇｍａ ９６０７１７２１）、ＣＨＯ－ＫＩ＋ヒトＴｆＲ（ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒ ＣＲＯ契約）を、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅウシ血清ＳＨ３００８０．０３）及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １５１４０－１２２）を補充したＲＰＭＩ（Ｌｉｆｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ６１８７０－０３６）中で対数期まで培養し、ＰＢＳで２回洗浄し、１０％ＦＢＳ及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩに、１．０ｘ１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。白色９６ウェル高結合Ｎｕｎｃプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、ウェルあたり、５０，０００細胞を含む培地２５μＬでコーティングした。
表６における組み合わせに従う二重特異性抗体のヒトＦｃγＲＩＩＩａの活性化を評価するためにヒトＡＤＣＣレポーターバイオアッセイ、Ｖバリアントキット（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ７０１８）を使用し、ヒトＦｃγＲＩＩａレポーターの活性化を測定するためにヒトＦｃｇＲＩＩａ ＡＤＣＰレポーターバイオアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ９９９５）を使用した。このキットは、以下に記載の成分のすべてを含む。ＨＥＲ２及びＴｆＲの発現レベルが異なるいくつかの細胞株を試験した。細胞ＳＫＢＲ３（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－３０）、ＺＲ－７５－３０（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５０４）、ＢＴ－４７４（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２０）、ＯＥ－１９（Ｓｉｇｍａ ９６０７１７２１）、ＣＨＯ－ＫＩ＋ヒトＴｆＲ（ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒ ＣＲＯ契約）を、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅウシ血清ＳＨ３００８０．０３）及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １５１４０－１２２）を補充したＲＰＭＩ（Ｌｉｆｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ６１８７０－０３６）中で対数期まで培養し、ＰＢＳで２回洗浄し、１０％ＦＢＳ及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩに、１．０ｘ１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。白色９６ウェル高結合Ｎｕｎｃプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、ウェルあたり、５０，０００細胞を含む培地２５μＬでコーティングした。
【0369】
抗体のタイトレーションは、４％低ＩｇＧ血清を含むＲＰＭＩで調製し、ウェルあたり２５μｌをプレートに加えて細胞をオプソニン化した後、蓋をし、３７℃、５％ＣＯ２にて３０分間インキュベートした。抗体オプソニン化の間に、３．５ｍＬの培地を３７℃に予熱し、ＦｃγＲレポーター細胞を反転せずに３７℃のウォーターバスで素早く解凍し、１５ｍＬのコニカルチューブにて予熱した培地に穏やかに混合しながら加えた。３０分間のオプソニン化後、ＦｃγＲレポーター細胞株を各プレートにウェルあたり２５μｌ添加し、３７℃、５％ＣＯ２にて６時間（ＳＫＢＲ３、ＺＲ－７５－３０、ＢＴ－４７４に関するｈＦｃγＲＩＩＩａ及びｈＦｃγＲＩＩａの活性化）または１６時間（ＣＨＯ－ＫＩ＋ｈｕＴｆＲに関するｈＦｃγＲＩＩＩａ及びｈＦｃγＲＩＩａ）インキュベートした。インキュベーション後、プレートを室温に慣らし、ウェルあたり７５μＬのＢｉｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼ基質懸濁液（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加え、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｅｎｖｉｓｉｏｎリーダーにて発光を測定した。結果を表７に示す。
【0370】
【表6】
【0371】
【表7】
【0372】
目的は、対照及び／またはＦｃ１と比較して、ＴｆＲ媒介ＡＤＣＣを増加させず、また、対照と同等のレベルのＨＥＲ２媒介ＡＤＣＣ及び／またはＦｃ１と比較して改善されたレベルのＨＥＲ２媒介ＡＤＣＣレベルを有するＦｃバリアントを開発することであった。上記の表７に示すように、Ｆｃ１、Ｆｃ４１、Ｆｃ５、Ｆｃ４５、Ｆｃ４２、Ｆｃ５２、Ｆｃ４４、Ｆｃ５０、Ｆｃ６８、Ｆｃ７、Ｆｃ８、Ｆｃ２、Ｆｃ３４、及びＦｃ４はすべて、ＴｆＲを過剰発現するＣＨＯ細胞において対照と同等のレベルのＴｆＲ媒介ＡＤＣＣを有した。Ｆｃ５０及びＦｃ５２は、ＴｆＲ媒介ＡＤＣＣの活性化を増加させることなく、試験したすべてのＨＥＲ２を過剰発現する細胞株にわたって最も高レベルのＨＥＲ２媒介ＡＤＣＣを示した。
【0373】
Ｆｃ１、Ｆｃ４１、Ｆｃ５、Ｆｃ４５、Ｆｃ４２、Ｆｃ５２、Ｆｃ４４、及びＦｃ５０バリアントのＡＤＣＰレベルもまた表７に、ＨＥＲ２を過剰発言する細胞株、すなわち、ＯＥ１９、ＺＲ－７５－３０、及びＳＫＢＲ３にわたって対象と比較して示されている。
【0374】
実施例９ 抗ＨＥＲ２二重特異性タンパク質のインビトロ増殖阻害
増殖阻害アッセイを使用して、異なる抗体で異なる期間処置した後の細胞の生存率を特定する。ＨＥＲ２及びＴｆＲの発現レベルが異なるいくつかの細胞株を試験する。細胞ＳＫＢＲ３（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－３０）、ＺＲ－７５－３０（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５０４）、ＢＴ－４７４（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２０）、ＯＥ－１９（Ｓｉｇｍａ ９６０７１７２１）、ＣＨＯ－ＫＩ＋ヒトＴｆＲ（ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒ ＣＲＯ契約）を、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅウシ血清ＳＨ３００８０．０３）及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １５１４０－１２２）を補充したＲＰＭＩ（Ｌｉｆｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ６１８７０－０３６）中で対数期まで培養する。ＰＢＳで洗浄した後、これらの細胞を１０％ＦＢＳ及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩに、１．０ｘ１０５細胞／ｍＬで再懸濁する。黒色のポリ－Ｄ－リジンプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３５４６４０）を、ウェルあたり、１０，０００細胞を含む細胞培地１００ｕｌでコーティングする。これらのプレートを、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベータ内で２４時間インキュベートする。
増殖阻害アッセイを使用して、異なる抗体で異なる期間処置した後の細胞の生存率を特定する。ＨＥＲ２及びＴｆＲの発現レベルが異なるいくつかの細胞株を試験する。細胞ＳＫＢＲ３（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－３０）、ＺＲ－７５－３０（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５０４）、ＢＴ－４７４（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－２０）、ＯＥ－１９（Ｓｉｇｍａ ９６０７１７２１）、ＣＨＯ－ＫＩ＋ヒトＴｆＲ（ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒ ＣＲＯ契約）を、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅウシ血清ＳＨ３００８０．０３）及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ １５１４０－１２２）を補充したＲＰＭＩ（Ｌｉｆｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ６１８７０－０３６）中で対数期まで培養する。ＰＢＳで洗浄した後、これらの細胞を１０％ＦＢＳ及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩに、１．０ｘ１０５細胞／ｍＬで再懸濁する。黒色のポリ－Ｄ－リジンプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ３５４６４０）を、ウェルあたり、１０，０００細胞を含む細胞培地１００ｕｌでコーティングする。これらのプレートを、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベータ内で２４時間インキュベートする。
【0375】
抗体のタイトレーションは、１０％ＦＢＳ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩで調製する。抗体を、各プレートに、ウェルあたり６５μｌで加えた後、蓋をし、３７℃、５％ＣＯ２にて７２時間（ＯＥ－１９細胞株のみ）インキュベートする。ＢＴ－４７４及びＺＲ－７５－３０細胞株の場合、７２時間後にさらに６５μｌの抗体を加え、その後３７℃、５％ＣＯ２でさらに７２時間インキュベートした。
【0376】
７日目に、細胞増殖を、５０μＬの増殖培地において５μＬのＷＳＴ－１試薬（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して測定する。このプレートをＷＳＴ－１試薬の存在下で４時間インキュベートし、４４０ｎｍの吸光度を測定する。増殖阻害／増殖のパーセントを、Ａ４４０ｎＭに基づいて算出し、未処置の対照に対して正規化する。
【0377】
Ｘ．例示的な実施形態
本開示の主題に従って提供される例示的な実施形態には、特許請求の範囲及び以下の実施形態が含まれるがこれらに限定されない。
本開示の主題に従って提供される例示的な実施形態には、特許請求の範囲及び以下の実施形態が含まれるがこれらに限定されない。
【0378】
１．以下：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、前記第一及び前記第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、前記第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために前記（ａ）に記載のＦｄ部分と対になる軽鎖ポリペプチド
を含む、タンパク質であって、
前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、または、前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ
前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む、
前記タンパク質。
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、前記第一及び前記第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、前記第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために前記（ａ）に記載のＦｄ部分と対になる軽鎖ポリペプチド
を含む、タンパク質であって、
前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、または、前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ
前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む、
前記タンパク質。
【0379】
２．前記Ｓ２３９Ｄ及び／または前記Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強することが可能である、実施形態１に記載のタンパク質。
【0380】
３．（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｇ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｈ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｊ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｋ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｌ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｍ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｎ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｏ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
実施形態１または２に記載のタンパク質。
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｇ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｈ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｊ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｋ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｌ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｍ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｎ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｏ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
実施形態１または２に記載のタンパク質。
【0381】
４．（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
実施形態３に記載のタンパク質。
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
実施形態３に記載のタンパク質。
【0382】
５．（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含む、
実施形態４に記載のタンパク質。
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含む、
実施形態４に記載のタンパク質。
【0383】
６．前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する、実施形態１～５のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0384】
７．前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する、実施形態１～５のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0385】
８．前記第二のＦｃポリペプチドが、第一のリンカーを介して前記ｓｃＦｖと融合している、実施形態１～７のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0386】
９．前記第一のリンカーが、１～２０アミノ酸長を有する、実施形態８に記載のタンパク質。
【0387】
１０．前記第一のリンカーが、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む、実施形態８または９に記載のタンパク質。
【0388】
１１．前記ｓｃＦｖが、第二のリンカーを介して接続されているＶＬ領域及びＶＨ領域を含む、実施形態１～１０のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0389】
１２．前記第二のリンカーが、１～２０アミノ酸長を有する、実施形態１１に記載のタンパク質。
【0390】
１３．前記第二のリンカーが、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む、実施形態１１または１２に記載のタンパク質。
【0391】
１４．前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に特異的に結合する、実施形態１～１３のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0392】
１５．前記第一のＦｃポリペプチド及び前記第二のＦｃポリペプチドが各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含む、実施形態１～１４のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0393】
１６．ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｗの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含む、実施形態１５に記載のタンパク質。
【0394】
１７．ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｗの置換を含む、実施形態１５に記載のタンパク質。
【0395】
１８．前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾を含む、実施形態１４～１７のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0396】
１９．前記エフェクター機能を低下させる修飾が、ＥＵナンバリングに従ってＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換である、実施形態１８に記載のタンパク質。
【0397】
２０．前記第一のＦｃポリペプチドが、ＴｆＲに特異的に結合し、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む、実施形態１９に記載のタンパク質。
【0398】
２１．前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従ってＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換をさらに含む、実施形態２０に記載のタンパク質。
【0399】
２２．前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位及び２３５位にＬｅｕ、ならびに３２９位にプロリンを含む、実施形態２１に記載のタンパク質。
【0400】
２３．前記第二のＦｃポリペプチドが、ＴｆＲに特異的に結合し、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む、実施形態１９に記載のタンパク質。
【0401】
２４．前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従ってＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換をさらに含む、実施形態２３に記載のタンパク質。
【0402】
２５．前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位及び２３５位にＬｅｕ、ならびに３２９位にプロリンを含む、実施形態２４に記載のタンパク質。
【0403】
２６．ヒンジ領域またはその一部分が、前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドのＮ末端に連結されている、実施形態１～２５のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0404】
２７．前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、配列番号１３１～１４９及び１８３～１９６からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、実施形態１～２６のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0405】
２８．前記第一のＦｃポリペプチドまたは前記第二のＦｃポリペプチドが、配列番号１３３及び１８３～１８５から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７に記載のタンパク質。
【0406】
２９．前記第一のＦｃポリペプチドまたは前記第二のＦｃポリペプチドが、配列番号１３７及び１８６～１９６から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７に記載のタンパク質。
【0407】
３０．前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、ＥＵナンバリングに従って３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３５～１３９及び１８６～１９６から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、実施形態１～２９のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0408】
３１．前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、かつ
前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、
実施形態１～３０のいずれか１つに記載のタンパク質。
前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、
実施形態１～３０のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0409】
３２．前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、かつ
前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、
実施形態１～３０のいずれか１つに記載のタンパク質。
前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、
実施形態１～３０のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0410】
３３．以下：
（ａ）（ｉ）配列番号１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１５９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｂ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｃ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｄ）（ｉ）配列番号１６６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｅ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｆ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｇ）（ｉ）配列番号１６７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｈ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｉ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｊ）（ｉ）配列番号１６６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｋ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｌ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｍ）（ｉ）配列番号１６７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド
を含む、タンパク質。
（ａ）（ｉ）配列番号１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１５９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｂ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｃ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｄ）（ｉ）配列番号１６６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｅ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｆ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｇ）（ｉ）配列番号１６７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｈ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｉ）（ｉ）配列番号１６４の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｊ）（ｉ）配列番号１６６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｋ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｌ）（ｉ）配列番号１６５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド、または
（ｍ）（ｉ）配列番号１６７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２５の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖ポリペプチド
を含む、タンパク質。
【0411】
３４．（ａ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１５９の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｂ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６４の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７３の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｃ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６４の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７４の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｄ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６６の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７３の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｅ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６５の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７３の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｆ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６５の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７４の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｇ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６７の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７３の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｈ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６４の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７５の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｉ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６４の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７６の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｊ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６６の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７５の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｋ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６５の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７５の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｌ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６５の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７６の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｍ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６７の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７５の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、
実施形態３３に記載のタンパク質。
（ｂ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６４の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７３の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｃ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６４の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７４の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｄ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６６の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７３の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｅ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６５の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７３の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｆ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６５の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７４の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｇ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６７の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７３の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｈ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６４の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７５の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｉ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６４の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７６の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｊ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６６の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７５の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｋ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６５の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７５の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｌ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６５の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７６の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、または
（ｍ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６７の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７５の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記軽鎖ポリペプチドが、配列番号２５の配列を含む、
実施形態３３に記載のタンパク質。
【0412】
３５．以下：
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、前記第一及び前記第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、前記第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド
を含む、タンパク質であって、
前記（ａ）及び／または前記（ｂ）におけるＦｄ部分が、ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、
前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、または、前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ
前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む、
前記タンパク質。
（ａ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第一のＦｃポリペプチド、
（ｂ）ＦａｂのＦｄ部分とＮ末端で融合している第二のＦｃポリペプチドであって、前記第一及び前記第二のＦｃポリペプチドがＦｃ二量体を形成する、前記第二のＦｃポリペプチド、ならびに
（ｃ）Ｆａｂを形成するために（ａ）及び（ｂ）に記載の各Ｆｄ部分と各々対になる２つの軽鎖ポリペプチド
を含む、タンパク質であって、
前記（ａ）及び／または前記（ｂ）におけるＦｄ部分が、ｓｃＦｖとＮ末端で融合しており、
前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、または、前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ
前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、ＥＵナンバリングに従ってＳ２３９Ｄ及び／またはＩ３３２Ｅの置換を含む、
前記タンパク質。
【0413】
３６．前記Ｓ２３９Ｄ及び／または前記Ｉ３３２Ｅの置換を独立して含む前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、ＨＥＲ２媒介エフェクター機能を増強することが可能である、実施形態３５に記載のタンパク質。
【0414】
３７．（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｇ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｈ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｊ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｋ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｌ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｍ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｎ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｏ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
実施形態３５または３６に記載のタンパク質。
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｇ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｈ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｉ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｊ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｋ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｌ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
（ｍ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｎ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｏ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、
実施形態３５または３６に記載のタンパク質。
【0415】
３８．（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
実施形態３７に記載のタンパク質。
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換を含む、
実施形態３７に記載のタンパク質。
【0416】
３９．（ａ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含む、
実施形態３８に記載のタンパク質。
（ｂ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含む、
（ｃ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｄ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含む、
（ｅ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄの置換及び３３２位にイソロイシンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｓ２３９Ｄ及びＩ３３２Ｅの置換を含む、または
（ｆ）ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｉ３３２Ｅの置換及び２３９位にセリンを含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、２３９位にセリン及び３３２位にイソロイシンを含む、
実施形態３８に記載のタンパク質。
【0417】
４０．前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合する、実施形態３５～３９のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0418】
４１．前記Ｆａｂが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＶに結合し、かつ前記ｓｃＦｖが、ヒトＨＥＲ２のサブドメインＩＩに結合する、実施形態３５～３９のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0419】
４２．前記（ａ）または前記（ｂ）におけるＦｄ部分が、前記ｓｃＦｖとＮ末端で融合している、実施形態３５～４１のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0420】
４３．前記（ａ）及び／または前記（ｂ）におけるＦｄ部分が、第一のリンカーを介して前記ｓｃＦｖと融合している、実施形態３５～４２のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0421】
４４．前記第一のリンカーが、１～２０アミノ酸長を有する、実施形態４３に記載のタンパク質。
【0422】
４５．前記第一のリンカーが、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む、実施形態４３または４４に記載のタンパク質。
【0423】
４６．前記ｓｃＦｖが、第二のリンカーを介して接続されているＶＬ領域及びＶＨ領域を含む、実施形態３５～４５のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0424】
４７．前記第二のリンカーが、１～２０アミノ酸長を有する、実施形態４６に記載のタンパク質。
【0425】
４８．前記第二のリンカーが、ＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１１６、（ＧＧＳＧ）５）、ＧＧＧＧＳ（配列番号１１７、Ｇ４Ｓ）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１８、（Ｇ４Ｓ）２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１１９、（Ｇ４Ｓ）３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号１２０、（Ｇ４Ｓ）２－Ｇ４）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号１２１）、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２２）、及びＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１２３）のいずれか１つの配列を含む、実施形態４６または４７に記載のタンパク質。
【0426】
４９．前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に特異的に結合する、実施形態３５～４８のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0427】
５０．前記第一のＦｃポリペプチド及び前記第二のＦｃポリペプチドが各々、ヘテロ二量体化を促進する修飾を含む、実施形態３５～４９のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0428】
５１．ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｗの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含む、実施形態５０に記載のタンパク質。
【0429】
５２．ＥＵナンバリングに従って、前記第一のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖの置換を含み、かつ前記第二のＦｃポリペプチドが、Ｔ３６６Ｗの置換を含む、実施形態５０に記載のタンパク質。
【0430】
５３．前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、ＴｆＲ媒介エフェクター機能を低下させる修飾を含む、実施形態４９～５２のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0431】
５４．前記エフェクター機能を低下させる修飾が、ＥＵナンバリングに従ってＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換である、実施形態５３に記載のタンパク質。
【0432】
５５．前記第一のＦｃポリペプチドが、ＴｆＲに特異的に結合し、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む、実施形態５４に記載のタンパク質。
【0433】
５６．前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従ってＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換をさらに含む、実施形態５５に記載のタンパク質。
【0434】
５７．前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位及び２３５位にＬｅｕ、ならびに３２９位にプロリンを含む、実施形態５６に記載のタンパク質。
【0435】
５８．前記第二のＦｃポリペプチドが、ＴｆＲに特異的に結合し、かつＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの置換を含む、実施形態５４に記載のタンパク質。
【0436】
５９．前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従ってＰ３２９ＧまたはＰ３２９Ｓの置換をさらに含む、実施形態５８に記載のタンパク質。
【0437】
６０．前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位及び２３５位にＬｅｕ、ならびに３２９位にプロリンを含む、実施形態５９に記載のタンパク質。
【0438】
６１．ヒンジ領域またはその一部分が、前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドのＮ末端に連結されている、実施形態３５～６０のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0439】
６２．前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、配列番号１３１～１４９及び１８３～１９６からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、実施形態３５～６１のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0440】
６３．前記第一のＦｃポリペプチドまたは前記第二のＦｃポリペプチドが、配列番号１３３及び１８３～１８５から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、実施形態６２に記載のタンパク質。
【0441】
６４．前記第一のＦｃポリペプチドまたは前記第二のＦｃポリペプチドが、配列番号１３７及び１８６～１９６から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、実施形態６２に記載のタンパク質。
【0442】
６５．前記第一のＦｃポリペプチド及び／または前記第二のＦｃポリペプチドが、独立して、ＥＵナンバリングに従って３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３５～１３９及び１８６～１９６から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、実施形態３５～６４のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0443】
６６．前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、かつ
前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、
実施形態３５～６５のいずれか１つに記載のタンパク質。
前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、
実施形態３５～６５のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0444】
６７．前記第一のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って３６６位にＳｅｒ、３６８位にＡｌａ、及び４０７位にＶａｌを含み、かつ配列番号１３３の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、かつ
前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、
実施形態３５～６５のいずれか１つに記載のタンパク質。
前記第二のＦｃポリペプチドが、ＥＵナンバリングに従って２３４位にＡｌａ、２３５位にＡｌａ、３６６位にＴｒｐ、３８４位にＴｙｒ、３８６位にＴｈｒ、３８７位にＧｌｕ、３８８位にＴｒｐ、３８９位にＳｅｒ、４１３位にＳｅｒ、４１５位にＧｌｕ、４１６位にＧｌｕ、及び４２１位にＰｈｅを含み、かつ配列番号１３７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、
実施形態３５～６５のいずれか１つに記載のタンパク質。
【0445】
６８．以下：
（ａ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｂ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｃ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｄ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｅ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７８の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｆ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｇ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｈ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７８の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｉ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｊ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｋ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｌ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｍ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｎ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｏ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｐ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｑ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｒ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｓ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｔ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｕ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド
を含む、タンパク質。
（ａ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｂ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｃ）（ｉ）配列番号６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１６２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｄ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｅ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７８の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｆ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｇ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｈ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７８の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｉ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７７の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｊ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｋ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｌ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｍ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｎ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｏ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１７９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｐ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｑ）（ｉ）配列番号１６９の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｒ）（ｉ）配列番号１７１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｓ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｔ）（ｉ）配列番号１７０の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド、または
（ｕ）（ｉ）配列番号１７２の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第一の重鎖ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１８１の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む第二の重鎖ポリペプチド、及び（ｉｉｉ）配列番号２６の配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を各々含む２つの軽鎖ポリペプチド
を含む、タンパク質。
【0446】
６９．（ａ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号６の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６０の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｂ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号６の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｃ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号６の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６２の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｄ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７７の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｅ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７８の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｆ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７１の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７７の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｇ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７７の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｈ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７８の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｉ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７２の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７７の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｊ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７９の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｋ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８０の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｌ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７１の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７９の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｍ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７９の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｎ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８０の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｏ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７２の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７９の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｐ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｑ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８２の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｒ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７１の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｓ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｔ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８２の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｕ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７２の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、
実施形態６８に記載のタンパク質。
（ｂ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号６の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｃ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号６の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６２の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｄ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７７の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｅ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７８の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｆ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７１の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７７の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｇ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７７の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｈ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７８の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｉ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７２の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７７の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｊ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７９の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｋ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８０の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｌ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７１の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７９の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｍ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７９の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｎ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８０の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｏ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７２の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７９の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｐ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｑ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１６９の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８２の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｒ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７１の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｓ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｔ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７０の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８２の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、または
（ｕ）（ｉ）前記第一の重鎖ポリペプチドが、配列番号１７２の配列を含み、（ｉｉ）前記第二の重鎖ポリペプチドが、配列番号１８１の配列を含み、かつ（ｉｉｉ）前記２つの軽鎖ポリペプチドが各々、配列番号２６の配列を含む、
実施形態６８に記載のタンパク質。
【0447】
７０．実施形態１～６９のいずれか１つに記載のタンパク質と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【0448】
７１．実施形態１～６９のいずれか１つに記載のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
【0449】
７２．実施形態７１に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【0450】
７３．実施形態７１に記載のポリヌクレオチドまたは実施形態７２に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【0451】
７４．対象におけるがんを処置するまたはがんの脳転移を処置するための方法であって、前記対象に対して、治療有効量の実施形態１～６９のいずれか１つに記載のタンパク質または実施形態７０に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【0452】
７５．前記タンパク質が、化学療法または放射線療法と組み合わせて投与される、実施形態７４に記載の方法。
【0453】
７６．前記がんが、転移がんである、実施形態７４または７５に記載の方法。
【0454】
７７．前記がんが、乳がんである、実施形態７４～７６のいずれか１つに記載の方法。
【0455】
７８．前記がんが、ＨＥＲ２陽性がんである、実施形態７４～７７のいずれか１つに記載の方法。
【0456】
本明細書に記載の実施例及び実施形態は、例示目的のためのみであり、それらを考慮した様々な修正または変更が当業者に提案され、本出願の趣旨及び範囲ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれるべきであることが理解される。本明細書に引用される配列アクセッション番号の配列は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0457】
非公式配列表
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図3D】
【図4】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図8D】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【図9D】
【図9E】
【図9F】
【図9G】
【図9H】
【図9I】
【図9J】
【図9K】
【図9L】
【手続補正書】
【提出日】2024-06-19
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】