特表 2024-535353 感染性疾患に対するＲＮＡワクチン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-09-30

(54)【発明の名称】感染性疾患に対するＲＮＡワクチン

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/88 20060101AFI20240920BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20240920BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240920BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20240920BHJP

   A61P 31/22 20060101ALI20240920BHJP

   A61P 31/16 20060101ALI20240920BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20240920BHJP

   A61P 31/18 20060101ALI20240920BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20240920BHJP

   A61P 31/10 20060101ALI20240920BHJP

   A61P 33/00 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/12 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/02 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/002 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/145 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/245 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/215 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/205 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/25 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/21 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/04 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/09 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/104 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/112 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/085 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/095 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/08 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/118 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 39/015 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 47/44 20170101ALI20240920BHJP

   A61K 47/14 20170101ALI20240920BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 9/51 20060101ALI20240920BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20240920BHJP

   A61P 31/20 20060101ALI20240920BHJP

   C12N 15/33 20060101ALI20240920BHJP

   C12N 15/31 20060101ALI20240920BHJP

   C12N 15/30 20060101ALI20240920BHJP

【ＦＩ】

C12N15/88 Z

A61K31/7088

A61P37/04

A61P31/12

A61P31/22

A61P31/16

A61P31/14

A61P31/18

A61P31/04

A61P31/10

A61P33/00

A61K39/12

A61K39/02

A61K39/00 K

A61K39/002

A61K39/145

A61K39/245

A61K39/215

A61K39/205

A61K39/25

A61K39/21

A61K39/04

A61K39/09

A61K39/104

A61K39/112

A61K39/085

A61K39/095

A61K39/08

A61K39/118

A61K39/015

A61K47/22

A61K47/44

A61K47/14

A61K47/24

A61K47/02

A61K9/107

A61K9/51

A61K31/7105

A61P31/20

C12N15/33 ZNA

C12N15/31

C12N15/30

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024518363

(86)(22)【出願日】2022-01-24

(85)【翻訳文提出日】2024-05-21

(86)【国際出願番号】 US2022013516

(87)【国際公開番号】W WO2023048760

(87)【国際公開日】2023-03-30

(31)【優先権主張番号】63/247,175

(32)【優先日】2021-09-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/297,498

(32)【優先日】2022-01-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522375693

【氏名又は名称】エイチディーティー バイオ コーポレーション

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】リード， スティーブン グレゴリー

(72)【発明者】

【氏名】カーター， ダリック アルバート

(72)【発明者】

【氏名】カンダール， アミット プラフル

(72)【発明者】

【氏名】ダシー， マルコルム エス．

(72)【発明者】

【氏名】バーグランド， ラース ピーター アクセル

(72)【発明者】

【氏名】エラスムス， ジェシー

(72)【発明者】

【氏名】ベルべ， ブライアン

(72)【発明者】

【氏名】アーチャー， ジェイコブ フリーマン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C085

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA17

4C076AA65

4C076AA95

4C076BB15

4C076BB25

4C076CC07

4C076CC32

4C076CC34

4C076CC35

4C076DD29

4C076DD30

4C076DD34

4C076DD46

4C076DD46F

4C076DD59

4C076DD63

4C076EE53

4C076EE54

4C076FF70

4C085BA06

4C085BA09

4C085BA12

4C085BA13

4C085BA14

4C085BA16

4C085BA19

4C085BA24

4C085BA45

4C085BA49

4C085BA51

4C085BA55

4C085BA61

4C085BA64

4C085BA69

4C085BA71

4C085BA78

4C085BA79

4C085EE01

4C085GG03

4C085GG10

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA03

4C086MA05

4C086MA22

4C086MA38

4C086MA59

4C086MA66

4C086NA13

4C086ZB09

4C086ZB32

4C086ZB33

4C086ZB35

4C086ZB37

4C086ZC55

(57)【要約】

本開示は、核酸を対象に送達するための、組成物、処置の方法、ならびに組成物を作製するおよび使用する方法を提供する。本明細書に記載される組成物は、核酸と混合することができる、必要に応じて無機粒子を含む脂質キャリアを含む。これらの組成物を感染性疾患の処置のためのワクチンとして使用する方法も提供される。ワクチン接種は、限定されるものではないが、ウイルス性、細菌性および／または寄生虫性疾患を含む感染性疾患に対する予防的防御をもたらすことができる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

組成物であって、
脂質キャリアであって、
前記脂質キャリアが、
液状油、および
界面活性剤
を含み、前記界面活性剤が、
カチオン性脂質、
親水性界面活性剤、および
疎水性界面活性剤
を含む、脂質キャリア、ならびに
抗原配列をコードする少なくとも１つの核酸であって、
前記抗原配列が、ウイルス抗原配列、細菌抗原配列、真菌抗原配列もしくは寄生虫抗原配列または前述のもののいずれかについての機能的バリアントをコードする配列を含み、前記ウイルス抗原配列が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原配列でもその機能的バリアントでもない、少なくとも１つの核酸
を含む組成物。

【請求項2】

前記ウイルス抗原配列が、インフルエンザウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス１（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１）、ヒトガンマヘルペスウイルス４、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、狂犬病ウイルス、ヒトアルファヘルペスウイルス１、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）もしくはヒトアルファヘルペスウイルス２、または前述のもののいずれかについての機能的バリアント由来である、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記インフルエンザウイルスが、インフルエンザＡ型またはインフルエンザＢ型である、請求項２に記載の組成物。

【請求項4】

前記細菌抗原配列が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ菌、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ菌、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ菌、もしくはＣｈｌａｍｙｄｉａ菌、または前述のもののいずれかについての機能的バリアント由来である、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

前記真菌抗原配列が、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ真菌、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ真菌、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ真菌、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ真菌、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ真菌、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ真菌、もしくはＢｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ真菌、または前述のもののいずれかについての機能的バリアント由来である、請求項１に記載の組成物。

【請求項6】

前記寄生虫抗原配列が、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫またはその機能的バリアント由来である、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

前記少なくとも１つの核酸が、配列番号１～６と少なくとも８５％同一の配列を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項8】

前記少なくとも１つの核酸が、配列番号７～３３のいずれか１つのアミノ酸配列をコードする配列を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

前記核酸が、前記脂質キャリアを有する複合体中にある、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項10】

前記核酸が、ＲＮＡポリメラーゼをさらにコードする、請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項11】

前記ＲＮＡポリメラーゼが、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）ＲＮＡポリメラーゼである、請求項１０に記載の組成物。

【請求項12】

前記ＲＮＡポリメラーゼをコードする前記核酸が、配列番号３４の核酸配列を含む、請求項１１に記載の組成物。

【請求項13】

前記液状油が、α－トコフェロール、ココナツ油、ブドウ種子油、ラウロイルポリオキシルグリセリド、鉱物油、モノアシルグリセロール、パーム核油、オリーブ油、パラフィン油、ピーナッツ油、プロポリス、スクアレン、スクアラン、大豆レシチン、大豆油、ヒマワリ油、トリグリセリド、またはビタミンＥである、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項14】

前記トリグリセリドが、カプリン酸トリグリセリド、カプリル酸トリグリセリド、カプリル酸およびカプリン酸トリグリセリド、トリグリセリドエステル、またはミリスチン酸トリグリセリンである、請求項１３に記載の組成物。

【請求項15】

前記脂質キャリアが、疎水性コアを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項16】

前記脂質キャリアが、無機粒子を含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項17】

前記無機粒子が、前記疎水性コア内にある、請求項１６に記載の組成物。

【請求項18】

前記無機粒子が、金属を含む、請求項１６または請求項１７に記載の組成物。

【請求項19】

前記金属が、金属塩、金属酸化物、金属水酸化物、または金属リン酸塩を含む、請求項１８に記載の組成物。

【請求項20】

前記金属酸化物が、酸化アルミニウム、オキシ水酸化アルミニウム、酸化鉄、二酸化チタン、または二酸化ケイ素を含む、請求項１９に記載の組成物。

【請求項21】

前記疎水性界面活性剤が、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、またはソルビタントリオレエートである、請求項１から２０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項22】

前記親水性界面活性剤が、ポリソルベートである、請求項１から２１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項23】

組成物であって、
脂質キャリアであって、
前記脂質キャリアが、
液状油、および
界面活性剤
を含み、前記界面活性剤が、
カチオン性脂質、
親水性界面活性剤、および
疎水性界面活性剤
を含む、脂質キャリア、ならびに
少なくとも１つの核酸であって、
前記核酸が、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質ステム領域またはその機能的バリアントをコードする抗原配列を含む、少なくとも１つの核酸
を含む組成物。

【請求項24】

前記核酸が、配列番号３と少なくとも８５％同一の配列またはその機能的断片を含む、請求項２３に記載の組成物。

【請求項25】

前記核酸が、配列番号１０～１２のいずれか１つと少なくとも８５％同一のアミノ酸配列をコードする、請求項２３または請求項２４に記載の組成物。

【請求項26】

前記核酸が、前記脂質キャリアを有する複合体中にある、請求項２３から２５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項27】

前記核酸が、ＲＮＡポリメラーゼをさらにコードする、請求項２３から２６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項28】

前記ＲＮＡポリメラーゼが、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）ＲＮＡポリメラーゼである、請求項２７に記載の組成物。

【請求項29】

前記ＲＮＡポリメラーゼをコードする前記核酸が、配列番号３４の核酸配列を含む、請求項２８に記載の組成物。

【請求項30】

前記液状油が、α－トコフェロール、ココナツ油、ブドウ種子油、ラウロイルポリオキシルグリセリド、鉱物油、モノアシルグリセロール、パーム核油、オリーブ油、パラフィン油、ピーナッツ油、プロポリス、スクアレン、スクアラン、大豆レシチン、大豆油、ヒマワリ油、トリグリセリド、またはビタミンＥである、請求項２３から２９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項31】

前記トリグリセリドが、カプリン酸トリグリセリド、カプリル酸トリグリセリド、カプリル酸およびカプリン酸トリグリセリド、トリグリセリドエステル、またはミリスチン酸トリグリセリンである、請求項３０に記載の組成物。

【請求項32】

前記脂質キャリアが、疎水性コアを含む、請求項２３から３１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項33】

前記脂質キャリアが、無機粒子をさらに含む、請求項２３から３２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項34】

前記無機粒子が、前記疎水性コア内にある、請求項３３に記載の組成物。

【請求項35】

前記無機粒子が、金属を含む、請求項３３または請求項３４に記載の組成物。

【請求項36】

前記金属が、金属塩、金属酸化物、金属水酸化物、または金属リン酸塩を含む、請求項３５に記載の組成物。

【請求項37】

前記金属酸化物が、酸化アルミニウム、オキシ水酸化アルミニウム、酸化鉄、二酸化チタン、または二酸化ケイ素を含む、請求項３６に記載の組成物。

【請求項38】

前記疎水性界面活性剤が、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、またはソルビタントリオレエートである、請求項２３から３７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項39】

前記親水性界面活性剤が、ポリソルベートである、請求項２３から３８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項40】

組成物であって、
脂質キャリアであって、
前記脂質キャリアが、
液状油、および
界面活性剤
を含み、前記界面活性剤が、
カチオン性脂質、
親水性界面活性剤、および
疎水性界面活性剤
を含む、脂質キャリア、ならびに
少なくとも１つの核酸であって、
前記核酸が、ＶＺＶタンパク質またはその機能的バリアントをコードする抗原配列を含む、少なくとも１つの核酸
を含む組成物。

【請求項41】

前記ＶＺＶタンパク質またはその機能的バリアントが、糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）、ｇＩ、ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＮまたはその機能的断片である、請求項４０に記載の組成物。

【請求項42】

ＶＺＶタンパク質をコードする前記抗原配列が、配列番号４、５、３８～４３のいずれか１つと少なくとも８５％同一である、請求項４０または請求項４１に記載の組成物。

【請求項43】

前記核酸が、前記脂質キャリアを有する複合体中にある、請求項４０から４２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項44】

前記核酸が、ＲＮＡポリメラーゼをさらにコードする、請求項４０から４３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項45】

前記ＲＮＡポリメラーゼが、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）ＲＮＡポリメラーゼである、請求項４４に記載の組成物。

【請求項46】

前記ＲＮＡポリメラーゼをコードする前記核酸が、配列番号３４の核酸配列を含む、請求項４４に記載の組成物。

【請求項47】

前記液状油が、α－トコフェロール、ココナツ油、ブドウ種子油、ラウロイルポリオキシルグリセリド、鉱物油、モノアシルグリセロール、パーム核油、オリーブ油、パラフィン油、ピーナッツ油、プロポリス、スクアレン、スクアラン、大豆レシチン、大豆油、ヒマワリ油、トリグリセリド、またはビタミンＥである、請求項４０から４６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項48】

前記トリグリセリドが、カプリン酸トリグリセリド、カプリル酸トリグリセリド、カプリル酸およびカプリン酸トリグリセリド、トリグリセリドエステル、またはミリスチン酸トリグリセリンである、請求項４７に記載の組成物。

【請求項49】

前記脂質キャリアが、疎水性コアを含む、請求項４０から４８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項50】

前記脂質キャリアが、無機粒子をさらに含む、請求項４０から４９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項51】

前記無機粒子が、前記疎水性コア内にある、請求項５０に記載の組成物。

【請求項52】

前記無機粒子が、金属を含む、請求項５０または請求項５１に記載の組成物。

【請求項53】

前記金属が、金属塩、金属酸化物、金属水酸化物、または金属リン酸塩を含む、請求項５２に記載の組成物。

【請求項54】

前記金属酸化物が、酸化アルミニウム、オキシ水酸化アルミニウム、酸化鉄、二酸化チタン、または二酸化ケイ素を含む、請求項５３に記載の組成物。

【請求項55】

前記疎水性界面活性剤が、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、またはソルビタントリオレエートである、請求項４０から５４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項56】

前記親水性界面活性剤が、ポリソルベートである、請求項４０から５５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項57】

組成物であって、
脂質キャリアであって、
前記脂質キャリアが、
約３０ｍｇ／ｍＬのＤＯＴＡＰクロリド
約３７．５ｍｇ／ｍＬのスクアレン、
約３７ｍｇ／ｍｌのソルビタンモノステアレート、
約３７ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、
約１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、および
約０．２ｍｇ Ｆｅ／ｍｌのオレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子
を含む、ナノエマルジョンであり、前記オレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子が、約５ナノメートル（ｎｍ）から最大で２５ｎｍの範囲のサイズのものであり、必要に応じて、前記オレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子が、サイズ１２ｎｍである、脂質キャリア、ならびに
少なくとも１つの核酸であって、
前記少なくとも１つの核酸が、配列番号１～６、３８～４７と少なくとも８５％同一の配列を含む、少なくとも１つの核酸
を含む組成物。

【請求項58】

スクロースをさらに含み、必要に応じて、前記スクロースが、約５０ｍｇで存在する、請求項５７に記載の組成物。

【請求項59】

前記核酸が、前記脂質キャリアを有する複合体中にある、請求項５７または請求項５８に記載の組成物。

【請求項60】

前記核酸が、ＲＮＡポリメラーゼをさらにコードする、請求項５７から５９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項61】

前記ＲＮＡポリメラーゼが、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）ＲＮＡポリメラーゼである、請求項６０に記載の組成物。

【請求項62】

前記ＲＮＡポリメラーゼをコードする前記核酸が、配列番号３４の核酸配列を含む、請求項６０に記載の組成物。

【請求項63】

前記脂質キャリアが、疎水性コアを含む、請求項５７から６２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項64】

前記オレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子が、前記疎水性コア内にある、請求項６３に記載の組成物。

【請求項65】

組成物であって、
脂質キャリアであって、
前記脂質キャリアが、
約０．７５ｍｇの量で存在するＤＯＴＡＰクロリド、
約０．９４ｍｇの量で存在するスクアレン、
約０．９３ｍｇの量で存在するソルビタンモノステアレート、
約０．９３ｍｇの量で存在するポリソルベート８０、
約１．０５ｍｇの量で存在するクエン酸一水和物、および
約０．００５ｍｇの量で存在するオレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子
を含む、ナノエマルジョンである、脂質キャリア、ならびに
少なくとも１つの核酸であって、
前記少なくとも１つの核酸が、配列少なくとも配列番号１～６、３８～４７を含む、少なくとも１つの核酸
を含む組成物。

【請求項66】

前記少なくとも１つの核酸配列が、最大で約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、請求項６５に記載の組成物。

【請求項67】

前記少なくとも１つの核酸配列が、最大で約２５μｇの量で存在する、請求項６５に記載の組成物。

【請求項68】

スクロースをさらに含み、必要に応じて、前記スクロースが、約５０ミリグラム（ｍｇ）で存在する、請求項６５に記載の組成物。

【請求項69】

前記核酸が、前記脂質キャリアを有する複合体中にある、請求項６５から６８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項70】

前記核酸が、ＲＮＡポリメラーゼをさらにコードする、請求項６５から６９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項71】

前記ＲＮＡポリメラーゼが、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）ＲＮＡポリメラーゼである、請求項７０に記載の組成物。

【請求項72】

前記ＲＮＡポリメラーゼをコードする前記核酸が、配列番号３４の核酸配列を含む、請求項７０に記載の組成物。

【請求項73】

前記脂質キャリアが、疎水性コアを含む、請求項６５から７２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項74】

前記オレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子が、前記疎水性コア内にある、請求項７３に記載の組成物。

【請求項75】

組成物であって、
脂質キャリアであって、
前記脂質キャリアが、
液状油、および
界面活性剤
を含み、前記界面活性剤が、
カチオン性脂質、
親水性界面活性剤、および
疎水性界面活性剤
を含む、脂質キャリア、ならびに
少なくとも１つの核酸であって、
前記核酸が、呼吸器合胞体ウイルス抗原またはその機能的バリアントをコードする抗原配列を含む、少なくとも１つの核酸
を含む組成物。

【請求項76】

前記呼吸器合胞体ウイルス抗原が、ＲＳＶ－Ｆ抗原である、請求項７５に記載の組成物。

【請求項77】

前記呼吸器合胞体ウイルス抗原が、ＲＳＶ－Ｇ抗原である、請求項７５に記載の組成物。

【請求項78】

呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする前記抗原配列が、配列番号１、２、４５または４６のいずれか１つと少なくとも８５％同一である、請求項７５から７７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項79】

前記核酸が、前記脂質キャリアを有する複合体中にある、請求項７５から７８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項80】

前記核酸が、ＲＮＡポリメラーゼをさらにコードする、請求項７５から７９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項81】

前記ＲＮＡポリメラーゼが、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）ＲＮＡポリメラーゼである、請求項８０に記載の組成物。

【請求項82】

前記ＲＮＡポリメラーゼをコードする前記核酸が、配列番号３４の核酸配列を含む、請求項８０に記載の組成物。

【請求項83】

前記液状油が、α－トコフェロール、ココナツ油、ブドウ種子油、ラウロイルポリオキシルグリセリド、鉱物油、モノアシルグリセロール、パーム核油、オリーブ油、パラフィン油、ピーナッツ油、プロポリス、スクアレン、スクアラン、大豆レシチン、大豆油、ヒマワリ油、トリグリセリド、またはビタミンＥである、請求項７５から８２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項84】

前記トリグリセリドが、カプリン酸トリグリセリド、カプリル酸トリグリセリド、カプリル酸およびカプリン酸トリグリセリド、トリグリセリドエステル、またはミリスチン酸トリグリセリンである、請求項８３に記載の組成物。

【請求項85】

前記脂質キャリアが、疎水性コアを含む、請求項７５から８４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項86】

前記脂質キャリアが、無機粒子をさらに含む、請求項７５から８５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項87】

前記無機粒子が、前記疎水性コア内にある、請求項８６に記載の組成物。

【請求項88】

前記無機粒子が、金属を含む、請求項８６または請求項８７に記載の組成物。

【請求項89】

前記金属が、金属塩、金属酸化物、金属水酸化物、または金属リン酸塩を含む、請求項８８に記載の組成物。

【請求項90】

前記金属酸化物が、酸化アルミニウム、オキシ水酸化アルミニウム、酸化鉄、二酸化チタン、または二酸化ケイ素を含む、請求項８９に記載の組成物。

【請求項91】

前記疎水性界面活性剤が、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、またはソルビタントリオレエートである、請求項７５から９０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項92】

前記親水性界面活性剤が、ポリソルベートである、請求項７５から９１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項93】

前記少なくとも１つの核酸配列が、最大で約５、約１０、約２５、約５０または約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、請求項１から９２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項94】

前記少なくとも１つの核酸配列が、最大で約２５μｇの量で存在する、請求項９３に記載の組成物。

【請求項95】

凍結乾燥されている、請求項１から９４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項96】

請求項１から９４のいずれか一項に記載の組成物を含む懸濁液。

【請求項97】

請求項１から９５のいずれか一項に記載の組成物と薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。

【請求項98】

対象における免疫応答を生じさせる方法であって、請求項１から９５のいずれか一項に記載の組成物を対象に投与し、それによって、抗原に対する免疫応答を生じさせるステップを含む、方法。

【請求項99】

前記組成物が、２回の投薬によって前記対象に投与される、請求項９８に記載の方法。

【請求項100】

２回目の投薬が、１回目の投薬の約２８日後に投与される、請求項９９に記載の方法。

【請求項101】

前記組成物の３回目の投薬を前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項９９に記載の方法。

【請求項102】

５μｇの前記組成物が、前記対象に投与される、請求項９８から１０１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項103】

１０μｇの前記組成物が、前記対象に投与される、請求項９８から１０１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項104】

２５μｇの前記組成物が、前記対象に投与される、請求項９８から１０１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項105】

前記組成物が、筋肉内または鼻腔内投与される、請求項９８から１０４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項106】

前記対象がヒトである、請求項９８から１０５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項107】

前記対象が、ウイルス感染症を有する、それを有する疑いがある、またはそれを発症するリスクがある、請求項９８から１０６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項108】

前記ウイルス感染症が、インフルエンザ感染症、ＶＺＶ感染症、ＲＳＶ感染症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）感染症、ヒトガンマヘルペスウイルス４感染症、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症、狂犬病ウイルス感染症、ヒトアルファヘルペスウイルス１感染症、またはヒトアルファヘルペスウイルス２感染症である、請求項１０７に記載の方法。

【請求項109】

前記対象が、細菌感染症を有する、それを有する疑いがある、またはそれを発症するリスクがある、請求項９８から１０６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項110】

前記細菌感染症が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ感染症、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染症、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ感染症、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ感染症、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ感染症、またはＣｈｌａｍｙｄｉａ感染症である、請求項１０９に記載の方法。

【請求項111】

前記対象が、寄生虫感染症、真菌感染症もしくは酵母感染症を有する、それを有する疑いがある、またはそれを発症するリスクがある、請求項９８から１０６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項112】

前記免疫応答が、前記組成物の投与を受けていない対象と比較して前記抗原に対する中和抗体の力価を上昇させることを含む、請求項９８から１１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項113】

前記免疫応答が、前記組成物の投与を受けていない対象と比較してＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋陽性Ｔ細胞の量を増加させることを含む、請求項９８から１１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項114】

前記対象が、免疫無防備状態または免疫抑制状態である、請求項９８から１１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項115】

対象における免疫応答を増強させる方法であって、請求項１から９５のいずれか一項に記載の組成物を対象に投与し、それによって、抗原に対する免疫応答を増強させるステップを含む、方法。

【請求項116】

インフルエンザ感染症を処置する方法であって、請求項２３から３９のいずれか一項に記載の組成物を対象に投与し、それによって、前記インフルエンザ感染症を処置するステップを含む、方法。

【請求項117】

対象におけるＶＺＶ感染症を処置する方法であって、請求項４０から５６のいずれか一項に記載の組成物を対象に投与し、それによって、前記ＶＺＶ感染症を処置するステップを含む、方法。

【請求項118】

対象におけるＲＳＶ感染症を処置する方法であって、請求項７５から９２のいずれか一項に記載の組成物を対象に投与し、それによって、前記ＲＳＶ感染症を処置するステップを含む、方法。

【請求項119】

前記対象がヒトである、請求項１１５から１１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項120】

前記対象が、免疫無防備状態または免疫抑制状態である、請求項１１５から１１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項121】

前記組成物が、筋肉内または鼻腔内投与される、請求項１１５から１２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項122】

請求項１から９５のいずれか一項に記載の組成物と、パッケージと、そのための材料とを含むキット。

【請求項123】

ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼをコードする配列を含む第１の核酸と；
感染性疾患抗原をコードする配列を含む第２の核酸と
を含む組成物。

【請求項124】

前記感染性疾患抗原が、インフルエンザ、ＶＺＶ、ＲＳＶ、ヒトガンマヘルペスウイルス４、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、狂犬病ウイルス、ヒトアルファヘルペスウイルス１、またはヒトアルファヘルペスウイルス２であるウイルス由来である、請求項１２３に記載の組成物。

【請求項125】

前記感染性疾患抗原が、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質ステム領域またはその機能的バリアントである、請求項１２３に記載の組成物。

【請求項126】

前記感染性疾患抗原が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、またはＣｈｌａｍｙｄｉａ由来である、請求項１２３に記載の組成物。

【請求項127】

前記第１の核酸および前記第２の核酸が、共通の核酸上に存在する、請求項１２３に記載の組成物。

【請求項128】

前記第１の核酸および前記第２の核酸が、別々の核酸上に存在する、請求項１２３に記載の組成物。

【請求項129】

前記ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼが、ＶＥＥＶ ＲＮＡポリメラーゼを含む、請求項１２３に記載の組成物。

【請求項130】

ナノ粒子キャリアシステムをさらに含む、請求項１２３から１２９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項131】

前記ナノ粒子キャリアシステムが、カチオン性脂質および疎水性コアを含む、請求項１３０に記載の組成物。

【請求項132】

前記疎水性コアが、無機ナノ粒子を含む、請求項１３１に記載の組成物。

【請求項133】

前記第１の核酸および／または前記第２の核酸が、ＲＮＡを含む、請求項１２３から１３２のいずれか一項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

相互参照
本出願は、２０２１年９月２２日に出願された米国特許仮出願第６３／２４７，１７５号および２０２２年１月７日に出願された米国特許仮出願第６３／２９７，４９８号に対する優先権の利益を主張し、それらのそれぞれの内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

背景
ワクチン接種は、限定されるものではないが、ウイルス性、細菌性および／または寄生虫性疾患を含む感染性疾患に対する予防的防御をもたらすことができる。例えば、インフルエンザ感染症は、米国における７番目に多い死因であり、米国では１年に２００，０００件の入院および４０，０００件の死亡が見受けられ、世界中で１年に約３～５百万件の入院および約３００，０００～５００，０００件の死亡を引き起こす。何百万もの人々が、毎年、季節性インフルエンザからの防御のためにインフルエンザワクチンを受ける。ワクチン接種は、新興型インフルエンザ大流行の拡大を迅速に予防することもできる。ワクチンに対する耐性を発生させる感染性疾患因子の能力を考えると、ワクチン生産の効率向上、および感染性疾患因子によって進化を介して回避される変化が低減されたワクチンの開発が必要である。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0003】

簡潔な概要
下に記載され、説明される、以下の態様およびその実施形態は、例示的かつ説明的であることを意図したものであり、範囲の限定となることを意図したものではない。

【0004】

脂質キャリアであって、脂質キャリアが、液状油、および界面活性剤を含み、界面活性剤が、カチオン性脂質、親水性界面活性剤、および疎水性界面活性剤を含む、脂質キャリア；ならびに抗原配列をコードする少なくとも１つの核酸であって、抗原配列が、ウイルス抗原配列、細菌抗原配列、真菌抗原配列もしくは寄生虫抗原配列または前述のもののいずれかについての機能的バリアントをコードする配列を含み、ウイルス抗原配列が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原配列でもその機能的バリアントでもない、少なくとも１つの核酸を含む組成物が本明細書に提供される。

【0005】

脂質キャリアであって、脂質キャリアが、液状油、および界面活性剤を含み、界面活性剤が、カチオン性脂質、親水性界面活性剤および疎水性界面活性剤を含む、脂質キャリア；ならびに少なくとも１つの核酸であって、核酸が、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質ステム領域またはその機能的バリアントをコードする抗原配列を含む、少なくとも１つの核酸を含む組成物が本明細書にさらに提供される。

【0006】

脂質キャリアであって、脂質キャリアが、液状油、および界面活性剤を含み、界面活性剤が、カチオン性脂質、親水性界面活性剤、および疎水性界面活性剤を含む、脂質キャリア；ならびに少なくとも１つの核酸であって、核酸が、ＶＺＶタンパク質またはその機能的バリアントをコードする抗原配列を含む、少なくとも１つの核酸を含む組成物が本明細書にさらに提供される。

【0007】

脂質キャリアであって、脂質キャリアが、液状油、および界面活性剤を含み、界面活性剤が、カチオン性脂質、親水性界面活性剤、および疎水性界面活性剤を含む、脂質キャリア；ならびに少なくとも１つの核酸であって、核酸が、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原またはその機能的バリアントをコードする抗原配列を含む、少なくとも１つの核酸を含む組成物が本明細書にさらに提供される。

【0008】

脂質キャリアであって、脂質キャリアが、約３０ｍｇ／ｍＬのＤＯＴＡＰクロリド 約３７．５ｍｇ／ｍＬのスクアレン、約３７ｍｇ／ｍｌのソルビタンモノステアレート、約３７ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、約１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、および約０．２ｍｇ Ｆｅ／ｍｌのオレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子を含む、ナノエマルジョンであり、オレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子が、約５ナノメートル（ｎｍ）から最大で２５ｎｍの範囲のサイズのものであり、必要に応じて、オレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子が、サイズ１２ｎｍである、脂質キャリア；ならびに配列番号１～６、３８～４７と少なくとも８５％同一の配列を含む、少なくとも１つの核酸を含む組成物が本明細書にさらに提供される。

【0009】

脂質キャリアであって、脂質キャリアが、約０．７５ｍｇの量で存在するＤＯＴＡＰクロリド、約０．９４ｍｇの量で存在するスクアレン、約０．９３ｍｇの量で存在するソルビタンモノステアレート、約０．９３ｍｇの量で存在するポリソルベート８０、約１．０５ｍｇの量で存在するクエン酸一水和物、および約０．００５ｍｇの量で存在するオレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子を含む、ナノエマルジョンである、脂質キャリア；ならびに配列少なくとも配列番号１～６、３８～４７を含む、少なくとも１つの核酸を含む組成物が本明細書にさらに提供される。

【0010】

（ａ）疎水性コアと１つまたは複数の無機ナノ粒子と１つまたは複数の油または脂質とを含むナノエマルジョンである脂質キャリア；（ｂ）抗原を発現することができる配列をコードし、抗原が感染性病原体タンパク質である、少なくとも１つの核酸配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。

【0011】

疎水性コアと１つまたは複数の無機ナノ粒子と１つまたは複数の脂質とを含むナノエマルジョンである脂質キャリア；抗原を発現することができる配列をコードし、抗原が感染性疾患タンパク質である、少なくとも１つの核酸配列；および少なくとも１つの凍結保護物質を含む、乾燥組成物が本明細書にさらに提供される。

【0012】

本明細書に提供される組成物を含むワクチンが本明細書にさらに提供される。（ａ）疎水性コアと１つまたは複数の無機ナノ粒子と１つまたは複数の脂質とを含むナノエマルジョンである脂質キャリア；（ｂ）抗原を発現することができる配列をコードし、抗原が感染性疾患タンパク質である、少なくとも１つの核酸配列を含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。

【0013】

ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼをコードする配列を含む第１の核酸と；感染性疾患抗原をコードする配列を含む第２の核酸とを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。

【0014】

本明細書に提供される組成物またはワクチン組成物と；薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物が本明細書にさらに提供される。

【0015】

対象における免疫応答を生じさせる方法であって、本明細書に提供される組成物を前記対象に投与するステップを含む方法が本明細書にさらに提供される。対象における免疫応答を生じさせる方法であって、本明細書に提供される組成物を前記対象に投与し、それによって、抗原に対する免疫応答を生じさせるステップを含む、方法が本明細書にさらに提供される。

【0016】

対象を免疫保護するための方法であって、対象に本明細書に提供される組成物を投与するステップを含む方法が本明細書にさらに提供される。

【0017】

感染症の重症度を低下させる方法であって、疎水性コアと１つまたは複数の無機ナノ粒子と１つまたは複数の脂質とを含むナノエマルジョンである脂質キャリアと；抗原を発現することができる配列をコードし、抗原が感染性因子に由来する、少なくとも１つの核酸配列とを含む組成物を、感染前に対象に投与するステップを含む方法が本明細書にさらに提供される。

【0018】

対象における免疫応答を増強させる方法であって、本明細書に提供される組成物を対象に投与し、それによって抗原に対する免疫応答を増強させるステップを含む、方法が本明細書に提供される。

【0019】

インフルエンザ感染症を処置する方法であって、本明細書に提供される組成物を対象に投与し、それによって、インフルエンザ感染症を処置するステップを含む、方法が本明細書に提供される。対象におけるＶＺＶ感染症を処置する方法であって、本明細書に提供される組成物を対象に投与し、それによって、ＶＺＶ感染症を処置するステップを含む、方法が本明細書に提供される。対象におけるＲＳＶ感染症を処置する方法であって、本明細書に提供される組成物を対象に投与し、それによって、ＲＳＶ感染症を処置するステップを含む、方法が本明細書にさらに提供される。

【0020】

本明細書に提供される組成物と、パッケージと、そのための材料とを含むキットが本明細書にさらに提供される。（ａ）疎水性コアと１つまたは複数の無機ナノ粒子と１つまたは複数の脂質とを含むナノエマルジョンである脂質キャリア；（ｂ）抗原を発現することができる配列をコードし、抗原が感染性因子に由来する、少なくとも１つの核酸配列を含む、キットが本明細書にさらに提供される。

【0021】

本発明の新規特徴は、添付の特許請求の範囲において具体的に示される。本発明の原理が用いられる説明に役立つ実施形態を示す後続の詳細な説明、および下記の添付の図面を参照することにより、本発明の特徴および利点のよりよい理解が得られるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0022】

【図1-1】図１Ａ～１Ｃは、例示的なナノ粒子（ＮＰ）キャリアの概要図を示す。図１Ａは、水中油型エマルジョンを示す。図１Ｂは、ナノ構造脂質キャリア（ＮＬＣ）を示す。図１Ｃは、液状油中の無機ナノ粒子を有するナノ粒子を示す。

【図1-2】同上。

【0023】

【図2】図２は、脂質キャリアを用いて製剤化した２．５μｇのＲＳＶ ｒｅｐＲＮＡをＩＭ注射したＣ５７Ｂｌ／６およびＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＲＳＶ－Ｆ ＩｇＧレベルを示す。血液を免疫化の２８日後に採取し、血清を調製し、ＥＬＩＳＡにより評価した。レプリコン数がカッコの中に示されている（６４５がＲＳＶ－Ｇをコードし、６４６がＲＳＶ－Ｆをコードする）。それぞれの点は、個々の動物からのデータを表し、ひげは、最小値から最大値を表し、箱は、四分位範囲を表し、水平バーは、中央値を描示する。Ｘ軸：ｒｅｐＲＮＡ ＲＳＶ抗原。Ｙ軸：免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）濃度（マイクログラム／ミリリットル）。

【0024】

【図3】図３Ａ～３Ｂは、脂質キャリアを用いて製剤化した２．５μｇのＲＳＶ ｒｅｐＲＮＡをＩＭ注射したＣ５７Ｂｌ／６およびＢＡＬＢ／ｃマウスにおける抗Ｇ ＩｇＧレベルを示す。血液を免疫化の２８日後に採取し、血清を調製し、ＥＬＩＳＡにより評価した。レプリコン数が、カッコの中に示されている。それぞれの点は、個々の動物からのデータを表し、ひげは、最小値から最大値を表し、箱は、四分位範囲を表し、水平バーは、中央値を描示する。Ｘ軸：ｒｅｐＲＮＡ ＲＳＶ抗原。Ｙ軸：免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）濃度（マイクログラム／ミリリットル）。

【0025】

【図4A】図４Ａ～４Ｂは、Ｍｉｇｌｙｏｌ脂質キャリア製剤、ＮＰ－３により誘導されたタンパク質産生の増加を示す。図４Ａは、第１のアッセイを示す。図４Ｂは、第２のアッセイを示す。

【図4B】同上。

【0026】

【図5A】図５Ａ～５Ｂは、Ｍｉｇｌｙｏｌ脂質キャリア製剤、ＮＰ－３により誘導された免疫応答の減少を示す。図５Ａは、第１のアッセイを示す。図５Ｂは、第２のアッセイを示す。

【図5B】同上。

【0027】

【図6】図６Ａ～６Ｂは、第１および第２のアッセイの結果としてＮＰ－３で観察されたタンパク質産生向上と低いＴＮＦ（例えば、ＴＮＦ α）刺激との相関関係を示す。図６Ａは、第１のアッセイを示す。図６Ｂは、第２のアッセイを示す。

【0028】

【図7A】図７Ａ～７Ｃは、抗体力価および発現に対するＶＺＶ ｒｅｐＲＮＡの効果を示す。図７Ａは、ＶＺＶ ｒｅｐＲＮＡワクチン構築物 － ｇＥの膜貫通配列を含有する全長糖タンパク質Ｅ（ＶＺＶ－ＦＬ－ｇＥ；黒色）；ＦＬ－ｇＩ；Ｎ末端切断型であるｇＥ；下流のｇＥの共発現を考慮に入れて調整するためにＴｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ（Ｔ２Ａ）リボソームスキッピングペプチドまたは内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）のどちらかが後に続く全長ｇＩ；および膜貫通配列がない分泌型ｇＥをコードするｒｅｐＲＮＡの概略図を示す。図７Ｂは、ウェスタンブロットを示し、抗ＶＺＶ－ｇＥ抗体を用いて探索した。図７Ｃは、ワクチン接種の１４日後にＥＬＩＳＡによって測定した可溶性ＶＺＶ ｇＥに対する血清抗体力価を示す。

【図7B】同上。

【図7C】同上。

【発明を実施するための形態】

【0029】

ここに、さまざまな態様を、本明細書の以下でより完全に記載する。そのような態様は、しかしながら、多くの異なる形態で具現化され得、本明細書に示される実施形態に限定されるとして解釈されるべきではなく、むしろ、これらの実施形態は、本開示が徹底的および完全なものであり、その範囲を当業者に完全に伝えるように、提供される。

【0030】

詳細な説明
感染性微生物に対する免疫応答を誘導するための組成物、そのキット、方法および使用が本明細書に提供される。手短に述べると、（１）ナノ粒子キャリアシステム；（２）微生物抗原とＲＮＡポリメラーゼとをコードする核酸；（３）組合せ組成物；（４）熱的に安定な、乾燥および凍結乾燥ワクチン；（５）医薬組成物；（６）投薬；（７）投与；（８）治療的適用；ならびに（９）キットが本明細書にさらに記載される。
定義

【0031】

すべての定義は、本明細書で定義および使用される場合、辞書による定義、参照により組み込まれた文献における定義、および／または定義された用語の通常の意味を制御するものと理解されるべきである。

【0032】

本明細書に開示されるすべての参考文献、特許および特許出願は、それぞれが引用される主題に関して参照によって組み込まれ、一部の事例では、文献の全体を包含することがある。特許文献および非特許文献を含む本明細書に開示されるすべての参考文献は、それぞれが個々に組み込まれたかのように、それらの全体が、これにより参照により本明細書に組み込まれる。しかしながら、明白な定義を含有する特許、特許出願、または刊行物が参照により組み込まれる場合、これらの明白な定義は、それらが見出される組み込まれた特許、特許出願、または刊行物に適用され、本出願の本文、特に、本出願の特許請求の範囲に必ずしも適用されず、その場合には、本明細書に提供される定義が優先されることを意味するものとすると理解されるべきである。

【0033】

不定冠詞の「ａ」および「ａｎ」は、明細書および特許請求の範囲において本明細書で使用される場合、対照的に明確に指示されない限り、「少なくとも１つ」を意味すると理解されるべきである。

【0034】

「および／または」という語句は、明細書および特許請求の範囲において本明細書で使用される場合、そのように結合された要素、すなわち、一部の事例において結合的に存在し、他の事例において分離的に存在する要素の「いずれかまたは両方」を意味すると理解されるべきである。「および／または」を用いて列挙された複数の要素は、同じ方式で、すなわち、そのように結合された要素の「１つまたは複数」と解釈されるべきである。他の要素は、具体的に特定された要素に関連するまたは関連しないかどうかにかかわらず、「および／または」節によって具体的に特定される要素以外に、必要に応じて存在していてもよい。そのため、非限定的な例として、「Ａおよび／またはＢ」への言及は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などのオープンエンドの語と組み合わせて使用される場合、一実施形態では、Ａのみ（必要に応じて、Ｂ以外の要素を含む）、別の実施形態では、Ｂのみ（必要に応じて、Ａ以外の要素を含む）、さらに別の実施形態では、ＡおよびＢの両方（必要に応じて、他の要素を含む）などを指すことができる。

【0035】

明細書および特許請求の範囲において本明細書で使用される場合、「または」は、上記で定義された「および／または」と同じ意味を有すると理解されるべきである。例えば、リスト中の項目を分ける場合、「または」または「および／または」は、包括的である、すなわち、要素の数またはリストの少なくとも１つを含むが、２つ以上も含み、必要に応じて、追加の列挙されていない項目を含むとして解釈されるべきである。「の１つのみ」もしくは「の正確に１つ」、または特許請求の範囲で使用される場合に「からなる」などの、明確に逆のことが示されている用語のみが、要素の数またはリストの正確に１つの要素を含むことを指す。一般に、「または」という用語は、本明細書で使用される場合、「いずれか」、「の１つ」、「のただ１つ」、または「の正確に１つ」などの排他的な用語が先行する場合に、排他的代替（すなわち、「どちらか一方であるが、両方ではない」）を示すとして単に解釈されるものとする。「から本質的になる」は、特許請求の範囲で使用される場合、特許法の分野で使用されるその通常の意味を有するものとする。

【0036】

本明細書で使用される場合、「必要に応じた」または「必要に応じて」は、その後に記載される状況が生じてもよく、または生じなくてもよいことを意味し、その結果、その記載は、状況が生じる例および状況が生じない例を含む。

【0037】

本明細書で使用される場合、用語「約」または「およそ」は、所与の値の±２０％までの範囲を意味する。あるいは、特に生体システムまたは生物学的プロセスに関して、この用語は、値の１桁以内、好ましくは２倍以内を意味し得る。特定の値が本願および特許請求の範囲に記載される場合、別段の記述がない限り、用語「約」は、暗黙的であり、これに関連して、特定の値の許容される誤差範囲内を意味する。

【0038】

用語「有効量」または「治療有効量」は、所望の効果を達成するのにまたは少なくとも部分的に達成するのに十分である量を指す。
ナノ粒子キャリアシステム

【0039】

ナノ粒子または多数のナノ粒子を含むさまざまな組成物が本明細書に提供される。ナノ粒子は、本明細書ではキャリアとも呼ばれ、またはＮＰと略記される。本明細書に提供されるナノ粒子は、直径約１マイクロメートル（μｍ）未満である、有機材料、無機材料、または無機材料と有機材料の組合せであり得る。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、本明細書に提供される生物活性剤のための送達システムとして使用される。

【0040】

さまざまなナノ粒子およびナノ粒子の製剤（すなわち、ナノエマルジョン）が用いられる。例示的なナノ粒子は、図１Ａ～１Ｃに示されている。本明細書に提供されるナノ粒子としては、限定されるものではないが、水中油型エマルジョン、ナノ構造脂質キャリア（ＮＬＣ）、カチオン性ナノエマルジョン（ＣＮＥ）、小胞リン脂質ゲル（ＶＰＧ）、ポリマーナノ粒子、カチオン性脂質ナノ粒子、リポソーム、金ナノ粒子、固体脂質ナノ粒子（ＬＮＰまたはＳＬＮ）、混合相コアＮＬＣ、イオン化可能な脂質キャリア、磁気キャリア、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）官能化キャリア、コレステロール官能化キャリア、ポリ乳酸（ＰＬＡ）官能化キャリア、およびポリ乳酸－ｃｏ－グリコール酸（ＰＬＧＡ）官能化脂質キャリアを挙げることができる。

【0041】

図１Ａ（正確な縮尺でない）に示されているような水中油型エマルジョンは、水または水性相に分散された油滴を含有する、安定な混和性の流体である。図１Ｂ（正確な縮尺でない）は、固体有機脂質（例えば、トリミリスチン）と液状油（例えば、スクアレン）のブレンドを含み得る、ナノ構造脂質キャリア（ＮＬＣ）を示す。ＮＬＣでは、固体脂質は、液状油に分散されている。ナノ液滴全体は、水性（水）相に分散されている。一部の実施形態では、ナノ粒子は、無機ナノ粒子を、図１Ｃ（正確な縮尺でない）に示されているように、液状油に分散された固体無機ナノ粒子（例えば、酸化鉄ナノ粒子）として含む。その場合、ナノ液滴全体は、水性（水）相にコロイドとして分散されている。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、水溶液に分散されている。水溶液の非限定的な例としては、水（例えば、滅菌、蒸留、脱イオン化、超純粋、ＲＮＡｓｅを含まないなど）、生理食塩水（例えば、クレブス、Ａｓｃａｒｉｓ、デンツ、テト食塩水）、または１％（ｗ／ｖ）の水中のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）が挙げられる。

【0042】

一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、親水性表面を含む。一部の実施形態では、親水性表面は、カチオン性脂質を含む。一部の実施形態では、親水性表面は、イオン化脂質を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、膜を含む。一部の実施形態では、膜は、カチオン性脂質を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、カチオン性脂質を含む。親水性表面への包含のための例示的なカチオン性脂質としては、限定されないが、１，２－ジオレオイルオキシ－３（トリメチルアンモニウム）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、３β－［Ν－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣコレステロール）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡ）；１，２－ジミリストイル３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、ジパルミトイル（Ｃ１６：０）トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＰＴＡＰ）、ジステアロイルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＳＴＡＰ）、Ｎ－［ｌ－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル］Ｎ，Ｎ，Ｎトリメチルアンモニウム、クロリド（ＤＯＴＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジオレオイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（ＤＯＥＰＣ）、１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＤＡＰ）、および１，２－ジリノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、１，１’－（（２－（４－（２－（（２－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）アザンジイル）ビス（ドデカン－２－オール）（Ｃ１２－２００）、３０６Ｏｉ１０、テトラキス（８－メチルノニル）３，３’，３’’，３’’’－（（メチルアザンジイル）ビス（プロパン－３，１－ジイル））ビス（アザントリイル））テトラプロピオネート、９Ａ１Ｐ９、デシル（２－（ジオクチルアンモニオ）エチル）ホスフェート；Ａ２－Ｉｓｏ５－２ＤＣ１８、エチル５，５－ジ（（Ｚ）－ヘプタデカ－８－エン－１－イル）－１－（３－（ピロリジン－１－イル）プロピル）－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－イミダゾール－２－カルボキシレート；ＡＬＣ－０３１５、（（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）；ＡＬＣ－０１５９、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド；β－シトステロール、（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１７－（（２Ｒ，５Ｒ）－５－エチル－６－メチルヘプタン－２－イル）－１０，１３－ジメチル－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－オール；ＢＡＭＥ－Ｏ１６Ｂ、ビス（２－（ドデシルジスルファニル）エチル）３，３’－（（３－メチル－９－オキソ－１０－オキサ－１３，１４－ジチア－３，６－ジアザヘキサコシル）アザンジイル）ジプロピオネート；ＢＨＥＭ－コレステロール、２－（（（（（３Ｓ，８Ｓ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｓ，１７Ｒ）－１０，１３－ジメチル－１７－（（Ｒ）－６－メチルヘプタン－２－イル）－２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７－テトラデカヒドロ－１Ｈ－シクロペンタ［ａ］フェナントレン－３－イル）オキシ）カルボニル）アミノ）－Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ－メチルエタン－１－アミニウムブロミド；ｃＫＫ－Ｅ１２、３，６－ビス（４－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）ブチル）ピペラジン－２，５－ジオン；ＤＣ－コレステロール、３β－［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル］コレステロール；ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ、（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート；ＤＯＰＥ、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン；ＤＯＳＰＡ、２，３－ジオレイルオキシ－Ｎ－［２－（スペルミンカルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパンアミニウムトリフルオロアセテート；ＤＳＰＣ、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン；ｅＰＣ、エチルホスファチジルコリン；ＦＴＴ５、ヘキサ（オクタン－３－イル）９，９’，９’’，９’’’，９’’’’，９’’’’’－（（（（ベンゼン－１，３，５－トリカルボニル）イリス（アザンジイル））トリス（プロパン－３，１－ジイル））トリス（アザントリイル））ヘキサノナノエート；Ｌｉｐｉｄ Ｈ（ＳＭ－１０２）、ヘプタデカン－９－イル８－（（２－ヒドロキシエチル）（６－オキソ－６－（ウンデシルオキシ）ヘキシル）アミノ）オクタノエート；ＯＦ－Ｄｅｇ－Ｌｉｎ、（（（３，６－ジオキソピペラジン－２，５－ジイル）ビス（ブタン－４，１－ジイル））ビス（アザントリイル））テトラキス（エタン－２，１－ジイル）（９Ｚ，９’Ｚ，９’’Ｚ，９’’’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ，１２’’Ｚ，１２’’’Ｚ）－テトラキス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）；ＰＥＧ２０００－ＤＭＧ、（Ｒ）－２，３－ビス（ミリストイルオキシ）プロピル－１－（メトキシポリ（エチレングリコール）２０００）カルバメート；ＴＴ３、またはＮ１，Ｎ３，Ｎ５－トリス（３－（ジドデシルアミノ）プロピル）ベンゼン－１，３，５－トリカルボキサミドが挙げられる。脂質の好適なクラスの他の例としては、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、およびＰＥＧ化脂質が挙げられるがこれらに限定されず、ＰＥＧ化脂質には、上記脂質のいずれかのＰＥＧ化バージョン（例えば、ＤＳＰＥ－ＰＥＧ）が含まれる。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、ＤＯＴＡＰを含む。

【0043】

一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、油を含む。一部の実施形態では、油は、液相中にある。使用することができる油の非限定的な例としては、α－トコフェロール、ココナツ油、ブドウ種子油、ラウロイルポリオキシルグリセリド、鉱物油、モノアシルグリセロール、パーム核油、オリーブ油、パラフィン油、ピーナッツ油、プロポリス、スクアレン、スクアラン、ソラネソール、大豆レシチン、大豆油、ヒマワリ油、トリグリセリド、またはビタミンＥが挙げられる。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、トリグリセリドを含む。例示的なトリグリセリドとしては、限定されるものではないが、カプリン酸トリグリセリド、カプリル酸トリグリセリド、カプリル酸およびカプリン酸トリグリセリド、トリグリセリドエステル、およびミリスチン酸トリグリセリンが挙げられる。一部の実施形態では、油は、固相中にある。一部の実施形態では、油は、ソラネソールを含む。

【0044】

一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、液体有機材料および固体無機材料を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、無機粒子を含む。一部の実施形態では、無機粒子は、固体無機粒子である。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、疎水性コア内の無機粒子を含む。

【0045】

一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、金属を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、疎水性コア内に金属を含む。金属は、限定されないが、金属塩、金属酸化物、金属水酸化物、または金属リン酸塩であり得る。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、酸化アルミニウム（Ａｌ_２Ｏ_３）、オキシ水酸化アルミニウム、酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４、Ｆｅ_２Ｏ_３、ＦｅＯ、もしくはこれらの組合せ）、二酸化チタン、二酸化ケイ素（ＳｉＯ_２）、ヒドロキシリン酸アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）_ｘ（ＰＯ_４）_ｙ）、リン酸カルシウム（Ｃａ_３（ＰＯ_４）_２）、カルシウムヒドロキシアパタイト（Ｃａ_１０（ＰＯ_４）_６（ＯＨ）_２）、グルコン酸鉄、または硫酸鉄を含む。無機粒子は、１つまたは複数の同じまたは異なる金属（遷移金属を含む任意の金属）から形成され得る。一部の実施形態では、無機粒子は、遷移金属酸化物である。一部の実施形態では、遷移金属は、マグネタイト（Ｆｅ_３Ｏ_４）、マグヘマイト（ｙ－Ｆｅ_２Ｏ_３）、ウスタイト（ＦｅＯ）、またはヘマタイト（アルファ（α）－Ｆｅ_２Ｏ_３）である。一部の実施形態では、金属は、水酸化アルミニウムまたはオキシ水酸化アルミニウムであり、ホスフェート末端脂質、または界面活性剤、例えば、オレイン酸、オレイルアミン、ＳＤＳ、ＴＯＰＯもしくはＤＳＰＡは、液状油と混合されて、疎水性コアが形成される前に、無機固体ナノ粒子をコーティングするために使用される。

【0046】

一部の実施形態では、金属は、常磁性、超常磁性、フェリ磁性または強磁性化合物を含み得る。一部の実施形態では、金属は、超常磁性酸化鉄（Ｆｅ_３Ｏ_４）である。

【0047】

一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、カチオン性脂質、油、および無機粒子を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、ＤＯＴＡＰ；スクアレンおよび／またはトリミリスチン酸グリセリル－ｄｙｎａｓａｎ；ならびに酸化鉄を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、界面活性剤をさらに含む。したがって、一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、カチオン性脂質、油、無機粒子、および界面活性剤を含む。

【0048】

界面活性剤は、本明細書に提供されるナノ粒子の、２つの液体間、または液体および固体構成要素間の表面張力を低下させる化合物である。界面活性剤は、疎水性、親水性、または両親媒性であり得る。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、疎水性界面活性剤を含む。用いられ得る例示的な疎水性界面活性剤としては、限定されるものではないが、ソルビタンモノラウレート（ＳＰＡＮ（登録商標）２０）、ソルビタンモノパルミテート（ＳＰＡＮ（登録商標）４０）、ソルビタンモノステアレート（ＳＰＡＮ（登録商標）６０）、ソルビタントリステアレート（ＳＰＡＮ（登録商標）６５）、ソルビタンモノオレエート（ＳＰＡＮ（登録商標）８０）、およびソルビタントリオレエート（ＳＰＡＮ（登録商標）８５）が挙げられる。好適な疎水性界面活性剤としては、１０もしくはそれ未満、例えば、５もしくはそれ未満、１～５、または４～５の親水性－疎水性バランス（ＨＬＢ）値を有するものが挙げられる。例えば、疎水性界面活性剤は、１～５または４～５のＨＬＢ値を有するソルビタンエステルであり得る。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、乳化剤とも呼ばれる親水性界面活性剤を含む。

【0049】

一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、ポリソルベートを含む。ポリソルベートは、脂肪酸でエステル化されたエトキシ化ソルビタン（ソルビトールの誘導体）に由来する油性液体である。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子または脂質キャリアは、親水性界面活性剤を含む。用いることができる例示的な親水性界面活性剤としては、限定されるものではないが、ポリソルベート、例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）、Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ、Ｓｃａｔｔｉｃｓ、Ａｌｋｅｓｔ、もしくはＣａｎａｒｃｅｌ；ポリオキシエチレンソルビタンエステル（ポリソルベート）；ポリソルベート８０（モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、またはＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）；ポリソルベート６０（モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、またはＴＷＥＥＮ（登録商標）６０）；ポリソルベート４０（モノパルミチン酸ポリオキシエチレンソルビタン、またはＴＷＥＥＮ（登録商標）４０）：およびポリソルベート２０（モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、またはＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）が挙げられる。一実施形態では、親水性界面活性剤は、ポリソルベート８０である。

【0050】

本明細書に提供されるナノ粒子は、脂質膜（例えば、カチオン性脂質、例えばＤＯＴＡＰ）により包囲された疎水性コアを含む。一部の実施形態では、疎水性コアは、１つまたは複数の無機粒子；ホスフェート末端脂質；および界面活性剤を含む。

【0051】

本明細書に記載される無機固体ナノ粒子は、液状油と混合する前に表面改変され得る。例えば、無機固体ナノ粒子の表面が親水性である場合、無機固体ナノ粒子は、ナノエマルジョン粒子の「油」相中の液状油との無機固体ナノ粒子の混和性を促進するために疎水性分子（または界面活性剤）でコーティングされ得る。一部の実施形態では、無機粒子は、キャッピングリガンド、ホスフェート末端脂質、および／または界面活性剤でコーティングされる。一部の実施形態では、疎水性コアは、ホスフェート末端脂質を含む。用いることができる例示的なホスフェート末端脂質としては、限定されるものではないが、トリオクチルホスフィンオキシド（ＴＯＰＯ）またはジステアリルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）が挙げられる。一部の実施形態では、疎水性コアは、リン末端界面活性剤、カルボキシレート末端界面活性剤、サルフェート末端界面活性剤、またはアミン末端界面活性剤である界面活性剤を含む。典型的なカルボキシレート末端界面活性剤としては、オレイン酸が挙げられる。典型的なアミン末端界面活性剤としては、オレイルアミンが挙げられる。一部の実施形態では、界面活性剤は、ジステアリルホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）、オレイン酸、オレイルアミンまたはドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）である。一部の実施形態では、無機固体ナノ粒子は、金属酸化物、例えば酸化鉄であり、液状油と混合して、疎水性コアが形成される前に、界面活性剤、例えばオレイン酸、オレイルアミン、ＳＤＳ、ＤＳＰＡ、またはＴＯＰＯを使用して、無機固体ナノ粒子がコーティングされる。

【0052】

一部の実施形態では、疎水性コアは、必要に応じてホスフェート末端脂質、リン末端界面活性剤、カルボキシレート末端界面活性剤、サルフェート末端界面活性剤、またはアミン末端界面活性剤でコーティングされた、少なくとも１つの金属水酸化物またはオキシ水酸化物粒子を含有する１つまたは複数の無機粒子；ならびに天然に存在するまたは合成のスクアレンを含有する液状油；ＤＯＴＡＰを含むカチオン性脂質；ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、およびソルビタントリオレエートからなる群から選択されるソルビタンエステルを含む疎水性界面活性剤；ならびにポリソルベートを含む親水性界面活性剤を含む。

【0053】

一部の実施形態では、疎水性コアは、必要に応じてＴＯＰＯでコーティングされた、水酸化アルミニウムまたはオキシ水酸化アルミニウムナノ粒子を含有する１つまたは複数の無機ナノ粒子、ならびに天然に存在するまたは合成のスクアレンを含有する液状油；カチオン性脂質ＤＯＴＡＰ；ソルビタンモノステアレートを含む疎水性界面活性剤；およびポリソルベート８０を含む親水性界面活性剤を含む。

【0054】

一部の実施形態では、疎水性コアは、必要に応じてホスフェート末端脂質、リン末端界面活性剤、カルボキシレート末端界面活性剤、サルフェート末端界面活性剤、またはアミン末端界面活性剤でコーティングされた、少なくとも１つの金属水酸化物またはオキシ水酸化物粒子を含有する１つまたは複数の無機粒子；ならびに天然に存在するまたは合成のスクアレンを含有する液状油；ＤＯＴＡＰを含むカチオン性脂質；ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、およびソルビタントリオレエートからなる群から選択されるソルビタンエステルを含む疎水性界面活性剤；ならびにポリソルベートを含む親水性界面活性剤からなる。一部の実施形態では、疎水性コアは、必要に応じてＴＯＰＯでコーティングされた、水酸化アルミニウムまたはオキシ水酸化アルミニウムナノ粒子を含有する１つまたは複数の無機ナノ粒子、ならびに天然に存在するまたは合成のスクアレンを含有する液状油；カチオン性脂質ＤＯＴＡＰ；ソルビタンモノステアレートを含む疎水性界面活性剤；およびポリソルベート８０を含む親水性界面活性剤からなる。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、約０．２％～約４０％ｗ／ｖのスクアレン、約０．００１％～約１０％ｗ／ｖの酸化鉄ナノ粒子、約０．２％～約１０％ｗ／ｖのＤＯＴＡＰ、約０．２５％～約５％ｗ／ｖのソルビタンモノステアレート、および約０．５％～約１０％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含み得る。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、約２％～約６％ｗ／ｖのスクアレン、約０．０１％～約１％ｗ／ｖの酸化鉄ナノ粒子、約０．２％～約１％ｗ／ｖのＤＯＴＡＰ、約０．２５％～約１％ｗ／ｖのソルビタンモノステアレート、および約０．５％～約５％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含み得る。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、約０．２％～約４０％ｗ／ｖのスクアレン、約０．００１％～約１０％ｗ／ｖの水酸化アルミニウムまたはオキシ水酸化アルミニウムナノ粒子、約０．２％～約１０％ｗ／ｖのＤＯＴＡＰ、約０．２５％～約５％ｗ／ｖのソルビタンモノステアレート、および約０．５％～約１０％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含み得る。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、約２％～約６％ｗ／ｖのスクアレン、約０．０１％～約１％ｗ／ｖの水酸化アルミニウムまたはオキシ水酸化アルミニウムナノ粒子、約０．２％～約１％ｗ／ｖのＤＯＴＡＰ、約０．２５％～約１％ｗ／ｖのソルビタンモノステアレート、および約０．５％～約５％ｗ／ｖのポリソルベート８０を含み得る。

【0055】

一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、表１に記載される少なくとも１つのナノ粒子製剤を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、ＮＰ－１～ＮＰ－３０のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、ＮＰ－１～ＮＰ－３１のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、本明細書に提供される核酸と混合される。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、ホモジナイゼーションおよび超音波処理技法によって作製される。

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【表1-6】

【表1-7】

【0056】

一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、ソルビタンモノステアレート（例えば、ＳＰＡＮ（登録商標）６０）、ポリソルベート８０（例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、ＤＯＴＡＰ、スクアレンを含み、固体粒子を含まない。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、ソルビタンモノステアレート（例えば、ＳＰＡＮ（登録商標）６０）、ポリソルベート８０（例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、ＤＯＴＡＰ、スクアレン、および酸化鉄粒子を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、免疫刺激物質を含む。一部の実施形態では、免疫刺激物質は、スクアレンである。一部の実施形態では、免疫刺激物質は、中鎖トリグリセリドである。一部の実施形態では、免疫刺激物質は、Ｍｉｇｌｙｏｌ ８１０またはＭｉｇｌｙｏｌ ８１２である。Ｍｉｇｌｙｏｌ ８１０は、飽和カプリルおよびカプリン脂肪酸とグリセロールのトリグリセリドエステルである。Ｍｉｇｌｙｏｌ ８１２は、飽和ココナツ／パーム核油由来カプリルおよびカプリン脂肪酸と植物由来グリセロールのトリグリセリドエステルである。一部の実施形態では、免疫刺激物質は、産生されるタンパク質の総量を減少させることができるが本明細書に提供される組成物に対する免疫応答を（例えば、ワクチンとして送達されたとき）増大させることができる。一部の実施形態では、免疫刺激物質は、産生されるタンパク質の総量を増加させることができるが本明細書に提供される組成物に対する免疫応答を減少させることができる。

【0057】

本明細書に提供されるナノ粒子は、サイズの点ではさまざまな平均直径のものであり得る。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、約２０ナノメートル（ｎｍ）～約２００ｎｍの範囲の平均直径（動的光散乱により測定される、ｚ平均流体力学直径）を有する。一部の実施形態では、ナノ粒子のｚ平均直径は、約２０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約２０ｎｍ～約１００ｎｍ、約２０ｎｍ～約８０ｎｍ、約２０ｎｍ～約６０ｎｍの範囲である。一部の実施形態では、ナノ粒子のｚ平均直径）は、約４０ｎｍ～約２００ｎｍ、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１００ｎｍ、約４０ｎｍ～約９０ｎｍ、約４０ｎｍ～約８０ｎｍ、または約４０ｎｍ～約６０ｎｍの範囲である。一実施形態では、ナノ粒子のｚ平均直径は、約４０ｎｍ～約８０ｎｍである。一部の実施形態では、ナノ粒子のｚ平均直径は、約４０ｎｍ～約６０ｎｍである。一部の実施形態では、ナノ粒子は、最大で１００ｎｍの直径である。一部の実施形態では、ナノ粒子は、５０～７０ｎｍの直径である。一部の実施形態では、ナノ粒子は、４０～８０ｎｍの直径である。一部の実施形態では、ナノ粒子の疎水性コア内の無機粒子（例えば、酸化鉄）は、約３ｎｍ～約５０ｎｍの範囲の平均直径（数加重平均直径）であり得る。例えば、無機粒子は、約５ｎｍ、約１０ｎｍ、約１５ｎｍ、約２０ｎｍ、約２５ｎｍ、約３０ｎｍ、約３５ｎｍ、約４０ｎｍ、約４５ｎｍ、または約５０ｎｍの平均直径を有し得る。

【0058】

本明細書に提供されるナノ粒子は、多分散指数（ＰＤＩ）によって特徴付けられ得、これは、サイズ分布に関するそれらの品質の指標である。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子の平均多分散指数（ＰＤＩ）は、約０．１～約０．５の範囲である。一部の実施形態では、ナノ粒子の平均ＰＤＩは、約０．２～約０．５、約０．１～約０．４、約０．２～約０．４、約０．２～約０．３、または約０．１～約０．３の範囲であり得る。

【0059】

一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、約０．１：１～約２０：１、約０．５：１～約１２：１、約０．５：１～約９：１、約０．５：１～約５：１、約０．５：１～約３：１、または約０．５：１～約１：１の範囲の油の界面活性剤に対するモル比を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、約０．１：１～約２：１、約０．２：１～約１．５：１、約０．３：１～約１：１、約０．５：１～約１：１、または約０．６：１～約１：１の範囲の親水性界面活性剤の脂質に対する比を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、約０．１：１～約５：１、約０．２：１～約３：１、約０．３：１～約２：１、約０．５：１～約２：１、または約１：１～約２：１の範囲の疎水性界面活性剤の脂質に対する比を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、約０．２％～約４０％ｗ／ｖの液状油、約０．００１％～約１０％ｗ／ｖの無機固体ナノ粒子、約０．２％～約１０％ｗ／ｖの脂質、約０．２５％～約５％ｗ／ｖの疎水性界面活性剤、および約０．５％～約１０％ｗ／ｖの親水性界面活性剤を含む。一部の実施形態では、脂質はカチオン性脂質を含み、油はスクアレンを含み、および／または疎水性界面活性剤は、ソルビタンエステルを含む。一部の実施形態では、本明細書に提供されるナノ粒子は、８～１１の間の親水性－親油性バランスを生じさせる、エステルの比を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、本明細書に提供される脂質キャリアに組み込まれるか、それと会合するか、またはそれと複合体化して、脂質キャリア－核酸複合体を形成する。一部の実施形態では、脂質キャリア－核酸複合体は、非共有結合性相互作用を介して、または可逆的な共有結合性相互作用を介して形成される。
感染性疾患抗原発現のための核酸

【0060】

ナノ粒子と核酸とを含む組成物が本明細書に提供される。一部の実施形態では、核酸は、ナノ粒子を有する複合体中にある。一部の実施形態では、核酸は、ナノ粒子の膜を有する複合体中にある。一部の実施形態では、核酸は、ナノ粒子の親水性表面を有する複合体中にある。一部の実施形態では、核酸は、ナノ粒子内にある。一部の実施形態では、核酸は、疎水性コア内にある。

【0061】

一部の実施形態では、核酸は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）である。核酸は、線状であることがあり、または二次構造（例えば、ヘアピン）を含むことがある。一部の実施形態では、核酸は、改変ヌクレオチドもしくは塩基および／またはそれらのアナログを含む、ポリヌクレオチドである。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびそれらのアナログなどの、改変ヌクレオチドを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造への改変は、本明細書に提供される組成物のアセンブリーの前または後に付与され得る。改変ヌクレオシドおよびヌクレオチドに組み込まれ得るならびにＲＮＡ分子中に存在し得る改変核酸塩基としては、ｍ５Ｃ（５－メチルシチジン）、ｍ５Ｕ（５－メチルウリジン）、ｍ６Ａ（Ｎ６－メチルアデノシン）、ｓ２Ｕ（２－チオウリジン）、Ｕｍ（２’－Ｏ－メチルウリジン）、ｍ１Ａ（１－メチルアデノシン）；ｍ２Ａ（２－メチルアデノシン）；Ａｍ（２－１－Ｏ－メチルアデノシン）；ｍｓ２ｍ６Ａ（２－メチルチオ－Ｎ６－メチルアデノシン）；ｉ６Ａ（Ｎ６－イソペンテニルアデノシン）；ｍｓ２ｉ６Ａ（２－メチルチオ－Ｎ６イソペンテニルアデノシン）；ｉｏ６Ａ（Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン）；ｍｓ２ｉｏ６Ａ（２－メチルチオ－Ｎ６－（ｃｉｓ－ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン）；ｇ６Ａ（Ｎ６－グリシニルカルバモイルアデノシン）；ｔ６Ａ（Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン）；ｍｓ２ｔ６Ａ（２－メチルチオ－Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン）；ｍ６ｔ６Ａ（Ｎ６－メチル－Ｎ６－トレオニルカルバモイルアデノシン）；ｈｎ６Ａ（Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン）；ｍｓ２ｈｎ６Ａ（２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン）；Ａｒ（ｐ）（２’－Ｏ－リボシルアデノシン（リン酸エステル））；Ｉ（イノシン）；ｍ１Ｉ（１－メチルイノシン）；ｍ’Ｉｍ（１，２’－Ｏ－ジメチルイノシン）；ｍ３Ｃ（３－メチルシチジン）；Ｃｍ（２Ｔ－Ｏ－メチルシチジン）；ｓ２Ｃ（２－チオシチジン）；ａｃ４Ｃ（Ｎ４－アセチルシチジン）；ｆ５Ｃ（５－ホルミルシチジン（fonnylcytidine））；ｍ５Ｃｍ（５，２－Ｏ－ジメチルシチジン）；ａｃ４Ｃｍ（Ｎ４アセチル２ＴＯメチルシチジン）；ｋ２Ｃ（リシジン）；ｍ１Ｇ（１－メチルグアノシン）；ｍ２Ｇ（Ｎ２－メチルグアノシン）；ｍ７Ｇ（７－メチルグアノシン）；Ｇｍ（２’－Ｏ－メチルグアノシン）；ｍ２２Ｇ（Ｎ２，Ｎ２－ジメチルグアノシン）；ｍ２Ｇｍ（Ｎ２，２’－Ｏ－ジメチルグアノシン）；ｍ２２Ｇｍ（Ｎ２，Ｎ２，２’－Ｏ－トリメチルグアノシン）；Ｇｒ（ｐ）（２’－Ｏ－リボシルグアノシン（リン酸エステル））；ｙＷ（ワイブトシン）；ｏ２ｙＷ（ペルオキシワイブトシン）；ＯＨｙＷ（ヒドロキシワイブトシン）；ＯＨｙＷ^＊（未改変ヒドロキシワイブトシン）；ｉｍＧ（ワイオシン）；ｍｉｍＧ（メチルグアノシン）；Ｑ（キューオシン）；ｏＱ（エポキシキューオシン）；ｇａｌＱ（ガラクトシル－キューオシン）；ｍａｎＱ（マンノシル－キューオシン）；ｐｒｅＱｏ（７－シアノ－７－デアザグアノシン）；ｐｒｅＱｉ（７－アミノメチル－７－デアザグアノシン）；Ｇ^＊（アーケオシン）；Ｄ（ジヒドロウリジン）；ｍ５Ｕｍ（５，２’－Ｏ－ジメチルウリジン）；ｓ４Ｕ（４－チオウリジン）；ｍ５ｓ２Ｕ（５－メチル－２－チオウリジン）；ｓ２Ｕｍ（２－チオ－２’－Ｏ－メチルウリジン）；ａｃｐ３Ｕ（３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン）；ｈｏＳＵ（５－ヒドロキシウリジン）；ｍｏＳＵ（５－メトキシウリジン）；ｃｍｏ５Ｕ（ウリジン５－オキシ酢酸）；ｍｃｍｏ５Ｕ（ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル）；ｃｈｍ５Ｕ（５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン））；ｍｃｈｍ５Ｕ（５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジンメチルエステル）；ｍｃｍ５Ｕ（５－メトキシカルボニルメチルウリジン）；ｍｃｍ５Ｕｍ（Ｓ－メトキシカルボニルメチル－２－Ｏ－メチルウリジン）；ｍｃｍ５ｓ２Ｕ（５－メトキシカルボニルメチル－２－チオウリジン）；ｎｍ５ｓ２Ｕ（５－アミノメチル－２－チオウリジン）；ｍｎｍ５Ｕ（５－メチルアミノメチルウリジン）；ｍｎｍ５ｓ２Ｕ（５－メチルアミノメチル－２－チオウリジン）；ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ（５－メチルアミノメチル－２－セレノウリジン）；ｎｃｍ５Ｕ（５－カルバモイルメチルウリジン）；ｎｃｍ５Ｕｍ（５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン）；ｃｍｎｍ５Ｕ（５－カルボキシメチルアミノメチルウリジン）；ｃｎｍｍ５Ｕｍ（５－カルボキシメチルアミノメチル－２－Ｌ－Ｏメチルウリジン）；ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ（５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン）；ｍ６２Ａ（Ｎ６，Ｎ６－ジメチルアデノシン）；Ｔｍ（２’－Ｏ－メチルイノシン）；ｍ４Ｃ（Ｎ４－メチルシチジン）；ｍ４Ｃｍ（Ｎ４，２－Ｏ－ジメチルシチジン）；ｈｍ５Ｃ（５－ヒドロキシメチルシチジン）；ｍ３Ｕ（３－メチルウリジン）；ｃｍ５Ｕ（５－カルボキシメチルウリジン）；ｍ６Ａｍ（Ｎ６，Ｔ－Ｏ－ジメチルアデノシン）；ｒｎ６２Ａｍ（Ｎ６，Ｎ６，Ｏ－２－トリメチルアデノシン）；ｍ２’７Ｇ（Ｎ２，７－ジメチルグアノシン）；ｍ２’２’７Ｇ（Ｎ２，Ｎ２，７－トリメチルグアノシン）；ｍ３Ｕｍ（３，２Ｔ－Ｏ－ジメチルウリジン）；ｍ５Ｄ（５－メチルジヒドロウリジン）；ｆ５Ｃｍ（５－ホルミル－２’－Ｏ－メチルシチジン）；ｍ１Ｇｍ（１，２’－Ｏ－ジメチルグアノシン）；ｍ’Ａｍ（１，２－Ｏ－ジメチルアデノシン）イリノメチルウリジン）；ｔｍ５ｓ２Ｕ（Ｓ－タウリノメチル－２－チオウリジン））；ｉｍＧ－１４（４－デメチルグアノシン）；ｉｍＧ２（イソグアノシン）；ａｃ６Ａ（Ｎ６－アセチルアデノシン）、ヒポキサンチン、イノシン、８－オキソ－アデニン、その７－置換誘導体、ジヒドロウラシル、シュードウラシル、２－チオウラシル、４－チオウラシル、５－アミノウラシル、５－（Ｃ_１～Ｃ_６）－アルキルウラシル、５－メチルウラシル、５－（Ｃ_２～Ｃ_６）－アルケニルウラシル、５－（Ｃ_２～Ｃ_６）－アルキニルウラシル、５－（ヒドロキシメチル）ウラシル、５－クロロウラシル、５－フルオロウラシル、５－ブロモウラシル、５－ヒドロキシシトシン、５－（Ｃ_１～Ｃ_６）－アルキルシトシン、５－メチルシトシン、５－（Ｃ_２～Ｃ_６）－アルケニルシトシン、５－（Ｃ_２～Ｃ_６）－アルキニルシトシン、５－クロロシトシン、５－フルオロシトシン、５－ブロモシトシン、Ｎ^２－ジメチルグアニン、７－デアザグアニン、８－アザグアニン、７－デアザ－７－置換グアニン、７－デアザ－７－（Ｃ２～Ｃ６）アルキニルグアニン、７－デアザ－８－置換グアニン、８－ヒドロキシグアニン、６－チオグアニン、８－オキソグアニン、２－アミノプリン、２－アミノ－６－クロロプリン、２，４－ジアミノプリン、２，６－ジアミノプリン、８－アザプリン、置換７－デアザプリン、７－デアザ－７－置換プリン、７－デアザ－８－置換プリン、水素（脱塩基残基）、ｍ５Ｃ、ｍ５Ｕ、ｍ６Ａ、ｓ２Ｕ、Ｗ、または２’－Ｏ－メチル－Ｕが挙げられる。これらの改変核酸塩基のいずれか１つまたは任意の組合せを、本発明の自己複製ＲＮＡに含めることができる。これらの改変核酸塩基およびそれらの対応するリボヌクレオシドの多くは、商業供給業者から入手可能である。必要に応じて、核酸は、ホスホロアミデート、ホスホロチオエート、および／またはメチルホスホネート連結を含有することができる。ＲＮＡ配列を、そのコドン使用頻度に関して、例えば、ＲＮＡの翻訳有効性および半減期を増加させるように、改変することができる。ポリＡテール（例えば、約３０またはそれよりも多くのアデノシン残基のもの）は、その半減期を増加させるために、ＲＮＡの３’末端に付着されてもよい。ＲＮＡ合成中に組み込むことができるまたはＲＮＡ転写後に酵素的に操作することができる、構造ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｎ（キャップ０構造）を有する改変リボヌクレオチドまたはその誘導体で（例えば、Ｎ７－モノメチル化キャップ０構造の構築を触媒する、ｍＲＮＡトリホスファターゼ、グアニリル－トランスフェラーゼおよびグアニン－７－メチルトランスフェラーゼからなるワクシニアウイルスキャッピング酵素（ＶＣＥ）を使用することにより）ＲＮＡの５’末端をキャップすることができる。キャップ構造は、安定性および翻訳有効性をＲＮＡ分子に与えることができる。ＲＮＡ分子の５’キャップを２’－Ｏ－メチルトランスフェラーゼによりさらに改変することができ、その結果、キャップ１構造（ｍ７Ｇｐｐｐ［ｍ２’－Ｏ］Ｎ）が生成されることになり、これは、翻訳有効性をさらに増加させることができる。キャップ１構造は、ｉｎ ｖｉｖｏ効力を増大させることもできる。

【0062】

一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、１つまたは複数の核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、２つまたはそれより多くの核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、少なくとも１つのＤＮＡを含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、少なくとも１つのＲＮＡを含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、少なくとも１つのＤＮＡおよび少なくとも１つのＲＮＡを含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、５ｎｇ超～約１ｍｇの量で存在する。一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、最大で約２５、５０、７５、１００、１５０、１７５ｎｇの量で存在する。一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、最大で約１ｍｇの量で存在する。一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、約０．０５μｇ、０．１μｇ、０．２μｇ、０．５μｇ、１μｇ、５μｇ、１０μｇ、１２．５μｇ、１５μｇ、２５μｇ、４０μｇ、５０μｇ、１００μｇ、２００μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、１ｍｇの量で存在する。一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、０．０５μｇ、０．１μｇ、０．２μｇ、０．５μｇ、１μｇ、５μｇ、１０μｇ、１２．５μｇ、１５μｇ、２５μｇ、４０μｇ、５０μｇ、１００μｇ、２００μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、１ｍｇの量で存在する。一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、約５μｇ、約１０μｇ、約２５μｇ、約５０μｇ、または約１００μｇの量で存在する。一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、最大で約５μｇ、約１０μｇ、約２５μｇ、約５０μｇまたは１００μｇの量で存在する。一部の実施形態では、核酸は、長さ少なくとも約２００、２５０、５００、７５０、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００、１１，０００、１２，０００、１３，０００、１４，０００、１５，０００、１６，０００、１７，０００、１８，０００、１９，０００、または２０，０００ヌクレオチドである。一部の実施形態では、核酸は、最大で約７０００、８０００、９０００、１０，０００、１１，０００、１２，０００、１３，０００、１４，０００、１５，０００、１６，０００、１７，０００、１８，０００、１９，０００または２０，０００ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、核酸は、長さ約７５００、１０，０００、１５，０００、または２０，０００ヌクレオチドである。
感染性疾患抗原

【0063】

宿主による認識のための感染性疾患抗原が本明細書に提供される。一部の実施形態では、感染性疾患抗原は、抗原タンパク質配列をコードする核酸である。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、微生物に由来する抗原をコードする配列を含む少なくとも１つの核酸配列を含む。一部の実施形態では、微生物は、感染性微生物である。感染性微生物および感染性因子の非限定的な例としては、限定されるものではないが、ウイルス、例えば、アデノウイルス、単純ヘルペス１型ウイルス、単純ヘルペス２型ウイルス、脳炎ウイルス、パピローマウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、チクングニアウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ＢＫウイルス、ＪＣウイルス、天然痘、ポリオウイルス（ｐｏｌｉｏ ｖｉｒｕｓ）、Ｂ型肝炎ウイルス、ヒトボカウイルス、パルボウイルスＢ１９、ヒトアストロウイルス、ノーウォークウイルス、コクサッキーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス（ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ）、ライノウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、黄熱病ウイルス、デングウイルス、ウエストナイルウイルス、風疹ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス（インフルエンザＡ型またはインフルエンザＢ型）、グアナリトウイルス、フニンウイルス、ラッサウイルス、マチュポウイルス、サビアウイルス、クリミア－コンゴ出血熱ウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ヒトメタニューモウイルス、ヘンドラウイルス、ニパウイルス、狂犬病ウイルス、Ｄ型肝炎、ロタウイルス、オルビウイルス、コルチウイルス、バンナウイルス、ジカウイルス、ハンタウイルス、ウエストナイルウイルス、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）コロナウイルス、日本脳炎ウイルス、および東部ウマ脳炎；細菌、例えば、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｎａｐｌａｓｍａ、Ａｚｏｒｈｉｚｏｂｉａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ、Ｂｕｒｋｋｏｌｄｅｒｉａ、Ｃａｌｙｍｍａｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｒｏｃｈａｌｉｍａｅａ、Ｒｏｔｈｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ、Ｖｉｂｒｉｏ、Ｗａｌｂａｃｈｉａ、およびＹｅｒｓｉｎｉａ；真菌、例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ；寄生虫、例えば、Ｂａｂｅｓｉａ ｓｐ．、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ．、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｓｐ．、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｓｐ． Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｓｐ．、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｅｉｍｅｒｉａ ｓｐ．、Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ、Ｔｈｅｉｌｅｒｉａ ｓｐ．、Ｔｈｅｉｌｅｒｉａ ｐａｒｖａ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｓｐ． Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｓｐ．、およびＬｅｉｓｈｍａｎｉａ ｍａｊｏｒ；ならびに酵母、例えば、Ｃａｎｄｉｄａが挙げられる。

【0064】

一部の実施形態では、抗原は、哺乳動物集団において重症呼吸器疾患を引き起こす微生物（ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ）に由来する。一部の実施形態では、抗原は、微生物（ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｏｒｇａｎｉｓｍ）の表面に発現される、表面タンパク質または膜貫通タンパク質である。

【0065】

一部の実施形態では、ウイルス抗原は、インフルエンザウイルス抗原である。一部の実施形態では、インフルエンザウイルス抗原は、ヘマグルチニン抗原である。ヘマグルチニン（ＨＡと略記される）は、インフルエンザウイルスの表面に存在するタンパク質である。ウイルス表面に、ヘマグルチニンタンパク質は、ホモトリマーの状態で存在し、ホモポリマーのそれぞれのモノマーは、ジスルフィド結合により連結された２つのサブユニット、ＨＡ１およびＨＡ２、で構成されている。構造的には、ヘマグルチニンタンパク質は、いくつかのドメイン：球状ヘッドドメイン、ストークドメイン（ステムまたはステムタンパク質とも呼ばれる）、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインで構成されている。一般に、インフルエンザウイルスによる宿主細胞（例えば、真核細胞、例えばヒト細胞）の感染中に、ヘマグルチニンタンパク質は、宿主細胞の表面の受容体のシアル酸を認識し、それに結合し、こうして宿主細胞へのウイルスの付着を促進する。ウイルスのエンドサイトーシス、およびエンドソームの酸性化の後、ヘマグルチニンタンパク質は、ｐＨ依存性立体構造変化を来たし、この変化によって、ヘマグルチニンタンパク質が、ウイルスエンベロープと宿主細胞のエンドソーム膜との融合およびウイルス核酸の宿主細胞への進入を助長することが可能になる。一般に、インフルエンザウイルスは、ウイルスヘマグルチニンタンパク質のアミノ酸配列および／またはウイルスノイラミニダーゼ（ＮＡ）のアミノ酸配列に基づいて分類される。一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質をコードする抗原配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質ステム領域またはその機能的バリアントをコードする抗原配列を含む。一部の実施形態では、ヘマグルチニン抗原は、サブタイプＨ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１０、Ｈ１１、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５、Ｈ１６、Ｈ１７、またはＨ１８のものである。異なるサブタイプのヘマグルチニンタンパク質間のアミノ酸配列の差は、主として、タンパク質のヘッドドメインの配列内に見られる。ステム領域のアミノ酸配列は、ヘッドドメインの配列と比較して、ヘマグルチニンサブタイプ間で高度に保存されると考えられる。一部の実施形態では、ヘマグルチニン抗原は、ヘッドドメイン（ＨＡ１）を含まない。一部の実施形態では、ヘマグルチニン抗原は、ヘッドドメイン（ＨＡ１）の一部分を含む。一部の実施形態では、ヘマグルチニン抗原は、細胞質ドメインを含まない。一部の実施形態では、ヘマグルチニン抗原は、細胞質ドメインの一部分を含む。一部の実施形態では、切断型ヘマグルチニン抗原。一部の実施形態では、切断型ヘマグルチニンタンパク質は、膜貫通ドメインの一部分を含む。一部の実施形態では、切断型ヘマグルチニンタンパク質は、ステム領域またはその機能的断片を含む。

【0066】

一部の実施形態では、ウイルス抗原は、水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）抗原である。一部の実施形態では、ＶＺＶ抗原は、糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）抗原、糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）抗原、糖タンパク質Ｈ（ｇＨ）抗原、糖タンパク質Ｌ（ｇＬ）抗原、糖タンパク質Ｎ（ｇＮ）抗原、糖タンパク質Ｉ（ｇＩ）抗原である。一部の実施形態では、ウイルス抗原は、コロナウイルス抗原である。一部の実施形態では、コロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１コロナウイルスまたは中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）コロナウイルス抗原である。一部の実施形態では、コロナウイルス抗原は、スパイク（Ｓ）タンパク質抗原である。一部の実施形態では、ウイルス抗原は、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）抗原である。一部の実施形態では、ウイルス抗原は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原である。一部の実施形態では、単純ヘルペスウイルス抗原は、ＨＳＶ１またはＨＳＶ２抗原である。一部の実施形態では、ＨＳＶ抗原は、糖タンパク質Ｂ、糖タンパク質Ｅ、糖タンパク質Ｌ、糖タンパク質Ｍ、または糖タンパク質Ｉである。一部の実施形態では、ウイルス抗原は、狂犬病ウイルス抗原である。一部の実施形態では、狂犬病ウイルス抗原は、核タンパク質（Ｎ）、リンタンパク質（Ｐ）、基質スタンパク質（Ｍ）、糖タンパク質（Ｇ）またはポリメラーゼ（Ｌ）抗原である。一部の実施形態では、ウイルス抗原は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ、ヒトベータヘルペスウイルス５）抗原である。一部の実施形態では、ＣＭＶ抗原は、糖タンパク質Ｂである。包含のためのウイルス抗原の非限定的な例としては、ジカウイルスエンベロープタンパク質（ＺＩＫＶ Ｅ）、ジカウイルス前駆体膜およびエンベロープタンパク質（ｐｒＭ－ＥＮＶ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２スパイク（Ｓ）タンパク質およびエンベロープ（Ｅ）タンパク質、ＨＩＶ ｐ２４抗原およびＮｅｆタンパク質、インフルエンザウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）抗原（Ｈ２、Ｈ３、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８およびＨ９）、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ、風疹Ｅ１およびＥ２抗原、ロタウイルスＶＰ７ｓｃ抗原、ＲＳＶ Ｍ２タンパク質、サイトメガロウイルスエンベロープ糖タンパク質Ｂ、Ｂ型肝炎ウイルスのＳ、ＭおよびＬタンパク質、狂犬病糖タンパク質、狂犬病核タンパク質、クリミア－コンゴ出血熱糖タンパク質ＧｃおよびもしくはＧｎ、ニパヘニパウイルス糖タンパク質、ヘンドラウイルス糖タンパク質、ヒトパピローマウイルスＥ６タンパク質、ヒトパピローマウイルスＥ７タンパク質、ヒトパピローマウイルスＬ１タンパク質、またはヒトパピローマウイルスＬ２タンパク質が挙げられる。

【0067】

一部の実施形態では、抗原は、ウイルス抗原である。一部の実施形態では、抗原は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原である。一部の実施形態では、抗原は、ＲＳＶ糖タンパク質（Ｇ）、ＲＳＶ－Ｇである。一部の実施形態では、抗原は、ＲＳＶ融合（Ｆ）糖タンパク質ＲＳＶ－Ｆである。一部の実施形態では、抗原は、ジカウイルス抗原である。一部の実施形態では、ジカウイルス抗原は、エンベロープ（Ｅ）タンパク質である。

【0068】

一部の実施形態では、抗原は、細菌抗原である。一部の実施形態では、細菌抗原は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原である。一部の実施形態では、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原は、Ｈ３７Ｒｖ、リンゴ酸シンターゼ、またはＭＰＴ５１である。一部の実施形態では、細菌抗原は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ抗原である。一部の実施形態では、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ抗原は、主要外膜タンパク質抗原である。一部の実施形態では、細菌抗原は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ抗原である。

【0069】

一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、表２にリストされる抗原またはその断片をコードする。一部の実施形態では、核酸は、表２にリストされる抗原に特異的に結合する配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、表２にリストされるＲＮＡ配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列類似性を含む。参照配列と比べた所与の配列についての配列同一性パーセント（％）は、最大配列同一性パーセントを達成するように、２つの配列を整列させ、必要によりギャップを導入した後に、特定された同一の残基のパーセンテージとして定義される。同一性パーセントは、当技術分野において公知のアライメント方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、Ａｌｉｇｎ、ＣｌｕｓｔａｌＷ２などの公に利用可能なソフトウェアを使用して実施され得る配列のアライメントを使用して計算することができる。当業者は、アライメントのための適切なパラメーターを決定することができるが、ＢＬＡＳＴについてのデフォルトパラメーターが具体的に企図される。例示的なウイルスおよび細菌抗原をコードする例示的な核酸配列は、表２にリストされる。

【表2-1】

【表2-2】

【0070】

一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、配列番号１～６のいずれか１つを含む核酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、配列番号７～３３のいずれか１つのアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、配列番号１～６のいずれか１つに相補的なＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号７の抗原をコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号８の抗原をコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号９の抗原をコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号１０の抗原をコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号１１の抗原をコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号１２の抗原をコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号１３～１８の抗原のいずれか１つをコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号２０～２１の抗原のいずれか１つをコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号２２～２７の抗原のいずれか１つをコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号２８の抗原をコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号２９の抗原をコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号３０または３１の抗原をコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号３２の抗原をコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号３３の抗原をコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む。切断型Ｎ末端ドメインを有するＶＺＶ ｇＥタンパク質をコードする核酸配列を含む組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶ ｇＥタンパク質切断型配列をコードする核酸配列が配列番号４０と少なくとも８５％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。

【0071】

一部の実施形態では、抗原は、寄生虫抗原である。一部の実施形態では、寄生虫抗原は、Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｌｉａ抗原、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｓｉｓ抗原、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ抗原、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ抗原、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ抗原、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ抗原、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ抗原、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ抗原、Ｔｏｘｏｃａｒａ抗原、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ抗原、またはＢａｂｅｓｉａ抗原である。

【0072】

一部の実施形態では、抗原は、真菌抗原である。一部の実施形態では、真菌抗原は、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ抗原、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ抗原、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ抗原、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｐｏｓａｄａｓｉｉ抗原、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ抗原、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ抗原、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ抗原、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ抗原、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ抗原、またはＥｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ抗原である。一部の実施形態では、抗原は、酵母抗原である。一部の実施形態では、酵母抗原は、Ｃａｎｄｉｄａ抗原である。
自己複製核酸

【0073】

自己複製核酸を含む組成物が本明細書に提供される。本明細書に提供される抗原またはその断片は、自己複製核酸構築物の一部としてコードされることがある。一部の実施形態では、自己複製核酸分子は、ウイルスレプリカーゼ、ウイルスプロテアーゼ、ウイルスヘリカーゼおよび他の非構造ウイルスタンパク質からなる群から選択される少なくとも１つまたは複数の遺伝子を含み、５’末端および３’末端ｃｉｓ活性複製配列、ならびに抗原タンパク質をコードする抗原配列も含む。異種配列の発現を指令するサブゲノムプロモーターを自己複製ヌクレオチド配列に含めることができる。必要に応じて、異種配列は、インフレームで自己複製ＲＮＡ内の他のコード領域と融合していてもよく、および／または内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）の制御下にあってもよい。

【0074】

一部の実施形態では、自己複製ヌクレオチド配列は、自己複製ＲＮＡ分子である。自己複製ＲＮＡ分子は、自己複製ＲＮＡ分子が感染性ウイルス粒子の生成を誘導することができないように設計される。これは、例えば、自己複製ＲＮＡ中のウイルス粒子の生成のために必要である構造タンパク質をコードする１つまたは複数のウイルス遺伝子を除くことによって達成することができる。例えば、自己複製ＲＮＡ分子がアルファウイルス、例えば、シンドビスウイルス（ＳＩＮ）、セムリキ森林ウイルスおよびベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥ）に基づいている場合、ウイルス構造タンパク質、例えば、カプシドおよび／またはエンベロープ糖タンパク質をコードする１つまたは複数の遺伝子を除くことができる。所望により、本発明の自己複製ＲＮＡ分子は、弱毒化されているもしくは毒性がある感染性ウイルス粒子の生成を誘導するように、またはその後の感染の単一ラウンドが可能であるウイルス粒子を生成するように、設計することができる。

【0075】

自己複製ＲＮＡ分子は、脊椎動物細胞に送達されたとき、いずれのタンパク質も伴わなかったとしても、それ自体からの（またはそれ自体のアンチセンスコピーからの）転写により複数の娘ＲＮＡの産生をもたらすことができる。自己複製ＲＮＡは、細胞への送達後に直接翻訳され得、この翻訳によってＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼが得られ、すると、それによって、送達されたＲＮＡから転写物が産生される。このように、送達されたＲＮＡが複数の娘ＲＮＡの産生をもたらす。これらの転写物は、送達されたＲＮＡに対してアンチセンスであり、それら自体が、翻訳されて、コードされた抗原のｉｎ ｓｉｔｕ発現をもたらし得るか、または転写されて、コードされた抗原のｉｎ ｓｉｔｕ発現をもたらすように翻訳される送達されたＲＮＡと同じセンスであるさらなる転写物をもたらし得る。

【0076】

本明細書に提供される自己複製ＲＮＡ分子は、１つまたは複数の改変ヌクレオチドを含有することができ、それ故、改善された安定性を有し、ｉｎ ｖｉｖｏでの分解およびクリアランスに対して抵抗性であり、ならびに他の利点を有し得る。一部の実施形態では、改変ヌクレオチドを含有する自己複製ＲＮＡ分子は、自己複製ＲＮＡが細胞に送達される場合、エンドソームおよび細胞質免疫受容体の刺激を回避かまたは低減する。これは、タンパク質の自己複製、増幅および発現が生じるのを可能にする。これはまた、改変ヌクレオチドを含有する自己複製性ＲＮＡが、自然免疫系の活性化およびその後の望ましくない結果（例えば、注射部位の炎症、注射部位の刺激、痛みなど）を低減するので、改変ヌクレオチドを含有しない自己複製性ＲＮＡと比べて安全性の懸念も低減する。自己複製の結果として生成したＲＮＡ分子は、細胞質免疫受容体によって外来核酸として認識される。そのため、改変ヌクレオチドを含有する自己複製ＲＮＡ分子は、宿主細胞におけるＲＮＡの効率的増幅、および本明細書に提供される抗原の発現、ならびにアジュバント効果を提供する。

【0077】

一部の実施形態では、本明細書に提供される自己複製ＲＮＡ分子は、少なくとも１つの改変ヌクレオチドを含有する。５’キャップの一部でない改変ヌクレオチドを（例えば、５’’キャップの一部である改変に加えて）使用することができる。したがって、自己複製ＲＮＡ分子は、単一の位置に改変ヌクレオチドを含有することができ、２つもしくはそれより多くの位置に特定の改変ヌクレオチド（例えば、シュードウリジン、Ｎ６－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、５－メチルウリジン）を含有することができ、または２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくはそれより多くの改変ヌクレオチドを（例えば、それぞれ、１つもしくは複数の位置に）含有することができる。好ましくは、自己複製ＲＮＡ分子は、窒素含有塩基上または内に改変を含有するが改変された糖部分もリン酸部分も含有しない、改変ヌクレオチドを含む。一部の例では、自己複製ＲＮＡ分子中のヌクレオチドの０．００１％～９９％または１００％の間は、改変ヌクレオチドである。例えば、自己複製ＲＮＡ分子中のヌクレオチドの０．００１％～２５％、０．０１％～２５％、０．１％～２５％、または１％～２５％は、改変ヌクレオチドである。他の例では、自己複製ＲＮＡ分子中の特定の未改変ヌクレオチドの０．００１％～９９％または１００％の間は、改変ヌクレオチドで置き換えられている。例えば、ウリジンを含有する自己複製ＲＮＡ分子中のヌクレオチドの約１％は、例えばウリジンのシュードウリジンによる置き換えによって、改変されていることがある。他の例では、自己複製ＲＮＡ分子中の２つ、３つまたは４つの特定のヌクレオチド（ウリジン、シチジン、グアノシンまたはアデニンを含有するヌクレオチド）の所望の量（パーセンテージ）が、改変ヌクレオチドである。例えば、自己複製ＲＮＡ分子中の特定のヌクレオチドの０．００１％～２５％、０．０１％～２５％、０．１％～２５％、または１％～２５％は、改変ヌクレオチドである。他の例では、自己複製ＲＮＡ分子中の特定のヌクレオチドの０．００１％～２０％、０．００１％～１５％、０．００１％～１０％、０．０１％～２０％、０．０１％～１５％、０．１％～２５、０．０１％～１０％、１％～２０％、１％～１５％、１％～１０％、または約５％、約１０％、約１５％、約２０％は、改変ヌクレオチドである。自己複製ＲＮＡ分子中のヌクレオチドの１００％未満が改変ヌクレオチドであることが、好ましい。自己複製ＲＮＡ分子中の特定のヌクレオチドの１００％未満が改変ヌクレオチドであることも、好ましい。したがって、好ましい自己複製ＲＮＡ分子は、少なくとも多少の未改変ヌクレオチドを含む。

【0078】

少なくとも１つの改変ヌクレオチドを含む自己複製ＲＮＡ分子を、任意の好適な方法を使用して調製することができる。改変ヌクレオチドを含有するＲＮＡ分子を生成するために、いくつかの好適な方法が、当技術分野において公知である。例えば、改変ヌクレオチドを含有する自己複製ＲＮＡ分子を、好適なＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ、例えば、Ｔ７ファージＲＮＡポリメラーゼ、ＳＰ６ファージＲＮＡポリメラーゼ、Ｔ３ファージＲＮＡポリメラーゼなど、または改変ヌクレオチドのＲＮＡ分子への効率的な組み込みを可能にするこれらのポリメラーゼの突然変異体を使用して、自己複製ＲＮＡ分子をコードするＤＮＡを転写すること（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写）によって調製することができる。転写反応は、ヌクレオチドおよび改変ヌクレオチド、ならびに選択されたポリメラーゼの活性をサポートする他の構成要素、例えば、好適な緩衝液および好適な塩を含有する。ヌクレオチドアナログの自己複製ＲＮＡへの組み込みは、例えば、そのようなＲＮＡ分子の安定性を変更する、ＲＮａｓｅに対する耐性を増加させる、適切な宿主細胞への導入後に複製を確立する（ＲＮＡの「感染力」）、ならびに／または自然免疫応答および適応免疫応答を誘導もしくは低減するように、操作され得る。好適な合成法を、単独で、または１つもしくは複数の他の方法（例えば、組換えＤＮＡまたはＲＮＡ技術）と組み合わせて使用して、１つもしくは複数の改変ヌクレオチドを含有する自己複製ＲＮＡ分子を生成することができる。

【0079】

核酸合成は、ポリヌクレオチドおよびそのようなポリヌクレオチドによってコードされる遺伝子産物のクローニング、プロセシングおよび／または発現を含む、当技術分野において周知のおよび従来の好適な組換え法を使用して行うこともできる。ランダムな断片化、ならびに遺伝子断片および合成ポリヌクレオチドのＰＣＲ再アセンブリーによるＤＮＡシャッフリングは、ポリヌクレオチド配列を設計および操作するために使用することができる公知の技法の例である。部位特異的突然変異誘発を使用して、核酸およびコードされるタンパク質を変更して、例えば、新たな制限部位を挿入し、グリコシル化パターンを変更し、コドン選好を変化させ、スプライスバリアントを生成し、突然変異を導入することなどができる。

【0080】

一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、ＲＮＡポリメラーゼをコードする。一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、ウイルスＲＮＡポリメラーゼをコードする。一部の実施形態では、本明細書に提供される核酸は、（１）ウイルスＲＮＡポリメラーゼ；および（２）タンパク質またはその機能的断片をコードする。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ウイルスＲＮＡポリメラーゼをコードする第１の核酸；およびタンパク質またはその機能的断片をコードする第２の核酸を含む。

【0081】

自己複製ＲＮＡを含む組成物が本明細書に提供される。自己複製ＲＮＡ（レプリコンとも呼ばれる）は、任意の遺伝子エレメント、例えば、主としてそれ自体の制御下で複製することができるプラスミド、コスミド、バクミド、ファージまたはウイルスを含む。自己複製は、哺乳動物細胞における本明細書に提供される核酸の自己複製のためのシステムを提供する。一部の実施形態では、自己複製ＲＮＡは、一本鎖である。一部の実施形態では、自己複製ＲＮＡは、二本鎖である。

【0082】

本明細書に提供されるＲＮＡポリメラーゼとしては、限定されるものではないが、アルファウイルスＲＮＡポリメラーゼ、東部ウマ脳炎ウイルス（ＥＥＥＶ）ＲＮＡポリメラーゼ、西部ウマ脳炎ウイルス（ＷＥＥＶ）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）、また、チクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）またはシンドビスウイルス（ＳＩＮＶ）を挙げることができる。一部の実施形態では、ＲＮＡポリメラーゼは、ＶＥＥＶ ＲＮＡポリメラーゼである。一部の実施形態では、ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸は、配列番号３４の核酸配列に対して少なくとも８５％の同一性を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸は、配列番号３４の核酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸は、配列番号３４の核酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸は、配列番号３４の核酸配列に対して少なくとも９９％の同一性を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸は、配列番号３４である。

【0083】

一部の実施形態では、ＶＥＥＶ ＲＮＡポリメラーゼのアミノ酸配列は、ＲＥＬＰＶＬＤＳＡＡＦＮＶＥＣＦＫＫＹＡＣＮＮＥＹＷＥＴＦＫＥＮＰＩＲＬＴＥＥＮＶＶＮＹＩＴＫＬＫＧＰ（配列番号３５）、ＴＱＭＲＥＬＰＶＬＤＳＡＡＦＮＶＥＣＦＫＫＹＡＣＮＮＥＹＷＥＴＦＫＥＮＰＩＲＬＴＥ（配列番号３６）、または配列番号３７に対して少なくとも８５％の同一性を含む。一部の実施形態では、ＶＥＥＶ ＲＮＡポリメラーゼのアミノ酸配列は、配列番号３５、配列番号３６または配列番号３７に対して少なくとも９０％の同一性を含む。一部の実施形態では、ＶＥＥＶ ＲＮＡポリメラーゼのアミノ酸配列は、配列番号３５、配列番号３６または配列番号３７に対して少なくとも９５％の同一性を含む。一部の実施形態では、ＶＥＥＶ ＲＮＡポリメラーゼのアミノ酸配列は、配列番号３５、配列番号３６または配列番号３７に対して少なくとも９９％の同一性を含む。一部の実施形態では、ＶＥＥＶ ＲＮＡポリメラーゼのアミノ酸配列は、配列番号３５、配列番号３６または配列番号３７を含む。

【0084】

エンベロープを有さないウイルスからの１つまたは複数の構造タンパク質をコードするレプリコンＲＮＡ（ｒｅｐＲＮＡ）を含む組成物および方法が本明細書に提供される。一部の実施形態では、ｒｅｐＲＮＡは、プロテアーゼをコードする。一部の実施形態では、ｒｅｐＲＮＡは、３ＣＤプロテアーゼをコードする。一部の実施形態では、構造タンパク質およびプロテアーゼは、共発現される。さらなる実施形態では、ｒｅｐＲＮＡは、１つまたは複数のオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、オープンリーディングフレームは、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）により隔てられている。一部の実施形態では、オープンリーディングフレームは、リボソームスキッピングペプチド配列により隔てられている。一部の実施形態では、リボソームスキッピングペプチド配列は、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス（Ｔ２Ａ）由来である。
組合せ組成物

【0085】

本明細書に記載されるナノ粒子とコロナウイルス抗原をコードする核酸とを含む組成物が本明細書に提供される。本明細書に提供される多数のナノ粒子を含むナノエマルジョンが本明細書にさらに提供される。一部の実施形態では、核酸は、自己複製ＲＮＡポリメラーゼをさらにコードする。一部の実施形態では、核酸は、自己複製ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼをさらにコードする。一部の実施形態では、自己複製ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸は、タンパク質をコードする核酸配列と同じ核酸鎖上にある（例えば、ｃｉｓである）。一部の実施形態では、自己複製ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸は、タンパク質をコードする核酸配列と異なる核酸鎖上にある（例えば、ｔｒａｎｓである）。一部の実施形態では、自己複製ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸は、ＤＮＡ分子である。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗原をコードする核酸配列は、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子である。一部の実施形態では、本明細書に提供される抗原は、ＤＮＡによりコードされる。包含のためのナノ粒子としては、限定されないが、ＮＰ－１～ＮＰ－３０のいずれか１つ、またはＮＰ－１～ＮＰ－３１のいずれか１つが挙げられる。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－１を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－２を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－３を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－４を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－５を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－６を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－７を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－８を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－９を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－１０を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－１１を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－１２を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－１３を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－１４を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－１５を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－１６を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－１７を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－１８を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－１８を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－１９を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－２０を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－２１を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－２２を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－２３を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－２４を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－２５を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－２６を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－２７を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－２８を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－２８を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－２９を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－３０を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－３１を含む。一部の実施形態では、ナノ粒子は、ＮＰ－１～ＮＰ－３１のいずれかと凍結保護物質とを含む。一部の実施形態では、凍結保護物質は、本明細書に記載される糖である。一部の実施形態では、包含のための核酸としては、限定されないが、配列番号１～６、３８～５４のいずれか１つまたは多数を含む領域を含むもの、または配列番号７～３３のいずれか１つのアミノ酸配列をコードするものが挙げられる。一部の実施形態では、包含のための核酸は、限定されないが、配列番号１～６、３８～５４のいずれか１つに相補的な領域を含むもの、または配列番号７～３３のいずれか１つのアミノ酸配列をコードするものが挙げられる。一部の実例では、核酸は、ＲＮＡポリメラーゼをコードする領域、例えば、配列番号３４の配列を含む領域をさらに含む。

【0086】

一部の実施形態では、核酸は、配列番号１と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号２と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号５と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号６と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３８と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号３９と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４０と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４１と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４２と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４３と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４４と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４５と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４６と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４７と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４８と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４９と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号５０と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号５１と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号５２と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号５３と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、核酸は、配列番号５４と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される核酸は、ここに記載される感染性疾患抗原をコードした、およびＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼをコードした、配列を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼは、ＶＥＥＶ ＲＮＡポリメラーゼである。一部の実施形態では、２つの核酸コードエレメントが別々の核酸内に存在する。一部の実施形態では、２つの核酸コードエレメントが同じ核酸上に存在する。

【0087】

一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号１と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号２と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号３と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号４と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号５と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号６と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号３８と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号３９と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号４０と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号４１と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号４２と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号４３と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号４４と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号４５と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号４６と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号４７と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号４８と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号４９と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号５０と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号５１と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号５２と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－１、および配列番号５３と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。

【0088】

一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号１と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号２と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号３と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号４と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号５と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号６と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号３８と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号３９と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号４０と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号４１と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号４２と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号４３と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号４４と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号４５と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号４６と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号４７と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号４８と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号４９と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号５０と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号５１と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号５２と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－２、および配列番号５３と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。

【0089】

一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号１と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号２と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号３と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号４と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号５と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号６と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号３８と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号３９と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号４０と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号４１と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号４２と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号４３と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号４４と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号４５と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号４６と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号４７と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号４８と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号４９と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号５０と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号５１と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号５２と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、ＮＰ－３０、および配列番号５３と少なくとも８５％同一である配列またはその機能的断片を含む核酸を含む。

【0090】

本明細書に提供される組成物は、窒素：ホスフェート（Ｎ：Ｐ）のモル比によって特徴付けられ得る。Ｎ：Ｐ比は、窒素を含有するナノ粒子中のカチオン性脂質の量、および負に荷電したホスフェートを含有する組成物中で使用される核酸の量によって決定される。脂質キャリアの核酸に対するモル比は、核酸の送達効率を増加させる、核酸保持ナノエマルジョン組成物が抗原に対する免疫応答を誘発する能力を増加させる、核酸保持ナノエマルジョン組成物が対象において抗原に対する抗体価の生成を誘発する能力を増加させるように選択することができる。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、窒素のホスフェートに対するモル比によって特徴付けられ得る脂質キャリアの核酸に対するモル比を有し、これは、約０．０１：１～約１０００：１、例えば、約０．２：１～約５００：１、約０．５：１～約１５０：１、約１：１～約１５０：１、約１：１～約１２５：１、約１：１～約１００：１、約１：１～約５０：１、約１：１～約５０：１、約５：１～約５０：１、約５：１～約２５：１、または約１０：１～約２０：１の範囲であり得る。一部の実施形態では、窒素のホスフェートに対する（Ｎ：Ｐ）モル比によって特徴付けられる脂質キャリアの核酸に対するモル比は、約１：１～約１５０：１、約５：１～約２５：１、または約１０：１～約２０：１の範囲である。一部の実施形態では、ナノエマルジョン組成物のＮ：Ｐのモル比は、約１５：１である。一部の実施形態では、ナノ粒子は、膜に共有結合的に付着した本明細書に提供される核酸を含む。

【0091】

本明細書に提供される組成物は、油の界面活性剤に対するモル比によって特徴付けられ得る。一部の実施形態では、油の界面活性剤に対する比は、スクアレン：カチオン性脂質、疎水性界面活性剤、および親水性界面活性剤のモル比である。一部の実施形態では、油の界面活性剤に対する比は、スクアレン：ＤＯＴＡＰ、疎水性界面活性剤、および親水性界面活性剤のモル比である。一部の実施形態では、油の界面活性剤に対する比は、スクアレン：ＤＯＴＡＰ、ソルビタンモノステアレート、およびポリソルベート８０のモル比である。一部の実施形態では、油の界面活性剤に対するモル比は、約０．１：１～約２０：１、約０．５：１～約１２：１、約０．５：１～約９：１、約０．５：１～約５：１、約０．５：１～約３：１、または約０．５：１～約１：１の範囲である。一部の実施形態では、油の界面活性剤に対するモル比は、少なくとも約０．１：１、少なくとも約０．２：１、少なくとも約０．３：１、少なくとも約０．４：１、少なくとも約０．５：１、少なくとも約０．６：１、少なくとも約０．７：１である。一部の実施形態では、油の界面活性剤に対するモル比は、少なくとも約０．４：１から最高で１：１である。

【0092】

本明細書に提供される組成物は、親水性界面活性剤のカチオン性脂質に対する比によって特徴付けられ得る。一部の実施形態では、親水性界面活性剤のカチオン性脂質に対する比は、約０．１：１～約２：１、約０．２：１～約１．５：１、約０．３：１～約１：１、約０．５：１～約１：１、または約０．６：１～約１：１の範囲である。本明細書に提供される組成物は、疎水性界面活性剤の脂質（例えば、カチオン性脂質）に対する比によって特徴付けられ得る。一部の実施形態では、疎水性界面活性剤の脂質に対する比は、約０．１：１～約５：１、約０．２：１～約３：１、約０．３：１～約２：１、約０．５：１～約２：１、または約１：１～約２：１の範囲である。一部の実施形態では、カチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰである。

【0093】

ソルビタン脂肪酸エステル、エトキシ化ソルビタンエステル、カチオン性脂質、免疫刺激物質、およびＲＮＡを含む、乾燥組成物が本明細書にさらに提供される。ソルビタンモノステアレート（例えば、ＳＰＡＮ（登録商標）６０）、ポリソルベート８０（例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、ＤＯＴＡＰ、免疫刺激物質、およびＲＮＡを含む、乾燥組成物が本明細書にさらに提供される。
熱的に安定な乾燥および凍結乾燥された感染性疾患ワクチン

【0094】

乾燥または凍結乾燥組成物およびワクチンが本明細書に提供される。好適な希釈剤および薬学的に許容される担体中で再構成される、本明細書に提供される乾燥または凍結乾燥組成物を含む医薬組成物が本明細書にさらに提供される。一部の実施形態では、希釈剤は、水性である。一部の実施形態では、希釈剤は、水である。

【0095】

一部の実施形態では、凍結乾燥組成物は、組成物を凍結すること、それに続いて、圧力を低下させること、および昇華による氷の除去を含む低温脱水プロセスによって作製される。ある特定の事例では、凍結乾燥は、脱着プロセスによる結合水分子の除去も含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物およびワクチンは、噴霧乾燥される。噴霧乾燥は、溶液をアトマイザーを通して供給して、スプレーを作出し、その後、これを、加熱ガス流に曝露して、迅速な蒸発を促進することによるプロセスである。十分な液体質量が蒸発したら、液滴中の残った固体材料は、粒子を形成し、次いで、これは、ガス流から分離される（例えば、フィルターまたはサイクロンを使用して）。乾燥は、本明細書に提供される組成物およびワクチンを、既存のｍＲＮＡワクチンの貯蔵のために必要な零下温度と比較してより高い温度（例えば４℃超）で貯蔵することに役立つ。一部の実施形態では、本明細書に提供される乾燥組成物および凍結乾燥組成物は、（ａ）（ｉ）疎水性コアと、（ｉｉ）１つまたは複数の無機ナノ粒子と、（ｉｉｉ）１つまたは複数の脂質とを含むナノエマルジョンである脂質キャリア；（ｂ）１つまたは複数の核酸；および（ｃ）少なくとも１つの凍結保護物質を含む。一部の実施形態では、凍結保護物質は、スクロース、マルトース、トレハロース、マンニトール、グルコース、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。凍結保護物質の追加の例としては、限定されるものではないが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、グリセロール、プロピレングリコール、エチレングリコール、３－Ｏ－メチル－Ｄ－グルコピラノース（３－ＯＭＧ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、１，２－プロパンジオール、アセトアミド、トレハロース、ホルムアミド、糖、タンパク質、および炭水化物が挙げられる。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物および方法は、少なくとも１つの凍結保護物質を含む。包含のための例示的な凍結保護物質は、限定されるものではないが、スクロース、マルトース、トレハロース、マンニトール、またはグルコース、およびそれらの任意の組合せである。一部の実施形態では、包含のための追加のまたは代替の凍結保護物質は、ソルビトール、リビトール、エリスリトール（erthritol）、トレイトール、エチレングリコール、またはフルクトースである。一部の実施形態では、包含のための追加のまたは代替の凍結保護物質は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、グリセロール、プロピレングリコール、エチレングリコール、３－Ｏ－メチル－Ｄ－グルコピラノース（３－ＯＭＧ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、１，２－プロパンジオール、アセトアミド、トレハロース、ホルムアミド、糖、タンパク質、および炭水化物である。一部の実施形態では、凍結保護物質は、約１％ ｗ／ｖ～約２０％ ｗ／ｖ、好ましくは、約１０％ ｗ／ｖ～約２０％ ｗ／ｖ、より好ましくは、約１０％ ｗ／ｖで存在する。本開示のある特定の態様では、凍結保護物質は、スクロースである。本開示の一部の態様では、凍結保護物質は、マルトースである。本開示の一部の態様では、凍結保護物質は、トレハロースである。本開示の一部の態様では、凍結保護物質は、マンニトールである。本開示の一部の態様では、凍結保護物質は、グルコースである。一部の実施形態では、凍結保護物質は、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４５０、５００ｍｇまたはそれよりも多くの量で存在する。一部の実施形態では、凍結保護物質は、約５０～約５００ｍｇの量で存在する。一部の実施形態では、凍結保護物質は、約２００～約３００ｍｇの量で存在する。一部の実施形態では、凍結保護物質は、約２５０ｍｇの量で存在する。一部の実施形態では、凍結保護物質は、凍結乾燥組成物の少なくとも５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５またはそれを超える重量パーセントの量で存在する。一部の実施形態では、凍結保護物質は、凍結乾燥組成物の約９５重量％の量で存在する。一部の実施形態では、凍結保護物質は、凍結乾燥組成物の８０～９８重量％、８５～９８重量％、９０～９８重量％、または９４～９６重量％の量で存在する。一部の実施形態では、凍結保護物質は、糖である。一部の実施形態では、糖は、スクロース、マルトース、トレハロース、マンニトール、またはグルコースである。一部の実施形態では、糖は、スクロースである。一部の実施形態では、スクロースは、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４５０、５００ｍｇまたはそれよりも多くの量で存在する。一部の実施形態では、スクロースは、約５０～約５００ｍｇの量で存在する。一部の実施形態では、スクロースは、約２００～約３００ｍｇの量で存在する。一部の実施形態では、スクロースは、約２５０ｍｇの量で存在する。一部の実施形態では、スクロースは、凍結乾燥組成物の少なくとも５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５またはそれを超える重量パーセントの量で存在する。一部の実施形態では、スクロースは、凍結乾燥組成物の約９５重量％の量で存在する。一部の実施形態では、スクロースは、凍結乾燥組成物の８０～９８重量％、８５～９８重量％、９０～９８重量％、または９４～９６重量％の量で存在する。

【0096】

一部の実施形態では、凍結保護物質は、スクロースである。一部の実施形態では、凍結保護物質は、少なくとも約０．１％ｗ／ｖの濃度である。一部の実施形態では、凍結保護物質は、約１％ｗ／ｖ～約２０％ｗ／ｖの濃度である。一部の実施形態では、凍結保護物質は、約１０％ｗ／ｖ～約２０％ｗ／ｖの濃度である。一部の実施形態では、凍結保護物質は、約１０％ｗ／ｖの濃度である。

【0097】

一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物およびワクチンは、熱的に安定である。組成物は、組成物が、熱または低温の作用に抵抗し、および所与の温度で分解から核酸分子を保護する能力など、その性質を維持する場合、熱的に安定であると考えられる。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物およびワクチンは、約２５℃または標準的な室温で熱的に安定である。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物およびワクチンは、約４５℃で熱的に安定である。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物およびワクチンは、約－２０℃で熱的に安定である。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物およびワクチンは、約２℃～約８℃で熱的に安定である。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物およびワクチンは、少なくとも約－８０℃、少なくとも約－２０℃、少なくとも約０℃、少なくとも約２℃、少なくとも約４℃、少なくとも約６℃、少なくとも約８℃、少なくとも約１０℃、少なくとも約２０℃、少なくとも約２５℃、少なくとも約３０℃、少なくとも約３７℃、最高で４５℃の温度で熱的に安定である。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物およびワクチンは、少なくとも約５日間、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約１カ月、最大で３カ月間、熱的に安定である。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物およびワクチンは、少なくとも約４℃から最高で３７℃の温度で、少なくとも約５日間、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約１カ月、最大で３カ月間、貯蔵される。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物およびワクチンは、少なくとも約２０℃から最高で２５℃の温度で、少なくとも約５日間、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約１カ月、最大で３カ月間、貯蔵される。

【0098】

凍結乾燥組成物を調製するための方法であって、脂質キャリアを得るステップであって、脂質キャリアが、疎水性コア、１つまたは複数の無機ナノ粒子、および１つまたは複数の脂質を含むナノエマルジョンである、ステップ；１つまたは複数の核酸を脂質キャリアに組み込んで、脂質キャリア－核酸複合体を形成するステップ；少なくとも１つの凍結保護物質を脂質キャリア－核酸複合体に添加して、製剤を形成するステップ；ならびに製剤を凍結乾燥して、凍結乾燥組成物を形成するステップを含む方法も本明細書に提供される。

【0099】

噴霧乾燥組成物を調製するための方法であって、脂質キャリアを得るステップであって、脂質キャリアが、疎水性コア、１つまたは複数の無機ナノ粒子、および１つまたは複数の脂質を含むナノエマルジョンである、ステップ；１つまたは複数の核酸を脂質キャリアに組み込んで、脂質キャリア－核酸複合体を形成するステップ；少なくとも１つの凍結保護物質を脂質キャリア－核酸複合体に添加して、製剤を形成するステップ；ならびに製剤を噴霧乾燥して、噴霧乾燥組成物を形成するステップを含む方法が本明細書にさらに提供される。

【0100】

凍結乾燥組成物を再構成するための方法であって、脂質キャリアを得るステップであって、脂質キャリアが、疎水性コア、１つまたは複数の無機ナノ粒子、および１つまたは複数の脂質を含むナノエマルジョンである、ステップ；１つまたは複数の核酸を前記脂質キャリアに組み込んで、脂質キャリア－核酸複合体を形成するステップ；少なくとも１つの凍結保護物質を脂質キャリア－核酸複合体に添加して、製剤を形成するステップ；製剤を凍結乾燥して、凍結乾燥組成物を形成するステップ；ならびに好適な希釈剤中で凍結乾燥組成物を再構成するステップを含む方法が本明細書にさらに提供される。

【0101】

噴霧乾燥組成物を再構成するための方法であって、脂質キャリアを得るステップであって、脂質キャリアが、疎水性コア、１つまたは複数の無機ナノ粒子、および１つまたは複数の脂質を含むナノエマルジョンである、ステップ；１つまたは複数の核酸を前記脂質キャリアに組み込んで、脂質キャリア－核酸複合体を形成するステップ；少なくとも１つの凍結保護物質を脂質キャリア－核酸複合体に添加して、製剤を形成するステップ；製剤を噴霧乾燥して、噴霧乾燥組成物を形成するステップ；ならびに好適な希釈剤中で噴霧乾燥組成物を再構成するステップを含む方法が本明細書にさらに提供される。
医薬組成物

【0102】

本明細書に提供される組成物を含む医薬組成物が本明細書に提供される。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物を、薬学的に許容される塩、賦形剤、および／または担体と組み合わせて、医薬組成物を形成する。薬学的に許容される塩、賦形剤、および担体は、投与経路、標的組織の場所、および薬物の送達の時間経過に基づいて選択され得る。薬学的に許容される担体または賦形剤としては、医薬品投与に適合する、溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられ得る。

【0103】

一部の実施形態では、医薬組成物は、本明細書に提供される組成物を含む懸濁液である。一部の実施形態では、本明細書に提供される懸濁液は、本明細書に提供される多数のナノ粒子または組成物を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、懸濁液、必要に応じて、均質な懸濁液中にある。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物は、エマルジョン形態である。

【0104】

一部の実施形態では、医薬組成物は、固体、半固体、液体または気体（エアロゾル）の形態である。注射用調製物、例えば、無菌注射用水性または油性懸濁液は、好適な分散剤または湿潤剤、および懸濁化剤を使用して、公知技術に従って製剤化され得る。無菌注射用調製物はまた、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌の注射用溶液、懸濁液、またはエマルジョンであってもよい。中でも、用いられ得る許容される媒体および溶媒は、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および等張塩化ナトリウム溶液である。加えて、無菌の固定油が、溶媒または分散媒として用いられる。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意のブランドの固定油を用いることができる。加えて、オレイン酸などの脂肪酸が、注射剤の調製において使用される。注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過によって、または使用の前に、滅菌水または他の滅菌注射媒体に溶解または分散され得る無菌固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって、滅菌することができる。

【0105】

経口投与のための固形剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤が挙げられる。そのような固形剤形において、封入または非封入コンジュゲートは、クエン酸ナトリウムもしくは第二リン酸カルシウムなどの少なくとも１つの不活性な薬学的に許容される賦形剤もしくは担体、ならびに／または（ａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸などのフィラーもしくは増量剤、（ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、およびアカシアなどの結合剤、（ｃ）グリセロールなどの保水剤、（ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、（ｅ）パラフィンなどの溶解抑制剤、（ｆ）第四級アンモニウム化合物などの吸収加速剤、（ｇ）例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、（ｈ）カオリンおよびベントナイトクレイなどの吸収剤、ならびに（ｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびそれらの混合物などの滑沢剤と混合される。カプセル剤、錠剤、および丸剤の事例では、剤形はまた、緩衝剤を含んでいてもよい。
投薬

【0106】

本明細書に提供される組成物は、投与の容易さおよび投薬量の均一性のため投薬単位形で製剤化されてもよい。投薬単位形は、処置される対象に適切な本明細書に提供される組成物の物理的に別個の単位である。しかしながら、本明細書に提供される組成物の総使用量が、健全な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されることが理解されるであろう。本明細書に提供される任意の組成物について、治療有効量は、細胞培養アッセイ、またはマウス、ウサギ、イヌ、ブタ、もしくは非ヒト霊長類などの動物モデルにおいて最初に推定され得る。動物モデルは、投与の望ましい濃度範囲および経路を達成するためにも使用される。次いで、そのような情報は、ヒトにおける投与のための有用な用量および経路を決定するために使用することができる。本明細書に提供される組成物の治療有効性および毒性は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順、例えば、ＥＤ_５０（集団の５０％で治療的に有効な用量）およびＬＤ_５０（集団の５０％で致死的な用量）によって決定することができる。毒性効果の治療効果に対する用量比は、治療指数であり、これは、ＬＤ_５０／ＥＤ_５０の比として表すことができる。大きい治療指数を示す医薬組成物は、一部の実施形態では有用であり得る。細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒト使用のための投薬量範囲を処方するのに使用され得る。本明細書に記載される組成物への組み込みのための例示的な総核酸量としては、約１、２、２．５、５、７．５、１０、１２．５、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０マイクログラム（μｇ）またはそれより多い量が挙げられる。
投与

【0107】

それを必要とする対象に投与するための組成物および医薬組成物が本明細書に提供される。一部の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、本明細書に提供される組成物を対象に投与することを可能にする形態である。

【0108】

一部の実施形態では、投与は、局所投与または全身投与である。一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物は、皮下、皮内、筋肉内、吸入、静脈内、腹腔内、頭蓋内、舌下、経口またはくも膜下腔内経路を介した投与のため／それを介した投与における使用のために製剤化される。一部の実施形態では、投与は、１、２、４、６、８、１２、２４、３６または４８時間ごとである。一部の実施形態では、投与は、毎日、毎週、または毎月である。一部の実施形態では、投与は、少なくとも約２８日または５６日ごとに繰り返される。

【0109】

一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物の単回の投薬が、対象に投与される。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物または医薬組成物は、２回の投薬によって対象に投与される。一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物または医薬組成物の２回目の投薬は、１回目の投薬の約２８日後または５６日後に投与される。一部の実施形態では、１回目の投薬が投与され、２回目の投薬は、約１４日後、または約２１日後、または約２８日後、または約３５日後、または約４２日後、または約４９日後、または約５６日後、または約６３日後、または約７０日後、または約７７日後、または約８４日後に投与される。一部の実施形態では、２回目の投薬は、１回目の投薬の投与の約１０～９０日後、または１回目の投薬の投与の約１５～８５日後、または１回目の投薬の投与の約２０～８０日後、または１回目の投薬の投与の約２５～７５日後、または１回目の投薬の投与の約３０～７０日後、または１回目の投薬の投与の約３５～６５日後、または１回目の投薬の投与の約４０～６０日後に投与される。

【0110】

一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物または医薬組成物の３回目の投薬が対象に投与される。一部の実施形態では、３回目の投薬は、２回目の投薬の投与の約１カ月後、２回目の投薬の投与の約２カ月後、２回目の投薬の投与の約３カ月後、２回目の投薬の投与の約４カ月後、２回目の投薬の投与の約５カ月後、２回目の投薬の投与の約６カ月後、２回目の投薬の投与の約７カ月後、２回目の投薬の投与の約８カ月後、２回目の投薬の投与の約９カ月後、２回目の投薬の投与の約１０カ月後、２回目の投薬の投与の約１１カ月後、２回目の投薬の投与の約１２カ月後、２回目の投薬の投与の約１３カ月後、２回目の投薬の投与の約１４カ月後、２回目の投薬の投与の約１５カ月後、２回目の投薬の投与の約１６カ月後、２回目の投薬の投与の約１７カ月後、または２回目の投薬の投与の約１８カ月後に投与される。
治療的適用

【0111】

対象における疾患または障害を処置する方法が本明細書に提供される。感染性微生物に対する対象における免疫応答を生じさせる方法が本明細書に提供される。一部の実施形態では、疾患または障害は、感染症である。一部の実施形態では、感染症は、ウイルス感染症、細菌感染症、寄生虫感染症、真菌感染症、または酵母感染症である。

【0112】

一部の実施形態では、対象は、ウイルス感染症を有する、それを有する疑いがある、またはそれを発症するリスクがある。一部の実施形態では、ウイルス感染症は、ＲＳＶ感染症、ＣＭＶ感染症、ＳＡＲＳ、狂犬病、ＨＰＶ感染症、水痘、帯状疱疹、単純ヘルペス１感染症、単純ヘルペス２感染症、またはインフルエンザである。一部の実施形態では、対象は、細菌感染症を有する、それを有する疑いがある、またはそれを発症するリスクがある。一部の実施形態では、細菌感染症は、結核、クラミジア、淋病、連鎖球菌性咽頭炎、またはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ感染症である。一部の実施形態では、対象は、真菌感染症を有する、またはそれを有する疑いがある。一部の実施形態では、対象は、寄生虫感染症を有する、またはそれを有する疑いがある。一部の実施形態では、寄生虫感染症は、マラリアである。一部の実施形態では、対象は、感染性疾患または障害を発症するリスクがある。一部の実施形態では、対象は、別の感染した対象との接触によって感染性疾患に罹患した。一部の実施形態では、対象は、汚染された飲用水から感染性疾患に罹患した。一部の実施形態では、対象は、微生物を保有する異なる種から感染性疾患に罹患した。一部の実施形態では、対象は、哺乳動物である。一部の実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
キット

【0113】

本明細書に提供される組成物、本明細書に提供される医薬組成物、および必要に応じて、対象への投与のための送達システムを含む、キットが本明細書に提供される。一部の実施形態では、キットは、１つまたは複数の界面活性剤をさらに含む。一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物の製剤は、投与のために単一の容器中で調製される。一部の実施形態では、本明細書に記載される組成物の製剤は、投与のために２つの容器中で調製され、ナノ粒子キャリアから核酸を分離する。本明細書で使用される場合、「容器（ｃｏｎｔａｉｎｅｒ）」としては、容器（ｖｅｓｓｅｌ）、バイアル、アンプル、管、カップ、ボックス、ボトル、フラスコ、ジャー、ディッシュ、単一ウェルもしくは複数ウェルの器具のウェル、リザーバー、タンクなど、または本明細書に開示される組成物が、入れられ、貯蔵され、および／もしくは輸送され得る、ならびに内容物を取り出すためにアクセスされ得る他のデバイスが挙げられる。そのような容器の例としては、針および注射器を使用する内容物の抜き取りに適合するゴム栓または他のシール手段を有するものを含む、ガラスおよび／またはプラスチックのシールされたまたは再シール可能な管およびアンプルが挙げられる。一部の実行では、容器は、ＲＮａｓｅを含まない。一部の実施形態では、キットは、液状油および界面活性剤を含む脂質キャリアであって、界面活性剤が、カチオン性脂質、親水性界面活性剤および疎水性界面活性剤を含む、脂質キャリアと；核酸が、ウイルス抗原配列、細菌抗原配列、真菌抗原配列もしくは寄生虫抗原配列またはその機能的バリアントをコードする配列を含み、ウイルス抗原配列が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に由来しない、少なくとも１つの核酸とを含む。
例示的な実施形態

【0114】

脂質キャリアであって、脂質キャリアが、液状油、および界面活性剤を含み、界面活性剤が、カチオン性脂質、親水性界面活性剤、および疎水性界面活性剤を含む、脂質キャリア；抗原配列をコードする少なくとも１つの核酸であって、抗原配列が、ウイルス抗原配列、細菌抗原配列、真菌抗原配列もしくは寄生虫抗原配列または前述のもののいずれかについての機能的バリアントをコードする配列を含み、ウイルス抗原配列が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原配列でもその機能的バリアントでもない、少なくとも１つの核酸を含む組成物が本明細書に提供される。ウイルス抗原配列が、インフルエンザウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ＲＳＶ、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス１（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１）、ヒトガンマヘルペスウイルス４、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、狂犬病ウイルス、ヒトアルファヘルペスウイルス１、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）またはヒトアルファヘルペスウイルス２に由来する、組成物が本明細書にさらに提供される。細菌抗原配列が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ菌、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ菌、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ菌、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ菌、またはＣｈｌａｍｙｄｉａ菌に由来する、組成物が本明細書にさらに提供される。真菌抗原配列が、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ真菌、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ真菌、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ真菌、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ真菌、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ真菌、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ真菌、またはＢｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ真菌に由来する、組成物が本明細書にさらに提供される。寄生虫抗原配列がＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ寄生虫に由来する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号１～６、４３～４７と少なくとも８５％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号１～６、４３～４７と少なくとも９０％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号１～６、４３～４７と少なくとも９５％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号１～６、４３～４７のいずれか１つから選択される配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号１と少なくとも８５％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号２と少なくとも８５％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号３と少なくとも８５％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号４と少なくとも８５％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号５と少なくとも８５％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号６と少なくとも８５％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号４３と少なくとも８５％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号４４と少なくとも８５％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号４５と少なくとも８５％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号４６と少なくとも８５％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号４７と少なくとも８５％同一の配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が配列番号１を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が配列番号２を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が配列番号３を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が配列番号４を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が配列番号５を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が配列番号６を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が配列番号４３を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が配列番号４４を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が配列番号４５を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が配列番号４６を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が配列番号４７を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号７～３３のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードする配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号７～３３のいずれか１つと少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列をコードする配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸が、配列番号７～３３のいずれか１つのアミノ酸配列をコードする配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、脂質キャリアを有する複合体中にある、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、ＲＮＡポリメラーゼをさらにコードする、組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡポリメラーゼが、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）ＲＮＡポリメラーゼである、組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸が、配列番号３４の核酸配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。液状油が、α－トコフェロール、ココナツ油、ブドウ種子油、ラウロイルポリオキシルグリセリド、鉱物油、モノアシルグリセロール、パーム核油（palmkernal oil）、オリーブ油、パラフィン油、ピーナッツ油、プロポリス、スクアレン、スクアラン、ソラネソール、大豆レシチン、大豆油、ヒマワリ油、トリグリセリド、またはビタミンＥである、組成物が本明細書にさらに提供される。トリグリセリドが、カプリン酸トリグリセリド、カプリル酸トリグリセリド、カプリル酸およびカプリン酸トリグリセリド、トリグリセリドエステル、またはミリスチン酸トリグリセリンである、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、疎水性コアを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、無機粒子を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。無機粒子が、疎水性コア内にある、組成物が本明細書にさらに提供される。無機粒子が、金属を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。金属が、金属塩、金属酸化物、金属水酸化物、または金属リン酸塩を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。金属酸化物が、酸化アルミニウム、オキシ水酸化アルミニウム、酸化鉄、二酸化チタン、または二酸化ケイ素を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。疎水性界面活性剤が、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、またはソルビタントリオレエートである、組成物が本明細書にさらに提供される。親水性界面活性剤が、ポリソルベートである、組成物が本明細書にさらに提供される。窒素のホスフェートに対する（Ｎ：Ｐ）モル比によって特徴付けられる脂質キャリアの１つまたは複数の核酸に対するモル比が、約１：１～約１５０：１の範囲である、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、約０．１～０．４の範囲の平均多分散指数で、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍの範囲のｚ平均流体力学直径を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約５、約１０、約２５、約５０または約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約２５μｇの量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。懸濁液の形態である組成物が本明細書にさらに提供される。凍結乾燥されている組成物が本明細書にさらに提供される。

【0115】

脂質キャリアであって、脂質キャリアが、液状油、および界面活性剤を含み、界面活性剤が、カチオン性脂質、親水性界面活性剤、および疎水性界面活性剤を含む、脂質キャリア；ならびに少なくとも１つの核酸であって、核酸が、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質ステム領域またはその機能的バリアントをコードする抗原配列を含む、少なくとも１つの核酸を含む組成物が本明細書に提供される。核酸が、配列番号３と少なくとも８５％同一の配列またはその機能的断片を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、配列番号３と少なくとも９０％同一の配列またはその機能的断片を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、配列番号３と少なくとも９５％同一の配列またはその機能的断片を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が配列番号３を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、配列番号１０～１２のいずれか１つと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列をコードする、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、配列番号１０～１２のいずれか１つと少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列をコードする、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、配列番号１０～１２のいずれか１つと少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列をコードする、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、配列番号１０～１２のいずれか１つを含むアミノ酸配列をコードする、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、脂質キャリアを有する複合体中にある、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、ＲＮＡポリメラーゼをさらにコードする、組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡポリメラーゼが、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）ＲＮＡポリメラーゼである、組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸が、配列番号３４の核酸配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。液状油が、α－トコフェロール、ココナツ油、ブドウ種子油、ラウロイルポリオキシルグリセリド、鉱物油、モノアシルグリセロール、パーム核油、オリーブ油、パラフィン油、ピーナッツ油、プロポリス、スクアレン、スクアラン、ソラネソール、大豆レシチン、大豆油、ヒマワリ油、トリグリセリド、またはビタミンＥである、組成物が本明細書にさらに提供される。トリグリセリドが、カプリン酸トリグリセリド、カプリル酸トリグリセリド、カプリル酸およびカプリン酸トリグリセリド、トリグリセリドエステル、またはミリスチン酸トリグリセリンである、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、疎水性コアを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、無機粒子を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。無機粒子が、疎水性コア内にある、組成物が本明細書にさらに提供される。無機粒子が、金属を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。金属が、金属塩、金属酸化物、金属水酸化物、または金属リン酸塩を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。金属酸化物が、酸化アルミニウム、オキシ水酸化アルミニウム、酸化鉄、二酸化チタン、または二酸化ケイ素を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。疎水性界面活性剤が、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、またはソルビタントリオレエートである、組成物が本明細書にさらに提供される。親水性界面活性剤が、ポリソルベートである、組成物が本明細書にさらに提供される。窒素のホスフェートに対する（Ｎ：Ｐ）モル比によって特徴付けられる脂質キャリアの１つまたは複数の核酸に対するモル比が、約１：１～約１５０：１の範囲である、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、約０．１～０．４の範囲の平均多分散指数で、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍの範囲のｚ平均流体力学直径を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約５、約１０、約２５、約５０または約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約２５μｇの量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。懸濁液の形態である組成物が本明細書にさらに提供される。凍結乾燥されている組成物が本明細書にさらに提供される。

【0116】

脂質キャリアであって、脂質キャリアが、液状油、および界面活性剤を含み、界面活性剤が、カチオン性脂質、親水性界面活性剤、および疎水性界面活性剤を含む、脂質キャリア；ならびに少なくとも１つの核酸であって、核酸が、ＶＺＶタンパク質またはその機能的バリアントをコードする抗原配列を含む、少なくとも１つの核酸を含む組成物が本明細書に提供される。ＶＺＶタンパク質またはその機能的バリアントが、糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）、ｇＩ、ｇＢ、ｇＨ、ｇＬ、ｇＮまたはその機能的断片である、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号４、５、３８～４３のいずれか１つと少なくとも８５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号４、５、３８～４３のいずれか１つと少なくとも９０％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号４、５、３８～４３のいずれか１つと少なくとも９５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号４、５、３８～４３のいずれか１つを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号４と少なくとも８５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号４と少なくとも９０％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号４と少なくとも９５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号４を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号５と少なくとも８５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号５と少なくとも９０％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号５と少なくとも９５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号５を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号４０と少なくとも８５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号４０と少なくとも９０％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質をコードする抗原配列が、配列番号４０と少なくとも９５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。ＶＺＶタンパク質抗原をコードする核酸配列が、配列番号４０を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。切断型Ｎ末端ドメインを有するＶＺＶ ｇＥタンパク質をコードする核酸配列を含む組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、脂質キャリアを有する複合体中にある、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、ＲＮＡポリメラーゼをさらにコードする、組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡポリメラーゼが、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）ＲＮＡポリメラーゼである、組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸が、配列番号３４の核酸配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。液状油が、α－トコフェロール、ココナツ油、ブドウ種子油、ラウロイルポリオキシルグリセリド、鉱物油、モノアシルグリセロール、パーム核油、オリーブ油、パラフィン油、ピーナッツ油、プロポリス、スクアレン、スクアラン、ソラネソール、大豆レシチン、大豆油、ヒマワリ油、トリグリセリド、またはビタミンＥである、組成物が本明細書にさらに提供される。トリグリセリドが、カプリン酸トリグリセリド、カプリル酸トリグリセリド、カプリル酸およびカプリン酸トリグリセリド、トリグリセリドエステル、またはミリスチン酸トリグリセリンである、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、疎水性コアを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、無機粒子を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。無機粒子が、疎水性コア内にある、組成物が本明細書にさらに提供される。無機粒子が、金属を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。金属が、金属塩、金属酸化物、金属水酸化物、または金属リン酸塩を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。金属酸化物が、酸化アルミニウム、オキシ水酸化アルミニウム、酸化鉄、二酸化チタン、または二酸化ケイ素を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。疎水性界面活性剤が、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、またはソルビタントリオレエートである、組成物が本明細書にさらに提供される。親水性界面活性剤が、ポリソルベートである、組成物が本明細書にさらに提供される。窒素のホスフェートに対する（Ｎ：Ｐ）モル比によって特徴付けられる脂質キャリアの１つまたは複数の核酸に対するモル比が、約１：１～約１５０：１の範囲である、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、約０．１～０．４の範囲の平均多分散指数で、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍの範囲のｚ平均流体力学直径を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約５、約１０、約２５、約５０または約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約２５μｇの量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。懸濁液の形態である組成物が本明細書にさらに提供される。凍結乾燥されている組成物が本明細書にさらに提供される。

【0117】

脂質キャリアであって、脂質キャリアが、液状油、および界面活性剤を含み、界面活性剤が、カチオン性脂質、親水性界面活性剤、および疎水性界面活性剤を含む、脂質キャリア；ならびに少なくとも１つの核酸であって、核酸が、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原またはその機能的バリアントをコードする抗原配列を含む、少なくとも１つの核酸を含む組成物が本明細書に提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原が、ＲＳＶ－Ｆ抗原である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原が、ＲＳＶ－Ｇ抗原である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号１、２、４５または４６のいずれか１つと少なくとも８５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号１、２、４５または４６のいずれか１つと少なくとも９０％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号１、２、４５または４６のいずれか１つと少なくとも９５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号１、２、４５または４６のいずれか１つを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号１と少なくとも８５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号１と少なくとも９０％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号１と少なくとも９５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号１を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号２と少なくとも８５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号２と少なくとも９０％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号２と少なくとも９５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号２を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号４５と少なくとも８５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号４５と少なくとも９０％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号４５と少なくとも９５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号４５を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号４６と少なくとも８５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号４６と少なくとも９０％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号４６と少なくとも９５％同一である、組成物が本明細書にさらに提供される。呼吸器合胞体ウイルス抗原をコードする抗原配列が、配列番号４６を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、脂質キャリアを有する複合体中にある、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、ＲＮＡポリメラーゼをさらにコードする、組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡポリメラーゼが、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）ＲＮＡポリメラーゼである、組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸が、配列番号３４の核酸配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。液状油が、α－トコフェロール、ココナツ油、ブドウ種子油、ラウロイルポリオキシルグリセリド、鉱物油、モノアシルグリセロール、パーム核油、オリーブ油、パラフィン油、ピーナッツ油、プロポリス、スクアレン、スクアラン、ソラネソール、大豆レシチン、大豆油、ヒマワリ油、トリグリセリド、またはビタミンＥである、組成物が本明細書にさらに提供される。トリグリセリドが、カプリン酸トリグリセリド、カプリル酸トリグリセリド、カプリル酸およびカプリン酸トリグリセリド、トリグリセリドエステル、またはミリスチン酸トリグリセリンである、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、疎水性コアを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、無機粒子を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。無機粒子が、疎水性コア内にある、組成物が本明細書にさらに提供される。無機粒子が、金属を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。金属が、金属塩、金属酸化物、金属水酸化物、または金属リン酸塩を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。金属酸化物が、酸化アルミニウム、オキシ水酸化アルミニウム、酸化鉄、二酸化チタン、または二酸化ケイ素を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。疎水性界面活性剤が、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、またはソルビタントリオレエートである、組成物が本明細書にさらに提供される。親水性界面活性剤が、ポリソルベートである、組成物が本明細書にさらに提供される。窒素のホスフェートに対する（Ｎ：Ｐ）モル比によって特徴付けられる脂質キャリアの１つまたは複数の核酸に対するモル比が、約１：１～約１５０：１の範囲である、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、約０．１～０．４の範囲の平均多分散指数で、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍの範囲のｚ平均流体力学直径を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約５、約１０、約２５、約５０または約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約２５μｇの量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。懸濁液の形態である組成物が本明細書にさらに提供される。凍結乾燥されている組成物が本明細書にさらに提供される。

【0118】

脂質キャリアであって、脂質キャリアが、約３０ｍｇ／ｍＬのＤＯＴＡＰクロリド 約３７．５ｍｇ／ｍＬのスクアレン、約３７ｍｇ／ｍｌのソルビタンモノステアレート、約３７ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、約１０ｍＭのクエン酸ナトリウム、および約０．２ｍｇ Ｆｅ／ｍｌのオレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子を含む、ナノエマルジョンであり、オレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子が、約５ナノメートルから最大で２５ｎｍの範囲のサイズのものである、脂質キャリア；ならびに、配列番号１～６、３８～４７と少なくとも８５％同一の配列を含む少なくとも１つの核酸を含む組成物が本明細書に提供される。オレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子が、約５～約２５ナノメートルのサイズの範囲のサイズのものである、組成物が本明細書にさらに提供される。オレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子が、サイズ１２ナノメートルである、組成物が本明細書にさらに提供される。スクロースを含む組成物が本明細書にさらに提供される。スクロースが、約５０ｍｇで存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、脂質キャリアを有する複合体中にある、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、ＲＮＡポリメラーゼをさらにコードする、組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡポリメラーゼが、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）ＲＮＡポリメラーゼである、組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸が、配列番号３４の核酸配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、疎水性コアを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。オレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子が、疎水性コア内にある、組成物が本明細書にさらに提供される。窒素のホスフェートに対する（Ｎ：Ｐ）モル比によって特徴付けられる脂質キャリアの１つまたは複数の核酸に対するモル比が、約１：１～約１５０：１の範囲である、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、約０．１～０．４の範囲の平均多分散指数で、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍの範囲のｚ平均流体力学直径を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約５、約１０、約２５、約５０または約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約２５μｇの量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。懸濁液の形態である組成物が本明細書にさらに提供される。凍結乾燥されている組成物が本明細書にさらに提供される。

【0119】

脂質キャリアであって、脂質キャリアが、約０．７５ｍｇの量で存在するＤＯＴＡＰクロリド、約０．９４ｍｇの量で存在するスクアレン、約０．９３ｍｇの量で存在するソルビタンモノステアレート、約０．９３ｍｇの量で存在するポリソルベート８０、約１．０５ｍｇの量で存在するクエン酸一水和物、および約０．００５ｍｇの量で存在するオレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子を含む、ナノエマルジョンである、脂質キャリア；ならびに配列少なくとも配列番号１～６、３８～４７を含む、少なくとも１つの核酸を含む組成物が本明細書に提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約５、約１０、約２５、約５０または約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約２５μｇの量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。スクロースを含む組成物が本明細書にさらに提供される。スクロースが、約５０ミリグラム（ｍｇ）で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、脂質キャリアを有する複合体中にある、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、ＲＮＡポリメラーゼをさらにコードする、組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡポリメラーゼが、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）ＲＮＡポリメラーゼである、組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡポリメラーゼをコードする核酸が、配列番号３４の核酸配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、疎水性コアを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。オレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子が、疎水性コア内にある、組成物が本明細書にさらに提供される。窒素のホスフェートに対する（Ｎ：Ｐ）モル比によって特徴付けられる脂質キャリアの１つまたは複数の核酸に対するモル比が、約１：１～約１５０：１の範囲である、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、約０．１～０．４の範囲の平均多分散指数で、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍの範囲のｚ平均流体力学直径を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。懸濁液の形態である組成物が本明細書にさらに提供される。凍結乾燥されている組成物が本明細書にさらに提供される。

【0120】

（ａ）疎水性コアと１つまたは複数の無機ナノ粒子と１つまたは複数の油または脂質とを含むナノエマルジョンである脂質キャリア；（ｂ）抗原を発現することができる配列をコードし、抗原が感染性病原体タンパク質である、少なくとも１つの核酸配列を含む、組成物が本明細書に提供される。核酸ポリメラーゼを含むか、または核酸ポリメラーゼを発現することができる配列をコードする核酸を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸配列が、ＲＮＡ核酸配列である、組成物が本明細書にさらに提供される。組成物が本明細書にさらに提供され、ここで、ＲＮＡポリメラーゼ、またはＲＮＡポリメラーゼを発現することができる核酸配列。配列番号１～６、３４～５４のいずれか１つを含む核酸配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。宿主細胞が、核酸配列から抗原を発現することができ、抗原が、感染性因子に由来する、組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である、組成物が本明細書にさらに提供される。抗原が、ＲＳＶ付着（Ｇ）糖タンパク質（ＲＳＶ－Ｇ）を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。抗原が、ＲＳＶ融合（Ｆ）糖タンパク質（ＲＳＶ－Ｆ）を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２ではない、組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、ジカウイルスである、組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、エンテロウイルスである、組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、インフルエンザウイルスである、組成物が本明細書にさらに提供される。疎水性コアが、油を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。油が、α－トコフェロール、ラウロイルポリオキシルグリセリド、モノアシルグリセロール、プロポリス、スクアレン、スクアレン、ｍｉｇｌｙｏｌ、デヒドロイソスクアレン（ＤＨＩＳ）、鉱物油、ブドウ種子油、オリーブ油、パラフィン油、ピーナッツ油、大豆油、ヒマワリ油、大豆レシチン、トリグリセリド、ビタミンＥ、および中鎖トリグリセリドのうちの少なくとも１つを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の無機ナノ粒子が、金属塩、金属酸化物、金属水酸化物、金属リン酸塩、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の脂質が、カチオン性脂質、アニオン性脂質、中性脂質、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の脂質が、カチオン性脂質である、組成物が本明細書にさらに提供される。カチオン性脂質が、１，２－ジオレオイルオキシ－３－（トリメチルアンモニウム）プロパン（ＤＯＴＡＰ）；３β－［Ν－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル］コレステロール（ＤＣコレステロール）；ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡ）；１，２－ジミリストイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、ジパルミトイル（Ｃ１６：０）トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＰＴＡＰ）；ジステアロイルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＳＴＡＰ）；Ｎ－［１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎトリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）；Ｎ，Ｎ－ジオレオイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）；１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（ＤＯＥＰＣ）；１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＤＡＰ）；および１，２－ジリノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）；１，１’－（（２－（４－（２－（（２－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）アザンジイル）ビス（ドデカン－２－オール）（Ｃ１２－２００）、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、必要に応じて、１つまたは複数の界面活性剤を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の界面活性剤が、疎水性界面活性剤、親水性界面活性剤、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、組成物が本明細書にさらに提供される。疎水性界面活性剤が、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエートおよびソルビタントリオレエートからなる群から選択されるソルビタンエステルを含み、親水性界面活性剤が、ポリソルベートを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、約０．１～約０．４の範囲の平均多分散指数で、約４０ｍｍ～約１５０ｎｍの範囲のｚ平均流体力学直径を有する、組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の核酸が、脂質キャリアに組み込まれるか、またはそれと複合体化して、脂質キャリア－核酸複合体を形成する、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリア－ＲＮＡ複合体が、非共有結合性相互作用を介して、または可逆的な共有結合性相互作用を介して形成される、組成物が本明細書にさらに提供される。窒素のホスフェートに対する（Ｎ：Ｐ）モル比によって特徴付けられる脂質キャリアの１つまたは複数の核酸に対するモル比が、約１：１～約１５０：１の範囲である、組成物が本明細書にさらに提供される。摂氏２～８度で安定である組成物が、本明細書にさらに提供される。懸濁液の形態である組成物が、本明細書にさらに提供される。凍結乾燥されている組成物が本明細書にさらに提供される。本明細書に提供される組成物を含むワクチンが本明細書にさらに提供される。

【0121】

（ａ）疎水性コアと１つまたは複数の無機ナノ粒子と１つまたは複数の脂質とを含むナノエマルジョンである脂質キャリア；（ｂ）抗原を発現することができる配列をコードし、抗原が感染性疾患タンパク質である、少なくとも１つの核酸配列を含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、ＲＮＡである、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。ポリメラーゼ、またはポリメラーゼを発現することができる配列をコードする核酸をさらに含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡポリメラーゼ、またはＲＮＡポリメラーゼを発現することができる核酸配列をさらに含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。配列番号１～６または３４～５４のいずれか１つに示される配列を含む核酸配列を含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。配列番号１を含む核酸配列を含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。配列番号２を含む核酸配列を含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。配列番号３を含む核酸配列を含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。配列番号４を含む核酸配列を含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。配列番号５を含む核酸配列を含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。配列番号６を含む核酸配列を含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。抗原を発現することができる核酸配列を含むワクチン組成物であって、抗原が感染性因子に由来する、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。抗原が、ＲＳＶ付着（Ｇ）糖タンパク質（ＲＳＶ－Ｇ）を含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。抗原が、ＲＳＶ融合（Ｆ）糖タンパク質（ＲＳＶ－Ｆ）を含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、ジカウイルスである、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、エンテロウイルスである、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、インフルエンザウイルスである、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ではない、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。疎水性コアが、油を含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。油が、α－トコフェロール、ラウロイルポリオキシルグリセリド、モノアシルグリセロール、プロポリス、スクアレン、鉱物油、ブドウ種子油、オリーブ油、パラフィン油、ピーナッツ油、大豆油、ヒマワリ油、大豆レシチン、トリグリセリド、およびビタミンＥ、ならびに中鎖トリグリセリドのうちの少なくとも１つを含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の無機ナノ粒子が、金属塩、金属酸化物、金属水酸化物、金属リン酸塩、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の脂質が、カチオン性脂質、アニオン性脂質、中性脂質、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の脂質が、カチオン性脂質である、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。カチオン性脂質が、１，２－ジオレオイルオキシ－３－（トリメチルアンモニウム）プロパン（ＤＯＴＡＰ）；３β－［Ν－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル］コレステロール（ＤＣコレステロール）；ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡ）；１，２－ジミリストイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、ジパルミトイル（Ｃ１６：０）トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＰＴＡＰ）；ジステアロイルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＳＴＡＰ）；Ｎ－［１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎトリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）；Ｎ，Ｎ－ジオレオイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）；１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（ＤＯＥＰＣ）；１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＤＡＰ）；および１，２－ジリノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）；１，１’－（（２－（４－（２－（（２－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）アザンジイル）ビス（ドデカン－２－オール）（Ｃ１２－２００）、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、必要に応じて、１つまたは複数の界面活性剤を含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の界面活性剤が、疎水性界面活性剤、親水性界面活性剤、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。疎水性界面活性剤が、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエートおよびソルビタントリオレエートからなる群から選択されるソルビタンエステルを含み、親水性界面活性剤が、ポリソルベートを含む、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、約０．１～約０．４の範囲の平均多分散指数で、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍの範囲のｚ平均流体力学直径を有する、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の核酸が、脂質キャリアに組み込まれるか、またはそれと複合体化して、脂質キャリア－核酸複合体を形成する、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリア－ＲＮＡ複合体が、非共有結合性相互作用を介して、または可逆的な共有結合性相互作用を介して形成される、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。窒素のホスフェートに対する（Ｎ：Ｐ）モル比によって特徴付けられる脂質キャリアの１つまたは複数の核酸に対するモル比が、約１：１～約１５０：１の範囲である、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。組成物が摂氏２～８度で安定である、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約５、約１０、約２５、約５０または約１００マイクログラム（μｇ）の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの核酸配列が、最大で約２５μｇの量で存在する、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。懸濁液の形態であるワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。凍結乾燥されているワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。

【0122】

対象を免疫保護するための組成物および方法であって、対象に本明細書に提供される組成物を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。対象を免疫保護するための組成物であって、（ａ）疎水性コアと１つまたは複数の無機ナノ粒子と１つまたは複数の脂質とを含むナノエマルジョンである脂質キャリア；（ｂ）抗原を発現することができる配列をコードし、抗原が感染性因子に由来する、少なくとも１つの核酸配列を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。核酸が、ＲＮＡである、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。ポリメラーゼ、またはポリメラーゼを発現することができる配列をコードする核酸をさらに含む、対象を免疫保護するための組成物が、本明細書にさらに提供される。ＲＮＡポリメラーゼ、またはＲＮＡポリメラーゼを発現することができる核酸配列をさらに含む、対象を免疫保護するための組成物が、本明細書にさらに提供される。配列番号１～６または３４～５４のいずれか１つに示される配列を含む核酸配列を含む、対象を免疫保護するための組成物が、本明細書にさらに提供される。配列番号１を含む核酸配列を含む、対象を免疫保護するための組成物が、本明細書にさらに提供される。配列番号２を含む核酸配列を含む、対象を免疫保護するための組成物が、本明細書にさらに提供される。配列番号３を含む核酸配列を含む、対象を免疫保護するための組成物が、本明細書にさらに提供される。配列番号４を含む核酸配列を含む、対象を免疫保護するための組成物が、本明細書にさらに提供される。配列番号５を含む核酸配列を含む、対象を免疫保護するための組成物が、本明細書にさらに提供される。配列番号６を含む核酸配列を含む、対象を免疫保護するための組成物が、本明細書にさらに提供される。抗原を発現することができる核酸配列を含む、対象を免疫保護するための組成物であって、抗原が感染性因子に由来する、組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）である、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。抗原が、ＲＳＶ付着（Ｇ）糖タンパク質（ＲＳＶ－Ｇ）を含む、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。抗原が、ＲＳＶ融合（Ｆ）糖タンパク質（ＲＳＶ－Ｆ）を含む、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、ジカウイルスである、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、エンテロウイルスである、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、インフルエンザウイルスである、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。感染性因子が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ではない、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。疎水性コアが、油を含む、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。油が、α－トコフェロール、ラウロイルポリオキシルグリセリド、モノアシルグリセロール、プロポリス、スクアレン、鉱物油、ブドウ種子油、オリーブ油、パラフィン油、ピーナッツ油、大豆油、ヒマワリ油、大豆レシチン、トリグリセリド、およびビタミンＥ、ならびに中鎖トリグリセリドのうちの少なくとも１つを含む、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の無機ナノ粒子が、金属塩、金属酸化物、金属水酸化物、金属リン酸塩、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の脂質が、カチオン性脂質、アニオン性脂質、中性脂質、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の脂質が、カチオン性脂質である、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。カチオン性脂質が、１，２－ジオレオイルオキシ－３－（トリメチルアンモニウム）プロパン（ＤＯＴＡＰ）；３β－［Ν－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル］コレステロール（ＤＣコレステロール）；ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡ）；１，２－ジミリストイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、ジパルミトイル（Ｃ１６：０）トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＰＴＡＰ）；ジステアロイルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＳＴＡＰ）；Ｎ－［１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎトリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）；Ｎ，Ｎ－ジオレオイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）；１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（ＤＯＥＰＣ）；１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＤＡＰ）；および１，２－ジリノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）；１，１’－（（２－（４－（２－（（２－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）アザンジイル）ビス（ドデカン－２－オール）（Ｃ１２－２００）、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、ワクチン組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、必要に応じて、１つまたは複数の界面活性剤を含む、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の界面活性剤が、疎水性界面活性剤、親水性界面活性剤、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。疎水性界面活性剤が、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエートおよびソルビタントリオレエートからなる群から選択されるソルビタンエステルを含み、親水性界面活性剤が、ポリソルベートを含む、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、約０．１～約０．４の範囲の平均多分散指数で、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍの範囲のｚ平均流体力学直径を有する、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の核酸が、脂質キャリアに組み込まれるか、またはそれと複合体化して、脂質キャリア－核酸複合体を形成する、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリア－ＲＮＡ複合体が、非共有結合性相互作用を介して、または可逆的な共有結合性相互作用を介して形成される、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。窒素のホスフェートに対する（Ｎ：Ｐ）モル比によって特徴付けられる脂質キャリアの１つまたは複数の核酸に対するモル比が、約１：１～約１５０：１の範囲である、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。組成物が摂氏２～８度で安定である、対象を免疫保護するための組成物が本明細書にさらに提供される。

【0123】

（ａ）疎水性コアと１つまたは複数の無機ナノ粒子と１つまたは複数の脂質とを含むナノエマルジョンである脂質キャリア；（ｂ）抗原を発現することができる配列をコードし、抗原が感染性疾患タンパク質である、少なくとも１つの核酸配列；および少なくとも１つの凍結保護物質を含む、乾燥組成物が本明細書に提供される。疎水性コアと１つまたは複数の脂質とを含むナノエマルジョンである脂質キャリア；１つまたは複数の核酸；および少なくとも１つの糖を含む、乾燥組成物であって、少なくとも１つの糖が、（ｉ）乾燥組成物の少なくとも約５０重量％の量で存在する、または（ｉｉ）少なくとも５０ｍｇの量で存在する、乾燥組成物が本明細書にさらに提供される。凍結乾燥されている組成物が、本明細書にさらに提供される。摂氏約２５度で熱的に安定である、組成物が本明細書にさらに提供される。摂氏約４５度で熱的に安定である、組成物が本明細書にさらに提供される。摂氏約－２０度で熱的に安定である、組成物が本明細書にさらに提供される。摂氏約２度～摂氏約８度で熱的に安定である、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１週間、少なくとも２週間、および／または少なくとも１カ月間、熱的に安定である、組成物が本明細書にさらに提供される。疎水性コアが、油を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。油が、α－トコフェロール、ラウロイルポリオキシルグリセリド、モノアシルグリセロール、プロポリス、スクアレン、鉱物油、ブドウ種子油、オリーブ油、パラフィン油、ピーナッツ油、大豆油、ヒマワリ油、大豆レシチン、トリグリセリド、ビタミンＥ、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、飽和ココナツ／パーム核油由来カプリルおよびカプリン脂肪酸と植物由来グリセロールのトリグリセリドエステル、ジヒドロイソスクアレン（ＤＨＩＳ）、ファルネセンならびにスクアレンのうちの少なくとも１つを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の脂質が、カチオン性脂質、アニオン性脂質、中性脂質、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の脂質が、カチオン性脂質を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。カチオン性脂質が、１，２－ジオレオイルオキシ－３－（トリメチルアンモニウム）プロパン（ＤＯＴＡＰ）；３β－［Ν－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル］コレステロール（ＤＣコレステロール）；ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡ）；１，２－ジミリストイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、ジパルミトイル（Ｃ１６：０）トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＰＴＡＰ）；ジステアロイルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＳＴＡＰ）；Ｎ－［１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎトリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）；Ｎ，Ｎ－ジオレオイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）；１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（ＤＯＥＰＣ）；１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＤＡＰ）；および１，２－ジリノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＭＡ）；１，１’－（（２－（４－（２－（（２－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）アザンジイル）ビス（ドデカン－２－オール）（Ｃ１２－２００）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）；Ｎ－デシル－Ｎ，Ｎ－ジメチルデカン－１－アミニウムブロミド（ＤＤＡＢ）；２，３－ジオレイルオキシ－Ｎ－［２－（スペルミンカルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）；エチルホスファチジルコリン（ｅＰＣ）；およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、少なくとも１つの界面活性剤を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの界面活性剤が、疎水性界面活性剤、親水性界面活性剤、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、組成物が本明細書にさらに提供される。疎水性界面活性剤が、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタントリステアレート、ソルビタンモノオレエート、およびソルビタントリオレエートからなる群から選択されるソルビタンエステルを含み、親水性界面活性剤が、ポリソルベートを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリアが、約０．１～約０．４の範囲の平均多分散指数で、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍの範囲のｚ平均流体力学直径を有する、組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の核酸が、ＤＮＡである、組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の核酸が、ＲＮＡである、組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡが、自己複製ＲＮＡである、組成物が本明細書にさらに提供される。疎水性コアが、１つまたは複数の無機ナノ粒子を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の無機ナノ粒子が、金属塩、金属酸化物、金属水酸化物、金属リン酸塩、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、組成物が本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の核酸が、脂質キャリアに組み込まれるか、またはそれと複合体化して、脂質キャリア－核酸複合体を形成する、組成物が本明細書にさらに提供される。脂質キャリア－核酸複合体が、非共有結合性相互作用を介して、または可逆的な共有結合性相互作用を介して形成される、組成物が本明細書にさらに提供される。窒素のホスフェートに対する（Ｎ：Ｐ）モル比によって特徴付けられる脂質キャリアの１つまたは複数の核酸に対するモル比が、約１：１～約１５０：１の範囲である、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの糖が、スクロース、マルトース、トレハロース、マンニトール、グルコース、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの糖が、少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００ｍｇまたはそれよりも多くの量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの糖が、５０ｍｇ～２５０ｍｇの量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの糖が、少なくとも約２５０ｍｇの量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。糖が、組成物の少なくとも５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５重量％のまたはそれを超える量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。糖が、組成物の８０～９８重量％、必要に応じて９４～９６重量％の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。糖が、組成物の約９５重量％の量で存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。少なくとも１つの糖が、スクロースを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。

【0124】

本明細書に提供される組成物またはワクチン組成物と；薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物が本明細書に提供される。好適な希釈剤で再構成される本明細書に開示される乾燥組成物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物が本明細書にさらに提供される。希釈剤が水性である、医薬組成物が本明細書にさらに提供される。希釈剤が水である、医薬組成物が本明細書にさらに提供される。

【0125】

対象における免疫応答を生じさせる方法であって、本明細書に提供される組成物を前記対象に投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。対象における免疫応答を生じさせる方法であって、本明細書に提供される組成物を前記対象に投与し、それによって、抗原に対する免疫応答を生じさせるステップを含む、方法が本明細書にさらに提供される。組成物が、２回の投薬によって対象に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約１４日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約２８日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約４２日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約５６日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約７０日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。前記組成物の３回目の投薬を前記対象に投与するステップをさらに含む方法が本明細書にさらに提供される。５マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。１０マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。２５マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。３０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。３５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。４０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。４５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。５０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。５５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。６０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。６５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。７０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。７５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。８０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。８５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。９０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。９５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。１００マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。対象が、哺乳動物である、方法が本明細書にさらに提供される。哺乳動物が、ヒトである、方法が本明細書にさらに提供される。組成物が筋肉内投与される方法が本明細書にさらに提供される。組成物が鼻腔内投与される方法が本明細書にさらに提供される。対象が、ウイルス感染症を有する、それを有する疑いがある、またはそれを発症するリスクがある、方法が本明細書にさらに提供される。ウイルス感染症が、インフルエンザ感染症、ＶＺＶ感染症、ＲＳＶ感染症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）感染症、ヒトガンマヘルペスウイルス４感染症、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症、狂犬病ウイルス感染症、ヒトアルファヘルペスウイルス１感染症、またはヒトアルファヘルペスウイルス２感染症である、方法が本明細書にさらに提供される。対象が、細菌感染症を有する、それを有する疑いがある、またはそれを発症するリスクがある、方法が本明細書にさらに提供される。細菌感染症が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ感染症、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染症、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ感染症、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ感染症、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ感染症、またはＣｈｌａｍｙｄｉａ感染症である、方法が本明細書にさらに提供される。対象が、寄生虫感染症、真菌感染症もしくは酵母感染症を有する、それを有する疑いがある、またはそれを発症するリスクがある、方法が本明細書にさらに提供される。免疫応答が、組成物の投与を受けていない対象と比較して抗原に対する中和抗体の力価を上昇させることを含む、方法が本明細書にさらに提供される。免疫応答が、組成物の投与を受けていない対象と比較してＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋陽性Ｔ細胞の量を増加させることを含む、方法が本明細書にさらに提供される。対象が、免疫無防備状態または免疫抑制状態である、方法が本明細書にさらに提供される。

【0126】

対象における免疫応答を増強させる方法であって、本明細書に提供される組成物を対象に投与し、それによって、抗原に対する免疫応答を増強させるステップを含む、方法が本明細書に提供される。組成物が、２回の投薬によって対象に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約１４日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約２８日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約４２日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約５６日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約７０日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。前記対象に前記組成物の３回目の投薬を投与するステップをさらに含む方法が本明細書にさらに提供される。５マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。１０マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。２５マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。３０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。３５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。４０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。４５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。５０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。５５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。６０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。６５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。７０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。７５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。８０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。８５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。９０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。９５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。１００マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。対象が、哺乳動物である、方法が本明細書にさらに提供される。哺乳動物が、ヒトである、方法が本明細書にさらに提供される。組成物が筋肉内投与される方法が本明細書にさらに提供される。組成物が鼻腔内投与される方法が本明細書にさらに提供される。対象が、ウイルス感染症を有する、それを有する疑いがある、またはそれを発症するリスクがある、方法が本明細書にさらに提供される。ウイルス感染症が、インフルエンザ感染症、ＶＺＶ感染症、ＲＳＶ感染症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）感染症、ヒトガンマヘルペスウイルス４感染症、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染症、狂犬病ウイルス感染症、ヒトアルファヘルペスウイルス１感染症、またはヒトアルファヘルペスウイルス２感染症である、方法が本明細書にさらに提供される。対象が、細菌感染症を有する、それを有する疑いがある、またはそれを発症するリスクがある、方法が本明細書にさらに提供される。細菌感染症が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ感染症、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染症、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ感染症、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染症、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ感染症、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ感染症、またはＣｈｌａｍｙｄｉａ感染症である、方法が本明細書にさらに提供される。対象が、寄生虫感染症、真菌感染症もしくは酵母感染症を有する、それを有する疑いがある、またはそれを発症するリスクがある、方法が本明細書にさらに提供される。免疫応答が、組成物の投与を受けていない対象と比較して抗原に対する中和抗体の力価を上昇させることを含む、方法が本明細書にさらに提供される。免疫応答が、組成物の投与を受けていない対象と比較してＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋陽性Ｔ細胞の量を増加させることを含む、方法が本明細書にさらに提供される。対象が、免疫無防備状態または免疫抑制状態である、方法が本明細書にさらに提供される。

【0127】

インフルエンザ感染症を処置する方法であって、本明細書に提供される組成物を対象に投与し、それによって、インフルエンザ感染症を処置するステップを含む、方法が本明細書に提供される。組成物が、２回の投薬によって対象に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約１４日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約２８日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約４２日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約５６日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約７０日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。前記対象に前記組成物の３回目の投薬を投与するステップをさらに含む方法が本明細書にさらに提供される。５マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。１０マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。２５マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。３０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。３５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。４０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。４５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。５０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。５５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。６０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。６５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。７０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。７５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。８０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。８５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。９０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。９５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。１００マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。対象が、哺乳動物である、方法が本明細書にさらに提供される。哺乳動物が、ヒトである、方法が本明細書にさらに提供される。組成物が筋肉内投与される方法が本明細書にさらに提供される。組成物が鼻腔内投与される方法が本明細書にさらに提供される。対象が、インフルエンザ感染症を有する、それを有する疑いがある、またはそれを発症するリスクがある、方法が本明細書にさらに提供される。対象が、抗原に対する免疫応答を生じさせる、方法が本明細書にさらに提供される。免疫応答が、組成物の投与を受けていない対象と比較して抗原に対する中和抗体の力価を上昇させることを含む、方法が本明細書にさらに提供される。免疫応答が、組成物の投与を受けていない対象と比較してＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋陽性Ｔ細胞の量を増加させることを含む、方法が本明細書にさらに提供される。対象が、免疫無防備状態または免疫抑制状態である、方法が本明細書にさらに提供される。

【0128】

対象におけるＶＺＶ感染症を処置する方法であって、本明細書に提供される組成物を対象に投与し、それによって、ＶＺＶ感染症を処置するステップを含む、方法が本明細書に提供される。組成物が、２回の投薬によって対象に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約１４日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約２８日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約４２日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約５６日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約７０日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。前記対象に前記組成物の３回目の投薬を投与するステップをさらに含む方法が本明細書にさらに提供される。５マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。１０マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。２５マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。３０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。３５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。４０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。４５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。５０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。５５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。６０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。６５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。７０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。７５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。８０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。８５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。９０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。９５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。１００マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。対象が、哺乳動物である、方法が本明細書にさらに提供される。哺乳動物が、ヒトである、方法が本明細書にさらに提供される。組成物が筋肉内投与される方法が本明細書にさらに提供される。組成物が鼻腔内投与される方法が本明細書にさらに提供される。対象が、ＶＺＶ感染症を有する、それを有する疑いがある、またはそれを発症するリスクがある、方法が本明細書にさらに提供される。対象が、抗原に対する免疫応答を生じさせる、方法が本明細書にさらに提供される。免疫応答が、組成物の投与を受けていない対象と比較して抗原に対する中和抗体の力価を上昇させることを含む、方法が本明細書にさらに提供される。免疫応答が、組成物の投与を受けていない対象と比較してＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋陽性Ｔ細胞の量を増加させることを含む、方法が本明細書にさらに提供される。対象が、免疫無防備状態または免疫抑制状態である、方法が本明細書にさらに提供される。

【0129】

対象におけるＲＳＶ感染症を処置する方法であって、本明細書に提供される組成物を対象に投与し、それによって、ＲＳＶ感染症を処置するステップを含む、方法が本明細書に提供される。組成物が、２回の投薬によって対象に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約１４日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約２８日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約４２日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約５６日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。２回目の投薬が、１回目の投薬の約７０日後に投与される、方法が本明細書にさらに提供される。前記対象に前記組成物の３回目の投薬を投与するステップをさらに含む方法が本明細書にさらに提供される。５マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。１０マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。２５マイクログラムの前記組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。３０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。３５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。４０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。４５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。５０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。５５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。６０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。６５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。７０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。７５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。８０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。８５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。９０マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。９５マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。１００マイクログラムの組成物が前記対象に投与される方法が本明細書にさらに提供される。対象が、哺乳動物である、方法が本明細書にさらに提供される。哺乳動物が、ヒトである、方法が本明細書にさらに提供される。組成物が筋肉内投与される方法が本明細書にさらに提供される。組成物が鼻腔内投与される方法が本明細書にさらに提供される。対象が、ＲＳＶ感染症を有する、それを有する疑いがある、またはそれを発症するリスクがある、方法が本明細書にさらに提供される。対象が、抗原に対する免疫応答を生じさせる、方法が本明細書にさらに提供される。免疫応答が、組成物の投与を受けていない対象と比較して抗原に対する中和抗体の力価を上昇させることを含む、方法が本明細書にさらに提供される。免疫応答が、組成物の投与を受けていない対象と比較してＣＤ４＋および／またはＣＤ８＋陽性Ｔ細胞の量を増加させることを含む、方法が本明細書にさらに提供される。対象が、免疫無防備状態または免疫抑制状態である、方法が本明細書にさらに提供される。

【0130】

本明細書に提供される組成物と、パッケージと、そのための材料とを含むキットが本明細書にさらに提供される。（ａ）疎水性コアと１つまたは複数の無機ナノ粒子と１つまたは複数の脂質とを含むナノエマルジョンである脂質キャリア；（ｂ）抗原を発現することができる配列をコードし、抗原が感染性因子に由来する、少なくとも１つの核酸配列を含む、キットが本明細書にさらに提供される。１つまたは複数の界面活性剤を含むキットが本明細書にさらに提供される。

【0131】

ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼをコードする配列を含む第１の核酸と；感染性疾患抗原をコードする配列を含む第２の核酸とを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。感染性疾患抗原が、インフルエンザ、ＶＺＶ、ＲＳＶ、ヒトガンマヘルペスウイルス４、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、狂犬病ウイルス、ヒトアルファヘルペスウイルス１、またはヒトアルファヘルペスウイルス２であるウイルス由来である、組成物が本明細書にさらに提供される。感染性疾患抗原が、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質ステム領域またはその機能的バリアントである、組成物が本明細書にさらに提供される。感染性疾患抗原が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、またはＣｈｌａｍｙｄｉａ由来である、組成物が本明細書にさらに提供される。第１の核酸および第２の核酸が、共通の核酸上に存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。第１の核酸および第２の核酸が、別々の核酸上に存在する、組成物が本明細書にさらに提供される。ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼが、ＶＥＥＶ ＲＮＡポリメラーゼを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。ナノ粒子キャリアシステムをさらに含む組成物が、本明細書にさらに提供される。ナノ粒子キャリアシステムが、カチオン性脂質および疎水性コアを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。疎水性コアが、無機ナノ粒子を含む、組成物が本明細書にさらに提供される。第１の核酸および／または第２の核酸が、ＲＮＡを含む、組成物が本明細書にさらに提供される。

【0132】

以下の実施例は、本明細書に開示される実施形態の原理およびプラクティスを当業者により明確に説明するために示され、任意の特許請求の範囲に記載の実施形態の範囲を制限するものと解釈されるべきでない。他に述べられない限り、全ての部およびパーセンテージは、重量基準である。

【実施例】

【0133】

（実施例１）
ＲＳＶレプリコンの免疫原性
ＲＳＶ ｒｅｐＲＮＡと複合体化した脂質キャリアの生物活性を決定するために、および抗ＲＳＶ ＩｇＧのｉｎ ｖｉｖｏ生成を測定するために、アッセイを、先ず、６～８週齢Ｃ５７ＢＬ／６およびＢＡＬＢ／ｃ雌マウスをＲＳＶ ｒｅｐＲＮＡで免疫し、次いで、血清中の抗ＲＳＶ標的ＩｇＧレベルを分析するように、設計した。

【0134】

製剤を、ＲＳＶ－ＦおよびＲＳＶ－Ｇタンパク質をコードするｒｅｐＲＮＡ（およそ１０ｎｇ／μＬ、摂氏－８０度）と脂質キャリア製剤（３０ｍｇ ＤＯＴＡＰ／ｍＬ、摂氏４度）を併せることにより、調製した。次いで、１４４マイクロリットル（μＬ）の製剤を１８０μＬの４０％スクロースおよび３６μＬの１００ｍＭクエン酸塩と混合し、２ｍＬ管に分割した。管を１０回反転させて、入念に混合した。

【0135】

５０マイクロリットルの溶液を０日目にそれぞれのマウス系統に筋肉内注射して２．５μｇのＲＮＡ用量を生じさせ、注射後１４日目、２８日目および７５日目に後眼窩からの眼球採血により血液を採取した。採取後、血液を放置して凝固させ、血清を採取し、評価まで摂氏－８０度で貯蔵した。

【0136】

血液採取物を、ＲＳＶ組換えタンパク質に応じてＩｇＧ濃度についてＥＬＩＳＡにより評価した。次の３つの組換えタンパク質を使用した（１μｇ／ｍＬ）：ＲＳＶ－Ｆタンパク質；ＲＳＶからの組換え体である、呼吸器合胞体ウイルスＢ１からのＣ末端Ｈｉｓタグを有するＲＳＶ－Ｇタンパク質；およびＨＥｐ－２細胞（Ａ２）から精製されたＲＳＶからのＲＳＶ－Ｇタンパク質。データは、ＲＳＶ－Ｆタンパク質特異的応答がＣ５７ＢＬ／６マウスとＢＡＬＢ／ｃマウスの両方で誘導された（図２）一方で、ＲＳＶ－Ｇ Ａ２株タンパク質特異的応答がＢＡＬＢ／ｃマウスのみで誘導された（図３Ａ）ことを示した。ＲＳＶ－Ｇ Ｂ１株タンパク質特異的応答は、観察されなかった（図３Ｂ）。ＲＳＶ－Ｇ Ａ２タンパク質応答が同じＥＬＩＳＡプレートで検出されたので、Ｂ１株に対する応答の欠如は、ＥＬＩＳＡ試薬の不具合によるものではなかった。
（実施例２）
マクロファージにおける脂質キャリア自然免疫応答

【0137】

さまざまなｒｅｐＲＮＡ／脂質キャリア製剤を調製し、分析して、マクロファージにおける脂質キャリアの自然免疫応答を評価した。アッセイしたｒｅｐＲＮＡ／脂質キャリア製剤は、Ｆｅ－脂質キャリア、高Ｆｅ－脂質キャリア、Ｆｅ－脂質キャリアｍｉｇｌｙｏｌ、高Ｆｅ－脂質キャリアｍｉｇｌｙｏｌ、ミョウバン－脂質キャリア、Ｆｅ－脂質キャリアソラネソール（ＳＬＮ）、ＮＬＣおよびＣＮＥを含む。

【0138】

ＴＨＰ－１マクロファージによる腫瘍壊死因子－アルファ（ＴＮＦα）産生のタンパク質発現および刺激をアッセイした。ヒトＴＮＦ－アルファ（α）ＤＵＯＳＥＴ（商標）ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）を使用して、製造業者のプロトコールに従って、ＥＬＩＳＡアッセイを行って、培地におけるＴＮＦ－アルファ（α）タンパク質レベルを評価した。９６ウェルマイクロプレートを抗ＴＮＦα捕捉抗体でコーティングした。プレートをブロッキングし、培地試料を希釈せずに直接マイクロプレートに添加した。ビオチン化検出抗体、ストレプトアビジン－ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＳＡ－ＨＲＰ）、および基質の添加後、ＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）ｉ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，ＬＬＣ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ ＣＡ、ＵＳＡ）プレートリーダーにおいて４５０ｎｍで吸光度を読み取った。

【0139】

最初に、ＴＨＰ－１単球を、ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ）を使用して、マクロファージに分化させた。次いで、レプリコンＲＮＡまたは病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）をコードするナノルシフェラーゼ（ＮａｎｏＬｕｃ）を有するさまざまな製剤を細胞にトランスフェクトした。次いで、細胞培養培地を、ルシフェラーゼアッセイによってＮａｎｏＬｕｃ発現について、およびＥＬＩＳＡによってＴＮＦα発現について、評価した。アッセイに使用した製剤を表３に記載する。

【表3】

【0140】

１１の処置群を調製した。これらの群のうちの８つは、ＮａｎｏＬｕｃ ｒｅｐＲＮＡ群であり、ウェル当たり６００ｎｇのｒｅｐＲＮＡ用量を、Ｆｅ－脂質キャリア、高Ｆｅ－脂質キャリア、Ｆｅ－脂質キャリアｍｉｇｌｙｏｌ、高Ｆｅ－脂質キャリアｍｉｇｌｙｏｌ、ミョウバン－脂質キャリア、Ｆｅ－脂質キャリアソラネソール（ＳＬＮ）、ＮＬＣ、およびＣＮＥ製剤を使用して調製した。これらの群のうちの２つは、ＰＡＭＰ群であり、ウェル当たり２００ナノグラム（ｎｇ）用量を、Ｆｅ－脂質キャリアおよびＦｅ－脂質キャリアｍｉｇｌｙｏｌ製剤を使用して調製した。未処置群は、ＮａｎｏＬｕｃ ｒｅｐＲＮＡもＰＡＭＰも有さなかった。

【0141】

ＮａｎｏＬｕｃ ｒｅｐＲＮＡを、ＲＮＡｓｅを含まない水２．２ｍＬ中、８ｎｇ／μＬに希釈し、ＰＡＭＰ ＲＮＡを、水６００μＬ中、２．６７ｎｇ／μＬに希釈することにより、さまざまな製剤を調製した。脂質キャリアおよびＲＮＡマスターミックスを、２５０μＬのそれぞれの希釈された製剤と２５０μＬの希釈されたＲＮＡを添加することによって複合体化し、上下にピペッティングすることによって混合した。

【0142】

細胞トランスフェクションを、２４ウェルプレートにおいて、ウェルあたり７×１０^５個のＴＨＰ－１ｓを播種することによって行った。８０マイクロモル濃度（μＭ）のＰＭＡをそれぞれのウェルに添加し、摂氏３７度でインキュベートした。翌日、トランスフェクションの１時間前に、ＰＭＡ含有培地を除去し、完全ＲＰＭＩ（ｃＲＰＭＩ）培地で置き換えた。次いで、試料を、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（商標）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ ＵＳＡ）に連続希釈して、０．４５ｎｇ／μＬで開始する１０点の１．５倍の希釈系列を作製した。次いで、培養培地を、ピペッティングによってプレートから除去した。４５０μＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭ（商標）および１５０μＬの複合体化製剤を、二反復で、プレートに添加した。空のウェルには、４５０μＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭ（商標）のみを入れた。４時間後、試料を、ピペッティングによってプレートから除去し、５００μＬの増殖培地で置き換えた。次いで、プレートを、摂氏３７度で終夜インキュベートした。増殖培地を翌日回収し、摂氏－８０度で貯蔵した。下流のアッセイを実施し、下記に記載した。

【0143】

第１のアッセイ（図４Ａ）および第２のアッセイ（図４Ｂ）からのタンパク質発現レベルを、Ｎａｎｏ－Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイ試薬を緩衝剤で先ず１：５０希釈することによりルシフェラーゼアッセイを使用して果たした。２５μＬの上清を除去し、９６ウェルプレートにおいて、２５μＬのＮａｎｏ－Ｇｌｏ（登録商標）試薬と混合し、室温で３分間インキュベートした。発光を、発光光度計を使用して読み取った。

【0144】

本明細書に記載する研究は、図４Ａの第１のアッセイにおいておよび図４Ｂの第２のアッセイにおいて示されるように、ｍｉｇｌｙｏｌ脂質キャリア製剤が、レプリコンからのより高いタンパク質産生を誘導したことを実証する。図５Ａ～５Ｂに示されているようにＴＮＦ－α分泌により測定して、自然免疫応答の低減が検出された。

【0145】

次に、ヒトＴＮＦ－α ＤＵＯＳＥＴ（商標）ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、製造業者のプロトコールに従って、ＥＬＩＳＡアッセイを行って、細胞培養培地におけるＴＮＦ－アルファ（α）タンパク質レベルを評価した。９６ウェルマイクロプレートを、抗ＴＮＦα捕捉抗体でコーティングした。プレートをブロッキングし、次いで、培地試料を、希釈なしで直接添加した。ビオチン化検出抗体ＳＡ－ＨＲＰおよび基質の添加後、吸光度を、ＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）ｉ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）プレートリーダーにおいて、４５０ｎｍで読み取った。

【0146】

図５Ａの第１のアッセイおよび図５Ｂの第２のアッセイからの培地におけるＴＮＦ－αタンパク質レベルは、ヒトＴＮＦ－α ＤＵＯＳＥＴ（商標）ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、製造業者のプロトコールに従って決定した。９６ウェルマイクロプレートを抗ＴＮＦ捕捉抗体でコーティングした。プレートをブロッキングし、次いで、培地試料を希釈せずに直接添加した。ビオチン化検出抗体、ＳＡ－ＨＲＰ、および基質の添加後、吸光度を、ＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ（登録商標）ｉ３（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）プレートリーダーにおいて４５０ｎｍで読み取った。図６Ａの第１のアッセイにおいておよび図６Ｂの第２のアッセイにおいて示されるように、タンパク質産生の増強と低ＴＮＦ－α刺激との間の相関が、ｍｉｇｌｙｏｌ脂質キャリア製剤で観察された。ソラネソール脂質キャリア製剤は、わずかに低いタンパク質産生を誘導したが、より多いＴＮＦα産生を誘導した（図６Ａ～６Ｂ）。図６Ａに示されている第１のアッセイからの相関データは、図４Ａおよび図５Ａに表示されているデータから導出されたものである。第２のアッセイからの相関データが図６Ｂに示されており、これは、図４Ｂおよび図５Ｂに表示されているデータから導出されたものである。
（実施例３）
ＮＰ－１の製造および安定性

【0147】

ＮＰ－１の製造。ＮＰ－１粒子は、３７．５ｍｇ／ｍｌのスクアレン（ＳＥＰＰＩＣ）、３７ｍｇ／ｍｌのＳＰＡＮ（登録商標）６０（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ）、３７ｍｇ／ｍｌのＴＷＥＥＮ（登録商標）８０（Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）、３０ｍｇ／ｍｌのＤＯＴＡＰクロリド（ＬＩＰＯＩＤ）、０．２ｍｇ Ｆｅ／ｍｌの１２ｎｍのオレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子（Ｉｍａｇｉｏｎ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）および１０ｍＭのクエン酸ナトリウム二水和物（Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）を含む。クロロホルム中の１ｍｌの２０ｍｇ Ｆｅ／ｍｌの１２ｎｍ直径のオレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子（Ｉｍａｇｉｏｎ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ロット番号９５－１２７）を、４：１のアセトン：クロロホルム（ｖ／ｖ）溶媒混合物中で磁気的に分離することにより３回洗浄した。３回目の洗浄後、揮発性溶媒（アセトンおよびクロロホルム）をドラフト内に放置して完全に蒸発させ、その結果、乾燥オレイン酸酸化鉄ナノ粒子のコーティングが残った。この酸化鉄コーティングに、３．７５グラムのスクアレン、３．７グラムのＳＰＡＮ（登録商標）６０、および３グラムのＤＯＴＡＰを添加して、油相を生成した。油相を４５分間、６５℃の水浴中で超音波処理した。別途、ヌクレアーゼを含まない水中で調製した５００ｍｌの１０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝剤に１９．５グラムのＴＷＥＥＮ（登録商標）８０を溶解することにより水性相を調製した。９２ｍｌの水性相を別のガラスボトルに移し、３０分間、６５℃に加熱した。温かい油相を温かい水性相に添加することにより、油相を９２ｍｌの水性相と混合した。混合物を、ＶＷＲ ２００ホモジナイザー（ＶＷＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を使用して乳化し、得られた粗エマルジョンを、動的光散乱（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ Ｓ）によって測定されるｚ平均流体力学直径が、０．１～０．２５の多分散指数（ＰＤＩ）で、４０～８０ｎｍに達するまで、３０，０００ｐｓｉで、Ｆ１２Ｙ ７５μｍのダイヤモンド相互作用チャンバーおよび補助的なＨ３０Ｚ－２００μｍのセラミック相互作用チャンバーを備えたＭ１１０Ｐマイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ）を通過させることによって処理した。マイクロフルイダイズされたＮＰ－１を、最後に、２００ｎｍの細孔サイズのポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）フィルターで濾過し、摂氏２～８度で貯蔵した。鉄濃度を、誘導結合プラズマ発光分光分析（ＩＣＰ－ＯＥＳ）によって決定した。ＤＯＴＡＰおよびスクアレン濃度を、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）によって測定した。

【0148】

ＮＰ－３の製造。ＮＰ－３粒子は、３７．５ｍｇ／ｍｌのＭｉｇｌｙｏｌ ８１２ Ｎ（ＩＯＩ Ｏｌｅｏ ＧｍｂＨ）、３７ｍｇ／ｍｌのＳＰＡＮ（登録商標）６０（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ）、３７ｍｇ／ｍｌのＴＷＥＥＮ（登録商標）８０（Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）、３０ｍｇ／ｍｌのＤＯＴＡＰクロリド（ＬＩＰＯＩＤ）、０．２ｍｇ Ｆｅ／ｍｌの１５ｎｍのオレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子（Ｉｍａｇｉｏｎ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）および１０ｍＭのクエン酸ナトリウム二水和物（Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）を含む。クロロホルム中の１ｍｌの２０ｍｇ Ｆｅ／ｍｌの１５ｎｍ直径のオレイン酸コーティング酸化鉄ナノ粒子（Ｉｍａｇｉｏｎ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、ロット番号９５－１２７）を、４：１のアセトン：クロロホルム（ｖ／ｖ）溶媒混合物中で磁気的に分離することにより３回洗浄した。３回目の洗浄後、揮発性溶媒（アセトンおよびクロロホルム）をドラフト内で放置して完全に蒸発させ、その結果、乾燥オレイン酸酸化鉄ナノ粒子のコーティングが残った。この酸化鉄コーティングに、３．７５グラムのスクアレン、３．７グラムのＳＰＡＮ（登録商標）６０、および３グラムのＤＯＴＡＰを添加して、油相を生成した。油相を、摂氏６５度の水浴中で４５分間超音波処理した。別途、ヌクレアーゼを含まない水中で調製した５００ｍｌの１０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝剤に１９．５グラムのＴＷＥＥＮ（登録商標）８０を溶解することにより水性相を調製した。９２ｍｌの水性相を別のガラスボトルに移し、３０分間、６５℃に加熱した。温かい油相を温かい水性相に添加することにより、油相を９２ｍｌの水性相と混合した。混合物を、ＶＷＲ ２００ホモジナイザー（ＶＷＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を使用して乳化し、得られた粗エマルジョンを、動的光散乱（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ Ｓ）によって測定されるｚ平均流体力学直径が、０．１～０．３の多分散指数（ＰＤＩ）で、４０～８０ｎｍに達するまで、３０，０００ｐｓｉで、Ｆ１２Ｙ ７５μｍのダイヤモンド相互作用チャンバーおよび補助的なＨ３０Ｚ－２００μｍのセラミック相互作用チャンバーを備えたＭ１１０Ｐマイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ）を通過させることによって処理した。マイクロフルイダイズされたＮＰ－１を、最後に、２００ｎｍの細孔サイズのポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）フィルターで濾過し、２～８℃で貯蔵した。鉄濃度を、ＩＣＰ－ＯＥＳによって決定した。ＤＯＴＡＰ濃度を、ＲＰ－ＨＰＬＣによって測定した。

【0149】

ＮＰ－３０の製造。コア内に無機コア粒子を備えていない脂質キャリアであって、３７．５ｍｇ／ｍｌのスクアレン（ＳＥＰＰＩＣ）、３７ｍｇ／ｍｌのＳＰＡＮ（登録商標）６０（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ）、３７ｍｇ／ｍｌのＴＷＥＥＮ（登録商標）８０（Ｆｉｓｈｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）、３０ｍｇ／ｍｌのＤＯＴＡＰクロリド（ＬＩＰＯＩＤ）および１０ｍＭのクエン酸ナトリウムを有する、脂質キャリアを生成した。２００ｍｌビーカーに、３．７５グラムのスクアレン、３．７グラムのＳＰＡＮ（登録商標）６０、および３．０グラムのＤＯＴＡＰを添加して、油相を生成した。油相を４５分間、摂氏６５度の水浴中で超音波処理した。別途、ヌクレアーゼフリー水中で調製した５００ｍｌの１０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝剤に１９．５グラムのＴＷＥＥＮ（登録商標）８０を溶解することにより水性相を調製した。９６ｍｌの水性相を別のガラスボトルに移し、３０分間、摂氏６５度に加熱した。温かい油相を温かい水性相に添加することにより、油相を９６ｍｌの水性相と混合した。混合物を、ＶＷＲ ２００ホモジナイザー（ＶＷＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を使用して乳化し、得られた粗エマルジョンを、動的光散乱（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ Ｓ）によって測定されるｚ平均流体力学直径が、０．１～０．３の多分散指数（ＰＤＩ）で、４０～８０ｎｍに達するまで、３０，０００ｐｓｉで、Ｆ１２Ｙ ７５μｍのダイヤモンド相互作用チャンバーおよび補助的なＨ３０Ｚ－２００μｍのセラミック相互作用チャンバーを備えたＭ１１０Ｐマイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ）を通過させることによって処理した。無機コア製剤を有さない、マイクロフルイダイズされたＮＰ－３０を、最後に、２００ｎｍ細孔サイズのポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）フィルターで濾過し、摂氏２～８度で貯蔵した。ＤＯＴＡＰおよびスクアレン濃度を、ＲＰ－ＨＰＬＣにより測定した。

【0150】

安定性。ＮＰ－１によるナノ粒子を指示温度の安定性チャンバーに入れた。動的光散乱を使用する粒径測定により安定性を決定した。結果は、ＮＰ－１製剤が、摂氏４、２５および４２度で貯蔵されたときに安定したコロイドを形成したことを示す。時間測定を４週間にわたって行った。ナノ粒子サイズの範囲は、直径約５０～１００ｎｍであり、摂氏４および２５度条件については時間が経つにつれて直径４０～６０ｎｍに、より近くなった。
（実施例４）
追加のナノ粒子製剤
追加のナノ粒子製剤を、以下の表（表４および表５）に従って生成する。ｍＲＮＡは、インフルエンザウイルス抗原またはＶＺＶウイルス抗原をコードする配列（配列番号３～５、および３８～４３、４７）を含む。

【表4】

【表5】

（実施例５）
自己複製ｍＲＮＡ構築物
Ｔ７プロモーターと、それに続くベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）株ＴＣ－８３の５’および３’ＵＴＲならびに非構造遺伝子をコードするプラスミドを、標準的なＤＮＡ合成およびクローニング法を使用して生成した。ＶＥＥＶレプリコンｍＲＮＡ骨格を、配列番号３４に示す。
（実施例６）
水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）ＲＮＡワクチン組成物

【0151】

糖タンパク質Ｅ（ｇＥ）と糖タンパク質Ｉ（ｇＩ）のさまざまな組合せをコードする水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）に対する自己複製（ｒｅｐＲＮＡ）ワクチンのために６つの構築物を設計した。下流ｇＥの共発現を調整するためにＴｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ（Ｔ２Ａ）リボソームスキッピングペプチドまたは内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）のどちらかを含むように、ＶＺＶ ｇＩを設計した。それぞれの自己複製ＲＮＡ構築物を表６に要約し、図７Ａに示す。

【表6】

【0152】

送達媒体としてリポフェクタミン２０００を使用して、４マイクログラム（μｇ）のそれぞれの対応するＲＮＡをベビーハムスター腎臓上皮細胞（ＢＨＫ）にトランスフェクトした。細胞溶解物および細胞上清をウェスタンブロットによって試験し、１：２０００希釈の抗ＶＺＶ－ｇＥ抗体を用いて探索した（図７Ｂ）。分泌型ｇＥ、ＶＺＶ－ＦＬ－ｇＥ、およびＶＺＶ－Ｎ末端ｔｒｕｎｃ ｇＥをトランスフェクトしたＢＨＫからの上清は、抗ＶＺＶ－ｇＥ抗体を発現した。

【0153】

６週齢雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（群当たりｎ＝５匹のマウス）を、水痘・帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）抗原をコードする１０μｇのｒｅｐＲＮＡを後肢に筋肉内投与することにより免疫した（表６、図７Ａ）。ワクチン接種の１４日後に血清を採取した。加えて、膜貫通配列を有さないｇＥをコードする、したがって可溶性ｇＥのみということになる、ｒｅｐＲＮＡを含有する陽性対照で、マウスを免疫化した。ワクチン接種後に可溶性ＶＺＶ ｇＥに対する血清抗体力価をＥＬＩＳＡによって測定した（図７Ｃ）。Ｎ末端短縮型であるｇＥ（ＶＺＶ－Ｎ末端ｔｒｕｎｃ ｇＥ）をコードするＲＮＡで処置したマウスは、対照マウスまたは全長ｇＥで免疫したものと比較して抗体力価の上昇を生じさせた。
配列

【0154】

以下の配列（配列番号３８～４３）は、次のようにベクター骨格および抗原オープンリーディングフレームを示すように書式設定されている：小文字は、ベクター骨格配列を示し、大文字は、ＶＺＶ抗原オープンリーディングフレームを示す。

【化1-1】

【化1-2】

【化1-3】

【化1-4】

【化1-5】

【化1-6】

【化1-7】

【化1-8】

【化1-9】

【化1-10】

【化1-11】

【化1-12】

【化1-13】

【化1-14】

【化1-15】

【化1-16】

【化1-17】

【化1-18】

【化1-19】

【0155】

以下の配列（配列番号４４～４７）は、次のようにベクター骨格および抗原オープンリーディングフレームを示すように書式設定されている：小文字は、ＶＥＥＶレプリコン骨格配列を示し、大文字は、抗原オープンリーディングフレームを示す。

【化2-1】

【化2-2】

【化2-3】

【化2-4】

【化2-5】

【化2-6】

【化2-7】

【化2-8】

【化2-9】

【化2-10】

【化2-11】

【化2-12】

【0156】

本開示の好ましい実施形態を本明細書で示し、説明したが、このような実施形態を単なる例として提供することは当業者には明らかであろう。本開示から逸脱することなく、非常に多くの変形形態、変更形態および置換形態が、今や当業者の心に浮かぶことであろう。本明細書に記載する本開示の実施形態のさまざまな代替形態を、本開示の実施の際に利用することができることは、理解されるはずである。下記の請求項により本開示の範囲が定義されること、およびこれらの請求項の範囲内の方法および構造ならびにそれらの均等物がそれによってカバーされることを意図している。

【図1-1】

【図1-2】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【配列表】

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【国際調査報告】