特表 2024-535740 ＣＤ３３を標的とする抗原認識受容体及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-02

(54)【発明の名称】ＣＤ３３を標的とする抗原認識受容体及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 19/00 20060101AFI20240925BHJP

   C12N 5/16 20060101ALI20240925BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240925BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240925BHJP

   C12N 15/867 20060101ALI20240925BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240925BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240925BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240925BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240925BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20240925BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240925BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240925BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240925BHJP

   A61K 35/545 20150101ALI20240925BHJP

   A61K 9/51 20060101ALI20240925BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240925BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20240925BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20240925BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240925BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240925BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20240925BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20240925BHJP

   C12N 5/078 20100101ALN20240925BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240925BHJP

   A61K 47/18 20170101ALN20240925BHJP

   A61K 47/24 20060101ALN20240925BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00 ZNA

C12N5/16

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N15/867 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12N5/0783

A61P35/00

A61P11/00

A61K35/17

A61K35/545

A61K9/51

A61P35/02

A61P7/00

A61K31/7088

A61K48/00

A61K39/395 T

A61K39/395 N

C07K16/28

C07K14/705

C12N5/078

C12N15/13

A61K47/18

A61K47/24

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024513936

(86)(22)【出願日】2022-09-02

(85)【翻訳文提出日】2024-04-30

(86)【国際出願番号】 US2022042444

(87)【国際公開番号】W WO2023034560

(87)【国際公開日】2023-03-09

(31)【優先権主張番号】63/240,196

(32)【優先日】2021-09-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/306,395

(32)【優先日】2022-02-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】500213834

【氏名又は名称】メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター

(71)【出願人】

【識別番号】399026731

【氏名又は名称】スローン － ケタリング・インスティテュート・フォー・キャンサー・リサーチ

(71)【出願人】

【識別番号】522023761

【氏名又は名称】メモリアル ホスピタル フォー キャンサー アンド アライド ディジージズ

(71)【出願人】

【識別番号】522099135

【氏名又は名称】トライ－インスティテューショナル セラピューティクス ディスカバリー インスティテュート， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ダニヤン， アンソニー

(72)【発明者】

【氏名】ブレントジェンズ， レニアー ジェイ．

(72)【発明者】

【氏名】ロレンツ， イボ シー．

(72)【発明者】

【氏名】カーン， アブドゥル

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA94X

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065BC01

4B065CA24

4B065CA44

4C076AA65

4C076AA95

4C076BB11

4C076CC14

4C076CC15

4C076CC27

4C076DD49

4C076DD63

4C076FF70

4C084AA13

4C084MA38

4C084MA66

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZA51

4C084ZA59

4C084ZB26

4C084ZB27

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB31

4C085BB41

4C085CC23

4C085EE01

4C085GG01

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA05

4C086MA38

4C086MA66

4C086NA13

4C086NA14

4C086ZA51

4C086ZA59

4C086ZB26

4C086ZB27

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087BB61

4C087BB65

4C087MA38

4C087MA66

4C087NA13

4C087NA14

4C087ZA51

4C087ZA59

4C087ZB26

4C087ZB27

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA50

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本明細書に開示される主題は、ＣＤ３３を特異的に標的とする抗原認識受容体、及びそのようなＣＤ３３標的化抗原認識受容体を含む細胞を提供する。本明細書に開示される主題は、治療のためのＣＤ３３標的化抗原認識受容体の使用を更に提供する。本明細書に開示される主題は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、抗原認識受容体を提供し、細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３に特異的に結合する。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。
【選択図】図１Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、抗原認識受容体であって、前記細胞外抗原結合ドメインが、ＣＤ３３に特異的に結合し、前記細胞外抗原結合ドメインが、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、
（ａ）配列番号２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号２２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｅ）配列番号３７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号３９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｆ）配列番号４７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｇ）配列番号５６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号５８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｈ）配列番号６６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号６８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｉ）配列番号７６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、又は
（ｊ）配列番号８５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号８６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号８７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含む、抗原認識受容体。

【請求項2】

前記細胞外抗原結合ドメインが、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項１に記載の抗原認識受容体。

【請求項3】

前記細胞外抗原結合ドメインが、ヒトｓｃＦｖである、請求項２に記載の抗原認識受容体。

【請求項4】

前記細胞外抗原結合ドメインが、任意選択で架橋されるＦａｂである、請求項１に記載の抗原認識受容体。

【請求項5】

前記細胞外抗原結合ドメインが、Ｆ（ａｂ）_２である、請求項１に記載の抗原認識受容体。

【請求項6】

前記ｓｃＦｖ、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ）_２のうちの１つ以上が、異種配列を有する融合タンパク質中に含まれて、前記細胞外抗原結合ドメインを形成する、請求項２～５のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項7】

前記重鎖可変領域が、
（ａ）配列番号２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、又は
（ｃ）配列番号２２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項8】

前記軽鎖可変領域が、
（ａ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号２５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号４０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号４１若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｅ）配列番号４９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号５１に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｆ）配列番号５９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号６１に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｇ）配列番号６９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号７０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７１に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｈ）配列番号７８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号７９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号８０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、又は
（ｉ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項9】

前記軽鎖可変領域が、
（ａ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、又は
（ｃ）配列番号２５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項10】

（ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｂ）前記重鎖可変領域が、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｃ）前記重鎖可変領域が、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｄ）前記重鎖可変領域が、配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｅ）前記重鎖可変領域が、配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｆ）前記重鎖可変領域が、配列番号４７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号４９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号５１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｇ）前記重鎖可変領域が、配列番号５６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号５８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号５９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｈ）前記重鎖可変領域が、配列番号６６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号６９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｉ）前記重鎖可変領域が、配列番号７６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、又は
（ｊ）前記重鎖可変領域が、配列番号８５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項11】

（ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｂ）前記重鎖可変領域が、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、又は
（ｃ）前記重鎖可変領域が、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項12】

前記重鎖可変領域が、配列番号８、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３５、配列番号４３、配列番号５２、配列番号６２、配列番号７２、配列番号８１、又は配列番号８８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項13】

前記重鎖可変領域が、配列番号８、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３５、配列番号４３、配列番号５２、配列番号６２、配列番号７２、配列番号８１、又は配列番号８８に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項14】

前記重鎖可変領域が、配列番号８、配列番号１８、又は配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項15】

前記軽鎖可変領域が、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号４４、配列番号５３、配列番号６３、配列番号７３、配列番号８２、配列番号８９、又は配列番号９２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項16】

前記軽鎖可変領域が、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号４４、配列番号５３、配列番号６３、配列番号７３、配列番号８２、配列番号８９、又は配列番号９２に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項17】

前記軽鎖可変領域が、配列番号９、配列番号１９、又は配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項18】

（ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号８、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３５、配列番号４３、配列番号５２、配列番号６２、配列番号７２、配列番号８１、又は配列番号８８に記載される選択されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）前記軽鎖可変領域が、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号４４、配列番号５３、配列番号６３、配列番号７３、配列番号８２、配列番号８９、又は配列番号９２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項19】

（ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号８、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３５、配列番号４３、配列番号５２、配列番号６２、配列番号７２、配列番号８１、又は配列番号８８に記載されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）前記軽鎖可変領域が、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号４４、配列番号５３、配列番号６３、配列番号７３、配列番号８２、配列番号８９、又は配列番号９２に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項20】

（ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号８、配列番号１８、又は配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）前記軽鎖可変領域が、配列番号９、配列番号１９、又は配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項21】

（ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）前記重鎖可変領域が、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｃ）前記重鎖可変領域が、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｄ）前記重鎖可変領域が、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｅ）前記重鎖可変領域が、配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号４４に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｆ）前記重鎖可変領域が、配列番号５２に記載されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｇ）前記重鎖可変領域が、配列番号６２に記載されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号６３に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｈ）前記重鎖可変領域が、配列番号７２に記載されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｉ）前記重鎖可変領域が、配列番号８１に記載されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８２に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｊ）前記重鎖可変領域が、配列番号８８に記載されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号８９に記載されるアミノ酸配列を含むか、又は
（ｋ）前記重鎖可変領域が、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号９３に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項22】

（ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）前記重鎖可変領域が、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むか、又は
（ｃ）前記重鎖可変領域が、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項23】

前記細胞外抗原結合ドメインが、前記重鎖可変領域と前記軽鎖可変領域との間のリンカーを含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項24】

前記リンカーが、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、又は配列番号１００に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる、請求項２３に記載の抗原認識受容体。

【請求項25】

シグナルペプチドが、前記細胞外抗原結合ドメインの５’末端に共有結合される、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項26】

前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＰＤ－１ポリペプチド、ＬＡＧ－３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項27】

前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζポリペプチドを含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項28】

前記細胞内シグナル伝達ドメインが、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域を更に含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項29】

前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域が、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ－１０ポリペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、請求項２８に記載の抗原認識受容体。

【請求項30】

前記抗原認識受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、又はＴ細胞様融合タンパク質である、請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項31】

前記抗原認識受容体が、ＣＡＲである、請求項１～３０のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項32】

前記抗原認識受容体が、組換え発現される、請求項１～３１のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項33】

前記抗原認識受容体が、ベクターから発現される、請求項１～３２のいずれか一項に記載の抗原認識受容体。

【請求項34】

前記ベクターが、γ－レトロウイルスベクターである、請求項３３に記載の抗原認識受容体。

【請求項35】

請求項１～３４のいずれか一項に記載の抗原認識受容体を含む、細胞。

【請求項36】

前記細胞が、前記抗原認識受容体を形質導入されている、請求項３５に記載の細胞。

【請求項37】

前記抗原認識受容体が、前記細胞の表面上に構成的に発現される、請求項３５又は３６に記載の細胞。

【請求項38】

前記細胞が、免疫応答性細胞である、請求項３５～３７のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項39】

前記細胞が、リンパ系の細胞又は骨髄系の細胞である、請求項３５～３８のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項40】

前記細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及びリンパ球細胞が分化し得る幹細胞からなる群から選択される、請求項３５～３９のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項41】

前記細胞が、Ｔ細胞である、請求項３５～４０のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項42】

前記Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）又は制御性Ｔ細胞である、請求項４０又は４１に記載の細胞。

【請求項43】

前記幹細胞が、多能性幹細胞である、請求項４２に記載の細胞。

【請求項44】

前記多能性幹細胞が、胚様幹細胞又は誘導多能性幹細胞である、請求項４３に記載の細胞。

【請求項45】

請求項１～３４のいずれか一項に記載の抗原認識受容体をコードする、核酸。

【請求項46】

請求項４５に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項47】

前記ベクターが、γ－レトロウイルスベクターである、請求項４６に記載のベクター。

【請求項48】

請求項４５に記載の核酸を発現する、宿主細胞。

【請求項49】

前記宿主細胞が、Ｔ細胞である、請求項４８に記載の宿主細胞。

【請求項50】

請求項３５～４４のいずれか一項に記載の細胞を含む、組成物。

【請求項51】

薬学的に許容される担体を更に含む医薬組成物である、請求項５０に記載の組成物。

【請求項52】

請求項４５に記載の核酸を含む、脂質ナノ粒子。

【請求項53】

請求項５２に記載の脂質ナノ粒子を含む、組成物。

【請求項54】

薬学的に許容される担体を更に含む医薬組成物である、請求項５３に記載の組成物。

【請求項55】

対象において疾患又は障害を治療又は改善する方法であって、前記対象に、請求項３５～４４のいずれか一項に記載の細胞、又は請求項５０、５１、５３若しくは５４のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【請求項56】

前記疾患又は障害が、腫瘍である、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

対象において腫瘍負荷を低減させる方法であって、前記対象に、請求項３５～４４のいずれか一項に記載の細胞、又は請求項５０、５１、５３若しくは５４のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【請求項58】

前記方法が、前記対象において、腫瘍細胞の数を低減させ、腫瘍サイズを低減させ、かつ／又は腫瘍を根絶する、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

対象において腫瘍を治療及び／又は予防する方法であって、前記対象に、請求項３５～４４のいずれか一項に記載の細胞、又は請求項５０、５１、５３若しくは５４のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【請求項60】

腫瘍を有する対象の生存時間を増加又は延長する方法であって、前記対象に、請求項３５～４４のいずれか一項に記載の細胞、又は請求項５０、５１、５３若しくは５４のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【請求項61】

前記方法が、前記対象において腫瘍負荷を低減させるか、又は根絶する、請求項６０に記載の方法。

【請求項62】

前記腫瘍が、がんである、請求項５６～６１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項63】

前記腫瘍が、血液がん又は固形組織がんである、請求項５６～６２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項64】

前記腫瘍が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）、及び慢性骨髄性腫瘍からなる群から選択される、請求項５６～６３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

前記腫瘍が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

前記対象が、ヒトである、請求項５５～６５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項67】

対象において疾患若しくは障害を治療若しくは改善するため、対象において腫瘍負荷を低減させるため、対象において腫瘍を治療及び／若しくは予防するため、並びに／又は腫瘍を有する対象の生存時間を増加若しくは延長するための、キットであって、請求項３５～４４のいずれか一項に記載の細胞、請求項４５に記載の核酸、請求項５２に記載の脂質ナノ粒子、又は請求項５０、５１、５３若しくは５４のいずれか一項に記載の組成物を含む、キット。

【請求項68】

前記キットが、対象において疾患若しくは障害を治療若しくは改善するため、対象において腫瘍負荷を低減させるため、対象において腫瘍を治療及び／若しくは予防するため、並びに／又は腫瘍を有する対象の生存時間を増加若しくは延長するために、前記細胞又は組成物を使用するための、書面による説明書を更に含む、請求項６７に記載のキット。

【請求項69】

前記細胞内に、前記抗原認識受容体をコードする核酸を導入することを含む、請求項１～３４のいずれか一項に記載のＣＤ３３標的化抗原認識受容体を生成するための方法。

【請求項70】

対象において疾患又は障害を治療又は改善することにおける使用のための、請求項３５～４４のいずれか一項に記載の細胞、又は請求項５０、５１、５３若しくは５４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項71】

前記疾患又は障害が、腫瘍である、請求項７０に記載の使用のための細胞又は組成物。

【請求項72】

前記腫瘍が、がんである、請求項７１に記載の使用のための細胞又は組成物。

【請求項73】

前記疾患又は障害が、肺の神経内分泌腫瘍、肺外神経内分泌がん、黒色腫、神経内分泌前立腺がん、乳がん、胃腸管の神経内分泌腫瘍、膵がん、甲状腺髄様がん、小細胞膀胱がん、卵巣小細胞がん、低悪性度神経膠腫、膠芽腫、及び神経芽腫からなる群から選択される、請求項７０～７２のいずれか一項に記載の使用のための細胞又は組成物。

【請求項74】

前記肺の前記神経内分泌腫瘍が、肺神経内分泌がん、大細胞神経内分泌がん、及び小細胞肺がんからなる群から選択される、請求項７３に記載の使用のための細胞又は組成物。

【請求項75】

前記腫瘍が、小細胞肺がんである、請求項７４に記載の使用のための細胞又は組成物。

【請求項76】

前記対象が、ヒトである、請求項７０～７５のいずれか一項に記載の使用のための細胞又は組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２２年２月２日に出願された米国仮特許出願第６３／３０６，３９５号、及び２０２１年９月２日に出願された米国仮特許出願第６３／２４０，１９６号の優先権を主張し、これらの内容は、それらの全体が参照により組み込まれ、それに対する優先権が主張される。

【0002】

配列表
本出願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２２年８月３１日に作成された当該配列表は、０７２７３４１３８７．ｘｍｌという名称であり、１６４，０３６バイトのサイズである。

【0003】

１．導入
本明細書に開示される主題は、免疫療法のための方法及び組成物を提供する。これは、ＣＤ３３を特異的に標的とする抗原認識受容体（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ））、そのような受容体を含む細胞、及び治療のためにそのような細胞を使用する方法に関する。

【背景技術】

【0004】

２．本発明の背景
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、米国において最も一般的かつ最も致死的な形態の急性白血病である。過去４０年間、標準治療は化学療法であったが、近年、ＣＤ３３抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）及び標的化された低分子がその一式に追加された。これらの新しい追加にもかかわらず、ＡＭＬは、５年生存率が３０％未満の深刻な疾患であり続けている。したがって、新規のＡＭＬ介入に対する重要な必要性が存在している。

【0005】

過去１０年間で、ＣＡＲ Ｔ細胞は、免疫療法の最も強力な形態の１つとして出現した。多くのグループが、ＣＤ３３の標的化を介してＡＭＬの治療にこの技術を展開しているが、１つの主要な障害である、患者集団内及び患者集団間のこの抗原の不均一な密度が残っている。これは、ＣＡＲ Ｔ細胞の有効性が抗原密度と相関し、抗原表面発現の完全な喪失ではなく、低減がＣＡＲ Ｔ細胞の免疫回避の機構であることが示されているため、非常に重要なものである。これを克服するために、膜近位エピトープ標的化が、ＣＡＲ Ｔ細胞の有効性を強化する戦略として浮上し、全体的なＣＡＲ Ｔ細胞の効力、及び低抗原密度バリアントを認識するエフェクター細胞の能力を増加させることをもたらした。結果として、ＣＤ３３の膜近位エピトープを標的とするＣＡＲ Ｔ細胞を開発することは、現在知られている全ての抗体の標的である膜遠位ドメインを欠き得るスプライスバリアントを含む様々なＣＤ３３発現を伴う疾患の強化された排除を可能にするであろう。

【発明の概要】

【0006】

３．本発明の概要
本明細書に開示される主題は、ＣＤ３３を特異的に標的とする抗原認識受容体、及びそのようなＣＤ３３標的化抗原認識受容体を含む細胞を提供する。本明細書に開示される主題は、治療のためのＣＤ３３標的化抗原認識受容体の使用を更に提供する。

【0007】

本明細書に開示される主題は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、抗原認識受容体を提供し、細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３に特異的に結合する。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。特定の実施形態では、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ヒトｓｃＦｖである。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、任意選択で架橋されるＦａｂである。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、Ｆ（ａｂ）_２である。特定の実施形態では、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ）_２のうちの１つ以上は、異種配列を有する融合タンパク質中に含まれて、細胞外抗原結合ドメインを形成する。

【0008】

特定の実施形態では、重鎖可変領域は、
（ａ）配列番号２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号２２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｅ）配列番号３７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号３９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｆ）配列番号４７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｇ）配列番号５６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号５８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｈ）配列番号６６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号６８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｉ）配列番号７６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、又は
（ｊ）配列番号８５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号８６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号８７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含む。

【0009】

特定の実施形態では、重鎖可変領域は、
（ａ）配列番号２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、又は
（ｃ）配列番号２２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含む。

【0010】

特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、
（ａ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号２５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号４０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号４１若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｅ）配列番号４９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号５１に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｆ）配列番号５９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号６１に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｇ）配列番号６９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号７０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７１に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｈ）配列番号７８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号７９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号８０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、又は
（ｉ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含む。

【0011】

特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、
（ａ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号２５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含む。

【0012】

特定の実施形態では、
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｂ）重鎖可変領域が、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｃ）重鎖可変領域が、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｄ）重鎖可変領域が、配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｅ）重鎖可変領域が、配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｆ）重鎖可変領域が、配列番号４７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号４９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号５１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｇ）重鎖可変領域が、配列番号５６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号５８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号５９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｈ）重鎖可変領域が、配列番号６６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号６９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｉ）重鎖可変領域が、配列番号７６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号７８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、又は
（ｊ）重鎖可変領域が、配列番号８５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0013】

特定の実施形態では、
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｂ）重鎖可変領域が、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、又は
（ｃ）重鎖可変領域が、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0014】

特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号８、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３５、配列番号４３、配列番号５２、配列番号６２、配列番号７２、配列番号８１、又は配列番号８８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号８、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３５、配列番号４３、配列番号５２、配列番号６２、配列番号７２、配列番号８１、又は配列番号８８に記載されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号８、配列番号１８、又は配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0015】

特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号４４、配列番号５３、配列番号６３、配列番号７３、配列番号８２、配列番号８９、又は配列番号９２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号４４、配列番号５３、配列番号６３、配列番号７３、配列番号８２、配列番号８９、又は配列番号９２に記載されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号９、配列番号１９、又は配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0016】

特定の実施形態では、（ａ）重鎖可変領域は、配列番号８、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３５、配列番号４３、配列番号５２、配列番号６２、配列番号７２、配列番号８１、又は配列番号８８に記載される選択されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含み、（ｂ）軽鎖可変領域は、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号４４、配列番号５３、配列番号６３、配列番号７３、配列番号８２、配列番号８９、又は配列番号９２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む。

【0017】

特定の実施形態では、（ａ）重鎖可変領域は、配列番号８、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３５、配列番号４３、配列番号５２、配列番号６２、配列番号７２、配列番号８１、又は配列番号８８に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｂ）軽鎖可変領域は、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号４４、配列番号５３、配列番号６３、配列番号７３、配列番号８２、配列番号８９、又は配列番号９２に記載されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、（ａ）重鎖可変領域は、配列番号８、配列番号１８、又は配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｂ）軽鎖可変領域は、配列番号９、配列番号１９、又は配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0018】

特定の実施形態では、
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）重鎖可変領域が、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｃ）重鎖可変領域が、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｄ）重鎖可変領域が、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｅ）重鎖可変領域が、配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号４４に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｆ）重鎖可変領域が、配列番号５２に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｇ）重鎖可変領域が、配列番号６２に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号６３に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｈ）重鎖可変領域が、配列番号７２に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｉ）重鎖可変領域が、配列番号８１に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８２に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｊ）重鎖可変領域が、配列番号８８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８９に記載されるアミノ酸配列を含むか、又は
（ｋ）重鎖可変領域が、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号９３に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0019】

特定の実施形態では、
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）重鎖可変領域が、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むか、又は
（ｃ）重鎖可変領域が、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0020】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーを含む。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、又は配列番号１００に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる。特定の実施形態では、シグナルペプチドは、細胞外抗原結合ドメインの５’末端に共有結合される。

【0021】

特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＰＤ－１ポリペプチド、ＬＡＧ－３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、又はそれらの組み合わせを含む。

【0022】

特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζポリペプチドを含む。特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域を更に含む。特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域は、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ－１０ポリペプチド、又はそれらの組み合わせを含む。

【0023】

特定の実施形態では、抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、又はＴ細胞様融合タンパク質である。特定の実施形態では、抗原認識受容体は、ＣＡＲである。

【0024】

特定の実施形態では、抗原認識受容体は、組換え発現される。特定の実施形態では、抗原認識受容体は、ベクターから発現される。特定の実施形態では、ベクターは、γ－レトロウイルスベクターである。

【0025】

本明細書に開示される主題は、細胞が本明細書に開示される抗原認識受容体を含むことを提供する。特定の実施形態では、細胞は、抗原認識受容体を形質導入されている。特定の実施形態では、抗原認識受容体は、細胞の表面上に構成的に発現される。

【0026】

特定の実施形態では、細胞は、免疫応答性細胞である。特定の実施形態では、細胞は、リンパ系の細胞又は骨髄系の細胞である。特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及びリンパ球細胞が分化し得る幹細胞からなる群から選択される。特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）又は制御性Ｔ細胞である。特定の実施形態では、幹細胞は、多能性幹細胞である。特定の実施形態では、多能性幹細胞は、胚様幹細胞又は誘導多能性幹細胞である。

【0027】

本明細書に開示される主題は、本明細書に開示される抗原認識受容体をコードする核酸を更に提供する。本明細書に開示される主題は、本明細書に開示される核酸分子を含むベクターを更に提供する。特定の実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。特定の実施形態では、ベクターは、γ－レトロウイルスベクターである。

【0028】

加えて、本明細書に開示される主題は、本明細書に開示される核酸分子を発現する宿主細胞を提供する。特定の実施形態では、宿主細胞は、Ｔ細胞である。

【0029】

本明細書に開示される主題は、本明細書に開示される細胞を含む組成物を更に提供する。特定の実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体を更に含む医薬組成物である。

【0030】

本明細書に開示される主題はまた、本明細書に開示される核酸を含む脂質ナノ粒子を提供する。また、本明細書に開示される主題は、本明細書に開示される脂質ナノ粒子を含む組成物を提供する。特定の実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体を更に含む医薬組成物である。

【0031】

本明細書に開示される主題は、対象において疾患又は障害を治療又は改善する方法を更に提供する。特定の実施形態では、方法は、本明細書に開示される細胞、又は組成物を対象に投与することを含む。

【0032】

本明細書に開示される主題はまた、対象において腫瘍負荷を低減させる方法を提供する。特定の実施形態では、方法は、本明細書に開示される細胞、又は組成物を対象に投与することを含む。特定の実施形態では、方法は、対象において腫瘍細胞の数を低減させ、腫瘍サイズを低減させ、かつ／又は腫瘍を根絶する。

【0033】

本明細書に開示される主題は、対象において腫瘍を治療及び／又は予防する方法を提供する。特定の実施形態では、方法は、本明細書に開示される細胞、又は組成物を対象に投与することを含む。本明細書に開示される主題は、腫瘍を有する対象の生存時間を増加又は延長する方法を提供する。特定の実施形態では、方法は、本明細書に開示される細胞、又は組成物を対象に投与することを含む。特定の実施形態では、方法は、対象において腫瘍負荷を低減させるか、又は根絶する。

【0034】

特定の実施形態では、疾患又は障害は、腫瘍である。特定の実施形態では、腫瘍は、血液がん又は固形組織がんである。特定の実施形態では、腫瘍は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）、及び慢性骨髄性腫瘍からなる群から選択される。特定の実施形態では、腫瘍は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。特定の実施形態では、対象は、ヒトである。

【0035】

本明細書に開示される主題は、対象において疾患若しくは障害を治療若しくは改善するため、対象において腫瘍負荷を低減させるため、対象において腫瘍を治療及び／若しくは予防するため、並びに／又は腫瘍を有する対象の生存時間を増加若しくは延長するための、キットであって、本明細書に開示される細胞、核酸、又は組成物を含む、キットを更に提供する。特定の実施形態では、キットは、対象において疾患若しくは障害を治療若しくは改善するため、対象において腫瘍負荷を低減させるため、対象において腫瘍を治療及び／若しくは予防するため、並びに／又は腫瘍を有する対象の生存時間を増加若しくは延長するために、本明細書に開示される細胞若しくは組成物を使用するための、書面による説明書を更に含む。

【0036】

加えて、本明細書に開示される主題は、細胞内に、抗原認識受容体をコードする核酸を導入することを含む、ＣＤ３３標的化抗原認識受容体を産生する方法を提供する。

【0037】

最後に、本明細書に開示される主題は、対象において疾患又は障害を治療又は改善することにおける使用のための、本明細書に開示される細胞又は組成物を提供する。特定の実施形態では、疾患又は障害は、腫瘍である。特定の実施形態では、腫瘍は、がんである。特定の実施形態では、疾患又は障害は、肺の神経内分泌腫瘍、肺外神経内分泌がん、黒色腫、神経内分泌前立腺がん、乳がん、胃腸管の神経内分泌腫瘍、膵がん、甲状腺髄様がん、小細胞膀胱がん、卵巣小細胞がん、低悪性度神経膠腫、膠芽腫、及び神経芽腫からなる群から選択される。特定の実施形態では、肺の神経内分泌腫瘍は、肺神経内分泌がん、大細胞神経内分泌がん、及び小細胞肺がんからなる群から選択される。特定の実施形態では、腫瘍は、小細胞肺がんである。特定の実施形態では、対象は、ヒトである。

【0038】

４．図面の簡単な説明
以下の詳細な説明は、例として与えられるが、本発明を記載される特定の実施形態に限定することを意図するものではなく、添付の図面と併せて理解され得る。

【図面の簡単な説明】

【0039】

【図1A】ＣＤ３３ドメイン構造を示す。細胞外領域における２つのＩｇ様ドメイン（ＩｇＶ及びＩｇＣ２）、単一の膜貫通セグメント、細胞質領域における免疫受容体チロシンベースの抑制性モチーフ（ＩＴＩＭ）及びＩＴＩＭ様モチーフを有する全長ＣＤ３３（ＣＤ３３Ｍ）を示す。一般的なＣＤ３３バリアント（ＣＤ３３ｍ）では、ＩｇＶドメインは、選択的スプライシングのために欠損している。

【図1B】ＣＤ３３ドメイン構造を示す。選択的スプライシングを有する及び有しない、ＣＤ３３遺伝子構造を示す。エクソン２の除去は、ＩｇＶドメインの喪失をもたらす。様々なフォーマット（ＣＡＲ、ＢｉＴＥ、放射線療法）で臨床に進行したいくつかの抗体は、ＩｇＶドメインを標的とする。「ＧＯ」は、ゲムツズマブオゾガマイシンを表す。

【図2】本明細書に開示される主題による、例示的なＣＤ３３標的化ＣＡＲの構造を示す。ＣＤ３３標的化ＣＡＲは、切断ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）、抗ＣＤ３３ ｓｃＦｖ、Ｍｙｃタグ、ＣＤ２８ポリペプチドを含む膜貫通ドメイン、並びにＣＤ３ζポリペプチド、及びＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。Ｔ２Ａは、切断部位である。

【図3-1】抗Ｍｙｃタグ抗体によって検出された各構築物の形質導入効率及びＣＡＲ表面発現を示す形質導入ＰＢＭＣの表面発現レベル及びフローサイトメトリー分析を示す。

【図3-2】抗Ｍｙｃタグ抗体によって検出された各構築物の形質導入効率及びＣＡＲ表面発現を示す形質導入ＰＢＭＣの表面発現レベル及びフローサイトメトリー分析を示す。

【図4A】膜近位ＣＡＲの細胞傷害性を示す。Ｈ１９５参照ＣＡＲとともに３Ｐ１４及び４Ｂ２を、Ｕ９３７細胞株上でＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌ（ＨＬ）又はＶ_Ｌ－Ｖ_Ｈ（ＬＨ）配向で各抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を用いて試験したことを示す。

【図4B】膜近位ＣＡＲの細胞傷害性を示す。Ｈ１９５参照ＣＡＲとともに３Ｐ１４及び４Ｂ２を、ＯＣｉ－ＡＭＬ３細胞株上で試験したことを示す。

【図5A】膜遠位ＣＡＲの細胞傷害性を示す。ドナー２からの細胞を使用して、ＣＤ３３ ＩｇＶドメイン内の膜遠位エピトープを標的とする５つの抗体から生成されたＣＡＲ Ｔ細胞によるＵ９３７細胞のインビトロ殺傷を示す。

【図5B】膜遠位ＣＡＲの細胞傷害性を示す。ドナー３からの細胞を使用して、ＣＤ３３ ＩｇＶドメイン内の膜遠位エピトープを標的とする５つの抗体から生成されたＣＡＲ Ｔ細胞によるＵ９３７細胞のインビトロ殺傷を示す。

【図6A】ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲのインビトロ細胞傷害性を示す。Ａ～Ｃは、示されるように、エフェクター対標的比を増加させた、ドナー１による、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼレポーター（ｇＬ）を含有する３つのＡＭＬ標的株の細胞傷害性を示す。殺傷は、ルシフェラーゼアッセイを使用して評価した。異なるドナーからの様々なＣＤ３３＋標的細胞及びＰＢＭＣにおいて、ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７による強力な殺傷が観察された。

【図6B】ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲのインビトロ細胞傷害性を示す。Ａ～Ｃは、示されるように、エフェクター対標的比を増加させた、ドナー１による、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼレポーター（ｇＬ）を含有する３つのＡＭＬ標的株の細胞傷害性を示す。殺傷は、ルシフェラーゼアッセイを使用して評価した。異なるドナーからの様々なＣＤ３３＋標的細胞及びＰＢＭＣにおいて、ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７による強力な殺傷が観察された。

【図6C】ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲのインビトロ細胞傷害性を示す。Ａ～Ｃは、示されるように、エフェクター対標的比を増加させた、ドナー１による、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼレポーター（ｇＬ）を含有する３つのＡＭＬ標的株の細胞傷害性を示す。殺傷は、ルシフェラーゼアッセイを使用して評価した。異なるドナーからの様々なＣＤ３３＋標的細胞及びＰＢＭＣにおいて、ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７による強力な殺傷が観察された。

【図6D】ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲのインビトロ細胞傷害性を示す。Ｄ～Ｆは、示されるように、エフェクター対標的比を増加させた、ドナー２による、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼレポーター（ｇＬ）を含有する３つのＡＭＬ標的株の細胞傷害性を示す。殺傷は、ルシフェラーゼアッセイを使用して評価した。異なるドナーからの様々なＣＤ３３＋標的細胞及びＰＢＭＣにおいて、ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７による強力な殺傷が観察された。

【図6E】ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲのインビトロ細胞傷害性を示す。Ｄ～Ｆは、示されるように、エフェクター対標的比を増加させた、ドナー２による、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼレポーター（ｇＬ）を含有する３つのＡＭＬ標的株の細胞傷害性を示す。殺傷は、ルシフェラーゼアッセイを使用して評価した。異なるドナーからの様々なＣＤ３３＋標的細胞及びＰＢＭＣにおいて、ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７による強力な殺傷が観察された。

【図6F】ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲのインビトロ細胞傷害性を示す。Ｄ～Ｆは、示されるように、エフェクター対標的比を増加させた、ドナー２による、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼレポーター（ｇＬ）を含有する３つのＡＭＬ標的株の細胞傷害性を示す。殺傷は、ルシフェラーゼアッセイを使用して評価した。異なるドナーからの様々なＣＤ３３＋標的細胞及びＰＢＭＣにおいて、ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７による強力な殺傷が観察された。

【図7A】１Ｊ１９ ＣＡＲの細胞傷害性を示す。Ａは、示されるように、エフェクター対標的比を増加させた、ドナー２による、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼレポーター（ｇＬ）を含有するＨＬ６０細胞株の殺傷パーセントとしての細胞傷害性を示す。殺傷は、ルシフェラーゼアッセイを使用して評価した。全体的に、Ｈ１９５参照ＣＡＲと比較して、１Ｊ１９による強力な殺傷が観察された。

【図7B】１Ｊ１９ ＣＡＲの細胞傷害性を示す。Ｂは、示されるように、エフェクター対標的比を増加させた、ドナー３による、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼレポーター（ｇＬ）を含有するＨＬ６０細胞株の殺傷パーセントとしての細胞傷害性を示す。殺傷は、ルシフェラーゼアッセイを使用して評価した。全体的に、Ｈ１９５参照ＣＡＲと比較して、１Ｊ１９による強力な殺傷が観察された。

【図7C】１Ｊ１９ ＣＡＲの細胞傷害性を示す。Ｃは、示されるように、エフェクター対標的比を増加させた、ドナー２による、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼレポーター（ｇＬ）を含有するＵ９３７細胞株の殺傷パーセントとしての細胞傷害性を示す。殺傷は、ルシフェラーゼアッセイを使用して評価した。全体的に、Ｈ１９５参照ＣＡＲと比較して、１Ｊ１９による強力な殺傷が観察された。

【図7D】１Ｊ１９ ＣＡＲの細胞傷害性を示す。Ｄは、示されるように、エフェクター対標的比を増加させた、ドナー１による、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼレポーター（ｇＬ）を含有するＯＣＩ－ＡＭＬ３細胞株の殺傷パーセントとしての細胞傷害性を示す。殺傷は、ルシフェラーゼアッセイを使用して評価した。全体的に、Ｈ１９５参照ＣＡＲと比較して、１Ｊ１９による強力な殺傷が観察された。

【図8A】標的細胞への結合時のＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ細胞増殖を示す。Ａ及びＢは、リードＣＡＲを形質導入した２人のドナー由来のヒトＴ細胞をＵ９３７細胞（ＣＤ３３ｈｉｇｈ）と共培養したことを示す。共培養後７、１４及び２１日で、フローサイトメトリーを使用して、残存する標的及びＴ細胞の総数を検出した。１ｍＬ当たりの残存ヒトＴ細胞の合計は、経時的に日数で示される。

【図8B】標的細胞への結合時のＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ細胞増殖を示す。Ａ及びＢは、リードＣＡＲを形質導入した２人のドナー由来のヒトＴ細胞をＵ９３７細胞（ＣＤ３３ｈｉｇｈ）と共培養したことを示す。共培養後７、１４及び２１日で、フローサイトメトリーを使用して、残存する標的及びＴ細胞の総数を検出した。１ｍＬ当たりの残存ヒトＴ細胞の合計は、経時的に日数で示される。

【図8C】標的細胞への結合時のＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ細胞増殖を示す。Ｃ及びＤは、リードＣＡＲを形質導入した２人のドナー由来のヒトＴ細胞を、ＯＣｉ－ＡＭＬ３（ＣＤ３３ｌｏｗ）細胞と共培養したことを示す。共培養後７、１４及び２１日で、フローサイトメトリーを使用して、残存する標的及びＴ細胞の総数を検出した。１ｍＬ当たりの残存ヒトＴ細胞の合計は、経時的に日数で示される。

【図8D】標的細胞への結合時のＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ細胞増殖を示す。Ｃ及びＤは、リードＣＡＲを形質導入した２人のドナー由来のヒトＴ細胞を、ＯＣｉ－ＡＭＬ３（ＣＤ３３ｌｏｗ）細胞と共培養したことを示す。共培養後７、１４及び２１日で、フローサイトメトリーを使用して、残存する標的及びＴ細胞の総数を検出した。１ｍＬ当たりの残存ヒトＴ細胞の合計は、経時的に日数で示される。

【図9A】リードＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ細胞のサイトカイン分泌プロファイルを示す。３人の異なるドナーを用いて、４つのサイトカインのパネルを分析した。２４時間での標的及びエフェクター細胞の共培養後に収集した上清中のＧＭＣＳＦのレベルを、ヒト１２－ｐｌｅｘ Ｌｕｍｉｎｅｘパネルキットを使用して測定したことを示す。代表的なドナー１からのデータを示す。

【図9B】リードＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ細胞のサイトカイン分泌プロファイルを示す。３人の異なるドナーを用いて、４つのサイトカインのパネルを分析した。ＩＮＦ－γのレベルを示す。代表的なドナー１からのデータを示す。

【図9C】リードＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ細胞のサイトカイン分泌プロファイルを示す。３人の異なるドナーを用いて、４つのサイトカインのパネルを分析した。ＴＮＦ－αのレベルを示す。代表的なドナー１からのデータを示す。

【図9D】リードＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ細胞のサイトカイン分泌プロファイルを示す。３人の異なるドナーを用いて、４つのサイトカインのパネルを分析した。ＩＬ－２のレベルを示す。代表的なドナー１からのデータを示す。

【図10A】Ｕ９３７ ＡＭＬ異種移植片マウスモデルにおけるリードＣＡＲ Ｔのインビボ有効性を示す。リードＣＡＲ Ｔ細胞でＩＶ処置したＮＣＧマウスにおけるＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼでタグ付けしたＵ９３７細胞（ＣＤ３３ｈｉｇｈ）の経時的なイメージング及び定量化を示す。

【図10B】Ｕ９３７ ＡＭＬ異種移植片マウスモデルにおけるリードＣＡＲ Ｔのインビボ有効性を示す。生存曲線を示す。

【図11A】滴定投与によるリードＣＡＲ Ｔのインビボ有効性を示す。５・１０^５個のＣＡＲ Ｔ細胞を注射し、腫瘍成長及び生存についてモニタリングした動物のデータを示す。

【図11B】滴定投与によるリードＣＡＲ Ｔのインビボ有効性を示す。２．５・１０^５個のＣＡＲ Ｔ細胞を注射した動物のデータを示す。

【図12A】ＯＣｉ－ＡＭＬ３異種移植片マウスモデルにおけるリードＣＡＲ Ｔのインビボ有効性を示す。リードＣＡＲ Ｔ細胞でＩＶ処置したＮＣＧマウスにおけるホタルルシフェラーゼでタグ付けしたＯＣｉ－ＡＭＬ３細胞（ＣＤ３３ｌｏｗ）の経時的なイメージング及び定量化。１群当たり５匹の動物についての平均生存時間を示す。

【図12B】ＯＣｉ－ＡＭＬ３異種移植片マウスモデルにおけるリードＣＡＲ Ｔのインビボ有効性を示す。リードＣＡＲ Ｔ細胞でＩＶ処置したＮＣＧマウスにおけるホタルルシフェラーゼでタグ付けしたＯＣｉ－ＡＭＬ３細胞（ＣＤ３３ｌｏｗ）の経時的なイメージング及び定量化。各動物についての個々の生存曲線を示す。

【図13】Ｕ９３７ ＡＭＬ異種移植片マウスモデルにおける２つのリード及び１つのバックアップＣＡＲのインビボ有効性の直接比較を示す。リード及びバックアップ１Ｊ１９ ＣＡＲ Ｔ細胞でＩＶ処置したＮＣＧマウスにおけるホタルルシフェラーゼでタグ付けしたＵ９３７細胞（ＣＤ３３ｈｉｇｈ）の経時的なイメージング及び定量化。

【図14】患者由来ＡＭＬ異種移植片を有するＴＤＩ－Ｙ－００６ ＣＡＲ Ｔのインビボ有効性を示す。患者由来腫瘍細胞を静脈内に注入し、１０日間増殖させた。ＴＤＩ－Ｙ－００６ ＣＡＲ Ｔを１４日目に注射した。７日後、ＣＤ２－ＣＤ３３＋細胞の数をフローサイトメトリーによって決定した。０．０５未満のｐ値＊で示される、Ｈ１９５＿Ｄｅｌについての５匹のマウス及びＴＤＩ－Ｙ－００６ ＣＡＲ Ｔについての４匹のマウスからの平均データ。

【図15A】ＰＤＸモデルにおける炎症促進性サイトカインレベルを示す。患者由来異種移植片移植後にＴＤＩ－Ｙ－００６ ＣＡＲ Ｔで処置したマウスからヒト１２－ｐｌｅｘ Ｌｕｍｉｎｅｘパネルキットを使用して測定したＩＦＮ－ガンマのレベルを示す。＊ｐ値＜０．０５。

【図15B】ＰＤＸモデルにおける炎症促進性サイトカインレベルを示す。ＴＮＦ－アルファのレベルを示す。＊ｐ値＜０．０５。

【図16A】ＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔの毒性のインビトロ評価を示す。ＣＤ３３リードＣＡＲ Ｔを有する、及び有しないコロニー形成単位によって試験された臍帯から単離された造血幹細胞を示す。ゲムツズマブオゾガマイシン（ＧＯ、抗ＣＤ３３ ＡＤＣ）及びＤｅｌ ＣＡＲを対照として使用した。

【図16B】ＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔの毒性のインビトロ評価を示す。実験薬剤の毒性を評価するためのコロニーの総数を示す。ゲムツズマブオゾガマイシン（ＧＯ、抗ＣＤ３３ ＡＤＣ）及びＤｅｌ ＣＡＲを対照として使用した。

【図17】ヒト完全長ＣＤ３３、ＣＤ３３－ＩｇＣ、及びＵ９３７ ＣＤ３３発現腫瘍株に対する選択された抗体の相対的な結合を示すヒートマップを示す。

【図18A】ｓｃＦｖを標的とする膜近位ＣＤ３３－ＩｇＣの選択を示す。Ｈｉｓ－タグ結合によって測定した場合のハイブリドーマ由来モノクローナル抗体の交差反応性の定量化を示す。

【図18B】ｓｃＦｖを標的とする膜近位ＣＤ３３－ＩｇＣの選択を示す。溶液中のＣＤ３３に対するハイブリドーマ由来モノクローナル抗体の結合動態の定量化を示す。

【図18C】ｓｃＦｖを標的とする膜近位ＣＤ３３－ＩｇＣの選択を示す。過剰発現（３Ｔ３）及びＡＭＬ細胞株（Ｕ９３７）上でのリードハイブリドーマ由来モノクローナル抗体のＥＣ５０の定量化を示す。

【図18D】ｓｃＦｖを標的とする膜近位ＣＤ３３－ＩｇＣの選択を示す。選択されたハイブリドーマ由来モノクローナル抗体のエピトープビニングの定量化を示す。

【図19】フローサイトメトリーによって決定した場合の同等のレトロウイルス形質導入効率を実証する代表的なフローサイトメトリープロットを示す。反復測定一元配置分散分析によって決定したｐ値。データは、３つの独立した実験の平均±ＳＥＭである。ｎｓ、有意ではない。

【図20A】インビトロで機能性及び増殖能力を増強するＣＡＲ Ｔ細胞を標的とする膜近位を示す。蛍光標識抗ＣＤ３３抗体で検出された野生型又はＣＤ３３ノックアウト（ＣＤ３３ＫＯ）ＡＭＬ細胞上でのＣＤ３３の発現を示すフローサイトメトリーヒストグラム及び定量的幾何平均蛍光（ＭＦＩ）を示す。

【図20B】インビトロで機能性及び増殖能力を増強するＣＡＲ Ｔ細胞を標的とする膜近位を示す。Ｕ９３７－ＣＤ３３ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞の溶解を実証する２４時間のＤ－ルシフェリンアッセイを示す（ｎ＝４、＊＊＊＊、Ｐ＜０．０００１、＊＊＊、Ｐ＜０．００１、＊、Ｐ＜０．０５、二元配置分散分析による）。データは、４つの独立した実験の平均±ＳＥＭである。

【図20C】インビトロで機能性及び増殖能力を増強するＣＡＲ Ｔ細胞を標的とする膜近位を示す。ＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３ｌｏｗｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞の溶解を実証する２４時間のＤ－ルシフェリンアッセイを示す（ｎ＝４、＊、Ｐ＜０．０５、二元配置分散分析による）。データは、４つの独立した実験の平均±ＳＥＭである。

【図20D】インビトロで機能性及び増殖能力を増強するＣＡＲ Ｔ細胞を標的とする膜近位を示す。低いエフェクター対標的比でのＵ９３７－ＣＤ３３ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞の溶解を実証する１３８時間（６日）のアッセイを示す（ｎ＝２、＊＊、Ｐ＜０．０１、＊、Ｐ＜０．０５、二元配置分散分析による）。データは、４つの独立した実験の代表である。

【図20E】インビトロで機能性及び増殖能力を増強するＣＡＲ Ｔ細胞を標的とする膜近位を示す。低いエフェクター対標的比でのＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３ｌｏｗｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞の溶解を実証する１３８時間のアッセイを示す（ｎ＝２、＊＊、Ｐ＜０．０１、＊、Ｐ＜０．０５、二元配置分散分析による）。データは、４つの独立した実験の代表である。

【図20F】インビトロで機能性及び増殖能力を増強するＣＡＲ Ｔ細胞を標的とする膜近位を示す。Ｕ９３７－ＣＤ３３ｈｉｇｈ腫瘍細胞の存在下において、ＣＡＲ Ｔ細胞を標的とする膜近位ＣＤ３３によって増強された増殖を実証するフローサイトメトリー分析の定量化を示す（ｎ＝９、＊＊＊＊、Ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析による）。データは、３つの独立した実験の平均±ＳＥＭである。

【図20G】インビトロで機能性及び増殖能力を増強するＣＡＲ Ｔ細胞を標的とする膜近位を示す。ＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３ｌｏｗｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞の存在下において、ＣＡＲ Ｔ細胞を標的とする膜近位ＣＤ３３によって増強された増殖を実証するフローサイトメトリー分析の定量化を示す（ｎ＝９、＊＊＊＊、Ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析による）。データは、３つの独立した実験の平均±ＳＥＭである。ｎｓ、有意ではない。

【図21A】ＣＡＲ Ｔ細胞を標的とする膜近位の特異性を示す。形質導入Ｕ９３７－ＣＤ３３ＩｇＣｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞上でのＦＬＡＧ発現を示すフローサイトメトリーヒストグラムを示す。

【図21B】ＣＡＲ Ｔ細胞を標的とする膜近位の特異性を示す。Ｕ９３７－ＣＤ３３ＩｇＣｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞の溶解を実証する２４時間のＤ－ルシフェリンアッセイを示す。データは、２つの独立した実験の代表である。

【図21C】ＣＡＲ Ｔ細胞を標的とする膜近位の特異性を示す。Ｕ９３７－ＣＤ３３ＫＯｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞の溶解を実証する２４時間のＤ－ルシフェリンアッセイを示す。データは、２つの独立した実験の代表である。

【図21D】ＣＡＲ Ｔ細胞を標的とする膜近位の特異性を示す。造血殺傷を測定するためのコロニー形成単位（ＣＦＵ）アッセイを使用して産生された総コロニーの定量化を示しており、総コロニー数は、ＢＦＵ－Ｅ、ＧＥＭＭ－ＣＦＵ、及びＧＭ－ＣＦＵの複合体である（ｎ＝９、＊＊＊＊、Ｐ＜０．０００１、＊＊＊、Ｐ＜０．００１、通常の一元配置分散分析による、ｎｓ、有意ではない）。示されるデータは、３つの独立した実験の平均±ＳＥＭの複合体である。

【図22A】インビトロでの独自の活性化プロファイルによって特徴付けられる、膜近位標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。ヒト１２－ｐｌｅｘ Ｌｕｍｉｎｅｘパネルによって検出された、Ｕ９３７－ＣＤ３３ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋、ＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３ｌｏｗｇｆｐＬｕｃ^＋、Ｕ９３７－ＣＤ３３ＩｇＣｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍、及びＵ９３７－ＣＤ３３ＫＯｇｆｐＬｕｃ^＋と共培養したときのＴｃ１／Ｔｈ１サイトカインの２４時間のサイトカイン分泌プロファイルを示す（ｎ＝３、＊＊＊＊、Ｐ＜０．０００１、＊、Ｐ＜０．０５、Ｈ１９５ＤＥＬ対照に対するダネットの多重比較検定による）。データは、３つの独立した実験の代表である。

【図22B】インビトロでの独自の活性化プロファイルによって特徴付けられる、膜近位標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。Ｔｃ１／Ｔｈ１活性化サイトカインのＣＡＲ Ｔ細胞の細胞内産生を示すフローサイトメトリー分析の定量化を示す（ｎ＝４、＊＊＊＊、Ｐ＜０．０００１、＊＊、Ｐ＜０．０１、＊、Ｐ＜０．０５、二元配置分散分析による、ｎｓ、有意ではない）。データは、４つの独立した実験の平均±ＳＥＭである。

【図22C】インビトロでの独自の活性化プロファイルによって特徴付けられる、膜近位標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。ＣＤ４^＋ＣＡＲ^＋及びＣＤ８^＋ＣＡＲ^＋Ｔｃ１／Ｔｈ１活性化サイトカイン分泌の定性的表現を示す。

【図22D】インビトロでの独自の活性化プロファイルによって特徴付けられる、膜近位標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。Ｔｃ１／Ｔｈ１活性化サイトカインのＣＤ４^＋ ＣＡＲ Ｔ細胞の細胞内産生を示すフローサイトメトリー分析の定量化を示す（ｎ＝４、＊＊＊＊、Ｐ＜０．０００１、＊、Ｐ＜０．０５、二元配置分散分析による）。データは、４つの独立した実験の平均±ＳＥＭである。

【図22E】インビトロでの独自の活性化プロファイルによって特徴付けられる、膜近位標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。Ｔｃ１／Ｔｈ１活性化サイトカインのＣＤ８^＋ ＣＡＲ Ｔ細胞の細胞内産生を示すフローサイトメトリー分析の定量化を示す（ｎ＝４、＊＊＊、Ｐ＜０．００１、＊＊、Ｐ＜０．０１、＊、Ｐ＜０．０５、二元配置分散分析による）。データは、４つの独立した実験の平均±ＳＥＭである。

【図22F】インビトロでの独自の活性化プロファイルによって特徴付けられる、膜近位標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。抗原刺激の７日後のＣＡＲ Ｔ細胞活性化状態を実証するフローサイトメトリー分析の定量化を示す（ｎ＝４、＊＊＊＊、Ｐ＜０．０００１、二元配置分散分析による）。データは、３つの独立した実験の平均±ＳＥＭである。

【図22G】インビトロでの独自の活性化プロファイルによって特徴付けられる、膜近位標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。ＣＡＲ Ｔ細胞活性化プロファイルを比較したフローサイトメトリー分析の定性的表現を示す。データは、３つの独立した実験からプールされる。

【図23A】異種移植片マウスモデルにおける生存時間を増強する膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。インビボ実験設定の概略図を示す。ＮＣＧマウスに、Ｕ９３７－ＣＤ３３ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍を接種し、続いてＣＡＲ Ｔ細胞で処置した。

【図23B】異種移植片マウスモデルにおける生存時間を増強する膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。Ｕ９３７－ＣＤ３３ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍を有し、５．０×１０^５個のＣＡＲ Ｔ細胞で処置したＮＣＧマウスの生存時間を示す（ｎ＝５、＊＊、Ｐ＜０．０１）。９５％信頼区間で、ログランクＭａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ検定によって決定した生存時間についてのｐ値。示したインビボデータは、５匹のマウスからプールされる。

【図23C】異種移植片マウスモデルにおける生存時間を増強する膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。Ｕ９３７－ＣＤ３３ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ＋腫瘍を有し、２．５×１０^５個のＣＡＲ Ｔ細胞で処置したＮＣＧマウスの生存時間を示す（ｎ＝５、＊＊、Ｐ＜０．０１、＊、Ｐ＜０．０５）。９５％信頼区間で、ログランクＭａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ検定によって決定した生存時間についてのｐ値。示したインビボデータは、５匹のマウスからプールされる。

【図23D】異種移植片マウスモデルにおける生存時間を増強する膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。Ｕ９３７－ＣＤ３３ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ＋腫瘍を有し、１．０×１０^５個のＣＡＲ Ｔ細胞で処置したＮＣＧマウスの生存時間を示す（ｎ＝５、＊＊、Ｐ＜０．０１、ｎｓ、有意ではない）。９５％信頼区間で、ログランクＭａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ検定によって決定した生存時間についてのｐ値。

【図23E】異種移植片マウスモデルにおける生存時間を増強する膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。Ｕ９３７－ＣＤ３３ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍を有し、５．０×１０^４個のＣＡＲ Ｔ細胞で処置したＮＣＧマウスの生存時間を示す（ｎ＝５、＊、Ｐ＜０．０５）。９５％信頼区間で、ログランクＭａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ検定によって決定した生存時間についてのｐ値。

【図23F】異種移植片マウスモデルにおける生存時間を増強する膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。５．０×１０^５個のＣＡＲ Ｔ細胞で処置した腫瘍保有ＮＣＧマウスにおけるＵ９３７－ＣＤ３３ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋の経時的なイメージングを示す。

【図23G】異種移植片マウスモデルにおける生存時間を増強する膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。Ｕ９３７－ＣＤ３３ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍を接種し、続いて５．０×１０^５個のＣＡＲ Ｔ細胞で処置したＮＣＧマウスの腫瘍退縮を示す。

【図23H】異種移植片マウスモデルにおける生存時間を増強する膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。インビボ実験設定の概略図を示す。ＮＣＧマウスに、ＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３ｌｏｗｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍を接種し、続いてＣＡＲ Ｔ細胞で処置した。

【図23I】異種移植片マウスモデルにおける生存時間を増強する膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。ＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３ｌｏｗｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍を接種し、５．０×１０^５個のＣＡＲ Ｔ細胞で処置したＮＣＧマウスの生存時間を示す（ｎ＝５、＊、Ｐ＜０．０５）。９５％信頼区間で、ログランクＭａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ検定によって決定した生存時間についてのｐ値。

【図23J】異種移植片マウスモデルにおける生存時間を増強する膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。５．０×１０^５個のＣＡＲ Ｔ細胞で処置した腫瘍保有ＮＣＧマウスにおけるＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３ｌｏｗｇｆｐＬｕｃ^＋の経時的なイメージングを示す。

【図23K】異種移植片マウスモデルにおける生存時間を増強する膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。ＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３ｌｏｗｇｆｐＬｕｃ＋腫瘍を有し、５．０×１０^５個のＣＡＲ Ｔ細胞で処置したＮＣＧマウスの腫瘍退縮を示す。

【図24A】患者由来ＡＭＬ異種移植片モデルにおいて腫瘍負荷を減少させる膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。蛍光標識されたＣＤ３３特異的抗体及びアイソタイプ対照で検出されたＡＭＬ６０Ｂ患者試料上でのＣＤ３３発現のフローサイトメトリーヒストグラム及び幾何学的中央蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。

【図24B】患者由来ＡＭＬ異種移植片モデルにおいて腫瘍負荷を減少させる膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。患者由来異種移植片モデルの実験設定の概略図を示す。ＮＣＧマウスに患者由来のＡＭＬ芽球を接種し、同種異系のＣＡＲ Ｔ細胞で処置した。腫瘍接種の２８日後に、骨髄穿刺液を分析した。

【図24C】患者由来ＡＭＬ異種移植片モデルにおいて腫瘍負荷を減少させる膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞で処置したマウスにおける腫瘍負荷の減少を実証するフローサイトメトリー分析の定量化を示す（ｎ＝６、＊、Ｐ＜０．０５、通常の一元配置分散分析による、ｎｓ、有意ではない）。

【図24D】患者由来ＡＭＬ異種移植片モデルにおいて腫瘍負荷を減少させる膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞を示す。ＡＭＬ６０Ｂ患者由来の腫瘍を有し、膜遠位又は膜近位ＣＡＲ Ｔ細胞で処置したＮＣＧマウスの生存時間を示す（ｎ＝６、＊＊、Ｐ＜０．０１、＊、Ｐ＜０．０５）。９５％信頼区間で、ログランクＭａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ検定によって決定した生存時間についてのｐ値。示したデータは、２つの異なる健康なドナーを使用した２つの独立した実験からプールされる。

【発明を実施するための形態】

【0040】

５．本発明の詳細な説明
本明細書に開示される主題は、ＣＤ３３を特異的に標的とする抗原認識受容体（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ））を提供する。本明細書に開示される主題は、そのような受容体を含む細胞を更に提供する。細胞は、免疫応答性細胞、例えば、遺伝子修飾免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）であり得る。本明細書に開示される主題はまた、治療、例えば、ＣＤ３３に関連する疾患又は障害（例えば、ＡＭＬ）を治療及び又は改善するためにそのような細胞を使用する方法を提供する。

【0041】

本開示の非限定的な実施形態は、本明細書及び実施例によって説明される。

【0042】

制限のためではなく、開示を明確にするために、この詳細な説明は、以下のセクションに分けられる。
５．１．定義、
５．２．ＣＤ３３、
５．３．抗原認識受容体、
５．４．細胞、
５．５．組成物及びベクター、
５．６．ポリペプチド、
５．７．製剤及び投与、
５．８．治療方法、
５．９．キット、並びに
５．１０．例示的な実施形態。

【0043】

５．１．定義
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。以下の参考文献は、本発明で使用される用語の多くの一般的な定義を当業者に提供する。Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ ｅｄ．１９９４）、Ｔｈｅ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｋｅｒ ｅｄ．，１９８８）、Ｔｈｅ Ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ（１９９１）、及びＨａｌｅ＆Ｍａｒｈａｍ，Ｔｈｅ Ｈａｒｐｅｒ Ｃｏｌｌｉｎｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）。本明細書で使用される場合、以下の用語は、別段の指定がない限り、以下にそれらに帰属する意味を有する。

【0044】

本明細書で使用される場合、「約」又は「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値に対する許容誤差範囲内であることを意味し、それは、部分的には、その値がどのように測定又は決定されるか、すなわち、測定システムの限界に依存する。例えば、「約」は、当該技術分野における慣例に従って、３以内又は３を超える標準偏差を意味し得る。代替的に、「約」は、所与の値の２０％まで、好ましくは１０％まで、より好ましくは５％まで、及びより好ましくは更に１％までの範囲を意味し得る。代替的に、特に生体系又はプロセスに関して、この用語は、値の１桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内であることを意味し得る。

【0045】

「免疫応答性細胞」とは、免疫応答又は前駆体、又はその子孫で機能する細胞を意味する。特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、リンパ系の細胞である。リンパ系の細胞の非限定的な例としては、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、及びリンパ球細胞が分化し得る幹細胞が挙げられる。特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、骨髄系の細胞である。

【0046】

「免疫応答性細胞を活性化する」とは、免疫応答の開始をもたらす、細胞内のシグナル伝達又はタンパク質発現の変化の誘導を意味する。例えば、リガンド結合及び免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＡＭ）に応答してＣＤ３鎖がクラスター化すると、シグナル伝達カスケードが産生される。特定の実施形態では、内因性ＴＣＲ又は外因性ＣＡＲが抗原に結合すると、結合した受容体（例えば、ＣＤ４又はＣＤ８、ＣＤ３γ／δ／ε／ζなど）の近くに多くの分子のクラスター化を含む免疫学的シナプスの形成が起こる。膜結合シグナル伝達分子のこのクラスター化は、ＣＤ３鎖内に含まれるＩＴＡＭモチーフがリン酸化されることを可能にする。このリン酸化は、次に、Ｔ細胞活性化経路を開始し、最終的に、ＮＦ－κＢ及びＡＰ－１などの転写因子を活性化する。これらの転写因子は、Ｔ細胞の全体的な遺伝子発現を誘導して、Ｔ細胞媒介免疫応答を開始するために、マスターレギュレーターＴ細胞タンパク質の増殖及び発現のためのＩＬ－２産生を増加させる。

【0047】

「免疫応答性細胞を刺激する」とは、堅牢で持続的な免疫応答をもたらすシグナルを意味する。様々な実施形態では、これは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化後に、又は限定されないが、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＯＸ４０、ＣＤ４０、及びＩＣＯＳを含む受容体を介して同時に媒介される。複数の刺激シグナルを受信することは、堅牢で長期的なＴ細胞媒介性免疫応答をマウントするために重要であり得る。Ｔ細胞は、すぐに阻害され、抗原に応答しなくなる可能性がある。これらの共刺激シグナルの効果は変化し得るが、それらは一般に、完全かつ持続的な根絶のために抗原に強固に応答する長寿命、増殖性、及び抗アポトーシスＴ細胞を生成するために、遺伝子発現の増加をもたらす。

【0048】

本明細書で使用される場合、「抗原認識受容体」という用語は、標的抗原（例えば、ＣＤ３３）を認識することができる受容体を指す。特定の実施形態では、抗原認識受容体は、標的抗原に結合すると、免疫細胞又は免疫応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）を活性化することができる。

【0049】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、無傷の抗体分子だけではなく、免疫原結合能力を保持する抗体分子の断片も意味する。そのような断片も、当該技術分野で周知であり、通常、インビトロ及びインビボの両方で使用される。したがって、本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、無傷の免疫グロブリン分子だけでなく、周知の活性断片Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦａｂも意味する。Ｆ（ａｂ’）_２、及び無傷の抗体のＦｅ断片を欠くＦａｂ断片は、循環からより迅速に排泄され、無傷の抗体の非特異的組織結合が、より少なくなる場合がある（Ｗａｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ（１９８３）；２４：３１６－３２５）。本明細書で使用される場合、天然の抗体全体、二重特異性抗体、キメラ抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、一本鎖Ｖ領域断片（ｓｃＦｖ）、融合ポリペプチド、及び従来のものではない抗体を含む。特定の実施形態では、抗体は、ジスルフィド結合によって相互に接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｈと略される）及び重鎖定常（Ｃ_Ｈ）領域で構成される。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３の３つのドメインで構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｌと略される）及び軽鎖定常Ｃ_Ｌ領域で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣ_Ｌで構成される。Ｖ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が点在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変性の領域へと更に細分することができる。各Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順序で配置された、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織又は因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介し得る。

【0050】

本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の超可変領域である抗体の相補性決定領域アミノ酸配列として定義される。例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，４ｔｈ Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（１９８７）、又はＩＭＧＴ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ（１９９９）；７：１３２－１３６、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）；２７：５５－７７）を参照されたい。一般に、抗体は、可変領域中に３つの重鎖及び３つの軽鎖のＣＤＲ又はＣＤＲ領域を含む。ＣＤＲは、抗原又はエピトープに対する抗体の結合のための接触残基の大部分を提供する。特定の実施形態では、ＣＤＲ領域は、ＩＭＧＴ番号付けシステムを使用して描写される。特定の実施形態では、ＣＤＲ領域は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴ＿ｖｑｕｅｓｔ／ｉｎｐｕｔでアクセス可能なＩＭＧＴ番号付けシステムを使用して描写される。

【0051】

本明細書で使用される場合、「一本鎖可変断片」又は「ｓｃＦｖ」という用語は、Ｖ_Ｈ：：Ｖ_Ｌヘテロ二量体を形成するように共有結合される免疫グロブリン（例えば、マウス又はヒト）の重鎖（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖（Ｖ_Ｌ）の可変領域の融合タンパク質である。重鎖（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖（Ｖ_Ｌ）は、直接的に接続されるか、又はペプチドをコードするリンカー（例えば、１０、１５、２０、２５個のアミノ酸）によって接続されるかのいずれかであり、Ｖ_ＨのＮ末端をＶ_ＬのＣ末端に接続するか、又はＶ_ＨのＣ末端をＶ_ＬのＮ末端に接続する。リンカーは通常、可撓性のためにグリシンが豊富であり、溶解性のためにセリン又はトレオニンが豊富である。リンカーは、細胞外抗原結合ドメインの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を連結し得る。リンカーの非限定的な例は、Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．８０（６）：１９１０－１９１７（２００８）及びＷＯ２０１４／０８７０１０に開示されており、それらの内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態では、リンカーは、Ｇ４Ｓリンカーである。

【0052】

特定の実施形態では、リンカーは、以下に提供する配列番号９５に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ［配列番号９５］

【0053】

特定の実施形態では、リンカーは、以下に提供する配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ［配列番号９６］

【0054】

特定の実施形態では、リンカーは、以下に提供する配列番号９７に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ［配列番号９７］

【0055】

特定の実施形態では、リンカーは、以下に提供する配列番号９８に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳ［配列番号９８］

【0056】

特定の実施形態では、リンカーは、以下に提供する配列番号９９に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる：
ＧＧＧＧＳ［配列番号９９］

【0057】

特定の実施形態では、リンカーは、以下に提供する配列番号１００に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる：
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ［配列番号１００］

【0058】

定常領域の除去及びリンカーの導入にもかかわらず、ｓｃＦｖタンパク質は、元の免疫グロブリンの特異性を保持する。一本鎖Ｆｖポリペプチド抗体は、Ｈｕｓｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，（１９８８）；８５：５８７９－５８８３、米国特許第５，０９１，５１３号、同第５，１３２，４０５号、及び同第４，９５６，７７８号、並びに米国特許公開第２００５／０１９６７５４号及び同第２００５／０１９６７５４号に記載されているように、Ｖ_Ｈコード配列及びＶ_Ｌコード配列を含む核酸から発現され得る。阻害活性を有する拮抗性ｓｃＦｖが記載されている（例えば、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｒｂｉｄｏｍａ（Ｌａｒｃｈｍｔ）（２００８）；２７（６）：４５５－５１、Ｐｅｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃａｃｈｅｘｉａ Ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ Ｍｕｓｃｌｅ（２０１２）；Ａｕｇｕｓｔ １２、Ｓｈｉｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｕｎｏｌ（２００９）；１８３（４）：２２７７－８５、Ｇｉｏｍａｒｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ（２００７）；９７（６）：９５５－６３、Ｆｉｆｅ ｅｔａ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｓｔ（２００６）；１１６（８）：２２５２－６１、Ｂｒｏｃｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １９９７ ３（３）：１７３－８４、Ｍｏｏｓｍａｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９５ ２（１０：３１－４０）を参照されたい。刺激活性を有する作動性ｓｃＦｖが記載されている（Ｐｅｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｒｎ（２００３）；２５２７８（３８）：３６７４０－７、Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ １９９７ １５（８）：７６８－７１、Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９７）；１７（５－６）：４２７－５５、Ｈｏ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＣｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ（２００３）；１６３８（３）：２５７－６６）。

【0059】

本明細書で使用される場合、「キメラ抗原受容体」又は「ＣＡＲ」という用語は、免疫応答性細胞を活性化又は刺激することができる細胞内シグナル伝達ドメインに融合された細胞外抗原結合ドメイン、及び膜貫通ドメインを含む分子を指す。特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む。ｓｃＦｖは、抗体の可変重鎖及び軽鎖領域を融合することに由来し得る。代替的又は追加的に、ｓｃＦｖは、（例えば、Ｆａｂライブラリから得られた抗体由来の代わりに）Ｆａｂに由来し得る。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、膜貫通ドメインに、次いで細胞内シグナル伝達ドメインに融合される。「実質的に同一の」又は「実質的に相同な」とは、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書に記載のアミノ酸配列のうちのいずれか）又は参照ヌクレオチド配列（例えば、本明細書に記載のヌクレオチド配列のうちのいずれか）に対して少なくとも約５０％の相同性又は同一性を示すポリペプチド又は核酸分子を意味する。特定の実施形態では、このような配列は、比較のために使用されるアミノ酸又は核酸の配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、又は少なくとも約１００％相同若しくは同一である。

【0060】

配列同一性は、配列分析ソフトウェア（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ、１７１０ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｖｅｎｕｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰ、又はＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）を使用して測定される。そのようなソフトウェアは、様々な置換、欠失、及び／又は他の修飾に対して相同性の程度を割り当てることによって、同一又は類似の配列を一致させる。保存的置換としては、典型的には、以下の群内の置換が含まれる：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リジン、アルギニン；及びフェニルアラニン、チロシン。同一性の程度を決定するための例示的なアプローチでは、ＢＬＡＳＴプログラムが使用されてもよく、ｅ－３～ｅ－１００の確率スコアは、密接に関連する配列を示している。

【0061】

本明細書で使用される場合、２つのアミノ酸配列間の相同性パーセントは、２つの配列間の同一性パーセントに等しい。２つの配列間の同一性パーセントは、それらの２つの配列の最適アライメントのために導入される必要のあるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮して、それらの配列によって共有された同一の位置の数の関数（すなわち、相同性％＝同一の位置の数／位置の総数×１００）である。配列の比較及び２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。

【0062】

２つのアミノ酸配列間の相同性パーセントは、ＰＡＭ１２０重み残基表、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用した、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれた、Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１－１７（１９８８））のアルゴリズムを使用して決定され得る。加えて、２つのアミノ酸配列間の相同性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２行列又はＰＡＭ２５０行列のいずれか、及びギャップ重み１６、１４、１２、１０、８、６、又は４、及び長さ重み１、２、３、４、５、又は６を使用した、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで利用可能）内のＧＡＰプログラムに組み込まれた、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４－４５３（１９７０））のアルゴリズムを使用して決定され得る。

【0063】

追加的又は代替的に、本明細書に開示された主題のアミノ酸配列は、例えば、関連配列を特定するために、公開データベースに対する検索を行うための「問い合わせ配列」として更に使用され得る。かかる検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して行われ得る。本明細書に開示される特定の配列（例えば、ｓｃＦｖ ｍ９０３、ｍ９０４、ｍ９０５、ｍ９０６、及びｍ９００の重鎖及び軽鎖可変領域配列）に相同なアミノ酸配列を得るために、ＢＬＡＳＴタンパク質検索が、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、文字長＝３で行われ得る。比較目的のためにギャップドアライメントを得るために、ギャップドＢＬＡＳＴが、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９－３４０２に記載されるように利用され得る。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。

【0064】

「有効量」は、治療時に有益又は所望の臨床結果をもたらすのに十分な量である。有効量は、１回以上の用量で対象に投与され得る。特定の実施形態では、有効量は、疾患の進行を緩和するか、改善するか、安定化するか、逆行させるか、又は遅らせる、あるいは疾患の病理学的結果をその他の方法で低減させるのに十分な量であり得る。有効量は、症例ごとに医師によって決定され得、当業者の技能の範囲内である。いくつかの因子は、典型的には、有効量を達成するために適切な投薬量を決定する際に考慮される。これらの因子としては、対象の年齢、性別、及び体重、治療される状態、状態の重症度、並びに投与される細胞の形態及び有効濃度が挙げられる。

【0065】

本明細書で使用される場合、「保存的配列修飾」という用語は、アミノ酸配列を含む本明細書に開示されるＣＤ３３標的化ＣＡＲ（例えば、細胞外抗原結合ドメイン）の結合特徴に有意に影響しないか、又は変化させないアミノ酸修飾を指す。保存的修飾は、アミノ酸置換、付加、及び欠失を含み得る。修飾は、部位特異的変異誘発及びＰＣＲによる変異誘発などの当該技術分野で既知の標準的な技術によって、本明細書に開示されるＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインに導入することができる。アミノ酸は、電荷及び極性などの物理化学的特性に従って、グループに分類することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同じグループ内のアミノ酸で置き換えられたものである。例えば、アミノ酸は、電荷によって分類することができ、正に帯電したアミノ酸としては、リジン、アルギニン、ヒスチジンが挙げられ、負に帯電したアミノ酸としては、アスパラギン酸、グルタミン酸が挙げられ、中性電荷のアミノ酸としては、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンが挙げられる。加えて、アミノ酸は、極性によって分類することができ、極性アミノ酸としては、アルギニン（塩基性極性）、アスパラギン、アスパラギン酸（酸性極性）、グルタミン酸（酸性極性）、グルタミン、ヒスチジン（塩基性極性）、リジン（塩基性極性）、セリン、トレオニン、及びチロシンが挙げられ、非極性アミノ酸としては、アラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、及びバリンが挙げられる。したがって、ＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸残基を、同じグループからの他のアミノ酸残基と置き換えることができ、改変された抗体を、本明細書に記載の機能的アッセイを使用して、保持された機能（すなわち、上の（ｃ）～（ｌ）に示される機能）について試験することができる。特定の実施形態では、指定された配列又はＣＤＲ領域内の１つ以下、２つ以下、３つ以下、４つ以下、５つ以下の残基が改変される。

【0066】

本明細書で使用される場合、「内因性」という用語は、細胞又は組織において通常発現される核酸分子又はポリペプチドを指す。

【0067】

本明細書で使用される場合、「外因性」という用語は、細胞内に内因性に存在しない核酸分子又はポリペプチドを指す。したがって、「外因性」という用語は、外来性、異種性、並びに過剰発現核酸分子及びポリペプチドなどの細胞内で発現される任意の組換え核酸分子又はポリペプチドを包含するであろう。「外因性」核酸とは、天然の野生型細胞に存在しない核酸を意味し、例えば、外因性核酸は、配列、位置／場所、又は両方によって内因性の対応物から変化し得る。明確にするために、外因性核酸は、その天然の内因性対応物と比較して同じ又は異なる配列を有してもよく、それは、遺伝子操作によって細胞自体又はその前駆体に導入されてもよく、任意選択で、非天然のプロモーター又は分泌配列などの代替的な制御配列に連結されてもよい。

【0068】

「異種核酸分子又はポリペプチド」とは、細胞、又は細胞から得られた試料中に通常は存在しない、核酸分子（例えば、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ、若しくはＲＮＡ分子）、又はポリペプチドを意味する。この核酸は、別の生物由来であってもよく、又は例えば、細胞若しくは試料において通常は発現しないｍＲＮＡ分子であってもよい。

【0069】

「増加する」とは、少なくとも約５％正に変化することを意味する。変化は、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、約１００％、又はそれ以上であり得る。

【0070】

「減少する」とは、少なくとも約５％負に変化することを意味する。変化は、約５％、約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７５％、又は約１００％でさえあり得る。

【0071】

「単離された」、「精製された」、又は「生物学的に純粋な」という用語は、その天然状態で見られるように通常それに伴う成分から様々な程度に遊離している材料を指す。「分離する」は、元の供給源又は周囲からの分離の程度を示す。「精製する」は、単離よりも高い分離の程度を示す。「精製された」又は「生物学的に純粋な」タンパク質は、任意の不純物がタンパク質の生物学的特性に実質的に影響を及ぼさないか、又は他の有害な結果を引き起こさない程十分に他の材料を含まない。すなわち、核酸又はペプチドは、組換えＤＮＡ技法によって産生されたときに細胞物質、ウイルス物質、若しくは培養培地を実質的に含まないか、又は化学合成されたときに化学前駆体若しくは他の化学物質を実質的に含まない場合に精製されている。純度及び均一性は、典型的には、分析化学技術、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動又は高速液体クロマトグラフィーを使用して判定される。「精製された」という用語は、核酸又はタンパク質が電気泳動ゲルにおいて本質的に１つのバンドを生じることを示すことができる。修飾、例えば、リン酸化又はグリコシル化に供され得るタンパク質について、異なる修飾は、別々に精製され得る異なる単離されたタンパク質を生じ得る。

【0072】

「単離された細胞」という用語は、細胞に天然に伴う分子及び／又は細胞成分から分離される細胞を意味する。

【0073】

本明細書で使用される場合、「抗原結合ドメイン」という用語は、細胞上に存在する特定の抗原決定基又は抗原決定基のセットに特異的に結合することができるドメインを指す。

【0074】

「認識する」とは、標的に選択的に結合することを意味する。腫瘍を認識するＴ細胞は、腫瘍抗原に結合する受容体（例えば、ＣＡＲ）を発現することができる。

【0075】

「シグナル配列」又は「リーダー配列」とは、新しく合成されたタンパク質のＮ末端に存在するペプチド配列（例えば、５、１０、１５、２０、２５又は３０個のアミノ酸）であって、分泌経路へのそれらの侵入を導くペプチド配列を意味する。

【0076】

「特異的に結合する」又は「に特異的に結合する」又は「特異的に標的とする」とは、目的の生体分子（例えば、ポリペプチド、例えば、ＣＤ３３ポリペプチド）を認識する、かつ／又はそれに結合するが、試料、例えば、生体試料中の他の分子を実質的に認識しない、かつ／又はそれに結合しないポリペプチド又はその断片を意味し、これは、本明細書に開示されるポリペプチド（例えば、ＣＤ３３ポリペプチド）を自然に含む。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗原認識受容体は、約１×１０^－８Ｍ以下、約５×１０^－９Ｍ以下、約１×１０^－９Ｍ以下、約５×１０^－１０Ｍ以下、約１×１０^－１０Ｍ以下、約５×１０^－１１Ｍ以下、又は約１×１０^－１１Ｍ以下の解離定数（Ｋ_Ｄ）でＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）に結合する。

【0077】

本明細書で使用される場合、「誘導体」という用語は、いくつかの他の化合物に由来し、その一般的な構造を維持する化合物を指す。例えば、いかなる限定もされないが、トリクロロメタン（クロロホルム）は、メタンの誘導体である。

【0078】

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、米国特許法においてそれらに起因する広範な意味を有することが意図され、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味し得る。

【0079】

本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、治療される個体又は細胞の疾患経過を変更しようとする試みにおける臨床介入を指し、予防のために、又は臨床病理学の経過中のいずれかで実施することができる。治療の治療効果としては、限定されないが、疾患の発生若しくは再発を予防すること、症状の緩和、疾患の任意の直接的若しくは間接的な病理学的結果の軽減、転移を予防すること、疾患進行の速度を低減すること、疾患状態の改善若しくは緩和、並びに寛解又は改善された予後が挙げられる。疾患又は障害の進行を予防することによって、治療は、罹患したか、若しくは診断した対象、又は障害を有する疑いがある対象において、障害に起因する悪化を予防することができるだけではなく、治療は、障害のリスクがある対象、若しくは障害を有する疑いがある対象において、障害の発症又は障害の症状を予防することができる。

【0080】

本明細書における「個体」又は「対象」は、脊椎動物、例えば、ヒト又は非ヒト動物、例えば、哺乳動物である。哺乳動物としては、ヒト、霊長類、家畜、スポーツ動物、げっ歯類、及びペットが挙げられるが、これらに限定されない。非ヒト動物対象の非限定的な例としては、マウス、ラット、ハムスターなどのげっ歯類、及びモルモット、ウサギ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、並びに類人猿及びサルなどの非ヒト霊長類が挙げられる。

【0081】

本明細書に開示される主題の他の態様は、以下の開示に記載され、本明細書に開示される主題の範囲内である。

【0082】

５．２．ＣＤ３３
ＣＤ３３は、１回膜貫通分子であり、シアル酸結合免疫グロブリン（Ｉｇ）様レクチン（Ｓｉｇｌｅｃ）ファミリーのメンバーである。ＣＤ３３は、免疫グロブリン様の折り畳みを有する２つの細胞外ドメイン、ＩｇＶ及びＩｇＣ２からなる（図１Ａを参照されたい）。ＣＤ３３は、選択的スプライシングによって産生される３つのアイソフォームを有し、アイソフォーム３は、ＩｇＶドメインを欠く（Ｅｈｎｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ ４，ｅ２１８（２０１４）、Ｓａｎｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋ Ｌｙｍｐｈｏｍａ ５７，１９６５－１９６８（２０１６）、及びＨａｕｂｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ ３３，６４－７４（２０１９））最近の研究により、ＡＭＬ患者の約５０％が、ＩｇＶドメインの排除をもたらす、エクソン２を欠く選択的スプライシングされたＣＤ３３アイソフォームの発現をもたらすＣＤ３３一塩基多型（ＳＮＰ）（ｒｓ１２４５９４１９Ｃ＞Ｔ）を有することが示された（Ｂａｋｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６４，８４４３－８４５０（２００４））。これらの患者において、ＣＤ３３を標的とする抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であるゲムツズマブオゾガマイシン（ＧＯ）は、このＡＤＣがこのＩｇＶ欠損ＣＤ３３アイソフォームを発現するＡＭＬ細胞を殺傷することができないことに起因して、おそらく影響を及ぼさず、再発リスクを増加させた。この問題は、ＩｇＶドメインにおけるそれらのエピトープを考慮すると、現在臨床的に利用可能な全てのＣＤ３３標的化生成物が遭遇することになる（図１Ｂを参照されたい）（Ｐｅｒｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ３２，５０６－５１９ ｅ５０５（２０１７）を参照されたい）。

【0083】

特定の実施形態では、抗原認識受容体は、ヒトＣＤ３３に結合する。特定の実施形態では、ヒトＣＤ３３は、ＵｎｉＰｒｏｔ参照番号：Ｐ２０１３８－１（配列番号１）若しくはその断片を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。配列番号１を以下に提供する。特定の実施形態では、ＣＤ３３は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質ドメインを含む。特定の実施形態では、細胞外ドメインは、配列番号１のアミノ酸１８～２５９を含むか又はそれらからなる。特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１のアミノ酸２６０～２８２を含むか又はそれらからなる。特定の実施形態では、細胞質ドメインは、配列番号１のアミノ酸２８３～３６４を含むか、又はそれらからなる。
ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡＭＤＰＮＦＷＬＱＶＱＥＳＶＴＶＱＥＧＬＣＶＬＶＰＣＴＦＦＨＰＩＰＹＹＤＫＮＳＰＶＨＧＹＷ
ＦＲＥＧＡＩＩＳＲＤＳＰＶＡＴＮＫＬＤＱＥＶＱＥＥＴＱＧＲＦＲＬＬＧＤＰＳＲＮＮＣＳＬＳＩＶＤＡＲＲＲＤＮＧＳＹＦＦＲＭ
ＥＲＧＳＴＫＹＳＹＫＳＰＱＬＳＶＨＶＴＤＬＴＨＲＰＫＩＬＩＰＧＴＬＥＰＧＨＳＫＮＬＴＣＳＶＳＷＡＣＥＱＧＴＰＰＩＦＳＷＬ
ＳＡＡＰＴＳＬＧＰＲＴＴＨＳＳＶＬＩＩＴＰＲＰＱＤＨＧＴＮＬＴＣＱＶＫＦＡＧＡＧＶＴＴＥＲＴＩＱＬＮＶＴＹＶＰＱＮＰＴＴ
ＧＩＦＰＧＤＧＳＧＫＱＥＴＲＡＧＶＶＨＧＡＩＧＧＡＧＶＴＡＬＬＡＬＣＬＣＬＩＦＦＩＶＫＴＨＲＲＫＡＡＲＴＡＶＧＲＮＤＴＨ
ＰＴＴＧＳＡＳＰＫＨＱＫＫＳＫＬＨＧＰＴＥＴＳＳＣＳＧＡＡＰＴＶＥＭＤＥＥＬＨＹＡＳＬＮＦＨＧＭＮＰＳＫＤＴＳＴＥＹＳＥ
ＶＲＴＱ［配列番号１］

【0084】

特定の実施形態では、ＣＤ３３は、配列番号１に記載されるアミノ酸配列又はその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらからなる。

【0085】

特定の実施形態では、抗原認識受容体は、ヒトＣＤ３３の一部に結合する。特定の実施形態では、抗原認識受容体は、ＣＤ３３の細胞外ドメインに結合する。特定の実施形態では、ＣＤ３３の細胞外ドメインは、Ｉｇ様Ｖ型ドメイン及びＩｇ様Ｃ２型を含む。特定の実施形態では、ＣＤ３３の細胞外ドメインは、Ｉｇ様Ｃ２型を含む。特定の実施形態では、Ｉｇ様Ｖ型ドメインは、配列番号１のアミノ酸１９～１３５を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、Ｉｇ様Ｃ２型ドメインは、配列番号１のアミノ酸１４５～２２８を含むか、又はそれからなる。

【0086】

５．３．抗原認識受容体
本明細書に開示される抗原認識受容体は、ＣＤ３３を特異的に標的とするか、又はＣＤ３３に結合する。特定の実施形態では、抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。特定の実施形態では、抗原認識受容体は、ＴＣＲ様融合分子である。

【0087】

本明細書に開示される主題はまた、本明細書に開示される抗原認識受容体をコードする核酸分子を提供する。特定の実施形態では、核酸分子は、本明細書に開示されるＣＤ３３標的化抗原認識受容体のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。

【0088】

５．３．１．細胞外抗原結合ドメイン
特定の実施形態では、抗原認識受容体の細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３に結合する。

【0089】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒトｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ヒト化ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、マウスｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖファージライブラリを抗原－Ｆｃ融合タンパク質でスクリーニングすることによって特定される。

【0090】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、Ｆａｂである。特定の実施形態では、Ｆａｂは、架橋されている。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、Ｆ（ａｂ）_２である。

【0091】

前述の分子のうちのいずれかは、異種配列を有する融合タンパク質に含まれて、細胞外抗原結合ドメインを形成し得る。特定の非限定的な実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、具現化されたｓｃＦｖ）は、結合親和性で、例えば、１×１０^－８Ｍ以下、例えば、約１×１０^－８Ｍ以下、約５×１０^－９Ｍ以下、約１×１０^－９Ｍ以下、約５×１０^－１０Ｍ以下、約１×１０^－１０Ｍ以下、又は約１×１０^－１１Ｍ以下の解離定数（Ｋ_Ｄ）でＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約５×１０^－９Ｍ以下の解離定数（Ｋ_Ｄ）でＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３、例えば、可溶性ヒトＣＤ３３）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約５×１０^－９Ｍの解離定数（Ｋ_Ｄ）でＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３、例えば、可溶性ヒトＣＤ３３）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約１×１０^－９Ｍの解離定数（Ｋ_Ｄ）でＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３、例えば、可溶性ヒトＣＤ３３）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約１×１０^－９Ｍ～約５×１０^－９Ｍの解離定数（Ｋ_Ｄ）でＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３、例えば、可溶性ヒトＣＤ３３）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約１×１０^－９Ｍ～約２×１０^－９Ｍの解離定数（Ｋ_Ｄ）でＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３、例えば、可溶性ヒトＣＤ３３）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約５×１０^－９Ｍの解離定数（Ｋ_Ｄ）でＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３、例えば、可溶性ヒトＣＤ３３）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約１×１０^－９Ｍの解離定数（Ｋ_Ｄ）でＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３、例えば、可溶性ヒトＣＤ３３）に結合する。

【0092】

特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約１ｎＭ～約５０ｎＭ、約５ｎＭ～約５０ｎＭ、約１０ｎＭ～約５０ｎＭ、約２０ｎＭ～約５０ｎＭ、約３０ｎＭ～約５０ｎＭ、約４０ｎＭ～約５０ｎＭ、又は約５０ｎＭを超える半最大有効濃度（ＥＣ５０）値で、ＣＤ３３を発現する細胞（例えば、ＣＤ３３を発現するＡＭＬ細胞）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約１ｎＭ～約５ｎＭのＥＣ５０値で、ＣＤ３３を発現する細胞（例えば、ＣＤ３３を発現するＡＭＬ細胞）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約２ｎＭのＥＣ５０値で、ＣＤ３３を発現する細胞（例えば、ＣＤ３３を発現するＡＭＬ細胞）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約２．１６ｎＭのＥＣ５０値で、ＣＤ３３を発現する細胞（例えば、ＣＤ３３を発現するＡＭＬ細胞）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約５ｎＭ～約１０ｎＭのＥＣ５０値で、ＣＤ３３を発現する細胞（例えば、ＣＤ３３を発現するＡＭＬ細胞）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約１０ｎＭのＥＣ５０値で、ＣＤ３３を発現する細胞（例えば、ＣＤ３３を発現するＡＭＬ細胞）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約８．５ｎＭのＥＣ５０値で、ＣＤ３３を発現する細胞（例えば、ＣＤ３３を発現するＡＭＬ細胞）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約４０ｎＭ～約５０ｎＭのＥＣ５０値で、ＣＤ３３を発現する細胞（例えば、ＣＤ３３を発現するＡＭＬ細胞）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約４５ｎＭのＥＣ５０値で、ＣＤ３３を発現する細胞（例えば、ＣＤ３３を発現するＡＭＬ細胞）に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞外抗原結合ドメインは、約４５ｎＭのＥＣ５０値で、ＣＤ３３を発現する細胞（例えば、ＣＤ３３を発現するＡＭＬ細胞）に結合する。

【0093】

細胞外抗原結合ドメインの結合は、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば、成長阻害）、又はウエスタンブロットアッセイによって確認することができる。これらのアッセイの各々は、一般に、目的の複合体に特異的な標識された試薬（例えば、抗体、又はｓｃＦｖ）を使用することによって、特定の目的のタンパク質－抗体複合体の存在を検出する。例えば、ｓｃＦｖを放射性標識し、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）で使用することができる（例えば、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，Ｂ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ，Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｔｒａｉｎｉｎｇ Ｃｏｕｒｓｅ ｏｎ Ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ Ａｓｓａｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｔｈｅ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｍａｒｃｈ，１９８６（本明細書に参照として組み込まれる）を参照されたい）。放射性同位体は、γカウンター若しくはシンチレーションカウンターの使用、又は自己放射線検査のような手段によって検出され得る。特定の実施形態では、ＣＤ３３標的化細胞外抗原結合ドメインは、蛍光マーカーで標識される。蛍光マーカーの非限定的な例としては、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、青色蛍光タンパク質（例えば、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、アズライト、及びｍＫａｌａｍａ１）、シアン蛍光タンパク質（例えば、ＥＣＦＰ、セルリアン、及びＣｙＰｅｔ）、並びに黄色蛍光タンパク質（例えば、ＹＦＰ、シトリン、Ｖｅｎｕｓ、及びＹＰｅｔ）が挙げられる。特定の実施形態では、ＣＤ３３標的化ヒトｓｃＦｖは、ＧＦＰで標識される。

【0094】

特定の実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従って特定される。

【0095】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈを含む。配列番号２～４を表１に提供する。

【0096】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。配列番号５～７を表１に提供する。

【0097】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列又は保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0098】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0099】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。配列番号８のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号１０に記載されている。配列番号８及び１０を以下の表１に提供する。

【0100】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号９と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。配列番号９のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号１１に記載されている。配列番号９及び１１を以下の表１に提供する。

【0101】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、「３－Ｐ１４」と指定される。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、リンカーを介して連結される。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0102】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。

【0103】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ。

【表1】

【0104】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈを含む。配列番号１２～１４を表２に提供する。

【0105】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。配列番号１５～１７を表２に提供する。

【0106】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号１５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0107】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0108】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。配列番号１８のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号２０に記載されている。配列番号１８及び２０を以下の表２に提供する。

【0109】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。配列番号１９のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号２１に記載されている。配列番号１９及び２１を以下の表２に提供する。

【0110】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、「４－Ｂ２」と指定される。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、リンカーを介して連結される。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0111】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。

【0112】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ。

【表2】

【0113】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈを含む。配列番号２２～２４を表３に提供する。

【0114】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。配列番号２５～２７を表３に提供する。

【0115】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号２５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0116】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0117】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。配列番号２８のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号３０に記載されている。配列番号２８及び３０を以下の表３に提供する。

【0118】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。配列番号２９のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号３１に記載されている。配列番号２９及び３１を以下の表３に提供する。

【0119】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、「１－Ｊ１９」と指定される。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、リンカーを介して連結される。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0120】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。

【0121】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ。

【表3】

【0122】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号３２に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈを含む。配列番号３２～３４を表４に提供する。

【0123】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。配列番号２５～２７を表４に提供する。

【0124】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号３２に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、配列番号３４に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号２５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0125】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0126】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。配列番号３５のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号３６に記載されている。配列番号３５及び３６を以下の表４に提供する。

【0127】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。配列番号２９のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号３１に記載されている。配列番号２９及び３１を以下の表４に提供する。

【0128】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、「１－Ｊ１９－２」と指定される。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、リンカーを介して連結される。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0129】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。

【0130】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ。

【表4】

【0131】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号３７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号３９に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈを含む。配列番号３７～３９を表５に提供する。

【0132】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４０に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。配列番号４０～４２を表５に提供する。

【0133】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号３７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、配列番号３９に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号４０に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0134】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0135】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４３に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４３に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。配列番号４３のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号４５に記載されている。配列番号４３及び４５を以下の表５に提供する。

【0136】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４４に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４４に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。配列番号４４のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号４６に記載されている。配列番号４４及び４６を以下の表５に提供する。

【0137】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号４４に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、「１－Ｐ１３」と指定される。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、リンカーを介して連結される。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0138】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。

【0139】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ。

【表5】

【0140】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４８に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈを含む。配列番号３８、４７及び４８を表６に提供する。

【0141】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４９に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５０に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号５１に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。配列番号４９～５１を表６に提供する。

【0142】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、配列番号４８に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号４９に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５０に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号５１に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0143】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号４７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、配列番号４８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号４９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号５１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0144】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５２に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。配列番号５２のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号５４に記載されている。配列番号５２及び５４を以下の表６に提供する。

【0145】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５３に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５３に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。配列番号５３のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号５５に記載されている。配列番号５３及び５５を以下の表６に提供する。

【0146】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５２に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、「１－Ｐ２３」と指定される。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0147】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。

【0148】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ。

【表6】

【0149】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号５８に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈを含む。配列番号５６～５８を表７に提供する。

【0150】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５９に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６０に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号６１に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。配列番号５９～６１を表７に提供する。

【0151】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、配列番号５８に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号５９に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６０に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号６１に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0152】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、配列番号５８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号５９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0153】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号６２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号６２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６２に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。配列番号６２のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号６４に記載されている。配列番号６２及び６４を以下の表７に提供する。

【0154】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号６３に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号６３に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号６３に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。配列番号６３のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号６５に記載されている。配列番号６３及び６５を以下の表７に提供する。

【0155】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号６２に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号６３に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、「１－Ａ２０」と指定される。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、リンカーを介して連結される。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0156】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。

【0157】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ。

【表7】

【0158】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号６６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号６８に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈを含む。配列番号６６～６８を表８に提供する。

【0159】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号６９に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号７０に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７１に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。配列番号６９～７１を表８に提供する。

【0160】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号６６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、配列番号６８に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号６９に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号７０に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７１に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0161】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号６６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、配列番号６８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号６９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0162】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号７２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号７２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７２に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。配列番号７２のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号７４に記載されている。配列番号７２及び７４を以下の表８に提供する。

【0163】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号７３に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号７３に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。配列番号７３のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号７５に記載されている。配列番号７３及び７５を以下の表８に提供する。

【0164】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号７２に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、「１－Ｎ３」と指定される。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、リンカーを介して連結される。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0165】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。

【0166】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ。

【表8】

【0167】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号７６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈを含む。配列番号５７、７６及び７７を表９に提供する。

【0168】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号７８に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号７９に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号８０に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。配列番号７８～８０を表９に提供する。

【0169】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号７６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、配列番号７７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号７８に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号７９に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号８０に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0170】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号７６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、配列番号７７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号７８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0171】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８１に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８１に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８１に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。配列番号８１のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号８３に記載されている。配列番号８１及び８３を以下の表９に提供する。

【0172】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８２に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。配列番号８２のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号８４に記載されている。配列番号８２及び８４を以下の表９に提供する。

【0173】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８１に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号８２に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、「１－Ｈ１９」と指定される。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、リンカーを介して連結される。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0174】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。

【0175】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ。

【表9】

【0176】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号８６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号８７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈを含む。配列番号８５～８７を表１０に提供する。

【0177】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。配列番号５、４１及び４２を表１０に提供する。

【0178】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１を含むＶ_Ｈ、配列番号８６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２を含むＶ_Ｈ、配列番号８７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0179】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、配列番号８７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0180】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８８に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。配列番号８８のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号９０に記載されている。配列番号８８及び９０を以下の表１０に提供する。

【0181】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８９に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８９に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。配列番号８９のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号９１に記載されている。配列番号８９及び９１を以下の表１０に提供する。

【0182】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８８に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号８９に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、「２－Ｆ１８」と指定される。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、リンカーを介して連結される。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0183】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。

【0184】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ。

【表10】

【0185】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈを含む。配列番号２～４を表１１に提供する。

【0186】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。配列番号５～７を表１１に提供する。

【0187】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、配列番号４に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号５に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列又はその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0188】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む。

【0189】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｈを含む。配列番号８のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号９３に記載されている。配列番号８及び９３を以下の表１１に提供する。

【0190】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号９２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％）相同又は同一であるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。例えば、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号９２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、若しくは約１００％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号９２に記載されるアミノ酸配列を含む、Ｖ_Ｌを含む。配列番号９２のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、配列番号９４に記載されている。配列番号９２及び９４を以下の表１１に提供する。

【0191】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ、及び配列番号９２に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌを含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、「４－Ｐ３」と指定される。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、リンカーを介して連結される。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0192】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。

【0193】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ。

【表11】

【0194】

特定の配列（例えば、配列番号８、配列番号９、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４３、配列番号４４、配列番号５２、配列番号５３、配列番号６２、配列番号６３、配列番号７２、配列番号７３、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８８、配列番号８９、又は配列番号９２）と少なくとも約８０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％（例えば、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％）の相同性又は同一性を有するＶ_Ｈアミノ酸配列及び／又はＶ_Ｌアミノ酸配列は、特定の配列（複数可）に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含み得るが、ＣＤ３３に結合する能力を保持する。

【0195】

特定の実施形態では、合計１～１０個のアミノ酸が、特定の配列（例えば、配列番号８、配列番号９、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３５、配列番号４３、配列番号４４、配列番号５２、配列番号５３、配列番号６２、配列番号６３、配列番号７２、配列番号７３、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８８、配列番号８９、又は配列番号９２）において置換、挿入、及び／又は欠失される。特定の実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、細胞外抗原結合ドメインのＣＤＲ（例えば、ＦＲ内）の外側の領域で生じる。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号８、９、１８、１９、２８、２９、３５、４３、４４、５２、５３、６２、６３、７２、７３、８１、８２、８８、８９、又は９２から選択されるＶ_Ｈ配列及び／又はＶ_Ｌ配列を含む（その配列（配列番号８、９、１８、１９、２８、２９、３５、４３、４４、５２、５３、６２、６３、７２、７３、８１、８２、８８、８９、又は９２）の翻訳後修飾を含む）。

【0196】

特定の実施形態では、本明細書に開示される抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）の細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）への結合について、例えば、本明細書に開示されるｓｃＦｖ（例えば、３－Ｐ１４、４－Ｂ２、１－Ｊ１９、１－Ｊ１９－２、１－Ｐ１３、１－Ｐ２３、１－Ａ２０、２－Ｎ３、１－Ｈ１９、２－Ｆ１８、及び４－Ｐ３）のうちのいずれか１つのＶ_Ｈ ＣＤＲ１配列、Ｖ_Ｈ ＣＤＲ２配列、及びＶ_Ｈ ＣＤＲ３配列、並びにＶ_Ｌ ＣＤＲ１配列、Ｖ_Ｌ ＣＤＲ２配列、及びＶ_Ｌ ＣＤＲ３配列を含む、参照抗体又はその抗原結合断片と交差競合する。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）への結合について、例えば、本明細書に開示されるｓｃＦｖ（例えば、３－Ｐ１４、４－Ｂ２、１－Ｊ１９、１－Ｊ１９－２、１－Ｐ１３、１－Ｐ２３、１－Ａ２０、２－Ｎ３、１－Ｈ１９、２－Ｆ１８、及び４－Ｐ３）のうちのいずれか１つのＶ_Ｈ配列及びＶ_Ｌ配列を含む、参照抗体又はその抗原結合部分と交差競合する。

【0197】

特定の実施形態では、本明細書に開示される抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）の細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）への結合について、ｓｃＦｖ ３－Ｐ１４のＶ_Ｈ ＣＤＲ１配列、Ｖ_Ｈ ＣＤＲ２配列、及びＶ_Ｈ ＣＤＲ３配列、並びにＶ_Ｌ ＣＤＲ１配列、Ｖ_Ｌ ＣＤＲ２配列、及びＶ_Ｌ ＣＤＲ３配列を含む、参照抗体又はその抗原結合部分と交差競合する。例えば、本明細書に開示される抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）の細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）への結合について、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ ＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ ＣＤＲ２、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ ＣＤＲ３、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ ＣＤＲ１、配列番号６に記載される配列を有するアミノ酸を含むＶ_Ｌ ＣＤＲ２、及び配列番号７に記載される配列を有するアミノ酸を含むＶ_Ｌ ＣＤＲ３を含む、参照抗体又はその抗原結合部分と交差競合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）の細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）への結合について、ｓｃＦｖ ３－Ｐ１４のＶ_Ｈ配列及びＶ_Ｌ配列を含む参照抗体又はその抗原結合部分と交差競合する。例えば、本明細書に開示される抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）の細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）への結合について、配列番号８に記載される配列を有するアミノ酸を含むＶ_Ｈ、及び配列番号９に記載される配列を有するアミノ酸を含むＶ_Ｌを含む参照抗体又はその抗原結合部分と交差競合する。

【0198】

特定の実施形態では、本明細書に開示される抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）の細胞外抗原結合ドメインは、参照抗体又はその抗原結合部分と同じＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）上のエピトープ領域に結合する。例えば、本明細書に開示されるＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、例えば、本明細書に開示されるｓｃＦｖ（例えば、３－Ｐ１４、４－Ｂ２、１－Ｊ１９、１－Ｊ１９－２、１－Ｐ１３、１－Ｐ２３、１－Ａ２０、２－Ｎ３、１－Ｈ１９、２－Ｆ１８、及び４－Ｐ３）のうちのいずれか１つのＶ_Ｈ ＣＤＲ１配列、Ｖ_Ｈ ＣＤＲ２配列、及びＶ_Ｈ ＣＤＲ３配列、並びにＶ_Ｌ ＣＤＲ１配列、Ｖ_Ｌ ＣＤＲ２配列、及びＶ_Ｌ ＣＤＲ３配列を含む参照抗体又はその抗原結合部分と同じＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）上のエピトープ領域に結合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）の細胞外抗原結合ドメインは、例えば、本明細書に開示されるｓｃＦｖ（例えば、３－Ｐ１４、４－Ｂ２、１－Ｊ１９、１－Ｊ１９－２、１－Ｐ１３、１－Ｐ２３、１－Ａ２０、２－Ｎ３、１－Ｈ１９、２－Ｆ１８、及び４－Ｐ３）のうちのいずれか１つのＶ_Ｈ配列及びＶ_Ｌ配列を含む参照抗体又はその抗原結合部分と同じＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）上のエピトープ領域に結合する。

【0199】

特定の実施形態では、本明細書に開示される抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）の細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）への結合について、参照抗体又はその抗原結合部分と交差競合する。例えば、本明細書に開示される抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）の細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）への結合について、例えば、本明細書に開示されるｓｃＦｖ（例えば、３－Ｐ１４、４－Ｂ２、１－Ｊ１９、１－Ｊ１９－２、１－Ｐ１３、１－Ｐ２３、１－Ａ２０、２－Ｎ３、１－Ｈ１９、２－Ｆ１８、及び４－Ｐ３）のうちのいずれか１つのＶ_Ｈ ＣＤＲ１配列、Ｖ_Ｈ ＣＤＲ２配列、及びＶ_Ｈ ＣＤＲ３配列、並びにＶ_Ｌ ＣＤＲ１配列、Ｖ_Ｌ ＣＤＲ２配列、及びＶ_Ｌ ＣＤＲ３配列を含む参照抗体又はその抗原結合部分と交差競合する。特定の実施形態では、本明細書に開示される抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）の細胞外抗原結合ドメインは、例えば、本明細書に開示されるｓｃＦｖ（例えば、３－Ｐ１４、４－Ｂ２、１－Ｊ１９、１－Ｊ１９－２、１－Ｐ１３、１－Ｐ２３、１－Ａ２０、２－Ｎ３、１－Ｈ１９、２－Ｆ１８、及び４－Ｐ３）のうちのいずれか１つのＶ_Ｈ配列及びＶ_Ｌ配列を含む参照抗体又はその抗原結合部分と同じＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）上のエピトープ領域に結合する。

【0200】

ＣＤ３３（例えば、ヒトＣＤ３３）への結合について参照抗体又はその抗原結合部分と交差競合するか、又は競合する細胞外抗原結合ドメインは、限定されないが、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、Ｂｉａｃｏｒｅ、フローサイトメトリー、ウエスタンブロッティング、及び任意の他の好適な定量的又は定性的抗体結合アッセイを含む、当該技術分野で既知の日常的な方法を使用することによって特定することができる。競合ＥＬＩＳＡは、Ｊ．Ｗａｌｋｅｒによって編集された、Ｍｏｒｒｉｓ，“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ｂｙ Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ ＥＬＩＳＡ”，Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（１９９６），ｐｐ５９５－６００（その全体が参照により組み込まれる）に記載されている。特定の実施形態では、抗体結合アッセイは、ＣＤ３３ポリペプチドに対する参照抗体の初期結合を測定することと、参照抗体を試験細胞外抗原結合ドメインと混合することと、試験細胞外抗原結合ドメインの存在下で、参照抗体のＣＤ３３ポリペプチドに対する第２の結合を測定することと、初期結合を参照抗体の第２の結合と比較することとを含み、初期結合と比較して、ＣＤ３３ポリペプチドに対する参照抗体の第２の結合の減少は、試験細胞外抗原結合ドメインが、ＣＤ３３への結合について、参照抗体、例えば、同じ又は実質的に同じエピトープ、重複エピトープ、又は隣接するエピトープを認識する抗体と交差競合することを示す。特定の実施形態では、参照抗体は、例えば、蛍光色素、ビオチン、又はペルオキシダーゼで標識される。特定の実施形態では、ＣＤ３３ポリペプチドは、細胞内、例えば、フローサイトメトリー試験で発現される。特定の実施形態では、ＣＤ３３ポリペプチドは、Ｂｉａｃｏｒｅシップ（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ試験において）、又は表面プラズモン共鳴分析に好適な他の培地を含む表面上に固定化される。（ＣＤ３３に結合しない）完全に無関係な抗体の存在下における参照抗体の結合は、対照の高い値として機能し得る。対照の低い値は、標識された参照抗体を標識されていない参照抗体とインキュベートすることによって得ることができ、標識された参照抗体の競合及び低減した結合が生じるであろう。特定の実施形態では、参照抗体のＣＤ３３ポリペプチドへの結合を少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％低減させる試験細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３への結合について参照抗体と交差競合する細胞外抗原結合ドメインであると考えられる。特定の実施形態では、アッセイは、室温で実施される。

【0201】

特定の実施形態では、抗体結合アッセイは、ＣＤ３３ポリペプチドへの試験細胞外抗原結合ドメインの初期結合を測定することと、試験細胞外抗原結合ドメインを参照抗体と混合することと、参照抗体の存在下で、試験細胞外抗原結合ドメインのＣＤ３３ポリペプチドへの第２の結合を測定することと、試験細胞外抗原結合ドメインの初期結合を、試験細胞外抗原結合ドメインの第２の結合と比較することとを含み、初期結合と比較して、試験細胞外抗原結合ドメインのＣＤ３３ポリペプチドへの第２の結合の減少は、試験細胞外抗原結合ドメインが、ＣＤ３３への結合について、参照抗体、例えば、同じ又は実質的に同じエピトープ、重複エピトープ、又は隣接するエピトープを認識する抗体と交差競合することを示す。特定の実施形態では、試験細胞外抗原結合ドメインは、例えば、蛍光色素、ビオチン、又はペルオキシダーゼで標識される。特定の実施形態では、ＣＤ３３ポリペプチドは、細胞内、例えば、フローサイトメトリー試験で発現される。特定の実施形態では、ＣＤ３３ポリペプチドは、Ｂｉａｃｏｒｅシップ（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ試験において）、又は表面プラズモン共鳴分析に好適な他の培地を含む表面上に固定化される。（ＣＤ３３に結合しない）完全に無関係な抗体の存在下における試験細胞外抗原結合ドメインの結合は、対照の高い値として機能し得る。対照の低い値は、標識された試験細胞外抗原結合ドメインを、標識されていない試験細胞外抗原結合ドメインとインキュベートすることによって得ることができ、標識された試験細胞外抗原結合ドメインの競合及び低減した結合が生じるであろう。特定の実施形態では、ＣＤ３３ポリペプチドへの結合が、参照抗体の存在下で少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％減少する試験細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３への結合について参照抗体と交差競合する細胞外抗原結合ドメインであると考えられる。特定の実施形態では、アッセイは、室温で実施される。

【0202】

特定の実施形態では、本明細書に開示される抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）の細胞外抗原結合ドメインは、細胞外抗原結合ドメインの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を接続するリンカーを含む。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９５に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９７に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９８に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号９９に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる。特定の実施形態では、リンカーは、配列番号１００に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる。

【0203】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。

【0204】

特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメイン内の可変領域は、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）が配置されるように、次々と連結されなければならない。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインがｓｃＦｖである場合、可変領域は、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｌ－Ｖ_Ｈ。

【0205】

５．３．２．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
特定の実施形態では、抗原認識受容体は、ＣＡＲである。ＣＡＲは、免疫エフェクター細胞に目的の特異性を移植又は与える操作された受容体である。ＣＡＲはモノクローナル抗体の特異性をＴ細胞に移植するために使用され得、それらのコード配列の移入はレトロウイルスベクターによって促進される。

【0206】

３世代のＣＡＲが存在する。「第一世代」のＣＡＲは、典型的には、細胞質／細胞内シグナル伝達ドメインに融合される膜貫通ドメインに融合される細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から構成される。「第一世代」のＣＡＲは、新規抗原認識を提供し、ＨＬＡ媒介抗原提示とは無関係に、単一の融合分子中のＣＤ３ζ鎖シグナル伝達ドメインを介してＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の両方の活性化を引き起こすことができる。「第二世代」のＣＡＲは、様々な共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０）からの細胞内シグナル伝達ドメインをＣＡＲの細胞質尾部に付加し、Ｔ細胞に追加のシグナルを提供する。「第二世代」のＣＡＲは、共刺激（例えば、ＣＤ２８又は４－１ＢＢ）及び活性化（ＣＤ３ζ）の両方を提供するものを含む。「第三世代」のＣＡＲは、複数の共刺激（例えば、ＣＤ２８及び４－１ＢＢ）及び活性化（ＣＤ３ζ）を提供するものを含む。特定の実施形態では、抗原認識受容体は、第一世代のＣＡＲである。特定の実施形態では、抗原認識受容体は、共刺激分子又はその断片の細胞内シグナル伝達ドメインを含まないＣＡＲである。特定の実施形態では、抗原認識受容体は、第二世代のＣＡＲである。

【0207】

特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３３に特異的に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0208】

５．３．２．１．ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメイン
ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、本明細書、例えば、セクション５．３．１に開示される任意の細胞外抗原結合ドメインであり得る。

【0209】

特定の実施形態では、ＣＡＲは、セクション５．３．１に開示される細胞外抗原結合ドメインを含む。

【0210】

加えて、細胞外抗原結合ドメインは、新生タンパク質を内皮小胞体内に導くリーダー又はシグナルペプチドを含むことができる。ＣＡＲがグリコシル化され、細胞膜内に固定される場合、シグナルペプチド又はリーダーは、必須であり得る。シグナル配列又はリーダーは、新しく合成されたタンパク質のＮ末端に存在するペプチド配列（約５個、約１０個、約１５個、約２０個、約２５個、又は約３０個のアミノ酸長）であってもよく、これは分泌経路へのそれらの侵入を導く。特定の実施形態では、シグナルペプチドは、細胞外抗原結合ドメインの５’末端に共有結合される。特定の実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＤ８ポリペプチドを含み、例えば、ＣＡＲは、切断型ＣＤ８シグナルペプチドを含む。特定の実施形態では、ＣＤ８シグナルペプチドは、配列番号１０１のアミノ酸１～１８を含むか、又はそれからなる。配列番号１０１のアミノ酸１～１８をコードする例示的なヌクレオチド配列は、以下に提供される配列番号１２２に記載されている。
ＡＴＧＧＣＴＣＴＣＣＣＡＧＴＧＡＣＴＧＣＣＣＴＡＣＴＧＣＴＴＣＣＣＣＴＡＧＣＧＣＴＴＣＴＣＣＴＧＣＡＴＧＣＡ［配列番号１２２］

【0211】

５．３．２．２．ＣＡＲの膜貫通ドメイン
特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、膜の少なくとも一部分にまたがる疎水性アルファヘリックスを含む。異なる膜貫通ドメインは、異なる受容体安定性をもたらす。抗原認識後、受容体がクラスター化し、シグナルが細胞に伝達される。本明細書に開示される主題によれば、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８の天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、ＣＤ２８の天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、ＣＤ３ζの天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、ＣＤ４の天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、４－１ＢＢの天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、ＯＸ４０の天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、ＩＣＯＳの天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、ＣＤ８４の天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、ＣＤ１６６の天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、ＣＤ８ａの天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、ＣＤ８ｂの天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、ＩＣＡＭ－１の天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、ＣＴＬＡ－４の天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、ＣＤ２７の天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、ＣＤ４０の天然若しくは修飾膜貫通ドメイン又はその断片、ＮＫＧＤ２又はその断片、あるいはそれらの組み合わせを含み得る。

【0212】

特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド（例えば、ＣＤ８の膜貫通ドメイン又はその断片）を含む。特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ヒトＣＤ８又はその断片の膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１１３９３４５．１（配列番号１０１）又はその断片を有するアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％若しくは約１００％相同若しくは同一であるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、かつ／又は任意選択で、最大１つ、若しくは最大２つ、若しくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得る。特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、少なくとも２０個、若しくは少なくとも３０個、若しくは少なくとも４０個、若しくは少なくとも５０個、及び最大で２３５個のアミノ酸長である配列番号１０１の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、配列番号１０１のアミノ酸１～２３５、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、１３７～２０９、若しくは２００～２３５のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号１０１のアミノ酸１３７～２０９を含むか、又はそれからなるＣＤ８ポリペプチドを含む。配列番号１０１を以下に提供する。
ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＳＱＦＲＶＳＰＬＤＲＴＷＮＬＧＥＴＶＥＬＫＣＱＶＬＬＳＮＰＴＳＧＣＳＷＬＦＱＰＲＧＡＡＡＳＰＴＦＬＬＹＬＳＱＮＫＰＫＡＡＥＧＬＤＴＱＲＦＳＧＫＲＬＧＤＴＦＶＬＴＬＳＤＦＲＲＥＮＥＧＹＹＦＣＳＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＶＶＫＳＧＤＫＰＳＬＳＡＲＹＶ［配列番号１０１］

【0213】

特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、マウスＣＤ８又はその断片の膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＡＡＡ９２５３３．１（配列番号１０２）又はその断片を有するアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％若しくは約１００％相同若しくは同一であるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、かつ／又は任意選択で、最大１つ、若しくは最大２つ、若しくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得る。特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、配列番号１０２の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、これは、少なくとも約２０個、又は少なくとも約３０個、又は少なくとも約４０個、又は少なくとも約５０個、又は少なくとも約６０個、又は少なくとも約７０個、又は少なくとも約１００個、又は少なくとも約２００個、かつ最大２４７個のアミノ酸長である。特定の実施形態では、ＣＤ８ポリペプチドは、配列番号１０２のアミノ酸１～２４７、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、１５１～２１９、若しくは２００～２４７のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号１０２のアミノ酸１５１～２１９を含むか、又はそれからなるＣＤ８ポリペプチドを含む。配列番号１０２を以下に提供する。

【化1】

【0214】

特定の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ＣＤ２８の膜貫通ドメイン又はその断片）を含む。

【0215】

特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ヒトＣＤ２８又はその断片の膜貫通ドメインを含む。特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００６１３０（配列番号１０３）又はその断片を有するアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％若しくは１００％相同若しくは同一であるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、かつ／又は任意選択で、最大１つ、若しくは最大２つ、若しくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得る。非限定的な特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも２０個、若しくは少なくとも３０個、若しくは少なくとも４０個、若しくは少なくとも５０個、及び最大で２２０個のアミノ酸長である配列番号１０３の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１０３のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、１５３～１７９、若しくは２００～２２０のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号１０３のアミノ酸１５３～１７９を含むか、又はそれからなるＣＤ２８ポリペプチドを含む。配列番号１０３を以下に提供する：

【化2】

【0216】

配列番号１０３のアミノ酸１５３～１７９をコードする例示的なヌクレオチド配列は、以下に提供される配列番号１０４に記載されている。
ＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧ［配列番号１０４］

【0217】

特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、マウスＣＤ２８の膜貫通ドメイン又はその断片）を含む。特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿０３１６６８．３（配列番号１０５）又はその断片を有するアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％若しくは１００％相同若しくは同一であるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、かつ／又は任意選択で、最大１つ、若しくは最大２つ、若しくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得る。特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも２０個、若しくは少なくとも３０個、若しくは少なくとも４０個、若しくは少なくとも５０個、及び最大で２１８個のアミノ酸長である配列番号１０５の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１０５のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、１５１～１７７、若しくは２００～２１８のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、配列番号１０５のアミノ酸１５１～１７７を含むか、又はそれからなるＣＤ２８ポリペプチドを含む。配列番号１０５を以下に提供する：

【化3】

【0218】

特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインを膜貫通ドメインに連結するスペーサー領域を更に含む。スペーサー領域は、抗原結合ドメインが異なる方向に配向して、ＣＡＲの活性化している活性を維持しながら抗原認識を促進することを可能にするのに十分な柔軟性であり得る。

【0219】

特定の実施形態では、ＣＡＲのヒンジ／スペーサー領域は、ＣＤ８の天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、ＣＤ２８の天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、ＣＤ３ζの天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、ＣＤ４０の天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、４－１ＢＢの天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、ＯＸ４０の天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、ＣＤ８４の天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、ＣＤ１６６の天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、ＣＤ８ａの天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、ＣＤ８ｂの天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、ＩＣＯＳの天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、ＩＣＡＭ－１の天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、ＣＴＬＡ－４の天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、ＣＤ２７の天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、ＣＤ４０の天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、ＮＫＧＤ２の天然若しくは修飾ヒンジ領域又はその断片、合成ポリペプチド（免疫応答に関連するタンパク質に基づかない）、あるいはそれらの組み合わせを含む。ヒンジ／スペーサー領域は、ＩｇＧ１からのヒンジ領域、若しくは免疫グロブリンのＣＨ_２ＣＨ_３領域及びＣＤ３の一部分、ＣＤ８ポリペプチドの一部分（例えば、配列番号１０１若しくは１０２の一部分）、ＣＤ２８ポリペプチドの一部分（例えば、配列番号１０３若しくは１０５の一部分）、それらと少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、若しくは少なくとも約１００％相同若しくは同一である前述のうちのいずれかの変形、又は合成スペーサー配列であり得る。

【0220】

５．３．２．３．ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメイン
特定の実施形態では、ＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。特定の非限定的な実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζポリペプチドを含む。ＣＤ３ζは、細胞（例えば、リンパ系の細胞、例えば、Ｔ細胞）を活性化又は刺激することができる。野生型（「天然」）ＣＤ３ζは、３つの機能的免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）、３つの機能的塩基性リッチ伸長（ＢＲＳ）領域（ＢＲＳ１、ＢＲＳ２及びＢＲＳ３）を含む。抗原が結合した後、ＣＤ３ζは、活性化シグナルを細胞（例えば、リンパ系の細胞、例えば、Ｔ細胞）に伝達する。ＣＤ３ζ鎖の細胞内シグナル伝達ドメインは、内因性ＴＣＲからのシグナルの主要伝達物質である。

【0221】

特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、天然ＣＤ３ζを含む。特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿９３２１７０（配列番号１０６）又はその断片を有するアミノ酸配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％若しくは約１００％相同若しくは同一であるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、かつ／又は任意選択で、最大１つ、若しくは最大２つ、若しくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得る。特定の非限定的な実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、少なくとも２０個、若しくは少なくとも３０個、若しくは少なくとも４０個、若しくは少なくとも５０個、及び最大で１６４個のアミノ酸長である配列番号１０６の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドは、配列番号１０６のアミノ酸１～１６４、１～５０、５０～１００、５２～１６４、１００～１５０、若しくは１５０～１６４のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１０６のアミノ酸５２～１６４を含むか、又はそれからなるＣＤ３ζポリペプチドを含む。配列番号１０６を以下に提供する：

【化4】

【0222】

特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１０７に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなるＣＤ３ポリペプチドを含む。配列番号１０７を以下に提供する。
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ［配列番号１０７］

【0223】

配列番号１０７のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、以下に提供する配列番号１０８に記載されている。
ＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣ［配列番号１０８］

【0224】

特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、少なくとも共刺激シグナル伝達領域を更に含む。特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域は、少なくとも１つの共刺激分子又はその断片を含む。特定の実施形態では、共刺激シグナル伝達領域は、少なくとも１つの共刺激分子又はその断片の細胞内ドメインを含む。

【0225】

本明細書で使用される場合、「共刺激分子」とは、抗原にリンパ球の効率的な応答を提供することができる抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子を指す。特定の実施形態では、共刺激分子は、最適なリンパ球活性化を提供することができる。共刺激分子の非限定的な例としては、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ－１０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＮＫＧＤ２、ＣＤ２、ＦＮ１４、ＨＶＥＭ、ＬＴＢＲ、ＣＤ２８Ｈ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩ、ＴＲＯＹ、ＲＡＮＫ、ＣＤ４０、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＧＩＴＲ、ＤＲ６、及びＮＧＦＲ、並びにそれらの組み合わせが挙げられる。共刺激分子は、共刺激リガンドに結合することができ、これは、その受容体に結合すると、共刺激応答、すなわち、抗原認識受容体（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ））がその標的抗原に結合するときに提供される刺激に影響を与える細胞内応答を生成する、細胞表面上に発現されるタンパク質である。一例として、４－１ＢＢリガンド（すなわち、４－１ＢＢＬ）は、ＣＡＲシグナルと組み合わせてＣＡＲ^＋Ｔ細胞のエフェクター細胞機能を誘導する細胞内シグナルを提供するために、４－１ＢＢに結合し得る。

【0226】

特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチド、例えば、ＣＤ２８の細胞内ドメイン又はその断片を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチド、例えば、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン又はその断片を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１０３に記載のアミノ酸配列若しくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同若しくは同一であるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、かつ／又は任意選択で、最大１つ、若しくは最大２つ、若しくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得る。特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも２０個、若しくは少なくとも３０個、若しくは少なくとも４０個、若しくは少なくとも５０個、及び最大で２２０個のアミノ酸長である配列番号１０３の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１０３のアミノ酸１～２２０、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１１４～２２０、１５０～２００、１８０～２２０、若しくは２００～２２０のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１０３のアミノ酸１８０～２２０のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。

【0227】

配列番号１０３のアミノ酸１８０～２２０をコードする例示的なヌクレオチド配列は、以下に提供される配列番号１０９に記載されている。
ＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣ［配列番号１０９］

【0228】

特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチド、例えば、マウスＣＤ２８の細胞内ドメイン又はその断片を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１０４に記載のアミノ酸配列若しくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同若しくは同一であるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、かつ／又は任意選択で、最大１つ、若しくは最大２つ、若しくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得る。非限定的な特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、少なくとも約２０個、若しくは少なくとも約３０個、若しくは少なくとも約４０個、若しくは少なくとも約５０個、及び最大で２１８個のアミノ酸長である配列番号１０４の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１０５のアミノ酸１～２１８、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２１８、１７８～２１８、若しくは２００～２１８のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲの共刺激シグナル伝達領域は、配列番号１０５のアミノ酸１７８～２１８を含むか、又はそれからなるＣＤ２８ポリペプチドを含む。

【0229】

特定の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲの共刺激シグナル伝達領域は、変異したＹＭＮＭモチーフを含むＣＤ２８ポリペプチドを含む。ＣＤ２８は、共刺激分子としての機能を通じて、Ｔ細胞活性化において重要な役割を果たす膜貫通タンパク質である。ＣＤ２８は、ＣＤ２８の有効なシグナル伝達に重要な細胞内モチーフを含む細胞内ドメインを有する。特定の実施形態では、ＣＤ２８細胞内ドメインは、ＴＣＲ刺激後のシグナル伝達経路を調節する細胞内サブドメイン（「細胞内モチーフ」としても知られている）を含む。ＣＤ２８は、３つの細胞内モチーフ：ＹＭＮＭモチーフ、及び２つのプロリンリックモチーフ：ＰＲＲＰモチーフ、及びＰＹＡＰモチーフを含む。ＣＤ２８細胞内モチーフは、それらのＳＨ２又はＳＨ３ドメインを介してこれらのモチーフと相互作用する多数のアダプター分子についてのドッキング部位として機能することができる。そのような相互作用は、遺伝子発現を調節する転写因子上で終結する下流シグナルを伝達する。例えば、天然ＹＭＮＭモチーフは、ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）のｐ８５サブユニットに結合する。天然ＹＭＮＭモチーフはまた、成長因子受容体結合タンパク質２（Ｇｒｂ２）及び／又はＧｒｂ２関連アダプタータンパク質２（ＧＡＤＳ）に結合する。Ｇｒｂ２はＧａｂ１及びＧａｂ２に結合し、これは次にＰＩ３Ｋのｐ８５サブユニットを動員することができる。

【0230】

特定の実施形態では、天然ＹＭＮＭモチーフは、ＹＭＮＭ（配列番号１２３）に記載されるアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、天然ＹＭＮＭモチーフは、コンセンサス配列ＹＭｘＭ（配列番号１２４）を介して、ＰＩ３Ｋのｐ８５サブユニットに結合し、ここで、ｘは、アスパラギン酸（Ｎ）ではない。特定の実施形態では、天然ＹＭＮＭモチーフは、コンセンサス配列ＹｘＮｘ（配列番号１２５）を介して、Ｇｒｂ２及び／又はＧＡＤに結合し、ここで、ｘは、メチオニン（Ｍ）ではない。

【0231】

特定の実施形態では、本明細書に開示される変異したＹＭＮＭモチーフを含むＣＤ２８ポリペプチドは、天然ＹＭＮＭモチーフを含むＣＤ２８分子と比較して、ＰＩ３Ｋのｐ８５サブユニットの動員が低減している。特定の実施形態では、ＰＩ３Ｋのｐ８５サブユニットは、変異したＹＭＮＭモチーフに結合せず、それによって、ＣＤ２８ポリペプチドへのＰＩ３Ｋのｐ８５サブユニットの動員を低減する。ＰＩ３Ｋのｐ８５サブユニットの結合をブロックする変異したＹＭＮＭモチーフは、Ｇｒｂ２及び／又はＧＡＤＳへの結合を保持する。したがって、Ｇｒｂ２／ＧＡＤＳの下流シグナル伝達は無傷のままであり、例えば、ＩＬ－２分泌につながる下流シグナル伝達は無傷のままである。そのような変異したＹＭＮＭモチーフは、「ＧＡＤＳ／Ｇｒｂ２許容変異体」と称される。

【0232】

特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭは、ＰＩ３Ｋのｐ８５サブユニットに結合するが、Ｇｒｂ２及び／又はＧＡＤＳに結合しない。ＰＩ３Ｋ ｐ８５の結合が保持されるため、ＰＩ３Ｋの下流シグナル伝達は無傷のままである。Ｇｒｂ２／ＧＡＤＳの結合がブロックされるため、Ｇｒｂ２のＧａｂ１及びＧａｂ２への結合によって誘発されるＰＩ３Ｋ ｐ８５サブユニットの動員は、低減又はブロックされる。加えて、Ｇｒｂ２／ＧＡＤＳの下流シグナル伝達はブロックされる。そのような変異したＹＭＮＭモチーフは、「ＰＩ３Ｋ許容変異体」と称される。

【0233】

特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭは、ＰＩ３Ｋのｐ８５サブユニットに結合せず、Ｇｒｂ２及び／又はＧＡＤＳに結合しない。そのような変異したＹＭＮＭモチーフは、「非機能性変異体」と称される。非機能性変異体は、ＹＭＮＭモチーフでのＣＤ２８へのＰＩ３Ｋ、Ｇｒｂ２、又はＧＡＤＳの結合を提供しないが、これらのシグナル伝達分子がＣＤ２８分子内の他の場所で結合することを妨げない。

【0234】

特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭは、ＹＭＮＭモチーフに存在する２つのメチオニン残基、すなわち、ＹＭｘｘ又はＹｘｘＭのうちの１つのメチオニン残基のみを保持する。これらのモチーフは、ＰＩ３Ｋのｐ８５サブユニットに結合することができるメチオニン残基の数を制限することによって、ＰＩ３Ｋを介したシグナル伝達を潜在的に調節する。そのような変異したＹＭＮＭモチーフは、「ハイブリッド「ＨＥＭＩ」変異体」と称される。

【0235】

特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＧＡＤＳ／Ｇｒｂ－２許容変異体である。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹｘＮｘ（配列番号１２５）に記載されるアミノ酸配列からなり、ここで、ｘは、メチオニン（Ｍ）ではない。特定の実施形態では、ｘは、アミノ酸Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、及びＬからなる群から選択される。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＥＮＶ（配列番号１２６）、ＹＳＮＶ（配列番号１２７）、ＹＫＮＬ（配列番号１２８）、ＹＥＮＱ（配列番号１２９）、ＹＫＮＩ（配列番号１３０）、ＹＩＮＱ（配列番号１３１）、ＹＨＮＫ（配列番号１３２）、ＹＶＮＱ（配列番号１３３）、ＹＬＮＰ（配列番号１３４）、ＹＬＮＴ（配列番号１３５）、ＹＤＮＤ（配列番号１３６）、ＹＥＮＩ（配列番号１３７）、ＹＥＮＬ（配列番号１３８）、ＹＫＮＱ（配列番号１３９）、ＹＫＮＶ（配列番号１４０）、又はＹＡＮＧ（配列番号１４１）に記載されるアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＳＮＶ（配列番号１２７）に記載されるアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＫＮＩ（配列番号１３０）に記載されるアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＥＮＶ（配列番号１２６）に記載されるアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＫＮＬ（配列番号１２８）に記載されるアミノ酸配列からなる。

【0236】

特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＰＩ３Ｋ許容変異体である。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＭｘＭ（配列番号１２４）に記載されるアミノ酸配列からなり、ここで、ｘは、アスパラギン酸（Ｎ）ではない。特定の実施形態では、ｘは、アミノ酸Ａ、Ｒ、Ｄ、Ｃ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、及びＬからなる群から選択される。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＭＤＭ（配列番号１４２）、ＹＭＰＭ（配列番号１４３）、ＹＭＲＭ（配列番号１４４）、又はＹＭＳＭ（配列番号１４５）に記載されるアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＭＤＭ（配列番号１４２）に記載されるアミノ酸配列からなる。

【0237】

特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹｂｘＭ（配列番号１４６）に記載されるアミノ酸配列からなり、ここで、ｘは、アスパラギン酸（Ｎ）ではなく、ｂは、メチオニン（Ｍ）ではない。特定の実施形態では、ｘは、アミノ酸Ａ、Ｒ、Ｄ、Ｃ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、及びＬからなる群から選択される。特定の実施形態では、ｂは、アミノ酸Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｃ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｎ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、及びＬからなる群から選択される。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＴＨＭ（配列番号１４７）、ＹＶＬＭ（配列番号１４８）、ＹＩＡＭ（配列番号１４９）、ＹＶＥＭ（配列番号１５０）、ＹＶＫＭ（配列番号１５１）、又はＹＶＰＭ（配列番号１５２）に記載されるアミノ酸配列からなる。

【0238】

特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＭｘｂ（配列番号１５３）に記載されるアミノ酸配列からなり、ここで、ｘは、アスパラギン酸（Ｎ）ではなく、ｂは、メチオニン（Ｍ）ではない。特定の実施形態では、ｘは、アミノ酸Ａ、Ｒ、Ｄ、Ｃ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、及びＬからなる群から選択される。特定の実施形態では、ｂは、アミノ酸Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｃ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｎ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、及びＬからなる群から選択される。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＭＡＰ（配列番号１５４）に記載されるアミノ酸配列からなる。

【0239】

特定の変異ＹＭＮＭモチーフは、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．２０１０ Ｎｏｖ；９（１１）：２３９１－４０４、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．２０１５ Ｍａｙ；０：５６８－５７７（これらの両方は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。

【0240】

特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ハイブリッド「ＨＥＭＩ」変異体である。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＭＮｘ（配列番号１５５）又はＹｘＮＭ（配列番号１５６）に記載されるアミノ酸配列からなり、ここで、ｘは、メチオニン（Ｍ）ではない。特定の実施形態では、ｘは、アミノ酸Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｃ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｎ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、及びＬからなる群から選択される。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＭＮＶ（配列番号１５７）、ＹＥＮＭ（配列番号１５８）、ＹＭＮＱ（配列番号１５９）、ＹＭＮＬ（配列番号１６０）、又はＹＳＮＭ（配列番号１６１）に記載されるアミノ酸配列からなる。

【0241】

特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、非機能性変異体である。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、アミノ酸配列Ｙｂｘｂ（配列番号１６２）からなり、ここで、ｘは、アスパラギン酸（Ｎ）ではなく、ｂは、メチオニン（Ｍ）ではない。特定の実施形態では、ｘは、Ａ、Ｒ、Ｄ、Ｃ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、及びＬからなる群から選択される。特定の実施形態では、ｂは、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、及びＬからなる群から選択される。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＧＧＧ（配列番号１６３）、ＹＡＡＡ（配列番号１６４）、ＹＦＦＦ（配列番号１６５）、ＹＥＴＶ（配列番号１６６）、ＹＱＱＱ（配列番号１６７）、ＹＨＡＥ（配列番号１６８）、ＹＬＤＬ（配列番号１６９）、ＹＬＩＰ（配列番号１７０）、ＹＬＲＶ（配列番号１７１）、ＹＴＡＶ（配列番号１７２）、又はＹＶＨＶ（配列番号１７３）に記載されるアミノ酸配列からなる。特定の実施形態では、変異したＹＭＮＭモチーフは、ＹＧＧＧ（配列番号１６３）に記載されるアミノ酸配列からなる。

【0242】

特定の実施形態では、本明細書に開示されるキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＹＥＮＶ（配列番号１２６）に記載されるアミノ酸配列からなる変異したＹＭＮＭモチーフを含むＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１７４に記載されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。配列番号１７４を以下に提供する。
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＥＮＶＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ［配列番号１７４］

【0243】

特定の実施形態では、本明細書に開示されるキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＹＫＮＩ（配列番号１３０）に記載されるアミノ酸配列からなる変異したＹＭＮＭモチーフを含むＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１７５に記載されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。配列番号１７５を以下に提供する。
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＫＮＩＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ［配列番号１７５］

【0244】

特定の実施形態では、本明細書に開示されるキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＹＭＤＭ（配列番号１４２）に記載されるアミノ酸配列からなる変異したＹＭＮＭモチーフを含むＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１７６に記載されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。配列番号１７６を以下に提供する。
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＤＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ［配列番号１７６］

【0245】

特定の実施形態では、本明細書に開示されるキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＹＧＧＧ（配列番号１６３）に記載されるアミノ酸配列からなる変異したＹＭＮＭモチーフを含むＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１７７に記載されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。配列番号１７７を以下に提供する。
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＧＧＧＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ［配列番号１７７］

【0246】

特定の実施形態では、本明細書に開示されるキメラ受容体の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＹＳＮＶ（配列番号１２７）に記載されるアミノ酸配列からなる変異したＹＭＮＭモチーフを含むＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ２８ポリペプチドは、配列番号１７８に記載されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。配列番号１７８を以下に提供する。
ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＳＮＶＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ［配列番号１７８］

【0247】

特定の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、変異したＹＭＮＭモチーフ（本明細書に開示される）を含むＣＤ２８ポリペプチドを含む第１の共刺激シグナル伝達ドメイン、及び共刺激分子の細胞内ドメインを含む第２の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。変異したＹＭＮＭモチーフを含むＣＤ２８ポリペプチドを含むＣＡＲに関する追加情報は、国際特許公開第２０２１／１５８８５０号（その全体が参照により組み込まれる）に見出すことができる。

【0248】

特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢポリペプチド、例えば、４－１ＢＢの細胞内ドメイン又はその断片を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢポリペプチド、例えば、ヒト４－１ＢＢの細胞内ドメイン又はその断片を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。特定の実施形態では、４－１ＢＢポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１５５２（配列番号１１０）を有するアミノ酸配列若しくはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、若しくは少なくとも約９９％、少なくとも約１００％相同若しくは同一であるアミノ酸配列を含むか、若しくはそれからなり、かつ／又は任意選択で、最大１つ、若しくは最大２つ、若しくは最大３つの保存的アミノ酸置換を含み得る。非限定的な特定の実施形態では、４－１ＢＢポリペプチドは、少なくとも２０個、若しくは少なくとも３０個、若しくは少なくとも４０個、若しくは少なくとも５０個、若しくは少なくとも１００個、若しくは少なくとも１５０個、若しくは少なくとも１５０個、及び最大で２５５個のアミノ酸長である、配列番号１０６の連続部分であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、４－１ＢＢポリペプチドは、配列番号１１０のアミノ酸１～２５５、１～５０、５０～１００、１００～１５０、１５０～２００、若しくは２００～２５５のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号１１０のアミノ酸２１４～２５５のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる４－１ＢＢポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。配列番号１１０を以下に提供する。

【化5】

【0249】

配列番号１１０のアミノ酸２１４～２５５をコードする例示的なヌクレオチド配列は、以下に提供される配列番号１１１に記載されている。
ＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧ［配列番号１１１］

【0250】

特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上の共刺激分子又はその部分の細胞内ドメイン、例えば、ＣＤ２８の細胞内ドメイン若しくはその断片、４－１ＢＢの細胞内ドメイン若しくはその断片、又はＣＤ２８の細胞内ドメイン若しくはその断片、及びＯＸ４０の細胞内ドメイン若しくはその断片を含む共刺激シグナル伝達領域を含む。

【0251】

特定の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲは、ヒト細胞において核酸配列を発現させるための誘導性プロモーターを更に含む。ＣＡＲ遺伝子の発現に使用するためのプロモーターは、ユビキチンＣ（ＵｂｉＣ）プロモーターなどの構成的プロモーターであってもよい。

【0252】

５．３．２．４．例示的なＣＡＲ
特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３３標的化ＣＡＲである。特定の実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）（ｉ）配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに（ｉｉ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む、細胞外抗原結合ドメイン、（ｂ）ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８の膜貫通ドメイン又はその断片）を含む、膜貫通ドメイン、並びに（ｃ）（ｉ）ＣＤ３ζポリペプチド、及び（ｉｉ）ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン又はその断片）を含む共刺激シグナル伝達領域を含む、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１０３のアミノ酸１５３～１７９を含むＣＤ２８ポリペプチドを含む。特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、（ｉ）配列番号１０７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤ３ζポリペプチド、及び（ｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列セットアミノ酸１８０～２２０を含むＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、「３－Ｐ１４」として指定されるｓｃＦｖである。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなるリンカーを介して連結される。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。特定の実施形態では、ＣＡＲは、「ＴＤＩ－Ｙ－００６＿ｈ２８ｚ」として設計される。特定の実施形態では、ＣＡＲは、以下に提供される配列番号１１２に記載されるアミノ酸配列を含む。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＴＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＲＧＧＳＴＹＹＴＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＳＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＧＲＧＤＹＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＡＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＦＳＣＲＳＳＱＳＬＶＹＳＤＧＮＴＹＬＳＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫＩＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＳＴＱＦＰＨＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＡＡＡＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ［配列番号１１２］

【0253】

配列番号１１２のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、以下に提供する配列番号１１３に記載されている。
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＴＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＧＣＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＡＧＣＴＡＴＴＡＧＴＧＧＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＡＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＧＴＧＴＣＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＡＴＴＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＧＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＴＣＣＡＣＴＣＴＣＣＴＣＡＣＣＴＧＴＣＡＣＣＣＴＴＧＧＡＣＡＧＣＣＧＧＣＣＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＴＣＴＡＧＴＣＡＡＡＧＣＣＴＣＧＴＡＴＡＣＡＧＴＧＡＴＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＡＣＴＴＧＡＧＴＴＧＧＣＴＴＣＡＧＣＡＧＡＧＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡＡＧＡＣＴＣＣＴＡＡＴＴＴＡＴＡＡＧＡＴＴＴＣＴＡＡＣＣＧＧＴＴＣＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＡＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＴＧＧＡＡＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＣＧＧＧＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＡＴＧＣＡＡＴＣＴＡＣＡＣＡＡＴＴＴＣＣＴＣＡＣＡＣＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＧＡＡＣＡＧＡＡＡＣＴＧＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＡＴＴＧＡＡＧＴＴＡＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＡＣＣＴＡＧＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＡＡＣＣＡＴＴＡＴＣＣＡＴＧＴＧＡＡＡＧＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＴＴＧＴＣＣＡＡＧＴＣＣＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＧＧＡＣＣＴＴＣＴＡＡＧＣＣＣＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＴＡＧ［配列番号１１３］

【0254】

特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３３標的化ＣＡＲである。特定の実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）（ｉ）配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ ＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに（ｉｉ）配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ ＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む、細胞外抗原結合ドメイン、（ｂ）ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８の膜貫通ドメイン又はその部分）を含む、膜貫通ドメイン、並びに（ｃ）（ｉ）ＣＤ３ζポリペプチド、及び（ｉｉ）ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン又はその断片）を含む共刺激シグナル伝達領域を含む、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１０３のアミノ酸１５３～１７９を含むＣＤ２８ポリペプチドを含む。特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、（ｉ）配列番号１０７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤ３ζポリペプチド、及び（ｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列セットアミノ酸１８０～２２０を含むＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、「４－Ｂ２」として指定されるｓｃＦｖである。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなるリンカーを介して連結される。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。特定の実施形態では、ＣＡＲは、「ＴＤＩ－Ｙ－００７＿ｈ２８ｚ」として設計される。特定の実施形態では、ＣＡＲは、以下に提供される配列番号１１４に記載されるアミノ酸配列を含む。
ＥＶＨＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＩＦＳＳＮＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＹＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＷＧＴＹＩＶＧＡＴＧＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＳＡＬＴＱＰＰＳＡＳＧＳＰＧＱＳＶＴＩＳＣＴＧＴＳＮＤＶＧＧＹＮＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＥＶＳＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＱＳＧＮＴＡＳＬＴＶＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＳＹＡＧＳＮＮＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＡＡＡＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ［配列番号１１４］

【0255】

配列番号１１４のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、以下に提供する配列番号１１５に記載されている。
ＧＡＧＧＴＧＣＡＣＣＴＧＴＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＴＣＴＴＴＡＧＣＡＧＣＡＡＴＧＣＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＡＧＣＴＡＴＴＡＧＴＧＧＴＴＡＴＧＧＴＧＧＴＡＡＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＡＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＡＡＴＧＧＧＧＧＡＣＴＴＡＴＡＴＡＧＴＧＧＧＡＧＣＴＡＣＧＧＧＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＣＡＧＴＣＴＧＣＣＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＣＴＣＣＧＣＧＴＣＣＧＧＧＴＣＴＣＣＴＧＧＡＣＡＧＴＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＣＴＧＧＡＡＣＣＡＧＣＡＡＴＧＡＣＧＴＴＧＧＴＧＧＴＴＡＴＡＡＣＴＡＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＣＡＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＣＣＡＡＡＣＴＣＴＴＧＡＴＴＴＡＴＧＡＧＧＴＣＡＧＴＡＡＧＣＧＧＣＣＣＴＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＴＣＧＣＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＣＡＧＴＣＴＧＧＣＡＡＣＡＣＧＧＣＣＴＣＣＣＴＧＡＣＣＧＴＣＴＣＴＧＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＡＧＧＣＴＧＡＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＡＧＣＴＣＡＴＡＴＧＣＡＧＧＣＡＧＣＡＡＣＡＡＴＴＧＧＧＴＧＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＡＧＡＡＣＡＧＡＡＡＣＴＧＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＡＴＴＧＡＡＧＴＴＡＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＡＣＣＴＡＧＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＡＡＣＣＡＴＴＡＴＣＣＡＴＧＴＧＡＡＡＧＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＴＴＧＴＣＣＡＡＧＴＣＣＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＧＧＡＣＣＴＴＣＴＡＡＧＣＣＣＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＴＡＧ［配列番号１１５］

【0256】

特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３３標的化ＣＡＲである。特定の実施形態では、ＣＡＲは、（ａ）（ｉ）配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ ＣＤＲ３を含むＶ_Ｈ、並びに（ｉｉ）配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ ＣＤＲ３を含むＶ_Ｌを含む、細胞外抗原結合ドメイン、（ｂ）ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８の膜貫通ドメイン又はその部分）を含む、膜貫通ドメイン、並びに（ｃ）（ｉ）ＣＤ３ζポリペプチド、及び（ｉｉ）ＣＤ２８ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ２８の細胞内ドメイン又はその断片）を含む共刺激シグナル伝達領域を含む、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号１０３のアミノ酸１５３～１７９を含むＣＤ２８ポリペプチドを含む。特定の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、（ｉ）配列番号１０７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤ３ζポリペプチド、及び（ｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列セットアミノ酸１８０～２２０を含むＣＤ２８ポリペプチドを含む共刺激シグナル伝達領域を含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、「１－Ｊ１９」として指定されるｓｃＦｖである。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、配列番号９６に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなるリンカーを介して連結される。特定の実施形態では、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、Ｎ末端からＣ末端に配置される：Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ。特定の実施形態では、ＣＡＲは、「１Ｊ１９ＨＬ＿ｈ２８ｚ」として設計される。特定の実施形態では、ＣＡＲは、以下に提供される配列番号１１６に記載されるアミノ酸配列を含む。
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＳＡＡＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＦＲＳＫＷＹＮＶＹＡＶＳＶＫＳＲＩＴＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＥＧＧＳＹＹＤＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＮＷＬＴＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＤＳＦＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬＡＡＡＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ［配列番号１１６］

【0257】

配列番号１１６のアミノ酸配列をコードする例示的なヌクレオチド配列は、以下に提供する配列番号１１７に記載されている。
ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＡＧＧＴＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＣＴＣＧＣＡＧＡＣＣＣＴＣＴＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＴＧＣＣＡＴＣＴＣＣＧＧＧＧＡＣＡＧＴＧＴＣＴＣＴＡＧＣＡＡＣＡＧＴＧＣＴＧＣＴＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＡＧＴＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＡＧＧＡＣＡＴＡＣＴＴＣＡＧＧＴＣＣＡＡＧＴＧＧＴＡＴＡＡＴＧＴＴＴＡＴＧＣＡＧＴＧＴＣＴＧＴＧＡＡＧＡＧＴＣＧＡＡＴＡＡＣＣＡＴＣＡＡＣＣＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＣＴＣＴＧＴＧＡＣＴＣＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＧＣＡＡＧＣＧＡＧＧＧＴＧＧＧＡＧＣＴＡＴＴＡＴＧＡＣＣＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＧＴＡＴＴＡＧＴＡＡＴＴＧＧＴＴＡＡＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＴＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＣＴＧＡＣＡＧＴＴＴＣＣＣＡＴＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＡＧＴＧＧＡＴＡＴＣＡＡＡＧＡＡＣＡＧＡＡＡＣＴＧＡＴＣＴＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＣＧＣＡＡＴＴＧＡＡＧＴＴＡＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＡＣＣＴＡＧＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＡＡＣＣＡＴＴＡＴＣＣＡＴＧＴＧＡＡＡＧＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＴＴＧＴＣＣＡＡＧＴＣＣＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＧＧＡＣＣＴＴＣＴＡＡＧＣＣＣＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＣＡＧＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＴＡＧ［配列番号１１７］

【0258】

特定の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲは、ヒト細胞においてヌクレオチド配列を発現させるための誘導性プロモーターを更に含む。ＣＡＲ遺伝子の発現に使用するためのプロモーターは、ユビキチンＣ（ＵｂｉＣ）プロモーターなどの構成的プロモーターであってもよい。

【0259】

５．３．３．ＴＣＲ様融合分子
特定の実施形態では、抗原認識受容体は、ＴＣＲ様融合分子である。ＴＣＲ融合分子の非限定的な例としては、ＨＬＡ非依存性ＴＣＲベースのキメラ抗原受容体（「ＨＩＴ－ＣＡＲ」としても知られており、例えば、その全体が参照により組み込まれる、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ１９／０１７５２５に開示されているもの）、Ｔ細胞受容体融合構築物（ＴＲｕＣ）（例えば、その全体が参照により組み込まれる、Ｂａｅｕｅｒｌｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ＴＲｕＣ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｅｎｇａｇｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ，”Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ｖｏｌｕｍｅ １０，Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ：２０８７（２０１９）に開示されているもの）、及びＴ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）（内因性ＴＣＲを共選択するキメラ受容体である）（例えば、その全体が参照により組み込まれる、Ｈｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ＴＡＣ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏ－ｏｐｔｓ ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｙｉｅｌｄｉｎｇ ｒｏｂｕｓｔ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｏｘｉｃｉｔｙ，”Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（２０１８）；９：３０４９（２０１８）に開示されているもの）が挙げられる。

【0260】

特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子は、細胞外抗原結合ドメイン及び定常ドメインを含む抗原結合鎖を含み、ＴＣＲ様融合分子は、ＨＬＡ非依存的な方法で抗原に結合する。特定の実施形態では、定常ドメインは、天然又は修飾ＴＲＡＣペプチド、天然又は修飾ＴＲＢＣペプチド、天然又は修飾ＴＲＤＣペプチド、天然又は修飾ＴＲＧＣペプチド、及びそれらの任意のバリアント又は機能的断片からなる群から選択されるＴ細胞受容体定常領域を含む。特定の実施形態では、定常ドメインは、天然又は修飾ＴＲＡＣペプチドを含む。特定の実施形態では、定常ドメインは、天然又は修飾ＴＲＢＣペプチドを含む。特定の実施形態では、定常ドメインは、別の定常ドメインとホモ二量体又はヘテロ二量体を形成することができる。特定の実施形態では、抗原結合鎖は、ＣＤ３ζポリペプチドと会合することができる。特定の実施形態では、抗原結合鎖は、抗原に結合すると、抗原結合鎖に関連するＣＤ３ζポリペプチドを活性化することができる。特定の実施形態では、ＣＤ３ζポリペプチドの活性化は、免疫応答性細胞を活性化することができる。特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子は、ＣＤ３複合体と組み込み、ＨＬＡ非依存性抗原認識を提供することができる。特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体中の内因性ＴＣＲを置き換える。特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、別の細胞外抗原結合ドメインと二量体化することができる。特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、細胞表面受容体に対するリガンド、細胞表面リガンドに対する受容体、抗体若しくはその断片の抗原結合部分、又はＴＣＲの抗原結合部分を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、１つ又は２つの免疫グロブリン可変領域を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、別の細胞外抗原結合ドメインと二量体化することができる。特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、抗体のＶ_Ｈを含み、Ｖ_Ｈは、抗体のＶ_Ｌを含む別の細胞外抗原結合ドメインと二量体化し、断片可変物（Ｆｖ）を形成することができる。特定の実施形態では、ＴＣＲ様融合分子の細胞外抗原結合ドメインは、抗体のＶ_Ｌを含み、Ｖ_Ｌは、抗体のＶ_Ｈを含む別の細胞外抗原結合ドメインと二量体化し、断片可変物（Ｆｖ）を形成することができる。

【0261】

５．４．細胞
本明細書に開示される主題は、本明細書に開示されるＣＤ３３標的化抗原認識受容体（例えば、セクション５．３に開示されるもの）を含む細胞を提供する。特定の実施形態では、細胞は、リンパ系の細胞、骨髄系の細胞、リンパ系の細胞が由来し得る幹細胞、及び骨髄系の細胞が由来し得る幹細胞からなる群から選択される。特定の実施形態では、細胞は、免疫応答性細胞である。特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、リンパ系の細胞である。

【0262】

特定の実施形態では、細胞は、リンパ系の細胞である。リンパ系の細胞は、抗体の産生、細胞免疫系の調節、血液中の外来物質の検出、宿主に対して外来の細胞の検出などを提供することができる。リンパ系の細胞の非限定的な例としては、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、リンパ系細胞が分化し得る幹細胞が挙げられる。特定の実施形態では、幹細胞は、多能性幹細胞（例えば、胚性幹細胞）である。

【0263】

特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、胸腺内で成熟し、主に細胞媒介性免疫に関与するリンパ球であり得る。Ｔ細胞は、適応免疫系に関与している。本明細書に開示される主題のＴ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞（セントラルメモリーＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞（又は幹様メモリーＴ細胞）、及び２つの種類のエフェクターメモリーＴ細胞：例えば、ＴＥＭ細胞及びＴＥＭＲＡ細胞、制御性Ｔ細胞（サプレッサーＴ細胞としても知られている）、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞、及びγδＴ細胞を含むが、これらに限定されない、任意の種類のＴ細胞であり得る。細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ又はキラーＴ細胞）は、感染した体細胞又は腫瘍細胞の死を誘導することができるＴリンパ球のサブセットである。患者自身のＴ細胞は、抗原認識受容体、例えば、ＣＡＲの導入を通じて、特定の抗原を標的とするように遺伝子修飾されてもよい。特定の実施形態では、免疫応答性細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、ＣＤ４^＋ Ｔ細胞又はＣＤ８^＋ Ｔ細胞であり得る。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４^＋ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞である。

【0264】

特定の実施形態では、細胞は、ＮＫ細胞である。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、細胞媒介性免疫の一部であり、先天性免疫応答中に作用するリンパ球であり得る。ＮＫ細胞は、標的細胞に対する細胞傷害性効果を実施するために、事前の活性化を必要としない。

【0265】

本明細書に開示される主題のヒトリンパ球の種類には、限定されないが、末梢ドナーリンパ球が含まれる。例えば、Ｓａｄｅｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ（２００３）；３：３５－４５（ＣＡＲを発現するように遺伝子修飾された末梢血ドナーリンパ球を開示している）、Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．２００６ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１４：１２６－１２９（α及びβヘテロ二量体を含む完全長腫瘍抗原認識Ｔ細胞受容体複合体を発現するように遺伝子修飾された末梢血ドナーリンパ球を開示している）、Ｐａｎｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０００）；１６４：４９５－５０４、Ｐａｎｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０００）；１６４：４３８２－４３９２（腫瘍生検中の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）に由来するリンパ球培養物を開示している）、及びＤｕｐｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ（２００５）；６５：５４１７－５４２７、Ｐａｐａｎｉｃｏｌａｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（２００３）；１０２：２４９８－２５０５（人工抗原提示細胞（ＡＡＰＣ）又はパルス樹状細胞を利用する、選択的にインビトロで増殖させた抗原特異的末梢血白血球を開示している）に開示されているもの。

【0266】

細胞（例えば、Ｔ細胞）は、自己、非自己（例えば、同種異系）、又は操作された前駆細胞若しくは幹細胞にインビトロで由来することができる。

【0267】

本明細書に開示される主題の細胞は、骨髄系の細胞であり得る。骨髄系の細胞の非限定的な例には、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好塩基球、好中球、好酸球、巨核球、マスト細胞、赤血球、血小板、及び骨髄細胞が分化し得る幹細胞が含まれる。特定の実施形態では、幹細胞は、多能性幹細胞（例えば、胚性幹細胞又は誘導多能性幹細胞）である。

【0268】

特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞は、腫瘍微小環境を調節することができる。腫瘍は、免疫認識及び除去から自己を保護するための悪性細胞による一連のメカニズムを伴う宿主免疫応答に敵対する微小環境を有する。この「敵対する腫瘍微小環境」は、浸潤制御性ＣＤ４^＋Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、ＴＧＦ－βを含む免疫抑制サイトカイン、及び活性化Ｔ細胞（ＣＴＬＡ－４及びＰＤ－１）によって発現された免疫抑制受容体を標的とするリガンドの発現を含む、様々な免疫抑制因子を含む。これらの免疫抑制メカニズムは、寛容の維持及び不適切な免疫応答の抑制において役割を果たすが、腫瘍微小環境内では、これらのメカニズムは、効果的な抗腫瘍免疫応答を妨げる。これらの免疫抑制因子をまとめると、標的腫瘍細胞との遭遇時に、養子移植されたＣＡＲ修飾Ｔ細胞の顕著なアネルギー又はアポトーシスのいずれかを誘導することができる。

【0269】

特定の実施形態では、細胞に、抗原認識受容体を発現させるように、本明細書に開示されるＣＤ３３標的化抗原認識受容体を導入することができる。

【0270】

特定の実施形態では、細胞は、免疫抑制活性又は免疫刺激活性を有するポリペプチドに結合する可溶性単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を更に含む。特定の実施形態では、免疫抑制活性は、免疫応答の減少をもたらす細胞（例えば、活性化免疫応答性細胞）におけるシグナル伝達の誘導又はタンパク質発現の変化を指す。結合を介して免疫応答を抑制又は減少させることが知られているポリペプチドとしては、ＣＤ４７、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、並びにＳＩＲＰａ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－１、及びＢ７－２を含む、それらの対応するリガンドが挙げられる。そのようなポリペプチドは、腫瘍微小環境に存在し、腫瘍細胞に対する免疫応答を阻害する。様々な実施形態では、免疫抑制ポリペプチド及び／又はそれらのリガンドの相互作用を阻害、遮断、又は拮抗することは、免疫応答性細胞の免疫応答を増強する。

【0271】

特定の実施形態では、免疫刺激活性は、免疫応答の増加をもたらす細胞（例えば、活性化免疫応答性細胞）におけるシグナル伝達の誘導又はタンパク質発現の変化を指す。免疫刺激活性は、炎症促進活性を含み得る。結合を介して免疫応答を刺激又は増加させることが知られているポリペプチドとしては、ＣＤ２８、ＯＸ－４０、４－ＩＢＢ、並びにＢ７－１、Ｂ７－２、ＯＸ－４０Ｌ、及び４－１ＢＢＬを含む、それらの対応するリガンドが挙げられる。そのようなポリペプチドは、腫瘍微小環境に存在し、腫瘍細胞に対する免疫応答を活性化する。様々な実施形態では、炎症誘発性ポリペプチド及び／又はそれらのリガンドを促進、刺激、又はアゴナイズすることは、免疫応答性細胞の免疫応答を増強する。

【0272】

抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）及び免疫抑制活性又は免疫刺激活性を有するポリペプチドに結合する可溶性ｓｃＦｖを含む細胞は、国際特許公開第２０１４／１３４１６５号（その全体が参照により組み込まれる）に開示されている。

【0273】

特定の実施形態では、細胞は、外因性ＣＤ４０Ｌを更に含む。抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）及び外因性ＣＤ４０Ｌを含む細胞は、国際特許公開第２０１４／１３４１６５号に開示されている。

【0274】

更に、特定の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１８を発現するように操作される。特定の実施形態では、細胞は、外因性ＩＬ－１８ポリペプチドを更に含む。特定の実施形態では、外因性ＩＬ－１８ポリペプチドは、以下に提供される配列番号１１８に記載されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
ＭＧＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＧＹＦＧＫＬＥＳＫＬＳＶＩＲＮＬＮＤＱＶＬＦＩＤＱＧＮＲＰＬＦＥＤＭＴＤＳＤＣＲＤＮＡＰＲＴＩＦＩＩＳＭＹＫＤＳＱＰＲＧＭＡＶＴＩＳＶＫＣＥＫＩＳＴＬＳＣＥＮＫＩＩＳＦＫＥＭＮＰＰＤＮＩＫＤＴＫＳＤＩＩＦＦＱＲＳＶＰＧＨＤＮＫＭＱＦＥＳＳＳＹＥＧＹＦＬＡＣＥＫＥＲＤＬＦＫＬＩＬＫＫＥＤＥＬＧＤＲＳＩＭＦＴＶＱＮＥＤ［配列番号１１８］

【0275】

特定の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１８ポリペプチドをコードする核酸分子を更に含む。特定の実施形態では、核酸分子は、以下に提供される配列番号１１９に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ＡＴＧＧＧＴＴＡＣＡＧＧＡＴＧＣＡＡＣＴＣＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＴＴＧＣＡＣＴＡＡＧＴＣＴＴＧＣＡＣＴＴＧＴＣＡＣＡＡＡＣＡＧＴＧＧＣＴＡＣＴＴＴＧＧＣＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＣＴＡＡＡＴＴＡＴＣＡＧＴＣＡＴＡＡＧＡＡＡＴＴＴＧＡＡＴＧＡＣＣＡＡＧＴＴＣＴＣＴＴＣＡＴＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＡＡＴＣＧＧＣＣＴＣＴＡＴＴＴＧＡＡＧＡＴＡＴＧＡＣＴＧＡＴＴＣＴＧＡＣＴＧＴＡＧＡＧＡＴＡＡＴＧＣＡＣＣＣＣＧＧＡＣＣＡＴＡＴＴＴＡＴＴＡＴＡＡＧＴＡＴＧＴＡＴＡＡＡＧＡＴＡＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＡＧＧＴＡＴＧＧＣＴＧＴＡＡＣＴＡＴＣＴＣＴＧＴＧＡＡＧＴＧＴＧＡＧＡＡＡＡＴＴＴＣＡＡＣＴＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＡＧＡＡＣＡＡＡＡＴＴＡＴＴＴＣＣＴＴＴＡＡＧＧＡＡＡＴＧＡＡＴＣＣＴＣＣＴＧＡＴＡＡＣＡＴＣＡＡＧＧＡＴＡＣＡＡＡＡＡＧＴＧＡＣＡＴＣＡＴＡＴＴＣＴＴＴＣＡＧＡＧＡＡＧＴＧＴＣＣＣＡＧＧＡＣＡＴＧＡＴＡＡＴＡＡＧＡＴＧＣＡＡＴＴＴＧＡＡＴＣＴＴＣＡＴＣＡＴＡＣＧＡＡＧＧＡＴＡＣＴＴＴＣＴＡＧＣＴＴＧＴＧＡＡＡＡＡＧＡＧＡＧＡＧＡＣＣＴＴＴＴＴＡＡＡＣＴＣＡＴＴＴＴＧＡＡＡＡＡＡＧＡＧＧＡＴＧＡＡＴＴＧＧＧＧＧＡＴＡＧＡＴＣＴＡＴＡＡＴＧＴＴＣＡＣＴＧＴＴＣＡＡＡＡＣＧＡＡＧＡＣＴＡＧ［配列番号１１９］

【0276】

代替的に、特定の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１８遺伝子座に、ＩＬ－１８遺伝子発現を増加させることができる修飾プロモーター／エンハンサーを更に含み、例えば、構成的又は誘導的プロモーターを配置して、ＩＬ－１８遺伝子発現を駆動する。

【0277】

抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）を含み、例えば、ＩＬ－１８遺伝子座における外因性ＩＬ－１８ポリペプチド又は修飾プロモーター／エンハンサーを含む、ＩＬ－１８を発現するように操作された細胞は、国際特許公開第２０１８／０２７１５５号（その全体が参照により組み込まれる）に開示されている。

【0278】

追加的又は代替的に、細胞は、ＩＬ－３３を発現するように操作される。特定の実施形態では、細胞は、外因性ＩＬ－３３ポリペプチドを更に含む。特定の実施形態では、外因性ＩＬ－３３ポリペプチドは、以下に提供される配列番号１２０に記載されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＳＩＴＧＩＳＰＩＴＥＹＬＡＳＬＳＴＹＮＤＱＳＩＴＦＡＬＥＤＥＳＹＥＩＹＶＥＤＬＫＫＤＥＫＫＤＫＶＬＬＳＹＹＥＳＱＨＰＳＮＥＳＧＤＧＶＤＧＫＭＬＭＶＴＬＳＰＴＫＤＦＷＬＨＡＮＮＫＥＨＳＶＥＬＨＫＣＥＫＰＬＰＤＱＡＦＦＶＬＨＮＭＨＳＮＣＶＳＦＥＣＫＴＤＰＧＶＦＩＧＶＫＤＮＨＬＡＬＩＫＶＤＳＳＥＮＬＣＴＥＮＩＬＦＫＬＳＥＴ［配列番号１２０］

【0279】

特定の実施形態では、細胞は、ＩＬ－３３ポリペプチドをコードする核酸分子を更に含む。特定の実施形態では、核酸分子は、以下に提供される配列番号１２１に記載されるヌクレオチド配列を含む。
ＡＴＧＴＡＣＡＧＧＡＴＧＣＡＡＣＴＣＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＴＴＧＣＡＣＴＡＡＧＴＣＴＴＧＣＡＣＴＴＧＴＣＡＣＡＡＡＣＡＧＴＡＧＴＡＴＣＡＣＡＧＧＡＡＴＴＴＣＡＣＣＴＡＴＴＡＣＡＧＡＧＴＡＴＣＴＴＧＣＴＴＣＴＣＴＡＡＧＣＡＣＡＴＡＣＡＡＴＧＡＴＣＡＡＴＣＣＡＴＴＡＣＴＴＴＴＧＣＴＴＴＧＧＡＧＧＡＴＧＡＡＡＧＴＴＡＴＧＡＧＡＴＡＴＡＴＧＴＴＧＡＡＧＡＣＴＴＧＡＡＡＡＡＡＧＡＴＧＡＡＡＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＧＴＧＴＴＡＣＴＧＡＧＴＴＡＣＴＡＴＧＡＧＴＣＴＣＡＡＣＡＣＣＣＣＴＣＡＡＡＴＧＡＡＴＣＡＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＴＧＡＴＧＧＴＡＡＧＡＴＧＴＴＡＡＴＧＧＴＡＡＣＣＣＴＧＡＧＴＣＣＴＡＣＡＡＡＡＧＡＣＴＴＣＴＧＧＴＴＧＣＡＴＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＡＧＧＡＡＣＡＣＴＣＴＧＴＧＧＡＧＣＴＣＣＡＴＡＡＧＴＧＴＧＡＡＡＡＡＣＣＡＣＴＧＣＣＡＧＡＣＣＡＧＧＣＣＴＴＣＴＴＴＧＴＣＣＴＴＣＡＴＡＡＴＡＴＧＣＡＣＴＣＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＴＣＡＴＴＴＧＡＡＴＧＣＡＡＧＡＣＴＧＡＴＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＴＴＡＴＡＧＧＴＧＴＡＡＡＧＧＡＴＡＡＴＣＡＴＣＴＴＧＣＴＣＴＧＡＴＴＡＡＡＧＴＡＧＡＣＴＣＴＴＣＴＧＡＧＡＡＴＴＴＧＴＧＴＡＣＴＧＡＡＡＡＴＡＴＣＴＴＧＴＴＴＡＡＧＣＴＣＴＣＴＧＡＡＡＣＴＴＡＧ［配列番号１２１］

【0280】

代替的に、特定の実施形態では、細胞は、ＩＬ－３３遺伝子座に、ＩＬ－３３遺伝子発現を増加させることができる修飾プロモーター／エンハンサーを更に含み、例えば、構成的又は誘導的プロモーターを配置して、ＩＬ－３３遺伝子発現を駆動する。抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）を含み、例えば、ＩＬ－３３遺伝子座における外因性ＩＬ－３３ポリペプチド又は修飾プロモーター／エンハンサーを含む、ＩＬ－３３を発現するように操作された細胞は、国際特許公開第２０１９／０９９４７９号（その全体が参照により組み込まれる）に開示されている。

【0281】

追加的又は代替的に、細胞は、ＩＬ－３６を発現するように操作される。特定の実施形態では、細胞は、外因性ＩＬ－３６ポリペプチドを更に含む。特定の実施形態では、細胞は、ＩＬ－３６遺伝子座に、ＩＬ－３６遺伝子発現を増加させることができる修飾プロモーター／エンハンサーを更に含み、例えば、構成的又は誘導的プロモーターを配置して、ＩＬ－３６遺伝子発現を駆動する。抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）を含み、例えば、ＩＬ－３６遺伝子座における外因性ＩＬ－３６ポリペプチド又は修飾プロモーター／エンハンサーを含む、ＩＬ－３６を発現するように操作された細胞は、国際特許公開第２０１９／０９９４８３号（その全体が参照により組み込まれる）に開示されている。

【0282】

５．５．核酸組成物及びベクター
本明細書に開示される主題は、本明細書に開示されるＣＤ３３標的化抗原認識受容体（例えば、セクション５．３に開示されるもの）をコードする核酸を提供する。本明細書に開示される核酸を含む核酸組成物が更に提供される。また、かかる核酸組成物を含む細胞も提供される。

【0283】

特定の実施形態では、核酸組成物は、本明細書に開示されるＣＤ３３標的化抗原認識受容体に作動可能に連結されたプロモーターを更に含む。

【0284】

特定の実施形態では、プロモーターは、内因性又は外因性である。特定の実施形態では、外因性プロモーターは、伸長因子（ＥＦ）－１プロモーター、サイトメガロウイルス最初期プロモーター（ＣＭＶ）プロモーター、シミアンウイルス４０早期プロモーター（ＳＶ４０）プロモーター、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、及びメタロチオネインプロモーターから選択される。特定の実施形態では、プロモーターは、誘導性プロモーターである。特定の実施形態では、誘導性プロモーターは、ＮＦＡＴ転写応答エレメント（ＴＲＥ）プロモーター、ＣＤ６９プロモーター、ＣＤ２５プロモーター、及びＩＬ－２プロモーターから選択される。組成物及び核酸組成物は、当該技術分野で既知の方法によって、又は本明細書に記載されるように、対象に投与され得る、かつ／又は細胞に送達され得る。細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の遺伝子修飾は、組換えＤＮＡ構築物を用いて実質的に均質な細胞組成物を形質導入することによって達成することができる。特定の実施形態では、レトロウイルスベクター（例えば、ガンマ－レトロウイルスベクター又はレンチウイルスベクター）は、細胞へのＤＮＡ構築物の導入に用いられる。例えば、抗原認識受容体をコードするポリヌクレオチドを、レトロウイルスベクターにクローニングすることができ、発現を、その内因性プロモーター、レトロウイルス長末端反復、又は対象の標的細胞型に特異的なプロモーターから駆動することができる。非ウイルスベクターも同様に使用され得る。

【0285】

本明細書に開示されるＣＤ３３標的化抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）を含むための細胞の初期遺伝子修飾のために、レトロウイルスベクターを形質導入のために使用することができるが、任意の他の好適なウイルスベクター又は非ウイルス送達系を使用することができる。抗原認識受容体は、単一のマルチシストロン性発現カセット内、単一のベクターの複数の発現カセット内、又は複数のベクター内に構築され得る。ポリシストロン性発現カセットを作製するエレメントの例としては、限定されないが、様々なウイルス及び非ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ、例えば、ＦＧＦ－１ ＩＲＥＳ、ＦＧＦ－２ ＩＲＥＳ、ＶＥＧＦ ＩＲＥＳ、ＩＧＦ－ＩＩ ＩＲＥＳ、ＮＦ－κＢ ＩＲＥＳ、ＲＵＮＸ１ ＩＲＥＳ、ｐ５３ ＩＲＥＳ、Ａ型肝炎ＩＲＥＳ、Ｃ型肝炎ＩＲＥＳ、ペスチウイルスＩＲＥＳ、アフトウイルスＩＲＥＳ、ピコルナウイルスＩＲＥＳ、ポリオウイルスＩＲＥＳ及び脳心筋炎ウイルスＩＲＥＳ）、並びに切断可能なリンカー（例えば、２Ａペプチド、例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ及びＦ２Ａペプチド）が挙げられる。レトロウイルスベクターと適切なパッケージング株との組み合わせも好適であり、カプシドタンパク質はヒト細胞に感染するために機能するであろう。ＰＡ１２（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ （１９８５）；５：４３１－４３７）、ＰＡ３１７（Ｍｉｌｌｅｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ（１９８６）；６：２８９５－２９０２）、及びＣＲＩＰ（Ｄａｎｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ（１９８８）；８５：６４６０－６４６４）を含む、様々な両種性ウイルス産生細胞株が知られている。非両種性粒子、例えば、ＶＳＶＧ、ＲＤ１１４又はＧＡＬＶエンベロープ及び当該技術分野で既知の任意の他のもので偽型化された粒子も好適である。

【0286】

形質導入の可能な方法としてはまた、細胞とプロデューサー細胞との直接共培養（Ｂｒｅｇｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（１９９２）；８０：１４１８－１４２２）、あるいはウイルス上清単独又は適切な成長因子及びポリカチオンを有する若しくは有しない濃縮ベクターストックとの培養（Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔ（１９９４）；２２：２２３－２３０、及びＨｕｇｈｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ（１９９２）；８９：１８１７）が挙げられる。

【0287】

他の形質導入ウイルスベクターを使用して、細胞を修飾することができる。特定の実施形態では、選択されたベクターは、高い感染効率及び安定した組み込み及び発現を示す（例えば、Ｃａｙｏｕｅｔｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ８：４２３－４３０，１９９７、Ｋｉｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １５：８３３－８４４，１９９６、Ｂｌｏｏｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７１：６６４１－６６４９，１９９７、Ｎａｌｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７２：２６３－２６７，１９９６、及びＭｉｙｏｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４：１０３１９，１９９７を参照されたい）。使用することができる他のウイルスベクターとしては、例えば、アデノウイルス、レンチウイルス、及びアデナ関連ウイルスベクター、ワクシニアウイルス、ウシパピローマウイルス、又はエプスタインバーウイルスなどのヘルペスウイルスが挙げられる（例えば、Ｍｉｌｌｅｒ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａ（１９９０）；１５－１４、Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１２７５－１２８１，１９８９、Ｅｇｌｉｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（１９８８）；６：６０８－６１４、Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ（１９９０）；１：５５－６１、Ｓｈａｒｐ，Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ（１９９１）；３３７：１２７７－７８、Ｃｏｒｎｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３６：３１１－２２，１９８７、Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８４）；２２６：４０１－４０９、Ｍｏｅｎ，Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌｓ １７：４０７－１６，１９９１、Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ（１９８９）；７：９８０－９０、ＬｅＧａｌ Ｌａ Ｓａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９３）；２５９：９８８－９０、及びＪｏｈｎｓｏｎ，Ｃｈｅｓｔ（１９９５）１０７：７７Ｓ－８３Ｓのベクターも参照されたい）。レトロウイルスベクターは、特に十分に開発されており、臨床環境で使用されている（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ（１９９０）；３２３：３７０，１９９０、Ａｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，３９９，３４６号）。

【0288】

非ウイルスアプローチはまた、細胞の遺伝子修飾のために用いることができる。例えば、核酸分子は、リポフェクションの存在下で核酸を投与することによって（Ｆｅｉｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９８７）；８４：７４１３、Ｏｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ（１９９０）；１７：２５９、Ｂｒｉｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ Ｓｃｉ（１９８９）；２９８：２７８、Ｓｔａｕｂｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８３）；１０１：５１２，Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ（１９８８）；２６３：１４６２１、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ（１９８９）；２６４：１６９８５）、又は外科的条件下での微量注射によって（Ｗｏｌｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９０）；２４７：１４６５）、細胞内に導入され得る。遺伝子導入のための他の非ウイルス手段には、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、及びプロトプラスト融合を使用したインビトロでのトランスフェクションが含まれる。リポソームはまた、ＤＮＡの細胞内への送達に潜在的に有益であり得る。正常な遺伝子の対象の罹患組織内への移植は、正常な核酸をエクスビボで培養可能な細胞型（例えば、自己若しくは異種の一次細胞又はその子孫）に移入することによっても達成され得、その後、細胞（又はその子孫）が標的組織内に注射されるか、又は全身的に注射される。組換え受容体は、トランスポザーゼ又は標的化ヌクレアーゼ（例えば、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、又はＴＡＬＥヌクレアーゼ、ＣＲＩＳＰＲ）を使用して誘導又は取得することもできる。一過性発現は、ＲＮＡエレクトロポレーションによって得られ得る。

【0289】

任意の標的ゲノム編集方法を使用して、本明細書に開示される抗原認識受容体を細胞又は対象に送達することもできる。特定の実施形態では、ＣＲＩＳＰＲシステムは、本明細書に開示される、本明細書に開示される抗原認識受容体を送達するために使用される。特定の実施形態では、亜鉛フィンガーヌクレアーゼは、抗原認識受容体を送達するために使用される。特定の実施形態では、ＴＡＬＥＮシステムは、本明細書に開示される抗原認識受容体を送達するために使用される。

【0290】

クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）システムは、原核細胞において発見されたゲノム編集ツールである。ゲノム編集に利用される場合、このシステムは、Ｃａｓ９（そのガイドとしてｃｒＲＮＡを利用してＤＮＡを修飾することができるタンパク質）、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡは、Ｃａｓ９と活性複合体を形成するｔｒａｃｒＲＮＡ（一般的に、ヘアピンループ形態である）に結合する領域とともに、それを宿主ＤＮＡの正しい部分に誘導するためにＣａｓ９によって使用されるＲＮＡを含有する）、トランス活性化ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡは、ｃｒＲＮＡに結合し、Ｃａｓ９と活性複合体を形成する）、及びＤＮＡ修復鋳型の任意選択の部分（特定のＤＮＡ配列の挿入を可能にする細胞修復プロセスを誘導するＤＮＡ）を含む。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９は、多くの場合、標的細胞をトランスフェクトするためにプラスミドを用いる。ｃｒＲＮＡは、Ｃａｓ９が細胞における標的ＤＮＡを特定し、それに直接結合するために使用する配列であるため、各用途のために設計される必要がある。ＣＡＲ発現カセットを保有する修復鋳型はまた、それが、切断のいずれかの側の配列と重複し、挿入配列をコードしなければならないため、各用途に合わせて設計する必要がある。複数のｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡを一緒にパッケージ化して、単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）を形成することができる。このｓｇＲＮＡは、Ｃａｓ９遺伝子と一緒に連結され、細胞にトランスフェクトされるためにプラスミドに作製され得る。

【0291】

亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）は、亜鉛フィンガーＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ開裂ドメインと組み合わせることによって生成される人工制限酵素である。亜鉛フィンガードメインは、特定のＤＮＡ配列を標的とするように操作することができ、これにより、亜鉛フィンガーヌクレアーゼはゲノム内の所望の配列を標的とすることができる。個々のＺＦＮのＤＮＡ結合ドメインは、典型的には、複数の個々の亜鉛フィンガー反復を含有し、各々が複数の塩基対を認識することができる。新しい亜鉛フィンガードメインを生成する最も一般的な方法は、既知の特異性のより小さい亜鉛フィンガー「モジュール」を組み合わせることである。ＺＦＮにおける最も一般的な切断ドメインは、ＩＩ型制限エンドヌクレアーゼＦｏｋＩからの非特異的切断ドメインである。内因性相同組換え（ＨＲ）機構及びＣＡＲ発現カセットを保有する相同ＤＮＡ鋳型を使用して、ＺＦＮを使用して、ＣＡＲ発現カセットをゲノム内に挿入することができる。標的化配列がＺＦＮによって切断されると、ＨＲ機構は、損傷した染色体と相同ＤＮＡ鋳型との間の相同性を探索し、次いで、染色体の２つの壊れた末端間の鋳型の配列をコピーし、それによって相同ＤＮＡ鋳型がゲノム内に組み込まれる。

【0292】

転写活性化因子様エフェクタヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）は、ＤＮＡの特定の配列を切断するように操作することができる制限酵素である。ＴＡＬＥＮシステムは、ＺＦＮとほぼ同じ原理で作用する。これらは、転写活性化因子様エフェクターＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ切断ドメインと組み合わせることによって生成される。転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）は、特定のヌクレオチドに対する強い認識を有する２つの可変位置を有する３３～３４個のアミノ酸反復モチーフで構成される。これらのＴＡＬＥのアレイを組み立てることによって、ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合ドメインは、所望のＤＮＡ配列に結合し、それによってヌクレアーゼをゲノム内の特定の位置で切断するよう誘導するように操作され得る。ポリヌクレオチド療法の方法で使用するためのｃＤＮＡ発現は、任意の好適なプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、又はメタロチオネインプロモーター）から誘導され、任意の適切な哺乳動物調節要素又はイントロン（例えば、伸長因子１ａエンハンサー／プロモーター／イントロン構造）によって調節され得る。例えば、必要に応じて、特定の細胞型における遺伝子発現を優先的に指示することが知られているエンハンサーを使用して、核酸の発現を指示することができる。使用されるエンハンサーは、限定されないが、組織又は細胞特異的エンハンサーとして特徴付けられるものを含むことができる。代替的に、ゲノムクローンが治療用構築物として使用される場合、調節は、同族の調節配列によって、又は必要に応じて、上述のプロモーター若しくは調節エレメントのうちのいずれかを含む、異種源に由来する調節配列によって媒介され得る。

【0293】

５．５．１ ゲノム編集剤／システムを送達するための送達方法の方法は、必要に応じて変化し得る。特定の実施形態では、選択されたゲノム編集方法の成分は、１つ以上のプラスミド中のＤＮＡ構築物として送達される。特定の実施形態では、成分は、ウイルスベクターを介して送達される。一般的な送達方法としては、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、遺伝子銃、インパレフェクション、静水圧、連続注入、超音波処理、磁気結合、アデノ関連ウイルス、ウイルスベクターのエンベロープタンパク質偽型、複製能ベクターシス及びトランス作用エレメント、単純ヘルペスウイルス、及び化学ビヒクル（例えば、オリゴヌクレオチド、リポプレックス、ポリマーソーム、ポリプレックス、デンドリマー、無機ナノ粒子、並びに細胞透過性ペプチド）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0294】

特定の実施形態では、送達方法は、コロイドの使用を含む。本明細書で使用される場合、用語「コロイド」は、１つの相（例えば、分散相）が他の相（例えば、連続相）に分布する、２つ以上の相が存在する系を指す。更に、位相のうちの少なくとも１つは、小さい寸法（約１０^－９～約１０^－６ｍの範囲内）を有する。本明細書に開示される主題に包含されるコロイドの非限定的な例としては、巨大分子複合体、ナノカプセル、微粒子、ビーズ、及び脂質ベースの系（例えば、ミセル、リポソーム、及び脂質ナノ粒子）が挙げられる。

【0295】

特定の実施形態では、送達方法は、リポソームの使用を含む。本明細書で使用される場合、「リポソーム」という用語は、有機溶媒中に溶解され、次いで水性媒体中に分散された脂質から生成された単層又は多層の球状脂質二重層構造を指す。活性薬学的成分（例えば、本明細書に開示される核酸組成物）を細胞に送達するために実験的及び治療的に使用され、リポソームは細胞膜と融合するため、内容物は細胞質に移される。

【0296】

特定の実施形態では、送達方法は、脂質ナノ粒子の使用を含む。本明細書で使用される場合、「脂質ナノ粒子」という用語は、ナノメートルのオーダー（例えば、約１ｎｍ～約１，０００ｎｍ）の少なくとも１つの寸法を有し、少なくとも１つの脂質を含む粒子を指す。特定の実施形態では、脂質ナノ粒子は、細胞に送達するための活性薬学的成分（例えば、本明細書に開示される核酸組成物）を含むことができる。脂質ナノ粒子の形態は、リポソームとは異なり得る。リポソームは、親水性コアを取り囲む脂質二重層によって特徴付けられるが、脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質及び／又はイオン化可能な脂質が活性薬学的成分（例えば、本明細書に開示される核酸組成物）の周りの反転ミセルに編成される、電子密度の高いコアを有する。脂質ナノ粒子及びリポソームの形態及び特性に関する更なる情報は、Ｗｉｌｃｚｅｗｓｋａ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｐｏｒｔｓ ６４，ｎｏ．５（２０１２）：１０２０－１０３７、Ｅｙｇｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５５，ｎｏ．１（２０２１）：２－１２、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ １２１，ｎｏ．２０（２０２１）：１２１８１－１２２７７、及びＦａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ １９２（２０２１）：１１３６４２に見出すことができる。

【0297】

特定の実施形態では、脂質ナノ粒子は、約３０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約５０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１３０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１００ｎｍ、約８０ｎｍ～約１００ｎｍ、約９０ｎｍ～約１００ｎｍ、約７０～約９０ｎｍ、約８０ｎｍ～約９０ｎｍ、約７０ｎｍ～約８０ｎｍ、又は約３０ｎｍ、３５ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、又は１５０ｎｍの平均直径を有する。

【0298】

特定の実施形態では、脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質又はイオン化可能な脂質を含むことができる。「カチオン性脂質」という用語は、恒久的な正電荷を有する頭部基を含む脂質を指す。本明細書に開示される主題に包含されるカチオン性脂質の非限定的な例としては、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＴＭＡ）、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＴＡＰ）、２，３－ジオレイルオキシ－Ｎ－［２－（スペルミンカルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、及びエチルホスファチジルコリン（ｅＰＣ）が挙げられる。

【0299】

本明細書で使用される場合、「イオン化可能脂質」という用語は、低ｐＨでプロトン化され、生理学的ｐＨで中性である脂質を指す。イオン化可能な脂質のｐＨ感受性は、中性脂質が血液細胞のアニオン性膜との相互作用が少なく、したがって、脂質ナノ粒子の生体適合性が改善されるため、インビボでの送達（例えば、本明細書に開示される核酸組成物の送達）に特に有益である。エンドソームに捕捉されると、イオン化可能な脂質はプロトン化され、膜の不安定化を促進して、ナノ粒子のエンドソーム脱出を可能にする。本明細書で開示される主題に包含されるイオン化可能な脂質の非限定的な例としては、テトラキス（８－メチルノニル）３，３’，３’’，３’’’－（（（メチルアザンジイル）ビス（プロパン－３，１ジイル））ビス（アザントリイル））テトラプロピオネート、デシル（２－（ジオクチルアンモニオ）エチル）ホスフェート、（（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート）、ビス（２－（ドデシルジスルファニル）エチル）３，３’－（（３－メチル－９－オキソ－１０－オキサ－１３，１４－ジチア－３，６－ジアザヘキサコシル）アザンジイル）ジプロピオネート、１，１’－（（２－（４－（２－（（２－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）エチル）ピペラジン－１－イル）エチル）アザンジイル）ビス（ドデカン－２－オール）、ｃＫＫ－Ｅ１２、３，６－ビス（４－（ビス（２－ヒドロキシドデシル）アミノ）ブチル）ピペラジン－２，５－ジオン、（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノアート、ヘキサ（オクタン－３－イル）９，９’，９’’，９’’’，９’’’’，９’’’’’－（（（（ベンゼン－１，３，５－トリカルボニル）イリス（アザンジイル））トリス（プロパン－３，１－ジイル））トリス（アザントリイル））ヘキサノナノエート、ヘプタデカン－９－イル８－（（２－ヒドロキシエチル）（６－オキソ－６－（ウンデシルオキシ）ヘキシル）アミノ）オクタノエート、及び（（（３，６－ジオキソピペラジン－２，５－ジイル）ビス（ブタン－４，１－ジイル）ビス（アザントリイル））テトラキス（エタン－２，１－ジイル）（９Ｚ，９’Ｚ，９’’Ｚ，９’’’Ｚ，１２Ｚ，１２’Ｚ，１２’’Ｚ，１２’’’Ｚ）－テトラキス（オクタデカ－９，１２－ジエノエート）が挙げられる。

【0300】

追加的に、特定の実施形態では、脂質ナノ粒子は、他の脂質を含むことができる。例えば、限定されないが、本明細書に開示される主題の脂質ナノ粒子は、リン脂質、コレステロール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）官能性脂質（ＰＥＧ－脂質）を含むことができる。これらの脂質は、脂質ナノ粒子の特定の特性（例えば、安定性、生体内分布など）を改善することができる。例えば、コレステロールは、完全性及び剛性を調節することによって、脂質ナノ粒子の安定性を増強する。脂質ナノ粒子中に存在する他の脂質の非限定的な例としては、コレステロール、ＤＣ－コレステロール、β－シトステロール、ＢＨＥＭ－コレステロール、ＡＬＣ－０１５９、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、パルミトイルオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、及びジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＤＯＰＥ－ｍａｌ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１６－Ｏ－モノメチルＰＥ、１６－Ｏ－ジメチルＰＥ、１８－１－トランスＰＥ、１－ステアリオイル－２－オレオイル－ホスファチジエタノールアミン（ＳＯＰＥ）、並びにｌ，２－ジエライドイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ｔｒａｎｓＤＯＰＥ）が挙げられる。

【0301】

特定の実施形態では、脂質ナノ粒子は、リガンドに結合する標的化部分を含むことができる。標的化部分の使用は、活性薬学的成分（例えば、本明細書に開示される核酸組成物）の、リガンドを発現する標的細胞（例えば、Ｔ細胞）への選択的送達を可能にする。特定の実施形態では、標的化部分は、細胞表面受容体に結合する抗体又はその抗原結合断片であり得る。例えば、限定されないが、標的化ドメインは、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ９５、ＦａｓＬ、ＣＴＬＡ－４、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＬＡＧ３、ＩＣＯＳ、及びＰＤ－１）の表面上に発現される受容体に結合する抗体又はその抗原結合断片である。

【0302】

特定の実施形態では、送達方法は、インビボ送達方法である。特定の実施形態では、送達方法は、エクスビボ送達方法である。

【0303】

５．６．ポリペプチド
本明細書に開示される主題は、配列における変化を産生することによって、アミノ酸配列又はヌクレオチド配列を最適化するための方法を提供する。そのような変化は、特定の変異、欠失、挿入、又は翻訳後修飾を含み得る。本明細書に開示される主題は、本明細書に開示される任意の天然に存在するポリペプチド（限定されないが、ＣＤ３３、ＣＤ８、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、及びＣＤ３ζを含む）の類似体を更に含む。類似体は、アミノ酸配列の違い、翻訳後修飾、又は両方によって、本明細書に開示される天然に存在するポリペプチドとは異なり得る。類似体は、本明細書に開示される主題の天然に存在するアミノ酸配列の全部又は一部と少なくとも約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又はそれ以上の相同性又は同一性を示すことができる。配列比較の長さは、少なくとも５個、１０個、１５個、若しくは２０個のアミノ酸残基、例えば、少なくとも２５個、５０個、若しくは７５個のアミノ酸残基、又は１００個を超えるアミノ酸残基である。再度、同一性の程度を決定するための例示的なアプローチでは、ＢＬＡＳＴプログラムが使用されてもよく、ｅ^－３～ｅ^－１００の確率スコアは、密接に関連する配列を示している。修飾は、ポリペプチドのインビボ及びインビトロの化学的誘導体化、例えば、アセチル化、カルボキシル化、リン酸化、又はグリコシル化を含み、このような修飾は、ポリペプチドの合成中、処理中、又は単離された修飾酵素による処理の後に生じ得る。類似体はまた、一次配列の変化によって、天然に存在するポリペプチドとは異なり得る。これらには、天然及び誘導の両方の遺伝子バリアントが含まれる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ ａｎｄ Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｄ ｅｄ．），ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，１９８９、又はＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．、上記に記載されているように、放射線照射若しくはエタンメチルスルファートへの曝露によるランダム変異誘発、又は部位特異的変異誘発によって生じる）。Ｌ－アミノ酸以外の残基、例えば、Ｄ－アミノ酸、又は天然に存在しない若しくは合成アミノ酸、例えば、β又はγアミノ酸を含有する環化ペプチド、分子、及び類似体も含まれる。

【0304】

完全長ポリペプチドに加えて、本明細書に開示される主題はまた、本明細書に開示されるポリペプチドのうちのいずれかの断片を提供する。本明細書で使用される場合、「断片」という用語は、少なくとも５、１０、１３、又は１５個のアミノ酸を意味する。特定の実施形態では、断片は、少なくとも２０個の連続アミノ酸、少なくとも３０個の連続アミノ酸、又は少なくとも５０個の連続アミノ酸を含む。特定の実施形態では、断片は、少なくとも６０～８０個、１００個、２００個、３００個、又はそれ以上の連続アミノ酸を含む。断片は、当業者に既知の方法によって生成され得るか、又は通常のタンパク質処理（例えば、生物学的活性に必要とされない新生ポリペプチドからのアミノ酸の除去、又は代替のｍＲＮＡスプライシング若しくは代替のタンパク質処理事象によるアミノ酸の除去）から生じ得る。

【0305】

５．７．製剤及び投与
本明細書に開示される主題は、本明細書に開示される細胞を含む組成物を提供する。特定の実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体を更に含む医薬組成物である。本明細書に開示される細胞を含む組成物は、滅菌液体調製物、例えば、等張水溶液、懸濁液、エマルション、分散液、又は粘性組成物として便利に提供することができ、これらは、選択されたｐＨに緩衝化されてもよい。液体調製物は、通常、ゲル、他の粘性組成物、及び固体組成物よりも調製が容易である。追加的に、液体組成物は、特に注射によって投与することがいくらかより便利である。一方、粘性組成物は、特定の組織とのより長い接触期間を提供するために、適切な粘度範囲内で製剤化することができる。液体又は粘性組成物は、担体を含むことができ、担体は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの好適な混合物を含む、溶媒又は分散媒体であり得る。

【0306】

滅菌注射可能溶液は、必要な量の適切な溶媒に、必要に応じて様々な量の他の成分とともに遺伝子修飾された細胞を組み込むことによって調製することができる。そのような組成物は、滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどの好適な担体、希釈剤、又は賦形剤との混合物中にあってもよい。組成物を凍結乾燥することもできる。組成物は、投与経路及び所望の調製物に応じて、湿潤剤、分散剤、又は乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化剤若しくは粘度増強添加剤、防腐剤、香料剤、色素などの補助物質を含有することができる。“ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥ”，１７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８５（参照により本明細書に組み込まれる）などの標準的なテキストを、過度の実験なしに好適な調製物を調製するために参照してもよい。

【0307】

抗菌防腐剤、酸化防止剤、キレート剤、及び緩衝剤を含む、組成物の安定性及び無菌性を向上させる様々な添加剤を添加することができる。微生物の活動の予防は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などの様々な抗菌剤及び抗真菌剤によって確実にすることができる。注射可能な薬学的形態の吸収の延長は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用によってもたらされ得る。しかしながら、本明細書に開示される主題によれば、使用される任意のビヒクル、希釈剤、又は添加剤は、遺伝子修飾細胞と適合性でなければならない。

【0308】

組成物は、等張であることができ、すなわち、それらは、血液及び涙液と同じ浸透圧を有することができる。組成物の所望の等張性は、塩化ナトリウム、あるいはデキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、又は他の無機若しくは有機溶質などの他の薬学的に許容される薬剤を使用して達成され得る。塩化ナトリウムは、特にナトリウムイオンを含有する緩衝液のためであり得る。

【0309】

組成物の粘度は、所望の場合、薬学的に許容される増粘剤を使用して、選択されたレベルで維持することができる。例えば、メチルセルロースは、容易かつ経済的に入手可能であり、取り扱いが容易である。他の好適な増粘剤としては、例えば、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマーなどが挙げられる。増粘剤の濃度は、選択された薬剤に依存し得る。重要な点は、選択した粘度を達成する量を使用することである。明らかに、好適な担体及び他の添加剤の選択は、正確な投与経路及び特定の剤形、例えば、液体剤形の性質（例えば、組成物が溶液、懸濁液、ゲル又は時間放出形態若しくは液体充填形態などの別の液体形態に製剤化されるかどうか）に依存する。

【0310】

本明細書に開示される細胞を含む組成物は、疾患又は障害を治療又は改善するために、対象に全身的に又は直接的に提供することができる。特定の実施形態では、本明細書に開示される細胞又はそれを含む組成物は、目的の臓器（例えば、腫瘍に罹患した臓器）に直接注射される。代替的に、本明細書に開示される細胞又はそれを含む組成物は、例えば、循環系（例えば、腫瘍血管系）への投与によって、目的の臓器に間接的に提供される。増殖剤及び分化剤は、インビトロ又はインビボで細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の産生を増加させるために、細胞又は組成物の投与前、投与中又は投与後に提供することができる。

【0311】

本明細書に開示される細胞は、任意の生理学的に許容されるビヒクルにおいて、通常は血管内に投与され得るが、それらはまた、骨又は他の好都合な部位に導入され得、そこで細胞は、再生及び分化のための適切な部位（例えば、胸腺）を見出すことができる。

【0312】

投与される細胞の量は、治療されている対象によって異なり得る。特定の実施形態では、約１０^４～約１０^１０、約１０^４～約１０^７、約１０^５～約１０^７、約１０^５～約１０^９、又は約１０^６～約１０^８の本明細書に開示される細胞が対象に投与される。より効果的な細胞は、更に少ない数で投与され得る。通常、少なくとも約ｌ×ｌ０^５個の細胞が投与され、最終的に約ｌ×ｌ０^１０個又はそれ以上に達する。特定の実施形態では、少なくとも約１×１０^５、５×１０^５、１×１０^６、約５×１０^６、約１×１０^７、約５×１０^７、約１×１０^８、又は約５×１０^８個の本明細書に開示される細胞が対象に投与される。特定の実施形態では、約１×１０^６個の本明細書に開示される細胞が対象に投与される。有効用量とみなされるものの正確な決定は、特定の対象の大きさ、年齢、性別、体重、及び状態を含む、各対象に対する個々の要因に基づいてもよい。投薬量は、本開示及び当該技術分野の知識から当業者によって容易に確認され得る。

【0313】

本明細書に開示される細胞は、精製された細胞集団を含み得る。当業者は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などの様々な周知の方法を使用して、集団における本明細書に開示された細胞のパーセンテージを容易に決定することができる。本明細書に開示される免疫応答性細胞を含む集団における純度の好適な範囲は、約５０％～約５５％、約５％～約６０％、及び約６５％～約７０％である。特定の実施形態では、純度は、約７０％～約７５％、約７５％～約８０％、又は約８０％～約８５％である。特定の実施形態では、純度は、約８５％～約９０％、約９０％～約９５％、及び約９５％～約１００％である。投与量は、当業者によって容易に調整することができる（例えば、純度を減少させるには、投薬量を増加させることが必要であり得る）。細胞は、注射、カテーテルなどによって導入され得る。

【0314】

当業者は、組成物中の細胞及び任意選択の添加剤、ビヒクル、及び／又は担体の量を容易に決定し、方法で投与されることができる。典型的には、任意の添加剤（活性細胞（複数可）及び／又は薬剤（複数可）に加えて）は、リン酸緩衝生理食塩水溶液中に０．００１～５０％（重量）溶液の量で存在し、有効成分は、約０．０００１～約５重量％、約０．０００１～約１重量％、約０．０００１～約０．０５重量％、又は約０．００１～約２０重量％、約０．０１～約１０重量％、又は約０．０５～約５重量％などのマイクログラムからミリグラムのオーダーで存在する。動物又はヒトに投与される任意の組成物について、以下を決定することができる：好適な動物モデル、例えば、マウスなどのげっ歯類における致死量（ＬＤ）及びＬＤ５０を決定することによるような毒性、好適な応答を誘発する組成物（複数可）の投与量、その中の成分の濃度、及び組成物（複数可）の投与のタイミング。そのような決定は、当業者の知識、本開示、及び本明細書で引用される文書からの過度の実験を必要としない。また、連続投与の時間は、過度の実験をすることなく確認することができる。

【0315】

特定の実施形態では、組成物は、本明細書に開示される細胞と、薬学的に許容可能な担体と、を含む、医薬組成物である。

【0316】

組成物の投与は、自己又は異種であり得る。例えば、細胞は、１つの対象から得て、同じ対象又は異なる適合性の対象に投与することができる。末梢血由来細胞又はそれらの子孫（例えば、インビボ、エクスビボ、又はインビトロ由来）を投与することができる。本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される細胞を含む医薬組成物）を投与する場合、それは、単位投薬量の注射可能な形態（溶液、懸濁液、エマルション）で製剤化され得る。

【0317】

本明細書に開示される細胞及び組成物は、経口投与、静脈内投与、皮下投与、結節内投与、腫瘍内投与、髄腔内投与、硝子体内投与、胸膜内投与、骨内投与、腹腔内投与、胸膜投与、及び対象への直接投与を含むが、これらに限定されない、当該技術分野で既知の任意の方法によって投与され得る。

【0318】

追加的又は代替的に、本明細書に開示される主題はまた、本明細書に開示される核酸又は核酸組成物を含む（例えば、セクション５．５．１に記載される）脂質ナノ粒子を含む組成物を提供する。本明細書に開示される脂質ナノ粒子を含む組成物は、滅菌及び／又は発熱物質フリーとして便利に提供することができる。組成物は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、及び／又は国際薬局方の基準を満たすように調製することができる。

【0319】

本明細書に開示される脂質ナノ粒子を含む組成物は、薬学的に許容される賦形剤を含むことができる。薬学的に許容される賦形剤の非限定的な例としては、不活性希釈剤、分散剤、造粒剤、表面活性剤、乳化剤、崩壊剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤、潤滑剤、及び／又は油が挙げられる。更に、カカオバター及び坐剤ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤、及び／又は香料剤などの賦形剤が、組成物中に存在し得る。

【0320】

特定の実施形態では、本明細書に開示される脂質ナノ粒子を含む組成物は、注射可能な調製物として調製することができる。これらの注射可能な調製物には、水、リンゲル溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、等張性塩化ナトリウム溶液、及び／又は油（例えば、オレイン酸）を含むが、これらに限定されない、薬学的に許容されるビヒクル及び溶媒を含むことができる。特定の実施形態では、本明細書に開示される脂質ナノ粒子を含む注射用調製物は、水溶性が低い結晶性又は非晶質材料の液体懸濁液を含むことができる。これらの低い水溶性材料の使用は、皮下又は筋肉内注射からの吸収を遅らせることを可能にする。代替的又は追加的に、本明細書に開示される脂質ナノ粒子を含む組成物は、直腸又は膣投与、経口投与、局所投与及び／又は経皮投与、皮内投与、肺投与、鼻腔投与、口腔投与、又は眼科投与のために調製することができる。本明細書に開示される脂質ナノ粒子を含む医薬組成物を製剤化及び調製するための様々な方法に関する追加的な情報は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．，２０１２に見出すことができる。

【0321】

特定の実施形態では、本明細書に開示される脂質ナノ粒子を含む組成物は、制御放出又は持続放出のために製剤化され得る。本明細書で使用される場合、「制御放出」という用語は、治療転帰をもたらすための特定の放出パターンに適合する医薬組成物又は化合物放出プロファイルを指す。本明細書で使用される場合、「持続放出」という用語は、特定の期間にわたる放出速度に適合する医薬組成物又は化合物を指す。期間は、時間、日、週、月、及び年を含み得るが、これらに限定されない。

【0322】

本明細書に開示される脂質ナノ粒子を含む組成物は、抗原に対する免疫応答を誘導及び／若しくは増強するため、並びに／又は腫瘍、例えば、ＣＤ３３に関連する腫瘍を治療及び／若しくは予防するために、全身的に又は直接的に対象に提供することができる。特定の実施形態では、本明細書に開示される脂質ナノ粒子又はそれを含む組成物は、インビボで免疫応答性細胞に提供される。特定の実施形態では、本明細書に開示される脂質ナノ粒子又はそれを含む組成物は、目的の臓器（例えば、腫瘍に罹患した臓器）に直接注射される。代替的に、本開示の脂質ナノ粒子又はそれを含む組成物は、例えば、循環系（例えば、腫瘍血管系）への投与によって、目的の臓器に間接的に提供される。特定の実施形態では、本明細書に開示される脂質ナノ粒子又はそれを含む組成物は、エクスビボで免疫応答性細胞に提供される。増殖剤及び分化剤は、エクスビボ又はインビボで細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）の産生を増加させるために、脂質ナノ粒子又は組成物の投与前、投与中又は投与後に提供することができる。

【0323】

本明細書に開示される脂質ナノ粒子は、任意の生理学的に許容されるビヒクルにおいて、通常は血管内に投与され得るが、それらはまた、骨又は他の好都合な部位に導入され得、そこで細胞は、再生及び分化のための適切な部位（例えば、胸腺）を見出すことができる。

【0324】

投与される細胞の量は、治療されている対象によって異なり得る。特定の実施形態では、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇ、又は約０．１ｍｇ／ｋｇ～約０．２５ｍｇ／ｋｇの本明細書に開示される脂質ナノ粒子が対象に投与される。特定の実施形態では、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約２．５ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、又は約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの本明細書に開示される細胞が対象に投与される。有効用量とみなされるものの正確な決定は、特定の対象の大きさ、年齢、性別、体重、及び状態を含む、各対象に対する個々の要因に基づいてもよい。投薬量は、本開示及び当該技術分野の知識から当業者によって容易に確認され得る。投与量は、当業者によって容易に調整することができる（例えば、純度を減少させるには、投薬量を増加させることが必要であり得る）。

【0325】

５．８．治療方法
本明細書に開示される主題は、免疫応答を誘導及び／又は増加させるための方法を、それを必要とする対象において提供する。本開示の細胞及びそれを含む組成物は、治療又は医薬において使用され得る。本明細書に開示される主題は、細胞（例えば、Ｔ細胞）又はそれを含む組成物を使用する様々な方法を提供する。例えば、本明細書に開示される細胞及びそれを含む組成物は、対象において腫瘍負荷を低減させるために使用することができる。本明細書に開示される細胞は、対象において腫瘍細胞の数を低減させ、腫瘍サイズを低減させ、かつ／又は腫瘍を根絶することができる。本明細書に開示される細胞及びそれを含む組成物は、対象において腫瘍を治療及び／又は予防するために使用することができる。本明細書に開示される細胞及びそれを含む組成物は、対象において疾患又は障害を治療又は改善するために使用することができる。特定の実施形態では、疾患又は障害は、ＣＤ３３に関連する。特定の実施形態では、疾患又は障害は、ＣＤ３３の過剰発現に関連する。特定の実施形態では、疾患又は障害は、腫瘍である。本明細書に開示される細胞及びそれを含む組成物は、腫瘍に罹患している対象の生存時間を延長するために使用することができる。

【0326】

そのような方法は、所望の効果、例えば、既存の状態の緩和又は再発の防止を達成するために、本明細書に開示される細胞又はそれを含む組成物（例えば、医薬組成物）を投与することを含む。治療のために、投与量は、所望の効果を生み出すのに有効な量である。有効量は、１回の投与又は一連の投与で提供され得る。有効量は、ボーラスで、又は連続灌流によって提供され得る。

【0327】

本明細書に開示される主題は、細胞（例えば、Ｔ細胞）又はそれを含む組成物を使用する様々な方法を提供する。例えば、本明細書に開示される主題は、対象において腫瘍負荷を低減させる方法を提供する。特定の実施形態では、腫瘍負荷を低減させる方法は、本明細書に開示される細胞又はそれを含む組成物を対象に投与することを含む。本明細書に開示される細胞は、対象において腫瘍細胞の数を低減させ、腫瘍サイズを低減させ、かつ／又は腫瘍を根絶することができる。

【0328】

本明細書に開示される主題はまた、腫瘍を有する対象の生存時間を増加又は延長する方法を提供する。特定の実施形態では、腫瘍又は新生物を有する対象の生存時間を増加又は延長する方法は、本明細書に開示される免疫応答性細胞又はそれを含む組成物を対象に投与することを含む。この方法は、対象において腫瘍負荷を低減させるか、又は根絶することができる。

【0329】

追加的に、本明細書に開示される主題は、対象において免疫応答を増加させるための方法であって、本明細書に開示される細胞又はそれを含む組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0330】

本明細書に開示される主題は、対象において腫瘍を治療及び／又は予防するための方法であって、本明細書に開示される細胞又はそれを含む組成物を対象に投与することを含む、方法を更に提供する。

【0331】

特定の実施形態では、方法は、本明細書に開示される細胞又はそれを含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。特定の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。Ｔ細胞は、ＣＤ４^＋ Ｔ細胞又はＣＤ８^＋ Ｔ細胞であり得る。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４^＋ Ｔ細胞である。

【0332】

特定の実施形態では、腫瘍は、がんである。特定の実施形態では、がんは、血液がん又は固形組織がんである。血液がんの非限定的な例としては、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）、及び慢性骨髄性腫瘍が挙げられる。特定の実施形態では、血液がんは、ＡＭＬである。

【0333】

対象は、進行した形態の疾患を有する可能性があり、その場合、治療目的は、疾患進行の緩和若しくは逆転、及び／又は副作用の改善を含み得る。対象は、既に治療されている状態の病歴を有する場合があり、その場合、治療目的は、典型的には、再発のリスクの低下又は遅延を含む。

【0334】

本明細書に開示されるＣＤ３３標的抗原認識受容体の表面発現の結果として、養子移された細胞（例えば、免疫応答性細胞、例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）は、腫瘍部位で増強された選択的細胞溶解活性を与えられる。更に、腫瘍又はウイルス感染症への局在化及びそれらの増殖に続いて、細胞は、腫瘍又はウイルス感染部位を、生理学的抗腫瘍又は抗ウイルス応答に関与する広範囲の免疫細胞（腫瘍浸潤リンパ球、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、樹状細胞、及びマクロファージ）のための高伝導性環境に変換する。

【0335】

更なる修飾を、ＣＤ３３特異的ＣＤ３３を発現する操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）に導入して、免疫学的合併症（「悪性Ｔ細胞形質転換」として知られている）、例えば、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）のリスクを回避又は最小化することができる。操作された免疫細胞の修飾は、自殺遺伝子をＣＤ３３特異的ＣＡＲ発現Ｔ細胞内に操作することを含み得る。好適な自殺遺伝子としては、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ｈｓｖ－ｔｋ）、誘導性カスパーゼ９自殺遺伝子（ｉＣａｓｐ－９）、及び切断型ヒト上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲｔ）ポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、自殺遺伝子は、ＥＧＦＲｔポリペプチドである。ＥＧＦＲｔポリペプチドは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（例えば、セツキシマブ）を投与することによって、Ｔ細胞排除を可能にすることができる。ＥＧＦＲｔは、ＣＤ３３特異的ＣＡＲの細胞内ドメインのＣ末端に共有結合することができる。自殺遺伝子は、本明細書に開示されるＣＤ３３特異的ＣＡＲをコードする核酸を含むベクター内に含むことができる。本明細書に開示されるＣＤ３３特異的ＣＡＲに自殺遺伝子を組み込むことにより、非常に短い期間内に大部分のＣＡＲ Ｔ細胞を排除する能力を伴う更なる安全性レベルが得られる。自殺遺伝子を組み込まれた本明細書に開示される操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ＣＡＲ Ｔ細胞注入後の所与の時点で先制的に排除されるか、又は最も初期の毒性徴候で根絶され得る。

【0336】

５．９．キット
本明細書に開示される主題は、対象において疾患若しくは障害を改善するため、対象において免疫応答を誘導及び／若しくは増強するため、対象において腫瘍を治療及び／若しくは予防するため、対象において腫瘍負荷を低減させるため、並びに／又は対象において腫瘍を有する対象の生存時間を増加若しくは延長するためのキットを提供する。特定の実施形態では、キットは、本明細書に開示される細胞又はそれを含む組成物を含む。特定の実施形態では、キットは、滅菌容器を含み、そのような容器は、箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、パウチ、ブリスターパック、又は当該技術分野で既知の他の好適な容器形態であり得る。そのような容器は、プラスチック、ガラス、積層紙、金属ホイル、又は医薬品を保持するのに好適な他の材料で作製することができる。特定の非限定的な実施形態では、キットは、本明細書に開示されるＣＤ３３標的化抗原認識受容体（例えば、ＣＡＲ）をコードする核酸分子を含む。

【0337】

必要に応じて、細胞及び／又は核酸分子は、疾患又は障害（例えば、腫瘍）を有するか、又は発症する危険性がある対象に、細胞又は核酸分子を投与するための説明書とともに提供される。説明書は、概して、腫瘍を治療及び／又は予防するための組成物の使用に関する情報を含む。特定の実施形態では、説明書は、以下のうちの少なくとも１つを含む：治療剤の説明、腫瘍若しくは新生物の治療又は予防のための投薬スケジュール及び投与、予防措置、警告、適応症、対抗適応症、過剰投薬情報、有害反応、動物薬理学、臨床研究、並びに／又は参考事項。説明書は、容器に直接（存在する場合）、又は容器に適用されるラベルとして、又は容器内若しくは容器とともに供給される別個のシート、パンフレット、カード、若しくはフォルダとして印刷され得る。

【0338】

５．１０．例示的な実施形態
Ａ１．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、抗原認識受容体を提供し、細胞外抗原結合ドメインは、ＣＤ３３に特異的に結合し、細胞外抗原結合ドメインは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、
（ａ）配列番号２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号２２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号３２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｅ）配列番号３７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号３９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｆ）配列番号４７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｇ）配列番号５６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号５８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｈ）配列番号６６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号６８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｉ）配列番号７６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、又は
（ｊ）配列番号８５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号８６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号８７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含む。

【0339】

Ａ２．細胞外抗原結合ドメインが、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、Ａ１に記載の抗原認識受容体。

【0340】

Ａ３．細胞外抗原結合ドメインが、ヒトｓｃＦｖである、Ａ２に記載の抗原認識受容体。

【0341】

Ａ４．細胞外抗原結合ドメインが、任意選択で架橋されるＦａｂである、Ａ１に記載の抗原認識受容体。

【0342】

Ａ５．細胞外抗原結合ドメインが、Ｆ（ａｂ）_２である、Ａ１に記載の抗原認識受容体。

【0343】

Ａ６．ｓｃＦｖ、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ）_２のうちの１つ以上が、異種配列を有する融合タンパク質中に含まれて、細胞外抗原結合ドメインを形成する、Ａ２～Ａ５のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0344】

Ａ７．重鎖可変領域が、
（ａ）配列番号２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、又は
（ｃ）配列番号２２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含む、Ａ１～Ａ６のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0345】

Ａ８．軽鎖可変領域が、
（ａ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｃ）配列番号２５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号４０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号４１若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｅ）配列番号４９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号５０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号５１に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｆ）配列番号５９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号６１に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｇ）配列番号６９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号７０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７１に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｈ）配列番号７８に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号７９に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号８０に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、又は
（ｉ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含む、Ａ１～Ａ７のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0346】

Ａ９．軽鎖可変領域が、
（ａ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３、又は
（ｃ）配列番号２５に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列若しくはその保存的修飾を含むＣＤＲ３を含む、Ａ１～Ａ８のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0347】

Ａ１０．
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｂ）重鎖可変領域が、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｃ）重鎖可変領域が、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｄ）重鎖可変領域が、配列番号３２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｅ）重鎖可変領域が、配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号４０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｆ）重鎖可変領域が、配列番号４７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号４９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号５１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｇ）重鎖可変領域が、配列番号５６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号５８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号５９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｈ）重鎖可変領域が、配列番号６６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６８に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号６９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｉ）重鎖可変領域が、配列番号７６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号７９に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８０に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、又は
（ｊ）重鎖可変領域が、配列番号８５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号８７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号４１に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、Ａ１～Ａ９のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0348】

Ａ１１．
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、
（ｂ）重鎖可変領域が、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むか、又は
（ｃ）重鎖可変領域が、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、Ａ１～Ａ１０のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0349】

Ａ１２．重鎖可変領域が、配列番号８、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３５、配列番号４３、配列番号５２、配列番号６２、配列番号７２、配列番号８１、又は配列番号８８に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ａ１～Ａ１１のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0350】

Ａ１３．重鎖可変領域が、配列番号８、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３５、配列番号４３、配列番号５２、配列番号６２、配列番号７２、配列番号８１、又は配列番号８８に記載されるアミノ酸配列を含む、Ａ１～Ａ１２のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0351】

Ａ１４．重鎖可変領域が、配列番号８、配列番号１８、又は配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含む、Ａ１～Ａ１０のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0352】

Ａ１５．重鎖可変領域が、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号４４、配列番号５３、配列番号６３、配列番号７３、配列番号８２、配列番号８９、又は配列番号９２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ａ１～Ａ１４のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0353】

Ａ１６．軽鎖可変領域が、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号４４、配列番号５３、配列番号６３、配列番号７３、配列番号８２、配列番号８９、又は配列番号９２に記載されるアミノ酸配列を含む、Ａ１～Ａ１５のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0354】

Ａ１７．軽鎖可変領域が、配列番号９、配列番号１９、又は配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含む、Ａ１～Ａ１６のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0355】

Ａ１８．
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号８、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３５、配列番号４３、配列番号５２、配列番号６２、配列番号７２、配列番号８１、又は配列番号８８に記載される選択されたアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）軽鎖可変領域が、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号４４、配列番号５３、配列番号６３、配列番号７３、配列番号８２、配列番号８９、又は配列番号９２に記載されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、若しくは約９９％相同であるか又は同一であるアミノ酸配列を含む、Ａ１～Ａ１７のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0356】

Ａ１９．
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号８、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３５、配列番号４３、配列番号５２、配列番号６２、配列番号７２、配列番号８１、又は配列番号８８に記載されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）軽鎖可変領域が、配列番号９、配列番号１９、配列番号２９、配列番号４４、配列番号５３、配列番号６３、配列番号７３、配列番号８２、配列番号８９、又は配列番号９２に記載されるアミノ酸配列を含む、Ａ１～Ａ１８のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0357】

Ａ２０．
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号８、配列番号１８、又は配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）軽鎖可変領域が、配列番号９、配列番号１９、又は配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含む、Ａ１～Ａ１９のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0358】

Ａ２１．
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）重鎖可変領域が、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｃ）重鎖可変領域が、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｄ）重鎖可変領域が、配列番号３５に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｅ）重鎖可変領域が、配列番号４３に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号４４に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｆ）重鎖可変領域が、配列番号５２に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号５３に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｇ）重鎖可変領域が、配列番号６２に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号６３に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｈ）重鎖可変領域が、配列番号７２に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号７３に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｉ）重鎖可変領域が、配列番号８１に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８２に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｊ）重鎖可変領域が、配列番号８８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号８９に記載されるアミノ酸配列を含むか、又は
（ｋ）重鎖可変領域が、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号９３に記載されるアミノ酸配列を含む、Ａ１～Ａ２０のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0359】

Ａ２２．
（ａ）重鎖可変領域が、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）重鎖可変領域が、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むか、又は
（ｃ）重鎖可変領域が、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域が、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含む、Ａ１～Ａ２１のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0360】

Ａ２３．細胞外抗原結合ドメインが、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間のリンカーを含む、Ａ１～Ａ２２のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0361】

Ａ２４．リンカーが、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、又は配列番号１００に記載されるアミノ酸配列を含むか又はそれからなる、Ａ２３に記載の抗原認識受容体。

【0362】

Ａ２５．シグナルペプチドが、細胞外抗原結合ドメインの５’末端に共有結合される、Ａ１～Ａ２４のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0363】

Ａ２６．膜貫通ドメインが、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３ζポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＰＤ－１ポリペプチド、ＬＡＧ－３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、Ａ１～Ａ２５のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0364】

Ａ２７．細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζポリペプチドを含む、Ａ１～Ａ２６のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0365】

Ａ２８．細胞内シグナル伝達ドメインが、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域を更に含む、Ａ１～Ａ２７のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0366】

Ａ２９．少なくとも１つの共刺激シグナル伝達領域が、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＤＡＰ－１０ポリペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、Ａ２８に記載の抗原認識受容体。

【0367】

Ａ３０．抗原認識受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、又はＴ細胞様融合タンパク質である、Ａ１～Ａ２９のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0368】

Ａ３１．抗原認識受容体が、ＣＡＲである、Ａ１～Ａ３０のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0369】

Ａ３２．抗原認識受容体が、組換え発現される、Ａ１～Ａ３１のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0370】

Ａ３３．抗原認識受容体が、ベクターから発現される、Ａ１～Ａ３２のいずれか１つに記載の抗原認識受容体。

【0371】

Ａ３４．ベクターが、γ－レトロウイルスベクターである、Ａ３３に記載の抗原認識受容体。

【0372】

Ｂ１．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、Ａ１～Ａ３４のいずれか１つに記載の抗原認識受容体を含む、細胞を提供する。

【0373】

Ｂ２．細胞が、抗原認識受容体を形質導入されている、Ｂ１に記載の細胞。

【0374】

Ｂ３．抗原認識受容体が、細胞の表面上に構成的に発現される、Ｂ１又はＢ２に記載の細胞。

【0375】

Ｂ４．細胞が、免疫応答性細胞である、Ｂ１～Ｂ３のいずれか１つに記載の細胞。

【0376】

Ｂ５．細胞が、リンパ系の細胞又は骨髄系の細胞である、Ｂ１～Ｂ４のいずれか１つに記載の細胞。

【0377】

Ｂ６．細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、及びリンパ球細胞が分化し得る幹細胞からなる群から選択される、Ｂ１～Ｂ５のいずれか１つに記載の細胞。

【0378】

Ｂ７．細胞が、Ｔ細胞である、Ｂ１～Ｂ６のいずれか１つに記載の細胞。

【0379】

Ｂ８．Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）又は制御性Ｔ細胞である、Ｂ６又はＢ７に記載の細胞。

【0380】

Ｂ９．幹細胞が、多能性幹細胞である、Ｂ６に記載の細胞。

【0381】

Ｂ１０．多能性幹細胞が、胚様幹細胞又は誘導多能性幹細胞である、Ｂ９に記載の細胞。

【0382】

Ｃ．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、Ａ１～Ａ３４のいずれか１つに記載の抗原認識受容体をコードする核酸を提供する。

【0383】

Ｄ１．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、Ｃの核酸を含む、ベクターを提供する。

【0384】

Ｄ２．ベクターが、γ－レトロウイルスベクターである、Ｄ１に記載のベクター。

【0385】

Ｅ１．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、Ｃの核酸を発現する宿主細胞を提供する。

【0386】

Ｅ２．宿主細胞が、Ｔ細胞である、Ｅ１に記載の宿主細胞。

【0387】

Ｆ１．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、Ｂ１～Ｂ１０のいずれか１つに記載の細胞を含む、組成物を提供する。

【0388】

Ｆ２．薬学的に許容される担体を更に含む医薬組成物である、Ｆ１に記載の組成物。

【0389】

Ｇ．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、Ｃの核酸を含む、脂質ナノ粒子を提供する。

【0390】

Ｈ１．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、Ｇの脂質ナノ粒子を含む、組成物を提供する。

【0391】

Ｈ２．薬学的に許容される担体を更に含む医薬組成物である、Ｈ１に記載の組成物。

【0392】

Ｉ１．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象において疾患又は障害を治療又は改善する方法であって、Ｂ１～Ｂ１０のいずれか１つに記載の細胞、又は請求項Ｆ１、Ｆ２、Ｈ１、若しくはＨ２のいずれか１つに記載の組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0393】

Ｉ２．疾患又は障害が、腫瘍である、Ｉ１に記載の方法。

【0394】

Ｊ１．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象において腫瘍負荷を低減させる方法であって、Ｂ１～Ｂ１０のいずれか１つに記載の細胞、又はいずれか１つのＦ１、Ｆ２、Ｈ１、若しくはＨ２の組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0395】

Ｊ２．方法が、対象において、腫瘍細胞の数を低減させ、腫瘍サイズを低減させ、かつ／又は腫瘍を根絶する、Ｊ１に記載の方法。

【0396】

Ｋ．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象において腫瘍を治療及び／又は予防する方法であって、Ｂ１～Ｂ１０のいずれか１つに記載の細胞、又はＦ１、Ｆ２、Ｈ１、若しくはＨ２のいずれか１つに記載の組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0397】

Ｌ１．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、腫瘍を有する対象の生存時間を増加又は延長する方法であって、請求項Ｂ１～Ｂ１０のいずれか１つに記載の細胞、又は請求項Ｆ１、Ｆ２、Ｈ１、若しくはＨ２のいずれか１つに記載の組成物を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0398】

Ｌ２．方法が、対象において腫瘍負荷を低減させるか、又は根絶する、Ｌ１に記載の方法。

【0399】

Ｌ３．腫瘍が、がんである、Ｉ２～Ｌ２のいずれか１つに記載の方法。

【0400】

Ｌ４．腫瘍が、血液がん又は固形組織がんである、Ｉ２～Ｌ３のいずれか１つに記載の方法。

【0401】

Ｌ５．腫瘍が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）、及び慢性骨髄性腫瘍からなる群から選択される、いずれか１つのＩ２～Ｌ４に記載の方法。

【0402】

Ｌ６．腫瘍が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、Ｌ５に記載の方法。

【0403】

Ｌ７．対象が、ヒトである、Ｉ２～Ｌ６のいずれか１つに記載の方法。

【0404】

Ｍ１．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、対象において疾患若しくは障害を治療若しくは改善するため、対象において腫瘍負荷を低減させるため、対象において腫瘍を治療及び／若しくは予防するため、並びに／又は腫瘍を有する対象の生存時間を増加若しくは延長するためのキットであって、いずれか１つのＢ１～Ｂ１０に記載の細胞、Ｃの核酸、Ｇの脂質ナノ粒子、又は請求項Ｆ１、Ｆ２、Ｈ１、若しくはＨ２のいずれか１つに記載の組成物を含む、キットを提供する。

【0405】

Ｍ２．キットが、対象において疾患若しくは障害を治療若しくは改善するため、対象において腫瘍負荷を低減させるため、対象において腫瘍を治療及び／若しくは予防するため、並びに／又は腫瘍を有する対象の生存時間を増加若しくは延長するために、細胞又は組成物を使用するための、書面による説明書を更に含む、請求項Ｍ１に記載のキット。

【0406】

Ｎ．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、細胞内に、抗原認識受容体をコードする核酸を導入することを含む、請求項Ａ１～Ａ３４のいずれか１つに記載のＣＤ３３標的化抗原認識受容体を産生するための方法を提供する。

【0407】

Ｏ１．特定の非限定的な実施形態では、本明細書に開示される主題は、疾患を治療又は改善する際における使用のための、Ｂ１～Ｂ１０のいずれか１つに記載の細胞、又はＦ１、Ｆ２、Ｈ１、若しくはＨ２に記載の組成物を提供する。

【0408】

Ｏ２．疾患又は障害が腫瘍である、Ｏ１に記載の使用のための細胞又は組成物。

【0409】

Ｏ３．腫瘍ががんである、Ｏ２に記載の使用のための細胞又は組成物。

【0410】

Ｏ４．疾患又は障害が、肺の神経内分泌腫瘍、肺外神経内分泌がん、黒色腫、神経内分泌前立腺がん、乳がん、胃腸管の神経内分泌腫瘍、膵がん、甲状腺髄様がん、小細胞膀胱がん、卵巣小細胞がん、低悪性度神経膠腫、膠芽腫、及び神経芽腫からなる群から選択される、いずれか１つのＯ１～Ｏ３に記載の使用のための細胞又は組成物。

【0411】

Ｏ５．肺の神経内分泌腫瘍が、肺神経内分泌がん、大細胞神経内分泌がん、及び小細胞肺がんからなる群から選択される、Ｏ４に記載の使用のための細胞又は組成物。

【0412】

Ｏ６．腫瘍が、小細胞肺がんである、Ｏ５に記載の使用のための細胞又は組成物。

【0413】

Ｏ７．対象が、ヒトである、Ｏ１～Ｏ６のいずれか１つに記載の使用のための細胞又は組成物。

【実施例】

【0414】

６．実施例
本開示の実施は、特に明記しない限り、当該技術分野の十分に範囲内にある、分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、及び免疫学の従来の技法を用いる。そのような技法は、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９）、“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｇａｉｔ，１９８４）、“Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，１９８７）、“Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｗｅｉｒ，１９９６）、”Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ”（Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ，１９８７）、“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ａｕｓｕｂｅｌ，１９８７）、“ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓ，１９９４）、“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｃｏｌｉｇａｎ，１９９１）などの文献に十分に説明されている。これらの技法は、本明細書に開示されるポリヌクレオチド及びポリペプチドの産生に適用可能であり、そのため、本明細書に開示される主題を作製及び実施する際に考慮され得る。特定の実施形態のための特に有用な技法は、以下のセクションで論じられるであろう。

【0415】

以下の実施例は、当業者に、本明細書に開示される主題の抗体、多重特異性抗体、それらを含む組成物、スクリーニング、及び治療方法をどのように作製及び使用するかに関する完全な開示及び説明を提供するために提示されており、本発明者らが本明細書に開示される主題とみなすものの範囲を限定することを意図していない。上記に提供される一般的な説明を考慮すると、様々な他の実施形態が実施され得ることが理解される。

【0416】

実施例１－ＣＡＲ構築物の設計及び細胞表面発現
独自の配列を有する候補ｍＡｂについての可変領域をｓｃＦｖとしてフォーマットした。２つの抗体（３Ｐ１４及び４Ｂ２）は、ＩｇＣ２特異的であったが、他の５つの抗体（１Ａ２０、１Ｊ１９、１Ｐ１３、１Ｐ２３及び２Ｎ３）は、ＩｇＶドメインを標的とした。これらのｓｃＦｖを、図２に示すように、形質導入効率マーカーとしてのＣＤ８リーダー配列、切断ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）、Ｔ２Ａ切断シグナル、候補抗体ｓｃＦｖ、ＣＡＲ検出のためのＭｙｃタグ、ＣＤ２８膜貫通セグメント、並びに５’及び３’長末端反復（ＬＴＲ）に隣接するＣＤ２８／ＣＤ３ζＴ細胞シグナル伝達ドメインを含有する第２世代ＣＡＲベクターにクローニングした。全てのｓｃＦｖを、配列番号９６に記載される１５－アミノ酸グリシンセリンリンカーによって接続されるＶ_Ｌ－Ｖ_Ｈ配向及びＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌ配向で試験した。最終構築物を、レトロウイルスベクターＳＦＧ１４内にクローニングした。抗体Ｈ１９５（リンツズマブ）を参照対照として含めた。リンツズマブの可変領域の配列は、特許文献から導出した。

【0417】

レトロウイルスの産生は、パッケージング細胞を使用して行った。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を様々なドナーから単離し、標準的な方法を使用して活性化した。活性化したＴ細胞に、活性化後３日目及び４日目に、異なるＣＡＲを用いて産生されたウイルス上清を形質導入した。細胞を増殖させ、抗ＥＧＦＲ及び抗Ｍｙｃ抗体を使用したフローサイトメトリーによって試験して、形質導入効率及びＣＡＲ発現をそれぞれモニタリングした。全体として、ＣＡＲ構築物を有する様々なドナーにおいて、６０％を超える形質導入効率が達成された。ＣＤ３３の膜近位エピトープを標的とする２つのＣＡＲのうち、３Ｐ１４及び４Ｂ２の両方が、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ配向のみで良好な表面発現を示した（図３を参照されたい）。膜遠位エピトープを標的とする５つのＣＡＲの表面発現は、低から中まで変化した（データは示さず）。

【0418】

実施例２－ＣＤ３３－ＣＡＲ Ｔ細胞のインビトロ細胞傷害性
ＣＡＲ操作ヒトＴ細胞の細胞溶解能を、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼレポーターを用いて、Ｕ９３７又はＯＣｉ－ＡＭＬ３ ＡＭＬ細胞株を使用した殺傷アッセイによって評価した。ＣＡＲ Ｔ細胞を、９６ウェルプレート中で３連で、様々なエフェクター対標的比で１×１０^４個の標的細胞と共培養した。標的細胞を、同じ細胞密度で非シグナル伝達対照ＣＡＲ Ｔ細胞でプレーティングして、参照として最大ルシフェラーゼ発現を決定した。生物発光を２４時間後に測定し、非機能性ＣＡＲ Ｔ細胞で観察された殺傷のパーセンテージとして、溶解パーセントを決定した。

【0419】

ＣＤ３３の膜近位ＩｇＣ２ドメインを標的とする抗体を有するＣＡＲを、Ｕ９３７（ＣＤ３３ｈｉｇｈ）及びＯＣｉ－ＡＭＬ３（ＣＤ３３ｌｏｗ）細胞株上で評価した。３Ｐ１４は、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ配向でのみ殺傷を示した。これは、ｖＬ－ｖＨ配向におけるこのｓｃＦｖの表面発現の欠如と一致する。しかしながら、驚くべきことに、４Ｂ２を有するＣＡＲは、ｖＬ－ｖＨが弱い表面発現を示したにもかかわらず、両方の配向において同等の殺傷を示した。全体的に、両方のＣＡＲは、不活性なＣＡＲと比較して６０％を超える殺傷活性を示した。ＣＤ３３ｈｉｇｈ（Ｕ９３７）及びＣＤ３３ｌｏｗ（ＯＣｉ－ＡＭＬ３）発現細胞の両方における殺傷力は、低Ｅ／Ｔ比でわずかに異なるが同等であった（図４Ａ及び４Ｂを参照されたい）。

【0420】

ＣＤ３３の膜遠位ＩｇＶドメインを標的とする５つの抗体を有するＣＡＲの細胞傷害性評価を、２つの異なるドナーを有するＵ９３７において実施した。１つのクローン（１Ｊ１９）は、Ｈ１９５（リンツズマブ）抗体を用いて作製した参照ＣＡＲよりも強い殺傷を示した（図５Ａ及び５Ｂを参照されたい）。

【0421】

これらの結果に基づいて、更なる評価のために、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ ｓｃＦｖ配向における２つの膜近位クローン３Ｐ１４及び４Ｂ２（それぞれ、「ＴＤＩ－Ｙ－００６」及び「ＴＤＩ－Ｙ－００７」として示される）、並びに１Ｊ１９を選択した。

【0422】

実施例３－ＣＤ３３－ＣＡＲ Ｔ細胞の機能的特性評価
細胞傷害性。インビトロでのＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲの細胞傷害性を評価するために、ＣＡＲ Ｔ細胞を、ＣＤ３３発現ヒトＡＭＬ標的株と共培養した。３つのＡＭＬ細胞株（Ｕ９３７、ＨＬ６０及びＳｅｔ２）を使用した。実施例２のデータに基づいて、更なる特性評価のために、Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ配向のみを選択した。Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ配向におけるＨ１９５を有する参照ＣＡＲを全ての実験に含めた。ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲは、ドナー１（図６Ａ～６Ｃを参照されたい）又はドナー２（図６Ｄ～６Ｆを参照されたい）由来のＴ細胞において操作されたときに、様々な種類のＣＤ３３発現ＡＭＬ標的細胞を強力に溶解した。全体として、８０％超の殺傷が、最も高いエフェクター対標的比で観察された。これらのデータは、リード選択段階中のこれらのクローンの初期評価と一致している。異なるドナーを用いて試験した場合、１Ｊ１９ ＣＡＲは、ＣＤ３３発現標的細胞を等しく良好に溶解した（図７Ａ～７Ｄを参照されたい）。３つのＣＡＲ Ｔ細胞は全て、Ｈ１９５参照ＣＡＲと比較して優れた殺傷を示し、ＴＤＩ－Ｙ－００６、ＴＤＩ－Ｙ－００７、１Ｊ１９、及びＨ１９５の順序での有効性の明確なランク付けが観察された。

【0423】

増殖及びサイトカインプロファイル。ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲ ＴのインビトロでのＴ細胞増殖及びサイトカイン活性化プロファイルを、標的細胞及びエフェクター細胞を共培養し、Ｔ細胞の増殖及びサイトカインレベルを測定することによって評価した。簡潔に述べると、２つの異なるドナーからのＣＡＲ Ｔ細胞を、１：５の腫瘍対ＣＡＲ Ｔ細胞比でＵ９３７又はＯＣｉ－ＡＭＬ３ ＡＭＬ細胞と共培養した。７日ごとに、フローサイトメトリーを使用して、残りの腫瘍及びＣＡＲ Ｔ細胞を検出し、次いで、１：５の腫瘍対ＣＡＲ Ｔ細胞比にて腫瘍で更に刺激した。Ｕ９３７細胞（ＣＤ３３^ｈｉｇｈ）では、両方のドナーからのＴＤＩ－Ｙ－００６ ＣＡＲ Ｔ細胞が非常に強い増殖を示し、続いてＴＤＩ－Ｙ－００７であり、これは、Ｈ１９５参照ＣＡＲ Ｔと比較して中等度であるが、依然として顕著な刺激を有した。同様の結果が、ＯＣｉ－ＡＭＬ３細胞で観察され、２つのドナー間でわずかな変動があった。これらの全ての設定において、Ｈ１９５参照ＣＡＲ Ｔ細胞は、増殖のバックグラウンドレベルのみを有した（図８Ａ～８Ｄを参照されたい）。まとめると、これらのデータは、ＴＤＩ－Ｙ－００６ ＣＡＲ Ｔ、及びより少ない程度のＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲ Ｔが、Ｈ１９５参照ＣＡＲ Ｔ細胞よりも強力であり、それらが標的細胞に結合するときに優れた増殖を示すことを示唆する。

【0424】

４つのサイトカインマーカー（ＩＬ－２、ＧＭＣＳＦ、ＩＦＮ－ガンマ及びＴＮＦ－アルファ）のパネルを評価して、各ＣＡＲの効力を評価した。３人の健康なドナーに由来するＴＤＩ－Ｙ－００６ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１：１のＥ：ＴのＣＤ３３発現Ｕ９３７標的細胞の存在下で、高レベルのＩＬ－２、ＧＭＣＳＦ、ＩＦＮ－ガンマ及びＴＮＦ－アルファを分泌した（４０，０００個のＣＡＲ Ｔ細胞：４０，０００個のＵ９３７細胞）。図９Ａ～９Ｄは、１つのドナーからの代表的なデータを示しているが、３つのドナー全てにわたって一貫したサイトカインプロファイルが見られた。ＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲ Ｔ細胞によって誘導されたサイトカイン分泌のレベルは、ドナーに応じて、ＴＤＩ－Ｙ－００６ ＣＡＲ Ｔよりも３０％～６０％低かった。Ｈ１９５参照ＣＡＲ Ｔによるサイトカイン分泌のレベルは、ＴＤＩ－Ｙ－００７と同様であったか、又はドナーに応じて更に低減した。これらのデータは、ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲ Ｔが、標的細胞の関与時に強力なサイトカイン産生を誘導することを示す。ＴＤＩ－Ｙ－００７と比較してＴＤＩ－Ｙ－００６について見られるより強い効果は、その優れた増殖能力と一致しており、細胞上のＣＤ３３に対するＣＡＲの異なる親和性と相関する可能性がある。

【0425】

これらのサイトカインの産生及び分泌は、低親和性ＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲ Ｔ及びＨ１９５参照ＣＡＲ Ｔよりも高い程度で高親和性ＴＤＩ－Ｙ－００６ ＣＡＲ Ｔのインビトロ増殖を増強する可能性が高い。Ｈ１９５ ＣＡＲ Ｔが標的に対して高い親和性を有するにもかかわらず、サイトカイン分泌レベルは、概して、リードＣＡＲ、特にＴＤＩ－Ｙ－００６に対してよりも低い。これは、ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７のエピトープが、膜近位ＩｇＣ２ドメインに位置するという事実が原因である可能性が高い。標的細胞の膜に近いＣＤ３３の領域へのＣＡＲの結合は、より強い免疫シナプスの確立を可能にし、したがって、強力なＣＡＲ Ｔをもたらし得る。重要なことに、ＩＬ２分泌は、ＴＤＩ－Ｙ－００６において一貫して高く、続いてＴＤＩ－Ｙ－００７であり、抗原陽性細胞の状況における増殖の可能性を示している。

【0426】

インビボ有効性：ＡＭＬ異種移植片マウスモデル。ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲのインビボ有効性を、ＮＣＧマウスにＵ９３７腫瘍細胞を静脈内（ＩＶ）に注入し、３日後に１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ細胞を注入することによって評価した。マウス生存及び全腫瘍負荷を、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼ発現腫瘍細胞の生物発光イメージングによって追跡した。持続的な腫瘍制御を、ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲ Ｔ細胞の注入によって観察した（図１０Ａを参照されたい）が、Ｈ１９５参照抗体を有するＣＡＲ Ｔは、非シグナル伝達Ｈ１９５対照と比較して、腫瘍増殖を最小限に遅延させただけであった。一貫した腫瘍退縮を促進することに加えて、ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲ Ｔ細胞は、Ｈ１９５参照ＣＡＲ Ｔと比較して、腫瘍保有マウスの生存時間を実質的に向上させた（図１０Ｂを参照されたい）。

【0427】

リードＣＡＲ Ｔ細胞のインビボ有効性を更に検証するために、ＮＣＧマウスにＵ９３７細胞を接種し、３日後に低用量のＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲ Ｔ細胞で処置した。両方のＣＡＲ Ｔ細胞は、５×１０^５用量で非シグナル伝達又はシグナル伝達Ｈ１９５ Ｔ細胞に対して同等の生存利益を示した（図１１Ａ及び１１Ｂを参照されたい）。興味深いことに、ＴＤＩ－Ｙ－００６とＴＤＩ－Ｙ－００７との間のより微妙な違いは、Ｔ細胞を２．５×１０^５で使用したときに見られ、ＴＤＩ－Ｙ－００６は、この低いＣＡＲ Ｔ細胞用量でマウスに長期生存をもたらした。

【0428】

低レベルのＣＤ３３を発現する細胞を有する腫瘍モデルにおいて、これらの結果を要約するために、ＮＣＧマウスにＯＣｉ－ＡＭＬ３腫瘍細胞をＩＶで接種し、３日後に５×１０^５個のＣＡＲ Ｔ細胞を注入した。マウスの生存時間及び全腫瘍負荷を、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼを発現するように操作された、ＯＣｉ－ＡＭＬ３腫瘍細胞の生物発光イメージングによって追跡した。ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲ Ｔ細胞は、Ｈ１９５参照ＣＡＲ Ｔ細胞と比較して、腫瘍保有マウスの生存時間を向上させた。以前の実験で見られるように、ＴＤＩ－Ｙ－００６ ＣＡＲ Ｔ細胞は、平均化されたコホート（図１２Ａを参照されたい）又は個々の動物イメージング（図１２Ｂを参照されたい）によって最も強い腫瘍制御を示した。

【0429】

２つのリード及び１つのバックアップ１Ｊ１９ ＣＡＲのインビボ有効性及びランキングを評価するために、Ｕ９３７異種移植片を使用して直接比較を行った。図１３に示すように、ＴＤＩ－Ｙ－００６、ＴＤＩ－Ｙ－００７、１Ｊ１９及びＨ１９５の順に明確なランキングが観察された。これは、インビトロ殺傷データ及び複数のドナーにわたって一致した。

【0430】

インビボ有効性：患者由来異種移植片マウスモデル。上述のＡＭＬ細胞株異種移植片モデルにおいて最も強力な有効性を示したＴＤＩ－Ｙ－００６ ＣＡＲ Ｔ細胞を、インビボ患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおいて更に評価した。ＮＳＧＳマウスを２５０ｃＧｙで亜致死的に照射し、末梢芽球を有するＡＭＬ患者に由来するＰＢＭＣを静脈内に注入した。腫瘍細胞を１０日間増殖させ、その時点で、末梢血中のヒトＣＤ４５のフローサイトメトリー染色によって腫瘍生着を検証した。腫瘍接種の１４日後に、マウスに同種異系ＣＡＲ Ｔ細胞を注入した。Ｔ細胞注入の７日後、非シグナル伝達対照ＣＡＲ Ｔ細胞で処置されたマウスと比較して、ＴＤＩ－Ｙ－００６ ＣＡＲ Ｔ細胞処置マウスの骨髄中に有意に少ないｈＣＤ４５＋、ＣＤ２－、ＣＤ３３＋ＡＭＬ細胞が存在した（図１４を参照されたい）。

【0431】

更に、ＴＤＩ－Ｙ－００６ ＣＡＲ Ｔ細胞で処置したマウスの血清中に、炎症誘発性サイトカインＩＦＮ－ガンマ及びＴＮＦ－アルファの有意に上昇したレベルが見出され（図１５Ａ及び１５Ｂを参照されたい）、このモデルにおいても同様に強いＴ細胞活性化及び増殖を示した。

【0432】

毒性。インビトロでのＣＡＲ Ｔ細胞を標的とするＣＤ３３の造血幹細胞殺傷能力を、コロニー形成単位（ＣＦＵ）アッセイを使用して評価した。総コロニー数によって定量化すると、ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＤ３４＋ＨＳＣを溶解し、陽性対照として使用したゲムツズマブオゾガマイシン（ＧＯ）と同等であった（図１６Ａ及び１６Ｂを参照されたい）。これらのデータは、他の任意のＣＤ３３ベースの療法と同様に、これらのＣＡＲ Ｔ細胞がＣＤ３３を発現するので、これらのＣＡＲ Ｔ細胞がＨＳＣに影響を及ぼす可能性が最も高いことを示唆する。したがって、それらの臨床使用は、レスキュー同種異系幹細胞移植を必要とするであろう。ＨＳＣを除去するＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７のこの能力は、実際には、これらのＣＡＲ Ｔ細胞が、過酷な細胞傷害性薬剤による骨髄調製を必要とせずに同種異系細胞の生着を可能にするため、化学療法を伴わない移植レジメンを開発するために利用され得る。更に、抗原低集団の標的化を回避するために、異なる投与量のＣＡＲ Ｔ細胞を用いてもよい。

【0433】

結論。要約すると、ＴＤＩ－Ｙ－００６及びＴＤＩ－Ｙ－００７は、抗原の膜近位ドメインを標的とする新規の抗ＣＤ３３抗体である。これらの標的は、ＣＡＲ Ｔフォーマットにおいて優れたインビトロ及びインビボでの有効性を示し、既存の参照ＣＡＲ疾患関連マウスモデルを上回り、実質的な生存利益を伴う完全な腫瘍根絶をもたらした。薬理学的特性の概要を以下の表１２に提供する。

【表12】

【0434】

結論として、これらの新規分子は、単一の薬剤として、又は相補的アプローチのための他の抗原と組み合わせて、次世代ＡＭＬ ＣＡＲ Ｔ療法として使用される大きな可能性を有する。

【0435】

実施例４－膜近位ＣＤ３３標的化ＣＡＲ Ｔ細胞の開発
本実施例は、リンツズマブ－ＣＤ２８／ＣＤ３Ｚ（Ｈ１９５ＨＬｈ２８Ｚ）プラットフォームと、ＣＤ３３の膜近位ＩｇＣドメイン（ＣＤ３３－ＩｇＣ）を標的とする本明細書に開示される抗原認識受容体との間の差異を分析する。本実施例は、高親和性ＣＤ３３－ＩｇＣ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞が、Ｈ１９５ＨＬｈ２８Ｚと比較してより高い増殖能力及びインビトロで増加した多機能性を有し、高及び低抗原密度並びに高腫瘍負荷の異種移植片モデルにおいて改善された生存時間及び腫瘍制御をもたらすことを実証する。驚くべきことに、低親和性ＣＤ３３ ＩｇＣ標的化ＣＡＲ Ｔ細胞は、高親和性の膜遠位標的化Ｈ１９５ＨＬｈ２８Ｚと比較して優れた機能性を実証した。まとめると、これらのデータは、ＣＤ３３－ＩｇＣを標的にして、ＡＭＬ処置に対するＣＡＲ Ｔ細胞の有効性を著しく向上させることを支持する。

【0436】

方法
動物モデル。異種研究のために、ＮＯＤ－Ｐｒｋｄｃ^{ｅｍ２６Ｃｄ５２}Ｉｌ２ｒｇ^{ｅｍ２６ＣＤ２２}／ＮｊｕＣｒｌ、コアイソジェニック免疫不全（Ｃｏｉｓｏｇｅｎｉｃ Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔ）（ＮＣＧ）マウスを、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒから購入し、続いて、動物施設で特異的病原体フリー（ＳＰＦ）条件下で飼育した。全ての実験について、６～１２週齢のマウスを使用した。ＣＤ３３－高腫瘍研究について、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）－ホタルルシフェラーゼを発現する５×１０^４個のＵ９３７ ＡＭＬ細胞を０日目に接種した。ＣＤ３３－低腫瘍研究について、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼを発現する５×１０^５個のＯＣｉＡＭＬ３ ＡＭＬ細胞を０日目に接種した。両方のモデルにおいて、マウスを、腫瘍接種の３日後に様々な用量のＣＡＲ Ｔ細胞で処置した。患者由来ＡＭＬ異種移植動物研究のために、ＮＣＧマウスに、１×１０^６個の原発性ＡＭＬ芽球を接種し、１４日目に１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ細胞で処置した。

【0437】

細胞株。１０％の熱不活化ＦＢＳ（ウシ胎仔血清）非必須アミノ酸（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｆｌｏｗｅｒｙ Ｂｒａｎｃｈ）、２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、及び１％のペニシリン／ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充した高グルコースを有するＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地）中に、２９３個のＧｌｖ９－パッケージング細胞を維持した。Ｕ９３７ヒト急性白血病株、ＯＣｉＡＭＬ３ヒト急性骨髄性白血病株、及びＨＬ６０ヒト急性骨髄性白血病株を、ＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼを発現するように改変して、発光によってインビトロ及びインビボで腫瘍を検出した。全ての腫瘍細胞株を、１０％の熱不活化ＦＢＳ非必須アミノ酸（Ａｔｌａｎｔａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｆｌｏｗｅｒｙ Ｂｒａｎｃｈ）、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホン酸、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、１％のペニシリン／ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、及び１１ｍＭのグルコース（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補充したＲＰＭＩ－１６４０培地中に維持した。腫瘍株は、ＧＦＰの高発現に基づいて、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって選別した。細胞株を、潜在的なマイコプラズマ汚染について定期的に試験した。

【0438】

ｓｃＦｖの選択。抗体生成及び特性評価研究を、市販されているか、又は社内で産生されたＣＤ３３組換えタンパク質の細胞外ドメインを有するＡｌｉｖａＭａｂ（登録商標）トランスジェニックマウス（Ａｂｌｅｘｉｓ）を利用して、Ｔｒｉ－Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＴｒｉＩ－ＴＤＩ）によって実施した。組換えヒトＣＤ３３タンパク質は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ及びＡｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから市販されていた。マウス及びカニクイザルＣＤ３３タンパク質は、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌから購入した。加えて、末端マウスＩｇＧ１ Ｆｃ又は６×Ｈｉｓタグを有するヒトＣＤ３３－ＩｇＣドメイン（残基１４０～２５９）を社内で産生した。免疫化及びスクリーニングは、ＬａｋｅＰｈａｒｍａ（Ｂｅｌｍｏｎｔ，ＣＡ）で行った。ＡｌｉｖａＭａｂ（登録商標）マウスの複数のコホートを組換えタンパク質で免疫化し、１つのコホートがＣＤ３３－ＩｇＣを受け取った。血清を１７日目、２４日目、２８日目、及び３１日目に収集し、免疫応答を、組換えヒト全長ＣＤ３３－６ｘＨｉｓ及びＣＤ３３ ＩｇＣ２－６ｘＨｉｓタンパク質を使用して、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって分析した。ハイブリドーマを電気融合によって生成し、上清を組換えタンパク質上でＥＬＩＳＡによって、及び完全長ＣＤ３３又はＣＤ３３－ＩｇＣ単独のいずれかを過剰発現する３Ｔ３細胞及び内因性ＣＤ３３発現を有するＡＭＬ細胞株上でフローサイトメトリーによってスクリーニングした。限界希釈によりサブクローニングを実施し、Ａｂｌｅｘｉｓにより推奨される標準ＩｇＧプライマーを使用して、上位１０のリード候補の配列決定を実施した。

【0439】

結合選択性及び親和性。リード及び参照抗体を、ヒトＩｇＧ１定常領域を用いて組換え的に産生した。選択性を、Ｈｉｓタグ組換えヒト完全長ＣＤ３３又はＣＤ３３－ＩｇＣ、マウス完全長ＣＤ３３、及びカニクイザル完全長ＣＤ３３タンパク質を使用して試験した。５μｇ／ｍＬの組換えタンパク質を、予めブロックされたＮｉ－ＮＴＡプレートによって捕捉した。候補抗体を１０μｇ／ｍＬで３連で添加し、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲート抗ヒトＦｃ抗体を使用して検出した。細胞表面結合ＣＤ３３への結合を評価するために、ＣＤ３３を過剰発現する３Ｔ３細胞、及びＵ９３７ ＡＭＬ細胞株を使用した。Ｕ９３７ ＣＤ３３ノックアウト（ＣＤ３３ＫＯ）又はＮＡＬＭ６細胞を陰性対照として含めた。ＮＡＬＭ６、Ｕ９３７ ＣＤ３３^＋、及びＣＤ３３ＫＯ細胞を、ヒトＩｇＧ Ｆｃで、氷上で２０分間ブロックした。次いで、組換え抗体を、１００μｇ／ｍＬの濃度で開始して連続的に希釈し、氷上で３０分間添加した。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲートヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）_２を、氷上で３０分間細胞に添加し、洗浄し、フローサイトメトリーによって分析し、二次のみの染色（ＭＦＩ比）に正規化した。ＥＣ_５０値は、非線形回帰によって決定した。結合親和性及びヒトＣＤ３３タンパク質へのエピトープビニングを、Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ９６ｅを使用して、生体層干渉法（ＢＬＩ）によって測定した。全ての実験は、動態緩衝液（ＰＢＳ ｐＨ７．４、０．０１％ＢＳＡ、０．００２％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０）を使用して行った。親和性測定のために、抗体を抗ｈｕＦｃバイオセンサーによって捕捉し、ｈｕＣＤ３３－Ｈｉｓの７点、２倍希釈シリーズを分析物として使用した。データを二重参照減算によって処理し、応答曲線を１：１のＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデルに全体的に適合させた。

【0440】

エピトープビニング。エピトープビニングのために、ヒトＣＤ３３－Ｈｉｓを抗ペンタ－Ｈｉｓバイオセンサーによって捕捉した。３Ｐ１４、４Ｂ２Ａ、及びＨ１９５を有する３×３マトリックスを試験した。各抗体についての全体的な捕捉レベルを決定するために、緩衝液のみの参照バイオセンサーを使用した。抗体を飽和レベルで事前結合した後、バイオセンサーを抗体溶液に浸して競合を評価した。

【0441】

レトロウイルス構築物の生成。構築物を、ヒトシグナル伝達ドメインを有するＳＦＧガンマレトロウイルスベクターにクローニングした。レトロウイルス産生細胞株を、製造業者の指示に従ってＣａＰＯ４（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用することによって生成して、ｇｐｇ２９線維芽細胞（Ｈ２９）を、ＣＡＲをコードするレトロウイルス構築物で一過性にトランスフェクトした。Ｈ２９細胞からの上清を使用して、２９３Ｇｌｖ９を形質導入し、安定したレトロウイルス産生細胞株を産生した。

【0442】

Ｔ細胞単離及びレトロウイルス形質導入。簡潔に述べると、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、健康なドナーの末梢血又はリューコパック（ｌｅｕｋｏｐａｃｋ）（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）から単離した。ＡＣＫ（アンモニウム－クロリド－カリウム）溶解緩衝液（Ｌｏｎｚａ）による赤血球溶解後、ヒトＴ細胞をＰＢＭＣ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から単離し、続いて、１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２及びＤｙｎａｂｅａｄｓ Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ａｃｔｉｖａｔｏｒ ＣＤ３／ＣＤ２８を用いて、１：５のビーズ：細胞比で活性化した（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。最初の増殖の４８時間後、Ｔ細胞を、２日連続して、レトロネクチンでコーティングしたプレート上の２９３Ｇｌｖ９パッケージング細胞から収集したウイルス上清でスピノキュレート（ｓｐｉｎｏｃｕｌａｔｅ）した（Ｔａｋａｒａ Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）。形質導入効率を、フローサイトメトリー分析によって決定した。全ての実験をＣＡＲ＋生存細胞について正規化した。

【0443】

フローサイトメトリー。フローサイトメトリー分析は、１０色のＧａｌｌｉｏｓ Ｂ４３６１８（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）及び１４色のＡｔｔｕｎｅ ＮｘＴ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）機器を使用して行った。ＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を使用してデータを分析した。フィコエリスリン（ＰＥ）コンジュゲートセツキシマブ抗体及びＭｙｃ－タグ（９Ｂ１１、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）で染色した後の形質導入細胞の形質導入効率を決定するためにフローサイトメトリーを使用した。ＤＡＰＩ（０．５ｍｇ／ｍＬ、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）又は７－アミノ－アクチノマイシンＤ（０．０５ｍｇ／ｍＬ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）及びＰＯ－ＰＲＯ－１ヨウ素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）染色を使用して、全ての実験で死細胞を除外した。以下の抗ヒト抗体をフローサイトメトリーに使用した：抗ＣＤ４（ＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ８（ＳＫ１）、抗６２Ｌ（ＤＲＥＧ－５６）、抗ＣＤ４５ＲＡ（ＨＩ１００）、抗ＣＤ２（ＴＳ１／８）、抗ＣＤ３７１（５０Ｃ１）、抗ＣＤ４５（２Ｄ１）、抗ＣＤ３３（ＷＭ５３）、及び抗ＣＤ１２３（６Ｈ６）。以下の抗マウス抗体を、フローサイトメトリーに使用した：抗ＣＤ４５（２Ｄ１）。全ての抗体は、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、又はｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入した。

【0444】

インビトロコロニー形成単位アッセイ。ＰＢＭＣを、健康な臍帯血単位（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ）から単離した。ＡＣＫ溶解緩衝液（Ｌｏｎｚａ）による赤血球細胞溶解後、ＣＤ３４^＋幹細胞を単離し、その後、無血清増殖培地（ＳＦＥＭ）ＩＩ及び１．０μＭのＵＭ１７１（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で増殖させた。増殖したＣＤ３４^＋前駆細胞及びＣＡＲ Ｔ細胞を、約４８時間、１：１の細胞比で共培養した。処理したヒトＣＤ３４^＋前駆体を、３，３３３個の細胞／条件の密度で、サイトカイン補充メチルセルロース培地（ＭｅｔｈｏＣｕｌｔ Ｈ４４３５、ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に６ウェルプレート上に播種した。各条件を３連で培養した。コロニーを培養物中で増殖させ、１０日目にスコア付けし、カウントを複製にわたって平均化した。

【0445】

細胞傷害性アッセイ。ＣＡＲ修飾ヒトＴ細胞の細胞溶解能を、ルシフェラーゼ殺傷アッセイによって評価した。ＣＡＲ Ｔ細胞を、１×１０^４個の標的細胞、Ｕ９３７－ｇｆｐＬｕｃ^＋又はＯＣｉＡＭＬ３－ｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞と、２００μＬの細胞培地の総体積において、白壁９６ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で４連の様々なエフェクター対標的比で共培養した。標的細胞を、同じ細胞密度で非シグナル伝達対照ＣＡＲ Ｔ細胞でプレーティングして、参照（最大シグナル）として最大ルシフェラーゼ発現を決定した。２４時間後、５０μＬのＰＢＳ中に溶解した１５μｇのＤ－ルシフェリン（Ｇｏｌｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を各ウェルに加えた。各試料（試料シグナル）の発光を、Ｓｐａｒｋプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ）で検出し、ＳｐａｒｋＣｏｎｔｒｏｌソフトウェア（Ｔｅｃａｎ）を使用して測定した。溶解パーセントを、［１００－（試料シグナル／平均最大シグナル）］×１００として決定した。長期殺傷アッセイについて、ＣＡＲ Ｔ細胞及び腫瘍細胞を、２００μＬの細胞培地の総体積において、白壁９６ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で２連で１：４０のエフェクター対腫瘍比で共培養し、１３８時間にわたってＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ３で撮像した。腫瘍細胞殺傷を、経時的な総緑色カウントとして測定した。

【0446】

増殖アッセイ。ＣＡＲ Ｔ細胞を、Ｕ９３７－ｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞又はＯＣｉＡＭＬ３－ｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞と１：５のＣＡＲ Ｔ：腫瘍細胞比で共培養した。７日後、フローサイトメトリーを使用して、蛍光標識されたセツキシマブで染色した後、腫瘍及びＴ細胞を検出した。ＣＡＲ Ｔ細胞を、同じ１：５のＣＡＲ Ｔ：腫瘍細胞比で新鮮な腫瘍細胞で再刺激した。上記の手順を、最初の刺激後２１日間、毎週繰り返した。

【0447】

インビトロサイトカイン分泌分析。インビトロＴ細胞サイトカイン産生を測定するために、ＣＡＲ Ｔ細胞を、９６ウェルの丸底プレート中の抗原陽性腫瘍細胞又は抗原陰性腫瘍細胞と１：１の比で２４時間共培養した。２４時間後、上清液を回収し、Ｌｕｍｉｎｅｘ ＩＳ１００機器上でサイトカインについて分析した。サイトカインを検出するために、Ｌｕｍｉｎｅｘ ＦｌｅｘＭａｐ３Ｄシステム、Ｌｕｍｉｎｅｘ ｘＰＯＮＥＮＴ４．２、及び１２－ｐｌｅｘ ヒトパネル（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用した。

【0448】

多機能性のための細胞内フローサイトメトリー。細胞内Ｔ細胞サイトカイン及びグランザイムＢの産生を測定するために、ＣＡＲ Ｔ細胞を、Ｕ９３７－ｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞と１：５で共培養した。約１６時間後、５００Ｘタンパク質輸送阻害剤カクテルを細胞培養物（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に添加し、６時間後に細胞を採取し、Ｆｉｘａｂｌｅ Ｙｅｌｌｏｗ Ｄｅａｄ染色（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で染色し、製造業者の提案したプロトコルに従って、ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ Ｆｉｘａｔｉｏｎ及びＰｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で固定及び透過処理した。細胞をカウントし、以下のヒト抗体で染色した：（フィコエリスリン）ＰＥ、抗ＣＤ４（ＲＰＡ－Ｔ４）、抗ＣＤ８（ＳＫ１）、抗ＩＬ２（ＭＱ１－１７Ｈ１２）、抗ＴＮＦ－アルファ（ＭＡｂ１１）、抗ＩＦＮ－ガンマ（４Ｓ．Ｂ３）、及び抗グランザイムＢ（ＱＡ１６Ａ０２）と社内でコンジュゲートしたセツキシマブ。

【0449】

マルチパラメトリックフローサイトメトリー分析。細胞をＰＢＳで洗浄し、３．０×１０^６／ｍＬの濃度でＰＢＳ中に再懸濁し、製造業者の仕様書に従って、ヒトＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ Ｆｃ受容体遮断溶液（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）及びＬｉｖｅ／ＤＥＡＤ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｂｌｕｅ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で、光から保護された状態で、室温で２０分間インキュベートした。細胞を次いで、フロー洗浄緩衝液（ＦＷＢ；ＲＰＭＩ １６４０、フェノールレッドなし＋４％ＦＢＳ＋０．０１％ナトリウム－アジド）中で１回洗浄した。細胞を、Ｓｕｐｅｒ Ｂｒｉｇｈｔ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の存在下で、１００μｌの染色体積において、暗所で室温で２０分間、抗体混合物とインキュベートし、ＦＷＢで２回洗浄し、０．５％のパラホルムアルデヒド／ＰＢＳ中に再懸濁し、Ｃｙｔｅｋ Ａｕｒｏｒａ ５Ｌフローサイトメーター（Ｃｙｔｅｋ）を使用して直ちに取得した。ＦｌｏｗＪｏ ｖ１０．８．０で分析を行った。

【0450】

インビボ実験。ＣＤ３３高発現腫瘍研究について、ＮＣＧマウスに５×１０^４個のＵ９３７－ｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞を０日目に尾静脈を介して接種した。３日目に、マウスを、尾静脈を介して５×１０^４～５×１０^５個のＣＡＲ Ｔ細胞で処置したＣＡＲ Ｔ細胞を用いた異なる処置コホートに盲検無作為化した。ＣＤ３３低発現腫瘍研究について、ＮＣＧマウスに５×１０^５個のＯ ＣｉＡＭＬ３－ｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞を０日目に尾静脈を介して接種した。３日目に、マウスを、尾静脈を介して５×１０^５個のＣＡＲ Ｔ細胞で処置したＣＡＲ Ｔ細胞を用いた異なる処置コホートに盲検無作為化した。Ｕ９３７－ｇｆｐＬｕｃ^＋及びＯＣｉＡＭＬ３－ｇｆｐＬｕｃ^＋腫瘍細胞の両方が、非常に均一な腫瘍負荷を生じさせ、処置前にマウスを除外しなかった。０日目の生物発光を、１×１０^７に割り当てた。Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅソフトウェア（Ｘｅｎｏｇｅｎ）を備えたＸｅｎｏｇｅｎ ＩＶＩＳ Ｉｍａｇｉｎｇシステム（Ｘｅｎｏｇｅｎ）を使用した生物発光イメージングを使用して、腫瘍負荷を毎週測定した。ＡＭＬ６０Ｂ患者由来異種移植片モデルについて、ＭＳＫの治験審査委員会が承認した研究プロトコルを介して、生体内で凍結保存された原発性ＡＭＬ検体を得た。ＮＣＧマウスに、０日目に１×１０^６個の細胞を接種した。１４日目に、マウスを異なる処置コホートに無作為化し、続いて尾静脈を介して１×１０^６個のＣＡＲ Ｔ細胞で処置した。２８日目に、骨髄吸引を行い、フローサイトメトリーによって腫瘍細胞を定量化した。

【0451】

統計解析。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用して統計解析を行った。データ点は、生物学的複製を表し、図の凡例に示されるように、平均値の平均値±標準偏差（ＳＥＭ）として示される。統計的有意性は、図の凡例に示されるように、対応のあるｔ検定、一元配置分散分析、又は二元配置分散分析によって決定した。マウス生存実験における全生存時間の統計学的有意性を決定するために、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）検定を使用した。有意性は、＊、Ｐ＜０．０５、＊＊、Ｐ＜０．０１、＊＊＊、Ｐ＜０．００１、及び＊＊＊＊、Ｐ＜０．０００１で示された。

【0452】

結果。
ＣＤ３３－ＩｇＣ免疫化は、部位特異的結合剤の発見に必要である。ＣＤ３３－ＩｇＣ特異的抗体を生成するために、遠位ＩｇＶドメインが免疫認識に必要なＩｇＣコンフォメーションを保持するために重要であるかどうかは不明であったため、マウスを完全長ＣＤ３３又はＣＤ３３－ＩｇＣ組換えタンパク質のいずれかで免疫化した。組換えヒトＣＤ３３を使用して、ハイブリドーマを生成し、５３ヒットをＥＬＩＳＡによって特定した。細胞上結合は、完全長ＣＤ３３又はＣＤ３３－ＩｇＣのいずれかを発現する３Ｔ３細胞、及び内因性ＣＤ３３発現を有するＵ９３７（ＡＭＬ細胞株）上でフローサイトメトリーによって評価した（図１７）。結合剤の特異性は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９又はＮＡＬＭ６（ＣＤ３３陰性細胞株）を使用して、ＣＤ３３をノックアウトしたＵ９３７などのＣＤ３３陰性株をスクリーニングすることによって試験した。興味深いことに、様々な細胞株への一貫した結合を示す全てのＣＤ３３－ＩｇＣドメイン特異的抗体は、ＣＤ３３－ＩｇＣ免疫化コホートのみに由来した。この群から、３つのハイブリドーマを選択し、配列決定した結果、２つの独自のクローン、３Ｐ１４及び４Ｂ２Ａが特定された。

【0453】

次に、３Ｐ１４、４Ｂ２Ａ、及び参照ＣＤ３３ ＩｇＶ特異的モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、リンツズマブ（Ｈ１９５）の結合特異性及び親和性を確認した。抗体を、ヒトＩｇＧ１サブクラスとして組換え的に発現させた。全てのｍＡｂは、完全長ヒトＣＤ３３に結合したが、カニクイザル又はマウスオルソログには結合せず、予想通り、３Ｐ１４及び４Ｂ２ＡのみがヒトＣＤ３３－ＩｇＣに結合した（図１８Ａ）。生体層干渉法（ＢＬＩ）を利用すると、全てのｍＡｂは、類似の解離定数（Ｋ_Ｄ）及びオンレートを有する組換え完全長ＣＤ３３に対して類似の結合親和性を有したが、３Ｐ１４及び４Ｂ２Ａと比較して、Ｈ１９５については対数より低いオフレートを有する（図１８Ａ）。ｍＡｂが、細胞結合抗原に対して可溶性について様々な親和性を有し得ることを考慮して、抗原を過剰発現する３Ｔ３細胞（３Ｔ３－ＣＤ３３）、及びＣＤ３３の内因性発現を有する関連するＡＭＬ腫瘍細胞株Ｕ９３７を利用して、細胞表面ＣＤ３３へのそれらの結合を測定した。親和性の階層は、最高から最低まで、Ｈ１９５＞３Ｐ１４＞４Ｂ２Ａであり、Ｕ９３７細胞について最も顕著な差異が認められた（図１８Ｂ及び１８Ｃ）。

【0454】

次に、固定化されたＣＤ３３でエピトープビニングを使用して、３Ｐ１４及び４Ｂ２Ａが同様のエピトープに結合したかどうか、並びにそれらの異なる親和性が別の抗体に対する１つの抗体の結合に影響を与えたかどうかを決定した。３Ｐ１４が飽和ｍＡｂである場合、４Ｂ２Ａは結合を示すことができず（０％）、４Ｂ２Ａが飽和ｍＡｂである場合、３Ｐ１４は結合することができ（６８％）、Ｈ１９５と３Ｐ１４又は４Ｂ２Ａのいずれかとの間に結合競合は観察されず（図１８Ｄ）、３Ｐ１４及び４Ｂ２Ａが重複するエピトープを有し得るが、両方が膜遠位Ｈ１９５とは異なることを示すことが観察された。

【0455】

次に、Ｈ１９５、３Ｐ１４、及び４Ｂ２Ａの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を、ＶＨ－ＶＬ（ＨＬ）及びＶＬ－ＶＨ（ＬＨ）配向の両方で生成し、これらを、ヒトＣＤ２８／ＣＤ３Ｚ（ｈ２８Ｚ）シグナル伝達モチーフに沿った切断型上皮成長因子受容体タグ（ＥＧＦＲｔ）及びＭｙｃ－タグを含有するバイシストロニックベクターにクローニングした（図２）。一貫性のために、形質導入は、全ての構築物にわたって類似していたＥＧＦＲ陽性によって評価した（図１９）。Ｍｙｃ－タグ染色は、ＨＬフォーマットがより確実に実証された細胞表面ＣＡＲ発現を確認した（図３）。

【0456】

これらのデータは、ＣＤ３３－ＩｇＣ免疫化は、このドメインへの結合剤を上昇させるために重要であり、３Ｐ１４は、ＣＤ３３－ＩｇＣへのより高い親和性で結合し、エピトープビニング中に後者を置き換える前者の能力を考慮すると、４Ｂ２Ａと同様のエピトープを認識する可能性が高いことを示す。これらのデータはまた、ＨＬ ｓｃＦｖ配向が、本発明者らの候補結合剤のＣＡＲ表面発現をより一貫して示すため、前臨床試験に好ましいフォーマットであることを示唆している。

【0457】

ＣＤ３３－ＩｇＣを標的とするＣＡＲ Ｔ細胞は、インビトロで強化された機能性を示す。低い表面抗原密度及び過剰な腫瘍負荷は、耐性及び処置失敗の主要なメカニズムであり、腫瘍制御の障害及びＣＡＲ Ｔ細胞のエフェクター拡張の減少をもたらす（Ｍａｊｚｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．１０，７０２－７２３（２０２０）、Ｓｐｉｅｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２７，１４１９－１４３１（２０２１）、Ｌｏｃｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖ ４，４８９８－４９１１（２０２０））。ｒｓ１２４５９４１９Ｃ＞Ｔ ＳＮＰのＣＴ又はＴＴ遺伝子型は、ＡＭＬを有する患者の約５０％に存在し、その結果、悪性細胞上で低ＣＤ３３表面発現をもたらす。フローサイトメトリーを用いて、ＣＤ３３発現レベルを、ｓ１２４５９４１９ Ｃ＞Ｔ ＳＮＰ遺伝子型が報告されている３つの細胞株：ＨＬ６０（ＣＣ）、Ｕ９３７（ＣＴ）、及びＯＣｉＡＭＬ３（ＴＴ）で決定した（Ｇｏｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ ３５，２４９６－２５０７（２０２１））。ＨＬ６０及びＵ９３７細胞株は等価なＣＤ３３発現を発現したが、Ｕ９３７を、高発現ＣＤ３３モデル（Ｕ９３７－ＣＤ３３^ｈｉｇｈ）及びＯＣｉＡＭＬ３を特徴付けるために選択し、報告された遺伝子型を与えられた低発現ＣＤ３３モデル（ＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３^ｌｏｗ）を特徴付けた（図２０Ａ）。標的株をＧＦＰ－ホタルルシフェラーゼ融合遺伝子（ｇｆｐＬｕｃ）で形質導入して、インビトロでの追跡のためにＵ９３７－ＣＤ３３^ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋及びＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３^ｌｏｗｇｆｐＬｕｃ^＋を生成した（データは示さず）。

【0458】

次に、高及び低ＣＤ３３抗原密度で腫瘍細胞を殺傷するＣＤ３３－ＩｇＣ特異的ＣＡＲ Ｔ細胞の能力を決定した。様々なエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比（１：４～１：１２８）での２４時間の殺傷アッセイにおいて、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚ及び４Ｂ２ＡＨＬｈ２８Ｚは、Ｈ１９５ＨＬｈ２８Ｚと比較して、低いＥ：Ｔ比でＵ９３７－ＣＤ３３^ｈｉｇｈの用量依存的殺傷の増加を示したが、同じ低い比でＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３^ｌｏｗ細胞に対する増強された細胞傷害性を示したのは、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚのみであった（図２０Ｂ及び２０Ｃ）。１：４０のＥ：Ｔ比を用いた６日間の長期殺傷アッセイにおいて、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚ及び４Ｂ２ＡＨＬｈ２８Ｚは、Ｈ１９５ＨＬｈ２８Ｚと比較してＵ９３７－ＣＤ３３^ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋の優れた腫瘍制御を示した（図２０Ｄ）が、ＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３^ｌｏｗｇｆｐＬｕｃ^＋の設定において、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚは、４Ｂ２ＡＨＬｈ２８Ｚ及びＨ１９５ＨＬｈ２８Ｚの両方と比較して優れた殺傷を示した（図２０Ｅ）。

【0459】

３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚ及び４Ｂ２ＡＨＬｈ２８ＺのＣＤ３３－ＩｇＣ特異性を検証するために、Ｕ９３７－ＣＤ３３^ＫＯｇｆｐＬｕｃ^＋細胞を、修飾ＦＬＡＧタグ化ＣＤ３３－ＩｇＣをコードするレトロウイルスベクターで形質導入し、表面発現をフローサイトメトリーによって確認した（図２１Ａ）。Ｈ１９５ＨＬｈ２８Ｚと比較して、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚ及び４Ｂ２ＡＨＬｈ２８Ｚの両方が、用量依存性様式で標的細胞を溶解した（図２１Ｂ）。重要なことに、陰性対照Ｕ９３７－ＣＤ３３^ＫＯｇｆｐＬｕｃ^＋を溶解したＣＡＲ Ｔ細胞はなかった（図２１Ｃ）。ＨＳＣ上での低レベルのＣＤ３３の発現が報告されていることを考慮して、コロニー形成単位（ＣＦＵ）アッセイを使用して、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚ及び４Ｂ２ＡＨＬｈ２８Ｚがこれらの細胞を検出して除去することができるかどうかを決定した。陽性対照として機能した３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚ及び高用量ゲムツズマブオゾガマイシン（ＧＯ）のみでコロニーの完全なアブレーションを観察し、４Ｂ２ＡＨＬｈ２８Ｚ又はＨ１９５ＨＬｈ２８Ｚのいずれかでコロニーの不完全なアブレーションを観察した（図２１Ｄ）。

【0460】

臨床有効性に対するＣＡＲ Ｔ細胞拡大の関連性を考慮して、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚ及び４Ｂ２ＡＨＬｈ２８Ｚの増殖能を、高い及び低いＣＤ３３抗原密度標的による再帰的刺激の状況で試験した。３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚは、Ｕ９３７－ＣＤ３３^ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋（図２０Ｆ）及びＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３^ｌｏｗｇｆｐＬｕｃ^＋細胞（図２０Ｇ）と共培養した場合、他のＣＡＲ Ｔ細胞と比較して、拡大及び持続性が増加したが、後者では、低抗原密度で予想されるように、拡大及び持続性の大きさが低下した。

【0461】

要約すると、これらのデータは、再帰的刺激又は低抗原密度遭遇によって評価されるように、高腫瘍負荷の設定において、高親和性ＣＤ３３－ＩｇＣ特異的３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚが、低親和性ＣＤ３３－ＩｇＣ特異的４Ｂ２ＡＨＬｈ２８Ｚ及び高親和性ＣＤ３３－ＩｇＶ特異的Ｈ１９５ＨＬｈ２８Ｚよりも機能的に優れていることを示す。更に、低親和性の膜近位４Ｂ２ＨＬｈ２８Ｚは、高親和性の膜遠位Ｈ１９５ＨＬｈ２８Ｚと比較して優れたＣＡＲ Ｔ活性を示し、ＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ細胞の状況における抗原標的近接性の重要性を強調した。

【0462】

高い親和性を有するＣＤ３３－ＩｇＣを標的とするＣＡＲ Ｔ細胞は、多機能性である。３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚの機能強化のメカニズムを特定するために、２４時間のインビトロサイトカイン産生を、Ｕ９３７－ＣＤ３３^ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋又はＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３^ｌｏｗｇｆｐＬｕｃ^＋でＣＡＲ Ｔ細胞を共培養することによって評価した。３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚは、４Ｂ２ＡＨＬｈ２８Ｚ及びＨ１９５ＨＬｈ２８Ｚの両方と比較して、標的特異的な方法で、Ｔｃ１／Ｔｈ１サイトカインの上昇したレベルを分泌した（図２２Ａ）。３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚによる、より高い累積サイトカイン産生を考慮して、増強された臨床応答に関連付けられている多機能性の役割が決定された（Ｒｏｓｓｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １３２，８０４－８１４（２０１８）を参照されたい）。ＣＡＲ Ｔ細胞及びＵ９３７－ＣＤ３３^ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋共培養の２４時間後、１：５のＥ：Ｔ比で、細胞内フローサイトメトリーは、Ｈ１９５ＨＬｈ２８Ｚと比較して、３Ｐ１４ＨＬｈ２８ＺでのＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、及びグランザイムＢのレベルの増加を示した（図２２Ｂ）。更に、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚは、Ｈ１９５ＨＬｈ２８Ｚと比較して、非分泌ＣＤ４^＋細胞が少なく、少なくとも２つの因子を分泌するＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋細胞が多かった。逆に、４Ｂ２ＡＨＬｈ２８Ｚは、３Ｐ１４ＨＬｈ２８ＺとＨ１９５ＨＬｈ２８Ｚとの間の分泌パターンを示した（図２２Ｃ～２２Ｅ）。

【0463】

Ｕ９３７－ＣＤ３３^ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋遭遇（図２２Ｆ）の７日後のピークＣＡＲ Ｔ細胞増殖の事前観察を考慮して、これらのＣＡＲ Ｔ細胞を、この時点で、マルチパラメトリックフローサイトメトリーを利用して更に特徴付けた。ＣＤ６９及びＨＬＡ－ＤＲ（ＤＲ）陽性に基づいて、活性化と一致する免疫表現型を示す３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚ細胞数の増加が観察された（図２２Ｆ及び２２Ｇ）。

【0464】

まとめると、これらのデータは、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚ細胞が、抗原遭遇時に多機能性可溶性因子分泌プロファイルを示し、抗原遭遇後に高レベルの活性化を示すことを示唆する。

【0465】

ＣＤ３３－ＩｇＣを標的とするＣＡＲ Ｔ細胞は、ＡＭＬの異種移植片モデルにおいて有効である。ＣＤ３３指向性ＣＡＲ Ｔ細胞は、低細胞数及び低抗原密度ＡＭＬの設定において有効性を示す必要がある。３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚ及び４Ｂ２ＡＨＬｈ２８Ｚが、これらの設定において疾患を制御することができるかどうかを決定するために、ＮＣＧマウスにＵ９３７－ＣＤ３３^ｈｉｇｈｇｆｐＬｕｃ^＋を接種し、３日後に様々な低用量のＣＡＲ Ｔ細胞（５×１０^５、２．５×１０^５、１×１０^５、及び５×１０^４）で処置し、生物発光（ＢＬＩ）及び生存時間を追跡した（図２３Ａ）。ＣＤ３３－ＩｇＣ指向性ＣＡＲ Ｔ細胞は、Ｈ１９５ＨＬｈ２８Ｚと比較して、用量依存性の様式で、優れた腫瘍制御及び改善された生存時間を示し、一方、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚは、迅速な腫瘍制御及び延長された無腫瘍状態を示し、全ての用量レベルでの改善された生存をもたらした（図２３Ｂ～２３Ｇ）。ＯＣｉＡＭＬ３－ＣＤ３３^ｌｏｗｇｆｐＬｕｃ^＋を生着したＮＣＧマウスを利用して、低抗原密度腫瘍の設定における腫瘍成長を制御するこれらのＣＡＲ Ｔ細胞の能力を評価した（図２３Ｈ）。この設定では、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚは、４Ｂ２ＡＨＬｈ２８Ｚと比較して再び優れた腫瘍制御及び改善された生存時間を示し、次にＨ１９５ＨＬｈ２８Ｚよりも改善された生存時間を示した（図２３Ｉ～２３Ｋ）。

【0466】

まとめると、これらのデータは、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚ細胞が、高抗原密度及び低抗原密度の異種移植片モデルの両方において強化された機能を有し、長期生存を可能にすることを示唆する。

【0467】

ＣＤ３３－ＩｇＣを標的とするＣＡＲ Ｔ細胞は、高腫瘍負荷のＡＭＬ患者由来異種移植片において有効である。翻訳関連性を実証するために、Ｒ／Ｒ ＣＤ３３^＋ＡＭＬを有する患者からの末梢芽球を利用して、高腫瘍負荷のインビボモデルを確立した（ＡＭＬ６０Ｂ、図２４Ａ）。ＡＭＬ６０Ｂは、条件付け照射なしで生着することができ、経時的な腫瘍負荷の増加及びＣＡＲ Ｔ細胞処置の遅延を可能にする。ＮＣＧマウスに接種してから１４日後、それらを無作為化し、同種異系Ｈ１９５ｈ２８Ｚ、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚ又は４Ｂ２ＡＨＬｈ２８Ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞で処置した（図２４Ｂ）。Ｈ１９５ＨＬｈ２８Ｚと比較して、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚ及び４Ｂ２ＡＨＬｈ２８Ｚは、２８日目の骨髄吸引で評価したように優れた腫瘍制御を付与し（図２４Ｃ）、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚ処置マウスのみが、大部分のマウスにおいて長期生存を達成した（図２４Ｄ）。

【0468】

まとめると、これらのデータは、３Ｐ１４ＨＬｈ２８Ｚが優れた腫瘍制御を提供し、Ｒ／Ｒ原発性ＡＭＬから確立された高い腫瘍負荷の設定においてインビボでの長期生存をもたらすことを示す。

【0469】

考察。
ＡＭＬ治療用一式への新規薬剤の導入にもかかわらず、この骨髄性悪性腫瘍は、非常に悪い予後を有し続け、養子Ｔ細胞療法などの強力な介入に対する重要な必要性がある。ＣＡＲ Ｔ細胞は、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療に革命をもたらしたが、骨髄性疾患における有効性はまだ示されていない。

【0470】

最近、Ｒ／Ｒ ＡＭＬを有する成人患者の治療のために、自己ＣＤ３３指向性４－１ＢＢ／ＣＤ３Ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞を利用する第Ｉ相試験（ＮＣＴ０３１２６８６４）が説明された（Ｔａｍｂａｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ ３５，３２８２－３２８６（２０２１））。ＣＡＲ Ｔ細胞産物は、部分的にはリンパ球減少及びアフェレーシスステップで得られた開始Ｔ細胞の数が不十分であることに起因して、１０人の登録された患者のうちの３人のみに正常に製造及び投与された。これら３人の治療された患者のいずれも、最初の用量レベルで観察可能な抗白血病応答を有しなかった。この研究は、ＡＭＬ指向性ＣＡＲ Ｔ細胞は、Ｒ／Ｒ ＡＭＬを有する多くの患者がリンパ球減少症及び循環末梢芽球の高い疾患負荷を有するため、低いエフェクター対腫瘍比で堅牢な増殖及び殺傷が可能でなければならないことを示した。別の研究は、最近、ＣＤ２８／ＣＤ３Ｚ又は４－１ＢＢ／ＣＤ３Ｚ共刺激ドメインのいずれかを組み込んだ、リンツズマブ及びゲムツズマブに由来するＣＤ３３ ＩｇＶ指向性ＣＡＲ Ｔ細胞の広範な前臨床スクリーニングを説明した（Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒ ９（２０２１））。この研究は、ＡＭＬの治療のためのクラス最高のＣＡＲとして、リンツズマブ－ＣＤ２８／ＣＤ３Ｚプラットフォームを報告した。本明細書に開示される主題は、ＣＤ３３の膜近位ＩｇＣドメインを標的とすることによって、ＣＤ３３指向性ＣＡＲ Ｔ細胞の有効性を改善することができ、より堅牢なＴ細胞機能及び改善された腫瘍制御を可能にすると仮定した。ＣＤ３３ ＣＡＲ Ｔ細胞の効力は、高い親和性でＣＤ３３－ＩｇＣを標的とするｓｃＦｖを利用することによって顕著に増加させることができることが実証された。驚くべきことに、膜近位エピトープへのヒト結合剤の上昇は、完全長ＣＤ３３免疫化が常にＩｇＶ特異的抗体の生成をもたらし、ＩｇＶが免疫優性エピトープであることを示唆するため、ＩｇＣ免疫化に依存していた。これらのデータは、ドメイン特異的免疫化を介して高親和性で膜近位エピトープを標的とするｓｃＦｖを選択することが、標的に対するＣＡＲ Ｔ細胞の有効性を高めることができることを示唆している。

【0471】

本明細書に開示される主題の実施形態
前述の説明から、様々な使用法及び条件にそれを採用するために、本明細書に開示される主題に変形及び修正が行われ得ることが明らかであろう。かかる実施形態は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。

【0472】

本明細書における変数の任意の定義における要素のリストの列挙は、列挙された要素の任意の単一の要素又は組み合わせ（又はサブコンビネーション）としてのその変数の定義を含む。本明細書における実施形態の列挙は、任意の単一の実施形態として、又は任意の他の実施形態若しくはその一部と組み合わせて、その実施形態を含む。

【0473】

本明細書に記載されている全ての特許及び刊行物は、各々の独立した特許及び刊行物が参照により組み込まれることが具体的及び個別に示された場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3-1】

【図3-2】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図6E】

【図6F】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図10A】

【図10B】

【図11A】

【図11B】

【図12A】

【図12B】

【図13】

【図14】

【図15A】

【図15B】

【図16A】

【図16B】

【図17】

【図18A】

【図18B】

【図18C】

【図18D】

【図19】

【図20A】

【図20B】

【図20C】

【図20D】

【図20E】

【図20F】

【図20G】

【図21A】

【図21B】

【図21C】

【図21D】

【図22A】

【図22B】

【図22C】

【図22D】

【図22E】

【図22F】

【図22G】

【図23A】

【図23B】

【図23C】

【図23D】

【図23E】

【図23F】

【図23G】

【図23H】

【図23I】

【図23J】

【図23K】

【図24A】

【図24B】

【図24C】

【図24D】

【配列表】

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【国際調査報告】