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▶ シーメンス・ヘルスケア・ダイアグノスティックス・インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-10-02
(54)【発明の名称】バイオマーカー組成物およびその使用方法
(51)【国際特許分類】
G01N 33/68 20060101AFI20240925BHJP
C12Q 1/48 20060101ALI20240925BHJP
C07K 14/47 20060101ALN20240925BHJP
C12N 9/12 20060101ALN20240925BHJP
【ＦＩ】
G01N33/68 ZNA
C12Q1/48 Z
C07K14/47
C12N9/12
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024514626
(86)(22)【出願日】2022-09-07
(85)【翻訳文提出日】2024-04-18
(86)【国際出願番号】 US2022076076
(87)【国際公開番号】W WO2023039449
(87)【国際公開日】2023-03-16
(31)【優先権主張番号】63/241,518
(32)【優先日】2021-09-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＰＹＴＨＯＮ
２．ＪＡＶＡ
３．ＭＡＴＬＡＢ
４．ＭＡＴＨＥＭＡＴＩＣＡ
(71)【出願人】
【識別番号】508147326
【氏名又は名称】シーメンス・ヘルスケア・ダイアグノスティックス・インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100127926
【弁理士】
【氏名又は名称】結田 純次
(74)【代理人】
【識別番号】100216105
【弁理士】
【氏名又は名称】守安 智
(72)【発明者】
【氏名】アレイジャス・ジェームズ・ウズギリス
(72)【発明者】
【氏名】クリス・グリーン
(72)【発明者】
【氏名】マーク・バウマイスター
【テーマコード（参考）】
2G045
4B063
4H045
【Ｆターム（参考）】
2G045AA25
2G045CA25
2G045CA26
2G045CB01
2G045CB26
2G045JA01
4B063QA01
4B063QA19
4B063QQ03
4B063QQ27
4B063QS10
4B063QS39
4B063QX04
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA30
4H045DA89
4H045EA50
(57)【要約】
本開示は、アミロイドトランスチレチン心筋症の危険性があるか、またはこれを罹患している個体を特定し、治療するための方法およびキットを提供する。一般に、１種またはそれ以上のバイオマーカー、例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せの検出または測定は、アミロイドトランスチレチン心筋症の特定を支援する。本開示は、例えばトランスチレチン安定化剤を用いたアミロイドトランスチレチン心筋症の治療のために患者を選択するための方法も提供する。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
方法であって、方法は、サンプル中の２種以上のトランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）バイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含み、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、（ｉ）トロポニンＩ（ＴｎＩ）、
（ｉｉ）ピルビン酸キナーゼ筋肉アイソフォーム１（ＰＫＭ１）、
（ｉｉｉ）ピルビン酸キナーゼ筋肉アイソフォーム２（ＰＫＭ２）、
（ｉｖ）Ｎ末端－ホルモン前駆体Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）、
（ｖ）レチノール結合タンパク質４（ＲＢＰ４）、
（ｖｉ）組織メタロプロテアーゼ阻害物質２（ＴＩＭＰ２）、
（ｖｉｉ）ニューロフィラメント軽鎖（ＮｆＬ）、または
（ｖｉｉｉ）これらの組合せ
を含む、方法。
【請求項2】
方法であって、方法は、サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含み、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、（ｉ）ＴｎＩおよびＰＫＭ１、（ｉｉ）ＴｎＩおよびＰＫＭ２または（ｉｉｉ）ＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＰＫＭ２を含む、方法。
【請求項3】
方法であって、方法は、（ａ）対象から得られたサンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを検出して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る工程；および
（ｂ）ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程
を含み、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、
（ｉ）トロポニンＩ（ＴｎＩ）、
（ｉｉ）ピルビン酸キナーゼ筋肉アイソフォーム１（ＰＫＭ１）、
（ｉｉｉ）ピルビン酸キナーゼ筋肉アイソフォーム２（ＰＫＭ２）、
（ｉｖ）Ｎ末端－ホルモン前駆体Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）、
（ｖ）レチノール結合タンパク質４（ＲＢＰ４）、
（ｖｉ）組織メタロプロテアーゼ阻害物質２（ＴＩＭＰ２）、
（ｖｉｉ）ニューロフィラメント軽鎖（ＮｆＬ）、または
（ｖｉｉｉ）これらの組合せ
を含み、
ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程は、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルにアルゴリズムを適用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含み、アルゴリズムは、決定木法、ニューラルブースト法、ブートストラップ森法、ブーストツリー法またはサポートベクターマシン法に由来する、
方法。
【請求項4】
対象はヒト対象である、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
サンプルは血液、血清、血漿または心臓組織を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項6】
ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、サンプルを得た対象は、トランスチレチンアミロイド心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）の危険性があるか、またはこれを罹患しているかどうかを決定する、請求項３～５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項7】
ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、請求項３～６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項8】
ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、サンプルを得た対象は１つまたはそれ以上の心筋症試験に選択されるかどうかを決定する工程をさらに含む、請求項３～７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項9】
ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、サンプルを得た対象は１回またはそれ以上の用量のＴＴＲ安定化剤を受けるために選択されるかどうかを決定する工程をさらに含む、請求項３～８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項10】
２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ１を含まない、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項11】
２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ２を含まない、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項12】
２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ１もＰＫＭ２も含まない、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項13】
２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＳＭＯＣ－２を含まない、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項14】
２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＤＣＮを含まない、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項15】
２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＳＭＯＣ－２もＤＣＮも含まない、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項16】
非一時的コンピューター可読媒体であって、実行時に請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法を含むオペレーションをプロセッサーに実行させる実行可能命令を含む、非一時的コンピューター可読媒体。
【請求項17】
組成物であって、（ａ）（ｉ）ＴｎＩ、
（ｉｉ）ＰＫＭ１、
（ｉｉｉ）ＰＫＭ２、
（ｉｖ）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、
（ｖ）ＲＢＰ４、
（ｖｉ）ＴＩＭＰ２、
（ｖｉｉ）ＮｆＬ、または
（ｖｉｉｉ）これらの組合せ
を含む、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー、および
（ｂ）（ｉ）抗ＴｎＩ薬、
（ｉｉ）抗ＰＫＭ１薬、
（ｉｉｉ）抗ＰＫＭ２薬、
（ｉｖ）抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、
（ｖ）抗ＲＢＰ４薬、
（ｖｉ）抗ＴＩＭＰ２薬、
（ｖｉｉ）抗ＮｆＬ薬、または
（ｖｉｉｉ）これらの組合せ
を含む、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬
を含む、組成物。
【請求項18】
ＴＴＲ－ＣＭを検出するためのキットであって、（ａ）（ｉ）抗ＴｎＩ薬、
（ｉｉ）抗ＰＫＭ１薬、
（ｉｉｉ）抗ＰＫＭ２薬、
（ｉｖ）抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、
（ｖ）抗ＲＢＰ４薬、
（ｖｉ）抗ＴＩＭＰ２薬、
（ｖｉｉ）抗ＮｆＬ薬、または
（ｖｉｉｉ）これらの組合せ
を含む、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬、および
（ｂ）使用のための説明書
を含む、キット。
【請求項19】
ＴＴＲ－ＣＭを検出するためのキットであって、（ａ）（ｉ）抗ＴｎＩ薬および抗ＰＫＭ１薬、（ｉｉ）抗ＴｎＩ薬および抗ＰＫＭ２薬または（ｉｉｉ）抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬および抗ＰＫＭ２薬を含む１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬；ならびに
（ｂ）使用のための説明書
を含む、キット。
【請求項20】
キットであって、（ａ）抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＴｎＩ薬および抗ＲＢＰ４薬を含む１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬；および
（ｂ）使用のための説明書
を含む、キット。
【請求項21】
１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は１種またはそれ以上の抗体薬を含む、請求項１８～２０のいずれか１項に記載のキット。
【請求項22】
抗体薬の１種またはそれ以上は検出可能な部分で標識されている、請求項２１に記載のキット。
【請求項23】
１種またはそれ以上の対照サンプルをさらに含む、請求項１８～２２のいずれか１項に記載のキット。
【請求項24】
対照サンプルは１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー標準を含む、請求項２３に記載のキット。
【請求項25】
対象においてＴＴＲ－ＣＭを診断するためのインビトロ診断アッセイにおける、請求項１８～２４のいずれか１項に記載のキットの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９の下で、２０２１年９月７日に出願された米国特許仮出願第６３／２４１，５１８号の優先権または恩恵を主張し、その全内容は、参照によって本明細書に組み入れられる。
本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９の下で、２０２１年９月７日に出願された米国特許仮出願第６３／２４１，５１８号の優先権または恩恵を主張し、その全内容は、参照によって本明細書に組み入れられる。
【0002】
配列表の相互参照
本出願は、１２ＫＢのサイズである、２０２２年９月７日に作成された「ＡｔｔｒＳＥＱＬＳＴ．ｘｍｌ」と題するコンピューター可読形式の配列表を含む。該コンピューター可読形式は、参照によって本明細書に組み入れられる。
本出願は、１２ＫＢのサイズである、２０２２年９月７日に作成された「ＡｔｔｒＳＥＱＬＳＴ．ｘｍｌ」と題するコンピューター可読形式の配列表を含む。該コンピューター可読形式は、参照によって本明細書に組み入れられる。
【0003】
本開示は、一般に、分子生物学および心臓の健康の分野に関する。
【背景技術】
【0004】
アミロイドトランスチレチン心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）は、トランスチレチンタンパク質（ＴＴＲ）のミスフォールディングにより生じる珍しい状態であり、心臓組織中にアミロイド細線維の沈着をもたらし、最終的に心不全に至る。したがって、ＴＴＲ－ＣＭの早期治療は、罹患個体における予後の影響の改善に重要である。しかし、野生型トランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲｗｔ）のスクリーニングは、ＴＴＲ－ＣＭ（野生型ＡＴＴＲアミロイドーシスによって生じるＴＴＲ－ＣＭを含める）に特に特異的ではない、費用がかかりかつ侵襲的な複数の手順を行うことをともなうので、治療が遅れて問題となる可能性がある。さらに、野生型ＡＴＴＲアミロイドーシス（ＡＴＴＲｗｔ）によって生じるアミロイドトランスチレチン心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）を検出および／または特定するための非侵襲的なインビトロスクリーニング試験はない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0005】
現在の方法によってＡＴＴＲｗｔによって生じるＴＴＲ－ＣＭを特定することが難しいことが、この疾患が概して過小診断されている一因となっている可能性がある。したがって、ＴＴＲ－ＣＭ、特に、野生型ＡＴＴＲアミロイドーシスによって生じるＴＴＲ－ＣＭを許容されるレベルの特異性で検出するための組成物、キットおよび方法が当技術分野において必要である。さらに、ミスフォールドしたＴＴＲタンパク質を有する個体または個体の集団を試験する、特定するまたは病期分類するための組成物、アッセイ、装置および方法が、絶えず必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【0006】
本開示は、ＴＴＲ－ＣＭ、特に、野生型ＡＴＴＲアミロイドーシスによって生じるＴＴＲ－ＣＭを検出および／または特定するための組成物、キットおよび方法を提供する。さらに、本開示は、正常な個体または心臓の他の状態を経験している個体と比較して、ＴＴＲ－ＣＭ患者（野生型ＡＴＴＲアミロイドーシスによって生じるＴＴＲ－ＣＭを含める）を分類する方法を提供する。さらに、本開示は、ある特定のバイオマーカー（例えば、ＡＴＴＲバイオマーカー、例えば、トロポニンＩ（ＴｎＩ）、ピルビン酸キナーゼ筋肉アイソフォーム１（ＰＫＭ１）、ピルビン酸キナーゼ筋肉アイソフォーム２（ＰＫＭ２）、Ｎ末端－ホルモン前駆体Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）、レチノール結合タンパク質４（ＲＢＰ４）、デコリン（ＤＣＮ）、組織メタロプロテアーゼ阻害物質２（ＴＩＭＰ２）、ＳＰＡＲＣ関連モジュラーカルシウム結合２（ＳＭＯＣ－２）、ニューロフィラメント軽鎖（ＮｆＬ）およびこれらの組合せ）が、ＴＴＲ－ＣＭを検出および／もしくは診断するのを支援する、ならびに／またはＴＴＲ－ＣＭ患者の分類を支援することができることを初めて認識している。本開示は、組成物、キットおよび方法におけるこれらのバイオマーカー（例えば、ＡＴＴＲバイオマーカー、例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）は、侵襲的なまたは費用がかかる試験を行う必要なく、ＴＴＲ－ＣＭ（野生型ＡＴＴＲアミロイドーシスによって生じるＴＴＲ－ＣＭを含める）を分類、検出および／または診断するのに有用であり得ることをさらに認識している。これは、患者にとってより快適であり、患者にあまり害を与えず、ならびに／または検出および／もしくは診断方法の後に患者が回復するのに必要とする時間量を減少させる方法によってＡＴＴＲｗｔによって生じるＴＴＲ－ＣＭを検出および特定することができるので、患者のケアにおけるかなりの進歩を意味する。
【0007】
さらに、本開示は、ある特定のバイオマーカー（例えば、ＡＴＴＲバイオマーカー、例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）は、改善された感度でＴＴＲ－ＣＭを検出するのに有用であることを提供する。本明細書に記載のＡＴＴＲバイオマーカーを用いて達成される感度の増大は、ＴＴＲ－ＣＭを検出および／または特定する場合に得られる偽陰性の数を減少させる。偽陰性の減少は、ひいては、より多くのＴＴＲ－ＣＭ患者が、ＴＴＲ－ＣＭに関連する徴候、症状および状態を低減させるのに重要なより早期の治療を受けること、ならびにＴＴＲ－ＣＭ患者の長期生存を促進することを確実にすることを助長する。
【0008】
数ある中でも、本開示は、サンプル中の２種以上のトランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）バイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含む方法を提供する。一部の実施形態では、サンプルは対象から得られる。
【0009】
本開示は、（ａ）対象から得られたサンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを検出して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る工程、および（ｂ）ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含む、方法も提供する。
【0010】
本明細書に提供される方法の一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、（ｉ）トロポニンＩ（ＴｎＩ）、（ｉｉ）ピルビン酸キナーゼ筋肉アイソフォーム１（ＰＫＭ１）、（ｉｉｉ）ピルビン酸キナーゼ筋肉アイソフォーム２（ＰＫＭ２）、（ｉｖ）Ｎ末端－ホルモン前駆体Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）、（ｖ）レチノール結合タンパク質４（ＲＢＰ４）、（ｖｉ）組織メタロプロテアーゼ阻害物質２（ＴＩＭＰ２）、（ｖｉｉ）ニューロフィラメント軽鎖（ＮｆＬ）、または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含む。
【0011】
一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩおよびＰＫＭ１を含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩおよびＰＫＭ２を含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＰＫＭ２を含む。
【0012】
一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＲＢＰ４を含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ２およびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ２およびＲＢＰ４を含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＲＢＰ４を含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＲＢＰ４を含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２およびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２およびＲＢＰ４を含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＲＢＰ４、ＳＭＯＣ－２およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＤＣＮ、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＤＣＮ、ＲＢＰ４およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＳＭＯＣ－２およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＴＩＭＰ２およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＤＣＮおよびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＲＢＰ４およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＲＢＰ４、ＴＩＭＰ２およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＤＣＮ、ＳＭＯＣ－２およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴＩＭＰ２およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＳＭＯＣ－２、ＴＩＭＰ２およびＴｎＩを含む。
【0013】
一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ１を含まない。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ２を含まない。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ１もＰＫＭ２も含まない。
【0014】
一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＳＭＯＣ－２を含まない。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＤＣＮを含まない。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＳＭＯＣ－２もＤＣＮも含まない。
【0015】
一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程は、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルにアルゴリズムを適用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含む。一部の実施形態では、アルゴリズムは、決定木法、ニューラルブースト法、ブートストラップ森法、ブーストツリー法、Ｋ近傍法、一般化回帰変数増加法、一般化回帰枝刈り変数増加法（ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｕｎｅｄ ｆｏｒｗａｒｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ）、フィットステップワイズ法（ｆｉｔ ｓｔｅｐｗｉｓｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ）、一般化回帰ラッソ法、一般化回帰エラスティックネット法、一般化回帰リッジ法、名義ロジスティック法、サポートベクターマシン法、判別法、ナイーブベイズ法もしくはこれらの組合せであるか、またはこれらに由来する。一部の実施形態では、アルゴリズムは、決定木法、ニューラルブースト法、ブートストラップ森法、ブーストツリー法、一般化回帰ラッソ法、一般化回帰エラスティックネット法、一般化回帰リッジ法、名義ロジスティック法、サポートベクターマシン法、判別法もしくはこれらの組合せであるか、またはこれらに由来する。一部の実施形態では、アルゴリズムは、決定木法、ニューラルブースト法、ブートストラップ森法、ブーストツリー法、サポートベクターマシン法もしくはこれらの組合せであるか、またはこれらに由来する。
【0016】
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、サンプルを得た対象が、トランスチレチンアミロイド心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）の危険性があるか、またはこれを罹患しているかどうかを決定する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、サンプルを得た対象が１つまたはそれ以上の心筋症試験に選択されるかどうかを決定する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、サンプルを得た対象が１回またはそれ以上の用量のＴＴＲ安定化剤を受けるために選択されるかどうかを決定する工程を含む。
【0017】
一部の実施形態では、対象はヒト対象である。
【0018】
一部の実施形態では、サンプルは、血液、血清、血漿または心臓組織を含む。
【0019】
本開示は、非一時的コンピューター可読媒体も提供する。一部の実施形態では、非一時的コンピューター可読媒体は、実行時に本明細書に記載の方法を含むオペレーションをプロセッサーに行わせる実行可能命令を含む。
【0020】
さらに、本開示は組成物を提供する。一部の実施形態では、組成物は１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーを含む。一部の実施形態では、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＴＩＭＰ２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含む。
【0021】
一部の実施形態では、組成物は、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬を含む。一部の実施形態では、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬、抗ＰＫＭ２薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＲＢＰ４薬、抗ＴＩＭＰ２薬、抗ＮｆＬ薬またはこれらの組合せを含む。
【0022】
本開示は、さらにキットを提供する。一部の実施形態では、キットは、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーを含む。一部の実施形態では、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＴＩＭＰ２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含む。
【0023】
一部の実施形態では、キットは、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬を含む。一部の実施形態では、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬、抗ＰＫＭ２薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＲＢＰ４薬、抗ＴＩＭＰ２薬、抗ＮｆＬ薬またはこれらの組合せを含む。
【0024】
一部の実施形態では、キットは使用のための説明書を含む。
【0025】
一部の実施形態では、キットは、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬を含み、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカーは、１種またはそれ以上の抗体薬を含む。一部の実施形態では、抗体薬の１種またはそれ以上が検出可能な部分で標識されている。
【0026】
一部の実施形態では、キットは、１つまたはそれ以上の対照サンプルを含む。一部の実施形態では、対照サンプルは、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー標準を含む。
【0027】
本開示は、本明細書に記載のキットの使用を提供する。一部の実施形態では、キットは、対象においてＴＴＲ－ＣＭを診断するためのインビトロ診断アッセイで使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【0028】
【図1】本明細書に記載の例示的方法で使用される患者コホートを示す図である。
【図2】本明細書に記載の例示的方法から得られたデータの概要を示す図である。
【図7】各ＮＹＨＡクラスに対する代表的なバイオマーカーの効果を示す棒グラフを含む図である。
【図8-1】使用された回帰フィットの評価を含む、本明細書に記載の例示的バイオマーカーを用いたスクリーニングの結果を示す表を含む図である。
【図9】バイオマーカーの選択されたサブセットを様々な予測モデルで使用した場合に得られたデータの概要を述べる表を含む図である。
【図10】ＰＫＭ、ＴＩＭＰ２、ＬＩＭＳ－１、Ｃ３およびＡ１１を測定するアッセイに対する検出カットオフ値の最適化を示す図である。図１０Ａは、検出カットオフ値の最適化のためのＲＯＣプロットデータを描写する。図１０Ｂは、列挙されるバイオマーカーに対する感度、特異性、精度および検出カットオフ値の例示的値を描写する。
【図11】コンピューターシステム１１００の例示的ブロック線図を描写する図である。
【図12】方法１２００の例示的フローチャートを描写する図である。
【図13】方法１３００の例示的フローチャートを描写する図である。
【図14-1】選択されたマーカーのＳ／Ｎ比を示す表を含む図である。
【発明を実施するための形態】
【0029】
定義
抗体薬：本明細書で使用する場合、用語「抗体薬」は、特定の抗原に特異的に結合する薬剤を指す。一部の実施形態では、本用語は、特異的結合を与えるのに十分である免疫グロブリン構造要素を含む任意のポリペプチドまたはポリペプチド複合体を包含する。そのようなポリペプチドは、天然に生成（例えば、抗原に反応する生物によって生成）することができ、または組換え操作、化学合成または他の人工のシステムもしくは方法体系によって生成することができる。例示的抗体薬としては、限定されないが、ヒト抗体、霊長類化抗体、キメラ抗体、２重特異性抗体、ヒト化抗体、コンジュゲート抗体（例えば、他のタンパク質、放射標識、細胞毒とコンジュゲートまたは融合した抗体）、小型モジュラー医薬品（Ｓｍａｌｌ Ｍｏｄｕｌａｒ ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（「ＳＭＩＰｓ（商標）」）、単鎖抗体、キャメロイド抗体（ｃａｍｅｌｏｉｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）および抗体フラグメントが挙げられる。本明細書で使用する場合、用語「抗体薬」は、インタクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一ドメイン抗体（例えば、サメ単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲまたはそのフラグメント））、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、２重特異性抗体）、および所望の生物活性を示しさえすれば抗体フラグメントも含む。抗体薬は、マウス、ウサギ、霊長類またはヒトの抗体に特徴的である抗体定常領域配列を有することができる。一部の実施形態では、本用語はステープルペプチドを包含する。一部の実施形態では、本用語は、１種またはそれ以上の抗体様結合ペプチド模倣薬を包含する。一部の実施形態では、本用語は、１種またはそれ以上の抗体様結合スキャフォールドタンパク質を包含する。一部の実施形態では、本用語は、モノボディまたはアドネクチンを包含する。多くの実施形態では、抗体薬は、アミノ酸配列が、相補性決定領域（ＣＤＲ）として当業者によって認識される１つまたはそれ以上の構造要素を含むポリペプチドであるか、または該ポリペプチドを含み；一部の実施形態では、抗体薬は、アミノ酸配列が、参照抗体に見られるものと実質的に同一の少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、少なくとも１つの重鎖ＣＤＲおよび／または少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ）を含むポリペプチドであるか、または該ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、抗体薬は、アミノ酸配列が、免疫グロブリン可変ドメインとして当業者によって認識される構造要素を含むポリペプチドであるか、または該ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、抗体薬は、免疫グロブリン結合ドメインと相同であるか、または大部分は相同である結合ドメインを有するポリペプチドタンパク質である。一部の実施形態では、抗体薬は、共有結合的修飾（例えば、グリカン、ペイロード（例えば、検出可能な部分、治療的部分、触媒部分など）、または他のペンダント基（例えば、ポリエチレングリコールなどの付着）を含むことができる。
抗体薬：本明細書で使用する場合、用語「抗体薬」は、特定の抗原に特異的に結合する薬剤を指す。一部の実施形態では、本用語は、特異的結合を与えるのに十分である免疫グロブリン構造要素を含む任意のポリペプチドまたはポリペプチド複合体を包含する。そのようなポリペプチドは、天然に生成（例えば、抗原に反応する生物によって生成）することができ、または組換え操作、化学合成または他の人工のシステムもしくは方法体系によって生成することができる。例示的抗体薬としては、限定されないが、ヒト抗体、霊長類化抗体、キメラ抗体、２重特異性抗体、ヒト化抗体、コンジュゲート抗体（例えば、他のタンパク質、放射標識、細胞毒とコンジュゲートまたは融合した抗体）、小型モジュラー医薬品（Ｓｍａｌｌ Ｍｏｄｕｌａｒ ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（「ＳＭＩＰｓ（商標）」）、単鎖抗体、キャメロイド抗体（ｃａｍｅｌｏｉｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）および抗体フラグメントが挙げられる。本明細書で使用する場合、用語「抗体薬」は、インタクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一ドメイン抗体（例えば、サメ単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲまたはそのフラグメント））、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、２重特異性抗体）、および所望の生物活性を示しさえすれば抗体フラグメントも含む。抗体薬は、マウス、ウサギ、霊長類またはヒトの抗体に特徴的である抗体定常領域配列を有することができる。一部の実施形態では、本用語はステープルペプチドを包含する。一部の実施形態では、本用語は、１種またはそれ以上の抗体様結合ペプチド模倣薬を包含する。一部の実施形態では、本用語は、１種またはそれ以上の抗体様結合スキャフォールドタンパク質を包含する。一部の実施形態では、本用語は、モノボディまたはアドネクチンを包含する。多くの実施形態では、抗体薬は、アミノ酸配列が、相補性決定領域（ＣＤＲ）として当業者によって認識される１つまたはそれ以上の構造要素を含むポリペプチドであるか、または該ポリペプチドを含み；一部の実施形態では、抗体薬は、アミノ酸配列が、参照抗体に見られるものと実質的に同一の少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、少なくとも１つの重鎖ＣＤＲおよび／または少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ）を含むポリペプチドであるか、または該ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、抗体薬は、アミノ酸配列が、免疫グロブリン可変ドメインとして当業者によって認識される構造要素を含むポリペプチドであるか、または該ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、抗体薬は、免疫グロブリン結合ドメインと相同であるか、または大部分は相同である結合ドメインを有するポリペプチドタンパク質である。一部の実施形態では、抗体薬は、共有結合的修飾（例えば、グリカン、ペイロード（例えば、検出可能な部分、治療的部分、触媒部分など）、または他のペンダント基（例えば、ポリエチレングリコールなどの付着）を含むことができる。
【0030】
バイオマーカー：用語「バイオマーカー」または「生物学的マーカー」は、当技術分野におけるその使用と矛盾せず、その存在、レベルまたは形態が、目的の特定の生物学的事象または状況と相関し、その結果、その事象または状況の「マーカー」とみなされる実体を指すように本明細書で使用される。少しではあるが例を挙げると、一部の実施形態では、バイオマーカーは、特定の病態に対する、もしくは特定の疾患、障害もしくは状態が発生する、生じるもしくは再度生じる可能性がある見込みに対するマーカーであってもよく、または該マーカーを含むことができる。一部の実施形態では、バイオマーカーは、特定の疾患もしくは治療転帰またはそれらの見込みに対するマーカーであってもよく、または該マーカーを含むことができる。したがって、一部の実施形態では、バイオマーカーは、目的の関連する生物学的事象または状況の予測であり、一部の実施形態では、バイオマーカーは該生物学的事象または状況の予後徴候であり、一部の実施形態では、バイオマーカーは該生物学的事象または状況の診断である。一部の実施形態では、バイオマーカーは、目的の関連する生物学的事象または状況の可能なバイオマーカーである。バイオマーカーは、いかなる化学物質クラスの実体であってもよい。例えば、一部の実施形態では、バイオマーカーは、核酸、ポリペプチド、小分子またはこれらの組合せであってもよく、またはこれらを含むことができる。一部の実施形態では、バイオマーカーは細胞表面マーカーである。一部の実施形態では、バイオマーカーは細胞内にある。一部の実施形態では、バイオマーカーは特定の組織（例えば、心臓組織）に見出される。一部の実施形態では、バイオマーカーは細胞の外側に見出される（例えば、分泌されるか、またはそうでなければ、細胞の外側で、例えば、体液、例えば、血液、尿、涙、唾液、脳脊髄液などで生成されるか、もしくはこれらに存在する）。
【0031】
本明細書に記載のように、一部の実施形態では、バイオマーカーはＡＴＴＲバイオマーカーである。本明細書で使用する場合、「ＡＴＴＲバイオマーカー」は、ＡＴＴＲアミロイドーシスまたはＴＴＲ－ＣＭに対する生物学的マーカーを指す。一部の実施形態では、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含む。誤解を避けるために、ＡＴＴＲバイオマーカーは、列挙される特定のバイオマーカーに関連する遺伝子産物を含む。例えば、文脈に応じて、「ＴｎＩ」は、ＴｎＩまたはその特徴的なフラグメントをコードするヌクレオチド、ならびにＴｎＩタンパク質またはその特徴的なフラグメントを指す。
【0032】
特徴的なフラグメント：用語「特徴的なフラグメント」は、フラグメントが由来したバイオマーカーを特定するのに十分である、バイオマーカー（例えば、ＡＴＴＲバイオマーカー）のフラグメントを指す。例えば、一部の実施形態では、バイオマーカーの「特徴的なフラグメント」は、フラグメントが由来したバイオマーカーを他の可能なバイオマーカー、タンパク質またはポリペプチドと区別することを一緒に可能にするアミノ酸配列またはアミノ酸配列の集合体を含むものである。一部の実施形態では、特徴的なフラグメントは、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０または少なくとも５０アミノ酸を含む。
【0033】
遺伝子産物または発現産物：本明細書で使用する場合、用語「遺伝子産物」は、一般に、遺伝子から転写されるＲＮＡ（プロセッシング前および／もしくは後）または遺伝子から転写されるＲＮＡにコードされるポリペプチド（修飾前および／または後）を指す。
【0034】
ハイブリダイゼーション：用語「ハイブリダイゼーション」は、相補的核酸分子にアニールするための、一本鎖核酸分子（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）の物理的特性を指す。ハイブリダイゼーションは、典型的には、相互作用核酸分子が独立して研究される場合、またはより複雑なシステムの状況で（例えば、共有結合的にもしくは別の方法で担体実体と結合している間、および／または生物システムまたは細胞中で）研究される場合を含めて、様々な状況で評価することができる。一部の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、ハイブリダイゼーション技法、例えば、インサイチュハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）、マイクロアレイ、ノーザンブロットおよびサザンブロットからなる群から選択される技法によって検出することができる。一部の実施形態では、ハイブリダイゼーションは、一本鎖核酸分子と相補的核酸分子との間の１００％のアニーリングを指す。一部の実施形態では、アニーリングは１００％未満（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％の一本鎖核酸分子が相補的核酸分子にアニールする）である。ハイブリダイゼーション技法およびハイブリダイゼーションを評価する方法は、当技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ、Ｎ．Ｙ．を参照されたい。当業者は、少なくとも所望のレベルの相補性を有する配列は安定してハイブリダイズするが、相補性がより低いものは安定してハイブリダイズしないようにハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーを推定および調整する方法を理解している。ハイブリダイゼーション条件およびパラメーターの例については、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ、Ｎ．Ｙ．；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら、１９９４、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｓｅｃａｕｃｕｓ、Ｎ．Ｊ．を参照されたい。
【0035】
検出薬：本明細書で使用する場合、用語「検出薬」は、検出可能な任意の元素、分子、官能基、化合物、フラグメントまたは部分を指す。一部の実施形態では、検出薬は、単独で提供されるかまたは利用される。一部の実施形態では、検出薬は、別の薬剤とともに（例えば、結合して）提供される、および／または利用される。検出薬の例としては、限定されないが、以下が挙げられる：様々なリガンド、放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１８Ｆ、１９Ｆ、３２Ｐ、３５Ｓ、１３５Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、６４Ｃｕ、１８７Ｒｅ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕ、８９Ｚｒなど）、蛍光色素、化学発光剤（例えば、アクリジニウムエステル、安定化ジオキセタンなど）、生物発光剤、スペクトル分解可能な無機蛍光半導体ナノ結晶（すなわち、量子ドット）、金属ナノ粒子（例えば、金、銀、銅、白金など）、ナノクラスター、常磁性金属イオン、酵素、比色標識（例えば、色素、コロイド金など）、ビオチン、ジゴキシゲニン、ハプテン、および抗血清またはモノクローナル抗体が利用可能なタンパク質。
【0036】
診断試験：本明細書で使用する場合、「診断試験」は、患者が疾患、障害もしくは状態を有するかどうかを決定するのに、および／または疾患、障害もしくは状態を、表現型カテゴリー、もしくは疾患、障害または状態の予後、もしくは疾患、障害もしくは状態の治療（一般的な治療もしくは任意の特定の治療のいずれか）への可能性のある応答に関して有意性を有する任意のカテゴリーに分類するのに有用な情報を獲得するために行われるか、または行われた一工程または一連の工程である。同様に、「診断」は、任意のタイプの診断情報、限定されないが、対象が疾患、障害もしくは状態を有するもしくは発生する可能性があるかどうか、対象に顕在化した疾患、障害もしくは状態の状況、病期分類、もしくは特性、腫瘍の性質もしくは分類に関する情報、予後に関する情報、および／または適切な治療もしくはさらなる診断試験の選択に有用な情報を提供することを指す。治療の選択は、特定の治療薬または他の治療法、手術、放射線照射などの選択、療法を控えるかまたは提供するかどうかについての選択、投与レジメン（例えば、１回またはそれ以上の用量の特定の治療薬または治療薬の組合せの頻度またはレベル）に関する選択などを含むことができる。さらなる診断試験の選択は、所与の疾患、障害または状態のためのより特異的な試験を含むことができる。
【0037】
サンプル：本明細書で使用する場合、用語「サンプル」は、本明細書に記載のように、ヒト対象から得られるかまたはヒト対象に由来する生体サンプルを指す。一部の実施形態では、生体サンプルは、生物学的組織または液体を含む。一部の実施形態では、生体サンプルは、血液；血液細胞；組織もしくは細針生検サンプル；細胞含有体液；浮遊性核酸；脳脊髄液；リンパ液；組織生検検体；手術検体；他の体液、分泌物および／もしくは排泄物；ならびに／またはこれら由来の細胞を含むことができる。一部の実施形態では、生体サンプルは、個体から、例えば、ヒトまたは動物対象から得られる細胞を含む。一部の実施形態では、得られる細胞は、サンプルが得られる個体由来の細胞であるか、または該細胞を含む。一部の実施形態では、サンプルは、任意の適切な手段によって目的の供給源から直接得られる「一次サンプル」である。例えば、一部の実施形態では、一次生体サンプルは、生検（例えば、細針吸引または組織生検）、手術、体液（例えば、血液）の採取からなる群から選択される方法によって得られる。一部の実施形態では、サンプルは対象から得られる心臓組織である。一部の実施形態では、文脈から明らかであるように、用語「サンプル」は、一次サンプルを処理することによって（例えば、一次サンプルの１つもしくはそれ以上の成分を除去することによって、および／または一次サンプルに１種もしくはそれ以上の薬剤を加えることによって）得られる調製物を指す。例えば、半透膜を使用して濾過することである。サンプル処理の別の例として、サンプルはＥＤＴＡ、ヘパリンおよびクエン酸からなる群から選択される抗凝固剤で処理される、血漿サンプルであってもよい。サンプル処理の別の例として、（例えば、１種またはそれ以上の抗体でタンパク質を捕獲することによって）１種またはそれ以上のタンパク質を単離するようにサンプルを処理することができる。「処理されたサンプル」は、例えば、サンプルから抽出された、またはｍＲＮＡの増幅もしくは逆転写、ある特定の成分の単離および／または精製などの技法に一次サンプルを供することによって得られた、核酸またはポリペプチドを含むことができる。
【0038】
対象：本明細書で使用する場合、用語「対象」は、生物、例えば、哺乳動物（例えばヒト）を指す。一部の実施形態では、ヒト対象は成人、青年または小児対象である。一部の実施形態では、対象は少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５または少なくとも８０歳である。一部の実施形態では、対象は、疾患、障害または状態、例えば、本明細書で提供されるように治療することができる疾患、障害または状態を罹患している。一部の実施形態では、対象は疾患、障害または状態に感受性であり；一部の実施形態では、感受性対象は、疾患、障害もしくは状態に罹りやすい、および／または疾患、障害もしくは状態を発生する危険性の増大を示す（参照対象または集団で観察される平均危険率と比較して）。一部の実施形態では、対象は、疾患、障害または状態の１つまたはそれ以上の症状を呈する。一部の実施形態では、対象は、疾患、障害または状態の特定の症状（例えば、疾患の臨床症状）も特性も呈さない。一部の実施形態では、対象は、疾患、障害または状態のいかなる症状も特性も呈さない。一部の実施形態では、対象は患者である。一部の実施形態では、対象は、診断および／または療法が施される、および／または施されている個体である。
【0039】
閾値：本明細書で使用する場合、用語「閾値」は、情報を獲得する、および／または測定の結果、例えば、アッセイで獲得された測定の結果を分類するために参照として使用される値を指す。閾値は、１つまたはそれ以上の対照サンプルに基づいて決定することができる。閾値は、目的の測定が行われるより前に、目的の測定が行われるのと同時に、または目的の測定が行われた後に決定することができる。一部の実施形態では、閾値は、値の範囲であり得る。一部の実施形態では、閾値は、関連分野で報告された値（または値の範囲）（例えば、標準的な表に見られる値）であり得る。
【0040】
ある特定の実施形態の詳細な説明
アミロイドトランスチレチン心筋症
トランスチレチン（ＴＴＲ）は、甲状腺ホルモンチロキシン（Ｔ４）およびレチノール結合タンパク質を輸送する、血清および脳脊髄液中にある輸送タンパク質である。肝臓はＴＴＲを血液中に分泌し、脈絡叢はＴＴＲを脳脊髄液中に分泌する。ＴＴＲはホモ四量体複合体として産生される。しかし、ＴＴＲはコンフォメーション変換を受けて、病的状態につながる異常なアミロイド形態に凝集する可能性がある。
アミロイドトランスチレチン心筋症
トランスチレチン（ＴＴＲ）は、甲状腺ホルモンチロキシン（Ｔ４）およびレチノール結合タンパク質を輸送する、血清および脳脊髄液中にある輸送タンパク質である。肝臓はＴＴＲを血液中に分泌し、脈絡叢はＴＴＲを脳脊髄液中に分泌する。ＴＴＲはホモ四量体複合体として産生される。しかし、ＴＴＲはコンフォメーション変換を受けて、病的状態につながる異常なアミロイド形態に凝集する可能性がある。
【0041】
ＡＴＴＲアミロイドーシスの状態は、様々な器官および組織における、トランスチレチン（ＴＴＲ）タンパク質に由来するアミロイド細線維の沈着を特徴とする。例えば、ＴＴＲタンパク質のミスフォールディングは、心臓組織でアミロイド細線維の沈着を引き起こし、心筋症（「アミロイドトランスチレチン心筋症」、または「ＴＴＲ－ＣＭ」と本明細書で言及される）につながる可能性がある。ＴＴＲ－ＣＭの臨床症状は、心室壁厚の増加および心不全を含む。
【0042】
以下の３タイプのＡＴＴＲアミロイドーシスがある：（１）家族性アミロイド多発ニューロパチー（ＦＡＰ）、（２）家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、および（３）野生型ＡＴＴＲアミロイドーシス（ＡＴＴＲｗｔ）とも呼ばれる老年性全身性アミロイドーシス。家族性アミロイド多発ニューロパチー（ＦＡＰ）は、心臓ならびに時には腎臓および眼に加えて、神経系に影響を及ぼす。ＦＡＰの症状は、末梢性神経障害、自律神経ニューロパチーおよび心不全を含み得る。家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）は心臓に影響を及ぼし、さらに、手根管症候群をともなって顕在化する。ＦＡＰおよびＦＡＣは、異常な（「バリアント」）ＴＴＲの産生につながる、ＴＴＲ遺伝子中の変異によって引き起こされる、遺伝性の状態である。ＴＴＲ遺伝子中に１００個を超える異なる変異が観察されており、それらの多くは、変アミロイド細線維にミスフォールドし、組織内にアミロイド沈着物の凝集を引き起こす可能性があるバリアント型ＴＴＲの産生を引き起こす。たいていの罹患個体はヘテロ接合体であり；したがって、変異体型ＴＴＲと野生型ＴＴＲの両方が凝集体中に含まれ得る。本明細書で使用する場合、ＴＴＲの変異体型またはバリアント型によって生じる遺伝性心筋症は、家族性アミロイド心筋症（省略形ＡＴＴＲｍ）と称される。野生型ＡＴＴＲアミロイドーシス（ＡＴＴＲｗｔ）は、緩徐進行性の非遺伝性（散発性）疾患である。ＡＴＴＲｗｔを有する個体は、ＴＴＲ遺伝子中に変異がなく、アミロイド細線維は野生型ＴＴＲからなる。ＡＴＴＲｗｔの症状は、心不全を含み、一部の個体では手根管症候群を含む。ＡＴＴＲｗｔは、６５歳以上の高齢対象でより頻繁に生じる。
【0043】
正確な有病率は不明であるが、ＡＴＴＲｍについては、米国において０．４症例／１００万人／年とおおまかに推定されており、ＡＴＴＲｗｔについては、少なくとも２倍高い発生率である。しかし、８０歳を超える患者の検死試験によって、ＡＴＴＲｗｔについて約２５％の有病率が示され、これによって、本疾患は、大部分は過小診断されており、特に、高齢者集団における実際の有病率ははるかに高いことが示唆される。費用がかかりかつ侵襲的な試験および手順で多数の個体を試験するという難題は、ＴＴＲ－ＣＭのかなりの過小診断に対する可能性のある寄与因子である。
【0044】
アミロイドトランスチレチン心筋症の現在の診断法
ＴＴＲ－ＣＭは、現在、心エコー図から開始する一連の異なる試験を使用して診断される（Ｇｅｒｔｚ，Ｍ．Ａ．ら、ＪＡＣＣ ６６：２４５２～２４６６、２０１５）。この技法は、一般的な心臓機能を確認するため、および構造的異常を探すために使用され（Ａｓｈｌｅｙ，Ｅ．Ａ．およびＮｉｅｂａｕｅｒ，Ｊ．、Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ Ｅｘｐｌａｉｎｅｄ、Ｌｏｎｄｏｎ：Ｒｅｍｅｄｉｃａ、４章、２００４）、心室の肥厚および肥大によって証明される心臓アミロイドーシスのスクリーニングとして使用される。本試験は肥大型心筋症と高血圧性心筋症を区別することができないが、ある研究（Ａｓｈｌｅｙ ２００４）において、心臓アミロイドーシスを心肥大と見分ける際に比較的良好な特異性（例えば、８２％）が示されている。しかし、心臓アミロイドーシスの１つより多い形態（例えば、軽鎖アミロイドーシス（ＡＬ））が存在するので、この試験は、ＴＴＲ－ＣＭに対して特異的ではない。
ＴＴＲ－ＣＭは、現在、心エコー図から開始する一連の異なる試験を使用して診断される（Ｇｅｒｔｚ，Ｍ．Ａ．ら、ＪＡＣＣ ６６：２４５２～２４６６、２０１５）。この技法は、一般的な心臓機能を確認するため、および構造的異常を探すために使用され（Ａｓｈｌｅｙ，Ｅ．Ａ．およびＮｉｅｂａｕｅｒ，Ｊ．、Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ Ｅｘｐｌａｉｎｅｄ、Ｌｏｎｄｏｎ：Ｒｅｍｅｄｉｃａ、４章、２００４）、心室の肥厚および肥大によって証明される心臓アミロイドーシスのスクリーニングとして使用される。本試験は肥大型心筋症と高血圧性心筋症を区別することができないが、ある研究（Ａｓｈｌｅｙ ２００４）において、心臓アミロイドーシスを心肥大と見分ける際に比較的良好な特異性（例えば、８２％）が示されている。しかし、心臓アミロイドーシスの１つより多い形態（例えば、軽鎖アミロイドーシス（ＡＬ））が存在するので、この試験は、ＴＴＲ－ＣＭに対して特異的ではない。
【0045】
心エコー図で試験が陽性の患者は、次に、心臓磁気共鳴画像（ＣＭＲ）によって試験される（Ｇｅｒｔｚ，Ｍ．Ａ．ら、ＪＡＣＣ ６６：２４５２～２４６６、２０１５；Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ，Ｒ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ、９：１８５～１９０、２０１３；Ｄｏｌｔｒａ，Ａ．ら、Ｃｕｒｒ Ｃａｒｄｉｏｌ Ｒｅｖ．９（３）：１８５～９０、２０１３）。この技法は、心細胞損傷（例えば、心筋梗塞）の領域または瘢痕もしくはアミロイド沈着物が理由で細胞外間隙が増大した領域に集中することができる造影剤ガドリニウムを使用する（Ｋｒｉｓｈｎａｍｕｒｔｈｙ，Ｒ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ、９：１８５～１９０、２０１３）。本技法は、心エコー図よりも良好に高血圧性心筋症と肥大型心筋症を区別することができ、ある研究において、ＡＬよりもＡＴＴＲアミロイドーシスの検出に対してより大きな特異性を示した（Ａｓｈｌｅｙ ２００４）。しかし、この試験も、それだけではＴＴＲ－ＣＭ診断のための確定試験ではない。
【0046】
心臓アミロイドーシスの検出のための別の画像方法は、９９ｍＴｃ－ピロリン酸などの放射性同位体コンジュゲートを使用するシンチグラフィーである（Ｂｏｋｈａｒｉら、Ｃｉｒｃ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｉｍａｇｉｎｇ．６（２）：１９５～２０１、２０１３）。これは、３Ｄ画像を得るために単一光子放射型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を使用して行われ、放射性トレーサーは心臓組織に特異的ではないが、病的な心臓組織で生じるような血流が乏しい領域を検出するのに有用である。この技法は、ある研究において、高い特異性および感度（それぞれ、１００％および９７％）でＡＴＴＲアミロイドーシスをＡＬアミロイドーシスと見分けることが示されている。
【0047】
現在、典型的には、上述の試験を使用して陽性スコアが得られた後に行われる、ＴＴＲ－ＣＭの診断のための最も確定的な試験は、心臓生検、それに続く免疫化学的染色である。心臓組織中のカッパまたは軽鎖アミロイド沈着物に対するポリクローナル抗体はＡＬの検出のために使用され、一方で、トランスチレチン沈着物に対するポリクローナル抗体はＴＴＲ－ＣＭの検出のために使用される（Ｃｒｏｔｔｙ，Ｔ．Ｂ．ら、Ｃａｒｄｉｏｖａｃｕｌａｒ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ４：３９～４２、１９９５）。
【0048】
最後に、トランスチレチン（ＴＴＲ）に対する抗体が以前に開示され、ＡＴＴＲｗｔなどのアミロイド疾患の診断におけるそのような抗体の適用が記載されている（ＷＯ２０１４／１２４３３４Ａ２およびＷＯ２０１６／１２０８１１）。ＡＴＴＲｗｔによって生じる心筋症などの心筋症の診断のためにそのような抗ＴＴＲ抗体を使用することに対する不利点は、ＴＴＲは、一部の患者において、ミスフォールドまたは凝集された状況では認識されない可能性があり、偽陰性の試験結果および過小診断をもたらすことである。例えば、ＷＯ２０１４／１２４３３４Ａ２およびＷＯ２０１６／１２０８１１の両方は、ＴＴＲの特定のアミノ酸残基内のエピトープの曝露に依拠するが；そのようなエピトープは、ＴＴＲの非天然型によっては、すべてのＡＴＴＲアミロイドーシス患者で容易にアクセスできるとは限らない可能性がある。野生型ＴＴＲ、変異体ＴＴＲまたは混合ＴＴＲ四量体は、ＡＴＴＲアミロイドーシス疾患において、解離する、ミスフォールドする、凝集する、および／または細線維を形成し得る。そのような異なる形態は、抗ＴＴＲ抗体で容易に検出できない可能性がある。さらに、ＴＴＲをコードする遺伝子は、ＡＴＴＲアミロイドーシスに関連する多くの異なる変異を有することが報告されている。したがって、抗ＴＴＲ抗体は、多くの患者で疾患を認識することができない可能性がある。
【0049】
ＡＴＴＲバイオマーカー
本明細書に記載の実施形態は、本明細書に論じる従来の技法を超えるいくつかの利点を提供する。例えば、本開示の技術は非侵襲的であり、最低限の患者の不快感しか要せず、迅速に実施され、比較的費用対効果が大きい。したがって、本明細書に記載の技術は、限定されないが、以下を提供することを含めて、これらの従来の技法を超える利点を提供する：ＡＴＴＲｗｔによって生じるＴＴＲ－ＣＭについての非侵襲性のインビトロ診断（ＩＶＤ）試験、ＩＶＤ試験での使用に適する１種またはそれ以上の特異的インビトロバイオマーカー、疾患の診断におけるより費用がかかりかつ侵襲的な手順の候補を効果的に確定する（ｒｕｌｅ ｉｎ）または除外する（ｒｕｌｅ ｏｕｔ）する１種を超えるマーカーを含む、単一マーカーＩＶＤ試験の代替法。
本明細書に記載の実施形態は、本明細書に論じる従来の技法を超えるいくつかの利点を提供する。例えば、本開示の技術は非侵襲的であり、最低限の患者の不快感しか要せず、迅速に実施され、比較的費用対効果が大きい。したがって、本明細書に記載の技術は、限定されないが、以下を提供することを含めて、これらの従来の技法を超える利点を提供する：ＡＴＴＲｗｔによって生じるＴＴＲ－ＣＭについての非侵襲性のインビトロ診断（ＩＶＤ）試験、ＩＶＤ試験での使用に適する１種またはそれ以上の特異的インビトロバイオマーカー、疾患の診断におけるより費用がかかりかつ侵襲的な手順の候補を効果的に確定する（ｒｕｌｅ ｉｎ）または除外する（ｒｕｌｅ ｏｕｔ）する１種を超えるマーカーを含む、単一マーカーＩＶＤ試験の代替法。
【0050】
本開示は、特に、ＡＴＴＲアミロイドーシスおよびＴＴＲ－ＣＭに対するバイオマーカーに関する。そのようなバイオマーカーは、「ＡＴＴＲバイオマーカー」と本明細書で言及される。ＡＴＴＲバイオマーカーは、例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬ、これらの特徴的なフラグメント、および／またはこれらのバリアントを含むことができる。
【0051】
本明細書で提供されるように、ＡＴＴＲバイオマーカーは、列挙される特定のバイオマーカーに関連する遺伝子産物を含む。例えば、ＡＴＴＲバイオマーカーは、例えば、タンパク質またはヌクレオチド（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）を含むことができる。ＡＴＴＲバイオマーカーは、ＡＴＴＲバイオマーカーの全長タンパク質、およびフラグメント（例えば、特徴的なフラグメント）も包含する。例えば、一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーは、表１に列挙されるタンパク質を含むことができる。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーは、表１に提供されるアミノ酸配列のうちの少なくとも１０アミノ酸、少なくとも２０アミノ酸、少なくとも３０アミノ酸、少なくとも４０アミノ酸、少なくとも５０アミノ酸、少なくとも６０アミノ酸、少なくとも７０アミノ酸、少なくとも８０アミノ酸、少なくとも９０アミノ酸または少なくとも１００アミノ酸の連続的スパンと同一のアミノ酸配列を有するフラグメントを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーは、表１に提供されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を有するフラグメントを含む。バイオマーカーのバリアントまたは代替形態は、例えば、開示されるバイオマーカーをコードする転写産物の任意のスプライスバリアントにコードされるポリペプチドを含む。
【0052】
本明細書で企図されるバイオマーカーは、本明細書に記載のタンパク質のうちのいずれかのトランケート形態またはポリペプチドフラグメントも含む。タンパク質のトランケート形態またはポリペプチドフラグメントは、Ｎ末端が除去またはトランケートされた形態およびＣ末端が除去またはトランケートされた形態を含むことができる。タンパク質のトランケート形態またはフラグメントは、任意の機構によって、例えば、限定されないが、選択的翻訳、エキソおよび／もしくはエンドタンパク質分解、ならびに／または例えば、物理的、化学的および／もしくは酵素的タンパク質分解による分解によって生じるフラグメントを含むことができる。限定されないが、バイオマーカーは、タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドのトランケート型もしくはフラグメントも含むことができ、これは、ＡＴＴＲバイオマーカータンパク質のアミノ酸配列の少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも８％または少なくとも９９％を含むことができる。
【0053】
場合によっては、フラグメントは、対応する成熟した全長ＡＴＴＲバイオマーカータンパク質と比較して、例えば、１～１５アミノ酸、１～１０アミノ酸または１～５アミノ酸だけなど、１～２０アミノ酸だけＮ末端および／またはＣ末端がトランケートされている。
【0054】
ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質およびこれらのフラグメントなどの、本開示の任意のＡＴＴＲバイオマーカータンパク質は、限定されないが、リン酸化、グリコシル化、脂質化、メチル化、セレノシスチン修飾、システイン化、スルホン化、グルタチオン化、アセチル化、および／またはメチオニンスルホキシドもしくはメチオニンスルホンへのメチオニンの酸化などの修飾を含めて、発現後修飾を有するなど、前記マーカー、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質およびフラグメントの修飾形態を包含することもできる。
【0055】
一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーは異なるアイソフォームを有する。１種のみまたはそれ以上のアイソフォームが本明細書に開示されている可能性があるが、ＡＴＴＲバイオマーカーのすべてのアイソフォームが、開示される技術における使用が企図される。
【0056】
一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーはヌクレオチドであり得る。一部の実施形態では、ヌクレオチドはＲＮＡまたはＤＮＡであり得る。ある場合には、対応するＲＮＡまたはＤＮＡは、全長タンパク質と比較して、診断においてより良好な識別力を示すことができる。
【0057】
本明細書で提供される技術とともに使用するための例示的ＡＴＴＲバイオマーカーを以下に簡潔に記載する。
【0058】
トロポニンＩ（ＴｎＩ）
トロポニンは、骨格筋線維および心筋線維で見出される一群のタンパク質である。トロポニンの１つの機能は、筋収縮を調節することである。以下の３タイプのトロポニンタンパク質が公知である：トロポニンＣ、トロポニンＩおよびトロポニンＴ。一緒に、３タイプのトロポニンは複合体を形成する。複合体内で、トロポニンＣはカルシウムイオンに結合する。この結合は、トロポニンＩのコンフォメーション変化をもたらすことによって、収縮を起こす。トロポニンＩは、薄い筋フィラメントにおいてアクチンに結合して、アクチン－トロポミオシン複合体を所定の位置に保つ。トロポニンＴは、筋線維構造体であるトロポミオシンにトロポニン複合体を係留する。
トロポニンは、骨格筋線維および心筋線維で見出される一群のタンパク質である。トロポニンの１つの機能は、筋収縮を調節することである。以下の３タイプのトロポニンタンパク質が公知である：トロポニンＣ、トロポニンＩおよびトロポニンＴ。一緒に、３タイプのトロポニンは複合体を形成する。複合体内で、トロポニンＣはカルシウムイオンに結合する。この結合は、トロポニンＩのコンフォメーション変化をもたらすことによって、収縮を起こす。トロポニンＩは、薄い筋フィラメントにおいてアクチンに結合して、アクチン－トロポミオシン複合体を所定の位置に保つ。トロポニンＴは、筋線維構造体であるトロポミオシンにトロポニン複合体を係留する。
【0059】
以前の分析によって、トロポニンＣの違いは、骨格筋と心筋との間でほとんどまたは全くないが、トロポニンＩとトロポニンＴの形態は、骨格筋と心筋との間で異なると理解されることが示される。通常は、トロポニンは、非常に少量から検出不可能な量で血液中に存在する。しかし、心筋細胞に損傷がある場合、トロポニンが血液中に放出される。血液中のトロポニンＩの濃度が高いほど、一般に、心臓組織の損傷が大きいことと相関する。
【0060】
本開示の一部の実施形態では、ＴｎＩはＡＴＴＲバイオマーカーである。一部の実施形態では、ＴｎＩ、ＴｎＩの特徴的なフラグメント、および／またはＴｎＩのバリアントの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＴｎＩは、抗ＴｎＩ薬（例えば、抗ＴｎＩ抗体薬、プローブなど）を用いてサンプル中で検出される。一部の実施形態では、ＴｎＩをコードするヌクレオチド、ＴｎＩの特徴的なフラグメントをコードするヌクレオチドおよび／またはＴｎＩのバリアントをコードするヌクレオチドの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＴｎＩをコードするヌクレオチドは、抗ＴｎＩヌクレオチド配列薬（例えば、抗ＴｎＩヌクレオチド配列抗体薬、プローブ、相補的核酸など）を用いてサンプル中で検出される。
【0061】
ピルビン酸キナーゼ筋肉アイソフォーム１およびアイソフォーム２（ＰＫＭ１およびＰＫＭ２）
ピルビン酸キナーゼは、ホスホエノールピルビン酸（ＰＥＰ）からアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）へのリン酸基の移行を触媒して、ピルビン酸およびＡＴＰをもたらすことによって解糖の最終工程を触媒する酵素である。脊椎動物では、ピルビン酸キナーゼの以下の４種の組織特異的アイソザイムが存在する：Ｌ（肝臓）、Ｒ（赤血球）、筋肉アイソフォーム１（筋肉、心臓および脳）ならびに筋肉アイソフォーム２（早期胎児組織およびたいていの成体組織）。ピルビン酸キナーゼタンパク質は、二量体および四量体を形成することができる。
ピルビン酸キナーゼは、ホスホエノールピルビン酸（ＰＥＰ）からアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）へのリン酸基の移行を触媒して、ピルビン酸およびＡＴＰをもたらすことによって解糖の最終工程を触媒する酵素である。脊椎動物では、ピルビン酸キナーゼの以下の４種の組織特異的アイソザイムが存在する：Ｌ（肝臓）、Ｒ（赤血球）、筋肉アイソフォーム１（筋肉、心臓および脳）ならびに筋肉アイソフォーム２（早期胎児組織およびたいていの成体組織）。ピルビン酸キナーゼタンパク質は、二量体および四量体を形成することができる。
【0062】
ＰＫＭ遺伝子は、筋肉アイソフォーム１アイソザイムおよび筋肉アイソフォーム２アイソザイム（ＰＫＭ１およびＰＫＭ２）をコードする。ＰＫＭ遺伝子のエクソン９および１０は、それぞれ、筋肉アイソフォーム１アイソザイムおよび筋肉アイソフォーム２アイソザイムに対する配列を含む。１種のノンコーディングバリアントを含めて、ＰＫＭの少なくとも１４種のスプライスバリアントが存在する。ＰＫＭのスプライスバリアントの中には、差次的なスプライシングによって産生され、カルボキシ末端の２２アミノ酸だけ異なるＰＫＭ１およびＰＫＭ２が存在する。ＰＫＭ１およびＰＫＭ２のアミノ酸配列は同一の領域を共有するので、ＰＫＭ１およびＰＫＭ２のある特定のフラグメントは、ＰＫＭ１とＰＫＭ２の両方の特徴的なフラグメントであり、ある特定のフラグメント（例えば、カルボキシ末端の２２アミノ酸由来のフラグメント）は、ＰＫＭ１またはＰＫＭ２の特徴的なフラグメントである。さらに、ＰＫＭ１およびＰＫＭ２のアミノ酸配列は同一の領域を共有するので、ある特定の抗ＰＫＭ１薬はＰＫＭ２も検出し、逆もまた同じである。
【0063】
本開示の一部の実施形態では、ＰＫＭ（例えば、ＰＫＭ１および／またはＰＫＭ２）はＡＴＴＲバイオマーカーである。一部の実施形態では、ＰＫＭ、ＰＫＭの特徴的なフラグメントおよび／またはＰＫＭのバリアントの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＰＫＭは、抗ＰＫＭ薬（例えば、抗ＰＫＭ抗体薬、プローブなど）を用いてサンプル中で検出される。一部の実施形態では、ＰＫＭをコードするヌクレオチド、ＰＫＭの特徴的なフラグメントをコードするヌクレオチドおよび／またはＰＫＭのバリアントをコードするヌクレオチドの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＰＫＭをコードするヌクレオチドは、抗ＰＫＭヌクレオチド配列薬（例えば、抗ＰＫＭヌクレオチド配列抗体薬、プローブ、相補的核酸など）を用いてサンプル中で検出される。
【0064】
本開示の一部の実施形態では、ＰＫＭ１はＡＴＴＲバイオマーカーである。一部の実施形態では、ＰＫＭ１、ＰＫＭ１の特徴的なフラグメント、および／またはＰＫＭ１のバリアントの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＰＫＭ１は、抗ＰＫＭ１薬（例えば、抗ＰＫＭ１抗体薬、プローブなど）を用いてサンプル中で検出される。一部の実施形態では、ＰＫＭ１をコードするヌクレオチド、ＰＫＭ１の特徴的なフラグメントをコードするヌクレオチドおよび／またはＰＫＭ１のバリアントをコードするヌクレオチドの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＰＫＭ１をコードするヌクレオチドは、抗ＰＫＭ１ヌクレオチド配列薬（例えば、抗ＰＫＭ１ヌクレオチド配列抗体薬、プローブ、相補的核酸など）を用いてサンプル中で検出される。
【0065】
本開示の一部の実施形態では、ＰＫＭ２はＡＴＴＲバイオマーカーである。一部の実施形態では、ＰＫＭ２、ＰＫＭ２の特徴的なフラグメントおよび／またはＰＫＭ２のバリアントの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＰＫＭ２は、抗ＰＫＭ２薬（例えば、抗ＰＫＭ２抗体薬、プローブなど）を用いてサンプル中で検出される。一部の実施形態では、ＰＫＭ２をコードするヌクレオチド、ＰＫＭ２の特徴的なフラグメントをコードするヌクレオチドおよび／またはＰＫＭ２のバリアントをコードするヌクレオチドの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＰＫＭ２をコードするヌクレオチドは、抗ＰＫＭ２ヌクレオチド配列薬（例えば、抗ＰＫＭ２ヌクレオチド配列抗体薬、プローブ、相補的核酸など）を用いてサンプル中で検出される。
【0066】
Ｎ末端－ホルモン前駆体Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）
Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）は心臓で産生されるホルモンである。ＢＮＰは、血圧および体液バランスを調節するために心臓によって分泌される小さな環状ペプチドである。Ｎ末端（ＮＴ）－ホルモン前駆体ＢＮＰ（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰまたはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）は、ＢＮＰを産生する同じ分子から放出される非活性のホルモン前駆体である。特に、ＢＮＰは、前駆形態（ｐｒｏＢＮＰ）で心室の膜顆粒に貯蔵され、主にそこから分泌される。心室容積の拡大または圧負荷に応答して心臓からいったん放出されれば、７６アミノ酸のＮ末端（ＮＴ）断片（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）が、酵素コリン（ｃｏｒｉｎ）およびフューリンによって迅速に切断されて、活性な３２アミノ酸ペプチド（ＢＮＰ）が放出される。
Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）は心臓で産生されるホルモンである。ＢＮＰは、血圧および体液バランスを調節するために心臓によって分泌される小さな環状ペプチドである。Ｎ末端（ＮＴ）－ホルモン前駆体ＢＮＰ（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰまたはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）は、ＢＮＰを産生する同じ分子から放出される非活性のホルモン前駆体である。特に、ＢＮＰは、前駆形態（ｐｒｏＢＮＰ）で心室の膜顆粒に貯蔵され、主にそこから分泌される。心室容積の拡大または圧負荷に応答して心臓からいったん放出されれば、７６アミノ酸のＮ末端（ＮＴ）断片（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）が、酵素コリン（ｃｏｒｉｎ）およびフューリンによって迅速に切断されて、活性な３２アミノ酸ペプチド（ＢＮＰ）が放出される。
【0067】
本開示の一部の実施形態では、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰはＡＴＴＲバイオマーカーである。一部の実施形態では、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの特徴的なフラグメントおよび／またはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのバリアントの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰは、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬（例えば、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ抗体薬、プローブなど）を用いてサンプル中で検出される。一部の実施形態では、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰをコードするヌクレオチド、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの特徴的なフラグメントをコードするヌクレオチドおよび／またはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのバリアントをコードするヌクレオチドの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰをコードするヌクレオチドは、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰヌクレオチド配列薬（例えば、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰヌクレオチド配列抗体薬、プローブ、相補的核酸など）を用いてサンプル中で検出される。
【0068】
レチノール結合タンパク質４（ＲＢＰ４）
レチノール結合タンパク質４（ＲＢＰ４）はレチノール（ビタミンＡアルコール）のためのトランスポータータンパク質である。ＲＢＰ４はおよそ２１ｋＤａの分子量を有し、ヒトにおいてＲＢＰ４遺伝子にコードされる。これは、独占的ではないが、主に肝臓で合成される。ＲＢＰ４は、肝臓の貯蔵部位から末梢組織にレチノールを送達する。血漿中で、ＲＢＰ－レチノール複合体は、トランスチレチンと相互作用し、これは、腎臓糸球体を介した濾過によりその喪失を防止する。ビタミンＡの欠乏は、翻訳後に、この結合タンパク質の分泌を遮断し、その結果、上皮細胞への送達および供給が不完全になる。循環ＲＢＰ４は、ＡＴＴＲｍと非アミロイド心不全と識別する方法として以前に提唱された（Ａｒｖａｎｉｔｉｓ，Ｍ．ら、ＪＡＭＡ Ｃａｒｄｉｏｌ．、２０１７）。しかし、この先行研究は、ＲＢＰ４中の特定の変異（ＴＴＲ遺伝子のコドン１２２におけるイソロイシンのバリンへの置換（Ｖ１２２Ｉ））によって引き起こされるＡＴＴＲｍしか調べておらず、単独で評価するかまたは他の可能なバイオマーカーとともに評価するかを問わず、ＴＴＲ－ＣＭに対するバイオマーカーとしてＲＢＰ４をより一般的に使用することができるかどうか調べていない。
レチノール結合タンパク質４（ＲＢＰ４）はレチノール（ビタミンＡアルコール）のためのトランスポータータンパク質である。ＲＢＰ４はおよそ２１ｋＤａの分子量を有し、ヒトにおいてＲＢＰ４遺伝子にコードされる。これは、独占的ではないが、主に肝臓で合成される。ＲＢＰ４は、肝臓の貯蔵部位から末梢組織にレチノールを送達する。血漿中で、ＲＢＰ－レチノール複合体は、トランスチレチンと相互作用し、これは、腎臓糸球体を介した濾過によりその喪失を防止する。ビタミンＡの欠乏は、翻訳後に、この結合タンパク質の分泌を遮断し、その結果、上皮細胞への送達および供給が不完全になる。循環ＲＢＰ４は、ＡＴＴＲｍと非アミロイド心不全と識別する方法として以前に提唱された（Ａｒｖａｎｉｔｉｓ，Ｍ．ら、ＪＡＭＡ Ｃａｒｄｉｏｌ．、２０１７）。しかし、この先行研究は、ＲＢＰ４中の特定の変異（ＴＴＲ遺伝子のコドン１２２におけるイソロイシンのバリンへの置換（Ｖ１２２Ｉ））によって引き起こされるＡＴＴＲｍしか調べておらず、単独で評価するかまたは他の可能なバイオマーカーとともに評価するかを問わず、ＴＴＲ－ＣＭに対するバイオマーカーとしてＲＢＰ４をより一般的に使用することができるかどうか調べていない。
【0069】
本開示は、ＲＢＰ４がＡＴＴＲバイオマーカーとして使用することができるという認識を提供する。したがって、本開示の一部の実施形態では、ＲＢＰ４はＡＴＴＲバイオマーカーである。一部の実施形態では、ＲＢＰ４、ＲＢＰ４の特徴的なフラグメント、および／またはＲＢＰ４のバリアントの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＲＢＰ４は、抗ＲＢＰ４薬（例えば、抗ＲＢＰ４抗体薬、プローブなど）を用いてサンプル中で検出される。一部の実施形態では、ＲＢＰ４をコードするヌクレオチド、ＲＢＰ４の特徴的なフラグメントをコードするヌクレオチドおよび／またはＲＢＰ４のバリアントをコードするヌクレオチドの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＲＢＰ４をコードするヌクレオチドは、抗ＲＢＰ４ヌクレオチド配列薬（例えば、抗ＲＢＰ４ヌクレオチド配列抗体薬、プローブ、相補的核酸など）を用いてサンプル中で検出される。
【0070】
組織メタロプロテアーゼ阻害物質２（ＴＩＭＰ２）
組織メタロプロテアーゼ阻害物質２（ＴＩＭＰ２）は、ＴＩＭＰ２タンパク質をコードする遺伝子である。ＴＩＭＰ２遺伝子は、ゲノムＤＮＡの８３ｋｂにまたがる５つのエクソンにコードされる。ＴＩＭＰ２遺伝子の５プライム末端は、Ｓｐ１結合部位、ＡＰ２結合部位、ＡＰ１結合部位およびＰＥＡ３結合部位を含めて、いくつかの調節エレメントを含む。
組織メタロプロテアーゼ阻害物質２（ＴＩＭＰ２）は、ＴＩＭＰ２タンパク質をコードする遺伝子である。ＴＩＭＰ２遺伝子は、ゲノムＤＮＡの８３ｋｂにまたがる５つのエクソンにコードされる。ＴＩＭＰ２遺伝子の５プライム末端は、Ｓｐ１結合部位、ＡＰ２結合部位、ＡＰ１結合部位およびＰＥＡ３結合部位を含めて、いくつかの調節エレメントを含む。
【0071】
ＴＩＭＰ２遺伝子はＴＩＭＰ遺伝子ファミリーのメンバーである。ＴＩＭＰ遺伝子ファミリーの遺伝子にコードされるタンパク質は、細胞外基質の分解に関与する一群のペプチダーゼであるマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）を阻害する。ＴＩＭＰ２は、内皮細胞の増殖を直接抑制する能力も有する。ＴＩＭＰ２は、腫瘍転移を抑制することが示されている。
【0072】
本開示の一部の実施形態では、ＴＩＭＰ２はＡＴＴＲバイオマーカーである。一部の実施形態では、ＴＩＭＰ２、ＴＩＭＰ２の特徴的なフラグメント、および／またはＴＩＭＰ２のバリアントの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＴＩＭＰ２は、抗ＴＩＭＰ２薬（例えば、抗ＴＩＭＰ２抗体薬、プローブなど）を用いてサンプル中で検出される。一部の実施形態では、ＴＩＭＰ２をコードするヌクレオチド、ＴＩＭＰ２の特徴的なフラグメントをコードするヌクレオチドおよび／またはＴＩＭＰ２のバリアントをコードするヌクレオチドの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＴＩＭＰ２をコードするヌクレオチドは、抗ＴＩＭＰ２ヌクレオチド配列薬（例えば、抗ＴＩＭＰ２ヌクレオチド配列抗体薬、プローブ、相補的核酸など）を用いてサンプル中で検出される。
【0073】
ニューロフィラメント軽鎖（ＮｆＬ）
ニューロフィラメントは、軸索に特に豊富な、ニューロンの細胞骨格成分である。ニューロフィラメントの機能は、構造的支持の提供ならびに軸索のサイズ、形状および内径の維持を含む。ニューロフィラメントは、３つのサブユニット：ニューロフィラメント軽鎖（ＮｆＬ）、ニューロフィラメント中鎖およびニューロフィラメント重鎖を含む。ＮｆＬのレベルは、炎症性疾患、神経変性疾患、外傷性疾患および脳血管疾患を含めて、様々な神経障害における軸索損傷の程度に比例して、脳脊髄液（ＣＳＦ）および血液で増加する。ＮｆＬは神経変性障害に対するバイオマーカーとして使用されているが、心臓状態を含めて、他の疾患および状態へのその関連は十分に探究されていない。
ニューロフィラメントは、軸索に特に豊富な、ニューロンの細胞骨格成分である。ニューロフィラメントの機能は、構造的支持の提供ならびに軸索のサイズ、形状および内径の維持を含む。ニューロフィラメントは、３つのサブユニット：ニューロフィラメント軽鎖（ＮｆＬ）、ニューロフィラメント中鎖およびニューロフィラメント重鎖を含む。ＮｆＬのレベルは、炎症性疾患、神経変性疾患、外傷性疾患および脳血管疾患を含めて、様々な神経障害における軸索損傷の程度に比例して、脳脊髄液（ＣＳＦ）および血液で増加する。ＮｆＬは神経変性障害に対するバイオマーカーとして使用されているが、心臓状態を含めて、他の疾患および状態へのその関連は十分に探究されていない。
【0074】
本明細書に記載のように、一部の実施形態では、ニューロフィラメント軽鎖（ＮｆＬ）は、ＴＴＲ－ＣＭの検出および診断に有用であり得る。一部の実施形態では、ＮｆＬはＡＴＴＲバイオマーカーである。一部の実施形態では、ＮｆＬ、ＮｆＬの特徴的なフラグメントおよび／またはＮｆＬのバリアントの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＮｆＬは、抗ＮｆＬ薬（例えば、抗ＮｆＬ抗体薬、プローブなど）を用いてサンプル中で検出される。一部の実施形態では、ＮｆＬをコードするヌクレオチド、ＮｆＬの特徴的なフラグメントをコードするヌクレオチドおよび／またはＮｆＬのバリアントをコードするヌクレオチドの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＮｆＬをコードするヌクレオチドは、抗ＮｆＬヌクレオチド配列薬（例えば、抗ＮｆＬヌクレオチド配列抗体薬、プローブ、相補的核酸など）を用いてサンプル中で検出される。
【0075】
デコリン（ＤＣＮ）
デコリン（ＤＣＮ）は、平均９０～１４０キロダルトン（ｋＤａ）の分子量であるプロテオグリカンである。これは、小型ロイシンリッチプロテオグリカン（ＳＬＲＰ）ファミリーに属し、コンドロイチン硫酸（ＣＳ）またはデルマタン硫酸（ＤＳ）のいずれかのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）鎖とともにロイシンリピートを含むタンパク質コアを含む。ＤＣＮは結合組織の成分であり、Ｉ型コラーゲン細線維に結合する。ＤＣＮはまた、細胞増殖、分化、増殖、接着および転移に関与する対応するシグナリング分子に直接的または間接的に相互作用することによって、様々なサイトカインおよび増殖因子のリガンドとして作用し、ＤＣＮは、癌細胞の増殖、伝播、炎症促進性プロセスおよび抗原線維形成において、特にきわめて重要な役割を果たす。
デコリン（ＤＣＮ）は、平均９０～１４０キロダルトン（ｋＤａ）の分子量であるプロテオグリカンである。これは、小型ロイシンリッチプロテオグリカン（ＳＬＲＰ）ファミリーに属し、コンドロイチン硫酸（ＣＳ）またはデルマタン硫酸（ＤＳ）のいずれかのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）鎖とともにロイシンリピートを含むタンパク質コアを含む。ＤＣＮは結合組織の成分であり、Ｉ型コラーゲン細線維に結合する。ＤＣＮはまた、細胞増殖、分化、増殖、接着および転移に関与する対応するシグナリング分子に直接的または間接的に相互作用することによって、様々なサイトカインおよび増殖因子のリガンドとして作用し、ＤＣＮは、癌細胞の増殖、伝播、炎症促進性プロセスおよび抗原線維形成において、特にきわめて重要な役割を果たす。
【0076】
本開示の一部の実施形態では、ＤＣＮはＡＴＴＲバイオマーカーである。一部の実施形態では、ＤＣＮ、ＤＣＮの特徴的なフラグメントおよび／またはＤＣＮのバリアントの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＤＣＮは、抗ＤＣＮ薬（例えば、抗ＤＣＮ抗体薬、プローブなど）を用いてサンプル中で検出される。一部の実施形態では、ＤＣＮをコードするヌクレオチド、ＤＣＮの特徴的なフラグメントをコードするヌクレオチドおよび／またはＤＣＮのバリアントをコードするヌクレオチドの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＤＣＮをコードするヌクレオチドは、抗ＤＣＮヌクレオチド配列薬（例えば、抗ＤＣＮヌクレオチド配列抗体薬、プローブ、相補的核酸など）を用いてサンプル中で検出される。
【0077】
ＳＰＡＲＣ関連モジュラーカルシウム結合２（ＳＭＯＣ－２）
ＳＭＡＰ２（平滑筋関連タンパク質２）と以前に呼ばれていたＳＰＡＲＣ関連モジュラーカルシウム結合タンパク質２（ＳＭＯＣ－２）は、マトリックス細胞タンパク質のＳＰＡＲＣファミリーのメンバーである５５ｋＤａ糖タンパク質である。ＳＭＯＣ－２は、インテグリン結合型キナーゼ（ＩＬＫ）を介してシグナルを伝達して、サイクリンＤ１をアップレギュレートすることによって、細胞周期の進行を促進する。内皮細胞外基質で発現している場合、これは、増殖因子誘導性血管新生を増強する。ＳＭＯＣ－２の発現は、新生内膜形成の間アップレギュレートされ、血管平滑筋の増殖および遊走を促進する。皮膚において、これは、ケラチノサイトの付着および遊走を促進する。ＳＭＯＣ－２は、肺および動脈においてプロテアーゼを阻害することもできる。ＳＭＯＣ－２は、いくつかの癌に対するバイオマーカーとして提唱されている。
ＳＭＡＰ２（平滑筋関連タンパク質２）と以前に呼ばれていたＳＰＡＲＣ関連モジュラーカルシウム結合タンパク質２（ＳＭＯＣ－２）は、マトリックス細胞タンパク質のＳＰＡＲＣファミリーのメンバーである５５ｋＤａ糖タンパク質である。ＳＭＯＣ－２は、インテグリン結合型キナーゼ（ＩＬＫ）を介してシグナルを伝達して、サイクリンＤ１をアップレギュレートすることによって、細胞周期の進行を促進する。内皮細胞外基質で発現している場合、これは、増殖因子誘導性血管新生を増強する。ＳＭＯＣ－２の発現は、新生内膜形成の間アップレギュレートされ、血管平滑筋の増殖および遊走を促進する。皮膚において、これは、ケラチノサイトの付着および遊走を促進する。ＳＭＯＣ－２は、肺および動脈においてプロテアーゼを阻害することもできる。ＳＭＯＣ－２は、いくつかの癌に対するバイオマーカーとして提唱されている。
【0078】
一部の実施形態では、ＳＰＡＲＣ関連モジュラーカルシウム結合２（ＳＭＯＣ２）はＡＴＴＲバイオマーカーである。一部の実施形態では、ＳＭＯＣ２、ＳＭＯＣ２の特徴的なフラグメントおよび／またはＳＭＯＣ２のバリアントの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＳＭＯＣ２は、抗ＳＭＯＣ２薬（例えば、抗ＳＭＯＣ２抗体薬、プローブなど）を用いてサンプル中で検出される。一部の実施形態では、ＳＭＯＣ２をコードするヌクレオチド、ＳＭＯＣ２の特徴的なフラグメントをコードするヌクレオチドおよび／またはＳＭＯＣ２のバリアントをコードするヌクレオチドの検出が、対象がＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性を評価する、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する、または対象をさらなる心筋症試験に推奨するための方法で使用される。一部の実施形態では、ＳＭＯＣ２をコードするヌクレオチドは、抗ＳＭＯＣ２ヌクレオチド配列薬（例えば、抗ＳＭＯＣ２ヌクレオチド配列抗体薬、プローブ、相補的核酸など）を用いてサンプル中で検出される。
【0079】
本明細書に開示されるある特定のＡＴＴＲバイオマーカーの例示的アミノ酸配列は、以下の表１に含まれる。
【0080】
【表1-1】
【表1-2】
【0081】
一部の実施形態では、さらなるマーカーを分析または評価することができる。一部のそのような実施形態では、さらなるマーカーは、ミスフォールドまたは凝集トランスチレチン（ＴＴＲ）を含む。
【0082】
一部の実施形態では、限定されないが、サンプルを得た対象の人口統計学的要因（例えば、年齢、体重、生物学的性、民族性、ＢＭＩ、病歴、危険因子、家族歴および地理的位置の１つまたはそれ以上）ならびに／または画像ベースのバイオマーカー（例えば、左心室隔壁厚および／または駆出率）を含めて、さらなる要因が考慮される。
【0083】
ＡＴＴＲバイオマーカーの例示的組合せ
本明細書で提供されるように、各ＡＴＴＲバイオマーカーは全長タンパク質またはそのフラグメントであり得る。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーのフラグメントは特徴的なフラグメントである。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーは全長ＡＴＴＲバイオマーカータンパク質である。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーはＡＴＴＲバイオマーカーの特徴的なフラグメントである。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーのサブセットは全長ＡＴＴＲバイオマーカータンパク質であり、ＡＴＴＲバイオマーカーのサブセットはＡＴＴＲバイオマーカーの特徴的なフラグメントである。
本明細書で提供されるように、各ＡＴＴＲバイオマーカーは全長タンパク質またはそのフラグメントであり得る。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーのフラグメントは特徴的なフラグメントである。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーは全長ＡＴＴＲバイオマーカータンパク質である。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーはＡＴＴＲバイオマーカーの特徴的なフラグメントである。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーのサブセットは全長ＡＴＴＲバイオマーカータンパク質であり、ＡＴＴＲバイオマーカーのサブセットはＡＴＴＲバイオマーカーの特徴的なフラグメントである。
【0084】
一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーは野生型アミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーはバリアントアミノ酸配列、例えば、１つまたはそれ以上の変異を含むアミノ酸配を有する。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーはそれぞれ野生型アミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーはそれぞれバリアントアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーのサブセットはそれぞれ野生型アミノ酸配列を有し、ＡＴＴＲバイオマーカーのサブセットはそれぞれバリアントアミノ酸配列を有する。
【0085】
一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、表２～５において以下に列挙されるＡＴＴＲバイオマーカーの組合せを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、表２において以下に列挙されるＡＴＴＲバイオマーカーの組合せを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、表３において以下に列挙されるＡＴＴＲバイオマーカーの組合せを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、表４において以下に列挙されるＡＴＴＲバイオマーカーの組合せを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、表５において以下に列挙されるＡＴＴＲバイオマーカーの組合せを含む。
【0086】
一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せのうちの１つまたはそれ以上を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せのうちの２つ以上を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せのうちの３つ以上を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せのうちの４つ以上を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せのうちの５つ以上を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せのうちの６つ以上を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せのうちの７つ以上を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せのうちの８つ以上を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、またはＮｆＬを含む。
【0087】
一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴｎＩを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴｎＩおよびＰＫＭ１を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴｎＩおよびＰＫＭ２を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＰＫＭ２を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４または両方をさらに含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴＩＭＰ２、ＮｆＬまたは両方をさらに含む。
【0088】
一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＲＢＰ４またはこれらの組合せをさらに含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せは、ＴＩＭＰ２、ＮｆＬまたは両方をさらに含む。
【0089】
一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１つまたはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＲＢＰ４を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ２およびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ２およびＲＢＰ４を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＲＢＰ４を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＲＢＰ４を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２およびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２およびＲＢＰ４を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＲＢＰ４、ＳＭＯＣ－２およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＤＣＮ、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＤＣＮ、ＲＢＰ４およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＳＭＯＣ－２およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＴＩＭＰ２およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＤＣＮおよびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＲＢＰ４およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＲＢＰ４、ＴＩＭＰ２およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＤＣＮ、ＳＭＯＣ－２およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴＩＭＰ２およびＴｎＩを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＳＭＯＣ－２、ＴＩＭＰ２およびＴｎＩを含む。
【0090】
本開示と矛盾しないＡＴＴＲバイオマーカーの例示的組合せは、以下の表２に含まれる。以下の表２に列挙される組合せを含むＡＴＴＲバイオマーカーの組合せも本明細書に開示される。
【0091】
【表2】
【0092】
本開示と矛盾しない２種のＡＴＴＲバイオマーカーを含む例示的組合せは、以下の表３に含まれる。以下の表３に列挙される組合せを含むＡＴＴＲバイオマーカーの組合せも本明細書に開示される。
【0093】
【表3】
【0094】
本開示と矛盾しない３種のＡＴＴＲバイオマーカーを含む例示的組合せは、以下の表４に含まれる。以下の表４に列挙される組合せを含むＡＴＴＲバイオマーカーの組合せも本明細書に開示される。
【0095】
【表4-1】
【表4-2】
【表4-3】
【0096】
本開示と矛盾しない４種のＡＴＴＲバイオマーカーを含む例示的組合せは、以下の表５に含まれる。以下の表５に列挙される組合せを含むＡＴＴＲバイオマーカーの組合せも本明細書に開示される。
【0097】
【表5-1】
【表5-2】
【表5-3】
【表5-4】
【0098】
一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＰＫＭ１を含まない。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＰＫＭ２を含まない。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＰＫＭもＰＫＭ２も含まない。
【0099】
一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＳＭＯＣ－２を含まない。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＤＣＮを含まない。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＳＭＯＣ－２もＤＣＮも含まない。
【0100】
方法
本開示の方法は、偽陰性の数を最少にすると同時に、ＴＴＲ－ＣＭの危険性があるより多くの患者の早期の特定をさらに可能にする。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＡＴＴＲｗｔの存在の早期スクリーニングという利点を提供する。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、遺伝子検査がＡＴＴＲｍを除外した後に、ＡＴＴＲｗｔの検出または診断を支援することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、費用がかかり、複雑なプロセスの心エコー図、それに続くＣＭＲおよびシンチグラフィーを用いてＴＴＲ－ＣＭについてスクリーニングを開始する必要性を低減するかまたは排除する。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法によって、対象においてＴＴＲ－ＣＭの可能性が検出される場合、対象は、その後の確証試験、例えば、心エコー図、心臓磁気共鳴画像（ＣＭＲ）、シンチグラフィーおよび／または心臓生検を受けることができる。
本開示の方法は、偽陰性の数を最少にすると同時に、ＴＴＲ－ＣＭの危険性があるより多くの患者の早期の特定をさらに可能にする。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＡＴＴＲｗｔの存在の早期スクリーニングという利点を提供する。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、遺伝子検査がＡＴＴＲｍを除外した後に、ＡＴＴＲｗｔの検出または診断を支援することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、費用がかかり、複雑なプロセスの心エコー図、それに続くＣＭＲおよびシンチグラフィーを用いてＴＴＲ－ＣＭについてスクリーニングを開始する必要性を低減するかまたは排除する。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法によって、対象においてＴＴＲ－ＣＭの可能性が検出される場合、対象は、その後の確証試験、例えば、心エコー図、心臓磁気共鳴画像（ＣＭＲ）、シンチグラフィーおよび／または心臓生検を受けることができる。
【0101】
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、アミロイドトランスチレチン心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）を発生する対象の危険性を決定する方法である。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する方法であり、サンプルは対象から得られたものである。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＴＴＲ－ＣＭの危険性があるか、またはＴＴＲ－ＣＭを罹患している対象においてＴＴＲ－ＣＭを治療する方法である。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、患者がＴＴＲ－ＣＭ有さないか、またはＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性がないことを決定する方法である。
【0102】
一部の実施形態では、ＴＴＲ－ＣＭは野生型トランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲｗｔ）から生じる。一部の実施形態では、対象は、遺伝子検査によって、家族性アミロイド心筋症（ＡＴＴＲｍ）の試験結果が陰性である。
【0103】
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、１回またはそれ以上の用量のＴＴＲ安定化剤を受けるための対象を選択する方法であり、サンプルは対象から得られたものである。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、１回またはそれ以上の用量のＴＴＲ安定化剤を対象に投与する工程を含む。
【0104】
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、１つまたはそれ以上の心筋症試験のために対象を選択する方法であり、サンプルは対象から得られたものである。一部の実施形態では、１つまたはそれ以上の心筋症試験は、心エコー図、先進画像方法または両方を含む。一部の実施形態では、先進画像方法は、心臓磁気共鳴画像（ＣＭＲ）、シンチグラフィーまたは両方を含む。一部の実施形態では、シンチグラフィーは９９ｍ Ｔｃ－ピロリン酸などの放射性同位体コンジュゲートの使用を含む。一部の実施形態では、シンチグラフィーは単一光子放射型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を使用して行われる。
【0105】
本開示は、上記の方法によるバイオマーカーの検出を特徴とする、ＴＴＲ－ＣＭ（野生型ＡＴＴＲアミロイドーシスによって生じるＴＴＲ－ＣＭを含める）の診断試験を提供する。
【0106】
一部の実施形態では、本開示によって教示されるようにＴＴＲ－ＣＭの危険性を検出、診断または特定する方法は、標準的な技法と比較して、本開示の方法は、以下の１つまたはそれ以上の利益を含むという点において、改善された方法である：ＴＴＲ－ＣＭを特定するための感度の改善、ＴＴＲ－ＣＭを特定するための特異性の改善、ＴＴＲ－ＣＭを特定するための精度の改善、ＴＴＲ－ＣＭの診断までの時間の低減および／またはＴＴＲ－ＣＭについて患者をスクリーニングする費用の低減。
【0107】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるバイオマーカーは、アミロイドトランスチレチン心筋症の状態についてのインビトロ診断（ＩＶＤ）またはスクリーニング試験に使用することができる。一部の実施形態では、本開示によって教示される診断試験は、１種またはそれ以上のバイオマーカーが対象から得られたサンプル中に存在するかどうかを検出する。一部の実施形態では、本開示によって教示される診断試験は、対象におけるＴＴＲ－ＣＭ（野生型ＡＴＴＲアミロイドーシスによって生じるＴＴＲ－ＣＭを含める）の検出または診断を支援することができる。
【0108】
一部の実施形態では、本開示によって教示される診断試験は、イムノアッセイプラットフォームに適している。一部の実施形態では、そのようなイムノアッセイプラットフォームは、半自動化または自動化イムノアッセイプラットフォームを含む。一部の実施形態では、本開示によって教示される診断試験は、１種またはそれ以上のバイオマーカーの半自動化試験に適している。
【0109】
一部の実施形態では、本開示によって教示される診断試験は、標準的な技法と比較して、本開示の診断試験が以下の１つまたはそれ以上の利益を含むという点において、ＴＴＲ－ＣＭの改善された診断である：ＴＴＲ－ＣＭを特定するための感度の改善、ＴＴＲ－ＣＭを特定するための特異性の改善、ＴＴＲ－ＣＭを特定するための精度の改善、ＴＴＲ－ＣＭの診断までの時間の低減および／またはＴＴＲ－ＣＭについて患者をスクリーニングする費用の低減。
【0110】
一部の実施形態では、本明細書で開示される診断試験は、血漿ベースのスクリーニングアッセイであり得る。一部の実施形態では、診断試験は、例えば、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ａｔｅｌｌｉｃａ（登録商標）システムまたはＳｉｅｍｅｎｓ Ａｄｖｉａ Ｃｅｎｔａｕｒ（登録商標）システムに適している。
【0111】
以下により詳細に示したように、一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、サンプル中に存在する２種以上のトランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）バイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。
【0112】
一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、サンプル中の２種以上のトランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）バイオマーカーのそれぞれのレベルを検出して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る工程、およびＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、サンプル中の２種以上のトランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）バイオマーカーのそれぞれのレベルを検出して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る工程、ならびにＡＴＴＲバイオマーカープロファイルおよび人口統計学的要因を使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、サンプル中の２種以上のトランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）バイオマーカーのそれぞれのレベルを検出して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る工程、ならびにＡＴＴＲバイオマーカープロファイルおよび画像ベースのバイオマーカーを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、サンプル中の２種以上のトランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）バイオマーカーのそれぞれのレベルを検出して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る工程、ならびにＡＴＴＲバイオマーカープロファイル、人口統計学的要因および画像ベースのバイオマーカーを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含む。
【0113】
一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、サンプル中の２種以上のトランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）バイオマーカーのそれぞれのレベルを受け取る工程を含む。一部の実施形態では、受け取る工程は電子的に受け取る工程を含む。
【0114】
一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、サンプル中の２種以上のトランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）バイオマーカーのそれぞれのレベルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る工程、およびＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、サンプル中の２種以上のトランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）バイオマーカーのそれぞれのレベルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る工程、ならびにＡＴＴＲバイオマーカープロファイルおよび人口統計学的要因を使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、サンプル中の２種以上のトランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）バイオマーカーのそれぞれのレベルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る工程、ならびにＡＴＴＲバイオマーカープロファイルおよび画像ベースのバイオマーカーを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書に提供される方法は、サンプル中の２種以上のトランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）バイオマーカーのそれぞれのレベルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る工程、ならびにＡＴＴＲバイオマーカープロファイル、人口統計学的要因および画像ベースのバイオマーカーを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含む。
【0115】
一部の実施形態では、人口統計学的要因は、年齢、体重、生物学的性、民族性、ＢＭＩ、病歴、危険因子、家族歴および地理的位置の１つまたはそれ以上を含む。一部の実施形態では、画像ベースのバイオマーカーは、左心室隔壁厚および／または駆出率を含む。
【0116】
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、さらなる心筋症試験のために対象を選択する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、１回またはそれ以上の用量のＴＴＲ安定化剤を受け取るための対象を選択する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、ＴＴＲ－ＣＭを有するかまたはＴＴＲ－ＣＭを有する危険性があるとして対象を特定する工程を含む。
【0117】
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを参照ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアと比較する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、１回またはそれ以上の用量のＴＴＲ安定化剤を対象に投与する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、１つまたはそれ以上の心筋症試験を対象に対して行う工程を含む。
【0118】
本明細書に開示される例示的方法のさらなる説明を以下に提供する。
【0119】
ＡＴＴＲバイオマーカーの検出およびＡＴＴＲバイオマーカープロファイルの取得
数ある中でも、本明細書に提供される方法は、サンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルの評価を含む。ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルは、サンプル中で検出することができる。１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出するための例示的方法は、本明細書に記載されている。しかし、ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルは、例えば、サンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出した研究室から、例えば、電子的な形態で提供することもできる。
数ある中でも、本明細書に提供される方法は、サンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルの評価を含む。ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルは、サンプル中で検出することができる。１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出するための例示的方法は、本明細書に記載されている。しかし、ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルは、例えば、サンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出した研究室から、例えば、電子的な形態で提供することもできる。
【0120】
一部の実施形態では、本開示は、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーが、サンプル中で検出、分析および／または評価される技術を提供する。一部の実施形態では、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーは対象から得られたサンプル中にあり；一部の実施形態では、診断または治療的決定は、そのような検出、分析および／または評価に基づいて行われる。一部の実施形態では、検出、分析または評価されるバイオマーカーは、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）である。
【0121】
一部の実施形態では、本開示は、サンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）のレベルを検出する方法を提供する。本明細書に記載されるＡＴＴＲバイオマーカーのレベルは、ＡＴＴＲバイオマーカーの存在、ＡＴＴＲバイオマーカーの非存在、ＡＴＴＲバイオマーカーの量、ＡＴＴＲバイオマーカーの絶対量、ＡＴＴＲバイオマーカーの相対量またはＡＴＴＲバイオマーカーの濃度を包含する。
【0122】
一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中の表２～５に列挙される組合せの各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中の表２に列挙される組合せの各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中の表３に列挙される組合せの各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中の表４に列挙される組合せの各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中の表５に列挙される組合せの各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程を含む。
【0123】
一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含み、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含み、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中の３種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含み、３種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中の４種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含み、４種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中の５種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含み、５種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中の６種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含み、６種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中の７種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含み、７種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２およびＮｆＬを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中の８種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含み、８種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２およびＮｆＬを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２およびＮｆＬのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。
【0124】
一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴｎＩのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴｎＩおよびＰＫＭ１のレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴｎＩおよびＰＫＭ２のレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＰＫＭ２のレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４または両方のレベルを検出する工程をさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴＩＭＰ２、ＮｆＬまたは両方のレベルを検出する工程をさらに含む。
【0125】
一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＲＢＰ４またはこれらの組合せのレベルを検出する工程をさらに含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴＩＭＰ２、ＮｆＬまたは両方のレベルを検出する工程をさらに含む。
【0126】
一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴｎＩ、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＲＢＰ４のそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴｎＩ、ＰＫＭ２およびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴｎＩ、ＰＫＭ２およびＲＢＰ４のそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＲＢＰ４のそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＲＢＰ４のそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２およびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２およびＲＢＰ４のそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４およびＴｎＩのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＲＢＰ４、ＳＭＯＣ－２およびＴｎＩのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＤＣＮ、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＴｎＩのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＤＣＮ、ＲＢＰ４およびＴｎＩのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＳＭＯＣ－２およびＴｎＩのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＴＩＭＰ２およびＴｎＩのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＴｎＩのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＤＣＮおよびＴｎＩのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＤＣＮ、ＴＩＭＰ２およびＴｎＩのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＲＢＰ４およびＴｎＩのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＲＢＰ４、ＴＩＭＰ２およびＴｎＩのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＤＣＮ、ＳＭＯＣ－２およびＴｎＩのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＴＩＭＰ２およびＴｎＩのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、サンプル中のＳＭＯＣ－２、ＴＩＭＰ２およびＴｎＩのそれぞれのレベルを検出する工程を含む。
【0127】
バイオマーカー（例えば、ＡＴＴＲバイオマーカー）を検出する方法は、タンパク質としてのバイオマーカーを検出するための方法を含む。タンパク質ベースのバイオマーカー検出方法は、例えば、質量分析（ＭＳ）、イムノアッセイ（例えば、免疫沈降法）、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学的検査、免疫細胞化学的検査、フローサイトメトリーおよび／またはイムノＰＣＲを含む。
【0128】
一部の実施形態では、質量分析は、ＭＳ、ＭＳ／ＭＳ、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ、エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩＭＳ）、ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ、ＥＳＩ－ＭＳ／（ＭＳ）ｎ、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ）、表面増強レーザー脱離／イオン化飛行時間型質量分析（ＳＥＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳ）、タンデム液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）質量分析、シリコン上脱離／イオン化（ＤＩＯＳ）、二次イオン質量分析（ＳＩＭＳ）、四重極飛行時間型（Ｑ－ＴＯＦ）、大気圧化学イオン化質量分析（ＡＰＣＩ－ＭＳ）、ＡＰＣＩ－ＭＳ／ＭＳ、ＡＰＣＩ－（ＭＳ）、大気圧光イオン化質量分析（ＡＰＰＩ－ＭＳ）、ＡＰＰＩ－ＭＳ／ＭＳおよびＡＰＰＩ－（ＭＳ）ｎ、四重極質量分析、フーリエ変換質量分析（ＦＴＭＳ）およびイオントラップ質量分析を含む。多くの場合、ＭＳアプローチは、全長タンパク質ではなく、バイオマーカーのフラグメントを定量化する。しかし、ＭＳアプローチは、開示される方法および／または評価に十分な精度までバイオマーカーのタンパク質レベルを決定するのに十分であり得る。
【0129】
一部の実施形態では、イムノアッセイは化学発光イムノアッセイであり得る。一部の実施形態では、イムノアッセイはハイスループットおよび／または自動化イムノアッセイプラットフォームであり得る。例えば、ハイスループットおよび／または自動化イムノアッセイプラットフォームは、時間あたり少なくとも２４０試験または時間あたり少なくとも４４０試験を分析するために使用することができる。
【0130】
一部の実施形態では、サンプル中でタンパク質としてのバイオマーカーを検出する方法は、目的のバイオマーカーに対する１種またはそれ以上の抗体薬とサンプルを接触させる工程を含む。一部の実施形態では、そのような方法は、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットとサンプルを接触させることも含む。一部の実施形態では、抗体薬は、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットで標識されている。一部の実施形態では、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットは１種またはそれ以上のアクリジニウムエステル分子を含む。
【0131】
アクリジニウムエステル（ＡＥ）分子は、タンパク質および核酸を標識するために使用することができる。アクリジニウム標識タンパク質は、イムノアッセイで検出に使用することができる。アルカリ性Ｈ２Ｏ２（過酸化水素）にＡＥを曝露すると、化学発光が発生する。光は、特定のＡＥバリアントに応じて、４３０～４８０ｎｍの範囲の最大波長で発光する。そのような光は、例えば高効率光電子増倍管によって、検出することができる。光発光は急速であり、１～５秒に終了する。ＡＥ形態の多様性は、感度および頑健性の改善を含めて、より良好なアッセイ性能に寄与する。ＡＥ分子は、小分子、大きな分析物および抗体を標識するために使用することができる。
【0132】
バイオマーカーを検出するさらなる方法は、核酸としてのバイオマーカーを検出するための方法を含む。核酸ベースのバイオマーカー検出方法は、核酸増幅法、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）、転写増幅法（ＴＭＡ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、鎖置換増幅法（ＳＤＡ）および核酸配列ベースの増幅（ＮＡＳＢＡ）の実施を含む。一部の実施形態では、核酸ベースのバイオマーカー検出方法は、１種またはそれ以上の核酸プローブと目的のバイオマーカーをコードする１種またはそれ以上のヌクレオチドとの間のハイブリダイゼーションを検出する工程を含む。一部の実施形態では、核酸プローブは、目的のバイオマーカーをコードする１種またはそれ以上のヌクレオチドのうちの１種の少なくとも一部とそれぞれ相補的である。一部の実施形態では、目的のバイオマーカーをコードするヌクレオチドはＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）を含む。一部の実施形態では、目的のバイオマーカーをコードするヌクレオチドはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含む。
【0133】
一部の実施形態では、本明細書で提供される方法は、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベル（例えば、２種以上、３種以上、４種以上または５種以上のＡＴＴＲバイオマーカーの）レベルを検出して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルは、評価されるＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルは、例えば本明細書に記載のように検出されるＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを含む。
【0134】
サンプル
一部の実施形態では、本明細書に開示されるサンプルは生体サンプルである。一部の実施形態では、生体サンプルは、例えば対象の動脈または静脈から採血した血液サンプルである。血液サンプルは、全血サンプル、血漿サンプルまたは血清サンプルであり得る。一部の実施形態では、生体サンプルは心臓組織を含む。
一部の実施形態では、本明細書に開示されるサンプルは生体サンプルである。一部の実施形態では、生体サンプルは、例えば対象の動脈または静脈から採血した血液サンプルである。血液サンプルは、全血サンプル、血漿サンプルまたは血清サンプルであり得る。一部の実施形態では、生体サンプルは心臓組織を含む。
【0135】
一部の実施形態では、サンプルは対象から得られる。一部の実施形態では、サンプルを得た対象はＴＴＲ－ＣＭについて評価されている。一部の実施形態では、サンプルを得た対象は、アミロイドトランスチレチン心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）を罹患しているか、またはこれを発生する危険性がある。
【0136】
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、対象から生体サンプルを得る工程を含む。一部の実施形態では、対象から生体サンプルを得る工程は採血を含む。一部の実施形態では、対象から生体サンプルを得る工程は生検を行う工程を含む。
【0137】
本明細書に開示される方法の一部の実施形態では、サンプルは、例えば医療関係者によって提供される。
【0138】
対象
一部の実施形態では、本明細書に開示される対象は哺乳動物である。一部の実施形態では、哺乳動物はヒトである。
一部の実施形態では、本明細書に開示される対象は哺乳動物である。一部の実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【0139】
一部の実施形態では、本明細書に開示される対象は生物学的雄である。一部の実施形態では、本明細書に開示される対象は生物学的雌である。
【0140】
一部の実施形態では、本明細書に開示される対象は過体重である。一部の実施形態では、対象は２５以上の肥満指数（ＢＭＩ）を有する。一部の実施形態では、対象は３０以上の肥満指数（ＢＭＩ）を有する。
【0141】
一部の実施形態では、対象は少なくとも５０歳である。一部の実施形態では、対象は少なくとも５５歳である。一部の実施形態では、対象は少なくとも６０歳である。一部の実施形態では、対象は少なくとも６５歳である。
【0142】
閾値を利用する方法
本明細書に開示されるいくつかの方法では、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを閾値と比較することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルとそれぞれの閾値との比較を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルと参照閾値との比較を含む。
本明細書に開示されるいくつかの方法では、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを閾値と比較することができる。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルとそれぞれの閾値との比較を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルと参照閾値との比較を含む。
【0143】
参照閾値は、心臓の健康が良好であることが既知であるかもしくは独立に検証された対象からの、またはＴＴＲ－ＣＭを有する対象の場合のように、心臓の健康が不良であることが既知であるかもしくは独立に検証された対象からの閾値であってもよい。交互に、または組合せで、対象のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルは、共通の既知の状態（例えば、健康、ＴＴＲ－ＣＭと診断されていない、またはＴＴＲ－ＣＭと診断されている）の複数の対象から決定された参照閾値と比較される。一部の実施形態では、参照閾値は、複数の対象からのＡＴＴＲバイオマーカーの既知のレベルの平均であるか、または代わりに、参照対象で観察されたＡＴＴＲバイオマーカーのレベルの範囲によって定義された範囲である。
【0144】
より複雑な評価アプローチでは、対象のＡＴＴＲバイオマーカーレベルは、共通の状態（例えば、健康、ＴＴＲ－ＣＭと診断されていない、またはＴＴＲ－ＣＭと診断されている）のより多数の対象、例えば、少なくとも１０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも５００、少なくとも１０００またはそれ以上の対象から構築された参照ＡＴＴＲバイオマーカーレベルと比較される。多くの場合、参照対象は、（１）健康である／ＴＴＲ－ＣＭと診断されていないことと（２）ＴＴＲ－ＣＭと診断されていることとの間で状態が均等に分布している。ある場合には、評価は、対象のＡＴＴＲバイオマーカーレベルと既知の状態の複数のプロファイルとの反復または同時比較を含む。
【0145】
複数の既知の参照ＡＴＴＲバイオマーカープロファイル（例えば、参照サンプルの１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーの検出レベル）は、対象のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルと参照ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルとの間の単一比較が、共通の既知の健康状態（例えば、健康、ＴＴＲ－ＣＭと診断されていない、またはＴＴＲ－ＣＭと診断されている）の多数の対象、例えば、少なくとも１０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも５００、少なくとも１０００またはそれ以上の個体から情報を統合するまたは集合させる結果を提供するように、コンピューター計算評価アルゴリズム、例えば、機械学習モデルを訓練するのに使用することもできる。そのような参照ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルの生成によって、ＴＴＲ－ＣＭに関する対象の危険性のより速い評価、またはより低いコンピューター計算能力を使用した評価が容易になり得る。
【0146】
参照ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルは、当業者に公知のいくつかのコンピューター計算アプローチのうちのいずれかによって、複数の参照ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルから生成することができる。機械学習モデルは、例えば、任意の数の統計学的プログラミング言語、例えば、Ｒ、スクリプト言語、例えばＰｙｔｈｏｎ、および関連する機械学習パッケージ、データマイニングソフトウェア、例えば、ＷｅｋａまたはＪａｖａ、Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａ、ＭａｔｌａｂまたはＳＡＳを使用して、容易に構築される。
【0147】
対象のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルは、上記のように、またはそうでなければ当業者によって生成された参照ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルと比較することができ出力評価が生成される。いくつかの出力評価は、本明細書の本開示と矛盾しない。出力評価は、単一の評価を含み、多くの場合、感度、特異性または感度および特異性パラメーターによって絞り込まれ、健康状態評価（例えば、対象がＴＴＲ－ＣＭを有する確率、対象はＴＴＲ－ＣＭの危険性がない、対象はＴＴＲ－ＣＭの危険性がある、対象はＴＴＲ－ＣＭを有する）を示す。交互に、または組合せで、対象の人口統計学的要因（例えば、年齢、体重、生物学的性、民族性、ＢＭＩ、病歴、危険因子、家族歴および地理的位置の１つもしくはそれ以上）ならびに／または対象の画像ベースのバイオマーカー（例えば、左心室隔壁厚および／もしくは駆出率）などのさらなるパラメーターが提供される。
【0148】
より具体的には、一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、検出される１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）のうちの少なくとも１種のレベルが閾値を上回る場合に、対象をアミロイドトランスチレチン心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）と診断する工程をさらに含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、検出される１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）のうちの少なくとも１種のレベルが閾値よりも少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８または少なくとも１．９倍大きい場合に、対象をアミロイドトランスチレチン心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）と診断する工程をさらに含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、検出される１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）のそれぞれのレベルが閾値を上回る場合に、対象をアミロイドトランスチレチン心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）と診断する工程をさらに含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、検出される１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）のそれぞれのレベルが閾値よりも少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８または少なくとも１．９倍大きい場合に、対象をアミロイドトランスチレチン心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）と診断する工程をさらに含む。
【0149】
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、少なくとも１種のまたは１種もしくはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルが閾値を上回る場合に、対象を１つまたはそれ以上の心筋症試験に推奨する工程をさらに含む。いくつかのそのような方法では、検出される１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのうちの少なくとも１種のレベルが閾値よりも少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８または少なくとも１．９倍大きい場合に、対象は１つまたはそれ以上の心筋症試験に推奨される。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルが閾値を上回る場合に、対象を１つまたはそれ以上の心筋症試験に推奨する工程をさらに含む。いくつかのそのような方法では、検出される１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルが閾値よりも少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８または少なくとも１．９倍大きい場合に、対象は１つまたはそれ以上の心筋症試験に推奨される。
【0150】
上述したように、一部の実施形態では、サンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＡＴＴＲバイオマーカータンパク質）を検出する方法は、ＡＴＴＲバイオマーカーに対する１種またはそれ以上の抗体薬とサンプルを接触させる工程を含む。一部の実施形態では、そのような方法は、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットとサンプルを接触させる工程も含む。一部の実施形態では、抗体薬は、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットで標識されている。一部の実施形態では、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットは１種またはそれ以上のアクリジニウムエステル分子を含む。
【0151】
アクリジニウムエステル（ＡＥ）分子は、タンパク質および核酸を標識するために使用することができる。アクリジニウム標識タンパク質は、イムノアッセイで検出に使用することができる。アルカリ性Ｈ２Ｏ２（過酸化水素）にＡＥを曝露すると、化学発光が発生する。光は、特定のＡＥバリアントに応じて、４３０～４８０ｎｍの範囲の最大波長で発光する。そのような光は、例えば高効率光電子増倍管によって、検出することができる。
【0152】
一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーとＡＴＴＲバイオマーカーに対する１種またはそれ以上の抗体薬との間の結合を検出する工程は、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットに対する吸光度値または発光値を決定する工程を含む。例えば、吸光度値は結合のレベルを示す（例えば、吸光度が高いほどより多くの結合を示す）。一部の実施形態では、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットに対する吸光度値または発光値は閾値を上回る。一部の実施形態では、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットに対する吸光度値または発光値は、閾値よりも少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８または少なくとも１．９倍大きい。一部の実施形態では、閾値は、２種以上の対照サンプルを標識する１種またはそれ以上の検出薬の第２のセットに対して決定される吸光度値または発光値の平均である。一部のそのような実施形態では、１種またはそれ以上の検出薬の第２のセットは、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットと同様であるかまたは同じである。
【0153】
一態様では、本開示は、対象において１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）を検出する方法であって、上記の生物学的マーカーを検出する方法に従って、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）が対象から得られたサンプル中に存在するかどうかを検出する方法を提供する。一部の実施形態では、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーを検出する方法は、ＡＴＴＲバイオマーカーと１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー抗体薬との間の結合を検出する工程を含む。一部の実施形態では、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーが対象から得られたサンプル中に存在するかどうかを検出する工程は、対象から得られたサンプル中に存在する１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程を含む。一部の実施形態では、検出されるＡＴＴＲバイオマーカーのレベルは、それぞれのＡＴＴＲバイオマーカーについて閾値を上回る。一部の実施形態では、検出されるＡＴＴＲバイオマーカーのレベルは、閾値よりも少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８または少なくとも１．９倍大きい。
【0154】
一部の実施形態では、本開示は、対象から得られたサンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）を検出する方法を提供する。アミロイドトランスチレチン心筋症に対する生物学的マーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含むことができる。一部の実施形態では、上記の方法で使用される対照サンプルは、ＡＴＴＲアミロイドーシスおよび／またはＴＴＲ－ＣＭを有さない１またはそれ以上の対象から得られたサンプルを含む。
【0155】
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、少なくとも１種のまたは検出される１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）のレベルが閾値を上回る場合に、対象をアミロイドトランスチレチン心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）と診断する工程をさらに含む。一部の実施形態では、方法は、少なくとも１種のまたは１種もしくはそれ以上の検出されるＡＴＴＲバイオマーカーのレベルが、閾値よりも少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８または少なくとも１．９倍大きい場合に、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する工程を含む。
【0156】
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットに対する吸光度値または発光値が閾値を上回る場合に、対象をアミロイドトランスチレチン心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）と診断する工程をさらに含む。一部の実施形態では、方法は、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットに対する吸光度値または発光値が、閾値よりも少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８または少なくとも１．９倍大きい場合に、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する工程を含む。一部の実施形態では、閾値は、２種以上の対照サンプルを標識する１種またはそれ以上の検出薬の第２のセットに対して決定される吸光度値または発光値の平均である。一部のそのような実施形態では、１種またはそれ以上の検出薬の第２のセットは、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットと同様であるかまたは同じである。
【0157】
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、少なくとも１種のまたは１種もしくはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルが閾値を上回る場合に、対象を１つまたはそれ以上の心筋症試験に推奨する工程をさらに含む。いくつかのそのような方法では、少なくとも１種のまたは１種もしくはそれ以上の検出されるＡＴＴＲバイオマーカーのレベルが、閾値よりも少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８または少なくとも１．９倍大きい場合に、対象は１つまたはそれ以上の心筋症試験に推奨される。
【0158】
一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットに対する吸光度値または発光値が閾値を上回る場合に、対象を１つまたはそれ以上の心筋症試験に推奨する工程をさらに含む。いくつかのそのような方法では、１種またはそれ以上の検出薬の第１のセットに対する吸光度値または発光値が閾値よりも少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８または少なくとも１．９倍大きい場合に、対象は１つまたはそれ以上の心筋症試験に推奨される。
【0159】
本開示の方法に従って使用することができる心筋症試験は、心エコー図または先進画像方法を含む。一部の実施形態では、先進画像方法は、心臓磁気共鳴画像（ＣＭＲ）またはシンチグラフィー（例えば、９９ｍ Ｔｃ－ピロリン酸などの放射性同位体コンジュゲートを使用する、および／または単一光子放射型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を使用する）を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、少なくとも１種のまたは１種もしくはそれ以上の検出されるＡＴＴＲバイオマーカーのレベルが閾値を上回り、かつ対象が心筋症試験の１つまたはそれ以上において心筋症について試験が陽性である場合に、対象を心臓生検に推奨する工程をさらに含む。一部のそのような実施形態では、生検組織は、免疫化学的染色によって心筋症について試験される。例えば、免疫化学的染色は、心臓組織におけるカッパまたはラムダ軽鎖アミロイド沈着物に対する１種またはそれ以上の抗体薬、および／またはトランスチレチン沈着物に対する１種またはそれ以上の抗体薬の使用を含む。免疫化学的染色によって心臓組織中にトランスチレチン沈着物の存在が示される場合に、対象をアミロイドトランスチレチン心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）と診断することができる。
【0160】
上記実施形態のいずれかでは、閾値は、２種以上の対照サンプルについて検出された値の平均であり得る。一部のそのような実施形態では、２種以上の対照サンプルについて検出される値は、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーに対する対照レベルを表す。一部の実施形態では、対照サンプルは、組換えＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）を含む。一部の実施形態では、２種以上の対照サンプルは、それぞれ、ＴＴＲ－ＣＭを有さない対象から得られたサンプルである。一部の実施形態では、閾値は、標準的な表で報告される値である。
【0161】
ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを利用する方法
本明細書に記載の方法のいずれかの実施によって提供されるアルゴリズムベースのアッセイおよび関連情報は、対象に対する最適な治療および意思決定を容易にすることができる。例えば、本明細書に記載の方法によって、医師または世話人が、ＴＴＲ－ＣＭを有する見込みが低く、したがって、治療を必要としないであろう、さらなる心臓試験を必要としないであろう、もしくはＴＴＲ－ＣＭについてモニタリングを増やすことを必要としないであろう患者、またはＴＴＲ－ＣＭを有する見込みが高く、治療を必要とするであろう、さらなる心臓試験を必要とするであろう、もしくはＴＴＲ－ＣＭについてモニタリングを増やすことを必要とする患者を特定することを可能になり得る。
本明細書に記載の方法のいずれかの実施によって提供されるアルゴリズムベースのアッセイおよび関連情報は、対象に対する最適な治療および意思決定を容易にすることができる。例えば、本明細書に記載の方法によって、医師または世話人が、ＴＴＲ－ＣＭを有する見込みが低く、したがって、治療を必要としないであろう、さらなる心臓試験を必要としないであろう、もしくはＴＴＲ－ＣＭについてモニタリングを増やすことを必要としないであろう患者、またはＴＴＲ－ＣＭを有する見込みが高く、治療を必要とするであろう、さらなる心臓試験を必要とするであろう、もしくはＴＴＲ－ＣＭについてモニタリングを増やすことを必要とする患者を特定することを可能になり得る。
【0162】
ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアは、ある場合には、特定のアルゴリズムの適用によって決定することができる。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアは定量的である。本明細書に開示される方法においてＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算するために使用されるアルゴリズムは、ＡＴＴＲバイオマーカーまたはＡＴＴＲバイオマーカー群の発現レベルの値をグループ化することができる。さらに、ＡＴＴＲバイオマーカーの特定の群を形成することにより、定量的スコアに対するＡＴＴＲバイオマーカーまたはＡＴＴＲバイオマーカーサブセット（例えば分類子）の様々な発現レベル寄与の数学的重み付けを容易にすることができる。
【0163】
例示的ＡＴＴＲバイオマーカーおよび対応するアミノ酸配列は表１に列挙される。ＡＴＴＲバイオマーカーの例示的組合せは表２～５に列挙される。
【0164】
本明細書に記載の方法ならびに本明細書で提供されるキットおよびシステムは、サンプルを得た対象がＴＴＲ－ＣＭの危険性があるか、もしくはＴＴＲ－ＣＭを罹患しているかどうかを予測する、１つもしくはそれ以上の心筋症試験のためにサンプルを得た対象を選択する、および／または１回もしくはそれ以上の用量のＴＴＲ安定化剤を受けるためにサンプルを得た対象を選択するために、アルゴリズムベースの診断アッセイを利用することができる。
【0165】
１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルならびに場合により１つもしくはそれ以上の人口統計学的要因（例えば、年齢、体重、生物学的性、民族性、ＢＭＩ、病歴、危険因子、家族歴および地理的位置の１つもしくはそれ以上）ならびに／または画像ベースのバイオマーカー（例えば、左心室隔壁厚および／もしくは駆出率）を単独で使用して、または機能的サブセット中に配置して、サンプルを得た対象が、ＴＴＲ－ＣＭの危険性があるか、もしくはＴＴＲ－ＣＭを罹患しているかどうかを予測する、１つもしくはそれ以上の心筋症試験のためにサンプルを得た対象を選択する、および／または１回もしくはそれ以上の用量のＴＴＲ安定化剤を受けるためにサンプルを得た対象を選択するために使用されるＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算することができる。
【0166】
本明細書に開示される方法は、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程は、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルにアルゴリズムを適用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含む。一部の実施形態では、アルゴリズムは、決定木法、ニューラルブースト法、ブートストラップ森法、ブーストツリー法、Ｋ近傍法、一般化回帰変数増加法、一般化回帰枝刈り変数増加法、フィットステップワイズ法、一般化回帰ラッソ法、一般化回帰エラスティックネット法、一般化回帰リッジ法、名義ロジスティック法、サポートベクターマシン法、判別法、ナイーブベイズ法またはこれらの組合せであるか、またはこれらに由来する。一部の実施形態では、アルゴリズムは、決定木法、ニューラルブースト法、ブートストラップ森法、ブーストツリー法、一般化回帰ラッソ法、一般化回帰エラスティックネット法、一般化回帰リッジ法、名義ロジスティック法、サポートベクターマシン法、判別法もしくはこれらの組合せであるか、またはこれらに由来する。一部の実施形態では、アルゴリズムは、決定木法、ニューラルブースト法、ブートストラップ森法、ブーストツリー法、サポートベクターマシン法もしくはこれらの組合せであるか、またはこれらに由来する。
【0167】
さらなるアルゴリズムを本明細書に提供される方法で使用することができ、上記で提供されるアルゴリズムは、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを生成するために使用することができるアルゴリズムのタイプの単に例示である。例示的アルゴリズムは、例えば、Ｄｕｄａ、２００１、Ｐａｔｔｅｒｎ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．３９６～４０８頁および４１１～４１２頁；ならびにＨａｓｔｉｅら、２００１、Ｔｈｅ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｏｆ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｌｅａｒｎｉｎｇ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、９章に記載されており、これらのそれぞれを参照によって本明細書に組み入れる。さらに、前述のように、アルゴリズムの組合せを本明細書に提供される方法で使用することができる。例えば、ブーストツリー法は、決定木法とブースティング法の組合せであり得る。さらなる組合せが可能であり、本明細書に提供される方法における使用が企図される。本明細書に提供される方法で使用することができる例示的アルゴリズムは以下に記載される。
【0168】
決定木
ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルからＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算するために使用することができる１つの方法体系は決定木である。決定木は、訓練集団および特定のデータ分析アルゴリズムを使用して構築することができる。決定木は、Ｄｕｄａ、２００１、Ｐａｔｔｅｒｎ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．３９５～３９６頁に一般的に記載されており、参照によってこれを本明細書に組み入れる。ツリーベースの方法は、特徴空間（ｆｅａｔｕｒｅ ｓｐａｃｅ）を一連の矩形に分割し、次いで、それぞれの矩形にモデル（定数など）をあてはめる。
ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルからＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算するために使用することができる１つの方法体系は決定木である。決定木は、訓練集団および特定のデータ分析アルゴリズムを使用して構築することができる。決定木は、Ｄｕｄａ、２００１、Ｐａｔｔｅｒｎ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．３９５～３９６頁に一般的に記載されており、参照によってこれを本明細書に組み入れる。ツリーベースの方法は、特徴空間（ｆｅａｔｕｒｅ ｓｐａｃｅ）を一連の矩形に分割し、次いで、それぞれの矩形にモデル（定数など）をあてはめる。
【0169】
訓練集団データは、訓練セット集団全体にわたってＡＴＴＲバイオマーカープロファイル（例えば、サンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを含む）を含むことができる。決定木を構築するために使用することができる１つの特定のアルゴリズムは、分類および回帰木（ＣＡＲＴ）である。他の特定の決定木アルゴリズムとしては、限定されないが、ＩＤ３、Ｃ４．５、ＭＡＲＴおよびランダムフォレストが挙げられる。ＣＡＲＴ、ＩＤ３およびＣ４．５は、Ｄｕｄａ、２００１、Ｐａｔｔｅｒｎ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．３９６～４０８頁および４１１～４１２頁に記載されているおり、参照によってこれを本明細書に組み入れる。ＣＡＲＴ、ＭＡＲＴおよびＣ４．５は、Ｈａｓｔｉｅら、２００１、Ｔｈｅ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｏｆ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｌｅａｒｎｉｎｇ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、９章に記載されており、その内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。ランダムフォレストは、Ｂｒｅｉｍａｎ、１９９９、「Ｒａｎｄｏｍ Ｆｏｒｅｓｔｓ－Ｒａｎｄｏｍ Ｆｅａｔｕｒｅｓ」、Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔ ５６７、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ、Ｕ．Ｃ．Ｂｅｒｋｅｌｅｙ、１９９９年９月に記載されており、その内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
【0170】
決定木の目的は、実例（ｒｅａｌ－ｗｏｒｌｄ ｅｘａｍｐｌｅ）データから分類子（ツリー）を誘導することである。このツリーを使用して、決定木を導出するために使用されなかった未知の例（ｕｎｓｅｅｎ ｅｘａｍｐｌｅｓ）を分類することができる。したがって、決定木は訓練データから導出することができる。例示的訓練データは、複数の対象（例えば、訓練集団）に対するデータを含む。ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルをそれぞれの各対象ごとに提供および／または使用することができる。一部の実施形態では、訓練データは、訓練集団をプロファイルする（ｐｒｏｌｅｓ）ＡＴＴＲバイオマーカーを含む。
【0171】
以下のアルゴリズムは、例示的な決定木導出を説明する：
ツリー（例、クラス、特徴（ｆｅａｔｕｒｅ））
ルートノードを作成する
すべての例が同じクラス値を有する場合、ルートにこのラベルを与える
さもなければ、特徴が空である場合、最も一般的な値に従ってルートをラベルする
さもなければ、以下を開始する
各特徴について情報利得を計算する
情報利得が最高である特徴Ａを選択し、これをルート特徴にする
この特徴の可能な各値、ｖについて
Ａ＝ｖに対応する新しい枝をルートの下に加える
例（ｖ）をＡ＝ｖをともなう例とする
例（ｖ）が空である場合、新しい枝を、例の中の最も一般的な値でラベルされたリーフノードにする
さもなければ、新しい枝を下記によって作成されたツリーとする
ツリー（例（ｖ）、クラス、特徴－｛Ａ｝）
終わり
ツリー（例、クラス、特徴（ｆｅａｔｕｒｅ））
ルートノードを作成する
すべての例が同じクラス値を有する場合、ルートにこのラベルを与える
さもなければ、特徴が空である場合、最も一般的な値に従ってルートをラベルする
さもなければ、以下を開始する
各特徴について情報利得を計算する
情報利得が最高である特徴Ａを選択し、これをルート特徴にする
この特徴の可能な各値、ｖについて
Ａ＝ｖに対応する新しい枝をルートの下に加える
例（ｖ）をＡ＝ｖをともなう例とする
例（ｖ）が空である場合、新しい枝を、例の中の最も一般的な値でラベルされたリーフノードにする
さもなければ、新しい枝を下記によって作成されたツリーとする
ツリー（例（ｖ）、クラス、特徴－｛Ａ｝）
終わり
【0172】
一変量決定木では、各分裂は、対応するバイオマーカーに対する特徴量（ｆｅａｔｕｒｅ ｖａｌｕｅ）（例えば、レベル）に基づく。さらに、多変量決定木を本明細書に記載の方法で実行することができる。多変量決定木は、Ｄｕｄａ、２００１、Ｐａｔｔｅｒｎ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、４０８～４０９頁に記載されており、参照によってこれを本明細書に組み入れる。そのような多変量決定木では、決定のいくつかまたはすべては、ＡＴＴＲプロファイルの複数のＡＴＴＲバイオマーカーに対する特徴量（例えば、レベル）の線形結合を含む。そのような線形結合は、分類における勾配降下などの公知の技法を使用して、または二乗和誤差（ｓｕｍ－ｓｑｕａｒｅｄ－ｅｒｒｏｒ）判定基準の使用によって、訓練を受けることができる。
【0173】
説明的例として、以下の式が使用される：
０．０５（Ｘ１）＋０．２（Ｘ２）＜５００
０．０５（Ｘ１）＋０．２（Ｘ２）＜５００
【0174】
この例では、Ｘ１およびＸ２は、２種の異なるＡＴＴＲバイオマーカーに対する２つの異なる特徴（例えば、レベル）を指す。本方法体系を適用するために、特徴Ｘ１およびＸ２（例えば、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルの一部として）の値が、未分類の対象から得られた測定値から得られる。次いで、これらの値が式に挿入される。５００未満の値がコンピューターで計算されれば、次いで、決定木の第１の枝が選ばれる。そうでなければ、決定木の第２の枝が選ばれる。
【0175】
弱い決定則を改善するために、バギング、ブースティングおよびアディティブツリーを決定方法体系と組み合わせることができる。これらの技法は上記の決定木などの決定木のために設計され、該決定木に通常適用される。さらに、そのような技法は、線形判別分析などの他のタイプのデータ分析アルゴリズムを使用して開発された決定則にも有用であり得る。
【0176】
バギングでは、訓練セットがサンプリングされ、ランダム独立ブートストラップ複製物を生成し、これらのそれぞれに基づいて決定則を構築し、最終的な決定則において単純な多数決によってこれらを集合させる。例えば、その内容全体を参照によって本明細書に組み入れる、Ｂｒｅｉｍａｎ、１９９６、Ｍａｃｈｉｎｅ Ｌｅａｒｎｉｎｇ ２４、１２３～１４０；およびＥｆｒｏｎ ＆ Ｔｉｂｓｈｉｒａｎｉ、Ａｎ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｂｏｏｓｔｒａｐ、Ｃｈａｐｍａｎ ＆ Ｈａｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９３を参照されたい。
【0177】
ブースティングでは、以前の分類結果に依存する訓練セットの重み付けされたバージョンで決定則が構築される。最初に、考慮中のすべての特徴は等しい重みを有し、第１の決定則がこのデータセットで構築される。次いで、重みは、決定則の性能に従って変えられる。誤って分類された特徴にはより大きな重みが与えられ、再度重み付けされた訓練セットで次の決定則がブーストされる。このようにして、一連の訓練セットおよび決定則が得られ、次いで、これは、最終的な決定則において、単純な多数決または重み付けされた多数決により組み合わされる。その内容全体を参照によって本明細書に組み入れる、例えば、「Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａ ｎｅｗ ｂｏｏｓｔｉｎｇ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ」、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ １３ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｍａｃｈｉｎｅ Ｌｅａｒｎｉｎｇ、１９９６、１４８～１５６を参照されたい。
【0178】
本明細書に開示される方法、システム、キットおよび組成物で使用される測定データは、場合により正規化される。正規化は、例えば、アッセイされた遺伝子またはタンパク質レベルの量の違い、および使用されるテンプレートの品質の変動性を補正して、遺伝子またはタンパク質の発現の処理および検出に関与する系統的変動測定の望まれない出所を除去するためのプロセスを指す。系統的変動の他の出所は、研究室での処理条件に起因し得る。
【0179】
場合によっては、正規化方法は、研究室での処理条件の正規化のために使用される。本開示の方法で使用することができる、研究室での処理の正規化の非限定例としては、以下が挙げられるが、これに限定されない：データ生成プロセス中に使用される器具、試薬および機器の間の、ならびに／またはデータ収集におけるデータおよび時間または時間経過の間の系統的な違いを考慮すること。
【0180】
アッセイは、関連する条件下での発現レベルに有意差がない、すなわち、その特定のサンプルタイプにおいて安定した一定の発現レベルを有することが知られているある特定の正規化標準遺伝子またはタンパク質の発現を組み入れることによって、正規化を提供することができる。本開示で使用することができる適切な正規化遺伝子およびタンパク質としては、ハウスキーピング遺伝子が挙げられる（例えば、Ｅ．Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇら、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １９（７）：３６２～３６５（２００３）を参照されたい）。いくつかの適用では、参照遺伝子とも称される正規化バイオマーカー（遺伝子およびタンパク質）は、ＴＴＲ－ＣＭを有さない対照の対象と比較して、ＴＴＲ－ＣＭを有する対象において有意差のある発現レベルを示さないことが既知である。いくつかの適用では、データ正規化で使用するために使用することができ、データ正規化で使用するための既知の特性を有する実体に相当する、安定同位体で標識された標準を加えることは、有用であり得る。
【0181】
他の適用では、器具および日々の測定変動性を考慮するために、標準の固定化サンプルを分析バッチごとに測定することができる。
【0182】
識別バイオマーカーおよび場合により対象特性をサブ選択するための、ならびに分類モデルを構築するための機械学習アルゴリズムが、臨床転帰スコアを決定するために、本明細書のいくつかの方法およびシステムで使用される。そのようなアルゴリズムの例は上に記載される。これらのアルゴリズムは、重要なバイオマーカー特徴の選択に役立ち、基礎となる測定値を、例えば、臨床転帰、疾患の危険性、疾患の見込み、疾患の有無、治療応答および／または疾患状態の分類に関するスコアまたは確率に変換することができる。
【0183】
ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアは、対象特異的ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルと参照ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを比較することによって決定することができる。参照ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルは、既知の診断を代表し得る。例えば、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルは、ＴＴＲ－ＣＭの陽性診断を代表し得る。別の例として、参照ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルは、ＴＴＲ－ＣＭの陰性診断を代表し得る。ある場合には、スコアの増加は、以下の１つまたはそれ以上の見込みが高いことを示す：不良な臨床転帰、良好な臨床転帰、疾患の危険性が高いこと、疾患の危険性が低いこと、完全奏効、部分奏効、安定している疾患、非奏効および疾患管理のための治療の推奨。ある場合には、定量的スコアの減少は、以下の１つまたはそれ以上の見込みが高いことを示す：不良な臨床転帰、良好な臨床転帰、疾患の危険性が高いこと、疾患の危険性が低いこと、完全奏効、部分奏効、安定している疾患、非奏効および疾患管理のための治療の推奨。
【0184】
参照ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルと類似した、対照からのＡＴＴＲバイオマーカープロファイルは、以下の１つまたはそれ以上の見込みが高いことを示すことが多い：不良な臨床転帰、良好な臨床転帰、疾患の危険性が高いこと、疾患の危険性が低いこと、完全奏効、部分奏効、安定している疾患、非奏効および疾患管理のための治療の推奨。いくつかの適用では、対象と参照との間で類似していないＡＴＴＲバイオマーカープロファイルは、以下の１つまたはそれ以上を示す：不良な臨床転帰、良好な臨床転帰、疾患の危険性が高いこと、疾患の危険性が低いこと、完全奏効、部分奏効、安定している疾患、非奏効および疾患管理のための治療の推奨の見込みが高いこと。
【0185】
対象、健康管理専門家または他の専門家に結果を提供することができる。結果は、場合により、例えば１つまたはそれ以上の心筋症試験を使用して、ＴＴＲ－ＣＭの危険性を確認するかまたは独立に評価するための推奨などの健康に関する推奨をともなう。
【0186】
推奨は、治療レジメンに関連する情報、例えば、治療レジメンを示す情報を場合により含む。レジメンの有効性は、ある場合には、初期の時点で、場合により治療より前に、および後期の第２の時点で、場合により治療例の後に、対象のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルの比較によって、評価することができる。ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルは、治療レジメンが効能を示し、その結果、これを続ける、増加させる、代替レジメンと置き換える、またはＴＴＲ－ＣＭもしくは関連する徴候および症状に対処することに成功したので中断するべきであるかどうかを決定するために、互いに比較する、それぞれ参照と比較する、またはそうでなければ評価することができる。いくつかの評価は、治療より前の少なくとも１つの時点および治療後の少なくとも１つの時点などの複数の時点の対象のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルの比較に依拠する。ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルは、互いに少なくとも１つの参照バイオマーカーパネルレベルと比較することができ、または互いにかつ少なくとも１つの参照バイオマーカーパネルレベルと比較することができる。
【0187】
アミロイドトランスチレチン心筋症の治療
ＡＴＴＲアミロイドーシスに対する治療的アプローチは、ＴＴＲの生成を低減させること、ＴＴＲの凝集を阻害するまたは低減させること、ＴＴＲ細線維またはアミロイド形成を阻害するまたは低減させること、ＴＴＲ沈着物を低減させるまたは取り除くこと、およびＴＴＲの無毒性コンフォメーション（例えば、四量体形態）を安定化することを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、対象から得られたサンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）のそれぞれのレベルを検出する工程、および有効量のトランスチレチン（ＴＴＲ）安定化剤を診断された対象に投与する工程をさらに含む。一部の実施形態では、ＴＴＲ安定化剤はタファミジスである。
ＡＴＴＲアミロイドーシスに対する治療的アプローチは、ＴＴＲの生成を低減させること、ＴＴＲの凝集を阻害するまたは低減させること、ＴＴＲ細線維またはアミロイド形成を阻害するまたは低減させること、ＴＴＲ沈着物を低減させるまたは取り除くこと、およびＴＴＲの無毒性コンフォメーション（例えば、四量体形態）を安定化することを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示される方法は、対象から得られたサンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）のそれぞれのレベルを検出する工程、および有効量のトランスチレチン（ＴＴＲ）安定化剤を診断された対象に投与する工程をさらに含む。一部の実施形態では、ＴＴＲ安定化剤はタファミジスである。
【0188】
一部の実施形態では、本開示は、ＴＴＲ安定化剤による治療のために患者を選択する方法であって、対象から得られたサンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）のそれぞれのレベルを検出する工程を含む、方法を含む。
【0189】
一部の実施形態では、本開示は、ＴＴＲ－ＣＭの危険性があるか、またはＴＴＲ－ＣＭを罹患している対象においてＴＴＲ－ＣＭを治療する方法であって、該方法は、治療有効量のＴＴＲ安定化剤を対象に投与する工程を含み、対象は、ＡＴＴＲバイオマーカーまたはＡＴＴＲバイオマーカー遺伝子産物の、閾値を上回るレベルを発現する、方法を含む。一部の実施形態では、ＴＴＲ－ＣＭの危険性があるか、またはＴＴＲ－ＣＭを罹患している対象においてＴＴＲ－ＣＭを治療する方法は、治療有効量のＴＴＲ安定化剤を対象に投与する工程を含み、対象は、１種より多いＡＴＴＲバイオマーカーまたはＡＴＴＲバイオマーカー遺伝子産物の、閾値を上回るレベルを発現する。一部の実施形態では、方法は、対象が、ＡＴＴＲバイオマーカーまたはＡＴＴＲバイオマーカー遺伝子産物の、閾値を上回るレベルを発現することを決定する工程をさらに含む。一部の実施形態では、投与より前に、対象は、ＡＴＴＲバイオマーカーまたはＡＴＴＲバイオマーカー遺伝子産物の、閾値を上回るレベルを発現することが決定されている。
【0190】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるバイオマーカーは、ＡＴＴＲアミロイドーシスおよびＴＴＲ－ＣＭの有効な療法について患者をスクリーニングために使用することができる。一部の実施形態では、ＴＴＲ－ＣＭの療法はＴＴＲ四量体の安定剤である。ＴＴＲ安定剤の例としては、タファミジスおよびジフルニサルが挙げられる。
【0191】
療法の別のアプローチは、全ＴＴＲ生成を低減させることである。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）ベースの療法およびＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、全ＴＴＲを低下させるための治療的アプローチである。ＩＳＩＳ－ＴＴＲＲｘは、ＴＴＲ転写産物の野生型と変異型の両方の破壊を引き起こす、ＡＳＯベースの療法である。他の可能な治療薬としては、ＡＬＮ－ＴＴＲ０２（パチシラン）、ＡＬＮ－ＴＴＲｓｃ（レブシラン）、ドキシサイクリン、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、ドキシサイクリンとＴＵＤＣＡとの組合せ、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、クルクミンまたはレスベラトロールが挙げられる。例えば、ＴＴＲ凝集および細線維形成の抗体媒介性阻害；ＴＴＲの無毒性コンフォメーション（例えば、四量体形態）の抗体媒介性安定化；または凝集ＴＴＲ、オリゴマーＴＴＲもしくはモノマーＴＴＲの抗体媒介性クリアランスによって、ＴＴＲを標的化する抗体も療法として使用することができる。さらに、例えばＴＴＲを標的にするために、ＴＴＲに対する抗体を治療薬に結合させるかまたはコンジュゲートさせることができる。
【0192】
キット
１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬および使用（例えば、治療、予防的または診断的使用）のための説明書を含むキットも本開示によって提供される。一部の実施形態では、キットは、ＴＴＲ－ＣＭ（野生型ＡＴＴＲアミロイドーシスによって生じるＴＴＲ－ＣＭを含める）を診断するためのインビトロ診断アッセイに使用される。一部の実施形態では、本開示のキットは、ＴＴＲ安定化剤（例えば、タファミジス）をさらに含む。
１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬および使用（例えば、治療、予防的または診断的使用）のための説明書を含むキットも本開示によって提供される。一部の実施形態では、キットは、ＴＴＲ－ＣＭ（野生型ＡＴＴＲアミロイドーシスによって生じるＴＴＲ－ＣＭを含める）を診断するためのインビトロ診断アッセイに使用される。一部の実施形態では、本開示のキットは、ＴＴＲ安定化剤（例えば、タファミジス）をさらに含む。
【0193】
一部の実施形態では、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗体薬を含む。一部の実施形態では、抗体薬の１種またはそれ以上は検出可能な部分で標識されている。一部の実施形態では、キットは検出薬（例えば、１種またはそれ以上のアクリジニウムエステル分子）をさらに含む。一部の実施形態では、抗体薬の１種またはそれ以上はアクリジニウムエステル分子の１種またはそれ以上で標識されている。一部の実施形態では、キットは、抗ＡＴＴＲバイオマーカー抗体薬の１種またはそれ以上に特異的に結合する１種またはそれ以上の二次抗体薬をさらに含む。
【0194】
一部の実施形態では、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は核酸プローブを含む。一部の実施形態では、各核酸プローブの少なくとも一部は、ＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）をコードするヌクレオチドの１つまたはそれ以上の部分にハイブリダイズする。ＡＴＴＲバイオマーカーをコードするヌクレオチドはＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）であってもよいし、またはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であってもよい。一部の実施形態では、核酸プローブは、１種またはそれ以上の検出薬で標識されている（例えば、検出薬はＡＴＴＲバイオマーカーをコードするヌクレオチドの存在を示す）。
【0195】
一部の実施形態では、キットは１種またはそれ以上の対照サンプルをさらに含む。一部の実施形態では、対照サンプルは、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー標準を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカー標準は組換えＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカー標準は合成ＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）核酸を含む。
【0196】
上記に加えて、キットは他の成分、例えば、溶媒または緩衝液、安定剤もしくは防腐剤、および／または本明細書に記載の状態もしくは障害を治療するための薬剤を含むことができる。代わりに、キット中であるが、抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬と異なる組成物または容器中に他の成分を含めることができる。そのような実施形態では、キットは、抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬と他の成分を混合するための、または他の成分とともに抗ＡＴＴＲバイオマーカーを使用するための説明書を含むことができる。
【0197】
ある特定の実施形態では、本開示に従って使用するためのキットは、参照または対照サンプル、サンプルを処理し、サンプルに対して試験行うための説明書、結果を解釈するための説明書、試験を行うために必要である緩衝液および／または他の試薬を含むことができる。
【0198】
本開示は、ある特定の単一のＡＴＴＲバイオマーカーがＡＴＴＲアミロイドーシスまたはＴＴＲ－ＣＭを検出および／または診断するのに役立ち得るという認識も提供する。本開示は、さらに、ＡＴＴＲバイオマーカーの特定の組合せは、ＡＴＴＲアミロイドーシスまたはＴＴＲ－ＣＭを検出および／または診断するのに特に有用であるという洞察を提供する。したがって、本明細書に記載の方法、組成物およびキットは、ＴＴＲ－ＣＭの危険性を評価する、対象がさらなる心臓試験を受けるべきであるかどうかを評価する、および／またはサンプル、例えば、対象から得られた生体サンプル中のＡＴＴＲバイオマーカーの検出もしくは測定に基づいてＴＴＲ－ＣＭを診断するためのアッセイに使用することができる。
【0199】
本明細書で提供される方法およびキットは、試験の結果を医学的に実施可能なほど信頼できるものにする感度および特異性で、サンプル中のＴＴＲ－ＣＭを検出することができる。対象のＴＴＲ－ＣＭの検出および／または診断のための本明細書に記載の方法およびキットは、７５％を越える、８０％を越える、８５％を越える、９０％を越える、９５％を越える、９６％を越える、９７％を越える、９８％を越える、９９％を越える，または約１００％の感度でＴＴＲ－ＣＭを検出する。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法およびキットは、約７０％～１００％の間、約８０％～１００％の間または約９０～１００％の間の感度でＴＴＲ－ＣＭを検出することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法およびキットは、７０％を越える、７５％を越える、８０％を越える、８５％を越える、９０％を越える、９５％を越える、９６％を越える、９７％を越える、９８％を越える、９９％を越えるまたは約１００％の特異性でＴＴＲ－ＣＭを検出することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法およびキットは、約５０％～１００％の間、約６０％～１００％の間、約７０％～１００％の間、約８０％～１００％の間または約９０～１００％の間の特異性でＴＴＲ－ＣＭを検出することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法およびキットは、５０％以上、６０％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上の感度および特異性でＴＴＲ－ＣＭを検出することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される方法およびキットは、約５０％～１００％の間、約６０％～１００％の間、約７０％～１００％の間、約８０％～１００％の間または約９０～１００％の間の感度および特異性でＴＴＲ－ＣＭを検出することができる。
【0200】
組成物
組成物も本明細書で提供される。一部の実施形態では、組成物は１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーおよび１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬を含む。一部の実施形態では、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含み、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬、抗ＰＫＭ２薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＲＢＰ４薬、抗ＴＩＭＰ２薬、抗ＮｆＬ薬またはこれらの組合せを含む。
組成物も本明細書で提供される。一部の実施形態では、組成物は１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーおよび１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬を含む。一部の実施形態では、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含み、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬、抗ＰＫＭ２薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＲＢＰ４薬、抗ＴＩＭＰ２薬、抗ＮｆＬ薬またはこれらの組合せを含む。
【0201】
一部の実施形態では、組成物は、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上、５種以上など）および抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬の対応する組合せを含む。
【0202】
一部の実施形態では、組成物は２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーおよび２種以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬を含む。一部の実施形態では、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含み、２種以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬、抗ＰＫＭ２薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＲＢＰ４薬、抗ＴＩＭＰ２薬、抗ＮｆＬ薬またはこれらの組合せを含む。
【0203】
一部の実施形態では、組成物は３種以上のＡＴＴＲバイオマーカーおよび３種以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬を含む。一部の実施形態では、３種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、３種以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬、抗ＰＫＭ２薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＲＢＰ４薬、抗ＴＩＭＰ２薬、抗ＮｆＬ薬またはこれらの組合せを含む。
【0204】
一部の実施形態では、組成物は４種以上のＡＴＴＲバイオマーカーおよび４種以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬を含む。一部の実施形態では、４種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、４種以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬、抗ＰＫＭ２薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＲＢＰ４薬、抗ＴＩＭＰ２薬、抗ＮｆＬ薬またはこれらの組合せを含む。
【0205】
一部の実施形態では、組成物は５種以上のＡＴＴＲバイオマーカーおよび５種以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬を含む。一部の実施形態では、５種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、５種以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬、抗ＰＫＭ２薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＲＢＰ４薬、抗ＴＩＭＰ２薬、抗ＮｆＬ薬またはこれらの組合せを含む。
【0206】
一部の実施形態では、組成物はＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）および抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬の対応する組合せを含む。一部の実施形態では、組成物は表２～５のＡＴＴＲバイオマーカーの組合せおよび抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬の対応する組合せを含む。一部の実施形態では、組成物は表２のＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）および抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬の対応する組合せを含む。一部の実施形態では、表３のＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）および抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬の対応する組合せである。一部の実施形態では、表４のＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）および抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬の対応する組合せである。一部の実施形態では、表５のＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）および抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬の対応する組合せである。
【0207】
一部の実施形態では、組成物はＴｎＩおよび抗ＴｎＩ薬を含む。一部の実施形態では、組成物はＴｎＩ、ＰＫＭ１、抗ＴｎＩ薬および抗ＰＫＭ１薬を含む。一部の実施形態では、組成物はＴｎＩ、ＰＫＭ２、抗ＴｎＩ薬および抗ＰＫＭ２薬を含む。一部の実施形態では、組成物はＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬および抗ＰＫＭ２薬を含む。一部の実施形態では、組成物はＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４または両方および抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＲＢＰ４薬または両方を含む。一部の実施形態では、組成物はＴＩＭＰ２、ＮｆＬまたは両方および抗ＴＩＭＰ２薬、抗ＮｆＬ薬または両方を含む。
【0208】
一部の実施形態では、組成物はＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよび抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬を含む。一部の実施形態では、組成物はＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＲＢＰ４またはこれらの組合せおよび抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬、抗ＰＫＭ２薬、抗ＲＢＰ４薬またはこれらの組合せを含む。一部の実施形態では、組成物はＴＩＭＰ２、ＮｆＬまたは両方および抗ＴＩＭＰ２薬、抗ＮｆＬ薬または両方を含む。
【0209】
一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ２薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬および抗ＲＢＰ４薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、抗ＴｎＩ薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬および抗ＲＢＰ４薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ２、ＲＢＰ４、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ２薬および抗ＲＢＰ４薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬および抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＲＢＰ４、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬および抗ＲＢＰ４薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬、抗ＰＫＭ２薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬および抗ＲＢＰ４薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬、抗ＰＫＭ２薬および抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＲＢＰ４、抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬、抗ＰＫＭ２薬および抗ＲＢＰ４薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＴｎＩ、抗ＴｎＩ薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬および抗ＲＢＰ４薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＲＢＰ４、ＳＭＯＣ－２、ＴｎＩ、抗ＴｎＩ薬、抗ＲＢＰ４薬および抗ＳＭＯＣ－２薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＤＣＮ、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＴｎＩ、抗ＴｎＩ薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬および抗ＤＣＮ薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＤＣＮ、ＲＢＰ４、ＴｎＩ、抗ＴｎＩ薬、抗ＲＢＰ４薬および抗ＤＣＮ薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＳＭＯＣ－２、ＴｎＩ、抗ＴｎＩ薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬および抗ＳＭＯＣ－２薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＴＩＭＰ２、ＴｎＩ、抗ＴｎＩ薬、抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬および抗ＴＩＭＰ２薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＴｎＩ、抗ＴｎＩ薬および抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＤＣＮ、ＴｎＩ、抗ＴｎＩ薬および抗ＤＣＮ薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＴｎＩ、抗ＴｎＩ薬、抗ＴＩＭＰ２薬および抗ＤＣＮ薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＲＢＰ４、ＴｎＩ、抗ＴｎＩ薬および抗ＲＢＰ４薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＲＢＰ４、ＴＩＭＰ２、ＴｎＩ、抗ＴｎＩ薬、抗ＲＢＰ４薬および抗ＴＩＭＰ２薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＤＣＮ、ＳＭＯＣ－２、ＴｎＩ、抗ＴｎＩ薬、抗ＳＭＯＣ－２薬および抗ＤＣＮ薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＴＩＭＰ２、ＴｎＩ、抗ＴｎＩ薬および抗ＴＩＭＰ２薬を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せ（例えば、１種またはそれ以上、２種以上、３種以上、４種以上など）は、ＳＭＯＣ－２、ＴＩＭＰ２、ＴｎＩ、抗ＴｎＩ薬、抗ＳＭＯＣ－２薬および抗ＴＩＭＰ２薬を含む。
【0210】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物中の１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗体薬を含む。一部の実施形態では、抗体薬の１種またはそれ以上は検出可能な部分で標識されている。一部の実施形態では、キットは検出薬（例えば、１種またはそれ以上のアクリジニウムエステル分子）をさらに含む。一部の実施形態では、抗体薬の１種またはそれ以上はアクリジニウムエステル分子の１種またはそれ以上で標識されている。一部の実施形態では、キットは、抗ＡＴＴＲバイオマーカー抗体薬の１種またはそれ以上に特異的に結合する１種またはそれ以上の二次抗体薬をさらに含む。
【0211】
一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物中の１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は核酸プローブを含む。一部の実施形態では、各核酸プローブの少なくとも一部は、ＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）をコードするヌクレオチドの１つまたはそれ以上の部分にハイブリダイズする。ＡＴＴＲバイオマーカーをコードするヌクレオチドはＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）であってもよいし、またはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であってもよい。一部の実施形態では、核酸プローブは、１種またはそれ以上の検出薬で標識されている（例えば、検出薬はＡＴＴＲバイオマーカーをコードするヌクレオチドの存在を示す）。
【0212】
一部の実施形態では、組成物は１種またはそれ以上の対照サンプルを含む。一部の実施形態では、対照サンプルは、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー標準を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカー標準は組換えＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）を含む。一部の実施形態では、ＡＴＴＲバイオマーカー標準は合成ＡＴＴＲバイオマーカー（例えば、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２、ＳＭＯＣ－２、ＮｆＬまたはこれらの組合せ）核酸を含む。
【0213】
上記に加えて、組成物は、他の成分、例えば、溶媒または緩衝液、安定剤もしくは防腐剤、および／または本明細書に記載の状態もしくは障害を治療するための薬剤を含むことができる。
【0214】
コンピューターシステム
本明細書に記載の方法は、コンピュータープログラム中の特定の命令を実行するプロセッサーを有するコンピューターシステムで実行することができる。一部の実施形態では、コンピューターシステムは、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルおよび／または２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルの受信に基づいてＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを出力するように配置することができる。特に、コンピュータープログラムは、適切な次の工程、例えば、対象に対するさらなる医薬（例えば、ＴＴＲ安定剤）、治療および／またはさらなる試験（例えば、心筋症試験）をシステムが選択するための命令を含むことができる。
本明細書に記載の方法は、コンピュータープログラム中の特定の命令を実行するプロセッサーを有するコンピューターシステムで実行することができる。一部の実施形態では、コンピューターシステムは、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルおよび／または２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルの受信に基づいてＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを出力するように配置することができる。特に、コンピュータープログラムは、適切な次の工程、例えば、対象に対するさらなる医薬（例えば、ＴＴＲ安定剤）、治療および／またはさらなる試験（例えば、心筋症試験）をシステムが選択するための命令を含むことができる。
【0215】
一部の実施形態では、コンピュータープログラムは、コンピューターシステムが、受信したデータ（例えば、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイル）に基づいて、さらなる試験（例えば、心筋症試験）のために対象を特定すること、ＴＴＲ－ＣＭの危険性があるかもしくはＴＴＲ－ＣＭを有するとして対象を特定すること、および／または医薬（例えば、ＴＴＲ安定剤）を受けるための患者を特定すること、ならびにデータを使用してＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算することができるように構成することができる。システムは、人口統計学的要因および／または画像ベースのバイオマーカーとともにＡＴＴＲバイオマーカープロファイルに基づいて、特定された次の工程に順位付けすることができる可能性がある。システムは、例えば、対象の、またはＴＴＲ－ＣＭを有するか、または有する疑いがある対象のまたは対象の家族の臨床応答に基づいて、順位付けを調整することができる。
【0216】
図１１は、一実施形態による、上記のオペレーションで使用することができるコンピューターシステム１１００のブロック線図である。システム１１００は、プロセッサー１１１０、メモリー１１２０、記憶装置１１３０および入力／出力装置１１４０を含む。コンポーネント１１１０、１１２０、１１３０および１１４０のそれぞれは、システムバス１１５０を使用して相互接続される。システムは、サンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを決定するための分析機器１１６０を含むことができる。
【0217】
プロセッサー１１１０は、システム１１００内の実行のための命令を処理することができる。一実施形態では、プロセッサー１１１０はシングルスレッドプロセッサーである。別の実施形態では、プロセッサー１１１０はマルチスレッドプロセッサーである。プロセッサー１１１０は、入力／出力装置１１４０を通じて情報を受信または送信するためのものを含めて、メモリー１１２０または記憶装置１１３０に記憶された命令を処理することができる。
【0218】
メモリー１１２０は、システム１１００内の情報を記憶する。一実施形態では、メモリー１１２０はコンピューター可読媒体である。一実施形態では、メモリー１１２０は揮発性メモリーユニットである。別の実施形態では、メモリー１１２０は不揮発性メモリーユニットである。
【0219】
記憶装置１１３０は、大容量記憶をシステム１１００に提供することができる。一実施形態では、記憶装置１１３０はコンピューター可読媒体である。
【0220】
入力／出力装置１１４０は、入力／出力オペレーションをシステム１１００に提供する。一実施形態では、入力／出力装置１１４０はキーボードおよび／またはポインティングデバイスを含む。一実施形態では、入力／出力装置１１４０は、グラフィカルユーザーインターフェースを表示するためのディスプレイユニットを含む。
【0221】
システム１１００はデータベースを構築するために使用することができる。図１２は、さらなる試験（例えば、心筋症試験）のために対象を特定する、ＴＴＲ－ＣＭの危険性があるかもしくはＴＴＲ－ＣＭを有するとして対象を特定する、および／または医薬（例えば、ＴＴＲ安定剤）を受けるための患者を特定するのに使用するためのデータベースを構築するための方法１２００のフローチャートを示す。好ましくは、方法１２００はシステム１１００において実行される。例えば、コンピュータープログラム製品は、プロセッサー１１１０に方法１２００または方法１３００の工程を実行させる命令を含むことができる。
【0222】
方法１２００は以下の工程を含む。工程１２１０において、対象のＡＴＴＲバイオマーカープロファイル（例えば、サンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベル）を受信する。システム６００中のコンピュータープログラムは、入力／出力装置６４０上に適切なグラフィカルユーザーインターフェースを提示するための命令を含むことができ、グラフィカルユーザーインターフェースは、入力／出力装置６４０、例えばキーボードを使用してレベル６７０を入力するようにユーザーに促すことができる。工程１２２０において、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルからＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算する。本明細書に記載のように、工程１２２０において、（ｉ）ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルならびに（ｉｉ）人口統計学的要因および／または画像ベースのバイオマーカーからＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算する。工程１２３０において、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを記憶する。システム６００は、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを記憶装置６３０中に記憶することができる。さらに、または代わりに、システム６００はＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを含む読み出し情報を提供することができる。読み出し情報は、対象に対して提唱される次の工程および／またはＡＴＴＲバイオマーカーのスコアに関連する信頼水準を含むこともできる。
【0223】
方法１３００は以下の工程を含む。工程１３１０において、例えば対象からのサンプル中の１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する。工程１３２０において、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る。工程１３３０において、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルからＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算する。本明細書に記載のように、工程１３３０において、（ｉ）ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルならびに（ｉｉ）人口統計学的要因および／または画像ベースのバイオマーカーからＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算する。工程１３４０において、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを記憶する。システム６００は、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを記憶装置６３０中に記憶することができる。さらに、または代わりに、システム６００はＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを含む読み出し情報を提供することができる。読み出し情報は、対象に対して提唱される次の工程および／またはＡＴＴＲバイオマーカーのスコアに関連する信頼水準を含むこともできる。
【0224】
さらに、実行時に本明細書で提供される方法を含むオペレーションをプロセッサーに実行させる実行可能命令を含む非一時的コンピューター可読媒体が提供される。例えば、実行可能命令を含む非一時的コンピューター可読媒体は、実行時に上記の１２００または１３００の方法を含むオペレーションをプロセッサーに実行させる。
【0225】
番号付けされた例示的実施形態
実施形態１． 方法であって、方法は、サンプル中の２種以上のトランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）バイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含み、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、（ｉ）トロポニンＩ（ＴｎＩ）、（ｉｉ）ピルビン酸キナーゼ筋肉アイソフォーム１（ＰＫＭ１）、（ｉｉｉ）ピルビン酸キナーゼ筋肉アイソフォーム２（ＰＫＭ２）、（ｉｖ）Ｎ末端－ホルモン前駆体Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）、（ｖ）レチノール結合タンパク質４（ＲＢＰ４）、（ｖｉ）組織メタロプロテアーゼ阻害物質２（ＴＩＭＰ２）、（ｖｉｉ）ニューロフィラメント軽鎖（ＮｆＬ）、または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含む、方法。
実施形態１． 方法であって、方法は、サンプル中の２種以上のトランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲ）バイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含み、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、（ｉ）トロポニンＩ（ＴｎＩ）、（ｉｉ）ピルビン酸キナーゼ筋肉アイソフォーム１（ＰＫＭ１）、（ｉｉｉ）ピルビン酸キナーゼ筋肉アイソフォーム２（ＰＫＭ２）、（ｉｖ）Ｎ末端－ホルモン前駆体Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）、（ｖ）レチノール結合タンパク質４（ＲＢＰ４）、（ｖｉ）組織メタロプロテアーゼ阻害物質２（ＴＩＭＰ２）、（ｖｉｉ）ニューロフィラメント軽鎖（ＮｆＬ）、または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含む、方法。
【0226】
実施形態２． サンプル中の３種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを検出し、３種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、（ｉ）ＴｎＩ、（ｉｉ）ＰＫＭ１、（ｉｉｉ）ＰＫＭ２、（ｉｖ）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、（ｖ）ＲＢＰ４、（ｖｉ）ＴＩＭＰ２、（ｖｉｉ）ＮｆＬ、または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含む、実施形態１に記載の方法。
【0227】
実施形態３． サンプル中の４種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出し、４種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、（ｉ）ＴｎＩ、（ｉｉ）ＰＫＭ１、（ｉｉｉ）ＰＫＭ２、（ｉｖ）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、（ｖ）ＲＢＰ４、（ｖｉ）ＴＩＭＰ２、（ｖｉｉ）ＮｆＬ、または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含む、実施形態１または２に記載の方法。
【0228】
実施形態４． サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する方法であって、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩを含む、方法。
【0229】
実施形態５． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩおよびＰＫＭ１を含む、実施形態４に記載の方法。
【0230】
実施形態６． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩおよびＰＫＭ２を含む、実施形態４に記載の方法。
【0231】
実施形態７． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＰＫＭ２を含む、実施形態４に記載の方法。
【0232】
実施形態８． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４または両方をさらに含む、実施形態４～７のいずれか１つに記載の方法。
【0233】
実施形態９． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴＩＭＰ２、ＮｆＬまたは両方をさらに含む、実施形態４～８のいずれか１つに記載の方法。
【0234】
実施形態１０． サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する方法であって、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含む、方法。
【0235】
実施形態１１． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＲＢＰ４またはこれらの組合せをさらに含む、実施形態４～７のいずれか１つに記載の方法。
【0236】
実施形態１２． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴＩＭＰ２、ＮｆＬまたは両方をさらに含む、実施形態４～８のいずれか１つに記載の方法。
【0237】
実施形態１３． 方法であって、
（ａ）サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る工程；および
（ｂ）ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程
を含む、方法。
（ａ）サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る工程；および
（ｂ）ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程
を含む、方法。
【0238】
実施形態１４． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、（ｉ）ＴｎＩ、（ｉｉ）ＰＫＭ１、（ｉｉｉ）ＰＫＭ２、（ｉｖ）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、（ｖ）ＲＢＰ４、（ｖｉ）ＴＩＭＰ２、（ｖｉｉ）ＮｆＬ、または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含む、実施形態１３に記載の方法。
【0239】
実施形態１５． サンプル中の３種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出し、３種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、（ｉ）ＴｎＩ、（ｉｉ）ＰＫＭ１、（ｉｉｉ）ＰＫＭ２、（ｉｖ）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、（ｖ）ＲＢＰ４、（ｖｉ）ＴＩＭＰ２、（ｖｉｉ）ＮｆＬ、または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含む、実施形態１３または１４に記載の方法。
【0240】
実施形態１６． サンプル中の４種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出し、４種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、（ｉ）ＴｎＩ、（ｉｉ）ＰＫＭ１、（ｉｉｉ）ＰＫＭ２、（ｉｖ）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、（ｖ）ＲＢＰ４、（ｖｉ）ＴＩＭＰ２、（ｖｉｉ）ＮｆＬ、または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含む、実施形態１３～１５のいずれか１つに記載の方法。
【0241】
実施形態１７． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩを含む、実施形態１３～１６のいずれか１つに記載の方法。
【0242】
実施形態１８． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩおよびＰＫＭ１を含む、実施形態１３～１７のいずれか１つに記載の方法。
【0243】
実施形態１９． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩおよびＰＫＭ２を含む、実施形態１３～１８のいずれか１つに記載の方法。
【0244】
実施形態２０． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＰＫＭ２を含む、実施形態１３～１９のいずれか１つに記載の方法。
【0245】
実施形態２１． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４または両方をさらに含む、実施形態１７～２０のいずれか１つに記載の方法。
【0246】
実施形態２２． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴＩＭＰ２、ＮｆＬまたは両方をさらに含む、実施形態１７～２１のいずれか１つに記載の方法。
【0247】
実施形態２３． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含む、実施形態１３～１６のいずれか１つに記載の方法。
【0248】
実施形態２４． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＲＢＰ４またはこれらの組合せをさらに含む、実施形態２３に記載の方法。
【0249】
実施形態２５． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴＩＭＰ２、ＮｆＬまたは両方をさらに含む、実施形態２３または２４に記載の方法。
【0250】
実施形態２６． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＲＢＰ４を含むかまたはこれらからなる、実施形態１に記載の方法。
【0251】
実施形態２７． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＲＢＰ４を含むかまたはこれらからなる、実施形態１に記載の方法。
【0252】
実施形態２８． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含むかまたはこれらからなる、実施形態１に記載の方法。
【0253】
実施形態２９． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＲＢＰ４を含むかまたはこれらからなる、実施形態１に記載の方法。
【0254】
実施形態３０． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ２およびＲＢＰ４を含むかまたはこれらからなる、実施形態１に記載の方法。
【0255】
実施形態３１． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ２およびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含むかまたはこれらからなる、実施形態１に記載の方法。
【0256】
実施形態３２． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＲＢＰ４を含むかまたはこれらからなる、実施形態１に記載の方法。
【0257】
実施形態３３． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＰＫＭ１、ＰＫＭ２およびＲＢＰ４を含むかまたはこれらからなる、実施形態１に記載の方法。
【0258】
実施形態３４． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＲＢＰ４を含むかまたはこれらからなる、実施形態１に記載の方法。
【0259】
実施形態３５． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＴＩＭＰ２を含むかまたはこれらからなる、実施形態１に記載の方法。
【0260】
実施形態３６． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩおよびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含むかまたはこれらからなる、実施形態１に記載の方法。
【0261】
実施形態３７． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩおよびＲＢＰ４を含むかまたはこれらからなる、実施形態１に記載の方法。
【0262】
実施形態３８． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩ、ＲＢＰ４およびＴＩＭＰ２を含むかまたはこれらからなる、実施形態１に記載の方法。
【0263】
実施形態３９． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、ＴｎＩおよびＴＩＭＰ２を含むかまたはこれらからなる、実施形態１に記載の方法。
【0264】
実施形態４０． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ１を含まない、実施形態１～３、４、６、８、９、１０～１２、１３～１７、１９および２１～２５のいずれか１つに記載の方法。
【0265】
実施形態４１． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ２を含まない、実施形態１～３、４、５、８、９、１０～１２、１３～１８および２１～２５のいずれか１つに記載の方法。
【0266】
実施形態４２． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ１もＰＫＭ２も含まない、実施形態１～３、４、８、９、１０～１２、１３～１７および２１～２５のいずれか１つに記載の方法。
【0267】
実施形態４３． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＳＭＯＣ－２を含まない、実施形態１～４２のいずれか１つに記載の方法。
【0268】
実施形態４４． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＤＣＮを含まない、実施形態１～４２のいずれか１つに記載の方法。
【0269】
実施形態４５． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＳＭＯＣ－２もＤＣＮも含まない、実施形態１～４２のいずれか１つに記載の方法。
【0270】
実施形態４６． アミロイドトランスチレチン心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）を発生する対象の危険性を決定する方法であり、サンプルは対象から得られたものである、実施形態１～４５のいずれか１つに記載の方法。
【0271】
実施形態４７． 対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する方法であり、サンプルは対象から得られたものである、実施形態１～４５のいずれか１つに記載の方法。
【0272】
実施形態４８． ＴＴＲ－ＣＭの危険性があるか、またはＴＴＲ－ＣＭを罹患している対象においてＴＴＲ－ＣＭを治療する方法である、実施形態１～４５のいずれか１つに記載の方法。
【0273】
実施形態４９． ＴＴＲ－ＣＭは野生型トランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲｗｔ）から生じる、実施形態４６～４８のいずれか１つに記載の方法。
【0274】
実施形態５０． 対象は、遺伝子検査によって、家族性アミロイド心筋症（ＡＴＴＲｍ）の試験結果が陰性である、実施形態４６～４９のいずれか１つに記載の方法。
【0275】
実施形態５１． １回またはそれ以上の用量のＴＴＲ安定化剤を受けるための対象を選択する方法であり、サンプルは対象から得られたものである、実施形態１～４５のいずれか１つに記載の方法。
【0276】
実施形態５２． １回またはそれ以上の用量のＴＴＲ安定化剤を対象に投与する工程をさらに含む、実施形態５１に記載の方法。
【0277】
実施形態５３． １つまたはそれ以上の心筋症試験のために対象を選択する方法であり、サンプルは対象から得られたものである、実施形態１～４５のいずれか１つに記載の方法。
【0278】
実施形態５４． １つまたはそれ以上の心筋症試験は、心エコー図、先進画像方法または両方を含む、実施形態５３に記載の方法。
【0279】
実施形態５５． 先進画像方法は、心臓磁気共鳴画像（ＣＭＲ）、シンチグラフィーまたは両方を含む、実施形態５４に記載の方法。
【0280】
実施形態５６． シンチグラフィーは９７７Ｔｃ－ピロリン酸などの放射性同位体コンジュゲートの使用を含む、実施形態５５に記載の方法。
【0281】
実施形態５７． シンチグラフィーは単一光子放射型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を使用して行われる、実施形態５５または５６に記載の方法。
【0282】
実施形態５８． 患者がＴＴＲ－ＣＭ有さないか、またはＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性がないことを決定する方法である、実施形態１～４５のいずれか１つに記載の方法。
【0283】
実施形態５９． サンプルは生体サンプルであるかまたは生体サンプルを含む、実施形態１～５７のいずれか１つに記載の方法。
【0284】
実施形態６０． 生体サンプルは血液、血清、血漿または心臓組織を含む、実施形態５９に記載の方法。
【0285】
実施形態６１． サンプルは対象から得られたものである、実施形態１～６０のいずれか１つに記載の方法。
【0286】
実施形態６２． 対象はヒトである、実施形態６１に記載の方法。
【0287】
実施形態６３． 対象は、アミロイドトランスチレチン心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）を罹患しているか、またはこれを発生する危険性がある、実施形態６１または６２に記載の方法。
【0288】
実施形態６４． 対象は少なくとも６５歳である、実施形態４６～６３のいずれか１つに記載の方法。
【0289】
実施形態６５． サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程は、サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれの存在、非存在、レベルまたは遺伝子型を検出する工程を含む、実施形態１～６４のいずれか１つに記載の方法。
【0290】
実施形態６６． サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程は、質量分析を行う工程を含む、実施形態１～６５のいずれか１つに記載の方法。
【0291】
実施形態６７． サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程は、化学発光を測定する工程を含む、実施形態１～６６のいずれか１つに記載の方法。
【0292】
実施形態６８． サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程は、サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーをコードする２種以上のヌクレオチドを検出する工程を含む、実施形態１～６７のいずれか１つに記載の方法。
【0293】
実施形態６９． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーをコードする２種以上のヌクレオチドを検出する工程は、核酸増幅法を行う工程を含む、実施形態６８に記載の方法。
【0294】
実施形態７０． 核酸増幅法は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）、転写増幅法（ＴＭＡ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、鎖置換増幅法（ＳＤＡ）および核酸配列ベースの増幅（ＮＡＳＢＡ）からなる群から選択される、実施形態６９に記載の方法。
【0295】
実施形態７１． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーをコードする２種以上のヌクレオチドを検出する工程は、２種以上の核酸プローブと２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーをコードする２種以上のヌクレオチドとの間のハイブリダイゼーションを検出する工程を含む、実施形態６８～７０のいずれか１つに記載の方法。
【0296】
実施形態７２． ２種以上の核酸プローブは、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーをコードする２種以上のヌクレオチドのうちの１種の少なくとも一部とそれぞれ相補的である、実施形態７１に記載の方法。
【0297】
実施形態７３． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーをコードするヌクレオチドはＤＮＡである、実施形態６８～７２のいずれか１つに記載の方法。
【0298】
実施形態７４． ＤＮＡはｃＤＮＡである、実施形態７３に記載の方法。
【0299】
実施形態７５． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーをコードするヌクレオチドはＲＮＡである、実施形態６８～７２のいずれか１つに記載の方法。
【0300】
実施形態７６． サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程は、イムノアッセイを行う工程を含む、実施形態１～７５のいずれか１つに記載の方法。
【0301】
実施形態７７． イムノアッセイは化学発光イムノアッセイである、実施形態７６に記載の方法。
【0302】
実施形態７８． イムノアッセイは、免疫沈降法；ウエスタンブロット；ＥＬＩＳＡ；免疫組織化学的検査；免疫細胞化学的検査；フローサイトメトリー；およびイムノＰＣＲからなる群から選択される、実施形態７６または７７に記載の方法。
【0303】
実施形態７９． イムノアッセイはＥＬＩＳＡである、実施形態７６～７８のいずれか１つに記載の方法。
【0304】
実施形態８０． イムノアッセイはハイスループットおよび／または自動化イムノアッセイプラットフォームである、実施形態７６～７９のいずれか１つに記載の方法。
【0305】
実施形態８１． サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程は、２種以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー抗体薬とサンプルを接触させる工程を含む、実施形態１～８０のいずれか１つに記載の方法。
【0306】
実施形態８２． 対象から得られたサンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程は、２種以上の検出薬とサンプルを接触させる工程を含む、実施形態１～８１のいずれか１つに記載の方法。
【0307】
実施形態８３． ２種以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー抗体薬は２種以上の検出薬で標識されている、実施形態８２に記載の方法。
【0308】
実施形態８４． ２種以上の検出薬は２種以上のアクリジニウムエステル分子である、実施形態８２または８３に記載の方法。
【0309】
実施形態８５． サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程は、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーと２種以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー抗体薬との間の結合を検出する工程を含む、実施形態１～８４のいずれか１つに記載の方法。
【0310】
実施形態８６． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーと２種以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー抗体薬との間の結合を検出する工程は、免疫細胞化学的検査（ＩＣＣ）を行う工程を含む、実施形態８５に記載の方法。
【0311】
実施形態８７． ２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーと２種以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー抗体薬との間の結合を検出する工程は、少なくとも１種のＡＴＴＲバイオマーカーの吸光度値または発光値を決定する工程を含む、実施形態８５または８６に記載の方法。
【0312】
実施形態８８． サンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出する工程は、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルを検出する工程を含み、２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルをそれぞれのＡＴＴＲバイオマーカーに対する閾値と比較する工程をさらに含み、検出される１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルは、それぞれのＡＴＴＲバイオマーカーに対する閾値を上回る、実施形態１～８７に記載の方法。
【0313】
実施形態８９． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルがそれぞれのＡＴＴＲバイオマーカーに対する閾値を上回る場合に、対象は、ＴＴＲ－ＣＭを罹患しているか、またはＴＴＲ－ＣＭを発生する危険性があることを決定する工程をさらに含む、実施形態８８に記載の方法。
【0314】
実施形態９０． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルがそれぞれのＡＴＴＲバイオマーカーに対する閾値を上回る場合に、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する工程をさらに含む、実施形態８８または８９に記載の方法。
【0315】
実施形態９１． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルがそれぞれのＡＴＴＲバイオマーカーに対する閾値を上回る場合に、対象を１つまたはそれ以上の心筋症試験に推奨する工程をさらに含む、実施形態８８～９０のいずれか１つに記載の方法。
【0316】
実施形態９２． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルは、それぞれのＡＴＴＲバイオマーカーに対する閾値よりも少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８または少なくとも１．９倍大きい、実施形態８８～９１のいずれか１つに記載の方法。
【0317】
実施形態９３． ＡＴＴＲバイオマーカーに対する閾値は、２種以上の対照サンプルについて検出されたＡＴＴＲバイオマーカーに対する値の平均である、実施形態８８～９２のいずれか１つに記載の方法。
【0318】
実施形態９４． ２種以上の対照サンプルは、それぞれ、ＡＴＴＲアミロイドーシスを有さない対象から得られたサンプルである、実施形態９３に記載の方法。
【0319】
実施形態９５． ＡＴＴＲバイオマーカーに対する閾値は、標準的な表で報告される値である、実施形態８８～９２のいずれか１つに記載の方法。
【0320】
実施形態９６． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーのそれぞれのレベルが閾値を上回る場合に、対象を心臓生検に推奨する工程をさらに含み、対象は心筋症試験の１つまたはそれ以上において心筋症について試験が陽性である、実施形態８８～９２のいずれか１つに記載の方法。
【0321】
実施形態９７． ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程は、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルにアルゴリズムを適用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含み、アルゴリズムは、決定木アルゴリズム、ニューラルブーストアルゴリズム、ブートストラップ森アルゴリズム、ブーストツリーアルゴリズム、Ｋ近傍アルゴリズム、一般化回帰変数増加アルゴリズム、一般化回帰枝刈り変数増加アルゴリズム、フィットステップワイズアルゴリズム、一般化回帰ラッソアルゴリズム、一般化回帰エラスティックネットアルゴリズム、一般化回帰リッジアルゴリズム、名義ロジスティックアルゴリズム、サポートベクターマシンアルゴリズム、判別アルゴリズムまたはナイーブベイズアルゴリズムである、実施形態１３～８７のいずれか１つに記載の方法。
【0322】
実施形態９８． ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程は、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルにアルゴリズムを適用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含み、アルゴリズムは、決定木アルゴリズム、ニューラルブーストアルゴリズム、ブートストラップ森アルゴリズム、ブーストツリーアルゴリズム、一般化回帰ラッソアルゴリズム、一般化回帰エラスティックネットアルゴリズム、一般化回帰リッジアルゴリズム、名義ロジスティックアルゴリズム、サポートベクターマシンアルゴリズムまたは判別アルゴリズムである、実施形態１３～８７および９７のいずれか１つに記載の方法。
【0323】
実施形態９９． ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程は、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルにアルゴリズムを適用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含み、アルゴリズムは、決定木アルゴリズム、ニューラルブーストアルゴリズム、ブートストラップ森アルゴリズム、ブーストツリーアルゴリズムまたはサポートベクターマシンアルゴリズムである、実施形態１３～８７、９７および９８のいずれか１つに記載の方法。
【0324】
実施形態１００． ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、サンプルを得た対象が、ＴＴＲ－ＣＭの危険性があるか、またはＴＴＲ－ＣＭを罹患しているかどうかを決定する工程をさらに含む、実施形態１３～８７および９７～９９のいずれか１つに記載の方法。
【0325】
実施形態１０１． ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、サンプルを得た対象が１つまたはそれ以上の心筋症試験に選択されるかどうかを決定する工程をさらに含む、実施形態１３～８７および９７～１００のいずれか１つに記載の方法。
【0326】
実施形態１０２． ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、サンプルを得た対象が１回またはそれ以上の用量のＴＴＲ安定化剤を受けるために選択されるかどうかを決定する工程をさらに含む、実施形態１３～８７および９７～１０１のいずれか１つに記載の方法。
【0327】
実施形態１０３． 対象由来の生検組織の免疫化学的染色をさらに含む、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の方法。
【0328】
実施形態１０４． 生検組織は心臓生検組織を含む、実施形態８８に記載の方法。
【0329】
実施形態１０５． 免疫化学的染色は、心臓組織中のカッパもしくはラムダ軽鎖アミロイド沈着物に対する２種以上の抗体薬および／またはトランスチレチン沈着物に対する２種以上の抗体薬の使用を含む、実施形態８８または８９に記載の方法。
【0330】
実施形態１０６． 免疫化学的染色によって心臓組織中にトランスチレチン沈着物の存在が示される場合に、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する工程をさらに含む、実施形態８８～９０のいずれか１つに記載の方法。
【0331】
実施形態１０７． （ａ）対象から得られたサンプル中の２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーのレベルを検出して、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る工程；および
（ｂ）ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程
を含む、方法であって、
２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、（ｉ）ＴｎＩ、（ｉｉ）ＰＫＭ１、（ｉｉｉ）ＰＫＭ２、（ｉｖ）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、（ｖ）ＲＢＰ４、（ｖｉ）ＴＩＭＰ２、（ｖｉｉ）ＮｆＬ、または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含み、
ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程は、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルにアルゴリズムを適用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含み、アルゴリズムは、決定木アルゴリズム、ニューラルブーストアルゴリズム、ブートストラップ森アルゴリズム、ブーストツリーアルゴリズムまたはサポートベクターマシンアルゴリズムである、方法。
（ｂ）ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程
を含む、方法であって、
２種以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、（ｉ）ＴｎＩ、（ｉｉ）ＰＫＭ１、（ｉｉｉ）ＰＫＭ２、（ｉｖ）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、（ｖ）ＲＢＰ４、（ｖｉ）ＴＩＭＰ２、（ｖｉｉ）ＮｆＬ、または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含み、
ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程は、ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルにアルゴリズムを適用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアをコンピューターで計算する工程を含み、アルゴリズムは、決定木アルゴリズム、ニューラルブーストアルゴリズム、ブートストラップ森アルゴリズム、ブーストツリーアルゴリズムまたはサポートベクターマシンアルゴリズムである、方法。
【0332】
実施形態１０８． 対象はヒト対象である、実施形態１０７に記載の方法。
【0333】
実施形態１０９． 対象は少なくとも６５歳である、実施形態１０７または１０８に記載の方法。
【0334】
実施形態１１０． サンプルは、血液、血清、血漿または心臓組織を含む、実施形態１０７～１０９のいずれか１つに記載の方法。
【0335】
実施形態１１１． ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、サンプルを得た対象が、ＴＴＲ－ＣＭの危険性があるか、またはＴＴＲ－ＣＭを罹患しているかどうかを決定する工程をさらに含む、実施形態１０７～１１０のいずれか１つに記載の方法。
【0336】
実施形態１１２． ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、アミロイドトランスチレチン心筋症（ＴＴＲ－ＣＭ）を発生する対象の危険性を決定する工程をさらに含む、実施形態１０７～１１１のいずれか１つに記載の方法。
【0337】
実施形態１１３． ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、対象をＴＴＲ－ＣＭと診断する工程をさらに含む、実施形態１０７～１１２のいずれか１つに記載の方法。
【0338】
実施形態１１４． ＴＴＲ－ＣＭは野生型トランスチレチンアミロイドーシス（ＡＴＴＲｗｔ）から生じる、実施形態１１３に記載の方法。
【0339】
実施形態１１５． ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、サンプルを得た対象が１つまたはそれ以上の心筋症試験に選択されるかどうかを決定する工程をさらに含む、実施形態１０７～１１４のいずれか１つに記載の方法。
【0340】
実施形態１１６． １つまたはそれ以上の心筋症試験は、心エコー図、先進画像方法または両方を含む、実施形態１１５に記載の方法。
【0341】
実施形態１１７． 先進画像方法は、心臓磁気共鳴画像（ＣＭＲ）、シンチグラフィーまたは両方を含む、実施形態１１６に記載の方法。
【0342】
実施形態１１８． シンチグラフィーは９９ｍ Ｔｃ－ピロリン酸などの放射性同位体コンジュゲートの使用を含む、実施形態１１７に記載の方法。
【0343】
実施形態１１９． シンチグラフィーは単一光子放射型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を使用して行われる、実施形態１１７または１１８に記載の方法。
【0344】
実施形態１２０． ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを使用して、サンプルを得た対象が１回またはそれ以上の用量のＴＴＲ安定化剤を受けるために選択されるかどうかを決定する工程をさらに含む、実施形態１０７～１１９のいずれか１つに記載の方法。
【0345】
実施形態１２１． １回またはそれ以上の用量のＴＴＲ安定化剤を対象に投与する工程をさらに含む、実施形態１２０に記載の方法。
【0346】
実施形態１２２． 実行時に実施形態１～１２１のいずれか１つに記載の方法を含むオペレーションをプロセッサーに実行させる実行可能命令を含む、非一時的コンピューター可読媒体。
【0347】
実施形態１２３． （ａ）（ｉ）ＴｎＩ、（ｉｉ）ＰＫＭ１、（ｉｉｉ）ＰＫＭ２、（ｉｖ）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、（ｖ）ＲＢＰ４、（ｖｉ）ＴＩＭＰ２、（ｖｉｉ）ＮｆＬ、または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含む、１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー；および
（ｂ）（ｉ）抗ＴｎＩ薬、（ｉｉ）抗ＰＫＭ１薬、（ｉｉｉ）抗ＰＫＭ２薬、（ｉｖ）抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、（ｖ）抗ＲＢＰ４薬、（ｖｉ）抗ＴＩＭＰ２薬、（ｖｉｉ）抗ＮｆＬ薬または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含む、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬
を含む、組成物。
（ｂ）（ｉ）抗ＴｎＩ薬、（ｉｉ）抗ＰＫＭ１薬、（ｉｉｉ）抗ＰＫＭ２薬、（ｉｖ）抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、（ｖ）抗ＲＢＰ４薬、（ｖｉ）抗ＴＩＭＰ２薬、（ｖｉｉ）抗ＮｆＬ薬または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含む、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬
を含む、組成物。
【0348】
実施形態１２４． （ａ）ＴｎＩを含む１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー、および
（ｂ）抗ＴｎＩ薬を含む１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬
を含む、組成物。
（ｂ）抗ＴｎＩ薬を含む１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬
を含む、組成物。
【0349】
実施形態１２５． （ａ）１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩおよびＰＫＭ１を含み、
（ｂ）１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＴｎＩ薬および抗ＰＫＭ１薬を含む、
実施形態１２４に記載の組成物。
（ｂ）１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＴｎＩ薬および抗ＰＫＭ１薬を含む、
実施形態１２４に記載の組成物。
【0350】
実施形態１２６． （ａ）１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩおよびＰＫＭ２を含み、
（ｂ）１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＴｎＩ薬および抗ＰＫＭ２薬を含む、
実施形態１２４に記載の組成物。
（ｂ）１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＴｎＩ薬および抗ＰＫＭ２薬を含む、
実施形態１２４に記載の組成物。
【0351】
実施形態１２７． （ａ）１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴｎＩ、ＰＫＭ１およびＰＫＭ２含み、
（ｂ）１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬および抗ＰＫＭ２薬を含む、
実施形態１２４に記載の組成物。
（ｂ）１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬および抗ＰＫＭ２薬を含む、
実施形態１２４に記載の組成物。
【0352】
実施形態１２８． （ａ）１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＲＢＰ４または両方をさらに含み、
（ｂ）１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＲＢＰ４薬または両方をさらに含む、
実施形態１２３～１２７のいずれか１つに記載の組成物。
（ｂ）１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＲＢＰ４薬または両方をさらに含む、
実施形態１２３～１２７のいずれか１つに記載の組成物。
【0353】
実施形態１２９． （ａ）１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＴＩＭＰ２、ＮｆＬまたは両方をさらに含み、
（ｂ）１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＴＩＭＰ２薬、抗ＮｆＬ薬または両方をさらに含む、
実施形態１２３～１２８のいずれか１つに記載の組成物。
（ｂ）１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＴＩＭＰ２薬、抗ＮｆＬ薬または両方をさらに含む、
実施形態１２３～１２８のいずれか１つに記載の組成物。
【0354】
実施形態１３０． （ａ）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含む１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー、および
（ｂ）抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬を含む１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬
を含む組成物。
（ｂ）抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬を含む１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬
を含む組成物。
【0355】
実施形態１３１． （ａ）１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーは、（ｉ）ＴｎＩ、（ｉｉ）ＰＫＭ１、（ｉｉｉ）ＰＫＭ２、（ｉｖ）ＲＢＰ４、（ｖ）ＴＩＭＰ２、（ｖｉ）ＮｆＬ、または（ｖｉｉ）これらの組合せをさらに含み、
（ｂ）１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は、（ｉ）抗ＴｎＩ薬、（ｉｉ）抗ＰＫＭ１薬、（ｉｉｉ）抗ＰＫＭ２薬、（ｉｖ）抗ＲＢＰ４薬、（ｖ）抗ＴＩＭＰ２薬、（ｖｉ）抗ＮｆＬ薬または（ｖｉｉ）これらの組合せをさらに含む、
実施形態１３０に記載の組成物。
（ｂ）１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は、（ｉ）抗ＴｎＩ薬、（ｉｉ）抗ＰＫＭ１薬、（ｉｉｉ）抗ＰＫＭ２薬、（ｉｖ）抗ＲＢＰ４薬、（ｖ）抗ＴＩＭＰ２薬、（ｖｉ）抗ＮｆＬ薬または（ｖｉｉ）これらの組合せをさらに含む、
実施形態１３０に記載の組成物。
【0356】
実施形態１３２． （ａ）１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＮＴ ｐｒｏＢＮＰ、ＴｎＩおよびＲＢＰを含み、
（ｂ）１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＮＴ ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＴｎＩ薬および抗ＲＢＰ薬を含む、
実施形態１３０または１３１に記載の組成物。
（ｂ）１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＮＴ ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＴｎＩ薬および抗ＲＢＰ薬を含む、
実施形態１３０または１３１に記載の組成物。
【0357】
実施形態１３３． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ１を含まず、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＰＫＭ１薬を含まない、実施形態１２３、１２４、１２６および１２８～１３２のいずれか１つに記載の組成物。
【0358】
実施形態１３４． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ２を含まず、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＰＫＭ２薬を含まない、実施形態１２３～１２５および１２８～１３２のいずれか１つに記載の組成物。
【0359】
実施形態１３５． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ１もＰＫＭ２も含まず、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬を抗ＰＫＭ１薬も抗ＰＫＭ２薬も含まない、実施形態１２３、１２４および１２８～１３２のいずれか１つに記載の組成物。
【0360】
実施形態１３６． ＴＴＲ－ＣＭを検出するためのキットであって、
（ａ）（ｉ）抗ＴｎＩ薬、（ｉｉ）抗ＰＫＭ１薬、（ｉｉｉ）抗ＰＫＭ２薬、（ｉｖ）抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、（ｖ）抗ＲＢＰ４薬、（ｖｉ）抗ＴＩＭＰ２薬、（ｖｉｉ）抗ＮｆＬ薬または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含む１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬；および（ｂ）使用のための説明書
を含む、キット。
（ａ）（ｉ）抗ＴｎＩ薬、（ｉｉ）抗ＰＫＭ１薬、（ｉｉｉ）抗ＰＫＭ２薬、（ｉｖ）抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、（ｖ）抗ＲＢＰ４薬、（ｖｉ）抗ＴＩＭＰ２薬、（ｖｉｉ）抗ＮｆＬ薬または（ｖｉｉｉ）これらの組合せを含む１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬；および（ｂ）使用のための説明書
を含む、キット。
【0361】
実施形態１３７． ＴＴＲ－ＣＭを検出するためのキットであって、
（ａ）抗ＴｎＩ薬を含む１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬；および
（ｂ）使用のための説明書
を含むキット。
（ａ）抗ＴｎＩ薬を含む１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬；および
（ｂ）使用のための説明書
を含むキット。
【0362】
実施形態１３８． １種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＴｎＩ薬および抗ＰＫＭ１薬を含む、実施形態１３７に記載のキット。
【0363】
実施形態１３９． １種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＴｎＩ薬および抗ＰＫＭ２薬を含む、実施形態１３７に記載のキット。
【0364】
実施形態１４０． １種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＴｎＩ薬、抗ＰＫＭ１薬および抗ＰＫＭ２薬を含む、実施形態１３７に記載のキット。
【0365】
実施形態１４１． １種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＲＢＰ４薬または両方をさらに含む、実施形態１３７～１４０のいずれか１つに記載のキット。
【0366】
実施形態１４２． １種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＴＩＭＰ２薬、抗ＮｆＬ薬または両方をさらに含む、実施形態１３７～１４１のいずれか１つに記載のキット。
【0367】
実施形態１４３． （ａ）抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬を含む、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬；および
（ｂ）使用のための説明書
を含む、キット。
（ｂ）使用のための説明書
を含む、キット。
【0368】
実施形態１４４． １種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は、（ｉ）抗ＴｎＩ薬、（ｉｉ）抗ＰＫＭ１薬、（ｉｉｉ）抗ＰＫＭ２薬、（ｉｖ）抗ＲＢＰ４薬、（ｖ）抗ＴＩＭＰ２薬、（ｖｉ）抗ＮｆＬ薬または（ｖｉｉ）これらの組合せをさらに含む、実施形態１４３に記載のキット。
【0369】
実施形態１４５． １種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ薬、抗ＴｎＩ薬および抗ＲＢＰ薬を含む、実施形態１４３または１４４に記載のキット。
【0370】
実施形態１４６． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ１を含まず、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＰＫＭ１薬を含まない、実施形態１３６、１３７、１３９および１４１～１４５のいずれか１つに記載のキット。
【0371】
実施形態１４７． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ２を含まず、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＰＫＭ２薬を含まない、実施形態１３６～１３８および１４１～１４５のいずれか１つに記載のキット。
【0372】
実施形態１４８． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーはＰＫＭ１もＰＫＭ２も含まず、１種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は抗ＰＫＭ１薬も抗ＰＫＭ２薬も含まない、実施形態１３６、１３７および１４１～１４５のいずれか１つに記載のキット。
【0373】
実施形態１４９． ＴＴＲ安定化剤をさらに含む、実施形態１３６～１４８のいずれか１つに記載のキット。
【0374】
実施形態１５０． １種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は１種またはそれ以上の抗体薬を含む、実施形態１３６～１４９のいずれか１つに記載のキット。
【0375】
実施形態１５１． １種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー薬は１種またはそれ以上の核酸プローブを含む、実施形態１３６～１５０のいずれか１つに記載のキット。
【0376】
実施形態１５２． 抗体薬の１種またはそれ以上は検出可能な部分で標識されている、実施形態１５０または１５１に記載のキット。
【0377】
実施形態１５３． １種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー抗体薬に特異的に結合する１種またはそれ以上の二次抗体薬をさらに含む、実施形態１５０～１５２に記載のキット。
【0378】
実施形態１５４． １種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー抗体薬および／または二次抗体薬の１種またはそれ以上は酵素に連結されている、実施形態１５３に記載のキット。
【0379】
実施形態１５５． 検出薬をさらに含む、実施形態１３６～１５４に記載のキット。
【0380】
実施形態１５６． 検出薬は、酵素の基質であるかまたは該基質を含む、実施形態１５５に記載のキット。
【0381】
実施形態１５７． 検出薬は、１種またはそれ以上のアクリジニウムエステル分子であるかまたは該アクリジニウムエステル分子を含む、実施形態１５５に記載のキット。
【0382】
実施形態１５８． １種またはそれ以上の抗ＡＴＴＲバイオマーカー抗体薬および／または二次抗体薬の１種またはそれ以上は、アクリジニウムエステル分子の１種またはそれ以上で標識されている、実施形態１５３に記載のキット。
【0383】
実施形態１５９． 抗ＡＴＴＲバイオマーカー核酸プローブの１種またはそれ以上は、ＡＴＴＲバイオマーカーをコードする１種またはそれ以上のヌクレオチドに相補的である、実施形態１５１～１５８のいずれか１つに記載のキット。
【0384】
実施形態１６０． 各抗ＡＴＴＲバイオマーカー核酸プローブの少なくとも一部は、ＡＴＴＲバイオマーカーをコードする１種またはそれ以上のヌクレオチドにハイブリダイズする、実施形態１５１～１５９のいずれか１つに記載のキット。
【0385】
実施形態１６１． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーをコードするヌクレオチドはＤＮＡである、実施形態１５９および１６０のいずれか１つに記載のキット。
【0386】
実施形態１６２． ＤＮＡはｃＤＮＡである、実施形態１６１に記載のキット。
【0387】
実施形態１６３． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーをコードするヌクレオチドはＲＮＡである、実施形態１５９および１６０のいずれか１つに記載のキット。
【0388】
実施形態１６４． 抗ＡＴＴＲバイオマーカー核酸プローブの１種またはそれ以上は、検出薬の１種またはそれ以上で標識されている、実施形態１５１～１６３に記載のキット。
【0389】
実施形態１６５． 検出薬は１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカーをコードするヌクレオチドの存在を示す、実施形態１６４に記載のキット。
【0390】
実施形態１６６． １種またはそれ以上の対照サンプルをさらに含む、実施形態１３６～１６５に記載のキット。
【0391】
実施形態１６７． 対照サンプルは１種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー標準を含む、実施形態１６６に記載のキット。
【0392】
実施形態１６８． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー標準は組換えＡＴＴＲバイオマーカーを含む、実施形態１６７に記載のキット。
【0393】
実施形態１６９． １種またはそれ以上のＡＴＴＲバイオマーカー標準は合成ＡＴＴＲバイオマーカー核酸を含む、実施形態１６７に記載のキット。
【0394】
実施形態１７０． 対象においてＴＴＲ－ＣＭを診断するためのインビトロ診断アッセイにおける、実施形態１３６～１６９によるキットの使用。
【実施例1】
【0395】
ＡＴＴＲアミロイドーシスに対するマーカーの特定
本実施例は、ＡＴＴＲアミロイドーシスおよびＴＴＲ－ＣＭを示すバイオマーカーを特定するためにヒト血漿をスクリーニングための方法を示す。
本実施例は、ＡＴＴＲアミロイドーシスおよびＴＴＲ－ＣＭを示すバイオマーカーを特定するためにヒト血漿をスクリーニングための方法を示す。
【0396】
ＡＴＴＲアミロイドーシスに対して特異的なバイオマーカーを特定するために、質量分析（ＭＳ）を用いた。ヒトの正常（Ｎ＝４）およびＡＴＴＲｗｔ ＥＤＴＡ血漿（Ｎ＝６）を予洗した（１×ＴＴＢＳ）ヤギ抗マウス９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに加え（５０ｕＬ）、室温で１時間インキュベートした。続いて、プレートを洗浄し（１×ＴＴＢＳ中で３回）、残留捕獲物質を抽出し、ＭＳのために調製した。
【0397】
指数関数的に変換されたタンパク質発現量指標（Ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌｌｙ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｂｕｎｄａｎｃｅ Ｉｎｄｅｘ）（ｅｍＰＡＩ）で表されるＭＳの結果を生成し、最高のｅｍＰＡＩスコアから最低のｅｍＰＡＩスコアまでデータを選別した。ＡＴＴＲｗｔ／正常スコアの平均ｅｍＰＡＩスコアに対して信号対雑音（Ｓ／Ｎ）比を計算した。逆のＳ／Ｎも計算した。選択されたマーカーは、３以上のＳ／Ｎ比で選んだ（図１４）。マーカー選択の判定基準には、病的資料、正常サンプルまたは両方のカテゴリーに複数の一定のスコア値を有することが含まれていた。欠測または空データは、検出可能限界未満に相当する。Ｓ／Ｎ値を生成する目的で、空データは「１」の値で人為的にスコア化した。ＡＴＴＲｗｔに対する可能なマーカーとして追求するために、８種の異なるマーカーを表１のリストから選択した（表６）。
【0398】
【表6】
【実施例2】
【0399】
バイオマーカー試験のための患者コホート
本実施例は、ＴＴＲ－ＣＭの検出において様々なＡＴＴＲバイオマーカーがどのように働いたかについての分析で使用した患者コホートに関する情報を提供する。図１に示すように、２７３人の心不全患者、４６人の臨床試験患者および２０人の独立の推定正常ドナーが本研究に参加した。本研究のすべての個体は６０歳以上であり、主に白人であった。各サブセットの男性および女性の数は異なっていた。患者のＮＹＨＡクラスもサブセット間で異なっていた。特に、マッチする陰性を有する少数の陽性サンプルのみがコホートで利用可能であった。
本実施例は、ＴＴＲ－ＣＭの検出において様々なＡＴＴＲバイオマーカーがどのように働いたかについての分析で使用した患者コホートに関する情報を提供する。図１に示すように、２７３人の心不全患者、４６人の臨床試験患者および２０人の独立の推定正常ドナーが本研究に参加した。本研究のすべての個体は６０歳以上であり、主に白人であった。各サブセットの男性および女性の数は異なっていた。患者のＮＹＨＡクラスもサブセット間で異なっていた。特に、マッチする陰性を有する少数の陽性サンプルのみがコホートで利用可能であった。
【実施例3】
【0400】
試験結果の概要
本実施例は、実施例２に記載されている患者コホートを使用したＴＴＲ－ＣＭの検出において様々なＡＴＴＲバイオマーカーがどのように働いたかについての分析から得られたデータの概要を述べる。図２に示すように。試験したすべてのバイオマーカーの全体で１つの結果のみが欠測であった。このＲＢＰの結果は、必要な再試験のためのサンプルの量が不十分であったので、得ることができなかった。全体で、インビトロ診断アッセイの結果はサンプルあたり１試験に基づいており；アッセイしか使用しない研究のより高い変動性を考慮するために、２つの試験反復の平均を利用した。
本実施例は、実施例２に記載されている患者コホートを使用したＴＴＲ－ＣＭの検出において様々なＡＴＴＲバイオマーカーがどのように働いたかについての分析から得られたデータの概要を述べる。図２に示すように。試験したすべてのバイオマーカーの全体で１つの結果のみが欠測であった。このＲＢＰの結果は、必要な再試験のためのサンプルの量が不十分であったので、得ることができなかった。全体で、インビトロ診断アッセイの結果はサンプルあたり１試験に基づいており；アッセイしか使用しない研究のより高い変動性を考慮するために、２つの試験反復の平均を利用した。
【実施例4】
【0401】
単一バイオマーカーの分類性能
本実施例は、ＴＴＲ－ＣＭの検出のための単一バイオマーカーとして使用される能力についての、本明細書に記載の例示的ＡＴＴＲバイオマーカーの評価を示す。結果は、本明細書に記載のある特定のＡＴＴＲバイオマーカーは、それらを単独で使用することを可能にするのに十分な感度および／または特異性レベルで働くことができることを示す。しかし、本実施例は、ＴＴＲ－ＣＭを評価するために単一バイオマーカーとして使用した場合に、すべてのＡＴＴＲバイオマーカーが、感度と特異性の両方についての判定基準を満たしていたわけではないことも示す。図３～６に示すように、ＴｎＩは感度および特異性の両方の判定基準を満たしており、ＴｎＩは、ＴＴＲ－ＣＭの検出のための単一バイオマーカーとして有用であり得ることが示唆される。評価した残りのＡＴＴＲバイオマーカーは、単一バイオマーカーとしての使用のために設定された感度と特異性の両方の判定基準を満たすというわけではなかった。次いで、ＴＴＲ－ＣＭを検出する場合に、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せが感度および特異性の改善を達成することができるかどうかを決定するために、これらのバイオマーカーを組合せで評価した。
本実施例は、ＴＴＲ－ＣＭの検出のための単一バイオマーカーとして使用される能力についての、本明細書に記載の例示的ＡＴＴＲバイオマーカーの評価を示す。結果は、本明細書に記載のある特定のＡＴＴＲバイオマーカーは、それらを単独で使用することを可能にするのに十分な感度および／または特異性レベルで働くことができることを示す。しかし、本実施例は、ＴＴＲ－ＣＭを評価するために単一バイオマーカーとして使用した場合に、すべてのＡＴＴＲバイオマーカーが、感度と特異性の両方についての判定基準を満たしていたわけではないことも示す。図３～６に示すように、ＴｎＩは感度および特異性の両方の判定基準を満たしており、ＴｎＩは、ＴＴＲ－ＣＭの検出のための単一バイオマーカーとして有用であり得ることが示唆される。評価した残りのＡＴＴＲバイオマーカーは、単一バイオマーカーとしての使用のために設定された感度と特異性の両方の判定基準を満たすというわけではなかった。次いで、ＴＴＲ－ＣＭを検出する場合に、ＡＴＴＲバイオマーカーの組合せが感度および特異性の改善を達成することができるかどうかを決定するために、これらのバイオマーカーを組合せで評価した。
【実施例5】
【0402】
単一バイオマーカーのＮＹＨＡクラス応答スクリーニング
本実施例は、各ＮＹＨＡクラスを考慮した場合のバイオマーカーの効果の評価を示す。図７に示すように、ＮＹＨＡクラスに対するすべてのバイオマーカーの効果をモデル化し、有意性試験に対するｐ値を報告した。データは、バイオマーカーの効果がＰＫＭ、ＴｎＩ、ＲＢＰ４、ＲＢＰおよびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰについて統計学的に有意であることを示した。これは、これらのＡＴＴＲバイオマーカーが、実施例４で上述したように、これらのバイオマーカーのどれも感度および特異性の判定基準を満たさなかったという事実にもかかわらず、ＴＴＲ－ＣＭの検出に有用であり得たことを示している。
本実施例は、各ＮＹＨＡクラスを考慮した場合のバイオマーカーの効果の評価を示す。図７に示すように、ＮＹＨＡクラスに対するすべてのバイオマーカーの効果をモデル化し、有意性試験に対するｐ値を報告した。データは、バイオマーカーの効果がＰＫＭ、ＴｎＩ、ＲＢＰ４、ＲＢＰおよびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰについて統計学的に有意であることを示した。これは、これらのＡＴＴＲバイオマーカーが、実施例４で上述したように、これらのバイオマーカーのどれも感度および特異性の判定基準を満たさなかったという事実にもかかわらず、ＴＴＲ－ＣＭの検出に有用であり得たことを示している。
【実施例6】
【0403】
性能の結果
本実施例は、バイオマーカーの組合せから得られたデータを処理するための一般化回帰フィットのスクリーニングを示す。主効果および交互作用をスクリーニングし、４種以下のバイオマーカーとのベストフィットをさらなる評価のために選択した。
本実施例は、バイオマーカーの組合せから得られたデータを処理するための一般化回帰フィットのスクリーニングを示す。主効果および交互作用をスクリーニングし、４種以下のバイオマーカーとのベストフィットをさらなる評価のために選択した。
【0404】
入力として完全応答局面（ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ）を使用する一個抜き検証を用いた適合二重ラッソ一般化回帰方法（ａｄａｐｔｉｖｅ ｄｏｕｂｌｅ ｌａｓｓｏ ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ）は、いくつかの相関したバイオマーカーを含む小さなデータセットで最小数の効果を使用して、ほぼ最適なモデルを選択することが予想された。図８に示すように、使用する方法に応じて、バイオマーカーの異なるサブセットが情報価値のあることが分かった。しかし、実際的な考慮に基づいて、４種のバイオマーカーという制限を決定した。バイオマーカーのいくつかのサブセットおよび予測モデルを生成した。ＰＫＭ、ＴｎＩ、ＤＣＮ、ＴＩＭＰ２およびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを含むさらなる機械学習を使用して、これらのバイオマーカーをさらに評価した。
【0405】
ＰＫＭとＴｎＩとＤＣＮとＴＩＭＰ２とＮＴ－ｐｒｏＢＮＰとの組合せを使用するさらなるモデルスクリーニングを行った。図９に示すように、ブートストラップ森モデルは、他の機械学習方法と比較して、最良の結果をもたらすことが分かった。神経回路網モデルも良好な結果もたらしたが、偽陰性がより多い。
【0406】
これらの結果によって、ＴｎＩおよびＰＫＭを含み、特に、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよび／またはＲＢＰ４との、３種のバイオマーカーまたは４種のバイオマーカーの組合せが、高い感度および特異性でＴＴＲ－ＣＭを検出することができることが示される。
【実施例7】
【0407】
ＡＴＴＲアミロイドーシス患者で上昇しているバイオマーカーとしてのＰＫＭおよびＴＩＭＰ２の特定
本実施例は、正常なヒト対照サンプルと比較して、ＡＴＴＲｗｔ患者において個々におよび組合せで、血漿レベルの上昇を示す、特定された２種のバイオマーカー（ＰＫＭおよびＴＩＭＰ２）を示す。
本実施例は、正常なヒト対照サンプルと比較して、ＡＴＴＲｗｔ患者において個々におよび組合せで、血漿レベルの上昇を示す、特定された２種のバイオマーカー（ＰＫＭおよびＴＩＭＰ２）を示す。
【0408】
正常ヒト血漿およびＡＴＴＲアミロイドーシス血漿に対する免疫反応性について、表２で選択されたバイオマーカーをＥＬＩＳＡによって試験した（表７）。
【0409】
【表7】
【0410】
【表8】
【0411】
信号対雑音（Ｓ／Ｎ）比（各バイオマーカーに対して、心筋症（ＣＭ）または正常（Ｎ）サンプルの生の吸光度値を正常サンプルの平均で割ったものとして計算する）を各バイオマーカーアッセイに対して決定した。カットオフ値は、それぞれの最高値の正常サンプルが平均＋（４×標準偏差）より大きいので除外されたＩＬＫおよびＰＫＭに対するアッセイを除いて、各バイオマーカーアッセイに対する正常血漿サンプルの最高Ｓ／Ｎ値として設定した。
【0412】
Ｓ／Ｎ値を使用し、これらを各バイオマーカーに対するカットオフ値と比較することによって、各サンプル（すなわち、ＣＭまたはＮ）を陽性（＞カットオフ）または陰性（＜カットオフ）として、それぞれ１または０でスコア化した（表８）。感度、特異性および精度を含めて、各バイオマーカーの性能比も以下の計算により決定した：％感度＝陽性にスコア化されたＣＭサンプルの数／全ＣＭサンプル；％特異性＝（１－陽性にスコア化された正常サンプルの数）×１００；％精度＝（報告された陽性ＣＭサンプルの数＋報告された陰性正常サンプルの数）／試験した全サンプル（ＣＭおよびＮ）×１００。
【0413】
【表9-1】
【表9-2】
【0414】
試験した様々なバイオマーカーの性能スコアは、２種の個々のマーカー、ＴＩＭＰ２（感度７２％、特異性１００％、精度８７％）およびＰＫＭ（感度８３％、特異性９７％、精度９０％）について、高い感度、特異性および精度を示した。サンプルの同じセット全体にわたって２種のマーカー、ＴＩＭＰ２およびＰＫＭを組み合わせると、感度、特異性および精度は、有意に改善され（感度９３％、特異性９７％、精度９５％）、組み合わせたＴＩＭＰ２およびＰＫＭは、ＡＴＴＲｗｔ血漿の特定のための高感度かつ特異的なマーカーとして働くことができることが示唆される。
【実施例8】
【0415】
バイオマーカーの閾値の計算
本実施例は、ＡＴＴＲアミロイドーシスのバイオマーカーに対する閾値の特定を示す。
本実施例は、ＡＴＴＲアミロイドーシスのバイオマーカーに対する閾値の特定を示す。
【0416】
合計でＮ＝３０の診断されたＴＴＲ－ＣＭ患者の血漿サンプルおよびＮ＝３０の正常なドナーのサンプルをＰＫＭ、ＴＩＭＰ２、ＬＩＭＳ１、Ｃ３およびＡ１１の発現について評価した。感度、特異性および精度は、上記のように計算した。感度および特異性の計算は、未診断のＴＴＲ－ＣＭドナーはいないと仮定した。各アッセイに対する最適化された検出カットオフは、およそ１００％の特異性を保持すると同時に感度を最大にすることによって決定した（表９および図１０）。
【0417】
開示される方法は、手動で実施することができ、または自動化することができる。例えば、開示される方法は、ＡＤＶＩＡ ＣＥＮＴＡＵＲ（登録商標）イムノアッセイシステムまたはＡＴＥＬＬＩＣＡ＠（商標）を使用することができる。例えば、以下の動作を行うようにシステムを自動化することができる：
１．サンプルをキュベットに分注する。
２．抗ヒトＩｇＭ抗体が結合した固体支持体を含む緩衝液を分注し、例えば３７℃で１８．２５分間インキュベートする。
３．固体支持体を脱離／分離させ、キュベットを吸引し、洗浄試薬で洗浄する。
４．化学発光でタグされたＮＳ１抗原を含む緩衝液を分注し、例えば、３７℃で１８分間インキュベートする。
５．固体支持体を脱離／分離させ、キュベットを吸引し、洗浄試薬で洗浄する。
６．化学発光試薬を分注して、化学発光反応を惹起する。
７．ユーザーが選択したオプションに従って、結果を報告する。
１．サンプルをキュベットに分注する。
２．抗ヒトＩｇＭ抗体が結合した固体支持体を含む緩衝液を分注し、例えば３７℃で１８．２５分間インキュベートする。
３．固体支持体を脱離／分離させ、キュベットを吸引し、洗浄試薬で洗浄する。
４．化学発光でタグされたＮＳ１抗原を含む緩衝液を分注し、例えば、３７℃で１８分間インキュベートする。
５．固体支持体を脱離／分離させ、キュベットを吸引し、洗浄試薬で洗浄する。
６．化学発光試薬を分注して、化学発光反応を惹起する。
７．ユーザーが選択したオプションに従って、結果を報告する。
【0418】
特定の実施形態では、開示されるイムノアッセイは、ＡＤＶＩＡ ＣＥＮＴＡＵＲイムノアッセイシステム（Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＡＧ）での使用に適している可能性があり、および／または上記の動作を実施するようにＡＤＶＩＡ ＣＥＮＴＡＵＲイムノアッセイシステムを自動化することができる。
【0419】
【表10】
【実施例9】
【0420】
患者評価
例えば表２～５において本明細書で開示されるようなＡＴＴＲバイオマーカーの組合せにおける各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルについて、ＴＴＲ－ＣＭの危険性がある患者を試験する。血液サンプルを患者から採取し、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ａｔｅｌｌｉｃａ（登録商標）システムまたはＳｉｅｍｅｎｓ Ａｄｖｉａ Ｃｅｎｔａｕｒ（登録商標）システムを使用してレベルを測定して、患者に関するＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る。必要に応じて、患者の人口統計学的要因および画像ベースのバイオマーカーを考慮する。患者のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算する。ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアに基づいて、ＴＴＲ－ＣＭを有するとして患者をカテゴリー化する。ＴＴＲ安定剤または心臓の他の医薬の投与が推奨される。
例えば表２～５において本明細書で開示されるようなＡＴＴＲバイオマーカーの組合せにおける各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルについて、ＴＴＲ－ＣＭの危険性がある患者を試験する。血液サンプルを患者から採取し、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ａｔｅｌｌｉｃａ（登録商標）システムまたはＳｉｅｍｅｎｓ Ａｄｖｉａ Ｃｅｎｔａｕｒ（登録商標）システムを使用してレベルを測定して、患者に関するＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る。必要に応じて、患者の人口統計学的要因および画像ベースのバイオマーカーを考慮する。患者のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算する。ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアに基づいて、ＴＴＲ－ＣＭを有するとして患者をカテゴリー化する。ＴＴＲ安定剤または心臓の他の医薬の投与が推奨される。
【実施例10】
【0421】
患者評価
例えば表２～５において本明細書で開示されるようなＡＴＴＲバイオマーカーの組合せにおける各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルについて、ＴＴＲ－ＣＭの危険性がある患者を試験する。血液サンプルを患者から採取し、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ａｔｅｌｌｉｃａ（登録商標）システムまたはＳｉｅｍｅｎｓ Ａｄｖｉａ Ｃｅｎｔａｕｒ（登録商標）システムを使用してレベルを測定して、患者に関するＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る。必要に応じて、患者の人口統計学的要因および画像ベースのバイオマーカーを考慮する。患者のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを参照ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルと比較する。比較に基づいて、ＴＴＲ－ＣＭを有するとして患者をカテゴリー化する。ＴＴＲ安定剤または心臓の他の医薬の投与が推奨される。
例えば表２～５において本明細書で開示されるようなＡＴＴＲバイオマーカーの組合せにおける各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルについて、ＴＴＲ－ＣＭの危険性がある患者を試験する。血液サンプルを患者から採取し、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ａｔｅｌｌｉｃａ（登録商標）システムまたはＳｉｅｍｅｎｓ Ａｄｖｉａ Ｃｅｎｔａｕｒ（登録商標）システムを使用してレベルを測定して、患者に関するＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る。必要に応じて、患者の人口統計学的要因および画像ベースのバイオマーカーを考慮する。患者のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを参照ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルと比較する。比較に基づいて、ＴＴＲ－ＣＭを有するとして患者をカテゴリー化する。ＴＴＲ安定剤または心臓の他の医薬の投与が推奨される。
【実施例11】
【0422】
患者評価
例えば表２～５において本明細書で開示されるようなＡＴＴＲバイオマーカーの組合せにおける各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルについて、ＴＴＲ－ＣＭの危険性がある患者を試験する。血液サンプルを患者から採取し、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ａｔｅｌｌｉｃａ（登録商標）システムまたはＳｉｅｍｅｎｓ Ａｄｖｉａ Ｃｅｎｔａｕｒ（登録商標）システムを使用してレベルを測定して、患者に関するＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る。必要に応じて、患者の人口統計学的要因および画像ベースのバイオマーカーを考慮する。患者のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算する。ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアに基づいて、ＴＴＲ－ＣＭを有する危険性があるとして患者をカテゴリー化する。さらなる心筋症試験が推奨される。
例えば表２～５において本明細書で開示されるようなＡＴＴＲバイオマーカーの組合せにおける各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルについて、ＴＴＲ－ＣＭの危険性がある患者を試験する。血液サンプルを患者から採取し、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ａｔｅｌｌｉｃａ（登録商標）システムまたはＳｉｅｍｅｎｓ Ａｄｖｉａ Ｃｅｎｔａｕｒ（登録商標）システムを使用してレベルを測定して、患者に関するＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る。必要に応じて、患者の人口統計学的要因および画像ベースのバイオマーカーを考慮する。患者のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算する。ＡＴＴＲバイオマーカーのスコアに基づいて、ＴＴＲ－ＣＭを有する危険性があるとして患者をカテゴリー化する。さらなる心筋症試験が推奨される。
【実施例12】
【0423】
患者評価
例えば表２～５において本明細書で開示されるようなＡＴＴＲバイオマーカーの組合せにおける各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルについて、ＴＴＲ－ＣＭの危険性がある患者を試験する。血液サンプルを患者から採取し、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ａｔｅｌｌｉｃａ（登録商標）システムまたはＳｉｅｍｅｎｓ Ａｄｖｉａ Ｃｅｎｔａｕｒ（登録商標）システムを使用してレベルを測定して、患者に関するＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る。必要に応じて、患者の人口統計学的要因および画像ベースのバイオマーカーを考慮する。患者のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを参照ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルと比較する。比較に基づいて、ＴＴＲ－ＣＭを有する危険性があるとして患者をカテゴリー化する。さらなる心筋症試験が推奨される。
例えば表２～５において本明細書で開示されるようなＡＴＴＲバイオマーカーの組合せにおける各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルについて、ＴＴＲ－ＣＭの危険性がある患者を試験する。血液サンプルを患者から採取し、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ａｔｅｌｌｉｃａ（登録商標）システムまたはＳｉｅｍｅｎｓ Ａｄｖｉａ Ｃｅｎｔａｕｒ（登録商標）システムを使用してレベルを測定して、患者に関するＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る。必要に応じて、患者の人口統計学的要因および画像ベースのバイオマーカーを考慮する。患者のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを参照ＡＴＴＲバイオマーカープロファイルと比較する。比較に基づいて、ＴＴＲ－ＣＭを有する危険性があるとして患者をカテゴリー化する。さらなる心筋症試験が推奨される。
【実施例13】
【0424】
集団評価
例えば表２～５において本明細書で開示されるようなＡＴＴＲバイオマーカーの組合せにおける各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルについて、ＴＴＲ－ＣＭのリスクのある１０００人の患者を試験する。血液サンプルを患者から採取し、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ａｔｅｌｌｉｃａ（登録商標）システムまたはＳｉｅｍｅｎｓ Ａｄｖｉａ Ｃｅｎｔａｕｒ（登録商標）システムを使用してレベルを測定して、患者に関するＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る。必要に応じて、患者の人口統計学的要因および画像ベースのバイオマーカーを考慮する。患者のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、それぞれのＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算する。ＴＴＲ－ＣＭを有する危険性があるとして患者のサブセットをカテゴリー化する。さらなる心筋症試験が推奨される。
例えば表２～５において本明細書で開示されるようなＡＴＴＲバイオマーカーの組合せにおける各ＡＴＴＲバイオマーカーのレベルについて、ＴＴＲ－ＣＭのリスクのある１０００人の患者を試験する。血液サンプルを患者から採取し、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ａｔｅｌｌｉｃａ（登録商標）システムまたはＳｉｅｍｅｎｓ Ａｄｖｉａ Ｃｅｎｔａｕｒ（登録商標）システムを使用してレベルを測定して、患者に関するＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを得る。必要に応じて、患者の人口統計学的要因および画像ベースのバイオマーカーを考慮する。患者のＡＴＴＲバイオマーカープロファイルを使用して、それぞれのＡＴＴＲバイオマーカーのスコアを計算する。ＴＴＲ－ＣＭを有する危険性があるとして患者のサブセットをカテゴリー化する。さらなる心筋症試験が推奨される。
【実施例14】
【0425】
非侵襲的で正確なＴＴＲ－ＣＭの臨床的有用性
本実施例は、高感度でもあり特異的でもあり、準拠が容易である非侵襲的ＴＴＲ－ＣＭアッセイを提供する利益を公衆に示す。本実施例は、侵襲的な心筋症試験を受けたがらないのは一般的であること、およびこれは、ＴＴＲ－ＣＭが早期に検出されない場合、健康に重大な結果を招く可能性があることを示す。
本実施例は、高感度でもあり特異的でもあり、準拠が容易である非侵襲的ＴＴＲ－ＣＭアッセイを提供する利益を公衆に示す。本実施例は、侵襲的な心筋症試験を受けたがらないのは一般的であること、およびこれは、ＴＴＲ－ＣＭが早期に検出されない場合、健康に重大な結果を招く可能性があることを示す。
【0426】
患者はＴＴＲ－ＣＭの症状を示したが、心臓生検を拒否した。患者のプライマリケア医は、例えば表２～５において本明細書で開示されるようなＡＴＴＲバイオマーカーの組合せにおける各ＡＴＴＲバイオマーカーの患者のレベルの評価を依頼した。この結果は、患者はＴＴＲ－ＣＭの危険性が高いことを示した。患者は医師に相談し、ＴＴＲ－ＣＭの根拠を明らかにするさらなる心筋症試験を予定するように説得された。
【0427】
参考文献
1. Gertz, M.A., Benson, M.D., Dyck, P.J., Grogan, M. Coelho, T., Crus, M., Berk, J.L., Plante-Bordeneuve, V., Schmidt, H.H., Merlini, G. Diagnosis, Prognosis, and Therapy of Transthyretin Amyloidosis. JACC 66:2452-2466 (2015).
2. Ashley 2004
3. Krishnamurthy, R., Cheong, B., Muthypillai, R. Tools for cardiovascular magnetic resonance imaging. Current Cardiology Reviews, 9:185-190, 2013.
4. Doltra, A., Amundsen, B.H., Gebker, R., Fleck, E., Kelle, S. Emerging concepts for myocardial late gadolinium enhancement MRI. Curr Cardiol Rev. 9(3):185-90, 2013.
5. Bokhari, S., Castano, A., Pozniakoff, T., Deslisle, S., Latif, F., Maurer, M.S., (99m)Tc-pyrophosphate scintigraphy for differentiating light-chain cardiac amyloidosis from the transthyretin-related familial and senile cardiac amyloidoses. Circ Cardiovasc Imaging. 6(2):195-201, 2013.
6. Crotty, T.B. Li, C.Y., Edwards, W.D., Suman, V.J. Amyloidosis and endomyocardial biopsy: Correlation of extent and pattern of deposition with amyloid immunophenotype in 100 cases. Cardiovascular Pathology 4:39-42, 1995.
7. Arvanitis, M. et al. Identification of Transthyretin Cardiac Amyloidosis Using Serum Retinol-Binding Protein 4 and a Clinical Prediction Model. JAMA Cardiol., 2017.
1. Gertz, M.A., Benson, M.D., Dyck, P.J., Grogan, M. Coelho, T., Crus, M., Berk, J.L., Plante-Bordeneuve, V., Schmidt, H.H., Merlini, G. Diagnosis, Prognosis, and Therapy of Transthyretin Amyloidosis. JACC 66:2452-2466 (2015).
2. Ashley 2004
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5. Bokhari, S., Castano, A., Pozniakoff, T., Deslisle, S., Latif, F., Maurer, M.S., (99m)Tc-pyrophosphate scintigraphy for differentiating light-chain cardiac amyloidosis from the transthyretin-related familial and senile cardiac amyloidoses. Circ Cardiovasc Imaging. 6(2):195-201, 2013.
6. Crotty, T.B. Li, C.Y., Edwards, W.D., Suman, V.J. Amyloidosis and endomyocardial biopsy: Correlation of extent and pattern of deposition with amyloid immunophenotype in 100 cases. Cardiovascular Pathology 4:39-42, 1995.
7. Arvanitis, M. et al. Identification of Transthyretin Cardiac Amyloidosis Using Serum Retinol-Binding Protein 4 and a Clinical Prediction Model. JAMA Cardiol., 2017.
【0428】
本開示で引用されるすべての刊行物および特許（上に列挙したものを含む）は、個々の刊行物または特許のそれぞれが、参照によって組み入れられることが具体的にかつ個々に示されるかのように、参照によって本明細書に組み入れられる。
【0429】
均等物
当業者は、ルーチンに過ぎない実験を使用して、本明細書に記載の本開示の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、または確認することができる。本開示の範囲は、上記の説明に限定されることを意図するものではなく、むしろ以下の特許請求の範囲に記載される通りである。
当業者は、ルーチンに過ぎない実験を使用して、本明細書に記載の本開示の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識するか、または確認することができる。本開示の範囲は、上記の説明に限定されることを意図するものではなく、むしろ以下の特許請求の範囲に記載される通りである。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8-1】
【図8-2】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14-1】
【図14-2】
【図14-3】
【図14-4】
【図14-5】
【図14-6】
【図14-7】
【図14-8】
【図14-9】
【図14-10】
【図14-11】
【図14-12】
【図14-13】
【図14-14】
【図14-15】
【図14-16】
【図14-17】
【図14-18】
【図14-19】
【配列表】
【国際調査報告】