特表 2024-536148 抗微生物性化合物および使用法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-04

(54)【発明の名称】抗微生物性化合物および使用法

(51)【国際特許分類】

   C07K 7/06 20060101AFI20240927BHJP

   A61P 31/10 20060101ALI20240927BHJP

   A61K 38/08 20190101ALI20240927BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240927BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240927BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20240927BHJP

   A61P 31/06 20060101ALI20240927BHJP

   A01P 3/00 20060101ALI20240927BHJP

   A01N 43/08 20060101ALI20240927BHJP

【ＦＩ】

C07K7/06

A61P31/10

A61K38/08

A61P43/00 121

A61K45/00

A61P31/04

A61P31/06

A01P3/00

A01N43/08 E

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024519317

(86)(22)【出願日】2022-09-30

(85)【翻訳文提出日】2024-05-23

(86)【国際出願番号】 US2022045350

(87)【国際公開番号】W WO2023055999

(87)【国際公開日】2023-04-06

(31)【優先権主張番号】63/251,401

(32)【優先日】2021-10-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524060588

【氏名又は名称】ミドル テネシー ステイト ユニバーシティー

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ビッカー， ケビン リー

(72)【発明者】

【氏名】グリーン， ロバート マディソン

【テーマコード（参考）】

4C084

4H011

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084AA07

4C084AA19

4C084BA01

4C084BA17

4C084BA32

4C084CA59

4C084MA52

4C084MA56

4C084MA58

4C084MA59

4C084MA60

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZB35

4H011AA03

4H011BB08

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA14

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA30

(57)【要約】

ペプトイド、その組成物、および上記ペプトイドを使用する方法。上記ペプトイドは、抗微生物性ペプトイドであり得る。いくつかの実施形態において、上記ペプトイドは、ヒトもしくは動物などの脊椎動物、または植物において、真菌感染、真菌感染から生成されるバイオフィルム、またはその組み合わせを処置または防止するために使用され得る。いくつかの実施形態において、上記ペプトイドは、ヒトもしくは動物などの脊椎動物、または植物において、細菌感染、または細菌感染から生成されるバイオフィルム、またはその組み合わせを処置または防止するために使用され得る。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

一般式：

【化22】

の化合物、そのプロトン化形態、その薬学的に受容可能な塩、または両方であって、
ここで：
Ａ^Ｘは、Ｈまたは直線状もしくは分枝状の（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルキルまたは直線状もしくは分枝状の（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルケニルであり、ここで前記アルキルもしくは前記アルケニルは、必要に応じてカルボニル基を含み；
Ｔは、直線状もしくは分枝状の（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルキルまたは直線状もしくは分枝状の（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルケニルであり、ここで前記アルキルまたは前記アルケニルは、必要に応じてカルボニル基を含み；
Ｑは、ヒドロキシルまたはＮＨ_２であり；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６は、各々独立して、

【化23】

【化24】

または一般式Ｒ^１０ＮＲ^１１Ｒ^１２Ｒ^１３のアルキルアミンであり、
ここで：
各ｎは、独立して、（Ｃ_０～Ｃ_３）アルキレンであり；
各ｙは、独立して、（Ｃ_０～Ｃ_６）アルキレンであり；
ＮｃｐｅｎＷである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｗは、独立して、Ｎ、Ｓ、またはＯであり；
ＮｌｉｎＷである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｗは、独立して、Ｎ、Ｓ、またはＯであり；
ＮｐｈＸである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩであり；
ＮｐｅｎＺである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｚは、独立して、Ｓ、またはＯであり；
Ｒ^１０ＮＲ^１１Ｒ^１２Ｒ^１３である各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｒ^１０は、独立して、直線状（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキレンであり；
ＮｎｐｈＯＲである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｒ^５０は、独立して、（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキルであり；
Ｒ^１０ＮＲ^１１Ｒ^１２Ｒ^１３である各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｒ^１１、各Ｒ^１２、および各Ｒ^１３は、独立して、Ｈまたは（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキルである、化合物、そのプロトン化形態、その薬学的に受容可能な塩、または両方。

【請求項2】

Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６は、各々独立して、

【化25】

【化26】

である、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ｔは、直線状（Ｃ_１３）アルキル；直線状（Ｃ_１５）アルキル；または（ＣＯ）Ｒ^２０であり、ここでＲ^２０は、直線状（Ｃ_１３）アルキルまたは直線状（Ｃ_１５）アルキルである、請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ^１０は、直線状（Ｃ_２～Ｃ_４）アルキレンである、請求項１に記載の化合物。

【請求項5】

Ｒ^１１、Ｒ^１２、およびＲ^１３は、メチルである、請求項１に記載の化合物。

【請求項6】

Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎｎｖａであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５のうちのいずれか１つは、Ｎｐｅａであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎｌｙｓであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎｆｕｒであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎｐｈｅであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎａｐである、請求項１に記載の化合物。

【請求項7】

以下の構造：

【化27】

またはそのプロトン化形態を有する、請求項６に記載の化合物。

【請求項8】

一般式：

【化28】

の化合物、またはそのプロトン化形態であって、ここで：
Ａ^Ｘは、Ｈまたは直線状もしくは分枝状の（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルキルまたは直線状もしくは分枝状の（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルケニルであり、ここで前記アルキルもしくは前記アルケニルは、必要に応じて、カルボニル基を含み；
Ｔは、直線状もしくは分枝状の（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルキルまたは直線状もしくは分枝状の（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルケニルであり、ここで前記アルキルまたは前記アルケニルは、必要に応じてカルボニル基を含み；
Ｑは、ヒドロキシルまたはＮＨ_２であり；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６は、各々独立して、

【化29】

【化30】

または一般式Ｒ^１０ＮＲ^１１Ｒ^１２Ｒ^１３のアルキルアミンであり、
ここで：
各ｎは、独立して、（Ｃ_０～Ｃ_３）アルキレンであり；
各ｙは、独立して、（Ｃ_０～Ｃ_６）アルキレンであり；
ＮｃｐｅｎＷである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｗは、独立して、Ｎ、Ｓ、またはＯであり；
ＮｌｉｎＷである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｗは、独立して、Ｎ、Ｓ、またはＯであり；
ＮｐｈＸである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩであり；
ＮｐｅｎＺである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｚは、独立して、Ｓ、またはＯであり；
Ｒ^１０ＮＲ^１１Ｒ^１２Ｒ^１３である各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｒ^１０は、独立して、直線状（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキレンであり；
ＮｎｐｈＯＲである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｒ^５０は、独立して、（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキルであり；
Ｒ^１０ＮＲ^１１Ｒ^１２Ｒ^１３である各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｒ^１１、各Ｒ^１２、および各Ｒ^１３は、独立して、Ｈまたは（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキルである、
化合物；ならびに
薬学的に受容可能なキャリアまたは殺真菌性の受容可能なキャリア、
を含む組成物。

【請求項9】

Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６は、各々独立して、

【化31】

【化32】

である、請求項８に記載の組成物。

【請求項10】

Ｔは、直線状（Ｃ_１３）アルキル；直線状（Ｃ_１５）アルキル；または（ＣＯ）Ｒ^２０であり、ここでＲ^２０は、直線状（Ｃ_１３）アルキルまたは直線状（Ｃ_１５）アルキルである、請求項８に記載の組成物。

【請求項11】

Ｒ^１０は、直線状（Ｃ_２～Ｃ_４）アルキレンである、請求項８に記載の組成物。

【請求項12】

Ｒ^１１、Ｒ^１２、およびＲ^１３は、メチルである、請求項８に記載の組成物。

【請求項13】

Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎｎｖａであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５のうちのいずれか１つは、Ｎｐｅａであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎｌｙｓであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎｆｕｒであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎｐｈｅであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎａｐである、請求項８に記載の組成物。

【請求項14】

以下の構造：

【化33】

またはそのプロトン化形態を有する、請求項１３に記載の組成物。

【請求項15】

請求項８に記載の組成物を被験体に投与する工程を包含する方法。

【請求項16】

前記被験体は、ヒトまたは動物である、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記方法は、前記被験体において真菌感染、もしくは真菌感染から生成されるバイオフィルム、またはその組み合わせを処置または防止する工程をさらに包含する、請求項１５に記載の方法。

【請求項18】

前記真菌感染は、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｕｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｉｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｍｉｎｕｔａ、もしくはＲｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇｌｕｔｉｎｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、もしくはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

さらなる抗真菌化合物を投与する工程をさらに包含する、請求項１５に記載の方法。

【請求項20】

前記さらなる抗真菌化合物の投与は、前記組成物の投与と同時に行われる、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記方法は、前記被験体において細菌感染、または細菌感染から生成されるバイオフィルム、またはその組み合わせを処置または防止する工程をさらに包含する、請求項１５に記載の方法。

【請求項22】

さらなる抗真菌化合物を投与する工程をさらに包含する、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

前記さらなる抗真菌化合物の投与は、前記組成物の投与と同時に行われる、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記細菌感染は、グラム陽性またはグラム陰性細菌を含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項25】

前記グラム陽性細菌は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、またはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓを含む、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記グラム陰性細菌は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、またはＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉを含む、請求項２４に記載の方法。

【請求項27】

前記細菌感染は、結核を含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項28】

植物、植物の種子、または前記植物が生長する土壌に、請求項８に記載の組成物を投与する工程を包含する方法。

【請求項29】

前記方法は、前記植物において真菌感染、または真菌感染から生成されるバイオフィルム、またはその組み合わせを処置または防止する工程をさらに包含する、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

さらなる抗真菌化合物を投与する工程をさらに包含する、請求項２８に記載の方法。

【請求項31】

前記さらなる抗真菌化合物の投与は、前記組成物の投与と同時に行われる、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記真菌感染は、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ、Ｓｐｈａｅｒｏｐｓｉｓ、Ｐｈｏｍａ ｃｌｅｍａｔｉｄｉｎａ、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ、Ｄｉｐｌｏｃａｒｐｏｎ ｒｏｓａｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ、Ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｕｍ、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｈｏｍｏｅｏｃａｒｐａ、Ｐｈｙｓｏｄｅｒｍａ、Ｌａｅｔｉｓａｒｉａ ｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ、Ｓｅｒｐｕｌａ ｌａｃｒｙｍａｎｓ、Ｓｙｎｃｈｙｔｒｉｕｍ ｅｎｄｏｂｉｏｔｉｃｕｍ、Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ、Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｍ、Ｔａｐｈｒｉｎａ ｄｅｆｏｒｍａｎｓ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ、Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ ｂｉｄｗｅｌｌｉｉ、Ｖｅｎｔｕｒｉａ ｉｎａｅｑｕａｌｉｓ、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｒｏｌｆｓｉｉ、Ｆｉｂｒｏｐｏｒｉａ ｖａｉｌｌａｎｔｉｉ、Ｐｈｏｍａ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ、Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ ｏｘｙｃｏｃｃｉ、Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｍａｙｄｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ、Ｃｏｎｉｏｐｈｏｒａ ｐｕｔｅａｎａ、Ｐｏｒｉａ ｖａｉｌｌａｎｔｉｉ、Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ、Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓ、もしくはＰｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ ｔｒｉｔｉｃｉ－ｒｅｐｅｎｔｉｓａ、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項２９に記載の方法。

【請求項33】

第２の最小阻害濃度は、第１の最小阻害濃度の２００％以下であり、ここで前記第１の最小阻害濃度は、目的の微生物に対する連続耐性獲得アッセイなしに評価され、前記第２の最小阻害濃度は、前記目的の微生物に対する連続耐性獲得アッセイ後に評価される、請求項１に記載の化合物。

【請求項34】

前記目的の微生物は、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓである、請求項３３に記載の化合物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１０月１日出願の米国仮特許出願第６３／２５１，４０１号（これは、その全体において本明細書に参考として援用される）の利益を主張する。
政府による資金提供
本発明は、アメリカ国立衛生研究所によって授与された１Ｒ０３ＡＩ１４６３９３－０１Ａ１の下で政府の支援を得て行われた。政府は、本発明において一定の権利を有する。

【0002】

分野
本開示は一般に、ペプトイド、より具体的には、抗微生物性ペプトイド化合物；これを含む組成物；ならびに上記化合物および／または組成物を使用する方法に関する。

【背景技術】

【0003】

緒言
Ｃａｎｄｉｄａ種は、１年あたり７００万症例を超え、死亡率３３％の真菌による院内感染（ＨＡＩ）の主要原因である（Ｐｆａｌｌｅｒら，Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．２０，１３３－１６３（２００７））。Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓは、身体上でまたは口中に一般に見出され、ｐＨまたは栄養素利用性のような環境の変化が存在しなければ、宿主において健康上の問題は概して生じない。カンジダ性敗血症は、血流中のＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ感染であり、健常個体において死亡率は４０～６０％である（Ｓａｒｍａら，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｉｓｔ．１０，１５５－１６５（２０１７））。Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓは、環境に応じて、出芽酵母、仮性菌糸、または菌糸間でそれらの形態を切り替え得る（Ｓｕｄｂｅｒｙら，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．９，７３７（２０１１））。栄養素が豊富な環境では、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓは主に出芽酵母であるが、環境がより不利になると、それらはより強い菌糸形態へと切り替わる。菌糸形態では、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓは、ポリサッカリド、およびバイオフィルムと称される３Ｄマトリクスを形成する他の生体分子を分泌する（Ｄｏｕｇｌａｓら，Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１１，３０－３６（２００３））。バイオフィルムは、病原体が非生物表面（例えば、カウンター、カテーテル、移植される補綴物（Ｒａｍａｇｅら，ＦＥＭＳ Ｙｅａｓｔ Ｒｅｓ．６，９７９－９８６（２００６））、および換気装置（Ｎｏｂｉｌｅら，Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６９，７１－９２（２０１５）））上で増殖することを許容する。バイオフィルムは、ポリサッカリド、タンパク質、細胞外ＤＮＡ、ならびに防御および集団感知（ＱＳ）のために使用される低分子を含む（Ｓｚｔａｊｅｒら，ＩＳＭＥ Ｊ．８，２２５６－２２７１（２０１４））。上記ポリサッカリド混合物は、治療剤が上記病原体に達することを困難にし、従って、上記病原体と戦うために代替の処置を要する。

【0004】

バイオフィルムは、単一の種、多数の種、またはさらには異なる界に由来する病原体を含み得る（Ｓｚｔａｊｅｒら，ＩＳＭＥ Ｊ．８，２２５６－２２７１（２０１４））。日和見細菌は、真菌性バイオフィルムの中へと潜り込んで、界を横断する（ｃｒｏｓｓ－ｋｉｎｇｄｏｍ）バイオフィルムを作り出し得る。これらのシナリオの中で、上記患者は、初期感染のために処置されなければならないのみならず、より複雑な界を横断する感染と戦う多数の抗生物質をも要する。例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓがＣ．ａｌｂｉｃａｎｓバイオフィルムの中で見出される例が明らかに示されている（Ｈａｒｒｉｏｔｔら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．５３，３９１４－３９２２（２００９））。両方の種は、ＱＳ分子を放出して、いずれかの種が化合物の生成を促進または遅らせるようにシグナルを発し得る。ファルネソールは、Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓを含む大部分の真菌種によって放出される菌糸形成を刺激するＱＳ分子である（Ｐｅｌｅｇら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０５，１４５８５－１４５９０（２００８））。重要なことには、界を横断するバイオフィルムの必ずしも全てが相乗効果的であるわけではない。Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉは、初期増殖中のＣ．ａｌｂｉｃａｎｓバイオフィルムの増殖を阻害するが、バイオフィルムがいったん確立されれば、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓは、Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉの増殖を阻害する（Ｋｏｓｔｏｕｌｉａｓら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．６０，１６１－１６７（２０１６））。Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓは、ファルネソール（Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ増殖を阻害することが示された低分子）の放出を通じてこのことを行い得る。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】Ｐｆａｌｌｅｒら，Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．２０，１３３－１６３（２００７）

【非特許文献2】Ｓａｒｍａら，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｉｓｔ．１０，１５５－１６５（２０１７）

【非特許文献3】Ｓｕｄｂｅｒｙら，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．９，７３７（２０１１）

【非特許文献4】Ｄｏｕｇｌａｓら，Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１１，３０－３６（２００３）

【非特許文献5】Ｒａｍａｇｅら，ＦＥＭＳ Ｙｅａｓｔ Ｒｅｓ．６，９７９－９８６（２００６）

【非特許文献6】Ｎｏｂｉｌｅら，Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６９，７１－９２（２０１５）

【非特許文献7】Ｓｚｔａｊｅｒら，ＩＳＭＥ Ｊ．８，２２５６－２２７１（２０１４）

【非特許文献8】Ｈａｒｒｉｏｔｔら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．５３，３９１４－３９２２（２００９）

【非特許文献9】Ｐｅｌｅｇら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０５，１４５８５－１４５９０（２００８）

【非特許文献10】Ｋｏｓｔｏｕｌｉａｓら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．６０，１６１－１６７（２０１６）

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0006】

出願の概要
プランクトン様に増殖する（ｐｌａｎｋｔｏｎｉｃａｌｌｙ ｇｒｏｗｉｎｇ）微生物を標的とするのみならず、病原体のバイオフィルムをも標的とする抗微生物性薬剤の開発は、ＨＡＩを処置するにあたって非常に有利である。本開示は、ペプトイド、その組成物、および上記ペプトイドを使用して、脊椎動物または植物において、真菌感染および／もしくは細菌感染、ならびに／または細菌感染および／もしくは真菌感染から生成されるバイオフィルムを処置および／または防止する方法を記載する。

【0007】

１つの局面において、本開示は、一般式：

【化1】

の化合物、そのプロトン化形態、その薬学的に受容可能な塩、または両方を記載する。Ａ^Ｘは、Ｈまたは直線状もしくは分枝状の（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルキルまたは直線状もしくは分枝状の（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルケニルであり、ここで上記アルキルまたは上記アルケニルは、必要に応じて、カルボニル基を含む。Ｔは、直線状もしくは分枝状の（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルキルまたは直線状もしくは分枝状の（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルケニルであり得、ここで上記アルキルまたは上記アルケニルは、必要に応じて、カルボニル基を含む。Ｑは、ヒドロキシルまたはＮＨ_２であり得る。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６は、各々独立して、

【化2】

【化3】

または一般式Ｒ^１０ＮＲ^１１Ｒ^１２Ｒ^１３のアルキルアミンである。各ｎは、独立して、（Ｃ_０～Ｃ_３）アルキレンである。各ｙは、独立して、（Ｃ_０～Ｃ_６）アルキレンである。ＮｃｐｅｎＷである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関しては、各Ｗは、独立して、Ｎ、Ｓ、またはＯである。ＮｌｉｎＷである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関しては、各Ｗは、独立して、Ｎ、Ｓ、またはＯである。ＮｐｈＸである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関しては、各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩである。ＮｐｅｎＺである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関しては、各Ｚは、独立して、Ｓ、またはＯである。Ｒ^１０ＮＲ^１１Ｒ^１２Ｒ^１３である各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関しては、各Ｒ^１０は、独立して、直線状（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキレンである。Ｒ^１０ＮＲ^１１Ｒ^１２Ｒ^１３である各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関しては、各Ｒ^１１、各Ｒ^１２、および各Ｒ^１３は、独立して、Ｈまたは（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキルである。

【0008】

別の局面において、本開示は、先の局面の化合物および薬学的に受容可能なキャリアまたは殺真菌性の受容可能なキャリアを含む組成物を記載する。

【0009】

別の局面において、本開示は、上述の局面のうちのいずれか１つの化合物および／または組成物を被験体に投与して、真菌感染、細菌感染、真菌感染から生成されるバイオフィルム、細菌感染から生成されるバイオフィルム、またはこれらの組み合わせを防止および／または処置する方法を記載する。いくつかの実施形態において、上記被験体は、脊椎動物（例えば、ヒト、飼い慣らされた動物、またはコンパニオンアニマル）である。いくつかの実施形態において、上記被験体は、植物である。

【0010】

定義

【0011】

本明細書で使用される用語は、別段特定されなければ、関連分野におけるそれらの通常の意味をとることが理解される。本明細書で使用されるいくつかの用語、およびそれらの意味は、以下に示される。

【0012】

別段特定されなければ、「１つの、ある（ａ）」、「１つの、ある（ａｎ）」、「上記、この、その（ｔｈｅ）」および「少なくとも１（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」とは、交換可能に使用され、１または１より多いことを意味する。

【0013】

本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、用語「または（ｏｒ）」は、内容が別段明らかに規定しなければ、「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」を含むその意味において概して使用される。用語「および／または」は、列挙された要素のうちの１つもしくは全て、またはその列挙された要素のうちのいずれか２つもしくはこれより多くの組み合わせを意味する。「および／または」の使用は、場合によっては、他の場合での「または」の使用が「および／または」を意味しない場合もあることを示唆しない。

【0014】

本明細書で使用される場合、「有する（ｈａｖｅ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む、包含する（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む、包含する（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む、包含する、（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などは、それらの制限のない包括的な意味において使用され、「挙げられるが、これらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｅ， ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」、「挙げられるが、これらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｅｓ， ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」または「挙げられるが、これらに限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ， ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」を概して意味する。

【0015】

実施形態が、文言「有する（ｈａｖｅ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む、包含する（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む、包含する（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む、包含する、（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などを用いて本明細書で記載される場合は常に、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」および／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」に関して記載される別の点で類似の実施形態がまた提供されることは、理解される。用語「からなる」は、語句「からなる」の後ろに続くものを含み、これらに限定されることを意味する。すなわち、「からなる」は、その列挙された要素が要求されるかまたは必須であること、および他の要素が存在し得ないことを示す。用語「から本質的になる」は、その語句が含まれた後に列挙される任意の要素が含まれること、および列挙された要素以外の要素がその列挙された要素に関する開示の中で特定される活動または行為に干渉しないかまたは寄与しないことを条件として、それら列挙された要素以外の要素が含まれてもよいことを示す。

【0016】

本明細書で使用される場合、組成物または化合物の文脈における「提供する（ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ）」とは、上記組成物または化合物を作製する、上記組成物または化合物を購入する、あるいは上記組成物または化合物を別の方法で得ることを意味する。

【0017】

本明細書全体を通じて「１つの実施形態（ｏｎｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、「一実施形態（ａｎ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」、「ある特定の実施形態（ｃｅｒｔａｉｎ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔｓ）」、または「いくつかの実施形態（ｓｏｍｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔｓ）」などへの言及は、上記実施形態と関連して記載される特定の特徴、構成、組成、または特性が、本開示の少なくとも１つの実施形態の中に含まれることを意味する。従って、本明細書全体を通じて種々の箇所でのこのような語句の出現は、本開示の同じ実施形態に必ずしも言及するわけではない。さらに、特定の特徴（例えば、化学官能基（例えば、Ｔ、Ａ^Ｘ、Ｑ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６））、構成、組成、または特性は、１またはこれより多くの実施形態において任意の適切な様式で組み合わされ得る。

【0018】

本開示全体を通じて、本開示の種々の局面は、範囲形式で示され得る。範囲形式での記載が便宜および簡潔さのために過ぎず、本開示の範囲に対する変更のできない限定として解釈されるべきではないことは、理解されるべきである。よって、範囲の記載は、具体的に開示される全ての考えられる部分範囲およびその範囲内の個々の数値を有すると見做されるべきである。例えば、１～６のような範囲の記載は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６などのような具体的に開示される部分範囲、ならびに１、２、２．７、３、４、５、５．３、および６のようなその範囲内の個々の数字を有すると見做されるべきである。このことは、範囲の幅とは無関係に該当する。

【0019】

本明細書で使用される場合、「脂肪族基（ａｌｉｐｈａｔｉｃ ｇｒｏｕｐ）」とは、飽和または不飽和の直線状または分枝状の炭化水素基を意味する。この用語は、例えば、アルキル、アルケニル、アルキレン、およびアルキニル基を包含するために使用される。

【0020】

本明細書で使用される場合、「アルキル（ａｌｋｙｌ）」とは、アルカンのラジカルである一価の基をいい、直鎖、分枝鎖、環式および二環式のアルキル基、ならびにこれらの組み合わせを含む（置換されていないおよび置換されたアルキル基の両方を含む）。

【0021】

用語「アルキレン（ａｌｋｙｌｅｎｅ）」とは、アルカンのラジカルである二価の基をいい、直線状、分枝状、環式、二環式、またはその組み合わせである基を含む。

【0022】

用語「アルケニル（ａｌｋｅｎｙｌ）」とは、アルケンのラジカルである一価の基をいい、直線状、分枝状、環式、またはこれらの組み合わせである基を含む。アルケニル基は、１個またはこれより多くの二重結合を有する。上記二重結合の位置は、上記アルケニルに沿った任意の位置に存在し得る。

【0023】

用語「芳香族（ａｒｏｍａｔｉｃ）」とは、ヒュッケル則に従う環式の完全共役平面構造をいい、すなわち、上記化合物は、４ｎ＋２個のπ電子を有し、ここでｎは、正の整数またはゼロである。例えば、ベンゼンは、６個のπ電子を有する。従って、６＝４ｎ＋２π。ｎについて解けば、１が得られる。従って、ベンゼンは、芳香族化合物である。

【0024】

用語「骨格（ｂａｃｋｂｏｎｅ）」とは、最長の連続鎖をいう。１またはこれより多くの分枝が、上記骨格に共有結合され得る。

【0025】

本明細書で使用される場合、用語「感染（ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）」とは、被験体の身体における微生物の存在および増加をいう。感染は、臨床上不顕性であり得るか、または微生物によって引き起こされる疾患と関連する症状を生じ得る。感染は、早期段階にあり得るか、または後期段階にあり得る。微生物の例としては、真菌および細菌が挙げられる。

【0026】

本明細書中の説明において、特定の実施形態は、明確性のために分離して説明され得る。特定の実施形態の特徴が別の実施形態の特徴と適合しないことを別段明示的に特定されなければ、ある特定の実施形態は、１またはこれより多くの実施形態と関連して本明細書で記載される適合する特徴の組み合わせを含み得る。

【0027】

不連続工程を含む本明細書で開示される任意の方法に関して、上記工程は、任意の実現可能な順序で行われ得る。そして、適切な場合、２またはこれより多くの工程の任意の組み合わせが、同時に行われ得る。

【0028】

上記の本開示の要旨は、各開示される実施形態または本開示のあらゆる実行を記載することは意図されない。以下に続く記載は、例証的実施形態をより詳細に例示する。本出願全体を通じたいくつかの箇所では、例のリストを通じてガイダンスが提供される。その例は、種々の組み合わせにおいて使用され得る。各場合において、その記載されるリストは、代表的グループとして役立つに過ぎず、排他的リストとして解釈されるべきではない。

【図面の簡単な説明】

【0029】

図面の簡単な説明

【0030】

本開示の例証的実施形態の以下の詳細な説明は、以下の図面とともに読まれるときに最も良く理解され得る。

【0031】

【図1】図１は、倒立型ペプトイドライブラリーアガー拡散（Ｉｎｖｅｒｔｅｄ Ｐｅｐｔｏｉｄ Ｌｉｂｒａｒｙ Ａｇａｒ Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）（ｉＰＬＡＤ）アッセイのための個々の段階の図解を示す。段階１：成熟Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓバイオフィルムは、組織培養処理したペトリ皿上に形成される。段階２：ＰＬＡＤ連結したペプトイドライブラリービーズを、確立されたバイオフィルムの頂部にある還元剤を含むソフトアガー中に埋め込む。一晩のインキュベーションは、ビーズからのβ鎖ペプトイドの放出を可能にして、真菌と相互作用させる。段階３：細胞生存性インジケーターであるフロキシンＢが添加され、上記アガーを通って拡散する。ビーズから放出される上記ペプトイドが真菌に対して毒性である場合、それら真菌は、フロキシンＢを排出することができず、それらを赤みがかった色に染色する。段階４：ヒットビーズを除去し、α鎖ペプトイドを、タンデム質量分析法による構造決定のために切断する。

【0032】

【図2A】図２Ａは、固相ＰＬＡＤリンカーシステム上のＲＧＬ９の構造を示す。位置Ｃは、カチオン性サブモノマーを含み、位置Ｒは、芳香族または脂肪族のサブモノマーを含む。

【0033】

【図2B】図２Ｂは、ＲＧＬ９へと組み込まれ得る考えられるカチオン性（Ｃ）および芳香族／脂肪族（Ｒ）側鎖基の例を示す。

【0034】

【図2C】図２Ｃは、ＲＭＧ９－１１（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓに対するｉＰＬＡＤスクリーニング作戦から特定されたペプトイド）の構造を示す。

【0035】

【図3】図３は、ＲＭＧ９－１１誘導体の構造を示す。

【0036】

【図4-1】図４は、ＲＭＧ９－１１の質量スペクトルを示す。

【図4-2】同上。

【0037】

【図5】図５は、サルコシンスキャンにおいて試験したサルコシンＲＭＧ９－１１誘導体を示す。

【0038】

【図6-1】図６は、構造活性関係性（ＳＡＲ）試験の第１回において試験したＲＭＧ９－１１誘導体の構造を示す。

【図6-2】同上。

【0039】

【図7】図７は、ＳＡＲ第１回ハイブリッド化合物の構造を示す。

【0040】

【図8-1】図８は、ＳＡＲ試験の第２回において試験したＲＭＧ９－１１誘導体の構造を示す。

【図8-2】同上。

【0041】

【図9】図９は、企図されたＳＡＲ第２回ハイブリッド化合物の構造を示す。

【0042】

【図10-1】図１０は、第３回構造活性関係性（ＳＡＲ）試験に関して企図されたＲＭＧ９－１１誘導体の構造を示す。

【図10-2】同上。

【図10-3】同上。

【図10-4】同上。

【発明を実施するための形態】

【0043】

詳細な説明
ペプトイド

【0044】

ペプトイド、その組成物、ならびに上記ペプトイドを作製および使用する方法が、本明細書で記載される。いくつかの実施形態において、本開示のペプトイドは、抗微生物性ペプトイドである。いくつかの実施形態において、本開示のペプトイドを含む組成物は、病原性微生物に感染した被験体、または病原性微生物に感染するリスクにある被験体、病原性微生物への感染から生成されるバイオフィルム、またはその組み合わせに投与され得る。

【0045】

いくつかの実施形態において、上記ペプトイドを含む組成物は、病原性真菌に感染した被験体、または病原性真菌に感染に感染するリスクにある被験体、または病原性真菌への感染から生じるバイオフィルム、あるいはその組み合わせに投与され得る。病原性真菌への感染としては、例えば、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐｐ．（例えば、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃ．ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ、Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃ．ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃ．ｖｉｓｗａｎａｔｈｉｉ、Ｃ．ａｕｒｉｓ、もしくはＣ．ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、またはその組み合わせが挙げられる）への感染；Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｓｐｐ．（例えば、Ｒ．ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ、Ｒ．ｍｉｎｕｔａ、もしくはＲ．ｇｌｕｔｉｎｉｓ、またはその組み合わせが挙げられる）への感染；および／あるいはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．（例えば、Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓもしくはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ、またはその組み合わせ）への感染が挙げられる。

【0046】

いくつかの実施形態において、上記ペプトイドを含む組成物は、病原性細菌に感染した被験体、または病原性細菌に感染するリスクにある被験体、または病原性細菌への感染から生成されるバイオフィルム、あるいはその組み合わせに投与され得る。病原性細菌としては、例えば、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、もしくはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、またはその組み合わせが挙げられる。

【0047】

抗微生物性ペプチドおよびペプトイド

【0048】

多くの生物が、抗微生物性ペプチド（ＡＭＰ）を病原性細菌および真菌に対するそれらの先天的免疫応答の一部として使用する（Ｚａｓｌｏｆｆら，Ｎａｔｕｒｅ ２００２，４１５（６８７０），３８９－３９５）。ＡＭＰは、おそらくそれらの概して許容される作用様式に由来して、哺乳動物細胞を超える微生物に対するそれらの比較的高い特異性および観察される薬物耐性がないことを考慮すれば、臨床的抗微生物性薬剤として有利であり得る。真菌に対して使用される大部分のＡＭＰは、細胞膜を標的とし、孔を形成するかまたは細胞透過性における変化を引き起こして、細胞質構成要素の漏出を生じさせ、最終的には、病原体の死滅を生じる（Ｚａｓｌｏｆｆら，Ｎａｔｕｒｅ ２００２，４１５（６８７０），３８９－３９５）。これらのＡＭＰは、哺乳動物細胞膜と真菌細胞膜との間の重要な差異（例えば、真菌細胞膜にのみ存在する主要ステロールであるエルゴステロール）を利用して、上記病原体を選択的に標的とし得る（Ｗａｌｓｈら，Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．２００８，４６（３），３２７－３６０）。さらに、ＡＭＰは、バイオフィルム形成を防止し、確立されたバイオフィルム内の病原体を死滅させることが示されている（Ｙａｓｉｒら，Ｍａｔｅｒｉａｌｓ １１，（２０１８）；Ｇａｌｄｉｅｒｏら，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ １１，３２２（２０１９））。これらの抗バイオフィルムペプチドに関する作用機序は、一般に、膜破壊であるが、細胞シグナル伝達系における干渉またはバイオフィルム自体の破壊がまた、観察されている（Ｙａｓｉｒら，Ｍａｔｅｒｉａｌｓ １１，（２０１８））。しかし、ペプチドは、プロテアーゼによって容易に認識されかつ分解されるので、インビボで真菌感染と戦うための臨床的治療剤としてはしばしば不十分である（Ｌａｔｈａｍら，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１９９９，１７（８），７５５－７５７；Ｚｈａｎｇら，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．２００６，７（６），６５３－６６３）。

【0049】

ＡＭＰのタンパク質分解不安定性を解決する１つの手段は、Ｎ－置換されたグリシン（ペプトイドともいわれるの使用）を含む。ペプチドでは、側鎖Ｒ基は、α－炭素に結合されるのに対して、ペプトイドでは、そのＲ基は、アミド窒素に結合される。この構造変化は、ペプトイドのプロテアーゼによる認識を不可能にすると同時に、ペプチドの有利な特性のうちの多くを維持し、インビボ半減期を延長させる（Ｃｕｌｆら Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０１０，１５（８），５２８２－５３３５；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９２，１１４（２６），１０６４６－１０６４７）。

【0050】

ペプトイド

【0051】

１つの局面において、本開示は、一般式Ｉ：

【化4】

のペプトイド、そのプロトン化形態、その薬学的に受容可能な塩、または両方を記載する。いくつかの実施形態において、上記一般式Ｉのペプトイドは、抗微生物性特性を有し、そのために、抗微生物性ペプトイドである。

【0052】

本明細書で使用される場合、用語「そのプロトン化形態（ａ ｐｒｏｔｏｎａｔｅｄ ｆｏｒｍ ｔｈｅｒｅｏｆ）」とは、ある特定のｐＨ値（例えば、生物学的ｐＨ）においてプロトン化され、従って、形式電荷を有する、ペプトイド、Ｒ基（Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６）、Ｔ基、Ａ^Ｘ基、またはＱ基に言及する。多数のＲ基がプロトン化されてもよいので、その形式電荷は、＋１より大きくてもよい（例えば、２、＋３、＋４など）。Ｒ基（Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６）、Ｔ基、Ａ^Ｘ基、またはＱ基のうちの１またはこれより多くのものがプロトン化される場合、そのペプトイド全体がプロトン化されているといわれ得る（すなわち、ペプトイドのプロトン化形態）。

【0053】

式Ｉは、６個のＮ－置換されたグリシン反復を有するペプトイドである。各反復は、上記ペプトイド骨格のアミド窒素に共有結合された１個の側鎖（Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６）を有する。上記ペプトイドは、Ｎ末端キャップ基Ｔ、必要に応じた第２のＮ末端キャップ基Ａ^Ｘ（例えば、Ａ^Ｘは、ＨまたはＮ末端キャップ基Ｔであり得る）、およびＣ末端キャップ基Ｑを有する。

【0054】

一般に、Ｔは、疎水性である。Ｔは、直線状もしくは分枝状のアルキル、または直線状もしくは分枝状のアルケニルであり得る。上記アルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、カルボニルを含み得る。好ましくは、カルボニル含有アルキルまたはアルケニル基は、一般式（ＣＯ）－Ｒ^２０のものであり、ここでＲ^２０は、上記アルキルまたはアルケニル基である。いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、少なくともＣ_６、少なくともＣ_１０、または少なくともＣ_１５の直線状アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、Ｃ_２０以下、Ｃ_１５以下、またはＣ_１０以下の直線状アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルキル、（Ｃ_６～Ｃ_１５）アルキル、または（Ｃ_６～Ｃ_１０）アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、（Ｃ_１０～Ｃ_２０）アルキルまたは（Ｃ_１５～Ｃ_２０）アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、（Ｃ_１０～Ｃ_１５）アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^２０は、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｎ－ノニル、ｎ－デシル、ｎ－ウンデシル、ｎ－ドデシル、ｎ－トリデシル、ｎ－テトラデシル、ｎ－ペンタデシル（ｎ－ｐｅｎｔａｄａｃｔｙｌ）、ｎ－ヘキサデシル、ｎ－ヘプタデシル、ｎ－オクタデシル、ｎ－ノナデシル、およびｎ－エイコサニルから選択される直線状アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、一般式（ＣＯ）－Ｒ^２０を有し、Ｒ^２０は、直線状（Ｃ_１５）アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、一般式（ＣＯ）－Ｒ^２０を有し、ここでＲ^２０は、直線状（Ｃ_１３）アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、パルミチン酸から誘導される。このような実施形態において、Ｔは、一般式（ＣＯ）－Ｒ^２０を有し、ここでＲ^２０は、Ｃ_１５Ｈ_２７である。いくつかの実施形態において、Ｔは、ミリスチン酸から誘導される。いくつかのこの様な実施形態において、Ｔは、一般式（ＣＯ）－Ｒ^２０を有し、ここでＲ^２０は、Ｃ_１３Ｈ_３１である。

【0055】

いくつかの実施形態において、Ｔは、少なくともＣ_６、少なくともＣ_１０、または少なくともＣ_１５の直線状アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、Ｃ_２０以下、Ｃ_１５以下、またはＣ_１０以下の直線状アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、直線状（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルキル、直線状（Ｃ_６～Ｃ_１５）アルキル、または直線状（Ｃ_６～Ｃ_１０）アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、直線状（Ｃ_１０～Ｃ_２０）アルキルまたは直線状（Ｃ_１５～Ｃ_２０）アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、直線状（Ｃ_１０～Ｃ_１５）アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｎ－ノニル、ｎ－デシル、ｎ－ウンデシル、ｎ－ドデシル、ｎ－トリデシル、ｎ－テトラデシル、ｎ－ペンタデシル、ｎ－ヘキサデシル、ｎ－ヘプタデシル、ｎ－オクタデシル、ｎ－ノナデシル、またはｎ－エイコサニルである。いくつかの実施形態によれば、Ｔは、ｎ－トリデシル（直線状（Ｃ_１３）アルキル；Ｃ_１３Ｈ_２７；ときおりＮｔｒｉといわれる）である。いくつかの実施形態によれば、Ｔは、ｎ－オクチル（直線状（Ｃ_８）アルキル；Ｃ_８Ｈ_１７）である。いくつかの実施形態によれば、Ｔは、ｎ－ヘキシル（直線状（Ｃ_６）アルキル；Ｃ_６Ｈ_１３）である。いくつかの実施形態によれば、Ｔは、ｎ－ペンタデシル（直線状（Ｃ_１５）アルキル；Ｃ_１５Ｈ_３１）である。

【0056】

いくつかの実施形態において、Ｔは、分枝状アルキルである。上記分枝状アルキルは、骨格およびこの骨格に共有結合した１個またはこれより多くの分枝を有する。いくつかの実施形態において、上記骨格は、少なくともＣ_６、少なくともＣ_１０、または少なくともＣ_１５のアルキルである。いくつかの実施形態において、上記骨格は、Ｃ_２０以下、Ｃ_１５以下、またはＣ_１０以下のアルキルである。いくつかの実施形態において、上記骨格は、（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルキル、（Ｃ_６～Ｃ_１５）アルキル、または（Ｃ_６～Ｃ_１０）アルキルである。いくつかの実施形態において、上記骨格は、（Ｃ_１０～Ｃ_２０）アルキルまたは（Ｃ_１０～Ｃ_１５）アルキルである。いくつかの実施形態において、上記骨格は、（Ｃ_１５～Ｃ_２０）アルキルである。

【0057】

１個またはこれより多くのアルキル分枝は、分枝状アルキルの骨格に共有結合される。いくつかの実施形態において、上記分枝は、少なくともＣ_１、少なくともＣ_５、または少なくともＣ_１０のアルキルである。いくつかの実施形態において、上記分枝は、Ｃ_１０以下、Ｃ_５以下、またはＣ_１以下のアルキルである。いくつかの実施形態において、上記分枝は、（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルまたは（Ｃ_１～Ｃ_５）アルキルである。いくつかの実施形態において、上記分枝は、（Ｃ_５～Ｃ_１０）アルキルである。いくつかの実施形態において、上記分枝状アルキルのアルキル分枝は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、またはドデシルである。いくつかの実施形態において、上記分枝状アルキルは、上記骨格に共有結合された１つのアルキル分枝を有する。いくつかの実施形態において、上記分枝状アルキルは、上記骨格に共有結合された２個またはこれより多くの分枝を有する。

【0058】

いくつかの実施形態において、Ｔは、直線状アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、少なくともＣ_６、少なくともＣ_１０、または少なくともＣ_１５の直線状アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、Ｃ_２０以下、Ｃ_１５以下、またはＣ_１０以下の直線状アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、直線状（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルケニル、直線状（Ｃ_６～Ｃ_１５）アルケニル、または直線状（Ｃ_６～Ｃ_１０）アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、直線状（Ｃ_１０～Ｃ_２０）アルケニルまたは直線状（Ｃ_１０～Ｃ_１５）アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、直線状（Ｃ_１５～Ｃ_２０）アルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、ｎ－ヘキセニル、ｎ－ヘプテニル、ｎ－オクテニル、ｎ－ノネニル、ｎ－デセニル、ｎ－ウンデセニル、ｎ－ドデセニル、ｎ－トリデセニル、ｎ－テトラデセニル、ｎ－ペンタデセニル（ｎ－ｐｅｎｔａｄａｃｅｎｙｌ）、ｎ－ヘキサデセニル、ｎ－ヘプタデセニル、ｎ－オクタデセニル、ｎ－ノナデセニル、およびｎ－エイコセニルである。いくつかの実施形態において、上記直線状アルケニルは、１個の二重結合を有し得る。いくつかの実施形態において、上記直線状アルケニルは、２個またはこれより多くの二重結合を有し得る。全炭素数（Ｃ_ｎ）が偶数である場合の直線状アルケニルの最大の不飽和度、および従って二重結合の最大数は、Ｃ_ｎ／２である。全炭素数（Ｃ_ｎ）が奇数である場合の直線状アルケニルの最大の不飽和度は、（Ｃ_ｎ－１）／２である。上記直線状アルケニルが２個またはこれより多くの二重結合を有する実施形態において、上記二重結合は、上記アルケニルに沿った任意の位置に配置され得る。

【0059】

いくつかの実施形態において、Ｔは、分枝状アルケニルである。上記分枝状アルケニルは、骨格およびこの骨格に共有結合された１個またはこれより多くの分枝を有する。いくつかの実施形態において、上記骨格は、少なくともＣ_６、少なくともＣ_１０、または少なくともＣ_１５のアルケニルである。いくつかの実施形態において、上記骨格は、Ｃ_２０以下、Ｃ_１５以下、またはＣ_１０以下のアルケニルである。いくつかの実施形態において、上記骨格は、（Ｃ_６～Ｃ_２０）アルケニル、（Ｃ_６～Ｃ_１５）アルケニル、または（Ｃ_６～Ｃ_１０）アルケニルである。いくつかの実施形態において、上記骨格は、（Ｃ_１０～Ｃ_２０）アルケニルまたは（Ｃ_１０～Ｃ_１５）アルケニルである。いくつかの実施形態において、上記骨格は、（Ｃ_１５～Ｃ_２０）アルケニルである。いくつかの実施形態において、上記骨格は、（Ｃ_８）アルケニルである。いくつかの実施形態において、上記骨格は、（Ｃ_１２）アルケニルである。いくつかの実施形態において、上記分枝状アルケニルのアルケニル骨格は、１個の二重結合を有し得る。いくつかの実施形態において、上記分枝状アルケニルアルケニル骨格は、２個またはこれより多くの二重結合を有する。全炭素数（Ｃ_ｎ）が偶数である場合のアルケニル骨格の最大の不飽和度、および従って二重結合の最大数は、Ｃ_ｎ／２である。全炭素数（Ｃ_ｎ）が奇数である場合のアルケニル骨格の最大の不飽和度は、（Ｃ_ｎ－１）／２である。上記分枝状アルケニルのアルケニル骨格が２個またはこれより多くの二重結合を有する実施形態において、上記二重結合は、上記骨格に沿った任意の位置に配置され得る。いくつかの実施形態において、上記分枝状アルケニルのアルケニル骨格は、２個の二重結合を有する。いくつかの実施形態において、上記分枝状アルケニルのアルケニル骨格は、３個の二重結合を有する。

【0060】

１個またはこれより多くのアルキル分枝は、上記分枝状アルケニルの骨格に共有結合される。いくつかの実施形態において、上記分枝は、少なくともＣ_１、少なくともＣ_５、または少なくともＣ_１０のアルキルである。いくつかの実施形態において、上記分枝は、Ｃ_１０以下、Ｃ_５以下、またはＣ_１以下のアルキルである。いくつかの実施形態において、上記分枝は、（Ｃ_１～Ｃ_１５）アルキルまたは（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルキルである。いくつかの実施形態において、上記分枝は、（Ｃ_５～Ｃ_１０）アルキルである。いくつかの実施形態において、上記分枝は、直線状アルキルである。いくつかの実施形態において、上記分枝は、分枝状アルキルである。いくつかの実施形態において、上記分枝は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、およびドデシルから選択される。いくつかの実施形態において、上記分枝状アルケニルの骨格は、１個のアルキル分枝を有する。いくつかの実施形態において、上記分枝状アルケニルの骨格は、２個またはこれより多くのアルキル分枝を有する。いくつかの実施形態において、上記分枝状アルケニルのアルケニル骨格は、２個またはこれより多くの二重結合および２個またはこれより多くの共有結合されたアルキル分枝を有する。いくつかの実施形態において、Ｔは、シトリルである。いくつかの実施形態において、Ｔは、ファルネシルである。

【0061】

Ａ^Ｘは、第２のＮ末端キャップ基または水素原子（Ｈ）である。いくつかの実施形態において、Ａ^Ｘは、Ｈである。Ａ^ＸがＨではない実施形態において、Ａ^Ｘは、Ｔに関して記載されるとおりの任意のＮ末端キャップ基であり得る。Ａ^ＸがＨではない実施形態において、Ａ^ＸおよびＴは、同じであってもよい。例えば、いくつかの実施形態において、Ａ^ＸおよびＴの両方が、ｎ－トリデシル（Ｃ_１３Ｈ_２７）である。他の実施形態において、Ａ^ＸおよびＴの両方が、ともにｎ－ヘキシル（Ｃ_６Ｈ_１３）（ときおり、Ｎｄｈａと称される）である。他の実施形態において、Ａ^ＸおよびＴの両方が、ともにｎ－オクチル（Ｃ_８Ｈ_１７）（ときおり、Ｎｄｏａと称される）である。Ａ^ＸがＨではない実施形態において、Ａ^ＸおよびＴは、同じでなくてもよい。

【0062】

いくつかの実施形態において、Ｑは、ヒドロキシルである。いくつかの実施形態において、Ｑは、ＮＨ_２である。

【0063】

式Ｉにおいて、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６は、各々独立して、上記ペプトイド骨格の窒素に共有結合された、Ｎ－置換されたグリシン側鎖から選択される。

【0064】

一般に、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６は、各々独立して、以下から選択される：一般式Ｒ^１０ＮＲ^１１Ｒ^１２Ｒ^１３のアルキルアミン（本明細書中で詳細に考察される）；あるいは以下の一般式のうちのいずれか１つを有する基（Ｎｖａｌ、Ｎｙａｌｋ、Ｎｌｅｕｎ、Ｎｃｐｅｎ、Ｎｃｈｅｘ、ＮｐｅｎＷ、ＮｌｉｎＷ、Ｎｐｈｎ、Ｎｐｅａ、ＮｐｈＯＨ、ＮｐｈＸ、Ｎｎａｐｎ、ＮｎｐｈＯＲ、Ｎｎｐｙｒｐ、Ｎｎｐｙｒｍ、Ｎｎｐｙｒｏ、Ｎｎｉｍ１、Ｎｎｉｍ２、Ｎｃｈｅｘｍ、Ｎｎａｉｎ、Ｎｉｎｄｎ、ＮｐｅｎＺ、Ｎａｒｇ、サルコシン）、またはそのプロトン化形態：

【化5】

【化6】

【0065】

各ｎは、独立して、（Ｃ_０、Ｃ_１、Ｃ_２、またはＣ_３）アルキレン（例えば、（Ｃ_０～Ｃ_３）アルキレン）である。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、またはその組み合わせが各々独立して、Ｎｙａｌｋ、Ｎｌｅｕｎ、Ｎｃｐｅｎ、Ｎｃｈｅｘ、ＮｃｐｅｎＷ、ＮｌｉｎＷ、Ｎｐｈｎ、ＮｐｈＯＨ、ＮｐｈＸ、Ｎｎａｐｎ、ＮｎｐｈＯＲ、Ｎｎｐｙｒｐ、Ｎｎｐｙｒｍ、Ｎｎｐｙｒｏ、Ｎｎｉｍ１、Ｎｎｉｍ２、Ｎｎａｉｎ、Ｎｉｎｄｎ、ＮｐｅｎＺ、そのプロトン化形態、またはその組み合わせである場合のいくつかの実施形態において、各ｎは、独立して、（Ｃ_０、Ｃ_１、Ｃ_２、またはＣ_３）アルキレンである。

【0066】

Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６のうちの少なくとも１つがＮｐｅａである場合のいくつかの実施形態において、メチル基が結合される炭素は、Ｒ立体化学（ＮｘｘＩ）を有する。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６のうちの少なくとも１つがＮｐｅａである場合のいくつかの実施形態において、メチル基が結合される炭素は、Ｓ立体化学（Ｎｓｐｅ）を有する。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６のうちの２個またはこれより多くのものがＮｐｅａである実施形態において、各Ｎｐｅａは、同じ立体化学または異なる立体化学を有し得る。

【0067】

Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６のうちの少なくとも１つがＮｃｈｅｘｍである場合のいくつかの実施形態において、メチル基が結合される炭素は、Ｒ立体化学（ＮｃｈｅｘｍＲ）を有する。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６のうちの少なくとも１つがＮｃｈｅｘｍである場合のいくつかの実施形態において、メチル基が結合される炭素は、Ｓ立体化学（ＮｃｈｅｘｍＳ）を有する。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６のうちの２個またはこれより多くのものがＮｃｈｅｘｍである実施形態において、各Ｎｃｈｅｘｍは、同じ立体化学または異なる立体化学を有し得る。

【0068】

各ｙは、独立して、（Ｃ_０、Ｃ_１、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５、またはＣ_６）アルキレン（例えば、（Ｃ_０～Ｃ_６）アルキレン）である。いくつかの実施形態において、Ｎｙａｌｋは、Ｎｈｅｘである。いくつかの実施形態において、Ｎｙａｌｋは、Ｎｎｖａである。

【化7】

【0069】

ＮｎｐｈＯＲの各Ｒ^５０は、独立して、（Ｃ_１、Ｃ_２、またはＣ_３）アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^５０は、メチル（Ｃ_１）、エチル（Ｃ_２）、またはプロピル（Ｃ_３）である。ＮｎｐｈＯＲ環の周りのＯＲ^５０の任意の置換パターンが許容される。例えば、上記ＯＲ^５０基は、上記環上のアルキレンスペーサー（ｎ）に対してオルト、パラ、またはメタにあり得る。一実施形態によれば、ＯＲ^５０は、上記環上のアルキレンスペーサー（ｎ）に対してパラにある。いくつかの実施形態において、ＮｎｐｈＯＲは、ＮｐｈＯＭｅである。

【化8】

【0070】

ＮｌｉｎＷおよびＮｃｐｅｎＷにおける各Ｗは、独立して、Ｏ、Ｓ、またはＮである。いくつかの実施形態において、ＮｌｉｎＷは、Ｎｍｅａである。いくつかの実施形態において、ＮｃｐｅｎＷは、Ｎｔｈｆである。

【化9】

【0071】

ＮｐｈＸにおける各Ｘは、独立して、ハロゲン、例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードである。ＮｐｈＸ環の周りのＸの任意の置換パターンが許容される。例えば、上記ハロゲンは、上記環上のアルキレンスペーサー（ｎ）に対してオルト、パラ、またはメタにあり得る。いくつかの実施形態において、Ｘは、上記環上のアルキレンスペーサー（ｎ）に対してパラにある。いくつかの実施形態において、ＮｐｈＸは、Ｎｐｆｂである。いくつかの実施形態において、ＮｐｈＸは、Ｎｐｃｂである。いくつかの実施形態において、ＮｐｈＸは、Ｎｐｉｂである。いくつかの実施形態において、ＮｐｈＸは、Ｎｐｂｂである。

【化10】

【0072】

ＮｐｈＯＨの環の周りのヒドロキシルの任意の置換パターンが許容される。例えば、上記ヒドロキシルは、上記環上のアルキレンスペーサー（ｎ）に対してオルト、パラ、またはメタにあり得る。いくつかの実施形態において、上記ヒドロキシルは、上記環上のアルキレンスペーサー（ｎ）に対してパラにある。いくつかの実施形態において、ＮｐｈＯＨは、Ｎｔｒｙである。

【化11】

【0073】

ＮｐｅｎＺの各Ｚは、独立して、ＮＨ、Ｓ、またはＯである。いくつかの実施形態において、ＮｐｅｎＺは、Ｎｆｕｒである。いくつかの実施形態において、ＮｐｅｎＺは、Ｎｔｍａである。

【化12】

【0074】

いくつかの実施形態において、Ｎｃｐｅｎは、Ｎｃｐａである。いくつかの実施形態において、Ｎｃｈｅｘは、Ｎｃｈａである。いくつかの実施形態において、Ｎｃｈｅｘは、Ｎｃｈｍである。いくつかの実施形態において、Ｎｐｈｎは、Ｎａｎｉである。いくつかの実施形態において、Ｎｐｈｎは、Ｎｐｈｅである。いくつかの実施形態において、Ｎｎａｐｎは、Ｎｎａｐである。いくつかの実施形態において、Ｎｎａｐｎは、Ｎｎａｐｘである。いくつかの実施形態において、Ｎｎａｉｎは、Ｎａｉｎである。いくつかの実施形態において、Ｎｉｎｄｎは、Ｎｔｒｐである。いくつかの実施形態において、Ｎｉｎｄｎは、Ｎｈｔｒｐである。いくつかの実施形態において、Ｎｎｐｙｒは、Ｎｐｙｒまたはそのプロトン化形態である。いくつかの実施形態において、Ｎｎｐｙｒｍは、Ｎｐｙｒｍまたはそのプロトン化形態である。いくつかの実施形態において、Ｎｎｐｙｒｏは、Ｎｐｙｒｏまたはそのプロトン化形態である。いくつかの実施形態において、Ｎｎｉｍ１は、Ｎｉｍ１またはそのプロトン化形態である。いくつかの実施形態において、Ｎｎｉｍ２は、Ｎｉｍ２またはそのプロトン化形態である。

【化13】

【0075】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６またはこれらの組み合わせは、一般式Ｒ^１０ＮＲ^１１Ｒ^１２Ｒ^１３のアルキルアミンである。Ｒ^１０は、上記ペプトイドの骨格の窒素に共有結合されたアルキレンである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１０は、少なくともＣ_１または少なくともＣ_３のものである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１０は、Ｃ_６以下またはＣ_３以下である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１０は、（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキレンである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１０は、（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキレンである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１０は、（Ｃ_３～Ｃ_６）アルキレンである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１０は、（Ｃ_２）アルキレン、（Ｃ_３）アルキレン、または（Ｃ_４）アルキレンである。Ｒ^１１、Ｒ^１２、およびＲ^１３は、各々独立して、Ｈまたは（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキルから選択される。いくつかの実施形態において、上記アルキル鎖は、メチル、エチル、またはｎ－プロピルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１、Ｒ^１２、およびＲ^１３は、Ｈである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１およびＲ^１２は、Ｈであり、Ｒ^１３は、（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１はＨであり、Ｒ^１２およびＲ^１３は、各々独立して、（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１、Ｒ^１２、およびＲ^１３は、各々独立して、（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１は、Ｈであり、Ｒ^１２およびＲ^１３は、メチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１、Ｒ^１２、およびＲ^１３は、メチルである。いくつかの実施形態において、Ｒ^１１およびＲ^１２は、Ｈであり、Ｒ^１３は、メチルである。

【0076】

いくつかの実施形態において、上記アルキルアミンは、Ｎｌｙｓ（またはそのプロトン化形態）である。いくつかの実施形態において、上記アルキルアミンは、Ｎａｐ（またはそのプロトン化形態）である。いくつかの実施形態において、上記アルキルアミンは、Ｎａｅ（またはそのプロトン化形態）である。いくつかの実施形態において、上記アルキルアミンは、Ｎｌｙｓ（ｍｅ）_３である。いくつかの実施形態において、上記アルキルアミンは、Ｎａｐ（ｍｅ）_３である。いくつかの実施形態において、上記アルキルアミンは、Ｎａｅ（ｍｅ）_３である。いくつかの実施形態において、Ｎｌｙｓ、Ｎａｐ、および／またはＮａｅの窒素は、プロトン化されていてもよく、従って、形式電荷を有し得る（および従って、上記アルキルアミドのプロトン化形態である）。

【化14】

【0077】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^４、およびＲ^５の各１つは、独立して、Ｎｖａｌ、Ｎｙａｌｋ、Ｎｌｅｕｎ、Ｎｃｐｅｎ、Ｎｃｈｅｘ、ＮｐｅｎＷ、ＮｌｉｎＷ、Ｎｐｈｎ、Ｎｐｅａ、ＮｐｈＯＨ、ＮｐｈＸ、Ｎｎａｐｎ、ＮｎｐｈＯＲ、Ｎｎｐｙｒｐ、Ｎｎｐｙｒｍ、Ｎｎｐｙｒｏｌ、Ｎｎｉｍ１、Ｎｎｉｍ２、Ｎｎａｉｎ、Ｎｉｎｄｎ、Ｎｐｅｎｚ、Ｎｃｈｅｘｍ、サルコシン、またはそのプロトン化形態から選択され；Ｒ^３およびＲ^６の各１つは、独立して、Ｎａｒｇ（またはそのプロトン化形態）、Ｎｌｙｓ（またはそのプロトン化形態）、Ｎａｐ（またはそのプロトン化形態）、Ｎａｅ（またはそのプロトン化形態）、Ｎｌｙｓ（ｍｅ）_３、Ｎａｐ（ｍｅ）_３、またはＮａｅ（ｍｅ）_３から選択される。

【0078】

いくつかの実施形態において、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３ Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６のうちの１つは、Ｎｎｖａであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３ Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６のうちの１つは、Ｎｐｅａであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３ Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６のうちの１つは、Ｎｌｙｓ（またはそのプロトン化形態）であり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３ Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６のうちの１つは、Ｎｆｕｒであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３ Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６のうちの１つは、Ｎｐｈｅであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３ Ｒ^４、Ｒ^５、またはＲ^６のうちの１つは、Ｎａｐ（またはそのプロトン化形態）である。いくつかの実施形態において、Ｒ^１は、Ｎｎｖａであり；Ｒ^２は、Ｎｐｅａであり；Ｒ^３は、Ｎｌｙｓ（またはそのプロトン化形態）であり；Ｒ^４は、Ｎｆｕｒであり；Ｒ^５は、Ｎｐｈｅであり；Ｒ^６は、Ｎａｐ（またはそのプロトン化形態）である。いくつかの実施形態において、Ｑは、ＮＨ_２であり；Ａ^Ｘは、Ｈであり；Ｔは、（Ｃ_１３Ｈ_２７）アルキルであり；Ｒ^１は、Ｎｎｖａであり；Ｒ^２は、Ｎｐｅａであり；Ｒ^３は、Ｎｌｙｓ（またはそのプロトン化形態）であり；Ｒ^４は、Ｎｆｕｒであり；Ｒ^５は、Ｎｐｈｅであり；Ｒ^６は、Ｎａｐ（またはそのプロトン化形態）である。いくつかの実施形態において、上記ペプトイドは、以下の構造：

【化15】

またはそのプロトン化形態を有する。

【0079】

式Ｉの例証的なペプトイドの例は、図３（ＲＭＧ９－１１ＳＡＲ１；ＲＭＧ９－１１ＳＡＲ２；ＲＭＧ９－１１ＳＡＲ３；ＲＭＧ９－１１ＳＡＲ４；ＲＭＧ９－１１ＳＡＲ５；ＲＭＧ９－１１ＳＡＲ６；ＲＭＧ９－１１ＳＡＲ７；およびＲＭＧ９－１１ＳＡＲ８、ＲＭＧ９－１１ＳＡＲ９、ＲＭＧ９－１１ＳＡＲ１０、ＲＭＧ９－１１ＳＡＲ１１、ＲＭＧ９－１１ＳＡＲ１２、ＲＭＧ９－１１ＳＡＲ１３、ＲＭＧ９－１１ＳＡＲ１４、およびＲＭＧ９－１１ＳＡＲ１５）；図５（ＳＡＲ１、ＳＡＲ２、ＳＡＲ３、ＳＡＲ４、ＳＡＲ５、ＳＡＲ６、およびＳＡＲ７）；図６（９－１１－Ｍ１、９－１１－Ｍ２、９－１１－Ｍ３、９－１１－Ｍ４、９－１１－Ｍ５、９－１１－Ｍ６、９－１１－Ｍ７、９－１１－Ｍ８、９－１１－Ｍ９、９－１１－Ｍ１０、および９－１１－Ｍ１１）；図７（９－１１－Ｍ１２および９－１１－Ｍ１１３）；図８（９－１１－Ｍ１４、９－１１－Ｍ１５、９－１１－Ｍ１６、９－１１－Ｍ１７、９－１１－Ｍ１８９－１１－Ｍ１９、９－１１－Ｍ２０、９－１１－Ｍ２１、および９－１１－Ｍ２２）；図９（９１１－Ｍ２３および９－１１－Ｍ２４）；および図１０（９－１１－Ｍ２５、９－１１－Ｍ２６、９－１１－Ｍ２７、９－１１－Ｍ２８、９－１１－Ｍ２９、９－１１－Ｍ３０、９－１１－Ｍ３１、９－１１－Ｍ３２、９－１１－Ｍ３３、９－１１－Ｍ３４、９－１１－Ｍ３５、９－１１－Ｍ３６、９－１１－Ｍ３７、９－１１－Ｍ３８、および９－１１－Ｍ３９）；またはそのプロトン化形態に示される。

【0080】

ペプトイドを作製する方法

【0081】

一般に、ペプトイドは、サブモノマープロトコール（Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４，１０６４６－１０６４７（１９９２））を使用して、Ｎ末端からＣ末端へと合成される。ペプトイドは、マイクロ波の補助ありで樹脂上に、マイクロ波の補助なしで樹脂上に、マイクロ波の補助ありで溶液中に、またはマイクロ波の補助なしで溶液中に、合成され得る。ペプトイド合成は、一般に、６工程を伴う：樹脂調製、アシル化、アミンカップリング、切断、保護基が存在する場合には保護基の必要に応じた脱保護、および末端官能化。いくつかの実施形態において、上記工程のうちのいくつかが組み合わされ得る。例えば、樹脂からの切断および保護基の脱保護が、同時に達成され得る。本開示のペプトイドは、マイクロ波の補助ありで樹脂上に合成され得る。

【0082】

一般式Ｉの化合物（ペプトイド）のペプトイド合成の例示的方法は、以下のとおりである。Ｆｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ樹脂を、上記樹脂をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で膨潤させることによって調製する。上記Ｆｍｏｃ保護基を、上記樹脂をＤＭＦ中１０～４０％ピペリジンとともに５～６０分間撹拌することによって除去し、遊離アミンを得る。いくつかの実施形態において、Ｆｍｏｃ脱保護を、上記樹脂をＤＭＦ中２０％のピペリジンとともに２０分間撹拌することによって行う。上記遊離アミンを、上記樹脂、１～４Ｍのブロモ酢酸、１～６Ｍのジイソプロピルカルボジイミド、およびＤＭＦを混合して、β炭素上にブロモ基を有するアミド生成物を得ることによって、アシル化する。いくつかの実施形態において、上記樹脂上のアミンを、上記樹脂、２Ｍのブロモ酢酸、３．２Ｍのジイソプロピルカルボジイミド、およびＤＭＦを混合することによってアシル化する。アシル化の後、一般式ＮＨ_２－Ｒ（ここでＲは、所望のＮ－置換されたグリシン側鎖または所望のＮ－置換されたグリシン側鎖の保護された誘導体である）によって記載されるアミン１～６Ｍを、上記樹脂に添加する。各Ｒ基は、保護基（例えば、Ｂｏｃ基）を含み得る。置換反応は、ブロモ基がβ炭素上でＮＨ_２－Ｒ基によって置き換えられる、従って、アシル化工程において形成されたアミドへのアミンのカップリングの場合に起こる。いくつかの実施形態において、一般式－ＮＨ_２－Ｒのアミン２Ｍを、上記樹脂に添加して、上記置換反応を完了させる。上記アシル化およびアミンカップリング工程を、記載されるペプトイド配列に達するまで反復する。上記樹脂からの切断の前または後に、Ｃ末端を官能化し得る。上記ペプトイドおよびＮ－置換されたグリシン側鎖に存在する任意のＢｏｃ保護基を、トリフルオロ酢酸、水、およびトリイソプロピルシランのカクテルを３０分～２時間インキュベートすることによって、上記樹脂から切断し得る。いくつかの実施形態において、トリフルオロ酢酸、水、およびトリイソプロピルシランのカクテルは、９５：２．５：２．５である。いくつかの実施形態において、トリフルオロ酢酸、水、およびトリイソプロピルシランのカクテルを、上記樹脂とともに１時間インキュベートする。上記樹脂からの切断後、Ｎ末端を官能化し得る。上記ペプトイドを、０．０５％のトリフルオロ酢酸を含む０～１００％の水からアセトニトリルの勾配を使用する逆相ＨＰＬＣシステムで精製し得る。溶媒を、真空中で除去して、ペプトイドを粉末として得ることができる。

【0083】

ペプトイドを試験する方法

【0084】

ペプトイドライブラリーアガー拡散（ＰＬＡＤ）アッセイを、抗微生物性活性を有するペプトイドを特定するために使用し得る。上記ＰＬＡＤアッセイを、Ｆｉｓｃｈｅｒら，ＡＣＳ Ｃｏｍｂ．Ｓｃｉ．１８，２８７－２９１（２０１６）；Ｃｏｒｓｏｎら，ＡＣＳ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．７，１１３９－１１４４（２０１６）；Ｔｕｒｋｅｔｔら，ＡＣＳ Ｃｏｍｂ．Ｓｃｉ．１８，２８７－２９１（２０１６）（これは、本明細書に参考として援用される）に記載されるとおりの方法を使用して達成し得る。上記ＰＬＡＤアッセイは、ＰＬＡＤ化学リンカーを使用する。ＰＬＡＤリンカー構築および合成に関する詳細については、実施例１を参照されたい。上記ＰＬＡＤ化学リンカーは、目的のペプトイドの２つの同一の鎖、αおよびβを記載し、ここで各鎖は、異なる化学的刺激に応じて放出され得る（Ｆｉｓｃｈｅｒら，ＡＣＳ Ｃｏｍｂ．Ｓｃｉ．１８，２８７－２９１（２０１６））。ＰＬＡＤ連結ペプトイドを含むビーズを、アガー培地中に埋め込み、ここでアガー培地を、上記目的の微生物とともにインキュベートする。上記β鎖ペプトイドを、還元試薬によって放出する。その還元剤は、上記ＰＬＡＤリンカー内のジスルフィドを切断し、上記β鎖ペプトイドが上記ビーズの周りの微生物と相互作用することを可能にする。その放出されたペプトイドが抗微生物性活性を有する場合、阻害された増殖のゾーンが存在する。上記α鎖ペプトイドは、スクリーニングプロセス中にビーズに結合したままである。上記α鎖ペプトイドを、阻害された増殖のゾーンを示すビーズから切断する。α鎖ペプトイドの化学的切断は、臭化シアンを使用して、ＰＬＡＤリンカーのＣ末端メチオニンにおいて達成され得る。質量分析シーケンシング（ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）を使用して、阻害された増殖のゾーンを示したβ鎖ペプトイドに相当するα鎖ペプトイドの構造を決定する。ＰＬＡＤアッセイを、目的のペプトイドを、アッセイパラメーターのわずかな改変を通じて、目的の微生物の異なるタイプに対してスクリーニングするために適合し得る。ＰＬＡＤアッセイにおいて使用され得る微生物の例としては、真菌病原体および細菌病原体が挙げられる。真菌病原体の例としては、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃ．ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ、Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃ．ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃ．ｖｉｓｗａｎａｔｈｉｉ、Ｃ．ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃ．ａｕｒｉｓ、Ｒ．ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ、Ｒ．ｍｉｎｕｔａ、またはＲ．ｇｌｕｔｉｎｉｓ、Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、およびＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉが挙げられるが、これらに限定されない。細菌病原体の例としては、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓが挙げられるが、これらに限定されない。

【0085】

倒立型ペプトイドライブラリーアガー拡散（ｉＰＬＡＤ）アッセイは、目的の微生物から生成されるバイオフィルムに対するペプトイドの抗微生物活性を評価するために使用され得る。実施例１は、ｉＰＬＡＤアッセイを完了させるために使用され得る例示的方法を示す。簡潔には、上記ｉＰＬＡＤアッセイは、４段階を有すると理解され得る。第１の段階では、真菌病原体の培養物を増殖させ、ペトリ皿の表面にバイオフィルムを生成させる。第２の段階では、過剰な培地をそのペトリ皿から除去し、そのバイオフィルムを洗浄する。ＰＬＡＤ連結したペプトイド（またはライブラリー）ビーズおよび還元試薬（ともに、最小量の液化したソフトアガー中に懸濁）を、上記バイオフィルムに添加する。第３の段階では、上記ＰＬＡＤ連結ペプトイドを、上記バイオフィルムとともに一晩インキュベートする。上記還元試薬は、β鎖ペプトイドをライブラリービーズから放出して、上記バイオフィルムと相互作用させる。インキュベーション後、画像化試薬を上記ソフトアガーの頂部に添加し、上記バイオフィルムの中へと拡散させると、上記バイオフィルム内の真菌細胞を殺滅した「ヒット」ペプトイドが明らかになる。第４の段階では、上記ヒットペプトイドが単離され、上記活性ペプトイドのα鎖の構造が、タンデム質量分析法によってデコンボリューションされる。ＰＬＡＤアッセイにおいて使用され得る微生物の例としては、真菌病原体および細菌病原体が挙げられる。真菌病原体の例としては、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃ．ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ、Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃ．ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃ．ｖｉｓｗａｎａｔｈｉｉ、Ｃ．ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃ．ａｕｒｉｓ、Ｒ．ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ、Ｒ．ｍｉｎｕｔａ、またはＲ．ｇｌｕｔｉｎｉｓ、Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、およびＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉが挙げられるが、これらに限定されない。細菌病原体の例としては、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓが挙げられるが、これらに限定されない。

【0086】

最小阻害濃度（ＭＩＣ）アッセイは、目的の微生物に対するペプトイドの活性を決定するために使用され得る。実施例１は、ＭＩＣアッセイを完了させるために使用され得る例示的方法を示す。ＭＩＣアッセイは、Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＣＬＳＩ）に示されるガイドラインを介して行われ得る。一例のＭＩＣアッセイでは、目的のペプトイドを、目的の微生物を含む溶液へと希釈する。上記ペプトイド－微生物溶液を、設定温度（例えば、３７℃）で設定時間量にわたってインキュベートする。インキュベーション後の微生物の増殖または増殖の欠如を、手動での観察によって、または細胞生存性の色素および蛍光測定の助けを借りて決定する。ＭＩＣアッセイは、技術的および生物学的に複製して行われ得る。目的の微生物を殺滅することが公知の化合物を、陽性コントロールとして含め得る。ＭＩＣは、一般に、微生物増殖を防止する上記目的のペプトイドの最低濃度として定義される。ＭＩＣアッセイにおいて使用され得る微生物の例としては、真菌病原体および細菌病原体が挙げられる。真菌病原体の例としては、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃ．ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ、Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃ．ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃ．ｖｉｓｗａｎａｔｈｉｉ、Ｃ．ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃ．ａｕｒｉｓ、Ｒ．ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ、Ｒ．ｍｉｎｕｔａ、またはＲ．ｇｌｕｔｉｎｉｓ、Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、およびＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉが挙げられるが、これらに限定されない。細菌病原体の例としては、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓが挙げられるが、これらに限定されない。

【0087】

いくつかの実施形態において、微生物は、本開示のペプトイドに対する耐性を発生させることができない。耐性改変体の出現を防止する抗微生物性化合物は、非常に所望される治療剤である。なぜなら抗微生物ストラテジーは、代表的には、標的微生物が耐性を発生させる場合にもはや用いられることができなくなるからである。本開示のペプトイドは、標的微生物における耐性の発生を低減するという活性を有し得る。連続継代耐性獲得アッセイは、目的の微生物が目的のペプトイドに対する耐性を獲得する能力を評価し、それによって、上記ペプトイドが標的微生物における耐性の発生を低減するという活性を有するか否かを決定するために使用され得る。例示的な連続継代耐性獲得アッセイは、実施例１に記載される。連続継代耐性獲得アッセイにおいて使用され得る微生物の例としては、真菌病原体および細菌病原体が挙げられる。真菌病原体の例としては、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃ．ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ、Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃ．ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃ．ｖｉｓｗａｎａｔｈｉｉ、Ｃ．ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃ．ａｕｒｉｓ、Ｒ．ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ、Ｒ．ｍｉｎｕｔａ、またはＲ．ｇｌｕｔｉｎｉｓ、Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、およびＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉが挙げられるが、これらに限定されない。細菌病原体の例としては、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓが挙げられるが、これらに限定されない。

【0088】

単一継代耐性獲得アッセイは、目的の微生物が目的のペプトイドに対する耐性を獲得する能力を評価し、それによって、上記ペプトイドが標的微生物における耐性の発生を低減するという活性を有するか否かを決定するために使用され得る。例示的な単一継代耐性獲得アッセイは、実施例１に記載される。ＭＩＣアッセイにおいて使用され得る微生物の例としては、真菌病原体および細菌病原体が挙げられる。真菌病原体の例としては、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃ．ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ、Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃ．ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃ．ｖｉｓｗａｎａｔｈｉｉ、Ｃ．ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃ．ａｕｒｉｓ、Ｒ．ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ、Ｒ．ｍｉｎｕｔａ、またはＲ．ｇｌｕｔｉｎｉｓ、Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、およびＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉが挙げられるが、これらに限定されない。細菌病原体の例としては、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓが挙げられるが、これらに限定されない。

【0089】

耐性獲得アッセイの前に得られるＭＩＣおよび耐性獲得アッセイ中に得られるＭＩＣの比率は、微生物が目的のペプトイドに対する耐性を発生させる能力を定量するために使用され得る。獲得または耐性アッセイの例としては、連続継代耐性獲得アッセイおよび単一継代耐性獲得アッセイが挙げられるが、これらに限定されない。下限は所望されないが、実際には、耐性獲得アッセイのＭＩＣは、耐性獲得アッセイの前に得られるＭＩＣの２００％以下、１５０％以下、１２５％以下、１０５％または１０２％以下であり得る。いくつかの実施形態において、耐性獲得アッセイのＭＩＣは、耐性獲得アッセイ前に得られるＭＩＣの１５０％以上、１２５％以上、１０５％以上、または１０２％以上であり得る。いくつかの実施形態において、耐性獲得アッセイのＭＩＣは、耐性獲得アッセイ前に得られるＭＩＣの１０２％～２００％、１０２％～１５０％、１０２％～１２５％、または１０２％～１０５％であり得る。いくつかの実施形態において、耐性獲得アッセイのＭＩＣは、耐性獲得アッセイ前に得られるＭＩＣの１０５％～１２５％、１０５％～１５０％、または１０５％～２００％であり得る。いくつかの実施形態において、耐性獲得アッセイのＭＩＣは、耐性獲得アッセイ前に得られるＭＩＣの１２５％～１５０％または１２５％～２００％であり得る。いくつかの実施形態において、耐性獲得アッセイのＭＩＣは、耐性獲得アッセイ前に得られるＭＩＣの５０％～２００％であり得る。１つの実施形態において、本開示のペプトイドに対して耐性を発生させることができない微生物は、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐｐ．（例えば、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃ．ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ、Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃ．ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃ．ｖｉｓｗａｎａｔｈｉｉ、Ｃ．ａｕｒｉｓ、またはＣ．ｌｕｓｉｔａｎｉａｅのような）である。

【0090】

目的のペプトイドは、病原性微生物の異なる株に対して評価され得る。例えば、ＭＩＣアッセイは、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、例えばＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ Ｍ１（基準株）、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ Ｍ２、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ Ｍ３、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ Ｍ４、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ Ｍ５、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ Ｍ６、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ Ｍ７、およびＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ ＡＴＣＣ ６４１２４によって生成されるバイオフィルムに対する目的のペプトイドの活性を評価するために使用され得る。特定の治療的処置に対して耐性であることが公知である株に対する目的のペプトイドの活性を評価することは、有益であり得る。例えば、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ Ｍ２、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ Ｍ３、およびＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ Ｍ５は、フルコナゾール処置に耐性である。さらに、ＡＴＣＣ ６４１２４は、アンホテリシンＢ、フルコナゾール、カスポファンギン、およびフルシトシンに対して耐性の多剤耐性Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ株である。薬物耐性微生物株に対して活性を示すペプトイドは、その薬物耐性微生物株に感染した被験体を処置するために有利であり得る。薬物耐性微生物株に対して活性を示すペプトイドは、微生物感染を有する被験体を処置するために有利であり得る。なぜなら微生物は、これらのペプトイドに対する耐性を発生させる可能性がより低いからである。

【0091】

目的のペプトイドは、治療的処置としてのそれらの使用を評価するために、インビボでの実験を介して評価され得る。インビボでの生物モデルとしては、植物、マウス、ラット、ネコ、ブタ、ウシ、サル、およびヒトが挙げられ得るが、これらに限定されない。

【0092】

組成物および使用方法

【0093】

別の局面において、本開示は、本明細書で記載されるペプトイド、またはその塩のうちの少なくとも１つを活性成分として含む組成物（例えば、薬学的組成物および殺真菌組成物）を記載する。本開示の文脈内では、ペプトイドの記載は、上記ペプトイドを遊離塩基および／または塩（例えば、上記ペプトイドの薬学的に受容可能な塩）として含むと理解される。用語「遊離塩基（ｆｒｅｅ ｂａｓｅ）」とは、アミン（複数可）の共役塩基（非プロトン化）に言及する。ペプトイドの薬学的に受容可能な塩とは、適切な対イオン（例えば、アニオンまたはカチオン）への１またはこれより多くのイオン結合を通じて中和されているイオン化されたかまたはイオン化可能な薬物物質に言及する。本明細書で記載されるとおりの任意のペプトイドは、本明細書で記載される任意の組成物中の活性成分であり得る。

【0094】

実施形態において、上記組成物は、薬学的組成物である。上記薬学的組成物は、薬学的に受容可能なキャリアとともに製剤化され得る。本明細書で使用される場合、「キャリア（ｃａｒｒｉｅｒ）」は、任意の溶媒、分散媒、ビヒクル、コーティング、希釈剤、等張剤、吸収遅延剤、緩衝化剤、キャリア溶液、懸濁物、コロイドなどを含む。薬学的活性物質のためのこのような媒体および／または薬剤の使用は、当該分野で周知である。いずれかの従来の媒体または薬剤が上記活性成分と非適合性である限りを除いて、治療用組成物におけるその使用が企図される。本明細書で使用される場合、「薬学的に受容可能な（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）」とは、生物学的にもその他の点でも望ましくないものではない物質に言及する。例えば、上記物質は、上記ペプトイドまたはその薬学的に受容可能な塩とともに、これが含まれる薬学的組成物の他の成分のうちのいずれかと有害な様式でいかなる望ましくない生物学的効果も相互作用をも引き起こすことなしに、個体に投与され得る。

【0095】

上記ペプトイドのうちの少なくとも１つは、薬学的組成物中に製剤化され、次いで、本開示の方法に従って、選択した投与経路に適合される種々の形態において、被験体（例えば、哺乳動物（例えば、ヒト、コンパニオンアニマル、または飼い慣らされた動物））に投与される。上記製剤は、経口投与、直腸投与、膣投与、局所投与、鼻投与、眼投与または非経口投与（皮下、筋肉内、腹腔内、および静脈内が挙げられる）に適切なものを含む。上記製剤は、便利なことには、所定の投与経路による送達に適した形態で示され得、薬学分野で周知の方法によって調製され得る。

【0096】

いくつかの実施形態において、ペプトイドは、１またはこれより多くのさらなる活性薬剤（例えば、抗真菌化合物）と組み合わせて製剤化される。本質的に任意の公知の治療剤が、さらなる活性薬剤として含まれ得る。併用療法における上記さらなる活性薬剤の作用は、上記ペプトイドに対して累積的であってもよいし、例えば、副作用または被験体の医学的状態の他の局面を管理するために補助的であってもよい。いくつかの実施形態において、上記併用療法は、アゾール、ポリエン、フルオロシトシン、アンホテリシンＢ、フルコナゾール、および／またはエキノカンジンを含む。

【0097】

いくつかの実施形態において、上記組成物は、殺真菌組成物である。上記殺真菌組成物は、活性薬剤として、本明細書で記載されるペプトイド、またはその塩、および殺真菌性の受容可能なキャリアを含む。本明細書で使用される場合、「殺真菌的に受容可能な（ｆｕｎｇｉｃｉｄａｌ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）」とは、生物学的にもその他の点でも望ましくないものではない物質に言及し、例えば、その物質は、上記ペプトイドまたはその殺真菌的に受容可能な塩とともに、これが含まれる殺真菌組成物の他の成分のうちのいずれかと有害な様式でいかなる望ましくない生物学的効果も相互作用をも引き起こすことなしに、植物に投与され得る。本開示の少なくとも１つのペプトイドは、殺真菌組成物中に製剤化され、次いで、本開示の方法に従って、植物、植物の種子、または植物が生長する土壌へと投与される。上記製剤は、上記植物が生長する土壌を、または上記植物を直接的に処理するために適したものを含む。製剤のタイプとしては、ベイト剤、ゲル、ダスト（ｄｕｓｔ）、顆粒水和剤（ｗａｔｅｒ ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ ｇｒａｎｕｌｅ）、乾燥粉末剤（ｄｒｙ ｐｏｗｄｅｒ）、溶解粉末剤（ｓｏｌｕｂｌｅ ｐｏｗｄｅｒ）、乾燥粒剤、ペレット、乳剤（ｅｍｕｌｓｉｏｎ）、液剤、懸濁剤（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）、含浸製品（ｉｍｐｒｅｇｎａｔｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔ）、肥料配合物（ｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）、またはエアロゾルが挙げられ得る。

【0098】

上記殺真菌性の受容可能なキャリアとしては、賦形剤が挙げられ得る。賦形剤としては、例えば、希釈剤、溶媒、またはアジュバントが挙げられ得る。アジュバントとしては、適合性の薬剤（ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ａｇｅｎｔ）、活性化剤、緩衝化剤、消泡剤、スプレー着色剤、流動制御材（ｄｒｉｆｔ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｇｅｎｔ）、水質調整剤（ｗａｔｅｒ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｒ）、界面活性剤、またはこれらの組み合わせが挙げられ得る。

【0099】

いくつかの実施形態において、ペプトイドは、１またはこれより多くのさらなる活性薬剤（例えば、殺真菌化合物）と組み合わせて製剤化される。任意の公知の植物処理薬剤が、さらなる活性薬剤として含まれ得る。上記併用療法におけるさらなる活性薬剤の作用は、上記ペプトイドに対して累積的であってもよいし、補助的であってもよい。いくつかの実施形態において、併用療法は、上記併用療法は、１またはこれより多くの殺真菌剤（例えば、アゾキシストロビン、ベノミル、プロピコナゾール、トリシクラゾール、カルベンダジム、メタラキシル、ジフェノコナゾール、ヘキサコナゾール（ｈｅｘａｃｏｎａｚｌｅ）、アシベンゾラル、ポリオキシンＤ塩、フルオキサストロビン、カルボン酸、リン酸の一カリウム塩および二カリウム塩、シモキサニル、クロロタロニル、テブコナゾール、塩化銅、水酸化銅、ミネラルオイル、ピラクロストロビン、硫酸銅、シモキサニル、マンコゼブ、ボスカリド、トリフロキシストロビン（ｔｒｉｆｌｕｘｙｓｔｒｏｂｉｎ）、ジメトモルフ、過炭酸ナトリウム、チオファネート－メチル、銅アンモニアアセテート（ｃｕｐｒａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ）、硫黄、テブコナゾール、フォセチル－Ａｌ、ミクロブタニル、シアゾファミド、フェナミドン、ミクロブタニル、クレソキシム－メチル、またはメトラフェノンが挙げられるが、これらに限定されない）を含む。

【0100】

実施形態において、本開示のペプトイド、またはこれを含む薬学的組成物は、被験体、例えば、脊椎動物（例えば、ヒト、コンパニオンアニマル、もしくは飼い慣らされた動物）における真菌感染または細菌感染、および疾患の処置、制御または防止において有用性が見出され得る。治療的処置は、感染の症状の発生の前に；診断の前に；診断後に；または真菌、細菌、もしくは両方への感染の症状の発生の後に、開始され得る。活性薬剤（例えば、本開示のペプトイドまたはこれを含む組成物）は、所望の効果を生じるために有効な量で被験体に投与される。よって、有効量のペプトイドは、真菌感染、細菌感染、または両方を処置するために、被験体に投与され得る。有効量は、症状を低減する；症状の拡大を防止する；感染の１もしくはこれより多くの微生物を殺滅する；または被験体から感染を一掃するために適切な量である。

【0101】

上記製剤は、単一用量または多数の用量で投与され得る。活性薬剤の有用な投与量は、それらのインビトロでの活性および動物モデルにおけるインビボでの活性を比較することによって決定され得る。いくつかの感染性疾患に関しては、病原性細菌または真菌の代わりが、初期データを集めるために使用され得る。例えば、Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓは、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの代わりとして使用され得る。マウス、および他の動物における有効投与量をヒトへと外挿するための方法は、当該分野で公知である。

【0102】

ペプトイド、またはこれを含む薬学的組成物は、真菌感染、細菌感染、真菌感染から生成されるバイオフィルム、細菌感染から生成されるバイオフィルム、真菌および細菌感染から生成されるバイオフィルム、またはこれらの組み合わせを処置または防止するために使用され得る。例示的な真菌感染としては、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐｐ．（例えば、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃ．ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ、Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃ．ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃ．ｖｉｓｗａｎａｔｈｉｉ、Ｃ．ａｕｒｉｓ、Ｃ．ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、またはその組み合わせが挙げられる）への感染；Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｓｐｐ（例えば、Ｒ．ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ、Ｒ．ｍｉｎｕｔａ、Ｒ．ｇｌｕｔｉｎｉｓ、またはその組み合わせが挙げられる）への感染；および／またはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．（例えば、Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ、またはその組み合わせが挙げられる）への感染が挙げられるが、これらに限定されない。細菌感染の例としては、グラム陰性微生物、グラム陽性微生物、またはマイコバクテリアへの感染が挙げられる。グラム陰性細菌の例としては、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、またはＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、またはその組み合わせが挙げられる。グラム陽性細菌の例としては、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、またはその組み合わせが挙げられる。マイコバクテリアの例は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓである。

【0103】

本開示のペプトイド、またはこれを含む薬学的組成物はまた、真菌、細菌、または両方への感染の発生を防止または遅らせるために、予防的に投与され得る。予防的である処置は、例えば、リスクのある被験体が真菌または細菌への感染の症状を発現させる前に開始され得る。本明細書で使用される場合、用語「リスクのある（ａｔ ｒｉｓｋ）」とは、その記載されるリスクを実際に有してもよいし、有していなくてもよい被験体に言及する。従って、例えば、感染状態の「リスクにある」被験体は、被験体が、微生物による感染のいかなる検出可能な指標も未だ発現させていないとしても、および上記被験体が、微生物の無症状の量を有し得るか否かにかかわらず、他の個体が、感染状態を有すると特定されている、および／またはおそらく感染性因子に曝されている領域に存在する被験体である。真菌または細菌への感染を発生させる特定のリスクにある被験体の例は、免疫不全状態の個体である。処置は、感染の症状の診断または発生の前、その間、またはその後に行われ得る。症状の発生後に開始される処置は、上記状態のうちの１つの症状の重篤度の減少、または上記症状の完全な除去を生じ得る。本開示のペプトイド、またはこれを含む薬学的組成物は、真菌または細菌感染の任意の段階で上記被験体（例えば、脊椎動物（例えば、哺乳動物））へと導入され得る。

【0104】

本開示のペプトイド、またはこれを含む薬学的組成物の投与は、他の処置の前、その間、および／またはその後に行われ得る。このような併用療法は、他の抗真菌薬剤または抗細菌薬剤の使用の間、および／またはその後に、ペプトイド、またはこれを含む薬学的組成物の投与を伴い得る。ペプトイド、またはこれを含む薬学的組成物の投与は、数時間、数日、またはさらには数週間でさえ、他の抗真菌薬剤の投与から時間が隔てられ得る。

【0105】

被験体（例えば、ヒト患者）への上記ペプトイドまたはこれを含む組成物の投与が、真菌感染もしくは細菌感染またはこれらと関連する症状を低減または排除するために；被験体内での感染または症状の進行を停止させるもしくは遅らせるために；および／あるいは集団内の感染の拡がり、または別の集団への感染の移動を制御、制限または防止するために、有効であり得ることは、理解されるべきである。

【0106】

本開示のペプトイド、またはこれを含む組成物は、ヒトにおいてのみならず、動物においても、真菌感染または細菌感染、および疾患の処置、制御、または防止において有用性が見出され得る。本開示のペプトイド、またはこれを含む薬学的組成物は、コンパニオンアニマル、飼い慣らされた動物（例えば、家畜、研究のために使用される動物）、または野生の動物に投与され得る。コンパニオンアニマルとしては、イヌ、ネコ、ハムスター、アレチネズミ、およびモルモットが挙げられるが、これらに限定されない。飼い慣らされた動物としては、ウシ、ウマ、ブタ、家禽、ヤギ、およびラマが挙げられるが、これらに限定されない。研究用動物としては、マウス、ラット、イヌ、サル（ａｐｅ）、およびサル（ｍｏｎｋｅｙ）が挙げられるが、これらに限定されない。投与は、例えば、小規模または大規模の公衆衛生感染制御プログラムの一部であり得る。上記ペプトイド、またはこれを含む組成物は、例えば、野生動物または飼い慣らされた動物の集団において真菌感染または細菌感染を低減、制御または排除するための予防的手段として動物飼料に添加され得る。上記ペプトイド、またはこれを含む組成物は、例えば、コンパニオンアニマルまたは飼い慣らされた動物または動物集団の慣用的なまたは特殊な獣医学的処置の一部として投与され得る。

【0107】

上記ペプトイドまたはこれを含む組成物の動物への投与が、真菌細菌もしくは細菌感染またはこれらと関連する症状を低減または排除するために；被験体内での感染または症状の進行を停止させるもしくは遅らせるために；および／あるいは集団内の感染の拡がり、または別の集団への感染の移動を制御、制限または防止するために、有効であり得ることは、理解されるべきである。

【0108】

いくつかの実施形態において、本開示のペプトイド、またはこれを含む殺真菌組成物は、植物の真菌感染の処置、制御または防止において有用性が見出され得る。よって、いくつかの実施形態において、本開示は、有効量のペプトイドを含む殺真菌組成物、またはこれを含む殺真菌組成物を植物に投与する工程を包含する方法を記載する。

【0109】

例示的な真菌感染としては、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ、Ｓｐｈａｅｒｏｐｓｉｓ、Ｐｈｏｍａ ｃｌｅｍａｔｉｄｉｎａ、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ、Ｄｉｐｌｏｃａｒｐｏｎ ｒｏｓａｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ、Ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｕｍ、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｈｏｍｏｅｏｃａｒｐａ、Ｐｈｙｓｏｄｅｒｍａ、Ｌａｅｔｉｓａｒｉａ ｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ、Ｓｅｒｐｕｌａ ｌａｃｒｙｍａｎｓ、Ｓｙｎｃｈｙｔｒｉｕｍ ｅｎｄｏｂｉｏｔｉｃｕｍ、Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ、Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｍ、Ｔａｐｈｒｉｎａ ｄｅｆｏｒｍａｎｓ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ、Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ ｂｉｄｗｅｌｌｉｉ、Ｖｅｎｔｕｒｉａ ｉｎａｅｑｕａｌｉｓ、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｒｏｌｆｓｉｉ、Ｆｉｂｒｏｐｏｒｉａ ｖａｉｌｌａｎｔｉｉ、Ｐｈｏｍａ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ、Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ ｏｘｙｃｏｃｃｉ、Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｍａｙｄｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ、Ｃｏｎｉｏｐｈｏｒａ ｐｕｔｅａｎａ、Ｐｏｒｉａ ｖａｉｌｌａｎｔｉｉ、Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ、Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓ、Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ ｔｒｉｔｉｃｉ－ｒｅｐｅｎｔｉｓａ、またはその組み合わせへの感染が挙げられるが、これらに限定されない。本開示は、本開示のペプトイド、またはこれを含む殺真菌組成物を上記被験体に投与することによって、真菌感染を有するか、または発生させるリスクにある植物を処理する治療的方法を提供する。治療的処置は、診断前に、真菌への感染の症状の発生前に、診断後に、または真菌への感染の症状の発生後に開始される。

【0110】

本開示のペプトイド、またはこれを含む殺真菌組成物はまた、真菌への感染の発生を防止または遅らせるために、予防的に投与され得る。予防的である処置は、例えば、植物が真菌への感染の症状を発現する前に開始され得る。本開示のペプトイド、またはこれを含む殺真菌組成物は、真菌感染の任意の段階で上記植物に導入され得る。

【0111】

本開示のペプトイド、またはこれを含む殺真菌組成物の植物への投与は、小規模または大規模の植物防疫（ｐｌａｎｔ ｈｅａｌｔｈ）の感染制御プログラムの一部であり得る。上記ペプトイド、またはこれを含む殺真菌組成物は、例えば、作物集団において真菌感染を低減、制御または排除するための予防的手段として肥料に添加され得る。上記ペプトイド、またはこれを含む殺真菌組成物の投与が、真菌感染またはこれと関連する症状を低減または排除するために；被験体内での感染または症状の進行を停止させるもしくは遅らせるために；および／あるいは集団内の感染の拡がり、または別の集団への感染の移動を制御、制限または防止するために、有効であり得ることは、理解されるべきである。

【0112】

実施形態において、本開示のペプトイド、またはこれを含む組成物は、健康補助食品または栄養補助食品としての有用性が見出され得る。よって、本開示のペプトイド、またはこれを含む組成物は、栄養食品、健康補助食品または栄養補助食品として（例えば、丸剤またはカプセル剤形態において）パッケージされ得る。さらに、ペプトイド、またはこれを含む組成物は、「栄養補給（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）」食品または「機能性」食品と一般にいわれるものを得るために、食品に添加され得る。ペプトイド、またはこれを含む組成物が添加され得る食品としては、動物飼料；穀物；乳製品（例えば、ヨーグルト、カッテージチーズ）；油（水素添加もしくは部分的水素添加油が挙げられる）；スープ；および飲料が挙げられるが、これらに限定されない。１個またはこれより多くの親油性または疎水性置換を有するペプトイドは、好ましくは、可溶化を容易にするために、油分のあるまたは脂肪分のある食品へと組み込まれ得る。

【0113】

本発明は、特許請求の範囲において規定される。しかし、非限定的な例示的局面の非網羅的な列挙が、以下に提供される。これらの局面の特徴のうちのいずれか１またはこれより多くのものが、本明細書で記載される別の例、実施形態、または局面のうちのいずれか１またはこれより多くの特徴と組み合わされ得る。

【0114】

例示的局面

【0115】

局面１． 局面１は、一般式：

【化16】

の化合物、そのプロトン化形態、またはその薬学的に受容可能な塩であって、
ここで：
Ａ^Ｘは、Ｈまたは直線状もしくは分枝状の（Ｃ６～Ｃ２０）アルキルまたは直線状もしくは分枝状の（Ｃ６～Ｃ２０）アルケニルであり、ここで上記アルキルまたは上記アルケニルは、必要に応じて、カルボニル基を含み；
Ｔは、直線状もしくは分枝状の（Ｃ６～Ｃ２０）アルキルまたは直線状もしくは分枝状の（Ｃ６～Ｃ２０）アルケニルであり、ここで上記アルキルまたは上記アルケニルは、必要に応じて、カルボニル基を含み；
Ｑは、ヒドロキシルまたはＮＨ２であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、各々独立して、

【化17】

【化18】

もしくはそのプロトン化形態、または一般式Ｒ^１０ＮＲ^１１Ｒ^１２Ｒ^１３のアルキルアミンであり、
ここで：
各ｎは、独立して、（Ｃ_０～Ｃ_３）アルキレンであり；
各ｙは、独立して、（Ｃ_０～Ｃ^６）アルキレンであり；
ＮｃｐｅｎＷである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｗは、独立して、Ｎ、Ｓ、またはＯであり；
ＮｌｉｎＷである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｗは、独立して、Ｎ、Ｓ、またはＯであり；
ＮｐｈＸである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｘは、独立して、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩであり；
ＮａｐｅｎＺである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｚは、独立して、Ｓ、またはＯであり；
Ｒ^１０ＮＲ^１１Ｒ^１２Ｒ^１３である各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｒ^１０は、独立して、直線状（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキレンであり；
ＮｎｐｈＯＲである各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｒ^５０は、独立して、（Ｃ_１～Ｃ_３）アルキルであり；
Ｒ^１０ＮＲ^１１Ｒ^１２Ｒ^１３である各Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、および／またはＲ^６に関して、各Ｒ^１１、各Ｒ^１２、および各Ｒ^１３は、独立して、Ｈまたは（Ｃ_１～Ｃ_６）アルキルである、
化合物である。

【0116】

局面２． 局面２は、局面１に記載の化合物であって、ここでＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６は、各々独立して、

【化19】

【化20】

【0117】

またはそのプロトン化形態である化合物である。

【0118】

局面３． 局面３は、局面１～２に記載の化合物であって、ここでＴは、直線状（Ｃ_１３）アルキル；直線状（Ｃ_１５）アルキル；シトリル；ファルネシル；または（ＣＯ）Ｒ^５０であり、ここでＲ^５０は、直線状（Ｃ_１３）アルキルまたは直線状（Ｃ_１５）アルキルである化合物である。

【0119】

局面４． 局面４は、局面１～３に記載の化合物であって、ここでＲ^１０は、直線状（Ｃ_２～Ｃ_４）アルキレンである化合物である。

【0120】

局面５． 局面５は、局面１～４の化合物であって、ここでＲ^１１、Ｒ^１２、およびＲ^１３はメチルである化合物である。

【0121】

局面７． 局面６は、局面１～５の化合物であって、ここでＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎｎｖａであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５のうちのいずれか１つは、Ｎｐｅａであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎｌｙｓであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎｆｕｒであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎｐｈｅであり；Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、およびＲ^６のうちのいずれか１つは、Ｎａｐである、化合物である。いくつかのこのような局面において、Ｔは、直線状（Ｃ_１３）アルキルまたは（ＣＯ）Ｒ^５０であり、ここでＲ^５０は、直線状（Ｃ_１３）アルキルまたは直線状（Ｃ_１５）アルキルであり；Ｑは、－ＮＨ_２である。
局面７． 局面５は、局面１～５の化合物であって、構造：

【化21】

またはそのプロトン化形態を有する化合物である。

【0122】

局面８． 局面８は、局面１～７のいずれか１つに記載の化合物および薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物である。

【0123】

局面９． 局面９は、局面８に記載の組成物を被験体に投与する工程を包含する方法である。

【0124】

局面１０． 局面１０は、局面９に記載の方法であって、ここで上記被験体は、ヒトまたは動物である方法である。

【0125】

局面１１． 局面１１は、局面９または１０に記載の方法であって、ここで上記方法は、上記被験体において真菌感染、もしくは真菌感染から生成されるバイオフィルム、またはその組み合わせを処置または防止する工程をさらに包含する方法である。

【0126】

局面１２． 局面１２は、局面９～１１のいずれか１つに記載の方法であって、ここで上記真菌感染は、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｕｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｉｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｍｉｎｕｔａ、もしくはＲｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｇｌｕｔｉｎｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、もしくはＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ、またはこれらの任意の組み合わせを含む方法である。

【0127】

局面１３． 局面１３は、局面９～１２のいずれか１つに記載の方法であって、さらなる抗真菌化合物を投与する工程をさらに包含する方法である。

【0128】

局面１４． 局面１４は、局面９～１３のいずれか１つに記載の方法であって、ここで上記さらなる抗真菌化合物の投与は、上記組成物の投与と同時に行われる方法である。

【0129】

局面１５． 局面１５は、局面９～１４のいずれか１つに記載の方法であって、ここで上記方法は、上記被験体において細菌感染、または細菌感染から生成されるバイオフィルム、またはその組み合わせを処置または防止する工程をさらに包含する方法である。

【0130】

局面１６． 局面１６は、局面９～１５のいずれか１つに記載の方法であって、さらなる抗真菌化合物を投与する工程をさらに包含する方法である。

【0131】

局面１７． 局面１６は、局面９～１６のいずれか１つに記載の方法であって、ここで上記さらなる抗真菌化合物の投与は、上記組成物の投与と同時に行われる方法である。

【0132】

局面１８． 局面１８は、局面９～１７のいずれか１つに記載の方法であって、ここで上記細菌感染は、グラム陽性またはグラム陰性細菌を含む方法である。

【0133】

局面１９． 局面１９は、局面９～１８のいずれか１つに記載の方法であって、ここで上記グラム陽性細菌は、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、またはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓを含む方法である。

【0134】

局面２０． 局面２０は、局面９～１９のいずれか１つに記載の方法であって、ここで上記グラム陰性細菌は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、またはＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉを含む方法である。

【0135】

局面２１． 局面２１は、局面９～２０のいずれか１つに記載の方法であって、ここで上記細菌感染は、結核を含む方法である。

【0136】

局面２２． 局面２２は、局面８～１４のいずれか１つに記載の組成物を植物、植物の種子、または上記植物が生長する土壌に投与する工程を包含する方法である。

【0137】

局面２３． 局面２３は、局面２２に記載の方法であって、ここで上記方法は、上記植物において真菌感染、または真菌感染から生成されるバイオフィルム、またはその組み合わせを処置または防止する工程をさらに包含する方法である。

【0138】

局面２４． 局面２４は、局面２２または２３に記載の方法であって、ここで上記方法は、さらなる抗真菌化合物を投与する工程をさらに包含する方法である。

【0139】

局面２５． 局面２５は、局面２２～２４のいずれか１つに記載の方法であって、ここで上記さらなる抗真菌化合物の投与は、上記組成物の投与と同時に行われる方法である。

【0140】

局面２６． 局面２６は、局面２２～２５のいずれか１つに記載の方法であって、ここで上記真菌感染は、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ、Ｓｐｈａｅｒｏｐｓｉｓ、Ｐｈｏｍａ ｃｌｅｍａｔｉｄｉｎａ、Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ、Ｄｉｐｌｏｃａｒｐｏｎ ｒｏｓａｅ、Ｐｙｔｈｉｕｍ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ、Ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｕｍ、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｈｏｍｏｅｏｃａｒｐａ、Ｐｈｙｓｏｄｅｒｍａ、Ｌａｅｔｉｓａｒｉａ ｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ、Ｓｅｒｐｕｌａ ｌａｃｒｙｍａｎｓ、Ｓｙｎｃｈｙｔｒｉｕｍ ｅｎｄｏｂｉｏｔｉｃｕｍ、Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ、Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｍ、Ｔａｐｈｒｉｎａ ｄｅｆｏｒｍａｎｓ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ、Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ ｂｉｄｗｅｌｌｉｉ、Ｖｅｎｔｕｒｉａ ｉｎａｅｑｕａｌｉｓ、Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｒｏｌｆｓｉｉ、Ｆｉｂｒｏｐｏｒｉａ ｖａｉｌｌａｎｔｉｉ、Ｐｈｏｍａ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ、Ｍｏｎｉｌｉｎｉａ ｏｘｙｃｏｃｃｉ、Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｍａｙｄｉｓ、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ、Ｃｏｎｉｏｐｈｏｒａ ｐｕｔｅａｎａ、Ｐｏｒｉａ ｖａｉｌｌａｎｔｉｉ、Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ、Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓ、またはＰｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ ｔｒｉｔｉｃｉ－ｒｅｐｅｎｔｉｓａを含む方法である。

【0141】

局面３７． 局面２７は、局面１～８のいずれか１つに記載の化合物または組成物であって、ここで第２の最小阻害濃度は、第１の最小阻害濃度の２００％以下であり、ここで上記第１の最小阻害濃度は、目的の微生物に対する連続耐性獲得アッセイなしに評価され、上記第２の最小阻害濃度は、上記目的の微生物に対する連続耐性獲得アッセイ後に評価される化合物または組成物である。

【0142】

局面３８． 局面３８は、局面３７の化合物または組成物であって、ここで上記目的の微生物は、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓである化合物または組成物である。

【実施例】

【0143】

実施例

【0144】

本開示は、以下の実施例によって例証される。特定の例、材料、量、および手順が本明細書で示されるとおりの開示の範囲および趣旨に従って広く解釈されるべきであることは、理解されるべきである。

【0145】

実施例１

【0146】

ｉＰＬＡＤアッセイを、例示的なペプトイドＲＭＧ９－１１を発見するために使用した。ｉＰＬＡＤアッセイは、図１に示されるとおりの４つの段階で理解され得る。第１の段階では、ＲＰＭＩ－ＭＯＰＳ中でのＣ．ａｌｂｉｃａｎｓの一晩培養物は、ＴＣ処理したペトリ皿の表面に成熟バイオフィルムを生成した。第２の段階では、培地を除去し、上記バイオフィルムをＰＢＳで洗浄し、その後、４２℃で液化したソフトアガー中のＰＬＡＤ連結ペプトイドライブラリービーズおよび還元試薬の混合物を上記バイオフィルムの頂部に添加し、固化させた。最小量のアガーを、ライブラリービーズとバイオフィルムとの間の良好な接触を提供するために使用した。第３の段階では、一晩のインキュベーションから、還元試薬がβ鎖ペプトイドを、バイオフィルムと相互作用したライブラリービーズから放出することを可能にした。フロキシンＢを、上記ソフトアガーの頂部に添加し、上記バイオフィルムの中へと拡散させ、「ヒット」の周りに位置したピンク色がかった環によって可視化されたバイオフィルム内の真菌細胞を殺滅したペプトイドを明らかにした。最後に、段階４では、ヒットを単離し、α鎖の構造を、タンデム質量分析法によってデコンボリューションした。

【0147】

いったん最適化したら、ｉＰＬＡＤアッセイを、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓバイオフィルムに対するコンビナトリアルペプトイドライブラリーＲＧＬ９をスクリーニングするために使用した。コンビナトリアルライブラリーは、特有かつ多様な化合物の大きな収集物を合成および迅速にスクリーニングすることができることから、リード分子の供給源として有利である（Ｌａｍら，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９７，４１１－４４８（１９９７））。ペプトイドライブラリーＲＧＬ９に関する設計は、一般配列Ｎｔｒｉ－Ｎ_Ｒ－Ｎ_Ｒ－Ｎ_Ｃ－Ｎ_Ｒ－Ｎ_Ｒ－Ｎ_Ｃ－リンカーを有し、ここでＮｔｒｉは、トリデシルアミン脂質テールであり、Ｎ_Ｒは、無作為化された脂肪族および芳香族モノマーであり、Ｎ_Ｃは、無作為化されたカチオン性モノマーである（図２Ａおよび図２Ｂ）。リポペプトイドを得るためのコンビナトリアルライブラリーのＮ末端におけるトリデシルアミンテールの付加は、ライブラリー長を低減し、ＭＳ／ＭＳによるヒット配列決定を改善するために使用されるストラテジーである（Ｔｕｒｋｅｔｔら，ＡＣＳ Ｃｏｍｂ．Ｓｃｉ．１９，２２９－２３３（２０１７）；Ｃｈｏｎｇｓｉｒｉｗａｔａｎａら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．５５，４１７－４２０（２０１１））。全てのこれらのモノマーの付加を通じて、ＲＧＬ９は、およそ１．６×１０^５の特有の化合物という理論的多様性を有した。この理論的多様性は、合成中に使用される樹脂の量（これは０．５ｇであった）によって制限され、およそ３．２×１０^４の特有のペプトイドというＲＧＬ９に関する実際の多様性を与えた。

【0148】

ｉＰＬＡＤアッセイを使用してＲＧＬ９をスクリーニングするために、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ成熟バイオフィルムを、ＲＰＭＩ－ＭＯＰＳに真菌細胞溶液を接種し、一晩インキュベートすることによって生成した。バイオフィルムを、ＰＢＳで穏やかに洗浄して、あらゆるプランクトン様または死滅したＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ細胞を除去した。ＲＰＭＩ－ＭＯＰＳソフトアガーと１４ｍＭのＴＣＥＰおよびＰＢＳ中で平衡化したＲＧＬ９樹脂の２～５ｍｇアリコートを、上記洗浄したバイオフィルムに添加し、一晩インキュベートした。細胞生存性を決定し、ヒットを特定するために、フロキシンＢ（５μＭ）を上記ソフトアガーの頂部に添加し、１時間インキュベートした。フロキシンＢを流出できない死細胞によって形成される赤いハローを有する任意のビーズは、「ヒット」と考えられ、手動で除去し、個々のチューブへと入れ、１％のドデシル硫酸ナトリウム溶液中で沸騰させて、培地および細胞デブリを除去することによって清浄にした。次いで、α鎖ペプトイドを、臭化シアンを使用して上記ビーズから切断し、タンデム質量分析法によって分析して、未知のペプトイド配列を決定した。

【0149】

このスクリーニングから、ＲＭＧ９－１１の発見がもたらされた（図２Ｃ）。再合成したＲＭＧ９－１１の最小阻害濃度（ＭＩＣ）を、ＣＳＬＩガイドライン（ＣＬＳＩ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｄｉｌｕｔｉｏｎ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔｓ ｆｏｒ Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｔｈａｔ Ｇｒｏｗ Ａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ，１１ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（２０１８）；ＣＬＳＩ．Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｂｒｏｔｈ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ ｙｅａｓｔｓ；ａｐｐｒｏｖｅｄ ｓｔａｎｄａｒｄ－ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ；ＣＬＳＩ ｄｏｃｕｍｅｎｔ Ｍ２７－Ａ３．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（２００８））を介して、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、およびＥＳＫＡＰＥ細菌に対して最初に決定した。表１は、真菌病原体および細菌病原体に対するＲＭＧ９－１１の最小阻害濃度（ＭＩＣ）値を示す。Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ臨床単離物は、基準株（Ｍ１）、フルコナゾール感受性株（Ｍ４およびＭ６）、およびフルコナゾール耐性株（Ｍ２、Ｍ３、Ｍ５、およびＭ７）を含む。ＡＴＣＣ ６４１２４は、アンホテリシンＢ、フルコナゾール、カスポファンギン、およびフルシトシンに対して耐性である多剤耐性Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ株である。全てのＭＩＣを、少なくとも３日の異なる日に、ＣＳＬＩガイドラインの下で、三連で行った。

【0150】

Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓに対するＲＭＧ９－１１のＭＩＣは、６．２５μｇ／ｍＬであり、これは、他の抗真菌ペプトイド（Ｃｈｏｎｇｓｉｒｉｗａｔａｎａら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．５５，４１７－４２０（２０１１））およびこの真菌病原体に対するいくつかの臨床的処置（フルコナゾールおよびフルシトシンを含む）（Ｐｉｎｔｏら，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｓ．１６３，５７９－５８５（２００８））に匹敵する。以前に発見された抗真菌ペプトイドで観察されたように、ＲＭＧ９－１１は、Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓを殺滅するにあたってＣ．ａｌｂｉｃａｎｓより有効であった（Ｓｐｉｃｅｒら，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ １１０，ｅ２３２７６（２０１９）；Ｒｙｇｅら，Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ５４，１５２－１５６（２００８）；Ｇｒｅｅｎら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ ５６，１０６０４８（２０２０））が、それぞれ、６．２５から３．１３μｇ／ｍＬへの２倍の改善に過ぎなかった。ＲＭＧ９－１１のバイオフィルムＭＩＣ（ＢＭＩＣ）は、ＭＩＣと比較して１６倍増大した（ＢＭＩＣ＝１００μｇ／ｍＬ）。ＢＭＩＣはしばしば、確立されたバイオフィルムに関して細胞数の１００～１０００倍の増大を含めた多くの理由から、ＭＩＣと比較して上昇する。他の理論から、バイオフィルムの負に荷電したポリサッカリドマトリクスがカチオン性抗微生物性のペプチドおよびペプトイドを包み、病原体標的のそれらへの関与を妨げ得ることが示唆される（Ｙａｓｉｒら，Ｍａｔｅｒｉａｌｓ １１，（２０１８））。

【表1-1】

【表1-2】

【0151】

ＲＭＧ９－１１を、フルコナゾール感受性に関わらず、６．２５～１２．５μｇ／ｍＬの間のＭＩＣを有するＣ．ａｌｂｉｃａｎｓのフルコナゾール耐性株および感受性株に対して評価した。励みになることには、ＲＭＧ９－１１は、アンホテリシンＢ、カスポファンギン、フルコナゾール、およびフルシトシン薬物耐性を有するＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ株であるＡＴＣＣ ６４１２４（６．２５μｇ／ｍＬ）に対して効力を維持した。Ｃ．ａｕｒｉｓに対するＲＭＧ９－１１の効力を調査した。Ｃ．ａｕｒｉｓは、２００７年に、Ｃａｎｄｉｄａの多剤耐性株として同定され、最初に日本、続いて、アフリカおよび欧州の症例で観察された（Ｋａｔｈｕｒｉａら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５３，１８２３－１８３０（２０１５）；Ｂｏｒｍａｎら，ｍＳｐｈｅｒｅ １，４－６（２０１６）；Ｂｏｒｍａｎら，ｍＳｐｈｅｒｅ １，４－６（２００９）；Ｍａｇｏｂｏら，Ｅｍｅｒｇ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．２０，１２５０－１２５１（２０１４））。ＲＭＧ９－１１に関するＣ．ａｕｒｉｓでの有効性の減少はごくわずかに認められ（１２．５μｇ／ｍＬ）、これは、Ｃ．ａｕｒｉｓが大部分の臨床用抗真菌剤に対して耐性であることを考慮すれば、励みになった（Ｄｕら，ＰＬＯＳ Ｐａｔｈｏｇ．１６，ｅ１００８９２１（２０２０））。他の一般的なＣａｎｄｉｄａ種（ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、ｋｒｕｓｅｉ、ｇｌａｂｒａｔａ、およびｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）を、ＲＭＧ９－１１が汎用のＣａｎｄｉｄａ処置として使用され得るか否かを決定するために評価した。ＲＭＧ９－１１は、試験した全てのＣａｎｄｉｄａ種に対して３．１３～６．２５μｇ／ｍＬの範囲に及ぶＭＩＣ値を有し、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓと比較して有効性を維持またはさらには改善して、有望と思われる。ＲＭＧ９－１１の効力を、細菌病原体、特に、ＥＳＫＡＰＥ細菌に対して評価して、ＲＭＧ９－１１がより幅広いスケールで使用され得るか否かを決定した。

【0152】

ＥＳＫＡＰＥ細菌は、グラム陽性およびグラム陰性種の両方を含む最も一般的な多剤耐性かつ院内の細菌病原体からなる（Ｐｅｎｄｌｅｔｏｎら，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ．Ａｎｔｉ－ｉｎｆｅｃｔ．Ｔｈｅｒ．１１，２９７－３０８（２０１３））。励みになることには、ＲＭＧ９－１１は、グラム陰性であるＫ．ｐｎｕｅｍｏｎｉａｅ（５０μｇ／ｍＬ）を除いて、グラム陰性およびグラム陽性細菌の両方に対して中程度の活性を有した（３．１３～１２．５μｇ／ｍＬ；図３）。ＲＭＧ９－１１のこの広いスペクトルの抗微生物性活性は、特に、真菌および哺乳動物の膜が類似のリン脂質組成を有することから、哺乳動物の細胞傷害性についての懸念を当然のことながらもたらす。

【0153】

ＲＭＧ９－１１の哺乳動物の細胞傷害性を評価した（表２）。表２は、いくつかの異なる哺乳動物細胞系に対するＲＭＧ９－１１の細胞傷害性分析を示す。肝臓（ＨｅｐＧ２）、線維芽細胞（３Ｔ３）、およびケラチノサイト（ＨａＣａｔ）の生存細胞における５０％低減を生じたペプトイド濃度（ＴＤ_５０；毒性用量５０％）を示す。単一ドナーのヒト赤血球（ｈＲＢＣ）の１０％溶血（ＨＣ_１０）を生じたペプトイド濃度もまた示す。選択比（ＳＲ）を、プランクトン様Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓに対するＭＩＣで除算した細胞傷害性として計算した。

【0154】

試験した哺乳動物細胞系（ＨｅｐＧ２、３Ｔ３、およびＨａＣａｔ）を、ＲＭＧ９－１１とともに７２時間インキュベートし、細胞生存性を、生存細胞がＭＴＴをホルマザンへと還元するＭＴＴ還元アッセイを使用して、ミトコンドリア活性を介して決定した。毒性を、生存細胞の５０％低減を生じる上記ペプトイドの濃度（毒性用量５０％またはＴＤ_５０と称される）として報告する。ＲＭＧ９－１１の細胞傷害性を、ＨｅｐＧ２肝細胞癌の細胞に対して最初に決定した（１１４μｇ／ｍＬのＴＤ_５０、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓに対するＭＩＣで毒性はなく、中程度の選択比（ＳＲ）１８を与えた）（表２）。ＳＲは、ＭＩＣで除算したＴＤ_５０として定義し、化合物の治療範囲の尺度を提供する。代表的には、開発および最適化を通して継続する大部分のリード化合物に関して、１０というＳＲは好ましい一方で、１００というＳＲは、前臨床動物モデル評価へと移る化合物に関してはより望ましい。ＲＭＧ９－１１は、マウス線維芽細胞（３Ｔ３；ＴＤ_５０＝３９μｇ／ｍＬ）およびケラチノサイト（ＨａＣａｔ；ＴＤ_５０＝５３μｇ／ｍＬ）に対する毒性の増大を示したが、毒性は、ＭＩＣにおいてなお最小であった。溶血分析は、ＲＭＧ９－１１がｈＲＢＣに対して中程度に毒性（ＨＣ_１０ ２９μｇ／ｍＬおよびＳＲ ５）であることを示した。

【表2】

【0155】

新たなおよび既存の抗微生物性化合物の両方が直面した最も重篤な危機のうちの１つは、病原体がその化合物に対して耐性を急激に発生させ、これがその化合物を役に立たなくすることである。これは、全ての主要な市販の抗微生物性薬物で観察される論点であり、抗真菌薬物に伴うますます広く認められている論点である（Ｃｌａｔｗｏｒｔｈｙら，Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．３，５４１－５４８（２００７）；Ｗｉｅｄｅｒｈｏｌｄら，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｉｓｔ．１０，２４９－２５９（２０１７））。Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓがＲＭＧ９－１１に対する耐性を獲得する能力を、２つの技術；連続および単一継代を使用して評価した。Ｃｈｉｎｇらは、耐性獲得の単一継代評価のための方法を記載した。ここではこれを、ＲＭＧ９－１１で使用した（Ｃｈｉｎｇら，Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．１０，８７５４（２０２０））。簡潔には、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓの単一のコロニーを、ＲＰＭＩ－ＭＯＰＳ中で一晩インキュベートした。次いで、真菌培養物を、０～８０％ＭＩＣの範囲に及ぶＲＭＧ９－１１の濃度とともに２４時間または４８時間のいずれかにわたってインキュベートした。２４時間および４８時間のいずれかにわたってＲＭＧ９－１１の全ての濃度に曝された真菌は、標準的なＭＩＣアッセイのペプトイドに対してなお等しく感受性であった（ＭＩＣ＝６．２５μｇ／ｍＬ；表３）。これらの知見は、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓが、ＲＭＧ９－１１に対する耐性を発生させることができないことを示唆する。この知見をさらに確かなものにするために、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓを、Ｓａｍｕｅｌｓｅｎらによって記載されるように（Ｓａｍｕｅｌｓｅｎら，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．５７９，３４２１－３４２６（２００５））、連続継代耐性獲得アッセイ介して、漸増濃度のＲＭＧ９－１１に導入した。最初に、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓを、ペプトイド非含有培地中で増殖させ、１～２５％ＭＩＣの範囲に及ぶＲＭＧ９－１１の漸増濃度に連日導入した。連続継代アッセイと単一継代アッセイとの間の１つの大きな差異は、１つの継代から次の継代への接種方法にある。単一継代は、１つの個々のコロニーに依拠する一方で、連続継代は、一連の真菌濃度（細胞／ｍＬ）に焦点を当てる。連続継代の最後には、ＲＭＧ９－１１の徐々に増大する濃度に曝したＣ．ａｌｂｉｃａｎｓを使用して、旧来のＭＩＣアッセイを準備した。理論的には、真菌が、ＭＩＣ未満の抗真菌薬剤での連続継代中に耐性を発達させてしまったとすると、これらの真菌に対するＲＭＧ９－１１のＭＩＣは、増大するはずである。微生物の耐性獲得へのこの代替のアプローチは、６．２５μｇ／ｍＬのＭＩＣを維持するＲＭＧ９－１１を伴う単一継代方法と同じ結果を有した（表３）。全体的に、これらのデータは、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓがＲＭＧ９－１１に対する耐性を急速に発生させることができないことを示し、潜在的なリード抗真菌薬剤としてのこのペプトイドの有望性を検証する。本発明者らの知る限りでは、これは、微生物がペプトイドに対して耐性を獲得する能力の最初の評価であるが、長い間、ペプトイドの耐性を獲得する確率は低いという仮説が立てられていた。

【表3】

【0156】

ＲＭＧ９－１１の抗真菌有効性、哺乳動物細胞傷害性、および選択比は、反復構造活性関係性（ＳＡＲ）試験を通じて改善され得る（Ｍｉｄｄｅｌｔｏｎら，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２８，３５１４－３５１９（２０１８））。一連の提唱されるＲＭＧ９－１１誘導体を、図３に示す。この誘導体リストは網羅的ではない。広い範囲の誘導体を調査し得、各ペプトイドモノマーのファーマコフォアの重要性を決定するために、最初のサルコシンスキャンによってガイドし得る。

【0157】

略語

【0158】

ｉＰＬＡＤ，倒立型ペプトイドライブラリーアガー拡散；ＡＭＰ，抗微生物性ペプチド；ＹＰＤ，酵母エクストラクトペプトンデキストロース；ＭＩＣ，最小阻害濃度；ＴＤ_５０，毒性用量５０％；ＨＣ_１０，溶血濃度１０％；ＳＲ，選択比。

【0159】

実験法

【0160】

材料

【0161】

試薬を、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）、Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ（Ｈａｖｅｒｈｉｌｌ，ＭＡ）、Ａｍｒｅｓｃｏ（Ｓｏｌｏｎ，ＯＨ）、ＴＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ（Ｐｏｒｔｌａｎｄ，ＯＲ）、Ａｎａｓｐｅｃ（Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ）、およびＣｈｅｍ－Ｉｍｐｌｅｘ（Ｗｏｏｄ Ｄａｌｅ，ＩＬ）から購入した。使用した全ての試薬は、９５％を超える純度であった。ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）を、Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｎｏｖｉ，ＭＩ）から獲得した。ＢｏｃおよびＭｍｔ保護ジアミンを、Ｃｈｅｍ－Ｉｍｐｅｘ（Ｗｏｏｄ Ｄａｌｅ，ＩＬ）から購入または以前に記載されるように合成した。４４枚の顕微鏡画像を、Ｌｅｉｃａ Ｍ１６５ＦＣ顕微鏡を使用して獲得した。全ての質量スペクトルを、Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｎａｐｔ ＨＤＭＳ ＱＴｏＦでイオン移動度を用いて獲得した。全ての蛍光および吸光度読み取りを、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｍ５プレートリーダーで獲得した。化合物の精製を、Ｓｕｐｅｌｃｏ Ａｓｃｅｎｔｉｓ Ｃ１８カラム（５μＭ；２５ｃｍ×２１．２ｍｍ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ ５８１３４７－Ｕ）および０．０５％のトリフルオロ酢酸を含む水からアセトニトリルへの０から１００％の勾配で、Ｖａｒｉａｎ Ｐｒｅｐｓｔａｒ ＳＤ－１によって達成した。

【0162】

ＲＧＬ９ライブラリー合成

【0163】

ＰＬＡＤリンカーを、以前に記載されたように合成した（Ｆｉｓｃｈｅｒら，ＡＣＳ Ｃｏｍｂ．Ｓｃｉ．１８，２８７－２９１（２０１６））。ＲＧＬ９を、ＰＬＡＤリンカーを含むＴｅｎｔａＧｅｌ上にスプリット－アンド－プール法（ｓｐｌｉｔ－ａｎｄ－ｐｏｏｌ ｍｅｔｈｏｄ）を使用して合成した。簡潔には、樹脂（５００ｍｇ）を、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のブロモ酢酸（ＢｒＡｃＯＨ；２Ｍ）およびジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ；３．２Ｍ）を使用してブロモアシル化し、マイクロ波の補助（１０％出力；１５秒；２回）の後に１０分間撹拌した。次いで、樹脂を、４本のカチオン性または１０本の非カチオン性反応バイアルのいずれかへと等しく分け、ＤＭＦ中のアミン溶液（２Ｍ）で処理し、マイクロ波の補助の後に４５分間撹拌した。次いで、樹脂を一緒にプールし、ブロモアシル化、分割、アミノ化、プールプロセスの全体を、６回反復した。４位および７位は、カチオン性サブモノマーのために取っておき、２位、３位、５位、および６位を、非カチオン性サブモノマーのために取っておいた／スプリット－アンド－プール合成中に使用したアミンは、Ｂｏｃ－エチレンジアミン、Ｂｏｃ－ジアミノプロパン、Ｂｏｃ－ジアミノブタン、Ｍｍｔ－ジアミノプロパン、ホモトリプタミン、フルフリルアミン、４－（アミノメチル）フェノール、ベンジルアミン、シクロヘキシルアミン、メトキシエチルアミン、ナフチルアミン、イソプロピルアミン、（＋／－）フェニルエチルアミン、およびプロピルアミンであった。これは、ＲＧＬ９に、１．６×１０^７の理論的多様性を与えた。スプリット－アンド－プール合成が完了した後に、トリデシルアミンの最終付加を、ペプトイド化学を使用して完了させた。次いで、末端アミンを、樹脂装填能力（ｒｅｓｉｎ ｌｏａｄｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ）と比較して、１０モル当量で、ＤＭＦ中５％のＮ－メチルモルホリン（ＮＭＭ）中のジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカーボネート（Ｂｏｃ_２Ｏ）を使用してＢｏｃ保護した。アルギニン摸倣物を形成するためにグアニジニル化を意図したアミンを、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ；１％）を使用してＭｍｔ脱保護し、樹脂と撹拌した（５回、１０分）。グアニジル化を、ライブラリーを一晩、ピラゾールカルボキサミジン（１０モル当量）と、５％のＮＭＭ－ＤＭＦ中の４－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ；１モル当量）とともに撹拌することによって達成した。全体的なＢｏｃ脱保護を、それぞれ９５：２．５：２．５比のＴＦＡ、水、およびトリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）で１時間処理し、続いて、ジクロロメタンで洗浄することによって達成して、最終的なＲＧＬ９ペプトイドライブラリーを得た。

【0164】

ｉＰＬＡＤアッセイ

【0165】

酵母ペプトンデキストロース（ＹＰＤ）アガープレートに、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓの凍結ストックを画線培養し、一晩、３７℃でインキュベートした。単一のコロニーを、ＯＤ_５３０＝０．１５～０．２５の間の濁度を達成するまで、塩類溶液（０．８５％）に添加した。細胞溶液（１００μＬ）を、ＲＰＭＩ－ＭＯＰＳ（ｐＨ７；６ｍＬ）に添加し、細胞処理ペトリ皿（６０ｍｍ）にプレートし、一晩、３７℃でインキュベートした。培地を除去し、バイオフィルムを、ＰＢＳで穏やかに洗浄した（３回）。ＲＰＭＩ－ＭＯＰＳソフトアガー（０．７５％ｗ／ｖ）を液化し、使用時まで４２℃で維持した。ＲＧＬ９（０．５ｍＬ ＰＢＳ中２～５ｍｇ）およびＴＣＥＰ（１００ｍＭ；５８０μＬ）をソフトアガーに添加し（４ｍＬ全容積）、バイオフィルムの頂部にプレートした。プレートを、３７℃で一晩インキュベートした。フロキシンＢ（１０μｇ／ｍＬ；１ｍＬ）を上記ソフトアガーの頂部に添加し、さらに１時間インキュベートした。赤いハローを伴うビーズを、外科用ピンセットで取り出し、微量遠心管中に入れ、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ；１％）中で２０分間沸騰させ、続いて、ＰＢＳで洗浄した（３回）。これらのビーズ上の残りのα鎖ペプトイドを、塩酸（０．１Ｍ）を含むアセトニトリル：水（１：１）中の臭化シアン（４０ｍｇ／ｍＬ）とともに遮光して室温で一晩インキュベートすることによって樹脂から切断した。上記臭化シアン溶液を、真空中で除去し、ＴＦＡ（０．０５％）を含むアセトニトリル：水（１：１）中で再懸濁し、ＭＳを介して分析し、未知のペプトイドの構造を得るためにＭＳ／ＭＳを使用して配列決定した。

【0166】

ペプトイド合成

【0167】

ＭＳ／ＭＳによって決定されたペプトイド配列を、標準的なサブモノマーアプローチ（Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４，１０６４６－１０６４７（１９９２））を使用する抗微生物性特徴づけのために再合成した。ペプトイドを、ポリスチレン（ＰＳ）表面（ｒｉｎｋ）アミド樹脂上で合成した。樹脂を、ＤＭＦ中で２０分間膨潤させた。樹脂を、ＤＭＦ中２０％のピペリジンを使用してＦｍｏｃ脱保護し、１０分間、２回撹拌した。比色Ｋａｉｓｅｒ試験によって除去を確認した。樹脂を、無水ＤＭＦ中でＢｒＡｃＯＨ（２Ｍ）およびＤＩＣ（３．２Ｍ）を使用してブロモアシル化し、マイクロ波の補助後に１０分間撹拌した。ＤＭＦで洗浄した後、アミンを、マイクロ波の補助後に無水ＤＭＦ中で２５分間、樹脂と選択したアミン（２Ｍ）を撹拌することによってカップリングし、続いて、ＤＭＦで洗浄した。このプロセスを反復して、所望のペプトイドを形成した。ペプトイドを樹脂から切断し、Ｂｏｃ基を、ＴＦＡ、水、ＴＩＳ（９５：２．５：２．５）とともに１時間撹拌することによって同時に脱保護した。ＴＦＡ溶液を、上記溶液に空気を吹き込むことによって除去し、続いて、ＴＦＡ（０．０５％）を含むアセトニトリル：水（１：１）中で再懸濁し、ＭＳによって検証した。次いで、ペプトイドを、ＳＵＰＬＲＣＯ Ｃ－１８カラムおよび０．０５％のＴＦＡを含む水からアセトニトリル（０から１００％）の勾配で、ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して精製した。溶媒を真空中で除去して、ペプトイドを白色粉末として得た。

【0168】

真菌最小阻害濃度アッセイ

【0169】

真菌病原体Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓおよびＣ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓに対するペプトイドの最小阻害濃度（ＭＩＣ）を、ＣＬＳＩガイドライン（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｂｒｏｔｈ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ ｙｅａｓｔｓ；ａｐｐｒｏｖｅｄ ｓｔａｎｄａｒｄ－ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ；ＣＬＳＩ ｄｏｃｕｍｅｎｔ Ｍ２７－Ａ３．”ＣＬＳＩ．２００８．）に従って決定した。コロニーを、画線培養したＹＰＤプレートから０．８５％の塩類溶液へと移して、０．１８～０．２５の間のＯＤ_５３０を達成した。この接種物をＲＰＭＩ－ＭＯＰＳへと１：１００希釈し、次いで、さらに、ＲＰＭＩ－ＭＯＰＳへと１：２０希釈した。１９８μＬの接種物を、９６ウェル黒色壁プレートの各ウェルへと播種した。１００×ペプトイド溶液の２倍段階希釈物を、水中で調製し、２μＬのペプトイドを各ウェルに三連で添加した。プレートを、３７℃で、Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓについては７２時間、およびＣ．ａｌｂｉｃａｎｓについては２４時間インキュベートし、その後、手動での観察によってＭＩＣを評価した。ＭＩＣを、真菌増殖を防止する化合物の最低濃度として定義した。このアッセイを、各化合物で別の日に３回反復した。

【0170】

真菌バイオフィルム最小阻害濃度アッセイ

【0171】

真菌病原体Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓに対するペプトイドのバイオフィルム最小阻害濃度（ＭＩＣ）を、ＣＬＳＩガイドライン（ＣＬＳＩ．Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｂｒｏｔｈ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ ｙｅａｓｔｓ；ａｐｐｒｏｖｅｄ ｓｔａｎｄａｒｄ－ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ；ＣＬＳＩ ｄｏｃｕｍｅｎｔ Ｍ２７－Ａ３．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，２００８）に従って決定した。コロニーを、画線培養したＹＰＤプレートから０．８５％の塩類溶液へと移して、０．１５～０．２５の間のＯＤ_５３０を達成した。この接種物をＲＰＭＩ－ＭＯＰＳへと１：１００希釈し、次いで、さらに、ＲＰＭＩ－ＭＯＰＳへと１：２０希釈した。２００μＬの接種物を、９６ウェル黒色壁プレートの各ウェルへと播種した。プレートを３７℃で一晩インキュベートした。培地を穏やかに除去し、ＰＢＳで３回穏やかに洗浄した。ＲＰＭＩ－ＭＯＰＳ（１９８μＬ）を各ウェルに添加した。１００×ペプトイド溶液の２倍段階希釈物を、水中で調製し、２μＬのペプトイドを各ウェルに三連で添加し、次いで、３７℃で２４時間インキュベートした。ＰＲＥＳＴＯＢＬＵＥ（２０μＬ）を各ウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートし、その後、ＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ Ｍ５プレートリーダーで蛍光を測定した（励起５５５ｎｍ；発光５８５ｎｍ）。

【0172】

細菌最小阻害濃度アッセイ

【0173】

ＥＳＫＡＰＥ細菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ ＡＴＣＣ ６５６９；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ＡＴＣＣ ２９２１３；Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＡＴＣＣ １３８８３；Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｉｉ ＡＴＣＣ １９６０６；Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＡＴＣＣ ２５６１９；Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ＡＴＣＣ ２９２１２；およびＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＡＴＣＣ ２５９２２）に対するペプトイドの最小阻害濃度（ＭＩＣ）を、ＣＬＳＩガイドライン（ＣＬＳＩ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｄｉｌｕｔｉｏｎ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔｓ ｆｏｒ Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｔｈａｔ Ｇｒｏｗ Ａｅｒｏｂｉｃａｌｌｙ，１１ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，２０１８）に従って決定した。Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓに対するＭＩＣを同様に、ＣＬＳＩガイドライン（Ｗｏｏｄｓ，Ｇ．Ｌ．ら Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ，Ｎｏｃａｒｄｉａｅ，ａｎｄ Ｏｔｈｅｒ Ａｅｒｏｂｉｃ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ，２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ．（２０１１））に従って決定した。画線培養したトリプティックソイアガープレートから拾い上げたコロニーを、トリプティックソイブロス（ＴＳＢ）へと添加して、ＯＤ_６００＝０．０８～０．１５の濁度を達成した。接種物を、カチオン調節ミュラーヒントンブロス（ＣＡＭＨＢ）へと１：２００希釈し、９０μＬを、９６ウェル黒色壁プレートの各ウェルへとプレートした。１０×ペプトイドの２倍系列希釈物（１０μＬ）を各ウェルに三連で添加し、３７℃で、ＥＳＫＡＰＥ細菌については２４時間、およびＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓについては７２時間インキュベートした。テトラサイクリン（２０μｇ／ｍＬ）を、陽性コントロールとして使用するとともに、ＤＩ水をビヒクルコントロールとして使用した。ＥＳＫＡＰＥ細菌についてのインキュベーション後に、ＰＲＥＳＴＯ ＢＬＵＥ（１０μＬ）を各ウェルに添加し、３７℃で１時間インキュベートし、その後、ＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ Ｍ５プレートリーダーで蛍光を測定した（励起５５５ｎｍ；発光５８５ｎｍ）。Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓについてのインキュベーション後に、ウェルを、ＣＬＳＩガイドラインに従ってスコア付けして、ＭＩＣを決定した。このアッセイを別個の日に３回反復した。

【0174】

哺乳動物細胞傷害性

【0175】

肝細胞癌（ＨｅｐＧ２）、マウス線維芽細胞（３Ｔ３）、およびヒトケラチノサイト（ＨａＣａｔ）細胞を、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、ならびに１％のペニシリン、ストレプトマイシン、およびグルタミン（ＰＳＧ）を含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で、３７℃および５％ ＣＯ_２において培養した。細胞を収集し、フェノールレッド非含有ＤＭＥＭ中で１×１０^５～４×１０^５個の細胞／ｍＬへと調節し、９６ウェルプレートにプレートした（１００μＬ）。１０×ペプトイドの２倍系列希釈物（１１．１μＬ）を各ウェルに三連で添加した。水（ビヒクル）を陰性コントロールとして使用した。プレートを、３７℃で５％ ＣＯ_２中、７２時間インキュベートした。チアゾリルブルーテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を各ウェルに添加し（５ｍｇ／ｍＬ；２０μＬ）、３時間インキュベートした。培地を除去し、ＤＭＳＯ（１００μＬ）を添加し、プレートを３７℃で１０分間インキュベートした。プレートを、ＳＰＥＣＴＲＡＭＡＸ Ｍ５プレートリーダーで読み取った（吸光度５７０ｎｍ）。コントロールと比較して増殖の５０％低減を生じる化合物の濃度（毒性用量５０％；ＴＤ_５０）を、ＧＲＡＦＩＴを使用して決定した。この手順を、別個の日に３回反復した。

【0176】

溶血アッセイ

【0177】

溶血活性を、単一ドナーのヒト赤血球（ｈＲＢＣ）を使用して決定した。ｈＲＢＣを、ＰＢＳで洗浄および遠心分離（１０００ＲＰＭ；１０分）を３回行い、ＰＢＳ中に再懸濁し、９６ウェルプレート中でアリコートに分けた（１００μＬ）。ＰＢＳ中で１０×ペプトイド最終濃度の２倍系列希釈物を調製し、ウェルに三連で添加した。ＰＢＳをビヒクルコントロールとして、１％のＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ－１００を陽性コントロールとして使用した。プレートを、１時間（３７℃；５％ ＣＯ_２）インキュベートし、次いで、遠心分離し（１０００ＲＰＭ；１０分）、上清を新たな９６ウェルプレート中でＰＢＳへと１：２０希釈した。プレートを、ＳＰＥＣＴＲＡＮＡＸ Ｍ５プレートリーダーで読み取った（吸光度４０５ｎｍ）。パーセント溶血を、以下の式によって決定した：

【数1】

ＧＲＡＦＩＴを使用して、５０％溶血活性の濃度（ＨＣ５０）およびＨｉｌｌ係数（Ｈ）を決定した。次いで、１０％での溶血活性（ＨＣ_１０）を以下の式によって決定した：
ＨＣ_１０＝ＨＣ_５０［１０％／（１００％－１０％）］^１／Ｈ

【0178】

連続継代耐性獲得アッセイ

【0179】

Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓによるＲＭＧ９－１１に対する耐性獲得を、以前に公開され方法に従う連続継代アッセイを使用して決定した。凍結したストック画線培養プレートからのＣ．ａｌｂｉｃａｎｓの４３個の単一コロニーを、塩類溶液（０．８５％）へと添加して、ＯＤ_５３０＝０．１５～０．２５を達成した。ＲＰＭＩ－ＭＯＰＳ（ｐＨ７；５ｍＬ）を、１０^５個の細胞／ｍＬの濃度に達成するように細胞溶液に接種した（ＯＤ_５３０ １．０００＝３×１０^７個の細胞／ｍＬ）。ＲＭＧ９－１１を、１％ＭＩＣで添加し、一晩インキュベートした（２００ＲＰＭ；３７℃）。新鮮なＲＭＰＩ－ＭＯＰＳを、５％ＭＩＣ濃度のペプトイドを含む一晩細胞溶液に接種した。このプロセスを反復し、５から１０％、最終的には２５％ＭＩＣへと連続的に増大させた。ＭＩＣを、ＣＬＳＩガイドライン（ＣＬＳＩ．Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｂｒｏｔｈ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ ｙｅａｓｔｓ；ａｐｐｒｏｖｅｄ ｓｔａｎｄａｒｄ－ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ；ＣＬＳＩ ｄｏｃｕｍｅｎｔ Ｍ２７－Ａ３．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，２００８）に従って、連続継代培養物からの細胞を使用して、２５％ＭＩＣンキュベーション後に行った。これを、生物学的複製のために凍結したストックからの４枚の別個の画線培養したプレートで行った。

【0180】

単一継代耐性獲得アッセイ

【0181】

単一継代を介する第２の耐性獲得を、ＲＭＧ９－１１に関して、連続継代結果の確認として以前に公開された方法（Ｃｈｉｎｇら，Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．１０，８７５４（２０２０））に従ってＣ．ａｌｂｉｃａｎｓに対して行った。単一のＣ．ａｌｂｉｃａｎｓコロニーを、ＲＰＭＩ－ＭＯＰＳ（ｐＨ７；５ｍＬ）へと接種し、一晩インキュベートした（２００ＲＰＭ；３７℃）。一晩の溶液を、０、１０、２０、４０、６０、および８０％ＭＩＣ濃度のＲＭＧ９－１１を含むＲＰＭＩ－ＭＯＰＳ（ｐＨ７；５ｍＬ）へと１：１０００希釈し、２４時間インキュベートした（２００ＲＰＭ；３７℃）。一晩の溶液を、０、１０、２０、４０、６０、または８０％ＭＩＣ ＲＭＧ９－１１を含むＹＰＤまたは新鮮なＲＰＭＩ－ＭＯＰＳのいずれかへと１：１０００希釈し、さらに２４時間インキュベートした。ＹＰＤ溶液を使用して旧来のＭＩＣアッセイを設定し、２４時間後に獲得した耐性を評価した一方で、４８時間ＲＰＭＩ－ＭＯＰＳ溶液を、化合物なしのＹＰＤへと１：１０００希釈し、一晩インキュベートした。翌日、ＭＩＣをこれらの細胞溶液で行って、４８時間後に耐性獲得を評価した。このアッセイを、生物学的複製のために凍結したストックからの４枚の別個の画線培養したプレートで行った。

【0182】

実施例２

【0183】

ＲＭＧ９－１１サルコシンスキャン

【0184】

ＲＭＧ９－１１の反復構造活性関係性（ＳＡＲ）を行って、改善された生物学的活性および選択性を有する誘導体を開発することを目標として、この化合物の誘導体を調査した。最初に、サルコシンスキャンを完了させて、各モノマーの薬理学的重要性を決定した。この試験では、ＲＭＧ９－１１の各モノマーをサルコシン、すなわちＮ－メチルグリシン（これは、アラニンのペプトイド等価物である）で置換した誘導体を合成した。（図５）。Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓに対する抗真菌有効性（最小阻害濃度またはＭＩＣ）およびＨｅｐＧ２肝臓細胞に対する哺乳動物細胞傷害性（毒性用量５０％またはＴＤ_５０）を、各化合物に関して決定した（表４）。

【表4】

【0185】

これらのデータは、１位（一般式Ｉの位置Ｔ）における親油性トリデシルテールが、薬理学的に重要であり、抗真菌有効性および細胞傷害性の両方に最も寄与することを示した。２番目は、３位（Ｒ^２）におけるフェニルエチル基（Ｎｐｅａ）であり、続いて、６位（Ｒ^５）におけるベンジル基（Ｎｐｈｅ）、５位（Ｒ^６）におけるフルフリル基（Ｎｆｕｒ）、２位（Ｒ^１）におけるプロピル基（Ｎｎｖａ）、ならびに４位（Ｒ^３）および７位（Ｒ^６）におけるカチオン性基（ＮｌｙｓおよびＮａｐ）であった。カチオン性基は、細胞傷害性を主に軽減し、あるとしても、抗真菌有効性にはほとんど寄与しない。さらに、２位（Ｒ^１）におけるプロピル基は、抗真菌有効性または細胞傷害性のいずれにもほとんど寄与せず、開発のために、この部位が生物学的ペナルティーをあまり受けることなく改変され得るという仮説を立てた。

【0186】

反復ＳＡＲ第１回

【0187】

反復ＳＡＲの第１回は、３位（Ｒ^２；図６）における置換を探索した誘導体とともに、２つの種々雑多な誘導体を調査した。構造をＥＳＩ－ＭＳによって確認し、疎水性をＲＰ－ＨＰＬＣ精製中の溶離時間におけるパーセントアセトニトリルによっておよびＭａｒｖｉｎＳｋｅｔｃｈを使用して決定して、ｐＨ７．４での分配係数を計算した（表５）。トリデシルテール（９１１－Ｍ１）の代わりに１４炭素の脂肪酸（ミリスチン酸）テールに置き換わる１位（式１の基Ｔ）のただ１つの誘導体を調査した。これは、この脂肪酸が以前に毒性を低減しながらＣ．ａｌｂｉｃａｎｓに伴う活性を改善することを示したことから試験された（Ｇｒｅｅｎ ＲＭ，Ｂｉｃｋｅｒ ＫＬ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｐｔｏｉｄ ｍｉｍｉｃｓ ｏｆ ｓｈｏｒｔ，ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓ．Ｉｎｔ Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ．２０２０；５６（２）：１０６０４８．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｊａｎｔｉｍｉｃａｇ．２０２０．１０６０４８）。第２の種々雑多な誘導体を、抗真菌活性に影響を与えることなく毒性を低減しようとして、２位（Ｒ^１）のプロピル基（Ｎｎｖａ）をカチオン性基で置換して試験した（９１１－Ｍ２）。３位における置換（Ｒ^２）は、ベンジル基（Ｎｐｈｅ；９１１－Ｍ３）、パラ－フルオロベンジル基（Ｎｐｆｂ；９１１－Ｍ４）、パラ－クロロベンジル基（Ｎｐｃｂ；９１１－Ｍ５）、パラ－ブロモベンジル基（Ｎｐｂｂ；９１１－Ｍ６）、フルフリル基（Ｎｆｕｒ；９１１－Ｍ７）、チオフェン基（Ｎｔｍａ；９１１－Ｍ８）、シクロヘキシル基（Ｎｃｈａ；９１１－Ｍ９）、シクロヘキシルメチル基（Ｎｃｈｅｘｍ；９１１－Ｍ１０）、およびＳ－シクロヘキシルエチル基（ＮｃｈｅｘｍＳ；９１１－Ｍ１１）を含んだ。

【表5】

【0188】

抗真菌活性を、全ての誘導体に関して、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓおよびＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓに対して決定した。これをＭＩＣとして報告する（表６）。哺乳動物細胞傷害性を、ＨｅｐＧ２肝臓細胞に対して決定した。これをＴＤ_５０として報告する（表６）。これらのデータは、脂肪酸テールを有する化合物９１１－Ｍ１およびＳ－シクロヘキシルエチル基（ＮｃｈｅｘｍＳ）を有する化合物９１１－Ｍ１１が、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓに対して中程度に改善した抗真菌活性を有したことを示す。興味深いことには、化合物９１１－Ｍ８および９１１－１０は、Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓに対して１μｇ／ｍＬ未満の活性を示した。第１回における誘導体の大部分は、ＲＭＧ９－１１と比較して類似のまたは増大した細胞傷害性を有したので、ＴＤ_５０をＭＩＣで除算することによって計算される選択比（ＳＲ）を減少させた。さらなるカチオン性基を有する化合物９１１－Ｍ２は、細胞傷害性の劇的な減少を示したが、抗真菌活性の減少も示した。第１回からの最も有望な化合物は、９１１－Ｍ１であり、これは、改善された抗真菌活性および減少した細胞傷害性の両方を有し、改善されたＳＲを生じた。第１回のいくつかの有望な要素を組み合わせて、有望な生物学的特性を有すると仮定される第１回のハイブリッドを生成した。具体的には、これらの要素は、１位（基Ｔ）におけるミリスチン脂肪酸（（ＣＯ）－Ｒ^２０、ここでＲ^２０は、直線状（Ｃ_１３）アルキルである）、２位（Ｒ^１）における余分のカチオン性基、および３位（Ｒ^２）におけるＳ－シクロヘキシルエチル基（ＮｃｈｅｘｍＳ）であった。全３個の要素（９１１－Ｍ１２）または最後の２つの要素（９１１－Ｍ１３）を含むハイブリッドを合成し、特徴づけた（図７および表７）。これらのハイブリッドは、９１１－Ｍ１と比較して、増大した選択性を示さなかったので、１位（基Ｔ）におけるミリスチン酸は、ＳＡＲ開発の第２回へと持ち越された。

【表6】

【表7】

【0189】

反復ＳＡＲ第２回

【0190】

反復ＳＡＲの第２回は、サルコシンスキャンによって決定される場合の２番目に最も薬理学的に重要なモノマー、６位（Ｒ^５；図８Ａおよび８Ｂ）におけるベンジル基（Ｎｐｈｅ）の改変を調査した。第１回の間に特定された１位（基Ｔ）における最適なミリスチン酸テール（（ＣＯ）－Ｒ^２０（ここでＲ^２０は、直線状（Ｃ_１３）アルキル；Ｃ_１３Ｈ_３１である）は、全ての第２回の誘導体において保持した。６位（Ｒ^５）における置換は、イミダゾール基（Ｎｉｍ１；９１１－Ｍ１４）、ナフチル基（Ｎｎａｐ；９１１－Ｍ１５）、パラ－メトキシベンジル基（ＮｐｈＯＭｅ；９１１－Ｍ１６）、Ｓ－シクロヘキシルエチル基（ＮｃｈｅｘｍＳ；９１１－Ｍ１７）、フルフリル基（Ｎｆｕｒ；９１１－Ｍ１８）、パラ－フルオロベンジル基（Ｎｐｆｂ；９１１－Ｍ１９）、シクロヘキシルメチル基（Ｎｃｈｍ；９１１－Ｍ２０）、チオフェン基（Ｎｔｍａ；９１１－Ｍ２１）、および（±）－フェニルエチル基（Ｎｐｅａ；９１１－Ｍ２２）を含んだ。構造をＥＳＩ－ＭＳによって確認し、疎水性を、ＭａｒｖｉｎＳｋｅｔｃｈを使用して決定して、ｐＨ７．４での分配係数を計算した（表８）。

【表8】

【0191】

抗真菌活性を、全ての誘導体に関して、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓおよびＣ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓに対して決定した。これをＭＩＣとして報告する（表９）。哺乳動物細胞傷害性を、ＨｅｐＧ２肝臓細胞に対して決定した。これをＴＤ_５０として報告する（表９）。これらのデータは、第２回の誘導体がいずれも、９１１－Ｍ１と比較して、改善された選択性を有しなかったことを示す。大部分の化合物は、イミダゾール基（Ｎｉｍ１）を含む９１１－Ｍ１４（これは、顕著な活性の減少を有した）を除いて、９１１－Ｍ１に類似の抗真菌活性を有した。毒性は変動したが、大部分の化合物は、顕著により毒性であったシクロヘキシル基を含むもの（９１１－Ｍ１７、Ｎｃｈｅｘｍ；および９１１－Ｍ２０、Ｎｃｈｍ）を除いて、９１１－Ｍ１に匹敵した。第２回内で、化合物９１１－Ｍ１８は、１５１．９６±８．０４μｇ／ｍＬというＴＤ_５０で最良の細胞傷害性プロフィールを有した。これは、わずかではあるが、９１１－Ｍ１より有意に良好ではなかった。

【0192】

図９は、第１回および第２回において調査した有望な改変の内のいくつかの組み合わせを試験するために設計されている一連の第２回のハイブリッドを示す。図１０は、５位（Ｒ^４）におけるフルフリル基、続いて、２位（Ｒ^１）におけるプロピル基に対する改変を調査するために合成される第３回の誘導体の例を示す。

【表9】

【0193】

本明細書で引用される全ての特許、特許出願、および刊行物、ならびに電子的に入手可能な資料（例えば、ヌクレオチド配列提出（例えば、ＧｅｎＢａｎｋおよびＲｅｆＳｅｑにおけるもの）およびアミノ酸配列提出（例えば、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、ＰＩＲ、ＰＲＦ、ＰＤＢにおけるもの、ならびにＧｅｎＢａｎｋおよびＲｅｆＳｅｑにおける註釈されたコード配列からの翻訳）を含む）の完全な開示が、それらの全体において参考として援用される。刊行物の中で参照される補助的な資料（例えば、補助的な表、補助的な図、補助的な材料および方法、ならびに／または補助的な実験データ）は、同様にそれらの全体において参考として援用される。本出願の開示と、本明細書で参考として援用される任意の文書の開示（複数可）との間で何らかの矛盾が存在する場合には、本出願の開示が優先するものとする。前述の詳細な説明および実施例は、理解を明瞭にするために示されているに過ぎない。不必要な限定は、そこから理解されるべきではない。本開示は、示され、記載される正確な細部に限定されない。というのは、当業者に自明なバリエーションに関しては、特許請求の範囲によって定義される開示内に含まれるからである。

【0194】

別段示されなければ、明細書および特許請求の範囲の中で使用される構成要素の量、分子量などを表す全ての数字は、全ての場合に、用語「約（ａｂｏｕｔ）」によって修飾されていると理解されるべきである。よって、別段逆に示されなければ、明細書および特許請求の中で示される数値パラメーターは、本開示によって得ようと求められる望ましい特性に依存して変動し得る近似値である。少なくとも、および均等論を特許請求の範囲に限定する試みとしてではなく、各数値パラメーターは、少なくとも、報告される有効数字の桁数に鑑みて、および通常の丸め技術を適用することによって、解釈されるべきである。

【0195】

本開示の広い範囲を示す数値範囲およびパラメーターが近似値であるにもかかわらず、具体的な実施例において示される数値は、可能な限り正確に報告される。しかし、全ての数値は、それらそれぞれの試験測定において見出される標準偏差から必然的に生じる範囲を本質的に含む。

【0196】

全ての見出しは、読み手の便宜のためであり、特定されなければ、その見出しに続く本文の意味を限定するために使用されるべきではない。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3】

【図4】

【図】

【図5】

【図6-1】

【図6-2】

【図7】

【図8-1】

【図8-2】

【図9】

【図10-1】

【図10-2】

【図10-3】

【図10-4】

【国際調査報告】