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特表2024-536242ＳＩＧＬＥＣ受容体チェックポイント阻害剤およびそれらを使用して腫瘍性細胞成長を阻害する方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-10-04
(54)【発明の名称】ＳＩＧＬＥＣ受容体チェックポイント阻害剤およびそれらを使用して腫瘍性細胞成長を阻害する方法
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20240927BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240927BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240927BHJP
C12N 5/09 20100101ALI20240927BHJP
C12N 5/0783 20100101ALI20240927BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20240927BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240927BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20240927BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20240927BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20240927BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20240927BHJP
C07K 14/725 20060101ALI20240927BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N
A61K39/395 D
A61P35/00
A61P35/02
C12N5/09 ZNA
C12N5/0783
C07K16/28
C12N5/10
C12N15/12
C12N15/13
C12N15/62 Z
C07K19/00
C07K14/725
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024519669
(86)(22)【出願日】2022-09-29
(85)【翻訳文提出日】2024-05-23
(86)【国際出願番号】 US2022077257
(87)【国際公開番号】W WO2023056354
(87)【国際公開日】2023-04-06
(31)【優先権主張番号】63/250,630
(32)【優先日】2021-09-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】524119613
【氏名又は名称】アドバンティジェン バイオサイエンシーズ， エルエルシー
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ハイド， フレッド
(72)【発明者】
【氏名】ジャクソン， マーク
(72)【発明者】
【氏名】カークパトリック， ヘザー
【テーマコード（参考）】
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA92X
4B065AB05
4B065AC14
4B065BA08
4B065CA44
4B065CA46
4C085AA13
4C085AA14
4C085AA16
4C085BB11
4C085BB41
4C085BB43
4C085CC23
4C085EE01
4C085EE03
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA28
4H045FA72
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上のその同族リガンドとの相互作用を阻害するための組成物、および腫瘍性障害の処置におけるチェックポイント阻害剤としてのそれらの使用を提供する。対象においてＳｉｇｌｅｃ－５リガンドを発現するがんを処置および／または予防するための方法であって、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されるＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する分子を対象に投与することを含む方法が提供される。いくつかの態様では、対象は、Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドを発現するがんを有すると同定される。好ましくは、上記分子は、Ｓｉｇｌｅｃ－５に対するモノクローナル抗体である。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
Ｓｉｇｌｅｃ－５を発現する免疫細胞とＳｉｇｌｅｃ－５リガンドを発現するがん細胞との間の相互作用を阻害するための方法であって、前記免疫細胞を、Ｓｉｇｌｅｃ－５と前記Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドとの前記相互作用を阻害する分子と接触させることを含み、前記分子が、Ｓｉｇｌｅｃ－５に対するモノクローナル抗体である、方法。
【請求項2】
前記方法がインビトロで実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記方法がインビボで実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
Ｓｉｇｌｅｃ－５を発現する前記免疫細胞が活性化Ｔ細胞であり、および／または前記モノクローナル抗体が、ａ）動物をヒトＳｉｇｌｅｃ－５抗原で免疫化する工程および前記動物から脾細胞を単離する工程；ｂ）ＣＤ１３８陽性細胞の単離された前記脾細胞を枯渇させて、枯渇された免疫化細胞を得る工程；ｃ）前記枯渇された免疫化細胞を活性化剤と接触させて、活性化された抗原特異的Ｂリンパ球を得る工程；ｄ）前記活性化された抗原特異的Ｂリンパ球を不死化し、それによって不死化されたヒトＳｉｇｌｅｃ－５特異的形質細胞を産生する工程；およびｅ）前記不死化されたＳｉｇｌｅｃ－５特異的形質細胞を増殖させて、Ｓｉｇｌｅｃ－５に特異的に結合するモノクローナル抗体を得る工程、を含む方法によって得られる、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記Ｔ細胞がキメラ抗原受容体を発現する、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
がんを処置するための方法であって、がんの処置を必要とする対象に、活性化Ｔ細胞上に発現されるＳｉｇｌｅｃ－５とがん細胞（複数可）上に発現されるＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する分子を投与することを含み、前記相互作用を阻害する前記分子が、Ｓｉｇｌｅｃ－５の細胞外ドメインを含む融合タンパク質またはＳｉｇｌｅｃ－５に対するモノクローナル抗体である、方法。
【請求項7】
Ｓｉｇｌｅｃ－５と前記Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する前記分子が、（ｉ）Ｓｉｇｌｅｃ－５の細胞外ドメインまたはそのリガンド結合部分、および必要に応じて（ｉｉ）Ｆｃ部分、を含む融合タンパク質である、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
Ｓｉｇｌｅｃ－５と前記Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する前記分子が、抗体またはそのリガンド結合部分であり、好ましくは、前記抗体またはそのリガンド結合部分が、（ｉ）ＴＣＲ（１３８３ｉ）で形質導入された操作されたヒトＴ細胞と（ｉｉ）ＭＥＬ６２４細胞との共培養物における少なくとも１つの炎症促進性サイトカインの産生を、前記抗体またはそのリガンド結合部分の非存在下と比較して少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍または少なくとも３倍増加させ、より好ましくは、１またはそれを超える前記炎症促進性サイトカインがＩＦＮγを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項9】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
前記抗体がマウス抗体、ヒト抗体、またはヒト化抗体である、請求項９に記載の方法。
【請求項11】
前記抗体がヒトＳｉｇｌｅｃ－５に結合する、請求項６～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記対象が、Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドを発現するがんを有すると同定される、請求項６～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記がんが、固形腫瘍、血液がんおよび／または転移性病変である、請求項６～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記がんが、乳がん（例えば、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体またはＨｅｒ２／ｎｅｕのうちの１つ、２つまたはすべてを発現しない乳がん、例えばトリプルネガティブ乳がん）、胃腸／泌尿生殖器（子宮頸がん、卵巣がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、腎臓がん、尿路上皮がん、膀胱がん、前立腺がん、膵臓がん、腸がん、肛門がん）、頭頸部がん（例えば、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ））、咽頭がん、胃食道がん（例えば、食道扁平上皮癌）、食道がん、鼻咽頭がん、甲状腺がん、血液悪性疾患［例えば、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、濾胞性、ＭＡＬＴ、辺縁帯、大細胞／びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を含むがこれらに限定されない、緩慢性および非緩慢性Ｂ細胞リンパ腫）］、Ｔ細胞リンパ腫、白血病（例えば、ＴおよびＢ細胞白血病、骨髄性白血病またはリンパ性白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄性白血病、ヘアリーセル白血病、前骨髄球性白血病（ＰＭＬ））、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、リンパ増殖性疾患（例えば、移植後リンパ増殖性疾患）、肺がん（例えば、非小細胞肺がん）、肝臓がん（例えば、肝細胞癌）、中枢神経系がん、皮膚がん（例えば、黒色腫）、中皮腫から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項15】
前記がんが、血液がん、白血病、黒色腫、肝臓がんおよび乳がんから選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項16】
Ｓｉｇｌｅｃ－５と前記Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する前記分子が、１またはそれを超える追加の免疫チェックポイントタンパク質阻害剤と共に前記対象に同時投与される、請求項６～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記１またはそれを超える追加の免疫チェックポイントタンパク質阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、Ｂ７－Ｈ３およびＢ７－Ｈ４から選択される免疫チェックポイントタンパク質の阻害剤を含み、必要に応じて、前記ＰＤ－１の阻害剤が、セミプリマブ、ニボルマブおよびペンブロリズマブから選択される抗体であり；前記ＰＤ－Ｌ１の阻害剤が、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブから選択される抗体であり；前記ＣＴＬＡ－４の阻害剤がイピリムマブであり；前記ＴＩＭ－３の阻害剤が、ＭＢＧ４５３、Ｓｙｍ０２３およびＴＳＲ－０２２から選択され；前記ＬＡＧ－３の阻害剤が、ＬＡＧ５２５（ＩＭＰ７０１）、ＲＥＧＮ３７６７（Ｒ３７６７）、ＢＩ ７５４，０９１、ＩＭＰ３２１、ＦＳ１１８およびテボテリマブから選択され；前記Ｂ７－Ｈ３および／またはＢ７－Ｈ４の阻害剤が、ＭＧＣ０１８およびＦＰＡ１５０から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
前記１またはそれを超える追加の免疫チェックポイントタンパク質阻害剤が、ＰＤ－１の阻害剤を含み、好ましくは前記ＰＤ－１の阻害剤が抗体であり、より好ましくは前記ＰＤ－１の阻害剤がセミプリマブ、ニボルマブまたはペンブロリズマブである、請求項１７に記載の方法。
【請求項19】
Ｓｉｇｌｅｃ－５と前記Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する前記分子および前記１またはそれを超える追加の免疫チェックポイントタンパク質阻害剤が、逐次的に、同時に、または同時発生的に投与され、好ましくは同時発生的に投与される、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記対象がヒトである、請求項１６～１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記対象の腫瘍微小環境が、対照と比較してＳｉｇｌｅｃ－５リガンドおよび／またはＰＤ－１の増大した発現を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項22】
Ｓｉｇｌｅｃ－５と前記Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する前記分子が、１またはそれを超える共刺激分子と共に前記対象に同時投与され、好ましくは、前記１またはそれを超える共刺激分子が、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、またはＣＤ８３リガンドのアゴニストを含む、請求項６～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
前記１またはそれを超える共刺激分子がＯＸ４０アゴニストを含み、好ましくは、前記ＯＸ４０アゴニストが抗体であり、より好ましくは、前記ＯＸ４０アゴニストが、チスレズマブ、ＨＦＢ３０１００１、ＹＨ００２、イブクリマブ（ＰＦ－０４５１８６００）、およびＩＮＢＲＸ－１０６から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項24】
Ｓｉｇｌｅｃ－５と前記Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する前記分子および前記１またはそれを超える共刺激分子が、逐次的に、同時に、または同時発生的に投与される、請求項２２または２３に記載の方法。
【請求項25】
単離された抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体またはその抗原結合部分がＳｉｇｌｅｃ－５に結合し、Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドへのＳｉｇｌｅｃ－５の結合を減少させ、好ましくは、がん細胞上に発現されるＳｉｇｌｅｃ－５リガンドへのＳｉｇｌｅｃ－５の結合を減少させる、抗体またはその抗原結合部分。
【請求項26】
前記抗体またはその抗原結合部分がヒトＳｉｇｌｅｃ－５に特異的に結合する、請求項２５に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項27】
請求項２５または２６に記載の抗体またはその抗原結合部分であって、以下の特性：（ｊ）［１×１０－７ Ｍ］またはそれ未満のｋＤでヒトＳｉｇｌｅｃ－５に結合する
（ｋ）インビトロおよび／またはインビボで免疫細胞（例えば活性化Ｔ細胞）上に発現されるＳｉｇｌｅｃ－５の細胞表面レベルを実質的に減少させない
（ｌ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖を増加させる
（ｍ）ＭＬＲアッセイにおいてＩＬ－２分泌を増加させる
（ｎ）Ｔ細胞増殖アッセイにおいてＴ細胞増殖を増加させ、および／またはＩＬ－２分泌を増加させる
（ｏ）ヒトＳｉｇｌｅｃ－５およびカニクイザルＳｉｇｌｅｃ－５に結合する
（ｐ）免疫細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドへのＳｉｇｌｅｃ－５の結合を阻害する
（ｑ）インビボで腫瘍細胞成長を阻害する
（ｒ）ヒトＳｉｇｌｅｃ－１４と交差反応しない
のうちの１またはそれを超える特性を示す、抗体またはその抗原結合部分。
【請求項28】
ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または完全ヒト抗体である、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項29】
Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２またはｓｃＦｖ断片である、請求項２５～２８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項30】
請求項２５～２９のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含む、好ましくはがんの処置に使用するための医薬組成物。
【請求項31】
請求項２５～２９のいずれか一項に記載の抗体と、免疫チェックポイントタンパク質の阻害剤と、を含む薬学的組み合わせ物。
【請求項32】
前記免疫チェックポイントタンパク質の阻害剤が、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１ ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、Ｂ７－Ｈ３およびＢ７－Ｈ４から選択される免疫チェックポイントタンパク質を阻害する、請求項３１に記載の薬学的組み合わせ物。
【請求項33】
前記免疫チェックポイントタンパク質の阻害剤がＰＤ－１を阻害する、請求項３２に記載の薬学的組み合わせ物。
【請求項34】
前記免疫チェックポイントタンパク質の阻害剤が、抗体またはその抗原結合断片である、請求項３１～３３のいずれか一項に記載の薬学的組み合わせ物。
【請求項35】
抗Ｓｉｇｌｅｃ－５処置レジメンの候補としてがんを有する対象を同定する方法であって、前記がん上および／または腫瘍微小環境内のＳｉｇｌｅｃ－５リガンドの発現レベルを評価することを含み、前記がん上のＳｉｇｌｅｃ－５リガンドの発現レベルが所定の標準レベルを上回ると、前記対象が前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－５処置レジメンの候補として同定される、方法。
【請求項36】
前記抗Ｓｉｇｌｅｃ－５処置レジメンの候補として同定された対象に、Ｓｉｇｌｅｃ－５と前記Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する分子を投与することをさらに含む、請求項３５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年９月３０日に出願された米国仮特許出願第６３／２５０，６３０号の利益を主張し、その全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年９月３０日に出願された米国仮特許出願第６３／２５０，６３０号の利益を主張し、その全開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
背景
疾患の処置の改善は、基礎研究および臨床研究の両方において長年のテーマであった。特定の疾患標的ならびに免疫系を調節する標的の治療は、非常に長い間、研究者およびそのような研究の目標であった。免疫チェックポイントは、自己寛容を維持し、免疫応答を助ける阻害性または刺激性の特徴を有する経路である。それらには、細胞、細胞群、組織、組織群をインビトロ様式で、および動物または動物の免疫系においてインビボで免疫調節する能力が含まれる。免疫調節のための新しい標的は、過去に誤って分類されていたが、チェックポイント阻害剤によって標的化することができる免疫チェックポイント細胞表面受容体として現在特徴付けられている。標的化された処置は、がんに影響を及ぼすことができ、固形腫瘍がんに対するＣＡＲ－Ｔ治療の有効性を高めることができる。
疾患の処置の改善は、基礎研究および臨床研究の両方において長年のテーマであった。特定の疾患標的ならびに免疫系を調節する標的の治療は、非常に長い間、研究者およびそのような研究の目標であった。免疫チェックポイントは、自己寛容を維持し、免疫応答を助ける阻害性または刺激性の特徴を有する経路である。それらには、細胞、細胞群、組織、組織群をインビトロ様式で、および動物または動物の免疫系においてインビボで免疫調節する能力が含まれる。免疫調節のための新しい標的は、過去に誤って分類されていたが、チェックポイント阻害剤によって標的化することができる免疫チェックポイント細胞表面受容体として現在特徴付けられている。標的化された処置は、がんに影響を及ぼすことができ、固形腫瘍がんに対するＣＡＲ－Ｔ治療の有効性を高めることができる。
【0003】
免疫系を調節するためのモノクローナル抗体などのチェックポイント阻害剤の必要性は、当技術分野において満たされていない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0004】
本発明の概要
Ｓｉｇｌｅｃ－５は、本明細書では免疫チェックポイント阻害剤として同定される。対象における免疫応答が調節されるように、Ｓｉｇｌｅｃ－５と同族Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンド（例えば、がん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンド）との間の相互作用を阻害する分子を対象に投与することを含む、対象における免疫応答を調節する方法が本明細書で提供される。いくつかの態様では、Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドは、（糖）タンパク質リガンドである。好ましくは、分子は、対象における免疫応答を増強、刺激または増加させる。
Ｓｉｇｌｅｃ－５は、本明細書では免疫チェックポイント阻害剤として同定される。対象における免疫応答が調節されるように、Ｓｉｇｌｅｃ－５と同族Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンド（例えば、がん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンド）との間の相互作用を阻害する分子を対象に投与することを含む、対象における免疫応答を調節する方法が本明細書で提供される。いくつかの態様では、Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドは、（糖）タンパク質リガンドである。好ましくは、分子は、対象における免疫応答を増強、刺激または増加させる。
【0005】
いくつかの態様では、１またはそれを超えるＳｉｇｌｅｃ－５リガンドを発現するがん細胞は、Ｖｕｃｈｋｏｖｓｋａら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６６（２）：２３８－２４８（２０２２）に記載の方法（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）によって同定される。関連する態様では、分子（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体）による、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用の阻害は、Ｖｕｃｈｋｏｖｓｋａらに記載された方法によって評価される。他の態様では、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する分子による抗腫瘍Ｔ細胞応答の刺激は、Ｖｕｃｈｋｏｖｓｋａらに記載された方法によって評価される。
【0006】
いくつかの態様では、対象においてＳｉｇｌｅｃ－５リガンドを発現するがんを処置および／または予防する方法であって、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されるＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する分子を対象に投与することを含む方法が提供される。いくつかの態様では、対象は、Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドを発現するがんを有すると同定される。
【0007】
特定の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞分子上に発現されるＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する分子（例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体またはＳｉｇｌｅｃ－５の可溶性形態）で処置されるがんには、固形腫瘍、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫、例えば多発性骨髄腫）、および転移性病変が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、がんは固形腫瘍である。固形腫瘍の例としては、悪性疾患、例えば肉腫および癌腫、例えば様々な器官系の腺癌、例えば肺、乳房、卵巣、リンパ、胃腸（例えば、結腸）、肛門、生殖器および尿生殖路（例えば、腎臓、尿路上皮、膀胱細胞、前立腺）、咽頭、ＣＮＳ（例えば、脳、神経またはグリア細胞）、頭頸部、皮膚（例えば、黒色腫）および膵臓に影響を及ぼすもの、ならびに結腸がん、直腸がん、腎細胞癌、肝臓がん、非小細胞肺がん、小腸がんおよび食道がんなどの悪性疾患を含む腺癌が挙げられる。がんは、初期、中期、後期または転移性のがんであり得る。
【0008】
一実施形態では、がんは、肺がん（例えば、肺腺癌または非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）（例えば、扁平上皮および／または非扁平上皮組織像を有するＮＳＣＬＣ、またはＮＳＣＬＣ腺癌））、黒色腫（例えば、進行した黒色腫）、腎臓がん（例えば、腎細胞癌）、肝臓がん（例えば、肝細胞癌）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、前立腺がん、乳がん（例えば、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体またはＨｅｒ２／ｎｅｕのうちの１つ、２つまたはすべてを発現しない乳がん、例えばトリプルネガティブ乳がん）、卵巣がん、結腸直腸がん、膵臓がん、頭頸部がん（例えば、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、肛門がん、胃食道がん（例えば、食道扁平上皮癌）、中皮腫、鼻咽頭がん、甲状腺がん、子宮頸がん、リンパ増殖性疾患（例えば、移植後リンパ増殖性疾患）または血液がん（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、または非ホジキンリンパ腫）、または白血病（例えば、骨髄性白血病またはリンパ性白血病）から選択される。
【0009】
いくつかの好ましい実施形態では、がんは、結腸直腸がん、食道がん、扁平上皮癌、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、頭頸部扁平上皮癌、黒色腫、中皮腫、非小細胞肺がん、腎細胞癌、尿路上皮癌、乳がん、子宮頸がん、皮膚扁平上皮癌、子宮内膜癌、食道癌、胃の癌腫、メルケル細胞癌、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、および小細胞肺がんから選択される。いくつかの態様では、これらのがんの１またはそれより多くの処置方法は、がんの処置を必要とする対象に、（ｉ）Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の結合を阻害する分子および（ｉｉ）好ましくはＰＤ－１の阻害剤を含む１またはそれを超える追加の免疫チェックポイント阻害剤を同時投与する工程を含む。
【0010】
いくつかの実施形態では、対象は、ＰＤ－Ｌ１発現レベルが上昇したがん微小環境を含む。あるいは、または組み合わせて、がん微小環境は増加したＩＦＮγおよび／またはＣＤ８発現を有することができる。
【0011】
いくつかの実施形態では、対象は、高いＰＤ－Ｌ１レベルもしくは発現のうちの１またはそれより多くを有する腫瘍を有するか、または有するとして同定されるか、または腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）＋である（例えば、増加した数のＴＩＬを有する）として同定されるか、またはその両方である。特定の実施形態では、対象は、高いＰＤ－Ｌ１レベルまたは発現を有し、かつＴＩＬ＋である腫瘍を有するか、または有すると同定される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される方法は、高いＰＤ－Ｌ１レベルもしくは発現のうちの１またはそれより多くを有する腫瘍を有することに基づいて、またはＴＩＬ＋であるとして、またはその両方であるとして対象を同定することをさらに含む。特定の実施形態では、本明細書中に記載される方法は、高いＰＤ－Ｌ１レベルまたは発現を有する腫瘍を有することに基づいて、かつ、ＴＩＬ＋であるとして、対象を同定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＴＩＬ＋である腫瘍はＣＤ８およびＩＦＮγについて陽性である。いくつかの実施形態では、対象は、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ８および／またはＩＦＮγのうちの１つ、２つまたはそれより多くについて陽性である細胞を高いパーセンテージで有するか、または有するとして同定される。特定の実施形態では、対象は、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ８およびＩＦＮγのすべてについて陽性である細胞を高いパーセンテージで有するか、または有するとして同定される。
【0012】
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される方法は、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ８および／またはＩＦＮγのうちの１つ、２つまたはそれより多くについて陽性である細胞を高いパーセンテージで有することに基づいて対象を同定することをさらに含む。特定の実施形態では、本明細書中に記載される方法は、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ８およびＩＦＮγのすべてについて陽性である細胞を高いパーセンテージで有することに基づいて対象を同定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、対象は、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ８および／またはＩＦＮγのうちの１つ、２つまたはそれより多く、ならびに肺がん、例えば、扁平上皮肺がんまたは肺腺癌；頭頸部がん；扁平上皮子宮頸がん；胃がん；食道がん；甲状腺がん；黒色腫および／または鼻咽頭がん（ＮＰＣ）の１またはそれより多くを有するか、または有するとして同定される。特定の実施形態では、本明細書中に記載される方法は、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ８および／またはＩＦＮγのうちの１つ、２つまたはそれより多く、ならびに肺がん、例えば、扁平上皮肺がんまたは肺腺癌；頭頸部がん；扁平上皮子宮頸がん；胃がん；甲状腺がん；黒色腫および／または鼻咽頭がんの１またはそれより多くを有することに基づいて対象を同定することをさらに記載する。
【0013】
いくつかの実施形態では、対象は、高いＰＤ－１レベルもしくは発現、高いＴＩＭ－３レベルもしくは発現、および／または腫瘍内の制御性Ｔ細胞の高レベルの浸潤、例えば腫瘍内に存在するＴｒｅｇの数またはパーセンテージの増加のうちの１つ、２つまたはそれより多くを有する腫瘍を有するか、または有するとして同定される。特定の実施形態において、対象は、ＰＤ－１およびＴＩＭ－３の高いレベルまたは発現、および高いレベル（例えば数）の腫瘍内の制御性Ｔ細胞を有する腫瘍を有するか、または有するとして同定される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される方法は、ＰＤ－１について陽性である高いパーセンテージの細胞、ＴＩＭ－３について陽性である高いパーセンテージの細胞、および／または腫瘍における制御性Ｔ細胞の高レベルの浸潤、例えば腫瘍に存在するＴｒｅｇの数またはパーセンテージの増加のうちの１つ、２つまたはそれより多くに基づいて対象を同定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される方法は、ＰＤ－１について陽性である高いパーセンテージの細胞、ＴＩＭ－３について陽性である高いパーセンテージの細胞、および／または腫瘍における制御性Ｔ細胞の高レベルの浸潤、例えば腫瘍に存在するＴｒｅｇの数またはパーセンテージの増加のうちの１つ、２つまたはそれより多く、ならびに肺がん、例えば非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）；肝細胞がん、例えば肝細胞癌；または卵巣がん、例えば卵巣癌のうちの１またはそれより多くに基づいて対象を同定することをさらに含む。
【0014】
いくつかの実施形態では、本方法に従って処置される対象は、上昇したレベルのＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－１発現を含む腫瘍微小環境を有するとして同定される。
【0015】
いくつかの実施形態では、本方法に従って処置される対象は、上昇したレベルのＳｉｇｌｅｃ－５リガンドの発現を含む腫瘍微小環境を有するとして同定される。関連する実施形態では、本方法に従って処置される対象は、上昇したレベルのＳｉｇｌｅｃ－５リガンドおよびＰＤ－１の発現を含む腫瘍微小環境を有するとして同定される。
【0016】
がんを処置する方法であって、試料（例えば、がん細胞を含むヒト対象からの試料）をＳｉｇｌｅｃ－５リガンドおよび／またはＰＤ－１の存在について試験し、それによってＳｉｇｌｅｃ－５リガンドおよび／またはＰＤ－１の値を同定することと、Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドおよび／またはＰＤ－１の値を対照値と比較することと、Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドおよび／またはＰＤ－１の値が対照値よりも大きい場合、治療有効量の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体（例えば、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体）を、必要に応じて１またはそれを超える他の薬剤、例えば抗ＰＤ－１抗体分子と組み合わせて、対象に投与し、それによってがんを処置することとを含む方法も提供される。
【0017】
いくつかの態様では、がん細胞の高シアリル化は、がん細胞とＳｉｇｌｅｃ－５との間の相互作用を調節する。
【0018】
いくつかの態様では、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する分子は、Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドのデコイ受容体として作用し得る可溶性形態のＳｉｇｌｅｃ－５を含む。いくつかの実施形態では、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ－５は、例えば、Ｃｏｎｎｏｌｌｙら、Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ．，１１９（１）：２２１－２３８（２００２）に記載されているように、Ｓｉｇｌｅｃ－５の細胞外配列を有する可溶性切断型タンパク質をコードするＳｉｇｌｅｃ－５アイソフォームを含む。他の実施形態では、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ－５は、リガンド結合ドメインを含むＳｉｇｌｅｃ－５の細胞外配列の一部を含む。関連する態様では、可溶性Ｓｉｇｌｅｃ－５は、シアル酸を認識するアミノ末端Ｖ－セット免疫グロブリンドメインを含む。いくつかの実施形態では、可溶性形態のＳｉｇｌｅｃ－５は、（ｉ）Ｓｉｇｌｅｃ－５の細胞外部分またはそのリガンド結合断片および（ｉｉ）ＩｇＧ１のＦｃ部分を含む融合タンパク質を含む。
【0019】
他の態様では、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する分子は、抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｓｉｇｌｅ－５に特異的に結合し、Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドへのＳｉｇｌｅｃ－５の結合を減少させる。好ましい実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、対象におけるがんの処置および／または予防に使用するために対象に投与される。いくつかの好ましい実施形態では、抗体または抗原結合断片は、Ｓｉｇｌｅｃ－５に結合し、Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドへのＳｉｇｌｅｃ－５の結合を減少させる。他の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、がん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドに結合し、Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドへのＳｉｇｌｅｃ－５の結合を減少させる。
【0020】
他の態様では、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する分子は、干渉ＲＮＡまたはアンチセンスＲＮＡを含む。いくつかの態様では、干渉ＲＮＡまたはアンチセンスＲＮＡは、腫瘍微小環境におけるＳｉｇｌｅｃ－５の発現を減少させる。
【0021】
他の態様では、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する分子は、小分子を含む。例えば、Ｒｉｌｌａｈａｎら、Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ．，５１（４４）：１１０１４－１１０１８（２０１２）を参照されたい（その内容は参照により本明細書に組み込まれる）。
【0022】
（ｉ）Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドへのＳｉｇｌｅｃ－５の結合を阻害する分子と（ｉｉ）第２のがん治療薬との同時投与を含む併用治療も提供される。いくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－５の結合を阻害する分子は、共刺激分子の調節因子（例えば共刺激分子のアゴニスト）と組み合わせて対象に投与される。他の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－５の結合を阻害する分子は、阻害性分子の調節因子（例えば、免疫チェックポイントタンパク質の阻害剤）と組み合わせて対象に投与される。いくつかの態様では、第２のがん治療薬は、免疫チェックポイント阻害剤、好ましくは抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１および／または抗ＣＴＬＡ－４抗体である。
【0023】
Ｓｉｇｌｅｃ－５に結合する単離された抗体も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、単離された抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－５に結合するヒトモノクローナル抗体である。抗体をコードする核酸分子、および抗体を含む医薬組成物も提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、以下の特性のうちの１またはそれを超える特性を示す：
（ａ）［１×１０－７ Ｍ］またはそれ未満のｋＤでヒトＳｉｇｌｅｃ－５に結合する
（ｂ）インビトロおよび／またはインビボで免疫細胞（例えば活性化Ｔ細胞）上に発現されるＳｉｇｌｅｃ－５の細胞表面レベルを実質的に減少させない
（ｃ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖を増加させる
（ｄ）ＭＬＲアッセイにおいてＩＬ－２分泌を増加させる
（ｅ）Ｔリンパ球増殖アッセイにおいてＴ細胞増殖および／またはＩＬ－２分泌を増加させる
（ｆ）ヒトＳｉｇｌｅｃ－５およびカニクイザルＳｉｇｌｅｃ－５に結合する
（ｇ）免疫細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドへのＳｉｇｌｅｃ－５の結合を阻害する
（ｈ）インビボで腫瘍細胞成長を阻害する
（ｉ）ヒトＳｉｇｌｅｃ－１４と交差反応しない
（ａ）［１×１０－７ Ｍ］またはそれ未満のｋＤでヒトＳｉｇｌｅｃ－５に結合する
（ｂ）インビトロおよび／またはインビボで免疫細胞（例えば活性化Ｔ細胞）上に発現されるＳｉｇｌｅｃ－５の細胞表面レベルを実質的に減少させない
（ｃ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖を増加させる
（ｄ）ＭＬＲアッセイにおいてＩＬ－２分泌を増加させる
（ｅ）Ｔリンパ球増殖アッセイにおいてＴ細胞増殖および／またはＩＬ－２分泌を増加させる
（ｆ）ヒトＳｉｇｌｅｃ－５およびカニクイザルＳｉｇｌｅｃ－５に結合する
（ｇ）免疫細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドへのＳｉｇｌｅｃ－５の結合を阻害する
（ｈ）インビボで腫瘍細胞成長を阻害する
（ｉ）ヒトＳｉｇｌｅｃ－１４と交差反応しない
【0024】
好ましくは、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体はヒト抗体であるが、代替的な実施形態では、抗体は、例えばマウス抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体であり得る。本発明の抗体は、例えば完全長抗体、例えばＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプであり得る。あるいは、抗体は、Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片）、Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域で少なくとも１つのジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片）、Ｆｄ断片（ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなる）、Ｆｖ断片（抗体の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなる）、ｄＡｂ断片（単一可変ドメイン断片（ＶＨドメインまたはＶＬドメイン）からなる）、Ｆｖ断片の２つのドメイン（ＶＬドメインおよびＶＨ）を含む単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）などの抗体断片であることができ、これらは一緒に融合され、いくつかの実施形態では、リンカーを用いて単一タンパク質鎖を作製する。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－５に特異的に結合するｓｃＦｖである。
【0025】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体が提供される。いくつかの実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドを発現するがん細胞への組換えヒトＳｉｇｌｅｃ－５の結合を低減または減少させる。他の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、インビトロおよび／またはインビボで、免疫細胞（例えば活性化Ｔ細胞）上に発現されるＳｉｇｌｅｃ－５の細胞表面レベルを有意に低減または減少させることなく、がん細胞上に発現されるその同族リガンドへのＳｉｇｌｅｃ－５の結合を低減させる。
【0026】
本明細書で使用される場合、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、本明細書に記載されているかまたは当技術分野で公知の任意のインビトロアッセイまたは細胞ベースの培養アッセイを利用して、飽和抗体濃度で少なくとも２０％、Ｓｉｇｌｅｃ－５へのリガンド結合を低減させる場合、Ｓｉｇｌｅｃ－５と１またはそれを超えるＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用（例えば、結合）を阻害する。いくつかの態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－５リガンドを発現するがん細胞へのＳｉｇｌｅｃ－５の結合の２０％またはそれを超える低減を誘導する場合、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する。
【0027】
いくつかの実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体の非存在下でのＳｉｇｌｅｃ－５の結合と比較して、１またはそれを超えるＳｉｇｌｅｃ－５リガンドに対するＳｉｇｌｅｃ－５の結合を、少なくとも２０％、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、少なくとも５０％、少なくとも５１％、少なくとも５２％、少なくとも５３％、少なくとも５４％、少なくとも５５％、少なくとも５６％、少なくとも５７％、少なくとも５８％、少なくとも５９％、少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれを超えて、低減させる。
【0028】
さらに、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体を使用して、がんを予防するか、そのリスクを減少させるか、または処置することができる。いくつかの実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体を使用して、Ｔ細胞不活性化の防止／逆転を必要とする個体の腫瘍微小環境において、Ｓｉｇｌｅｃ－５（活性化Ｔ細胞上に発現）とその同族リガンド（がん細胞上に発現）との相互作用によって引き起こされるＴ細胞不活性化を防止／逆転することができる。いくつかの実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体はモノクローナル抗体である。したがって、いくつかの態様では、対象のがんまたは腫瘍細胞の増殖を減少または阻害する（例えば、がんを処置する）方法が提供され、この方法は、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体分子、例えば治療有効量の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体分子を、単独で、または第２の薬剤、例えば免疫調節薬（例えば、抗ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ－３もしくはＣＥＡＣＡＭ－１阻害剤（例えば、抗体）、またはそれらの組み合わせと組み合わせて対象に投与することを含む。
【0029】
いくつかの態様では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、抗原（例えば腫瘍抗原）刺激時に、Ｓｉｇｌｅｃ－５を発現する活性化Ｔ細胞による１またはそれを超える炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＦＮ－ｇおよびＩＬ－２２）の分泌のＳｉｇｌｅｃ－５リガンド媒介性の低減および／または１またはそれを超えるＴｈ２サイトカイン（例えば、ＩＬ－４、ＩＬ－５およびＩＬ－１３）の分泌の増加を防止する。
【0030】
いくつかの態様では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、Ｔ細胞、例えばＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞において、例えばＩＬ－１２の存在下で抗ＣＤ３／ＣＤ２８で刺激されたＣＤ４＋Ｔ細胞において、または抗ＣＤ３／ＣＤ２８刺激を用いたＴ細胞－ＤＣ自己培養アッセイにおいて、１またはそれを超える炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＦＮ－ｇ、ＴＮＦ－αおよび／またはＩＬ－２２）の分泌および／または増殖を増強する。
【0031】
いくつかの態様では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、例えばインビトロアッセイにおいて、標的がん細胞に対する細胞傷害性ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞活性を増強する。他の態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、マクロファージまたは抗原提示細胞がＴ細胞応答を刺激する能力、例えば抗原提示細胞のＩＬ－１２分泌を増加させる能力を増強する。
【0032】
他の態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－５のエピトープ、例えば、本明細書に記載の抗体分子によって認識されるエピトープと同じまたは類似のエピトープに特異的に結合する。
【0033】
特定の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－５と１またはそれを超えるＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－５に結合するかまたは物理的に相互作用する抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体である。抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、標的抗原（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－５）に対してナノモル濃度またはさらにはピコモル濃度の親和性を有し得る。特定の実施形態では、抗体のＫｄは、約１０ｐＭ～約１００ｎＭである。例えば、抗体のＫｄは、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約９００ｐＭ、約８００ｐＭ、約７９０ｐＭ、約７８０ｐＭ、約７７０ｐＭ、約７６０ｐＭ、約７５０ｐＭ、約７４０ｐＭ、約７３０ｐＭ、約７２０ｐＭ、約７１０ｐＭ、約７００ｐＭ、約６５０ｐＭ、約６００ｐＭ、約５９０ｐＭ、約５８０ｐＭ、約５７０ｐＭ、約５６０ｐＭ、約５５０ｐＭ、約５４０ｐＭ、約５３０ｐＭ、約５２０ｐＭ、約５１０ｐＭ、約５００ｐＭ、約４５０ｐＭ、約４００ｐＭ、約３５０ｐＭ 約３００ｐＭ、約２９０ｐＭ、約２８０ｐＭ、約２７０ｐＭ、約２６０ｐＭ、約２５０ｐＭ、約２４０ｐＭ、約２３０ｐＭ、約２２０ｐＭ、約２１０ｐＭ、約２００ｐＭ、約１５０ｐＭ、約１００ｐＭ、約５０ｐＭ、約４０ｐＭ、約３０ｐＭ、もしくは約２０ｐＭのいずれか、または約１５ｐＭ～約１ｐＭ、約２ｐＭ、約３ｐＭ、約４ｐＭ、約５ｐＭ、約６ｐＭ、約７ｐＭ、約８ｐＭ、約９ｐＭ、約１０ｐＭ、約１１ｐＭ、約１２ｐＭ、約１３ｐＭ、もしくは約１４ｐＭまでのいずれかである。Ｓｉｇｌｅｃ－５に特異性をもって相互作用および／または結合する抗体の調製および選択のための方法は、本明細書に記載されている。
【0034】
いくつかの実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－５に結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－５に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－５に結合するが、Ｓｉｇｌｅｃ－１４には結合しない。いくつかの実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－５に結合するが、ヒトＳｉｇｌｅｃ－１４には結合しない。いくつかの実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－５に結合するが、カニクイザルＳｉｇｌｅｃ－５には結合しない。
【0035】
いくつかの態様では、本開示は、例えばインビトロまたはインビボで、試料（例えば、生物学的試料、例えば、血液、血清、精液もしくは尿、または、例えば過剰増殖性もしくはがん性病変からの組織生検）のＳｉｇｌｅｃ－５の存在を検出する方法を提供する。本明細書の方法は、評価するため（例えば、対象における、本明細書中に記載される障害、例えば、免疫障害、がんまたは感染性疾患の処置または進行の監視、診断および／または病期分類）に使用することができる。この方法は、（ｉ）相互作用が生じることを可能にする条件下で、試料（および必要に応じて、参照試料、例えば対照試料）を、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体分子と接触させること、または対象に投与すること、および（ｉｉ）抗体分子と試料（および必要に応じて、参照試料、例えば対照試料）との間に複合体の形成があるかどうかを検出することを含み得る。複合体の形成は、Ｓｉｇｌｅｃ－５の存在を示し、本明細書に記載の処置の適合性または必要性を示すことができる。この方法は、例えば、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、抗体分子複合磁気ビーズ、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＰＣＲ技術（例えば、ＲＴ－ＰＣＲ）を含むことができる。
【0036】
典型的には、インビボおよびインビトロ診断方法で使用される抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体分子は、結合した結合剤または結合していない結合剤の検出を容易にするために、検出可能な物質で直接的または間接的に標識される。適切な検出可能な物質には、様々な生物学的に活性な酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、常磁性（例えば、核磁気共鳴活性）材料、および放射性材料が含まれる。
【0037】
いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体分子および使用についての指示を含む診断キットまたは治療キットを提供する。
【0038】
いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載の処置方法に有用な、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する分子を同定するためのスクリーニング方法を提供する。好ましい実施形態では、スクリーニング方法は、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する小分子を同定する。
【0039】
いくつかの好ましい実施形態では、そのようなスクリーニングアッセイにおいて、第１の結合混合物は、Ｓｉｇｌｅｃ－５と本発明の抗体とを組み合わせることによって形成され；第１の結合混合物中の結合量（Ｍ０）が測定される。第２の結合混合物も、Ｓｉｇｌｅｃ－５、抗体、およびスクリーニングされる化合物または薬剤を組み合わせることによって形成され、第２の結合混合物中の結合量（Ｍ１）が測定される。試験される化合物は、別の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体または小分子であってもよい。次いで、例えばＭ１／Ｍ０比を計算することによって、第１および第２の結合混合物中の結合量を比較する。化合物または薬剤は、第１の結合混合物と比較して第２の結合混合物における結合の低減が観察される場合、免疫応答のＳｉｇｌｅｃ－５関連ダウンレギュレーションを調節することができると考えられる。結合混合物の製剤化および最適化は当業者のレベル内であり、そのような結合混合物はまた、結合を増強または最適化するのに必要な緩衝液および塩を含有してもよく、追加の対照アッセイが本発明のスクリーニングアッセイに含まれてもよい。したがって、少なくとも約１０％（すなわち、Ｍ１／Ｍ０＜０．９）、好ましくは約３０％超、Ｓｉｇｌｅｃ－５－抗体結合を減少させることが見出された化合物を同定し、次いで、所望であれば、他のアッセイまたは疾患の関連動物モデルにおいて障害を好転させる（ameliorate）能力について二次スクリーニングしてもよい。Ｓｉｇｌｅｃ－５と抗体との結合の強さは、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、表面プラズモン共鳴ベースの技術（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ）を用いて測定することができ、これらはすべて当技術分野で周知の技術である。
【0040】
関連する実施形態において、例えばＲｉｌｌａｈａｎら、Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ．，５１（４４）：１１０１４－１１０１８（２０１２）の方法に従って、ヒトＳｉｇｌｅｃ－５に対するヒットを同定するためのマイクロアレイ技術と結合させたクリックケミストリーを用いたシアロシドアナログライブラリーのハイスループット合成を用いて小分子候補を生成し、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を阻害する能力についてスクリーニングすることができる。次いで、そのような化合物を、ＭＬＲもしくは他のインビトロアッセイまたは疾患（例えば、がん）の関連動物モデルにおいてＴ細胞を刺激する能力について二次スクリーニングすることができる。
【0041】
さらに他の実施形態では、対象のＴ細胞応答を低減させる抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体を対象に投与することを含む、免疫応答のダウンレギュレーションのための方法が提供される。免疫応答のダウンレギュレーションに有用な抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－５アゴニストとして作用し、免疫応答のＳｉｇｌｅｃ－５媒介性の減弱を増強する特性を有し得る。そのような抗体は、１またはそれを超える炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＦＮγ、ＩＬ－２、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－８）の免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）分泌を減少させること、および／または１またはそれを超えるＴｈ２サイトカイン（例えば、ＩＬ－４および／またはＩＬ－１０）の分泌を増加させること、および／またはＴ細胞の増殖を減少させることに対するそれらの効果によって同定することができ、自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、１型糖尿病、多発性硬化症、炎症性腸疾患、クローン病、全身性エリテマトーデスおよび喘息）、過剰増殖性免疫障害、組織、皮膚および臓器の移植拒絶ならびに移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を処置および／または予防するのに有用である。
【図面の簡単な説明】
【0042】
【0043】
【0044】
【0045】
【0046】
【0047】
【0048】
【0049】
【発明を実施するための形態】
【0050】
詳細な説明
【0051】
定義
本明細書で言及される「抗体」という用語は、抗体全体および任意の抗原結合断片（すなわち、「抗原結合部分」）またはその単鎖を含む。「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互に連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合部分を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す）および重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３の３つのドメインからなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す）および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬからなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序で配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
本明細書で言及される「抗体」という用語は、抗体全体および任意の抗原結合断片（すなわち、「抗原結合部分」）またはその単鎖を含む。「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互に連結された少なくとも２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合部分を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す）および重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３の３つのドメインからなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す）および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬからなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序で配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【0052】
本明細書で使用される抗体の「抗原結合部分」（または単に「抗体部分」）という用語は、抗原（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－５）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１またはそれを超える断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって行うことができることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片）；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片）；（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）；および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン（ＶＬおよびＶＨ）は別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え法を使用して、ＶＬ領域およびＶＨ領域が対になって一価分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３を参照）を形成する単一のタンパク質鎖として作製することを可能にする合成リンカーによって連結され得る。そのような単鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されることが意図されている。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来の技術を使用して得られ、断片は、インタクトな抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。
【0053】
本明細書で使用される場合、「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことを意図している（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－５に特異的に結合する単離された抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－５以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかし、Ｓｉｇｌｅｃ－５に特異的に結合する単離された抗体は、他の種由来のＳｉｇｌｅｃ－５分子などの他の抗原に対して交差反応性を有し得る。さらに、単離された抗体は、他の細胞材料および／または化学物質を実質的に含まなくてもよい。
【0054】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一分子組成物の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。
【0055】
本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、フレームワーク領域とＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことを意図している。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、その定常領域もまた、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的変異誘発またはインビボでの体細胞変異によって導入された変異）を含み得る。しかしながら、本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフトされている抗体を含むことを意図しない。
【0056】
「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、フレームワーク領域とＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する単一の結合特異性を示す抗体を指す。一実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物、例えばトランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。
【0057】
本明細書で使用される「組換えヒト抗体」という用語は、組換え手段によって調製、発現、作成または単離されるすべてのヒト抗体、例えば（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックもしくはトランスクロモソーマル（transchromosomal）である動物（例えば、マウス）またはそれから調製されたハイブリドーマ（以下にさらに記載される）から単離された抗体、（ｂ）ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマ（transfectoma）から単離された抗体、（ｃ）組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段によって調製、発現、作成または単離された抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかしながら、特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体をインビトロ変異誘発（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックな動物を使用する場合、インビボ体細胞変異誘発）に供することができ、したがって、組換え抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系ＶＨ配列およびＶＬ配列に由来し関連するが、インビボでヒト抗体生殖細胞系レパートリー内に天然に存在し得ない配列である。
【0058】
本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇまたはＩｇＧ１）を指す。
【0059】
「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」という語句は、本明細書では、「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と互換的に使用される。
【0060】
「ヒト化抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフトされている抗体を指すことを意図する。ヒトフレームワーク配列内で追加のフレームワーク領域改変を行ってもよい。
【0061】
「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を指すことを意図する。
【0062】
本明細書で使用される「ヒトＳｉｇｌｅｃ－５に特異的に結合する」抗体とは、１×１０－７Ｍまたはそれ未満、より好ましくは５×１０－８Ｍまたはそれ未満、より好ましくは１×１０－８Ｍまたはそれ未満、より好ましくは５×１０－９Ｍまたはそれ未満のＫＤでヒトＳｉｇｌｅｃ－５に結合する抗体を指すことを意図する。
【0063】
本明細書で使用される「Ｋａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度を指すことを意図しており、一方、本明細書で使用される「Ｋｄｉｓ」または「Ｋｄ」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度を指すことを意図している。本明細書で使用される「ＫＤ」という用語は、Ｋａに対するＫｄの比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指すことを意図している。抗体のＫＤ値は、当技術分野で十分に確立された方法を使用して決定することができる。抗体のＫＤを決定するための好ましい方法は、表面プラズモン共鳴を使用すること、好ましくはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用することによるものである。
【0064】
本明細書で使用される場合、ＩｇＧ抗体についての「高親和性」という用語は、標的抗原について１０－８Ｍまたはそれ未満、より好ましくは１０－９Ｍまたはそれ未満、さらにより好ましくは１０－１０Ｍまたはそれ未満のＫＤを有する抗体を指す。しかしながら、「高親和性」結合は、他の抗体アイソタイプについて異なり得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプについての「高親和性」結合は、１０－７Ｍまたはそれ未満、より好ましくは１０－８Ｍまたはそれ未満、さらにより好ましくは１０－９Ｍまたはそれ未満のＫＤを有する抗体を指す。
【0065】
本明細書で使用される場合、「干渉ＲＮＡ」および「干渉ＲＮＡ分子」という用語は、ＲＩＳＣと相互作用し、遺伝子発現のＲＩＳＣ媒介性変化に関与し、好ましくは、Ｓｉｇｌｅｃ－５ ｍＲＮＡなどの特定のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の翻訳を減少（すなわち、ノックダウン）させることができるすべてのＲＮＡまたはＲＮＡ様分子を指す。ＲＩＳＣと相互作用することができる干渉ＲＮＡ分子の例には、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、一本鎖ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ピコＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）、およびダイサー基質２７ｍｅｒ二重鎖が含まれる。ＲＩＳＣと相互作用することができる「ＲＮＡ様」分子の例には、１またはそれを超える化学修飾ヌクレオチド、１またはそれを超える非ヌクレオチド、１またはそれを超えるデオキシリボヌクレオチド、および／または、１またはそれを超える非ホスホジエステル結合を含有する、ｓｉＲＮＡ、一本鎖ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｐｉＲＮＡ、非対称ｓｉＲＮＡ、およびｓｈＲＮＡ分子が含まれる。したがって、ｓｉＲＮＡ、一本鎖ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｐｉＲＮＡ、非対称ｓｉＲＮＡ、およびダイサー基質２７ｍｅｒ二重鎖は、「干渉ＲＮＡ」または「干渉ＲＮＡ分子」のサブセットである。
【0066】
本明細書で使用される「ｓｉＲＮＡ」という用語は、特に明記しない限り、二本鎖干渉ＲＮＡを指す。典型的には、本発明の方法で使用されるｓｉＲＮＡは、各鎖が約１９～約２８ヌクレオチド（すなわち、約１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７または２８ヌクレオチド）を有する２つのヌクレオチド鎖を含む二本鎖核酸分子である。典型的には、本発明の方法で使用される干渉ＲＮＡは、約１９～４９ヌクレオチドの長さを有する。二本鎖干渉ＲＮＡに言及する場合の「１９～４９ヌクレオチドの長さ」という語句は、センス鎖およびアンチセンス鎖がリンカー分子によって連結されている干渉ＲＮＡ分子を含めて、アンチセンス鎖およびセンス鎖が独立して約１９～約４９ヌクレオチドの長さを有することを意味する。
【0067】
「処置」または「治療」という用語は、状態（例えば、疾患）、状態の症状を治癒する、治す、緩和する、軽減する、変化させる、治療する（ｒｅｍｅｄｙ）、好転させる、改善する、または影響を及ぼす目的で、または症状、合併症、疾患の生化学的徴候の発生を他の方法で予防するもしくは遅延させる目的で、あるいは統計学的に有意な様式で疾患、状態、または障害のさらなる発症を停止もしくは阻害する目的で、活性剤を投与することを指す。
【0068】
本明細書で使用される場合、２つのアミノ酸配列間の相同性パーセントは、２つの配列間の同一性パーセントと同等である。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮した、配列によって共有される同一の位置の数（すなわち、相同性％＝同一位置の数／位置の総数×１００）の関数である。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、以下の非限定的な例に記載されるように、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。
【0069】
２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０重み残基表、ギャップ長ペナルティ１２およびギャップペナルティ４を使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．Ｍｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１－１７（１９８８））のアルゴリズムを使用して決定することができる。さらに、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、および１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重みおよび１、２、３、４、５、または６の長さ重みを使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４－４５３（１９７０））アルゴリズムを使用して決定することができる。
【0070】
追加的または代替的に、本発明のタンパク質配列は、例えば関連配列を同定するために公開データベースに対して検索を実行するための「クエリ配列」としてさらに使用することができる。このような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を用いて行うことができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本発明の抗体分子に相同なアミノ酸配列を得るためにＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で行うことができる。比較目的のためにギャップのあるアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９－３４０２に記載されているように、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ参照）。
【0071】
Ｓｉｇｌｅｃ－５は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する１型膜貫通タンパク質である。Ｓｉｇｌｅｃ－５の単一の膜貫通ドメインは、４つの細胞外ＩＧ様ドメインを、２つのチロシンに基づく保存されたモチーフを有する８９アミノ酸長の細胞質尾部に連結する。ヒトＳｉｇｌｅｃ－５のアミノ酸配列を以下に提供する。
【化1-1】
【化1-2】
【化1-3】
【0072】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－５などのＳｉｇｌｅｃ－５タンパク質は、限定されないが、配列番号１のアミノ酸残基１～１６に位置するシグナル配列、配列番号１のアミノ酸残基１９～１３６に位置する細胞外免疫グロブリン様可変型（ＩｇＶ）ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基１４６～２２９および２３６～３３０に位置する２つのＩｇ様Ｃ２型ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基４４２～４６２に位置する膜貫通ドメイン、配列番号１のアミノ酸残基５１８～５２３に位置するＩＴＩＭモチーフ１、および配列番号１のアミノ酸残基５４２～５４７に位置するＳＬＡＭ様モチーフを含むいくつかのドメインを含有する。当業者には理解されるように、本開示のドメインの開始残基および終了残基は、使用されるコンピュータモデリングプログラムまたはドメインを決定するために使用される方法に応じて異なり得る。
【0073】
本明細書で使用される場合、本開示の「Ｓｉｇｌｅｃ－５」タンパク質には、哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ－５タンパク質、ヒトＳｉｇｌｅｃ－５タンパク質、および霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－５タンパク質が含まれるが、これらに限定されない。さらに、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、哺乳動物Ｓｉｇｌｅｃ－５タンパク質、ヒトＳｉｇｌｅｃ－５タンパク質、および霊長類Ｓｉｇｌｅｃ－５のうちの１またはそれより多くの中のエピトープに結合し得る。いくつかの実施形態では、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－５タンパク質に特異的に結合し得る。好ましい実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－５タンパク質のアミノ酸残基１９～１３６、１４６～２２９または２３６～３３０内のエピトープに結合する。
【0074】
Ｓｉｇｌｅｃ－５は、ａ２，３－およびａ２，６連結シアル酸の両方に結合し、より少ない程度で、ａ２，８連結シアル酸に結合する。ｂタンパク質（Ｂ群連鎖球菌で発現）、ＨＳＰ７０およびＰＳＬＧ－１を含む、Ｓｉｇｌｅｃ－５のいくつかのタンパク質リガンドが同定されている。Ｓｉｇｌｅｃ－５は、本明細書において、活性化Ｔ細胞における阻害性受容体として同定されており、Ｓｉｇｌｅｃ－５と腫瘍細胞上のその同族リガンドとの係合はＴ細胞特異的抗腫瘍応答を抑制する。したがって、本出願は、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を遮断することによってＴ細胞疲弊を逆転させる方法を提供する。
【0075】
本出願は、Ｓｉｇｌｅｃ－５が有意な免疫チェックポイントの性質を有すると同定する。他のＳｉｇｌｅｃファミリーメンバーも免疫チェックポイントの性質を有し得る。したがって、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を遮断する抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体、およびチェックポイント阻害剤としてのこれらの抗体の治療的使用が提供される。いくつかの態様では、抗体は、Ｔ細胞疲弊を逆転させ、ＣＡＲ－Ｔ治療の有効性を増加させるために投与される。他の態様では、抗体は、Ｋｅｙｔｒｕｄａなどの１またはそれを超える他のチェックポイント阻害剤およびＰＤ－１／ＰＤＬ－１経路を標的とする他の治療と同時投与される。いくつかの態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体と１またはそれを超える他のチェックポイント阻害剤との同時投与は、相乗的な抗腫瘍効果を示す。いくつかの好ましい実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、（ｉ）限定されないが、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、セミプリマブなどのプログラム細胞死受容体－１（ＰＤ－１）を標的とするチェックポイント阻害剤；（ｉｉ）限定されないが、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブなどのプログラム細胞死リガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）を標的とするチェックポイント阻害剤；（ｉｉｉ）限定されないがイピリムマブなどの細胞傷害性Ｔリンパ球関連分子４（ＣＴＬＡ－４）を標的とするチェックポイント阻害剤；（ｉｖ）リンパ球活性化遺伝子３（ＣＤ２２３としても知られるＬＡＧ－３）を標的とするチェックポイント阻害剤；（ｖ）ＴＩＭ－３を標的とするチェックポイント阻害剤、（ｖｉ）Ｂ７－Ｈ３もしくはＢ７－Ｈ４を標的とするチェックポイント阻害剤、ならびに／または（ｖｉｉ）Ａ２ａＲ、ＣＤ７３、ＮＫＧ２Ａおよび／もしくはＰＶＲＩＧＰＶＲＬ２；および／もしくは他の阻害性免疫機構、例えば、限定されないがＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ＦＡＫ、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２、ＬＩＦ、ＣＤ４７ＳＩＲＰα、ＣＳＦ－１（Ｍ－ＣＳＦ）、ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｒ３（ＩＬ－１ＲＡＰ）、ＩＬ－８、セマフォリンＳＥＭＡ４Ｄ、Ａｎｇ２、ＥＶＥＲ－１、Ａｘｌおよび／もしくはホスファチジルセリンに作用する経路を標的とするチェックポイント阻害剤と組み合わせて投与される。
【0076】
いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体分子は、１またはそれを超える追加の免疫チェックポイント阻害剤と同時発生的に、同時に、または逐次的に投与される。同時発生的な投与は、２つの別個の治療剤の投与レジメンが少なくとも１日重複することを意味する。
【0077】
関連する態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体分子は、がんの処置および／または予防のために、ＭＢＧ４５３、Ｓｙｍ０２３および／またはＴＳＲ－０２２を含むがこれらに限定されない抗ＴＩＭ－３剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５分子は、抗Ｔｉｍ－３抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて投与される。
【0078】
好ましい態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体分子は、がんの処置および／または予防のために抗ＰＤ－１剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１剤は抗体またはその抗原結合断片であり、その代表的な例としては、セミプリマブ、ニボルマブおよびペンブロリズマブが挙げられる。
【0079】
別の態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体分子は、がんの処置および／または予防のために抗ＰＤ－Ｌ１剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１剤は抗体またはその抗原結合断片であり、その代表的な例としては、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブが挙げられる。
【0080】
別の態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体分子は、がんの処置および／または予防のために抗ＣＴＬＡ－４剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４剤は抗体またはその抗原結合断片であり、その代表例はイピリムマブである。
【0081】
別の態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体分子は、がんの処置および／または予防のために、ＬＡＧ５２５（ＩＭＰ７０１）、ＲＥＧＮ３７６７（Ｒ３７６７）、ＢＩ ７５４，０９１、ＩＭＰ３２１またはＦＳ１１８などの抗ＬＡＧ－３剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、抗Ｌａｇ３剤は抗体またはその抗原結合断片であり、その代表例はテボテリムマブ（ｔｅｂｏｔｅｌｉｍａｂ）である。
【0082】
別の態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体分子は、がんの処置および／または予防のために、ＭＧＣ０１８またはＦＰＡ１５０などの抗Ｂ７－Ｈ３または抗Ｂ７－Ｈ４剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３または抗Ｂ７－Ｈ４剤は抗体またはその抗原結合断片である。
【0083】
他の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体分子は、共刺激分子の調節因子、例えばアゴニストと組み合わせて投与される。一実施形態では、共刺激分子のアゴニストは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、またはＣＤ８３リガンドのアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体もしくはその抗原結合断片、または可溶性融合物）から選択される。
【0084】
好ましい態様では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体分子は、がんの処置および／または予防のためにＯＸ４０アゴニストと組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは抗体またはその抗原結合断片であり、その代表的な例としては、チスレズマブ、ＨＦＢ３０１００１、ＹＨ００２、イブクリマブ（ｉｖｕｘｏｌｉｍａｂ）（ＰＦ－０４５１８６００）およびＩＮＢＲＸ－１０６が挙げられる。
【0085】
薬物治療のこれらの組み合わせまたはカクテルは、がんの処置および／または予防において相加的または相乗的に作用し得る。
【0086】
Ｓｉｇｌｅｃ－５および他のＳｉｇｌｅｃ－５ファミリーメンバー（Ｓｉｇｌｅｃ １、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５）は、本明細書ではチェックポイントタンパク質として同定される。したがって、Ｓｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を遮断する抗体または他の化合物は、これらの標的のチェックポイント阻害剤として作用する。これらのチェックポイント阻害剤（複数可）は、単独で、または他のチェックポイント阻害剤（複数可）（および他の治療）（抗体治療薬［Ｋｅｙｔｒｕｄａ］）と組み合わせて投与されて、対象（例えば、哺乳動物）の液体腫瘍（リンパ腫）および固形腫瘍の両方の腫瘍サイズを減少させることができる。これらのチェックポイント阻害剤（複数可）は、液体腫瘍（リンパ腫）または固形腫瘍の処置において、ｔ細胞疲弊を減少および逆転させるために、単独で、または他の治療と組み合わせて投与され得る。これらのチェックポイント阻害剤（複数可）はまた、ＣＡＲ－Ｔ治療におけるＴ細胞疲弊を減少および逆転させるために、単独で、または他のチェックポイント阻害剤および治療と組み合わせて投与され得る。チェックポイント阻害剤（複数可）は、腫瘍微小環境における免疫系疲弊を逆転させるように作用する。
【0087】
上記の実施形態のいずれかにおいて、本発明の抗体または抗体断片は、約７．５×１０５ １／Ｍ・ｓまたはそれより速いｋａｓｓｏｃでヒトＳＩＧＬＥＣ５に結合し得る。一実施形態では、抗体または抗体断片は、約１×１０６ １／Ｍ・ｓまたはそれより速いｋａｓｓｏｃでヒトＳＩＧＬＥＣ５に結合し得る。
【0088】
上記の実施形態のいずれかにおいて、抗体または抗体断片は、約２×１０－５ １／ｓまたはそれより遅いｋｄｉｓｓｏｃでヒトＳＩＧＬＥＣ５に結合し得る。一実施形態では、抗体または抗体断片は、約２．７×１０－５ １／ｓまたはそれより遅いｋｄｉｓｓｏｃでヒトＳＩＧＬＥＣ５に結合し得る。一実施形態では、抗体または抗体断片は、約３×１０－５ １／ｓまたはそれより遅いｋｄｉｓｓｏｃでヒトＳＩＧＬＥＣ５に結合し得る。
【0089】
ＫＤ、ｋａｓｓｏｃおよびｋｄｉｓｓｏｃ値は、任意の利用可能な方法を用いて測定することができる。好ましい実施形態では、解離定数は、生体光干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ法）を用いて測定される。他の好ましい実施形態では、解離定数は、表面プラズモン共鳴（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ）またはＫｉｎｅｘａを使用して測定することができる。
【0090】
さらに、上記の実施形態のいずれかにおいて、本発明の抗体または抗体断片は、約１ｎＭ以下のＩＣ５０でヒトＳＩＧＬＥＣ５に対するヒトＰＳＧＬ１の結合を遮断し得る。リガンド結合の遮断は、当技術分野で公知の任意の方法、例えば、本明細書中の実施例に記載されるＦＡＣＳまたはＦＭＡＴ法を使用して測定することができ、ＩＣ５０を計算することができる。
【0091】
本発明はまた、ヒトＳＩＧＬＥＣ５上の結合エピトープについて上記の抗体のいずれかと競合し、約１ｎＭ以下のＩＣ５０でヒトＰＳＧＬ１の結合またはヒトＳＩＧＬＥＣ５への結合を遮断する抗体または抗体断片を含む。
【0092】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体または抗体断片は、キメラ抗体またはキメラ抗体の断片である。
【0093】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体または抗体断片は、ヒト抗体またはヒト抗体の断片である。
【0094】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体または抗体断片は、ヒト化抗体またはヒト化抗体の断片である。
【0095】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、またはＦ（ａｂ’）２抗体断片である。
【0096】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体断片はダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）である。
【0097】
本発明はまた、ヒトＳＩＧＬＥＣ５に結合する上記の抗体または抗体断片のいずれか１つを含む二重特異性抗体を含む。
【0098】
いくつかの実施形態では、本発明の単離された抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体および抗体断片は、当業者に公知の典型的な手段（限定されないが、免疫細胞増殖の増加、サイトカイン分泌の増加、またはＣＤ２５および／もしくはＣＤ６９などの活性化マーカーの発現を含む）によって測定されるＴ細胞活性化を増加させる。
【0099】
上記の実施形態のいずれかにおいて、本発明の抗体または抗体断片は、ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ Ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ Ｂ）または破傷風トキソイド（Ｔｅｔａｎｕｓ Ｔｏｘｏｉｄ）によるエクスビボまたはインビボでの刺激後に免疫応答を増強し得る。増加した免疫活性化は、当業者に公知の方法、例えば、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の増殖または免疫細胞によるサイトカイン産生（例えば、Ｔ細胞によるＩＦＮγまたはＩＬ－２の産生）を定量することを用いて決定され得る。
【0100】
本発明はまた、免疫細胞を本発明の抗体または抗体断片のいずれか１つと接触させることを含む、免疫細胞の活性を増加させる、またはダウンモジュレーションを減少させる方法を含む。この方法は、がんまたは感染性疾患（慢性ウイルス感染症など）を処置するために使用することができ、または予防用または治療用ワクチンに対するアジュバントとして使用することができる。
【0101】
本発明はまた、抗原に対する免疫応答が増加または増強されるように、免疫細胞を抗原および抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体または抗体断片と接触させることを含む、抗原に対する免疫応答を増加させる方法を含む。この方法は、インビボ（対象において）またはエクスビボで行うことができる。
【0102】
いくつかの実施形態では、抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体または抗体断片は、第２の治療剤または処置モダリティと組み合わせてもよい。一実施形態では、抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体または抗体断片を、組換えサイトカインまたは分泌された免疫因子の適用を含むがん処置と組み合わせることができる。組み合わせの非限定的な例としては、黒色腫または腎細胞癌の処置のために抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体を組換えＩＬ－２または組換えＩＦＮα２と組み合わせることが挙げられる。組換えＩＬ－２は、がん患者においてＴ細胞の増殖を増強する。組換えＩＦＮα２は、がん細胞成長を阻害するが、処置患者のがん細胞、抗原提示細胞および他の体細胞上のＳＩＧＬＥＣ５に対する阻害性リガンドの発現も増加させる。抗ＳＩＧＬＥＣ５は、がんまたは感染性疾患の処置に有用であると考えられ得る他のサイトカインと組み合わせることができる。
【0103】
いくつかの実施形態では、抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体または抗体断片をワクチンと組み合わせて、がんまたは感染性疾患を予防または処置することができる。非限定的な例として、抗ＳＩＧＬＥＣ５は、処置されるがんまたは感染症に関連する１またはそれを超える抗原を含有するタンパク質、ペプチドまたはＤＮＡワクチン、またはそのような抗原でパルスされた樹状細胞を含むワクチンと組み合わせることができる。別の実施形態は、（弱毒化）がん細胞または全ウイルスワクチンとの抗ＳＩＧＬＥＣ５の使用を含む。一実施形態は、ＧＭ－ＣＳＦを分泌するように操作された全細胞がんワクチンと抗ＳＩＧＬＥＣ５治療の組み合わせを含む。
【0104】
いくつかの実施形態では、抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体または抗体断片は、がんまたは感染性疾患における標準ケアと考えられる処置と組み合わせることができる。そのような組み合わせの根拠は、抗ＳＩＧＬＥＣ５による同時発生的な免疫活性化増加が、標準ケア処置に対する初期臨床応答を誘導または促進し、疾患の永続的な臨床応答および長期免疫制御を誘導することである。
【0105】
一実施形態では、抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体または抗体断片による処置を化学療法と組み合わせてもよい。細胞傷害剤を使用する化学療法は、がん細胞死をもたらし、それによって腫瘍抗原の放出を増加させる。このような腫瘍抗原の利用可能性の増加は、抗ＳＩＧＬＥＣ５処置との相乗効果をもたらし得る。非限定的な例は、黒色腫の処置のためのダカルバジン（ｄｅｃａｒｂａｚｉｎｅ）またはテモゾロミドおよび膵臓がんのためのゲムシタビンの使用によって提供される。
【0106】
一実施形態では、抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体または抗体断片による処置を放射線療法と組み合わせてもよい。放射線療法は、がん細胞死を誘導し、免疫細胞の提示および活性化のための腫瘍抗原の利用可能性を増加させる。
【0107】
別の実施形態では、抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体または抗体断片による処置を手術と組み合わせて、対象からがん細胞を除去してもよい。
【0108】
他の実施形態では、抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体または抗体断片は、ホルモン欠乏もしくは血管新生の阻害に使用される標的化された薬剤を含むＳＩＧＬＥＣ５遮断、または腫瘍細胞で活性なタンパク質を標的とすることとの相乗効果をもたらし得る治療と組み合わせてもよく、すべて腫瘍細胞死の増強および免疫刺激腫瘍抗原の利用可能性をもたらす。抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体または抗体断片と組み合わせて、Ｔ細胞活性化の増加は、がんの永続的な免疫制御をもたらし得る。
【0109】
いくつかの実施形態では、抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体または抗体断片を、がんまたは感染性疾患の処置に有用な別の治療用抗体と組み合わせてもよい。非限定的な例は、抗ＳＩＧＬＥＣ５と、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを標的とする抗体またはＥＧＦ受容体を標的とする抗体との組み合わせによって提供される。別の非限定的な例では、抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体または抗体断片を、ＶＥＧＦまたはその受容体を標的とする処置と組み合わせる。別の実施形態では、抗ＳＩＧＬＥＣ５抗体または抗体断片を、抗ＣＴＬＡ－４と組み合わせる。さらに別の非限定的な例では、抗ＳＩＧＬＥＣ５を、ＲＳＶを標的とする抗体と組み合わせる。
【0110】
本発明のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、従来のモノクローナル抗体方法論、例えばＫｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５の標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技術を含む様々な技術によって産生され得る。体細胞ハイブリダイゼーション手順が好ましいが、原則として、モノクローナル抗体を産生するための他の技術、例えばＢリンパ球のウイルスまたは発がん性形質転換を使用することができる。
【0111】
ハイブリドーマを調製するための好ましい動物系はマウス系である。マウスにおけるハイブリドーマ産生は、非常によく確立された手順である。融合のために免疫化脾細胞を単離するための免疫化プロトコルおよび技術は、当技術分野で公知である。融合パートナー（例えば、マウス骨髄腫細胞）および融合手順も公知である。
【0112】
本発明のキメラ抗体またはヒト化抗体は、上記のように調製されたマウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製することができる。重鎖免疫グロブリンおよび軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、目的のマウスハイブリドーマから得ることができ、標準的な分子生物学技術を使用して非マウス（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含有するように操作することができる。例えば、キメラ抗体を作製するために、マウス可変領域を、当該分野で公知の方法（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙらによる米国特許第４，８１６，５６７号を参照）を使用してヒト定常領域に連結することができる。ヒト化抗体を作製するために、マウスＣＤＲ領域を、当該分野で公知の方法（例えば、Ｗｉｎｔｅｒによる米国特許第５，２２５，５３９号、ならびにＱｕｅｅｎらによる米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号および同第６，１８０，３７０号を参照）を使用してヒトフレームワークに挿入することができる。
【0113】
いくつかの好ましい実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体は、米国特許第７７３１９６９号（その全内容が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている方法に従って生成される。特に好ましい実施形態では、抗体は、ａ）動物をヒトＳｉｇｌｅｃ－５抗原で免疫化することおよび動物から脾細胞を単離すること；ｂ）ＣＤ１３８陽性細胞の単離された脾細胞を枯渇させて、枯渇された免疫化細胞を得ること；ｃ）枯渇された免疫化細胞を活性化剤と接触させて、活性化された抗原特異的Ｂリンパ球を得ること；ｄ）活性化された抗原特異的Ｂリンパ球を不死化し、それによって不死化されたヒトＳｉｇｌｅｃ－５特異的形質細胞を産生すること；およびｅ）不死化されたＳｉｇｌｅｃ－５特異的形質細胞を増殖させて、Ｓｉｇｌｅｃ－５に特異的に結合する抗体を得ること、を含む方法に従って生成される。
【0114】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体をコードする核酸分子が提供される。核酸は、全細胞、細胞溶解物、または部分的に精製された形態もしくは実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動、および当技術分野で周知の他のものを含む標準的な技術によって、他の細胞成分または他の汚染物質、例えば他の細胞核酸またはタンパク質から精製されると、「単離される」または「実質的に純粋になる」。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄ．（１９８７）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。本発明の核酸は、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡであることができ、イントロン配列を含有しても含有しなくてもよい。好ましい実施形態では、核酸はｃＤＮＡ分子である。
【0115】
本発明の核酸は、標準的な分子生物学技術を用いて得ることができる。ハイブリドーマによって発現される抗体（例えば、下記にさらに記載されるようなヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウスから調製されるハイブリドーマ）の場合、ハイブリドーマによって作製された抗体の軽鎖および重鎖をコードするｃＤＮＡは、標準的なＰＣＲ増幅またはｃＤＮＡクローニング技術によって得ることができる。免疫グロブリン遺伝子ライブラリー（例えば、ファージディスプレイ技術の使用）から得られた抗体については、抗体をコードする核酸をライブラリーから回収することができる。
【0116】
本発明のいくつかの実施形態は、以下の項目１～に例示される。
１．がん細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
２．インビトロで免疫細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
３．生物においてインビボで免疫細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
４．Ｔ細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
５．Ｔ細胞もしくはＮＫ（ナチュラルキラー）細胞または他の免疫細胞型において発現されるＣＡＲ－Ｔ細胞（キメラ抗原受容体）からなる群より選択される免疫細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
６．インビトロでがん細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
７．インビトロでがん細胞に影響を及ぼし、それらを死滅させるために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
８．生物においてインビボでがん細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
９．生物においてインビボでがん細胞を死滅させることによってがん細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
１０．Ｓｉｇｌｅｃファミリーメンバー（受容体）およびそれらのリガンドの両方を使用して免疫調節する方法。
１１．受容体のＳｉｇｌｅｃファミリーの個々の受容体およびそれらのリガンドを調節することができる組成物であって、Ｓｉｇｌｅｃファミリーのメンバーに結合する抗体を含む、組成物。
１２．受容体のＳｉｇｌｅｃファミリーの個々の受容体およびそれらのリガンドを調節することができる組成物であって、Ｓｉｇｌｅｃ－５およびＳｉｇｌｅｃ－１４の少なくとも１つに結合する抗体を含む、組成物。
１３．前述の組成物のいずれかを使用することによって個体を処置する方法。
１４．免疫系の疾患を処置するために前述の組成物のいずれかを使用することによって個体を処置する方法。
１５．がんを処置するために前述の組成物のいずれかを使用することによって個体を処置する方法。
１６．組成物を少なくとも１つの他の薬物と組み合わせることによって、前述の組成物のいずれかを使用して個体を処置する方法。
１７．少なくとも１つの他の薬物が少なくとも１つのチェックポイント阻害剤である、項目１６の方法。
１８．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、プログラム細胞死受容体－１（ＰＤ－１）を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
１９．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、およびセミプリマブからなる群より選択される、項目１７に記載の方法。
２０．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、チェックポイント阻害剤プログラム細胞死リガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）である、項目１７に記載の方法。
２１．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、アテゾリズマブ、アベルマブ、およびデュルバルマブからなる群より選択される、項目１７の方法。
２２．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、細胞傷害性Ｔリンパ球関連分子４（ＣＴＬＡ－４）を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
２３．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤がイピリムマブである、項目１７の方法。
２４．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、リンパ球活性化遺伝子３（ＣＤ２２３としても知られるＬＡＧ－３）を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
２５．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、ＴＩＭ３を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
２６．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、Ｂ７－Ｈ３を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
２７．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、Ｂ７－Ｈ４を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
２８．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、Ａ２ａＲを標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
２９．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、ＣＤ７３を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
３０．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、ＮＫＧ２Ａを標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
３１．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、ＰＶＲＩＧＰＶＲＬ２を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
３２．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、他の阻害性免疫機構に作用する経路を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７の方法。
３３．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ＦＡＫ、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２、ＬＩＦ、ＣＤ４７ＳＩＲＰα、ＣＳＦ－１（Ｍ－ＣＳＦ）、ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｒ３（ＩＬ－１ＲＡＰ）、ＩＬ－８、セマフォリンＳＥＭＡ４Ｄ、Ａｎｇ２、ＥＶＥＲ－１、Ａｘｌおよびホスファチジルセリンからなる群より選択される、項目１７に記載の方法。
３４．ＣＡＲ－Ｔと組み合わせて前述の組成物のいずれかを使用することによって個体を処置する方法。
３５．ＣＡＲ－Ｔおよび少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と組み合わせて前述の組成物のいずれかを使用することによって個体を処置する方法。
３６．固形腫瘍におけるＣＡＲ－Ｔ処置と組み合わせて前述の組成物のいずれかを使用することによって個体を処置する方法。
１．がん細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
２．インビトロで免疫細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
３．生物においてインビボで免疫細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
４．Ｔ細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
５．Ｔ細胞もしくはＮＫ（ナチュラルキラー）細胞または他の免疫細胞型において発現されるＣＡＲ－Ｔ細胞（キメラ抗原受容体）からなる群より選択される免疫細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
６．インビトロでがん細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
７．インビトロでがん細胞に影響を及ぼし、それらを死滅させるために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
８．生物においてインビボでがん細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
９．生物においてインビボでがん細胞を死滅させることによってがん細胞に影響を及ぼすために、Ｓｉｇｌｅｃを使用して免疫調節する方法。
１０．Ｓｉｇｌｅｃファミリーメンバー（受容体）およびそれらのリガンドの両方を使用して免疫調節する方法。
１１．受容体のＳｉｇｌｅｃファミリーの個々の受容体およびそれらのリガンドを調節することができる組成物であって、Ｓｉｇｌｅｃファミリーのメンバーに結合する抗体を含む、組成物。
１２．受容体のＳｉｇｌｅｃファミリーの個々の受容体およびそれらのリガンドを調節することができる組成物であって、Ｓｉｇｌｅｃ－５およびＳｉｇｌｅｃ－１４の少なくとも１つに結合する抗体を含む、組成物。
１３．前述の組成物のいずれかを使用することによって個体を処置する方法。
１４．免疫系の疾患を処置するために前述の組成物のいずれかを使用することによって個体を処置する方法。
１５．がんを処置するために前述の組成物のいずれかを使用することによって個体を処置する方法。
１６．組成物を少なくとも１つの他の薬物と組み合わせることによって、前述の組成物のいずれかを使用して個体を処置する方法。
１７．少なくとも１つの他の薬物が少なくとも１つのチェックポイント阻害剤である、項目１６の方法。
１８．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、プログラム細胞死受容体－１（ＰＤ－１）を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
１９．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、およびセミプリマブからなる群より選択される、項目１７に記載の方法。
２０．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、チェックポイント阻害剤プログラム細胞死リガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）である、項目１７に記載の方法。
２１．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、アテゾリズマブ、アベルマブ、およびデュルバルマブからなる群より選択される、項目１７の方法。
２２．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、細胞傷害性Ｔリンパ球関連分子４（ＣＴＬＡ－４）を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
２３．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤がイピリムマブである、項目１７の方法。
２４．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、リンパ球活性化遺伝子３（ＣＤ２２３としても知られるＬＡＧ－３）を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
２５．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、ＴＩＭ３を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
２６．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、Ｂ７－Ｈ３を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
２７．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、Ｂ７－Ｈ４を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
２８．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、Ａ２ａＲを標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
２９．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、ＣＤ７３を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
３０．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、ＮＫＧ２Ａを標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
３１．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、ＰＶＲＩＧＰＶＲＬ２を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７に記載の方法。
３２．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、他の阻害性免疫機構に作用する経路を標的とするチェックポイント阻害剤である、項目１７の方法。
３３．少なくとも１つのチェックポイント阻害剤が、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ＦＡＫ、ＣＣＬ２／ＣＣＲ２、ＬＩＦ、ＣＤ４７ＳＩＲＰα、ＣＳＦ－１（Ｍ－ＣＳＦ）、ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｒ３（ＩＬ－１ＲＡＰ）、ＩＬ－８、セマフォリンＳＥＭＡ４Ｄ、Ａｎｇ２、ＥＶＥＲ－１、Ａｘｌおよびホスファチジルセリンからなる群より選択される、項目１７に記載の方法。
３４．ＣＡＲ－Ｔと組み合わせて前述の組成物のいずれかを使用することによって個体を処置する方法。
３５．ＣＡＲ－Ｔおよび少なくとも１つのチェックポイント阻害剤と組み合わせて前述の組成物のいずれかを使用することによって個体を処置する方法。
３６．固形腫瘍におけるＣＡＲ－Ｔ処置と組み合わせて前述の組成物のいずれかを使用することによって個体を処置する方法。
【実施例】
【0117】
実施例１－抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体の生成
免疫化
免疫化
【0118】
例示的な免疫化プロトコルを以下に示す：
【表1】
【0119】
ヒトＳｉｇｌｅｃ－５に対する抗体を、米国特許第７７３１９６９号（その全内容が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている方法に従って生成した。
【0120】
３０～５０日齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス５匹に、０、１４、２１、２８、３５、４２、４３、および４４日目に、ヒトＳｉｇｌｅｃ－５抗原（カタログ番号ＳＩ５－Ｈ５２５０ ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．）または内部で生成した可溶性Ｓｉｇｌｅｃ－５を腹腔内注射し、抗原をマウスあたり１００マイクログラムのタンパク質抗原（マウスあたり総体積１００マイクログラム／マイクロリットル）でミョウバンアジュバント中で混合した。全てのマウスに、４３、４４、および４５日目に尾静脈による最終静脈内ブーストを与えた。あるいは、マウスを休ませ、５７、５８、および５９日目に最終ブーストを受けることができる。それぞれ４６日目または６０日目に、マウスを融合のために安楽死させた。脾臓を採取し、脾臓からリンパ球を単離した。
【0121】
一般に、組換えＳｉｇｌｅｃ－５タンパク質は、一次マウス免疫化のための標準抗原として使用することができ、各位置に５０％のタンパク質を注射する腹腔内注射および皮下注射によってマウスをＳｉｇｌｅｃ－５で免疫化することができる。フロイントまたはミョウバンなどのアジュバントが使用される。ミョウバンは、Ｓｉｇｌｅｃ－５で免疫化する場合にのみ使用した。
【0122】
脾臓回収および単一細胞懸濁物
【0123】
免疫化マウスからの脾臓を、３回の最終ブーストの最後の１日後に採取した。脾臓あたり２０ｍＬの培地で脾臓を灌流することによって、単一細胞懸濁物を作製した。赤血球を、Ｒｅｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌ Ｌｙｓｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）を使用して溶解した後、適切な細胞培地に再懸濁した。
【0124】
細胞計数
【0125】
脾細胞単離、細胞選別、発生後の細胞回収および生存度を、自動化ＶｉＣｅ１１．ＴＭ．ＸＲ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｎａｌｙｚｅｒシステム（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，Ｃａｌｉｆ．）を用いて評価した。
【0126】
融合
【0127】
リンパ球を、５匹のマウスの脾臓から単一細胞懸濁物として単離し、次いで、ポリエチレングリコール（５０％ ＰＥＧ（Ｓｉｇｍａ、＃Ｐ－７１８１）の存在下でマウスＳＰ２／０骨髄腫細胞と融合した。融合細胞を、アザセリン（Ｓｉｇｍａ、＃Ａ１１６４－０．５ＭＧ）培地選択を使用して培養した。すべての培養ウェルは、５０，０００個のフィーダー細胞を含有していた。フィーダー細胞は、ナイーブマウスの脾臓から単一細胞懸濁物を作製することによって作製した。融合の１４日後、１９２０ウェルを抗原特異的応答について試験した。
【0128】
ハイブリドーマ溶液：
【0129】
ハイブリドーマ溶液は、９５～１００％エタノール、７０％エタノール噴霧ボトル、５０％ ＰＥＧ（Ｓｉｇｍａ、＃Ｐ－７１８１）、マスターＯＰＩ－ＨＴハイブリドーマ増殖培地、ＨＢＳＳ（１×）、［滅菌１×ＰＢＳを代用品として使用することができる］アザセリン（５０×）［Ｓｉｇｍａ、＃Ａ１１６４－０．５ＭＧまたはＦｉｓｈｅｒ ＩＣＮ１５４８０５１０］を含んでいた。
【0130】
ＯＰＩ－ＨＴハイブリドーマ増殖培地
【0131】
ＯＰＩ－ＨＴハイブリドーマ増殖培地は以下を含んでいた：６００ｍｌのＤＭＥＭ、高グルコース（４５００ｍｇ／Ｌ）；２０ｍｌの５０×ＨＴサプリメント；１０ｍｌの１００×ＯＰＩサプリメント；１０ｍｌのＬ．グルタミン；２００ｍｌ（標準＝特徴付けられた、規定済み＝マスター）の熱不活性化ＦＢＳ；２００ｍｌのＳＰ２／０馴化培地；１０ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシン（１００×）；１ｍｌのアムホテリシンＢ（２５０ｕｇ／ｍｌストック）；５ｕｌのβ－メルカプトエタノール（換気フード中で９８％純粋）；培地全体を０．２μｍボトルトップフィルタで滅菌１Ｌボトルに濾過滅菌する。
【0132】
実施例２－抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体の特徴付け
（実施例１で生成された）Ｓｉｇｌｅｃ－５に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を試験して、それらが細胞表面ヒトＳｉｇｌｅｃ－５を認識するかどうか、およびそれらがＴ細胞抗原応答を調節するかどうかを決定した。
（実施例１で生成された）Ｓｉｇｌｅｃ－５に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を試験して、それらが細胞表面ヒトＳｉｇｌｅｃ－５を認識するかどうか、およびそれらがＴ細胞抗原応答を調節するかどうかを決定した。
【0133】
第１のＥＬＩＳＡ
【0134】
１９２０個のハイブリドーマからの組織培養上清をＳｉｇｌｅｃ－５（カタログ番号ＳＩ５－Ｈ５２５０ ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．）に対するＥＬＩＳＡによってスクリーニングし、ＨＲＰ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ二次抗体でプローブした。ＴＭＢ（Ｔ５５６９－１００ｍｌ）を反応に使用して陽性を可視化した。Ｈ２ＳＯ４または硫酸を使用して反応を停止させた。このアッセイにおける０．３ＯＤを超える陽性ハイブリドーマクローンは、次の発生レベルまで継続し、サブクローニングされた。
【0135】
陽性ハイブリドーマの２４ウェルプレート培養
【0136】
陽性細胞株は、元の９６ウェル融合プレートから移した後、２４ウェル培養プレートで培養中で維持した。２４ウェルプレートを２週間成長させ、その後、ハイブリドーマのサブクローニングを行った。１チューブの細胞を、融合産物を含有する各ウェルから凍結し、これを２４ウェルフォーマットに進めた。「ニッケルウェル」増殖期間中、２本の追加のチューブの細胞を凍結した。サブクローニング、安定化、およびサブクローニング後の２本のチューブのうちの１本の検証の後、チューブのマスターバンクが作られ、マスターバンクのチューブのうちの１本から、ハイブリドーマの１０本またはそれを超えるワーキングバンクチューブが凍結される。一般に、３回のサブクローニングが、初期段階のハイブリドーマを産生培地において安定なフォーマットにするために必要であった。
【0137】
ハイブリドーマ細胞の凍結
【0138】
特定のクローンの喪失を制限するために、ハイブリドーマを初期段階または「バルク」段階で細胞凍結培地（２０％ ＤＭＳＯ）中で凍結した。この手順は、最初に２４ウェルプレートで拡大させたこの初期段階の「バルク」および中期段階の「モノ」ハイブリドーマでハイブリドーマ細胞株を凍結させる。この凍結技術には細胞計数は必要ない。
【0139】
ハイブリドーマのサブクローニング
【0140】
上位のハイブリドーマ細胞株（クローン）をサブクローニングして、単クローン性を確実にした。サブクローニングを、本発明者らのサブクローニング法を使用して親クローンを再度プレーティングすることによって行った。その方法は、９６ウェルプレートにおいてウェルあたり５０，０００個のフィーダー細胞を必要とする。フィーダー細胞は、マウス脾細胞の単一細胞懸濁物であった。特定のクローン由来の細胞を、９６ウェルプレートの左端の８つのウェルに滴下した。左側の８つのウェルでは、上部のウェルが６～８の最大数の液滴を受け、最後のウェルが目的のクローンからの細胞の１滴を受けた。クローンがおよそ６～１０日間成長するにつれて、９６ウェルプレートは、プレートの左上がバルク領域であり、右下がモノクローナル領域であるものを発達させた。ＥＬＩＳＡによるスクリーニング後、プレートのモノクローナル領域から最低２つのサブクローンを採取した。上位２つのクローンの両方を培養で拡大させた。
【0141】
抗原（Ｓｉｇｌｅｃ－５）特異的ＥＬＩＳＡ
【0142】
Ａｇ特異的ＥＬＩＳＡのために、５００ｎｇ／ウェル抗原（Ｓｉｇｌｅｃ－５：カタログ番号ＳＩ５－Ｈ５２５０ ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．）を９６ウェルプレートにコーティングした。９６ウェルの各々からの２５ｕｌの培地をコーティングしたプレート上でインキュベートし、次いで、ＰＢＳ中の０．０５％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０（ＰＢＳＳＴ）で洗浄した。ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）にコンジュゲートした二次ヤギ抗マウス「二次抗体」を、Ｓｉｇｌｅｃ－５の検出に使用した。洗浄後、ＴＭＢ（テトラメチルベンジジン）を用いてシグナルを検出し、１Ｎ Ｈ２ＳＯ４停止溶液を添加することによって反応を停止させ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃａｌｉｆ．）製のＥＬＩＳＡプレートリーダーで４５０ｎｍで読み取った。
【0143】
活性化Ｔ細胞フローサイトメトリー上に存在するＳｉｇｌｅｃ－５
【0144】
細胞のアリコートを使用して、表面Ｓｉｇｌｅｃ ５染色を評価した（図１）。このアッセイのために、細胞を抗Ｓｉｇｌｅｃ ５ Ａｂ（１μｇ／ｍｌで使用）で３０分間染色し、洗浄し、次いでヤギ抗マウスＩｇＧ－ＦＩＴＣ Ａｂで再染色した。マウスＩｇＧ染色を陰性対照として使用した。陽性対照として、ＢｉｏｌｅｇｅｎｄモノクローナルＡｂを使用した（ＢＬとして示す）。Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ抗体を対照として使用すると、抗体は活性化ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞集団の両方に直接結合することが分かる。２つの代表的なクローン（クローン５および２０）のみを図１に示す。他の全てのクローンは、これらの細胞を同様のレベルで染色した。
【0145】
抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体の存在下での活性化Ｔ細胞成長
【0146】
活性化Ｔ細胞の集団を調製するために、ヒト末梢血由来（健常成人ドナー由来）の単核細胞（ＰＢＭＣ）をＦｉｃｏｌｌ勾配によって精製した。この調製物は、Ｔ細胞、Ｂ細胞および骨髄細胞（主に単球）を含む。細胞（５×１０６細胞／ｍｌ）を、ヒトＩＬ－２（１０ｎｇ／ｍｌ）を含有する培地中で抗ヒトＣＤ３および抗ヒトＣＤ２８（５０μｇ／ｍｌ）でコーティングしたポリスチレンビーズと混合した。３日間の培養後、細胞を回収した。
【0147】
次いで、活性化細胞を機能アッセイのために二次培養に入れた。ここでは、細胞を、可溶性抗ＣＤ２８と共に（ＩＬ－２を添加しなかった）プレートコーティング抗ＣＤ３および抗Ｓｉｇｌｅｃ５ ｍＡｂ（モノクローナル抗体）で再刺激した。このアッセイからの培養上清を、マルチプレックスサイトカインアッセイのための１日および４日間の培養後に回収した。４日間の培養後、細胞を回収し、各ｍＡｂ処理試料について全生細胞数を決定した。ここでは、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ製の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５および抗ＰＤ１ ｍＡｂを単独または組み合わせて参照点として使用し、マウスＩｇＧをＳｉｇｌｅｃ－５ ｍＡｂの陰性対照として使用した。
【0148】
表面染色とは対照的に、細胞成長分析は、これらのクローン間の差を示した（図２）。ヒトＳｉｇｌｅｃ－５への結合について陽性であった抗体を、活性化Ｔ細胞に結合する能力、および活性化Ｔ細胞集団を拡大もしくは増殖させる能力、または活性化Ｔ細胞集団の増殖を収縮もしくは低減させる能力について試験した。図２のデータは、マウスＩｇＧ対照と比較した、抗Ｓｉｇｌｅｃ５ Ａｂの存在下で４日間刺激した後の生細胞数のパーセント差を示す。２つのクローンは、ＩｇＧ対照と比較して生細胞数の１０％を超える増加を示した。他の３つのクローンは軽度の増加を示した。５つのクローンは、細胞数の１０％を超える減少を示した。２０個のモノクローナル抗体クローンの最初のセットでは、２つのクローン（クローン＃５、＃６）が、ＣＤ４陽性およびＣＤ８陽性の両方の活性化Ｔ細胞上に存在するＳｉｇｌｅｃ－５に作用することによって、活性化Ｔ細胞成長を促進した（図２）。
【0149】
データは、全てのクローンが表面発現ヒトＳｉｇｌｅｃ５を認識できることを示す。データはまた、活性化Ｔ細胞上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５に結合する抗体を、Ｔ細胞応答を調節する能力についてスクリーニングすることによって、Ｓｉｇｌｅｃ－５アゴニスト（例えば、自己免疫障害の処置に有用である）または免疫チェックポイント阻害剤（例えば、がんの処置に有用である）として同定できることを実証している。
【0150】
実施例３－フローサイトメトリー－Ｓｉｇｌｅｃ－５サイトカインプロファイルおよびＴ細胞活性化
ＰＢＭＣ由来の活性化ヒトＴ細胞の集団を上記のように調製した。活性化後、細胞を機能アッセイのために二次培養に入れた。ここでは、細胞を、可溶性抗ＣＤ２８と共に（ＩＬ－２を添加しなかった）プレートコーティング抗ＣＤ３および抗Ｓｉｇｌｅｃ５ ｍＡｂ（モノクローナル抗体）で再刺激した。このアッセイからの培養上清を、マルチプレックスサイトカインアッセイのための４日間の培養後に回収した。４日間の培養後、細胞を回収し、培養上清のサイトカインプロファイルを各ｍＡｂ処理試料について決定した。ＩＬ－１７－Ａ、ＩＬ－２およびＩＬ－６サイトカインプロファイルを図３～５に示す。ここでは、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ製の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５および抗ＰＤ１ ｍＡｂをそれぞれ単一または混合物として参照点として使用し、マウスＩｇＧをＳｉｇｌｅｃ５ ｍＡｂ（モノクローナル抗体）の陰性対照として使用した。
ＰＢＭＣ由来の活性化ヒトＴ細胞の集団を上記のように調製した。活性化後、細胞を機能アッセイのために二次培養に入れた。ここでは、細胞を、可溶性抗ＣＤ２８と共に（ＩＬ－２を添加しなかった）プレートコーティング抗ＣＤ３および抗Ｓｉｇｌｅｃ５ ｍＡｂ（モノクローナル抗体）で再刺激した。このアッセイからの培養上清を、マルチプレックスサイトカインアッセイのための４日間の培養後に回収した。４日間の培養後、細胞を回収し、培養上清のサイトカインプロファイルを各ｍＡｂ処理試料について決定した。ＩＬ－１７－Ａ、ＩＬ－２およびＩＬ－６サイトカインプロファイルを図３～５に示す。ここでは、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ製の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５および抗ＰＤ１ ｍＡｂをそれぞれ単一または混合物として参照点として使用し、マウスＩｇＧをＳｉｇｌｅｃ５ ｍＡｂ（モノクローナル抗体）の陰性対照として使用した。
【0151】
培養上清からのＴ細胞活性化中のアッセイされたサイトカインプロファイルは、ＩＬ－２、ＩＬ－１７ ＡおよびＩＬ－６産生の強い阻害を示した（図３～図５、クローン８、１１および１６）。対照的に、２つのクローン（クローン１および１８）は、ＩＬ－２およびＩＬ－１７ａ産生を実質的に増強した（図３および図４）。抗ＰＤ１ ｍＡｂ（モノクローナルマウス免疫チェックポイント阻害剤抗体）は、ＩＬ－２およびＩＬ－１７Ａを増強し、その効果はクローン１と抗ＰＤ１抗体との間で同等であった。アッセイで利用されたｍＡｂクローンに応じて、Ｔ細胞活性化の低減およびＴ細胞活性化の増加の両方が観察され、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体がＴ細胞応答を調節することができることを示した。
【0152】
実施例４－ヒト１３８３ｉ ＴＣＲ Ｔ細胞の抗原特異的活性化
活性化ヒト１３８３ｉ ＴＣＲ＋Ｔ細胞（黒色腫抗原チロシナーゼに特異的なＴＣＲ（１３８３ｉ）で形質導入された操作されたヒトＴ細胞）上のＳｉｇｌｅｃ－５と、黒色腫細胞（ＭＥＬ６２４細胞）上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を遮断することによって、免疫チェックポイント阻害剤として作用する抗Ｓｉｇｌｅｃ－５ ｍＡｂの能力を評価した。
活性化ヒト１３８３ｉ ＴＣＲ＋Ｔ細胞（黒色腫抗原チロシナーゼに特異的なＴＣＲ（１３８３ｉ）で形質導入された操作されたヒトＴ細胞）上のＳｉｇｌｅｃ－５と、黒色腫細胞（ＭＥＬ６２４細胞）上に発現されたＳｉｇｌｅｃ－５リガンドとの間の相互作用を遮断することによって、免疫チェックポイント阻害剤として作用する抗Ｓｉｇｌｅｃ－５ ｍＡｂの能力を評価した。
【0153】
ヒト１３８３ｉ ＴＣＲ＋Ｔ細胞を、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ ＭＩ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９９；５９：６２３０－８に記載のとおりに生成した。１３８３ｉ ＴＣＲ＋Ｔ細胞を刺激するために、Ｔ細胞を黒色腫細胞株ＭＥＬ６２４と１０：１の比（１３８３ｉ Ｔ細胞：ＭＥＬ６２４）で共培養した。この培養物に、精製抗ｓｉｇｌｅｃ－５ ｍＡＢ（前の実施例に記載）を０日目から添加した（５μｇ／ｍｌ）。抗Ｓｉｇｌｅｃ－５ ｍＡｂの添加の６０時間後に培養上清を回収し、フローサイトメトリーベースのサイトカインアッセイ（ＢｉｏｌｅｇｅｎｄのＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘ）によって分析した。
【0154】
黒色腫刺激１３８３ｉ ＴＣＲ Ｔ細胞からの上清の分析は、いくつかのｍＡｂクローンで処理したＴ細胞によるＩＦＮガンマ（図６）、ＩＬ－５（図７）およびＩＬ－１３（図８）発現の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５ ｍＡｂ媒介性増加を示した（クローン８および４は特に強い応答を媒介した）。興味深いことに、陽性対照（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄマウス抗ＰＤ－１免疫チェックポイント阻害剤抗体（カタログ番号３２９９０２、ＰＤ－１リガンド結合を遮断する能力が実証されている）およびＦｃ断片に融合したｓｉｇｌｅｃ－５の可溶性部分を含む可溶性ｓｉｇｌｅｃ－５は、このアッセイにおいてわずかなＴ細胞応答しかもたらさなかった（図６～８、「ＰＤ１ Ｃ＋」および「Ｓｉｇｌｅｃ５ Ｆｃ Ｃ＋」）。注目すべきことに、このアッセイでは、ＭＥＬ６２４は、試験されたいかなる検出可能なレベルのサイトカインも産生しない。本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５ ｍＡｂとは全く対照的に、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ抗Ｓｉｇｌｅｃ－５ ｍＡｂは、Ｔ細胞刺激に対して有意な観察可能な効果を何ら有さなかった（図６～８）。
【0155】
データは、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５ ｍＡｂのいくつかが、黒色腫細胞の表面上のそのリガンドによるＳｉｇｌｅｃ－５チェックポイントタンパク質の係合から生じるＴ細胞疲弊を逆転させることを実証している。興味深いことに、これらの抗Ｓｉｇｌｅｃ－５ ｍＡｂは、マウス抗ヒトＰＤ－１免疫チェックポイント阻害剤（陽性対照）および可溶性Ｓｉｇｌｅｃ－５（陽性対照）よりも有意に強いＴ細胞応答を生じた。より長い刺激時間を用いる抗Ｓｉｇｌｅｃ－５ ｍＡｂによって、さらに大きなＴ細胞応答が予想されるであろう。
【0156】
実施例５－Ｓｉｇｌｅｃ－５の発現サイレンシングにおける低分子干渉リボ核酸分子の使用
ヒトＳｉｇｌｅｃ－５ ｍＲＮＡの領域に相補的な約１５～２５ヌクレオチド長の短い干渉ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）のアレイを設計する。ｓｈＲＮＡはＳｉｇｌｅｃ－５ ｍＲＮＡに結合し、ダイサー酵素（二本鎖リボヌクレアーゼ）の存在下で「ＲＩＳＣ複合体」（ＲＮＡ干渉サイレンシング複合体）を形成し、これがｍＲＮＡを切断してそれを翻訳不能にし、したがって遺伝子の発現をサイレンシングする。
ヒトＳｉｇｌｅｃ－５ ｍＲＮＡの領域に相補的な約１５～２５ヌクレオチド長の短い干渉ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）のアレイを設計する。ｓｈＲＮＡはＳｉｇｌｅｃ－５ ｍＲＮＡに結合し、ダイサー酵素（二本鎖リボヌクレアーゼ）の存在下で「ＲＩＳＣ複合体」（ＲＮＡ干渉サイレンシング複合体）を形成し、これがｍＲＮＡを切断してそれを翻訳不能にし、したがって遺伝子の発現をサイレンシングする。
【0157】
ｓｈＲＮＡを、ヒトＳｉｇｌｅｃ－５を発現する１またはそれを超える標的細胞に導入し、抗体ベースの検出アッセイ（酵素結合免疫吸着アッセイ［ＥＬＩＳＡ］）などを用いて、ｓｈＲＮＡがＳｉｇｌｅｃ－５の発現を減少させる（またはノックダウンする）能力を評価する。好ましくは、ｓｈＲＮＡは、ｓｈＲＮＡの逐次的なインビトロ発現のためのプロモーター（例えばバクテリオファージＴ７ ＲＮＡポリメラーゼプロモーター）の制御下にあるようにプラスミド内に含有される。あるいは、ｓｈＲＮＡは、エレクトロポレーションまたはウイルス媒介性ウイルス形質導入によって標的細胞に導入される。
【0158】
Ｓｉｇｌｅｃ－５発現の低減をもたらし、それによってＳｉｇｌｅｃ－５と１またはそれを超えるがん細胞上のそのリガンドとの相互作用を妨げるｓｈＲＮＡが同定される。これらのｓｈＲＮＡを、１またはそれを超えるがん細胞においてインビトロで、および／またはインビボで（１またはそれを超える適切な動物がんモデルにおいて）、抗がん活性について評価する。好ましくは、ｓｈＲＮＡは、ヒトＳｉｇｌｅｃ－５のノックダウンを増強する足場（例えば、ｍｉｒ－３０骨格）内に含有される。
【0159】
細胞ＲＮＡ転写機構によって認識される発現プロモーターと共にｓｈＲＮＡの配列を含有する複製プラスミド（複数可）を使用して、標的細胞内にｓｉＲＮＡを長期的に生成する。標的細胞／組織によるＳｉｇｌｅｃ－５発現のモニタリングを、上記と同じＥＬＩＳＡアッセイによってモニターする。あるいは、Ｓｉｇｌｅｃ－５発現のノックダウンは、ｓｈＲＮＡについて記載したのと同じ機構に従う長い二本鎖ＲＮＡ（長いｄｓＲＮＡ）を使用して達成される。
【0160】
実施例６－ＰＤ－１およびＳｉｇｌｅｃ－５遮断の協調的抗腫瘍効果。
Ｓｉｇｌｅｃ－５は、活性化Ｔ細胞上のＰＤ－１と同時に共発現される（データは示さず）。活性化Ｔ細胞上のＳｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上のその同族受容体との相互作用を阻害する化合物およびＰＤ－１阻害剤の同時投与は、複数のシグナル伝達経路を阻害することによって相乗的な抗腫瘍効果を提供する。
Ｓｉｇｌｅｃ－５は、活性化Ｔ細胞上のＰＤ－１と同時に共発現される（データは示さず）。活性化Ｔ細胞上のＳｉｇｌｅｃ－５とがん細胞上のその同族受容体との相互作用を阻害する化合物およびＰＤ－１阻害剤の同時投与は、複数のシグナル伝達経路を阻害することによって相乗的な抗腫瘍効果を提供する。
【0161】
がんに対する相乗効果は、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体と抗ＰＤ－１ ＩＣＩ抗体の組み合わせをがんのモデルマウスに投与し、この組み合わせで観察された抗腫瘍効果を、抗Ｓｉｇｌｅｃ－５抗体または抗ＰＤ－１抗体を単独で投与した同じがんモデルの年齢が一致したマウスで観察された抗腫瘍効果と比較することによって実証される。相乗（すなわち、相加より大きい）効果が実証される。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【配列表】
【国際調査報告】