特表 2024-536380 抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体及びその使用Ｉ

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-04

(54)【発明の名称】抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体及びその使用Ｉ

(51)【国際特許分類】

   C07K 14/47 20060101AFI20240927BHJP

   C07K 16/08 20060101ALI20240927BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240927BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20240927BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20240927BHJP

【ＦＩ】

C07K14/47

C07K16/08 ZNA

A61K39/395 S

A61P31/14

C12N15/09 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024520867

(86)(22)【出願日】2022-10-07

(85)【翻訳文提出日】2024-05-31

(86)【国際出願番号】 AU2022051202

(87)【国際公開番号】W WO2023056521

(87)【国際公開日】2023-04-13

(31)【優先権主張番号】2021903205

(32)【優先日】2021-10-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524127917

【氏名又は名称】セキラス ピーティーワイ リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100114188

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100119253

【弁理士】

【氏名又は名称】金山 賢教

(74)【代理人】

【識別番号】100124855

【弁理士】

【氏名又は名称】坪倉 道明

(74)【代理人】

【識別番号】100129713

【弁理士】

【氏名又は名称】重森 一輝

(74)【代理人】

【識別番号】100137213

【弁理士】

【氏名又は名称】安藤 健司

(74)【代理人】

【識別番号】100183519

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻田 芳恵

(74)【代理人】

【識別番号】100196483

【弁理士】

【氏名又は名称】川嵜 洋祐

(74)【代理人】

【識別番号】100160749

【弁理士】

【氏名又は名称】飯野 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100160255

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100219265

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 崇大

(74)【代理人】

【識別番号】100203208

【弁理士】

【氏名又は名称】小笠原 洋平

(74)【代理人】

【識別番号】100216839

【弁理士】

【氏名又は名称】大石 敏幸

(74)【代理人】

【識別番号】100228980

【弁理士】

【氏名又は名称】副島 由加里

(74)【代理人】

【識別番号】100151448

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 孝博

(74)【代理人】

【識別番号】100146318

【弁理士】

【氏名又は名称】岩瀬 吉和

(74)【代理人】

【識別番号】100127812

【弁理士】

【氏名又は名称】城山 康文

(72)【発明者】

【氏名】ロックマン，スティーブン

(72)【発明者】

【氏名】ヴァンデンバーグ，キルステン

(72)【発明者】

【氏名】オン，チ

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA14

4C085AA19

4C085BA71

4C085CC02

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG01

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA09

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に結合するタンパク質及びその使用に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗体可変領域を含むタンパク質であって、前記抗体可変領域が、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）スパイク（Ｓ）タンパク質受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）に結合するかまたは特異的に結合しかつ前記Ｓタンパク質のアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）への結合を中和するものであり、かつ前記抗体可変領域は、
（ａ）配列番号１に示す配列を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、配列番号２に示す配列を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）と、を含む抗体、
（ｂ）配列番号３に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体、
（ｃ）配列番号５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体、
（ｄ）配列番号７に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号８に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体、及び
（ｅ）配列番号９に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１０に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体のいずれか１つの前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤへの結合を競合的に阻害するものである、前記タンパク質。

【請求項2】

前記タンパク質は、少なくとも約５μｇ／ｍｌの半最大阻害濃度（ＩＣ_５０）で、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤのＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和するものである、請求項１に記載のタンパク質。

【請求項3】

前記抗体可変領域は、
（ｉ）前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ中の立体構造エピトープに特異的に結合するものであり、ここで、前記ＲＢＤは、配列番号５１に示す配列のアミノ酸残基５、６、１７、１８、及び１９を含み、
（ｉｉ）変異型Ｓタンパク質に結合するものであり、ここで、前記変異型Ｓタンパク質は、
（ａ）配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基におけるＤからＧへの変異、及び／または
（ｂ）配列番号５０のヌクレオチド５０１に対応する残基におけるＮからＹへの変異、及び／または
（ｃ）配列番号５０のヌクレオチド４７７に対応する残基におけるＳからＮへの変異、及び／または
（ｄ）配列番号５０のヌクレオチド４８５に対応する残基におけるＧからＲへの変異を含み、及び／または
（ｉｉｉ）以下の抗体、すなわち
（ａ）配列番号１に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号２に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体、
（ｂ）配列番号３に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体、
（ｃ）配列番号５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体、
（ｄ）配列番号７に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号８に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体、及び
（ｅ）配列番号９に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１０に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体のいずれか１つによって結合されるエピトープと同じ前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ中のエピトープに特異的に結合するものである、請求項１または２に記載のタンパク質。

【請求項4】

前記抗体可変領域は、配列番号５１に示す配列を含むペプチドと交差反応するものである、請求項１～３のいずれか１項に記載のタンパク質。

【請求項5】

前記タンパク質は、可変フラグメント（Ｆｖ）を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載のタンパク質。

【請求項6】

前記タンパク質は、
（ｉ）単鎖フラグメント可変（Ｆｖ）フラグメント（ｓｃＦｖ）、
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ－ｓｃＦｖ）、
（ｉｉｉ）ダイアボディ、
（ｉｖ）トリアボディ、
（ｖ）テトラボディ、
（ｖｉ）抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）、
（ｖｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２、
（ｖｉｉｉ）Ｆｖ、
（ｉｘ）抗体の定常領域、定常フラグメント（Ｆｃ）、または重鎖定常ドメイン（Ｃ_Ｈ）２及び／またはＣ_Ｈ３に連結された（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、及び
（ｘ）抗体からなる群から選択される、請求項５に記載のタンパク質。

【請求項7】

前記タンパク質は抗体であり、前記抗体は、
（ｉ）配列番号４５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４６または配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むものであるか、
（ｉｉ）配列番号４５に示す配列を含むＶ_Ｈの３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶ_Ｈと、配列番号４６または配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌの３つのＣＤＲを含むＶ_Ｌと、を含むものであるか、または
（ｉｉｉ）配列番号４７に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号４８に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４９に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈと、配列番号３６または配列番号３２に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７または配列番号３３に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３８または配列番号３４に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌと、を含むものである、請求項１～６のいずれか１項に記載のタンパク質。

【請求項8】

前記タンパク質は抗体であり、前記抗体は、
（ｉ）配列番号１に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号２に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むものであるか、
（ｉｉ）配列番号３に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むものであるか、
（ｉｉｉ）配列番号５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むものであるか、
（ｉｖ）配列番号７に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号８に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むものであるか、または
（ｖ）配列番号９に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１０に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むものである、請求項１～７のいずれか１項に記載のタンパク質。

【請求項9】

前記タンパク質は抗体であり、
（ｉ）前記抗体は、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｈを含み、
（ａ）前記ＣＤＲ１は、配列番号２１に示す配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲ２は、配列番号２２に示す配列を含み、かつ
（ｃ）前記ＣＤＲ３は、配列番号２３に示す配列を含み、
前記抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｌを含み、
（ａ）前記ＣＤＲ１は、配列番号２４に示す配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲ２は、配列番号２５に示す配列を含み、かつ
（ｃ）前記ＣＤＲ３は、配列番号２６に示す配列を含むか、または
（ｉｉ）前記抗体は、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｈを含み、
（ａ）前記ＣＤＲ１は、配列番号２９に示す配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲ２は、配列番号３０に示す配列を含み、かつ
（ｃ）前記ＣＤＲ３は、配列番号３５に示す配列を含み、
前記抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｌを含み、
（ａ）前記ＣＤＲ１は、配列番号３６に示す配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲ２は、配列番号３７に示す配列を含み、かつ
（ｃ）前記ＣＤＲ３は、配列番号３８に示す配列を含むか、または
（ｉｉｉ）前記抗体は、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｈを含み、
（ａ）前記ＣＤＲ１は、配列番号２７に示す配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲ２は、配列番号２８に示す配列を含み、かつ
（ｃ）前記ＣＤＲ３は、配列番号３５に示す配列を含み、
前記抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｌを含み、
（ａ）前記ＣＤＲ１は、配列番号３６に示す配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲ２は、配列番号３７に示す配列を含み、かつ
（ｃ）前記ＣＤＲ３は、配列番号３８に示す配列を含むか、または
（ｉｖ）前記抗体は、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｈを含み、
（ａ）前記ＣＤＲ１は、配列番号２９に示す配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲ２は、配列番号３０に示す配列を含み、かつ
（ｃ）前記ＣＤＲ３は、配列番号３１に示す配列を含み、
前記抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｌを含み、
（ａ）前記ＣＤＲ１は、配列番号３２に示す配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲ２は、配列番号３３に示す配列を含み、かつ
（ｃ）前記ＣＤＲ３は、配列番号３４に示す配列を含むか、または
（ｖ）前記抗体は、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｈを含み、
（ａ）前記ＣＤＲ１は、配列番号３９に示す配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲ２は、配列番号４０に示す配列を含み、かつ
（ｃ）前記ＣＤＲ３は、配列番号４１に示す配列を含み、
前記抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｌを含み、
（ａ）前記ＣＤＲ１は、配列番号４２に示す配列を含み、
（ｂ）前記ＣＤＲ２は、配列番号４３に示す配列を含み、かつ
（ｃ）前記ＣＤＲ３は、配列番号４４に示す配列を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載のタンパク質。

【請求項10】

抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体であって、
（ｉ）配列番号１に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号２に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むものであるか、
（ｉｉ）配列番号３に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むものであるか、
（ｉｉｉ）配列番号５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むものであるか、
（ｉｖ）配列番号７に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号８に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むものであるか、または
（ｖ）配列番号９に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１０に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むものであるかのいずれか１つである、前記抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体。

【請求項11】

抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体であって、
（ｉ）配列番号１１を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１１を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１２を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１２を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含むものであるか、
（ｉｉ）配列番号１３を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１３を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１４を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１４を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含むものであるか、
（ｉｉｉ）配列番号１５を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１５を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１６を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１６を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含むものであるか、
（ｉｖ）配列番号１７を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１７を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１８を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１８を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含むものであるか、または
（ｖ）配列番号１９を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１９を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号２０を含む核酸から発現されるかまたは配列番号２０を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含むものである、前記抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体。

【請求項12】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫応答を誘導するのに十分な立体構造を有する抗原を検出するための、請求項１～１１のいずれか１項に記載のタンパク質または抗体の使用。

【請求項13】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫応答を誘導するのに十分な立体構造を有する抗原を検出する方法であって、請求項１～１１のいずれか１項に記載のタンパク質または抗体を前記抗原と接触させることと、前記タンパク質または抗体の前記抗原への結合を検出することと、を含み、ここで、前記タンパク質または抗体の前記抗原への結合は、前記抗原がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫応答を誘導するのに十分な立体構造を有することを示すものである、前記方法。

【請求項14】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫応答を誘導するのに十分な立体構造を有する抗原を検出するためのタンパク質または抗体のキットまたはパネルであって、請求項１～１１のいずれか１項に記載の１つ以上のタンパク質または抗体を含む、前記キットまたはパネル。

【請求項15】

前記抗原が、タンパク質、ペプチド、弱毒化ウイルス、またはウイルス様粒子である、請求項１２に記載の使用、請求項１３に記載の方法、または請求項１４に記載のキットまたはパネル。

【請求項16】

請求項１～９のいずれか１項に記載のタンパク質または請求項１０もしくは１１に記載の抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。

【請求項17】

呼吸器ウイルス感染症を治療し、呼吸器ウイルス感染症を予防し、及び／または呼吸器ウイルス感染症の進行を遅らせるのに使用するためのものである、請求項１６に記載の医薬組成物。

【請求項18】

対象において呼吸器ウイルス感染症を治療し、呼吸器ウイルス感染症を予防し、及び／または呼吸器ウイルス感染症の進行を遅らせる方法であって、請求項１～９のいずれか１項に記載のタンパク質、請求項１０または１１に記載の抗体、及び／または請求項１６に記載の医薬組成物を、治療、予防、及び／または進行の遅延を必要とする対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項19】

治療、予防、及び／または進行の遅延を必要とする対象において呼吸器ウイルス感染症を治療し、呼吸器ウイルス感染症を予防し、及び／または呼吸器ウイルス感染症の進行を遅らせるための薬剤の製造における、請求項１～９のいずれか１項に記載のタンパク質、請求項１０または１１に記載の抗体、及び／または請求項１６に記載の医薬組成物の使用。

【請求項20】

前記呼吸器ウイルス感染症が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、コロナウイルス病２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）、急性呼吸器疾患症候群（ＡＲＤＳ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１６に記載の医薬組成物、または請求項１８に記載の方法、または請求項１９に記載の使用。

【請求項21】

複数のタンパク質、複数の抗体、及び／または複数の医薬組成物が前記対象に投与される、請求項１８もしくは２０に記載の方法、または請求項１９もしくは２０に記載の使用。

【請求項22】

請求項１～９のいずれか１項に記載のタンパク質または請求項１０に記載の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体をコードするポリヌクレオチド。

【請求項23】

前記ポリヌクレオチドは配列番号１１～配列番号２０に示す核酸配列を含む、請求項２２に記載のポリヌクレオチド。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願データ
本出願は、「抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体及びその使用Ｉ」と題する２０２１年１０月７日に出願されたオーストラリア特許出願第２０２１９０３２０５号の優先権を主張するものであり、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、電子書式の配列表と共に出願されている。配列表の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0003】

本開示は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に結合するタンパク質及びその使用に関する。

【背景技術】

【0004】

呼吸器ウイルス感染症は、人間の健康と生命にとって重大な脅威である。感染症、例えば、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）による感染症は、世界的なパンデミックを引き起こし、世界中で数百万人を死亡させていることが知られている。２０１９年末に、新型ＳＡＲＳウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）が中国でヒトにおいて確認され、２０２０年３月に世界保健機関はこのウイルスの流行を世界的なパンデミックと宣言した。

【0005】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によるヒトの感染は、高い伝播率を伴う幅広い臨床スペクトルを示している。世界の感染者数と死亡者数は増加し続けており、現在までの感染者数は６億１，５００万人を超え、死者数は６５４万人を超えている。

【0006】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のパンデミックに対して、前例のない多数のワクチン開発が行われており、８種類のワクチンの完全使用が承認され、１３０を超えるワクチンが第１～３相臨床試験中である。開発中のワクチンの大部分は、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２スパイクタンパク質（すなわちＳタンパク質）を認識するよう免疫系を誘発しようとするものである。これは、ハムスターチャレンジモデルにおける組換えＳＡＲＳ－ＣｏＶタンパク質の初期の研究で、このアプローチは免疫原性があり、防御的であることが実証されたからである。これら特定の利用可能な治療法について、例えば、ＣＯＶＩＤ－１９に対するｍＲＮＡワクチンなどについて、その有効性を高めるためにさらなる改良の余地がある。

【0007】

したがって、当業者には明らかなとおり、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２及びＣＯＶＩＤ－１９に対する療法の必要性が当該技術分野において存在する。

【発明の概要】

【0008】

本開示は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対するタンパク質を本発明者らが特定したことに基づいている。具体的には、本発明者らは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）に結合する抗体可変領域を含むタンパク質であって、該抗体可変領域が、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）（細胞の表面に発現する）への該Ｓタンパク質の結合を中和する、タンパク質を開発した。本発明者らはまた、当該中和タンパク質が、Ｓタンパク質上の立体構造的な非線形エピトープに特異的に結合することを特定した。

【0009】

概して、本発明者らの発見は、抗体可変領域を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和タンパク質のための基礎となるものである。本発明者らによる発見は、対象において疾患または障害（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９またはＡＲＤＳなどのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染によって引き起こされる疾患）を治療し、予防し、及び／またはその進行を遅らせる方法のための基礎となるものでもある。本発明者らによる発見はさらに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫応答を誘導するのに十分な立体構造を有する抗原を検出するための基礎となるものである。

【0010】

したがって、本開示は、抗体可変領域を含むタンパク質であって、該抗体可変領域が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤに結合または特異的に結合しかつ該Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を中和するものであるタンパク質を提供する。

【0011】

本開示はまた、抗体可変領域を含むタンパク質であって、該抗体可変領域が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤに結合または特異的に結合しかつ該Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を中和するものであり、かつ該抗体可変領域が、以下の抗体のいずれか１つとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤとの結合を競合的に阻害するものであるタンパク質を提供する。

【0012】

（ａ）配列番号１に示す配列を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、配列番号２に示す配列を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）と、を含む抗体、
（ｂ）配列番号３に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体、
（ｃ）配列番号５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体、
（ｄ）配列番号７に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号８に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体、及び
（ｅ）配列番号９に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１０に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体。

【0013】

一例では、該抗体可変領域は、配列番号１に示す配列を含むＶ_Ｈと配列番号２に示す配列を含むＶ_Ｌとを含む抗体のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤへの結合を競合的に阻害する。

【0014】

一例では、該抗体可変領域は、配列番号３に示す配列を含むＶ_Ｈと配列番号４に示す配列を含むＶ_Ｌとを含む抗体のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤへの結合を競合的に阻害する。

【0015】

一例では、該抗体可変領域は、配列番号５に示す配列を含むＶ_Ｈと配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌとを含む抗体のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤへの結合を競合的に阻害する。

【0016】

一例では、該抗体可変領域は、配列番号７に示す配列を含むＶ_Ｈと配列番号８に示す配列を含むＶ_Ｌとを含む抗体のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤへの結合を競合的に阻害する。

【0017】

一例では、該抗体可変領域は、配列番号９に示す配列を含むＶ_Ｈと配列番号１０に示す配列を含むＶ_Ｌとを含む抗体のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤへの結合を競合的に阻害する。

【0018】

競合的阻害を測定する方法は、当業者には明らかであり、及び／または本明細書に記載されている。

【0019】

タンパク質の中和活性を測定する方法は、当業者には明らかであり、及び／または本明細書に記載されている。例示的なアッセイには、ベロ（Ｖｅｒｏ）マイクロ中和アッセイ、サロゲートウイルス中和試験（ｓＶＮＴ）、及びシュードウイルス中和アッセイ（ＰｓＶ、例えば、２９３ＴまたはＨｅＬａ－ＡＣＥ２細胞株を使用）が含まれる。上記から明らかなとおり、該タンパク質はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を完全に中和する必要はなく、むしろ統計的に有意な量だけ結合を中和すればよく、例えば、少なくとも約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約１００％結合を中和すればよい。

【0020】

一例では、該タンパク質は、ｓＶＮＴアッセイにおいてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を中和する。一例では、該タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を、約３０％、または約４０％、または約５０％、または約６０％、または約７０％、または約８０％、または約９０％、または約９５％、または約１００％、ｓＶＮＴアッセイにおいて中和する。一例では、該タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を、約３０％～約５０％、ｓＶＮＴアッセイにおいて中和する。例えば、約３０％、または約３５％、または約４０％、または約４５％、または約５０％中和する。一例では、該タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を、約３０％、ｓＶＮＴアッセイにおいて中和する。別の一例では、該タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を、約４０％、ｓＶＮＴアッセイにおいて中和する。さらなる一例では、該タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を、約４５％、ｓＶＮＴアッセイにおいて中和する。別の一例では、該タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を、約５０％、ｓＶＮＴアッセイにおいて中和する。さらなる一例では、該タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を、約５０％～約８０％、ｓＶＮＴアッセイにおいて中和する。例えば、約５０％、または約５５％、または約６０％、または約６５％、または約７０％、または約７５％、または約８０％中和する。さらなる一例では、該タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を、約８０％～約９５％、ｓＶＮＴアッセイにおいて中和する。例えば、約８０％、または約８５％、または約９０％、または約９５％、ｓＶＮＴアッセイにおいて中和する。一例では、該タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を、約９０％、ｓＶＮＴアッセイにおいて中和する。

【0021】

一例では、該タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を、ベロマイクロ中和アッセイにおいて中和する。例えば、該タンパク質は、阻害濃度（ＩＣ）値（例えば、半最大阻害濃度（ＩＣ_５０））を参照して測定されるベロマイクロ中和アッセイにおいて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質のＡＣＥ２への結合を中和する。一例では、該タンパク質は、少なくとも約５μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。一例では、ＩＣ_５０は、約１０μｇ／ｍｌと１２０μｇ／ｍｌとの間である。例えば、ＩＣ_５０は、約５μｇ／ｍｌと約１０μｇ／ｍｌとの間、例えば、約５μｇ／ｍｌ、または約６μｇ／ｍｌ、または約７μｇ／ｍｌ、または約８μｇ／ｍｌ、または約９μｇ／ｍｌ、または約１０μｇ／ｍｌである。一例では、該タンパク質は、５μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。別の一例では、該タンパク質は、７μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。一例では、該タンパク質は、８μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。一例では、ＩＣ_５０は、約１０μｇ／ｍｌと約２０μｇ／ｍｌとの間、例えば、約１０μｇ／ｍｌ、または約１２μｇ／ｍｌ、または約１４μｇ／ｍｌ、または約１６μｇ／ｍｌ、または約１８μｇ／ｍｌ、または約２０μｇ／ｍｌである。一例では、該タンパク質は、１２μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。別の一例では、該タンパク質は、１４μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。さらなる一例では、該タンパク質は、２０μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。一例では、ＩＣ_５０は、約２０μｇ／ｍｌと約５０μｇ／ｍｌとの間、例えば、約２０μｇ／ｍｌ、または約２５μｇ／ｍｌ、または約３０μｇ／ｍｌ、または約３５μｇ／ｍｌ、または約４０μｇ／ｍｌ、または約４５μｇ／ｍｌ、または約５０μｇ／ｍｌである。一例では、該タンパク質は、２６μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。別の一例では、該タンパク質は、２８μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。さらなる一例では、該タンパク質は、３２μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。別の一例では、該タンパク質は、５０μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。一例では、ＩＣ_５０は、約５０μｇ／ｍｌと約１００μｇ／ｍｌとの間、例えば、約５０μｇ／ｍｌ、または約６０μｇ／ｍｌ、または約７０μｇ／ｍｌ、または約８０μｇ／ｍｌ、または約９０μｇ／ｍｌ、または約１００μｇ／ｍｌである。一例では、該タンパク質は、６０μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。別の一例では、該タンパク質は、７６μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。さらなる一例では、該タンパク質は、７８μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。別の一例では、該タンパク質は、９６μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。一例では、ＩＣ_５０は、約１００μｇ／ｍｌと約１２０μｇ／ｍｌとの間、例えば、約１００μｇ／ｍｌ、または約１０５μｇ／ｍｌ、または約１１０μｇ／ｍｌ、または約１１５μｇ／ｍｌ、または約１２０μｇ／ｍｌである。一例では、該タンパク質は、１１８μｇ／ｍｌのＩＣ_５０で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２トランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を中和する。

【0022】

一例では、該タンパク質は、シュードウイルス中和アッセイ（ＰｓＶ）において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を中和する。例えば、該タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２発現細胞（例えば、ＨｅＬａ－ＡＣＥまたはＨＥＫ－２９３Ｔ）への結合を中和する。一例では、該タンパク質は、相対発光量（ＲＬＵ）を参照して測定されるＰｓＶアッセイにおいて、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のＡＣＥ２への結合を中和する。一例では、ＲＬＵはＩＣ_５０として表される。例えば、対照サンプル（つまり、該タンパク質が存在しないか、または既知の抗ＣｏＶ－２抗体が存在するもの）のＲＬＵと比較してＲＬＵを５０％減少させるのに必要なタンパク質の濃度として表される。一例では、ＩＣ_５０は、約１μｇ／ｍｌと１０μｇ／ｍｌとの間である。例えば、ＩＣ_５０は、約１μｇ／ｍｌ、または約２μｇ／ｍｌ、または約３μｇ／ｍｌ、または約４μｇ／ｍｌ、または約５μｇ／ｍｌ、または約６μｇ／ｍｌ、または約７μｇ／ｍｌ、または約８μｇ／ｍｌ、または約９μｇ／ｍｌ、または約１０μｇ／ｍｌである。一例では、ＩＣ_５０は約１．５μｇ／ｍｌである。別の一例では、ＩＣ_５０は約４．５μｇ／ｍｌである。さらなる一例では、ＩＣ_５０は約１０μｇ／ｍｌである。別の一例では、ＲＬＵは、中和曲線下面積（ＡＵＣ）として表される。例えば、ＡＵＣは、約１５，０００と６５，０００との間である。例えば、ＡＵＣは約１５，０００である。別の一例では、ＡＵＣは約５５，０００である。さらなる一例では、ＡＵＣは約５５，０００である。

【0023】

一例では、該タンパク質は抗体可変領域を含み、該抗体可変領域は、
（ｉ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ中の立体構造エピトープに特異的に結合するものであり、ここで、該ＲＢＤは、配列番号５１に示す配列のアミノ酸残基５、６、１７、１８、及び１９を含み、
（ｉｉ）変異型Ｓタンパク質に結合するものであり、ここで、該変異型Ｓタンパク質は、
（ａ）配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基におけるＤからＧへの変異、及び／または
（ｂ）配列番号５０のヌクレオチド５０１に対応する残基におけるＮからＹへの変異、及び／または
（ｃ）配列番号５０のヌクレオチド４７７に対応する残基におけるＳからＮへの変異、及び／または
（ｄ）配列番号５０のヌクレオチド４８５に対応する残基におけるＧからＲへの変異を含み、及び／または
（ｉｉｉ）以下の抗体（ａ）～（ｅ）のいずれか１つによって結合されるエピトープと同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ中のエピトープに特異的に結合するものである。

【0024】

（ａ）配列番号１に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号２に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体、
（ｂ）配列番号３に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体、
（ｃ）配列番号５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体、
（ｄ）配列番号７に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号８に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体、及び
（ｅ）配列番号９に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１０に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体。

【0025】

一例では、該タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ中の立体構造エピトープに特異的に結合する抗体可変領域を含むものであり、該ＲＢＤは、配列番号５１に示す配列のアミノ酸残基５、６、１７、１８、及び１９を含むものである。

【0026】

一例では、該タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ中の立体構造エピトープに特異的に結合する抗体可変領域を含むものであり、該ＲＢＤは、配列番号５０に示す配列のアミノ酸残基４７５、４７６、４８７、４８８、及び４８９を含むものである。

【0027】

一例では、該タンパク質は、変異型Ｓタンパク質に結合する抗体可変領域を含む。

【0028】

一例では、変異型Ｓタンパク質は、受容体結合ドメインに変異を含む。例えば、該変異は、Ｒ３４６Ｋ、Ｋ４１７Ｎ、Ｋ４１７Ｔ、Ｓ４３８Ｆ、Ｎ４３９Ｋ、Ｎ４４０Ｋ、Ｌ４４１Ｉ、Ｋ４４４Ｒ、Ｖ４４５Ａ、Ｖ４４５Ｉ、Ｇ４４６Ｖ、Ｇ４４６Ｓ、Ｎ４５０Ｋ、Ｌ４５２Ｒ、Ｌ４５２Ｐ、Ｌ４５５Ｆ、Ｋ４５８Ｎ、Ｎ４６０Ｔ、Ｄ４６７Ｖ、Ｉ４６８Ｆ、Ｉ４６８Ｔ、Ｉ４６８Ｖ、Ｅ４７１Ｏ、Ｉ４７２Ｖ、Ａ４７５Ｖ、Ｇ４７６Ｓ、Ｓ４７７Ｇ、Ｓ４７７Ｉ、Ｓ４７７Ｎ、Ｓ４７７Ｒ、Ｔ４７８Ｉ、Ｔ４７８Ｋ、Ｐ４７９Ｌ、Ｐ４７９Ｓ、Ｎ４８１Ｄ、Ｎ４８１Ｈ、Ｖ４８３Ｆ、Ｖ４８３Ａ、Ｅ４８４Ｄ、Ｅ４８４Ｋ、Ｅ４８４Ｋ、Ｅ４８４Ｏ、Ｇ４８５Ｓ、Ｙ４８９Ｈ、Ｙ４８９Ｄ、Ｙ４８９Ｆ、Ｙ４８９Ｃ、Ｙ４８９Ｎ、Ｆ４９０Ｌ、Ｆ４９０Ｓ、Ｐ４９１Ｒ、Ｑ４９３Ｌ、Ｓ４９４Ｐ、Ｙ４９５Ｎ、Ｔ５００Ｎ、Ｎ５０１Ｓ、Ｎ５０１Ｙ、Ｙ５０５Ｈ、及びＹ５０８Ｈからなる群から選択される。一例では、変異型Ｓタンパク質は、Ｒ３４６Ｋ、Ｋ４１７Ｎ、Ｋ４１７Ｔ、Ｎ４３９Ｋ、Ｎ４３９Ｌ、Ｌ４５２Ｒ、Ｓ４７７Ｎ、Ｔ４７８Ｉ、Ｖ４８３Ａ、Ｅ４８４Ｄ、Ｅ４８４Ｋ、及びＮ５０１Ｙからなる群から選択される受容体結合ドメイン中の変異を含む。

【0029】

一例では、変異型Ｓタンパク質は、Ｔ９５Ｉ、Ｙ１４４Ｓ、Ｙ１４５Ｎ、Ｐ３３７Ｓ、Ｆ３３８Ｌ、Ｆ３３８Ｃ、Ｇ３３９Ｄ、Ｅ３４０Ｋ、Ｖ３４１Ｉ、Ａ３４４Ｓ、Ｔ３４５Ｓ、Ｒ３４６Ｋ、Ａ３４８Ｓ、Ａ３４８Ｔ、Ｗ３５３Ｒ、Ｎ３５４Ｄ、Ｎ３５４Ｋ、Ｎ３５４Ｓ、Ｓ３５９Ｎ、Ｄ３６４Ｙ、Ｖ３６７Ｆ、Ｓ３７３Ｌ、Ｖ３８２Ｌ、Ｐ３８４Ｌ、Ｐ３８４Ｓ、Ｔ３８５Ａ、Ｔ３９３Ｐ、Ｖ３９５Ｉ、Ｆ４００Ｃ、Ｒ４０３Ｋ、Ｒ４０３Ｓ、Ｄ４０５Ｖ、Ｒ４０８Ｉ、Ｑ４１４Ｅ、Ｑ４１４Ｋ、Ｑ４１４Ｐ、Ｑ４１４Ｒ、Ｔ４１５Ｓ、Ｋ４１７Ｎ、Ｋ４１７Ｔ、Ｋ４１７Ｒ、Ｉ４１８Ｖ、Ｙ４２１Ｓ、Ｙ４２３Ｃ、Ｙ４２３Ｆ、Ｙ４２３Ｓ、Ｄ４２７Ｙ、Ｓ４３８Ｆ、Ｎ４３９Ｋ、Ｎ４４０Ｋ、Ｌ４４１Ｉ、Ｋ４４４Ｒ、Ｖ４４５Ａ、Ｖ４４５Ｉ、Ｇ４４６Ｖ、Ｇ４４６Ｓ、Ｎ４５０Ｋ、Ｌ４５２Ｒ、Ｌ４５２Ｐ、Ｌ４５５Ｆ、Ｋ４５８Ｎ、Ｎ４６０Ｔ、Ｄ４６７Ｖ、Ｉ４６８Ｆ、Ｉ４６８Ｔ、Ｉ４６８Ｖ、Ｅ４７１Ｏ、Ｉ４７２Ｖ、Ａ４７５Ｖ、Ｇ４７６Ｓ、Ｓ４７７Ｇ、Ｓ４７７Ｉ、Ｓ４７７Ｎ、Ｓ４７７Ｒ、Ｔ４７８Ｉ、Ｔ４７８Ｋ、Ｐ４７９Ｌ、Ｐ４７９Ｓ、Ｎ４８１Ｄ、Ｎ４８１Ｈ、Ｖ４８３Ｆ、Ｖ４８３Ａ、Ｅ４８４Ｄ、Ｅ４８４Ｋ、Ｅ４８４Ｋ、Ｅ４８４Ｏ、Ｇ４８５Ｓ、Ｙ４８９Ｈ、Ｙ４８９Ｄ、Ｙ４８９Ｆ、Ｙ４８９Ｃ、Ｙ４８９Ｎ、Ｆ４９０Ｌ、Ｆ４９０Ｓ、Ｐ４９１Ｒ、Ｑ４９３Ｌ、Ｓ４９４Ｐ、Ｙ４９５Ｎ、Ｔ５００Ｎ、Ｎ５０１Ｓ、Ｎ５０１Ｙ、Ｙ５０５Ｈ、Ｙ５０８Ｈ、Ｒ５０９Ｋ、Ｖ５１０Ｌ、Ｖ５１１Ｅ、Ｖ５１２Ｌ、Ｌ５１８Ｉ、Ｈ５１９Ｏ、Ａ５２０Ｓ、Ａ５２０Ｖ、Ｐ５２１Ｒ、Ｐ５２１Ｓ、Ａ５２２Ｐ、Ａ５２２Ｓ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｈ、及びＤ９５０Ｎからなる群から選択される変異を含む。

【0030】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、（ｉ）Ｓ１／Ｓ２境界においてフューリン切断部位を欠き、かつ配列番号５０のヌクレオチド６８２～６８５に対応する残基においてＲＲＡＲからＱＱＡＡへの変異を含むものであり、及び／または、（ｉｉ）Ｓ２’部位にフューリン切断部位を欠くものであり、及び／または、（ｉｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含むものであり、及び／または、（ｉｖ）配列番号５０のヌクレオチド９８６及び９８７に対応する残基間に２つのプロリン残基の挿入を含むものである。

【0031】

一例では、該Ｓタンパク質は、Ｓ１／Ｓ２境界においてフューリン切断部位を欠き、かつ配列番号５０のヌクレオチド６８２～６８５に対応する残基においてＲＲＡＲからＱＱＡＡへの変異を含む。

【0032】

一例では、該Ｓタンパク質は、Ｓ２’部位にフューリン切断部位を欠く。

【0033】

一例では、該Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含む。

【0034】

一例では、該Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド９８６及び９８７に対応する残基間に２つのプロリン残基の挿入を含む。

【0035】

一例では、該Ｓタンパク質は、（ｉ）Ｓ１／Ｓ２境界においてフューリン切断部位を欠き、かつ配列番号５０のヌクレオチド６８２～６８５に対応する残基においてＲＲＡＲからＱＱＡＡへの変異を含み、かつ（ｉｉ）Ｓ２’部位にフューリン切断部位を欠く。例えば、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０に示す配列によってコードされる。

【0036】

一例では、該Ｓタンパク質は、（ｉ）Ｓ１／Ｓ２境界においてフューリン切断部位を欠き、かつ配列番号５０のヌクレオチド６８２～６８５に対応する残基においてＲＲＡＲからＱＱＡＡへの変異を含み、かつ（ｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含む。

【0037】

一例では、該Ｓタンパク質は、（ｉ）Ｓ１／Ｓ２境界においてフューリン切断部位を欠き、かつ配列番号５０のヌクレオチド６８２～６８５に対応する残基においてＲＲＡＲからＱＱＡＡへの変異を含み、かつ（ｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド９８６及び９８７に対応する残基間に２つのプロリン残基の挿入を含む。

【0038】

一例では、該Ｓタンパク質は、（ｉ）Ｓ１／Ｓ２境界においてフューリン切断部位を欠き、かつ配列番号５０のヌクレオチド６８２～６８５に対応する残基においてＲＲＡＲからＱＱＡＡへの変異を含み、かつ（ｉｉ）Ｓ２’部位にフューリン切断部位を欠き、かつ（ｉｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含む。

【0039】

一例では、該Ｓタンパク質は、（ｉ）Ｓ１／Ｓ２境界においてフューリン切断部位を欠き、かつ配列番号５０のヌクレオチド６８２～６８５に対応する残基においてＲＲＡＲからＱＱＡＡへの変異を含み、かつ（ｉｉ）Ｓ２’部位にフューリン切断部位を欠き、かつ（ｉｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド９８６及び９８７に対応する残基間に２つのプロリン残基の挿入を含む。

【0040】

一例では、該Ｓタンパク質は、（ｉ）Ｓ２’部位にフューリン切断部位を欠き、かつ（ｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含む。

【0041】

一例では、該Ｓタンパク質は、（ｉ）Ｓ２’部位にフューリン切断部位を欠き、かつ（ｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド９８６及び９８７に対応する残基間に２つのプロリン残基の挿入を含む。

【0042】

一例では、該Ｓタンパク質は、（ｉ）Ｓ２’部位にフューリン切断部位を欠き、かつ（ｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含み、かつ（ｉｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド９８６及び９８７に対応する残基間に２つのプロリン残基の挿入を含む。

【0043】

一例では、該Ｓタンパク質は、（ｉ）配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含み、かつ（ｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド９８６及び９８７に対応する残基間に２つのプロリン残基の挿入を含む。

【0044】

一例では、該Ｓタンパク質は、（ｉ）Ｓ１／Ｓ２境界においてフューリン切断部位を欠き、かつ配列番号５０のヌクレオチド６８２～６８５に対応する残基においてＲＲＡＲからＱＱＡＡへの変異を含み、かつ（ｉｉ）Ｓ２’部位にフューリン切断部位を欠き、かつ（ｉｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含み、かつ（ｉｖ）配列番号５０のヌクレオチド９８６及び９８７に対応する残基間に２つのプロリン残基の挿入を含む。

【0045】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、（ｉ）配列番号５０のヌクレオチド５０１に対応する残基においてＮからＹへの変異を含むものであり、及び／または、（ｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド６９及び７０に対応する２つの残基が欠失しているものであり、及び／または、（ｉｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド６８１に対応する残基においてＰからＨへの変異を含むものである。

【0046】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド５０１に対応する残基においてＮからＹへの変異を含み、かつ配列番号５０のヌクレオチド６９及び７０に対応する２つの残基が欠失しており、かつ配列番号５０のヌクレオチド６８１に対応する残基においてＰからＨへの変異を含む。

【0047】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド６８１に対応する残基においてＰからＨへの変異を含む。

【0048】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、（ｉ）配列番号５０のヌクレオチド４１７に対応する残基においてＫからＮへの変異を含むものであり、及び／または、（ｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド４８４に対応する残基においてＥからＫへの変異を含むものであり、及び／または、（ｉｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド５０１に対応する残基においてＮからＹへの変異を含むものである。

【0049】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド４１７に対応する残基においてＫからＮへの変異を含む。

【0050】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド４８４に対応する残基においてＥからＫへの変異を含む。

【0051】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド４１７に対応する残基においてＫからＮへの変異を含み、かつ配列番号５０のヌクレオチド４８４に対応する残基においてＥからＫへの変異を含み、かつ配列番号５０のヌクレオチド５０１に対応する残基においてＮからＹへの変異を含む。

【0052】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、（ｉ）配列番号５０のヌクレオチド４１７に対応する残基においてＫからＴへの変異を含むものであり、及び／または、（ｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド４８４に対応する残基においてＥからＫへの変異を含むものであり、及び／または、（ｉｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド５０１に対応する残基においてＮからＹへの変異を含むものである。

【0053】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド４１７に対応する残基においてＫからＴへの変異を含む。

【0054】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド４１７に対応する残基においてＫからＴへの変異を含み、かつ配列番号５０のヌクレオチド４８４に対応する残基においてＥからＫへの変異を含み、かつ配列番号５０のヌクレオチド５０１に対応する残基においてＮからＹへの変異を含む。

【0055】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、（ｉ）配列番号５０のヌクレオチド９５に対応する残基においてＴからＩへの変異を含むものであり、及び／または、（ｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド１４４に対応する残基においてＹからＳへの変異を含むものであり、及び／または、（ｉｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド１４５に対応する残基においてＹからＮへの変異を含むものであり、及び／または、（ｉｖ）配列番号５０のヌクレオチド３４６に対応する残基においてＲからＫへの変異を含むものであり、及び／または、（ｖ）配列番号５０のヌクレオチド４８４に対応する残基においてＥからＫへの変異を含むものであり、及び／または、（ｖｉ）配列番号５０のヌクレオチド５０１に対応する残基においてＮからＹへの変異を含むものであり、及び／または、（ｖｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含むものであり、及び／または、（ｖｉｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド６８１に対応する残基においてＰからＨへの変異を含むものであり、及び／または、（ｉｘ）配列番号５０のヌクレオチド９５０に対応する残基においてＤからＮへの変異を含むものである。

【0056】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド９５に対応する残基においてＴからＩへの変異を含む。

【0057】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド１４４に対応する残基においてＹからＳへの変異を含む。

【0058】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド１４５に対応する残基においてＹからＮへの変異を含む。

【0059】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド３４６に対応する残基においてＲからＫへの変異を含む。

【0060】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド９５０に対応する残基においてＤからＮへの変異を含む。

【0061】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、（ｉ）配列番号５０のヌクレオチド９５に対応する残基においてＴからＩへの変異を含み、かつ（ｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド１４４に対応する残基においてＹからＳへの変異を含み、かつ（ｉｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド１４５に対応する残基においてＹからＮへの変異を含み、かつ（ｉｖ）配列番号５０のヌクレオチド３４６に対応する残基においてＲからＫへの変異を含み、かつ（ｖ）配列番号５０のヌクレオチド４８４に対応する残基においてＥからＫへの変異を含み、かつ（ｖｉ）配列番号５０のヌクレオチド５０１に対応する残基においてＮからＹへの変異を含み、かつ（ｖｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含み、（ｖｉｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド６８１に対応する残基においてＰからＨへの変異を含み、（ｉｘ）配列番号５０のヌクレオチド９５０に対応する残基においてＤからＮへの変異を含む。

【0062】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、（ｉ）配列番号５０のヌクレオチド４７８に対応する残基においてＴからＫへの変異を含むものであり、及び／または、（ｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド６８１に対応する残基においてＰからＲへの変異を含むものであり、及び／または、（ｉｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド４５２に対応する残基においてＬからＲへの変異を含むものである。

【0063】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド４７８に対応する残基においてＴからＫへの変異を含む。

【0064】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド６８１に対応する残基においてＰからＲへの変異を含む。

【0065】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド４５２に対応する残基においてＬからＲへの変異を含む。

【0066】

一例では、該変異型Ｓタンパク質は、（ｉ）配列番号５０のヌクレオチド４７８に対応する残基においてＴからＫへの変異を含み、かつ（ｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド６８１に対応する残基においてＰからＲへの変異を含み、かつ（ｉｉｉ）配列番号５０のヌクレオチド４５２に対応する残基においてＬからＲへの変異を含む。

【0067】

一例では、該タンパク質は、変異型Ｓタンパク質に結合する抗体可変領域を含み、該変異型Ｓタンパク質は、
（ａ）配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含むものであり、及び／または、
（ｂ）配列番号５０のヌクレオチド５０１に対応する残基においてＮからＹへの変異を含むものであり、及び／または、
（ｃ）配列番号５０のヌクレオチド４７７に対応する残基においてＳからＮへの変異を含むものであり、及び／または、
（ｄ）配列番号５０のヌクレオチド４８５に対応する残基においてＧからＲへの変異を含むものである。

【0068】

一例では、該タンパク質は、変異型Ｓタンパク質に結合する抗体可変領域を含み、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含む。

【0069】

一例では、該タンパク質は、変異型Ｓタンパク質に結合する抗体可変領域を含み、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド５０１に対応する残基においてＮからＹへの変異を含む。

【0070】

一例では、該タンパク質は、変異型Ｓタンパク質に結合する抗体可変領域を含み、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド４７７に対応する残基においてＳからＮへの変異を含む。

【0071】

一例では、該タンパク質は、変異型Ｓタンパク質に結合する抗体可変領域を含み、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド４８５に対応する残基においてＧからＲへの変異を含む。

【0072】

一例では、該タンパク質は、変異型Ｓタンパク質に結合する抗体可変領域を含み、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド４７７に対応する残基においてＳからＮへの変異を含み、かつ配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含む。

【0073】

一例では、該タンパク質は、変異型Ｓタンパク質に結合する抗体可変領域を含み、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド４８５に対応する残基においてＧからＲへの変異を含み、かつ配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含む。

【0074】

一例では、該タンパク質は、変異型Ｓタンパク質に結合する抗体可変領域を含み、該変異型Ｓタンパク質は、配列番号５０のヌクレオチド５０１に対応する残基においてＮからＹへの変異を含み、かつ配列番号５０のヌクレオチド６１４に対応する残基においてＤからＧへの変異を含む。

【0075】

一例では、該タンパク質は、配列番号１に示す配列を含むＶ_Ｈと配列番号２に示す配列を含むＶ_Ｌとを含む抗体によって結合されるエピトープと同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ中のエピトープに特異的に結合する抗体可変領域を含む。

【0076】

一例では、該タンパク質は、配列番号３に示す配列を含むＶ_Ｈと配列番号４に示す配列を含むＶ_Ｌとを含む抗体によって結合されるエピトープと同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ中のエピトープに特異的に結合する抗体可変領域を含む。

【0077】

一例では、該タンパク質は、配列番号５に示す配列を含むＶ_Ｈと配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌとを含む抗体によって結合されるエピトープと同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ中のエピトープに特異的に結合する抗体可変領域を含む。

【0078】

一例では、該タンパク質は、配列番号７に示す配列を含むＶ_Ｈと配列番号８に示す配列を含むＶ_Ｌとを含む抗体によって結合されるエピトープと同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ中のエピトープに特異的に結合する抗体可変領域を含む。

【0079】

一例では、該タンパク質は、配列番号９に示す配列を含むＶ_Ｈと配列番号１０に示す配列を含むＶ_Ｌとを含む抗体によって結合されるエピトープと同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ中のエピトープに特異的に結合する抗体可変領域を含む。

【0080】

一例では、該タンパク質は、配列番号５１に示す配列を含むペプチドと交差反応する抗体可変領域を含む。一例では、該タンパク質は、配列番号５１に示す配列のアミノ酸残基５、６、１７、１８、及び１９を含むペプチドと交差反応する抗体可変領域を含む。配列番号５１に示す配列を含むペプチドと交差反応する例示的なタンパク質は、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体３０Ｂ８である。配列番号５１に示す配列を含むペプチドと交差反応しない例示的なタンパク質は、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体ＡＳ３５である。配列番号５１に示す配列を含むペプチドと交差反応しないさらなる例示的なタンパク質は、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体Ｂ３８である。

【0081】

交差反応性を測定する方法は、当業者には明らかであり、及び／または本明細書に記載されている。

【0082】

一例では、該タンパク質は、可変フラグメント（Ｆｖ）を含む。

【0083】

一例では、該タンパク質は、
（ｉ）単鎖フラグメント可変（Ｆｖ）フラグメント（ｓｃＦｖ）、
（ｉｉ）二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ－ｓｃＦｖ）、
（ｉｉｉ）ダイアボディ、
（ｉｖ）トリアボディ、
（ｖ）テトラボディ、
（ｖｉ）抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）、
（ｖｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２、
（ｖｉｉｉ）Ｆｖ、
（ｉｘ）抗体の定常領域、定常フラグメント（Ｆｃ）、または重鎖定常ドメイン（Ｃ_Ｈ）２及び／またはＣ_Ｈ３に連結された（ｉ）～（ｖｉｉｉ）のうちの１つ、または
（ｘ）抗体、からなる群から選択される。

【0084】

例えば、該タンパク質は、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌを含み、該Ｖ_Ｈ及び該Ｖ_Ｌは、単一のポリペプチド鎖中にあり、かつ該タンパク質は、
（ａ）ｓｃＦｖ、
（ｂ）ｄｉ－ｓｃＦｖ、及び
（ｃ）抗体の定常領域、Ｆｃ、またはＣＨ２及び／またはＣＨ３に連結された（ａ）または（ｂ）の１つ、からなる群から選択される。

【0085】

一例では、該タンパク質は、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌを含み、該Ｖ_Ｈ及び該Ｖ_Ｌは、別々のポリペプチド鎖中にあり、かつ該タンパク質は、
（ａ）ダイアボディ、
（ｂ）トリアボディ、
（ｃ）テトラボディ、
（ｄ）Ｆａｂ、
（ｅ）Ｆ（ａｂ’）２、
（ｆ）Ｆｖ、
（ｇ）抗体の定常領域、Ｆｃ、またはＣＨ２及び／またはＣＨ３に連結された（ａ）～（ｆ）の１つ、及び
（ｈ）抗体、からなる群から選択される。

【0086】

一例では、該タンパク質は抗体である。例示的な抗体は、完全長抗体及び／または裸の抗体である。例えば、該タンパク質は抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体である。一例では、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体は、モノクローナル抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体である。

【0087】

一例では、該タンパク質は、組換え型、キメラ型、ＣＤＲ移植型、ヒト化型、類似ヒト化（ｓｙｎｈｕｍａｎｉｚｅｄ）型、霊長類化型、脱免疫化型、またはヒト型である。

【0088】

一例では、該タンパク質は抗体であり、該抗体は、
（ｉ）配列番号４５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４６または配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、
（ｉｉ）配列番号４５に示す配列を含むＶ_Ｈの３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶ_Ｈと、配列番号４６または配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌの３つのＣＤＲを含むＶ_Ｌと、を含むか、または
（ｉｉｉ）配列番号４７に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号４８に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４９に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈと、配列番号３６または配列番号３２に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７または配列番号３３に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３８または配列番号３４に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0089】

一例では、該タンパク質は、配列番号４５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。

【0090】

一例では、Ｖ_Ｈのアミノ酸配列は、配列番号４５に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２４位にアラニン（Ａ）もしくはバリン（Ｖ）、及び／または、２６位にグリシン（Ｇ）もしくはアスパラギン酸（Ｄ）、及び／または、３４位にメチオニン（Ｍ）もしくはイソロイシン（Ｉ）、及び／または、５５位にセリン（Ｓ）もしくはアスパラギン（Ｎ）、及び／または、５６位にグリシン（Ｇ）もしくはアスパラギン酸（Ｄ）、及び／または、５８位にスレオニン（Ｔ）もしくはセリン（Ｓ）、及び／または、７２位にアラニン（Ａ）もしくはプロリン（Ｐ）、及び／または、９４位にシステイン（Ｃ）もしくはチロシン（Ｙ）、及び／または、９８位にグリシン（Ｇ）もしくはセリン（Ｓ）、及び／または、１００位にロイシン（Ｌ）もしくはチロシン（Ｙ）、及び／または、１０６位にアラニン（Ａ）もしくはセリン（Ｓ）、及び／または、１０７位にプロリン（Ｐ）もしくはトリプトファン（Ｗ）を含む。

【0091】

一例では、Ｖ_Ｌのアミノ酸配列は、配列番号４６に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２６位にセリン（Ｓ）もしくはアルギニン（Ｒ）、及び／または、４５位にイソロイシン（Ｉ）もしくはバリン（Ｖ）、及び／または、１０２位にアルギニン（Ｒ）もしくはリシン（Ｋ）を含む。

【0092】

一例では、該タンパク質は、配列番号４５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。例えば、Ｖ_Ｈのアミノ酸配列は、配列番号４５に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２４位にバリン（Ｖ）、２６位にグリシン（Ｇ）、３４位にメチオニン、５５位にアスパラギン（Ｎ）、５６位にグリシン（Ｇ）、５８位にスレオニン（Ｔ）、７２位にアラニン（Ａ）、９４位にチロシン（Ｙ）、９８位にセリン（Ｓ）、１００位にチロシン（Ｙ）、１０６位にセリン（Ｓ）、及び１０７位にトリプトファン（Ｗ）を含み、そしてＶ_Ｌのアミノ酸配列は、配列番号４６に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２６位にセリン（Ｓ）、４５位にイソロイシン（Ｉ）、及び１０２位にアルギニン（Ｒ）を含む。

【0093】

一例では、該タンパク質は、配列番号４５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。例えば、Ｖ_Ｈのアミノ酸配列は、配列番号４５に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２４位にアラニン（Ａ）、２６位にアスパラギン酸（Ｄ）、３４位にメチオニン（Ｍ）、５５位にセリン（Ｓ）、５６位にアスパラギン酸（Ｄ）、５８位にセリン（Ｓ）、７２位にプロリン（Ｐ）、９４位にチロシン（Ｙ）、９８位にセリン（Ｓ）、１００位にチロシン（Ｙ）、１０６位にセリン（Ｓ）、及び１０７位にトリプトファン（Ｗ）を含み、そしてＶ_Ｌのアミノ酸配列は、配列番号４６に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２６位にアルギニン（Ｒ）、４５位にバリン（Ｖ）、及び１０２位にリシン（Ｋ）を含む。

【0094】

一例では、該タンパク質は、配列番号４５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。例えば、Ｖ_Ｈのアミノ酸配列は、配列番号４５に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２４位にアラニン（Ａ）、２６位にグリシン（Ｇ）、３４位にイソロイシン（Ｉ）、５５位にアスパラギン（Ｎ）、５６位にグリシン（Ｇ）、５８位にスレオニン（Ｔ）、７２位にアラニン（Ａ）、９４位にシステイン（Ｃ）、９８位にグリシン（Ｇ）、１００位にロイシン（Ｌ）、１０６位にアラニン（Ａ）、及び１０７位にプロリン（Ｐ）を含む。

【0095】

一例では、該タンパク質は、配列番号４５に示す配列を含むＶ_Ｈの３つのＣＤＲを含むＶ_Ｈと、配列番号４６または配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌの３つのＣＤＲを含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。

【0096】

一例では、該タンパク質は、配列番号４５に示す配列を含むＶ_Ｈの３つのＣＤＲを含むＶ_Ｈと、配列番号４６に示す配列を含むＶ_Ｌの３つのＣＤＲを含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。例えば、Ｖ_Ｈのアミノ酸配列は、配列番号４５に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２４位にバリン（Ｖ）、２６位にグリシン（Ｇ）、３４位にメチオニン（Ｍ）、５５位にアスパラギン（Ｎ）、５６位にグリシン（Ｇ）、５８位にスレオニン（Ｔ）、７２位にアラニン（Ａ）、９４位にチロシン（Ｙ）、９８位にセリン（Ｓ）、１００位にチロシン（Ｙ）、１０６位にセリン（Ｓ）、及び１０７位にトリプトファン（Ｗ）を含み、そしてＶ_Ｌのアミノ酸配列は、配列番号４６に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２６位にセリン（Ｓ）、４５位にイソロイシン（Ｉ）、及び１０２位にアルギニン（Ｒ）を含む。

【0097】

一例では、該タンパク質は、配列番号４５に示す配列を含むＶ_Ｈの３つのＣＤＲを含むＶ_Ｈと、配列番号４６に示す配列を含むＶ_Ｌの３つのＣＤＲを含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。例えば、Ｖ_Ｈのアミノ酸配列は、配列番号４５に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２４位にアラニン（Ａ）、２６位にアスパラギン酸（Ｄ）、３４位にメチオニン（Ｍ）、５５位にセリン（Ｓ）、５６位にアスパラギン酸（Ｄ）、５８位にセリン（Ｓ）、７２位にプロリン（Ｐ）、９４位にチロシン（Ｙ）、９８位にセリン（Ｓ）、１００位にチロシン（Ｙ）、１０６位にセリン（Ｓ）、及び１０７位にトリプトファン（Ｗ）を含み、そしてＶ_Ｌのアミノ酸配列は、配列番号４６に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２６位にアルギニン（Ｒ）、４５位にバリン（Ｖ）、及び１０２位にリシン（Ｋ）を含む。

【0098】

一例では、該タンパク質は、配列番号４５に示す配列を含むＶ_Ｈの３つのＣＤＲを含むＶ_Ｈと、配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌの３つのＣＤＲを含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。例えば、Ｖ_Ｈのアミノ酸配列は、配列番号４５に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２４位にアラニン（Ａ）、２６位にグリシン（Ｇ）、３４位にイソロイシン（Ｉ）、５５位にアスパラギン（Ｎ）、５６位にグリシン（Ｇ）、５８位にスレオニン（Ｔ）、７２位にアラニン（Ａ）、９４位にシステイン（Ｃ）、９８位にグリシン（Ｇ）、１００位にロイシン（Ｌ）、１０６位にアラニン（Ａ）、及び１０７位にプロリン（Ｐ）を含む。

【0099】

一例では、該タンパク質は、配列番号４７に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号４８に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４９に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈと、配列番号３６または配列番号３２に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７または配列番号３３に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３８または配列番号３４に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。

【0100】

一例では、Ｖ_ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号４７に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、１位にグリシン（Ｇ）またはアスパラギン酸（Ｄ）を含む。

【0101】

一例では、Ｖ_ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は、配列番号４８に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、５位にセリン（Ｓ）もしくはアスパラギン（Ｎ）、及び／または、６位にグリシン（Ｇ）もしくはアスパラギン酸（Ｄ）、及び／または、８位にスレオニン（Ｔ）もしくはセリン（Ｓ）を含む。

【0102】

一例では、Ｖ_ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は、配列番号４９に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２位にグリシン（Ｇ）もしくはセリン（Ｓ）、及び／または、４位にリシン（Ｌ）もしくはチロシン（Ｙ）、及び／または、１０位にアラニン（Ａ）もしくはセリン（Ｓ）、及び／または、１１位にプロリン（Ｐ）もしくはトリプトファン（Ｗ）を含む。

【0103】

一例では、該タンパク質は、配列番号４７に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号４８に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４９に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈと、配列番号３６に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３８に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。例えば、Ｖ_ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号４７に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、１位にグリシン（Ｇ）を含み、Ｖ_ＨＣＤＲ２は、配列番号４８に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、５位にアスパラギン（Ｎ）、６位にグリシン（Ｇ）、８位にスレオニン（Ｔ）を含み、そしてＶ_ＨＣＤＲ３は、配列番号４９に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２位にセリン（Ｓ）、４位にチロシン（Ｙ）、１０位にセリン（Ｓ）、１１位にトリプトファン（Ｗ）を含む。

【0104】

一例では、該タンパク質は、配列番号４７に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号４８に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４９に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈと、配列番号３６に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３８に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。例えば、Ｖ_ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号４７に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、１位にアスパラギン酸（Ｄ）を含み、Ｖ_ＨＣＤＲ２は、配列番号４８に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、５位にセリン（Ｓ）、６位にアスパラギン酸（Ｄ）、８位にセリン（Ｓ）を含み、そしてＶ_ＨＣＤＲ３は、配列番号４９に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２位にセリン（Ｓ）、４位にチロシン（Ｙ）、１０位にセリン（Ｓ）、１１位にトリプトファン（Ｗ）を含む。

【0105】

一例では、該タンパク質は、配列番号４７に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号４８に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４９に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈと、配列番号３２に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号３３に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３４に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。例えば、Ｖ_ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は、配列番号４７に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、１位にグリシン（Ｇ）を含み、Ｖ_ＨＣＤＲ２は、配列番号４８に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、５位にアスパラギン（Ｎ）、６位にグリシン（Ｇ）、８位にスレオニン（Ｔ）を含み、そしてＶ_ＨＣＤＲ３は、配列番号４９に示す配列を含み、該アミノ酸配列は、２位にグリシン（Ｇ）、リシン（Ｌ）、１０位にアラニン（Ａ）、１１位にプロリン（Ｐ）を含む。

【0106】

一例では、該タンパク質は抗体であり、
（ｉ）該抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、
ａ．配列番号１のアミノ酸２６～３４、または
ｂ．配列番号３のアミノ酸２６～３３、または
ｃ．配列番号５のアミノ酸２６～３３、または
ｄ．配列番号７のアミノ酸２６～３３、または
ｅ．配列番号９のアミノ酸２６～３３に示す配列を含み、
（ｂ）該ＣＤＲ２は、
ａ．配列番号１のアミノ酸５２～５８、または
ｂ．配列番号３のアミノ酸５１～５８、または
ｃ．配列番号５のアミノ酸５１～５８、または
ｄ．配列番号７のアミノ酸２６～３３、または
ｅ．配列番号９のアミノ酸５１～５８に示す配列を含み、
（ｃ）該ＣＤＲ３は、
ａ．配列番号１のアミノ酸９７～１０８、または
ｂ．配列番号３のアミノ酸９７～１１０、または
ｃ．配列番号５のアミノ酸９７～１１０、または
ｄ．配列番号７のアミノ酸９７～１１０、または
ｅ．配列番号９のアミノ酸９７～１０６に示す配列を含み、
（ｉｉ）該抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、
ａ．配列番号２のアミノ酸２７～３８、または
ｂ．配列番号４のアミノ酸２７～３１、または
ｃ．配列番号６のアミノ酸２７～３２、または
ｄ．配列番号８のアミノ酸２７～３１、または
ｅ．配列番号１０のアミノ酸２７～３７に示す配列を含み、
（ｂ）該ＣＤＲ２は、
ａ．配列番号２のアミノ酸５６～５８、または
ｂ．配列番号４のアミノ酸４９～５１、または
ｃ．配列番号６のアミノ酸５０～５２、または
ｄ．配列番号８のアミノ酸４９～５１、または
ｅ．配列番号１０のアミノ酸５５～５７に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、
ａ．配列番号２のアミノ酸９５～１０３、または
ｂ．配列番号４のアミノ酸８８～９６、または
ｃ．配列番号６のアミノ酸８９～９７、または
ｄ．配列番号８のアミノ酸８８～９６、または
ｅ．配列番号１０のアミノ酸９４～１０２に示す配列を含む。

【0107】

一例では、該タンパク質は抗体であり、
（ｉ）該抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸２６～３４に示す配列を含み、かつ
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号１のアミノ酸５２～５８に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号１のアミノ酸９７～１０８に示す配列を含み、
（ｉｉ）該抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号２のアミノ酸２７～３８に示す配列を含み、かつ
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号２のアミノ酸５６～５８に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号２のアミノ酸９５～１０３に示す配列を含む。

【0108】

一例では、該タンパク質は抗体であり、
（ｉ）該抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号３のアミノ酸２６～３３に示す配列を含み、かつ
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号３のアミノ酸５１～５８に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号３のアミノ酸９７～１１０に示す配列を含み、
（ｉｉ）該抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号４のアミノ酸２７～３１に示す配列を含み、かつ
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号４のアミノ酸４９～５１に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号４のアミノ酸８８～９６に示す配列を含む。

【0109】

一例では、該タンパク質は抗体であり、
（ｉ）該抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号５のアミノ酸２６～３３に示す配列を含み、かつ
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸５１～５８に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号５のアミノ酸９７～１１０に示す配列を含み、
（ｉｉ）該抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号６のアミノ酸２７～３２に示す配列を含み、かつ
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号６のアミノ酸５０～５２に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号６のアミノ酸８９～９７に示す配列を含む。

【0110】

一例では、該タンパク質は抗体であり、
（ｉ）該抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号７のアミノ酸２６～３３に示す配列を含み、かつ
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号７のアミノ酸２６～３３に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号７のアミノ酸９７～１１０に示す配列を含み、
（ｉｉ）該抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号８のアミノ酸２７～３１に示す配列を含み、かつ
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号８のアミノ酸４９～５１に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号８のアミノ酸８８～９６に示す配列を含む。

【0111】

一例では、該タンパク質は抗体であり、
（ｉ）該抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号９のアミノ酸２６～３３に示す配列を含み、かつ
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号９のアミノ酸５１～５８に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号９のアミノ酸９７～１０６に示す配列を含み、
（ｉｉ）該抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号１０のアミノ酸２７～３７に示す配列を含み、かつ
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号１０のアミノ酸５５～５７に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号１０のアミノ酸９４～１０２に示す配列を含む。

【0112】

一例では、該タンパク質は抗体であり、該抗体は、
（ｉ）配列番号１に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号２に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、
（ｉｉ）配列番号３に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、
（ｉｉｉ）配列番号５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、
（ｉｖ）配列番号７に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号８に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、または
（ｖ）配列番号９に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１０に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0113】

一例では、該タンパク質は、配列番号１に示すアミノ酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号２に示すアミノ酸配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。

【0114】

一例では、該タンパク質は、配列番号３に示すアミノ酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４に示すアミノ酸配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。

【0115】

一例では、該タンパク質は、配列番号５に示すアミノ酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号６に示すアミノ酸配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。

【0116】

一例では、該タンパク質は、配列番号７に示すアミノ酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号８に示すアミノ酸配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。

【0117】

一例では、該タンパク質は、配列番号９に示すアミノ酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１０に示すアミノ酸配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。

【0118】

一例では、該タンパク質は抗体であり、
（ｉ）該抗体は、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｈを含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号２１に示す配列を含み、
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号２２に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号２３に示す配列を含み、
該抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｌを含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号２４に示す配列を含み、
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号２５に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号２６に示す配列を含むか、または
（ｉｉ）該抗体は、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｈを含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号２９に示す配列を含み、
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号３０に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号３５に示す配列を含み、
該抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｌを含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号３６に示す配列を含み、
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号３７に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号３８に示す配列を含むか、または
（ｉｉｉ）該抗体は、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｈを含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号２７に示す配列を含み、
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号２８に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号３５に示す配列を含み、
該抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｌを含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号３６に示す配列を含み、
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号３７に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号３８に示す配列を含むか、または
（ｉｖ）該抗体は、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｈを含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号２９に示す配列を含み、
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号３０に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号３１に示す配列を含み、
該抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｌを含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号３２に示す配列を含み、
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号３３に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号３４に示す配列を含むか、または
（ｖ）該抗体は、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｈを含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号３９に示す配列を含み、
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号４０に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号４１に示す配列を含み、
該抗体はさらに、ＣＤＲ１と、ＣＤＲ２と、ＣＤＲ３と、を含むＶ_Ｌを含み、
（ａ）該ＣＤＲ１は、配列番号４２に示す配列を含み、
（ｂ）該ＣＤＲ２は、配列番号４３に示す配列を含み、かつ
（ｃ）該ＣＤＲ３は、配列番号４４に示す配列を含む。

【0119】

一例では、該タンパク質は、配列番号２１に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号２２に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２３に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈと、配列番号２４に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号２５に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号２６に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。

【0120】

一例では、該タンパク質は、配列番号２９に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３５に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈと、配列番号３６に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３８に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。

【0121】

一例では、該タンパク質は、配列番号２７に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号２８に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３５に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈと、配列番号３６に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号３７に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３８に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。

【0122】

一例では、該タンパク質は、配列番号２９に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３１に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈと、配列番号３２に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号３３に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号３４に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。

【0123】

一例では、該タンパク質は、配列番号３９に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号４０に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４１に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｈと、配列番号４２に示す配列を含むＣＤＲ１、配列番号４３に示す配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号４４に示す配列を含むＣＤＲ３を含むＶ_Ｌと、を含む抗体である。

【0124】

本開示はまた、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を提供し、該抗体は、
（ｉ）配列番号１に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号２に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、
（ｉｉ）配列番号３に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、
（ｉｉｉ）配列番号５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、
（ｉｖ）配列番号７に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号８に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、または
（ｖ）配列番号９に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１０に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0125】

一例では、該抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体は、配列番号１に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号２に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0126】

一例では、該抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体は、配列番号３に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号４に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0127】

一例では、該抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体は、配列番号５に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号６に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0128】

一例では、該抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体は、配列番号７に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号８に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0129】

一例では、該抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体は、配列番号９に示す配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１０に示す配列を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0130】

本開示はまた、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌを含む抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を提供し、ここで該Ｖ_Ｈは、ヒト重鎖定常領域に連結されており、かつ該Ｖ_Ｌは、ヒト軽鎖定常領域に連結されている。

【0131】

一例では、該タンパク質または該抗体は、上記タンパク質または抗体のいずれかをコードする核酸によりコードされるタンパク質または抗体の任意の形態である。

【0132】

本開示は、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を提供し、該抗体は、
（ｉ）配列番号１１を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１１を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１２を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１２を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、
（ｉｉ）配列番号１３を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１３を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１４を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１４を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、
（ｉｉｉ）配列番号１５を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１５を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１６を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１６を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、
（ｉｖ）配列番号１７を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１７を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１８を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１８を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、
（ｖ）配列番号１７を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１７を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１８を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１８を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0133】

一例では、本開示は、配列番号１１を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１１を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１２を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１２を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を提供する。

【0134】

一例では、本開示は、配列番号１３を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１３を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１４を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１４を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を提供する。

【0135】

一例では、本開示は、配列番号１５を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１５を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１６を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１６を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を提供する。

【0136】

一例では、本開示は、配列番号１７を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１７を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１８を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１８を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を提供する。

【0137】

一例では、本開示は、配列番号１９を含む核酸から発現されるかまたは配列番号１９を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｈと、配列番号２０を含む核酸から発現されるかまたは配列番号２０を含む核酸によりコードされる配列を含むＶ_Ｌと、を含む抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を提供する。

【0138】

本開示はさらに、本明細書に記載のタンパク質または抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体をコードするポリヌクレオチドを提供する。

【0139】

一例では、該ポリヌクレオチドは、配列番号１１～配列番号２０に示す核酸配列を含む。

【0140】

一例では、該ポリヌクレオチドは、
（ｉ）配列番号１１に示す核酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１２に示す核酸配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、または
（ｉｉ）配列番号１３に示す核酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１４に示す核酸配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、または
（ｉｉｉ）配列番号１５に示す核酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１６に示す核酸配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、または
（ｉｖ）配列番号１７に示す核酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１８に示す核酸配列を含むＶ_Ｌと、を含むか、または
（ｖ）配列番号１９に示す核酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号２０に示す核酸配列を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0141】

一例では、該ポリヌクレオチドは、配列番号１１に示す核酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１２に示す核酸配列を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0142】

一例では、該ポリヌクレオチドは、配列番号１３に示す核酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１４に示す核酸配列を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0143】

一例では、該ポリヌクレオチドは、配列番号１５に示す核酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１６に示す核酸配列を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0144】

一例では、該ポリヌクレオチドは、配列番号１７に示す核酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号１８に示す核酸配列を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0145】

一例では、該ポリヌクレオチドは、配列番号１９に示す核酸配列を含むＶ_Ｈと、配列番号２０に示す核酸配列を含むＶ_Ｌと、を含む。

【0146】

一例では、本開示のポリヌクレオチドは、異種プロモーターに作動可能に連結されている。

【0147】

本開示はさらに、プロモーターに対し作動可能に連結された本開示の核酸を含む発現コンストラクトを提供する。このような発現コンストラクトは、ベクター内、例えばプラスミド内のものであり得る。

【0148】

抗体可変領域を含むタンパク質を形成する単一のポリペプチドに関する本開示の例において、発現コンストラクトは、そのポリペプチド鎖をコードする核酸に連結されたプロモーターを含んでもよい。

【0149】

抗体可変領域を含むタンパク質を形成する複数のポリペプチドに関する本開示の例において、本開示の発現コンストラクトは、該複数のポリペプチドのうちの１つ（例えば、Ｖ_Ｈを含む）をコードしかつプロモーターに作動可能に連結された核酸と、該複数のポリペプチドのうちのもう１つ（例えば、Ｖ_Ｌを含む）をコードしかつもう１つのプロモーターに作動可能に連結された核酸と、を含む。

【0150】

別の一例では、発現コンストラクトは、２シストロン性の発現コンストラクトであり、例えば、５′から３′の順に作動可能に連結された以下の構成要素、すなわち
（ｉ）プロモーター、
（ｉｉ）第１のポリペプチドをコードする核酸、
（ｉｉｉ）配列内リボソーム進入部位、及び
（ｉｖ）第２のポリペプチドをコードする核酸、を含む。

【0151】

例えば、第１のポリペプチドはＶ_Ｈを含み、かつ第２のポリペプチドはＶ_Ｌを含むか、または第１のポリペプチドはＶ_Ｌを含み、かつ第２のポリペプチドはＶ_Ｈを含む。

【0152】

本開示はまた、別々の発現コンストラクトも意図しており、別々の発現コンストラクトのうち１つは、第１のポリペプチド（例えば、Ｖ_Ｈを含む）をコードし、そのもう１つは、第２のポリペプチド（例えば、Ｖ_Ｌを含む）をコードする。例えば、本開示はさらに組成物を提供し、該組成物は、
（ｉ）ポリペプチドをコードする核酸を含む第１の発現コンストラクト（例えば、プロモーターに作動可能に連結されたＶ_Ｈを含む）と、
（ｉｉ）ポリペプチドをコードする核酸を含む第２の発現コンストラクト（例えば、プロモーターに作動可能に連結されたＶ_Ｌを含む）と、を含み、
ここで、該第１及び第２のポリペプチドは、結合して抗体可変領域を含むタンパク質を形成するものである。

【0153】

本開示はさらに、抗体可変領域を含む該タンパク質を発現する単離された細胞を提供するか、または本開示のタンパク質または抗体を発現するよう遺伝子修飾された組換え細胞を提供する。例えば、本開示は、本開示のタンパク質または抗体を調製するための単離された細胞の使用を提供する。別の例では、該細胞は、本開示の核酸を含むか、または本開示の発現コンストラクトを含むか、または
（ｉ）プロモーターに作動可能に連結された、ポリペプチド（例えば、Ｖ_Ｈを含む）をコードする核酸を含む第１の発現コンストラクトと、
（ｉｉ）プロモーターに作動可能に連結された、ポリペプチド（例えば、Ｖ_Ｌを含む）をコードする核酸を含む第２の発現コンストラクトと、を含み、
ここで、該第１及び第２のポリペプチドは、結合してタンパク質または抗体を形成するものである。

【0154】

本開示はさらに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫応答を誘導するのに十分な立体構造を有する抗原を検出するためのタンパク質または抗体の使用を提供する。

【0155】

本開示はまた、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫応答を誘導するのに十分な立体構造を有する抗原を検出する方法を提供する。該方法は、本明細書に記載のタンパク質または抗体を抗原と接触させることと、該タンパク質または抗体の該抗原への結合を検出することと、を含み、ここで、該タンパク質または抗体の該抗原への結合は、該抗原がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫応答を誘導するのに十分な立体構造を有することを示すものである。

【0156】

本開示はさらに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫応答を誘導するのに十分な立体構造を有する抗原を検出するためのタンパク質もしくは抗体のキットまたはパネルを提供する。該キットまたはパネルは、本明細書に記載の１つ以上のタンパク質または抗体を含む。

【0157】

一例では、該抗原は、タンパク質、ペプチド、弱毒化ウイルス、またはウイルス様粒子である。例えば、該抗原は、タンパク質であり、例えば、抗体または抗原結合フラグメントである。例えば、該抗原は、ペプチドである。例えば、該抗原は弱毒化ウイルスである。例えば、該抗原はウイルス様粒子である。

【0158】

本開示はまた、該タンパク質及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

【0159】

一例では、担体は薬学的に許容されるものである。

【0160】

本開示はさらに、薬剤として使用するための、本開示のタンパク質、または抗体、または核酸、または発現コンストラクト、または細胞、または組成物を提供する。

【0161】

本開示はさらに、対象において呼吸器ウイルス感染症の治療に使用するための、対象において呼吸器ウイルス感染症の予防に使用するための、及び／または、対象において呼吸器ウイルス感染症の進行を遅らせるのに使用するための本開示のタンパク質、抗体、または組成物を提供する。一例では、本開示のタンパク質、または抗体、または核酸、または発現コンストラクト、または細胞、または組成物は、対象において呼吸器ウイルス感染症の治療に使用するためのものである。別の一例では、本開示のタンパク質、または抗体、または核酸、または発現コンストラクト、または細胞、または組成物は、対象において呼吸器ウイルス感染症の予防に使用するためのものである。さらなる一例では、本開示のタンパク質、または抗体、または核酸、または発現コンストラクト、または細胞、または組成物は、対象において呼吸器ウイルス感染症の進行を遅らせるのに使用するためのものである。

【0162】

本開示はまた、治療、予防、及び／または進行遅延が必要な対象において、呼吸器ウイルス感染症を治療する方法、呼吸器ウイルス感染症を予防する方法、及び／または呼吸器ウイルス感染症の進行を遅らせる方法を提供する。該方法は、該対象に、本開示のタンパク質、または抗体、または核酸、または発現コンストラクト、または細胞、または組成物を投与することを含む。例えば、本開示は、対象において呼吸器ウイルス感染症を治療する方法を提供する。別の一例では、本開示は、対象において呼吸器ウイルス感染症を予防する方法を提供する。さらなる一例では、本開示は、対象において呼吸器ウイルス感染症の進行を遅らせる方法を提供する。

【0163】

本開示はさらに、治療、予防、及び／または進行遅延が必要な対象において、呼吸器ウイルス感染症の治療に使用するための、呼吸器ウイルス感染症の予防に使用するための、及び／または、呼吸器ウイルス感染症の進行を遅らせるのに使用するための薬剤の製造における本開示のタンパク質、または抗体、または組成物の使用を提供する。例えば、本開示は、対象において呼吸器ウイルス感染症を治療するための薬剤の製造における、本開示のタンパク質、または抗体、または組成物の使用を提供する。別の一例では、本開示は、対象において呼吸器ウイルス感染症を予防するための薬剤の製造における、本開示のタンパク質、または抗体、または組成物の使用を提供する。さらなる一例では、本開示は、進行遅延が必要な対象において呼吸器ウイルス感染症の進行を遅らせるための薬剤の製造における、本開示のタンパク質、または抗体、または組成物の使用を提供する。

【0164】

一例では、該対象は、呼吸器ウイルス感染症を患っている（すなわち、該対象は治療を必要としている）。

【0165】

一例では、該呼吸器ウイルス感染症は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、コロナウイルス病２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）、急性呼吸器疾患症候群（ＡＲＤＳ）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0166】

一例では、該呼吸器ウイルス感染症はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症である。

【0167】

一例では、該呼吸器ウイルス感染症はＣＯＶＩＤ－１９である。

【0168】

一例では、該呼吸器ウイルス感染症はＡＲＤＳである。

【0169】

一例では、該呼吸器ウイルス感染症はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症及びＣＯＶＩＤ－１９である。

【0170】

一例では、該呼吸器ウイルス感染症はＣＯＶＩＤ－１９及びＡＲＤＳである。

【0171】

一例では、本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の予防、及び／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の進行の遅延に使用するための本開示の医薬組成物を提供する。例えば、本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療に使用するための本開示の医薬組成物を提供する。別の一例では、本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の予防に使用するための本開示の医薬組成物を提供する。別の一例では、本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の進行の遅延に使用するための本開示の医薬組成物を提供する。

【0172】

一例では、本開示は、ＣＯＶＩＤ－１９の治療、ＣＯＶＩＤ－１９の予防、及び／またはＣＯＶＩＤ－１９の進行の遅延に使用するための本開示の医薬組成物を提供する。例えば、本開示は、ＣＯＶＩＤ－１９の治療に使用するための本開示の医薬組成物を提供する。別の一例では、本開示は、ＣＯＶＩＤ－１９の予防に使用するための本開示の医薬組成物を提供する。別の一例では、本開示は、ＣＯＶＩＤ－１９の進行の遅延に使用するための本開示の医薬組成物を提供する。

【0173】

一例では、本開示は、ＡＲＤＳの治療、ＡＲＤＳの予防、及び／またはＡＲＤＳの進行の遅延に使用するための本開示の医薬組成物を提供する。例えば、本開示は、ＡＲＤＳの治療に使用するための本開示の医薬組成物を提供する。別の一例では、本開示は、ＡＲＤＳの予防に使用するための本開示の医薬組成物を提供する。別の一例では、本開示は、ＡＲＤＳの進行の遅延に使用するための本開示の医薬組成物を提供する。

【0174】

本明細書に記載の任意の方法の一例では、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物は、対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、及び／またはＡＲＤＳの発症前または発症後に投与される。本明細書に記載の任意の方法の一例では、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物は、対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、及び／またはＡＲＤＳの発症前に投与される。本明細書に記載の任意の方法の一例では、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物は、対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、及び／またはＡＲＤＳの発症後に投与される。

【0175】

本明細書に記載の任意の方法の一例では、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物は、呼吸器ウイルス感染症の検出後に投与される。例えば、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物は、対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、及び／またはＡＲＤＳの検出後に投与される。本明細書に記載の任意の方法の別の一例では、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の検出後に投与される。一例では、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の検出後であるが、ＣＯＶＩＤ－１９の発症前に投与される。一例では、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物は、ＡＲＤＳの検出後に投与される。

【0176】

一例では、対象は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、及び／またはＡＲＤＳを発症するリスクを有する。例えば、対象は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を発症するリスクを有する。別の一例では、対象は、ＣＯＶＩＤ－１９を発症するリスクを有する。さらなる一例では、対象は、ＡＲＤＳを発症するリスクを有する。

【0177】

一例では、本開示の組成物は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、及び／またはＡＲＤＳの１つ以上の症状の重症度を軽減するのに十分な量で、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、及び／またはＡＲＤＳの１つ以上の症状の発症を予防するのに十分な量で、投与される。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、及び／またはＡＲＤＳの症状は当業者には明らかであり、及び／または本明細書に記載されている。

【0178】

本開示は、対象において免疫応答を誘導する方法を提供する。該方法は、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物を、免疫応答の誘導を必要とする対象に投与することを含む。

【0179】

本開示はまた、免疫応答の誘導を必要とする対象において免疫応答を誘導するための薬剤の製造における、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物の使用を提供する。

【0180】

一例では、該方法または該使用は、免疫応答の誘導を必要とする対象に、本開示のタンパク質、抗体、及び／または医薬組成物を投与することを含む。

【0181】

一例では、該方法または該使用は、免疫応答の誘導を必要とする対象に、本開示の複数のタンパク質、複数の抗体、及び／または複数の医薬組成物を投与することを含む。

【0182】

一例では、該方法または該使用は、免疫応答の誘導を必要とする対象に、本開示の複数のタンパク質、複数の抗体、及び／または複数の医薬組成物を投与することを含み、ここで該複数のタンパク質、複数の抗体、及び／または複数の組成物は同じものである。

【0183】

一例では、該方法または該使用は、免疫応答の誘導を必要とする対象に、本開示の複数のタンパク質、複数の抗体、及び／または複数の医薬組成物を投与することを含み、ここで該複数のタンパク質、複数の抗体、及び／または複数の組成物は異なるものである。例えば、該方法または該使用は、最初のタンパク質、抗体、及び／または医薬組成物を対象に投与することと、その後のタンパク質、抗体、及び／または医薬組成物を対象に投与することと、を含む。

【0184】

一例では、複数のタンパク質、複数の抗体、及び／または複数の組成物は、同時にまたは逐次的に投与される。例えば、複数のタンパク質及び／または複数の抗体は、同じ組成物中に配合される。別の一例では、複数のタンパク質及び／または複数の抗体は、同時にまたは逐次的に投与される別個の組成物中に配合される。

【0185】

一例では、複数のタンパク質、複数の抗体、及び／または複数の組成物は、異なる時点で投与される。一例では、第１回目、及び、第２回目、及び／またはその後の用量は、所定の間隔で、例えば、約２４～２８週間の間隔で、または約４８～５６週間の間隔で、投与される。例えば、各用量は、それぞれ約２４～２６週間、または約３８～４２週間、または約５０～５４週間の間隔で投与される。

【0186】

一例では、複数のタンパク質、複数の抗体、及び／または複数の組成物は、別々に処方され、別々の時間間隔で対象に投与される。一例では、複数のタンパク質、複数の抗体、及び／または複数の組成物は、呼吸器ウイルス感染症が発症する前のそれぞれの時点で投与される。別の一例では、第１のタンパク質、抗体、または組成物が、呼吸器ウイルス感染症の発症前に対象に投与され、第２のタンパク質、抗体、または組成物が、呼吸器ウイルス感染症の発症後に対象に投与される。さらなる一例では、複数のタンパク質、複数の抗体、及び／または複数の組成物は、呼吸器ウイルス感染症が発症した後のそれぞれの時点で投与される。例えば、第１のタンパク質、抗体、または組成物が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス感染症の発症後に対象に投与され、第２のタンパク質、抗体、または組成物が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス感染症の発症後であるがＣＯＶＩＤ－１９及び／またはＡＲＤＳの発症前に対象に投与される。

【0187】

一例では、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物は、細胞性免疫応答を誘導する。タンパク質が細胞性免疫応答を誘導するかどうかを決定する方法は、当業者には明らかであり、及び／または本明細書に記載されている。例えば、細胞性免疫応答には、抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞の活性化の評価が含まれる。一例では、Ｔ細胞は、ＣＤ４Ｔ細胞及び／またはＣＤ８Ｔ細胞である。

【0188】

一例では、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物の投与は、ＣＤ４Ｔ細胞性の免疫応答を誘導する。

【0189】

一例では、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物の投与は、ＣＤ８Ｔ細胞性の免疫応答を誘導する。

【0190】

一例では、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物の投与は、ＣＤ４Ｔ細胞性かつＣＤ８Ｔ細胞性の免疫応答を誘導する。

【0191】

本明細書に記載の任意の方法の一例では、対象は、哺乳動物、例えばヒトなどの霊長類である。

【0192】

本開示はまた、本開示の少なくとも１つのタンパク質または抗体を、必要に応じてデリバリーシステム及び／または薬学的に許容される担体もしくは希釈剤中に、含むキットであって、対象において呼吸器ウイルス感染症（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、及び／またはＡＲＤＳ）を治療または予防するのに使用される説明書とともに該タンパク質または該抗体が包装されたキットを提供する。

【0193】

本開示はまた、本開示の少なくとも１つのタンパク質または抗体を、必要に応じてデリバリーシステム及び／または薬学的に許容される担体もしくは希釈剤中に、含むキットであって、呼吸器ウイルス感染症（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、及び／またはＡＲＤＳ）に罹患しているかまたは罹患するリスクを有する対象にタンパク質、抗体、または医薬組成物を投与するための説明書とともに該タンパク質または該抗体が包装されたキットを提供する。

【0194】

本開示はまた、本開示の複数のタンパク質または複数の抗体を、必要に応じてデリバリーシステム及び／または薬学的に許容される担体もしくは希釈剤中に、含むキットであって、呼吸器ウイルス感染症（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、及び／またはＡＲＤＳ）に罹患しているかまたは罹患するリスクを有する対象にタンパク質、抗体、または医薬組成物を投与するための説明書とともに該タンパク質または該抗体が包装されたキットを提供する。

【0195】

一例では、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物は、バイアル中で供給される。別の一例では、本開示のタンパク質、抗体、または医薬組成物は、シリンジ中で供給される。

【0196】

配列表の一覧
配列番号１ 抗体６Ｇ６のＶ_Ｈのアミノ酸配列
配列番号２ 抗体６Ｇ６のＶ_Ｌのアミノ酸配列
配列番号３ 抗体１９Ｇ２のＶ_Ｈのアミノ酸配列
配列番号４ 抗体１９Ｇ２のＶ_Ｌのアミノ酸配列
配列番号５ 抗体３０Ｂ８のＶ_Ｈのアミノ酸配列
配列番号６ 抗体３０Ｂ８のＶ_Ｌのアミノ酸配列
配列番号７ 抗体３９Ｅ７のＶ_Ｈのアミノ酸配列
配列番号８ 抗体３９Ｅ７のＶ_Ｌのアミノ酸配列
配列番号９ 抗体３３Ｅ１０のＶ_Ｈのアミノ酸配列
配列番号１０ 抗体３３Ｅ１０のＶ_Ｌのアミノ酸配列
配列番号１１ 抗体６Ｇ６のＶ_Ｈのヌクレオチド配列
配列番号１２ 抗体６Ｇ６のＶ_Ｌのヌクレオチド配列
配列番号１３ 抗体１９Ｇ２のＶ_Ｈのヌクレオチド配列
配列番号１４ 抗体１９Ｇ２のＶ_Ｌのヌクレオチド配列
配列番号１５ 抗体３０Ｂ８のＶ_Ｈのヌクレオチド配列
配列番号１６ 抗体３０Ｂ８のＶ_Ｌのヌクレオチド配列
配列番号１７ 抗体３９Ｅ７のＶ_Ｈのヌクレオチド配列
配列番号１８ 抗体３９Ｅ７のＶ_Ｌのヌクレオチド配列
配列番号１９ 抗体３３Ｅ１０のＶ_Ｈのヌクレオチド配列
配列番号２０ 抗体３３Ｅ１０のＶ_Ｌのヌクレオチド配列
配列番号２１ 抗体６Ｇ６のＶ_ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２２ 抗体６Ｇ６のＶ_ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２３ 抗体６Ｇ６のＶ_ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号２４ 抗体６Ｇ６のＶ_ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２５ 抗体６Ｇ６のＶ_ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２６ 抗体６Ｇ６のＶ_ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号２７ 抗体１９Ｇ２のＶ_ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号２８ 抗体１９Ｇ２のＶ_ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号２９ 抗体３０Ｂ８及び抗体３９Ｅ７のＶ_ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号３０ 抗体３０Ｂ８及び抗体３９Ｅ７のＶ_ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号３１ 抗体３０Ｂ８のＶ_ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号３２ 抗体３０Ｂ８のＶ_ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号３３ 抗体３０Ｂ８のＶ_ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号３４ 抗体３０Ｂ８のＶ_ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号３５ 抗体３９Ｅ７及び抗体１９Ｇ２のＶ_ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号３６ 抗体３９Ｅ７及び抗体１９Ｇ２のＶ_ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号３７ 抗体３９Ｅ７及び抗体１９Ｇ２のＶ_ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号３８ 抗体３９Ｅ７及び抗体１９Ｇ２のＶ_ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号３９ 抗体３３Ｅ１０のＶ_ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号４０ 抗体３３Ｅ１０のＶ_ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号４１ 抗体３３Ｅ１０のＶ_ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号４２ 抗体３３Ｅ１０のＶ_ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列
配列番号４３ 抗体３３Ｅ１０のＶ_ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列
配列番号４４ 抗体３３Ｅ１０のＶ_ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列
配列番号４５ 抗体３０Ｂ８、抗体３９Ｅ７、及び抗体１９Ｇ２のＶ_Ｈのアミノ酸コンセンサス配列
配列番号４６ 抗体３９Ｅ７及び抗体１９Ｇ２のＶ_Ｌのアミノ酸コンセンサス配列
配列番号４７ 抗体３０Ｂ８、抗体３９Ｅ７、及び抗体１９Ｇ２のＶ_ＨＣＤＲ１のアミノ酸コンセンサス配列
配列番号４８ 抗体３０Ｂ８、抗体３９Ｅ７、及び抗体１９Ｇ２のＶ_ＨＣＤＲ２のアミノ酸コンセンサス配列
配列番号４９ 抗体３０Ｂ８、抗体３９Ｅ７、及び抗体１９Ｇ２のＶ_ＨＣＤＲ３のアミノ酸コンセンサス配列
配列番号５０ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質全長（ｗｔ）のアミノ酸配列
配列番号５１ ペプチド４０のアミノ酸配列

【図面の簡単な説明】

【0197】

【図1】野生型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質及び変異型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質を中和するのに必要なモノクローナル抗体クローン６Ｇ６（Ａ）及びモノクローナル抗体クローン３０Ｂ８（Ｂ）の濃度を示す一連のグラフである。データはシュードウイルスアッセイにより測定された５０％阻害濃度（ＩＣ５０）として表されている。

【発明を実施するための形態】

【0198】

全般
本明細書全体を通して、具体的に別段明記されない限り、または文脈上他の意味に解すべき場合を除き、単一のステップ、単一の組成物、ステップ群、または組成物群への言及は、それらのステップ、それらの組成物、ステップ群、または組成物群のうちの１つ及び複数（すなわち１つ以上）を包含すると解釈すべきである。

【0199】

当業者には明らかなとおり、本開示は、具体的に記載されているもの以外への変形及び変更が容易に可能である。当然のことながら、本開示は、そのような変形及び変更をすべて含むものである。本開示はまた、個別にまたは包括的に本明細書で言及しまたは示しているステップ、特徴、組成物、及び化合物の全てを含むものであり、さらに、それらのステップまたはそれらの特徴の任意の２つ以上の任意のもの及びそれらのステップまたはそれらの特徴の任意の２つ以上の組み合わせすべてを含むものである。

【0200】

本開示は、本明細書に記載の特定の実施例によって範囲を限定されるものではなく、そのような特定の実施例が目的するところは、単なる例示である。機能的に等価の物、組成物、及び方法が本開示の範囲内にあることは明らかなことである。

【0201】

本開示のいかなる例も、別段の具体的な記載がない限り、本開示の任意の他の例に準用できると解釈すべきである。

【0202】

別段の具体的な定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当該技術分野の（例えば、細胞培養、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、及び生化学における）当業者が一般的に理解するものと同じ意味を有するものと解釈すべきである。

【0203】

別途指定されない限り、本開示で利用される組換えタンパク質、細胞培養、及び免疫学的技法は、当業者に周知の標準的手順である。かかる技法は、例えば、以下の出典における文献に記載説明されている。Ｊ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９８４）、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９），Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（ｅｄｉｔｏｒ）、Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １ ａｎｄ ２，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ （１９９１），Ｄ．Ｍ．Ｇｌｏｖｅｒ ａｎｄ Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（ｅｄｉｔｏｒｓ）、ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １－４，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９５ ａｎｄ １９９６）、及びＦ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｉｔｏｒｓ），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、これまでの更新をすべて含む）、Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ （ｅｄｉｔｏｒｓ）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８）、及びＪ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｉｔｏｒｓ）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（これまでの更新をすべて含む）。

【0204】

本明細書における可変領域及びその部分、免疫グロブリン、抗体、及びそれらのフラグメントの説明及び定義は、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９８７ ａｎｄ １９９１、Ｂｏｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４２，３０９－３２０，１９９４、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３４２，８７７－８８３，１９８９、及び／またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３，９２７－９４８，１９９７の記述によってさらに明確になり得る。

【0205】

本明細書におけるタンパク質または抗体のあらゆる記述には、製造及び／または保管中に生成されるタンパク質または抗体のあらゆる変形物が含まれると解すべきである。例えば、製造中または保存中に、抗体は（例えば、アスパラギンまたはグルタミン残基において）脱アミド化される可能性があり、及び／またはグリコシル化が変化する可能性があり、及び／またはグルタミン残基がピログルタミン酸に変換される可能性があり、及び／またはＮ末端またはＣ末端の残基が除去されまたは「切り取られ」る可能性があり、及び／またはシグナル配列の一部またはすべてが不完全に処理される可能性があり、その結果、抗体の末端に残る可能性がある。特定のアミノ酸配列を含む組成物が、記載された配列もしくはコードされた配列及び／またはその記載されたもしくはコードされた配列の変異体の不均質な混合物であることも考えられる。

【0206】

「及び／または」、例えば、「Ｘ及び／またはＹ」という用語は、「Ｘ及びＹ」または「ＸまたはＹ」のいずれかを意味すると解されるものであり、両方の意味またはいずれかの意味を明確に支持していると解釈すべきである。

【0207】

本明細書を通じて、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のような変化形は、記載された要素、完結物、もしくはステップ、または記載された要素群、完結物群、もしくはステップ群を包含することを意味する一方、任意の他の要素、完結物、もしくはステップ、または任意の他の要素群、完結物群、もしくはステップ群を除外することを意味していないと解釈すべきである。

【0208】

本明細書で使用される「～に由来する」という用語は、特定される完結物が、特定の供給源から得られる一方、必ずしもその供給源から直接得られるものとは限らないことを示していると解すべきである。

【0209】

選択された定義
本明細書で使用する「重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）」（「２０１９新型コロナウイルス（２０１９－ｎＣｏＶ）」及び「ヒトコロナウイルス２０１９（ＨＣｏＶ－１９またはｈＣｏＶ－１９）」としても知られている）という用語は、コロナウイルス病２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）を引き起こすコロナウイルス株を指すと解されるものである。

【0210】

「タンパク質」という用語は、単一のポリペプチド鎖、すなわち、ペプチド結合により連結された一連の連続するアミノ酸、または互いに共有結合によりもしくは非共有結合的に連結された一連のポリペプチド鎖（すなわち、ポリペプチド複合体）を包含すると解されるものである。例えば、一連のポリペプチド鎖は、適当な化学結合またはジスルフィド結合により共有結合させることができる。非共有結合の例には、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス力、及び疎水性相互作用が挙げられる。

【0211】

本明細書で使用される「ポリペプチド」または「ポリペプチド鎖」という用語は、ペプチド結合によって連結された一連の連続したアミノ酸を意味すると解される。例えば、タンパク質は、単一のポリペプチド鎖、すなわち、ペプチド結合により連結された一連の連続するアミノ酸、または互いに共有結合によりもしくは非共有結合的に連結された一連のポリペプチド鎖（すなわち、ポリペプチド複合体）を包含すると解されるものである。一連のポリペプチド鎖は、適当な化学結合またはジスルフィド結合により共有結合させることができる。非共有結合の例には、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス力、及び疎水性相互作用が挙げられる。

【0212】

本明細書で使用する「組換え」という用語は、人工的な遺伝子組換えの産物を意味すると解されるものである。

【0213】

本明細書で使用する「抗体」という用語は、複数のポリペプチド鎖（例えば、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含むポリペプチド及び重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含むポリペプチド）で構成される可変領域を含むタンパク質を意味すると解されるものである。抗体は、一般に定常ドメインも含み、定常ドメインの一部は、定常領域に配置され得、定常領域には、重鎖の場合、定常フラグメントまたは結晶化可能フラグメント（Ｆｃ）が含まれる。Ｖ_ＨとＶ_Ｌは相互作用してＦｖを形成する。このＦｖは、１つまたはいくつかの密接に関連した抗原に特異的に結合できる抗原結合領域を含んでいる。一般に、哺乳類由来の軽鎖は、κ軽鎖またはλ軽鎖のいずれかであり、哺乳類由来の重鎖は、α、δ、ε、γ、またはμである。抗体は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、及びＩｇＡ_２）、またはサブクラスのものとすることができる。「抗体」という用語は、ヒト化抗体、霊長類化抗体、ヒト抗体、類似ヒト化抗体、及びキメラ抗体も包含する。

【0214】

「全長抗体」、「インタクトな抗体」、または「全抗体」という用語は、実質的にインタクトな形態にある抗体を指して同義的に使用され、これは、抗体の抗原結合フラグメントと対照的な意味である。具体的には、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものを含む。定常ドメインは、野生型配列の定常ドメイン（例えば、ヒト野生型配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変異型であり得る。

【0215】

本明細書で使用される「可変領域」という用語は、ここに規定されるように、抗原に特異的に結合することができかつ相補性決定領域（ＣＤＲ）（すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）ならびにフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む抗体の軽鎖及び／または重鎖の部分を指す。例示的な可変領域は、３つまたは４つのＦＲ（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及び場合によりＦＲ４）を３つのＣＤＲとともに含んでいる。ＩｇＮＡＲに由来するタンパク質の場合、タンパク質はＣＤＲ２が欠如している場合がある。Ｖ_Ｈとは重鎖の可変領域を指す。Ｖ_Ｌとは軽鎖の可変領域を指す。

【0216】

本明細書で使用される「相補性決定領域」（同義語ＣＤＲ、すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）という用語は、抗原結合にその存在が必要な抗体可変ドメインのアミノ酸残基を指す。各可変ドメインは通常、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３として識別される３つのＣＤＲ領域を有する。ＣＤＲ及びＦＲに割り当てられるアミノ酸の位置は、本開示の実施において、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９８７ ａｎｄ １９９１に従い規定することができ、あるいは、その他の番号付けシステム、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３４２，８７７－８８３，１９８９、及び／またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７－９４８，１９９７の標準的番号付けシステム、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌ．Ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７：５５－７７，２００３のＩＭＧＴ番号付けシステム、またはＨｏｎｎｅｇｈｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｋｔｈｕｎ Ｊ． Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７－６７０，２００１のＡＨＯ番号付けシステムにより規定することができる。

【0217】

本明細書で使用する「フレームワーク領域」（ＦＲ）という用語は、ＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

【0218】

本明細書で使用する「Ｆｖ」という用語は、複数のポリペプチドで構成されているか単一のポリペプチドで構成されているかにかかわらず、Ｖ_ＬとＶ_Ｈが結合して抗原結合部位を有する（すなわち抗原に特異的に結合することができる）複合体を形成する任意のタンパク質を意味すると解されるものである。抗原結合部位を形成するＶ_Ｈ及びＶ_Ｌは、単一のポリペプチド鎖内にあってもよく、異なるポリペプチド鎖内にあってもよい。さらに、本開示のＦｖ（及び本開示の任意のタンパク質）は、複数の抗原結合部位を有してもよく、それらは、同じ抗原に結合する場合もあれば、同じ抗原に結合しない場合もある。この用語は、抗体に直接由来するフラグメントのほか、組換え手段を使用して生成されるそのようなフラグメントに対応するタンパク質をも包含すると解されるものである。いくつかの例では、Ｖ_Ｈは、重鎖定常ドメイン（Ｃ_Ｈ）１に連結されておらず、及び／または、Ｖ_Ｌは、軽鎖定常ドメイン（Ｃ_Ｌ）に連結されていない。例示的なＦｖ含有ポリペプチドまたはタンパク質としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、もしくはさらに高次の複合体、または定常領域もしくはそのドメイン（例えばＣ_Ｈ２またはＣ_Ｈ３ドメイン）に連結された上記のいずれか（例えばミニボディ）が挙げられる。「Ｆａｂフラグメント」は、抗体の一価の抗原結合フラグメントから構成されるものである。「Ｆａｂフラグメント」は、酵素パパインによる全抗体の消化によって無傷の軽鎖と重鎖の一部から構成されるフラグメントを得ることにより作製でき、あるいは、組換え手段を使用して作製できる。抗体の「Ｆａｂ’フラグメント」は、全抗体をペプシンで処理し、続いて還元して無傷の軽鎖と、Ｖ_Ｈ及び単一の定常ドメインを含む重鎖の一部と、から構成される分子を作製することによって得ることができる。この方法で処理した抗体ごとに２つのＦａｂ’フラグメントが得られる。Ｆａｂ’フラグメントは、組換え手段によっても作製することができる。抗体の「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、２つのジスルフィド結合によって結合された２つのＦａｂ’フラグメントの二量体から構成され、全抗体分子を酵素ペプシンで処理することにより（その後、還元を行わないで）得られる。「Ｆａｂ_２」フラグメントは、組換えフラグメントであり、これは、例えばロイシンジッパーまたはＣ_Ｈ３ドメインを使用して連結された２つのＦａｂフラグメントを含む。「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」は、抗体の可変領域フラグメント（Ｆｖ）を含む組換え分子である。この組換え分子において、軽鎖の可変領域と重鎖の可変領域は、適当な可動性ポリペプチドリンカーによって共有結合されている。

【0219】

タンパク質またはその抗原結合部位と抗原との相互作用に関して本明細書で使用する「結合する」という用語は、その相互作用が抗原上の特定の構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に依存することを意味する。例えば、抗体は通常タンパク質全体ではなく、特定のタンパク質構造を認識してそれに結合する。抗体がエピトープ「Ａ」に結合する場合、標識された「Ａ」とタンパク質を含む反応において、エピトープ「Ａ」を含む分子（または遊離の標識されていない「Ａ」）が存在すると、抗体に結合する標識された「Ａ」の量は減少する。

【0220】

本明細書で使用される「特異的に結合する」という用語は、本開示のタンパク質が、特定の抗原またはそれを発現する細胞に対して、それに代わる抗原または細胞に比べて、より高頻度に、より速く、より長い持続期間で、及び／またはより高い親和性で、反応または結合することを意味していると解されるものである。例えば、タンパク質は、多反応性天然抗体（すなわち、ヒトに天然に存在するさまざまな抗原に結合することが知られている天然抗体）によって一般的に認識される抗原に対してよりも、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質に対して、実質的により高い親和性（例えば、１．５倍または２倍または５倍または１０倍または２０倍または４０倍または６０倍または８０倍～１００倍または１５０倍または２００倍）で結合する。一般に、必ずしもではないが、結合についての言及は、特異的結合を意味し、また各用語は、他の用語を明確に支持しているものとして解されるものである。

【0221】

本明細書で使用する「中和する」という用語は、タンパク質が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤのアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）への結合を、遮断、低減、または防止できることを意味すると解されるものである。このことから明らかなとおり、当該タンパク質は、Ｓタンパク質ＲＢＤのＡＣＥ２への結合を完全に中和する必要はなく、むしろ統計的に有意な量で結合を中和すればよく、例えば、ｓＶＮＴ ＰｓＶ及びベロマイクロ中和アッセイを含む中和アッセイによって測定する場合、例えば少なくとも約３０％、または４０％、または５０％、または６０％、または７０％、または８０％、または９０％、または９５％、結合を中和すればよい。

【0222】

本明細書で使用する「抗原」という用語は、細胞性免疫応答及び／または体液性免疫応答を誘導、誘発、増加、または増強する１つ以上のエピトープを含む分子または構造を指す。

【0223】

「競合的に阻害する」という用語は、本開示のタンパク質（またはその抗原結合部位）が、言及された抗体またはタンパク質のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤへの結合を低減または阻止することを意味すると解されるものである。このことは、タンパク質（または抗原結合部位）と抗体が同じエピトープまたは重複するエピトープに結合することに起因し得る。上記から明らかなとおり、タンパク質は抗体の結合を完全に阻害する必要はなく、むしろ結合を統計的に有意な量で、例えば、少なくとも約１０％、または２０％、または３０％、または４０％、または５０％、または６０％、または７０％、または８０％、または９０％、または９５％減少させればよい。好ましくは、タンパク質は、抗体の結合を少なくとも約３０％、より好ましくは少なくとも約５０％、より好ましくは少なくとも約７０％、さらにより好ましくは少なくとも約７５％、さらにより好ましく少なくとも約８０％または８５％、さらにより好ましくは少なくとも約９０％、減少させる。結合の競合的阻害を測定するための方法は、当該技術分野で知られており、及び／または本明細書に記載されている。例えば、抗体を、タンパク質の存在下または不在下のいずれかで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤにさらす。抗体の結合が、タンパク質の不在下よりもタンパク質の存在下で少ない場合、タンパク質は抗体の結合を競合的に阻害するものと考えられる。一例では、競合阻害は立体障害によるものではない。

【0224】

２つのエピトープについて「重複する」という用語は、２つのエピトープが、十分な数のアミノ酸残基を共有しており、その結果、１つのエピトープに結合するタンパク質（またはその抗原結合部位）が、もう１のエピトープに結合するタンパク質（または抗原結合部位）の結合を競合的に阻害できるようになっていることを意味すると解されるものである。例えば、「重複する」エピトープは、少なくとも１、または２、または３、または４、または５、または６、または７、または８、または９、または２０のアミノ酸を共有する。

【0225】

本明細書で使用する「半最大阻害濃度（ＩＣ_５０）」という用語は、生物学的プロセスを半分阻害するのに必要な化合物（例えば、本明細書に記載のタンパク質）の濃度を指す。例えば、本明細書に記載のタンパク質の少なくとも約５μｇ／ｍｌは、Ｓタンパク質ＲＢＤのＡＣＥトランスフェクトＶｅｒｏＥ６細胞への結合を半分中和する。

【0226】

本明細書で使用する用語「エピトープ」（同義語「抗原決定基」）は、抗体可変領域を含むタンパク質が結合するＳタンパク質ＲＢＤのある領域を意味すると解されるものである。この用語は、タンパク質が接触する特定の残基または構造に必ずしも限定されるものではない。例えば、この用語には、タンパク質が接触する複数のアミノ酸にわたる領域、及び／または、この領域の外側の５～１０個、２～５個、または１～３個のアミノ酸が含まれる。いくつかの例では、エピトープは、Ｓタンパク質ＲＢＤが折りたたまれたときに互いに近くに位置する一連の不連続なアミノ酸、すなわち「立体構造エピトープ」を含む。また当業者には明らかなとおり、「エピトープ」という用語はペプチドまたはポリペプチドに限定されるものではない。例えば、「エピトープ」という用語には、分子の化学的に活性な表面基、例えば、糖側鎖、ホスホリル側鎖、またはスルホニル側鎖など、が含まれ、特定の例では、特定の三次元構造特性、及び／または特定の電荷特性を有する場合がある。

【0227】

本明細書で使用する「交差反応する」または「交差反応性」という用語は、特定の抗原に対して生じたタンパク質が別の抗原（例えば、抗原の変異型）に対して競合する親和性を有することを意味すると解されるものである。

【0228】

本明細書で使用する「ヌクレオチド配列」または「核酸配列」という用語は、ホスホジエステル骨格に共有結合した一連の連続するヌクレオチド（または塩基）を意味すると解されるものである。

【0229】

本明細書において、呼吸器ウイルス感染症を発症する「リスクを有する」対象は、呼吸器ウイルス感染症の検出可能な症状を有している場合もあれば、有していない場合もあり、また、本開示に従う治療の前に呼吸器ウイルス感染症の検出可能な症状を示している場合もあれば、示していない場合もある。「リスクを有する」は、対象が１つ以上の危険因子を有することを意味し、当該危険因子は、当該技術分野で知られている、及び／または本明細書に記載されているように、呼吸器ウイルス感染症の発症と相関する測定可能なパラメータである。

【0230】

本明細書で使用する「対象」という用語は、ヒトを含む任意の動物、例えば哺乳動物を意味すると解されるものである。例示的な対象には、ヒト及びヒト以外の霊長類が含まれるが、これらに限定されない。一例では、対象はヒトである。

【0231】

本明細書で使用する「治療」、「治療する」、または「治療すること」という用語は、本明細書に記載のタンパク質、抗体、または医薬組成物を投与することにより対象において呼吸器ウイルス感染症の少なくとも１つの症状を軽減または除去することを包含する。

【0232】

本明細書で使用する「予防」、「予防する」、または「予防すること」という用語は、対象における特定の呼吸器ウイルス感染症の発生または再発に関して予防を行うことを包含する。対象は、呼吸器ウイルス感染症にかかりやすいかまたは呼吸器ウイルス感染症を発症するリスクを有するが、まだ呼吸器ウイルス感染症と診断されていないものであり得る。

【0233】

本明細書で使用する「進行を遅らせる」「進行の遅延」という表現は、対象における呼吸器ウイルス感染症の進行及び／または呼吸器ウイルス感染症の少なくとも１つの症状の進行を軽減するかまたは遅らせることを包含する。

【0234】

「有効量」は、必要な投薬量及び期間で所望の結果を達成するのに有効な量以上を指す。例えば、所望の結果は、治療結果または予防結果であり得る。有効量は、１回以上の投与でもたらすことができる。本開示のいくつかの例では、「有効量」という用語は、上記の呼吸器ウイルス感染症の治療に効果を発揮するのに必要な量を意味する。本開示のいくつかの例では、「有効量」という用語は、上記の疾患または病気について変化をもたらすのに必要な量を意味する。有効量は、治療される疾患もしくは病気、または変化する因子に応じて変わり得、さらに、体重、年齢、人種的背景、性別、健康状態、及び／または身体状態、ならびに治療される哺乳動物に関する他の因子に応じて変わり得る。典型的には、有効量は、医師による日常的な治験及び実験を通じて決定できる比較的広い範囲（例えば、「用量」範囲）内に入ることになる。したがって、この用語は、本開示を特定の量（例えば、重量または数）の結合タンパク質に限定するものと解釈すべきものではない。有効量は、単回用量で、または治療期間にわたって１回もしくは数回繰り返される用量で投与することができる。

【0235】

「治療上有効な量」は、特定の疾患または病気の測定可能な改善をもたらすのに必要な最小限の濃度以上である。本明細書において治療上有効な量は、患者の病状、年齢、性別、及び体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する本開示のタンパク質または抗体の能力などの要因に応じて変わり得る。治療上有効な量は、治療上有益な効果が分子の任意の毒性または有害な作用を上回る量でもある。

【0236】

本明細書で使用する「予防上有効な量」という用語は、本明細書に記載の病気または疾患の１つ以上の検出可能な症状の発症を予防しまたは阻害しまたは遅らせるのに十分な本開示の分子の量を意味すると解されるものである。

【0237】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、エンベロープ型のポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスのコロナウイルス科の一種である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２タンパク質は、４つの構造タンパク質、すなわちスパイク（Ｓ）、膜（Ｍ）、ヌクレオカプシド（Ｎ）、エンベロープ（Ｅ）で構成されている。

【0238】

Ｓタンパク質は、標的のアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）受容体を認識し、ウイルスと標的細胞膜の融合を媒介する役割を担っており、これが感染プロセスの鍵と考えられる。Ｓタンパク質は、高度にグリコシル化された大きなＩ型膜貫通タンパク質である。これには、Ｓ１とＳ２の２つのサブユニットが含まれている。Ｓ１サブユニットには、２つの重要なドメインがある。これらは、Ｎ末端ドメイン（ＮＴＤ）として知られるものと、ＡＣＥ２への結合を担う受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）として知られるものである。Ｓ２には、それぞれヘプタッドリピート（ＨＲ）、セントラルヘリックス（ＣＨ）、コネクタドメイン（ＣＤ）と呼ばれる３つのドメインがある。さらに、Ｓ１／Ｓ２にはフューリン切断部位がある。

【0239】

Ｓタンパク質は、融合前と融合後の２つの異なる立体構造を持つホモ三量体としてウイルス表面から突き出ている。ビリオン表面上のＳタンパク質の三量体集合体が、ビリオンに独特の「コロナ」すなわち王冠のような外観を与えている。Ｓタンパク質ＲＢＤのＡＣＥ２への結合は、融合前から融合後への構造変化を引き起こし、その結果、Ｓ１サブユニットとＳ２サブユニットが解離し、Ｓ２サブユニットが非常に安定した融合後の立体構造に変換される。

【0240】

本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤに結合しかつＳタンパク質ＲＢＤのＡＣＥ２への結合を中和するタンパク質を提供する。一例では、該タンパク質は、本明細書に記載の抗体と競合して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ＲＢＤのＡＣＥ２への結合を中和する。

【0241】

抗体可変領域を含むタンパク質
本開示は、Ｓタンパク質ＲＢＤに特異的に結合しかつＳタンパク質のＡＣＥ２への結合を中和する抗体可変領域を含むタンパク質を提供する。

【0242】

本開示はさらに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫応答を誘導するのに十分な立体構造を有する抗原を検出するための当該タンパク質の使用を提供する。

【0243】

抗体
本開示は、例えば本明細書に記載の可変領域を含む抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体を提供する。例えば、本開示は、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和抗体を提供する。例示的な抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和抗体は、６Ｇ６、１９Ｇ２、３０Ｂ８、３９Ｅ７、及び３３Ｅ１０である。

【0244】

一例では、該抗体は組換え抗体である。例えば、抗体またはその可変領域を含むタンパク質は、例えば当該技術分野で知られている、または本明細書に簡単に記載されているような標準的な方法を使用して作製される。

【0245】

モノクローナル抗体は、本開示が意図する例示的な抗体である。「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」または「ＭＡｂ」という用語は、同じ抗原（複数可）に対して、例えば、抗原内の同じエピトープに対して結合可能である均質な抗体集団を指す。この用語は、抗体の供給源や抗体の作製法について限定されるものではない。

【0246】

脱免疫化タンパク質、キメラタンパク質、ヒト化タンパク質、類似ヒト化タンパク質、霊長類化タンパク質、及びヒトタンパク質
本開示のタンパク質は、ヒト化タンパク質であってもよい。

【0247】

「ヒト化タンパク質」という用語は、ヒト抗体からのＦＲに移植または挿入された非ヒト種（例えば、マウスまたはラットまたは非ヒト霊長類）由来の抗体からのＣＤＲを含むヒト様可変領域を含むタンパク質（このタイプの抗体は「ＣＤＲ移植抗体」とも呼ばれる）を指していると解されるものである。ヒト化タンパク質には、ヒトタンパク質の１つ以上の残基が１つ以上のアミノ酸置換によって修飾されている、及び／またはヒトタンパク質の１つ以上のＦＲ残基が対応する非ヒト残基によって置き換えられている、タンパク質も含まれる。また、ヒト化タンパク質は、ヒト抗体にも非ヒト抗体にも存在しない残基を含んでもよい。タンパク質の任意のさらなる領域（例えば、Ｆｃ領域）は通常ヒトのものである。ヒト化は、当該技術分野で知られている方法、例えば、米国特許第５２２５５３９号、米国特許第６０５４２９７号、米国特許第７５６６７７１号、または米国特許第５５８５０８９号の方法を用いて実施することができる。「ヒト化タンパク質」という用語は、例えば、米国特許第７７３２５７８号に記載のスーパーヒト化タンパク質も包含する。

【0248】

本開示のタンパク質は、ヒトタンパク質であってもよい。本明細書で使用される「ヒトタンパク質」という用語は、可変抗体領域と、必要に応じて、定常抗体領域とを有し、それらの領域がヒト（例えば、ヒトの生殖系細胞または体細胞）に存在するものであるかまたはそのような領域を用いて作られるライブラリーに由来するものである、タンパク質を指す。「ヒト」抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基、例えば、ランダム突然変異または部位特異的突然変異によりインビトロで導入される変異（特に、タンパク質の少数の残基、例えば、タンパク質の残基のうち１、２、３、４、または５個の保存的置換または変異を伴う変異）を含むことができる。このような「ヒト抗体」は、必ずしもヒトの免疫応答の結果として生成される必要はない。むしろ、このような「ヒト抗体」は、組換え手段（例えば、ファージディスプレイライブラリーのスクリーニング）を用いて、及び／または、ヒト抗体定常領域及び／またはヒト抗体可変領域をコードする核酸を含むトランスジェニック動物（例えば、マウス）により、及び／または（例えば、米国特許該５５６５３３２号に記載されるように）誘導性選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）を用いて、生成させることができる。この用語は、このような抗体の親和性成熟型の形態も包含する。本開示の目的のため、ヒトタンパク質には、ヒト抗体からのＦＲを含むタンパク質、またはヒトＦＲのコンセンサス配列からの配列を含むＦＲを含むタンパク質であって、ＣＤＲの１つ以上がランダムまたはセミランダムであるもの（例えば、米国特許第６３０００６４号及び／または米国特許第６２４８５１６号に記載されるように）が含まれると考えられる。

【0249】

本開示のタンパク質は、類似ヒト化タンパク質であってもよい。「類似ヒト化タンパク質」という用語は、ＷＯ２００７／０１９６２０に記載の方法により調製されるタンパク質を指す。類似ヒト化タンパク質は、抗体の可変領域を含むものであり、そこにおいて可変領域は、新世界霊長類抗体可変領域からのＦＲと非新世界霊長類抗体可変領域からのＣＤＲとを含むものである。例えば、類似ヒト化タンパク質は、抗体の可変領域を含むものであり、そこにおいて可変領域は、新世界霊長類抗体可変領域からのＦＲとマウス抗体またはラット抗体からのＣＤＲとを含むものである。

【0250】

本開示のタンパク質は、霊長類化タンパク質であってもよい。「霊長類化タンパク質」は、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）の免疫化の後に生成された抗体からの可変領域（複数可）を含む。必要に応じて、非ヒト霊長類抗体の可変領域を、ヒト定常領域に連結して霊長類化抗体を作製する。霊長類化抗体を作製するための例示的な方法は、米国特許第６１１３８９８号に記載されている。

【0251】

一例では、本開示のタンパク質はキメラタンパク質である。「キメラタンパク質」という用語は、タンパク質であって、ある抗原結合ドメインが特定の種（例えば、マウスもしくはラットのようなネズミ科動物）に由来するかまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属するものである一方、その残りの部分が別の種（例えば、ヒトまたは非ヒト霊長類）に由来するかまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属するタンパク質からのものである、タンパク質を指す。一例では、キメラタンパク質は、非ヒト抗体（例えば、ネズミ科動物抗体）からのＶ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌを含むキメラ抗体であり、その抗体の残りの領域はヒト抗体からのものである。このようなキメラタンパク質の作製は当該技術分野で知られており、標準的な手段（例えば、米国特許第６３３１４１５号、米国特許第５８０７７１５号、米国特許第４８１６５６７号、及び米国特許第４８１６３９７号に記載の手段）によって達成することができる。

【0252】

本開示は、例えばＷＯ２０００／３４３１７及びＷＯ２００４／１０８１５８に記載されているような、脱免疫化タンパク質も意図する。脱免疫化抗体及び脱免疫化タンパク質は、１つ以上のエピトープが除かれており、例えば、Ｂ細胞エピトープまたはＴ細胞エピトープが除かれており（すなわち、変異しており）、そのため対象が当該抗体またはタンパク質に対して免疫応答を引き起こす可能性が低くなっている。

【0253】

抗体フラグメント
単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント及び二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ－ｓｃＦｖ）
当業者には明らかなとおり、ｓｃＦｖは、単一のポリペプチド鎖にＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。このポリペプチド鎖は、Ｖ_ＨとＶ_Ｌとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これにより、ｓｃＦｖは、抗原結合のための必要な構造を形成することができる（すなわち、単一ポリペプチド鎖のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌが互いに結合してＦｖを形成する）。例えば、リンカーは１２個以上のアミノ酸残基を含み、（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_３は、ｓｃＦｖにとってより好ましいリンカーの１つである。

【0254】

本開示はまた、ジスルフィド安定化Ｆｖ（すなわちｄｉＦｖまたはｄｓＦＶ）を意図する。ジスルフィド安定化Ｆｖにおいて、単一のシステイン残基が、Ｖ_ＨのＦＲ及びＶ_ＬのＦＲにそれぞれ導入されており、該システイン残基は、ジスルフィド結合によって連結されて安定なＦｖを生成する（例えば、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３を参照のこと）。

【0255】

代替的にまたは追加的に、本開示は、二量体ｓｃＦｖ、すなわち、非共有結合または共有結合によって（例えばロイシンジッパードメイン（例えば、ＦｏｓまたはＪｕｎに由来する）によって）連結された２つのｓｃＦｖ分子を含むタンパク質を提供する（例えば、Ｋｒｕｉｆ ａｎｄ Ｌｏｇｔｅｎｂｅｒｇ，１９９６を参照のこと）。あるいは、２つのｓｃＦｖは、例えば米国特許出願公開第２００６０２６３３６７号に記載されているように、十分な長さのペプチドリンカーにより連結されており、両方のｓｃＦｖの形成及び抗原への結合が可能になっている。

【0256】

ｓｃＦｖのレビューについては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）を参照のこと。

【0257】

ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ
抗体抗原結合ドメインを含む例示的なタンパク質は、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、及びより高次のタンパク質複合体、例えばＷＯ９８／０４４００１及びＷＯ９４／００７９２１に記載のものである。

【0258】

例えば、ダイアボディは、２つの結合したポリペプチド鎖を含むタンパク質であり、ここで各ポリペプチド鎖は構造Ｖ_Ｌ－Ｘ－Ｖ_ＨまたはＶ_Ｈ－Ｘ－Ｖ_Ｌを含み、この構造中、Ｖ_Ｌは、抗体軽鎖可変領域であり、Ｖ_Ｈは、抗体重鎖可変領域であり、Ｘは、単一ポリペプチド鎖内でＶ_Ｈ及びＶ_Ｌを結合させる（またはＦｖを形成する）には不十分な残基を含むリンカーであるか、または存在せず、さらにここで一方のポリペプチド鎖のＶ_Ｈは他方のポリペプチド鎖のＶ_Ｌに結合して抗原結合部位を形成する、すなわち、１つ以上の抗原に特異的に結合可能なＦｖ分子を形成する。Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈは、各ポリペプチド鎖で同じであってもよく、あるいはＶ_Ｌ及びＶ_Ｈは、各ポリペプチド鎖で異なっており二重特異性ダイアボディ（すなわち、異なる特異性を有する２つのＦｖを含む）を形成してもよい。

【0259】

ミニボディ
当業者には明らかなとおり、ミニボディは、抗体のＶ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインが抗体のＣＨ_２ドメイン及び／またはＣＨ_３ドメインに融合されているものである。場合によって、ミニボディは、Ｖ_ＨとＶ_Ｌとの間にヒンジ領域を含み、この立体構造はフレックスミニボディと呼ばれることもある。ミニボディは、Ｃ_Ｈ１やＣ_Ｌを含まない。一例では、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、抗体のヒンジ領域及びＣ_Ｈ３ドメインと融合されている。当該ミニボディの可変領域の少なくとも１つが、本開示の態様でＳタンパク質ＲＢＤに結合する。例示的なミニボディ及びその作製方法は、例えば、ＷＯ９４／０９８１７に記載されている。

【0260】

定常ドメインの融合
本開示は、可変領域及び定常領域またはそれらのドメイン（複数可）（例えば、Ｆｃ、Ｃ_Ｈ２ドメイン、及び／またはＣ_Ｈ３ドメイン）を含むタンパク質を包含する。定常領域及び定常ドメインという用語の意味は、本明細書の開示及び本明細書に示す参考文献に基づき、当業者には明らかである。

【0261】

本開示のタンパク質の作製に有用な定常領域の配列は、複数の異なる供給源から取得することができる。いくつかの例では、タンパク質の定常領域またはその部分は、ヒト抗体に由来する。さらに、定常ドメインまたはその部分は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む任意の抗体クラス、ならびにＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、及びＩｇＧ_４を含む任意の抗体アイソタイプに由来し得る。

【0262】

さまざまな定常領域の遺伝子配列が、公的にアクセス可能な供託物の形態で入手可能であるか、またはその配列が公的に入手可能なデータベースから入手可能である。定常領域としては、特定のエフェクター機能を有するもの（もしくは特定のエフェクター機能が欠如したもの）、または免疫原性を低減するための特定の修飾を伴うものが選択され得る。

【0263】

本開示は、例えば米国特許第７２１７７９７号、米国特許第７２１７７９８号、または米国出願公開第２００９００４１７７０号（半減期が増加したもの）、または米国出願公開第２００５０３７０００号（ＡＤＣＣの増加）に記載されているような、変異型定常領域または変異型定常ドメインを含むタンパク質も意図する。

【0264】

タンパク質の作製
一例では、本開示のタンパク質または抗体は、当該タンパク質を作製するのに十分な条件下で、細胞株を培養することによって（例えば、本明細書に記載されるように、及び／または、当該技術分野で知られているように）作製される。

【0265】

組換え発現
組換えタンパク質の場合、組換えタンパク質をコードする核酸を１つ以上の発現コンストラクト（例えば、発現ベクター（複数可））に入れ、次いでそれ／それらを宿主細胞（例えば、ジスルフィド架橋または結合をもたらし得る細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、酵母細胞、昆虫細胞、または哺乳類細胞）にトランスフェクトする。例示的な哺乳類細胞としては、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または他の場合には免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞が挙げられる。このような目的を達成するための分子クローニング技術は当該技術分野で知られており、例えば、ＡｕｓｕｂｅｌまたはＳａｍｂｒｏｏｋに記載されている。さまざまなクローニング及びインビトロ増幅法が組換え核酸の構築に好適である。組換え抗体を作製する方法も当該技術分野で知られている。例えば、米国特許第４８１６５６７号、米国特許第７９２３２２１号、及び米国特許第７０２２５００号を参照のこと。

【0266】

本開示のタンパク質をコードする核酸は、単離の後、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）のため、または無細胞系もしくは細胞内で発現させるために、発現コンストラクトまたは複製可能なベクター内に挿入される。例えば、核酸は、プロモーターに作動可能に連結される。

【0267】

本明細書で使用される「プロモーター」という用語は、最も広い文脈で解釈するものとし、ゲノム遺伝子の転写制御配列を含むものである。そのような配列には、ＴＡＴＡボックスまたは開始エレメント（的確な転写開始に必要とされる）がある。それは、例えば、発生刺激及び／または外部刺激に応答してあるいは組織特異的態様で核酸の発現を改変する、追加の制御エレメント（例えば、上流活性化配列、転写因子結合部位、エンハンサー、及びサイレンサー）を伴う場合もあれば、伴わない場合もある。また、本文脈において「プロモーター」という用語は、組換え核酸、合成核酸、もしくは融合核酸、または誘導体を示すためにも使用される。そのような組換え核酸、合成核酸、もしくは融合核酸、または誘導体は、プロモーターが作動可能に連結された核酸の発現をもたらし、活性化し、または強化するものである。例示的なプロモーターは、当該核酸の発現をさらに強化し、及び／または、当該核酸の空間的発現及び／または時間的発現を改変するための、１つ以上の特定の制御エレメントのさらなるコピーを含むことができる。

【0268】

本明細書で使用される「作動可能に連結」という用語は、核酸の発現がプロモーターによって制御されるように核酸に対してプロモーターを配置することを意味する。

【0269】

細胞内での発現のために多くのベクターが利用可能である。通常、ベクター構成要素には、シグナル配列、本開示のタンパク質をコードする配列（例えば、本明細書で提供される情報に由来する）、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列の１つ以上が含まれるが、これらに限定されるものではない。タンパク質の発現に好適な配列は、当業者には明らかなものである。例えば、例示的なシグナル配列としては、原核生物分泌シグナル（例えば、ｐｅｌＢ、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐ、もしくは熱安定性エンテロトキシンＩＩ）、酵母分泌シグナル（例えば、インベルターゼリーダー、α因子リーダー、もしくは酸性ホスファターゼリーダー）、または哺乳類分泌シグナル（例えば、単純ヘルペスｇＤシグナル）が挙げられる。

【0270】

例示的なプロモーターとしては、原核生物において活性なプロモーター（例えば、ｐｈｏＡプロモーター、β－ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ならびにハイブリッドプロモーター、例えば、ｔａｃプロモーター）が挙げられる。

【0271】

哺乳類細胞において活性な例示的なプロモーターとしては、サイトメガロウイルス最初期プロモーター（ＣＭＶ－ＩＥ）、ヒト伸長因子１－αプロモーター（ＥＦ１）、小核ＲＮＡプロモーター（Ｕ１ａ及びＵ１ｂ）、α－ミオシン重鎖プロモーター、サルウイルス４０プロモーター（ＳＶ４０）、ラウス肉腫ウイルスプロモーター（ＲＳＶ）、アデノウイルス主要後期プロモーター、β－アクチンプロモーター、ＣＭＶエンハンサー／β－アクチンプロモーターもしくは免疫グロブリンプロモーターまたはその活性断片を含むハイブリッド制御エレメントが挙げられる。有用な哺乳類宿主細胞株の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＵＳＴＲＡＬＩＡＮ ＣＥＬＬ ＢＡＮＫ ＣＲＬ １６５１）、ヒト胚腎臓株（２９３細胞または懸濁培養下での成長のためにサブクローニングされた２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＵＳＴＲＡＬＩＡＮ ＣＥＬＬ ＢＡＮＫ ＣＣＬ １０）、またはチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）である。

【0272】

酵母細胞（例えば、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、及びＳ．ｐｏｍｂｅからなる群より選択される酵母細胞）内での発現に適した典型的なプロモーターとしては、ＡＤＨ１プロモーター、ＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ４プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、ｎｍｔプロモーター、ＲＰＲ１プロモーター、またはＴＥＦ１プロモーターが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0273】

単離された核酸分子またはそのような核酸分子を含む遺伝子コンストラクトを発現のため細胞内に導入する手段は、当業者に知られている。所定の細胞に使用する技法は、好結果を収めている既知の技法に依存する。組換えＤＮＡを細胞内に導入するための手段としては、マイクロインジェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介のトランスフェクション、例えば、リポフェクタミン（Ｇｉｂｃｏ、ＭＤ、ＵＳＡ）及び／またはセルフェクチン（Ｇｉｂｃｏ、ＭＤ、ＵＳＡ）の使用によるリポソーム媒介のトランスフェクション、ＰＥＧ媒介のＤＮＡ取込み、エレクトロポレーション、ウイルス形質導入（例えば、レンチウイルスを用いる形質導入）、ならびに微粒子衝撃（例えば、とりわけ、ＤＮＡでコーティングされたタングステン粒子または金粒子（Ａｇｒａｃｅｔｕｓ Ｉｎｃ．，ＷＩ，ＵＳＡ）の使用による微粒子衝撃）が挙げられる。

【0274】

本開示のタンパク質の作製に使用される宿主細胞は、使用する細胞タイプに応じてさまざまな培地で培養され得る。市販の培地、例えば、Ｈａｍ’ｓ Ｆｌ０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭｌ－１６４０（Ｓｉｇｍａ））、及びダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）などは、哺乳類細胞の培養に好適である。本明細書で言及される他の細胞タイプを培養するための培地は、当該技術分野で知られている。

【0275】

タンパク質の単離
本開示のタンパク質または抗体は、単離、精製することができる。

【0276】

本開示のタンパク質または抗体を精製するための方法は、当該技術分野で知られており、及び／または本明細書に記載されている。

【0277】

組換え技法を使用する場合、本開示のタンパク質または抗体は、細胞内または細胞周辺腔で産生させることができ、あるいは、培地中に直接分泌させることができる。タンパク質を細胞内で産生させる場合、第１のステップとして、微粒子状デブリである宿主細胞または溶解断片を、例えば、遠心分離または限外濾過により除去する。タンパク質を培地中に分泌させる場合、最初に、このような発現系からの上清を市販のタンパク質濃縮フィルター（例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニット）を使用して濃縮することができる。タンパク質分解を阻害するためにＰＭＳＦのようなプロテアーゼ阻害物質が前述のステップのうちのいずれかに含まれていてもよく、さらに外来性汚染微生物の増殖を防止するために抗生物質が含まれていてもよい。

【0278】

細胞から調製されるタンパク質を、例えば、イオン交換、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、親和性クロマトグラフィー（例えば、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーもしくはプロテインＧクロマトグラフィー）、または以上の任意の組合せにより精製することができる。これらの方法は当該技術分野で知られており、例えば、ＷＯ９９／５７１３４またはＺｏｌａ（１９９７）に記載されている。

【0279】

また、当業者には明らかなとおり、本開示のタンパク質を修飾して、精製または検出を容易にするためのタグ、例えば、ポリヒスチジンタグ、例えば、ヘキサヒスチジンタグ、またはインフルエンザウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）タグ、またはサルウイルス５型（Ｖ５）タグ、またはＦＬＡＧタグ、またはグルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグを含むようにしてもよい。例えば、該タグはヘキサ－ｈｉｓタグである。次いで、得られたタンパク質を、当該技術分野で知られている方法、例えば、親和性精製により精製する。例えば、ヘキサ－ｈｉｓタグを含むタンパク質を精製するため、当該タンパク質を含む試料を、固体または半固体支持体上に固定したヘキサ－ｈｉｓタグと特異的に結合するニッケル－ニトリロ三酢酸（Ｎｉ－ＮＴＡ）に接触させ、試料を洗浄して非結合タンパク質を除去し、次いで結合タンパク質を溶離させる。代替的または追加的に、タグに結合するリガンドまたは抗体を、親和性精製法で使用する。

【0280】

複合体（コンジュゲート）
本開示はまた、任意の例に従う本明細書に記載のタンパク質の複合体（コンジュゲート）を提供する。例えば、抗体可変領域を含むタンパク質は、検出可能な標識、治療化合物、コロイド、毒素、核酸、ペプチド、タンパク質、対象における本タンパク質の半減期を増加させる化合物、及びこれらの混合物と複合体化される。

【0281】

本明細書で使用する「複合体」または「複合体化」という用語は、間接的結合及び直接的結合の両方を包含すると解されるものである。例えば、直接的な複合体化には、化学結合があり、これは、非共有結合、または共有結合、または遺伝的結合（「融合」とも呼ばれる）であり得る。一例では、複合体化は共有結合、例えばジスルフィド結合である。

【0282】

本明細書で使用する「検出可能な標識」とは、分子タグもしくは原子タグまたは分子マーカーもしくは原子マーカーであって、視覚的にまたは適切な検出器を使用することによって検出できる光学的シグナルもしくは光学的生成物または他のシグナルまたは生成物を生成するかまたは生成するように誘導できるタグまたはマーカーをいう。検出可能な標識は、当該技術分野で周知であり、例えば放射性標識、酵素標識、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識、補欠分子族、造影剤、及び超音波剤を含む。

【0283】

一例では、任意の例による本明細書に記載のタンパク質は、別のタンパク質と複合体化または連結される。そのような別のタンパク質は、本開示の別のタンパク質または抗体可変領域を含むタンパク質（例えば、抗体またはそれに由来するタンパク質（例えば、本明細書に記載の通り））を含むものである。その他のタンパク質も排除されるものではない。その他のタンパク質は、当業者には明らかであり、例えば、免疫調節剤、または半減期延長タンパク質、またはとりわけ血清アルブミンに結合するペプチドまたは他のタンパク質を含む。

【0284】

例示的な血清アルブミン結合ペプチドまたはタンパク質は、米国出願公開第２００６０２２８３６４号または米国出願公開第２００８０２６０７５７号に記載されている。

【0285】

本開示のタンパク質を修飾して、当該技術分野で知られており容易に入手可能なさらなる非タンパク質部分を含むものとすることができる。例えば、タンパク質の誘導体化に好適な部分は、生理学的に許容されるポリマー、例えば、水溶性ポリマーである。このようなポリマーは、安定性の増加及び／またはクリアランスの低減（例えば、腎臓による）及び／または本開示のタンパク質の免疫原性の低減に有用である。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、以下に限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、またはポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）が挙げられる。

【0286】

一例では、任意の例に従う本明細書に記載のタンパク質は、検出及び／または単離を容易にするための１つ以上の検出可能なマーカーを含む。例えば、そのような化合物には、蛍光標識、例えば、フルオレセイン（ＦＩＴＣ）、５，６－カルボキシメチルフルオレセイン、テキサスレッド、ニトロベンズ－２－オキサ－１，３－ジアゾール－４－イル（ＮＢＤ）、クマリン、塩化ダンシル、ローダミン、４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ）、ならびにシアニン色素Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、及びＣｙ７、フルオレセイン（５－カルボキシフルオセイン－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）、ローダミン（５，６－テトラメチルローダミン）がある。これらの蛍光物質における吸収及び発光の最大値は、それぞれ以下の通りである。ＦＩＴＣ（４９０ｎｍ、５２０ｎｍ）、Ｃｙ３（５５４ｎｍ、５６８ｎｍ）、Ｃｙ３．５（５８１ｎｍ、５８８ｎｍ）、Ｃｙ５（６５２ｎｍ、６７２ｎｍ）、Ｃｙ５．５（６８２ｎｍ、７０３ｎｍ）、及びＣｙ７（７５５ｎｍ、７７８ｎｍ）。

【0287】

代替的または追加的に、任意の例に従う本明細書に記載のタンパク質は、例えば、蛍光半導体ナノ結晶（例えば、米国特許第６，３０６，６１０号に記載のもの）で標識される。

【0288】

代替的または追加的に、タンパク質は、磁性化合物または常磁性化合物で標識される（例えば、鉄、鋼、ニッケル、コバルト、希土類材料、ネオジム－鉄－ホウ素、二価鉄－クロム－コバルト、ニッケル－二価鉄、コバルト－白金、またはストロンチウムフェライトなどで標識される）。

【0289】

本開示のタンパク質のアッセイ
本開示のタンパク質は、当該技術分野で公知の方法及び／または以下に記載する方法を使用して、物理的及び生物学的活性及び／または安定性について容易にスクリーニングされる。

【0290】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤへの結合
本開示から当業者には明らかなとおり、本開示のタンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤに結合する（または特異的に結合する）。タンパク質への結合を評価するための方法は、当該技術分野において知られており、例えばＳｃｏｐｅｓ（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，１９９４参照）に記載されている。このような方法には通常、タンパク質を標識し、それを固定化化合物と接触させることが含まれる。洗浄して非特異的結合タンパク質を除去した後、標識の量、そして結果として結合タンパク質を検出する。もちろん、タンパク質を固定化し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のＲＢＤに結合する化合物を標識することもできる。パニング型アッセイも使用することができる。代替的または追加的に、表面プラズモン共鳴アッセイを使用することもできる。

【0291】

上記のアッセイは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のＲＢＤに対する本開示のタンパク質の結合レベルを検出するために使用することもできる。結合レベルを検出する方法は、当業者には明らかであり、及び／または本明細書に記載されている。例えば、結合レベルはバイオセンサーを使用して測定される。

【0292】

中和アッセイ
本開示のタンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤに結合しかつＳタンパク質ＲＢＤのＡＣＥ２への結合を中和するその能力についてインビトロでスクリーニングすることができる。適切なアッセイは、当業者には明らかであり、例えば、ベロマイクロ中和アッセイ、ｓＶＮＴアッセイ、またはシュードウイルス中和アッセイ（例えば、ＨＥＫ－２９３Ｔ細胞またはＨｅｌａ－ＡＣＥ２細胞を使用）を含む。

【0293】

一例では、中和アッセイはベロマイクロ中和アッセイである。簡単に説明すると、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２野生型ウイルスをベロ細胞（すなわち、アフリカミドリザルから抽出した腎臓上皮細胞から単離したベロ系統）で継代する。試験タンパク質の２倍段階希釈物を１００ＴＣＩＤ_５０（すなわち組織培養感染量の中央値）のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２と１時間インキュベートし、ベロ細胞で残存ウイルス感染価を評価する。ウイルスの細胞変性効果を、例えば５日目に読み取る。中和抗体力価を、上述したようなＲｅｅｄ／Ｍｕｅｎｃｈ法を使用して算出する（Ｈｏｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６、Ｓｕｂｂａｒａｏ ｅｔ ａｌ ２００４）。

【0294】

一例では、中和アッセイはサロゲート中和試験（ｓＶＮＴ）である。簡単に言うと、プレートのウェルを、炭酸塩－重炭酸塩コーティング緩衝液（例えば、ｐＨ９．６）中のｈＡＣＥ２タンパク質でコーティングする。試験タンパク質とプレインキュベートしたＨＲＰ結合ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－ＲＢＤ及びＨＲＰ結合ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を、異なる濃度でｈＡＣＥ２に添加し、例えば室温で１時間インキュベートする。未結合のＨＲＰ結合抗原を洗浄によって除去する。比色シグナルは、ＨＲＰと発色基質（例えば、３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ））との酵素反応で発生する。一例では、４５０ｎｍ及び５７０ｎｍで吸光度を読み取る。

【0295】

一例では、中和はシュードウイルス中和アッセイである。簡単に説明すると、ＳＡＲＳ－２－ＣＯＶ－２スパイクプラスミドをウイルスバックボーンプラスミド（例えばｐＤＲ－ＮＬΔｅｎｖＦＬＵＣ）とともに例えばＨＥＫ－２９３Ｔ細胞に同時トランスフェクションすることによって、ＳＡＲＳ－２－スパイクタンパク質でシュードタイプ化されたＨＩＶレポーターウイルスを作製する。トランスフェクション後にシュードウイルスを回収し、濾過によって清澄化する。相対ルシフェラーゼ単位感染量（ＲＬＵ）としてレポートされるウイルスストック力価を、ウイルス感染の読み取り値としてルシフェラーゼ活性を測定するＨｅｌａ－ｈＡＣＥ２細胞の限界希釈感染によって算出する。

【0296】

競争的結合の測定
抗体６Ｇ６、１９Ｇ２、３０Ｂ８、３９Ｅ７、及び／または３０Ｅ１０（または本明細書に記載の任意の他の抗体）の結合を競合的に阻害するタンパク質を決定するためのアッセイは、当業者には明らかである。例えば、６Ｇ６、１９Ｇ２、３０Ｂ８、３９Ｅ７、または３０Ｅ１０を、検出可能な標識、例えば、蛍光標識または放射性標識と複合体化させる。次いで、標識された抗体及び試験タンパク質を混合し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤまたはその領域、あるいはそれを発現する細胞と接触させる。次いで、標識された６Ｇ６、１９Ｇ２、３０Ｂ８、３９Ｅ７、または３０Ｅ１０のレベルを測定し、タンパク質の非存在下で標識抗体をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ、領域、または細胞と接触させたときに測定したレベルと比較する。標識された６Ｇ６、１９Ｇ２、３０Ｂ８、３９Ｅ７、または３０Ｅ１０のレベルが、試験タンパク質の非存在下と比較して、試験タンパク質の存在下で低下している場合、そのタンパク質は、６Ｇ６、１９Ｇ２、３０Ｂ８、３９Ｅ７、または３０Ｅ１０がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のＲＢＤまたはその領域に結合するのを競合的に阻害していると考えられる。

【0297】

必要に応じて、試験タンパク質を、６Ｇ６、１９Ｇ２、３０Ｂ８、３９Ｅ７、または３０Ｅ１０と異なる標識と複合体化する。このような代替標識により、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ、またはその領域、または細胞への試験タンパク質の結合レベルを検出することができる。

【0298】

別の例では、タンパク質を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ、またはその領域、またはそれを発現する細胞に結合できるようにした後、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤ、またはその領域、またはそれを発現する細胞を６Ｇ６、１９Ｇ２、３０Ｂ８、３９Ｅ７、または３０Ｅ１０と接触させる。タンパク質の非存在下と比較して、タンパク質の存在下で結合される６Ｇ６、１９Ｇ２、３０Ｂ８、３９Ｅ７、または３０Ｅ１０の量が減少すれば、タンパク質が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のＲＢＤへの６Ｇ６、１９Ｇ２、３０Ｂ８、３９Ｅ７、または３０Ｅ１０の結合を競合的に阻害していることがわかる。標識タンパク質を使用し、まず６Ｇ６、１９Ｇ２、３０Ｂ８、３９Ｅ７、または３０Ｅ１０をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のＲＢＤに結合させることで、相互アッセイを実行することもできる。この場合、６Ｇ６、１９Ｇ２、３０Ｂ８、３９Ｅ７、または３０Ｅ１０の非存在下と比較して、６Ｇ６、１９Ｇ２、３０Ｂ８、３９Ｅ７、または３０Ｅ１０の存在下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤに結合する標識タンパク質の量が減少すれば、このタンパク質が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤへの６Ｇ６、１９Ｇ２、３０Ｂ８、３９Ｅ７、または３０Ｅ１０の結合を競合的に阻害していることがわかる。

【0299】

タンパク質のエピトープマッピング
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤの１つ以上のエピトープに対する本明細書に開示されるタンパク質の結合部位を決定するためのアッセイは、当業者には明らかである。一例では、タンパク質を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤの直線状エピトープに結合させることができる。例えば、本明細書に記載のタンパク質をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質のエピトープと接触させ、結合を特定のアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロッティング、Ｘ線結晶構造解析、３Ｄ電子顕微鏡法、液体クロマトグラフィ－質量分析）によって測定する。一例では、アッセイはＸ線結晶構造解析である。

【0300】

タンパク質、抗体、または医薬製剤の用途
本明細書で論じられるように、本開示は、対象において呼吸器ウイルス感染症を治療し、呼吸器ウイルス感染症を予防し、及び／または呼吸器ウイルス感染症の進行を遅らせる方法であって、対象にタンパク質、抗体、または医薬製剤を投与することを含む方法を提供する。

【0301】

一例では、タンパク質、抗体、または医薬製剤は、対象における呼吸器ウイルス感染症及び／またはその症状の重症度を軽減する量で対象に投与される。

【0302】

一例では、呼吸器ウイルス感染症は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、及びＡＲＤＳ、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0303】

一例では、呼吸器ウイルス感染症はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症である。

【0304】

一例では、呼吸器ウイルス感染症はＣＯＶＩＤ－１９である。

【0305】

一例では、呼吸器ウイルス感染症はＡＲＤＳである。

【0306】

一例では、対象は呼吸器ウイルス感染症を患っている（すなわち、治療を必要としている）。

【0307】

一例では、対象は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、ＡＲＤＳ、またはそれらの組み合わせを患っている。

【0308】

一例では、本方法は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、ＡＲＤＳ、またはそれらの組み合わせに罹患している対象を特定することをさらに含む。そのような対象を特定する方法は、当業者には明らかであり、及び／または本明細書に記載されている。

【0309】

一例では、対象は呼吸器ウイルス感染症を発症するリスクを有する。例えば、対象は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、ＡＲＤＳ、またはそれらの組み合わせを発症するリスクを有する。例えば、対象はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を発症するリスクを有する。例えば、対象はＣＯＶＩＤ－１９を発症するリスクを有する。例えば、対象はＡＲＤＳを発症するリスクを有する。

【0310】

対照集団よりも呼吸器ウイルス感染症を発症するリスクが高い対象者は、リスクを有することになる。対照集団は、呼吸器ウイルス感染症に罹患していないかまたは呼吸器ウイルス感染症の家族歴を有する一般集団（例えば、年齢、性別、人種、及び／または民族が一致する）から無作為に選択された１人以上の対象を含み得る。呼吸器ウイルス感染症に関連する「危険因子」がその対象に関連していることが判明した場合、その対象は補体媒介性疾患のリスクを有するとみなすことができる。危険因子には、例えば対象の集団に関する統計的研究または疫学研究を通じて特定の呼吸器ウイルス感染症に関連するあらゆる活動、形質、事象、または特性が含まれる。したがって、潜在的な危険因子を特定する研究に対象が具体的に含まれていない場合でも、対象は、呼吸器ウイルス感染症のリスクを有すると分類できる。

【0311】

一例では、本開示の方法は、呼吸器ウイルス感染症（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、ＡＲＤＳ、またはそれらの組み合わせ）のあらゆる症状を軽減する。

【0312】

当業者には明らかなように、対象における呼吸器ウイルス感染症の症状の「軽減」は、同様に呼吸器ウイルス感染症を患っているが本明細書に記載の方法による治療を受けていない別の対象と相対的なものである。これは、必ずしも２つの対象を並べて比較することを必要とするものではない。むしろ集団データに依存し得る。例えば、本明細書に記載の方法による治療を受けていない呼吸器ウイルス感染症に罹患している対象の集団（必要に応じて、治療された対象と類似の対象の集団（例えば、年齢、体重、人種））を評価し、その平均値を、本明細書に記載の方法で治療された対象または対象集団の結果と比較する。

【0313】

一例では、本開示の任意の例にしたがって本明細書に記載の方法を実施すると、臨床応答の増強及び／または疾患進行の遅延がもたらされる。

【0314】

「臨床応答」とは、病気の症状の改善を意味する。臨床応答は、特定の時間枠内、例えば、治療の開始からまたは最初の投与から約８週間以内または約８週間で達成され得る。臨床応答は、２４週間超、または４８週間以上などの一定期間、持続することもある。

【0315】

コロナウイルス病２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）
本開示は、例えば、ＣＯＶＩＤ－１９を治療し、ＣＯＶＩＤ－１９を予防し、及び／またはＣＯＶＩＤ－１９の進行を遅らせる方法を提供する。

【0316】

ＣＯＶＩＤ－１９は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされる感染症である。ＣＯＶＩＤ－１９は、２０１９年１２月に中国湖北省武漢で初めて確認され、進行中のパンデミックに至っている。一般的な症状には、発熱、咳、倦怠感、息切れ、嗅覚と味覚の喪失などがある。大部分の症例は軽度の症状で終わるが、一部の症例はＡＲＤＳに進行する。暴露から症状の発生までの時間は、通常約５日であるが、２日から１４日にわたることがある。現在、ＣＯＶＩＤ－１９に対するワクチンや特定の抗ウイルス治療法はなく、対処には、症状の治療、対症療法、隔離、及び実験的措置が含まれる。

【0317】

したがって、いくつかの例では、対象はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症に罹患している。一例では、対象は、ＣＯＶＩＤ－１９、例えば、重度のＣＯＶＩＤ－１９に罹患している。特に、重度のＣＯＶＩＤ－１９は、ＡＲＤＳを引き起こすことがよくある。本開示の方法は、重度のＣＯＶＩＤ－１９に罹患している対象においてＡＲＤＳを治療または予防するために使用することができる。

【0318】

急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）
本開示は、例えば、対象においてＡＲＤＳを治療し、ＡＲＤＳを予防し、及び／またはＡＲＤＳの進行を遅らせる方法を提供する。

【0319】

ＡＲＤＳは、生命にかかわる疾患であり、両側性肺浸潤、重度の低酸素血症、肺胞毛細管膜関門の破壊（すなわち肺血管漏出）を特徴とし、非心原性肺水腫を引き起こす。現在、効果的な薬物療法はない。

【0320】

インフルエンザやコロナウイルス感染症などの感染性の病因が、ＡＲＤＳの主な原因である。したがって、本開示の一例では、ＡＲＤＳはインフルエンザまたはコロナウイルス感染症に関連する。例えば、ＡＲＤＳはインフルエンザに関連する。別の例では、ＡＲＤＳは、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ感染症などのコロナウイルス感染症に関連する。一例では、ＡＲＤＳはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症に関連する。

【0321】

ＡＲＤＳは、ベルリン定義にしたがって分類されており、次のものを含む。

【0322】

（１）臨床的発作または呼吸器症状の発症から１週間以内の症状、
（２）急性低酸素性呼吸不全（少なくとも５ｃｍの持続気道陽圧（ＣＰＡＰ）または呼気終末陽圧（ＰＥＥＰ）で３００ｍｍＨｇ以下のＰａＯ２／ＦｉＯ２比によって判定される。ここで、ＰａＯ２は動脈内の酸素分圧であり、ＦｉＯ２は吸入酸素の割合である）、
（３）浸出、硬化、または無気肺によって十分に説明されない肺のＸ線写真上の両側陰影、及び
（４）心不全または体液過剰によって十分に説明されない浮腫／呼吸不全。

【0323】

一例では、対象は、ＡＲＤＳを有するかまたはＡＲＤＳに罹患している（すなわち、対象はＡＲＤＳのベルリン定義を満たしている）。例えば、対象は処置を必要としている（すなわち、治療、予防、及び／または進行遅延を必要としている）。

【0324】

一例では、対象は、ＡＲＤＳに関連する症状を有するか、またはＡＲＤＳに関連する症状を患っている。ＡＲＤＳに関連する症状及びＡＲＤＳを発症するリスクを有する対象を特定する方法は、当業者には明らかであり、及び／または本明細書に記載されている。例えば、対象には次の症状が１つ以上またはすべて存在する。

【0325】

（ａ）毎分３０回を超える呼吸頻度、
（ｂ）室内空気の酸素飽和度（ＳｐＯ_２）が９３％以下、
（ｃ）動脈血酸素分圧と吸気酸素分圧との比（ＰａＯ_２／ＦｉＯ_２）が３００ｍｍＨｇ未満、
（ｄ）ＳｐＯ_２／ＦｉＯ_２比が２１８未満、及び
（ｅ）５０％を超えるＸ線撮影による肺浸潤。

【0326】

現在、ＡＲＤＳは、軽度、中等度、または重度に分類されており、この順に死亡率が増加していく。ＡＲＤＳの重症度は、ベルリン定義にしたがって次のように分類できる。

【0327】

（ａ）軽度のＡＲＤＳ：少なくとも５ｃｍのＣＰＡＰまたはＰＥＥＰで２００～３００ｍｍＨｇのＰａＯ_２／ＦｉＯ_２、
（ｂ）中等度のＡＲＤＳ：少なくとも５ｃｍのＰＥＥＰで１００～２００ｍｍＨｇのＰａＯ_２／ＦｉＯ_２、そして
（ｃ）重度のＡＲＤＳ：少なくとも５ｃｍのＰＥＥＰで１００ｍｍＨｇ以下のＰａＯ_２／ＦｉＯ_２。

【0328】

一例では、ＡＲＤＳは軽度のＡＲＤＳである。別の例では、ＡＲＤＳは中等度のＡＲＤＳである。さらなる例では、ＡＲＤＳは重度のＡＲＤＳである。

【0329】

本方法は、既存のＡＲＤＳの治療に加えて、ＡＲＤＳの発症を予防するためにも使用できる。したがって、一例では、対象はＡＲＤＳを患っていない。

【0330】

医薬組成物
本開示のタンパク質及び抗体（有効成分と同義）は、予防的治療または療法的治療のために、非経口投与、局所投与、経口投与、もしくは局在的投与、エアロゾル投与、または経皮投与用の医薬組成物に製剤化するのに有用である。医薬組成物は、投与方法に応じてさまざまな単位剤形で投与され得る。例えば、経口投与に好適な単位剤形としては、粉末、錠剤、ピル、カプセル、及びロゼンジが挙げられる。

【0331】

本開示の医薬組成物は、非経口投与、例えば、静脈内投与、または皮下投与、または体腔もしくは器官もしくは関節の内腔への投与に有用である。投与のための組成物は、通常、薬学的に許容される担体、例えば、水性担体に溶解した本開示のタンパク質または抗体の溶液を含む。さまざまな水性担体、例えば、緩衝生理食塩水などを使用することができる。組成物は、必要に応じて生理的条件に近づけるための薬学的に許容される担体、例えば、ｐＨ調整剤、緩衝剤、及び毒性調整剤など、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含んでもよい。このような製剤における本開示のタンパク質または抗体の濃度は、広く変動し得、選択する特定の投与様式及び患者のニーズに応じて、主に体液の体積、粘度、体重などに基づき選択される。例示的な担体としては、水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンが挙げられる。混合油及びオレイン酸エチルのような非水性媒体も使用することができる。リポソームも担体として使用することができる。媒体は、等張性及び化学的安定性を強化する少量の添加剤、例えば、緩衝剤及び保存料を含んでもよい。

【0332】

本開示のタンパク質または抗体は、非経口投与用に製剤化することができ、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、経皮、またはその他のこのような経路を介する注入用（腫瘍もしくは疾患部位内への蠕動投与及び直接的点滴注入（腔内投与）を含む）に製剤化することができる。有効成分として本開示の化合物を含む水性組成物の調製は、当業者に知られている。

【0333】

本開示に従う好適な医薬組成物は、通常、ある量の本開示のタンパク質または抗体と、それと混合された許容される医薬担体（例えば、無菌水性溶液）とを含み、意図される用途に応じて、ある範囲の最終濃度をもたらすものである。調製の技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ Ｅｄ．Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９８０に例示されるように、当該技術分野で広く知られている。

【0334】

投薬量及び投与
製剤化の後、本開示のタンパク質及び抗体は、用量の処方に適合した態様でかつ治療的／予防的に有効であるような量で投与される。

【0335】

用量は、有害な副作用を引き起こすほど多量であってはならない。一般的に、用量は、年齢、状態、性別、患者における疾患の程度によって変わってくるが、当業者によって決定することができる。用量は、何らかの合併症の場合、個々の医師により調整され得る。

【0336】

用量は、１日１回以上の投与を１日または数日間行う場合、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約３００ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．２ｍｇ／ｋｇ～約２００ｍｇ／ｋｇ、例えば約０．５ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの範囲で変動し得る。

【0337】

いくつかの例では、タンパク質または抗体は、その後の（維持用量）よりも高い初回（または負荷）用量で投与される。例えば、タンパク質または抗体は、約１ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇの間の初回用量で投与される。その後、タンパク質または抗体は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの間の維持用量で投与される。維持用量は、７～３５日ごと、例えば１４日ごと、２１日ごと、または２８日ごとに投与することができる。

【0338】

いくつかの例では、用量漸増レジメンが使用され、その場合、タンパク質または抗体は、その後の用量で使用されるよりも低い用量で最初に投与される。この投与レジメンは、対象が最初有害事象を患っている場合に役立つ。

【0339】

対象が治療に十分に反応していない場合、１週間に複数回投与してもよい。代替的また追加的に、用量を増加させて投与してもよい。

【0340】

対象は、タンパク質及び／または抗体の１回より多い投与または一連の投与によって再治療してもよく、例えば少なくとも約２回のタンパク質及び／または抗体の投与、例えば約２～６０回の投与、より具体的には約２～４０回の投与、最も具体的には約２～２０回の投与によって再治療してもよい。

【0341】

別の例では、所定の間隔で任意の再治療を行ってもよい。例えば、その後の投与は、例えば、約２４～２８週間または４８～５６週間またはそれ以上など、さまざまな間隔で行うことができる。例えば、各投与は、約２４～２６週間、または約３８～４２週間、または約５０～５４週間ごとの間隔で行われる。

【0342】

キット
本開示の別の例は、上記のように呼吸器ウイルス感染症を治療し、呼吸器ウイルス感染症を予防し、及び／または呼吸器ウイルス感染症の進行を遅らせるのに有用な本開示のタンパク質を含むキットを提供する。

【0343】

一例では、キットは、（ａ）タンパク質を、必要に応じてデリバリーシステム及び／または薬学的に許容される担体もしくは希釈剤中に、含む容器と、（ｂ）対象において呼吸器ウイルス感染症（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、及び／またはＡＲＤＳ）を治療し、予防し、及び／またはその進行を遅らせるための説明が示された添付文書と、を含む。

【0344】

本開示のこの例によれば、添付文書は、容器上にあるかまたは容器に付随するものである。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどのさまざまな材料から形成してもよい。容器は、本開示の病気または疾患に有効な組成物を保持するかまたは含んでおり、滅菌取り出し口を有してもよい（例えば、容器は、静注溶液バッグ、または皮下注射針によって穿刺可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、タンパク質である。ラベルまたは添付文書は、組成物が、治療に適格な対象（例えば、呼吸器ウイルス感染症（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症、ＣＯＶＩＤ－１９、またはＡＲＤＳ）を有するかまたは発症しやすい対象）を、投与量と治療の間隔についての特定のガイダンス及び提供されるその他の薬剤についての特定のガイダンスに従って治療するために使用されるものであることを示している。キットは、薬学的に許容される希釈緩衝液を含む別の容器をさらに含んでもよい。そのような希釈緩衝液は、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸塩緩衝生理食塩水、リンゲル溶液、及び／またはデキストロース溶液などである。キットは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的に及びユーザの立場から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。

【0345】

本開示の別の一例は、本明細書に記載される任意の方法（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫応答を誘導するのに十分な立体構造を有する抗原の検出）において使用するための、本開示のタンパク質または抗体を含むキットを提供する。

【0346】

一例では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して免疫応答を誘導するのに十分な立体構造を有する抗原を検出するためのタンパク質または抗体のキットまたはパネルは、本明細書に記載される１つ以上のタンパク質または抗体を含む。一例では、抗原は、タンパク質、ペプチド、弱毒化ウイルス、またはウイルス様粒子である。

【0347】

本開示には、以下の非限定的な実施例が含まれる。

【実施例】

【0348】

実施例１：モノクローナル抗体の開発
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤに対するモノクローナル抗体を、１０μｇのＨＥＫ２９３ ＳＡＲＳ－Ｃ０Ｖ２ Ｓタンパク質（Ｓ１サブユニット、Ｈｉｓタグ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ））とそれに等容量の完全フロイントアジュバントとの混合物でＢａｌｂ／ｃマウスを免疫することにより作製した。膝窩リンパ節をＢａｌｂ／ｃ免疫マウスから採取し、上述したようにリンパ球を融合かつ選択し（Ｐｉｅｔｒｚｙｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ ２００２）、ハイブリドーマ細胞株を生成させた。ハイブリドーマ細胞をクローン化し、４μｇ／ｍｌのＳＡＲＳ－Ｃ０Ｖ２スパイクタンパク質（Ｓ１サブユニット、ＲＢＤ Ｈｉｓタグ（バキュロウイルスで発現（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ））を使用して、固相ＥＬＩＳＡによりスクリーニングした。抗体結合を、ＨＲＰヤギ抗マウスＩｇＧ（ガンマ）とそれに続くクロマトグラフィー変換により検出した。反応性の確認は、その後の固相ＥＬＩＳＡを使用した２０１９ｎＣｏＶ Ｓタンパク質ＲＢＤ、Ｆｃタグ（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）による抗体分泌ハイブリドーマのスクリーニングにより行った。各クローン化モノクローナル抗体のアイソタイプ（重鎖／軽鎖）を、製造元の説明書に従いＲｏｃｈｅ ＩｓｏＳｔｒｉｐマウスモノクローナル抗体アイソタイピングキット（Ｍｅｒｃｋ １１４９３０２７００１）を使用して決定した。

【0349】

合計３４個の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質モノクローナル抗体をＥＬＩＳＡによって特定した。モノクローナル抗体クローン３０Ｂ８及び６Ｇ６を使用し、固相ＥＬＩＳＡにおいて、酵母及び大腸菌（これらは異なるグリコシル化プロファイルを有する）で発現されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤに結合する能力をさらに測定した。モノクローナル抗体３０Ｂ８及び６Ｇ６は、大腸菌で発現されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤに対して反応性がないか反応性が弱かったが、酵母で発現されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤに対しては中程度の反応性を示した。

【0350】

これらの結果は、大腸菌で発現されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤは哺乳動物の発現系を反映するタンパク質構造を持たないことを示唆する。酵母で発現されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２Ｓタンパク質ＲＢＤは、モノクローナル抗体３０Ｂ８及び６Ｇ６に結合するが、三量体の形態ではないと考えられる。というのも、３０Ｂ８捕捉／検出ＥＬＩＳＡは陰性であった一方、３０Ｂ８捕捉及び６Ｇ６検出ＥＬＩＳＡは陽性であったからである。

【0351】

実施例２：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のインビトロ中和アッセイ
実施例１に記載の方法により作製しかつ特定した３４種の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体の中和能力を測定するために、以下の３つの異なるウイルス中和アッセイを実施した。（１）ベロマイクロ中和、（２）シュードウイルス中和、及び（３）ｓＶＮＴ（サロゲートウイルス中和試験）。結果を下の表１にまとめる。

【0352】

シュードウイルスアッセイの使用は、細胞へのウイルス侵入を防ぐ抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体の能力を実証するためであり、一方、ベロ中和アッセイ（上記）の使用は、細胞へのウイルスの侵入を中和しさらにウイルスの複製を防ぐ抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶモノクローナル抗体の能力を実証するためである。中和スクリーニングの結果、多くの抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体候補が、ｓＶＮＴアッセイにおいてＲＢＤのＡＣＥ２への結合を立体的に妨害できることがわかり、一方、他のアッセイにおいてはシュードウイルスの侵入及び／または野生型ウイルスの侵入及び複製を阻害できないことがわかった。抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体候補は、３つのアッセイのうちの少なくとも１つ以上で中和能力を示した（表１）。

【0353】

【表1】

【0354】

ベロマイクロ中和アッセイ
野生型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスは、ベロ細胞内で複数回の複製を行うことができる。そこで、実施例１に記載の方法により作製しかつ特定した３４種の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体のウイルス複製阻止能力を試験した。

【0355】

抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体の２倍段階希釈物を１００ＴＣＩＤ_５０のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２分離株ＣｏＶ／Ａｕｓｔｒａｌｉａ／ＶＩＶＣ０１／２０２０（Ｃａｌｙ ｅｔ ａｌ ２０２０）とともに１時間インキュベートした。そして、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体プレインキュベーションありとなしにおいて、残存感染価を、感染後５日目にベロ細胞で評価した。中和抗体力価は、上述したＲｅｅｄ／Ｍｕｅｎｃｈ法を使用して算出した（Ｈｏｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６、Ｓｕｂｂａｒａｏ ｅｔ ａｌ ２００４）。

【0356】

シュードウイルスアッセイ
抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体がシュードウイルス上のスパイクタンパク質の受容体結合ドメインに結合し、それによってウイルスの細胞への侵入を防ぐ能力を調べるために、シュードウイルスアッセイを実施した。ＳＡＲＳ－２－スパイクタンパク質でシュードタイプ化したＨＩＶレポーターウイルスを、リポフェクタミン同時トランスフェクションによって作製した。トランスフェクションでは、８μｇの異なるＳＡＲＳ－２－ＣＯＶ－２スパイクプラスミドを、１６μｇのウイルスバックボーンプラスミド（ｐＤＲ－ＮＬ Δｅｎｖ ＦＬＵＣ）とともに、８．１０^６ＨＥＫ－２９３Ｔ細胞に導入した。抗体中和を分析するために、ウイルスストックを、参照Ｗｕｈａｎ配列及び循環スパイク変異体から作製した。表２は、パネル用に選択したＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２スパイクを示している。

【0357】

【表2】

【0358】

トランスフェクションの４８時間後にシュードウイルスを回収し、４５μｍフィルターで濾過して清澄化し、等分して－８０℃で保存した。相対ルシフェラーゼ単位感染量（ＲＬＵ）としてレポートされるウイルスストック力価を、ウイルス感染の読み取り値としてルシフェラーゼ活性を測定するＨｅｌａ－ｈＡＣＥ２細胞（中和アッセイで使用した同じ標的細胞）の限界希釈感染によって算出した。

【0359】

実施例１で作製したモノクローナル抗体の中和活性を試験するために、抗体の１／５段階希釈液（ＦＢＳに対するＤＭＥＭ）を、１５０μｌ容量の１００．０００ＲＬＵのウイルスと混合した。ウイルス－抗体混合物を３７℃で１時間インキュベートして中和を可能にした。インキュベーション後、ウイルス－抗体混合物を９６ウェルプレートに播種した１．１０４Ｈｅｌａ－ＡＣＥ２細胞に加え（細胞－ウイルス－抗体の総量２５０μｌ）、１５００ｇで２時間スピノキュレーションした。細胞をさらに３７℃、５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。

【0360】

インキュベーション期間の終わりに、１５０μｌの培地を細胞から除去する一方、プレート上に１００μｌの培地を残した。そして等容量のＢｒｉｔｅｌｉｔｅ Ｐｌｕｓ試薬（ルシフェラーゼ酵素基質カタログ番号６０６６７６９）を２分間添加して、細胞溶解と酵素による発光生成物への変換とを行った。ウイルス感染価を読み取るために、１００μｌの細胞溶解物をブラックウォールプレートに移し、ＦＬＵＯＳｔａｒマイクロプレートリーダーで発光シグナルを測定した。

【0361】

抗体候補を二連で試験し、中和百分率を求めた。中和百分率は、ウイルス対照（ハイブリドーマ培地の希釈液でインキュベーしたウイルス）とテストウェルとの間の平均ＲＬＵの差を算出し、その結果を、ウイルス対照と非感染細胞対照ウェル（バックグラウンド）との間の平均ＲＬＵの差で割り、１００倍することによって求めた。

【0362】

中和抗体力価は、ウイルス対照ウェルのレベルと比較して相対発光量（ＲＬＵ）を５０％減少させるのに必要なモノクローナル抗体濃度（μｇ／ｍｌ）として表される。中和パーセント対ＩｇＧ濃度をプロットしたグラフを作成し、非線形回帰モデル（ｌｏｇ［Ａｂ濃度］ｖｓ応答／３パラメータ曲線）を使用して中和曲線を最近似した。各近似曲線（ｒ２係数０．７超）から、５０％阻害濃度（ＩＣ５０）値を推定した。ＩＣ５０値は、各近似滴定曲線における５０％中和に対応する抗体濃度を示す。

【0363】

図１は、モノクローナル抗体６Ｇ６及び３０Ｂ８の、野生型ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２スパイクタンパク質（Ｗｕｈａｎ）、単一変異型ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２スパイクタンパク質（Ｄ６１４Ｇ、Ｎ５０１Ｙ）、及び二重変異型ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２スパイクタンパク質（Ｇ４８５Ｒ－Ｄ６１４Ｇ、Ｎ５０１Ｙ－Ｄ６１４Ｇ）に対する、シュードウイルスアッセイによって測定した、中和能力を示している。図１のＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２スパイクタンパク質は、表２（上記）に記載されたものである。モノクローナル抗体６Ｇ６は、抗体３０Ｂ８と比較して、野生型及びすべての変異型ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２スパイクタンパク質を中和するのに必要な抗体濃度が低く、より高い中和能力を示した。モノクローナル抗体３０Ｂ８は、野生型ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２スパイクタンパク質（Ｗｕｈａｎ）の中和と比較して、変異型Ｎ５０１Ｙ ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２スパイクタンパク質を中和するのにより高い濃度が必要であった。モノクローナル抗体６Ｇ６は、単一変異型Ｎ５０１Ｙ ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２スパイクタンパク質に比べて、二重変異型ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２スパイクタンパク質（Ｎ５０１Ｙ－Ｄ６１４Ｇ）を中和するのに必要な濃度が、より低かった。

【0364】

ｓＶＮＴ（サロゲートウイルス中和試験）
ｓＶＮＴは、サロゲート中和アッセイであり、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体とタグ付きＲＢＤタンパク質を混合することにより、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体がスパイクタンパク質ＲＢＤの組換えＡＣＥ２タンパク質（プラスチックプレート上に結合されている）への結合を阻害できるかどうかを判定するものである。ｓＶＮＴは、モノクローナル抗体のＲＢＤへの結合能力についてスクリーニングするのに有用なアッセイである。

【0365】

ｈＡＣＥ２タンパク質（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）を、１００ｍＭ炭酸－重炭酸コーティング緩衝液（ｐＨ９．６）中１００ｎｇ／ウェルでコーティングした。ＨＲＰが結合したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＨＲＰ複合化ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－ＲＢＤ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）を、ＯｐｔＥＩＡアッセイ希釈液（ＢＤ）中のさまざまな濃度でｈＡＣＥ２コーティングプレートに室温で１時間添加した。未結合のＨＲＰ複合化抗原を、リン酸緩衝生理食塩水、０．０５％ツイーン－２０（ＰＢＳＴ）で洗浄することにより除去した。比色シグナルを、ＨＲＰと発色基質（３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））との酵素反応によって発生させた。等容量のＴＭＢ停止溶液（ＫＰＬ）を加えて反応を停止させ、Ｃｙｔａｔｉｏｎ５マイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ）を使用して４５０ｎｍ及び５７０ｎｍでの吸光度を読み取った。サロゲート中和試験（ｓＶＮＴ）では、６ｎｇのＨＲＰ－ＲＢＤ（いずれかのウイルス由来）を１：２０に希釈したモノクローナル抗体とともに３７℃で１時間プレインキュベートし、続いてｈＡＣＥ２のインキュベーションを室温で１時間行った。阻害（％）＝（１－試料ＯＤ値／ネガティブ対照ＯＤ値）ｘ１００

【0366】

実施例３：ハイブリドーマ配列解析
抗体配列決定プロトコルでは、ハイブリドーマ細胞からｍＲＮＡを単離した後、ｃＤＮＡ合成と重鎖及び軽鎖の可変領域遺伝子のＰＣＲ増幅を行った。次に、遺伝子をｐＧＥＮ－Ｔ ｅａｓｙベクターにクローニングした。クローンをＰＣＲによってスクリーニングし、陽性クローンを配列決定した（サンガー配列決定）。ＶＨ遺伝子配列及びＶＬ遺伝子配列の分析を、ＩＭＧＴ／Ｖ－Ｑｕｅｓｔプログラム（Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴ＿ｖｑｕｅｓｔ／ｖｑｕｅｓｔ）を使用して行った。

【0367】

実施例４：エピトープ結合
抗体３０Ｂ８ならびに２つの公的に入手可能な抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体Ｂ３８（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６８：１２７４－１２８，２０２０に開示）及びＡＳ３５（カタログ番号ＳＰＤ－Ｓ６８ Ａｃｒｏｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を、１３個のビオチン化ペプチド（１個のネガティブコントロールを含む）のプールに対する結合について、試験した。各ペプチドは、１５アミノ酸長であり、各ペプチドは４アミノ酸の重複を有していた。

【0368】

Ｂ３８もＡＳ３５も、分析したどのペプチドに対しても、バックグラウンドを超えるＯＤ応答を示さなかった。抗体３０Ｂ８は、バックグラウンドを超えるＯＤ応答を示し、ペプチド４０（配列番号５１：ＳＧＳＧＡＧＳＴＰＣＮＧＶＥＧＦＮＣＹ）に対してのみ交差反応した。

【0369】

マッピングにより、抗体３０Ｂ８がペプチド４０のアミノ酸残基５、６、１７、１８、及び１９に対応する非線形エピトープＡＧＮＣＹに結合することがわかった。

【0370】

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【表3-4】

【表3-5】

【表3-6】

【表3-7】

【表3-8】

【表3-9】

【表3-10】

【表3-11】

【図1】

【配列表】

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【国際調査報告】