特表 2024-536647 操作されたＴＣＲ複合体及びそれを使用する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-07

(54)【発明の名称】操作されたＴＣＲ複合体及びそれを使用する方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/12 20060101AFI20240930BHJP

   C07K 14/725 20060101ALI20240930BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240930BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240930BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240930BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240930BHJP

   A61K 38/16 20060101ALI20240930BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240930BHJP

   A61P 35/00 20060101ALN20240930BHJP

【ＦＩ】

C12N15/12

C07K14/725 ZNA

C07K19/00

C12N15/62 Z

C12N5/10

A61K35/17

A61K38/16

A61P43/00 121

A61P35/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024507909

(86)(22)【出願日】2022-07-26

(85)【翻訳文提出日】2024-03-25

(86)【国際出願番号】 IB2022056886

(87)【国際公開番号】W WO2023012584

(87)【国際公開日】2023-02-09

(31)【優先権主張番号】21189516.4

(32)【優先日】2021-08-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】63/345,966

(32)【優先日】2022-05-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524048483

【氏名又は名称】ジェニシティー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100136629

【弁理士】

【氏名又は名称】鎌田 光宜

(74)【代理人】

【識別番号】100080791

【弁理士】

【氏名又は名称】高島 一

(74)【代理人】

【識別番号】100125070

【弁理士】

【氏名又は名称】土井 京子

(74)【代理人】

【識別番号】100121212

【弁理士】

【氏名又は名称】田村 弥栄子

(74)【代理人】

【識別番号】100174296

【弁理士】

【氏名又は名称】當麻 博文

(74)【代理人】

【識別番号】100137729

【弁理士】

【氏名又は名称】赤井 厚子

(74)【代理人】

【識別番号】100152308

【弁理士】

【氏名又は名称】中 正道

(74)【代理人】

【識別番号】100201558

【弁理士】

【氏名又は名称】亀井 恵二郎

(74)【代理人】

【識別番号】100118371

【弁理士】

【氏名又は名称】▲駒▼谷 剛志

(72)【発明者】

【氏名】ヤシン、ムハンマド

(72)【発明者】

【氏名】サワイド、ムニール

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA92X

4B065AA92Y

4B065AA94X

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065AC20

4B065BA01

4B065CA24

4B065CA44

4C084AA02

4C084BA02

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB26

4C084ZC75

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087BB64

4C087CA12

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZB26

4C087ZC75

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA50

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体及びそれを使用する方法が提供される。したがって、ＴＣＲαポリペプチド及びＴＣＲβポリペプチドを含むＴＣＲであって、結合ドメインを欠いており、ＴＣＲα及びβポリペプチドが、ＴＣＲを発現するＴ細胞の表面上でのＴＣＲ複合体としてのＴＣＲの提示を可能にするアミノ酸改変を含む、ＴＣＲが提供される。ＴＣＲをコードするポリヌクレオチド、ＴＣＲ複合体を発現するＴ細胞、及びそれを使用する方法も提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトＴＣＲαポリペプチド及びヒトＴＣＲβポリペプチドを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、前記ＴＣＲが、抗原結合ドメイン及び異種細胞外結合ドメインを欠いており、前記ＴＣＲα及びβポリペプチドが、前記ＴＣＲを発現するＴ細胞の表面上でのＴＣＲ複合体としての前記ＴＣＲの提示を可能にするアミノ酸改変を含み、前記改変が、
（ｉ）配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＴ４８Ｃアミノ酸置換、及び配列番号１２に記載のヒトＴＣＲβポリペプチドに対応するＳ５７Ｃアミノ酸置換を含む、及び／又は
（ｉｉ）前記ＴＣＲαポリペプチド及び前記ＴＣＲβポリペプチドが、キメラヒト及びマウスＴＣＲαポリペプチド並びにキメラヒト及びマウスＴＣＲβポリペプチドを含む、ＴＣＲ。

【請求項2】

ヒトＴＣＲαポリペプチド及びヒトＴＣＲβポリペプチドを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、前記ＴＣＲが、抗原結合ドメインを欠いており、前記ＴＣＲα及びβポリペプチドが、前記ＴＣＲを発現するＴ細胞の表面上でのＴＣＲ複合体としての前記ＴＣＲの提示を可能にするアミノ酸改変を含み、前記改変が、
（ｉ）配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＴ４８Ｃ、Ｓ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌアミノ酸置換、並びに配列番号１２に記載のヒトＴＣＲβポリペプチドに対応するＳ５７Ｃ突然変異、及び／又は
（ｉｉ）配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＰ９１Ｓ、Ｅ９２Ｄ、Ｓ９３Ｖ、及びＳ９４Ｐアミノ酸置換、並びに配列番号１２に記載のヒトＴＣＲβポリペプチドに対応するＥ１８Ｋ、Ｓ２２Ａ、Ｆ１３３Ｉ、Ｅ／Ｖ１３６Ａ、及びＱ１３９Ｈアミノ酸置換、を含む、ＴＣＲ。

【請求項3】

（ｉｉ）の前記改変が、配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＳ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌアミノ酸置換を更に含む、請求項２に記載のＴＣＲ。

【請求項4】

前記改変が、配列番号９に示されるヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＳ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌアミノ酸置換を更に含む、請求項１に記載のＴＣＲ。

【請求項5】

（ｉｉ）の前記改変が、配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＰ９１Ｓ、Ｅ９２Ｄ、Ｓ９３Ｖ、及びＳ９４Ｐアミノ酸置換、並びに配列番号１２に記載のヒトＴＣＲβポリペプチドに対応するＥ１８Ｋ、Ｓ２２Ａ、Ｆ１３３Ｉ、Ｅ／Ｖ１３６Ａ、及びＱ１３９Ｈアミノ酸置換を含む、請求項１又は４に記載のＴＣＲ。

【請求項6】

前記ＴＣＲαポリペプチドが、配列番号１４、１７、２０～２３、４７、１１１、１１４、及び１１７～１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＴＣＲ。

【請求項7】

前記ＴＣＲαポリペプチドが、配列番号１４、２０～２３、４７、１１１、及び１１７～１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載のＴＣＲ。

【請求項8】

前記ＴＣＲβポリペプチドが、配列番号１５～１６、１８～１９、２４～２５、１１２～１１３、１１５～１１６、及び１２１～１２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～２及び６～７のいずれか一項に記載のＴＣＲ。

【請求項9】

請求項１～８のいずれか一項に記載のＴＣＲをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチド。

【請求項10】

請求項１～８のいずれか一項に記載のＴＣＲ又は請求項９に記載の少なくとも１つのポリヌクレオチドを発現させる形質導入細胞。

【請求項11】

請求項１～８のいずれか一項に記載のＴＣＲ又は請求項９に記載の少なくとも１つのポリヌクレオチドを発現させる形質導入Ｔ細胞。

【請求項12】

ＴＣＲ発現細胞を作製する方法であって、前記ＴＣＲの発現を可能にする条件下で、請求項９に記載の少なくとも１つのポリヌクレオチドを細胞に導入することを含む、方法。

【請求項13】

前記細胞が、内因性ＴＣＲを発現しない、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の細胞又は方法。

【請求項14】

前記内因性ＴＣＲの発現を下方制御することを更に含む、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

必要とする対象において病的細胞に関連する疾患を処置する際に使用するための、請求項１１又は１３に記載のＴ細胞と、前記病的細胞及び前記ＴＣＲを含むＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物。

【請求項16】

必要とする対象において病的細胞に関連する疾患を処置する方法であって、治療有効量の請求項１１又は１３に記載のＴ細胞と、前記病的細胞及び前記ＴＣＲを含むＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物と、を前記対象に投与し、それによって前記対象における前記疾患を処置することを含む、方法。

【請求項17】

請求項１０～１１及び１３のいずれか一項に記載の細胞と、病的細胞及び前記ＴＣＲを含むＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物と、をパッケージングするパッケージング材料を含む製品。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、２０２１年８月３日に出願された欧州特許出願第２１１８９５１６．４号及び２０２２年５月２６日に出願された米国仮特許出願第６３／３４５，９６６号の優先権の利益を主張するものであり、これらの出願の内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表の記述
２０２２年７月２１日に作成され、２７４，４３２バイトを含み、本出願の出願と同時に提出された９３２５１．ｘｍｌという名称のファイルは、参照により本明細書に組み込まれる。

【0003】

本発明は、そのいくつかの実施形態において、操作されたＴＣＲ複合体及びそれを使用する方法に関する。

【0004】

細胞ベースの療法、抗体療法、及びサイトカイン療法を含む癌免疫療法は、薬物耐性の遺伝的及び細胞機構を回避し、健康な組織を残しながら腫瘍細胞を標的化するその潜在能力に起因して、様々なタイプの癌を処置するための有望な戦略としてここ数年で出現した。

【0005】

例えば、癌細胞上のＭＨＣクラスＩ分子と会合して差次的に発現される抗原に特異的なＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有するか、又は抗原認識部分［例えば、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）］及びＴ細胞活性化部分を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を有するＴ細胞を使用する細胞ベースの療法は、いくつかのタイプの癌、例えば、血液悪性腫瘍において抗腫瘍効果を発揮することが示された。しかしながら、ＴＣＲは、それらの認識スペクトル及びＭＨＣクラスにおいて制限されており、加えて、外因性ＴＣＲをＴ細胞に導入する場合、外因性鎖と内因性鎖との間のハイブリダイゼーションのリスクがあり、これは自己抗原の認識を誘導し得る［Ｖａｎ Ｌｏｅｎｅｎ ＭＭら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１０；１０７：１０９７２－７］。一方、ＣＡＲＴ細胞は、それらの利点にもかかわらず、例えば、重度の副作用、腫瘍溶解症候群及びサイトカイン放出症候群をもたらす重い腫瘍負荷の存在下での活発な増殖、治療中に標的抗原を喪失した腫瘍エスケープ変異体の発生などの、臨床治療における技術の完全な利用を可能にするために解決する必要がある重大な欠陥を有する［Ｍｏｒｇａｎ ＲＡら（２０１０年）Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．１８：８４３－５１；Ｂｒｕｄｎｏ ＪＮら（２０１６年）；Ｂｌｏｏｄ．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ；３３２１～３０頁；及びＧｒｕｐｐ ＳＡら（２０１３年）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３６８：１５０９－１８］。更に、治療のために同種異系Ｔ細胞を使用することは、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）をもたらす自己抗原の有害な認識のリスクをもたらす。

【0006】

モノクローナル抗体、抗体融合タンパク質、及び抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）などの抗体ベースの癌免疫療法は、非癌性細胞と比較して癌細胞上で差次的に発現される細胞表面分子の認識及び／又は免疫チェックポイント遮断に依存する。抗体ベースの免疫療法の癌細胞への結合は、様々な機構、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）からのペイロードの直接的な細胞傷害活性、又は抑制性チェックポイント遮断を介して癌細胞死をもたらし得る。これらの機構の多くは、造血細胞上の特殊化された細胞表面受容体（Ｆｃ受容体）への細胞結合抗体のＦｃドメインの結合を介して開始する。近年、別のタイプの抗体に基づく療法、すなわち、モスネツズマブ、オドロネクスタマブ、及びブリナツモマブなどの抗ＣＤ３二重特異性抗体が提案された。これらの二重特異性抗体は、ＣＤ３陽性Ｔ細胞を腫瘍関連抗原と結合させ、よって、Ｔ細胞が腫瘍細胞を攻撃することを促進する。

【0007】

抗体ベースの療法、ＣＡＲ Ｔ細胞及び／又はＴＣＲベースの免疫療法の原理を組み合わせた免疫療法が開示されている［例えば、ＣｈｏｉＢＤら（２０１９年）Ｎａｔｕｒｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ；３７：１０４９－５８；Ｃｈａｎｄｒａｎ ａｎｄ Ｋｌｅｂａｎｏｆｆ（２０１９年）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ．２９０：１２７－１４７；Ｂｅｎｊａｍｉｎ Ｒ．（２０２０年）Ｌａｎｃｅｔ ３９６：１８８５－９４；Ｌｉｕら（２０２１年）Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．１３、ｅａｂｂ５１９１；Ｈｅｌｓｅｎ Ｃ．Ｗら（２０１８年）Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ９：３０４９；Ｂａｅｕｅｒｌｅ Ｐ．Ａ．ら（２０１９年）Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ １０：２０８７を参照されたい］。

【0008】

追加の背景技術は、
国際特許出願公開第ＷＯ２０１９２２２２７５号、同第ＷＯ２０２１０３５１７０号、及び同第ＷＯ２０１５１４３２２４号；
米国特許出願公開第ＵＳ２０１９０３８８４７２号及び同第ＵＳ２０１９００７０２４８号；
日本国特許第２０１７５１４４７１号；並びに
ロシア特許第ＲＵ２７２５５４２号を含む。

【発明の概要】

【0009】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＴＣＲαポリペプチド及びＴＣＲβポリペプチドを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体が提供され、ＴＣＲは、抗原結合ドメインを欠いており、ＣＤ３ポリペプチドは、異種抗原結合ドメインを欠いており、ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲを発現するＴ細胞の表面上に提示することができる。

【0010】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ヒトＴＣＲαポリペプチド及びヒトＴＣＲβポリペプチドを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が提供され、ＴＣＲは、抗原結合ドメインを欠いており、ＴＣＲα及びβポリペプチドは、ＴＣＲを発現するＴ細胞の表面上でのＴＣＲ複合体としてのＴＣＲの提示を可能にするアミノ酸改変を含む。

【0011】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＴＣＲは、異種二量体化部分を含む。

【0012】

本発明のいくつかの実施形態によれば、異種二量体化部分は、ＴＣＲαポリペプチド及びＴＣＲβポリペプチドの各々にシステインを含む。

【0013】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチド及びＴＣＲβポリペプチドは、ヒトＴＣＲαポリペプチド及びヒトＴＣＲβポリペプチドを含む。

【0014】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチド及びＴＣＲβポリペプチドは、キメラヒト及びマウスＴＣＲαポリペプチド並びにキメラヒト及びマウスＴＣＲβポリペプチドを含む。

【0015】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ヒトＴＣＲαポリペプチド及びヒトＴＣＲβポリペプチドを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が提供され、ＴＣＲは、抗原結合ドメイン及び異種細胞外結合ドメインを欠いており、ＴＣＲα及びβポリペプチドは、ＴＣＲを発現するＴ細胞の表面上でＴＣＲ複合体としてのＴＣＲの提示を可能にするアミノ酸改変を含み、改変は、
（ｉ）配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＴ４８Ｃアミノ酸置換、及び配列番号１２に記載のヒトＴＣＲβポリペプチドに対応するＳ５７Ｃアミノ酸置換を含む、及び／又は
（ｉｉ）ＴＣＲαポリペプチド及びＴＣＲβポリペプチドは、キメラヒト及びマウスＴＣＲαポリペプチド並びにキメラヒト及びマウスＴＣＲβポリペプチドを含む。

【0016】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ヒトＴＣＲαポリペプチド及びヒトＴＣＲβポリペプチドを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が提供され、ＴＣＲは、抗原結合ドメインを欠いており、ＴＣＲα及びβポリペプチドは、ＴＣＲを発現するＴ細胞の表面上にＴＣＲ複合体としてのＴＣＲの提示を可能にするアミノ酸改変を含み、改変は、
（ｉ）配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＴ４８Ｃ、Ｓ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌアミノ酸置換、並びに配列番号１２に記載のヒトＴＣＲβポリペプチドに対応するＳ５７Ｃ突然変異、及び／又は
（ｉｉ）配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＰ９１Ｓ、Ｅ９２Ｄ、Ｓ９３Ｖ、及びＳ９４Ｐアミノ酸置換、並びに配列番号１２に記載のヒトＴＣＲβポリペプチドに対応するＥ１８Ｋ、Ｓ２２Ａ、Ｆ１３３Ｉ、Ｅ／Ｖ１３６Ａ、及びＱ１３９Ｈアミノ酸置換、を含む。

【0017】

本発明のいくつかの実施形態によれば、（ｉｉ）の改変は、配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＳ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌアミノ酸置換を更に含む。

【0018】

本発明のいくつかの実施形態によれば、改変は、配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＳ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌアミノ酸置換を更に含む。

【0019】

本発明のいくつかの実施形態によれば、（ｉｉ）の改変は、配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＰ９１Ｓ、Ｅ９２Ｄ、Ｓ９３Ｖ、及びＳ９４Ｐアミノ酸置換、並びに配列番号１２に記載のヒトＴＣＲβポリペプチドに対応するＥ１８Ｋ、Ｓ２２Ａ、Ｆ１３３Ｉ、Ｅ／Ｖ１３６Ａ、及びＱ１３９Ｈアミノ酸置換を含む。

【0020】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号１４、１７、２０～２３、４７、１１１、１１４、及び１１７～１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0021】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号１４、２０～２３、４７、１１１、及び１１７～１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0022】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号８、１４、１７、及び２０～２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0023】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号１４、１７、及び２０～２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0024】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号１４及び２０～２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0025】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１５～１６、１８～１９、２４～２５、１１２～１１３、１１５～１１６、及び１２１～１２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0026】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１０～１１、１５～１６、１８～１９、及び２４～２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0027】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１５～１６、１８～１９、及び２４～２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0028】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＴＣＲをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドが提供される。

【0029】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＴＣＲ又は少なくとも１つのポリヌクレオチドを発現させる形質導入細胞が提供される。

【0030】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＴＣＲ複合体又はＴＣＲ又は少なくとも１つのポリヌクレオチドを発現させる形質導入Ｔ細胞が提供される。

【0031】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、ＴＣＲ発現細胞を作製する方法が提供され、本方法は、ＴＣＲの発現を可能にする条件下で、少なくとも１つのポリヌクレオチドを細胞に導入することを含む。

【0032】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、Ｔ細胞においてＴＣＲを発現させる方法が提供され、本方法は、ＴＣＲの発現を可能にする条件下で、少なくとも１つのポリヌクレオチドをＴ細胞に導入することを含む。

【0033】

本発明のいくつかの実施形態によれば、導入は、インビトロ又はエクスビボで行われる。

【0034】

本発明のいくつかの実施形態によれば、細胞は、内因性ＴＣＲを発現しない。

【0035】

本発明のいくつかの実施形態によれば、Ｔ細胞は、内因性ＴＣＲを発現しない。

【0036】

本発明のいくつかの実施形態によれば、本方法は、内因性ＴＣＲの発現を下方制御することを更に含む。

【0037】

本発明のいくつかの実施形態によれば、本方法は、導入することの前に内因性ＴＣＲの発現を下方制御することを更に含む。

【0038】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、必要とする対象において病的細胞に関連する疾患を処置する方法が提供され、本方法は、治療有効量のＴ細胞と、病的細胞及びＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物と、を対象に投与し、それによって対象における疾患を処置することを含む。

【0039】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、必要とする対象において病的細胞に関連する疾患を処置する際に使用するための、Ｔ細胞と、病的細胞及びＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物と、が提供される。

【0040】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、治療を必要とする対象において病的細胞に関連する疾患を処置する方法が提供され、本方法は、治療有効量のＴ細胞と、病的細胞及びＴＣＲを含むＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物と、を対象に投与し、それによって対象における疾患を処置することを含む。

【0041】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、必要とする対象において病的細胞に関連する疾患を処置する際に使用するための、Ｔ細胞と、病的細胞及びＴＣＲを含むＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物と、が提供される。

【0042】

本発明のいくつかの実施形態によれば、Ｔ細胞は、対象に対して同種異系である。

【0043】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、細胞と、病的細胞及びＴＣＲを含むＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物と、をパッケージングするパッケージング材料を含む製品が提供される。

【0044】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、Ｔ細胞と、病的細胞及びＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物と、をパッケージングするパッケージング材料を含む製品が提供される。

【0045】

本発明のいくつかの実施形態によれば、治療用組成物は、抗ＣＤ３抗体を含む。

【0046】

本発明の特定の実施形態で使用することができる抗ＣＤ３抗体の非限定的な例としては、Ｌ２Ｋ、ＴＲ６６、ＯＫＴ３、ＳＰ３４、ＵＣＨＴ１、Ｆ６Ａ、ヒト化ＵＣＨＴ１、ＳＫ７、及びＨＩＴ３Ａが挙げられる。

【0047】

本発明のいくつかの実施形態によれば、抗ＣＤ３抗体は、Ｌ２Ｋ、ＴＲ６６、及びＯＫＴ３からなる群から選択される。

【0048】

本発明のいくつかの実施形態によれば、病的細胞はＣＤ１９を発現し、治療用組成物はブリナツモマブを含む。

【0049】

本発明のいくつかの実施形態によれば、病的細胞はＥｐＣＡＭを発現し、治療用組成物はＭＴ１１０を含む。

【0050】

本発明のいくつかの実施形態によれば、病的細胞は、癌細胞である。

【0051】

本発明のいくつかの実施形態によれば、癌は、リンパ種、白血病、膠芽腫、結腸癌、胃癌、膵臓癌、卵巣癌、肺癌、及び皮膚癌からなる群から選択される。

【0052】

他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び／又は科学用語は、本発明が関係する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似又は同等の方法及び材料を、本発明の実施形態の実施又は試験において使用することができるが、例示的な方法及び／又は材料を以下に記載する。矛盾する場合には、定義を含む本特許明細書が適用される。更に、材料、方法、及び実施例は例示に過ぎず、必ずしも限定することを意図するものではない。

【図面の簡単な説明】

【0053】

本発明のいくつかの実施形態は、添付の図面を参照して、単なる例として本明細書に記載される。ここで図面を詳細に具体的に参照すると、示される詳細は、例としてであり、本発明の実施形態の例証的議論の目的のためであることが強調される。この点に関して、図面を用いた説明は、本発明の実施形態がどのように実施され得るかを当業者に明らかにする。

【0054】

図面は以下の通りである。

【図1A】本発明のいくつかの実施形態の操作されたＴＣＲ複合体の概略図を示す。図１Ａは、可変α及びβ領域を欠いているＴＣＲα及びβ鎖を含むＴＣＲ複合体を実証する。このＴＣＲは、本明細書において「平滑末端切断型ＴＣＲ（ＢｌｕＴ）」と称される。図１Ｂは、可変領域を欠く外因性ＴＣＲα鎖及びβ鎖と内因性ＴＣＲα鎖及びβ鎖とのミスマッチ対合を含むＴＣＲ複合体を実証する。

【図1B】本発明のいくつかの実施形態の操作されたＴＣＲ複合体の概略図を示す。図１Ａは、可変α及びβ領域を欠いているＴＣＲα及びβ鎖を含むＴＣＲ複合体を実証する。このＴＣＲは、本明細書において「平滑末端切断型ＴＣＲ（ＢｌｕＴ）」と称される。図１Ｂは、可変領域を欠く外因性ＴＣＲα鎖及びβ鎖と内因性ＴＣＲα鎖及びβ鎖とのミスマッチ対合を含むＴＣＲ複合体を実証する。

【図2A-1】本発明のいくつかの実施形態の操作されたＴＣＲの概略図を示す。示される場合、３つの突然変異をα鎖の膜貫通ドメインに導入した：Ｓ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌ（ＬＶＬと記される）。示される場合、システインをα鎖及びβ鎖の両方に導入した（ＣＹＳと表示した）：α鎖にＴ４８Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ。示される場合、いくつかの突然変異を、以下のようにα鎖及びβ鎖の細胞外ドメインに導入した。α鎖突然変異Ｐ９１Ｓ、Ｅ９２Ｄ、Ｓ９３Ｖ、Ｓ９４Ｐ；β鎖突然変異：Ｅ１８Ｋ、Ｓ２２Ａ、Ｆ１３３Ｉ、Ｅ／Ｖ１３６Ａ、Ｑ１３９Ｈ（ｍｍと表示する）。示される場合、システインは、α鎖及びβ鎖の両方に導入された：α鎖にＣＬ１２及びβ鎖にＳ１７Ｃ、α鎖にＹ４３Ｃに及びβ鎖にＬ６３Ｃ、α鎖にＳ６１Ｃ及びβ鎖にＲ７９Ｃ、α鎖にＬ１２Ｃ及びβ鎖にＦ１４Ｃ、α鎖にＶ２２Ｃ及びβ鎖にＦ１４Ｃ、α鎖にＹ１０Ｃ及びβ鎖にＳ１７Ｃ、α鎖にＴ４５Ｃ及びβ鎖にＤ５９Ｃ、α鎖にＬ５０Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ、α鎖にＳ６１Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ、α鎖にＴ４５Ｃ及びβ鎖にＳ７７Ｃ、α鎖にＳ１５Ｃ及びβ鎖にＶ１３Ｃ、又はα鎖にＳ１５Ｃ及びβ鎖にＥ１５Ｃ。示される場合、いくつかの突然変異を、以下のようにα鎖及びβ鎖に導入した。α鎖突然変異Ｓ２１Ｆ、Ｔ３２Ｉ、Ａ７２Ｔ及びβ鎖突然変異Ｅ１８Ｋ、Ｈ２３Ｒ、Ｄ３９Ｐ、Ｓ５４Ｄ（Ｄｅｓと記す）。Ｆ５Ｐ２Ａ－フーリン－Ｖ５タグ配列をＰ２Ａと組み合わせた。

【図2A-2】本発明のいくつかの実施形態の操作されたＴＣＲの概略図を示す。示される場合、３つの突然変異をα鎖の膜貫通ドメインに導入した：Ｓ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌ（ＬＶＬと記される）。示される場合、システインをα鎖及びβ鎖の両方に導入した（ＣＹＳと表示した）：α鎖にＴ４８Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ。示される場合、いくつかの突然変異を、以下のようにα鎖及びβ鎖の細胞外ドメインに導入した。α鎖突然変異Ｐ９１Ｓ、Ｅ９２Ｄ、Ｓ９３Ｖ、Ｓ９４Ｐ；β鎖突然変異：Ｅ１８Ｋ、Ｓ２２Ａ、Ｆ１３３Ｉ、Ｅ／Ｖ１３６Ａ、Ｑ１３９Ｈ（ｍｍと表示する）。示される場合、システインは、α鎖及びβ鎖の両方に導入された：α鎖にＣＬ１２及びβ鎖にＳ１７Ｃ、α鎖にＹ４３Ｃに及びβ鎖にＬ６３Ｃ、α鎖にＳ６１Ｃ及びβ鎖にＲ７９Ｃ、α鎖にＬ１２Ｃ及びβ鎖にＦ１４Ｃ、α鎖にＶ２２Ｃ及びβ鎖にＦ１４Ｃ、α鎖にＹ１０Ｃ及びβ鎖にＳ１７Ｃ、α鎖にＴ４５Ｃ及びβ鎖にＤ５９Ｃ、α鎖にＬ５０Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ、α鎖にＳ６１Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ、α鎖にＴ４５Ｃ及びβ鎖にＳ７７Ｃ、α鎖にＳ１５Ｃ及びβ鎖にＶ１３Ｃ、又はα鎖にＳ１５Ｃ及びβ鎖にＥ１５Ｃ。示される場合、いくつかの突然変異を、以下のようにα鎖及びβ鎖に導入した。α鎖突然変異Ｓ２１Ｆ、Ｔ３２Ｉ、Ａ７２Ｔ及びβ鎖突然変異Ｅ１８Ｋ、Ｈ２３Ｒ、Ｄ３９Ｐ、Ｓ５４Ｄ（Ｄｅｓと記す）。Ｆ５Ｐ２Ａ－フーリン－Ｖ５タグ配列をＰ２Ａと組み合わせた。

【図2B-1】本発明のいくつかの実施形態の操作されたＴＣＲの概略図を示す。示される場合、３つの突然変異をα鎖の膜貫通ドメインに導入した：Ｓ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌ（ＬＶＬと記される）。示される場合、システインをα鎖及びβ鎖の両方に導入した（ＣＹＳと表示した）：α鎖にＴ４８Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ。示される場合、いくつかの突然変異を、以下のようにα鎖及びβ鎖の細胞外ドメインに導入した。α鎖突然変異Ｐ９１Ｓ、Ｅ９２Ｄ、Ｓ９３Ｖ、Ｓ９４Ｐ；β鎖突然変異：Ｅ１８Ｋ、Ｓ２２Ａ、Ｆ１３３Ｉ、Ｅ／Ｖ１３６Ａ、Ｑ１３９Ｈ（ｍｍと表示する）。示される場合、システインは、α鎖及びβ鎖の両方に導入された：α鎖にＣＬ１２及びβ鎖にＳ１７Ｃ、α鎖にＹ４３Ｃに及びβ鎖にＬ６３Ｃ、α鎖にＳ６１Ｃ及びβ鎖にＲ７９Ｃ、α鎖にＬ１２Ｃ及びβ鎖にＦ１４Ｃ、α鎖にＶ２２Ｃ及びβ鎖にＦ１４Ｃ、α鎖にＹ１０Ｃ及びβ鎖にＳ１７Ｃ、α鎖にＴ４５Ｃ及びβ鎖にＤ５９Ｃ、α鎖にＬ５０Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ、α鎖にＳ６１Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ、α鎖にＴ４５Ｃ及びβ鎖にＳ７７Ｃ、α鎖にＳ１５Ｃ及びβ鎖にＶ１３Ｃ、又はα鎖にＳ１５Ｃ及びβ鎖にＥ１５Ｃ。示される場合、いくつかの突然変異を、以下のようにα鎖及びβ鎖に導入した。α鎖突然変異Ｓ２１Ｆ、Ｔ３２Ｉ、Ａ７２Ｔ及びβ鎖突然変異Ｅ１８Ｋ、Ｈ２３Ｒ、Ｄ３９Ｐ、Ｓ５４Ｄ（Ｄｅｓと記す）。Ｆ５Ｐ２Ａ－フーリン－Ｖ５タグ配列をＰ２Ａと組み合わせた。

【図2B-2】本発明のいくつかの実施形態の操作されたＴＣＲの概略図を示す。示される場合、３つの突然変異をα鎖の膜貫通ドメインに導入した：Ｓ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌ（ＬＶＬと記される）。示される場合、システインをα鎖及びβ鎖の両方に導入した（ＣＹＳと表示した）：α鎖にＴ４８Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ。示される場合、いくつかの突然変異を、以下のようにα鎖及びβ鎖の細胞外ドメインに導入した。α鎖突然変異Ｐ９１Ｓ、Ｅ９２Ｄ、Ｓ９３Ｖ、Ｓ９４Ｐ；β鎖突然変異：Ｅ１８Ｋ、Ｓ２２Ａ、Ｆ１３３Ｉ、Ｅ／Ｖ１３６Ａ、Ｑ１３９Ｈ（ｍｍと表示する）。示される場合、システインは、α鎖及びβ鎖の両方に導入された：α鎖にＣＬ１２及びβ鎖にＳ１７Ｃ、α鎖にＹ４３Ｃに及びβ鎖にＬ６３Ｃ、α鎖にＳ６１Ｃ及びβ鎖にＲ７９Ｃ、α鎖にＬ１２Ｃ及びβ鎖にＦ１４Ｃ、α鎖にＶ２２Ｃ及びβ鎖にＦ１４Ｃ、α鎖にＹ１０Ｃ及びβ鎖にＳ１７Ｃ、α鎖にＴ４５Ｃ及びβ鎖にＤ５９Ｃ、α鎖にＬ５０Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ、α鎖にＳ６１Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ、α鎖にＴ４５Ｃ及びβ鎖にＳ７７Ｃ、α鎖にＳ１５Ｃ及びβ鎖にＶ１３Ｃ、又はα鎖にＳ１５Ｃ及びβ鎖にＥ１５Ｃ。示される場合、いくつかの突然変異を、以下のようにα鎖及びβ鎖に導入した。α鎖突然変異Ｓ２１Ｆ、Ｔ３２Ｉ、Ａ７２Ｔ及びβ鎖突然変異Ｅ１８Ｋ、Ｈ２３Ｒ、Ｄ３９Ｐ、Ｓ５４Ｄ（Ｄｅｓと記す）。Ｆ５Ｐ２Ａ－フーリン－Ｖ５タグ配列をＰ２Ａと組み合わせた。

【図3A-1】ＢｌｕＴの発現後の内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞におけるＣＤ３の再発現を実証する。図３Ａは、ＴＣＲα鎖（配列番号１）を標的とするＣａｓ９ ＲＮＰ及びｇＲＮＡを用いた電気穿孔によるＣＤ３－／ＴＣＲ－Ｔ細胞の生成、それに続くＣＤ３－／ＴＣＲ－Ｔ細胞の磁気ビーズ精製を示す。図３Ｂは、抗ＣＤ３ＯＫＴ３抗体を使用するフローサイトメトリーによって決定される、切断型α鎖（ＴＲＡＣ、配列番号：３）のみをコードする構築物による感染後の発現なしと比較した、追加のシステイン及びいくつかの膜貫通疎水性突然変異を含む切断型α鎖並びに追加のシステインを含む切断型β鎖をコードする構築物、ＴＲＡＣ（Ｃｙｓ，ＬＶＬ）－Ｐ２Ａ－ＴＲＢＣ１（Ｃｙｓ）、配列番号２による感染後の図３Ａに示されるＴ細胞におけるＣＤ３の再発現を示す。ＥＧＦＰは、感染のマーカーとして機能する。

【図3A-2】ＢｌｕＴの発現後の内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞におけるＣＤ３の再発現を実証する。図３Ａは、ＴＣＲα鎖（配列番号１）を標的とするＣａｓ９ ＲＮＰ及びｇＲＮＡを用いた電気穿孔によるＣＤ３－／ＴＣＲ－Ｔ細胞の生成、それに続くＣＤ３－／ＴＣＲ－Ｔ細胞の磁気ビーズ精製を示す。図３Ｂは、抗ＣＤ３ＯＫＴ３抗体を使用するフローサイトメトリーによって決定される、切断型α鎖（ＴＲＡＣ、配列番号：３）のみをコードする構築物による感染後の発現なしと比較した、追加のシステイン及びいくつかの膜貫通疎水性突然変異を含む切断型α鎖並びに追加のシステインを含む切断型β鎖をコードする構築物、ＴＲＡＣ（Ｃｙｓ，ＬＶＬ）－Ｐ２Ａ－ＴＲＢＣ１（Ｃｙｓ）、配列番号２による感染後の図３Ａに示されるＴ細胞におけるＣＤ３の再発現を示す。ＥＧＦＰは、感染のマーカーとして機能する。

【図3B】ＢｌｕＴの発現後の内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞におけるＣＤ３の再発現を実証する。図３Ａは、ＴＣＲα鎖（配列番号１）を標的とするＣａｓ９ ＲＮＰ及びｇＲＮＡを用いた電気穿孔によるＣＤ３－／ＴＣＲ－Ｔ細胞の生成、それに続くＣＤ３－／ＴＣＲ－Ｔ細胞の磁気ビーズ精製を示す。図３Ｂは、抗ＣＤ３ＯＫＴ３抗体を使用するフローサイトメトリーによって決定される、切断型α鎖（ＴＲＡＣ、配列番号：３）のみをコードする構築物による感染後の発現なしと比較した、追加のシステイン及びいくつかの膜貫通疎水性突然変異を含む切断型α鎖並びに追加のシステインを含む切断型β鎖をコードする構築物、ＴＲＡＣ（Ｃｙｓ，ＬＶＬ）－Ｐ２Ａ－ＴＲＢＣ１（Ｃｙｓ）、配列番号２による感染後の図３Ａに示されるＴ細胞におけるＣＤ３の再発現を示す。ＥＧＦＰは、感染のマーカーとして機能する。

【図4-1】少なくとも、α鎖にＴ４８Ｃ突然変異及びβ鎖にＳ５７Ｃ突然変異を含むＢｌｕＴの発現後の内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞におけるＣＤ３の再発現を実証する。図３Ａに示される内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞を、示される構築物に感染させ（各構築物の詳細な説明については図２Ｂを参照されたい）、抗ＣＤ３ＯＫＴ３抗体を使用してフローサイトメトリーによって評価した。ＥＧＦＰは、感染のマーカーとして機能する。

【図4-2】少なくとも、α鎖にＴ４８Ｃ突然変異及びβ鎖にＳ５７Ｃ突然変異を含むＢｌｕＴの発現後の内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞におけるＣＤ３の再発現を実証する。図３Ａに示される内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞を、示される構築物に感染させ（各構築物の詳細な説明については図２Ｂを参照されたい）、抗ＣＤ３ＯＫＴ３抗体を使用してフローサイトメトリーによって評価した。ＥＧＦＰは、感染のマーカーとして機能する。

【図5】α鎖におけるＴ４８Ｃ及びＬＶＬ突然変異並びにβ鎖におけるＳ５７Ｃ突然変異を含むＢｌｕＴの発現後の、内因性β又はα鎖及びβ鎖を標的化することによって生成された内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞におけるＣＤ３の再発現を実証する。ＣＤ３－／ＴＣ－ＲＴ細胞を、ＴＣＲβ鎖（配列番号４５）、又はＴＣＲα鎖及びβ鎖の両方（配列番号１及び４５）を標的とするＣａｓ９ ＲＮＰ及びｇＲＮＡを用いた電気穿孔と、それに続くＣＤ３－／ＴＣＲ－Ｔ細胞の磁気ビーズ精製によって生成した。続いて、細胞を示された構築物に感染させ（各構築物の詳細な説明については図２Ｂを参照されたい）、抗ＣＤ３ ＯＫＴ３抗体を使用してフローサイトメトリーによって評価した。ＥＧＦＰは、感染のマーカーとして機能する。

【図6-1】α鎖中のＴ４８Ｃ及びβ鎖中のＳ５７Ｃ以外のα鎖とβ鎖との間の追加のジスルフィド結合をもたらす突然変異を含むＢｌｕＴの発現が、ＣＤ３の再発現を可能にしないことを実証する。図３Ａに示される内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞を、示される構築物に感染させ（各構築物の詳細な説明については図２Ｂを参照されたい）、抗ＣＤ３ＯＫＴ３抗体を使用してフローサイトメトリーによって評価した。ＥＧＦＰは、感染のマーカーとして機能する。

【図6-2】α鎖中のＴ４８Ｃ及びβ鎖中のＳ５７Ｃ以外のα鎖とβ鎖との間の追加のジスルフィド結合をもたらす突然変異を含むＢｌｕＴの発現が、ＣＤ３の再発現を可能にしないことを実証する。図３Ａに示される内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞を、示される構築物に感染させ（各構築物の詳細な説明については図２Ｂを参照されたい）、抗ＣＤ３ＯＫＴ３抗体を使用してフローサイトメトリーによって評価した。ＥＧＦＰは、感染のマーカーとして機能する。

【図7】最小マウスアミノ酸置換を含むＢｌｕＴの発現後の内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞におけるＣＤ３の再発現を実証する。図３Ａに示される内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞を、示される構築物に感染させ（各構築物の詳細な説明については図２Ｂを参照されたい）、抗ＣＤ３ＯＫＴ３抗体を使用してフローサイトメトリーによって評価した。ＥＧＦＰは、感染のマーカーとして機能する。

【図8A】内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞におけるＣＤ３の再発現に対する、ＢｌｕＴのα鎖のＮ末端から６～２１アミノ酸を除去することの効果を実証する。図３Ａに示される内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞を、示される構築物に感染させ（各構築物の詳細な説明については図２Ｂを参照されたい）、抗ＣＤ３ＯＫＴ３抗体を使用してフローサイトメトリーによって評価した。ＥＧＦＰは、感染のマーカーとして機能する。

【図8B】国際特許出願公開第ＷＯ２０２０１３８３７１号によって開示される構築物の発現後、内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞におけるＣＤ３の発現がないことを示す。図３Ａに示される内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞を、Ｂａ９（配列番号８３／８４）又はα６（配列番号８１／８２）に感染させ、抗ＣＤ３ ＯＫＴ３抗体を使用するフローサイトメトリーによって評価した。ＥＧＦＰは、感染のマーカーとして機能する。

【図9】二重特異性Ｔ細胞エンゲージャと組み合わせてＢｌｕＴを発現するＴ細胞が、有効なインビトロ腫瘍細胞溶解を誘導することを実証する。図３Ａに示される内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞を、Ｔ４８Ｃ突然変異及びＬＶＬ突然変異を含むＢｌｕＴに感染させ、Ｓ５７Ｃ突然変異（配列番号１２５／１２６）を含む切断型β鎖を、ブリナツモマブ（ＣＤ１９ ＢｉＴＥ）の存在下又は非存在下で、示されたＥ：Ｔ比でＲａｊｉ－Ｆ．Ｌｕｃ ＣＤ１９＋リンパ腫細胞と共にインキュベートし、ホタルルシフェラーゼ活性を測定して細胞毒性を判定した。ＣＤ３陰性抗ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞（配列番号１２７／１２８）及び非改変ＣＤ３陽性ＴＣＲ陽性Ｔ細胞を、陽性対照として使用した。示されているのは、無処置のみの腫瘍群ＲＬＵに対する試験群ＲＬＵ（相対光ユニット）を割ることによって計算された相対溶解のパーセンテージである。結果を（％）で示す。^＊二元配置分散分析による^＊＊＊ｐ＜０．０００１、^＊＊＊ｐ＜０．００１

【図10】二重特異性Ｔ細胞エンゲージャと組み合わせてＢｌｕＴを発現するＴ細胞が、有効なインビボ抗癌効果を誘導することを実証する。図３Ａに示す内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞を、Ｔ４８Ｃ突然変異及びＬＶＬ突然変異を含むＢｌｕＴ、並びにＳ５７Ｃ突然変異（配列番号１２５／１２６）を含む切断型β鎖に感染させた。その後、マウスに、ＢｌｕＴ形質導入Ｔ細胞と組み合わせてＣＤ１９＋Ｒａｊｉ細胞を移植し、示された場合、抗ＣＤ１９ＢｉＴＥブリナツモマブで処置した。ＣＤ３陰性抗ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞（配列番号１２７／１２８）及び非改変ＣＤ３陽性ＴＣＲ陽性Ｔ細胞を、陽性対照として使用した。生理食塩水処置を陰性対照とした。マウス生存をカプラン－マイヤー曲線として示す。

【発明を実施するための形態】

【0055】

本発明は、いくつかの実施形態では、操作されたＴＣＲ及びそれを使用する方法に関する。

【0056】

本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、その適用において、以下の説明に記載されるか又は実施例によって例示される詳細に必ずしも限定されないことが理解されるべきである。本発明は、他の実施形態が可能であり、又は様々な方法で実施若しくは実行することが可能である。

【0057】

癌免疫療法は、様々なタイプの癌を処置するための有望な戦略としてここ数年で登場した。例えば、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有するＴ細胞又はＣＡＲＴ細胞を使用する細胞ベースの療法、抗体ベースの癌免疫療法、及びそれらの組み合わせは、いくつかのタイプの癌において抗腫瘍効果を発揮することが示された。

【0058】

本発明の特定の実施形態を実施に移しているが、本発明者らは、内因性ＴＣＲを欠くＴ細胞の表面上のＴＣＲ複合体の一部として提示されたＴＣＲα鎖及びβ鎖の可変領域を欠く切断型ＴＣＲを設計及び発現させた（以下の実施例セクションの実施例１）。更に、切断型ＴＣＲを発現するＴ細胞は、インビトロ及びインビボの両方で、ＴＣＲ及び抗ＣＤ３メディエーターの存在下でのみ抗腫瘍効果を有した（以下の実施例のセクションの実施例２～３）。

【0059】

結果として、本教示の特定の実施形態は、病的細胞に関連する疾患（例えば、癌）を処置するために、一方で病的細胞に、他方でＴＣＲ複合体（例えば、Ｔ細胞エンゲージャ抗体）に結合することができる治療用組成物と組み合わせて、切断型ＴＣＲを発現するように遺伝子操作されたＴ細胞を示唆する。

【0060】

したがって、本発明の一態様によれば、ＴＣＲαポリペプチド及びＴＣＲβポリペプチドを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体が提供され、当該ＴＣＲは、抗原結合ドメインを欠いており、ＣＤ３ポリペプチドは、異種抗原結合ドメインを欠いており、当該ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲを発現するＴ細胞の表面上に提示することができる。

【0061】

本発明の追加の又は代替の態様によれば、ヒトＴＣＲαポリペプチド及びヒトＴＣＲβポリペプチドを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が提供され、当該ＴＣＲは、抗原結合ドメインを欠いており、当該ＴＣＲα及びβポリペプチドは、ＴＣＲを発現するＴ細胞の表面上でのＴＣＲ複合体としての当該ＴＣＲの提示を可能にするアミノ酸改変を含む。

【0062】

本発明の追加の又は代替の態様によれば、ヒトＴＣＲαポリペプチド及びヒトＴＣＲβポリペプチドを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が提供され、当該ＴＣＲは、抗原結合ドメイン及び異種細胞外結合ドメインを欠いており、当該ＴＣＲα及びβポリペプチドは、当該ＴＣＲを発現するＴ細胞の表面上でのＴＣＲ複合体としての当該ＴＣＲの提示を可能にするアミノ酸改変を含み、当該改変は、
（ｉ）配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＴ４８Ｃアミノ酸置換、及び配列番号１２に記載のヒトＴＣＲβポリペプチドに対応するＳ５７Ｃアミノ酸置換を含む、及び／又は
（ｉｉ）当該ＴＣＲαポリペプチド及び当該ＴＣＲβポリペプチドは、キメラヒト及びマウスＴＣＲαポリペプチド並びにキメラヒト及びマウスＴＣＲβポリペプチドを含む。

【0063】

本発明の追加の又は代替の態様によれば、ヒトＴＣＲαポリペプチド及びヒトＴＣＲβポリペプチドを含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が提供され、当該ＴＣＲは、抗原結合ドメインを欠いており、当該ＴＣＲα及びβポリペプチドは、ＴＣＲを発現するＴ細胞の表面上でのＴＣＲ複合体としての当該ＴＣＲの提示を可能にするアミノ酸改変を含み、当該改変は、
（ｉ）配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＴ４８Ｃ、Ｓ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌアミノ酸置換、並びに配列番号１２に記載のヒトＴＣＲβポリペプチドに対応するＳ５７Ｃアミノ酸置換、及び／又は
（ｉｉ）配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するＰ９１Ｓ、Ｅ９２Ｄ、Ｓ９３Ｖ、及びＳ９４Ｐアミノ酸置換、並びに配列番号１２に記載のヒトＴＣＲβポリペプチドに対応するＥ１８Ｋ、Ｓ２２Ａ、Ｆ１３３Ｉ、Ｅ／Ｖ１３６Ａ、及びＱ１３９Ｈアミノ酸置換、を含む、ＴＣＲが提供される。

【0064】

本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）」という用語は、ＴＣＲαポリペプチド及びＴＣＲβポリペプチドのヘテロ二量体を含む受容体であって、ＴＣＲを発現するＴ細胞の表面上にＴＣＲ複合体として提示することができる（又は提示可能である）受容体を指す。

【0065】

本明細書で使用される場合、「ＴＣＲ複合体」という用語は、ＣＤ３とＴＣＲとの会合によって形成される複合体を指す。

【0066】

本明細書で使用される場合、「ＣＤ３」という用語は、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｄ、ＣＤ３Ｅ、又はＣＤ２４７遺伝子のポリペプチド発現産物を指し（それぞれ遺伝子ＩＤ９１７、９１５、９１６、９１９）、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、及びＣＤ３ゼータを含む。特定の実施形態によれば、ＣＤ３は、ヒトＣＤ３である。

【0067】

特定の実施形態によれば、ＣＤ３は、それが発現される細胞にとって内因性である。

【0068】

特定の実施形態によれば、ＣＤ３は、以下のアクセッション番号ＮＰ＿００００６４又は配列番号４に提供されるようなヒトＣＤ３γポリペプチドを指す。

【0069】

特定の実施形態によれば、ＣＤ３は、以下のアクセッション番号ＮＰ＿０００７２３、ＮＰ＿００１０３５７４１又は配列番号５に提供されるようなヒトＣＤ３δを指す。

【0070】

特定の実施形態によれば、ＣＤ３は、以下のアクセッション番号ＮＰ＿０００７２４又は配列番号６で提供されるようなヒトＣＤ３εを指す。

【0071】

特定の実施形態によれば、ＣＤ３ゼータ（ＣＤ２４７）は、以下のアクセッション番号ＮＰ＿０００７２５、ＮＰ＿９３２１７０、ＮＰ＿００１３６５４４４、ＮＰ＿００１３６５４４５、又は配列番号７に提供されるようなヒトを指す。

【0072】

本明細書において、「ＣＤ３ポリペプチド」又は「ＣＤ３鎖」は、完全長ＣＤ３又はその断片若しくはホモログを指し、これは、シグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ３を発現するＴ細胞の表面上にＴＣＲ複合体として提示されるＣＤ３の能力を少なくとも維持する。このようなホモログは、例えば、配列番号４～７に示されるポリペプチドに対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一又は相同であり得る。

【0073】

したがって、例えば、ＴＣＲ複合体は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、２つのＣＤ３ε鎖、ＣＤ３ゼータ鎖のホモ二量体、ＴＣＲαポリペプチド、及びＴＣＲβポリペプチドから構成され得る。

【0074】

ＴＣＲ複合体の提示を決定する方法は、当技術分野において周知であり、例えば、フローサイトメトリー又は抗ＣＤ３抗体若しくは抗ＴＣＲβ抗体を使用する免疫染色を含む。

【0075】

本明細書に開示されるＴＣＲは、抗原結合ドメインを欠いている。

【0076】

特定の実施形態によれば、ＣＤ３ポリペプチドは、異種抗原結合ドメインを欠いている。

【0077】

ＴＣＲが、それを発現するＴ細胞の表面上でのＴＣＲ複合体としてのＴＣＲの提示を可能にするアミノ酸改変を含むヒトＴＣＲα及びヒトＴＣＲβポリペプチドを含む特定の実施形態によれば、ＣＤ３ポリペプチドは、異種抗原結合ドメインを含み得る。

【0078】

本明細書中で使用される場合、「異種」という用語は、少なくとも局在化において、列挙されたアミノ酸配列（例えば、ＴＣＲαポリペプチド、ＴＣＲβポリペプチド、ＣＤ３ポリペプチド）に対してネイティブでないか、又は列挙されたアミノ酸配列のネイティブ配列に完全に存在しないアミノ酸配列又は残基をいう。

【0079】

したがって、特定の実施形態によれば、ＴＣＲ複合体の全ての成分は、抗原結合ドメインを欠いている。

【0080】

本明細書で使用される場合、「抗原結合ドメイン」という句は、ＴＣＲ又は抗体の特異的な様式での抗原への結合、すなわち、１０^－４Ｍ以下のＫｄを付与するアミノ酸配列を含有するドメインを指す。典型的には、本発明の文脈におけるそのようなドメインは、ＴＣＲのＴＣＲα鎖及びβ鎖の可変ドメイン、又は抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメインを含む。

【0081】

したがって、ＴＣＲは、天然に存在する抗原結合ドメインが切断されている、すなわち、天然に存在するＴＣＲの天然に存在する抗原結合ドメインを欠いている。

【0082】

言い換えれば、本発明のいくつかの実施形態のＴＣＲα及びβポリペプチド、並びにＣＤ３ポリペプチドは、抗原結合ドメイン（複数可）に翻訳的に融合されない。

【0083】

いくつかの実施形態のＴＣＲα及びβポリペプチド又はＣＤ３ポリペプチドは、翻訳融合物（例えば、ＴＣＲ複合体に対する結合特異性を有する抗原結合ドメインを含む抗体）としてではなく、抗原結合ドメインに結合され得る。

【0084】

他の特定の実施形態によれば、ＴＣＲα及び／又はβポリペプチドは、非翻訳的に融合された抗原結合ドメインに結合されない。

【0085】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲ及び／又はＣＤ３ポリペプチドは、例えば、Ｔ細胞の標的細胞の細胞表面上に提示される標的に結合することができる結合ドメインを欠いている。言い換えれば、ＴＣＲα及びβポリペプチド及び／又はＣＤ３ポリペプチドは、標的に結合することができる異種細胞外結合ドメインに翻訳的に融合されていない。

【0086】

本明細書で使用される場合、「標的に結合することができる細胞外結合ドメイン」という句は、例えば、標的細胞上に提示されている標的などの目的の標的（又は結合対）に対する結合親和性、すなわち、１０^－４Ｍ以下のＫｄを有するタンパク質性部分を指す。結合ドメインの非限定的な例としては、本明細書中上記で更に記載されるような、受容体の結合ドメイン、リガンドの結合ドメイン、ホルモン（例えば、レプチン）の結合ドメイン、タグ及び抗原結合ドメインが挙げられる。

【0087】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲは、抗原結合ドメイン及び異種細胞外結合ドメインを欠いている。

【0088】

言い換えれば、特定の実施形態によれば、ＴＣＲポリペプチドの細胞外ドメインは、ＴＣＲα鎖及びβ鎖の定常ドメイン若しくはその断片若しくはホモログ、又は定常ドメイン及びヒンジドメイン若しくはその断片若しくはホモログからなる。

【0089】

結合を試験するためのアッセイは、当技術分野において周知であり、フローサイトメトリー、免疫染色、バイオレイヤー干渉法Ｂｌｉｔｚ（登録商標）アッセイ、ＨＰＬＣ、表面プラズモン共鳴（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ）を含むが、これらに限定されない。

【0090】

本明細書において、「ＴＣＲαポリペプチド」は、抗原結合ドメインを欠く（すなわち、可変ドメインを欠く）細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び任意選択で細胞内ドメインを含む、ＴＣＲα鎖又はその相同体の断片であって、少なくとも、ＴＣＲα鎖が、それを発現するＴ細胞の表面上でＴＣＲ複合体として提示される能力を維持する断片を指す。

【0091】

本明細書で使用される場合、「ＴＣＲα」又は「ＴＣＲα鎖」は、ＴＲＡ遺伝子（ヒト遺伝子ＩＤ６９５５に対応する）又はその相同体のポリペプチド発現産物を指す。特定の実施形態によれば、ＴＣＲαは、ヒトＴＣＲαを指す。特定の実施形態によれば、ＴＣＲαは、マウスＴＣＲαを指す。

【0092】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、ＴＣＲα定常ドメイン又はその断片若しくは相同体、ＴＣＲαヒンジ領域、ＴＣＲα膜貫通ドメイン、及びＴＣＲα細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。

【0093】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、１７０未満、１６０未満、１５５未満、又は１５２未満のアミノ酸長であり、各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0094】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、少なくとも１２０、少なくとも１２５、少なくとも１３０、少なくとも１３５、少なくとも１４０、又は少なくとも１５０アミノ酸長であり、各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0095】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、１３５～１５１アミノ酸長である。

【0096】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、約１３５アミノ酸長である。

【0097】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、１４０～１５１アミノ酸長である。

【0098】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、約１４１アミノ酸長である。

【0099】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、約１５１アミノ酸長である。

【0100】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、約１４５アミノ酸長である。

【0101】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、約１５０アミノ酸長である。

【0102】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドのＴＣＲα定常ドメインは、少なくとも８４、少なくとも８５、少なくとも８６、少なくとも８７、少なくとも８８、少なくとも８９、少なくとも９０アミノ酸長である。

【0103】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドのＴＣＲα定常ドメインは、少なくとも８４アミノ酸長である。

【0104】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドのＴＣＲα定常ドメインは、少なくとも８８アミノ酸長である。

【0105】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドのＴＣＲα定常ドメインは、９４アミノ酸長である。

【0106】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドのＴＣＲα定常ドメインは、少なくとも配列番号９のアミノ酸１１～配列番号９のアミノ酸９４の配列であるが、配列番号９の相同配列及び配列改変は、本明細書の上記及び下記に更に記載されるように更に企図される。

【0107】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドのＴＣＲα定常ドメインは、少なくとも、配列番号９のアミノ酸７から配列番号９のアミノ酸９４の間の配列であるが、配列番号９の相同配列及び配列改変は、上記及び下記に更に記載されるように更に企図される。

【0108】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαペプチドは、ＴＣＲαの定常ドメイン全体を含む。

【0109】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、マウスＴＣＲαポリペプチドを含む。

【0110】

本発明の特定の実施形態で使用することができるマウスＴＣＲαポリペプチドの非限定的な例は、Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ Ａ０Ａ０７５Ｂ６６２（配列番号８）で提供される。

【0111】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、ヒトＴＣＲαポリペプチドを含む。

【0112】

可変ドメインを欠くヒトＴＣＲαポリペプチドの非限定的な例は、Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ Ｐ０１８４８（配列番号９）で提供されている。

【0113】

本明細書において、「ＴＣＲβポリペプチド」は、抗原結合ドメインを欠く（すなわち、可変ドメインを欠く）細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び任意選択で細胞内ドメインを含む、ＴＣＲβ鎖又はその相同体の断片であって、少なくとも、ＴＣＲβ鎖が、それを発現するＴ細胞の表面上でＴＣＲ複合体として提示される能力を維持する断片を指す。

【0114】

本明細書で使用される場合、「ＴＣＲβ」又は「ＴＣＲβ鎖」は、ＴＲＢ遺伝子（ヒト遺伝子ＩＤ６９５７に対応する）又はその相同体のポリペプチド発現産物を指し、ＴＲＢＣ１（ヒト遺伝子ＩＤ２８６３９に対応する）及びＴＲＢＣ２（ヒト遺伝子ＩＤ２８６３８に対応する）又はその相同体を含む。

【0115】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβは、ＴＲＢＣ１を指す。

【0116】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβは、ＴＲＢＣ２を指す。

【0117】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβは、ヒトＴＣＲβを指す。

【0118】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβは、マウスＴＣＲβを指す。

【0119】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、ＴＣＲβ定常ドメイン又はその断片若しくはホモログ、ＴＣＲβヒンジ領域、ＴＣＲβ膜貫通ドメイン、及びＴＣＲβ細胞内ドメインのアミノ酸配列を含む。

【0120】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、２５０未満、２００未満、１９０未満、又は１８８未満のアミノ酸長であり、各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0121】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、又は少なくとも１８５アミノ酸長であり、各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0122】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、１７０～１８７アミノ酸長である。

【0123】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、約１７２アミノ酸長である。

【0124】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、約１７８アミノ酸長である。

【0125】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、約１８３アミノ酸長である。

【0126】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、約１８７アミノ酸長である。

【0127】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドのＴＣＲβ定常ドメインは、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１２５アミノ酸長である。

【0128】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドのＴＣＲβ定常ドメインは、１３０アミノ酸長である。

【0129】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβペプチドは、ＴＣＲβの定常ドメイン全体を含む。

【0130】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、マウスＴＣＲβポリペプチドを含む。

【0131】

本発明の特定の実施形態と共に使用され得るマウスＴＣＲβポリペプチドの非限定的な例は、配列番号１０～１１に提供される。

【0132】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、ヒトＴＣＲβポリペプチドを含む。

【0133】

可変ドメインを欠くヒトＴＣＲβポリペプチドの非限定的な例は、配列番号１２～１３に提供される。

【0134】

結合ドメイン（抗原結合ドメイン、異種細胞外結合ドメイン）を欠くヒトＴＣＲα及びβポリペプチドを有するＴＣＲの提示を可能にするために、本発明者らは、ヒトＴＣＲα及びβポリペプチドの配列における改変を想定した。このような改変の非限定的な例としては、異種二量体化部分の挿入及び最小マウスアミノ酸配列の挿入が挙げられる。

【0135】

したがって、特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチド及び／又はＴＣＲβポリペプチドは、キメラヒト及びマウスＴＣＲαポリペプチド及び／又はＴＣＲβポリペプチドを含む。したがって、例えば、ＴＣＲα及び／又はβポリペプチドは、短い（例えば、３～２０）マウスアミノ酸配列を含むヒトＴＣＲα及び／又はβに基づき得る。そのような配列は当技術分野で公知であり、例えば、Ｓｏｍｍｅｒｍｅｙｅｒ Ｄら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０年；Ｂｉａｌｅｒ Ｇら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０に記載されており、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる。

【0136】

したがって、特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号９に記載のＴＣＲαアミノ酸配列に対応するアミノ酸置換（又は変化、又は突然変異）Ｐ９１Ｓ、Ｅ９２Ｄ、Ｓ９３Ｖ、及びＳ９４Ｐを含むヒトＴＣＲαポリペプチドを含む。

【0137】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１２に記載のＴＣＲβアミノ酸配列に対応するアミノ酸置換（又は変化若しくは突然変異）Ｅ１８Ｋ、Ｓ２２Ａ、Ｆ１３３Ｉ、Ｅ／Ｖ１３６Ａ、Ｑ１３９Ｈを含むヒトＴＣＲβポリペプチドを含む。

【0138】

本明細書中で使用される場合、「配列番号９に対応する」という句は、任意の他のＴＣＲαアミノ酸配列に対する対応するアミノ酸残基を含むことが意図される。

【0139】

本明細書中で使用される場合、句「配列番号１２に対応する」という句は、任意の他のＴＣＲβアミノ酸配列に対する対応するアミノ酸残基を含むことが意図される。

【0140】

したがって、特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは配列番号１４を含み、ＴＣＲβポリペプチドは配列番号１５又は１６を含む。

【0141】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは配列番号１１１を含み、ＴＣＲβポリペプチドは配列番号１１２又は１１３を含む。

【0142】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲα及び／又はβポリペプチドは、それぞれマウスＴＣＲα及び／又はβのヒンジ領域を含むヒトＴＣＲα及び／又はβに基づき得る。

【0143】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲα及び／又はβポリペプチドは、それぞれヒトＴＣＲα及び／又はβの膜貫通ドメイン及び任意選択で細胞内ドメイン、並びにそれぞれマウスＴＣＲα及び／又はβの細胞外ドメインを含み得る。

【0144】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲは、異種二量体化部分を含む。

【0145】

特定の実施形態によれば、異種二量体化部分は、ＴＣＲの細胞外ドメインに位置する。

【0146】

特定の実施形態によれば、異種二量体化部分は、ＴＣＲの定常ドメインに位置する。

【0147】

特定の実施形態によれば、異種二量体化部分は、ＴＣＲのヒンジドメインに位置する。

【0148】

本明細書で使用される場合、「二量体化部分」という用語は、ＴＣＲαポリペプチド－ＴＣＲβポリペプチドヘテロ二量体を形成することができる異種アミノ酸配列を指す。このようなアミノ酸は、例えば、少なくとも２つのシステイン残基（１つはＴＣＲαポリペプチド中にあり、第２のシステイン残基はＴＣＲβポリペプチド中にある）を含むアミノ酸配列を含み、チオール基間のジスルフィド結合の形成を可能にする。別の例は、二量体化ドメイン又は二量体の立体的形成を可能にするアミノ酸配列である。このような配列は、当業者に公知である。二量体化を決定する方法は、当技術分野において公知であり、免疫沈降、サイズ排除クロマトグラフィー、高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）、多角度光散乱（ＳＥＣ－ＭＡＬＳ）分析、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析、ナノＤＳＦ、酵母ツーハイブリッドシステム（例えば、ＲＲＳ）、及びフローサイトメトリーが挙げられるが、これらに限定されない。

【0149】

当技術分野で公知の任意の公知の二量体化部分を、本発明の特定の実施形態で使用することができる。本発明の特定の実施形態と共に使用され得る二量体化部分の非限定的な例としては、ＴＣＲαポリペプチド及びＴＣＲβポリペプチドの各々における異種システイン残基、抗体のＦｃドメイン（抗体抗原結合ドメインを含まない）、ヘテロダイマーを形成し得るマウスアミノ酸配列、例えば、本明細書中上記で記載される短いマウスアミノ酸配列、ＦＲＢ－ＦＫＢＰ、ロイシンジッパーが挙げられる。

【0150】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲα及びβポリペプチドの各々は、少なくとも１つの異種システインを含む。

【0151】

特定の実施形態によれば、異種システインは、ＴＣＲα及びβポリペプチドの各々の細胞外ドメインに位置する。

【0152】

特定の実施形態によれば、異種システインは、ＴＣＲα及びβポリペプチドの各々のヒンジ又は定常ドメインに位置する。

【0153】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号９に記載のＴＣＲαアミノ酸配列に対応するＴ４８Ｃアミノ酸置換を含み、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１２に記載のＴＣＲβアミノ酸配列に対応するＳ５７Ｃアミノ酸置換を含む。

【0154】

したがって、特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは配列番号１７を含み、ＴＣＲβポリペプチドは配列番号１８又は１９を含む。

【0155】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは配列番号１１４を含み、ＴＣＲβポリペプチドは配列番号１１５又は１１６を含む。

【0156】

ＴＣＲα及びβポリペプチドの各々は、αポリペプチドとβポリペプチドとの間に単一のジスルフィド結合を形成するポリペプチドのヒンジ領域に位置する内因性システインを含むので、少なくとも１つの異種システインの付加は、ＴＣＲαポリペプチドとＴＣＲβポリペプチドとの間の少なくとも２つのジスルフィド結合の形成を可能にするＴＣＲα及びβポリペプチドの各々における少なくとも２つのシステイン残基の存在をもたらす。

【0157】

したがって、特定の実施形態によれば、ＴＣＲα及びβポリペプチドの各々は、αポリペプチドとβポリペプチドとの間に少なくとも２つのジスルフィド結合を形成することができる少なくとも２つのシステイン残基を含む。

【0158】

特定の実施形態によれば、少なくとも２つのシステイン残基は、ＴＣＲα及びβポリペプチドの各々の細胞外ドメインに位置する。

【0159】

特定の実施形態によれば、少なくとも１つのシステイン残基は、ＴＣＲα及びβポリペプチドの各々のヒンジ領域に位置し、少なくとも１つのシステイン残基は、ＴＣＲα及びβポリペプチドの各々のヒンジ又は定常ドメインに位置する。

【0160】

「ＴＣＲαポリペプチド」及び「ＴＣＲβポリペプチド」という用語はまた、所望の活性を示す（すなわち、それを発現するＴ細胞の表面上にＴＣＲ複合体として提示される）機能的相同体（天然に存在する、又は合成的／組換え的に産生される）を包含する。このような相同体は、例えば、ＴＣＲαについては配列番号８、９、１４、１７、１１１、又は１１４に示されるポリペプチド、及びＴＣＲβについては配列番号１０～１３、１５～１６、１８～１９、１１２～１１３、又は１１５～１１６に示されるポリペプチドに対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一又は相同であり得る（以下に更に記載されるように）。

【0161】

配列同一性又は相同性は、Ｂｌａｓｔ、ＣｌｕｓｔａｌＷ、及びＭＵＳＣＬＥなどの任意のタンパク質又は核酸配列アラインメントアルゴリズムを使用して判定することができる。

【0162】

相同体はまた、以下に更に記載されるように、オルソログ、欠失、挿入、又はアミノ酸置換を含む置換改変体を指し得る。

【0163】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチド及び／又はＴＣＲβポリペプチドは、保存的及び／又は非保存的アミノ酸置換を含み得る。そのような置換の非限定的な例は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｈａｇａ－Ｆｒｉｅｄｍａｎ Ａら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２年；１８８：５５３８－４６；Ｆｒｏｎｉｎｇ Ｋら、Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ［インターネット］．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ ＵＳ；２０２０年；１１：１－１４；Ｂｏｕｌｔｅｒ ＪＭら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．２００３年；１６：７０７－１１に記載されており、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる。

【0164】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチド及び／又はＴＣＲβポリペプチドは、内因性システイン残基、例えば、ＴＣＲα及びβのそれぞれのヒンジ領域に位置する内因性システイン残基に保存的及び／又は非保存的アミノ酸置換を含まない。

【0165】

本明細書で使用される「保存的置換」という用語は、ペプチド中の天然配列中に存在するアミノ酸の、天然若しくは非天然のアミノ又は同様の立体特性を有するペプチド模倣体による置換を指す。置換される天然アミノ酸の側鎖が、極性又は疎水性のいずれかである場合、保存的置換は、天然に存在するアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、又は（置換されたアミノ酸の側鎖と同じ立体特性を有することに加えて）極性又は疎水性であるペプチド模倣物部分によるものであるべきである。

【0166】

天然に存在するアミノ酸は、典型的には、それらの特性に従って分類されるので、天然に存在するアミノ酸による保存的置換は、本発明に従って、立体的に類似した非荷電アミノ酸による荷電アミノ酸の置換が保存的置換とみなされるという事実を考慮して、容易に決定することができる。

【0167】

天然に存在しないアミノ酸による保存的置換を生成するために、当該分野で周知のアミノ酸アナログ（合成アミノ酸）を使用することもまた可能である。天然に存在するアミノ酸のペプチド模倣物は、当業者に公知の文献に十分に記載されている。

【0168】

保存的置換に影響を及ぼす場合、置換アミノ酸は、元のアミノ酸と同じ又は類似の官能基を側鎖に有するべきである。

【0169】

「非保存的置換」という句は、本明細書で使用される場合、親配列中に存在するアミノ酸の、異なる電気化学的及び／又は立体的特性を有する別の天然又は非天然アミノ酸による置換を指す。したがって、置換アミノ酸の側鎖は、置換される天然アミノ酸の側鎖よりも有意に大きく（又は小さく）することができる、及び／又は置換されるアミノ酸とは有意に異なる電子特性を有する官能基を有することができる。このタイプの非保存的置換の例としては、アラニンに対するフェニルアラニン若しくはシクロヘキシルメチルグリシンの置換、グリシンに対するイソロイシンの置換、又はアスパラギン酸に対する－ＮＨ－ＣＨ［（－ＣＨ_２）_５－ＣＯＯＨ］－ＣＯの置換が挙げられる。本発明の範囲に入るこれらの非保存的置換は、神経保護特性を有するペプチドをなお構成するものである。

【0170】

したがって、特定の実施形態によれば、ＴＣＲαにおける１つ以上のアミノ酸置換（又は変化若しくは突然変異）は、配列番号９に記載のＴＣＲαアミノ酸配列に対応するＳ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌからなる群から選択される。

【0171】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号９に示されるヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するアミノ酸置換Ｓ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌを含む。

【0172】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するアミノ酸置換Ｔ４８Ｃ、Ｓ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌを含み、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１２に記載のヒトＴＣＲβポリペプチドに対応するアミノ酸置換Ｓ５７Ｃを含む。

【0173】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチド及びＴＣＲβポリペプチドは、キメラヒト及びマウスＴＣＲαポリペプチド並びにキメラヒト及びマウスＴＣＲβポリペプチドを含み、更に、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号９に記載のヒトＴＣＲαポリペプチドに対応するアミノ酸置換Ｔ４８Ｃを含み、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１２に記載のヒトＴＣＲβポリペプチドに対応するアミノ酸置換Ｓ５７Ｃを含む。

【0174】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαにおける１つ以上のアミノ酸変化は、配列番号９に記載のＴＣＲαアミノ酸配列に対応するＳ２１Ｆ、Ｔ３２Ｉ、Ａ７２Ｔからなる群から選択される。

【0175】

他の特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号９に記載のＴＣＲαアミノ酸配列に対応するＳ２１Ｆ、Ｔ３２Ｉ、Ａ７２Ｔからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸変化を含まない。

【0176】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβにおける１つ以上のアミノ酸変化は、配列番号１２に記載のＴＣＲβアミノ酸配列に対応するＥ１８Ｋ、Ｈ２３Ｒ、Ｄ３９Ｐ、Ｓ５４Ｄからなる群から選択される。

【0177】

他の特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１２に記載のＴＣＲβアミノ酸配列に対応するＥ１８Ｋ、Ｈ２３Ｒ、Ｄ３９Ｐ、Ｓ５４Ｄからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸変化を含まない。

【0178】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号８、１４、１７、２０～２３、４７、１１１、１１４、及び１１７～１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0179】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号８、１４、１７、２０～２３、４７、１１１、１１４、及び１１７～１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0180】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号８、１４、１７、及び２０～２３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0181】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号８、１４、１７、及び２０～２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0182】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号１４、１７、２０～２３、４７、１１１、１１４、及び１１７～１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0183】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号１４、１７、２０～２３、４７、１１１、１１４、及び１１７～１２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0184】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号１４、１７、及び２０～２３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0185】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号１４、１７、及び２０～２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0186】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号１４及び２０～２３からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0187】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号１４及び２０～２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0188】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１０～１１、１５～１６、１８～１９、２４～２５、１１２～１１３、１１５～１１６、及び１２１～１２２からなる群から選択されるアミノ酸に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0189】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１０～１１、１５～１６、１８～１９、２４～２５、１１２～１１３、１１５～１１６、及び１２１～１２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0190】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１０～１１、１５～１６、１８～１９、及び２４～２５からなる群から選択されるアミノ酸に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0191】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１０～１１、１５～１６、１８～１９、及び２４～２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0192】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１５～１６、１８～１９、２４～２５、１１２～１１３、１１５～１１６、及び１２１～１２２からなる群から選択されるアミノ酸に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0193】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１５～１６、１８～１９、２４～２５、１１２～１１３、１１５～１１６、及び１２１～１２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0194】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１５～１６、１８～１９、及び２４～２５からなる群から選択されるアミノ酸に対して少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0195】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１５～１６、１８～１９及び２４～２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0196】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは配列番号８を含み、ＴＣＲβポリペプチドは配列番号１０又は１１を含む。

【0197】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは配列番号１４を含み、ＴＣＲβポリペプチドは配列番号１５又は１６を含む。

【0198】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは配列番号１１１を含み、ＴＣＲβポリペプチドは配列番号１１２又は１１３を含む。

【0199】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは配列番号１７又は２０を含み、ＴＣＲβポリペプチドは配列番号１８又は１９を含む。

【0200】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号１１４又は１１７を含み、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１１５又は１１６を含む。

【0201】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは配列番号２１又は２３を含み、ＴＣＲβポリペプチドは配列番号２４又は２５を含む。

【0202】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは、配列番号１１８又は１２０を含み、ＴＣＲβポリペプチドは、配列番号１２１又は１２２を含む。

【0203】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは配列番号２２を含み、ＴＣＲβポリペプチドは配列番号１５又は１６を含む。

【0204】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは配列番号１１９を含み、ＴＣＲβポリペプチドは配列番号１１２又は１１３を含む。

【0205】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは配列番号４７を含み、ＴＣＲβポリペプチドは配列番号１８又は１９を含む。

【0206】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲαポリペプチドは配列番号４７を含み、ＴＣＲβポリペプチドは配列番号１１５又は１１６を含む。

【0207】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲは、本明細書で定義されるＴＣＲα及びβポリペプチドに対して異種の細胞外ドメインを欠いている。

【0208】

しかしながら、特定の実施形態によれば、ＴＣＲは、細胞外ドメイン（例えば、細胞外結合ドメイン）でない限り、ＴＣＲα及び／又はβポリペプチドに翻訳的に融合された異種アミノ酸配列を含み得る。そのような異種配列の非限定的な例は、輸送配列（例えば、配列番号４２に提供されるようなＣＤ８膜輸送ペプチド）、タグなどの細胞内ドメイン、シグナル伝達ドメインなどのアミノ酸配列を含み得る。

【0209】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲは、それが抗原結合ドメインでない限り、ＴＣＲα及び／又はβポリペプチドに翻訳的に融合された異種アミノ酸配列を含み得る。そのような異種配列の非限定的な例は、輸送配列（例えば、配列番号４２に提供されるようなＣＤ８膜輸送ペプチド）、受容体、リガンド又はホルモン、シグナル伝達ドメインのアミノ酸配列を含み得る。

【0210】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲは、受容体又はリガンドの異種ドメインを含む。このような受容体の非限定的な例としては、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＥｐｏＲ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＭＰＬ、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＳＦ２ＲＡ、ＦＬＴ３、ＣＤ１１７、ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＣＤ２８、設計アンキリンリピートタンパク（ＤＡＲＰｉｎ）が挙げられる。このようなリガンドの非限定的な例としては、ＴＰＯ、ＩＬ２、ＩＬ１５、ＩＬ１８、ＳＣＦが挙げられる。

【0211】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲは、受容体又はリガンドの異種ドメインを欠いている。

【0212】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲは、活性化又は阻害シグナル伝達ドメインであり得る異種シグナル伝達ドメインを含む。

【0213】

本明細書中で使用される場合、「活性化シグナル」という句は、Ｔ細胞増殖、成熟、サイトカイン産生及び／又は調節機能若しくはエフェクター機能の誘導を生じる一次刺激シグナル又は共刺激シグナルを伝達し得るアミノ酸配列を指す。典型的には、活性化一次刺激シグナルドメインはＩＴＡＭドメインを含み、共刺激シグナルドメインはＩＴＡＭドメインを含まない。

【0214】

任意の公知の活性化シグナルドメインを、本発明の特定の実施形態で使用することができる。活性化シグナル伝達ドメインの非限定的な例としては、タンパク質ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲβ、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ１、ＬＦＡ１（ＣＤ１１ａ）、ＣＤ２、ＣＤ４０Ｌ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ３０、Ｆｃ受容体、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２の細胞内シグナル伝達ドメインが挙げられる。

【0215】

本明細書中で使用される場合、「阻害シグナル」という句は、Ｔ細胞増殖の抑制、成熟、サイトカイン産生及び／又は調節機能若しくはエフェクター機能の誘導を生じる一次又は二次阻害シグナルを伝達し得るアミノ酸配列を指す。特定の実施形態によれば、阻害シグナルドメインは、ＩＴＩＭドメインを含む細胞内ドメインである。

【0216】

任意の公知の阻害シグナルドメインを、本発明の特定の実施形態で使用することができる。阻害性シグナル伝達ドメインの非限定的な例としては、タンパク質ＰＤ１、ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、２Ｂ４、ＣＤ３００ＬＦ、ＰＥＣＡＭ、ＬＹ９、ＳＩＲＰＡ、及びＣＤ２４４の細胞内シグナル伝達ドメインが挙げられる。

【0217】

Ｔ細胞における活性化又は阻害シグナルのシグナル伝達を判定する方法は、当技術分野において周知であり、例えば、ＢｉａＣｏｒｅ、ＨＰＬＣ、又はフローサイトメトリーを使用する結合アッセイ、キナーゼ活性アッセイなどの酵素活性アッセイ、並びに例えば、ＰＣＲ、ウェスタンブロット、免疫沈降及び免疫組織化学を使用するシグナル伝達カスケードに関与する分子の発現が挙げられるが、これらに限定されない。追加的に又は代替的に、シグナルの伝達を判定することは、Ｔ細胞活性化又は機能を評価することによって達成することができる。Ｔ細胞活性化又は機能を評価する方法は、当技術分野において周知であり、ＢＲＤＵ及びチミジン取り込みなどの増殖アッセイ、クロム放出などの細胞傷害性アッセイ、細胞内サイトカイン染色ＥＬＩＳＰＯＴ及びＥＬＩＳＡなどのサイトカイン分泌アッセイ、フローサイトメトリーを使用するＣＤ２５、ＣＤ６９、及びＣＤ６９などの活性化マーカーの発現を含むが、これらに限定されない。

【0218】

他の特定の実施形態によれば、ＴＣＲは、異種シグナル伝達ドメインを欠いている。

【0219】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲは、異種タグを含むか、又はタグに結合している。

【0220】

特定の実施形態によれば、タグは、検出可能な部分である。

【0221】

本発明において使用され得る検出可能な部分の例としては、放射性同位体（例えば、^{［１２５］}ヨウ素）、リン光化学発光又は蛍光化学物質及び酵素［例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＰＲ）、β－ガラクトシダーゼ、及びアルカリホスファターゼ（ＡＰ）］が挙げられるが、これらに限定されない。検出可能な部分の更なる例としては、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）及び磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）によって検出可能なものが挙げられ、これらは全て当業者に周知である。

【0222】

特定の実施形態で使用することができるタグの非限定的な例としては、キチン結合タンパク質（ＣＢＰ）タグ、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグ、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ、ポリ（Ｈｉｓ）タグ、ＦＬＡＧタグ、ビオチン、ヒスチジン、エピトープタグ、例えば、Ｖ５タグ、ｃ－ｍｙｃタグ、及びＨＡタグ、並びに蛍光タグ、例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ又はＥＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）、及びシアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、並びにこれらのタグの誘導体、又は当技術分野で公知の任意のタグが挙げられる。

【0223】

本発明のいくつかの実施形態のＴＣＲの非限定的な概略図及び配列は、図２Ａ～Ｂ並びに配列番号２、２６～３２、４６、４９、６３～６８、及び１２５に提供される。

【0224】

典型的には、本明細書に開示されるＴＣＲは、組換えＤＮＡ技術によって産生される。

【0225】

したがって、本発明の一態様によれば、ＴＣＲ又はＴＣＲ複合体をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドが提供される。

【0226】

本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、単離され、ＲＮＡ配列、相補的ポリヌクレオチド配列（ｃＤＮＡ）、ゲノムポリヌクレオチド配列、及び／又は複合ポリヌクレオチド配列（例えば、上記の組合せ）の形態で提供される一本鎖又は二本鎖核酸配列を指す。

【0227】

特定の実施形態によれば、少なくとも１つのポリヌクレオチドは、ＴＣＲαポリペプチドをコードする核酸配列、及びＴＣＲβポリペプチドをコードする核酸配列を含む。

【0228】

特定の実施形態によれば、ＴＣＲα及びβポリペプチドは、単一のポリヌクレオチドによってコードされる。単一のポリヌクレオチドからの複数のポリペプチドの発現についての更なる説明を以下に提供する。

【0229】

したがって、特定の実施形態によれば、少なくとも１つのポリヌクレオチドは、１つのポリヌクレオチドである。

【0230】

他の特定の実施形態によれば、別個のポリヌクレオチドが、ＴＣＲα及びβポリペプチドをコードするために使用される。

【0231】

したがって、特定の実施形態によれば、少なくとも１つのポリヌクレオチドは、少なくとも２つのポリヌクレオチドである。

【0232】

特定の実施形態によれば、少なくとも１つのポリヌクレオチドは、２つのポリヌクレオチドである。

【0233】

特定の実施形態によれば、少なくとも１つのポリヌクレオチドは、ＣＤ３ポリペプチドをコードする核酸配列を更に含む。

【0234】

開示されたポリペプチドのいずれかを細胞内で発現させるために、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、好ましくは、細胞発現に適した核酸構築物に連結される。このような核酸構築物は、核酸配列の発現を指示するための少なくとも１つのシス作用性調節エレメントを含む。シス作用性調節配列には、ヌクレオチド配列の構成的発現を指示するもの、並びに特定の条件下でのみヌクレオチド配列の誘導性発現を指示するものが含まれる。したがって、例えば、構成的又は誘導性の様式で細胞においてポリヌクレオチド配列の転写を指示するためのプロモーター配列が、核酸構築物に含まれる。

【0235】

本発明のいくつかの実施形態の核酸構築物（本明細書では「発現ベクター」とも呼ばれる）は、このベクターを複製及び組み込みに適したものにする更なる配列（例えば、シャトルベクター）を含む。更に、典型的なクローニングベクターはまた、転写及び翻訳開始配列、転写及び翻訳ターミネーター、並びにポリアデニル化シグナルを含み得る。例として、このような構築物は、典型的には、５’ＬＴＲ、ｔＲＮＡ結合部位、パッケージングシグナル、第２鎖ＤＮＡ合成の起点、及び３’ＬＴＲ又はその一部を含む。

【0236】

本発明のいくつかの実施形態の核酸構築物は、典型的には、ポリペプチドを細胞表面に標的化するためのシグナル配列を含むか、又はコードする。特定の実施形態によれば、この目的のためのシグナル配列は、哺乳動物シグナル配列又は本発明のいくつかの実施形態のポリペプチド変異体のシグナル配列である。

【0237】

真核生物プロモーターは、代表的に、２つの型の認識配列であるＴＡＴＡボックス及び上流プロモーターエレメントを含む。転写開始部位の２５～３０塩基対上流に位置するＴＡＴＡボックスは、ＲＮＡポリメラーゼにＲＮＡ合成を開始させることに関与すると考えられている。他の上流プロモーターエレメントは、転写が開始される速度を決定する。

【0238】

好ましくは、本発明のいくつかの実施形態の核酸構築物によって利用されるプロモーターは、形質転換された特定の細胞集団、すなわちＴ細胞において活性である。Ｔ細胞特異的プロモーターの例としては、リンパ系特異的プロモーター［Ｃａｌａｍｅら（１９８８年）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３：２３５－２７５］；特に、Ｔ細胞受容体のプロモーター［Ｗｉｎｏｔｏら（１９８９年）ＥＭＢＯ Ｊ．８：７２９－７３３］を含む。

【0239】

エンハンサーエレメントは、連結された同種又は異種プロモーターから１，０００倍まで転写を刺激することができる。エンハンサーは、転写開始部位から下流又は上流に配置された場合に活性である。ウイルスに由来する多くのエンハンサーエレメントは、広い宿主範囲を有し、種々の組織において活性である。例えば、ＳＶ４０初期遺伝子エンハンサーは、多くの細胞型に適している。本発明のいくつかの実施形態に適した他のエンハンサー／プロモーターの組み合わせとしては、ポリオーマウイルス、ヒト又はマウスサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、種々のレトロウイルス（例えば、マウス白血病ウイルス、マウス又はラウス肉腫ウイルス及びＨＩＶ）由来の末端反復配列に由来するものが挙げられる。引用により本明細書に組み込まれた、Ｅｎｈａｎｃｅｒ ａｎｄ Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ニューヨーク、１９８３年を参照されたい。

【0240】

発現ベクターの構築において、プロモーターは、好ましくは、その天然の設定における転写開始部位からの距離とほぼ同じ、異種転写開始部位からの距離に位置する。しかし、当該分野で公知であるように、この距離におけるいくらかの変動は、プロモーター機能の損失なしに適応させることができる。

【0241】

ポリアデニル化配列もまた、ｍＲＮＡ翻訳の効率を増加させるために発現ベクターに付加され得る。２つの別個の配列エレメントであるリアデニル化部位から下流に位置するＧＵ又はＵリッチ配列、及び１１～３０ヌクレオチド上流に位置する６ヌクレオチドの高度に保存された配列ＡＡＵＡＡＡが、正確かつ効率的なポリアデニル化のために必要とされる。本発明のいくつかの実施形態に適した終結シグナル及びポリアデニル化シグナルとしては、ＳＶ４０に由来するものが挙げられる。

【0242】

既に記載されたエレメントに加えて、本発明のいくつかの実施形態の発現ベクターは、典型的には、クローン化された核酸の発現のレベルを増加させること、又は組換えＤＮＡを保有する細胞の同定を容易にすることが意図される他の特殊化されたエレメントを含み得る。例えば、多くの動物ウイルスは、許容細胞型におけるウイルスゲノムの染色体外複製を促進するＤＮＡ配列を含む。これらのウイルスレプリコンを保有するプラスミドは、適切な因子がプラスミド上に保有されるか、又は宿主細胞のゲノムと共に保有される遺伝子によって提供される限り、エピソーム状に複製される。

【0243】

ベクターは、真核生物レプリコンを含んでも含まなくてもよい。真核生物レプリコンが存在する場合、ベクターは、適切な選択マーカーを使用して真核生物細胞において増幅可能である。ベクターが真核生物レプリコンを含まない場合、エピソーム増幅は不可能である。代わりに、組換えＤＮＡは、操作された細胞のゲノムに組み込まれ、ここで、プロモーターは、所望の核酸の発現を指向する。

【0244】

本発明のいくつかの実施形態の発現ベクターは、例えば、単一のｍＲＮＡからのいくつかのタンパク質の翻訳を可能にする追加のポリヌクレオチド配列、例えば、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）又は自己切断可能ペプチド、例えば、スペーサ及び／又はプロテアーゼ、例えば、フーリン切断部位を伴い得る２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ）（例えば、Ｙａｎｇら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００８年；１５（２１）：１４１１－１４２３を参照されたい）；及びゲノム組み込みのための配列を更に含むことができる。

【0245】

発現ベクター中に含まれる個々のエレメントは、種々の構成で配置され得ることが理解される。例えば、エンハンサーエレメント、プロモーターなど、及びポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列（複数可）でさえ、「頭－尾」配置で配置され得、逆方向補体として、又は逆平行鎖として相補的構成で存在し得る。このような種々の構成は、発現ベクターの非コードエレメントで生じる可能性がより高いが、発現ベクター内のコード配列の代替的な構成も想定される。

【0246】

哺乳動物発現ベクターの例としては、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能なｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／－）、ｐＧＬ３、ｐＺｅｏＳＶ２（＋／－）、ｐＳｅｃＴａｇ２、ｐＤｉｓｐｌａｙ、ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＭＶ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＳｉｎＲｅｐ５、ＤＨ２６Ｓ、ＤＨＢＢ、ｐＮＭＴ１、ｐＮＭＴ４１、ｐＮＭＴ８１、Ｐｒｏｍｅｇａから入手可能なｐＣＩ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅから入手可能なｐＭｂａｃ、ｐＰｂａｃ、ｐＢＫ－ＲＳＶ及びｐＢＫ－ＣＭＶ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手可能なｐＴＲＥＳ、並びにそれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。

【0247】

真核生物ウイルス（例えば、レトロウイルス）由来の調節エレメントを含む発現ベクターも使用することができる。ＳＶ４０ベクターは、ｐＳＶＴ７及びｐＭＴ２を含む。ウシパピローマウイルス由来のベクターにはｐＢＶ－１ＭＴＨＡが含まれ、エプスタインバーウイルス由来のベクターにはｐＨＥＢＯ及びｐ２Ｏ５が含まれる。他の例示的なベクターとしては、ｐＭＳＧ、ｐＡＶ００９／Ａ^＋、ｐＭＴＯ１０／Ａ^＋、ｐＭＡＭｎｅｏ－５、バキュロウイルスｐＤＳＶＥ、及びＳＶ－４０初期プロモーター、ＳＶ－４０後期プロモーター、メタロチオネインプロモーター、マウス乳癌ウイルスプロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ポリヘドリンプロモーター、又は真核生物細胞における発現に有効であることが示されている他のプロモーターの指示下でタンパク質の発現を可能にする任意の他のベクターが挙げられる。

【0248】

上記のように、ウイルスは、多くの場合、宿主防御機構を逃れるために進化してきた非常に特殊化した感染性因子である。典型的には、ウイルスは特定の細胞型に感染し、増殖する。ウイルスベクターの標的特異性は、予め決定された細胞型を特異的に標的とし、それによって組換え遺伝子を感染細胞に導入するその天然の特異性を利用する。Ｔ細胞を形質転換するための適切なベクターを選択する能力は、十分に当業者の能力の範囲内であり、したがって、選択の考慮の一般的な説明は、本明細書中に提供されない。

【0249】

組換えウイルスベクターは、側方感染及び標的特異性などの利点を提供するので、ポリペプチドのインビボ発現に有用である。側方感染は、例えばレトロウイルスの生活環に固有であり、単一の感染細胞が、出芽して隣接細胞に感染する多くの子孫ビリオンを産生するプロセスである。その結果、大きな領域が急速に感染し、その大部分は最初は元のウイルス粒子に感染しなかった。これは、感染因子が娘子孫を介してのみ広がる垂直型の感染とは対照的である。側方に広がることができないウイルスベクターも作製することができる。この特徴は、所望の目的が局在化された数の標的細胞のみに特定の遺伝子を導入することである場合に有用であり得る。

【0250】

様々な方法を使用して、本発明のいくつかの実施形態の発現ベクターを細胞に導入することができる。このような方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ニューヨーク（１９８９年、１９９２年）、Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、メリーランド州ボルチモア（１９８９年）、Ｃｈａｎｇら、Ｓｏｍａｔｉｃ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ（１９９５年）、Ｖｅｇａら、Ｇｅｎｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、ミシガン州アンアーバー（１９９５年）、Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ，Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，Ｂｏｓｔｏｎ Ｍａｓｓ．（１９８８年）、及びＧｉｌｂｏａら［Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４（６）：５０４－５１２，１９８６］に一般的に記載されており、例えば、安定又は一過性トランスフェクション、リポフェクション、電気穿孔、及び組換えウイルスベクターによる感染を含む。更に、正－負選択法については、米国特許第５，４６４，７６４号及び同第５，４８７，９９２号を参照されたい。

【0251】

ウイルス感染による核酸の導入は、ウイルスの感染性のためにより高いトランスフェクション効率を得ることができるので、リポフェクション及び電気穿孔などの他の方法よりもいくつかの利点を提供する。

【0252】

現在好ましいインビボ核酸移入技術としては、ウイルス構築物又は非ウイルス構築物（例えば、アデノウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスＩウイルス、又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）及び脂質ベースの系）でのトランスフェクションが挙げられる。遺伝子の脂質媒介移入に有用な脂質は、例えば、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥ、及びＤＣ－Ｃｈｏｌである［Ｔｏｎｋｉｎｓｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，１４（１）：５４－６５（１９９６年）］。遺伝子治療における使用のための最も好ましい構築物はウイルスであり、最も好ましくはアデノウイルス、ＡＡＶ、レンチウイルス、又はレトロウイルスである。レトロウイルス構築物のようなウイルス構築物は、少なくとも１つの転写プロモーター／エンハンサー又は遺伝子座規定エレメント、あるいは選択的スプライシング、核ＲＮＡ輸送、又はメッセンジャーの翻訳後修飾のような他の手段によって遺伝子発現を制御する他のエレメントを含む。このようなベクター構築物はまた、パッケージングシグナル、末端反復配列（ＬＴＲ）又はその一部、並びにウイルス構築物中に既に存在しない限り、使用されるウイルスに適切なプラス鎖プライマー結合部位及びマイナス鎖プライマー結合部位を含む。更に、このような構築物は、代表的には、ポリペプチドを細胞中の所望の部位に標的化するためのシグナル配列を含む。特定の実施形態によれば、シグナル配列は、膜輸送配列を含む。このような配列は、当該分野で公知である。このような配列の非限定的な例は、配列番号４３に提供されるようなＣＤ８シグナルペプチドである。必要に応じて、この構築物はまた、ポリアデニル化を指向するシグナル、並びに１つ以上の制限部位及び翻訳終結配列を含み得る。例として、このような構築物は、典型的には、５’ＬＴＲ、ｔＲＮＡ結合部位、パッケージングシグナル、第２鎖ＤＮＡ合成の起点、及び３’ＬＴＲ又はその一部を含む。非ウイルス性である他のベクター（例えば、カチオン性脂質、ポリリジン、及びデンドリマー）を使用することができる。

【0253】

特定の実施形態によれば、ポリヌクレオチドは、例えば内因性ＴＣＲをノックアウトしながら（すなわち、ノックイン／ノックアウト）、細胞において発現される。そのような方法は、当技術分野において公知であり［例えば、Ｍｅｎｋｅ Ｄ．Ｇｅｎｅｓｉｓ（２０１３）５１：－６１８；Ｃａｐｅｃｃｈｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８９）２４４：１２８８－１２９２；Ｓａｎｔｉａｇｏら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ（２００８年）１０５：５８０９－５８１４；国際特許出願第ＷＯ２０１４０８５５９３号、同第ＷＯ２００９０７１３３４号、及び第ＷＯ２０１１１４６１２１号；米国特許第８７７１９４５号、同第８５８６５２６号、同第６７７４２７９号、及び米国特許出願公開第２００３０２３２４１０号、同第２００５００２６１５７号、同第２００６００１４２６４号；その内容は参照によりその全体が組み込まれる］、標的化相同組換え、部位特異的リコンビナーゼ、ＰＢトランスポザーゼ、並びに操作されたヌクレアーゼ（例えば、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）及びＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系）によるゲノム編集を含む。

【0254】

本発明のいくつかの実施形態のＴＣＲをコードする非限定的な概略図及び核酸構築物を、図２Ａ～Ｂ並びに配列番号３３～４０、５３、７３～７９、及び１２６に提供する。

【0255】

本発明の特定の実施形態はまた、本明細書に記載されるＴＣＲ又はＴＣＲ複合体を含む細胞、例えばＴ細胞、及びそれを生成する方法を企図する。

【0256】

したがって、本発明の一態様によれば、ＴＣＲ複合体又はＴＣＲ若しくはそれをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを発現させる形質導入細胞が提供される。

【0257】

本発明の一態様によれば、ＴＣＲ複合体又はＴＣＲ若しくはそれをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを発現させる形質導入Ｔ細胞が提供される。

【0258】

本発明の追加の又は代替の態様によれば、ＴＣＲ又はＴＣＲ複合体発現細胞を作製する方法が提供され、本方法は、ＴＣＲ又はＴＣＲ複合体の発現を可能にする条件下で、本明細書に開示されるＴＣＲをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを細胞に導入することを含む。

【0259】

本発明の追加の又は代替の態様によれば、ＴＣＲ又はＴＣＲ複合体発現Ｔ細胞を作製する方法が提供され、本方法は、ＴＣＲ又はＴＣＲ複合体の発現を可能にする条件下で、本明細書に開示されるＴＣＲをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドをＴ細胞に導入することを含む。

【0260】

本発明の追加の又は代替の態様によれば、Ｔ細胞においてＴＣＲ又はＴＣＲ複合体を発現させる方法が提供され、本方法は、ＴＣＲ又はＴＣＲ複合体の発現を可能にする条件下で、本明細書に開示されるＴＣＲをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドをＴ細胞に導入することを含む。

【0261】

そのような条件は、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）、雰囲気（例えば、空気＋５％ＣＯ_２）、ｐＨ、光、培地、サプリメントなどが挙げられる。

【0262】

他の特定の実施形態によれば、導入は、インビボで行われる。

【0263】

特定の実施形態によれば、導入は、インビトロ又はエクスビボで行われる。

【0264】

ポリヌクレオチドが導入される細胞の非限定的な例としては、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、多能性幹細胞、造血幹細胞、及び前駆細胞などが挙げられる。

【0265】

本発明の特定の実施形態で使用することができる幹細胞の非限定的な例としては、胚幹（ＥＳ）細胞、生殖系列幹細胞（ＧＳ細胞）、胚生殖細胞（ＥＧ細胞）、人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞、臍帯血由来多能性幹細胞、骨髄由来幹細胞などが挙げられる。

【0266】

特定の実施形態によれば、ポリヌクレオチドが導入される細胞は、ｉＰＳ細胞である。

【0267】

特定の実施形態によれば、幹細胞又は前駆細胞は、導入後に例えばＴ細胞に更に分化させ、それによって本明細書に開示されるＴＣＲを発現するＴ細胞を得ることができる。幹細胞又は前駆細胞をＴ細胞に分化させる方法は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｂｌｏｏｄ，１０５（４）：１４３１－１４３９，２００５；及び国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０７６４１５号、同第ＷＯ２０１７／２２１９７５号に開示されている。

【0268】

特定の実施形態によれば、ポリヌクレオチドが導入される細胞は、Ｔ細胞である。

【0269】

本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞」という用語は、ＣＤ３を発現する分化したリンパ球を指し、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、及びＮＫＴ細胞を含む。

【0270】

特定の実施形態によれば、Ｔ細胞は、エフェクター細胞である。

【0271】

本明細書で使用される場合、「エフェクターＴ細胞」という用語は、例えばサイトカインを産生することによって他の免疫細胞を活性化若しくは指向するか、又は細胞傷害活性を有するＴ細胞、例えば、ＣＤ４＋、Ｔｈ１／Ｔｈ２、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球を指す。

【0272】

特定の実施形態によれば、Ｔ細胞は、調節性細胞である。

【0273】

本明細書で使用される場合、「調節性Ｔ細胞」又は「Ｔｒｅｇ」という用語は、エフェクターＴ細胞、並びに自然免疫系細胞を含む他のＴ細胞の活性化を負に制御するＴ細胞を指す。Ｔｒｅｇ細胞は、エフェクターＴ細胞応答の持続的な抑制を特徴とする。特定の実施形態によれば、Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔ細胞である。

【0274】

特定の実施形態によれば、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。

【0275】

他の具体的な実施形態によれば、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。

【0276】

特定の実施形態によれば、Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞である。

【0277】

特定の実施形態によれば、Ｔ細胞は、メモリーＴ細胞である。メモリーＴ細胞の非限定的な例としては、ＣＤ３＋／ＣＤ４＋／ＣＤ４５ＲＡ－／ＣＣＲ７－表現型を有するエフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋／ＣＤ４＋／ＣＤ４５ＲＡ－／ＣＣＲ７＋表現型を有するセントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋／ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ－／ＣＣＲ７－表現型を有するエフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、及びＣＤ３＋／ＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＡ－／ＣＣＲ７＋表現型を有するセントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞が挙げられる。

【0278】

特定の実施形態によれば、Ｔ細胞は、ＮＫＴ細胞である。

【0279】

本明細書で使用される場合、「ＮＫＴ細胞」という用語は、ＮＫ１．１などのＮＫ細胞に典型的に関連する様々な分子マーカーを発現する特殊なＴ細胞を指す。ＮＫＴ細胞は、ＮＫ１．１＋及びＮＫ１．１－、並びにＣＤ４＋、ＣＤ４－、ＣＤ８＋、及びＣＤ８－細胞を含む。

【0280】

他の特定の実施形態によれば、Ｔ細胞は、ＮＫＴ細胞ではない。

【0281】

Ｔ細胞を取得する方法は、当技術分野で周知である。したがって、例えば、ＰＢＭＣは、対象から全血を採取し、抗凝固剤（例えば、ヘパリン又はクエン酸塩）を含有する容器への収集；及びアフェレーシスによって単離することができる。他の特定の実施形態によれば、Ｔ細胞は、病態に関連する細胞を含む組織から得られる。対象から組織試料を得るための方法は、当技術分野において周知であり、例えば、生検、手術又は剖検、及びその単一細胞懸濁液の調製を含む。続いて、特定の実施形態によれば、Ｔ細胞は、末梢血又は単一細胞懸濁液から濃縮又は精製される。白血球アフェレーシス、沈降、密度勾配遠心分離（例えばフィコール）、遠心水簸、分画、例えば赤血球の化学的溶解（例えばＡＣＫによる）、細胞表面マーカーを使用するＴ細胞の選択（例えばＦＡＣＳソーター、又は例えばＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃｅｌｌｐｒｏ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ、又はＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃから市販されているような磁気細胞分離技術を使用する）、及び特異的抗体による根絶（例えば死滅）などの方法による、又は陰性選択に基づく親和性ベースの精製（例えば磁気細胞分離技術、ＦＡＣＳソーター及び／又は捕捉ＥＬＩＳＡ標識を使用する）による他の細胞型の枯渇などの、Ｔ細胞を精製するための当業者に公知のいくつかの方法及び試薬がある。このような方法は、例えば、ＴＨＥ ＨＡＮＤＢＯＯＫ ＯＦ ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ、１－４巻（Ｄ．Ｎ．Ｗｅｉｒ編）及びＦＬＯＷ ＣＹＴＯＭＥＴＲＹ ＡＮＤ ＣＥＬＬ ＳＯＲＴＩＮＧ（Ａ．Ｒａｄｂｒｕｃｈ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、２０００年）に記載されている。

【0282】

特定の実施形態によれば、細胞、例えばＴ細胞は、哺乳動物細胞である。

【0283】

特定の実施形態によれば、細胞、例えばＴ細胞は、ヒト細胞である。

【0284】

特定の実施形態によれば、細胞、例えばＴ細胞は、健康な対象のものである。

【0285】

特定の実施形態によれば、細胞、例えばＴ細胞は、病態（例えば、癌）に罹患している対象のものである。

【0286】

具体的な実施形態によれば、細胞、例えばＴ細胞は、内因性ＣＤ３を発現する。

【0287】

特定の実施形態によれば、細胞、例えばＴ細胞は、外因性ＣＤ３を発現する。

【0288】

細胞、例えば、本発明のいくつかの実施形態のＴ細胞は、目的の遺伝子（例えば、内因性ＴＣＲ、ＰＤ１、ＴＧＦＢＲ１、Ｂ２Ｍ、ＣＴＬＡ４）の発現を上方制御又は下方制御するように改変される（又は操作若しくは形質導入される）。

【0289】

具体的な実施形態によれば、細胞、例えばＴ細胞は、内因性ＴＣＲを発現しない。

【0290】

したがって、特定の実施形態によれば、本方法は、内因性ＴＣＲの発現を下方制御することを更に含む。内因性ＴＣＲの下方制御は、本明細書に開示されるＴＣＲをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを細胞に導入する前又は後に行われ得る。

【0291】

具体的な実施形態によれば、本方法は、細胞、例えば、Ｔ細胞に、本明細書に開示されるＴＣＲをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを導入する前に、内因性ＴＣＲの発現を下方制御することを更に含む。

【0292】

目的の遺伝子、例えば内因性ＴＣＲの発現を下方制御する方法は、当該技術分野において周知であり［例えば、国際公開第２０１９２２２２７５号、国際公開第２０１５１４３２２４号、米国特許第２０１９０３８８４７２号（その内容は参照により全体が組み込まれる）を参照されたい］、これらには、標的化相同組換え、部位特異的リコンビナーゼ、ＰＢトランスポザーゼ及び操作されたヌクレアーゼによるゲノム編集［ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系、及び定常ｓｈＲＮＡ］が含まれる。ＴＣＲに核酸改変を導入するための薬剤は、公的に入手可能な供給源から設計することができる、又はＴｒａｎｓｐｏｓａｇｅｎ、Ａｄｄｇｅｎｅ、及びＳａｎｇａｍｏ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから商業的に入手することができる。内因性ＴＣＲを下方制御する方法の非限定的な例は、以下の実施例のセクションにおいて詳細に記載される。

【0293】

細胞、例えば、本発明のいくつかの実施形態のＴ細胞は、キメラ受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように改変（又は操作若しくは形質導入）される。

【0294】

本明細書で使用される場合、「ＣＡＲで形質導入された」又は「ＣＡＲを発現するように遺伝子操作された」という句は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸配列のクローニングを指し、ここで、ＣＡＲは、抗体の抗原認識部分及びＴ細胞活性化部分を含む。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、Ｔ細胞シグナル伝達ドメイン又はＴ細胞活性化ドメインに連結された抗体の抗原結合ドメイン（例えば、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ））を含有する人工的に構築されたハイブリッドタンパク質又はポリペプチドである。ＣＡＲで形質導入する方法は当技術分野で公知であり、例えば、Ｄａｖｉｌａら、Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１２年１２月１日；１（９）：１５７７～１５８３；Ｗａｎｇ ａｎｄ Ｒｉｖｉｅｒｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１５年３月；２２（２）：８５－９４）；Ｍａｕｓら、Ｂｌｏｏｄ．２０１４年４月２４日；１２３（１７）：２６２５－３５；Ｐｏｒｔｅｒ ＤＬ Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１１，３６５（８）：７２５－７３３；Ｊａｃｋｓｏｎ ＨＪ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２０１６年；１３（６）：３７０－３８３；及びＧｌｏｂｅｒｓｏｎ－Ｌｅｖｉｎら、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１４年；２２（５）：１０２９－１０３８に開示されている。特定の実施形態によれば、抗原認識部分は、病的細胞に特異的である。

【0295】

他の具体的な実施形態によれば、細胞は、ＣＡＲを形質導入されていない（すなわち、発現しない）。

【0296】

具体的な実施形態によれば、細胞、例えば、Ｔ細胞は、新たに単離され、将来の使用のために長期間（例えば、数ヶ月、数年）にわたって任意の段階で例えば液体窒素温度で保存、例えば、凍結保存（すなわち、凍結）され得る、及び細胞系統。

【0297】

凍結保存の方法は、当業者に一般的に知られており、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２００７０５４１６０号及び第ＷＯ２００１０３９５９４号並びに米国特許出願公開第ＵＳ２０１２０１４９１０８号に開示されている。

【0298】

特定の実施形態によれば、細胞、例えばＴ細胞は、細胞バンク又は保管場所若しくは貯蔵施設に貯蔵することができる。

【0299】

結果として、本教示は更に、限定されないが、養子細胞療法のための供給源としての、本明細書に開示される細胞、例えばＴ細胞及び方法の使用を示唆する。

【0300】

したがって、本発明の一態様によれば、本明細書に開示される細胞、例えばＴ細胞は、養子細胞療法において使用するためのものである。

【0301】

本発明の特定の実施形態に従って使用される細胞、例えばＴ細胞は、自己由来であっても非自己由来であってもよい。それらは、対象に対して同系又は非同系：同種又は異種であり得る。各可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0302】

特定の実施形態によれば、細胞は、対象に対して自己由来である。

【0303】

特定の実施形態によれば、細胞は、対象に対して非自己由来である。

【0304】

特定の実施形態によれば、細胞は、対象に対して同種異系である。

【0305】

いくつかの実施形態のＴ細胞は、内因性ＴＣＲを発現せず、結合ドメイン（抗原結合ドメイン、異種細胞外結合ドメイン）を欠くＴＣＲ又はＴＣＲ複合体を発現するので、いくつかの実施形態のＴ細胞は、非自己対象において移植片対宿主病を刺激しない。

【0306】

具体的な実施形態によれば、本明細書に記載されるＴ細胞は、対象への投与の前にエクスビボで培養され、増殖され、及び／又は活性化される。

【0307】

Ｔ細胞を培養、増殖、及び活性化する方法は、当業者に周知である。例えば、いくつかの実施形態のＴ細胞は、ＩＬ－２の存在下又は非存在下で、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ３、及び抗ＣＤ２８コーティングビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃから入手されるＣＤ３ＣＤ２８ ＭＡＣＳｉ Ｂｅａｄなど）の存在下でエクスビボで増殖させることができる。

【0308】

本明細書に開示されるＴＣＲ又はＴＣＲ複合体は、結合ドメイン（抗原結合ドメイン、異種細胞外結合ドメイン）を欠いているので、本発明のいくつかの実施形態のＴ細胞は、一方では標的細胞（例えば、病的細胞）に結合し、他方ではＴＣＲ複合体に結合することを対象とする治療用組成物と組み合わせて対象に投与され、それによってＴ細胞を標的細胞に対して活性化することができる。

【0309】

したがって、本発明の一態様によれば、必要とする対象において病的細胞に関連する疾患を処置する方法が提供され、本方法は、治療有効量の本明細書に開示されるＴ細胞と、病的細胞及びＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物と、対象に投与し、それによって対象における疾患を処置することを含む。

【0310】

本発明の追加の又は代替の態様によれば、必要とする対象において病的細胞に関連する疾患を処置する際に使用するための、本明細書に開示されるＴ細胞と、病的細胞及びＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物と、が提供される。

【0311】

本明細書中で使用される場合、「対象」という用語は、哺乳動物、好ましくは任意の年齢及び任意の性別のヒトを含む。特定の実施形態によれば、「対象」という用語は、病態（疾患、障害、又は医学的状態）に罹患している対象を指す。特定の実施形態によれば、この用語は、病態を発症するリスクがある個体を包含する。

【0312】

本明細書で使用される場合、「処置する」という用語は、疾患又は障害（例えば、癌）の有害作用を治癒、逆転、減弱、緩和、最小化、抑制、又は停止させることを指す。当業者は、種々の方法論及びアッセイが、病理の発生を評価するために使用され得、同様に、種々の方法論及びアッセイが、以下に議論されるように、病理（例えば、悪性腫瘍）の減少、寛解、又は退行を評価するために使用され得ることを理解するであろう。

【0313】

本明細書で使用される場合、「予防する」という用語は、疾患のリスクがあり得るが、疾患を有するとまだ診断されていない対象において、疾患、障害、又は状態が発生しないようにすることを指す。

【0314】

本明細書で使用される場合、「病的細胞に関連する疾患」という語句は、病的細胞が疾患の発症及び／又は進行を推進することを意味する。

【0315】

特定の実施形態によれば、疾患は、免疫細胞を調節することから利益を得ることができる。

【0316】

本明細書中で使用される場合、「免疫細胞を調節することから利益を得ることができる疾患」という句とは、対象の免疫応答活性が、疾患の症状を少なくとも改善するか、又は症状の発症を遅延させるのに十分であり得るが、何らかの理由で、そうする際の対象の免疫応答の活性が最適未満である疾患をいう。

【0317】

特定の実施形態によれば、疾患は、免疫細胞を活性化することから利益を得ることができる。

【0318】

免疫細胞を活性化することから利益を得ることができる疾患の非限定的な例としては、過剰増殖性疾患、免疫抑制に関連する疾患、投薬（例えば、ｍＴＯＲ阻害剤、カルシニューリン阻害剤、ステロイド）によって引き起こされる免疫抑制、及び感染症が挙げられる。

【0319】

特定の実施形態によれば、疾患は、感染症を含む。

【0320】

本明細書で使用される場合、「感染症」又は「感染性疾患」という用語は、病原体によって誘導される疾患を指す。病原体の具体例としては、ウイルス病原体、細菌病原体、例えば、細胞内マイコバクテリア病原体（例えば、結核菌（Mycobacterium tuberculosis）など）、細胞内細菌性病原体（例えば、リステリア・モノサイトゲネス（Listeria monocytogenes）など）、又は細胞内原生動物病原体（例えば、リーシュマニア（Leishmania）及びトリパノソーマ（Trypanosoma）など）が挙げられる。

【0321】

感染性疾患を引き起こすウイルス病原体の特定の型としては、レトロウイルス、シルコウイルス、パルボウイルス、パポバウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、イリドウイルス、ポックスウイルス、ヘパドナウイルス、ピコルナウイルス、カリシウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、オルソミクソウイルス、パラミクソウイルス、ラブドウイルス、ブニヤウイルス、コロナウイルス、アレナウイルス、及びフィロウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。

【0322】

本発明の特定の実施形態に従って処置され得るウイルス感染の特定の例としては、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）誘導性後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、インフルエンザ、ライノウイルス感染、ウイルス性髄膜炎、エプスタインバルウイルス（ＥＢＶ）感染、Ａ型、Ｂ型、又はＣ型肝炎ウイルス感染、麻疹、乳頭腫ウイルス感染／疣贅、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染、単純疱疹ウイルス感染、黄熱病、エボラウイルス感染、狂犬病ウイルス感染などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0323】

特定の実施形態によれば、疾患は、過剰増殖性疾患を含む。

【0324】

特定の実施形態によれば、過剰増殖病は、硬化症、線維症、特発性肺線維症、乾癬、全身性硬化症／硬皮症、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、肝線維症、放射線誘発性肺線維症の予防、骨髄線維症、又は後腹膜線維症を含む。

【0325】

他の特定の実施形態によれば、過剰増殖性疾患は、癌を含む。

【0326】

したがって、特定の実施形態によれば、病的細胞は、癌性細胞である。

【0327】

本発明のいくつかの実施形態によって処置され得る癌は、任意の固形腫瘍又は非固形腫瘍、癌転移、及び／又は前癌であり得る。

【0328】

特定の実施形態によれば、癌は、悪性癌である。

【0329】

癌の例としては、癌腫、芽細胞腫、肉腫、及びリンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。このような癌のより具体的な例としては、胃腸管の腫瘍（結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、結腸直腸癌、結腸直腸腺腫、遺伝性非ポリポーシス１型、遺伝性非ポリポーシス２型、遺伝性非ポリポーシス３型、遺伝性非ポリポーシス６型）；結腸直腸癌、遺伝性非ポリポーシス７型、小及び／又は大腸癌、食道癌、食道癌を伴う肥厚化、胃癌、膵臓癌、膵内分泌腫瘍）、子宮内膜癌、隆起性皮膚線維肉腫、胆嚢癌、胆道腫瘍、前立腺癌、前立腺腺癌、腎臓癌（例えば、ウィルムス腫瘍２型又は１型）、肝臓癌（例えば、肝芽腫、肝細胞癌、肝細胞癌）、膀胱癌、胎児性横紋筋肉腫、胚細胞性腫瘍、トロホブラスト腫瘍、精巣生殖細胞腫瘍、卵巣の未熟奇形腫、子宮癌、上皮性卵巣癌、仙尾骨腫瘍、絨毛癌、胎盤部位トロホブラスト腫瘍、上皮性成人腫瘍、卵巣癌、漿液性卵巣癌、卵巣性脊髄腫瘍、子宮頸癌、子宮頸部癌、小細胞及び非小細胞肺癌、鼻咽頭癌、乳癌（例えば、乳管癌、浸潤性乳管癌、散発性、乳癌、乳癌感受性、４型乳癌、１型乳癌、３型乳癌；胸部－卵巣癌）、扁平上皮癌（例えば、頭部及び頸部の癌）、神経原性腫瘍、星状細胞腫、神経節芽細胞腫、神経芽細胞種、リンパ腫（例えば、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞、バーキット、皮膚Ｔ細胞、組織球性、リンパ芽球、Ｔ細胞、胸腺）、神経膠腫、腺癌、副腎腫瘍、遺伝性副腎皮質癌、脳悪性病変（腫瘍）、様々な他の癌（例えば、気管支原性大細胞、管、エールリッヒ腹水、類表皮、大細胞、ルイス肺、髄様、粘膜類表皮、燕麦細胞、小細胞、紡錘細胞、有棘細胞、移行細胞、未分化、癌肉腫、絨毛癌、嚢胞腺癌）、上衣芽細胞腫、上皮腫、赤白血病（例えば、フレンド病、リンパ芽球）、線維肉腫、巨細胞腫、グリア腫瘍、グリア芽細胞腫（例えば、多形性、星状細胞腫）、神経膠腫肝癌、ヘテロハイブリドーマ、ヘテロ骨髄腫、組織球腫、ハイブリドーマ（例えば、Ｂ細胞）、副腎腫、インスリノーマ、膵島腫瘍、角化腫、上皮様平滑筋腫、平滑筋肉腫、白血病（例えば、急性リンパ性、急性リンパ芽球、前駆Ｂ細胞急性リンパ性、Ｔ細胞急性リンパ芽球性、急性巨核芽球、単球性、急性骨髄性、急性ミエロイド、好酸球増加急性ミエロイド、Ｂ細胞、好塩基性、慢性ミエロイド、慢性、Ｂ細胞、好酸性、フレンド、顆粒球性又は骨髄球性、毛様細胞、リンパ球性、巨核芽球性、単球、単球マクロファージ、骨髄芽球性、ミエロイド、骨髄単球性、形質細胞、前Ｂ細胞、前骨髄球性、亜急性、Ｔ細胞、リンパ系腫瘍、骨髄性悪性腫瘍の素因、急性非リンパ性白血病）、リンパ肉腫、メラノーマ、乳癌、肥満細胞腫、髄芽細胞腫、中皮腫、転移性腫瘍、単球腫瘍、多発骨髄腫、脊髄形成異常性症候群、骨髄腫、腎芽細胞腫、神経組織グリア腫瘍、神経組織神経細胞腫瘍、神経鞘腫、神経芽細胞腫、乏枝神経膠腫、骨軟骨腫、骨内骨髄腫、骨肉腫（例えば、ユーイング）、乳頭腫、移行細胞、褐色細胞腫、下垂体腫瘍（侵襲性）、プラスマ細胞腫、網膜芽腫、横紋筋肉腫、肉腫（例えば、ユーイング、組織球細胞、イエンセン、骨原性、細網細胞）、神経線維腫、皮下腫瘍、奇形癌（例えば、多能性）、奇形腫、睾丸腫瘍、胸腺腫及び毛様上皮腫、胃癌、線維肉腫、未分化星状細胞腫；多発性グロムス腫瘍、リー－フラウメニ症候群、脂肪肉腫、リンチ癌ファミリー症候群ＩＩ、男性胚細胞性腫瘍、肥満細胞性白血病、甲状腺髄様、多発性髄膜腫、内分泌腫瘍粘液肉腫、傍神経節腫、家族性非クロム親和性、毛母腫、乳頭状、家族性及び孤発性、ラブドイド素因症候群、家族性ラブドイド腫瘍、軟部組織肉腫、並びに膠芽腫を伴うターコット症候群が挙げられるが、これらに限定されない。

【0330】

特定の実施形態によれば、癌は、前悪性癌である。

【0331】

前癌は、十分に特徴付けられており、当技術分野において公知である（例えば、Ｂｅｒｍａｎ ＪＪ．及びＨｅｎｓｏｎ ＤＥ、２００３年、Ｃｌａｓｓｉｆｙｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒｅ－ｃａｎｃｅｒｓ：ａ ｍｅｔａｄａｔａ ａｐｐｒｏａｃｈ．ＢＭＣ Ｍｅｄ Ｉｎｆｏｒｍ Ｄｅｃｉｓ Ｍａｋ．３：８を参照されたい）。前癌の例としては、後天性小前癌、核異型を伴う後天性大病変、癌に進行する遺伝的過形成症候群を伴って生じる前駆病変、並びに後天性びまん性過形成、及びまん性化生が挙げられるが、これらに限定されない。小前癌状態の非限定的な例としては、ＨＧＳＩＬ（子宮頸部の高悪性度扁平上皮内病変）、ＡＩＮ（肛門上皮内腫瘍）、声帯の異形成、（結腸の）異常陰窩、ＰＩＮ（前立腺上皮内腫瘍）が挙げられる。

【0332】

核異型を伴う後天性大病変の非限定的な例としては、管状腺腫、ＡＩＬＤ（タンパク異常血症を伴う血管免疫芽球性リンパ節症）、非定型髄膜腫、胃ポリープ、大プラーク類乾癬、骨髄異形成、乳頭状移行上皮癌、芽球増加型不応性貧血、及びシュナイダー乳頭腫が挙げられる。癌に進行する遺伝性過形成症候群と共に生じる前駆病変の非限定的な例としては、非定型黒子症候群、Ｃ細胞腺腫症、及びＭＥＡが挙げられる。後天性びまん性過形成及びびまん性化生の非限定的な例としては、骨のパジェット病及び潰瘍性大腸炎が挙げられる。

【0333】

特定の実施形態によれば、癌は、リンパ腫、白血病、膠芽腫、結腸癌、胃癌、膵臓癌、卵巣癌、肺癌、及び皮膚癌からなる群から選択される。

【0334】

特定の実施形態によれば、疾患は、免疫細胞を阻害することから利益を得ることができる。

【0335】

特定の実施形態によれば、疾患は、自己免疫疾患である。このような自己免疫疾患としては、心血管疾患、リウマチ性疾患、腺疾患、胃腸疾患、皮膚疾患、肝疾患、神経疾患、筋疾患、腎疾患、生殖に関連する疾患、結合組織疾患、及び全身性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。

【0336】

自己免疫心血管疾患の例としては、アテローム性動脈硬化症（Ｍａｔｓｕｕｒａ Ｅら、Ｌｕｐｕｓ．１９９８年；７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ１３５）、心筋梗塞（Ｖａａｒａｌａ Ｏ、Ｌｕｐｕｓ．１９９８年；７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ１３２）、血栓症（Ｔｉｎｃａｎｉ Ａら、Ｌｕｐｕｓ １９９８年；７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ１０７－９）、ウェゲナー肉芽腫症、高安動脈炎、川崎病（Ｐｒａｐｒｏｔｎｉｋ Ｓ．ら、Ｗｉｅｎ Ｋｌｉｎ Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ ２０００年８月２５日；１１２（１５－１６）：６６０）、抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫性疾患（Ｌａｃｒｏｉｘ－Ｄｅｓｍａｚｅｓ Ｓ．ら、Ｓｅｍｉｎ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈｅｍｏｓｔ．２０００年；２６（２）：１５７）、壊死性小血管炎、顕微鏡的多発性血管炎、チャーグ・ストラウス症候群、自己免疫性限局性壊死性及び半月体糸球体腎炎（Ｎｏｅｌ ＬＨ．Ａｎｎ Ｍｅｄ Ｉｎｔｅｒｎｅ（Ｐａｒｉｓ）．２０００年５月；１５１（３）：１７８）、抗リン脂質症候群（Ｆｌａｍｈｏｌｚ Ｒ．ら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ １９９９年；１４（４）：１７１）、抗体誘発性心不全（Ｗａｌｌｕｋａｔ Ｇ．ら、Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９９年６月１７日；８３（１２Ａ）：７５Ｈ）、血小板減少性紫斑病（Ｍｏｃｃｉａ Ｆ．Ａｎｎ Ｉｔａｌ Ｍｅｄ Ｉｎｔ．１９９９年４月～６月；１４（２）：１１４；Ｓｅｍｐｌｅ ＪＷ．ら、Ｂｌｏｏｄ．１９９６年５月１５日；８７（１０）：４２４５）、自己免疫性溶血性貧血（Ｅｆｒｅｍｏｖ ＤＧ．ら、Ｌｅｕｋ Ｌｙｍｐｈｏｍａ １９９８年１月；２８（３－４）：２８５；Ｓａｌｌａｈ Ｓ．ら、Ａｎｎ Ｈｅｍａｔｏｌ．１９９７年３月；７４（３）：１３９）、シャーガス病における心臓自己免疫（Ｃｕｎｈａ－Ｎｅｔｏ Ｅ．ら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １９９６年１０月１５日；９８（８）：１７０９）、及び抗ヘルパーＴリンパ球自己免疫（Ｃａｐｏｒｏｓｓｉ ＡＰ．ら、Ｖｉｒａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９８年；１１（１）：９）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0337】

自己免疫性リウマチ疾患の例としては、関節リウマチ（Ｋｒｅｎｎ Ｖ．ら、Ｈｉｓｔｏｌ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ、２０００年７月；１５（３）：７９１；Ｔｉｓｃｈ Ｒ、ＭｃＤｅｖｉｔｔ ＨＯ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ｕｎｉｔｓ Ｓ Ａ．１９９４年１月１８日；９１（２）：４３７）、及び強直性脊椎炎（Ｊａｎ Ｖｏｓｗｉｎｋｅｌら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ ２００１年；３（３）：１８９）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0338】

自己免疫腺疾患の例としては、膵臓疾患、Ｉ型糖尿病、甲状腺疾患、グレーブス病、甲状腺炎、自発性自己免疫甲状腺炎、橋本甲状腺炎、突発性粘液水腫、卵巣自己免疫、自己免疫抗精子不妊症、自己免疫前立腺炎、及びＩ型自己免疫多腺性症候群が挙げられる。自己免疫疾患としては、自己免疫疾患、１型糖尿病（Ｃａｓｔａｎｏ Ｌ．及びＥｉｓｅｎｂａｒｔｈ ＧＳ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：６４７；Ｚｉｍｍｅｔ Ｐ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ １９９６年１０月；３４ Ｓｕｐｐｌ：Ｓ１２５）、自己免疫甲状腺疾患、グレーブス病（Ｏｒｇｉａｚｚｉ Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ ２０００年６月；２９（２）：３３９；Ｓａｋａｔａ Ｓ．ら、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １９９３年３月；９２（１）：７７）、自発性自己免疫甲状腺炎（Ｂｒａｌｅｙ－Ｍｕｌｌｅｎ Ｈ．及びＹｕ Ｓ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０００年１２月１５日；１６５（１２）：７２６２年）、橋本甲状腺炎（Ｔｏｙｏｄａ Ｎ．ら、Ｎｉｐｐｏｎ Ｒｉｎｓｈｏ １９９９年８月；５７（８）：１８１０）、突発性粘液水腫（Ｍｉｔｓｕｍａ Ｔ．Ｎｉｐｐｏｎ Ｒｉｎｓｈｏ．１９９９年８月；５７（８）：１７５９）、卵巣自己免疫（Ｇａｒｚａ ＫＭ．ら、Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９８年２月；３７（２）：８７）、自己免疫性抗精子不妊症（Ｄｉｅｋｍａｎ ＡＢ．ら、Ａｍ Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００年３月；４３（３）：１３４）、自己免疫性前立腺炎（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ＲＢ．ら、Ｕｒｏｌｏｇｙ １９９７年１２月；５０（６）：８９３）、及びＩ型自己免疫多腺性症候群（Ｈａｒａ Ｔ．ら、Ｂｌｏｏｄ．１９９１年３月１日；７７（５）：１１２７）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0339】

自己免疫胃腸疾患の例としては、慢性炎症性腸疾患（Ｇａｒｃｉａ Ｈｅｒｏｌａ Ａ．ら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ．２０００年１月；２３（１）：１６）、セリアック病（Ｌａｎｄａｕ ＹＥ．及びＳｈｏｅｎｆｅｌｄ Ｙ、２０００年１月１６日；１３８（２）：１２２）、大腸炎、回腸炎、及びクローン病が挙げられるが、これらに限定されない。

【0340】

自己免疫皮膚疾患の例としては、自己免疫水疱性皮膚疾患、例えば、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、及び落葉状天疱瘡が挙げられるが、これらに限定されない。

【0341】

自己免疫肝疾患の例としては、肝炎、自己免疫慢性活動性肝炎（Ｆｒａｎｃｏ Ａ．ら、Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ １９９０年３月；５４（３）：３８２）、原発性胆汁性肝硬変（Ｊｏｎｅｓ ＤＥ．Ｃｌｉｎ Ｓｃｉ（Ｃｏｌｃｈ）１９９６年１１月；９１（５）：５５１；Ｓｔｒａｓｓｂｕｒｇ ＣＰ．ら、Ｅｕｒ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ．１９９９年６月；１１（６）：５９５）、及び自己免疫性肝炎（Ｍａｎｎｓ ＭＰ．Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ ２０００年８月；３３（２）：３２６）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0342】

自己免疫性神経疾患の例としては、多発性硬化症（Ｃｒｏｓｓ ＡＨ．ら、Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ ２００１年１月１日；１１２（１－２）：１）、アルツハイマー病（Ｏｒｏｎ Ｌ．ら、Ｊ Ｎｅｕｒａｌ Ｔｒａｎｓｍ Ｓｕｐｐｌ．１９９７年；４９：７７）、重症筋無力症（Ｉｎｆａｎｔｅ ＡＪ．及びＫｒａｉｇ Ｅ、Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９９年；１８（１－２）：８３；Ｏｓｈｉｍａ Ｍ．ら、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９０年１２月；２０（１２）：２５６３）、神経障害、運動神経障害（Ｋｏｒｎｂｅｒｇ ＡＪ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０００年５月；７（３）：１９１）；ギラン・バレー症候群及び自己免疫神経障害（Ｋｕｓｕｎｏｋｉ Ｓ．、Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ Ｓｃｉ．２０００年４月；３１９（４）：２３４）、筋無力症、ランバート・イートン筋無力症候群（Ｔａｋａｍｏｒｉ Ｍ．Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ Ｓｃｉ．２０００年４月；３１９（４）：２０４）；腫瘍随伴性神経疾患、小脳萎縮、腫瘍随伴性小脳萎縮、及びスティッフマン症候群（Ｈｉｅｍｓｔｒａ ＨＳ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ｕｎｉｔｓ Ｓ Ａ ２００１年３月２７日；９８（７）：３９８８）；非腫瘍随伴性スティッフマン症候群、進行性小脳萎縮症、脳炎、ラスムッセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シデナム舞踏病、ジル・ド・ラ・トゥレット症候群、及び自己免疫多発性内分泌障害（Ａｎｔｏｉｎｅ ＪＣ．及びＨｏｎｎｏｒａｔ Ｊ．Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｌ（Ｐａｒｉｓ）２０００年１月；１５６（１）：２３）；免疫性神経障害（Ｎｏｂｉｌｅ－Ｏｒａｚｉｏ Ｅ．ら、Ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｇｒ Ｃｌｉｎ Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ Ｓｕｐｐｌ １９９９年；５０：４１９）；アイザックス症候群、先天性多発性関節拘縮症（Ｖｉｎｃｅｎｔ Ａ．ら、Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．１９９８年５月１３日；８４１：４８２）、神経炎、視神経炎（Ｓｏｄｅｒｓｔｒｏｍ Ｍ．ら、Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ １９９４年５月；５７（５）：５４４）、及び神経変性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。

【0343】

自己免疫性筋疾患の例としては、筋炎、自己免疫性筋炎、及び原発性シェーグレン症候群（Ｆｅｉｓｔ Ｅ．ら、Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０００年９月；１２３（１）：９２）、及び平滑筋自己免疫障害（Ｚａｕｌｉ Ｄ．ら、Ｂｉｏｍｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ １９９９年６月；５３（５－６）：２３４）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0344】

自己免疫腎疾患の例としては、腎炎及び自己免疫間質性腎炎（Ｋｅｌｌｙ ＣＪ．Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ １９９０年８月；１（２）：１４０）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0345】

生殖に関連する自己免疫疾患の例としては、反復胎児喪失（Ｔｉｎｃａｎｉ Ａ．ら、Ｌｕｐｕｓ １９９８年；７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ１０７－９）が挙げられるが、これに限定されない。

【0346】

自己免疫性結合組織疾患の例としては、耳疾患、自己免疫性耳疾患（Ｙｏｏ ＴＪ．ら、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９４年８月；１５７（１）：２４９年）、及び内耳の自己免疫疾患（Ｇｌｏｄｄｅｋ Ｂ．ら、Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９９７年１２月２９日；８３０：２６６）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0347】

自己免疫全身性疾患の例としては、全身性紅斑性狼瘡（Ｅｒｉｋｓｏｎ Ｊ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ１９９８年；１７（１－２）：４９）及び全身性硬化症（Ｒｅｎａｕｄｉｎｅａｕ Ｙ．ら、Ｃｌｉｎ Ｄｉａｇｎ Ｌａｂ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９年３月；６（２）：１５６）；Ｃｈａｎ ＯＴ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ １９９９年６月；１６９：１０７）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0348】

特定の実施形態によれば、疾患は、移植片拒絶疾患である。

【0349】

移植片の移植に関連する疾患の例としては、移植片拒絶、慢性移植片拒絶、亜急性移植片拒絶、超急性移植片拒絶、急性移植片拒絶、及び移植片対宿主病が挙げられるが、これらに限定されない。

【0350】

特定の実施形態によれば、疾患は、アレルギー性疾患である。

【0351】

アレルギー性疾患の例としては、喘息、発疹、蕁麻疹、花粉アレルギー、チリダニアレルギー、毒液アレルギー、化粧品アレルギー、ラテックスアレルギー、化学アレルギー、薬アレルギー、刺虫症アレルギー、動物性鱗屑アレルギー、刺痛感植物アレルギー、ツタウルシアレルギー、及び食物アレルギーが挙げられるが、これらに限定されない。

【0352】

上述したように、特定の実施形態によれば、Ｔ細胞は、一方では［例えば、非病的細胞と比較して病的（例えば、癌性）細胞によって過剰発現又は単独発現される抗原に結合する］病的細胞に特異的であり、他方ではＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物と組み合わせて対象に投与される。

【0353】

特定の実施形態によれば、治療用組成物は、ＣＤ３に結合する。

【0354】

特定の実施形態によれば、治療用組成物は、ＴＣＲの定常領域又はヒンジ領域に結合する。

【0355】

特定の実施形態によれば、治療用組成物は、ＴＣＲ複合体に融合した異種タグ又はＴＣＲ複合体に結合したタグに結合する。このようなタグの非限定的な例は、当該分野で公知であり、そして本明細書中、上記で更に詳細に記載される。

【0356】

Ｔ細胞の投与及び治療用組成物の投与は、同じ経路又は別々の経路で行うことができる。

【0357】

Ｔ細胞の投与は、治療薬の前であっても、治療薬の後であっても、治療薬と同時であってもよい。

【0358】

Ｔ細胞及び／又は治療用組成物の複数回の投与を行うことができる。

【0359】

特定の実施形態によれば、病的細胞に特異的であり（例えば、異なる抗原を標的とする）、ＴＣＲ複合体に結合することができる複数の別個の治療用組成物が、対象に提供される。

【0360】

病的細胞及びＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物は、当技術分野において公知であり、二重特異性抗体及び三重特異性抗体などの抗体を含むが、これらに限定されない。

【0361】

本明細書で使用される「抗体」という用語は、インタクトな分子並びにその機能的断片（抗原のエピトープに結合することができる）を含む。

【0362】

本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、抗体のパラトープが結合する抗原上の任意の抗原決定基を指す。エピトープ決定基は、通常、アミノ酸又は炭水化物側鎖などの分子の化学的に活性な表面基からなり、通常、特異的な三次元構造特性並びに特異的な電荷特性を有する。

【0363】

特定の実施形態によれば、抗体断片は、単鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ、Ｆｃａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖｓ、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、Ｆａｂ発現ライブラリー、又はＨＬＡ拘束様式で抗原のエピトープに結合することができるＶＨ及びＶＬなどの単一ドメイン分子を含むが、これらに限定されない。

【0364】

特定の実施形態によれば、治療用組成物は、少なくとも二重特異性抗体である。

【0365】

本明細書で使用される場合、「二重特異性抗体」という用語は、２つの異なる抗原結合部分を有し、第１の結合部分がＴＣＲ複合体に対する親和性を有し、第２の結合部分がＴＣＲ複合体とは異なる抗原に対する親和性を有する、抗体を指す。特定の実施形態によれば、二重特異性抗体は、一方でＴＣＲ複合体に結合し、他方で病的細胞（例えば、癌細胞）によって発現される抗原に結合する。

【0366】

二重特異性抗体を産生する方法は、当技術分野で公知であり、例えば、米国特許第４，４７４，８９３号、第５，９５９，０８４号、米国及び第７，２３５，６４１号、第７，１８３，０７６号、米国公開第２００８０２１９９８０号、並びに国際公開第ＷＯ２０１０／１１５５８９号、第ＷＯ２０１３１５００４３号、及び第ＷＯ２０１２１１８９０３号に開示されており、これらは全て、その全体が本明細書に組み込まれ、例えば、化学架橋（Ｂｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９，８１（１９８５年）；Ｒａｓｏら、Ｊ．ＢｉｏＩ．Ｃｈｅｒｎ．２７２，２７６２３（１９９７年））、ジスルフィド交換、ハイブリッド－ハイブリドーマ（クアドローマ）の産生など、二重特異性抗体を具現化する単一ポリペプチド鎖を産生するための転写及び翻訳による、又は二重特異性抗体を産生するために共有結合的に会合することができる２つ以上のポリペプチド鎖を産生するための転写及び翻訳による方法が挙げられる。企図される二重特異性抗体は、完全に化学合成によって作製することもできる。

【0367】

したがって、特定の実施形態によれば、治療用抗体は、病的細胞によって過剰発現又は単独で発現される抗原に結合する少なくとも１つのアームと、ＴＣＲ複合体に結合する抗体部分を含む１つのアームと、を含む。

【0368】

使用される治療用抗体の選択は、十分に当業者の能力の範囲内であり、疾患のタイプ及び病理に関連する病的細胞によって発現される抗原に依存する。

【0369】

特定の実施形態によれば、治療用組成物は、抗ＣＤ３抗体を含む。

【0370】

特定の実施形態によれば、抗ＣＤ３抗体部分は、Ｌ２Ｋ、ＴＲ６６、ＯＫＴ３ＵＣＨＴ１、ヒト化ＵＨＣＴ１、Ｆ６Ａ、ＳＰ３４、及びＩ２Ｃからなる群から選択される抗体のものである。

【0371】

特定の実施形態によれば、抗ＣＤ３抗体部分は、Ｌ２Ｋ、ＴＲ６６、及びＯＫＴ３からなる群から選択される抗体のものである。

【0372】

特定の実施形態によれば、抗ＣＤ３抗体部分は、Ｌ２Ｋ、ＳＰ３４、及びＵＣＨＴ１からなる群から選択される抗体のものである。

【0373】

特定の実施形態によれば、治療用抗体は、癌性細胞によって発現される抗原に結合する。そのような抗原の非限定的な例としては、ＣＤ１９、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＣＡ－１２５、メソテリン、ＲＯＲ１、ＧＰＣ３、ＰＳＣＡ、ＣＤ１３３、ＣＤ７０、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ＣＡＩＸ、ＣＤ１７１、ＧＤ２、Ｔｎ－ＭＵＣ１、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＡＤＧＲＥ２、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＣＲ１、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＬＩＬＲＢ２、ＢＣＭＡ、ＣＤ１３８、ｇｐ１００、及びＱ Ｈｅら（２０１９年）Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ １２，９９に記載されており、その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる。

【0374】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ブリナツモマブ、ＡＭＧ３３０、ＡＭＧ７０１、Ｏｒｌｏｔａｍａｂ、ＡＭＧ４２０、ＣＣ－９３２６９、ＡＰＶＯ４３６、ＪＮＪ－６３７０９１７８、ＡＭＧ７５７、ＭＴ１１０、テベンタフスプ、オドロネクスタマブ、ＲＧ６００７、ＲＧ６１９４、ＲＧ６２３２、ＲＧ７８２８、テクリスタマブ、モスネツズマブ、ＲＧ７８０２シビサタマブ、セボスタマブ、グロフィタマブ、及びＩＭＭＴＡＣ（例えば、ＲＧ６２９０）からなる群から選択される。

【0375】

特定の実施形態によれば、病的細胞はＣＤ１９を発現し、治療用組成物はブリナツモマブを含む。

【0376】

特定の実施形態によれば、病的細胞はＥｐＣＡＭを発現し、当該治療用組成物はＭＴ１１０を含む。

【0377】

特定の実施形態によれば、病的細胞はＣＤ２０を発現し、当該治療用組成物はオドロネクスタマブを含む。

【0378】

特定の実施形態によれば、病的細胞はＣＤ２０を発現し、当該治療用組成物はモスネツズマブを含む。

【0379】

特定の実施形態によれば、病的細胞はＨＬＡ－Ａ２－ＷＴ１を発現し、当該治療用組成物はＲＧ６００７を含む。

【0380】

特定の実施形態によれば、病的細胞はＨＥＲ２を発現し、当該治療用組成物はＲＧ６１９４を含む。

【0381】

特定の実施形態によれば、病的細胞はＴＹＲＰ１を発現し、当該治療用組成物はＲＧ６２３２を含む。

【0382】

特定の実施形態によれば、病的細胞はＭＡＧＥ－Ａ４を発現し、当該治療用組成物はＲＧ６２９０を含む。

【0383】

特定の実施形態によれば、治療用組成物は、抗ＴＣＲ抗体を含む。

【0384】

特定の実施形態によれば、抗ＴＣＲ抗体部分は、ＩＰ２６、ＷＴ３１、Ｔ１０Ｂ９、ＢＷ２４２／４１、８Ａ３、３Ａ８、Ｊｏｖｉ－１からなる群から選択される抗体クローンのものである。

【0385】

特定の実施形態によれば、Ｔ細胞並びに病的細胞及びＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物は、病的細胞（例えば、癌）に関連する疾患を処置するための他の確立された又は実験的な治療レジメン（鎮痛剤、化学療法剤、放射線療法剤、細胞傷害性療法（コンディショニング）、ホルモン療法及び当技術分野で周知の他の治療レジメン（例えば、手術）が挙げられるが、これらに限定されない）と組み合わせて対象に投与することができる。

【0386】

本明細書に開示されるＴ細胞、及び／又は病的細胞及び本明細書に開示されるＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物は、対象自体に、又は適切な担体若しくは賦形剤と混合された医薬組成物で投与することができる。

【0387】

本明細書で使用される場合、「薬学的組成物」とは、本明細書中に記載される活性成分のうちの１つ以上と、他の化学成分（例えば、生理学的に適切なキャリア及び賦形剤）との調製物をいう。医薬組成物の目的は、生物への化合物の投与を容易にすることである。

【0388】

本明細書において、「活性成分」という用語は、病的細胞に結合することができるＴ細胞及び／又は治療用組成物、並びに生物学的効果の原因となるＴＣＲ複合体を指す。

【0389】

したがって、特定の実施形態によれば、Ｔ細胞は、製剤中の活性成分である。

【0390】

以下、互換的に使用され得る「生理学的に許容される担体」及び「薬学的に許容される担体」という語句は、生物に著しい刺激を引き起こさず、投与された化合物の生物学的活性及び特性を無効にしない担体又は希釈剤を指す。アジュバントは、これらの句に含まれる。

【0391】

本明細書において、「賦形剤」という用語は、活性成分の投与を更に容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。賦形剤の非限定的な例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖及び種々のタイプのデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、及びポリエチレングリコールが挙げられる。

【0392】

薬物の処方及び投与のための技術は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、ペンシルバニア州イーストンの最新版に見出され得、これは、本明細書中に参考として組み込まれる。

【0393】

適切な投与経路としては、例えば、経口送達、直腸送達、経粘膜送達、特に経鼻送達、腸管送達又は非経口送達（筋肉内注射、皮内注射、皮下注射及び髄内注射、並びに髄腔内注射、直接脳室内注射、心臓内注射（例えば、右心室腔若しくは左心室腔への注射、総冠状動脈への注射）、静脈内注射、腹腔内注射、鼻腔内注射、又は眼内注射が挙げられ得る。

【0394】

中枢神経系（ＣＮＳ）への薬物送達のための従来のアプローチとしては、神経外科的戦略（例えば、脳内注射又は脳室内注入）；ＢＢＢの内因性輸送経路の１つを利用しようとする、薬剤の分子操作（例えば、それ自体がＢＢＢを通過することができない薬剤と組み合わせて、内皮細胞表面分子に対して親和性を有する輸送ペプチドを含むキメラ融合タンパク質の産生）；薬剤の脂溶性を増加させるように設計された薬理学的戦略（例えば、水溶性薬剤の脂質又はコレステロール担体へのコンジュゲーション）；及び高浸透圧破壊（頚動脈内へのマンニトール溶液の注入又はアンジオテンシンペプチドなどの生物学的活性剤の使用に起因する）によるＢＢＢの完全性の一時的破壊、が挙げられる。しかしながら、これらの戦略の各々は、侵襲的外科的処置に関連する固有のリスク、内因性輸送系に固有の制限によって課されるサイズ制限、ＣＮＳの外側で活性であり得る担体モチーフから構成されるキメラ分子の全身投与に関連する潜在的に望ましくない生物学的副作用、及びＢＢＢが破壊される脳の領域内での脳損傷の可能性のあるリスクなどの制限を有し、それにより最適以下の送達方法となる。

【0395】

代替的に、例えば、患者の組織領域に医薬組成物を直接注射することによって、全身的ではなく局所的に医薬組成物を投与し得る。

【0396】

特定の実施形態によれば、本発明のＴ細胞又はそれを含む医薬組成物は、ＩＶ経路を介して投与される。

【0397】

本発明のいくつかの実施形態の薬学的組成物は、当該分野で周知のプロセスによって、例えば、従来の混合プロセス、溶解プロセス、顆粒化プロセス、糖衣錠作製プロセス、粉末化プロセス、乳化プロセス、カプセル化プロセス、捕捉プロセス、又は凍結乾燥プロセスによって製造され得る。

【0398】

したがって、本発明のいくつかの実施形態により使用するための医薬組成物は、薬学的に使用することができる調製物への活性成分の加工を容易にする賦形剤及び助剤を含む１つ以上の生理学的に許容される担体を使用して、従来の様式で製剤化され得る。適切な製剤は、選択される投与経路に依存する。

【0399】

注射のために、薬学的組成物の活性成分は、水溶液、好ましくは生理学的に適合性の緩衝液（例えば、ハンクス液、リンガー液、又は生理学的塩緩衝液）中で処方され得る。経粘膜投与のためには、透過すべき障壁に適した浸透剤が、製剤中に使用される。そのような浸透剤は、当技術分野で一般に知られている。

【0400】

経口投与の場合、医薬組成物は、活性化合物を当技術分野で周知の薬学的に許容される担体と組み合わせることによって容易に製剤化することができる。そのような担体は、医薬組成物が、患者による経口摂取のための錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤などとして製剤化されることを可能にする。経口使用のための薬理学的調製物は、固体賦形剤を使用して作製され得、任意選択で、得られた混合物を粉砕し、所望される場合、適切な補助剤を添加した後、顆粒の混合物を加工して、錠剤又は糖衣錠コアを得る。適切な賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース、マンニトール、又はソルビトールを含む糖などの充填剤；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボメチルセルロースナトリウムなど；及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの生理学的に許容されるポリマーである。所望であれば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸若しくはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウム）などの崩壊剤が添加され得る。

【0401】

糖衣錠コアは、適切なコーティングと共に提供される。この目的のために、濃縮糖溶液が使用され得、これは、任意選択で、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液、及び適切な有機溶媒又は溶媒混合物を含み得る。識別のため、又は活性化合物用量の異なる組合せを特徴付けるために、染料又は顔料を錠剤又は糖衣錠コーティングに添加してもよい。

【0402】

経口的に使用され得る薬学的組成物としては、ゼラチンから作製されるプッシュフィットカプセル、並びにゼラチン及び可塑剤（例えば、グリセロール又はソルビトール）から作製される軟質密封カプセルが挙げられる。プッシュフィットカプセルは、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、タルク又はステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、及び任意選択で安定剤と混合した活性成分を含有し得る。軟質カプセルにおいて、活性成分は、脂肪油、液体パラフィン、又は液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体に溶解又は懸濁され得る。更に、安定剤が添加され得る。経口投与のための全ての製剤は、選択された投与経路に適した投与量であるべきである。

【0403】

口腔投与のために、組成物は、従来の様式で製剤化された錠剤又は薬用ドロップの形態をとり得る。

【0404】

鼻吸入による投与のために、本発明のいくつかの実施形態による使用のための活性成分は、適切な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、又は二酸化炭素を使用して、加圧パック又はネブライザーからのエアロゾルスプレー提示の形態で都合よく送達される。加圧エアロゾルの場合、投薬単位は、計量された量を送達するためのバルブを提供することによって決定され得る。化合物とラクトース又はデンプンなどの適切な粉末基剤との粉末混合物を含有する、ディスペンサで使用するための例えばゼラチンのカプセル及びカートリッジが製剤化され得る。

【0405】

本明細書に記載の医薬組成物は、例えばボーラス注射又は持続注入による非経口投与用に製剤化され得る。注射用製剤は、単位剤形で、例えば、アンプルで、又は任意選択で保存剤を添加した複数回用量容器で提供され得る。組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、又はエマルジョンであり得、懸濁化剤、安定化剤、及び／又は分散剤などの製剤化剤を含有し得る。

【0406】

非経口投与用の医薬組成物は、水溶性形態の活性調製物の水溶液を含む。更に、活性成分の懸濁液は、適切な油性又は水性注射懸濁液として調製され得る。適切な親油性溶媒又はビヒクルとしては、ゴマ油などの脂肪油、又はオレイン酸エチル、トリグリセリド、若しくはリポソームなどの合成脂肪酸エステルが挙げられる。水性注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、又はデキストランなどの懸濁液の粘度を増加させる物質を含有し得る。必要に応じて、懸濁液はまた、適切な安定剤又は活性成分の溶解度を増加させて、高濃縮溶液の調製を可能にする薬剤を含み得る。

【0407】

代替的に、活性成分は、使用前に、適切なビヒクル、例えば、滅菌された発熱物質を含まない水ベースの溶液で構成するための粉末形態であり得る。

【0408】

本発明のいくつかの実施形態の医薬組成物は、例えば、カカオ脂又は他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を使用して、坐剤又は停留浣腸などの直腸用組成物に製剤化され得る。

【0409】

代替的な実施形態は、当該技術分野において周知であるように、対象における活性成分の活性の持続放出又は延長された持続時間を提供するデポー製剤を含む。

【0410】

本発明のいくつかの実施形態の文脈における使用に適した医薬組成物は、活性成分が意図された目的を達成するのに有効な量で含有される組成物を含む。より具体的には、治療有効量は、障害（例えば、癌）の症状を予防、緩和、若しくは改善するか、又は処置される対象の生存を延長するのに有効な活性成分の量を意味する。

【0411】

治療有効量の決定は、特に本明細書に提供される詳細な開示に照らして、当業者の能力の十分に範囲内である。

【0412】

本発明の方法において使用される任意の調製物について、治療有効量又は用量は、インビトロアッセイ及び細胞培養アッセイから最初に推定され得る。例えば、用量を動物モデルにおいて処方して、所望の濃度又は力価を達成することができる。このような情報は、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定するために使用することができる。

【0413】

本明細書に記載される活性成分の毒性及び治療有効性は、インビトロ、細胞培養、又は実験動物における標準的な薬学的手順によって判定することができる。これらのインビトロアッセイ及び細胞培養アッセイ並びに動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用のための投薬量の範囲を処方する際に使用することができる。投与量は、使用される剤形及び利用される投与経路に依存して変化し得る。正確な製剤、投与経路、及び投与量は、患者の状態を考慮して個々の医師が選択することができる。（例えば、Ｆｉｎｇｌら、１９７５年、「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」、Ｃｈ．１、１頁を参照されたい）。

【0414】

投与量及び間隔は、生物学的効果を誘導又は抑制するのに十分な活性成分のレベル（最小有効濃度ＭＥＣ）を提供するように個々に調整され得る。ＭＥＣは、各調製物について変化するが、インビトロデータから推定することができる。ＭＥＣを達成するために必要な投与量は、個々の特徴及び投与経路に依存する。検出アッセイを使用して、血漿濃度を判定することができる。

【0415】

処置される状態の重篤度及び応答性に依存して、投薬は、単回又は複数回の投与であり得、処置の過程は、数日から数週間まで、又は治癒がもたらされるまで、又は疾患状態の軽減が達成されるまで続く。

【0416】

投与される組成物の量は、もちろん、処置される対象、苦痛の重症度、投与様式、処方する医師の判断などに依存する。

【0417】

本発明のいくつかの実施形態の組成物は、必要に応じて、有効成分を含有する１つ以上の単位剤形を含有し得る、ＦＤＡ承認キットなどのパック又はディスペンサ装置で提供され得る。パックは、例えば、ブリスターパックなどの金属箔又はプラスチック箔を含み得る。パック又はディスペンサ装置には、投与のための説明書が添付されていてもよい。パック又はディスペンサはまた、医薬品の製造、使用、又は販売を規制する政府機関によって規定された形態で容器に付随する通知によって収容され得、この通知は、組成物の形態又はヒト若しくは動物への投与の機関による承認を反映する。そのような通知は、例えば、処方薬について米国食品医薬品局によって承認されたラベルであってもよく、又は承認された製品挿入物であってもよい。適合性の薬学的キャリア中に処方された本発明の調製物を含む組成物はまた、上記で更に詳述されるように、調製され、適切な容器に入れられ、示された状態の処置のためにラベル付けされ得る。

【0418】

本発明の別の態様によれば、本明細書に開示されるＴ細胞と、病的細胞及びＴＣＲ複合体に結合することができる治療用組成物と、をパッケージングするパッケージング材料を含む製品が提供される。

【0419】

特定の実施形態によれば、製品は、病的細胞に関連する疾患（例えば、癌）の処置のために特定される。

【0420】

特定の実施形態によれば、Ｔ細胞及び治療用組成物は、別々の容器にパッケージングされる。

【0421】

特定の実施形態によれば、Ｔ細胞及び治療用組成物は、共製剤中にパッケージングされる。

【0422】

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、±１０％を指す。

【0423】

「含む（comprises）」、「含んでいる（comprising）」、「含む（includes）」、「含んでいる（including）」、「有する（having）」という用語及びそれらの活用形は、「含むが、これに限定されない」ことを意味する。

【0424】

「～からなる」という用語は、「～を含み、～に限定される」ことを意味する。

【0425】

「から本質的になる」という用語は、組成物、方法、又は構造が、追加の組成物、工程、及び／又は部分を含んでもよいが、追加の組成物、工程、及び／又は部分が、特許請求される成分、方法、又は構造の基本的かつ新規な特徴を実質的に変更しない場合に限ることを意味する。

【0426】

本明細書で使用される場合、単数形「１つの（a）」、「１つの（an）」及び「その（the）」は、別途文脈で明確に示されない限り、複数の言及を含む。例えば、「化合物」又は「少なくとも１つの化合物」という用語は、複数の化合物（それらの混合物を含む）を含み得る。

【0427】

本出願を通して、本発明の様々な実施形態は、範囲形式で提示され得る。範囲形式での記載は、単に便宜上及び簡潔さのためであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきではないことが理解されるべきである。したがって、範囲の記載は、具体的に開示された全ての可能な部分範囲並びにその範囲内の個々の数値を有すると考えられるべきである。例えば、１～６などの範囲の記載は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６などの部分範囲、並びにその範囲内の個々の数、例えば、１、２、３、４、５、及び６を具体的に開示しているとみなされるべきである。これは、範囲の幅に関係なく適用される。

【0428】

数値範囲が本明細書で示されるときはいつでも、示された範囲内の任意の引用された数字（分数又は整数）を含むことを意味する。第１の指示数と第２の指示数と「の間の範囲／範囲」、並びに第１の指示数「から」第２の指示数「までの範囲／範囲（ranging/ranges」という句は、本明細書において互換的に使用され、第１及び第２の指示数、並びにそれらの間の全ての分数及び整数を含むことを意味する。

【0429】

本明細書中で使用される場合、「方法」という用語は、所定のタスクを達成するための様式、手段、技術、及び手順をいい、これらとしては、化学分野、薬学分野、生物学分野、生化学分野、及び医学分野の実施者に公知であるか、又はこれらから容易に開発される様式、手段、技術、及び手順が挙げられるが、これらに限定されない。

【0430】

特定の配列表を参照する場合、このような参照はまた、例えば、配列決定エラー、クローニングエラー、又は塩基置換、塩基欠失若しくは塩基付加を生じる他の変化から生じるわずかな配列変動を含むとして、その相補的配列に実質的に対応する配列を包含すると理解されるべきであるが、ただし、このような変動の頻度は、５０ヌクレオチド中１未満、あるいは１００ヌクレオチド中１未満、あるいは２００ヌクレオチド中１未満、あるいは５００ヌクレオチド中１未満、あるいは１０００ヌクレオチド中１未満、あるいは５０００ヌクレオチド中１未満、あるいは１０，０００ヌクレオチド中１未満である。

【0431】

明確にするために別々の実施形態の文脈で説明される本発明の特定の特徴は、単一の実施形態において組み合わせて提供されてもよいことが理解される。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈で記載されている本発明の様々な特徴はまた、別々に、又は任意の適切な部分的組み合わせで、又は本発明の任意の他の記載された実施形態において適切に提供され得る。様々な実施形態の文脈で説明される特定の特徴は、実施形態がそれらの要素なしで動作しない場合を除き、それらの実施形態の本質的な特徴とみなされるべきではない。

【0432】

上記で説明され、以下の特許請求の範囲の項で請求される本発明の様々な実施形態及び態様は、以下の実施例において実験的な裏付けを見出す。

【0433】

実施例
ここで以下の実施例を参照するが、これらの実施例は、上記の説明と共に、本発明のいくつかの実施形態を非限定的に例示するものである。

【0434】

一般に、本明細書中で使用される命名法及び本発明において利用される実験手順は、分子技術、生化学技術、微生物学的技術、及び組換えＤＮＡ技術を含む。このような技術は、文献において十分に説明されている。例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｉ－ＩＩＩ巻、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．編（１９９４年）；Ａｕｓｕｂｅｌら、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、メリーランド州バルチモア（１９８９年）；Ｐｅｒｂａｌ、「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ニューヨーク（１９８８年）；Ｗａｔｓｏｎら、「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ」、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ、ニューヨーク；Ｂｉｒｒｅｎら（編）「Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ」、１－４巻、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、ニューヨーク（１９９８年）；米国特許第４，６６６，８２８号；同第４，６８３，２０２号；同第４，８０１，５３１号；同第５，１９２，６５９号、及び同第５，２７２，０５７号に記載されている方法；「Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」、Ｉ－ＩＩＩ巻、Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．編（１９９４年）；「Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ－Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ、ニューヨーク（１９９４年）、第３版：「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｉ－ＩＩＩ巻、Ｃｏｌｉｇａｎ Ｊ．Ｅ．編（１９９４年）；Ｓｔｉｔｅｓら（編）、「Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（第８版）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ、カリフォルニア州ノーウォーク（１９９４年）；Ｍｉｓｈｅｌｌ及びＳｈｉｉｇｉ（編）、「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．、ニューヨーク（１９８０年）を参照されたい。利用可能なイムノアッセイは、特許及び科学文献に広く記載されており、例えば、米国特許第３，７９１，９３２号；同第３，８３９，１５３号；同第３，８５０，７５２号；同第３，８５０，５７８号；同第３，８５３，９８７号；同第３，８６７，５１７号；同第３，８７９，２６２号；同第３，９０１，６５４号；同第３，９３５，０７４号；同第３，９８４，５３３号；同第３，９９６，３４５号；同第４，０３４，０７４号；同第４，０９８，８７６号；同第４，８７９，２１９号；同第５，０１１，７７１号、及び同第５，２８１，５２１号；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．編（１９８４年）；「Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」、Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．及びＨｉｇｇｉｎｓ Ｓ．Ｊ．編（１９８５年）；「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ」、Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．及びＨｉｇｇｉｎｓ Ｓ．Ｊ．編（１９８４年）；「Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．編（１９８６年）；「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ」、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９８６年）；「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」、Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．（１９８４年）及び「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」、１－３１７巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；「ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、カリフォルニア州サンディエゴ（１９９０年）；Ｍａｒｓｈａｋら、「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ－Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ」、ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９６年）を参照されたい。これらは全て、参照により本明細書に完全に記載されているかのように組み込まれる。他の一般的な参考文献は、本文献全体を通じて提供される。その中の手順は、当該技術分野において周知であると考えられ、読者の便宜のために提供される。そこに含まれる全ての情報は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0435】

材料及び方法
細胞培養及び試薬－Ｋ５６２、Ｒａｊｉ、及び２９３Ｔ細胞株（ＪＣＲＢ）を、供給業者によって推奨されるように培養した。全ての細胞株を、ＰｏｗｅｒＰｌｅｘ１６ ＨＳキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してショートタンデムリピート（ＳＴＲ）プロファイリングによって認証した。細胞数及び生存率を、それぞれ血球計数器及びトリパンブルー排除アッセイを使用して推定した。研究グレードのブリナツモマブ及びＭＴ１１０は、Ｏａｋ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ（米国カリフォルニア州）から購入した。

【0436】

内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞の生成－ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）細胞を、フィコール－ハイパック密度勾配遠心分離を使用して、健常ドナーの末梢血試料から精製した。抽出したＰＢＭＣを活性化し、ＯＫＴ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３１７３０１）を用いて、５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、２００－０２）及び抗生物質を補充した４Ｃｅｌｌ（登録商標）Ｎｕｔｒｉ－Ｔ Ｍｅｄｉａ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、０５－１１Ｆ２００１－１Ｋ）中の２４ウェル懸濁液プレート中で増殖させた。活性化の７２時間後に、細胞を、ＡＭＡＸＡ Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（Ｌｏｎｚａ）を使用して、Ａｌｔ－ＲＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９システムを使用するＳｐＣａｓ９ ＲＮＰ及びヒト定常α領域（配列番号１）又はヒト定常β領域（配列番号４５）（ＩＤＴ、Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ）を標的とするｓｇＲＮＡで電気穿孔した。電気穿孔された細胞を、５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２及び抗生物質を補充した４Ｃｅｌｌ（登録商標）Ｎｕｔｒｉ－Ｔ培地中で培養した。電気穿孔の３日後、ほとんどの細胞は、抗ＣＤ３フロー抗体（ＰＥ－Ｃｙ７ＯＫＴ３ Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３１７３３３）によって決定される定常α又はβ鎖に対して陰性であった（＞８５％）。陰性細胞は、９５％～９９．９％のＣＤ３－／ＴＣＲｃｅｌｌｓに達するように、製造者の指示に従って、磁気抗ＣＤ３ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１３０－０５０－１０１）によって更に濃縮された（図３Ａ）。α鎖及びβ鎖の両方をノックアウトするために、細胞を、α鎖（配列番号１）を標的とするｇＲＮＡでまず電気穿孔し、磁気ビーズによって負に選択し、次いで、β領域（配列番号４５）を標的とするｓｇＲＮＡで更に電気穿孔し、その後、ＣＤ３－／ＴＣＲ－Ｔ細胞の磁気ビーズ精製を行った。

【0437】

ＤＮＡ構築物及びクローニング－ＲＴＶ－０２０レトロウイルスベクター（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ．、カリフォルニア州サンディエゴ）を使用した。各構築物について、アミノ酸配列を最適化し（ＩＤＴ、Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ）、各配列を、示されるように、異なるＴＣＲα及び／又はβポリペプチド、Ｖ５－フーリン－Ｐ２Ａ配列（ＳＹａｎｇら、２００８年）及びＥＧＦＰ又は切断型ＮＧＦＲ（ΔＮＧＦＲ）をコードするポリペプチドを発現するように設計した。設計された構築物の概略図を図２Ａ～Ｂに示し、アミノ酸配列は配列番号２～３、２６～３２、４６、４８～５２、５７、５９、６１～６９、１０９、１２３、１２５、及び１２７に提供され、核酸配列は、配列番号３３～４１、５３～５６、５８、６０、７０～８０、１１０、１２４、１２６、及び１２８に提供される。最終配列をｇＢｌｏｃｋｓ（登録商標）（ＩＤＴ，Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ）として注文した。ｇＢｌｏｃｋｓ（登録商標）を、適切なプライマー及びＨｉｇｈ ｆｉｄｅｌｉｔｙ ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ ＧＸＬ ＤＮＡポリメラーゼ（カタログ番号Ｒ０５０Ｂ、ＴＡＫＡＲＡ）を使用して増幅し、次いでＢａｍＨＩ－ＨＦ及びＸｈｏＩ（ＮＥＢ）で消化し、レトロウイルスベクターに連結した。示される場合、３つの突然変異をα鎖の膜貫通ドメインに導入した：Ｓ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌ（ＬＶＬと記される）。示される場合、システインは、α鎖及びβ鎖（Ｃｙｓ）の両方に導入された：α鎖にＴ４８Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ、α鎖にＬ１２Ｃ及びβ鎖にＳ１７Ｃ、α鎖にＹ４３Ｃ及びβ鎖にＬ６３Ｃ、α鎖にＳ６１Ｃ及びβ鎖にＲ７９Ｃ、α鎖にＬ１２Ｃ及びβ鎖にＦ１４Ｃ、α鎖にＶ２２Ｃ及びβ鎖にＦ１４Ｃ、α鎖にＹ１０Ｃ及びβ鎖にＳ１７Ｃ、α鎖にＴ４５Ｃ及びβ鎖にＤ５９Ｃ、α鎖にＬ５０Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ、α鎖にＳ６１Ｃ及びβ鎖にＳ５７Ｃ、α鎖にＴ４５Ｃ及びβ鎖にＳ７７Ｃ、α鎖にＳ１５Ｃ及びβ鎖にＶ１３Ｃ、又はα鎖にＳ１５Ｃ及びβ鎖にＥ１５Ｃ。示されている場合（ｍｍと記されている）、いくつかの突然変異を、以下のように、α鎖及びβ鎖の細胞外ドメインに導入した。α鎖突然変異Ｐ９１Ｓ、Ｅ９２Ｄ、Ｓ９３Ｖ、Ｓ９４Ｐ；β鎖突然変異：Ｅ１８Ｋ、Ｓ２２Ａ、Ｆ１３３Ｉ、Ｅ／Ｖ１３６Ａ、Ｑ１３９Ｈ。示した場合（Ｄｅｓと記す）、いくつかの突然変異を以下のようにα鎖及びβ鎖に導入した。α鎖突然変異Ｓ２１Ｆ、Ｔ３２Ｉ、Ａ７２Ｔ及びβ鎖突然変異Ｅ１８Ｋ、Ｈ２３Ｒ、Ｄ３９Ｐ、Ｓ５４Ｄ。サンガー配列決定を使用して、クローニングされたベクターを検証した。同様に、国際特許出願公開第ＷＯ２０２０１３８３７１号によって開示されるＢａ９（配列番号：８３－８４）及びα６（配列番号：８１－８２）構築物を設計し、クローニングした。

【0438】

ウイルス調製及び形質導入手順－ウイルス粒子を、ＣＭＶ－ｇａｇＰｏｌ及びＣＭＶ－ＶＳＶＧ（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｉｎｃ．）を使用して、収縮したレトロウイルスベクターによる２９３Ｔ細胞の一過性トランスフェクションによって生成した。ＣＲＩＳＰＲ編集されたＴＣＲ陰性Ｔ細胞を、Ｒｅｔｒｏｎｅｃｔｉｎ（ＴａＫａＲａ Ｂｉｏ）でコーティングした組織培養プレート上に播種し、濃縮したウイルス粒子を添加した。細胞をウイルス調製物と共に７時間インキュベートし、次いで、培地を、５００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２及び抗生物質を補充した４Ｃｅｌｌ（登録商標）Ｎｕｔｒｉ－Ｔ培地と交換した。

【0439】

フローサイトメトリー分析－製造業者の指示に従って、細胞をＯＫＴ３抗ＣＤ３－ＡＰＣ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色した。結果は、Ｇａｌｌｉｏｓ（商標）及びＣｙｔｏｆｌｅｘ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒｓ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．）を使用して得た。フローサイトメトリーの結果を、ＦｌｏｗＪｏ ｖ１０ソフトウェアを使用して分析した。

【0440】

インビトロ抗腫瘍効果－内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞を、Ｔ４８Ｃ突然変異及びＬＶＬ突然変異を含むＢｌｕＴ、並びにＳ５７Ｃ突然変異（配列番号１２５～１２６）を含む切断型β鎖に感染させ、ΔＮＧＦＲマーカーを使用して磁気ビーズで選択した。続いて、細胞を、Ｒａｊｉ－Ｆ．Ｌｕｃ ＣＤ１９＋リンパ腫細胞（カタログ番号ＩＦＯ５００４６ＪＣＲＢ）と共に、様々なＥ：Ｔ比で、５００μｇ／ｍＬのブリナツモマブ（ＣＤ１９ ＢｉＴＥ）の存在下又は非存在下で、３７℃で２４時間インキュベートし、ホタルルシフェラーゼ活性をＧｌｏＭａｘ（登録商標）Ｄｉｓｃｏｖｅｒ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒによって測定して細胞傷害性を判定した。抗ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞は、内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞に抗ＣＤ１９（ＦＭＣ６３）－ＣＤ２８ｚ（配列番号１２７～１２８）を感染させ、ΔＮＧＦＲマーカーを用いて磁気ビーズで選択し、非改変ＣＤ３陽性ＴＣＲ陽性Ｔ細胞を陽性対照として使用した。

【0441】

インビボ抗腫瘍効果－２×１０^６Ｒａｊｉ－Ｆ．Ｌｕｃを、１０^７個のＴ細胞（Ｔ４８Ｃ突然変異及びＬＶＬ突然変異を含む切断型α鎖並びにＳ５７Ｃを含む切断型β鎖（配列番号１２５～１２６）をコードするベクターで感染させ、ΔＮＧＦＲマーカーを使用して磁気ビーズで選択した内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞）（ｎ＝１０）；抗ＣＤ１９（ＦＭＣ６３）－ＣＤ２８ｚに感染させ、ΔＮＧＦＲマーカーを使用して磁気ビーズで選択した内因性ＴＣＲ陰性抗ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞（ｎ＝８）；又は非改変ＣＤ３陽性ＴＣＲ陽性Ｔ細胞（ｎ＝１６）、を有する（ｎ＝３４）又は有さない（ｎ＝８）ＮＳＧマウスに皮下注射した。注射の２４時間後、示された群を５μｇ／マウスのブリナトムマブで５日間連続して静脈内処置した。生物発光イメージング（ＩＶＩＳ（登録商標）Ｌｕｍｉｎａ Ｘ５、ＰｅｒｋＥｌｍｅｒ）を６０日目まで週１回実施して、腫瘍増殖を追跡した。

【0442】

実施例１
切断型Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の生成
本発明者らは、ＴＣＲα鎖及びβ鎖の可変領域を欠いている新規の操作されたＴＣＲを考案した。本明細書において「平滑末端切断型ＴＣＲ（ＢｌｕＴ）」と称されるこのＴＣＲは、細胞表面上のＴＣＲ複合体の一部として提示され（図１Ａ）、ＭＨＣ機構を介していかなる抗原も認識しないＴＣＲとして機能することができ、したがって、内因性ＴＣＲα鎖又はβ鎖とのミスマッチ対合の場合であってもＧｖＨＤの誘導を防止する（図１Ｂ）。

【0443】

この目的のために、それらの可変領域を欠くヒトＴＣＲα鎖及び／又はβ鎖をコードするいくつかの構築物を設計し（図２Ａ～Ｂ、アミノ酸配列は配列番号２～３及び２６～３２、４６～５２、５７、５９、６１～６９、８１、８３、１０９、１２３、１２５、及び１２７に提供され、核酸配列は配列番号３３～４１、５３～５６、５８、６０、７０、８０、８２、８４、１２４、１２６、及び１２８に提供される）、レトロウイルスにパッケージングし、ＴＣＲ陰性Ｔ細胞（ＴＣＲα鎖のＣＲＩＳＰＲターゲティングによって形成される）に感染させるために使用した（図３Ａ～Ｂ）。ＥＧＦＰを、安定感染のマーカーとして使用した。図３Ｂ及び４Ａ並びに以下の表１に示されるように、切断型α鎖のみ又は切断型β鎖のみをコードするベクターの導入は、細胞表面上のＴＣＲ複合体の提示をもたらさなかった（表面上のＣＤ３の発現がないことによって明示される）。更に、切断型α鎖及びβ鎖（ＴＲＢＣ１鎖又はＴＲＢＣ２鎖のいずれか）をコードするベクターの導入は、細胞表面上のＴＣＲ複合体の提示をもたらさなかった。

【0444】

この問題を解決するために、本発明者らは、切断型ＴＣＲを安定化させる改変を探索した（図３Ｂ～８Ｂ及び以下の表１）。

【0445】

安定化突然変異Ｓ１１６Ｌ、Ｇ１１９Ｖ、及びＦ１２０Ｌ（ＬＶＬとして示される）を含む切断型α鎖をコードするベクター、及び切断型β鎖をコードするベクター；又はコンピュータにより設計された安定化突然変異、すなわち、α鎖にＳ２１Ｆ、Ｔ３２Ｉ、Ａ７２Ｔ及びβ鎖にＥ１８Ｋ、Ｈ２３Ｒ、Ｄ３９Ｐ、Ｓ５４Ｄ（Ｄｅｓと記す）を含む切断型α鎖及びβ鎖をコードするベクターの導入は、細胞表面上でのＴＣＲ複合体の提示をもたらさなかった（図４及び７）。更に、内因性α鎖を発現しない初代Ｔ細胞において発現させることを試みると、国際特許出願公開第ＷＯ２０２０１３８３７１号に開示されている。単独又は完全定常β鎖を有する最も高くランク付けされた切断型α鎖は、ＣＤ３再発現をもたらさなかった（図８Ｂ）。

【0446】

しかしながら、Ｔ４８Ｃ突然変異を含む切断型α鎖及びＳ５７Ｃを含む切断型β鎖をコードするベクターを導入して、α鎖とβ鎖との間に更なるジスルフィド結合を形成させると、細胞表面上にＴＣＲ複合体が提示された（表面上でのＣＤ３の再発現によって明示される）（図３Ｂ及び４）。更に、Ｔ４８／Ｓ５７システイン突然変異へのＬＶＬ突然変異の付加は、細胞表面上のＣＤ３再発現を改善した（図４）。重要なことに、他の適用可能なシステイン部位においてα鎖とβ鎖との間に更なるジスルフィド結合をもたらす突然変異を導入すること（配列番号８５～１０８；例えば、Ｂｏｕｌｔｅｒら、２００３年を参照）、ＣＤ３再発現を可能にしなかった（図６）。更に、α鎖の定常ドメインのＮ末端からの１１個以上のアミノ酸の除去は、複合体を不安定化し、ＣＤ３発現を防止することが見出された（図８Ａ）。

【0447】

加えて、α鎖中に最小マウスアミノ酸置換（ｍｍとして表示される）、すなわち、Ｐ９１Ｓ、Ｅ９２Ｄ、Ｓ９３Ｖ、Ｓ９４Ｐを、及びβ鎖中にＥ１８Ｋ、Ｓ２２Ａ、Ｆ１３３Ｉ、Ｅ／Ｖ１３６Ａ、Ｑ１３９Ｈを含む切断型α鎖及びβ鎖をコードするベクターの導入もまた、細胞表面上でのＴＣＲ複合体の提示をもたらした（表面上でのＣＤ３の再発現によって明らかにされる）（図７）。システイン突然変異と同様に、ｍｍ修飾にＬＶＬ修飾を付加することにより、ＣＤ３再発現が更に増強された。

【0448】

これらの結果が、内因性α鎖をノックアウトして内因性ＴＣＲの細胞表面発現を防止する場合に排他的に有効ではないことを示すために、ＳｐＣａｓ９ ＲＮＰを使用して内因性β鎖を標的化した（図５）。同様に、切断型α鎖及びβ鎖をコードするベクターを導入しても、細胞表面上にＴＣＲ複合体が提示されなかったが、Ｔ４８Ｃ突然変異を含む切断型α鎖及びＳ５７Ｃ突然変異を含む切断型β鎖をコードするベクターを導入することにより、細胞表面上にＴＣＲ複合体が提示された（表面上のＣＤ３の再発現によって現れる）。α及びβ内因性鎖の両方のノックアウトは、更なる効果を有さなかった。

【0449】

まとめると、可変ドメインを欠くヒトＴＣＲα鎖及びβ鎖を含むＴＣＲ複合体をＴ細胞の表面上で発現させるためには、ヒトＴＣＲ野生型配列に対する改変を導入しなければならない。以下の可能かつ十分な改変が同定された：α鎖のＴ４８及びβ鎖のＳ５７をシステイン残基で置換すること、及び／又は両方の鎖におけるいくつかの残基をそれらのマウス対応物で置換すること。α鎖におけるＬＶＬ突然変異の更なる導入は、細胞表面発現を改善する。

【0450】

【表1】

【0451】

実施例２
二重特異性Ｔ細胞エンゲージャと組み合わせてＢｌｕＴＴＣＲを発現するＴ細胞は、有効なインビトロ腫瘍細胞溶解を誘導する。
いくつかの実施形態の治療戦略は、ＢｌｕＴを発現するＴ細胞を、一方でＴＣＲ複合体（例えば、ＣＤ３）に結合し、他方で癌抗原に結合する二重特異性抗体と共に対象に注入することに基づくので、形質導入されたＴ細胞の細胞傷害活性は、例えば、抗ＣＤ１９二重特異性Ｔ細胞エンゲージャ（ＢｉＴＥ）ブリナツモマブ及び／又は抗ＥＰＣＡＭ ＢｉＴＥ－ＭＴ１１０と組み合わせて、例えばＣＤ１９＋Ｒａｊｉ細胞及び／又はＥＧＦＲ＋Ｋ５６２細胞上でインビトロで評価することができる。Ｔ細胞活性化は、例えば、ＣＤ１０７の発現及びＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ－２などのサイトカインの分泌によって判定することができる。細胞傷害活性は、例えば、非処置対照と比較したＲＬＵの変化、ＣＤ１９又はＥＧＦＲパーセンテージの減少によって判定することができる。ＢｌｕＴによる形質導入されたＴ細胞の正の選択のために、（図２Ａ～Ｂ及び上記の実施例１に記載されるＥＧＦＰの代わりに）ΔＮＧＦＲが選択マーカーとして使用され得る。

【0452】

この目的のために、Ｔ４８Ｃ突然変異及びＬＶＬ突然変異を含む切断型α鎖並びにＳ５７Ｃを含む切断型β鎖を発現する内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞を、ブリナツモマブ（ＣＤ１９ ＢｉＴＥ）の存在下又は非存在下で、様々なＥ：Ｔ比でＲａｊｉ－Ｆ．Ｌｕｃ ＣＤ１９陽性リンパ腫株と共に２４時間インキュベートし、ホタルルシフェラーゼ活性を測定して、細胞傷害性を判定した（図９）。内因性ＴＣＲ陰性抗ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞及び非改変ＣＤ３陽性ＴＣＲ陽性Ｔ細胞を、陽性対照として使用した。

【0453】

完全内因性ＴＣＲ（ＭＨＣ－ＴＣＲ機構を介して腫瘍細胞を認識することができ、その結果、ＢｉＴＥを添加することなく標的細胞に対する細胞傷害活性を有する）を含有する非改変Ｔ細胞とは異なり、改変切断型ＴＣＲを含むＴ細胞は、抗ＣＤ３メディエーターの存在下でのみ抗腫瘍活性を有する。更に、改変切断型ＴＣＲを含むＴ細胞は、非改変Ｔ細胞又は抗ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、有意により細胞毒性であった。

【0454】

実施例３
二重特異性Ｔ細胞エンゲージャと組み合わせてＢｌｕＴ ＴＣＲを発現するＴ細胞を有効なインビボ抗腫瘍ＥＦＦＥＣＲを誘導する。
いくつかの実施形態の治療戦略は、ＢｌｕＴを発現するＴ細胞を、一方でＴＣＲ複合体（例えば、ＣＤ３）に結合し、他方で癌抗原に結合する二重特異性抗体と共に対象に注入することに基づくので、Ｔ４８Ｃ突然変異及びＬＶＬ突然変異を含む切断型α鎖並びにＳ５７Ｃを含む切断型β鎖を発現する内因性ＴＣＲ陰性Ｔ細胞の細胞傷害活性を、抗ＣＤ１９ＢｉＴＥブリナツモマブと組み合わせてＣＤ１９＋Ｒａｊｉ細胞を移植したマウスにおいてインビボで評価した。内因性ＴＣＲ陰性抗ＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞及び非改変ＣＤ３陽性ＴＣＲ陽性Ｔ細胞を、陽性対照として使用した。

【0455】

図１０に示すように、改変切断型ＴＣＲを含むＴ細胞は、抗ＣＤ３メディエーターの存在下でのみ抗腫瘍活性を有する。

【0456】

本発明をその特定の実施形態に関連して説明してきたが、多くの代替例、修正例、及び変形例が当業者には明らかであることは明白である。したがって、添付の特許請求の範囲の精神及び広い範囲内に入る全てのそのような代替例、修正例、及び変形例を包含することが意図される。

【0457】

本明細書で言及される全ての刊行物、特許及び特許出願は、あたかも個々の刊行物、特許又は特許出願が参照されたときに参照により本明細書に組み込まれるべきであると具体的かつ個別に記載されているかのように、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれるべきであることが出願人の意図である。加えて、本出願における任意の参考文献の引用又は特定は、そのような参考文献が本発明に対する先行技術として利用可能であることの承認として解釈されるべきではない。セクションの見出しが使用される限りにおいて、それらは必ずしも限定するものとして解釈されるべきではない。加えて、本出願の任意の優先権書類（複数可）は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0458】

参考文献
（他の参考文献は、本出願全体を通じて引用される）。
１．ＭａｃＫａｙ Ｍ、Ａｆｓｈｉｎｎｅｋｏｏ Ｅ、Ｒｕｂ Ｊ、Ｈａｓｓａｎ Ｃ、Ｋｈｕｎｔｅ Ｍ、Ｂａｓｋａｒａｎ Ｎら。Ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｌａｎｄｓｃａｐｅ ｆｏｒ ｃｅｌｌｓ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｗｉｔｈ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ［インターネット］．２０２０［２０２０年１月２０日に引用］；ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｎｃｂｉ（ｄｏｔ）ｎｌｍ（ｄｏｔ）ｎｉｈ（ｄｏｔ）ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／３１９０７４０５から入手可能。
２．Ｓａｄｅｌａｉｎ Ｍ、Ｒｉｄｄｅｌｌ Ｓ。Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔ ｃｅｌｌ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ［インターネット］．Ｎａｔｕｒｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ；２０１７年；５４５：４２３－３１。ｄｘ（ｄｏｔ）ｄｏｉ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／１０（ｄｏｔ）１０３８／ｎａｔｕｒｅ２２３９５から入手可能。
３．Ｆｅｓｎａｋ ＡＤ、Ｊｕｎｅ ＣＨ、Ｌｅｖｉｎｅ ＢＬ。Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ：Ｔｈｅ ｐｒｏｍｉｓｅ ａｎｄ ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ［インターネット］．Ｎａｔｕｒｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ；２０１６年；１６：５６６－８１。ｄｘ（ｄｏｔ）ｄｏｉ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／１０（ｄｏｔ）１０３８／ｎｒｃ（ｄｏｔ）２０１６（ｄｏｔ）９７から入手可能。
４．Ｋｅｒｓｈａｗ ＭＨ、Ｗｅｓｔｗｏｏｄ ＪＡ、Ｄａｒｃｙ ＰＫ。Ｇｅｎｅ－ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ［インターネット］．Ｎａｔｕｒｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ；２０１３年；１３：５２５－４１。ｄｘ（ｄｏｔ）ｄｏｉ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／１０（ｄｏｔ）１０３８／ｎｒｃ３５６５から入手可能。
５．Ｓａｆａｒｚａｄｅｈ Ｋｏｚａｎｉ Ｐ、Ｓａｆａｒｚａｄｅｈ Ｋｏｚａｎｉ Ｐ、Ｒａｈｂａｒｉｚａｄｅｈ Ｆ、Ｋｈｏｓｈｔｉｎａｔ Ｎｉｋｋｈｏｉ Ｓ。Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｄｏｄｇｉｎｇ ｔｈｅ Ｏｂｓｔａｃｌｅｓ ｉｎ ＣＡＲ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ［インターネット］。Ｆｒｏｎｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ Ｍｅｄｉａ Ｓ．Ａ．；２０２１［２０２１年５月２７日に引用］９２４頁。ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｆｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎ（ｄｏｔ）ｏｒｇから入手可能。
６．Ｇｏｅｂｅｌｅｒ ＭＥ、Ｂａｒｇｏｕ ＲＣ．Ｔ ｃｅｌｌ－ｅｎｇａｇｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ－ＢｉＴＥｓ ａｎｄ ｂｅｙｏｎｄ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ［インターネット］。Ｓｐｒｉｎｇｅｒ ＵＳ；２０２０年；１７：４１８－３４。ｄｘ（ｄｏｔ）ｄｏｉ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／１０（ｄｏｔ）１０３８／ｓ４１５７１－０２０－０３４７－５から入手可能。
７．Ｒａｊａｔ Ｂａｎｎｅｒｊｉ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｊｏｈｎ Ｎ．Ａｌｌａｎ，ＭＤ，Ｊｏｎ Ｅ．Ａｒｎａｓｏｎ，ＭＤ，Ｊｅｎｎｉｆｅｒ Ｒ．Ｂｒｏｗｎ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｒａｎｊａｎａ Ａｄｖａｎｉ，ＭＤ，Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｍ．Ａｎｓｅｌｌ，ＭＤ，ＰｈＤ，Ｓｕｓａｎ Ｍ．Ｏ’Ｂｒｉｅｎ，ＭＤ，Ｊｏｈａｎｎｅｓ Ｄｕｅｌｌ，ＭＤ，Ｐｅｔｅｒ Ｍａｒｔｉｎ，ＦＲＣＰＣ，ＭＤ，ＭＳ，Ｒｏｂｉｎ Ｍ．Ｊｏｙｃｅ，ＭＤ，Ｊｉｎｇｊｉｎ Ｌｉ，ＰｈＤ，Ｄｉｎａ Ｍ．Ｍ．Ｏｄｒｏｎｅｘｔａｍａｂ（ＲＥＧＮ１９７９），ａ Ｈｕｍａｎ ＣＤ２０ ｘ ＣＤ３ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｉｎｄｕｃｅｓ Ｄｕｒａｂｌｅ，Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｈｉｇｈｌｙ Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ Ｂ－Ｃｅｌｌ Ｎｏｎ－Ｈｏｄｇｋｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｔｏ ＣＡＲ Ｔ Ｔｈｅｒａｐｙ．２０２０年。ａｓｈ（ｄｏｔ）ｃｏｎｆｅｘ（ｄｏｔ）ｃｏｍ／ａｓｈ／２０２０／ｗｅｂｐｒｏｇｒａｍ／Ｐａｐｅｒ１３６６５９（ｄｏｔ）ｈｔｍｌから入手可能。
８．Ａｈａｍａｄｉ－Ｆｅｓｈａｒａｋｉ Ｒ、Ｆａｔｅｈ Ａ、Ｖａｚｉｒｉ Ｆ、Ｓｏｌｇｉ Ｇ、Ｓｉａｄａｔ ＳＤ、Ｍａｈｂｏｕｄｉ Ｆら。Ｓｉｎｇｌｅ－Ｃｈａｉｎ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｆｒａｇｍｅｎｔ－Ｂａｓｅｄ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｈｉｔｔｉｎｇ Ｔｗｏ Ｔａｒｇｅｔｓ ｗｉｔｈ Ｏｎｅ Ｓｏｐｈｉｓｔｉｃａｔｅｄ Ａｒｒｏｗ．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ－Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃｓ［インターネット］．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｌｔｄ．２０１９年；１４：３８－５６。ｄｏｉ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／１０（ｄｏｔ）１０１６／ｊ（ｄｏｔ）ｏｍｔｏ（ｄｏｔ）２０１９（ｄｏｔ）０２（ｄｏｔ）００４から入手可能。
９．Ｇａｒｂｅｒ Ｋ．Ｄｒｉｖｉｎｇ Ｔ－ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｔｏ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ；２０１８年；３６：２１５－９。
１０．Ｓｌａｎｅｙ ＣＹ、Ｗａｎｇ Ｐ、Ｄａｒｃｙ ＰＫ、Ｋｅｒｓｈａｗ ＭＨ。ＣＡＲｓ ｖｅｒｓｕｓ ｂｉＴＥｓ：Ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｔ ｃｅｌｌ－ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［インターネット］。Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ．；２０１８［２０２１年５月２７日に引用］。９２４－３４頁。ｗｗｗ（ｄｏｔ）ａａｃｒｊｏｕｒｎａｌｓ（ｄｏｔ）ｏｒｇから入手可能。
１１．Ｃｈａｎｄｒａｎ ＳＳ、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆ ＣＡ。Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｂａｓｅｄ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ：Ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｐａｔｈｗａｙｓ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２０１９年；２９０：１２７－４７。
１２．Ｇｕｄｉｐａｔｉ Ｖ、Ｒｙｄｚｅｋ Ｊ、Ｄｏｅｌ－Ｐｅｒｅｚ Ｉ、Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ ＶＤＲ、Ｓｃｈａｒｆ Ｌ、Ｋｏｅｎｉｇｓｂｅｒｇｅｒ Ｓら。Ｉｎｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ＣＡＲ－ｐｒｏｘｉｍａｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｌｕｎｔｓ ａｎｔｉｇｅｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ。Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０２０年；２１：８４８－５６。
１３．Ｈｅｌｓｅｎ ＣＷ、Ｈａｍｍｉｌｌ ＪＡ、Ｌａｕ ＶＷＣ、Ｍｗａｗａｓｉ ＫＡ、Ａｆｓａｈｉ Ａ、Ｂｅｚｖｅｒｂｎａｙａ Ｋら。Ｔｈｅ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ＴＡＣ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏ－ｏｐｔｓ ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｙｉｅｌｄｉｎｇ ｒｏｂｕｓｔ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ［インターネット］．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ ＵＳ；２０１８年；９：１－１３。ｄｘ（ｄｏｔ）ｄｏｉ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／１０（ｄｏｔ）１０３８／ｓ４１４６７－０１８－０５３９５－ｙから入手可能。
１４．Ｂａｅｕｅｒｌｅ ＰＡ、Ｄｉｎｇ Ｊ、Ｐａｔｅｌ Ｅ、Ｔｈｏｒａｕｓｃｈ Ｎ、Ｈｏｒｔｏｎ Ｈ、Ｇｉｅｒｕｔ Ｊら、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ＴＲｕＣ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｅｎｇａｇｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ［インターネット］．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ ＵＳ；２０１９年；１０：１－１２。ｄｘ（ｄｏｔ）ｄｏｉ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／１０（ｄｏｔ）１０３８／ｓ４１４６７－０１９－１００９７－０から入手可能。
１５．Ｌｅｅ ＹＧ、Ｃｈｕ Ｈ、Ｌｕ Ｙ、Ｌｅａｍｏｎ ＣＰ、Ｓｒｉｎｉｖａｓａｒａｏ Ｍ、Ｐｕｔｔ ＫＳら。Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＡＲ Ｔ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ－ｌｉｋｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｕｓｉｎｇ ｌｏｗ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ａｄａｐｔｅｒｓ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ［インターネット］．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ ＵＳ；２０１９年；１０：１－１１。ｄｘ（ｄｏｔ）ｄｏｉ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／１０（ｄｏｔ）１０３８／ｓ４１４６７－０１９－１０５６５－７から入手可能。
１６．Ｇｈｏｒａｓｈｉａｎ Ｓ、Ｋｒａｍｅｒ ＡＭ、Ｏｎｕｏｈａ Ｓ、Ｗｒｉｇｈｔ Ｇ、Ｂａｒｔｒａｍ Ｊ、Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ Ｒら。Ｅｎｈａｎｃｅｄ ＣＡＲ Ｔ ｃｅｌｌ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ｉｎ ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＡＬＬ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｌｏｗ－ａｆｆｉｎｉｔｙ ＣＤ１９ ＣＡＲ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．Ｎａｔｕｒｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ；２０１９年。１４０８－１４頁。
１７．Ｂｅｎｊａｍｉｎ Ｒ、Ｇｒａｈａｍ Ｃ、Ｙａｌｌｏｐ Ｄ、Ｊｏｚｗｉｋ Ａ、Ｍｉｒｃｉ－Ｄａｎｉｃａｒ ＯＣ、Ｌｕｃｃｈｉｎｉ Ｇら。Ｇｅｎｏｍｅ－ｅｄｉｔｅｄ，ｄｏｎｏｒ－ｄｅｒｉｖｅｄ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ａｎｔｉ－ＣＤ１９ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐａｅｄｉａｔｒｉｃ ａｎｄ ａｄｕｌｔ Ｂ－ｃｅｌｌ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋａｅｍｉａ：ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｗｏ ｐｈａｓｅ １ ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｌａｎｃｅｔ．２０２０年；３９６：１８８５－９４。
１８．Ａｌｄｅｒｔｏｎ ＧＫ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ：Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ａｌｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔｕｒｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ；２０１７年、２０６－７頁。
１９．Ｖａｎ Ｌｏｅｎｅｎ ＭＭ、Ｄｅ Ｂｏｅｒ Ｒ、Ａｍｉｒ ＡＬ、Ｈａｇｅｄｏｏｒｎ ＲＳ、Ｖｏｌｂｅｄａ ＧＬ、Ｗｉｌｌｅｍｚｅ Ｒら。Ｍｉｘｅｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｉｍｅｒｓ ｈａｒｂｏｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙ ｈａｒｍｆｕｌ ｎｅｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ。２０１０年；１０７：１０９７２－７。
２０．Ｍａｃｋ Ｍ、Ｇｒｕｂｅｒ Ｒ、Ｓｃｈｍｉｄｔ Ｓ、Ｒｉｅｔｈｍｕｌｌｅｒ Ｇ、Ｋｕｆｅｒ Ｐ。Ｂｉｏｌｏｇｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ａ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ａｇａｉｎｓｔ １７－１Ａ（ＥｐＣＡＭ）ａｎｄ ＣＤ３：ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｔ ｃｅｌｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９７年；１５８。
２１．Ｅｘｌｅｙ Ｍ、Ｔｅｒｈｏｒｓｔ Ｃ、Ｗｉｌｅｍａｎ Ｔ。Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ａｓｓｅｍｂｌｙ ａｎｄ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｏｒ ａｎｔｉｇｅｎ．Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１年；３：２８３－９７。
２２．Ｇａｒｆａｌｌ ＡＬ、Ｄａｎｃｙ ＥＫ、Ｃｏｈｅｎ ＡＤ、Ｈｗａｎｇ ＷＴ、Ｆｒａｉｅｔｔａ ＪＡ、Ｄａｖｉｓ ＭＭら。Ｔ－ｃｅｌｌ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ＣＡＲ Ｔ－ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｐｏｓｔｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｖｓ ｒｅｌａｐｓｅｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖ．２０１９年；３：２８１２－５。
２３．Ｌａｍｅｒｓ ＣＨＪ、Ｓｌｅｉｊｆｅｒ Ｓ、Ｖｕｌｔｏ ＡＧ、Ｋｒｕｉｔ ＷＨＪ、Ｋｌｉｆｆｅｎ Ｍ、Ｄｅｂｅｔｓ Ｒら。Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｗｉｔｈ ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｒｅｔａｒｇｅｔｅｄ ａｇａｉｎｓｔ ｃａｒｂｏｎｉｃ ａｎｈｙｄｒａｓｅ ＩＸ：ｆｉｒｓｔ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ［インターネット］．２００６年［２０２０年１月２０日に引用］；２４：ｅ２０－２。ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｎｃｂｉ（ｄｏｔ）ｎｌｍ（ｄｏｔ）ｎｉｈ（ｄｏｔ）ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／１６６４８４９３から入手可能。
２４．Ｍｏｒｇａｎ ＲＡ、Ｙａｎｇ ＪＣ、Ｋｉｔａｎｏ Ｍ、Ｄｕｄｌｅｙ ＭＥ、Ｌａｕｒｅｎｃｏｔ ＣＭ、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ＳＡ．Ｃａｓｅ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ａ ｓｅｒｉｏｕｓ ａｄｖｅｒｓｅ ｅｖｅｎｔ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｔｈｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ ＥＲＢＢ２．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１０年；１８：８４３－５１。
２５．Ｌｉｎｅｔｔｅ ＧＰ、Ｓｔａｄｔｍａｕｅｒ ＥＡ、Ｍａｕｓ Ｍ Ｖ．、Ｒａｐｏｐｏｒｔ ＡＰ、Ｌｅｖｉｎｅ ＢＬ、Ｅｍｅｒｙ Ｌら、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｔｉｔｉｎ ｃｒｏｓｓ－ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｆｆｉｎｉｔｙ－ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｍｙｅｌｏｍａ ａｎｄ ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ．２０１３年；１２２：８６３－７１。
２６．Ｍｏｒｇａｎ ＲＡ、Ｃｈｉｎｎａｓａｍｙ Ｎ、Ａｂａｔｅ－Ｄａｇａ Ｄ、Ｇｒｏｓ Ａ、Ｒｏｂｂｉｎｓ ＰＦ、Ｚｈｅｎｇ Ｚ，ら。Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ａｎｔｉ－ＭＡＧＥ－Ａ３ ＴＣＲ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１３年；３６：１３３－５１。
２７．Ｂｒｕｄｎｏ ＪＮ、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ＪＮ。Ｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓ ｏｆ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔ ｃｅｌｌｓ：Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ．Ｂｌｏｏｄ．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ；２０１６年；３３２１－３０頁。
２８．Ｍａｕｄｅ ＳＬ、Ｂａｒｒｅｔｔ Ｄ、Ｔｅａｃｈｅｙ ＤＴ、Ｇｒｕｐｐ ＳＡ。Ｍａｎａｇｉｎｇ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｎｏｖｅｌ Ｔ ｃｅｌｌ－ｅｎｇａｇｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．（米国）。Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ；２０１４年．１１９－２２頁。
２９．Ｇｒｕｐｐ ＳＡ、Ｋａｌｏｓ Ｍ、Ｂａｒｒｅｔｔ Ｄ、Ａｐｌｅｎｃ Ｒ、Ｐｏｒｔｅｒ ＤＬ、Ｒｈｅｉｎｇｏｌｄ ＳＲら。Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ－Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔ Ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ Ａｃｕｔｅ Ｌｙｍｐｈｏｉｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ［インターネット］．２０１３年［２０２０年１月２０日に引用］；３６８：１５０９－１８。ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｎｅｊｍ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／ｄｏｉ／１０（ｄｏｔ）１０５６／ＮＥＪＭｏａ１２１５１３４から入手可能。
３０．Ｆｒｙ ＴＪ、Ｓｈａｈ ＮＮ、Ｏｒｅｎｔａｓ ＲＪ、Ｓｔｅｔｌｅｒ－Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ Ｍ、Ｙｕａｎ ＣＭ、Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａ Ｓら。ＣＤ２２－ｔａｒｇｅｔｅｄ ＣＡＲ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎｄｕｃｅ ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｂ－ＡＬＬ ｔｈａｔ ｉｓ ｎａｉｖｅ ｏｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ＣＤ１９－ｔａｒｇｅｔｅｄ ＣＡＲ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．Ｎａｔｕｒｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ；２０１８年；２４：２０－８。
３１．Ｃｈｏｉ ＢＤ、Ｙｕ Ｘ、Ｃａｓｔａｎｏ ＡＰ、Ｂｏｕｆｆａｒｄ ＡＡ、Ｓｃｈｍｉｄｔｓ Ａ、Ｌａｒｓｏｎ ＲＣら。ＣＡＲ－Ｔ ｃｅｌｌｓ ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ＢｉＴＥｓ ｃｉｒｃｕｍｖｅｎｔ ａｎｔｉｇｅｎ ｅｓｃａｐｅ ｗｉｔｈｏｕｔ ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ；２０１９年；３７：１０４９－５８。
３２．Ｌｉｕ Ｙ、Ｌｉｕ Ｇ、Ｗａｎｇ Ｊ、Ｚｈｅｎｇ ＺＹ、Ｊｉａ Ｌ、Ｒｕｉ Ｗら。Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ＳＴＡＲ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｕｓｉｎｇ ＴＣＲ ｍａｃｈｉｎｅｒｙ ｍｅｄｉａｔｅ ｒｏｂｕｓｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０２１年；１３。
３３．Ｙａｎｇ Ｓ、Ｃｏｈｅｎ ＣＪ、Ｐｅｎｇ ＰＤ、Ｚｈａｏ Ｙ、Ｃａｓｓａｒｄ Ｌ、Ｙｕ Ｚら。Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｏｐｔｉｍａｌ ｂｉｃｉｓｔｒｏｎｉｃ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ ｈｉｇｈ－ｌｅｖｅｌ ＴＣＲ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｒｏｂｕｓｔ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ［インターネット］．Ｎａｔｕｒｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ；２００８年［２０２１年５月２８日引用］；１５：１４１１－２３。ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｎａｔｕｒｅ（ｄｏｔ）ｃｏｍ／ｇｔから入手可能。
３４．Ｈａｇａ－Ｆｒｉｅｄｍａｎ Ａ、Ｈｏｒｏｖｉｔｚ－Ｆｒｉｅｄ Ｍ、Ｃｏｈｅｎ ＣＪ。Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ Ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ＴＣＲ Ｅｎｈａｎｃｅ Ｉｔｓ Ｓｕｒｆａｃｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ａｖｉｄｉｔｙ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２年；１８８：５５３８－４６。
３５．Ｊｉｎ ＢＹ、Ｃａｍｐｂｅｌｌ ＴＥ、Ｄｒａｐｅｒ ＬＭ、Ｓｔｅｖａｎｏｖｉｃ Ｓ、Ｗｅｉｓｓｂｒｉｃｈ Ｂ、Ｙｕ Ｚ，ら。Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｅ７ ｍｅｄｉａｔｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ ｃａｎｃｅｒｓ ｉｎ ａ ｍｕｒｉｎｅ ｍｏｄｅｌ．ＪＣＩ ｉｎｓｉｇｈｔ．２０１８年；３。
３６．Ｋｕｂａｌｌ Ｊ、Ｈａｕｐｔｒｏｃｋ Ｂ、Ｍａｌｉｎａ Ｖ、Ａｎｔｕｎｅｓ Ｅ、Ｖｏｓｓ ＲＨ、Ｗｏｌｆｌ Ｍら。Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｖｉｄｉｔｙ ｏｆ ＴＣＲ－ Ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｒｅｍｏｖｉｎｇ ｄｅｆｉｎｅｄ Ｎ－ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ＴＣＲ ｃｏｎｓｔａｎｔ ｄｏｍａｉｎ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２００９年；２０６：４６３－７５。
３７．Ｃｏｈｅｎ ＣＪ、Ｌｉ ＹＦ、Ｅｌ－Ｇａｍｉｌ Ｍ、Ｒｏｂｂｉｎｓ ＰＦ、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ＳＡ、Ｍｏｒｇａｎ ＲＡ。Ｅｎｈａｎｃｅｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｔｏ ｅｘｐｒｅｓｓ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｗｉｔｈ ａ ｓｅｃｏｎｄ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｂｏｎｄ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００７年；６７：３８９８－９０３。
３８．Ｂｏｕｌｔｅｒ ＪＭ、Ｇｌｉｃｋ Ｍ、Ｔｏｄｏｒｏｖ ＰＴ、Ｂａｓｔｏｎ Ｅ、Ｓａｍｉ Ｍ、Ｒｉｚｋａｌｌａｈ Ｐら。Ｓｔａｂｌｅ，ｓｏｌｕｂｌｅ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｆｏｒ ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．２００３年；１６：７０７－１１。
３９．Ｋｕｂａｌｌ Ｊ、Ｄｏｓｓｅｔｔ ＭＬ、Ｗｏｌｆｌ Ｍ、Ｈｏ ＷＹ、Ｖｏｓｓ ＲＨ、Ｆｏｗｌｅｒ Ｃら。Ｆａｃｉｌｉｔａｔｉｎｇ ｍａｔｃｈｅｄ ｐａｉｒｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＴＣＲ ｃｈａｉｎｓ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎｔｏ ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｂｌｏｏｄ．２００７年；１０９：２３３１－８。
４０．Ｆｒｏｎｉｎｇ Ｋ、Ｍａｇｕｉｒｅ Ｊ、Ｓｅｒｅｎｏ Ａ、Ｈｕａｎｇ Ｆ、Ｃｈａｎｇ Ｓ、Ｗｅｉｃｈｅｒｔ Ｋら。Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｌｌｏｗｓ ｐａｉｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｆｏｒｍ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃｓ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ［インターネット］．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ ＵＳ；２０２０年；１１：１－１４。ｄｘ（ｄｏｔ）ｄｏｉ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／１０（ｄｏｔ）１０３８／ｓ４１４６７－０２０－１６２３１－７から入手可能。
４１．Ｓｏｍｍｅｒｍｅｙｅｒ Ｄ、Ｕｃｋｅｒｔ Ｗ。Ｍｉｎｉｍａｌ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｅｘｃｈａｎｇｅ ｉｎ Ｈｕｍａｎ ＴＣＲ Ｃｏｎｓｔａｎｔ Ｒｅｇｉｏｎｓ Ｆｏｓｔｅｒｓ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＴＣＲ Ｇｅｎｅ－Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔ Ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０年；１８４：６２２３－３１。
４２．Ｂｒｉｓｃｈｗｅｉｎ Ｋ、Ｓｃｈｌｅｒｅｔｈ Ｂ、Ｇｕｌｌｅｒ Ｂ、Ｓｔｅｉｇｅｒ Ｃ、Ｗｏｌｆ Ａ、Ｌｕｔｔｅｒｂｕｅｓｅ Ｒら。ＭＴ１１０：Ａ ｎｏｖｅｌ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｉｎ ｅｒａｄｉｃａｔｉｎｇ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｔｕｍｏｒｓ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ［インターネット］．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ；２００６年［２０２１年５月３０日引用］；４３：１１２９－４３。ｐｕｂｍｅｄ（ｄｏｔ）ｎｃｂｉ（ｄｏｔ）ｎｌｍ（ｄｏｔ）ｎｉｈ（ｄｏｔ）ｇｏｖ／１６１３９８９２／から入手可能。

【図1A】

【図1B】

【図2A-1】

【図2A-2】

【図2B-1】

【図2B-2】

【図3A-1】

【図3A-2】

【図3B】

【図4-1】

【図4-2】

【図5】

【図6-1】

【図6-2】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9】

【図10】

【配列表】

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