特表 2024-536844 処置様式のための標的封入戦略

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-08

(54)【発明の名称】処置様式のための標的封入戦略

(51)【国際特許分類】

   A23L 33/10 20160101AFI20241001BHJP

   A61K 9/51 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 9/127 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 38/02 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 38/22 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 31/20 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 31/12 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20241001BHJP

【ＦＩ】

A23L33/10

A61K9/51

A61K9/127

A61K9/14

A61K38/02

A61K38/22

A61K31/20

A61K31/12

A61P25/00

A61P35/00

A61P3/10

A61P1/04

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024518628

(86)(22)【出願日】2022-09-22

(85)【翻訳文提出日】2024-05-02

(86)【国際出願番号】 IL2022051014

(87)【国際公開番号】W WO2023047401

(87)【国際公開日】2023-03-30

(31)【優先権主張番号】63/248,448

(32)【優先日】2021-09-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】524111754

【氏名又は名称】ヌタリア リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000855

【氏名又は名称】弁理士法人浅村特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ポラット、オマー

【テーマコード（参考）】

4B018

4C076

4C084

4C206

【Ｆターム（参考）】

4B018LB10

4B018LE06

4B018MD10

4B018MD14

4B018MD18

4B018MD20

4B018MD36

4B018MD48

4B018MD94

4B018ME03

4B018ME08

4B018ME11

4B018ME14

4B018MF01

4B018MF02

4B018MF14

4C076AA19

4C076AA20

4C076AA21

4C076AA65

4C076AA95

4C076BB01

4C076CC01

4C076CC16

4C076CC21

4C076CC27

4C076CC40

4C076CC41

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF70

4C084AA02

4C084BA44

4C084DB01

4C084MA24

4C084MA38

4C084MA52

4C084NA13

4C084ZA02

4C084ZA66

4C084ZB26

4C084ZC35

4C206AA01

4C206AA02

4C206AA10

4C206CB14

4C206DA03

4C206MA01

4C206MA04

4C206MA44

4C206MA58

4C206MA72

4C206NA13

4C206ZA02

4C206ZA66

4C206ZB26

4C206ZC35

(57)【要約】

哺乳動物の身体の標的組織または標的細胞に活性医薬成分（ＡＰＩ）および活性栄養補助成分（ＡＮＩ）の送達に有用な組成物であって、少なくとも１つのナノ粒子と、ナノ粒子に含有される少なくとも１つのＡＰＩと、標的組織または標的細胞に特異的に結合するように構成される少なくとも１つの栄養補助リガンドとの複合体を含み、ＡＰＩまたはＡＮＩが、栄養補助リガンドの媒介によって標的組織または標的細胞で活性化される、組成物。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

哺乳動物の身体の標的組織または標的細胞に活性医薬成分（ＡＰＩ）を送達するための組成物であって、
ａ．少なくとも１つのナノ粒子と、
ｂ．前記ナノ粒子によって含有される少なくとも１つの活性成分と、
ｃ．前記標的組織または前記標的細胞に特異的に結合するように構成される少なくとも１つの栄養補助リガンドと
を含む複合体を含み、
前記活性成分が、前記栄養補助リガンドの媒介によって前記標的組織または前記標的細胞で活性化される、組成物。

【請求項2】

前記組成物が、前記少なくとも１つの栄養補助リガンドを前記少なくとも１つのナノ粒子に結合するリンカーをさらに含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記栄養補助リガンドが標的化栄養補助リガンドである、請求項２に記載の組成物。

【請求項4】

前記ナノ粒子が、リポソーム、ミセル、固体脂質ナノ粒子、シクロデキストリンナノ粒子、デンドリマー、ポリマーナノ粒子、マイクロ／ナノエマルジョン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

前記ミセルが単層または二重層構造である、請求項４に記載の組成物。

【請求項6】

前記ナノ粒子の直径が１０～２５０ｎｍの範囲内である、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

前記活性医薬成分（ＡＰＩ）が、化学的結合または物理的結合を介して前記ナノ粒子に結合している、請求項１～６のいずれか一項に記載の複合体。

【請求項8】

前記ＡＰＩが、前記単層もしくは二重層内に含有されるか、前記二重層の層間に含有されるか、または前記単層もしくは二重層の外層に結合される、請求項７に記載の組成物。

【請求項9】

前記化学的結合または物理的結合が、共有結合、水素結合、ファンデルワールス結合、疎水結合、静電結合、ロンドン結合、イオン結合、塩架橋、吸着、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項７に記載の複合体。

【請求項10】

前記組成物が、前記標的組織または前記標的細胞で前記ＡＰＩを放出するように適合されている、請求項７に記載の組成物。

【請求項11】

前記ＡＰＩが、栄養補助食品、小分子、フードサプリメント、タンパク質、ホルモン、ペプチド、および脂肪酸からなる群から選択される、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項12】

前記栄養補助食品が活性栄養補助成分（ＡＮＩ）である、請求項１１に記載の組成物。

【請求項13】

前記ＡＮＩが、神経活性栄養補助食品、腫瘍活性栄養補助食品、エンド活性栄養補助食品、胃活性栄養補助食品、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１２に記載の組成物。

【請求項14】

前記ＡＮＩがクルクミンである、請求項１１～１２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項15】

前記ＡＰＩが一般に安全と認められている（ＧＲＡＳ）、請求項１に記載の組成物。

【請求項16】

前記栄養補助リガンドが、神経標的化化合物、腫瘍標的化化合物、胃標的化化合物、エンド（膵臓）標的化化合物、心血管標的化化合物、腎臓標的化化合物、炎症標的化化合物、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。

【請求項17】

前記神経標的化化合物が、カフェイン、テオブロミン（キサンテオース）、パラキサンチン、テオフィリン、１，３，７－トリメチル尿酸、ガラナ（パウリニア・クパナ（Ｐａｕｌｌｉｎｉａ ｃｕｐａｎａ）、ＨＢＫ）、フェネチルアミン（ＰＥＡ、チョコレート）、トリプタミン（アカシア（Ａｃａｃｉａ））、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１６に記載の組成物。

【請求項18】

前記神経標的化化合物が、バイカレイン、ウォゴニン、オロキシリンＡ、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１６に記載の組成物。

【請求項19】

前記栄養補助リガンドが一般に安全と認められている（ＧＲＡＳ）、請求項１６に記載の組成物。

【請求項20】

以下の少なくとも１つ：
ａ．前記標的組織における前記ＡＰＩのより高い濃度、
ｂ．非標的組織における前記ＡＰＩのより低い濃度、
ｃ．前記標的組織における前記ＡＰＩのより高い活性、
ｄ．前記標的組織における前記ＡＰＩの活性の延長、
ｅ．標的細胞への前記ＡＰＩの送達の増加
を達成するように構成される、請求項１に記載の組成物。

【請求項21】

前記ＡＰＩの送達機構が、能動的または受動的取り込み機構であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。

【請求項22】

前記ＡＰＩの前記取り込み機構が、前記少なくとも１つのＡＰＩを含有する前記少なくとも１つのナノ粒子、または前記少なくとも１つのナノ粒子から放出された前記少なくとも１つのＡＰＩの取り込みとして定義される、請求項１に記載の組成物。

【請求項23】

前記少なくとも１つのＡＰＩを含有する前記少なくとも１つのナノ粒子の前記取り込み機構がエンドサイトーシスである、請求項２１または２２に記載の組成物。

【請求項24】

前記エンドサイトーシスの様式が、受容体媒介エンドサイトーシス、クラスリン媒介エンドサイトーシス、非媒介エンドサイトーシス、カベオラ、飲作用および食作用からなる群から選択される、請求項２３に記載の組成物。

【請求項25】

前記能動的取り込み機構が、トランスポーター、ポンプおよびチャネルからなる群の１つによって促進されることを特徴とする、請求項２１または２２に記載の組成物。

【請求項26】

前記受動的取り込み機構が、拡散、促進拡散および濾過からなる群から選択される、請求項２１または２２に記載の組成物。

【請求項27】

前記取り込みが、二次能動輸送、共役輸送または共輸送からなる群から選択される、請求項２１または２２に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、標的とされ濃縮された栄養補助食品ベースの処置／薬剤の分野にある。

【背景技術】

【0002】

処置が困難な多数の慢性または長期の健康状態が存在する。神経変性障害、癌、糖尿病、ＩＢＤなどの疾患は、難解な薬物治療標的を有し、処置耐性が高いことが示されている。

【0003】

ほとんどの薬理学的処置／介入／治療は、多種多様な有害作用および副作用を引き起こすことが示されている。多くの薬理学的処置は、しばしば化学物質と他の薬理学的標的との間の相互作用に関連する広範な副作用を示す化学物質からなる。これらの他の薬理学的標的は、他の組織または器官において発現され得る。例えば、エンドカンナビノイド系は、末梢神経系、免疫系および消化管（ＣＢ２）に加えて中枢神経系および消化管（ＣＢ１）で発現されるため、様々なカンナビノイドの生物学的効果は、異なるカンナビノイド受容体に対する親和性に依存する。副作用をもたらすさらなる機構は、薬物動態または薬物－薬物相互作用の変動である。例えば、パーキンソン病の場合、副作用のいくつかは、Ｌ－ドパ（治療化学物質）と末梢神経系の受容体との相互作用に関連しているが、中枢神経系（ＣＮＳ）では、Ｌ－ドパは選択的にドーパミンに代謝される。

【0004】

治療薬の有効性を改善し、副作用を制限するための１つの解決策は、障害に罹患した組織または器官に薬理学的組成物を選択的に標的化することである。標的組織または器官への治療薬の選択的送達は、より低い投与量の使用を可能にし、有害作用の可能性をさらに低下させることができる。

【0005】

慢性および長期の病状の処置のための標的治療薬の必要性は満たされていない。

【発明の概要】

【0006】

本発明は、活性医薬成分（ＡＰＩ）または活性栄養補助成分（ＡＮＩ）であり得る活性成分の組織特異的および細胞特異的送達のための組成物を開示する。特異的送達は、特異的な栄養補助リガンドによって得られ、したがって特定の部位への医薬品およびフードサプリメントの送達を可能にし、したがって様々な病気に罹患している対象に長期にわたって必要な補助を提供する。

【0007】

したがって、本発明の１つの目的は、哺乳動物の身体の標的組織または標的細胞に活性医薬成分（ＡＰＩ）を送達するための組成物であって、少なくとも１つのナノ粒子と、ナノ粒子に含有される少なくとも１つのＡＰＩと、標的組織または標的細胞に特異的に結合するように構成される少なくとも１つの栄養補助リガンドとを含む複合体を含み、ＡＰＩが、栄養補助リガンドの媒介によって標的組織または標的細胞で活性化される、組成物を開示することである。

【0008】

本発明の別の目的は、少なくとも１つの栄養補助リガンドを少なくとも１つのナノ粒子に結合するリンカーをさらに含む、上記で定義される組成物を開示することである。

【0009】

本発明の別の目的は、栄養補助食品が標的化栄養補助食品である、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0010】

本発明の別の目的は、ナノ粒子が、リポソーム、ミセル、固体脂質ナノ粒子、シクロデキストリンナノ粒子、デンドリマー、ポリマーナノ粒子、マイクロ／ナノエマルジョン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0011】

本発明の別の目的は、ミセルが単層または二重層構造である、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0012】

本発明の別の目的は、ナノ粒子の直径が１０～２５０ｎｍの範囲内である、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0013】

本発明の別の目的は、ＡＰＩが化学的結合または物理的結合を介してナノ粒子に結合している、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0014】

本発明の別の目的は、ＡＰＩが単層もしくは二重層内に含有されるか、二重層の層間に含有されるか、または単層もしくは二重層の外層に結合される、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0015】

本発明の別の目的は、化学的結合または物理的結合が、共有結合、水素結合、ファンデルワールス結合、疎水結合、静電結合、ロンドン結合（Ｌｏｎｄｏｎ ｂｏｎｄ）、イオン結合、塩架橋、吸着、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0016】

本発明の別の目的は、標的組織でＡＰＩを放出するように適合されている、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0017】

本発明の別の目的は、ＡＰＩが栄養補助食品、小分子、フードサプリメント、タンパク質、ホルモン、ペプチド、および脂肪酸からなる群から選択される、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0018】

本発明の別の目的は、栄養補助食品が活性栄養補助成分（ＡＮＩ）である、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0019】

本発明の別の目的は、ＡＮＩが神経活性栄養補助食品、腫瘍活性栄養補助食品、エンド活性栄養補助食品（ｅｎｄｏ－ａｃｔｉｖｅ ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）、胃活性栄養補助食品、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0020】

本発明の別の目的は、ＡＮＩがクルクミンである、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0021】

本発明の別の目的は、ＡＰＩが一般に安全と認められている（ＧＲＡＳ）、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0022】

本発明の別の目的は、栄養補助リガンドが、神経標的化化合物、腫瘍標的化化合物、胃標的化化合物、エンド（膵臓）標的化化合物、心血管標的化化合物、腎臓標的化化合物、炎症標的化化合物、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0023】

本発明の別の目的は、神経標的化化合物がカフェイン、テオブロミン（キサンテオース）、パラキサンチン、テオフィリン、１，３，７－トリメチル尿酸、ガラナ（パウリニア・クパナ（Ｐａｕｌｌｉｎｉａ ｃｕｐａｎａ）、ＨＢＫ）、フェネチルアミン（ＰＥＡ、チョコレート）、トリプタミン（アカシア（Ａｃａｃｉａ））、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0024】

本発明の別の目的は、神経標的化化合物がバイカレイン、ウォゴニン、オロキシリンＡ、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0025】

本発明の別の目的は、栄養補助リガンドが一般に安全と認められている（ＧＲＡＳ）、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0026】

本発明の別の目的は、以下の少なくとも１つ：標的組織での前記ＡＰＩのより高い濃度、非標的組織における前記ＡＰＩのより低い濃度、標的組織における前記ＡＰＩのより高い活性、前記標的組織における前記ＡＰＩの活性の延長、標的細胞への前記ＡＰＩの送達の増加を達成するように構成される、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0027】

本発明の別の目的は、ＡＰＩの送達機構が能動的または受動的取り込み機構であることを特徴とする、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0028】

本発明の別の目的は、ＡＰＩの取り込み機構が、少なくとも１つのＡＰＩを含有する少なくとも１つのナノ粒子または少なくとも１つのナノ粒子から放出された少なくとも１つのＡＰＩの取り込みとして定義される、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0029】

本発明の別の目的は、少なくとも１つのＡＰＩを含有する少なくとも１つのナノ粒子の取り込み機構がエンドサイトーシス（飲食作用）である、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0030】

本発明の別の目的は、エンドサイトーシスの様式が、受容体媒介エンドサイトーシス、クラスリン媒介エンドサイトーシス、非媒介エンドサイトーシス、カベオラ、飲作用（ピノサイトーシス）および食作用（ファゴサイトーシス）からなる群から選択される、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0031】

本発明の別の目的は、能動的取り込み機構が、トランスポーター、ポンプおよびチャネルからなる群の１つによって促進されることを特徴とする、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0032】

本発明の別の目的は、受動的取り込み機構が拡散、促進拡散および濾過からなる群から選択される、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0033】

本発明の別の目的は、取り込みが二次能動輸送、共役輸送または共輸送からなる群から選択される、上記のいずれかで定義される組成物を開示することである。

【0034】

本発明に対するさらなる理解を提供するために含まれ、かつ本明細書に組み込まれてその一部を構成する添付図面は、本発明の実施形態を例示し、かつ、本明細書と共に本発明の原理を説明する役割を果たす。

【図面の簡単な説明】

【0035】

【図1】組成物の一実施形態の概略図である。

【図2】組成物の一実施形態の結合活性の概略図である。

【図3】組成物の一実施形態の毒性実験の結果の図である。

【図4a】組成物の一実施形態のＡＰＩ送達実験の結果の図である。

【図4b】組成物の一実施形態のＡＰＩ送達実験の結果の図である。

【図4c】組成物の一実施形態のＡＰＩ送達実験の結果の図である。

【図4d】組成物の一実施形態のＡＰＩ送達実験の結果の図である。

【図4e】組成物の一実施形態のＡＰＩ送達実験の結果の図である。

【図5a】組成物の別の実施形態のＡＰＩ送達実験の結果の図である。

【図5b】組成物の別の実施形態のＡＰＩ送達実験の結果の図である。

【図6a】標的細胞中の組成物の一実施形態によって送達されるＡＰＩの図である。

【図6b】標的細胞中の組成物の一実施形態によって送達されるＡＰＩの図である。

【図6c】標的細胞中の組成物の一実施形態によって送達されるＡＰＩの図である。

【発明を実施するための形態】

【0036】

以下の記述は、当業者が本発明を利用することを可能にするよう本発明の全ての章と共に提供され、本発明を実施する本発明者が企図する最良の形態を説明する。しかし、組成物および方法を提供するための本発明の一般的な原理が具体的に定義されていることから、当業者に明白であり続けるように、様々な改変が加えられる。

【0037】

本発明の中心的な目的は、栄養補助リガンドによって標的哺乳動物細胞、組織または器官に誘導される活性医薬成分（ＡＰＩ）の標的送達のためのプラットフォームを開示および提供することである。プラットフォームは、少なくとも１つの栄養補助食品標的化化合物または栄養補助リガンドで装飾されたシェルと、少なくとも１つの活性医薬成分または栄養補助食品化合物を含むコアとを有するナノ粒子を提供し得る。栄養補助リガンドは、哺乳動物細胞、組織または器官上の特異的受容体に結合する。

【0038】

本出願では、「ナノ粒子」（ＮＰ）という用語は、界面層（シェル）によって囲まれたコアを有する、直径１～２５０ナノメートル（ｎｍ）の間の粒子に関する。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、リポソーム、ミセル、固体脂質ナノ粒子、シクロデキストリンナノ粒子、デンドリマー、ポリマーナノ粒子、マイクロ／ナノエマルジョン、およびそれらの任意の組み合わせから選択される。

【0039】

いくつかの実施形態では、ＮＰは、脂質二重層または単層（多層膜リポソームまたは一枚膜リポソーム）を含む器またはリポソームである。

【0040】

本出願の一実施形態では、ナノ粒子の外面（シェル）は、標的への結合に利用可能であるように配向された少なくとも１つの標的化化合物（栄養補助リガンド）を含むように装飾される。標的は、組織、器官または特定の細胞であり得る。

【0041】

「栄養補助食品」という用語は、１９８９年にＳｔｅｐｈｅｎ Ｄｅｆｅｌｉｃｅによって最初に考案され、「食品または食品の一部であり、疾患の予防および処置を含む医学的または健康上の利益を提供する任意の物質」と定義されている。単離された栄養素、健康サプリメント（ミネラル、ビタミン、アミノ酸、脂肪酸、糖類、プロバイオティクス、プレバイオティクス、およびハーブ）および植物性化学物質を含むこれらの栄養補助食品は、食品に見られる従来の栄養価以外に有益な健康効果を有することが期待される。栄養補助食品は、一般に、植物もしくは細菌などの天然源に由来する食物源、植物物質、真菌、細菌または微生物に由来する。栄養補助食品は、アルカロイド、フェノール（またはポリフェノール）、ペプチド、糖類、テルペン、フェノール類、グリコシド、脂肪酸、フラボノイド、ファイトステロール、およびタンニンとして定義することができる。栄養補助食品は、一次または二次代謝産物として機能することができる。

【0042】

医薬品に対する栄養補助食品の主な利点の１つには、「市場に出す」期間がはるかに速いこと、有害作用がより少ないかまたはないこと、経済的に手頃であること、容易に入手可能なこと、複数の治療効果、および毒性または用量設定の懸念なしに長期間の消費を可能にすることが挙げられる。

【0043】

装飾は、シェルの任意の種類の改変（シェルに化学的に結合し、シェルと化学的に配位し、シェルの一部を形成し、重合してシェルにするなど）によって、またはシェルに結合するように栄養補助リガンドを改変することによって達成される。いくつかの実施形態では、複合体は、栄養補助リガンドおよびＮＰに結合するリンカーを含む。本発明の顕著な非限定的な例では、栄養補助リガンドはカフェインであり、ＡＰＩはＡＮＩ、すなわちクルクミンである。

【0044】

本発明はさらに、少なくとも１つの神経変性疾患、新生物性疾患、消化器疾患、内分泌障害、腎臓障害、心血管疾患およびそれらの任意の症状の処置に使用するための、少なくとも１つの神経標的化栄養補助食品で装飾されたナノ粒子シェルと、少なくとも１つの神経活性栄養補助食品を含むコアとを含むナノ粒子ベースの組成物を提供する。

【0045】

活性医薬成分（ＡＰＩ）は、「完成医薬品（ＦＰＰ）に使用され、薬理学的活性を提供すること、または疾患の診断、治癒、緩和、処置もしくは予防に直接的な効果を有すること、またはヒトにおける生理学的機能の回復、修正もしくは改変に直接的な効果を有することを意図する、任意の物質または物質の組み合わせ」（ＷＨＯ、２０１１年）と定義される。ＡＰＩは、その構造（抗体など）、その治療標的（鎮痛薬など）またはその生物学的効果（非ステロイド性抗炎症薬－ＮＳＡＩＤなど）に従って分類することができる。ＡＰＩは、小分子（ＮＳＡＩＤなど）または高分子（抗体など）であり得る。ＡＰＩは、天然源（天然産物など）からのものであり得るか、または半合成もしくは合成の様式で製造され得る。

【0046】

いくつかの実施形態では、ＡＰＩは、能動的または受動的取り込み機構を介して標的組織または細胞に送達される。いくつかの実施形態では、取り込み機構は、エンドサイトーシスなどのＡＰＩ含有ＮＰ全体のものである。エンドサイトーシスは、受容体媒介エンドサイトーシス（クラスリン媒介エンドサイトーシスとしても知られている）などの媒介性、または非媒介性（カベオラ、飲作用、食作用など）であり得る。いくつかの実施形態では、ＡＰＩはＮＰによって細胞外マトリックスに放出され、ＡＰＩ取り込みは放出された（結合されていない）ＡＰＩのものである。取り込みは能動的機構（トランスポーター、ポンプ、チャネルなど）または受動的（拡散、促進拡散および濾過など）であり得る。いくつかの実施形態では、輸送は二次能動輸送（共役輸送または共輸送として知られている）である。

【0047】

いくつかの実施形態では、ＡＰＩは栄養補助食品である。このＡＰＩは、活性栄養補助食品（ＡＮＩ）と呼ばれる。

【0048】

内部容積１２を有する二重層リポソーム１１を含むナノ粒子１０を含む組成物の一実施形態を示す図１を参照する。標的化化合物１３は、リンカー１７を介して外面シェルに結合され、ＡＰＩは、内部容積１４内、二重層１５内に含有されるか、または外部シェル１６に結合される。

【0049】

組成物の一実施形態の結合活性の概略図を示す図２を参照する。組成物は、ナノ粒子１０の二重層１１の外面をカフェインリガンド１３で装飾されたナノ粒子１０を含む。ナノ粒子１０は、抗酸化神経活性ＡＰＩ １４を含有する。ナノ粒子１０は、その標的細胞２２に、カフェインリガンド１３を介して結合する。この標的細胞２２は、そのシナプス後膜２４上にシナプス後ドーパミン受容体２６を含むシナプス後細胞である。ドーパミン分子２５は、シナプス前細胞２０によって小胞モノアミントランスポーター（ＶＭＡＴ）２９を介してシナプス２１に放出される。過剰な分子２５は、その後、ドーパミントランスポーター（ＤＡＴ）２によってシナプス２１から再取り込みされてシナプス前細胞２０に戻り、そこでミトコンドリアモノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）２８によって異化される２７。他の実施形態では、ナノ粒子は、ＤＡＴ結合リガンドによって装飾され得る。

【0050】

組成物の一実施形態のインビトロ毒性実験の結果を示す図３を参照する。ヒトアストロサイト（Ｕ－８７ ＭＧ細胞株）を、カフェインリガンド１３によって装飾され、ＡＮＩクルクミン１４を含有する固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）１０に曝露した。３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）アッセイを使用して、細胞生存率を決定した。一晩の安定化後、細胞を様々な濃度のＳＬＮ １０に曝露した。２４時間後、培地を除去し、全ての細胞を、ＭＴＴを含有する無血清培地と共にインキュベーター内で３～４時間インキュベートした。生細胞によって形成されたＭＴＴ紫色結晶を、０．０４ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌを含有するイソプロパノールを使用して希釈した。光学密度を５７０ｎｍで測定した。データを未処理細胞（対照）のパーセンテージとして示す。データは平均±ＳＥ（ｎ＝４）である。上記の濃度でのＳＬＮ １０処理後に毒性効果は観察されなかった。処理細胞の細胞生存率は、対照細胞よりもさらに高かった。

【0051】

組成物の一実施形態のインビトロでのクルクミン送達実験の結果を示す図４ａ～図４ｅを参照する。ヒトアストロサイト（Ｕ－８７ ＭＧ細胞株）を、カフェインリガンド１３によって装飾され、ＡＮＩクルクミン１４を含有する固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）１０に曝露した。図４ａ～図４ｃは、同じ実験の異なる時点を示す。細胞を播種し、処理前に２４時間増殖させた。各時点を異なるプレートで測定した。培地を、異なる処理を含有する新鮮な培地と交換した。処理期間後、細胞をＰＢＳ×１を使用して洗浄し、ＲＩＰＡ緩衝液を用いて溶解した。５分間撹拌後、クルクミン１４のクルクミン特異波長（Ｅｘ／Ｅｍ＝４８５／５３０ｎｍ）を使用して蛍光を測定した。結果は、クルクミン試料（対照としての役割を果たす）のパーセンテージとして示される。データは平均±ＳＥ（ｎ＝４）である。図４ａに示すように、０．５時間後、カフェイン１３で装飾されたＳＬＮ １０とリガンドを含まないＳＬＮ １０との間に有意差は認められなかった。しかし、処理の１時間後（図４ｂ）および１．５時間後（図４ｃ）、リガンドを含まないＳＬＮ対照試料およびＳＬＮを含まないカフェイン試料と比較して、ＳＬＮ＋カフェイン試料の後にクルクミン蛍光の有意な増加が観察された。これは、カフェイン１３による試料のコーティングが１．５時間でクルクミン１４の細胞内含有量を増加させることを示す。図４ｃと同様の実験を図４ｄに示す。両方の実験において、測定は１．５時間の処理後に行った。唯一の違いは、細胞中のクルクミン１４の絶対量である。しかしながら、異なる処理の結果間の関係は、図４ｃおよび図４ｄにおいて同様である。図４ｅは、カフェイン１３がＡ２Ｒ受容体に対するアンタゴニストであるために使用される別の対照変数：Ａ２Ｒ受容体遮断薬を加えた、図４ｄに示す実験と同様の組成物の一実施形態のインビトロでのクルクミン送達実験の結果を示す。結果は、実際に、Ａ２Ｒ受容体をアンタゴニストで遮断すると、クルクミン含有量がＳＬＮ対照と同じレベル（２０ｍｇ／ｍｌの濃度）に減少することを示している。

【0052】

組成物の別の実施形態のインビトロでのクルクミン送達実験の結果を示す図５ａ～図５ｂを参照する。ヒト神経芽腫細胞（ＳＨ Ｓｙ５Ｙ細胞細胞株）を、カフェインリガンド１３によって装飾され、ＡＮＩクルクミン１４を含有する固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）１０に曝露した。図５ａ～図５ｂは、同じ実験の異なる時点を示す。図５ａに示すように、１時間後、ＳＬＮ １０対照試料およびクルクミン１４試料と比較して、ＳＬＮ １０＋カフェイン１３試料の後にクルクミン１４蛍光の有意な増加が観察された。しかし、図５ｂに示すように、３．５時間の処理後、ＳＬＮ １０対照試料およびクルクミン１４試料の蛍光は、かなり減少したＳＬＮ １０＋カフェイン１３試料とは対照的に、同じレベルのままであった。この効果は、ＳＬＮ １０＋カフェイン１３試料中に存在するクルクミンの細胞内代謝によるものであり得る。

【0053】

カフェインリガンド１３によって装飾されており、ＡＮＩクルクミン１４を含有する固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）１０に曝露されたヒトアストロサイト（Ｕ－８７ ＭＧ細胞株）の蛍光イメージングを示す、図６ａ～図６ｃを参照する。細胞３０を８×１０＾４細胞／ウェルの密度で２４ウェルプレートに播種し、一晩の安定化のためにインキュベートした。処理後、細胞３０をＰＢＳ×１で洗浄し、３％パラホルムアルデヒドを使用して２０分間固定した。ＰＢＳで２回目に洗浄した後、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２を使用して細胞核３１を染色した。分析は、Ｔｈｅ Ｈｅｂｒｅｗ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ Ｉｎｔｅｒｄｅｐａｒｔｍｅｎｔａｌ Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ ＦａｃｉｌｉｔｙにおいてＮｉｋｏｎのＡ１Ｒ＋共焦点顕微鏡を使用して行った。このイメージングアッセイでは、写真の緑色蛍光は細胞質中のクルクミン３２の存在を示し、青色は細胞の核３１を示す。図６ａは未処理の対照細胞を示し、図６ｂは１．５時間にわたってリガンドを含まない対照ＳＬＮ １０に曝露された細胞を示し、図６ｃは１．５時間にわたってカフェインリガンド１３によって装飾されたＳＬＮ １０に曝露された細胞を示す。１．５時間でのＳＬＮ １０＋カフェイン１３処理では、ＳＬＮ １０対照および未処理細胞３０と比較して、有意に高いクルクミン３２染色を観察することができる。未処理細胞３０では、緑色は検出できない。ＳＬＮ １０対照細胞３０では、特定の量の緑色が細胞３０の核３１の周りで検出可能である。カフェインで装飾された細胞３０では、緑色は非常に強いので、核３１の青色と干渉さえする。蛍光画像の数値解析については後述する。

【0054】

標的化活性：本出願では、「標的化栄養補助食品」という用語は、天然源に由来し、対象の身体の他の部分と比較して、中枢神経系（ＣＮＳ）またはその一部などの特定の器官または組織におけるナノ粒子の局所濃度を増加させるように本発明のナノ粒子の送達に寄与することが臨床的に実証されている化合物を指す。標的化栄養補助食品は、ナノ粒子コンジュゲートを標的器官、組織または細胞に「担持する」能力として、バイオキャリアとも呼ばれ得る。本発明の標的送達システムの目標は、標的との標的化された、局在化された、延長された／長期効果の相互作用を提供することである。標的化栄養補助食品は、中枢または末梢神経系（例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病または多発性硬化症）、新生物増殖（腫瘍）、内分泌系（糖尿病など）または胃腸系（胃潰瘍またはＩＤＢなど）などの様々な系および障害を標的とすることができる。

【0055】

標的送達の利点は、関心対象の組織中の薬剤の局所濃度に関連し、残りの組織中の薬剤の相対濃度の低下に関連する。この戦略は、様々な有益な効果をもたらすことができる：
ａ．低用量の活性化合物、
ｂ．対象が服用する投与量の頻度の減少、
ｃ．より一貫した薬理学的効果、
ｄ．本発明のナノ粒子の循環レベルの変化を低減および制御することによる有害な副作用の減少。

【0056】

いくつかの実施形態では、標的化化合物は、神経標的化栄養補助食品である。

【0057】

いくつかの実施形態では、神経標的化栄養補助食品は、カフェイン、ならびにテオブロミン（キサンテオース）、パラキサンチン、テオフィリンおよび１，３，７－トリメチル尿酸、ガラナ（パウリニア・クパナ（Ｐａｕｌｌｉｎｉａ ｃｕｐａｎａ）、ＨＢＫ）、フェネチルアミン（ＰＥＡ、チョコレート）、トリプタミン（アカシア（Ａｃａｃｉａ））およびそれらの任意の組み合わせを含むその４つのジメチルキサンチン代謝産物から選択される。カフェインは、ＰＤ標的部位で発現されるアデノシン受容体アンタゴニスト（Ａ_２ＡＲ）である（Ｓｖｅｎｎｉｎｇｓｓｏｎら、１９９９年、Ｍａｄｒｅｉｒａら、２０１７年；Ｒｉｖｅｒａ－Ｏｌｉｖｅｒら、２０１４年）。いくつかの実施形態では、標的化栄養補助食品は、テオブロミン（キサンテオース）、カカオ植物の苦味アルカロイド、およびそのアルカロイド類似体から選択される。

【0058】

いくつかの実施形態では、標的化化合物は、ドーパミンニューロンの細胞体を特異的に標的化する神経標的化栄養補助食品の別の群：バイカレイン、ウォゴニン、およびオロキシリンＡである。これらの神経標的化栄養補助食品は、コカインと同じ受容体に結合し、したがって物質嗜癖の処置に有用である可能性が高い。

【0059】

ドーパミン受容体はほとんどがシナプス後であるので、ＤＡＴ（ドーパミントランスポーター）が標的化のために選択される。ＤＡＴは、ドーパミンをシナプス間隙から細胞質ゾルに戻す膜貫通トランスポーターである。各ＤＡＴは、３番目と４番目のＴＭＤの間に大きな細胞外ループを有する１２個の膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）から構成される［Ｂｅｎ－Ｊｏｎａｔｈａｎ、Ｎｉｒａ．Ｄｏｐａｍｉｎｅ．ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ．Ｋｉｎｄｌｅ版］。

【0060】

ニューロンおよびグリアの両方に見られるアミノ酸トランスポーターとは異なり、ＤＡＴの発現はドーパミン作動性ニューロンに限定され、ＤＡＴをこれらのニューロンのよく受け入れられている実験的および病理学的マーカーにする。細胞レベルでは、ＤＡＴは、黒質および腹側被蓋野のニューロンの樹状突起および細胞体の両方に見られる。

【0061】

上記を考慮して、神経標的化栄養補助食品である、ＤＡＴのための天然リガンドは、薬草コガネバナ（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ）およびスカルキャップ（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｌａｔｅｒｉｆｌｏｒａ）の主要な活性フラボンであるバイカレイン、ウォゴニンおよびオロキシリンＡとして提案されている［Ｊｉ，Ｙｅｏｎｇｓｅｏｎら、「Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｂａｉｃａｌｅｉｎ，ｗｏｇｏｎｉｎ，ａｎｄ ｏｒｏｘｙｌｉｎ Ａ ｏｎ ａｍｙｌｏｉｄ ｂｅｔａ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｖｉａ ＮＦ－κＢ／ＭＡＰＫ ｐａｔｈｗａｙ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ」、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２５巻２１号（２０２０年）：５０８７頁）］。

【0062】

いくつかの実施形態では、標的化栄養補助食品は、腫瘍標的化栄養補助食品である。

【0063】

いくつかの実施形態では、腫瘍標的化栄養補助食品は、糖類および代替糖から選択される。いくつかの実施形態では、標的化栄養補助食品は、スクラロース（塩素化スクロース）などの修飾糖である。いくつかの実施形態では、標的化栄養補助食品は、ソルビトール、キシリトール、エリスリトール、マンニトール、マルチトール、ラクチトール、エリスリトールなどの糖アルコールである。いくつかの実施形態では、代替糖はサッカリンである。修飾糖または糖アルコールは、腫瘍の血管外細胞外腔（ＥＥＳ）におけるより遅い代謝およびより高い蓄積を実証することができる。

【0064】

いくつかの実施形態では、標的化栄養補助食品は、内分泌標的化栄養補助食品である。

【0065】

いくつかの実施形態では、内分泌標的化栄養補助食品は、インスリン類似体およびインスリン受容体アゴニスト／アンタゴニストの群から選択される。インスリン受容体は、インスリンおよびインスリン増殖因子（ＩおよびＩＩ）に結合する膜貫通チロシンキナーゼ受容体である。いくつかの実施形態では、インスリン類似体は、ニガウリ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）インスリン受容体結合タンパク質またはタンパク質のペプチドセグメントである。いくつかの実施形態では、インスリン受容体は、ビオチン、マグネシウム、クロム、ギムネマ、ツバキ、およびスノキによって活性化され得る［Ｃｏｖｏｌｏら（２０１７年）、ＢＭＣ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ、１３巻、７７７頁を参照のこと］。

【0066】

いくつかの実施形態では、標的化栄養補助食品は、胃標的化栄養補助食品である。

【0067】

いくつかの実施形態では、ＮＰは、ＮＰの生物多様性を低下させ、腸へのＮＰの送達を増加させる栄養補助食品系コーティングを含む。いくつかの実施形態では、コーティングはＮＰの溶解度を低下させる。コーティングは、脂質または糖類ベースであり得る。いくつかの実施形態では、コーティングは、胃または／および腸などの胃腸管内の状態に対するＮＰの耐性を増加させる。

【0068】

いくつかの実施形態では、胃標的化栄養補助食品は、小腸上皮細胞株の腸内脂肪酸結合タンパク質（Ｉ－ＦＡＢＰ）に結合する、オレイン酸、リノール酸、およびリノレン酸などの長鎖脂肪酸（ＬＣＦＡ）である。

【0069】

いくつかの実施形態では、ＮＰは、腎臓または心臓標的化栄養補助食品を含む。いくつかの実施形態では、腎臓または心血管標的化化合物は、低分子量ペプチドである。いくつかの実施形態では、ペプチドは、腎臓または心血管系において心房性ナトリウム利尿ペプチド受容体に結合するナトリウム利尿ペプチド（または類似体）である［Ｍａｓｓｉｍｏら、２０１４年、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊｏｕｒｎａｌ、３５巻、４１９～４２５頁を参照のこと］。

【0070】

いくつかの実施形態では、標的化栄養補助食品は、炎症標的化栄養補助食品である。

【0071】

いくつかの実施形態では、炎症標的化栄養補助食品は、大豆食品中のイソフラボン（植物エストロゲン）である。

【0072】

いくつかの実施形態では、ＮＰに付着したリガンドは、関節リウマチ（ＲＡ）に影響を及ぼす大豆由来の２つのイソフラボンであるゲニステインまたはダイゼインである。

【0073】

ゲニステインおよびダイゼインの作用の可能な機構の１つは、それらのエストロゲン様作用である。ゲニステインは、エストロゲンと構造的に関連しており、エストロゲン受容体に結合する。エストロゲン様性ホルモンがＲＡ状態を改善および予防することが既に実証されている（ＭｃＭｕｒｒａｙ ２００１年）。イソフラボンが軟骨代謝に直接作用することによってそれらの効果を発揮することも可能である。エストロゲンαおよびβ受容体の両方がヒト関節の軟骨に見出され得るので、軟骨はエストロゲン受容体の修飾因子の標的でもあり得る。エストロゲンの関節内注射は、軟骨細胞中の乳酸デヒドロゲナーゼ酵素を破壊することによってマトリックスコラーゲンの破壊をもたらす。エストロゲン受容体に結合し、局所エストロゲン機能を妨害するエストロゲン様イソフラボンは、変形性関節症に有効であり得る［Ｍｏｈａｍｍａｄ－Ｓｈａｈｉ，Ｍａｊｉｄら、「Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ａｎｄ ｄａｉｄｚｅｉｎ ｗｉｔｈ ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ ａｎｄ ｓｏｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｉｎ ｒａｔｓ」、ＢｉｏＩｍｐａｃｔｓ：ＢＩ １巻３号（２０１１年）：１６１～７０頁を参照のこと］。

【0074】

いくつかの実施形態では、炎症標的化栄養補助食品は、フラボノイドおよび他の植物性化学物質である。オレガノ由来のフラボノイドおよび他の植物性化学物質を、それらのアゴニストおよびアンタゴニストＰＰＡＲγ活性について特徴付けた。

【0075】

ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）は、核内受容体スーパーファミリーのサブセットである。細胞質に位置し、活性化リガンドの結合後に核に移行するエストロゲン受容体などの古典的なホルモン活性化受容体とは異なり、ＰＰＡＲ受容体はＤＮＡ応答エレメントに結合した核内に存在する。

【0076】

ＰＰＡＲへのそれらの結合を通じて、またはＮＦ－ｋＢおよびＡＰ－１へのそれらの結合によって直接的に、食物由来分子は炎症過程を阻害することができる。

【0077】

これまで論じてきた不飽和脂肪酸とは全く異なる構造および特性を有する食物由来植物性化学物質は、活性に基づく分画によってオレガノから特徴付けられている。化合物は、最初にＰＰＡＲγ蛍光偏光アッセイを使用してリガンドとして同定され、その後、ロシグリタゾン誘導性細胞応答を阻害するそれらの能力に基づいてアゴニストまたはアンタゴニストとして分類された。

【0078】

いくつかの実施形態では、ＮＰは、食物由来フラボノイドであるケルセチン、ルテオリン、ロスマリン酸およびジオスメチンである。食物由来フラボノイドはＰＰＡＲγアンタゴニストであることが見出され、ナリンゲニンおよびアピゲニンは修飾因子であり、ビオカニンＡはＰＰＡＲγアゴニストであることが見出された［Ｍａｒｔｉｎ，Ｈ．（２０１０年）Ｒｏｌｅ ｏｆ ＰＰＡＲ－ｇａｍｍａ ｉｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｂｙ ｆｏｏｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ．Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ／Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ、６９０巻（１～２号）、５７～６３頁を参照のこと］。

【0079】

これらの植物性化学物質のバイオアベイラビリティに対処する必要があるが、このアプローチは、結合部位の乱雑な性質のために、多くの一般的な植物性化学物質がＰＰＡＲγ活性に影響を及ぼす可能性があることを実証している。クルクミンと構造的に類似しているショウガの活性成分であるジンゲロンもまた、ＰＰＡＲγ発現を増加させるその能力によって抗炎症性である。

【0080】

いくつかの実施形態では、炎症標的化栄養補助食品はジンセノサイドである。

【0081】

ジンセノサイドＲｅは、マクロファージ上のＴＬＲ４へのリポ多糖の結合を阻害することによって炎症を改善する［Ｌｅｅ，Ｉｎ－Ａｈら、「Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｅ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｔｏ ＴＬＲ４ ｏｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．」 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ ｆｏｏｄ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６０巻３８号（２０１２年）：９５９５～９６０２頁を参照のこと］。ジンセノサイドＲｂ１およびその代謝産物である化合物Ｋは、炎症の重要なステップであるＩＲＡＫ－１活性化を阻害する［Ｊｏｈ，Ｅｕｎ－Ｈａら、「Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｂ１ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｋ ｉｎｈｉｂｉｔ ＩＲＡＫ－１ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ－ｔｈｅ ｋｅｙ ｓｔｅｐ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．」 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ８２巻３号（２０１１年）：２７８～２８６頁を参照のこと］。

【0082】

予備研究では、オタネニンジン（Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ）（ウコギ（Ａｒａｌｉａｃｅａｅ）科）の根の主成分であるジンセノサイドＲｂ１およびその代謝産物化合物Ｋは、リポ多糖（ＬＰＳ）刺激マウス腹膜マクロファージにおいて、炎症の重要な因子である核転写因子κＢ（ＮＦ－κＢ）活性化を阻害した。ジンセノサイドＲｂ１および化合物Ｋはまた、インターロイキン－１受容体関連キナーゼ－１（ＩＲＡＫ－１）、ＩＫＫ－β、ＮＦ－κＢおよびＭＡＰキナーゼ（ＥＲＫ、ＪＮＫおよびｐ－３８）の活性化を有意に阻害した。

【0083】

いくつかの実施形態では、炎症標的化栄養補助食品は、スピルリナ・プラテンシス（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）からのｃ－フィコシアニンビリタンパク質である。

【0084】

Ｃ－フィコシアニンは、非常に低いＩＣ５０ ＣＯＸ－２／ＩＣ５０ ＣＯＸ－１比（０．０４）を有するシクロオキシゲナーゼ－２（ＣＯＸ－２）の選択的阻害剤である。阻害の程度は、フィコシアニンとＣＯＸ－２とのプレインキュベーションの期間に依存するが、ＣＯＸ－１とのプレインキュベーションの期間には何ら影響を及ぼさない［Ｒｅｄｄｙ，Ｃ．Ｍａｄｈａｖａら、「Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２ ｂｙ Ｃ－ｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ，ａ ｂｉｌｉｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ．」 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ２７７巻３号（２０００年）：５９９～６０３頁を参照のこと］。

【0085】

いくつかの実施形態では、標的化栄養補助食品は、ウイルス炎症標的化栄養補助食品である。

【0086】

いくつかの実施形態では、ウイルス炎症標的化栄養補助食品はフコイダンである。

【0087】

ウイルスによる宿主細胞の感染過程における必須免疫グロブリンであるＴリンパ球上のＣＤ４糖タンパク質へのフコイダンの結合によって、抗ウイルス活性が確保される
［Ｃｈｏｌｌｅｔ，Ｌｕｃａｓら、「Ｆｕｃｏｉｄａｎｓ ｉｎ ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ．」 Ｍａｒｉｎｅ ｄｒｕｇｓ １４巻８号（２０１６年）：１４５頁を参照のこと］。

【0088】

ガラクトフカンの作用機序は、ウイルス結合および宿主細胞への侵入の阻害であることが示された。さらに、最近の研究に示されているように、藻類フコイダンはＩｇＥおよびＴｈ２サイトカイン産生を抑制することが見出されている。

【0089】

治療活性：いくつかの実施形態では、複合体は、少なくとも１つの活性医薬成分（ＡＰＩ）を含む。ＡＰＩは、薬理学的（または治療的）効果を有する化合物である。いくつかの実施形態では、ＡＰＩは、合成化合物、天然産物、半天然産物または神経化学物質である。いくつかの実施形態では、ＡＰＩは活性栄養補助食品である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＡＰＩは、ＮＰの外面／シェルに結合／付着し、ナノ粒子の内部容積と共に含有されるか、またはＮＰ内（ＮＰの脂質層内）に結合する。いくつかの実施形態では、複合体は、リガンドおよびＡＰＩに結合するリンカーを含む。

【0090】

「活性栄養補助食品（ＡＮＩ）」という用語は、天然源に由来するかまたは起源をもち、それに罹患している対象の疾患、障害または状態の予防および／または処置に有益であることが臨床的に示されている化合物を指す（Ｃｈａｏら（２０１２年）Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｒｅｖｉｅｗｓ、７０巻（７号）、３７３～３８６頁の定義も参照のこと）。ＡＮＩは、中枢または末梢神経系（例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病または多発性硬化症）、新生血管形成または新生物悪性増殖（固形癌腫瘍）、内分泌系（糖尿病など）または胃腸系（胃潰瘍またはＩＢＤなど）などの様々な系および障害を標的とすることができる。

【0091】

いくつかの実施形態では、活性栄養補助食品は、神経活性栄養補助食品である。

【0092】

いくつかの実施形態では、少なくとも１つの神経活性栄養補助食品は、単純なポリフェノールおよびフェノール酸誘導体、例えば没食子酸、クルクミン、フェルラ酸、ロスマリン酸およびベルバスコシドを含むポリフェノールから選択される。栄養補助食品は、フラボノイド（カテキン、エピカテキン、ＥＧＣＧ、ケンペロール、モリン、ミリセチンまたはケルセチンなど）、フラボン（アピゲニン、スクテラレインおよびバイカレインなど）、イソフラボン（ゲニステインなど）、アントシアニジン（デルフィニジンおよびプロアントシアニジンなど）、タンニン（タンニン酸など）、スチルベン（例えば、ピセアタンノール、ピセイド、レスベラトロール、ビニフェリン）、オメガ脂肪酸（エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）など）およびリグナン（ノルジヒドログアヤレチン酸（ＮＤＧＡ）など）を含む複合ポリフェノールから選択することができる。（神経）活性栄養補助食品は、マンニトール、ソルビトール、およびそれらの任意の組み合わせのような糖アルコールであってもよい。

【0093】

いくつかの実施形態では、神経活性栄養補助食品は、抗酸化特性および神経保護特性を有する。

【0094】

いくつかの実施形態では、活性栄養補助食品は、腫瘍活性栄養補助食品である。

【0095】

いくつかの実施形態では、腫瘍活性栄養補助食品は、癌細胞の増殖を制御することができる。いくつかの実施形態では、腫瘍活性栄養補助食品は、クルクミン、オレイン酸からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、活性栄養補助食品は、アホエン、アリシン、アリルイソチオシアナート、ベルガプテン、β－カロテン、α－シトステロール、カンタキサンチン、カプサイシン、カルノソール、シネオール、シンナムアルデヒド、シトラール、クロシン、クルクミン、ジアリルジスルフィド、ジアリルスルフィド、ジアリルトリスルフィド、［６］－ジンゲロール、ケンペロール、リモネン、ルテイン、ミリスチシン、［６］－パラドール、ロスマリン酸、Ｓ－アリルシステイン、Ｓ－アリルメルカプトシステイン、セサミン、セサモリン、ショウガオール、スルフォラファン、テルピネン－４－オール、ツルメロンおよびウルソール酸から選択されるスパイス抽出物である。

【0096】

いくつかの実施形態では、腫瘍活性栄養補助食品は、アルカンニン（またはアルカンの類似体もしくはエナンチオマー）などの色素である。いくつかの実施形態では、腫瘍活性栄養補助食品は、植物ホルモン、例えばジャスモン酸（ＪＡ）（リンパ芽球性白血病細胞において死を誘導することが示されている）またはその誘導体、例えばジャスモン酸メチル（癌細胞株において増殖を阻害することが示されている）である。

【0097】

いくつかの実施形態では、活性栄養補助食品はＢｃＬ－２タンパク質を調節する。

【0098】

いくつかの実施形態では、標的化栄養補助食品は、エンド活性栄養補助食品である。

【0099】

いくつかの実施形態では、エンド活性栄養補助食品は、スチルベンまたはスチルベノイド（ピセアタンノールおよびレスベラトロールなど）からなる群から選択されるポリフェノールである内分泌系を調節することができる。いくつかの実施形態では、活性栄養補助食品はホルモン（インスリンなど）である。

【0100】

いくつかの実施形態では、活性栄養補助食品は、胃または腸などの胃腸管で活性な胃活性栄養補助食品である。

【0101】

いくつかの実施形態では、胃活性栄養補助食品は脂溶性ビタミン（例えば、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｋ）である。いくつかの実施形態では、胃活性栄養補助食品は、脂質、例えば多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）である。ＰＵＦＡは、プロスタグランジンＥ（２）およびロイコトリエンＢ（４）のような炎症性エイコサノイドの前駆体であるｎ－６ ＰＵＦＡアラキドン酸（ＡＡ）、ならびに魚油に豊富に存在するｎ－３ ＰＵＦＡエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり得る。脂質および脂溶性ビタミンは、ＮＰの脂質（二重）層に溶解することができる。いくつかの実施形態では、ＮＰは、ビタミンとＰＵＦＡとの組み合わせを含むことができる。

【0102】

いくつかの実施形態では、胃活性栄養補助食品は、ステビア・レバウディアナ（Ｓｔｅｖｉａ ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）の葉から抽出された食品添加物であるステビアなどのポリフェノールである。その生物活性要素および／または代謝産物としては、ステビオール、ステビオールグリコシド、主にレバウジオシドＡおよびステビオシドが挙げられる。いくつかの実施形態では、ポリフェノールは、クルクミンなどの環状または直鎖状（クルクミノイド）ジアリールヘプタノイドである。いくつかの実施形態では、ポリフェノールは、エピガロカテキン－３－ガレート（ＥＧＣＧ）などの緑茶フラボノイドである。

【0103】

別段の定めのない限り、数量に関して「約」という用語は、明示された公称値の±２５％の許容範囲を指す。

【0104】

別段の定めのない限り、数値範囲は全て、明示された範囲の限界値を含む。

【0105】

ここで、哺乳動物の身体の標的組織または標的細胞２２に活性医薬成分（ＡＰＩ）を送達するための組成物であって、少なくとも１つのナノ粒子１０と、ナノ粒子１０に含有される少なくとも１つのＡＰＩと、標的組織または標的細胞２２に特異的に結合するように構成される少なくとも１つの栄養補助リガンド１３とを含む複合体を含み、ＡＰＩが、栄養補助リガンド１３の媒介によって標的組織または標的細胞２２で活性化されることを特徴とする、組成物を参照する。

【0106】

少なくとも１つの栄養補助リガンド１３を少なくとも１つのナノ粒子１０に結合するリンカー１７をさらに含む組成物をさらに特徴とする、上記に定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0107】

栄養補助食品が標的化栄養補助食品であることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0108】

ナノ粒子１０が、リポソーム、ミセル、固体脂質ナノ粒子、シクロデキストリンナノ粒子、デンドリマー、ポリマーナノ粒子、マイクロ／ナノエマルジョン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0109】

ミセルが単層または二重層１１構造であることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0110】

ナノ粒子１０が１０～２５０ｎｍの範囲にあることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0111】

ＡＰＩが化学的結合または物理的結合を介してナノ粒子１０に結合していることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0112】

ＡＰＩ １４が単層または二重層１１内に含有されるか、ＡＰＩ １５が二重層１１の層間に含有されるか、またはＡＰＩ １６が単層もしくは二重層１１の外層に結合されることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0113】

化学的結合または物理的結合が共有結合、水素結合、ファンデルワールス結合、疎水結合、静電結合、ロンドン結合、イオン結合、塩架橋、吸着、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0114】

組成物が、標的組織または標的細胞２２でＡＰＩを放出するように適合されていることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0115】

ＡＰＩが、栄養補助食品、小分子、フードサプリメント、タンパク質、ホルモン、ペプチド、および脂肪酸からなる群から選択されることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0116】

栄養補助食品が活性栄養補助成分（ＡＮＩ）であることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0117】

ＡＮＩが神経活性栄養補助食品、腫瘍活性栄養補助食品、エンド活性栄養補助食品、胃活性栄養補助食品、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0118】

ＡＮＩがクルクミンであることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0119】

ＡＰＩが一般に安全と認められている（ＧＲＡＳ）ことをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0120】

栄養補助リガンド１３が、神経標的化化合物、腫瘍標的化化合物、胃標的化化合物、エンド（膵臓）標的化化合物、心血管標的化化合物、腎臓標的化化合物、炎症標的化化合物、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0121】

神経標的化化合物が、カフェイン、テオブロミン（キサンテオース）、パラキサンチン、テオフィリン、１，３，７－トリメチル尿酸、ガラナ（パウリニア・クパナ（Ｐａｕｌｌｉｎｉａ ｃｕｐａｎａ）、ＨＢＫ）、フェネチルアミン（ＰＥＡ、チョコレート）、トリプタミン（アカシア（Ａｃａｃｉａ））、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0122】

神経標的化化合物が、バイカレイン、ウォゴニン、オロキシリンＡ、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0123】

栄養補助リガンド１３が一般に安全と認められている（ＧＲＡＳ）ことをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0124】

組成物が、以下の少なくとも１つ：前記標的組織におけるＡＰＩのより高い濃度、非標的組織におけるＡＰＩのより低い濃度、前記標的組織におけるＡＰＩのより高い活性、標的組織におけるＡＰＩの活性の延長、標的細胞２２への前記ＡＰＩの送達の増加を達成するように構成されることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0125】

ＡＰＩの送達機構が、能動的または受動的取り込み機構としてさらに特徴付けられる、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0126】

ＡＰＩの取り込み機構が、少なくとも１つのＡＰＩを含有する少なくとも１つのナノ粒子１０の取り込み、または少なくとも１つのナノ粒子１０から放出された少なくとも１つのＡＰＩの取り込みとして定義されることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0127】

少なくとも１つのＡＰＩを含有する少なくとも１つのナノ粒子１０の取り込み機構がエンドサイトーシスであることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0128】

エンドサイトーシスの様式が、受容体媒介エンドサイトーシス、クラスリン媒介エンドサイトーシス、非媒介エンドサイトーシス、カベオラ、飲作用および食作用からなる群から選択されることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0129】

能動的取り込み機構が、トランスポーター、ポンプおよびチャネルからなる群の１つによって促進されることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0130】

受動的取り込み機構が、拡散、促進拡散および濾過からなる群から選択されることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0131】

取り込みが二次能動輸送、共役輸送または共輸送からなる群から選択されることをさらに特徴とする、上記のいずれかに定義される上記の組成物をさらに参照する。

【0132】

例
例１：ナノ粒子複合体の調製
活性栄養補助食品を含有するコアを覆う標的化栄養補助食品を含有するリポソームを、活性栄養補助食品を負荷し、標的化栄養補助食品で「装飾された」モノオレイン酸グリセリル（ＧＭＯ）などの自己集合性両親媒性生体適合性脂質を製剤化することによって製造する。リポソームは、超音波処理、押出、逆相蒸発および溶媒注入によって製造することができる。製造は、製造されたリポソームのサイズによる分離をさらに含み得る。

【0133】

細胞取り込み試験［Ｉｓｍａｉｌら、２０１３年、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ、８巻、３９３～４０６頁に記載］。薬物負荷ＮＰの細胞取り込みは、実質的な治療応答を誘導するのに十分な薬物レベルを達成するために不可欠である。

【0134】

ＡＤＭＥ（標的化：吸収、分布および蓄積試験－標的栄養補助食品を負荷したＮＰ（リポソーム）を、蛍光色素または放射性（３Ｈ、１４Ｃ）リポソームで標識する。負荷されたリポソームをマウスに注射し（静脈内、消化管腔を介して、皮下）、スキャンして標的組織における蛍光色素の蓄積を同定および測定する。

【0135】

例２：神経機能：
細胞生存率試験を、３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）アッセイをＰＣ１２細胞において行った細胞生存率試験を介して、ロテノン誘導毒性に対する装飾されたリポソームの効果を評価するために行う。ロテノンを用いた細胞毒性試験は、２μｇ／ｍＬのロテノンが約５０％の細胞死を引き起こす用量依存性を明らかにするはずである。さらに、ロテノン誘導毒性に対する装飾されたリポソームの保護効果を試験するために、ＰＣ１２細胞を天然またはリポソームナノ製剤中の様々な濃度のカフェイン／バイカレイン／ウォゴニン／オロキシリンＡマンニトール、またはその両方と共にロテノン（２μｇ／ｍＬ）に曝露する。

【0136】

図３に示すように、クルクミンを含有するカフェインで装飾されたＳＮＬは毒性でないことが示された。

【0137】

インビボ試験 体重２６０±２０ｇのＷｉｓｔａｒ系の雄アルビノラットに対してインビボ試験を行う。実験を開始する前に、動物を１週間順応させ、研究を通してラット飼料および水を自由に摂取させた。実験は、１９６４年６月のヘルシンキでの第１８回世界医師会総会に従い、２００８年１０月のソウルでの第５９回世界医師会総会によって更新された、大学の動物実験委員会または民間施設職員によって承認された倫理的手順および方針に従って行われる。

【0138】

ラットを、それぞれ１２匹の動物を含む２つの群に割り当てる。Ｉ群ラットに超純水を経口投与し、正常対照とした。ＩＩ群では、ラットに装飾物（５０ｍｇ／ｋｇ／日）を経口投与する。ラットを追跡し、３ヶ月間評価する。

【0139】

行動実験［Ｉｓｍａｉｌら、２０１３年、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ、８巻、３９３～４０６頁に記載］

【0140】

モリス水迷路－３ヶ月後、モリス水迷路（ＭＷＭ）試験によって空間記憶を測定する。水迷路は、その周囲の４つの固定点によって４つの四分円に分割されている、円形の水タンク（直径１６０ｃｍおよび高さ３５ｃｍ）からなった。水迷路は、試験全体を通して水槽の一定の四分円に配置され、水面下１．５ｃｍに保たれている、（視覚による偽陽性結果を排除するために）水槽の残りの部分と同じ色の直径１０ｃｍの逃避プラットフォームを含む。ラットを、逃避領域を含まない四分円の縁の中央の開始点に、顔を壁に向けて置く。動物に、５日間連続して１０分間隔で１日あたり４回の試験を行い、その間に隠れたプラットフォームを見つけるのに必要な時間を平均化する。

【0141】

さらなる試験には、他の可能性のある研究実験の中でも、脂質ベースのリポソーム、ＰＤのロテノン誘導マウスモデルにおける機能障害の回復、細胞内酸化ストレスの測定、オートファジー－リソソーム機能（オートファジー－リソソーム経路（ＡＬＰ）は、異常な凝集したタンパク質を除去するための重要な機構であり、十分な証拠によって、この経路における疾患進行を悪化させる障害が示唆されている）の誘導、アポトーシスの調節、マンニトール負荷およびカフェインで装飾されたリポソームの血漿バイオアベイラビリティおよび脳生体内分布、ＰＤのロテノン誘導マウスモデルにおける機能障害の回復が含まれる。

【0142】

予備的結果：図４ａ～図４ｄに示されるように、ヒトアストロサイト（Ｕ－８７ ＭＧ細胞株）の処置の１時間後（図４ｂ）および１．５時間後（図４ｃ～図４ｄ）において、リガンドを含まないＳＬＮ対照試料およびＳＬＮを含まないカフェイン試料と比較して、クルクミン蛍光の有意な増大がＳＬＮ＋カフェイン試料の後で認められた。これは、カフェイン１３による試料のコーティングが１．５時間でクルクミン１４の細胞内含有量を増加させることを示す。さらに、図４ｅに示すように、カフェインに対するアンタゴニストによるＡ２Ｒ受容体の遮断は、クルクミン含有量をＳＬＮ対照（２０ｍｇ／ｍｌの濃度）と同じレベルまで減少させる。前記細胞株の蛍光イメージングでは、ＳＬＮ １０対照（図６ｂ）および未処理細胞３０（図６ｃ）と比較して、１．５時間でのＳＬＮ １０＋カフェイン１３処理で有意に高いクルクミン３２染色を観察することができる（図６ａ）。未処理細胞３０では、緑色は検出できない。ＳＬＮ １０対照細胞３０では、特定の量の緑色が細胞３０の核３１の周りで検出可能である。カフェインで装飾された細胞３０では、緑色は非常に強いので、核３１の青色と干渉さえする。蛍光画像の数値解析については後述する。

【0143】

ドーパミン受容体、ヒト神経芽腫細胞（ＳＨ Ｓｙ５Ｙ）を含む別の細胞株では、図５ａに示すように、１時間後、ＳＬＮ １０対照試料およびクルクミン１４試料と比較して、ＳＬＮ １０＋カフェイン１３試料の後にクルクミン１４蛍光の有意な増加が観察された。しかし、図５ｂに示すように、３．５時間の処理後、ＳＬＮ １０対照試料およびクルクミン１４試料の蛍光は、かなり減少したＳＬＮ １０＋カフェイン１３試料とは対照的に、同じレベルのままであった。この効果については説明が必要である。しかしながら、上記の結果は、リガンド１３がＡＰＩ １４の取り込みに及ぼす影響を依然として示している。

【0144】

パーキンソン病：ＰＤ処置の評価を、６－ＯＨＤＡおよびＭＰＴＰパーキンソン病モデルの両方で、ＮＰをマウスに投与して評価する（ｎ＝８）。マウスに、生理食塩水中のＭＰＴＰ－ＨＣｌ（１８ｍｇ／ｋｇの遊離塩基）を２時間間隔で４回腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。中毒マウスを、経管栄養針を使用した経管栄養によるＭＰＴＰの最後の注射の３時間後から、神経標的化栄養補助食品および神経活性栄養補助食品を含む１００μＬのＮＰベースの組成物で毎日処置する。

【0145】

２つのタイプの行動実験：自発運動活性についてのオープンフィールド実験および足の動きについてのロータロッド実験を行う。自発運動活性を、Ｄｉｇｉｓｃａｎ Ｍｏｎｉｔｏｒ（Ｏｍｎｉｔｅｃｈ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ、ＯＨ）で、ＭＰＴＰ注射の最後の投与の７日後に測定する。このＤｉｇｉｓｃａｎ Ｍｏｎｉｔｏｒは、常動および立ち上がり、線条体によって直接制御される挙動、ならびに水平活動、総移動距離、移動回数、移動時間、休止時間、平均距離、平均時間、および中心時間（ｃｅｎｔｅｒ ｔｉｍｅ）などの他の基本的な自発運動パラメータを記録する。任意の傷害または処置の前に、マウスをＤｉｇｉｓｃａｎ Ｉｎｆｒａ－ｒｅｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｍｏｎｉｔｏｒに毎日１０分間、およびロータロッドに毎日１０分間、３日間連続して入れて訓練し、それらのベースライン値を記録する。手短に言えば、動物をケージから直接取り出し、オープンフィールド装置の指定された隅に鼻から先に静かに置き、解放後、５分間隔ごとにデータ取得を開始した。ＤＩＧＩＳＣＡＮソフトウェアを、赤外線ビームによって自動的に監視される水平および垂直活動データを分析および記憶するために使用する。ロータロッドでは、異なる速度でマウスの足の動きを観察する。ストレスおよび疲労を解消するために、マウスに５分間の休息期間を与える。次いで、ＭＰＴＰの最後の投与の７日後、オープンフィールドアッセイおよびロータロッド試験を６時間間隔で２回、各マウスで別々に実施する。自発運動活性測定値をベースライン値比較後に評価する。

【0146】

多発性硬化症：６週齢の雄ＤＡラット（ｎ＝８、体重＝２００ｇｒ±２０ｇｒ）を２３±２℃、相対湿度５０％に保ち、午前６時に点灯、午後６時に消灯する。動物には、市販の食餌を自由に与え、水を自由に摂取させる。ＥＡＥ疾患を、等量の新たに抽出したＤＡラット脊髄ホモジネート（生理食塩水中５０％ ｗ／ｖ）と７ｍｇ／ｍｌの結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）を含有する完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）とを混合することによって調製した脳炎誘導エマルジョンでラットを免疫することによって誘導する。免疫したラットをモニタリングし、神経学的スコアを、ＥＡＥの臨床症状について疾患誘導後５日目から毎日非盲検様式で評価する。臨床疾患を、以下の尺度に従って典型的な徴候についてスコア化する：０、臨床徴候なし；１、弛緩尾；２、後肢脱力；３後肢不全麻痺；４、完全な両側後肢麻痺；５、ＥＡＥによる死亡］。神経標的化栄養補助食品および神経活性栄養補助食品を含むＮＰベースの組成物を、水中に最大０．５％で作られ、０．６％の最終濃度に達するようにＴｗｅｅｎ ８０を添加したカルボキシメチルセルロースに懸濁し、３４日間毎日経口投与する。処置的処置のために、臨床疾患の徴候についての動物のモニタリングを、疾患誘導の５日後に開始する。

【0147】

アルツハイマー病：ＡＤの二重トランスジェニック動物モデル（ロンドン変異（Ｖ７１７Ｉ）を有するヒトＡＰＰおよびＡ２４６Ｅ変異を有するヒトＰＳ１を過剰発現する）で実験を行う。６月齢マウス（ｎ＝８、体重＝動物を、神経標的化栄養補助食品および神経活性栄養補助食品を含むＮＰベースの組成物の脳室内（ｉ．ｃ．ｖ．）注入および腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって８週間処置する。処置に対する免疫学的応答を、ｉ．ｐ．処置動物で試験する。組織学的分析を、アミロイド斑、大脳皮質および海馬におけるアミロイド負荷についてそれぞれ行う。

【0148】

例３：腫瘍学的機能
癌：様々な癌型のインビトロスクリーニング、次いでインビボマウスモデル－脳神経膠腫、結腸癌、乳癌に対する異種移植マウスの様式で、装飾されたリポソームを試験する。腫瘍細胞（結腸癌）を免疫不全宿主（重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウス）の皮下で１４日間増殖させる。腫瘍を測定し、腫瘍標的栄養補助食品および腫瘍活性栄養補助食品を含むＮＰベースの組成物を注射する。腫瘍を処置後１４日間評価する。

【0149】

解糖遮断薬：インビボでの腫瘍増殖に対するＮＰの効果を試験するために、６週齢の雄ＳＣＩＤマウスにＢ１６黒色腫細胞（または他の癌細胞）を皮下注射する（マウス１匹あたり１×１０^６細胞、群あたり６匹のマウス）。異種移植片を確立した後、腫瘍担持マウスに、腫瘍標的栄養補助食品を含むＮＰベースの組成物を投与し、腫瘍活性栄養補助食品を腹腔内注射によって注射する。マウスを１４日間評価する。

【0150】

例４：内分泌機能：
糖尿病：化学モデルは、グルコース低下処置の評価に有効であることが示されている。ＳＴＺ［２－デオキシ－２－（３－（メチル－３－ニトロソウレイド）－Ｄ－グルコピラノース］を（ｉ．ｐ．またはｉ．ｖ．を介して）投与し、これはＧｌｕｔ－２トランスポーターを介して膵臓ベータ細胞に入り、ＤＮＡのアルキル化を引き起こす（Ｓｚｋｕｄｅｌｓｋｉ、２００１年）。その後のＰＡＲＰの活性化は、ＮＡＤ^＋枯渇、細胞ＡＴＰの減少およびその後のインスリン産生の阻害をもたらす（ＳａｎｄｌｅｒおよびＳｗｅｎｎｅ、１９８３年）。単回用量のＳＴＺ（１５０ｍｇ／ｋｇ）をマウスに投与する（ｎ＝８）。ＳＴＺ投与の２４時間後、膵臓標的化栄養補助食品および膵臓活性栄養補助食品を含むＮＰを、ｉ．ｐ．を介してマウスの半分に投与し、両方の群の血糖値を１０日間追跡する。

【0151】

Ｗｉｓｔａｒ－Ｂｒａｔｉｓｌａｖａアルビノ雄ラット（ｎ＝８、体重２２５ｇｒ±２５ｇｒ）を、一定の温度（２４±２℃）、湿度６０±５％、および明暗体制でポリプロピレンケージに保つ。ラットには、食物および水を無制限に摂取させる。Ｐｏｒｆｉｒｅらに従って、膵臓標的化栄養補助食品および膵臓活性栄養補助食品を含むＮＰを、ＳＴＺ投与の３０分前にｉ．ｐ．投与する。７２時間後、空腹時血漿グルコースを確認し、血漿グルコース値が２００ｍｇ／ｄＬを超える動物を糖尿病性と見なす（そして試験に含める）。

【0152】

膵臓リパーゼ活性アッセイ：市販の膵臓リパーゼをＭｃＤｏｕｇａｌｌらに従って調製する。膵臓リパーゼを調製し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析によってリパーゼおよびコリパーゼの純度を推定する。タンパク質濃度をＢｒａｄｆｏｒｄによって決定する。膵臓リパーゼ基質（ｐＮＰＬ、容積あたり０．０８質量％）を５ｍＭ酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ＝５．０、１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００）に溶解する。膵臓標的化栄養補助食品および膵臓活性栄養補助食品を含むＮＰベースの組成物は、メタノール中に３つの異なる濃度で溶解した。オルリスタット溶液をメタノール中１．２ｍｇ／ｍＬで調製する。溶媒中の化合物の安定性を、それらのＵＶ－Ｖｉｓスペクトルを測定することによってアッセイ時に試験する。

【0153】

例５：胃腸機能：
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（ＴＮＢＳモデル）：６～８歳のＷｉｓｔｅｒラット（２４０～２８０ｇ）（ｎ＝１０）に１００ｍｇ／ｋｇを絶食期間（２４時間）後に投与して、５の平均ウォレススコアを得る。投与の３日後および７日後にマウスを評価する。ＴＮＢＳ投与の７日後、マウスを胃標的化栄養補助食品および胃活性栄養補助食品を含むＮＰベースの組成物で処置し、１４日間評価する。

【0154】

脂肪肝：非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）が一般的な医学的問題として浮上している。マウスに、相当量のスクロース（エネルギーの４０％）からなり、脂肪が中程度に濃縮され（１０％）、メチオニンおよびコリンが欠乏している食餌を与える。雄野生型（ＷＴ）マウスＣ５７Ｂｌ／６に、ＭＣＤ食（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、番号９６０４３９；ｎ＝１５マウス）を８週間与えた。食餌開始は１２週齢で開始し、マウスを、食餌８週間後（２０週齢）に標的栄養補助食品および活性栄養補助食品を含むＮＰベースの組成物で処置した。炎症を３週間追跡する。

【0155】

胃潰瘍：Ｂａｌｂｃマウス（ｎ＝８）を、１ｃｃシリンジ（約２×１０^８個の生物）に取り付けた２４ゲージ×１インチの直線ステンレス鋼供給管を使用して、胃内で０．２ｃｃの接種物でピロリ菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ、Ｓｙｄｎｅｙ株）に感染させる。マウスに、１日に１回、それぞれ１～２日間隔で合計３回投与する。感染の２１日後、マウスを、胃標的化栄養補助食品および胃活性栄養補助食品を含むＮＰベースの組成物で処置する。マウスを１５日間評価する。

【0156】

肥満：肥満糖尿病（ＺＤＦ）ラット（ｎ＝８、平均体重１３５ｇｒ±５ｇｒ）を、病原体を含まない条件下、２３±０．５℃および相対湿度５５％±１０％にて１２時間の明暗サイクルで維持し、水および市販の食餌を与え、マウスを胃標的化栄養補助食品および胃活性栄養補助食品を含むＮＰベースの組成物で１４週間処置し、体重を追跡することによって評価する。

【0157】

ヒト膵臓由来のリパーゼの酵素アッセイ：肥満は、エネルギーバランスの乱れであり、主に脂質代謝の障害と考えられている。脂質代謝経路に関与するますます多くの酵素が同定され、特徴付けられている。それらは、肥満の潜在的な治療標的の豊富なプールを表す。合成され分泌される主要な脂肪分解酵素であるＰＬ（トリアシルグリセロールアシルヒドロラーゼ）の阻害は、より新しい抗肥満薬の開発のためのアプローチの１つである。市販の抗肥満薬であるテトラヒドロリプスタチン（オルリスタット）は、既知の膵臓リパーゼ阻害剤である。ＮＰは、それらの抗肥満能にアクセスするためのインビトロでのリパーゼ活性をさらに特徴とする。膵臓リパーゼ活性の測定、インビトロでのリパーゼ活性を、トリオレインからのオレイン酸の放出速度を測定することによって決定する。

【0158】

例６：腎臓機能：
腎機能性：８週齢の雌Ｗｉｓｔａｒラット（ｎ＝１２、体重１８０ｇｒ±２０ｇｒ）を、制御された明暗サイクルの下、一定の室温（２０℃）および湿度（７５％）で単一の代謝ケージに収容する。ラットに標準的な固形飼料食を与え、動物に飲料水を自由に摂取させた。０日目に、腎標的化栄養補助食品および腎活性栄養補助食品を含むＮＰベースの組成物でラットを処置した。腎臓の形態学的研究のために、４匹のラットを７日ごとに屠殺する。

【0159】

腎炎：試験は、正常血圧の雌Ｗｉｓｔａｒラット（ｎ＝８、体重２１０ｇｒ±２０ｇｒ）で行う。免疫複合体性腎炎を、５ｍｇの不完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）の初期皮下注射を受けているラットで誘導する。３週目に、第２の用量を不完全フロイントアジュバントで投与する。４週目に、１０ｍｇのオボアルブミンの毎日の腹腔内投与を開始する。タンパク尿は、９週目から現れるはずである。タンパク尿が２０～５０ｍｇ／日に達したら、動物を、腎標的化栄養補助食品および腎活性栄養補助食品を含むＮＰベースの組成物で経口処置する。タンパク尿の発症の３週間後、動物を屠殺し、血液を採取し、腎臓を摘出する。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4a】

【図4b】

【図4c】

【図4d】

【図4e】

【図5a】

【図5b】

【図6a】

【図6b】

【図6c】

【国際調査報告】