特表 2024-536860 長鎖化合物およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-08

(54)【発明の名称】長鎖化合物およびその使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/194 20060101AFI20241001BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 31/7076 20060101ALI20241001BHJP

   C07H 19/20 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 31/7024 20060101ALI20241001BHJP

   C07H 13/04 20060101ALI20241001BHJP

   C07C 57/13 20060101ALI20241001BHJP

   C07C 55/28 20060101ALI20241001BHJP

【ＦＩ】

A61K31/194

A61P3/06

A61P1/16

A61P9/10 101

A61K31/7076

C07H19/20 CSP

A61K31/7024

C07H13/04

C07C57/13

C07C55/28

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024518781

(86)(22)【出願日】2022-09-21

(85)【翻訳文提出日】2024-05-14

(86)【国際出願番号】 CN2022120315

(87)【国際公開番号】W WO2023045985

(87)【国際公開日】2023-03-30

(31)【優先権主張番号】202111116447.1

(32)【優先日】2021-09-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】524113242

【氏名又は名称】バージョン セラピューティクス カンパニー，リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＢＵＲＧＥＯＮ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＣＯ．，ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ７，１９９９ Ｚｈａｎｇ Ｈｅｎｇ Ｒｏａｄ，Ｐｕｄｏｎｇ Ｎｅｗ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１２１０，Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】110003971

【氏名又は名称】弁理士法人葛和国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ナン，ファジュン

(72)【発明者】

【氏名】リー，ジンヤ

(72)【発明者】

【氏名】ヂャン，メイ

(72)【発明者】

【氏名】シエ，ジーフー

(72)【発明者】

【氏名】ヂャン，ヤンミン

【テーマコード（参考）】

4C057

4C086

4C206

4H006

【Ｆターム（参考）】

4C057BB02

4C057DD01

4C057DD03

4C057HH02

4C057LL29

4C057LL41

4C057LL46

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086EA05

4C086EA18

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA45

4C086ZA75

4C086ZC33

4C206AA01

4C206AA02

4C206AA03

4C206DA36

4C206MA01

4C206MA04

4C206NA14

4C206ZA45

4C206ZA75

4C206ZC33

4H006AA01

4H006AA03

4H006AB23

4H006AB27

4H006BS10

(57)【要約】

長鎖化合物およびその使用で、長鎖化合物の構造は式（Ｉ）で表される。本発明の化合物は直接ＡＣＬＹを抑制することができ、高コレステロール血症および非アルコール性脂肪性肝炎をはじめとした代謝性疾患に顕著な治療効果があり、高コレステロール血症および非アルコール性脂肪性肝炎などの代謝性疾患の治療薬に製造する開発に有用である。
【化１】

【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

一般式（Ｉ）で表される化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体もしくはその薬学的に許容される塩の使用であって、代謝性疾患を治療する薬物の製造、またはアテローム性動脈硬化症を治療する薬物の製造に用いられる、前記使用。

【化1】

（ただし、

【化2】

は二重結合または単結合を表す。
ｍ、ｎはそれぞれ独立に１、２、３、４、５または６である。
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６はそれぞれ独立にＨ、Ｃ１－Ｃ４アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ４アルキニル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルケニル基、フェニル基またはベンジル基である。
あるいは、Ｒ_１およびＲ_２はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
あるいは、Ｒ_５およびＲ_６はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
あるいは、Ｒ_３およびＲ_４はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
Ｙ_１およびＹ_２はそれぞれ独立に－ＯＨ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＣｏＡ、－ＣＯＯＲ_７から選ばれる。ここで、Ｒ_７はメチル基、エチル基または

【化3】

である。ＣｏＡの構造は以下の通りである：

【化4】

。）

【請求項2】

前記化合物は一般式ＩＩで表される構造を有することを特徴とする、請求項１に記載の使用：

【化5】

【請求項3】

前記化合物は一般式ＩＩＩで表される構造を有することを特徴とする、請求項１に記載の使用：

【化6】

【請求項4】

前記化合物は一般式ＩＶで表される構造を有することを特徴とする、請求項１に記載の使用：

【化7】

（式において、ｐは０、１、２または３である。）

【請求項5】

前記化合物は重水素化化合物であることを特徴とする、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用。

【請求項6】

前記の化合物は以下の群から選ばれることを特徴とする、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用：

【化8】

【請求項7】

前記代謝性疾患は、高コレステロール血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝線維症から選ばれることを特徴とする、請求項１に記載の使用。

【請求項8】

一般式（Ｉ）で表される化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体またはその薬学的に許容される塩。

【化9】

（ただし、

【化10】

は二重結合または単結合を表す。
ｍ、ｎはそれぞれ独立に１、２、３、４、５または６である。
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６はそれぞれ独立にＨ、Ｃ１－Ｃ４アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ４アルキニル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルケニル基、フェニル基またはベンジル基である。
あるいは、Ｒ_１およびＲ_２はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
あるいは、Ｒ_５およびＲ_６はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
あるいは、Ｒ_３およびＲ_４はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
Ｙ_１およびＹ_２はそれぞれ独立に－ＯＨ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＣｏＡ、－ＣＯＯＲ_７から選ばれる。ここで、Ｒ_７はメチル基、エチル基または

【化11】

である。ＣｏＡの構造は以下の通りである：

【化12】

。）

【請求項9】

前記化合物は一般式ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶで表される構造を有することを特徴とする、請求項８に記載の化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体またはその薬学的に許容される塩：

【化13】

（式において、ｐは０、１、２または３である。）

【請求項10】

前記化合物は重水素化化合物であることを特徴とする、請求項８または９に記載の化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体またはその薬学的に許容される塩。

【請求項11】

前記化合物は以下の群から選ばれることを特徴とする、請求項８～１０のいずれか一項に記載の化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体またはその薬学的に許容される塩：

【化14】

【請求項12】

薬物組成物であって、請求項８～１１のいずれか一項に記載の化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体またはその薬学的に許容される塩；ならびに
薬学的に許容される塩を含む、前記薬物組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、新規な長鎖脂肪酸系ＡＣＬＹ阻害剤、その薬学的に許容される塩、薬用エステル、結晶水和物、溶媒和物またはこれらの混合物、ならびにこのような阻害剤を含む薬物組成物、高コレステロール血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝線維症などの代謝性疾患の治療薬の製造における使用に関する。

【背景技術】

【0002】

ミトコンドリアトリカルボン酸回路（ＴＣＡ ｃｙｃｌｅ）で生成するアセチル補酵素Ａは一から内因性コレステロールおよびトリグリセリドを合成する開始基質である。トリカルボン酸回路で生成するアセチル補酵素Ａは、通常、そのままミトコンドリア膜を通過して細胞質に入ることなく、ミトコンドリアの中においてクエン酸合成酵素の触媒作用によってクエン酸を生成する。クエン酸はクエン酸トランスポーターを介してミトコンドリア膜を通過して細胞質に入り、さらに小胞体に分布するＡＴＰクエン酸シンターゼ（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｃｉｔｒａｔｅ ｌｙａｓｅ、ＡＣＬＹ）によってアセチル補酵素Ａおよびオキサロ酢酸に分解される。中では、オキサロ酢酸はＮＡＤＨによってリンゴ酸になり、後者はＮＡＰＤＨによってさらにピルビン酸になり、リンゴ酸およびピルビン酸はそれぞれのトランスポーターによってミトコンドリアに戻される。アセチル補酵素Ａは基質として直接トリグリセリドおよびコレステロールの一からの合成に関与する。非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、高コレステロール血症およびアテローム性動脈硬化症などの多くの代謝性疾患はいずれも肝臓の脂質合成レベルの異常上昇に関連する。そのため、ＡＣＬＹを抑制する活性は顕著に肝細胞の一からの脂質の合成を減少させることができ、ＡＣＬＹ阻害剤は代謝性疾患の治療薬の製造に使用することができる。ベンペド酸（Ｂｅｍｐｅｄｏｉｃ ａｃｉｄ、ＥＴＣ－１００２）は世界初の市販のＡＣＬＹ小分子阻害剤で、主にスタチンのないヘテロ型家族性高コレステロール血症の治療に使用されることが知られている。また、ベンゼンスルホンアミド類などのＡＣＬＹ阻害剤は細胞レベルおよび臨床前の動物レベルにおいてもそれぞれ脂質降下の薬理学的活性を有することが検証された。

【0003】

そのため、高コレステロール血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝線維症などの代謝性疾患の治療のため、ＡＣＬＹ阻害剤の研究が必要である。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0004】

本発明の目的は、長鎖化合物の使用であって、高コレステロール血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝線維症、アテローム性動脈硬化症などの疾患の治療に用いられる使用を提供することにある。

【課題を解決するための手段】

【0005】

本発明の第一の側面では、一般式（Ｉ）で表される化合物、またはその重水素置換化合物、立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体もしくはその薬学的に許容される塩、あるいは一般式（Ｉ）で表される化合物のうちの２種類または２種類以上の化合物からなる混合物の使用であって、代謝性疾患を治療する薬物の製造、またはアテローム性動脈硬化症を治療する薬物の製造に用いられる使用を提供する。

【化1】

（ただし、

【化2】

は二重結合または単結合を表す。
ｍ、ｎはそれぞれ独立に１、２、３、４、５または６である。
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６はそれぞれ独立にＨ、Ｃ１－Ｃ４アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ４アルキニル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルケニル基、フェニル基またはベンジル基である。
あるいは、Ｒ_１およびＲ_２はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
あるいは、Ｒ_５およびＲ_６はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
あるいは、Ｒ_３およびＲ_４はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
Ｙ_１およびＹ_２はそれぞれ独立に－ＯＨ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＣｏＡ、－ＣＯＯＲ_７から選ばれる。ここで、Ｒ_７はメチル基、エチル基または

【化3】

である。ＣｏＡの構造は以下の通りである：

【化4】

。）

【0006】

もう一つの好適な例において、

【化5】

は二重結合を表し、二重結合の配置はシスまたはトランスである。

【0007】

もう一つの好適な例において、前記化合物は一般式ＩＩで表される構造を有する：

【化6】

【0008】

もう一つの好適な例において、前記化合物は一般式ＩＩＩで表される構造を有する：

【化7】

【0009】

もう一つの好適な例において、前記化合物は一般式ＩＶで表される構造を有する：

【化8】

（式において、ｐは０、１、２または３である。）

【0010】

もう一つの好適な例において、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６はそれぞれ独立にＨ、Ｃ１－Ｃ４アルキル基、重水素化Ｃ１－Ｃ４アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ４アルキニル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、重水素化Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルケニル基、フェニル基またはベンジル基で、
あるいは、Ｒ_１およびＲ_２はこれらに隣接する炭素原子とともに重水素化Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成しており、
あるいは、Ｒ_５およびＲ_６はこれらに隣接する炭素原子とともに重水素化Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成しており、
あるいは、Ｒ_３およびＲ_４はこれらに隣接する炭素原子とともに重水素化Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。

【0011】

もう一つの好適な例において、Ｒ_１、Ｒ_２はそれぞれ独立にＨ、メチル基、エチル基、重水素化メチル基、重水素化エチル基、重水素化プロピル基またはプロピル基で、好ましくはＲ_１およびＲ_２は同時にＨまたは同時にメチル基で、あるいはＲ_１およびＲ_２はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ５シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ４シクロアルキル基を形成している。

【0012】

もう一つの好適な例において、Ｒ_３、Ｒ_４はそれぞれ独立にＨ、メチル基、エチル基、重水素化メチル基、重水素化エチル基、重水素化プロピル基またはプロピル基で、好ましくはＲ_３およびＲ_４は同時にＨまたは同時にメチル基で、あるいはＲ_３およびＲ_４はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ５シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ４シクロアルキル基を形成している。

【0013】

もう一つの好適な例において、Ｒ_５、Ｒ_６はそれぞれ独立にＨ、メチル基、エチル基、重水素化メチル基、重水素化エチル基、重水素化プロピル基またはプロピル基で、好ましくはＲ_５およびＲ_６は同時にＨまたは同時にメチル基で、あるいはＲ_５およびＲ_６はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ６シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ５シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ４シクロアルキル基を形成している。

【0014】

もう一つの好適な例において、Ｙ_１およびＹ_２はそれぞれ独立に－ＣＯＯＨ、－ＣＯＣｏＡまたは－ＣＯＯＲ_７で、ここで、Ｒ_７はメチル基、エチル基または

【化9】

で、ＣｏＡの構造は以下の通りである：

【化10】

【0015】

もう一つの好適な例において、前記化合物は以下の群から選ばれる：

【化11】

【0016】

もう一つの好適な例において、前記化合物は、さらに、以下の群から選ばれる：

【化12】

【0017】

もう一つの好適な例において、前記代謝性疾患は、高コレステロール血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝線維症から選ばれる。
もう一つの好適な例において、前記アテローム性動脈硬化症は高コレステロール血症によるものである。

【0018】

本発明の第二の側面では、一般式（Ｉ）で表される化合物、またはその重水素置換化合物、立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体もしくはその薬学的に許容される塩、あるいは一般式（Ｉ）で表される化合物のうちの２種類または２種類以上の化合物からなる混合物を提供する。

【化13】

（ただし、

【化14】

は二重結合または単結合を表す。
ｍ、ｎはそれぞれ独立に１、２、３、４、５または６である。
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６はそれぞれ独立にＨ、Ｃ１－Ｃ４アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ４アルキニル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルケニル基、フェニル基またはベンジル基である。
あるいは、Ｒ_１およびＲ_２はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
あるいは、Ｒ_５およびＲ_６はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
あるいは、Ｒ_３およびＲ_４はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
Ｙ_１およびＹ_２はそれぞれ独立に－ＯＨ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＣｏＡ、－ＣＯＯＲ_７から選ばれる。ここで、Ｒ_７はメチル基、エチル基または

【化15】

である。ＣｏＡの構造は以下の通りである：

【化16】

。）

【0019】

もう一つの好適な例において、前記化合物は一般式ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶで表される構造を有する：

【化17】

（式において、ｐは０、１、２または３である。）

【0020】

もう一つの好適な例において、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６はそれぞれ独立にＨ、Ｃ１－Ｃ４アルキル基、重水素化Ｃ１－Ｃ４アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ４アルキニル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルケニル基、フェニル基またはベンジル基で、
あるいは、Ｒ_１およびＲ_２はこれらに隣接する炭素原子とともに重水素化Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成しており、
あるいは、Ｒ_５およびＲ_６はこれらに隣接する炭素原子とともに重水素化Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成しており、
あるいは、Ｒ_３およびＲ_４はこれらに隣接する炭素原子とともに重水素化Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。

【0021】

もう一つの好適な例において、前記化合物は以下の群から選ばれる：

【化18】

【0022】

もう一つの好適な例において、前記化合物は、さらに、以下の群から選ばれる：

【化19】

【0023】

本発明の第三の側面では、薬物組成物であって、第一の側面に記載の化合物、またはその重水素置換化合物、立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体もしくはその薬学的に許容される塩、あるいは一般式（Ｉ）で表される化合物のうちの２種類または２種類以上の化合物からなる混合物、ならびに
薬学的に許容される塩を含むものを提供する。
本発明に記載の薬物の組み合わせの剤形は様々でもよく、錠剤、カプセル、顆粒、シロップ、溶液、懸濁液またはエアゾール剤を含むが、これらに限定されない。

【0024】

本発明の第四の側面では、代謝性疾患を治療する方法であって、必要な対象に第二の側面に記載の化合物、またはその重水素置換化合物、立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体もしくはその薬学的に許容される塩、あるいは一般式（Ｉ）で表される化合物のうちの２種類または２種類以上の化合物からなる混合物、あるいは第三の側面に記載の薬物組成物を施用する工程を含む方法を提供する。
もう一つの好適な例において、前記代謝性疾患は、高コレステロール血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝線維症から選ばれる。

【0025】

本発明の第五の側面では、アテローム性動脈硬化症を治療する方法であって、必要な対象に第二の側面に記載の化合物、またはその重水素置換化合物、立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体もしくはその薬学的に許容される塩、あるいは一般式（Ｉ）で表される化合物のうちの２種類または２種類以上の化合物からなる混合物、あるいは第三の側面に記載の薬物組成物を施用する工程を含む方法を提供する。
もう一つの好適な例において、前記アテローム性動脈硬化症は高コレステロール血症によるものである。

【0026】

有益な効果
中国特許出願第２０１６１０１０５０６７号（ＣＮ１０７１１８０９８）では、脂肪酸系化合物、その製造方法およびその使用が公開されたが、このような化合物はＡＰＭＫを活性化させる活性を有し、マウス初代肝細胞のグルコース供給を抑制する能力があり、肥満または糖尿病を治療する薬物の製造に有用である。

【0027】

発明者は、意外に、このような化合物はＡＣＬＹを抑制する活性を有することを見出した。さらなる体内外薬理学的活性の評価では、代表的な化合物Ａ３は初代肝細胞において脂質の一からの合成を抑制し、ゴールデンハムスターおよびＡｐｏＥ^－／－マウスの高脂高コレステロール血症を改善し、顕著に高脂高糖高コレステロールの飲食によって誘導されるｏｂ／ｏｂマウスおよびカニクイザルのＮＡＳＨ症状を改善することができることが見出された。また、研究結果から、二重結合がトランスの配置の化合物の体内活性は二重結合がシスの配置の化合物よりも良いことが示された。そして、同等の経口投与量において化合物Ａ３はベンペド酸の血漿高暴露量よりも４倍以上高いことから、化合物Ａ３はより良い治療効果があることが示された。

【0028】

上記のように、本願で公開されるこの一連の化合物は良いＡＣＬＹ抑制活性を有し、初代肝細胞においてトリグリセリドおよびコレステロールの一からの合成を抑制し、顕著にゴールデンハムスターおよび老年アカゲザルの自発性高脂血症を改善することができ、げっ歯類動物および非霊長類動物のＮＡＳＨモデルのいずれにおいても突出した治療効果を示した。

【0029】

このような新規なＡＣＬＹ小分子阻害剤は、高コレステロール血症および非アルコール性脂肪性肝炎をはじめとした代謝性疾患に顕著な治療効果があり、高コレステロール血症および非アルコール性脂肪性肝炎などの代謝性疾患の治療薬に製造する開発に有用である。

【0030】

もちろん、本発明の範囲内において、本発明の上記の各技術特徴および下記（たとえば実施例）の具体的に記述された各技術特徴は互いに組合せ、新しい、または好適な技術方案を構成できることが理解される。明細書で開示された各特徴は、任意の相同、同等或いは類似の目的の代替性特徴にも任意に替えることができる。紙数に限りがあるため、ここで逐一説明しない。

【図面の簡単な説明】

【0031】

【図1】図１は化合物Ａ３の初代肝細胞の脂質の一からの合成に対する抑制作用の評価を示す。ここで、ＡはＷＴマウスおよびＡＣＬＹノックアウトマウスの肝細胞における化合物Ａ３のトリグリセリドの一からの合成に対する抑制作用の考察で、ＢはＷＴマウスおよびＡＣＬＹノックアウトマウスの肝細胞における化合物Ａ３のトリグリセリドの一からの合成に対する抑制作用の考察である。対照群に対して、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１で、相応する投与量群に対して、^＃Ｐ＜０．０５、^＃＃Ｐ＜０．０１、^＃＃＃Ｐ＜０．００１である。

【図2】図２は化合物Ａ３およびＡ４の複数回投与のゴールデンハムスターの血清総コレステロールおよび低密度リポタンパク質コレステロールの含有量に対する降下作用の評価を示す。ここで、＊はモデル対照群に対してＰ＜０．０５で、＊＊はモデル対照群に対してＰ＜０．０１で、＊＊＊はモデル対照群に対してＰ＜０．００１である。

【図3】図３は被験物の化合物Ａ３の長期間投与のＡｐｏＥ^－／－マウスの主動脈プラークの形成に対する影響を示す。ここで、＊はモデル対照群に対してＰ＜０．０５で、＊＊はモデル対照群に対してＰ＜０．０１で、＊＊＊はモデル対照群に対してＰ＜０．００１である。

【図4】図４は化合物Ａ３のｏｂ／ｏｂマウスＮＡＳＨに対する治療作用の評価を示す。ここで、Ａはｏｂ／ｏｂマウス肝臓の外観および化合物の長期間投与後の肝臓の病理的分析の結果（ｎ＝８）で、ＢはＣＤ６８免疫組織化学の病理的分析の統計図で、Ｃはピクロシリウスレッド染色の病理的分析の統計図である。ここで、＊はモデル対照群に対してＰ＜０．０５で、＊＊はモデル対照群に対してＰ＜０．０１で、＊＊＊はモデル対照群に対してＰ＜０．００１である。

【図5】図５は化合物Ａ３の長期間投与後の肝臓ＮＡＳスコアの変化を示す。ここで、＊はモデル対照群に対してＰ＜０．０５で、＊＊はモデル対照群に対してＰ＜０．０１で、＊＊＊はモデル対照群に対してＰ＜０．００１である。

【発明を実施するための形態】

【0032】

本願の発明者は、幅広く深く研究したところ、本願の化合物はＡＣＬＹ抑制活性を有し、このような化合物は初代肝細胞において脂質の一からの合成を抑制し、そして多くの代謝性疾患の動物モデルにおいて治療効果を示し、さらに高コレステロール血症、非アルコール性脂肪性肝炎などの代謝性疾患の治療薬として開発することが可能で、またアテローム性動脈硬化症の治療に有用であることを見出した。これに基づき、本発明を完成させた。

【0033】

用語
本発明において、特別に説明しない限り、用いられる用語は、当業者に公知の一般的な意味を持つ。
本発明において、用語「Ｃ_１－Ｃ_６」とは、炭素原子を１、２、３または４個有することである。用語「Ｃ_３－Ｃ_７」とは、炭素原子を３、４、５、６または７個有することである。上記に準じて同様に表記する。

【0034】

本発明において、用語「アルキル基」は飽和の線形または分枝鎖の炭化水素の部分を表し、たとえば、用語「Ｃ１－Ｃ４アルキル基」とは炭素原子を１～４個有する直鎖または分岐鎖のアルキル基で、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔ－ブチル基を含むが、これらに限定されない。

【0035】

本発明において、用語「アルケニル基」は少なくとも一つの二重結合を含む、直鎖または分岐鎖の炭化水素基の部分を表し、たとえば、用語「Ｃ_２－Ｃ_４アルケニル基」とは、炭素原子を２～４個有し、二重結合を一つ含有する直鎖または分岐鎖のアルケニル基で、ビニル基、プロペニル基、ブテニル基、イソブテニル基を含むが、これらに限定されない。

【0036】

本発明において、用語「アルキニル基」とは、三重結合を一つ含有する直鎖または分岐鎖のアルキニル基で、エチニル基、プロパギル基、ブチニル基、イソブチニル基などを含むが、これらに限定されない。

【0037】

本発明において、用語「シクロアルキル基」は飽和の環状炭化水素基の部分を表し、たとえば、用語「Ｃ_３－Ｃ_７シクロアルキル基」とは、環に炭素原子を３～７個有する環状アルキル基で、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基などを含むが、これらに限定されない。

【0038】

本発明において、用語「シクロアルケニル基」は少なくとも一つの二重結合を含む、環状炭化水素基の部分を表し、たとえば、用語「Ｃ_３－Ｃ_７環アルケニル基」とは、環に炭素原子を３～７個有する環アルケニル基、シクロプロペニル基、シクロブテニル基、シクロペンテニル基、シクロヘキセニル基などを含むが、これらに限定されない。

【0039】

本発明に記載の薬学的に許容される塩は、陰イオンと式Ｉの化合物における正の電荷を持つ基からなる塩でもよい。適切な陰イオンは塩素イオン、臭素イオン、ヨウ素イオン、硫酸イオン、硝酸イオン、リン酸イオン、クエン酸イオン、メタンスルホン酸イオン、トリフルオロ酢酸イオン、酢酸イオン、リンゴ酸イオン、トルエンスルホン酸イオン、酒石酸イオン、フマル酸イオン、グルタミン酸イオン、グロクロン酸イオン、乳酸イオン、グルタル酸イオンまたはマレイン酸イオンである。同じように、陽イオンと式Ｉの化合物における負の電荷を持つ基からなる塩でもよい。適切な陽イオンはナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオンおよびアンモニウムイオン、たとえば、テトラメチルアンモニウムイオンを含む。

【0040】

以下、具体的な実施例によって、さらに本発明を説明する。これらの実施例は本発明を説明するために用いられるものだけで、本発明の範囲の制限にはならないと理解されるものである。下記実施例で具体的な条件が示されていない実験方法は、通常、たとえば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、「モレキュラー・クローニング：研究室マニュアル」（ニューヨーク、コールド・スプリング・ハーバー研究所出版社、１９８９） に記載の条件などの通常の条件、あるいはメーカーのお薦めの条件に従う。特に説明しない限り、百分率および部は重量百分率および重量部である。

【0041】

別途に定義しない限り、本文に用いられるすべての専門用語と科学用語は、当業者に熟知される意味と同様である。また、記載の内容と類似あるいは同等の方法および材料は、いずれも本発明の方法に用いることができる。ここで記載の好ましい実施方法及び材料は例示のためだけである。

【0042】

実施例１：化合物の合成および特徴付け
化合物Ａ４の合成

【化20】

【0043】

１．化合物５－ヘキシン－１－オール（９ ｇ， ９１ ｍｍｏｌ）およびｐ－トルエンスルホン酸ピリジニウム（２５．１ ｇ， １００ ｍｍｏｌ）を１００ ｍＬのＤＣＭに溶解させ、テトラヒドロピラン（１２．５ ｍＬ， １２６ ｍｍｏｌ）を入れ、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。ＤＣＭの大半を除去し、約３０ ｍＬ残し、約１００ ｍＬのエチルエーテルを入れて０．５ ｈ撹拌し、ろ過によって固体を除去し、固体にエチルエーテルを入れて１回洗浄し、ろ液を濃縮し、カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ（体積比）＝５０／１で、産物Ｂ１の油状物を１８ｇ得たが、収率が＞１００％であった。

【0044】

２．化合物５－ブロモ－１－ペンタノール（１５．１ ｇ， ９１ ｍｍｏｌ）およびｐ－トルエンスルホン酸ピリジニウム（２５．１ ｇ， １００ ｍｍｏｌ）を１００ ｍＬのＤＣＭに溶解させ、テトラヒドロピラン（１２．５ ｍＬ， １２６ ｍｍｏｌ）を入れ、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。ＤＣＭの大半を除去し、約３０ ｍＬ残し、約１００ ｍＬのエチルエーテルを入れて０．５ ｈ撹拌し、ろ過によって固体を除去し、固体にエチルエーテルを入れて１回洗浄し、ろ液を濃縮し、カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ（体積比）＝５０／１で、化合物Ｂ２を１８ ｇ得たが、収率が７９％であった。

【0045】

３．化合物Ｂ２（５．４ ｇ， ３０ ｍｍｏｌ）を４０ ｍＬの無水ＴＨＦに溶解させ、－４０℃に冷却し、リチウム－ｎ－ブトキシド（１９ ｍＬ， ３０．４ ｍｍｏｌ）を滴下し（約０．５ ｈで滴下完了）、さらに１０ ｍＬのＨＭＰＡを入れ、同温度で１ ｈ撹拌した後、化合物Ｂ２（７．７８ ｇ， ３１ ｍｍｏｌ）の１０ ｍＬ ＴＨＦ溶液を入れた。同温度で１ ｈ反応させた後、ゆっくり室温に上昇させて一晩撹拌した。飽和塩化アンモニウム溶液を入れて反応をクエンチングし、層分離し、水相をさらに酢酸エチルで１回抽出し、有機相を合併し、水および飽和食塩水を入れて洗浄した。乾燥して濃縮し、カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ（体積比）＝２０／１→１０／１→５／１で、産物Ｂ３を８．５ ｇ得たが、収率が８０％であった。

【0046】

４．化合物Ｂ３（３ ｇ， ８．５ ｍｍｏｌ）を１００ ｍＬのメタノールおよび１０ ｍＬに溶解させ、ｐ－トルエンスルホン酸（３００ ｍｇ）を入れ、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。濃縮してメタノールの大半を除去し、水を入れて希釈し、エチルエーテルで２回抽出し、有機相を合併し、水および飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮し、カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ（体積比）＝２／１→１／１→１／２で、産物Ｂ４を１．１ ｇ得たが、収率が７０％であった。

【0047】

５．化合物Ｂ４（１．１ ｇ， ５．９ ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（５．９５ ｇ， １７．９ ｍｍｏｌ）を３０ ｍＬの無水ＤＣＭに溶解させ、０℃に冷却し、トリフェニルホスフィン（４．７ ｇ， １７．９ ｍｍｏｌ）の１０ ｍＬのＤＣＭ溶液を滴下し、室温で１ ｈ撹拌した後、完全に反応させた。約１５ ｍＬまで濃縮し、５０ ｍＬのエチルエーテルを入れて０．５ ｈ撹拌し、ろ過によって固体を除去し、ろ液を濃縮し、カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ＝３０／１で、臭化物Ｂ５を１．８４ ｇ得たが、収率が１００％であった。

【0048】

６．化合物Ｂ５（１．８４ ｇ， ５．９ ｍｍｏｌ）およびイソ酪酸エチル（２．７３ ｇ， ２３．６ ｍｍｏｌ）を５０ ｍＬの無水ＴＨＦに溶解させ、０℃に冷却し、ＬＤＡ（１５．７ ｍＬ， ２３．６ ｍｍｏｌ）を滴下し（約０．５ ｈで滴下完了）、同温度で１ ｈ維持した後、室温に昇温させて一晩撹拌した。ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。飽和塩化アンモニウム溶液を入れて反応をクエンチングし、層分離し、ＥＡを入れて水相を２回抽出し、有機相を合併し、水、飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮した。カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ（体積比）＝５０／１→２０／１で、産物Ｂ６を１．８ ｇ得たが、収率が８０％であった。

【0049】

７．１大気圧のＨ_２において、酢酸ニッケル（７４９ ｍｇ， ３ ｍｍｏｌ）を２０ ｍＬの無水エタノールに懸濁させ、迅速に水素化ホウ素ナトリウム（１１４ ｍｇ， ３ ｍｍｏｌ）を入れ、水素ガスで再び２回置換し、溶液が黒くなった。室温で１５分撹拌した後、エチレンジアミン（０．４５ ｍＬ， ６ ｍｍｏｌ）を入れた後、化合物Ｂ６（１．８ ｇ， ４．７ ｍｍｏｌ）の１０ ｍＬの無水エタノール溶液を入れた。室温で２ ｈ撹拌した後、ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。５０ ｍＬのエチルエーテルを入れて希釈し、珪藻土でろ過し、ろ液を濃縮し、カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ（体積比）＝５０／１で、産物Ｂ７を１．７ ｇ得たが、収率が９５％であった。

【0050】

８．化合物Ｂ７（１．７ ｇ， ４．４５ ｍｍｏｌ）を５０ ｍＬのエタノールに溶解させ、ＫＯＨ（２ ｇ， ３５ ｍｍｏｌ）の１０ ｍＬ水溶液を入れ、加熱して６ ｈ還流させ、ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。冷却後、回転蒸発によってエタノールの大半を除去し、水（４０ ｍＬ）を入れて希釈し、エチルエーテルを入れて２回抽出して不純物を除去した。水層に２Ｎ ＮＣｌを入れて酸性に調整し、ＤＣＭを入れて４回抽出し、有機相を合併し、水および飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮した。カラムにかけ、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（体積比）＝１００／１で、Ａ４を１．１ ｇ得た。

【0051】

Ａ４ ^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ５．３１－５．３２（ｍ， ２Ｈ）， １．９６－１．９８ （ｍ， ４Ｈ）， １．４０－１．４４（ｍ， ４Ｈ）， １．２２－１．３０ （ｍ， ４Ｈ）， １．１８－１．２２ （ｍ， ６Ｈ）， １．０６ （ｓ， １２Ｈ）．

【0052】

異なる基質に替え、Ａ４と類似する合成スキームにより、以下の化合物を得た。
Ａ２ ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ３Ｃｌ） δ５．３１－５．３２（ｍ， ２Ｈ）， １．９６－１．９８ （ｍ， ４Ｈ）， １．４０－１．４４（ｍ， ４Ｈ）， １．１８－１．２２ （ｍ， ８Ｈ）， １．０６ （ｓ， １２Ｈ）

【0053】

Ａ６ ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ３Ｃｌ） δ５．３０－５．３２（ｍ， ２Ｈ）， １．９６－１．９８ （ｍ， ４Ｈ）， １．４０－１．４５（ｍ， ４Ｈ）， １．１８－１．２２ （ｍ， １２Ｈ）， １．０６ （ｓ， １２Ｈ）

【0054】

Ａ８ ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ５．４０ － ５．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０５ － １．９３ （ｍ， ４Ｈ）， １．５７ － １．４８ （ｍ， ４Ｈ）， １．３９ － １．２２ （ｍ， １４Ｈ）， １．１９ （ｓ， ６Ｈ）， １．１８ （ｓ， ６Ｈ）．

【0055】

Ａ１０ ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤ３Ｃｌ） δ５．３０－５．３２（ｍ， ２Ｈ）， １．９８－２．０２（ｍ， ４Ｈ）， １．４８－１．５３（ｍ， ４Ｈ）， １．１８－１．２２ （ｍ， １６Ｈ）， １．０６ （ｓ， １２Ｈ）

【0056】

化合物Ａ３の合成

【化21】

【0057】

１．窒素ガスの保護下において、３５０ ｍｇの水素化アルミニウムリチウム（９．１ ｍｍｏｌ）を１０ ｍＬのジエチレングリコールジメチルエーテルに溶解させ、４１０ ｍｇのＢ２（１．１ ｍｍｏｌ）を２ ｍＬのジエチレングリコールジメチルエーテルに溶解させ、１４０℃で１８時間反応させ、ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングし、３０ ｍＬのエチルエーテルを入れて希釈し、氷水浴で冷却する条件において、泡が出なくなるまで硫酸ナトリウム十水和物を分けて入れ、珪藻土でろ過して固体を除去し、無水エチルエーテルで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、ＰＥ：ＥＡ＝２０：１のカラムにかけ、産物Ｂ８を２５０ ｍｇを得たが、無色の液体で、収率が６２％であった。

【0058】

２．化合物Ｂ８（２５０ ｍｇ、 ０．７１ ｍｍｏｌ）を１０ ｍＬのメタノールおよび１１ ｍＬに溶解させ、ｐ－トルエンスルホン酸（２５ ｍｇ）を入れ、室温で一晩撹拌した。ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。濃縮してメタノールの大半を除去し、水を入れて希釈し、エチルエーテルで２回抽出し、有機相を合併し、水および飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮し、カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ（体積比）＝４／１で、産物Ｂ９を１００ ｇ得たが、収率が７５％であった。

【0059】

３．化合物Ｂ９（１００ ｍｇ、 ０．５３ ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（３６０ ｍｇ、 １．１ ｍｍｏｌ）を１０ ｍＬの無水ＤＣＭに溶解させ、０℃に冷却し、トリフェニルホスフィン（２５６ ｇ、 ０．９８ ｍｍｏｌ）の２ ｍＬのＤＣＭ溶液を滴下し、室温で１ ｈ撹拌した後、完全に反応させた。濃縮してカラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ（体積比）＝２０／１で、臭化物Ｂ１０を１４２ ｍｇ得たが、収率が８７％であった。

【0060】

４．化合物Ｂ１０（１４２ ｍｇ、 ０．４６ ｍｍｏｌ）およびイソ酪酸エチル（３２０ ｍｇ、 ２．７６ ｍｍｏｌ）を１０ ｍＬの無水ＴＨＦに溶解させ、０℃に冷却し、ＬＤＡ（１．８４ ｍＬ、２．７６ ｍｍｏｌ）を滴下し（約０．５ ｈで滴下完了）、同温度で１ ｈ維持した後、室温に昇温させて一晩撹拌した。ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。飽和塩化アンモニウム溶液を入れて反応をクエンチングし、層分離し、ＥＡを入れて水相を２回抽出し、有機相を合併し、水、飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮した。カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ（体積比）＝５０／１で、産物Ｂ１１を１４０ ｍｇ得たが、収率が８０％であった。

【0061】

５．化合物Ｂ１１（１０７ ｍｇ、 ０．２８ ｍｍｏｌ）を１０ ｍＬのエタノールに溶解させ、ＫＯＨ（２００ ｍｇ， ３．５ ｍｍｏｌ）の２ ｍＬ水溶液を入れ、加熱して６ ｈ還流させ、ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。冷却後、回転蒸発によってエタノールの大半を除去し、水（１０ ｍＬ）を入れて希釈し、エチルエーテルを入れて２回抽出して不純物を除去した。水層に２Ｎ ＮＣｌを入れて酸性に調整し、ＤＣＭを入れて４回抽出し、有機相を合併し、水および飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮した。カラムにかけ、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（体積比）＝１００／１で、化合物Ａ３を７０ ｍｇ得た。

【0062】

Ａ３ ^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ） δ５．３５－５．３６（ｍ， ２Ｈ）， １．９２－１．９４ （ｍ， ４Ｈ）， １．４０－１．４３ （ｍ， ４Ｈ）， １．２７－１．２９ （ｍ， ４Ｈ）， １．１７－１．１９ （ｍ， ６Ｈ），１．１８ ｐｐｍ （ｓ， １２Ｈ）．

【0063】

異なる基質に替え、Ａ３と類似する合成スキームにより、以下の化合物を得た。
Ａ１ ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ５．３７ － ５．２３ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０７ － １．９０ （ｍ， ４Ｈ）， １．６０ － １．４４ （ｍ， ４Ｈ）， １．３４ － １．２１ （ｍ， ８Ｈ）， １．１６ （ｓ， １２Ｈ）．

【0064】

Ａ５ ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ５．４１ － ５．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０９ － １．８７ （ｍ， ４Ｈ）， １．６０ － １．４６ （ｍ， ４Ｈ）， １．４１ － １．３２ （ｍ， ４Ｈ）， １．３１ － １．２３ （ｍ， ８Ｈ）， １．２２ － １．０７ （ｓ， １２Ｈ）．

【0065】

Ａ７ ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ５．４０ － ５．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０６ － １．８８ （ｍ， ４Ｈ）， １．５７ － １．４８ （ｍ， ４Ｈ）， １．４０ － １．２０ （ｍ， １４Ｈ）， １．１８ （ｓ， １２Ｈ）．

【0066】

Ａ９ ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ ５．３３ － ５．２４ （ｍ， ２Ｈ）， ２．００ － １．９２ （ｍ， ４Ｈ）， １．５４ － １．４７ （ｍ， ４Ｈ）， １．３１ － １．１７ （ｍ， ２８Ｈ）．

【0067】

化合物Ａ１１

【化22】

【0068】

１．ビス（ピナコラト）ジボロン（４８３ ｍｇ，１．９ ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）白金（７０ ｍｇ）を２５ ｍＬ丸底フラスコに置き、アルゴンガスで３回置換した後、Ｂ６（６６０ ｍｇ，１．７４ ｍｍｏｌ）の１０ ｍＬのＤＭＦ溶液に滴下し、８０℃で一晩反応させた。水を入れて希釈し、エチルエーテルで抽出し、有機相を合併し、水、飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮した。カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ（体積比）＝１０／１で、産物Ｂ１２を１ ｇ得たが、収率が９０％であった。

【0069】

２．化合物Ｂ１２（１５０ ｍｇ， ０．２３ ｍｍｏｌ）、ヨードメタン（０．１ ｍＬ）およびトリフェニルホスフィン（１０ ｍｇ）を１ ｍＬのジオキサンに溶解させ、アルゴンガスで３回置換した後、酢酸パラジウム（２０ ｍｇ）、ＫＯＨ（４０ ｍｇ）の０．２ ｍＬ水溶液を入れ、９０℃で１２ ｈ反応させ、水および酢酸エチルを入れて希釈し、酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合併し、水、飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮した。カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ＝５０／１で、産物Ｂ１３を３０ ｍｇ得たが、収率が３１％であった。

【0070】

３．化合物Ｂ１３（３０ ｍｇ、 ０．０７ ｍｍｏｌ）を５ ｍＬのエタノールに溶解させ、ＫＯＨ（５０ ｍｇ， ０．８９ ｍｍｏｌ）の１ ｍＬ水溶液を入れ、加熱して６ ｈ還流させ、ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。冷却後、回転蒸発によってエタノールの大半を除去し、水（４ ｍＬ）を入れて希釈し、エチルエーテルを入れて２回抽出して不純物を除去した。水層に２Ｎ ＮＣｌを入れて酸性に調整し、ＤＣＭを入れて４回抽出し、有機相を合併し、水および飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮した。カラムにかけ、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（体積比）＝１００／１で、Ａ１１を１５ ｍｇ得た。

【0071】

Ａ１１ ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ １．９４－１．９６ （ｍ， ４Ｈ）， １．５８（ｓ， ６Ｈ）， １．４８－１．５０ （ｍ， ４Ｈ）， １．２５－１．３３（ｍ， １２Ｈ）， １．１３ ｐｐｍ （ｓ， １２Ｈ）

【0072】

化合物Ａ１２の合成

【化23】

【0073】

１．窒素ガスの保護下において、ジエチル亜鉛試薬（１ ｍＬ， １ ｍｍｏｌ）を１ ｍＬのＤＣＭに入れ、－４０℃に冷却し、５ ｍｉｎ後、ジヨードメタン（０．５４ｇ，２ｍｍｏｌ）の０．５ ｍＬのＤＣＭ溶液を滴下し、－４０℃で１ ｈ反応させた後、トリクロロ酢酸（１６ ｍｇ，０．１ ｍｍｏｌ）およびＤＭＥ（４５ ｍｇ，０．５ ｍｍｏｌ）を入れ、添加完了後、－１５℃に昇温させて１ ｈ反応させ、Ｂ７（１９３ ｍｇ，０．５ ｍｍｏｌ）の０．５ ｍＬのＤＣＭ溶液を入れ、添加完了後、室温で一晩撹拌した。飽和塩化アンモニウム溶液を入れて反応をクエンチングし、酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合併し、水、飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮した。カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ（体積比）＝５０／１で、産物Ｂ１４を１２０ ｍｇ得たが、収率が６０％であった。

【0074】

２．化合物Ｂ１４（１００ ｍｇ、 ０．２５ ｍｍｏｌ）を５ ｍＬのエタノールに溶解させ、ＫＯＨ（１０ ｍｇ， ０．１８ ｍｍｏｌ）の１ ｍＬ水溶液を入れ、加熱して６ ｈ還流させ、ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。冷却後、回転蒸発によってエタノールの大半を除去し、水（４ ｍＬ）を入れて希釈し、エチルエーテルを入れて２回抽出して不純物を除去した。水層に２Ｎ ＮＣｌを入れて酸性に調整し、ＤＣＭを入れて４回抽出し、有機相を合併し、水および飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮した。カラムにかけ、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（体積比）＝１００／１で、Ａ１２を６５ ｍｇ得た。

【0075】

Ａ１２ ^１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ １．１．４５－１．５２ （ｍ， ４Ｈ）， １．２１－１．４３（ｍ， １６Ｈ）， １．１８ （ｓ， １２Ｈ）， ０．６５－０．７０ｐｐｍ （ｍ， ２Ｈ）

【0076】

化合物Ａ１３の合成

【化24】

【0077】

１．化合物Ａ３（３０ ｍｇ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（５．０ ｍＬ）に溶解させ、１，１’－カルボニルジイミダゾール（５０ ｍｇ， ３０ ｍｍｏｌ）を入れて室温で２ ｈ撹拌した。５．０ ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２を入れて希釈し、水（毎回１０ ｍＬ、２回）で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、そのまま次の工程の反応を行った。

【0078】

２．アルゴンガスの保護下において、上記イミダゾール中間体を乾燥したＴＨＦ （８．５ ｍＬ）に溶解させ、補酵素Ａ三リチウム塩（２０ ｍｇ， ０．０２６ ｍｍｏｌ）のＮａＨＣＯ_３ （０．１ Ｍ， ３ ｍＬ）溶液を滴下した。反応液を室温で２４ ｈ撹拌した。反応液に酢酸エチルを入れて抽出した（２ × ３ ｍＬ）。水層に１ Ｍ ＨＣｌを入れてｐＨ ２に調整した。水層（～１ ｍＬ）をそのままカラムにかけ （ＳＰＥ、Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＦ Ｂｏｎｄ Ｅｌｕｒ Ｃ１８カラム、サイズ： ５ ｇｍ／２０ ｍＬ、ＵＳＡ）、溶離液の濃度が順に０％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、および１００％のＭｅＣＮであった（毎回１０ ｍＬ）。Ａ１３を得たが、構造は^１ Ｈ ＮＭＲスペクトル ＬＲ－ＥＳＩ－ＭＳによって確認した。

【0079】

化合物Ａ１３： Ｚｏｒｂａｘ－ＳＢ Ｃ１８カラムにおける溶媒システム、４．６×５０ ｍｍ， ３．５ μ： 勾配， Ａ：１０ｍＭ ＮＨ_４ＣＯＯＨ ｉｎ Ｈ_２Ｏ， Ｂ： ＣＨ_３ＯＨ， ０ ｍｉｎ： ５０％ Ａ と ５０％ Ｂ； ０－３０ ｍｉｎ： Ａ ５０％→０％， Ｂ ５０％→１００％， ０．５ｍＬ／ｍｉｎ． ＨＰＬＣ分析： ｔｒ ＝ １４．７７７ ｍｉｎ と １６．０７４ ｍｉｎ； 白色固体 （１３ ｍｇ， ４２％）； ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， Ｄ_２Ｏ） δ ８．６５ （ｓ， １Ｈ） ， ８．５８（ｓ， １Ｈ）， ８．３０（ｓ， １Ｈ）， ６．０１（ｄ， Ｊ ＝ ５．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４５－５．４２（ｍ， ２Ｈ）， ４．７５－４．７４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４８ （ｂｓ， １Ｈ）， ４．２８（ｂｓ， ２Ｈ）， ３．９８ （ｓ， １Ｈ）， ３．８２－３．８０ （ｍ， １Ｈ）， ３．５６－３．５２（ｍ， １Ｈ）， ３．４０－３．３８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．２０－３．１８（ｍ， ２Ｈ）， ２．２５－２．２２（ｍ， ２Ｈ）， ２．３３－２．３０ （ｍ， ２Ｈ）， １．７８－１．７４（ｍ，４Ｈ）， １．４２－１．３５（ｍ，４Ｈ）， １．２９－１．２０ （ｍ， １０Ｈ）， １．０６ （ｓ， １２Ｈ）， ０．８０ （ｓ， ３Ｈ）， ０．６５ （ｓ， ３Ｈ）ｐｐｍ； ＬＲ－ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ、Ｃ_４０Ｈ_６８Ｎ_７Ｏ_１９Ｐ_３Ｓ ［Ｍ-Ｈ］^- 計算値： １０７４．３， 実測値：１０７４．３。

【0080】

化合物Ａ１４の合成

【化25】

Ａ４を基質とし、化合物Ａ１３の合成方法を参照し、Ａ１４を得た：^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， Ｄ_２Ｏ） δ ８．６５ （ｓ， １Ｈ） ， ８．５７（ｓ， １Ｈ）， ８．３０（ｓ， １Ｈ）， ６．０２（ｄ， Ｊ ＝ ５．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４７－５．４２（ｍ， ２Ｈ）， ４．７５－４．７３ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４９ （ｂｓ， １Ｈ）， ４．２７（ｂｓ， ２Ｈ）， ３．９８ （ｓ， １Ｈ）， ３．８２－３．８１ （ｍ， １Ｈ）， ３．５６－３．５２（ｍ， １Ｈ）， ３．４０－３．３８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．２０－３．１８（ｍ， ２Ｈ）， ２．２５－２．２０（ｍ， ２Ｈ）， ２．３３－２．２９ （ｍ， ２Ｈ）， １．７８－１．７５（ｍ，４Ｈ）， １．４２－１．３５（ｍ，４Ｈ）， １．２９－１．１９ （ｍ， １０Ｈ）， １．０６ （ｓ， １２Ｈ）， ０．８０ （ｓ， ３Ｈ）， ０．６５ （ｓ， ３Ｈ）ｐｐｍ； ＬＲ－ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ、Ｃ_４０Ｈ_６８Ｎ_７Ｏ_１９Ｐ_３Ｓ ［Ｍ-Ｈ］^- 計算値： １０７４．３， 実測値：１０７４．３。

【0081】

化合物Ａ１５の合成

【化26】

【0082】

１．化合物Ａ３（３２６ ｍｇ， １ ｍｍｏｌ）および（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－ブロモ－６－（メトキシカルボニル）－テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４，５－トリイルトリアセテート（４７６ ｍｇ， １．２０ ｍｍｏｌ）を１０ ｍＬのトルエンに溶解させ、０℃に冷却し、酸化銀（９２５ ｍｇ， ４ ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．３５ ｍＬ， ４ ｍｍｏｌ）を入れ、室温で一晩撹拌した。珪藻土でろ過し、トルエンで洗浄し、濃縮後、カラムにかけ、ジクロロメタン／メチル－ｔ－ブチルエーテル（体積比）＝１０／１で、Ｂ１５を３５０ ｍｇ得た。

【0083】

２．Ｂ１５（３５０ ｍｇ， ０．５４ ｍｍｏｌ）を５ ｍＬのメタノールに溶解させ、０℃に冷却し、ジイソプロピルエチルアミン（０．３ ｍＬ）を入れ、室温で２日撹拌し、濃縮後、カラムにかけ、石油エーテル／酢酸エチル／イソプロパノール（体積比）＝５０／５０／６で、化合物Ｂ１６を１００ ｍｇ得た。

【0084】

３．Ｂ１６（６０ ｍｇ， ０．１７ ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（０．５ ｍＬ）に溶解させ、ＰＨ＝７のリン酸緩衝溶液（５ ｍＬ）を入れ、ＣＡＬ－Ｂ（１００ ｍｇ）を入れ、室温で３時間撹拌し、少量のイソプロパノールを除去し、ろ過して水洗し、酢酸エチルで２回抽出し、有機相を合併し、飽和食塩水で洗浄した後、乾燥して濃縮し、逆相カラムにかけ、メタノール／水（体積比）＝９０／１０で、Ａ１５を１５ ｍｇ得た。

【0085】

化合物Ａ１５ ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ３ＯＤ） δ ５．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４０ － ５．３５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８０ （ｄ， Ｊ ＝ ９．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５７ － ３．３４ （ｍ， ３Ｈ）， ２．０１ － １．９４ （ｍ， ４Ｈ）， １．６０ － １．４７ （ｍ， ４Ｈ）， １．３９ － １．２３ （ｍ， １０Ｈ）， １．２２ － １．１７ （ｍ， ６Ｈ）， １．１７ － １．１１ （ｍ， ６Ｈ） ｐｐｍ． ＬＲ－ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ、Ｃ_２５Ｈ_４２Ｏ_１０ ［Ｍ-Ｈ］^- 計算値： ５０１．２， 実測値：５０１．２。

【0086】

化合物Ａ１６の合成

【化27】

【0087】

１．ＮａＨ（６７２ ｍｇ， １６．８ ｍｍｏｌ）を１０ ｍＬのＴＨＦに懸濁させ、０℃に冷却し、メチルマロン酸ジメチル（２．３５ ｇ，１６ ｍｍｏｌ）を滴下し（約０．５ ｈで滴下完了）、室温に昇温させて０．５ ｈ撹拌した後、さらにゆっくり化合物Ｂ１０（７３０ ｍｇ，２．３ ｍｍｏｌ）／１０ ｍＬＴＨＦ溶液を滴下した。滴下完了後、６０℃で７ ｈ撹拌し、ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。飽和塩化アンモニウム溶液を入れて反応をクエンチングし、層分離し、ＥＡを入れて水相を２回抽出し、有機相を合併し、水、飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮した。カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ（体積比）＝５０／１で、産物Ｂ１７を５１０ ｍｇ得たが、収率が５０％であった。

【0088】

２．化合物Ｂ１７（３００ ｍｇ，０．６８ ｍｍｏｌ）を５ ｍＬのＤＭＳＯに溶解させ、ＬｉＣｌ（（２８６ ｍｇ，６．８ ｍｍｏｌ）、Ｈ_２Ｏ（０．１２ ｍＬ）を入れ、マイクロ波で１８０℃に加熱して５分反応させ、ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。冷却後、水を入れて希釈し、水相にＥＡを入れて４回抽出し、有機相を合併し、水、飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮した。カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ（体積比）＝５０／１で、産物Ｂ１８を１６６ ｍｇ得たが、収率が７５％であった。

【0089】

３．化合物Ｂ１７（１４０ ｍｇ、 ０．４３ ｍｍｏｌ）を５ ｍＬの無水ＴＨＦに溶解させ、－７８℃に冷却し、ＬＤＡ（１．８４ ｍＬ、２．７６ ｍｍｏｌ）、ＨＭＰＡ（０．４ ｍＬ）を滴下し、同温度で１ ｈ維持した後、ＣＤ_３Ｉ（０．１６ ｍＬ， ２．５８ ｍｍｏｌ）を滴下し、室温に昇温させて一晩撹拌した。ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。飽和塩化アンモニウム溶液を入れて反応をクエンチングし、層分離し、ＥＡを入れて水相を２回抽出し、有機相を合併し、水、飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮した。カラムにかけ、ＰＥ／ＥＡ（体積比）＝５０／１で、産物Ｂ１９を７７ ｍｇ得たが、収率が４９％であった。

【0090】

４．化合物Ｂ１９（７７ ｍｇ、 ０．２１ ｍｍｏｌ）をエタノール（２ ｍＬ）に溶解させ、ＮａＯＨ（１２０ ｍｇ， ３ ｍｍｏｌ）の２ ｍＬ水溶液を入れ、加熱して６ ｈ還流させ、ＴＬＣによって完全に反応するのをモニタリングした。冷却後、回転蒸発によってエタノールの大半を除去し、水（１０ ｍＬ）を入れて希釈し、エチルエーテルを入れて２回抽出して不純物を除去した。水層に２Ｎ ＮＣｌを入れて酸性に調整し、ＤＣＭを入れて４回抽出し、有機相を合併し、水および飽和食塩水を入れて洗浄し、乾燥して濃縮した。カラムにかけ、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（体積比）＝５０／１で、化合物Ａ１６を５０ ｍｇ得た。

【0091】

Ａ１６ ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤ_３Ｃｌ） δ５．３３－５．３４（ｍ， ２Ｈ）， １．９６－１．９９ （ｍ， ４Ｈ）， １．５１－１．５５ （ｍ， ４Ｈ）， １．３５－１．４２ （ｍ， ４Ｈ）， １．２２－１．２８ （ｍ， ６Ｈ），１．１８ （ｓ， ３Ｈ） ， １．１７ ｐｐｍ （ｓ， ３Ｈ）．

【0092】

化合物Ａ１６を原料とし、化合物Ａ１５と類似する合成スキームにより、以下の化合物Ａ１７を得た。

【化28】

【0093】

化合物Ａ１７ ^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤ_３ＯＤ） δ ５．４８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３７ － ５．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８２ （ｄ， Ｊ ＝ ９．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５８ － ３．５５ （ｔ， １Ｈ）， ３．４８ － ３．４４ （ｔ， １Ｈ）， ３．４２－３．３８（ｍ， １Ｈ）， ２．０１ － １．９４ （ｍ， ４Ｈ）， １．６０ － １．４４ （ｍ， ４Ｈ）， １．３９ － １．２１ （ｍ， １０Ｈ）， １．１９ （ｓ， ３Ｈ）， １．１５ （ｓ， ３Ｈ） ｐｐｍ． ＬＲ－ＥＳＩ－ＭＳ ｍ／ｚ、Ｃ_２５Ｈ_３６Ｄ_６Ｏ_１０ ［Ｍ-Ｈ］^-計算値： ５０７．２， 実測値：５０７．２。

【0094】

実施例２：生物学的体外活性評価
（１）化合物のＡＣＬＹクエン酸シンターゼを抑制する活性
ＡＣＬＹによるクエン酸分解の触媒の過程において、クエン酸の活性化に１分子のＡＴＰが消耗される。当該反応原理に基づき、発明者はＡＤＰ－Ｇｌｏ検出キットを利用し、ＡＴＰからＡＤＰに転換した量を検出してＡＣＬＹの触媒活性を反映させた。活性検出系の構築、反応条件の最適化を経た後、発明者は得られた新規なＡＣＬＹ小分子阻害剤に対してＡＣＬＹの抑制活性評価を行った。

【0095】

活性検出プロトコール：ヒト由来ＡＣＬＹタンパク質は北京Ｓｉｎｏ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社（カタログ番号：１１７６９－Ｈ０７Ｂ）から、ＡＤＰ－Ｇｌｏ検出キットはＰｒｏｍｅｇａ（カタログ番号：Ｖ９１０２）から購入された。最終の反応系は表１を参照し、反応系の総体積が５ μＬで、１ μＬの２％のＤＭＳＯ、２ μＬの基質混合液、２ μＬの酵素（最終濃度が２５ ｎＭ）の３部分を混合してなるものである。さらに１ μＬの異なる濃度の化合物を入れてインキュベートした。反応条件：３０ ｍｉｎ、３７ ℃。さらにＡＤＰ－ＧｌｏキットにおけるＡＤＰ Ｒｅａｇｅｎｔを２．５ μＬ入れ、均一に混合した、２ ｈ反応させ、ＡＤＰ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎを５ μＬ入れ、遠心し、均一に混合した後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチラベルプレートリーダーによって全波長の数値を読み取った。

【表1】

【0096】

試験結果：まず、酵素の３０ ｍｉｎの反応時間内における蛍光強度の累計量ＲＦＵ／ｍｉｎを計算し、それを酵素の初期速度とし、さらに化合物を添加した後の酵素の速度（ｖｓａｍｐｌｅ）と化合物未添加の酵素の速度（ｖＤＭＳＯ）の比を計算し、サンプルの各濃度群の活性百分率（Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒａｔｅ ％）とし、式は％活性百分率＝（Ｖ（ｓａｍｐｌｅ））／（ｖ（ＤＭＳＯ））×１００％である。濃度の対数値を活性百分率に対してグラフを作り、さらに非線形回帰を使用して回帰曲線を算出し、ソフトＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．０の数式ｌｏｇ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ） ｖｓ． ｒｅｓｐｏｎｓｅ －－ Ｖａｒｉａｂｌｅ ｓｌｏｐｅで曲線フィッティングを行い、そしてＩＣ_５０値を算出したが、結果は下記表に示す。

【表2】

【0097】

【化29】

以上は陽性対照のＥＴＣ－１００２－ＣｏＡの構造式である。

【0098】

（２）化合物の初代肝細胞の脂質の一からの合成に対する抑制活性の評価
ＡＣＬＹはミトコンドリアからのクエン酸をアセチル補酵素Ａに分解させる役割を担い、後者は細胞の脂質合成の主要原料で、ＡＣＬＹの活性を抑制すると、顕著に脂質（トリグリセリドおよびコレステロール）の一からの合成を降下させることができる。さらに被験物のＡＣＬＹに対する抑制による機能の変化を評価するため、発明者はマウス初代肝細胞を分離して［１，２－^１４Ｃ］－酢酸ナトリウムを基質として追跡することによって脂質の一からの合成の能力の評価を行い、同時に化合物ＥＴＣ－１００２を陽性対照とした。

【0099】

試験プロトコール：
初代肝細胞の分離および付着：カルシウムフリー灌流液でマウスの肝臓を灌流した後、コラゲナーゼでマウスの肝臓を消化し、そして密度勾配遠心でマウス初代肝細胞を得、３×１０^５／ｍＬの密度で６ウェルプレートに接種し（プレートに接種する前に０．２％ゼラチンを敷いておいた）、プレートに接種した後、細胞を６ ｈ付着させ、無血清ＬＧ－ＤＭＥＭ（２×二重抗体含有）に置換して一晩飢餓させた。

【0100】

同位体追跡：２日目に１０ ｎＭ インスリン含有無血清ＬＧ－ＤＭＥＭ、および相応する濃度の化合物（１９５０ μＬ、各群に４つの重複ウェル）に置換した。各ウェルに０．１ μＣｉの［１，２－^１４Ｃ］－酢酸塩無血清培地を入れ、インキュベーターに置いて４時間インキュベートした。

【0101】

脂質の鹸化：各ウェルに１．６ ｍＬの冷ＰＢＳを入れて３回洗浄し、プレートを乾燥して各ウェルに６００ μＬの０．５ Ｍ ＫＯＨを入れて分解させ、分解時間が１ ｈであった。４８０ μＬ吸い取って予め４００ μＬ ２０％ ＫＯＨ（メタノールを溶媒とする）を入れておいたガラス試験管に入れ、振とうして均一に混合した後、９５度の水浴において３ ｈ鹸化させた。過剰な分解液をタンパク質濃度の測定に使用した。各管に４００ μＬの石油エーテルを入れ、ピペットで５－６回吹いた後、２５００ ｒｐｍで５ ｍｉｎ遠心し、３５０ μＬの上清液をＥＰチューブに吸い取り、さらに４００ μＬの石油エーテルを入れて繰り返して２回抽出した（計３回）。上清液を全部移した後、各管に２００ μＬの水および４００ μＬの５Ｎ 硫酸を入れて酸型化し、振とうして均一に混合した。各管に４００ μＬの石油エーテルを入れ、ピペットで５－６回吹いた後、２５００ ｒｐｍで５ ｍｉｎ遠心し、３５０ μＬの上清液をＥＰチューブに吸い取り、さらに４００ μＬの石油エーテルを入れて繰り返して２回抽出した（計３回）。ドラフトチャンバーに置き、一晩石油エーテルを揮発させた。

【0102】

同位体の配合および定量：各管に１７００ μＬのシンチレーション液を入れ、数値を読み取った。

【0103】

データの処理および分析：まず、未処理群のマウス初代肝細胞のコントロール群の４時間内における遊離脂肪酸およびコレステロールの同位体配合量（Ｒコントロール、単位：ＣＣＰＭ／ｍｇタンパク質）を計算し、それを基礎合成量とした。その後、サンプルの各濃度群の脂質合成抑制百分率を計算した。
一部の化合物（１２．５ μＭ）で初代肝細胞を処理した後、トリグリセリドおよびコレステロールの一からの合成に対する抑制率は下記表に示す。

【表3】

【0104】

（３）化合物Ａ３の脂質合成を抑制する活性のＡＣＬＹに対する依存性
試験プロトコール：さらに一連の化合物の脂質の一からの合成を抑制する作用のＡＣＬＹに対する依存性を考察するため、発明者はＡＣＬＹノックアウトの初代肝細胞を使用してさらなる脂質の一からの合成の評価を行い、同時に化合物ＥＴＣ－１００２を陽性対照とした。具体的な試験プロトコールは前記のように、０．１ μＣｉ／ウェルの［^１４Ｃ］－クエン酸で追跡した。

【0105】

試験結果：ＷＴマウス初代肝細胞において、ＡＣＬＹ小分子阻害剤ＥＴＣ－１００２および化合物Ａ３はいずれも顕著に細胞の［^１４Ｃ］－クエン酸を基質とするトリグリセリド（図１におけるＡ）およびコレステロール（図１におけるＢ）の一からの合成を抑制することができた。しかし、ＡＣＬＹノックアウトの肝細胞において、上記２つの化合物のトリグリセリドおよびコレステロールの一からの合成を抑制する作用効果が顕著に減少したか、ひいては抑制作用がなくなった（図１）。

【0106】

実施例３：化合物Ａ３およびＡ４による高コレステロール血症を改善する薬物効果
（１）化合物Ａ３およびＡ４によるゴールデンハムスターの高脂高コレステロール血症に対する改善作用
投与プラン：ゴールデンハムスター高脂血症モデルは公認の高脂血症の薬物治療（薬効学評価）研究の理想的な動物モデルの一つである。初歩的に候補化合物の肝臓の脂質代謝の平衡に潜在的な調節作用があることを考察するため、高脂高コレステロールの飲食によって誘導されたゴールデンハムスター高脂血症モデルを利用して初歩的な薬効学評価を行った。具体的なプランは、雄のゴールデンハムスター５６匹で、高脂高コレステロール飼料（Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｄｉｅｔ、カタログ番号Ｃ１１９５３）で２週間モデルを構築し、８匹残してブランク対照群にした。その後、群分けして投与し（７群、ｎ＝８）、モデル対照群、陽性対照ＥＴＣ－１００２ ３０ ｍｇ／ｋｇ群、化合物Ａ３ １０ ｍｇ／ｋｇおよび３０ ｍｇ／ｋｇ群、化合物Ａ４ １０ ｍｇ／ｋｇおよび３０ ｍｇ／ｋｇ群、ブランク対照群であった。各群の化合物は生理食塩水で調製し（０．９％ ＮａＣｌ）、投与の頻度が１回／日で、投与周期が７日であった。

【0107】

指標の検出：投与期間において密接にゴールデンハムスターの体重および摂食の変化をモニタリングした。各群の化合物は７日投与し、それぞれ目縁から採血し（一晩飢餓、約１６時間）、遠心で血清を取り、低温冷凍して保存し、血清における総コレステロール、低密度リポタンパク質コレステロールの含有量を検出した。関連指標の相対量の計算方法は、相対量（１００％）＝投与群の含有量／モデル対照群の含有量×１００％である。

【0108】

試験結果：対照群と比較すると、化合物投与の１週間後、１）化合物Ａ３は、二つの投与量群のいずれでも顕著にゴールデンハムスターの血清における総コレステロールおよび低密度リポタンパク質コレステロールを降下させることができ、高投与量群では、降下の幅が陽性対照ＥＴＣ－１００２ ３０ ｍｇ／ｋｇ投与量群の効果に相当する；２）化合物Ａ４は、１０ ｍｇ／ｋｇ投与群では、血清における総コレステロールおよび低密度リポタンパク質コレステロールに顕著な変化がなく、３０ ｍｇ／ｋｇ投与群では、顕著に血清における総コレステロールおよび低密度リポタンパク質コレステロールの含有量を降下させることができた（図２）。また、研究では、化合物Ａ４は投与過程において体重が顕著な低下し、摂食が顕著に減少し、そして活動緩慢などの耐性のない現象が伴ったことが見出された。上記結果をまとめると、化合物Ａ３は高コレステロール血症の改善の有効性よび安全性が化合物Ａ４よりも良いことが示され、さらに、二重結合がトランス配置であることは高コレステロール血症の治療効果に重要であることが示唆された。

【0109】

（２）化合物Ａ３によるＡｐｏＥ^－／－マウスのアテローム性動脈硬化症に対する改善作用
投与プラン：高コレステロール血症はアテローム性動脈硬化症の発生の重要な誘因である。化合物Ａ３が高脂高コレステロール血症に対して顕著な改善があるという前提で、発明者は、さらに、化合物Ａ３が顕著にＡｐｏＥ^－／－マウスのアテローム性動脈硬化症の発生を緩和させることができることを見出した。具体的なプロトコールは、雄のＡｐｏＥ^－／－ マウス６０匹で、平均に６群（ｎ＝１０）に分け、中では、５群は高コレステロール飼料（Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｄｉｅｔ、カタログ番号Ｄ１２０７９Ｂ）で飼育してモデルを構築し、１群をブランク対照群として残し、同時に長期間の投与治療を行い、モデル対照群、陽性対照ＥＴＣ－１００２ ３０ ｍｇ／ｋｇ群、化合物Ａ３ １５ ｍｇ／ｋｇおよび３０ ｍｇ／ｋｇおよび６０ ｍｇ／ｋｇ群、ブランク対照群であった。各群の化合物は生理食塩水で調製し（０．９％ ＮａＣｌ）、投与の頻度が１回／日で、投与周期が２４週間であった。

【0110】

指標の検出：投与期間において密接にＡｐｏＥ^－／－ マウスの体重および摂食の変化をモニタリングした。各群の化合物は２４週間投与し、マウスの主動脈血管を剥離し、主動脈プラークのスダンＩＶ染色を行い、そしてＩｍａｇｅ－Ｐｒｏ Ｐｌｕｓソフトによってプラークの面積を統計した。

【0111】

試験結果：図３の結果から、対照群と比較すると、化合物を２４週間投与した後、化合物Ａ３の三つの投与量群はいずれも顕著にＡｐｏＥ^－／－マウスの主動脈のプラーク面積を減少させることができたことがわかり（右の図は左の図の統計図である）、化合物Ａ３は顕著に高コレステロール血症によって誘導されるアテローム性動脈硬化症の発生を改善する作用を有することが示された。

【0112】

実施例４：化合物Ａ３の飲食によって誘導される非アルコール性脂肪性肝炎に対する改善の薬効評価
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の発症機序の研究が多く、まとめると、「脂質の沈着が基礎で、炎症が核心で、線維化が病状の悪化または制御困難な要素である」。一方では、肝細胞ＡＣＬＹを抑制する活性は効率的に肝臓の脂質の一からの合成を減少させ、ＮＡＳＨ発生を駆動する要素を減少させることができる。他方では、ＡＣＬＹはヒストンの後成的修飾（アセチル化、スクシン化など）を仲介することで、免疫細胞の代謝のリプログラミング、炎症性刺激への応答およびＲＯＳの発生などにつながる。また、伊東細胞の脂質の一からの合成を抑制すると、効率的に伊東細胞（ＨＳＣ）の活性化を減少させることができる。ＮＡＳＨ発生の三大特徴（脂質沈着、炎症、線維化）の潜在的な関与に基づき、発明者は、さらに、化合物Ａ３のＮＡＳＨに対する改善の実行性を評価した。

【0113】

（１）化合物Ａ３の高脂高糖高コレステロール飲食によって誘導されるｏｂ／ｏｂマウスＮＡＳＨに対する改善作用
投与プラン：７－８週齢の雄のｏｂ／ｏｂマウス１６匹で、平均に２群（ｎ＝８）に分け、高脂高糖高コレステロール飼料（Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｄｉｅｔ、カタログ番号Ｄ０９１００３１０）で８週間飼育してモデルを構築し、もう１組の同じ由来の野生型マウスをブランク対照群として設けた。８週間モデルを構築した後、長期間の投与治療を行い、各群はそれぞれモデル対照群、化合物Ａ３ ３０ ｍｇ／ｋｇ群、ブランク対照群であった。各群の化合物は生理食塩水で調製し（０．９％ ＮａＣｌ）、投与の頻度が１回／日で、投与周期が１０週間であった。

【0114】

指標の検出：投与期間において密接にｏｂ／ｏｂマウスおよびブランク対照マウスの体重および摂食の変化をモニタリングした。各群の化合物は１０週間投与し、肝臓を摘出し、ＮＡＳＨの相応する指標の検出（ＨＥ染色、ピクロシリウスレッド染色、炎症シグナルの免疫組織化学など）を行った。

【0115】

試験結果：ｏｂ／ｏｂマウスは過剰な脂質沈着によって白くなって顆粒感が現れ、化合物Ａ３を投与した後、顕著に上記現象を逆転させることができた（図４におけるＡ）。さらに、発明者は肝臓に対して病理的分析行った：モデル対照群と比較すると、Ｈ＆Ｅ染色の研究では、化合物Ａ３投与群で肝臓脂肪変性およびバルーン化が顕著に減少した（脂肪肝、図４におけるＡ）。マクロファージのＣＤ６８染色の研究では、化合物Ａ３投与群で肝臓の炎症細胞浸潤が顕著に減少したことがわかった（炎症、図４におけるＡ、４おけるＢ）。ピクロシリウスレッド染色の研究では、化合物Ａ３投与群で肝臓のコラーゲン沈着の程度が顕著に減少した（線維化、図４におけるＡ、４におけるＣ）。以上の結果から、化合物Ａ３は顕著に飲食によって誘導されるｏｂ／ｏｂマウスＮＡＳＨを改善する薬理学的活性を有することがわかる。

【0116】

（２）化合物Ａ３の高脂高糖高コレステロール飲食によって誘導されるカニクイザルＮＡＳＨに対する改善作用
さらに、発明者は非ヒト霊長類動物モデルにおいてさらに化合物Ａ３の長期間投与によるカニクイザルの非アルコール性脂肪性肝炎に対する治療作用を評価した。
投与プラン：１８匹の雄の非アルコール性脂肪性肝炎のカニクイザルで、２群（ｎ＝８－１０）に分け、一方の群はモデル対照群で、もう一方の群は投与群であった。高脂高糖高コレステロール飲食で１４週間飼育すると同時に、投与治療を行い（２０ ｍｇ／ｋｇ）、投与の頻度が１回／日で、投与周期が１４週間であった。

【0117】

指標の検出：投与期間において密接にカニクイザルの体重および摂食の変化をモニタリングした。化合物を１４週間投与し、肝臓穿刺してＮＡＳＨの相応する指標の病理的分析・検出を行った。
試験結果：肝臓穿刺の結果から、化合物Ａ３の長期間投与は顕著にカニクイザルの肝臓の脂質沈着を減少させ、そして炎症および線維化の発生を減少させることができ、非アルコール性脂肪性肝疾患活動性スコア（ＮＡＳ）が投与後顕著に低下したことが示された（図５）。以上の結果から、化合物Ａ３は顕著にカニクイザルの非アルコール性脂肪性肝炎を改善する薬理学的活性を有することがわかる。

【0118】

実施例５：化合物Ａ３の経口投与の薬物動態学のパラメーターの考察
前期の研究では、化合物Ａ３がアテローム性動脈硬化症を改善する効果がＥＴＣ－１００２よりも優れたことが見出され、この部分の研究では、２種類の化合物の経口投与薬物暴露量および関連する薬物動態学のパラメーターを比較する。

【0119】

投与プラン：６匹の雄の正常ＩＣＲマウスで、２群（ｎ＝３）に分け、一方の群は陽性対照のＥＴＣ－１００２を、もう一方の群は被験物の化合物Ａ３を経口投与し、投与量がいずれも３０ ｍｇ／ｋｇであった。投与前後の異なる時点で目縁から採血し、血漿薬物濃度を検出した。

【0120】

試験結果：異なる時点における血漿薬物濃度を検出し、そして二つの化合物の薬物動態学のパラメーターを計算した（表４）。考察したところ、被験物の化合物Ａ３の血漿暴露量が顕著に陽性対照薬物のＥＴＣ－１００２よりも高かったことがわかった（Ｃ_ｍａｘ： １３．４ μｇ／ｍＬ ｖｓ ３．８１ μｇ／ｍＬ；ＡＵＣ_０－ｔ：６３．７ ｈ＊μｇ／ｍＬ ｖｓ １４．４ ｈ＊μｇ／ｍＬ，前者は化合物Ａ３である）。

【表4】

【0121】

上記試験結果から、本発明の化合物はＡＣＬＹを抑制する活性を有することがわかる。さらなる体内外薬理学的活性の評価では、代表的な化合物Ａ３は初代肝細胞において脂質の一からの合成を抑制し、ゴールデンハムスターおよびＡｐｏＥ^－／－マウスの高脂高コレステロール血症を改善し、顕著に高脂高糖高コレステロールの飲食によって誘導されるｏｂ／ｏｂマウスおよびカニクイザルのＮＡＳＨ症状を改善することができることが見出された。また、研究結果から、二重結合がトランスの配置の化合物の体内活性は二重結合がシスの配置の化合物よりも良いことが示された。そして、同等の経口投与量において化合物Ａ３はベンペド酸の血漿高暴露量よりも４倍以上高いことから、化合物Ａ３はより良い治療効果があることが示された。

【0122】

上記のように、本願の一連の化合物は優れたＡＣＬＹ抑制活性を有し、そして多くの代謝性疾患の薬効モデルにおいて良い治療効果を示し、さらに高コレステロール血症、非アルコール性脂肪性肝炎などの代謝性疾患の治療薬として開発することが可能である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【手続補正書】

【提出日】2024-05-14

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

一般式（Ｉ）で表される化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体もしくはその薬学的に許容される塩の使用であって、代謝性疾患を治療する薬物の製造、またはアテローム性動脈硬化症を治療する薬物の製造に用いられる、前記使用。

【化1】

（ただし、

【化2】

は二重結合または単結合を表す。
ｍ、ｎはそれぞれ独立に１、２、３、４、５または６である。
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６はそれぞれ独立にＨ、Ｃ１－Ｃ４アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ４アルキニル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルケニル基、フェニル基またはベンジル基である。
あるいは、Ｒ_１およびＲ_２はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
あるいは、Ｒ_５およびＲ_６はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
あるいは、Ｒ_３およびＲ_４はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
Ｙ_１およびＹ_２はそれぞれ独立に－ＯＨ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＣｏＡ、－ＣＯＯＲ_７から選ばれる。ここで、Ｒ_７はメチル基、エチル基または

【化3】

である。ＣｏＡの構造は以下の通りである：

【化4】

。）

【請求項2】

前記化合物は一般式ＩＩで表される構造を有することを特徴とする、請求項１に記載の使用：

【化5】

【請求項3】

前記化合物は一般式ＩＩＩで表される構造を有することを特徴とする、請求項１に記載の使用：

【化6】

【請求項4】

前記化合物は一般式ＩＶで表される構造を有することを特徴とする、請求項１に記載の使用：

【化7】

（式において、ｐは０、１、２または３である。）

【請求項5】

前記化合物は重水素化化合物であることを特徴とする、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用。

【請求項6】

前記の化合物は以下の群から選ばれることを特徴とする、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用：

【化8】

【請求項7】

前記代謝性疾患は、高コレステロール血症、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝線維症から選ばれることを特徴とする、請求項１に記載の使用。

【請求項8】

一般式（Ｉ）で表される化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体またはその薬学的に許容される塩。

【化9】

（ただし、

【化10】

は二重結合または単結合を表す。
ｍ、ｎはそれぞれ独立に１、２、３、４、５または６である。
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６はそれぞれ独立にＨ、Ｃ１－Ｃ４アルキル基、Ｃ２－Ｃ４アルケニル基、Ｃ２－Ｃ４アルキニル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルキル基、Ｃ３－Ｃ７シクロアルケニル基、フェニル基またはベンジル基である。
あるいは、Ｒ_１およびＲ_２はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
あるいは、Ｒ_５およびＲ_６はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
あるいは、Ｒ_３およびＲ_４はこれらに隣接する炭素原子とともにＣ３－Ｃ７シクロアルキル基またはＣ３－Ｃ７シクロアルケニル基を形成している。
Ｙ_１およびＹ_２はそれぞれ独立に－ＯＨ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＣｏＡ、－ＣＯＯＲ_７から選ばれる。ここで、Ｒ_７はメチル基、エチル基または

【化11】

である。ＣｏＡの構造は以下の通りである：

【化12】

。）

【請求項9】

前記化合物は一般式ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶで表される構造を有することを特徴とする、請求項８に記載の化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体またはその薬学的に許容される塩：

【化13】

（式において、ｐは０、１、２または３である。）

【請求項10】

前記化合物は重水素化化合物であることを特徴とする、請求項８に記載の化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体またはその薬学的に許容される塩。

【請求項11】

前記化合物は以下の群から選ばれることを特徴とする、請求項８に記載の化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体またはその薬学的に許容される塩：

【化14】

【請求項12】

薬物組成物であって、請求項８～１１のいずれか一項に記載の化合物、またはその立体異性体、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体またはその薬学的に許容される塩；ならびに
薬学的に許容される塩を含む、前記薬物組成物。

【国際調査報告】