特表 2024-536865 メッセンジャーＲＮＡ送達のためのイオン化性カチオン化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-08

(54)【発明の名称】メッセンジャーＲＮＡ送達のためのイオン化性カチオン化合物

(51)【国際特許分類】

   A61K 48/00 20060101AFI20241001BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 9/51 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20241001BHJP

   A61K 47/24 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 47/28 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 9/127 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 31/16 20060101ALI20241001BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 38/02 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 39/145 20060101ALI20241001BHJP

   A61K 39/215 20060101ALI20241001BHJP

【ＦＩ】

A61K48/00

A61P43/00 105

A61K9/51

A61K47/22

A61K47/18

A61K47/24

A61K47/28

A61K9/127

A61K9/14

A61P37/04

A61P31/00

A61P35/00

A61P37/06

A61P3/10

A61P25/00

A61P9/00

A61P13/12

A61P3/00

A61P31/16

A61P31/14

A61K38/02

A61K39/00 G

A61K39/145

A61K39/215

A61K39/00 H

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024518837

(86)(22)【出願日】2022-09-28

(85)【翻訳文提出日】2024-05-22

(86)【国際出願番号】 IB2022059217

(87)【国際公開番号】W WO2023053017

(87)【国際公開日】2023-04-06

(31)【優先権主張番号】63/249,128

(32)【優先日】2021-09-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．ＴＲＩＴＯＮ

３．ＳＰＡＮ

４．ＭＡＲＣＯＬ

(71)【出願人】

【識別番号】523207227

【氏名又は名称】セキラス インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100114188

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100119253

【弁理士】

【氏名又は名称】金山 賢教

(74)【代理人】

【識別番号】100124855

【弁理士】

【氏名又は名称】坪倉 道明

(74)【代理人】

【識別番号】100129713

【弁理士】

【氏名又は名称】重森 一輝

(74)【代理人】

【識別番号】100137213

【弁理士】

【氏名又は名称】安藤 健司

(74)【代理人】

【識別番号】100183519

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻田 芳恵

(74)【代理人】

【識別番号】100196483

【弁理士】

【氏名又は名称】川嵜 洋祐

(74)【代理人】

【識別番号】100160749

【弁理士】

【氏名又は名称】飯野 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100160255

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100219265

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 崇大

(74)【代理人】

【識別番号】100203208

【弁理士】

【氏名又は名称】小笠原 洋平

(74)【代理人】

【識別番号】100216839

【弁理士】

【氏名又は名称】大石 敏幸

(74)【代理人】

【識別番号】100228980

【弁理士】

【氏名又は名称】副島 由加里

(74)【代理人】

【識別番号】100146318

【弁理士】

【氏名又は名称】岩瀬 吉和

(74)【代理人】

【識別番号】100127812

【弁理士】

【氏名又は名称】城山 康文

(72)【発明者】

【氏名】デーン，エリック・エル

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

【Ｆターム（参考）】

4C076AA19

4C076AA29

4C076AA65

4C076AA95

4C076DD49

4C076DD60

4C076DD63

4C076DD70

4C076EE23

4C084AA02

4C084AA13

4C084BA03

4C084MA05

4C084MA24

4C084MA38

4C084MA41

4C084NA13

4C084ZA011

4C084ZA012

4C084ZA361

4C084ZA362

4C084ZA811

4C084ZA812

4C084ZB081

4C084ZB082

4C084ZB091

4C084ZB092

4C084ZB211

4C084ZB212

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB311

4C084ZB312

4C084ZB331

4C084ZB332

4C084ZC211

4C084ZC212

4C084ZC351

4C084ZC352

4C085AA03

4C085BA55

4C085BA71

4C085BB01

4C085CC03

4C085CC08

4C085DD62

4C085EE01

(57)【要約】

脂質ナノ粒子の形成における特定のイオン化可能なカチオン性脂質化合物の使用について説明する。当該脂質ナノ粒子は、核酸などの治療薬をカプセル化してもよく、当該治療薬の送達及び特定の状態の治療方法において、または免疫応答の誘導のために使用してもよい。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

メッセンジャーＲＮＡと、以下からなる群から選択されるイオン性カチオン性脂質化合物とを含む脂質ナノ粒子：

【化1-1】

【化1-2】

【化1-3】

またはその薬学的に許容される塩、もしくはプロドラッグ。

【請求項2】

脂質成分が、中性脂質、構造脂質及びＰＥＧ化脂質のうちの１つ以上をさらに含む、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項3】

請求項２に記載の脂質ナノ粒子であって、前記中性脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びスフィンゴミエリンからなる群より選択される、前記脂質ナノ粒子。

【請求項4】

前記構造脂質が、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、及びα－トコフェロールからなる群から選択される、請求項２に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項5】

前記ＰＥＧ化脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、及びＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、任意選択でＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、及びＰＥＧ－ＤＳＰＥからなる群から選択される、請求項２に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項6】

約２５モル％～約６０モル％の化合物１～１２から選択される化合物；約２モル％～約２５モル％の中性脂質；約１８．５モル％～約６０モル％の構造脂質；及び約０．２モル％～約１０モル％のＰＥＧ化脂質を含む、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項7】

前記メッセンジャーＲＮＡが、従来のメッセンジャーＲＮＡ及び自己増幅メッセンジャーＲＮＡから選択される、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項8】

従来のメッセンジャーＲＮＡ及び／または自己増幅メッセンジャーＲＮＡが、抗原性ペプチドもしくはタンパク質、またはそれらの断片、バリアントもしくは誘導体をコードする配列を含む、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項9】

前記抗原性ペプチドまたはタンパク質が、病原性抗原、腫瘍抗原、アレルギー性抗原または自己免疫性自己抗原からなる群から選択される、請求項８に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項10】

前記病原性抗原が、細菌、ウイルスまたは原虫学的病原生物に由来する、請求項９に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項11】

前記脂質ナノ粒子の直径が約３０ｎｍ～約１６０ｎｍである、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項12】

請求項１に記載の複数の脂質ナノ粒子と、薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤とを含む脂質ナノ粒子組成物。

【請求項13】

哺乳動物細胞にメッセンジャーＲＮＡを送達する方法であって、請求項１に記載の脂質ナノ粒子を対象に投与し、それにより前記細胞と前記脂質ナノ粒子を接触させ、前記メッセンジャーＲＮＡを前記細胞に送達することを含む、前記方法。

【請求項14】

前記細胞がヒト対象の細胞である、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

哺乳動物細胞において目的のポリペプチドを産生する方法であって、前記細胞を請求項１に記載の脂質ナノ粒子と接触させるステップを含み、前記脂質ナノ粒子が、前記ポリペプチドをコードする従来のメッセンジャーＲＮＡまたは自己増幅メッセンジャーＲＮＡを含む、前記方法。

【請求項16】

疾患、障害または状態の治療を必要とする対象における疾患、障害または状態を治療する方法であって、前記対象に請求項１に記載の脂質ナノ粒子を投与し、それによって前記疾患、障害または状態を治療することを含む、前記方法。

【請求項17】

前記疾患、障害または状態が、希少疾患、感染症、がん、増殖性疾患、遺伝病、自己免疫疾患、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患、腎血管疾患、及び代謝性疾患からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

請求項１に記載の脂質ナノ粒子、または請求項１２に記載の脂質ナノ粒子組成物を含むワクチン。

【請求項19】

前記ワクチンが、腫瘍ワクチン、インフルエンザワクチン、及びＳＡＲＳワクチンから選択される、請求項１８に記載のワクチン。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、対象にメッセンジャーＲＮＡを送達するための脂質ナノ粒子を形成するために、他の脂質分子と組み合わせて使用され得るカチオン性及び／またはイオン化可能な脂質化合物に関する。

【背景技術】

【0002】

核酸ベースの治療は、ある範囲の治療用途において大きな可能性を示している。しかしながら、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、自己増幅ｍＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、プラスミド、ＤＮＡなどのようなポリヌクレオチドの送達には、多くの課題がある。ＲＮＡなどの遊離核酸は急速な酵素分解を受けやすいので、一般に全身に残存しない。さらに、核酸は負の電荷を持っているため、細胞障壁を効果的に通過して、必要な細胞内コンパートメントに入ることができない場合があり、例えば、翻訳またはその他の効果を達成できない場合がある。

【0003】

したがって、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）などの脂質粒子は、核酸を分解から保護し、細胞への取り込み及び細胞内送達を改善するように、核酸を製剤化するために使用されてきた。ＬＮＰは通常、イオン化可能なカチオン性脂質と、中性脂質、コレステロールなどのステロール、及びＰＥＧ化脂質などの他の脂質成分とから形成される。イオン化可能なカチオン性脂質は、１つ以上の炭化水素基を含む親油性領域と、少なくとも１つの正電荷またはイオン化可能な極性頭部基を含む親水性領域とを有する両親媒性分子である。このようなカチオン性脂質は適切なｐＨでイオン化され、核酸と正に帯電した複合体を形成し得、この核酸が細胞の細胞膜を通過して細胞質に侵入しやすくなる。

【0004】

最初に承認されたｓｉＲＮＡ治療薬であるＯｎｐａｔｔｒｏ（パチシラン）は、遺伝性アミロイド生成性トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシスの治療薬としてわずか数年前に市場に参入した。パチシランの治療効果は、ｓｉＲＮＡを介したＴＴＲ遺伝子サイレンシングに依存しており、変異タンパク質の生成を防ぎ、少なくとも疾患の進行を防ぐ。ｓｉＲＮＡの効率的な送達は、ＬＮＰテクノロジーに依存する。

【0005】

さらに最近では、核酸ワクチンが、重症感染性コロナウイルス感染症２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）の現在の世界的大流行の原因となっている重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）など、さまざまな疾患の治療及び予防に対する有望なアプローチとして浮上している。メッセンジャーＲＮＡワクチンは、従来のｍＲＮＡまたは自己増幅メッセンジャーＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）の宿主細胞の細胞質への送達に依存しており、最終的には転写され、抗原タンパク質に翻訳されて免疫応答の生成を引き起こす。メッセンジャーＲＮＡはサイズが大きく負に帯電しており、細胞への取り込みが妨げられるため、適切な送達にはやはりＬＮＰが必要である。

【0006】

異なるイオン化可能なカチオン性脂質は、酸解離定数（ｐＫａ）値を含む異なる物理化学的プロファイルを示し、それによって核酸と複合体を形成する能力に影響を与えるだけでなく、インビボでの異なる毒性プロファイルも示す可能性があり、そのためメッセンジャーＲＮＡの送達のためのＬＮＰなどの脂質粒子を形成するのに適した、改良されたイオン化可能なカチオン性脂質化合物が引き続き必要とされていることが当業者には明らかであろう。

【発明の概要】

【0007】

本発明の実施形態は、中性脂質、荷電脂質、構造脂質、ＰＥＧ化脂質及びその類似体のうちの１つ以上を含む追加の脂質の存在下で脂質粒子、例えばＬＮＰを形成し得、かつ、従来のメッセンジャーＲＮＡ及び自己増幅メッセンジャーＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）を含むメッセンジャーＲＮＡの送達に使用することができる、イオン化可能なカチオン性脂質化合物、及びその薬学的に許容される塩、及びプロドラッグを提供する。イオン化可能なカチオン性脂質化合物及び会合するメッセンジャーＲＮＡを含む脂質粒子は、一連の疾患、障害及び症状の治療に使用され得る。

【0008】

したがって、一実施形態では、本開示は、メッセンジャーＲＮＡと会合した脂質ナノ粒子を提供し、この脂質ナノ粒子は、以下からなる群から選択される１つ以上のイオン化可能なカチオン性脂質化合物を含んでいる：

【化1-1】

【化1-2】

【化1-3】

またはその薬学的に許容されるもしくはプロドラッグ。

【0009】

さらなる実施形態では、本開示は、複数のそのような脂質粒子及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む、ＬＮＰ組成物などの脂質粒子組成物を提供する。

【0010】

さらなる実施形態では、前述の脂質粒子及び／または脂質粒子組成物内のメッセンジャーＲＮＡを細胞に送達する方法が提供される。

【0011】

さらなる実施形態では、細胞内で目的のポリペプチドを産生する方法が提供される。

【0012】

なおさらなる実施形態では、対象における疾患、障害または状態を治療する方法は、そのような治療を必要とする対象に前述の脂質粒子及び／または脂質粒子組成物を投与することによって提供される。

【0013】

脂質粒子及び／または脂質粒子組成物は、ワクチンの成分として対象に送達され得る。

【図面の簡単な説明】

【0014】

【図1】ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してｐＨの関数としてプロットされた強度値、及びＳＬ０１のシグモイド用量応答曲線との適合を示す。見かけのｐＫａは、イオン化可能なアミンの半分がプロトン化されていると予想されるこの曲線のＥＣ５０として決定された。

【図2】ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してｐＨの関数としてプロットされた強度値、及びＳＬ０２のシグモイド用量応答曲線との適合を示す。見かけのｐＫａは、イオン化可能なアミンの半分がプロトン化されていると予想されるこの曲線のＥＣ５０として決定された。

【図3】ＳＬ０１とＳＬ０２はどちらもインビトロでＢＨＫ－Ｖ細胞をトランスフェクトできることを示す。ＳＬ０２ ＬＮＰは、調べた両方のｓａＲＮＡ構築物の効力がより高い傾向があった。

【図4】プライムブーストワクチン接種スケジュール後の赤血球凝集阻害（ＨＡＩ）アッセイによって測定した場合、インフルエンザ抗原Ｈ５及びＮ１を発現するｓａＲＮＡをカプセル化したＬＮＰが、マウスにおいて高レベルの中和抗体をもたらしたことを示す。０．１μｇのｓａＲＮＡ用量では、両方のＬＮＰの値とも、ＭＦ５９をアジュバントとして添加した不活化ウイルスワクチンによって誘発される値と同等であった。点線は検出限界である。

【図5】プライムブーストワクチン接種スケジュール後の疑似ウイルスマイクロ中和（ＭＮ）アッセイによって測定した場合、インフルエンザ抗原Ｈ５及びＮ１を発現するｓａＲＮＡをカプセル化したＬＮＰがマウスにおいて高レベルの中和抗体をもたらしたことを示す。０．１μｇのｓａＲＮＡ用量では、両方のＬＮＰの値とも、ＭＦ５９をアジュバントとして添加した不活化ウイルスワクチンによって誘発される値と同等であった。点線は検出限界である。

【図6】インフルエンザ抗原Ｈ５及びＮ１を発現するｓａＲＮＡをカプセル化しているＳＬ０１及びＳＬ０２のＬＮＰは、ＭＦ５９をアジュバントとして添加した不活化ウイルスワクチンとは対照的に、プライムブーストワクチン接種スケジュールに従って測定可能なレベルの抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞の活性化をもたらしたことを示す。

【発明を実施するための形態】

【0015】

本開示は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）及び／またはＬＮＰ組成物の使用に基づいており、このＬＮＰは、メッセンジャーＲＮＡの送達のための、特定のイオン化脂質化合物、本明細書で定義される化合物１～１２のうちの１つ以上を含む。イオン化可能な脂質化合物は生分解性基を示し、これがインビボでの毒性の軽減またはクリアランスの改善に役立つ場合がある。

【0016】

一実施形態では、ＬＮＰ及び／またはＬＮＰ組成物はワクチンの成分であり得るが、本明細書に記載のＬＮＰ及び／またはＬＮＰ組成物の治療的使用はそれに限定されない。

【0017】

いくつかの実施形態では、ＬＮＰ及び／またはＬＮＰ組成物は、メッセンジャーＲＮＡによってコードされるタンパク質の発現のためのメッセンジャーＲＮＡの送達に適し得る。

【0018】

いくつかの実施形態では、ＬＮＰ及び／またはＬＮＰ組成物は、メッセンジャーＲＮＡワクチンの成分としてメッセンジャーＲＮＡの送達に適している場合がある。

【0019】

全般
本明細書全体を通して、具体的に別段明記されない限り、または文脈上他の意味に解すべき場合を除き、単一のステップ、事象構成、ステップ群、または事象構成群への言及は、これらのステップ、事象構成、ステップ群、または事象構成群のうちの１つ及び複数（すなわち１つ以上）を包含すると解釈されるものとする。

【0020】

当業者は、本開示が、具体的に記載されているものの他にも変形形態及び変更形態が生じやすいことを理解するであろう。本開示が全てのこのような変形及び変更を含むことを理解されたい。本開示はまた、個別にまたは集合的に本明細書で言及されるか、または示されるステップ、特徴、組成物、及び化合物の全て、ならびに該ステップまたは特徴の任意のかつ全ての組み合わせまたは任意の２つ以上を含む。

【0021】

本開示は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲を限定されないものとする。このような特定の実施形態は、例示を意図するに過ぎない。機能的に等価の産物、組成物、及び方法は、明らかに本開示の範囲内にある。

【0022】

本開示の任意の実施形態は、別段の明記がない限り、変更すべきところは変更して、本開示の任意の他の例に適用されるように解釈するものとする。

【0023】

別段の具体的な定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、（例えば、有機合成化学、細胞培養、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、及び生化学における実施形態について）当該技術分野の当業者が一般的に理解するものと同じ意味を有すると解釈するものとする。

【0024】

別途指定されない限り、本開示で利用される任意の組換えタンパク質、細胞培養、及び免疫学的技法は、当業者に周知の標準手順である。かかる技法は、Ｊ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９８４），Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９），Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（編集），Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １ ａｎｄ ２，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９１），Ｄ．Ｍ．Ｇｌｏｖｅｒ ａｎｄ Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（編集），ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １－４，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９５ ａｎｄ １９９６），ａｎｄ Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（編集），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までの全アップデートを含む），Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（編集）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８），ａｎｄ Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（編集）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（現在までの全アップデートを含む）などの文献を通じて記述及び説明される。

【0025】

「及び／または」、例えば、「Ｘ及び／またはＹ」という用語は、「Ｘ及びＹ」または「ＸまたはＹ」のいずれかを意味すると理解され、両方の意味またはいずれかの意味に明確なサポートを提供するものとみなされる。

【0026】

用語「から」及び「まで」とは、範囲を示す場合、その範囲が列挙された下限値及び上限値を含むことを意味すると理解されるべきである。例えば、「ｘは０から６までの整数である」とは、ｘが存在しない（ｘが０）状況、ｘが６の状況、及びその間の各整数値を含む（すなわち、ｘは１、２、３、４、または５である）ものとして理解されるものとする。

【0027】

本明細書全体において、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のような変形例は、述べられた要素、整数もしくはステップ、または要素、整数もしくはステップの群の包含を意味するが、任意の他の要素、整数もしくはステップ、または要素、整数もしくはステップの群の除外は意味しないことが理解されるであろう。

【0028】

本明細書で使用される場合、「～に由来する」という用語は、指定の整数が、特定の供給源から取得することができること（ただし、必ずしもその供給源から直接取得されるとは限らない）を示すものと解釈されたい。

【0029】

選択された定義
本明細書で使用される場合、「脂質ナノ粒子」または「ＬＮＰ」という用語は、ナノメートルオーダー（例えば、１～１，０００ｎｍ）の少なくとも１つの寸法を有し、本明細書に記載の化合物１～１２から選択される化合物を含む脂質ベースの粒子を指すと理解されるべきである。実施形態では、ＬＮＰは、従来のメッセンジャーＲＮＡまたは自己増幅メッセンジャーＲＮＡを含むメッセンジャーＲＮＡを細胞、組織、器官、腫瘍などの所望の標的に送達するための組成物中に製剤化される。ＬＮＰは、化合物１～１２のうちの１つ以上と、中性脂質、荷電脂質、ステロール及びＰＥＧ化脂質のうちの１つ以上とから選択されるイオン化可能なカチオン性化合物とを含む。

【0030】

「カチオン性化合物」、「イオン化可能なカチオン性化合物」、「カチオン性脂質化合物」、「イオン化可能なカチオン性脂質化合物」、「イオン化可能な脂質化合物」または同様の用語は、正の電荷を帯びることができる、本明細書に記載の化合物１～１２から選択される脂質化合物を指す。本明細書に開示されるイオン化可能なカチオン性脂質は、正電荷を帯び得る１つ以上の窒素含有基を含む。これらはイオン化可能であるため、ｐＨに応じて正に帯電した形または中性の形で存在してもよい。カチオン性脂質のイオン化は、異なるｐＨ条件下で脂質ナノ粒子の表面電荷に影響を与える場合がある。

【0031】

「中性脂質」という用語は、選択されたｐＨで非荷電または中性両性イオン形態で存在する多くの脂質種のいずれかを指す。生理的ｐＨでは、このような脂質としては、限定するものではないが、ホスファチジルコリン、例えば、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ならびにホスファチジルエタノールアミン、例えば、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、及びスフィンゴミエリン（ＳＭ）が挙げられる。

【0032】

「荷電脂質」という用語は、有用な生理学的範囲、例えばｐＨ約３～ｐＨ約９内のｐＨに関係なく、正に荷電または負に荷電した形態で存在する多数の脂質種のいずれかを指す。荷電脂質の非限定的な例としては、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルモシトール、ステロールヘミサクシネート、ジアルキルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ及びＤＯＴＭＡを含む）、ジアルキルジメチルアミノプロパン、エチルホスホコリン、及びジメチルアミノエタンカルバモイルステロールが挙げられる。

【0033】

本明細書で使用される「メッセンジャーＲＮＡ」という用語は、従来の非複製メッセンジャーＲＮＡ（従来のｍＲＮＡ）、ならびに自己増幅メッセンジャーＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）、及びそれらの組み合わせを指す。この用語は一般に、少なくとも１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。メッセンジャーＲＮＡには、１つ以上のコード領域及び非コード領域が含まれる場合がある。それは、天然源から精製しても、組換え発現系を使用して生成してもよく、任意選択で精製しても、化学合成しても、その他でもよい。メッセンジャーＲＮＡは、既知のヌクレオチド類似体または修飾された主鎖残基もしくは連結を含むポリヌクレオチドであって、合成、天然、及び非天然に存在し、基準のポリヌクレオチドと類似の結合特性を有するポリヌクレオチドを含んでもよい。このような類似体の例としては、限定するものではないが、ホスホロチオエート、ホスホロアミデート、メチルホスホネート、キラルメチルホスホネート、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、及びペプチド核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。特に限定しない限り、この用語は、参照ポリヌクレオチドと同様の結合特性を有する天然ヌクレオチドの既知の類似体を含むポリヌクレオチドを含むメッセンジャーＲＮＡを包含する。他に示されない限り、特定のメッセンジャーＲＮＡ核酸配列は、明示的に示された配列だけでなく、保存的に修飾されたそのバリアント（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、一塩基多型、及び相補配列も暗黙的に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（またはすべての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／またはデオキシイノシン残基で置換される配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６０：２６０５－２６０８（１９８５）；Ｒｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ，８：９１－９８（１９９４））。

【0034】

本明細書で使用される「発現」という用語は、メッセンジャーＲＮＡのポリペプチドへの翻訳、ポリペプチドのインタクトなタンパク質へのアセンブリ、及び／またはポリペプチドもしくは完全にアセンブリされたタンパク質の翻訳後修飾を指す。

【0035】

治療用メッセンジャーＲＮＡの「有効量」または「治療有効量」とは、メッセンジャーＲＮＡの非存在下で検出される正常な発現レベルと比較した標的ポリペプチドの発現の増大など、所望の効果を生み出すのに十分な量である。標的遺伝子または標的配列の発現を測定するための適切なアッセイとしては、当業者に公知の技術を用いるタンパク質またはＲＮＡレベルの検査、例えば、ドットブロット、ノーザンブロット、インサイチュハイブリダイゼーション、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、酵素機能、適切なレポータータンパク質の蛍光または発光、及び表現型アッセイが挙げられる。

【0036】

本明細書で使用する場合、「プロドラッグ」とは、生理的条件下で、または加溶媒分解によって、本明細書に記載の化合物１～１２のいずれかに変換され得る化合物を示すことを意味する。したがって、「プロドラッグ」という用語は、薬学的に許容されるそのような化合物の代謝前駆体を指す。プロドラッグは、それを必要とする対象に投与されるときは不活性である場合があるが、インビボでは活性型に変換される。この用語にはまた、そのようなプロドラッグが哺乳動物対象に投与されるとインビボで活性化合物を放出する任意の共有結合した担体も含まれ得る。化合物１～１２のいずれかのプロドラッグは、修飾がルーチン操作またはインビボで親化合物に切断されるような方法で、化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製され得る。

【0037】

「薬学的に容認可能な担体、希釈剤または賦形剤」とは、患者において実質的に非毒性かつ非炎症性であるという性質を有する、本明細書で説明される化合物１～１２以外の任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁、複合体化または溶解させることが可能なビヒクル）を指す。賦形剤としては、例えば以下が挙げられる：付着防止剤、酸化防止剤、結合剤、コーティング、圧縮補助剤、崩壊剤、染料（着色剤）、皮膚軟化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、皮膜形成剤またはコーティング、香料、芳香剤、流動促進剤（ｇｌｉｄａｎｔ）（流動促進剤（ｆｌｏｗ ｅｎｈａｎｃｅｒ））、潤滑剤、防腐剤、印刷インク、吸着剤、懸濁剤または分散剤、甘味料、及び水和水。例示的な賦形剤としては、限定するものではないが、以下が挙げられる：ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶性セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファデンプン、プロピルパラベン、レチニルパルミテート、シェラック、二酸化ケイ素、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ（アルファ－トコフェロール）、ビタミンＣ、キシリトール及び本明細書に開示の他の種。

【0038】

「薬学的に許容される塩」としては、酸付加塩と塩基付加塩の両方が挙げられる。適切な塩の列挙は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０，ｐ．１４４５，ａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２－１９（１９７７）に見出され得る。酸付加塩とは、遊離塩基の生物学的有効性及び特性を保持する塩であって、これは、生物学的にも、そうでなくても望ましくはない塩であり、これは、限定するものではないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸と形成される塩、及び限定するものではないが、酢酸、２，２－ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４－アセトアミド安息香酸、ショウノウ酸、カンファー－１０－スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、炭酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシル硫酸、エタン－１，２－ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、２－オキソ－グルタル酸、グリセロリン酸、グリコール酸、馬尿酸、イソ酪酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、１－ヒドロキシ－２－ナフトエ酸、ニコチン酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、プロピオン酸、ピログルタミン酸、ピルビン酸、サリチル酸、４－アミノサリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、チオシアン酸、ｐトルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、ウンデシレン酸などの有機酸と形成される塩である。塩基付加塩とは、遊離の酸の生物学的有効性及び特性を保持しており、かつ生物学的にもその他の点でも望ましくないものではない塩である。これらの塩は、遊離酸への無機塩基または有機塩基の付加から調製される。無機塩基に由来する塩としては、限定するものではないが、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩などが挙げられる。好ましい無機塩は、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、及びマグネシウムの塩である。有機塩基から誘導される塩としては、限定するものではないが、一級、二級及び三級アミン、天然置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、ならびに塩基性イオン交換樹脂、例えば、アンモニア、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、デアノール、２－ジメチルアミノエタノール、２－ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、ベネタミン、ベンザチン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ－エチルピペリジン、ポリアミン樹脂の塩などが挙げられる。

【0039】

本明細書で使用される場合、「生分解性基」という用語は、哺乳動物における脂質のより速い代謝を促進し得る基である。エステルは、適切な生分解性基であり、本開示の化合物１～１２は、インビボの生分解性を改善するための２つのそのようなエステル基を提示するが、化合物１０はさらに、細胞内還元ステップを介して同様に生分解性であり得るジスルフィド結合を提示する。

【0040】

本明細書で使用される場合、「カプセル化効率」とは、ＬＮＰ組成物の調製に使用されるメッセンジャーＲＮＡの初期総量に対する、ＬＮＰ組成物の一部となるメッセンジャーＲＮＡの量を指す。例えば、組成物に最初に提供されたメッセンジャーＲＮＡの合計１００ｍｇのうち、９２ｍｇのメッセンジャーＲＮＡがＬＮＰ組成物中にカプセル化される場合、カプセル化効率は９２％とされ得る。本明細書で使用される場合、「カプセル化」とは、完全な、実質的な、または部分的な囲い、閉じ込め、取り囲む、または包み込むことを指し得る。

【0041】

本明細書で使用される「対象」という用語は、ヒトを含む哺乳動物などの任意の動物を意味すると解釈されるものとする。例示的な対象としては、限定するものではないが、ヒト及びヒト以外の霊長類が挙げられる。例えば、対象とはヒトである。

【0042】

本明細書で使用される「哺乳動物」という用語には、ヒトと、実験動物及び家庭用ペット（例えば、ネコ、イヌ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウサギ）などの家畜、及び野生動物などの非家畜動物の両方などが含まれる。

【0043】

化合物
実施形態では、以下の化合物１～１２から選択される化合物は、メッセンジャーＲＮＡ－ＬＮＰにおいて、他の選択された従来技術のイオン化可能なカチオン性脂質化合物を超える利点を提供し得、これには、以下のうちの１つ以上が挙げられる：メッセンジャーＲＮＡとの複合体化の改善；有益なｐＫａ特性；ＬＮＰの一部としてメッセンジャーＲＮＡのカプセル化効率の向上；毒性の減少；生分解性の向上；インビボのクリアランスの改善；メッセンジャーＲＮＡと複合体を形成した場合の望ましいＮ：Ｐ比；それらを含むＬＮＰの望ましい多分散指数；及びＬＮＰ形成の改善。

【0044】

一つの広範な形態では、本開示は、メッセンジャーＲＮＡと会合した脂質ナノ粒子を提供し、この脂質ナノ粒子は、以下からなる群から選択される１つ以上のイオン化可能なカチオン性脂質化合物を含んでいる：

【化2-1】

【化2-2】

【化2-3】

またはその薬学的に許容される塩、またはプロドラッグ。

【0045】

脂質ナノ粒子
本開示は、メッセンジャーＲＮＡと会合したＬＮＰを提供し、このＬＮＰは、本明細書に記載の化合物１～１２からなる群から選択される化合物、例えば、化合物２～１２からなる群から選択される化合物を含む。

【0046】

実施形態では、ＬＮＰはメッセンジャーＲＮＡを含む。

【0047】

実施形態では、ＬＮＰはメッセンジャーＲＮＡをカプセル化する。

【0048】

実施形態では、ＬＮＰは、約３０ｎｍ～約１６０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１６０ｎｍ、約５０ｎｍ～約１６０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１６０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１６０ｎｍ、約５０～約１４０ｎｍ、約６０～約１３０ｎｍ、約７０～約１２０ｎｍ、約８０～約１２０ｎｍ、約９０～約１２０ｎｍ、約７０～約１１０ｎｍ、約８０ｎｍ～約１１０ｎｍ、または約４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、１５０ｎｍ、１５５ｎｍまたは１６０ｎｍの平均直径を有する。ＬＮＰの直径は、動的光散乱（ＤＬＳ）、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）、または当該技術分野で知られている他の方法によって測定され得る。

【0049】

いくつかの実施形態では、ＬＮＰは比較的均一であり得る。多分散性指数は、ＬＮＰの均一性を示すために使用され得る。小さい、例えば０．３未満または０．２未満の多分散指数は、一般に狭い粒度分布を示す。本明細書に記載されるＬＮＰの組成物は、約０～約０．２５、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、または０．２５の多分散指数を有し得る。いくつかの実施形態では、ＬＮＰ組成物の多分散指数は、約０～約０．２０または０．０５～０．２０であり得る。

【0050】

ＬＮＰは、必要に応じて、化合物１～１２から選択される１つ以上の異なる化合物を含んでもよい。例えば、所望のｐＫａプロファイルを達成するために、２つ以上のそのような化合物を含んで使用してもよい。

【0051】

ＬＮＰは、化合物１～１２から選択される化合物と、追加のカチオン性及び／またはイオン化可能脂質、例えば環状または非環状アミンを含むカチオン性及び／またはイオン化可能脂質とを含んでもよい。このような追加のカチオン性及び／またはイオン化可能脂質は、以下からなる非限定的な群から選択され得る：
３－（ジドデシルアミノ）－Ｎ１，Ｎ１，４－トリドデシル－１－ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、
Ｎ１－［２－（ジドデシルアミノ）エチル］－Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４－トリドデシル－１，４－ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、
１４，２５－ジトリデシル－１５，１８，２１，２４－テトラアザ－オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、
１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＭＡ）、
２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、
ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、
２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、
１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、
２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ）、
（２Ｒ）－２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、
（２Ｓ）－２－（｛８－［（３β）－コレスト－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））、
（（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカノエート））及び
８－［（２－ヒドロキシエチル）［６－オキソ－６－（ウンデシルオキシ）ヘキシル］アミノ］－オクタン酸、１－オクチルノニルエステル。

【0052】

実施形態では、ＬＮＰは、ＰＥＧ脂質、ステロール構造脂質、及び／または中性脂質のうちの１つ以上をさらに含む。

【0053】

ＰＥＧ化脂質
一実施形態では、本開示は、化合物１～１２から選択される化合物及びＰＥＧ化脂質を含むＬＮＰ、ならびにメッセンジャーＲＮＡと会合したＬＮＰを提供する。

【0054】

ＰＥＧ化脂質とは、ポリエチレングリコールで修飾された脂質であることは、当業者には明らかであろう。例示的なＰＥＧ化脂質としては、限定するものではないが、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、及びＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロールが挙げられる。実施形態では、ＰＥＧ脂質としては、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、ＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質及びそれらの組み合わせが挙げられる。

【0055】

中性脂質
一実施形態では、本開示は、化合物１～１２から選択される化合物及び中性脂質を含むＬＮＰ、ならびにメッセンジャーＲＮＡと会合したＬＮＰを提供する。

【0056】

本開示での使用に適した中性または両性イオン性脂質は当業者には明らかであり、実施形態では、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びスフィンゴミエリンが挙げられる。脂質は飽和であっても不飽和であってもよい。

【0057】

構造脂質
一実施形態では、本開示は、化合物１～１２から選択される化合物及び構造脂質を含むＬＮＰ、ならびにメッセンジャーＲＮＡと会合したＬＮＰを提供する。

【0058】

例示的な構造脂質としては、限定するものではないが、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸及びα－トコフェロールが挙げられる。

【0059】

一実施形態では、構造脂質はステロールである。実施形態では、構造脂質はコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質はカンペステロールである。

【0060】

実施形態では、ＬＮＰは、化合物１～１２から選択されるイオン化可能なカチオン性脂質化合物；中性脂質；コレステロールなどのステロール；及びＰＥＧ化脂質を含む。ＬＮＰは、対象に送達されるメッセンジャーＲＮＡとともに製剤化される。

【0061】

特定の実施形態では、ＬＮＰは、化合物１～１０から選択されるイオン化可能なカチオン性脂質化合物；中性脂質；コレステロールなどのステロール；及びＰＥＧ化脂質を含む。ＬＮＰは、対象に送達されるメッセンジャーＲＮＡとともに製剤化される。

【0062】

実施形態では、複数のＬＮＰが本明細書に記載のＬＮＰ組成物を形成する。

【0063】

メッセンジャーＲＮＡ
本明細書に記載の化合物１～１２から選択される１つ以上の化合物は、従来のメッセンジャーＲＮＡまたは非複製メッセンジャーＲＮＡ（本明細書では従来のｍＲＮＡと呼ぶ）及び自己増幅メッセンジャーＲＮＡ（本明細書ではｓａＲＮＡと称する）の両方を含む、ある範囲のメッセンジャーＲＮＡ分子と複合体を形成し、したがってＬＮＰに製剤化され得る。このように、いくつかの実施形態では、ＬＮＰ及び組成物は、化合物１～１２のうちの１つ以上を含むＬＮＰと細胞を接触させることによって、インビトロ及びインビボの両方で所望のタンパク質の発現を誘導するために使用され得、ここで、ＬＮＰは、カプセル化するか、または所望のタンパク質を生成するために発現されるメッセンジャーＲＮＡと会合される。

【0064】

したがって、実施形態では、メッセンジャーＲＮＡは、任意の天然ポリペプチド、または非天然ポリペプチド、またはその他の修飾ポリペプチドを含む、目的のポリペプチドをコードする従来のｍＲＮＡまたはｓａＲＮＡである。従来のｍＲＮＡまたはｓａＲＮＡによってコードされるポリペプチドは、任意のサイズであってもよく、任意の二次構造または活性を有してもよい。いくつかの実施形態では、従来のｍＲＮＡまたはｓａＲＮＡによってコードされるポリペプチドは、細胞内で発現されると治療効果を有し得る。

【0065】

化合物１～１２から選択されるイオン化可能なカチオン性化合物を組み込んだＬＮＰとの製剤化に有用なメッセンジャーＲＮＡは、目的のポリペプチドをコードする連結ヌクレオシドの第１の領域（例えば、コード領域）、第１の領域の５’末端（例えば、５’－ＵＴＲ）に位置する第１の隣接領域、第１の領域の３’末端（例えば、３’－ＵＴＲ）に位置する第２の隣接領域、少なくとも１つの５’－キャップ領域、及び３’安定化領域を含み得る。いくつかの実施形態では、メッセンジャーＲＮＡは、ポリＡ領域またはコザック配列（例えば、５’－ＵＴＲ内）をさらに含む。場合によっては、メッセンジャーＲＮＡには、メッセンジャーＲＮＡから切除できる１つ以上のイントロン配列を含み得る。いくつかの実施形態では、メッセンジャーＲＮＡは、５’キャップ構造、鎖終結ヌクレオチド、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでもよい。メッセンジャーＲＮＡの領域のいずれか１つは、１つ以上の代替成分（例えば、代替ヌクレオシド）を含んでもよい。例えば、３’－安定化領域は、代替ヌクレオシド、例えば、Ｌ－ヌクレオシド、反転チミジン、もしくは２’－Ｏ－メチルヌクレオシド及び／またはコード領域、５’－ＵＴＲ、３’－ＵＴＲを含んでもよく、あるいはキャップ領域には、５－置換ウリジン（例えば、５－メトキシウリジン）、１－置換シュードウリジン（例えば、１－メチル－シュードウリジンまたは１－エチル－シュードウリジン）、及び／または５－置換シチジン（例えば、５－メチル－シチジン）などの代替ヌクレオシドを含んでもよい。

【0066】

化合物１～１２から選択されるイオン化可能なカチオン性化合物を組み込んだＬＮＰとの製剤化に有用なメッセンジャーＲＮＡは、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）を含んでもよい。ＩＲＥＳは、単一のリボソーム結合部位として機能する場合も、複数のリボソーム結合部位の１つとして機能する場合もある。２つ以上の機能的リボソーム結合部位を含むメッセンジャーＲＮＡは、リボソームによって独立して翻訳されるいくつかのペプチドまたはポリペプチドをコードし得る。有用となり得る適切なＩＲＥＳ配列としては、ピコルナウイルス（例えばＦＭＤＶ）、害虫ウイルス（ＣＦＦＶ）、ポリオウイルス（ＰＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＣＭＶ）、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、古典的豚コレラウイルス（ＣＳＦＶ）、ネズミ白血病ウイルス（ＭＬＶ）、サル免疫不全ウイルス（Ｓ１Ｖ）、及びコオロギ麻痺ウイルス（ＣｒＰＶ）由来の配列が挙げられる。

【0067】

化合物１～１２から選択されるイオン化可能なカチオン性化合物を組み込んだＬＮＰとの製剤化に有用な例示的なメッセンジャーＲＮＡは、抗原性ポリペプチドをコードする連結ヌクレオシドの第１の領域、第１の領域の５’末端（例えば、５’－ＵＴＲ）に位置する第１の隣接領域、第１の領域の３’末端（例えば、３’－ＵＴＲ）に位置する第２の隣接領域、少なくとも１つの５’－キャップ領域、及び３’安定化領域を含む。

【0068】

本ＬＮＰでの使用に適したメッセンジャーＲＮＡには、標準ヌクレオチドＡ（アデノシン）、Ｇ（グアノシン）、Ｃ（シトシン）、Ｕ（ウリジン）、またはＴ（チミジン）のいずれかを含む１つ以上の天然成分が含まれ得る。一実施形態では、（ａ）５’－ＵＴＲ、（ｂ）オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、（ｃ）３’－ＵＴＲ、（ｄ）ポリＡテール、及び（上記のａ、ｂ、ｃ、またはｄ）の任意の組み合わせを含むヌクレオチドのすべてまたは実質的にすべては、天然に存在する標準ヌクレオチドＡ（アデノシン）、Ｇ（グアノシン）、Ｃ（シトシン）、Ｕ（ウリジン）、またはＴ（チミジン）を含む。

【0069】

いくつかの実施形態では、メッセンジャーＲＮＡは、本明細書に記載されるように、ポリメッセンジャーＲＮＡが導入される細胞の安定性の増大及び／または自然免疫応答の実質的な誘導の欠如を含む、有用な特性を付与する１つ以上の代替成分を含んでもよい。例えば、代替メッセンジャーＲＮＡは、対応する非改変メッセンジャーＲＮＡと比較して、メッセンジャーＲＮＡが導入された細胞内での分解の減少を示す。これらの代替種は、免疫原性が低下するだけでなく、タンパク質生産の効率、メッセンジャーＲＮＡの細胞内保持、及び／または接触細胞の生存率を高める場合がある。

【0070】

メッセンジャーＲＮＡヌクレオチドは、天然に存在するものでも、天然に存在しないものでもよい。メッセンジャーＲＮＡは、１つ以上の修飾された（例えば、変更された、または代替の）核酸塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはそれらの組み合わせを含み得る。メッセンジャーＲＮＡは、核酸塩基、糖、またはヌクレオシド間結合（例えば、リン酸結合／ホスホジエステル結合／ホスホジエステル主鎖）などに対する任意の有用な修飾または改変を含み得る。いくつかの実施形態では、核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合のそれぞれに１つ以上の改変が存在する。

【0071】

メッセンジャーＲＮＡは、分子の全長に沿って均一に変化する場合もあれば、そうでない場合もある。例えば、１つ以上またはすべてのタイプのヌクレオチド（例えば、プリンもしくはピリミジン、またはＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃのいずれか１つ以上もしくはすべて）は、メッセンジャーＲＮＡ内またはその所与の所定の配列領域内で均一に変化する場合もあれば、そうでない場合もある。

【0072】

メッセンジャーＲＮＡのさまざまな位置に、さまざまな糖の変化及び／またはヌクレオシド間結合（例えば、骨格構造）が存在し得る。当業者であれば、ヌクレオチド類似体または他の改変（複数可）は、メッセンジャーＲＮＡの機能が実質的に低下しないように、メッセンジャーＲＮＡの任意の位置（複数可）に位置し得ることを理解するであろう。変化は、５’末端の変化であっても、または３’末端の変化であってもよい。いくつかの実施形態では、メッセンジャーＲＮＡは、３’末端に改変を含む。

【0073】

核酸塩基の代替品
代替ヌクレオシド及びヌクレオチドは、代替核酸塩基を含み得る。メッセンジャーＲＮＡの核酸塩基は、プリン、ピリミジン、またはそれらの誘導体などの有機塩基である。核酸塩基は、標準的な塩基（例えば、アデニン、グアニン、ウラシル、チミン、及びシトシン）であってもよい。これらの核酸塩基を、改変するかまたは完全に置換して、強化された特性、例えば、ヌクレアーゼに対する耐性などの安定性の増大を有するメッセンジャーＲＮＡ分子を提供し得る。非標準塩基または修飾塩基には、例えば、アルキル、アリール、ハロ、オキソ、ヒドロキシル、アルキルオキシ、及び／またはチオ置換を含むがこれらに限定されない、１つ以上の置換または修飾；１つ以上の縮合環または開環；酸化；及び／または還元、が挙げられる。

【0074】

代替ヌクレオチド塩基対には、標準的なアデニン－チミン、アデニン－ウラシル、またはグアニン－シトシン塩基対だけでなく、ヌクレオチド間及び／または非標準塩基もしくは代替塩基を含む代替ヌクレオチド間で形成される塩基対も含まれ、水素結合ドナー及び水素結合アクセプターの配置は、非標準塩基と標準塩基の間、または２つの相補的な非標準塩基構造間の水素結合を可能にする。このような非標準的な塩基対の１つの例は、代替ヌクレオチドのイノシンと、アデニン、シトシン、またはウラシルとの間の塩基対であった。

【0075】

いくつかの実施形態では、核酸塩基は代替ウラシルである。代替ウラシルを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、シュードウリジン（ψ）、ピリジン－４－オンリボヌクレオシド、５－アザ－ウラシル、６－アザ－ウラシル、２－チオ－５－アザ－ウラシル、２－チオ－ウラシル（ｓ２Ｕ）、４－チオ－ウラシル（ｓ４Ｕ）、４－チオ－シュードウリジン、２－チオ－シュードウリジン、５－ヒドロキシ－ウラシル（ｈｏ５Ｕ）、５－アミノアリル－ウラシル、５－ハロ－ウラシル（例えば、５－ヨード－ウラシルまたは５－ブロモ－ウラシル）、３－メチル－ウラシル（ｍ３Ｕ）、５－メトキシ－ウラシル（ｍｏ５Ｕ）、ウラシル５－オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウラシル５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５－カルボキシメチル－ウラシル（ｃｍ５Ｕ）、１－カルボキシメチル－シュードウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウラシル（ｃｈｍ５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウラシルメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－ウラシル（ｍｃｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオ－ウラシル（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオ－ウラシル（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－ウラシル（ｍｎｍ５Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－チオ－ウラシル（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウラシル（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウラシル（ｎｃｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウラシル（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウラシル（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５－プロピニル－ウラシル、１－プロピニル－シュードウラシル、５－タウリノメチル－ウラシル（τｍ５Ｕ）、１－タウリノメチル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウラシル（τｍ５ｓ２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオ－シュードウリジン、５－メチル－ウラシル（ｍ５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１－メチル－シュードウリジン（ｍψ）、１－エチル－シュードウリジン（Ｅｔ１ψ）、５－メチル－２－チオ－ウラシル（ｍ５ｓ２Ｕ）、１－メチル－４－チオ－シュードウリジン（ｍ１ｓ４ψ）、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、３－メチル－シュードウリジン（ｍ３ψ）、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、ジヒドロロウラシル（Ｄ）、ジヒドロシュードウリジン、５，６－ジヒドロロウラシル、５－メチル－ジヒドロロウラシル（ｍ５Ｄ）、２－チオ－ジヒドロロウラシル、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－メトキシ－ウラシル、２－メトキシ－４－チオ－ウラシル、４－メトキシ－シュードウリジン、４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、Ｎ１－メチル－シュードウリジン、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウラシル（ａｃｐ３Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ３ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウラシル（ｉｎｍ５Ｕ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオ－ウラシル（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、５，２’－Ｏ－ジメチルウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２－チオ－２’－Ｏ＿メチル－ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－Ｏ－メチルウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’－Ｏ－ジメチルウリジン（ｍ３Ｕｍ）、及び５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－Ｏ－メチルウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１－チオ－ウラシル、デオキシチミジン、５－（２－カルボメトキシビニル）－ウラシル、５－（カルバモイルヒドロキシメチル）－ウラシル、５－カルバモイルメチル－２－チオ－ウラシル、５－カルボキシメチル－２－チオ－ウラシル、５－シアノメチル－ウラシル、５－メトキシ－２－チオ－ウラシル、及び５－［３－（１－Ｅ－プロペニルアミノ）］ウラシルが挙げられる。一実施形態では、修飾ウラシルは、シュードウリジンである。一実施形態では、修飾ウラシルは、Ｎ１－メチル－シュードウリジンである。

【0076】

いくつかの実施形態では、核酸塩基は、代替シトシンである。代替シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、５－アザ－シトシン、６－アザ－シトシン、シュードイソシチジン、３－メチル－シトシン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４－アセチル－シトシン（ａｃ４Ｃ）、５－ホルミル－シトシン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４－メチル－シトシン（ｍ４Ｃ）、５－メチル－シトシン（ｍ５Ｃ）、５－ハロ－シトシン（例えば、５－ヨード－シトシン）、５－ヒドロキシメチル－シトシン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－シュードイソシチジン、ピロロ－シトシン、ピロロ－シュードイソシチジン、２－チオ－シトシン（ｓ２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シトシン、４－チオ－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル－ゼブラリン、５－アザ－２－チオ－ゼブラリン、２－チオ－ゼブラリン、２－メトキシ－シトシン、２－メトキシ－５－メチル－シトシン、４－メトキシ－シュードイソシチジン、４－メトキシ－１－メチル－シュードイソシチジン、リシジン（ｋ２Ｃ）、５，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４－アセチル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ａｃ４Ｃｍ）、Ｎ４，２’－Ｏ－ジメチル－シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５－ホルミル－２’－Ｏ－メチル－シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４、２’－Ｏ－トリメチル－シチジン（ｍ４２Ｃｍ）、１－チオ－シトシン、５－ヒドロキシ－シトシン、５－（３－アジドプロピル）－シトシン、及び５－（２－アジドエチル）－シトシンが挙げられる。一例では、修飾シトシンは、５－メチル－シトシンである。

【0077】

いくつかの実施形態では、核酸塩基は、代替アデニンである。代替アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、２－アミノ－プリン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノ－６－ハロ－プリン（例えば、２－アミノ－６－クロロ－プリン）、６－ハロ－プリン（例えば、６－クロロプリン）、２－アミノ－６－メチルプリン、８－アジド－アデニン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノプリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチル－アデニン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデニン（ｍ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－メチル－アデニン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６－イソペンテニル－アデニン（ｉ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニル－アデニン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６－（シス－ヒドロキシイソペンテニル）アデニン（ｉｏ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－（シス－ヒドロキシイソペンテニル）アデニン（ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６－グリシニルカルバモイル－アデニン（ｇ６Ａ）、Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデニン（ｔ６Ａ）、Ｎ６－メチル－Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデニン（ｍ６ｔ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデニン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６－ジメチル－アデニン（ｍ６２Ａ）、Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデニン（ｈｎ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデニン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６－アセチルアデニン（ａｃ６Ａ）、７－メチルアデニン、２－メチルチオアデニン、２－メトキシアデニン、Ｎ６，２’－Ｏ－ジメチルアデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６、２’－Ｏ－トリメチル－アデノシン（ｍ６２Ａｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－アデノシン（ｍ１Ａｍ）、２－アミノ－Ｎ６－メチル－プリン、１－チオ－アデニン、８－アジド－アデニン、Ｎ６－（１９－アミノ－ペンタオキサナデシル）－アデニン、２，８－ジメチル－アデニン、Ｎ６－ホルミル－アデニン、及びＮ６－ヒドロキシメチル－アデニンが挙げられる。

【0078】

いくつかの実施形態では、核酸塩基は代替グアニンである。代替グアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍｌｌ）、ウィオシン（ｉｍＧ）、メチルウィオシン（ｍｉｍＧ）、４－デメチル－ウィオシン（ｉｍＧ－１４）、イソウィオシン（ｉｍＧ２）、ウィブトシン（ｙＷ）、ペルオキシウィブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシウィブトシン（ＯＨｙＷ）、低修飾ヒドロキシウィブトシン（ＯＨｙＷ＊）、７－デアザ－グアニン、クエオシン（Ｑ）、エポキシクエオシン（ｏＱ）、ガラクトシル－クエオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル－クエオシン（ｍａｎＱ）、７－シアノ－７－デアザ－グアニン（ｐｒｅＱ０）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアニン（ｐｒｅＱ１）、アーキオシシン（Ｇ＋）、７－デアザ－８－アザ－グアニン、６－チオ－グアニン、６－チオ－７－デアザ－グアニン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアニン、７－メチル－グアニン（ｍ７Ｇ）、６－チオ－７－メチル－グアニン、７－メチル－イノシン、６－メトキシ－グアニン、１－メチル－グアニン（ｍ１Ｇ）、Ｎ２－メチル－グアニン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－グアニン（ｍ２２Ｇ）、Ｎ２，７－ジメチル－グアニン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ２、Ｎ２，７－ジメチル－グアニン（ｍ２，２，７Ｇ）、８－オキソ－グアニン、７－メチル－８－オキソ－グアニン、１－メチル－６－チオ－グアニン、Ｎ２－メチル－６－チオ－グアニン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオグアニン、Ｎ２－メチル－２’－Ｏ－メチルグアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－２’－Ｏ－メチルグアノシン（ｍ２２Ｇｍ）、１－メチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇｍ）、Ｎ２，７－ジメチル－２’－Ｏ－メチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇｍ）、２’－Ｏ－メチル－イノシン（Ｉｍ）、１，２’－Ｏ－ジメチル－イノシン（ｍｌｌｍ）、１－チオ－グアニン、及びＯ－６－メチル－グアニンが挙げられる。

【0079】

ヌクレオチドの代替核酸塩基は、独立して、プリン、ピリミジン、プリンまたはピリミジン類似体であってもよい。例えば、核酸塩基は、アデニン、シトシン、グアニン、ウラシル、またはヒポキサンチンの代替となり得る。別の実施形態では、核酸塩基としてはまた、例えば、塩基の天然及び合成の誘導体、例としては、ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６－メチル及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２－プロピル及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン及び２－チオシトシン、５－プロピニルウラシル、及びシトシン、６－アゾウラシル、シトシン及びチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ（例えば、８－ブロモ）、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシル、ならびに他の８－置換アデニン及びグアニン、５－ハロ、特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチル、ならびに他の５－置換ウラシル及びシトシン、７－メチルグアニン及び７－メチルアデニン、８－アザグアニン及び８－アザアデニン、デアザグアニン、７－デアザグアニン、３－デアザグアニン、デアザアデニン、７－デアザアデニン、３－デアザアデニン、ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン、イミダゾ［１，５－ａ］１，３，５トリアジノン、９－デアザプリン、イミダゾ［４，５－ｄ］ピラジン、チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン、ピラジン－２－オン、１，２，４－トリアジン、ピリダジン；または１，３，５トリアジンが挙げられる。

【0080】

化合物１～１２のうちの１つ以上から選択される化合物を含むＬＮＰとの製剤化のための従来のｍＲＮＡは、当該技術分野で公知の任意の利用可能な技術に従って調製され得る。メッセンジャーＲＮＡは、例えば、目的の遺伝子をコードする下流配列に連結された上流バクテリオファージプロモーター配列からなる操作されたＤＮＡテンプレートからＲＮＡ分子をテンプレート指向的に合成するプロセスを提供する酵素合成によって調製され得る。テンプレートＤＮＡは、プラスミドＤＮＡ及びポリメラーゼ連鎖反応増幅を含むがこれらに限定されない、当該技術分野で周知の適切な技術を用いて、多くの供給源からインビトロ転写用に調製してもよい（Ｌｉｎｐｉｎｓｅｌ，Ｊ．Ｌ ａｎｄ Ｃｏｎｎ，Ｇ．Ｌ．，Ｇｅｎｅｒａｌ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｓｍｉｄ ＤＮＡ ｔｅｍｐｌａｔｅ ａｎｄ Ｂｏｗｍａｎ，Ｊ．Ｃ．，Ａｚｉｚｉ，Ｂ．，Ｌｅｎｚ，Ｔ．Ｋ．，Ｒａｙ，Ｐ．，ａｎｄ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｌ．Ｄ．ｉｎ ＲＮＡ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ ＲＮＡ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｂｙ ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ ＰＡＧＥ ｉｎ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｖ．９４１ Ｃｏｎｎ Ｇ．Ｌ．（ｅｄ），Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，２０１２を参照のこと）。

【0081】

ＲＮＡの転写は、得られるｍＲＮＡ転写物の分解の可能性を最小限に抑えながらポリメラーゼ活性を支持する条件下で、対応するＲＮＡポリメラーゼ及びアデノシン、グアノシン、ウリジン、及びシチジンリボヌクレオシド三リン酸（ｒＮＴＰ）の存在下で、適切な線状ＤＮＡテンプレートを使用してインビトロで行われる。インビトロ転写は、さまざまな市販のキット、例としては、限定するものではないが、ＲｉｂｏＭａｘ Ｌａｒｇｅ Ｓｃａｌｅ ＲＮＡ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ），ＭｅｇａＳｃｒｉｐｔ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｋｉｔｓ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ならびにＲＮＡポリメラーゼ及びｒＮＴＰなどの市販の試薬を使用して行ってもよい。ｍＲＮＡのインビトロ転写の方法論は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｌｏｓｉｃｋ，Ｒ．，１９７２，Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ｖ．４１ ４０９－４６；Ｋａｍａｋａｋａ，Ｒ．Ｔ．ａｎｄ Ｋｒａｕｓ，Ｗ．Ｌ．２００１．Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ．２：１１．６：１１．６．１－１１．６．１７；Ｂｅｃｋｅｒｔ，Ｂ．Ａｎｄ Ｍａｓｑｕｉｄａ，Ｂ．，（２０１０）Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ＲＮＡ ｂｙ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｉｎ ＲＮＡ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖ．７０３（Ｎｅｉｌｓｏｎ，Ｈ．Ｅｄ），Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，２０１０；Ｂｒｕｎｅｌｌｅ，Ｊ．Ｌ．ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ，Ｒ．，２０１３，Ｃｈａｐｔｅｒ Ｆｉｖｅ － Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｐｌａｓｍｉｄ ｏｒ ＰＣＲ－ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ＤＮＡ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ｖ．５３０，１０１－１１４を参照のこと；それらすべてが参照により本明細書に組み込まれる）。

【0082】

次に、インビトロで転写された所望のメッセンジャーＲＮＡを、転写または関連反応の不要な成分から精製する。メッセンジャーＲＮＡ転写物の単離技術は当該技術分野で周知であり、フェノール／クロロホルム抽出、または一価カチオンもしくは塩化リチウムの存在下でのアルコールによる沈殿を含む。

【0083】

実施形態では、ＬＮＰに会合するメッセンジャーＲＮＡは、自己増幅メッセンジャーＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）分子である。特定の実施形態では、ｓａＲＮＡはアルファウイルスに由来するか、アルファウイルスに基づく。このようなｓａＲＮＡ分子は当該技術分野で公知であり、例えば、構造ウイルスタンパク質を目的のタンパク質をコードするヌクレオチド配列で置換するアルファウイルス由来の複製エレメントを使用して生成され得る。ｓａＲＮＡが送達される標的細胞は、タンパク質または抗原などのコードされた遺伝子産物の指数関数的な増大を生じ、それらは細胞内に蓄積するか、細胞から分泌され得る。

【0084】

ｓａＲＮＡは、ウイルスレプリカーゼ、ウイルスプロテアーゼ、ウイルスヘリカーゼ及び他の非構造ウイルスタンパク質からなる群から選択される１つ以上の遺伝子を含んでもよく、また、５’－及び３’－末端シス活性複製配列、及び任意選択で、所望のアミノ酸配列をコードする異種配列も含んでもよい。異種配列の発現を指示するサブゲノムプロモーターが存在してもよい。実施形態では、異種配列は、ｓａＲＮＡ内の他のコード領域にインフレームで融合されてもよいし、及び／または内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）の制御下にあってもよい。

【0085】

ｓａＲＮＡは、標的細胞への送達後に直接翻訳され、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを提供し、次いで、これが、送達されたＲＮＡから転写物を生成し、それにより、送達されたＲＮＡに対してアンチセンスである複数のＲＮＡ転写物を提供する。

【0086】

実施形態では、ｓａＲＮＡはアルファウイルスベースのＲＮＡレプリコンを使用する。アルファウイルスベースのレプリコンは、細胞に送達された後に翻訳されてレプリカーゼ（またはレプリカーゼ転写酵素）を提供し得る（＋）鎖レプリコンである。レプリカーゼはポリタンパク質として翻訳され、自己切断して複製複合体を提供し、送達された（＋）鎖のＲＮＡのゲノム（－）鎖コピーを作成する。これらの（－）鎖転写物自体を転写して、（＋）鎖親ＲＮＡのさらなるコピーを得て、また、所望の遺伝子産物をコードするサブゲノム転写物も得る。それにより、サブゲノム転写物の翻訳により、トランスフェクトされた細胞による所望の遺伝子産物のインサイチュ発現がもたらされる。適切なアルファウイルスレプリコンは、例えば、シンドビスウイルス、セムリキ森林ウイルス、東部馬脳炎ウイルス、ベネズエラ馬脳炎ウイルスなど由来のレプリカーゼを使用し得る。

【0087】

したがって、好ましいｓａＲＮＡ分子は、（ｉ）ｓａＲＮＡ分子からＲＮＡを転写し得るＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ、及び（ｉｉ）ポリペプチド抗原をコードする。ポリメラーゼは、例えば、アルファウイルスタンパク質ｎｓＰ４を含むアルファウイルスレプリカーゼであり得る。

【0088】

実施形態では、適切なｓａＲＮＡは、２つのオープンリーディングフレームを有し得る。最初（５’）のオープンリーディングフレームはレプリカーゼをコードする；第２（３’）のオープンリーディングフレームはポリペプチド抗原をコードする。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、例えば、別の所望の遺伝子産物をコードする追加の（下流）オープンリーディングフレームを有し得る。適切なｓａＲＮＡ分子は、コードされたレプリカーゼと適合する５’配列を有し得る。

【0089】

実施形態では、ｓａＲＮＡは、上で定義した１つ以上の修飾ヌクレオチドを含み得る。

【0090】

本発明のｓａＲＮＡは、ヘルパーＴ細胞応答もしくは細胞傷害性Ｔ細胞応答、またはその両方を誘発し得るエピトープなどのある範囲のエピトープを含む１つ以上のポリペプチド抗原をコードし得る。

【0091】

実施形態では、ｓａＲＮＡは、２つ以上のオープンリーディングフレームから複数のヌクレオチド配列を発現するように操作され得、それにより、サイトカインまたは他の免疫調節因子と一緒に２つ以上の抗原などのタンパク質の同時発現が可能になり、これが、免疫反応の生成を増強し得る。このようなｓａＲＮＡ分子は、二価または多価ワクチンとしてさまざまなタンパク質を同時に生産するのに有用であり得る。

【0092】

ｓａＲＮＡは、当該技術分野で公知の任意の適切な方法を使用して調製され得る。修飾ヌクレオチドを含むｓａＲＮＡ分子は、Ｔ７ファージＲＮＡポリメラーゼ、ＳＰ６ファージＲＮＡポリメラーゼ、Ｔ３ファージＲＮＡポリメラーゼなどの適切なＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ、または修飾されたヌクレオチドのＲＮＡへの効率的な組み込みを可能にするポリメラーゼの変異体を使用して、ｓａＲＮＡ分子をコードするＤＮＡを転写することによって調製され得る。ｓａＲＮＡへのヌクレオチド類似体の組み込みを使用して、そのようなＲＮＡ分子の安定性を変化させても、ＲＮａｓｅに対する耐性を高めても、適切な宿主細胞への導入後の複製（ＲＮＡの「感染性」）を確立しても、及び／または自然免疫応答及び適応免疫応答誘導もしくは軽減してもよい。

【0093】

実施形態では、当業者に公知の様々なインビトロまたはインビボ試験方法を使用して、ｓａＲＮＡをスクリーニングして、その治療的及び予防的特性を確認し得る。例えば、ｓａＲＮＡを含むワクチンは、目的の特定のリンパ球タイプ、例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、Ｔ細胞株、及びＴ細胞クローンの増殖またはエフェクター機能の誘導に対する効果について試験し得る。例えば、免疫化マウス由来の脾臓細胞を単離し、ポリペプチド抗原をコードする自己増幅メッセンジャーＲＮＡ分子を含む自己標的細胞を溶解する細胞傷害性Ｔリンパ球の能力を調べてもよい。さらに、ヘルパーＴ細胞の分化は、ＥＬＩＳＡによってＴＨ１（ＩＬ－２及びＩＦＮ－γ）及び／またはＴＨ２（ＩＬ－４及びＩＬ－５）サイトカインの増殖もしくは産生を測定することによって、または細胞質サイトカイン染色及びフローサイトメトリーによってＣＤ４＋Ｔ細胞内で直接測定することによって分析され得る。

【0094】

実施形態では、ポリペプチド抗原をコードするｓａＲＮＡは、例えば、目的の抗原に特異的な抗体のＢ細胞産生の誘導によって証明されるように、体液性免疫応答を誘導する能力について試験され得る。これらのアッセイは、一実施形態では、免疫化された個体由来の末梢Ｂリンパ球を使用して実施し得る。

【0095】

脂質ナノ粒子の形成
メッセンジャーＲＮＡと会合し、化合物１～１２のうちの１つ以上から選択される化合物を含むＬＮＰは、製剤分野で周知のアプローチを使用して作製され得る。例えば、適切なＬＮＰは、ヘリンボーンマイクロ混合を含むマイクロ流体工学、及び２つの流体流（一方の流体流は通常水溶液中にメッセンジャーＲＮＡを含み、他方の流体流は、通常はエタノール中に必要なさまざまな脂質成分を有する）のＴ字接合混合などの混合プロセスを使用して形成してもよい。

【0096】

次いで、ＬＮＰは、化合物１～１２の１つ以上から選択される化合物、リン脂質（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬを含む商業的供給源から購入され得るＤＯＰＥまたはＤＳＰＣなど）、ＰＥＧ化脂質（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬを含む商業的供給元から購入できる、ＰＥＧ－ＤＭＧとしても公知の１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロールメトキシポリエチレングリコールなど）、及び構造脂質／ステロール（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈを含む商業的供給源から購入され得る、コレステロールなど）を、例えば、エタノール中約５０ｍＭの濃度で組み合わせることによって調製され得る。溶液は、保管中、例えば、－２０℃で冷蔵すべきである。様々な脂質を組み合わせて、所望のモル比を生じ、水及びエタノールで、例えば、約５．５ｍＭ～約２５ｍＭの所望の最終脂質濃度まで希釈してもよい。

【0097】

メッセンジャーＲＮＡを含むＬＮＰ組成物は、上記の脂質溶液とメッセンジャーＲＮＡを含む溶液とを、例えば脂質成分対メッセンジャーＲＮＡの重量：重量比が約５：１～約５０：１で混合することによって調製される（実施例に示すように）。この脂質溶液は、ＮａｎｏＡｓｓｅｍｂｌｒマイクロ流体システムを使用して約３ｍｌ／分～約１８ｍｌ／分の流速でメッセンジャーＲＮＡ溶液と急速に混合され、約１：１～約４：１、または約２：１～約４：１の水対エタノール比を有する懸濁液を生成し得る。

【0098】

メッセンジャーＲＮＡを含むＬＮＰ組成物の場合、脱イオン水中の濃度１．０ｍｇ／ｍｌのメッセンジャーＲＮＡの溶液を、ｐＨ３～６の５０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液で希釈してストック溶液を形成してもよい。

【0099】

ＬＮＰ組成物は、当該技術分野で知られているように、ｐＨ６の５０ｍＭクエン酸緩衝液に１０倍希釈することによってさらに処理して、元の容積に濃縮されるまで３００ｋの分子量カットオフ膜（ｍＰＥＳ）を使用する接線流濾過（ＴＦＦ）に供してもよい。続いて、一例において、クエン酸緩衝液は、１０倍容積の新しい緩衝液を用いたダイアフィルトレーションを使用して、ｐＨ７．５の２０ｍＭトリス緩衝液、８０ｍＭ塩化ナトリウム、及び３％スクロースを含有する緩衝液と置き換えてもよい。ＬＮＰ溶液は、例えば５～１０ｍＬの容量に濃縮して、０．２ミクロンのＰＥＳ シリンジフィルターを使用して濾過して、バイアルにアリコートし、試料が－８０℃に達するまで、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）ＣｏｏｌＣｅｌｌ（登録商標）ＬＸ Ｃｅｌｌ Ｆｒｅｅｚｉｎｇ Ｃｏｎｔａｉｎｅｒを使用して１℃／分で凍結する。試料は必要になるまで－８０℃で保存してもよい。

【0100】

上記の方法により、ナノ沈殿及び粒子形成が誘導される。Ｔ字接合及び直接注入を含むがこれらに限定されない代替プロセスを使用して、同じナノ析出を達成し得る。

【0101】

いくつかの実施形態では、ＬＮＰ製剤の脂質成分は、約２５モル％～約６０モル％の構造１～１２の化合物、約２モル％～約２５モル％のリン脂質（中性脂質）、約１８．５モル％～約６０モル％の構造脂質（ステロール）、及び約０．２モル％～約１０モル％のＰＥＧ化脂質を含み、ただし合計モル％は１００％を超えない。いくつかの実施形態では、ＬＮＰ製剤の脂質成分は、約３０モル％～約５０モル％の構造１～１２の化合物、約５モル％～約２０モル％のリン脂質、約３０モル％～約５５モル％の構造脂質、及び約１モル％～約５モル％のＰＥＧ化脂質を含む。特定の実施形態では、脂質成分は、約４０モル％の構造１～１２の化合物、約１０モル％のリン脂質、約４８モル％の構造脂質、及び約２．０モル％のＰＥＧ脂質を含む。いくつかの実施形態では、リン脂質は、ＤＯＰＥであっても、またはＤＳＰＣであってもよい。他の実施形態では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ－ＤＭＧであってもよく、及び／または構造脂質はコレステロールであってもよい。

【0102】

化合物１～１２から選択される化合物を含むＬＮＰ内のメッセンジャーＲＮＡのカプセル化効率は、少なくとも５０％、例えば、約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であり得る。いくつかの実施形態では、カプセル化効率は少なくとも８０％であり得る。特定の実施形態では、カプセル化効率は少なくとも９０％であり得る。

【0103】

脂質ナノ粒子組成物
化合物１～１２から選択される化合物及びメッセンジャーＲＮＡを含むＬＮＰは、ＬＮＰ、リポソーム、脂質小胞及び同様の脂質ベースの粒子を含む脂質粒子の任意の許容される投与様式を介して投与するために製剤化し得る。本発明の医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、懸濁液、座薬、注射剤、吸入剤、ゲル、ミクロスフェア及びエアロゾルなどの固体、半固体、液体または気体の形態の調製物に製剤化してもよい。このような医薬ＬＮＰ組成物の典型的な投与経路としては、限定するものではないが、経口、局所、経皮、吸入、非経口、舌下、頬側、直腸、膣、及び鼻腔内が挙げられる。本明細書で使用される非経口という用語には、皮下注射、静脈内、筋肉内、皮内、胸骨内注射または注入技術が含まれる。対象に投与される組成物は、１つ以上の単位剤形の形態であってもよく、例えば、錠剤または注射可能な液体の容積が単一の剤形であってもよい。このような剤形を調製する実際の方法は、当業者には公知であるか、明らかとなるであろう；例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００）を参照のこと。

【0104】

したがって、本開示の一実施形態は、化合物１～１２から選択される化合物を含むＬＮＰを薬学的に許容される担体と組み合わせて含む組成物（薬学的組成物など）を提供する。

【0105】

一般的に、「担体」という用語は、任意の対象、例えば、ヒトに安全に投与し得る固体または液体の充填剤、結合剤、希釈剤、封入物質、乳化剤、湿潤剤、溶媒、懸濁剤、コーティングまたは潤滑剤を意味する。特定の投与経路に応じて、当該技術分野で公知の種々の許容される担体が、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．Ｎ．Ｊ．ＵＳＡ，１９９１）に記載の実施形態についてのとおり、用いられてもよい。

【0106】

ＬＮＰは、予防的または治療的処置のための、非経口、局所、経口、または局所投与、筋肉内投与、エアロゾル投与、または経皮投与に有用である。一実施形態では、ＬＮＰは、筋肉内、皮下、または静脈内などの非経口的に投与される。いくつかの実施形態では、ＬＮＰは筋肉内に投与される。

【0107】

投与するＬＮＰの製剤化（配合）は、選択した投与経路及び製剤（例えば、溶液、乳剤、カプセル剤）に応じて変動する。投与するＬＮＰを含む適切な医薬組成物は、生理学的に許容可能な担体中で調製され得る。液剤または乳剤では、好適な担体としては、実施形態では、生理食塩水及び緩衝化媒体を含め、水溶液またはアルコール／水溶液、乳濁液または懸濁液が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸リンゲルまたは固定油を挙げることができる。様々な適切な水性担体が当業者に公知であり、水、緩衝水、緩衝生理食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）、デキストロース溶液及びグリシンが挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、様々な添加剤、保存剤、または流体、栄養補給液または電解質補液を挙げることができる（概して、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ，Ｅｄ．１９８０を参照されたい）。この組成物は任意選択で、生理的条件に近づけるために必要とされるような製薬学的に許容可能な補助物質（ｐＨ調整剤、及び緩衝剤及び毒性調整剤、実施形態に関しては、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム及び乳酸ナトリウムなど）を含んでもよい。ＬＮＰは、液体段階で保管してもよいし、または当該技術分野において公知の凍結乾燥技法及び再構成技法に従って、保存のために凍結乾燥して、使用前に、好適な担体で再構成してもよい。

【0108】

ＬＮＰ組成物がワクチン組成物であるならば、その担体は水、典型的には発熱物質を含まない水、等張食塩水または緩衝（水）溶液、例えばリン酸塩、クエン酸塩などの緩衝溶液であり得る。ＬＮＰワクチン組成物の注射には、ナトリウム塩、好ましくは少なくとも５０ｍＭのナトリウム塩、カルシウム塩、好ましくは少なくとも０．０１ｍＭのカルシウム塩、及び任意選択でカリウム塩、例えば少なくとも３ｍＭのカリウム塩を含有する、水、または好ましくは緩衝液、より好ましくは水性緩衝液を使用してもよい。一実施形態では、ナトリウム塩、カルシウム塩、及び任意選択でカリウム塩は、それらの塩化物、ヨウ化物、もしくは臭化物として、またはそれらの水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩、もしくは硫酸塩などの形態で存在し得る。ナトリウム塩の非限定的な例としては、例えば、ＮａＣＩ、ＮａＩ、ＮａＢｒ、Ｎａ_２ＣＯ_３、ＮａＨＣＯ_３、Ｎａ_２ＳＯ_４が挙げられ、任意のカリウム塩の例としては、例えば、ＫＣｌ、ＫＩ、ＫＢｒ、Ｋ_２ＣＯ３、ＫＨＣＯ_３、Ｋ_２ＳＯ_４が挙げられ、カルシウム塩の例としては、例えば、ＣａＣＩ_２、ＣａＩ_２、ＣａＢｒ_２、ＣａＣＯ_３、ＣａＳＯ_４、Ｃａ（ＯＨ）_２が挙げられる。さらに、上記カチオンの有機アニオンが緩衝液中に含まれてもよい。特定の実施形態では、注射目的に適した緩衝液は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カルシウム（ＣａＣｌ_２）、及び任意選択で塩化カリウム（ＫＣｌ）から選択される塩を含有してもよく、塩化物に加えてさらなるアニオンが存在してもよい。実施形態では、注射緩衝液中の塩は、少なくとも５０ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、少なくとも３ｍＭの塩化カリウム（ＫＣｌ）、及び少なくとも０．０１ｍＭの塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）という濃度で存在する。注入緩衝液は、特定の参照媒体に対して高張性、等張性、または低張性であり得る。

【0109】

ワクチンのいくつかの実施形態では、人への投与に適した１つ以上の適合性のある固体または液体の充填剤または希釈剤またはカプセル化化合物を使用してもよい。薬学的に許容される担体、充填剤、及び希釈剤は、対象への投与に適したものとするのに十分に高い純度及び十分に低い毒性を有する。薬学的に許容される担体、充填剤、またはその構成成分として使用され得る化合物のいくつかの例は、糖、例えばラクトース、グルコース、トレハロース及びスクロースなど；デンプン、例えば、コーンスターチまたはジャガイモデンプンなど；デキストロース；セルロース及びその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、酢酸セルロースなど；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；獣脂；固体流動促進剤、例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウムなど；硫酸カルシウム；植物油、例えば、ラッカセイ油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油及びテオブロマ油など；ポリオール、例えば、ポリプロピレングリコール、グリセロール、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコールなど；ならびにアルギン酸である。

【0110】

ＬＮＰ組成物がワクチン組成物である場合、組成物の免疫刺激特性を増強するために、１つ以上の薬学的に許容されるアジュバントをさらに含んでもよい。アジュバントは、ＬＮＰ組成物の投与及び送達を支援するのに適しており、自然免疫系の免疫応答、すなわち非特異的免疫応答を開始または増大し得る任意の化合物であり得る。

【0111】

このようなアジュバントは、当業者に公知であり、ワクチンの特定の性質に適した、すなわち哺乳動物における適切な免疫応答の誘導に適した任意のアジュバントから選択され得る。実施形態では、アジュバントは、以下からなる群から選択され得る：ＭＦ５９（登録商標）（スクアレン－水エマルジョン）、ＴＤＭ、ＭＤＰ、ムラミルジペプチド、プルロニクス、ミョウバン溶液、水酸化アルミニウム、ＡＤＪＵＭＥＲ（商標）（ポリホスファゼン）；リン酸アルミニウムゲル；藻類由来のグルカン；アルガンムリン；水酸化アルミニウムゲル（ミョウバン）；タンパク質吸着性の高い水酸化アルミニウムゲル；低粘度の水酸化アルミニウムゲル；ＡＦまたはＳＰＴ（スクアラン（５％）、Ｔｗｅｅｎ ８０（０．２％）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｌ１２１（１．２５％）、リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４のエマルジョン）；ＡＶＲＩＤＩＮＥ（商標）（プロパンジアミン）；ＢＡＹ Ｒ１００５（商標）（（Ｎ－（２－デオキシ－２－Ｌ－ロイシルアミノ－ｂ－Ｄ－グルコピラノシル）－Ｎ－オクタデシル－ドデカノイル－アミドヒドロアセテート）；ＣＡＬＣＩＴＲＩＯＬ（商標）（１－α，２５－ジヒドロキシ－ビタミンＤ３）；リン酸カルシウムゲル；ＣＡＰ（商標）（リン酸カルシウムナノ粒子）；コレラホロトキシン、コレラ毒素－Ａｌ－タンパク質－Ａ－Ｄ－フラグメント融合タンパク質、コレラ毒素のサブユニットＢ；ＣＲＬ １００５（ブロックコポリマーＰ１２０５）；サイトカイン含有リポソーム；ＤＤＡ（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド）；ＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン）；ＤＭＰＣ（ジミリストイルホスファチジルコリン）；ＤＭＰＧ（ジミリストイルホスファチジルグリセロール）；ＤＯＣ／ミョウバン複合体（デオキシコール酸ナトリウム塩）；フロイント完全アジュバント；フロイント不完全アジュバント；ガンマイヌリン；ゲルブアジュバント（以下の混合物：ｉ）Ｎ－アセチルグルコサミニル－（Ｐｌ－４）－Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－グルタミン（ＧＭＤＰ）、ｉｉ）ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロリド（ＤＤＡ）、ｉｉｉ）亜鉛－Ｌ－プロリン塩錯体（ＺｎＰｒｏ－８）；ＧＭ－ＣＳＦ）；ＧＭＤＰ（Ｎ－アセチルグルコサミニル－（ｂｌ－４）－Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン）；イミキモド（１－（２－メチルプロピル）－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－４－アミン）；ＩｍｍＴｈｅｒ（商標）（Ｎ－アセチルグルコサミニル－Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－Ａｌａ－Ｄ－ｉｓｏＧｌｕ－Ｌ－Ａｌａ－グリセロールジパルミテート）；ＤＲＶ（脱水－再水和小胞から調製された免疫リポソーム）；インターフェロン－ガンマ；インターロイキン－Ｉβ；インターロイキン－２；インターロイキン－７；インターロイキン－１２；ＩＳＣＯＭＳ（商標）；ＩＳＣＯＰＲＥＰ ７．０．３．（商標）；リポソーム；ＬＯＸＯＲＩＢＩＮＥ（商標）（７－アリル－８－オキソグアノシン）；ＬＴ経口アジュバント（Ｅ．ｃｏｌｉ不安定性エンテロトキシン－プロトキシン）；任意の組成の微小球及び微粒子；；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ ＩＳＡ ５１（商標）（精製不完全フロイントアジュバント）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ ＩＳＡ ７２０（商標）（代謝性油アジュバント）；ＭＰＬ（商標）（３－Ｑ－デアシル－４’－モノホスホリルリピドＡ）；ＭＴＰ－ＰＥ及びＭＴＰ－ＰＥリポソーム（（Ｎ－アセチル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－（ヒドロキシホスホリルオキシ））－エチルアミド、一ナトリウム塩））；ＭＵＲＡＭＥＴＩＤＥ（商標）（Ｎａｃ－Ｍｕｒ－Ｌ－Ａｌａ－Ｄ－Ｇｌｎ－ＯＣＨ３）；ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ（商標）及びＤ－ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ（商標）（Ｎａｃ－Ｍｕｒ－Ｌ－Ｔｈｒ－Ｄ－ｉｓｏＧＩｎ－ｓｎ－グリセロジパルミトイル）；ＮＡＧＯ（ノイラミニダーゼ－ガラクトースオキシダーゼ）；任意の組成のナノスフィアまたはナノ粒子；ＮＩＳＶ（非イオン性界面活性剤小胞）；ＰＬＥＵＲＡＮ（商標）（β－グルカン）；ＰＬＧＡ、ＰＧＡ、及びＰＬＡ（乳酸とグリコール酸のホモポリマー及びコポリマー；ミクロスフェア／ナノスフェア）；ＰＬＵＲＯＮＩＣ Ｌ１２１（商標）；ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリレート）；ＰＯＤＤＳ（商標）（プロテイノイドミクロスフェア）；ポリエチレンカルバメート誘導体；ポリ－ｒＡ：ポリ－ｒＵ（ポリアデニル酸－ポリウリジル酸複合体）；ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）；タンパク質コクリエート（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．，Ａｌａｂａｓｔｅｒ，ＡＬ）；ＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標）（ＱＳ－２１）；Ｑｕｉｌ－Ａ（Ｑｕｉｌ－Ａサポニン）；Ｓ－２８４６３（４－アミノ－オテック－ジメチル－２－エトキシメチル－１Ｈ－イミダゾ［４，５ ｃ］キノリン－１－エタノール）；ＳＡＦ－１（商標）（「Ｓｙｎｔｅｘアジュバント製剤」）；センダイプロテオリポソーム及びセンダイ含有脂質マトリックス；Ｓｐａｎ－８５（トリオレイン酸ソルビタン）；Ｓｐｅｃｏｌ（Ｍａｒｃｏｌ ５２、Ｓｐａｎ８５、及びＴｗｅｅｎ８５のエマルジョン）；スクアレンまたはＲｏｂａｎｅ（登録商標）（２，６，１０，１５，１９，２３－ヘキサメチルテトラコサン及び２，６，１０，１５，１９，２３－ヘキサメチル－２，６，１０，１４，１８，２２－テトラコサヘキサン）；ステアリルチロシン（オクタデシルチロシン塩酸塩）；Ｔｈｅｒａｍｉｄ（登録商標）（Ｎ－アセチルグルコサミニル－Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－Ａｌａ－Ｄ－イソＧｌｕ－Ｌ－Ａｌａ－ジパルミトキシプロピルアミド）；セロニル－ＭＤＰ（Ｔｅｒｍｕｒｔｉｄｅ（商標）または［ｔｈｒｌ］－ＭＤＰ；Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－スレオニル－Ｄ－イソグルタミン）；Ｔｙ粒子（Ｔｙ－ＶＬＰまたはウイルス様粒子）；Ｗａｌｔｅｒ－Ｒｅｅｄリポソーム（水酸化アルミニウムに吸着されたリピドＡを含むリポソーム）、及びＰａｍ３Ｃｙｓを含むリポペプチド、特にＡｄｊｕ－ｐｈｏｓ、Ａｌｈｙｔｒｏｇｅｌ、Ｒｅｈｙｄｒａｇｅｌなどのアルミニウム塩；ＣＦＡ、ＳＡＦ、ＩＦＡ、ＭＦ５９、Ｐｒｏｖａｘ、ＴｉｔｅｒＭａｘ、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ、Ｖａｘｆｅｃｔｉｎを含むエマルジョン；Ｏｐｔｉｖａｘ（ＣＲＬ１００５）、Ｌ１２１、Ｐｏｌｏａｘｍｅｒ４０１０）などを含むコポリマー；Ｓｔｅａｌｔｈを含むリポソーム、ＢＩＯＲＡＬを含むコクリエート；ＱＳ２１、Ｑｕｉｌ Ａ、Ｉｓｃｏｍａｔｒｉｘ、ＩＳＣＯＭを含む植物由来アジュバント；Ｔｏｍａｔｉｎｅ（ＰＬＧ、ＰＭＭ、イヌリンなどの生体高分子）を含む共刺激に適したアジュバント；微生物由来アジュバント、例としては、Ｒｏｍｕｒｔｉｄｅ、ＤＥＴＯＸ、ＭＰＬ、ＣＷＳ、マンノース、ＣｐＧポリヌクレオチド配列、ＣｐＧ７９０９、ヒトＴＬＲ１－１０のリガンド、マウスＴＬＲ１－１３のリガンド、ＩＳＳ－１０１８、ＩＣ３１、イミダゾキノリン、Ａｍｐｌｉｇｅｎ、Ｒｉｂｉ５２９、ＩＭＯｘｉｎｅ、ＩＲＩＶ、ＶＬＰ、コレラ毒素、易熱性毒素、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、フラジェリン、ＧＰＩアンカー、ＬＮＦＰＩＩＩ／ルイスＸ、抗菌ペプチド、ＵＣ－１Ｖ１５０、ＲＳＶ融合タンパク質、ｃｄｉＧＭＰ；ならびにアンタゴニストとして適したアジュバント、例としては、ＣＧＲＰ神経ペプチド。１つの好ましい例において、特にワクチンがインフルエンザワクチンである場合、そのアジュバントは水中油型エマルジョンアジュバントＭＦ５９（登録商標）であってもよい。

【0112】

製剤化の際、本開示の組成物は、投薬の製剤化に適合した方法で、かつ治療的／予防的に有効であるような量で投与される。ＬＮＰの投与量範囲は、望ましい効果を生み出すのに十分大きい範囲であった。実施形態では、組成物は、有効量のカプセル化または会合したメッセンジャーＲＮＡ、すなわち従来のｍＲＮＡまたはｓａＲＮＡを含む。一実施形態では、その組成物は治療有効量のメッセンジャーＲＮＡを含む。別の実施形態では、その組成物は予防有効量のメッセンジャーＲＮＡを含む。

【0113】

投与量は副作用を引き起こすほど多量であってはならない。一般的に、投与量は、患者の年齢、状態、性別、及び疾患の程度により変動し、当業者により決定され得る。この投与量は、任意の合併症の事象において個々の医師により調整され得る。

【0114】

上記の化合物及び組成物の調製方法は、本明細書にさらに記載され、及び／または当該技術分野で公知である。

【0115】

目的のポリペプチドの治療及び生産の方法
異常なタンパク質もしくはポリペプチドの産生の結果であるか、またはそれに関連する場合がある、疾患、障害、及び／または状態は、メッセンジャーＲＮＡ及び化合物１～１２から選択される化合物を含む本発明のＬＮＰによって治療され得、これには、限定するものではないが、希少疾患、感染症、がん及び増殖性疾患、遺伝性疾患、自己免疫疾患、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患及び腎血管疾患、及び代謝疾患が挙げられる。

【0116】

実施形態では、従来のｍＲＮＡ及びｓａＲＮＡを含むメッセンジャーＲＮＡ、ＬＮＰの構成要素は、目的のポリペプチドを発現するために使用され得る。ヒトの特定の疾患は、通常はタンパク質が存在して活性化している細胞種における機能タンパク質の欠如または障害によって引き起こされる。機能的タンパク質は、例えば、コード遺伝子の転写不活性、またはタンパク質を完全または部分的に非機能にするコード遺伝子における変異の存在に起因して、完全または部分的に欠失され得る。

【0117】

ＬＮＰ組成物は、投与単位形態で製剤化され得る。任意の特定の患者のための治療有効量または予防有効量は、治療されている障害の重症度及び同一性；利用される特定の組成物；患者の年齢、体重、全般的な健康、性別、及び食生活；利用される特定の医薬組成物の投与時間、投与経路、及び排泄速度；治療の持続期間；利用される特定の医薬組成物と組み合わせて、または同時に使用される薬物；ならびに医療技術分野で周知である同様の要因を含む、様々な要因に依存する。

【0118】

本明細書に記載のＬＮＰ組成物は、１つ以上の他の治療薬、予防薬、診断薬、または画像化薬と組み合わせて使用され得る。それらは、単一の組成物中で一緒に投与されてもよく、または異なる組成物中で別々に投与されてもよい。

【0119】

本開示は、哺乳動物細胞において目的のポリペプチドを産生する方法を提供する。ポリペプチドを産生する方法は、本明細書に記載されるように、目的のポリペプチドをコードするメッセンジャーＲＮＡを含むＬＮＰ組成物と細胞とを接触させることを含む。細胞をＬＮＰ組成物と接触させると、メッセンジャーＲＮＡが細胞内に取り込まれ、翻訳されて、目的のポリペプチドが生成され得る。

【0120】

いくつかの実施形態では、目的のポリペプチドは、目的の標的細胞または組織内で特異的に産生され得る。すなわち、ポリペプチドの産生は、非標的細胞または組織よりも標的細胞または組織において高い。

【0121】

メッセンジャーＲＮＡを含むＬＮＰ組成物を細胞と接触させるステップは、トランスフェクションを伴うか、またはトランスフェクションを引き起こし得る。例えば、中性脂質（例えばリン脂質）、ＰＥＧ化脂質またはステロールなどの構成ＬＮＰ脂質の１つ以上は、例えば、細胞膜または細胞内膜と相互作用及び／または融合することによって、トランスフェクションを促進し、及び／またはトランスフェクション効率を増大して、翻訳が起こる細胞サイトゾルへの移行を促進し得る。より具体的には、トランスフェクションは、ＬＮＰのエンドソーム取り込み、その後のＬＮＰ脂質成分とエンドソーム膜の相互作用によって引き起こされるエンドソームの不安定化と脱出によって起こる場合がある。トランスフェクションにより、細胞内でメッセンジャーＲＮＡが翻訳され得る。

【0122】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＬＮＰ組成物は、治療的に使用され得る。例えば、ＬＮＰ組成物に含まれるメッセンジャーＲＮＡは、治療用ポリペプチドを（例えば、翻訳可能領域において）コードし、細胞への接触及び／または侵入（例えば、トランスフェクション）の際に治療用ポリペプチドを産生し得る。他の実施形態では、ＬＮＰ組成物に含まれるメッセンジャーＲＮＡは、対象の免疫を改善または増大し得るポリペプチドをコードし得る。

【0123】

実施形態では、ＬＮＰ組成物に含まれるメッセンジャーＲＮＡは、ＬＮＰ組成物と接触させた細胞中に実質的に存在しない場合がある１つ以上のポリペプチドを置換し得る組換えポリペプチドをコードし得る。１つ以上の実質的に存在しないポリペプチドは、コード遺伝子またはその調節経路の遺伝子変異に起因して欠損している場合がある。あるいは、メッセンジャーＲＮＡの翻訳によって生成される組換えポリペプチドは、細胞内、細胞表面上に存在するか、または細胞から分泌される内因性タンパク質の活性に拮抗し得る。拮抗性組換えポリペプチドは、突然変異によって引き起こされる活性または局在化の変化など、内因性タンパク質の活性によって引き起こされる有害な影響に対抗するために望ましい場合がある。別の代替法では、メッセンジャーＲＮＡの翻訳によって生成される組換えポリペプチドは、細胞内、細胞表面上に存在するか、または細胞から分泌される生物学的部分の活性に間接的または直接的に拮抗し得る。拮抗する生物学的部分としては、限定するものではないが、脂質（例えば、コレステロール）、リポタンパク質（例えば、低密度リポタンパク質）、核酸、炭水化物、及び小分子毒素が挙げられる。メッセンジャーＲＮＡの翻訳によって生成される組換えポリペプチドは、細胞内、例えば核などの特定の区画内に局在化するように操作してもよいし、または細胞から分泌するかもしくは、細胞の原形質膜に移行するように操作してもよい。

【0124】

いくつかの実施形態では、メッセンジャーＲＮＡを含む本開示のＬＮＰ組成物と細胞を接触させることにより、外因性ポリヌクレオチドに対する細胞の自然免疫応答が低下し得る。細胞を、翻訳可能領域を含む第１の量の第１の外因性メッセンジャーＲＮＡを含む第１のＬＮＰ組成物と接触させてもよく、この第１の外因性メッセンジャーＲＮＡに対する細胞の自然免疫応答のレベルを決定し得る。続いて、細胞を、第２の量の第１の外因性メッセンジャーＲＮＡを含む第２のＬＮＰ組成物と接触させてもよく、この第２の量は、第１の量と比較してより少ない量の第１の外因性メッセンジャーＲＮＡである。あるいは、第２の組成物は、第１の外因性メッセンジャーＲＮＡとは異なる第１の量の第２の外因性メッセンジャーＲＮＡを含んでもよい。細胞を第１及び第２のＬＮＰ組成物と接触させるステップは、１回以上繰り返してもよい。さらに、細胞におけるポリペプチド産生（例えば、翻訳）の効率を任意選択で決定してもよく、標的タンパク質の産生効率が達成されるまで、その細胞を第１及び／または第２の組成物と繰り返し再接触させてもよい。

【0125】

いくつかの実施形態では、本開示は、疾患、障害または状態の治療用の薬剤の製造における、メッセンジャーＲＮＡ及び化合物１～１２から選択される化合物を含むＬＮＰの使用を提供する。この疾患、障害、または状態とは、本明細書の任意の１つ以上の実施形態に記載されている通りであり得る。

【0126】

医薬は、がん、感染症、アレルギー、または自己免疫疾患の予防または治療用であり得る。実施形態では、医薬はワクチンである。ワクチンは、腫瘍ワクチン、インフルエンザワクチン、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンであり得る。

【0127】

ワクチンにおけるＬＮＰの使用
いくつかの実施形態では、化合物１～１２から選択される化合物及びメッセンジャーＲＮＡを含むＬＮＰは、ワクチンの成分であり得る。ワクチンには、感染症に関連する１つ以上の症状に対する免疫を提供できる化合物及び調製物が含まれ、そのため感染症由来の抗原及び／またはエピトープをコードするメッセンジャーＲＮＡが含まれてもよい。ワクチンには、がん細胞に対する免疫応答を誘導する化合物及び調製物も含まれ、腫瘍細胞由来の抗原、エピトープ、及び／またはネオエピトープをコードするメッセンジャーＲＮＡが含まれてもよい。

【0128】

実施形態では、ワクチンは従来のｍＲＮＡワクチンまたはｓａＲＮＡワクチンであってもよく、したがって、化合物１～１２から選択される化合物を含むＬＮＰは、抗原ペプチドもしくはタンパク質、その断片、バリアント、または誘導体をコードする配列を含む従来のｍＲＮＡまたはｓａＲＮＡ分子を封入するか、またはそれらと会合する。

【0129】

実施形態では、メッセンジャーＲＮＡは、感染因子からの抗原をコードする。

【0130】

抗原性ペプチドまたはタンパク質は、病原性抗原、腫瘍抗原、アレルギー性抗原、または自己免疫性自己抗原であってもよい。このような病原性抗原は、ヒトなどの哺乳動物対象において免疫学的反応を引き起こす病原性生物、特に細菌、ウイルスまたは原生動物学的（多細胞）病原生物に由来する抗原であり得る。病原性抗原とは、ウイルスまたは細菌または原生動物の表面に位置する表面抗原、例えばタンパク質またはその断片であり得る。

【0131】

目的の病原性抗原としては、以下のうちの１つ以上に由来する抗原が挙げられ得る：Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ａｎａｐｌａｓｍａ属、Ａｎａｐｌａｓｍａ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌｕｍ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｅ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ａｒｅａ ｎｏｂａｃｔｅｒｉ ｕｒｎ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ、Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｂａｂｅｓｉａ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ ｈｅｎｓｅｌａｅ、ＢＫウイルス、Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｓ ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ属、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｓｐｐ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ属、Ｂｒｕｇｉａ ｍａｌａｙｉ、Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ科、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ及び他のＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ種、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｍａｌｌｅｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ、Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ科、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ属、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐｐ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｓｉｔｔａｃｉ、ＱＤプリオン、Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｓｐｐ、コロナウイルス、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｉｉ、クリミヤ・コンゴ出血熱ウイルス、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、デングウイルス（ＤＥＮ－１、ＤＥＮ－２、ＤＥＮ－３及びＤＥＮ－４）、Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂａ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｅｂｏｌａｖｉｒｕｓ（ＥＢＯＶ）、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃｈａｆｆｅｅｎｓｉｓ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｅｗｉｎｇｉｉ、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ属、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ属、エンテロウイルス、主にコクサッキーＡウイルス及びエンテロウイルス７１（ＥＶ７１）、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｓｐｐ、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ０１５７：Ｈ７、Ｏｌｌ ｌ及びＯ１０４：Ｈ４、Ｆａｓｃｉｏｌａ ｈｅｐａｔｉｃａ及びＦａｓｃｉｏｌａ ｇｉｇａｎｔｉｃａ、ＦＦＩプリオン、Ｆｉｌａｒｉｏｉｄｅａ上科、フラビウイルス、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ、Ｇｉａｒｄｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ、Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ ｓｐｐ、ＧＳＳプリオン、グアナリトウイルス、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、ヘニパウイルス（ヘンドラウイルスニパウイルス）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型及び２型（ＨＳＶ－１及びＨＳＶ－２）、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、Ｈｏｒｔａｅａ ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ、ヒトボカウイルス（ＨＢｏＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ－６）及びヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ－７）、ヒトメタニューモウイルス（ｈＭＰＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、日本脳炎ウイルス、ＪＣウイルス、フニンウイルス、Ｋｉｎｇｅｌｌａ ｋｉｎｇａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ、クール・プリオン、ラッサウイルス、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ属、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ属、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、マチュポウイルス、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｓｐｐ、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、Ｍｅｔａｇｏｎｉｍｕｓ ｙｏｋａｇａｗａｉ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ ｐｈｙｌｕｍ、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ムンプスウイルス、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ ｆｏｗｌｅｒｉ、Ｎｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ ｓｐｐ、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ ｖｏｌｖｕｌｕｓ、Ｏｒｉｅｎｔｉａ ｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ ｆａｍｉｌｙ （Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｓｐｐ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ、Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ Ｂ１９、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ属、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ属、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ライノウイルス（Ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、ライノウイルス（ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓｅｓ）、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ａｋａｒｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ属、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｙｐｈｉ、リフトバレー熱ウイルス、ロタウイルス、風疹ウイルス、サビアウイルス、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属、Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ ｓｃａｂｉｅｉ、ＳＡＲＳコロナウイルス、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ属、Ｓｈｉｇｅｌｌａ属、シン・ノンブルウイルス、ハンタウイルス、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、Ｔａｅｎｉａ属、Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ、ダニ媒介脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｓｐｐ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、大痘瘡または小痘瘡、ｖＣＪＤプリオン、ベネズエラ馬脳炎ウイルス、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、西ナイルウイルス、西馬脳炎ウイルス、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、黄熱病ウイルス、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ、及びＹｅｒｓｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ。

【0132】

特定の実施形態では、関連抗原は、以下から選択される病原体に由来し得る：重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス、及び重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、マラリア原虫、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、デング熱ウイルス、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、結核菌、狂犬病ウイルス、黄熱病ウイルス。

【0133】

いくつかの実施形態では、関連の病原性抗原は、以下から選択され得る：外膜タンパク質Ａ ＯｍｐＡ、バイオフィルム会合タンパク質Ｂａｐ、輸送タンパク質ＭｕｃＫ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ感染））；可変表面糖タンパク質ＶＳＧ、微小管結合タンパク質ＭＡＰＰ１５、トランスシアリダーゼＴＳＡ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ、アフリカ睡眠病（Ａｆｒｉｃａｎ ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍｉａｓｉｓ））；ＨＩＶ ｐ２４抗原、ＨＩＶエンベロープタンパク質（Ｇｐｌ２０、Ｇｐ４１、Ｇｐｌ６０）、ポリタンパク質ＧＡＧ、ネガティブファクタータンパク質Ｎｅｆ、転写のトランス活性化因子Ｔａｔ（ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、ＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群））；ガラクトース阻害性接着タンパク質ＧＩＡＰ、２９ｋＤａ抗原Ｅｈ２９、Ｇａｌ／ＧａｌＮＡｃレクチン、タンパク質ＣＲＴ、１２５ｋＤａ免疫優勢抗原、タンパク質Ｍ１７、アドヘシンＡＤＨ１１２、タンパク質ＳＴＩＲＰ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ａｍｏｅｂｉａｓｉｓ）；主要表面タンパク質１－５（ＭＳＰｌａ、ＭＳＰｌｂ、ＭＳＰ２、ＭＳＰ３、ＭＳＰ４、ＭＳＰ５）、ＩＶ型分泌系タンパク質（ＶｉｒＢ２、ＶｉｒＢ７、ＶｉｒＢｌ１、ＶｉｒＤ４）（Ａｎａｐｌａｓｍａ属、Ａｎａｐｌａｓｍｏｓｉｓ）；防御抗原ＰＡ、浮腫因子ＥＦ、致死因子ＬＦ、Ｓ層ホモログタンパク質ＳＬＨ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ａｎｔｈｒａｘ）；アクラノリシン、ホスホリパーゼＤ、コラーゲン－結合タンパク質ＣｂｐＡ（Ａｒｅａ ｎｏｂａｃｔｅｒｉ ｕｒｎ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ、Ａｒｅａ ｎｏｂａｃｔｅｒｉ ｕｒｎ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ感染）；ヌクレオカプシドタンパク質ＮＰ、糖タンパク質前駆体ＧＰＣ、糖タンパク質ＧＰ１、糖タンパク質ＧＰ２（Ｊｕｎｉｎウイルス、アルゼンチン出血熱）；キチン－タンパク質層タンパク質、１４ｋＤａ表面抗原Ａ１４、主要な精子タンパク質ＭＳＰ、ＭＳＰ重合－組織化タンパク質ＭＰＯＰ、ＭＳＰファイバータンパク質２ＭＦＰ２、ＭＳＰ重合－活性化キナーゼＭＰＡＫ、ＡＢＡ－ｌ様タンパク質ＡＬＢ、タンパク質ＡＢＡ－１、クチクリンＣＵＴ－１（Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ａｓｃａｒｉａｓｉｓ）；４１ｋＤａアレルゲンＡｓｐ ｖｌ３、アレルゲンＡｓｐ ｆ３、主要分生子表面タンパク質ｒｏｄｌｅｔ Ａ、プロテアーゼＰｅｐｌｐ、ＧＰＩアンカー型タンパク質Ｇｅｌｌｐ、ＧＰＩアンカー型タンパク質Ｃｒｆｌｐ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｓｉｓ）；ファミリーＶＰ２６タンパク質、ＶＰ２９タンパク質（Ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、アストロウイルス感染）；ロプトリー－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄタンパク質１ ＲＡＰ－１、メロゾイト表面抗原ＭＳＡ－１、ＭＳＡ－２（ａｌ、ａ２、ｂ、ｃ）、１２Ｄ３、１１Ｃ５、２１Ｂ４、Ｐ２９、変異型赤血球表面抗原ＶＥＳＡ１、頂端膜抗原１ＡＭＡ－１（Ｂａｂｅｓｉａ属、Ｂａｂｅｓｉｏｓｉｓ）；溶血素、エンテロトキシンＣ、ＰＸＯｌ－５１、グリコール酸オキシダーゼ、ＡＢＣ－トランスポーター、ペニシリン結合タンパク質、亜鉛トランスポーターファミリータンパク質、シュードウリジンシンテターゼＲｓｕ、プラスミド複製タンパク質ＲｅｐＸ、オリゴエンドペプチダーゼＦ、プロファージ膜タンパク質、タンパク質ＨｅｍＫ、鞭毛抗原Ｈ、２８．５ｋＤａ細胞表面抗原（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ感染）；ラージＴ抗原ＬＴ、スモールＴ抗原、カプシドタンパク質ＶＰ１、カプシドタンパク質ＶＰ２（ＢＫウイルス、ＢＫウイルス感染）；２９ｋＤａ－タンパク質、カスパーゼ－３様抗原、糖タンパク質（Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｓ ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｉｓ ｈｏｍｉｎｉｓ感染）；酵母表面アドヘシンＷＩ－１（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｏｓｉｓ）；核タンパク質Ｎ、ポリメラーゼＬ、マトリクスタンパク質Ｚ、糖タンパク質ＧＰ（マチュポウイルス、ボリビア出血熱）；外表面タンパク質Ａ ＯｓｐＡ、外表面タンパク質ＯｓｐＢ、外表面タンパク質ＯｓｐＣ、デコリン結合タンパク質Ａ ＤｂｐＡ、デコリン結合タンパク質Ｂ ＤｂｐＢ、鞭毛フィラメント４１ｋＤａコアタンパク質Ｆｌａ、基底膜タンパク質Ａ前駆体 ＢｍｐＡ（免疫優勢抗原Ｐ３９）、外表面 ２２ｋＤａリポタンパク質前駆体（抗原ＩＰＬＡ７）、可変性表面リポタンパク質ｖｌｓＥ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ属、Ｂｏｒｒｅｌｉａ感染）；Ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎｓ ＢｏＮＴ／Ａｌ、ＢｏＮＴ／Ａ２、ＢｏＮＴ／Ａ３、ＢｏＮＴ／Ｂ、ＢｏＮＴ／Ｃ、ＢｏＮＴ／Ｄ、ＢｏＮＴ／Ｅ、ＢｏＮＴ／Ｆ、ＢｏＮＴ／Ｇ、組み換えボツリヌス毒素Ｆ ＨｅドメインＦＨｃ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｂｏｔｕｌｉｓｍ（及びＩｎｆａｎｔ ｂｏｔｕｌｉｓｍ））；ヌクレオカプシド、糖タンパク質前駆体（Ｓａｂｉａウイルス、ブラジル出血熱）；銅／亜鉛スーパーオキシドディスムターゼＳｏｄＣ、バクテリオフェリチンＢｆｒ、５０Ｓリボソームタンパク質ＲｐＩＬ、ＯｍｐＡ様膜通過ドメイン含有タンパク質Ｏｍｐ３１、免疫原性３９ｋＤａタンパク質Ｍ５ Ｐ３９、亜鉛 ＡＢＣトランスポーター周辺質亜鉛－結合タンパク質ｚｎｕＡ、周辺質免疫原性タンパク質Ｂｐ２６、３０Ｓリボソームタンパク質Ｓ１２ ＲｐｓＬ、グリセルアルデヒド－３－リン酸塩デヒドロゲナーゼＧａｐ、２５ｋＤａ 外膜免疫原性タンパク質前駆体Ｏｍｐ２５、侵入タンパク質Ｂ ｌａｌＢ、トリガー因子Ｔｉｇ、分子シャペロンＤｎａＫ、推定ペプチジル－プロリル ｃｉｓ－ｔｒａｎｓイソメラーゼＳｕｒＡ、リポタンパク質Ｏｍｐｌ９、外膜タンパク質ＭｏｔＹ Ｏｍｐｌ６、保存された外膜タンパク質Ｄ１５、リンゴ酸塩デヒドロゲナーゼＭｄｈ、ＩＶ型分泌系の構成要素（Ｔ４ＳＳ）ＶｉｒＪ、機能未知のＢＡＢ１＿０１８７のリポタンパク質（Ｂｒｕｃｅｌｌａ属、Ｂｒｕｃｅｌｌｏｓｉｓ）；ＡＢＣトランスポーターファミリーのメンバー（ＬｏｌＣ、ＯｐｐＡ、及びＰｏｔＦ）、推定リポタンパク質放出系膜貫通タンパク質ＬｏｌＣ／Ｅ、フラジェリンＦｌｉＣ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ細胞内運動性Ａ ＢｉｍＡ、細菌の伸長因子－Ｔｕ ＥＦ－Ｔｕ、１７ｋＤａ ＯｍｐＡ様タンパク質、ｂｏａＡコードタンパク質、ｂｏａＢコードタンパク質（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ及び他のＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ種、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ感染）；ミコリル －トランスフェラーゼＡｇ８５Ａ、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ６５、タンパク質ＴＢ１０．４、１９ｋＤａ抗原、タンパク質ＰｓｔＳ３、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ７０（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｂｕｒｕｌｉ ｕｌｃｅｒ）；ノロウイルスの主要及びマイナーなウイルスカプシドタンパク質ＶＰ１及びＶＰ２、ゲノムポリタンパク質、Ｓａｐｏｖｉｕｒｕｓカプシドタンパク質ＶＰ１、タンパク質Ｖｐ３、ゲノムポリタンパク質（Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅファミリー、Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ感染（ノロウイルス及びＳａｐｏｖｉｒｕｓ））；主要外膜タンパク質ＰｏｒＡ、フラジェリンＦｌａＡ、表面抗原ＣｊａＡ、フィブロネクチン結合タンパク質ＣａｄＦ、アスパラギン酸塩／グルタミン酸塩－結合 ＡＢＣトランスポータータンパク質ＰｅｂｌＡ、タンパク質ＦｓｐＡｌ、タンパク質ＦｓｐＡ２（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ属、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｏｓｉｓ）；糖分解酵素エノラーゼ、分泌型アスパルチルプロテイナーゼＳＡＰｌ－１０、グリコホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）－連結細胞壁タンパク質、タンパク質Ｈｙｒｌ、補体受容体３－関連タンパク質ＣＲ３－ＲＰ、アドヘシンＡｌｓ３ｐ、熱ショックタンパク質９０ｋＤａ ｈｓｐ９０、細胞表面疎水性タンパク質ＣＳＨ（通常はＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ及び他のＣａｎｄｉｄａ種、Ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ）；１７ｋＤａ抗原、タンパク質Ｐ２６、三量体型オートトランスポーターアドヘシンＴＡＡ、ＢａｒｔｏｎｅｌｌａアドヘシンＡ ＢａｄＡ、可変的に発現された外膜タンパク質Ｖｏｍｐｓ、タンパク質Ｐａｐ３、タンパク質ＨｂｐＡ、エンベロープ－会合プロテアーゼＨｔｒＡ、タンパク質ＯＭＰ８９、タンパク質ＧｒｏＥＬ、タンパク質ＬａｌＢ、タンパク質ＯＭＰ４３、ジヒドロリポアミドスクシニルトランスフェラーゼＳｕｃＢ（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ ｈｅｎｓｅｌａｅ、猫ひっかき病）；無鞭毛型表面タンパク質－２、無鞭毛型－特異的表面タンパク質ＳＳＰ４、クルジパイン、トランスシアリダーゼＴＳ、錐鞭毛期型表面糖タンパク質ＴＳＡ－１、補体制御因子タンパク質ＣＲＰ－１０、タンパク質Ｇ４、タンパク質Ｇ２、毛棹タンパク質ＰＡＲ２、副鞭毛ロッド 構成要素 Ｐａｒｉ、ムチン関連表面タンパク質ＭＰＳＰ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ、シャーガス病（Ａｍｅｒｉｃａｎ ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍｉａｓｉｓ））；エンベロープ糖タンパク質（ｇＢ、ｇＣ、ｇＥ、ｇＨ、ｇｌ、ｇＫ、ｇＬ）、（水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、水痘（Ｃｈｉｃｋｅｎｐｏｘ））；主要外膜タンパク質ＭＯＭＰ、推定外膜タンパク質ＰＭＰＣ、外膜複合体タンパク質Ｂ ＯｍｃＢ、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ６０ ＨＳＰ１０、タンパク質ＩｎｃＡ、ＩＩＩ型分泌系由来のタンパク質、リボヌクレオチドレダクターゼ小鎖タンパク質ＮｒｄＢ、プラスミドタンパク質Ｐｇｐ３、クラミジア外側タンパク質Ｎ ＣｏｐＮ、抗原ＣＴ５２１、抗原ＣＴ４２５、抗原ＣＴ０４３、抗原ＴＣ００５２、抗原ＴＣ０１８９、抗原ＴＣ０５８２、抗原ＴＣ０６６０、抗原ＴＣ０７２６、抗原ＴＣ０８１６、抗原ＴＣ０８２８（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）；低カルシウム応答タンパク質Ｅ ＬＣｒＥ、クラミジア外側タンパク質Ｎ ＣｏｐＮ、セリン／トレオニン－タンパク質キナーゼＰｋｎＤ、アシル－キャリア－タンパク質Ｓ－マロニルトランスフェラーゼＦａｂＤ、一本鎖ＤＮＡ－結合タンパク質Ｓｓｂ、主要外膜タンパク質ＭＯＭＰ、外膜タンパク質２ Ｏｍｐ２、多形性膜タンパク質ファミリー（Ｐｍｐｌ、Ｐｍｐ２、Ｐｍｐ３、Ｐｍｐ４、Ｐｍｐ５、Ｐｍｐ６、Ｐｍｐ７、Ｐｍｐ８、Ｐｍｐ９、ＰｍｐｌＯ、Ｐｍｐｌｌ、Ｐｍｐｌ２、Ｐｍｐｌ３、Ｐｍｐｌ４、Ｐｍｐｌ５、Ｐｍｐｌ６、Ｐｍｐｌ７、Ｐｍｐｌ８、Ｐｍｐｌ９、Ｐｍｐ２０、Ｐｍｐ２１）、（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染）；コレラ毒素Ｂ ＣＴＢ、毒素共発現線毛Ａ ＴｃｐＡ、毒素共発現線毛ＴｃｐＦ、毒素共発現線毛生合成タンパク質Ｆ ＴｃｐＦ、コレラエンテロトキシンサブユニットＡ、コレラエンテロトキシンサブユニットＢ、熱安定性エンテロトキシンＳＴ、マンノース感受性赤血球凝集素ＭＳＨＡ、外膜タンパク質Ｕ Ｐｏｒｉｎ ｏｍｐＵ、Ｐｏｒｉｎｇ Ｂタンパク質、多形性膜タンパク質－Ｄ（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｃｈｏｌｅｒａ）；プロピオニル－ＣｏＡカルボキシラーゼＰＣＣ、１４－３－３タンパク質、プロヒビチン、システインプロテアーゼ、グルタチオントランスフェラーゼ、ゲルゾリン、カテプシンＬプロテイナーゼＣａｔＬ、Ｔｅｇｕｍｅｎｔａｌタンパク質２０．８ｋＤａ ＴＰ２０．８、外被タンパク質３１．８ｋＤａ ＴＰ３１．８、リゾホスファチジン酸ホスファターゼＬＰＡＰ、（Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉａｓｉｓ）；表面層タンパク質ＳＬＰ、グルタミン酸塩デヒドロゲナーゼ抗原ＧＤＨ、Ａ毒素、Ｂ毒素、システインプロテアーゼＣｗｐ８４、システインプロテアーゼＣｗｐｌ３、システインプロテアーゼＣｗｐｌ９、Ｃｅｌｌ Ｗａｌｌタンパク質ＣｗｐＶ、鞭毛タンパク質ＦｌｉＣ、鞭毛タンパク質ＦｌｉＤ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染）；ライノウイルス：カプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３
、ＶＰ４；コロナウイルス類：スパイクタンパク質Ｓ、エンベロープタンパク質Ｅ、膜タンパク質Ｍ、ヌクレオカプシドタンパク質Ｎ（通常は、ライノウイルス及びコロナウイルス、風邪（急性ウイルス性微咽頭炎；急性鼻感冒））；プリオンタンパク質Ｐｒｐ（ＣＪＤプリオン、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ））；エンベロープタンパク質Ｇｃ、エンベロープタンパク質Ｇｎ、ヌクレオカプシドタンパク質（クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、クリミア・コンゴ出血熱（ＣＣＨＦ））；毒性関連ＤＥＡＤボックスＲＮＡヘリカーゼＶＡＤ１、ガラクトキシロマンナン－タンパク質ＧａｌＸＭ、グルクロノキシロマンナンＧＸＭ、マンノプロテインＭＰ（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｏｓｉｓ）；酸性リボソームタンパク質Ｐ２ ＣｐＰ２、ムチン抗原Ｍｕｃｌ、Ｍｕｃ２、Ｍｕｃ３ Ｍｕｃ４、Ｍｕｃ５、Ｍｕｃ６、Ｍｕｃ７、表面接着タンパク質ＣＰ２０、表面接着タンパク質ＣＰ２３、表面タンパク質ＣＰ１２、表面タンパク質ＣＰ２１、表面タンパク質ＣＰ４０、表面タンパク質ＣＰ６０、表面タンパク質ＣＰ１５、表面会合糖ペプチドｇｐ４０、表面会合糖ペプチド ｇｐｌ５、卵母細胞壁タンパク質ＡＢ、プロフィリンＰＲＦ、アピラ－ゼ（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｏｓｉｓ）；脂肪酸及びレチノール結合タンパク質－１ ＦＡＲ－１、メタロプロテイナーゼの組織インヒビターＴＩＭＰ（ＴＭＰ）、システインプロテイナーゼＡＣＥＹ－１、システインプロテイナーゼＡＣＣＰ－１、表面抗原Ａｃ－１６、分泌型タンパク質２ ＡＳＰ－２、メタロプロテアーゼ１ ＭＴＰ－１、アスパルチルプロテアーゼインヒビターＡＰＩ－１、表面会合抗原ＳＡＡ－１、成人特異的分泌型Ｘａ因子セリンプロテアーゼインヒビター抗凝固因子ＡＰ、カテプシンＤ様アスパラギン酸プロテアーゼＡＲＲ－１（通常は、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｅ；複数の他の寄生生物、Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｌａｒｖａ ｍｉｇｒａｎｓ（ＣＬＭ））；カテプシンＬ様 プロテアーゼ、５３／２５ｋＤａ抗原、８ｋＤａファミリーのメンバー、わずかなトリプシン様活性ＴｓＡｇ５を有する嚢虫タンパク質、六鉤幼虫タンパク質ＴＳＯＬ１８、六鉤幼虫タンパク質ＴＳＯＬ４５－１Ａ、乳酸塩デヒドロゲナーゼＡ ＬＤＨＡ、乳酸塩デヒドロゲナーゼＢ ＬＤＨＢ（Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ、Ｃｙｓｔｉｃｅｒｃｏｓｉｓ）；ｐｐ６５抗原、膜タンパク質ｐｐｌ５、カプシド－近位外被タンパク質ｐｐｌ５０、タンパク質Ｍ４５、ＤＮＡポリメラーゼＵＬ５４、ヘリカーゼＵＬ１０５、糖タンパク質ｇＭ、糖タンパク質ｇＮ、糖タンパク質Ｈ、糖タンパク質Ｂ ｇＢ、タンパク質ＵＬ８３、タンパク質ＵＬ９４、タンパク質ＵＬ９９（サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サイトメガロウイルス感染）；カプシドタンパク質Ｃ、プレ膜タンパク質ｐｒＭ、膜タンパク質Ｍ、エンベロープタンパク質Ｅ（ドメインＩ、ドメインＩＩ、ドメインＩＩ）、タンパク質ＮＳ１、タンパク質ＮＳ２Ａ、タンパク質ＮＳ２Ｂ、タンパク質ＮＳ３、タンパク質ＮＳ４Ａ、タンパク質２Ｋ、タンパク質ＮＳ４Ｂ、タンパク質ＮＳ５（デングウイルス（ＤＥＮ－１、ＤＥＮ－２、ＤＥＮ－３及びＤＥＮ－４）－ウラビウイルス、デング熱）；３９ｋＤａタンパク質（Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂａ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｄｉｅｎｔａｍｏｅｂｉａｓｉｓ）；ジフテリア毒素前駆体Ｔｏｘ、ジフテリア毒素ＤＴ、ピリン特異的ソルターゼＳｒｔＡ、シヤフトのピリン（ｐｉｌｉｎ）タンパク質ＳｐａＡ、先端のピリンタンパク質ＳｐａＣ、マイナーピリンタンパク質ＳｐａＢ、表面関連タンパク質ＤＩＰ１２８１（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、ジフテリア）；糖タンパク質ＧＰ、核タンパク質ＮＰ、マイナーなマトリクスタンパク質ＶＰ２４、主要マトリクスタンパク質ＶＰ４０、転写活性化因子ＶＰ３０、ポリメラーゼ補因子ＶＰ３５、ＲＮＡポリメラーゼＬ（エボラウイルス（ＥＢＯＶ）、エボラ出血熱）；プリオンタンパク質（ｖＱＤプリオン、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ、ｎｖＣＪＤ））；ＵｖｒＡＢＣ系タンパク質Ｂ、タンパク質Ｆｌｐｌ、タンパク質Ｆｌｐ２、タンパク質Ｆｌｐ３、タンパク質ＴａｄＡ、ヘモグロビン受容体ＨｇｂＡ、外膜タンパク質ＴｄｈＡ、タンパク質ＣｐｓＲＡ、制御因子 ＣｐｘＲ、タンパク質ＳａｐＡ、１８ｋＤａ抗原、外膜タンパク質ＮｃａＡ、タンパク質ＬｓｐＡ、タンパク質ＬｓｐＡｌ、タンパク質ＬｓｐＡ２、タンパク質ＬｓｐＢ、外膜構成要素ＤｓｒＡ、レクチンＤｌｔＡ、リポタンパク質Ｈｉｐ、主要外膜タンパク質ＯＭＰ、外膜タンパク質ＯｍｐＡ２（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｃｈａｎｃｒｏｉｄ）；アスパルチルプロテアーゼ１ Ｐｅｐｌ、ホスホリパーゼＢ ＰＬＢ、アルファ－マンノシダーゼ１ ＡＭＮ１、グルカノシルトランスフェラーゼＧＥＬ１、ウレアーゼＵＲＥ、ペルオキシソームのマトリクスタンパク質Ｐｍｐｌ、プロリンリッチ抗原Ｐｒａ、ヒトＴ細胞反応性タンパク質ＴｃｒＰ（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ及びＣｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｐｏｓａｄａｓｉｉ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｏｍｙｃｏｓｉｓ）；アレルゲンＴｒｉ ｒ ２、熱ショックタンパク質６０ Ｈｓｐ６０、真菌のアクチンＡｃｔ、抗原Ｔｒｉ ｒ２、抗原Ｔｒｉ ｒ４、抗原Ｔｒｉ ｔｌ、タンパク質ＩＶ、グリセロール－３－リン酸塩デヒドロゲナーゼＧｐｄｌ、浸透圧センサーＨｗＳｈｏｌＡ、浸透圧センサーＨｗＳｈｏｌＢ、ヒスチジンキナーゼＨｗＨｈｋ７Ｂ、アレルゲンＭａｌａ ｓ １、アレルゲンＭａｌａ ｓ １１、チオレドキシンＴｒｘ Ｍａｌａ ｓ １３、アレルゲンＭａｌａ ｆ、アレルゲンＭａｌａ ｓ（通常は、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｓｐｐ、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｓｐｐ．、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｓｐｐ．、Ｈｏｒｔａｅａ ｗｅｒｎｅｃｋｉｉ、Ｄｅｒｍａｔｏｐｈｙｔｏｓｉｓ）；タンパク質ＥＧ９５、タンパク質ＥＧ１０、タンパク質ＥＧ１８、タンパク質ＥｇＡ３１、タンパク質ＥＭ１８、抗原ＥＰＣ１、抗原Ｂ、抗原５、タンパク質Ｐ２９、タンパク質１４－３－３、８ｋＤａタンパク質、ミオフィリン、熱ショックタンパク質２０ ＨＳＰ２０、糖タンパク質ＧＰ－８９、脂肪酸結合タンパク質ＦＡＰＢ（Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｏｓｉｓ）；主要表面タンパク質２ ＭＳＰ２、主要表面タンパク質４ ＭＳＰ４、ＭＳＰ変異型ＳＧＶ１、ＭＳＰ変異型ＳＧＶ２、外膜タンパク質ＯＭＰ、外膜タンパク質１９ ＯＭＰ－１９、主要抗原性タンパク質ＭＡＰＩ、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１－２、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１Ｂ、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１－３、Ｅｒｕｍ２５１０コードタンパク質、タンパク質ＧｒｏＥＬ、タンパク質ＧｒｏＥＳ、３０ｋＤａ 主要外膜タンパク質、ＧＥ １００ｋＤａタンパク質、ＧＥ １３０ｋＤａタンパク質、ＧＥ １６０ｋＤａタンパク質（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ属、Ｅｈｒｌｉｃｈｉｏｓｉｓ）；分泌型抗原ＳａｇＡ、ｓａｇＡ様タンパク質ＳａｌＡ及びＳａｌＢ、コラーゲンアドヘシンＳｃｍ、表面タンパク質Ｆｍｓｌ（ＥｂｐＡ（ｆｍ）、Ｆｍｓ５（ＥｂｐＢ（ｆｍ）、Ｆｍｓ９（ＥｐｂＣ（ｆｍ）及び ＦｍｓｌＯ、タンパク質ＥｂｐＣ（ｆｍ）、９６ｋＤａ免疫防御糖タンパク質Ｇｌ（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ感染）；ゲノムポリタンパク質、ポリメラーゼ３Ｄ、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ１、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ２、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ３、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ４、プロテアーゼ２Ａ、プロテアーゼ３Ｃ（Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ属、Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ感染）；外膜タンパク質ＯＭ、６０ｋＤａ 外膜タンパク質、細胞表面抗原ＯｍｐＡ、細胞表面抗原ＯｍｐＢ（ｓｃａ５）、１３４ｋＤａ 外膜タンパク質、３１ｋＤａの外膜タンパク質、２９．５ｋＤａの外膜タンパク質、細胞表面タンパク質ＳＣＡ４、細胞表面タンパク質Ａｄｒｌ（ＲＰ８２７）、細胞表面タンパク質Ａｄｒ２（ＲＰ８２８）、細胞表面タンパク質ＳＣＡ１、侵入タンパク質ｉｎｖＡ、細胞分裂タンパク質ｆｔｓ、分泌タンパク質ｓｅｃ Ｏファミリー、病原性タンパク質ｖｉｒＢ、ｔｌｙＡ、ｔｌｙＣ、パルブリン様タンパク質Ｐｉｐ、プレプロプロテイントランスロカーゼＳｅｃＡ、１２０ｋＤａ表面タンパク質抗原ＳＰＡ、１３８ ｋＤ複合体抗原、主要１００－ｋＤタンパク質（プロテインＩ）、細胞質内のプロテインＤ、防御表面タンパク質抗原ＳＰＡ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｐｒｏｗａｚｅｋｉｉ、Ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｔｙｐｈｕｓ）；エプスタイン・バー核抗原（ＥＢＮＡ－１、ＥＢＮＡ－２、ＥＢＮＡ－３Ａ、ＥＢＮＡ－３Ｂ、ＥＢＮＡ－３Ｃ、ＥＢＮＡ－リーダータンパク質（ＥＢＮＡ－ＬＰ））、潜伏感染膜タンパク質（ＬＭＰ－１、ＬＭＰ－２Ａ、ＬＭＰ－２Ｂ）、早期抗原ＥＢＶ－ＥＡ、膜抗原ＥＢＶ－ＭＡ、ウイルスカプシド抗原ＥＢＶ－ＶＣＡ、アルカリヌクレアーゼＥＢＶ－ＡＮ、糖タンパク質Ｈ、糖タンパク質ｇｐ３５０、糖タンパク質ｇｐｌｌＯ、糖タンパク質ｇｐ４２、糖タンパク質ｇＨｇＬ、糖タンパク質ｇＢ（エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、エプスタイン・バーウイルス感染単核球症）；カプシドタンパク質ＶＰ２、カプシドタンパク質ＶＰ１、主要タンパク質ＮＳ１（Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ Ｂ１９、Ｅｒｙｔｈｅｍａ ｉｎｆｅｃｔｉｏｓｕｍ（第５病））；ｐｐ６５抗原、糖タンパク質１０５、主要カプシドタンパク質、エンベロープ糖タンパク質Ｈ、タンパク質Ｕ５１（ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ－６）及びヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ－７）、Ｅｘａｎｔｈｅｍ ｓｕｂｉｔｕｍ）；チオレドキシン－グルタチオンレダクターゼＴＧＲ、カテプシンＬＩ及びＬ２、クニッツ型タンパク質ＫＴＭ、ロイシンアミノペプチダーゼＬＡＰ、システインプロテイナーゼＦａｓ２、サポニン様タンパク質－２ ＳＡＰ－２、チオレドキシンペルオキシダーゼＴＰｘ、Ｐｒｘ－１、Ｐｒｘ－２、カテプシンＩ システインプロテイナーゼＣＬ３、プロテアーゼカテプシンＬ ＣＬｌ、ホスホグリセリン酸塩キナーゼＰＧＫ、２７ｋＤａ分泌性タンパク質、６０ｋＤａタンパク質ＨＳＰ３５アルファ、グルタチオントランスフェラーゼＧＳＴ、２８．５ｋＤａ 外被抗原２８．５ｋＤａ ＴＡ、カテプシンＢ３ プロテアーゼＣａｔＢ３、Ｉ型シスタチン・ステフィン－１、カテプシンＬ５、カテプシンＬｌｇ及びカテプシンＢ、脂肪酸結合タンパク質ＦＡＢＰ、ロイシンアミノペプチダーゼＬＡＰ（Ｆａｓｃｉｏｌａ ｈｅｐａｔｉｃａ及びＦａｓｃｉｏｌａ ｇｉｇａｎｔｉｃａ、Ｆａｓｃｉｏｌｏｓｉｓ）；プリオンタンパク質（ＦＦＩプリオン、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ））；毒液アレルゲンホモログ様タンパク質ＶＡＬ－１、大量幼虫転写産物ＡＬＴ－１、大量幼虫転写産物ＡＬＴ－２、チオレドキシンペルオキシダーゼＴＰＸ、スズメバチアレルゲンホモログＶＡＨ、チオレドキシンペルオキシダーゼ２ ＴＰＸ－２、抗原性タンパク質ＳＸＰ（ペプチドＮ、Ｎｌ、Ｎ２、及びＮ３）、活性化関連タンパク質－１ ＡＳＰ－１、チオレドキシンＴＲＸ、トランスグルタミナーゼＢｍＴＧＡ、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼＧＳＴ、ミオシン、ススメバチアレルゲンホモログＶＡＨ、１７５ｋＤａコラゲナーゼ、グリセルアルデヒド－３－リン酸塩デヒドロゲナーゼＧＡＰＤＨ、クチクラコラーゲンＣｏｌ－４、分泌型幼虫酸性タンパク質ＳＬＡＰ、キチナーゼＣＨＩ－１、マルトース結合タンパク質ＭＢＰ、糖分解酵素フルクトース－ｌ，６－ビスリン酸塩アルドラーゼＦｂａ、トロポミオシン ＴＭＹ－１、線虫特異的遺伝子産物ＯｖＢ２０、オンコシスタチンＣＰＩ－２、Ｃｏｘ－２（Ｆｉｌａｒｉｏｉｄｅａスーパーファミリー、Ｆｉｌａｒｉａｓｉｓ）；ホスホリパーゼＣ ＰＬＣ、易熱性エンテロトキシンＢ、Ｉｏｔａ毒素成分ｌｂ、タンパク質ＣＰＥ１２８１ 、ピルビン酸フェレドキシンオキシドレダクターゼ、伸長因子Ｇ ＥＦ－Ｇ
、パーフリンゴリジン０ Ｐｆｏ、グリセルアルデヒド－３－リン酸塩デヒドロゲナーゼＧａｐＣ、Ｆｒｕｃｔｏｓｅ－ビスリン酸塩アルドラーゼＡｌｆ２、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ エンテロトキシンＣＰＥ、アルファ毒素ＡＴ、アルファトキソイドＡＴｄ、イプシロン－トキソイドＥＴｄ、タンパク質ＨＰ、ラージ細胞毒素ＴｐｅＬ、エンド－ベータ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼＮａｇｌｕ、ホスホグリセロムターゼＰｇｍ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓによる食中毒）；白血球毒素ＩｋｔＡ、接着ＦａｄＡ、外膜タンパク質ＲａｄＤ、高分子量アルギニン－結合タンパク質（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ感染）；ホスホリパーゼＣ ＰＬＣ、易熱性エンテロトキシンＢ、イオタ毒素成分ｌｂ、タンパク質ＣＰＥ１２８１、ピルビン酸 フェレドキシンオキシドレダクターゼ、伸長因子Ｇ ＥＦ－Ｇ、パーフリンゴリジン０ Ｐｆｏ、グリセルアルデヒド－３－リン酸塩デヒドロゲナーゼＧａｐＣ、フルクトース－ビスリン酸塩アルドラーゼＡｌｆ２、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ エンテロトキシンＣＰＥ、アルファ毒素ＡＴ、アルファトキソイドＡＴｄ、イプシロン－トキソイドＥＴｄ、タンパク質ＨＰ、ラージ細胞毒素ＴｐｅＬ、エンド－ベータ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼＮａｇｌｕ、ホスホグリセロムターゼＰｇｍ（通常は、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ；他のＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ種、Ｇａｓ ｇａｎｇｒｅｎｅ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌ ｍｙｏｎｅｃｒｏｓｉｓ））；リパーゼＡ、リパーゼＢ、ペルオキシダーゼＤｅｃｌ（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｏｓｉｓ）；プリオンタンパク質（ＧＳＳプリオン、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ））；嚢腫壁タンパク質ＣＷＰ１、ＣＷＰ２、ＣＷＰ３、改変型表面タンパク質ＶＳＰ、ＶＳＰ１、ＶＳＰ２、ＶＳＰ３、ＶＳＰ４、ＶＳＰ５、ＶＳＰ６、５６ｋＤａ抗原、ピルビン酸フェレドキシンオキシドレダクターゼＰＦＯＲ、アルコールデヒドロゲナーゼＥ ＡＤＨＥ、アルファ－ジアルディン、アルファ８－ジアルディン、アルファ－ジアルディン、ベータ－ジアルディン、システインプロテアーゼ、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼＧＳＴ、アルギニンデイミナーゼＡＤＩ、フルクトース－ｌ，６－ビスフォスフェイトアルドラーゼＦＢＡ、Ｇｉａｒｄｉａ ｔｒｏｐｈｏｚｏｉｔｅ抗原ＧＴＡ（ＧＴＡ１、ＧＴＡ２）、オルニチンカルボキシルトランスフェラーゼＯＣＴ、線状ファイバーアセブリン様タンパク質ＳＡＬＰ、ウリジンホスホリル様タンパク質ＵＰＬ、アルファ－チューブリン、ベータ－チューブリン（Ｇｉａｒｄｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ、Ｇｉａｒｄｉａｓｉｓ）；ＡＢＣトランスポーターファミリーのメンバー（ＬｏｌＣ、ＯｐｐＡ、及びＰｏｔＦ）、推定リポタンパク質放出系膜貫通タンパク質ＬｏｌＣ／Ｅ、フラジェリンＦｌｉＣ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ細胞内運動性Ａ ＢｉｍＡ、細菌の伸長因子－Ｔｕ ＥＦ－Ｔｕ、１７ｋＤａ ＯｍｐＡ様タンパク質、ｂｏａＡコードタンパク質（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｍａｌｌｅｉ、Ｇｌａｎｄｅｒｓ）；サイクロフィリンＣｙＰ、２４ｋＤａ第３期幼虫タンパク質ＧＳ２４、排泄 －分泌産物ＥＳＰｓ（４０、８０、１２０及び２０８ｋＤａ）（Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍａ ｓｐｉｎｉｇｅｒｕｍ及びＧｎａｔｈｏｓｔｏｍａ ｈｉｓｐｉｄｕｍ、Ｇｎａｔｈｏｓｔｏｍｉａｓｉｓ）；ピリンタンパク質、マイナーピリン－会合サブユニットｐｉｌＣ、主要ピリンサブユニット及び変異型ｐｉｌＥ、ｐｉｌＳ、相変異型タンパク質ｐｏｒＡ、ポーリンＢ ＰｏｒＢ、タンパク質ＴｒａＤ、ナイセリアの外膜抗原Ｈ．８、７０ｋＤａ抗原、主要外膜タンパク質ＰＩ、外膜タンパク質ＰＩＡ及びＰＩＢ、Ｗ抗原、表面タンパク質Ａ ＮｓｐＡ、トランスフェリン結合タンパク質ＴｂｐＡ、トランスフェリン結合タンパク質ＴｂｐＢ 、ＰＢＰ２、ｍｔｒＲコードタンパク質、ｐｏｎＡコードタンパク質、膜パーミアーゼＦｂｐＢＣ、ＦｂｐＡＢＣタンパク質系、ＬｂｐＡＢタンパク質、外膜タンパク質Ｏｐａ、外膜トランスポーター ＦｅｔＡ、鉄抑制制御因子 ＭｐｅＲ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｇｏｎｏｒｒｈｅａ）；外膜タンパク質Ａ ＯｍｐＡ、外膜タンパク質Ｃ ＯｍｐＣ、外膜タンパク質Ｋ１７ ＯｍｐＫ１７（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｉｓ、Ｇｒａｎｕｌｏｍａ ｉｎｇｕｉｎａｌｅ（Ｄｏｎｏｖａｎｏｓｉｓ））；フィブロネクチン－結合タンパク質Ｓｆｂ、フィブロネクチン／フィブリノーゲン－結合タンパク質ＦＢＰ５４、フィブロネクチン－結合タンパク質ＦｂａＡ、Ｍタンパク質１型Ｅｍｍｌ、Ｍタンパク質６型Ｅｍｍ６、免疫グロブリン－結合タンパク質３５ Ｓｉｂ３５、表面タンパク質Ｒ２８ Ｓｐｒ２８、スーパーオキシドディスムターゼＳＯＤ、Ｃ５ａ ペプチダーゼＳｃｐＡ、抗原Ｉ／ＩＩ Ａｇｌ／ＩＩ、アドヘシンＡｓｐＡ、Ｇ－関連アルファ２－マクログロブリン－結合タンパク質ＧＲＡＢ、表面原線維タンパク質Ｍ５（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ａ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ感染）；Ｃタンパク質β抗原、アルギニンデイミナーゼタンパク質、アドヘシンＢｉｂＡ、１０５ ｋＤＡタンパク質ＢＰＳ、表面抗原ｃ、表面抗原Ｒ、表面抗原Ｘ、トリプシン耐性タンパク質Ｒｌ、トリプシン耐性タンパク質Ｒ３、トリプシン耐性タンパク質Ｒ４、表面 免疫原性タンパク質Ｓｉｐ、表面タンパク質Ｒｉｂ、ロイシンリッチリピートタンパク質ＬｒｒＧ、セリンリッチリピートタンパク質Ｓｒｒ－２、Ｃタンパク質アルファ－抗原Ｂｃａ、ベータ抗原Ｂａｇ、表面抗原イプシロン、アルファ様タンパク質ＡＬＰ１、アルファ様タンパク質ＡＬＰ５表面抗原デルタ、アルファ様タンパク質ＡＬＰ２、アルファ様タンパク質ＡＬＰ３、アルファ様タンパク質ＡＬＰ４、Ｃベータタンパク質Ｂａｃ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｂ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ感染）；トランスフェリン－結合タンパク質２ Ｔｂｐ２、ホスファターゼＰ４、外膜タンパク質Ｐ６、ペプチドグリカン関連リポタンパク質Ｐａｌ、タンパク質Ｄ、タンパク質Ｅ、接着及び浸透タンパク質Ｈａｐ、外膜タンパク質２６ Ｏｍｐ２６、外膜タンパク質Ｐ５（Ｆｉｍｂｒｉｎ）、外膜タンパク質Ｄ１５、外膜タンパク質ＯｍｐＰ２、５’－ヌクレオチダーゼＮｕｃＡ、外膜タンパク質ＰＩ、外膜タンパク質Ｐ２、外膜リポタンパク質Ｐｅｐ、リポタンパク質Ｅ、外膜タンパク質Ｐ４、フルクトキナーゼＦｕｃＫ、［Ｃｕ，Ｚｎ］－スーパーオキシドディスムターゼＳｏｄＣ、プロテアーゼＨｔｒＡ、タンパク質０１４５、アルファ－ガラクトシルセラミド（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ感染）；ポリメラーゼ３Ｄ、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰｌ、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ２、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ３、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ４、プロテアーゼ２Ａ、プロテアーゼ３Ｃ（エンテロウイルス、主にコクサッキーＡウイルス及びエンテロウイルス７１（ＥＶ７１）、手足口病（ＨＦＭＤ））；ＲＮＡポリメラーゼＬ、タンパク質Ｌ、糖タンパク質Ｇｎ、糖タンパク質Ｇｃ、ヌクレオカプシドタンパク質Ｓ、エンベロープ糖タンパク質Ｇｌ、核タンパク質ＮＰ、タンパク質Ｎ、ポリタンパク質Ｍ（Ｓｉｎ Ｎｏｍｂｒｅウイルス、ハンタウイルス、ハンタウイルス肺症候群（ＨＰＳ））；熱ショックタンパク質ＨｓｐＡ、熱ショックタンパク質ＨｓｐＢ、クエン酸シンテターゼＧｌｔＡ、タンパク質ＵｒｅＢ、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ６０、好中球－活性化タンパク質ＮＡＰ、カタラーゼＫａｔＡ、空胞化細胞毒素ＶａｃＡ、ウレアーゼアルファＵｒｅＡ、ウレアーゼベータＵｒｅｂ、タンパク質ＣｐｎｌＯ、タンパク質ｇｒｏＥＳ、熱ショックタンパク質ＨｓｐｌＯ、タンパク質ＭｏｐＢ、細胞毒性関連１０ｋＤａタンパク質ＣＡＧ、３６ｋＤａ抗原、ベータ－ラクタマーゼＨｃｐＡ、ベータ－ラクタマーゼＨｃｐＢ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ感染）；内在性膜タンパク質、易凝集タンパク質、Ｏ－抗原、毒素－抗原Ｓｔｘ２Ｂ、毒素－抗原ＳｔｘｌＢ、接着－抗原断片Ｉｎｔ２８、タンパク質ＥｓｐＡ、タンパク質ＥｓｐＢ、Ｉｎｔｉｍｉｎ、タンパク質Ｔｉｒ、タンパク質ＩｎｔＣ３００、タンパク質Ｅａｅ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ０１５７：Ｈ７、Ｏｌｌｌ及びＯ１０４：Ｈ４、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ））；ＲＮＡポリメラーゼＬ、タンパク質Ｌ、糖タンパク質Ｇｎ、糖タンパク質Ｇｃ、ヌクレオカプシドタンパク質Ｓ、エンベロープ糖タンパク質Ｇｌ、核タンパク質ＮＰ、タンパク質Ｎ、ポリタンパク質Ｍ（Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ科、腎症候性出血熱（ＨＦＲＳ））；糖タンパク質Ｇ、マトリクスタンパク質Ｍ、核タンパク質Ｎ、融合タンパク質Ｆ、ポリメラーゼＬ、タンパク質Ｗ、プロテインＣ、リンタンパク質ｐ、非構造的タンパク質Ｖ（ヘニパウイルス（ヘンドラウイルスニパウイルス）、ヘニパウイルス感染）；ポリタンパク質、糖タンパク質Ｇｐ２、Ａ型肝炎表面抗原ＨＢＡｇ、タンパク質２Ａ、ウイルスタンパク質ＶＰｌ、ウイルスタンパク質ＶＰ２、ウイルスタンパク質ＶＰ３、ウイルスタンパク質ＶＰ４、タンパク質Ｐ１Ｂ、タンパク質Ｐ２Ａ、タンパク質Ｐ３ＡＢ、タンパク質Ｐ３Ｄ（Ａ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎）；Ｂ型肝炎表面抗原ＨＢｓＡｇ、Ｂ型肝炎コア抗原ＨｂｃＡｇ、ポリメラーゼ、タンパク質Ｈｂｘ、ｐｒｅＳ２ ミドル表面タンパク質、表面タンパク質Ｌ、ラージＳタンパク質、ウイルスタンパク質ＶＰｌ、ウイルスタンパク質ＶＰ２、ウイルスタンパク質ＶＰ３、ウイルスタンパク質ＶＰ４（Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｂ型肝炎）；エンベロープ糖タンパク質Ｅｌ ｇｐ３２ ｇｐ３５ 、エンベロープ糖タンパク質Ｅ２ ＮＳｌ ｇｐ６８ ｇｐ７０、カプシドタンパク質Ｃ 、コアタンパク質コア、ポリタンパク質、ウイルスタンパク質ＶＰｌ、ウイルスタンパク質ＶＰ２、ウイルスタンパク質ＶＰ３、ウイルスタンパク質ＶＰ４、抗原Ｇ、タンパク質ＮＳ３、タンパク質ＮＳ５Ａ、（Ｃ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎）；ウイルスタンパク質ＶＰｌ、ウイルスタンパク質ＶＰ２、ウイルスタンパク質ＶＰ３、ウイルスタンパク質ＶＰ４、ラージデルタ肝炎抗原、スモールデルタ肝炎抗原（Ｄ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎）；ウイルスタンパク質ＶＰｌ、ウイルスタンパク質ＶＰ２、ウイルスタンパク質ＶＰ３、ウイルスタンパク質ＶＰ４、カプシドタンパク質Ｅ２（Ｅ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎）；糖タンパク質Ｌ ＵＬ１、ウラシル－ＤＮＡグリコシラーゼＵＬ２、タンパク質ＵＬ３、タンパク質ＵＬ４、ＤＮＡ複製タンパク質ＵＬ５、ｐｏｒｔａｌタンパク質ＵＬ６、ビリオン成熟タンパク質ＵＬ７、ＤＮＡヘリカーゼＵＬ８、複製起点－結合タンパク質ＵＬ９、糖タンパク質Ｍ ＵＬ１０、タンパク質ＵＬ１１、アルカリエキソヌクレアーゼＵＬ１２、セリン－トレオニンプロテインキナーゼＵＬ１３、外被タンパク質ＵＬ１４、ターミナーゼＵＬ１５、外被タンパク質ＵＬ１６、タンパク質ＵＬ１７、カプシドタンパク質ＶＰ２３ ＵＬ１８、主要カプシドタンパク質ＶＰ５ ＵＬ１９、膜タンパク質ＵＬ２０、外被タンパク質ＵＬ２１、糖タンパク質Ｈ（ＵＬ２２）、チミジンキナーゼＵＬ２３、タンパク質ＵＬ２４、タンパク質ＵＬ２５、カプシドタンパク質Ｐ４０（ＵＬ２６、ＶＰ２４、ＶＰ２２Ａ）、糖タンパク質Ｂ（ＵＬ２７）、ＩＣＰ１８．５タンパク質（ＵＬ２８）、主要ＤＮＡ－結合タンパク質ＩＣＰ８（ＵＬ２９）、ＤＮＡポリメラーゼＵＬ３０、核マトリクスタンパク質ＵＬ３１、エンベロープ糖タンパク質ＵＬ３２、タンパク質ＵＬ３３、内側核膜タンパク質ＵＬ３４、カプシドタンパク質ＶＰ２６（ＵＬ３５）、ラージ外被タンパク質ＵＬ３６、カプシドアセンブ
リタンパク質ＵＬ３７、ＶＰ１９Ｃタンパク質（ＵＬ３８）、リボヌクレオチドレダクターゼ（ラージサブユニット）ＵＬ３９、リボヌクレオチドレダクターゼ（スモールサブユニット）ＵＬ４０、外被タンパク質／ビリオンホストシャットオフＶＨＳタンパク質（ＵＬ４１）、ＤＮＡポリメラーゼ進化性要因ＵＬ４２、膜タンパク質ＵＬ４３、糖タンパク質Ｃ（ＵＬ４４）、膜タンパク質ＵＬ４５、外被タンパク質ＶＰ１１／１２（ＵＬ４６）、外被タンパク質ＶＰ１３／１４（ＵＬ４７）、ビリオン成熟タンパク質ＶＰ１６（ＵＬ４８、Ａｌｐｈａ－ＴＩＦ）、エンベロープタンパク質ＵＬ４９、ｄＵＴＰ ｄｉホスファターゼＵＬ５０、外被タンパク質ＵＬ５１、ＤＮＡヘリカーゼ／プリマーゼ複合体タンパク質ＵＬ５２、糖タンパク質Ｋ（ＵＬ５３）、転写調節タンパク質ＩＥ６３（ＩＣＰ２７、ＵＬ５４）、タンパク質ＵＬ５５、タンパク質ＵＬ５６、ウイルス複製タンパク質ＩＣＰ２２（ＩＥ６８、ＵＳ１）、タンパク質ＵＳ２、セリン／トレオニン－タンパク質キナーゼＵＳ３、糖タンパク質Ｇ（ＵＳ４）、糖タンパク質Ｊ（ＵＳ５）、糖タンパク質Ｄ（ＵＳ６）、糖タンパク質Ｉ（ＵＳ７）、糖タンパク質Ｅ（ＵＳ８）、外被タンパク質ＵＳ９、カプシド／外被タンパク質ＵＳ１０、Ｖｍｗ２１タンパク質（ＵＳ１１）、ＩＣＰ４７タンパク質（ＩＥ１２、ＵＳ１２）、主要転写活性化因子ＩＣＰ４（ＩＥ１７５、ＲＳＩ）、Ｅ３ユビキチンリガーゼＩＣＰＯ（ＩＥ１１０）、潜伏期関連タンパク質１ ＬＲＰ１、潜伏期関連タンパク質２ ＬＲＰ２、神経毒性因子ＲＬ１（ＩＣＰ３４．５）、潜伏感染関連転写ＬＡＴ（単純ヘルペスウイルス１及び２（ＨＳＶ－１及びＨＳＶ－２）、単純ヘルペス）；熱ショックタンパク質Ｈｓｐ６０、細胞表面タンパク質Ｈ１Ｃ、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ型ＤｐｐＩＶ、Ｍ抗原、７０ｋＤａタンパク質、１７ｋＤａヒストン様タンパク質（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍｏｓｉｓ）；脂肪酸及びレチノール結合タンパク質－１ ＦＡＲ－１、メタロプロテイナーゼの組織インヒビターＴＩＭＰ（ＴＭＰ）、システインプロテイナーゼＡＣＥＹ－１、システインプロテイナーゼＡＣＣＰ－１、表面抗原Ａｃ－１６、分泌型タンパク質２ ＡＳＰ－２、メタロプロテアーゼ１ ＭＴＰ－１、アスパルチルプロテアーゼインヒビターＡＰＩ－１、表面会合抗原ＳＡＡ－１、表面会合抗原ＳＡＡ－２、成人特異的分泌型因子Ｘａ、セリンプロテアーゼインヒビター抗凝固因子ＡＰ、カテプシンＤ様アスパラギン酸プロテアーゼＡＲＲ－１、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼＧＳＴ、アスパラギン酸プロテアーゼＡＰＲ－１、アセチルコリンエステラーゼＡＣｈＥ（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｄｕｏｄｅｎａｌｅ及びＮｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ｈｏｏｋｗｏｒｍ感染）；タンパク質ＮＳｌ、タンパク質ＮＰ１、タンパク質ＶＰ１、タンパク質ＶＰ２、タンパク質ＶＰ３（ヒトボカウイルス（ＨＢｏＶ）、ヒトボカウイルス感染）；主要表面タンパク質２ ＭＳＰ２、主要表面タンパク質４ ＭＳＰ４、ＭＳＰ変異型ＳＧＶ１、ＭＳＰ変異型ＳＧＶ２、外膜タンパク質ＯＭＰ、外側膜タンパク質１９ ＯＭＰ－１９、主要抗原性タンパク質ＭＡＰＩ、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１－２、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１Ｂ、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１－３、Ｅｒｕｍ２５１０コードタンパク質、タンパク質ＧｒｏＥＬ、タンパク質ＧｒｏＥＳ、３０ｋＤａ 主要外膜タンパク質、ＧＥ １００ｋＤａタンパク質、ＧＥ １３０ｋＤａタンパク質、ＧＥ １６０ｋＤａタンパク質（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｅｗｉｎｇｉｉ、Ｈｕｍａｎ ｅｗｉｎｇｉｉ ｅｈｒｌｉｃｈｉｏｓｉｓ）；主要表面タンパク質１－５（ＭＳＰｌａ、ＭＳＰｌｂ、ＭＳＰ２、ＭＳＰ３、ＭＳＰ４、ＭＳＰ５）、ＩＶ型分泌系タンパク質ＶｉｒＢ２、ＶｉｒＢ７、ＶｉｒＢｌｌ、ＶｉｒＤ４（Ａｎａｐｌａｓｍａ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｐｈｉｌｕｍ、ヒト顆粒球アナプラズマ症（ＨＧＡ））；タンパク質ＮＳｌ、小型疎水性タンパク質ＮＳ２、ＳＨタンパク質、融合タンパク質Ｆ、糖タンパク質Ｇ、マトリクスタンパク質Ｍ、マトリクスタンパク質Ｍ２－１、マトリクスタンパク質Ｍ２－２、リンタンパク質Ｐ、核タンパク質Ｎ、ポリメラーゼＬ（ヒトメタ肺炎ウイルス（ｈＭＰＶ）、ヒトメタ肺炎ウイルス感染）；主要表面タンパク質２ ＭＳＰ２、主要表面タンパク質４ ＭＳＰ４、ＭＳＰ変異型ＳＧＶ１、ＭＳＰ変異型ＳＧＶ２、外膜タンパク質ＯＭＰ、外側膜タンパク質１９ ＯＭＰ－１９、主要抗原性タンパク質ＭＡＰＩ、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１－２、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１Ｂ、主要抗原性タンパク質ＭＡＰ１－３、Ｅｒｕｍ２５１０コードタンパク質、タンパク質ＧｒｏＥＬ、タンパク質ＧｒｏＥＳ、３０ｋＤａ 主要外膜タンパク質、ＧＥ １００ｋＤａタンパク質、ＧＥ １３０ｋＤａタンパク質、ＧＥ １６０ｋＤａタンパク質（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｃｈａｆｆｅｅｎｓｉｓ、Ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｙｔｉｃ ｅｈｒｌｉｃｈｉｏｓｉｓ）；複製タンパク質Ｅｌ、制御因子タンパク質Ｅ２、タンパク質Ｅ３、タンパク質Ｅ４、タンパク質Ｅ５、タンパク質Ｅ６、タンパク質Ｅ７、タンパク質Ｅ８、主要カプシドタンパク質ＬＩ、マイナー－カプシドタンパク質Ｌ２（ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染）；融合タンパク質Ｆ、赤血球凝集素－ノイラミニダーゼＨＮ、糖タンパク質Ｇ、マトリクスタンパク質Ｍ、リンタンパク質Ｐ、核タンパク質Ｎ、ポリメラーゼＬ（ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＩＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス感染）赤血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、Ｍｌタンパク質、Ｍ２タンパク質、ＮＳｌタンパク質、ＮＳ２タンパク質（ＮＥＰタンパク質：核外移行タンパク質）、ＰＡタンパク質、ＰＢ１タンパク質（ポリメラーゼｂａｓｉｃ １タンパク質）、ＰＢ１－Ｆ２タンパク質及びＰＢ２タンパク質（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅｋファミリー、インフルエンザウイルス（ｆｌｕ））；ゲノムポリタンパク質、タンパク質Ｅ、タンパク質Ｍ、カプシドタンパク質Ｃ（日本脳炎ウイルス、日本脳炎）；ＲＴＸ毒素、ＩＶ型ｐｉｌｉ、主要性線毛サブユニットＰｉｌＡ、制御因子転写因子ＰｉｌＳ及びＰｉｌＲ、タンパク質シグマ５４、外膜タンパク質（Ｋｉｎｇｅｌｌａ ｋｉｎｇａｅ、Ｋｉｎｇｅｌｌａ ｋｉｎｇａｅ感染）；プリオンタンパク質（Ｋｕｒｕプリオン、Ｋｕｒｕ）；核タンパク質Ｎ、ポリメラーゼＬ、マトリクスタンパク質Ｚ、糖タンパク質ＧＰ（ラッサウイルス、ラッサ熱）；ペプチドグリカン関連リポタンパク質ＰＡＬ、６０ｋＤａ シャペロニンＣｐｎ６０（ｇｒｏＥＬ、ＨｓｐＢ）、ＩＶ型ピリンＰｉｌＥ、外膜タンパク質ＭＩＰ、主要外膜タンパク質ＭｏｍｐＳ、亜鉛メタロプロテイナーゼＭＳＰ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌｏｓｉｓ（レジオネラ病、ポンティアック熱））；Ｐ４ヌクレアーゼ、タンパク質ＷＤ、リボヌクレオチドレダクターゼＭ２、表面膜糖タンパク質Ｐｇ４６、システインプロテイナーゼＣＰ、グルコース調節性タンパク質７８ ＧＲＰ－７８、ステージ特異的Ｓ抗原様タンパク質Ａ２、ＡＴＰａｓｅ Ｆｌ、ベータ－チューブリン、熱ショックタンパク質７０ Ｈｓｐ７０、ＫＭＰ－１１、糖タンパク質ＧＰ６３、タンパク質ＢＴ１、ヌクレオシド ヒドロラーゼＮＨ、細胞表面タンパク質Ｂｌ、リボソームタンパク質Ｐｌ様タンパク質ＰＩ、ステロール２４－ｃ－メチルトランスフェラーゼＳＭＴ、ＬＡＣＫタンパク質、ヒストンＨＩ、ＳＰＢ１タンパク質、チオール特異的抗酸化物質ＴＳＡ、タンパク質抗原ＳＴＩ１、シグナルペプチダーゼＳＰ、ヒストンＨ２Ｂ、表面抗原ＰＳＡ－２、システインプロテイナーゼｂ Ｃｐｂ（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ属、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｓｉｓ）；主要膜タンパク質Ｉ、セリンリッチ抗原－ ４５ｋＤａ、１０ｋＤａ カペロニンＧｒｏＥＳ、ＨＳＰｋＤａ抗原、アミノ－オキソペンタン酸シンテターゼＡＯＮＳ、タンパク質リコンビナーゼＡ ＲｅｃＡ、アセチル－／プロピオニル－補酵素Ａカルボキシラーゼアルファ、アラニンラセマーゼ、６０ｋＤａシャペロニン２、ＥＳＡＴ－６様タンパク質ＥｃｘＢ（Ｌ－ＥＳＡＴ－６）、タンパク質Ｌｓｒ２、タンパク質ＭＬ０２７６、ヘパリン－結合赤血球凝集素 ＨＢＨＡ、熱ショックタンパク質６５ Ｈｓｐ６５、ｍｙｃＰｌまたはＭＬ００４１コードタンパク質、ｈｔｒＡ２またはＭＬ０１７６コードタンパク質、ｈｔｒＡ４またはＭＬ２６５９コードタンパク質、ｇｃｐまたはＭＬ０３７９コードタンパク質、ｃｌｐＣまたはＭＬ０２３５コードタンパク質（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ及びＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ、Ｌｅｐｒｏｓｙ）；外膜タンパク質ＬｉｐＬ３２、膜タンパク質ＬＩＣ１０２５８、膜タンパク質ＬＰ３０、膜タンパク質ＬＩＣ１２２３８、Ｏｍｐａ様タンパク質Ｌｓａ６６、表面タンパク質ＬｉｇＡ、表面タンパク質ＬｉｇＢ、主要外膜タンパク質ＯｍｐＬｌ、外膜タンパク質ＬｉｐＬ４１、タンパク質ＬｉｇＡｎｉ、表面タンパク質ＬｃｐＡ、接着タンパク質ＬｉｐＬ５３、外膜タンパク質ＵｐＬ３２、表面タンパク質Ｌｓａ６３、フラジェリンＦｌａＢｌ、膜リポタンパク質ＬｉｐＬ２１、膜タンパク質ｐＬ４０、レプトスピラ表面アドヘシンＬｓａ２７、外膜タンパク質ＯｍｐＬ３６、外膜タンパク質ＯｍｐＬ３７、外膜タンパク質ＯｍｐＬ４７、外膜タンパク質ＯｍｐＬ５４、アシルトランスフェラーゼＬｐｘＡ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ属、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ）；リステリオリシンＯ前駆体 Ｈｌｙ（ＬＬＯ）、侵襲関連タンパク質ｌａｐ（Ｐ６０）、Ｌｉｓｔｅｒｉｏｌｙｓｉｎ制御因子タンパク質ＰｒｆＡ、ＺｉｎｃメタロプロテイナーゼＭｐｌ、ホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼＣ ＰＬＣ（ＰｌｃＡ、ＰｌｃＢ）、Ｏ－アセチルトランスフェラーゼＯａｔ、ＡＢＣ－トランスポーターパーミアーゼＩｍ．Ｇ＿１７７１、接着タンパク質ＬＡＰ、ＬＡＰ受容体Ｈｓｐ６０、アドヘシンＬａｐＢ、ｈａｅｍｏｌｙｓｉｎ ｌｉｓｔｅｒｉｏｌｙｓｉｎ ＯＬＬＯ、タンパク質ＡｃｔＡ、Ｉｎｔｅｒｎａｌｉｎ Ａ ＩｎＩＡ、タンパク質ＩｎＩＢ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉｏｓｉｓ）；外表面タンパク質Ａ ＯｓｐＡ、外表面タンパク質ＯｓｐＢ、外表面タンパク質ＯｓｐＣ、デコリン結合タンパク質Ａ ＤｂｐＡ、デコリン結合タンパク質Ｂ ＤｂｐＢ、鞭毛フィラメント４１ｋＤａコアタンパク質Ｆｌａ、塩基性膜タンパク質Ａ ＢｍｐＡ（免疫優勢抗原Ｐ３９）、外表面 ２２ｋＤａリポタンパク質前駆体（抗原ＩＰＬＡ７）、可変性表面リポタンパク質ｖｌｓＥ（通常は、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ及び他のＢｏｒｒｅｌｉａ種、ライム病（Ｌｙｍｅ ｂｏｒｒｅｌｉｏｓｉｓ））；毒液アレルゲンホモログ様タンパク質ＶＡＬ－１、大量幼虫転写物ＡＬＴ－１、大量幼虫転写物ＡＬＴ－ ２、チオレドキシンペルオキシダーゼＴＰＸ、スズメバチアレルゲンホモログＶＡＨ、チオレドキシンペルオキシダーゼ２ ＴＰＸ－２、抗原性タンパク質ＳＸＰ（ペプチドＮ、Ｎｌ、Ｎ２、及びＮ３）、活性化関連タンパク質－１ ＡＳＰ－１、チオレドキシンＴＲＸ、トランスグルタミナーゼＢｍＴＧＡ、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼＧＳＴ、ミオシン、スズメバチアレルゲンホモログＶＡＨ、１７５ｋＤａコラゲナーゼ、グリセルアルデヒド－３－リン酸塩デヒドロゲナーゼＧＡＰＤＨ、クチクラコラーゲンＣｏｌ－４、分泌型幼虫酸性タンパク質ＳＬＡＰｓ、キチナーゼＣＨＩ－１、マルトース結合タンパク質ＭＢＰ、糖分解酵素フルクトース－ｌ，６－ビスリン酸塩アルドラーゼＦｂａ、トロポミオシン ＴＭＹ－１、線虫特異的遺伝子産物ＯｖＢ２０、オンコシスタチンＣＰＩ－２、タンパク質Ｃｏｘ－２（Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ ｂａｎｃｒｏｆｔｉ及びＢｒｕｇｉａ ｍａｌａｙｉ、Ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｆｉｌａｒｉａ
ｓｉｓ（Ｅｌｅｐｈａｎｔｉａｓｉｓ））；糖タンパク質ＧＰ、マトリクスタンパク質Ｚ、ポリメラーゼＬ、核タンパク質Ｎ（Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｃｈｏｒｉｏｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓウイルス（ＬＣＭＶ）、Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｃｈｏｒｉｏｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ）；トロンボスポンジン関連アノニマスタンパク質ＴＲＡＰ、ＳＳＰ２ Ｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅ表面タンパク質２、頂端膜抗原１ ＡＭＡ１、ロプトリー膜抗原ＲＭＡ１、酸性塩基性リピート抗原ＡＢＲＡ、細胞横断タンパク質ＰＦ、タンパク質Ｐｖｓ２５、メロゾイト表面タンパク質１ ＭＳＰ－１、メロゾイト表面タンパク質２ ＭＳＰ－２、環状体感染赤血球表面抗原ＲＥＳＡ肝臓ステージ抗原３ ＬＳＡ－３、タンパク質Ｅｂａ－１７５、セリンリピート抗原５ ＳＥＲＡ－５、スポロゾイト周囲タンパク質ＣＳ、メロゾイト表面タンパク質３ ＭＳＰ３、メロゾイト表面タンパク質８ ＭＳＰ８、エノラーゼＰＦ１０、肝細胞赤血球タンパク質１７ｋＤａ ＨＥＰ１７、赤血球膜タンパク質１ ＥＭＰ１、タンパク質Ｋベータメロゾイト表面タンパク質４／５ ＭＳＰ ４／５、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ９０、グルタミン酸塩リッチタンパク質ＧＬＵＲＰ、メロゾイト表面タンパク質４ ＭＳＰ－４、タンパク質ＳＴＡＲＰ、スポロゾイト周囲タンパク質関連抗原前駆体 ＣＲＡ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ属、マラリア）；核タンパク質Ｎ、膜－会合タンパク質ＶＰ２４、マイナー核タンパク質ＶＰ３０、ポリメラーゼ補因子ＶＰ３５、ポリメラーゼＬ、マトリクスタンパク質ＶＰ４０、エンベロープ糖タンパク質ＧＰ（マールブルグウイルス、マールブルグ出血熱（ＭＨＦ））；タンパク質Ｃ、マトリクスタンパク質Ｍ、リンタンパク質Ｐ、非構造的タンパク質Ｖ、赤血球凝集素糖タンパク質Ｈ、ポリメラーゼＬ、核タンパク質Ｎ、融合タンパク質Ｆ（麻疹ウイルス、麻疹）；ＡＢＣトランスポーターファミリーのメンバー（ＬｏｌＣ、ＯｐｐＡ、及びＰｏｔＦ）、推定リポタンパク質放出系膜通過タンパク質ＬｏｌＣ／Ｅ、フラジェリンＦｌｉＣ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ細胞内運動性Ａ ＢｉｍＡ、細菌の伸長因子－Ｔｕ ＥＦ－Ｔｕ、１７ｋＤａ ＯｍｐＡ様タンパク質、ｂｏａＡコードタンパク質、ｂｏａＢコードタンパク質（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ、Ｍｅｌｉｏｉｄｏｓｉｓ（ホイットモア病））；ピリンタンパク質、マイナーピリン関連サブユニットｐｉｌＣ、主要ピリンサブユニット及び変異型ｐｉｌＥ、ｐｉｌＳ、相変異型タンパク質ｐｏｒＡ、Ｐｏｒｉｎ Ｂ ＰｏｒＢ、タンパク質ＴｒａＤ、ナイセリアの外膜抗原Ｈ．８、７０ｋＤａ抗原、主要外膜タンパク質ＰＩ、外膜タンパク質ＰＩＡ及びＰＩＢ、Ｗ抗原、表面タンパク質Ａ ＮｓｐＡ、トランスフェリン結合タンパク質ＴｂｐＡ、トランスフェリン結合タンパク質ＴｂｐＢ 、ＰＢＰ２、ｍｔｒＲコードタンパク質、ｐｏｎＡコードタンパク質、膜パーミアーゼＦｂｐＢＣ、ＦｂｐＡＢＣタンパク質系、ＬｂｐＡＢタンパク質、外膜タンパク質Ｏｐａ、外膜トランスポーター ＦｅｔＡ、鉄調節型制御因子 ＭｐｅＲ、第Ｈ因子－結合タンパク質ｆＨｂｐ、アドヘシンＮａｄＡ、タンパク質ＮｈｂＡ、リプレッサーＦａｒＲ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ ｄｉｓｅａｓｅ）；６６ｋＤａタンパク質、２２ｋＤａタンパク質（通常は、Ｍｅｔａｇｏｎｉｍｕｓ ｙｏｋａｇａｗａｉ、Ｍｅｔａｇｏｎｉｍｉａｓｉｓ）；極性チューブタンパク質（３４、７５、及び１７０ｋＤａ（Ｇｌｕｇｅａ）、３５、５５及び１５０ｋＤａ（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ））、キネシン関連タンパク質、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ最大サブユニット、同様の内在性膜タンパク質ＹＩＰＡ、抗サイレンシングタンパク質１、熱ショック転写因子ＨＳＦ、プロテインキナーゼ、チミジンキナーゼ、ＮＯＰ－２様核小体タンパク質（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ ｐｈｙｌｕｍ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉｏｓｉｓ）；ＣＡＳＰ８及びＦＡＤＤ様アポトーシス制御因子、グルタチオンペルオキシダーゼＧＰＸ１、ＲＮＡヘリカーゼＮＰＨ－ＩＩ ＮＰＨ２、Ｐｏｌｙ（Ａ）ポリメラーゼ触媒性サブユニットＰＡＰＬ、主要エンベロープタンパク質Ｐ４３Ｋ、早期転写因子 ７０ｋＤａサブユニットＶＥＴＦＳ、早期転写因子８２ｋＤａサブユニットＶＥＴＦＬ、メタロエンドペプチダーゼＧｌ型、ヌクレオシドトリホスファターゼＩ ＮＰＨ１、複製タンパク質Ａ２８様 ＭＣ１３４Ｌ、ＲＮＡポリメラーゼ７ｋＤａサブユニットＲＰ０７（Ｍｏｌｌｕｓｃｕｍ ｃｏｎｔａｇｉｏｓｕｍウイルス（ＭＣＶ）、Ｍｏｌｌｕｓｃｕｍ ｃｏｎｔａｇｉｏｓｕｍ（ＭＣ））；マトリクスタンパク質Ｍ、リンタンパク質Ｐ／Ｖ、小型疎水性タンパク質ＳＨ、核タンパク質Ｎ、タンパク質Ｖ、融合糖タンパク質Ｆ、赤血球凝集素－ノイラミニダーゼＨＮ、ＲＮＡポリメラーゼＬ（ムンプス（おたふく風邪）ウイルス、おたふく風邪）；外膜タンパク質ＯＭ、細胞表面抗原ＯｍｐＡ、細胞表面抗原ＯｍｐＢ（ｓｃａ５）、細胞表面タンパク質ＳＣＡ４、細胞表面タンパク質ＳＣＡ１、細胞質内のタンパク質Ｄ、結晶性表面層タンパク質ＳＬＰ、防御表面タンパク質抗原ＳＰＡ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｙｐｈｉ、Ｍｕｒｉｎｅ ｔｙｐｈｕｓ（Ｅｎｄｅｍｉｃ ｔｙｐｈｕｓ））；アドヘシンＰＩ、接着 Ｐ３０、タンパク質ｐｌｌ６、タンパク質Ｐ４０、細胞骨格タンパク質ＨＭＷ１、細胞骨格タンパク質ＨＭＷ２、細胞骨格タンパク質ＨＭＷ３、ＭＰＮ１５２コードタンパク質、ＭＰＮ４２６コードタンパク質、ＭＰＮ４５６コードタンパク質、ＭＰＮ－５００コードタンパク質（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）；ＮｏｃＡ、鉄依存性制御因子タンパク質、ＶａｐＡ、ＶａｐＤ、ＶａｐＦ、ＶａｐＧ、カゼイン分解性プロテアーゼ、フィラメント先端会合４３ｋＤａタンパク質、タンパク質Ｐ２４、タンパク質Ｐ６１、１５ｋＤａタンパク質、５６ｋＤａタンパク質（通常は、Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ及び他のＮｏｃａｒｄｉａ種、Ｎｏｃａｒｄｉｏｓｉｓ）；毒液アレルゲンホモログ様タンパク質ＶＡＬ－１、大量幼虫転写物ＡＬＴ－１、大量幼虫転写物ＡＬＴ－ ２、チオレドキシンペルオキシダーゼＴＰＸ、スズメバチアレルゲンホモログＶＡＨ、チオレドキシンペルオキシダーゼ２ ＴＰＸ－２、抗原性タンパク質ＳＸＰ（ペプチド Ｎ、Ｎｌ、Ｎ２、及びＮ３）、活性化関連タンパク質－１ ＡＳＰ－１、チオレドキシンＴＲＸ、トランスグルタミナーゼＢｍＴＧＡ、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼＧＳＴ、ミオシン、スズメバチアレルゲンホモログ ＶＡＨ、１７５ｋＤａコラゲナーゼ、グリセルアルデヒド－３－リン酸塩デヒドロゲナーゼＧＡＰＤＨ、クチクラコラーゲンＣｏｌ－４、分泌型幼虫酸性タンパク質ＳＬＡＰｓ、キチナーゼＣＨＩ－１、マルトース結合タンパク質ＭＢＰ、糖分解酵素フルクトース－ｌ，６－ビスリン酸塩アルドラーゼＦｂａ、トロポミオシン ＴＭＹ－１、線虫特異的遺伝子産物ＯｖＢ２０、オンコシスタチンＣＰＩ－２、Ｃｏｘ－２（Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ ｖｏｌｖｕｌｕｓ、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃｉａｓｉｓ（Ｒｉｖｅｒ ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ））；４３ｋＤａ 分泌型糖タンパク質、糖タンパク質ｇｐＯ、糖タンパク質ｇｐ７５、抗原Ｐｂ２７、抗原Ｐｂ４０、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ６５、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ７０、熱ショックタンパク質Ｈｓｐ９０、タンパク質Ｐ１０、トリオースリン酸塩イソメラーゼＴＰＩ、Ｎ－アセチル－グルコサミン－結合レクチンＰａｒａｃｏｃｃｉｎ、２８ｋＤａタンパク質Ｐｂ２８（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｏｍｙｃｏｓｉｓ（南アメリカブラストミセス症））；２８ｋＤａ クルジパイン様システインプロテアーゼＰｗ２８ＣＣＰ（通常は、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｗｅｓｔｅｒｍａｎｉ及び他のＰａｒａｇｏｎｉｍｕｓ種、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｉａｓｉｓ）；外膜タンパク質ＯｍｐＨ、外膜タンパク質Ｏｍｐ２８、タンパク質ＰＭ１５３９、タンパク質ＰＭ０３５５、タンパク質ＰＭ１４１７、修復タンパク質ＭｕｔＬ、タンパク質ＢｃｂＣ、タンパク質ＰＭ０３０５、ギ酸塩デヒドロゲナーゼ－Ｎ、タンパク質ＰＭ０６９８、タンパク質ＰＭ１４２２、ＤＮＡギラーゼ、リポタンパク質ＰｌｐＥ、接着性タンパク質Ｃｐ３９、ヘム獲得系受容体ＨａｓＲ、３９ｋＤａ莢膜タンパク質、鉄調節性ＯＭＰ ＩＲＯＭＰ、外膜タンパク質ＯｍｐＡ８７、線毛タンパク質Ｐｔｆ、線毛サブユニットタンパク質ＰｔｆＡ、トランスフェリン結合タンパク質Ｔｂｐｌ、エステラーゼ酵素ＭｅｓＡ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ毒素ＰＭＴ、ａｄｈｅｓｉｖｅタンパク質Ｃｐ３９（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ属、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌｏｓｉｓ）；「線維状赤血球凝集素 ＦｈａＢ、アデニレートシクラーゼＣｙａＡ、百日咳毒素サブユニット４前駆体 ＰｔｘＤ、パータクチン前駆体 Ｐｒｎ、毒素サブユニット１ ＰｔｘＡ、タンパク質Ｃｐｎ６０、タンパク質ｂｒｋＡ、百日咳毒素サブユニット２前駆体 ＰｔｘＢ、百日咳毒素サブユニット３前駆体 ＰｔｘＣ、百日咳毒素サブユニット５前駆体 ＰｔｘＥ、パータクチンＰｒｎ、タンパク質Ｆｉｍ２、タンパク質Ｆｉｍ３；」（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ百日咳、Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ（百日咳（Ｗｈｏｏｐｉｎｇ ｃｏｕｇｈ）））；「Ｆｌ莢膜抗原、毒性関連Ｖ抗原、分泌型エフェクタータンパク質ＬｃｒＶ、Ｖ抗原、外膜プロテアーゼＰｌａ、分泌型エフェクタータンパク質ＹｏｐＤ、推定分泌タンパク質－チロシンホスファターゼＹｏｐＨ、ニードル複合体主要サブユニットＹｓｃＦ、プロテインキナーゼＹｏｐＯ、推定オートトランスポータータンパク質ＹａｐＦ、内側膜ＡＢＣ－トランスポーターＹｂｔＱ（Ｉｒｐ７）、推定糖結合タンパク質ＹＰＯ０６１２、熱ショックタンパク質９０ ＨｔｐＧ、推定スルファターゼタンパク質ＹｄｅＮ、外膜リポタンパク質キャリアタンパク質ＬｏｌＡ、分泌シャペロンＹｅｒＡ、推定リポタンパク質ＹＰＯ０４２０、ヘモリシン活性化因子タンパク質ＨｐｍＢ、ペスチシン／エルシニアバクチン外膜受容体Ｐｓｎ、分泌型エフェクタータンパク質ＹｏｐＥ、分泌型エフェクタータンパク質ＹｏｐＦ、分泌型エフェクタータンパク質ＹｏｐＫ、外膜タンパク質ＹｏｐＮ、外膜タンパク質ＹｏｐＭ、コアグラーゼ／フィブリノリジン前駆体 Ｐｌａ；」（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ、Ｐｌａｇｕｅ）；タンパク質ＰｈｐＡ、表面アドヘシンＰｓａＡ、ニューモリシン Ｐｌｙ、ＡＴＰ依存性プロテアーゼＣＩｐ、リポ酸塩－タンパク質リガーゼＬｐｌＡ、細胞壁表面固定タンパク質ｐｓｒＰ、ソルターゼＳｒｔＡ、グルタミル－ｔＲＮＡシンテターゼＧｌｔＸ、コリン結合タンパク質Ａ ＣｂｐＡ、肺炎球菌表面タンパク質Ａ ＰｓｐＡ、肺炎球菌表面タンパク質Ｃ ＰｓｐＣ、６－ホスホグルコン酸デヒドロゲナーゼＧｎｄ、鉄結合タンパク質ＰｉａＡ、ムレインヒドロラーゼＬｙｔＢ、プロテオンＬｙｔＣ、プロテアーゼＡｌ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌ感染）；主要表面タンパク質Ｂ、ｋｅｘｉｎ様プロテアーゼＫＥＸ１、タンパク質Ａ１２、５５ｋＤａ抗原Ｐ５５、主要表面糖タンパク質Ｍｓｇ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ（ＰＣＰ））；ゲノムポリタンパク質、ポリメラーゼ３Ｄ、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ１、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ２、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ３、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ４、プロテアーゼ２Ａ、プロテアーゼ３Ｃ（Ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ、Ｐｏｌｉｏｍｙｅｌｉｔｉｓ）；タンパク質Ｎｆａｌ、エクセンディン－３、分泌性リパーゼ、カテプシンＢ様プロテアーゼ、システインプロテアーゼ、カテプシン、ペルオキシレドキシン、タンパク質ＣｒｙｌＡｃ（通常は、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ ｆｏｗｌｅｒｉ、原発性アメーバ性髄膜脳炎（ＰＡＭ））；アグノプロテ
イン、ラージＴ抗原、スモールＴ抗原、主要カプシドタンパク質ＶＰ１、マイナーカプシドタンパク質Ｖｐ２（ＪＣウイルス、進行性多巣性白質脳症）；低カルシウム応答タンパク質Ｅ ＬＣｒＥ、クラミジア外側タンパク質Ｎ ＣｏｐＮ、セリン／トレオニン－タンパク質キナーゼＰｋｎＤ、アシル－キャリア－タンパク質Ｓ－マロニルトランスフェラーゼＦａｂＤ、一本鎖ＤＮＡ－結合タンパク質Ｓｓｂ、主要外膜タンパク質ＭＯＭＰ、外膜タンパク質２ Ｏｍｐ２、多形性膜タンパク質ファミリー（Ｐｍｐｌ、Ｐｍｐ２、Ｐｍｐ３、Ｐｍｐ４、Ｐｍｐ５、Ｐｍｐ６、Ｐｍｐ７、Ｐｍｐ８、Ｐｍｐ９、ＰｍｐｌＯ、Ｐｍｐｌｌ、Ｐｍｐｌ２、Ｐｍｐｌ３、Ｐｍｐｌ４、Ｐｍｐｌ５、Ｐｍｐｌ６、Ｐｍｐｌ７、Ｐｍｐｌ８、Ｐｍｐｌ９、Ｐｍｐ２０、Ｐｍｐ２１）（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｐｓｉｔｔａｃｏｓｉｓ）；外膜タンパク質ＰＩ、熱ショックタンパク質Ｂ ＨｓｐＢ、ペプチドＡＢＣトランスポーター、ＧＴＰ－結合タンパク質、タンパク質ＩｃｍＢ、リボヌクレアーゼＲ、ホスファターゼＳｉｘＡ、タンパク質ＤｓｂＤ、外膜タンパク質ＴｏｌＣ、ＤＮＡ－結合タンパク質ＰｈｏＢ、ＡＴＰａｓｅ ＤｏｔＢ、熱ショックタンパク質Ｂ ＨｓｐＢ、膜タンパク質Ｃｏｍｌ、２８ｋＤａタンパク質、ＤＮＡ－３－メチルアデニングリコシダーゼＩ、ｐ外膜タンパク質ＯｍｐＨ、外膜タンパク質ＡｄａＡ、グリシン切断系Ｔ－タンパク質（Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｉｉ、Ｑ熱）；核タンパク質Ｎ、大型構造的タンパク質Ｌ、リンタンパク質Ｐ、マトリクスタンパク質Ｍ、糖タンパク質Ｇ（Ｒａｂｉｅｓウイルス、Ｒａｂｉｅｓ）；融合タンパク質Ｆ、核タンパク質Ｎ、マトリクスタンパク質Ｍ、マトリクスタンパク質Ｍ２－１、マトリクスタンパク質Ｍ２－２、リンタンパク質Ｐ、小型疎水性タンパク質ＳＨ、主要表面糖タンパク質Ｇ、ポリメラーゼＬ、非構造的タンパク質１ ＮＳ１、非構造的タンパク質２ ＮＳ２（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、呼吸器合胞体ウイルス感染）；ゲノムポリタンパク質、ポリメラーゼ３Ｄ、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ１、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ２、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ３、ウイルスカプシドタンパク質ＶＰ４、プロテアーゼ２Ａ、プロテアーゼ３Ｃ（ライノウイルス、ライノウイルス感染）；外膜タンパク質ＯＭ、細胞表面抗原ＯｍｐＡ、細胞表面抗原ＯｍｐＢ（ｓｃａ５）、細胞表面タンパク質ＳＣＡ４、細胞表面タンパク質ＳＣＡ１、タンパク質ＰＳ１２０、細胞質内のタンパク質Ｄ、防御表面タンパク質抗原ＳＰＡ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ属、リケッチア感染）；外膜タンパク質ＯＭ、細胞表面抗原ＯｍｐＡ、細胞表面抗原ＯｍｐＢ（ｓｃａ５）、細胞表面タンパク質ＳＣＡ４、細胞表面タンパク質ＳＣＡ１、細胞質内のタンパク質Ｄ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ａｋａｒｉ、リケッチア痘瘡）；エンベロープ糖タンパク質ＧＰ、ポリメラーゼＬ、核タンパク質Ｎ、非構造的タンパク質ＮＳＳ（リフトバレー熱ウイルス、リフトバレー熱（ＲＶＦ））；外膜タンパク質ＯＭ、細胞表面抗原ＯｍｐＡ、細胞表面抗原ＯｍｐＢ（ｓｃａ５）、細胞表面タンパク質ＳＣＡ４、細胞表面タンパク質ＳＣＡ１、細胞質内のタンパク質Ｄ（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ、ロッキー山紅斑熱（ＲＭＳＦ））；非構造的タンパク質６ ＮＳ６、非構造的タンパク質２ ＮＳ２、中間のカプシドタンパク質ＶＰ６、内側カプシドタンパク質ＶＰ２、非構造的タンパク質３ ＮＳ３、ＲＮＡ指向性ＲＮＡポリメラーゼＬ、タンパク質ＶＰ３、非構造的タンパク質１ ＮＳ１、非構造的タンパク質５ ＮＳ５、外側カプシド糖タンパク質ＶＰ７、非構造的糖タンパク質４ ＮＳ４、外側カプシドタンパク質ＶＰ４；（ロタウイルス、ロタウイルス感染）；ポリタンパク質Ｐ２００、糖タンパク質Ｅｌ、糖タンパク質Ｅ２、タンパク質ＮＳ２、カプシドタンパク質Ｃ（風疹ウイルス、風疹）；シャペロニンＧｒｏＥＬ（ＭｏｐＡ）、イノシトールリン酸塩ホスファターゼＳｏｐＢ、熱ショックタンパク質ＨｓＩＵ、シャペロンタンパク質ＤｎａＪ、タンパク質ＴｖｉＢ、タンパク質ＩｒｏＮ、フラジェリンＦｌｉＣ、侵襲タンパク質ＳｉｐＣ、糖タンパク質ｇｐ４３、外膜タンパク質ＬａｍＢ、外膜タンパク質ＰａｇＣ、外膜タンパク質ＴｏｌＣ、外膜タンパク質ＮｍｐＣ、外膜タンパク質ＦａｄＬ、輸送タンパク質ＳａｄＡ、トランスフェラーゼＷｇａＰ、エフェクタータンパク質ＳｉｆＡ、ＳｔｅＣ、ＳｓｅＬ、ＳｓｅＪ及びＳｓｅＦ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ属、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌｏｓｉｓ）；「タンパク質１４、非構造的タンパク質ＮＳ７ｂ、非構造的タンパク質ＮＳ８ａ、タンパク質９ｂ、タンパク質３ａ、核タンパク質Ｎ、非構造的タンパク質ＮＳ３ｂ、非構造的タンパク質ＮＳ６、タンパク質７ａ、非構造的タンパク質ＮＳ８ｂ、膜タンパク質Ｍ、エンベロープ小型膜タンパク質ＥｓＭ、レプリカーゼポリタンパク質ｌａ、スパイク糖タンパク質Ｓ、レプリカーゼポリタンパク質ｌａｂ；ＳＡＲＳコロナウイルス、ＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群））；セリンプロテアーゼ、異型ヒゼンダニ抗原１ ＡＳＡ１、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼＧＳＴ、システインプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、アポリポタンパク質（Ｓａｒｃｏｐｔｅｓ ｓｃａｂｉｅｉ、Ｓｃａｂｉｅｓ）；グルタチオンＳ－トランスフェラーゼｓ ＧＳＴ、パラミオシン、ヘモグロビナーゼＳＭ３２、主要卵抗原、１４ｋＤａ脂肪酸結合タンパク質Ｓｍｌ４、主要幼虫表面抗原Ｐ３７、２２，６ｋＤａ 外被抗原、カルパインＣＡＮＰ、三リン酸イソメラーゼＴｉｍ、表面タンパク質９Ｂ、外側カプシドタンパク質ＶＰ２、２３ｋＤａ内在性膜タンパク質Ｓｍ２３、Ｃｕ／Ｚｎ－スーパーオキシドディスムターゼ、糖タンパク質Ｇｐ、ミオシン（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ属、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓ（Ｂｉｌｈａｒｚｉｏｓｉｓ））；６０ｋＤａシャペロニン、５６ｋＤａ型特異的抗原、ピルビン酸リン酸ジキナーゼ、４－ヒドロキシ安息香酸 オクタプレニルトランスフェラーゼ（Ｏｒｉｅｎｔｉａ ｔｓｕｔｓｕｇａｍｕｓｈｉ、Ｓｃｒｕｂ ｔｙｐｈｕｓ）；デヒドロゲナーゼＧｕａＢ、侵入タンパク質Ｓｐａ３２、ｉｎｖａｓｉｎ（インバシン）ＩｐａＡ、ｉｎｖａｓｉｎ ＩｐａＢ、ｉｎｖａｓｉｎ ＩｐａＣ、ｉｎｖａｓｉｎ ＩｐａＤ、ｉｎｖａｓｉｎ ＩｐａＨ、ｉｎｖａｓｉｎ ＩｐａＪ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ属、Ｓｈｉｇｅｌｌｏｓｉｓ（細菌性赤痢））；タンパク質Ｐ５３、ビリオンタンパク質ＵＳ１０ホモログ、転写制御因子 ＩＥ６３、転写トランスアクチベーター ＩＥ６２、プロテアーゼＰ３３、アルファトランス誘導性因子７４ｋＤａタンパク質、デオキシウリジン ５’－三リン酸ヌクレオチドヒドロラーゼ、転写トランスアクチベーターＩＥ４、膜タンパク質ＵＬ４３ホモログ、核リンタンパク質ＵＬ３ホモログ、核タンパク質ＵＬ４ホモログ、複製起点－結合タンパク質、膜タンパク質２、リンタンパク質３２、タンパク質５７，ＤＮＡポリメラーゼ進化性要因、ポータルタンパク質５４、ＤＮＡプリマーゼ、外被タンパク質ＵＬ１４ホモログ、外被タンパク質ＵＬ２１ホモログ、外被タンパク質ＵＬ５５ホモログ、３部ターミナーゼサブユニットＵＬ３３ホモログ、３部ターミナーゼサブユニットＵＬ１５ホモログ、カプシド－結合タンパク質４４、ビリオン－パッケージングタンパク質４３（水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、Ｓｈｉｎｇｌｅｓ（帯状疱疹（Ｈｅｒｐｅｓ ｚｏｓｔｅｒ）））；短縮型３－ベータヒドロキシ－５－エンステロイドデヒドロゲナーゼホモログ、ビリオン膜タンパク質Ａ１３、タンパク質Ａ１９、タンパク質Ａ３１、短縮型タンパク質Ａ３５ホモログ、タンパク質Ａ３７．５ホモログ、タンパク質Ａ４７、タンパク質Ａ４９、タンパク質Ａ５１、セマフォリン様タンパク質Ａ４３、セリンプロテイナーゼインヒビター１、セリンプロテイナーゼインヒビター２、セリンプロテイナーゼインヒビター３、タンパク質Ａ６、タンパク質Ｂ１５、タンパク質ＣＩ、タンパク質Ｃ５、タンパク質Ｃ６、タンパク質Ｆ７、タンパク質Ｆ８、タンパク質Ｆ９、タンパク質Ｆｌｌ、タンパク質Ｆ１４、タンパク質Ｆ１５、タンパク質Ｆ１６（Ｖａｒｉｏｌａ 主要またはＶａｒｉｏｌａ ｍｉｎｏｒ、Ｓｍａｌｌｐｏｘ（Ｖａｒｉｏｌａ））；アドヘシン／糖タンパク質ｇｐ７０、プロテアーゼｓ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｏｓｉｓ）；ヘム－鉄結合タンパク質ＩｓｄＢ、コラーゲンアドヘシンＣｎａ、クランピング因子Ａ ＣｌｆＡ、タンパク質ＭｅｃＡ、フィブロネクチン－結合タンパク質Ａ ＦｎｂＡ、エンテロトキシンＡ型 ＥｎｔＡ、エンテロトキシンＢ型 ＥｎｔＢ、エンテロトキシンＣ型 ＥｎｔＣｌ、エンテロトキシンＣ型 ＥｎｔＣ２、エンテロトキシンＤ型 ＥｎｔＤ、エンテロトキシンＥ型 ＥｎｔＥ、毒素性ショック症候群毒素－１ ＴＳＳＴ－１、スタフィロキナーゼ、ペニシリン結合タンパク質２ａ ＰＢＰ２ａ（ＭｅｃＡ）、分泌抗原ＳｓｓＡ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ食中毒）；ヘム－鉄結合タンパク質ＩｓｄＢ、コラーゲンアドヘシンＣｎａ、クランピング因子Ａ ＣｌｆＡ、タンパク質ＭｅｃＡ、フィブロネクチン－結合タンパク質Ａ ＦｎｂＡ、エンテロトキシンＡ型 ＥｎｔＡ、エンテロトキシンＢ型 ＥｎｔＢ、エンテロトキシンＣ型 ＥｎｔＣｌ、エンテロトキシンＣ型 ＥｎｔＣ２、エンテロトキシンＤ型 ＥｎｔＤ、エンテロトキシンＥ型 ＥｎｔＥ、毒素性ショック症候群毒素－１ ＴＳＳＴ－１、スタフィロキナーゼ、ペニシリン結合タンパク質２ａ ＰＢＰ２ａ（ＭｅｃＡ）、分泌抗原ＳｓｓＡ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属、例えば、ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ感染）；抗原Ｓｓ－ＩＲ、抗原ＮＩＥ、ストロンギラスタチン（ｓｔｒｏｎｇｙｌａｓｔａｃｉｎ）、Ｎａ＋－Ｋ＋ ＡＴＰａｓｅ Ｓｓｅａｔ－６、トロポマイシンＳｓＴｍｙ－１、タンパク質ＬＥＣ－５、４１ｋＤａ抗原Ｐ５、４１ｋＤａ幼虫タンパク質、３１ｋＤａ幼虫タンパク質、２８ｋＤａ幼虫タンパク質（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｉａｓｉｓ）；グリセロホスホジエステルホスホジエステラーゼＧｌｐＱ（Ｇｐｄ）、外膜タンパク質ＴｍｐＢ、タンパク質Ｔｐ９２、抗原ＴｐＦｌ、リピートタンパク質Ｔｐｒ、リピートタンパク質Ｆ ＴｐｒＦ、リピートタンパク質Ｇ ＴｐｒＧ、リピートタンパク質Ｉ Ｔｐｒｌ、リピートタンパク質Ｊ ＴｐｒＪ、リピートタンパク質Ｋ ＴｐｒＫ、トレポネーマの膜タンパク質Ａ ＴｍｐＡ、リポタンパク質、１５ｋＤａ Ｔｐｐｌ５、４７ｋＤａ膜抗原、ミニフェリチンＴｐＦｌ、アドヘシンＴｐ０７５１、リポタンパク質ＴＰ０１３６、タンパク質ＴｐＮ１７、タンパク質ＴｐＮ４７、外膜タンパク質ＴＰ０１３６、外膜タンパク質ＴＰ０１５５、外膜タンパク質ＴＰ０３２６、外膜タンパク質ＴＰ０４８３、外膜タンパク質ＴＰ０９５６（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｓｙｐｈｉｌｉｓ）；カテプシンＬ様プロテアーゼ、５３／２５ｋＤａ抗原、８ｋＤａファミリーメンバー、わずかなトリプシン様活性ＴｓＡｇ５を有するＣｙｓｔｉｃｅｒｃｕｓタンパク質、六鉤幼虫タンパク質ＴＳＯＬ１８、六鉤幼虫タンパク質ＴＳＯＬ４５－１Ａ、乳酸塩デヒドロゲナーゼＡ ＬＤＨＡ、乳酸塩デヒドロゲナーゼＢ ＬＤＨＢ（Ｔａｅｎｉａ属、Ｔａｅｎｉａｓｉｓ）；破傷風毒素ＴｅｔＸ、破傷風毒素Ｃ ＴＴＣ、１４０ｋＤａのＳ相タンパク質、フラボプロテインベータ－サブユニットＣＴ３、ホスホリパーゼ（ｌｅｃｉｔｈｉｎａｓｅ）、ホスホキャリアタンパク質ＨＰｒ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、Ｔｅｔａｎｕｓ（Ｌｏｃｋｊａｗ））；ゲノムポリタンパク質、タンパク質Ｅ、タンパク質Ｍ、カプシドタンパク質Ｃ（ダニ媒介脳炎ウイルス（ＴＢＥＶ）、ダニ媒介脳炎）；５８ｋＤａ抗原、６８ｋＤａ抗原、Ｔｏｘｏｃａｒａ ｌａｒｖａｅ排泄性－分泌抗原ＴＥＳ、３２ｋＤａ糖タンパク質、糖タンパク質ＴＥＳ
－７０、糖タンパク質ＧＰ３１、排泄性－分泌抗原ＴｃＥＳ－５７、腸周囲抗原Ｐｅ、可溶性抽出抗原Ｅｘ、排泄性／分泌性幼虫抗原ｓ ＥＳ、抗原ＴＥＳ－１２０、ポリタンパク質アレルゲンＴＢＡ－１、カテプシンＬ様システインプロテアーゼｃ－ｃｐｌ－１、２６ｋＤａタンパク質（Ｔｏｘｏｃａｒａ ｃａｎｉｓまたはＴｏｘｏｃａｒａ ｃａｔｉ、Ｔｏｘｏｃａｒｉａｓｉｓ（Ｏｃｕｌａｒ Ｌａｒｖａ Ｍｉｇｒａｎｓ（ＯＬＭ）及び Ｖｉｓｃｅｒａｌ Ｌａｒｖａ Ｍｉｇｒａｎｓ（ＶＬＭ）））；短系タンパク質（ＭＩＣｌ、ＭＩＣ２、ＭＩＣ３、ＭＩＣ４、ＭＩＣ５、ＭＩＣ６、ＭＩＣ７、ＭＩＣ８）、ロプトリータンパク質Ｒｏｐ２、ロプトリータンパク質（Ｒｏｐｌ、Ｒｏｐ２、Ｒｏｐ３、Ｒｏｐ４、Ｒｏｐ５、Ｒｏｐ６、Ｒｏｐ７、Ｒｏｐｌ６、Ｒｊｏｐｌ７）、タンパク質ＳＲｌ，表面抗原Ｐ２２、主要抗原ｐ２４、主要表面抗原ｐ３０、高密度顆粒タンパク質（ＧＲＡ１、ＧＲＡ２、ＧＲＡ３、ＧＲＡ４、ＧＲＡ５、ＧＲＡ６、ＧＲＡ７、ＧＲＡ８、ＧＲＡ９、ＧＲＡ１０）、２８ｋＤａ抗原、表面抗原ＳＡＧ１、ＳＡＧ２関連抗原、ヌクレオシド－トリホスファターゼ１、ヌクレオシド－トリホスファターゼ２、タンパク質Ｓｔｔ３、ＨｅｓＢ様ドメイン含有タンパク質、ロンボイド（ｒｈａｍｂｏｉｄ）様プロテアーゼ５、トキソメプシン１（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍｏｓｉｓ）；４３ｋＤａ 分泌型糖タンパク質、５３ｋＤａ 分泌型糖タンパク質、パラミオシン、抗原Ｔｓ２１、抗原Ｔｓ８７、抗原ｐ４６０００、ＴＳＬ－１抗原、ｃａｖｅｏｌｉｎ－１ ＣＡＶ－１、４９ｋＤａ新生幼虫抗原、プロサポシンホモログ、セリンプロテアーゼ、セリンプロテイナーゼインヒビター、４５ ｋＤａ糖タンパク質Ｇｐ４５（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌｏｓｉｓ）；Ｍｙｂ様 転写因子（Ｍｙｂｌ、Ｍｙｂ２、Ｍｙｂ３）、接着タンパク質ＡＰ２３、接着タンパク質ＡＰ３３、接着タンパク質ＡＰ３３－３、接着ＡＰ５１、接着ＡＰ６５、接着タンパク質ＡＰ６５－１、アルファ－アクチニン、キネシン関連タンパク質、テネウリン、６２ｋＤａプロテイナーゼ、スブチリシン様 セリンプロテアーゼＳＵＢ１、システインプロテイナーゼ遺伝子３ ＣＰ３、アルファ－エノラーゼＥｎｏｌ、システインプロテイナーゼＣＰ３０、熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ６０）、免疫原性タンパク質Ｐ２７０、（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎｉａｓｉｓ）；ベータ－チューブリン、４７ｋＤａタンパク質、分泌型白血球様プロテイナーゼ－１ ＳＬＰ－１、５０ｋＤａタンパク質ＴＴ５０、１７ｋＤａ抗原、４３／４７ｋＤａタンパク質（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉａｓｉｓ（Ｗｈｉｐｗｏｒｍ感染））；タンパク質ＥＳＡＴ－６（ＥｓｘＡ）、１０ｋＤａ ｆｉｌｔｒａｔｅ抗原ＥｓｘＢ、分泌型抗原８５－Ｂ ＦＢＰＢ、フィブロネクチン－結合タンパク質Ａ ＦｂｐＡ（Ａｇ８５Ａ）、セリンプロテアーゼＰｅｐＡ、ＰＰＥファミリータンパク質ＰＰＥ１８、フィブロネクチン－結合タンパク質Ｄ ＦｂｐＤ、免疫原性タンパク質ＭＰＴ６４、分泌型タンパク質ＭＰＴ５１、カタラーゼ－ペルオキシダーゼ－ペルオキシニトリターゼＴ ＫＡＴＧ、周辺質リン酸塩－結合リポタンパク質ＰＳＴＳ３（ＰＢＰ－３、Ｐｈｏｓ－１）、鉄調節ヘパリン結合赤血球凝集素 Ｈｂｈａ、ＰＰＥファミリータンパク質ＰＰＥ１４、ＰＰＥファミリータンパク質ＰＰＥ６８、タンパク質Ｍｔｂ７２Ｆ、タンパク質Ａｐａ、免疫原性タンパク質ＭＰＴ６３、周辺質のリン酸塩－結合リポタンパク質ＰＳＴＳ１（ＰＢＰ－１）、分子シャペロンＤｎａＫ、細胞表面リポタンパク質Ｍｐｔ８３、リポタンパク質Ｐ２３、リン酸輸送系パーミアーゼタンパク質ｐｓｔＡ、１４ｋＤａ抗原、フィブロネクチン－結合タンパク質Ｃ ＦｂｐＣｌ、アラニンデヒドロゲナーゼＴＢ４３、グルタミン合成酵素１、ＥＳＸ－１タンパク質、タンパク質ＣＦＰ１０、ＴＢ１０．４タンパク質、タンパク質ＭＰＴ８３、タンパク質ＭＴＢ１２、タンパク質ＭＴＢ８、Ｒｐｆ様タンパク質、タンパク質ＭＴＢ３２、タンパク質ＭＴＢ３９、クリスタリン、熱ショックタンパク質ＨＳＰ６５、タンパク質ＰＳＴ－Ｓ（通常は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）；外膜タンパク質ＦｏｂＡ、外膜タンパク質ＦｏｂＢ、細胞内成長遺伝子座ＩｇｌＣｌ、細胞内成長遺伝子座ＩｇｌＣ２、アミノトランスフェラーゼＷｂｔｌ、シャペロニンＧｒｏＥＬ、１７ｋＤａ主要膜タンパク質ＴＵＬ４、リポタンパク質ＬｐｎＡ、キチナーゼファミリー１８タンパク質、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ、Ｎｉｆ３ファミリータンパク質、ＩＶ型ピリングリコシル化タンパク質、外膜タンパク質ｔｏｌＣ、ＦＡＤ結合ファミリータンパク質、ＩＶ型ピリン多量体外膜タンパク質、２成分センサータンパク質ＫｄｐＤ、シャペロンタンパク質ＤｎａＫ、タンパク質ＴｏｌＱ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｔｕｌａｒｅｍｉａ）；」ＭＢ抗原、ウレアーゼ、タンパク質ＧｙｒＡ、タンパク質ＧｙｒＢ、タンパク質ＰａｒＣ、タンパク質ＰａｒＥ、脂質関連膜タンパク質ＬＡＭＰ、チミジンキナーゼＴＫ、ホスホリパーゼＰＬ－Ａｌ、ホスホリパーゼＰＬ－Ａ２、ホスホリパーゼＰＬ－Ｃ、表面発現９６ｋＤａ抗原；（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ感染）；非構造的ポリタンパク質、構造的ポリタンパク質、カプシドタンパク質ＣＰ、タンパク質Ｅｌ、タンパク質Ｅ２、タンパク質Ｅ３、プロテアーゼＰＩ、プロテアーゼＰ２、プロテアーゼＰ３（ベネズエラウマ脳炎ウイルス、ベネズエラウマ脳炎）；糖タンパク質ＧＰ、マトリクスタンパク質Ｚ、ポリメラーゼＬ、核タンパク質Ｎ（グアナリトウイルス、ベネズエラ出血熱）；ポリタンパク質、タンパク質Ｅ、タンパク質Ｍ、カプシドタンパク質Ｃ、プロテアーゼＮＳ３、タンパク質ＮＳ１、タンパク質ＮＳ２Ａ、タンパク質ＡＳ２Ｂ、タンパク質ＮＳ４Ａ、タンパク質ＮＳ４Ｂ、タンパク質ＮＳ５（西ナイルウイルス、西ナイル熱）；カプシドタンパク質ＣＰ、タンパク質Ｅｌ、タンパク質Ｅ２、タンパク質Ｅ３、プロテアーゼＰ２（西部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎）；ゲノムポリタンパク質、タンパク質Ｅ、タンパク質Ｍ、カプシドタンパク質Ｃ、プロテアーゼＮＳ３、タンパク質ＮＳ１、タンパク質ＮＳ２Ａ、タンパク質ＡＳ２Ｂ、タンパク質ＮＳ４Ａ、タンパク質ＮＳ４Ｂ、タンパク質ＮＳ５（黄熱病ウイルス、黄熱病）；推定Ｙｏｐ標的化タンパク質ＹｏｂＢ、エフェクタータンパク質ＹｏｐＤ、エフェクタータンパク質ＹｏｐＥ、タンパク質ＹｏｐＨ、エフェクタータンパク質ＹｏｐＪ、タンパク質トランスロケーションタンパク質ＹｏｐＫ、エフェクタータンパク質ＹｏｐＴ、タンパク質ＹｐｋＡ、鞭毛生合成タンパク質ＦｌｈＡ、ペプチダーゼＭ４８、カリウム流出系 ＫｅｆＡ、転写制御因子ＲｏｖＡ、アドヘシンＩｆｐ、トランスロケータータンパク質ＬｃｒＶ、タンパク質ＰｃｒＶ、ｉｎｖａｓｉｎ Ｉｎｖ、外膜タンパク質ＯｍｐＦ様ポーリン、アドヘシンＹａｄＡ、プロテインキナーゼＣ、ホスホリパーゼＣＩ、タンパク質ＰｓａＡ、マンノシルトランスフェラーゼ様タンパク質ＷｂｙＫ、タンパク質ＹｓｃＵ、抗原ＹＰＭａ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染）；エフェクタータンパク質ＹｏｐＢ、６０ｋＤａ シャペロニン、タンパク質ＷｂｃＰ、ｔｙｒｏｓｉｎ－タンパク質ホスファターゼＹｏｐＨ、タンパク質ＹｏｐＱ、エンテロトキシン、ガラクトシドパーミアーゼ、レダクターゼＮｒｄＥ、タンパク質ＹａｓＮ、Ｉｎｖａｓｉｎ Ｉｎｖ、アドヘシンＹａｄＡ、外膜ポーリンＦ ＯｍｐＦ、タンパク質ＵｓｐＡｌ、タンパク質ＥｉｂＡ、タンパク質Ｈｉａ、細胞表面タンパク質Ａｉｌ、シャペロンＳｙｃＤ、タンパク質ＬｃｒＤ、タンパク質ＬｃｒＧ、タンパク質ＬｃｒＶ、タンパク質ＳｙｃＥ、タンパク質ＹｏｐＥ、調節因子タンパク質ＴｙｅＡ、タンパク質ＹｏｐＭ、タンパク質ＹｏｐＮ、タンパク質ＹｏｐＯ、タンパク質ＹｏｐＴ、タンパク質ＹｏｐＤ、プロテアーゼＣｌｐＰ、タンパク質ＭｙｆＡ、タンパク質ＦｉｌＡ、及びタンパク質ＰｓａＡ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉｏｓｉｓ）。

【0134】

感染症がインフルエンザである実施形態では、ｍＲＮＡ分子は、インフルエンザウイルスのヘマグルチニン（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、マトリックスタンパク質１（Ｍ１）、マトリックスプロテイン２（Ｍ２）、非構造タンパク質１（ＮＳ１）、非構造タンパク質２（ＮＳ２）、核輸送タンパク質（ＮＥＰ）、ポリメラーゼ酸性タンパク質（ＰＡ）、ポリメラーゼ塩基性タンパク質ＰＢ１、ＰＢ１－Ｆ２、またはポリメラーゼ塩基性プロテイン２（ＰＢ２）またはその断片もしくは変異型に由来する少なくとも１つの抗原性ペプチドまたはタンパク質をコードするコード領域を有し得る。

【0135】

特定の実施形態では、コード領域は、インフルエンザウイルスのヘマグルチニン（ＨＡ）及び／またはノイラミニダーゼ（ＮＡ）またはその断片もしくは変異型に由来する少なくとも１つの抗原性ペプチドまたはタンパク質をコードする。ＨＡ及び／またはＮＡは、独立して、インフルエンザＡ型ウイルスもしくはインフルエンザＢ型ウイルス、またはいずれかの断片に由来し得る。

【0136】

感染症がインフルエンザである実施形態では、メッセンジャーＲＮＡ分子は、スパイク（Ｓ）タンパク質に由来する少なくとも１つの抗原性ペプチドまたは抗原タンパク質をコードするコード領域を有し得る。

【0137】

実施形態では、本発明のＬＮＰ組成物は、対象のがんに関連する抗原、または対象のがん細胞から同定される抗原をコードするメッセンジャーＲＮＡを含む。メッセンジャーＲＮＡは、患者自身のがん細胞から決定された抗原をコードして、個別化されたがんワクチンを提供し得る。

【0138】

実施形態では、本ＬＮＰ組成物は、抗体をコードするメッセンジャーＲＮＡを含む。実施形態では、抗体は二重特異性抗体または融合タンパク質の一部であり得る。
（実施例）
実施例１：化合物１（ＳＬ０１）及び化合物１１（ＳＬ０２）の合成

【0139】

化合物１（ＳＬ－０１）及び１１（ＳＬ－０２）の全合成を以下に示す。条件または任意の特定の基質の性質を簡単に変更するだけで、他の化合物を得ることができる。

【化3】

【0140】

スキーム１：化合物１（ＳＬ－０１）及び１１（ＳＬ－０２）にアクセスするための合成スキーム。本開示の他の化合物は、同じまたは類似の合成経路を介して入手することができる。
化合物１１（ＳＬ－０２）の合成
ステップ１：エステル化

【化4】

【0141】

化合物１（３０．０ｇ、１４８ｍｍｏｌ、１．００当量）、化合物１Ａ（２２．１ｇ、１１８ｍｍｏｌ、０．８５当量）、ＴＥＡ（４５．１ｇ、４４５ｍｍｏｌ、６１．９ｍＬ、３．００当量）及びＨＡＴＵ（８４．６ｇ、２２３ｍｍｏｌ、１．１当量）の溶液ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中の溶液を２５℃で１時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル＝２／１、生成物のＲ_ｆ＝０．３４）は、出発物質が完全に消費されたことを示した。その反応混合物を、ＮＨ_４Ｃｌ（２００ｍＬ）の水溶液に注ぎ、その溶液を、ＤＣＭ（１００ｍＬ×２）で抽出した。その有機層を、Ｈ_２Ｏ（１００ｍＬ×２）で抽出した。その有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して残渣を得た。その残留物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／酢酸エチル＝５００／１～０／１）によって精製して、化合物２（４１．０ｇ、１１０ｍｍｏｌ、収率７４．５％）を黄色の油として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ３．９４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．３２－２．２５（ｍ，４Ｈ），１．６０－１．５９（ｍ，５Ｈ），１．３４－１．２１（ｍ，２５Ｈ），０．８８－０．８４（ｍ，６Ｈ）。
ステップ２：ワインレブアミドの合成

【化5】

【0142】

化合物２（１５．０ｇ、４０．５ｍｍｏｌ、１．００当量）、化合物２Ａ（８．１４ｇ、６０．７ｍｍｏｌ、１．５０当量、ＨＣｌ塩）及びＤＩＰＥＡ（２６．１ｇ、２０２ｍｍｏｌ、３５．２ｍＬ、３．００当量）のＤＭＦ（８０．０ｍＬ）中の溶液に、ＨＡＴＵ（２３．１ｇ、６０．７ｍｍｏｌ、１．１０当量）を２５℃で添加した。添加後、その反応溶液を２５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル＝５／１、生成物のＲ_ｆ＝０．５０）は、反応が終了したことを示した。その反応物を、水（１００ｍＬ）に注ぎ入れた。有機相を収集して、その水性を酢酸エチル（１００ｍＬ×２）で抽出した。その合わせた有機相を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧下で濃縮して、粗生成物を油状物として得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０～０／１）によって精製して、化合物３（１２．０ｇ、２９．１ｍｍｏｌ、収率７１．７％）を黄色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ３．９６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．３１－２．２７（ｍ，２Ｈ），１．６９－１．６１（ｍ，５Ｈ），１．３１－１．２５（ｍ，２４Ｈ），０．８９－０．８０（ｍ，６Ｈ）。
ステップ３：グリニャール反応

【化6】

【0143】

化合物３（７．５０ｇ、１８．３ｍｍｏｌ、１．００当量）のＴＨＦ（２０．０ｍＬ）中の溶液に、化合物３Ａ（１Ｍ、３６．２ｍＬ、２．００当量）を加えた。その反応物を、２５℃で５時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル＝５／１、生成物のＲ_ｆ＝０．７８）は、出発物質が完全に消費されたことを示した。反応溶液をＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１５０ｍＬ）に注ぎ、その懸濁液を酢酸エチル（４０．０ｍＬ×２）で抽出した。その有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して残渣を得た。その残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／酢酸エチル＝５００／１～０／１）によって精製して、化合物４（３．２０ｇ、６．６６ｍｍｏｌ、収率３６．７％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ３．９６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，４Ｈ），２．２８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６０－１．５３（ｍ，７Ｈ），１．２７－１．２６（ｍ，３６Ｈ），０．９０－０．８５（ｍ，９Ｈ）。
ステップ４：還元

【化7】

【0144】

化合物４（２．２０ｇ、４．５８ｍｍｏｌ、１．００当量）のＴＨＦ（１０．０ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（１．００ｍＬ）中の溶液に、ＮａＢＨ_４（３４６ｍｇ、９．１５ｍｍｏｌ、２．００当量）を添加した。得られた溶液を、０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル＝８／１、生成物のＲ_ｆ＝０．７７）は、出発物質が完全に消費されたことを示した。その反応溶液を、ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１００．０ｍＬ）に注ぎ、その溶液を、酢酸エチル（３０．０ｍＬ×２）で抽出した。その有機層を、Ｈ_２Ｏ（３０．０ｍＬ×２）で抽出した。その有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、化合物５（２．２０ｇ、４．５６ｍｍｏｌ、収率９９．５８％）を無色油状物として得て、これを次のステップに直接使用した。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）：δ３．９７（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．５８（ｓ，１Ｈ），２．３０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．６２－１．３１（ｍ，４Ｈ），１．４３－１．２８（ｍ，４３Ｈ），０．９０－０．８７（ｍ，９Ｈ）。
ステップ５：ＳＬ－０２の合成

【化8】

【0145】

化合物５（２．２０ｇ、４．５６ｍｍｏｌ、１．００当量）のＰｙ（８．００ｍＬ）中の溶液に、化合物１－５Ａ（１．５３ｇ、９．１１ｍｍｏｌ、２．００当量、ＨＣｌ）を加えた。ＥＤＣＩ（１．７５ｇ、９．１１ｍｍｏｌ、２．００当量）をこの溶液に加えた。その溶液を４５℃で１２時間撹拌した。ＬＣＭＳは、出発物質が完全に消費されたことを示した。その反応混合物を、ＮＨ_４Ｃｌの水溶液（１００ｍＬ）中に注ぎ、その溶液を酢酸エチル（２０．０ｍＬ×２）で抽出した。その有機層を、Ｈ_２Ｏ（３０．０ｍＬ×２）で洗浄した。その有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して残渣を得た。その残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／酢酸エチル＝８０／１～０／１）によって精製して、ＳＬ－０２（１．００ｇ、１．６８ｍｍｏｌ、収率３６．８％）を淡黄色油状物として得た。ＬＣＭＳ：（ＲＴ＝２．２９１分、Ｍ＋Ｈ^＋＝５９６．６）

【0146】

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ５．７９－５．７１（ｍ，２Ｈ），５．５８－５．５２（ｍ，２Ｈ），４．５０（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，４Ｈ），２．３８－２．３４（ｍ，４Ｈ），２．３０－２．２６（ｍ，４Ｈ），２．０４－２．０３（ｍ，４Ｈ），１．６０－１．５４（ｍ，８Ｈ），１．３６－１．２７（ｍ，３２Ｈ），０．８９－０．８５（ｍ，６Ｈ）。
グリニャール試薬の合成

【化9】

【0147】

Ｍｇ（１１．７ｇ、４８２ｍｍｏｌ、１０．０当量）のＴＨＦ（５０．０ｍＬ）中の溶液に、化合物３－１（１０ｇ、４８．２７ｍｍｏｌ、１．００当量）のＴＨＦ（１０．０ｍＬ）中の溶液を、溶液滴下して加えた。結果として生じる懸濁液を、２５℃で２時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル＝５／１、生成物のＲ_ｆ＝０．３）は、反応が終了したことを示した。その反応溶液を後処理せずに次のステップに使用した。その反応溶液を直接次のステップに使用した。
化合物１の合成（ＳＬ－０１）

【0148】

ステップ１～４は、上で概説したとおりに実行した。
ステップ５：ＳＬ－０１の合成

【化10】

【0149】

化合物５（４．００ｇ、８．２８ｍｍｏｌ、１．００当量）のＤＣＭ（２０．０ｍＬ）中の溶液に、ＴＥＡ（２．５１ｇ、２４．８ｍｍｏｌ、３．４６ｍＬ、３．００当量）を加えた。化合物５（２．０１ｇ、１２．４ｍｍｏｌ、１．５０当量）をその溶液に加えた。その溶液を２０℃で４時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル＝３／１、生成物のＲ_ｆ＝０．６０）は、反応が終了したことを示した。その反応溶液を、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）に注ぎ、その懸濁液を酢酸エチル（５０．０ｍＬ×２）で抽出した。その有機層を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して残渣を得た。その残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／酢酸エチル＝３００／１～０／１）で精製して、ＳＬ－０１（１．００ｇ、１．６４ｍｍｏｌ、収率１９．８％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ４．８８－４．８５（ｍ，１Ｈ），３．９７（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．８２－２．７９（ｍ，２Ｈ），２．３１－２．２６（ｍ，６Ｈ），２．０１－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９１－１．８７（ｍ，２Ｈ），１．８２－１．７５（ｍ，２Ｈ），１．６２－１．５７（ｍ，３Ｈ），１．５０－１．４９（ｍ，４Ｈ），１．２８－１．２５（ｍ，４０Ｈ），０．９０－０．８６（ｍ，９Ｈ）。
ＳＬ－０１用の酸塩化物ビルディングブロックの合成

【化11】

【0150】

化合物５－１（５．００ｇ、３４．９ｍｍｏｌ、１．００当量）のＳＯＣｌ_２（２５．０ｍＬ）中の溶液にＤＭＦ（２５．５ｍｇ、３４９μｍｏｌ、２６．８μＬ、０．０１当量）を加え、その反応溶液を７０℃で１２時間撹拌した。試料を採取してＭｅＯＨでクエンチした。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝５／１、生成物のＲ_ｆ＝０．７１）は、出発物質が完全に消費されたことを示した。その反応溶液を真空下で濃縮して残渣を得た。その残渣をＴｏｌ．（２０．０ｍＬ×３）に溶解し、真空下で２回濃縮して、化合物５－２（５．６０ｇ、３４．６ｍｍｏｌ、収率９９．２％）を淡黄色油状物として得、これを次のステップに直接使用した。

【0151】

本発明の他の化合物は、上で概説したのと同じまたは類似の合成プロトコールを使用して合成し得る。

【0152】

実施例２：メッセンジャーＲＮＡを用いたＬＮＰへの化合物の製剤化
メッセンジャーＲＮＡ含有脂質ナノ粒子組成物は、化合物１～１２、具体的には化合物１（ＳＬ０１）及び化合物１１（ＳＬ０２）から選択されるイオン化可能なカチオン性脂質、追加のヘルパー脂質、及び目的のタンパク質をコードする自己増幅性ｍＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）を使用して調製した。一般的に言えば、メッセンジャーＲＮＡ－ＬＮＰは、脂質成分を含むエタノール溶液と、ｓａＲＮＡを含むｐＨ６のクエン酸緩衝液を含む水溶液とを制御しながら混合することによって製剤化した。次いで、得られたＬＮＰを、接線流濾過（ＴＦＦ）または遠心限外濾過（ＵＦ）を使用して、スクロースを含む中性ｐＨのＴｒｉｓ凍結緩衝液に緩衝液交換した。

【0153】

ｓａＲＮＡを発現するＨ５－ルシフェラーゼの化合物１ＬＮＰへの製剤化。化合物１、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、及び１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン（ＤＭＧ－ＰＥＧ）を、濃度３．２ｍＭのエタノール中で４０：１０：４８：２のモル比で組み合わせた。１０ｍＭのトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）を含む、ｐＨ６の５０ｍＭクエン酸緩衝液中のＨ５－ルシフェラーゼを発現するｓａＲＮＡの溶液を、０．０２５ｍｇ／ｍＬで調製した。次いで、Ｎａｎｏａｓｓｅｍｂｌｒベンチトップ装置（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用し、総流量（ＴＦＲ）１２ｍＬ／分及び２：１という水性緩衝液とエタノールの流量比（ＦＲＲ）で、ジグザグヘリンボーンマイクロミキサーチップを使用して、エタノール中の脂質溶液を、ｓａＲＮＡ溶液と急速に混合した。この混合比により、イオン化カチオン性脂質（化合物１）とｓａＲＮＡリン酸基のモル比は８：１、総脂質とｓａＲＮＡの質量比は３７：１になる。次いで、得られた混合溶液を、１０ｍＭのＴＣＥＰを含むｐＨ６の５０ｍＭのクエン酸緩衝液で１０倍に希釈し、元の容積に濃縮されるまで３００ｋ分子量カットオフ膜（ｍＰＥＳ）を使用したタンジェンシャルフローフィルトレーション（ＴＦＦ）に供した。続いて、１０倍容量のダイアフィルトレーションを使用して、クエン酸緩衝液を、ｐＨ７．５の２０ｍＭトリス緩衝液、８０ｍＭ塩化ナトリウム、及び３％スクロースを含む緩衝液と置き換えた。ＬＮＰ溶液は、６．２ｍＬの容積に濃縮して、０．２ミクロンのＰＥＳシリンジフィルターを使用して濾過して、バイアルにアリコートし、試料が－８０℃に達するまで、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）ＣｏｏｌＣｅｌｌ（登録商標）ＬＸ Ｃｅｌｌ Ｆｒｅｅｚｉｎｇ Ｃｏｎｔａｉｎｅｒを使用して１℃／分で凍結する。試料は－８０℃で保存して、分析または使用前に濡れた氷上で解凍した。リボグリーンアッセイに基づくと、総ＲＮＡ濃度は４１．６μｇ／ｍＬ、投入ＲＮＡの４９．１％が回収され、カプセル化効率は８５．９％であった。動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定したところ、ＬＮＰのＺ平均直径は１１６．１ｎｍ、多分散指数（ＰＤＩ）は０．１５であった（表１、エントリ４を参照）。

【0154】

ｓａＲＮＡを発現するＨ５Ｎ１の化合物１ＬＮＰへの製剤化。化合物１、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、及び１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン（ＤＭＧ－ＰＥＧ）を、濃度３．２ｍＭのエタノール中で４０：１０：４８：２のモル比で組み合わせた。１０ｍＭのトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）を含む、ｐＨ６の５０ｍＭクエン酸緩衝液中のＨ５－Ｎ１インフルエンザ抗原を発現するｓａＲＮＡの溶液を、０．０２５ｍｇ／ｍＬで調製した。次いで、Ｎａｎｏａｓｓｅｍｂｌｒベンチトップ装置（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用し、総流量（ＴＦＲ）１２ｍＬ／分及び２：１という水性緩衝液とエタノールの流量比（ＦＲＲ）で、ジグザグヘリンボーンマイクロミキサーチップを使用して、エタノール中の脂質溶液を、ｓａＲＮＡ溶液と急速に混合した。この混合比により、イオン化カチオン性脂質（化合物１）とｓａＲＮＡリン酸基のモル比は８：１、総脂質とｓａＲＮＡの質量比は３７：１になる。次いで、得られた混合溶液を、１０ｍＭのＴＣＥＰを含むｐＨ６の５０ｍＭのクエン酸緩衝液で１０倍に希釈し、元の容積に濃縮されるまで３００ｋ分子量カットオフ膜（ｍＰＥＳ）を使用したタンジェンシャルフローフィルトレーション（ＴＦＦ）に供した。続いて、１０倍容量のダイアフィルトレーションを使用して、クエン酸緩衝液を、ｐＨ７．５の２０ｍＭトリス緩衝液、８０ｍＭ塩化ナトリウム、及び３％スクロースを含む緩衝液と置き換えた。ＬＮＰ溶液は、６．５ｍＬの容積に濃縮して、０．２ミクロンのＰＥＳシリンジフィルターを使用して濾過して、バイアルにアリコートし、試料が－８０℃に達するまで、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）ＣｏｏｌＣｅｌｌ（登録商標）ＬＸ Ｃｅｌｌ Ｆｒｅｅｚｉｎｇ Ｃｏｎｔａｉｎｅｒを使用して１℃／分で凍結する。試料は－８０℃で保存して、分析または使用前に濡れた氷上で解凍した。リボグリーンアッセイに基づくと、総ＲＮＡ濃度は５１．３μｇ／ｍＬ、投入ＲＮＡの３１．８％が回収され、カプセル化効率は８９．３％であった。動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定したところ、ＬＮＰのＺ平均直径は１２２．５ｎｍ、多分散指数（ＰＤＩ）は、０．０３であった（表１、エントリ１を参照）。

【0155】

ｓａＲＮＡを発現するＨ５－ルシフェラーゼの化合物１１ ＬＮＰへの製剤化。化合物１１、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、及び１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン（ＤＭＧ－ＰＥＧ）を、濃度３．２ｍＭのエタノール中で４０：１０：４８：２のモル比で組み合わせた。１０ｍＭのトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）を含む、ｐＨ６の５０ｍＭクエン酸緩衝液中のＨ５－ルシフェラーゼを発現するｓａＲＮＡの溶液を、０．０２５ｍｇ／ｍＬで調製した。次いで、Ｎａｎｏａｓｓｅｍｂｌｒベンチトップ装置（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用し、総流量（ＴＦＲ）１２ｍＬ／分及び２：１という水性緩衝液とエタノールの流量比（ＦＲＲ）で、ジグザグヘリンボーンマイクロミキサーチップを使用して、エタノール中の脂質溶液を、ｓａＲＮＡ溶液と急速に混合した。この混合比により、イオン化カチオン性脂質（化合物１１）とｓａＲＮＡリン酸基のモル比は８：１、総脂質とｓａＲＮＡの質量比は３７：１になる。次いで、得られた混合溶液を、１０ｍＭのＴＣＥＰを含むｐＨ６の５０ｍＭのクエン酸緩衝液で１０倍に希釈し、元の容積に濃縮されるまで３００ｋ分子量カットオフ膜（ｍＰＥＳ）を使用したタンジェンシャルフローフィルトレーション（ＴＦＦ）に供した。続いて、１０倍容量のダイアフィルトレーションを使用して、クエン酸緩衝液を、ｐＨ７．５の２０ｍＭトリス緩衝液、８０ｍＭ塩化ナトリウム、及び３％スクロースを含む緩衝液と置き換えた。ＬＮＰ溶液は、６．２ｍＬの容積に濃縮して、０．２ミクロンのＰＥＳシリンジフィルターを使用して濾過して、バイアルにアリコートし、試料が－８０℃に達するまで、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）ＣｏｏｌＣｅｌｌ（登録商標）ＬＸ Ｃｅｌｌ Ｆｒｅｅｚｉｎｇ Ｃｏｎｔａｉｎｅｒを使用して１℃／分で凍結する。試料は－８０℃で保存して、分析または使用前に濡れた氷上で解凍した。リボグリーンアッセイに基づくと、総ＲＮＡ濃度は４３．１μｇ／ｍＬ、投入ＲＮＡの４６．０％が回収され、カプセル化効率は８９．７％であった。動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定したところ、ＬＮＰのＺ平均直径は１０８．６ｎｍ、多分散指数（ＰＤＩ）は０．１４であった（表１、エントリ６を参照）。

【0156】

ｓａＲＮＡを発現するＨ５Ｎ１の化合物１１ＬＮＰへの製剤化。化合物１１、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、コレステロール、及び１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メチルポリオキシエチレン（ＤＭＧ－ＰＥＧ）を、濃度３．２ｍＭのエタノール中で４０：１０：４８：２のモル比で組み合わせた。１０ｍＭのトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）を含む、ｐＨ６の５０ｍＭクエン酸緩衝液中のＨ５－Ｎ１インフルエンザ抗原を発現するｓａＲＮＡの溶液を、０．０２５ｍｇ／ｍＬで調製した。次いで、Ｎａｎｏａｓｓｅｍｂｌｒベンチトップ装置（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｎａｎｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用し、総流量（ＴＦＲ）１２ｍＬ／分及び３：１という水性緩衝液とエタノールの流量比（ＦＲＲ）で、ジグザグヘリンボーンマイクロミキサーチップを使用して、エタノール中の脂質溶液を、ｓａＲＮＡ溶液と急速に混合した。この混合比により、イオン化カチオン性脂質（化合物１）とｓａＲＮＡリン酸基のモル比は８：１、総脂質とｓａＲＮＡの質量比は３７：１になる。次いで、得られた混合溶液を、１０ｍＭのＴＣＥＰを含むｐＨ６の５０ｍＭのクエン酸緩衝液で１０倍に希釈し、元の容積に濃縮されるまで３００ｋ分子量カットオフ膜（ｍＰＥＳ）を使用したタンジェンシャルフローフィルトレーション（ＴＦＦ）に供した。続いて、１０倍容量のダイアフィルトレーションを使用して、クエン酸緩衝液を、ｐＨ７．５の２０ｍＭトリス緩衝液、８０ｍＭ塩化ナトリウム、及び３％スクロースを含む緩衝液と置き換えた。ＬＮＰ溶液は、４．８ｍＬの容積に濃縮して、０．２ミクロンのＰＥＳシリンジフィルターを使用して濾過して、バイアルにアリコートし、試料が－８０℃に達するまで、Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）ＣｏｏｌＣｅｌｌ（登録商標）ＬＸ Ｃｅｌｌ Ｆｒｅｅｚｉｎｇ Ｃｏｎｔａｉｎｅｒを使用して１℃／分で凍結する。試料は－８０℃で保存し、分析または使用前に濡れた氷上で解凍した。リボグリーンアッセイに基づくと、総ＲＮＡ濃度は５８．３μｇ／ｍＬ、投入ＲＮＡの５３．３％が回収され、カプセル化効率は８８．８％であった。動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定したところ、ＬＮＰのＺ平均直径は１３８．８ｎｍ、多分散指数（ＰＤＩ）は、０．０７であった（表１、エントリ７を参照）。

【0157】

【表1】

【0158】

脂質ナノ粒子の生物物理学的特性評価
メッセンジャーＲＮＡ含有ＬＮＰ組成物は、メッセンジャーＲＮＡの負荷、カプセル化されたメッセンジャーＲＮＡの割合、及び粒子のサイズを決定する分析方法を使用して特性評価された。試料に含まれるメッセンジャーＲＮＡの総量と、カプセル化されたメッセンジャーＲＮＡの割合は、メッセンジャーＲＮＡに結合する際により発光する色素であるリボグリーンを使用した蛍光アッセイを使用して決定された。メッセンジャーＲＮＡの総量は、１重量％のＴｒｉｔｏｎ－Ｘ １００でＬＮＰを破壊してカプセル化されたメッセンジャーＲＮＡを露出させ、色素を添加し、発光強度をリボソーム ＲＮＡを使用して作成した標準曲線と比較することによって決定した。カプセル化されていないメッセンジャーＲＮＡの量は、ＬＮＰの界面活性剤による破壊を省略して同様の方法で測定した。既知のメッセンジャーＲＮＡの総量と既知のカプセル化されていないメッセンジャーＲＮＡの量を使用して、カプセル化されたメッセンジャーＲＮＡのパーセントは次のように算出した：
カプセル化パーセント（％）＝（（ＲＮＡ_合計－ＲＮＡ_{カプセル化されていない}）／ＲＮＡ_合計）×１００
式中、ＲＮＡ_合計とＲＮＡ_{カプセル化されていない}はそれぞれ、トータルメッセンジャーＲＮＡ及びカプセル化されていないメッセンジャーＲＮＡの濃度である。総メッセンジャーＲＮＡ含有量は、製剤によって異なるが、一般に０．０３０～０．２００ｍｇ／ｍＬの範囲内に収まった。ＬＮＰのサイズは、ＰＢＳ緩衝液で１：１００に希釈した試料の動的光散乱を使用して測定した。

【0159】

ｐＫａプロトコール
黒色の９６ウェルプレートで、ｐＨ４～９．５の範囲の一連の緩衝液中のｓａＲＮＡ－ＬＮＰの溶液（最終アッセイ濃度２μｇ／ｍＬの合計ＲＮＡ）を調製した。リン酸二ナトリウム及びクエン酸からｐＨ４～７．６の緩衝液を調製した。７．８～９．５の緩衝液は、トリス緩衝液を１０Ｎの水酸化ナトリウムで滴定することによって調製した。各ウェルに、水中の６－（ｐ－トルイジノ）－２－ナフタレンスルホン酸ナトリウム塩（ＴＮＳ）を、最終アッセイ濃度６μＭまで添加した。蛍光は、２５℃、励起設定３２１ｎｍ、発光設定４４５ｎｍでプレートリーダーで読み取った。強度値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してｐＨの関数としてプロットして、シグモイド用量応答曲線に適合させた。見かけのｐＫａは、イオン化可能なアミンの半分がプロトン化されていると予想されるこの曲線のＥＣ５０として決定した。ＳＬ０１及びＳＬ０２を有するｓａＲＮＡ－ＬＮＰの見かけのｐＫａ値は、それぞれ６．３１及び６．２５であった（図１及び２）。

【0160】

ＬＮＰのインビトロ効力の特性評価
ｓａＲＮＡ－ＬＮＰが培養細胞にトランスフェクトする能力は、目的の抗原を発現する細胞のパーセンテージに基づいたインビトロアッセイを使用して特性評価された。具体的には、１００万個のＢＨＫ－Ｖ細胞を、０．３ｍＬの培地中でさまざまな濃度（１ウェルあたり最高５０ｎｇ、最低０．３９ｎｇ）のｓａＲＮＡ－ＬＮＰと、３７℃で１７～１９時間、５％のＣＯ_２を用いて共インキュベートした。続いて、細胞をディッシュからこすり落として単一細胞懸濁液を形成し、固定及び透過処理（ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｐｅｒｍキット）を行った後、Ｈ５及びＮ１に対する蛍光標識した抗原特異的抗体で染色した（Ｈ５及びＮ１を両方発現するｓａＲＮＡの場合）。ルシフェラーゼ発現は、Ｈ５とルシフェラーゼの両方を発現するｓａＲＮＡについては測定されなかった。単一または二重抗原陽性細胞の割合は、ＢＤ Ａｃｃｕｒｉフローサイトメーターを使用して定量した。抗原を発現しなかった細胞画分の自然対数を、添加したＲＮＡの質量（ｎｇ）に対してプロットし、線形回帰を使用して線形部分を直線に当てはめた。その線の傾斜に－１００，０００を乗じたものをＬＮＰ効力として報告した。あるいは、ＢＨＫ－２１細胞を使用して同様のアッセイを９６ウェルで実行し、Ｃｙｔａｔｉｏｎ ５ Ｃｅｌｌ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して分析した。このアッセイの結果は、フローサイトメトリーアッセイについて説明したのと同じ方法で分析した。このデータによって、ＳＬ０１とＳＬ０２の両方がインビトロでＢＨＫ－Ｖ細胞にトランスフェクトできることが示される。ＳＬ０２ ＬＮＰは、調べた両方のｓａＲＮＡ構築物の効力においてより高い傾向であった（図３）。

【0161】

脂質ナノ粒子のインビボ効力の特性評価
ｓａＲＮＡ ＬＮＰがワクチンとして作用する能力は、インビボマウス免疫原性研究を使用して評価された。６～８週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃマウス１０匹のグループに、研究０日目と研究２１日目に筋肉内注射として０．１μｇのｓａＲＮＡ ＬＮＰまたは０．００１μｇのｓａＲＮＡのいずれかを投与した。研究４２日目にマウスを安楽死させ、血清学的及び細胞ベースの免疫アッセイのために血清及び脾臓を収集した。血清中のワクチン抗体反応は、ＩｇＧ ＥＬＩＳＡ、赤血球凝集阻害アッセイ（ＨＡＩ）、疑似ウイルス微量中和アッセイ（ＭＮ）、及び酵素結合レクチンアッセイ（ＥＬＬＡ）を使用して測定した。図４及び図５に示すとおり、プライムブーストワクチン接種スケジュール後の血球凝集抑制（ＨＡＩ）アッセイ及び疑似ウイルスマイクロ中和（ＭＮ）アッセイによって測定した場合、インフルエンザ抗原Ｈ５及びＮ１を発現するｓａＲＮＡをカプセル化したＬＮＰがマウスにおいて高レベルの中和抗体をもたらした。０．１μｇのｓａＲＮＡ用量では、両方のＬＮＰの値とも、ＭＦ５９をアジュバントとして添加した不活化ウイルスワクチンによって誘発される値と同等であった。

【0162】

抗原特異的Ｔ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋の両方）とも、ペプチド刺激後の細胞内サイトカイン染色を使用して評価した。図６に示すように、インフルエンザ抗原Ｈ５及びＮ１を発現するｓａＲＮＡをカプセル化したＳＬ０１及びＳＬ０２のＬＮＰは、ＭＦ５９をアジュバントとして添加した不活化ウイルスワクチンとは対照的に、プライムブーストワクチン接種スケジュールに従って測定可能なレベルの抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞の活性化をもたらした。

【0163】

ＬＮＰのインビボトランスフェクション効率の特性評価
ＬＮＰとともに送達された場合のｓａＲＮＡのタンパク質へのインビボ翻訳の効率及び位置はまた、マウス全体の生物発光イメージングに基づいたルシフェラーゼＨ５ ｓａＲＮＡ ＬＮＰを使用しても評価される。例えば、１．０μｇまたは０．１μｇのｓａＲＮＡ ＬＮＰを、後肢に筋肉注射する。毎日などの定められた時点で、マウスにルシフェリンを投与し、生物発光を画像化及び定量化する。

【0164】

遺伝毒性の可能性、忍容性、生体内分布、生分解性の特性評価
単一の検査では腫瘍形成につながるすべての遺伝毒性メカニズムを検出できないので、遺伝毒性の可能性（ＤＮＡの損傷）を予測するための標準的な一連の検査を使用する。例として、インビトロ哺乳動物細胞アッセイで陽性結果が見られ、適切な組織での２つのインビボアッセイで明らかに陰性結果が得られ、十分な試験物質への曝露が実証された場合は、インビボでは遺伝毒性の可能性を欠いている証拠とみなされる。「ヒト使用を目的とした医薬品のＳ２（Ｒ１）遺伝毒性試験とデータ解釈」などの関連ガイドラインが遵守される。
●細菌の遺伝子変異の試験。
●染色体損傷に関するインビトロ細胞遺伝学試験（中期染色体異常または小核試験）またはマウスリンパ腫Ｔｋ遺伝子変異アッセイ。
●げっ歯類の造血細胞を使用した、中期細胞の小核または染色体異常に関する染色体損傷に関するインビボ遺伝毒性試験。

【0165】

新規脂質の毒性に関するインシリコスクリーニング
新規のイオン化カチオン性脂質は、国際「ヒト用医薬品技術要件調和評議会（Ｃｏｕｎｃｉｌ ｆｏｒ Ｈａｒｍｏｎｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｕｓｅ）（ＩＣＨ）Ｍ７（Ｒ１）潜在的な発がんリスクを制限するための医薬品中のＤＮＡ反応性（変異原性）不純物の評価と管理（Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ＤＮＡ Ｒｅａｃｔｉｖｅ（Ｍｕｔａｇｅｎｉｃ）Ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｔｏ Ｌｉｍｉｔ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃ Ｒｉｓｋ）」を満たすために、市販の計算毒性評価製品及び／またはサービスを使用して、潜在的な毒性及び変異原性についてスクリーニングされる。例えば、２つの補完的な定量（Ｑ）ＳＡＲ法、専門家ルールベースのＤｅｒｅｋ Ｎｅｘｕｓ及び統計ベースのＳａｒａｈ Ｎｅｘｕｓ（またはＬｅａｄｓｃｏｐｅ）が、細菌の変異原性の結果を予測するために使用される。分類は、既知の変異原性発がん物質（クラス１）から変異原性または発がん性の欠如（クラス５）まで、変異原性及び発がん性の可能性に関してのクラス１～５に基づく。コンピューターベースの分析の結果を、肯定的、否定的、矛盾する、または決定的ではない予測の関連性について検討し、結論の根拠を提供する。

【0166】

ほとんどの構造的警告は、細菌の変異原性に基づいているため、構造的警告を有する化合物は標準的な一連の試験で検出され得る。さらに、一部の化学クラスは細菌変異アッセイよりも哺乳動物細胞の染色体損傷アッセイの方が容易に検出される。いずれかの一連の試験で構造警告のある化合物からの陰性結果は、遺伝毒性がないとみなされるべきである。

【0167】

遺伝毒性のインビトロスクリーニング
新規脂質は、まず細菌逆遺伝子突然変異試験（Ａｍｅｓ）で変異原性について評価され、この試験では、関連する遺伝子変化とほとんどの遺伝毒性のあるげっ歯類及びヒトの発がん性物質が検出され、次に、哺乳動物細胞を使用したインビトロ小核（ＭＮ）アッセイで遺伝毒性が検出される。

【0168】

エイムズ（Ａｍｅｓ）アッセイは、変異原性の可能性を評価するための、経済協力開発機構（ＯＥＣＤ）の化学物質試験に関するガイドライン（Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｅｃｏｎｏｍｉｃ Ｃｏ－ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（ＯＥＣＤ）Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）Ｎｏ．４７１細菌復帰突然変異試験及びＳ２（Ｒ１）遺伝毒性試験及びヒト使用を目的とした医薬品のデータ解釈（Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｔｅｓｔ ａｎｄ Ｓ２（Ｒ１）Ｇｅｎｏｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｄａｔａ Ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｔｅｎｄｅｄ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｕｓｅ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｍｕｔａｇｅｎｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）に準拠する。少なくとも５つの菌株Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ＴＡ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１５３７、ＴＡ１５３５及びＴＡ１０２またはＥ．ｃｏｌｉ ＷＰ２を、代謝活性化系ラット肝臓代謝系（Ｓ－９）の存在下及び非存在下で試験物質に曝露する。

【0169】

インビトロ哺乳動物細胞小核遺伝毒性試験は、ＯＥＣＤ 化学物質試験ガイドラインＮｏ．４８７に準拠する。この検査では、間期細胞の細胞質内のＭＮ及び染色体損傷の可能性（異性原及びクラストロゲン）を検出する必要がある。ラット肝臓代謝系（Ｓ－９）の非存在下及び存在下で処理されたマウスリンパ腫 Ｌ５１７８Ｙ細胞Ｔｋ（チミジンキナーゼ）遺伝子変異アッセイ（ＭＬＡ）及びヒトリンパ球小核アッセイ（ＨＬＭ）を十分に検証し、適切である。

【0170】

遺伝毒性のインビボスクリーニング
一部の薬剤はインビボでは変異原性であるが、インビトロでは変異原性ではないので、新規脂質は急性または反復投与ラット研究では、インビボで評価する。分析の選択は、赤血球（血液または骨髄内）の小核、または骨髄の中期細胞の染色体異常である。

【0171】

生体内分布及び生分解性の評価
エキソビボ生分解性評価：ヒト、マウス、ラットなどの関連種から調製した酵素含有溶液を使用して、新規脂質を酵素生分解性についてスクリーニングする。脂質は、そのままの状態（未製剤化）と、ＲＮＡを含むか、または含まないＬＮＰに組み込まれた場合との両方でスクリーニングされる。例えば、新規のイオン化可能なカチオン性脂質は、ヒトまたはラットの肝臓ミクロソームの水溶液中でおよそ１．０～０．００１ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈され、２５～３７℃の範囲の温度で０．１～２４時間インキュベートされる。その後、蒸発光散乱（ＥＬＳ）または質量分析（ＭＳ）検出を備えた液体クロマトグラフィー（ＬＣ）を使用して、残っているインタクトの脂質の量を測定し、酵素で処理しなかったか、または酵素活性を阻害するために２～８℃でインキュベートした対照試料と比較する。さらに、クロマトグラフにおける新しいピークの出現は、おそらく分解生成物を表しており、同一性を確認するためにＭＳを使用して調査される。理論に束縛されるつもりはないが、分解はエステル加水分解を介して起こる可能性があること、及び脂質の構造がエステル加水分解の速度に影響を与えることが予想される。

【0172】

インビボの生体内分布、薬物動態、及び生分解性の評価：生体内分布及び薬物動態［吸収、分布、代謝、及び排泄）（ＡＤＭＥ）］の評価をラットで行い、新規脂質（そのままの形及び／またはＲＮＡを含むかもしくは含まないＬＮＰに組み込まれる）を筋肉内または静脈内に与える。

【0173】

生体内分布の評価は、ＩＣＨ－Ｍ３（Ｒ２）及びワクチンの非臨床評価に関する世界保健機関（ＷＨＯ）のガイドライン、ＷＨＯ テクニカルレポートシリーズＮｏ．９２７、付録１の原則に基づいて行う。血液試料は脂質、ｍＲＮＡ及び免疫原性の分析のために複数回収集する。組織は事前に定義された日に収集し、適格な液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＳ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して脂質分析を実行する。必要に応じて、核酸ペイロードのＲＴ ｑＰＣＲ分析を実行する。

【0174】

血漿中の脂質薬物動態は、認定されたＬＳ－ＭＳ／ＭＳで評価される。

【0175】

インビボ忍容性評価
新規脂質の耐容性は、マウスやラットなどの適切な種で評価される。例えば、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットの群には、筋肉内注射により動物１匹あたり０．１～３０μｇの全ＲＮＡの範囲の用量で新規脂質含有ＲＮＡ ＬＮＰワクチンが投与される。各動物には１～３回の注射を行い、体重減少、摂食量、体温に対する治療の効果を測定する。さらに、注射部位は、Ｄｒａｉｚｅ皮膚刺激スコアリングシステムを使用してモニターする。さらに、ＥＬＩＳＡ及び機能的抗体アッセイを使用してワクチン免疫応答を評価するために血清を収集する。さらに、全血球数、血液化学、及び血液凝固を、研究中の１つ以上の時点で評価する。研究の最後に、剖検中に選択された臓器を肉眼的に評価して、秤量する場合がある。高い免疫原性を維持しながら、体重減少、発熱、注射部位の反応原性などの望ましくない反応を最小限に抑えるＲＮＡ ＬＮＰワクチンに関連する新規脂質は、忍容性プロファイルがあまり魅力的ではない脂質よりも有望な候補と考えられる。

【0176】

毒性評価
反復投与一般毒性研究：新規脂質候補の毒性は、薬理学的に関連する非臨床種（例えば、ラット）で評価する。新規脂質含有ＲＮＡ／ＬＮＰワクチンは、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットに３週間ごとに１回（合計３回）筋肉内注射で投与される。効果の可逆性または持続性は、３週間の回復期後に評価される。

【0177】

毒性の評価は、死亡率、臨床観察、体重、摂食量、眼科的観察、投与部位（皮膚）観察、体温、ならびに臨床病理学及び解剖学的病理学、小核分析に基づく。免疫原性分析のために血液試料を収集する。

【0178】

反応原性／忍容性プロファイルが改善され、高い免疫原性を維持する、新規な脂質含有ＲＮＡ／ＬＮＰワクチンのさらなる開発が検討される。

【0179】

実施形態の項目別リスト
１．メッセンジャーＲＮＡと、以下からなる群から選択されるイオン性カチオン性脂質化合物とを含む脂質ナノ粒子：

【化12-1】

【化12-2】

【化12-3】

またはその薬学的に許容される塩、もしくはプロドラッグ。

【0180】

２．前記脂質成分が、中性脂質、構造脂質及びＰＥＧ化脂質のうちの１つ以上をさらに含む、項目１に記載の脂質ナノ粒子。

【0181】

３．項目２に記載の脂質ナノ粒子であって、前記中性脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びスフィンゴミエリンからなる群より選択される、前記脂質ナノ粒子。

【0182】

４．前記構造脂質が、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、及びα－トコフェロールからなる群から選択される、項目２または項目３に記載の脂質ナノ粒子。

【0183】

５．前記ＰＥＧ化脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、及びＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、任意選択でＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、及びＰＥＧ－ＤＳＰＥからなる群から選択される、項目２～項目４のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。

【0184】

６．約２５モル％～約６０モル％の化合物１～１２から選択される化合物と、約２モル％～約２５モル％の中性脂質；約１８．５モル％～約６０モル％の構造脂質；及び約０．２モル％～約１０モル％のＰＥＧ化脂質を含む、項目１～項目５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。

【0185】

７．前記メッセンジャーＲＮＡが、従来のメッセンジャーＲＮＡ及び自己増幅メッセンジャーＲＮＡから選択される、項目１～項目６のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。

【0186】

８．前記従来のメッセンジャーＲＮＡ及び／または自己増幅メッセンジャーＲＮＡが、抗原性ペプチドもしくはタンパク質、あるいはそれらの断片、バリアントもしくは誘導体をコードする配列を含む、項目１～項目７のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。

【0187】

９．前記抗原性ペプチドまたはタンパク質が、病原性抗原、腫瘍抗原、アレルギー性抗原または自己免疫性自己抗原からなる群から選択される、項目８に記載の脂質ナノ粒子。

【0188】

１０．前記病原性抗原が、細菌、ウイルスまたは原虫学的病原生物に由来する、項目９に記載の脂質ナノ粒子。

【0189】

１１．脂質ナノ粒子の直径が約３０ｎｍ～約１６０ｎｍである、項目１～項目１０のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。

【0190】

１２．化合物１～１０及び１２から選択される化合物を含む、項目１～項目１１のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。

【0191】

１３．化合物１～１０から選択される化合物を含む、項目１～項目１２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。

【0192】

１４．項目１～項目１３のいずれか１項に記載の複数の脂質ナノ粒子と、薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤とを含む脂質ナノ粒子組成物。

【0193】

１５．項目１～項目１３のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子もしくは項１４に記載の脂質ナノ粒子組成物を対象に投与することにより、細胞と脂質ナノ粒子または、脂質ナノ粒子組成物とを接触させて、メッセンジャーＲＮＡを細胞に送達することを含む、哺乳動物の細胞にメッセンジャーＲＮＡを送達する方法。

【0194】

１６．前記細胞がヒト対象の細胞である、項目１５に記載の方法。

【0195】

１７．哺乳動物細胞において目的のポリペプチドを産生する方法であって、細胞を項目１～項目１３のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子、または項目１４に記載の脂質ナノ粒子組成物と接触させるステップを含み、前記脂質ナノ粒子が、ポリペプチドをコードする従来のメッセンジャーＲＮＡまたは自己増幅メッセンジャーＲＮＡを含む、前記方法。

【0196】

１８．項目１～項目１３のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子、または項目１４に記載の脂質ナノ粒子組成物を対象に投与することを含み、それによって疾患、障害または状態を治療する、そのような治療を必要とする対象において、病気、障害、状態を治療する方法。

【0197】

１９．疾患、障害、または状態の治療のための医薬の製造における、項目１～項目１３のいずれか１つの脂質ナノ粒子、または項目１４に記載の脂質ナノ粒子組成物の使用。

【0198】

２０．当該治療を必要とする対象における疾患、障害または状態の治療に使用するための、項目１～項目１３のいずれか１つに記載の脂質ナノ粒子、または項目１４に記載の脂質ナノ粒子組成物。

【0199】

２１．前記疾患、障害または状態が、希少疾患、感染症、がん、増殖性疾患、遺伝病、自己免疫疾患、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患、腎血管疾患、及び代謝性疾患からなる群から選択される、項目１８に記載の方法、項目１９に記載の使用、または項目２０に記載の脂質ナノ粒子。

【0200】

２２．項目１～項目１３のいずれかに記載の脂質ナノ粒子、または項目１４に記載の脂質ナノ粒子組成物を含む、ワクチン。

【0201】

２３．前記ワクチンが、腫瘍ワクチン、インフルエンザワクチン、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ワクチンなどのＳＡＲＳワクチンから選択される、項目２２に記載のワクチン。

【0202】

２４．項目１～項目１３のいずれかに記載の脂質ナノ粒子；項目１４に記載の脂質ナノ粒子組成物；項目１５または項目１６に記載のメッセンジャーＲＮＡの送達方法；項目１７に記載の目的ポリペプチドの製造方法；項目１９に記載の疾患、障害または状態を治療する方法；項目１９または項目２１に記載の脂質ナノ粒子の使用；項目２０または項目２１に記載の使用のための脂質ナノ粒子；項目２２または項目２３に記載のワクチン；ここで、関連する化合物は、化合物２～化合物１２の１つ以上から選択される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【手続補正書】

【提出日】2024-06-05

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

メッセンジャーＲＮＡと、以下からなる群から選択されるイオン性カチオン性脂質化合物と、を含む脂質ナノ粒子：

【化1-1】

【化1-2】

【化1-3】

またはその薬学的に許容される塩、もしくはプロドラッグ。

【請求項2】

脂質成分が、中性脂質、構造脂質及びＰＥＧ化脂質のうちの１つ以上をさらに含む、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項3】

請求項２に記載の脂質ナノ粒子であって、前記中性脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びスフィンゴミエリンからなる群より選択される、前記脂質ナノ粒子。

【請求項4】

前記構造脂質が、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、及びα－トコフェロールからなる群から選択される、請求項２に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項5】

前記ＰＥＧ化脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、及びＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、任意選択でＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、及びＰＥＧ－ＤＳＰＥからなる群から選択される、請求項２に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項6】

約２５モル％～約６０モル％の化合物１～１２から選択される化合物；約２モル％～約２５モル％の中性脂質；約１８．５モル％～約６０モル％の構造脂質；及び約０．２モル％～約１０モル％のＰＥＧ化脂質を含む、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項7】

前記メッセンジャーＲＮＡが、従来のメッセンジャーＲＮＡ及び自己増幅メッセンジャーＲＮＡから選択される、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項8】

従来のメッセンジャーＲＮＡ及び／または自己増幅メッセンジャーＲＮＡが、抗原性ペプチドもしくはタンパク質、またはそれらの断片、バリアントもしくは誘導体をコードする配列を含む、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項9】

前記抗原性ペプチドまたはタンパク質が、病原性抗原、腫瘍抗原、アレルギー性抗原または自己免疫性自己抗原からなる群から選択される、請求項８に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項10】

前記脂質ナノ粒子が約３０ｎｍ～約１６０ｎｍの直径を有する、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項11】

請求項１に記載の複数の脂質ナノ粒子と、薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤とを含む脂質ナノ粒子組成物。

【請求項12】

哺乳動物細胞にメッセンジャーＲＮＡを送達するための、請求項１に記載の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物であって、
ここで、哺乳動物細胞を前記医薬組成物と接触させ、そして、前記メッセンジャーＲＮＡが前記細胞に送達される、前記医薬組成物。

【請求項13】

哺乳動物細胞において目的のポリペプチドを産生するための、請求項１に記載の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物であって、
ここで、哺乳動物細胞を前記医薬組成物と接触させ、そしてここで、前記脂質ナノ粒子が、前記ポリペプチドをコードする従来のメッセンジャーＲＮＡまたは自己増幅メッセンジャーＲＮＡを含む、前記医薬組成物。

【請求項14】

希少疾患、感染症、がん、増殖性疾患、遺伝病、自己免疫疾患、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患、腎血管疾患、及び代謝性疾患からなる群から選択される疾患、障害または状態を治療するための、請求項１に記載の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物。

【請求項15】

請求項１に記載の脂質ナノ粒子、または請求項１１に記載の脂質ナノ粒子組成物を含むワクチンであって、ここで、前記ワクチンが、腫瘍ワクチン、インフルエンザワクチン、及びＳＡＲＳワクチンから選択される、前記ワクチン。

【手続補正書】

【提出日】2024-06-05

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

メッセンジャーＲＮＡと、以下からなる群から選択されるイオン性カチオン性脂質化合物と、を含む脂質ナノ粒子：

【化1-1】

【化1-2】

【化1-3】

またはその薬学的に許容される塩、もしくはプロドラッグ。

【請求項2】

脂質成分が、中性脂質、構造脂質及びＰＥＧ化脂質のうちの１つ以上をさらに含む、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項3】

請求項２に記載の脂質ナノ粒子であって、前記中性脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ Ｌｙｓｏ ＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ １６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びスフィンゴミエリンからなる群より選択される、前記脂質ナノ粒子。

【請求項4】

前記構造脂質が、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、及びα－トコフェロールからなる群から選択される、請求項２に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項5】

前記ＰＥＧ化脂質が、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、及びＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、任意選択でＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、及びＰＥＧ－ＤＳＰＥからなる群から選択される、請求項２に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項6】

約２５モル％～約６０モル％の化合物１～１２から選択される化合物；約２モル％～約２５モル％の中性脂質；約１８．５モル％～約６０モル％の構造脂質；及び約０．２モル％～約１０モル％のＰＥＧ化脂質を含む、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項7】

前記メッセンジャーＲＮＡが、従来のメッセンジャーＲＮＡ及び自己増幅メッセンジャーＲＮＡから選択される、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項8】

従来のメッセンジャーＲＮＡ及び／または自己増幅メッセンジャーＲＮＡが、抗原性ペプチドもしくはタンパク質、またはそれらの断片、バリアントもしくは誘導体をコードする配列を含む、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項9】

前記抗原性ペプチドまたはタンパク質が、病原性抗原、腫瘍抗原、アレルギー性抗原または自己免疫性自己抗原からなる群から選択される、請求項８に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項10】

前記脂質ナノ粒子が約３０ｎｍ～約１６０ｎｍの直径を有する、請求項１に記載の脂質ナノ粒子。

【請求項11】

請求項１に記載の複数の脂質ナノ粒子と、薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤とを含む脂質ナノ粒子組成物。

【請求項12】

哺乳動物細胞にメッセンジャーＲＮＡを送達するための、請求項１に記載の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物であって、
ここで、前記哺乳動物細胞を前記医薬組成物と接触させ、そして、前記メッセンジャーＲＮＡが前記細胞に送達される、前記医薬組成物。

【請求項13】

哺乳動物細胞において目的のポリペプチドを産生するための、請求項１に記載の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物であって、
ここで、前記哺乳動物細胞を前記医薬組成物と接触させ、そしてここで、前記脂質ナノ粒子が、前記ポリペプチドをコードする従来のメッセンジャーＲＮＡまたは自己増幅メッセンジャーＲＮＡを含む、前記医薬組成物。

【請求項14】

希少疾患、感染症、がん、増殖性疾患、遺伝病、自己免疫疾患、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患、腎血管疾患、及び代謝性疾患からなる群から選択される疾患、障害または状態を治療するための、請求項１に記載の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物。

【請求項15】

請求項１に記載の脂質ナノ粒子、または請求項１１に記載の脂質ナノ粒子組成物を含むワクチンであって、ここで、前記ワクチンが、腫瘍ワクチン、インフルエンザワクチン、及びＳＡＲＳワクチンから選択される、前記ワクチン。

【国際調査報告】