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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-10-08
(54)【発明の名称】方法
(51)【国際特許分類】
A61K 47/54 20170101AFI20241001BHJP
C07D 237/32 20060101ALI20241001BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241001BHJP
A61K 31/502 20060101ALI20241001BHJP
A61K 31/473 20060101ALI20241001BHJP
A61K 31/197 20060101ALI20241001BHJP
A61K 45/06 20060101ALI20241001BHJP
A61K 41/00 20200101ALI20241001BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20241001BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241001BHJP
C07D 219/04 20060101ALI20241001BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20241001BHJP
A61K 31/496 20060101ALI20241001BHJP
A61K 31/357 20060101ALI20241001BHJP
【ＦＩ】
A61K47/54
C07D237/32
A61P35/00
A61K31/502
A61K31/473
A61K31/197
A61K45/06
A61K41/00
A61P25/00
A61P43/00 121
C07D219/04
A61K45/00
A61K31/496
A61K31/357
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024541285
(86)(22)【出願日】2022-09-20
(85)【翻訳文提出日】2024-05-16
(86)【国際出願番号】 GB2022052366
(87)【国際公開番号】W WO2023041938
(87)【国際公開日】2023-03-23
(31)【優先権主張番号】20210100622
(32)【優先日】2021-09-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GR
(31)【優先権主張番号】22154473.7
(32)【優先日】2022-02-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】513227446
【氏名又は名称】オスロ ウニヴェルスィテーツスィーケフース ハーエフ
【氏名又は名称原語表記】ＯＳＬＯ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＥＴＳＳＹＫＥＨＵＳ ＨＦ
【住所又は居所原語表記】Ｐｏｓｔｂｏｋｓ ４５０，Ｎｙｄａｌｅｎ Ｎ－０４２４ Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ
(71)【出願人】
【識別番号】524104930
【氏名又は名称】ヴギウカラキス ゲオルギオス シー
(71)【出願人】
【識別番号】524104941
【氏名又は名称】ロータス ゲオルギオス
(71)【出願人】
【識別番号】520503245
【氏名又は名称】ナショナル アンド カポディストリアン ユニヴァーシティー オヴ アテンス
(74)【代理人】
【識別番号】110000109
【氏名又は名称】弁理士法人特許事務所サイクス
(72)【発明者】
【氏名】ヴギウカラキス ゲオルギオス シー
(72)【発明者】
【氏名】ロータス ゲオルギオス
(72)【発明者】
【氏名】テオドッシュウ テオドッシス
(72)【発明者】
【氏名】ベルグ クリスチャン
(72)【発明者】
【氏名】アロンソ ミゲル アンヘル ミランダ
(72)【発明者】
【氏名】グリガラヴィシウス マンタス
(72)【発明者】
【氏名】エザットパナー ソマイエ
(72)【発明者】
【氏名】ラーベ ティーネ テレーゼ ヘンリクセン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C086
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C076AA95
4C076BB11
4C076CC27
4C076DD55
4C076DD60
4C076EE59
4C084AA11
4C084AA17
4C084AA19
4C084AA20
4C084MA05
4C084MA55
4C084MA65
4C084MA66
4C084NA05
4C084NA13
4C084ZA011
4C084ZB261
4C084ZC75
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086BA16
4C086BC28
4C086BC41
4C086BC50
4C086GA07
4C086MA55
4C086MA65
4C086MA66
4C086NA13
4C086ZA01
4C086ZB26
4C086ZC75
4C206AA01
4C206AA02
4C206FA47
4C206MA02
4C206MA04
4C206MA75
4C206MA85
4C206MA86
4C206NA13
4C206ZA01
4C206ZB26
4C206ZC75
(57)【要約】
本発明は、小胞体標的化化学発光薬剤及び光線力学療法（ＰＤＴ）の方法におけるそれらの使用を提供する。特に、本発明は、一般式（Ｉ）の化合物及び薬学的に許容される塩を提供し、式中、Ａは化学発光部分を表し、各Ｌは、同じであっても異なってもよく、直接結合又はリンカーのいずれかであり、各Ｂは、同じであっても異なってもよく、小胞体標的化部分を表し、ｎは、１～３の整数、好ましくは１であり、ｘは、１～３の整数、好ましくは１である。このような化合物は、光増感剤又は光増感剤前駆体と組み合わせて使用される場合、深部腫瘍、例えば、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）の治療における特定の使用が見出されている。
【化１】
【化１】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
光線力学療法の方法における使用のための小胞体標的化化学発光薬剤。
【請求項2】
前記薬剤は、少なくとも１つの小胞体標的化部分に結合した又は別様に関連した少なくとも１つの化学発光部分を含むコンジュゲートである、請求項１に記載の使用のための薬剤。
【請求項3】
前記コンジュゲートは、一般式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩：【化1】
式中、Ａは、化学発光部分を表し、
各Ｌは、同じであっても異なってもよく、直接結合又はリンカー（例えば、有機リンカー）のいずれかであり、
各Ｂは、同じであっても異なってもよく、小胞体標的化部分を表し、
ｎは、１～３の整数、好ましくは１であり、
ｘは、１～３の整数、好ましくは１である、請求項２に記載の使用のための薬剤。
【請求項4】
前記コンジュゲートは、式（ＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩：【化2】
式中、Ａ、Ｌ、及びＢは、請求項３に記載されるとおりである、請求項３に記載の使用のための薬剤。
【請求項5】
前記化学発光薬剤又は前記化学発光部分は、ルミノール、イソルミノール、ルシゲニン、アクリジニウムエステル、シュウ酸エステル、及びそれらの誘導体からなる群から選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項6】
前記化学発光薬剤又は前記化学発光部分は、ルミノール、イソルミノール、アクリジニウムエステル、又はそれらの誘導体である、請求項５に記載の使用のための薬剤。
【請求項7】
前記小胞体標的化部分は、スルホンアミド又はスルホンアミド誘導体である、請求項２～６のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項8】
前記小胞体標的化部分は、以下の構造：【化3】
式中、
Ｒ１４は、Ｃ１～６アルキル又は任意選択的に置換されたアリール基であり、
Ｒ１５は、水素又はＣ１～６アルキルであり、
【化4】
【請求項9】
前記小胞体標的化部分は、以下の構造：【化5】
式中、
Ｒ１４は、請求項８で記載されるとおりである、請求項８に記載の使用のための薬剤。
【請求項10】
前記小胞体標的化部分は、以下の構造：【化6】
式中、
Ｒ１５は、請求項８で記載されるとおりであり、
各Ｒ１６は、独立して、Ｃ１～３アルキル（例えば、メチル）、Ｃ１～３アルコキシ（例えば、メトキシ）又はハロゲン原子（例えば、Ｃｌ若しくはＢｒ）を表し、
ｕは、０～５の整数、好ましくは１～３、例えば、１である、請求項８に記載の使用のための薬剤。
【請求項11】
前記リンカーＬは、Ｃ１～３アルキル、－Ｏ（Ｃ１～３）アルキル、－ＯＨ、シクロアルキル基及びアリール基から選択される１つ以上の基によって任意選択的に置換されたアルキレン鎖（好ましくはＣ１～１５アルキレン、例えば、Ｃ２～１１アルキレン）を含み、前記アルキレン鎖の１つ以上の－ＣＨ２－基は、－Ｏ－、－ＣＯ－、－ＮＲ－（式中、Ｒは、Ｈ又はＣ１～６アルキル、好ましくはＣ１～３アルキル、例えば、メチルである）、シクロアルキル基、複素環基、アリール基及びヘテロアリール基から独立して選択される基によって置き換えられてもよい、請求項３～１０のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項12】
前記リンカーＬは、－Ｃ３Ｈ６－、－Ｃ４Ｈ８－、－Ｃ６Ｈ１２－、－Ｃ８Ｈ１６－、－Ｃ１０Ｈ２０－、－Ｃ１１Ｈ２２－、－ＣＯ－、－ＣＯ－ＣＨ２－、－ＣＯ－Ｃ３Ｈ６、－ＣＯ－Ｃ５Ｈ１０－、－ＣＯ－Ｃ６Ｈ１２－、－ＣＯ－Ｃ１０Ｈ２０－、及び１～４個のエチレンオキシド単位を含むポリエチレングリコール基からなる群から選択される、請求項１１に記載の使用のための薬剤。
【請求項13】
式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩：【化7】
Ｂ１は、小胞体標的化部分、例えば、請求項７～１０のいずれか一項に記載される小胞体標的化部分であり、
Ｒ３は、水素、又はＣ１～３アルキル（例えば、メチル）などのアルキル基であり、
各Ｒ４は、Ｃ１～６アルキル、及び－ＮＲ５Ｒ６から独立して選択され、
Ｒ５及びＲ６は、Ｈ及びＣ１～６アルキルから、好ましくはＨ及びＣ１～３アルキル（例えば、－ＣＨ３）から独立して選択され、
ｐは、０～３の整数、好ましくは０、１又は２、例えば、０又は１である）である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項14】
式（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）：【化8】
式中、Ｌ１、Ｂ１、Ｒ３、Ｒ４、及びｐは、請求項１３に記載されるとおりである、請求項１３に記載の使用のための薬剤。
【請求項15】
Ｌ１は、【化9】
式中、ａは、１～１０の整数、好ましくは３～１０であり、
ｂは、１～４の整数、例えば、２である、請求項１３又は請求項１４に記載の使用のための薬剤。
【請求項16】
式（ＩＶ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩：【化10】
Ｂ２は、小胞体標的化部分、例えば、請求項７～１０のいずれか一項に記載される小胞体標的化部分であり、
各Ｒ６は、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、及びＣ１～６アルキル（例えば、ｔｅｒｔ－Ｂｕ）から独立して選択され、
ｑは、０～４の整数、好ましくは０又は２であり、
Ｚは、一価のアニオン、例えば、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、又はＣＦ３ＯＳＯ２アニオンである）である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項17】
Ｌ２は、以下の基：【化11】
式中、ａは、１～１０の整数、好ましくは３、４、又は５である、請求項１６に記載の使用のための薬剤。
【請求項18】
式（Ｖ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩：【化12】
Ｂ３は、小胞体標的化部分、例えば、請求項７～１０のいずれか一項に記載される小胞体標的化部分であり、
各Ｒ７は、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、－ＣＯ２Ｒ８（式中、Ｒ８は、水素又はＣ１～６アルキルである）、シアノ、及びＣ１～６アルキル（例えば、ｔｅｒｔ－Ｂｕ）から独立して選択され、
ｒは、０～５の整数、好ましくは０又は３であり、
Ｚは、一価のアニオン、例えば、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、又はＣＦ３ＯＳＯ２アニオンである）である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項19】
Ｌ３は、Ｃ１～１０アルキレン基、例えば、Ｃ１～６アルキレンである、請求項１８に記載の使用のための薬剤。
【請求項20】
式（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩：【化13】
式中、Ｌ４は、直接結合又はリンカー、例えば、請求項１１又は１２に記載されるリンカーのいずれかであり、
Ａ１は、化学発光部分、例えば、請求項５又は６に記載される化学発光部分である）、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項21】
Ｌ４は、【化14】
式中、ａは、１～１０の整数、好ましくは３～１０である、請求項２０に記載の使用のための薬剤。
【請求項22】
Ａ１は、以下：【化15】
各Ｒ４は、Ｃ１～６アルキル、及び－ＮＲ５Ｒ６から独立して選択され、
Ｒ５及びＲ６は、Ｈ及びＣ１～６アルキルから、好ましくはＨ及びＣ１～３アルキル（例えば、－ＣＨ３）から独立して選択され、
ｐは、０～３の整数、好ましくは０、１又は２、例えば、０又は１であり、
Ｚは、一価のアニオン、例えば、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、又はＣＦ３ＯＳＯ２アニオンであり、
各Ｒ９は、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、及びＣ１～６アルキル（例えば、ｔＢｕ）から独立して選択され、
ｓは、０～４の整数、好ましくは０、２、又は３である）のいずれかから選択される、請求項２０又は請求項２１に記載の使用のための薬剤。
【請求項23】
式（ＶＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩：【化16】
Ｂ４は、小胞体標的化部分、例えば、請求項７～１０のいずれか一項に記載される小胞体標的化部分であり、
各Ｒ１０は、Ｃ１～６アルキル（例えば、メチル）、及び－ＮＲ１１Ｒ１２から独立して選択され、
Ｒ１１及びＲ１２は、Ｈ及びＣ１～６アルキルから、好ましくはＨ及びＣ１～３アルキル（例えば、－ＣＨ３）から独立して選択され、
ｔは、０～３の整数、好ましくは１又は２である）である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項24】
式（ＶＩＩａ）：【化17】
【請求項25】
Ｌ５は、Ｃ１～１１アルキレン、好ましくはＣ２～８アルキレン、例えば、プロピレンである、請求項２３又は請求項２４に記載の使用のための薬剤。
【請求項26】
以下の化合物：【化18】
【請求項27】
前記光線力学療法は、光増感剤又はその前駆体の同時又は連続した使用を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の使用のための薬剤。
【請求項28】
前記光増感剤又は前記前駆体は、５－アミノレブリン酸（５－ＡＬＡ）及び５－ＡＬＡの誘導体、プロトポルフィリン（例えば、プロトポルフィリンＩＸ）、任意選択的にスルホン化され得る金属化フタロシアニン（すなわち、ＡｌＰｃＳ）、例えば、ＡｌＰｃＳ２若しくはＡｌＰｃＳ２ａなどのジスルホン化アルミニウムフタロシアニン、又はアルミニウムフタロシアニンテトラスルホネート（Ａ１ＰｃＳ４）などのフタロシアニン類、スルホン化テトラフェニルポルフィリン類（例えば、ＴＰＰＳ２ａ、ＴＰＰＳ４、ＴＰＰＳ１及びＴＰＰＳ２ｏ）、テトラ（ｍ－ヒドロキシフェニル）クロリン（ｍ－ＴＨＰＣ）（例えば、商品名Ｆｏｓｃａｎで市販されているテモポルフィン）などのクロリン、バクテリオクロリン及びケトクロリンを含むクロリン誘導体、モノ－Ｌ－アスパルチルクロリンｅ６（ＮＰｅ６）又はクロリンｅ６、ヘマトポルフィリン及びベンゾポルフィリンを含む天然ポルフィリン及び合成ポルフィリン、アントラキノン及びその誘導体（例えば、ヒペリシン、ヒポクレリン［Ａ、Ｂ］、セルコスポリン、カルホスチン、エルシノクロム［Ａ、Ｂ、Ｃ］）から選択される、請求項２７に記載の使用のための薬剤。
【請求項29】
前記光増感剤又は前記前駆体は、以下：セルコスポリン、５－ＡＬＡ、５－ＡＬＡの誘導体又はその薬学的に許容される塩から選択される、請求項２８に記載の使用のための薬剤。
【請求項30】
前記光増感剤は、セルコスポリンである、請求項２８に記載の使用のための薬剤。
【請求項31】
光線力学的療法に応答する動物の体（例えば、ヒト）の細胞又は組織の任意の障害又は異常の光線力学的治療に使用するための、請求項１～３０のいずれか一項に記載の薬剤。
【請求項32】
癌の治療において、好ましくは内部癌、例えば、深部癌の治療における、請求項３１に記載の使用のための薬剤。
【請求項33】
前記癌は、神経膠腫及び他の脳癌、肝癌及び膵臓癌、乳癌、肺癌及び前立腺癌、胆管癌、胃癌及び結腸癌、膀胱癌、子宮頸部癌、頭頸部癌からなる群から選択される、請求項３２に記載の使用のための薬剤。
【請求項34】
前記癌は、ＧＢＭである、請求項３３に記載の使用のための薬剤。
【請求項35】
少なくとも１つの薬学的に許容される担体又は賦形剤と一緒に、請求項１～２６のいずれか一項に記載の薬剤を含む、医薬組成物。
【請求項36】
少なくとも１つの薬学的に許容される担体又は賦形剤と一緒に、請求項１～２６のいずれか一項に記載の薬剤と、請求項２７～３０のいずれか一項に記載の光増感剤又は光増感剤前駆体と、を含む、医薬組成物。
【請求項37】
光線力学療法に使用するための、好ましくは内部癌、例えば、深部癌の治療に使用するための、請求項３５又は請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項38】
光線力学療法の方法において同時に、別個に、又は連続して使用するための、請求項１～２６のいずれか一項に記載の薬剤と、請求項２７～３０のいずれか一項に記載の光増感剤又は光増感剤前駆体と、を含む、製品。
【請求項39】
キットであって、（ｉ）請求項１～２６のいずれか一項に記載される薬剤と、別個に（ｉｉ）請求項２７～３０のいずれか一項に記載の光増感剤又は光増感剤前駆体と、任意選択的に（ｉｉｉ）光線力学療法の方法における（ｉ）及び（ｉｉ）の使用のための指示書と、を含む、キット。
【請求項40】
例えば、光線力学療法の方法に使用するための、請求項２７～３０のいずれか一項に記載の光増感剤又は光増感剤前駆体との併用療法に使用するための薬物の製造における、請求項１～２６のいずれか一項に記載の薬剤の使用。
【請求項41】
例えば、光線力学療法の方法に使用するための、請求項１～２６のいずれか一項に記載の薬剤との併用療法に使用するための薬物の製造における、請求項２７～３０のいずれか一項に記載の光増感剤又は光増感剤前駆体の使用。
【請求項42】
光線力学療法の方法に使用するための薬物の製造における、請求項２７～３０のいずれか一項に記載される光増感剤又は光増感剤前駆体と一緒の、請求項１～２６のいずれか一項に記載される薬剤の使用。
【請求項43】
患者（例えば、ヒト患者）の細胞又は組織の光線力学療法の方法であって、前記方法は、前記細胞又は前記組織に、（ａ）請求項１～２６のいずれか一項に記載される有効量の薬剤と、それと同時に、別個に、若しくは連続して、請求項２７～３０のいずれか一項に記載される有効量の光増感剤若しくは光増感剤前駆体、又は
（ｂ）請求項３６に記載される有効量の医薬組成物を投与する工程を含む、方法。
【請求項44】
請求項１～２６のいずれか一項に記載されるコンジュゲート、又はその薬学的に許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、光線力学療法（photodynamic therapy、ＰＤＴ）の方法における改善及びそのような方法に関連する改善に関し、特に、外部光源を必要とせずに、過剰増殖細胞及び／又は異常な細胞を特徴とする疾患及び状態の標的治療のためのそのような方法に関する。より具体的には、本発明は、腫瘍、特に、既存のＰＤＴ方法を使用した場合に到達できない腫瘍を治療するためのそのような方法に関する。
【0002】
本発明は更に、新規な小胞体標的化化学発光薬剤、それらの調製方法、及び光増感剤又は光増感剤前駆体を使用するＰＤＴの方法における細胞内光源としてのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【0003】
内部腫瘍の従来の治療は、典型的には、侵襲的手術、放射線療法、非治癒的化学療法、又はこれらの組み合わせを含む。多形神経膠芽腫（glioblastoma multiforme、ＧＢＭ）などの頭蓋内腫瘍は、その位置及び悪性度が高い特徴のために治療するのが非常に困難な深部腫瘍の一例である。ＥＵ及び米国では、毎年約２８，０００件のＧＢＭなどの悪性神経膠腫の新しい症例が診断されており、世界的には毎年２４０，０００人の患者が診断されている。現在の標準的な治療法は、腫瘍の約９９％を除去する高侵襲性（開頭）手術からなっているが、約１０億個の細胞が残されるため、再発につながる。放射線療法は、手術の補助として（６０～６５Ｇｙで）用いられてもよく、手術と併せると、残された癌細胞を数百万個に減少させることができるが、放射線耐性癌細胞を内部に有するいくつかの場所にも転移する傾向があるＧＢＭなどの癌には大きな効果は発揮しない。更に、放射線療法は、正常組織に対する癌性組織の破壊に特異的ではない。放射線療法に加えて、テモゾロミドによる化学療法も使用することができる。しかしながら、これらの療法は、患者の全生存期間を制限し、治癒転帰をもたらさず、細胞が最終的に（治療の約１年以内に）耐性を発達させ、治療がもはや有効ではなくなるため、これらの療法は、主に細胞増殖抑制性である。手術と放射線療法の組み合わせにより、生存期間の中央値が４．５ヶ月（未治療）から１２．１ヶ月に増加する。テモゾロミドによる追加の化学療法は、生存期間を１４．６ヶ月に延長する。ＧＢＭと診断された成人の相対生存率は、診断から１年以内には３０％未満であり、最初の診断から５年以上生存する患者はわずか３％である。
【0004】
そのため、ＧＢＭなどの深部に位置する到達困難な腫瘍は、治療することが依然として非常に困難であり、既存の治療法が提供する生存率の増加はごくわずかである。したがって、改善された有効性を有する、より標的を定めた、低侵襲性の治療手法の開発が緊急に必要とされている。
【0005】
腫瘍の治療に使用されることが知られている他の方法は、ＰＤＴを含む。ＰＤＴは、局所的に又は全身的にのいずれかで光増感剤を投与した後、周囲の酸素と相互作用して細胞毒性中間体を生成する光活性化光に患部を曝露することを含む。これは、細胞の破壊及び腫瘍血管系のシャットダウンをもたらす。
【0006】
ＰＤＴは、必須であるが個々には非化学毒性の３つの構成要素、（ｉ）光活性化薬物である光増感剤（photosensitizer、ＰＳ）と、（ｉｉ）ＰＳを活性化するために適切な波長の光と、（ｉｉｉ）毒性種の最終発生剤である酸素の存在と、の相乗効果を通して癌治療を提供する。ＰＤＴの抗腫瘍効果は、主に３つの相互に関連する効果に分類することができる。（ｉ）主にＩ型又はＩＩ型機構のいずれかを介してもたらされる直接的な細胞毒性作用（前者は、活性酸素種（reactive oxygen species、ＲＯＳ）を生成し、最終的にヒドロキシルラジカルを生成するが、ＰＳの大部分において顕著であるＩＩ型機構は、有害な一重項酸素［Ｏ２（１Δｇ）又は１Ｏ２］を生成する）、（ｉｉ）腫瘍血管系への損傷、及び（ｉｉｉ）ＰＤＴ誘導性酸化ストレスの結果として、全身性免疫の発生をもたらし得る炎症反応の誘導。
【0007】
光線力学療法及び診断の方法における使用が現在承認されている光増感剤には、その生合成非光感受性前駆体である５－アミノレブリン酸（5-aminolevulinic acid、５－ＡＬＡ）から生成されるプロトポルフィリンＩＸ（protoporphyrin IX、ＰｐＩＸ）が挙げられる。５－ＡＬＡの外部投与に続いて、ヘムの生合成サイクルが、細胞ミトコンドリアにおける活性光増感剤ＰｐＩＸへの変換を促進する。５－ＡＬＡで処理された癌細胞は、主にＰｐＩＸ合成促進酵素の量が多いために、かつ／又はフェロキラターゼの量が大幅に少ないために、大量のＰｐＩＸを蓄積する（この酵素は、ミトコンドリアマトリックス内のＰｐＩＸによる鉄のキレート化を触媒してヘムを生成し、次いでヘムはミトコンドリア外に輸送される）。その後の光への曝露により、ＰｐＩＸは、その基底一重項状態からその励起一重項状態に励起される。次いで、項間交差を経て、より長寿命の励起された三重項状態になる。三重項状態のＰｐＩＸが酸素分子（基底三重項状態にある）と相互作用すると、ＰｐＩＸから酸素へのエネルギー移動が起こる。これにより、２つの分子が互いにスピン反転する結果となり、ＰｐＩＸが緩和してその基底一重項状態に戻る一方で、細胞毒性のある励起一重項状態の酸素分子が形成される。
【0008】
光増感剤はまた、癌性細胞及び組織の光線力学的診断の方法における使用が知られており、腫瘍塊の外科的切除を誘導するためにも使用することができる。例えば、ＰＤＴは膀胱癌の治療における手術の補助として使用される。５－ＡＬＡによって誘発されるＰｐＩＸ蛍光は、現在、ＧＢＭの治療における蛍光誘導切除のために術中にも使用されている（Ｓｔｕｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ Ｏｎｃｏｌ．，２００６，７（５）：３９２－４０１を参照）。しかしながら、従来のＰＤＴ手順の制限（例えば、光の到達性及び組織への光浸透性）に起因して、現在、外科的介入を必要とせずにこの侵襲性状態を治療において顕著ないかなる利益も提供することはできない。
【0009】
抗癌治療としてのＰＤＴの既存の方法の主な制限は、臨床医による治療領域の判断が不十分であること、治療される腫瘍体積の定義が不十分であること、及び光活性化光が組織に浸透する深さ（約１．５ｃｍ）が制限されていることである。これは、効果のない治療及び生存癌細胞の残存につながる。例えば、５－ＡＬＡに基づくＰＤＴは、日光角化症及び基底細胞癌の治療に非常に高い治癒率を伴って特異的かつ効率的であるが、それは２ｍｍより薄い病変の場合のみである。より厚い病変又は非表在性癌の場合、５－ＡＬＡ ＰＤＴは、患者の治癒を保証することはできず、大きな腫瘍の場合は対症療法的であるに過ぎない。これは、ＰｐＩＸの活性化波長（６３５ｎｍ）での光の組織浸透性が制限されているためである。
【0010】
場合によっては、ＰＤＴを用いて、固形臓器又は食道などの中空臓器のより深くに位置する腫瘍を治療することができるが、これは通常、光増感剤の光活性化のために、カテーテル又は内視鏡を誘導する光ファイバーなどのデバイスの使用を伴う。これは複雑な手技であるだけでなく、体の特定の領域への到達を妨げ、治療にある程度の侵襲性をもたらす。またこれは、癌細胞全体を根絶することはできず、多病巣性疾患（例えば、神経膠腫）又は多病巣性転移には適用することができない。したがって、表在性腫瘍の治療には適しているが、深部腫瘍細胞及び解剖学的に到達しにくい病変の治療における既存のＰＤＴ法の使用は非常に制限されている。
【0011】
ＰＤＴの主な制約は、特に癌性病変が脳、肝臓、又は膵臓などの深部臓器にある場合の、病変への光の到達であるため、光増感剤の投与後の光線力学的な細胞自殺に必要な光を提供する細胞内光源として生物発光又は化学発光を利用するためにいくつかの努力がなされてきた。２０１３年に最初に開発された１つのそのような治療（Ｔｈｅｏｄｏｓｓｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１３，６３：１８１８－２１）は、ＢＬＡＤｅ（ＢｉｏＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ、生物発光活性化破壊）である。ＢＬＡＤｅは、ホタルルシフェラーゼ酵素による細胞内トランスフェクションと、それに続く光増感剤、及びルシフェラーゼの天然基質であるルシフェリンの投与に依存する。この方法の主な欠点は、ルシフェラーゼを産生するために細胞を遺伝子改変する必要があること、及び上記３つの因子とＡＴＰとの共局在を必要とすることである。また、この共局在は、脆弱な細胞内一重項酸素標的に非常に近接していなければならない。
【0012】
それ以来、所望のＰＤＴ効果を達成するために発光を利用するいくつかの試みがなされてきた（例えば、Ｈｓｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２０１３，３４（４）：１２０４－１２；及びＢａａｃｉｒｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ，２０１１，２６（６）：４１０－５を参照）。Ｌａｐｔｅｖ ｅｔ ａｌ．（Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，２００６，９５（２）：１８９－９６）は、細胞内発光によって細胞を死滅させるために、ルミノール（５－アミノ－２，３－ジヒドロ－１，４－フタラジンジオン）をトランスフェリン－ヘマトポルフィリンコンジュゲートと共に使用することを以前に提案している。それらは十分な概念実証（９５％細胞毒性）を提供したが、以下の欠点がこれらの方法に関連しており、それらを臨床において実行不可能にしている。（ｉ）非特異的細胞内標的化、（ｉｉ）Ｌａｐｔｅｖ ｅｔ ａｌ．による研究において、鉄源としてのトランスフェリンの必要性、及び（ｉｉｉ）細胞内ＲＯＳへの近接のための設計の欠如。
【0013】
直近では、国際公開第２０１９／２４３７５７号において、本発明者らは、ＧＢＭなどの腫瘍を治療するためのＰＤＴの方法におけるミトコンドリア標的化化学発光薬剤の使用を提案した。この初期の研究は、ルミノールを細胞ミトコンドリアに標的化し、ミトコンドリア膜を横断して効率的に輸送する基を結合させるためのルミノールの化学修飾を含む。ミトコンドリア呼吸は、ルミノール発光に必要な活性酸素種（ＲＯＳ）及び遷移金属触媒を提供する。更に、ＰｐＩＸは、ミトコンドリアで生合成されるため、効率的な活性化及び有害な一重項酸素生成のためにルミノールに近接している。このようにして、細胞の生存に直接の脅威をもたらさないミトコンドリアＲＯＳは、細胞内から致命的な細胞損傷を与える細胞毒性の高いＲＯＳに「アップグレード」される。標的部位で高レベルのＰｐＩＸが産生されるため、この作用は癌性病変に特異的である。したがって、化学的に修飾されたルミノール（「ミトコンドリア指向性ルミノール」）は、自己持続性の細胞内光源として使用され、標的細胞ミトコンドリアは、「光をスイッチオンする」ための電源として使用される。その結果、これは腫瘍細胞内の光増感剤（例えば、ＰｐＩＸ）の細胞毒性活性を活性化する。
【0014】
本発明者らは、以前の研究の発展において、標的腫瘍細胞の小胞体（endoplasmic reticulum、ＥＲ）に蓄積することができるルミノールなどの化学修飾化学発光薬剤の使用を含む、ＰＤＴの代替的な非侵襲的方法をここで提案する。
【0015】
腫瘍細胞殺傷において効率的であるが、国際公開第２０１９／２４３７５７号におけるミトコンドリア標的化化合物は、それらが毒性濃度に達する前に限定された治療濃度域を有し得る。これは、ミトコンドリアマトリックスにおける化合物のカチオン電荷の蓄積の結果としてのミトコンドリア膜電位の消失に起因する。しかしながら、ＥＲ標的化の場合、そのような効果がないので、耐性ははるかに高い。同時に、小胞体は、脆弱な細胞内ＰＤＴ標的の１つであり、ミトコンドリアとのその多数の接触部位に起因して、ミトコンドリア産生ＲＯＳへの近接性を提供する（Ｖａｎｃｅ，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，２０１４，１８４１：５９５－６０９）。更に、ＰＤＴにおける使用のために現在提案されている薬剤はまた、ＥＲ産生ＲＯＳ［ｄｏｉ：１０．１０８９／ａｒｓ．２０１４．５８５１］、特に、癌の進行及び生存にとって極めて重要な小胞体ストレス応答（unfolded protein response、ＵＰＲ）由来のＲＯＳ［ｄｏｉ：１０．１１１１／ｂｏｃ．２０１８０００５０］）を利用してもよい。したがって、これらの薬剤は、腫瘍細胞をより効率的に死滅させることができ、したがって、国際公開第２０１９／２４３７５７号に記載されている治療を上回って改善された治療を提供することができると予想される。
【0016】
従来のＰＤＴ技術を使用してアクセスすることができない内部腫瘍塊の治療に特に好適であるが、本明細書に記載されるＰＤＴの方法は、全ての腫瘍型及び細胞の過剰増殖を含む任意の状態の治療において使用される。
【発明の概要】
【0017】
本発明者は、光増感剤、又は光増感剤の前駆体（例えば、５－ＡＬＡ）と、小胞体（「ＥＲ」）を標的化することができる化学発光薬剤との併用を含むＰＤＴの方法に関する。小胞体に対する親和性は、「修飾」化学発光薬剤、具体的には、少なくとも１つの化学発光部分が少なくとも１つの小胞体標的化部分（本明細書では「ＥＲ標的化部分」とも称する）に結合している化学発光薬剤「コンジュゲート」の使用によって達成される。
【0018】
化学発光薬剤「コンジュゲート」の例は、化学的に修飾されたルミノール及びアクリジニウムエステルである。それらの化学修飾は、それらを小胞体に標的化する１つ以上の化学基の結合を含む。
【0019】
したがって、広義に言えば、本発明は、特に過剰増殖細胞及び／又は異常な細胞、例えば、癌細胞に対してＰＤＴを行うために化学発光薬剤がＥＲ標的化されるように、既知の化学発光薬剤の修飾を含む。この修飾の結果として、セルコスポリン、ヒペリシン及びＰｐＩＸ（ミトコンドリアからのその移行後）などの、標的部位に蓄積する光増感剤を活性化するために必要とされる発光は、「自動的」であり、多くの場合、より高いミトコンドリアＲＯＳ及びＥＲ ＲＯＳの形成を示す癌細胞において更により強い。
【0020】
例えば、５－ＡＬＡ由来ＰｐＩＸの形成は、癌性ＧＢＭ病変に非常に特異的である。この高い特異性は、侵襲的手法を必要としないＧＢＭ治療の可能性をもたらすが、ＥＲ標的化ルミノールなどのＥＲ標的化化学発光薬剤と５－ＡＬＡとの全身投与だけで、脳の全ＧＭＢ病変を根絶するのに十分である。ＧＢＭは、最初に発生した後、脳内で高度に移動し、様々な脳の場所で再表面化するため、これは特に重要である。ＧＢＭを治療するために使用される場合、本発明はまた、血液脳関門のＧＢＭ誘発性破壊を利用するため、修飾された化学発光薬剤（例えば、ルミノール又はアクリジニウムエステル）と光増感剤又はその前駆体（例えば、セルコスポリン又は５－ＡＬＡ）との両方が、脳のＧＭＢ病変に効率的に到達する。
【0021】
本発明では、ＰＤＴにおいて従来的に使用されるランプ又はレーザーなどの外部光源を必要とせずに、ＰＤＴが個々の腫瘍細胞に効果的に適用される（すなわち、ＰＤＴ効果は、集団病変ではなく、単一細胞レベルである）。ＰＤＴに対するこの治療アプローチにおいて、組織への光透過の深さは、もはや制限ではない。これは、光化学的であるにもかかわらず、２つの個々の非化学療法薬の投与を伴う、癌の代替的治療の基礎を確立する。したがって、その治療は、有害な副作用のリスクなしに複数回繰り返すことができる。これは、転移のリスクを最小にし、治療の治癒可能性を最大にする。
【0022】
本発明は更に、侵襲的手術、電離放射線又は非治癒的化学療法を必要とすることなく、位置及び侵襲性が高い性質のために現在は実質的に不治であるＧＢＭなどの内部癌の効果的な治療の必要性に対応する。そのような治療は、一次治療として、及び／又は繰り返される非侵襲的治療を通じて生涯にわたって疾患の進行を効果的に制御することができる光化学療法剤としてのいずれかであり得る。到達することができない癌の治療に対するこの手法は、過剰増殖細胞及び／又は異常な細胞を特徴とする他の疾患及び状態の治療、特に、浅い又は表面的なものを含む他の癌の治療にまで及ぶ。
【発明を実施するための形態】
【0023】
定義
本明細書で使用される場合、「化学発光薬剤」という用語は、細胞の小胞体（ＥＲ）内で起こる化学反応の結果として発光することができる様々な薬剤のいずれか、すなわち、ＥＲに局在すると「活性化」され得る任意の薬剤を包含することを意図している。より具体的には、化学発光薬剤は、細胞の小胞体に存在するか、又はそれに近接して（例えば、隣接細胞ミトコンドリア又は他の細胞内供給源において）生成される、反応性酸素種又は反応性窒素種などの物質との反応後に光を放出する薬剤である。そのような酸素種は、例えば、酸素ラジカル、酸素スーパーオキシドアニオン、ヒドロキシルラジカルなどの任意の活性酸素種（ＲＯＳ）、及び過酸化水素を含む。窒素種は、例えば、一酸化窒素、ペルオキシ亜硝酸、窒素酸化物などを含む。理解されるように、本発明で使用するための任意の化学発光薬剤は、生理学的に許容されるであろう。
本明細書で使用される場合、「化学発光薬剤」という用語は、細胞の小胞体（ＥＲ）内で起こる化学反応の結果として発光することができる様々な薬剤のいずれか、すなわち、ＥＲに局在すると「活性化」され得る任意の薬剤を包含することを意図している。より具体的には、化学発光薬剤は、細胞の小胞体に存在するか、又はそれに近接して（例えば、隣接細胞ミトコンドリア又は他の細胞内供給源において）生成される、反応性酸素種又は反応性窒素種などの物質との反応後に光を放出する薬剤である。そのような酸素種は、例えば、酸素ラジカル、酸素スーパーオキシドアニオン、ヒドロキシルラジカルなどの任意の活性酸素種（ＲＯＳ）、及び過酸化水素を含む。窒素種は、例えば、一酸化窒素、ペルオキシ亜硝酸、窒素酸化物などを含む。理解されるように、本発明で使用するための任意の化学発光薬剤は、生理学的に許容されるであろう。
【0024】
本明細書で使用される場合、「化学発光部分」という用語は、任意の化学発光薬剤、又は化学発光薬剤に由来する任意の部分、すなわちその誘導体を包含する。いずれの誘導体も、上記のように、親分子の発光特性を保持するべきである。これは同様に、インビボでの生理学的忍容性の要件を満たす必要がある。誘導体の例として、１つ以上の追加の官能基又は非官能基（例えば、置換基）を担持する化学発光薬剤が挙げられる。「誘導体」という用語は、化学発光薬剤の断片又は残基にも及ぶ。
【0025】
「小胞体標的化部分」及び「ＥＲ標的化部分」という用語は、本明細書において交換可能に使用され、小胞体を標的化することができる、したがって小胞体に蓄積することができる任意の生理学的に受容可能な薬剤又は部分を包含することが意図される。それはまた、親分子の小胞体標的化特性を保持するそのような薬剤の誘導体も包含する。「誘導体」という用語は、小胞体標的化薬剤の断片又は残基にまで及ぶ。
【0026】
本明細書で使用される場合、「光増感剤前駆体」という用語は、代謝的に光増感剤に変換され、したがって本質的にそれと同等である任意の化合物を包含することが意図される。
【0027】
本明細書で使用される「薬学的に許容される塩」という用語は、本明細書に記載の化合物のいずれかの任意の薬学的に許容される有機塩又は無機塩を指す。薬学的に許容される塩は、対イオンなどの１つ以上の追加の分子を含んでもよい。対イオンは、親化合物の電荷を安定させる任意の有機基又は無機基であり得る。化合物が塩基である場合、遊離塩基を有機酸又は無機酸と反応させることにより、好適な薬学的に許容される塩を調製することができる。化合物が酸である場合、遊離酸を有機塩基又は無機塩基と反応させることにより、好適な薬学的に許容される塩を調製することができる。
【0028】
「薬学的に許容される」という用語は、化合物又は組成物が、製剤の他の成分又は治療される患者（例えば、ヒト）と化学的及び／又は毒物学的に適合性があることを意味する。
【0029】
「医薬組成物」とは、医療目的で使用するのに好適な任意の形態の組成物を意味する。
【0030】
本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、ヒト又は非ヒト動物（例えば、非ヒト哺乳動物）に利益をもたらすことができる任意の治療的適応を含む。ヒト及び動物の両方の治療が本発明の範囲内であるが、主に、本発明はヒトの治療を目的としている。「治療」又は「治療法」という用語は、治癒的及び予防的な治療又は治療法を包含する。
【0031】
本明細書で使用される「アルキル」という用語は、一価の飽和、直鎖状又は分枝状の炭素鎖を指す。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉｓｏ－プロピル、ｎ－ブチル、ｉｓｏ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｉｓｏ－ペンチル、ｎｅｏ－ペンチル、ｎ－ヘキシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、好ましくは、１～６個の炭素原子、例えば、１～４個の炭素原子を含む。
【0032】
本明細書で使用される「アルコキシ」という用語は、－Ｏ－アルキル基を指し、アルキルは、本明細書に定義されるとおりである。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【0033】
本明細書で使用される「アリール」という用語は、芳香環系を指す。そのような環系は、単環式又は二環式であり得、少なくとも１つの不飽和芳香族環を含有し得る。これらが二環式環を含有する場合、これらは縮合され得る。好ましくは、そのような系は、６～２０個の炭素原子、例えば、６又は１０個の炭素原子のいずれかを含有する。そのような基の例としては、フェニル、１－ナフチル、及び２－ナフチルが挙げられる。好ましいアリール基は、フェニルである。特に明記しない限り、任意のアリール基は、ヒドロキシ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルコキシ、アミノ、シアノ、及びニトロ基、又はハロゲン原子（例えば、Ｆ、Ｃｌ若しくはＢｒ）から選択される１つ以上の置換基で置換されてもよい。２個以上の置換基が存在する場合、これらは同じであっても異なってもよい。
【0034】
「ハロゲン原子」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩを指す。
【0035】
本明細書で使用される「ハロアルキル」という用語は、アルキル基の水素原子のうちの少なくとも１つがハロゲン原子、好ましくはＦ、Ｃｌ、又はＢｒによって置き換えられる、本明細書に定義されるアルキル基を指す。そのような基の例としては、－ＣＨ２Ｆ、－ＣＨＦ２、－ＣＦ３、－ＣＣｌ３、－ＣＨＣｌ２、－ＣＨ２ＣＦ３などが挙げられる。
【0036】
本明細書で使用される「複素環」という用語は、飽和又は部分的に不飽和の４～６員（好ましくは５又は６員）の炭素環系を指し、少なくとも１つの環原子は、窒素、酸素、及び硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子は、炭素である。複素環構造は、炭素原子又は窒素原子を介して分子の残りの部分に連結され得る。特に明記しない限り、本明細書に記載の任意の複素環は、同一であっても異なってもよい１つ以上の基、例えば、ヒドロキシ、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルコキシ、アミノ、シアノ、若しくはニトロ基、又はハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ若しくはＢｒ）によって任意選択的に置換されてもよい。
【0037】
特に明記しない限り、全ての置換基は互いに独立している。
【0038】
下付き文字が整数０（すなわち、ゼロ）である場合、下付き文字が指す基が存在しないことが意図される。
【0039】
一態様では、本発明は、光線力学療法の方法における使用のための小胞体標的化化学発光薬剤を提供する。
【0040】
一実施形態では、本発明で使用するための小胞体標的化化学発光薬剤は、小胞体を選択的に標的とする少なくとも１つの小胞体標的化部分（「ＥＲ標的化部分」）に結合した又は別様に関連した少なくとも１つの化学発光部分を含む化学発光薬剤「コンジュゲート」である。このコンジュゲートが２つ以上の化学発光部分を含む場合、これらは同じであっても異なってもよい。しかしながら、これらは概して同一である。化学発光部分が２つ以上のＥＲ標的化部分に結合している場合、ＥＲ標的化部分は、同じであっても異なってもよいが、好ましくは同じである。一実施形態では、コンジュゲートは、単一のＥＲ標的化部分に結合した又は別様に関連した単一の化学発光部分を含む。
【0041】
化学発光部分（又は複数の部分）は、共有結合手段又は非共有結合手段を介してＥＲ標的化部分（又は複数の部分）に結合してもよい。それは、例えば、静電相互作用、ファンデルワールス力、及び／又は水素結合を介して結合してもよい。典型的には、化学発光部分（又は複数の部分）及びＥＲ標的化部分（又は複数の部分）は、例えば、１つ以上の共有結合を介して、互いに共有結合する。場合によっては、化学発光部分（又は複数の部分）は、連結基（又は「スペーサー」）を介してＥＲ標的化部分（又はそのそれぞれ）に共有結合してもよい。
【0042】
本発明で使用するための化学発光薬剤「コンジュゲート」は、以下の一般式（Ｉ）を有する化合物、又はその薬学的に許容される塩であってもよく、
【0043】
【化1】
各Ｌは、同じであっても異なってもよく、直接結合又はリンカーのいずれかであり、
各Ｂは、同じであっても異なってもよく、小胞体標的化部分を表し、
ｎは、１～３の整数、好ましくは１であり、
ｘは、１～３の整数、好ましくは１である。
【0044】
式（Ｉ）の一実施形態では、ｎ及びｘの両方は、１である。したがって、本発明で使用するための化学発光薬剤「コンジュゲート」は、式（ＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩であってもよく、
【0045】
【化2】
【0046】
本発明における使用に好適な化学発光薬剤は、当技術分野で既知であり、例えば、ルミノール、イソルミノール、ルシゲニン、アクリジニウムエステル、シュウ酸塩エステル、並びにそれらの既知の類似体及び誘導体が挙げられる。任意の既知の化学発光薬剤又はその誘導体も使用してもよい。本発明で使用するための化学発光部分は、これらの薬剤のいずれかに「由来」し得る。好適な誘導体は、１つ以上の追加の官能基若しくは非官能基（例えば、置換基）を含んでもよいか、又はこれらは、化学発光活性を保持するそのような薬剤の断片若しくは残基を含んでもよい。
【0047】
本発明における使用に好ましいのは、ルミノール、イソルミノール、及びアクリジニウムエステルに由来する化学発光部分である。そのような化合物は、１つ以上の追加の置換基、例えば、Ｃ１～６アルキル、Ｃ１～６アルコキシ、アミノ、シアノ、ニトロ及びアリール（例えば、フェニル）基、又はハロゲン原子によって置換されてもよい。例えば、ルミノール又はイソルミノールのフェニル環は、ハロゲン原子、Ｃ１～６アルキル及びフェニル基から選択される１つ以上（例えば、１つ又は２つ）の基によって置換されてもよい。
【0048】
理解されるように、共有結合又はリンカーを介してＥＲ標的化部分（又は複数の部分）に結合するために、化学発光部分は、典型的には、親化学発光薬剤の「誘導体」である。例えば、これは、リンカーへの又は直接ＥＲ標的化薬剤へのいずれかの共有結合の形成に続いて１つ以上の末端原子又は基を欠いている可能性があり、したがって、元の分子の「残基」と見なされ得る。例えば、ルミノールの場合、第一級アミン基は、リンカー又はＥＲ標的化部分のいずれかに対する結合点を形成してもよいため、単一の水素原子の損失（すなわち－ＮＨ２から－ＮＨ－へ）によって「誘導体化」される。反応してＥＲ標的化部分（又は複数の部分）と共有結合を形成してもよい官能基の導入を含む、他の形態の誘導体化を想定してもよい。任意の所与の化学発光薬剤に必要な「誘導体化」の特定の形態は、その構造に依存し、任意の熟練化学者によって容易に決定され得る。
【0049】
式（Ｉ）又は（ＩＩ）において、化学発光部分は、以下の構造（式中、＊は、リンカーＬへの、又は直接ＥＲ標的化部分への結合点（又は複数の点）を示す）から選択されてもよく、
【0050】
【化3】
Ｒ１は、水素又はＣ１～６アルキル、好ましくはＣ１～３アルキル（例えば、メチル）などのアルキル基であり、
各Ｒ２は、
－ Ｃ１～６アルキル、
－ Ｃ１～６アルコキシ、
－ －ＮＲ５Ｒ６（式中、Ｒ５Ｒ６は、Ｈ及びＣ１～６アルキルから、好ましくはＨ及びＣ１～３アルキル（例えば、－ＣＨ３）から独立して選択される）、
－任意選択的に置換されたアリール（例えば、任意選択的に置換されたフェニル）から独立して選択され、
ｎは、０～３の整数、好ましくは０、１又は２、例えば、０又は１であり、
ｍは、０～２の整数、例えば、０又は１であり、
Ｒは、水素又はＣ１～６アルキル、好ましくはＣ１～３アルキル（例えば、メチル）であり、
Ｘは、一価のアニオン、例えば、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＴｏｓ、ＣｌＯ４、ＮＯ３、ＰＦ６、又はＢＦ４アニオンであり、
Ｙは、任意選択的に置換されたアリール（又はアリーレン）基、例えば、任意選択的に置換されたフェニル（又はフェニレン）である。
【0051】
一実施形態では、Ｒ１は、水素又はメチルである。好ましくは、Ｒ１は、水素である。
【0052】
一実施形態では、各Ｒ２は、Ｃ１～６アルキル及び非置換フェニルから独立して選択される。例えば、各Ｒ２は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉｓｏ－プロピル、ｎ－ブチル及びフェニルから独立して選択されてもよい。
【0053】
Ｙが置換アリール又はアリーレン基である場合、好適な置換基の例としては、１つ以上のハロゲン原子（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、Ｃ１～６アルキル（例えば、ｔｅｒｔ．ブチル、プロピル、エチル又はメチル）、－ＣＯＯＣ１～６アルキル（例えば、－ＣＯＯＣＨ３）、ニトロ又はシアノ基が挙げられる。
【0054】
ルミノール又はイソルミノールの芳香環上の異なる置換パターンは、当業者によって選択されてもよく、一実施形態では、置換パターンは、化学発光を増強するように選択されてもよい。一実施形態では、本発明における使用のための化学発光部分は、ルミノール又はその置換誘導体であり、例えば、それは、以下の構造（式中、＊は、リンカーＬへの、又は直接ＥＲ標的化部分への結合点を示す）を有する部分であってもよく、
【0055】
【化4】
Ｒ１７は、水素、Ｃ１～６アルキル（好ましくはＣ１～４アルキル、より好ましくはＣ１～３アルキル、例えば、メチル）、又は任意選択的に置換されたアリール（例えば、任意選択的に置換されたフェニル）であり、
Ｒ１８は、水素又はＣ１～６アルキル（好ましくはＣ１～４アルキル、より好ましくはＣ１～３アルキル、例えば、メチル）であり、
Ｒ１９は、水素又はＣ１～６アルキル（好ましくはＣ１～４アルキル、より好ましくはＣ１～３アルキル、例えば、メチル）である。
【0056】
一実施形態では、Ｒ１７及びＲ１８は、両方とも水素であり、Ｒ１９は、水素以外であり、例えば、Ｒ１９は、Ｃ１～３アルキル、例えば、メチルである。
【0057】
別の実施形態では、Ｒ１８は、水素であり、Ｒ１７及びＲ１９のそれぞれは、水素以外であり、例えば、Ｒ１７は、任意選択的に置換されたフェニルであり、Ｒ１９は、Ｃ１～６アルキル（例えば、メチル）である。
【0058】
本発明における使用のための化学発光部分の非限定的な例は、以下（式中、＊は、リンカーＬへの、又は直接ＥＲ標的化部分への結合点を示す）を含む。
【0059】
【化5】
【0060】
小胞体を選択的に標的化することができることが知られている任意の薬剤を使用して、本明細書に記載のコンジュゲート中の「ＥＲ標的化部分」を提供してもよい。そのような薬剤は、典型的には、それらをＥＲ膜環境への分配に適合させるために本質的に疎水性である。本発明での使用に特に好適なのは、小胞体に局在化する能力に起因して、スルホンアミド剤である。このような薬剤は、１つ以上のスルホンアミド基を有する。典型的には、これらは１個のスルホンアミド基を含む。
【0061】
理解されるように、共有結合又はリンカーを介して化学発光部分（又は複数の化学発光部分）に結合するために、ＥＲ標的化部分は、場合によっては、親薬剤の「誘導体」であってもよい。例えば、これは、リンカーへの又は直接化学発光薬剤（又は複数の薬剤）へのいずれかの共有結合の形成に続いて１つ以上の末端原子又は基を欠いている可能性があり、したがって元の分子の「残基」と見なされ得る。任意の所与のＥＲ標的化部分に必要な「誘導体化」の特定の形態は、その構造に依存し、任意の熟練化学者によって容易に決定され得る。
【0062】
本発明における使用のためのスルホンアミドＥＲ標的化部分は、以下（式中、＊は、リンカーＬへの、又は直接化学発光部分への結合点を示す）を含み、
【0063】
【化6】
Ｒ１４は、Ｃ１～６アルキル又は任意選択的に置換されたアリール基であり、
Ｒ１５は、水素又はＣ１～６アルキルであり、
【0064】
【化7】
【0065】
一実施形態では、Ｒ１４は、Ｃ１～６アルキル、好ましくはＣ１～３アルキル、例えば、－ＣＨ３である。
【0066】
一実施形態では、Ｒ１４は、任意選択的に置換されたアリール基である。例えば、Ｒ１４は、任意選択的に置換されたフェニル又はナフチルであってもよい。
【0067】
Ｒ１４が置換される場合、Ｃ１～３アルキル（例えば、メチル）、Ｃ１～３アルコキシ（例えば、メトキシ）、Ｃ１～３ハロアルキル（例えば、－ＣＦ３）、－ＯＣ１～３ハロアルキル（例えば、－ＯＣＦ３）、シアノ、ニトロ、－ＮＲ’２（式中、各Ｒ’は、独立して、Ｈ又はＣ１～３アルキルである）、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ又はＢｒ）、－ＣＯＲ”（式中、Ｒ”は、Ｈ又はＣ１～３アルキルである）、及び－ＣＯＯＲ”（式中、Ｒ”は、Ｈ又はＣ１～３アルキルである）からなる群から選択される１つ以上の置換基によって置換されてもよい。好ましい置換基は、Ｃ１～３アルキル（例えば、メチル）である。典型的には、１個又は２個の置換基、例えば、単一の置換基が存在してもよい。単一の置換基がフェニル環上に存在する場合、その置換基は、オルト、メタ又はパラ位にあってもよい。一実施形態では、置換基は、パラ位に存在する。例えば、メチル基は、フェニル環のパラ位に存在してもよい。
【0068】
一実施形態では、Ｒ１４は、非置換アリール基、例えば、非置換フェニル又はナフチルである。
【0069】
一実施形態では、Ｒ１５は、水素又は－ＣＨ３、例えば、水素である。
【0070】
一実施形態では、
【0071】
【化8】
【0072】
【化9】
Ｒ１４は、本明細書で定義されるとおりであり、
＊は、リンカーＬへの、又は直接化学発光部分への結合点を示す。
【0073】
一実施形態では、ＥＲ標的化剤は、以下の構造のうちの１つを有する基であり、
【0074】
【化10】
Ｒ１５は、本明細書で定義されるとおりであり、
各Ｒ１６は、独立して、Ｃ１～３アルキル（例えば、メチル）、Ｃ１～３アルコキシ（例えば、メトキシ）又はハロゲン原子（例えば、Ｃｌ若しくはＢｒ）を表し、
ｕは、０～５の整数、好ましくは１～３、例えば、１であり、
＊は、リンカーＬへの、又は直接化学発光部分への結合点を示す。
【0075】
本発明における使用のためのＥＲ標的化部分の非限定的な例は、以下（式中、＊は、リンカーＬへの、又は直接化学発光部分への結合点を示す）を含む。
【0076】
【化11】
【0077】
上記の一般式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、リンカーＬの正確な性質は、これが化学発光部分をＥＲ標的化部分（又は複数の部分）に連結するという目的の機能を果たし、したがって、化学発光部分の小胞体への標的化された送達を可能にする限り、本発明の性能にとって重要ではないと考えられる。リンカーは、剛性又は可撓性であり得、所望の標的部位においてインビボで切断可能であり得る（例えば、光切断可能であり得る）。一般的に、それは有機基を含む。
【0078】
連結基Ｌは、本質的に親水性又は疎水性であり得る。それは分岐（樹状を含む）鎖又は直鎖のいずれかであってもよいが、好ましくは直鎖である。連結基が分岐している場合、連結基は、例えば、２つ以上のＥＲ標的化部分を担持してもよい。連結基は、脂肪族及び／又は芳香族であってもよく、１つ以上のシクロアルキル環、複素環、アリール環、又はヘテロアリール環を含んでもよい。したがって、連結基は、本質的に脂肪族、（多）環式及び／又は（多環）芳香族であってもよい。
【0079】
リンカーの鎖長は異なってもよいが、一般に、これは、１～２０個の原子（例えば、１～２０個の炭素原子）、好ましくは２～１５個、例えば、２～１２個の原子を含む骨格を含み得る。場合によっては、リンカーの長さは、ＥＲ標的化部分に対するコンジュゲートの化学発光部分の正確な位置決めを調整するために変化させてもよい。
【0080】
リンカーＬは、例えば、Ｃ１～３アルキル、－Ｏ（Ｃ１～３）アルキル、－ＯＨ、シクロアルキル基及びアリール基から選択される１つ以上の基によって任意選択的に置換されたアルキレン鎖（好ましくはＣ１～１５アルキレン、例えば、Ｃ２～１１アルキレン）を含んでもよく、アルキレン鎖の１つ以上の－ＣＨ２－基は、－Ｏ－、－ＣＯ－、－ＮＲ－（式中、Ｒは、Ｈ又はＣ１～６アルキル、好ましくはＣ１～３アルキル、例えば、メチルである）、シクロアルキル基、複素環基、アリール基及びヘテロアリール基から独立して選択される基によって置き換えられてもよい。一実施形態では、アルキレン鎖の－ＣＨ２－基は、このような基で置き換えられてもよい。例えば、リンカーＬは、基－ＣＯ－であってもよい。
【0081】
好適なリンカー基は、当技術分野の当業者によって容易に決定され得る。好適なリンカーの例としては、任意選択的に置換されたアルキレン基、好ましくは非置換の直鎖アルキレン基、例えば、－Ｃ３Ｈ６－、－Ｃ４Ｈ８－、－Ｃ６Ｈ１２－、－Ｃ８Ｈ１６－、－Ｃ１０Ｈ２０－、及び－Ｃ１１Ｈ２２－が挙げられる。一実施形態では、－Ｃ３Ｈ６－及び－Ｃ４Ｈ８－などの短鎖アルキレン基が好ましい。
【0082】
アルキレン鎖の１つ以上の－ＣＨ２－基がある基によって置換されている場合、これらは、－Ｏ－若しくは－ＣＯ－基、又は複素環（例えば、ピペラジニレン基などの飽和複素環）、又はアリール環（例えば、フェニレン）のいずれかによって置き換えられてもよい。１つ以上の－ＣＯ－が存在するそのようなリンカーの例としては、－ＣＯ－、－ＣＯ－ＣＨ２－、－ＣＯ－Ｃ３Ｈ６、－ＣＯ－Ｃ５Ｈ１０－、－ＣＯ－Ｃ６Ｈ１２－、及び－ＣＯ－Ｃ１０Ｈ２０－が挙げられる。２つ以上の－Ｏ－基が存在する好適なリンカーの他の例は、オリゴ又はポリエチレングリコール基、好ましくは１～４個のエチレンオキシド単位、例えば、２又は４個のエチレンオキシド単位を含むポリエチレングリコール基を含む。
【0083】
特定の実施形態では、本発明で使用するための化学発光薬剤コンジュゲートは、式（ＩＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩であり、
【0084】
【化12】
Ｂ１は、本明細書に記載の任意の小胞体標的化部分であり、
Ｒ３は、水素、又はＣ１～３アルキル（例えば、メチル）などのアルキル基であり、
各Ｒ４は、Ｃ１～６アルキル、及び－ＮＲ５Ｒ６から独立して選択され、
Ｒ５及びＲ６は、Ｈ及びＣ１～６アルキルから、好ましくはＨ及びＣ１～３アルキル（例えば、－ＣＨ３）から独立して選択され、
ｐは、０～３の整数、好ましくは０、１又は２、例えば、０又は１である。
【0085】
式（ＩＩＩ）の好ましい化合物は、式（ＩＩＩａ）及び（ＩＩＩｂ）の以下の化合物を含み、
【0086】
【化13】
【0087】
式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）及び（ＩＩＩｂ）において、Ｌ１は、好ましくは以下のうちの１つから選択され、
【0088】
【化14】
ｂは、１～４の整数、例えば、２である。
【0089】
式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）及び（ＩＩＩｂ）の一実施形態では、Ｌ１は、基
【0090】
【化15】
【0091】
式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の一実施形態では、Ｂ１は、以下の基のうちの１つであってもよく、
【0092】
【化16】
Ｒ１４、Ｒ１５及び
【0093】
【化17】
【0094】
特定の実施形態では、本発明で使用するための化学発光薬剤コンジュゲートは、式（ＩＶ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩であり、
【0095】
【化18】
Ｂ２は、本明細書に記載の任意の小胞体標的化部分であり、
各Ｒ６は、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、及びＣ１～６アルキル（例えば、ｔｅｒｔ－ブチル）から独立して選択され、
ｑは、０～４の整数、好ましくは０又は２であり、
Ｚは、一価のアニオン、例えば、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、又はＣＦ３ＯＳＯ２アニオンである。
【0096】
式（ＩＶ）の一実施形態では、Ｌ２は、以下の基のうちの１つを表し、
【0097】
【化19】
【0098】
式（ＩＶ）の一実施形態では、Ｌ２は、基
【0099】
【化20】
【0100】
式（ＩＶ）の一実施形態では、Ｂ２は、以下の基のうちの１つであってもよく、
【0101】
【化21】
Ｒ１４、Ｒ１５及び
【0102】
【化22】
【0103】
特定の実施形態では、本発明で使用するための化学発光薬剤コンジュゲートは、式（Ｖ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩であり、
【0104】
【化23】
Ｂ３は、本明細書に記載の任意の小胞体標的化部分であり、
各Ｒ７は、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、－ＣＯ２Ｒ８（式中、Ｒ８は、水素又はＣ１～６アルキルである）、シアノ、及びＣ１～６アルキル（例えば、ｔｅｒｔ－Ｂｕ）から独立して選択され、
ｒは、０～５の整数、好ましくは０又は３であり、
Ｚは、一価のアニオン、例えば、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、又はＣＦ３ＯＳＯ２アニオンである。
【0105】
式（Ｖ）において、Ｌ３は、好ましくはＣ１～１０アルキレン、例えば、Ｃ１～６アルキレンである。
【0106】
式（Ｖ）の一実施形態では、Ｂ３は、以下の基のうちの１つであってもよく、
【0107】
【化24】
Ｒ１４、Ｒ１５及び
【0108】
【化25】
【0109】
特定の実施形態では、本発明で使用するための化学発光薬剤コンジュゲートは、式（ＶＩａ）、（ＶＩｂ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩であり、
【0110】
【化26】
Ａ１は、本明細書に記載の任意の化学発光部分である。
【0111】
式（ＶＩ）、（ＶＩａ）又は（ＶＩｂ）において、Ｌ４は、以下から選択されてもよく、
【0112】
【化27】
【0113】
式（ＶＩ）、（ＶＩａ）又は（ＶＩｂ）の一実施形態では、Ｌ４は、基
【0114】
【化28】
【0115】
式（ＶＩ）、（ＶＩａ）又は（ＶＩｂ）の一実施形態では、Ａ１は、以下のいずれかから選択され、
【0116】
【化29】
各Ｒ４は、Ｃ１～６アルキル、及び－ＮＲ５Ｒ６から独立して選択され、
Ｒ５及びＲ６は、Ｈ及びＣ１～６アルキルから、好ましくはＨ及びＣ１～３アルキル（例えば、－ＣＨ３）から独立して選択され、
ｐは、０～３の整数、好ましくは０、１又は２、例えば、０又は１であり、
Ｚは、一価のアニオン、例えば、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、又はＣＦ３ＯＳＯ２アニオンであり、
各Ｒ９は、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、及びＣ１～６アルキル（例えば、ｔｅｒｔ－Ｂｕ）から独立して選択され、
ｓは、０～４の整数、好ましくは０、２、又は３である。
【0117】
特定の実施形態では、本発明で使用するための化学発光薬剤コンジュゲートは、式（ＶＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩であり、
【0118】
【化30】
Ｂ４は、本明細書に記載の任意の小胞体標的化部分であり、
各Ｒ１０は、Ｃ１～６アルキル（例えば、メチル）、及び－ＮＲ１１Ｒ１２から独立して選択され、
Ｒ１１及びＲ１２は、Ｈ及びＣ１～６アルキルから、好ましくはＨ及びＣ１～３アルキル（例えば、－ＣＨ３）から独立して選択され、
ｔは、０～３の整数、好ましくは１又は２である。
【0119】
式（ＶＩＩ）の好ましい化合物は、以下の式（ＶＩＩａ）の化合物を含み、
【0120】
【化31】
【0121】
式（ＶＩＩ）及び（ＶＩＩａ）において、Ｌ５は、好ましくはＣ１～１１アルキレン、より好ましくはＣ２～８アルキレン、例えば、プロピレンである。
【0122】
本明細書に記載の化学発光薬剤コンジュゲートは、当技術分野で既知の方法及び手順を使用して調製することができる。好適な方法は、国際公開第２０１９／２４３７５７号に記載された方法を含み、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明における使用のためのルミノール誘導体の調製のための方法は、Ｍｉｋｒｏｕｌｉｓ ｅｔ ａｌ．によってＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０２１．ａｃｓ．ｊｏｃ．１ｃ００８９０を参照）に記載された方法を含み、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0123】
化学発光薬剤を小胞体標的化部分に共有結合させるために使用され得る方法は、既知のカップリング技術を含む。使用される正確な方法は、化学発光薬剤、小胞体標的化部分、及びリンカー（存在する場合）の正確な性質、特に結合の形成に関与するペンダント官能基の性質に依存する。ペンダント官能基が結合パートナー上に既に存在する場合、これらは様々な部分を連結する際に使用され得る。必要に応じて、例えば、成分を結合するために使用され得る反応性官能基を含めるように、コンジュゲートの１つ以上の成分（すなわち、化学発光部分、リンカー、及びＥＲ標的化部分）を官能化してもよい。好適な反応性基としては、カルボン酸、ヒドロキシ、チオール、カルボニル、酸ハロゲン化物、第一級及び第二級アミン、ハロゲン化アリール及び擬ハロゲン化アリール、ハロゲン化アルキル及び擬ハロゲン化アルキル、ハロゲン化アルケニル及び擬ハロゲン化アルケニル、末端アルキン、クリック可能な部分などが挙げられる。そのような官能基を導入するための方法は、当技術分野で周知である。
【0124】
化学発光薬剤を１つ以上のＥＲ標的化部分に共有結合させるために使用され得る方法の例は以下を含むが、これらに限定されない：アミド結合形成、エーテル結合形成、エステル結合形成、チオエステル結合形成、クロスカップリング反応、オレフィンメタセシス反応、芳香族求電子置換、クリック化学、求核置換反応など。
【0125】
本明細書に記載のコンジュゲートの調製において出発物質として使用するための化合物は、文献から既知であるか、又は市販され得る。代替的に、これらは、文献から既知の方法によって容易に得ることができる。本発明に従って使用するための化合物を調製する方法のより詳細な説明は、実施例に見出される。
【0126】
本明細書に記載の化学発光薬剤コンジュゲートは、それ自体が新規であり、本発明の更なる態様を形成する。例えば、本明細書に記載の技術のいずれかを使用して、１つ以上の化学発光薬剤を１つ以上のＥＲ標的化部分に連結する工程を含む化学発光薬剤コンジュゲートの調製方法は、本発明の更なる態様を形成する。
【0127】
ＰＤＴで使用するために、本明細書に記載のＥＲ標的化化学発光薬剤は、光増感剤又は光増感剤の前駆体と組み合わせて使用される。本発明の鍵は、化学発光薬剤が光増感剤を「活性化」できるようにするために、これらが細胞ＥＲ内で互いに近接しているべきであるということである。これらの薬剤は、ＰＤＴの方法において、患者に別々に、同時に、又は連続して投与するために個別に提供され得る。あるいは、これらは、ＥＲ標的化化学発光薬剤及び光増感剤（又は前駆体）の両方が存在する単一の製剤として提供され得る。そのような製剤は、本発明の一部を形成する。
【0128】
本発明で使用するために、任意の光増感剤（又は光増感剤前駆体）は、そのインビボ投与後に標的細胞の小胞体に蓄積して（又はＥＲに移行して）、これが化学発光化合物に近接することを確実にすることができなければならない。例えば、これはＥＲに局在する光増感剤又はその前駆体であり得る。
【0129】
小胞体を標的とすることができる光増感剤及び前駆体の例として、５－ＡＬＡ及びその誘導体（ミトコンドリアからの移行後）、ｍＴＨＰＣ、テモポルフィン、クロリンｅ６、フタロシアニン、アントラキノン及びその誘導体（例えば、ヒペリシン、ヒポクレリン［Ａ、Ｂ］、セルコスポリン、カルホスチン、エルシノクロム［Ａ、Ｂ、Ｃ］）、及びそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。他のＥＲに蓄積する光増感剤は、当技術分野で既知であり、これらもまた本発明で使用してもよい。
【0130】
他の既知の光増感剤及び前駆体は、所望の標的化特性を付与するための適切な修飾を条件として、本発明において使用され得る。例えば、これらは、ＥＲ標的化能力を有する好適なナノ担体内にカプセル化されてもよい。これらの実施形態では、より広い範囲の光増感剤を使用してもよく、ＰＤＴにおける使用に好適な任意の既知の光増感剤（又は前駆体）が使用され得ると想定される。好適な薬剤の範囲は、当技術分野で既知であり、例えば、５－アミノレブリン酸（５－ＡＬＡ）及び５－ＡＬＡの誘導体（プロトポルフィリンＩＸの産生をもたらす）、ポルフィリン、任意選択的にスルホン化され得る金属化フタロシアニン（例えば、ＡｌＰｃＳ）などのフタロシアニン、例えば、ＡｌＰｃＳ２若しくはＡｌＰｃＳ２ａなどのジ－スルホン化アルミニウムフタロシアニン、又はアルミニウムフタロシアニンテトラ－スルホネート（Ａ１ＰｃＳ４）、スルホン化テトラフェニルポルフィリン（例えば、ＴＰＰＳ２ａ、ＴＰＰＳ４、ＴＰＰＳ１及びＴＰＰＳ２ｏ）、テトラ（ｍ－ヒドロキシフェニル）クロリン（ｍ－ＴＨＰＣ）（例えば、商品名Ｆｏｓｃａｎで市販されているテモポルフィン）などのクロリン、バクテリオクロリン及びケトクロリンを含むクロリン誘導体、モノ－Ｌ－アスパルチルクロリンｅ６（ＮＰｅ６）又はクロリンｅ６、ヘマトポルフィリン及びベンゾポルフィリンを含む天然ポルフィリン及び合成ポルフィリン、アントラキノン及びその誘導体（例えば、ヒペリシン、ヒポクレリン［Ａ、Ｂ］、セルコスポリン、カルホスチン、エルシノクロム［Ａ、Ｂ、Ｃ］）が挙げられる。
【0131】
これらの光増感剤（又は前駆体）のいずれかの薬学的に許容される塩も使用してもよい。そのような塩は、薬学的に許容される有機又は無機の酸又は塩基との塩を含む。
【0132】
本発明で使用されてもよい５－ＡＬＡの誘導体は、インビボでＰｐＩＸを形成することができる５－ＡＬＡの任意の誘導体を含む。典型的には、そのような誘導体は、ヘムの生合成経路におけるＰｐＩＸの前駆体であり、したがって、投与後に標的部位でＰｐＩＸを産生することができる。ＰｐＩＸの好適な前駆体には、５－ＡＬＡエステルなどの５－ＡＬＡプロドラッグが挙げられる。
【0133】
以下は、本発明で使用するためのとりわけ好ましい光増感剤及び前駆体である：５－ＡＬＡ、ｍＴＨＰＣ、テモポルフィン、クロリンｅ６、スルホン化アルミニウムフタロシアニン、アントラキノン及びそれらの誘導体（例えば、ヒペリシン、ヒポクレリン［Ａ、Ｂ］、セルコスポリン、カルホスチン、エルシノクロム［Ａ、Ｂ、Ｃ］）、及びそれらの薬学的に許容される塩。本発明における使用に特に好ましいのは、セルコスポリン、５－ＡＬＡ及びその薬学的に許容される誘導体（例えば、薬学的に許容される塩、又はメチルエステル若しくはヘキシルエステル）である。
【0134】
化学発光部分の特定の選択は、治療される腫瘍の性質を含む様々な要因に依存するが、当技術分野の当業者は容易に選択することができる。理解されるように、化学発光薬剤の選択はまた、それが放出する光の波長が、直接光吸収又はエネルギー移動機構のいずれかによる光増感剤の光活性化に好適であるべきであるため、ＰＤＴ治療で使用される光増感剤にも依存する。
【0135】
好適な化学発光薬剤と光増感剤の「ペア」の例は、当業者によって容易に決定され得る。以下は、好適な非限定的な例として提供される。光増感剤が（例えば、５－ＡＬＡの投与後にインビボで生成される）ＰｐＩＸである場合、ルミノール又はイソルミノールを化学発光薬剤として使用してもよい。光増感剤ヒペリシンが、化学発光薬剤ルシゲニンとの使用に特に好適であるのは、これらの部分が、特に金属キレート剤ＤＴＰＡ又はＥＤＴＡなどの結合剤の存在下で、非常に効率的な分子内エネルギー移動のためのπスタックを形成できるためである。ルミノールとｍＴＨＰＣは、非常に効率的なエネルギー移動ペアである。他の効率的なエネルギー移動ペアとしては、ルミノール－エリスロシンＢ、ルミノール－ヒポクレリン、ルミノール－セルコスポリン、ルミノール－カルホスチン、ルミノール－エルシノクロムアクリジンエステル－ヒポクレリン、ルシゲニン－ヒポクレリン、アクリジンエステル－セルコスポリン、ルシゲニン－セルコスポリン、アクリジンエステル－ヒペリシン、及びルシゲニン－ヒペリシンが挙げられる。ヘマトポルフィリン誘導体（haematoporphyrin derivative、ＨＰＤ）又はスルホン化アルミニウムフタロシアニンは、ルミノール又はルシゲニンのいずれかとともに使用してもよい。しかしながら、これらは潜在的な機能的ペアの単なる示唆的な例であり、他のものが当業者によって容易に決定され得る。
【0136】
本明細書に記載のＥＲ標的化化学発光薬剤は、光線力学療法の方法における使用を意図しており、光線力学療法に応答する体内の細胞又は組織の障害又は異常の治療に使用するのに好適である。そのような方法は、本明細書に記載の光増感剤又は光増感剤の前駆体の同時の、別々の、又は連続した使用を伴う。
【0137】
一般に、代謝的に活性な細胞は光線力学的治療に応答する。代謝的に活性な細胞の例は、細胞数の増加／細胞増殖の増加、細胞の異常な成熟及び分化、又は細胞の異常な増殖などの異常な成長を経験する細胞である。そのような成長パターンを特徴とする任意の状態は、本明細書に記載のＰＤＴ法に従って治療することができる。
【0138】
治療され得る障害又は異常としては、癌性増殖又は腫瘍、及びそれらの転移などの悪性癌状態及び前悪性癌状態、肉腫及び癌腫などの腫瘍、特に固形腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。本発明は、腫瘍、特に皮膚の表面下に位置する腫瘍、すなわち内部癌又は深部癌の治療に特に好適である。
【0139】
本発明によるＰＤＴは、２つの方法で適用してもよい。（ｉ）従来のＰＤＴにおけるような外部光源を必要としない、悪性状態又は前悪性状態（例えば、神経膠腫）のための処置として、又は（ｉｉ）再発又は疾患播種性のいずれかをもたらし得る、後に残された任意の活性新生物病巣を抑制するための反復可能で補助的な、術後の光化学治療として。治療は、反復治療セッションを通して生涯にわたって状態（例えば、脳癌）を管理及び抑制するために効果的に使用してもよい。原発性疾患の潜在性転移の治療も、事前の診断を必要とせずに実施され得る。
【0140】
本発明を使用して治療され得る腫瘍の例は、骨原性肉腫及び軟部組織肉腫を含む肉腫、癌腫、例えば、乳房、肺、大脳、膀胱、甲状腺、前立腺、結腸、直腸、膵臓、胃、肝臓、子宮、肝臓、腎臓、前立腺、子宮頸部及び卵巣の癌腫、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、神経芽細胞腫、黒色腫、骨髄腫、ウィルムス腫瘍、急性リンパ芽球性白血病及び急性骨髄芽球性白血病を含む白血病、星状細胞腫、神経膠腫及び網膜芽細胞腫、中皮腫である。しかしながら、本発明は、非侵襲的に到達することが困難である深部にある癌性病変の治療において特定の価値を見出す。神経膠腫（例えば、ＧＭＢ）の治療は、本発明の好ましい態様を形成する。
【0141】
代謝的に活性な細胞の他の例は、炎症を起こした細胞である。したがって、関節リウマチなどの炎症性疾患もまた、本発明によるＰＤＴ法を使用して治療することができる。
【0142】
本明細書に記載のＰＤＴ法のいずれかで使用するために、ＥＲ標的化化学発光薬剤は、一般に、少なくとも１つの薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物として提供される。そのような組成物は、本発明の更なる態様を形成する。これらはまた、選択された光増感剤（又は前駆体）を含み得るが、ほとんどの場合、光増感剤（又はその前駆体）は、患者への別個の投与のために異なる製剤として提供されることが想定される。
【0143】
本明細書に記載の医薬組成物は、当技術分野で周知の技術を使用して製剤化することができる。投与経路は、目的とする用途、特に治療される細胞又は組織の位置に依存する。典型的には、これらは全身投与され、したがって、例えば、皮内、皮下、腹腔内、静脈内若しくは腫瘍内注射によって、又は点滴による注入によって、非経口投与に適合した形態で提供され得る。好適な剤形には、コンジュゲート及び／又は光増感剤（又はその前駆体）を１つ以上の不活性担体又は賦形剤とともに含む懸濁液及び溶液が挙げられる。好適な担体には、生理食塩水、滅菌水、リン酸緩衝生理食塩水及びそれらの混合物が挙げられる。好ましくは、組成物は、水又は生理食塩水、例えば、リン酸緩衝生理食塩水中の、水性懸濁液又は水溶液の形態で使用される。
【0144】
組成物は、乳化剤、懸濁剤、分散剤、粘度調整剤、可溶化剤、安定剤、緩衝剤、保存剤などの他の薬剤を更に含んでもよい。組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌され得る。
【0145】
一実施形態では、ＥＲ標的化化学発光薬剤は、静脈内又は腫瘍内注射に好適な水又は生理食塩水（又は任意の他の薬学的に関連する生体適合性ビヒクル）中の溶液の形態で提供される。これは、単回投与又は反復投与のいずれかで投与することができる。
【0146】
一実施形態では、化学発光薬剤コンジュゲートは、徐放性製剤の形態で投与することができる。好適な遅延放出型製剤は、当技術分野で既知であり、インビボで薬剤を連続的に徐放することができる任意の製剤を含む。好適な遅延放出型製剤の一例は、インビボでの持続放出を提供する注射可能なインプラントである。そのようなインプラントは、活性化合物のナノ粒子を含む生体適合性ポリマー及び生分解性ポリマーに基づくインサイチュ形成インプラントであり得る。これらは、化学発光薬剤の持続的な送達を提供して長期の発光を保証し、それにより、治療の最適化された治療効果を達成する。
【0147】
別の態様では、化学発光コンジュゲートは、生理学的温度で（すなわち、いったん体に送達されると）サーモゲルになる熱応答性製剤の形態で提供され得る。これらは、最大１５時間、例えば、１０～１５時間の期間にわたってそれらの負荷を最適に放出するように製剤化することができる。温度応答性ポリマーの使用により、皮下注射に好適な、体温に応答してインサイチュ相転移を起こしてゲル化する、低粘度溶液の製剤化が可能になる。ゲルネットワークの熱硬化特性を最適化するために、様々なポリマー及びそのコポリマーを使用することができる。そのようなポリマー材料は、当技術分野で既知であり、かつ使用されており、例えば、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、アルギン酸塩／ヒアルロン酸、ポリ（Ｎ－イソプロピルアクリルアミド）、及びポロキサマーが挙げられる。
【0148】
化学発光コンジュゲートを含有するナノ粒子及び／又はマイクロ粒子も、長期間、例えば、１０～１５時間にわたって活性物質の制御された連続的な放出をもたらすために提供され得る。そのような担体の例として、（ｉ）ミセル担体、（ｉｉ）リポソーム、（ｉｉｉ）デンドリマー又はポリマーナノ担体、及び（ｉｖ）固体脂質ナノ粒子が挙げられる。任意のそのような粒子は、インサイチュで生成されるゲルネットワークにおいて活性物質を放出するためのリザーバを形成するように、本明細書に記載の熱応答性製剤に含まれ得る。
【0149】
本明細書に記載の組成物は、全身的に（例えば、経口的又は非経口的に）投与することができるか、あるいは、これらは、患部又はその近くで局所的に（例えば、局部的に）適用することができる。投与経路は、治療される疾患の重症度、性質、及び場所、並びに使用される光増感剤（又は前駆体）に依存する。全身投与することができる組成物には、プレーンな又はコーティングされた錠剤、カプセル、懸濁液及び溶液が挙げられる。局所的に（例えば、局部的に）投与することができる組成物には、ゲル、クリーム、軟膏、スプレー、ローション、及び当技術分野の他の従来の剤形のいずれかが挙げられる。クリーム、軟膏及びゲルは、好適な増粘剤及び／又はゲル化剤を添加した水性又は油性基剤とともに製剤化することができる。
【0150】
典型的には、本明細書に記載の方法は、例えば、静脈内注射による、光増感剤を含む有効量の組成物の投与という最初の工程を含み得る。次に、光増感剤（又は前駆体）は、体の所望の標的領域に分布され、例えば、注射及び／又は点滴のいずれかによって静脈内に、ＥＲ標的化化学発光薬剤を投与する前に、活性光増感剤、例えば、ＰｐＩＸのインサイチュ生成を可能にする。５－ＡＬＡ投与後の細胞におけるＰｐＩＸ生成の時間プロファイルは、数時間であり得（典型的には、これは投与後２～１０時間の間にピークに達する場合がある）、したがってＥＲ標的化化学発光薬剤の送達を遅延させることが望ましい。これは、その投与を遅延させることによって、又は本明細書に記載される遅延放出製剤によって達成することができる。光増感剤の投与は、典型的には、ＥＲ標的化化学発光薬剤の投与の前に行われることが想定されるが、それにもかかわらず、これらの送達は、例えば、ＥＲ標的化化学発光薬剤が遅延放出製剤の形態（例えば、本明細書に記載のナノ粒子及び／又はマイクロ粒子担体系のいずれかの形態）で提供される場合、同時であり得る。
【0151】
例えば、患者は、最初に５－ＡＬＡ注射を受けることができ、次に適切な時間枠で適切な治療域内で、ＥＲ標的化化学発光薬剤の２回目の注射を受けるか、又はこの薬剤を含有する点滴を必要な限り行う。この設定では、任意の治療後のモニタリングの対象となる必要性が最小限に抑えられる。
【0152】
本明細書に記載の組成物の有効用量、用量の数、及び投与の正確なタイミングは、ＥＲ標的化化学発光薬剤の性質、光増感剤（又は前駆体）、それらの投与様式（複数可）、治療される状態、患者などを含む様々な要因に依存し、それに応じて調節することができる。
【0153】
本発明の更なる態様は、患者の細胞又は組織の光線力学療法の方法に関し、当該方法は、当該細胞又は当該組織に、
（ａ）本明細書に記載の有効量の小胞体標的化化学発光薬剤と、それと同時に、別々に、若しくは連続して、有効量の光増感剤若しくは光増感剤前駆体と、を投与する工程を含むか、又は
（ｂ）本明細書に記載の小胞体標的化化学発光薬剤と、光増感剤若しくは光増感剤前駆体を含む有効量の医薬組成物と、を投与する工程を含む。
（ａ）本明細書に記載の有効量の小胞体標的化化学発光薬剤と、それと同時に、別々に、若しくは連続して、有効量の光増感剤若しくは光増感剤前駆体と、を投与する工程を含むか、又は
（ｂ）本明細書に記載の小胞体標的化化学発光薬剤と、光増感剤若しくは光増感剤前駆体を含む有効量の医薬組成物と、を投与する工程を含む。
【0154】
更なる態様において、本発明は、例えば、本明細書に記載のＰＤＴ法のいずれかにおける、光線力学療法の方法における同時の、別々の、又は連続した使用のために、本明細書に記載の小胞体標的化化学発光薬剤、及び光増感剤又は前駆体を含む製品を提供する。
【0155】
更に更なる態様では、本発明は、以下を含むキットを提供する：（ｉ）本明細書に記載の小胞体標的化化学発光薬剤、別個に（ｉｉ）光増感剤又は光増感剤前駆体、並びに任意選択的に（ｉｉｉ）光線力学療法の方法における（ｉ）及び（ｉｉ）の使用のための指示書。使用される場合、キットの活性成分（すなわち、（ｉ）及び（ｉｉ））は、同時に、別々に、又は連続して投与され得る。
【図面の簡単な説明】
【0156】
次に、本発明を、以下の非限定的な実施例及び添付の図面を参照して更に説明する。
【図1】化合物ＤＺ３２５＋セルコスポリンに対するＬＮ１８細胞の細胞生存率のグラフである。
【図2】化合物ＤＺ３２５＋セルコスポリンに対するＭ０５９Ｋ細胞の細胞生存率のグラフである。
【図3】化合物ＥＫ２９７＋セルコスポリン又は５－ＡＬＡに対するＵ８７、Ｔ９８Ｇ、ＬＮ１８及びＭ０５９Ｋ細胞の細胞生存率のグラフである。
【実施例】
【0157】
実施例１－Ｎ－（３－（（１，４－ジオキソ－１，２，３，４－テトラヒドロフタラジン－５－イル）アミノ）プロピル）－４－メチルベンゼンスルホンアミド（ＤＺ３２５）の調製
【0158】
【化32】
【0159】
実験手順：
Ｎ－（３－ブロモプロピル）－４－メチルベンゼンスルホンアミド２の合成：
トリエチルアミン（４３７ｍｇ、４．３２ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の４－トルエンスルホニルクロリド（３４２ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ）及び３－ブロモプロピルアミン臭化水素酸塩（４５３ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）撹拌懸濁液に滴下して添加した。得られた混合物をその温度で１５分間撹拌し、次いでジクロロメタン（５０ｍＬ）を添加し、２Ｎ ＨＣｌ（２×４０ｍＬ）及びブライン（４０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を蒸発させて２（４７１ｍｇ、９０％）を得た。
Ｎ－（３－ブロモプロピル）－４－メチルベンゼンスルホンアミド２の合成：
トリエチルアミン（４３７ｍｇ、４．３２ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の４－トルエンスルホニルクロリド（３４２ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ）及び３－ブロモプロピルアミン臭化水素酸塩（４５３ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）撹拌懸濁液に滴下して添加した。得られた混合物をその温度で１５分間撹拌し、次いでジクロロメタン（５０ｍＬ）を添加し、２Ｎ ＨＣｌ（２×４０ｍＬ）及びブライン（４０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を蒸発させて２（４７１ｍｇ、９０％）を得た。
【0160】
１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．７６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ－ｏＳ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ－ｏＭｅ），５．０１（ｂｓ，２Ｈ，ＮＨ），３．４１（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｂｒ），３．０９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ２Ｎ），２．４３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），２．０１（ｑｕｉ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【0161】
Ｎ－（３－（（１，４－ジオキソ－１，２，３，４－テトラヒドロフタラジン－５－イル）アミノ）プロピル）－４－メチルベンゼンスルホンアミドＤＺ３２５の合成：
Ｎ－メチルピロリドン（２ｍＬ）中のルミノール（３１３ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ）及び臭化物２（５１４ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）の溶液を１２０℃で２日間撹拌した。冷却後、混合物を撹拌した氷水（６０ｍＬ）に注ぎ、１５分間撹拌した。形成された沈殿物を濾過し、水（３×５ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥させた。残渣を５％ＴＨＦ／ジクロロメタンに溶解し、カラムクロマトグラフィ（５～１０％ＴＨＦ／ジクロロメタン）により精製した。得られた粗製ＤＺ３２５をジエチルエーテル及びヘキサンで粉砕して、ＤＺ３２５を淡黄色粉末として得た（２００ｍｇ、２９％）。
Ｎ－メチルピロリドン（２ｍＬ）中のルミノール（３１３ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ）及び臭化物２（５１４ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）の溶液を１２０℃で２日間撹拌した。冷却後、混合物を撹拌した氷水（６０ｍＬ）に注ぎ、１５分間撹拌した。形成された沈殿物を濾過し、水（３×５ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥させた。残渣を５％ＴＨＦ／ジクロロメタンに溶解し、カラムクロマトグラフィ（５～１０％ＴＨＦ／ジクロロメタン）により精製した。得られた粗製ＤＺ３２５をジエチルエーテル及びヘキサンで粉砕して、ＤＺ３２５を淡黄色粉末として得た（２００ｍｇ、２９％）。
【0162】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：１１．３９（ｂｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），１１．１４（ｂｓ，１Ｈ，ＣＯＮＨ），８．９７（ｂｓ，１Ｈ，ＡｒＮＨ），７．６６（ａｐｐ ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－２’），７．５９（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ，ＳＮＨ），７．５５（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ－７），７．３５（ａｐｐ ｄｄ，Ｊ＝８．５，０．６Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－３’），６．９６（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ－８），６．７６（ｄｄ，Ｊ＝８．３，０．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ－６），３．１６（ｑ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＮＣＨ２），２．８５（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ，ＳＮＣＨ２），２．３５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３），１．６７（ｑｕｉ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【0163】
１３Ｃ ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ：１６１．６１，１５１．３８，１４９．９０，１４２．５７，１３７．５３，１３４．５１，１２９．６２，１２６．６０，１２６．５３，１１１．１２，１１０．８９，１０８．７２，２８．２８，２０．９８，２０．９６。
【0164】
ＥＳ－ＭＳ Ｃ１８Ｈ１９Ｎ４Ｏ４Ｓのｍ／ｚ［Ｍ－Ｈ］－：計算値３８７．１、実測値３８７．１。
【0165】
実施例２－９－（（２，６－ジブロモ－４－（４－トシルピペラジン－１－カルボニル）フェノキシ）カルボニル）－１０－メチルアクリジン－１０－イウム＝トリフルオロメタンスルホネート（ＥＫ２９７）の調製。
【0166】
【化33】
【0167】
実験手順：
４－（３，５－ジブロモ－４－ヒドロキシベンゾイル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル７の合成：
ＨＯＢｔ（２５９ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（７８７ｍｇ、５．０７ｍｍｏｌ）を、乾燥テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中の３，５－ジブロモ－４－ヒドロキシ安息香酸（１ｇ、３．３８ｍｍｏｌ）及び１－Ｂｏｃ－ピペラジン（１．８９ｇ、１０．１４ｍｍｏｌ）の溶液に順次添加し、得られた混合物をアルゴン下で７．５時間撹拌した。混合物を氷／水中にデカントし、１Ｎ ＨＣｌで酸性化し、沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥させて、フェノール７を白色固体として得た（１．３５ｇ、８６％）。
４－（３，５－ジブロモ－４－ヒドロキシベンゾイル）ピペラジン－１－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル７の合成：
ＨＯＢｔ（２５９ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（７８７ｍｇ、５．０７ｍｍｏｌ）を、乾燥テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中の３，５－ジブロモ－４－ヒドロキシ安息香酸（１ｇ、３．３８ｍｍｏｌ）及び１－Ｂｏｃ－ピペラジン（１．８９ｇ、１０．１４ｍｍｏｌ）の溶液に順次添加し、得られた混合物をアルゴン下で７．５時間撹拌した。混合物を氷／水中にデカントし、１Ｎ ＨＣｌで酸性化し、沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥させて、フェノール７を白色固体として得た（１．３５ｇ、８６％）。
【0168】
１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．５３（ｓ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．３２（ｂｓ，１Ｈ，ＯＨ），３．６５－３．４０（ｍ，８Ｈ，ピペラジン），１．４７（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ）。１３Ｃ ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１６７．９０，１５４．５１，１５１．５２，１３１．１０，１２９．１０，１１１．０４，８０．６４，４７．６７（ｂｒ），４３．６１（ｂｒ），２８．３６。
【0169】
ＥＳ－ＨＲＭＳ Ｃ１６Ｈ２０Ｂｒ２Ｎ２ＮａＯ４のｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋：計算値４８６．９６６７、実測値４８６．９６６１。
【0170】
アクリジン－９－カルボン酸２，６－ジブロモ－４－（４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペラジン－１－カルボニル）フェニル８の合成：
チオニルクロリド（３ｍＬ）中の９－アクリジンカルボン酸水和物（２８９ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）の懸濁液をアルゴン下で５時間還流撹拌した。冷却後、過剰のチオニルクロリドを高真空下で除去し、乾燥ジクロロメタン（７ｍＬ）をアルゴン下で添加した。得られた溶液に、フェノール７（６００ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．３６ｍＬ、２．５８ｍｍｏｌ）及びピリジン（０．０５２ｍＬ、０．６５ｍｍｏｌ）を順次添加し、全体を１８時間撹拌した。次いで、ジクロロメタン（３０ｍＬ）を添加し、相を分離し、水相をジクロロメタン（２×３０ｍＬ）で洗浄した。有機相を合わせ、１Ｎ ＨＣｌ（２×２０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）、及びブライン（２０ｍＬ）で順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を蒸発させた。残渣のカラムクロマトグラフィ（１０％ＭｅＣＮ／ジクロロメタン）により、８を黄色固体として得た（７１５ｍｇ、８３％）。
チオニルクロリド（３ｍＬ）中の９－アクリジンカルボン酸水和物（２８９ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）の懸濁液をアルゴン下で５時間還流撹拌した。冷却後、過剰のチオニルクロリドを高真空下で除去し、乾燥ジクロロメタン（７ｍＬ）をアルゴン下で添加した。得られた溶液に、フェノール７（６００ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．３６ｍＬ、２．５８ｍｍｏｌ）及びピリジン（０．０５２ｍＬ、０．６５ｍｍｏｌ）を順次添加し、全体を１８時間撹拌した。次いで、ジクロロメタン（３０ｍＬ）を添加し、相を分離し、水相をジクロロメタン（２×３０ｍＬ）で洗浄した。有機相を合わせ、１Ｎ ＨＣｌ（２×２０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）、及びブライン（２０ｍＬ）で順次洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を蒸発させた。残渣のカラムクロマトグラフィ（１０％ＭｅＣＮ／ジクロロメタン）により、８を黄色固体として得た（７１５ｍｇ、８３％）。
【0171】
１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：８．７４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－４），８．３４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－１），７．８７（ｄｄｄ，Ｊ＝８．８，６．６，１．４Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－３），７．７６（ｓ，２Ｈ，Ｈ－３’），７．６９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．８，６．７，１．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－２），３．８０－３．４０（ｍ，８Ｈ，ピペラジン），１．４９（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ）。
【0172】
１３Ｃ ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１６６．５３，１６３．６９，１５４．４３，１４８．６８，１４７．６２，１３６．３２，１３３．２２，１３１．６１，１３０．３６，１３０．１４，１２７．６９，１２５．７１，１２２．９２，１１８．２９，８０．５８，４７．６９（ｂｒ），４３．５９（ｂｒ），４３．３１（ｂｒ），４２．４５（ｂｒ），２８．３７。
【0173】
ＥＳ－ＨＲＭＳ Ｃ３０Ｈ２８Ｂｒ２Ｎ３Ｏ５のｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋：計算値６６７．０３７５、実測値６７０．０３７０。
【0174】
４－（４－（（アクリジン－９－カルボニル）オキシ）－３，５－ジブロモベンゾイル）ピペラジン－１－イウム＝２，２，２－トリフルオロアセテート９の合成：
アクリジン８（１６２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（２ｍＬ）及びクロロホルム（２ｍＬ）の混合物に添加し、溶液を４時間撹拌した。混合物を蒸発させると、塩９が白色固体として残った（１６５ｍｇ、定量的）。
アクリジン８（１６２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸（２ｍＬ）及びクロロホルム（２ｍＬ）の混合物に添加し、溶液を４時間撹拌した。混合物を蒸発させると、塩９が白色固体として残った（１６５ｍｇ、定量的）。
【0175】
１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ－ｄ４）δ：８．８４（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－４），８．３６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－１），８．１２（ｄｄｄ，Ｊ＝８．８，６．７，１．２Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－３），８．０２（ｓ，２Ｈ，Ｈ－３’），７．８９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．５，６．７，１．１Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－２），４．０３－３．８３（ｍ，４Ｈ，ピペラジン），３．４６－３．３３（ｍ，４Ｈ，ピペラジン）。
【0176】
１９Ｆ ＮＭＲ（１８８ＭＨｚ，ＭｅＯＤ－ｄ４）δ：－７７．９９。ＥＳ－ＨＲＭＳ Ｃ２５Ｈ２０Ｂｒ２Ｎ３Ｏ３のｍ／ｚ［Ｍ］＋：計算値５６９．９８４５、実測値５６９．９８９９。
【0177】
アクリジン－９－カルボン酸２，６－ジブロモ－４－（４－トシルピペラジン－１－カルボニル）フェニル１０の合成：
トシルクロリド（９５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン下０℃で、ＤＭＦ（８ｍＬ）中の９（３１０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．２５ｍＬ、１．４１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加し、反応混合物を３時間撹拌したままにした。水（３０ｍＬ）を添加し、沈殿物を濾過し、水で洗浄し、真空中で乾燥させると、所望の生成物１０が黄色固体として残った（２３５ｍｇ、７３％）。
トシルクロリド（９５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン下０℃で、ＤＭＦ（８ｍＬ）中の９（３１０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．２５ｍＬ、１．４１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加し、反応混合物を３時間撹拌したままにした。水（３０ｍＬ）を添加し、沈殿物を濾過し、水で洗浄し、真空中で乾燥させると、所望の生成物１０が黄色固体として残った（２３５ｍｇ、７３％）。
【0178】
１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：８．７０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－４），８．３２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－１），７．８４（ｄｄｄ，Ｊ＝８．７，６．７，１．１Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－３），７．７１－７．６０（ｍ，６Ｈ，Ｈ－２，３’，２ＴＯＳ），７．３５（ａｐｐ ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－３ＴＯＳ），３．７４（ｂｓ，４Ｈ，ピペラジン），３．０５（ｂｓ，４Ｈ，ピペラジン），２．４４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
【0179】
１３Ｃ ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１６６．４７，１６３．７６，１４８．７９，１４７．９０，１４４．４２，１３５．８１，１３３．２５，１３２．２６，１３１．７１，１３０．４７，１３０．２６，１３０．０９，１２７．８５，１２７．８２，１２５．７６，１２３．０２，１１８．４２，４６．０５，２１．７０。
【0180】
ＥＳ－ＨＲＭＳ Ｃ３２Ｈ２６Ｂｒ２Ｎ３Ｏ５Ｓのｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋：計算値７２３．９９３９、実測値７２３．９９９８。
【0181】
９－（（２，６－ジブロモ－４－（４－トシルピペラジン－１－カルボニル）フェノキシ）カルボニル）－１０－メチルアクリジン－１０－イウム＝トリフルオロメタンスルホネートＥＫ２９７の合成：
メチルトリフラート（３６ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（７ｍＬ）中のアクリジンエステル１０（１６０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、アルゴン下で２４時間撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、残渣を冷ＥｔＯＡｃ（４×５ｍＬ）で洗浄し（超音波処理／遠心分離）、ＤＣＭ／トルエンで沈殿させ、ヘキサン（×２）で洗浄すると、アクリジニウムエステルＥＫ２９７が黄色粉末として残った（４８ｍｇ、２５％）。
メチルトリフラート（３６ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（７ｍＬ）中のアクリジンエステル１０（１６０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、アルゴン下で２４時間撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、残渣を冷ＥｔＯＡｃ（４×５ｍＬ）で洗浄し（超音波処理／遠心分離）、ＤＣＭ／トルエンで沈殿させ、ヘキサン（×２）で洗浄すると、アクリジニウムエステルＥＫ２９７が黄色粉末として残った（４８ｍｇ、２５％）。
【0182】
１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤ３ＣＮ）δ：８．９８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－４），８．７２（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－１），８．５０（ｄｄｄ，Ｊ＝９．４，６．９，１．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－３），８．１４（ｄｄ，Ｊ＝８．７，６．７Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－２），７．７８（ｓ，２Ｈ，Ｈ－３’），７．６４（ａｐｐ ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－２ＴＯＳ），７．４３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ－３ＴＯＳ），４．９０（ｓ，３Ｈ，ＮＣＨ３），３．９５－３．２７（ｍ，４Ｈ，ピペラジン），３．００（ａｐｐ ｂｓ，４Ｈ，ピペラジン），２．４４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）。
【0183】
１３Ｃ ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＣＤ３ＣＮ）δ：１６６．５９，１６２．４７，１４６．９８，１４５．３７，１４３．２４，１４０．５９，１３８．７５，１３３．４９，１３２．８８，１３０．８５，１３０．６４，１２９．１５，１２８．７５，１２４．４２，１２０．３１，１１８．２７，４６．７２，４０．９６，２１．５６。１９Ｆ ＮＭＲ（１８８ＭＨｚ，ＣＤ３ＣＮ）δ：－７８．６５。
【0184】
ＥＳ－ＨＲＭＳ Ｃ３３Ｈ２８Ｂｒ２Ｎ３Ｏ５Ｓのｍ／ｚ［Ｍ］＋：計算値７３８．０１００、実測値７３８．００９９。
【0185】
実施例３－ＧＢＭ細胞株におけるセルコスポリン又は５－ＡＬＡ＋ＤＺ３２５又はＥＫ２９７
化学発光化合物ＤＺ３２５及びＥＫ２９７の有効性を、ヒト多形性膠芽腫細胞株（Ｕ８７、Ｔ９８Ｇ、Ｍ０５９Ｋ及びＬＮ－１８）の細胞培養物において試験した。
化学発光化合物ＤＺ３２５及びＥＫ２９７の有効性を、ヒト多形性膠芽腫細胞株（Ｕ８７、Ｔ９８Ｇ、Ｍ０５９Ｋ及びＬＮ－１８）の細胞培養物において試験した。
【0186】
細胞を９６ウェルプレートに播種し、５％ＣＯ２、加湿雰囲気中、３７℃で一晩付着させた。続いて、細胞を、（ｉ）光増感剤（セルコスポリン）又は光増感剤前駆体（光増感剤ＰｐＩＸの生成のための５－ＡＬＡ）、及び（ｉｉ）適切な濃度の化合物でインキュベートした。５－ＡＬＡの場合、細胞培養への５－ＡＬＡの導入は、十分なＰｐＩＸ産生を確実にするために、化学発光化合物の導入の１時間前に行った。セルコスポリンの場合、化学発光化合物と同時に投与した。
【0187】
化学発光化合物をＤＭＳＯ（又は１－メチル－２－ピロリドン）中の５０ｍＭストック溶液として調製し、細胞培地中でそれらの最終濃度に希釈した。セルコスポリンをＤＭＳＯ中の４ｍＭ溶液として調製し、細胞培地で適切に希釈した。５－ＡＬＡをＯｐｔｉｍｅｍ中でその最終濃度にした。ルミノール系化合物（ＤＺ３２５）の場合、いくつかの場合において、ＣｕをＣｕＳＯ４の形態で最終濃度１００μＭにて細胞培地に添加した。
【0188】
細胞への化学発光化合物の導入から２４時間後、細胞培地を除去し、標準的なＭＴＴ生存率アッセイの実施のために、０．５ｍｇ／ｍＬのチアゾリルブルー塩を含有する１００μＬの培地と交換した。ＭＴＴ含有培地を１～３時間インキュベートし、次いで除去し、１００μＬのＤＭＳＯと交換した。終点吸光度測定は、５６１ｎｍで行った。培地のみの対照を１００％細胞生存率対照として使用した。併用処理（光増感剤＋化学発光化合物）の実験的細胞生存率を、光増感剤＋化学発光化合物の理論的相加処理（以下のように計算）と比較した。
【0189】
細胞生存率（光増感剤のみ）％×細胞生存率（化学発光部分のみ）％
１００％（対照）
１００％（対照）
【0190】
理論的に計算された相加値よりも有意に高い併用処置（実験）の生存率は、化学発光化合物と光増感剤との間の相乗効果の証拠と考えられる。
【0191】
その結果を図１及び図３に提示する。それぞれの図において、相乗作用の一例が強調されている。例えば、図３において、３μＭのセルコスポリン単独は、細胞生存率を８０％に低下させたが、４００μＭのＥＫ２９７は、毒性を７４．５％に低下させた。計算細胞生存率は、以下の式に従って決定される（式中、「ＰＳ」＝光増感剤、「ＣＬ」＝化学発光薬剤）。
【0192】
【数1】
【0193】
３μＭセルコスポリン＋４００μＭ ＥＫ２９７について計算細胞生存率は、５９．５％であるが、対応する細胞生存率の実験値は、２１．５％であることが見出された。これは、ＥＫ２９７とセルコスポリンとの間の細胞毒性相乗作用を示唆する。ＤＺ３２５を使用した場合の図１及び図２に示される相乗作用の例は、同じ方法で計算される。
【図1】
【図2】
【図3】
【国際調査報告】