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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-10-08
(54)【発明の名称】ＩＬ－２３シグナル伝達を阻害する組成物および方法
(51)【国際特許分類】
C07K 16/46 20060101AFI20241001BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20241001BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20241001BHJP
C07K 16/24 20060101ALI20241001BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20241001BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20241001BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20241001BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20241001BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20241001BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20241001BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20241001BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241001BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20241001BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241001BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20241001BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20241001BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20241001BHJP
【ＦＩ】
C07K16/46
C07K19/00 ZNA
C07K16/28
C07K16/24
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12N15/12
C12N15/62 Z
C12N15/63 Z
A61K39/395 N
A61K48/00
A61P35/00
A61P37/02
A61P35/02
A61K45/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024546043
(86)(22)【出願日】2022-10-11
(85)【翻訳文提出日】2024-05-31
(86)【国際出願番号】 US2022046287
(87)【国際公開番号】W WO2023064278
(87)【国際公開日】2023-04-20
(31)【優先権主張番号】63/254,387
(32)【優先日】2021-10-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】524137318
【氏名又は名称】ワイ－トラップ， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ベディ， リシ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA90X
4B065AB01
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C084AA13
4C084AA19
4C084MA02
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZB07
4C084ZB26
4C084ZB27
4C085AA14
4C085AA25
4C085BB11
4C085BB31
4C085DD62
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA72
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、ＩＬ－２３軸をモジュレートするための組換え分子、組成物、および方法を提供する。特定の実施形態では、これらの組換え分子を、ＩＬ－２３軸およびシグナル伝達に関連するがん、自己免疫疾患、および炎症性障害の処置および／または予防的処置の方法で使用する。１つの態様では、組換え分子であって、（ａ）インターロイキン－２３（ＩＬ－２３）阻害ポリペプチド（ＩＩＰ）であって、ＩＩＰが、ＩＬ－２３結合ポリペプチドまたはＩＬ－２３Ｒ結合ポリペプチドを含む、ＩＩＰ；および（ｂ）１またはそれを超える免疫チェックポイントタンパク質または免疫刺激性受容体に結合する標的結合ポリペプチド部分を含む、組換え分子を本明細書中に提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
組換え分子であって、ａ）インターロイキン－２３（ＩＬ－２３）阻害ポリペプチド（ＩＩＰ）であって、前記ＩＩＰが、ＩＬ－２３結合ポリペプチドまたはＩＬ－２３Ｒ結合ポリペプチドを含む、ＩＩＰ；および
ｂ）１またはそれを超える免疫チェックポイントタンパク質または免疫刺激性受容体に結合する標的結合ポリペプチド部分
を含む、組換え分子。
【請求項2】
前記標的結合ポリペプチドが、アンタゴニストまたはアゴニストとして免疫チェックポイントタンパク質に結合する、請求項１に記載の組換え分子。
【請求項3】
前記免疫チェックポイントタンパク質が、Ｔ細胞共阻害受容体もしくはリガンドまたは自然阻害受容体もしくはリガンドである、請求項１または２に記載の組換え分子。
【請求項4】
前記免疫チェックポイントタンパク質が、プログラム死－１（ＰＤ１；ＣＤ２７９）、プログラム死リガンド１（ＰＤＬ１）、プログラム死リガンド２（ＰＤＬ２）、細胞傷害性Ｔ－リンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ４；ＣＤ１５２）、Ｂリンパ球およびＴリンパ球のアテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリンサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびＩＴＩＭドメイン（ＴＩＧＩＴ）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３；ＣＤ２２３）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン３（Ｔｉｍ－３；ＨＡＶＣＲ２）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ４７、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰａ）、主要組織適合性遺伝子複合体クラスＩ，Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）、Ｉｇ様転写物２（ＩＬＴ２；ＬＩＬＲＢ１）、またはＩｇ様転写物４（ＩＬＴ４、ＬＩＬＲＢ２）から選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の組換え分子。
【請求項5】
前記免疫刺激性受容体が、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ；ＣＤ２７８）、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、糖質コルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ；ＣＤ３５７）、ＣＤ４０、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２８、またはＣＤ２７から選択される、請求項１に記載の組換え分子。
【請求項6】
前記ＩＩＰが、ＩＬ－２３に結合して阻害する、請求項１～５のいずれか１項に記載の組換え分子。
【請求項7】
前記ＩＩＰが、ＩＬ－２３ｐ１９サブユニットに結合して阻害する、請求項６に記載の組換え分子。
【請求項8】
前記ＩＩＰが、ＩＬ－２３Ｒに結合して阻害する、請求項１～５のいずれか１項に記載の組換え分子。
【請求項9】
前記ＩＩＰが、抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の組換え分子。
【請求項10】
前記ＩＩＰが抗体またはその抗原結合断片であり、ここで、前記その抗原結合断片が、結晶化可能断片（Ｆｃ）領域、抗原結合断片（Ｆａｂ）領域、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、軽鎖もしくはその機能的部分、前記軽鎖の可変領域（ＶＬ）、前記軽鎖の定常領域（ＣＬ）、重鎖もしくはその機能的部分、前記重鎖の可変領域（ＶＨ）、前記重鎖の定常領域（ＣＨ），少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはその一部、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項９に記載の組換え分子。
【請求項11】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒトＩＬ－２３ｐ１９サブユニットを標的にするモノクローナル抗体を含む、請求項１０に記載の組換え分子。
【請求項12】
前記抗体またはその抗原結合断片が、リサンキズマブ、グセルクマブ、チルドラキズマブ、ブラジクマブ、およびミリキズマブのうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む、請求項１１に記載の組換え分子。
【請求項13】
前記抗体またはその抗原結合断片がグセルクマブである、請求項１２に記載の組換え分子。
【請求項14】
前記標的結合ポリペプチドが、抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項１に記載の組換え分子。
【請求項15】
前記標的結合ポリペプチドが抗体またはその抗原結合断片であり、前記その抗原結合断片が、結晶化可能断片（Ｆｃ）領域、抗原結合断片（Ｆａｂ）領域、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、軽鎖もしくはその機能的部分、前記軽鎖の可変領域（ＶＬ）、前記軽鎖の定常領域（ＣＬ）、重鎖もしくはその機能的部分、前記重鎖の可変領域（ＶＨ）、前記重鎖の定常領域（ＣＨ）、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはその一部、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１４に記載の組換え分子。
【請求項16】
前記標的結合ポリペプチドが、アンタゴニストとして免疫チェックポイントタンパク質に結合し、前記標的結合ポリペプチドが、免疫チェックポイントタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のリガンド結合配列を含む、請求項２に記載の組換え分子。
【請求項17】
前記免疫チェックポイントタンパク質のＥＣＤが、腫瘍細胞または免疫細胞上に発現または提示されるその同族リガンドのうちの１つまたは複数に特異的に結合することができる、請求項１６に記載の組換え分子。
【請求項18】
前記免疫細胞が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、ＣＤ４Ｔ細胞、またはＴＨ１７細胞である、請求項１７に記載の組換え分子。
【請求項19】
前記ＥＣＤが、プログラム死－１リガンド１（ＰＤＬ１；ＣＤ２７４；Ｂ７－Ｈ１）および／またはプログラム死－１リガンド２（ＰＤＬ２）に特異的に結合することができる、請求項１６～１８のいずれか１項に記載の組換え分子。
【請求項20】
前記標的結合ポリペプチドが、前記ＰＤ１（ＣＤ２７９）細胞外ドメイン（ＰＤ１－ＥＣＤ）またはそのリガンド結合断片を含む、請求項１９に記載の組換え分子。
【請求項21】
前記標的結合ポリペプチドが、配列番号５６のアミノ酸配列、または配列番号５６に対して少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列もしくはそのリガンド結合断片を含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の組換え分子。
【請求項22】
前記標的結合ポリペプチドが、配列番号５６のアミノ酸配列またはそのリガンド結合断片の１またはそれを超える改変を含み、ここで、前記標的結合ポリペプチドが、１～１０個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、または逆位を含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の組換え分子。
【請求項23】
前記１またはそれを超える改変が、野生型ＰＤ１－ＥＣＤのそのリガンドに対する親和性と比較して、前記標的結合ポリペプチドのＰＤＬ１もしくはＰＤＬ２またはその両方に対する親和性を増加させる、請求項２２に記載の組換え分子。
【請求項24】
前記１またはそれを超える改変が、Ａ１３２Ｉ、Ｓ８７Ｇ、Ｐ８９Ｌ、Ｎ１１６Ｓ、Ｇ１２４Ｓ、Ｓ１２７Ｖ、Ａ１４０Ｖから選択される、請求項２２または２３に記載の組換え分子。
【請求項25】
前記改変がＡ１３２Ｉである、請求項２４に記載の組換え分子。
【請求項26】
前記標的結合ポリペプチドが、配列番号５７のアミノ酸配列を有する、請求項２５に記載の組換え分子。
【請求項27】
前記ＩＩＰがリンカーを介して前記標的結合ポリペプチド部分に連結している、請求項１～２６のいずれか１項に記載の組換え分子。
【請求項28】
前記標的結合ポリペプチド部分が、前記ＩＩＰのＣ末端に連結している、請求項２７に記載の組換え分子。
【請求項29】
前記リンカーが、非切断性リンカー、ペプチドリンカー、可動性リンカー、リジッドリンカー、らせん状リンカー、および非らせん状リンカーから選択される、請求項２７または２８に記載の組換え分子。
【請求項30】
前記リンカーが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、または８である）を含むアミノ酸配列を有するペプチドリンカーである、請求項２７～２９のいずれか１項に記載の組換え分子。
【請求項31】
前記リンカーが、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の組換え分子。
【請求項32】
前記組換え分子が、配列番号５３のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチドおよび配列番号５４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチドを含む、請求項１～３１のいずれか１項に記載の組換え分子。
【請求項33】
請求項１～３２のいずれか１項に記載の組換え分子を含む宿主。
【請求項34】
請求項１～３２のいずれか１項に記載の組換え分子をコードするポリヌクレオチド配列。
【請求項35】
請求項３６に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項36】
請求項１～３２のいずれか１項に記載の組換え分子を含むポリペプチド。
【請求項37】
請求項１～３２のいずれか１項に記載の組換え分子または請求項３５に記載のベクターを含む医薬組成物。
【請求項38】
薬学的に許容され得る賦形剤をさらに含む、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項39】
被験体における新生物疾患、がん、または免疫障害を処置する方法であって、有効量の、請求項１～３２のいずれか１項に記載の組換え分子、または請求項３５に記載のベクターを含む医薬組成物を前記被験体に投与することを含む、方法。
【請求項40】
前記被験体ががんを有する、請求項３９に記載の方法。
【請求項41】
前記組換え分子が、配列番号５３のアミノ酸配列有する第１のポリペプチドおよび配列番号５４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチドを含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項42】
前記がんが、前立腺がん、膵臓がん、胆道がん、結腸がん、直腸がん、肝臓がん、腎臓がん、肺がん、精巣がん、乳がん、卵巣がん、脳がん、皮膚がん、膀胱がん、および頭頸部がん、黒色腫、肉腫、多発性骨髄腫、白血病、および／またはリンパ腫から選択される、請求項３９～４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項43】
前記方法が、腫瘍成長を少なくとも１０、１５、または２０日間抑制する、請求項３９～４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項44】
前記方法が、腫瘍成長を少なくとも５％、１０％、１５％、または２０％低下させる、請求項３９～４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項45】
抗ＣＴＬＡ４－ＴＧＦβＲＩＩ分子を含む治療剤を前記被験体に投与することをさらに含む、請求項３９～４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項46】
１またはそれを超える抗がん剤を投与することをさらに含む、請求項３９～４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項47】
前記１またはそれを超える抗がん剤が、免疫治療剤、化学療法分子、抗体、抗体－薬物コンジュゲート、小分子キナーゼ阻害剤、ホルモン剤、アンドロゲン合成阻害剤、アンドロゲン受容体アンタゴニスト、抗血管新生剤、細胞治療、ＣＡＲ－Ｔ細胞治療、ＣＡＲ－ＮＫ細胞治療、放射性核種治療、電離放射線、紫外放射線、冷凍アブレーション、熱アブレーション、選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）、選択的エストロゲン受容体分解薬（ＳＥＲＤ）、または高周波アブレーションを含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項48】
前記免疫治療剤が、免疫チェックポイント阻害剤、免疫刺激性受容体アゴニスト、免疫刺激性サイトカイン／サイトカイン受容体アゴニスト、免疫阻害性サイトカイン／サイトカイン受容体アンタゴニスト、腫瘍ワクチン、免疫調節性イミド薬、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、または腫瘍溶解性ウイルスから選択される、請求項４７に記載の方法。
【請求項49】
前記１またはそれを超える抗がん剤の前記投与が、前記１またはそれを超える抗がん剤のみの投与と比較して、重度の免疫関連有害事象または毒性をより有効に低下または予防する、請求項４６～４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項50】
前記１またはそれを超える抗がん剤の前記投与が、前記１またはそれを超える抗がん剤のみの投与と比較して、より有効に腫瘍成長の低下を増強するまたは腫瘍成長を抑制する、請求項４６～４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項51】
前記被験体が哺乳動物である、請求項３９～５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項52】
前記被験体がヒトである、請求項３９～５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項53】
被験体における新生物疾患またはがんを処置する方法であって、１またはそれを超える治療剤を前記被験体に投与することを含み、ここで、前記１またはそれを超える治療剤が、ａ．ＩＬ－２３シグナル伝達の阻害剤を含む第１の治療剤；および
ｂ．以下のうちのいずれか１つまたは複数を含む第２の治療剤：
（ｉ）１またはそれを超える調節剤であって、各々が、１またはそれを超える免疫チェックポイントタンパク質のアンタゴニストである、１またはそれを超える調節剤；
（ｉｉ）１またはそれを超える調節剤であって、各々が、１またはそれを超える免疫刺激性受容体のアゴニストである、１またはそれを超える調節剤；
（ｉｉｉ）１またはそれを超える調節剤であって、各々が、１またはそれを超えるサイトカインのシグナル伝達のアンタゴニストである、１またはそれを超える調節剤；
（ｉｖ）１またはそれを超える調節剤であって、各々が、１またはそれを超えるサイトカイン受容体のアゴニストである、１またはそれを超える調節剤；
（ｖ）１またはそれを超える調節剤であって、各々が、腫瘍細胞または免疫細胞の細胞表面上に発現または提示される１またはそれを超える細胞表面分子をモジュレートする、１またはそれを超える調節剤；
（ｖｉ）ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、または造血幹細胞を含む１またはそれを超える免疫細胞；
（ｖｉｉ）１またはそれを超える免疫原性化学療法剤；および／あるいは
（ｖｉｉｉ）１またはそれを超える調節剤であって、各々が、１またはそれを超える免疫阻害性酵素のアンタゴニストである、１またはそれを超える調節剤
を含む、方法。
【請求項54】
前記ＩＬ－２３シグナル伝達の阻害剤が、ＩＬ－２３に結合する組換えタンパク質であるＩＬ－２３結合部分を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項55】
前記ＩＬ－２３シグナル伝達の阻害剤が、ＩＬ－２３Ｒに結合する組換えタンパク質であるＩＬ－２３Ｒ結合部分を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項56】
前記ＩＬ－２３シグナル伝達の阻害剤が、請求項１～３２のいずれか１項に記載の組換え分子を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項57】
前記ＩＬ－２３シグナル伝達の阻害剤が、抗体またはその抗原結合断片であり、前記その抗原結合断片が、結晶化可能断片（Ｆｃ）領域、抗原結合断片（Ｆａｂ）領域、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、軽鎖もしくはその機能的部分、前記軽鎖の可変領域（ＶＬ）、前記軽鎖の定常領域（ＣＬ）、重鎖もしくはその機能的部分、前記重鎖の可変領域（ＶＨ）、前記重鎖の定常領域（ＣＨ）、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはその抗原結合部分、またはこれらの組み合わせを含む、請求項５４または５５に記載の方法。
【請求項58】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＩＬ－２３サブユニットを標的にするモノクローナル抗体を含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項59】
前記モノクローナル抗体が、前記ＩＬ－２３ｐ１９サブユニットを標的にする、請求項５８に記載の方法。
【請求項60】
前記抗体またはその抗原結合断片が、リサンキズマブ、グセルクマブ、チルドラキズマブ、ブラジクマブ、およびミリキズマブのうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む、請求項５８または５９に記載の方法。
【請求項61】
前記ＩＬ－２３Ｒ結合部分が、抗体またはその抗原結合断片を含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項62】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ＡＳ２７６２９００－００の６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む、請求項６１に記載の分子。
【請求項63】
前記第２の治療剤が、１またはそれを超える免疫チェックポイントタンパク質のアンタゴニストである調節剤を含む、請求項５３～６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項64】
前記免疫チェックポイントタンパク質が、プログラム死－１（ＰＤ１；ＣＤ２７９）、プログラム死リガンド１（ＰＤＬ１）、プログラム死リガンド２（ＰＤＬ２）、細胞傷害性Ｔ－リンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ４；ＣＤ１５２）、Ｂリンパ球およびＴリンパ球のアテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリンサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびＩＴＩＭドメイン（ＴＩＧＩＴ）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３；ＣＤ２２３）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン３（Ｔｉｍ－３；ＨＡＶＣＲ２）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ４７、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰａ）、主要組織適合性遺伝子複合体クラスＩ，Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）、Ｉｇ様転写物２（ＩＬＴ２；ＬＩＬＲＢ１）、またはＩｇ様転写物４（ＩＬＴ４、ＬＩＬＲＢ２）から選択される、請求項６３に記載の方法。
【請求項65】
前記第２の治療剤が、ＰＤ１シグナル伝達のアンタゴニストである調節剤を含む、請求項６３または６４に記載の方法。
【請求項66】
前記ＰＤ１シグナル伝達のアンタゴニストが、ＰＤ１を標的にするポリペプチドである、請求項６５に記載の方法。
【請求項67】
前記調節剤が、ＰＤ１（ＣＤ２７９）を標的にするモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む阻害剤である、請求項６５または６６に記載の方法。
【請求項68】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、シンチリマブ、ササンリマブ、チセリズマブ、またはトリパリマブから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項69】
前記調節剤が、プログラム死－１リガンド１（ＰＤＬ１；ＣＤ２７４；Ｂ７－Ｈ１）、プログラム死－１リガンド２（ＰＤＬ２）、またはこれらの両方から選択される前記チェックポイントタンパク質の阻害剤である、請求項６３に記載の方法。
【請求項70】
前記調節剤が、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、またはこれらの両方を標的にするポリペプチドである、請求項６９に記載の方法。
【請求項71】
前記ポリペプチドが、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、またはこれらの両方を標的にする抗体またはその抗原結合断片である、請求項６９または７０に記載の方法。
【請求項72】
前記抗体またはその抗原結合断片が、デュルバルマブ、アベルマブ、またはアテゾリズマブのうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項73】
前記調節剤が、前記チェックポイントタンパク質ＣＴＬＡ－４のポリペプチド阻害剤である、請求項６３に記載の方法。
【請求項74】
前記ポリペプチドが、ＣＴＬＡ－４を標的にする抗体またはその抗原結合断片である、請求項７３に記載の方法。
【請求項75】
前記抗体またはその抗原結合断片が、イピリムマブまたはトレメリムマブのうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む、請求項７３または７４に記載の方法。
【請求項76】
前記調節剤が、前記チェックポイントタンパク質ＬＡＧ－３のポリペプチド阻害剤である、請求項６３に記載の方法。
【請求項77】
前記ポリペプチドが、ＬＡＧ－３を標的にする抗体またはその抗原結合断片である、請求項７６に記載の方法。
【請求項78】
前記抗体またはその抗原結合断片が、レラトリマブ、フィアンリマブ、Ｓｙｍ０２２、ＧＳＫ２８３１７８１、ＴＳＲ－０３３、イエルミリマブ、ファベゼリマブ、テボテリマブ、ＦＳ１１８、またはパブナリマブのうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む、請求項７６または７７に記載の方法。
【請求項79】
前記調節剤が、前記チェックポイントタンパク質ＴＩＧＩＴのポリペプチド阻害剤である、請求項６３に記載の方法。
【請求項80】
前記ポリペプチドが、ＴＩＧＩＴを標的にする抗体またはその抗原結合断片である、請求項７９に記載の方法。
【請求項81】
前記抗体またはその抗原結合断片が、チラゴルマブ、ビボストリマブ、ＢＭＳ－９８６２０７、オシペルリマブ、エチギリマブ、ドムバナリマブ、ＥＯＳ－４４８、ＳＥＡ－ＴＧＴ、ＡＳＰ８３７４、ＣＯＭ９０２、またはＩＢＩ９３９のうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む、請求項７９または８０に記載の方法。
【請求項82】
前記第２の治療剤が、１またはそれを超える免疫刺激性受容体のアゴニストである調節剤を含む、請求項５３～６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項83】
前記免疫刺激性受容体が、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ；ＣＤ２７８）、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、糖質コルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ；ＣＤ３５７）、ＣＤ４０、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２８、またはＣＤ２７から選択される、請求項８２に記載の方法。
【請求項84】
前記第２の治療剤が、ＣＤ４０ＬまたはそのＣＤ４０結合断片を含むポリペプチドである、請求項８３に記載の方法。
【請求項85】
前記第２の治療剤が、ＣＤ８０もしくはＣＤ８６；またはそのＣＤ２８結合断片を含むポリペプチドである、請求項８３または８４に記載の方法。
【請求項86】
前記第２の治療剤が、腫瘍細胞または腫瘍関連間質細胞上に発現または提示される細胞表面分子の調節剤を含む、請求項５３～６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項87】
前記細胞表面分子が、成長因子受容体、トランスフォーミング成長因子－ベータ受容体（ＴＧＦβＲ）、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリー受容体、Ｉｇスーパーファミリー受容体、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、腫瘍細胞表面分子、サイトカイン受容体、またはケモカイン受容体から選択される、請求項８６に記載の方法。
【請求項88】
前記第２の治療剤が、免疫細胞上に発現または提示される細胞表面分子の調節剤を含む、請求項５３～６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項89】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、または骨髄性細胞である、請求項８８に記載の方法。
【請求項90】
前記細胞表面分子が、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリー受容体、Ｉｇスーパーファミリー受容体、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、Ｔ細胞共刺激分子受容体、Ｔ細胞共阻害分子受容体、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞受容体である、請求項８８または８９に記載の方法。
【請求項91】
前記細胞表面分子が、骨髄性細胞阻害受容体、または骨髄性細胞刺激受容体である、請求項８８～９０のいずれか１項に記載の分子。
【請求項92】
前記細胞表面受容体が、ＳＩＲＰａまたはＣＤ４７である、請求項８６または８８に記載の方法。
【請求項93】
前記第２の治療剤が、ＳＩＲＰａのＣＤ４７への結合を阻害する、請求項９２に記載の方法。
【請求項94】
前記第２の治療剤が、ＣＤ４７に結合するポリペプチドである、請求項９３に記載の方法。
【請求項95】
前記ポリペプチドが、ＣＤ４７を標的にする抗体またはその抗原結合断片である、請求項９４に記載の方法。
【請求項96】
前記抗体またはその抗原結合断片が、マグロリマブ、ＺＬ－１２０１、ＴＪ０１１１３３、ＳＴＩ－６６４３、ＳＲＦ２３１、ＳＨＲ－１６０３、ＩＭＣ－００２、ＩＢＩ１８８、ＣＣ－９０００２、ＡＯ－１７６またはＡＫ１１７から選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む、請求項９５に記載の方法。
【請求項97】
前記ポリペプチドが、前記ＳＩＲＰａ細胞外ドメインまたはそのＣＤ４７結合断片を含む、請求項９４に記載の方法。
【請求項98】
前記ポリペプチドが、エボルパセプト、ＴＴＩ－６２１、またはＴＴＩ－６２２から選択される、請求項９７に記載の方法。
【請求項99】
前記第２の治療剤が、ＳＩＲＰａに結合するポリペプチドである、請求項９３に記載の方法。
【請求項100】
前記第２の治療剤が、１またはそれを超えるサイトカインのシグナル伝達のアンタゴニストである、請求項５３～６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項101】
前記サイトカインがトランスフォーミング成長因子－ベータ（ＴＧＦｂ）である、請求項１００に記載の方法。
【請求項102】
前記調節剤が、小分子キナーゼ阻害剤、ＴＧＦｂＲＩＩ ＥＣＤもしくはそのＴＧＦｂ結合断片を含むポリペプチド、または抗ＴＧＦβ抗体、抗ＴＧＦβＲ抗体、抗ＧＡＲＰ抗体、もしくは抗ＬＡＰ抗体から選択される抗体もしくはその抗原結合断片から選択されるＴＧＦｂシグナル伝達の阻害剤である、請求項１０１に記載の方法。
【請求項103】
前記小分子キナーゼ阻害剤が、ガルニセルチブを含むＴＧＦβＲ小分子キナーゼ阻害剤である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項104】
前記抗ＴＧＦβ抗体またはその抗原結合断片が、フレソリムマブの６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む、請求項１０２に記載の方法。
【請求項105】
前記ＴＧＦｂＲＩＩ ＥＣＤまたはそのＴＧＦｂ結合断片を含む前記ポリペプチドが、ＡＶＩＤ２００、ビントラフスプアルファ（Ｍ７８２４）、抗ＣＴＬＡ４－ＴＧＦｂＲＩＩ、ＳＩＲＰａ ＥＣＤ－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＣＥＡ－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＰＳＭＡ－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＩＬ６Ｒ－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＰＤ１－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＥＧＦＲ－ＴＧＦｂＲＩＩ、または抗ＨＥＲ２－ＴＧＦｂＲＩＩから選択される、請求項１０２に記載の方法。
【請求項106】
前記サイトカインが、以下：ＩＬ－４、ＩＬ－１３、ＩＬ－１０、ＩＬ－６、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－１７、ＩＬ－２２、またはＶＥＧＦのうちの１つまたは複数から選択される、請求項１００～１０５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項107】
前記サイトカインが、ＩＬ－４またはＩＬ－１３である、請求項１０６に記載の方法。
【請求項108】
前記調節剤が、ＩＬ４受容体アルファ（ＩＬ４Ｒａ）を標的にするポリペプチドである、請求項１０６または１０７に記載の方法。
【請求項109】
前記ポリペプチドが、デュピルマブの６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む抗体または抗原結合断片である、請求項１０８に記載の方法。
【請求項110】
前記サイトカインがＩＬ１ｂである、請求項１０６に記載の方法。
【請求項111】
前記第２の治療剤がアナキンラを含む、請求項１１０に記載の方法。
【請求項112】
前記第２の治療剤が、カナキヌマブの６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む、請求項１１０に記載の方法。
【請求項113】
前記サイトカインがＩＬ１０である、請求項１０６に記載の方法。
【請求項114】
前記第２の治療剤が、ＩＬ１０Ｒの細胞外ドメインのＩＬ１０結合配列、またはＩＬ１０もしくはＩＬ１０Ｒを標的にする抗体もしくはその抗原結合断片を含む、請求項１１３に記載の方法。
【請求項115】
前記第２の治療剤が、１またはそれを超えるサイトカイン受容体のアゴニストである、請求項５３～６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項116】
前記サイトカイン受容体が、ＩＬ１２Ｒ、ＩＬ１５Ｒ、およびＩＬ１８Ｒから選択される、請求項１１５に記載の方法。
【請求項117】
前記第２の治療剤が、ＩＬ－１２を含むポリペプチドである、請求項１１５または１１６に記載の方法。
【請求項118】
前記細胞表面分子が、ＣＡ１２５、ＣＡ１９－９、ＣＤ３０、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＥＡＣＡＭ５もしくは表面抗原分類、６６ｅ（ＣＤ６６ｅ）、ＣＥＡＣＡＭ６、ＤＬＬ３、ＤＬＬ４、ＤＰＥＰ３、ＥＧＦＲ ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＧＦ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ１５、ＭＵＣ１、ＰＲＬＲ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＳＥＺ６、ＳＬＡＭＦ７、ＴＦ、ｃＭｅｔ，クローディン、メソテリン、ネクチン４、ｕＰＡＲ、ＧＰＮＭＢ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２２、ＮａＰｉ２ｂ、ＳＬＴＲＫ６、ＳＴＥＡＰ１、ＭＵＣ１６、ＣＤ３７、ＧＣＣ、ＡＧＣ－１６、５Ｔ４、ＣＤ７０、ＴＲＯＰ２、ＣＤ７４、ＣＤ２７Ｌ、Ｆｒａ、ＣＤ１３８、ＣＡ６、ＣＤ３８、ＳＬＡＭＦ７、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３３またはＣＤ３０から選択される腫瘍細胞表面分子である、請求項８８に記載の方法。
【請求項119】
前記調節剤が、前記腫瘍細胞表面分子を標的にするモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む阻害剤である、請求項１１８に記載の方法。
【請求項120】
前記抗体またはその抗原断片が、ラベツズマブ、セルグツズマブ、セツキシマブ、ネシツムマブ、パニツムマブ、デパツキシズマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、エンフォルツマブ、またはサシツズマブのうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項121】
前記免疫細胞が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、またはマクロファージを含む、請求項８８に記載の方法。
【請求項122】
前記免疫細胞が、ＴＨ１７細胞、ＣＤ４Ｔ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、ガンマデルタＴ細胞、ＮＫ細胞、自然リンパ球系細胞（ＩＬＣ）、またはガンマデルタＴ１７細胞を含む、請求項８８または１２１に記載の方法。
【請求項123】
前記第１および第２の薬剤の組み合わせを用いた処置により、前記第２の薬剤のみでの処置よりも有効に、腫瘍成長が低下するか抑制され、重度の免疫関連有害事象が予防されるか低下し、全生存または無増悪生存が増加し、有害事象が軽減するか予防されるか毒性が低下し、あるいは骨への転移または骨格関連有害事象が軽減または予防される、請求項５３～１２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項124】
前記がんが、前立腺がん、膵臓がん、胆道がん、結腸がん、直腸がん、肝臓がん、腎臓がん、肺がん、精巣がん、乳がん、卵巣がん、脳がん、皮膚がん、膀胱がん、および頭頸部がん、黒色腫、肉腫、多発性骨髄腫、白血病、および／またはリンパ腫から選択される、請求項５３～１２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項125】
抗ＣＴＬＡ４－ＴＧＦβＲＩＩ分子を含む治療剤を前記被験体に投与することをさらに含む、請求項５３～１２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項126】
１またはそれを超える抗がん治療を投与することをさらに含む、請求項５３～１２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項127】
前記１またはそれを超える抗がん治療が、免疫治療剤、化学療法分子、抗体、抗体－薬物コンジュゲート、小分子キナーゼ阻害剤、ホルモン剤、アンドロゲン合成阻害剤、アンドロゲン受容体アンタゴニスト、抗血管新生剤、細胞治療、ＣＡＲ－Ｔ細胞治療、ＣＡＲ－ＮＫ細胞治療、放射性核種治療、電離放射線、紫外放射線、冷凍アブレーション、熱アブレーション、選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）、選択的エストロゲン受容体分解薬（ＳＥＲＤ）、または高周波アブレーションを含む、請求項１２６に記載の方法。
【請求項128】
前記免疫治療剤が、免疫チェックポイント阻害剤、免疫刺激性受容体アゴニスト、免疫刺激性サイトカイン／サイトカイン受容体アゴニスト、免疫阻害性サイトカイン／サイトカイン受容体アンタゴニスト、腫瘍ワクチン、免疫調節性イミド薬、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、または腫瘍溶解性ウイルスから選択される、請求項１２７に記載の方法。
【請求項129】
前記被験体が哺乳動物である、請求項５３～１２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項130】
前記被験体がヒトである、請求項５３～１２８のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１０月１１日出願の米国特許仮出願第６３／２５４，３８７号（その全体が参考として援用される）の優先権の利益を主張する。
本出願は、２０２１年１０月１１日出願の米国特許仮出願第６３／２５４，３８７号（その全体が参考として援用される）の優先権の利益を主張する。
【0002】
配列表
本出願は、配列表を含んでおり、この配列表は、Ｐａｔｅｎｔ Ｃｅｎｔｅｒを介して提出され、その全体が本明細書中で参考として援用される。２０２２年ＸＸＸ ＸＸに作成された前述のＸＭＬコピーの名称は５００４８ＷＯ＿ｓｅｑｕｅｎｃｅｌｉｓｔｉｎｇ．ｘｍｌであり、サイズはＸＸ，ＸＸＸバイトである。
本出願は、配列表を含んでおり、この配列表は、Ｐａｔｅｎｔ Ｃｅｎｔｅｒを介して提出され、その全体が本明細書中で参考として援用される。２０２２年ＸＸＸ ＸＸに作成された前述のＸＭＬコピーの名称は５００４８ＷＯ＿ｓｅｑｕｅｎｃｅｌｉｓｔｉｎｇ．ｘｍｌであり、サイズはＸＸ，ＸＸＸバイトである。
【背景技術】
【0003】
背景
インターロイキン２３（ＩＬ－２３）は、乾癬、炎症性腸疾患、多発性硬化症、または関節リウマチなどの慢性炎症性疾患の発症における肝要な炎症促進性サイトカインであることが知られている。過剰なＩＬ－２３シグナル伝達は、病理学的結果として、標的集団、主にＴｈ１７細胞およびＩＬ－１７分泌ＴＣＲγδ細胞（Ｔγδ１７）による炎症メディエーター（ＩＬ－１７、ＩＬ－２２、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、または腫瘍壊死因子（ＴＮＦα）など）の産生を促進し得ることと関連している。また、ＩＬ－２３は、腫瘍促進性の炎症促進性シグナル伝達および抗腫瘍適応免疫不全の重要な決定要因である。
インターロイキン２３（ＩＬ－２３）は、乾癬、炎症性腸疾患、多発性硬化症、または関節リウマチなどの慢性炎症性疾患の発症における肝要な炎症促進性サイトカインであることが知られている。過剰なＩＬ－２３シグナル伝達は、病理学的結果として、標的集団、主にＴｈ１７細胞およびＩＬ－１７分泌ＴＣＲγδ細胞（Ｔγδ１７）による炎症メディエーター（ＩＬ－１７、ＩＬ－２２、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、または腫瘍壊死因子（ＴＮＦα）など）の産生を促進し得ることと関連している。また、ＩＬ－２３は、腫瘍促進性の炎症促進性シグナル伝達および抗腫瘍適応免疫不全の重要な決定要因である。
【0004】
したがって、ＩＬ－２３シグナル伝達をモジュレートすることができる分子が必要である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0005】
概要
１つの態様では、組換え分子であって、（ａ）インターロイキン－２３（ＩＬ－２３）阻害ポリペプチド（ＩＩＰ）であって、ＩＩＰが、ＩＬ－２３結合ポリペプチドまたはＩＬ－２３Ｒ結合ポリペプチドを含む、ＩＩＰ；および（ｂ）１またはそれを超える免疫チェックポイントタンパク質または免疫刺激性受容体に結合する標的結合ポリペプチド部分を含む、組換え分子を本明細書中に提供する。
１つの態様では、組換え分子であって、（ａ）インターロイキン－２３（ＩＬ－２３）阻害ポリペプチド（ＩＩＰ）であって、ＩＩＰが、ＩＬ－２３結合ポリペプチドまたはＩＬ－２３Ｒ結合ポリペプチドを含む、ＩＩＰ；および（ｂ）１またはそれを超える免疫チェックポイントタンパク質または免疫刺激性受容体に結合する標的結合ポリペプチド部分を含む、組換え分子を本明細書中に提供する。
【0006】
種々の実施形態では、標的結合ポリペプチドは、アンタゴニストまたはアゴニストとして免疫チェックポイントタンパク質に結合する。種々の実施形態では、免疫チェックポイントタンパク質は、Ｔ細胞共阻害受容体もしくはリガンドまたは自然阻害受容体もしくはリガンドである。
【0007】
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントタンパク質は、プログラム死－１（ＰＤ１；ＣＤ２７９）、プログラム死リガンド１（ＰＤＬ１）、プログラム死リガンド２（ＰＤＬ２）、細胞傷害性Ｔ－リンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ４；ＣＤ１５２）、Ｂリンパ球およびＴリンパ球のアテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリンサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびＩＴＩＭドメイン（ＴＩＧＩＴ）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３；ＣＤ２２３）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン３（Ｔｉｍ－３；ＨＡＶＣＲ２）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ４７、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰａ）、主要組織適合性遺伝子複合体クラスＩ，Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）、Ｉｇ様転写物２（ＩＬＴ２；ＬＩＬＲＢ１）、またはＩｇ様転写物４（ＩＬＴ４、ＬＩＬＲＢ２）から選択される。
【0008】
いくつかの実施形態では、免疫刺激性受容体は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ；ＣＤ２７８）、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、糖質コルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ；ＣＤ３５７）、ＣＤ４０、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２８、またはＣＤ２７から選択される。
【0009】
いくつかの実施形態では、ＩＩＰは、ＩＬ－２３に結合してそれを阻害する。いくつかの実施形態では、ＩＩＰは、ＩＬ－２３ｐ１９サブユニットに結合してそれを阻害する。いくつかの実施形態では、ＩＩＰは、ＩＬ－２３Ｒに結合してそれを阻害する。
【0010】
種々の実施形態では、ＩＩＰは、抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、ＩＩＰは抗体またはその抗原結合断片であり、ここで、その抗原結合断片は、結晶化可能断片（Ｆｃ）領域、抗原結合断片（Ｆａｂ）領域、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、軽鎖もしくはその機能的部分、軽鎖の可変領域（ＶＬ）、軽鎖の定常領域（ＣＬ）、重鎖もしくはその機能的部分、重鎖の可変領域（ＶＨ）、重鎖の定常領域（ＣＨ），少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはその一部、またはこれらの任意の組み合わせを含む。
【0011】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＩＬ－２３ｐ１９サブユニットを標的にするモノクローナル抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、リサンキズマブ（ＶＨ：配列番号７９；ＶＬ：配列番号８０）、グセルクマブ（ＶＨ：配列番号８１；ＶＬ：配列番号８２）、チルドラキズマブ（ＶＨ：配列番号８３；ＶＬ：配列番号８４）、ブラジクマブ（ＶＨ：配列番号８５；ＶＬ：配列番号８６）、およびミリキズマブ（ＶＨ：配列番号８７；ＶＬ：配列番号８８）のうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はグセルクマブである。
【0012】
いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは、抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは抗体またはその抗原結合断片であり、その抗原結合断片は、結晶化可能断片（Ｆｃ）領域、抗原結合断片（Ｆａｂ）領域、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、軽鎖もしくはその機能的部分、軽鎖の可変領域（ＶＬ）、軽鎖の定常領域（ＣＬ）、重鎖もしくはその機能的部分、重鎖の可変領域（ＶＨ）、重鎖の定常領域（ＣＨ）、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはその一部、またはこれらの任意の組み合わせを含む。
【0013】
いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは、アンタゴニストとして免疫チェックポイントタンパク質に結合し、標的結合ポリペプチドは、免疫チェックポイントタンパク質の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のリガンド結合配列を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントタンパク質のＥＣＤは、腫瘍細胞または免疫細胞上に発現または提示されるその同族リガンドのうちの１つまたは複数に特異的に結合することができる。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、ＣＤ４Ｔ細胞、またはＴＨ１７細胞である。
【0014】
いくつかの実施形態では、ＥＣＤは、プログラム死－１リガンド１（ＰＤＬ１；ＣＤ２７４；Ｂ７－Ｈ１）および／またはプログラム死－１リガンド２（ＰＤＬ２）に特異的に結合することができる。いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは、ＰＤ１（ＣＤ２７９）細胞外ドメイン（ＰＤ１－ＥＣＤ）またはそのリガンド結合断片を含む。
【0015】
いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは、配列番号５６のアミノ酸配列、または配列番号５６に対して少なくとも８０％同一性を有するアミノ酸配列もしくはそのリガンド結合断片を含む。
【0016】
いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは、配列番号５６のアミノ酸配列またはそのリガンド結合断片の１またはそれを超える改変を含み、ここで、標的結合ポリペプチドが、１～１０個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、または逆位を含む。いくつかの実施形態では、１またはそれを超える改変は、野生型ＰＤ１－ＥＣＤのそのリガンドに対する親和性と比較して、標的結合ポリペプチドのＰＤＬ１もしくはＰＤＬ２またはその両方に対する親和性を増加させる。いくつかの実施形態では、１またはそれを超える改変は、Ａ１３２Ｉ、Ｓ８７Ｇ、Ｐ８９Ｌ、Ｎ１１６Ｓ、Ｇ１２４Ｓ、Ｓ１２７Ｖ、Ａ１４０Ｖから選択される。いくつかの実施形態では、改変はＡ１３２Ｉである。いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは、配列番号５７のアミノ酸配列を有する。
【0017】
種々の実施形態では、ＩＩＰはリンカーを介して標的結合ポリペプチド部分に連結している。いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチド部分は、ＩＩＰのＣ末端に連結している。いくつかの実施形態では、リンカーは、非切断性リンカー、ペプチドリンカー、可動性リンカー、リジッドリンカー、らせん状リンカー、および非らせん状リンカーから選択される。いくつかの実施形態では、リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、または８である）を含むアミノ酸配列を有するペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号５５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組換え分子は、配列番号５３のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチドおよび配列番号５４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチドを含む。
【0018】
いくつかの態様では、本明細書に記載の組換え分子を含む宿主を本明細書中に提供する。
【0019】
いくつかの態様では、本明細書に記載の組換え分子をコードするポリヌクレオチド配列を本明細書中に提供する。いくつかの態様では、そのポリヌクレオチドを含むベクターを本明細書中に提供する。
【0020】
いくつかの態様では、本明細書に記載の組換え分子を含むポリペプチドを本明細書中に提供する。
【0021】
いくつかの態様では、本明細書に記載の組換え分子または本明細書に記載の組換え分子をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターを含む医薬組成物を本明細書中に提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容され得る賦形剤をさらに含む。
【0022】
いくつかの態様では、被験体における新生物疾患、がん、または免疫障害を処置する方法であって、有効量の、本明細書に記載の組換え分子、または本明細書に記載の組換え分子をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターを含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、方法を本明細書中に提供する。
【0023】
いくつかの実施形態では、被験体はがんを有する。いくつかの実施形態では、組換え分子は、配列番号５３のアミノ酸配列有する第１のポリペプチドおよび配列番号５４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチドを含む。
【0024】
いくつかの実施形態では、がんは、前立腺がん、膵臓がん、胆道がん、結腸がん、直腸がん、肝臓がん、腎臓がん、肺がん、精巣がん、乳がん、卵巣がん、脳がん、皮膚がん、膀胱がん、および頭頸部がん、黒色腫、肉腫、多発性骨髄腫、白血病、および／またはリンパ腫から選択される。
【0025】
いくつかの実施形態では、方法は、腫瘍成長を少なくとも１０、１５、または２０日間抑制する。いくつかの実施形態では、方法は、腫瘍成長を少なくとも５％、１０％、１５％、または２０％低下させる。
【0026】
いくつかの実施形態では、方法は、抗ＣＴＬＡ４－ＴＧＦβＲＩＩ分子を含む治療剤を被験体に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、１またはそれを超える抗がん剤を投与することをさらに含む。
【0027】
いくつかの実施形態では、１またはそれを超える抗がん剤は、免疫治療剤、化学療法分子、抗体、抗体－薬物コンジュゲート、小分子キナーゼ阻害剤、ホルモン剤、アンドロゲン合成阻害剤、アンドロゲン受容体アンタゴニスト、抗血管新生剤、細胞治療、ＣＡＲ－Ｔ細胞治療、ＣＡＲ－ＮＫ細胞治療、放射性核種治療、電離放射線、紫外放射線、冷凍アブレーション、熱アブレーション、選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）、選択的エストロゲン受容体分解薬（ＳＥＲＤ）、または高周波アブレーションを含む。いくつかの実施形態では、免疫治療剤は、免疫チェックポイント阻害剤、免疫刺激性受容体アゴニスト、免疫刺激性サイトカイン／サイトカイン受容体アゴニスト、免疫阻害性サイトカイン／サイトカイン受容体アンタゴニスト、腫瘍ワクチン、免疫調節性イミド薬、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、または腫瘍溶解性ウイルスから選択される。
【0028】
いくつかの実施形態では、１またはそれを超える抗がん剤と組み合わせた抗ＩＬ－２３剤の投与は、１またはそれを超える抗がん剤のみの投与と比較して、重度の免疫関連有害事象または毒性をより有効に低下または予防する。いくつかの実施形態では、１またはそれを超える抗がん剤と組み合わせた抗ＩＬ－２３剤の投与は、１またはそれを超える抗がん剤のみの投与と比較して、より有効に腫瘍成長の低下を増強するまたは腫瘍成長を抑制する。
【0029】
いくつかの実施形態では、被験体は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、被験体はヒトである。
【0030】
１つの態様では、被験体における新生物疾患またはがんを処置する方法であって、１またはそれを超える治療剤を被験体に投与することを含み、ここで、１またはそれを超える治療剤が、（ａ）ＩＬ－２３シグナル伝達の阻害剤を含む第１の治療剤；および（ｂ）以下を含む第２の治療剤：（ｉ）１またはそれを超える調節剤であって、各々が、１またはそれを超える免疫チェックポイントタンパク質のアンタゴニストである、１またはそれを超える調節剤；（ｉｉ）１またはそれを超える調節剤であって、各々が、１またはそれを超える免疫刺激性受容体のアゴニストである、１またはそれを超える調節剤；（ｉｉｉ）１またはそれを超える調節剤であって、各々が、１またはそれを超えるサイトカインのシグナル伝達のアンタゴニストである、１またはそれを超える調節剤；（ｉｖ）１またはそれを超える調節剤であって、各々が、１またはそれを超えるサイトカイン受容体のアゴニストである、１またはそれを超える調節剤；（ｖ）１またはそれを超える調節剤であって、各々が、腫瘍細胞または免疫細胞の細胞表面上に発現または提示される１またはそれを超える細胞表面分子をモジュレートする、１またはそれを超える調節剤；（ｖｉ）ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、または造血幹細胞を含む１またはそれを超える免疫細胞；（ｖｉｉ）１またはそれを超える免疫原性化学療法剤；および／あるいは（ｖｉｉｉ）１またはそれを超える調節剤（one or modulators）であって、各々が、１またはそれを超える免疫阻害性酵素のアンタゴニストである、１またはそれを超える調節剤を含む、方法を本明細書中に提供する。
【0031】
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３シグナル伝達の阻害剤は、ＩＬ－２３に結合する組換えタンパク質であるＩＬ－２３結合部分を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３シグナル伝達の阻害剤は、ＩＬ－２３Ｒに結合する組換えタンパク質であるＩＬ－２３Ｒ結合部分を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３シグナル伝達の阻害剤は、本明細書に記載の組換え分子を含む。
【0032】
種々の実施形態では、ＩＬ－２３シグナル伝達の阻害剤は、抗体またはその抗原結合断片であり、その抗原結合断片が、結晶化可能断片（Ｆｃ）領域、抗原結合断片（Ｆａｂ）領域、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、軽鎖もしくはその機能的部分、軽鎖の可変領域（ＶＬ）、軽鎖の定常領域（ＣＬ）、重鎖もしくはその機能的部分、重鎖の可変領域（ＶＨ）、重鎖の定常領域（ＣＨ）、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはその抗原結合部分、またはこれらの組み合わせを含む。
【0033】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＩＬ－２３サブユニットを標的にするモノクローナル抗体を含む。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、ＩＬ－２３ｐ１９サブユニットを標的にする。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、リサンキズマブ、グセルクマブ、チルドラキズマブ、ブラジクマブ、およびミリキズマブのうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む。
【0034】
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ結合部分は、抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＡＳ２７６２９００－００の６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む。
【0035】
種々の実施形態では、第２の治療剤は、１またはそれを超える免疫チェックポイントタンパク質のアンタゴニストである調節剤を含む。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントタンパク質は、プログラム死－１（ＰＤ１；ＣＤ２７９）、プログラム死リガンド１（ＰＤＬ１）、プログラム死リガンド２（ＰＤＬ２）、細胞傷害性Ｔ－リンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ４；ＣＤ１５２）、Ｂリンパ球およびＴリンパ球のアテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリンサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびＩＴＩＭドメイン（ＴＩＧＩＴ）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３；ＣＤ２２３）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン３（Ｔｉｍ－３；ＨＡＶＣＲ２）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ４７、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰａ）、主要組織適合性遺伝子複合体クラスＩ，Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）、Ｉｇ様転写物２（ＩＬＴ２；ＬＩＬＲＢ１）、またはＩｇ様転写物４（ＩＬＴ４、ＬＩＬＲＢ２）から選択される。
【0036】
いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、ＰＤ１シグナル伝達のアンタゴニストである調節剤を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ１シグナル伝達のアンタゴニストは、ＰＤ１を標的にするポリペプチドである。いくつかの実施形態では、調節剤は、ＰＤ１（ＣＤ２７９）を標的にするモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む阻害剤である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、シンチリマブ、ササンリマブ、チセリズマブ、またはトリパリマブから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む。
【0037】
いくつかの実施形態では、調節剤は、プログラム死－１リガンド１（ＰＤＬ１；ＣＤ２７４；Ｂ７－Ｈ１）、プログラム死－１リガンド２（ＰＤＬ２）、またはこれらの両方から選択されるチェックポイントタンパク質の阻害剤である。いくつかの実施形態では、調節剤は、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、またはこれらの両方を標的にするポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、またはこれらの両方を標的にする抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、デュルバルマブ、アベルマブ、またはアテゾリズマブのうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む。
【0038】
いくつかの実施形態では、調節剤は、チェックポイントタンパク質ＣＴＬＡ－４のポリペプチド阻害剤である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＣＴＬＡ－４を標的にする抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、イピリムマブまたはトレメリムマブのうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む。
【0039】
いくつかの実施形態では、調節剤は、チェックポイントタンパク質ＬＡＧ－３のポリペプチド阻害剤である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＬＡＧ－３を標的にする抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、レラトリマブ、フィアンリマブ、Ｓｙｍ０２２、ＧＳＫ２８３１７８１、ＴＳＲ－０３３、イエルミリマブ、ファベゼリマブ、テボテリマブ、ＦＳ１１８、またはパブナリマブのうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む。
【0040】
いくつかの実施形態では、調節剤は、チェックポイントタンパク質ＴＩＧＩＴのポリペプチド阻害剤である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＴＩＧＩＴを標的にする抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、チラゴルマブ、ビボストリマブ、ＢＭＳ－９８６２０７、オシペルリマブ、エチギリマブ、ドムバナリマブ、ＥＯＳ－４４８、ＳＥＡ－ＴＧＴ、ＡＳＰ８３７４、ＣＯＭ９０２、またはＩＢＩ９３９のうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む。
【0041】
種々の実施形態では、第２の治療剤は、１またはそれを超える免疫刺激性受容体のアゴニストである調節剤を含む。いくつかの実施形態では、免疫刺激性受容体は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ；ＣＤ２７８）、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、糖質コルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ；ＣＤ３５７）、ＣＤ４０、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２８、またはＣＤ２７から選択される。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、ＣＤ４０ＬまたはそのＣＤ４０結合断片を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、ＣＤ８０もしくはＣＤ８６；またはそのＣＤ２８結合断片を含むポリペプチドである。
【0042】
種々の実施形態では、第２の治療剤は、腫瘍細胞または腫瘍関連間質細胞上に発現または提示される細胞表面分子の調節剤を含む。種々の実施形態では、細胞表面分子は、成長因子受容体、トランスフォーミング成長因子－ベータ受容体（ＴＧＦβＲ）、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリー受容体、Ｉｇスーパーファミリー受容体、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、腫瘍細胞表面分子、サイトカイン受容体、またはケモカイン受容体から選択される。
【0043】
いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、免疫細胞上に発現または提示される細胞表面分子の調節剤を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、または骨髄性細胞である。
【0044】
いくつかの実施形態では、細胞表面分子は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリー受容体、Ｉｇスーパーファミリー受容体、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、Ｔ細胞共刺激分子受容体、Ｔ細胞共阻害分子受容体、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞受容体である。いくつかの実施形態では、細胞表面分子は、骨髄性細胞阻害受容体、または骨髄性細胞刺激受容体である。
【0045】
種々の実施形態では、細胞表面受容体は、ＳＩＲＰａまたはＣＤ４７である。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、ＳＩＲＰａのＣＤ４７への結合を阻害するいくつかの実施形態では、第２の治療剤は、ＣＤ４７に結合するポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＣＤ４７を標的にする抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、マグロリマブ、ＺＬ－１２０１、ＴＪ０１１１３３、ＳＴＩ－６６４３、ＳＲＦ２３１、ＳＨＲ－１６０３、ＩＭＣ－００２、ＩＢＩ１８８、ＣＣ－９０００２、ＡＯ－１７６またはＡＫ１１７から選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＳＩＲＰａ細胞外ドメインまたはそのＣＤ４７結合断片を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、エボルパセプト、ＴＴＩ－６２１、またはＴＴＩ－６２２から選択される。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、ＳＩＲＰａに結合するポリペプチドである。
【0046】
種々の実施形態では、第２の治療剤は、１またはそれを超えるサイトカインのシグナル伝達のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、サイトカインはトランスフォーミング成長因子－ベータ（ＴＧＦｂ）である。いくつかの実施形態では、調節剤は、小分子キナーゼ阻害剤、ＴＧＦｂＲＩＩ ＥＣＤもしくはそのＴＧＦｂ結合断片を含むポリペプチド、または抗ＴＧＦβ抗体、抗ＴＧＦβＲ抗体、抗ＧＡＲＰ抗体、もしくは抗ＬＡＰ抗体から選択される抗体もしくはその抗原結合断片から選択されるＴＧＦｂシグナル伝達の阻害剤である。
【0047】
いくつかの実施形態では、小分子キナーゼ阻害剤は、ガルニセルチブを含むＴＧＦβＲ小分子キナーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、抗ＴＧＦβ抗体またはその抗原結合断片は、フレソリムマブの６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、ＴＧＦｂＲＩＩ ＥＣＤまたはそのＴＧＦｂ結合断片を含むポリペプチドは、ＡＶＩＤ２００、ビントラフスプアルファ（Ｍ７８２４）、抗ＣＴＬＡ４－ＴＧＦｂＲＩＩ、ＳＩＲＰａ ＥＣＤ－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＣＥＡ－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＰＳＭＡ－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＩＬ６Ｒ－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＰＤ１－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＥＧＦＲ－ＴＧＦｂＲＩＩ、または抗ＨＥＲ２－ＴＧＦｂＲＩＩから選択される。
【0048】
種々の実施形態では、サイトカインは、以下：ＩＬ－４、ＩＬ－１３、ＩＬ－１０、ＩＬ－６、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－１７、ＩＬ－２２、またはＶＥＧＦのうちの１つまたは複数から選択される。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－４またはＩＬ－１３である。
【0049】
いくつかの実施形態では、調節剤は、ＩＬ４受容体アルファ（ＩＬ４Ｒａ）を標的にするポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、デュピルマブの６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む抗体または抗原結合断片である。
【0050】
いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ１ｂである。いくつかの実施形態では、第２の治療剤はアナキンラを含む。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、カナキヌマブの６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む。
【0051】
いくつかの実施形態では、サイトカインはＩＬ１０である。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、ＩＬ１０Ｒの細胞外ドメインのＩＬ１０結合配列、またはＩＬ１０もしくはＩＬ１０Ｒを標的にする抗体もしくはその抗原結合断片を含む。
【0052】
種々の実施形態では、第２の治療剤は、１またはそれを超えるサイトカイン受容体のアゴニストである。いくつかの実施形態では、サイトカイン受容体は、ＩＬ１２Ｒ、ＩＬ１５Ｒ、およびＩＬ１８Ｒから選択される。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、ＩＬ－１２を含むポリペプチドである。
【0053】
種々の実施形態では、細胞表面分子は、ＣＡ１２５、ＣＡ１９－９、ＣＤ３０、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＥＡＣＡＭ５もしくは表面抗原分類、６６ｅ（ＣＤ６６ｅ）、ＣＥＡＣＡＭ６、ＤＬＬ３、ＤＬＬ４、ＤＰＥＰ３、ＥＧＦＲ ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＧＦ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ１５、ＭＵＣ１、ＰＲＬＲ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＳＥＺ６、ＳＬＡＭＦ７、ＴＦ、ｃＭｅｔ，クローディン、メソテリン、ネクチン４、ｕＰＡＲ、ＧＰＮＭＢ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２２、ＮａＰｉ２ｂ、ＳＬＴＲＫ６、ＳＴＥＡＰ１、ＭＵＣ１６、ＣＤ３７、ＧＣＣ、ＡＧＣ－１６、５Ｔ４、ＣＤ７０、ＴＲＯＰ２、ＣＤ７４、ＣＤ２７Ｌ、Ｆｒａ、ＣＤ１３８、ＣＡ６、ＣＤ３８、ＳＬＡＭＦ７、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３３またはＣＤ３０から選択される腫瘍細胞表面分子である。
【0054】
いくつかの実施形態では、調節剤は、腫瘍細胞表面分子を標的にするモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を含む阻害剤である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原断片は、ラベツズマブ、セルグツズマブ、セツキシマブ、ネシツムマブ、パニツムマブ、デパツキシズマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、エンフォルツマブ、またはサシツズマブのうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む。
【0055】
種々の実施形態では、免疫細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、またはマクロファージを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＨ１７細胞、ＣＤ４Ｔ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、ガンマデルタＴ細胞、ＮＫ細胞、自然リンパ球系細胞（ＩＬＣ）、またはガンマデルタＴ１７細胞を含む。
【0056】
いくつかの実施形態では、第１および第２の薬剤の組み合わせを用いた処置により、第２の薬剤のみでの処置よりも有効に、腫瘍成長が低下するか抑制され、重度の免疫関連有害事象が予防されるか低下し、全生存または無増悪生存が増加し、有害事象または毒性が軽減または予防され、あるいは骨への転移または骨格関連有害事象が軽減または予防される。
【0057】
いくつかの実施形態では、がんは、前立腺がん、膵臓がん、胆道がん、結腸がん、直腸がん、肝臓がん、腎臓がん、肺がん、精巣がん、乳がん、卵巣がん、脳がん、皮膚がん、膀胱がん、および頭頸部がん、黒色腫、肉腫、多発性骨髄腫、白血病、および／またはリンパ腫から選択される。
【0058】
いくつかの実施形態では、方法は、抗ＣＴＬＡ４－ＴＧＦβＲＩＩ分子を含む治療剤を被験体に投与することをさらに含む。
【0059】
いくつかの実施形態では、方法は、１またはそれを超える抗がん治療を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、１またはそれを超える抗がん治療は、免疫治療剤、化学療法分子、抗体、抗体－薬物コンジュゲート、小分子キナーゼ阻害剤、ホルモン剤、アンドロゲン合成阻害剤、アンドロゲン受容体アンタゴニスト、抗血管新生剤、細胞治療、ＣＡＲ－Ｔ細胞治療、ＣＡＲ－ＮＫ細胞治療、放射性核種治療、電離放射線、紫外放射線、冷凍アブレーション、熱アブレーション、選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）、選択的エストロゲン受容体分解薬（ＳＥＲＤ）、または高周波アブレーションを含む。いくつかの実施形態では、免疫治療剤は、免疫チェックポイント阻害剤、免疫刺激性受容体アゴニスト、免疫刺激性サイトカイン／サイトカイン受容体アゴニスト、免疫阻害性サイトカイン／サイトカイン受容体アンタゴニスト、腫瘍ワクチン、免疫調節性イミド薬、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、または腫瘍溶解性ウイルスから選択される。
【0060】
いくつかの実施形態では、被験体は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、被験体はヒトである。
【図面の簡単な説明】
【0061】
本発明のこれらおよび他の特徴、側面、および利点は、以下の説明および添付の図面を参照すると理解がより深まるようになる。
【0062】
【0063】
【0064】
【図3A】図３Ａは、ＰＤ１細胞外ドメイン中に少なくとも１つのアミノ酸改変を有する多重特異性ポリペプチドの例示的デザインに対応する略図を示す（ＰＤ１ ＥＣＤ Ａ１２３ＩまたはＧＶ－２）。野生型ＰＤ１と比較した場合、図３Ｂ～３Ｃは、ＰＤ１ ＥＣＤ Ａ１２３ＩまたはＰＤ１ ＥＣＤ ＧＶ－２がＰＤ１に対する優れた結合親和性を示し、図３Ｄ～３Ｅは、ＰＤＬ２に対する優れた結合親和性を示すことを示す。
【0065】
【図4A】図４Ａ～４Ｃは、ＩＬ－２３抗体がＰＤＬ１／ＰＤ１遮断によって誘導された抗腫瘍免疫応答を増強することを実証している。抗ＩＬ－２３（抗ＩＬ－２３ｐ１９）抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体の併用処置（（ａ－ＩＬ－２３／ＰＤＬ１遮断）により、抗ＰＤＬ１のみ（ａ－ＰＤＬ１）または抗ＩＬ－２３抗体のみ（ａ－ＩＬ－２３）で処置したマウスと比較して、生存率が優れており、腫瘍が縮小した。図４Ａは、併用処置（ａ－ＩＬ－２３／ＰＤＬ１遮断）は優れた生存率を示したことを示す。＊＊＊ペアワイズログランク検定によってｐ＜０．００５。Ｙ軸：生存確率。Ｘ軸：生存日数。図４Ｂは、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞を移植したマウスにおける腫瘍接種後の腫瘍体積（ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｌｍｎ）（Ｙ軸）の測定値を示す。併用処置（右のパネル）は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体のみでの処置（左のパネル）と比較した場合、腫瘍体積（ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｎ）を低下させる。図４Ｃは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体のみで処置したマウスと比較した場合の併用処置で処置したマウスにおける肺腫瘍転移の低下を示す。白色の斑点は腫瘍転移を示す。
【図4B】図４Ａ～４Ｃは、ＩＬ－２３抗体がＰＤＬ１／ＰＤ１遮断によって誘導された抗腫瘍免疫応答を増強することを実証している。抗ＩＬ－２３（抗ＩＬ－２３ｐ１９）抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体の併用処置（（ａ－ＩＬ－２３／ＰＤＬ１遮断）により、抗ＰＤＬ１のみ（ａ－ＰＤＬ１）または抗ＩＬ－２３抗体のみ（ａ－ＩＬ－２３）で処置したマウスと比較して、生存率が優れており、腫瘍が縮小した。図４Ａは、併用処置（ａ－ＩＬ－２３／ＰＤＬ１遮断）は優れた生存率を示したことを示す。＊＊＊ペアワイズログランク検定によってｐ＜０．００５。Ｙ軸：生存確率。Ｘ軸：生存日数。図４Ｂは、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞を移植したマウスにおける腫瘍接種後の腫瘍体積（ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｌｍｎ）（Ｙ軸）の測定値を示す。併用処置（右のパネル）は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体のみでの処置（左のパネル）と比較した場合、腫瘍体積（ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｎ）を低下させる。図４Ｃは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体のみで処置したマウスと比較した場合の併用処置で処置したマウスにおける肺腫瘍転移の低下を示す。白色の斑点は腫瘍転移を示す。
【図4C】図４Ａ～４Ｃは、ＩＬ－２３抗体がＰＤＬ１／ＰＤ１遮断によって誘導された抗腫瘍免疫応答を増強することを実証している。抗ＩＬ－２３（抗ＩＬ－２３ｐ１９）抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体の併用処置（（ａ－ＩＬ－２３／ＰＤＬ１遮断）により、抗ＰＤＬ１のみ（ａ－ＰＤＬ１）または抗ＩＬ－２３抗体のみ（ａ－ＩＬ－２３）で処置したマウスと比較して、生存率が優れており、腫瘍が縮小した。図４Ａは、併用処置（ａ－ＩＬ－２３／ＰＤＬ１遮断）は優れた生存率を示したことを示す。＊＊＊ペアワイズログランク検定によってｐ＜０．００５。Ｙ軸：生存確率。Ｘ軸：生存日数。図４Ｂは、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞を移植したマウスにおける腫瘍接種後の腫瘍体積（ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｌｍｎ）（Ｙ軸）の測定値を示す。併用処置（右のパネル）は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体のみでの処置（左のパネル）と比較した場合、腫瘍体積（ｔｕｍｏｒ ｖｏｌｕｍｎ）を低下させる。図４Ｃは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体のみで処置したマウスと比較した場合の併用処置で処置したマウスにおける肺腫瘍転移の低下を示す。白色の斑点は腫瘍転移を示す。
【0066】
【0067】
【図6】図６は、本明細書中に記載の例示的な多重特異性ポリペプチドが、免疫チェックポイント阻害剤である抗ＰＤ１抗体（ａ－ＰＤ１）（ｐ＝０．０３）またはチェックポイント阻害剤である抗ＰＤ１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体の組み合わせ（ａ－ＰＤＬ１＋ａ－ＣＴＬＡ４）での処置と比較して、腫瘍成長阻害により有効であることを実証している。抗ＩＬ－２３－ＰＤ１ＥＣＤおよび抗ＰＤ１抗体および抗ＣＴＬＡ４抗体（ａ－ＩＬ－２３－ＰＤ１＋ａ－ＣＴＬＡ４－ＴＧＦｂＲＩＩ）ポリペプチドでの併用処置は、抗ＰＤ１抗体と抗ＣＴＬＡ４抗体の併用処置（ａ－ＰＤ１＋ａ－ＣＴＬＡ４）と比較した場合、腫瘍成長を阻害し、統計的に相乗的な抗腫瘍効率（ｐ＜０．００１）を示す。
【0068】
【発明を実施するための形態】
【0069】
詳細な説明
ＩＬ－２３軸に関連するがん、自己免疫疾患、および炎症性障害を処置するための新規のポリペプチドおよび方法を本明細書中に提供する。
ＩＬ－２３軸に関連するがん、自己免疫疾患、および炎症性障害を処置するための新規のポリペプチドおよび方法を本明細書中に提供する。
【0070】
がんの場合、免疫治療剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）または他の抗がん治療（例えば、従来の抗がん治療）による免疫系の活性化は、Ｔｈ１７、ガンマデルタＴ１７、およびＩＬＣ３細胞のようなＩＬ－２３依存性免疫細胞の逆の結果を生む活性化および増大（expansion）をもたらす可能性がある。これらの細胞型は、その表現型を維持するＩＬ－２３シグナル伝達の存在下で、抗腫瘍免疫の抑制および／または腫瘍促進炎症に寄与する。さらに、これらの細胞型は、免疫関連有害事象および処置関連毒性に寄与する。そのようなものとして、本明細書中に記載の多重特異性ポリペプチドおよび処置の方法は、ＩＬ－２３シグナル伝達を遮断すると同時に、抗腫瘍免疫応答を活性化するようにデザインされている。このストラテジーは、免疫応答の活性化のみに注目したアプローチよりも優れた抗腫瘍効率およびより低い毒性の両方（すなわち、より広い免疫活性化の治療域）を可能にし得る。
【0071】
いくつかの場合、本明細書中に記載の多重特異性ポリペプチドおよび併用処置レジメンは、ＩＬ－２３シグナル伝達を妨害する１つの部分および免疫細胞活性化を促進するさらなる部分を含む。他の場合では、さらなる部分は、免疫細胞の表現型を抗腫瘍状態に偏向させるのにさらに役立つ。腫瘍誘導性免疫寛容をそれ自体で破壊するとＩＬ－２３依存性免疫細胞の逆の結果を生む活性化をもたらし得るが、本発明者らは、ＩＬ－２３シグナル伝達が阻害される状況で腫瘍誘導性免疫寛容を破壊へ向かわせるポリペプチドおよび方法を開示する。
【0072】
がん処置の状況においてＴｈ１７細胞を増大させる逆の結果を生む効果は明らかではない。実際には、いくつかの研究において、ＴＭＥにおけるＴｈ１７細胞の浸潤がより良好な臨床予後に関連することが示唆されている；あるいは、逆に、がんにおけるＴｈ１７細胞の役割が特徴づけられている。この分野におけるかかる所見を考慮して、本明細書中に記載の多重特異性ポリペプチドおよび種々の組み合わせは、有効性の増加および望ましくない免疫関連有害事象の軽減の両方についての免疫活性化（例えば、免疫チェックポイント阻害剤の使用）と併せたＩＬ－２３遮断の予想外の有益な効果を実証している。
【0073】
１つの態様では、組換え分子であって、（ａ）インターロイキン－２３（ＩＬ－２３）阻害ポリペプチド（ＩＩＰ）であって、前述のＩＩＰが、ＩＬ－２３結合ポリペプチドまたはＩＬ－２３Ｒ結合ポリペプチドを含むＩＩＰ；および（ｂ）１またはそれを超える免疫チェックポイントタンパク質または免疫刺激性受容体に結合する標的結合ポリペプチド部分を含む、組換え分子を本明細書中に提供する。ＩＩＰは、ＩＬ－２３阻害剤またはＩＬ－２３Ｒ阻害剤であり得る。標的結合ポリペプチドは、１またはそれを超える細胞表面分子またはそのリガンド（免疫チェックポイントタンパク質受容体（例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４）など）の阻害剤に特異的に結合することができる。したがって、本明細書中に記載の組換え分子は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）におけるＩＬ－２３／チェックポイントタンパク質（例えば、ＰＤ－１）シグナル伝達の特異的阻害および免疫応答の増強ならびに腫瘍成長の低下および／または抑制が可能である。
【0074】
定義
別段の定義がない限り、本明細書中で使用した全ての技術用語および科学用語は、本発明に属する当業者によって一般的に理解されている意味を有する。
別段の定義がない限り、本明細書中で使用した全ての技術用語および科学用語は、本発明に属する当業者によって一般的に理解されている意味を有する。
【0075】
本明細書中で使用される場合、用語「患者」および「被験体」は、交換可能に使用され、本発明の化合物で処置され得る任意の生きている生物を意味すると捉えることができる。そのようなものとして、用語「患者」および「被験体」としては、任意の非ヒト哺乳動物、霊長類、およびヒトが挙げられるが、これらに限定されない。
【0076】
本明細書中に列挙した病状のうちのいずれかに関する限りにおいて本開示の文脈では、用語「処置する」および「処置」などは、かかる状態に関連する少なくとも１つの症状を軽減または緩和するか、かかる状態の進行を遅延または逆転することを意味する。本開示の意味の範囲内で、用語「処置する」は、疾患の発現（すなわち、疾患の臨床的発現の前の期間）を停止、遅延させ、そして／または疾患の発症または悪化のリスクを低下させることも示す。また、状態（state）、障害、または状態（condition）に関する用語「処置する」および「処置」などは、（１）状態、障害、または状態に罹患し得るかその素因があり得るが、依然として状態、障害、または状態の臨床または準臨床症状を経験も示しもしていない被験体において発症する状態、障害、または状態の少なくとも１つの臨床または準臨床症状の出現の予防または遅延；または（２）状態、障害、または状態の阻害（すなわち、疾患もしくはその再発（維持処置の場合）または少なくとも１つのその臨床もしくは準臨床症状の発症の停止、低下、または遅滞）；または（３）疾患の軽減（すなわち、状態、障害、もしくは状態またはその臨床もしくは準臨床症状のうちの少なくとも１つを後退させること）を含み得る。
【0077】
本明細書中で使用される場合、疾患の「予防」は、疾患の完全な発症の阻害を指す。
【0078】
用語「生物試料」は、生物（例えば、ヒト被験体）に由来する任意の組織、細胞、流体、または他の材料を指す。ある特定の実施形態では、生物試料は、血清または血液である。
【0079】
用語「免疫グロブリン」は、一般に２対のポリペプチド鎖：１対の軽（Ｌ）鎖および１対の重（Ｈ）鎖を含む構造関連タンパク質のクラスを指す。「インタクトな免疫グロブリン」では、これらの鎖のうちの４つ全てがジスルフィド結合によって相互接続されている。免疫グロブリンの構造は十分に特徴づけられている。例えば、Ｐａｕｌ，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７ｔｈ ｅｄ．，Ｃｈ．５（２０１３）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡを参照のこと。簡潔に述べれば、各々の重鎖は、典型的には、重鎖可変領域（ＶＨ）および重鎖定常領域（ＣＨ）を含む。重鎖定常領域は、典型的には、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３と略される３つのドメインを含む。各々の軽鎖は、典型的には、軽鎖可変領域（ＶＬ）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、典型的には、ＣＬと略される１つのドメインを含む。
【0080】
用語「抗体」は、本明細書中でその最も広い意味で使用され、抗原またはエピトープに特異的に結合する１またはそれを超える抗原結合ドメインを含むある特定のタイプの免疫グロブリン分子が挙げられる。抗体は、具体的には、インタクトな抗体（例えば、インタクトな免疫グロブリン）、抗体断片、および多重特異性抗体が挙げられる。抗原結合ドメインの一例は、ＶＨ－ＶＬ二量体によって形成された抗原結合ドメインである。本明細書中で使用される「抗体」は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を包含し、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）、もしくはＩｇＭクラスの免疫グロブリン分子、またはその断片もしくは誘導体（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖抗体、ダイアボディ、二重特異性抗体、二機能性抗体、ヒト化抗体、およびその種々の誘導体が挙げられるが、これらに限定されない）を指す。
【0081】
用語「抗原結合断片」は、インタクトな抗体の一部を指し、そして／またはインタクトな抗体の抗原決定可変領域を指す。全長抗体の断片によって抗体の抗原結合機能を発揮することできることが公知である。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片、線状抗体、単鎖抗体、ダイアボディ、ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【0082】
用語「Ｆｃ領域」は、天然に存在する抗体においてＦｃ受容体および補体系のある特定のタンパク質と相互作用する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を意味する。種々の免疫グロブリンのＦｃ領域、およびこの領域中に含まれるグリコシル化部位の構造は、当該分野で公知である。Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ａｎｄ Ｃａｖａｃｉｎｉ，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１０，１２５：Ｓ４１－５２（その全体が参考として援用される）を参照のこと。Ｆｃ領域は、天然に存在するＦｃ領域であり得るか、本開示の他所に記載のように改変されたＦｃ領域であり得る。
【0083】
ＶＨ領域およびＶＬ領域を、より保存された領域が散在する超可変性の領域（「超可変領域」（ＨＶＲ）；「相補性決定領域」（ＣＤＲ）とも呼ばれる）にさらに細分することができる。より保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。各々のＶＨおよびＶＬは、一般に、以下の順序で（Ｎ末端からＣ末端）配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４。ＣＤＲは、抗原結合に関与し、抗体の抗原特異性および結合親和性に影響を及ぼす。Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ ５ｔｈ ｅｄ．（１９９１）Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（その全体が参考として援用される）を参照のこと。
【0084】
任意の脊椎動物種由来の軽鎖を、その定常ドメイン配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つのタイプのうちの１つに割り当てることができる。
【0085】
任意の脊椎動物種由来の重鎖を、以下の５つの異なるクラス（またはアイソタイプ）のうちの１つに割り当てることができる：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ。また、これらのクラスは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと命名されている。ＩｇＧクラスおよびＩｇＡクラスは、配列および機能の相違に基づいてサブクラスにさらに分類される。ヒトは、以下のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２。
【0086】
当業者は、いくつかの公知のナンバリングスキーム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，前出（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリングスキーム）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（「Ｃｏｎｔａｃｔ」ナンバリングスキーム）；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，２７：５５－７７（「ＩＭＧＴ」ナンバリングスキーム）；およびＨｏｎｅｇｇｅ ａｎｄ Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００１，３０９：６５７－７０（「ＡＨｏ」ナンバリングスキーム）（これらの各々は、その全体が参考として援用される）に記載のものが挙げられる）のうちのいずれかを使用してＣＤＲのアミノ酸配列境界を決定することができる。
【0087】
表１は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａのスキームによって同定されるＣＤＲ１－Ｌ（ＶＬのＣＤＲ１）、ＣＤＲ２－Ｌ（ＶＬのＣＤＲ２）、ＣＤＲ３－Ｌ（ＶＬのＣＤＲ３）、ＣＤＲ１－Ｈ（ＶＨのＣＤＲ１）、ＣＤＲ２－Ｈ（ＶＨのＣＤＲ２）、およびＣＤＲ３－Ｈ（ＶＨのＣＤＲ３）の位置を提供する。ＣＤＲ１－Ｈの場合、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａのナンバリングスキームの両方を使用して残基ナンバリングを提供する。
【0088】
ＣＤＲを、例えば、抗体ナンバリングソフトウェア（ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ａｂｎｕｍ／で利用可能であり、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００８，４５：３８３２－３８３９（その全体が参考として援用される）に記載のＡｂｎｕｍなど）を使用して割り当てることができる。
【表1】
【0089】
「Ｆｖ」断片は、１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインの非共有結合性に連結した二量体を含む。
【0090】
「Ｆａｂ」断片は、重鎖および軽鎖の可変ドメインに加えて、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂ断片は、例えば、組換え法または全長抗体のパパイン消化によって生成され得る。
【0091】
「Ｆ（ａｂ’）２」断片は、ジスルフィド結合によってヒンジ領域付近で連結した２つのＦａｂ’断片を含む。Ｆ（ａｂ’）２断片は、例えば組換え法またはインタクトな抗体のペプシン消化によって生成され得る。例えば、β－メルカプトエタノールでの処理によってＦ（ａｂ’）断片に分離することができる。
【0092】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、単一のポリペプチド鎖中にＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む。ＶＨおよびＶＬは、一般に、ペプチドリンカーによって連結されている。Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ Ａ．（１９９４）を参照のこと。いくつかの実施形態では、リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号５５）である。いくつかの実施形態では、ｎ＝１、２、３、４、５、または６。Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ．Ｉｎ Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ Ｍ．＆Ｍｏｏｒｅ Ｇ．Ｐ．（Ｅｄｓ．），Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｖｏｌ．１１３（ｐｐ．２６９－３１５）．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（その全体が参考として援用される）を参照のこと。
【0093】
「ｓｃＦｖ－Ｆｃ」断片は、Ｆｃドメインに結合したｓｃＦｖを含む。例えば、Ｆｃドメインは、ｓｃＦｖのＣ末端に結合し得る。Ｆｃドメインは、ｓｃＦｖ中の可変ドメインの配向（すなわち、ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨ）に応じてＶＨまたはＶＬに続き得る。当該分野で公知であるか、本明細書中に記載の任意の好適なＦｃドメインが使用され得る。いくつかの場合、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む。
【0094】
非ヒト抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する配列を最小限に含むキメラ抗体である。ヒト化抗体は、一般に、１またはそれを超えるＣＤＲ由来の残基が非ヒト抗体（ドナー抗体）の１またはそれを超えるＣＤＲ由来の残基によって置き換えられたヒト抗体（レシピエント抗体）である。ドナー抗体は、任意の好適な非ヒト抗体（所望の特異性、親和性、または生物学的効果を有するマウス、ラット、ウサギ、ニワトリ、または非ヒト霊長類の抗体など）であり得る。いくつかの例では、レシピエント抗体の選択されたフレームワーク領域残基は、ドナー抗体由来の対応するフレームワーク領域残基によって置き換えられている。また、ヒト化抗体は、レシピエント抗体やドナー抗体のいずれにおいても見出されない残基を含み得る。かかる改変は、抗体機能をさらに改善するために行われ得る。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８６，３２１：５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８８，３３２：３２３－３２９；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，１９９２，２：５９３－５９６（各々の全体が参考として援用される）を参照のこと。
【0095】
「ヒト抗体」は、ヒトまたはヒト細胞によって産生されたか、ヒト抗体レパートリーまたはヒト抗体コード配列を利用する非ヒト供給源に由来する（例えば、ヒト供給源から入手したかｄｅ ｎｏｖｏでデザインした）抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を保有する抗体である。ヒト抗体は、具体的には、ヒト化抗体を除外する。いくつかの実施形態では、げっ歯類を、そのげっ歯類抗体配列をヒト抗体配列で置き換えるように遺伝子操作する。
【0096】
用語「腫瘍」は、悪性や良性と無関係の全ての新生物細胞の成長および増殖、ならびに全ての前がん性およびがん性の細胞および組織を指す。本明細書中で使用される場合、「がん」は、異常細胞の無制御の分裂によって引き起こされる疾患を指す。用語「がん」、「新生物疾患」、および「腫瘍」は、本明細書中で言及されるように、相互に排他的でない。用語「細胞増殖性障害」および「増殖性障害」は、ある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を指す。いくつかの実施形態では、細胞増殖性障害はがんである。がんの非限定的な例としては、前立腺がん、膵臓がん、胆道がん、結腸がん、直腸がん、肝臓がん、腎臓がん、肺がん、精巣がん、乳がん、卵巣がん、脳がん、皮膚がん、膀胱がん、および頭頸部がん、黒色腫、肉腫、多発性骨髄腫、白血病、および／またはリンパ腫が挙げられる。
【0097】
用語「免疫応答」は、抗原（例えば、ウイルス抗原）などの刺激に対する免疫系細胞（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、または多形核球）の応答を指す。能動免疫応答は、抗体の合成もしくは細胞媒介反応性の発達またはこれらの両方に至る免疫担当細胞の分化および増殖に関与し得る。（例えば、感染またはワクチン接種による）抗原への曝露後に宿主が能動免疫応答を開始することができる。能動免疫応答を、能動免疫された宿主から非免疫宿主への、例えば、抗体、伝達因子、胸腺移植片、および／またはサイトカインなどの物質の移動によって獲得することができる受動免疫と対比することができる。
【0098】
「相同性」または「同一性」または「類似性」は、２つのペプチド間または２つの核酸分子間の配列類似性を指すことができる。相同性は、比較するためにアラインメントすることができる各配列内の位置の比較によって決定することができる。比較される配列内の位置が同じ塩基またはアミノ酸によって占有され得る場合、分子は、その位置において相同であり得る。配列間の相同性の程度は、前述の配列が共有する、一致するまたは相同である位置の数の関数であり得る。「無関係の」または「非相同性の」配列は、本開示の配列の１つと４０％未満の同一性、あるいは２５％未満の同一性を共有する。配列相同性は、参照配列に対するある配列の％同一性を指すことができる。実際には、任意の特定の配列が本明細書中に記載の任意の配列（本明細書中に記載の特定の核酸配列に対応することができる）に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり得るかどうかについて、かかる特定のポリペプチド配列を、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ配列解析パッケージ，Ｕｎｉｘ（登録商標）用バージョン８，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７１１）などの公知のコンピュータプログラムを使用することで慣習的に決定することができる。特定の配列が、例えば参照配列と９５％同一であるかどうかを決定するためのＢｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の配列アラインメントプログラムを使用した場合、同一率を参照配列の全長にわたって計算することができ、かつ配列相同性におけるギャップを全参照配列の５％まで許容することができるようなパラメーターを設定することができる。２またはそれを超える核酸またはポリペプチド配列の文脈における用語「同一」率または「相同」率は、下記の配列比較アルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰおよびＢＬＡＳＴＮまたは当業者が利用可能な他のアルゴリズム）のうちの１つを使用して測定するか、目視によって最大限一致するように比較およびアラインメントした場合に同一である指定の百分率のヌクレオチドまたはアミノ酸残基を有する２つまたはそれを超える配列またはサブシーケンスを指す。適用に応じて、「同一」率は、比較される配列領域にわたって（例えば、機能的ドメインにわたって）存在することができるか、あるいは、比較される２つの配列の全長にわたって存在することができる。配列比較のために、典型的には１つの配列は、試験配列が比較される参照配列としての役目を果たす。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列および参照配列をコンピュータに入力し、必要であれば部分配列の座標を指定し、かつ配列アルゴリズムプログラムのパラメーターを指定する。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定したプログラムのパラメーターに基づいて参照配列と比較して、試験配列（複数可）についての配列同一率を計算する。本明細書中の目的のために、同一率および配列類似性を、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）に記載のＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して決定する。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、国立生物工学情報センター（以下のワールド・ワイド・ウェブ上：ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）から公的に入手可能である。
【0099】
いくつかの場合、参照配列（問い合わせ配列、例えば、本開示の配列）と対象配列との間の同一性（グローバル配列アラインメントとも称される）を、ＦＡＳＴＤＢコンピュータプログラムを使用して決定することができる。いくつかの実施形態では、ＦＡＳＴＤＢアミノ酸アラインメントで使用された同一性を局所的に解釈することができる特定の実施形態についてのパラメーターは、以下を含むことができる：スコアリングスキーム＝ＰＡＭ（許容変異率）０、ｋ－タプル＝２、ミスマッチペナルティ＝１、結合ペナルティ＝２０、無作為化群長＝０、カットオフスコア＝１、ウィンドウサイズ＝配列長、ギャップペナルティ＝５、ギャップサイズペナルティ＝０．０５、ウィンドウサイズ＝５００または対象配列長（どれもより短くてよい）。この実施形態によれば、対象配列が内部欠失のためではなくＮ末端またはＣ末端の欠失のために問い合わせ配列より短い可能性がある場合、グローバル同一率を計算するときにＦＡＳＴＤＢプログラムが対象配列のＮ末端およびＣ末端の短縮を考慮しないという事実を考慮して結果を手作業で補正することができる。問い合わせ配列と比較してＮ末端またはＣ末端が短縮した対象配列の場合、対象配列のＮ末端およびＣ末端の側方に位置し得る問い合わせ配列の残基（対応する対象配列と一致／アラインメントできない）の数を問い合わせ配列の総塩基に対する百分率として計算することによって同一率を補正することができる。残基が一致／アラインメントすることができるかどうかを、ＦＡＳＴＤＢ配列アラインメントの結果によって決定することができる。次いで、この百分率を、指定のパラメーターを使用したＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算された同一率から差し引いて、最終同一率スコアに到達することができる。この最終同一率スコアを、この実施形態の目的のために使用することができる。いくつかの場合、問い合わせ配列と一致／アラインメントすることができない対象配列のＮ末端およびＣ末端に対する残基のみを、同一率スコアを手作業で調整するために考慮することができる。すなわち、対象配列の最も遠くのＮ末端およびＣ末端の残基の外側の問い合わせ残基の位置のみを、この手作業での補正のために考慮することができる。例えば、９０残基の対象配列を、１００残基の問い合わせ配列とアラインメントして、同一率を決定することができる。対象配列のＮ末端で欠失が起こると、その結果として、ＦＡＳＴＤＢアラインメントは、Ｎ末端の最初の１０残基の一致／アラインメントを示さない。１０個の不対合残基は１０％の配列を示すので（適合しなかったＮ末端およびＣ末端の残基数／問い合わせ配列中の残基の総数）、ＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算された同一率スコアから１０％を差し引くことができる。残りの９０残基が完全に適合した場合、最終同一率は９０％であり得る。別の例では、９０残基の対象配列を、１００残基の問い合わせ配列と比較することができる。この時、欠失は内部欠失であり得るので、問い合わせと一致／アラインメントすることができない対象配列のＮ末端またはＣ末端に残基は存在し得ない。この場合、ＦＡＳＴＤＢによって計算された同一率を、手作業で補正することができない。再度、問い合わせ配列と一致／アラインメントすることができないＦＡＳＴＤＢアラインメントに表示された対象配列のＮ末端およびＣ末端の外側の残基の位置のみを手作業で補正することができる。
【0100】
句「薬学的に許容され得る」は、本明細書中に記載の組成物に関して使用される場合、生理学的に許容することができ、かつ典型的には被験体（例えば、ヒト）に投与したときに有害反応を生じないかかる組成物の分子実体および他の成分を指す。好ましくは、用語「薬学的に許容され得る」は、哺乳動物、より具体的にはヒトでの使用について連邦政府または州政府の規制当局より承認を受けたか、米国薬局方または他の一般に認識されている薬局方に収載されていることを意味する。
【0101】
本明細書中で使用される「担体」は、使用した投薬量および濃度に曝露された細胞または哺乳動物に無毒である薬学的に許容され得る担体、賦形剤、または安定剤を含む。しばしば、生理学的に許容され得る担体は、ｐＨ緩衝化水溶液である。生理学的に許容され得る担体の例としては、バッファー（リン酸バッファー、クエン酸バッファー、および他の有機酸のバッファーなど）；抗酸化剤（アスコルビン酸およびメチオニンが挙げられる）；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン（メチルまたはプロピルパラベンなど）；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど）；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジンなど）；モノサッカリド、ジサッカリド、および他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンが挙げられる）；キレート剤（ＥＤＴＡなど）；糖（スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトールなど）；塩形成対イオン（ナトリウムなど）；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；および／または非イオン性界面活性剤（ＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など）が挙げられる。
【0102】
本明細書中で使用される「希釈剤」は、薬学的に許容され得（ヒトへの投与に関して安全かつ無毒である）、かつ液体製剤（凍結乾燥後に再構成された製剤など）の調製に有用な希釈剤である。例示的な希釈剤としては、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル液、またはデキストロース溶液が挙げられる。別の実施形態では、希釈剤としては、塩の水溶液および／または緩衝液を挙げることができる。
【0103】
「防腐剤」は、細菌活性を低下させるために本明細書中の製剤に添加することができる化合物である。防腐剤の添加により、例えば、反復使用（反復投与）製剤の生産を容易にすることができる。潜在的な防腐剤の例としては、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム（アルキル基が長鎖化合物であるアルキルベンジルジメチル塩化アンモニウムの混合物）、および塩化ベンゼトニウムが挙げられる。他のタイプの防腐剤としては、芳香族アルコール（フェノール、ブチルおよびベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチルまたはプロピルパラベンなど）、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、およびｍ－クレゾールなど）が挙げられる。本明細書中で最も好ましい防腐剤は、ベンジルアルコールである。
【0104】
用語「医薬製剤」は、有効成分の生物学的活性を有効にするような形態であり、製剤を投与されると考えられる被験体に対して受け入れ難い毒性を示すさらなる成分を含まない調製物を指す。かかる製剤は滅菌されている。「滅菌」製剤は、無菌であるか、全ての生存している微生物およびその胞子を含まない。
【0105】
「安定な」製剤は、製剤中のタンパク質が保存の際にその物理的および化学的な安定性ならびに完全性を本質的に保持している製剤である。タンパク質安定性を測定するための種々の分析技術は、当該分野で利用可能であり、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７－３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）およびＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９－９０（１９９３）に概説されている。安定性を、選択された温度で選択された期間測定することができる。迅速なスクリーニングのために、製剤を４０℃で２週間～１ヶ月保持してよく、その期間に安定性を測定する。製剤を２～８℃で保存しようとする場合、一般に、製剤は、３０℃または４０℃で少なくとも１ヶ月および／または２～８℃で少なくとも２年間安定でなければならない。製剤を３０℃で保存しようとする場合、一般に、製剤は、３０℃で少なくとも２年間および／または４０℃で少なくとも６ヶ月安定でなければならない。例えば、保存中の凝集度をタンパク質安定性の指標として使用することができる。したがって、「安定な」製剤は、約１０％未満、好ましくは約５％未満のタンパク質が製剤中の凝集物として存在する製剤であり得る。他の実施形態では、製剤保存中の凝集物形成の任意の増加を決定することができる。
【0106】
「再構成された」製剤は、凍結乾燥されたタンパク質または抗体の製剤を、タンパク質が製剤全体に分散されるように希釈剤に溶解することによって調製されている製剤である。再構成された製剤は、目的のタンパク質で処置すべき患者への投与（例えば、皮下投与）に好適であり、ある特定の実施形態では、非経口投与または静脈内投与に好適な製剤であり得る。
【0107】
「等張性」製剤は、ヒトの血液と本質的に同一の浸透圧を有する製剤である。等張性製剤は、一般に、約２５０～３５０ｍＯｓｍの浸透圧を有する。用語「低張性」は、ヒト血液未満の浸透圧を有する製剤を記載する。それに応じて、用語「高張性」を、ヒト血液を超える浸透圧を有する製剤を記載するために使用する。等張性を、例えば、蒸気圧または氷凍結型浸透圧計を用いて測定することができる。本出願の製剤は、塩および／または緩衝液の添加の結果として高張性であり得る。
【0108】
本明細書中で使用される場合、「免疫細胞」、「免疫エフェクター細胞」、または「免疫応答細胞」としては、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、抗原提示細胞（ＡＰＣ）が挙げられる。
【0109】
用語「エフェクターＴ細胞」または「Ｔ細胞」としては、Ｔヘルパー（すなわち、ＣＤ４＋）細胞および細胞傷害性（すなわち、ＣＤ８＋）Ｔ細胞が挙げられる。ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞は、いくつかの免疫学的過程（Ｂ細胞の形質細胞および記憶Ｂ細胞への成熟、ならびに細胞傷害性Ｔ細胞およびマクロファージの活性化が挙げられる）の発生に寄与する。ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞は、ウイルス感染細胞および腫瘍細胞を破壊する。エフェクターＴ細胞に関するさらなる情報については、Ｓｅｄｅｒ ａｎｄ Ａｈｍｅｄ，Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，４：８３５－８４２（その全体が参考として援用される）を参照のこと。
【0110】
用語「制御性Ｔ細胞」としては、例えば、エフェクターＴ細胞の抑制によって免疫学的寛容を調節する細胞が挙げられる。いくつかの態様では、制御性Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋表現型を有する。いくつかの態様では、制御性Ｔ細胞は、ＣＤ８＋ＣＤ２５＋表現型を有する。制御性Ｔ細胞に関するさらなる情報については、Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２０１２，１６５：２０８９－２０９９（その全体が参考として援用される）を参照のこと。
【0111】
用語「Ｔｈ１７細胞」としては、シグネチャー転写因子ＲＯＲガンマおよびサイトカイン（インターロイキン－１７（ＩＬ－１７）など）の発現を特徴とするＣＤ４＋Ｔ細胞のサブセットが挙げられる。用語「ガンマデルタＴ１７細胞」としては、同様にＩＬ－１７の発現を特徴とするガンマデルタＴ細胞のサブセットが挙げられる。用語「ＩＬＣ３細胞」としては、自然免疫細胞のサブセットが挙げられる。
【0112】
用語「樹状細胞」は、ナイーブＴ細胞を活性化し、Ｂ細胞の成長および分化を刺激することができるプロフェッショナル抗原提示細胞を指す。
【0113】
用語「処置（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」（および「処置する（ｔｒｅａｔ）」または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」などのそのバリエーション）は、処置を必要とする被験体における疾患または状態の自然経過を変化させようと試みる臨床的介入を指す。処置を、予防のためおよび臨床的な病的状態の経過中の両方において行うことができる。望ましい処置の効果としては、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接または間接的な病理学的帰結の減少、転移の予防、疾患進行速度の低下、病状の改善または一時的軽減、および寛解または予後の改善が挙げられる。
【0114】
本明細書中で使用される場合、用語「治療有効量」または「有効量」は、被験体に投与したときに疾患または障害を処置するのに有効な、本明細書中に提供された組換え分子、ポリペプチド、または医薬組成物のうちのいずれかの量を指す。
【0115】
本明細書中で使用される場合、「標的結合部分」または「標的結合ポリペプチド」は、特異的な分子または細胞の成分に局在化して結合する能力を有する分子を指す。ターゲティング結合部分またはポリペプチドは、抗体、抗体断片、ｓｃＦｖ、Ｆｃ含有ポリペプチド、融合抗体、ポリペプチド、ペプチド、アプタマー、リガンド、核酸、またはこれらの任意の組み合わせであり得る。非限定的な例として、ターゲティング部分またはポリペプチドは、細胞または組織中に存在する分子、罹患した細胞または組織（例えば、がん細胞または腫瘍）中の分子、正常な細胞または組織（例えば、免疫細胞）、免疫応答をモジュレートする細胞分子または細胞外分子（例えば、サイトカイン（ＩＬ－２３など）、または免疫チェックポイントタンパク質（ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４など））、成長因子受容体（例えば、ＴＧＦｂＲＩＩ、ＶＥＧＦＲ、ＴＮＦＲ、ＥＧＦＲ）、成長因子、サイトカイン受容体、サイトカイン、または細胞表面分子に結合することができる。別の例として、ターゲティング部分またはポリペプチドは、腫瘍細胞の成分または腫瘍細胞付近（例えば、腫瘍脈管構造または腫瘍微小環境）、腫瘍微小環境、腫瘍脈管構造、腫瘍関連リンパ球、腫瘍抗原、腫瘍関連抗原、腫瘍細胞表面分子、腫瘍抗原決定基、腫瘍抗原含有融合タンパク質、腫瘍関連細胞、腫瘍関連免疫細胞、または腫瘍ワクチンに結合することができる腫瘍ターゲティング部分である。ターゲティング部分またはポリペプチドが特異的に結合することができる非限定的な例は、以下が挙げられる分子または成分である：上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ１、ＥｒｂＢ－１、ＨＥＲ１）、ＥｒｂＢ－２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ＥｒｂＢ－３／ＨＥＲ３、ＥｒｂＢ－４／ＨＥＲ４、ＥＧＦＲリガンドファミリー；インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）ファミリー、ＩＧＦ結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）、ＩＧＦＲリガンドファミリー（ＩＧＦ－１Ｒ）；血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）ファミリー、ＰＤＧＦＲリガンドファミリー；線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）ファミリー、ＦＧＦＲリガンドファミリー、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）ファミリー、ＶＥＧＦファミリー；ＨＧＦ受容体ファミリー：ＴＲＫ受容体ファミリー；エフリン（ＥＰＨ）受容体ファミリー：ＡＸＬ受容体ファミリー；白血球チロシンキナーゼ（ＬＴＫ）受容体ファミリー；ＴＩＥ受容体ファミリー、アンギオポエチン１、２；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体（ＲＯＲ）受容体ファミリー；ジスコイジンドメイン受容体（ＤＤＲ）ファミリー；ＲＥＴ受容体ファミリー；ＫＬＧ受容体ファミリー；ＲＹＫ受容体ファミリー；ＭｕＳＫ受容体ファミリー；トランスフォーミング成長因子アルファ（ＴＧＦ－α）、ＴＧＦ－α受容体；トランスフォーミング成長因子－ベータ（ＴＧＦ－β）、ＴＧＦ－β受容体；インターロイキンβ受容体アルファ２鎖（ＩＬ１３Ｒアルファ２）、インターロイキン－６（ＩＬ－６）、１Ｌ－６受容体、インターロイキン－４、ＩＬ－４受容体、サイトカイン受容体、クラスＩ（ヘマトポイエチンファミリー）およびクラスＩＩ（インターフェロン／ＩＬ－１０ファミリー）受容体、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリー、ＴＮＦ－α、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）、デスレセプターファミリー、ＴＲＡＩＬ－受容体；がん精巣（ＣＴ）抗原、系統特異的抗原、分化抗原、アルファ－アクチニン－４、ＡＲＴＣ１、フィブロネクチン（ＦＮ）、ＧＰＮＭＢ、ＨＬＡ－Ａ２、ＭＬＡ－Ａ１１、ＭＡＲＴ２、黒色腫遍在性変異１、２、３（ＭＵＭ－１、２、３）、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、ｎｅｏ－ＰＡＰ、ミオシンクラス１、ＮＦＹＣ、ＯＧＴ、ＯＳ－９、ｐｍｌ－ＲＡＲアルファ融合タンパク質、ＰＲＤＸ５、ＰＴＰＲＫ、ＩＲＴ２、ＳＮＲＰＤ１、ＳＹＴ－ＳＳＸ１または－ＳＳＸ２融合タンパク質、ＢＡＧＥ、ＢＡＧＥ－１－５、ＧＡＧＥ－１－８、ＭＧＡＴ５、ＬＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、黒色腫上のＣＴＬ認識抗原（ＣＡＭＥＬ）、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）ファミリーのメンバー、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ（ＭＬＡＮＡ）、ｇｐ１００、ｇｐ１００／Ｐｍｅ１１７（Ｓ１ＬＶ）、チロシナーゼ（ＴＹＲ）、ＴＲＰ－１、ＨＡＧＥ、ＮＡ－８８、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＬＡＧＥ－２、ＳＡＧＥ、Ｓｐ１７、ＳＳＸ－１－４、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、カリクフェイン４、マンマグロビン－Ａ、ＯＡ１、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原、ＴＲＰ－２、アディポフィリン、黒色腫（ｎｉｅｌａｎｏｒｎａ）に存在しないインターフェロン誘導性タンパク質２（ＡＩＭ－２）、ＢＩＮＧ－４、ＣＰＳＦ、サイクリンＤ１、上皮細胞接着分子（Ｅｐ－ＣＡＭ）、ＥｐｂＡ３、線維芽細胞成長因子－５（ＦＧＦ－５）、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＵＣＩ、ＰＢＦ、ＦＲＡＭＥ、ＲＡＧＥ－１、ＲＮＦ４３、ＲＵ２ＡＳ、ＳＯＸ１０、ＳＴＥＡＰ１、ＸＡＧＥ、ＡＤＡＭ２、ＰＡＧＥ－５、ＬＩＰ１、ＣＴＡＧＥ－１、ＣＳＡＧＥ、ＭＭＡ１、ＣＡＧＥ、ＢＯＲＩＳ、ＨＯＭ－ＴＥＳ－８５、ＡＦ１５ｑ１４、ＨＣＡ６６Ｉ、ＬＤＨＣ、ＭＯＲＣ、ＳＧＹ－１、ＳＰＯ１１、ＴＰＸ１、ＮＹ－ＳＡＲ－３５、ＦＴＨＬＩ７、、ＴＤＲＤ１、ＴＥＸ １５、ＦＡＴＥ、ＴＰＴＥ、エストロゲン受容体（ＥＲ）、アンドロゲン受容体（ＡＲ）、ＣＤ４０、ＣＤ３０、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ３、がん抗原７２－４（ＣＡ７２－４）、がん抗原１５－３（ＣＡ１５－３）、がん抗原２７－２９（ＣＡ２７－２９）、がん抗原１２５（ＣＡ１２５）、がん抗原１９－９（ＣＡ１９－９）、ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、１－２ミクログロブリン、扁平上皮癌抗原、ＧＭ２、７０７アラニンプロリン（７０７－ＡＰ）、Ｔ細胞によって認識される腺癌抗原４（ＡＲＴ－４）、癌胎児形成抗原ペプチド－１（ＣＡＰ－１）、カルシウム活性化塩素チャネル－２（ＣＬＣＡ２）、シクロフィリンＢ（Ｃｙｐ－Ｂ）、ヒト環状体腫瘍－２（ＨＳＴ－２）。本発明の組成物は、ペプチド／ポリペプチドとしての上記および／またはこれらをコードするものをさらに含むことができる。
【0116】
本明細書中で使用される場合、用語「被験体」は、哺乳動物被験体を意味する。例示的な被験体としては、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ラクダ、ヤギ、ウサギ、およびヒツジが挙げられる。ある特定の実施形態では、被験体はヒトである。いくつかの実施形態では、被験体は、本明細書中に提供された多重特異性ポリペプチドで処置することができる疾患または状態を有する。いくつかの態様では、疾患または状態はがんである。いくつかの態様では、疾患または状態は免疫障害である。
【0117】
用語「免疫刺激性受容体」は、免疫細胞の細胞表面上に発現される、前述の細胞を活性化、変異、増殖、または刺激するポリペプチドを指す。いくつかの態様では、免疫刺激性受容体は、１またはそれを超える細胞内の免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）または免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を介してシグナル伝達し得る。Ｔ細胞上で発現される免疫刺激性受容体のサブセットは、「Ｔ細胞共刺激受容体」と称され得る。いくつかの態様では、Ｔ細胞共刺激受容体がその同族リガンドによって連結されると、Ｔ細胞を活性化する細胞内シグナル伝達が生じる。いくつかの態様では、この「シグナル２」は、ＴＣＲ連結に起因する「シグナル１」と協力して作用して、Ｔ細胞を完全に活性化する。Ｔ細胞共刺激受容体の非限定的な例としては、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ；ＣＤ２７８）、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、糖質コルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ；ＣＤ３５７）、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２８、またはＣＤ２７が挙げられる。自然免疫細胞上に発現された免疫刺激性受容体のサブセットは、「自然免疫刺激性受容体」と称され得る。ＮＫ細胞上に発現される自然免疫刺激性受容体の非限定的な例としては、ＴＲＡＩＬ、ＣＤ１６、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、２Ｂ４（ＣＤ２４４）、ＤＮＡＭ－１（ＣＤ２２６）、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、およびＣＤ２７が挙げられる。骨髄性細胞上に発現される自然免疫刺激性受容体の非限定的な例としては、ＤＡＰ１２およびＦｃ受容体ガンマ、ならびにＤＡＰ１２およびＦｃ受容体ガンマのようなＩＴＡＭ含有アダプターに結合した受容体（ＴＲＥＭ－２など）が挙げられる。
【0118】
用語「免疫チェックポイントタンパク質」は、免疫細胞の活性化を減弱させるポリペプチドを指す。いくつかの態様では、免疫チェックポイントタンパク質としては、免疫細胞中の阻害シグナルを伝達する受容体（例えば、ＰＤ－１）およびかかる受容体を活性化するリガンド（例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２）が挙げられる。他の態様では、免疫チェックポイントタンパク質としては、免疫刺激性受容体のリガンドを隔離する受容体が挙げられる（例えば、ＣＴＬＡ－４は、免疫刺激性リガンドＣＤ８０を隔離し、それにより、ＣＤ８６は免疫刺激性受容体ＣＤ２８とのその相互作用が妨害される）。いくつかの態様では、免疫チェックポイントタンパク質は、１またはそれを超える細胞内の免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）または免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を介してシグナル伝達し得る。Ｔ細胞上に発現される免疫チェックポイント受容体のサブセットは、「Ｔ細胞共阻害受容体」と称され得、その同族リガンドは「Ｔ細胞共阻害リガンド」と称され得る。自然免疫細胞上に発現される免疫チェックポイント受容体のサブセットは、「自然阻害受容体」と称され得、その同族リガンドは「自然阻害リガンド」と称され得る。
【0119】
用語「免疫原性化学療法剤」は、がん細胞を免疫原性細胞死に至らせる化学療法剤を指す。免疫原性細胞死は、細胞死が抗原特異的免疫応答を駆動することができる任意の機序を指す。化学療法、照射、および標的療法が挙げられる多数の抗がん治療は、免疫原性細胞死を誘導することができる。いくつかの態様では、免疫原性化学療法剤は、遺伝毒性を示す。免疫原性細胞死を引き起こすことができる化学療法剤クラスの非限定的な例としては、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、イフォスファミド）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、ドキソルビシン）、白金誘導体（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン）、タキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）、またはアントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン）が挙げられる。いくつかの態様では、免疫原性化学療法剤またはその誘導体は、抗体－薬物コンジュゲートとして送達用の抗体または他のポリペプチドにコンジュゲートされ得る。
【0120】
用語「免疫阻害性酵素」は、代謝活性が免疫抑制効果を有する酵素を指す。いくつかの実施形態では、免疫阻害性酵素は、エクトヌクレオチダーゼ（例えば、ＣＤ３９、ＣＤ７３）またはインドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼである。好適な免疫阻害性酵素の非限定的な例としては、キエシンスルフヒドリルオキシダーゼ１（ＱＳＯＸ１）、炭酸脱水酵素１２（ＣＡ１２）、および炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）が挙げられる。
【0121】
本明細書中で使用される場合、特定の標的の「調節剤」は、制限されないが、ある特定の実施形態では、前述の標的に結合し、前述の標的の活性を阻害し得る（すなわち、アンタゴニストとして作用し得る）薬剤を指すか、あるいは、別の実施形態では、調節剤は、前述の標的の活性を促進し得る（すなわち、アゴニストとして作用し得る）。調節剤は、（例えば、その同族結合パートナー、そのシグナル伝達の上流の分子、またはそのシグナル伝達の下流の分子への結合によって）所与の標的の活性を直接または間接的に阻害または促進し得る。
【0122】
用語「腫瘍間質細胞」は、腫瘍微小環境中の非悪性細胞を指す。１つの態様では、腫瘍間質細胞は、腫瘍中の構造組織または結合組織の成分である。別の態様では、腫瘍間質細胞は、血管を形成するか血管の形成に関与する。腫瘍間質細胞の非限定的な例としては、線維芽細胞、がん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）、血管内皮細胞、周皮細胞、脂肪細胞（ａｄｉｐｐｏｃｙｔｅ）、間葉間質細胞、および筋線維芽細胞が挙げられる。
【0123】
用語「免疫関連有害事象」（ｉｒＡＥ）は、免疫活性化によって引き起こされる任意の望ましくない副作用を指す。ｉｒＡＥとしては、胃腸毒性、内分泌毒性、心毒性、肺毒性、肝臓毒性、リウマチ性（rheumatalogical）毒性、腎臓毒性、神経学的または皮膚科学的／皮膚毒性が挙げられ得る。ｉｒＡＥは、免疫チェックポイント阻害剤、または免疫細胞の活性化に原因するか関連する他の抗がん治療を用いた処置に原因し得るか、関連し得る。ｉｒＡＥは、Ｍａｒｔｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，‘‘Ａｄｖｅｒｓｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ－ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ，ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ａｎｄ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ．’’Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０１９；１６：５６３（その全体が本明細書中で援用される）にさらに定義され、概説されている。
【0124】
配列表中の記号「＋」は、表示のポリペプチド配列の融合を意味する。例えば、「Ａ＋Ｂ」は、表示の順序でのＡのＢへの融合を意味する（すなわち、Ｎ末端－Ａ－Ｂ－Ｃ末端）。
【0125】
ＩＬ－２３／ＩＬ－２３Ｒを遮断する多重特異性ポリペプチド
ＩＬ－２３は、悪性細胞の発生、進行、および転移に関与する腫瘍微小環境（ＴＭＥ）の１つの成分である。ＩＬ－２３は、宿主免疫応答を操作し、ＴＭＥ中の細胞をモジュレートし、種々の前悪性腫瘍および悪性腫瘍に直接影響を及ぼし得る。
ＩＬ－２３は、悪性細胞の発生、進行、および転移に関与する腫瘍微小環境（ＴＭＥ）の１つの成分である。ＩＬ－２３は、宿主免疫応答を操作し、ＴＭＥ中の細胞をモジュレートし、種々の前悪性腫瘍および悪性腫瘍に直接影響を及ぼし得る。
【0126】
免疫細胞活性化を促進する薬剤でのがんの処置により、抗腫瘍免疫を阻害し、そして／または腫瘍形成性炎症性シグナル伝達に寄与するＴ細胞サブセットの活性化をもたらし得る。例えば、Ｔｈ１７細胞は、シグネチャー転写因子ＲＯＲｇの発現ならびにＩＬ－１７、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－１、およびＴＮＦａのような炎症性サイトカインの発現を特徴とするＣＤ４Ｔ細胞のサブセットである。いかなる理論にも拘束されないが、Ｔｈ１７細胞は、線維症に至る線維芽細胞の活性化、上皮細胞の生存／増殖に寄与するサイトカインの産生、ならびに内皮細胞活性化およびＥＣＭリモデリングを介した血管形成の促進によって腫瘍進行を直接および間接的に促進し得る。Ｔｈ１７細胞は、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）などの抗腫瘍免疫を阻害する独立した免疫抑制性プログラムを発揮する骨髄性細胞を動員および活性化し得る。したがって、免疫細胞活性化を促進する薬剤でのがんの処置により、抗腫瘍免疫を阻害し、そして／または腫瘍形成性炎症性シグナル伝達に寄与するＴｈ１７細胞、ガンマデルタＴ１７細胞、およびＩＬＣ３細胞のような炎症性Ｔ細胞が逆の結果を生む活性化／増大をもたらし得る。さらに、Ｔｈ１７細胞およびガンマデルタＴ１７細胞などのＩＬ１７＋Ｔ細胞は、免疫療法に応答した免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の誘導および毒性に関連する。これにより、免疫治療剤、より一般的には任意の免疫原性抗がん剤の治療範囲が制限され得る。ＩＬ－２３は、これらの炎症細胞表現型（Ｔｈ１７細胞、ガンマデルタＴ１７細胞、およびＩＬＣ３細胞など）の分化および維持で極めて重要な役割を果たすＳＴＡＴ３活性化サイトカインである。さらに、ＩＬ－２３シグナル伝達およびその結果としてのＳＴＡＴ３シグナル伝達は、ＩＬ－１２シグナル伝達およびその結果としてのＳＴＡＴ４シグナル伝達を阻害するために複数の機序を使用し、それにより抗腫瘍Ｔｈ１ Ｔ細胞表現型の分化および維持を制限する。したがって、ＩＬ－２３遮断は、免疫細胞の活性化、増殖、および／または機能の増強を目的とする治療ストラテジーの有効性および安全性を高め得る。かかる治療ストラテジーの非限定的な例としては、免疫チェックポイントタンパク質（Ｔ細胞共阻害受容体および自然阻害受容体が挙げられる）のアンタゴニズム、免疫刺激性受容体（Ｔ細胞共刺激受容体および自然刺激受容体が挙げられる）のアゴニズム、特定のサイトカイン／サイトカイン受容体のアンタゴニズム、特定のサイトカイン受容体のアゴニズム、免疫原性化学療法、免疫阻害性酵素のアンタゴニズム、およびＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ－ＮＫ、または造血幹細胞を含む細胞治療の実施が挙げられる。がん処置のためのかかる治療ストラテジーは、時折、「寛容を破壊する」またはそれを試みると説明される。そのようなものとして、いくつかの態様では、本発明の分子および方法は、寛容を破壊する一方で、ＩＬ－２３（免疫細胞表現型を腫瘍促進状態に偏向させる主要な決定要因）を抑えるためのストラテジーを提供する。これは、寛容を破壊する一方で、確実に腫瘍微小環境中の免疫細胞の表現型がかかる逆の結果を生む状態に偏向させず、従って、寛容を破壊することを目的にする治療の安全性および有効性の両方を向上させることができる。
【0127】
ＩＬ－２３／ＩＬ－２３受容体（ＩＬ－２３／ＩＬ－２３Ｒ）シグナル伝達を特異的に遮断することができる多重特異性ポリペプチドを本明細書中に提供する。多重特異性ポリペプチドは、以下の少なくとも２つの部分を含む：（ａ）ＩＬ－２３阻害ポリペプチド（ＩＩＰ）、および（ｂ）二次ポリペプチド（２Ｐ）（標的結合ポリペプチドなど）。好ましい実施形態では、本明細書中に開示の多重特異性ポリペプチドは、免疫チェックポイント阻害剤のみでの処置と比較して、有効に腫瘍成長を阻害し、そして／または腫瘍体積を低下させる。別の好ましい実施形態では、本明細書中に開示の多重特異性ポリペプチドは、移植片対宿主病などの免疫障害を予防または軽減する。
【0128】
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、ＩＬ－２３リガンドとＩＬ－２３受容体の相互作用を遮断または妨害することによってＩＬ－２３／ＩＬ－２３Ｒシグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、ＩＬ－２３リガンドに特異的に結合し、細胞（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、樹状細胞（ｄｅｎｔｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ）、マクロファージ（ｍａｃｒｐｈａａｇｅ）、腫瘍細胞）の表面上に存在するＩＬ－２３受容体へのＩＬ－２３の結合を枯渇させることができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、細胞表面上に存在するＩＬ－２３受容体に特異的に結合することができる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、抗ＩＬ－２３抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、抗ＩＬ－２３Ｒ抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、ＩＬ－２３受容体の細胞外ドメイン（ＩＬ－２３ ＥＣＤ）を含み、ＩＬ－２３リガンドに結合することができ、それにより、ＩＬ－２３が内因性ＩＬ－２３Ｒに結合し、そしてＩＬ－２３シグナル伝達を阻害するのを防止することができる。
【0129】
いくつかの実施形態では、二次ポリペプチド（２Ｐ）は、免疫細胞（ｉｍｍｕｅ ｃｅｌｌ）（例えば、抗原提示細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｔｈ１７細胞）または腫瘍細胞の細胞表面上に発現されるか存在する１またはそれを超える免疫チェックポイントタンパク質に結合し、それにより、免疫チェックポイントタンパク質の相互作用を遮断または妨害する標的結合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは、プログラム死－１（ＰＤ１；ＣＤ２７９）、プログラム死リガンド１（ＰＤＬ１；ＣＤ２７４；Ｂ７－Ｈ１）、プログラム死リガンド２（ＰＤＬ２）、細胞傷害性Ｔ－リンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ４；ＣＤ１５２）、Ｂリンパ球およびＴリンパ球のアテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリンサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびＩＴＩＭドメイン（ＴＩＧＩＴ）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３；ＣＤ２２３）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン３（Ｔｉｍ－３；ＨＡＶＣＲ２）、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ４７、シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰａ）、主要組織適合性遺伝子複合体クラスＩ，Ｇ（ＨＬＡ－Ｇ）、Ｉｇ様転写物２（ＩＬＴ２；ＬＩＬＲＢ１）、Ｉｇ様転写物４（ＩＬＴ４、ＬＩＬＲＢ２）、またはこれらの組み合わせから選択される免疫チェックポイントタンパク質、その受容体もしくはリガンド結合断片、またはリガンドもしくはその受容体結合断片に結合する。いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは、ＰＤ１（ＣＤ２７９）に結合する。いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは、ＰＤＬ１（ＣＤ２７４；Ｂ７－Ｈ１）に結合する。いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは、抗ＰＤＬ１抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは、ＰＤＬ２に結合する。いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは、抗ＰＤＬ２抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、標的結合ポリペプチドは、例えばＰＤＬ１、ＰＤＬ２のリガンドまたは受容体結合断片に結合することができるＰＤ１の細胞外ドメイン（ＰＤ１ ＥＣＤ）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ１ ＥＣＤは、野生型ヒトＰＤ１ ＥＣＤ（配列番号５６）と比較して、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２に対するその結合親和性を増加させるための１またはそれを超える変異を有する。ＰＤ１ ＥＣＤは、残基Ａ１３２（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ１５１１６の場合のように完全なヒトＰＤ１配列によって定義される残基ナンバリング）に変異を含み得る。ＰＤ１ ＥＣＤは、残基Ａ１３２に保存的置換を含み得る。好ましい実施形態では、ＰＤ１ ＥＣＤは、変異Ａ１３２Ｉ（配列番号５７）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ１ ＥＣＤバリアントは、１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、または０．１ｎＭを超える親和性でＰＤＬ１に結合する。いくつかの実施形態では、ＰＤ１ ＥＣＤバリアントは、１００ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、または０．１ｎＭを超える親和性でＰＤＬ２に結合する。
【0130】
腫瘍細胞および骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）は、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２を発現し得る。また、腫瘍細胞およびＭＤＳＣは、ＩＬ－２３を発現し得る。そのようなものとして、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２；ならびにＩＬ－２３に結合する多重特異性ポリペプチドは、ＩＬ－２３の遮断を、ＩＬ－２３も発現するＰＤＬ１＋および／またはＰＤＬ２＋細胞（例えば、ＩＬ－２３、およびＰＤＬ１もしくはＰＤＬ２、またはその両方が存在するか発現する細胞）の細胞表面に局在させ得る。
【0131】
ＩＬ－２３阻害ポリペプチド
したがって、いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチド（ＩＩＰ）は、以下の方法のうちの１つにおいてＩＬ－２３／ＩＬ－２３Ｒシグナル伝達を阻害する：（ａ）ＩＬ－２３への結合によるＩＬ－２３とＩＬ－２３Ｒの相互作用の阻害（ＩＩＰは、「ＩＬ－２３バインダー」である）、または（ｂ）ＩＬ－２３Ｒへの結合によるＩＬ－２３とＩＬ－２３Ｒの相互作用の阻害（ＩＩＰは、「ＩＬ－２３Ｒバインダー」である）。
したがって、いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチド（ＩＩＰ）は、以下の方法のうちの１つにおいてＩＬ－２３／ＩＬ－２３Ｒシグナル伝達を阻害する：（ａ）ＩＬ－２３への結合によるＩＬ－２３とＩＬ－２３Ｒの相互作用の阻害（ＩＩＰは、「ＩＬ－２３バインダー」である）、または（ｂ）ＩＬ－２３Ｒへの結合によるＩＬ－２３とＩＬ－２３Ｒの相互作用の阻害（ＩＩＰは、「ＩＬ－２３Ｒバインダー」である）。
【0132】
ＩＬ－２３バインダー
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、ＩＬ－２３に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、抗ＩＬ－２３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２３抗体は、ＩＬ－２３サブユニット（例えば、ＩＬ－２３ｐ１９、ＩＬ－２３ｐ４０）に特異的に結合することができるヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態（ｅｍｅｂｏｄｉｍｅｎｔ）では、ＩＬ－２３抗体またはその抗原結合断片は、ＩＬ－２３ｐ１９サブユニットに特異的に結合することができる。非限定的な例として、ＩＬ－２３抗体またはその抗原結合断片は、リサンキズマブ（ＶＨ：配列番号７９；ＶＬ：配列番号８０）、グセルクマブ（ＶＨ：配列番号８１；ＶＬ：配列番号８２）、チルドラキズマブ（ＶＨ：配列番号８３；ＶＬ：配列番号８４）、ブラジクマブ（ＶＨ：配列番号８５；ＶＬ：配列番号８６）、およびミリキズマブ（ＶＨ：配列番号８７；ＶＬ：配列番号８８）のうちのいずれか１つから選択される６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの１つまたは複数を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、ＩＬ－２３に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、抗ＩＬ－２３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２３抗体は、ＩＬ－２３サブユニット（例えば、ＩＬ－２３ｐ１９、ＩＬ－２３ｐ４０）に特異的に結合することができるヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態（ｅｍｅｂｏｄｉｍｅｎｔ）では、ＩＬ－２３抗体またはその抗原結合断片は、ＩＬ－２３ｐ１９サブユニットに特異的に結合することができる。非限定的な例として、ＩＬ－２３抗体またはその抗原結合断片は、リサンキズマブ（ＶＨ：配列番号７９；ＶＬ：配列番号８０）、グセルクマブ（ＶＨ：配列番号８１；ＶＬ：配列番号８２）、チルドラキズマブ（ＶＨ：配列番号８３；ＶＬ：配列番号８４）、ブラジクマブ（ＶＨ：配列番号８５；ＶＬ：配列番号８６）、およびミリキズマブ（ＶＨ：配列番号８７；ＶＬ：配列番号８８）のうちのいずれか１つから選択される６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの１つまたは複数を含む。
【0133】
ＩＬ－２３Ｒバインダー
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、ＩＬ－２３Ｒに結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、抗ＩＬ－２３Ｒ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２３Ｒ抗体は、ＩＬ－２３リガンドまたはその受容体結合断片に特異的に結合することができるヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。非限定的な例として、ＩＬ－２３Ｒ抗体またはその抗原結合断片は、ＡＳ２７６２９００－００の６つのＣＤＲのうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ抗体またはその抗原結合断片は、米国特許第９，３７１，３９１号（その全体が本明細書中で援用される）に開示の抗体から選択される。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、ＩＬ－２３Ｒに結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、抗ＩＬ－２３Ｒ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２３Ｒ抗体は、ＩＬ－２３リガンドまたはその受容体結合断片に特異的に結合することができるヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合断片である。非限定的な例として、ＩＬ－２３Ｒ抗体またはその抗原結合断片は、ＡＳ２７６２９００－００の６つのＣＤＲのうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ抗体またはその抗原結合断片は、米国特許第９，３７１，３９１号（その全体が本明細書中で援用される）に開示の抗体から選択される。
【0134】
ＩＬ－２３Ｒ ＥＣＤ
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、内因性のＩＬ－２３リガンドに特異的に結合することができるＩＬ－２３受容体、そのリガンド結合ドメインもしくは断片、またはその細胞外ドメイン（ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤ）を含む。例えば、ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤは、ＩＬ－２３ＲのＤ１サブユニット、ＩＬ－２３ＲのＤ１およびＤ２サブユニット、またはＩＬ－２３ＲのＤ１、Ｄ２、およびＤ３サブユニットであり得る。ヒトＩＬ－２３Ｒおよびその細胞外ドメインの配列は報告されている。本明細書中で使用される場合、ＥＣＤ配列は、配列番号１のアミノ酸配列（ＵｎｉＰｒｏｔアクセッションＱ５ＶＷＫ５）を有する。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３阻害ポリペプチドは、内因性のＩＬ－２３リガンドに特異的に結合することができるＩＬ－２３受容体、そのリガンド結合ドメインもしくは断片、またはその細胞外ドメイン（ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤ）を含む。例えば、ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤは、ＩＬ－２３ＲのＤ１サブユニット、ＩＬ－２３ＲのＤ１およびＤ２サブユニット、またはＩＬ－２３ＲのＤ１、Ｄ２、およびＤ３サブユニットであり得る。ヒトＩＬ－２３Ｒおよびその細胞外ドメインの配列は報告されている。本明細書中で使用される場合、ＥＣＤ配列は、配列番号１のアミノ酸配列（ＵｎｉＰｒｏｔアクセッションＱ５ＶＷＫ５）を有する。
【0135】
ＩＬ－２３リガンドは、ｐ１９サブユニットおよびｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインである。ＩＬ－１２リガンドは、ｐ３５サブユニットおよびｐ４０サブユニットを含むヘテロ二量体サイトカインである。１つの態様では、本発明の融合タンパク質のＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤは、ＩＬ－１２よりもＩＬ－２３に対して高い親和性を示す。１つの実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤは、ｐ３５サブユニットと比較してｐ１９サブユニットに優先的に結合する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤは、ＩＬ－２３のｐ１９サブユニットおよびｐ４０サブユニットの両方と相互作用する残基を含む。他の実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤは、ｐ１９サブユニットのみと相互作用する残基を含む。
【0136】
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤドメインは、Ｄ１の上流のＧＩＴＮＩＮヘキサペプチドを含む。他の実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤドメインは、Ｄ１の先頭のアミノ酸配列（ＣＳＧＨＩ）で始まる。
【0137】
いくつかの実施形態では、本明細書中で使用されるＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤを、ネイティブヒトＩＬ－２３－Ｒ細胞外ドメイン（例えば、野生型ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤ）配列（配列番号１）を参照して、以下の方法のうちの１つまたは複数で改変し得る。ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤは、ＩＬ－２３へのその特異性、ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤの１またはそれを超える不連続ドメインの融合、またはＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤの異なるイソ型由来のドメインの融合を維持または増加させながら、リガンド結合に必要ではない残基の１またはそれを超える置換または欠失、Ｎ結合グリコシル化部位を除去するための残基の１またはそれを超える置換、ＩＬ－２３に対する親和性を増加させるための残基の１またはそれを超える置換、付加、または欠失、融合タンパク質の発現を改善するための残基の１またはそれを超える置換、付加、または欠失、薬物コンジュゲートの部位特異的コンジュゲーションを可能にするための残基の１またはそれを超える置換、付加、または欠失、ＩＬ－１２へのリガンド捕捉の特異性を減少させるための残基の１またはそれを超える置換、付加、または欠失を有し得る。
【0138】
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤは、野生型ヒトＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤ（配列番号１）のリガンド結合配列に対して少なくとも４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、またはそれを超える配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。
【0139】
二次ポリペプチド（２Ｐ）
いくつかの実施形態では、二次ポリペプチドは、以下の機能（ａ）特異的な組織、細胞型、または腫瘍細胞への多重特異性ポリペプチドの局在化；（ｂ）阻害性免疫チェックポイントシグナル伝達のアンタゴニズム；（ｃ）免疫刺激性シグナル伝達のアゴニズム；（ｄ）別のサイトカインまたはサイトカイン受容体のアンタゴニズム、（ｅ）サイトカイン受容体のアゴニズム、および／または（ｆ）ケモカインまたはケモカイン受容体のアンタゴニズムなどのうちの１つまたは複数の役目を果たす標的結合ポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、二次ポリペプチドは、以下の機能（ａ）特異的な組織、細胞型、または腫瘍細胞への多重特異性ポリペプチドの局在化；（ｂ）阻害性免疫チェックポイントシグナル伝達のアンタゴニズム；（ｃ）免疫刺激性シグナル伝達のアゴニズム；（ｄ）別のサイトカインまたはサイトカイン受容体のアンタゴニズム、（ｅ）サイトカイン受容体のアゴニズム、および／または（ｆ）ケモカインまたはケモカイン受容体のアンタゴニズムなどのうちの１つまたは複数の役目を果たす標的結合ポリペプチドである。
【0140】
種々の実施形態では、二次ポリペプチド（２Ｐ）は、免疫グロブリン、抗体、二重特異性抗体もしくは多重特異性抗体、ナノボディ、抗体断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、二価もしくは多価のｓｃＦｖ、Ａｆｆｉｍｅｒ、受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）由来のリガンド結合配列、リガンドのＥＣＤ由来の受容体結合配列、またはＦｃ含有ポリペプチドの抗原結合ドメインである標的結合ポリペプチドである。
【0141】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、結晶化可能断片（Ｆｃ）領域、抗原結合断片（Ｆａｂ）領域、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、軽鎖もしくはその機能的部分、軽鎖の可変領域（ＶＬ）、軽鎖の定常領域（ＣＬ）、重鎖もしくはその機能的部分、重鎖の可変領域（ＶＨ）、重鎖の定常領域（ＣＨ）、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはその抗原結合部分、またはこれらの組み合わせなどの抗体またはその抗原結合断片である標的結合ポリペプチドである。
【0142】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、受容体の細胞外ドメインのリガンド結合配列を有する標的結合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、２Ｐは、リガンドの細胞外ドメインの受容体結合配列を有する標的結合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＥＣＤは、野生型ＥＣＤを参照して以下の改変のうちの１つまたは複数を有する。種々の実施形態では、ＥＣＤは、融合タンパク質の発現を改良するための残基の１またはそれを超える置換、付加、または欠失、リガンド結合に必要ではない残基の１またはそれを超える置換または欠失、Ｎ結合グリコシル化部位を除去するための残基の１またはそれを超える置換、あるいはＥＣＤの天然の結合パートナーに対する親和性を増加させるための残基の１またはそれを超える置換、付加、または欠失を有する。
【0143】
がんまたは免疫障害を処置するための２Ｐ部分の例
種々の実施形態では、二次ポリペプチド（２Ｐ）は、１またはそれを超えるサイトカインもしくはサイトカイン受容体、または１またはそれを超える細胞表面分子に特異的に結合することができる標的結合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、２Ｐは、血液脳関門を通じて融合タンパク質を交換可能な標的結合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、２Ｐは、免疫グロブリンのＦｃドメイン、ＣＤＲ、または抗原結合断片を含む標的結合ポリペプチドである。
種々の実施形態では、二次ポリペプチド（２Ｐ）は、１またはそれを超えるサイトカインもしくはサイトカイン受容体、または１またはそれを超える細胞表面分子に特異的に結合することができる標的結合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、２Ｐは、血液脳関門を通じて融合タンパク質を交換可能な標的結合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、２Ｐは、免疫グロブリンのＦｃドメイン、ＣＤＲ、または抗原結合断片を含む標的結合ポリペプチドである。
【0144】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＴＨ１７細胞の分化、成熟、または機能を促進するサイトカインまたはサイトカイン受容体に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－１７またはＩＬ－１７Ｒに結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－１７またはＩＬ－１７Ｒに結合して無能にする抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、２Ｐ抗体またはその抗原結合断片は、アファセビクマブ、ビメキズマブ、イキセキズマブ、ネタキマブ、ペラキズマブ、セクキヌマブ、ブナキズマブ、またはブロダルマブのうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－１７Ｒの細胞外ドメインまたはその断片のリガンド結合配列である。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、またはＩＬ－１Ｒに結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、および／またはＩＬ－１Ｒに結合して無能にする抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－１Ｒの細胞外ドメイン、ＩＬ－１受容体アンタゴニスト（ＩＬ－１ＲＡ）（配列番号７７）、またはその断片のリガンド結合配列である。いくつかの実施形態では、２Ｐは、アナキンラのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－６またはＩＬ－６Ｒに結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－６またはＩＬ－６Ｒに結合して無能にする抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、２Ｐ抗体またはその抗原結合断片は、クラザキズマブ、オロキズマブ、シルツキシマブ、シルクマブ、ジルチベキマブ、レビリマブ、サペリズマブ、サリルマブ、サトラリズマブ、またはトシリズマブのうちのいずれか１つから選択される６つのＣＤＲまたはその抗原結合部分のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＲＡＮＫのＲＡＮＫＬとの相互作用を防止する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＲＡＮＫの細胞外ドメイン（配列番号７６）のＲＡＮＫＬ結合配列である。
【0145】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＴＮＦＲスーパーファミリー受容体またはＴＮＦＲスーパーファミリー受容体に結合するリガンドに結合する。他の実施形態では、２Ｐは、Ｉ型サイトカイン受容体またはＩ型サイトカイン受容体に結合するサイトカインに結合する。他の実施形態では、２Ｐは、ＩＩ型サイトカイン受容体またはＩＩ型サイトカイン受容体に結合するサイトカインに結合する。他の実施形態では、２Ｐは、Ｉｇスーパーファミリー受容体またはＩｇスーパーファミリー受容体に結合するサイトカインに結合する。他の実施形態では、２Ｐは、ケモカイン受容体またはケモカイン受容体に結合するケモカインに結合する。
【0146】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－２３の産生を担う細胞の細胞表面分子に結合し、それにより、ＩＬ－２３が発現するときにそれを隔離する。他の実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－２３Ｒを発現し、かつ通常はＩＬ－２３に応答する細胞の細胞表面分子に結合し、それにより、本来ならばＩＬ－２３Ｒシグナル伝達を開始するであろう細胞上のＩＬ－２３を隔離する。
【0147】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、Ｔ細胞表面分子に結合する。融合タンパク質は、ＴＨ１７細胞によって媒介される炎症を抑えるようにデザインされ得る。そのようなものとして、いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＴＨ１７細胞によって優先的に発現されるＴ細胞表面分子に結合する。他の実施形態では、２Ｐは、ＣＤ４Ｔ細胞によって発現されるＴ細胞表面分子に結合する。
【0148】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に結合する。いかなる理論にも拘束されないが、２ＰがＴｆＲに結合すると、血液脳関門を通じた融合タンパク質の交換が可能である。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＴｆＲに結合する抗体またはその抗原結合断片である。他の実施形態では、２Ｐは、ＴｆＲに結合するように変異した操作されたＦｃ領域を有する抗体またはその抗原結合断片である。他の実施形態では、２Ｐは、ＴｆＲに結合するように操作された合成ペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＦｃ領域は、配列番号１１６を含む。いくつかの実施形態では、操作されたＦｃ領域は、Ｋａｒｉｏｌｉｓ ｅｔ ａｌ，‘‘Ｂｒａｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｕｓｉｎｇ ａｎ Ｆｃ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｖｅｈｉｃｌｅ ｉｎ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｍｏｎｋｅｙｓ’’Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓ Ｍｅｄ ２０２０，１２：５４５（その全体が本明細書中で参考として援用される）に開示の１またはそれを超える変異を含む。
【0149】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、免疫グロブリンのＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、野生型ＩｇＧである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、種々のＦｃ受容体へのその結合を増強するか破棄するようにデザインされた１またはそれを超える変異を保有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｌ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）変異を含むＩｇＧ１ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｓ２２８Ｐ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃである。
【0150】
がんを処置するための２Ｐ部分の例
種々の実施形態では、２Ｐは、がん処置のための１またはそれを超える標的分子に結合することができる標的結合ポリペプチドを有する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、腫瘍細胞表面分子に結合する。いかなる理論にも拘束されないが、２Ｐは、腫瘍細胞の微小環境中の任意のＩＬ－２３を隔離するためのＩＬ－２３バインダーで「飾られて」おり、腫瘍細胞表面に融合タンパク質を局在化するのに役立ち得る。２Ｐのその標的への結合は、さらに、免疫寛容または腫瘍促進性の炎症を悪化させる受容体／リガンド相互作用を中和するか、成長因子、成長因子受容体、または腫瘍細胞の生存、成長、もしくは転移を促進する他の分子を中和するのに役立ち得る。種々の実施形態では、腫瘍細胞表面分子は、Ｔ細胞共阻害リガンド、腫瘍成長因子受容体、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、または腫瘍抗原である。いくつかの実施形態では、２Ｐは、特異的腫瘍細胞表面分子に結合する抗体またはその抗原結合断片である。非限定的な例として、２Ｐは、以下のリストから選択される腫瘍細胞表面分子（ＣＡ１２５、ＣＡ１９－９、ＣＤ３０、癌胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）またはＣＤ６６ｅ（例えば、ラベツズマブ、セルグツズマブ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ６、ＤＬＬ３、ＤＬＬ４、ＤＰＥＰ３、ＥＧＦＲ（例えば、セツキシマブ、ネシツムマブ、パニツムマブ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（例えば、デパツキシズマブ）、ＧＤ２、ＨＥＲ２（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ）、ＨＥＲ３、ＨＧＦ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ１５、ＭＵＣ１、ＰＲＬＲ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＳＥＺ６、ＳＬＡＭＦ７、ＴＦ、ｃＭｅｔ、クローディン、メソテリン、ネクチン４（例えば、エンフォルツマブ）、ｕＰＡＲ、ＧＰＮＭＢ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２２、ＮａＰｉ２ｂ、ＳＬＴＲＫ６、ＳＴＥＡＰ１、ＭＵＣ１６、ＣＤ３７、ＧＣＣ、ＡＧＣ－１６、５Ｔ４、ＣＤ７０、ＴＲＯＰ２（例えば、サシツズマブ）、ＣＤ７４、ＣＤ２７Ｌ、Ｆｒａ、ＣＤ１３８、およびＣＡ６が挙げられる）に結合する。種々の実施形態では、２Ｐは、腫瘍間質細胞の細胞表面分子に結合する。
種々の実施形態では、２Ｐは、がん処置のための１またはそれを超える標的分子に結合することができる標的結合ポリペプチドを有する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、腫瘍細胞表面分子に結合する。いかなる理論にも拘束されないが、２Ｐは、腫瘍細胞の微小環境中の任意のＩＬ－２３を隔離するためのＩＬ－２３バインダーで「飾られて」おり、腫瘍細胞表面に融合タンパク質を局在化するのに役立ち得る。２Ｐのその標的への結合は、さらに、免疫寛容または腫瘍促進性の炎症を悪化させる受容体／リガンド相互作用を中和するか、成長因子、成長因子受容体、または腫瘍細胞の生存、成長、もしくは転移を促進する他の分子を中和するのに役立ち得る。種々の実施形態では、腫瘍細胞表面分子は、Ｔ細胞共阻害リガンド、腫瘍成長因子受容体、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、または腫瘍抗原である。いくつかの実施形態では、２Ｐは、特異的腫瘍細胞表面分子に結合する抗体またはその抗原結合断片である。非限定的な例として、２Ｐは、以下のリストから選択される腫瘍細胞表面分子（ＣＡ１２５、ＣＡ１９－９、ＣＤ３０、癌胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）またはＣＤ６６ｅ（例えば、ラベツズマブ、セルグツズマブ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ６、ＤＬＬ３、ＤＬＬ４、ＤＰＥＰ３、ＥＧＦＲ（例えば、セツキシマブ、ネシツムマブ、パニツムマブ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（例えば、デパツキシズマブ）、ＧＤ２、ＨＥＲ２（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ）、ＨＥＲ３、ＨＧＦ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ１５、ＭＵＣ１、ＰＲＬＲ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＳＥＺ６、ＳＬＡＭＦ７、ＴＦ、ｃＭｅｔ、クローディン、メソテリン、ネクチン４（例えば、エンフォルツマブ）、ｕＰＡＲ、ＧＰＮＭＢ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２２、ＮａＰｉ２ｂ、ＳＬＴＲＫ６、ＳＴＥＡＰ１、ＭＵＣ１６、ＣＤ３７、ＧＣＣ、ＡＧＣ－１６、５Ｔ４、ＣＤ７０、ＴＲＯＰ２（例えば、サシツズマブ）、ＣＤ７４、ＣＤ２７Ｌ、Ｆｒａ、ＣＤ１３８、およびＣＡ６が挙げられる）に結合する。種々の実施形態では、２Ｐは、腫瘍間質細胞の細胞表面分子に結合する。
【0151】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ５）に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐはラベツズマブである。別の実施形態では、２Ｐは、セルグツズマブまたはＣＨ１Ａ１Ａ－２Ｆ１である。１つの実施形態では、２Ｐは、可溶性ＣＥＡよりも優先的に膜結合ＣＥＡに結合する。いくつかの実施形態では、この結合は、ＣＥＡ細胞外ドメインのＣ末端のＧＰＩ係留部位付近のＣＥＡエピトープに結合することによる。いくつかの実施形態では、この結合は、ＣＥＡのＢ３ドメインと重複するＣＥＡエピトープに結合することによる。
【0152】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、血液悪性疾患によって過剰発現された抗原に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、多発性骨髄腫によって過剰発現された抗原に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＣＤ３８、ＳＬＡＭＦ７、またはＢＣＭＡに結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、以下のリストから選択される抗体である：ＭＥＤＩ２２２８；ＣＣ－９９７１２；ベランタマブ；ゲムツズマブ（抗ＣＤ３３ ｍＡｂ）。いくつかの実施形態では、抗体はＣＤ２０に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、リツキシマブ（キメラマウス／ヒト抗ＣＤ２０ ｍＡｂ）；オビヌツズマブ（抗ＣＤ２０ ｍＡｂ）；オファツムマブ（抗ＣＤ２０ ｍＡｂ）に結合する。いくつかの実施形態では、２ＰはＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＤ３０、またはＣＤ２２に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、白血病によって過剰発現された抗原に結合する。いくつかの実施形態では、２ＰはＣＤ３３に結合する。
【0153】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、免疫チェックポイントタンパク質のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、２Ｐは、自然免疫チェックポイントタンパク質のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、２Ｐは、アンタゴニストとしてＴ細胞共阻害分子に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、Ｔ細胞共阻害受容体の細胞外ドメインのリガンド結合配列を有する。かかる２Ｐは、Ｔ細胞共阻害リガンドを隔離し、Ｔ細胞表面に発現されるネイティブＴ細胞共阻害受容体のリガンド誘導性シグナル伝達を減少させる効果を有する。
【0154】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＰＤ１ ＥＣＤのリガンド結合配列を有する。ＰＤ１ ＥＣＤは、野生型ヒトＰＤ１ ＥＣＤと比較して、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２に対するその結合親和性を増加させるための１またはそれを超える変異を含み得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ１ ＥＣＤは、残基Ａ１３２（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ１５１１６の場合のように全長ヒトＰＤ１配列によって定義される残基ナンバリング）に変異を有する。Ａ１３２残基は、Ｉ（Ａ１３２Ｉ）、Ｖ（Ａ１３２Ｖ）、またはＬ（Ａ１３２Ｌ）が変異（例えば、置換、欠失、挿入、または逆位）し得る。好ましい実施形態では、ＰＤ１ ＥＣＤは、Ａ１３２Ｉに変異を有する。いくつかの実施形態では、ＰＤ１ ＥＣＤは、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２に対するその結合親和性を増加させるための複数のアミノ酸変異（Ｓ８７Ｇ、Ｐ８９Ｌ、Ｎ１１６Ｓ、Ｇ１２４Ｓ、Ｓ１２７Ｖ、Ａ１４０Ｖ、Ａ１２５Ｉ、Ａ１２５Ｖ、Ｌ１２２Ｖ、Ｋ７８Ｔ、Ｎ７４Ｇ、Ｍ７０Ｅ、Ｙ６８Ｈ、Ｎ６６Ｖ、Ｎ６６Ｉ、Ｌ６５Ｉ、Ｌ６５Ｖ、Ｖ６４Ｈ、またはＭｉａｏ ｅｔ ａｌ．，‘‘Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＤ－Ｌ２ ｉｓ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ Ｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇ Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ Ｂｌｏｃｋａｄｅ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ Ｏｖａｒｉａｎ Ｃａｎｃｅｒ．’’Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０２１．２７（１５）：４４３５－４４４８，Ｍａｕｔｅ ｅｔ ａｌ．，‘‘Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｈｉｇｈ－ａｆｆｉｎｉｔｙ ＰＤ－１ ｖａｒｉａｎｔｓ ｆｏｒ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏ－ＰＥＴ ｉｍａｇｉｎｇ．’’Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．２０１５．１１２（４７），Ｅ６５０６－Ｅ６５１４（これらの各々の全体が本明細書中で援用される）に記載のさらなるアミノ酸変異が挙げられるが、これらに限定されない）を有する。
【0155】
他の実施形態では、２Ｐは、ＴＩＭ３ ＥＣＤ（配列番号６３）のリガンド結合配列を含む。他の実施形態では、２Ｐは、ＣＤ８０ ＥＣＤ（配列番号６６）またはＣＤ８６ ＥＣＤ（配列番号６７）のＣＴＬＡ４結合配列を含む。
【0156】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、アゴニストとして免疫刺激性受容体に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、アゴニストとしてＴ細胞共刺激分子に結合する。いくつかの実施形態では、免疫刺激性受容体は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ；ＣＤ２７８）、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、糖質コルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ；ＣＤ３５７）、ＣＤ４０、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２８、またはＣＤ２７から選択され得る。いくつかの実施形態では、２Ｐは、Ｔ細胞共刺激リガンドの受容体結合配列、またはその受容体結合断片を含む。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＣＤ４０Ｌ（配列番号７４）のＣＤ４０結合配列を含む。いくつかの実施形態では、２Ｐは複数のＣＤ４０Ｌ部分を含み、それらが集合して三量体または六量体構成となる。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＣＯＳ－Ｌ（配列番号７３）、４－１ＢＢＬ（配列番号７０）、ＯＸ４０Ｌ（配列番号７１）、またはＧＩＴＲＬ（配列番号７２）の受容体結合配列を含む。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＢＴＬＡ ＥＣＤ（配列番号６２）またはＬＩＧＨＴ ＥＣＤ（配列番号６５）のＨＶＥＭ結合配列を含む。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＣＤ８０ ＥＣＤまたはＣＤ８６ ＥＣＤのＣＤ２８結合配列を含む。
【0157】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、アゴニストとして自然免疫刺激性受容体に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、アゴニストとしてＮＫ細胞上に発現される自然免疫刺激性受容体に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、アゴニストとしてＮＫＧ２Ｄに結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＮＫＧ２Ｄリガンド（ＮＫＧ２ＤＬ）のＮＫＧ２Ｄ結合配列を含む。
【0158】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、成長因子または成長因子受容体に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＴＧＦｂシグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、２ＰはＴＧＦｂに結合し、ＴＧＦｂ がＴＧＦｂＲＩＩに結合するのを防止する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＴＧＦｂＲＩＩ ＥＣＤ（配列番号５８）のリガンド結合配列を含む。いくつかの実施形態では、２Ｐは、抗ＴＧＦｂ抗体またはその抗原結合断片（例えば、フレソリムマブ、ＳＲＫ－１８１、ＳＡＲ４３９４５９、ＮＩＳ７９３）である。他の実施形態では、２ＰはＴＧＦｂＲＩＩに結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、抗ＴＧＦｂＲＩＩ抗体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、多重特異性ポリペプチドは、配列番号９０および配列番号５４のアミノ酸配列を含む抗ＩＬ－２３－ＴＧＦｂＲＩＩである。
【0159】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＶＥＧＦとＶＥＧＦＲの相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、２ＰはＶＥＧＦに結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＶＥＧＦＲ１（配列番号５９）またはＶＥＧＦＲ２（配列番号６０）の細胞外ドメインのリガンド結合配列；またはＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２由来のドメインを含むキメラＥＣＤである。いくつかの実施形態では、キメラＥＣＤは、ＶＥＧＦＲ１ドメイン２およびＶＥＧＦＲ２ドメイン３（配列番号６１）を含む。いくつかの実施形態では、２Ｐはアフリベルセプトである。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＶＥＧＦに結合する抗体またはその抗原結合断片（例えば、ベバシズマブ）である。いくつかの実施形態では、２ＰはＶＥＧＦＲに結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＶＥＧＦに結合する抗体またはその抗原結合断片（例えば、ラムシルマブ）である。いくつかの実施形態では、多重特異性ポリペプチドは、配列番号９１および５４のアミノ酸配列を含む抗ＩＬ－２３－ＶＥＧＦＲである。
【0160】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、樹状細胞またはマクロファージの細胞表面上に発現される分子に結合して中和する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＳＩＲＰａである樹状細胞またはマクロファージの細胞表面上に発現される分子に結合して中和する。他の実施形態では、２Ｐは、樹状細胞またはマクロファージ上の阻害受容体に結合するリガンドに結合して中和する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＣＤ４７である樹状細胞またはマクロファージ上の阻害受容体に結合するリガンドに結合して中和する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＳＩＲＰａ ＥＣＤ（配列番号６８）のＣＤ４７結合配列である。いくつかの実施形態では、多重特異性ポリペプチドは、配列番号６８および５４のアミノ酸配列を含む抗ＩＬ－２３－ＳＩＲＰａ ＥＣＤである。他の実施形態では、２Ｐは、樹状細胞またはマクロファージの成熟または機能を阻害するリガンドに結合して中和する。１つの実施形態では、２Ｐは、ＳＩＧＬＥＣ１０の細胞外ドメインのリガンド結合配列である。
【0161】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、サイトカイン／サイトカイン受容体のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、２Ｐは、免疫阻害性サイトカイン／サイトカイン受容体シグナル伝達のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－８シグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、２ＰはＩＬ－８に結合する。
【0162】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＮＫ細胞の活性化、成熟、または機能を阻害するリガンドまたはサイトカインに結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、Ｔ細胞の活性化、成熟、または機能を阻害するリガンドまたはサイトカインに結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、かかるリガンドまたはサイトカインに結合する受容体の細胞外ドメインのリガンド結合ドメインである。１つの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－１０Ｒの細胞外ドメインのリガンド結合ドメインである。
【0163】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＮＫ細胞の活性化、成熟、または機能を促進するサイトカイン受容体に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＮＫ細胞の活性化、成熟、または機能を促進するサイトカインまたはその受容体結合断片である。いくつかの実施形態では、２Ｐは、Ｔ細胞の活性化、成熟、または機能を促進するサイトカイン受容体に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、Ｔ細胞の活性化、成熟、または機能を促進するサイトカインまたはその受容体結合断片である。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、またはその受容体結合断片である。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－１５の受容体結合断片とＩＬ－１５Ｒ ｓｕｓｈｉドメインのリガンド結合断片の融合物を含む。
【0164】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、アゴニストとしてＴ細胞の活性化、成熟、または機能を促進するサイトカイン受容体に結合する。いくつかの実施形態では、２ＰはＩＬ－２を含む。
【0165】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＮＫ細胞表面分子に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋ＮＫ細胞によって優先的に発現されるＮＫ細胞表面分子に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、アゴニストとしてＮＫ細胞表面活性化受容体に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＮＫＧ２ＤＬ細胞外ドメインのＮＫＧ２Ｄ結合断片である。ＮＫＧ２ＤＬは、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、またはＵＬＢＰ１－６から選択され得る。
【0166】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＦＧＦ－２またはＦＧＦＲに結合する。他の実施形態では、２Ｐは、ＰＤＧＦまたはＰＤＧＦＲに結合する。他の実施形態では、２Ｐは、アンギオポエチン（１、２、３、または４）またはアンギオポエチン受容体（ＴＩＥ－１またはＴＩＥ－２）に結合する。
【0167】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＴＨ２細胞の活性化、分化、成熟、または機能を阻害する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、ＩＬ４ＲＡ、またはＩＬ１３Ｒに結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＩＬ４ＲＡに結合する抗体またはその抗原結合断片（例えば、デュピルマブ）である。
【0168】
自己免疫状態のための２Ｐ部分の例
自己免疫状態などの免疫障害の処置を意図する本発明の多重特異性ポリペプチドは、「寛容を破壊する」ことを試みない。その代わりに、自己免疫障害の有効な処置は、ＩＬ－２３の遮断に加えて、寛容を誘導することまたは１またはそれを超える炎症機序を抑えることに関与し得る。そのようなものとして、いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性ポリペプチドは、下記の２Ｐを含む。
自己免疫状態などの免疫障害の処置を意図する本発明の多重特異性ポリペプチドは、「寛容を破壊する」ことを試みない。その代わりに、自己免疫障害の有効な処置は、ＩＬ－２３の遮断に加えて、寛容を誘導することまたは１またはそれを超える炎症機序を抑えることに関与し得る。そのようなものとして、いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性ポリペプチドは、下記の２Ｐを含む。
【0169】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、融合タンパク質を特定の組織に局在化させる。一般に、自己免疫状態のＮＫ／マクロファージ媒介性の悪化を軽減するために、２Ｐは、ヒト免疫グロブリンのＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、活性化ＦｃＲへのその結合を軽減または排除するための１またはそれを超える変異を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、阻害性ＦｃＲへのその結合を増加させるための１またはそれを超える変異を有する。
【0170】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、炎症促進性サイトカインに結合して中和する。ある特定の自己免疫障害の処置のために、融合タンパク質がＩＬ－２３に加えてさらなる炎症促進性サイトカインを中和することがさらに有利な場合がある。炎症促進性サイトカインは、ＩＦＮｇ、ＴＮＦａ、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＲＡＮＫＬ、およびＧＭ－ＣＳＦから選択され得る。例示的なかかる２Ｐとしては、ＴＮＦＲ２－ＥＣＤ（配列番号７５）（例えば、エタネルセプト）、抗ＩＬ１７ ｍＡｂ（例えば、セクキヌマブ）、ＲＡＮＫ－ＥＣＤ（配列番号７６）、または抗ＧＭＣＳＦ ｍＡｂ（例えば、レンジルマブ）が挙げられる。
【0171】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、炎症促進性サイトカイン受容体に結合して中和する。炎症促進性サイトカイン受容体は、以下から選択され得る：ＩＦＮｇＲ、ＴＮＦＲ、ＩＬ－１Ｒ、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－１２Ｒ、ＩＬ－１８Ｒ、ＲＡＮＫ、およびＧＭ－ＣＳＦＲ。
【0172】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、Ｔ細胞共刺激リガンドに結合してその効果を無効にする。いくつかの実施形態では、２Ｐは、以下の共刺激リガンドのうちの１つに結合する：ＣＤ４０Ｌ、４１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＩＣＯＳＬ、またはＧＩＴＲＬ。いくつかの実施形態では、２Ｐは、以下の共刺激受容体のうちの１つの細胞外ドメインのリガンド結合配列を含む：ＣＤ４０－ＥＣＤ、４１ＢＢ－ＥＣＤ、ＯＸ４０－ＥＣＤ、ＩＣＯＳ－ＥＣＤ、ＧＩＴＲ－ＥＣＤ。他の実施形態では、２Ｐは、アンタゴニスト（ａｎｔａａｇｏｎｉｓｔ）としてＴ細胞共刺激受容体に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、アンタゴニストとしてＣＤ４０、４１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、またはＧＩＴＲに結合する。
【0173】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、アゴニストとしてＴ細胞共阻害受容体に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、以下の共阻害受容体のうちの１つに結合する：ＰＤ１、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３。いくつかの実施形態では、２Ｐは、以下の共阻害リガンドのうちの１つの細胞外ドメインの受容体結合配列を含む：ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＨＶＥＭ。
【0174】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＣＴＬＡ－４（配列番号１１５）の細胞外ドメインの配列（例えば、ＣＴＬＡ４－Ｆｃ；アバタセプト）を含む。
【0175】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、アゴニストとしてマクロファージおよび／または樹状細胞上の阻害受容体に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、アゴニストとしてＳＩＲＰａに結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、ＣＤ４７の細胞外ドメインの受容体結合配列を含む。
【0176】
いくつかの実施形態では、２Ｐは、アゴニストとして抗炎症性サイトカインの受容体に結合する。いくつかの実施形態では、２Ｐは、抗炎症性サイトカイン自体、またはその受容体結合断片であり得る。他の実施形態では、２Ｐは、炎症を阻害するためにサイトカイン受容体に結合するアゴニスト抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗炎症性サイトカイン受容体は、ＩＬ－４Ｒ、ＩＬ－１０Ｒ、およびＴＧＦｂＲから選択される。いくつかの実施形態では、抗炎症性サイトカインは、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、およびＴＧＦ－ｂ、またはこれらの受容体結合断片から選択される。
【0177】
多重特異性ポリペプチドのデザイン
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性ポリペプチドを、融合タンパク質として構築する。いくつかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成部分は、可動性リンカーを介して融合されている。いくつかの実施形態では、可動性リンカーは、ポリペプチド配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは１と１０との間である）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーを使用して、２ＰをＩＩＰのＣ末端に連結する。いくつかの実施形態では、リンカーは、非切断性リンカー、ペプチドリンカー、可動性リンカー、リジッドリンカー、らせん状リンカー、および／または非らせん状リンカーから選択される。可能なリンカーの非限定的な例は、当該分野において、例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．”Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｌｉｎｋｅｒｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｙ，Ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ” Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１４，６５（１０）：１３５７（その全体が本明細書中で参考として援用される）に開示されている。いくつかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成部分は、その間をリンカーなしで融合されている。
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性ポリペプチドを、融合タンパク質として構築する。いくつかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成部分は、可動性リンカーを介して融合されている。いくつかの実施形態では、可動性リンカーは、ポリペプチド配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは１と１０との間である）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーを使用して、２ＰをＩＩＰのＣ末端に連結する。いくつかの実施形態では、リンカーは、非切断性リンカー、ペプチドリンカー、可動性リンカー、リジッドリンカー、らせん状リンカー、および／または非らせん状リンカーから選択される。可能なリンカーの非限定的な例は、当該分野において、例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．”Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｌｉｎｋｅｒｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｙ，Ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ” Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１４，６５（１０）：１３５７（その全体が本明細書中で参考として援用される）に開示されている。いくつかの実施形態では、本発明の融合タンパク質の構成部分は、その間をリンカーなしで融合されている。
【0178】
本明細書中で使用される多重特異性ポリペプチドの例示的なデザインを、例えば、図１Ａ～１Ｄ、２Ａ～２Ｇに示す。
【0179】
以下の例示では、Ｎはタンパク質のＮ末端を表し、Ｃはタンパク質のＣ末端を表す。いくつかの実施形態では、ＩＩＰは、抗体またはその抗原結合断片である。そのような場合、融合タンパク質（例えば、組換え分子）は、以下のうちの１つの構造を有する場合があり、ここで、ＨＣは抗体の重鎖を指し、ＬＣは抗体の軽鎖を指す：
・Ｎ－ＨＣ－リンカー－２Ｐ－Ｃ；Ｎ－ＬＣ－Ｃ（例えば、図１Ａ）
・Ｎ－２Ｐ－リンカー－ＨＣ－Ｃ；Ｎ－ＬＣ－Ｃ
・Ｎ－ＨＣ－Ｃ；Ｎ－ＬＣ－リンカー－２Ｐ－Ｃ（例えば、図１Ｂ）
・Ｎ－ＨＣ－Ｃ；Ｎ－２Ｐ－リンカー－ＬＣ－Ｃ
・Ｎ－ＨＣ－リンカー－２Ｐ－Ｃ；Ｎ－ＬＣ－Ｃ（例えば、図１Ａ）
・Ｎ－２Ｐ－リンカー－ＨＣ－Ｃ；Ｎ－ＬＣ－Ｃ
・Ｎ－ＨＣ－Ｃ；Ｎ－ＬＣ－リンカー－２Ｐ－Ｃ（例えば、図１Ｂ）
・Ｎ－ＨＣ－Ｃ；Ｎ－２Ｐ－リンカー－ＬＣ－Ｃ
【0180】
いくつかの実施形態では、分子は二重特異性抗体であり、ここで、二重特異性抗体の一方のＦａｂはＩＩＰであり、二重特異性抗体の他方のＦａｂは２Ｐである（例えば、図１Ｃ）。他の実施形態では、分子は２つのｓｃＦｖ抗体断片の融合物であり、ここで、一方のｓｃＦｖはＩＩＰであり、他方のｓｃＦｖは２Ｐである（例えば、図１Ｄ）。
【0181】
他の実施形態では、２Ｐは抗体である。そのような場合、融合タンパク質は、以下のうちの１つの構造を有する場合があり、ここで、ＨＣは抗体の重鎖を指し、ＬＣは抗体の軽鎖を指す：
・Ｎ－ＨＣ－リンカー－ＩＩＰ－Ｆｃ；Ｎ－ＬＣ－Ｃ（例えば、図２Ａ～Ｃ）
・Ｎ－ＩＩＰ－リンカー－ＨＣ－Ｆｃ；Ｎ－ＬＣ－Ｃ
・Ｎ－ＨＣ－Ｃ；Ｎ－ＬＣ－リンカー－ＩＩＰ－Ｃ
・Ｎ－ＨＣ－Ｃ；Ｎ－ＩＩＰ－リンカー－ＬＣ－Ｃ
・Ｎ－ＨＣ－リンカー－ＩＩＰ－Ｆｃ；Ｎ－ＬＣ－Ｃ（例えば、図２Ａ～Ｃ）
・Ｎ－ＩＩＰ－リンカー－ＨＣ－Ｆｃ；Ｎ－ＬＣ－Ｃ
・Ｎ－ＨＣ－Ｃ；Ｎ－ＬＣ－リンカー－ＩＩＰ－Ｃ
・Ｎ－ＨＣ－Ｃ；Ｎ－ＩＩＰ－リンカー－ＬＣ－Ｃ
【0182】
いくつかの実施形態では、ＩＩＰ部分および２Ｐ部分は、以下の方法のうちの１つで融合されている：
・Ｎ－ＩＩＰ－Ｆｃ－２Ｐ－Ｃ（例えば、図２Ｄ）
・Ｎ－ＩＩＰ－２Ｐ－Ｃ（例えば、図２Ｆ）
・Ｎ－ＩＩＰ－Ｆｃ－リンカー－２Ｐ－Ｃ
・Ｎ－ＩＩＰ－リンカー－２Ｐ－Ｃ
・Ｎ－２Ｐ－Ｆｃ－ＩＩＰ－Ｃ（例えば、図２Ｅ）
・Ｎ－２Ｐ－ＩＩＰ－Ｃ（例えば、図２Ｇ）
・Ｎ－２Ｐ－Ｆｃ－リンカー－ＩＩＰ－Ｃ
・Ｎ－２Ｐ－リンカー－ＩＩＰ－Ｃ
・Ｎ－ＩＩＰ－Ｆｃ－２Ｐ－Ｃ（例えば、図２Ｄ）
・Ｎ－ＩＩＰ－２Ｐ－Ｃ（例えば、図２Ｆ）
・Ｎ－ＩＩＰ－Ｆｃ－リンカー－２Ｐ－Ｃ
・Ｎ－ＩＩＰ－リンカー－２Ｐ－Ｃ
・Ｎ－２Ｐ－Ｆｃ－ＩＩＰ－Ｃ（例えば、図２Ｅ）
・Ｎ－２Ｐ－ＩＩＰ－Ｃ（例えば、図２Ｇ）
・Ｎ－２Ｐ－Ｆｃ－リンカー－ＩＩＰ－Ｃ
・Ｎ－２Ｐ－リンカー－ＩＩＰ－Ｃ
【0183】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性ポリペプチドは、二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）である。いくつかの実施形態では、ｂＳａｂは、絶対または非絶対ｂｓＡｂである。
【0184】
いくつかの実施形態では、ｂｓＡｂは、１＋１形式（すなわち、各々の標的について１つの結合部位）の二価である。さらなる実施形態では、二重特異性抗体は、タンデムＶＨＨナノボディ融合物、タンデムｓｃＦｖｓ（例えば、ＢｉＴＥ）、ＤＡＲＴ、ダイアボディ、Ｆ（ａｂ）２、またはｓｃＦｖ－Ｆａｂ融合物であり得る。別の実施形態では、二重特異性抗体は、２つまたはそれを超える以下の非対称鎖を含み得る：例えば、強制・ノブ・アンド・ホール（forced knob-and-hole）ＨＬ対合を有するヘテロ重鎖、ＣｒｏｓｓＭａｂ ＶＨ／ＶＬスワップドメインを有するヘテロ重鎖、ＣｒｏｓｓＭＡＢ ＣＨ１／ＣＬスワップドメインを有するヘテロ重鎖、ＤＡＲＴ－Ｆｃ、ＬＰ－ＤＡＲＴ、または半減期延長ＢｉＴＥ。
【0185】
他の実施形態では、ｂｓＡｂは、１＋２形式（すなわち、一方の標的について１つの結合部位および他方の標的について２つの結合部位）の三価である。さらなる実施形態では、ｂｓＡｂは、３つのＦ（ａｂ）領域を有するＣｒｏｓｓＭａｂである。
【0186】
他の実施形態では、ｂｓＡｂは、２＋２形式（すなわち、各々の標的について２つの結合部位）の四価である。さらなる実施形態では、ｂｓＡｂは、２つのｓｃＦｖドメインを有する通常のＩｇＧの融合物、Ｂｓ４Ａｂ、ＤＶＤ－Ｉｇ、四価のＤＡＲＴ－Ｆｃ、Ｆｃに融合した４つのｓｃＦｖドメイン、ＣＯＤＶ－Ｉｇ、Ｆｃに融合したタンデムＶＨＨナノボディの対、または４つのＦ（ａｂ）領域を有するＣｒｏｓｓＭａｂである。
【0187】
いくつかの実施形態では、ｂｓＡｂは、リサンキズマブ、グセルクマブ、チルドラキズマブ、ブラジクマブ、ミリキズマブのうちのいずれか１つのＶＨおよびＶＬを含む。いくつかの実施形態では、ｂｓＡｂは、別の抗体またはその抗原結合断片のＶＨおよびＶＬをさらに含む。
いくつかの実施形態では、ｂｓＡｂは、リサンキズマブ、グセルクマブ、チルドラキズマブ、ブラジクマブ、ミリキズマブのうちのいずれか１つの６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、ｂｓＡｂは、別の抗体またはその抗原結合断片のさらなるＣＤＲをさらに含む。
いくつかの実施形態では、ｂｓＡｂは、リサンキズマブ、グセルクマブ、チルドラキズマブ、ブラジクマブ、ミリキズマブのうちのいずれか１つの６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、ｂｓＡｂは、別の抗体またはその抗原結合断片のさらなるＣＤＲをさらに含む。
【0188】
例示的な多重特異性ポリペプチド
図１Ａおよび３Ａに図式的に示すように、抗ＩＬ－２３－ＰＤ１ｅｃｄは、可動性リンカー（ＧＧＧＧＳ）３を介してその重鎖のＣ末端にＰＤ１ ＥＣＤ（２Ｐ）のリガンド結合配列が融合または連結された抗ＩＬ－２３抗体（ＩＩＰ）を有する例示的な分子である。ＰＤ１ ＥＣＤは、Ａ１３２Ｉ変異を含む。この例示的な分子の配列を、配列番号５３および配列番号５４に示す。
図１Ａおよび３Ａに図式的に示すように、抗ＩＬ－２３－ＰＤ１ｅｃｄは、可動性リンカー（ＧＧＧＧＳ）３を介してその重鎖のＣ末端にＰＤ１ ＥＣＤ（２Ｐ）のリガンド結合配列が融合または連結された抗ＩＬ－２３抗体（ＩＩＰ）を有する例示的な分子である。ＰＤ１ ＥＣＤは、Ａ１３２Ｉ変異を含む。この例示的な分子の配列を、配列番号５３および配列番号５４に示す。
【0189】
ある特定の実施形態では、本明細書中に記載の組換え分子は、配列番号１～１１６に記載の配列のうちのいずれかの「保存的配列改変」（すなわち、ヌクレオチド配列によってコードされるかアミノ酸配列を含むＶＨ配列およびＶＬ配列の、抗原への結合を抑止しないヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の改変）を含むことができる。かかる保存的配列改変としては、保存的なヌクレオチドおよびアミノ酸の置換、ならびにヌクレオチドおよびアミノ酸の付加および欠失が挙げられる。例えば、当該分野で公知の標準的な技術（部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発など）によって配列番号１～１１６を改変することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる置換を含む。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当該分野で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。したがって、本明細書中に記載の部分のうちのいずれかにおける予想される非必須アミノ酸残基を、同一の側鎖ファミリー由来の別のアミノ酸残基で置き換えることができる。抗原結合を排除しないヌクレオチドおよびアミノ酸の保存的置換を同定する方法は、当該分野で周知である（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１１８０－１１８７（１９９３）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１２（１０）：８７９－８８４（１９９９）；およびＢｕｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：４１２－４１７（１９９７）を参照のこと）。
【0190】
ある特定の実施形態では、保存的なアミノ酸配列改変は、本明細書中に記載のＣＤＲ配列に対する最大で１、２、３、４、または５つの保存的アミノ酸置換を指す。例えば、各々のかかるＣＤＲは、５つまでの保存的アミノ酸置換、例えば、４つまで（すなわち、以下）の保存的アミノ酸置換、例えば、３つまで（すなわち、以下）の保存的アミノ酸置換、例えば、２つまで（すなわち、以下）の保存的アミノ酸置換、またはわずか１つの保存的アミノ酸置換を含み得る。
【0191】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性ポリペプチドは、抗体であるＩＩＰおよびＩＩＰ抗体の重鎖のＣ末端に融合したポリペプチドである２Ｐを含む。例示的な融合タンパク質（ＩＩＰとして抗ＩＬ－２３抗体グセルクマブを使用）を、以下のように提供する：配列番号５３または９７～１０９のうちのいずれか１つに対応する重鎖；および配列番号５４に対応する軽鎖。
【0192】
いくつかの実施形態では、ＩＩＰは、以下のＶＨ／ＶＬ対のうちの１つを含む抗体である：配列番号７９＋８０、配列番号８１＋８２、配列番号８３＋８４、配列番号８５＋８６、または配列番号８７＋８８。ＩＩＰ抗体は、配列番号１１１～１１２から選択され得るＶＨのＣ末端に融合したＩｇＧ１定常領域をさらに含み得る。ＩＩＰ抗体は、ＶＬのＣ末端に融合した軽鎖定常領域をさらに含み得る。ＩＩＰ抗体は、配列番号５５であり得るリンカーが有りまたは無しのいずれかで２Ｐ部分に融合され得る。２Ｐは、配列番号５６～７８または８９から選択され得る。
【0193】
組換えＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤのデザイン
種々の実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤの例示的なデザインは、以下の通りである：ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２Ｄ３（配列番号６）、ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２（配列番号５）、またはＩＬ－２３ＲＤ１（配列番号２）。
種々の実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤの例示的なデザインは、以下の通りである：ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２Ｄ３（配列番号６）、ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２（配列番号５）、またはＩＬ－２３ＲＤ１（配列番号２）。
【0194】
いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性ポリペプチドのＩＩＰは、ヒトＩＬ－２３Ｒの細胞外ドメインのリガンド結合ドメイン、およびヒトＩＬ－１２Ｒｂの細胞外ドメインのリガンド結合ドメインを含み得る（ＩＬ－２３Ｒ／ＩＬ１２Ｒ－ＥＣＤ）。
【0195】
シグナル伝達するために、細胞表面上に発現されるネイティブＩＬ－２３Ｒは、ＩＬ－２３ヘテロ二量体（ｐ１９、ｐ４０）に結合する。このヘテロ三量体は、一般に、ＩＬ－２３Ｒシグナル伝達を活性化するためにＩＬ－１２Ｒｂに結合する。同様に、細胞表面上に発現されるネイティブＩＬ１２Ｒａは、ＩＬ－１２ヘテロ二量体（ｐ３５、ｐ４０）に結合する。次いで、このヘテロ三量体は、ＩＬ１２Ｒシグナル伝達を活性化するために同一のＩＬ－１２Ｒｂに結合する。
【0196】
いかなる理論にも拘束されないが、融合タンパク質のＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤは完全なＩＬ－２３ヘテロ二量体（ｐ１９、ｐ４０）に結合し、ＩＬ－２３Ｒ／ｐ１９／ｐ４０のこのヘテロ三量体はネイティブＩＬ－１２Ｒｂに結合することができる可能性がある。これにより、ＩＬ１２Ｒシグナル伝達のために利用可能なＩＬ１２Ｒｂサブユニット数が減少し、そのようなものとして、ＩＬ１２Ｒシグナル伝達の減少に至り得る。がん処置の場合、これは望ましくない場合がある。したがって、この望ましくないネイティブＩＬ１２Ｒｂの隔離の結果を予防するためのキメラＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤ－ＩＬ１２Ｒｂ－ＥＣＤ融合物（ＩＬ－２３Ｒ／ＩＬ１２Ｒ－ＥＣＤ）のデザインを本明細書中に記載する。
【0197】
ＩＬ－２３Ｒ／ＩＬ１２Ｒ－ＥＣＤは、ｐ１９に結合するＩＬ－２３Ｒのリガンド結合配列およびｐ４０に結合するＩＬ－１２Ｒｂのリガンド結合配列を含む。
【0198】
ＩＬ－２３Ｒは、１つのＮ末端Ｉｇ様ドメイン（Ｄ１）、２つのフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（Ｄ２およびＤ３）から構成され、その後にストーク領域、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインが続く。ＩＬ１２Ｒｂは、２つのＮ末端フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン（Ｄ１、Ｄ２）から始まり、その後に３つのフィブロネクチンＩＩＩ型様ドメイン（Ｄ３、Ｄ４、Ｄ５）が続き、その後に膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインが続く。
【0199】
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ／ＩＬ１２Ｒ－ＥＣＤは、１またはそれを超える、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３から選択されるＩＬ－２３Ｒのドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ／ＩＬ１２Ｒ－ＥＣＤは、１またはそれを超える、Ｄ１、Ｄ２から選択されるＩＬ１２Ｒｂのドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ／ＩＬ１２Ｒ－ＥＣＤは、ＩＬ－２３ＲＤ１、ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２、またはＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２Ｄ３を含み得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ／ＩＬ１２Ｒ－ＥＣＤは、ＩＬ１２ＲｂＤ１、ＩＬ１２ＲｂＤ２、またはＩＬ１２ＲｂＤ１Ｄ２を含み得る。
【0200】
いくつかの実施形態では、ＩＬ１２ＲｂドメインおよびＩＬ－２３Ｒドメインは、可動性リンカーを介して融合または連結されている。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ／ＩＬ１２Ｒ－ＥＣＤは、Ｎ－ＩＬ－２３Ｒドメイン（複数可）－リンカー－ＩＬ１２Ｒドメイン（複数可）－Ｃという形態を有する。他の実施形態では、ＩＬ－２３Ｒ／ＩＬ１２Ｒ－ＥＣＤは、Ｎ－ＩＬ１２Ｒドメイン（複数可）－リンカー－ＩＬ－２３Ｒドメイン（複数可）－Ｃという形態を有する。さらなる態様では、可動性リンカーは、ポリペプチド配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは１と１０との間である）を含む。
【0201】
ＩＬ－２３Ｒ／ＩＬ１２Ｒ－ＥＣＤの例示的な実施形態は、以下の通りである：ＩＬ１２ＲｂＤ１－リンカー－ＩＬ－２３ＲＤ１（配列番号２９）、ＩＬ１２ＲｂＤ１－リンカー－ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２（配列番号３０）、ＩＬ１２ＲｂＤ１－リンカー－ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２Ｄ３（配列番号３１）、ＩＬ１２ＲｂＤ１Ｄ２－リンカー－ＩＬ－２３ＲＤ１（配列番号３２）、ＩＬ１２ＲｂＤ１Ｄ２－リンカー－ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２（配列番号３３）、ＩＬ－２３ＲＤ１－リンカー－ＩＬ１２ＲｂＤ１（配列番号３４）、ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２－リンカー－ＩＬ１２ＲｂＤ１（配列番号３５）、ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２Ｄ３－リンカー－ＩＬ１２ＲｂＤ１（配列番号３６）、ＩＬ－２３ＲＤ１－リンカー－ＩＬ１２ＲｂＤ１Ｄ２（配列番号３７）、またはＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２－リンカー－ＩＬ１２ＲｂＤ１Ｄ２（配列番号３８）。
【0202】
融合タンパク質の例示的な実施形態としては、以下が挙げられる：ＨＣのＣ末端に融合したＩＬ－２３ＲＤ１を有する抗ＣＥＡ抗体（配列番号１２、１３）、ＬＣのＣ末端に融合したＩＬ－２３ＲＤ１を有する抗ＣＥＡ抗体（配列番号１１、１４）、ＨＣのＣ末端に融合したＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２を有する抗ＣＥＡ抗体（配列番号１２、１５）、ＬＣのＣ末端に融合したＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２を有する抗ＣＥＡ抗体（配列番号１１、１６）、ＨＣのＣ末端に融合したＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２Ｄ３を有する抗ＣＥＡ抗体（配列番号１２、１７）、ＬＣのＣ末端に融合したＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２Ｄ３を有する抗ＣＥＡ抗体（配列番号１１、１８）、ＬＣのＣ末端に融合したＩＬ－２３ＲＤ１およびＨＣのＣ末端に融合したＴＧＦｂＲＩＩ－ＥＣＤを有する抗ＣＥＡ抗体（配列番号１４、１９）、ＴＮＦＲ－ＥＣＤ－Ｆｃ－ＩＬ－２３ＲＤ１（配列番号２０）、ＴＮＦＲ－ＥＣＤ－Ｆｃ－ＩＬ－２３ＲＤ２（配列番号２１）、ＴＮＦＲ－ＥＣＤ－Ｆｃ－ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２Ｄ３（配列番号２２）、Ｆｃ－ＩＬ－２３ＲＤ１（配列番号２３）、Ｆｃ－ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２（配列番号２４）、Ｆｃ－ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２Ｄ３（配列番号２５）、ＩＬ－２３ＲＤ１－Ｆｃ（配列番号２６）、ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２－Ｆｃ（配列番号２７）、ＩＬ－２３ＲＤ１Ｄ２Ｄ３－Ｆｃ（配列番号２８）、ＨＣのＣ末端に融合したＩＬ１２ＲｂＤ１－リンカー－ＩＬ－２３ＲＤ１を有する抗ＣＥＡ抗体（配列番号３９）、ＬＣのＣ末端に融合したＩＬ１２ＲｂＤ１－リンカー－ＩＬ－２３ＲＤ１を有する抗ＣＥＡ抗体（配列番号４０）、ＶＥＧＦＲ－Ｆｃ－ＩＬ－２３ＲＤ１（配列番号４１）、ＩＬ－２３ＲＤ１－Ｆｃ－ＶＥＧＦＲ（配列番号４２）、ＴＧＦｂＲＩＩ－Ｆｃ－ＩＬ－２３ＲＤ１（配列番号４３）、ＩＬ－２３ＲＤ１－Ｆｃ－ＴＧＦｂＲＩＩ（配列番号４４）、ＦｃおよびＩＬ－２３ＲＤ１に融合したＰＳＭＡ結合ペプチド（配列番号４５）、ＨＣのＣ末端に融合したＩＬ－２３ＲＤ１を有する抗ＰＳＭＡ抗体（配列番号４８、４７）、ＬＣのＣ末端に融合したＩＬ－２３ＲＤ１を有する抗ＰＳＭＡ抗体（配列番号４６、４９）、ＬＣのＣ末端に融合したＩＬ－２３ＲＤ１およびＨＣのＣ末端に融合したＴＧＦｂＲＩＩ－ＥＣＤを有する抗ＰＳＭＡ抗体（配列番号５０、４９）、またはＨＣのＣ末端に融合したＴＧＦｂＲＩＩ－ＥＣＤおよびＬＣのＣ末端に融合したＰＳＭＡ結合ペプチドを有する抗ＩＬ－２３抗体（配列番号５１、５２）。
【0203】
がんの処置のための併用療法
被験体における新生物疾患またはがんを処置する方法であって、有効量の、１またはそれを超える治療剤を含む医薬組成物（複数可）を前述の被験体に投与することを含み、ここで、前述の１またはそれを超える治療剤が、少なくとも、ＩＬ－２３／ＩＬ－２３Ｒシグナル伝達の阻害剤を含む第１の治療剤（「ａ－ＩＬ－２３剤」）；および第２の治療剤（「併用剤」）を含む、方法も本明細書中に提供する。第２の治療剤は、１またはそれを超える免疫チェックポイントタンパク質のアンタゴニスト；１またはそれを超える免疫刺激性受容体のアゴニスト；１またはそれを超えるサイトカインのシグナル伝達のアンタゴニスト；１またはそれを超えるサイトカイン受容体のアゴニスト；腫瘍細胞または免疫細胞の細胞表面に発現または提示される１またはそれを超える細胞表面分子の調節剤；ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、または造血幹細胞を含む免疫細胞；免疫原性化学療法剤；および／または１またはそれを超える免疫阻害性酵素のアンタゴニストを含み得る。
被験体における新生物疾患またはがんを処置する方法であって、有効量の、１またはそれを超える治療剤を含む医薬組成物（複数可）を前述の被験体に投与することを含み、ここで、前述の１またはそれを超える治療剤が、少なくとも、ＩＬ－２３／ＩＬ－２３Ｒシグナル伝達の阻害剤を含む第１の治療剤（「ａ－ＩＬ－２３剤」）；および第２の治療剤（「併用剤」）を含む、方法も本明細書中に提供する。第２の治療剤は、１またはそれを超える免疫チェックポイントタンパク質のアンタゴニスト；１またはそれを超える免疫刺激性受容体のアゴニスト；１またはそれを超えるサイトカインのシグナル伝達のアンタゴニスト；１またはそれを超えるサイトカイン受容体のアゴニスト；腫瘍細胞または免疫細胞の細胞表面に発現または提示される１またはそれを超える細胞表面分子の調節剤；ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、または造血幹細胞を含む免疫細胞；免疫原性化学療法剤；および／または１またはそれを超える免疫阻害性酵素のアンタゴニストを含み得る。
【0204】
いくつかの実施形態では、ａ－ＩＬ－２３剤は、ＩＬ－２３ｐ１９に結合する抗体（例えば、リサンキズマブ、グセルクマブ、チルドラキズマブ、ブラジクマブ、ミリキズマブ）を含む。他の実施形態では、ａ－ＩＬ－２３剤は、ＩＬ－２３Ｒに結合する抗体（例えば、ＡＳ２７６２９００－００）である。他の実施形態では、ａ－ＩＬ－２３剤は、ＩＬ－２３ｐ１９またはＩＬ－２３Ｒに結合する抗体を含む融合タンパク質を含む。他の実施形態では、ａ－ＩＬ－２３剤は、本発明の多重特異性ポリペプチド／融合タンパク質である。いくつかの態様では、ａ－ＩＬ－２３剤は、ＩＬ－２３Ｒ－ＥＣＤを含む抗体－リガンドトラップ融合タンパク質である。
【0205】
いくつかの実施形態では、併用剤は、ＴＧＦｂ／ＴＧＦｂＲを阻害する。いくつかの実施形態では、ＴＧＦｂ／ＴＧＦｂＲ阻害剤は、以下から選択される：ａ－ＴＧＦｂ抗体（例えば、フレソリムマブ）；ａ－ＴＧＦｂＲ抗体；ＴＧＦｂＲＩＩ ＥＣＤ含有融合タンパク質（例えば、ＴＧＦｂＲＩＩｅｃｄ－Ｆｃ、ＡＶＩＤ２００）；ＴＧＦｂＲ ＴＫＩ（例えば、ガルニセルチブ）；抗ＧＡＲＰ抗体；抗ＬＡＰ抗体；抗体およびＴＧＦｂＲＩＩ ＥＣＤを含む融合タンパク質（例えば、ａ－ＰＤＬ１－ＴＧＦｂＲＩＩｅｃｄ；ビントラフスプアルファ、ＳＩＲＰａ ＥＣＤ－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＣＥＡ－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＰＳＭＡ－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＩＬ６Ｒ－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＰＤ１－ＴＧＦｂＲＩＩ、抗ＥＧＦＲ－ＴＧＦｂＲＩＩ、または抗ＨＥＲ２－ＴＧＦｂＲＩＩ）。具体的な実施形態では、併用剤は抗ＥＧＦＲ－ＴＧＦｂＲＩＩである。具体的な実施形態では、併用剤はＢＣＡ１０１である。
【0206】
いくつかの実施形態では、併用剤は、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲを阻害する。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ阻害剤は、以下から選択され得る：抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ）、抗ＶＥＧＦＲ抗体（例えば、ラムシルマブ）、ＶＥＧＦＲキナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ、カボザンチニブ、レゴラフェニブ、パゾパニブ、バンデタニブ、レンバテニブ）、ＶＥＧＦＲ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、アフリベルセプト）、または抗体およびＶＥＧＦＲ ＥＣＤを含む融合タンパク質。
【0207】
いくつかの実施形態では、併用剤は、ＣＤ４７とＳＩＲＰａの相互作用を阻害する。いくつかの態様では、ＣＤ４７／ＳＩＲＰａ阻害剤は、以下から選択され得る：ａ－ＣＤ４７ ｍＡｂ（例えば、マグロリマブ、ＺＬ－１２０１、ＴＪ０１１１３３、ＳＴＩ－６６４３、ＳＲＦ２３１、ＳＨＲ－１６０３、ＩＭＣ－００２、ＩＢＩ１８８、ＣＣ－９０００２、ＡＯ－１７６、またはＡＫ１１７、レタプリマブ、ウラブレリマブ）、ａ－ＳＩＲＰａ ｍＡｂ、ＳＩＲＰａ－ＥＣＤ含有融合タンパク質（例えば、ＳＩＲＰａ－Ｆｃ、エボルパセプト、ＴＴＩ－６２１、ＴＴＩ－６２２）。
【0208】
いくつかの実施形態では、併用剤は、ＳＩＧＬＥＣ１０とＣＤ２４の相互作用を阻害する。
【0209】
いくつかの実施形態では、併用剤は免疫チェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態では、併用剤は、自然免疫チェックポイント受容体またはリガンドのアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、併用剤は、Ｔ細胞共阻害分子のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＰＤ－１に結合する抗体（例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、セミプリマブ、ドスタルリマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、シンチリマブ、ササンリマブ、チセリズマブ、またはトリパリマブ）またはＰＤＬ１に結合する抗体（例えば、デュルバルマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ）である。他の実施形態では、併用剤は、ＢＴＬＡとＨＶＥＭの相互作用を阻害する。他の実施形態では、併用剤は、ＴＩＧＩＴとＰＶＲの相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴを阻害する併用剤は、チラゴルマブ、ビボストリマブ、ＢＭＳ－９８６２０７、オシペルリマブ、エチギリマブ、ドムバナリマブ、ＥＯＳ－４４８、ＳＥＡ－ＴＧＴ、ＡＳＰ８３７４、ＣＯＭ９０２、またはＩＢＩ９３９から選択される。他の実施形態では、併用剤は、ＴＩＭ－３とＣＥＡＣＡＭの相互作用を阻害する。いくつかの実施形態（ｅｍｅｂｏｄｉｍｅｎｔ）では、併用剤は、ＬＡＧ－３を阻害する。いくつかの実施形態では、ＬＡＧ－３を阻害する併用剤は、レラトリマブ、フィアンリマブ、Ｓｙｍ０２２、ＧＳＫ２８３１７８１、ＴＳＲ－０３３、イエルミリマブ、ファベゼリマブ、テボテリマブ、ＦＳ１１８、またはパブナリマブから選択される。
【0210】
いくつかの実施形態では、併用剤は、免疫刺激性受容体のアゴニストである。いくつかの実施形態では、併用剤は、Ｔ細胞共刺激分子のアゴニストである。いくつかの実施形態では、併用剤は、対応する共刺激リガンドまたはその受容体結合断片を含むポリペプチドである。他の実施形態では、併用剤は、Ｔ細胞共刺激受容体に結合するアゴニスト抗体である。いくつかの実施形態では、併用剤は、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、糖質コルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、ＣＤ４０、ＣＤ３０、ＤＮＡＭ、またはＣＤ２７に結合する。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＢＴＬＡ、ＬＩＧＨＴ、ＯＸ－４０Ｌ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、またはＣＤ４０Ｌの細胞外ドメインの受容体結合配列を含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、併用剤はＦＰＴ－１５５である。いくつかの実施形態では、併用剤は、アゴニストとして４－１ＢＢに結合する抗体またはその抗原結合断片（例えば、ウレルマブ、ウトミルマブ）を含む。いくつかの実施形態では、併用剤は、アゴニストとしてＯＸ４０に結合する抗体またはその抗原結合断片（例えば、タボリマブ、ＰＦ－０４５１８６００、ＢＭＳ－９８６１７８、ＭＯＸＲ－０９１６、ＧＳＫ－３１７４９９８、ＩＮＣＡＧＮ０１９４９）を含む。いくつかの実施形態では、併用剤は、アゴニストとしてＩＣＯＳに結合する抗体またはその抗原結合断片（例えば、ＧＳＫ－３３５９６０９、ＪＴＸ－２０１１）を含む。いくつかの実施形態では、併用剤（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ａＴｇｅｎｔ）は、アゴニストとしてＧＩＴＲに結合する抗体またはその抗原結合断片（例えば、ＴＲＸ－５１８、ＭＫ－４１６６、ＭＫ－１２４８、ＧＷＮ－３２３、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＢＭＳ－９８６１５６、ＡＭＧ－２２８）を含む。いくつかの実施形態では、併用剤は、アゴニストとしてＣＤ４０に結合する抗体またはその抗原結合断片（例えば、ＣＤＸ－１１４０、ＳＥＡ－ＣＤ４０、ＲＯ７００９７８９、ＪＮＪ－６４４５７１０７、ＡＰＸ－００５Ｍ、Ｃｈｉ Ｌｏｂ ７／４）を含む。いくつかの実施形態では、併用剤は、アゴニストとしてＣＤ２７に結合する抗体またはその抗原結合断片（例えば、バルリルマブ）を含む。いくつかの実施形態では、併用剤は、アゴニストとしてＴＮＦＲスーパーファミリーメンバー受容体に結合する。
【0211】
いくつかの実施形態では、併用剤は、自然免疫細胞上に発現される免疫刺激性受容体のアゴニストである。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＮＫ細胞上に発現される免疫刺激性受容体のアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞の免疫刺激性受容体はＮＫＧ２Ｄである。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＮＫＧ２Ｄリガンド（ＮＫＧ２ＤＬ）のＮＫＧ２Ｄ結合断片を含むポリペプチドである。
【0212】
いくつかの実施形態では、併用剤は腫瘍標的化抗体である。いくつかの実施形態では、併用剤は、腫瘍細胞表面分子、腫瘍抗原、または腫瘍関連抗原に結合する。いくつかの実施形態では、腫瘍標的化抗体は、ＮＫ細胞および／またはマクロファージ上の活性化受容体に結合するＦｃドメイン（例えば、ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩＩ）を有する。いくつかの実施形態では、腫瘍標的化抗体のＦｃドメインは、１またはそれを超えるＦｃ受容体へのその結合を増加させるようにデザインされた変異を有する。
【0213】
いくつかの実施形態では、併用剤は、ＮＫ細胞を活性化するサイトカイン、またはＮＫ細胞を活性化するサイトカインを含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、このサイトカインは、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、またはＩＬ－１８であり得る。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＳＴ－０６７、ノガペンデキンアルファ、ＳＨＲ１５０１、ＢＪ－００１、ＳＯ－Ｃ１０１、またはＮＨＳ－ＩＬ１２であり得る。いくつかの実施形態では、併用剤は、サイトカインをコードするウイルスまたはプラスミドである。
【0214】
いくつかの実施形態では、併用剤は、ホルモン処置剤である。いくつかの実施形態では、ホルモン剤は、アンドロゲン合成を阻害するか、アンドロゲン受容体シグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、ホルモン剤は、ＬＨＲＨアゴニスト（例えば、ゴセレリン、ヒストレリン、ロイプロリド、またはトリプトレリン）；ＬＨＲＨアンタゴニスト（例えば、デガレリクス）、第１世代抗アンドロゲン（例えば、ニルタミド、フルタミド、またはビカルタミド）、第２世代抗アンドロゲン（例えば、アパルタミド、エンザルタミド、またはダロルタミド）、またはアンドロゲン合成阻害剤（例えば、アビラテロンアセタート）である。
【0215】
いくつかの実施形態では、併用剤は、細胞毒性剤である。いくつかの実施形態では、併用剤は、化学療法剤、放射線、または腫瘍標的化抗体である。
【0216】
いくつかの実施形態では、併用剤は、抗体－薬物コンジュゲートである。いくつかの実施形態では、併用剤は、以下のリストから選択される：ゲムツズマブオゾガマイシン、ブレンツキシマブベドチン、トラスツズマブエムタンシン、イノツズマブオゾガマイシン、ポラツズマブベドチン、エンフォルツマブベドチン、トラスツズマブデルクステカン、ベランタマブマフォドチン、またはサシツズマブゴビテカン。
【0217】
いくつかの実施形態では、併用剤は、小分子キナーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＰＡＲＰ阻害剤である。いくつかの実施形態では、併用剤は、腫瘍ワクチンまたはウイルス溶解剤である。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＴＨ１７の分化、維持、または機能の阻害剤である。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＩＬ－１７／ＩＬ－１７Ｒ、ＩＬ－６／ＩＬ－６Ｒ、またはＩＬ－１／ＩＬ－１Ｒを阻害する。いくつかの実施形態では、併用剤は、抗ＩＬ６抗体または抗ＩＬ６Ｒ抗体である。
【0218】
いくつかの実施形態では、併用剤は、１またはそれを超えるサイトカインのシグナル伝達のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、免疫阻害性サイトカインである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、以下から選択される：ＩＬ－４、ＩＬ－１３、ＩＬ－１０、ＩＬ－６、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－１７、ＩＬ－２２。いくつかの実施形態では、併用剤は、サイトカインに結合するポリペプチドである。他の実施形態では、併用剤は、サイトカインの同族サイトカイン受容体に結合するポリペプチドである。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＩＬ１ｂまたはＩＬ１Ｒに結合して阻害する。いくつかの実施形態では、併用剤は、アナキンラまたはカナキヌマブから選択される。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＩＬ－１０またはＩＬ－１０Ｒに結合して阻害する。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＩＬ－１０またはＩＬ－１０Ｒに結合する抗体またはその抗原結合断片；またはＩＬ－１０ＲのＩＬ１０結合断片を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＩＬ－１７またはＩＬ－１７Ｒに結合する抗体である。いくつかの実施形態では、併用剤は、アファセビクマブ、ビメキズマブ、イキセキズマブ、ネタキマブ、ペラキズマブ、セクキヌマブ、ブナキズマブ、またはブロダルマブから選択される。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＩＬ－６またはＩＬ－６Ｒに結合する抗体である。いくつかの実施形態では、併用剤は、クラザキズマブ、オロキズマブ、シルツキシマブ、シルクマブ、ジルチベキマブ、レビリマブ、サペリズマブ、サリルマブ、サトラリズマブ、またはトシリズマブから選択される。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、ＩＬ４ＲＡ、またはＩＬ１３Ｒに結合する抗体である。いくつかの実施形態では、併用剤はデュピルマブである。
【0219】
いくつかの実施形態では、併用剤は、ＲＡＮＫ／ＲＡＮＫＬシグナル伝達のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＲＡＮＫＬまたはＲＡＮＫに結合する抗体である。いくつかの実施形態では、併用剤は、デノスマブである。他の実施形態では、併用剤は、ＲＡＮＫ ＥＣＤのＲＡＮＫＬ結合断片を含むポリペプチドである。
【0220】
いくつかの実施形態では、併用剤は、以下から選択される１またはそれを超える薬剤を含む：免疫治療剤、化学療法分子、抗体、抗体－薬物コンジュゲート、小分子キナーゼ阻害剤、ホルモン剤、アンドロゲン合成阻害剤、アンドロゲン受容体アンタゴニスト、抗血管新生剤、細胞治療、ＣＡＲ－Ｔ細胞治療、ＣＡＲ－ＮＫ細胞治療、放射性核種治療、電離放射線、紫外放射線、冷凍アブレーション、熱アブレーション、選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）、選択的エストロゲン受容体分解薬（ＳＥＲＤ）、または高周波アブレーション。いくつかの実施形態では、免疫治療剤は、以下から選択される：免疫チェックポイント阻害剤、免疫刺激性受容体アゴニスト、免疫刺激性サイトカイン／サイトカイン受容体アゴニスト、免疫阻害性サイトカイン／サイトカイン受容体アンタゴニスト、腫瘍ワクチン、免疫調節性イミド薬、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、腫瘍溶解性ウイルス。
【0221】
いくつかの実施形態では、併用剤は、免疫原性化学療法剤である。免疫原性化学療法の作用機序は、免疫活性化に関与している可能性があり、そのため、ＩＬ－２３依存性炎症細胞の増大／活性化によって妨げられる可能性がある。いくつかの実施形態では、免疫原性化学療法剤は、アルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、白金誘導体、タキサン、またはアントラサイクリンである。
【0222】
いくつかの実施形態では、併用剤は、免疫阻害性酵素のアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫阻害性酵素は、エクトヌクレオチダーゼ（例えば、ＣＤ３９、ＣＤ７３）またはインドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼである。
【0223】
ＩＬ－２３が豊富な腫瘍免疫微小環境では、患者に養子移入された操作されたＴ細胞またはＮＫ細胞（それぞれ、ＣＡＲ－Ｔ、ＣＡＲ－ＮＫ細胞）は、望ましくない腫瘍促進性の表現型を取り込み得る。いくつかの実施形態では、併用剤は、ＣＡＲ－Ｔ細胞またはＣＡＲ－ＮＫ細胞を含む組成物である。
【0224】
いくつかの実施形態では、がんは、急性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄球性（または顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（無症候性および高悪性度の形態）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、毛様細胞白血病、および脊髄形成異常、ならびにこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される血液系または血行性のがんである。
【0225】
いくつかの実施形態では、がんは、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、および他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ系悪性腫瘍、膵臓がん、乳がん、肺がん、卵巣がん、前立腺がん、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髄様癌、甲状腺乳頭癌、クロム親和性細胞腫 脂腺癌、乳頭状癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーム、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、セミノーマ、膀胱癌、黒色腫、およびＣＮＳ腫瘍（例えば、神経膠腫（脳幹部神経膠腫および混合型神経膠腫など）、膠芽細胞腫（多形性膠芽細胞腫としても公知）星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、シュワン細胞腫 頭蓋咽頭腫（ｃｒａｎｉｏｐｈａｒｙｏｇｉｏｍａ）、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、ならびに脳転移からなる群から選択される固形腫瘍である。
【0226】
いくつかの実施形態では、処置の方法は、ＴｆＲに結合し、それにより、血液脳関門を横切るポリペプチド配列を含む２Ｐを含む本発明の多重特異性ポリペプチドの投与を含む。いくつかのかかる実施形態では、がんは、ＣＮＳ腫瘍（例えば、神経膠腫（脳幹部神経膠腫および混合型神経膠腫など）、膠芽細胞腫（多形性膠芽細胞腫としても公知）星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、シュワン細胞腫 頭蓋咽頭腫（ｃｒａｎｉｏｐｈａｒｙｏｇｉｏｍａ）、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、および脳転移である。
【0227】
いくつかの実施形態では、方法は、併用剤と併せてまたは逐次、ａ－ＩＬ－２３剤での処置を含む。例えば、ａ－ＩＬ－２３剤での処置を、併用剤の投与と同時に（例えば、同一の医薬組成物中で、または約０．１時間～約２４時間の間の時間枠内で）施し得る；ａ－ＩＬ－２３剤での処置を、併用剤投与の１～２８日後に施し得る；あるいは、ａ－ＩＬ－２３剤での処置を、併用剤投与の１～２８日前に施し得る。
【0228】
いくつかの実施形態では、単剤または併用剤のいずれかでの処置を、患者の疾患が改善するか安定する／非進行性となる限り、維持処置として毎月１回から２ヶ月毎に１回まで、３ヶ月毎に１回まで、４ヶ月毎に１回まで、５ヶ月毎に１回まで、６ヶ月毎に１回まで、または７ヶ月毎に１回、または８ヶ月毎に１回、または９ヶ月毎に１回、または１０ヶ月毎に１回、または１１ヶ月毎に１回、または毎年１回の時間枠で周期的に繰り返す。
【0229】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２３剤と他の抗がん剤（複数可）の組み合わせでの処置の方法により、他の抗がん剤（複数可）のみでの処置と比較して、免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の発生率および／または重症度が低下する。いくつかの実施形態では、毒性に起因して治療を中断する患者の割合の低下は、少なくとも１０％、３０％、５０％、７０％、または９０％である。いくつかの実施形態では、グレード３、グレード４、グレード３＋４、または全グレードのｉｒＡＥの発生率の低下は、少なくとも１０％、３０％、５０％、７０％、または９０％である。いくつかの実施形態では、ｉｒＡＥの特定のクラスのグレード３、グレード４、グレード３＋４、または全グレードの低下は、少なくとも１０％、３０％、５０％、７０％、または９０％である；ここで、クラスは、制限されないが、胃腸毒性、内分泌毒性、心毒性、肺毒性、肝臓毒性、リウマチ性毒性、腎臓毒性、神経学的または皮膚科学的／皮膚毒性から選択され得る。いくつかの実施形態では、特定のｉｒＡＥのグレード３、グレード４、グレード３＋４、または全グレードの低下は、少なくとも１０％、３０％、５０％、７０％、または９０％であり；ここで、特定のｉｒＡＥは、制限されないが、ブドウ膜炎、シェーグレン症候群、結膜炎、眼瞼炎、上強膜炎、強膜炎、網膜炎、肺臓炎、胸膜炎、サルコイド様肉芽腫症（ｇｒａｎｕｌａｍａｔｏｓｉｓ）、肝炎、膵炎、自己免疫性糖尿病、皮疹、掻痒症、白斑、ＤＲＥＳＳ、乾癬、スティーブンス・ジョンソン症候群、関節痛、関節炎、筋炎、皮膚筋炎、脳炎、髄膜炎、多発性ニューロパシー、疲労、ギラン・バレー症候群、下垂体炎、甲状腺炎、副腎炎、心筋炎、心膜炎、間質性腎炎、糸球体腎炎、大腸炎、腸炎、胃炎、貧血、好中球減少症、血小板減少症、血栓性微小血管障害、後天性血友病、脈管炎、または任意の有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）有害事象から選択され得る。
【0230】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２３剤と他の抗がん剤（複数可）の組み合わせでの処置の方法は、他の抗がん剤（複数可）のみでの処置より有効に全生存または無増悪生存を延長する。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２３剤と他の抗がん剤（複数可）の組み合わせでの処置の方法は、当該分野、例えば、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，‘‘Ｎｅｗ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｕｒｓ：Ｒｅｖｉｓｅｄ ＲＥＣＩＳＴ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ（ｖｅｒｓｉｏｎ １．１）’’Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ２００９；４５：２２８（その全体が本明細書中で援用される）に十分に説明されている任意のＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１規準において統計的に有意に改善する。
【0231】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２３剤と他の抗がん剤（複数可）の組み合わせでの処置の方法は、他の抗がん剤（複数可）のみでの処置よりも有効に骨への転移または骨格関連事象を軽減または予防する。いくつかの実施形態では、骨への転移の軽減は、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１規準に従う。いくつかの実施形態では、骨格関連事象の軽減は、少なくとも１０％、３０％、５０％、７０％、または９０％である。
【0232】
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２３剤と他の抗がん剤（複数可）の組み合わせでの処置の方法により、他の抗がん剤（複数可）のみでの処置と比較して、上記の有効および毒性の両方が改善される。
【0233】
いくつかの実施形態では、処置を、患者の疾患が改善するか安定する／非進行性となる限り、維持処置として２週間毎に１回から３週間毎に１回まで、毎月１回まで、２ヶ月毎に１回まで、３ヶ月毎に１回まで、４ヶ月毎に１回まで、５ヶ月毎に１回まで、６ヶ月毎に１回まで、または７ヶ月毎に１回、または８ヶ月毎に１回、または９ヶ月毎に１回、または１０ヶ月毎に１回、または１１ヶ月毎に１回、または毎年１回の時間枠で周期的に繰り返す。
【0234】
いくつかの実施形態では、処置は、転移を予防し、腫瘍成長を阻害し、そして／または腫瘍成長を低減する。
【0235】
免疫障害または自己免疫状態を処置するための治療
被験体における免疫障害を処置する方法であって、有効量の、１またはそれを超える治療剤を含む医薬組成物を前述の被験体に投与することを含み、ここで、前述の１またはそれを超える治療剤が、本発明の抗ＩＬ－２３剤、または多重特異性ポリペプチドを含む、方法を本明細書中に提供する。
被験体における免疫障害を処置する方法であって、有効量の、１またはそれを超える治療剤を含む医薬組成物を前述の被験体に投与することを含み、ここで、前述の１またはそれを超える治療剤が、本発明の抗ＩＬ－２３剤、または多重特異性ポリペプチドを含む、方法を本明細書中に提供する。
【0236】
いくつかの実施形態では、方法は、第２の薬剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、この第２の薬剤は、ＩＬ１０シグナル伝達のアゴニストである。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、アゴニストＩＬ１０Ｒ抗体またはＩＬ１０のＩＬ１０Ｒ結合配列を含む。
【0237】
いくつかの実施形態では、処置の方法は、ＴｆＲに結合し、それにより、血液脳関門を横切るポリペプチド配列を含む２Ｐを含む本発明の多重特異性ポリペプチドの投与を含む。いくつかのかかる実施形態では、免疫障害は、多発性硬化症であるか、神経炎症を引き起こす。
【0238】
いくつかの実施形態では、免疫障害は、自己免疫障害である。本明細書中で言及されるように、免疫障害の非限定的な例としては、アジソン病、セリアック病、皮膚筋炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、反応性関節炎、関節リウマチ、シェーグレン症候群、強皮症、全身性硬化症、全身性エリテマトーデス、またはＩ型糖尿病、慢性炎症性疾患、乾癬、潰瘍性大腸炎、クローン病、および炎症性腸疾患が挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫障害は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）である。
【0239】
１つの実施形態では、本発明は、本発明の抗ＩＬ－２３剤または多重特異性ポリペプチドを含む急性または慢性の移植片対宿主病の処置または予防の方法を開示する。
【0240】
キットおよび製品
本明細書中に記載の組換え分子のうちのいずれかを含むキット、単位投与量、および製品をさらに提供する。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載の医薬組成物のうちのいずれか１つを含むキットを提供し、キットは、好ましくは、使用のための指示を提供する。
本明細書中に記載の組換え分子のうちのいずれかを含むキット、単位投与量、および製品をさらに提供する。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載の医薬組成物のうちのいずれか１つを含むキットを提供し、キットは、好ましくは、使用のための指示を提供する。
【0241】
本出願のキットは、好適に包装されている。好適な包装としは、バイアル、ボトル、ジャー、およびフレキシブル包装（例えば、密封Ｍｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などが挙げられるが、これらに限定されない。キットは、必要に応じて、バッファーおよび説明のための情報（interpretative information）などのさらなる構成成分を提供し得る。したがって、本出願は、バイアル（密封バイアルなど）、ボトル、ジャー、およびフレキシブル包装などが挙げられる製品も提供する。
【0242】
製品は、容器および容器上または容器に添付したラベルもしくは添付文書を含むことができる。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの種々の材料から形成され得る。一般に、容器は、本明細書中に記載の疾患または障害の処置に有効な組成物を保持し、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針で突き刺すことができるストッパーを有する静脈注射用液剤のバッグまたはバイアルであり得る）。ラベルまたは添付文書は、組成物を個体における特定の状態を処置するために使用することを示す。ラベルまたは添付文書は、個体への組成物の投与についての指示をさらに含む。ラベルは、再構成および／または使用のための指示を示し得る。医薬組成物を保持している容器は、再構成された製剤の反復投与（例えば、２～６回の投与）が可能な複数回使用バイアルであり得る。添付文書は、かかる治療製品の使用に関する適応症、用法、用量、投与、禁忌および／または警告についての情報を含む治療製品の市販のパッケージ中に慣習的に含まれる指示を指す。さらに、製品は、薬学的に許容され得る緩衝液（静菌性の注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、およびデキストロース溶液など）を含む第２の容器をさらに含み得る。製品は、商業的観点およびユーザー側の観点から望ましい他の材料（他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジが挙げられる）をさらに含み得る。
【0243】
キットまたは製品は、複数回単位用量の医薬組成物および使用のための指示を含み、薬局（例えば、病院の薬局および調剤薬局）での保存および使用に十分な量で包装され得る。
【実施例】
【0244】
実施例１：多機能構築物のデザイン
多機能融合タンパク質は、抗体またはその抗原結合断片であるＩＩＰを含み得る。かかる構築物の例を、図１Ａ～１Ｄに示す。
多機能融合タンパク質は、抗体またはその抗原結合断片であるＩＩＰを含み得る。かかる構築物の例を、図１Ａ～１Ｄに示す。
【0245】
図１Ａ～１Ｄは、本明細書中に記載の多重特異性ポリペプチドの複数の例示的なデザインに対応している略図を示し、図中、ＩＩＰ（暗灰色）は抗体または抗体断片を含み、２Ｐ（薄灰色）は標的結合ポリペプチドを示す。図１Ａは、重鎖のＣ末端に融合した２Ｐを有する抗体ＩＩＰを示す。図１Ｂは、軽鎖のＣ末端に融合した２Ｐを有する抗体ＩＩＰを示す。図１Ｃは、二重特異性抗体を示し、ここで、一方のＦａｂがＩＩＰであり、他方のＦａｂが２Ｐである。図１Ｄは、２つのｓｃＦｖの融合物であり、ここで、一方のｓｃＦｖはＩＩＰであり、他方のｓｃＦｖは２Ｐである。
【0246】
図２Ａ～２Ｇは、本明細書中に記載の多重特異性ポリペプチドの複数の例示的なデザインに対応している略図を示し、図中、ＩＩＰは、ＩＬ－２３Ｒ ＥＣＤのリガンド結合断片を含む。Ｄ１、Ｄ２およびＤ３は、ＩＬ－２３Ｒ結合ドメイン１、２、および３をそれぞれ示す。これらの図では、暗灰色は、ＩＩＰおよび薄灰色に対応する。多機能性融合タンパク質は、ＩＬ－２３ ＥＣＤのリガンド結合断片を含むＩＩＰを含み得る。
【0247】
本発明の例示的な融合タンパク質のアミノ酸配列を、ＧｅｎｅＯｐｔｉｍｉｚｅｒ（登録商標）を用いてコドン最適化した。抗体重鎖のｃＤＮＡおよび抗体軽鎖のｃＤＮＡを合成し、その後に哺乳動物のプロモーターおよびポリアデニル化シグナルの制御下で別個のプラスミド（ｐＥｖｉ３；ｅｖｉｔｒｉａ ＡＧ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）にクローン化した。プラスミドＤＮＡを、大腸菌中で増幅させ、低内毒素プラスミドＤＮＡ調製用の陰イオン交換キットを用いてＤＮＡを精製した。ＤＮＡ濃度を、波長２６０ｎｍの吸収の測定によって決定した。配列の正確さを、Ｓａｎｇｅｒ配列決定（ｃＤＮＡのサイズに応じてプラスミドあたり最大２回の配列決定反応で）で検証した。重鎖および軽鎖のプラスミドＤＮＡを、その後に浮遊培養のためのＣＨＯ Ｋ１細胞（最初にＡＴＣＣから入手し、ｅｖｉｔｒｉａにおいて懸濁培養中の無血清成長に対応させた）に共トランスフェクトした。シードを、ｅｖｉＧｒｏｗ培地（既知組成で動物成分を含まない無血清培地）中で成長させた。細胞を、ｅｖｉＦｅｃｔ（ｅｖｉｔｒｉａ ＡＧ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）でトランスフェクトし、ＣＨＯ細胞をｅｖｉＭａｋｅ２（ｅｖｉｔｒｉａ ＡＧ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）（無血清で動物成分を含まない培地）中で培養した。生存率が７５％に到達した時点（トランスフェクションの８日後）で産生を停止させた。上清を、遠心分離およびその後の濾過（０．２ｕｍのフィルター）によって採取した。抗体を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ（商標）Ｓｕｒｅ（商標）（Ｂｉｏ－Ｒａｄ ＢｉｏＬｏｇｉｃ ＦｕｏＦｌｏｗ ＦＰＬＣ機械装置でのプロテインＡアフィニティクロマトグラフィー、その後のポリッシングおよびリバッファリングステップとしてのゲル濾過）を使用して精製した。いくつかの場合、抗体を、ＳＥＣ精製を用いてさらに精製した。
【0248】
また、本発明の融合タンパク質を、融合タンパク質の鎖をコードするプラスミドＤＮＡでの哺乳動物細胞株（例えば、ＣＨＯ Ｋ１細胞）の安定なトランスフェクション、融合タンパク質を発現する安定にトランスフェクトされた細胞クローンまたは細胞プールの選択、融合タンパク質の産生のためのマスターセルバンクの開発、プロテインＡアフィニティクロマトグラフィーおよび／またはＳＥＣによる融合タンパク質の精製、ならびに当該分野で十分に記載されている方法を使用した製剤化によって産生することができる。
【0249】
実施例２：ＰＤ１ｅｃｄ中に単一のアミノ酸変異を有する抗ＩＬ－２３－ＰＤ１ｅｃｄ構築物は、ＰＤＬ１に対して優れた結合親和性を示す。
図３Ａ～３Ｄに示すように、データは、ＰＤ１ｅｃｄ中に単一のアミノ酸変異を有する抗ＩＬ－２３－ＰＤ１ｅｃｄ構築物が、野生型ＰＤ１と比較して、ＰＤＬ１（図３Ｂ～３Ｃ）およびＰＤＬ２（図３Ｄ～３Ｅ）に対して優れた結合親和性を示すことを実証している。さらに、この単一の変異が、文献で報告されたより広範囲に操作されたＰＤ１バリアントと比較して、本質的に等価な結合特性を保有することが実証された。これは、試験構築物である抗ＩＬ－２３－ＰＤ１ｅｃｄが、たった１つのアミノ酸変異しか必要でなかったので、免疫原性リスクがより低い好ましい結合特性を獲得していることを意味する。（図３Ａ～３Ｄを参照のこと）。
図３Ａ～３Ｄに示すように、データは、ＰＤ１ｅｃｄ中に単一のアミノ酸変異を有する抗ＩＬ－２３－ＰＤ１ｅｃｄ構築物が、野生型ＰＤ１と比較して、ＰＤＬ１（図３Ｂ～３Ｃ）およびＰＤＬ２（図３Ｄ～３Ｅ）に対して優れた結合親和性を示すことを実証している。さらに、この単一の変異が、文献で報告されたより広範囲に操作されたＰＤ１バリアントと比較して、本質的に等価な結合特性を保有することが実証された。これは、試験構築物である抗ＩＬ－２３－ＰＤ１ｅｃｄが、たった１つのアミノ酸変異しか必要でなかったので、免疫原性リスクがより低い好ましい結合特性を獲得していることを意味する。（図３Ａ～３Ｄを参照のこと）。
【0250】
固定濃度の各々の構築物を、プレートにコーティングし（１μｇ／ｍＬ）、その後に種々の濃度のビオチン化ｈｕ－ＰＤＬ１をコーティングした（ストレプトアビジン－ＨＲＰによって検出）。試験構築物（ａ－ＩＬ－２３－ＰＤ１（Ａ１２３Ｉ））の結合ＥＣ５０は５７ｎＭであり、これは４７１ｎＭの野生型ＥＣ５０より優れているが、文献で報告されたより広範囲に変異させたａ－ＩＬ－２３－ＰＤ１（Ｇ－Ｖ２）と本質的に等価である。Ａ１２３Ｉ ＰＤ１ｅｃｄ変異を有する対照構築物（しかし、異なる標的化抗体）は、抗ＩＬ－２３－ＰＤ１（Ａ１２３Ｉ）と同一の結合特性を示し、これにより、Ｆａｂが観察された異なる結合活性（differential binding activity）に寄与しないことが確認される。（図３Ａを参照のこと）
【0251】
種々の濃度の各々の構築物をプレートにコーティングし、その後に固定濃度のビオチン化ｈｕ－ＰＤＬ１（１００ｎｇ／ｍＬ）をコーティングした。ａ－ＩＬ－２３－ＰＤ１（Ａ１２３Ｉ））の結合ＥＣ５０は１μＭであり、これは３．３μＭの野生型ＥＣ５０より優れている。ａ－ＩＬ－２３－ＰＤ１（Ｇ－Ｖ２）は、わずかにより良好である（０．６μＭ）。（図３Ｂを参照のこと）。
【0252】
固定濃度の各々の構築物をプレートにコーティングし（１μｇ／ｍＬ）、その後に種々の濃度のビオチン化ｈｕ－ＰＤＬ２をコーティングした（ストレプトアビジン－ＨＲＰによって検出）。ａ－ＩＬ－２３－ＰＤ１（Ａ１２３Ｉ））の結合ＥＣ５０は５４ｎＭであり、これは１３１ｎＭの野生型ＥＣ５０より優れており；抗ＩＬ－２３－ＰＤ１（Ｇ－Ｖ２）（６２ｎＭ）と本質的に等価である。（図３Ｃを参照のこと）。
【0253】
種々の濃度の各々の構築物をプレートにコーティングし、その後に固定濃度のビオチン化ｈｕ－ＰＤＬ２（５００ｎｇ／ｍＬ）をコーティングした。ａ－ＩＬ－２３－ＰＤ１（Ａ１２３Ｉ））の結合ＥＣ５０は０．７８μＭであり、これは６μＭの野生型ＥＣ５０より優れており；抗ＩＬ－２３－ＰＤ１（Ｇ－Ｖ２）（０．６μＭ）と本質的に等価である。（図３Ｄを参照のこと）。
【0254】
実施例３：ＩＬ－２３ｐ１９抗体は、ＰＤＬ１／ＰＤ１遮断によって誘導される抗腫瘍免疫応答を増強する
図４Ａ～４Ｃに示すように、ＩＬ－２３ｐ１９抗体は、ＰＤＬ１／ＰＤ１遮断によって誘導される抗腫瘍免疫応答を増強する。抗ＰＤＬ１／ＰＤ１治療に対する抵抗がＴＨ１７ｂ細胞によって媒介され得るという仮説、およびかかる抵抗がＰＤ１／ＰＤＬ１およびＩＬ－２３の同時遮断によって抑えられ得るという仮説を評価するために以下の試験を行った。Ｂ１６腫瘍細胞（４×１０ｅ５細胞、ｓｃ）を、Ｃ５７／ＢＬ６マウスに移植した。腫瘍サイズが約５０ｍｍ３に到達した時点で、マウスをランダム化し、抗ＰＤＬ１抗体（５ｍｇ／ｋｇをｉ．ｐで毎週×４）および／または抗ＩＬ－２３ｐ１９ Ａｂ（抗マウスｐ１９ Ａｂ＝Ｇ２３－８）（５ｍｇ／ｋｇをｉ．ｐ．で毎週２回×４）のいずれかで処置した。（図４Ａ～４Ｃを参照のこと）。ａ－ＰＤ－Ｌ１ Ａｂとａ－ＩＬ－２３ｐ１９の組み合わせで処置したマウスは、ａ－ＰＤＬ１のみで処置したマウスと比較して、生存率が優れており、腫瘍が小さかった（ｐ＜０．００５）。（図４Ａ～４Ｂを参照のこと）。
図４Ａ～４Ｃに示すように、ＩＬ－２３ｐ１９抗体は、ＰＤＬ１／ＰＤ１遮断によって誘導される抗腫瘍免疫応答を増強する。抗ＰＤＬ１／ＰＤ１治療に対する抵抗がＴＨ１７ｂ細胞によって媒介され得るという仮説、およびかかる抵抗がＰＤ１／ＰＤＬ１およびＩＬ－２３の同時遮断によって抑えられ得るという仮説を評価するために以下の試験を行った。Ｂ１６腫瘍細胞（４×１０ｅ５細胞、ｓｃ）を、Ｃ５７／ＢＬ６マウスに移植した。腫瘍サイズが約５０ｍｍ３に到達した時点で、マウスをランダム化し、抗ＰＤＬ１抗体（５ｍｇ／ｋｇをｉ．ｐで毎週×４）および／または抗ＩＬ－２３ｐ１９ Ａｂ（抗マウスｐ１９ Ａｂ＝Ｇ２３－８）（５ｍｇ／ｋｇをｉ．ｐ．で毎週２回×４）のいずれかで処置した。（図４Ａ～４Ｃを参照のこと）。ａ－ＰＤ－Ｌ１ Ａｂとａ－ＩＬ－２３ｐ１９の組み合わせで処置したマウスは、ａ－ＰＤＬ１のみで処置したマウスと比較して、生存率が優れており、腫瘍が小さかった（ｐ＜０．００５）。（図４Ａ～４Ｂを参照のこと）。
【0255】
ａ－ＰＤＬ１ Ａｂのみで処置したマウスと比較したａ－ＰＤ－Ｌ１ Ａｂとａ－ＩＬ－２３ｐ１９の組み合わせで処置したマウスにおける生存率の改善は、肺腫瘍転移の有意な阻害を反映していた。（図４Ｃを参照のこと）。
【0256】
実施例４：抗ＩＬ－２３－ＰＤ１ポリペプチドは、ヒト化マウスモデルにおいて腫瘍成長を低下させ、かつ毒性を制限する
ヒト腫瘍異種移植片を、ＮＳＧマウス（ヒトＰＢＭＣでヒト化）において樹立した。腫瘍担持マウスをランダム化し、以下の単一の薬剤または組み合わせで処置した：（ｉ）ビヒクルのみ（対照）、（ｉｉ）抗ＩＬ－２３抗体、（ｉｉｉ）抗ＰＤＬ１抗体、（ｉｖ）抗ＩＬ－２３－ＰＤ１ｅｃｄ。（図５を参照のこと）
ヒト腫瘍異種移植片を、ＮＳＧマウス（ヒトＰＢＭＣでヒト化）において樹立した。腫瘍担持マウスをランダム化し、以下の単一の薬剤または組み合わせで処置した：（ｉ）ビヒクルのみ（対照）、（ｉｉ）抗ＩＬ－２３抗体、（ｉｉｉ）抗ＰＤＬ１抗体、（ｉｖ）抗ＩＬ－２３－ＰＤ１ｅｃｄ。（図５を参照のこと）
【0257】
ａ－ＰＤＬ１を投与した処置群では、４／５のマウスが処置中に有意なＧＶＨＤを経験した。他の処置群のマウスでは認められなかった。抗ＩＬ－２３－ＰＤ１は、抗ＩＬ－２３のみと比較して腫瘍成長を有意に低下させた。これは、抗ＩＬ－２３－ＰＤ１が抗ＰＤＬ１処置に関連する望ましくない免疫関連毒性を緩和したその一方で、同時に腫瘍成長を制限したことを意味する。
【0258】
実施例５：抗ＩＬ－２３－ＰＤ１ポリペプチドは、免疫チェックポイント阻害剤での処置と比較して、腫瘍成長の阻害に有効である
ヒト腫瘍異種移植片を、ＮＳＧマウス（ヒトＰＢＭＣでヒト化）において樹立した。腫瘍担持マウスをランダム化し、以下の単一の薬剤または組み合わせで処置した：（ｉ）ビヒクルのみ（対照）；（ｉｉ）抗ＰＤ１抗体（ペムブロリズマブ）；（ｉｉｉ）抗ＰＤ１抗体（ペムブロリズマブ）＋抗ＣＴＬＡ４抗体（イピリムマブ）；（ｉｖ）抗ＩＬ－２３－ＰＤ１；（ｖ）抗ＣＴＬＡ４－ＴＧＦｂＲＩＩ；（ｖｉ）抗ＩＬ－２３－ＰＤ１＋ＣＴＬＡ４－ＴＧＦｂＲＩＩ（図６を参照のこと）。米国特許第８，９９３，５２４号；Ｒａｖｉ ｅｔ ａｌ．，‘‘Ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｍｍｕｎｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｌｉｇａｎｄ ｔｒａｐｓ ｔｈａｔ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｄｉｓａｂｌｅ ＴＧＦｂ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．’’Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１８；９：７４１（これらの各々の全体が本明細書中で援用される）に記載のように、抗ＣＴＬＡ４－ＴＧＦｂＲＩＩは、ＣＴＬＡ－４抗体（イピリムマブ）のみと比較して腫瘍浸潤Ｔｒｅｇの減少および腫瘍進行の阻害により有効であることが報告されている。
ヒト腫瘍異種移植片を、ＮＳＧマウス（ヒトＰＢＭＣでヒト化）において樹立した。腫瘍担持マウスをランダム化し、以下の単一の薬剤または組み合わせで処置した：（ｉ）ビヒクルのみ（対照）；（ｉｉ）抗ＰＤ１抗体（ペムブロリズマブ）；（ｉｉｉ）抗ＰＤ１抗体（ペムブロリズマブ）＋抗ＣＴＬＡ４抗体（イピリムマブ）；（ｉｖ）抗ＩＬ－２３－ＰＤ１；（ｖ）抗ＣＴＬＡ４－ＴＧＦｂＲＩＩ；（ｖｉ）抗ＩＬ－２３－ＰＤ１＋ＣＴＬＡ４－ＴＧＦｂＲＩＩ（図６を参照のこと）。米国特許第８，９９３，５２４号；Ｒａｖｉ ｅｔ ａｌ．，‘‘Ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｍｍｕｎｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｌｉｇａｎｄ ｔｒａｐｓ ｔｈａｔ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｄｉｓａｂｌｅ ＴＧＦｂ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．’’Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１８；９：７４１（これらの各々の全体が本明細書中で援用される）に記載のように、抗ＣＴＬＡ４－ＴＧＦｂＲＩＩは、ＣＴＬＡ－４抗体（イピリムマブ）のみと比較して腫瘍浸潤Ｔｒｅｇの減少および腫瘍進行の阻害により有効であることが報告されている。
【0259】
腫瘍担持マウスは、抗ＰＤ１（ペムブロリズマブ）のみまたはさらには抗ＰＤ１と抗ＣＴＬＡ４の組み合わせ（ペムブロリズマブ＋イピリムマブ）での処置のいずれに対しても応答できなかった。対照的に、ａ－ＩＬ－２３－ＰＤ１ｅｃｄのみでの処置は、抗ＰＤ１抗体と比較して、腫瘍成長の阻害で有意により有効であった（ｐ＜０．０３）。さらに、抗ＩＬ－２３－ＰＤ１とＣＴＬＡ４－ＴＧＦｂＲＩＩの組み合わせでの処置は、腫瘍成長を完全に停止させることができ、この組み合わせの相乗的な抗腫瘍効率は、現在のＩＣＩでの併用処置（抗ＰＤ１＋抗ＣＴＬＡ４）より際立って優れていた（ｐ＜０．００１）。データは、大多数のがんが免疫チェックポイント（細胞傷害性Ｔ－リンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ－４）またはプログラム死－１（ＰＤ－１）／ＰＤ－１リガンド（ＰＤ－Ｌ１）など）を標的にする抗体での免疫療法に応答できないことを示す文献の報告と一致する。Ｒａｖｉ ｅｔ ａｌ．，‘‘Ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｍｍｕｎｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ－ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｌｉｇａｎｄ ｔｒａｐｓ ｔｈａｔ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｄｉｓａｂｌｅ ＴＧＦｂ ｅｎｈｎｃｅ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．’’Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１８；９：７４１；米国特許第８，９９３，５２４号（これらの各々の全体が本明細書中で援用される）。ＩＬ－２３遮断のＴＧＦｂ遮断との相乗作用は、ＩＬ－２３遮断の免疫阻害性サイトカイン遮断との組み合わせの有効性を実証している。
【0260】
これらの結果は、現在のＩＣＩ（抗ＰＤ１のみまたは抗ＰＤ１と抗ＣＴＬＡ４の組み合わせのいずれか）に対する腫瘍の抵抗を、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）におけるＩＬ－２３／ＴＧＦｂシグナル伝達を同時に無能にする二機能性融合タンパク質（抗ＩＬ－２３－ＰＤ１およびＣＴＬＡ４－ＴＧＦｂＲＩＩ）での処置によって有効に抑えることができることを実証している。
【0261】
実施例６：抗ＩＬ－２３－ＰＤ１の作用機序
いかなる理論にも拘束されないが、抗ＩＬ－２３－ＰＤ１についての可能性のある作用機序を、図７Ａ～７Ｂに示す。最初に、無処置の腫瘍微小環境（ＴＭＥ）を図７Ａに示す。この状況では、腫瘍細胞および骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）上に発現されるＰＤＬ１およびＰＤＬ２は、Ｔ細胞上のＰＤ１への結合によってＴ細胞活性化を阻害する。（腫瘍細胞およびＭＤＳＣによって発現される）ＩＬ－２３の状況では、このＴＭＥにおけるＣＤ４Ｔ細胞は、Ｔｈ１７表現型に偏っている。ＰＤ１またはＰＤＬ１／ＰＤＬ２の遮断により、Ｔｈ１７細胞の活性化および増殖がもたらされる。Ｔｈ１７細胞由来の因子（例えば、ＩＬ－８、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－１７）は、ＭＤＳＣ上にフィードバックし、その表現型を維持する。したがって、この状況では、ＰＤ１シグナル伝達のみの遮断は、ＩＬ－２３の存在下では逆の結果を生む可能性がある。図７Ｂは、抗ＩＬ－２３－ＰＤ１での処置の結果を示す：ＰＤ１ ＥＣＤは、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２に結合して、ＰＤ１シグナル伝達を中和する。同時に、ＰＤＬ１＋および／またはＰＤＬ２＋細胞は、抗ＩＬ－２３抗体で飾られており、それにより、ＩＬ－２３を隔離し、Ｔｈ１７表現型を抑える。これにより、抗腫瘍Ｔｈ１表現型をＩＬ－１２媒介性に誘導すると同時に、これらのＴｈ１細胞を活性化することが可能である。
いかなる理論にも拘束されないが、抗ＩＬ－２３－ＰＤ１についての可能性のある作用機序を、図７Ａ～７Ｂに示す。最初に、無処置の腫瘍微小環境（ＴＭＥ）を図７Ａに示す。この状況では、腫瘍細胞および骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）上に発現されるＰＤＬ１およびＰＤＬ２は、Ｔ細胞上のＰＤ１への結合によってＴ細胞活性化を阻害する。（腫瘍細胞およびＭＤＳＣによって発現される）ＩＬ－２３の状況では、このＴＭＥにおけるＣＤ４Ｔ細胞は、Ｔｈ１７表現型に偏っている。ＰＤ１またはＰＤＬ１／ＰＤＬ２の遮断により、Ｔｈ１７細胞の活性化および増殖がもたらされる。Ｔｈ１７細胞由来の因子（例えば、ＩＬ－８、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－１７）は、ＭＤＳＣ上にフィードバックし、その表現型を維持する。したがって、この状況では、ＰＤ１シグナル伝達のみの遮断は、ＩＬ－２３の存在下では逆の結果を生む可能性がある。図７Ｂは、抗ＩＬ－２３－ＰＤ１での処置の結果を示す：ＰＤ１ ＥＣＤは、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２に結合して、ＰＤ１シグナル伝達を中和する。同時に、ＰＤＬ１＋および／またはＰＤＬ２＋細胞は、抗ＩＬ－２３抗体で飾られており、それにより、ＩＬ－２３を隔離し、Ｔｈ１７表現型を抑える。これにより、抗腫瘍Ｔｈ１表現型をＩＬ－１２媒介性に誘導すると同時に、これらのＴｈ１細胞を活性化することが可能である。
【表2-1】
【表2-2】
【表2-3】
【表2-4】
【表2-5】
【表2-6】
【表2-7】
【表2-8】
【表2-9】
【0262】
均等物および参照による援用
本明細書中の全ての参考文献は、各々の個別の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願、または特許が、全ての目的のためにその全体が参考として援用されると具体的かつ個別に示されるのと同じ程度まで、参考として援用される。出願人の、この参照による援用の陳述は、米国特許法施行規則§１．５７（ｂ）（１）に準拠し、ありとあらゆる個々の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願、または特許に関連し、たとえ、そのような引用が、参照による援用という専用の陳述にすぐ隣接していない場合であっても、その各々は米国特許法施行規則§１．５７（ｂ）（２）に準拠し、明らかに同一であることを意図している。参照による援用の陳述が明細書中に特別に含まれている場合であっても、この一般的な参照による援用の陳述を何ら弱めるものではない。本明細書中の参考文献の引用は、参照が関連する先行技術であることを承認するものとして意図せず、また、これらの刊行物または文書の内容または日付に関していかなる承認を構成するものでもない。
本明細書中の全ての参考文献は、各々の個別の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願、または特許が、全ての目的のためにその全体が参考として援用されると具体的かつ個別に示されるのと同じ程度まで、参考として援用される。出願人の、この参照による援用の陳述は、米国特許法施行規則§１．５７（ｂ）（１）に準拠し、ありとあらゆる個々の刊行物、データベースエントリー（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願、または特許に関連し、たとえ、そのような引用が、参照による援用という専用の陳述にすぐ隣接していない場合であっても、その各々は米国特許法施行規則§１．５７（ｂ）（２）に準拠し、明らかに同一であることを意図している。参照による援用の陳述が明細書中に特別に含まれている場合であっても、この一般的な参照による援用の陳述を何ら弱めるものではない。本明細書中の参考文献の引用は、参照が関連する先行技術であることを承認するものとして意図せず、また、これらの刊行物または文書の内容または日付に関していかなる承認を構成するものでもない。
【0263】
好ましい実施形態および種々の代替の実施形態を参照して本発明を詳細に示し、説明してきたが、関連分野の当業者は、本発明の意図および範囲を逸脱することなく形態および詳細を様々に変更することができることを理解している。
【図1A-D】
【図2A-C】
【図2D-G】
【図3A】
【図3B-C】
【図3D-E】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図5】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【国際調査報告】