特表 2024-537091 少なくともＥＧＦＲに結合する抗体を使用した、免疫チェックポイント阻害剤で治療された高いＥＧＦＲ発現を有するがんの治療

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-10

(54)【発明の名称】少なくともＥＧＦＲに結合する抗体を使用した、免疫チェックポイント阻害剤で治療された高いＥＧＦＲ発現を有するがんの治療

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20241003BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20241003BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20241003BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241003BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20241003BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 T

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

A61P35/00

A61K39/395 E

A61P1/00

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024519902

(86)(22)【出願日】2022-10-06

(85)【翻訳文提出日】2024-04-01

(86)【国際出願番号】 NL2022050563

(87)【国際公開番号】W WO2023059191

(87)【国際公開日】2023-04-13

(31)【優先権主張番号】2029327

(32)【優先日】2021-10-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】NL

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】510340757

【氏名又は名称】メルス ナムローゼ フェンノートシャップ

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山 靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100133400

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 達彦

(72)【発明者】

【氏名】アーネスト・アイザック・ワッサーマン

(72)【発明者】

【氏名】イェルン・イレス・ラマーツ・ファン・ブエレン

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB36

4C085CC22

4C085DD61

4C085EE01

4C085GG02

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、がんの治療における手段及び方法に関する。本開示は、特に、少なくともＥＧＦＲに結合する抗体で個体におけるがんを治療する方法に関する。本発明は、かかる方法における使用、及び特定のＥＧＦＲレベルを有するがんの治療のための薬剤の製造における使用に更に関する。かかる抗体は、胃がん、食道がん、胃食道接合部がん、又は頭頸部がんなどのがんの治療において特に有用である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象におけるがんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、前記対象におけるがんが、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行し、がんが、ＥＧＦＲを発現する、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。

【請求項2】

対象におけるがんを治療するための薬剤の製造における、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体の使用であって、前記対象におけるがんが、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行し、がんが、ＥＧＦＲを発現する、使用。

【請求項3】

ＥＧＦＲを発現するがんを有する対象を治療する方法であって、前記対象が、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行しており、前記方法が、前記対象に、有効量の、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む、方法。

【請求項4】

前記がんが、頭頸部がん、好ましくは、前記頭頸部の扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）であり、前記がんが、好ましくは、２＋又は３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項5】

前記がんが、３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲ発現を有する胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんである、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項6】

前記がんが、２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲ発現を有する胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんである、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項7】

対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、前記がんが、３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。

【請求項8】

対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、前記がんが、２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。

【請求項9】

対象におけるがんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、前記第１の可変ドメインが、
－少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ３配列、又は図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ３配列と多くとも３つ、好ましくは多くとも２つ、好ましくは１つ以下のアミノ酸が異なるＣＤＲ３配列、
－少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、又は多くとも３つ、好ましくは多くとも２つ、好ましくは多くとも１つのアミノ酸置換を有する図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、あるいは
図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨ鎖の配列、又は
ＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨ鎖に関して、多くとも１５個、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、好ましくは１、２、３、４、若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨ鎖のアミノ酸配列、を含む重鎖可変領域であり、前記がんが、頭頸部がん、好ましくは、前記頭頸部の扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）であり、がんが、好ましくは、２＋若しくは３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現するか、又は前記がんが、３＋のＩＨＣスコア、若しくは好ましくは２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲ発現を有する胃がん、食道がん、若しくは胃食道接合部がんである、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。

【請求項10】

前記対象が、抗ＥＧＦＲ剤で事前の治療を受けていない、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項11】

前記対象が、ＥＧＦＲを標的とする抗体での事前の治療を受けていない、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項12】

前記対象が、セツキシマブでの事前の治療を受けていない、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項13】

前記がんが、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行した、請求項７～１２のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。

【請求項14】

前記がんが、２００超～３００以下のＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項15】

前記ＥＧＦＲについてのＨスコアが、ＩＨＣを使用して決定される、請求項１４に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。

【請求項16】

前記対象が、哺乳動物、好ましくはヒトである、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項17】

前記治療が、前記対象に、有効量の前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項18】

前記治療が、前記対象に、１５００ｍｇの均一用量の前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項19】

前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が、前記対象に、静脈内に提供される、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項20】

前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が、毎週、隔週、又は毎月、好ましくは隔週で提供され、より好ましくは、前記対象に、少なくとも３回以上の隔週投薬量の前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が提供される、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項21】

前記抗体が、ＡＤＣＣ増強型である、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項22】

前記抗体が、アフコシル化されている、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項23】

前記がんが、腺がん又は扁平上皮がん、特に、胃腺がん、食道腺がん、又は胃食道接合部腺がん、特に、頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）である、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項24】

前記がん及び／又は前記対象が、ＳＭＡＤ４の野生型である、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項25】

前記がん又は対象が、ＴＰ５３における変異、好ましくは、活性化ＴＰ５３変異を有する、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項26】

前記がん又は対象が、Ｈｅｒ２陰性である、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項27】

前記抗体が、多重特異性抗体、好ましくは二重特異性抗体である、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項28】

前記抗体が、ＥＧＦＲに結合しない第２の可変ドメインを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項29】

前記抗体が、ＬＧＲ５に結合する第２の可変ドメインを含む、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項30】

前記抗体が、第２の可変ドメインを含まない一価抗体であるか、又は前記抗体が、前記第１のＥＧＦＲ結合可変ドメインを唯一の可変ドメインとして含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項31】

前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－１阻害剤を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項32】

前記治療が、ＥＧＦＲ状態、ＳＭＡＤ４状態、及び／又はＨｅｒ２状態について前記対象を診断するステップを含むか、又はそれの後であり、Ｈｅｒ２状態についての診断が、好ましくはＩＳＨ又はＩＨＣによるものである、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項33】

ＥＧＦＲに結合する前記第１の可変ドメインが、図２に示されるヒトＥＧＦＲ配列のアミノ酸残基４２０～４８０内に位置するエピトープに結合する、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項34】

前記第１の可変ドメインのＥＧＦＲへの結合が、ＥＧＦＲにおける以下のアミノ酸残基置換Ｉ４６２Ａ、Ｇ４６５Ａ、Ｋ４８９Ａ、Ｉ４９１Ａ、Ｎ４９３Ａ、及びＣ４９９Ａのうちの１つ以上によって、前記置換を含まないＥＧＦＲタンパク質と比較して低減される、先行請求項のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項35】

ＬＧＲ５に結合する前記可変ドメインが、図１に示されるヒトＬＧＲ５配列のアミノ酸残基２１～１１８内に位置するエピトープに結合する、請求項２９～３４のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【請求項36】

前記第１の可変ドメインが、
－少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ３配列、又は図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ３配列と多くとも３つ、好ましくは多くとも２つ、好ましくは１つ以下のアミノ酸が異なるＣＤＲ３配列、
－少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、又は多くとも３つ、好ましくは多くとも２つ、好ましくは多くとも１つのアミノ酸置換を有する図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、あるいは
図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨ鎖の配列、又は
ＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨ鎖に関して、多くとも１５個、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、好ましくは１、２、３、４、若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨ鎖のアミノ酸配列、を含む重鎖可変領域である、請求項１～８又は１０～３５のいずれか一項に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、がんの治療における手段及び方法に関する。本開示は、特に、少なくともＥＧＦＲに結合する抗体で個体におけるがんを治療する方法に関する。本発明は、かかる方法における使用、及び特定のＥＧＦＲレベルを有するがんの治療のための薬剤の製造における使用に更に関する。かかる抗体は、胃がん、食道がん、胃食道接合部がん、又は頭頸部がんなどのがんの治療において特に有用である。

【背景技術】

【0002】

従来、ほとんどのがん薬の発見は、必須細胞機能を遮断し、化学療法を介して分裂細胞を死滅させる薬剤に焦点を当ててきた。しかしながら、化学療法が完全な治癒をもたらすことは稀である。ほとんどの場合、患者における腫瘍は、増殖を停止させるか、又は一時的に縮小させるのみであり、再び、場合によっては、より迅速に増殖を開始し、治療するのがますます困難になる。

【0003】

がんは、疾病の治療において遂げられた多くの進歩、及びがんにつながる分子的事象に関する知識の増加にもかかわらず、世界での依然として主要な死因である。

【0004】

米国では、特に口腔及び咽頭における頭頸部がんが、既に悪性腫瘍の３％を占めており、毎年約５３，０００人の米国人がかかるがんを発症し、かかる状況から１０，８００人が死亡していることが報告されている（Ｓｉｅｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ．２０２０；７０（１）：７．Ｅｐｕｂ ２０２０ Ｊａｎ ８．）。更に、頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）は、世界で６番目に発生率の高いがんであり、ＨＮＳＣＣを有する患者の５年全生存率は約４０～５０％であると報告されている（Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｃａｎｃｅｒ，Ｕｎｉｏｎ ｆｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｏｎｔｒｏｌ，２０１４ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ＷＨＯ Ｌｉｓｔ ｏｆ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓにおいて）。

【0005】

局所進行性頭頸部扁平上皮がん（ＬＡ－ＨＮＳＣＣ）に対するメタ分析では、放射線療法又は化学放射線療法への抗ＥＧＦＲ剤な添加がＬＡ－ＨＮＳＣＣを有する患者における臨床転帰を改善しなかったことが報告された（Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１７；８（６０）：１０２３７１－１０２３８０）。また、抗ＥＧＦＲ剤の添加は、皮膚毒性及び粘膜炎のリスクを増加させることが報告された。

【0006】

更に、胃がんは、世界中で５番目に多く診断されるがんであり、３番目に致命的である。２０１８年には、胃がんによる死者は推定で７８３，０００人にのぼった。食道がんは、９番目に多い一般的ながんであり、６番目に多い一般的ながん死因である。上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）は、胃腺がん（ＧＡＣ）及び食道腺がん（ＥＡＣ）症例の３０％以上で過剰発現することが報告されている。しかしながら、６つの異なる研究の分析レビューでは、化学療法に抗ＥＧＦＲ剤を追加しても、進行性／転移性ＥＡＣ、ＧＡＣ、又は胃食道接合部腺がん（ＧＥＪＡＣ）を有する患者の全生存又は無増悪生存は有意に改善しなかったと結論づけた（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．２０１７ Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１７ Ｎｏｖ １７；８（５８）：９９０３３－９９０４０）。

【0007】

したがって、特に、胃がん、食道がん、及び頭頸部がんに対するがん治療の改善の必要性が存在する。

【発明の概要】

【0008】

本開示は、以下の好ましい態様を提供する。しかしながら、本発明は、それらに限定されない。

【0009】

本開示は、対象におけるがんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、がんが、ＥＧＦＲ、又はＥＧＦＲ及びＬＧＲ５を発現する、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供する。

【0010】

本開示は、対象におけるがんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、当該対象におけるがんが、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行し、がんが、ＥＧＦＲ、又はＥＧＦＲ及びＬＧＲ５を発現する、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供する。

【0011】

本開示はまた、対象におけるがんを治療するための薬剤の製造における、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体の使用であって、当該対象におけるがんが、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行し、がんが、ＥＧＦＲ、又はＥＧＦＲ及びＬＧＲ５を発現する、使用を提供する。

【0012】

本開示はまた、ＥＧＦＲを発現するがんを有する対象を治療する方法であって、当該対象が、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行しており、方法が、対象に、有効量の、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む、方法を提供する。

【0013】

ある特定の態様では、本開示のがんは、特に、胃がん、食道がん、胃食道接合部がん、又は頭頸部がんである。頭頸部がんは、特に、頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）である。胃がん、食道がん、胃食道接合部がんは、特に、腺がんである。当該食道がんはまた、扁平上皮がんであり得る。

【0014】

ある特定の態様では、本開示のがんは、特に、３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲ発現を有する胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんである。ある特定の態様では、本開示のがんは、２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲ発現を有する胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんである。

【0015】

本開示はまた、対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、当該がんが、３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供する。本開示はまた、対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、当該がんが、２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供する。

【0016】

本開示はまた、対象における頭頸部がん、胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、当該がんが、ＥＧＦＲ遺伝子増幅を含むことによって特徴付けられる、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供する。かかるＥＧＦＲの遺伝子増幅は、ある特定の態様では、８以上のＥＧＦＲコピー数、又は少なくとも２．１４若しくは少なくとも２．５の循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）のレベルによって特徴付けられる。

【0017】

ある特定の態様では、ＥＧＦＲ ｍＲＮＡの増幅は、８以上のＥＧＦＲコピー数（次世代配列決定によって定義されるなど）、又は少なくとも２．１４若しくは少なくとも２．５のｃｔＤＮＡによって適格と定義される。

【0018】

いくつかの態様では、対象は、免疫チェックポイント阻害剤による事前の治療を受けた後に進行している。ある特定の態様では、当該免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－１、又はＢ７－２阻害剤を含む。ある特定の態様では、かかる阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－１又はＢ７－２阻害剤を標的とする抗体を含む。ある特定の態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、デュルバルマブ、レチファンリマブ、セミプリマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、又はアテゾリズマブを含む。

【0019】

ある特定の態様では、本開示の対象は、抗ＥＧＦＲ剤での事前の治療を受けていない。ある特定の態様では、対象は、ＥＧＦＲを標的とする抗体での事前の治療を受けていないか、又は対象は、セツキシマブでの事前の治療を受けていない。

【0020】

ある特定の態様では、本開示の胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんは、２００超～３００以下のＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する。ある特定の態様では、当該ＥＧＦＲについてのＨスコアは、免疫組織化学（ＩＨＣ）を使用して決定される。

【0021】

ある特定の態様では、本開示の対象は、ヒト対象などの哺乳動物対象である。

【0022】

ある特定の態様では、本開示の治療は、対象に、有効量の当該抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む。ある特定の態様では、当該治療は、５００ｍｇ～２０００ｍｇの均一用量を提供することを含む。ある特定の態様では、当該用量は、１１００ｍｇ～１８００ｍｇである。ある特定の態様では、当該用量は、１１００ｍｇ～１５００ｍｇである。ある特定の態様では、当該治療は、対象に対する１５００ｍｇの均一用量の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を含む。ある特定の態様では、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、対象に、静脈内に提供される。ある特定の態様では、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、毎週、隔週、又は毎月提供される。ある特定の態様では、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、隔週提供される。

【0023】

ある特定の態様では、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、ＡＤＣＣ増強型である。また、ある特定の態様では、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、アフコシル化されている。

【0024】

ある特定の態様では、本開示の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、多重特異性抗体である。ある特定の態様では、本開示の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、少なくともＥＧＦＲに結合する二重特異性抗体である。ある特定の態様では、抗体は、ＥＧＦＲに結合しない第２の可変ドメインを含む。ある特定の態様では、抗体は、ＬＧＲ５に結合する第２の可変ドメインを含む。

【0025】

本開示のＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体はまた、本明細書で治療剤とも称される。

【図面の簡単な説明】

【0026】

【図1】ヒトＬＧＲ５配列、配列番号１である。

【図2】ヒトＥＧＦＲ配列、配列番号２である。

【図3a)-1】（ａ）ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１ ３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１の可変領域などの共通の軽鎖可変領域とともに、ＬＧＲ５及びＥＧＦＲに結合する可変ドメインを形成する、重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号３～１５）である。ＣＤＲ及びフレームワーク領域を、図３ｂに示す。それぞれのＤＮＡ配列を、図３ｃに示す。

【図3a)-2】（ａ）ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１ ３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１の可変領域などの共通の軽鎖可変領域とともに、ＬＧＲ５及びＥＧＦＲに結合する可変ドメインを形成する、重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号３～１５）である。ＣＤＲ及びフレームワーク領域を、図３ｂに示す。それぞれのＤＮＡ配列を、図３ｃに示す。

【図3b)-1】（ａ）ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１ ３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１の可変領域などの共通の軽鎖可変領域とともに、ＬＧＲ５及びＥＧＦＲに結合する可変ドメインを形成する、重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号３～１５）である。ＣＤＲ及びフレームワーク領域を、図３ｂに示す。それぞれのＤＮＡ配列を、図３ｃに示す。

【図3b)-2】（ａ）ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１ ３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１の可変領域などの共通の軽鎖可変領域とともに、ＬＧＲ５及びＥＧＦＲに結合する可変ドメインを形成する、重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号３～１５）である。ＣＤＲ及びフレームワーク領域を、図３ｂに示す。それぞれのＤＮＡ配列を、図３ｃに示す。

【図3c)-1】（ａ）ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１ ３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１の可変領域などの共通の軽鎖可変領域とともに、ＬＧＲ５及びＥＧＦＲに結合する可変ドメインを形成する、重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号３～１５）である。ＣＤＲ及びフレームワーク領域を、図３ｂに示す。それぞれのＤＮＡ配列を、図３ｃに示す。

【図3c)-2】（ａ）ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１ ３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１の可変領域などの共通の軽鎖可変領域とともに、ＬＧＲ５及びＥＧＦＲに結合する可変ドメインを形成する、重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号３～１５）である。ＣＤＲ及びフレームワーク領域を、図３ｂに示す。それぞれのＤＮＡ配列を、図３ｃに示す。

【図3c)-3】（ａ）ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１ ３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１の可変領域などの共通の軽鎖可変領域とともに、ＬＧＲ５及びＥＧＦＲに結合する可変ドメインを形成する、重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号３～１５）である。ＣＤＲ及びフレームワーク領域を、図３ｂに示す。それぞれのＤＮＡ配列を、図３ｃに示す。

【図3c)-4】（ａ）ヒトカッパ軽鎖ＩｇＶκ１ ３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１の可変領域などの共通の軽鎖可変領域とともに、ＬＧＲ５及びＥＧＦＲに結合する可変ドメインを形成する、重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号３～１５）である。ＣＤＲ及びフレームワーク領域を、図３ｂに示す。それぞれのＤＮＡ配列を、図３ｃに示す。

【図4-1】ａ）共通の軽鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列である。ｂ）共通の軽鎖可変領域ＤＮＡ配列及び翻訳（ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１）である。ｃ）軽鎖定常領域ＤＮＡ配列及び翻訳である。ｄ）Ｖ領域ＩＧＫＶ１－３９Ａの、ｅ）ＩＭＧＴ番号付けによる共通の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３である。

【図4-2】ａ）共通の軽鎖アミノ酸配列のアミノ酸配列である。ｂ）共通の軽鎖可変領域ＤＮＡ配列及び翻訳（ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１）である。ｃ）軽鎖定常領域ＤＮＡ配列及び翻訳である。ｄ）Ｖ領域ＩＧＫＶ１－３９Ａの、ｅ）ＩＭＧＴ番号付けによる共通の軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３である。

【図5-1】二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖である。ａ）ＣＨ１領域ＤＮＡ配列及び翻訳である。ｂ）ヒンジ領域ＤＮＡ配列及び翻訳である。ｃ）ＣＨ２領域ＤＮＡ配列及び翻訳である。ｄ）変異Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＫＫ）ＤＮＡ配列及び翻訳を含有するＣＨ３ドメインである。ｅ）変異Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ（ＤＥ）ＤＮＡ配列及び翻訳を含有するＣＨ３ドメインである。残基位置は、ＥＵ番号付けによる。

【図5-2】二重特異性分子の生成のためのＩｇＧ重鎖である。ａ）ＣＨ１領域ＤＮＡ配列及び翻訳である。ｂ）ヒンジ領域ＤＮＡ配列及び翻訳である。ｃ）ＣＨ２領域ＤＮＡ配列及び翻訳である。ｄ）変異Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＫＫ）ＤＮＡ配列及び翻訳を含有するＣＨ３ドメインである。ｅ）変異Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ（ＤＥ）ＤＮＡ配列及び翻訳を含有するＣＨ３ドメインである。残基位置は、ＥＵ番号付けによる。

【発明を実施するための形態】

【0027】

本説明をより容易に理解することができるように、ある特定の用語が最初に定義される。追加の定義は、必要とみなされる場合、詳細な説明全体にわたって記載され得る。本明細書で個別に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有し、免疫学、タンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術、及び薬理学の従来の方法が用いられる。

【0028】

本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、複数の指示物を含む。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含んだ（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、「有した（ｈａｄ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、及び「含んだ（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の語形の使用は、限定されない。

【0029】

本明細書で使用される「抗体」という用語は、抗原上のエピトープに結合する１つ以上のドメインを含有する、タンパク質の免疫グロブリンクラスに属するタンパク質分子を意味し、かかるドメインは、抗体の可変領域を有する配列相同性に由来するか、又はその配列相同性を共有する。抗体は、典型的には、各々２つの重鎖及び２つの軽鎖である基本的な構造単位から構成される。本発明による抗体は、任意の特定の形式又はその産生方法に限定されない。

【0030】

「二重特異性抗体」は、抗体の１つのドメインが第１の抗原に結合する一方で、抗体の第２のドメインが第２の抗原に結合し、該第１及び第２の抗原が同一ではないか、又は１つのドメインが抗原上の第１のエピトープに結合する一方で、第２のドメインが抗原上の第２のエピトープに結合する、本明細書に記載される抗体である。「二重特異性抗体」という用語はまた、１つの重鎖可変領域／軽鎖可変領域（ＶＨ／ＶＬ）の組み合わせが、抗原上の第１の抗原又がエピトープと、抗原上の第２の抗原又はエピトープに結合する第２のＶＨ／ＶＬの組み合わせとに結合する抗体を包含する。この用語は、ＶＨが第１の抗原を特異的に認識することができ、免疫グロブリン可変領域においてＶＨと対合したＶＬが、第２の抗原を特異的に認識することができる、抗体を更に含む。得られたＶＨ／ＶＬ対は、抗原１又は抗原２のいずれかに結合する。かかるいわゆる「ツーインワン抗体」は、例えば、ＷＯ２００８／０２７２３６、ＷＯ２０１０／１０８１２７、及びＳｃｈａｅｆｅｒ ｅｔ ａｌ（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２０，４７２－４８６，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１１）に記載されている。本発明による二重特異性抗体は、任意の特定の二重特異性形式又はその産生の方法に限定されない。

【0031】

本明細書で使用される「共通軽鎖」という用語は、二重特異性抗体における２つの軽鎖（又はそのＶＬ部分）を指す。２つの軽鎖（又はそのＶＬ部分）は、同一であり得るか、又はいくつかのアミノ酸配列差異を有し得るが、全長抗体の結合特異性は影響を受けない。「再配列された」という用語の付加を伴うか否かにかかわらず、「共通軽鎖」、「共通ＶＬ」、「単一軽鎖」、「単一ＶＬ」という用語は全て、本明細書で互換的に使用される。「共通」はまた、アミノ酸配列が同一ではない軽鎖の機能的等価物を指す。機能的結合領域の形成に実質的に影響を及ぼさない変異（欠失、置換、挿入及び／又は付加）が存在する当該軽鎖の多くのバリアントが存在する。ある特定の態様では、本発明の軽鎖はまた、０～１０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はそれらの組み合わせを有する、本明細書で既定される軽鎖であり得る。ある特定の態様では、本発明の軽鎖はまた、０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はそれらの組み合わせを有する、本明細書で既定される軽鎖であり得る。例えば、保存的アミノ酸変化、重鎖と対になったときに結合特異性に寄与しないか、又は部分的にしか寄与しない領域におけるアミノ酸の変化などを導入することにより試験することにより、同一ではないが依然として機能的に等価である可変の軽鎖を調製するか、又は見つけることは、例えば、本明細書で使用される共通軽鎖の定義の範囲内である。

【0032】

本明細書で使用される場合、「含む」及びその活用は、その単語に続く項目が含まれるが、具体的に言及されていない項目は除外されないことを意味する、その非限定的な意味で使用される。加えて、「からなる」という動詞は、本明細書で定義される化合物又は補助化合物が、具体的に特定された構成要素以外の追加の構成要素を含んでもよく、当該追加の構成要素は、本発明の固有の特徴を変化させないことを意味する、「から本質的になる」に置き換えられてもよい。

【0033】

本発明による「全長ＩｇＧ」又は「全長抗体」という用語は、本質的に完全なＩｇＧを含むと定義されるが、必ずしも無傷なＩｇＧの全ての機能を有するわけではない。誤解を避けるために、全長ＩｇＧは、２つの重鎖及び２つの軽鎖を含有する。各鎖は、定常（Ｃ）領域及び可変（Ｖ）領域を含有し、これらは、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＶＨ、及びＣＬ、ＶＬと指定されたドメインに分類され得る。ＩｇＧ抗体は、Ｆａｂ部分に含有される可変領域ドメインを介して抗原に結合し、結合後、定常ドメインを介して、主にＦｃ部分を介して免疫系の分子及び細胞と相互作用することができる。本発明による全長抗体は、所望の特徴を提供する変異が存在し得るＩｇＧ分子を包含する。全長ＩｇＧは、いずれの領域の実質的な部分の欠失を有してはならない。しかしながら、結果として得られたＩｇＧ分子の結合特性を本質的に変化させることなく、１つ又はいくつかのアミノ酸残基が欠失したＩｇＧ分子は、「全長ＩｇＧ」という用語に包含される。例えば、かかるＩｇＧ分子は、好ましくは非ＣＤＲ領域内で、１～１０個のアミノ酸残基の欠失を有することができ、欠失したアミノ酸は、ＩｇＧの抗原結合特異性に必須ではない。ある特定の態様では、かかるＩｇＧ分子は、非ＣＤＲ領域内で、１～１０個のアミノ酸残基の欠失を有することができ、欠失したアミノ酸は、ＩｇＧの抗原結合特異性に必須ではない。

【0034】

「抗体の誘導体」は、ＣＤＲ領域以外では、最大でも２０個のアミノ酸において天然抗体のアミノ酸配列から逸脱するタンパク質である。本明細書に開示される抗体の誘導体は、最大でも２０個のアミノ酸において当該アミノ酸配列から逸脱する抗体である。機能部分、誘導体、及び／又は類似体は、（二重特異性）抗体の結合特異性を維持する。「抗体の類似体」は、構造、形式、又は起源が異なる可能性があるが、その類似体である抗体の結合特異性を維持するタンパク質である。

【0035】

本明細書における核酸配列又はアミノ酸配列に関する「同一性パーセント（％）」は、最適比較目的のために配列を整列させた後の、選択された配列内の残基と同一の候補配列内の残基のパーセンテージとして定義される。核酸配列を比較する配列同一性パーセントは、改変ＣｌｕｓｔａｌＷアルゴリズム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．，ａｎｄ Ｇｉｂｓｏｎ Ｔ．Ｊ．，（１９９４）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．２２（２２）：４６７３－４６８０）、ｓｗｇａｐｄｎａｍｔスコア行列、１５のギャップオープニングペナルティ、及び６．６６のギャップ伸長ペナルティを用いるデフォルト設定を使用したＶｅｃｔｏｒ ＮＴＩ Ａｄｖａｎｃｅ（登録商標）１１．５．２ソフトウェアのＡｌｉｇｎＸアプリケーションを使用して決定される。アミノ酸配列は、改変ＣｌｕｓｔａｌＷアルゴリズム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．，ａｎｄ Ｇｉｂｓｏｎ Ｔ．Ｊ．，（１９９４）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．２２（２２）：４６７３－４６８０）、ｂｌｏｓｕｍ６２ｍｔ２スコア行列、１０のギャップオープニングペナルティ、及び０．１のギャップ伸長ペナルティを用いるデフォルト設定を使用したＶｅｃｔｏｒ ＮＴＩ Ａｄｖａｎｃｅ（登録商標）１１．５．２ソフトウェアのＡｌｉｇｎＸアプリケーションで決定される。

【0036】

抗体は、典型的には、抗原のエピトープを認識し、かかるエピトープは他の化合物にも同じように存在する場合があるため、抗原、例えば、ＥＧＦＲ又はＬＧＲ５を「特異的に認識する」本発明による抗体は、かかる他の化合物が同じ種類のエピトープを含有する場合、他の化合物も認識する場合がある。したがって、抗原と抗体との相互作用に関して「特異的に認識する」という用語は、同じ種類のエピトープを含有する他の化合物への抗体の結合を排除しない。

【0037】

「エピトープ」又は「抗原決定基」は、免疫グロブリン又は抗体が特異的に結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、タンパク質の三次フォールディング（いわゆる直鎖状エピトープ及び立体構造エピトープ）によって並置された隣接アミノ酸又は非隣接アミノ酸から形成され得る。隣接直鎖状アミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒への曝露時に保持されるが、三次フォールディングによって形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒での処理時に立体構造が失われる。エピトープは、典型的には、特有の空間的立体構造内に３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸を含み得る。

【0038】

本明細書で使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は、互換的に使用され、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、テンジクネズミ、ウサギ、ネコ、イヌ、サル、ウシ、ウマ、ブタなどの哺乳動物（例えば、がんを有するヒト患者などの患者）を指す。

【0039】

「治療する」、「治療すること」、及び「治療」という用語は、本明細書で使用される場合、疾患に関連する症状、合併症、状態又は生化学的兆候の進行、発生、重症化、又は再発を逆転させる、緩和する、改善する、阻害する、又は遅延させる若しくは予防する目的で、対象に活性薬剤又は活性薬剤の組み合わせを投与する任意の種類の介入又はプロセスを指す。

【0040】

本明細書で使用される場合、「有効な治療」又は「肯定的な治療応答」とは、有益な効果、例えば、疾患又は障害、例えば、がんの少なくとも１つの症状の改善をもたらす治療を指す。有益な効果は、その方法に従って治療を開始する前に行われた測定又は観察を上回る改善を含む、ベースラインを上回る改善の形態をとることができる。例えば、有益な効果は、疾患の臨床症状若しくは診断症状、又はがんのマーカーの軽減又は排除によって証明される、任意の臨床病期において対象におけるがんの進行を遅延させる、安定させる、停止する、又は逆転させる形態をとることができる。有効な治療は、例えば、腫瘍サイズを減少させ得る、循環腫瘍細胞の存在を減少させ得る、腫瘍の転移を軽減若しくは予防し得る、腫瘍増殖を遅延させ得る若しくは停止させ得る、及び／又は腫瘍再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）若しくは再発（ｒｅｌａｐｓｅ）を予防し得る若しくは遅延させ得る。

【0041】

「有効量」又は「治療有効量」という用語は、所望の生物学的、治療的、及び／又は予防的結果を提供する薬剤又は薬剤の組み合わせの量を指す。その結果は、疾患の兆候、症状、若しくは原因のうちの１つ以上の低減、改善、寛解、軽減、遅延、及び／若しくは緩和、又は生物系の任意の他の所望の変化であり得る。腫瘍の発生に関して、有効量は、腫瘍発生を遅延させるのに十分な量である。腫瘍再発に関して、有効量は、腫瘍再発を予防する又は遅延させるのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。有効量の薬剤又は組成物は、（ｉ）がん細胞の数を低減させ得、（ｉｉ）腫瘍サイズを低減させ得、（ｉｉｉ）がん細胞の末梢器官への浸潤を阻害し得、阻止し得、ある程度遅延させ得、かつ停止し得、（ｉｖ）腫瘍転移を阻害し得、（ｖ）腫瘍増殖を阻害し得、（ｖｉ）腫瘍の発生及び／若しくは再発を予防若しくは遅延させ得、かつ／又は（ｖｉｉ）がんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減し得る。一態様では、「有効量」は、がんの減少（例えば、がん細胞の数の減少）、がんの進行の遅延に影響を及ぼすか、又はがんの再成長若しくは再発を予防する、治療剤として本明細書に開示される抗体の量である。本明細書で前述するように、本開示のＥＧＦＲに結合するか、又はＥＧＦＲ及びＬＧＲ５に結合する抗体又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、本明細書では、「治療剤」としても称される。ある特定の態様では、本明細書での有効量は、本開示のがんを有する対象に隔週ベースで投与される１５００ｍｇの均一用量である。

【0042】

本明細書における「均一用量」という用語は、対象が、対象の体重とは無関係に、複数回の投与にわたって一定量の治療物質とともに投与される投与レジメンを指す。均一投与は、典型的には、ｑｎｗで省略され、式中、ｎは、間隔を示す整数であり、ｗは、週である。例えば、１５００ｍｇ抗体のｑ２ｗ均一用量投与レジメンは、一定量１５００ｍｇの抗体が２週間毎に投与されることを意味する。本明細書では、ある特定の態様では、治療物質は、１５００ｍｇのｑ２ｗ投与レジメンで投与される、ＥＧＦＲ、又はＥＧＦＲ及びＬＧＲ５に結合する抗体である。ある特定の態様では、対象は、１５００ｍｇの少なくとも３ｑ２ｗの均一投薬量で投与されている。ある特定の態様では、当該投与は、少なくとも４投薬量以上であり、患者が十分な臨床的又は放射線学的進行を示すまで持続し得る。

【0043】

均一用量は前投薬され得、これは、本発明の抗体を投与する前に薬物が対象に投与されることを意味する。ある特定の態様では、１５００ｍｇの抗体の均一用量は、抗ヒスタミン薬、鎮痛薬、解熱薬、及び／又は抗炎症薬が前投薬される。

【0044】

「Ｈスコア」という用語は、当該技術分野で、時には「ヒスト」とも称されることもあり、当業者に周知の免疫組織化学（ＩＨＣ）又はインサイチュハイブリダイゼーション技術（ＩＳＨ）の方法に基づいたプロトコルに従って、腫瘍試料中の目的の遺伝子の発現を半定量的に計算するために使用され得る再現性のある標準化されたスコアリング方法論を指し、Ｈスコアの計算方法を掲載するＡＳＣＯ Ａｐｒｉｌ １０^ｔｈ，２０１５に従う。Ｈｉｒｓｃｈ ＦＲ，Ｖａｒｅｌｌａ－Ｇａｒｃｉａ Ｍ，Ｂｕｎｎ ＰＡ Ｊｒ，ｅｔ ａｌ： Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｎｏｎ－ ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ： Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｇｅｎｅ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｐａｃｔ ｏｎ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２１：３７９８－３８０７，２００３、及びＪｏｈｎ Ｔ，Ｌｉｕ Ｇ，Ｔｓａｏ Ｍ－Ｓ： Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｅｓｔｉｎｇ ｉｎ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ： Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ，ｇｅｎｅ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ，ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ＥＧＦＲ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２８：Ｓ１４－Ｓ２３，２００９も参照されたい。これらの参考文献の関連する教示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0045】

ＥＧＦＲについてのＨスコアリングの文脈において、「ＩＨＣを使用して決定された」という用語は、ＩＨＣに代わる方法とは対照的に、Ｈスコアをその後決定するためのベースとしてＩＨＣを使用するか、又はＩＨＣを含む方法を指す。

【0046】

いくつかの態様では、本開示は、対象におけるがんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、当該対象におけるがんが、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行し、がんが、ＥＧＦＲを発現する、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供する。

【0047】

いくつかの態様では、がんは、胃がん、食道がん、胃食道接合部がん、又は頭頸部がん、特に、頭頸部の扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）から選択される。

【0048】

ある特定の態様では、がんは、３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲ発現を有する胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんである。ある特定の態様では、当該がんは、２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアを有する。ある特定の態様では、当該ＩＨＣは、腫瘍膜スコアである。

【0049】

また、本開示では、対象におけるがんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、当該がんが、３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現し、当該可変ドメインが、本明細書で更に開示されるアミノ酸を含む、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が提供される。

【0050】

また、本開示では、対象におけるがんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、当該がんが、２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現し、当該可変ドメインが、本明細書で更に開示されるアミノ酸を含む、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が提供される。

【0051】

また、本開示では、対象におけるがんを治療するための薬剤の製造における、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体の使用であって、当該対象におけるがんが、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行し、がんが、ＥＧＦＲを発現する、使用が提供される。

【0052】

また、本開示では、ＥＧＦＲを発現するがんを有する対象を治療する方法であって、当該対象が、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行しており、方法が、対象に、有効量の、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む、方法が提供される。

【0053】

また、本開示では、対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、当該がんが、３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が提供される。

【0054】

また、本開示では、対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、当該がんが、２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が提供される。

【0055】

がん及び腫瘍という単語は、特に別途記載されない限り、本明細書で使用され、通常は、両方ともがんを指す。

【0056】

上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体（ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ１、又はＨＥＲ１）は、Ｈｅｒ－又はｃＥｒｂＢ－１、－２、－３及び－４と名づけられた４つの受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のファミリーのメンバーである。ＥＧＦＲは様々な同義語で知られており、その最も一般的なものはＥＧＦＲである。ＥＧＦＲは、４つのサブドメインから構成される細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を有し、そのうちの２つはリガンド結合に関与し、そのうちの２つはホモ二量体化及びヘテロ二量体化に関与する。ＥＧＦＲは、様々なリガンドからの細胞外シグナルを統合し、多様な細胞内応答をもたらす。ＥＧＦＲによって活性化される主要なシグナル伝達経路は、Ｒａｓ－マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）分裂促進シグナル伝達カスケードから構成される。この経路の活性化は、Ｇｒｂ２のチロシンリン酸化ＥＧＦＲへの動員によって開始される。これにより、Ｇｒｂ２結合Ｒａｓ－グアニンヌクレオチド交換因子セブンレスの息子（Ｓｏｎ ｏｆ Ｓｅｖｅｎｌｅｓｓ）（ＳＯＳ）によるＲａｓの活性化がもたらされる。加えて、ＰＩ３－キナーゼ－Ａｋｔシグナル伝達経路はＥＧＦＲによっても活性化されるが、ＥｒｂＢ－３（ＨＥＲ３）の同時発現がある場合には、この活性化はよりかなり強い。ＥＧＦＲは、いくつかのヒト上皮悪性腫瘍、特に乳房、膀胱、非小細胞肺がん肺、結腸、卵巣、頭頸部、及び脳のがんに関与している。遺伝子における活性化変異、並びに受容体及びそのリガンドの過剰発現が見出され、自己分泌活性化ループを生じる。したがって、このＲＴＫは、がん療法の標的として広く使用されている。ＲＴＫを標的とする小分子阻害剤及び細胞外リガンド結合ドメインに指向されるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の両方が開発され、これまでにいくつかの臨床的成功が示されているが、ほとんどが選択された患者群に対してである。ヒトＥＧＦＲタンパク質及びそれをコードする遺伝子のデータベース受入番号は、ＧｅｎＢａｎｋ ＮＭ＿００５２２８．３である。受入番号は、主に、標的としてのＥＧＦＲタンパク質の特定化の更なる方法を提供するために与えられ、抗体によって結合されたＥＧＦＲタンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどで生じる変異などのコード遺伝子における変異のために、変化し得る。

【0057】

本明細書でＥＧＦＲについて言及される場合、別途記載されない限り、参照はヒトＥＧＦＲについて言及される。ＥＧＦＲに結合する可変ドメイン抗原結合部位は、ＥＧＦＲ及びその様々なバリアント、例えば、いくつかのＥＧＦＲ陽性腫瘍上に発現されるバリアントに結合する。

【0058】

「ＬＧＲ」という用語は、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質カップリング受容体として知られているタンパク質ファミリーを指す。このファミリーのいくつかのメンバーは、ＬＧＲ４、ＬＧＲ５及びＬＧＲ６に注目して、ＷＮＴシグナル伝達経路に関与することが知られている。

【0059】

ＬＧＲ５は、Ｇタンパク質共役受容体５を含有するロイシンリッチリピートである。遺伝子又はタンパク質の代替名は、Ｇタンパク質共役受容体５を含有するロイシンリッチ反復、ロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体５、Ｇタンパク質共役受容体ＨＧ３８、Ｇタンパク質共役受容体４９、Ｇタンパク質共役受容体６７、ＧＰＲ６７、ＧＰＲ４９、オーファンＧタンパク質共役受容体ＨＧ３８、Ｇタンパク質共役受容体４９、ＧＰＲ４９、ＨＧ３８及びＦＥＸである。ＬＧＲ５に結合する本発明のタンパク質又は抗体は、ヒトＬＧＲ５に結合する。ＬＧＲ５結合タンパク質又は抗体は、ヒトと他の哺乳動物オーソログとの間の配列及び三次構造類似性に起因して、かかるオーソログにも結合し得るが、必ずしもそうではない。ヒトＬＧＲ５タンパク質及びそれをコードする遺伝子についてのデータベース受入番号は、（ＮＣ＿００００１２．１２、ＮＴ＿０２９４１９．１３、ＮＣ＿０１８９２３．２、ＮＰ＿００１２６４１５５．１、ＮＰ＿００１２６４１５６．１、ＮＰ＿００３６５８．１）である。受入番号は、主に、標的としてのＬＧＲ５の更なる特定化方法を提供するために与えられ、結合されたＬＧＲ５タンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどに生じる変異などのコード遺伝子の変異のため、変化し得る。ＬＧＲ５抗原結合部位は、ＬＧＲ５及びその様々なバリアント、例えば、いくつかのＬＧＲ５陽性腫瘍細胞によって発現されるバリアントに結合する。

【0060】

特に、がんは、胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんである。胃（ｇａｓｔｒｉｃ）がん（胃（ｓｔｏｍａｃｈ）がんとも称される）は、胃の内壁、特に、その中に見られる粘液産生腺細胞から発症するがんである。かかるがんは、胃の内層から発生するために、腺がん、又はこの場合には胃腺がんとも称される。したがって、特に、がんは、本明細書で互換的に使用される胃の内層から発症する胃腺がん又はがんである。食道がんは、食道から発症するがんである。主な２つのサブタイプは、ＥＳＣＣ（食道扁平上皮がん）及びＥＡＣ（食道腺がん）である。胃食道接合部がん（胃食道接合部腺がんとしても知られる）は、胃食道接合部から生じる。

【0061】

頭頸部がんとして集合的に知られているがんは、通常、口、鼻、及び喉の内側など、頭部及び頸部の内側の湿った粘膜表面に並ぶ扁平細胞から発生する。これらの扁平上皮がんは、多くの場合、頭頸部の扁平上皮がんと称され、当該がんは、本開示のある特定の態様で治療される。まれではあるが、頭頸部がんはまた、唾液腺で発生する可能性がある。具体的には、頭頸部がんは、口腔内で発生し得る。これには、唇、舌の前部の３分の２、歯茎、頬と唇の内側の内面、舌の下の口の底、硬い口蓋、及び智歯の後ろの歯茎の小さな領域が含まれる。

【0062】

したがって、具体的には、頭頸部がんは、扁平上皮がんであり、鼻咽頭がん、喉頭がん、下咽頭がん、鼻腔がん、副鼻腔がん、口腔がん、中咽頭がん、又は唾液腺がんが含まれる。より具体的には、本発明は、中咽頭、下咽頭、喉頭、口腔、又は舌に位置するなどの扁平上皮頭頸部がんを含むがんの治療に関する。

【0063】

また、頭頸部がんは、特に、原発不明の扁平上皮がん（当該技術分野では、原発不明のがん又はＣＵＰとも称される）である。

【0064】

本開示では、がんは、ＥＧＦＲ、又はＥＧＦＲ及びＬＧＲ５を発現する。

【0065】

本明細書で使用される場合、がんがＥＧＦＲを発現する細胞を含む場合には、がんは、ＥＧＦＲを発現する。ＥＧＦＲを発現する細胞は、ＥＧＦＲをコードする検出可能なレベルのＲＮＡを含む。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ発現は、ＩＳＨによって決定される。

【0066】

ある特定の態様では、ＥＧＦＲタンパク質発現は、ＩＨＣによって検出される。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ発現は、製造業者の推奨事項を使用するＤａｋｏ自動染色装置（Ａｇｉｌｅｎｔ）用のＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘ（商標）キット、又はＥＧＦＲ細胞外ドメインに結合するＥＧＦＲクローン１１３に基づく市販のＩＨＣ ＥＧＦＲ検出キット（Ｌｅｉｃａ、ｈｔｔｐｓ：／／ｓｈｏｐ．ｌｅｉｃａｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ／ｕｓ／ｉｈｃ－ｉｓｈ／ｉｈｃ－ｐｒｉｍａｒｙ－ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ／ｐｉｄ－ｅｐｉｄｅｒｍａｌ－ｇｒｏｗｔｈ－ｆａｃｔｏｒ－ｒｅｃｅｐｔｏｒ）などの市販のＥＧＦＲ検出キットを使用して、ＩＨＣによって決定される。あるいは、ＥＧＦＲ発現は、クローンＥＧＦＲ．１１３に基づくＮｏｖｏｃａｓｔｒａ（商標）液体マウスモノクローナル抗体上皮成長因子受容体（製品コード：ＮＣＬ－Ｌ－ＥＧＦＲ、ｌｅｉｃａｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍ製の上皮成長因子受容体－ＩＨＣ一次抗体）を使用して決定される。

【0067】

簡潔に述べると、市販のＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘ（商標）ＩＨＣキットシステムは、規定どおりに固定されたパラフィン包埋標本のＩＨＣ染色手順を完了するために必要な試薬を含有する。ヒトＥＧＦＲタンパク質に対する一次、非Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ３及びＨｅｒ４交差反応性モノクローナル抗体（クローン２－１８Ｃ９）とのインキュベーション後、このキットは、デキストラン技術に基づく即座に使用可能な可視化試薬を用いる。この試薬は、二次ヤギ抗マウス抗体分子及び共通のデキストランポリマー骨格に連結された西洋ワサビペルオキシダーゼ分子の両方からなる。続いて添加された色素原の酵素変換は、抗原部位で可視的な反応生成物の形成をもたらす。結果は、光学顕微鏡を使用して日常的に評価される。２＋及び０の染色強度スコアを有する２つのホルマリン固定パラフィン包埋ヒト細胞株を含有する対照スライドが、キット試薬性能の品質管理のために提供される。

【0068】

染色強度は、以下のように確立される。３＋（強い染色）：必要に応じて高いレベルで確認できる、低いレベルの倍率、５倍の対物レンズで可視、２＋（中程度の染色）：中程度レベルの倍率、１０倍又は２０倍の対物レンズで可視、１＋（弱い染色）：高倍率、４０倍の対物レンズでのみ確実に確認可能、０（染色なし）：高倍率で可視染色はなし。

【0069】

ある特定の態様では、ＥＧＦＲ発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）を使用して決定され、がんは、ＥＧＦＲに対してＩＨＣ陽性である。ある特定の態様では、がんは、３＋のＥＧＦＲ ＩＨＣスコアによって特徴付けられる、胃がん、食道がん、胃食道接合部がんである。

【0070】

ある特定の態様では、ＥＧＦＲ発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）を使用して決定され、続いて、０～３００の範囲を使用してＥＧＦＲについてのＨスコアを割り当てる。ある特定の態様では、本開示のがんは、０～３００のスケールで２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられる、胃がん、食道がん、胃食道接合部がんである。したがって、ある特定の態様では、ＥＧＦＲＨスコアは、２００超、３００以下である。ある特定の態様では、本開示のがんは、０～３００のスケールで５０超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられる。ある特定の態様では、本開示のがんは、０～３００のスケールで５０超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられる頭頸部がんである。ある特定の態様では、本開示のがんは、０～３００のスケールで８０超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられる。ある特定の態様では、本開示のがんは、０～３００のスケールで８０超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられる頭頸部がんである。

【0071】

別の態様では、がんは、２＋又は３＋のＥＧＦＲ ＩＨＣスコアによって特徴付けられる頭頸部がんである。

【0072】

本明細書では、ＥＧＦＲ発現状態を割り当てるためにＨスコアを決定することは、本明細書に記載のように、所定のフィールド内の各細胞について決定される、膜染色の強度を確立する（０、１＋、２＋、又は３＋のスコアリングをもたらす）第１のステップを含む。続いて、各染色強度レベルでの細胞のパーセンテージを計算し、最後に、以下の式：［１×（１＋染色を有する細胞％）＋２×（２＋染色を有する細胞％）＋３×（３＋染色を有する細胞％）］を使用してＨスコアが割り当てられ、０～３００の間のＥＧＦＲについてのＨスコアがもたらされる。結果として、Ｈスコアは、所与の腫瘍試料におけるより高い強度又は染色の量に、より相対的な重みを与える。

【0073】

ある特定の態様では、本開示の当該がんは、ＥＧＦＲ遺伝子増幅を含むことによって特徴付けられる。ある特定の態様では、当該がんは、胃がんである。ある特定の態様では、当該がんは、胃食道接合部腺がんである。当該ＥＧＦＲの遺伝子増幅は、ある特定の態様では、８以上の固体組織試料に基づくＥＧＦＲコピー数、又は少なくとも２．１４若しくは少なくとも２．５であるが、ある特定の態様では、５以下の循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）に基づくＥＧＦＲ増幅スコア（コピー数変化（ＣＮＡ）としても知られる）によって特徴付けられる。

【0074】

ある特定の態様では、ＥＧＦＲ増幅は、８以上のＥＧＦＲコピー数として定義される（特に、固形組織増幅に基づいて８コピー以上上回る倍数性として定義される）。ある特定の態様では、ＥＧＦＲコピー数は、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織試料に対する次世代配列決定によって確立される。

【0075】

ある特定の態様では、ＥＧＦＲ遺伝子コピー数は、次世代配列決定（ＮＧＳ）を使用して確立される。ある特定の態様では、当該ＮＧＳは、固体組織試料又は血液又は血漿などの液体試料に対して行われる。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ増幅スコアは、少なくとも２．１４又は少なくとも２．５のスコアをもたらす、ｃｔＤＮＡに対する次世代配列決定によって確立される。ある特定の態様では、当該ｃｔＤＮＡスコアは、５以下である。当該コピー数評価は、血液由来のｃｆＤＮＡに基づき得る。一例として、ＥＧＦＲコピー数の決定は、Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．２０１９（Ｒｅｖｉｓｉｔｉｎｇ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＥＧＦＲ）Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｓ ａ Ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ Ａｎｔｉ－ＥＧＦＲ Ｔｈｅｒａｐｙ： Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｅｌｌ－Ｆｒｅｅ Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｔｕｍｏｒ ＤＮＡ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．ＪＣＯ Ｐｒｅｃｉｓ Ｏｎｃｏｌ ３： ＰＯ．１８．００１８０）に記載のとおりに実行され得る。

【0076】

本明細書では、「ｃｔＤＮＡ」（循環腫瘍ＤＮＡ）という用語は、「ｃｆＤＮＡ」（無細胞腫瘍ＤＮＡ）と互換的に使用される。

【0077】

ある特定の態様では、ＥＧＦＲ遺伝子コピー数は、ＦＩＳＨを使用して確立される。ある特定の態様では、当該がんは、少なくとも２．０以上のＥＧＦＲ／ＣＥＰ７比によって特徴付けられる。ＥＧＦＲ／ＣＥＰ７比を確立することは、当該技術分野で標準的であるが、例えば、市販のキットを使用して確立されてもよく、又はＭａｒｏｎ，ｅｔ ａｌ．，２０１８（Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｆｏｒ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ： Ａｎｔｉ－ＥＧＦＲ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ＥＧＦＲ－Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｇａｓｔｒｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌ Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ ８：６９６－７１３）に記載のとおりに実行されてもよい。ＥＧＦＲ ＦＩＳＨ試験は、ＥＧＦＲ遺伝子座（染色体７ｐ１１．２に位置する）の増幅を検出するように設計されている。かかる方法論では、ＦＩＳＨは、ホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍組織の切片上で実行される。スライドは、標準プロトコルに従って調製され、１００個の間期細胞がスコアリングされる。次いで、増幅についてのカットオフは、ＥＧＦＲ：ＣＥＰ７の２．０以上の比率で設定される。

【0078】

任意選択で、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体での治療は、対象をＥＧＦＲ状態について診断するステップを含む（又はある特定の態様では、そのステップの後である）。ある特定の態様では、３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられる胃がん、食道がん、胃－食道接合部がんを有する対象、又は当該がんが０～３００のスケールで２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられる、が治療のために選択される。ある特定の態様では、対象の治療は、０～３００のスケールで２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられる、胃がん、食道がん、胃食道接合部がんを有する当該対象を診断するステップの後である。

【0079】

ある特定の態様では、少なくとも２．０以上のＥＧＦＲ／ＣＥＰ７比、８以上のＥＧＦＲコピー数、又は少なくとも２．１４若しくは少なくとも２．５のＥＧＦＲ ｃｔＤＮＡスコアを含むＥＧＦＲ遺伝子増幅によって特徴付けられる胃がん、食道がん、胃食道接合部がんを有する対象が、治療のために選択される。ある特定の態様では、対象の治療は、少なくとも２．０以上のＥＧＦＲ／ＣＥＰ７比、８以上のＥＧＦＲコピー数、又は少なくとも２．１４若しくは少なくとも２．５のＥＧＦＲ ｃｔＤＮＡスコアを含むＥＧＦＲ遺伝子増幅によって特徴付けられる胃がん、食道がん、胃食道接合部がんを有する対象を診断するステップの後である。

【0080】

特に、本開示は、胃がん、食道がん、胃食道接合がんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメインを含み、かつＬＧＲ５の細胞外部分に結合する第２の可変ドメインを有し得る抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、がんが、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行し、対象が、Ｈｅｒ２陽性、Ｈｅｒ２高、Ｈｅｒ２ ３＋、Ｈｅｒ２ ２＋、Ｈｅｒ２ １＋、Ｈｅｒ２ ０、又はＨｅｒ２陰性対象であることから選択されるＨｅｒ２状態を有する、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供する。ある特定の態様では、対象は、Ｈｅｒ２陰性である。本開示は、Ｈｅｒ２陰性対象におけるかかるがんを治療する方法であって、その治療を必要とする対象に、抗体、又はその機能部分、誘導体及び／若しくは類似体を提供することを含む、方法を更に提供する。ある特定の態様では、当該使用は、対象に、１５００ｍｇの均一用量の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む。ある特定の態様では、Ｈｅｒ２陰性対象への治療剤の投与は、毎週、隔週、又は毎月行われ得る。ある特定の態様では、治療剤は、２週間に１回投与される。ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する好適な可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する好適な可変ドメインは、本明細書に開示される。ある特定の態様では、第１の可変ドメインは、図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、又はＭＦ４２８９からなる群から選択されるＥＧＦＲ特異的重鎖可変領域の少なくともＣＤＲ３配列、又は少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。ある特定の態様では、第２の可変ドメインは、図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、又はＭＦ５８１８からなる群から選択されるＬＧＲ５特異的重鎖可変領域の少なくともＣＤＲ３配列、又は少なくともＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む。

【0081】

対象のヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）の発現を決定する方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｈｅｒ２の発現レベルは、免疫組織化学（ＩＨＣ）又は（蛍光）ｉｎ－ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）を使用して確立され得、これは、Ｈｅｒ２陰性対象の同定を含む、Ｈｅｒ２状態の同定を可能にする。ＩＨＣ又はＩＳＨは、ヒト対象におけるＨｅｒ２状態を確立するために日常的に使用される明確に定義された手順及び標準的な手順の両方である。本明細書では、例えば、Ｂａｒｔｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，（ＨＥＲ２ Ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｃｉｓｉｏｎ Ｍａｋｉｎｇ ｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌ Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ａｒｃｈ Ｐａｔｈｏｌ Ｌａｂ Ｍｅｄ．２０１６；１４０：１３４５－１３６３）によるＡＳＣＯ／ＣＡＰガイドラインを参照する。例えば、抗ＨＥＲ－２／ｎｅｕ抗体（クローン４Ｂ５）を使用することにより、ＩＨＣを使用したＦＦＰＥ胃がん、食道がん、胃食道接合部がん、又は頭頸部がんの切片におけるＨＥＲ－２抗原の半定量的な検出が可能になる。染色及びスコアリングは、このがんの種類のコンセンサスガイドラインに従って実行される。がん組織試料中の細胞の表面上のＨＥＲ２受容体タンパク質の量を測定するかかるＨＣ試験は、通常は、０～３＋のスコアを与える。ＩＨＣスコアに基づいて、患者は、例えば、０又は１＋のスコアが測定されるときなどに、Ｈｅｒ２陰性であると分類され得る。ＨＥＲ２プローブ（１７ｑ１１．２－ｑ１２）及びセントロメア１７プローブ（Ｃｅｎ１７）を使用するなどして、ＩＳＨ試験を使用してＨｅｒ２発現を確立する場合に、診断は「陽性」又は「陰性」のいずれかであり、また時にはＨＥＲ２について「ゼロ」として報告されることもある。ある特定の態様では、本開示の治療方法は、ＩＨＣ及び／又はＩＳＨによって確立されるＨｅｒ２陰性である対象を含む。

【0082】

本明細書におけるＨｅｒ２陰性対象とは、がん、がん細胞、又は腫瘍を有する対象、すなわち、Ｈｅｒ２陰性である対象を意味する。Ｈｅｒ２状態は、上述のＩＨＣ及び／又はＩＳＨに従って決定されてもよい。

【0083】

ある特定の態様では、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体での治療は、対象をＨｅｒ２状態について診断するステップの後である。ある特定の態様では、Ｈｅｒ２陰性状態を有する対象が、治療のために選択される。ある特定の態様では、対象の治療は、Ｈｅｒ２陰性胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんを有する対象を診断するステップの後である。本開示の方法によって治療されるかかるがんには、胃腺がん、及び扁平上皮がん組織診断を有する食道がんが含まれる。

【0084】

ある特定の態様では、当該Ｈｅｒ２陰性診断は、Ｈｅｒ２状態のＩＳＨ又はＩＨＣ試験を含む。

【0085】

ある特定の態様では、Ｈｅｒ２陰性対象の治療は、Ｈｅｒ２陰性胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんを有する対象をスクリーニングするステップの後である。かかるがんは、特に、腺がんである。ある特定の態様では、当該スクリーニングは、Ｈｅｒ２状態のＩＳＨ又はＩＨＣ試験を含む。

【0086】

ある特定の態様では、対象は、以前に抗ＥＧＦＲ剤で治療されていない。ある特定の態様では、対象は、ＥＧＦＲを標的とする抗体で治療されていない。ある特定の態様では、対象は、セツキシマブで治療されていない。かかる対象はまた、セツキシマブ未経験対象又は抗ＥＧＦＲ未経験対象とも称される。別の言い方をすれば、当該対象のがんは、以前に抗ＥＧＦＲ剤で治療されていない。ある特定の態様では、当該対象のがんは、ＥＧＦＲを標的とする抗体で治療されていない。ある特定の態様では、当該対象のがんは、セツキシマブで治療されていない。かかる対象はまた、セツキシマブ未経験対象又は抗ＥＧＦＲ未経験対象とも称される。

【0087】

本開示の対象は、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けている。ある特定の態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、デュルバルマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、レチファンリマブ セミプリマブ、又は承認されたか、又は開発中の他の抗ＰＤ１、抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む。ある特定の態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、デュルバルマブ又はペムブロリズマブを含む。

【0088】

デュルバルマブ（ブランド名（商品名イミフィンジ（商標））で販売は、膀胱がん及び肺がんなどのがんを治療するためのＦＤＡ承認の免疫チェックポイント阻害剤である。プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）とＰＤ－１（ＣＤ２７９）との相互作用を遮断するヒト免疫グロブリンＧ１カッパ（ＩｇＧ１κ）モノクローナル抗体である。デュルバルマブは、免疫チェックポイント阻害剤であるか、又は時には免疫チェックポイント阻害剤薬物とも称される。実施例セクションに示されるように、免疫チェックポイント阻害剤としてデュルバルマブを用いた事前の治療を受けた患者において、臨床的に関連した応答が観察された。

【0089】

ペムブロリズマブ（ブランド名キイトルーダ（商標）で販売）は、黒色腫、肺がん、及びホジキンリンパ腫を含む様々ながんを治療するためにがん免疫療法において使用されるヒト化抗体であり、免疫チェックポイント阻害剤として機能する。それは、ＩｇＧ４アイソタイプ抗体であり、リンパ球のプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）受容体を標的とする。ペムブロリズマブは、２０１４年に米国で医療使用に対して承認された。２０１７年、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）は、ある特定の遺伝子異常を有する任意の切除不能又は転移性の固形腫瘍に対してそれを承認した。世界保健機関の必須医薬品リストに掲載されている。実施例セクションに示されるように、免疫チェックポイント阻害剤としてペムブロリズマブを用いた事前の治療を受けた患者において、臨床的に関連した応答が観察された。

【0090】

イピリムマブ（ブランド名ヤーボイ（商標）で販売）は、免疫系を下方調節するタンパク質受容体であるＣＴＬＡ－４を標的とすることによって免疫系を活性化するように働く、モノクローナル抗体及び免疫チェックポイント阻害剤である。イピリムマブは、黒色腫の治療に対して、２０１１年３月に米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認された。

【0091】

ニボルマブ（ブランド名オプジーボ（商標）で販売）は、黒色腫、肺がん、悪性胸膜中皮腫、腎細胞がん、ホジキンリンパ腫、頭頸部がん、尿路上皮がん、結腸がん、食道扁平上皮がん、肝臓がん、胃がん、及び食道又は胃食道接合部（ＧＥＪ）を含む多くのがんを治療するために使用される免疫チェックポイント阻害剤である。ニボルマブは、ＰＤ－１を遮断するヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ニボルマブは、２０１４年に米国で医療使用に対して承認された。世界保健機関の必須医薬品リストに掲載されている。ニボルマブは、中皮腫に対する２番目のＦＤＡ承認の全身療法であり、胃がんの第一選択治療のための最初のＦＤＡ承認の免疫療法である。

【0092】

アテゾリズマブ（ブランド名テセントリク（商標）で販売）は、尿路上皮がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）、及び肝細胞がん（ＨＣＣ）を治療するために使用されるモノクローナル抗体薬である。それは、ＩｇＧ１アイソタイプのヒト化モノクローナル抗体であり、プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）を標的とする。アテゾリズマブは、米国食品医薬品局によって承認された最初のＰＤ－Ｌ１阻害剤である。

【0093】

レチファンリマブ（以前はＭＧＡ０１２として知られていた）は、単剤療法として、及び他のがん治療薬と組み合わせた使用のために開発されているヒト化抗ＰＤ－１モノクローナル抗体である。レチファンリマブは、マイクロサテライト不安定性の高い子宮内膜がん、メルケル細胞がん及び肛門管の扁平上皮がん（ＳＣＡＣ）を有する患者のための単剤療法として、並びに非小細胞肺がん及びＳＣＡＣを有する患者のための白金系化学療法と併用して、臨床試験（ＮＣＴ０４４７２４２９及びＮＣＴ０４２０５８１２）を受けている。レチファンリマブは、肛門がんの治療のためにＦＤＡによって希少疾病用医薬品の指定を受けている。

【0094】

セミプリマブ（ブランド名リブタヨ（登録商標）で販売）は、扁平上皮細胞皮膚がんの治療のためのモノクローナル抗体薬である。セミプリマブは、プログラム死受容体１（ＰＤ－１）に結合し、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路を遮断する薬物のクラスに属する。２０１８年９月、治癒的手術又は治癒的放射線療法の候補ではない転移性皮膚扁平上皮がん（ＣＳＣＣ）又は局所進行性ＣＳＣＣを有する患者の治療に対してＦＤＡによって承認された。２０１９年６月に欧州連合で医療使用に対して承認された。

【0095】

また、本明細書に記載される免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－１、又はＢ７－２を含む免疫チェックポイントタンパク質を標的とすることを目的とする。したがって、本開示の免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－１、又はＢ７－２から選択される免疫チェックポイントタンパク質を標的とする。

【0096】

プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２７４、又はＢ７ホモログ１（Ｂ７－Ｈ１）、ＨＧＮＣ：１７６３５、ＮＣＢＩ、Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子：２９１２６、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｑ９ＮＺＱ７）は、ヒトにおいてＣＤ２７４遺伝子によってコードされるタンパク質である。この遺伝子は、Ｔ細胞及びＢ細胞、並びに様々な種類の腫瘍細胞などの造血及び非造血細胞によって発現される免疫抑制性受容体リガンドをコードする。コードされたタンパク質は、免疫グロブリンＶ様及びＣ様ドメインを有するＩ型膜貫通タンパク質である。このリガンドとその受容体との相互作用は、Ｔ細胞活性化及びサイトカイン産生を阻害する。正常組織の感染又は炎症の間、この相互作用は、免疫応答の恒常性を維持することによって自己免疫を予防するために重要である。腫瘍微小環境において、この相互作用は、細胞毒性Ｔ細胞不活性化を介して腫瘍細胞に免疫逃避を提供する。

【0097】

プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１又はＣＤ２７９、ＨＧＮＣ：８７６０、ＮＣＢＩ Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子：５１３３、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｑ１５１１６）は、活性化されたＴ細胞で発現された免疫阻害性受容体であり、エフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞の機能を含むＴ細胞機能の調節に関与する。加えて、このタンパク質はまた、ＣＤ４＋Ｔ細胞のＴ制御細胞への分化を促進し得る。それは、黒色腫を含む多くの種類の腫瘍で発現し、抗腫瘍免疫に役割を果たすことが実証されている。更に、このタンパク質は自己免疫に対する保護に関与することが示されているが、効果的な抗腫瘍及び抗微生物免疫の阻害にも寄与する可能性がある

【0098】

細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４又はＣＤ１５２、ＨＧＮＣ：２５０５、ＮＣＢＩ Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子：１４９３、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ１６４１０）は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、Ｔ細胞に抑制シグナルを伝達するタンパク質をコードする。タンパク質は、Ｖドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質尾部を含有する。異なるアイソフォームをコードする代替転写スプライスバリアントが特徴付けられている。膜結合アイソフォームは、ジスルフィド結合によって相互接続されたホモ二量体として機能する一方、可溶性アイソフォームは、単量体として機能する。この遺伝子における変異は、インスリン依存性糖尿病、グレーブス病、橋本甲状腺炎、セリアック病、全身性エリテマトーデス、甲状腺関連眼窩症、及びその他の自己免疫疾患と関連付けられている。

【0099】

Ｂ７－１又は分化クラスター８０（ＣＤ８０、ＨＧＮＣ：１７００、ＮＣＢＩ Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子９４１、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ３３６８１）は、細胞外免疫グロブリン定常様ドメイン及び受容体結合に必要な可変様ドメインを有する、免疫グロブリンスーパーファミリーの一部分であるＢ７、Ｉ型膜タンパク質である。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、ＣＤ２８又はＣＴＬＡ－４の結合によって活性化される膜受容体である。生物学的系におけるその機能には、Ｔ細胞増殖の誘導及びサイトカイン産生が含まれる。また、それは、Ｔリンパ球の活性化に必須の共刺激シグナルに関与する。Ｔ細胞増殖及びサイトカイン産生は、ＣＤ２８の結合によって誘導され、ＣＴＬＡ－４への結合は、反対の効果を有し、Ｔ細胞活性化を阻害する。これは、別のＢ７タンパク質であるＣＤ８６と密接に関連しており、多くの場合、連携して機能する。ＣＤ８０及びＣＤ８６の両方が、共刺激受容体ＣＤ２８及びＣＴＬＡ－４ＣＤ１５２と相互作用する）。

【0100】

Ｂ７－２又は分化クラスター８６（ＣＤ８６、ＨＧＮＣ：１７０５ ＮＣＢＩ Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子：９４２ ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ４２０８１）は、樹状細胞、ランゲルハンス細胞、マクロファージ、Ｂ細胞（メモリＢ細胞を含む）、及び他の抗原提示細胞上で構成的に発現されるタンパク質である。ＣＤ８０とともに、ＣＤ８６は、Ｔ細胞の活性化及び生存に必要な共刺激シグナルを提供する。リガンド結合に応じて、ＣＤ８６は、自己調節及び細胞－細胞会合のために、又は調節の減衰及び細胞－細胞解離のためにシグナル伝達することができる。ＣＤ８６遺伝子は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであるＩ型膜タンパク質をコードする。選択的スプライシングは、異なるアイソフォームをコードする２つの転写バリアントをもたらす。

【0101】

対象はまた、１つ以上の標準承認療法又は標準ケアで以前に治療された可能性がある。手術又は放射線療法は、早期又は限局性疾患を有するほとんどの患者にとって好ましい場合があり、限局的に進行した疾患に対して考慮される場合があるが、例えば、がんの解剖学的位置のために、全ての患者に適用することが可能ではない場合がある。ある特定の態様では、本明細書における標準承認療法又は標準ケアは、白金系化合物（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）、抗腫瘍性化合物（例えば、メトトレキサート）、フルオロピリミジン（例えば、フルオロウラシル、５－ＦＵ、カペシタビン）、タキサン（例えば、ドセタキセル又はパクリタキセル）、ヌクレオシド類似体（例えば、ゲムシタビン）、又はそれらの任意の組み合わせのうちの１つ以上などの化学療法剤の投与による治療を含む。

【0102】

したがって、ある特定の態様では、本開示の対象は、化学療法剤による事前の治療を受けている。ある特定の態様では、化学療法剤は、白金系化合物（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）、抗腫瘍性化合物（例えば、メトトレキサート）、フルオロピリミジン（例えば、フルオロウラシル、５－ＦＵ、カペシタビン）、タキサン（例えば、ドセタキセル又はパクリタキセル）、ヌクレオシド類似体（例えば、ゲムシタビン）、又はそれらの任意の組み合わせを含む。

【0103】

本開示によれば、ある特定の態様では、がん及び／又は当該がんを有する当該対象は、ＳＭＡＤ４の野生型である。ＳＭＡＤ４（ＨＧＮＣ：６７７０、ＮＣＢＩ Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子：４０８９、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｑ１３４８５）は、シグナル伝達タンパク質のＳＭＡＤファミリーに属する。ＳＭＡＤタンパク質は、形質転換成長因子（ＴＧＦ）－ベータシグナル伝達に応答して、膜貫通セリントレオニン受容体キナーゼによってリン酸化及び活性化される。この遺伝子の産物は、ホモマー複合体及び他の活性化されたＳＭＡＤタンパク質とのヘテロマー複合体を形成し、その後、それが核に蓄積し、標的遺伝子の転写を調節する。このタンパク質はＤＮＡに結合し、ＳＭＡＤ結合要素（ＳＢＥ）と呼ばれる８ｂｐ回文配列（ＧＴＣＴＡＧＡＣ）を認識する。このタンパク質は、腫瘍抑制剤として作用し、上皮細胞増殖を阻害する。また、血管新生を低減させ、血管透過性を増加させることによって、腫瘍に対する阻害効果を有する場合がある。コードされたタンパク質は、骨形態形成タンパク質シグナル伝達経路の重要な構成要素である。ＳＭＡＤタンパク質は、翻訳後修飾によって複雑な調節に供される。この遺伝子における変異又は欠失は、膵臓がん、若年性ポリポーシス症候群、及び遺伝性出血性毛細血管拡張症候群をもたらすことが示されている。ＳＭＡＤ４において生じる変異のこれらの以前に報告された含意にもかかわらず、本開示のがん及び／又は当該がんを有する対象は、ＳＭＡＤ４の野生型である。ある特定の態様では、当該患者又はがんは、本明細書で言及されるＳＭＡＤ４タンパク質情報にわたる任意の変異を含まない。

【0104】

任意選択で、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体での治療は、対象をＳＭＡＤ状態について診断するステップを含む。ある特定の態様では、治療は、当該診断のステップの後である。ある特定の態様では、野生型ＳＭＡＤ４遺伝子及び／又はタンパク質を有する胃がん、食道がん、胃食道接合部がんを有する対象が、治療のために選択される。ある特定の態様では、対象の治療は、野生型ＳＭＡＤ４遺伝子又は遺伝子産物によって特徴付けられる胃がん、食道がん、胃食道接合部がんを有する対象を診断するステップの後である。

【0105】

胃がん、食道がん、胃食道接合部がん、又は頭頸部がんなどのがんは、変異の存在に関連し得る。かかる変異には、ＰＩＫ３ＣＡ、ＫＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＨＲＡＳ、ＭＡＰ２Ｋ１及びＮＯＴＣＨ１などの既知のがん遺伝子における変異が含まれる。発がん性変異は、一般に、新たな機能をもたらす活性化変異又は変異として記載される。別の種類のがん変異は、ＴＰ５３、ＭＬＨ１、ＣＤＫＮ２Ａ、及びＰＴＥＮなどの腫瘍抑制遺伝子に関与する。腫瘍抑制遺伝子における変異は、一般に、不活性化である。

【0106】

ある特定の態様では、がんは、１つ以上のＥＧＦＲシグナル伝達経路遺伝子における変異を有する。ある特定の態様では、変異は、その発現産物がＥＧＦＲシグナル伝達経路におけるＥＧＦＲの下流で活性である遺伝子において存在する。ある特定の態様では、がんは、ＡＫＴ１、ＫＲＡＳ、ＭＡＰ２Ｋ１、ＮＲＡＳ、ＨＲＡＳ、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＴＥＮ、ＥＧＦＲ、及び／又はＰＬＣＧ２から選択される遺伝子及びそのコードされたタンパク質産物における変異を有する。ある特定の態様では、がんは、ＨＲＡＳをコードする遺伝子における変異を有する。ある特定の態様では、がんは、ＫＲＡＳ及び／又はＢＲＡＦにおける活性化変異を有しない。

【0107】

ある特定の態様では、がんは、１つ以上のＷＮＴシグナル伝達経路遺伝子における変異を有する。ある特定の態様では、ＡＰＣ、ＣＲＥＰＰＢ、ＣＵＬ１、ＥＰ３００、ＳＯＸ１７、及び／又はＴＰ５３において。

【0108】

ある特定の態様では、ＨＲＡＳ遺伝子における変異は、ミスセンス変異、体細胞変異、及び／又は発がん性ドライバ変異である。ある特定の態様では、ＨＲＡＳは、そのタンパク質配列における変異Ｇ１２Ｓ、又はＧ＞Ｓアミノ酸変化に繋がるＧ＞Ａミスセンス変異を含む。ある特定の態様では、ＨＲＡＳ遺伝子のコドンＧＧＣのコード配列（ＣＤＳ）におけるミスセンス変異Ｇ３４Ａ。ある特定の態様では、がんは、口腔扁平上皮がん又は頬粘膜の扁平上皮がんであり、ＨＲＡＳにおけるミスセンス変異Ｇ１２Ｓを含む。

【0109】

がんは、ＭＡＰ２Ｋ１をコードする遺伝子における変異を有し得る。ある特定の態様では、ＭＡＰ２Ｋ１遺伝子における変異は、ミスセンス変異、体細胞変異、及び／又は発がん性ドライバ変異である。ある特定の態様では、ＭＡＰ２Ｋ１は、そのタンパク質配列における変異Ｌ３７５Ｒ、又はＬ＞Ｒアミノ酸変化に繋がるＴ＞Ｇミスセンス変異を含む。ある特定の態様では、ミスセンス変異は、ＭＡＰ２Ｋ１遺伝子のコドンＣＴＣのコード配列（ＣＤＳ）におけるＴ１１２４Ｇである。

【0110】

ＴＰ５３は、ストレス応答及び細胞増殖を含むいくつかの活性を調節する転写因子をコードする。ＴＰ５３における変異は様々ながんと関連しており、胃がん及び食道がんを含むヒトがんの５０％以上で発生すると推定されている。特に、ＴＰ５３ Ｒ２４８Ｑ変異は、胃がん及び食道がんを含むがんと関連することが示された（Ｐｉｔｏｌｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０１９ ２０：６２４１）。位置Ｒ１９６及びＲ３４２におけるナンセンス変異は、乳房及び食道、並びに卵巣、前立腺、乳房、膵臓、胃、結腸／直腸、肺、食道、骨などのいくつかの腫瘍においてそれぞれ特定されている（Ｐｒｉｅｓｔｌｙ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ２０１９ ５７５：２１０－２１６）。特に、本明細書に開示される治療剤は、ＴＰ５３変異、特に、ＴＰ５３発現又は活性の低減をもたらす変異を有するがんを治療するのに有用である。

【0111】

ＭＬＨ１（ＭｕｔＬホモログ１）は、ＤＮＡミスマッチ修復に関与するタンパク質をコードし、既知の腫瘍抑制遺伝子である。ＭＬＨ１における変異は、消化管がんを含む様々ながんと関連している。低レベルのＭＬＨ１はまた、食道がんの家族歴を有する食道がん患者に関連し（Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｌ Ｌｅｔｔ．２０１５ ９：４３０－４３６）、ＭＬＨ１は、悪性食道腫瘍患者の１．３９％で変異している（Ｔｈｅ ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ：ｐｏｗｅｒｉｎｇ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（８）：８１８－８３１．Ｄａｔａｓｅｔ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６）。特に、ＭＬＨ１ Ｖ３８４Ｄ変異は、がん、例えば、結腸直腸がんと関連することが示された（Ｏｈｓａｗａ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２００９ ２：８８７－８９１）。ある特定の態様では、本明細書に開示される治療剤は、ＭＬＨ１変異、特に、ＭＬＨ１発現又は活性の低減をもたらす変異を有するがんを治療するのに有用である。

【0112】

ＰＩＫ３ＣＡ（ホスファチジルイノシトール－４，５－ビスリン酸３－キナーゼ触媒サブユニットアルファ）は、ＰＩ３Ｋ（ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ）の１１０ｋＤａ触媒サブユニットをコードする。ＰＩＫ３ＣＡの変異は、消化管がんを含む様々ながんと関連している。米国がん学会の報告によると、ＰＩＫ３ＣＡは悪性固形腫瘍患者の１２．７５％で変異している。具体的には、ＰＩＫ３ＣＡ Ｈ１０４７Ｒ変異は、全悪性固形腫瘍患者の２．９１％に存在し、ＰＩＫ３ＣＡ Ｅ５４５Ｋは、全悪性固形腫瘍患者の２．５５％に存在する（Ｔｈｅ ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ：ｐｏｗｅｒｉｎｇ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（８）：８１８－８３１．Ｄａｔａｓｅｔ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．を参照されたい）。ある特定の態様では、本明細書に開示される治療剤は、ＰＩＫ３ＣＡ変異、特に、ＰＩＫ２ＣＡ又はＰＩＫ３ＣＡにおける発がん性変異を有するがんを治療するのに有用である。

【0113】

ＣＤＫＮ２Ａ（サイクリン依存性キナーゼ阻害剤２Ａ）は、ＣＤＫ４及びＡＲＦを阻害するタンパク質をコードする。米国がん学会の報告によると、ＣＤＫＮ２Ａは食道がん患者の２２．２１％、食道扁平上皮がん患者の２８．７％、及び胃腺がん患者の６．０８％で変異している。具体的には、ＣＤＫＮ２Ａ Ｗ１１０Ｔｅｒ変異は、約０ ．１１％のがん患者に存在する。（Ｔｈｅ ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ：ｐｏｗｅｒｉｎｇ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（８）：８１８－８３１．Ｄａｔａｓｅｔ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６）。ある特定の態様では、本明細書に開示される治療剤は、ＣＤＫＮ２Ａ変異、特に、ＣＤＫＮ２Ａ発現又は活性の低減をもたらす変異を有するがんを治療するのに有用である。

【0114】

ＰＴＥＮ（ホスファターゼ及びテンシンホモログ）は、ホスファチジルイノシトール３，４，５－トリスリン酸３－ホスファターゼをコードする。米国がん学会の報告によると、ＰＴＥＮはがん患者の６．２８％、胃腺がん患者の３．４１％、食道がん患者の２．３７％、食道腺がん患者の２．２２％で変異している。特に、ＰＴＥＮ Ｒ１３０Ｔｅｒ変異（Ｔｅｒは終止／停止コドンを指す）は、全ての大腸がん患者の０．２１％に存在する（Ｔｈｅ ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ：ｐｏｗｅｒｉｎｇ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（８）：８１８－８３１．Ｄａｔａｓｅｔ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６）。ある特定の態様では、本明細書に開示される治療剤は、ＰＴＥＮ変異、特に、ＰＴＥＮ発現又は活性の低減をもたらす変異を有するがんを治療するのに有用である。

【0115】

ＢＲＡＦは、成長シグナル伝達に関与するセリン／トレオニン－タンパク質キナーゼＢ － Ｒａｆをコードする。米国がん学会の報告によると、ＢＲＡＦは胃がん患者の１．９１％、及び胃腺がん患者の１．９３％で変異している。具体的には、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異は、がん患者の２．７２％に存在する（Ｔｈｅ ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ：ｐｏｗｅｒｉｎｇ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（８）：８１８－８３１．Ｄａｔａｓｅｔ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６を参照されたい）。ある特定の態様では、本明細書に開示される治療剤は、ＢＲＡＦ変異、特に、ＢＲＡＦにおける発がん性変異を有するがんを治療するのに有用である。しかしながら、ある特定の態様では、本明細書に開示される治療剤は、ＢＲＡＦ変異Ｖ６００Ｅを有しない胃がんの治療に有用である。

【0116】

ＫＲＡＳ（Ｋｉｒｓｔｅｎ ＲＡｔ肉腫）は、ＲＡＳ／ＭＡＰＫ経路のパーティーであるタンパク質をコードする。米国がん学会の報告によると、ＫＲＡＳは、悪性固形腫瘍患者の２．２８％に存在するＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃを有する悪性固形腫瘍患者の１４．７％で変異している（Ｔｈｅ ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ：ｐｏｗｅｒｉｎｇ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（８）：８１８－８３１．Ｄａｔａｓｅｔ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．を参照されたい）。ある特定の態様では、本明細書に開示される治療剤は、ＫＲＡＳ変異、特に、ＫＲＡＳにおける発がん性変異を有するがんを治療するのに有用である。

【0117】

ＵＧＴ１Ａ１（ウリジンジホスファテグルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ１）及びＵＧＴ１Ａ８（ウリジンジホスファテグルクロノシルトランスフェラーゼ１Ａ８）は、グルクロニド化経路の酵素をコードする。酵素活性を低減させるいくつかの多型は、イリノテカンの代謝及び効果に影響を与えることが知られている。例えば、中国人、韓国人、及び日本人集団において約０．１３％の対立遺伝子頻度を有するＵＧＴ１Ａ１＊６対立遺伝子（Ｇ７１Ｒ多型）及びＵＧＴ１Ａ１＊２８対立遺伝子（プロモーター領域のＴＡＴＡ配列におけるジヌクレオチド反復多型）は、イリノテカン誘導性好中球減少症にとってのリスク因子である。ある特定の態様では、本明細書に開示される治療剤は、ＵＧＴ１Ａ１及び／又はＵＧＴ１Ａ８変異、特に、ＵＧＴ１Ａ１及び／又はＵＧＴ１Ａ８の発現又は活性の低減をもたらす変異を有するがんを治療するのに有用である。

【0118】

ＡＴＭ（Ａｔａｘｉａ Ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｉｓａ Ｍｕｔａｔｅｄ）は、セリントレオニンキナーゼファミリーのメンバーであり、異なるＤＮＡ修復経路及びシグナル伝達経路の活性化を介してＤＮＡ損傷に対する細胞応答を調整する。ＡＴＭ生殖細胞系列変異は、毛細血管拡張性運動失調症と関連しており、ＡＴＭ体細胞変異は、子宮内膜、結腸、膵臓、乳がん、及び尿路上皮がんで共通に観察される。

【0119】

ＡＯＳ５、ｈＮ１、ＡＯＶＤ１、及びＴＡＮ１としても知られているＮｏｔｃｈ１（ＮＯＴＣＨ１）は、複数の発生プロセス及び隣接細胞間の相互作用において機能する膜貫通タンパク質をコードする遺伝子である。膜貫通タンパク質はまた、膜結合リガンドの受容体としても機能する。融合、ミスセンス変異、ナンセンス変異、サイレント変異、フレームシフト欠失及び挿入、並びにフレーム内欠失及び挿入が、食道がん、造血及びリンパ系がん、並びに胃がんなどのがんにおいて観察される。ＮＯＴＣＨ１は、最も高い有病率の変化を有する結腸腺がん、肺腺がん、乳房浸潤性腺管がん、子宮内膜類内膜腺がん、及び皮膚扁平上皮がんを有する全てのがんの４．４８％で変化する。頭頸部扁平上皮がんでは、ＮＯＴＣＨ１は、患者の約１６％で変化する（Ｔｈｅ ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（８）：８１８－８３１）。

【0120】

ＨＲＡＳ（ＨＧＮＣ ＩＤ：５１７３）遺伝子産物は、Ｒａｓタンパク質シグナル伝達の活性化に関与する。Ｒａｓタンパク質は、ＧＤＰ／ＧＴＰに結合し、固有ＧＴＰａｓｅ活性を有する。ＨＲＡＳがん原遺伝子における体細胞変異は、膀胱がん、甲状腺、唾液腺導管がん、上皮－筋上皮がん、及び腎臓がんに関係付けられることが示されている（Ｃｈｉｏｓｅａ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ａｍ．Ｊ．ｏｆ Ｓｕｒｇ．Ｐａｔｈ．３９（６）：７４４－５２；Ｃｈｉｏｓｅａ ｅｔ ａｌ．，ｉｎ Ｈｅａｄ ａｎｄ Ｎｅｃｋ Ｐａｔｈ．２０１４．８（２）：１４６－５０）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療化合物は、ＨＲＡＳ変異、特に、ＨＲＡＳ変異Ｇ１２ＳなどのＨＲＡＳにおける発がん性変異を有するがんを治療するのに有用である。がんは、具体的には、口腔又は頬粘膜のＨＮＳＣＣである。

【0121】

ＭＡＰ２Ｋ１（ＨＧＮＣ ＩＤ：６８４０）は、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼの群に属する。それは、ＭＡＰキナーゼシグナル伝達において活性であり、タンパク質二重特異性マイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼ１をコードする。ＭＡＰキナーゼ経路の一部として、ＭＡＰ２Ｋ１は、細胞増殖、分化、及び転写調節を含む多くの細胞プロセスに関与する。ＭＡＰ２Ｋ１は、最も高い有病率の変化を有する皮膚黒色腫、肺腺がん、結腸腺がん、黒色腫、及び乳房浸潤性腺管がんを有する全てのがんの１．０５％で変化する（ＡＡＣＲ Ｐｒｏｊｅｃｔ ＧＥＮＩＥ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．２０１７；７（８）：８１８－８３１．Ｄａｔａｓｅｔ Ｖｅｒｓｉｏｎ８）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療化合物は、ＭＡＰ２Ｋ１変異、具体的には、ＭＡＰ２Ｋ１変異Ｌ３７５Ｒを有するがんを治療するのに有用である。

【0122】

ある特定の態様では、本開示は、ＴＰ５３、ＭＬＨ１、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＵＧＴ１Ａ、ＵＧＴ１Ａ８、ＢＲＡＦ、ＰＴＥＮ、及びＫＲＡＳをコードする遺伝子における変異を有するがんを治療するための方法を提供する。ある特定の態様では、がんは、ＴＰ５３ Ｒ１９６Ｔ、ＴＰ５３ Ｒ３４２Ｔ、ＴＰ５３ Ｒ２４８Ｑ、ＭＬＨ１ Ｖ３８４Ｄ、ＰＩＫ３ＣＡ Ｈ１０４７Ｒ、ＰＩＫ３ＣＡ Ｅ５４５Ｋ、ＣＤＫＮ２Ａ Ｗ１１０Ｔ、ＵＧＴ１Ａ１ Ｇ７１Ｒ、ＵＧＴ１Ａ８ Ｇ７１Ｒ、及びＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃから選択される１つ以上の変異を有する。ある特定の態様では、がんは、ＫＲＡＳについての野生型である。あるいは、本開示は、ＡＴＭをコードする遺伝子における変異、特に、変異Ｗ５７Ｔを有するがんを治療するための方法を提供する。具体的には、本開示は、ＡＴＭをコードする遺伝子における変異、特に、変異Ｗ５７Ｔを有する食道がん、特に、ＥＳＣＣを治療するための方法を提供する。

【0123】

ある特定の態様では、がんは、変異が、Ｒ３４２ＴであるなどのＴＰ５３をコードする遺伝子における変異を有し、がんは、変異が、Ｖ３８４ＤであるなどのＭＬＨ１をコードする遺伝子における変異を有する。ある特定の態様では、がんは、ＴＰ５３をコードする遺伝子における変異を有し、ある特定の態様では、変異は、Ｒ２４８Ｑである。ある特定の態様では、がんは、ＰＩＫ３ＣＡをコードする遺伝子における変異を有する。ある特定の態様では、変異は、Ｈ１０４７Ｒである。ある特定の態様では、がんは、ＣＤＫＮ２Ａをコードする遺伝子における変異を有し、ある特定の態様では、変異は、Ｗ１１０Ｔである。ある特定の態様では、がんは、ＵＧＴ１Ａ１をコードする遺伝子における変異を有し、ある特定の態様では、変異は、Ｇ７１Ｒであり、がんは、ＵＧＴ１Ａ８をコードする遺伝子における変異を有し、ある特定の態様では、変異は、Ｇ７１Ｒである。ある特定の態様では、がんは、食道がんである。ある特定の態様では、がんは、食道扁平上皮がん（ＥＳＣＣ）である。

【0124】

ある特定の態様では、がんは、ＢＲＡＦをコードする遺伝子における変異を有する。しかしながら、ある特定の態様では、がんは、ＢＲＡＦをコードする遺伝子における変異Ｖ６００Ｅを有せず、ある特定の態様では、ＰＴＥＮをコードする遺伝子における変異Ｒ１３０Ｔｅｒを有しない。ある特定の態様では、がんは、ＫＲＡＳをコードする遺伝子における変異を有し、ある特定の態様では、変異は、Ｇ１２Ｃであり、がんは、ＵＧＴ１Ａ１をコードする遺伝子における変異を有し、ある特定の態様では、変異は、Ｇ７１Ｒであり、がんはＵＧＴ１Ａ８をコードする遺伝子における変異を有し、ある特定の態様では、変異は、Ｇ７１Ｒである。ある特定の態様では、がんは、ＵＧＴ１Ａ１をコードする遺伝子における変異を有し、ある特定の態様では、変異は、Ｇ７１Ｒであり、がんは、ＵＧＴ１Ａ８をコードする遺伝子における変異を有し、ある特定の態様では、変異は、Ｇ７１Ｒである。ある特定の態様では、がんは、ＰＩＫ３ＣＡにおける変異を有し、ある特定の態様では、変異は、Ｅ５４５Ｋである。ある特定の態様では、がんは、胃がんである。

【0125】

いくつかの態様では、本明細書に開示される抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、多重特異性抗体である。ある特定の態様では、当該抗体は、二重特異性抗体である。当該多重特異性若しくは二重特性抗体、又はそれらの機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、ある特定の態様では、上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体の細胞外部分に結合する第１の可変ドメインと、ある特定の態様ではＥＧＦＲに結合しない第２の可変ドメインと、を含む。ある特定の態様では、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、ＥＧＦＲに一価で結合する。また、ある特定の態様では、当該多重特異性若しくは二重特異性抗体、又はそれらの機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、ＬＧＲ５に結合する第２の可変ドメインを含む。

【0126】

ある特定の態様では、ＥＧＦＲは、ヒトＥＧＦＲである。本開示の当該抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体によって結合されるＥＧＦＲは、野生型ＥＧＦＲ、及び発がん性ドライバ変異を有するＥＧＦＲを含む。ある特定の態様では、当該発がん性ドライバ変異は、活性化ＥＧＦＲ変異である。ある特定の態様では、かかる変異は、本開示の抗体によって結合されるエピトープを構造的に変化させない。ある特定の態様では、本開示のＥＧＦＲ変異は、Ｇ７１９Ａ、Ｇ７１９Ｃ、２Ｅ７０９＿Ｔ７１０Ｄ、Ｅ７０９Ａ、Ｇ７１９Ｓを含むエクソン１８変異；ＬＲＥＡ又はＶＡＩＫＥＬの欠失を含むエクソン１９欠失変異；エクソン１９点変異Ｇ７３５Ｓ、Ｐ７５３Ｌ、Ｌ７４７Ｓ、Ｄ７６１Ｙ；１～７アミノ酸のインフレームエクソン２０挿入変異、Ｖ７６５Ａ、Ｔ７８３Ａ、Ｖ７７４Ａ、Ｓ７８４Ｐ、Ｖ７６９Ｍ、Ｔ７９０Ｍを含むエクソン２０変異；Ｌ８５８Ｒ、Ｔ８５４Ａ、Ａ８７１Ｅ、Ｌ８６１Ａ、Ｌ８６１Ｃ、Ｌ８６１Ｓ、Ｖ８４３Ｉ、又はＰ８４８Ｌを含むエクソン２１変異などの変異を含む。本開示の抗体は、当該変異に近接して位置しないエピトープに結合する。特に、ＥＧＦＲ変異は、Ｓ４９２Ｒであり、これは、ＥＧＦＲへのセツキシマブの結合の喪失をもたらす。本開示の抗体は、セツキシマブによって認識されるエピトープとは異なるエピトープに結合する。

【0127】

いかなる理論にも拘束されないが、図２に示されるアミノ酸残基Ｉ４６２、Ｇ４６５、Ｋ４８９、Ｉ４９１、Ｎ４９３、及びＣ４９９は、本開示の抗体によるエピトープへの結合に関与していると考えられる。ある特定の態様では、結合への関与は、Ｉ４６２Ａ、Ｇ４６５Ａ、Ｋ４８９Ａ、Ｉ４９１Ａ、Ｎ４９３Ａ、及びＣ４９９Ａから選択されるアミノ酸残基置換のうちの１つ以上を有するＥＧＦＲへの可変ドメインの結合の低減を観察することによって決定される。

【0128】

一態様では、ヒトＥＧＦＲの細胞外部分上のエピトープに結合する可変ドメインは、図２に示される配列のアミノ酸残基４２０～４８０内に位置するエピトープに結合する可変ドメインである。ある特定の態様では、可変ドメインのＥＧＦＲへの結合は、ＥＧＦＲにおける以下のアミノ酸残基置換Ｉ４６２Ａ、Ｇ４６５Ａ、Ｋ４８９Ａ、Ｉ４９１Ａ、Ｎ４９３Ａ、及びＣ４９９Ａのうちの１つ以上によって低減される。ある特定の態様では、抗体のヒトＥＧＦＲへの結合は、ＥＧＦの受容体への結合を妨げる。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ上のエピトープは、立体構造エピトープである。一態様では、エピトープは、図２に示される配列のアミノ酸残基４２０～４８０内、又は図２に示される配列の４３０～４８０内に位置する。ある特定の態様では、当該エピトープは、図２に示される配列の４３８～４６９内に位置する。

【0129】

理論に拘束されるものではないが、エピトープの接触残基、すなわち、可変ドメインがヒトＥＧＦＲに接触する場所は、Ｉ４６２、Ｋ４８９、Ｉ４９１、及びＮ４９３である可能性が高いと考えられている。アミノ酸残基Ｇ４６５及びＣ４９９は、抗体のＥＧＦＲへの結合に間接的に関与している可能性が高い。

【0130】

ある特定の態様では、第２の可変ドメインは、ＬＧＲ５に結合する。ある特定の態様では、ＬＧＲ５は、ヒトＬＧＲ５である。本明細書に記載の多重特異性若しくは二重特異性抗体、又はそれらの機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、ヒト表皮成長因子（ＥＧＦ）受容体の細胞外部分に結合する可変ドメインと、ある特定の態様ではヒトＬＧＲ５に結合する可変ドメインと、を含む。

【0131】

ある特定の態様では、本明細書に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体の細胞外部分に結合し、ＥＧＦの受容体への結合を妨げる可変ドメインと、ＬＧＲ５に結合する可変ドメインと、を含み、抗体とＬＧＲ５発現細胞上のＬＧＲ５との相互作用は、ＬＧＲ５へのＲｓｐｏｎｄｉｎ（ＲＳＰＯ）の結合を遮断しない。抗体が、ＬＧＲ５へのＲｓｐｏｎｄｉｎの結合を遮断するか、又は遮断しないかを決定するための方法は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１７／０６９５２８に記載されている。

【0132】

本明細書において、タンパク質／遺伝子の受入番号又は代替の名称が与えられ、それらは、主に、標的として記載されたタンパク質の特定の更なる方法を提供するように与えられ、抗体によって結合された標的タンパク質の実際の配列は、例えば、いくつかのがんなどで生じるものなどのコード遺伝子における変異及び／又は選択的スプライシングのため、変化し得る。標的タンパク質は、エピトープがタンパク質内に存在し、かつエピトープが抗体にアクセス可能である限り、抗体によって結合される。

【0133】

ある特定の態様では、本明細書に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、ＥＧＦＲのリガンドのＥＧＦＲへの結合を妨げる。本明細書で使用される「結合を妨害する」という用語は、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体のＥＧＦＲへの結合が、ＥＧＦ受容体への結合についてリガンドと競合することを意味する。抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、リガンド結合を弱めてもよく、これがＥＧＦ受容体に既に結合している場合、リガンドを移動させてもよく、あるいはこれは、例えば、立体障害を介して、リガンドがＥＧＦ受容体に結合し得ることを少なくとも部分的に防止してもよい。

【0134】

ある特定の態様では、本明細書に開示されるＥＧＦＲ抗体は、ＢｘＰＣ３細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６８７）若しくはＢｘＰＣ３－ｌｕｃ２細胞（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ １２５０５８）のリガンド誘導性増殖、又はＡ４３１細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５５５）のリガンド誘導性細胞死として測定される、それぞれのＥＧＦＲリガンド誘導性シグナル伝達を阻害する。ＥＧＦＲは、いくつかのリガンドと結合し、かつ記載のＢｘＰＣ３細胞又はＢｘＰＣ３－ｌｕｃ２細胞の増殖を刺激し得る。ＥＧＦＲリガンドの存在下で、ＢｘＰＣ３又はＢｘＰＣ３－ｌｕｃ２細胞の増殖が刺激される。ＢｘＰＣ３細胞のＥＧＦＲリガンド誘導性増殖は、リガンドの不在下及び存在下にかかわらず、細胞の増殖を比較することによって測定され得る。ＢｘＰＣ３細胞又はＢｘＰＣ３－ｌｕｃ２細胞のＥＧＦＲリガンド誘導性増殖を測定するための好ましいＥＧＦＲリガンドは、ＥＧＦである。ある特定の態様では、リガンド誘導性増殖は、飽和量のリガンドを使用して測定される。ある特定の態様では、ＥＧＦは、１００ｎｇ／ｍｌの培地の量で使用される。ある特定の態様では、当該ＥＧＦは、ＥＧＦ Ｒ＆Ｄシステム、カタログ番号３９６－ＨＢ及び２３６－ＥＧである（ＷＯ２０１７／０６９６２８も参照されたく、これは、参照により本明細書に組み込まれる）。

【0135】

ある特定の態様では、本明細書に開示されるＥＧＦＲ抗体は、ＢｘＰＣ３細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６８７）又はＢｘＰＣ３－ｌｕｃ２細胞（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ １２５０５８）のＥＧＦＲリガンド誘導性増殖を阻害する。ＥＧＦＲは、いくつかのリガンドと結合し、かつ記載のＢｘＰＣ３細胞又はＢｘＰＣ３－ｌｕｃ２細胞の増殖を刺激し得る。リガンドの存在下で、ＢｘＰＣ３又はＢｘＰＣ３－ｌｕｃ２細胞の増殖が刺激される。ＢｘＰＣ３細胞のＥＧＦＲリガンド誘導性増殖は、リガンドの不在下及び存在下にかかわらず、細胞の増殖を比較することによって測定され得る。ある特定の態様では、ＢｘＰＣ３細胞又はＢｘＰＣ３－ｌｕｃ２細胞のＥＧＦＲリガンド誘導性増殖を測定するためのＥＧＦＲリガンドは、ＥＧＦである。ある特定の態様では、リガンド誘導性増殖は、飽和量のリガンドを使用して測定される。ある特定の態様では、ＥＧＦは、１００ｎｇ／ｍｌの培地の量で使用される。ある特定の態様では、ＥＧＦは、Ｒ＆ＤシステムのＥＧＦ、カタログ番号３９６－ＨＢ及び２３６－ＥＧである（ＷＯ２０１７／０６９６２８も参照されたく、これは、参照により本明細書に組み込まれる）。

【0136】

誤解を避けるために、本明細書で使用される細胞の増殖への言及は、細胞の数の変化を指す。増殖の阻害は、別様には得られたであろう細胞の数の低減を指す。増殖の増加は、別様には得られたであろう細胞の数の増加を指す。細胞の増殖（ｇｒｏｗｔｈ）は、通常は、細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を指す。

【0137】

ある特定の態様では、本明細書に記載される抗体が、多重特異性形式でのシグナル伝達を阻害するか、又は増殖を阻害するかどうかは、抗体の単一特異性一価又は単一特異性二価バージョンを使用して、本明細書で上記の方法によって決定される。ある特定の態様では、かかる抗体は、シグナル伝達が決定される受容体に対しての結合部位を有する。単一特異性一価抗体は、破傷風トキソイド特異性などの無関係な結合特異性を有する可変ドメインを有し得る。ある特定の態様では、当該抗体は、抗原結合可変ドメインが、ＥＧＦ受容体ファミリーメンバーに結合する可変ドメインからなる、二価単一特異性抗体である。

【0138】

そのＢｉｃｌｏｎｉｃｓ（登録商標）抗体プログラムにおいて、Ｍｅｒｕｓは、ＥＧＦＲ及びＬＧＲ５（Ｇタンパク質共役受容体を含有するロイシンリッチリピート）を標的とする多重特異性抗体が開発された。かかる多重特異性抗体の有効性は、患者由来のＣＲＣオルガノイド及びマウスＰＤＸモデルをそれぞれ使用して、インビトロ及びインビボで評価されている（例えば、ＷＯ２０１７／０６９６２８を参照されたく、これは参照により本明細書に組み込まれる）。ＥＧＦＲ及びＬＧＲ５を標的とする多重特異性抗体は、腫瘍増殖を阻害することが示された。かかる阻害性抗体の効力は、がん由来の細胞によるＬＧＲ５ ＲＮＡ発現のレベルと相関することが示された。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ及びＬＧＲ５を標的とする当該多重特異性抗体は、ＷＯ２０１７／０６９６２８に記載のものである。

【0139】

本明細書に記載の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体は、ＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む。ある特定の態様では、ＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインは、アミノ酸残基Ｄ４３、Ｇ４４、Ｍ４６、Ｆ６７、Ｒ９０、及びＦ９１が抗体のエピトープへの結合に関与する、図１の配列のアミノ酸残基２１～１１８内に位置するエピトープに結合する。

【0140】

ある特定の態様では、ＬＧＲ５可変ドメインは、Ｄ４３Ａ、Ｇ４４Ａ、Ｍ４６Ａ、Ｆ６７Ａ、Ｒ９０Ａ、及びＦ９１ＡのＬＧＲ５におけるアミノ酸残基置換のうちの１つ以上が、可変ドメインのＬＧＲ５への結合を低減させる可変ドメインである。

【0141】

ある特定の態様では、ＬＧＲ５の細胞外部分上のエピトープは、図１の配列のアミノ酸残基２１～１１８内に位置する。ある特定の態様では、それは、ＬＧＲ５可変ドメインのＬＧＲ５への結合が、ＬＧＲ５における以下のアミノ酸残基置換Ｄ４３Ａ、Ｇ４４Ａ、Ｍ４６Ａ、Ｆ６７Ａ、Ｒ９０Ａ、及びＦ９１Ａのうちの１つ以上によって低減されるエピトープである。

【0142】

本開示は、更に、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及びＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを有する抗体であって、ＬＧＲ５可変ドメインが、図１の配列のアミノ酸残基２１～１１８内に位置するＬＧＲ５上のエピトープに結合する、抗体を提供する。

【0143】

ある特定の態様では、ＬＧＲ５上のエピトープは、立体構造エピトープである。ある特定の態様では、エピトープは、図１の配列のアミノ酸残基４０～９５内に位置する。ある特定の態様では、ＬＧＲ５への抗体の結合は、以下のアミノ酸残基置換Ｄ４３Ａ、Ｇ４４Ａ、Ｍ４６Ａ、Ｆ６７Ａ、Ｒ９０Ａ、及びＦ９１Ａのうちの１つ以上で低減される。

【0144】

理論に拘束されるものではないが、図１に示されるＬＧＲ５のＭ４６、Ｆ６７、Ｒ９０、及びＦ９１は、本明細書において上で示される可変ドメイン、すなわち、ＬＧＲ５エピトープに結合する可変ドメインの抗原結合部位についての接触残基であると考えられる。アミノ酸残基置換Ｄ４３Ａ及びＧ４４Ａが抗体の結合を低減することは、これらが接触残基でもあることに起因し得るが、これらのアミノ酸残基置換が、他の接触残基のうちの１つ以上を有するＬＧＲ５の部分（すなわち、４６位、６７位、９０位又は９１位における）のコンフォメーションの（わずかな）修飾を誘導し、コンフォメーション変化が、抗体結合が低減されるようなものであることも可能性である。エピトープは、上述のアミノ酸置換によって特徴付けられる。抗体が同じエピトープに結合するかどうかは、様々な方法で決定され得る。例示的な方法では、ＣＨＯ細胞は、細胞膜上のＬＧＲ５、又は置換Ｍ４６Ａ、Ｆ６７Ａ、Ｒ９０Ａ、又はＦ９１Ａのうちの１つ以上を含む変異体などのアラニン置換変異体を発現する。試験抗体は、ＣＨＯ細胞と接触され、抗体の細胞への結合を比較される。試験抗体は、ＬＧＲ５に結合し、Ｍ４６Ａ、Ｆ６７Ａ、Ｒ９０Ａ、又はＦ９１Ａ置換を有するＬＧＲ５にはより小さい程度で結合する場合に、エピトープに結合する。１つのアラニン残基置換を各々含む変異体のパネルとの結合を比較することが好ましい。かかる結合試験は、当該技術分野で周知である。多くの場合、パネルは、実質的に全てのアミノ酸残基をカバーする単一アラニン置換変異体を含む。ＬＧＲ５の場合、パネルは、細胞が使用されるときには、もちろん、タンパク質の細胞外部分、及び細胞膜との関連性を保証する部分のみをカバーする必要がある。特定の変異体の発現は損なわれ得るが、これは異なる領域に結合する１つ以上のＬＧＲ５抗体によって容易に検出される。これらの対照抗体についても発現が低減される場合、膜上のタンパク質のレベル又はフォールディングは、この特定の変異体について損なわれる。パネルへの試験抗体の結合特性によって、試験抗体がＭ４６Ａ、Ｆ６７Ａ、Ｒ９０Ａ、又はＦ９１Ａ置換を有する変異体への結合の低減を示すかどうか、したがって、試験抗体が本発明の抗体であるかどうかが、容易に識別される。Ｍ４６Ａ、Ｆ６７Ａ、Ｒ９０Ａ、又はＦ９１Ａ置換を有する変異体への結合の低減によって、図１の配列のアミノ酸残基２１～１１８内に位置するエピトープも識別される。ある特定の態様では、パネルは、両方のＤ４３Ａ置換変異体、Ｇ４４Ａ置換変異体を含む。ＭＦ５８１６のＶＨのＶＨ配列を有する抗体は、これらの置換変異体への結合の低減を示す。

【0145】

いかなる理論にも拘束されないが、図２に示されるアミノ酸残基Ｉ４６２、Ｇ４６５、Ｋ４８９、Ｉ４９１、Ｎ４９３、及びＣ４９９は、本明細書において上で示される可変ドメインを含む抗体によるエピトープへの結合に関与していると考えられる。ある特定の態様では、結合への関与は、Ｉ４６２Ａ、Ｇ４６５Ａ、Ｋ４８９Ａ、Ｉ４９１Ａ、Ｎ４９３Ａ、及びＣ４９９Ａから選択されるアミノ酸残基置換のうちの１つ以上を有するＥＧＦＲへの可変ドメインの結合の低減を観察することによって決定される。例示的な方法では、ＣＨＯ細胞は、細胞膜上のＥＧＦＲ、又は置換Ｉ４６２Ａ、Ｇ４６５Ａ、Ｋ４８９Ａ、Ｉ４９１Ａ、Ｎ４９３Ａ、及びＣ４９９Ａのうちの１つ以上を含む変異体などのアラニン置換変異体を発現する。試験抗体は、ＣＨＯ細胞と接触され、抗体の細胞への結合を比較される。試験抗体は、ＥＧＦＲに結合し、Ｉ４６２Ａ、Ｇ４６５Ａ、Ｋ４８９Ａ、Ｉ４９１Ａ、Ｎ４９３Ａ、及びＣ４９９Ａ置換を有するＥＧＦＲにはより小さい程度で結合する場合に、エピトープに結合する。１つのアラニン残基置換を各々含む変異体のパネルとの結合を比較することが好ましい。かかる結合試験は、当該技術分野で周知である。多くの場合、パネルは、実質的に全てのアミノ酸残基をカバーする単一アラニン置換変異体を含む。ＥＧＦＲの場合、パネルは、細胞が使用される場合、もちろん、タンパク質の細胞外部分、及び細胞膜との関連性を保証する部分のみをカバーする必要がある。特定の変異体の発現は損なわれる可能性があるが、これは異なる領域に結合する１つ以上のＥＧＦＲ抗体によって容易に検出される。これらの対照抗体についても発現が低減される場合、膜上のタンパク質のレベル又はフォールディングは、この特定の変異体について損なわれる。パネルへの試験抗体の結合特性によって、試験抗体がＩ４６２Ａ、Ｇ４６５Ａ、Ｋ４８９Ａ、Ｉ４９１Ａ、Ｎ４９３Ａ、及びＣ４９９Ａ置換を有する変異体への結合の低減を示すかどうかが容易に特定される。

【0146】

一態様では、ヒトＥＧＦＲの細胞外部分上のエピトープに結合する可変ドメインは、図２に示される配列のアミノ酸残基４２０～４８０内に位置するエピトープに結合する可変ドメインである。ある特定の態様では、可変ドメインのＥＧＦＲへの結合は、ＥＧＦＲにおける以下のアミノ酸残基置換Ｉ４６２Ａ、Ｇ４６５Ａ、Ｋ４８９Ａ、Ｉ４９１Ａ、Ｎ４９３Ａ、及びＣ４９９Ａのうちの１つ以上によって低減される。ある特定の態様では、ヒトＥＧＦＲへの抗体の結合は、ＥＧＦの受容体への結合を妨げる。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ上のエピトープは、立体構造エピトープである。一態様では、エピトープは、図２に示される配列の４３０～４８０内など、図２に示される配列のアミノ酸残基４２０～４８０内に位置する。ある特定の態様では、当該エピトープは、図２に示される配列の４３８～４６９内に位置する。

【0147】

理論に拘束されるものではないが、エピトープの接触残基、すなわち、可変ドメインがヒトＥＧＦＲに接触する場所は、Ｉ４６２、Ｋ４８９、Ｉ４９１、及びＮ４９３である可能性が高いと考えられている。アミノ酸残基Ｇ４６５及びＣ４９９は、抗体のＥＧＦＲへの結合に間接的に関与している可能性が高い。

【0148】

ある特定の態様では、ヒトＥＧＦＲに結合する可変ドメインは、少なくとも図３に示されるＭＦ３７５５のＶＨのＣＤＲ３配列、又は図３に示されるＭＦ３７５５のＶＨのＣＤＲ３配列と、多くとも３つ、多くとも２つ、又は１つ以下のアミノ酸が異なるＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を有する可変ドメインである。

【0149】

ある特定の態様では、ヒトＥＧＦＲに結合する可変ドメインは、少なくとも図３に示されるＭＦ３７５５のＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、又は多くとも３つ、若しくは多くとも２つ、若しくは多くとも１つのアミノ酸置換を有する、図３に示されるＭＦ３７５５のＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を有する可変ドメインである。

【0150】

ある特定の態様では、ヒトＥＧＦＲに結合する可変ドメインは、図３に示されるＭＦ３７５５のＶＨ鎖の配列、又はＭＦ３７５５のＶＨ鎖に関して多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸挿入、欠失、置換、又はそれらの組み合わせを有する図３に示されるＭＦ３７５５のＶＨ鎖のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する可変ドメインである。

【0151】

ある特定の態様では、本開示は、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメインと、ＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインと、を含む抗体であって、
当該該可変ドメインの重鎖可変領域が、少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９からなる群から選択されるＥＧＦＲ特異的重鎖可変領域のＣＤＲ３配列を含むか、又は当該可変ドメインの重鎖可変領域が、図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９からなる群から選択されるＶＨのＣＤＲ３配列と、多くとも３つ、若しくは多くとも２つ、若しくは１つ以下のアミノ酸が異なる重鎖ＣＤＲ３配列を含む、抗体を提供する。ある特定の態様では、当該可変ドメインは、少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、又はＭＦ４２８９のＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0152】

ある特定の態様では、当該可変ドメインは、少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９からなる群から選択されるＥＧＦＲ特異的重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、又は少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９からなる群から選択されるＥＧＦＲ特異的重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列と、多くとも３つ、若しくは多くとも２つ、若しくは多くとも１つのアミノ酸が異なるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、を含む重鎖可変領域、を含む。ある特定の態様では、当該可変ドメインは、少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、又はＭＦ４２８９のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。ある特定の態様では、重鎖可変領域は、ＭＦ３７５５である。ある特定の態様では、重鎖可変領域は、ＭＦ４２８０である。

【0153】

ある特定の態様では、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメインと、ＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインと、を含む抗体であって、本明細書の上で示されるＣＤＲ３、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに／若しくはＶＨ配列を有するＥＧＦＲ結合可変ドメインが、少なくとも図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、若しくはＭＦ５８１８からなる群から選択されるＬＧＲ５特異的重鎖可変領域のＣＤＲ３配列、又は図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、若しくはＭＦ５８１８からなる群から選択されるＶＨのＣＤＲ３配列と、多くとも３つ、若しくは多くとも２つ、若しくは１つ以下のアミノ酸が異なる重鎖ＣＤＲ３配列、を含むＬＧＲ５に結合する可変ドメインを有する、抗体。ある特定の態様では、当該可変ドメインは、少なくとも図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、又はＭＦ５８１８のＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。

【0154】

ある特定の態様では、ＬＧＲ５可変ドメインは、少なくとも図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、若しくはＭＦ５８１８からなる群から選択されるＬＧＲ５特異的重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、又は図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、若しくはＭＦ５８１８からなる群から選択されるＬＧＲ５特異的重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列と、多くとも３つ、若しくは多くとも２つ、若しくは多くとも１つのアミノ酸が異なる重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、を含む重鎖可変領域を含む。ある特定の態様では、当該可変ドメインは、少なくとも図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、又はＭＦ５８１８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域を含む。ある特定の態様では、重鎖可変領域は、ＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、又はＭＦ５８１８である。ある特定の態様では、重鎖可変領域は、ＭＦ５７９０、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、及びＭＦ５８１８である。ある特定の態様では、重鎖可変領域は、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１８、又はＭＦ５８１６である。ある特定の態様では、重鎖可変領域は、ＭＦ５８１６である。ある特定の態様では、重鎖可変領域は、ＭＦ５８１８である。

【0155】

重鎖可変領域ＭＦ３７５５又はそれらの１つ以上のＣＤＲを有する１つ以上の可変ドメインを含む抗体は、ＥＧＦＲリガンド応答性がん又は細胞の増殖を阻害するために使用される場合、より良い有効性を有することが示されている。二重特異性抗体又は多重特異性抗体の文脈において、重鎖可変領域ＭＦ３７５５又はその１つ以上のＣＤＲを有する可変ドメインを含む抗体のアームは、重鎖可変領域ＭＦ５８１８又はその１つ以上のＣＤＲを有する可変ドメインを含むアームと良好に組み合わさる。

【0156】

ＥＧＦＲ又はＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、図３に示される配列に関して１つ以上のアミノ酸置換を有し得る。ある特定の態様では、ＶＨ鎖は、図３のＶＨ鎖配列に関して、多くとも１５個、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、及びある特定の態様では、１、２、３、４、若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、又はそれらの組み合わせを有する、図３のＥＧＦＲ又はＬＧＲ５ ＶＨのアミノ酸配列を有する。

【0157】

ＣＤＲ配列は、図のＣＤＲ配列に関して１つ以上のアミノ酸残基置換を有し得る。かかる１つ以上の置換は、例えば、抗体の結合強度又は安定性を改善するためなどの最適化目的のため作製される。最適化は、例えば、結果として生じる抗体の安定性及び／又は結合親和性が好ましく試験され、かつ改善されたＥＧＦＲ特異的ＣＤＲ配列又はＬＧＲ５特異的ＣＤＲ配列が好ましく選択された後に、変異誘発手順によって実行される。当業者は、本発明による少なくとも１つの改変されたＣＤＲ配列を含む抗体バリアントを生成することができる。例えば、保存的アミノ酸置換が適用され得る。保存的アミノ酸置換の例としては、１つの疎水性残基、例えば、イソロイシン、バリン、ロイシン、又はメチオニンを別の疎水性残基への置換、及び１つの極性残基の別の極性残基への置換、例えば、アルギニンのリジンへの置換、グルタミン酸のアスパラギン酸への置換、又はグルタミンのアスパラギンへの置換が挙げられる。

【0158】

ある特定の態様では、本明細書に指定されるＶＨ又はＶＬにおける言及される多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。ある特定の態様では、本明細書に指定されるＶＨ又はＶＬにおけるアミノ酸挿入、欠失、及び置換は、ＣＤＲ３領域に存在しない。ある特定の態様では、言及されるアミノ酸挿入、欠失、及び置換はまた、ＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域に存在しない。ある特定の態様では、言及されるアミノ酸挿入、欠失及び置換はまた、ＦＲ４領域に存在しない。

【0159】

ある特定の態様では、言及される多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。ある特定の態様では、挿入、欠失、置換、又はそれらの組み合わせは、ＶＨ鎖のＣＤＲ３領域に存在せず、ある特定の態様では、ＶＨ鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、又はＣＤＲ３領域に存在せず、ある特定の態様では、ＦＲ４領域に存在しない。

【0160】

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメインと、ある特定の態様ではＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインと、を含む抗体は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列、又は
－当該ＶＨに関して、多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列を含み、
ＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５７９０のアミノ酸配列、又は
－当該ＶＨに関して、多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５７９０のアミノ酸配列を含む。

【0161】

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメインと、ある特定の態様ではＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインと、を含む抗体は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列、又は
－当該ＶＨに関して、多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列を含み、
ＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８０３のアミノ酸配列、又は
－当該ＶＨに関して、多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８０３のアミノ酸配列を含む。

【0162】

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメインと、ある特定の態様ではＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインと、を含む抗体は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列、又は
－当該ＶＨに関して、多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列を含み、
ＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１４のアミノ酸配列、又は
－当該ＶＨに関して、多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１４のアミノ酸配列を含む。

【0163】

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメインと、ある特定の態様ではＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインと、を含む抗体は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列、又は
－当該ＶＨに関して、多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列を含み、
ＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１６のアミノ酸配列、又は
－当該ＶＨに関して、多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１６のアミノ酸配列を含む。

【0164】

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメインと、ある特定の態様ではＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインと、を含む抗体は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列、又は
－当該ＶＨに関して、多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列を含み、
ＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１７のアミノ酸配列、又は
－当該ＶＨに関して、多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１７のアミノ酸配列を含む。

【0165】

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメインと、ある特定の態様ではＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインと、を含む抗体は、
－図３に示すＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列、又は
－当該ＶＨに関して、多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ３７５５のアミノ酸配列を含み、
ＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ鎖は、
－図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１８のアミノ酸配列、又は
－当該ＶＨに関して、多くとも１５個（又はある特定の態様では１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又はある特定の態様では１、２、３、４、若しくは５個）のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する、図３に示されるＶＨ鎖ＭＦ５８１８のアミノ酸配列を含む。

【0166】

ＥＧＦＲ又はＬＧＲ５結合を保持する開示されたアミノ酸配列の付加のバリアントは、例えば、再配列されたヒトＩＧＫＶｌ－３９／ＩＧＫＪｌ ＶＬ領域（Ｄｅ Ｋｒｕｉｆ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．２０１０（１０６）７４１－５０）を含有するファージディスプレイライブラリ、及び以前に記載されているように（例えば、ＷＯ２０１７／０６９６２８）、本明細書に開示されるＥＧＦＲ又はＬＧＲ５ ＶＨ領域のアミノ酸配列にアミノ酸置換を組み込んだＶＨ領域の収集から得ることができる。ＥＧＦＲ又はＬＧＲ５に結合するＦａｂ領域をコードするファージを選択し、フローサイトメトリーによって分析し、抗原結合を保持するアミノ酸置換、挿入、欠失又は付加を有するバリアントを識別するように配列決定することができる。

【0167】

ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ／ＶＬ ＥＧＦＲ及びＬＧＲ５可変ドメインの軽鎖可変領域は、同じであっても異なっていてもよい。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ／ＶＬ ＥＧＦＲ可変ドメインのＶＬ領域は、ＶＨ／ＶＬ ＬＧＲ５可変ドメインのＶＬ領域と同様である。ある特定の態様では、第１及び第２のＶＨ／ＶＬ可変ドメインにおけるＶＬ領域は、同一である。

【0168】

ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の軽鎖可変領域は、共通の軽鎖可変領域を含む。ある特定の態様では、ＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の共通の軽鎖可変領域は、生殖系列ＩｇＶκ１－３９可変領域Ｖセグメントを含む。ある特定の態様では、ＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の軽鎖可変領域は、カッパ軽鎖ＶセグメントＩｇＶκ１－３９＊０１を含む。ＩｇＶκ１－３９は、免疫グロブリン可変カッパ１－３９遺伝子の略である。この遺伝子は、免疫グロブリンカッパ可変１－３９、ＩＧＫＶ１３９、ＩＧＫＶ１－３９としても知られている。この遺伝子についての外部Ｉｄは、ＨＧＮＣ：５７４０、Ｅｎｔｒｅｚ Ｇｅｎｅ：２８９３０、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００２４２３７１である。好適なＶ領域についてのアミノ酸配列が、図４に提供される。Ｖ領域は、５つのＪ領域のうちの１つと組み合わせることができる。ある特定の態様では、Ｊ領域は、ｊｋ１及びｊｋ５であり、連結された配列は、ＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ１及びＩＧＫＶ１－３９／ｊｋ５と示され、代替的な名称は、ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ５＊０１（ｉｍｇｔ．ｏｒｇでのＩＭＧＴデータベースワールドワイドウェブによる命名）である。ある特定の態様では、ＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の軽鎖可変領域は、カッパ軽鎖ＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０１又はＩｇＶκ１－３９＊０１／ＩＧＪκ１＊０５（図４に記載）を含む。

【0169】

ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体のＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＱＳＩＳＳＹを含むＬＣＤＲ１（図４に記載）と、アミノ酸配列ＡＡＳを含むＬＣＤＲ２（図４に記載）と、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰを含むＬＣＤＲ３（図４に記載）と（すなわち、ＩＭＧＴによるＩＧＫＶ１－３９のＣＤＲ）、を含む。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＱＳＩＳＳＹを含むＬＣＤＲ１（図４に記載）と、アミノ酸配列ＡＡＳＳＬＱＳを含むＬＣＤＲ２（図４に記載）と、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰを含むＬＣＤＲ３（図４に記載）と、を含む。

【0170】

ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体のＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＱＳＩＳＳＹを含むＬＣＤＲ１（図４に記載）と、アミノ酸配列ＡＡＳを含むＬＣＤＲ２（図４に記載）と、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＰＴを含むＬＣＤＲ３（図４に記載）と（すなわち、ＩＭＧＴによるＩＧＫＶ１－３９のＣＤＲ）、を含む。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の軽鎖可変領域は、アミノ酸配列ＱＳＩＳＳＹを含むＬＣＤＲ１（図４に記載）と、アミノ酸配列ＡＡＳＳＬＱＳを含むＬＣＤＲ２（図４に記載）と、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＰＴを含むＬＣＤＲ３（図４に記載）と、を含む。当該ＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従う。

【0171】

ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの一方又両方は、図４に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、ある特定の態様では少なくとも９５％、ある特定の態様では少なくとも９７％、ある特定の態様では少なくとも９８％、ある特定の態様では少なくとも９９％同一、又はある特定の態様では１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの一方又両方は、図４に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、ある特定の態様では少なくとも９５％、ある特定の態様では少なくとも９７％、ある特定の態様では少なくとも９８％、ある特定の態様では少なくとも９９％同一、又はある特定の態様では１００％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0172】

例えば、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の可変軽鎖は、図４の配列に関して、０～１０個、ある特定の態様では０～５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加又はそれらの組み合わせを有し得る。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の軽鎖可変領域は、示されるアミノ酸配列に関して、０～９個、０～８個、０～７個、０～６個、０～５個、０～４個、ある特定の態様では０～３個、ある特定の態様では０～２個、ある特定の態様では０～１個、及びある特定の態様では０個のアミノ酸挿入、欠失、置換、付加、又はそれらの組み合わせを含む。

【0173】

また、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの一方又は両方の軽鎖可変領域は、図４に示される配列のアミノ酸配列を含み得る。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体のＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの両方は、同一のＶＬ領域を含む。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体のＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの両方のＶＬは、図４に記載されるアミノ酸配列を含む。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体のＶＨ可変ドメイン／ＶＬ可変ドメインの両方のＶＬは、図４に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0174】

ある特定の態様では、本明細書に記載されるＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体は、ＥＧＦＲに結合する１つ、及び本明細書に記載されるＬＧＲ５に結合する別のドメインである、２つの可変ドメインを有する二重特異性抗体である。本明細書に開示される方法に使用するためのＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体は、いくつかのフォーマットで提供され得る。多くの異なる形式の二重特異性抗体が、当該技術分野で既知であり、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ（Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ，２０１５ Ｊｕｌ；２０（７）：８３８－４７、ＭＡｂｓ，２０１２ Ｍａｒ－Ａｐｒ；４（２）：１８２－９７）により、及びＳｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，（Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｏｒｍａｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１５）ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｍｏｌｉｍｍ．２０１５．０１．００３）においてレビューされており、これらは各々、参照により本明細書に組み込まれる。例えば、２つのＶＨ／ＶＬの組み合わせを有する古典的な抗体ではない二重特異性抗体フォーマットは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む少なくとも可変ドメインを有する。この可変ドメインは、単鎖Ｆｖ断片、単一体、ＶＨ及び第２の結合活性を提供するＦａｂ断片に連結されてもよい。

【0175】

ある特定の態様では、本明細書に提供される方法において使用されるＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体は、概して、ヒトＩｇＧサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）のものである。ある特定の態様では、抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。全長ＩｇＧ抗体は、それらの好ましい半減期のため、かつ免疫原性が低い理由で、好ましい。したがって、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体は、ある特定の態様では、全長ＩｇＧ分子である。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体は、全長ＩｇＧ１分子である。

【0176】

したがって、ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体は、結晶化可能な断片（Ｆｃ）を含む。ある特定の態様では、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体のＦｃは、ヒト定常領域からなる。ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体の定常領域又はＦｃは、天然に存在するヒト抗体の定常領域と１つ以上、又は１０個以下、又は５つ以下のアミノ酸の差異を含有し得る。例えば、二重特異性抗体の各Ｆａｂアームは、二重特異性抗体の形成を促進し、安定性及び／又は本明細書に記載される他の特徴を促進する修飾を含むＦｃ領域を更に含み得る。

【0177】

抗体は、典型的には、その抗体をコードする核酸を発現する細胞によって産生される。したがって、ある特定の態様では、本明細書に開示される二重特異性ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体は、二重特異性ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５抗体の重鎖及び軽鎖可変領域並びに定常領域をコードする１つ以上の核酸を含む細胞を提供することによって産生される。ある特定の態様では、細胞は、哺乳動物細胞、又は霊長類細胞などの動物細胞であり、ある特定の態様では、ヒト細胞である。好適な細胞は、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体を含むことができ、好ましくは、それを産生することができる任意の細胞である。

【0178】

抗体産生に好適な細胞は、当該技術分野で既知であり、ハイブリドーマ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０細胞又はＰＥＲ－Ｃ６細胞を含む。様々な機関及び企業が、例えば、臨床使用のための抗体の大規模な産生のための細胞株を開発している。かかる細胞株の非限定的な例は、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞又はＰＥＲ．Ｃ６細胞である。特に、当該細胞は、ヒト細胞である。好ましくは、細胞は、アデノウイルスＥ１領域又はその機能的等価物によって形質転換される。かかる細胞株の好ましい例は、ＰＥＲ．Ｃ６細胞株又はその等価物である。特に、当該細胞は、ＣＨＯ細胞又はそのバリアントである。好ましくは、バリアントは、抗体の発現のためにグルタミン合成酵素（ＧＳ）ベクター系を使用する。ある特定の態様では、細胞は、ＣＨＯ細胞である。

【0179】

ある特定の態様では、細胞は、ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体を構成する異なる軽鎖及び重鎖を発現する。ある特定の態様では、細胞は、２つの異なる重鎖及び少なくとも１つの軽鎖を発現する。ある特定の態様では、細胞は、異なる抗体種の数（異なる重鎖及び軽鎖の組み合わせ）を低減させるために、本明細書に記載の「共通軽鎖」を発現する。例えば、それぞれのＶＨ領域は、再編成されたヒトＩＧＫＶ１ ３９／ＩＧＫＪ１（ｈｕＶκ１ ３９）軽鎖と併せて、二重特異性ＩｇＧの産生のための当該技術分野で既知の方法（ＷＯ２０１３／１５７９５４、参照により本明細書に組み込まれる）を使用して発現ベクターにクローニングされ、以前に、２つ以上の重鎖と対合し、それによって、多様な特異性を有する抗体をもたらすことができ、これによって、二重特異性分子の産生が促進されることが示されている（Ｄｅ Ｋｒｕｉｆ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００９（３８７）５４８ ５８；ＷＯ２００９／１５７７７１）。

【0180】

共通の軽鎖及び等量の２つの重鎖を発現する抗体産生細胞は、典型的には、５０％の二重特異性抗体及び２５％の単一特異性抗体（すなわち、同一の重鎖の組み合わせを有する）の各々を産生する。それぞれの単一特異性抗体の産生よりも二重特異性抗体の産生を有利にするために、いくつかの方法が発表されている。このようなことは、典型的には、重鎖の定常領域を、それらがホモ二量体化よりもヘテロ二量体化（すなわち、他の重鎖／軽鎖の組み合わせの重鎖との二量体化）を有利にするように修飾することによって達成される。ある特定の態様では、本発明の二重特異性抗体は、適合性ヘテロ二量体化ドメインを有する２つの異なる免疫グロブリン重鎖を含む。様々な適合性ヘテロ二量体化ドメインが、当該技術分野で記載されている。ある特定の態様では、適合性ヘテロ二量体化ドメインは、適合性免疫グロブリン重鎖ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメインである。当該技術分野では、かかる重鎖のヘテロ二量体化を達成することができる様々な方法が記載されている。

【0181】

ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体を産生するための好ましい一方法が、ＵＳ９，２４８，１８１及びＵＳ９，３５８，２８６号に開示されている。具体的には、本質的に二重特異性全長ＩｇＧ分子のみを産生する好ましい変異は、第１のＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸置換Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＥＵ番号付け）（「ＫＫバリアント」重鎖）並びに第２のドメインにおけるアミノ酸置換Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ（「ＤＥバリアント」重鎖）、又はその逆である。前述のように、ＤＥバリアント及びＫＫバリアントは、優先的に対合して、ヘテロ二量体（いわゆる「ＤＥＫＫ」二重特異性分子）を形成する。ＤＥバリアント重鎖（ＤＥＤＥホモ二量体）又はＫＫバリアント重鎖（ＫＫＫＫホモ二量体）のホモ二量体化は、同一の重鎖間のＣＨ３－ＣＨ３界面における荷電残基間の強い反発に起因してほとんど生じない。

【0182】

したがって、ある特定の態様では、ＥＧＦＲに結合する可変ドメインを含む重鎖／軽鎖の組み合わせは、重鎖のＤＥバリアントを含む。ある特定の態様では、ＬＧＲ５に結合する可変ドメインを含む重鎖／軽鎖の組み合わせは、重鎖のＫＫバリアントを含む。

【0183】

候補のＥＧＦＲ／ＬＧＲ５ ＩｇＧ二重特異性抗体は、任意の好適なアッセイを使用して結合することについて試験することができる。例えば、ＣＨＯ細胞上の膜発現ＥＧＦＲ又はＬＧＲ５への結合は、フローサイトメトリーによって（ＷＯ２０１７／０６９６２８に以前に記載されているＦＡＣＳ手順によって）評価することができる。ある特定の態様では、ＣＨＯ細胞上のＬＧＲ５への候補のＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体の結合は、当該技術分野で既知の標準的な手順に従って実行されるフローサイトメトリーによって示される。ＣＨＯ細胞への結合は、ＥＧＦＲ及び／又はＬＧＲ５の発現カセットでトランスフェクトされていないＣＨＯ細胞と比較される。候補の二重特異性ＩｇＧ１のＥＧＦＲへの結合は、ＥＧＦＲ発現構築物でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞を使用して決定され、ＬＧＲ５単一特異性抗体及びＥＧＦＲ単一特異性抗体、並びに無関係なＩｇＧ１アイソタイプ対照ｍＡｂは、対照（例えば、ＬＧＲ５、及び破傷風毒素（ＴＴ）などの別の抗原に結合する抗体）としてアッセイに含まれる。

【0184】

標的に対する候補のＥＧＦＲ／ＬＧＲ５二重特異性抗体のＬＧＲ５及びＥＧＦＲ Ｆａｂの親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ１００を使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって測定され得る。簡単に述べると、抗ヒトＩｇＧマウスモノクローナル抗体（Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、カタログ番号５５５７８４）を、遊離アミン化学（ＮＨＳ／ＥＤＣ）を使用してＣＭ５センサーチップの表面上に結合させる。次に、ｂｓＡｂが、センサー表面上に捕捉される。続いて、組換え精製抗原ヒトＥＧＦＲ（ Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ、カタログ番号１１８９６－Ｈ０７Ｈ ）及びヒトＬＧＲ５タンパク質を、ある濃度範囲でセンサー表面上を走らせて、オン速度及びオフ速度を測定する。各サイクルの後、センサー表面はＨＣｌのパルスによって再生され、ｂｓＡｂは再び捕捉される。得られたセンサーグラムから、ヒトＬＧＲ５及びＥＧＦＲへの結合にためのオン速度及びオフ速度並びに親和性値が、ＵＳ２０１６／０３６８９８８においてＣＤ３について以前に記載されたＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して、決定される。

【0185】

本明細書に開示される抗体は、典型的には、ヒトＩｇＧサブクラスのある特定の態様では、二重特異性全長抗体である。ある特定の態様では、当該抗体は、ヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。かかる抗体は、所望に応じて、当該技術分野で既知の技法によって増強することができ、ヒトへのインビボ投与時に好ましい半減期を有し、クローン細胞での共発現時にホモ二量体よりも優先的にヘテロ二量体を形成する修飾された重鎖を提供することができるＣＨ３工学的技術が存在する、優れたＡＤＣＣ特性を有する。

【0186】

抗体のＡＤＣＣ活性は、抗体の定常領域を修飾することにより、抗体自体が低いＡＤＣＣ活性を有する場合に、改善され得る。抗体のＡＤＣＣ活性を改善する別の方法は、還元されたフコースをもたらすグリコシル化経路と酵素的に干渉することによるものである。ＡＤＣＣを誘発する際に抗体又はエフェクター細胞の有効性を決定するためのいくつかのインビトロ方法が存在する。それらの中には、クロム－５１［Ｃｒ５１］リリースアッセイ、ユウロピウム［Ｅｕ］リリースアッセイ、及び硫黄－３５［Ｓ３５］リリースアッセイが含まれる。通常、ある特定の表面が曝露された抗原を発現する標識標的細胞株は、その抗原に特異的な抗体とともにインキュベートされる。洗浄後、Ｆｃ受容体ＣＤ１６を発現するエフェクター細胞を、抗体標識標的細胞と共インキュベートする。続いて、標的細胞溶解を、シンチレーションカウンター又は分光光度法による細胞内標識のリリースによって測定する。

【0187】

本明細書で開示される二重特異性抗体は、ＡＤＣＣ増強型であり得る。ある特定の態様では、かかる二重特異性抗体は、アフコシル化されている。ある特定の態様では、二重特異性抗体は、正常なＣＨＯ細胞において産生される同じ抗体と比較した場合、Ｆｃ領域におけるＮ連結炭水化物構造のフコシル化の量の低減を含む。低フコースレベルは、ＮＫエフェクター細胞上のＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩａ）結合の増加と関連し、ＡＤＣＣ活性の増加をもたらす。ある特定の態様では、その直接的な抗腫瘍活性に加えて、本開示の二重特異性抗体は、オプソニン化並びに続くナチュラルキラー（ＮＫ）細胞媒介性ＡＤＣＣ活性及び補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）活性に続いて、腫瘍細胞を除去することができる。

【0188】

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメインと、ＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインと、を含む抗体は、１つ以上の更なる標的に結合し得る１つ以上の追加の可変ドメインを更に含み得る。ある特定の態様では、更なる標的は、細胞外部分を含む膜タンパク質などのタンパク質である。本明細書で使用される膜タンパク質は、細胞の外膜にあるタンパク質などの細胞膜タンパク質であり、細胞を外界から分離する膜である。膜タンパク質は、細胞外部分を有する。膜タンパク質は、細胞の細胞膜内にある膜貫通領域を含有する場合に、少なくとも細胞上にある。

【0189】

２つ以上の可変ドメインを有する抗体は、当該技術分野で既知である。例えば、追加の可変ドメインを結合することが可能である。ある特定の態様では、３つ以上の可変ドメインを有する抗体は、ＰＣＴ／ＮＬ２０１９／０５０１９９に記載される多価多量体抗体であり、これは、参照により本明細書に組み込まれる。

【0190】

ある特定の態様では、抗体は、２つの可変ドメインを含む二重特異性抗体であり、一方の可変ドメインは、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合し、別方の可変ドメインは、ＬＧＲ５の細胞外部分に結合する。ある特定の態様では、可変ドメインは、本明細書に記載の可変ドメインである。

【0191】

本明細書に記載される抗体の機能部分は、少なくとも、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメイン、及び本明細書に記載されるＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインを含む。したがって、それは、本明細書に記載される抗体の抗原結合部分を含み、典型的には、抗体の可変ドメインを含有する。機能部分の可変ドメインは、単鎖Ｆｖ断片又はいわゆるシングルドメイン抗体断片であり得る。ある特定の態様では、抗体部分又は誘導体は、抗体又はその等価物の少なくとも２つの可変ドメインを有する。かかる可変ドメイン又はその等価物の非限定的な例は、Ｆ（ａｂ）断片及び単鎖Ｆｖ断片である。二重特異性抗体の機能部分は、二重特異性抗体の抗原結合部分、又は結合部分の誘導体及び／若しくは類似体を含む。本明細書で上述されるように、抗体の結合部分は、可変ドメインに包含される。

【0192】

また、本明細書に開示される抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体（すなわち、治療剤）並びに薬学的に許容される担体も提供される。かかる医薬組成物は、がんの治療において、特に、胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療のために有用である。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、政府の規制機関によって承認されたか、又は米国薬局方若しくは動物、特にヒトでの使用のための別の一般に認められた薬局方に記載されたものを意味し、生理学的に適合する任意の及び全ての溶媒、塩、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。「担体」という用語は、化合物が投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを指す。かかる薬学的担体は、石油、動物、植物又は合成由来のもの、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油、リシノール酸グリセロールポリエチレングリコールリなどを含む、水及び油などの滅菌液体であり得る。水又は生理食塩水及びデキストロース水溶液及びグリセロール水溶液は、特に、注射可能な溶液のために担体として用いられてもよい。非経口投与用の液体組成物は、注射又は連続注入による投与のために製剤化され得る。注射又は注入による投与経路としては、膀胱内、腫瘍内、静脈内、腹腔内、筋肉内、くも膜下腔内、及び皮下が挙げられる。投与経路（例えば、静脈内、皮下、関節内など）に応じて、活性化合物をある材料でコーティングして、化合物を不活性化し得る酸の作用及び他の天然条件から化合物を保護してもよい。

【0193】

ヒト患者への投与に好適な医薬組成物は、典型的には、非経口投与のために、例えば、液体担体中に、又は静脈内投与のための溶液若しくは懸濁液への再構成に好適に製剤化される。組成物は、投与の容易さ及び投薬量の均一性のために、投薬単位形態で製剤化され得る。また、使用直前に、経口又は非経口投与のいずれかのための液体調製物への変換が意図された固体調製物も含まれる。かかる液体形態としては、溶液、懸濁液、及びエマルションが挙げられる。

【0194】

開示される治療剤は、好適な投薬量、及び好適な経路（例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、くも膜下腔内、又は皮下）に従って投与され得る。例えば、単一のボーラスが投与されてもよく、いくつかの分割された用量が経時的に投与されてもよく、又は用量が治療状況の緊急性によって示されるように比例的に低減又は増加されてもよい。ある特定の態様では、対象に、本明細書に開示される抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体の単回用量が投与される。ある特定の態様では、治療剤は、治療の経過にわたって繰り返し投与される。例えば、ある特定の実施形態では、複数回（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回以上）の用量の治療剤が、治療を必要とする対象に投与される。いくつかの実施形態では、治療剤の投与は、毎週、隔週、又は毎月行われ得る。

【0195】

臨床医は、治療されている患者の状態によって妥当とみなされる好ましい用量を利用してもよい。用量は、疾患の病期などを含むいくつかの因子に依存し得る。かかる因子のうちの１つ以上の存在に基づいて投与されるべき特定の用量を決定することは、当業者の技能の範囲内である。一般に、治療は、化合物の最適用量よりも少ないより小さな用量で開始される。その後、この状況下で最適な効果に達するまで、投薬量は、少量ずつ増加される。便宜上、１日当たりの総投薬量は、必要に応じて、１日中に分割して投与されてもよい。間欠療法（例えば、３週間のうちの１週間又は４週間のうちの３週間）がまた、使用されてもよい。

【0196】

ある特定の態様では、治療剤は、０．１、０．３、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。あるいは、治療剤は、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。

【0197】

ある特定の態様では、治療剤は、１５００ｍｇの均一な投薬量を使用して対象に提供される。均一な投薬量は、準備時間を低減し、潜在的な用量計算ミスを低減するため、体表面又は体重投与に対していくつかの利点を提供する。ある特定の態様では、治療剤は、少なくとも５００ｍｇの投薬量で提供される。ある特定の態様では、当該投薬量は、１１００～２０００ｍｇである。ある特定の態様では、当該投薬量は、１１００～１８００ｍｇである。当業者に理解されるように、投薬量は、経時的に投与され得る。例えば、投薬量は、ＩＶによって、例えば、１～６時間の注入、好ましくは、２～４時間の注入で投与され得る。ある特定の態様では、治療剤は、２週間に１回投与される。特に、本明細書に開示される均一投薬量は、成人及び／又は少なくとも３５ｋｇの体重の対象における使用に好適である。ある特定の態様では、対象は、胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんに罹患している。

【0198】

ある特定の態様では、前投薬レジメンが使用され得る。かかるレジメンは、注入関連反応の可能性又は重症度を低減させるのに有用であり得る。一般に、デクスクロルフェニラミン、ジフェンヒドラミン、又はクロルフェニラミンなどのデキサメタゾン及び／又は抗ヒスタミン剤などのステロイドは、抗体治療の前に（例えば、経口、静脈内）投与される。

【0199】

本明細書に記載の治療方法は、典型的には、患者のケアを監督する臨床医が、治療方法が有効である、すなわち、患者が治療に反応しているとみなす限り、継続される。治療方法が有効であることを示す非限定的なパラメータには、腫瘍細胞の減少、腫瘍細胞増殖の阻害、腫瘍細胞の排除、無増悪生存期間、好適な腫瘍マーカーによる適切な応答（該当する場合）のうちの１つ以上が含まれてもよい。

【0200】

治療剤の投与頻度に関して、当業者であれば、適切な頻度を決定することができるであろう。例えば、臨床医は、治療剤を比較的少ない頻度で（例えば、２週間に１回）投与することを決定し、患者によって許容される用量間の期間を徐々に短縮することができる。特許請求の範囲に記載の方法による療法の経過に関連する例示的な期間の例としては、約１週間、２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、約２４週間、約７か月、約８か月、約９か月、約１０か月、約１１か月、約１２か月、約１３か月、約１４か月、約１５か月、約１６か月、約１７か月、約１８か月、約１９か月、約２０か月、約２１か月、約２２か月、約２３か月、約２４か月、約３０か月、約３年、約４年、約５年、永続的（例えば、維持療法を継続する）が挙げられる。前述の持続時間は、治療の１つ以上のラウンド／サイクルに関連付けられてもよい。

【0201】

本明細書で提供される治療方法の有効性は、任意の好適な手段を使用して評価され得る。ある特定の態様では、治療の臨床的有効性は、客観的応答基準としてがん細胞数の低減を使用して分析される。本明細書に開示される方法に従って治療される患者、例えば、ヒトは、好ましくは、がんの少なくとも１つの兆候における改善を経験する。ある特定の態様では、以下、がん細胞数を低減させることができること、がんの再発を予防又は遅延させること、がんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度緩和することができることのうちの１つ以上が生じ得る。加えて、Ｔ細胞媒介性標的細胞溶解を決定するためのインビトロアッセイ。ある特定の態様では、腫瘍評価は、ＣＴスキャン及び／又はＭＲＩスキャンに基づいており、例えば、ＲＥＣＩＳＴ１．１ガイドライン（固形腫瘍における応答評価基準）（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００９ Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ４５：２２８－２４７）を参照されたい。かかる評価は、一般に、処置後４～８週間毎に行われる。

【0202】

ある特定の態様では、腫瘍細胞は、本明細書に記載の治療後にはもはや検出可能ではない。ある特定の態様では、対象は、部分寛解又は完全寛解にある。ある特定の態様では、対象は、全生存期間、生存期間中央値、及び／又は無増悪生存の増加を有する。

【0203】

治療剤（すなわち、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する可変ドメインと、ＬＧＲ５の細胞外部分に結合する可変ドメインと、を含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体）はまた、治療されているがんに対するそれらの特定の有用性のために選択される他の周知の療法（例えば、化学療法又は放射線療法）と併せて使用され得る。

【0204】

化学療法剤の安全かつ効果的な投与のための方法は、当業者に既知である。加えて、それらの投与は、標準的な文献に記載されている。例えば、多くの化学療法剤の投与は、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）、例えば、１９９６年版（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．０７６４５－１７４２，ＵＳＡ）に記載されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0205】

化学療法剤及び／又は放射線療法の投与が、治療されている疾患、及びその疾患に対する化学療法剤及び／又は放射線療法の既知の効果に応じて、変化し得ることが、当業者には明らかであろう。また、当業者の知識に従って、治療プロトコル（例えば、投与量及び投与時間）は、患者に対する投与された治療剤の観察された効果を考慮して、及び投与された治療剤に対する疾患の観察された応答を考慮して変えられ得る。

【0206】

本明細書に開示される化合物及び組成物は、療法として、及び治療処置において有用であり、したがって、薬剤として有用であり、薬剤の調製方法で使用され得る。

【0207】

本明細書に記載されるＧｅｎｂａｎｋエントリ、特許及び公開された特許出願、並びにウェブサイトを含む全ての文書及び参照文献は、各々、あたかも本明細書に全部又は一部が記載されたような同じ範囲で参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

【0208】

明確かつ簡潔な説明の目的のために、特徴は、本開示の同じ又は別個の部分の一部分として本明細書に記載されるが、本発明の範囲は、記載される特徴の全て又はいくつかの組み合わせを有する好ましい態様を含み得ることが理解されるであろう。

【0209】

ここで、本発明は、以下の実施例を参照して説明され、これらは例示に過ぎず、本発明を限定することを意図するものではない。本発明は、詳細に、その特定の態様を参照して説明されているが、その趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更及び修正を行うことができることが当業者には明らかであろう。

【0210】

条項のリスト
１．対象におけるがんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、当該対象におけるがんが、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行し、がんが、ＥＧＦＲを発現する、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
２．対象におけるがんを治療するための薬剤の製造における、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体の使用であって、当該対象におけるがんが、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行し、がんが、ＥＧＦＲを発現する、使用。
３．ＥＧＦＲを発現するがんを有する対象を治療する方法であって、当該対象が、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行しており、方法が、対象に、有効量の、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む、方法。
４．がんが、頭頸部がん、好ましくは、頭頸部の扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）であり、当該がんが、好ましくは、２＋又は３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
５．がんが、３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲ発現を有する胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんである、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
６．がんが、２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲ発現を有する胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんである、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
７．がんが、ＥＧＦＲ遺伝子増幅を含むことによって特徴付けられる、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
８．当該ＥＧＦＲ遺伝子増幅が、固体組織試料に対する次世代配列決定によって決定される８以上のＥＧＦＲコピー数、循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）に対する次世代配列決定によって決定される少なくとも２．１４若しくは少なくとも２．５のＥＧＦＲスコア、又はＦＩＳＨに基づく２以上のＥＧＦＲ／ＣＥＰ７比によって特徴付けられる、条項７の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
９．対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、当該がんが、３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
１０．対象における胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、当該がんが、２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
１１．対象におけるがんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体であって、第１の可変ドメインが、
－少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ３配列、又は図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ３配列と多くとも３つ、好ましくは多くとも２つ、好ましくは１つ以下のアミノ酸が異なるＣＤＲ３配列、
－少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、又は多くとも３つ、好ましくは多くとも２つ、好ましくは多くとも１つのアミノ酸置換を有する図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、あるいは
図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨ鎖の配列、又は
ＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨ鎖に関して、多くとも１５個、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、好ましくは１、２、３、４、若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨ鎖のアミノ酸配列、を含む重鎖可変領域であり、当該がんが、頭頸部がん、好ましくは、頭頸部の扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）であり、がんが、好ましくは、２＋若しくは３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現するか、又は当該がんが、３＋のＩＨＣスコア、若しくは好ましくは２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲ発現を有する胃がん、食道がん、若しくは胃食道接合部がんである、抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
１２．対象が、抗ＥＧＦＲ剤での事前の治療を受けていない、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
１３．対象が、ＥＧＦＲを標的とする抗体での事前の治療を受けていない、条項１～１１のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
１４．対象が、セツキシマブでの事前の治療を受けていない、条項１～１１のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
１５．当該がんが、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行した、条項９～１４のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
１６．当該がんが、２００超～３００以下のＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
１７．当該ＥＧＦＲについてのＨスコアが、ＩＨＣを使用して決定される、条項１６のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体。
１８．対象が、哺乳動物、好ましくはヒトである、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
１９．当該治療が、対象に、有効量の当該抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
２０．当該治療が、対象に、１５００ｍｇの均一用量の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
２９．抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が、対象に、静脈内に提供される、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
２２．抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が、毎週、隔週、又は毎月、好ましくは隔週で提供され、より好ましくは、対象に、少なくとも３回以上の隔週投薬量の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が提供される、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
２２．抗体が、ＡＤＣＣ増強型である、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
２４．抗体が、アフコシル化されている、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
２５．がんが、腺がん又は扁平上皮がん、特に、胃腺がん、食道腺がん、又は胃食道接合部腺がん、特に、頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）である、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
２６．当該がん及び／又は当該対象が、ＳＭＡＤ４の野生型である、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
２７．当該がん又は対象が、ＴＰ５３における変異、好ましくは、活性化ＴＰ５３変異を有する、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
２８．当該がん又は対象が、Ｈｅｒ２陰性である、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
２９．抗体が、多重特異性抗体、好ましくは二重特異性抗体である、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
３０．抗体が、ＥＧＦＲに結合しない第２の可変ドメインを含む、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
３１．抗体が、ＬＧＲ５に結合する第２の可変ドメインを含む、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
３２．抗体が、第２の可変ドメインを含まない一価抗体であるか、又は抗体が、当該第１のＥＧＦＲ結合可変ドメインを唯一の可変ドメインとして含む、条項１～２８のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
３３．当該免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－１阻害剤を含む、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
３４．治療が、ＥＧＦＲ状態、ＳＭＡＤ４状態、及び／又はＨｅｒ２状態について対象を診断するステップを含むか、又はそれの後であり、Ｈｅｒ２状態についての診断が、好ましくはＩＳＨ又はＩＨＣによるものである、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
３５．ＥＧＦＲに結合する第１の可変ドメインが、図２に示されるヒトＥＧＦＲ配列のアミノ酸残基４２０～４８０内に位置するエピトープに結合する、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法）。
３６．第１の可変ドメインのＥＧＦＲへの結合が、ＥＧＦＲにおける以下のアミノ酸残基置換Ｉ４６２Ａ、Ｇ４６５Ａ、Ｋ４８９Ａ、Ｉ４９１Ａ、Ｎ４９３Ａ、及びＣ４９９Ａのうちの１つ以上によって、当該置換を含まないＥＧＦＲタンパク質と比較して低減される、先行条項のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
３７．ＬＧＲ５に結合する可変ドメインが、図１に示されるヒトＬＧＲ５配列のアミノ酸残基２１～１１８内に位置するエピトープに結合する、条項２９～３４のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。
３８．第１の可変ドメインが、
－少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ３配列、又は図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ３配列と多くとも３つ、好ましくは多くとも２つ、好ましくは１つ以下のアミノ酸が異なるＣＤＲ３配列、
－少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、又は多くとも３つ、好ましくは多くとも２つ、好ましくは多くとも１つのアミノ酸置換を有する図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、あるいは
図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨ鎖の配列、又は
ＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨ鎖に関して、多くとも１５個、好ましくは１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、好ましくは１、２、３、４、若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨ鎖のアミノ酸配列、を含む重鎖可変領域である、条項１～１０又は１２～３７のうちのいずれか一項の抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体、又は使用、又は方法。

【実施例】

【0211】

本明細書で使用される場合、Ｘが独立して数字０～９である「ＭＦＸＸＸＸ」は、可変ドメインを含むＦａｂを指し、ＶＨは、図３に示される４桁によって識別されるアミノ酸配列を有する。別段指示されない限り、可変ドメインの軽鎖可変領域は、典型的には、図４ｂの配列を有する。実施例における軽鎖は、図４ａに示される配列を有する。「ＭＦＸＸＸＸ ＶＨ」は、４桁で識別されるＶＨのアミノ酸配列を指す。ＭＦは、更に、軽鎖の定常領域と、通常、軽鎖の定常領域と相互作用する重鎖の定常領域と、を含む。重鎖のＶＨ／可変領域は異なり、典型的には、ＣＨ３領域も異なり、重鎖の一方はそのＣＨ３ドメインのＫＫ変異を有し、他方はそのＣＨ３ドメインの相補的ＤＥ変異を有する（参考ＰＣＴ／ＮＬ２０１３／０５０２９４（ＷＯ２０１３／１５７９５４として公開）、並びに図５ｄ及び５ｅを参照されたい）。実施例における二重特異性抗体は、図５に示されるＫＫ／ＤＥ ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ１ドメインを有するＦｃ尾部、図４ａに示される共通の軽鎖、及びＭＦ番号によって指定されるＶＨを有する。例えば、ＭＦ３７５５×ＭＦ５８１６によって示される二重特異性抗体は、上記の一般的な配列、ＭＦ３７５５の配列を有するＶＨを有する可変ドメイン、及びＭＦ５８１６の配列を有するＶＨを有する可変ドメインを有する。

【0212】

様々な重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸及び核酸配列を、図３に示す。重鎖可変領域ＭＦ３７５５及びＭＦ５８１６並びに共通の軽鎖を含み、図３に示される他のＬＧＲ５とＥＧＦＲとの組み合わせのうち、アフコシル化からのＡＤＣＣの強化のための修飾を含む二重特異性抗体ＥＧＦＲ／ＬＧＲ５、ＭＦ３７５５×ＭＦ５８１６が、ＷＯ２０１７／０６９６２８において有効であることが示されている。

【0213】

二重特異性抗体の生成
二重特異性抗体は、効率的なヘテロ二量体化及び二重特異性抗体の形成を確実にする独自のＣＨ３工学技術を使用して、異なるＶＨドメインを有するＩｇＧをコードする２つのプラスミドの一過性コトランスフェクションによって生成された。共通の軽鎖はまた、同じプラスミド上又は別のプラスミド上のいずれかで同じ細胞内でコトランスフェクションされる。我々の出願（例えば、ＷＯ２０１３／１５７９５４及びＷＯ２０１３／１５７９５３、参照により本明細書に組み込まれる）では、単一細胞から二重特異性抗体を産生するための方法及び手段が開示されており、それにより、単一特異性抗体の形成よりも二重特異性抗体の形成を有利にする手段が提供される。これらの方法も、本発明で有利に用いることができる。具体的には、本質的に二重特異性全長ＩｇＧ分子のみを産生する好ましい変異は、第１のＣＨ３ドメインにおける３５１位及び３６６位のアミノ酸置換、例えば、Ｌ３５１Ｋ及びＴ３６６Ｋ（ＥＵ番号付けによる番号付け）（「ＫＫバリアント」重鎖）、並びに第２のＣＨ３ドメインにおける３５１位及び３６８位のアミノ酸置換、例えば、Ｌ３５１Ｄ及びＬ３６８Ｅ（「ＤＥバリアント」重鎖）、又はその逆である（図５ｄ及び５ｅを参照されたい）。負電荷を帯びたＤＥバリアント重鎖及び正電荷を帯びたＫＫバリアント重鎖が優先的に対合して、ヘテロ二量体（いわゆる「ＤＥＫＫ」二重特異性分子）を形成することが、前述の出願で実証された。ＤＥバリアント重鎖（ＤＥ－ＤＥホモ二量体）又はＫＫバリアント重鎖（ＫＫ－ＫＫホモ二量体）のホモ二量体化は、同一重鎖間のＣＨ３－ＣＨ３界面における荷電残基間の強い反発に起因してほとんど生じない。

【0214】

上述のＬＧＲ５に結合する可変ドメインのＶＨ遺伝子を、正に荷電したＣＨ３ドメインをコードするベクターにクローニングした。ＷＯ２０１５／１３０１７２（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されるものなどのＥＧＦＲに結合する可変ドメインのＶＨ遺伝子を、負に荷電したＣＨ３ドメインをコードするベクターにクローニングした。懸濁成長に適応した２９３Ｆフリースタイル細胞を、３．０×１０ｅ６細胞／ｍｌの密度になるまで、シェーカープラトー上のＴ１２５フラスコ内で培養した。細胞を、０．３～０．５×１０ｅ６生細胞／ｍｌの密度で、２４ディープウェルプレートの各ウェル内に播種した。細胞を、異なる抗体をコードする２つのプラスミドの混合物で一過的にトランスフェクトし、独自のベクター系にクローニングした。トランスフェクションから７日後に、細胞上清を回収し、０．２２μＭフィルター（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を通して濾過した。滅菌した上清を、抗体を精製するまで、４℃で保管した。

【0215】

ＩｇＧ精製及び定量化
精製を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用して、フィルタープレートでの滅菌条件下で行った。先ず、培地のｐＨをｐＨ８．０に調整し、続いて、ＩｇＧ含有上清を、プロテインＡセファロースＣＬ－４Ｂビーズ（５０％ｖ／ｖ）（Ｐｉｅｒｃｅ）とともに、振盪プラットフォーム上６００ｒｐｍで、２５℃で２時間インキュベートした。次に、ビーズを、濾過によって回収した。ビーズを、ＰＢＳ ｐＨ７．４で２回洗浄した。次いで、結合したＩｇＧを、０．１Ｍのクエン酸緩衝液で、ｐＨ３．０で溶出し、溶出液を、Ｔｒｉｓ ｐＨ８．０を使用して直ちに中和した。緩衝液交換を、マルチスクリーンＵｌｔｒａｃｅｌ １０マルチプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用した遠心分離によって実行した。試料を、ＰＢＳ ｐＨ７．４中で最終的に回収した。ＩｇＧ濃度を、Ｏｃｔｅｔを使用して測定した。タンパク質試料を、４℃で保管した。

【0216】

精製したＩｇＧの量を決定するために、抗体の濃度を、標準として総ヒトＩｇＧ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｉ４５０６）を使用して、プロテインＡバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅ－Ｂｉｏ、サプライヤーの推奨に従って）を使用したＯｃｔｅｔ分析の手段によって決定した。

【0217】

以下の二重特異性抗体は、本実施例における使用及び本発明の方法における使用に好適である。ＭＦ３３７０×ＭＦ５７９０、ＭＦ３３７０×５８０３、ＭＦ３３７０×５８０５、ＭＦ３３７０×５８０８、ＭＦ３３７０×５８０９、ＭＦ３３７０×５８１４、ＭＦ３３７０×５８１６、ＭＦ３３７０×５８１７、ＭＦ３３７０×５８１８、ＭＦ３７５５×ＭＦ５７９０、ＭＦ３７５５×５８０３、ＭＦ３７５５×５８０５、ＭＦ３７５５×５８０８、ＭＦ３７５５×５８０９、ＭＦ３７５５×５８１４、ＭＦ３７５５×５８１６、ＭＦ３７５５×５８１７、ＭＦ３７５５×５８１８、ＭＦ４２８０×ＭＦ５７９０、ＭＦ４２８０×５８０３、ＭＦ４２８０×５８０５、ＭＦ４２８０×５８０８、ＭＦ４２８０×５８０９、ＭＦ４２８０×５８１４、ＭＦ４２８０×５８１６、ＭＦ４２８０×５８１７、ＭＦ４２８０×５８１８、ＭＦ４２８９×ＭＦ５７９０、ＭＦ４２８９×５８０３、ＭＦ４２８９×５８０５、ＭＦ４２８９×５８０８、ＭＦ４２８９×５８０９、ＭＦ４２８９×５８１４、ＭＦ４２８９×５８１６、ＭＦ４２８９×５８１７、及びＭＦ４２８９×５８１８。各二重特異性抗体は、それぞれＥＧＦＲ及びＬＧＲ５に結合することができるＭＦ番号によって指定される２つのＶＨを含み、更に、それぞれ配列番号１３６（図５ｄ）及び配列番号１３８（図５ｅ）によって示されるＫＫ／ＤＥ ＣＨ３ヘテロ二量体化ドメイン、配列番号１３４（図５ｃ）によって示されるＣＨ２ドメイン、並びに配列番号１３１（図５ａ）によって示されるＣＨ１ドメイン、配列番号１２１（図４）に示される共通の軽鎖を有するＦｃテイルを含む。

【0218】

実施例１：ＥＡＣ、ＧＡＣ、ＧＥＪＡＣ、又は頭頸部がんを有する患者に対する抗ＥＧＦＲ×抗ＬＧＲ５抗体の用量拡大、及び有効性：
進行固形腫瘍における第１相用量漸増試験
試験デザイン
初回用量漸増部分を用いて第１相非盲検多施設試験を実行して、開始用量を５ｍｇの均一用量としてｍＣＲＣ患者における固形腫瘍についての抗ＥＧＦＲ×抗ＬＧＲ５二重特異性抗体の推奨第２相用量（ＲＰ２Ｄ）を決定した。ＲＰ２Ｄが確立されると、抗体は、ＥＡＣ、ＧＡＣ、ＧＥＪＡＣ、又は頭頸部の扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）を含む頭頸部がんと診断された患者を含む、試験の拡大部分において更に評価される。抗体の安全性、ＰＫ、免疫原性及び予備的抗腫瘍活性が、全ての患者において特徴付けられ、ＥＧＦＲ及びＬＧＲ５状態を含むバイオマーカー分析が実行される。

【0219】

選択基準
患者は、試験に参加するために以下の要件の全てを満たさなければならない：
１．いずれかの試験手順の開始前に、インフォームドコンセントに署名した。
２．インフォームドコンセントの署名時に、年齢は１８歳以上である。
３．根治目的の標準療法に適合しない転移性又は局所進行性疾患の証拠を有する組織学的又は細胞学的に確認された固形腫瘍：
拡大コホート：進行性転移性ＥＡＣ、ＧＡＣ、ＧＥＪＡＣ頭頸部扁平上皮がんを有する患者は、少なくとも２種の標準承認療法（該当する場合）で以前に治療されたことの有無にかかわらず、探索される。
４．転移性又は原発部位からの新鮮ベースライン腫瘍試料（ＦＦＰＥであり、十分な材料が凍結もされている場合）。
５．生検に適している。
６．放射線学的方法によるＲＥＣＩＳＴバージョン１．１で定義される測定可能な疾患。
７．０又は１のＥａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータス。
８．研究者によると、平均余命は≧１２週間である。
９．心エコー図（ＥＣＨＯ）又は複数のゲート収集スキャン（ＭＵＧＡ）による左心室駆出分画率（ＬＶＥＦ）≧５０％。
１０．適切な臓器機能：
●絶対好中球数（ＡＮＣ）≧１．５×１０^９／Ｌ
●ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ
●血小板≧１００ｘ１０９／Ｌ
●正常範囲内の補正総血清カルシウム
●正常範囲内の（又はサプリメントで補正された）血清マグネシウム
●アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）≦２．５×正常上限（ＵＬＮ）、総ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ（総ビリルビン＞３．０×ＵＬＮ又は直接ビリルビン＞１．５×ＵＬＮの場合に除外される既知のジルベール症候群による場合を除いて）、肝臓病変の場合、総ビリルビン≦３．０×ＵＬＮ若しくは直接ビリルビン≦１．５×ＵＬＮが許容される場合、既知のジルベール症候群による場合を除いて、又は総ビリルビン＜３ｍｇ／ｄＬが許容される場合、肝細胞がん［Ｃｈｉｌｄ－ＰｕｇｈクラスＡ］による場合を除いて、ＡＬＴ／ＡＳＴ≦５×ＵＬＮ及び総ビリルビン≦２×ＵＬＮが許容される
●６５歳超の年齢の患者のためのＣｏｃｋｒｏｆｔ及びＧａｕｌｔ式又はＭＤＲＤ式に従って計算された血清クレアチニン≦１．５×ＵＬＮ又はクレアチニンクリアランス≧６０ｍＬ／分
●血清アルブミン＞３．３ｇ／ｄＬ

【0220】

除外基準
以下の基準のうちのいずれかが存在する場合には、患者は試験への参加を除外される：
１．試験登録から１４日以内に症状を制御するように、未治療されていないか若しくは症候性である、又は放射線、手術、若しくは持続的ステロイド療法を必要とする中枢神経系転移。
２．既知の軟髄膜関与。
３．試験登録前４週間以内での任意の治験薬による別の臨床試験又は治療への参加。
４．試験治療投与の最初の投与の４週間又は５半減期のいずれか長い方以内の任意の全身抗がん療法。重大な遅延毒性（例えば、ミトマイシンＣ、ニトロソウレア）を有する細胞毒性剤、又は抗がん免疫療法の場合、６週間のウォッシュアウト期間が必要である。
５．免疫抑制薬（例：メトトレキサート、シクロホスファミド）の要件
６．試験治療の最初の投与から３週間以内の大手術又は放射線療法。骨髄の≧２５％に以前の放射線療法を受けた患者は、それを受けたときにかかわらず、適格ではない。
７．既存の抗悪性腫瘍療法に関連する持続性グレード＞１の臨床的に有意な毒性（脱毛症を除く）；安定した感覚性ニューロパチー≦グレード２のＮＣＩ－ＣＴＣＡＥ ｖ４．０３が許容される。
８．これらの薬剤の恒久的停止を正当化した、ヒトタンパク質又は賦形剤のいずれかに起因する過敏症反応又はいずれかの毒性の既往歴。
９．適切な治療又は不安定な狭心症を伴う制御されていない高血圧（収縮期＞１５０ｍｍＨｇ及び／又は拡張期＞１００ｍｍＨｇ）。
１０．クラスＩＩ－ＩＶニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）基準のうっ血性心不全の病歴、又は治療を必要とする重度の心不整脈（心房細動、発作性上室性頻拍を除く）。
１１．試験登録から６か月以内の心筋梗塞の既往歴。
１２．子宮頸部上皮内腫瘍若しくは非黒色腫皮膚がん、又は少なくとも３年間は疾患の証拠がなく、再発のリスクが低いとみなされる治癒的に治療されたがんを除く、以前の悪性腫瘍の既往歴。
１３．いずれかの起源の残りの部分での現在の呼吸困難、又は持続的な酸素療法を必要とする他の疾患。
１４．間質性肺疾患（例えば、肺炎又は肺線維症）の既往歴又はベースライン胸部ＣＴスキャンでのＩＬＤの証拠を有する患者。
１５．制御されていない活動性感染症、臨床的に重要な肺の、代謝性の若しくは精神の疾患を含むがそれらに限定されない現在の重篤な疾病又は精神障害。
１６．治療を必要とする活動性ＨＩＶ、ＨＢＶ、又はＨＣＶ感染。
１７．Ｃｈｉｌｄ－ＰｕｇｈクラスＢ又はＣの現在の肝硬変状態を有する患者、既知の線維性層板状ＨＣＣ、肉腫様ＨＣＣ、又は混合胆管がん及びＨＣＣ
１８．妊娠中又は授乳中の女性、妊娠可能性のある患者は、試験登録前、試験参加期間中、及び抗体の最後の投与後６か月間、効率が高い避妊方法を使用しなければならない。

【0221】

用量制限毒性（ＤＬＴ）
第１のサイクル（２８日）中に発生し、治験責任医師によって抗体治療に関連するとみなされた以下の臨床毒性及び／又は臨床検査異常のうちのいずれかは、ＤＬＴとみなされる：
●血液学的毒性：
－７日間以上のグレード４の好中球減少症（好中球絶対数［ＡＮＣ］＜０．５×１０９個／Ｌ）
－グレード３～４の発熱性好中球減少症
－グレード４の血小板減少症
－出血エピソードに伴うグレード３の血小板減少症
－その他のグレード４の血液学的毒性
●以下を除くグレード３～４の非血液学的ＡＥ及び臨床検査毒性：
－グレード３～４の点滴関連反応
－最適な治療で２週間以内にグレード２以下に回復するグレード３の皮膚毒性
－最適な治療で３日以内にグレード１以下又はベースラインまで回復するグレード３の下痢、吐き気、及び／又は嘔吐
－４８時間以内に最適な治療で消失するグレード３の電解質異常
－４８時間以下のグレード３～４の肝臓異常
●Ｈｙの法則の定義を満たす任意の肝機能異常。
●次の２回の投与を防ぐ、１５日以上続く任意の薬物関連の毒性。

【0222】

用量拡大
拡大部では、二重特異性抗体は、ＥＡＣ、ＧＡＣ、ＧＥＪＡＣ、又は頭頸部がん、特にＳＣＣＨＮを有する患者にＲＰ２Ｄで投与される。ＲＰ２Ｄが定義されると、追加の患者をこの用量及びスケジュールで治療して、抗体の安全性、忍容性、ＰＫ、及び免疫原性を更に特徴付け、かつ抗腫瘍活性及びバイオマーカー評価の予備的評価を実行する。

【0223】

ＥＡＣ、ＧＡＣ、ＧＥＪＡＣ、又は頭頸部がん、特にＳＣＣＨＮを有する患者における抗体治療は、例えば、予備的な抗腫瘍活性の兆候を条件とする、最大４０人の患者までの拡大の可能性がある各適応症について１０～２０人の患者が探索される。ＲＰ２Ｄの安全性は、安全性モニタリング委員会によって試験の拡大部分中に継続的に評価される。ＤＬＴの発生率が任意のコホートについて所定の閾値３３％を超える場合、このコホートについての登録は一時停止され、安全性、ＰＫ、及びバイオマーカーの完全なレビューが、そのコホートで発生を継続することが安全であるかどうかを判断するために、ＳＭＣによって実行される。その時点で、薬物の全体的な安全性も尋問される。

【0224】

治験療法及びレジメン
抗ＥＧＦＲ×抗ＬＧＲ５二重特異性抗体は、ＩＶ注入のための透明な液体溶液として製剤化される。ＩＶ注入は、５ｍｇの開始用量（均一用量）、及び１５００ｍｇの推奨される第２相用量（均一用量）で、標準的な注入手順を使用して、２週間毎に実施される。ＲＰ２Ｄに到達した後、用量エスカレーションを停止した。注入は、サイクル１の間、最低４時間にわたって投与される必要がある。サイクル１後の続く注入は、治験責任医師の裁量により、及びＩＲＲの不在下で、２時間に短縮され得る。サイクルは、４週間とみなされる。

【0225】

前投薬
サイクル１の間、全ての注入は、以下の前投薬レジメンを用いて、少なくとも４時間にわたって投与される：注入開始の２４時間前に、８ｍｇのデキサメタゾンＰＯを注入開始の１時間前に投与し、各患者にデキサメタゾン２０ｍｇＩＶ、デクスクロルフェニラミン５ｍｇＩＶ又はジフェンヒドラミン５０ｍｇＰＯ又はクロルフェニラミン１０ｍｇＩＶ、ラニチジン５０ｍｇＩＶ又は１５０ｍｇＰＯ及びパラセタモール１ｇＩＶ若しくは６５０ｍｇＰＯを投与する。

【0226】

患者は全てのサイクル１注入をＩＲＲなしで耐え、治験責任医師がそれを適切であるとみなす場合、患者はデキサメタゾンの前投薬なしで更なる抗体注入を持続して受けることができ、注入の持続時間を２時間に短縮することができる。かかる場合、ＩＲＲの発生率又は重症度を回避又は低減するのに適切であるとみなされる場合、注入持続期間を最大約４時間まで延長することができる。最初の抗体注入（１日目のサイクル１）の場合、各患者は、注入の開始から６時間、２回目の注入の開始から４時間観察される。その後、患者は、全ての後続の投与期間（最低２時間）にわたって観察される。

【0227】

治療期間
試験治療は、進行性疾患（ＲＥＣＩＳＴ１．１による）、許容できない毒性、同意の撤回、患者の非コンプライアンス、治験責任医師の決定（例えば、臨床的悪化）、又は連続した６週間超の抗体中断が確認されるまで、投与される。患者は、最後の抗体注入後、及び全ての関連毒性の回復又は安定化までの少なくとも３０日間の安全性、並びに１２か月間の疾患の進行及び生存状態について追跡される。

【0228】

ＥＧＦＲ増幅又は高ＥＧＦＲタンパク質発現のための胃患者の事前スクリーニング
胃／胃食道接合部腺がんを有する患者の場合、臨床試験では、ＤＮＡ事前スクリーニングによるＥＧＦＲ増幅又は高ＥＧＦＲ発現の文書化が必要である。事前スクリーニングに適格となるには、患者は、他の実行可能な標的が存在しない場合に、胃がんの組織学的診断を受ける必要がある。事前スクリーニング試験は、ＥＧＦＲ増幅及び腫瘍遺伝子変異又はＥＧＦＲ ＩＨＣ（例えば、ＥＧＦＲ ＰｈａｒｍＤｘキット又は同等の検証されたＩＶＤ）について分子スクリーニングを実行する資格を有する臨床検査室改善修正（ＣＬＩＡ）認定検査室において現地で実行される。ＥＧＦＲ増幅は、ＦＩＳＨ試験、ｃｔＤＮＡ分析、又は組織ＮＧＳを使用して試験され得る。適切な現地検査の選択肢が利用できない場合は、試料を適切な資格を有する承認された中央検査室に送ることができる。

【0229】

ｃｔＤＮＡ分析の場合、Ｇｕａｒｄａｎｔから入手可能な血液収集キットに提供されているチューブを使用して、１０ｍＬの２つのチューブの血液が収集される。Ｇｕａｒｄａｎｔ組織ＮＧＳ分析の場合、ＦＦＰＥスライド又は組織ブロックを、Ｇｕａｒｄａｎｔから入手可能な収集キットを使用して提出することができる。適格と定義されるＥＧＦＲ増幅又はＥＧＦＲタンパク質発現の閾値は、ＦＩＳＨスコアＥＧＦＲ／ＣＥＰ７比率≧２．０、又はＮＧＳ ＥＧＦＲコピー≧８、又はｃｔＤＮＡ＞２．１４、又はＥＧＦＲ ＩＨＣ Ｈスコア≧２００である（Ｍａｒｏｎ ＳＢ，ｅｔ ａｌ．，２０１８．Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｆｏｒ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ： Ａｎｔｉ－ＥＧＦＲ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ＥＧＦＲ－Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｇａｓｔｒｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌ Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ ８：６９６－７１３．、Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．２０１９．Ｒｅｖｉｓｉｔｉｎｇ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＥＧＦＲ）Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｓ ａ Ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ Ａｎｔｉ－ＥＧＦＲ Ｔｈｅｒａｐｙ： Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｅｌｌ－Ｆｒｅｅ Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｔｕｍｏｒ ＤＮＡ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．ＪＣＯ Ｐｒｅｃｉｓ Ｏｎｃｏｌ ３： ＰＯ．１８．００１８０）。次いで、ＥＧＦＲ増幅又はＥＧＦＲ ＩＨＣ Ｈスコアが２００以上の患者は、主研究に進んで参加することができる場合、主研究ＩＣＦに署名する資格がある。少なくとも１０人のＥＧＦＲ ＩＨＣ高患者が登録される。

【0230】

現地の認定検査室でのｃｔＤＮＡ試験によるＥＧＦＲ増幅が文書化された患者は、追加の事前スクリーニングを必要とせずに、主研究ＩＣＦに署名する資格がある

【0231】

有効性評価
腫瘍評価は、治療開始後８週間毎に、ＲＥＣＩＳＴ１．１（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００９ Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ４５：２２８－２４７）による造影剤を用いたＣＴ／ＭＲＩに基づく。客観的な奏効は、最初の観察から少なくとも４週間後に確認される必要がある。骨スキャンは、ベースライン時に骨転移を有するか、又は研究上の病変の疑いがある患者に対して臨床的に指示されるように実行される。がん胚抗原（ＣＥＡ）を含む循環血液腫瘍マーカーは、スクリーニング時及び各サイクルの１日目に評価される。

【0232】

実施例２
喉頭に位置する頭頸部の扁平上皮がんを有する６７歳の男性患者を、実施例１の臨床試験に登録した。患者は、以前に、白金系化学療法（カルボプラチン）、並びにパクリタキセル及び重要なことに免疫チェックポイント阻害剤としてデュルバルマブで治療されていた。

【0233】

観測された応答には、ＭＦ３７５５×ＭＦ５８１６によって示される第１及び第２の可変ドメインを有することによって特徴付けられる二重特異性抗体を受けた後の－４１％のＰＲｃが含まれた。患者は、１５００ｍｇの均一用量を使用して、６ｑ２ｗサイクル超の当該抗体を与えられ、その後、臨床応答が評価された。

【0234】

患者は、２＋のＥＧＦＲ ＩＨＣ腫瘍膜染色スコアを示した。

【0235】

実施例３
舌に位置する頭頸部の扁平上皮がんを有する５９歳の女性患者を、実施例１の臨床試験に登録した。患者は、以前に、白金系化学療法（カルボプラチン）、並びに５－ＦＵ及び重要なことに免疫チェックポイント阻害剤としてペムブロリズマブで治療されていた。

【0236】

観測された応答には、ＭＦ３７５５×ＭＦ５８１６によって示される第１及び第２の可変ドメインを有することによって特徴付けられる二重特異性抗体を受けた後の、腫瘍状態の第２の評価での完全応答（ＣＲ）を有する－８８％の部分応答（ＰＲ）が含まれた。患者は、１５００ｍｇの均一用量を使用して、４ｑ２ｗサイクル超の当該抗体を与えられ、その後、臨床応答が評価された。

【0237】

患者は、３＋のＥＧＦＲ ＩＨＣ腫瘍膜染色スコアを示した。

【0238】

実施例４
中咽頭の頭頸部の扁平上皮がんを有する６７歳の男性患者を、実施例１の臨床試験に登録した。患者は、以前に、白金系化学療法（カルボプラチン）及び重要なことに免疫チェックポイント阻害剤としてペムブロリズマブで治療されていた。

【0239】

観測された応答には、ＭＦ３７５５×ＭＦ５８１６によって示される第１及び第２の可変ドメインを有することによって特徴付けられる二重特異性抗体を受けた後の－４０％のＰＲｃが含まれた。患者は、１５００ｍｇの均一用量を使用して、８ｑ２ｗサイクルの当該抗体を与えられ、その後、臨床応答が評価された。

【0240】

患者は、３＋のＥＧＦＲ ＩＨＣ腫瘍膜染色スコアを示した。

【0241】

ＥＧＦＲ Ｈスコアリングを、実施例６に記載のとおりに実行した。

【0242】

実施例５
胃食道接合部がんを有する８０歳の男性患者を、実施例１の臨床試験に登録した。患者は、オキサリプラチン及びイリノテカンに基づく化学療法で以前に治療されていた。

【0243】

観測された応答には、ＭＦ３７５５×ＭＦ５８１６によって示される第１及び第２の可変ドメインを有することによって特徴付けられる二重特異性抗体を受けた後の安定した疾患（ＳＤ）が含まれた。患者は、１５００ｍｇの均一用量を使用して、４ｑ２ｗサイクルの当該抗体を与えられ、その後、臨床応答が評価された。

【0244】

患者は、３＋のＥＧＦＲ ＩＨＣスコア、及び３００のＥＧＦＲ Ｈスコアを示した。遺伝子プロファイリングは、患者がＳＭＡＤ４の野生型であったことを示した。

【0245】

ＥＧＦＲ Ｈスコアリングを、実施例８に記載のとおりに実行した。

【0246】

実施例６
胃がんを有する６２歳の男性患者を、実施例１の臨床試験に登録した。患者は、シスプラチン／カペシタビンによる化学療法で以前に治療されていた。

【0247】

観測された応答には、ＭＦ３７５５×ＭＦ５８１６によって示される第１及び第２の可変ドメインを有することによって特徴付けられる二重特異性抗体を受けた後の確認された部分応答（ＰＲｃ）が含まれた。患者は、１５００ｍｇの均一用量を使用して、７ｑ２ｗサイクルの当該抗体を与えられ、その後、臨床応答が評価された。

【0248】

患者は、３＋のＥＧＦＲ ＩＨＣスコア、及び３００のＥＧＦＲ Ｈスコアを示した。遺伝子プロファイリングは、患者がＳＭＡＤ４の野生型であったことを示した。

【0249】

ＥＧＦＲ Ｈスコアリングを、実施例８に記載のとおりに実行した。

【0250】

実施例７
再開された第２相用量での安全性プロファイルは、ＲＰ２Ｄで治療された固形腫瘍を有する２９人の患者に基づいた。最も頻繁な有害事象は、注入関連反応（ＩＲＲ）であり、７２％は、任意のグレードであり、７％は、グレード３以上であった。発症までの時間：全ての患者について最初の注入。ＩＲＲは、予防／長期注入で管理可能であった。軽度から中等度の皮膚毒性が観察された（３％の重度の事象を伴う）。

【0251】

注入関連反応は、注入後２４時間の間にＩＲＲとして治験責任医師によって考慮される全てのＡＥを含む複合用語である。

【0252】

実施例８： ＩＨＣを介したＥＧＦＲスコアリング
ＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘ（商標）アッセイは、組織学的評価のために規定どおりに固定された正常及び腫瘍組織における上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）発現を特定するための定性的免疫組織化学（ＩＨＣ）キットシステムである。ＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘは、ＥＧＦＲ発現細胞におけるＥＧＦＲ（ＨＥＲ１）タンパク質を特異的に検出する。

【0253】

ＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘ（商標）アッセイは、ＥＧＦＲ抗体、クローン２－１８Ｃ９（２－１８Ｃ９）を使用して、ＥＧＦＲタンパク質を検出する。クローン２－１８Ｃ９は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、及びＨＥＲ４を発現する細胞株に対する反応性について試験されている。ＳＫＢＲ３及びＡ４３１細胞溶解物のウェスタンブロットにおいて、２－１８Ｃ９は、ＥＧＦＲの既知の分子量と一致する１７０ｋＤバンドを認識した。クローン２－１８Ｃ９はまた、ＥＧＦＲｖＩＩＩがトランスフェクトされた細胞株の免疫組織化学、フローサイトメトリー、及びウェスタンブロッティングにおいて、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（１４５ｋＤ）形態の受容体を認識することが見出されている。ウェスタンブロッティング実験では、２－１８Ｃ９は、ＨＥＲ２陽性ＣＡＭＡ－１細胞溶解物、ＨＥＲ３で形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ ＢＬ－２１タンパク質抽出物、及びＣＨＯ－ＨＥＲ４がトランスフェクトされた細胞溶解物と非反応性であった。更に、ｍｙｃ（ベクタータグ）を発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）トランスフェクタントを、単独で、又はＨＥＲファミリーのうちの１つと共発現して、ホルマリン固定及びパラフィン包埋されたチャンバースライド中で増殖させ、抗ｍｙｃ及び２－１８Ｃ９で染色した。ｍｙｃ抗体は、５つのＣＨＯトランスフェクタント全てを染色したが、２－１８Ｃ９は、ＨＥＲ１でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞のみを染色した。

【0254】

ＥＧＦＲスコアリングは、製造業者の指示及び推奨に従って、Ｄａｋｏ ＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘ（商標）ユーザプロトコルを使用して実行される。ａｇｉｌｅｎｔ．ｃｏｍ／ｃｓ／ｌｉｂｒａｒｙ／ｕｓｅｒｍａｎｕａｌｓ／ｐｕｂｌｉｃ／０８０５２＿ｅｇｆｒ＿ｐｈａｒｍｄｘ＿ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ＿ｍａｎｕａｌ．ｐｄｆのワールドワイドウェブを参照されたい。

【0255】

標本調製
ＩＨＣ染色のための組織を保存するために、生検標本を処理した。全ての標本について、組織処理の標準的な方法を使用する必要がある。以下の固定剤に保存された標本は、ＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘで試験するのに好適である：１０％（ｖ／ｖ）中性緩衝ホルマリン、１０％（ｖ／ｖ）非緩衝ホルマリン、２５％（ｖ／ｖ）非緩衝ホルマリン、ＡＦＡ（酢酸ホルマリンアルコール）、Ｒｉｃｈａｒｄ－Ａｌｌｅｎ ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃのＰｅｎ－ｆｉｘ及びＢｏｕｉｎ’ｓ固定剤。

【0256】

パラフィン包埋切片
規定どおりに処理され、パラフィン包埋された組織は、使用に好適である。生検からの標本は、３又は４ｍｍの厚さにブロック化され、固定剤に適した期間固定する必要がある。次いで、組織を脱水し、一連のアルコール及びキシレンでクリアにし、続いて、溶融パラフィンによって浸潤した。パラフィン温度は、６０℃を超えてはならない。涼しい場所（１５～２５℃）で保管する場合、ＥＧＦＲタンパク質を発現する適切に固定及び埋め込まれた組織ブロックは、切片化及びスライド取り付けの前に無期限に保持される。

【0257】

組織標本を、３～５μｍの切片に切断する必要がある。切片化後、組織をスライドに取り付け、乾燥ラックに配置する必要がある。使用には以下のスライドを勧めする。Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ ＳｕｐｅｒＦｒｏｓｔ Ｐｌｕｓ、Ｄａｋｏ’ｓ Ｓｉｌａｎｉｚｅｄ（コードＳ３００３）、荷電又はポリＬ－リジンコーティングされたスライド。スライドラックを吸収性タオルの上で叩いて、パラフィンの下及びガラス上に閉じ込められた水分を除去し、室温で１時間乾燥させる必要がある。次いで、スライドのラックを５６～６０℃のインキュベーター内に１時間置く必要がある。インキュベーターから取り出した後、スライド上に残っている余分な水は、スライドをタオル上で叩き、インキュベーター内で更に１時間乾燥させることによって除去する必要がある。インキュベーターから取り出した後、スライドは、冷却されパラフィンが硬化するまで室温で保持される必要がある。抗原性を維持するために、スライド（Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ ＳｕｐｅｒＦｒｏｓｔ Ｐｌｕｓ、ポリ－Ｌ－リジン、帯電、又はＤａｋｏ’ｓ Ｓｉｌａｎｉｚｅｄスライド（コードＳ３００３））に取り付けられた組織切片は、室温（２０～２５℃）で保持した場合、切片化後２か月以内に染色する必要がある。

【0258】

ＥＧＦＲの評価及び腫瘍の存在の検証に必要なスライドを同時に準備する必要がある。

【0259】

少なくとも５つのスライド、腫瘍存在のための１つのスライド、ＥＧＦＲタンパク質評価のための２つのスライド（一次抗体のための１つのスライド、及び陰性対照試薬のための１つのスライド）、及びバックアップのための２つのスライドが推奨される。

【0260】

試薬調製
以下の試薬を、染色する前に調製する：

【0261】

洗浄緩衝液：洗浄ステップのために、蒸留水又は脱イオン水（試薬品質の水）を使用して、洗浄緩衝液を１０倍、１：１０希釈することによって、十分な量の洗浄緩衝液を調製する。外観が曇っている場合は、緩衝液を廃棄する。

【0262】

基質－色素原溶液（ＤＡＢ＋）：この溶液は使用前に完全に混合する必要がある。溶液中に発生する任意の沈殿物は、染色品質に影響を与えない。ＤＡＢ＋基質－色素原溶液を調製するために、１バイアルのＤＡＢ＋基質緩衝液に１１滴の液体ＤＡＢ＋色素原を添加し、混合する。任意の未使用の溶液は廃棄する。上記のガイドラインに従って希釈する。過剰な液体ＤＡＢ＋色素原をＤＡＢ＋基質緩衝液に添加すると、陽性シグナルの劣化をもたらす。

【0263】

対比染色。必要に応じて、対比染色ブルーイング用のアンモニア水を調製する。

【0264】

アンモニア水（０．０３７ｍｏｌ／Ｌ）を、２．５（±０．５）ｍＬの１５ｍｏｌ／Ｌの（濃縮）水酸化アンモニウムを１リットルの試薬品質水と混合することによって調製される。未使用の０．０３７ｍｏｌ／Ｌアンモニア水は、室温（２０～２５℃）で、最大１２か月間、しっかりとキャップされたボトルに貯蔵され得る。

【0265】

取り付け培地。水性の取り付けには、ＤａｋｏのＦａｒａｍｏｕｎｔ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｍｏｕｎｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍ、Ｒｅａｄｙ－ｔｏ－ｕｓｅ（コードＳ３０２５）、ＤａｋｏのＧｌｙｃｅｒｇｅｌ Ｍｏｕｎｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍ（コードＣ０５６３）など取り付け培地を推奨する。使用前に約４０（±５）℃に温めることによってグリセルゲルを液化させる。Ｄａｋｏ’ｓ Ｕｌｔｒａｍｏｕｎｔ（コードＳ１９６４）など、非水性の永久取付もまた好適である

【0266】

Ｄａｋｏ自動染色装置の染色手順
手順の備考
全ての試薬は、免疫染色の前に室温（２０～２５℃）に平衡化する必要がある。同様に、全てのインキュベーションは室温で行う必要がある。

【0267】

染色手順中に組織切片を乾燥させてはならない。乾燥した組織切片は、非特異的染色の増加を示す場合がある。

【0268】

脱パラフィン及び再水和。染色の前に、組織スライドは、包埋培地を除去するために脱パラフィン化され、再水和される必要がある。パラフィンの不完全な除去を避ける。残留包埋培地は、非特異的染色の増加をもたらす。

【0269】

ステップ１．スライドをキシレン浴に置き、５（±１）分間インキュベートする。浴を交換して、１回繰り返す。
ステップ２．余分な液体を軽くたたいて除き、スライドを無水エタノール中に３（±１）分間置く。浴を交換して、１回繰り返す。
ステップ３．余分な液体を軽くたたいて除き、スライドを９５％エタノール中に３（±１）分間置く。浴を交換して、１回繰り返す。
ステップ４．余分な液体を軽くたたいて除き、スライドを試薬品質水中に５（±１）分間置く。
ステップ５．余分な液体を軽くたたいて除き、スライドを洗浄緩衝液中に置く。染色プロトコルに概説されているとおりに、染色手順を開始する。

【0270】

キシレン及びアルコール溶液は、４０枚のスライド後に交換する必要がある。ヒストクリアなどのトルエン又はキシレンの代替物が、キシレンの代わりに使用され得る。ＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘには、タンパク質分解酵素消化ステップによる前処理が含まれる。組織切片は、時折過剰に消化され、細胞膜及び全体的な組織構造の破壊を引き起こす場合がある。タンパク質分解ステップの期間に注意してアッセイを実行する。

【0271】

固定後の手順
１．切片を脱パラフィンし、試薬品質水に浸す。
２．スライドを１０％中性緩衝ホルマリンに１０分間浸す。
３．スライドを脱イオン水又は蒸留水で２回すすぐ。
４．ＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘ染色手順を続行する。

【0272】

自動染色プロトコル
ステップ１．目的のプロトコル及びプログラム染色実行を選択する。
ステップ２．自動プログラムを使用してプログラムを設定し、ＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘプログラムを開始する。
ステップ３．コンピュータで生成された試薬マップに従って、試薬バイアルをＤＡＫＯ自動染色装置試薬ラックに配置する。
ステップ４．コンピュータで生成されたスライドマップに従って、スライドをＤＡＫＯ自動染色装置にロードする。
ステップ５．実行を開始する。
ステップ６．ＤＡＫＯ自動染色装置からスライドを取り外す。

【0273】

対比染色及び取り付けに進む。ＤＡＢ＋基質－色素原溶液ステップの後、試薬品質水でスライドをすすぐ。（ＤＡＫＯ自動染色装置ハードウェアバージョン０２及び０３は、基質－色素原ステップの後、試薬品質水でスライドをすすぐ。ＤＡＫＯ自動染色装置の０１ハードウェアバージョンは、緩衝液でスライドをすすぐ。したがって、０１ハードウェアで染色されたスライドは、自動染色装置から取り出した後、試薬品質水ですすぐ必要がある）。

【0274】

染色手順の解釈
スライド評価は、光学顕微鏡を使用して病理医によって実施される必要がある。全ての評価は、標本の腫瘍領域で行われるものとする。免疫細胞化学的染色及びスコアリングの評価の場合、１０倍又は２０倍の倍率の対物レンズが適切である。

【0275】

染色結果の解釈に無傷の細胞を使用する。壊死又は変性細胞は、多くの場合、非特異的に染色する。陽性及び陰性の細胞株は、各ＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘキットに含まれ、アッセイが実行されるたびに、染色実行を検証する。対照細胞株の適切な染色は、ＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘアッセイが適切に機能しているという証拠を提供する。ＣＡＭＡ－１対照細胞株（０）の膜染色はなく、ＨＴ－２９対照細胞株（２＋）における中程度の褐色の完全又は不完全な膜染色は、染色実行が有効であることを示す。陽性対照細胞株の染色強度が弱すぎる場合、又は強すぎる場合は、偽陰性又は偽陽性の結果が得られる可能性があり、試験を繰り返す必要がある。参照画像は、ＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘ解釈ガイドで入手可能である。

【0276】

ＥＧＦＲ ｐｈａｒｍＤｘは、主に細胞膜を染色し、完全及び不完全な円周染色の両方を示す。免疫染色パターンは、多くの場合不均一であり、単一の新生物内で様々な染色強度を示す。染色はまた、細胞質及び細胞外空間でも観察されている。細胞質染色は一般的に見られるが、著しい細胞質染色により、膜染色の区別及び結果の解釈が困難になる場合、試験を繰り返す必要がある。

【0277】

腫瘍は、評価可能な構造として膜染色を使用して、ＥＧＦＲ陽性又はＥＧＦＲ陰性として報告される必要がある。腫瘍細胞は、完全に円周状であるかどうかにかかわらず、バックグラウンドを上回る任意の膜染色を有する場合、ＥＧＦＲ陽性である。任意の腫瘍細胞において、バックグラウンドを上回る膜染色のない腫瘍は、ＥＧＦＲ陰性腫瘍として報告される。

【0278】

インキュベーション長さ及び使用されるヘマトキシリンの効力に応じて、対比染色は、細胞核の淡青色から濃青色の着色をもたらすであろう。過度又は不完全な対比染色は、結果の解釈を損なう可能性がある。

【0279】

染色強度は、以下のように確立される。３＋（強い染色）：必要に応じて高いレベルで確認できる、低いレベルの倍率、５倍の対物レンズで可視、２＋（中程度の染色）：中程度レベルの倍率、１０倍又は２０倍の対物レンズで可視、１＋（弱い染色）：高倍率、４０倍の対物レンズでのみ確実に確認可能、０（染色なし）：高倍率で可視染色はなし。

【表1】

【0280】

ＥＧＦＲ Ｈスコアリング
ＩＨＣを使用した膜性染色の評価は、試料を４つの染色強度カテゴリー（０～３＋）に分類する。注目すべきは、腫瘍細胞の線形細胞間染色のみが陽性とみなされ、完全及び不完全な膜性染色が考慮及び記録されることである。また、Ｈｉｓｔｏ－スコア計算のために、全ての膜染色は、完全性（完全及び不完全な膜性染色）とは無関係であるとみなされる。

【0281】

Ｈスコアは、以下の式：［１×（１＋染色を有する細胞％）＋２×（２＋染色を有する細胞％）＋３×（３＋染色を有する細胞％）］を使用して割り当てられ、０～３００の間のＥＧＦＲについてのＨスコアがもたらされる。

【図1】

【図2】

【図3a)-1】

【図3a)-2】

【図3b)-1】

【図3b)-2】

【図3c)-1】

【図3c)-2】

【図3c)-3】

【図3c)-4】

【図4-1】

【図4-2】

【図5-1】

【図5-2】

【配列表】

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【手続補正書】

【提出日】2024-04-12

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象におけるがんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を含む組成物であって、前記対象におけるがんが、免疫チェックポイント阻害剤での事前の治療を受けた後に進行し、がんが、ＥＧＦＲを発現する、組成物。

【請求項2】

前記がんが、頭頸部がんである、請求項１に記載の組成物

【請求項3】

前記がんが、前記頭頸部の扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）である、請求項２に記載の組成物。

【請求項4】

前記がんが、２＋又は３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

前記がんが、胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんである、請求項１に記載の組成物。

【請求項6】

前記がんが、３＋のＩＨＣスコアによって、又は２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲ発現を有する胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんである、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

対象におけるがんの治療における使用のための、ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインを含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を含む組成物であって、前記がんが、胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんであり、前記がんが、３＋のＩＨＣスコアによって、又は２００超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、組成物。

【請求項8】

前記抗体が、ＬＧＲ５に結合する第２の可変ドメインを含む、請求項１又は７に記載の組成物。

【請求項9】

前記第１の可変ドメインが、少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、又は多くとも３つ、好ましくは多くとも２つ、好ましくは多くとも１つのアミノ酸置換を有する図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含み、
前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が、図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、若しくはＭＦ５８１８からなる群から選択される重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、又は図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、若しくはＭＦ５８１８からなる群から選択されるＬＧＲ５特異的重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列と、多くとも３つ、若しくは多くとも２つ、若しくは多くとも１つのアミノ酸が異なる重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列、を含む重鎖可変領域を含む第２の可変ドメインを含む、請求項１又は７に記載の組成物。

【請求項10】

前記第１の可変ドメインは、図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、又はＭＦ４２８９のＶＨ鎖の配列を含む重鎖可変領域であり、
前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が、図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、若しくはＭＦ５８１８のＶＨの配列を含む重鎖可変領域である第２の可変ドメインを含む、請求項１又は７に記載の組成物。

【請求項11】

前記第１の可変ドメインが、
－図３に示されるＭＦ３７５５のＶＨ鎖のアミノ酸配列、又は
－前記ＶＨ鎖に関して、多くとも１５個、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又は１、２、３、４、若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する図３に示されるＭＦ３７５５のＶＨ鎖のアミノ酸配列
を含み、
前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が、
－図３に示されるＭＦ５８１６のＶＨ鎖のアミノ酸配列、又は
－前記ＶＨ鎖に関して、多くとも１５個、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個、又は１、２、３、４、若しくは５個のアミノ酸挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせを有する図３に示されるＭＦ５８１６のＶＨ鎖のアミノ酸配列
を含む第２の可変ドメインを含む、請求項１又は７に記載の組成物。

【請求項12】

前記挿入、欠失、置換、若しくはそれらの組み合わせが、前記ＶＨ鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、又はＣＤＲ３領域に存在しない、請求項９に記載の組成物。

【請求項13】

ＥＧＦＲの細胞外部分に結合する第１の可変ドメインと、ＬＧＲ５の細胞外部分に結合する第２の可変ドメインと、を含む抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を含む、対象におけるがんの治療のための組成物であって、
前記がんが、頭頸部がんであり、２＋又は３＋のＩＨＣスコアによって特徴付けられる、又は０～３００のスケールで８０超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、あるいは、
前記がんが、３＋のＩＨＣスコアによって、又は０～３００のスケールで５０超のＥＧＦＲについてのＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲ発現を有する、胃がん、食道がん、又は胃食道接合部がんであり、
前記第１の可変ドメインが、少なくとも図３に示されるＭＦ３３７０、ＭＦ３７５５、ＭＦ４２８０、若しくはＭＦ４２８９のＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域であり、
前記第２の可変ドメインが、図３に示されるＭＦ５７９０、ＭＦ５８０３、ＭＦ５８０５、ＭＦ５８０８、ＭＦ５８０９、ＭＦ５８１４、ＭＦ５８１６、ＭＦ５８１７、若しくはＭＦ５８１８からなる群から選択される重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域である、組成物。

【請求項14】

前記対象が、抗ＥＧＦＲ剤で事前の治療を受けていない、請求項１、７又は１３に記載の組成物。

【請求項15】

前記がんが、２００超～３００以下のＨスコアによって特徴付けられるＥＧＦＲを発現する、請求項１、７又は１３に記載の組成物。

【請求項16】

前記ＥＧＦＲについてのＨスコアが、ＩＨＣを使用して決定される、請求項１５に記載の組成物。

【請求項17】

前記対象が、ヒトである、請求項１、７又は１３に記載の組成物。

【請求項18】

前記治療が、前記対象に、有効量の前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む、請求項１、７又は１３に記載の組成物。

【請求項19】

前記治療が、前記対象に、１５００ｍｇの均一用量の前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体を提供することを含む、請求項１、７又は１３に記載の組成物。

【請求項20】

前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が、毎週、隔週、又は毎月提供される、請求項１、７又は１３に記載の組成物。

【請求項21】

前記抗体、又はその機能部分、誘導体、及び／若しくは類似体が、隔週で提供される、請求項１、７又は１３に記載の組成物。

【請求項22】

前記抗体が、ＡＤＣＣ増強型である、請求項１、７又は１３に記載の組成物。

【請求項23】

前記抗体が、アフコシル化されている、請求項１、７又は１３に記載の組成物。

【請求項24】

前記抗体が、二重特異性抗体である、請求項１、７又は１３に記載の組成物。

【請求項25】

前記抗体が、共通軽鎖を含む、請求項１、７又は１３に記載の組成物。

【請求項26】

前記抗体が、アミノ酸配列ＱＳＩＳＳＹを含むＬＣＤＲ１と、アミノ酸配列ＡＡＳを含むＬＣＤＲ２と、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＰＴを含むＬＣＤＲ３とを含む、請求項１、７又は１３に記載の組成物。

【国際調査報告】