特表 2024-537100 Ｆｃガンマ受容体ＩＩ結合、及びグリカン含量

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-10

(54)【発明の名称】Ｆｃガンマ受容体ＩＩ結合、及びグリカン含量

(51)【国際特許分類】

   C12Q 1/34 20060101AFI20241003BHJP

   G01N 33/50 20060101ALI20241003BHJP

   C07K 16/00 20060101ALN20241003BHJP

【ＦＩ】

C12Q1/34

G01N33/50 Z

C07K16/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024520017

(86)(22)【出願日】2022-10-04

(85)【翻訳文提出日】2024-05-29

(86)【国際出願番号】 US2022045633

(87)【国際公開番号】W WO2023059607

(87)【国際公開日】2023-04-13

(31)【優先権主張番号】63/252,245

(32)【優先日】2021-10-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/299,104

(32)【優先日】2022-01-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】500049716

【氏名又は名称】アムジエン・インコーポレーテツド

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】カナカラージ，パラニサミ

(72)【発明者】

【氏名】ヒュッタラー，カタリーナ

(72)【発明者】

【氏名】クーンズ，スコット

【テーマコード（参考）】

2G045

4B063

4H045

【Ｆターム（参考）】

2G045AA40

2G045DA80

2G045FB06

4B063QA01

4B063QA05

4B063QA18

4B063QA20

4B063QQ67

4B063QQ79

4B063QR15

4B063QS17

4B063QS28

4B063QX01

4H045AA11

4H045AA20

4H045BA53

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本願で提供されるのは、抗体組成物の製品品質を決定する方法であって、製品品質が抗体組成物のＦｃγ受容体ＩＩ（ＦｃγＩＩ）結合レベルに基づく、方法である。例示的な実施形態では、方法は、（ａ）抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定すること；（ｂ）任意選択的に、（ａ）で決定された非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量に基づいて、予測されたＦｃγＲＩＩ結合レベルを算出すること；並びに（ｃ）（ｉ）非フコシル化グリカン含量及び／若しくはβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内である場合、並びに／又は（ｉｉ）予測されたＦｃγＲＩＩ結合レベルが目標範囲内である場合には、抗体組成物の製品品質が許容可能であると決定することを含む。製品品質をモニターする関連方法、及び抗体組成物を製造する方法が、本願でさらに提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗体組成物の製品品質を決定する方法であって、前記製品品質は、前記抗体組成物のＦｃγ受容体ＩＩ（ＦｃγＲＩＩ）結合レベルに基づいており、前記方法は、
ａ．前記抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定すること；
ｂ．任意選択的に、（ａ）で決定された前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量に基づいてＦｃγＲＩＩ結合レベルを算出すること；
並びに
ｃ．（ｉ）前記非フコシル化グリカン含量及び／若しくはβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内であり、並びに／又は（ｉｉ）前記ＦｃγＲＩＩ結合レベルが目標範囲内である場合に、前記抗体組成物の前記製品品質が許容可能であると決定すること
を含む、方法。

【請求項2】

前記ＦｃγＲＩＩ結合レベルの目標範囲、前記非フコシル化グリカン含量の目標範囲、及び／又は前記β－ガラクトシル化グリカン含量の目標範囲は、参照抗体のＦｃγＲＩＩ結合レベル、非フコシル化グリカン含量、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量に基づいている、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記参照抗体は、キメラ定常領域を含む、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記参照抗体は、ＩｇＧ２定常領域の一部及びＩｇＧ４定常領域の一部を含み、任意選択的に、前記参照抗体は、エクリズマブである、請求項２又は３に記載の方法。

【請求項5】

前記ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、ＦｃγＲＩＩａ結合のレベルである、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

（ａ）で決定された前記β－ガラクトシル化グリカン含量に基づいてＦｃγＲＩＩａ結合レベルを算出することを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記ＦｃγＲＩＩ結合レベルを、方程式Ａ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＢＧ％＋ｙ
［方程式Ａ］
（式中、ｍは、約０．５３５～約１．０９１であり、ｙは、約７２．５８～約８５．７８であり、ＢＧ％は、（ａ）で決定されたβ－ガラクトシル化含量％である）
に従って算出する、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

ｍは、０．８１３又は０．７７８である、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

ｙは、７９．１８又は８１．７６である、請求項７又は８に記載の方法。

【請求項10】

（ａ）で決定された前記非フコシル化グリカン含量に基づいてＦｃγＲＩＩ結合レベルを算出することを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記ＲｃγＲＩＩ結合レベルを、方程式Ｂ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＡＦ％＋ｙ
［方程式Ｂ］
（式中、ｍは、約－１３．７３～約－７．５４であり、ｙは、約１０８．８～約１１９．１であり、ＡＦ％は、（ａ）で決定された非フコシル化グリカン含量％である）
に従って算出する、請求項８に記載の方法。

【請求項12】

ｍは、－１０．６３又は－９．５３である、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

ｙは、１１４である、請求項１１又は１２に記載の方法。

【請求項14】

（ａ）で決定された前記非フコシル化グリカン含量及び前記β－ガラクトシル化グリカン含量に基づいてＦｃγＲＩＩ結合レベルを算出することを含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式３：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５７６＊ＢＧ％＋（－４．９７８）＊ＡＦ％＋９８．８７７
［方程式３］
（式中、ＢＧ％は、前記β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内である、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、ＦｃγＲＩＩｂ結合のレベルである、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

（ａ）で決定された前記β－ガラクトシル化グリカン含量に基づいてＦｃγＲＩＩｂ結合レベルを算出することを含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記ＦｃγＲＩＩ結合レベルを、方程式Ｃ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＢＧ％＋ｙ
［方程式Ｃ］
（式中、ｍは、約０．３２６０～約０．９６９７であり、ｙは、約７７．７２～約９２．９９であり、ＢＧ％は、（ａ）で決定された前記β－ガラクトシル化グリカン含量％である）
に従って算出する、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

ｍは、０．６４８又は０．６４４である、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

ｙは、８５．３６又は８６．３４である、請求項１８又は１９に記載の方法。

【請求項21】

（ａ）で決定された前記非フコシル化グリカン含量に基づいてＦｃγＲＩＩｂ結合レベルを算出することを含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記ＦｃγＲＩＩ結合レベルを、方程式Ｄ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＡＦ％＋ｙ
［方程式Ｄ］
（式中、ｍは、約－１２．０２～約－６．２４７であり、ｙは、約１０９．３～約１１８．９であり、ＡＦ％は、（ａ）で決定された前記非フコシル化グリカン含量％である）
に従って算出する、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

ｍは、－９．１３２又は－７．１０２である、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

ｙは、１１４又は１１１．９である、請求項２２又は２３に記載の方法。

【請求項25】

（ａ）で決定された前記非フコシル化グリカン含量及び前記β－ガラクトシル化グリカン含量に基づいてＦｃγＲＩＩｂ結合レベルを算出することを含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式４：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．４６１＊ＢＧ％＋（－４．４２９）＊ＡＦ％＋１０５．７３１
［方程式４］
の直線の９５％信頼区間内である、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

高マンノース（ＨＭ）グリカン含量を決定することをさらに含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式５、又は方程式６、又は方程式９、又は方程式１０：
ＦｃγＲＩＩａ結合＝０．５７６＊ＢＧ％＋（－４．９７８）＊ＡＦ％＋９８．８７７＋（－１．３４３）＊ＨＭ％
［方程式５］
ＦｃγＲＩＩａ結合＝０．４６＊ＢＧ％＋（－４．４２９）＊ＡＦ％＋１０５．７３１＋（－１．８８３）＊ＨＭ％
［方程式６］
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５４５＊ＢＧ％＋（－４．４６６）＊ＡＦ％＋１０２．７＋（－２．０３６）＊ＨＭ％
［方程式９］
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５９０＊ＢＧ％＋（－２．０４）＊ＡＦ％＋９９．２＋（－１．９１）＊ＨＭ％
［方程式１０］
（式中、ＢＧ％は、前記β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、前記非フコシル化グリカン含量％であり、ＨＭ％は、前記高マンノースグリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内である、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記方法は、品質管理（ＱＣ）アッセイである、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記方法は、インプロセスＱＣアッセイである、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記試料は、インプロセス材料の試料である、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を、回収前又は回収後に決定する、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を、クロマトグラフィー工程後に決定する、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記クロマトグラフィー工程は、キャプチャークロマトグラフィー、中間クロマトグラフィー、及び／又はポリッシュクロマトグラフィーを含む、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を、ウイルスの不活化及び中和、ウイルス濾過、又は緩衝液交換の後に決定する、請求項３３又は３４に記載の方法。

【請求項36】

前記方法は、ロットリリースアッセイである、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記試料を、製造ロットから得る、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内である場合には、下流の処理のために前記抗体組成物を選択することをさらに含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

（ａ）で決定された前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が前記目標範囲内ではない場合には、細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して改変細胞培養物を得る、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

前記細胞培養の１つ又は複数の条件を改変した後に得られる前記抗体組成物の試料の前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定することをさらに含む、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

（ａ）で決定された前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が前記目標範囲内ではない場合には、前記方法は、（ｄ）前記細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して改変細胞培養物を得ること、並びに（ｅ）前記改変細胞培養物から得られた前記抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定することをさらに含む、請求項１～４０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

（ａ）で決定された前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が前記目標範囲内ではない場合には、前記方法は、（ｅ）で決定された前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が前記目標範囲内になるまで（ｄ）及び（ｅ）をさらに含む、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が前記目標範囲外である場合にのみ、前記抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合レベルを直接測定するアッセイを前記抗体組成物に対して実施する、請求項１～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が前記目標範囲内である場合には、前記抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合を直接測定するアッセイを前記抗体組成物に対して実施しない、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

抗体組成物の製品品質をモニタリングする方法であって、第１の時点で得られた第１の試料と、前記第１の時点とは異なる第２の時点で採取された第２の試料とを用いて、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法に従って抗体組成物の製品品質を決定することを含む、方法。

【請求項46】

前記第１の試料及び第２の試料のそれぞれは、インプロセス材料の試料である、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記第１の試料は、インプロセス材料の試料であり、前記第２の試料は、製造ロットの試料である、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記第１の試料は、前記細胞培養の１つ又は複数の条件を改変する前に得られた試料であり、前記第２の試料は、前記細胞培養の１つ又は複数の条件を改変した後に得られた試料である、請求項４６に記載の方法。

【請求項49】

抗体組成物を製造する方法であって、前記抗体組成物の製品品質を決定することを含み、前記抗体組成物の製品品質を、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法に従って決定し、前記試料は、インプロセス材料の試料であり、（ａ）で決定された前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が前記目標範囲内ではない場合には、前記方法は、（ｄ）前記細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して改変細胞培養物を得ること、並びに（ｅ）前記改変細胞培養物から得られた前記抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定すること、任意選択的に、前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が前記目標範囲内になるまで工程（ｄ）及び（ｅ）を繰り返すことをさらに含む、方法。

【請求項50】

前記細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、前記ＨＭグリカン含量を主に変化させて前記ＦｃγＲＩＩ結合の目標範囲を達成する、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、前記β－ガラクトシル化グリカン含量を主に変化させて、前記ＦｃγＲＩＩ結合の目標範囲を達成する、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

抗体組成物を製造する方法であって、
ａ．前記抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定すること；
ｂ．（ａ）で決定された非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量に基づいて、前記抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合レベルを決定すること；
並びに
ｃ．（ｂ）で決定されたＦｃγＲＩＩ結合のレベルに基づいて、下流の処理のために前記抗体組成物を選択すること
を含む方法。

【請求項53】

前記抗体組成物は、キメラ定常領域を含む、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

前記キメラ定常領域は、ＩｇＧ２定常領域の一部及びＩｇＧ４定常領域の一部を含む、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記キメラ定常領域は、ＩｇＧ２のＣＨ１及び／又はＩｇＧ４のＣＨ２－ＣＨ３を含む、請求項３～５４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項56】

前記抗体組成物は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むキメラ定常領域を含む、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

前記抗体組成物は、エクリズマブの重鎖及び軽鎖を含む抗Ｃ５抗体を含む、請求項１～５６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項58】

前記試料は、前記抗体組成物の抗体を発現するグリコシル化コンピテント細胞を含む細胞培養物に由来する、請求項１～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項59】

前記細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、前記抗体組成物の前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を改変すること、並びに前記改変された細胞培養物から得た前記抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定することをさらに含む、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

前記細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、前記抗体組成物の非フコシル化グリカンのレベルを増加させて、前記抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを低下させることをさらに含む、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

前記細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、前記抗体組成物のβ－ガラクトシル化グリカンのレベルを低下させて、前記抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを低下させることをさらに含む、請求項５９又は６０に記載の方法。

【請求項62】

前記細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、前記抗体組成物の非フコシル化グリカンのレベルを低下させて、前記抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを増加させることをさらに含む、請求項５９に記載の方法。

【請求項63】

前記細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、前記抗体組成物のβ－ガラクトシル化グリカンのレベルを増加させて、前記抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを増加させることをさらに含む、請求項５９又は６２に記載の方法。

【請求項64】

前記非フコシル化グリカン含量及び／又は前記β－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内になるまで前記改変を繰り返すことをさらに含む、請求項５９～６３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

前記非フコシル化グリカン含量及び／又は前記β－ガラクトシル化グリカン含量を、前記抗体組成物の製造に関してリアルタイムで決定する、請求項１～６４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項66】

前記非フコシル化グリカン含量及び／又は前記β－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内である場合には、下流の処理のために前記抗体組成物を選択することを含む、請求項１～６５のいずれか一項に記載を方法。

【請求項67】

前記ＦｃγＲＩＩ結合レベルが目標範囲内である場合には、下流の処理のために前記抗体組成物を選択することを含む、請求項１～６６のいずれか一項に記載を方法。

【請求項68】

前記ＦｃγＲＩＩ結合のレベルを決定することは、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／又はＣＤＣのレベルを決定することを含む、請求項１～６７のいずれか一項に記載を方法。

【請求項69】

前記抗体組成物のＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／又はＣＤＣのレベルを指定することをさらに含む、請求項１～６８のいずれか一項に記載の方法であって、前記選択された抗体組成物は、前記指定されたレベルのＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／又はＣＤＣを含む、方法。

【請求項70】

抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを改変する方法であって、
ａ）ＦｃγＲＩＩのレベルを指定すること；
並びに
ｂ）前記抗体組成物の非フコシル化グリカン及び／又はβ－ガラクトシル化グリカンのレベルを改変して、前記指定されたレベルのＦｃγＲＩＩを達成すること
を含む方法。

【請求項71】

前記抗体組成物の非フコシル化グリカンのレベルを増加させて前記抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを低下させることを含む、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

前記抗体組成物のβ－ガラクトシル化グリカンのレベルを低下させて前記抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを低下させることを含む、請求項７０又は７１に記載の方法。

【請求項73】

前記抗体組成物の非フコシル化グリカのレベルを低下させて前記抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを増加させることを含む、請求項７０に記載の方法。

【請求項74】

前記抗体組成物のβ－ガラクトシル化グリカンのレベルを増加させて前記抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを増加させることを含む、請求項７０又は７３に記載の方法。

【請求項75】

抗体組成物のＦｃγ受容体ＩＩ（ＦｃγＲＩＩ）結合のレベルを決定する方法であって、前記抗体組成物の非フコシル化グリカン及び／又はβ－ガラクトシル化グリカンのレベルを決定することを含む、方法。

【請求項76】

抗体組成物のインビボでの有効性及び／又は副作用を予測する方法であって、
ａ．前記抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定すること；
ｂ．（ａ）で決定された前記非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量に基づいて、前記抗体組成物をインビボでの副作用の原因と予測すること
を含む、方法。

【請求項77】

前記ＦｃγＲＩＩは、ＦｃγＲＩＩａである、請求項１～７６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項78】

前記ＦｃγＲＩＩは、ＦｃγＲＩＩｂである、請求項１～７７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項79】

前記抗体組成物は、キメラ定常領域を含む、請求項１～７８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項80】

前記キメラ定常領域は、ＩｇＧ２定常領域の一部及びＩｇＧ４定常領域の一部を含む、請求項７９に記載の方法。

【請求項81】

前記キメラ定常領域は、ＩｇＧ２のＣＨ１及び／又はＩｇＧ４のＣＨ２－ＣＨ３を含む、請求項８０に記載の方法。

【請求項82】

前記抗体組成物は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むキメラ定常領域を含む、請求項８１に記載の方法。

【請求項83】

前記抗体は、エクリズマブを含む、請求項１～８２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項84】

前記下流の処理は、希釈、濃縮、充填、濾過、製剤化、クロマトグラフィー、ウイルス濾過、及び／又はウイルス不活性化のうちの少なくとも１つを含む、請求項１～８３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項85】

前記下流の処理は、キャプチャークロマトグラフィー、中間クロマトグラフィー、及び／又はポリッシュクロマトグラフィー等のクロマトグラフィーを含む、請求項１～８４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項86】

前記クロマトグラフィーは、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、又は疎水性相互作用クロマトグラフィーのうちの１つ又は複数を含む、請求項８５に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本明細書では、２０２１年１０月５日に出願された米国仮特許出願第６３／２５２，２４５号明細書、及び２０２２年１月１３日に出願された米国仮特許出願第６３／２９９，１０４号明細書の３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の下での利益が主張されており、これらの開示が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

電子的に提出された資料の参照による組み込み
本明細書と同時に提出された、コンピュータにより読み込み可能なヌクレオチド／アミノ酸配列表は、その全体が参照により組み込まれ、且つ下記のように識別される：「Ａ－２７５５－ＷＯ０１－ＳＥＣ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ＸＭＬ」という名称の１５．４バイトのＸＭＬファイル、２０２２年９月２２日作成。

【背景技術】

【0003】

グリコシル化は、例えば、タンパク質折り畳み、品質管理、分子の輸送及び選別、並びに細胞表面受容体相互作用等の複数の細胞機能に関与することから、最も一般的であるが依然として顕著な翻訳後修飾の１つである。グリコシル化は、治療用糖タンパク質の生理活性、薬物動態、免疫原性、溶解度、及びインビボクリアランスに影響を及ぼすことから、組換えタンパク質薬の治療効果に影響を及ぼす。Ｆｃグリコフォームプロファイルは、特に、抗体の臨床効果及び薬物動態に直接影響を及ぼすことから、組換え抗体に対する製品品質特性である。

【0004】

Ｆｃ－ＣＨ２ドメイン中の保存された二分枝型グリカンに関連する特定のグリカン構造は、抗体エフェクター機能（例えば、抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ））を介在するＦｃドメインとＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）との相互作用に強く影響を及ぼす可能性がある（Ｒｅｕｓｃｈ Ｄ，Ｔｅｊａｄａ ＭＬ．Ｆｃ ｇｌｙｃａｎｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｑｕａｌｉｔｙ ａｔｔｒｉｂｕｔｅｓ．Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０１５；２５：１３２５－３４を参照されたい）。例えば、コアフコースは、ＦｃγＲＩＩＩａ結合親和性に対して大きい影響を有しており、ＡＤＣＣ活性に実質的な変化をもたらすことが示されている（Ｏｋａｚａｋｉ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｆｕｃｏｓｅ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｂｉｎｄｉｎｇ ｅｎｔｈａｌｐｙ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ＩｇＧ１ ａｎｄ ＦｃｇａｍｍａＲＩＩＩａ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ２００４；３３６：１２３９－４９；Ｆｅｒｒａｒａ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｕｎｉｑｕｅ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ－ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ａｒｅ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｅｔｗｅｅｎ ＦｃｇａｍｍａＲＩＩＩ ａｎｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｌａｃｋｉｎｇ ｃｏｒｅ ｆｕｃｏｓｅ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ ２０１１；１０８：１２６６９－７４を参照されたい）。高マンノースレベルも、コアフコースと比べてはるかに控えめであり且つ予測しにくい程度ではあるが、ＡＤＣＣ活性を調節する役割を果たすことが示されている（Ｔｈｏｍａｎｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｆｃ－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０１６；７３：６９－７５）。コアフコースは、ＦｃドメインがＦｃγＲと相互作用することを立体的に妨げると報告されていことから、多くの研究は、非フコシル化グリカン及び高マンノースグリカンを含む、コアフコースを欠くグリカン基に焦点を当ててきた。コアフコースを欠くこのグリカン基に加えて、末端ガラクトースがＡＤＣＣレベルに影響を及ぼすことが示唆されている。特に、末端ガラクトースの存在により、ＡＤＣＣ活性が増強される。Ｔｈｏｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７３：６９－７５（２０１６）。

【0005】

抗体のＦｃドメインに存在するグリカンの構造は、補体タンパク質Ｃ１ｑへのＦｃ結合にも影響を及ぼす可能性があり、そのため、最終的には抗体の補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）エフェクター機能に影響を及ぼす。例えば、β－ガラクトシル化がより高い抗体は、高親和性でＣ１ｑに結合し、より高レベルのＣＤＣ活性を誘導する。同様に、抗ＴＮＦ抗体アダリムマブのβ－ガラクトシル化の減少は、ＡＤＣＣ活性及びＣＤＣ活性の低下と関連している。アダリムマブのβ－ガラクトシル化の減少は、ＦｃγＲＩＩＩａ結合及びＣ１ｑタンパク質に対する結合親和性の低下とも関連している。Ｂｕｒｚａｗａ ｅｔ ａｌ．，“Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ：Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｇａｌａｃｔｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｏｎ Ｆｃ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ａｄａｌｉｍｕｍａｂ” Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｏｎｌｉｎｅ（２０１８）下記で閲覧可能：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓｏｎｌｉｎｅ．ｃｏｍ／ｄｏｃ／ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ－ｏｆ－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌａｔｉｏｎ－ｏｎ－ｆｃ－ｍｅｄｉａｔｅｄ－ｂｉｎｄｉｎｇ－ａｎｄ－ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ－ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ－ｏｆ－ａｄａｌｉｍｕｍａｂ－０００１。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Ｒｅｕｓｃｈ Ｄ，Ｔｅｊａｄａ ＭＬ．Ｆｃ ｇｌｙｃａｎｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｑｕａｌｉｔｙ ａｔｔｒｉｂｕｔｅｓ．Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０１５；２５：１３２５－３４

【非特許文献2】Ｏｋａｚａｋｉ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｆｕｃｏｓｅ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｂｉｎｄｉｎｇ ｅｎｔｈａｌｐｙ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ＩｇＧ１ ａｎｄ ＦｃｇａｍｍａＲＩＩＩａ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ２００４；３３６：１２３９－４９

【非特許文献3】Ｆｅｒｒａｒａ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｕｎｉｑｕｅ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ－ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ａｒｅ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｅｔｗｅｅｎ ＦｃｇａｍｍａＲＩＩＩ ａｎｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｌａｃｋｉｎｇ ｃｏｒｅ ｆｕｃｏｓｅ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ ２０１１；１０８：１２６６９－７４

【非特許文献4】Ｔｈｏｍａｎｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｆｃ－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０１６；７３：６９－７５

【非特許文献5】Ｔｈｏｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７３：６９－７５（２０１６）

【非特許文献6】Ｂｕｒｚａｗａ ｅｔ ａｌ．，“Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ：Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｇａｌａｃｔｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｏｎ Ｆｃ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ａｄａｌｉｍｕｍａｂ” Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｏｎｌｉｎｅ（２０１８）下記で閲覧可能：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓｏｎｌｉｎｅ．ｃｏｍ／ｄｏｃ／ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ－ｏｆ－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌａｔｉｏｎ－ｏｎ－ｆｃ－ｍｅｄｉａｔｅｄ－ｂｉｎｄｉｎｇ－ａｎｄ－ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ－ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ－ｏｆ－ａｄａｌｉｍｕｍａｂ－０００１

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

様々な要因がグリカン構造に影響を及ぼしており、そのため、タンパク質（糖タンパク質）の最終的なグリコシル化形態（グリコフォーム）に影響を及ぼす。例えば、抗体を発現する細胞株、細胞培養培地、フィード培地組成、及び細胞培養中のフィードのタイミングは、タンパク質のグリコフォームの産生に影響を及ぼす可能性がある。研究グループは、抗体の特定のグリコフォームのレベルに影響を及ぼす多くの方法を示唆しているが、バイオ医薬産業において、特定の抗体組成物がその抗体組成物の所与のグリコフォームプロファイルに基づいて示すエフェクター機能のレベル又はＦｃγＲへの結合を予測する簡単で効率的な方法が依然として必要とされている。加えて、当該技術分野では、所望のレベルのエフェクター機能又はＦｃγＲ結合レベルを達成する特定のグリカンのレベルを決定する方法が必要とされている。

【課題を解決するための手段】

【0008】

抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合レベルと、この抗体組成物のβ－ガラクトシル化グリカンのレベル及び／又は非フコシル化グリカンのレベルとの間の統計的に有意な関連性を示すデータが、本明細書において初めて提供される。本明細書でさらに説明されているように、方程式Ａ～Ｄ及び方程式１～１０が挙げられるがこれらに限定されない表現は、抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合と、この抗体組成物のβ－ガラクトシル化グリカン含量％及び／又は非フコシル化グリカン含量の％とを、統計的に有意に相関させる。そのような表現は、これらのグリカンのレベルに基づいて抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを予測する方法で有用である。様々な態様では、予測ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、抗体組成物が治療閾値を満たすという点で許容可能であると識別されるマーカーとして機能し、そのため、１つ又は複数の下流の製造プロセスで使用され得るものを特定するか、或いは、許容できず、製造プロセスで進ませるべきではないものを特定する。本開示の相関関係は、所望の抗体組成物の糖プロファイルの特定においてさらに有用である。本明細書で示されている相関関係、及び所与の目標ＦｃγＲＩＩ結合レベルにより、目標ＦｃγＲＩＩ結合レベルを有する抗体組成物の糖プロファイル（例えば、β－ガラクトシル化グリカン、非フコシル化グリカンのプロファイル）が特定される。目標ＦｃγＲＩＩ結合レベルを有する抗体組成物のβ－ガラクトシル化グリカン及び非フコシル化グリカンの特定されたプロファイルにより、この特定されたプロファイルを目標として、製造プロセス（例えば、細胞培養）を実行し得る。

【0009】

従って、本開示は、抗体組成物の製品品質を決定する方法を提供する。様々な実施形態では、この製品品質は、抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合レベルに基づいている。例示的な実施形態では、この方法は、（ａ）抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定すること；（ｂ）任意選択的に、（ａ）で決定された非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量に基づいて予測ＲｃγＲＩＩ結合レベルを算出すること；並びに（ｃ）（ｉ）非フコシル化グリカン含量及び／若しくはβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内であり、並びに／又は（ｉｉ）予測ＦｃγＲＩＩ結合レベルが目標範囲内である場合には、抗体組成物の製品品質が許容可能であると決定することを含む。

【0010】

本開示はまた、抗体組成物の製品品質をモニタリングする方法も提供する。例示的な実施形態では、この方法は、本開示の方法に従って第１の時点で得られた抗体組成物の第１の試料の製品品質を決定すること、及び本開示の方法に従って第２の時点で得られた抗体組成物の第２の試料の製品品質を決定することを含み、第２の時点は、第１の時点とは異なる。様々な態様では、第１の時点と第２の時点との間の抗体組成物の非フコシル化グリカン及び／又はβ－ガラクトシル化グリカンのレベルの差違は、この抗体組成物のＦｃＲＩＩ結合のレベルでの差違の情報を提供する。

【0011】

本開示は、加えて、抗体組成物を製造する方法を提供する。例示的な実施形態では、この方法は、抗体組成物の製品品質を決定することを含み、この抗体組成物の製品品質を、本開示の方法に従って決定し、試料は、インプロセス材料の試料であり、（ａ）で決定された非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内ではなく、この方法は、（ｄ）細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して改変細胞培養物を得ること、並びに（ｅ）この改変細胞培養物から得られた抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定すること、任意選択的に、この非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内になるまで（ｄ）及び（ｅ）を繰り返すことをさらに含む。代替の又は追加の例示的な実施形態では、この方法は、（ａ）抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定すること；（ｂ）（ａ）で決定された非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量に基づいて抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合レベルを決定すること；並びに（ｃ）（ｂ）で決定されたＦｃγＲＩＩ結合のレベルに基づいて、下流の処理のためにこの抗体組成物を選択することを含む。

【0012】

抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを改変する方法が、されに提供される。例示的な実施形態では、この方法は、（ａ）ＦｃγＲＩＩのレベルを指定すること、並びに（ｂ）抗体組成物の非フコシル化グリカン及び／又はβ－ガラクトシル化グリカンのレベルを改変して、このＦｃγＲＩＩの指定レベルを達成することを含む。

【0013】

本開示は、抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを決定する方法を提供する。例示的な実施形態では、この方法は、抗体組成物の非フコシル化グリカン及び／又はβ－ガラクトシル化グリカンのレベルを決定することを含む。本開示はまた、抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを予測する方法も提供する。例示的な実施形態では、この方法は、抗体組成物の非フコシル化グリカン及び／又はβ－ガラクトシル化グリカンのレベルを決定することを含む。様々な態様では、抗体組成物の非フコシル化グリカン及び／又はβ－ガラクトシル化グリカンのレベルは、本明細書で提示される関連性により、抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合の情報を提供する。

【0014】

抗体組成物のインビボでの有効性及び／又は副作用を予測する方法が、本開示により提供される。例示的な実施形態では、この方法は、（ａ）抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定すること；並びに（ｂ）（ａ）で決定された非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量に基づいて、抗体組成物をインビボでの副作用の原因と予測することを含む。

【図面の簡単な説明】

【0015】

【図1A】図１Ａ及び図１Ｂは、例示的なグリカン構造の図である。

【図1B】図１Ａ及び図１Ｂは、例示的なグリカン構造の図である。

【図2A】図２Ａは、代表的なグリカンマップクロマトグラム（フルスケールビュー）である。図２Ｂは、代表的なグリカンマップクロマトグラム（拡大スケールビュー）である。

【図2B】図２Ａは、代表的なグリカンマップクロマトグラム（フルスケールビュー）である。図２Ｂは、代表的なグリカンマップクロマトグラム（拡大スケールビュー）である。

【図3】図３は、実施例２及び４で説明されている結合アッセイの一部の大まかな概略図である。

【図4A】図４Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロット（ｌｅｖｅｒａｇｅ ｐｌｏｔ）である。図４Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図４Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図４Ｄは、予測ＦｃγＩＩａ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩａ結合をプロットするグラフである。図４Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図４Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図４Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図4B】図４Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロット（ｌｅｖｅｒａｇｅ ｐｌｏｔ）である。図４Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図４Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図４Ｄは、予測ＦｃγＩＩａ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩａ結合をプロットするグラフである。図４Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図４Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図４Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図4C】図４Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロット（ｌｅｖｅｒａｇｅ ｐｌｏｔ）である。図４Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図４Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図４Ｄは、予測ＦｃγＩＩａ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩａ結合をプロットするグラフである。図４Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図４Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図４Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図4D】図４Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロット（ｌｅｖｅｒａｇｅ ｐｌｏｔ）である。図４Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図４Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図４Ｄは、予測ＦｃγＩＩａ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩａ結合をプロットするグラフである。図４Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図４Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図４Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図4E】図４Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロット（ｌｅｖｅｒａｇｅ ｐｌｏｔ）である。図４Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図４Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図４Ｄは、予測ＦｃγＩＩａ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩａ結合をプロットするグラフである。図４Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図４Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図４Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図4F】図４Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロット（ｌｅｖｅｒａｇｅ ｐｌｏｔ）である。図４Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図４Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図４Ｄは、予測ＦｃγＩＩａ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩａ結合をプロットするグラフである。図４Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図４Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図４Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図4G】図４Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロット（ｌｅｖｅｒａｇｅ ｐｌｏｔ）である。図４Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図４Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図４Ｄは、予測ＦｃγＩＩａ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩａ結合をプロットするグラフである。図４Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図４Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図４Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図5A】図５Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｄは、予測ＦｃγＲＩＩｂ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットするグラフである。図５Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図５Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図５Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図5B】図５Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｄは、予測ＦｃγＲＩＩｂ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットするグラフである。図５Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図５Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図５Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図5C】図５Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｄは、予測ＦｃγＲＩＩｂ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットするグラフである。図５Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図５Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図５Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図5D】図５Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｄは、予測ＦｃγＲＩＩｂ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットするグラフである。図５Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図５Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図５Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図5E】図５Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｄは、予測ＦｃγＲＩＩｂ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットするグラフである。図５Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図５Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図５Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図5F】図５Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｄは、予測ＦｃγＲＩＩｂ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットするグラフである。図５Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図５Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図５Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図5G】図５Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図５Ｄは、予測ＦｃγＲＩＩｂ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットするグラフである。図５Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図５Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図５Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図6】図６は、原薬製造及び製剤リリースアッセイに関して現在開示されている相関関係及びその例示的な適用の図である。インプロセス試料又はロットの試料のＦｃγＲＩＩ結合又はエフェクター機能を試験する代わりに、この試料のβ－ガラクトシル化グリカン％及び非フコシル化グリカン％を測定して、抗体組成物を、継続製造又は下流の処理用に選択すべきかどうか、又はロットを販売すべきかどうかを決定する。

【図7A】図７Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｄは、予測ＦｃγＩＩａ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩａ結合をプロットするグラフである。図７Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図７Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図７Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図7B】図７Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｄは、予測ＦｃγＩＩａ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩａ結合をプロットするグラフである。図７Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図７Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図７Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図7C】図７Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｄは、予測ＦｃγＩＩａ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩａ結合をプロットするグラフである。図７Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図７Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図７Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図7D】図７Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｄは、予測ＦｃγＩＩａ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩａ結合をプロットするグラフである。図７Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図７Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図７Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図7E】図７Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｄは、予測ＦｃγＩＩａ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩａ結合をプロットするグラフである。図７Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図７Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図７Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図7F】図７Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｄは、予測ＦｃγＩＩａ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩａ結合をプロットするグラフである。図７Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図７Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図７Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図7G】図７Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットである。図７Ｄは、予測ＦｃγＩＩａ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩａ結合をプロットするグラフである。図７Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図７Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図７Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩａ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図8A】図８Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｄは、予測ＦｃγＲＩＩｂ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットするグラフである。図８Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図８Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図８Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図8B】図８Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｄは、予測ＦｃγＲＩＩｂ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットするグラフである。図８Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図８Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図８Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図8C】図８Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｄは、予測ＦｃγＲＩＩｂ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットするグラフである。図８Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図８Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図８Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図8D】図８Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｄは、予測ＦｃγＲＩＩｂ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットするグラフである。図８Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図８Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図８Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図8E】図８Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｄは、予測ＦｃγＲＩＩｂ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットするグラフである。図８Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図８Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図８Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図8F】図８Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｄは、予測ＦｃγＲＩＩｂ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットするグラフである。図８Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図８Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図８Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【図8G】図８Ａは、β－ガラクトシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｂは、非フコシル化グリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｃは、ＨＭグリカンに関するＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。図８Ｄは、予測ＦｃγＲＩＩｂ結合の関数として実際のＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットするグラフである。図８Ｅは、β－ガラクトシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図８Ｆは、非フコシル化グリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。図８Ｇは、高マンノースグリカン（％）の関数としてＦｃγＩＩｂ結合をプロットするグラフである。９５％信頼空間を、網掛け領域で示す。

【発明を実施するための形態】

【0016】

グリコシル化、グリカン、及びグリカン測定方法
多くの分泌タンパク質は、翻訳後グリコシル化され、このプロセスにより、糖部分（例えば、グリカン、糖類）が、タンパク質の特定のアミノ酸に共有結合する。真核細胞では、下記の２種類のグリコシル化反応が起こる：（１）グリカンが認識配列Ａｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒ／Ｓｅｒ（ここで、「Ｘ」は、プロリン以外の任意のアミノ酸である）のアスパラギンに結合するＮ結合型グリコシル化、及び（２）グリカンがセリン又はスレオニンに結合するＯ結合型グリコシル化。グリコシル化のタイプ（Ｎ結合型又はＯ結合型）にかかわらず、各部位（Ｏ又はＮ）と結合するグリカン構造は広範囲にわたるため、タンパク質グリコフォームには微小不均一性がある。

【0017】

全てのＮ－グリカンは、共通のコア糖配列：Ｍａｎα１－６（Ｍａｎα１－３）Ｍａｎβ１－４ＧｌｃＮＡｃβ１－４ＧｌｃＮＡｃβ１－Ａｓｎ－Ｘ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ（Ｍａｎ_３ＧｌｃＮＡｃ_２Ａｓｎ）を有しており、下記の３つのタイプのうちの１つに分類される：（Ａ）２個のＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｕＮＡｃ）部分、及び多数（例えば５、６、７、８、若しくは９個）のマンノース（Ｍａｎ）残基からなる高マンノース（ＨＭ）若しくはオリゴマンノース（ＯＭ）型、（Ｂ）２個超のＧｌｃＮＡｃ部分、及び任意の数の他の糖タイプを含む複合型、又は（Ｃ）分枝の一方でＭａｎ残基を含み且つ複合枝の基部でＧｌｃＮＡｃを含むハイブリッド型。

【0018】

Ｎ結合型グリカンは、典型的には、ガラクトース（Ｇａｌ）、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、ガラクトサミン（ＧａｌＮ）、グルコース（ＧＬｃ）、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、グルコサミン（ＧｌｃＮ）、マンノース（Ｍａｎ）、Ｎ－アセチルマンノサミン（ＭａｎＮＡｃ）、マンノサミン（ＭａｎＮ）、キシロース（Ｘｙｌ）、Ｎ－アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）、Ｎ－グリコリルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ｇｃ）、２－ケト－３－デオキシノノン酸（Ｋｄｎ）、フコース（Ｆｕｃ）、グルクロン酸（ＧＬｃＡ）、イズロン酸（ＩｄｏＡ）、ガラクツロン酸（ＧａｌＡ）、マヌロン酸（ＭａｎＡ）のうちの１つ又は複数の単糖類を含む。一般に使用される糖類の記号で示された例示的なグリカン構造、及びその同一性を、図１Ａ及び図１Ｂに示す。

【0019】

Ｎ結合型グリコシル化は、小胞体（ＥＲ）において開始され、複雑な一連の反応の結果、基本的に２個のＧｌｃＮＡｃ残基及び３個のＭａｎ残基から作られるコアグリカン構造の結合が起こる。ＥＲにおいて形成されたグリカン複合体は、ゴルジ装置において酵素の作用により修飾される。糖類が酵素に比較的接近しにくい場合には、これは、典型的には、元来のＨＭ形態にとどまる。酵素が糖類に接近し得る場合、Ｍａｎ残基の多くが切り離され、糖類がさらに修飾され、その結果、複合型のＮ－グリカン構造が生じる。例えば、ｃｉｓ－ゴルジに位置するマンノシダーゼ－１は、ＨＭグリカンを切断し得るか又は加水分解し得るが、メディアル－ゴルジに位置するフコシルトランスフェラーゼＦＵＴ－８は、グリカンをフコシル化する（Ｈａｎｒｕｅ Ｉｍａｉ－Ｎｉｓｈｉｙａ（２００７），ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，７：８４）。

【0020】

従って、グリカン構造の糖組成及び構造立体配置は、とりわけ、ＥＲ及びゴルジ装置におけるグリコシル化機序、その機序の酵素のグリカン構造への到達性、各酵素の作用の順序、及びタンパク質がグリコシル化機序から放出される段階に依存して変動する。

【0021】

糖タンパク質含有組成物中に存在するグリカンを評価するために、又は糖タンパク質を含む特定の試料のグリコフォームプロファイル（例えば、グリコプロファイル）を決定するか、検出するか、若しくは測定するために、様々な方法が当該技術分野で知られている。好適な方法として下記が挙げられるが、これらに限定されない：陽イオンＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ分析、陰イオンＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ分析、弱陰イオン交換（ＷＡＸ）クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー（ＮＰ－ＨＰＬＣ）、エキソグリコシダーゼ消化、Ｂｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ－４クロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、及び一次元ｎ．ｍ．ｒ．分光法、並びにこれらの組み合わせ。例えば、Ｍａｔｔｕ ｅｔ ａｌ．，ＪＢＣ ２７３：２２６０－２２７２（１９９８）；Ｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ２９９（Ｐｔ １）：２６１－２７５（１９９４）；Ｙｏｏ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ２（３）：３２０－３３４（２０１０）Ｗｕｈｒｅｒ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｂ，２００５，Ｖｏｌ．８２５，Ｉｓｓｕｅ ２，ｐａｇｅｓ １２４－１３３；Ｒｕｈａａｋ Ｌ．Ｒ．，Ａｎａｌ Ｂｉｏａｎａｌ Ｃｈｅｍ，２０１０，Ｖｏｌ．３９７：３４５７－３４８１及びＧｅｏｆｆｒｅｙ，Ｒ．Ｇ．ｅｔ．ａｌ．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９６，Ｖｏｌ．２４０，ｐａｇｅｓ ２１０－２２６を参照されたい。また、本明細書中に示す実施例１では、糖タンパク質含有組成物（例えば、抗体組成物）中に存在するグリカンを評価するのに好適な方法が説明されている。実施例１の方法は、組成物のグリコシル化タンパク質（例えば、抗体組成物の抗体）に結合したグリカンをタンパク質（例えば、抗体）から酵素により切断するアッセイを説明する。グリカンは、続いて親水性相互作用液体クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）によって分離され、いくつかのピークを有するクロマトグラムが作成される。このクロマトグラムの各ピークは、異なるグリカンの平均分布（量）を示す。異なるグリカンのピークを含む例示的なＨＩＬＩＣクロマトグラムの２つの図を、図２Ａ及び２Ｂに示す。これらの目的のために、ピーク面積％＝ピーク面積／総ピーク面積×１００％、及び総ピーク面積％＝試料の総面積／標準の総面積×１００％である。従って、特定のグリカン（又はグリカンの群）のレベルを、％として報告する。例えば、抗体組成物が３０％のＭａｎ６レベルを有すると特徴付けられる場合には、この組成物の抗体から切断された全てのグリカンの３０％がＭａｎ６であることを意味する。

【0022】

本開示（本明細書に示される相関、関連、及び方程式を含む）は、抗体組成物の非フコシル化グリカン、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン、及び／又は高マンノースグリカンに関する。本明細書で使用される場合、「非フコシル化グリカン」又は「ＡＦグリカン」という用語は、コアフコース、例えば、Ｎ－グリコシル化部位のＡｓｎとのアミド結合に関与するＧｌｃＮＡｃ残基上のα１，６－結合型フコースを欠くグリカンを指す。非フコシル化グリカンとして、Ａ１Ｇ０、Ａ２Ｇ０、Ａ２Ｇ１ａ、Ａ２Ｇ１ｂ、Ａ２Ｇ２、及びＡ１Ｇ１Ｍ５が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる非フコシル化グリカンとして、例えば、Ａ１Ｇ１ａ、Ｇ０［Ｈ３Ｎ４］、Ｇ０［Ｈ４Ｎ４］、Ｇ０［Ｈ５Ｎ４］、ＦＯ－Ｎ［Ｈ３Ｎ３］が挙げられる。例えば、Ｒｅｕｓｃｈ ａｎｄ Ｔｅｊａｄａ，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ２５（１２）：１３２５－１３３４（２０１５）を参照されたい。非フコシル化グリカンのレベルは、種々の態様では、各非フコシル化グリカン種の％を合計することにより得られ、例えば、Ａ１Ｇ０％、Ａ２Ｇ０％、Ａ２Ｇ１ａ％、Ａ２Ｇ１ｂ％、Ａ２Ｇ２％、Ａ１Ｇ１Ｍ５％、Ａ１Ｇ１ａ％、Ｇ０［Ｈ３Ｎ４］％、Ｇ０［Ｈ４Ｎ４］％、Ｇ０［Ｈ５Ｎ４］％、及びＦＯ－Ｎ［Ｈ３Ｎ３］％を合計することにより得られる。本明細書で使用される場合、「β－ガラクトシル化グリカン」という用語は、「末端ガラクトースグリカン」と同義であり、１つ又は２つのガラクトース分子を含む任意のグリカンを指す。１つのガラクトース分子を含むグリカンは、グリカン名では「Ｇ１」（例えば、「Ｇ１ａ」又は「Ｇ１ｂ」）と命名されており、２つのガラクトース分子を含むグリカンは、グリカン名では「Ｇ２」と命名されている。従って、β－ガラクトシル化グリカンは、様々な態様では、Ｇ１－ガラクトシル化グリカン、Ｇ１ａ－ガラクトシル化グリカン、Ｇ１ｂ－ガラクトシル化グリカン、又はＧ２－ガラクトシル化グリカンである。β－ガラクトシル化グリカンは、様々な態様では、コアフコースを（例えば、Ａ２Ｇ１Ｆ、Ａ２Ｇ２Ｆ）を含む。或いは、β－ガラクトシル化グリカンは、コアフコース（例えば、Ａ２Ｇ１（例えば、Ａ２Ｇ１ａ及びＡ２Ｇ１ｂ）並びにＡ２Ｇ２（又はＧ１及びＧ２））を欠いている。いくつかの実施形態では、ガラクトシル化グリカンは、それぞれＡ１Ｇ１Ｍ５及びＡ１Ｇ１によって例示される、高マンノースアーム及びガラクトース含有アームを含むハイブリッド型グリカン、並びにシングルアームグリカンである。β－ガラクトシル化グリカンは、コアフコースを欠いている可能性がある（そのため、非フコシル化グリカンのサブセットを表す）が、β－ガラクトシル化グリカンは、ある特定の特徴を有しており、且つ別個のグリカン基と称される場合があることに留意されたい。従って、別途特に明記しない限り、β－ガラクトシル化グリカンは、別個の特徴を表すものと理解されており、且つ非フコシル化グリカンとは別に分類され得るか、又は非フコシル化グリカンの追加の特性として分類され得る。β－ガラクトシル化グリカンのレベルは、様々な態様では、各β－ガラクトシル化グリカン種の％を合計することにより得られ、例えば、各Ｇ１－ガラクトシル化グリカン種、各Ｇ１ａ－ガラクトシル化グリカン種、各Ｇ１ｂ－ガラクトシル化グリカン種、及び各Ｇ２－ガラクトシル化グリカン種の％を合計することにより得られる。本明細書で使用される場合、「高マンノースグリカン」又は「ＨＭグリカン」という用語は、それぞれＭａｎ５、Ｍａｎ６、Ｍａｎ７、Ｍａｎ８、及びＭａｎ９と略称される、５、６、７、８、又は９個のマンノース残基を含むグリカンを包含する。ＨＭグリカンのレベルは、様々な態様では、Ｍａｎ５％、Ｍａｎ６％、Ｍａｎ７％、Ｍａｎ８％、及びＭａｎ９％を合計することにより得られる。

【0023】

例示的な態様では、グリカンレベル（例えば、任意選択的に％で表されるグリカン含量、例えば、ＡＦグリカン％、β－ガラクトシル化グリカン％、ＨＭグリカン％）は、糖タンパク質含有組成物中に存在するグリカンを評価するための、又は糖タンパク質を含む特定の試料のグリコフォームプロファイル（例えば、グリコプロファイル）を決定するか、検出するか、若しくは測定するための、当該技術分野で既知の様々な方法のうちのいずれかにより決定される（例えば、測定される）。例示的な事例では、抗体組成物のグリカンレベル（例えば、ＡＦグリカン％、β－ガラクトシル化グリカン％、ＨＭグリカン％）は、クロマトグラフィーに基づく方法（例えば、ＨＩＬＩＣ）により抗体組成物の試料中におけるそのようなグリカンのレベルを測定することにより決定され、このグリカンレベルは、本明細書で説明されているように％で表される。例えば、実施例１を参照されたい。例示的な事例では、抗体組成物のグリカンレベルは、この組成物の抗体から切断された全てのグリカンの％として表される。様々な態様では、グリカンレベル（例えば、ＡＦグリカン％、β－ガラクトシル化グリカン％、ＨＭグリカン％）は、抗体組成物の試料中におけるそのようなグリカンのレベルを測定することにより決定される（例えば、測定される）。例示的な事例では、抗体組成物の少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、又は少なくとも９個の試料が採取され、各試料について、グリカンレベル（例えば、ＡＦグリカン％、β－ガラクトシル化グリカン％、ＨＭグリカン％）が決定される（例えば、測定される）。様々な態様では、ＡＦグリカン％、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン％、及び／又はＨＭグリカン％の平均（ｍｅａｎ）又は平均（ａｖｅｒａｇｅ）が決定される。

【0024】

ＦｃγＲＩＩ結合
Ｆｃ受容体は、Ｂリンパ球、濾胞樹状細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球、血小板、及び肥満細胞の表面上の受容体であって、抗体のＦｃ領域に結合する受容体である。Ｆｃ受容体は、それが結合する抗体のタイプに基づいて異なるクラスに分類される。例えば、Ｆｃγ受容体は、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域に対する受容体であり、Ｆｃアルファ受容体は、ＩｇＡ抗体のＦｃ領域に対する受容体であり、Ｆｃイプシロン受容体は、ＩｇＥ抗体のＦｃ領域に対する受容体である。

【0025】

「ＦｃγＲ」又は「Ｆｃ－ガンマ受容体」という用語は、オプソニン化された細胞又は微生物の食作用の誘導に関与するＩｇＧスーパーファミリに属するタンパク質を指す。例えば、Ｆｒｉｄｍａｎ ＷＨ．Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｆａｃｔｏｒｓ．ＦＡＳＥＢ Ｊｏｕｒｎａｌ．５（１２）：２６８４－９０（１９９１）を参照されたい。Ｆｃガンマ受容体ファミリのメンバーとして、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、及びＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）が挙げられる。ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、及びＦｃγＲＩＩＩＢの配列は、多くの配列データベースで見出され得、例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベース（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）のアクセッション番号Ｐ１２３１４（ＦＣＧＲ１＿ＨＵＭＡＮ）、Ｐ１２３１８（ＦＣＧ２Ａ＿ＨＵＭＡＮ）、Ｐ３１９９４（ＦＣＧ２Ｂ＿ＨＵＭＡＮ）、Ｐ０８６３７（ＦＣＧ３Ａ＿ＨＵＭＡＮ）、及びＰ０８６３７（ＦＣＧ３Ａ＿ＨＵＭＡＮ）の下にそれぞれ見出され得る。

【0026】

ヒト内在性膜受容体糖タンパク質のＦｃγＲＩＩファミリとして、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ、及びＦｃγＲＩＩｂが挙げられる。ＦｃγＲＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｃは、ＦｃγＲＩＩｂの機能に対向する細胞機能を有する。ＦｃγＲＩＩａタンパク質は、活性化Ｆｃ受容体であるのに対して、ＦｃγＲＩＩｂは、抑制性であり、Ｂ細胞の活性化型Ｆｃ受容体及び抗原受容体の作用を調節する免疫チェックポイントと考えられている。ＦｃγＲＩＩｃは、ＦｃγＲＩＩａと類似しており、活性化Ｆｃ受容体と考えられている。ＦｃγＲＩＩａは、顆粒球、単球、及び単球由来細胞（例えば、マクロファージ、及び樹状細胞（ＤＣ））上で発現されている。ＩｇＧ架橋によるＦｃγＲＩＩａの関与は、様々なエフェクター機能を開始し得、例えば、食作用、ＩｇＧでオゾン化された標的細胞を殺傷するための好中球及び他の骨髄エフェクター細胞の活性化、炎症性メディエータを放出するための顆粒球の活性化、Ｔ細胞の増殖、及びＴ細胞により媒介されるサイトカイン分泌、並びに血管損傷後の血小板の活性化、接着、及び凝集を開始し得る。ＦｃγＲＩＩタンパク質の構造及び機能は、Ａｎａｎｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：４６４（２０１９）で概説されており；ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１９．００４６４にてワールド・ワイド・ウェブでアクセス可能である。

【0027】

本開示（本明細書に示される相関、関連、及び方程式を含む）は、抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルに関する。抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合レベルを測定する方法は、当該技術分野で既知であり、その例示的な方法は、本明細書で説明されており（例えば、実施例２及び４を参照されたい）、本明細書で提示されているデータは、抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合にレベルがこの抗体組成物の糖プロファイルにより予測され得ることを裏付ける。例示的な事例では、抗体組成物の非フコシル化グリカン％、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン％、及び／又はＨＭグリカン％を使用して、この抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを算出し得るか、又は予測し得る。同様に、抗体エフェクター機能は、抗体ＦｃドメインとＦｃγＲＩＩとの結合時に誘導されることを考慮すると、抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルは、様々な事例では、エフェクター機能の代理として機能し、その結果、抗体組成物の非フコシル化グリカン％、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン％、及び／又はＨＭグリカン％を使用して、この抗体組成物のエフェクター機能のレベルを算出し得るか、又は予測し得、このエフェクター機能は、ＦｃγＲＩＩ結合時に活性化される。例示的な態様では、本開示は、抗体組成物の非フコシル化グリカン％、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン％、及び／又はＨＭグリカン％を、ＦｃγＲＩＩａ結合のレベルに関連付ける。代替な又は追加の態様では、本開示は、抗体組成物の非フコシル化グリカン％、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン％、及び／又はＨＭグリカン％を、ＦｃγＲＩＩｂ結合のレベルに関連付ける。

【0028】

本開示の、抗体組成物の非フコシル化グリカン％、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン％、及び／又はＨＭグリカン％と、ＦｃγＲＩＩ結合のレベルとを結びつける関係は、様々な事例では、所望のＦｃγＲＩＩ結合活性が一貫して且つ意図されたレベルで送達され得ることを確実にするためのプロセス制御手段の設計に有用である。この相関関係を利用して、一貫した臨床成績を保証し得、バイオシミラー候補の機能的類似性を達成し得、且つ治療的抗体処置の潜在的なインビボでの効果を予測し得る。

【0029】

様々な態様では、本開示に基づいて、抗体組成物の非フコシル化グリカン％、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン％、及び／又はＨＭグリカン％に基づいて、ＦｃγＲＩＩ結合レベルを算出し得る。様々な態様では、抗体組成物の非フコシル化グリカン％、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン％、及び／又はＨＭグリカン％は、この抗体組成物の試料に基づいて測定された量である。様々な事例では、測定された非フコシル化グリカン％、及び／又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン％、及び／又は測定されたＨＭグリカン％は、ＨＩＬＩＣが挙げられるがこれに限定されない方法により測定される。様々な事例では、測定された非フコシル化グリカン％、及び／又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン％、及び／又は測定されたＨＭグリカン％は、実施例１で説明されている方法が挙げられるがこれに限定されない方法により測定される。

【0030】

様々な態様では、本開示に基づいて、非フコシル化グリカン％、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン％、及び／又はＨＭグリカン％を、既知の、又は予め決定された、又は予め選択された、又は目標のＦｃγＲＩＩ結合レベルに基づいて算出し得る。様々な事例では、抗体組成物の特定の抗体が産生されると仮定すると、目標ＦｃγＲＩＩ結合レベル又はＦｃγＲＩＩ結合レベルの目標範囲は、既知である。例えば、抗体は、参照抗体と同一のアミノ酸配列（又は参照抗体のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９７％、若しくは９９％同一のアミノ酸配列）を含み得、目標ＦｃγＲＩＩ結合レベル又はその範囲は、参照抗体に関して既知である。例示的な態様では、目標の非フコシル化グリカン％、及び／又は目標のβ－ガラクトシル化グリカン％、及び／又は目標のＨＭグリカン％は、非フコシル化グリカン％、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン％、及び／又はＨＭグリカン％と、ＦｃγＲＩＩ結合レベルとを相関させる第１のモデルに基づいて算出される。様々な事例では、第１のモデルは、線形回帰モデルである。様々な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルと、非フコシル化グリカン％、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン％、及び／又はＨＭグリカン％とを相関させる第１のモデルは、その低いｐ値により実証されるように統計的に有意である。様々な態様では、ｐ値は、０．０５未満である。様々な事例では、ｐ値は、０．０１未満であるか、又は０．００１未満である。様々な事例では、ｐ値は、０．０００１未満である。

【0031】

例示的な態様では、抗体組成物のβ－ガラクトシル化グリカン含量は、ＦｃγＲＩＩ結合レベルと正に相関する。様々な態様では、より高レベルのβ－ガラクトシル化グリカン含量は、より高いＦｃγＲＩＩ結合レベルと相関し、より低レベルのβ－ガラクトシル化グリカン含量は、より低いＦｃγＲＩＩ結合レベルと相関する。例示的な態様では、抗体組成物の非フコシル化グリカン含量は、ＦｃγＲＩＩ結合レベルと負に相関する。様々な態様では、より高レベルの非フコシル化グリカン含量は、より低いＦｃγＲＩＩ結合レベルと相関し、より低レベルの非フコシル化グリカン含量は、より高いＦｃγＲＩＩ結合レベルと相関する。例示的な態様では、抗体組成物の高マンノースグリカン含量は、ＦｃγＲＩＩ結合 レベルと相関する。例示的な事例では、この相関は、負の相関である。様々な態様では、より高レベルのＨＭグリカン含量は、より低いＦｃγＲＩＩ結合レベルと相関し、より低レベルのＨＭグリカン含量は、より高いＦｃγＲＩＩ結合レベルと相関する。

【0032】

例示的な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、ＦｃγＲＩＩａ結合のレベルである。例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩａ結合レベルは、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）に基づいて算出される。様々な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式Ａ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＢＧ％＋ｙ
［方程式Ａ］
（式中、ｍは、約０．５３５～約１．０９１であり、ｙは、約７２．５８～約８５．７８であり、ＢＧ％は、（ａ）で決定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量％である）
に従って算出される。

【0033】

例示的な事例では、方程式Ａのｍは、０．８１３であり、及び／又は方程式Ａのｙは、７９．１８である。代替の例示的な事例では、方程式Ａのｍは、０．７７８であり、及び／又は方程式Ａのｙは、８１．７６である。

【0034】

例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）に基づいて算出される。ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、様々な事例では、方程式Ｂ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＡＦ％＋ｙ
［方程式Ｂ］
（式中、ｍは、約－１３．７３～約－７．５４であり、ｙは、約１０８．８～約１１９．１であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％である）
に従って算出される。

【0035】

様々な態様では、方程式Ｂのｍは、－１０．６３であり、及び／又は方程式Ｂのｙは、１１４である。代替の例示的な事例では、方程式Ｂのｍは、－９．５３であり、及び／又は方程式Ｂのｙは、１１４である。

【0036】

例示的な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）と、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）とに基づいている。

【0037】

例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式３：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５７６＊ＢＧ％＋（－４．９７８）＊ＡＦ％＋９８．８７７
［方程式３］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0038】

例示的な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、ＦｃγＲＩＩｂ結合のレベルである。例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）に基づいて算出される。様々な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式Ｃ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＢＧ％＋ｙ
［方程式Ｃ］
（式中、ｍは、約０．３２６０～約０．９６９７であり、ｙは、約７７．７２～約９２．９９であり、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％である）
に従って算出される。

【0039】

様々な事例では、方程式Ｃのｍは、０．６４８であり、及び／又は方程式Ｃのｙは、８５．３６である。代替の例示的な事例では、方程式Ｃのｍは、０．６４４であり、及び／又は方程式Ｃのｙは、８６．３４である。

【0040】

例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）に基づいて算出される。ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、様々な事例では、方程式Ｄ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＡＦ％＋ｙ
［方程式Ｄ］
（式中、ｍは、約－１２．０２～約－６．２４７であり、ｙは、約１０９．３～約１１８．９であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％である）
に従って算出される。

【0041】

様々な態様では、方程式Ｄのｍは、約－９．１３２であり、及び／又は方程式Ｄのｙは、約１１４である。代替の例示的な事例では、方程式Ｄのｍは、－７．１０２であり、及び／又は方程式Ｄのｙは、１１１．９である。

【0042】

様々な態様では、ＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）と、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）とに基づいて算出される。例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式４：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．４６１＊ＢＧ％＋（－４．４２９）＊ＡＦ％＋１０５．７３１
［方程式４］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0043】

例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、決定されたか又は測定された高マンノース（ＨＭ）グリカン含量（例えば、ＨＭグリカン％）に基づいて算出される。様々な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）と、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）と、決定されたか又は測定されたＨＭグリカン含量（ＨＭグリカン％）とに基づいて算出される。例示的な態様では、抗体組成物のＦｃγＲＩＩａ結合レベルは、方程式５：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５７６＊ＢＧ％＋（－４．９７８）＊ＡＦ％＋９８．８７７＋（－１．３４３）＊ＨＭ％
［方程式５］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％であり、ＨＭ％は、高マンノースグリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0044】

例示的な態様では、抗体組成物のＦｃγＲＩＩａ結合レベルは、方程式９：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５４５＊ＢＧ％＋（－４．４６６）＊ＡＦ％＋１０２．７＋（－２．０３６）＊ＨＭ％
［方程式９］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％であり、ＨＭ％は、高マンノースグリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0045】

例示的な態様では、抗体組成物のＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、方程式６：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．４６１＊ＢＧ％＋（－４．４２９）＊ＡＦ％＋１０５．７３１＋（－１．８８３）＊ＨＭ％
［方程式６］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％であり、ＨＭ％は、高マンノースグリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0046】

例示的な態様では、抗体組成物のＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、方程式１０：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５９０＊ＢＧ％＋（－２．０４）＊ＡＦ％＋９９．２＋（－１．９１）＊ＨＭ％
［方程式１０］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％であり、ＨＭ％は、高マンノースグリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0047】

製品品質を決定する方法及び／又はモニタリングする方法
本開示に基づいて、抗体組成物の製品品質を決定し得、及び／又はモニタリングし得る。従って、本開示は、抗体組成物の製品品質を決定する方法であって、この抗体組成物の製品品質は、この抗体組成物のＦｃγＩＩ結合レベルに基づく、方法を提供する。例示的な実施形態では、この方法は、（ａ）抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定すること；（ｂ）任意選択的に、（ａ）で決定された非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量に基づいてＦｃγＲＩＩ結合レベルを算出すること；並びに（ｃ）（ｉ）非フコシル化グリカン含量及び／若しくはβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内である場合、並びに／又は（ｉｉ）ＦｃγＲＩＩ結合レベルが、目標範囲内である場合には、抗体組成物の製品品質を許容可能と決定することを含む。

【0048】

様々な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルの目標範囲、非フコシル化グリカン含量の目標範囲、及び／又はβ－グリコシル化グリカン含量の目標範囲は、参照抗体のＦｃγＲＩＩ結合レベル、非フコシル化グリカン含量、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量に基づいている。様々な事例では、この参照抗体は、キメラ定常領域を含む。例示的な事例では、この参照抗体のキメラ定常領域は、ＩｇＧ２定常領域の一部と、ＩｇＧ４定常領域の一部とを含む。様々な態様では、このキメラ定常領域は、ＣＨ１、及び／又はＩｇＧ２のヒンジ、及び／又はＩｇＧ４のＣＨ２－ＣＨ３を含む。例示的な事例では、このキメラ定常領域は、配列番号１５のキメラ定常領域を含む。任意選択的に、この参照抗体は、エクリズマブである。

【0049】

例示的な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、ＦｃγＲＩＩａ結合のレベルである。例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩａ結合レベルは、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）に基づいて算出される。様々な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式Ａ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＢＧ％＋ｙ
［方程式Ａ］
（式中、ｍは、約０．５３５～約１．０９１であり、ｙは、約７２．５８～約８５．７８であり、ＢＧ％は、（ａ）で決定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量％である）
に従って算出される。

【0050】

例示的な事例では、方程式Ａのｍは、０．８１３であり、及び／又は方程式Ａのｙは、７９．１８である。代替の例示的な事例では、方程式Ａのｍは、０．７７８であり、及び／又は方程式Ａのｙは、８１．７６である。

【0051】

例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）に基づいて算出される。ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、様々な事例では、方程式Ｂ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＡＦ％＋ｙ
［方程式Ｂ］
（式中、ｍは、約－１３．７３～約－７．５４であり、ｙは、約１０８．８～約１１９．１であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％である）
に従って算出される。

【0052】

様々な態様では、方程式Ｂのｍは、－１０．６３であり、及び／又は方程式Ｂのｙは、１１４である。代替の例示的な事例では、方程式Ｂのｍは、－９．５３であり、及び／又は方程式Ｂのｙは、１１４である。

【0053】

例示的な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）と、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）とに基づいている。

【0054】

例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式３：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５７６＊ＢＧ％＋（－４．９７８）＊ＡＦ％＋９８．８７７
［方程式３］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0055】

例示的な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、ＦｃγＲＩＩｂ結合のレベルである。例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）に基づいて算出される。様々な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式Ｃ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＢＧ％＋ｙ
［方程式Ｃ］
（式中、ｍは、約０．３２６０～約０．９６９７であり、ｙは、約７７．７２～約９２．９９であり、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％である）
に従って算出される。

【0056】

様々な事例では、方程式Ｃのｍは、０．６４８であり、及び／又は方程式Ｃのｙは、８５．３６である。代替の例示的な事例では、方程式Ｃのｍは、０．６４４であり、及び／又は方程式Ｃのｙは、８６．３４である。

【0057】

例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）に基づいて算出される。ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、様々な事例では、方程式Ｄ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＡＦ％＋ｙ
［方程式Ｄ］
（式中、ｍは、約－１２．０２～約－６．２４７であり、ｙは、約１０９．３～約１１８．９であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％である）
に従って算出される。

【0058】

様々な態様では、方程式Ｄのｍは、約－９．１３２であり、及び／又は方程式Ｄのｙは、約１１４である。代替の例示的な事例では、方程式Ｄのｍは、－７．１０２であり、及び／又は方程式Ｄのｙは、１１１．９である。

【0059】

様々な態様では、ＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）と、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）とに基づいて算出される。例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式４：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．４６１＊ＢＧ％＋（－４．４２９）＊ＡＦ％＋１０５．７３１
［方程式４］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0060】

例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、決定されたか又は測定された高マンノース（ＨＭ）グリカン含量（例えば、ＨＭグリカン％）に基づいて算出される。様々な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）と、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）と、決定されたか又は測定されたＨＭグリカン含量（ＨＭグリカン％）とに基づいて算出される。例示的な態様では、抗体組成物のＦｃγＲＩＩａ結合レベルは、方程式５：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５７６＊ＢＧ％＋（－４．９７８）＊ＡＦ％＋９８．８７７＋（－１．３４３）＊ＨＭ％
［方程式５］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％であり、ＨＭ％は、高マンノースグリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0061】

例示的な態様では、抗体組成物のＦｃγＲＩＩａ結合レベルは、方程式９：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５４５＊ＢＧ％＋（－４．４６６）＊ＡＦ％＋１０２．７＋（－２．０３６）＊ＨＭ％
［方程式９］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％であり、ＨＭ％は、高マンノースグリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0062】

例示的な態様では、抗体組成物のＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、方程式６：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．４６１＊ＢＧ％＋（－４．４２９）＊ＡＦ％＋１０５．７３１＋（－１．８８３）＊ＨＭ％
［方程式６］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％であり、ＨＭ％は、高マンノースグリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0063】

例示的な態様では、抗体組成物のＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、方程式１０：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５９０＊ＢＧ％＋（－２．０４）＊ＡＦ％＋９９．２＋（－１．９１）＊ＨＭ％
［方程式１０］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％であり、ＨＭ％は、高マンノースグリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0064】

例示的な態様では、本方法は、品質管理（ＱＣ）アッセイである。例示的な態様では、この方法は、インプロセスＱＣアッセイである。様々な態様では、試料は、インプロセス材料の試料である。様々な事例では、ＡＦグリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量は、回収前に決定されるか、又は回収後に決定される。例示的な事例では、ＡＦグリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量は、クロマトグラフィー後に決定される。任意選択的に、このクロマトグラフィーは、キャプチャークロマトグラフィー、中間クロマトグラフィー、及び／又はポリッシュクロマトグラフィーを含む。いくつかの態様では、ＡＦグリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量は、ウイルスの不活化及び中和、ウイルス濾過、又は緩衝液交換の後に決定される。本方法は、様々な実例では、ロットリリースアッセイである。試料は、いくつかの態様では、製造ロットの試料である。

【0065】

様々な態様では、本方法は、（ｉ）非フコシル化グリカン含量及び／若しくはβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内である場合に、並びに／又はＦｃγＲＩＩ結合レベルが目標範囲内である場合に、下流の処理のためにこの抗体組成物を選択することをさらに含む。（ａ）で決定されたＡＦグリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内ではない場合には、様々な態様では、細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して改変細胞培養物を得る。この方法は、いくつかの態様では、細胞培養の１つ又は複数の条件を改変した後に得られた抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定することをさらに含み、例えば、改変細胞培養物の抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定することをさらに含む。様々な態様では、（ａ）で決定された非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内ではない場合には、この方法は、（ｄ）細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して改変細胞培養物を得ること、並びに（ｅ）この改変細胞培養物から得られた抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定することをさらに含む。例示的な態様では、（ａ）で決定された非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内ではない場合には、この方法は、（ｄ）で決定された非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内になるまで（ｄ）及び（ｄ）をさらに含む。

【0066】

例示的な事例では、抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合を直接測定するアッセイを、（ａ）で決定された非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内ではない（例えば目標範囲外である）場合にのみ、この抗体組成物に対して実行する。ＦｃγＲＩＩ結合活性を直接測定するアッセイとして、例えば、実施例２又は実施例４で説明されているアッセイが挙げられる。例示的な事例では、抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合を直性測定するアッセイを、この抗体組成物に対して実行しない。様々な態様では、非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定することは、抗体組成物の製品品質を決定するために必要な唯一の工程である。理論に拘束されないが、本明細書で説明されている統計的に有意な相関により、非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量がＦｃγＲＩＩ結合レベルを示すことを可能になり、そのため、ＦｃγＲＩＩ結合レベルを直接測定するアッセイは、必要ではない。従って、抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合レベルの直性測定は必要でなくなり、そのため、本開示の方法の様々な態様で実行されない。

【0067】

様々な態様では、本方法は、ＦｃγＲＩＩ結合レベル基準に関して製品品質を決定する。様々な態様では、このＦｃγＲＩＩ結合レベル基準は、抗体組成物の許容基準のうちの１つである。本開示の方法は、様々な態様では、医薬品のバッチが、その承認及び販売（例えば、米国の２１ ＣＦＲ ２１１．１６５に準ずる承認及び販売）の条件として、適切な規格及び適切な統計的品質管理基準のそれぞれを満たすことを保証することを目的とする。様々な態様では、製品品質を決定する本開示の方法は、適切な許容レベル及び／又は適切な拒絶レベルを含む統計的品質管理基準を満たす。「許容基準」、「ロット」、及び「インプロセス」（これらに限定されない）を含む用語は、連邦規則集（ＣＦＲ）第２１章第２１０．３項に定義されるその意味に従う。

【0068】

本開示はまた、抗体組成物の製品品質をモニタリングする方法であって、この抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合レベルは、この抗体組成物の製品品質の基礎とする基準である、方法も提供する。例示的な実施形態では、この方法は、第１の時点で得られた第１の試料と、第１の時点とは異なる第２の時点で採取された第２の試料とを用いて、本開示の方法に従って抗体組成物の製品品質を決定することを含む。様々な事例では、第１の試料及び第２の試料のそれぞれは、インプロセス材料の試料である。様々な態様では、第１の試料は、インプロセス材料の試料であり、第２の試料は、製造ロットの試料である。任意選択的に、第１の試料は、細胞培養の１つ又は複数の条件を改変する前に得られた試料であり、第２の試料は、細胞培養の１つ又は複数の条件を改変した後に得られた試料である。例示的な事例では、非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量は、第１の試料及び第２の試料のそれぞれに関して決定される。抗体組成物の製品品質を決定するために、並びに非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定するために、追加の試料を得ることができる。抗体組成物の製品品質は、非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内であるかどうかに依存する。例示的な態様では、非フコシル化グリカ含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量の目標範囲は、参照抗体に基づいている。様々な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルの目標範囲、非フコシル化グリカ含量の目標範囲、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量の目標範囲は、参照抗体のＦｃγＲＩＩ結合レベル、非フコシル化グリカン含量、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量に基づいている。様々な事例では、参照抗体は、キメラ定常領域を含む。例示的な事例では、参照抗体のキメラ定常領域は、ＩｇＧ２定常領域の一部と、ＩｇＧ４定常領域の一部とを含む。様々な態様では、このキメラ定常領域は、ＣＨ１、及び／又はＩｇＧ２のヒンジ、及び／又はＩｇＧ４のＣＨ２－ＣＨ３を含む。例示的な事例では、このキメラ定常領域は、配列番号１５のキメラ定常領域を含む。任意選択的に、この参照抗体は、エクリズマブである。

【0069】

抗体組成物を製造する方法
本開示は、抗体組成物を製造する方法を提供する。例示的な実施形態では、この方法は、抗体組成物の製品品質を決定することであって、この抗体組成物の製品品質は、本開示の方法に従って決定される、決定することを含む。任意選択的に、この方法は、抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定することを含み、この試料は、インプロセス材料の試料である。様々な事例では、この方法は、（ａ）で決定された非フコシル化グルカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が、本明細書で定義されている目標範囲内である場合には、抗体組成物の製品品質が許容可能であると決定し、及び／又はＦｃγＲＩＩ結合レベル基準を達成していると決定することを含む。例示的な態様では、非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量の目標範囲は、参照抗体のＦｃγｒＩＩ結合レベルの目標範囲に基づいている。様々な態様では、（ａ）で決定された非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内ではない場合には、この方法は、（ｉｉｉ）細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して改変細胞培養物を得ること、及び（ｄ）改変細胞培養物から得られた抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定すること、任意選択的に、この非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内になるまで（ｉｉｉ）及び（ｄ）を繰り返すことをさらに含む。様々な事例では、試料は、抗体組成物の抗体を発現する細胞を含む細胞培養物の試料である。様々な事例では、細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を改変する。様々な事例では、宿主細胞又はクローンを、改変された非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が得られるように選択する。様々な態様では、この方法は、ＡＦグリカン含量を改変することを含む。例示的な態様では、細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、抗体組成物のＡＦグリカン含量を改変する。例示的な態様では、１つ又は複数の条件は、主にＡＦグリカン含量を改変する。様々な事例では、１つ又は複数の条件は、ＡＦグリカン含量を改変し、且つβ－ガラクトシル化グリカン含量を改変しない。例示的な態様では、この方法は、β－ガラクトシル化グリカン含量を改変することを含む。任意選択的に、細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、抗体組成物のβ－ガラクトシル化グリカン含量を改変する。いくつかの事例では、１つ又は複数の条件は、主にβ－ガラクトシル化グリカン含量を改変する。いくつかの態様では、１つ又は複数の条件は、β－ガラクトシル化グリカン含量を改変し、且つＡＦグリカン含量を改変しない。様々な事例では、この方法は、非フコシル化グリカン含量及びβ－ガラクトシル化グリカン含量の両方が目標範囲内になるまで、非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量の改変を繰り返すこと、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量の改変を繰り返すことを含む。最終的に、この方法は、ＦｃγＲＩＩ結合（計算値又は予測値）が目標範囲内になるまで、非フコシル化（ＡＦ）グリカン含量を改変すること、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を改変することを含む。様々な態様では、細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、ＨＭグリカン含量を主に変化させてＦｃγＲＩＩ結合の目標範囲を達成し、及び／又は細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、β－ガラクトシル化グリカン含量を主に変化させてＦｃγＲＩＩ結合の目標範囲を達成する。

【0070】

例示的な態様では、目標範囲は、参照抗体の目標範囲である。例えば、参照抗体のＦｃγＲＩＩ結合レベルの目標範囲が既知である場合には、非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量の目標レベルを、本明細書に記載されている相関関係に従って算出し得る。或いは、参照抗体の非フコシル化グリカン含量の目標範囲が既知であり、及び／又は参照抗体のβ－ガラクトシル化グリカン含量の目標範囲が既知である場合には、参照抗体のＦｃγＲＩＩ結合レベルの目標範囲を算出し得る。

【0071】

例示的な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、ＦｃγＲＩＩａ結合のレベルである。例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩａ結合レベルは、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）に基づいて算出される。様々な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式Ａ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＢＧ％＋ｙ
［方程式Ａ］
（式中、ｍは、約０．５３５～約１．０９１であり、ｙは、約７２．５８～約８５．７８であり、ＢＧ％は、（ａ）で決定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量％である）
に従って算出される。

【0072】

例示的な事例では、方程式Ａのｍは、０．８１３であり、及び／又は方程式Ａのｙは、７９．１８である。代替の例示的な事例では、方程式Ａのｍは、０．７７８であり、及び／又は方程式Ａのｙは、８１．７６である。

【0073】

例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）に基づいて算出される。ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、様々な事例では、方程式Ｂ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＡＦ％＋ｙ
［方程式Ｂ］
（式中、ｍは、約－１３．７３～約－７．５４であり、ｙは、約１０８．８～約１１９．１であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％である）
に従って算出される。

【0074】

様々な態様では、方程式Ｂのｍは、－１０．６３であり、及び／又は方程式Ｂのｙは、１１４である。代替の例示的な事例では、方程式Ｂのｍは、－９．５３であり、及び／又は方程式Ｂのｙは、１１４である。

【0075】

例示的な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）と、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）とに基づいている。

【0076】

例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式３：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５７６＊ＢＧ％＋（－４．９７８）＊ＡＦ％＋９８．８７７
［方程式３］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0077】

例示的な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、ＦｃγＲＩＩｂ結合のレベルである。例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）に基づいて算出される。様々な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式Ｃ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＢＧ％＋ｙ
［方程式Ｃ］
（式中、ｍは、約０．３２６０～約０．９６９７であり、ｙは、約７７．７２～約９２．９９であり、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％である）
に従って算出される。

【0078】

様々な事例では、方程式Ｃのｍは、０．６４８であり、及び／又は方程式Ｃのｙは、８５．３６である。代替の例示的な事例では、方程式Ｃのｍは、０．６４４であり、及び／又は方程式Ｃのｙは、８６．３４である。

【0079】

例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）に基づいて算出される。ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、様々な事例では、方程式Ｄ：
ＦｃγＲＩＩ結合レベル＝ｍ＊ＡＦ％＋ｙ
［方程式Ｄ］
（式中、ｍは、約－１２．０２～約－６．２４７であり、ｙは、約１０９．３～約１１８．９であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％である）
に従って算出される。

【0080】

様々な態様では、方程式Ｄのｍは、約－９．１３２であり、及び／又は方程式Ｄのｙは、約１１４である。代替の例示的な事例では、方程式Ｄのｍは、－７．１０２であり、及び／又は方程式Ｄのｙは、１１１．９である。

【0081】

様々な態様では、ＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）と、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）とに基づいて算出される。例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、方程式４：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．４６１＊ＢＧ％＋（－４．４２９）＊ＡＦ％＋１０５．７３１
［方程式４］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0082】

例示的な事例では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、決定されたか又は測定された高マンノース（ＨＭ）グリカン含量（例えば、ＨＭグリカン％）に基づいて算出される。様々な態様では、ＦｃγＲＩＩ結合レベルは、決定されたか又は測定された非フコシル化グリカン含量（例えば、非フコシル化グリカン％）と、決定されたか又は測定されたβ－ガラクトシル化グリカン含量（例えば、β－ガラクトシル化グリカン％）と、決定されたか又は測定されたＨＭグリカン含量（ＨＭグリカン％）とに基づいて算出される。例示的な態様では、抗体組成物のＦｃγＲＩＩａ結合レベルは、方程式５：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５７６＊ＢＧ％＋（－４．９７８）＊ＡＦ％＋９８．８７７＋（－１．３４３）＊ＨＭ％
［方程式５］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％であり、ＨＭ％は、高マンノースグリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0083】

例示的な態様では、抗体組成物のＦｃγＲＩＩａ結合レベルは、方程式９：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５４５＊ＢＧ％＋（－４．４６６）＊ＡＦ％＋１０２．７＋（－２．０３６）＊ＨＭ％
［方程式９］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％であり、ＨＭ％は、高マンノースグリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0084】

例示的な態様では、抗体組成物のＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、方程式６：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．４６１＊ＢＧ％＋（－４．４２９）＊ＡＦ％＋１０５．７３１＋（－１．８８３）＊ＨＭ％
［方程式６］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％であり、ＨＭ％は、高マンノースグリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0085】

例示的な態様では、抗体組成物のＦｃγＲＩＩｂ結合レベルは、方程式１０：
ＦｃγＲＩＩ結合＝０．５９０＊ＢＧ％＋（－２．０４）＊ＡＦ％＋９９．２＋（－１．９１）＊ＨＭ％
［方程式１０］
（式中、ＢＧ％は、β－ガラクトシル化グリカン含量％であり、ＡＦ％は、非フコシル化グリカン含量％であり、ＨＭ％は、高マンノースグリカン含量％である）
の直線の９５％信頼区間内のレベルである。

【0086】

例示的な実施形態では、本開示の抗体組成物を製造する方法は、（ａ）抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定すること；（ｂ）（ａ）で決定された非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量に基づいて抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合レベルを決定すること；並びに（ｃ）（ｂ）で決定されたＦｃγＲＩＩ結合のレベルに基づいて、下流の処理のためにこの抗体組成物を選択することを含む。様々な事例では、抗体組成物の抗体は、キメラ定常領域を含む。例示的な事例では、この抗体組成物の抗体のキメラ定常領域は、ＩｇＧ２定常領域の一部と、ＩｇＧ４定常領域の一部とを含む。様々な態様では、このキメラ定常領域は、ＣＨ１、及び／又はＩｇＧ２のヒンジ、及び／又はＩｇＧ４のＣＨ２－ＣＨ３を含む。例示的な事例では、このキメラ定常領域は、配列番号１５のキメラ定常領域を含む。

【0087】

様々な事例では、抗体組成物は、エクリズマブの重鎖及び軽鎖を含む抗Ｃ５抗体を含む。任意選択的に、試料は、抗体組成物の抗体を発現するグリコシル化コンピテント細胞を含む細胞培養物に由来する。例示的な態様では、本方法は、細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、抗体組成物の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を改変すること、並びに改変された細胞培養物から採取した抗体組成物の試料の非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量を決定することをさらに含む。例示的な事例では、この方法は、細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、抗体組成物の非フコシル化グリカンのレベルを増加させてこの抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを低下させること、及び／又は細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、抗体組成物のβ－ガラクトシル化グリカンのレベルを低下させてこの抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを低下させることをさらに含む。任意選択的に、この方法は、細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、抗体組成物の非フコシル化グリカンのレベルを低下させてこの抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを増加させること、及び／又は細胞培養の１つ又は複数の条件を改変して、抗体組成物のβ－ガラクトシル化グリカンのレベルを増加させてこの抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合のレベルを増加させることをさらに含む。例示的な態様では、この方法は、非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内になるまで前記改変することを繰り返すことをさらに含む。例示的な事例では、非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量は、抗体組成物の製造に関してリアルタイムで決定される。例示的な態様では、この方法は、非フコシル化グリカン含量及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量が目標範囲内である場合に、下流の処理のためにこの抗体組成物を選択することを含む。任意選択的に、この方法は、ＦｃγＲＩＩ結合レベルが目標範囲内である場合に、下流の処理のためにこの抗体組成物を選択することを含む。様々な事例では、ＦｃγＲＩＩ結合のレベルを決定することは、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／又はＣＤＣのレベルを決定することを含む。様々な事例では、この方法は、抗体組成物のＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／又はＣＤＣのレベルを指定することであって、選択された抗体組成物は、指定レベルのＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／又はＣＤＣを含む、指定することをさらに含む。

【0088】

処理工程
非フコシル化グリカン％及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量％が決定されて（例えば測定されて）、抗体組成物のＦｃγＲＩＩ結合レベルに関するよりよい情報が得られる。決定すること（例えば、測定すること）を、製造の任意の時点で行い得る。特に、測定を、回収前又は回収後、例えば、任意のクロマトグラフィー単位操作、例えば、キャプチャークロマトグラフィー、中間クロマトグラフィー、及び／若しくはポリッシュクロマトグラフィー単位操作；ウイルスの不活化及び中和、ウイルス濾過；並びに／又は最終製剤化に続く下流の処理中の任意の段階で行い得る。様々な態様での非フコシル化グリカン％及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量％は、リアルタイム、準リアルタイム、及び／又は事後に決定される（例えば、測定される）。モニタリング及び測定を、既知の手法及び市販の装置を使用して行い得る。

【0089】

本開示の様々な態様では、非フコシル化グリカン％及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量％を決定すること（例えば、測定すること）を、回収前に実行する。本明細書で使用される場合、「回収する（ｈａｒｖｅｓｔ）」という用語は、目的の組換えタンパク質を含有する細胞培養培地が収集され、細胞培養物の少なくとも細胞から分離される工程を指す。回収を、連続的に実施し得る。いくつかの態様では、回収を、遠心分離を使用して実施し、沈殿、濾過等をさらに含み得る。様々な態様では、決定することを、クロマトグラフィー（任意選択的に、プロテインＡクロマトグラフィー）後に実行する。様々な態様では、決定することを、回収後及びクロマトグラフィー（任意選択的に、プロテインＡクロマトグラフィー）後に実行する。

【0090】

本開示の方法に関して、抗体組成物は、様々な態様では、さらなる処理工程（例えば、１つ又は複数の下流の処理工程）のために選択され、この選択は、特定のパラメータ（例えば、ＦｃγＲＩＩ結合％、非フコシル化グリカン％、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量％）に基づいている。様々な事例では、本開示の方法は、特定のパラメータ（例えば、ＦｃγＲＩＩ結合％、非フコシル化グリカン％、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量％）に基づいて、さらなる処理工程（例えば、１つ又は複数の下流の処理工程）において抗体組成物を使用することを含む。様々な事例では、本開示の方法は、特定のパラメータ（例えば、ＦｃγＲＩＩ結合％、非フコシル化グリカン％、及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量％）に基づいて、抗体組成物により、さらなる処理工程（例えば、１つ又は複数の下流の処理工程）を実行することを含む。任意選択的に、これらの処理工程を、連続的に、同時に、及び／又は互いに重複して実施し得る。

【0091】

例示的な事例では、１つ又は複数の下流の処理工程は、非フコシル化グリカン％及び／又はβ－ガラクトシル化グリカン含量％が決定される（例えば、測定される）処理工程後に（又はその下流で）行われる任意の処理工程である。例えば、非フコシル化グリカン％及び又はβ－ガラクトシル化グリカン含量％が回収時に決定された（例えば、測定された）場合には、１つ又は複数の下流の処理工程は、回収工程後（又はその下流で）行われる任意の処理工程であり、様々な態様では、下記を含む：希釈工程、充填工程、濾過工程、製剤化工程、クロマトグラフィー工程、ウイルス濾過工程、ウイルス不活化工程、又はこれらの組み合わせ。また、例えば、非フコシル化グリカン％及び又はβ－ガラクトシル化グリカン含量％がクロマトグラフィー（例えば、プロテインＡクロマトグラフィー）後に決定された（例えば、測定された）場合には、１つ又は複数の下流の処理工程は、このクロマトグラフィー後に（又は、その下流で）行われる任意の処理工程であり、様々な態様では、下記を含む：希釈工程、充填工程、濾過工程、製剤化工程、さらなるクロマトグラフィー工程、ウイルス濾過工程、ウイルス不活化工程、又はこれらの組み合わせ。例示的な事例では、さらなるクロマトグラフィーは、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、陽イオン交換クロマトグラフィー又は陰イオン交換クロマトグラフィー）である。任意選択的に、これらの下流の処理工程を、連続的に、同時に、及び／又は互いに重複して実施し得る。

【0092】

下流の処理中に使用されるクロマトグラフィーの段階／タイプには、他のタンパク質、凝集体、ＤＮＡ、ウイルス、及び他のそのような不純物から組換え産物を分離するために使用されるキャプチャークロマトグラフィー又はアフィニティークロマトグラフィーが含まれる。例示的な事例では、最初のクロマトグラフィーを、プロテインＡ（例えば、樹脂に結合したプロテインＡ）を用いて実行する。様々な態様では、中間及びポリッシュクロマトグラフィーは、組換えタンパク質をさらに精製し、バルク汚染物質、外来性ウイルス、微量不純物、凝集体、アイソフォーム等を除去する。このクロマトグラフィーを、目的の組換えタンパク質がクロマトグラフィー媒体に結合し、不純物が流れる結合及び溶出モードで実施し得るか、又は不純物が結合し、組換えタンパク質が流れるフロースルーモードで実施し得る。このようなクロマトグラフィー方法の例として、下記が挙げられる：イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）、例えば、陰イオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＸ）、及び陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）；疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）；混合様式又は多様式クロマトグラフィー（ＭＭ）、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー（ＨＡ）；逆相クロマトグラフィー、及びゲル濾過。

【0093】

様々な態様では、下流工程は、ウイルス不活性化工程である。エンベロープウイルスは、リポタンパク質膜又は「エンベロープ」で囲まれたカプシドを有しており、従って、不活化を受けやすい。様々な事例では、ウイルス不活化工程として、熱不活化／低温殺菌、ｐＨ不活化、ＵＶ及びガンマ線照射、高強度広域スペクトル白色光の使用、化学不活化剤の添加、界面活性物質、及び溶媒／界面活性剤処理が挙げられる。

【0094】

様々な態様では、下流工程は、ウイルス濾過工程である。様々な態様では、このウイルス濾過工程は、ノンエンベロープウイルスを除去することを含む。様々な態様では、このウイルス濾過工程は、マイクロフィルタ又はナノフィルタの使用を含む。

【0095】

様々な態様では、下流の処理工程は、１つ又は複数の製剤化工程を含む。種々の態様では、クロマトグラフィー工程の完了後、精製された組換えタンパク質を、製剤化緩衝液に緩衝液交換する。例示的な態様では、緩衝液交換を、限外濾過及びダイアフィルトレーション（ＵＦ／ＤＦ）を使用して実施する。例示的な態様では、組換えタンパク質を、ダイアフィルトレーションを使用して所望の製剤化緩衝液に緩衝液交換し、限外濾過を使用して所望の最終製剤濃度まで濃縮する。様々な態様では、ＵＦ／ＤＦ製剤化工程に続いて、さらなる安定性増強賦形剤を添加する。

【0096】

組換えグリコシル化タンパク質
本開示の方法は、組換えグリコシル化タンパク質を含む組成物に関する。様々な態様では、この組換えグリコシル化タンパク質は、式：
Ａｓｎ－Ｘａａ_１－Ｘａａ_２
（式中、Ｘａａ_１は、Ｐｒｏを除く任意のアミノ酸であり、Ｘａａ_２は、Ｓｅｒ又はＴｈｒである）
の１つ又は複数のＮ－グリコシル化コンセンサス配列を含むアミノ酸配列を含む。

【0097】

例示的な実施形態では、組換えグリコシル化タンパク質は、結晶性断片（Ｆｃ）ポリペプチドを含む。「Ｆｃポリペプチド」という用語は、本明細書で使用される場合、抗体のＦｃ領域由来のポリペプチドのネイティブ形態及びムテイン形態を含む。二量体化を促進するヒンジ領域を含有するこのようなポリペプチドの切断型も含まれる。Ｆｃ部分（及びそれから形成されるオリゴマー）を含む融合タンパク質は、プロテインＡ又はプロテインＧカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィーによる容易な精製の長所をもたらす。例示的な実施形態では、組換えグリコシル化タンパク質は、ＩｇＧ（例えば、ヒトＩｇＧ）のＦｃを含む。例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、ＩｇＧ１又はＩｇＧ２のＦｃを含む。例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、抗体、抗体タンパク質生成物、ペプチボディ、又はＦｃ－融合タンパク質である。

【0098】

例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、抗体である。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、重鎖及び軽鎖を含み、且つ可変領域及び定常領域を含む、従来の免疫グロブリン型を有するタンパク質を指す。例えば、抗体は、ポリペプチド鎖の２つの同一のペアの「Ｙ型」構造であるＩｇＧであり得、各ペアは、１本の「軽」鎖（典型的には分子量が約２５ｋＤａ）及び１本の「重」鎖（典型的には分子量が約５０～７０ｋＤａ）を有する。抗体は、可変領域及び定常領域を有する。ＩｇＧ型において、可変領域は、一般に、約１００～１１０個又はそれを超えるアミノ酸であり、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、主に抗原認識に関与し、且つ異なる抗原に結合する他の抗体と実質的に異なる。例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａｎｄ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇｅｎｅｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ，４^ｔｈｅｄ．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．／Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，（１９９９）を参照されたい。

【0099】

簡潔に説明すると、抗体の骨格において、ＣＤＲは、重鎖及び軽鎖の可変領域中のフレームワーク内に埋め込まれており、そこで抗原結合及び抗原認識に大きい役割を果たす領域を構成する。可変領域は、少なくとも３つの重鎖又は軽鎖のＣＤＲを含み（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎ．Ｉ．Ｈ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３も参照されたい）、それらは、フレームワーク領域（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１によってフレームワーク領域１～４、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４と呼ばれている；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７，前出も参照されたい）内にある。

【0100】

ヒト軽鎖は、カッパ軽鎖及びラムダ軽鎖に分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、又はイプシロンに分類されており、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥと定義する。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含むがこれらに限定されないいくつかのサブクラスを有する。ＩｇＭは、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２を含むがこれらに限定されないサブクラスを有する。本開示の実施形態は、抗体の全てのこのようなクラス又はアイソタイプを含む。軽鎖定常領域は、例えば、カッパ型又はラムダ型の軽鎖定常領域であり得、例えば、ヒトカッパ型又はヒトラムダ型の軽鎖定常領域であり得る。重鎖定常領域は、例えば、アルファ型、デルタ型、イプシロン型、ガンマ型、又はミュー型の重鎖定常領域であり得、例えば、ヒトアルファ型、ヒトデルタ型、ヒトイプシロン型、ヒトガンマ型、又はヒトミュー型の重鎖定常領域であり得る。従って、例示的な実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のいずれか１つを含むアイソタイプＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、又はＩｇＭの抗体である。

【0101】

例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質（例えば、抗体）は、キメラ定常領域を含む。例示的な事例では、この組換えグリコシル化タンパク質のキメラ定常領域は、ＩｇＧ２定常領域の一部と、ＩｇＧ４定常領域の一部とを含む。様々な態様では、このキメラ定常領域は、ＣＨ１、及び／又はＩｇＧ２のヒンジ、及び／又はＩｇＧ４のＣＨ２－ＣＨ３を含む。例示的な事例では、このキメラ定常領域は、配列番号１５のキメラ定常領域を含む。この組換えグリコシル化タンパク質は、本明細書で説明されている抗体組成物の抗体であり得る。

【0102】

様々な態様では、抗体は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であり得る。例示的な事例では、この抗体は、哺乳動物抗体であり、例えば、マウス抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、ヤギ抗体、ウマ抗体、ニワトリ抗体、ハムスター抗体、ブタ抗体、ヒト抗体等である。ある特定の態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、モノクローナルヒト抗体である。

【0103】

抗体は、種々の態様では、例えば、パパイン及びペプシン等の酵素により断片へと切断される。パパインは、抗体を切断して、２個のＦａｂ断片及び１個のＦｃ断片を生じる。ペプシンは、抗体を切断して、Ｆ（ａｂ’）_２断片及びｐＦｃ’断片を生成する。例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、少なくとも１個のグリコシル化部位を保持する抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆｃ、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｐＦｃ’）である。本開示の方法に関して、抗体は、抗体のある特定の部分を欠く場合があり、抗体断片であってもよい。様々な態様では、この抗体断片は、グリコシル化部位を含む。いくつかの態様では、この断片は、真核細胞において翻訳後修飾によりグリコシル化される抗体のＦｃ領域の少なくとも一部を含む「グリコシル化Ｆｃ断片」である。様々な事例では、組換えグリコシル化タンパク質は、グリコシル化Ｆｃ断片である。

【0104】

少なくとも又は約１２～１５０ｋＤａの分子量範囲、及び単量体（ｎ＝１）、二量体（ｎ＝２）、及び三量体（ｎ＝３）から四量体（ｎ＝４）及び場合によってはそれより高い結合価（ｎ）範囲に広がる代替的な抗体形式の範囲を増大させるために抗体の構造が利用されており、このような代替的な抗体形式は、本明細書では「抗体タンパク質生成物」又は「抗体結合タンパク質」と呼ばれる。

【0105】

抗体タンパク質生成物は、完全な抗原結合能を保持する抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、及びＶＨＨ／ＶＨ）に基づく抗原結合形式であり得る。その完全な抗原結合部位を保持する最小の抗原結合断片は、Ｆｖ断片であり、これは、完全に可変（Ｖ）領域からなる。可溶性で柔軟なアミノ酸ペプチドリンカーを使用して、Ｖ領域をｓｃＦｖ（一本鎖断片可変）断片に連結させて分子を安定化させるか、又は定常（Ｃ）ドメインをＶ領域に加えて、Ｆａｂ断片［断片、抗原結合性］を生成する。ｓｃＦｖ及びＦａｂの両方は、原核宿主において容易に産生され得る広く使用される断片である。他の抗体タンパク質生成物として、オリゴマー化ドメインに連結されるｓｃＦｖからなる異なる型を含むダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディ、又はミニボディ（ミニＡｂｓ）のような、ジスルフィド結合で安定化されるｓｃＦｖ（ｄｓ－ｓｃＦｖ）、一本鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）、並びに二量体及び多量体抗体型が挙げられる。最小の断片は、ラクダ科動物の重鎖Ａｂ及び単一ドメインＡｂ（ｓｄＡｂ）のＶＨＨ／ＶＨである。新規の抗体型を作製するために最も頻繁に使用される構築ブロックは、約１５個のアミノ酸残基のペプチドリンカーにより連結された重鎖及び軽鎖由来のＶドメイン（ＶＨドメイン及びＶＬドメイン）を含む一本鎖可変（Ｖ）－ドメイン抗体断片（ｓｃＦｖ）である。ペプチボディ又はペプチド－Ｆｃ融合体は、さらに別の抗体タンパク質生成物である。ペプチボディの構造は、Ｆｃドメイン上にグラフト化された生物学的に活性なペプチドからなる。ペプチボディは、当該技術分野で十分に説明されている。例えば、Ｓｈｉｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ ４（５）：５８６－５９１（２０１２）を参照されたい。

【0106】

他の抗体タンパク質生成物として、一本鎖抗体（ＳＣＡ）；ダイアボディ；トリアボディ；テトラボディ；二重特異性抗体又は三重特異性抗体等が挙げられる。二重特異性抗体は、下記の５つの主要なクラス：ＢｓＩｇＧ、付加ＩｇＧ、ＢｓＡｂ断片、二重特異性融合タンパク質、及びＢｓＡｂコンジュゲートに分類され得る。例えば、Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６７（２）Ｐａｒｔ Ａ：９７－１０６（２０１５）を参照されたい。

【0107】

例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、これらの抗体タンパク質生成物（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ ＶＨＨ／ＶＨ、Ｆｖ断片、ｄｓ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、二量体抗体、多量体抗体（例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ）、ミニＡｂ、ラクダ科動物の重鎖抗体のペプチボディＶＨＨ／ＶＨ、ｓｄＡｂ、ダイアボディ；トリアボディ；テトラボディ；二重特異性抗体又は三重特異性抗体、ＢｓＩｇＧ、付加ＩｇＧ、ＢｓＡｂ断片、二重特異性融合タンパク質、及びＢｓＡｂコンジュゲート）のうちのいずれか１つを含み、且つ１つ又は複数のＮ－グリコシル化コンセンサス配列（任意選択的に、１つ又は複数のＦｃポリペプチド）を含む。様々な態様では、抗体タンパク質生成物は、グリコシル化部位を含む。例示的な態様では、抗体タンパク質生成物は、抗体結合断片にコンジュゲートされたグリコシル化Ｆｃ断片（「グリコシル化Ｆｃ断片抗体生成物」）であり得る。

【0108】

組換えグリコシル化タンパク質は、単量体形態、又は多量体（ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ）形態、オリゴマー形態、若しくは多量体（ｍｕｌｔｉｍｅｒｉｃ）形態の抗体タンパク質生成物であり得る。抗体が２つ以上の個別の抗原結合領域断片を含むある特定の実施形態では、この抗体は、この抗体により認識されて結合される個別のエピトープの数に応じて、二重特異性、三重特異性、若しくは多重特異性、又は二価、三価、若しくは多価とみなされる。

【0109】

様々な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、キメラ抗体又はヒト化抗体である。「キメラ抗体」という用語は、本明細書では、ある１つの種由来の定常ドメインと、第２の種由来の可変ドメインとを含むか、又はより一般には、少なくとも２つの種由来のアミノ酸配列のストレッチを含有する抗体を指すために使用される。「ヒト化」という用語は、抗体に関して使用される場合には、元の起源の抗体よりも真のヒト抗体と類似している構造及び免疫学的機能を有するように操作されている非ヒト起源由来の少なくともＣＤＲ領域を有する抗体を指す。例えば、ヒト化は、非ヒト抗体（例えばマウス抗体）由来のＣＤＲをヒト抗体に移植することを含み得る。ヒト化はまた、非ヒト配列をよりヒト配列に見えるようにするためのアミノ酸置換の選択も含み得る。

【0110】

有利には、本方法は、抗体、グリコシル化Ｆｃ断片、抗体タンパク質生成物、キメラ抗体、又はヒト化抗体の抗原特異性に限定されない。従って、抗体、グリコシル化Ｆｃ断片、抗体タンパク質生成物、キメラ抗体、又はヒト化抗体は、実質的に任意の抗原に対して任意の結合特異性を有する。例示的な態様では、抗体は、ホルモン、増殖因子、サイトカイン、細胞表面受容体又はその任意のリガンドに結合する。例示的な態様では、抗体は、免疫細胞の細胞表面に発現するタンパク質に結合する。例示的な態様では、抗体は、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１１Ａ、ＣＤ１１Ｂ、ＣＤ１１Ｃ、ＣＤｗ１２、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１５ｓ、ＣＤ１６、ＣＤｗ１７、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１，ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４２ａ、ＣＤ４２ｂ、ＣＤ４２ｃ、ＣＤ４２ｄ、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤｗ６０、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６５、ＣＤ６６ａ、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ６６ｃ、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ６６ｆ、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７５、ＣＤ７６、ＣＤ７９α、ＣＤ７９β、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８７、ＣＤ８８、ＣＤ８９、ＣＤ９０、ＣＤ９１、ＣＤｗ９２、ＣＤ９３、ＣＤ９４、ＣＤ９５、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９８、ＣＤ９９、ＣＤ１００、ＣＤ１０１、ＣＤ１０２、ＣＤ１０３、ＣＤ１０４、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、ＣＤｗ１０８、ＣＤ１０９、ＣＤ１１４、ＣＤ１１５、ＣＤ１１６、ＣＤ１１７、ＣＤ１１８、ＣＤ１１９、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２０ｂ、ＣＤ１２１ａ、ＣＤｗ１２１ｂ、ＣＤ１２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１２４、ＣＤ１２５、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１２８、ＣＤ１２９、ＣＤ１３０、ＣＤｗ１３１、ＣＤ１３２、ＣＤ１３４、ＣＤ１３５、ＣＤｗ１３６、ＣＤｗ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１３９、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１４１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４３、ＣＤ１４４、ＣＤ１４５、ＣＤ１４６、ＣＤ１４７、ＣＤ１４８、ＣＤ１５０、ＣＤ１５１、ＣＤ１５２、ＣＤ１５３、ＣＤ１５４、ＣＤ１５５、ＣＤ１５６、ＣＤ１５７、ＣＤ１５８ａ、ＣＤ１５８ｂ、ＣＤ１６１、ＣＤ１６２、ＣＤ１６３、ＣＤ１６４、ＣＤ１６５、ＣＤ１６６及びＣＤ１８２からなる群から選択される分化分子のクラスターに結合する。

【0111】

例示的な態様では、抗体、グリコシル化Ｆｃ断片、抗体タンパク質生成物、キメラ抗体、又はヒト化抗体は、下記で説明されているもののうちの１つである：米国特許第７９４７８０９号明細書及び米国特許出願公開第２００９００４１７８４号明細書（グルカゴン受容体）、米国特許第７９３９０７０号明細書、米国特許第７８３３５２７号明細書、米国特許第７７６７２０６号明細書及び米国特許第７７８６２８４号明細書（ＩＬ－１７受容体Ａ）、米国特許第７８７２１０６号明細書及び米国特許第７５９２４２９号明細書（スクレロスチン）、米国特許第７８７１６１１号明細書、米国特許第７８１５９０７号明細書、米国特許第７０３７４９８号明細書、米国特許第７７００７４２号明細書及び米国特許出願公開第２０１００２５５５３８号明細書（ＩＧＦ－１受容体）、米国特許第７８６８１４０号明細書（Ｂ７ＲＰ１）、米国特許第７８０７１５９号明細書及び米国特許出願公開第２０１１００９１４５５号明細書（ミオスタチン）、米国特許第７７３６６４４号明細書、米国特許第７６２８９８６号明細書、米国特許第７５２４４９６号明細書及び米国特許出願公開第２０１００１１１９７９号明細書（上皮成長因子受容体の欠失変異体）、米国特許第７７２８１１０（ＳＡＲＳコロナウイルス）、米国特許第７７１８７７６号明細書及び米国特許出願公開第２０１００２０９４３５号明細書（ＯＰＧＬ）、米国特許第７６５８９２４号明細書及び米国特許第７５２１０５３号明細書（アンジオポイエチン２）、米国特許第７６０１８１８号明細書、米国特許第７７９５４１３号明細書、米国特許出願公開第２００９０１５５２７４号明細書、米国特許出願公開第２０１１００４００７６号明細書（ＮＧＦ）、米国特許第７５７９１８６号明細書（ＴＧＦ－βＩＩ型受容体）、米国特許第７５４１４３８号明細書（結合組織増殖因子）、米国特許第７４３８９１０号明細書（ＩＬ１－Ｒ１）、米国特許第７４２３１２８号明細書（プロパージン）、米国特許第７４１１０５７号明細書、米国特許第７８２４６７９号明細書、米国特許第７１０９００３号明細書、米国特許第６６８２７３６号明細書、米国特許第７１３２２８１号明細書及び米国特許第７８０７７９７号明細書（ＣＴＬＡ－４）、米国特許第７０８４２５７号明細書、米国特許第７７９０８５９号明細書、米国特許第７３３５７４３号明細書、米国特許第７０８４２５７号明細書及び米国特許出願公開第２０１１００４５５３７号明細書（インターフェロン－ガンマ）、米国特許第７９３２３７２（ＭＡｄＣＡＭ）号明細書、米国特許第７９０６６２５号明細書、米国特許出願公開第２００８０２９２６３９号明細書及び米国特許出願公開第２０１１００４４９８６号明細書（アミロイド）、米国特許第７８１５９０７号明細書及び米国特許第７７００７４２号明細書（インシュリン用成長因子Ｉ）、米国特許第７５６６７７２号明細書及び米国特許第７９６４１９３号明細書（インターロイキン１β）、米国特許第７５６３４４２号明細書、米国特許第７２８８２５１号明細書、米国特許第７３３８６６０号明細書、米国特許第７６２６０１２号明細書、米国特許第７６１８６３３号明細書及び米国特許出願公開第２０１０００９８６９４号明細書（ＣＤ４０）、米国特許第７４９８４２０号明細書（ｃ－Ｍｅｔ）、米国特許第７３２６４１４号明細書、米国特許第７５９２４３０号明細書及び米国特許第７７２８１１３号明細書（Ｍ－ＣＳＦ）、米国特許第６９２４３６０号明細書、米国特許第７０６７１３１号明細書及び米国特許第７０９０８４４号明細書（ＭＵＣ１８）、米国特許第６２３５８８３号明細書、米国特許第７８０７７９８号明細書及び米国特許出願公開第２０１００３０５３０７号明細書（上皮成長因子受容体）、米国特許第６７１６５８７号明細書、米国特許第７８７２１１３号明細書、米国特許第７４６５４５０号明細書、米国特許第７１８６８０９号明細書、米国特許第７３１７０９０号明細書及び米国特許第７６３８６０６（インターロイキン４受容体）、米国特許出願公開第２０１１０１３５６５７号明細書（ベータ－クロトー）、米国特許第７８８７７９９号明細書及び米国特許第７８７９３２３号明細書（線維芽細胞増殖因子様ポリペプチド）、米国特許第７８６７４９４号明細書（ＩｇＥ）、米国特許出願公開第２０１００２５４９７５号明細書（アルファ－４ベータ－７）、米国特許出願公開第２０１００１９７００５号明細書及び米国特許第７５３７７６２号明細書（アクチビン受容体様キナーゼ１）、米国特許第７５８５５００号明細書及び米国特許出願公開第２０１０００４７２５３号明細書（ＩＬ－１３）、米国特許出願公開第２００９０２６３３８３号明細書及び米国特許第７４４９５５５号明細書（ＣＤ１４８）、米国特許出願公開第２００９０２３４１０６号明細書（アクチビンＡ）、米国特許出願公開第２００９０２２６４４７号明細書（アンジオポイエチン１及びアンジオポイエチン２）、米国特許出願公開第２００９０１９１２１２号明細書（アンジオポイエチン２）、米国特許出願公開第２００９０１５５１６４号明細書（Ｃ－ＦＭＳ）、米国特許第７５３７７６２号明細書（アクチビン受容体様キナーゼ１）、米国特許第７３７１３８１号明細書（ガラニン）、米国特許出願公開第２００７０１９６３７６号明細書（インシュリン用成長因子）、米国特許第７２６７９６０号明細書及び米国特許第７７４１１１５号明細書（ＬＤＣＡＭ）、ＵＳ７２６５２１２（ＣＤ４５ＲＢ）、米国特許第７７０９６１１号明細書、米国特許出願公開第２００６０１２７３９３号明細書及び米国特許出願公開第２０１０００４０６１９号明細書（ＤＫＫ１）、米国特許第７８０７７９５号明細書、米国特許出願公開第２００３０１０３９７８号明細書及び米国特許第７９２３００８号明細書（オステオプロテゲリン）、米国特許出願公開第２００９０２０８４８９号明細書（ＯＶ０６４）、米国特許出願公開第２００８０２８６２８４号明細書（ＰＳＭＡ）、米国特許第７８８８４８２、米国特許出願公開第２０１１０１６５１７１号明細書及び米国特許出願公開第２０１１００５９０６３号明細書（ＰＡＲ２）、米国特許出願公開第２０１１０１５０８８８号明細書（ヘプシジン）、米国特許第７９３９６４０号明細書（Ｂ７Ｌ－１）、米国特許第７９１５３９１号明細書（ｃ－Ｋｉｔ）、米国特許第７８０７７９６号明細書、米国特許第７１９３０５８号明細書及び米国特許第７４２７６６９号明細書（ＵＬＢＰ）、米国特許第７７８６２７１号明細書、米国特許第７３０４１４４号明細書及び米国特許出願公開第２００９０２３８８２３号明細書（ＴＳＬＰ）、米国特許第７７６７７９３号明細書（ＳＩＧＩＲＲ）、米国特許第７７０５１３０号明細書（ＨＥＲ－３）、米国特許第７７０４５０１号明細書（アタキシン１様ポリペプチド）、米国特許第７６９５９４８号明細書及び米国特許第７１９９２２４（ＴＮＦ－α変換酵素）、米国特許出願公開第２００９０２３４１０６号明細書（アクチビンＡ）、米国特許出願公開第２００９０２１４５５９号明細書及び米国特許第７４３８９１０号明細書（ＩＬ１－Ｒ１）、米国特許第７５７９１８６号明細書（ＴＧＦ－βＩＩ型受容体）、米国特許第７５６９３８７号明細書（ＴＮＦ受容体様分子）、米国特許第７５４１４３８号明細書（結合組織増殖因子）、米国特許第７５２１０４８号明細書（ＴＲＡＩＬ受容体２）、米国特許第６３１９４９９号明細書、米国特許第７０８１５２３号明細書及び米国特許出願公開第２００８０１８２９７６号明細書（エリスロポイエチン受容体）、米国特許出願公開第２００８０１６６３５２号明細書及び米国特許第７４３５７９６号明細書（Ｂ７ＲＰ１）、米国特許第７４２３１２８号明細書（プロペルジン）、米国特許第７４２２７４２号明細書及び米国特許第７１４１６５３号明細書（インターロイキン５）、米国特許第６７４０５２２号明細書及び米国特許第７４１１０５０号明細書（ＲＡＮＫＬ）、米国特許第７３７８０９１号明細書（炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡ ＩＸ）腫瘍抗原）、米国特許第７３１８９２５号明細書及び米国特許第７２８８２５３号明細書（副甲状腺ホルモン）、米国特許第７２８５２６９号明細書（ＴＮＦ）、米国特許第６６９２７４０号明細書及び米国特許第７２７０８１７号明細書（ＡＣＰＬ）、米国特許第７２０２３４３号明細書（単球走化性タンパク質１）、米国特許第７１４４７３１号明細書（ＳＣＦ）、米国特許第６３５５７７９号明細書及び米国特許第７１３８５００号明細書（４－１ＢＢ）、米国特許第７１３５１７４号明細書（ＰＤＧＦＤ）、米国特許第６６３０１４３号明細書及び米国特許第７０４５１２８号明細書（Ｆｌｔ－３リガンド）、米国特許第６８４９４５０号明細書（メタロプロテアーゼ阻害剤）、米国特許第６５９６８５２号明細書（ＬＥＲＫ－５）、米国特許第６２３２４４７号明細書（ＬＥＲＫ－６）、米国特許第６５００４２９号明細書（脳由来神経栄養因子）、米国特許第６１８４３５９号明細書（上皮由来Ｔ細胞因子）、米国特許第６１４３８７４号明細書（神経栄養因子ＮＮＴ－１）、米国特許出願公開第２０１１００２７２８７号明細書（プロタンパク質転換酵素サブチリシン・ケキシン９型（ＰＣＳＫ９））、米国特許出願公開第２０１１００１４２０１号明細書（ＩＬ－１８ＲＥＣＥＰＴＯＲ）、並びに米国特許出願公開第２００９０１５５１６４号明細書（Ｃ－ＦＭＳ）。上記の特許及び公開特許出願は、可変ドメインポリペプチド、可変ドメインをコードする核酸、宿主細胞、ベクター、前記可変ドメインをコードするポリペプチドを作製する方法、医薬組成物、及び可変ドメイン含有抗原結合タンパク質又は抗体の個々の標的に付随する疾患を処置する方法のそれらの開示の目的のために、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0112】

例示的な実施形態では、グリコシル化Ｆｃ断片、抗体タンパク質生成物、キメラ抗体、又はヒト化抗体は、下記のうちの１つである：ムロモナブ－ＣＤ３（商品名Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ Ｏｋｔ３（登録商標）で市販の製品）、アブシキシマブ（商品名Ｒｅｏｐｒｏ（登録商標）で市販の製品）、リツキシマブ（商品名ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）で市販の製品）、バシリキシマブ（商品名Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標）で市販の製品）、ダクリズマブ（商品名Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標）で市販の製品）、パリビズマブ（商品名Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標）で市販の製品）、インフリキシマブ（商品名Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）で市販の製品）、トラスツズマブ（商品名Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）で市販の製品）、アレムツズマブ（商品名ＭａｂＣａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｃａｍｐａｔｈ－１Ｈ（登録商標）で市販の製品）、アダリムマブ（商品名Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）で市販の製品）、トシツモマブ－Ｉ１３１（商品名Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）で市販の製品）、エファリズマブ（商品名Ｒａｐｔｉｖａ（登録商標）で市販の製品）、セツキシマブ（商品名Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）で市販の製品）、イブリツモマブチウキセタン（商品名Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）で市販の製品）、オマリズマブ（商品名Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）で市販の製品）、ベバシズマブ（商品名Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）で市販の製品）、ナタリズマブ（商品名Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）で市販の製品）、ラニビズマブ（商品名Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）で市販の製品）、パニツムマブ（商品名Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）で市販の製品）、エクリズマブ（商品名Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標）で市販の製品）、セルトリズマブペゴル（商品名Ｃｉｍｚｉａ（登録商標）で市販の製品）、ゴリムマブ（商品名Ｓｉｍｐｏｎｉ（登録商標）で市販の製品）、カナキヌマブ（商品名Ｉｌａｒｉｓ（登録商標）で市販の製品）、カツマキソマブ（商品名Ｒｅｍｏｖａｂ（登録商標）で市販の製品）、ウステキヌマブ（商品名Ｓｔｅｌａｒａ（登録商標）で市販の製品）、トシリズマブ（商品名ＲｏＡｃｔｅｍｒａ（登録商標）、Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標）で市販の製品）、オファツムマブ（商品名Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標）で市販の製品）、デノスマブ（商品名Ｐｒｏｌｉａ（登録商標）で市販の製品）、ベリムマブ（商品名Ｂｅｎｌｙｓｔａ（登録商標）で市販の製品）、ラキシバクマブ、イピリムマブ（商品名Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）で市販の製品）、及びペルツズマブ（商品名Ｐｅｒｊｅｔａ（登録商標）で市販の製品）。例示的な実施形態では、抗体は、下記のうちの１つである：抗ＴＮＦアルファ抗体、例えば、アダリムマブ、インフリキシマブ、エタネルセプト、ゴリムマブ、及びセルトリズマブペゴル；抗ＩＬ１．ベータ抗体、例えばカナキヌマブ；抗ＩＬ１２／２３（ｐ４０）抗体、例えば、ウステキヌマブ及びブリアキヌマブ；並びに抗ＩＬ２Ｒ抗体、例えばダクリズマブ。

【0113】

例示的な態様では、抗体の抗原は、補体タンパク質Ｃ５（例えば、ヒト補体Ｃ５）であり、抗体は、抗Ｃ５抗体（例えば、抗ヒトＣ５モノクローナル抗体）である。Ｃ５は、自然免疫系の一部である補体系の構成要素である。Ｃ５プレプロタンパク質は、タンパク質分解処理されて、Ｃ５アルファ鎖、Ｃ５ベータ鎖、Ｃ５ａアナフィラトキシン、及びＣ５ｂを含む複数のタンパク質産物が生成される。Ｃ５タンパク質は、Ｃ５アルファ鎖及びＣ５ベータ鎖で構成されており、これらは、ジスルフィド架橋で連結されている。プレプロタンパク質のアミノ酸配列は、本明細書では配列番号２として示されており、ここで、残基１９～６７３は、補体Ｃ５ベータ鎖の配列を表しており、残基７５２～１６７６は、補体Ｃ５アルファ鎖の配列を表しており、残基６７８～７５１は、Ｃ５ａアナフィラトキシンの配列を表す。配列番号３は、ヒトＣ５遺伝子によりコードされる転写産物バリアント１のｍＲＮＡ配列の配列である。様々な態様では、抗体は、エクリズマブ又はそのバイオシミラーである。エクリズマブという用語は、ＩｇＧ２のヒンジドメイン及びＣＨ１ドメインと、ＩｇＧ４のＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインとを含むキメラモノクローナル抗体を指しており、このｍＡｂは、補体タンパク質Ｃ５に結合する（ＣＡＳ Ｎｕｍｂｅｒ：２１９６８５－５０，ＤｒｕｇＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＤＢ０１２５７を参照されたい）。例示的な態様では、抗体は、表Ａに記載されているエクリズマブ軽鎖の可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖を含む。例示的な態様では、抗体は、表Ａに記載されているエクリズマブ重鎖の可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖を含む。様々な事例では、抗体は、エクリズマブのＶＨ及びＶＬを含むか、又はＶＨ－ＩｇＧ１カッパ配列及びＶＬ－ＩｇＧカッパ配列を含む。

【0114】

【表1】

【0115】

【表2】

【0116】

様々な態様では、抗体は、下記を含む：
ｉ．配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号４のバリアントアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号５のアミノ酸配列、又は配列番号５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号５のバリアントアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ２、
ｉｉｉ．配列番号６のアミノ酸配列、又は配列番号６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号６のバリアントアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ３、
ｉｖ．配列番号７のアミノ酸配列、又は配列番号７と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号７のバリアントアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、
ｖ．配列番号８のアミノ酸配列、又は配列番号８と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号８のバリアントアミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ２、
ｖｉ．配列番号９のアミノ酸配列、又は配列番号９と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号９のバリアントアミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ３。

【0117】

様々な事例では、抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１０と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１、若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１０のバリアントアミノ酸配列を含むＬＣ可変領域を含む。

【0118】

例示的な態様では、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列、配列番号１１と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１、若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントアミノ酸配列を含むＨＣ可変領域を含む。

【0119】

例示的な事例では、抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１、若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１２のバリアントアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0120】

様々な態様では、抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列、配列番号１３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１、若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１３のバリアントアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0121】

例示的な事例では、抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列、配列番号１４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１、若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１４のバリアントアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。

【0122】

様々な態様では、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列、配列番号１５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１、若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１５のバリアントアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。

【0123】

組成物
本開示の方法は、組換えグリコシル化タンパク質を含む組成物に関する。様々な態様では、この組成物は、１つの型の組換えグリコシル化タンパク質のみを含む。様々な事例では、この組成物は、組換えグリコシル化タンパク質を含み、この組成物の各組換えグリコシル化タンパク質は、同一の又は本質的に同一のアミノ酸配列を含む。様々な態様では、この組成物は、組換えグリコシル化タンパク質を含み、この組成物の各組換えグリコシル化タンパク質は、この組成物の他の全ての組換えグリコシル化タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。様々な態様では、この組成物は、組換えグリコシル化タンパク質を含み、この組成物の各組換えグリコシル化タンパク質は、この組成物の他の全ての組換えグリコシル化タンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。様々な態様では、この組成物は、組換えグリコシル化タンパク質を含み、この組成物の各組換えグリコシル化タンパク質は、同一の又は本質的に同一の（例えば、この組成物の他の全ての組換えグリコシル化タンパク質のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の）アミノ酸配列を含むが、この組成物の組換えグリコシル化タンパク質の糖プロファイルは、互いに相異し得る。

【0124】

例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、抗体断片であり、従って、組成物は、抗体断片組成物であり得る。

【0125】

例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、抗体タンパク質生成物であり、従って、組成物は、抗体タンパク質生成物組成物であり得る。

【0126】

例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、グリコシル化Ｆｃ断片であり、従って、組成物は、グリコシル化Ｆｃ断片組成物であり得る。

【0127】

例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、グリコシル化Ｆｃ断片抗体生成物であり、従って、組成物は、グリコシル化Ｆｃ断片抗体生成物組成物であり得る。

【0128】

例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、キメラ抗体であり、従って、組成物は、キメラ抗体組成物であり得る。

【0129】

例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、ヒト化抗体であり、従って、組成物は、ヒト化抗体組成物であり得る。

【0130】

例示的な態様では、組換えグリコシル化タンパク質は、抗体であり、組成物は、抗体組成物である。様々な態様では、この組成物は、１つの型の抗体のみを含む。様々な事例では、この組成物は、抗体を含み、この抗体組成物の各抗体は、同一の又は本質的に同一のアミノ酸配列を含む。様々な態様では、この抗体組成物は、抗体を含み、この抗体組成物の各抗体は、この抗体組成物の他の全ての抗体のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。様々な態様では、この抗体組成物は、抗体を含み、この抗体組成物の各抗体は、この抗体組成物の他の全ての抗体のアミノ酸配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。様々な態様では、この抗体組成物は、抗体を含み、この組成物の各抗体は、同一の又は本質的に同一の（例えば、この抗体組成物の他の全ての抗体のタンパク質のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一の）アミノ酸配列を含むが、この抗体組成物の抗体の糖プロファイルは、互いに相異し得る。例示的な態様では、この抗体組成物は、様々なグリコフォームの公知の不均一な混合物を含む。様々な事例では、この抗体組成物は、そのＡＦグリカン含量及び／又はそのβ－ガラクトシル化グリカン含量に関して特徴付けられ得る。様々な態様では、この抗体組成物は、ＡＦグリカン含量％及び／又はそのβ－ガラクトシル化グリカン含量％に関して説明されている。任意選択的に、この抗体組成物は、他の型のグリカン（例えば、高マンノースグリコフォーム、フコシル化グリコフォーム等）の含量に関して特徴付けられ得る。

【0131】

様々な態様では、抗体組成物の各抗体は、ＩｇＧであり、任意選択的に、ＩｇＧ２のヒンジドメイン及びＣＨ１ドメインと、ＩｇＧ４のＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインとを含むＩｇＧである。様々な事例では、抗体組成物の各抗体は、補体タンパク質Ｃ５に結合する。例示的な態様では、抗体組成物の各抗体は、抗Ｃ５抗体である。様々な態様では、抗体組成物の各抗体は、下記を含む：
ｉ．配列番号４のアミノ酸配列、又は配列番号４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号４のバリアントアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、
ｉｉ．配列番号５のアミノ酸配列、又は配列番号５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号５のバリアントアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ２、
ｉｉｉ．配列番号６のアミノ酸配列、又は配列番号６と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号６のバリアントアミノ酸配列を含むＬＣ ＣＤＲ３、
ｉｖ．配列番号７のアミノ酸配列、又は配列番号７と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号７のバリアントアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ１、
ｖ．配列番号８のアミノ酸配列、又は配列番号８と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号８のバリアントアミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ２、並びに／又は
ｖｉ．配列番号９のアミノ酸配列、又は配列番号９と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１個若しくは２個のアミノ酸置換を有する配列番号９のバリアントアミノ酸配列を含むＨＣ ＣＤＲ３。

【0132】

様々な事例では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列、配列番号１０と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１、若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１０のバリアントアミノ酸配列を含むＬＣ可変領域を含む。

【0133】

例示的な態様では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列、配列番号１１と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１、若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１１のバリアントアミノ酸配列を含むＨＣ可変領域を含む。

【0134】

例示的な事例では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列、配列番号１２と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１、若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１２のバリアントアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0135】

様々な態様では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列、配列番号１３と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１、若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１３のバリアントアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0136】

例示的な事例では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列、配列番号１４と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１、若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１４のバリアントアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。

【0137】

様々な態様では、抗体組成物の各抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列、配列番号１５と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列、又は１～１０（例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１、若しくは２）個のアミノ酸置換を有する配列番号１５のバリアントアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。

【0138】

例示的な態様では、抗体組成物は、様々なグリコフォームの抗体の不均一な混合物を含む。様々な事例では、抗体組成物は、そのＡＦグリカン含量及び／又はそのβ－ガラクトシル化グリカン含量に関して特徴付けられ得る。様々な態様では、抗体組成物は、ＡＦグリカン含量％及び／又はそのβ－ガラクトシル化グリカン含量％に関して説明されている。任意選択的に、抗体組成物は、他の型のグリカン（例えば、高マンノースグリコフォーム、フコシル化グリコフォーム等）の含量に関して特徴付けられ得る。

【0139】

例示的な実施形態では、本組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と組み合わされる。従って、本明細書で提供されるのは、本明細書で説明されている組換えグリコシル化タンパク質組成物（例えば、抗体組成物、又は抗体結合タンパク質組成物）と、薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤とを含む医薬組成物である。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語には、標準的な医薬担体のいずれかが含まれており、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、水、エマルション（例えば、油／水エマルション、又は水／油エマルション）、及び様々なタイプの湿潤剤が含まれる。

【0140】

例示的な実施形態では、本抗体組成物は、本明細書で説明されているように、細胞培養物中のグリコシル化コンピテント細胞により産生される。

【0141】

追加の工程
本明細書で開示されている方法は、様々な態様において、追加の工程を含む。例えば、いくつかの態様では、この方法は、組換えグリコシル化タンパク質（例えば、抗体）の産生、精製、及び製剤化に関与する１つ又は複数の上流工程又は下流工程を含む。任意選択的に、この下流工程は、本明細書で説明されているか又は当該技術分野で既知の下流の処理工程のうちのいずれか１つである。例えば、処理工程を参照されたい。例示的な実施形態では、この方法は、組換えグリコシル化タンパク質（例えば、抗体）を発現する宿主細胞を作製するための工程を含む。この宿主細胞は、いくつかの態様では、原核宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）若しくはバチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）であるか、又はこの宿主細胞は、いくつかの態様では、真核宿主細胞（例えば、酵母細胞、糸状菌細胞、原生動物細胞、昆虫細胞、若しくは哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞））である。このような宿主細胞は、当該技術分野で説明されている。例えば、Ｆｒｅｎｚｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４：２１７（２０１３）及び本明細書の「細胞」の節を参照されたい。例えば、この方法は、いくつかの事例では、組換えグリコシル化タンパク質又はそのポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含むベクターを宿主細胞に導入することを含む。

【0142】

例示的な態様では、本方法は、細胞（例えば、グリコシル化コンピテント細胞）を細胞培養物中で維持することを含む。従って、この方法は、本明細書の細胞培養物中における細胞の維持で説明されている任意の１つ又は複数の工程を実行することを含み得る。

【0143】

例示的な実施形態では、本明細書で開示されている方法は、培養物から組換えグリコシル化タンパク質（例えば、組換え抗体）を単離する及び／又は精製する工程を含む。例示的な態様では、この方法は、１つ又は複数のクロマトグラフィー工程（例えば、限定されないが、アフィニティークロマトグラフィー（例えば、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー）、イオン交換クロマトグラフィー、及び／又は疎水性相互作用クロマトグラフィー）を含む。例示的な態様では、この方法は、組換えグリコシル化タンパク質を含む溶液から結晶性生体分子を生成する工程を含む。

【0144】

本開示の方法は、様々な態様では、精製組換えグリコシル化タンパク質を含む組成物（例えば、いくつかの態様では、医薬組成物）を調製するための１つ又は複数の工程を含む。このような組成物は、本明細書中で考察されている。

【0145】

細胞培養物中における細胞の維持
本開示の抗体組成物を製造する方法に関して、この抗体組成物を、細胞培養物中で細胞を維持することにより製造し得る。この細胞培養物を、組換えグリコシル化タンパク質の産生に好適な任意の一連の条件に従って維持し得る。例えば、いくつかの態様では、細胞培養物は、特定のｐＨ、温度、細胞密度、培養体積、溶存酸素レベル、圧力、浸透圧等で維持される。例示的な態様では、ＣＯ_２インキュベーター中において、標準的な加湿条件下にて５％ＣＯ_２で播種前の細胞培養物を振とうする（例えば７０ｒｐｍ）。例示的な態様では、１．５Ｌの培地中に約１０^６個の細胞／ｍＬの播種密度で、細胞培養物を播種する。

【0146】

例示的な態様では、本開示の方法は、約６．８５～約７．０５のｐＨで、例えば、様々な態様では、約６．８５、約６．８６、約６．８７、約６．８８、約６．８９、約６．９０、約６．９１、約６．９２、約６．９３、約６．９４、約６．９５、約６．９６、約６．９７、約６．９８、約６．９９、約７．００、約７．０１、約７．０２、約７．０３、約７．０４、又は約７．０５のｐＨで、細胞培養培地中においてグリコシル化コンピテント細胞を維持することを含む。

【0147】

例示的な態様では、本方法は、３０℃～４０℃の温度で細胞培養物を維持することを含む。例示的な実施形態では、この温度は、約３２℃～約３８℃又は約３５℃～約３８℃である。

【0148】

例示的な態様では、本方法は、約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を維持することを含む。例示的な態様では、本方法は、約２２５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ又は約２２５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を維持することを含む。例示的な態様では、本方法は、約２２５ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を維持することを含む。種々の態様では、浸透圧（ｍＯｓｍ／ｋｇ）は、約２００、２２５、約２５０、約２７５、約３００、約３２５、約３５０、約３７５、約４００、約４２５、約４５０、約４７５、又は約５００で維持される。

【0149】

例示的な態様では、本方法は、初期細胞培養期間中にわたり、約２０％～約６０％酸素飽和度で細胞培養物の溶解酸素（ＤＯ）レベルを維持することを含む。例示的な事例では、この方法は、初期細胞培養期間中にわたり、約３０％～約５０％（例えば、約３５％～約４５％）の酸素飽和度で細胞培養物のＤＯレベルを維持することを含む。例示的な事例では、この方法は、初期細胞培養期間中にわたり、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、又は約６０％酸素飽和度で細胞培養物のＤＯレベルを維持することを含む。例示的な態様では、このＤＯレベルは、約３５ｍｍＨｇ～約８５ｍｍＨｇ、又は約４０ｍｍＨｇ～約８０ｍｍＨｇ、又は約４５ｍｍＨｇ～約７５ｍｍＨｇである。

【0150】

細胞培養物は、任意の１つ又は複数の培養培地中で維持される。例示的な態様では、この細胞培養物は、細胞増殖に適切な培地中で維持され、且つ／又は任意の適切な供給スケジュールに従って１つ又は複数のフィード培地が供給される。例示的な態様では、本方法は、グルコース、フコース、乳酸塩、アンモニア、グルタミン、及び／又はグルタミン酸塩を含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様では、この方法は、初期細胞培養期間中にわたり、約１μＭ以下の濃度でマンガンを含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様では、この方法は、約０．２５μＭ～約１μＭのマンガンを含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様では、この方法は、無視できる量のマンガンを含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様では、この方法は、初期細胞培養期間中にわたり、約５０ｐｐｂ以下の濃度で銅を含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様では、この方法は、初期細胞培養期間中にわたり、約４０ｐｐｂ以下の濃度で銅を含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様では、この方法は、初期細胞培養期間中にわたり、約３０ｐｐｂ以下の濃度で銅を含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様では、この方法は、初期細胞培養期間中にわたり、約２０ｐｐｂ以下の濃度で銅を含む培地中で細胞培養物を維持することを含む。例示的な態様では、この培地は、約５ｐｐｂ以上又は約１０ｐｐｂ以上の濃度で銅を含む。例示的な態様では、細胞培養培地は、マンノースを含む。例示的な態様では、細胞培養培地は、マンノースを含まない。

【0151】

例示的な実施形態では、細胞培養のタイプは、流加培養法又は連続灌流培養法である。しかし、本開示の方法は、有利には、いずれの特定のタイプの細胞培養にも限定されない。

【0152】

細胞培養物中で維持される細胞は、グリコシル化コンピテント細胞であり得る。例示的な態様では、このグリコシル化コンピテント細胞は、真核細胞であり、例えば、限定されないが、酵母細胞、糸状菌細胞、原生動物細胞、藻類細胞、昆虫細胞、又は哺乳動物細胞である。そのような宿主細胞は、当該技術分野で説明されている。例えば、Ｆｒｅｎｚｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４：２１７（２０１３）を参照されたい。例示的な態様では、真核細胞は、哺乳動物細胞である。例示的な態様では、哺乳動物細胞は、非ヒト哺乳動物細胞である。いくつかの態様では、この細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞及びその誘導体（例えば、ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ ｐｒｏ－３）、マウス骨髄腫細胞（例えば，ＮＳ０、ＧＳ－ＮＳ０、Ｓｐ２／０）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）活性を欠くように操作された細胞（例えば、ＤＵＫＸ－Ｘ１１、ＤＧ４４）、ヒト胚性腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞又はその誘導体（例えば，ＨＥＫ２９３Ｔ、ＨＥＫ２９３－ＥＢＮＡ）、アフリカミドリザル腎臓細胞（例えば，ＣＯＳ細胞、ＶＥＲＯ細胞）、ヒト子宮頸癌細胞（例えば，ＨｅＬａ）、ヒト骨の骨肉腫上皮細胞Ｕ２－ＯＳ、腺癌ヒト肺胞基底上皮細胞Ａ５４９、ヒト線維肉腫細胞ＨＴ１０８０、マウス脳腫瘍細胞ＣＡＤ、胚性癌腫細胞Ｐ１９、マウス胚性繊維芽細胞ＮＩＨ ３Ｔ３、マウス繊維芽 細胞Ｌ９２９、マウス神経芽腫細胞Ｎ２ａ、ヒト乳癌 細胞 ＭＣＦ－７、網膜芽腫細胞Ｙ７９、ヒト網膜芽腫細胞ＳＯ－Ｒｂ５０、ヒト肝臓癌細胞Ｈｅｐ Ｇ２、マウスＢ骨髄腫細胞Ｊ５５８Ｌ，又は新生児ハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞（Ｇａｉｌｌｅｔ ｅｔ ａｌ．２００７；Ｋｈａｎ，Ａｄｖ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ ３（２）：２５７－２６３（２０１３））である。

【0153】

グリコシル化コンピテントではない細胞はまた、例えば、グリコシル化に必要な関連酵素をコードする遺伝子をそれらに導入することによって、グリコシル化コンピテント細胞に形質転換され得る。例示的な酵素として下記が挙げられるが、これらに限定されない：オリゴサッカリルトランスフェラーゼ、グリコシダーゼ、グルコシダーゼＩ、グルコシダーゼＩＩ、カルネキシン／カルレティキュリン、グリコシルトランスフェラーゼ、マンノシダーゼ、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ、ガラクトシルトランスフェラーゼ、及びシアリルトランスフェラーゼ。

【0154】

例示的な実施形態では、グリコシル化コンピテント細胞は、デノボ経路又はサルベージ経路の酵素の活性を変えるように遺伝的に改変されていない。フコース代謝のこれら２つの経路を、図２に示す。例示的な実施形態では、グリコシル化コンピテント細胞は、フコシル－トランスフェラーゼ（ＦＵＴ、例えば、ＦＵＴ１、ＦＵＴ２、ＦＵＴ３、ＦＵＴ４、ＦＵＴ５、ＦＵＴ６、ＦＵＴ７、ＦＵＴ８、ＦＵＴ９）、フコースキナーゼ、ＧＤＰ－フコースピロホスホリラーゼ、ＧＤＰ－Ｄ－マンノース－４，６－デヒドラターゼ（ＧＭＤ）、及びＧＤＰ－ケト－６－デオキシマンノース－３，５－エピメラーゼ、４－レダクターゼ（ＦＸ）のうちのいずれか１つ又は複数の活性を変えるように遺伝的に改変されていない。例示的な実施形態では、グリコシル化コンピテント細胞は、ＦＸをコードする遺伝子をノックアウトするように遺伝的に改変されていない。

【0155】

例示的な実施形態では、グリコシル化コンピテント細胞は、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧＮＴＩＩＩ）又はＧＤＰ－６－デオキシ－Ｄ－リキソ－４－ヘキスロースレダクターゼ（ＲＭＤ）の活性を変えるように遺伝的に改変されていない。例示的な態様では、グリコシル化コンピテント細胞は、ＧＮＴＩＩＩ又はＲＭＤを過剰発現するように遺伝的に改変されていない。

【実施例】

【0156】

下記の実施例は、本発明の実施形態を説明するために示されているに過ぎず、本発明の範囲を限定するものでは決してない。

【0157】

実施例１
本実施例では、モノクローナル抗体のＮ結合型グリコシル化プロファイル（グリカンプロファイル）を決定する例示的な方法が説明されている。

【0158】

本分析法の目的は、親水性相互作用液体クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）超高速液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）グリカンマップ分析により、抗体を含む試料中の抗体のＮ結合型グリコシル化プロファイルを決定することである。このグリカンマップ法は、抗体のＮ結合型グリカン分布の定量的分析であり、ＰＮＧアーゼＦ、及び遊離グリカンを特異的に誘導体化し得るフルオロフォアを使用して、参照及び試験試料からＮ結合型グリカンを放出させて標識化すること、ＨＩＬＩＣカラムに、有効な線形範囲内の試料をロードすること、徐々に減少する有機溶媒の勾配を使用して、標識されたＮ結合型グリカンを分離すること、及び蛍光検出器を用いて、グリカン種の溶出をモニタリングすることを含む。

【0159】

標準及び試験試料を、下記を実行することにより調製する：（１）試料及び対照を水で希釈する、（２）この試料及び対照にＰＮＧアーゼＦを添加し、インキュベートして、Ｎ結合型グリカンを放出させる、（３）２－アミノ安息香酸等のフルオロフォアを使用して、フルオロフォア標識溶液と混合する。試料及び対照をボルテックスし、インキュベートする、（４）遠心分離してタンパク質をペレット化し、上清を除去する、並びに（５）乾燥させ、注射溶液中で標識グリカンを再構成する。

【0160】

このアッセイで使用される溶液は、移動相Ａ（１００ｍＭ ギ酸アンモニウム、目標ｐＨ３．０）、及び移動相Ｂ（アセトニトリル）である。この方法の工程を実施するために使用される装置は、下記の能力を有する。

【0161】

【表3】

【0162】

親水性相互作用分析ＢＥＨグリカン１．７μｍカラム（２．１ｍｍＩＤ×１５０ｍｍ）及び２－アミノ安息香酸フルオロフォア標識法を使用するＨＰＬＣの機器設定を、下記に示す。

【0163】

【表4】

【0164】

移動相勾配の例を、下記に示す。

【0165】

【表5】

【0166】

結果の報告は、下記の形式で構成される。

【0167】

【表6】

【0168】

代表的なグリカンマップクロマトグラムの例を、図２Ａ（フルスケールビュー）及び図２Ｂ（拡大スケールビュー）に示す。

【0169】

実施例２
本実施例では、例示的なＦｃγＲＩＩａ結合アッセイが説明されている。

【0170】

抗体を含む試料のＦｃγＲＩＩａ結合活性を測定するために、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するＦｃγＲＩＩａ結合アッセイを開発した。このアッセイの図解を、図３に示す。このアッセイでは、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４のハイブリッドＦｃドメインを有する、ヒト補体Ｃ５に対する抗体である抗体１を様々な濃度に連続希釈した試料を、プロテインＡセンサーチップ（Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上での捕捉に使用した。アミノ酸位置１３１でＨｉｓを含むＦｃγＲＩＩａのアイソフォーム（以降、「ＦｃγＲＩＩａ－Ｈ」と称される）への結合を、プロテインＡで補足された抗体を含む表面に一定濃度のＦｃγＲＩＩａ－Ｈを注入することにより検出した。結合データを、統計ソフトウェアＰＬＡ３．０を使用して線形モデルに適合させ、抗体１参照標準（Ａｂ１ ＲＳ）の結合レベルと比較して、試料の相対結合率を算出した。

【0171】

このＦｃγＲＩＩａ結合アッセイを、方法の直線性、中間精密度、及び精度に関して分析した。この実験のために、Ａｂ １ ＲＳ（４９．８ｍｇ／ｍＬ）又はＡｂ ２（１０．１ｍｇ／ｍＬ）を使用して、５種の模擬活性試料（６０％、８０％、１００％、１３０％、及び１６０％のレベル）を調製した。１００％公称レベルの試料も、アッセイ対照として使用した。

【0172】

方法の直線性、即ち、試料中の分析物の濃度に正比例する結果を得るための方法の能力を確立した。５種の模擬結合レベル（６０、８０、１００、１３０、及び１６０％）を、６種の独立したアッセイで評価した。結合レベルが６０～１６０％の範囲である試料に関して、予想される自然対数（Ｌｎ）結合レベルと、観測された自然対数結合値レベルとの直線関係が示された。傾き、Ｙ切片、及びＲ^２に関して観測された値は、それぞれ０．９９０８、０．０４７３、及び０．９９９８であった。

【0173】

直線性実験で得られたデータを使用して、結合アッセイの中間精密度及び精度を決定した。方法の中間精密度は、１．１％であると推定し、全ての結合レベルにわたる方法の精度は、１００．５％であると観察した。

【0174】

１００％公称レベルでの４種の独立して調製したＡｂ １ ＲＳを試験することにより、ＦｃγＩＩａ結合アッセイの再現性を決定した。１×公称濃度での４種の独立して調製した試料を、２名の分析者により、合計６回のアッセイで試験した。このアッセイの再現性に関する全体的なＣＶ％は、１．１％である。

【0175】

ＦｃγＲＩＩａ結合アッセイの特異性も、下記のように評価した：Ａｂ１（１００ｎＭ）を、プロテインＡセンサーチップのフローセル２で捕捉し、２００ｎＭ ＦｃγＲＩＩａ－Ｈを、フローセル１（Ａｂ１なし）及びフローセル２（Ａｂ１あり）の表面に注入した。センサーグラムから、ＦｃγＲＩＩａ－ＨがプロテインＡチップ上で捕捉されたＡｂ１に特異的に結合し、Ａｂ１を使用しないプロテインＡチップに対するバックグラウンドシグナルのみが検出されることが示された。

【0176】

これらの結果は、このＦｃγＲＩＩａ結合アッセイが、６０％～１６０％の結合範囲にわたり、方法の再現性、及び直線性、精密度、精度に関して適格であったことを裏付ける。

【0177】

実施例３
本実施例では、ＦｃγＲＩＩａ結合とグリカン含量との相関関係が実証されている。

【0178】

抗体１は、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４のハイブリッドＦｃドメインを有する、ヒト補体Ｃ５に対する抗体である。抗体１は、発作性夜間血色素尿症（ＰＩＮ）及び非典型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＣ）の処置用に米国及び欧州で承認されている抗体であるエクリズマブのアミノ酸配列を有している。抗体１を含む様々な試料に関するグリカンプロファイルを、実施例１で説明されている手順に従って決定した。これらの試料をまた、実施例２で説明されているアッセイを実行することにより、ＦｃγＲＩＩａ結合活性に関しても特徴付けた。

【0179】

表１では、高マンノース（ＨＭ）グリカン、β－ガラクトシル化グリカン、及び非フコシル化グリカンの測定量と、測定したＦｃγＲＩＩａ結合活性（相対結合％として表す）とが列挙されている。

【0180】

【表7】

【0181】

測定されたＦｃγＲＩＩａ結合、ＨＭ含量、β－ガラクトシル化含量、及び非フコシル化含量に関するデータを、統計解析のためのコンピュータプログラムのＪＭＰスイート（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｒｙ，ＮＣ）を使用して解析した。結果を、図４Ａ～４Ｃに示し、図４Ａは、β－ガラクトシル化グリカンのＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットであり、図４Ｂは、非フコシル化グリカンのてこ比プロットであり、図４Ｃは、ＨＭグリカンのてこ比プロットである。各グラフの最良適合直線を、暗赤色の直線で示す。これらの図に示されるように、β－ガラクトシル化含量、非フコシル化グリカン含量、及び高マンノース含量のそれぞれは、ＦｃγＲＩＩａ結合と関連しており、それぞれの関連は、統計的に有意であった（β－ガラクトシル化グリカンに関するｐ＜０．０００１；非フコシル化グリカンに関するｐ＝０．０００２；及び高マンノースに関するｐ＝０．０１４２）。抗体１に関するＦｃγＲＩＩａ結合％と、β－ガラクトシル化含量、非フコシル化グリカン含量、及び高マンノース含量との関係を、方程式１：
予測されたＦｃγＲＩＩａ結合％＝９８．８７７＋（０．５７６＊β－ガラクトシル化グリカン％）＋（－４．９７８＊非フコシル化グリカン％＋（－１．３４３ 高マンノースグリカン％）
［方程式１］
で説明し得る。

【0182】

β－ガラクトシル化グリカン％、非フコシル化グリカン％、及び高マンノースグリカン％に関して測定した値を方程式１に代入して、各試料に関して、予測されたＦｃγＲＩＩａ結合％値を算出して表１に示した。実際のＦｃγＲＩＩａ結合％（ＦｃγＲＩＩａ結合アッセイで測定されるとおり）を、予測されたＦｃγＲＩＩａ結合％（方程式１により算出されるとおり）に対してプロットし、このプロットを、図４Ｄとして提供する。図４Ｄはまた、二乗平均平方根誤差（ＲＭＳＥ）、ｒ^２（ＲＳｑ）、及びｐ値を含む統計パラメータも提供する。これらの結果から、方程式１は、実際の（測定された）ＦｃγＲＩＩａ結合を正確に予測し、且つβ－ガラクトシル化グリカン、非フコシル化グリカン、高マンノースグリカンと、ＦｃγＲＩＩａ結合との間の統計的に有意な直接相関（ｐ＜０．０００１）を強調していることが示唆される。β－ガラクトシル化グリカンのレベルが高いほど、且つ非フコシル化グリカン及び高マンノースグリカンのレベルが低いほど、ＦｃγＲＩＩａ結合活性が高くなる。β－ガラクトシル化グリカンのてこ比、及び非フコシル化グリカンのてこ比は、非常に類似していた（それぞれ、ｐ＜０．０００１及びｐ＜０．０００２）。

【0183】

測定されたＦｃγＲＩＩａ結合、β－ガラクトシル化含量、非フコシル化グリカン含量、及びＨＭ含量のデータをまた、統計解析のためのＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して解析した。結果を、図４Ｅ～４Ｇに示し、各図では、回帰直線の方程式（破線で示されている）、及び９５％信頼区間（水色の領域で示されている）を示す。これらの図に示すように、ほとんどのデータ点は、図４Ｅ及び図４Ｆの９５％信頼区間内に入った。図４Ｇに示すように、この信頼区間は、図４Ｅ及び図４Ｆの信頼区間と比べてはるかに広い。図４Ｅ及び図４Ｆの方程式の傾き及びｙ切片の範囲を、下記の表２に示す。

【0184】

【表8】

【0185】

この試験で使用されるデータセットに基づいて、β－ガラクトシル化含量、非フコシル化グリカン含量、及び／又はＨＭ含量を測定することにより、抗体組成物のＦｃγＲＩＩａ結合を予測し得る。このデータは、ＦｃγＲＩＩａ結合へのβ－ガラクトシル化含量及び非フコシル化グリカン含量の強い影響を裏付ける。従って、β－ガラクトシル化含量及び非フコシル化グリカン含量を測定するだけで、抗体組成物のＦｃγＲＩＩａ結合を予測し得る。図４Ｅ～４Ｆのデータは、非フコシル化グリカン含量のβ－ガラクトシル化含量を測定するだけで、ＦｃγＲＩＩａ結合を十分に合理的に予測し得ることを裏付ける。９５％信頼区間内のデータ点は、抗体組成物のＦｃＲＩＩａ結合を合理的に予測するだろう。

【0186】

実施例４
本実施例では、例示的なＦｃγＲＩＩｂ結合アッセイが説明されている。

【0187】

抗体を含む試料のＦｃγＲＩＩｂ結合を測定するために、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するＦｃγＲＩＩｂ結合アッセイを開発した。このアッセイでは、抗体１を様々な濃度に連続希釈した試料を、プロテインＡセンサーチップ（Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上での捕捉に使用した。ヒトＦｃγＲＩＩｂ－ＧＳＴ－Ｈ６組換えタンパク質（以降、「ＦｃγＲＩＩＢ－ＧＳＴ－Ｈ６」と称される）への結合を、プロテインＡで捕捉された抗体を含む表面に一定濃度のＦｃγＲＩＩｂ－ＧＳＴ－Ｈ６を注入することにより検出した。結合データを、統計ソフトウェアＰＬＡ３．０を使用して線形モデルに適合させ、試験抗体１参照標準（Ａｂ１ ＲＳ）の結合レベルと比較して、試料の相対結合率を算出した。

【0188】

実施例５
本実施例では、ＦｃγＲＩＩｂ結合とグリカン含量との相関関係が実証されている。

【0189】

抗体１を含む様々な試料に関するグリカンプロファイルを、実施例１で説明されている手順に従って決定した。これらの試料をまた、実施例４で説明されているアッセイを実行することにより、ＦｃγＲＩＩｂ結活性に関しても特徴付けた。

【0190】

表３では、高マンノース（ＨＭ）グリカン、β－ガラクトシル化グリカン、及び非フコシル化グリカンの測定量と、測定されたＦｃγＲＩＩｂ結合活性（相対結合％として表す）とが列挙されている。

【0191】

【表9】

【0192】

測定されたＦｃγＲＩＩｂ結合、高マンノース含量、β－ガラクトシル化含量、及び非フコシル化グリカン含量に関するデータを、統計解析のためのコンピュータプログラムのＪＭＰスイート（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｒｙ，ＮＣ）を使用して解析した。結果を、図５Ａ～５Ｃに示し、図５Ａは、β－ガラクトシル化グリカンのＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットであり、図５Ｂは、非フコシル化グリカンのてこ比プロットであり、図５Ｃは、ＨＭグリカンのてこ比プロットである。各グラフの最良適合直線を、暗赤色の直線で示す。これらの図に示されるように、β－ガラクトシル化含量及び非フコシル化グリカン含量は、ＦｃγＲＩＩｂ結合と関連しており、それぞれの関連は、統計的に有意であった（β－ガラクトシル化グリカンに関するｐ＝０．０２５８；非フコシル化グリカンに関するｐ＝０．０６００）。図５Ｃに示すように、ＨＭ含量とＦｃγＲＩＩｂ結合との関連は、統計的に有意ではなかった（ｐ＝０．１５３３）。抗体１に関するＦｃγＲＩＩｂ結合％と、β－ガラクトシル化含量及び非フコシル化グリカン含量との関係を、方程式２：
予測されたＦｃγＲＩＩｂ結合％＝１０５．７３１＋（０．４６１＊β－ガラクトシル化グリカン％）＋（－４．４２９＊非フコシル化グリカン％＋（－１．８８３）ＨＭグリカン％）
［方程式２］
で説明し得る。

【0193】

β－ガラクトシル化グリカン％及び非フコシル化グリカン％に関して測定した値を方程式２に代入して、各試料に関して、予測されたＦｃγＲＩＩｂ結合％値を算出して表３に示した。実際のＦｃγＲＩＩｂ結合％（ＦｃγＲＩＩｂ結合アッセイで測定されるとおり）を、予測されたＦｃγＲＩＩｂ結合％（方程式２により算出されるとおり）に対してプロットし、このプロットを、図５Ｄとして提供する。図５Ｄはまた、二乗平均平方根誤差（ＲＭＳＥ）、ｒ^２、及びｐ値を含む統計パラメータも提供する。これらの結果から、方程式２は、実際の（測定された）ＦｃγＲＩＩｂ結合を正確に予測し、且つβ－ガラクトシル化グリカン、非フコシル化グリカンと、ＦｃγＲＩＩｂ結合との明確な相関関係を強調していることが示唆される。β－ガラクトシル化グリカンのレベルが高いほど、且つ非フコシル化グリカンのレベルが低いほど、ＦｃγＲＩＩｂ結合活性が高くなる。β－ガラクトシル化グリカンのてこ比、及び非フコシル化グリカンのてこ比は、類似していた（それぞれ、ｐ＝０．０２５８及びｐ＝０．０６００）。

【0194】

測定されたＦｃγＲＩＩｂ結合、ＨＭ含量、β－ガラクトシル化含量、及び非フコシル化グリカン含量に関するデータをまた、統計解析のためのＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して解析した。結果を、図５Ｅ～５Ｇに示し、各図では、回帰直線の方程式（破線で示されている）、及び９５％信頼区間（水色の領域で示されている）を示す。これらの図に示すように、ほとんどのデータ点は、図５Ｅ及び図５Ｆの９５％信頼区間内に入った。図５Ｅ及び図５Ｆの方程式の傾き及びｙ切片の範囲を、下記の表４に示す。

【0195】

【表10】

【0196】

この試験で使用されるデータセットに基づいて、β－ガラクトシル化含量及び非フコシル化グリカン含量を測定することにより、抗体組成物のＦｃγＲＩＩｂ結合を予測し得る。図５Ｅ～５Ｆのデータは、非フコシル化グリカン含量のβ－ガラクトシル化含量を測定するだけで、ＦｃγＲＩＩｂ結合を合理的な信頼性で予測し得ることを裏付ける。９５％信頼区間内のデータ点は、抗体組成物のＦｃＲＩＩｂ結合を合理的に予測するだろう。

【0197】

実施例６
本実施例では、ＦｃγＲＩＩ結合とグリカン含量との相関関係が実証されている。

【0198】

実施例１～５の実験及び分析を、抗体１を含む追加の試料で実行した。簡潔に説明すると、抗体１を含む試料のグリカンプロファイルを、実施例１で説明されている手順に従って決定した。これらの試料をまた、実施例２及び実施例４それぞれで説明されているアッセイを実行することにより、ＦｃγＲＩＩａ結合活性及びＦｃγＲＩＩｂ結活性に関しても特徴付けた。

【0199】

表５では、既に分析した試料（試料ＩＤ番号１～１１）及び追加の試料（試料ＩＤ番号１２～１９）に関する、高マンノース（ＨＭ）グリカン、β－ガラクトシル化（β－ｇａｌ）グリカン、及び非フコシル化（ａｆｕｃｏ）グリカンの測定量と、測定されたＦｃγＲＩＩａ結合活性及びＦｃγＲＩＩｂ結合活性（それぞれ相対結合％として表す）とが列挙されている。

【0200】

【表11】

【0201】

表５の測定されたＦｃγＲＩＩａ結合、測定されたＦｃγＲＩＩｂ結合、高マンノース含量、β－ガラクトシル化含量、及び非フコシル化グリカン含量に関するデータを、統計解析のためのコンピュータプログラムのＪＭＰスイート（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｒｙ，ＮＣ）を使用して解析した。結果を、図７Ａ～７Ｃ及び図８Ａ～８Ｃに示し、図７Ａは、β－ガラクトシル化グリカンのＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットであり、図７Ｂは、非フコシル化グリカンのＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットであり、図７Ｃは、ＨＭグリカンのＦｃγＲＩＩａ結合てこ比プロットであり、図８Ａは、β－ガラクトシル化グリカンのＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットであり、図８Ｂは、非フコシル化グリカンのＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットであり、図８Ｃは、ＨＭグリカンのＦｃγＲＩＩｂ結合てこ比プロットである。各グラフの最良適合直線を、暗赤色の直線で示す。

【0202】

図７Ａ～７Ｂに示すように、β－ガラクトシル化含量、及び非フコシル化グリカン含量は、ＦｃγＲＩＩａ結合と関連しており、それぞれの関連は、統計的に有意であった（β－ガラクトシル化グリカンに関するｐ＜０．０００１；非フコシル化グリカンに関するｐ＝０．００３３）。図７Ｃに示すように、ＨＭ含量とＦｃγＲＩＩａ結合との関連も、統計的に有意であった（ｐ＝０．００３５）。抗体１に関するＦｃγＲＩＩａ結合％と、β－ガラクトシル化含量、非フコシル化グリカン含量、及びＨＭ含量との関係を、方程式７：
予測されたＦｃγＲＩＩａ結合％＝１０２．７０４＋（０．５４５＊β－ガラクトシル化グリカン％）＋（－４．４６６＊非フコシル化グリカン％＋（－２．０３５６）ＨＭグリカン％
［方程式７］
で説明し得る。

【0203】

表５のβ－ガラクトシル化グリカン％、非フコシル化グリカン％、及びＨＭグリカンに関して測定した値を方程式７に代入して、各試料に関して、予測されたＦｃγＲＩＩａ結合％値を算出した。予測されたＦｃγＲＩＩａ結合％値もまた、表５に表す。実際のＦｃγＲＩＩａ結合％（ＦｃγＲＩＩａ結合アッセイで測定されるとおり）を、予測されたＦｃγＲＩＩａ結合％（方程式７によって計算されるとおり）に対してプロットし、このプロットを、図７Ｄとして提供する。図７Ｄはまた、二乗平均平方根誤差（ＲＭＳＥ）、ｒ^２、及びｐ値を含む統計パラメータも提供する。これらの結果は、方程式７が、実際の（測定された）ＦｃγＲＩＩａ結合を正確に予測し、且つβ－ガラクトシル化グリカン、非フコシル化グリカン、ＨＭグリカンと、ＦｃγＲＩＩａ結合との明確な相関関係を強調していることを裏付ける。β－ガラクトシル化グリカンのレベルが高いほど、且つ非フコシル化グリカン及びＨＭグリカンのレベルが低いほど、ＦｃγＲＩＩａ結合活性が高くなる。各グリカン群のてこ比は、互いに類似していた。

【0204】

図８Ａ及び８Ｃに示すように、β－ガラクトシル化含量及びＨＭグリカン含量は、ＦｃγＲＩＩｂ結合と関連しており、それぞれの関連は、統計的に有意であった（β－ガラクトシル化グリカンに関するｐ＜０．０００１；ＨＭグリカンに関するｐ＝０．００２４）。図８Ｂに示すように、非フコシル化グリカン含量は、ＦｃγＲＩＩｂ結合を伴う傾向があった（ｐ＝０．０９４７）。抗体１に関するＦｃγＲＩＩｂ結合％と、β－ガラクトシル化含量、非フコシル化グリカン含量、及びＨＭ含量との関係を、方程式８：
予測されたＦｃγＲＩＩｂ結合％＝９９．２１１＋（０．５９０＊β－ガラクトシル化グリカン％）＋（－２．０４＊非フコシル化グリカン％＋（－１．９１１）ＨＭグリカン％
［方程式８］
で説明し得る。

【0205】

表５のβ－ガラクトシル化グリカン％、非フコシル化グリカン％、及びＨＭグリカンに関して測定した値を方程式８に代入して、各試料に関して、予測されたＦｃγＲＩＩｂ結合％値を算出した。予測されたＦｃγＲＩＩｂ結合％値もまた、表５に表す。実際のＦｃγＲＩＩｂ結合％（ＦｃγＲＩＩｂ結合アッセイで測定されるとおり）を、予測されたＦｃγＲＩＩｂ結合％（方程式８によって計算されるとおり）に対してプロットし、このプロットを、図８Ｄとして提供する。図８Ｄはまた、二乗平均平方根誤差（ＲＭＳＥ）、ｒ^２、及びｐ値を含む統計パラメータも提供する。これらの結果は、方程式８が、実際の（測定された）ＦｃγＲＩＩｂ結合を正確に予測し、且つβ－ガラクトシル化グリカン、非フコシル化グリカン、ＨＭグリカンと、ＦｃγＲＩＩｂ結合との明確な相関関係を強調していることを裏付ける。β－ガラクトシル化グリカンのレベルが高いほど、且つ非フコシル化グリカン及びＨＭグリカンのレベルが低いほど、ＦｃγＲＩＩｂ結合活性が高くなる。各グリカン群のてこ比は、互いに類似していた。

【0206】

表５の測定されたＦｃγＲＩＩａ結合、並びに測定されたＦｃγＲＩＩｂ結合、測定されたＨＭ含量、β－ガラクトシル化含量、及び非フコシル化グリカン含量に関するデータを、統計解析のためにＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して、さらに解析した。結果を、図７Ｅ～７Ｇ及び図８Ｅ～８Ｇに示し、図７Ｅは、β－ガラクトシル化含量の関数としてＦｃγＲＩＩａ結合をプロットしているグラフであり、図７Ｆは、非フコシル化含量の関数としてＦｃγＲＩＩａ結合をプロットしているグラフであり、図７Ｇは、ＨＭ含量の関数としてＦｃγＲＩＩａ結合をプロットしているグラフであり、図８Ｅは、β－ガラクトシル化含量の関数としてＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットしているグラフであり、図８Ｆは、非フコシル化含量の関数としてＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットしているグラフであり、図８Ｇは、ＨＭ含量の関数としてＦｃγＲＩＩｂ結合をプロットしているグラフである。各図では、回帰直線の方程式（破線で示されている）、及び９５％信頼区間（水色の領域で示されている）を示す。

【0207】

この試験で使用されるデータセットに基づいて、β－ガラクトシル化含量、非フコシル化グリカン含量、及びＨＭ含量を測定することにより、抗体組成物のＦｃγＲＩＩａ結合を予測し得る。図７Ｅ～７Ｇのデータは、これらのグリカンを測定することによりＦｃγＲＩＩａ結合を合理的な信頼性で予測し得ることを裏付ける。９５％信頼区間内のデータ点は、抗体組成物のＦｃＲＩＩａ結合を合理的に予測するだろう。測定されたＦｃγＲＩＩｂ結合及びグリカン含量に関しても、同様の観察を行った。この試験で使用されるデータセットに基づいて、β－ガラクトシル化含量、非フコシル化グリカン含量、及びＨＭ含量を測定することにより、抗体組成物のＦｃγＲＩＩｂ結合を予測し得る。図８Ｅ～８Ｇのデータは、これらのグリカンを測定することによりＦｃγＲＩＩｂ結合を合理的な信頼性で予測し得ることを裏付ける。９５％信頼区間内のデータ点は、抗体組成物のＦｃＲＩＩｂ結合を合理的に予測するだろう。

【0208】

本明細書で引用される、刊行物、特許出願及び特許を含む全ての参考文献は、それぞれの参考文献が、あたかも個々に及び具体的に参照により本明細書に組み込まれることが示されており、且つ本明細書においてその全体が記載されていたかのように同程度に参照により本明細書に組み込まれる。

【0209】

本開示の説明に関する（とりわけ下記の特許請求の範囲に関する）「１つの（ａ）」、及び「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」という用語、並びに類似の指示対象の使用は、本明細書中で別段の指示がない限り又は文脈と明確に矛盾しない限り、単数及び複数の両方を包含するものと解釈されるべきである。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」という用語は、別段の指定がない限り、指定の構成要素を含むが他の要素を排除しない（即ち、「含むが限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ，ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」を意味する）、非限定的な用語として解釈されるべきである。

【0210】

本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書で別段の指示がない限り、範囲内にあるそれぞれ別々の値及びそれぞれの終点を個々に言及する速記法としての役割を果たすことが単に意図され、本明細書であたかも個々に列挙されたかのように、それぞれ別々の値及び終点が本明細書に組み込まれる。

【0211】

本明細書で説明されている方法を全て、本明細書で別段の指示がない限り、又は文脈と明確に矛盾しない限り、あらゆる適切な順序で実施し得る。本明細書で提供されるありとあらゆる例又は例示的な言葉（例えば「等」）の使用は、本開示をより明らかにするすることが意図されているに過ぎず、別途特許請求されない限り、本開示の範囲の限定を課すものではない。本明細書におけるいかなる言語も、任意の特許請求されていない要素を、本開示を実施するのに必要不可欠なものとして示すものと解釈されるべきではない。

【0212】

本明細書では、本開示の好ましい実施形態が説明されており、例えば、本開示を実行するための本発明者らにとって既知の最良の形態が説明されている。それらの好ましい実施形態の変形形態は、上記の説明を読むことで当業者に明らかになり得る。発明者らは、当業者が必要に応じてこのような変形形態を採用することを予想し、発明者らは、本明細書中で具体的に説明されている形態以外で本開示が実施されることを意図する。従って、本開示は、適用される法により認められるとおり、本明細書に添付される特許請求の範囲に列挙されている主題の全ての変更形態及び均等物を含む。さらに、上記の要素の任意の組み合わせは、別途本明細書で指示されない限り、又は文脈と明らかに矛盾しない限り、その全ての可能な変形形態で本開示に包含される。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図4F】

【図4G】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図5E】

【図5F】

【図5G】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図7F】

【図7G】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図8E】

【図8F】

【図8G】

【配列表】

2024537100000001.xml

【国際調査報告】