特表 2024-537389 ＡＬＳ阻害剤除草剤耐性ベータ・ブルガリス（ＢＥＴＡ ＶＵＬＧＡＲＩＳ）突然変異体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-10

(54)【発明の名称】ＡＬＳ阻害剤除草剤耐性ベータ・ブルガリス（ＢＥＴＡ ＶＵＬＧＡＲＩＳ）突然変異体

(51)【国際特許分類】

   A01H 6/02 20180101AFI20241003BHJP

   C12N 15/54 20060101ALI20241003BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241003BHJP

   C12N 15/11 20060101ALI20241003BHJP

   C12Q 1/6895 20180101ALI20241003BHJP

   C12N 15/01 20060101ALI20241003BHJP

   C12N 15/09 20060101ALI20241003BHJP

   A01H 1/00 20060101ALI20241003BHJP

   A01M 21/00 20060101ALI20241003BHJP

【ＦＩ】

A01H6/02 ZNA

C12N15/54

C12N15/63 Z

C12N15/11 Z

C12Q1/6895 Z

C12N15/01 Z

C12N15/09 100

A01H1/00 A

A01H1/00 Z

A01M21/00 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024522458

(86)(22)【出願日】2022-10-14

(85)【翻訳文提出日】2024-04-12

(86)【国際出願番号】 EP2022078627

(87)【国際公開番号】W WO2023062184

(87)【国際公開日】2023-04-20

(31)【優先権主張番号】21202922.7

(32)【優先日】2021-10-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519275560

【氏名又は名称】カー・ヴェー・エス ザート エス・エー ウント コー． カー・ゲー・アー・アー

【氏名又は名称原語表記】ＫＷＳ ＳＡＡＴ ＳＥ ＆ Ｃｏ． ＫＧａＡ

【住所又は居所原語表記】Ｇｒｉｍｓｅｈｌｓｔｒａｓｓｅ ３１， ３７５７４ Ｅｉｎｂｅｃｋ， Ｇｅｒｍａｎｙ

(74)【代理人】

【識別番号】100114890

【弁理士】

【氏名又は名称】アインゼル・フェリックス＝ラインハルト

(74)【代理人】

【識別番号】100098501

【弁理士】

【氏名又は名称】森田 拓

(74)【代理人】

【識別番号】100116403

【弁理士】

【氏名又は名称】前川 純一

(74)【代理人】

【識別番号】100134315

【弁理士】

【氏名又は名称】永島 秀郎

(74)【代理人】

【識別番号】100162880

【弁理士】

【氏名又は名称】上島 類

(72)【発明者】

【氏名】オーラフ クツァルネッキ

(72)【発明者】

【氏名】マイク ゲアツ

(72)【発明者】

【氏名】イェンス クリストフ ライン

(72)【発明者】

【氏名】ダヴィット ヴアプス

【テーマコード（参考）】

2B121

4B063

【Ｆターム（参考）】

2B121AA19

2B121CC39

2B121EA21

4B063QA13

4B063QA17

4B063QA18

4B063QQ04

4B063QQ42

4B063QQ52

4B063QR08

4B063QR55

4B063QR62

4B063QS24

4B063QS34

4B063QX02

(57)【要約】

本発明は、３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含む突然変異型内因性アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）タンパク質を有するベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分に関する。そのような植物は、ＡＬＳ阻害剤除草剤に対する耐性が増加しているという点で特徴付けられる。本発明はさらに、そのような植物を作出するための方法の他、そのような植物を同定するための方法にも関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

突然変異型内因性アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）タンパク質、または３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含む突然変異型内因性アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）タンパク質をコードするポリ核酸を含むか、発現するか、または発現することができる、ベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【請求項2】

３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含むＡＬＳタンパク質をコードする突然変異型内因性対立遺伝子を含む、請求項１記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【請求項3】

１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤に対して耐性がある、請求項１または２記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【請求項4】

（スルホン）アミド、例えばスルホニル尿素、スルホニルアミノカルボニルトリアゾリノン、スルホンアニリド、またはトリアゾロピリミジン；イミダゾリノン；およびピリミジニル（チオ／オキシ）ベンゾエートから選択される、好ましくは、スルホニル尿素、スルホニルアミノカルボニルトリアゾリノン、イミダゾリノン、およびピリミジニル（チオ／オキシ）ベンゾエートから選択される１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤に対して耐性がある、請求項１から３までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【請求項5】

突然変異型内因性アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）タンパク質をコードするポリ核酸を含むか、または５６９位にトリプトファン（Ｗ）とは異なるアミノ酸を含むＡＬＳタンパク質をコードする突然変異型内因性対立遺伝子を含む、請求項１から４までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【請求項6】

前記ＡＬＳがホモ接合またはヘテロ接合である、請求項１から５までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【請求項7】

請求項１から６までのいずれか１項において定義される突然変異型内因性アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）タンパク質をコードする（単離された）ポリ核酸。

【請求項8】

前記ＡＬＳタンパク質が、配列番号３と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、例えば少なくとも９８％同一である配列を有する、請求項７記載の（単離された）ポリ核酸。

【請求項9】

請求項７または８記載のポリ核酸を含むベクター。

【請求項10】

請求項７または８記載のポリ核酸、その相補体、またはその逆相補体と特異的にハイブリダイズする（単離された）ポリ核酸であって、好ましくは、前記ポリ核酸がプライマーまたはプローブである、（単離された）ポリ核酸。

【請求項11】

ベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を同定するための方法であって、ＡＬＳタンパク質におけるアスパラギン酸（Ｄ）とは異なる３７１位のアミノ酸の存在についてスクリーニングすること、またはＡＬＳタンパク質におけるアスパラギン酸（Ｄ）とは異なる３７１位のアミノ酸をコードするコドンの存在についてスクリーニングすることを含む、方法。

【請求項12】

ベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を作出するための方法であって、植物もしくは植物の一部分のゲノムにおいて、３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含むＡＬＳタンパク質をコードするＡＬＳ対立遺伝子をもたらす内因性ＡＬＳ対立遺伝子を突然変異させること、または植物もしくは植物の一部分のゲノムにおいて、３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含む突然変異型内因性ＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸を導入する（および発現させる）ことを含む、方法。

【請求項13】

請求項１２記載の方法によって（直接）得られるか、または得ることができるベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分、またはその子孫。

【請求項14】

ベータ・ブルガリス生育地域における望ましくない植生を防除するための、またはベータ・ブルガリス生育地域における収量を増加させるための方法であって、
ａ）請求項１から６までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物を植え付けるか、またはベータ・ブルガリス種子を播種するステップ；
ｂ）生育中の植物に、好ましくは、望ましくない植生の生育を阻害するのに十分な用量で、より好ましくは、望ましくない植生を枯死させるのに十分な用量で、１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤を適用するステップ；および
ｃ）任意選択的に、生育期中にステップｂ）を繰り返すステップ
を含む、方法。

【請求項15】

前記望ましくない植生が、とう立ち、雑草ビート、または一年生ビートを含む、請求項１４記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、作物保護の技術分野に関する。特に、本発明は、アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）除草剤に対して抵抗性または耐性があるベータ・ブルガリス植物またはその部分、ならびにそのような植物もしくは植物の一部分を作出および／または同定するための方法、ならびにそのような植物もしくは植物の一部分を、望ましくない植生を防除するための方法において使用することに関する。

【0002】

発明の背景
アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）は、ロイシン、イソロイシン、およびバリンにつながる分岐鎖アミノ酸生合成経路の必須部分である。ＡＬＳは、種を超えて保存されており、細菌、酵母および高等植物の酵素はかなりの配列類似性を示す（Mazur et al. (1987): Isolation and characterization of plant genes-coding for acetolactate synthase, the target enzyme for 2 classes of herbicides. Plant Physiol. 85, 1110-1117）。興味深いことに、動物は分岐鎖アミノ酸経路を有しておらず、したがって、これらのアミノ酸をそれらの食事から摂取しなければならない。ＡＬＳは、葉緑体に存在するロイシンおよびバリンの生合成サイクルに関与する一連の酵素の中で最初のものである。シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）では、ＡｔＡＬＳは４つの同一のサブユニットからなる四量体を形成する。各サブユニットはチアミンピロリン酸（ＴＰＰ）を補欠分子族として含み、２分子のピルビン酸からアセト乳酸の生成を触媒する。これによって、ＴＰＰは１分子のピルビン酸と反応してヒドロキシエチル－ＴＰＰおよびＣＯ_２を形成する。その後、ＴＰＰのヒドロキシエチル残基が２分子目のピルビン酸に転移し、アセト乳酸が形成される。次いで、アセト乳酸はさらにバリンおよびロイシンに処理される。並行して、ＡＬＳは、スレオニン、および１分子のピルビン酸を触媒して２－アセト－２－ヒドロキシ酪酸にし、これをさらにイソロイシンに処理する。ＡＬＳ活性はロイシンおよびバリンによってフィードバック阻害されるが、これらはＡＬＳの２つの別々のドメインに相乗的に結合してその活性を阻害する。

【0003】

ＡＬＳは、スルホニル尿素、スルフニルアミノ－カルボニル－トリアゾリノン、イミダゾリノン、およびトリアゾロピリミジンの４つのクラスの構造的に無関係な除草剤（ＨＲＡＣクラスＢ）の標的酵素である。これらの除草剤クラスは５０超の市販の除草剤の基礎を成しており、米、トウモロコシ、小麦、および綿花の重要作物の保護に世界的に使用されている。スルホニル尿素およびイミダゾリノンはＡＬＳに結合し、その後、ＡＬＳ活性を阻害する。除草剤のスルホニル基および隣接する芳香環は、酵素の活性部位につながる基質チャネルの入口に位置し、分子の残りの部分はチャネルに挿入される（McCourt et al. (2006): Herbicide-binding sites revealed in the structure of plant acetohydroxyacid synthase. Proe. Natl. Aead. Sei. USA 103, 569-573）。基質、例えばピルビン酸は酵素活性中心に到達できなくなる。これは、ロイシン、バリンおよびイソロイシンの生合成の阻害につながり、除草効果を引き起こす。

【0004】

スルホニル尿素およびイミダゾリノンが除草剤市場に導入されてから間もなく、抵抗性雑草が出現し始めた（www.weedscience.org）。これらの抵抗性はアミノ酸置換をもたらす一点突然変異によるものが最も一般的である。最も包括的に特徴付けられた突然変異はＷ５７４（数字はアラビドプシス・タリアナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）のタンパク質配列に基づく位置を示す）のもので、これが幾つかの植物に除草剤耐性をもたらしている。トリプトファン残基は両クラスの除草剤を酵素に固定する役割を果たし、活性部位チャネルの形状を画定するのに重要である。その結果、この残基のロイシンへの一般的に観察される突然変異が除草剤結合部位の形状を変化させ、幾つかの相互作用の喪失をもたらす（Endo et al. (2013): Herbicide-resistant mutations in acetolactate synthase can reduce feedback inhibition and lead to accumulation of branched-chain amino acids. Food and Nutrition Sei. 4, 31233.）。

【0005】

スルホニル尿素およびイミダゾリノン抵抗性テンサイ（Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ Ｌ．ｓｐｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）突然変異体は、ＳＵ含有培地上でのテンサイ細胞培養のインキュベーションとその後のカルス誘導および植物修復とによって何年も前に同定されている。この突然変異体系統は、突然変異Ｗ５６９Ｌ（アラビドプシス・タリアナタンパク質配列のＷ５７４Ｌに対応）を保有し、スルホニル尿素およびイミダゾリノン、すなわちホラムスルフロンおよびチエンカルバゾン－メチルに対して耐性があり、除草剤抵抗性品種を開発するためのドナー系統として役割を果たす（国際公開第２０１２／０４９２６８号）。前述の除草剤抵抗性を利用したテンサイにおける雑草防除システムは、ＣＯＮＶＩＳＯ（登録商標）ＳＭＡＲＴ（www.convisosmart.com）というブランドで数年前から商品化されている。そのような除草剤抵抗性テンサイは、最大限の保護を確実にするためにＷ５６９Ｌをホモ接合的に保有している。国際公開第２０１４／０９１０２１号は、テンサイにおける２２種類の異なるＡＬＳ阻害剤除草剤を用いた研究を開示しており、ホモ接合状態のＷ５６９Ｌが試験した全ての除草剤に対する耐性を付与し、７種類の除草剤組成物のみが中程度の毒性を有することを示している。それとは対照的に、５６９位でヘテロ接合であるテンサイ植物は、幾つかの除草剤組成物に対して部分的にのみ抵抗性を有することになった。１２種類の除草剤組成物はかなりの毒性効果を示し、７種類は中程度の毒性を示した。したがって、商業的応用にはホモ接合状態のＷ５６９Ｌの使用が明らかに有利である。

【0006】

しかしながら、Ｗ５６９Ｌのホモ接合である交雑テンサイ種子の生産には、母系および父系の両方のプールに突然変異を導入し、維持する必要があるので、育種中に多大な労力を要する。さらに、交雑生産中に、例えば野生ビートによる外来の望ましくない何らかの受粉があると、ヘテロ接合交雑種子をもたらすため、Ｗ５６９Ｌをホモ接合的に保有する種子のみを農家に提供するには、種子品質管理に対する高い要求を満たす必要がある。これには、交雑種子生産のための追加のコストおよび時間を伴う。

【0007】

したがって、テンサイおよび飼料用ビート、レッドビートまたはスイスチャードのような他の栽培品種のベータ・ブルガリスにおけるＡＬＳ阻害剤抵抗性をさらに改善する必要がある。

【0008】

発明の概要
本発明は、テンサイ、飼料用ビート、スイスチャードまたはレッドビートなどのベータ・ブルガリス植物の生育地域における望ましくない植生に対してＡＬＳ（アセト乳酸シンターゼ；ＡＨＡＳ（アセトヒドロキシ酸シンターゼ；ＥＣ ２．２．１．６；以前はＥＣ ４．１．３．１８）としても知られる）阻害剤除草剤を使用することによる作物保護の技術分野に関する。

【0009】

幾つかの雑草でＡＬＳ突然変異が報告されているが、そのような突然変異を作物植物に導入することが実現可能であり、所望の効果を取り次ぐことは先験的に期待することはできない。実際、ＡＬＳ阻害剤抵抗性を、とりわけ作物植物、特にＡＬＳ阻害剤除草剤に対して極めて感受性が高いことが知られているベータ・ブルガリスに付与するには、強固な除草剤抵抗性を確立する必要がある。これに関連して、幾つかの同定されたＡＬＳ突然変異は部分的な除草剤抵抗性しか付与せず、それによって、商業的利用が妨げられていることが知られている。多くの場合、農学的に有用で安定したＡＬＳ阻害剤除草剤抵抗性を達成するためには、複数の突然変異を組み合わせる必要がある場合さえある。さらに、ＡＬＳ突然変異は、選択された数のＡＬＳ阻害剤除草剤にのみ耐性を付与する可能性があり、その結果、雑草防除の選択肢が制限されることになる。加えて、ＡＬＳ突然変異は生育特性および／または稔性に悪影響を及ぼす可能性があり、このことは、特に作物植物においては望ましくないことが記載されている。また、強固な除草剤抵抗性を付与するためには、ＡＬＳ突然変異がホモ接合的に存在する必要がある場合があり、これは育種、特に交雑の作出が望まれる場合に問題を引き起こす可能性がある。

【0010】

本発明者らは、驚くべきことに、ベータ・ブルガリスＡＬＳタンパク質を３７１位で突然変異させると、生育特性を維持したまま、多種多様なＡＬＳ阻害剤除草剤に対して強固なＡＬＳ阻害剤除草剤抵抗性を付与できることを見出した。さらに驚くべきことに、ヘテロ接合ＡＬＳ突然変異体も同様に適していることが判明した。

【0011】

したがって、一態様において、本発明は、コードされたＡＬＳ酵素の３７１位のアスパラギン酸が他のアミノ酸（好ましくはグルタミン酸）で置換されているＡＬＳ遺伝子の突然変異を含むベータ・ブルガリス植物に関する。本発明はさらに、ＡＬＳ阻害性除草剤に対して抵抗性がある交雑ベータ・ブルガリス品種を開発するために使用できる新規な非トランスジェニックベータ・ブルガリスドナー系統を提供する。

【0012】

アミノ酸置換Ｄ３７１Ｅは、配列番号４のヌクレオチド位１１４１の点突然変異に基づいており、ＴがＡに置き換えられている。その結果、野生型ＧＡＴにあるヌクレオチド位１１３９からヌクレオチド位１１４１までのコドンはＧＡＡに変更される。ｃＤＮＡ中の対応する位置はヌクレオチド位１１１１－１１１３である。

【0013】

本発明の別の態様は、コードされたＡＬＳ酵素の３７１位のアスパラギン酸が他のアミノ酸（好ましくはグルタミン酸）で置換されているＡＬＳ遺伝子の突然変異を含むベータ・ブルガリス植物の生育領域における望ましくない植生に対してＡＬＳ阻害剤除草剤を使用することによる作物保護方法を提供することである。

【0014】

本発明の有利な態様は、ＡＬＳ阻害性除草剤の抵抗性のための新しいかつ独立したドナーが存在することであり、これは、例えば、それぞれの突然変異の多面効果または突然変異に関連する別の負のリンケージドラッグが原因で生じる既知の他のドナー系統で起こり得る望ましくない悪影響を回避するのに役立ち得る。

【0015】

さらに、交雑テンサイの生産のために、両方の交雑プールに同一のドナーが使用された場合、同系交雑抑制が観察され、潜在的な収量ギャップにつながり得ることもある。本発明の新しいドナーは、除草剤耐性のための異なるドナーが両方のプール、例えば、Ｗ５６９Ｌ突然変異（配列番号１０～１２を参照のこと）を有する１つのプールと、本発明による別の、例えばＡＬＳ Ｄ３７１Ｅ突然変異（配列番号１～３を参照のこと）を有するプールとに使用され得ることを可能にし、それによって上記の問題を解決することができる。

【0016】

さらに、本発明による突然変異、例えばＡＬＳ Ｄ３７１Ｅ突然変異のみをヘテロ接合またはホモ接合で保有する独立した産物（除草剤耐性テンサイ系統）に新しいドナーを使用することも選択肢となり得る。

【0017】

更なる態様において、本発明は、本発明による突然変異型ＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸、ならびにそのようなポリ核酸を含むベクター、およびそのようなポリ核酸またはベクターを含む宿主細胞に関する。

【0018】

更なる態様において、本発明は、本発明による突然変異型ＡＬＳタンパク質を含む植物を作出するための方法、ならびに本発明による突然変異型ＡＬＳタンパク質を含む植物を同定するための方法に関する。

【0019】

更なる態様において、本発明は、作物植物が本発明による突然変異型ＡＬＳタンパク質を含む、作物地域における望ましくない植生を防除するためのＡＬＳ阻害剤除草剤の使用に関する。

【0020】

本発明は、特に、添付の特許請求の範囲によって捕捉され、これらは参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

【0021】

発明の詳細な説明
本発明の本システムおよび方法を説明する前に、本発明は、説明された特定のシステムおよび方法または組み合わせに限定されないことを理解されたい。また、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書で使用される用語は限定を意図したものではないことを理解されたい。

【0022】

本明細書で使用される場合、単数形「a」、「an」、および「the」は、文脈上特に明記されていない限り、単数形および複数形の両方の指示対象を含む。

【0023】

本明細書で使用される用語「comprising（含む）」、「comprises（含む）」、および「comprised of（から構成される）」は、「including（含む）」、「includes（含む）」、または「containing（含む）」、「contains（含む）」と同義であり、包括的または非限定的であり、かつ追加の、記載されていないメンバー、要素または方法ステップを除外するものではない。本明細書で使用される用語「comprising（含む）」、「comprises（含む）」および「comprised of（から構成される）」は、用語「consisting of（からなる）」、「consists（からなる）」および「consists of（からなる）」、ならびに用語「consisting essentially of（から実質的になる）」、「consists essentially（から実質的になる）」、および「consists essentially of（から実質的になる）」を含むことが理解されるであろう。

【0024】

端点による数値範囲の記載は、記載された端点の他、それぞれの範囲内に包含される全ての数値および分数も含む。

【0025】

本明細書で使用される用語「約」または「およそ」は、例えばパラメーター、量、時間的持続などの測定可能な値を指す場合、指定された値の±２０％以下、好ましくは±１０％以下、より好ましくは±５％以下、一層より好ましくは±１％以下の変動を、開示された発明でそのような変動を行うのに適切な限りにおいて包含することを意味する。修飾語「約」または「およそ」が指す値自体も、具体的に、好ましくは開示されることを理解されたい。

【0026】

用語「１つ以上」または「少なくとも１つ」、例えば一群のメンバーのうちの１つ以上または少なくとも１つのメンバーがそれ自体明確であるのに対し、更なる例示によって、この用語は、とりわけ、前述のメンバーのうちの任意の１つ、または前述のメンバーのうちの任意の２つ以上、例えば前述のメンバーのうちの任意の≧３、≧４、≧５、≧６または≧７など、および全ての前述のメンバーまでの指示対象を包含する。

【0027】

本明細書で引用される全ての文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。特に、本明細書で具体的に参照される全ての文献の教示は、参照により組み込まれる。

【0028】

別段の定義がない限り、技術用語および科学用語を含め、本発明を開示する際に使用される全ての用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。更なる指針として、本発明の教示をよりよく理解するための用語の定義が含まれる。

【0029】

組換えＤＮＡ技術の一般原理を明記する標準的な文献としては、Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 4th ed., (Green and Sambrook et al., 2012, Cold Spring Harbor Laboratory Press); Current Protocols in Molecular Biology, ed. Ausubel et al., Greene Publishing and Wiley-Interscience, New York, 1992 (with periodic updates) (“Ausubel et al. 1992”); the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Innis et al., PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academic Press: San Diego, 1990; PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds. (1995); Harlow and Lane, eds. (1988) Antibodies, a Laboratory Manual; and Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed. (1987)が挙げられる。微生物学の一般原理は、例えば、Davis, B. D. et al., Microbiology, 3rd edition, Harper & Row, publishers, Philadelphia, Pa. (1980)に明記されている。

【0030】

以下の文章では、本発明の異なる態様がより詳細に定義される。このように定義された各態様は、反対のことが明確に示されない限り、他の任意の態様または複数の態様と組み合わせることができる。特に、好ましいまたは有利であると示された任意の特徴は、好ましいまたは有利であると示された他の任意の特徴と組み合わせることができる。

【0031】

本明細書全体を通して「一実施形態」または「実施形態」への言及は、実施形態に関連して説明される特定の特徴、構造または特性が、本発明の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。したがって、本明細書全体を通して様々な箇所で「一実施形態において」または「ある実施形態において」という表現が現れるが、必ずしも全てが同じ実施形態を指すわけではなく、そうである場合もある。さらに、本開示から当業者に明らかであるように、１つ以上の実施形態において、特定の特徴、構造または特性を任意の適切な方法で組み合わせることができる。さらに、本明細書に記載される幾つかの実施形態は幾つかの特徴を含むが、他の実施形態に含まれる他の特徴は含まない一方で、当業者によって理解されるように、異なる実施形態の特徴の組み合わせは本発明の範囲内にあり、異なる実施形態を形成することを意味する。例えば、添付の特許請求の範囲において、特許請求される実施形態のいずれも任意の組み合わせで使用することができる。

【0032】

本発明の以下の詳細な説明において、本明細書の一部を形成し、かつ本発明が実施され得る特定の実施形態の例示のみを目的として示す添付図面を参照する。本発明の範囲から逸脱することなく、他の実施形態を利用してもよく、構造的または論理的な変更を加えてもよいことを理解されたい。したがって、以下の詳細な説明は、限定的な意味で解釈されるべきではなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義される。

【0033】

ここで本発明の好ましい記述（特徴）および実施形態を以下に示す。このように定義された本発明の各記述および実施形態は、反対のことが明確に示されない限り、他の任意の記述および／または実施形態と組み合わせることができる。特に、好ましいまたは有利であると示された任意の特徴は、好ましいまたは有利であると示された他の任意の特徴または複数の特徴または記述と組み合わせることができる。この点に関して、本発明は、特に、以下の番号付けされた態様および実施形態１～７６のうちのいずれか１つまたは１つ以上の任意の組み合わせと、他の任意の記述および／または実施形態とによって捕捉される。

【0034】

１．突然変異型内因性アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）タンパク質、または３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含む突然変異型内因性アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）タンパク質をコードするポリ核酸を含むか、発現するか、または発現することができる、ベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0035】

２．ベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団であって、任意選択的に、３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含むＡＬＳタンパク質をコードする突然変異型内因性対立遺伝子を含む、項目１記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0036】

３．前述のＡＬＳタンパク質が、配列番号３と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、例えば少なくとも９８％同一である配列を有する、項目１または２記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0037】

４．前述のＡＬＳタンパク質を発現するか、または発現することができる、項目１から３までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0038】

５．前述のＡＬＳタンパク質がＡＬＳ活性を有する、項目１から４までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0039】

６．前述のＡＬＳタンパク質が３７１位にグルタミン酸塩（Ｅ）を含む、項目１から５までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0040】

７．前述のＡＬＳタンパク質が配列番号３の配列を有する、項目１から６までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0041】

８．前述のＡＬＳがヘテロ接合である、項目１から７までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0042】

９．前述のＡＬＳがホモ接合である、項目１から７までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0043】

１０．１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤に対して耐性がある、項目１から９までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0044】

１１．（スルホン）アミド、例えばスルホニル尿素、スルホニルアミノカルボニルトリアゾリノン、スルホンアニリド、またはトリアゾロピリミジン；イミダゾリノン；およびピリミジニル（チオ／オキシ）ベンゾエートから選択される、好ましくは、スルホニル尿素、スルホニルアミノカルボニルトリアゾリノン、イミダゾリノン、およびピリミジニル（チオ／オキシ）ベンゾエートから選択される１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤に対して耐性がある、項目１から１０までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0045】

１２．前述のスルホニル尿素が、以下：
アミドスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １２０９２３－３７－７］（＝Ａ１－１）；
アジムスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １２０１６２－５５－２］（＝Ａ１－２）；
ベンスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ８３０５５－９９－６］（＝Ａ１－３）；
クロリムロン－エチル［ＣＡＳ ＲＮ ９０９８２－３２－４］（＝Ａ１－４）；
クロルスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ ６４９０２－７２－３］（＝Ａ１－５）；
シノスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ ９４５９３－９１－６］（＝Ａ１－６）；
シクロスルファムロン［ＣＡＳ ＲＮ １３６８４９－１５－５］（＝Ａ１－７）；
エタメトスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ９７７８０－０６－８］（＝Ａ１－８）；
エトキシスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １２６８０１－５８－９］（＝Ａ１－９）；
フラザスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １０４０４０－７８－０］（＝Ａ１－１０）；
フルセトスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ ４１２９２８－７５－７］（＝Ａ１－１１）；
フルピルスルフロン－メチル－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １４４７４０－５４－５］（＝Ａ１－１２）；
ホラムスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １７３１５９－５７－４］（＝Ａ１－１３）；
ハロスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ １００７８４－２０－１］（＝Ａ１－１４）；
イマゾスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １２２５４８－３３－８］（＝Ａ１－１５）；
ヨードスルフロン－メチル－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １４４５５０－３６－７］（＝Ａ１－１６）；
メソスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ２０８４６５－２１－８］（＝Ａ１－１７）；
メトスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ７４２２３－６４－６］（＝Ａ１－１８）；
モノスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １５５８６０－６３－２］（＝Ａ１－１９）；
ニコスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １１１９９１－０９－４］（＝Ａ１－２０）；
オルトスルファムロン［ＣＡＳ ＲＮ ２１３４６４－７７－８］（＝Ａ１－２１）；
オキサスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １４４６５１－０６－９］（＝Ａ１－２２）；
プリミスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ８６２０９－５１－０］（＝Ａ１－２３）；
プロスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ ９４１２５－３４－５］（＝Ａ１－２４）；
ピラゾスルフロン－エチル［ＣＡＳ ＲＮ ９３６９７－７４－６］（＝Ａ１－２５）；
リムスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １２２９３１－４８－０］（＝Ａ１－２６）；
スルホメツロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ７４２２２－９７－２］（＝Ａ１－２７）；
スルホスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １４１７７６－３２－１］（＝Ａ１－２８）；
チフェンスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ７９２７７－２７－３］（＝Ａ１－２９）；
トリアスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ ８２０９７－５０－５］（＝Ａ１－３０）；
トリベヌロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ １０１２００－４８－０］（＝Ａ１－３１）；
トリフロキシスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １４５０９９－２１－４］（ナトリウム）（＝Ａ１－３２）；
トリフルスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ １２６５３５－１５－７］（＝Ａ１－３３）；
トリトスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １４２４６９－１４－５］（＝Ａ１－３４）；
ＮＣ－３３０［ＣＡＳ ＲＮ １０４７７０－２９－８］（＝Ａ１－３５）；
ＮＣ－６２０［ＣＡＳ ＲＮ ８６８６８０－８４－６］（＝Ａ１－３６）；
ＴＨ－５４７［ＣＡＳ ＲＮ ５７０４１５－８８－２］（＝Ａ１－３７）；
モノスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ １７５０７６－９０－１］（＝Ａ１－３８）；
２－ヨード－Ｎ－［（４－メトキシ－６－メチル－１，３，５－トリアジニル）カルバモイル］ベンゼン－スルホンアミド（＝Ａ１－３９）；
一般式（Ｉ）の化合物

【化1】

［式中、Ｍ^＋は、化合物（Ｉ）のそれぞれの塩、すなわち、
そのリチウム塩（＝Ａ１－４０）；そのナトリウム塩（＝Ａ１－４１）；そのカリウム塩（＝Ａ１－４２）；そのマグネシウム塩（＝Ａ１－４３）；そのカルシウム塩（＝Ａ１－４４）；そのアンモニウム塩（＝Ａ１－４５）；そのメチルアンモニウム塩（＝Ａ１－４６）；そのジメチルアンモニウム塩（＝Ａ１－４７）；そのテトラメチルアンモニウム塩（＝Ａ１－４８）；そのエチルアンモニウム塩（＝Ａ１－４９）；そのジエチルアンモニウム塩（＝Ａ１－５０）；そのテトラエチルアンモニウム塩（＝Ａ１－５１）；そのプロピルアンモニウム塩（＝Ａ１－５２）；そのテトラプロピルアンモニウム塩（＝Ａ１－５３）；そのイソプロピルアンモニウム塩（＝Ａ１－５４）；そのジイソプロピルアンモニウム塩（＝Ａ１－５５）；そのブチルアンモニウム塩（＝Ａ１－５６）；そのテトラブチルアンモニウム塩（＝Ａ１－５７）；その（２－ヒドロキシエタ－１－イル）アンモニウム塩（＝Ａ１－５８）；そのビス－Ｎ，Ｎ－（２－ヒドロキシエタ－１－イル）アンモニウム塩（＝Ａ１－５９）；そのトリス－Ｎ，Ｎ，Ｎ－（２－ヒドロキシエチル－１－イル）アンモニウム塩（＝Ａ１－６０）；その１－フェニルエチルアンモニウム塩（＝Ａ１－６１）；その２－フェニルエチルアンモニウム塩（＝Ａ１－６２）；そのトリメチルスルホニウム塩（＝Ａ１－６３）；そのトリメチルオキソニウム塩（＝Ａ１－６４）；そのピリジニウム塩（＝Ａ１－６５）；その２－メチルピリジニウム塩（＝Ａ１－６６）；その４－メチルピリジニウム塩（＝Ａ１－６７）；その２，４－ジメチルピリジニウム塩（＝Ａ１－６８）；その２，６－ジメチルピリジニウム塩（＝Ａ１－６９）；そのピペリジニウム塩（＝Ａ１－７０）；そのイミダゾリウム塩（＝Ａ１－７１）；そのモルホリニウム塩（＝Ａ１－７２）；その１，５－ジアザビシクロ［４．３．０］ノン－７－エニウム塩（＝Ａ１－７３）；その１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エニウム塩（＝Ａ１－７４）である］；
式（ＩＩ）の化合物またはその塩

【化2】

［式中、Ｒ^２、およびＲ^３は、以下の表に定義される意味を有する］

【表1】

式（ＩＩＩ）（＝Ａ１－８７）の化合物、すなわち化合物（Ａ１－８３）のナトリウム塩

【化3】

および式（ＩＶ）の化合物（＝Ａ１－８８）、すなわち化合物（Ａ１－８２）のナトリウム塩

【化4】

のうちの１つ以上から選択される、項目１１記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0046】

１３．前述のスルホニルアミノカルボニルトリアゾリノンが、以下：
フルカルバゾン－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １８１２７４－１７－９］（＝Ａ２－１）；
プロポキシカルバゾン－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １８１２７４－１５－７］（＝Ａ２－２）；および
チエンカルバゾン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ３１７８１５－８３－１］（＝Ａ２－３）
のうちの１つ以上から選択される、項目１１記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0047】

１４．前述のトリアゾロピリミジンが、以下：
クロランスラム－メチル［１４７１５０－３５－４］（＝Ａ３－１）；
ジクロスラム［ＣＡＳ ＲＮ １４５７０１－２１－９］（＝Ａ３－２）；
フロラスラム［ＣＡＳ ＲＮ １４５７０１－２３－１］（＝Ａ３－３）；
フルメトスラム［ＣＡＳ ＲＮ ９８９６７－４０－９］（＝Ａ３－４）；
メトスラム［ＣＡＳ ＲＮ １３９５２８－８５－１］（＝Ａ３－５）；
ペノキススラム［ＣＡＳ ＲＮ ２１９７１４－９６－２］（＝Ａ３－６）；
ピロクススラム［ＣＡＳ ＲＮ ４２２５５６－０８－９］（＝Ａ３－７）
のうちの１つ以上から選択される、項目１１記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0048】

１５．前述のスルホンアニリドが、以下：
一般式（Ｖ）で記載される群からの化合物またはその塩

【化5】

［式中、
Ｒ^１はハロゲン、好ましくはフッ素または塩素であり、
Ｒ^２は水素であり、かつＲ^３はヒドロキシルであるか、または
Ｒ^２およびＲ^３は、それらが結合している炭素原子と一緒になってカルボニル基Ｃ＝Ｏであり、
Ｒ^４は水素またはメチルである］；
より具体的には、以下の所与の化学構造（Ａ４－１）～（Ａ４－８）の化合物

【化6-1】

【化6-2】

【化6-3】

のうちの１つ以上から選択される、項目１１記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0049】

１６．前述のイミダゾリノンが、以下：
イマザメタベンズメチル［ＣＡＳ ＲＮ ８１４０５－８５－８］（＝Ｂ１－１）；
イマザモックス［ＣＡＳ ＲＮ １１４３１１－３２－９］（＝Ｂ１－２）；
イマザピック［ＣＡＳ ＲＮ １０４０９８－４８－８］（＝Ｂ１－３）；
イマザピル［ＣＡＳ ＲＮ ８１３３４－３４－１］（＝Ｂ１－４）；
イマザキン［ＣＡＳ ＲＮ ８１３３５－３７－７］（＝Ｂ１－５）；
イマゼタピル［ＣＡＳ ＲＮ ８１３３５－７７－５］（＝Ｂ１－６）；
ＳＹＰ－２９８［ＣＡＳ ＲＮ ５５７０６４－７７－４］（＝Ｂ１－７）；
ＳＹＰ－３００［ＣＡＳ ＲＮ ３７４７１８－１０－２］（＝Ｂ１－８）
のうちの１つ以上から選択される、項目１１記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0050】

１７．前述のピリミジニルオキシベンゾエートが、以下：
ビスピリバック－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １２５４０１－９２－５］（＝Ｃ１－１）；
ピリベンゾキシム［ＣＡＳ ＲＮ １６８０８８－６１－７］（＝Ｃ１－２）；
ピリミノバック－メチル［ＣＡＳ ＲＮ １３６１９１－６４－５］（＝Ｃ１－３）；
ピリバムベンズ－イソプロピル［ＣＡＳ ＲＮ ４２０１３８－４１－６］（＝Ｃ１－４）；
ピリバムベンズ－プロピル［ＣＡＳ ＲＮ ４２０１３８－４０－５］（＝Ｃ１－５）
のうちの１つ以上から選択される、項目１１記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0051】

１８．前述のピリミジニルチオベンゾエートが、以下：
ピリフタリド［ＣＡＳ ＲＮ １３５１８６－７８－６］（＝Ｃ２－１）；
ピリチオバク－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １２３３４３－１６－８］（＝Ｃ２－２）
のうちの１つ以上から選択される、項目１１記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0052】

１９．前述の植物の一部分が、ルートビート、種子、細胞、組織、または器官である、項目１から１８までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物の一部分。

【0053】

２０．以下：
１１３位に、アラニン（Ａ）とは異なるアミノ酸；
１８８位に、プロリン（Ｐ）とは異なるアミノ酸；
１９６位に、アラニン（Ａ）とは異なるアミノ酸；
３７２位に、アルギニン（Ｒ）とは異なるアミノ酸；
５６９位に、トリプトファン（Ｗ）とは異なるアミノ酸；
６４８位に、セリン（Ｓ）とは異なるアミノ酸；
６４９位に、グリシン（Ｇ）とは異なるアミノ酸
のうちのいずれか１つ以上を含む突然変異型内因性アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）タンパク質をコードするポリ核酸を含む、項目１から１９までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0054】

２１．以下：
１１３位に、アラニン（Ａ）とは異なるアミノ酸；
１８８位に、プロリン（Ｐ）とは異なるアミノ酸；
１９６位に、アラニン（Ａ）とは異なるアミノ酸；
３７２位に、アルギニン（Ｒ）とは異なるアミノ酸；
５６９位に、トリプトファン（Ｗ）とは異なるアミノ酸；
６４８位に、セリン（Ｓ）とは異なるアミノ酸；
６４９位に、グリシン（Ｇ）とは異なるアミノ酸
のうちのいずれか１つ以上を含むＡＬＳタンパク質をコードする突然変異型内因性対立遺伝子を含む、項目１から２０までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0055】

２２．前述のＡＬＳタンパク質が、５６９位に、アラニン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、バリンまたはアルギニン、好ましくはロイシンを含む、項目１から２０までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0056】

２３．遺伝子導入、遺伝子編集、または突然変異が誘発されている、項目１から２２までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0057】

２４．前述のベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分がテンサイ植物もしくは植物の一部分である、項目１から２３までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0058】

２５．項目１から２４までのいずれかに定義される突然変異型内因性アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）タンパク質をコードする（単離された）ポリ核酸。

【0059】

２６．単離されたポリ核酸である、項目２５記載の（単離された）ポリ核酸。

【0060】

２７．項目２５または２６記載のポリ核酸を含むベクター。

【0061】

２８．前述のポリ核酸が、ＡＬＳタンパク質をコードする配列に作動可能に連結された１つ以上の調節配列を含む、項目２５から２７までのいずれか１項記載の（単離された）ポリ核酸またはベクター。

【0062】

２９．項目２５から２８までのいずれか１項記載のポリ核酸またはベクターを含む宿主細胞。

【0063】

３０．植物宿主細胞、好ましくはベータ・ブルガリス宿主細胞である、項目２９記載の宿主細胞。

【0064】

３１．項目２５から２８までのいずれか１項記載のポリ核酸、その相補体、またはその逆相補体と特異的にハイブリダイズする（単離された）ポリ核酸。

【0065】

３２．１０～２００ヌクレオチドの範囲の長さを有する、項目３１記載の（単離された）ポリ核酸。

【0066】

３３．プライマーまたはプローブである、項目３１または３２記載の（単離された）ポリ核酸。

【0067】

３４．ＫＡＳＰプライマーである、項目３１から３３までのいずれか１項記載の（単離された）ポリ核酸。

【0068】

３５．配列番号７の少なくとも１０個の最も３末端側のヌクレオチド、好ましくは少なくとも１５個の最も３末端側のヌクレオチド、その相補体、またはその逆相補体を含む、項目３１から３４までのいずれか１項記載の（単離された）ポリ核酸。

【0069】

３６．配列番号７、その相補体、またはその逆相補体を含むか、またはそれらからなる、項目３１から３５までのいずれか１項記載の（単離された）ポリ核酸。

【0070】

３７．ベータ・ブルガリス植物を同定するための、項目３１から３６までのいずれか１項記載のポリ核酸の使用。

【0071】

３８．項目１から２４までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物を同定するための、項目３１から３６までのいずれか１項記載のポリ核酸の使用。

【0072】

３９．１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤に対して耐性があるベータ・ブルガリス植物を同定するための、項目３１から３６までのいずれか１項記載のポリ核酸の使用。

【0073】

４０．前述のＡＬＳ阻害剤除草剤が、項目１１から１８までのいずれかに定義される１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤である、項目３９記載の使用。

【0074】

４１．ベータ・ブルガリス植物を作出するための、項目２５から３０までのいずれか１項記載のポリ核酸、ベクター、または宿主細胞の使用。

【0075】

４２．項目１から２４までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物を作出するための、項目２５から３０までのいずれか１項記載のポリ核酸、ベクター、または宿主細胞の使用。

【0076】

４３．１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤に対して耐性があるベータ・ブルガリス植物を作出するための、項目２５から３０までのいずれか１項記載のポリ核酸、ベクターまたは宿主細胞の使用。

【0077】

４４．前述のＡＬＳ阻害剤除草剤が、項目１１から１８までのいずれかに定義される１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤である、項目４０記載の使用。

【0078】

４５．ベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を同定するための方法であって、ＡＬＳタンパク質におけるアスパラギン酸（Ｄ）とは異なる３７１位のアミノ酸の存在についてスクリーニングすること、またはＡＬＳタンパク質におけるアスパラギン酸（Ｄ）とは異なる３７１位のアミノ酸をコードするコドンの存在についてスクリーニングすることを含む、方法。

【0079】

４６．３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含むＡＬＳタンパク質を含むか、または３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含むＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸を含むベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を選択することをさらに含む、項目４５記載の方法。

【0080】

４７．配列番号３と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、例えば少なくとも９８％同一である配列を有するＡＬＳタンパク質の存在についてスクリーニングすること、または配列番号３と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、例えば少なくとも９８％同一である配列を有するＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸の存在についてスクリーニングすることを含む、項目４５または４６記載の方法。

【0081】

４８．前述の植物もしくは植物の一部分が、前述のＡＬＳタンパク質を発現するか、または発現することができる、項目４５から４７までのいずれか１項記載の方法。

【0082】

４９．前述のＡＬＳタンパク質がＡＬＳ活性を有する、項目４５から４８までのいずれか１項記載の方法。

【0083】

５０．前述のＡＬＳタンパク質が３７１位にグルタミン酸塩（Ｅ）を含む、項目４５から４９までのいずれか１項記載の方法。

【0084】

５１．前述のＡＬＳタンパク質が配列番号３の配列を有する、項目４５から５０までのいずれか１項記載の方法。

【0085】

５２．前述のＡＬＳがヘテロ接合である、項目４５から５１までのいずれか１項記載の方法。

【0086】

５３．前述のＡＬＳがホモ接合である、項目４５から５１までのいずれか１項記載の方法。

【0087】

５４．前述の植物もしくは植物の一部分が、１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤に対して耐性がある、項目４５から５３までのいずれか１項記載の方法。

【0088】

５５．前述のＡＬＳ阻害剤除草剤が、項目１１から１８までのいずれかに定義される１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤である、項目４５から５４までのいずれか１項記載の方法。

【0089】

５６．ベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を作出するための方法であって、植物もしくは植物の一部分のゲノムにおいて、３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含むＡＬＳタンパク質をコードするＡＬＳ対立遺伝子をもたらす内因性ＡＬＳ対立遺伝子を突然変異させることを含む、方法。

【0090】

５７．以下のステップ：
ａ）少なくとも０．５％のＥＭＳまたは少なくとも０．３％のＥＮＵを用いて、ベータ・ブルガリスの細胞または組織に突然変異を誘発するステップ；
ｂ）突然変異を誘発された細胞または組織（Ｍ０）から挿木（stecks）を栽培するステップ；
ｃ）挿木を植え替えて種子（Ｍ１）の集団を栽培するステップ；
ｄ）Ｍ１の種子から生育した植物から種子（Ｍ２）を栽培するステップ；
ｅ）Ｍ２の種子を播種し、ＡＬＳ阻害剤除草剤を適用するステップ；
ｆ）任意選択的に、生き残った植物を鉢に植え替え、生育中の植物にＡＬＳ阻害剤除草剤を適用するステップ；および
ｇ）除草剤によるダメージを受けずに生き残った植物を選択し、かつ／または３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含むＡＬＳタンパク質をコードするＡＬＳ対立遺伝子を含む植物を選択するステップ
を含む、項目５５記載の方法。

【0091】

５８．ベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を作出するための方法であって、植物もしくは植物の一部分のゲノムにおいて、３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含む突然変異型内因性ＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸を導入する（および発現させる）ことを含む、方法。

【0092】

５９．前述のポリ核酸が、ＡＬＳタンパク質をコードする配列に作動可能に連結された１つ以上の調節配列を含む、項目５８記載の方法。

【0093】

６０．ゲノムに導入することが、遺伝子導入、遺伝子編集、または突然変異誘発を含む、項目５８または５９記載の方法。

【0094】

６１．植物もしくは植物の一部分、好ましくは植物細胞、より好ましくはプロトプラストを、項目２５から２９までのいずれか１項記載のポリ核酸またはベクターで形質転換すること、および任意選択的に前述の植物細胞、好ましくはプロトプラストから植物を再生することを含む、項目５８から６０までのいずれか１項記載の方法。

【0095】

６２．ゲノムに導入することが遺伝子移入を含む、項目５８または５９記載の方法。

【0096】

６３．項目５６から６２までのいずれか１項記載の方法によって（直接）得られるか、またはその方法によって得ることができるベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分、またはその子孫。

【0097】

６４．前述の植物の一部分が、ルートビート、種子、細胞、組織、または器官である、項目６３記載の植物の一部分。

【0098】

６５．ベータ・ブルガリス生育地域における望ましくない植生を防除するための、またはベータ・ブルガリス生育地域における収量を増加させるための方法であって、以下のステップ：
ａ）項目１から２４までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物を植え付けるか、またはベータ・ブルガリス種子を播種するステップ；
ｂ）生育中の植物に、好ましくは、望ましくない植生の生育を阻害するのに十分な用量で、より好ましくは、望ましくない植生を枯死させるのに十分な用量で、１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤を適用するステップ；および
ｃ）任意選択的に、生育期中にステップｂ）を繰り返すステップ
を含む、方法。

【0099】

６６．ステップｂ）が、望ましくない植生の受粉前、好ましくは開花前段階または遅くとも花が開く時期に行われる、項目６５記載の方法。

【0100】

６７．前述の収量がルートビート収量である、項目６５または６６記載の方法。

【0101】

６８．ベータ・ブルガリス生育地域における望ましくない植生を防除するための１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤の使用であって、ベータ・ブルガリス植物が、項目１から２４までのいずれかに記載のものである、使用。

【0102】

６９．前述の望ましくない植生が、とう立ち（bolters）、雑草ビート、もしくは一年生ビートであるか、またはそれらを含む、項目６５から６８までのいずれか１項記載の方法または使用。

【0103】

７０．前述の１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤が、項目１１から１８までのいずれかに定義されるような１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤である、項目６５から６９までのいずれか１項記載の方法または使用。

【0104】

７１．ベータ・ブルガリスルートビートを生産するための方法であって、以下のステップ：
ａ）項目６５から６７、６９、または７０のいずれか１項記載の方法を実施するステップ；および
ｂ）ベータ・ブルガリスルートビートを、好ましくは生育期の終わりまでに収穫するステップ
を含む、方法。

【0105】

７２．糖生産、嫌気性消化、または発酵のための方法における、項目１から２４までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団の使用。

【0106】

７３．バイオガスまたはバイオ燃料生産のための方法における、項目１から２４までのいずれか１項記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団の使用。

【0107】

７４．ベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団であって、
ａ）配列番号１に記載される配列を含むポリ核酸；
ｂ）配列番号２に記載される配列を含むポリ核酸；
ｃ）配列番号２に記載されるｃＤＮＡ配列を有するＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸；
ｄ）配列番号３に記載される配列を有するＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸
を含む、ベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0108】

７５．以下：
ａ）配列番号１０に記載される配列を含むポリ核酸；
ｂ）配列番号１１に記載される配列を含むポリ核酸；
ｃ）配列番号１１に記載されるｃＤＮＡ配列を有するＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸；
ｄ）配列番号１２に記載される配列を有するＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸
を含む、項目７４記載のベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団。

【0109】

７６．配列番号７に記載される配列を含む（単離された）ポリ核酸。

【0110】

一態様において、本発明は、突然変異型内因性アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）タンパク質、または３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含む突然変異型内因性アセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）タンパク質をコードするポリ核酸を含むか、発現するか、または発現することができる、ベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団に関する。ある実施形態において、ベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団は、３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含むＡＬＳタンパク質をコードする突然変異型内因性対立遺伝子を含む。

【0111】

一態様において、本発明は、３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含むＡＬＳタンパク質をコードする突然変異型内因性対立遺伝子を含むベータ・ブルガリス植物、植物の一部分、または植物集団に関する。

【0112】

種ベータ・ブルガリスの植物は、特に、亜種ベータ・ブルガリス・サブスプ・ブルガリス（Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）である。例えば、これらの中に含まれるのは、Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ ｖａｒ．ａｌｔｉｓｓｉｍａ（狭義のテンサイ）、Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ ｓｓｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ ｖａｒ．ｆａｖｅｓｃｅｎｓ（チャード）、Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ ｓｓｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ ｖａｒ．ｃｉｃｌａ（スピナッチビート）、Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ ｓｓｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ ｖａｒ．ｃｏｎｄｉｔｉｖａ（ビートルート／レッドビート／ガーデンビート）、Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ ｓｓｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ ｖａｒ．ｃｒａｓｓａ／ａｌｂａ（飼料用ビート）である。好ましい実施形態において、本発明に従って本明細書で言及されるベータ・ブルガリスは、ベータ・ブルガリス・サブスプ・ブルガリスであり、より好ましくはＢｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｖａｒ．ａｌｔｉｓｓｉｍａ（すなわちテンサイ）である。

【0113】

本明細書で使用される場合、ＡＬＳ（アセト乳酸シンターゼ；ＡＨＡＳ（アセトヒドロキシ酸シンターゼ；ＥＣ ２．２．１．６；以前はＥＣ ４．１．３．１８）としても知られる）は、２つのピルビン酸分子からアセト乳酸分子および二酸化炭素への変換に関与する。この反応では、２つのピルビン酸分子を連結するためにチアミンピロリン酸が使用される。この反応の結果得られる生成物のアセト乳酸は、最終的にバリン、ロイシンおよびイソロイシンになる（Singh (1999) “Biosynthesis of valine, leucine and isoleucine”, in Plant Amino Acids, Singh, B.K., ed., Marcel Dekker Inc. New York, New York, pp. 227-247）。ＡＬＳの阻害剤は、植物におけるバリン、ロイシンおよびイソロイシンの生合成を阻害する。その結果、それぞれのアミノ酸プールが即座に枯渇し、タンパク質生合成の停止が引き起こされて植物生育の中断につながり、最終的に植物は枯れるか、または少なくともダメージを受ける。

【0114】

ある実施形態において、野生型ベータ・ブルガリスＡＬＳは、配列番号６に提供されるようなアミノ酸配列を有する。ある実施形態において、野生型またはネイティブベータ・ブルガリスＡＬＳは、配列番号６の配列と、好ましくは全長にわたって、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、好ましくはＡＬＳ活性を有し、ただし、３７１位のアミノ酸残基はアスパラギン酸（Ｄ）である。本明細書で使用されるアスパラギン酸はアスパラギン酸塩と互換的に使用され得ることが理解されるであろう。ある実施形態において、野生型ベータ・ブルガリスＡＬＳは、ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿０１０６９５３６５．１で提供されるようなアミノ酸配列を有する。ある実施形態において、野生型またはネイティブベータ・ブルガリスＡＬＳは、ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿０１０６９５３６５．１の配列と、好ましくは全長にわたって、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、好ましくはＡＬＳ活性を有し、ただし、３７１位のアミノ酸残基はアスパラギン酸（Ｄ）である。

【0115】

ある実施形態において、本発明による突然変異型ベータ・ブルガリスＡＬＳは、配列番号３に提供されるようなアミノ酸配列を有する。ある実施形態において、突然変異型ベータ・ブルガリスＡＬＳは、配列番号３の配列と、好ましくは全長にわたって、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、好ましくはＡＬＳ活性を有し、ただし、３７１位のアミノ酸残基はアスパラギン酸（Ｄ）ではない。ある実施形態において、突然変異型ベータ・ブルガリスＡＬＳは、ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿０１０６９５３６５．１で提供されるようなアミノ酸配列を有する。ある実施形態において、突然変異型ベータ・ブルガリスＡＬＳは、ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿０１０６９５３６５．１の配列と、好ましくは全長にわたって、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、好ましくはＡＬＳ活性を有し、ただし、３７１位のアミノ酸残基はアスパラギン酸（Ｄ）ではない。

【0116】

ある実施形態において、野生型ベータ・ブルガリスＡＬＳ遺伝子は、配列番号６に提供されるようなアミノ酸配列をコードする配列を有する。ある実施形態において、野生型またはネイティブベータ・ブルガリスＡＬＳ遺伝子は、配列番号６の配列と、好ましくは全長にわたって、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする配列を有し、好ましくはＡＬＳシンターゼ活性を有し、ただし、３７１位のアミノ酸残基はアスパラギン酸（Ｄ）である。ある実施形態において、野生型ベータ・ブルガリスＡＬＳ遺伝子は、ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿０１０６９５３６５．１で提供されるようなアミノ酸配列をコードする配列を有する。ある実施形態において、野生型またはネイティブベータ・ブルガリスＡＬＳ遺伝子は、ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿０１０６９５３６５．１の配列と、好ましくは全長にわたって、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする配列を有し、好ましくはＡＬＳシンターゼ活性を有し、ただし、３７１位のアミノ酸残基はアスパラギン酸（Ｄ）である。

【0117】

ある実施形態において、本発明による突然変異型ベータ・ブルガリスＡＬＳ遺伝子は、配列番号３に提供されるようなアミノ酸配列をコードする配列を有する。ある実施形態において、突然変異型ベータ・ブルガリスＡＬＳ遺伝子は、配列番号３の配列と、好ましくは全長にわたって、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする配列を有し、好ましくはＡＬＳシンターゼ活性を有し、ただし、３７１位のアミノ酸残基はアスパラギン酸（Ｄ）ではない。ある実施形態において、突然変異型ベータ・ブルガリスＡＬＳ遺伝子は、ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿０１０６９５３６５．１で提供されるようなアミノ酸配列をコードする配列を有する。ある実施形態において、突然変異型ベータ・ブルガリスＡＬＳ遺伝子は、ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿０１０６９５３６５．１の配列と、好ましくは全長にわたって、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする配列を有し、好ましくはＡＬＳシンターゼ活性を有し、ただし、３７１位のアミノ酸残基はアスパラギン酸（Ｄ）ではない。

【0118】

ある実施形態において、野生型ベータ・ブルガリスＡＬＳ遺伝子は、配列番号４に提供されるようなヌクレオチド配列を有する。ある実施形態において、野生型またはネイティブベータ・ブルガリスＡＬＳ遺伝子は、配列番号４の配列と、好ましくは全長にわたって、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を有し、好ましくはＡＬＳ活性を有し、ただし、３７１位のアミノ酸残基に対応するコドンはアスパラギン酸（Ｄ）をコードする。

【0119】

ある実施形態において、本発明による突然変異型ベータ・ブルガリスＡＬＳ遺伝子は、配列番号１に提供されるようなヌクレオチド配列を有する。ある実施形態において、突然変異型ベータ・ブルガリスＡＬＳ遺伝子は、配列番号１の配列と、好ましくは全長にわたって、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を有し、好ましくはＡＬＳ活性を有し、ただし、３７１位のアミノ酸残基に対応するコドンはアスパラギン酸（Ｄ）をコードしない。

【0120】

ある実施形態において、野生型ベータ・ブルガリスＡＬＳコード配列（ｃＤＮＡ）は、配列番号５に提供されるようなヌクレオチド配列を有する。ある実施形態において、野生型ベータ・ブルガリスＡＬＳコード配列は、配列番号５の配列と、好ましくは全長にわたって、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を有し、好ましくはＡＬＳ活性を有し、ただし、３７１位のアミノ酸残基に対応するコドンはアスパラギン酸（Ｄ）をコードする。

【0121】

ある実施形態において、本発明による突然変異型ベータ・ブルガリスＡＬＳコード配列（ｃＤＮＡ）は、配列番号２に提供されるようなヌクレオチド配列を有する。ある実施形態において、突然変異型ベータ・ブルガリスＡＬＳコード配列は、配列番号２の配列と、好ましくは全長にわたって、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を有し、好ましくはＡＬＳ活性を有し、ただし、３７１位のアミノ酸残基に対応するコドンはアスパラギン酸（Ｄ）をコードしない。

【0122】

好ましくは、本明細書で使用される場合、アミノ酸残基の位置がＡＬＳについて言及されるとき、番号付けは配列番号６のアミノ酸位に対応する。配列番号３は、Ｄ３７１Ｅ突然変異を有する配列番号６の配列に対応する。

【0123】

本発明に従って使用される場合、用語「位置」は、本明細書に示されるアミノ酸配列内のアミノ酸の位置または本明細書に示されるヌクレオチド配列内のヌクレオチドの位置のいずれかを意味する。本明細書で使用される用語「対応する」は、位置が先行するヌクレオチド／アミノ酸の数によってのみ決定されるわけではないことも含む。

【0124】

置換され得る本発明に従った所与のヌクレオチドの位置は、プロモーターおよび／または他の任意の調節配列もしくは遺伝子（エキソンおよびイントロンを含む）を含むＡＬＳ５’非翻訳領域（ＵＴＲ）の他の場所での欠失または追加のヌクレオチドに起因して変化し得る。同様に、本発明に従って置換され得る所与のアミノ酸の位置は、ＡＬＳポリペプチドの他の場所でのアミノ酸の欠失または付加に起因して変化し得る。

【0125】

したがって、本発明に従った「対応する位置」の下では、ヌクレオチド／アミノ酸は示された数が異なり得るが、類似の隣接ヌクレオチド／アミノ酸を有し得ることも理解される。交換、欠失または付加され得る前述のヌクレオチド／アミノ酸もまた、用語「対応する位置」に含まれる。

【0126】

所与のＡＬＳヌクレオチド／アミノ酸配列中のヌクレオチド残基またはアミノ酸残基が、配列番号１、２、４、もしくは５のヌクレオチド配列、または配列番号３もしくは６のアミノ酸配列のような、ある位置に対応するかどうかを決定するために、当業者は、当該技術分野で周知の手段および方法、例えばアラインメントを、手動で、またはコンピュータープログラム、例えばＢａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌの略であるＢＬＡＳＴ（Altschul et al. (1990), Journal of Molecular Biology, 215, 403-410）またはＣｌｕｓｔａｌＷ（Thompson et al. (1994), Nucleic Acid Res., 22, 4673-4680）または配列アラインメントを生成するのに適した他の任意の適切なプログラムを使用することのいずれかによって使用することができる。

【0127】

Ｂ．ブルガリス（Ｂ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）野生型ＡＬＳ遺伝子と、本発明のＢ．ブルガリス植物に含まれるＡＬＳ遺伝子との差異を考慮すると、本発明のＢ．ブルガリス植物に含まれるＡＬＳ遺伝子（またはポリヌクレオチドもしくはヌクレオチド配列）は、「突然変異体ＡＬＳ遺伝子」、「突然変異体ＡＬＳ対立遺伝子」、「突然変異体ＡＬＳポリヌクレオチド」または同種のものとみなすこともできる。したがって、本明細書を通じて、用語「突然変異対立遺伝子」、「突然変異体ＡＬＳ対立遺伝子」、「突然変異体ＡＬＳ遺伝子」または「突然変異体ＡＬＳポリヌクレオチド」は、互換的に使用される。

【0128】

一方、別段の指示がない限り、用語「野生型対立遺伝子」、「野生型ＡＬＳ対立遺伝子」、「野生型ＡＬＳ遺伝子」または「野生型ＡＬＳポリヌクレオチド」は、Ｄ３７１置換を欠くＡＬＳタンパク質をコードするヌクレオチド配列を指す。そのような「野生型対立遺伝子」、「野生型ＡＬＳ対立遺伝子」、「野生型ＡＬＳ遺伝子」または「野生型ＡＬＳポリヌクレオチド」は、Ｄ３７１置換を引き起こす突然変異以外の突然変異を含んでもよいし、含んでなくてもよい。また、ＡＬＳにおいて自然に生じる多型（３７１位以外）も用語「野生型」に含まれると考えることができる。

【0129】

本明細書で使用される場合、用語「ＡＬＳ活性」は、ＡＬＳタンパク質の酵素活性を指す。ある好ましい実施形態において、上記のようなバリアントＡＬＳ（例えば、記載された配列番号と、あるパーセンテージ配列同一性を有するＡＬＳタンパク質）の文脈における用語「ＡＬＳ活性を有する」は、酵素活性が、野生型またはネイティブＡＬＳ（例えば、記載された配列番号の配列を有するＡＬＳ）と比較して影響を受けないか、または実質的に影響を受けないＡＬＳを指す。ある実施形態において、酵素活性は、野生型ＡＬＳ活性の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％、例えば少なくとも９５％である。酵素活性は、ピルビン酸からアセト乳酸への変換の測定など、当該技術分野で公知の手段によって測定することができる。

【0130】

ある実施形態において、本発明によるベータ・ブルガリス植物は、酵素活性が１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤による影響を受けないか、または実質的に影響を受けない（突然変異型）ＡＬＳを有する。ある実施形態において、本発明によるベータ・ブルガリス植物は、酵素活性が、１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤の存在下で、そのような除草剤の非存在下と比較して、多くとも５０％低い、好ましくは多くとも４０％低い、より好ましくは多くとも３０％低い、さらにより好ましくは多くとも２０％低い、最も好ましくは多くとも１０％低い、例えば多くとも５％低いＡＬＳを有する。酵素活性は、当該技術分野で公知の手段によって測定することができる。酵素活性は、好ましくは、ＡＬＳ阻害剤除草剤の存在下で、関連する適用可能な除草用量、例えば推奨される圃場適用に対応する用量で測定される。

【0131】

ある実施形態において、本発明による突然変異型ＡＬＳ、すなわち３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有する突然変異型ＡＬＳは、３７１位に類似のアミノ酸を含む。ある実施形態において、本発明による突然変異型ＡＬＳ、すなわち３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有する突然変異型ＡＬＳは、３７１位に保存的置換を含む。ある実施形態において、本発明による突然変異型ＡＬＳ、すなわち３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有する突然変異型ＡＬＳは、３７１位に非類似アミノ酸を含む。ある実施形態において、本発明による突然変異型ＡＬＳ、すなわち３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有する突然変異型ＡＬＳは、３７１位に非保存的置換を含む。ある実施形態において、本発明による突然変異型ＡＬＳ、すなわち３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有する突然変異型ＡＬＳは、３７１位に極性アミノ酸を含む。ある実施形態において、本発明による突然変異型ＡＬＳ、すなわち３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有する突然変異型ＡＬＳは、３７１位にグルタミン－Ｇｌｎ－Ｑ、アスパラギン－Ａｓｎ－Ｎ、ヒスチジン－Ｈｉｓ－Ｈ、セリン－Ｓｅｒ－Ｓ、スレオニン－Ｔｈｒ－Ｔ、チロシン－Ｔｙｒ－Ｙ、システイン－Ｃｙｓ－Ｃから選択されるアミノ酸を含む。ある実施形態において、本発明による突然変異型ＡＬＳ、すなわち３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有する突然変異型ＡＬＳは、３７１位に酸性アミノ酸を含む。ある実施形態において、本発明による突然変異型ＡＬＳ、すなわち３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有する突然変異型ＡＬＳは、３７１位に酸性極性アミノ酸を含む。ある実施形態において、本発明による突然変異型ＡＬＳ、すなわち３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有する突然変異型ＡＬＳは、３７１位にグルタミン酸（グルタミン酸塩、Ｅ）を含む。ある実施形態において、本発明による突然変異型ＡＬＳ、すなわち３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有する突然変異型ＡＬＳは、３７１位に非極性アミノ酸を含む。

【0132】

本明細書で使用される場合、用語「発現することができる」は、タンパク質が植物もしくは植物の一部分において発現され得ることを意味する。そのため、タンパク質の遺伝子配列またはタンパク質のコード配列が、植物もしくは植物の一部分、好ましくは植物もしくは植物の一部分のゲノム中に存在することが必要である。また、転写を確実にするために、適切な調節配列も存在するべきである。したがって、ＡＬＳをコードするポリヌクレオチドは、プロモーターなどの１つ以上の調節配列に作動可能に連結されるべきである。しかしながら、転写が遍在的（構成的）であることは（あり得るが）必須ではない。転写は、細胞特異的、組織特異的、または器官特異的であってもよい。転写は、代替的あるいは追加的に、発生特異的（すなわち、ある発生段階でのみタンパク質が発現される）であってもよい。転写は、代替的あるいは付加的に、条件的または誘導的であってもよい。これらの各例に適したプロモーターは当該技術分野で公知である。ある好ましい実施形態において、本発明による突然変異型ＡＬＳ遺伝子は、ゲノム中のそのネイティブ（内因性）位置（遺伝子座）に位置し、したがってそのネイティブ（内因性）プロモーターの制御下にある。

【0133】

本明細書で使用される場合、用語「作動的に連結された（operatively linked）」または「作動可能に連結された（operably linked）」は、核酸分子の転写が起こり得るように、連結された要素が互いに対して位置決めされ、配向されるような様式で、共通の核酸分子において連結されたことを意味する。プロモーターと作動的に連結されているＤＮＡは、このプロモーターの転写制御下にある。

【0134】

本明細書で使用される場合、特に別段の指示がない限り、用語「植物」は、任意の発生段階の植物を意味することが意図される。

【0135】

本発明のベータ・ブルガリス植物は、正倍数体または異倍数体であることが好ましい。正倍数体植物は、好ましくは、一倍体、二倍体、四倍体、六倍体、八倍体、十倍体または十二倍体であり得、一方、異倍数体植物は、好ましくは、三倍体または五倍体であってもよい。ある好ましい実施形態において、本発明によるベータ・ブルガリス植物は二倍体である。

【0136】

本発明による用語「植物」は、植物全体またはそのような植物全体の一部分を含む。植物全体は、好ましくは種子植物、または作物である。「植物の一部分」とは、例えば、シュート栄養器官／構造体、例えば、葉、茎および塊茎；根、花および花器官／構造体、例えば、苞、萼片、花弁、雄しべ、心皮、葯および胚珠；胚、胚乳、および種皮を含む種子；果実および成熟子房；植物組織、例えば、脈管組織、基本組織など；ならびに細胞、例えば、孔辺細胞、卵細胞、花粉、トリコームなど；ならびにこれらの子孫である。植物の一部分は、無傷の植物全体に付着している場合もあれば、それから分離している場合もある。植物のそのような部分には、植物の器官、組織、および細胞、好ましくは種子が含まれるが、これらに限定されない。「植物細胞」は、プロトプラストおよび細胞壁を含む、植物の構造的および生理学的単位である。植物細胞は、単離された単一細胞または培養細胞の形態であってもよく、または例えば、植物組織、植物器官、もしくは植物全体などのより高度に組織化された単位の一部としてであってもよい。「植物細胞培養物」とは、例えば、プロトプラスト、細胞培養細胞、植物組織中の細胞、花粉、花粉管、胚珠、胚嚢、接合子、および様々な発生段階の胚などの植物単位の培養物を意味する。「植物材料」とは、植物の葉、茎、根、花または花の一部分、果実、花粉、卵細胞、接合子、種子、挿穂、細胞もしくは組織培養物、または他の任意の部分または生成物を指す。これにはまた、カルスもしくはカルス組織の他、抽出物（主根からの抽出物など）またはサンプルも含まれる。「植物器官」は、根、茎、葉、花芽、または胚など、植物の明瞭で目に見えて構造化および分化された部分である。本明細書で使用される「植物組織」とは、構造的および機能的な単位に組織化された植物細胞の群を意味する。植物体（planta）または培養中の植物の任意の組織が含まれる。この用語には、植物全体、植物器官、植物種子、組織培養、および構造的および／または機能的な単位に組織化された植物細胞の任意の群が含まれるが、これらに限定されない。この用語を、上に列挙した、またはそれ以外のこの定義に包含されるような任意の特定の種類の植物組織と組み合わせて使用したり、それらなしで使用したりすることは、他の任意の種類の植物組織を排除することを意図したものではない。ある好ましい実施形態において、本明細書で言及される植物の一部分または植物器官は、ルートビート（root beet）（もしくはルートビート（rootbeet））または種子である。用語ルートビート（root beet）（もしくはルートビート（rootbeet））は、主根もしくは胚軸、または肉質の貯蔵器官に変化したビートを指す。ある実施形態において、本明細書で使用される植物の一部分はプロトプラストである。

【0137】

本明細書で使用される場合、用語「植物集団」は、植物の集団と互換的に使用され得る。植物集団は、好ましくは少なくとも１０個、例えば２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、または９０個、より好ましくは少なくとも１００個、例えば２００個、３００個、４００個、５００個、６００個、７００個、８００個、または９００個、さらにより好ましくは少なくとも１０００個、例えば少なくとも１００００個、または少なくとも１０００００個などの多数の個々の植物を含む。

【0138】

本明細書で使用される用語「配列」は、用語「配列」が使用される文脈に応じて、ヌクレオチド配列、ポリヌクレオチド、核酸配列、核酸、核酸分子、ペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質に関する。

【0139】

用語「ヌクレオチド配列」、「ポリヌクレオチド」、「核酸配列」、「核酸」、「核酸分子」は、本明細書では互換的に使用され、任意の長さのポリマー非分岐形態のリボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドまたはその両方の組み合わせのいずれかであるヌクレオチドを指す。核酸配列は、当業者には容易に理解されるように、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ＲＮＡ、合成形態および混合ポリマー、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方を含むか、または非天然もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基を含み得る。

【0140】

本明細書で使用される場合、用語「ポリペプチド」または「タンパク質」（両方の用語は、本明細書で互換的に使用される）は、アミノ酸残基が共有結合ペプチド結合によって連結されている、所与の長さのアミノ酸鎖を包含するペプチド、タンパク質、またはポリペプチドを意味する。しかしながら、アミノ酸および／またはペプチド結合が機能的アナログによって置き換えられたそのようなタンパク質／ポリペプチドのペプチド模倣物も、セレノシステインなどの２０個の遺伝子コードアミノ酸以外のものと同様に、本発明に包含される。ペプチド、オリゴペプチドおよびタンパク質は、ポリペプチドと呼ばれることがある。用語ポリペプチドは、ポリペプチドの修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化なども指し、それらを排除するものではない。そのような修飾は、基本的なテキストおよびより詳細なモノグラフ、ならびに研究文献によく説明されている。

【0141】

アミノ酸置換は、アミノ酸が異なる天然に存在するアミノ酸残基で置き換えられるアミノ酸改変を包含する。そのような置換は、野生型タンパク質に含まれるアミノ酸残基が、類似した性質の天然に存在する別のアミノ酸、例えば、Ｇｌｙ＜＞Ａｌａ、Ｖａｌ＜＞ｌｌｅ＜＞Ｌｅｕ、Ａｓｐ＜＞Ｇｌｕ、Ｌｙｓ＜＞Ａｒｇ、Ａｓｎ＜＞ＧｌｎまたはＰｈｅ＜＞Ｔｒｐ＜＞Ｔｙｒで置き換えられる「保存的」として分類され得る。本発明に包含される置換はまた、「非保存的」であってもよく、その場合、野生型タンパク質中に存在するアミノ酸残基が、異なる群からの天然に存在するアミノ酸などの異なる性状を有するアミノ酸で置換される（例えば、荷電したまたは疎水性のアミノ酸をアラニンで置換する）。「類似アミノ酸」とは、本明細書で使用される場合、類似アミノ酸側鎖を有するアミノ酸、すなわち、極性、非極性または実質的に中性の側鎖を有するアミノ酸を指す。「非類似アミノ酸」とは、本明細書で使用される場合、異なるアミノ酸側鎖を有するアミノ酸を指し、例えば、極性側鎖を有するアミノ酸は、非極性側鎖を有するアミノ酸と類似していない。極性側鎖は、通常、タンパク質の表面に存在する傾向があり、それらは細胞内に見出される水環境（「親水性」アミノ酸）と相互作用し得る。一方、「非極性」アミノ酸は、タンパク質の中心内に存在する傾向があり、それらは類似した非極性の隣接物（「疎水性」アミノ酸）と相互作用し得る。極性側鎖を有するアミノ酸の例としては、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸塩、ヒスチジン、リジン、セリン、およびスレオニン（疎水性であるシステインを除き、全て親水性）が挙げられる。非極性側鎖を有するアミノ酸の例としては、アラニン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、およびトリプトファン（中性であるグリシンを除き、全て疎水性）が挙げられる。

【0142】

本明細書で使用される場合、用語「遺伝子」は、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかである、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。この用語には、二本鎖および一本鎖のＤＮＡおよびＲＮＡが含まれる。また、それには既知の種類の修飾、例えばメチル化、「キャップ」、天然に存在するヌクレオチドの１つ以上のアナログによる置換も含まれる。好ましくは、遺伝子は、本明細書で定義されるポリペプチドをコードするコード配列を含む。「コード配列」とは、適切な調節配列の制御下に置かれるか、または制御下にあるときに、ｍＲＮＡに転写され、かつ／またはポリペプチドに翻訳されるヌクレオチド配列である。コード配列の境界は、５’末端の翻訳開始コドンおよび３’末端の翻訳停止コドンによって決定される。コード配列には、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、組換え核酸配列またはゲノムＤＮＡが含まれ得るが、これらに限定されず、ある状況下ではイントロンも同様に存在し得る。

【0143】

本明細書で使用される場合、用語「内因性」は、その天然のゲノム位置に存在する遺伝子または対立遺伝子を指す。用語「内因性」は、「ネイティブ」と互換的に使用され得る。しかしながら、これは野生型対立遺伝子との１つ以上の核酸の差異の存在を排除するものではない。特定の実施形態において、野生型対立遺伝子との差異は、９個未満のヌクレオチド、好ましくは６個未満のヌクレオチド、より詳細には３個未満のヌクレオチドの差異に限定され得る。より詳細には、野生型配列との差異は、１ヌクレオチドのみであり得る。好ましくは、内因性対立遺伝子は、野生型タンパク質と９個未満、好ましくは６個未満、より詳細には３個未満、さらにより好ましくは１個のみのアミノ酸差異を有する改変タンパク質をコードする。

【0144】

本明細書で使用される場合、用語「ホモ接合体」は、１つ以上または全ての遺伝子座に同じ対立遺伝子を有する個々の細胞または植物を指す。この用語が特定の遺伝子座または遺伝子に関連して使用される場合、それは少なくともその遺伝子座または遺伝子が同じ対立遺伝子を有することを意味する。本明細書で使用される場合、用語「ホモ接合」は、同一の対立遺伝子が相同染色体上の対応する遺伝子座にあるときに存在する遺伝的状態を意味する。本明細書で使用される場合、用語「ヘテロ接合体」は、１つ以上または全ての遺伝子座に異なる対立遺伝子を有する個々の細胞または植物を指す。この用語が特定の遺伝子座または遺伝子に関連して使用される場合、それは少なくともその遺伝子座または遺伝子が異なる対立遺伝子を有することを意味する。本明細書で使用される場合、用語「ヘテロ接合」は、異なる対立遺伝子が相同染色体上の対応する遺伝子座にあるときに存在する遺伝的状態を意味する。

【0145】

本明細書で使用される場合、「対立遺伝子」とは、遺伝子また任意の種類の同定可能な遺伝要素の異なる形態に関連する様々な遺伝単位の代替形態を指し、これらは相同染色体の同じ遺伝子座に場所を定めるため、遺伝において代替的である。二倍体の細胞または生物では、通常、所与の遺伝子（またはマーカー）の２つの対立遺伝子は、一対の相同染色体上の対応する遺伝子座を占める。

【0146】

用語「遺伝子座（locus）」（lociの複数形）は、例えば、本発明の（突然変異）ＡＬＳコード配列などの、ＱＴＬ、遺伝子または遺伝マーカーが見出される染色体上の特定の場所または複数の場所または部位を意味する。

【0147】

本明細書で使用される場合、用語「配列同一性」は、任意の所与の核酸配列と標的核酸配列との間の同一性の程度を指す。配列同一性パーセントは、整列された核酸配列中の一致した位置の数を決定し、一致した位置の数を整列されたヌクレオチドの総数で除し、１００を乗じることによって計算される。一致した位置とは、整列された核酸配列の同じ位置に同一のヌクレオチドが存在する位置を指す。配列同一性パーセントは、任意のアミノ酸配列についても決定することができる。配列同一性パーセントを決定するには、ＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰを含むＢＬＡＳＴＺのスタンドアローンバージョンからＢＬＡＳＴ２配列（Ｂｌ２ｓｅｑ）プログラムを使用して、標的核酸またはアミノ酸配列を同定された核酸またはアミノ酸配列と比較する。このＢＬＡＳＴＺのスタンドアローンバージョンは、Fish & Richardsonのウェブサイト（fr.com/blastのWorld Wide Web）または米国政府の国立生物工学情報センターのウェブサイト（ncbi.nlm.nih.govのWorld Wide Web）から入手できる。Ｂｌ２ｓｅｑプログラムの使用方法を説明する説明書は、ＢＬＡＳＴＺに付属するｒｅａｄｍｅファイルに見出すことができる。ＢＩ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して２つの配列間の比較を行う。

【0148】

ＢＬＡＳＴＮは核酸配列の比較に使用され、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列の比較に使用される。２つの核酸配列を比較するには、オプションを次のように設定する：－ｉには、比較する第１の核酸配列を含むファイル（例えば、Ｃ：＼ｓｅｑｌ．ｔｘｔ）を設定し、－ｊには、比較する第２の核酸配列を含むファイル（例えば、Ｃ：＼ｓｅｑ２．ｔｘｔ）を設定し、－ｐにはｂｌａｓｔｎを設定し、－ｏには任意の望ましいファイル名（例えば、Ｃ：＼ｏｕｔｐｕｔ．ｔｘｔ）を設定し、－ｑには－１を設定し、－ｒには２を設定し、他の全てのオプションはデフォルト設定のままとする。次のコマンドは、２つの配列の比較を含む出力ファイルを生成する：Ｃ：＼Ｂ１２ｓｅｑ－ｉ ｃ：＼ｓｅｑｌ．ｔｘｔ－ｊ ｃ：＼ｓｅｑ２．ｔｘｔ －ｐ ｂｌａｓｔｎ －ｏ ｃ：＼ｏｕｔｐｕｔ．ｔｘｔ －ｑ －１ －ｒ ２。標的配列が同定された配列の任意の部分と相同性を持つ場合、指定された出力ファイルはそれらの相同性領域を整列した配列として提示する。標的配列が同定された配列の任意の部分と相同性を持たない場合、指定された出力ファイルは整列した配列を提示しない。一旦整列されると、長さは、任意の一致した位置から始まり他の任意の一致した位置で終わる同定された配列からの配列と整列されて提示される標的配列からの連続したヌクレオチドの数を数えることによって決定される。一致した位置とは、標的配列および同定された配列の両方に同一のヌクレオチドが提示される任意の位置である。ギャップはヌクレオチドではないため、標的配列に提示されるギャップはカウントされない。同様に、標的配列のヌクレオチドがカウントされ、同定された配列のヌクレオチドはカウントされないため、同定された配列に提示されるギャップはカウントされない。特定の長さにわたる同一性パーセントは、その長さにわたって一致した位置の数を数え、その数を長さで除し、結果得られる値に１００を乗じることによって決定される。例えば、（ｉ）５００塩基の核酸標的配列が対象核酸配列と比較され、（ｉｉ）Ｂｌ２ｓｅｑプログラムが、対象配列の領域と整列された標的配列から２００塩基を提示し、その２００塩基領域の最初と最後の塩基は一致し、（ｉｉｉ）それらの整列された２００塩基にわたる一致の数が１８０である場合、５００塩基の核酸標的配列は２００の長さを含み、その長さにわたる配列同一性は９０％である（すなわち、１８０／２００×１００＝９０）。同定された配列と整列する単一の核酸標的配列内の異なる領域は、各々独自の同一性パーセントを有し得ることが理解されるであろう。同一性パーセント値は、小数点以下第２位で四捨五入されることに留意されたい。例えば、７８．１１、７８．１２、７８．１３、および７８．１４は７８．１に切り捨てられ、７８．１５、７８．１６、７８．１７、７８．１８、および７８．１９は７８．２まで切り上げられる。また、長さの値は常に整数であることにも留意されたい。

【0149】

「単離された核酸」とは、その自然環境または元の環境から単離された核酸と理解される。この用語には、合成製造された核酸も含まれる。したがって、「単離された核酸配列」または「単離されたＤＮＡ」とは、それが単離された自然環境にもはや存在しない核酸配列、例えば、細菌宿主細胞中の核酸配列または植物核または色素体ゲノム中の核酸配列を指す。本明細書で「配列」に言及する場合、そのような配列を有する分子は、例えば核酸分子を指すと理解される。「宿主細胞」または「組換え宿主細胞」または「形質転換細胞」は、少なくとも１つの核酸分子が前述の細胞に導入された結果として生じる新しい個々の細胞（または生物）を指す用語である。宿主細胞は、好ましくは植物細胞または細菌細胞である。宿主細胞は、染色体外（エピソーム）複製分子として核酸を含んでもよく、または宿主細胞の核もしくは色素体ゲノムに組み込まれた核酸を含むか、または導入された染色体、例えばミニ染色体としての核酸を含んでもよい。

【0150】

参照配列と「実質的な配列同一性」を有するか、または参照配列と少なくとも８０％＞、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％＞もしくは９９％＞の核酸配列同一性の配列同一性を有する核酸配列（例えば、ＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）に言及する場合、一実施形態において、前述の核酸配列は、所与の核酸配列と実質的に同一であると考えられ、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件を使用して同定することができる。別の実施形態において、核酸配列は、所与のヌクレオチド配列と比較して１つ以上の突然変異を含むが、それでもストリンジェントなハイブリダイゼーション条件を使用して同定することができる。「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」は、所与のヌクレオチド配列と実質的に同一であるヌクレオチド配列を同定するために使用することができる。ストリンジェントな条件は配列に依存し、状況が異なることで異なる。一般に、ストリンジェントな条件は、定義されたイオン強度およびｐＨで、特定の配列の熱融点（Ｔｍ）よりも約５℃低くなるように選択される。Ｔｍは、標的配列の５０％が完全に一致したプローブにハイブリダイズする（定義されたイオン強度およびｐＨの下での）温度である。典型的には、塩濃度がｐＨ７で約０．０２モルであり、温度が少なくとも６０℃であるストリンジェントな条件が選択される。塩濃度を下げ、かつ／または温度を上げるとストリンジェンシーが高まる。ＲＮＡ－ＤＮＡハイブリダイゼーション（例えば、１００ｎｔのプローブを使用するノーザンブロット）のためのストリンジェントな条件とは、例えば、０．２×ＳＳＣ中、６３℃で２０分間、少なくとも１回の洗浄を含む条件、または同等の条件である。ＤＮＡ－ＤＮＡハイブリダイゼーション（例えば、１００ｎｔのプローブを使用するサザンブロット）のためのストリンジェントな条件とは、例えば、０．２×ＳＳＣ中、少なくとも５０℃、通常は約５５℃の温度で２０分間、少なくとも１回の洗浄（通常は２回）を含む条件、または同等の条件である。Sambrook et al. (1989)およびSambrook and Russell (2001)も参照のこと。

【0151】

用語「ハイブリダイズする」または「ハイブリダイゼーション」とは、一本鎖核酸分子がそれ自体を相補的な核酸鎖に付着させる、すなわちこの塩基対形成に一致するプロセスを意味する。ハイブリダイゼーションの標準的な手順は、例えば、Sambrook et al. (Molecular Cloning. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 3rd edition 2001)に記載されている。好ましくは、これは核酸鎖の塩基の少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％または８５％、より好ましくは９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％が相補的核酸鎖と塩基対を形成することを意味すると理解されるであろう。そのような結合の可能性は、ハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーに依存する。用語「ストリンジェンシー」は、ハイブリダイゼーション条件を指す。高ストリンジェンシーは塩基対形成がより困難な場合であり、低ストリンジェンシーは塩基対形成が促進される場合である。ハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーは、例えば、塩濃度またはイオン強度と、温度とに依存する。一般に、ストリンジェンシーは、温度を上げ、かつ／または塩分濃度を下げることによって高めることができる。「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、ハイブリダイゼーションが主に相同核酸分子間でのみ起こる条件と定義される。用語「ハイブリダイゼーション条件」は、一般的な条件における核酸の実際の結合だけでなく、その後の洗浄ステップの一般的な条件も指す。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件とは、例えば、主に、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の配列同一性を有する核酸分子のみがハイブリダイズする条件である。あまりストリンジェントでないハイブリダイゼーション条件には、４×ＳＳＣ中、３７℃でハイブリダイゼーションを行い、それに続けて、１×ＳＳＣ中、室温で洗浄を繰り返すことが含まれる。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件には、４×ＳＳＣ中、６５℃でハイブリダイゼーションを行い、それに続けて、０．１×ＳＳＣ中、６５℃で合計約１時間洗浄を繰り返すことが含まれる。ある実施形態において、ある他のポリヌクレオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズすると言われている。

【0152】

ある態様において、本発明は、１つ以上のＡＬＳ阻害剤、特に最適な除草活性をもたらすのに十分な高用量のＡＬＳ阻害剤への耐性があるベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分に関する。ある実施形態において、本明細書に記載されるベータ・ブルガリス植物は、除草活性のために推奨される用量で１つ以上のＡＬＳ阻害剤への耐性がある。好ましくは、前述の用量は単回適用用量である。生育期中に複数回の適用が必要な場合、本発明によるベータ・ブルガリス植物は、好ましくは前述の複数回の適用に対して耐性があることが理解されるであろう。好ましくは、本発明によるＡＬＳ阻害剤耐性ベータ・ブルガリス植物は、生育、収量、品質、病原体耐性、生理学的機能などの他の重要な農学的特性に関して欠点を有しない。

【0153】

本明細書で使用される場合、「抵抗性がある（resistant）」、「抵抗性（resistance）」、「耐性（tolerance）」または「耐性がある（tolerant）」とは、１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤、例えば本明細書の他の箇所に記載されるものの適用が、それぞれのベータ・ブルガリス植物、特に３７１位に突然変異を含むＡＬＳポリペプチドを含むテンサイに適用した場合に、生理学的機能／細胞毒性に関する任意の明らかな影響を示さないことを意味し、一方、非耐性のベータ・ブルガリス植物に同量のそれぞれのＡＬＳ阻害剤除草剤を適用すると、植物生育、その生理学的機能に関する重大な悪影響をもたらすか、または植物毒性徴候を示す。観察された影響の質および量は、適用されたＡＬＳ阻害剤制除草剤の化学組成、適用率および適用の時期、ならびに処理された植物の生育条件／段階に依存し得る。

【0154】

本明細書で使用される場合、用語「耐性の増加」および「抵抗性の増加」は、ＡＬＳ阻害剤除草剤の適用による任意の徴候（例えばダメージまたはバイオマスの損失など）のあらゆる軽減、提示の減少、改善、またはそれらの組み合わせに関する。また、本明細書で言及される抵抗性または耐性の増加とは、例えば、ＡＬＳ阻害剤除草剤の適用時または適用後に、植物がそのバイオマス生産量（例えば収穫可能なバイオマス生産量、例えば種子収量）を維持する能力に関し得る。ＡＬＳ阻害剤除草剤抵抗性または耐性の植物、植物細胞または植物の一部分は、本明細書において、それぞれ、それらが由来する親植物と比較してＡＬＳ阻害剤除草剤に対して抵抗性／耐性が増加した（かつ３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有するＡＬＳタンパク質を有しない）植物、植物細胞または植物の一部分を指し得る。抵抗性または耐性は、本明細書において、１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤による植物の適応度、収量、バイオマス（生産）などへの影響を低減するその能力に関し得る。除草剤抵抗性／耐性を決定する方法、例えば、除草剤誘発ダメージの目視によるスコアリング、バイオマス（収量）の決定などが当業者に知られている。

【0155】

ＡＬＳ阻害剤耐性は、０（枯死した植物）～９（完全に影響を受けていない植物）の尺度に基づく植物の活力および植物の退緑に関する目視損傷評価、例えば、グリホサート適用の２週間後に個々の植物に対して取得された評価によって決定することができる。０～３の評価は感受性植物の特性である。３～７の評価は低レベル～中間レベルの耐性を示し、８または９の評価は良好なレベルの耐性を示す。特に、評価は次の意味を有する：９．影響を受けていない植物は未処理の対照と同一である；８．葉の先端にごく小さな壊死がみられ、葉の面積の５％未満が影響を受けて黄色になる；７．葉の先端にごく小さな壊死があり、カールし始める；葉の面積の５％未満が影響を受けて黄色になる；６，５，４．壊死および葉のカールの増加；葉が通常よりも小さくなってくる；３，２．葉の生育がないか、または非常に限られている；全ての葉がカールし、壊死の影響を受けている；１．植物が生育しない；植物の５％までが緑色のままである；０．枯死した植物。ある好ましい実施形態において、本発明によるベータ・ブルガリス植物は、少なくとも３、好ましくは少なくとも７、より好ましくは少なくとも８、さらにより好ましくは９の評価を有する。

【0156】

ある実施形態において、本発明によるベータ・ブルガリス植物は、対応する野生型ベータ・ブルガリス植物よりも、ＡＬＳ阻害剤除草剤に対して感受性が低い。ある実施形態において、本発明によるベータ・ブルガリス植物は、少なくとも１０倍感受性が低く、例えば１００倍感受性が低く、より好ましくは５００倍、さらにより好ましくは１０００倍、最も好ましくは２０００倍未満である。本明細書で使用される場合、用語「耐性の増加」および「抵抗性の増加」は、「感受性の低下（reduced sensitivity）」または「感受性の低下（reduced susceptibility）」と互換的に使用され得る。したがって、１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤に対してより耐性があるか、またはより抵抗性がある本発明による植物、植物の一部分、または植物集団は、そのような除草剤に対してより感受性が低いと考えられる。本明細書で使用される場合、感受性が低い（less sensitive）または感受性が低い（less susceptible）とは、「より耐性がある」または「より抵抗性がある」とみなすことができる。同様に、「より耐性がある」または「より抵抗性がある」とは、逆に、「感受性が低い（less sensitive）」または「感受性が低い（less susceptible）」とみなすことができる。本明細書で使用される場合、「感受性が高い（more sensitive）」または「感受性が高い（more susceptible）」とは、逆に、「耐性が低い」または「抵抗性が低い」とみなすことができる。同様に、「耐性が低い」または「抵抗性が低い」とは、逆に「感受性が高い（more sensitive）」または「感受性が高い（more susceptible）」とみなすことができる。

【0157】

一般に、本発明のＢ．ブルガリス植物およびその一部は、農学的に利用可能であることが好ましい。「農学的に利用可能」とは、Ｂ．ブルガリス植物およびその一部が農学的目的に有用であることを意味する。例えば、Ｂ．ブルガリス植物は、糖生産、バイオ燃料生産（例えばバイオガス、バイオブタノール）、エタノール生産、ベタインおよび／またはウリジン生産に有用であるという目的のために役立つべきである。本明細書で使用される用語「農学的に利用可能な」は、本発明のＢ．ブルガリス植物がＡＬＳ阻害剤除草剤に対して好ましくは感受性が低いこと、より好ましくは少なくとも１００倍感受性が低いこと、より好ましくは５００倍、さらにより好ましくは１０００倍、最も好ましくは２０００倍未満感受性が低いことも含む。ＡＬＳ阻害剤除草剤は、本明細書に記載される１つ以上であり、それは好ましくは、ホラムスルフロン単独、またはスルホニル尿素系除草剤のサブクラスまたはＡＬＳ阻害剤除草剤の他の任意のサブクラスからの１つ以上の更なるＡＬＳ阻害剤除草剤との組み合わせのいずれかであり、最も好ましくは、それはホラムスルフロンと更なるスルホニル尿素系除草剤および／またはスルホニルアミノカルボニルトリアゾリノン系除草剤のサブクラスのＡＬＳ阻害剤との組み合わせである。

【0158】

好ましくは、本発明の農学的に利用可能なＢ．ブルガリス植物、最も好ましくはテンサイ植物は、完全に稔性であり、より好ましくは野生型の稔性を有する。稔性は、本発明のＢ．ブルガリス植物が農学的に利用可能であるために最も重要である。

【0159】

農学的に利用可能なＢ．ブルガリス植物の例はテンサイである。本発明のテンサイ植物は、１ヘクタールの面積（約８０，０００～９０，０００本のテンサイ）で栽培される場合、好ましくは少なくとも４トンの砂糖の生産に役立つべきである。代替的に、本発明のテンサイ植物は、農業的に利用可能であるように、好ましくは、１５～２０％、好ましくは少なくとも１７％の糖含量を含むべきである。したがって、１５～２０％、好ましくは少なくとも１７％の糖含量を含むテンサイ植物は、本発明の好ましい実施形態である。

【0160】

本発明のある実施形態において使用され得るＡＬＳ阻害剤のクラスに属する除草化合物には、（ａ）スルホニル尿素系除草剤（Beyer E.M et al. (1988), Sulfonylureas in Herbicides: Chemistry, Degradation, and Mode of Action; Marcel Dekker, New York, 1988, 117-189）、（ｂ）スルホニルアミノカルボニルトリアゾリノン系除草剤（Pontzen, R., Pflanz.- Nachrichten Bayer, 2002, 55, 37-52）、（ｃ）イミダゾリノン系除草剤（Shaner, D.L., et al., Plant Physiol., 1984, 76, 545-546; Shaner, D.L., and O’Connor, S.L. (Eds.) The Imidazolinone Herbicides, CRC Press, Boca Rato, FL, 1991）、（ｄ）トリアゾロピリミジン系除草剤（Kleschick, W.A. et al., Agric. FoodChem, 1992, 40, 1083-1085）、および（ｅ）ピリミジニル（オキシ／チオ）ベンゾエート系除草剤（Shimizu, T.J., Pestic. Sci.,1997, 22, 245-256; Shimizu, T. et al., Acetolactate Synthase Inhibitors in Herbicide Classes in Development, Boger, P., Wakabayashi. K., Hirai, K., (Eds.), Springer Verlag, Berlin, 2002, 1-41）が含まれる。

【0161】

ある実施形態において、ＡＬＳ阻害剤は、スルホニル尿素、スルホニルアミノカルボニルトリアゾリノン、トリアゾロピリミジン、スルホンアニリド、イミダゾリノン、ピリミジニルオキシベンゾエ酸、ピリミジニルチオベンゾエ酸から選択される。本発明のある態様において使用され得る更なるＡＬＳ阻害剤は、例えば、国際公開第２０１４／０９０７６０号、国際公開第２０１２／０４９２６８号、国際公開第２０１２／０４９２６６号、欧州特許第２６２７１８３号明細書、および国際公開第２０１４／０９１０２１号に記載されており、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0162】

ある実施形態において、ＡＬＳ阻害剤は、国際公開第２０１２／０４９２６６号の請求項２～４に列挙されたＡＬＳ阻害剤から選択され、これらの全ては、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

【0163】

（スルホン）アミドの群からの化合物は、望ましくない植生を防除するための除草活性化合物としてすでに知られている；例えば、欧州特許第２３９４１４号明細書、米国特許第４２８８２４４号明細書、西独国特許第３３０３３８８号明細書、米国特許第５４５７０８５号明細書、米国特許第３１２０４３４号明細書、米国特許第３４８０６７１号明細書、欧州特許第２０６２５１号明細書、欧州特許第２０５２７１号明細書、米国特許第２５５６６６４号明細書、米国特許第３５３４０９８号明細書、欧州特許第５３０１１号明細書、米国特許第０４３８５９２７号明細書、欧州特許第３４８７３７号明細書、西独国特許出願公開第２８２２１５５号明細書、米国特許第３８９４０７８号明細書、英国特許出願公告第８６９１６９号明細書、欧州特許第４４７００４号明細書、西独国特許第１０３９７７９号明細書、ハンガリー国特許第１７６５８２号明細書、米国特許第３４４２９４５号明細書、西独国特許第２３０５４９５号明細書、西独国特許第２６４８００８号明細書、西独国特許第２３２８３４０号明細書、西独国特許第１０１４３８０号明細書、ハンガリー国特許第５３４８３号明細書、米国特許第４８０２９０７号明細書、英国特許出願公告第１０４０５４１号明細書、米国特許第２９０３４７８号明細書、米国特許第３１７７０６１号明細書、米国特許第２６９５２２５号明細書、西独国特許第１５６７１５１号明細書、英国特許出願公告第５７４９９５号明細書、西独国特許第１０３１５７１号明細書、米国特許第３１７５８９７号明細書、特許第１０９８３３１号明細書、米国特許第２９１３３２７号明細書、国際公開第８３００３２９号、特開昭５５－１２７３０２号公報、西独国特許第１３００９４７号明細書、西独国特許第２１３５７６８号明細書、米国特許第３１７５８８７号明細書、米国特許第３８３６５２４号明細書、特開昭６０－０６７４６３号公報、米国特許第３５８２３１４号明細書、米国特許第５３３３０８２１号明細書、欧州特許第１３１２５８号明細書、米国特許第４７４６３５３号明細書、米国特許第４４２０３２５号明細書、米国特許第４３９４５０６号明細書、米国特許第４１２７４０５号明細書、米国特許第４４７９８２１号明細書、米国特許第５００９６９９号明細書、欧州特許第１３６０６１号明細書、欧州特許第３２４５６９号明細書、欧州特許第１８４３８５号明細書、国際公開第２００２０３０９２１号、国際公開第０９２１５５７６号、国際公開第０９５２９８９９号、米国特許第４６６８２７７号明細書、欧州特許第３０５９３９号明細書、国際公開第０９６４１５３７号、国際公開第０９５１０５０７号、欧州特許第７６７７号明細書、中国特許第１０８０１１６号明細書、米国特許第４７８９３９３号明細書、欧州特許第９７１９０２号明細書、米国特許第５２０９７７１号明細書、欧州特許第８４０２０号明細書、欧州特許第１２０８１４号明細書、欧州特許第８７７８０号明細書、国際公開第０８８０４２９７号、欧州特許第５８２８９２４号明細書、国際公開第２００２０３６５９５号、米国特許第５，４７６，９３６号明細書、国際公開第２００９／０５３０５８号および上述の刊行物に記載されている文献を参照のこと。

【0164】

イミダゾリノンの群からの化合物は、望ましくない植生を防除するための除草活性化合物としてすでに知られている；例えば、Proc. South. Weed Sci. Soc. 1992. 45, 341 , Proc. South. Weed Sci. Soc. Annu. Mtg. 36th, 1983, 29, Weed Sci. Soc. Annu. Mtg. 36th, 1983, 90-91 , Weed Sci. Soc. Mtg., 1984, 18, Modern Agrochemicals, 2004, 14-15を参照のこと。

【0165】

ピリミジニル（チオ）ベンゾエートの群からの化合物は、望ましくない植生を防除するための除草活性化合物としてすでに知られている；例えば、米国特許第４９０６２８５号明細書、欧州特許第６５８５４９号明細書、米国特許第５１１８３３９号明細書、国際公開第９１／０５７８１号、米国特許第４９３２９９９号明細書、および欧州特許第３１５８８９号明細書を参照のこと。

【0166】

スルホンアミドの群からの化合物は、望ましくない植物を防除するための除草活性化合物としてすでに知られている；例えば、国際公開第９３／０９０９９号、国際公開第２００６／００８１５９号、および国際公開第２００５／０９６８１８号を参照のこと。

【0167】

本開示において引用される全ての刊行物および特許は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0168】

ある実施形態において、ＡＬＳ阻害剤に対する抵抗性を付与する適切な突然変異型ＡＬＳは、欧州特許第２９３１９０２号明細書および国際公開第２０１２／０４９２６８号に記載されているとおりであり、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0169】

ある実施形態において、本明細書で使用されるＡＬＳ阻害剤除草剤は、（スルホン）アミド、例えばスルホニル尿素、スルホニルアミノカルボニルトリアゾリノン、スルホンアニリド、またはトリアゾロピリミジン；イミダゾリノン；およびピリミジニル（チオ／オキシ）ベンゾエートから選択され、好ましくは、スルホニル尿素、スルホニルアミノカルボニルトリアゾリノン、イミダゾリノン、およびピリミジニル（チオ／オキシ）ベンゾエートから選択される。これらのクラスのＡＬＳ阻害剤除草剤は、グループＡ（サブグループＡ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４を有する）、Ｂ（Ｂ１）、およびＣ（サブグループＣ１およびＣ２を有する）に分類することができる。

【0170】

ある実施形態において、本明細書で使用されるＡＬＳ阻害剤除草剤は、以下：
アミドスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １２０９２３－３７－７］（＝Ａ１－１）；
アジムスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １２０１６２－５５－２］（＝Ａ１－２）；
ベンスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ８３０５５－９９－６］（＝Ａ１－３）；
クロリムロン－エチル［ＣＡＳ ＲＮ ９０９８２－３２－４］（＝Ａ１－４）；
クロルスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ ６４９０２－７２－３］（＝Ａ１－５）；
シノスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ ９４５９３－９１－６］（＝Ａ１－６）；
シクロスルファムロン［ＣＡＳ ＲＮ １３６８４９－１５－５］（＝Ａ１－７）；
エタメトスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ９７７８０－０６－８］（＝Ａ１－８）；
エトキシスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １２６８０１－５８－９］（＝Ａ１－９）；
フラザスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １０４０４０－７８－０］（＝Ａ１－１０）；
フルセトスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ ４１２９２８－７５－７］（＝Ａ１－１１）；
フルピルスルフロン－メチル－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １４４７４０－５４－５］（＝Ａ１－１２）；
ホラムスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １７３１５９－５７－４］（＝Ａ１－１３）；
ハロスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ １００７８４－２０－１］（＝Ａ１－１４）；
イマゾスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １２２５４８－３３－８］（＝Ａ１－１５）；
ヨードスルフロン－メチル－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １４４５５０－３６－７］（＝Ａ１－１６）；
メソスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ２０８４６５－２１－８］（＝Ａ１－１７）；
メトスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ７４２２３－６４－６］（＝Ａ１－１８）；
モノスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １５５８６０－６３－２］（＝Ａ１－１９）；
ニコスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １１１９９１－０９－４］（＝Ａ１－２０）；
オルトスルファムロン［ＣＡＳ ＲＮ ２１３４６４－７７－８］（＝Ａ１－２１）；
オキサスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １４４６５１－０６－９］（＝Ａ１－２２）；
プリミスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ８６２０９－５１－０］（＝Ａ１－２３）；
プロスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ ９４１２５－３４－５］（＝Ａ１－２４）；
ピラゾスルフロン－エチル［ＣＡＳ ＲＮ ９３６９７－７４－６］（＝Ａ１－２５）；
リムスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １２２９３１－４８－０］（＝Ａ１－２６）；
スルホメツロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ７４２２２－９７－２］（＝Ａ１－２７）；
スルホスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １４１７７６－３２－１］（＝Ａ１－２８）；
チフェンスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ７９２７７－２７－３］（＝Ａ１－２９）；
トリアスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ ８２０９７－５０－５］（＝Ａ１－３０）；
トリベヌロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ １０１２００－４８－０］（＝Ａ１－３１）；
トリフロキシスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １４５０９９－２１－４］（ナトリウム）（＝Ａ１－３２）；
トリフルスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ １２６５３５－１５－７］（＝Ａ１－３３）；
トリトスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １４２４６９－１４－５］（＝Ａ１－３４）；
ＮＣ－３３０［ＣＡＳ ＲＮ １０４７７０－２９－８］（＝Ａ１－３５）；
ＮＣ－６２０［ＣＡＳ ＲＮ ８６８６８０－８４－６］（＝Ａ１－３６）；
ＴＨ－５４７［ＣＡＳ ＲＮ ５７０４１５－８８－２］（＝Ａ１－３７）；
モノスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ １７５０７６－９０－１］（＝Ａ１－３８）；
２－ヨード－Ｎ－［（４－メトキシ－６－メチル－１，３，５－トリアジニル）カルバモイル］ベンゼン－スルホンアミド（＝Ａ１－３９）；
一般式（Ｉ）の化合物

【化7】

［式中、Ｍ^＋は、化合物（Ｉ）のそれぞれの塩、すなわち、
そのリチウム塩（＝Ａ１－４０）；そのナトリウム塩（＝Ａ１－４１）；そのカリウム塩（＝Ａ１－４２）；そのマグネシウム塩（＝Ａ１－４３）；そのカルシウム塩（＝Ａ１－４４）；そのアンモニウム塩（＝Ａ１－４５）；そのメチルアンモニウム塩（＝Ａ１－４６）；そのジメチルアンモニウム塩（＝Ａ１－４７）；そのテトラメチルアンモニウム塩（＝Ａ１－４８）；そのエチルアンモニウム塩（＝Ａ１－４９）；そのジエチルアンモニウム塩（＝Ａ１－５０）；そのテトラエチルアンモニウム塩（＝Ａ１－５１）；そのプロピルアンモニウム塩（＝Ａ１－５２）；そのテトラプロピルアンモニウム塩（＝Ａ１－５３）；そのイソプロピルアンモニウム塩（＝Ａ１－５４）；そのジイソプロピルアンモニウム塩（＝Ａ１－５５）；そのブチルアンモニウム塩（＝Ａ１－５６）；そのテトラブチルアンモニウム塩（＝Ａ１－５７）；その（２－ヒドロキシエタ－１－イル）アンモニウム塩（＝Ａ１－５８）；そのビス－Ｎ，Ｎ－（２－ヒドロキシエタ－１－イル）アンモニウム塩（＝Ａ１－５９）；そのトリス－Ｎ，Ｎ，Ｎ－（２－ヒドロキシエタ－１－イル）アンモニウム塩（＝Ａ１－６０）；その１－フェニルエチルアンモニウム塩（＝Ａ１－６１）；その２－フェニルエチルアンモニウム塩（＝Ａ１－６２）；そのトリメチルスルホニウム塩（＝Ａ１－６３）；そのトリメチルオキソニウム塩（＝Ａ１－６４）；そのピリジニウム塩（＝Ａ１－６５）；その２－メチルピリジニウム塩（＝Ａ１－６６）；その４－メチルピリジニウム塩（＝Ａ１－６７）；その２，４－ジメチルピリジニウム塩（＝Ａ１－６８）；その２，６－ジメチルピリジニウム塩（＝Ａ１－６９）；そのピペリジニウム塩（＝Ａ１－７０）；そのイミダゾリウム塩（＝Ａ１－７１）；そのモルホリニウム塩（＝Ａ１－７２）；その１，５－ジアザビシクロ［４．３．０］ノン－７－エニウム塩（＝Ａ１－７３）；その１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エニウム塩（＝Ａ１－７４）である］；
式（ＩＩ）の化合物またはその塩

【化8】

［式中、Ｒ^２、およびＲ^３は、以下の表に定義される意味を有する］

【表2】

式（ＩＩＩ）（＝Ａ１－８７）の化合物、すなわち化合物（Ａ１－８３）のナトリウム塩

【化9】

および式（ＩＶ）の化合物（＝Ａ１－８８）、すなわち化合物（Ａ１－８２）のナトリウム塩

【化10】

のうちの１つ以上から選択されるスルホニル尿素である。

【0171】

ある実施形態において、本明細書で使用されるＡＬＳ阻害剤除草剤は、
フルカルバゾン－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １８１２７４－１７－９］（＝Ａ２－１）；
プロポキシカルバゾン－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １８１２７４－１５－７］（＝Ａ２－２）；および
チエンカルバゾン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ３１７８１５－８３－１］（＝Ａ２－３）
のうちの１つ以上から選択されるスルホニルアミノカルボニルトリアゾリノンである。

【0172】

ある実施形態において、本明細書で使用されるＡＬＳ阻害剤除草剤は、
クロランスラム－メチル［１４７１５０－３５－４］（＝Ａ３－１）；
ジクロスラム［ＣＡＳ ＲＮ １４５７０１－２１－９］（＝Ａ３－２）；
フロラスラム［ＣＡＳ ＲＮ １４５７０１－２３－１］（＝Ａ３－３）；
フルメトスラム［ＣＡＳ ＲＮ ９８９６７－４０－９］（＝Ａ３－４）；
メトスラム［ＣＡＳ ＲＮ １３９５２８－８５－１］（＝Ａ３－５）；
ペノキススラム［ＣＡＳ ＲＮ ２１９７１４－９６－２］（＝Ａ３－６）；
ピロクススラム［ＣＡＳ ＲＮ ４２２５５６－０８－９］（＝Ａ３－７）
のうちの１つ以上から選択されるトリアゾロピリミジンである。

【0173】

ある実施形態において、本明細書で使用されるＡＬＳ阻害剤除草剤は、
一般式（Ｖ）で記載される群からの化合物またはその塩

【化11】

［式中、
Ｒ^１はハロゲン、好ましくはフッ素または塩素であり、
Ｒ^２は水素であり、かつＲ^３はヒドロキシルであるか、または
Ｒ^２およびＲ^３は、それらが結合している炭素原子と一緒になってカルボニル基Ｃ＝Ｏであり、
Ｒ^４は水素またはメチルである］；
より具体的には、以下の所与の化学構造（Ａ４－１）～（Ａ４－８）の化合物

【化12-1】

【化12-2】

のうちの１つ以上から選択されるスルホンアニリドである。

【0174】

ある実施形態において、本明細書で使用されるＡＬＳ阻害剤除草剤は、
イマザメタベンズメチル［ＣＡＳ ＲＮ ８１４０５－８５－８］（＝Ｂ１－１）；
イマザモックス［ＣＡＳ ＲＮ １１４３１１－３２－９］（＝Ｂ１－２）；
イマザピック［ＣＡＳ ＲＮ １０４０９８－４８－８］（＝Ｂ１－３）；
イマザピル［ＣＡＳ ＲＮ ８１３３４－３４－１］（＝Ｂ１－４）；
イマザキン［ＣＡＳ ＲＮ ８１３３５－３７－７］（＝Ｂ１－５）；
イマゼタピル［ＣＡＳ ＲＮ ８１３３５－７７－５］（＝Ｂ１－６）；
ＳＹＰ－２９８［ＣＡＳ ＲＮ ５５７０６４－７７－４］（＝Ｂ１－７）；
ＳＹＰ－３００［ＣＡＳ ＲＮ ３７４７１８－１０－２］（＝Ｂ１－８）
のうちの１つ以上から選択されるイミダゾリノンである。

【0175】

ある実施形態において、本明細書で使用されるＡＬＳ阻害剤除草剤は、
ビスピリバック－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １２５４０１－９２－５］（＝Ｃ１－１）；
ピリベンゾキシム［ＣＡＳ ＲＮ １６８０８８－６１－７］（＝Ｃ１－２）；
ピリミノバック－メチル［ＣＡＳ ＲＮ １３６１９１－６４－５］（＝Ｃ１－３）；
ピリバムベンズ－イソプロピル［ＣＡＳ ＲＮ ４２０１３８－４１－６］（＝Ｃ１－４）；
ピリバムベンズ－プロピル［ＣＡＳ ＲＮ ４２０１３８－４０－５］（＝Ｃ１－５）
のうちの１つ以上から選択されるピリミジニルオキシベンゾエートである。

【0176】

ある実施形態において、本明細書で使用されるＡＬＳ阻害剤除草剤は、
ピリフタリド［ＣＡＳ ＲＮ １３５１８６－７８－６］（＝Ｃ２－１）；
ピリチオバク－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １２３３４３－１６－８］（＝Ｃ２－２）
のうちの１つ以上から選択されるピリミジニルチオベンゾエートである。

【0177】

グループＡ～Ｃに挙げられている名称（一般名）の後ろの角括弧内に記載されている「ＣＡＳ ＲＮ」は、この「ＣＡＳ ＲＮ」が、とりわけ、立体異性体を含む異性体を区別することから、指定された物質を一義的に分類することを可能にする慣例的な参照番号である「化学物質アブストラクトサービス登録番号」に対応する。

【0178】

用語「ＡＬＳ阻害剤除草剤」または単に「ＡＬＳ阻害剤」は互換的に使用される。本明細書で使用される場合、「ＡＬＳ阻害剤除草剤」または「ＡＬＳ阻害剤」は、ＡＬＳ酵素の活性を妨げる単一の除草剤に限定されることを意味しない。したがって、別段の記載がない限り、または文脈から明らかでない限り、「ＡＬＳ阻害剤除草剤」または「ＡＬＳ阻害剤」は、当該技術分野で公知の１種の除草剤、または２種、３種、４種、またはそれよりも多い除草剤の混合物であり得、好ましくは本明細書で規定されるように、それらの各々がＡＬＳ酵素の活性を妨げる。

【0179】

好ましくは、グループ（Ａ）に属する本発明によるＡＬＳ阻害剤除草剤は、以下のとおりである：
アミドスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １２０９２３－３７－７］（＝Ａ１－１）；
クロリムロン－エチル［ＣＡＳ ＲＮ ９０９８２－３２－４］（＝Ａ１－４）；
エタメトスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ９７７８０－０６－８］（＝Ａ１－８）；
エトキシスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １２６８０１－５８－９］（＝Ａ１－９）；
フルピルスルフロン－メチル－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １４４７４０－５４－５］（＝Ａ１－１２）；
ホラムスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １７３１５９－５７－４］（＝Ａ１－１３）；
ヨードスルフロン－メチル－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １４４５５０－３６－７］（＝Ａ１－１６）；
メソスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ２０８４６５－２１－８］（＝Ａ１－１７）；
メトスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ７４２２３－６４－６］（＝Ａ１－１８）；
モノスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １５５８６０－６３－２］（＝Ａ１－１９）；
ニコスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １１１９９１－０９－４］（＝Ａ１－２０）；
スルホスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １４１７７６－３２－１］（＝Ａ１－２８）；
チフェンスルフロン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ７９２７７－２７－３］（＝Ａ１－２９）；
トリベヌロンメチル［ＣＡＳ ＲＮ １０１２００－４８－０］（＝Ａ１－３１）；
２－ヨード－Ｎ－［（４－メトキシ－６－メチル－１，３，５－トリアジニル）カルバモイル］ベンゼン－スルホンアミド（＝Ａ１－３９）；
２－ヨード－Ｎ－［（４－メトキシ－６－メチル－１，３，５－トリアジニル）カルバモイル］ベンゼン－スルホンアミドナトリウム塩（＝Ａ１－４１）；
（Ａ１－８３）またはそのナトリウム塩（＝Ａ１－８７）；
プロポキシカルバゾン－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １８１２７４－１５－７］（＝Ａ２－２）；
チエンカルバゾン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ３１７８１５－８３－１］（＝Ａ２－３）；
フロラスラム［ＣＡＳ ＲＮ １４５７０１－２３－１］（＝Ａ３－３）；
メトスラム［ＣＡＳ ＲＮ １３９５２８－８５－１］（＝Ａ３－５）；
ピロクススラム［ＣＡＳ ＲＮ ４２２５５６－０８－９］（＝Ａ３－７）
（Ａ４－１）；
（Ａ４－２）；および
（Ａ４－３）。

【0180】

グループ（Ａ）に属する本発明に従って特に好ましくは使用されるＡＬＳ阻害剤除草剤は以下のとおりである：
アミドスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １２０９２３－３７－７］（＝Ａ１－１）；
ホラムスルフロン［ＣＡＳ ＲＮ １７３１５９－５７－４］（＝Ａ１－１３）；
ヨードスルフロン－メチル－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １４４５５０－３６－７］（＝Ａ１－１６）；
２－ヨード－Ｎ－［（４－メトキシ－６－メチル－１，３，５－トリアジニル）カルバモイル］ベンゼン－スルホンアミド（＝Ａ１－３９）；
２－ヨード－Ｎ－［（４－メトキシ－６－メチル－１，３，５－トリアジニル）カルバモイル］ベンゼン－スルホンアミドナトリウム塩（＝Ａ１－４１）；
Ａ１－８３またはそのナトリウム塩（＝Ａ１－８７）；
チエンカルバゾン－メチル［ＣＡＳ ＲＮ ３１７８１５－８３－１］（＝Ａ２－３）。

【0181】

グループ（Ｂ）に属する本発明に従って好ましくは使用される別のＡＬＳ阻害剤除草剤は、イマザモックス［ＣＡＳ ＲＮ １１４３１１－３２－９］（＝Ｂ１－２）である。

【0182】

グループ（Ｃ）に属する本発明に従って好ましくは使用される別のＡＬＳ阻害剤除草剤は、ビスピリバック－ナトリウム［ＣＡＳ ＲＮ １２５４０１－９２－５］（＝Ｃ１－１）である。

【0183】

上記で定義される全てのＡＬＳ阻害剤除草剤に関して、それぞれのＣＡＳ ＲＮによってすでに規定されていない場合には、酸、および塩などの全ての使用形態が本発明に従って適用され得ることをさらに理解されたい。

【0184】

さらに、本発明に従って使用されるＡＬＳ阻害剤除草剤は、更なる成分、例えば、異なる種類の作用様式の農薬活性化合物および／または作物保護において慣用される配合補助剤および／または添加剤、例えば農学的に許容され得る担体を含んでもよく、またはこれらと一緒に併用することもできる。

【0185】

好ましい実施形態において、本発明に従って使用される除草剤の組み合わせは、グループ（Ａ）、（Ｂ）および／または（Ｃ）に属するＡＬＳ阻害剤除草剤の有効量を含み、かつ／または相乗作用を有する。この相乗作用は、例えば、グループ（Ａ）、（Ｂ）、および／または（Ｃ）に属する１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤を、例えば、共配合またはタンクミックスとして一緒に適用する場合に観察され得るが、しかしながら、それらは活性化合物を異なる時期に適用（分割）する場合にも観察され得る。また、除草剤または除草剤の組み合わせを複数回に分けて適用すること（逐次適用）も可能であり、例えば、発芽前適用に続いて発芽後適用が行われるか、または発芽後早期適用に続いて中期もしくは後期発芽後適用が行われる。ここでは、当該組み合わせのグループ（Ａ）、（Ｂ）および／または（Ｃ）に属するＡＬＳ阻害剤除草剤を共同またはほぼ同時に適用することが好ましい。相乗効果により、個々のＡＬＳ阻害剤除草剤の適用量の低減、同じ適用量でのより高い効果、まだ防除されていない種の防除（ギャップ）、個々のＡＬＳ阻害剤除草剤または多数のＡＬＳ阻害剤除草剤に対して抵抗性または耐性がある種の防除、適用期間の延長および／または必要な個々の適用回数の低減と、その結果、ユーザーにとって経済的および環境学的により有利な雑草防除システムとが可能になる。

【0186】

本発明に従って使用される除草剤は、全てアセト乳酸シンターゼ（ＡＬＳ）阻害剤除草剤（代替的かつ交換可能に「ＡＬＳ阻害剤除草剤」とも呼ばれ得る）であり、したがって植物におけるタンパク質生合成を阻害する。（上記で定義される）グループ（Ａ）、（Ｂ）または（Ｃ）に属するＡＬＳ阻害剤除草剤の適用量は、例えば、０．００１ｇ～１５００ｇのａｉ／ｈａ（ａｉ／ｈａは、ここ以降「１ヘクタール当たりの活性物質」＝１００％純粋な活性化合物に基づくことを意味する）の広い範囲内で変動し得る。０．００１ｇ～１５００ｇのａｉ／ｈａの適用量で適用すると、本発明によるクラスＡ、ＢおよびＣに属する除草剤、好ましくは化合物Ａ１－１；Ａ１－４；Ａ１－８；Ａ１－９；Ａ１－１２；Ａ１－１３；Ａ１－１６；Ａ１－１７；Ａ１－１８；Ａ１－１９；Ａ１－２０；Ａ１－２８；Ａ１－２９；Ａ１－３１；Ａ１－３９；Ａ１－４１；Ａ１－８３；Ａ１－８７；Ａ２－２；Ａ２－３；Ａ３－３；Ａ３－５；Ａ３－７、Ａ４－３は、発芽前および発芽後方法によって使用される場合、比較的広範囲の有害植物、例えば、一年生および多年生の単子葉または双子葉雑草、およびまた、例えば、雑草ビート、または一年生ビート、またはとう立ちを含む、望ましくない作物植物（合わせて「望ましくない植生」とも定義される）を防除する。

【0187】

本発明による多くの適用では、適用量は一般に低く、例えば、０．００１ｇ～１０００ｇのａｉ／ｈａ、好ましくは０．１ｇ～５００ｇのａｉ／ｈａ、特に好ましくは０．５ｇ～２５０ｇのａｉ／ｈａ、さらにより好ましくは１．０ｇ～２００ｇのａｉ／ｈａの範囲である。複数のＡＬＳ阻害剤除草剤の適用を行う場合、その量は適用された全てのＡＬＳ阻害剤除草剤の総量を表す。

【0188】

例えば、（グループ（Ａ）、（Ｂ）および／または（Ｃ）に属する）ＡＬＳ阻害剤除草剤の本発明による組み合わせにより、（グループ（Ａ）、（Ｂ）および／または（Ｃ）に属する）個々のＡＬＳ阻害剤除草剤を使用して達成され得る活性をはるかに、かつ予想外の方法で凌ぐ活性を相乗的に増強することができる。

【0189】

ＡＬＳ阻害剤除草剤の組み合わせについて、好ましい条件を以下に例示する。

【0190】

本発明に従って特に興味深いのは、以下のＡＬＳ阻害剤除草剤の含有量を有する除草組成物の使用である：

【化13-1】

【化13-2】

【化13-3】

【0191】

さらに、本発明に従って使用されるＡＬＳ阻害剤除草剤は、更なる成分、例えば、異なる種類の作用様式の農薬活性化合物および／または作物保護において慣用される配合補助剤および／または添加剤を含むことができ、またはこれらと一緒に併用することもできる。

【0192】

本発明に従って使用されるＡＬＳ阻害剤除草剤またはそのようなＡＬＳ阻害剤除草剤の種々の組み合わせは、さらに種々の農薬活性化合物、例えば、毒性緩和剤、殺菌剤、殺虫剤の群から、または作物保護において慣用される配合補助剤および添加剤の群からのものを含み得る。

【0193】

更なる実施態様において、本発明は、望ましくない植生を防除するための相乗効果を得るために、有効量のＡＬＳ阻害剤除草剤（すなわち、グループ（Ａ）、（Ｂ）および／または（Ｃ）のメンバー）と非ＡＬＳ阻害剤除草剤（すなわち、ＡＬＳ酵素［アセトヒドロキシ酸シンターゼ；ＥＣ ２．２．１．６］の阻害とは異なる作用様式を示す除草剤（グループＤ除草剤））とを使用することに関する。そのような相乗作用は、例えば、１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤（すなわち、グループ（Ａ）、（Ｂ）、および／または（Ｃ）のメンバー）と１つ以上の非ＡＬＳ阻害剤除草剤（グループＤ除草剤）とを、例えば、共配合またはタンクミックスとして一緒に適用する場合に観察され得るが、しかしながら、それらは活性化合物を異なる時期に適用（分割）する場合にも観察され得る。また、ＡＬＳ阻害剤除草剤と非ＡＬＳ阻害剤除草剤とを複数回に分けて適用すること（逐次適用）も可能である。例えば、発芽前適用に続いて発芽後適用が行われるか、または発芽後早期適用に続いて中期もしくは後期発芽後適用が行われる。ここでは、当該組み合わせの除草剤（（Ａ）、（Ｂ）および／または（Ｃ））と（Ｄ）とを共同またはほぼ同時に適用することが好ましい。

【0194】

ＡＬＳ阻害剤除草剤と一緒に適用される適切なパートナー除草剤は、例えば、上記で定義されるようなグループ（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）に属する除草剤とは構造的に異なる次の除草剤であり、好ましくは、その作用が、例えば、アセチルコエンザイムＡカルボキシラーゼ、ＰＳ Ｉ、ＰＳ ＩＩ、ＨＰＰＤＯ、フィトエンデサチュラーゼ、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ、グルタミンシンターゼ、セルロース生合成、５－エノールピルビルシキミ酸－３－リン酸シンテターゼの阻害に基づく除草活性化合物であり、例えば、Weed Research 26, 441-445 (1986)、または“The Pesticide Manual”, 14th edition, The British Crop Protection Council, 2007、または15th edition 2010、または対応する“e-Pesticide Manual”, Version 5 (2010)、いずれの場合も英国作物保護協議会によって発行されている（以降、略して「ＰＭ」ともいう）、およびその中で引用されている文献に記載されている。一般名のリストは、インターネット上の“The Compendium of Pesticide Common Names”でも入手可能である。文献から知られている除草剤（以下、一般名の後ろの括弧内は指標Ｄ１～Ｄ４２６によっても分類される）、これは、グループ（Ａ）、（Ｂ）および／または（Ｃ）のＡＬＳ阻害剤除草剤と組み合わせることができ、本発明に従って使用される活性化合物は、例えば、以下に列挙される活性化合物である：（注：除草剤は、国際標準化機構（ＩＳＯ）に準拠した「一般名」または化学名のいずれかで呼ばれる。必要に応じて慣例的なコード番号を併記し、それぞれの場合において、文脈が別段の指示をしない限り、酸、塩、エステルおよび異性体、例えば立体異性体および光学異性体などの全ての使用形態、特に商業形態を含む。与えられた引用は１つの使用形式のものであり、場合によっては２つ以上の使用形式のものである）：
アセトクロール（＝Ｄ１）、アシベンゾラル（＝Ｄ２）、アシベンゾラル－Ｓ－メチル（＝Ｄ３）、アシフルオルフェン（＝Ｄ４）、アシフルオルフェン－ナトリウム（＝Ｄ５）、アクロニフェン（＝Ｄ６）、アラクロール（＝Ｄ７）、アリドクロール（＝Ｄ８）、アロキシジム（＝Ｄ９）、アロキシジム－ナトリウム（＝Ｄ１０）、アメトリン（＝Ｄ１１）、アミカルバゾン（＝Ｄ１２）、アミドクロール（＝Ｄ１３）、アミノシクロピラクロール（＝Ｄ１４）、アミノピラリド（＝Ｄ１５）、アミトロール（＝Ｄ１６）、スルファミン酸アンモニウム（＝Ｄ１７）、アンシミドール（＝Ｄ１８）、アニロホス（＝Ｄ１９）、アシュラム（＝Ｄ２０）、アトラジン（＝Ｄ２１）、アザフェニジン（＝Ｄ２２）、アジプロトリン（＝Ｄ２３）、ベフルブタミド（＝Ｄ２４）、ベナゾリン（＝Ｄ２５）、ベナゾリン－エチル（＝Ｄ２６）、ベンカルバゾン（＝Ｄ２７）、ベンフルラリン（＝Ｄ２８）、ベンフレセート（＝Ｄ２９）、ベンスリド（＝Ｄ３０）、ベンタゾン（＝Ｄ３１）、ベンズフェンジゾン（＝Ｄ３２）、ベンゾビシクロン（＝Ｄ３３）、ベンゾフェナプ（＝Ｄ３４）、ベンゾフルオル（＝Ｄ３５）、ベンゾイルプロップ（＝Ｄ３６）、ビシクロピロン（＝Ｄ３７）、ビフェノックス（＝Ｄ３８）、ビラナホス（＝Ｄ３９）、ビラナホス－ナトリウム（＝Ｄ４０）、ブロマシル（＝Ｄ４１）、ブロモブチド（＝Ｄ４２）、ブロモフェノキシム（＝Ｄ４３）、ブロモキシニル（＝Ｄ４４）、ブロムロン（＝Ｄ４５）、ブミナホス（＝Ｄ４６）、ブソキシノン（＝Ｄ４７）、ブタクロール（＝Ｄ４８）、ブタフェナシル（＝Ｄ４９）、ブタミホス（＝Ｄ５０）、ブテナクロール（＝Ｄ５１）、ブトラリン（＝Ｄ５２）、ブトロキシジム（＝Ｄ５３）、ブチレート（＝Ｄ５４）、カフェンストロール（＝Ｄ５５）、カルベタミド（＝Ｄ５６）、カルフェントラゾン（＝Ｄ５７）、カルフェントラゾン－エチル（＝Ｄ５８）、クロメトキシフェン（＝Ｄ５９）、クロランベン（＝Ｄ６０）、クロラジホップ（＝Ｄ６１）、クロラジホップ－ブチル（＝Ｄ６２）、クロルブロムロン（＝Ｄ６３）、クロルブファム（＝Ｄ６４）、クロルフェナク（＝Ｄ６５）、クロルフェナク－ナトリウム（＝Ｄ６６）、クロルフェンプロップ（＝Ｄ６７）、クロルフルレノール（＝Ｄ６８）、クロルフルレノール－メチル（＝Ｄ６９）、クロリダゾン（＝Ｄ７０）、クロルメコート－クロリド（＝Ｄ７１）、クロルニトロフェン（＝Ｄ７２）、クロロフタリム（＝Ｄ７３）、クロルタール－ジメチル（＝Ｄ７４）、クロロトルロン（＝Ｄ７５）、シニドン（＝Ｄ７６）、シニドン－エチル（＝Ｄ７７）、シンメチリン（＝Ｄ７８）、クレトジム（＝Ｄ７９）、クロジナホップ（＝Ｄ８０）、クロジナホップ－プロパルギル（＝Ｄ８１）、クロフェンセット（＝Ｄ８２）、クロマゾン（＝Ｄ８３）、クロメプロップ（＝Ｄ８４）、クロプロップ（＝Ｄ８５）、クロピラリド（＝Ｄ８６）、クロランスラム（＝Ｄ８７）、クロランスラム－メチル（＝Ｄ８８）、クミルロン（＝Ｄ８９）、シアナミド（＝Ｄ９０）、シアナジン（＝Ｄ９１）、シクラニリド（＝Ｄ９２）、シクロエート（＝Ｄ９３）、シクロキシジム（＝Ｄ９４）、シクルロン（＝Ｄ９５）、シハロホップ（＝Ｄ９６）、シハロホップ－ブチル（＝Ｄ９７）、シペルコート（＝Ｄ９８）、シプラジン（＝Ｄ９９）、シプラゾール（＝Ｄ１００）、２，４－Ｄ（＝Ｄ１０１）、２，４－ＤＢ（＝Ｄ１０２）、ダイムロン／ダイムロン（daimuron/dymron）（＝Ｄ１０３）、ダラポン（＝Ｄ１０４）、ダミノジド（＝Ｄ１０５）、ダゾメット（＝Ｄ１０６）、ｎ－デカノール（＝Ｄ－１０７）、デスメディファム（＝Ｄ１０８）、デスメトリン（＝Ｄ１０９）、デトシル－ピラゾレート（＝Ｄ１１０）、ジアレート（＝Ｄ１１１）、ジカンバ（＝Ｄ１１２）、ジクロベニル（＝Ｄ１１３）、ジクロルプロップ（＝Ｄ１１４）、ジクロルプロップ－Ｐ（＝Ｄ１１５）、ジクロホップ（＝Ｄ１１６）、ジクロホップ－メチル（＝Ｄ１１７）、ジクロホップ－Ｐ－メチル（＝Ｄ１１８）、ジエタチル（＝Ｄ１１９）、ジエタチル－エチル（＝Ｄ１２０）、ジフェノクスロン（＝Ｄ１２１）、ジフェンゾコート（＝Ｄ１２２）、ジフルフェニカン（＝Ｄ１２３）、ジフルフェンゾピル（＝Ｄ１２４）、ジフルフェンゾピル－ナトリウム（＝Ｄ１２５）、ジメフロン（＝Ｄ１２６）、ジケグラク－ナトリウム（＝Ｄ１２７）、ジメフロン（＝Ｄ１２８）、ジメピペレート（＝Ｄ１２９）、ジメタクロール（＝Ｄ１３０）、ジメタメトリン（＝Ｄ１３１）、ジメテナミド（＝Ｄ１３２）、ジメテナミド－Ｐ（＝Ｄ１３３）、ジメチピン（＝Ｄ１３４）、ジメトラスルフロン（＝Ｄ１３５）、ジニトラミン（＝Ｄ１３６）、ジノセブ（＝Ｄ１３７）、ジノテルブ（＝Ｄ１３８）、ジフェナミド（＝Ｄ１３９）、ジプロペトリン（＝Ｄ１４０）、ジコート（＝Ｄ１４１）、ジコート－ジブロミド（＝Ｄ１４２）、ジチオピル（＝Ｄ１４３）、ジウロン（＝Ｄ１４４）、ＤＮＯＣ（＝Ｄ１４５）、エグリナジン－エチル（＝Ｄ１４６）、エンドタール（＝Ｄ１４７）、ＥＰＴＣ（＝Ｄ１４８）、エスプロカルブ（＝Ｄ１４９）、エタフルラリン（＝Ｄ１５０）、エテホン（＝Ｄ１５１）、エチジムロン（＝Ｄ１５２）、エチオジン（＝Ｄ１５３）、エトフメセート（＝Ｄ１５４）、エトキシフェン（＝Ｄ１５５）、エトキシフェン－エチル（＝Ｄ１５６）、エトベンザニド（＝Ｄ１５７）、Ｆ－５３３１（＝２－クロロ－４－フルオロ－５－［４－（３－フルオロプロピル）－４，５－ジヒドロ－５－オキソ－１Ｈ－テトラゾール－１－イル］－フェニル］－エタンスルホンアミド）（＝Ｄ１５８）、Ｆ－７９６７（＝３－［７－クロロ－５－フルオロ－２－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ベンズイミダゾール－４－イル］－１－メチル－６－（トリフルオロメチル）ピリミジン－２，４（１Ｈ，３Ｈ）－ジオン）（＝Ｄ１５９）、フェノプロップ（＝Ｄ１６０）、フェノキサプロップ（＝Ｄ１６１）、フェノキサプロップ－Ｐ（＝Ｄ１６２）、フェノキサプロップ－エチル（＝Ｄ１６３）、フェノキサプロップ－Ｐ－エチル（＝Ｄ１６４）、フェノキサスルホン（＝Ｄ１６５）、フェントラザミド（＝Ｄ１６６）、フェヌロン（＝Ｄ１６７）、フラムプロップ（＝Ｄ１６８）、フラムプロップ－Ｍ－イソプロピル（＝Ｄ１６９）、フラムプロップ－Ｍ－メチル（＝Ｄ１７０）、フルアジホップ（＝Ｄ１７１）、フルアジホップ－Ｐ（＝Ｄ１７２）、フルアジホップ－ブチル（＝Ｄ１７３）、フルアジホップ－Ｐ－ブチル（＝Ｄ１７４）、フルアゾレート（＝Ｄ１７５）、フルクロラリン（＝Ｄ１７６）、フルフェナセット（チアフルアミド）（＝Ｄ１７７）、フルフェンピル（＝Ｄ１７８）、フルフェンピル－エチル（＝Ｄ１７９）、フルメトラリン（＝Ｄ１８０）、フルミクロラック（＝Ｄ１８１）、フルミクロラック－ペンチル（＝Ｄ１８２）、フルミオキサジン（＝Ｄ１８３）、フルミプロピン（＝Ｄ１８４）、フルオメツロン（＝Ｄ１８５）、フルオロジフェン（＝Ｄ１８６）、フルオログリコフェン（＝Ｄ１８７）、フルオログリコフェン－エチル（＝Ｄ１８８）、フルポキサム（＝Ｄ１８９）、フルプロパシル（＝Ｄ１９０）、フルプロパネート（＝Ｄ１９１）、フルレノール（＝Ｄ１９２）、フルレノール－ブチル（＝Ｄ１９３）、フルリドン（＝Ｄ１９４）、フルロクロリドン（＝Ｄ１９５）、フルロキシピル（＝Ｄ１９６）、フルロキシピル－メプチル（＝Ｄ１９７）、フルプリミドール（＝Ｄ１９８）、フルルタモン（＝Ｄ１９９）、
フルチアセット（＝Ｄ２００）、フルチアセット－メチル（＝Ｄ２０１）、フルチアミド（＝Ｄ２０２）、ホメサフェン（＝２０３）、ホルクロルフェニュロン（＝Ｄ２０４）、ホサミン（＝Ｄ２０５）、フリルオキシフェン（＝Ｄ２０６）、ジベレリン酸（＝Ｄ２０７）、グルホシネート（＝Ｄ２０８）、グルホシネート－アンモニウム（＝Ｄ２０９）、グルホシネート－Ｐ（＝Ｄ２１０）、グルホシネート－Ｐ－アンモニウム（＝Ｄ２１１）、グルホシネート－Ｐ－ナトリウム（＝Ｄ２１２）、グリホサート（＝Ｄ２１３）、グリホサート－イソプロピルアンモニウム（＝Ｄ２１４）、Ｈ－９２０１（＝Ｏ－（２，４－ジメチル－６－ニトロフェニル）－Ｏ－エチル－イソプロピルホスホルアミドチオエート）（＝Ｄ２１５）、ハロサフェン（＝Ｄ２１６）、ハロキシホップ（＝Ｄ２１７）、ハロキシホップ－Ｐ（＝Ｄ２１８）、ハロキシホップ－エトキシエチル（＝Ｄ２１９）、ハロキシホップ－Ｐ－エトキシエチル（＝Ｄ２２０）、ハロキシホップ－メチル（＝Ｄ２２１）、ハロキシホップ－Ｐ－メチル（＝Ｄ２２２）、ヘキサジノン（＝Ｄ２２３）、ＨＷ－０２（＝１－（ジメトキシホスホリル）－エチル（２，４－ジクロルフェノキシ）アセテート）（＝Ｄ２２４）、イナベンフィド（＝Ｄ２２５）、インダノファン（＝Ｄ２２６）、インダジフラム（＝Ｄ２２７）、インドール－３－酢酸（ＩＡＡ）（＝Ｄ２２８）、４－インドール－３－イル酪酸（ＩＢＡ）（＝Ｄ２２９）、イオキシニル（＝Ｄ２３０）、イプフェンカルバゾン（＝Ｄ２３１）、イソカルバミド（＝Ｄ２３２）、イソプロパリン（＝Ｄ２３３）、イソプロツロン（＝Ｄ２３４）、イソウロン（＝Ｄ２３５）、イソキサベン（＝Ｄ２３６）、イソキサクロルトール（＝Ｄ２３７）、イソキサフルトール（＝Ｄ２３８）、イソキサピリホップ（＝Ｄ２３９）、ＫＵＨ－０４３（＝３－（｛［５－（ジフルオロメチル）－１－メチル－３－（トリフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル］メチル｝スルホニル）－５，５－ジメチル－４，５－ジヒドロ－１，２－オキサゾール）（＝Ｄ２４０）、カルブチレート（＝Ｄ２４１）、ケトスピラドックス（＝Ｄ２４２）、ラクトフェン（＝Ｄ２４３）、レナシル（＝Ｄ２４４）、リヌロン（＝Ｄ２４５）、マレイン酸ヒドラジド（＝Ｄ２４６）、ＭＣＰＡ（＝Ｄ２４７）、ＭＣＰＢ（＝Ｄ２４８）、ＭＣＰＢ－メチル、－エチルおよび－ナトリウム（＝Ｄ２４９）、メコプロップ（＝Ｄ２５０）、メコプロップ－ナトリウム（＝Ｄ２５１）、メコプロップ－ブトチル（＝Ｄ２５２）、メコプロップ－Ｐ－ブトチル（＝Ｄ２５３）、メコプロップ－Ｐ－ジメチルアンモニウム（＝Ｄ２５４）、メコプロップ－Ｐ－２－エチルヘキシル（＝Ｄ２５５）、メコプロップ－Ｐ－カリウム（＝Ｄ２５６）、メフェナセット（＝Ｄ２５７）、メフルイジド（＝Ｄ２５８）、メピコート－クロリド（＝Ｄ２５９）、メソトリオン（＝Ｄ２６０）、メタベンズチアズロン（＝Ｄ２６１）、メタム（＝Ｄ２６２）、メタミホップ（＝Ｄ２６３）、メタミトロン（＝Ｄ２６４）、メタザクロール（＝Ｄ２６５）、メタゾール（＝Ｄ２６６）、メチオピルスルフロン（＝Ｄ２６７）、メチオゾリン（＝Ｄ２６８）、メトキシフェノン（＝Ｄ２６９）、メチルジムロン（＝Ｄ２７０）、１－メチルシクロプロペン（＝Ｄ２７１）、メチルイソチオシアネート（＝Ｄ２７２）、メトベンズロン（＝Ｄ２７３）、メトブロムロン（＝Ｄ２７４）、メトラクロール（＝Ｄ２７５）、Ｓ－メトラクロール（＝Ｄ－２７６）、メトクスロン（＝Ｄ２７７）、メトリブジン（＝Ｄ２７８）、モリネート（＝Ｄ２７９）、モナリド（＝Ｄ２８０）、モノカルバミド（＝Ｄ２８１）、モノカルバミド－硫酸二水素酸塩（＝Ｄ２８２）、モノリヌロン（＝Ｄ２８３）、モノスルフロン－エステル（＝Ｄ２８４）、モヌロン（＝Ｄ２８５）、ＭＴ－１２８（＝６－クロロ－Ｎ－［（２Ｅ）－３－クロロプロップ－２－エン－１－イル］－５－メチル－Ｎ－フェニルピリダジン－３－アミン）（＝Ｄ２８６）、ＭＴ－５９５０（＝Ｎ－［３－クロロ－４－（１－メチルエチル）－フェニル］－２－メチルペンタンアミド）（＝Ｄ２８７）、ＮＧＧＣ－０１１（＝Ｄ２８８）、ナプロアニリド（＝Ｄ２８９）、ナプロパミド（＝Ｄ２９０）、ナフタラム（＝Ｄ２９１）、ＮＣ－３１０（＝４－（２，４－ジクロロベンゾイル）－１－メチル－５－ベンジルオキシピラゾール）（＝Ｄ２９２）、ネブロン（＝Ｄ２９３）、ニピラクロフェン（＝Ｄ２９４）、ニトラリン（＝Ｄ２９５）、ニトロフェン（＝Ｄ２９６）、ニトロフェノレート－ナトリウム（異性体混合物）（＝Ｄ２９７）、ニトロフルオルフェン（＝Ｄ２９８）、ノナン酸（＝Ｄ２９９）、ノルフルラゾン（＝Ｄ３００）、オルベンカルブ（＝Ｄ３０１）、オリザリン（＝Ｄ３０２）、オキサジアルギル（＝Ｄ３０３）、オキサジアゾン（＝Ｄ３０４）、オキサジクロメホン（＝Ｄ３０５）、オキシフルオルフェン（＝Ｄ３０６）、パクロブトラゾール（＝Ｄ３０７）、パラコート（＝Ｄ３０８）、パラコート－ジクロリド（＝Ｄ３０９）、ペラルゴン酸（ノナン酸）（＝Ｄ３１０）、ペンジメタリン（＝Ｄ３１１）、ペンドラリン（＝Ｄ３１２）、ペンタノクロール（＝Ｄ３１３）、ペントキサゾン（＝Ｄ３１４）、ペルフルイドン（＝Ｄ３１５）、ペトキサミド（＝Ｄ３１７）、フェニソファム（＝Ｄ３１８）、フェンメディファム（＝Ｄ３１９）、フェンメディファム－エチル（＝Ｄ３２０）、ピクロラム（＝Ｄ３２１）、ピコリナフェン（＝Ｄ３２２）、ピノキサデン（＝Ｄ３２３）、ピペロホス（＝Ｄ３２４）、ピリフェノプ（＝Ｄ３２５）、ピリフェノプ－ブチル（＝Ｄ３２６）、プレチラクロール（＝Ｄ３２７）、プロベナゾール（＝Ｄ３２８）、プロフルアゾール（＝Ｄ３２９）、プロシアジン（＝Ｄ３３０）、プロジアミン（＝Ｄ３３１）、プリフルラリン（＝Ｄ３３２）、プロホキシジム（＝Ｄ３３３）、プロヘキサジオン（＝Ｄ３３４）、プロヘキサジオン－カルシウム（＝Ｄ３３５）、プロヒドロジャスモン（＝Ｄ３３６）、プロメトン（＝Ｄ３３７）、プロメトリン（＝Ｄ３３８）、プロパクロール（＝Ｄ３３９）、プロパニル（＝Ｄ３４０）、プロパキザホップ（＝Ｄ３４１）、プロパジン（＝Ｄ３４２）、プロファム（＝Ｄ３４３）、プロピソクロール（＝Ｄ３４４）、プロピザミド（＝Ｄ３４５）、プロスルファリン（＝Ｄ３４６）、プロスルホカルブ（＝Ｄ３４７）、プリナクロール（＝Ｄ３４８）、ピラクロニル（＝Ｄ３４９）、ピラフルフェン（＝Ｄ３５０）、ピラフルフェン－エチル（＝Ｄ３５１）、ピラスルホトール（＝Ｄ３５２）、ピラゾリネート（ピラゾレート）（＝Ｄ３５３）、ピラゾキシフェン（＝Ｄ３５４）、ピリバムベンズ（＝Ｄ３５５）、ピリブチカルブ（＝Ｄ３５６）、ピリダホール（＝Ｄ３５７）、ピリデート（＝Ｄ３５８）、ピリミノバク（＝Ｄ３５９）、ピリミスルファン（＝Ｄ３６０）、ピロキサスルホン（＝Ｄ３６１）、キンクロラック（＝Ｄ３６２）、キンメラック（＝Ｄ３６３）、キノクラミン（＝Ｄ３６４）、キザロホップ（＝Ｄ３６５）、キザロホップ－エチル（＝Ｄ３６６）、キザロホップ－Ｐ（＝Ｄ３６７）、キザロホップ－Ｐ－エチル（＝Ｄ３６８）、キザロホップ－Ｐ－テフリル（＝Ｄ３６９）、サフルフェナシル（＝Ｄ３７０）、セクブメトン（＝Ｄ３７１）、セトキシジム（＝Ｄ３７２）、シデュロン（＝Ｄ３７３）、シマジン（＝Ｄ３７４）、シメトリン（＝Ｄ３７５）、ＳＮ－１０６２７９（＝メチル－（２Ｒ）－２－（｛７－［２－クロロ－４－（トリフルオロメチル）フェノキシ］－２－ナフチル｝オキシ）－プロパノエート）（＝Ｄ３７６）、スルコトリオン（＝Ｄ３７７）、スルファレート（ＣＤＥＣ）（＝Ｄ３７８）、スルフェントラゾン（＝Ｄ３７９）、スルホセート（グリホサート－トリメシウム）（＝Ｄ３８０）、ＳＹＮ－５２３（＝Ｄ３８１）、ＳＹＰ－２４９（＝１－エトキシ－３－メチル－１－オキソブタ－３－エン－２－イル－５－［２－クロロ－４－（トリフルオロメチル）フェノキシ］－２－ニトロベンゾエート）（＝Ｄ３８２）、テブタム（＝Ｄ３８３）、テブチウロン（＝Ｄ３８４）、テクナゼン（＝Ｄ３８５）、テフリルトリオン（＝Ｄ３８６）、テンボトリオン（＝Ｄ３８７）、テプラロキシジム（＝Ｄ３８８）、テルバシル（＝Ｄ３８９）、テルブカルブ（＝Ｄ３９０）、テルブクロール（＝Ｄ３９１）、テルブメトン（＝Ｄ３９２）、テルブチラジン（＝Ｄ３９３）、テルブトリン（＝Ｄ３９４）、テニルクロール（＝Ｄ３９５）、チアフルアミド（＝Ｄ３９６）、チアザフルロン（＝Ｄ３９７）、チアゾピル（＝Ｄ３９８）、チジアジミン（＝Ｄ３９９）、チジアズロン（＝Ｄ４００）、チオベンカルブ（＝Ｄ４０１）、チオカルバジル（＝Ｄ４０２）、トプラメゾン（＝Ｄ４０３）、トラルコキシジム（＝Ｄ４０４）、トリアレート（＝Ｄ４０５）、トリアジフラム（＝Ｄ４０６）、トリアゾフェンアミド（＝Ｄ４０７）、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）（＝Ｄ４０８）、トリクロピル（＝Ｄ４０９）、トリジファン（＝Ｄ４１０））、トリエタジン（＝Ｄ４１１）、トリフルラリン（＝Ｄ４１２）、トリメツロン（＝Ｄ４１３）、トリネキサパック（＝Ｄ４１４）、トリネキサパック－エチル（＝Ｄ４１５）、チトデフ（tsitodef）（＝Ｄ４１６）、ウニコナゾール（＝Ｄ４１７）、ウニコナゾール－Ｐ（＝Ｄ４１８）、ベルノレート（＝Ｄ４１９）、ＺＪ－０８６２（＝３，４－ジクロロ－Ｎ－｛２－［（４，６－ジメトキシピリミジン－２－イル）オキシ］ベンジル｝アニリン）（＝Ｄ４２０）、およびそれぞれそれらの化学構造によって定義される以下の化合物；

【化14】

【0195】

好ましくは、上記で定義されるようなグループ（Ａ）、（Ｂ）、および（Ｃ）に属するＡＬＳ阻害剤除草剤とは構造的におよびその作用様式によって異なり、かつ本発明に従って適用される更なる除草剤は、以下のグループに属するものである：クロリダゾン（＝Ｄ７０）、クレトジム（＝Ｄ７９）、クロジナホップ（＝Ｄ８０）、クロジナホップ－プロパルギル（＝Ｄ８１）、クロピラリド（＝Ｄ８６）、シクロキシジム（＝Ｄ９４）、デスメディファム（＝Ｄ１０８）、ジメテナミド（＝Ｄ１３２）、ジメテナミド－Ｐ（＝Ｄ１３３）、エトフメセート（＝Ｄ１５４）、フェノキサプロップ（＝Ｄ１６１）、フェノキサプロップ－Ｐ（＝Ｄ１６２）、フェノキサプロップ－エチル（＝Ｄ１６３）、フェノキサプロップ－Ｐ－エチル（＝Ｄ１６４）、フルアジホップ（＝Ｄ１７１）、フルアジホップ－Ｐ（＝Ｄ１７２）、フルアジホップ－ブチル（＝Ｄ１７３）、フルアジホップ－Ｐ－ブチル（＝Ｄ１７４）、グルホシネート（＝Ｄ２０８）、グルホシネート－アンモニウム（＝Ｄ２０９）、グルホシネート－Ｐ（＝Ｄ２１０）、グルホシネート－Ｐ－アンモニウム（＝Ｄ２１１）、グルホシネート－Ｐ－ナトリウム（＝Ｄ２１２）、グリホサート（＝Ｄ２１３）、グリホサート－イソプロピルアンモニウム（＝Ｄ２１４）、ハロキシホップ（＝Ｄ２１７）、ハロキシホップ－Ｐ（＝Ｄ２１８））、ハロキシホップ－エトキシエチル（＝Ｄ２１９）、ハロキシホップ－Ｐ－エトキシエチル（＝Ｄ２２０）、ハロキシホップ－メチル（＝Ｄ２２１）、ハロキシホップ－Ｐ－メチル（＝Ｄ２２２）、レナシル（＝Ｄ２４４）、メタミトロン（＝Ｄ２６４）、フェンメディファム（＝Ｄ３１９）、フェンメディファム－エチル（＝Ｄ３２０）、プロパキザホップ（＝Ｄ３４１）、キンメラック（＝Ｄ３６３）、キザロホップ（＝Ｄ３６５）、キザロホップ－エチル（＝Ｄ３６６）、キザロホップ－Ｐ（＝Ｄ３６７）、キザロホップ－Ｐ－エチル（＝Ｄ３６８）、キザロホップ－Ｐ－テフリル（＝Ｄ３６９）、セトキシジム（＝Ｄ３７２）。

【0196】

さらにより好ましくは、上記で定義されるようなグループ（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）に属するＡＬＳ阻害剤除草剤とは異なり、かつグループ（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）に属するＡＬＳ阻害剤除草剤と関連して本発明に従って適用される更なる除草剤は、以下の群に属するものである：デスメディファム（＝Ｄ１０８）、エトフメセート（＝Ｄ１５４）、グルホシネート（＝Ｄ２０８）、グルホシネート－アンモニウム（＝Ｄ２０９）、グルホシネート－Ｐ（＝Ｄ２１０）、グルホシネート－Ｐ－アンモニウム（＝Ｄ２１１）、グルホシネート－Ｐ－ナトリウム（＝Ｄ２１２）、グリホサート（＝Ｄ２１３）、グリホサート－イソプロピルアンモニウム（＝Ｄ２１４）、レナシル（＝Ｄ２４４）、メタミトロン（＝Ｄ２６４）、フェンメディファム（＝Ｄ３１９）、フェンメディファム－エチル（＝Ｄ３２０）。

【0197】

本発明に従って使用するために非常に興味深い、ＡＬＳ阻害剤除草剤と非ＡＬＳ阻害剤除草剤とを含む混合物、１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤（グループ（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の１つ以上に属する化合物）と非ＡＬＳ阻害剤除草剤（グループ（Ｄ）メンバー；上記で定義したとおり）との混合物を含む組成物は、以下のとおりである：

【化15-1】

【化15-2】

【0198】

ある実施形態において、非ＡＬＳ阻害剤除草剤は、ＡＬＳ阻害剤除草剤と組み合わせて適用され得る。ある実施形態において、それぞれの除草剤の適用は、（ｉ）共同もしくは同時に行われるか、または（ｉｉ）異なる時間および／または複数の部分で行われ（逐次適用）、発芽前適用に続いて発芽後適用が行われるか、または発芽後早期適用に続いて中期もしくは後期発芽後適用が行われる。ある実施形態において、除草剤は、クロリダゾン、クレトジム、クロジナホップ、クロジナホップ－プロパルギル、クロピラリド、シクロキシジム、デスメディファム、ジメテナミド、ジメテナミド－Ｐ、エトフメセート、フェノキサプロップ、フェノキサプロップ－Ｐ、フェノキサプロップ－エチル、フェノキサプロップ－Ｐ－エチル、フルアジホップ、フルアジホップ－Ｐ、フルアジホップ－ブチル、フルアジホップ－Ｐ－ブチル、グルホシネート、グルホシネート－アンモニウム、グルホシネート－Ｐ、グルホシネート－Ｐ－アンモニウム、グルホシネート－Ｐ－ナトリウム、ハロキシホップ、ハロキシホップ－Ｐ、ハロキシホップ－エトキシエチル、ハロキシホップ－Ｐ－エトキシエチル、ハロキシホップ－メチル、ハロキシホップ－Ｐ－メチル、レナシル、メタミトロン、フェンメディファム、フェンメディファム－エチル、プロパキザホップ、キンメラック、キザロホップ、キザロホップ－エチル、キザロホップ－Ｐ、キザロホップ－Ｐ－エチル、キザロホップ－Ｐ－テフリル、セトキシジムから選択される。

【0199】

ＡＬＳ阻害剤除草剤の適用は、根茎（rhizomes）、根茎（root stocks）および他の多年生器官から芽を出し、防除が難しい多年生雑草にも効率的に作用する。ここで、物質は、例えば、播種前方法、発芽前方法または発芽後方法によって、例えば、共同または別々に適用することができる。特に、発芽した有害植物に対しては、例えば、発芽後方法による適用が好ましい。

【0200】

特定の種に限定して列挙されることなく、ＡＬＳ阻害剤除草剤によって防除され得る単子葉および双子葉の雑草叢の幾つかの代表的な具体例を挙げることができる。

【0201】

本発明による適用が効率的に作用する雑草種の例は、単子葉雑草種の中から、カラムスギ属（Ａｖｅｎａ ｓｐｐ．）、スズメノテッポウ属（Ａｌｏｐｅｃｕｒｕｓ ｓｐｐ．）、セイヨウヌカボ属（Ａｐｅｒａ ｓｐｐ．）、ブラキリア属（Ｂｒａｃｈｉａｒｉａ ｓｐｐ．）、スズメノチャヒキ属（Ｂｒｏｍｕｓ ｓｐｐ．）、メヒシバ属（Ｄｉｇｉｔａｒｉａ ｓｐｐ．）、ドクムギ属（Ｌｏｌｉｕｍ ｓｐｐ．）、ノビエ属（Ｅｃｈｉｎｏｃｈｌｏａ ｓｐｐ．）、パニカム属（Ｐａｎｉｃｕｍ ｓｐｐ．）、クサヨシ属（Ｐｈａｌａｒｉｓ ｓｐｐ．）、イチゴツナギ属（Ｐｏａ ｓｐｐ．）、エノコログサ属（Ｓｅｔａｒｉａ ｓｐｐ．）、およびまた一年草群からのカヤツリグサ（Ｃｙｐｅｒｕｓ）種、多年生種の中では、カモジグサ（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ）種、ギョウギシバ（Ｃｙｎｏｄｏｎ）種、チガヤ（Ｉｍｐｅｒａｔａ）種およびソルガム（Ｓｏｒｇｈｕｍ）種、およびまた多年生カヤツリグサ種である。

【0202】

双子葉雑草の場合、その作用スペクトルは、例えば、アブチロン属（Ａｂｕｔｉｌｏｎ ｓｐｐ．）、アマランサス属（Ａｍａｒａｎｔｈｕｓ ｓｐｐ．）、アカザ属（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍ ｓｐｐ．）、キク属（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｓｐｐ．）、ヤエムグラ属（Ｇａｌｉｕｍ ｓｐｐ．）、サツマイモ属（Ｉｐｏｍｏｅａ ｓｐｐ．）、コキア属（Ｋｏｃｈｉａ ｓｐｐ．）、オドリコソウ属（Ｌａｍｉｕｍ ｓｐｐ．）、カミツレ属（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ ｓｐｐ．）、アサガオ属（Ｐｈａｒｂｉｔｉｓ ｓｐｐ．）、タデ属（Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ ｓｐｐ．）、シダ属（Ｓｉｄａ ｓｐｐ．）、シロガラシ属（Ｓｉｎａｐｉｓ ｓｐｐ．）、ナス属（Ｓｏｌａｎｕｍ ｓｐｐ．）、ハコベ属（Ｓｔｅｌｌａｒｉａ ｓｐｐ．）、ベロニカ属（Ｖｅｒｏｎｉｃａ ｓｐｐ）、およびスミレ属（Ｖｉｏｌａ ｓｐｐ．）、オナモミ属（Ｘａｎｔｈｉｕｍ ｓｐｐ．）、ならびに一年生雑草の場合にはセイヨウヒルガオ属（Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌｕｓ）、アザミ属（Ｃｉｒｓｉｕｍ）、スイバ属（Ｒｕｍｅｘ）およびヨモギ属（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ）などの属に及ぶ。

【0203】

本明細書に記載される除草剤は、例えば雑草ビート（または一年生ビート）を防除するためにも使用することができる。栽培されるベータ・ブルガリスは二年草で、これは一年目に貯蔵根および葉のロゼットを形成する。シュートの伸長（抽だい）および花の形成は低温期間の後に始まるが、野生型フダンソウ（Ｂ．ｖｕｌｇａｒｉｓ ｓｓｐ．ｍａｒｉｔｉｍａ）属の多くの野生ビートは、Ｂ遺伝子座に抽だい遺伝子Ｂが存在することに起因して、一年草の生育習性を示す。抽だい遺伝子（Ｂ遺伝子）はテンサイにおける一年生習性の決定に関与している。ベータ種における年次性は、単因子性かつ優性形質であると考えられている。優性Ｂ対立遺伝子を保有する植物は、春化とは無関係に幼若期から生殖期に切り替わることができ、これとは対照的に、ｂ対立遺伝子を保有する二年草の植物は、抽だいとそれに続く開花のために春化が必ず必要である。Ｂ遺伝子座の優性対立遺伝子は野生のビートに豊富に存在し、劣性対立遺伝子を保有する二年草の品種には通常不可欠な寒冷要件なしに、長日下で抽だいを引き起こす。本明細書で使用される「Ｂ遺伝子」とは、テンサイなどのベータ・ブルガリスにおける一年生習性（早期抽だい）の決定に関与する遺伝子を指す。優性対立遺伝子Ｂを保有する植物は、春化とは無関係に幼若期から生殖期に切り替わることができ、すなわち、低温に事前にさらすことなくシュートの伸長とそれに続く開花を行うことができる。

【0204】

一態様において、本発明は、ベータ・ブルガリス生育地域などにおける望ましくない植生を防除するための、またはベータ・ブルガリス生育地域の収量を維持もしくは増加させるための方法であって、以下のステップ：
ａ）本明細書の他の箇所に記載されるように、特に３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有するＡＬＳタンパク質を含む、本発明によるベータ・ブルガリス植物を植え付けるか、またはベータ・ブルガリス種子を播種するステップ；
ｂ）生育中の植物に、好ましくは、望ましくない植生の生育を阻害するのに十分な量で、より好ましくは、望ましくない植生を枯死させるのに十分な量で、１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤を適用するステップ；および
ｃ）任意選択的に、生育期中にステップｂ）を繰り返すステップ
を含む、方法に関する。

【0205】

関連する態様において、本発明は、本明細書の他の箇所で定義されるように、ベータ・ブルガリス生育地域などにおける望ましくない植生を防除するための、またはベータ・ブルガリス生育地域における収量を維持もしくは増加させるための、１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤の使用であって、ベータ・ブルガリス植物が、本明細書の他の箇所で記載されるような本発明によるものであり、特に３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有するＡＬＳタンパク質を含む。

【0206】

ビートルート（またはルートビート）の収量が維持または増加されることが特に好ましい。

【0207】

ある実施形態において、望ましくない植生を防除するための方法は、本明細書に記載されるように、とう立ち（bolters）、雑草ビート、または一年生ビートを防除するための方法を含み、ベータ・ブルガリス生育地域、好ましくはベータ・ブルガリス・サブスプ・ブルガリス生育地域、特にＢｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ ｖａｒ．ａｌｔｉｓｓｉｍａ生育地域のとう立ち、雑草ビート、または一年生ビートなどの望ましくない植生を防除するための方法に関し得る。ある実施形態において、本明細書に記載されるように、とう立ち、雑草ビート、または一年生ビートなどの望ましくない植生を防除するための方法は、二年草のベータ・ブルガリス生育地域、好ましくは二年草のベータ・ブルガリス・サブスプ・ブルガリス生育地域、特に二年草のＢｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ ｖａｒ．ａｌｔｉｓｓｉｍａ生育地域のとう立ち、雑草ビート、または一年生ビートなどの望ましくない植生を防除するための方法に関する。

【0208】

ある実施形態において、本明細書に記載される使用は、ベータ・ブルガリス生育地域、好ましくはベータ・ブルガリス・サブスプ・ブルガリス生育地域、特にＢｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ ｖａｒ．ａｌｔｉｓｓｉｍａ生育地域における使用に関する。ある実施形態において、本明細書に記載される使用は、二年草のベータ・ブルガリス生育地域、好ましくは二年草のベータ・ブルガリス・サブスプ・ブルガリス生育地域、特に二年草Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ ｖａｒ．ａｌｔｉｓｓｉｍａ生育地域における使用に関する。

【0209】

「二年草（biennial）」または「隔年草（biannual）」のベータ・ブルガリスは、生物学的なライフサイクルを完了するのに２年かかるベータ・ブルガリス植物を指す。「一年草」のベータ・ブルガリスとは、１年以内に発芽し、開花し、枯死するベータ・ブルガリス植物を指す。「一年草のベータ・ブルガリス」とは、Ｂ遺伝子座の優性対立遺伝子Ｂをヘテロ接合体またはホモ接合体の状態で含むベータ・ブルガリス植物を指す。「二年草のベータ・ブルガリス」とは、Ｂ遺伝子座の劣性対立遺伝子ｂをホモ接合状態で含むベータ・ブルガリス植物を指す。

【0210】

「抽だい」とは、植生ロゼット期から花序または生殖成長期への移行、特にシュート形成への移行を指す。抽だい（茎の伸長）は、植生から生殖生育への移行において、はっきりと目に見える最初のステップである。抽だいは、生育１年目の間に（望ましくない）シュートが出ることを特徴とすることがあり、これは収穫および加工に不利であるだけでなく、作物の収穫量も減少させる。たしかに、例えばテンサイの場合、種子または果実ではなく、むしろ植物の地下部分である貯蔵根が使用され、根に貯蔵されたエネルギーは、植物のとう立ちおよび開花の間に消費されてしまうことから、ベータ・ブルガリス植物の抽だいおよび開花は望ましくない。

【0211】

本明細書で使用される場合、用語「抽だい」は、生育期、特にベータ・ブルガリス植物が植え付けられるか、または播種されるのと同じ年に、好ましくはビートが収穫される時期または収穫される必要がある時期の前に、抽だいするベータ・ブルガリス植物を指す。ある実施形態において、とう立ちは一年生のベータ・ブルガリス植物である。ある実施形態において、とう立ちは雑草ビートである。ある実施形態において、とう立ちはシービート（すなわち、ベータ・ブルガリス・サブスプ・マリティマ（Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｍａｒｉｔｉｍａ）である。ある実施形態において、とう立ちは、ベータ・ブルガリス・サブスプ・ブルガリスではない。ある実施形態において、とう立ちは、Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ ｖａｒ．ａｌｔｉｓｓｉｍａではない。ある実施形態において、とう立ちは、優性抽だい遺伝子（Ｂ遺伝子）を含む。本明細書で使用される場合、用語「雑草ビート」は、ビート生育地域における意図された栽培ビート植物とは対照的に、望ましくないビート植物を指す。雑草ビートは、典型的には野生のビートである。雑草ビートは、好ましくは一年生ビートであり、任意選択的にベータ・ブルガリス・サブスプ・マリティマである。

【0212】

本明細書で使用される場合、とう立ちまたは望ましくない植物もしくは植生などの望ましくない植生を防除するという文脈における「防除する」には、とう立ち、雑草ビートもしくは一年生ビートまたは望ましくない植物の生育を阻害もしくは防止すること、または雑草ビートもしくは一年生ビートの抽だいを阻害すること、または少なくとも雑草ビートもしくは一年生ビートの種子生産を阻害することが含まれる。「防除する」には、好ましくは抽だいが起こる前に、または少なくとも抽だい、雑草ビート、もしくは一年生ビートの種子生産の前に、抽だい、雑草ビート、もしくは一年生ビート、または望ましくない植物を枯死させることも含まれ得る。「防除する」には、好ましくは抽だいが起こる前に、または少なくとも抽だい、雑草ビート、もしくは一年生ビートの種子生産の前に、ビート生育地域における抽だい、雑草ビート、もしくは一年生ビート、または望ましくない植物の量を減少させることも含まれ得る。ある実施形態における抽だい植物または望ましくない植物などを防除することとは、抽だいまたは望ましくない植物などの量の少なくとも５０％の減少、または抽だい植物または望ましくない植物などのバイオマスの少なくとも５０％の減少、例えば、好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、例えば少なくとも８０％または少なくとも９０％の減少を指す。

【0213】

本明細書で使用される場合、「望ましくない植物」または「望ましくない植生」とは、望ましくない場所に生育する全ての植物を意味すると理解される。これは、例えば、有害な植物（例えば、単子葉もしくは双子葉の雑草または望ましくない作物植物）であってもよい。

【0214】

本明細書で使用される場合、「ベータ・ブルガリス生育地域」とは、ビートルートの収穫または種子の収穫などの収穫を目的として、ベータ・ブルガリス植物が栽培される（すなわち、意図的に植え付けられるか、または播種される）農業地域を指す。

【0215】

本明細書に記載されるような本発明による方法および使用は、ある態様において、ベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分（すなわち、例えば雑草ビートとは対照的に、栽培されたベータ・ブルガリス植物）の収量を増加させるためのものであってもよい。収量の増加は、例えば、（栽培された）ベータ・ブルガリスの量の増加、または（栽培された）ベータ・ブルガリスのバイオマスの増加、例えば、収穫されたまたは収穫可能な植物の一部分、例えばビートルートのバイオマスの量の増加である。収量の増加はまた、例えばテンサイの場合、全体的な糖量または含量の増加（例えば、１ヘクタール当たりの糖収量の増加）であってもよい。

【0216】

本明細書で使用される場合、用語「生育期」は、一般に、ベータ・ブルガリス植物または種子を植え付けるか、または播種してからベータ・ブルガリス植物、特にビートルートを収穫するまでの間の期間を指す。通常、生育期は４月～１０月／１１月である。しかしながら、当業者であれば、例えば気候もしくは気象条件または地質学的条件に依存して生育期が長くなったり短くなったりする場合があることを理解するであろう。さらに、例えば冬ビートまたは春ビートの生産などにおいて、生育期がずれることがあることも理解されるであろう。

【0217】

ある態様において、本明細書に記載されるような除草剤は、本明細書に記載されるような本発明による方法および使用において、とう立ち、雑草ビート、または一年生ビートなどの望ましくない植生を防除（例えば、枯死、生育の阻害、開花の防止または遅延など）するのに十分な用量で適用される。ある実施形態において、そのような用量は、製造業者によって推奨されるとおりである。この用量は、好ましくは単回適用量を指す。生育期中に１回を超える適用、例えば２回または３回の適用などが必要な場合があることは理解されるであろう。そのような後続の適用の用量は、同じであってもよいし、または最初の適用の用量とは異なっていてもよい。

【0218】

ある実施形態において、本発明による植物もしくは植物の一部分は、Ｄ３７１突然変異に加えて、ＡＬＳにおける１つ以上の突然変異を含む。ある実施形態において、本発明による植物もしくは植物の一部分は、Ｄ３７１突然変異に代わるＡＬＳにおける１つ以上の突然変異を含む。

【0219】

ある実施形態において、植物もしくは植物の一部分は、以下から選択される１つ以上の突然変異を有するＡＬＳを含む：１１３位にアラニン（Ａ）とは異なるアミノ酸、１８８位にプロリン（Ｐ）とは異なるアミノ酸、１９６位にアラニン（Ａ）とは異なるアミノ酸、３７２位にアルギニン（Ｒ）とは異なるアミノ酸、５６９位にトリプトファン（Ｗ）とは異なるアミノ酸、６４８位にセリン（Ｓ）とは異なるアミノ酸、６４９位にグリシン（Ｇ）とは異なるアミノ酸。ある実施形態において、植物もしくは植物の一部分は、以下から選択される１つ以上の突然変異を有する突然変異型ＡＬＳをコードするポリ核酸を含む：１１３位にアラニン（Ａ）とは異なるアミノ酸、１８８位にプロリン（Ｐ）とは異なるアミノ酸、１９６位にアラニン（Ａ）とは異なるアミノ酸、３７２位にアルギニン（Ｒ）とは異なるアミノ酸、５６９位にトリプトファン（Ｗ）とは異なるアミノ酸、６４８位にセリン（Ｓ）とは異なるアミノ酸、６４９位にグリシン（Ｇ）とは異なるアミノ酸。ある実施形態において、植物もしくは植物の一部分は、以下から選択される１つ以上の突然変異を有するＡＬＳタンパク質をコードする内因性ＡＬＳ対立遺伝子を含む：１１３位にアラニン（Ａ）とは異なるアミノ酸、１８８位にプロリン（Ｐ）とは異なるアミノ酸、１９６位にアラニン（Ａ）とは異なるアミノ酸、３７２位にアルギニン（Ｒ）とは異なるアミノ酸、５６９位にトリプトファン（Ｗ）とは異なるアミノ酸、６４８位にセリン（Ｓ）とは異なるアミノ酸、６４９位にグリシン（Ｇ）とは異なるアミノ酸。アミノ酸置換は、本明細書の他の箇所で定義されるとおりである。特定の実施形態において、突然変異は保存的アミノ酸置換である。

【0220】

ある実施形態において、本発明による植物もしくは植物の一部分は、５６９位にトリプトファンとは異なるアミノ酸、例えばアラニン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、バリンまたはアルギニン、好ましくはロイシンを有するＡＬＳタンパク質（または（内因性）ＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸、またはＡＬＳタンパク質をコードする内因性ＡＬＳ対立遺伝）を含む。

【0221】

ある実施形態において、本発明による植物もしくは植物の一部分は、３７１位にアスパラギン酸、好ましくはグルタミン酸とは異なるアミノ酸と、５６９位にトリプトファン、好ましくはロイシンとは異なるアミノ酸を有するＡＬＳタンパク質（または（内因性）ＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸、またはＡＬＳタンパク質をコードする内因性ＡＬＳ対立遺伝子）を含む。

【0222】

これらの追加の突然変異は、同じ対立遺伝子上に存在してもよいし、異なる対立遺伝子上に存在してもよい（すなわち、二重突然変異体ＡＬＳまたは２つの別々の単一突然変異体ＡＬＳ）。

【0223】

ある実施形態において、本発明による植物もしくは植物の一部分は、ＡＬＳ以外の他の遺伝子における１つ以上の突然変異、特に除草剤抵抗性を付与する他の遺伝子における変異を含む。

【0224】

グリホサートは、芳香族アミノ酸であるフェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンの合成を阻害することが知られている唯一の除草剤であるため、ユニークな除草剤である。これらの３つのアミノ酸を合成できない植物は生命力がない。芳香族アミノ酸につながる生合成経路の影響を受ける酵素は５－エノールピルビルシキミ酸－３－リン酸シンターゼ（ＥＰＳＰＳ）であり、これはシキミ酸－３－リン酸（Ｓ３Ｐ）とホスホエノールピルビン酸（ＰＥＰ）との反応を触媒して５－エノールピルビルシキミ酸－３－リン酸（ＥＰＳＰ）を形成する。グリホサートはＰＥＰと構造が似ており、ＥＰＳＰＳに結合し、酵素の反応を競合的に阻害する。グリホサートはＥＰＳＰＳに作用する唯一の除草剤として知られている。芳香族アミノ酸の合成を阻害すると、多かれ少なかれ直ちに生育の停止が引き起こされ、最終的には適用後数日以内に植物が枯死する。したがって、グリホサートは一般に非選択的除草剤であり、接触したあらゆる生きた植物組織に深刻なダメージを与えるか、または枯死させる。しかしながら、それはテンサイ、トウモロコシ、ダイズ、綿花、およびカノーラを含む、グリホサート抵抗性作物に選択的に使用することができる。

【0225】

ある実施形態において、野生型ベータ・ブルガリスｅｐｓｐシンターゼは、ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿０１０６９２２２２．１で提供されるようなアミノ酸配列を有する。ある実施形態において、野生型またはネイティブベータ・ブルガリスｅｐｓｐシンターゼは、ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿０１０６９２２２２．１の配列と、好ましくは全長にわたって、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、好ましくはｅｐｓｐシンターゼ活性を有し、ただし、１７９位のアミノ酸残基はプロリンであり、任意選択的に１７５位のアミノ酸残基はスレオニンである。

【0226】

ある実施形態において、野生型ベータ・ブルガリスｅｐｓｐシンターゼ遺伝子は、ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿０１０６９２２２２．１で提供されるようなアミノ酸配列をコードする配列を有する。ある実施形態において、野生型またはネイティブベータ・ブルガリスｅｐｓｐシンターゼ遺伝子は、ＮＣＢＩ参照配列ＸＰ＿０１０６９２２２２．１の配列と、好ましくは全長にわたって、少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする配列を有し、好ましくはｅｐｓｐシンターゼ活性を有し、ただし、１７９位のアミノ酸残基はプロリンであり、任意選択的に１７５位のアミノ酸残基はスレオニンである。

【0227】

好ましくは、本明細書で使用される場合、アミノ酸残基位置がｅｐｓｐシンターゼについて言及される場合、番号付けは参照配列ＸＰ＿０１０６９２２２２．１のアミノ酸位に対応する。好ましい実施形態において、突然変異型ＥＰＳＰＳは、アミノ酸位１７９における突然変異、特に、Ｐ１７９Ｓ突然変異などの、１７９位がプロリンでない突然変異を含む。好ましい実施形態において、突然変異型ＥＰＳＰＳは、アミノ酸位１７５における突然変異、特に、Ｔ１７５Ｉ突然変異などの、１７５位がスレオニンではない突然変異を含む。ある実施形態において、両方の突然変異がＥＰＳＰＳに存在する。両方の突然変異はグリホサート抵抗性を付与する。

【0228】

ある実施形態において、本発明の植物もしくは植物の一部分は、好ましくは、（アミノ酸位３７１、または本明細書で言及される他のアミノ酸位のいずれかに突然変異を含んでいることは別として）内因性であるＡＬＳ遺伝子に関して非トランスジェニックである。もちろん、本発明は、他の外来遺伝子を遺伝子工学または交雑などの従来の方法のいずれかによって植物に導入できることを排除するものではない。前述の遺伝子は、除草剤耐性を付与する遺伝子、好ましくはＡＬＳ阻害剤除草剤耐性とは異なる除草剤耐性を付与する遺伝子、収量を改善する遺伝子、生物有機体に対する抵抗性を改善する遺伝子、および／または内容改変に関する遺伝子であり得る。

【0229】

ここでの用語「トランスジェニック」は、非内因性核酸配列の導入によって遺伝的に改変されたことを意味する。典型的には、種特異的な核酸配列は、ある形態、配置または量で細胞内に、その核酸配列が細胞内で天然に存在しない場所に導入される。本発明によるベータ・ブルガリス植物は、好ましくは突然変異型ＡＬＳシンターゼに関して非トランスジェニックであるが、そのようなベータ・ブルガリス植物は他の形質に関してトランスジェニックであってもよいことが理解されるであろう。

【0230】

ある態様において、本発明は、本明細書の他の箇所に記載されるような突然変異型ＡＬＳタンパク質をコードする（単離された）ポリ核酸に関する。ある実施形態において、（単離された）ポリ核酸は、配列番号３に記載される配列を有するＡＬＳタンパク質と、好ましくはその全長にわたって、少なくとも８０％同一、好ましくは少なくとも９０％同一、より好ましくは少なくとも９５％同一、例えば少なくとも９８％同一であるＡＬＳタンパク質をコードし、ただし、３７１位のアミノ酸はアスパラギン酸ではない。ある実施形態において、（単離された）ポリ核酸は、配列番号１に記載される配列（すなわち、突然変異型ＡＬＳ遺伝子）と、好ましくはその全長にわたって、少なくとも８０％同一、好ましくは少なくとも９０％同一、より好ましくは少なくとも９５％同一、例えば少なくとも９８％同一であり、ただし、３７１位のＡＬＳアミノ酸に対応するコドンはアスパラギン酸をコードしない。ある実施形態において、（単離された）ポリ核酸は、配列番号２に記載される配列（すなわち、突然変異型ＡＬＳ ｃＤＮＡまたはコード配列）と、好ましくはその全長にわたって、少なくとも８０％同一、好ましくは少なくとも９０％同一、より好ましくは少なくとも９５％同一、例えば少なくとも９８％同一であり、ただし、３７１位のＡＬＳアミノ酸に対応するコドンはアスパラギン酸をコードしない。好ましくは、ＡＬＳタンパク質は、本明細書の他の箇所に記載されるような、ＡＬＳ（酵素）活性を有する。ある実施形態において、３７１位のアミノ酸はグルタミン酸である。ある実施形態において、ＡＬＳタンパク質は、配列番号３に記載されるような配列を有する。ある態様において、本発明は、そのようなポリ核酸を含むベータ・ブルガリス植物もしくはその一部分に関する。好ましい実施形態において、ベータ・ブルガリス植物もしくはその一部分は、その内因性遺伝子座に、好ましくはその内因性プロモーターの制御下に、そのようなポリ核酸を含む。したがって、ある実施形態において、本発明は、そのようなポリ核酸が内因性ＡＬＳプロモーターに作動可能に連結されたベータ・ブルガリス植物もしくはその一部分に関する。ポリ核酸はＡＬＳ ｃＤＮＡに対応してもよいし、ＡＬＳ遺伝子配列に対応してもよいことが理解されるであろう。

【0231】

ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、５００００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、４００００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、３００００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、２５０００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、２００００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、１５０００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、１００００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、５０００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、少なくとも１００個のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、少なくとも１００個のヌクレオチドかつ５００００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、少なくとも１００個のヌクレオチドかつ４００００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、少なくとも１００ヌクレオチドかつ３００００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、少なくとも１００個のヌクレオチドかつ２５０００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、少なくとも１００個のヌクレオチドかつ２００００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、少なくとも１００個のヌクレオチドかつ１５０００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、少なくとも１００個のヌクレオチドかつ１００００個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、本明細書に記載されるような核酸分子は、少なくとも１００個のヌクレオチドおよび５０００個未満のヌクレオチドを含む。

【0232】

一態様において、本発明は、本明細書で言及されるポリ核酸を含むベクターに関する。ベクターは、原核生物ベクターまたは真核生物ベクターなどの、当該技術分野で公知の任意のベクターであり得る。ある実施形態において、ポリ核酸は、当該技術分野で公知のように、プロモーターなどのベクター中の１つ以上の調節配列に作動可能に連結される。ある実施形態において、プロモーターは植物プロモーターである。ある実施形態において、プロモーターは、構成的プロモーターである。ある実施形態において、プロモーターは誘導性プロモーターである。

【0233】

本明細書で使用される場合、「ベクター」は当該技術分野における通常の意味を有し、例えば、プラスミド、コスミド、ファージまたは発現ベクター、形質転換ベクター、シャトルベクターもしくはクローニングベクターであってもよく；それは二本鎖または一本鎖、直鎖または環状であってもよく；または原核生物宿主もしくは真核生物宿主を、そのゲノムへの組み込みを介してまたは染色体外のいずれかで形質転換してもよい。本発明による核酸は、好ましくは、原核生物または真核生物宿主細胞における転写、および任意選択的に発現を可能にする１つ以上の調節配列とベクター中で作動可能に連結される。調節配列－好ましくはＤＮＡ－は、本発明による核酸と相同であっても異種であってもよい。例えば、核酸は、適切なプロモーターまたはターミネーターの制御下にある。適切なプロモーターは、構成的に誘導されるプロモーター（例えば、「カリフラワーモザイクウイルス」からの３５Ｓプロモーター（Odell et al., 1985）；組織特異的なプロモーターが特に適している（例：花粉特異的プロモーター、Chen et al. (2010)、Zhao et al. (2006)、またはTwell et al. (1991)）：または発生特異的なプロモーター（例：花特異的プロモーター）であってもよい。適切なプロモーターはまた、自然界には存在しない合成またはキメラプロモーターであり得、複数のエレメントから構成され、最小プロモーターの他、最小プロモーターの上流に、特別な転写因子の結合場所として機能する少なくとも１つのシス調節エレメントも含む。キメラプロモーターは、所望の仕様に従って設計することができ、異なる因子を介して誘導または抑制される。そのようなプロモーターの例は、Gurr & Rushton (2005)またはVenter (2007)に見出される。例えば、適切なターミネーターはｎｏｓ－ターミネーターである（Depicker et al., 1982）。ベクターは、コンジュゲーション、動員、バイオリスティック形質転換、アグロバクテリア媒介形質転換、トランスフェクション、形質導入、真空浸潤、またはエレクトロポレーションを介して導入され得る。

【0234】

ベクターは、プラスミド、コスミド、ファージもしくは発現ベクター、形質転換ベクター、シャトルベクター、またはクローニングベクターであってもよく；それは二本鎖または一本鎖、直鎖または環状であってもよい。ベクターは、原核生物宿主もしくは真核生物宿主を、そのゲノムへの組み込みを介してまたは染色体外のいずれかで形質転換してもよい。

【0235】

ある実施形態において、ベクターは発現ベクターである。核酸は、好ましくは、原核生物または真核生物宿主細胞における転写、および任意選択的に発現を可能にする１つ以上の調節配列とベクター中で作動可能に連結される。調節配列は、核酸と相同であっても異種であってもよい。例えば、核酸は、適切なプロモーターまたはターミネーターの制御下にある。適切なプロモーターは、構成的に誘導されるプロモーター、例えば、「カリフラワーモザイクウイルス」からの３５Ｓプロモーターであってもよい（Odell et al., 1985. Identification of DNA sequences required for activity of the cauliflower mosaic virus 35S promoter）。Chen et al. (2010. Molecular Biology Reports 37(2):737-744)、Zhao et al. (2006. Planta 224(2): 405-412)、またはTwell et al. (1991. Genes & Development 5(3): 496-507)に記載されるような組織特異的なプロモーター、例えば花粉特異的プロモーターが特に適しており、発生特異的プロモーター、例えば開花特異的プロモーターも同様である。適切なプロモーターはまた、自然界には存在せず、かつ複数のエレメントから構成される合成またはキメラプロモーターであってもよい。そのような合成またはキメラプロモーターは、最小プロモーターの他、特別な転写因子の結合場所として機能する少なくとも１つのシス調節エレメントも含む。キメラプロモーターは、所望の仕様に従って設計することができ、異なる因子を介して誘導または抑制され得る。そのようなプロモーターの例は、Gurr & Rushton (2005. Trends in Biotechnology 23(6): 275-282)またはVenter (2007. Trends in Plant Science: 12(3): 118-124)に見出される。例えば、適切なターミネーターはｎｏｓ－ターミネーターである（Depicker et al., 1982. Journal of Molecular and Applied Genetics 1(6): 561-573）。

【0236】

ある実施形態において、ベクターは条件付き発現ベクターである。ある実施形態において、ベクターは構成的発現ベクターである。ある実施形態において、ベクターは、組織特異的発現ベクター、例えば葉特異的発現ベクターである。ある実施形態において、ベクターは誘導性発現ベクターである。そのようなベクターは全て当該技術分野で周知である。

【0237】

記載されたベクターの調製方法は、当業者に知られている（Sambrook et al., 2001）。

【0238】

また、本明細書では、本明細書に記載されるような核酸、または本明細書に記載されるようなベクターを含む、植物細胞または（植物）プロトプラストなどの宿主細胞も想定される。宿主細胞は、染色体外（エピソーム）複製分子として核酸を含むか、または宿主細胞の核もしくはプラスチドゲノムに組み込まれた核酸を含むか、または導入された染色体、例えばミニ染色体としての核酸を含む。

【0239】

宿主細胞は、原核細胞（例えば、細菌）または真核細胞（例えば、植物細胞もしくは酵母細胞）である。例えば、宿主細胞は、アグロバクテリウム、例えばアグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）またはアグロバクテリウム・リゾゲネス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）であってもよい。好ましくは、宿主細胞は植物細胞である。

【0240】

本明細書に記載される核酸または本明細書に記載されるベクターは、例えば、コンジュゲーション、動員、バイオリスティック形質転換、アグロバクテリア媒介形質転換、トランスフェクション、形質導入、真空浸潤、またはエレクトロポレーションを含む、選択された宿主細胞に依存し得る周知の方法を介して宿主細胞中に導入され得る。特に、アグロバクテリウム細胞に核酸またはベクターを導入するための方法は当業者に周知であり、コンジュゲーションまたはエレクトロポレーション方法を含み得る。また、核酸またはベクターを植物細胞に導入するための方法も知られており（Sambrook et al., 2001）、バイオリスティック形質転換およびアグロバクテリウム媒介形質転換などの多様な形質転換法が含まれ得る。

【0241】

ある実施形態において、本発明は、本明細書に記載されるような核酸、特に誘導促進核酸または本明細書に記載されるような二本鎖ＲＮＡをコードする核酸を、本明細書に記載されるような導入遺伝子またはベクターとして含むトランスジェニック植物細胞に関する。更なる実施形態において、本発明は、トランスジェニック植物またはトランスジェニック植物細胞を含むその一部分に関する。

【0242】

例えば、そのようなトランスジェニック植物細胞またはトランスジェニック植物は、好ましくは安定的に、本明細書に記載されるような核酸または本明細書に記載されるようなベクターで形質転換された植物細胞または植物である。

【0243】

好ましくは、トランスジェニック植物細胞中の核酸は、植物細胞における転写、および任意選択的に発現を可能にする１つ以上の調節配列と作動可能に連結されている。調節配列は、核酸と相同であっても異種であってもよい。次いで本発明による核酸と調節配列とで構成される全構造は、導入遺伝子を表すことができる。

【0244】

一態様において、本発明は、本明細書に記載されるような本発明のポリ核酸分子のいずれか、またはその相補体もしくは逆相補体と特異的にハイブリダイズすることができるポリ核酸、好ましくは単離されたポリ核酸に関する。ある実施形態において、そのようなポリ核酸は、配列番号１もしくは２のヌクレオチド配列分子；またはその相補体もしくは逆相補体と特異的にハイブリダイズすることができる。そのようなポリ核酸は、関連配列（例えば、突然変異型遺伝子対野生型遺伝子）と（機能的に）ハイブリダイズしない場合、記載された配列と特異的にハイブリダイズすることが理解されるであろう。したがって、そのようなポリ核酸は、例えば、本発明による突然変異型ＡＬＳと、例えば野生型ＡＬＳとを識別するために使用することができる。ある実施形態において、ポリ核酸は、５００個未満のヌクレオチド、例えば４００個未満のヌクレオチド、例えば３００個未満のヌクレオチド、例えば２００個未満のヌクレオチド、例えば１００個未満のヌクレオチド、例えば好ましくは８０個未満のヌクレオチド、より好ましくは６０個未満のヌクレオチド、最も好ましくは５０個未満のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、そのようなポリ核酸は、少なくとも５個のヌクレオチド、好ましくは少なくとも１０個のヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１５個のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、そのようなポリ核酸は、５～５００個のヌクレオチド、好ましくは１０～１００個のヌクレオチド、より好ましくは１５～５０個のヌクレオチド、例えば２０～５０個のヌクレオチドを含む。ある実施形態において、そのようなポリ核酸は、本明細書の他の箇所に記載されるようなプライマーまたはプローブ、例えばＫＡＳＰプライマー（競合対立遺伝子特異的ＰＣＲ）である。

【0245】

ある実施形態において、そのようなポリ核酸は、配列番号７の少なくとも１０個の最も３末端側のヌクレオチド、好ましくは少なくとも１５個の最も３末端側のヌクレオチド、例えば少なくとも２０個の最も３末端側のヌクレオチド、その相補体、またはその逆相補体を含む。ある実施形態において、そのようなポリ核酸は、配列番号７に記載される配列、その相補体、またはその逆相補体を含むか、またはそれらからなる。

【0246】

一態様において、本発明は、本明細書の他の箇所に記載されるような本発明によるベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分、特に３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有する（内因性）ＡＬＳタンパク質を含むベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を作出するための、本明細書に記載されるようなポリ核酸（特に突然変異体ＡＬＳをコードするポリ核酸）、ベクター、または宿主細胞の使用に関する。

【0247】

ある態様において、本発明は、本明細書の他の箇所に記載されるような本発明によるベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分、特に３７１位にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有する（内因性）ＡＬＳタンパク質を含むベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を同定するための、本明細書に記載されるようなポリ核酸、特にプライマーまたはプローブの使用に関する。

【0248】

ある態様において、本発明は、
ａ）配列番号１に記載される配列を含むポリ核酸；
ｂ）配列番号２に記載される配列を含むポリ核酸；
ｃ）配列番号２に記載されるｃＤＮＡ配列を有するＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸；
ｄ）配列番号３に記載される配列を有するＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸
を含む、植物の一部分のベータ・ブルガリス植物に関する。

【0249】

ある実施形態において、そのようなベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分は、さらに、
ａ）配列番号１０に記載される配列を含むポリ核酸；
ｂ）配列番号１１に記載される配列を含むポリ核酸；
ｃ）配列番号１１に記載されるｃＤＮＡ配列を有するＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸；
ｄ）配列番号１２に記載される配列を有するＡＬＳタンパク質をコードするポリ核酸
を含む。

【0250】

好ましくは、これらのポリ核酸は、植物もしくは植物の一部分のゲノムに含まれることが理解されるであろう。好ましくは、これらのポリ核酸は、条件付きまたは構成的に発現され、したがって、本明細書の他の箇所に記載されるように、適切な調節配列の制御下にある。好ましい実施形態において、これらのポリ核酸は、内因性ＡＬＳプロモーターの制御下で内因性ＡＬＳの位置にある。

【0251】

一態様において、本発明は、本明細書に記載されるような本発明によるベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分などのベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を作出するための方法であって、植物もしくは植物の一部分、例えばプロトプラストに、本発明によるポリ核酸を、好ましくは植物もしくは植物の一部分のゲノムにおいて、特に、本明細書の他の箇所で定義されるような本発明による（内因性）突然変異体ＡＬＳをコードするポリ核酸を導入することを含む、方法に関する。ある実施形態において、そのような方法は、プロトプラストなどの植物の一部分から植物を再生することをさらに含む。

【0252】

一態様において、本発明は、ベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分、例えば本明細書に記載されるような本発明によるベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を作出するための方法であって、植物もしくは植物の一部分、例えばプロトプラストまたは種子に、（内因性）ＡＬＳをコードするポリ核酸を、好ましくは、植物もしくは植物の一部分のゲノムに、特に、本明細書の他の箇所で定義されるような本発明による（内因性）突然変異体ＡＬＳをコードするポリ核酸を突然変異させることを含む、方法に関する。ある実施形態において、そのような方法は、プロトプラストまたは種子などの植物の一部分から植物を再生することをさらに含む。

【0253】

突然変異誘発は、当該技術分野で公知の技術のいずれかに従って行うことができる。本明細書で使用される場合、「突然変異生成」または「突然変異誘発」には、従来の突然変異誘発と、位置特異的突然変異誘発または「ゲノム編集」または「遺伝子編集」との両方が含まれる。従来の突然変異誘発では、ＤＮＡレベルでの修飾が、標的化された方法ではもたらされない。植物細胞または植物は、ＵＶ光曝露または化学物質の使用を介して、ＴＩＬＬＩＮＧなどの変異誘発性条件にさらされる（Till et al., 2004）。ランダム突然変異誘発のもう一つの方法は、トランスポゾンを利用した突然変異誘発である。位置特異的突然変異誘発では、ＤＮＡの予め定義された位置に、標的指向の方法でＤＮＡレベルでの修飾を導入することができる。例えば、ＴＡＬＥＮＳ、メガヌクレアーゼ、ホーミングエンドヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムをこのために使用することができる。

【0254】

ある実施形態において、ＡＬＳ遺伝子の核酸修飾はランダム突然変異誘発によって行われる。細胞または生物は、ＵＶ放射線または突然変異誘発性化学物質（例えば、メタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）など）のような突然変異原にさらされる場合があり、次いで、所望の特性を有する突然変異体が選択される。突然変異体は、例えば、ＴＩＬＬＩＮＧ（Targeting Induced Local Lesions in Genomes）によって同定することができる。この方法は、メタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）などの化学的な突然変異原を使用した突然変異誘発などの突然変異誘発と、標的遺伝子の一塩基突然変異／点突然変異を同定する高感度ＤＮＡスクリーニング技術とを組み合わせたものである。ＴＩＬＬＩＮＧ法は、複数の対立遺伝子がＰＣＲで増幅され、次いで加熱され、ゆっくりと冷却されたときに形成されるＤＮＡヘテロ二重鎖の形成に依拠している。２本のＤＮＡ鎖のミスマッチ部分に「バブル」が形成され、次いでこれが一本鎖ヌクレアーゼによって切断される。次いで生成物は、ＨＰＬＣなどによってサイズ別に分離される。McCallum et al. “Targeted screening for induced mutations”; Nat Biotechnol. 2000 Apr;18(4):455-7 and McCallum et al. “Targeting induced local lesions IN genomes (TILLING) for plant functional genomics”; Plant Physiol. 2000 Jun;123(2):439-42も参照のこと。ある実施形態において、突然変異体ＡＬＳは、当該技術分野で公知のように、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、またはＴＡＬＥＮ遺伝子編集技術を含む遺伝子編集技術などの標的化突然変異誘発によって得ることができる。

【0255】

ある実施形態において、本発明による突然変異型ＡＬＳは、
ａ）ＥＭＳおよび／またはＥＭＵ、例えば少なくとも０．５％のＥＭＳまたは少なくとも０．３％のＥＮＵを用いて、ベータ・ブルガリスの細胞または組織、例えば種子に突然変異を誘発するステップ；
ｂ）突然変異を誘発された細胞または組織（Ｍ０）から挿木を栽培するステップ；
ｃ）挿木を植え替えて種子（Ｍ１）の集団を栽培するステップ；
ｄ）Ｍ１の種子から生育した植物から種子（Ｍ２）を栽培するステップ；
ｅ）Ｍ２の種子を播種し、ＡＬＳ阻害剤除草剤を適用するステップ；
ｆ）任意選択的に、生き残った植物を鉢に植え替え、生育中の植物にＡＬＳ阻害剤除草剤を適用するステップ；および
ｇ）除草剤によるダメージを受けずに生き残った植物を選択し、かつ／または３７１位にアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるアミノ酸を含むＡＬＳタンパク質をコードするＡＬＳ対立遺伝子を含む植物を選択するするステップ
によって得ることができる。

【0256】

本発明による突然変異型ＡＬＳは、遺伝子移入によっても得ることができる。

【0257】

本明細書において、用語「遺伝子移入」、「遺伝子移入された」および「遺伝子移入する」は、ある植物、種、品種または栽培品種の染色体断片または遺伝子が、別の植物、種、品種、または栽培品種のゲノムに、それらの植物または種を交雑することによって移動する、自然および人工プロセスの両方を指す。このプロセスは、任意選択的に、反復親への戻し交雑によって完了することができる。例えば、特定の遺伝子座における所望の対立遺伝子の遺伝子移入は、少なくとも一方の親がそのゲノム中に所望の対立遺伝子を有する、同じ種の２つの親間の有性交雑を介して、少なくとも１つの子孫に伝達することができる。代替的に、例えば、対立遺伝子の伝達は、ドナープロトプラストのうちの少なくとも１つがそのゲノム中に所望の対立遺伝子を有する、融合プロトプラストなどの２つのドナーゲノム間の組換えによって起こり得る。所望の対立遺伝子は、例えば、表現型、ＱＴＬ、導入遺伝子または同種のものに関連するマーカーによって検出することができるか、または例えば、本明細書の他の箇所で定義されるように、配列決定、ハイブリダイゼーション、ＰＣＲなどのような標準的な技術を通して同定することができる。いずれにせよ、所望の対立遺伝子を含む子孫を、所望の遺伝的背景を有する系統に繰り返し戻し交雑し、所望の対立遺伝子について選択することにより、選択された遺伝的背景に対立遺伝子を固定させることができる。この「遺伝子移入」のプロセスは、このプロセスが２回以上繰り返される場合、「戻し交雑」と呼ばれることが多い。「遺伝子移入断片」または「遺伝子移入セグメント」または「遺伝子移入領域」とは、交雑または伝統的な育種技術、例えば戻し交雑によって、人工的または自然的に同じ種または近縁種の別の植物に導入された染色体断片（または染色体の一部分もしくは領域）を指し、すなわち、遺伝子移入された断片は、動詞「遺伝子移入する」が指す育種方法（例えば戻し交雑）の結果である。用語「遺伝子移入断片」は、染色体全体を含むことは決してなく、染色体の一部分のみを含むことが理解される。遺伝子移入断片は、例えば、染色体の４分の３または半分でも大きい可能性があるが、好ましくは、より小さく、例えば、約１５Ｍｂ以下、例えば約１０Ｍｂ以下、約９Ｍｂ以下、約８Ｍｂ以下、約７Ｍｂ以下、約６Ｍｂ以下、約５Ｍｂ以下、約４Ｍｂ以下、約３Ｍｂ以下、約２．５Ｍｂまたは２Ｍｂ以下、約１Ｍｂ（１，０００，０００塩基対に等しい）以下、または約０．５Ｍｂ（５００，０００塩基対に等しい）以下、例えば、約２００，０００ｂｐ（２００キロ塩基対に等しい）以下、約１００，０００ｂｐ（１００ｋｂ）以下、約５０，０００ｂｐ（５０ｋｂ）以下、約２５，０００ｂｐ（２５ｋｂ）以下である。ある実施形態において、遺伝子移入断片は、本明細書に記載されるような本発明による突然変異型ＡＬＳ（対立遺伝子）を含むか、それらからなるか、またはそれらから実質的になる。

【0258】

遺伝要素、遺伝子移入断片、または形質（例えばＡＬＳ阻害剤除草剤耐性）を付与する遺伝子もしくは対立遺伝子が、本明細書の他の箇所に記載されるような植物もしくは植物の一部分「から得ることができる」か、または「得られる」ことができるか、または「に由来し得る」か、または「由来することができる」か、または「に存在する」か、または「に見出される」と言われるのは、遺伝要素、遺伝子座、遺伝子移入断片、遺伝子または対立遺伝子によって付与される形質の付加を別にして、レシピエント植物の表現型の変化をもたらすことなく、伝統的な育種技術を使用して、それが存在する植物から、それが存在しない別の植物（例えば系統または品種）に移入することができる場合である。これらの用語は互換的に使用され、したがって、遺伝要素、遺伝子座、遺伝子移入断片、遺伝子または対立遺伝子は、形質を欠く任意の他の遺伝的背景に移入することができる。遺伝要素、遺伝子座、遺伝子移入断片、遺伝子または対立遺伝子を含む植物を使用することができるだけでなく、遺伝要素、遺伝子座、遺伝子移入断片、遺伝子または対立遺伝子を保持するように選択された、そのような植物からの子孫／派生も使用することができ、本明細書に包含される。植物（または植物のゲノムＤＮＡ、細胞または組織）が、そのような植物から得られるのと同じ遺伝要素、遺伝子座、遺伝子移入断片、遺伝子または対立遺伝子を含んでいるかどうかは、当業者によって、表現型アッセイ、全ゲノム配列決定、分子マーカー分析、形質マッピング、染色体ペインティング、対立遺伝子検定などの当該技術分野で公知の１つ以上の技術、または技術の組み合わせを使用して決定することができる。トランスジェニック植物もまた包含され得ることが理解されるであろう。

【0259】

本明細書で使用される場合、用語「遺伝子工学」、「形質転換」および「遺伝子組換え」は全て、単離されクローン化された遺伝子を他の生物のＤＮＡ、通常は染色体ＤＮＡまたはゲノムに導入することの同義語として使用される。

【0260】

本明細書で使用される「トランスジェニック」または「遺伝子組換え生物」（ＧＭＯ）とは、一般に「組換えＤＮＡ技術」として知られる技術を使用して遺伝物質が改変された有機体である。組換えＤＮＡ技術は、異なる供給源からのＤＮＡ分子を生体外（例えば、試験管内）で１つの分子に組み合わせる能力を包含する。この用語は一般に、従来の交雑育種または「突然変異誘発」育種によって遺伝子組成が変化した生物は対象としていない。なぜなら、これらの方法は組換えＤＮＡ技術が発見される以前のものだからである。本明細書で使用される「非トランスジェニック」とは、上記で定義されるような「トランスジェニック」または「遺伝子組換え生物」ではない植物および植物由来の食品を指す。

【0261】

「導入遺伝子」または「キメラ遺伝子」とは、アグロバクテリウム媒介形質転換などの形質転換によって植物のゲノムに導入された組換え遺伝子などのＤＮＡ配列を含む遺伝子座を指す。ゲノムに安定的に組み込まれた導入遺伝子を含む植物は「トランスジェニック植物」と呼ばれる。

【0262】

「遺伝子編集」または「ゲノム編集」とは、生命有機体のゲノムにＤＮＡまたはＲＮＡを挿入、欠失、改変、置換する遺伝子工学を指す。遺伝子編集には、標的および非標的（ランダム）突然変異誘発が含まれ得る。標的突然変異誘発は、例えば、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターベースヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９）システムなどのデザイナーヌクレアーゼを用いて達成することができる。これらのヌクレアーゼは、ゲノムの所望の位置に部位特異的二本鎖切断（ＤＳＢ）を作り出す。誘導された二本鎖切断は、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）または相同組換え（ＨＲ）によって修復され、標的突然変異または核酸修飾をもたらす。デザイナーヌクレアーゼの使用は、遺伝子ノックアウトまたはノックダウンの作出に特に適している。ある実施形態において、本明細書の他の箇所に記載されているように、ＡＬＳ遺伝子に特異的に突然変異を誘導するデザイナーヌクレアーゼが開発される。デザイナーヌクレアーゼシステムの送達および発現系は当該技術分野で周知である。

【0263】

ある実施形態において、ヌクレアーゼまたは標的化／部位特異的／ホーミングヌクレアーゼは、（改変された）ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムもしくは複合体、（改変された）Ｃａｓタンパク質、（改変された）ジンクフィンガー、（改変された）ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、（改変された）転写因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）、（改変された）転写因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、または（改変された）メガヌクレアーゼであるか、それらを含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる。ある実施形態において、前述の（改変された）ヌクレアーゼまたは標的化／部位特異的／ホーミングヌクレアーゼは、（改変された）ＲＮＡガイドヌクレアーゼであるか、（改変された）ＲＮＡガイドヌクレアーゼを含むか、（改変された）ＲＮＡガイドヌクレアーゼから本質的になるか、または（改変された）ＲＮＡガイドヌクレアーゼからなる。ある実施形態において、ヌクレアーゼは、植物における発現のためにコドン最適化され得ることが理解されるであろう。本明細書で使用される場合、選択された核酸配列の用語「標的化」は、ヌクレアーゼまたはヌクレアーゼ複合体がヌクレオチド配列特異的な様式で作用することを意味する。例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムの文脈では、ガイドＲＮＡは選択された核酸配列とハイブリダイズすることができる。

【0264】

遺伝子編集は、遺伝子編集コンポーネントまたはシステムの一過性、誘導性、または構成的発現を含むことができる。遺伝子編集は、遺伝子編集コンポーネントまたはシステムのゲノム統合またはエピソームでの存在を含むことができる。遺伝子編集コンポーネントまたはシステムは、プラスミドなどのベクター上で提供され得、これらは、当該技術分野で公知のように、適切な送達ビヒクルによって送達され得る。好ましいベクターは発現ベクターである。

【0265】

遺伝子編集は、相同性指向性修復（ＨＤＲ）を行うための組換えテンプレートを提供することを含み得る。例えば、組換えテンプレートが提供される遺伝子編集によって遺伝子エレメントが置き換えられ得る。ＤＮＡは、置き換えが必要な配列の上流および下流で切断され得る。したがって、置き換えられる配列はＤＮＡから切除される。次いでＨＤＲを通して、切除された配列はテンプレートに置き換えられる。ある実施形態において、本明細書に記載されるような本発明の突然変異型ＡＬＳ遺伝子またはｃＤＮＡ（または本発明の突然変異を含むその断片、すなわちＡＬＳのアミノ酸３７１位のアスパラギン酸とは異なるアミノ酸に対応する）をテンプレート上に／テンプレートとして提供することができる。突然変異体ＡＬＳを含まない植物のゲノムの対応する領域の上流および下流に二重鎖切断が導入されるようにシステムを設計することによって、この領域は切除され、本発明の突然変異体ＡＬＳ（または断片）を含むテンプレートと置き換えることができる。このようにして、本発明の突然変異体ＡＬＳを植物に導入する場合、特に、特定の遺伝的背景を持つ植物において、複数回の戻し交雑を行う必要はない。

【0266】

一態様において、本発明は、本明細書に記載されるような本発明によるベータ・ブルガリス植物を作出するための方法によって（直接）得られるか、または得られることができるベータ・ブルガリス植物（もしくは植物の一部分）に関する。好ましい実施形態において、植物の一部分はルートビート（またはビートルート）である。

【0267】

ある実施形態において、ベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分における突然変異体ＡＬＳはホモ接合である。ある実施形態において、ベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分における突然変異体ＡＬＳはヘテロ接合であり、すなわち、植物もしくは植物の一部分は、１つの突然変異体ＡＬＳ対立遺伝子および１つの野生型対立遺伝子、または代替的に、本発明による１つの突然変異体ＡＬＳ対立遺伝子（すなわち、本明細書の他の箇所に記載されるようにアミノ酸位３７１にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有する）、および異なる突然変異を有する（例えば、本明細書の他の箇所に記載されるように、好ましくはアミノ酸位５６９にトリプトファンとは異なるアミノ酸を有する）１つの突然変異体ＡＬＳ対立遺伝子を含む。

【0268】

ある実施形態において、本発明のベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分は、本明細書の他の箇所に記載されるようにアミノ酸位３７１にアスパラギン酸とは異なるアミノ酸を有し、本明細書の他の箇所に記載されるようにアミノ酸位５６９にトリプトファンとは異なるアミノ酸を有するＡＬＳタンパク質（すなわち、同じ対立遺伝子における二重突然変異）を含む。

【0269】

一態様において、本発明は、本明細書に記載されるような本発明によるベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分などのベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を同定するための方法であって、ＡＬＳタンパク質におけるアスパラギン酸（Ｄ）とは異なる３７１位のアミノ酸の存在についてスクリーニングすること、またはＡＬＳタンパク質におけるアスパラギン酸（Ｄ）とは異なる３７１位のアミノ酸をコードするコドンの存在についてスクリーニングすることを含む方法に関する。本方法は、アスパラギン酸（Ｄ）とは異なるＡＬＳタンパク質の３７１位のアミノ酸が同定された場合、またはアスパラギン酸（Ｄ）とは異なるＡＬＳタンパク質の３７１位のアミノ酸をコードするコドンが同定された場合に、ベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を選択するステップをさらに含み得る。

【0270】

一態様において、本発明は、１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤に対して耐性があるか、または耐性が増加したベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分などのベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を同定するための方法であって、ベータ・ブルガリス植物のＡＬＳタンパク質におけるアスパラギン酸（Ｄ）とは異なる３７１位のアミノ酸の存在についてスクリーニングすること、またはＡＬＳタンパク質におけるアスパラギン酸（Ｄ）とは異なる３７１位のアミノ酸をコードするコドンの存在についてスクリーニングすることを含む、方法に関する。本方法は、ＡＬＳタンパク質におけるアスパラギン酸（Ｄ）とは異なる３７１位のアミノ酸が同定された場合、またはＡＬＳタンパク質におけるアスパラギン酸（Ｄ）とは異なる３７１位のアミノ酸をコードするコドンが同定された場合に、１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤に対して耐性があるか、または１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤に対する耐性が増加したベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を同定するステップをさらに含み得る。本方法は、ＡＬＳタンパク質におけるアスパラギン酸（Ｄ）とは異なる３７１位のアミノ酸が同定された場合、またはＡＬＳタンパク質におけるアスパラギン酸（Ｄ）とは異なる３７１位のアミノ酸をコードするコドンが同定された場合に、１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤に耐性があるか、または１つ以上のＡＬＳ阻害剤除草剤に対する耐性が増加したベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分を選択するステップをさらに含み得る。

【0271】

ある態様において、本発明は、本明細書に記載されるような本発明によるＡＬＳ突然変異を検出または同定するための方法に関する。

【0272】

本明細書の他の箇所に記載されるように、任意の手段を適用することができ、この任意の手段には、例えば、配列決定、ハイブリダイゼーションに基づく方法（例えば（動的）対立遺伝子特異的ハイブリダイゼーション、分子ビーコン、ＳＮＰマイクロアレイ）、酵素に基づく方法（ＰＣＲ、ＫＡＳＰ（競合対立遺伝子特異的ＰＣＲ）、ＲＦＬＰ、ＡＬＦＰ、ＲＡＰＤ、フラップエンドヌクレアーゼ、プライマー伸長、５’－ヌクレアーゼ、オリゴヌクレオチドライゲーションアッセイなど）、ＤＮＡの物理的性質に基づく増幅後方法（例えば一本鎖コンフォメーション多型、温度勾配ゲル電気泳動）、変性高速液体クロマトグラフィー、アンプリコン全体の高分解能融解、ＤＮＡミスマッチ結合タンパク質の使用、ＳＮＰｌｅｘ、サーベイヤーヌクレアーゼアッセイなど）が挙げられる。

【0273】

ある実施形態において、突然変異型ＡＬＳの検出はＫＡＳＰによって行われる。ある実施形態において、（突然変異型ＡＬＳの）対立遺伝子特異的ＫＡＳＰプライマーは、配列番号７の少なくとも１０個の最も３末端側のヌクレオチド、好ましくは少なくとも１５個の最も３末端側のヌクレオチド、例えば少なくとも２０個の最も３末端側のヌクレオチド、その相補体、またはその逆相補体を含む。ある実施形態において、そのようなＫＳＡＰプライマーは、配列番号７、その相補体、またはその逆相補体に記載されるような配列を含むか、またはそれらからなる。

【0274】

ある実施形態において、野生型ＡＬＳの検出はＫＡＳＰによって行われる。ある実施形態において、（野生型ＡＬＳの）対立遺伝子特異的ＫＡＳＰプライマーは、配列番号８の少なくとも１０個の最も３末端側のヌクレオチド、好ましくは少なくとも１５個の最も３末端側のヌクレオチド、例えば少なくとも２０個の最も３末端側のヌクレオチド、その相補体、またはその逆相補体を含む。ある実施形態において、そのようなＫＳＡＰプライマーは、配列番号８、その相補体、またはその逆相補体に記載されるような配列を含むか、またはそれらからなる。

【0275】

共通のＫＡＳＰプライマー（突然変異型ＡＬＳおよび野生型ＡＬＳの両方の検出において使用される）は、当業者によって適切に選択され得、その位置は特に限定されない。ある実施形態において、共通のプライマーは、配列番号９に記載されるような配列を含むか、またはそれからなる。

【0276】

ある態様において、本発明は、本明細書に記載されるようなポリ核酸、特にプライマーまたはプローブ、および任意選択的に突然変異型ＡＬＳを検出するための、または突然変異型ＡＬＳと野生型ＡＬＳとを識別するための試薬、例えば本明細書に記載されるようなＫＡＳＰプライマーを含むキットに関する。

【0277】

一態様において、本発明は、本明細書の他の箇所に記載されるような本発明によるベータ・ブルガリス植物を播種するか、または植え付ける、好ましくは生育期の終わりにルートビート（またはビートルート）を収穫することを含む、ベータ・ブルガリスルートビート（またはビートルート）を生産するための方法に関する。

【0278】

ある態様において、本発明は、糖生産、嫌気性消化、または発酵のための方法における、ベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分、好ましくはルートビート（またはビートルート）の使用に関する。

【0279】

ある態様において、本発明は、バイオガスまたはバイオ燃料生産のための方法における、ベータ・ブルガリス植物もしくは植物の一部分、好ましくはルートビート（またはビートルート）の使用に関する。

【0280】

本明細書で使用される「発酵」とは、微生物を使用して有機分子を別の分子に変換するプロセスを指す。例えば、「発酵」とは、本発明の植物材料などの植物材料から糖または他の分子を好気的に変換して、アルコール（例えば、エタノール、メタノール、ブタノール）；有機酸［例えば、クエン酸、酢酸、イタコン酸、乳酸、グルコン酸）；ケトン［例えば、アセトン］、アミノ酸｛例えば、グルタミン酸｝；ガス｛例えば、Ｈ２およびＣＯ２｝、抗生物質｛例えば、ペニシリンおよびテトラサイクリン｝；酵素；ビタミン｛例えば、リボフラビン、Ｂ１２、β－カロチン｝；および／またはホルモンを産生する。発酵には、消費可能なアルコール産業｛例えば、ビールおよびワイン｝で使用される発酵が含まれる。発酵には、例えばバイオ燃料の製造のための嫌気性発酵も含まれる。発酵は、細菌、真菌、古細菌、および原生生物を含むがこれらに限定されない、所望の発酵ステップでの使用に適した任意の生物によって達成され得る。適切な発酵生物には、単糖、二糖、および三糖、特にグルコースおよびマルトース、または他の任意のバイオマス由来分子を、直接的または間接的に所望の発酵生成物（例えば、エタノール、ブタノールなど）に変換できるものが含まれる。適切な発酵生物には、非糖類分子を所望の発酵生成物に変換できるものも含まれる。そのような生物および発酵方法は当業者に知られている。

【0281】

本明細書で使用される用語「バイオ燃料」は、バイオマス、すなわち、植物または動物の排泄物など、生きている、または最近生きている生物有機体に由来する燃料を指す。バイオ燃料には、バイオディーゼル、バイオ水素、バイオガス、バイオマス由来のジメチルフラン（ＤＭＦ）などが含まれるが、これらに限定されない。特に、用語「バイオ燃料」は、エタノール、メタノール、プロパノール、またはブタノールなどの植物由来のアルコールを指すために使用することができ、これらは使用前に必要に応じて変性させることができる。また、「バイオ燃料」という用語は、アルコール／ガソリン混合物（すなわち、ガソホール）などの植物由来燃料を含む燃料混合物を指すために使用することもできる。ガソホールは、任意の所望された植物由来アルコールのパーセンテージ（すなわち、約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の植物由来アルコール）を含み得る。例えば、有用なバイオ燃料ベースの混合物には、８５％のエタノールと１５％のガソリンとを含むＥ８５がある。バイオ燃料は、植物原料の好気性発酵または嫌気性発酵によって産生される任意のバイオ燃料であり得る。好気性発酵によって得られるバイオ燃料の非限定的な例は、バイオエタノールである。嫌気性発酵によって得られるバイオ燃料には、バイオガスおよび／またはバイオディーゼルが含まれるが、これらに限定されない。好気性発酵および／または嫌気性発酵の方法は、当業者に知られている。本発明にさらに包含されるのは、１つ以上のバイオ燃料を製造するための方法または本発明によって製造されるエタノール、バイオガスおよび／またはバイオディーゼルを含む群から選択されるバイオ燃料である。

【0282】

本発明は、本発明のテンサイ植物における抗体またはバイオプラスチックの生産などの、他の工業的用途も含む。さらに、本発明のテンサイ植物もしくはその一部は、例えば、家畜の飼料など、さらに加工することなく使用することもできる。

【0283】

用語「糖」は、発酵可能な単糖類、二糖類、および三糖類、特に単糖類および二糖類を指す。したがって、本発明において糖は、スクロース、フルクトース、グルコース、ガラクトース、マルトース、ラクトース、およびマンノースを含むが、これらに限定されず、好ましくはスクロースである。

【0284】

本発明の態様および実施形態は、以下の非限定的な例によってさらに裏付けられる。

【0285】

実施例
実施例１
メタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）およびＮ－エチル－Ｎ－ニトロソ尿素（ＥＮＵ）で突然変異誘発した世代Ｍ２のＫＷＳ独自の遺伝子型のテンサイ種子２５０ｋｇを１５ｈａの圃場に播種した。発芽から６週間後および８週間後に、除草剤ＣＯＮＶＩＳＯ（登録商標）ＯＮＥ（５０ｇ／Ｌホルムスルフロン、３０ｇ／Ｌチエンカルバゾン－メチル）を０．５Ｌ ｈａ－１の濃度で圃場に散布した。２回目の処理から２週間後、生き残った植物を選択し、移植し、さらに温室で栽培した。さらにもう１回、温室でＣＯＮＶＩＳＯ（登録商標）ＯＮＥ（０．５Ｌ ｈａ－１）処理を適用した。合計７つの植物を選択した。５つの個体全てからＤＮＡサンプルを抽出し、ＢｖＡＬＳコード配列を標準的な方法（サンガー配列決定法）を使用して配列決定した。

【0286】

１８ＺＺＪＺＪ７ＭＳ１００１－００１９および１８ＺＺＪＺＪ７ＭＳ１００１－００２３と名付けられた２つの突然変異体は、（ＢｖＡＬＳ＿ｇ８９７６．ｔ１＿Ｔ８０７＿ｇｅｎｏｍｉｃ＿ＤＮＡ参照配列の配列番号１の１１４１位（提供されたＣＤＳの１１１３位、配列番号２）で同一のＴからＡへの突然変異を偶然にも保有し、ＢｖＡＬＳタンパク質配列（配列番号３）の３７１位でＡｓｐ（Ｄ）からＧｌｕ（Ｅ）へのアミノ酸変化に変換された。他の３つの突然変異体については、配列決定が明確でなかったため、ＢｖＡＬＳタンパク質コード配列内で突然変異していないとまず考えられた。

【0287】

接合状態を決定し、ＢｖＡＬＳの置換Ｄ３７１Ｅにつながる点突然変異を明確に同定するために、ＫＡＳＰマーカーとして適用可能な特異的マーカーｓｙｔｘａｌｓｓ１４ａｓ００１が開発された：
プライマー＿ＡｌｌｅｌｅＸ（突然変異対立遺伝子）：

【化16】

プライマー＿ＡｌｌｅｌｅＹ（野生型対立遺伝子）：

【化17】

プライマー＿共通：

【化18】

【0288】

マーカーの適用により、突然変異体植物１８ＺＺＪＺＪ７ＭＳ１００１－００１９および１８ＺＺＪＺＪ７ＭＳ１００１－００２３は、ＢｖＡＬＳの置換Ｄ３７１Ｅにつながる点突然変異に対してホモ接合であることが示された。このマーカーによって、３つの未知の突然変異体のうち２つである１８ＺＺＪＺＪ７ＭＳ１００１－００１８および１８ＺＺＪＺＪ７ＭＳ１００１－００３０は、ＢｖＡＬＳの置換Ｄ３７１Ｅにつながる点突然変異に対してヘテロ接合であることが同定された。

【0289】

同定されたＡＬＳ突然変異体は、圃場処理に使用される濃度のＣＯＮＶＩＳＯ（登録商標）ＯＮＥ処理、ならびにＣＯＮＶＩＳＯ（登録商標）ＯＮＥの各有効成分、ホラムスルフロンおよびチエンカルバゾン－メチルによる処理、Ｐｕｌｓａｒ（登録商標）４０（有効成分：イマザモックス）による処理、有効成分ビスピリバックによる処理、およびＢｒｏａｄｗａｙ（登録商標）（有効成分：フロラスラム、ピロキシラム）による処理で繰り返し試験された（表１）。いずれの除草剤処理も、推奨される圃場適用濃度の１倍に相当する量で行った：ＢｖＡＬＳ＿Ｄ３７１Ｅ突然変異およびＭ０－バックグラウンド遺伝子型について、ホモ接合およびヘテロ接合である植物の両方の子孫種子を播種し、温室で栽培し、発芽後に単一ポットに移植した。除草剤処理は本葉が出た時点で行った。

【0290】

【表3】

【0291】

耐性の評価は処理後１４日目に行った。除草剤耐性の指標として、最初の一対の本葉の生育を使用した。驚くべきことに、ホモ接合だけでなくヘテロ接合のＢｖＡＬＳ＿Ｄ３７１Ｅ突然変異体も、既知の５つのクラスのＡＬＳ阻害剤のうち４つに加え、２つのそのようなクラスのＡＬＳ阻害剤の混合物であるＣＯＮＶＩＳＯ（登録商標）ＯＮＥにも、目に見える植物毒性を示す除草剤のダメージを受けることなく生き残った（表２）。

【0292】

【表4】

【0293】

さらに、突然変異ＢｖＡＬＳ＿Ｄ３７１Ｅ（ＲＲ）のホモ接合であるテンサイ遺伝子型の１つを、第２のテンサイ遺伝子型と交雑した。子孫をＣＯＮＶＩＳＯ（登録商標）ＯＮＥに対する耐性に関して表現型分析した。遺伝学的にＲＲ：Ｒｓ：ｓｓ（１：２：１）の分離が予想された。観察により、３：１（抵抗性：感受性）の表現型の分離が示される。このことから、ヘテロ接合突然変異体であっても商業用途に適した高レベルの耐性を示すことが再確認される。

【配列表】

2024537389000001.xml

【国際調査報告】