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特表2024-537553歯肉炎と歯肉退縮の治療及び口腔粘膜の修復におけるオリゴペプチドの用途
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-10-10
(54)【発明の名称】歯肉炎と歯肉退縮の治療及び口腔粘膜の修復におけるオリゴペプチドの用途
(51)【国際特許分類】
A61K 38/08 20190101AFI20241003BHJP
A61K 38/07 20060101ALI20241003BHJP
A61P 1/02 20060101ALI20241003BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241003BHJP
C07K 7/06 20060101ALI20241003BHJP
C07K 5/103 20060101ALI20241003BHJP
【ＦＩ】
A61K38/08
A61K38/07
A61P1/02
A61P43/00 121
C07K7/06 ZNA
C07K5/103
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024547811
(86)(22)【出願日】2022-10-17
(85)【翻訳文提出日】2024-05-28
(86)【国際出願番号】 CN2022125610
(87)【国際公開番号】W WO2023066184
(87)【国際公開日】2023-04-27
(31)【優先権主張番号】202111222709.2
(32)【優先日】2021-10-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】524152104
【氏名又は名称】庄国昇
(74)【代理人】
【識別番号】100091683
【弁理士】
【氏名又は名称】▲吉▼川 俊雄
(74)【代理人】
【識別番号】100179316
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 寛奈
(72)【発明者】
【氏名】庄国昇
【テーマコード（参考）】
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084BA01
4C084BA07
4C084BA08
4C084BA16
4C084MA13
4C084MA16
4C084MA28
4C084MA43
4C084MA52
4C084NA12
4C084NA14
4C084ZA671
4C084ZC75
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA13
4H045BA14
4H045EA20
4H045FA20
(57)【要約】
本発明は、歯肉炎と歯肉退縮の治療及び口腔粘膜の修復におけるオリゴペプチドの用途を開示する。前記オリゴペプチドは、式（Ｉ）、即ち、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６（Ｉ）で表される構造を有する。Ｘ１は、グリシン（Ｇｌｙ，Ｇ）又はリシン（Ｌｙｓ，Ｋ）である。Ｘ２は、グルタミン酸（Ｇｌｕ，Ｅ）又はトレオニン（Ｔｈｒ，Ｔ）である。Ｘ３は、Ｋ又はＴである。Ｘ４は、Ｇ又はＫである。Ｘ５は、セリン（Ｓｅｒ，Ｓ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ，Ｆ）であるか、存在しない。且つ、Ｘ６は、Ｆであるか、存在しない。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
歯肉炎と歯肉退縮の治療及び口腔粘膜の修復のための薬剤の調製における下記式（Ｉ）のオリゴペプチドの用途であって、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ （Ｉ）
Ｘ１は、グリシン（Ｇｌｙ，Ｇ）又はリシン（Ｌｙｓ，Ｋ）であり、
Ｘ２は、グルタミン酸（Ｇｌｕ，Ｅ）又はトレオニン（Ｔｈｒ，Ｔ）であり、
Ｘ３は、Ｋ又はＴであり、
Ｘ４は、Ｇ又はＫであり、
Ｘ５は、セリン（Ｓｅｒ，Ｓ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ，Ｆ）であるか、存在せず、且つ、
Ｘ６は、Ｆであるか、存在しない用途。
【請求項2】
前記式（Ｉ）のオリゴペプチドはＧＥＫＧＦ及び／又はＧＥＫＧであることを特徴とする請求項１に記載の用途。
【請求項3】
前記式（Ｉ）のオリゴペプチドはＧＥＫＧであることを特徴とする請求項２に記載の用途。
【請求項4】
前記式（Ｉ）のオリゴペプチドはＫＴＴＫＳ及び／又はＫＴＴＫＳＦであることを特徴とする請求項１に記載の用途。
【請求項5】
前記式（Ｉ）のオリゴペプチドはＫＴＴＫＳであることを特徴とする請求項４に記載の用途。
【請求項6】
前記式（Ｉ）のオリゴペプチドはＧＥＫＧとＫＴＴＫＳの組み合わせであることを特徴とする請求項１に記載の用途。
【請求項7】
前記薬剤は、０．１～１０重量％のＧＥＫＧと、０．１～１０重量％のＫＴＴＫＳと、１又は複数の薬学的に許容可能な担体を含むことを特徴とする請求項６に記載の用途。
【請求項8】
前記薬剤は、０．２～２重量％のＧＥＫＧと、０．２～２重量％のＫＴＴＫＳと、１又は複数の薬学的に許容可能な担体を含むことを特徴とする請求項７に記載の用途。
【請求項9】
前記薬剤は、粉末、エアロゾル、軟膏、ゲル、ペースト又は溶液の形式をなすことを特徴とする請求項１～８のいずれか１項に記載の用途。
【請求項10】
前記薬剤は経口投与されることを特徴とする請求項９に記載の用途。
【請求項11】
前記薬剤は徐放型であることを特徴とする請求項１０に記載の用途。
【請求項12】
前記徐放型は、経粘膜吸収又は経口吸収の徐放型であることを特徴とする請求項１１に記載の用途。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、歯肉炎と歯肉退縮の治療及び口腔粘膜の修復におけるオリゴペプチドの用途に関する。本発明は医薬の技術分野に属する。
【背景技術】
【0002】
特許文献１は、遊離型又は塩型の塩基性アミノ酸及びフッ化物イオン源を含む口腔ケア組成物を開示している。
【0003】
特許文献２は、ザクロ、ニクズク、ショウガ及びジジフスジョアゼイロのうちの少なくとも３つの抽出物から選択される混合物を含む口腔用組成物を開示している。
【0004】
特許文献３は、分離された非毛球真皮鞘（ＮＤＢＳ）を含む細胞を口腔内に投与する歯肉損傷の治療方法を開示している。
【0005】
特許文献４は、口腔粘膜の治療におけるＮ末端及びＣ末端が置換された６つのアミノ酸を含むオリゴペプチドの用途を開示している。
【0006】
特許文献５は、副腎皮質刺激ホルモン又は抗炎症化合物を含む口腔軟組織の抗炎症・鎮痛剤を開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【特許文献1】台湾特許第Ｉ４４８３０６Ｂ号公報
【特許文献2】台湾特許第Ｉ４３２２０６Ｂ号公報
【特許文献3】台湾特許出願公開第２０１５３８７２９Ａ号公報
【特許文献4】台湾特許第Ｉ６３１１４１Ｂ号公報
【特許文献5】台湾特許出願公開第２０１８０６６０２Ａ号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
従来技術では、４つ、５つ又は６つのアミノ酸を含む非置換のオリゴペプチドを歯肉炎と歯肉退縮の治療及び口腔粘膜の修復に適用可能なことを教示も提案もしていない。
【課題を解決するための手段】
【0009】
本発明は、歯肉炎と歯肉退縮の治療及び口腔粘膜の修復のための薬剤の調製における下記式（Ｉ）のオリゴペプチド（又はペプチドと称する）の用途を開示する。
【0010】
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ （Ｉ）
【0011】
Ｘ１は、グリシン（Ｇｌｙ，Ｇ）又はリシン（Ｌｙｓ，Ｋ）である。
【0012】
Ｘ２は、グルタミン酸（Ｇｌｕ，Ｅ）又はトレオニン（Ｔｈｒ，Ｔ）である。
【0013】
Ｘ３は、Ｋ又はＴである。
【0014】
Ｘ４は、Ｇ又はＫである。
【0015】
Ｘ５は、セリン（Ｓｅｒ，Ｓ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ，Ｆ）であるか、存在しない。
【0016】
Ｘ６は、Ｆであるか、存在しない。
【0017】
好ましい実施例において、前記式（Ｉ）のオリゴペプチドはＧＥＫＧＦ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２）及び／又はＧＥＫＧ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１）である。
【0018】
別の好ましい実施例において、前記式（Ｉ）のオリゴペプチドはＧＥＫＧである。
【0019】
好ましい実施例において、前記式（Ｉ）のオリゴペプチドはＫＴＴＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．３）及び／又はＫＴＴＫＳＦ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．４）である。
【0020】
別の好ましい実施例において、前記式（Ｉ）のオリゴペプチドはＫＴＴＫＳである。
【0021】
好ましい実施例において、前記式（Ｉ）のオリゴペプチドはＧＥＫＧとＫＴＴＫＳの組み合わせである。
【0022】
好ましい実施例において、前記薬剤は、０．１～１０重量％のＧＥＫＧと、０．１～１０重量％のＫＴＴＫＳと、１又は複数の薬学的に許容可能な担体を含む。当該薬剤は、好ましくは、０．２～２重量％のＧＥＫＧ及び０．２～２重量％のＫＴＴＫＳを含む。
【0023】
別の好ましい実施例において、前記１又は複数の薬学的に許容可能な担体は、固体担体、半固体担体及び液体担体を含み、これらの固体担体、半固体担体及び液体担体の種類及び使用量は本技術分野において周知である。
【0024】
好ましい実施例において、前記薬剤は、粉末、エアロゾル、軟膏、ゲル、ペースト又は溶液の形式をなす。前記溶液は水溶性緩衝液の形式をなしてもよい。前記水溶性緩衝液は、リン酸塩又はクエン酸塩の水溶液を含むが、これらに限らない。
【0025】
好ましい実施例において、前記薬剤は経口投与される。当該経口投与には、経粘膜吸収及び経口吸収が含まれるが、これらに限らない。
【0026】
好ましい実施例において、前記薬剤は徐放型であり、特に、経粘膜吸収及び経口吸収の徐放型である。
【0027】
好ましい実施例において、前記ＧＥＫＧ及びＧＥＫＧＦと、ＫＴＴＫＳ及びＫＴＴＫＳＦは、従来技術（例えば、台湾特許出願公開第２０１１２９３６８Ａ１号公報及び台湾特許出願公開第２０１３３３０４５Ａ１号公報）に記載される方法に基づき調製可能である。
【0028】
当業者が本発明の構成、特徴及びその他の目的を更に理解し得るよう、以下に、本発明のいくつかの好ましい実施例を挙げるとともに、図面を組み合わせて下記のように詳細に説明し、且つ、当業者が具体的に実施できるようにする。
【図面の簡単な説明】
【0029】
【発明を実施するための形態】
【0030】
本発明は、歯肉炎と歯肉退縮の治療及び口腔粘膜の修復におけるオリゴペプチドの用途に関するものである。以下では、当業者が本明細書で開示する内容から本発明の利点及び効果を容易に理解できるよう、特定の具体的実施形態により本発明の技術内容について説明する。ただし、本発明はその他の異なる具体的実施形態によっても実施又は応用可能である。
【0031】
実施例１：生体外におけるＬ９２９細胞の増殖／細胞毒性分析によるＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳのＴＮＦα抑制活性及び細胞毒性評価
【0032】
生体外におけるＬ９２９細胞の増殖／細胞毒性分析はマイクロタイタープレート上で実施した。１０％ウシ血清、１％Ｐ／Ｓ及び１％非必須アミノ酸を含有するイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）でＬ９２９細胞を培養した。次に、集合したＬ９２９細胞を２ｍｌのＰＢＳ溶液で洗浄し、トリプシン処理したあとＥＭＥＭに再懸濁させた。続いて、２００μｌの細胞懸濁液を吸い取って細胞密度をカウントするとともに、残りの懸濁液を１５００ｒｐｍで５分間遠心分離にかけた。これにより上清液を除去し、当該希釈細胞にＥＭＥＭを加えることで、終濃度１．５ｘ１０５細胞／ｍｌを形成した。そして、１００μｌの細胞懸濁液を９６ウェル平底マイクロタイタープレートの各ウェルに加え、３７℃且つ５％ＣＯ２雰囲気で２４時間（ｈ）培養した。
【0033】
ＴＮＦα抑制活性
【0034】
まず、ＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳをそれぞれ１×ＰＢＳで１ｍｇ ＧＥＫＧ／ｍｌ及び１ｍｇ ＫＴＴＫＳ／ｍｌに相当する濃度まで溶解させた。次に、１×ＰＢＳ溶液でＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳを濃度５００μｇ／ｍｌ、１２５μｇ／ｍｌ、３１．２５μｇ／ｍｌ及７．８１μｇ／ｍｌとなるまでそれぞれ希釈し、希釈した溶液を等体積のＴＮＦα溶液と混合してから１ｈインキュベートした。続いて、この４種類の混合溶液を５０μｌずつ取り、上記のＬ９２９細胞を２４時間培養した９６ウェル平底マイクロタイタープレートに加えるとともに、培養液中のアクチノマイシンＤ（ＡｃｔＤ）の終濃度を２μｇ／ｍｌ、ＴＮＦαの終濃度を０．１ｎｇ／ｍｌに調整した。また、２μｇ／ｍｌのＡｃｔＤのみを加えたテストウェルと、０．１ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαのみを加えたテストウェルをそれぞれ陽性対照群及びブランク対照群とした。上記の９６ウェル平底マイクロタイタープレートを３７℃且つ５％ＣＯ２雰囲気で２４ｈ培養し続けた。そして、酵素結合免疫測定装置を用い、Ｏ．Ｄ．４９０／６３０ｎｍで数値を読み取って測定した。ＴＮＦα抑制作用の計算式は下記の通りであった。
【0035】
【数1】
【0036】
細胞毒性
【0037】
まず、ＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳをそれぞれ１×ＰＢＳで１ｍｇ ＧＥＫＧ／ｍｌ及び１ｍｇ ＫＴＴＫＳ／ｍｌに相当する濃度まで溶解させた。次に、１×ＰＢＳ溶液でＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳを濃度５００μｇ／ｍｌ、１２５μｇ／ｍｌ、３１．２５μｇ／ｍｌ及７．８１μｇ／ｍｌとなるまでそれぞれ希釈した。続いて、この４種類の希釈溶液を５０μｌずつ取り、上記のＬ９２９細胞を２４時間培養した９６ウェル平底マイクロタイタープレートに加えるとともに、培養液中のＡｃｔＤの終濃度を２μｇ／ｍｌに調整した。そして、上記の９６ウェル平底マイクロタイタープレートを３７℃且つ５％ＣＯ２雰囲気で２４ｈ培養し続けた。その後、５０μｌの２，３－ビス（２－メトキシ－４－ニトロ－５－スルホフェニル）－５－［（フェニルアミノ）カルボニル］－２Ｈ－水酸化テトラゾリウム（ＸＴＴ）を各ウェルに加えて４時間培養した。そして、酵素結合免疫測定装置を用い、Ｏ．Ｄ．４９０／６３０ｎｍで数値を読み取って測定した。細胞毒性の計算式は下記の通りであった。
【0038】
【数2】
【0039】
結果
【0040】
表１は、ＫＴＴＫＳの希釈倍数別のＬ９２９細胞についての分析結果を示している。ＫＴＴＫＳのＴＮＦα抑制率は１７９．４％であった。これより、図１のように、ＫＴＴＫＳは優れたＴＮＦα抑制作用を発揮し、且つ細胞毒性を有さないことが示された。
【0041】
【表1】
【0042】
表２は、ＧＥＫＧの希釈倍数別のＬ９２９細胞についての分析結果を示している。ＧＥＫＧのＴＮＦα抑制率は１８２．３％であった。これより、図２のように、ＧＥＫＧは優れたＴＮＦα抑制作用を発揮し、且つ細胞毒性を有さないことが示された。
【0043】
【表2】
【0044】
実施例２：炎症反応誘導物質（ＬＰＳ）により誘導生成される一酸化窒素（ＮＯ）（マクロファージ実験モデル）を生体外で抑制することでＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳのＮＯフリーラジカル捕捉能力（抗炎症作用）を評価
【0045】
既知の炎症反応誘導物質（ＬＰＳ）でマクロファージのＮＯ生成を誘導する実験モデルにより、生体外でＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳの抗炎症能力を評価した。
【0046】
ＫＴＴＫＳ及びＧＥＫＧの実験結果を図３及び図４にそれぞれ示す。これより、ＫＴＴＫＳ及びＧＥＫＧについて、いずれもＬＰＳに起因するＮＯ生成を抑制可能であること（即ち、抗炎症作用）が実証されたほか、薬物用量依存性（ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ）関係が存在することが示された。
【0047】
実施例３：生体外において炎症反応誘導物質（ＬＰＳ）により誘導生成される過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）（マクロファージ実験モデル）からＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳのＨ２Ｏ２捕捉能力（抗炎症型酸化ストレス作用）を評価
【0048】
既知の炎症反応誘導物質（ＬＰＳ）でマクロファージのＨ２Ｏ２生成を誘導する実験モデルにより、生体外でＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳの抗炎症型酸化ストレス能力を評価した。
【0049】
細胞膜透過性を有するジクロロフルオレセイン二酢酸（ｄｉｃｈｌｏｒｏｆｌｕｏｒｅｓｃｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ，ＤＣＦＨ－ＤＡ）を被検サンプルに加えた。ＤＣＦＨ－ＤＡは、細胞に進入すると、細胞内のＨ２Ｏ２に対し分解及び水素化反応（ｃｌｅａｖｅｄ ａｎｄ ｏｘｉｄｉｚｅｄ）を生じ、緑色蛍光を有するＤＣＦ産物を形成した。これにより、波長４８８～５３０ｎｍにおいて、ペプチドＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳがＬＰＳにより誘導生成されるフリーラジカルＨ２Ｏ２を抑制可能なことが検出された。また、ペプチド濃度の上昇に伴って、細胞がＬＰＳの刺激を受けて放出するフリーラジカル（Ｈ２Ｏ２）の濃度を明らかに低下させることができた。ＫＴＴＫＳ及びＧＥＫＧの実験結果を図５に示す。これより、ＫＴＴＫＳ及びＧＥＫＧについて、いずれもＬＰＳに起因するＨ２Ｏ２生成を抑制可能であること（即ち、抗炎症型酸化ストレス作用）が実証されたほか、薬物用量依存性関係が存在することが示された。
【0050】
実施例４：口腔上皮初期細胞の増殖促進評価
【0051】
図６は、異なる濃度のＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳが、生体外における口腔上皮初期細胞の増殖を促進可能なことを示すとともに、薬物用量依存性関係が存在することを示している。これより、ＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳを口腔粘膜の傷口の癒合に適用可能なことが実証された。
【0052】
実施例５：抗フリーラジカル／炎症反応により誘導される口腔上皮初期細胞死の評価
【0053】
図７は、異なる濃度のＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳが、生体外で、Ｈ２Ｏ２のフリーラジカルに起因する口腔上皮細胞死を低減させ得ることを示すとともに、薬物用量依存性関係が存在することを示している。これより、ＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳを口腔上皮細胞死の予防に適用可能であり、更には、口腔上皮細胞の保護、粘膜病変の防止、口腔癌の予防及び口腔潰瘍の治療を可能にすることが実証された。
【0054】
実施例６：ヒト歯肉線維芽細胞（ＨＧＦ）の増殖及びＩ型コラーゲンの生成の促進評価
【0055】
図８Ａは、異なる濃度のＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳが生体外のＨＧＦの増殖に顕著な影響を及ぼさないことを示している。
【0056】
図８Ｂにおいて、ＲＴ－ＰＣＲ産物のゲル電気泳動図は、ＧＡＰＤＨ及びＩ型コラーゲンのＤＮＡバンドがそれぞれ４６７ｂｐ及び４０９ｂｐの位置に現れたことを示している。これは、ＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳが、転写時にＩ型コラーゲン遺伝子の発現を刺激したことを示している。且つ、ヒト歯肉線維芽細胞においてＩ型コラーゲンの形成が認められた。また、当該Ｉ型コラーゲンの発現量とＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳの濃度には、０～４０μｌのときに用量依存性関係が存在していた。
【0057】
以上より、ＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳが歯肉のＩ型コラーゲンを増殖させる作用は、ヒト歯肉線維芽細胞の数の増殖によるものではなく、ヒト歯肉線維芽細胞に対する刺激又は活性化によりＩ型コラーゲンの増殖が達成されることが実証された。
【0058】
実施例７：ヒト歯肉線維芽細胞（ＨＧＦ）におけるＴＧＦ－β１の遺伝子発現促進評価
【0059】
ＴＧＦ－β１は、歯肉線維芽細胞及び骨芽細胞の増殖を調整可能であるとともに、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）と、Ｉ型及びＩＩＩ型コラーゲンの合成を促進することが知られている。
【0060】
生体外でのヒトＨＧＦにおけるＴＧＦ－β１の遺伝子発現促進
【0061】
図９Ａにおいて、ＲＴ－ＰＣＲ産物のゲル電気泳動図は、ＧＡＰＤＨ及びＴＧＦ－β１のＤＮＡバンドがそれぞれ４６７ｂｐ及び１６１ｂｐの位置に現れたことを示している。これは、ＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳが、転写時にＴＧＦ－β１遺伝子の発現を刺激したことを示している。
【0062】
図９Ｂは、ＴＧＦ－β１の発現量とＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳの濃度に用量依存性関係が存在することを示している。
【0063】
以上より、ＧＥＫＧ及びＫＴＴＫＳが、ヒトＨＧＦを刺激することでＴＧＦ－β１の発現を促進可能なことが実証された。
【0064】
ＴＧＦ－β１によるヒトＨＧＦにおける細胞外マトリックスの合成促進
【0065】
ＴＧＦ－β１（０．５ｎｇ／ｍｌ又は５ｎｇ／ｍｌ）を単独で使用するか、ＫＴＴＫＳ又はＧＥＫＧ（５０μＭ）と合わせて使用し、ヒトＨＧＦを処理することで、ＫＴＴＫＳ及びＧＥＫＧと、既知の細胞外マトリックス合成刺激因子であるＴＧＦ－β１とが、細胞外マトリックスの合成において相乗作用を有するか否かを確認した。
【0066】
０．２％血清を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）でヒトＨＧＦを２４時間前培養した。そして、３種類のＴＧＦβ１濃度（０ｎｇ／ｍｌ、０．５ｎｇ／ｍｌ及び５ｎｇ／ｍｌ）で２４時間処理するとともに、ＫＴＴＫＳ又はＧＥＫＧが存在しない場合（実線）、或いは、５０μＭ存在する場合（点線）で引き続き２４時間培養した。
【0067】
図１０は、ＫＴＴＫＳ又はＧＥＫＧが存在しない場合（実線）、或いは、５０μＭ存在する場合（点線）に合成されたコラーゲン量及びフィブリン量をそれぞれ示している。
【0068】
これより、ＴＧＦβ１とＫＴＴＫＳ及びＧＥＫＧが独立したメカニズムでＥＣＭの生合成を向上させ、且つ、ＫＴＴＫＳ及びＧＥＫＧがヒトＨＧＦにおけるＥＣＭ合成を誘導する能力はＴＧＦβ１を上回ることが実証された。また、別の可能なメカニズムとして、ＴＧＦβ１とＫＴＴＫＳ又はＧＥＫＧは連携してＥＣＭの生合成を増大させた。
【0069】
実施例８：ＫＴＴＫＳ又はＧＥＫＧを含む歯肉修復液の調製及び歯肉成長における効果
【0070】
下記表３に記載する成分及び割合で歯肉修復液を調製した。
【0071】
【表3】
【0072】
脱イオン水を計量して乳化釜に入れ、当該乳化釜の温度を２０℃に維持しつつ、計量したＥＤＴＡ．２Ｎａ、安息香酸ナトリウム及びクエン酸を順に投入した。次に、攪拌器を起動して均一に溶解させてから、グリセロール及びソルビトールを順に投入して引き続き均一に攪拌した。そして、ペパーミントオイル及びＰＥＧ－４０水添ヒマシ油を混合したあと当該乳化釜に投入し、均一に攪拌してから、最後にＫＴＴＫＳ及びＧＥＫＧを投入して均一に攪拌した。
【0073】
当該歯肉修復液の使用方式としては、毎日２回投与した。また、１回あたり約５～６ｍｌを投与し、約１０～１５分間口に含ませてから吐き出させた。
【0074】
図１１に示すように、治療前の歯Ａの歯肉は明らかに退縮していたが、当該歯肉修復液の使用から１か月後には、当該歯Ａの歯肉はそれ以上退縮することなく成長していた。また、当該歯肉修復液の使用から６か月後には、当該歯Ａの歯肉は明らかに成長し、歯の隙間が縮小していた。
【0075】
これより、当該歯肉修復液が、退縮した歯肉の成長を刺激する機能を有することが実証された。
【0076】
以上より、本発明は、従来技術に存在する課題を有効に解決可能なだけでなく、効果を大幅に促進することも可能である。且つ、同じ技術分野において、同一又は類似の製品の創造又は公開・使用及び効果の促進は見られない。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図9A】
【図9B】
【図10】
【図11】
【配列表】
【国際調査報告】