特表 2024-537824 ピラゾロキノリンＫＲＡＳ阻害剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-16

(54)【発明の名称】ピラゾロキノリンＫＲＡＳ阻害剤

(51)【国際特許分類】

   C07D 471/04 20060101AFI20241008BHJP

   A61K 31/4745 20060101ALI20241008BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20241008BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241008BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241008BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20241008BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20241008BHJP

【ＦＩ】

C07D471/04 105C

C07D471/04 CSP

A61K31/4745

A61P35/02

A61P35/00

A61P43/00 111

A61P37/02

A61P29/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024519781

(86)(22)【出願日】2022-09-30

(85)【翻訳文提出日】2024-05-28

(86)【国際出願番号】 US2022077350

(87)【国際公開番号】W WO2023056421

(87)【国際公開日】2023-04-06

(31)【優先権主張番号】63/261,982

(32)【優先日】2021-10-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＢＲＩＪ

(71)【出願人】

【識別番号】505193450

【氏名又は名称】インサイト・コーポレイション

【氏名又は名称原語表記】ＩＮＣＹＴＥ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100156144

【弁理士】

【氏名又は名称】落合 康

(72)【発明者】

【氏名】ジュー，ウェンユー

(72)【発明者】

【氏名】ワン，シャオジャオ

(72)【発明者】

【氏名】ヤオ，ウェンチン

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086CB05

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZB07

4C086ZB11

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC41

(57)【要約】

式（Ｉ）の化合物、ＫＲＡＳ活性を阻害するために化合物を使用する方法、及びそのような化合物を含む薬学的組成物が開示される。化合物は、がんなどのＫＲＡＳ活性に関連する疾患または障害を治療、予防、または改善するのに有用である。
【化１】

【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）

【化1】

を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｒ^１が、Ｃｌ、ＣＨ_３、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、及びＣＦ_３から選択され、
Ｃｙ^１が、以下から選択され、

【化2】

Ｒ^２が、Ｆ及びＣｌから選択され、
Ｒ^３が、以下から選択され、

【化3】

かつ、
Ｃｙ^２が、以下から選択され、

【化4】

但し、式Ｉの前記化合物が、以下以外である、前記化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【表1】

【請求項2】

Ｒ^１が、Ｃｌ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、及びＣＦ_３から選択され、
Ｃｙ^１が、以下から選択され、

【化5】

Ｒ^２が、Ｆ及びＣｌから選択され、
Ｒ^３が、以下から選択され、

【化6】

かつ、
Ｃｙ^２が、以下から選択される、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【化7】

【請求項3】

Ｒ^１が、ＣＨ_３、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、及びＣＦ_３から選択される、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項4】

Ｒ^１が、Ｃｌ、ＣＨ_３、及びＣＦ_３から選択される、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項5】

Ｒ^１が、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、及びＣＦ_３から選択される、請求項１もしくは２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項6】

Ｒ^１が、Ｃｌ及びＣＨ_３から選択される、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項7】

Ｒ^１が、Ｃｌ及びＣＦ_３から選択される、請求項１もしくは２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項8】

Ｒ^１が、ＣＨ_３及びＣＦ_３から選択される、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項9】

Ｃｙ^１が、Ｃｙ^１－ａ及びＣｙ^１－ｂから選択される、請求項１～８のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項10】

Ｃｙ^１が、Ｃｙ^１－ａ及びＣｙ^１－ｃから選択される、請求項１～８のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項11】

Ｃｙ^１が、Ｃｙ^１－ｂ及びＣｙ^１－ｃから選択される、請求項１～８のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項12】

Ｒ^２が、Ｆである、請求項１～１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項13】

Ｒ^２が、Ｃｌである、請求項１～１１のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項14】

Ｒ^３が、Ｒ^３－ａである、請求項１～１３のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項15】

Ｒ^３が、Ｒ^３－ｂである、請求項１～１３のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項16】

Ｃｙ^２が、Ｃｙ^２－ａ及びＣｙ^２－ｂから選択される、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項17】

Ｃｙ^２が、Ｃｙ^２－ａ及びＣｙ^２－ｃから選択される、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項18】

Ｃｙ^２が、Ｃｙ^２－ｂ及びＣｙ^２－ｃから選択される、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項19】

Ｃｙ^１が、Ｃｙ^１－ａであり、
Ｃｙ^２が、Ｃｙ^２－ａである、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。

【請求項20】

前記化合物が、
１－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ブタ－２－イノイル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－８－クロロ－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル、
１－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（（Ｅ）－４－メトキシブタ－２－エノイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル、
１－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（２－フルオロアクリロイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル、
２－（（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（５，６－ジメチル－１Ｈ－インダゾール－４－イル）－４－（３－（エチル（メチル）アミノ）アゼチジン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－１－（２－フルオロアクリロイル）ピペリジン－２－イル）アセトニトリル、
８－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（２－フルオロアクリロイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル、
８－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（（Ｅ）－４－メトキシブタ－２－エノイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル、及び
８－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ブタ－２－イノイル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－８－メチル－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル、
から選択される、請求項１に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。

【請求項21】

請求項１～２０のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。

【請求項22】

ＫＲＡＳ活性を阻害する方法であって、請求項１～２０のいずれか１項に記載の化合物、もしくは薬学的に許容される塩、または請求項２１に記載の薬学的組成物を、ＫＲＡＳと接触させることを含む、前記方法。

【請求項23】

前記接触させることが、前記化合物を患者に投与することを含む、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

ＫＲＡＳ相互作用の阻害に関連する疾患または障害を治療する方法であって、前記治療を必要とする患者に、治療有効量の請求項１～２０のいずれか１項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容される塩、または請求項２１に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項25】

Ｇ１２Ｃ変異を有するＫＲＡＳタンパク質の阻害に関連する疾患または障害を治療する方法であって、前記治療を必要とする患者に、治療有効量の請求項１～２０のいずれか１項に記載の化合物、もしくはその薬学的に許容される塩、または請求項２１に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項26】

患者におけるがんを治療するための方法であって、前記患者に、治療有効量の請求項１～２０のいずれか１項に記載の化合物、もしくは薬学的に許容される塩、または請求項２１に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。

【請求項27】

前記がんが、癌腫、血液癌、肉腫、及び神経膠芽腫から選択される、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

前記血液癌が、骨髄増殖性新生物、骨髄異形成症候群、慢性及び若年性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、及び多発性骨髄腫から選択される、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記癌腫が、膵臓癌腫、結腸直腸癌腫、肺癌腫、膀胱癌腫、胃癌腫、食道癌腫、乳房癌腫、頭頸部癌腫、子宮頸部癌腫、皮膚癌腫、及び甲状腺癌腫から選択される、請求項２７に記載の方法。

【請求項30】

前記疾患または障害が、免疫学的または炎症性障害である、請求項２５に記載の方法。

【請求項31】

前記免疫学的または炎症性障害が、ＫＲＡＳの体細胞変異によって引き起こされるＲａｓ関連リンパ増殖性障害及び若年性骨髄単球性白血病である、請求項３０に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、２０２１年１０月１日に出願された米国仮出願第６３／２６１，９８２号の優先権を主張し、その全体の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

本開示は、化合物ならびにそれらの組成物及び使用方法を提供する。当該化合物はＫＲＡＳ活性を調節し、がんを含む種々の疾患の治療に有用である。

【背景技術】

【0003】

Ｒａｓタンパク質は、増殖因子及び種々の細胞外刺激によって活性化される低分子量ＧＴＰａｓｅのファミリーの一部である。Ｒａｓファミリーは、細胞の増殖、遊走、生存及び分化に関与する細胞内シグナル伝達経路を調節する。細胞膜でのＲＡＳタンパク質の活性化は、重要なエフェクターの結合、ならびにＲＡＦ及びＰＩ３Ｋキナーゼ経路を含む細胞内の細胞内シグナル伝達経路のカスケードの開始をもたらす。ＲＡＳにおける体細胞変異は、制御されない細胞増殖及び悪性形質転換を生じる場合がある一方で、ＲＡＳタンパク質の活性化は正常細胞では厳密に調節されている（Ｓｉｍａｎｓｈｕ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ １７０．１（２０１７）：１７－３３）。

【0004】

Ｒａｓファミリーは３つのメンバー：ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ及びＨＲＡＳから構成される。ＲＡＳ変異がんは、ヒトがんの約２５％を占める。ＫＲＡＳは最も頻繁に変異するアイソフォームであり、全てのＲＡＳ変異８５％を占めるが、ＮＲＡＳ及びＨＲＡＳは、全てのＲＡＳ変異がんのそれぞれ１２％及び３％に変異が認められる（Ｓｉｍａｎｓｈｕ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ １７０．１（２０１７）：１７－３３）。ＫＲＡＳ変異は上位３つの最も致死的ながんの種類：膵臓癌（９７％）、結腸直腸癌（４４％）、及び肺癌（３０％）の間で広く見られる（Ｃｏｘ，Ａ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ（２０１４）１３：８２８－５１）。ＲＡＳ変異の大部分は、アミノ酸残基１２、１３、及び６１で発生する。特定の変異の頻度は、ＲＡＳ遺伝子アイソフォーム間で異なり、Ｇ１２及びＱ６１の変異は、それぞれＫＲＡＳ及びＮＲＡＳにおいて優勢であるが、Ｇ１２、Ｇ１３及びＱ６１の変異は、ＨＲＡＳにおいて最も頻繁である。更に、ＲＡＳアイソフォームにおける変異のスペクトルは、がんの種類間で異なる。例えば、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ変異は、膵臓癌（５１％）で優勢であり、続いて、結腸直腸腺癌（４５％）及び肺癌（１７％）で優勢であり、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ変異は、膵臓癌（３０％）と関連し、結腸直腸腺癌（２７％）及び肺腺癌（２３％）がそれに続く（Ｃｏｘ，Ａ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ（２０１４）１３：８２８－５１）。対照的に、ＫＲＡＳのＧ１２Ｃ変異は、肺腺癌の１１～１６％を含む非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、ならびに膵臓腺癌及び結腸直腸腺癌の２～５％において優勢である（Ｃｏｘ，Ａ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．（２０１４）１３：８２８－５１）。数百のがん細胞株にわたるゲノム研究は、ＫＲＡＳ変異を有するがん細胞が、細胞増殖及び生存に関するＫＲＡＳ機能に高度に依存することを実証してきた（ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ １７０（２０１７）：５７７－５９２）。発がん性ドライバーとしての変異体ＫＲＡＳの役割は、変異体ＫＲＡＳが動物モデルにおける初期腫瘍の発症及び維持に必要であることを示す広範なインビボの実験的証拠によって更に支持されている（Ｃｏｘ，Ａ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ（２０１４）１３：８２８－５１）。

【0005】

まとめると、これらの知見は、ＫＲＡＳ変異がヒトのがんにおいて重要な役割を担うことを示唆し、したがって、変異体ＫＲＡＳを標的とする阻害剤の開発は、ＫＲＡＳ変異を特徴とする疾患の臨床治療において有用であり得る。

【発明の概要】

【0006】

本開示は、とりわけ、式Ｉの化合物

【化1】

またはその薬学的に許容される塩を提供するものであり、式中、構成変数は本明細書で規定されている。

【0007】

本開示は更に、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩、及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体または賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。

【0008】

本開示は更に、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩を個体に投与することを含む、ＫＲＡＳ活性を阻害する方法を提供する。本開示はまた、療法に使用するための薬剤の製造における、本明細書に記載されている化合物の使用を提供する。本開示はまた、療法に使用するための、本明細書に記載されている化合物も提供する。

【0009】

本開示は更に、治療有効量の本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む、患者において疾患または障害を治療する方法を提供する。

【発明を実施するための形態】

【0010】

化合物
ある態様では、本明細書に提供されているのは、式Ｉ：

【化2】

を有する化合物、またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
Ｒ^１は、Ｃｌ、ＣＨ_３、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、及びＣＦ_３から選択され、
Ｃｙ^１は、以下から選択され、

【化3】

Ｒ^２は、Ｆ及びＣｌから選択され、
Ｒ^３は、以下から選択され、

【化4】

かつ、
Ｃｙ^２は、以下から選択され、

【化5】

但し、式Ｉの化合物は、以下以外である、化合物、またはその薬学的に許容される塩である。

【表1】

【0011】

式Ｉ、またはその薬学的に許容される塩の一実施形態では、
Ｒ^１は、Ｃｌ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、及びＣＦ_３から選択され、
Ｃｙ^１は、以下から選択され、

【化6】

Ｒ^２は、Ｆ及びＣｌから選択され、
Ｒ^３は、以下から選択され

【化7】

かつ、
Ｃｙ^２は、以下から選択される。

【化8】

【0012】

式Ｉ、またはその薬学的に許容される塩の別の実施形態では、
Ｒ^１は、Ｃｌであり、
Ｃｙ^１は、以下から選択され、

【化9】

Ｒ^２は、Ｆであり、
Ｒ^３は、以下であり、

【化10】

かつ、
Ｃｙ^２は、以下から選択される。

【化11】

【0013】

式Ｉ、またはその薬学的に許容される塩の一実施形態では、Ｒ^１は、Ｃｌ、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、及びＣＦ_３から選択される。更に別の実施形態では、Ｒ^１は、ＣＨ_３、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、及びＣＦ_３から選択される。なおも別の実施形態では、Ｒ^１は、Ｃｌ、ＣＨ_３、及びＣＦ_３から選択される。

【0014】

式Ｉ、またはその薬学的に許容される塩の一実施形態では、Ｒ^１は、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、及びＣＦ_３から選択される。別の実施形態では、Ｒ^１は、Ｃｌ及びＣＨ_３から選択される。更に別の実施形態では、Ｒ^１は、Ｃｌ及びＣＦ_３から選択される。なおも別の実施形態では、Ｒ^１は、ＣＨ_３及びＣＦ_３から選択される。

【0015】

式Ｉ、またはその薬学的に許容される塩の一実施形態では、Ｒ^１は、Ｃｌである。別の実施形態では、Ｒ^１は、ＣＨ_３である。更に別の実施形態では、Ｒ^１は、ＣＨ_２Ｆである。なおも別の実施形態では、Ｒ^１は、ＣＨＦ_２である。一実施形態では、Ｒ^１は、ＣＦ_３である。

【0016】

式Ｉ、またはその薬学的に許容される塩の一実施形態では、Ｃｙ^１は、Ｃｙ^１－ａ及びＣｙ^１－ｂから選択される。別の実施形態では、Ｃｙ^１は、Ｃｙ^１－ａ及びＣｙ^１－ｃから選択される。更に別の実施形態では、Ｃｙ^１は、Ｃｙ^１－ｂ及びＣｙ^１－ｃから選択される。

【0017】

式Ｉ、またはその薬学的に許容される塩の一実施形態では、Ｃｙ^１はＣｙ^１－ａである。別の実施形態では、Ｃｙ^１は、Ｃｙ^１－ｂである。別の実施形態では、Ｃｙ^１は、Ｃｙ^１－ｃである。

【0018】

式Ｉ、またはその薬学的に許容される塩の一実施形態では、Ｒ^２は、Ｆである。別の実施形態では、Ｒ^２は、Ｃｌである。

【0019】

式Ｉ、またはその薬学的に許容される塩の一実施形態では、Ｒ^３は、Ｒ^３－ａである。別の実施形態では、Ｒ^３は、Ｒ^３－ｂである。

【0020】

式Ｉ、またはその薬学的に許容される塩の一実施形態において、Ｃｙ^２は、Ｃｙ^２－ａ及びＣｙ^２－ｂから選択される。別の実施形態では、Ｃｙ^２は、Ｃｙ^２－ａ及びＣｙ^２－ｃから選択される。別の実施形態では、Ｃｙ^２は、Ｃｙ^２－ｂ及びＣｙ^２－ｃから選択される。別の実施形態では、Ｃｙ^２は、Ｃｙ^２－ａである。更に別の実施形態では、Ｃｙ^２は、Ｃｙ^２－ｂである。なおも別の実施形態では、Ｃｙ^２は、Ｃｙ^２－ｃである。

【0021】

式Ｉ、またはその薬学的に許容される塩の一実施形態では、Ｃｙ^１は、Ｃｙ^１－ａであり、Ｃｙ^２は、Ｃｙ^２－ａである。

【0022】

式Ｉ、またはその薬学的に許容される塩の一実施形態では、式Ｉの化合物は、以下以外である。

【表2】

【0023】

一実施形態では、式Ｉの化合物は、
１－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ブタ－２－イノイル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－８－クロロ－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル、
１－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（（Ｅ）－４－メトキシブタ－２－エノイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル、
１－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（２－フルオロアクリロイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル、
２－（（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（５，６－ジメチル－１Ｈ－インダゾール－４－イル）－４－（３－（エチル（メチル）アミノ）アゼチジン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－１－（２－フルオロアクリロイル）ピペリジン－２－イル）アセトニトリル、
８－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（２－フルオロアクリロイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル、
８－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（（Ｅ）－４－メトキシブタ－２－エノイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル、及び
８－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ブタ－２－イノイル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－８－メチル－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル、
またはそれらの薬学的に許容される塩から選択される。

【0024】

別の実施形態では、式Ｉの化合物は、
１－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ブタ－２－イノイル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－８－クロロ－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル、
１－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（（Ｅ）－４－メトキシブタ－２－エノイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル、
１－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（２－フルオロアクリロイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル、
２－（（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（５，６－ジメチル－１Ｈ－インダゾール－４－イル）－４－（３－（エチル（メチル）アミノ）アゼチジン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－１－（２－フルオロアクリロイル）ピペリジン－２－イル）アセトニトリル、
８－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（２－フルオロアクリロイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル、及び
８－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（（Ｅ）－４－メトキシブタ－２－エノイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル、
またはそれらの薬学的に許容される塩から選択される。

【0025】

更に別の実施形態では、式Ｉの化合物は、８－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ブタ－２－イノイル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－８－メチル－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル、またはその薬学的に許容される塩である。

【0026】

なおも別の実施形態では、式Ｉの化合物は、１－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（２－フルオロアクリロイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル、またはその薬学的に許容される塩である。

【0027】

別の実施形態では、本明細書の式の化合物は、式の化合物またはその薬学的に許容される塩である。

【0028】

明確にするために、別々の実施形態の文脈において説明される本発明の特定の特徴は、単一の実施形態と組み合わせて提供することもできる（一方で、実施形態は、多重従属形式で記載されたように、組み合わされることが意図される）と更に理解される。逆に、簡潔性のために単一の実施形態の文脈において説明される本発明の種々の特徴を、別個にまたは任意の好適な部分的組み合わせで提供することもできる。したがって、式Ｉの化合物の実施形態を任意の好適な組み合わせで組み合わせることができると記載される特徴として企図されている。

【0029】

特定の場所で、定義または実施形態は、特定の環（例えば、アゼチジン環、ピリジン環など）を指す。特に明記されていない限り、これらの環は、原子の原子価を超えないという条件で、任意の環員に結合することができる。例えば、アゼチジン環は、環の任意の位置で結合されてもよいのに対して、アゼチジン－３－イル環は３位で結合される。

【0030】

本明細書に記載されている化合物は、不斉であり得る（例えば、１つ以上の立体中心を有する）。特に明記されていない限り、エナンチオマー及びジアステレオマーのような全ての立体異性体が意図されている。不斉置換された炭素原子を含有する本発明の化合物は、光学的に活性がある形態、またはラセミ形態で単離され得る。光学的に不活性な出発材料から光学活性形態を調製する方法は、ラセミ混合物の分割によるのものまたは立体選択的合成によるものなど、当該技術分野において既知のものである。オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合などの多くの幾何異性体は、本明細書に記載されている化合物中に存在することもでき、全てのそのような安定した異性体が、本発明において企図される。本発明の化合物のシス及びトランスの幾何異性体が記載され、異性体の混合物として、または分離された異性体形態として単離され得る。

【0031】

化合物のラセミ混合物の分割は、当該技術分野で既知の多数の方法のうちのいずれかによって実施され得る。１つの方法は、光学的に活性な塩形成有機酸であるキラル分割酸を使用した分画再結晶化を含む。分画再結晶化方法に好適な分割剤は、例えば、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸、またはβ－カンファースルホン酸のような様々な光学的に活性なカンファースルホン酸のＤ及びＬ形態のような光学的に活性な酸である。分画結晶化方法に好適な他の分割剤は、α－メチルベンジルアミンの立体異性体的に純粋な形態（例えば、Ｓ及びＲ形態、またはジアステレオマー的に純粋な形態）、２－フェニルグリシノール、ノルエフェドリン、エフェドリン、Ｎ－メチルエフェドリン、シクロヘキシルエチルアミン、１，２－ジアミノシクロヘキサンなどを含む。

【0032】

ラセミ混合物の分割はまた、光学活性分割剤（例えば、ジニトロベンゾイルフェニルグリシン）を充填したカラム上への溶出によって実施され得る。好適な溶出溶媒組成物は当業者によって決定され得る。

【0033】

いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、（Ｒ）－構成を有する。他の実施形態では、本化合物は、（Ｓ）－構成を有する。１超のキラル中心を持つ化合物では、化合物におけるキラル中心のそれぞれは、別に示されない限り、独立して（Ｒ）または（Ｓ）であってもよい。

【0034】

本発明の化合物には、互変異性形態も含まれる。互変異性形態は、単結合と隣接する二重結合が入れ替わり、それに伴ってプロトンが移動することによって生じる。互変異性形態には、同じ実験式及び総電荷を有する異性体のプロトン化状態であるプロトトロピック互変異性体が含まれる。プロトトロピック互変異性体の例は、ケトン－エノール対、アミド－イミド酸対、ラクタム－ラクチム対、エナミン－イミン対、ならびにプロトンが複素環系の２つ以上の位置を占めることができる環状形態、例えば、１Ｈ－及び３Ｈ－イミダゾール、１Ｈ－、２Ｈ－及び４Ｈ－１，２，４－トリアゾール、１Ｈ－及び２Ｈ－イソインドール、ならびに１Ｈ－及び２Ｈ－ピラゾールを含む。互変異性形態は、平衡状態であり得るか、または適切な置換によって１つの形態に立体的に固定することができる。

【0035】

本発明の化合物には、中間体または最終化合物において発生する原子の全ての同位体も含まれ得る。同位体は、原子番号が同じであるが、質量数が異なる原子を含む。例えば、水素の同位体は、トリチウム及び重水素を含む。本発明の化合物の１つ以上の構成原子は、天然または非天然存在比で原子の同位体で置き換えられるか、または置換されることができる。いくつかの実施形態では、化合物は少なくとも１つの重水素原子を含む。例えば、本開示の化合物における１つ以上の水素原子を、重水素で置き換えることができ、または置換することができる。いくつかの実施形態では、化合物は２つ以上の重水素原子を含む。いくつかの実施形態では、化合物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２の重水素原子を含む。有機化合物中に同位体を含めるための合成法は、当該技術分野では既知である（Ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｂｙ Ａｌａｎ Ｆ．Ｔｈｏｍａｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ａｐｐｌｅｔｏｎ－Ｃｅｎｔｕｒｙ－Ｃｒｏｆｔｓ，１９７１；Ｔｈｅ Ｒｅｎａｉｓｓａｎｃｅ ｏｆ Ｈ／Ｄ Ｅｘｃｈａｎｇｅ ｂｙ Ｊｅｎｓ Ａｔｚｒｏｄｔ，Ｖｏｌｋｅｒ Ｄｅｒｄａｕ，Ｔｈｏｒｓｔｅｎ Ｆｅｙ ａｎｄ Ｊｏｃｈｅｎ Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００７，７７４４－７７６５；Ｔｈｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｉｓｏｔｏｐｉｃ Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ ｂｙ Ｊａｍｅｓ Ｒ．Ｈａｎｓｏｎ，Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１１）。同位体標識化合物は、ＮＭＲ分光法、代謝実験、及び／またはアッセイのような種々の試験において使用することができる。

【0036】

重水素のような更に重い同位体による置換は、更に大きな代謝安定性の結果として生じるある特定の治療上の利点、例えば、インビボでの半減期の増加または必要な投与量の減少をもたらし得、したがって、いくつかの状況では好ましい場合がある。（Ａ．Ｋｅｒｅｋｅｓ ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１１，５４，２０１－２１０、Ｒ．Ｘｕ ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｌａｂｅｌ Ｃｏｍｐｄ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．２０１５，５８，３０８－３１２）。

【0037】

「化合物」という用語は、本明細書で使用されるとき、図示される構造の全ての立体異性体、幾何異性体、互変異性体、及び同位体を含むことを意味する。この用語はまた、例えば、合成で、生物学的プロセス（例えば、代謝または酵素変換）を介して、またはそれらの組み合わせを介してそれらがどのように調製されるかに関係なく、本発明の化合物を指すことを意味する。

【0038】

全ての化合物及びその薬学的に許容される塩は、水及び溶媒のような他の物質と一緒に見いだされ得る（例えば、水和物及び溶媒和物）、または単離され得る。固体状態である場合、本明細書に記載されている化合物及びその塩は、種々の形態で発生してもよく、例えば、水和物を含む溶媒和物の形態を取ってもよい。化合物は、多形体または溶媒和物のような任意の固体形態であってもよく、したがって、特に明確に示されない限り、化合物及びその塩に対する本明細書における言及は、化合物の任意の固体形態を包含すると理解されるべきである。

【0039】

いくつかの実施形態では、本発明の化合物またはその塩は実質的に単離される。「実質的に単離される」とは、化合物が形成されたまたは検出された環境から化合物が少なくとも部分的に、または実質的に分離されていることを意味する。部分的な分離には、例えば、本発明の化合物が濃縮された組成物が含まれ得る。実質的な分離には、本発明の化合物またはその塩の少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、または少なくとも約９９重量％を含有する組成物が含まれ得る。

【0040】

「薬学的に許容される」という語句は、安全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴うことなくヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに好適であり、妥当な利益／リスク比に見合う化合物、物質、組成物、及び／または剤形を指すのに本明細書で採用されている。

【0041】

本明細書で使用される「周囲温度」及び「室温」という表現は、当該技術分野で理解され、一般に、およそ反応が実行される部屋の温度、例えば、約２０℃～約３０℃の温度である温度、例えば、反応温度を指す。

【0042】

本発明には、本明細書に記載されている化合物の薬学的に許容される塩も含まれる。「薬学的に許容される塩」という用語は、開示されている化合物の誘導体を指し、親化合物は、既存の酸または塩基の部分をその塩形態に変換することによって修飾される。薬学的に許容される塩の例には、アミンのような塩基性残基の無機酸塩または有機酸塩、カルボン酸のような酸性残基のアルカリ塩または有機塩などが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の薬学的に許容される塩には、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成される親化合物の非毒性塩が含まれる。本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法により、塩基性部分または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、そのような塩は、水中もしくは有機溶媒中、またはその２つの混合物中で、化学量論的量の適切な塩基または酸と、これらの化合物の遊離酸または塩基形態を反応させることにより調製することができ、一般に、エーテル、酢酸エチル、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、もしくはブタノール）またはアセトニトリル（ＭｅＣＮ）のような非水性媒質が好ましい。好適な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７^ｔｈ Ｅｄ．，（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，１９８５），ｐ．１４１８、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７，６６（１），１－１９及びＳｔａｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，（Ｗｉｌｅｙ，２００２）に見いだされる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている化合物にはＮ－オキシド形態が含まれる。

【0043】

合成
本発明の化合物（その塩を含む）は、既知の有機合成手法を使用して調製され得、以下のスキームにおけるもののような、多数の可能な合成経路のいずれかに従って合成され得る。

【0044】

本発明の化合物を調製するための反応は、有機合成の当業者によって容易に選択され得る好適な溶媒中において実施され得る。好適な溶媒は、反応が実施される温度、例えば、溶媒の凍結温度から溶媒の沸騰温度の範囲であり得る温度で、出発物質（反応物）、中間体または生成物と実質的に非反応性であり得る。所与の反応は、１つの溶媒または１よりも多くの溶媒の混合物において実施することができる。特定の反応ステップに応じて、特定の反応ステップに好適な溶媒が当業者によって選択され得る。

【0045】

本発明の化合物の調製は、種々の化学基の保護及び脱保護を含むことができる。保護及び脱保護の必要性、ならびに適切な保護基の選択は、当業者によって容易に決定され得る。保護基の化学は、例えば、Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ，（Ｔｈｉｅｍｅ，２００７）、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，６^ｔｈ Ｅｄ．（Ｗｉｌｅｙ，２００７）、Ｐｅｔｕｒｓｓｉｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，”Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｅｄｕｃ．，１９９７，７４（１１），１２９７、及びＷｕｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，４ｔｈ Ｅｄ．，（Ｗｉｌｅｙ，２００６）に記載される。

【0046】

反応は、当該技術分野で既知の任意の好適な方法に従ってモニタリングされ得る。例えば、生成物形成は、核磁気共鳴分光法（例えば、^１Ｈまたは^１３Ｃ）、赤外線分光法、分光光度測定（例えば、ＵＶ－可視）、質量分析法のような分光学的手段によって、または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）もしくは薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）のようなクロマトグラフィー方法によってモニタリングされ得る。

【0047】

以下のスキームは、本発明の化合物の調製に関連する一般的な指針を提供する。当業者は、スキームに示される調製物が、本発明の種々の化合物を調製するために有機化学の一般知識を使用して修飾または最適化され得ることを理解するであろう。

【化12】

【0048】

式１－１７の化合物は、スキーム１に概説される合成経路を介して調製され得る。エタノール中のＨ_２ＳＯ_４を用いた市販の出発物質１－１のエステル化。Ｎ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）などの適切な試薬による化合物１－２のハロゲン化は、中間体１－３（Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩなどのハロゲン化物である）をもたらす。化合物１－５は、１－３をエチルマロニルクロリド（１－４）などの試薬で処理することによって調製することができる。中間体１－５は、環化反応（エタノール中のナトリウムエトキシドなど）を受けて、化合物１～６を産生することができ、これは、適切な試薬（例えば、ＰＯＣｌ_３）で処理されて、化合物１～７をもたらすことができる。中間体１－７のアミン１－８との縮合（ＰＧは、Ｂｏｃなどの適切な保護基である）を実施して、化合物１－９を生成することができる。還元試薬（ＤＩＢＡＬなど）によるエステルの還元、それに続く酸化試薬（Ｄｅｓｓ－Ｍａｒｔｉｎペルヨージナンなど）による中間体の酸化により、アルデヒド１－１０を得る。中間体１－１０をヒドロキシルアミン塩酸塩及びピリジンで処理すると、化合物１－１１が得られる。中間体１－１１は、環化反応（例えば、ＤＣＭ中のメタンスルホニルクロリド、アミノピリジン）を経て、化合物１～１２を産生することができる。次いで、１－１３内のＲ^３基は、Ｓ_ＮＡｒ反応またはカップリング反応などの好適な変換を介して配置することができる。中間体１－１３は、まず、保護基ＰＧの脱保護を経て、続いて、得られたアミンの官能化（例えば、酸塩化物、例えば、アクリロイルクロリドとのカップリング）を経て、次いで、化合物１－１４を得ることができる。１－１４（Ｈａｌ）のハロゲンは、任意選択的に、遷移金属媒介カップリングまたは他の好適な方法を介してＲ^２に変換して１－１５を得ることができる。所望の生成物１－１７は、標準的な鈴木クロスカップリング条件下（例えば、パラジウム触媒及び好適な塩基の存在下）、または標準的なＳｔｉｌｌｅクロスカップリング条件下（例えば、パラジウム触媒の存在下）、または標準的な根岸クロスカップリング条件下（例えば、パラジウム触媒の存在下）で（Ｍはボロン酸、ボロン酸エステルまたは適切に置換された金属（例えば、ＭはＢ（ＯＲ）_２、Ｓｎ（アルキル）_３またはＺｎ－Ｈａｌ）である）、１－１５と式１－１６の付加物との間のクロスカップリング反応によって調製することができる。上記の化学反応の順序は、異なる類似体の調製に適するように、適切に再配置することができる。

【0049】

ＫＲＡＳタンパク質
Ｒａｓファミリーは３つのメンバー：ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ及びＨＲＡＳで構成される。ＲＡＳ変異がんは、ヒトがんの約２５％を占める。ＫＲＡＳは、ヒトがんにおいて最も頻繁に変異するアイソフォームである：全てのＲＡＳ変異の８５％がＫＲＡＳに、１２％がＮＲＡＳに、３％がＨＲＡＳに見られる（Ｓｉｍａｎｓｈｕ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ １７０．１（２０１７）：１７－３３）。ＫＲＡＳ変異は上位３つの最も致死的ながんの種類：膵臓癌（９７％）、結腸直腸癌（４４％）、及び肺癌（３０％）の間で広く見られる（Ｃｏｘ，Ａ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ（２０１４）１３：８２８－５１）。ＲＡＳ変異の大部分は、アミノ酸残基／コドン１２、１３、及び６１で発生し、コドン１２変異はＫＲＡＳにおいて最も頻繁である。ＲＡＳ遺伝子とＧ１２Ｄ変異との間で変化する特定の変異の頻度はＫＲＡＳにおいて最も優勢であるのに対して、Ｑ６１Ｒ及びＧ１２Ｒの変異はＮＲＡＳ及びＨＲＡＳにおいて最も頻繁である。更に、ＲＡＳアイソフォームにおける変異のスペクトルは、がんの種類間で異なる。例えば、ＫＲＡＳのＧ１２Ｄ変異は、膵臓癌（５１％）で優勢であり、結腸直腸腺癌（４５％）及び肺癌（１７％）がそれに続く（Ｃｏｘ，Ａ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ（２０１４）１３：８２８－５１）。対照的に、ＫＲＡＳのＧ１２Ｃ変異は、肺腺癌の１１～１６％構成する非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）（変異体ＫＲＡＳのほぼ半分はＧ１２Ｃである）、ならびに膵臓腺癌及び結腸直腸腺癌のそれぞれ２～５％において優勢である（Ｃｏｘ，Ａ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．（２０１４）１３：８２８－５１）。ゲノム研究は、数百のがん細胞株にわたる数千の遺伝子のｓｈＲＮＡノックダウンを使用して、ＫＲＡＳ変異を示すがん細胞が、細胞増殖に対するＫＲＡＳ機能に高度に依存することを実証した（ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ １７０（２０１７）：５７７－５９２）。まとめると、これらの知見は、ＫＲＡＳ変異がヒトがんにて重要な役割を担うことを示唆し、したがって、変異体ＫＲＡＳを標的とする阻害剤の開発は、ＫＲＡＳの変異を特徴とする疾患の臨床治療において有用であり得る。

【0050】

使用方法
Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、及びＧ１２Ｄ変異を有するＫＲＡＳが関与するがんの種類には、癌腫（例えば、膵臓癌腫、結腸直腸癌腫、肺癌腫、膀胱癌腫、胃癌腫、食道癌腫、乳房癌腫、頭頸部癌腫、頸部皮膚癌腫、甲状腺癌腫）、造血悪性腫瘍（例えば、骨髄増殖性新生物（ＭＰＮ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、慢性及び若年性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ及びＪＭＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）及び多発性骨髄腫（ＭＭ））、ならびに他の新生物（例えば、神経膠芽腫及び肉腫）が含まれるが、これらに限定されない。加えて、ＫＲＡＳ変異は、抗ＥＧＦＲ療法に対する獲得耐性において見いだされた（Ｋｎｉｃｋｅｌｂｅｉｎ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅｓ ＆ Ｃａｎｃｅｒ，（２０１５）：４－１２）。ＫＲＡＳ変異は、免疫学性障害及び炎症性障害において見いだされた（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｍｅｄａｒｄｅ，Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅｓ ＆ Ｃａｎｃｅｒ，（２０１１）：３４４－３５８）（例えば、ＫＲＡＳまたはＮＲＡＳの体細胞変異によって引き起こされるＲａｓ関連リンパ増殖性障害（ＲＡＬＤ）または若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ））。

【0051】

本開示の化合物は、ＫＲＡＳタンパク質の活性を阻害することができる。例えば、本開示の化合物は、細胞、個体、または患者に、本開示の１つ以上の化合物の阻害量を投与することによって、酵素の阻害を必要とする細胞または個体または患者においてＫＲＡＳの活性を阻害するのに使用することができる。

【0052】

ＫＲＡＳ阻害剤として、本開示の化合物は、ＫＲＡＳの異常な発現または活性と関連する種々の疾患の治療に有用である。ＫＲＡＳを阻害する化合物は、血管新生を阻害することによって、腫瘍における成長の防止またはアポトーシスの誘導の手段を提供するのに有用となる。したがって、本開示の化合物は、がんのような増殖性障害の治療または予防に有用であることが証明されることが予想される。特に、受容体型チロシンキナーゼの活性化変異体を持つ、または受容体型チロシンキナーゼの上方調節がある腫瘍は、阻害剤に対して特に感受性が高い場合がある。

【0053】

本明細書において、ある態様では、ＫＲＡＳ活性を阻害する方法が提供され、上記方法は、本開示の化合物をＫＲＡＳと接触させることを含む。一実施形態では、接触させることは、患者に化合物を投与することを含む。

【0054】

本明細書において、ある態様では、Ｇ１２Ｃ変異を有するＫＲＡＳタンパク質を阻害する方法が提供され、上記方法は、本開示の化合物をＫＲＡＳと接触させることを含む。

【0055】

本明細書において、ある態様では、Ｇ１２Ｄ変異を有するＫＲＡＳタンパク質を阻害する方法が提供され、上記方法は、本開示の化合物をＫＲＡＳと接触させることを含む。

【0056】

本明細書において、ある態様では、Ｇ１２Ｖ変異を有するＫＲＡＳタンパク質を阻害する方法が提供され、上記方法は、本開示の化合物をＫＲＡＳと接触させることを含む。

【0057】

本明細書において、別の態様では、ＫＲＡＳ相互作用の阻害に関連する疾患または障害を治療する方法が提供され、上記方法は、治療を必要とする患者に、治療有効量の本明細書に開示されている式のいずれかの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。

【0058】

本明細書において、更に別の態様では、Ｇ１２Ｃ変異を有するＫＲＡＳタンパク質を阻害することに関連する疾患または障害を治療する方法が提供され、上記方法は、治療を必要とする患者に、治療有効量の本明細書に開示されている式のいずれかの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。

【0059】

本明細書において、なおも別の態様では、治療有効量の本明細書に開示されている化合物を患者に投与することを含む、がんの治療を必要とする患者においてがんを治療する方法も提供され、がんは、Ｇ１２Ｃ変異を有するＫＲＡＳタンパク質との相互作用を特徴とする。

【0060】

本明細書において、更に別の態様では、Ｇ１２Ｄ変異を有するＫＲＡＳタンパク質を阻害することに関連する疾患または障害を治療する方法が提供され、上記方法は、治療を必要とする患者に、治療有効量の本明細書に開示されている式のいずれかの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。

【0061】

本明細書において、なお別の態様では、治療有効量の本明細書に開示されている化合物を患者に投与することを含む、がんの治療を必要とする患者においてがんを治療する方法が提供され、がんは、Ｇ１２Ｄ変異を有するＫＲＡＳタンパク質との相互作用を特徴とする。

【0062】

本明細書において、更に別の態様では、Ｇ１２Ｖ変異を有するＫＲＡＳタンパク質を阻害することに関連する疾患または障害を治療する方法が提供され、上記方法は、治療を必要とする患者に、治療有効量の本明細書に開示されている式のいずれかの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。

【0063】

本明細書において、なおも別の態様では、治療有効量の本明細書に開示されている化合物を患者に投与することを含む、がんの治療を必要とする患者においてがんを治療する方法が提供され、がんは、Ｇ１２Ｖ変異を有するＫＲＡＳタンパク質との相互作用を特徴とする。

【0064】

本明細書において、更に別の態様では、患者においてがんを治療する方法が提供され、上記方法は、治療有効量の本明細書に開示されている化合物のいずれか１つまたはその薬学的に許容される塩を患者に投与することを含む。

【0065】

本明細書において、ある態様では、ＫＲＡＳ相互作用またはその変異体の阻害に関連する疾患または障害の治療を必要とする患者においてそれを治療する方法が提供され、方法は、本明細書に開示されている化合物もしくはその薬学的に許容される塩、または本明細書に開示されている化合物もしくはその薬学的に許容される塩を含む組成物を、本明細書に記載されている別の療法または治療剤と組み合わせて患者に投与するステップを含む。

【0066】

一実施形態では、疾患または障害は、免疫学的または炎症性障害である。別の実施形態では、免疫学的または炎症性障害は、ＫＲＡＳの体細胞変異によって引き起こされるＲａｓ関連リンパ増殖性障害及び若年性骨髄単球性白血病である。

【0067】

一実施形態では、前記がんは、血液癌、肉腫、肺癌、消化器癌、泌尿生殖路癌、肝臓癌、骨癌、神経系癌、婦人科癌、及び皮膚癌から選択される。

【0068】

別の実施形態において、がんは、癌腫、血液癌、肉腫、及び神経膠芽腫から選択される。

【0069】

更に別の実施形態では、血液癌は、骨髄増殖性新生物、骨髄異形成症候群、慢性及び若年性の骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ球性白血病、及び多発性骨髄腫から選択される。

【0070】

なおも別の実施形態において、癌腫は、膵臓癌腫、大腸癌腫、肺癌腫、膀胱癌腫、胃癌腫、食道癌腫、乳房癌腫、頭頸部癌腫、子宮頸部癌腫、皮膚癌腫、及び甲状腺癌腫から選択される。

【0071】

別の実施形態では、肺癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌、気管支原性癌腫、扁平上皮細胞気管支原性癌腫、未分化小細胞気管支原性癌腫、未分化大細胞気管支原性癌腫、腺癌、気管支原性癌腫、肺胞癌腫、気管支癌腫、気管支腺腫、軟骨腫性過誤腫、中皮腫、小細胞癌（ｐａｖｉｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）及び非小細胞癌（ｎｏｎ－ｐａｖｉｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、気管支腺腫、及び胸膜肺芽腫から選択される。

【0072】

更に別の実施形態では、肺癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。なおも別の実施形態では、肺癌は腺癌である。

【0073】

一実施形態では、消化器癌は、食道扁平上皮癌腫、食道腺癌、食道平滑筋肉腫、食道リンパ腫、胃癌、胃リンパ腫、胃平滑筋肉腫、外分泌膵臓癌、膵管腺癌、膵臓インスリン腫、膵臓グルカゴン産生腫瘍、膵臓ガストリン産生腫瘍、膵臓カルチノイド腫瘍、膵臓ビポーマ、小腸腺癌、小腸リンパ腫、小腸カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、小腸平滑筋腫、小腸血管腫、小腸脂肪腫、小腸神経線維腫、小腸線維腫、大腸腺癌、大腸管腺腫、大腸絨毛腺腫、大腸過誤腫、大腸平滑筋腫、大腸癌、胆嚢癌、及び肛門癌から選択される。

【0074】

一実施形態では、胃腸癌は結腸直腸癌である。

【0075】

別の実施形態では、がんは癌腫である。更に別の実施形態では、癌腫は、膵臓癌、大腸癌腫、肺癌腫、膀胱癌腫、胃癌腫、食道癌腫、乳癌腫、頭頸部癌腫、子宮頸部皮膚癌腫、及び甲状腺癌腫から選択される。

【0076】

なおも別の実施形態では、がんは造血系悪性腫瘍である。一実施形態では、造血系悪性腫瘍は、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、及び骨髄増殖性新生物から選択される。

【0077】

別の実施形態では、がんは、新生物である。更に別の実施形態では、新生物は、神経膠芽腫または肉腫である。

【0078】

特定の実施形態では、本開示は、ＫＲＡＳが介在する障害の治療を必要とする患者においてそれを治療する方法を提供し、方法は、本発明による化合物またはその薬学的に許容される組成物を上記患者に投与するステップを含む。

【0079】

いくつかの実施形態では、本開示の化合物を使用して治療可能である疾患及び適応症には、血液癌、肉腫、肺癌、消化管癌、泌尿生殖器癌、肝臓癌、骨癌、神経系癌、婦人科癌、及び皮膚癌が挙げられるが、これらに限定されない。

【0080】

例示的な血液癌には、リンパ腫及び白血病、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（再発性または難治性ＮＨＬ及び再発性濾胞を含む）、ホジキンリンパ腫、骨髄増殖性疾患（例えば、原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）、真性赤血球増加症（ＰＶ）、本態性血小板増加性（ＥＴ）、８ｐ１１骨髄増殖性症候群、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性リンパ腫（Ｔ－ＡＬＬ）、多発性骨髄腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ヘアリー細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、慢性骨髄性リンパ腫、及びバーキットリンパ腫が挙げられる。

【0081】

例示的な肉腫には、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、血管肉腫、線維肉腫、脂肪肉腫、粘液腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、線維腫、脂肪腫、過誤腫、リンパ肉腫、平滑筋肉腫及び奇形腫が挙げられる。

【0082】

例示的な肺癌には、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞肺癌、気管支癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（気管支）癌、気管支腺腫、軟骨腫性過誤腫、中皮腫、小細胞癌（ｐａｖｉｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）及び非小細胞癌（ｎｏｎ－ｐａｖｉｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、気管支腺腫、及び胸膜肺芽腫が挙げられる。

【0083】

例示的な消化管癌には、食道のがん（扁平上皮細胞癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃のがん（癌腫、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓のがん（膵外分泌癌、導管腺癌、インスリノーマ、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、カルチノイド腫瘍、ビポーマ）、小腸のがん（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸のがん（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）、大腸癌、胆嚢癌及び肛門癌が挙げられる。

【0084】

例示的な泌尿生殖路癌には、腎臓のがん（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽細胞腫］、腎細胞癌）、膀胱及び尿道のがん（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺のがん（腺癌、肉腫）、精巣のがん（精上皮腫、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、脂肪腫）及び尿路上皮癌が挙げられる。

【0085】

例示的な肝臓癌には、肝癌（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、及び血管腫が挙げられる。

【0086】

例示的な骨癌には、例えば、骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫瘍脊索腫、骨軟骨腫（骨軟骨性外骨腫）、良性軟骨腫瘍、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫、及び巨細胞腫瘍が挙げられる。

【0087】

例示的な神経系癌には、頭蓋骨のがん（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜のがん（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳のがん（星状細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫（松果体腫）、膠芽腫、多形性膠芽腫、乏突起膠腫、神経鞘腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍、神経外胚葉性腫瘍）、及び脊髄のがん（神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）、神経芽細胞腫及びレルミット・ダクロス病及び松果体腫瘍が挙げられる。

【0088】

例示的な婦人科癌には、乳房のがん（乳管癌、小葉癌、乳房肉腫、トリプルネガティブ乳癌、ＨＥＲ２陽性乳癌、炎症性乳癌、乳頭癌）、子宮のがん（子宮内膜癌）、子宮頸部のがん（子宮頸癌、腫瘍前子宮頸部異形成）、卵巣のがん（卵巣癌（漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、分類不能癌腫）、顆粒－鱗屑細胞腫瘍、セルトリ－ライディッヒ細胞腫瘍、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰部のがん（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣のがん（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（ｂｏｔｒｙｏｉｄ ｓａｒｃｏｍａ）（胚性横紋筋肉腫））、及び卵管のがん（癌腫）が挙げられる。

【0089】

例示的な皮膚癌には、黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、メルケル細胞皮膚癌、ほくろ形成異常母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、及びケロイドが挙げられる。

【0090】

例示的な頭頸部癌には、膠芽腫、黒色腫、横紋筋肉腫、リンパ肉腫、骨肉腫、扁平上皮癌、腺癌、口腔癌、喉頭癌、鼻咽頭癌、鼻腔癌及び副鼻腔癌、甲状腺癌及び副甲状腺癌、眼の腫瘍、口唇及び口腔の腫瘍、ならびに扁平上皮頭頸部のがんが挙げられる。

【0091】

本開示の化合物はまた、腫瘍転移の阻害に有用であり得る。

【0092】

発がん性新生物に加えて、本発明の化合物は、軟骨無形成症、低軟骨形成症、小人症、タナトフォリック異形成症（ＴＤ）（臨床形態ＴＤＩ及びＴＤＩＩ）、アペール症候群、クルーゾン症候群、ジャクソン－ワイス症候群、ベア－スティーブンソン脳回状皮膚症候群（Ｂｅａｒｅ－Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ ｃｕｔｉｓ ｇｙｒａｔｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ファイファー症候群、及び頭蓋骨癒合症症候群を含むが、これらに限定されない、骨格及び軟骨細胞の障害の治療に有用である。いくつかの実施形態では、本開示は、骨格及び軟骨細胞の障害に罹患している患者を治療する方法を提供する。

【0093】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている化合物は、アルツハイマー病、ＨＩＶ、または結核を治療ために使用することができる。

【0094】

本明細書で使用されるとき、「８ｐ１１骨髄増殖性症候群」という用語は、好酸球増多症及びＦＧＦＲ１の異常と関連する骨髄性／リンパ性の新生物を指すことを意味する。

【0095】

本明細書で使用されるとき、「細胞」という用語は、インビトロ、エクスビボまたはインビボの細胞を指すことを意味する。いくつかの実施形態では、エクスビボ細胞は、哺乳動物などの生物から切除された組織試料の一部であり得る。いくつかの実施形態では、インビトロ細胞は、細胞培養物中の細胞であり得る。いくつかの実施形態では、インビボ細胞は、哺乳動物などの生物に生存する細胞である。

【0096】

本明細書で使用されるとき、「接触させること」という用語は、インビトロ系またインビボ系において示された部分を一緒にすることを指す。例えば、ＫＲＡＳを本明細書に記載されている化合物と「接触させること」は、本明細書に記載されている化合物を、ＫＲＡＳを有するヒトのような個体または患者に投与すること、ならびに、例えば、本明細書に記載されている化合物を、ＫＲＡＳを含有する細胞調製物または精製調製物を含む試料中に導入することを含む。

【0097】

本明細書で使用されるとき、相互交換可能に使用される「個体」、「対象」、または「患者」という用語は、哺乳動物、好ましくはマウス、ラット、他の齧歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマまたは霊長類を含む任意の動物を指し、最も好ましくはヒトを指す。

【0098】

本明細書で使用されるとき、「治療有効量」という語句は、研究者、獣医師、医師、または他の臨床医によって求められている組織、系、動物、個体、またはヒトにおいて生物学的応答または医薬的応答を誘発する、本明細書に開示されている固体形態またはその塩のうちのいずれかの量のような活性化合物または医薬剤の量を指す。任意の個々の場合における適切な「有効な」量は、当業者に知られている技術を使用して決定されてもよい。

【0099】

「薬学的に許容される」という語句は、安全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、または他の問題もしくは合併症を伴うことなくヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに好適であり、妥当な利益／リスク比に見合う、化合物、材料、組成物、及び／または剤形を指すように本明細書で使用される。

【0100】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体または賦形剤」という語句は、液体もしくは固体の充填剤、希釈剤、溶媒、またはカプセル化材料などの、薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを指す。賦形剤または担体は、一般的に安全で無毒であり、生物学的に望ましくないものでも他の点で望ましくないものでもなく、獣医学的用途ならびにヒトの薬学的用途に許容される賦形剤または担体を含む。一実施形態では、各構成成分は、本明細書に定義されているように「薬学的に許容される」。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ ｅｄ．、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，２００５；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，６ｔｈ ｅｄ．、Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．；Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：２００９；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ，３ｒｄ ｅｄ．、Ａｓｈ ａｎｄ Ａｓｈ Ｅｄｓ．；Ｇｏｗｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ：２００７；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，２ｎｄ ｅｄ．、Ｇｉｂｓｏｎ Ｅｄ．；ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ ＬＬＣ：Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．，２００９を参照されたい。

【0101】

本明細書で使用されるとき、「治療すること」または「治療」という用語は、疾患を阻害すること、例えば、疾患、状態、または障害の病理または総体的症状（ｓｙｍｐｔｏｍｏｌｏｇｙ）を経験している、または呈している個体において、疾患、状態、または障害を阻害すること（すなわち、病理及び／または総体的症状の更なる発達を停止させること）、あるいは疾患を改善すること；例えば、疾患、状態、または障害の病理または総体的症状を経験している、または呈している個体において、疾患、状態、または障害を改善すること（すなわち、病理及び／または総体的症状を元に戻すこと）、例えば、疾患の重症度を低減させることを指す。

【0102】

本明細書で使用されるとき「予防する」、「予防すること」、または「予防」という用語は、予防される状態、疾患または障害に関連する、またはそれによって引き起こされる少なくとも１つの症状の予防を含む。

【0103】

明確にするために、別個の実施形態の文脈において説明される本発明のある特定の特徴を、単一の実施形態に組み合わせて提供することもできることが理解される（一方で、実施形態は、多重従属形式で記載されたように組み合わされることが意図される）。逆に、簡潔性のために単一の実施形態の文脈において説明される本発明の種々の特徴を、別個にまたは任意の好適な部分的組み合わせで提供することもできる。

【0104】

併用療法
Ｉ．がん療法
がん細胞増殖及び生存は、複数のシグナル伝達経路の機能不全に影響を受け得る。したがって、そのような状態を治療するためには、活性を調節する標的において異なる嗜好性を示す、異なる酵素／タンパク質／受容体阻害剤を組み合わせることが有用である。１つ超のシグナル伝達経路（または所与のシグナル伝達経路に関与する１つ超の生体分子）を標的とすることは、細胞集団中で生じる薬物抵抗性の可能性を減少させ、及び／または処置の毒性を減少させる場合がある。

【0105】

１つ以上の追加の医薬剤、例えば、化学療法薬、抗炎症剤、ステロイド、免疫抑制剤、がん免疫療法剤、代謝酵素阻害剤、ケモカイン受容体阻害剤、及びホスファターゼ阻害剤などに加えて、標的療法、例えば、Ｂｃｒ－Ａｂｌ、Ｆｌｔ－３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＪＡＫ、ｃ－ＭＥＴ、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ｃ－Ｋｉｔ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＲＡＦ、ＦＡＫ、及びＣＤＫ４／６キナーゼ阻害剤など、例えば、ＷＯ２００６／０５６３９９に記載されているものなどが、ＣＤＫ２関連疾患、障害または状態を処置するために本開示の化合物と組み合わせて使用され得る。治療用抗体などの他の薬剤が、ＣＤＫ２関連疾患、障害または状態を処置するために本開示の化合物と組み合わせて使用され得る。１つ以上の追加の医薬剤が、患者に同時にまたは連続して投与され得る。

【0106】

いくつかの実施形態では、ＣＤＫ２阻害剤は、ＢＣＬ２阻害剤またはＣＤＫ４／６阻害剤と組み合わせて投与または使用される。

【0107】

本明細書で開示されているような化合物は、がんのような疾患及び本明細書に記載されている他の疾患または障害を処置するために、１つ以上の他の酵素／タンパク質／受容体阻害剤療法と組み合わせて使用され得る。併用療法で治療可能な疾患及び適応症の例としては、本明細書に記載されているようなものが挙げられる。がんの例には、固形腫瘍、及び液体腫瘍、血液癌のような非固形腫瘍が挙げられる。感染症の例としては、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症または寄生虫感染症が挙げられる。例えば、本開示の化合物は、がんの治療のために、以下のキナーゼの１つ以上の阻害剤と組み合わされ得る：Ａｋｔ１、Ａｋｔ２、Ａｋｔ３、ＢＣＬ２、ＣＤＫ４／６、ＴＧＦ－βＲ、ＰＫＡ、ＰＫＧ、ＰＫＣ、ＣａＭ－キナーゼ、ホスホリラーゼキナーゼ、ＭＥＫＫ、ＥＲＫ、ＭＡＰＫ、ｍＴＯＲ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＩＮＳ－Ｒ、ＩＤＨ２、ＩＧＦ－１Ｒ、ＩＲ－Ｒ、ＰＤＧＦαＲ、ＰＤＧＦβＲ、ＰＩ３Ｋ（アルファ、ベータ、ガンマ、デルタ、及び複数または選択的）、ＣＳＦ１Ｒ、ＫＩＴ、ＦＬＫ－ＩＩ、ＫＤＲ／ＦＬＫ－１、ＦＬＫ－４、ｆｌｔ－１、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ｃ－Ｍｅｔ、ＰＡＲＰ、Ｒｏｎ、Ｓｅａ、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、ＴＲＫＣ、ＴＡＭキナーゼ（Ａｘｌ、Ｍｅｒ、Ｔｙｒｏ３）、ＦＬＴ３、ＶＥＧＦＲ／Ｆｌｔ２、Ｆｌｔ４、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ４、Ｔｉｅ２、Ｓｒｃ、Ｆｙｎ、Ｌｃｋ、Ｆｇｒ、Ｂｔｋ、Ｆａｋ、ＳＹＫ、ＦＲＫ、ＪＡＫ、ＡＢＬ、ＡＬＫ及びＢ－Ｒａｆ。いくつかの実施形態では、本開示の化合物は、がんまたは感染症を治療するために以下の阻害剤のうち１つ以上と組み合わされ得る。がん及び感染症の治療のために本開示の化合物と組み合わされ得る阻害剤の非限定的な例には、ＦＧＦＲ阻害剤（ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、またはＦＧＦＲ４、例えば、ペミガチニブ（ＩＮＣＢ５４８２８）、ＩＮＣＢ６２０７９）、ＥＧＦＲ阻害剤（ＥｒＢ－１またはＨＥＲ－１としても知られており、例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ、バンデタニブ、オシメルチニブ、セツキシマブ、ネシツムマブ、またはパニツムマブ）、ＶＥＧＦＲ阻害剤もしくは経路遮断薬（例えば、ベバシズマブ、パゾパニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ、レゴラフェニブ、ポナチニブ、カボザンチニブ、バンデタニブ、ラムシルマブ、レンバチニブ、ｚｉｖ－アフリベルセプト）、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、オラパリブ、ルカパリブ、ベリパリブ、またはニラパリブ）、ＪＡＫ阻害剤（ＪＡＫ１及び／またはＪＡＫ２、例えば、ルキソリチニブまたはバリシチニブ；またはＪＡＫ１、例えば、イタシチニブ（ＩＮＣＢ３９１１０）、ＩＮＣＢ０５２７９３、またはＩＮＣＢ０５４７０７）、ＩＤＯ阻害剤（例えば、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９、またはＢＭＳ－９８６２０５、ＭＫ７１６２）、ＬＳＤ１阻害剤（例えば、ＧＳＫ２９７９５５２、ＩＮＣＢ５９８７２及びＩＮＣＢ６０００３）ＴＤＯ阻害剤、ＰＩ３Ｋ－デルタ阻害剤（例えば、パルサクリシブ（ＩＮＣＢ５０４６５）またはＩＮＣＢ５０７９７）、ＰＩ３Ｋ－ガンマ選択的阻害剤などのＰＩ３Ｋ－ガンマ阻害剤、Ｐｉｍ阻害剤（例えば、ＩＮＣＢ５３９１４）、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤、ＴＡＭ受容体チロシンキナーゼ（Ｔｙｒｏ－３、Ａｘｌ、及びＭｅｒ、例えば、ＩＮＣＢ０８１７７６）、アデノシン受容体アンタゴニスト（例えば、Ａ２ａ／Ａ２ｂ受容体アンタゴニスト）、ＨＰＫ１阻害剤、ケモカイン受容体阻害剤（例えば、ＣＣＲ２またはＣＣＲ５阻害剤）、ＳＨＰ１／２ホスファターゼ阻害剤、ＨＤＡＣ８阻害剤などのヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣ）、血管新生阻害剤、インターロイキン受容体阻害剤、ブロモ及び余剰末端ファミリーメンバー阻害剤（例えば、ブロモドメイン阻害剤またはＢＥＴ阻害剤、例えば、ＩＮＣＢ５４３２９及びＩＮＣＢ５７６４３）、ｃ－ＭＥＴ阻害剤（例えば、カプマチニブ）、抗ＣＤ１９抗体（例えば、タファシタマブ）、ＡＬＫ２阻害剤（例えば、ＩＮＣＢ００９２８）、またはそれらの組み合わせが挙げられる。

【0108】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている化合物または塩は、ＰＩ３Ｋδ阻害剤とともに投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている化合物または塩は、ＪＡＫ阻害剤とともに投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される化合物または塩は、ＪＡＫ１またはＪＡＫ２阻害剤（例えば、バリシチニブまたはルキソリチニブ）とともに投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている化合物または塩は、ＪＡＫ１阻害剤とともに投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている化合物または塩は、ＪＡＫ２よりも選択的であるＪＡＫ１阻害剤とともに投与される。

【0109】

併用療法で使用するための抗体の例には、トラスツズマブ（例えば、抗ＨＥＲ２）、ラニビズマブ（例えば、抗ＶＥＧＦ－Ａ）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標）、例えば、抗ＶＥＧＦ）、パニツムマブ（例えば、抗ＥＧＦＲ）、セツキシマブ（例えば、抗ＥＧＦＲ）、リツキサン（例えば、抗ＣＤ２０）及びｃ－ＭＥＴに対する抗体が挙げられるが、これらに限定されない。

【0110】

以下の薬剤のうちの１つ以上が、本開示の化合物と併用されてもよく、非限定的なリストとして提示される：細胞分裂阻害剤、シスプラチン、ドキソルビシン、タキソテール、タキソール、エトポシド、イリノテカン、カンプトサール、トポテカン、パクリタキセル、ドセタキセル、エポチロン、タモキシフェン、５－フルオロウラシル、メトトレキサート、テモゾロミド、シクロホスファミド、ＳＣＨ６６３３６、Ｒ１１５７７７、Ｌ７７８，１２３、ＢＭＳ２１４６６２、ＩＲＥＳＳＡ（商標）（ゲフィチニブ）、ＴＡＲＣＥＶＡ（商標）（エルロチニブ）、ＥＧＦＲに対する抗体、イントロン、ａｒａ－Ｃ、アドリアマイシン、シトキサン、ゲムシタビン、ウラシルマスタード、クロルメチン、イフォスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｎｅ）、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、フロクスウリジン、シタラビン、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、フルダラビンリン酸エステル、オキサリプラチン、ロイコビリン（ｌｅｕｃｏｖｉｒｉｎ）、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標）（オキサリプラチン）、ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎｅ）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトラマイシン、デオキシコホルマイシン、マイトマイシンＣ、Ｌ－アスパラギナーゼ、テニポシド１７．アルファ．－エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、酢酸メゲストロール、メチルプレドニゾロン、メチルテストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、メドロキシプロゲステロン酢酸エステル、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、ゴセレリン、カルボプラチン、ヒドロキシ尿素、アムサクリン、プロカルバジン、ミトタン、ミトキサントロン、レバミゾール、ナベルビン（ｎａｖｅｌｂｅｎｅ）、アナストロゾール（ａｎａｓｔｒａｚｏｌｅ）、レトラゾール（ｌｅｔｒａｚｏｌｅ）、カペシタビン、レロキサフィン（ｒｅｌｏｘａｆｉｎｅ）、ドロロキサフィン（ｄｒｏｌｏｘａｆｉｎｅ）、ヘキサメチルメラミン、アバスチン、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）（トラスツズマブ）、ＢＥＸＸＡＲ（商標）（トシツモマブ）、ＶＥＬＣＡＤＥ（商標）（ボルテゾミブ）、ＺＥＶＡＬＩＮ（商標）（イブリツモマブチウキセタン）、ＴＲＩＳＥＮＯＸ（商標）（ヒ素トリオキシド）、ＸＥＬＯＤＡ（商標）（カペシタビン）、ビノレルビン、ポルフィマー、ＥＲＢＩＴＵＸ（商標）（セツキシマブ）、チオテパ、アルトレタミン、メルファラン、トラスツズマブ、レロゾール（ｌｅｒｏｚｏｌｅ）、フルベストラント、エキセメスタン、イホスフォミド（ｉｆｏｓｆｏｍｉｄｅ）、リツキシマブ、Ｃ２２５（セツキシマブ）、キャンパス（アレムツズマブ）、クロファラビン、クラドリビン、アフィジコロン（ａｐｈｉｄｉｃｏｌｏｎ）、リツキサン、スニチニブ、ダサチニブ、テザシタビン、Ｓｍｌ１、フルダラビン、ペントスタチン、トリアピン、ジドックス、トリミドックス、アミドックス、３－ＡＰ、及びＭＤＬ－１０１，７３１。

【0111】

本開示の化合物は更に、例えば、化学療法、放射線療法、腫瘍標的療法、アジュバント療法、免疫療法または外科手術によって、がんを治療する他の方法と組み合わせて使用され得る。免疫療法の例には、サイトカイン治療（例えば、インターフェロン、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－２）、ＣＲＳ－２０７免疫療法、がんワクチン、モノクローナル抗体、二重特異性抗体または多重特異性抗体、抗体薬物複合体、養子Ｔ細胞移入、Ｔｏｌｌ受容体アゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、腫瘍溶解性ウイルス療法、及びサリドマイドまたはＪＡＫ１／２阻害剤、ＰＩ３Ｋδ阻害剤などを含む免疫調節低分子が挙げられる。化合物は、１つ以上の抗がん薬、例えば、化学療法剤などと組み合わせて投与され得る。化学療法薬の例としては、アバレリクス、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アルトレタミン、アナストロゾール、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アザシチジン、ベバシズマブ、ベキサロテン、バリシチニブ、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、静注用ブスルファン、経口用ブスルファン、カルステロン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、セツキシマブ、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダルテパリンナトリウム、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、デニロイキン、デニロイキンジフチトクス、デクスラゾキサン、ドセタキセル、ドキソルビシン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エクリズマブ、エピルビシン、エルロチニブ、エストラムスチン、リン酸エトポシド、エトポシド、エキセメスタン、クエン酸フェンタニル、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガマイシン、酢酸ゴセレリン、酢酸ヒストレリン、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イフォスファミド、メシル酸イマチニブ、インターフェロンアルファ２ａ、イリノテカン、ラパチニブジトシレート、レナリドミド、レトロゾール、ロイコボリン、酢酸ロイプロリド、レバミソール、ロムスチン、メクロレタミン、酢酸メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトキサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、フェンプロピオン酸ナンドロロン、ネララビン、ノフェツモマブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、パニツムマブ、ペグアスパラガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセド二ナトリウム、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、プロカルバジン、キナクリン、ラスブリカーゼ、リツキシマブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、ストレプトゾシン、スニチニブ、マレイン酸スニチニブ、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テストラクトン、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ボリノスタット、及びゾレドロネートのいずれかが挙げられる。

【0112】

化学療法薬の追加の例としては、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、サリドマイド、ＲＥＶＬＩＭＩＤ、及びＤＮＡ損傷剤、例えば、メルファラン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、エトポシド、カルムスチンなどが挙げられる。

【0113】

例示的なステロイドとしては、コルチコステロイド、例えば、デキサメタゾンまたはプレドニゾンなどが挙げられる。

【0114】

例示的なＢｃｒ－Ａｂｌ阻害剤としては、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＡＣ（商標））、ニロチニブ、ダサチニブ、ボスチニブ、及びポナチニブ、ならびに薬学的に許容される塩が挙げられる。他の例示的で好適なＢｃｒ－Ａｂｌ阻害剤には、米国特許第５，５２１，１８４号、ＷＯ０４／００５２８１、及び米国第６０／５７８，４９１号に開示されている属及び種の化合物及びその薬学的に許容される塩が含まれる。

【0115】

例示的で好適なＦｌｔ－３阻害剤には、ミドスタウリン、レスタウルチニブ、リニファニブ、スニチニブ、スニチニブ、マレエート、ソラフェニブ、キザルチニブ、クレノラニブ、パクリチニブ、タンズチニブ、ＰＬＸ３３９７及びＡＳＰ２２１５、ならびにそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。他の例示的で好適なＦｌｔ－３阻害剤としては、ＷＯ０３／０３７３４７、ＷＯ０３／０９９７７１、及びＷＯ０４／０４６１２０に開示されているような化合物、及びそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。

【0116】

例示的で好適なＲＡＦ阻害剤には、ダブラフェニブ、ソラフェニブ、及びベムラフェニブ、ならびにそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。他の例示的で好適なＲＡＦ阻害剤には、ＷＯ００／０９４９５及びＷＯ０５／０２８４４４に開示されているような化合物、及びそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。

【0117】

例示的で好適なＦＡＫ阻害剤には、ＶＳ－４７１８、ＶＳ－５０９５、ＶＳ－６０６２、ＶＳ－６０６３、ＢＩ８５３５２０、及びＧＳＫ２２５６０９８、ならびにそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。他の例示的で好適なＦＡＫ阻害剤には、ＷＯ０４／０８０９８０、ＷＯ０４／０５６７８６、ＷＯ０３／０２４９６７、ＷＯ０１／０６４６５５、ＷＯ００／０５３５９５、及びＷＯ０１／０１４４０２に開示されるような化合物、ならびにそれらの薬学的に許容される塩が含まれる。

【0118】

例示的で好適なＣＤＫ４／６阻害剤としては、パルボシクリブ、リボシクリブ、トリラシクリブ、レロシクリブ、及びアベマシクリブ、ならびにそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。他の例示的で好適なＣＤＫ４／６阻害剤には、ＷＯ０９／０８５１８５、ＷＯ１２／１２９３４４、ＷＯ１１／１０１４０９、ＷＯ０３／０６２２３６、ＷＯ１０／０７５０７４、及びＷＯ１２／０６１１５６に開示されているような化合物、及びそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。

【0119】

いくつかの実施形態では、本開示の化合物は、特にイマチニブまたは他のキナーゼ阻害剤に耐性がある患者を処置するために、イマチニブを含む１つ以上の他のキナーゼ阻害剤と組み合わせて使用され得る。

【0120】

いくつかの実施形態では、本開示の化合物は、がんの処置において化学療法薬と組み合わせて使用され得、その毒性作用の憎悪をもたらすことなく、化学療法剤単独での応答と比較した場合に処置応答を改善する場合がある。いくつかの実施形態では、本開示の化合物は、本明細書で提供されている化学療法剤と併用して使用することができる。例えば、多発性骨髄腫の治療に使用される追加の医薬剤には、限定しないで、メルファラン、メルファランとプレドニゾン［ＭＰ］、ドキソルビシン、デキサメタゾン、及びベルケイド（ボルテゾミブ）を挙げることができる。多発性骨髄腫の治療に使用される更に追加の薬剤には、Ｂｃｒ－Ａｂｌ、Ｆｌｔ－３、ＲＡＦ及びＦＡＫキナーゼ阻害剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、その薬剤は、アルキル化剤、プロテアソーム阻害剤、コルチコステロイド、または免疫調節剤である。アルキル化剤の例としては、シクロホスファミド（ＣＹ）、メルファラン（ＭＥＬ）、及びベンダムスチンが挙げられる。いくつかの実施形態では、プロテアソーム阻害剤はカルフィルゾミブである。いくつかの実施形態では、コルチコステロイドはデキサメタゾン（ＤＥＸ）である。いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、レナリドミド（ＬＥＮ）またはポマリドミド（ＰＯＭ）である。相加効果または相乗効果は、本開示のＣＤＫ２阻害剤を追加の薬剤と組み合わせる場合の望ましい結果である。

【0121】

薬剤は、単一のもしくは連続した剤形で本化合物と組み合わされ得るか、または薬剤は、別個の剤形として同時にもしくは連続して投与され得る。

【0122】

本開示の化合物は、感染症の治療のために、１つ以上の他の阻害剤または１つ以上の療法と併用して使用することができる。感染症の例としては、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症または寄生虫感染症が挙げられる。

【0123】

いくつかの実施形態では、デキサメタゾンのようなコルチコステロイドは、本開示の化合物と併用して患者に投与され、デキサメタゾンは連続的ではなく間欠的に投与される。

【0124】

式（Ｉ）もしくは本明細書に記載されている式のうちのいずれかの化合物、特許請求の範囲のいずれかに引用され、かつ本明細書に記載されている化合物、またはその塩を、がん性細胞、精製された腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチド、及び炭水化物分子を含む）、細胞、及び免疫刺激サイトカインをコードする遺伝子で形質移入された細胞のような別の免疫原性剤と組み合わせることができる。使用され得る腫瘍ワクチンの非限定的な例としては、黒色腫抗原のペプチド、例えば、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ－２、ＭＡＲＴＩ及び／またはチロシナーゼのペプチドなど、あるいはサイトカインＧＭ－ＣＳＦを発現するようにトランスフェクトされた腫瘍細胞が挙げられる。

【0125】

式（Ｉ）もしくは本明細書に記載されている式のうちのいずれかの化合物、特許請求の範囲のいずれかに引用され、かつ本明細書に記載されている化合物、またはその塩は、がんの治療のためのワクチン接種プロトコルと組み合わせて使用することができる。いくつかの実施形態では、腫瘍細胞は、ＧＭ－ＣＳＦを発現するように形質導入される。いくつかの実施形態では、腫瘍ワクチンとしては、ヒトのがんに関与するウイルス、例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、肝炎ウイルス（ＨＢＶ及びＨＣＶ）ならびにカポジヘルペス肉腫ウイルス（ＫＨＳＶ）などに由来するタンパク質が挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示の化合物は、腫瘍特異的抗原、例えば、腫瘍組織自体から単離された熱ショックタンパク質などと組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態では、式（Ｉ）もしくは本明細書に記載される式のうちのいずれかの化合物、特許請求の範囲のうちのいずれかに記載され、かつ本明細書に記載される化合物、またはそれらの塩は、樹状細胞免疫と組み合わされて、強力な抗腫瘍応答を活性化することができる。

【0126】

本開示の化合物は、腫瘍細胞をＦｅアルファまたはＦｅガンマ受容体発現エフェクター細胞の標的とする二重特異性大環状ペプチドと組み合わせて使用することができる。本開示の化合物はまた、宿主の免疫応答性を活性化する大環状ペプチドと組み合わせることができる。

【0127】

いくつかの更なる実施形態では、本開示の化合物と他の治療剤との組み合わせは、骨髄移植または幹細胞移植の前、その間、及び／またはその後に患者に投与され得る。本開示の化合物は、造血起源の種々の腫瘍を治療するために骨髄移植と組み合わせて使用することができる。

【0128】

式（Ｉ）のもしくは本明細書に記載されている式のうちのいずれかの化合物、特許請求の範囲のいずれかに引用され、かつ本明細書に記載されている化合物、またはその塩は、ワクチンと組み合わせて使用して、病原体、毒素、及び自己抗原に対する免疫応答を刺激することができる。この治療アプローチが特に有用な可能性がある病原体の例としては、現在効果的なワクチンが存在しない病原体、または従来のワクチンが完全に効果的ではない病原体が挙げられる。これらには、ＨＩＶ、肝炎（Ａ、Ｂ、及びＣ型）、インフルエンザ、ヘルペス、ジアルジア、マラリア、リーシュマニア、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ａｅｒｕｇｉｎｏｓａが挙げられるが、これらに限定されない。

【0129】

本開示の方法によって治療可能な感染症を引き起こすウイルスには、これらに限定されないが、ヒトパピローマウイルス、インフルエンザ、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型またはＤ型肝炎ウイルス、アデノウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、重症急性呼吸器症候群ウイルス、エボラウイルス、麻疹ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ－１、ＨＡＶ－６、ＨＳＶ－ＩＩ、及びＣＭＶ、エプスタインバーウイルス）、フラビウイルス、エコーウイルス、ライノウイルス、コクサッキーウイルス、コルノウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、マンプスウイルス、ロタウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、パルボウイルス、ワクシニアウイルス、ＨＴＬＶウイルス、デングウイルス、パピローマウイルス、伝染性ウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、ＪＣウイルス、及びアルボウイルス性脳炎ウイルスが含まれる。

【0130】

本開示の方法によって治療可能な感染症を引き起こす病原性細菌には、クラミジア、リケッチア細菌、マイコバクテリウム、ブドウ球菌、レンサ球菌、肺炎球菌、髄膜炎菌及びコノコッカス（ｃｏｎｏｃｏｃｃｉ）、クレブシエラ、プロテウス、セラチア、シュードモナス、レジオネラ、ジフテリア、サルモネラ、バチルス、コレラ、破傷風、ボツリヌス症、炭疽、ペスト、レプトスピラ症、ならびにライム病の細菌が挙げられるが、これらに限定されない。

【0131】

本開示の方法によって治療可能な感染症を引き起こす病原性真菌には、Ｃａｎｄｉｄａ（ａｌｂｉｃａｎｓ、ｋｒｕｓｅｉ、ｇｌａｂｒａｔａ、ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓなど）、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、ｎｉｇｅｒなど）、Ｇｅｎｕｓ Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ（ｍｕｃｏｒ、ａｂｓｉｄｉａ、ｒｈｉｚｏｐｈｕｓ）、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｋｉｉ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ、及びＨｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍが挙げられるが、これらに限定されない。

【0132】

本開示の方法によって治療可能な感染症を引き起こす病原性寄生虫には、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ ｃｏｌｉ、Ｎａｅｇｌｅｒｉａｆｏｗｌｅｒｉ、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ ｓｐ．、Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｉａ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐ．、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ、Ｂａｂｅｓｉａ ｍｉｃｒｏｔｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉ、及びＮｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓが挙げられるが、これらに限定されない。

【0133】

１つ超の医薬剤が患者に投与される場合、それらは同時に、別々に、逐次的に、または組み合わせて（例えば、２つ超の薬剤の場合に）投与され得る。

【0134】

これらの化学療法剤のほとんどを安全かつ効果的に投与するための方法は、当業者に既知である。加えて、それらの投与は、標準的な文献に記載されている。例えば、多くの化学療法剤の投与は、「Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ」（ＰＤＲ、例えば、１９９６ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪ）に記載されており、その開示は、その全体が記載されているかのように参照により本明細書に組み込まれる。

【0135】

ＩＩ．免疫チェックポイント療法
本開示の化合物は、疾患、例えば、がんまたは感染症などを処置するために１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用され得る。例示的な免疫チェックポイント阻害剤としては、免疫チェックポイント分子、例えば、ＣＢＬ－Ｂ、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ１２２、ＣＤ９６、ＣＤ７３、ＣＤ４７、ＣＤＫ２、ＧＩＴＲ、ＣＳＦ１Ｒ、ＪＡＫ、ＰＩ３Ｋデルタ、ＰＩ３Ｋガンマ、ＴＡＭ、アルギナーゼ、ＨＰＫ１、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＴＬＲ（ＴＬＲ７／８）、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１２Ｒ、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２などに対する阻害剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ及びＣＤ１３７から選択される刺激性チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子は、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、及びＶＩＳＴＡから選択される阻害性チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されている化合物は、ＫＩＲ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＬＡＩＲ１阻害剤、ＣＤ１６０阻害剤、２Ｂ４阻害剤及びＴＧＦＲベータ阻害剤から選択される１つ以上の薬剤と組み合わせて使用され得る。

【0136】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されている化合物は、免疫チェックポイント分子、例えば、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）の１つ以上のアゴニストと組み合わせて使用され得る。

【0137】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、または抗ＣＴＬＡ－４抗体である。

【0138】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の阻害剤、例えば、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、セミプリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、チスレリズマブ、スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）、セトレリマブ（ＪＮＪ－６３７２３２８３）、トリパリマブ（ＪＳ００１）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、シンチリマブ（ＩＢＩ３０８）、ＡＢ１２２（ＧＬＳ－０１０）、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４／ＭＥＤＩ－０６８０、ＢＭＳ９３６５５９、ＪＴＸ－４０１４、ＢＧＢ－１０８、ＳＨＲ－１２１０、ＭＥＤＩ４７３６、ＦＡＺ０５３、ＢＣＤ－１００、ＫＮ０３５、ＣＳ１００１、ＢＡＴ１３０６、ＬＺＭ００９、ＡＫ１０５、ＨＬＸ１０、ＳＨＲ－１３１６、ＣＢＴ－５０２（ＴＱＢ２４５０）、Ａ１６７（ＫＬ－Ａ１６７）、ＳＴＩ－Ａ１０１（ＺＫＡＢ００１）、ＣＫ－３０１、ＢＧＢ－Ａ３３３、ＭＳＢ－２３１１、ＨＬＸ２０、ＴＳＲ－０４２、またはＬＹ３３０００５４である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、米国特許第７，４８８，８０２号、同第７，９４３，７４３号、同第８，００８，４４９号、同第８，１６８，７５７号、同第８，２１７，１４９号、もしくは同第１０，３０８，６４４号、米国公開第２０１７／０１４５０２５号、同第２０１７／０１７４６７１号、同第２０１７／０１７４６７９号、同第２０１７／０３２０８７５号、同第２０１７／０３４２０６０号、同第２０１７／０３６２２５３号、同第２０１８／００１６２６０号、同第２０１８／００５７４８６号、同第２０１８／０１７７７８４号、同第２０１８／０１７７８７０号、同第２０１８／０１７９１７９号、同第２０１８／０１７９２０１号、同第２０１８／０１７９２０２号、同第２０１８／０２７３５１９号、同第２０１９／００４００８２号、同第２０１９／００６２３４５号、同第２０１９／００７１４３９号、同第２０１９／０１２７４６７号、同第２０１９／０１４４４３９号、同第２０１９／０２０２８２４号、同第２０１９／０２２５６０１号、同第２０１９／０３００５２４号、もしくは同第２０１９／０３４５１７０号、またはＰＣＴ公開第ＷＯ０３０４２４０２、同第ＷＯ２００８１５６７１２号、同第ＷＯ２０１００８９４１１号、同第ＷＯ２０１００３６９５９号、同第ＷＯ２０１１０６６３４２号、同第ＷＯ２０１１１５９８７７号、同第ＷＯ２０１１０８２４００号、もしくは同第ＷＯ２０１１１６１６９９号に開示されているものであり、各々が、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１の阻害剤は、ＩＮＣＢ０８６５５０である。

【0139】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、表Ａの化合物またはその薬学的に許容される塩から選択される。

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【表3-4】

【表3-5】

【表3-6】

【表3-7】

【表3-8】

【表3-9】

【表3-10】

【表3-11】

【表3-12】

【0140】

いくつかの実施形態では、抗体は抗ＰＤ－１抗体、例えば、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、セミプリマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、セトレリマブ、トリパリマブ、シンチリマブ、ＡＢ１２２、ＡＭＰ－２２４、ＪＴＸ－４０１４、ＢＧＢ－１０８、ＢＣＤ－１００、ＢＡＴ１３０６、ＬＺＭ００９、ＡＫ１０５、ＨＬＸ１０、またはＴＳＲ－０４２である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、セミプリマブ、スパルタリズマブ、カムレリズマブ、セトレリマブ、トリパリマブ、またはシンチリマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ペンブロリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、セミプリマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、スパルタリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、カムレリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、セトレリマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、トリパリマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、シンチリマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＡＢ１２２である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＡＭＰ－２２４である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＪＴＸ－４０１４である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＢＧＢ－１０８である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＢＣＤ－１００である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＢＡＴ１３０６である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＬＺＭ００９である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＡＫ１０５である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＨＬＸ１０である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体はＴＳＲ－０４２である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体は、ニボルマブまたはペンブロリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体は、ＭＧＡ０１２（ＩＮＣＭＧＡ００１２、レチファンリマブ）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ１抗体は、ＳＨＲ－１２１０である。他の抗がん薬剤（複数可）には、４－１ＢＢなどの抗体治療薬（例えば、ウレルマブ、ウトミルマブ）が含まれる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１の阻害剤、例えば、抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、チスレリズマブ、ＢＭＳ－９３５５５９、ＭＥＤＩ４７３６、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ；ＲＧ７４４６としても知られる）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＦＡＺ０５３、ＫＮ０３５、ＣＳ１００１、ＳＨＲ－１３１６、ＣＢＴ－５０２、Ａ１６７、ＳＴＩ－Ａ１０１、ＣＫ－３０１、ＢＧＢ－Ａ３３３、ＭＳＢ－２３１１、ＨＬＸ２０、またはＬＹ３３０００５４である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、またはチスレリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アベルマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、チスレリズマブである。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３５５５９である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ４７３６である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＦＡＺ０５３である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＫＮ０３５である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＣＳ１００１である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＳＨＲ－１３１６である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＣＢＴ－５０２である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ａ１６７である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＳＴＩ－Ａ１０１である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＣＫ－３０１である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＧＢ－Ａ３３３である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＭＳＢ－２３１１である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＨＬＸ２０である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＬＹ３３０００５４である。

【0141】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１に結合する小分子、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１に結合して内在化させる小分子、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＵＳ２０１８／０１７９２０１、ＵＳ２０１８／０１７９１９７、ＵＳ２０１８／０１７９１７９、ＵＳ２０１８／０１７９２０２、ＵＳ２０１８／０１７７７８４、ＵＳ２０１８／０１７７８７０、米国第１６／３６９，６５４号（２０１９年３月２９日出願）、及び米国第６２／６８８，１６４号の中のものから選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩であり、それらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0142】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＫＩＲ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４及びＴＧＦＲベータの阻害剤である。

【0143】

いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＭＣＬＡ－１４５である。

【0144】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤はＣＴＬＡ－４の阻害剤、例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＡＧＥＮ１８８４、またはＣＰ－６７５，２０６である。

【0145】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＬＡＧ３の阻害剤、例えば、抗ＬＡＧ３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、ＢＭＳ－９８６０１６、ＬＡＧ５２５、ＩＮＣＡＧＮ２３８５、またはエフチラギモドアルファ（ＩＭＰ３２１）である。

【0146】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＣＤ７３の阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＣＤ７３の阻害剤はオレクルマブである。

【0147】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＴＩＧＩＴの阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＴＩＧＩＴの阻害剤は、ＯＭＰ－３１Ｍ３２である。

【0148】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＶＩＳＴＡの阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＶＩＳＴＡの阻害剤は、ＪＮＪ－６１６１０５８８またはＣＡ－１７０である。

【0149】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、Ｂ７－Ｈ３の阻害剤である。いくつかの実施形態では、Ｂ７－Ｈ３の阻害剤は、エノブリツズマブ、ＭＧＤ００９、または８Ｈ９である。

【0150】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＫＩＲの阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＫＩＲの阻害剤は、リリルマブまたはＩＰＨ４１０２である。

【0151】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、Ａ２ａＲの阻害剤である。いくつかの実施形態では、Ａ２ａＲの阻害剤は、ＣＰＩ－４４４である。

【0152】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＴＧＦ－ベータの阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＴＧＦ－ベータの阻害剤は、トラベデルセン、ガルセルチニブ、またはＭ７８２４である。

【0153】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤はＰＩ３Ｋ－ガンマの阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ－ガンマの阻害剤は、ＩＰＩ－５４９である。

【0154】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＣＤ４７の阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＣＤ４７の阻害剤は、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４またはＴＴＩ－６２１である。

【0155】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＣＤ７３の阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＣＤ７３の阻害剤はＭＥＤＩ９４４７である。

【0156】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤はＣＤ７０の阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＣＤ７０の阻害剤は、クサツズマブまたはＢＭＳ－９３６５６１である。

【0157】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＴＩＭ３の阻害剤、例えば、抗ＴＩＭ３抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＴＩＭ３抗体は、ＩＮＣＡＧＮ２３９０、ＭＢＧ４５３、またはＴＳＲ－０２２である。

【0158】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子の阻害剤は、ＣＤ２０の阻害剤、例えば、抗ＣＤ２０抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブまたはリツキシマブである。

【0159】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストは、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０、ＴＬＲ７／８、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）のアゴニストである。

【0160】

いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７のアゴニストはウレルマブである。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７のアゴニストはウトミルマブである。

【0161】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストはＧＩＴＲの阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲのアゴニストは、ＴＲＸ５１８、ＭＫ－４１６６、ＩＮＣＡＧＮ１８７６、ＭＫ－１２４８、ＡＭＧ２２８、ＢＭＳ－９８６１５６、ＧＷＮ３２３、ＭＥＤＩ１８７３、またはＭＥＤＩ６４６９である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストはＯＸ４０のアゴニスト、例えば、ＯＸ４０アゴニスト抗体またはＯＸ４０Ｌ融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、抗ＯＸ４０抗体は、ＩＮＣＡＧＮ０１９４９、ＭＥＤＩ０５６２（タボリマブ）、ＭＯＸＲ－０９１６、ＰＦ－０４５１８６００、ＧＳＫ３１７４９９８、ＢＭＳ－９８６１７８、または９Ｂ１２である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０Ｌ融合タンパク質はＭＥＤＩ６３８３である。

【0162】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストは、ＣＤ４０のアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０のアゴニストは、ＣＰ－８７０８９３、ＡＤＣ－１０１３、ＣＤＸ－１１４０、ＳＥＡ－ＣＤ４０、ＲＯ７００９７８９、ＪＮＪ－６４４５７１０７、ＡＰＸ－００５Ｍ、またはＣｈｉ Ｌｏｂ７／４である。

【0163】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストは、ＩＣＯＳのアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＩＣＯＳのアゴニストは、ＧＳＫ－３３５９６０９、ＪＴＸ－２０１１、またはＭＥＤＩ－５７０である。

【0164】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストは、ＣＤ２８のアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８のアゴニストはセラリズマブである。

【0165】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストは、ＣＤ２７のアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＣＤ２７のアゴニストはバルリルマブである。

【0166】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント分子のアゴニストは、ＴＬＲ７／８のアゴニストである。いくつかの実施形態では、ＴＬＲ７／８のアゴニストは、ＭＥＤＩ９１９７である。

【0167】

本開示の化合物は、二重特異性抗体と組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体のドメインのうち１つは、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＣＤ３またはＴＧＦβ受容体を標的とする。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１に結合する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１に結合する二重特異性抗体は、ＭＣＬＡ－１３６である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、ＰＤ－Ｌ１及びＣＴＬＡ－４に結合する。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１及びＣＴＬＡ－４に結合する二重特異性抗体は、ＡＫ１０４である。

【0168】

いくつかの実施形態では、本開示の化合物は１つ以上の代謝酵素阻害剤と組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態では、代謝酵素阻害剤はＩＤＯ１、ＴＤＯ、またはアルギナーゼの阻害剤である。ＩＤＯ１阻害剤の例としては、エパカドスタット、ＮＬＧ９１９、ＢＭＳ－９８６２０５、ＰＦ－０６８４０００３、ＩＯＭ２９８３、ＲＧ－７００９９及びＬＹ３３８１９６が挙げられる。アルギナーゼ阻害剤の阻害剤としては、ＩＮＣＢ１１５８が挙げられる。

【0169】

全体を通して提供されるように、追加的な化合物、阻害剤、薬剤などは、単一または連続剤形で本発明の化合物と組み合わされ得るか、またはそれらは、別個の剤形として同時にまたは順次投与され得る。

【0170】

製剤、剤形、及び投与
医薬品として使用される場合、本開示の化合物は薬学的組成物の形態で投与することができる。したがって、本開示は、式Ｉ、ＩＩのもしくは本明細書に記載されている式のいずれかの化合物、特許請求の範囲のいずれかに引用され、かつ本明細書に記載されている化合物、またはその薬学的に許容される塩、またはその実施形態のいずれか、及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体もしくは賦形剤を含む組成物を提供する。これらの組成物は、薬学分野において周知の方法で調製することができ、局所性または全身性の治療が示されるかどうかに応じて、及び治療される領域に応じて種々の経路によって投与することができる。投与は、局所（経皮、表皮、眼内、ならびに鼻腔内、膣内、及び直腸送達を含む粘膜を含む）、肺（例えば、噴霧器によるものを含む粉末もしくはエアロゾルの吸入もしくは充填によるもの、気管内もしくは鼻腔内）、経口または非経口のものであり得る。非経口投与は、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、筋肉内または注射もしくは注入、あるいは頭蓋内、例えば、くも膜下または脳室内投与を含む。非経口投与は、単回ボーラス用量の形態であることができ、または例えば、連続灌流ポンプによるものであってもよい。局所投与のための薬学的組成物及び製剤には、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、坐薬、スプレー、液体、及び粉末が挙げられてもよい。従来の薬学的担体、水性基剤、粉末基剤、または油性基剤、増粘剤などは、必須であるか、または望ましいことがある。

【0171】

本発明には、１つ以上の薬学的に許容される担体または賦形剤と組み合わせて、有効成分として、本開示の化合物またはその薬学的に許容される塩を含む薬学的組成物も含まれる。いくつかの実施形態では、組成物は、局所的投与に好適である。本発明の組成物を作製する際に、有効成分は通常、賦形剤と混合される、賦形剤によって希釈される、または例えば、カプセル、小袋、紙、もしくは他の容器の形態でそのような担体内に封入される。賦形剤は、希釈剤として機能する場合、有効成分のためのビヒクル、担体、または媒質として作用する固体、半固体、または液体の材料であり得る。したがって、組成物は、錠剤、丸剤、粉末、舐剤、小袋、カシェ剤、エリキシル、懸濁液、乳剤、溶液、シロップ、エアロゾル（固体としてまたは液体媒質中）、例えば、１０重量％までの活性化合物を含有する軟膏、軟質及び硬質のゼラチンカプセル、坐薬、無菌注入液、ならびに無菌包装粉末の形態であることができる。

【0172】

製剤を調製する際は、活性化合物は、他の成分と組み合わせる前に、適切な粒径を提供するために粉砕することができる。活性化合物が実質的に不溶性である場合、２００メッシュ未満の粒径まで粉砕され得る。活性化合物が実質的に水溶性である場合、粒径は、製剤中に実質的に均一な分布を提供するために、例えば、約４０メッシュに粉砕することにより調整することができる。

【0173】

本発明の化合物は、湿式粉砕のような既知の粉砕手順を使用して粉砕され、錠剤形成及び他の製剤型に適切な粒径を得ることができる。本発明の化合物の微粉化した（ナノ粒子）調製物は、当該技術分野において既知のプロセス（例えば、ＷＯ２００２／０００１９６を参照のこと）によって調製することができる。

【0174】

好適な賦形剤のいくつかの例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、及びメチルセルロースが挙げられる。製剤は更に、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び鉱物油のような潤滑剤；湿潤剤；乳化剤及び懸濁剤；安息香酸メチル及びプロピルヒドロキシベンゾエートのような保存剤；甘味料；ならびに香味料を含むことができる。本発明の組成物は、当該技術分野で既知の手順を使用することによる患者への投与後に、有効成分の迅速、持続、または遅延放出を提供するように製剤化することができる。

【0175】

いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、ケイ化微結晶性セルロース（ＳＭＣＣ）と、本明細書に記載されている少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩とを含む。いくつかの実施形態では、ケイ化微結晶性セルロースは、約９８重量％の微結晶性セルロース及び約２重量％の二酸化ケイ素で構成される。

【0176】

いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載されている少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む持続放出組成物である。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載されている少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩と、微結晶性セルロース、ラクトース一水和物、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、及びポリエチレンオキシドから選択される少なくとも１つの成分とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載されている少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩と、微結晶性セルロース、ラクトース一水和物、及びヒドロキシプロピルメチルセルロースとを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載されている少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩と、微結晶性セルロース、ラクトース一水和物、及びポリエチレンオキシドとを含む。いくつかの実施形態では、組成物は更に、ステアリン酸マグネシウムまたは二酸化ケイ素を含む。いくつかの実施形態では、微結晶性セルロースはＡｖｉｃｅｌ ＰＨ１０２（商標）である。いくつかの実施形態では、ラクトース一水和物はＦａｓｔ－ｆｌｏ ３１６（商標）である。いくつかの実施形態では、ヒドロキシプロピルメチルセルロースは、ヒドロキシプロピルメチルセルロース２２０８ Ｋ４Ｍ（例えば、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ Ｋ４ Ｍ Ｐｒｅｍｉｅｒ（商標））、及び／またはヒドロキシプロピルメチルセルロース２２０８ Ｋ１００ＬＶ（例えば、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ Ｋ００ＬＶ（商標））である。いくつかの実施形態では、ポリエチレンオキシドはポリエチレンオキシドＷＳＲ １１０５（例えば、Ｐｏｌｙｏｘ ＷＳＲ １１０５（商標））である。

【0177】

いくつかの実施形態では、湿式造粒プロセスを使用して組成物を製造する。いくつかの実施形態では、乾式造粒プロセスを使用して組成物を製造する。

【0178】

組成物は、単位剤形で製剤化され得、各投薬量は、約５～約１，０００ｍｇ（１ｇ）、より通常では約１００ｍｇ～約５００ｍｇの有効成分を含む。いくつかの実施形態では、各投薬量は、約１０ｍｇの有効成分を含む。いくつかの実施形態では、各投薬量は、約５０ｍｇの有効成分を含む。いくつかの実施形態では、各投薬量は、約２５ｍｇの有効成分を含む。「単位剤形」という用語は、ヒト対象及び他の哺乳動物のための単位投与量として好適な物理的に個別の単位を指し、各単位は、好適な薬学的賦形剤に関連して、所望の治療効果を生み出すように算出された既定量の活性物質を含有する。

【0179】

薬学的組成物を製剤化するのに使用される構成成分は、高純度のものであり、有害である可能性がある汚染物質を実質的に含まない（例えば、少なくとも国の食品グレード、一般には少なくとも分析グレード、更に通常では少なくとも医薬品グレード）。特にヒトの消費のために、組成物は、好ましくは、米国食品医薬品局の適用規制に定義される、医薬品及び医薬部外品の製造管理及び品質管理規則の基準の下で製造または製剤化される。例えば、好適な製剤は、滅菌及び／または実質的に等張であり得、及び／または米国食品医薬品局の全ての医薬品及び医薬部外品の製造管理及び品質管理規則の規定に完全に準拠することができる。

【0180】

活性化合物は、広い投与量範囲にわたって有効であり得、一般に、治療有効量で投与される。しかし、実際に投与される化合物の量は、通常、処置される状態、選択した投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重、及び応答、患者の症状の重症度などを含む関連状況に従って、医師が決定することが理解されるであろう。

【0181】

本発明の化合物の治療投与量は、例えば、処置が施される特定の用途、化合物の投与様式、患者の健康及び状態、ならびに処方医師の判断に従って変化し得る。薬学的組成物における本発明の化合物の比率または濃度は、投与量、化学的性質（例えば、疎水性）、及び投与経路を含む多くの因子に応じて変化することができる。例えば、本発明の化合物は、非経口投与の場合、約０．１～約１０％ｗ／ｖの化合物を含有する生理緩衝水溶液中で提供することができる。いくつかの典型的な用量範囲は、１日当たり約１μｇ／ｋｇ体重～約１ｇ／ｋｇ体重である。いくつかの実施形態では、用量範囲は、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。投与量は、疾患または障害の種類及び進行の程度、特定の患者の全体的な健康状態、選択された化合物の相対生体効能、賦形剤の製剤化、及びその投与経路のような変数に依存する可能性がある。有効用量は、インビトロまたは動物モデルの試験システムに由来する用量反応曲線から外挿することができる。

【0182】

錠剤のような固体組成物を調製するために、主要な有効成分を薬学的賦形剤と混合して、本発明の化合物の均質な混合物を含有する固体の予製剤組成物（ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）を形成する。これらの予製剤組成物が均質物として言及される場合、有効成分は、通常、組成物全体に均一に分散され、それにより、組成物は、錠剤、丸剤、及びカプセル剤のような等しく有効な単位剤形に容易に分割することができる。次いで、この固体の事前製剤は、例えば、約０．１～約１０００ｍｇの本発明の有効成分を含有する、上記のタイプの単位剤形に分割される。

【0183】

本発明の錠剤または丸剤をコーティングまたは他の方法で配合して、長期作用の利点をもたらす剤形を提供することができる。例えば、錠剤または丸剤は、内部用量及び外部用量の成分を含み得、後者は前者上のエンベロープの形態である。２つの成分は、胃における崩壊に抵抗し、かつその内部成分を無傷で十二指腸内まで通過させる、または放出を遅延させるのに役立つ腸溶性の層によって分離することができる。種々の材料をそのような腸溶性層またはコーティングに使用することができ、そのような材料は、多数のポリマー酸、ならびにポリマー酸とセラック、セチルアルコール、及びセルロース酢酸塩のような材料との混合物を含む。

【0184】

本発明の化合物及び組成物が経口または注射による投与のために組み込まれ得る液体形態には、水溶液、好適に風味付けされたシロップ、水性または油性懸濁液、及び綿実油、ゴマ油、ココナッツ油、またはピーナッツ油のような食用油で風味付けされた乳剤、ならびにエリキシル剤及び類似の薬学的ビヒクルが含まれる。

【0185】

吸入または吹送のための組成物には、薬学的に許容される水性もしくは有機溶媒、またはそれらの混合物中の溶液及び懸濁液、ならびに粉末が含まれる。液体または固体の組成物は、上記のような好適な薬学的に許容される賦形剤を含有し得る。いくつかの実施形態では、組成物は、局所または全身効果のために口または鼻呼吸経路により投与される。組成物は、不活性ガスの使用により噴霧され得る。噴霧された溶液は、噴霧デバイスから直接的に吸入され得るか、または噴霧デバイスが、顔面マスク、テント、もしくは断続的陽圧呼吸機器に装着され得る。溶液、懸濁液、または粉末の組成物は、適切な様式で製剤を送達するデバイスから経口的または経鼻的に投与され得る。

【0186】

局所製剤は１つ以上の従来の担体を含有することができる。いくつかの実施形態では、軟膏は、水と、例えば、流動パラフィン、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、プロピレングリコール、白色ワセリンなどから選択される１つ以上の疎水性担体とを含有することができる。クリームの担体組成物は、グリセロール及び１つ以上の他の構成成分、例えば、グリセリンモノステアリン酸塩、ＰＥＧ－グリセリンモノステアリン酸塩、及びセチルステアリルアルコールと組み合わせた水に基づくことができる。ゲルは、イソプロピルアルコール及び水を使用して、好適には、例えばグリセロール、ヒドロキシエチルセルロースなどの他の構成成分との組み合わせで製剤化することができる。いくつかの実施形態では、局所製剤は、少なくとも約０．１、少なくとも約０．２５、少なくとも約０．５、少なくとも約１、少なくとも約２、または少なくとも約５ｗｔ％の本発明の化合物を含有する。局所製剤は、好適には、選択適応症、例えば乾癬または他の皮膚状態の治療のための指示と任意選択的に関連する、例えば１００ｇのチューブに包装され得る。

【0187】

患者に投与される化合物または組成物の量は、投与されるもの、予防または治療のような投与の目的、患者の状態、投与様式などに応じて変化することになる。治療的用途では、組成物は、疾患の症状及びその合併症を治癒または少なくとも部分的に阻止するのに十分な量で、すでに疾患に罹患している患者に投与することができる。有効用量は、治療される病態、ならびに疾患の重症度、患者の年齢、体重、及び一般状態などのような因子に応じた担当医師の判断に左右されることになる。

【0188】

患者に投与される組成物は、上記の薬学的組成物の形態であることができる。これらの組成物は、従来の殺菌技法によって殺菌され得るか、または無菌濾過されてもよい。水溶液は、そのままで使用するために包装するか、または凍結乾燥することができ、凍結乾燥調製物は、投与前に無菌水性担体と組み合わされる。化合物調製物のｐＨは、典型的には、３～１１、より好ましくは５～９、最も好ましくは７～８となる。前述の賦形剤、担体、または安定剤のいくつかの使用が薬学的塩の形成をもたらすことは、理解されることになる。

【0189】

本発明の化合物の治療投与量は、例えば、処置が施される特定の用途、化合物の投与様式、患者の健康及び状態、ならびに処方医師の判断により変化し得る。薬学的組成物における本発明の化合物の比率または濃度は、投与量、化学的性質（例えば、疎水性）、及び投与経路を含む多くの因子に応じて変化させることができる。例えば、本発明の化合物は、非経口投与の場合、約０．１～約１０％ｗ／ｖの化合物を含有する生理緩衝水溶液中で提供することができる。いくつかの典型的な用量範囲は、１日当たり約１μｇ／ｋｇ体重～約１ｇ／ｋｇ体重である。いくつかの実施形態では、用量範囲は、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重である。投与量は、疾患または障害の種類及び進行の程度、特定の患者の全体的な健康状態、選択された化合物の相対生体効能、賦形剤の製剤化、及びその投与経路のような変数に依存する可能性がある。有効用量は、インビトロまたは動物モデルの試験システムに由来する用量反応曲線から外挿することができる。

【0190】

標識化合物及びアッセイ法
本発明の別の態様は、標識化合物の阻害結合によって、ヒトを含めた組織試料中でＫＲＡＳタンパク質の位置を特定してそれを定量するため、及びＫＲＡＳリガンドを特定するために、画像化技法のみならず、インビトロ及びインビボの両方でのアッセイにおいても有用であろう本開示の標識化合物（放射性標識、蛍光標識など）に関する。本開示の化合物の原子うちの１つ以上の置換はまた、異なるＡＤＭＥ（吸着、分布、代謝、及び排泄）を生み出す上で有用であり得る。したがって、本発明は、かかる標識または置換された化合物を含有するＫＲＡＳ結合アッセイを含む。

【0191】

本開示は更に、本開示の同位体標識化合物を含む。「同位体標識」または「放射性標識」化合物は、１つ以上の原子が、自然界で通常見られる（すなわち、天然に存在する）原子量または質量数とは異なる原子量または質量数を有する原子に置き換えられている、または置換されている本開示の化合物である。本開示の化合物に組み込まれ得る好適な放射性核種には、^２Ｈ（また、重水素としてＤとも記される）、^３Ｈ（また、トリチウムとしてＴとも記される）、^１１Ｃ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１３Ｎ、^１５Ｎ、^１５Ｏ、^１７Ｏ、^１８Ｏ、^１８Ｆ、^３５Ｓ、^３６Ｃｌ、^８２Ｂｒ、^７５Ｂｒ、^７６Ｂｒ、^７７Ｂｒ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、及び^１３１Ｉが含まれるがこれらに限定されない。例えば、本開示の化合物における１つ以上の水素原子は、重水素原子で置き換えられ得る（例えば、式Ｉ、ＩＩ、または本明細書に提供される任意の式のＣ_１～６アルキル基の１つ以上の水素原子は、－ＣＨ_３に対して置換されている－ＣＤ_３など、重水素原子で任意選択的に置換され得る）。いくつかの実施形態では、式Ｉ、ＩＩ、または本明細書に提供されている任意の式におけるアルキル基を過重水素化することができる。

【0192】

本明細書に提示されている化合物の１つ以上の構成原子は、天然または非天然の存在量の原子の同位体で置き換える、または置換することができる。いくつかの実施形態では、化合物は少なくとも１つの重水素原子を含む。いくつかの実施形態では、化合物は２つ以上の重水素原子を含む。いくつかの実施形態では、化合物は、１～２、１～３、１～４、１～５、または１～６の重水素原子を含む。いくつかの実施形態では、化合物における全ての水素原子を重水素原子に置き換える、または置換することができる。

【0193】

有機化合物中に同位体を含めるための合成法は、当該技術分野では既知である（Ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｂｙ Ａｌａｎ Ｆ．Ｔｈｏｍａｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ａｐｐｌｅｔｏｎ－Ｃｅｎｔｕｒｙ－Ｃｒｏｆｔｓ，１９７１；Ｔｈｅ Ｒｅｎａｉｓｓａｎｃｅ ｏｆ Ｈ／Ｄ Ｅｘｃｈａｎｇｅ ｂｙ Ｊｅｎｓ Ａｔｚｒｏｄｔ，Ｖｏｌｋｅｒ Ｄｅｒｄａｕ，Ｔｈｏｒｓｔｅｎ Ｆｅｙ ａｎｄ Ｊｏｃｈｅｎ Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００７，７７４４－７７６５；Ｔｈｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｉｓｏｔｏｐｉｃ Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ ｂｙ Ｊａｍｅｓ Ｒ．Ｈａｎｓｏｎ，Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１１）。同位体標識化合物は、ＮＭＲ分光法、代謝実験、及び／またはアッセイのような種々の試験で使用することができる。

【0194】

重水素などのより重い同位体での置換は、より高い代謝安定性、例えば、増加したインビボ半減期または減少した投与量要件に起因する特定の治療上の利点をもたらし得、それによって、いくつかの状況で好ましい場合がある（例えば、Ａ．Ｋｅｒｅｋｅｓ ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１１，５４，２０１－２１０、Ｒ．Ｘｕ ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｌａｂｅｌ Ｃｏｍｐｄ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．２０１５，５８，３０８－３１２を参照されたい）。特に、１つ以上の代謝部位での置換は、１つ以上の治療上の利点をもたらし得る。

【0195】

本放射標識化合物に組み込まれる放射性核種は、その放射標識化合物の特定の用途に依存することになる。例えば、インビトロアデノシン受容体標識及び競合アッセイの場合、^３Ｈ、^１４Ｃ、^８２Ｂｒ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉまたは^３５Ｓを組み込む化合物が有用であり得る。放射性画像化用途の場合、^１１Ｃ、^１８Ｆ、^１２５Ｉ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１３１Ｉ、^７５Ｂｒ、^７６Ｂｒ、または^７７Ｂｒが有用であり得る。

【0196】

「放射性標識」または「標識化合物」は少なくとも１つの放射性核種を組み込んだ化合物であることが理解される。いくつかの実施形態では、放射性核種は、^３Ｈ、^１４Ｃ、^１２５Ｉ、^３５Ｓ、及び^８２Ｂｒから選択される。

【0197】

本開示は更に、放射性同位体を本開示の化合物に組み込むための合成方法を含むことができる。有機化合物に放射性同位体を組み込むための合成方法は、当該技術分野で周知であり、当業者は、本開示の化合物に適用可能な方法を容易に認識するであろう。

【0198】

本発明の標識化合物をスクリーニングアッセイで使用して、化合物を特定する、及び／または評価することができる。例えば、標識されている新しく合成または特定された化合物（すなわち、試験化合物）は、ＫＲＡＳとの接触時のその濃度変化を、標識の追跡を介してモニタリングすることによって、ＫＲＡＳタンパク質と結合するその能力について評価され得る。例えば、（標識された）試験化合物は、ＫＲＡＳタンパク質（すなわち、標準化合物）に結合することが知られている別の化合物の結合を低減するその能力について評価され得る。したがって、ＫＲＡＳタンパク質への結合に関して標準化合物と競合する試験化合物の能力は、その結合親和性と直接相関している。逆に、他のいくつかのスクリーニングアッセイでは、標準化合物が標識され、試験化合物は標識されない。したがって、標識された標準化合物の濃度は、標準化合物と試験化合物との間の競合を評価するためにモニタリングされ、したがって、試験化合物の相対的結合親和性が確認される。

【0199】

キット
本開示はまた、例えば、がんまたは感染症のような、ＫＲＡＳの活性と関連する疾患または障害の治療または予防に有用な薬学的キットも含み、これには、治療有効量の式Ｉ、ＩＩの、またはその実施形態のいずれかの化合物を含む薬学的組成物を含有する１つ以上の容器が含まれる。かかるキットは、当業者に容易に明らかとなる、例えば、１つ以上の薬学的に許容される担体を有する容器、追加的な容器などのような、様々な従来の薬学的キット構成成分のうちの１つ以上を更に含むことができる。挿入物または標識のいずれかとして、投与される構成成分の量、投与のためのガイドライン、及び／または構成成分を混合するためのガイドラインを示す指示書もまた、キットに含まれ得る。

【0200】

本発明は、特定の実施例によって更に詳細に説明される。以下の実施例は例示の目的のために提供され、いかなる様式でも本発明を限定するようには意図されない。当業者は、本質的に同じ結果をもたらすように変更または修正され得る、種々の重要でないパラメータを容易に認識するであろう。実施例の化合物は、本明細書に記載されている少なくとも１つのアッセイに従ってＫＲＡＳの活性を阻害することが判明している。

【実施例】

【0201】

本発明の化合物の実験手順を以下に提供する。調製された化合物の一部の分取ＬＣ－ＭＳ精製を、Ｗａｔｅｒｓの質量分別システム（ｍａｓｓ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍｓ）で実施した。これらのシステムの操作のための基本的な機器セットアップ、プロトコル、及び制御ソフトウェアは、文献において詳細に記載されている。例えば、“Ｔｗｏ－Ｐｕｍｐ Ａｔ Ｃｏｌｕｍｎ Ｄｉｌｕｔｉｏｎ Ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＬＣ－ＭＳ”，Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｊ．Ｃｏｍｂｉ．Ｃｈｅｍ．，４，２９５（２００２）、“Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＬＣ－ＭＳ Ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｐａｒａｌｌｅｌ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ”，Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｒ．Ｓｐａｒｋｓ，Ｊ．Ｄｏｕｇｈｔｙ，Ｇ．Ｅｖｅｒｌｏｆ，Ｔ．Ｈａｑｕｅ，Ａ．Ｃｏｍｂｓ，Ｊ．Ｃｏｍｂｉ．Ｃｈｅｍ．，５，６７０（２００３）、及び“Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＬＣ－ＭＳ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ”，Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｂ．Ｇｌａｓｓ，Ｒ．Ｓｐａｒｋｓ，Ａ．Ｃｏｍｂｓ，Ｊ．Ｃｏｍｂｉ．Ｃｈｅｍ．，６，８７４－８８３（２００４）を参照されたい。分離した化合物を通常、純度チェックのために分析液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）に供した。

【0202】

分離した化合物を、典型的には、以下の条件下で純度チェックのために分析液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）に供した。機器；Ａｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズ、ＬＣ／ＭＳＤ、カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ（商標）Ｃ_１８ ５μｍ粒径、２．１×５．０ｍｍ、緩衝液：移動相Ａ：水中の０．０２５％ＴＦＡ及び移動相Ｂ：アセトニトリル、流速２．０ｍＬ／分で３分間のＢの勾配２％～８０％。

【0203】

また、実施例に示されるＭＳ検出器を有する逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）またはフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）により、調製された化合物のいくつかを分取規模で分離した。典型的な分取逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）カラム条件は次のとおりである：
ｐＨ＝２精製：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ（商標）Ｃ_１８ ５μｍ粒径、１９×１００ｍｍカラム、移動相Ａ：水中の０．１％のＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）及び移動相Ｂ：アセトニトリルで溶出、流速は３０ｍＬ／分であり、分離勾配を、文献に記載されるＣｏｍｐｏｕｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎプロトコルを使用して各化合物について最適化した［“Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＬＣＭＳ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ”，Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｂ．Ｇｌａｓｓ，Ｒ．Ｓｐａｒｋｓ，Ａ．Ｃｏｍｂｓ，Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．，６，８７４－８８３（２００４）を参照されたい］。通常、３０×１００ｍｍカラムで使用される流速は６０ｍＬ／分であった。

【0204】

ｐＨ＝１０精製：Ｗａｔｅｒｓ ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ_１８ ５μｍ粒径、１９×１００ｍｍカラム、移動相Ａ：水中の０．１５％のＮＨ_４ＯＨ及び移動相Ｂ：アセトニトリルで溶出、流速は３０ｍＬ／分であり、分離勾配を、文献に記載されるＣｏｍｐｏｕｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎプロトコルを使用して各化合物について最適化した［“Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＬＣＭＳ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ”，Ｋ．Ｂｌｏｍ，Ｂ．Ｇｌａｓｓ，Ｒ．Ｓｐａｒｋｓ，Ａ．Ｃｏｍｂｓ，Ｊ．Ｃｏｍｂ．Ｃｈｅｍ．，６，８７４－８８３（２００４）を参照されたい］。通常、３０×１００ｍｍカラムで使用される流速は６０ｍＬ／分であった。

【0205】

以下の略語が、本明細書で使用され得る。ＡｃＯＨ（酢酸）；Ａｃ_２Ｏ（無水酢酸）；ａｑ．（水性）；ａｔｍ．（雰囲気（複数可））；Ｂｏｃ（ｔ－ブトキシカルボニル）；ＢＯＰ（（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩）；ｂｒ（広域）；Ｃｂｚ（カルボキシベンジル）；ｃａｌｃ．（算出した）；ｄ（二重線）；ｄｄ（二重線の二重線）；ＤＢＵ（１，８－ジアザビジクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン）；ＤＣＭ（ジクロロメタン）；ＤＩＡＤ（Ｎ，Ｎ’－アジドジカルボン酸ジイソプロピル）；ＤＩＥＡ（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン）；ＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン）；ＤＩＢＡＬ（水素化ジイソブチルアルミニウム）；ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド）；Ｅｔ（エチル）；ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）；ＦＣＣ（フラッシュカラムクロマトグラフィー）；ｇ（グラム（複数可））；ｈ（時間（複数可））；ＨＡＴＵ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート）；ＨＣｌ（塩酸）；ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）；Ｈｚ（ヘルツ）；Ｊ（カップリング定数）；ＬＣＭＳ（液体クロマトグラフィー－質量分析）；ＬＤＡ（リチウムジイソプロピルアミド）；ｍ（多重線）；Ｍ（モル）；ｍＣＰＢＡ（３－クロロペルオキシ安息香酸）；ＭＳ（質量分析）；Ｍｅ（メチル）；ＭｅＣＮ（アセトニトリル）；ＭｅＯＨ（メタノール）；ｍｇ（ミリグラム（複数可））；ｍｉｎ（分（複数可））；ｍＬ（ミリリットル（複数可））；ｍｍｏｌ（ミリモル（複数可））；Ｎ（規定）；ＮＣＳ（Ｎ－クロロスクシンイミド）；ＮＥｔ_３（トリエチルアミン）；ｎＭ（ナノモル）；ＮＭＰ（Ｎ－メチルピロリジノン）；ＮＭＲ（核磁気共鳴分光法）；ＯＴｆ（トリフルオロメタンスルホン酸）；Ｐｈ（フェニル）；ｐＭ（ピコモル）；ＰＰＴ（沈殿物）；ＲＰ－ＨＰＬＣ（逆相高速液体クロマトグラフィー）；ｒ．ｔ．（室温）、ｓ（一重線）；ｔ（三重線または三級）；ＴＢＳ（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）；ｔｅｒｔ（三級）；ｔｔ（三重線の三重線）；ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）；ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）；μｇ（マイクログラム（複数可））；μＬ（マイクロリットル（複数可））；μＭ（マイクロモル）；ｗｔ％（重量パーセント）。ブラインは飽和塩化ナトリウム水溶液である。ｉｎ ｖａｃｕｏは真空下である。

【0206】

実施例１ａ及び実施例１ｂ．１－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ブタ－２－イノイル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－８－クロロ－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル

【化13】

ステップ１．２－アミノ－４－ブロモ－３－フルオロ安息香酸エチル

【化14】

エタノール（１８４ｍｌ）中の２－アミノ－４－ブロモ－３－フルオロ安息香酸（２２．７ｇ、９２ｍｍｏｌ）の溶液に、硫酸（９．８２ｍｌ、１８４ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。得られた混合物を２日間加熱還流させた。室温に冷却した後、反応混合物を、水で希釈し、ｐＨを、６ＭのＮａＯＨ（２２ｍＬ）で７に調節した。有機溶媒を真空中で除去した。得られた混合物を、酢酸エチル及び水で希釈した。有機層を０．５Ｎ ＮａＯＨ溶液、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、所望の生成物（２３．２ｇ、９６％）を得た。Ｃ_９Ｈ_１０ＢｒＦＮＯ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値 ｍ／ｚ＝２６２．０，２６４．０；測定値２６２．０，２６４．０。

【0207】

ステップ２．２－アミノ－３－フルオロ－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）安息香酸エチル

【化15】

窒素雰囲気下、１００℃で、２－アミノ－４－ブロモ－３－フルオロ安息香酸エチル（２１．８ｇ、８３ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（２５．３ｇ、１００ｍｍｏｌ）、ジクロロ［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加物（６．７９ｇ、８．３２ｍｍｏｌ）、及び酢酸、無水カリウム塩（１７．９６ｇ、１８３ｍｍｏｌ）、及びジオキサン（４１６ｍｌ）の混合物を５時間撹拌した。粗製物をセライトを通して濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、所望の生成物（２４ｇ、９３％）を得た。Ｃ_１５Ｈ_２２ＢＦＮＯ_４（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値 ｍ／ｚ＝３１０．２；測定値３１０．１。

【0208】

ステップ３．８－シアノイソキノリン２－オキシド

【化16】

ＣＨ_２Ｃｌ_２（２４０ｍｌ）中のイソキノリン－８－カルボニトリル（３．７０ｇ、２４．００ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でｍ－ＣＰＢＡ（７．１０ｇ、２８．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃で２時間撹拌した。この反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で希釈した。水層をＤＣＭ（×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物を、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中勾配０～１００％酢酸エチルで溶出する）で精製して、所望の生成物（３．２ｇ、７８％）を得た。Ｃ_１０Ｈ_７Ｎ_２Ｏ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対する ＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝１７１．１；測定値１７１．１。

【0209】

ステップ４．１－クロロイソキノリン－８－カルボニトリル

【化17】

ＣＨ_２Ｃｌ_２（６２．３ｍｌ）中の８－シアノイソキノリン２－オキシド（５．３０ｇ、３１．１ｍｍｏｌ）、２，６－ルチジン（７．２６ｍｌ、６２．３ｍｍｏｌ）の溶液に、ＰＯＣｌ_３（５．８１ｍｌ、６２．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３（８０ｍＬ）を添加してクエンチした。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物をヘキサン中の酢酸エチルで粉砕して、所望の生成物を白色固体（４．０ｇ、６８％）として得た。Ｃ_１０Ｈ_６ＣｌＮ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝１８９．０；測定値１８９．０。

【0210】

ステップ５．２－アミノ－４－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－３－フルオロ安息香酸エチル

【化18】

１，４－ジオキサン（１２０ｍＬ）及び水（２４ｍＬ）中の１－クロロイソキノリン－８－カルボニトリル（６．６０ｇ、３５．０ｍｍｏｌ）、２－アミノ－３－フルオロ－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）安息香酸エチル（１１．３６ｇ、３６．７ｍｍｏｌ）、ＳＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ４（１．３９０ｇ、１．７５０ｍｍｏｌ）、及びリン酸三カリウム水和物（１７．７３ｇ、７７ｍｍｏｌ）の混合物を、８０℃で２時間撹拌した。溶液を、酢酸エチル及び水で希釈した。有機層を濃縮した。粗製物を精製することなく次のステップで使用した。Ｃ_１９Ｈ_１５ＦＮ_３Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝３３６．１；測定値３３６．１。

【0211】

ステップ６．２－アミノ－５－クロロ－４－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－３－フルオロ安息香酸エチル

【化19】

ＤＭＦ（１１６ｍｌ）中の２－アミノ－４－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－３－フルオロ安息香酸エチル（１１．７ｇ、３４．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＣＳ（５．１２ｇ、３８．４ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を８０℃で１５時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、水で希釈した。沈殿物を、濾過により回収し、水及び酢酸エチル／ヘキサン（１：２）で洗浄した。濾液を、酢酸エチルで抽出した。有機層を濃縮した。固体を濾過により収集し、酢酸エチル／ヘキサン（１：２）で洗浄して、所望の生成物（１０．２ｇ、７９％）を得た。Ｃ_１９Ｈ_１４ＣｌＦＮ_３Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝３７０．１；測定値３７０．１。

【0212】

ステップ７．５－クロロ－４－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－２－（３－エトキシ－３－オキソプロパンアミド）－３－フルオロ安息香酸エチル

【化20】

ＤＣＭ（２８０ｍＬ）中の２－アミノ－５－クロロ－４－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－３－フルオロ安息香酸エチル（１０．３ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（５．０５ｍｌ、３６．２ｍｍｏｌ）の溶液に、３－クロロ－３－オキソプロパン酸エチル（３．９２ｍｌ、３０．６ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。得られた混合物を０℃で撹拌し、ＬＣ－ＭＳによってモニタリングした。別の当量の３－クロロ－３－オキソプロパン酸エチル（３．９２ｍｌ、３０．６ｍｍｏｌ）を滴下で添加し、１時間撹拌した。反応物を水及びＤＣＭで希釈した。有機層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（９．５ｇ、７０％）を得た。Ｃ_２４Ｈ_２０ＣｌＦＮ_３Ｏ_５（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝４８４．１；測定値４８４．１。

【0213】

ステップ８．エチル６－クロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロ－２，４－ジヒドロキシキノリン－３－カルボキシレート

【化21】

ＥｔＯＨ中の２１％ナトリウムエトキシド（１９．９１ｍｌ、５３．３ｍｍｏｌ）の溶液を、ＥｔＯＨ（８０ｍｌ）中の５－クロロ－４－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－２－（３－エトキシ－３－オキソプロパンアミド）－３－フルオロ安息香酸エチル（８．６ｇ、１７．７７ｍｍｏｌ）の溶液に滴下添加した。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。反応フラスコに１Ｎ ＨＣｌを添加して、ｐＨを３に調節した。溶媒を真空下で除去した。得られた沈殿物を収集し、酢酸エチルで洗浄して所望の生成物を白色の固体（７．４ｇ、９５％）として得た。Ｃ_２２Ｈ_１４ＣｌＦＮ_３Ｏ_４（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝４３８．１；測定値４３８．１。

【0214】

ステップ９．エチル６－クロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロ－２，４－ジヒドロキシキノリン－３－カルボキシレート

【化22】

反応フラスコに、エチル６－クロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロ－２，４－ジヒドロキシキノリン－３－カルボキシレート（７．４ｇ、１６．９０ｍｍｏｌ）及びＰＯＣｌ_３（３１．５ｍｌ、３３８ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を１１０℃で２時間撹拌した。ＰＯＣｌ_３を、トルエンによる共沸によって除去し（３回）、残留物を、ＤＣＭ及び飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で希釈した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物を、酢酸エチル／ヘキサン（１：１）で粉砕して、所望の生成物を白色の固体（７．２４ｇ、９０％）として得た。Ｃ_２２Ｈ_１２Ｃｌ_３ＦＮ_３Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝４７４．０，４７６．０；測定値４７４．０，４７６．０。

【0215】

ステップ１０．エチル４－（（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）アミノ）－２，６－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレート

【化23】

ＤＭＦ（１００ｍｌ）中のエチル２，４，６－トリクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレート（７．２４ｇ、１５．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノ－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（６．５６ｇ、１８．３０ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（５．３ｍｌ、３０．５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、６５℃で一晩撹拌した。反応混合物を、酢酸エチル及び水で希釈した。有機層を水及びブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物を、シリカゲルカラム（ヘキサン中勾配０～３０％酢酸エチルで溶出）で精製して所望の生成物を淡い黄色の泡状物（１１．５ｇ、９５％）として得た。Ｃ_４０Ｈ_４９Ｃｌ_２ＦＮ_５Ｏ_５Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７９６．３，７９８．３；測定値７９６．３，７９８．３。

【0216】

ステップ１１．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロ－３－（ヒドロキシメチル）キノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化24】

－７８℃の、エチル４－（（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）アミノ）－２，６－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレート（２．４５ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）のトルエン（３０．７ｍｌ）溶液に、ＤＣＭ中１．０Ｍ ＤＩＢＡＬ－Ｈ（９．８４ｍｌ、９．８４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、２時間にわたって－２０℃に温め、メタノール（１．３ｍＬ）でクエンチした。ロッシェル塩溶液（１４．７ｇ（６重量）のロッシェル塩及び５０ｍＬの水から調製された）を、１０℃以下で溶液に添加した。二相性混合物を１５～２５℃で１時間以上激しく撹拌し、分離して有機層を得た。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、そのまま使用した。Ｃ_３８Ｈ_４７Ｃｌ_２ＦＮ_５Ｏ_４Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７５４．３，７５６．３；測定値７５４．３，７５６．３。

【0217】

ステップ１２．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロ－３－ホルミルキノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化25】

ＤＣＭ（２３ｍｌ）及びアセトニトリル（７．７ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロ－３－（ヒドロキシメチル）キノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレート（２．３２ｇ、３．０７ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸（０．５３ｍｌ、９．２２ｍｍｏｌ）及びＩＢＸ（２．５８ｇ、９．２２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を３８℃で２２時間撹拌し、反応混合物を濾過し、ＤＣＭで洗浄した。濾液を濃縮し、シリカゲルカラム（ｈｅｘｓ中の勾配０～２０％の酢酸エチルで溶出）で精製して、所望の生成物を２つのピークとして得た。

【0218】

ジアステレオマー１（１．０５ｇ、４５％）。ピーク１。Ｃ_３８Ｈ_４５Ｃｌ_２ＦＮ_５Ｏ_４Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７５２．３，７５４．３；測定値７５２．３，７５４．３。

【0219】

ジアステレオマー２（１．０５ｇ、４５％）。ピーク２。Ｃ_３８Ｈ_４５Ｃｌ_２ＦＮ_５Ｏ_４Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７５２．３，７５４．３；測定値７５２．３，７５４．３。

【0220】

ステップ１３．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロ－３－（（Ｅ）－（ヒドロキシイミノ）メチル）キノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化26】

ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロ－３－ホルミルキノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレート（０．８５ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）（最後のステップからのピーク１）、ＤＣＭ（１１ｍｌ）及びＥｔＯＨ（１１ｍｌ）の混合物に、ヒドロキシルアミン塩酸塩（０．２５９ｇ、３．７３ｍｍｏｌ）及びピリジン（０．３０ｍｌ、３．７３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を４０℃で１６時間撹拌した。溶媒を、真空中で蒸発させた。ＤＣＭと水を含む残留物。水層をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層をＣｕＳＯ_４溶液、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物を、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製し、所望の生成物（０．５ｇ、５７％）を得た。Ｃ_３８Ｈ_４６Ｃｌ_２ＦＮ_６Ｏ_４Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７６７．３，７６９．３；測定値７６７．３，７６９．３。

【0221】

ジアステレオマー２を、最後のステップからのピーク２を使用して、ジアステレオマー１と同様の方法で調製した。Ｃ_３８Ｈ_４６Ｃｌ_２ＦＮ_６Ｏ_４Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７６７．３，７６９．３；測定値７６７．３，７６９．３。

【0222】

ステップ１４．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（４，８－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化27】

（ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロ－３－（（Ｅ）－（ヒドロキシイミノ）メチル）キノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレート（４８６ｍｇ、０．６３３ｍｍｏｌ）（最後のステップからのジアステレオマー１）のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（５ｍＬ）に、２－アミノピリジン（１１３ｍｇ、１．２０３ｍｍｏｌ）及びＭｓ－Ｃｌ（８４μｌ、１．０７６ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた混合物を０℃で２時間撹拌し、次いで一晩室温まで温めた。この反応混合物を水で希釈した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、そのまま使用した。Ｃ_３８Ｈ_４４Ｃｌ_２ＦＮ_６Ｏ_３Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７４９．３，７５１．３；測定値７４９．３，７５１．３。

【0223】

ジアステレオマー２を、最後のステップからのピーク２を使用して、ジアステレオマー１と同様の方法で調製した。Ｃ_３８Ｈ_４４Ｃｌ_２ＦＮ_６Ｏ_３Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７４９．３，７５１．３；測定値７４９．３，７５１．３。

【0224】

ステップ１５ ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化28】

ＭｅＯＨ（６．３ｍｌ）／１，４－ジオキサン（６．３ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（４，８－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）ピペリジン－１－カルボキシレート（４７５ｍｇ、０．６３４ｍｍｏｌ）（最後のステップからのジアステレオマー１）の混合物に、ナトリウムチオメトキシド（１３３ｍｇ、１．９０１ｍｍｏｌ）を添加し、９０℃で１８時間撹拌した。混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、そのまま使用した。Ｃ_３９Ｈ_４７ＣｌＦＮ_６Ｏ_３ＳＳｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７６１．３，；測定値７６１．３。

【0225】

ジアステレオマー２を、最後のステップからのピーク２を使用して、ジアステレオマー１と同様の方法で調製した。Ｃ_３９Ｈ_４７ＣｌＦＮ_６Ｏ_３ＳＳｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７６１．３，；測定値７６１．３。

【0226】

ステップ１６．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－ヒドロキシエチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化29】

ＴＨＦ（６．３３ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）ピペリジン－１－カルボキシレート（４８２ｍｇ、０．６３３ｍｍｏｌ）（最後のステップからのジアステレオマー１）の溶液に、ＴＨＦ中の１．０ＭのＴＢＡＦ（６３３μｌ、０．６３３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を６０℃で１時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物を、水及び酢酸エチルで希釈した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（０．３９ｇ、９５％）を得た。Ｃ_３３Ｈ_３３ＣｌＦＮ_６Ｏ_３Ｓ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６４７．２；測定値６４７．２。

【0227】

ジアステレオマー２を、最後のステップからのピーク２を使用して、ジアステレオマー１と同様の方法で調製した。Ｃ_３３Ｈ_３３ＣｌＦＮ_６Ｏ_３Ｓ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６４７．２；測定値６４７．２。

【0228】

ステップ１７．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（８－クロロナフタレン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化30】

ＤＣＭ（６．０ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－ヒドロキシエチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（３９２ｍｇ、０．６０６ｍｍｏｌ）の溶液に、デス－マーチンペルヨージナン（２８３ｍｇ、０．６６６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を１時間撹拌し、反応フラスコに飽和ＮａＨＣＯ_３を添加し、１０分間撹拌した。有機層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物をＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解させ、水酸化アンモニウム（１．３７ｍｌ、９．８１ｍｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いてヨウ素（１５７ｍｇ、０．６１８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で２時間撹拌し、反応溶液を、酢酸エチル及び飽和ＮａＳ_２Ｏ_３溶液で希釈した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（０．３２ｇ、８２％）を得た。Ｃ_３３Ｈ_３０ＣｌＦＮ_７Ｏ_２Ｓ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６４１．２；測定値６４１．２。

【0229】

ジアステレオマー２を、最後のステップからのピーク２を使用して、ジアステレオマー１と同様の方法で調製した。Ｃ_３３Ｈ_３０ＣｌＦＮ_７Ｏ_２Ｓ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６４１．２；測定値６４１．２。

【0230】

ステップ１８．１－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル

【化31】

ｍ－ＣＰＢＡ（４３．９ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）を、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２．２１１ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（１４２ｍｇ、０．２２１ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加し、次いで、この温度で反応物を２０分間撹拌した。反応物を、飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３を添加することによってクエンチし、酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液、ブラインで洗浄し、濾過し、濃縮し、粗製物を次のステップに直接使用した。

【0231】

ＬｉＨＭＤＳ（３１８μｌ、０．３１８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１ｍＬ）中の（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エタン－１－オール（４１．０ｍｇ、０．３１８ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。第１の溶液を、ＴＨＦ（２．０ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルスルフィニル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（９５ｍｇ、０．１４４ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、次いで反応物を６０℃で２時間撹拌した。反応混合物を、酢酸エチル及び水で希釈した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、１：１のＤＣＭ／ＴＦＡ（２ｍＬ）で１時間処理した。溶媒を真空中で蒸発させた。残留物を、分取ＬＣＭＳ（ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、６０ｍＬ／分の流速で、０．１％ＴＦＡを含有するアセトニトリル／水の勾配で溶出させる）で精製して、所望の生成物を２つのピーク（６０ｍｇ、５８％）として得た。Ｃ_３４Ｈ_３３ＣｌＦＮ_８Ｏ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６２３．２；測定値６２３．２。

【0232】

ジアステレオマー２を、最後のステップからのピーク２を使用して、ジアステレオマー１と同様の方法で調製した。Ｃ_３４Ｈ_３３ＣｌＦＮ_８Ｏ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６２３．２；測定値６２３．２。

【0233】

ステップ１９．１－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ブタ－２－イノイル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－８－クロロ－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル
ＤＭＦ（１．０ｍｌ）中のブタ－２－イン酸（０．７１１ｍｇ、８．４６μｍｏｌ）及び１－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリルビス（２，２，２－トリフルオロアセテート）（６．０ｍｇ、７．０５μｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（３．４ｍｇ、８．８１μｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（４．９μｌ、０．０２８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。反応物をメタノール及び１Ｎ ＨＣｌ（０．１ｍＬ）で希釈し、次いで分取ＬＣＭＳ（ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、６０ｍＬ／分の流速で０．１％ＴＦＡを含むアセトニトリル／水の勾配で溶出する）を使用して精製して、所望のジアステレオマー１を得た。

【0234】

ジアステレオマー２を、１－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリルビス（２，２，２－トリフルオロアセテート）（最後のステップからのピーク２）を使用して同様の方法で合成した。

【0235】

実施例１ａ．ジアステレオマー１．ピーク１．Ｃ_３８Ｈ_３５ＣｌＦＮ_８Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値 ｍ／ｚ＝６８９．３；測定値６８９．３。

【0236】

実施例１ｂ．ジアステレオマー２．ピーク２．Ｃ_３８Ｈ_３５ＣｌＦＮ_８Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値 ｍ／ｚ＝６８９．３；測定値６８９．３。

【0237】

実施例２ａ及び実施例２ｂ．１－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（（Ｅ）－４－メトキシブタ－２－エノイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル

【化32】

この化合物を、実施例１ａ及び実施例１ｂ、ステップ１９に記載の手順に従って、ブタ－２－イン酸を（Ｅ）－４－メトキシブタ－２－エン酸に置き換えて調製した。Ｃ_３９Ｈ_３９ＣｌＦＮ_８Ｏ_３（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７２１．３；測定値：７２１．３。

【0238】

実施例３ａ及び実施例３ｂ．１－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（２－フルオロアクリロイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）イソキノリン－８－カルボニトリル

【化33】

この化合物を、実施例１ａ及び実施例１ｂ、ステップ１９に記載の手順に従って、ブタ－２－イン酸を２－フルオロアクリル酸に置き換えて調製した。Ｃ_３７Ｈ_３４ＣｌＦ_２Ｎ_８Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６９５．２；測定値：６９５．２。

【0239】

実施例４ａ及び実施例４ｂ．２－（（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（５，６－ジメチル－１Ｈ－インダゾール－４－イル）－４－（３－（エチル（メチル）アミノ）アゼチジン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－１－（２－フルオロアクリロイル）ピペリジン－２－イル）アセトニトリル

【化34】

ステップ１：２－アミノ－４－ブロモ－５－クロロ－３－フルオロ安息香酸メチル

【化35】

硫酸（７．７６ｍｌ、１４６ｍｍｏｌ）を、室温で、ＭｅＯＨ（１４６ｍｌ）中の２－アミノ－４－ブロモ－５－クロロ－３－フルオロ安息香酸（１９．５ｇ、７２．８ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくりと添加した。得られた混合物を、８０℃に一晩加熱した。次いで混合物を室温に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ_３にゆっくりと注いだ。混合物を室温で３０分間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、更に精製することなく次のステップで使用した。Ｃ_８Ｈ_７ＢｒＣｌＦＮＯ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝２８１．９，２８３．９；測定値２８１．９，２８３．９。

【0240】

ステップ２：エチル７－ブロモ－６－クロロ－８－フルオロ－４－ヒドロキシ－２－オキソ－１，２－ジヒドロキノリン－３－カルボキシレート

【化36】

３－クロロ－３－オキソプロパン酸エチル（９．６０ｍｌ、７５．０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中の２－アミノ－４－ブロモ－５－クロロ－３－フルオロ安息香酸メチル（１９．２５ｇ、６８．１ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（１４．２５ｍｌ、１０２ｍｍｏｌ）の溶液に、室温で滴下した。１時間撹拌した後、追加の３－クロロ－３－オキソプロパン酸エチル（１．７４５ｍｌ、１３．６３ｍｍｏｌ）を追加した。更に１時間撹拌した後、反応物を水でクエンチし、次いで、酢酸エチルで抽出した。有機層を乾燥させ、濾過し、次いで濃縮した。濃縮した残留物をＥｔＯＨ（１５０ｍｌ）に再溶解し、エタノール（５３．４ｍｌ、１４３ｍｍｏｌ）中のナトリウムエトキシドを加え、室温で１時間撹拌した。反応混合物を水（１Ｌ）に注ぎ、ｐＨ約３に酸性化し、得られた沈殿物を濾過によって収集し、所望の生成物（１８．３９ｇ、７４．０％）を得た。Ｃ_１２Ｈ_９ＢｒＣｌＦＮＯ_４（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝３６３．９，３６５．９；測定値３６３．９，３６５．９。

【0241】

ステップ３：エチル７－ブロモ－２，４，６－トリクロロ－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレート

【化37】

エチル７－ブロモ－６－クロロ－８－フルオロ－２，４－ジヒドロキシキノリン－３－カルボキシレート（２．０ｇ、５．４９ｍｍｏｌ）をＰＯＣｌ_３（１０．２ｍｌ、１１０ｍｍｏｌ）に溶解し、ＤＩＥＡ（１．９２ｍｌ、１０．９７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を１００℃で２時間撹拌した。室温に冷却した後、反応物を、急速に撹拌された氷水（約２５０ｍＬ）中にゆっくりと注ぐことによってクエンチし、３０分間撹拌し、次いで、濾過によって固体を収集し、所望の生成物を茶色の固体として得た（１．６６ｇ、７５％）。Ｃ_１２Ｈ_７ＢｒＣｌ_３ＦＮＯ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝３９９．９，４０１．９，４０３．９；測定値３９９．９，４０１．９，４０３．９。

【0242】

ステップ４．ｔｅｒｔ－ブチル（Ｒ）－６－シアノ－５－ヒドロキシ－３－オキソヘキサノエート

【化38】

無水ＴＨＦ（２２３ｍｌ）中の２．０Ｍ ＬＤＡ（１００ｍｌ、２００ｍｍｏｌ）の溶液を、１時間－７８℃に冷却し、次いでｔｅｒｔ－ブチルアセテート（２６．９ｍｌ、２００ｍｍｏｌ）を２０分間にわたって撹拌しながら滴下した。－７８℃で更に４０分維持した後、（Ｒ）－４－シアノ－３－ヒドロキシブタン酸エチル（１０．５ｇ、６６．８ｍｍｏｌ）の溶液を滴下添加した。混合物を－４０℃で４時間撹拌し、次いで、ｐＨを約６に維持しながら、適切な量のＨＣｌ（２Ｍ）を混合物に添加した。このクエンチ中、混合物の温度を－１０℃に維持した。完了すると、混合物の温度を０℃に冷却した。混合物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａＨＣＯ_３（１００ｍＬ）及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、蒸発させて、材料を黄色の油状物（１５．０ｇ、９９％）として得た。

【0243】

ステップ５．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｒ）－２－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－４－ヒドロキシピペリジン－１－カルボキシレート

【化39】

酢酸（１１０ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（Ｒ）－６－シアノ－５－ヒドロキシ－３－オキソヘキサノエート（１５．０ｇ、６６．０ｍｍｏｌ）の溶液を、酸化白金（ＩＶ）水和物（０．８６８ｇ、３．３０ｍｍｏｌ）で処理した。Ｐａｒｒボトルを排気し、Ｈ_２で３回戻し充填し、Ｈ_２雰囲気（４５ｐｓｉ、再充填４回）下、２２℃で３時間撹拌した。混合物をセライトを通して濾過し、フィルターケーキをＥｔＯＨで洗浄した。濾液を濃縮して、約９：１のシス：トランスジアステレオマー比を有する生成物を得た。残留物をメタノール（１００ｍＬ）に溶解させ、Ｂｏｃ無水物（１５．３ｍｌ、６６．０ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１３．９９ｇ、１３２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（１１．７ｇ、５６％）を得た。Ｃ_１６Ｈ_２９ＮＮａＯ_５（Ｍ＋Ｎａ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値（生成物＋Ｎａ^＋）：ｍ／ｚ＝３３８．２；測定値：３３８．２。

【0244】

ステップ６．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジド－２－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化40】

０℃のＤＣＭ（３３ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｒ）－２－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）－４－ヒドロキシピペリジン－１－カルボキシレート（２．１０ｇ、６．６６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｍｓ－Ｃｌ（０．６７ｍＬ、８．６６ｍｍｏｌ）を添加し、１時間撹拌した後、反応物を水で希釈し、有機層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。生じた残留物をＤＭＦ中に溶解し、アジ化ナトリウム（１．３ｇ、２０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を７０℃で５時間加熱した。室温まで冷却した後、反応物をＥｔＯＡｃ及び水で希釈した。有機層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（１．９０ｇ、８４％）を得た。（生成物－Ｂｏｃ）Ｃ_１１Ｈ_２１Ｎ_４Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝２４１．２；測定値：２４１．２。

【0245】

ステップ７．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジド－２－（２－ヒドロキシエチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化41】

－７８℃のＤＣＭ（４００ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジド－２－（２－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソエチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（２１．４ｇ、６２．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＣＭ中の１．０ＭのＤＩＢＡＬ－Ｈ（１１３ｍｌ、１１３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を－７８℃で２時間撹拌した。反応物をメタノール（３８．１ｍｌ、９４３ｍｍｏｌ）で－７８℃でクエンチした。ロッシェル塩水溶液（ロッシェル塩１２６ｇ（６重量）及び水３００ｍＬから調製した）を、１０℃以下で溶液に添加した。二相性混合物を、１５～２５℃で１時間以上激しく撹拌し、分離して、有機層を得た。二相性混合物を分離した。有機層をＮａＣｌ水溶液（×２）で１５～２５℃で洗浄し、有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、そのまま使用した。残留物をメタノール（３００ｍＬ）中に溶解させ、水素化ホウ素ナトリウム（１．４３ｇ、３７．７ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で１時間撹拌した。反応物を水でクエンチし、メタノールを減圧下で蒸発させた。反応混合物を酢酸エチル（２回）で抽出し、有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物を、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の勾配０～５０％の酢酸エチルで溶出）で精製し、所望の生成物を無色の油状物（１４．８ｇ、８７％）として得た。（生成物－Ｂｏｃ）Ｃ_７Ｈ_１５Ｎ_４Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＬＣＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝１７１．１；測定値：１７１．１。

【0246】

ステップ８．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジド－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化42】

ＤＭＦ（７４．０ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジド－２－（２－ヒドロキシエチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（４．０ｇ、１４．８０ｍｍｏｌ）の溶液に、イミダゾール（１．５１ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）及びＴＢＳ－Ｃｌ（２．９０ｇ、１９．２４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を６０℃で１時間１５分間撹拌した。この反応混合物をＥｔＯＡｃ及び水で希釈した。有機層を水（２回）、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中０～２０％酢酸エチル）で精製して所望の生成物を無色油状物として得た。（５．３０ｇ，９３％）。（生成物－Ｂｏｃ）Ｃ_１３Ｈ_２９Ｎ_４ＯＳｉ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＬＣＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝２８５．２、測定値：２８５．２。

【0247】

ステップ９．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノ－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化43】

メタノール（７０ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アジド－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－ピペリジン－１－カルボキシレート（５．３０ｇ、１３．７８ｍｍｏｌ）の溶液に、１０％のパラジウム炭素（１．４７ｇ、１．３８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を真空下で排出し、Ｈ_２で再充填し、室温で２時間撹拌した。反応混合物を、セライトのパッドを通して濾過し、メタノールで洗浄した。濾液を濃縮して、所望の生成物（４．５ｇ、９１％）を得た。（生成物－Ｂｏｃ）Ｃ_１３Ｈ_３１Ｎ_２ＯＳｉ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＬＣＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝２５９．２、測定値：２５９．２。

【0248】

ステップ１０．エチル７－ブロモ－４－（（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）アミノ）－２，６－ジクロロ－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレート

【化44】

ＤＭＦ（８０ｍｌ）中のエチル７－ブロモ－２，４，６－トリクロロ－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレート（８．７ｇ、２１．７ｍｍｏｌ）の溶液に、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－アミノ－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（９．３３ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（７．６ｍｌ、４３．３ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を６５℃で５時間撹拌した。室温に冷却した後、酢酸エチル及び水を添加した。有機層を水（２回）及びブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中０％～２５％酢酸エチルで溶出）で精製して所望の生成物を泡状物（１４．６ｇ、９３％）として得た。Ｃ_３０Ｈ_４４ＢｒＣｌ_２ＦＮ_３Ｏ_５Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７２２．２，７２４．２；測定値７２２．２，７２４．２。

【0249】

ステップ１１．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２，６－ジクロロ－８－フルオロ－３－（ヒドロキシメチル）キノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化45】

７８℃のトルエン（２００ｍｌ）中のエチル７－ブロモ－４－（（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）アミノ）－２，６－ジクロロ－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレート（１４．６ｇ、２０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に、－ＤＣＭ中１．０ＭのＤＩＢＡＬ－Ｈ（６０．５ｍｌ、６０．５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、－７８℃で４０分間撹拌し、０℃まで１時間２０分温め、メタノール（６．８ｍｌ、１６７ｍｍｏｌ）でクエンチした。ロッシェル塩水溶液（ロッシェル塩８８ｇ（６重量）及び水２００ｍＬから調製した）を、１０℃以下で溶液に添加した。二相性混合物を１５～２５℃で１時間以上激しく撹拌し、分離して有機層を得た。二相性混合物を分離した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物をそのまま使用した。Ｃ_２８Ｈ_４２ＢｒＣｌ_２ＦＮ_３Ｏ_４Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６８０．１，６８２．１；測定値６８０．１，６８２．１。

【0250】

ステップ１２．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２，６－ジクロロ－８－フルオロ－３－ホルミルキノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化46】

ＤＣＭ（１５０ｍｌ）及びアセトニトリル（５０ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２，６－ジクロロ－８－フルオロ－３－（ヒドロキシメチル）キノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（１３．０ｇ、１９．０７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＩＢＸ（１６．０２ｇ、５７．２ｍｍｏｌ）及び酢酸（３．２８ｍｌ、５７．２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた反応混合物を３５℃で１６時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮した。生じた残留物をＥｔＯＡｃで粉砕し、得られた沈殿物を濾過によって収集し、真空下で乾燥させて、所望の生成物を淡黄色の固体（９．４ｇ、２ステップで７３％）として得た。Ｃ_２８Ｈ_４０ＢｒＣｌ_２ＦＮ_３Ｏ_４Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６７８．１，６８０．１；測定値６７８．１，６８０．１。

【0251】

ステップ１３．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２，６－ジクロロ－８－フルオロ－３－（（Ｅ）－（ヒドロキシイミノ）メチル）キノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化47】

ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２，６－ジクロロ－８－フルオロ－３－ホルミルキノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（７．６７ｇ、１１．２９ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（５６ｍｌ）及びＥｔＯＨ（５６ｍｌ）の混合物に、ヒドロキシルアミン塩酸塩（２．３５ｇ、３３．９ｍｍｏｌ）及びピリジン（２．８ｍｌ、３４．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で１６時間撹拌した。ピリジン（２．８ｍｌ、３４．４ｍｍｏｌ）及びヒドロキシルアミン塩酸塩（２．３５ｇ、３３．９ｍｍｏｌ）の別の一部を加え、４時間撹拌した。溶媒を、真空中で蒸発させた。ＤＣＭと水を含む残留物。水層をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層をＣｕＳＯ_４水溶液、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物を、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製し、所望の生成物（４．５ｇ、５７％）を得た。Ｃ_２８Ｈ_４１ＢｒＣｌ_２ＦＮ_４Ｏ_４Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６９３．１，６９５．１；測定値６９３．１，６９５．１。

【0252】

ステップ１４．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－４，８－ジクロロ－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化48】

ＣＨ_２Ｃｌ_２（７５ｍＬ）中の（ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２，６－ジクロロ－８－フルオロ－３－（（Ｅ）－（ヒドロキシイミノ）メチル）キノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（４．５３ｇ、６．５２ｍｍｏｌ）の溶液に、２－アミノピリジン（０．７９８ｇ、８．４８ｍｍｏｌ）及びＭｓ－Ｃｌ（０．６１０ｍｌ、７．８３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。得られた混合物を０℃で２時間撹拌した。反応混合物を一晩室温に温めた。反応物を水で希釈した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を、シリカゲルのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０～４０％酢酸エチルの勾配で溶出）によって精製して、所望の生成物（１．８０ｇ、４１％）を得た。Ｃ_２８Ｈ_３９ＢｒＣｌ_２ＦＮ_４Ｏ_３Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６７５．１，６７７．１；測定値６７５．１，６７７．１。

【0253】

ステップ１５．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－８－クロロ－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化49】

ナトリウムチオメトキシド（０．５６ｇ、８．００ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（２６ｍｌ）／ＤＣＭ（２６ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－４，８－ジクロロ－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）－オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（１．８０ｇ、２．６７ｍｍｏｌ）の混合物に添加し、次いで室温で１時間撹拌した。混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物を、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物を得た（１．７５ｇ、９５％）。Ｃ_２９Ｈ_４２ＢｒＣｌＦＮ_４Ｏ_３ＳＳｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６８７．２，６８９．２；測定値６８７．２，６８９．２。

【0254】

ステップ１６．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－８－クロロ－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－ヒドロキシエチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化50】

ＴＨＦ（２８ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－８－クロロ－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（１．９６ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ中の１．０ＭのＴＢＡＦ（４．２７ｍｌ、４．２７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を６０℃で１時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物を、水及び酢酸エチルで希釈した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物をそのまま使用した。Ｃ_２３Ｈ_２８ＢｒＣｌＦＮ_４Ｏ_３Ｓ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝５７３．１，５７５．１；測定値５７３．１，５７５．１。

【0255】

ステップ１７．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－８－クロロ－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化51】

ＤＣＭ（８ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－８－クロロ－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－ヒドロキシエチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（０．５０ｇ、０．８７１ｍｍｏｌ）の溶液に、デス－マーチンペルヨージナン（０．４０６ｇ、０．９５８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を１時間撹拌し、反応フラスコに飽和ＮａＨＣＯ_３を添加し、１０分間撹拌した。有機層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物をＴＨＦ（１０ｍＬ）中に溶解させ、水酸化アンモニウム（１．９６ｍｌ、１４．１１ｍｍｏｌ）を反応フラスコに添加し、続いてヨウ素（０．２４３ｇ、０．９５８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で３時間撹拌し、反応溶液を、酢酸エチル及び飽和ＮａＳ_２Ｏ_３溶液で希釈した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物（０．４０ｇ、８０％）を得た。Ｃ_２３Ｈ_２５ＢｒＣｌＦＮ_５Ｏ_２Ｓ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝５６８．１，５７０．１；測定値５６８．１，５７０．１。

【0256】

ステップ１８．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（６－クロロ－５－メチル－１－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－４－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化52】

ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－８－クロロ－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（４０１ｍｇ、０．７０５ｍｍｏｌ）、６－クロロ－５－メチル－１－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール（３１９ｍｇ、０．８４６ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１２２ｍｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（２９９ｍｇ、２．８２ｍｍｏｌ）、及び５：１のジオキサン／水（６ｍｌ）を充填したバイアルを、１０５℃で一晩加熱した。混合物をブライン及びＥｔＯＡｃで希釈し、有機層を分離し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製し、所望の生成物（０．３９ｇ、７５％）を得た。Ｃ_３６Ｈ_３９Ｃｌ_２ＦＮ_７Ｏ_３Ｓ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７３８．２；測定値７３８．２。

【0257】

ステップ１９．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（５，６－ジメチル－１－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－４－イル）－４－（３－（エチル（メチル）アミノ）アゼチジン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化53】

０℃でＤＣＭ（１０ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（６－クロロ－５－メチル－１－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－４－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（０．７３ｇ、０．９８８ｍｍｏｌ）の溶液に、ｍ－ＣＰＢＡ（０．１９６ｇ、１．１３６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をこの温度で２０分間撹拌した。反応物を、飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３を添加することによってクエンチし、酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３、ブラインで洗浄し、濾過し、乾燥させ、濃縮した。粗製物をアセトニトリル（８ｍｌ）及びトリエチルアミン（０．６０７ｍｌ、４．３６ｍｍｏｌ）に溶解し、Ｎ－エチル－Ｎ－メチルアゼチジン－３－アミン二塩酸塩（０．３０６ｇ、１．６３４ｍｍｏｌ）を反応バイアルに添加し、得られた混合物を８０℃で２時間撹拌した。粗製物を濃縮し、残留物をシリカゲルカラム（ＭｅＯＨ中０～２０％ＤＣＭの勾配で溶出）によって精製し、所望の生成物（０．６５ｇ、７６％）を得た。Ｃ_４２Ｈ_５２ＣｌＦＮ_９Ｏ_３（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７８４．４；測定値７８４．４。

【0258】

ステップ２０．２－（（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（５，６－ジメチル－１Ｈ－インダゾール－４－イル）－４－（３－（エチル（メチル）アミノ）アゼチジン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）ピペリジン－２－イル）アセトニトリル

【化54】

ＤＣＭ（５ｍｌ）中ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（６－クロロ－５－メチル－１－（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）－１Ｈ－インダゾール－４－イル）－４－（３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（０．６５ｇ、０．７７１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（４．８ｍｌ、６１．７ｍｍｏｌ）を添加した。０．５時間撹拌した後、溶媒を真空中で除去し、残留物を、分取ＬＣＭＳ（ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、６０ｍＬ／分の流速で、０．１％ＴＦＡを含有するアセトニトリル／水の勾配で溶出）で精製して、所望の生成物を２つのピーク（０．４０ｇ、８５％）として得た。

【0259】

ジアステレオマー１．ピーク１．Ｃ_３２Ｈ_３６ＣｌＦＮ_９（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６００．３；測定値６００．３。

【0260】

ジアステレオマー２．ピーク２．Ｃ_３２Ｈ_３６ＣｌＦＮ_９（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６００．３；測定値６００．３。

【0261】

ステップ２１．２－（（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（５，６－ジメチル－１Ｈ－インダゾール－４－イル）－４－（３－（エチル（メチル）アミノ）アゼチジン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－１－（２－フルオロアクリロイル）ピペリジン－２－イル）アセトニトリル
ＤＭＦ（１．０ｍｌ）中の２－フルオロアクリル酸（１．１ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）及び２－（（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（５，６－ジメチル－１Ｈ－インダゾール－４－イル）－４－（３－（エチル（メチル）アミノ）アゼチジン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）ピペリジン－２－イル）アセトニトリルビス（２，２，２－トリフルオロアセテート）（８．５ｍｇ、１０．３μｍｏｌ）（最後のステップからのピーク２）の溶液に、ＨＡＴＵ（５．１ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（９．０μｌ、０．０５１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。反応物を、メタノール及び１Ｎ ＨＣｌ（０．１ｍＬ）で希釈し、分取ＬＣＭＳ（ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、６０ｍＬ／分の流速で、０．１％ＴＦＡを含有するアセトニトリル／水の勾配で溶出）を使用して精製して、所望のジアステレオマー１を得た。

【0262】

ジアステレオマー２を、２－（（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（６－クロロ－５－メチル－１Ｈ－インダゾール－４－イル）－４－（３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）ピペリジン－２－イル）アセトニトリルビス（２，２，２－トリフルオロ酢酸）（最後のステップからのピーク１）を使用して同様の方法で合成した。

【0263】

実施例４ａ．ジアステレオマー１．ピーク１．Ｃ_３５Ｈ_３７ＣｌＦ_２Ｎ_９Ｏ （Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値 ｍ／ｚ ＝ ６７２．３；測定値６７２．３． ^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ８．３４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４８ （ｓ， １Ｈ）， ７．３８ （ｓ， １Ｈ）， ５．７０ （ｍ， １Ｈ）， ５．３５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．９８－４．２７ （ｍ， ９Ｈ）， ３．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ３．２７ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．４９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．３７ － ２．２７ （ｍ， ４Ｈ）， ２．０９ （ｓ， ３Ｈ）， １．２８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）。

【0264】

実施例４ｂ．ジアステレオマー２．ピーク２．Ｃ_３５Ｈ_３７ＣｌＦ_２Ｎ_９Ｏ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値 ｍ／ｚ＝６７２．３；測定値６７２．３。

【0265】

実施例５ａ及び実施例５ｂ．８－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（２－フルオロアクリロイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル

【化55】

ステップ１．２－アミノ－４－（８－シアノナフタレン－１－イル）－３－フルオロ安息香酸エチル

【化56】

１－クロロイソキノリン－８－カルボニトリルの代わりに８－ブロモ－１－ナフトニトリルを利用して、実施例１ａ及び実施例１ｂのステップ５に記載される手順に従って表題化合物を合成した。Ｃ_２０Ｈ_１６ＦＮ_２Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値 ｍ／ｚ＝３３５．１；測定値３３５．１。

【0266】

ステップ２．２－アミノ－５－クロロ－４－（８－シアノナフタレン－１－イル）－３－フルオロ安息香酸エチル

【化57】

２－アミノ－４－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－３－フルオロ安息香酸エチルの代わりに、２－アミノ－４－（８－シアノナフタレン－１－イル）－３－フルオロ安息香酸エチルを使用して、実施例１ａ及び実施例１ｂのステップ６に記載される手順に従って表題化合物を合成した。Ｃ_２０Ｈ_１５ＣｌＦＮ_２Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値 ｍ／ｚ＝３６９．１；測定値３６９．１。

【0267】

ステップ３．５－クロロ－４－（８－シアノナフタレン－１－イル）－２－（３－エトキシ－３－オキソプロパンアミド）－３－フルオロ安息香酸エチル

【化58】

この化合物を、実施例１ａ及び実施例１ｂのステップ７に記載の手順に従って、２－アミノ－５－クロロ－４－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－３－フルオロ安息香酸エチルを２－アミノ－５－クロロ－４－（８－シアノナフタレン－１－イル）－３－フルオロ安息香酸エチルに置き換えて調製した。Ｃ_２５Ｈ_２１ＣｌＦＮ_２Ｏ_５（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝４８３．１；測定値４８３．１。

【0268】

ステップ４．エチル６－クロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－８－フルオロ－２，４－ジヒドロキシキノリン－３－カルボキシレート

【化59】

この化合物を、実施例１ａ及び実施例１ｂのステップ８に記載の手順に従って、５－クロロ－４－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－２－（３－エトキシ－３－オキソプロパンアミド）－３－フルオロ安息香酸エチルを５－クロロ－４－（８－シアノナフタレン－１－イル）－２－（３－エトキシ－３－オキソプロパンアミド）－３－フルオロ安息香酸エチルに置き換えて調製した。Ｃ_２３Ｈ_１５ＣｌＦＮ_２Ｏ_４（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝４３７．１；測定値４３７．１。

【0269】

ステップ５．エチル２，４，６－トリクロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレート

【化60】

この化合物を、実施例１ａ及び実施例１ｂのステップ９に記載の手順に従って、エチル６－クロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロ－２，４－ジヒドロキシキノリン－３－カルボキシレートをエチル６－クロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－８－フルオロ－２，４－ジヒドロキシキノリン－３－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_２３Ｈ_１３Ｃｌ_３ＦＮ_２Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝４７３．０，４７５．０；測定値４７３．１，４７５．１。

【0270】

ステップ６．エチル４－（（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）アミノ）－２，６－ジクロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレート

【化61】

この化合物を、実施例１ａ及び実施例１ｂのステップ１０に記載の手順に従って、エチル２，４，６－トリクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレートをエチル２，４，６－トリクロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_４１Ｈ_５０Ｃｌ_２ＦＮ_４Ｏ_５Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７９５．３，７９７．３；測定値７９５．５，７９７．５。

【0271】

ステップ７．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－８－フルオロ－３－（ヒドロキシメチル）キノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化62】

この化合物を、実施例１ａ及び実施例１ｂのステップ１１に記載の手順に従って、エチル４－（（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）アミノ）－２，６－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレートをエチル４－（（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）アミノ）－２，６－ジクロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_３９Ｈ_４８Ｃｌ_２ＦＮ_４Ｏ_４Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７５３．３，７５５．３；測定値７５３．４，７５５．５。

【0272】

ステップ８．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－８－フルオロ－３－ホルミルキノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化63】

この化合物を、実施例１ａ及び実施例１ｂのステップ１２に記載の手順に従って、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロ－３－（ヒドロキシメチル）キノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレートをｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－８－フルオロ－３－（ヒドロキシメチル）キノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_３９Ｈ_６Ｃｌ_２ＦＮ_４Ｏ_４Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７５１．３，７５３．３；測定値７５１．４，７５３．４。

【0273】

ステップ９．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－８－フルオロ－３－（（Ｅ）－（ヒドロキシイミノ）メチル）キノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化64】

この化合物を、実施例１ａ及び実施例１ｂのステップ１３に記載の手順に従って、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロ－３－ホルミルキノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレートをｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－８－フルオロ－３－ホルミルキノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_３９Ｈ_４７Ｃｌ_２ＦＮ_５Ｏ_４Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７６６．３，７６８．３；測定値７６６．４，７６８．４。

【0274】

ステップ１０．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（４，８－ジクロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化65】

この化合物を、実施例１ａ及び実施例１ｂのステップ１４に記載の手順に従って、（ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－８－フルオロ－３－（（Ｅ）－（ヒドロキシイミノ）メチル）キノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレートをｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（（２，６－ジクロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－８－フルオロ－３－（（Ｅ）－（ヒドロキシイミノ）メチル）キノリン－４－イル）アミノ）ピペリジン－１－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_３９Ｈ_４５Ｃｌ_２ＦＮ_５Ｏ_３Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７４８．３，７５０．３；測定値７４８．４，７５０．４。

【0275】

ステップ１１．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化66】

この化合物を、実施例１ａ及び実施例１ｂのステップ１５に記載の手順に従って、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（４，８－ジクロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）ピペリジン－１－カルボキシレートをｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（４，８－ジクロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）ピペリジン－１－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_４０Ｈ_４８ＣｌＦＮ_５Ｏ_３ＳＳｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７６０．３；測定値７６０．３。

【0276】

ステップ１２．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－ヒドロキシエチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化67】

この化合物を、実施例１ａ及び実施例１ｂのステップ１６に記載の手順に従って、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）ピペリジン－１－カルボキシレートをｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）ピペリジン－１－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_３４Ｈ_３４ＣｌＦＮ_５Ｏ_３Ｓ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６４６．２；測定値６４６．２。

【0277】

ステップ１３．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化68】

この化合物を、実施例１ａ及び実施例１ｂのステップ１７に記載の手順に従って、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－ヒドロキシエチル）ピペリジン－１－カルボキシレートをｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－ヒドロキシエチル）ピペリジン－１－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_３４Ｈ_３１ＣｌＦＮ_６Ｏ_２Ｓ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６４１．２；測定値６４１．２。

【0278】

ステップ１４．８－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル

【化69】

この化合物を、実施例１ａ及び実施例１ｂのステップ１８に記載の手順に従って、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノイソキノリン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレートをｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（８－クロロ－７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_３５Ｈ_３４ＣｌＦＮ_７Ｏ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６２２．２；測定値６２２．２。

【0279】

ステップ１５．８－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－１－アセチル－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－８－クロロ－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル
ＤＭＦ（１．０ｍｌ）中の２－フルオロアクリル酸（０．９ｍｇ、９．８８μｍｏｌ）及び８－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリルビス（２，２，２－トリフルオロアセテート）（７．０ｍｇ、８．２３μｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（３．９ｍｇ、１０．３μｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（１．４μｌ、８．２３μｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。反応物を、メタノール及び１Ｎ ＨＣｌ（０．１ｍＬ）で希釈し、次いで、分取ＬＣＭＳ（ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、６０ｍＬ／分の流速で、０．１％ＴＦＡを含有するアセトニトリル／水の勾配で溶出）を使用して精製して、所望のジアステレオマー１を得た。

【0280】

ジアステレオマー２を、８－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリルビス（２，２，２－トリフルオロアセテート）（最後のステップからのピーク２）を使用して同様の方法で合成した。

【0281】

実施例５ａ．ジアステレオマー１．ピーク１．Ｃ_３７Ｈ_３６ＣｌＦＮ_７Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値 ｍ／ｚ＝６６４．３；測定値６６４．３。

【0282】

実施例５ｂ．ジアステレオマー２．ピーク２．Ｃ_３７Ｈ_３６ＣｌＦＮ_７Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値 ｍ／ｚ ＝ ６６４．３；測定値６６４．３。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ９．８６ （ｍ， １Ｈ）， ８．５２ （ｍ， ３Ｈ）， ８．３４ （ｍ， １Ｈ）， ８．１７ （ｍ， １Ｈ）， ７．８８ （ｍ， １Ｈ）， ７．７８ （ｍ， １Ｈ）， ７．７３ （ｍ， １Ｈ）， ５．８３ （ｍ， １Ｈ）， ５．５０ （ｍ， １Ｈ）， ５．３９ （ｍ， １Ｈ）， ５．２７ （ｓ， １Ｈ）， ３．８４ （ｍ， １Ｈ）， ３．５６ （ｍ， １Ｈ）， ３．３０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１８ （ｍ， １Ｈ）， ３．０９ （ｍ， ３Ｈ）， ２．３０ （ｍ， １Ｈ）， ２．１１ （ｍ， １Ｈ）， １．９２ （ｍ， ２Ｈ）， １．５３ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ３Ｈ）。

【0283】

実施例６ａ及び実施例６ｂ．８－（８－クロロ－１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－１－（（Ｅ）－４－メトキシブタ－２－エノイル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル

【化70】

この化合物を、実施例５ａ及び実施例５ｂのステップ１５に記載の手順に従って、２－フルオロアクリル酸を（Ｅ）－４－メトキシブタ－２－エン酸に置き換えて調製した。Ｃ_４０Ｈ_４０ＣｌＦＮ_７Ｏ_３（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７２０．３；測定値：７２０．３。

【0284】

実施例７ ８－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ブタ－２－イノイル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－８－メチル－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル

【化71】

ステップ１：エチル７－ブロモ－２，４－ジクロロ－８－フルオロ－６－ヨードキノリン－３－カルボキシレート

【化72】

実施例４ａ及び実施例４ｂのステップ１～３に記載される手順に従って、ステップ１の２－アミノ－４－ブロモ－５－クロロ－３－フルオロ安息香酸の代わりに、２－アミノ－４－ブロモ－３－フルオロ－５－ヨード安息香酸を使用して、表題化合物を合成した。Ｃ_１２Ｈ_７ＢｒＣｌ_２ＦＩＮＯ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値 ｍ／ｚ＝４９１．８０，４９３．８０；測定値４９１．８０，４９３．８０。

【0285】

ステップ２．エチル７－ブロモ－４－（（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）アミノ）－２－クロロ－８－フルオロ－６－ヨードキノリン－３－カルボキシレート

【化73】

この化合物を、実施例４ａ及び実施例４ｂのステップ１０に記載の手順に従って、エチル７－ブロモ－２，４，６－トリクロロ－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレートをエチル７－ブロモ－２，４－ジクロロ－８－フルオロ－６－ヨードキノリン－３－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_３０Ｈ_４４ＢｒＣｌＦＩＮ_３Ｏ_５Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝８１４．１，８１６．１；測定値８１４．１，８１６．２。

【0286】

ステップ３．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２－クロロ－８－フルオロ－３－（ヒドロキシメチル）－６－ヨードキノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化74】

この化合物を、実施例４ａ及び実施例４ｂのステップ１１に記載される手順に従って、エチル７－ブロモ－４－（（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）アミノ）－２，６－ジクロロ－８－フルオロキノリン－３－カルボキシレートをエチル７－ブロモ－４－（（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）アミノ）－２－クロロ－８－フルオロ－６－ヨードキノリン－３－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_２８Ｈ_４２ＢｒＣｌＦＩＮ_３Ｏ_４Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７７２．１，７７４．１；測定値７７２．１，７７４．１。

【0287】

ステップ４．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２－クロロ－８－フルオロ－３－ホルミル－６－ヨードキノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化75】

この化合物を、実施例４ａ及び実施例４ｂのステップ１２に記載の手順に従って、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２，６－ジクロロ－８－フルオロ－３－（ヒドロキシメチル）キノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレートをｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２－クロロ－８－フルオロ－３－（ヒドロキシメチル）－６－ヨードキノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_２８Ｈ_４０ＢｒＣｌＦＩＮ_３Ｏ_４Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７７０．１，７７２．１；測定値７７０．１，７７２．１。

【0288】

ステップ５．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２－クロロ－８－フルオロ－３－（（Ｅ）－（ヒドロキシイミノ）メチル）－６－ヨードキノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化76】

この化合物を、実施例４ａ及び実施例４ｂのステップ１３に記載の手順に従って、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２，６－ジクロロ－８－フルオロ－３－ホルミルキノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレートをｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２－クロロ－８－フルオロ－３－ホルミル－６－ヨードキノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_２８Ｈ_４１ＢｒＣｌＦＩＮ_４Ｏ_４Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７８５．１，７８７．１；測定値７８５．２，７８７．２。

【0289】

ステップ６．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－４－クロロ－６－フルオロ－８－ヨード－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化77】

この化合物を、実施例４ａ及び実施例４ｂのステップ１４に記載の手順に従って、（ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２，６－ジクロロ－８－フルオロ－３－（（Ｅ）－（ヒドロキシイミノ）メチル）キノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレートをｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（（７－ブロモ－２－クロロ－８－フルオロ－３－（（Ｅ）－（ヒドロキシイミノ）メチル）－６－ヨードキノリン－４－イル）アミノ）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_２８Ｈ_３９ＢｒＣｌＦＩＮ_４Ｏ_３Ｓｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７６７．１，７６９．１；測定値７６７．１，７６９．１。

【0290】

ステップ７．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－６－フルオロ－８－ヨード－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化78】

この化合物を、実施例４ａ及び実施例４ｂのステップ１５に記載の手順に従って、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－４，８－ジクロロ－６－フルオロ－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレートをｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－４－クロロ－６－フルオロ－８－ヨード－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレートと置き換えて、調製した。Ｃ_２９Ｈ_４２ＢｒＦＩＮ_４Ｏ_３ＳＳｉ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７７９．１，７８１．１；測定値７７９．１，７８１．１。

【0291】

ステップ８．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－６－フルオロ－８－ヨード－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－ヒドロキシエチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化79】

この化合物を、実施例４ａ及び実施例４ｂのステップ１６に記載の手順に従って、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－８－クロロ－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレートをｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－６－フルオロ－８－ヨード－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）エチル）ピペリジン－１－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_２３Ｈ_２８ＢｒＦＩＮ_４Ｏ_３Ｓ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６６５．０，６６７．０；測定値６６５．１，６６７．１。

【0292】

ステップ９．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－６－フルオロ－８－ヨード－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化80】

この化合物を、実施例４ａ及び実施例４ｂのステップ１７に記載の手順に従って、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－８－クロロ－６－フルオロ－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－ヒドロキシエチル）ピペリジン－１－カルボキシレートをｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－６－フルオロ－８－ヨード－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（２－ヒドロキシエチル）ピペリジン－１－カルボキシレートに置き換えて、調製した。Ｃ_２３Ｈ_２５ＢｒＦＩＮ_５Ｏ_２Ｓ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６６０．０，６６２．０；測定値６６０．０，６６２．０。

【0293】

ステップ１０．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－６－フルオロ－８－メチル－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化81】

１，４－ジオキサン（３６ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－６－フルオロ－８－ヨード－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（２．７５ｇ、４．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、水（６．０ｍｌ）、メチルボロン酸（１．４９６ｇ、２４．９９ｍｍｏｌ）、Ｋ_２ＣＯ_３（１．１５１ｇ、８．３３ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ_３）_２ＣＩ_２（０．２９２ｇ、０．４１６ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物をＮ_２雰囲気下、９０℃で１０時間撹拌した。反応が完了した後、反応混合物を水でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮し、次いで、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによって精製し（溶出剤：ヘキサン：酢酸エチル＝５：１）、化合物（１．９ｇ、８３％）を白色固体として得た。Ｃ_２４Ｈ_２８ＢｒＦＮ_５Ｏ_２Ｓ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝５４８．１，５５０．１；測定値５４８．２，５５０．２。

【0294】

ステップ１１．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－６－フルオロ－８－メチル－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化82】

ｍ－ＣＰＢＡ（５７．９ｍｇ、０．３３５ｍｍｏｌ）を、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２．９ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－６－フルオロ－８－メチル－４－（メチルチオ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（１６０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加し、次いでこの温度で２０分間反応物を撹拌した。反応物を、飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３を添加することによってクエンチし、酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３、ブラインで洗浄し、濾過し、乾燥させ、濃縮した。ＴＨＦ中の１．０ＭのＬｉＨＭＤＳ（７５３μｌ、０．７５３ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１ｍＬ）中の（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エタン－１－オール（９７ｍｇ、０．７５３ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。ＴＨＦ（２．０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－６－フルオロ－８－メチル－４－（メチルスルフィニル）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（１７０ｍｇ、０．３０１ｍｍｏｌ）の溶液を反応バイアルに添加し、次いで反応物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を、酢酸エチル及び水で希釈した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、シリカゲルカラムで精製（ＤＣＭ中０～２０％のメタノールの勾配で溶出）して、所望の生成物を黄色の泡状物（１５０ｍｇ、７９％）として得た。Ｃ_３０Ｈ_３９ＢｒＦＮ_６Ｏ_３（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６２９．２，６３１．２；測定値６２９．３，６３１．３。

【0295】

ステップ１２．ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）－４－（７－（８－シアノナフタレン－１－イル）－６－フルオロ－８－メチル－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）ピペリジン－１－カルボキシレート

【化83】

１，４－ジオキサン（２．０ｍＬ）／水（０．４００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－（７－ブロモ－６－フルオロ－８－メチル－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－１－イル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（１５０ｍｇ、０．２３８ｍｍｏｌ）、８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１－ナフトニトリル（８６ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、ＳＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ４（１９ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）及びリン酸三カリウム水和物（１２１ｍｇ、０．５２４ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ_２雰囲気下、８０℃で２時間撹拌した。溶液を、酢酸エチル及び水で希釈した。有機層を濃縮し、残留物を分取ＬＣＭＳ（ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、６０ｍＬ／分の流速で、０．１％ＴＦＡを含有するアセトニトリル／水の勾配で溶出）で精製して、所望の生成物を２つのピーク（１０５ｍｇ、６３％）として得た。

【0296】

ジアステレオマー１．ピーク１．Ｃ_４１Ｈ_４５ＦＮ_７Ｏ_３（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７０２．３；測定値７０２．３。

【0297】

ジアステレオマー２．ピーク２．Ｃ_４１Ｈ_４５ＦＮ_７Ｏ_３（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝７０２．３；測定値７０２．３。

【0298】

ステップ１３．８－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－８－メチル－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル

【化84】

最後のステップからの２つのジアステレオマーを１：１のＤＣＭ／ＴＦＡ（２ｍＬ）で４０分間処理し、揮発物を真空中で除去し、残留物をそのまま次のステップで使用した。

【0299】

ジアステレオマー１．ピーク１．Ｃ_３６Ｈ_３７ＦＮ_７Ｏ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６０２．３；測定値６０２．３。

【0300】

ジアステレオマー２．ピーク２．Ｃ_３６Ｈ_３７ＦＮ_７Ｏ（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣ－ＭＳ 計算値：ｍ／ｚ＝６０２．３；測定値６０２．３。

【0301】

ステップ１４．８－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－１－（ブタ－２－イノイル）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－８－メチル－４－（（Ｓ）－１－（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）エトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリル
ＤＭＦ（１．０ｍｌ）中のブタ－２－イン酸（０．７３０ｍｇ、８．６８μｍｏｌ）及び８－（１－（（２Ｓ，４Ｓ）－２－（シアノメチル）ピペリジン－４－イル）－６－フルオロ－８－メチル－４－（（（Ｓ）－１－メチルピロリジン－２－イル）メトキシ）－１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｃ］キノリン－７－イル）－１－ナフトニトリルビス（２，２，２－トリフルオロアセテート）（６．０ｍｇ、７．３６μｍｏｌ）（最後のステップからのジアステレオマー２ピーク２）の溶液に、ＨＡＴＵ（３．５ｍｇ、９．１９μｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（６．４μｌ、０．０３７ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、室温で１時間撹拌した。反応物を、メタノール及び１Ｎ ＨＣｌ（０．１ｍＬ）で希釈し、分取ＬＣＭＳ（ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム、６０ｍＬ／分の流速で、０．１％ＴＦＡを含有するアセトニトリル／水の勾配で溶出）を使用して精製して、所望の生成物（２．５ｍｇ、５２％）を得た。Ｃ_４０Ｈ_３９ＦＮ_７Ｏ_２（Ｍ＋Ｈ）^＋に対するＬＣＭＳ 計算値 ｍ／ｚ＝６６８．３；測定値６６８．３。

【0302】

実施例Ａ．ＧＤＰ－ＧＴＰ交換アッセイ
例示された化合物の阻害剤効力を、ＳＯＳ１（グアニンヌクレオチド交換因子）の存在下で、ＫＲＡＳの活性状態を生成するためのＧｐｐＮＨｐ（非加水分解性ＧＴＰ類似体）とＢｏｄｉｐｙ－ＧＤＰ（蛍光標識されたＧＤＰ）の交換を測定する、蛍光に基づくグアニンヌクレオチド交換アッセイによって判定した。阻害剤をＤＭＳＯで段階的に希釈し、０．１μＬの体積を黒色の低体積の３８４ウェルプレートのウェルに移した。アッセイ緩衝液（２５ｍＭのＨｅｐｅｓ ｐＨ７．５、５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、及び０．０１％のＢｒｉｊ－３５）中で５ｎＭに希釈された、５μＬ／ウェル体積のＢｏｄｉｐｙ充填ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃをプレートに添加し、周囲温度で２時間、阻害剤でプレインキュベートした。適切な対照（阻害剤を含まない、またはＧ１２Ｃ阻害剤（ＡＭＧ－５１０）を含む酵素）をプレートに含めた。交換は、アッセイ緩衝液中に１ｍＭのＧｐｐＮＨｐ及び３００ｎＭのＳＯＳ１を含有する５μＬ／ウェル体積を加えることによって開始した。Ｂｏｄｉｐｙ充填ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ、ＧｐｐＮＨｐ、及びＳＯＳ１の１０μＬ／ウェルの反応濃度は、それぞれ、２．５ｎＭ、５００ｕＭ、及び１５０ｎＭであった。反応プレートを周囲温度で２時間インキュベートし、時間は、阻害剤の非存在下での完全なＧＤＰ－ＧＴＰ交換について推定した。ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ及びＧ１２Ｖ変異体については、同様のグアニンヌクレオチド交換アッセイを、Ｂｏｄｉｐｙ充填ＫＲＡＳタンパク質の最終濃度として２．５ｎＭで、及びＧｐｐＮＨｐ－ＳＯＳ１混合物をＧ１２Ｄ及びＧ１２Ｖにそれぞれ添加した後、４時間及び３時間のインキュベーションで使用した。Ｇ１２Ｄ変異体に選択的に結合すると説明された環状ペプチド（Ｓａｋａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，ＢＢＲＣ，４８４．３（２０１７），６０５－６１１）または結合が確認された内部化合物を、アッセイプレート内で陽性対照として使用した。４８５ｎｍでの励起及び５２０ｎｍでの発光を使用して、ＰｈｅｒａＳｔａｒプレートリーダー装置（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）で蛍光強度を測定した。

【0303】

ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍまたはＧｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ ＳｍａｒｔＦｉｔのいずれかを使用してデータを分析した。データを４パラメータロジスティック方程式に適合させて、可変Ｈｉｌｌ係数を伴うシグモイド型用量反応曲線を生成することによって、ＩＣ_５０値を導き出した。

【0304】

ＫＲＡＳ＿Ｇ１２Ｃ交換アッセイＩＣ_５０データ、ＫＲＡＳ＿Ｇ１２Ｃ ｐＥＲＫアッセイＩＣ_５０データ、ＫＲＡＳ＿Ｇ１２Ｃ ＷＢ ｐＥＲＫアッセイＩＣ_５０データを以下の表１に提供する。記号「†」はＩＣ_５０が≦１００ｎＭであることを示し、「††」はＩＣ_５０が＞１００ｎＭであるが、≦１μＭであることを示し、「†††」はＩＣ_５０が＞１μΜであるが、≦５μΜであることを示し、「††††」はＩＣ_５０が＞５μΜであるが、≦１０μΜであることを示す。「ＮＡ」は、データが利用できないことを示す。

【表4】

【0305】

実施例Ｂ：発光生存率アッセイ
１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ１６４０培地において、ＭＩＡ ＰａＣａ－２（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１４２０）、ＮＣＩ－Ｈ３５８（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－５８０７）、Ａ４２７（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ５３）、ＨＰＡＦＩＩ（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１９９７）、ＹＡＰＣ（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ；ＤＳＭＺ ＡＣＣ３８２）、ＳＷ４８０（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２２８）及びＮＣＩ－Ｈ８３８（ＫＲＡＳ ＷＴ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－５８４４）細胞を培養する。２％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ１６４０培地において、ウェル当たり８００個の細胞を、試験化合物の５０ｎＬドットを含有する白色の透明な底の３８４ウェルのＣｏｓｔａｒ組織培養プレートに播種する（最終濃度は１：５００希釈、０．２％ＤＭＳＯ中の最終濃度）。プレートは、３７０℃、５％ＣＯ２で３日間インキュベートされる。アッセイの終了時に、２５μｌ／ウェルのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を加える。１５分後、ＰＨＥＲＡｓｔａｒ（ＢＭＧ）で発光を読み取る。データは、ＩＣ_５０値についてＳｍａｒｔＦｉｔを使用してＧｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒで分析する。

【0306】

実施例Ｃ：細胞ｐＥＲＫ ＨＴＲＦアッセイ
ＭＩＡ ＰａＣａ－２（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１４２０）、ＮＣＩ－Ｈ３５８（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－５８０７）、Ａ４２７（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ５３）、ＨＰＡＦＩＩ（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１９９７）、ＹＡＰＣ（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ；ＤＳＭＺ ＡＣＣ３８２）、ＳＷ４８０（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２２８）及びＮＣＩ－Ｈ８３８（ＫＲＡＳ ＷＴ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－５８４４）細胞をＡＴＣＣから購入し、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ １６４０培地において維持する。細胞を、ウェル当たり５０００個の細胞（８ｕＬ）で、Ｇｒｅｉｎｅｒ３８４－ウェル低体積、平底、組織培養処理白色プレート中に播種し、３７０℃、５％ＣＯ_２で一晩インキュベートする。翌朝、試験化合物ストック溶液を、培地中で３×最終濃度に希釈し、４μＬを細胞に加え、ＤＭＳＯの最終濃度を０．１％とする。細胞を試験化合物とともに、３７℃、５％ＣＯ_２で４時間（Ｇ１２Ｃ及びＧ１２Ｖ）または２時間（Ｇ１２Ｄ）インキュベートする。ブロッキング試薬（Ｃｉｓｂｉｏ）を含む４ｕＬの４×溶解緩衝液を各ウェルに加え、プレートを室温で３０分間穏やかに回転させる（３００ｒｐｍ）。４ｕＬ／ウェルのＣｉｓｂｉｏ抗ホスホ－ＥＲＫ１／２ｄ２を、抗ホスホ－ＥＲＫ１／２クリプテート（１：１）と混合し、各ウェルに加え、暗所において室温で一晩インキュベートする。Ｐｈｅｒａｓｔａｒプレートリーダーで６６５ｎｍ及び６２０ｎｍの波長でプレートを読み取る。データは、ＩＣ_５０値についてＳｍａｒｔＦｉｔを使用してＧｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒで分析する。

【0307】

実施例Ｄ：全血ｐＥＲＫ１／２ ＨＴＲＦアッセイ
１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を有するＲＰＭＩ １６４０において、ＭＩＡ ＰａＣａ－２細胞（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１４２０）、ＨＰＡＦ－ＩＩ（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１９９７）及びＹＡＰＣ（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ；ＤＳＭＺ ＡＣＣ３８２）を維持する。ＭＩＡ ＰａＣａ－２アッセイの場合、１００μＬの培地において、ウェル当たり２５０００個の細胞で、９６ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３５９６）に細胞を播種し、アッセイ前に３７℃、５％ＣＯ_２で２日間培養する。ＨＰＡＦ－ＩＩ及びＹＡＰＣアッセイの場合、１００μＬの培地において、９６ウェル組織培養プレートにウェル当たり５００００個の細胞で細胞を播種し、アッセイの前に１日間培養する。血中の化合物の濃度が、０．５％ＤＭＳＯ中で所望の濃度の１×となるように、９６ウェルプレート中の化合物（ＤＭＳＯ中で調製された）の１ｕＬドットに全血を加え、ピペットで上下することによって穏やかに混合する。培地を細胞から吸引し、試験化合物を含む５０ｕＬ／ウェルの全血を加え、ＭＩＡ ＰａＣａ及びＹＡＰＣアッセイの場合は４時間；またはＨＰＡＦ－ＩＩアッセイの場合は２時間、それぞれ３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートする。血液を捨てた後、ウェルの側面にＰＢＳを加え、プレートからＰＢＳを紙タオル上に捨て、プレートを軽く叩いて十分に排出させることによって、プレートを穏やかに２回洗浄する。次いで、ブロッキング試薬（Ｃｉｓｂｉｏ）及びベンゾナーゼヌクレアーゼ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｅ１０１４－５ＫＵ、１：１００００の最終濃度）を含む５０ｕｌ／ウェルの１×溶解緩衝液＃１（Ｃｉｓｂｉｏ）を加え、振盪しながら（２５０ｒｐｍ）室温で３０分間インキュベートする。溶解後、Ａｓｓｉｓｔ Ｐｌｕｓ（Ｉｎｔｅｇｒａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＮＨ）を使用して３８４ウェルＧｒｅｉｎｅｒ小容量白色プレートに１６ｕＬの溶解物を移す。抗ホスホ－ＥＲＫ１／２ ｄ２及び抗ホスホ－ＥＲＫ１／２クリプテート（Ｃｉｓｂｉｏ）の４ｕＬの１：１混合物を、Ａｓｓｉｓｔ Ｐｌｕｓを使用してウェルに加え、暗所において室温で一晩インキュベートする。Ｐｈｅｒａｓｔａｒプレートリーダーで６６５ｎｍ及び６２０ｎｍの波長でプレートを読み取る。データは、ＩＣ_５０値についてＳｍａｒｔＦｉｔを使用してＧｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒで分析する。

【0308】

実施例Ｅ：Ｒａｓ活性化ＥＬＩＳＡ
９６ウェルＲａｓ活性化ＥＬＩＳＡキット（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ；＃ＳＴＡ４４１）は、９６ウェルプレートに結合したＲａｆ１ ＲＢＤ（Ｒｈｏ結合ドメイン）を使用して、細胞溶解物から活性型Ｒａｓを選択的にプルダウンする。次いで、捕捉されたＧＴＰ－Ｒａｓを、汎－Ｒａｓ抗体及びＨＲＰコンジュゲート二次抗体によって検出する。

【0309】

１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を有するＲＰＭＩ １６４０培地において、ＭＩＡ ＰａＣａ－２（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１４２０）、ＮＣＩ－Ｈ３５８（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－５８０７）、Ａ４２７（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ５３）、ＨＰＡＦＩＩ（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１９９７）、ＹＡＰＣ（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ；ＤＳＭＺ ＡＣＣ３８２）、ＳＷ４８０（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－２２８）及びＮＣＩ－Ｈ８３８（ＫＲＡＳ ＷＴ；ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－５８４４）細胞を維持する。１００μＬ培地中で、ウェル当たり２５０００個の細胞で、９６ウェル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３５９６）に細胞を播種し、アッセイの開始時に約８０％コンフルエントになるように３７℃、５％ＣＯ_２で２日間培養する。細胞を、化合物で３７℃、５％ＣＯ_２で４時間または一晩処理する。回収の時点で、細胞をＰＢＳによって洗浄し、十分に排水を行い、次いで５０ｕＬの１×溶解緩衝液（キットにより提供される）、更に追加でＨａｌｔプロテアーゼ及びホスファターゼの阻害剤（１：１００）によって氷上で１時間溶解する。

【0310】

Ｒａｆ－１ ＲＢＤをアッセイ希釈液（キットで提供される）中で１：５００に希釈し、１００μＬの希釈したＲａｆ－１ ＲＢＤをＲＡｆ－１ＲＢＤ捕捉プレートの各ウェルに加える。プレートをプレート封止フィルムで覆い、室温で１時間オービタルシェーカーでインキュベートする。プレートをウェル当たり２５０μＬの１×洗浄緩衝液で３回洗浄し、各洗浄の間に完全な吸引を行う。ウェル当たり５０μＬのＲａｓ溶解物試料（１０～１００μｇ）を二重に添加する。「細胞溶解物なし」対照を、バックグラウンド測定のためにいくつかのウェルに追加する。全てのウェルに対して、５０μＬのアッセイ希釈液を各ウェルに直ちに加え、プレートを室温で１時間オービタルシェーカーでインキュベートする。プレートをウェル当たり２５０μＬの１×洗浄緩衝液で５回洗浄し、各洗浄の間に完全な吸引を行う。１００μＬの希釈された抗汎Ｒａｓ抗体を各ウェルに加え、プレートを室温で１時間オービタルシェーカーでインキュベートする。プレートは以前と同様に５回洗浄する。１００μＬの希釈した二次抗体であるＨＲＰコンジュゲートを各ウェルに加え、プレートを室温で１時間オービタルシェーカーでインキュベートする。プレートは以前と同様に５回洗浄し、十分に排水を行う。１００μＬの化学発光試薬（キットに提供される）を、ブランクウェルを含む各ウェルに添加する。プレートを室温で５分間オービタルシェーカー上でインキュベートした後、各マイクロウェルの発光をプレートルミノメーターで読み取る。％阻害は、全ての値から「溶解物なし対照」のバックグラウンドレベルを差し引いた後に、ＤＭＳＯ対照ウェルに対して計算する。ＩＣ_５０の決定は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ７ソフトウェアを使用して、阻害剤濃度の対数に対して阻害剤の阻害パーセントの曲線を当てはめることによって行う。

【0311】

実施例Ｆ：ＲＡＳ－ＲＡＦ経路及びＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ経路の阻害
化合物の細胞効力は、ＫＲＡＳ下流エフェクターの細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、リボソームＳ６キナーゼ（ＲＳＫ）、ＡＫＴ（プロテインキナーゼＢ、ＰＫＢとしても知られる）、及び下流基質Ｓ６リボソームタンパク質のリン酸化を測定することによって決定される。

【0312】

リン酸化細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、リボソームＳ６キナーゼ（ＲＳＫ）、ＡＫＴ及びＳ６リボソームタンパク質を測定するために、細胞（生成される細胞株及びデータの種類に関する詳細は、表２に更に詳細に記載される）を、Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウェル組織培養処理プレートに、４×１０４細胞／ウェルで、１０％ＦＢＳを有するＲＰＭＩ培地中で一晩播種する。翌日、細胞を、ある濃度範囲の試験化合物の存在下または非存在下で、３７℃、５％ＣＯ_２で４時間インキュベートする。細胞をＰＢＳで洗浄し、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤を含む１×溶解緩衝液（Ｃｉｓｂｉｏ）で溶解する（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ，７８４４６）。Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）からの以下の抗体：ホスホ－ＥＲＫ１／２－Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４（＃９１０１Ｌ）、トータル－ＥＲＫ１／２（＃９１０２Ｌ）、ホスホ（ｐｈｏｓｐｈｏｒ）－ＡＫＴ－Ｓｅｒ４７３（＃４０６０Ｌ）、ホスホ－ｐ９０ＲＳＫ－Ｓｅｒ３８０（＃１１９８９Ｓ）、及びホスホ－Ｓ６リボソームタンパク質－Ｓｅｒ２３５／Ｓｅｒ２３６（＃２２１１Ｓ）を使用して、１０または２０μｇの総タンパク質溶解物をＳＤＳ－ＰＡＧＥ及び免疫ブロット分析に供する。

【表5】

【0313】

実施例Ｇ：インビボ有効性試験
Ｍｉａ－Ｐａｃａ－２（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ）、Ｈ３５８（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｃ）、ＨＰＡＦ－ＩＩ（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ）、ＡＧＳ（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｄ）、ＳＷ４８０（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ）またはＹＡＰＣ（ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ）ヒトがん細胞を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから取得し、１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ培地で維持する。有効性試験の実験については、５×１０６個の細胞を６～８週齢のＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）の右後腹部に皮下接種する。腫瘍体積が約１５０～２５０ｍｍ^３であるときに、マウスを腫瘍体積によって無作為化し、化合物を経口投与する。腫瘍体積は、式（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して計算し、ここで、Ｌ及びＷはそれぞれ、長さ及び幅寸法を指す。腫瘍増殖阻害は、式（１－（ＶＴ／ＶＣ））×１００を使用して計算し、ここで、ＶＴは処置最終日の処置群の腫瘍体積であり、ＶＣは処置最終日の対照群の腫瘍体積である。ダネットの多重比較試験を用いた二元配置分散分析を使用して、処置群間の統計的差異を決定する（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）。マウスはケージ当たり１０～１２匹で飼育し、栄養強化し、１２時間の明／暗サイクルに曝露する。腫瘍体積が限界（体重の１０％）を超えたマウスは、ＣＯ_２の吸入によって人道的に安楽死させる。動物は、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌによって完全に認定されたバリア施設で維持される。全ての手順は、ＵＳ Ｐｕｂｌｉｃ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｐｏｌｉｃｙ ｏｎ Ｈｕｍａｎ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ及びＩｎｃｙｔｅ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅガイドラインに従って行う。

【0314】

実施例Ｈ：Ｃａｃｏ２アッセイ
Ｃａｃｏ－２細胞を、１０％（ｖ／ｖ）のウシ胎児血清、１％（ｖ／ｖ）の非必須アミノ酸、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）を補充したＤＭＥＭ増殖培地中で、５％ＣＯ_２の雰囲気で３７℃で増殖させた。コンフルエント細胞単層を、１μＭのＥＤＴＡを含有する０．０５％トリプシンで処理することによって、７日毎または４日毎にＣａｃｏ－２について継代培養した。Ｃａｃｏ－２細胞を９６ウェルのＴｒａｎｓｗｅｌｌプレートに播種した。Ｃａｃｏ－２細胞の播種密度は、１４，０００細胞／ウェルであった。ＤＭＥＭ増殖培地は、播種後１日おきに交換した。細胞単層を、Ｃａｃｏ－２細胞について２２～２５日間のトランスポートアッセイに使用した。

【0315】

細胞培養培地を除去し、ＨＢＳＳで置き換えた。ＴＥＥＲを測定するために、ＨＢＳＳをドナーコンパートメント（頂端側）及びレシーバーコンパートメント（基底側）に添加した。ＴＥＥＲは、細胞単層の完全性を確保するために、ＲＥＭＳ Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒを使用して測定した。ＴＥＥＲ値が３００Ω・ｃｍ^２以上のＣａｃｏ－２細胞単層を、トランスポート実験に使用した。吸収方向（Ａ－Ｂ）のＰ_ａｐｐを決定するために、ＨＢＳＳ中の試験化合物（５０μＭ）の溶液をドナーコンパートメント（頂端側）に添加し、４％ＢＳＡを含むＨＢＳＳ溶液をレシーバーコンパートメント（基底側）に添加した。頂端体積は０．０７５ｍＬ、基底体積は０．２５ｍＬであった。インキュベーション期間は、５％ＣＯ_２の雰囲気中、３７℃で１２０分であった。インキュベーション期間の終わりに、ドナー及びレシーバー側から試料を除去し、タンパク質沈殿のために等体積のアセトニトリルを添加した。上清を、ＬＣＭＳ分析のために遠心分離（３０００ ｒｐｍ，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮのＡｌｌｅｇｒａ Ｘ－１４Ｒ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）後に収集した。透過性値は、以下の式に従って決定した：
Ｐ_ａｐｐ（ｃｍ／ｓ）＝（Ｆ＊ＶＤ）／（ＳＡ＊ＭＤ）、
式中、流動速度（Ｆ、質量／時間）はレシーバー側の対象の化合物の累積量の傾きから算出され、ＳＡは細胞膜の表面積であり、ＶＤはドナー体積であり、ＭＤはドナーチャンバー内の溶液の初期量である。

【0316】

Ｃａｃｏ－２透過性アッセイデータを以下の表３に提供する。記号「†」は、Ｃａｃｏ２が≦０．５であることを示し、「††」は、Ｃａｃｏ－２が＞０．５であるが≦１であることを示し、「†††」は、Ｃａｃｏ－２が＞１であることを示す。「ＮＡ」は、Ｃａｃｏ－２データが利用できないことを示す。

【表6】

【0317】

実施例Ｉ：ヒト全血安定性
例示的な化合物の全血安定性を、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定した。バイアル当たり０．５ｍＬの血液を含む１．０ｍＬのガラスバイアルを含有するインキュベーションプレートには、９６ウェルのＦｌｅｘｉ－Ｔｉｅｒ（商標）ブロック（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓａｌｅｓ ＆ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ，Ｆｌａｎｄｅｒｓ，ＮＪ）を使用した（プールされた性別、ＢＩＯＩＶＴ，Ｈｉｃｋｓｖｉｌｌｅ，ＮＹなどから調達したヒト全血）。血液を、水浴中で３７℃に３０分間予め温めた。９６－ディープウェル分析プレートを、１００μＬの超純水／ウェルを添加して調製した。５０μＬの冷却された超純水／ウェルを９６－ディープウェル試料収集プレートに添加し、シーリングマットで覆った。１μＬの０．５ｍＭの化合物作業溶液（ＤＭＳＯ：水）を、インキュベーションプレート中の血液に添加して、１μＭの最終濃度に到達させ、ピペッティングで完全に混合し、５０μＬを、試料収集プレートのＴ＝０ウェルに移した。血液を水中に２分間放置し、次いで４００μＬの停止溶液／ウェルを添加した（内部標準を含有するアセトニトリル）。インキュベーションプレートを、１５０ｒｐｍで振盪しながら、Ｉｎｃｕ－Ｓｈａｋｅｒ ＣＯ_２ Ｍｉｎｉインキュベーター（Ｂｅｎｃｈｍａｒｋ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓａｙｒｅｖｉｌｌｅ，ＮＪ）に３７℃で配置した。１、２、及び４時間で、血液試料をピペッティングによって完全に混合し、５０μＬを試料収集プレートの対応するウェルに移す。血液を水中に２分間放置し、次いで、４００μＬの停止溶液／ウェルを添加した。収集プレートを密封し、１７００ｒｐｍで３分間ボルテックスし（ＶＸ－２５００ Ｍｕｌｔｉ－Ｔｕｂｅ Ｖｏｒｔｅｘｅｒ，ＶＷＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｒａｄｎｏｒ，ＰＡ）、次いで試料を収集プレート内で３５００ｒｐｍで１０分間遠心分離した（Ａｌｌｅｇｒａ Ｘ－１４Ｒ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）。１００μＬの上清／ウェルを、試料採取プレートから分析プレートの対応するウェルに移した。最終プレートを１７００ｒｐｍで１分間ボルテックスし、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって試料を分析した。Ｔ＝０に対する１、２、及び４時間の試料のピーク面積比を使用して、残存パーセントを決定した。残存パーセント対時間の自然対数を使用して、血液中の化合物の半減期を計算するための傾きを決定した（ｔ_１／２＝０．６９３／傾き）。

【0318】

ヒト全血安定性データを、以下の表４に提供する。記号「†」は、ＷＢＳが≦７０％であることを示し、「††」は、ＷＢＳが＞７０％だが≦９０％であることを示し、「†††」は、ＷＢＳが＞９０％であることを示す。「ＮＡ」は、ＷＢＳデータが利用できないことを示す。

【表7】

【0319】

実施例Ｊ：インビトロの固有クリアランスのプロトコル
試験化合物は、インビトロ代謝安定性実験のために、ヒト肝臓ミクロソームとともに３７℃でインキュベートされる。インキュベーション混合物は、１００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中に試験化合物（１μΜ）、ＮＡＤＰＨ（２ｍＭ）、及びヒト肝臓ミクロソーム（０．５ｍｇタンパク質／ｍＬ）を含有する。混合物を、ＮＡＤＰＨを添加する前に、３７℃で２分間プレインキュベートする。反応はＮＡＤＰＨの添加で開始し、０分、１０分、２０分及び３０分での氷冷メタノールによってクエンチする。終了したインキュベーション混合物をＬＣ－ＭＳ／ＭＳシステムを使用して分析する。分析システムは、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ－３０ＡＤバイナリーポンプシステム及びＳＩＬ－３０ＡＣオートサンプラー（Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＭＤ）と結合したＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）製のＳｃｉｅｘ Ｔｒｉｐｌｅ Ｑｕａｄ６５００＋質量分析計で構成された。試験化合物及び内部標準のクロマトグラフィー分離は、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）製のＨｙｐｅｒｓｉｌ Ｇｏｌｄ Ｃ１８カラム（５０×２．１ｍｍ、５μΜ、１７５Å）を使用して達成される。移動相Ａは、水中の０．１％ギ酸で構成され、移動相Ｂは、アセトニトリル中の０．１％ギ酸で構成される。総ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ実行時間は、０．７５ｍＬ／分の流速で２．７５分とすることができる。ピーク面積の積分及びピーク面積比の計算は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製のＡｎａｌｙｓｔソフトウェア（バージョン１．６．３）を使用して行う。

【0320】

インビトロ固有クリアランス、ＣＬ_{ｉｎｔ，ｉｎ ｖｉｔｒｏ}は、ＣＬ_{ｉｎｔ，ｉｎ ｖｉｔｒｏ}＝（０．６９３／ｔ_１／２）×（１／Ｃ_{ｐｒｏｔｅｉｎ}）としての試験化合物の消失のｔ_１／２から計算され_、式中、Ｃ_{ｐｒｏｔｅｉｎ}は、インキュベーション中のタンパク質濃度であり、ｔ_１／２は、濃度対時間プロファイルの対数線形回帰分析の傾き（ｋ）によって決定される；したがって、ｔ_１／２＝ｌｎ２／ｋである。ＣＬ_{ｉｎｔ，ｉｎ ｖｉｔｒｏ}値は、生理学に基づくスケーリング因子、肝臓ミクロソームタンパク質濃度（４５ｍｇタンパク質／ｇ肝臓）、及び肝臓重量（２１ｇ／ｋｇ体重）を使用することによってヒトのインビボ値にスケーリングされる。式ＣＬ_ｉｎｔ＝ＣＬ_{ｉｎｔ，ｉｎ ｖｉｔｒｏ}×（ｍｇタンパク質／ｇ肝臓重量）×（ｇ肝臓重量／ｋｇ体重）を使用する。次に、インビボ肝クリアランス（ＣＬ_Ｈ）を、十分に撹拌された肝臓モデルにおいて、ＣＬ_ｉｎｔ及び肝血流であるＱ（ヒトでは２０ｍＬ・ｍｉｎ^－１・ｋｇ^－１）を用いて、ＣＬ_Ｈ＝（Ｑ×ＣＬ_ｉｎｔ）／（Ｑ＋ＣＬ_ｉｎｔ）から全ての結合を無視して計算する。肝臓抽出比は、ＣＬ_ＨをＱで割ったものとして計算した。

【0321】

実施例Ｋ：インビボ薬物動態プロトコル
インビボ薬物動態実験については、静脈内に、または強制経口投与を介して、雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット、または雄及び雌のカニクイザルに試験化合物を投与する。静脈内（ＩＶ）投与については、ラットにはＩＶボーラス、及びサルには５分間または１０分間のＩＶ注入を介して、酸性化生理食塩水中１０％ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）の製剤を使用して、０．５～１ｍｇ／ｋｇで試験化合物を投与する。経口（ＰＯ）投与については、クエン酸緩衝液（ｐＨ２．５）中の０．５％メチルセルロース中の５％ＤＭＡＣを使用して、１．０～３．０ｍｇ／ｋｇで試験化合物を投与する。投与前及び投与後２４時間までの種々の時点で血液試料を採取する。全ての血液試料は抗凝固剤としてＥＤＴＡを使用して採取し、血漿試料を得るために遠心分離する。試験化合物の血漿中濃度を、ＬＣ－ＭＳ法によって決定する。測定された血漿濃度を使用して、Ｐｈｏｅｎｉｘ（登録商標）ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェアプログラム（バージョン８．０、Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用する標準的な非コンパートメント法によってＰＫパラメータを算出する。

【0322】

ラット及びサルでは、予備的なＰＫパラメータを取得するために試験化合物のカセット投与を行う。

【0323】

雄のビーグル犬を用いたインビボ薬物動態実験は上記の条件下で実施されてもよい。

【0324】

実施例Ｌ：ＣＹＰプロトコルの時間依存性阻害（ＴＤＩ）
このアッセイは、試験化合物が経時的に代謝されるにつれて、ＣＹＰ阻害が上昇することを特徴付けるように設計される。このための可能性があるメカニズムには、強固に結合した準不可逆的阻害代謝物複合体の形成または代謝物の共有結合付加体形成によるＰ４５０酵素の不活性化が含まれる。この実験は、代謝産物濃度を減少させ、したがって可逆的な阻害の効果を減少させるために１０倍希釈を採用しているが、非常に強力なＣＹＰ阻害剤である代謝物が陽性結果を生じ得る可能性がある（しかし一般的ではない）。

【0325】

結果は、ヒト肝臓ミクロソーム（ＨＬＭ）を使用したＣＹＰ２Ｃ９、２Ｃ１９、２Ｄ６及び３Ａ４（ミダゾラム）に対するそれらのＫｍ濃度の４倍でのＣＹＰ特異的プローブ基質のカクテルからのものである。ＨＬＭは、ＮＡＤＰＨ再生系の存在下（＋Ｎ）または非存在下（－Ｎ）で１０μＭの濃度の試験化合物と３０分間プレインキュベートし、１０倍に希釈し、ＮＡＤＰＨ再生系の新しいアリコートを加えて基質カクテルの存在下で８分間インキュベートすることができる。代謝産物標準の検量線を使用して、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを使用して酵素活性を定量的に測定することができる。加えて、陽性対照として使用される、既知の時間依存性阻害剤、チエニル酸（ＣＹＰ２Ｃ９）、チクロピジン（ＣＹＰ２Ｃ１９）、パロキセチン（ＣＹＰ２Ｄ６）、及びトロレアンドマイシン（ＣＹＰ３Ａ４）とのインキュベーションは、ＮＡＤＰＨ再生系の有無にかかわらずに３０分間プレインキュベートされる。

【0326】

分析システムは、Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ－３０ＡＤバイナリーポンプシステム及びＳＩＬ－３０ＡＣオートサンプラー（Ｓｈｉｍａｄｚｕ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＭＤ）と結合したＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）製のＳｃｉｅｘ Ｔｒｉｐｌｅ Ｑｕａｄ ６５００＋質量分析計で構成される。試験化合物及び内部標準のクロマトグラフィー分離は、ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ １３０Ａ、２．１×５０ｍｍ、１．７μｍ ＨＰＬＣカラム（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用して達成することができる。移動相Ａは、水中の０．１％ギ酸で構成され、移動相Ｂは、アセトニトリル中の０．１％ギ酸で構成される。総ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ実行時間は、０．９ｍＬ／分の流速で２．５０分である。ピーク面積の積分及びピーク面積比の計算はＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製のＡｎａｌｙｓｔソフトウェア（バージョン１．６．３）を使用して行う。

【0327】

ＮＡＤＰＨとの化合物のプレインキュベーション後の対照のＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、及びＣＹＰ３Ａ４の残存活性の割合を、対応する対照ビヒクル活性について補正し、次いで、０分を１００％として算出する。各アイソザイムについての残存活性％の自然対数の時間に対する線形回帰プロットを使用して傾きを算出する。－傾きは、酵素損失の速度、またはＫ_ｏｂｓに等しい。

【0328】

本明細書に説明されているものに加えて、本発明の種々の修正は前述の記載から当業者には明らかであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。本出願で引用された、限定されないが、全ての特許、特許出願、及び刊行物を含む各参考文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

【国際調査報告】