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特表2024-538050メソテリン結合タンパク質及びその使用

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-18

(54)【発明の名称】メソテリン結合タンパク質及びその使用

(51)【国際特許分類】

C07K 16/30 20060101AFI20241010BHJP

C07K 16/46 20060101ALI20241010BHJP

C07K 16/28 20060101ALI20241010BHJP

C12N 15/13 20060101ALI20241010BHJP

C12N 15/63 20060101ALI20241010BHJP

C12N 1/15 20060101ALI20241010BHJP

C12N 1/19 20060101ALI20241010BHJP

C12N 1/21 20060101ALI20241010BHJP

C12N 5/10 20060101ALI20241010BHJP

A61P 35/00 20060101ALI20241010BHJP

A61K 39/395 20060101ALI20241010BHJP

【ＦＩ】

C07K16/30 ZNA

C07K16/46

C07K16/28

C12N15/13

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61P35/00

A61K39/395 E

A61K39/395 T

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024521815

(86)(22)【出願日】2022-10-13

(85)【翻訳文提出日】2024-06-03

(86)【国際出願番号】 US2022078075

(87)【国際公開番号】W WO2023064876

(87)【国際公開日】2023-04-20

(31)【優先権主張番号】63/255,887

(32)【優先日】2021-10-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/255,891

(32)【優先日】2021-10-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/303,422

(32)【優先日】2022-01-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/392,569

(32)【優先日】2022-07-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】518452881

【氏名又は名称】テネオバイオ，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ハリス，キャサリン

(72)【発明者】

【氏名】マリク・チャウダリー，ハルバニ・カウール

(72)【発明者】

【氏名】アレン，ニコール

【テーマコード（参考）】

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA87X

4B065AA92Y

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C085AA13

4C085BB31

4C085CC22

4C085DD61

4C085EE01

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA72

4H045DA76

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体及びメソテリン結合タンパク質、抗メソテリン抗体及びその抗体断片、抗体－薬物複合体、合成免疫受容体、並びにそれを含む診断用薬が開示される。また、前述のいずれかを含む医薬組成物、並びにＭＳＬＮ発現と関連している疾患の治療及び／若しくは診断及び／又は監視における前述のいずれかの使用も開示される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、前記シングルドメイン抗体が、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１１～１９のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。

【請求項2】

メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、前記シングルドメイン抗体が、
（ｉ）配列番号１又は配列番号９と比べて、最大２個のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、
（ｉｉ）配列番号２、配列番号７、又は配列番号１０と比べて、最大２個のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、又は配列番号８と比べて、最大２個のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。

【請求項3】

メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、前記シングルドメイン抗体が、
（ｉ）配列
ＧＧＳＩＳＸ_１ＳＹＹ（配列番号５３）を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）であって、
式中、Ｘ_１がＮ又はＳである、ＶＨＣＤＲ１と、
（ｉｉ）配列
ＩＹＸ_２ＳＧＸ_３Ｘ_４（配列番号６８）を含むＶＨＣＤＲ２であって、
式中、Ｘ_２がＨ又はＹであり、Ｘ_３がＮ又はＳであり、且つＸ_４がＴ又はＩである、ＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）配列
Ｘ_５Ｘ_６ＱＸ_７ＧＶＧＡＴＴＴＥＥＹ（配列番号５４）を含むＶＨＣＤＲ３であって、
式中、Ｘ_５がＴ、Ｖ、又はＡであり、Ｘ_６がＳ又はＴであり、且つＸ_７がＤ又はＮである、ＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。

【請求項4】

メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、前記シングルドメイン抗体が、
（ｉ）配列番号１及び配列番号９から選択される配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、
（ｉｉ）配列番号２、配列番号７、及び配列番号１０から選択される配列を含むＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、及び配列番号８から選択される配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。

【請求項5】

メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、前記シングルドメイン抗体が、
（ａ）それぞれ配列番号１、２、及び３の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｂ）それぞれ配列番号１、２、及び４の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｃ）それぞれ配列番号１、２、及び５の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｄ）それぞれ配列番号１、２、及び６の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｅ）それぞれ配列番号１、７、及び８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｆ）それぞれ配列番号９、２、及び６の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｇ）それぞれ配列番号９、２、及び４の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；又は
（ｈ）それぞれ配列番号１、１０、及び４の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。

【請求項6】

メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、前記シングルドメイン抗体が、配列番号１１～１９のいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。

【請求項7】

前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、ヒトＶＨフレームワーク中に存在する、請求項１～６のいずれか一項に記載のシングルドメイン抗体。

【請求項8】

メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、前記シングルドメイン抗体が、配列番号１１～１９のいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。

【請求項9】

メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、前記シングルドメイン抗体が、配列番号１１～１９から選択される重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。

【請求項10】

前記シングルドメイン抗体が、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合する、請求項１～９のいずれか一項に記載のシングルドメイン抗体。

【請求項11】

前記シングルドメイン抗体が、約１０^－９Ｍ～１０^－６ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する、請求項１～１０のいずれか一項に記載のシングルドメイン抗体。

【請求項12】

前記シングルドメイン抗体が、単離されたシングルドメイン抗体である、請求項１～１１のいずれか一項に記載のシングルドメイン抗体。

【請求項13】

請求項１～１１のいずれか一項に記載のシングルドメイン抗体を含む、メソテリン結合タンパク質。

【請求項14】

前記メソテリン結合タンパク質が、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合する、請求項１３に記載のメソテリン結合タンパク質。

【請求項15】

前記メソテリン結合タンパク質が、ＣＤ３に更に特異的に結合する、請求項１３又は１４に記載のメソテリン結合タンパク質。

【請求項16】

前記メソテリン結合タンパク質が、ヒトＣＤ３に更に特異的に結合する、請求項１３～１５のいずれか一項に記載のメソテリン結合タンパク質。

【請求項17】

前記メソテリン結合タンパク質が、単離されたモノクローナル抗体である、請求項１３～１６のいずれか一項に記載のメソテリン結合タンパク質。

【請求項18】

請求項１～１１のいずれか一項に記載のシングルドメイン抗体を含む、抗体－薬物複合体。

【請求項19】

請求項１～１１のいずれか一項に記載のシングルドメイン抗体を含む、抗メソテリン抗体。

【請求項20】

前記抗メソテリン抗体が、多重特異性である、請求項１９に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項21】

前記抗メソテリン抗体が、ＭＳＬＮ以外の腫瘍特異的抗原に更に特異的に結合する、請求項１９又は２０に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項22】

前記抗メソテリン抗体が、二重特異性である、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項23】

前記抗メソテリン抗体が、ＣＤ３に更に特異的に結合する、請求項１９～２２のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項24】

前記抗メソテリン抗体が、ヒトＣＤ３に更に特異的に結合する、請求項１９～２３のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項25】

前記抗メソテリン抗体が、ＣＤ３結合ＶＨ領域を更に含む、請求項１９～２４のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項26】

前記抗メソテリン抗体が、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４サブタイプのものである、請求項１９～２５のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項27】

前記抗メソテリン抗体が、軽鎖可変（ＬＶ）領域と対合するＣＤ３結合ＶＨ領域を更に含む、請求項１９～２６のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項28】

前記ＣＤ３結合ＶＨ領域が、
（ｉ）配列番号２０～２５のいずれか１つと比べて、最大２個のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、
（ｉｉ）配列番号２６と比べて、最大２個のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）配列番号２７～３０と比べて、最大２個のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む、請求項２５又は２７に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項29】

前記ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ１が、配列番号２０～２５から選択される配列を含む、請求項２８に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項30】

前記ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ２が、配列番号２６の配列を含む、請求項２８又は２９に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項31】

前記ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ３が、配列番号２７～３０から選択される配列を含む、請求項２８～３０のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項32】

前記ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号３１～４８のいずれか１つの前記ＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項２５又は２７～３１のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項33】

前記ＣＤ３結合ＶＨ領域が、
（ｉ）配列
ＧＦＴＦＸ_８Ｘ_９ＹＡ（配列番号５５）を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）であって、
式中、Ｘ_８がＤ、Ａ、又はＨであり、且つＸ_９がＤ又はＮである、ＶＨＣＤＲ１と、
（ｉｉ）配列ＩＳＷＮＳＧＳＩ（配列番号２６）を含むＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）配列
ＡＫＤＳＲＧＹＧＸ_１０ＹＸ_１１Ｘ_１２ＧＧＡＹ（配列番号５６）を含むＶＨＣＤＲ３であって、
式中、Ｘ_１０がＤ又はＳであり、Ｘ_１１がＲ又はＳであり、且つＸ_１２がＬ又はＲである、ＶＨＣＤＲ３と、を含む、請求項２５又は２７に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項34】

前記ＣＤ３結合ＶＨ領域が、配列番号３１～４８のいずれか１つの前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、請求項２５又は２７に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項35】

前記ＣＤ３結合ＶＨ領域中の前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、ヒトＶＨフレームワーク中に存在する、請求項２５～３４のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項36】

前記ＣＤ３結合ＶＨ領域が、配列番号３１～４８のいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項２５～３５のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項37】

前記ＣＤ３結合ＶＨ領域が、
（ａ）それぞれ配列番号２０、２６、及び２７の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｂ）それぞれ配列番号２０、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｃ）それぞれ配列番号２０、２６、及び２９の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｄ）それぞれ配列番号２１、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｅ）それぞれ配列番号２２、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｆ）それぞれ配列番号２３、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｇ）それぞれ配列番号２４、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｈ）それぞれ配列番号２０、２６、及び３０の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｉ）それぞれ配列番号２５、２６、及び２９の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；又は
（ｊ）それぞれ配列番号２４、２６、及び２９の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む、請求項２５～３６のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項38】

前記ＣＤ３結合ＶＨ領域が、配列番号２０、２６、及び２７の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む、請求項３７に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項39】

前記軽鎖可変領域が、配列番号５２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、請求項２７～３８のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項40】

前記軽鎖可変領域が、それぞれ配列番号４９、５０、及び５１の配列を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含む、請求項２７～３９のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項41】

前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列が、ヒトＶＨフレームワーク中に存在する、請求項２７～４０のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項42】

前記軽鎖可変領域が、配列番号５２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項２７～４１のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項43】

前記抗メソテリン抗体が、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合する、請求項１９～４２のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項44】

前記抗メソテリン抗体が、単離された抗体である、請求項１９～４３のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項45】

メソテリンに特異的に結合する抗体断片であって、前記抗体断片が、請求項１９～４４のいずれか一項に記載の抗メソテリン抗体の断片を含む、抗体断片。

【請求項46】

前記抗体断片が、三鎖抗体様分子である、請求項４５に記載の抗体断片。

【請求項47】

請求項１３～４６のいずれか一項に記載の少なくとも１つのメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物。

【請求項48】

請求項１～１２のいずれか一項に記載のシングルドメイン抗体をコードする、ポリヌクレオチド。

【請求項49】

請求項１３～１７又は１９～４６のいずれか一項に記載のメソテリン結合タンパク質、抗メソテリン抗体、又は抗体断片をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む、組成物。

【請求項50】

請求項４８又は４９に記載のポリヌクレオチド又は組成物を含む、組換え発現ベクター。

【請求項51】

請求項５０に記載の組換え発現ベクターを含む、宿主細胞。

【請求項52】

メソテリンの発現と関連している疾患の治療を必要とする対象において治療を行う方法であって、前記対象に、請求項１３～４６のいずれか一項に記載の少なくとも１つのメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片を投与することを含む、方法。

【請求項53】

前記メソテリンの発現と関連している疾患が、中皮腫、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、及びトリプルネガティブ乳癌から選択される、請求項５２に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０２１年１０月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／２５５，８８７号明細書、２０２１年１０月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／２５５，８９１号明細書、２０２２年１月２６日に出願された米国仮特許出願第６３／３０３，４２２号明細書、及び２０２２年７月２７日に出願された米国仮特許出願第６３／３９２，５６９号明細書に対する優先権の利益を主張するものであり、これらの各々内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本明細書と同時に提出された、コンピュータにより読み込み可能なアミノ酸配列表は、その全体が参照により組み込まれ、下記のように識別される：２０２２年１０月１２日に作成された「１０１８４－ＷＯ０２＿ＳＥＣ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ」という名称の７０，４９９バイトのＸＭＬファイル。

【0003】

本明細書において、メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体及びメソテリン結合タンパク質、抗メソテリン抗体及びその抗体断片、抗体－薬物複合体、合成免疫受容体、並びにそれを含む診断用薬が開示される。前述のいずれかを含む医薬組成物、並びにＭＳＬＮの発現と関連している疾患の治療及び／若しくは診断及び／又は監視における前述のいずれかの使用も開示される。

【背景技術】

【0004】

メソテリン（ＭＳＬＮ；ＣＡＫ１；ＵｎｉＰｒｏｔＱ１３４２１；ＨＧＮＣＩＤ７３７１としても知られる）は、種々の悪性腫瘍細胞上で細胞表面糖タンパク質として広範に発現される腫瘍関連抗原である。メソテリン（ＭＳＬＮ）は、ヒト卵巣癌（ＯＶＣＡＲ－３）細胞を有するマウスの免疫化によって生成されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）Ｋ１を使用して、１９９２年にＰａｓｔａｎらによって最初に同定された（Ｃｈａｎｇ，ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪ．Ｃａｎｃｅｒ．（１９９２）５０：３７３－８１）。ＭＳＬＮは、ヒト膵臓癌細胞株ＨＰＣ－Ｙ５から精製され、巨核球増強能力を有することが示された。ＭＳＬＮ遺伝子は、７１ｋＤａの前駆体タンパク質をコードし、この前駆体タンパク質は、フーリンによって２つの生成物：巨核球増強因子（ＭＰＦ；３１ｋＤａ）と呼ばれるアミノ末端脱落（ｓｈｅｄ）断片及びＧＰＩ結合を通して細胞膜に連結したままである、グリコシル・ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー型糖タンパク質ＭＳＬＮ（４０ｋＤａ）に切断される。ＭＳＬＮタンパク質は、ＡＲＭ型リピートを有する超らせん中に組織化される。

【0005】

ＭＰＦ及びＭＤＬＮの両方は生理活性を示すが、それらの正確な生物学的機能は不明なままである。メソテリン遺伝子が相同組換えによって破壊されたノックアウトマウスが調製された（Ｂｅｒａ，Ｔ．Ｋ．ａｎｄＰａｓｔａｎ，Ｉ．（２０００）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２０：２９０２－２９０６）。解剖学的異常、血液学的異常、又は生殖異常は検出されておらず、少なくともこれらのノックアウトマウスでは、メソテリンの機能が成長又は生殖に必須ではないことが示されている。ＭＳＬＮは、以前に卵巣癌抗原として同定された腫瘍細胞の表面に存在するムチン様糖タンパク質である、ＭＵＣ１６（ＣＡ１２５）と特異的に相互作用する。ＭＳＬＮは、腫瘍細胞の増殖及び移動に関連しており（ＲｕｍｐＡｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２００４Ｍａｒ５；２７９（１０）：９１９０－８）、メソテリン－ＭＵＣ１６相互作用は、細胞接着、浸潤、及び転移において機能すると提案されている。例証として、腹膜の内側におけるメソテリンの発現は、卵巣癌の転移形成の優先的な部位と相互に関連し、メソテリン－ＭＵＣ１６結合は、卵巣腫瘍の腹膜転移を促進すると考えられている（Ｇｕｂｂｅｌｓ，Ｊ．Ａ．ｅｔａｌ．（２００６）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ．５：５０）。

【0006】

ＭＳＬＮは、中皮腫、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、及びトリプルネガティブ乳癌を含むいくつかの腫瘍型で高度に発現される（Ｈａｓｓａｎｅｔａｌ．，ＥｕｒＪＣａｎｃｅｒ（２００８）４４：４６－５３；Ｏｒｄｏｎｅｚ，ＡｍＪＳｕｒｇＰａｔｈｏｌ（２００３）２７：１４１８－２８；Ｈｏｅｔａｌ．，ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ（２００７）１３：１５７１－５）。しかしながら、ＭＳＬＮの正常組織の発現は、胸膜、心膜、及び腹膜における中皮細胞、並びに正常な卵巣、卵管、及び扁桃腺の表面上皮に限定されており、ＭＳＬＮを抗体－薬物複合体、モノクローナル抗体、及びＣＡＲ－Ｔ細胞療法のための有望な標的にする（ＨａｓｓａｎＲｅｔａｌ．，ＪＣｌｉｎＯｎｃｏｌ．２０１６Ｄｅｃ；３４（３４）：４１７１－４１７９）。更に、ＭＳＬＮ結合剤は、ある特定の種類の癌の診断及び予後のためのマーカーとして使用することができ、これは、微量のメソテリンがメソテリン陽性癌を有する一部の患者の血液中で検出され得るためである（Ｃｒｉｓｔａｕｄｏｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１３：５０７６－５０８１，２００７）。ＭＳＬＮの過剰発現は、例えば、肺腺癌及びトリプルネガティブ乳癌における予後不良と関連している。

【0007】

その細胞表面上での発現に加えて、メソテリンはまた、ＡＤＡＭ１７／ＴＡＣＥの作用を通して血清中に脱落される。脱落メソテリンの血清レベルは、卵巣癌及び他の癌を有する患者で上昇している。脱落血清メソテリンについてのＥＬＩＳＡ試験法であるＭＥＳＯＭＡＲＫ（登録商標）は、人道的使用のためにＦＤＡによって承認されており、中皮腫の診断又は監視における助けとなり得る。脱落メソテリンはまた、単独で又は他のマーカーと一緒になって、他の癌型の診断又は予後を補助するために使用されている。脱落メソテリンの血清レベルと疾患との相関は、癌の進行におけるメソテリンタンパク質の潜在的な役割を示唆した。

【0008】

従って、メソテリンの発現と関連している疾患のための追加的且つ効果的な治療薬及び診断用薬が必要である。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0009】

【非特許文献1】Ｃｈａｎｇ，ｅｔａｌ．，ＩｎｔＪ．Ｃａｎｃｅｒ．（１９９２）５０：３７３－８１

【非特許文献2】Ｂｅｒａ，Ｔ．Ｋ．ａｎｄＰａｓｔａｎ，Ｉ．（２０００）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２０：２９０２－２９０６

【非特許文献3】ＲｕｍｐＡｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２００４Ｍａｒ５；２７９（１０）：９１９０－８

【非特許文献4】Ｇｕｂｂｅｌｓ，Ｊ．Ａ．ｅｔａｌ．（２００６）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ．５：５０

【非特許文献5】Ｈａｓｓａｎｅｔａｌ．，ＥｕｒＪＣａｎｃｅｒ（２００８）４４：４６－５３

【非特許文献6】Ｏｒｄｏｎｅｚ，ＡｍＪＳｕｒｇＰａｔｈｏｌ（２００３）２７：１４１８－２８

【非特許文献7】Ｈｏｅｔａｌ．，ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ（２００７）１３：１５７１－５

【非特許文献8】ＨａｓｓａｎＲｅｔａｌ．，ＪＣｌｉｎＯｎｃｏｌ．２０１６Ｄｅｃ；３４（３４）：４１７１－４１７９

【非特許文献9】Ｃｒｉｓｔａｕｄｏｅｔａｌ．，Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１３：５０７６－５０８１，２００７

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0010】

本明細書において、メソテリン（ＭＳＬＮ）、例えば、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合するシングルドメイン抗体が開示される。

【0011】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、
（ｉ）配列
ＧＧＳＩＳＸ_１ＳＹＹ（配列番号５３）を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）であって、
式中、Ｘ_１がＮ又はＳである、ＶＨＣＤＲ１と、
（ｉｉ）配列
ＩＹＸ_２ＳＧＸ_３Ｘ_４（配列番号６８）を含むＶＨＣＤＲ２であって、
式中、Ｘ_２がＨ又はＹであり、Ｘ_３がＮ又はＳであり、且つＸ_４がＴ又はＩである、ＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）配列
Ｘ_５Ｘ_６ＱＸ_７ＧＶＧＡＴＴＴＥＥＹ（配列番号５４）を含むＶＨＣＤＲ３であって、
式中、Ｘ_５がＴ、Ｖ、又はＡであり、Ｘ_６がＳ又はＴであり、且つＸ_７がＤ又はＮである、ＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0012】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１１～１９のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１１～１９のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８５％（例えば、８５％、９０％、９５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１１～１９のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９５％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１１～１９のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0013】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、
（ｉ）配列番号１又は配列番号９と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、
（ｉｉ）配列番号２、配列番号７、又は配列番号１０と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、又は配列番号８と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、各アミノ酸修飾は、もしあれば、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、各アミノ酸修飾は、もしあれば、表Ａ１に列挙される保存的アミノ酸置換である。

【0015】

いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１は、配列番号１又は配列番号９と比べて、最大１個のアミノ酸修飾を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２、配列番号７、又は配列番号１０と比べて、最大１個のアミノ酸修飾を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、又は配列番号８と比べて、最大１個のアミノ酸修飾を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、最大１個のアミノ酸修飾は、アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、最大１個のアミノ酸修飾は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、最大１個のアミノ酸修飾は、アミノ酸欠失である。いくつかの実施形態では、最大１個のアミノ酸修飾は、アミノ酸付加である。

【0016】

いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１は、配列番号１及び配列番号９から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２、配列番号７、及び配列番号１０から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ３は、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、及び配列番号８から選択される配列を含む。

【0017】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、
（ｉ）配列番号１及び配列番号９から選択される配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、
（ｉｉ）配列番号２、配列番号７、及び配列番号１０から選択される配列を含むＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、及び配列番号８から選択される配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、
（ａ）それぞれ配列番号１、２、及び３の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｂ）それぞれ配列番号１、２、及び４の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｃ）それぞれ配列番号１、２、及び５の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｄ）それぞれ配列番号１、２、及び６の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｅ）それぞれ配列番号１、７、及び８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｆ）それぞれ配列番号９、２、及び６の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｇ）それぞれ配列番号９、２、及び４の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；又は
（ｈ）それぞれ配列番号１、１０、及び４の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0019】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１１～１９のいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0020】

いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２及びＶＨＣＤＲ３配列は、ヒトＶＨフレームワーク中に存在する。

【0021】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１１～１９のいずれか１つに対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１１～１９のいずれか１つに対して少なくとも８５％（例えば、８５％、９０％、９５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１１～１９のいずれか１つに対して少なくとも９０％（例えば、９０％、９５％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１１～１９のいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0022】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１１～１９から選択された重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0023】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、約１０^－９Ｍ～１０^－６ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。

【0024】

いくつかの実施形態ではシングルドメイン抗体は、単離されたシングルドメイン抗体である。

【0025】

また、本明細書において、本明細書に記載されるようにメソテリンに特異的に結合するシングルドメイン抗体を含むメソテリン結合タンパク質が開示される。

【0026】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、約１０^－９Ｍ～１０^－６ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。

【0027】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、メソテリン以外の１つ以上の標的抗原に更に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、多重特異性である。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、二重特異性である。

【0028】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、ＣＤ３に更に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、ヒトＣＤ３に更に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、ヒトＣＤ３イプシロンに更に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、ＣＤ３イプシロン（配列番号６９）：Ｋ７３及びＳ８３；並びにＣＤ３デルタ（配列番号７０）Ｋ８２及びＣ９３から選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤ３上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３上のエピトープは、Ｋ８２、Ｅ８３、Ｓ８４、Ｔ８５、Ｖ８６、Ｑ８７、Ｖ８８、Ｈ８９、Ｙ９０、Ｒ９１、Ｍ９２、Ｃ９３によって定義されるＣＤ３イプシロンの領域を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３上のエピトープは、Ｋ７３、Ｎ７４、１７５、Ｇ７６、Ｓ７７、Ｄ７８、Ｅ７９、Ｄ８０、Ｈ８１、Ｌ８２、Ｓ８３によって定義されるＣＤ３イプシロンの領域を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、ＣＤ３デルタ及びＣＤ３イプシロンの両方の残基を有する立体構造エピトープを含む。いくつかの実施形態では、立体構造エピトープは、残基ＣＤ３ε Ｋ７３及びＳ８３；ＣＤ３δ Ｋ８２及びＣ９３の各々を含む。

【0029】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、ＣＤ３結合ＶＨ領域を更に含む。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、軽鎖（ＬＶ）領域と対合するＣＤ３結合ＶＨ領域を含む。

【0030】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、
（ｉ）配列番号２０～２５のいずれか１つと比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、
（ｉｉ）配列番号２６と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）
配列番号２７～３０のいずれか１つと比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む。

【0031】

【0032】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ１は、配列番号２０～２５のいずれか１つと比べて、最大１個のアミノ酸修飾を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２６と比べて、最大１個のアミノ酸修飾を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ３は、配列番号２７～３０のいずれか１つと比べて、最大１個のアミノ酸修飾を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、最大１個のアミノ酸修飾は、アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、最大１個のアミノ酸修飾は、保存的アミノ酸置換である。いくつかの実施形態では、最大１個のアミノ酸修飾は、アミノ酸欠失である。いくつかの実施形態では、最大１個のアミノ酸修飾は、アミノ酸付加である。

【0033】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ１は、配列番号２０～２５から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２６の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ３は、配列番号２７～３０から選択される配列を含む。

【0034】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号３１～４８のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号３１～４８のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して、少なくとも８５％（例えば、８５％、９０％、９５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号３１～４８のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して、少なくとも９０％（例えば、９０％、９５％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号３１～４８のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して、少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0035】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３結合ＶＨ領域は、配列番号３１～４８のいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。

【0036】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、
（ｉ）配列
ＧＦＴＦＸ_８Ｘ_９ＹＡ（配列番号５５）を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）であって、
式中、Ｘ_８がＤ、Ａ、又はＨであり、且つＸ_９がＤ又はＮである、ＶＨＣＤＲ１と、
（ｉｉ）配列ＩＳＷＮＳＧＳＩ（配列番号２６）を含むＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）配列
ＡＫＤＳＲＧＹＧＸ_１０ＹＸ_１１Ｘ_１２ＧＧＡＹ（配列番号５６）を含むＶＨＣＤＲ３であって、
式中、Ｘ_１０がＤ又はＳであり、Ｘ_１１がＲ又はＳであり、且つＸ_１２がＬ又はＲである、ＶＨＣＤＲ３と、を含む。

【0037】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、ヒトＶＨフレームワーク内に存在する。

【0038】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３１～４８のいずれか１つに対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３１～４８のいずれか１つに対して、少なくとも８５％（例えば、８５％、９０％、９５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３１～４８のいずれか１つに対して、少なくとも９０％（例えば、９０％、９５％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３１～４８のいずれか１つに対して、少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0039】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、
（ａ）それぞれ配列番号２０、２６、及び２７の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｂ）それぞれ配列番号２０、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｃ）それぞれ配列番号２０、２６、及び２９の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｄ）それぞれ配列番号２１、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｅ）それぞれ配列番号２２、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｆ）それぞれ配列番号２３、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｇ）それぞれ配列番号２４、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｈ）それぞれ配列番号２０、２６、及び３０の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｉ）それぞれ配列番号２５、２６、及び２９の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；又は
（ｊ）それぞれ配列番号２４、２６、及び２９の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む。

【0040】

いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号５２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号４９、５０、及び５１の配列を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２及びＶＬＣＤＲ３配列は、ヒトＶＨフレームワーク中に存在する。

【0041】

いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号５２に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号５２に対して、少なくとも８５％（例えば、８５％、９０％、９５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号５２に対して、少なくとも９０％（例えば、９０％、９５％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号５２に対して、少なくとも９５％の配列同一性を有する。

【0042】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、抗メソテリン抗体又はその断片である。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、モノクローナル抗体又はその断片である。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、単離されたモノクローナル抗体又はその断片である。

【0043】

いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、抗ＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、抗ＩｇＧ２抗体である。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、抗ＩｇＧ４抗体である。

【0044】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、抗体断片である。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、重鎖のみ抗体である。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、三鎖抗体様分子（ＴＣＡ）である。

【0045】

いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体又はその断片は、Ｆｃ領域を更に含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体又はその断片は、バリアントＦｃ領域を更に含む。いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ領域は、ヘテロ二量体化改変を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、サイレンシングされたＦｃ領域である。

【0046】

また、本明細書において、本明細書に記載されるメソテリンに特異的に結合するシングルドメイン抗体をコードするポリヌクレオチドが開示される。

【0047】

また、本明細書において、本明細書に記載されるメソテリン結合タンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む組成物が開示される。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、抗メソテリン抗体又はその断片である。

【0048】

また、本明細書において、本明細書に記載されるメソテリンに特異的に結合するシングルドメイン抗体を含む組換え発現ベクター、並びに組換え発現ベクターを含む宿主細胞が開示される。

【0049】

また、本明細書において、本明細書に記載されるメソテリン結合タンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む１つ以上の組換え発現ベクター、並びに１つ以上の組換え発現ベクターを含む宿主細胞が開示される。

【0050】

また、本明細書において、本明細書に記載されるメソテリンに特異的に結合するシングルドメイン抗体を含む合成免疫受容体、並びに合成免疫受容体を含む細胞が開示される。

【0051】

また、本明細書において、本明細書に記載されるメソテリンに特異的に結合するシングルドメイン抗体を含む抗体－薬物複合体が開示される。いくつかの実施形態では、抗体－薬物複合体は、例えば、メソテリンの発現と関連する疾患、例えば、増殖性疾患又は癌などの検出又は監視などの診断的用途で使用するためのものである。

【0052】

また、本明細書において、メソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、又は抗メソテリン抗体若しくはその断片と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物が開示される。

【0053】

また、本明細書において、メソテリンの発現と関連している疾患の治療を必要とする対象において治療を行う方法であって、対象に、治療有効量の、少なくとも１つの本明細書に記載されるメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、若しくは抗体断片を投与することを含む、方法が開示される。いくつかの実施形態では、メソテリンの発現と関連している疾患は、増殖性疾患及び癌から選択される。いくつかの実施形態では、癌は、中皮腫、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、及びトリプルネガティブ乳癌から選択される。

【0054】

また、本明細書において、メソテリンの発現と関連している疾患の治療で使用するための、本明細書に記載されるメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、若しくは抗体断片が開示される。いくつかの実施形態では、メソテリンの発現と関連している疾患は、増殖性疾患及び癌から選択される。いくつかの実施形態では、癌は、中皮腫、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、及びトリプルネガティブ乳癌から選択される。

【0055】

また、本明細書において、メソテリンの発現と関連している疾患の治療のための医薬品の製造における、本明細書に記載されるメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、若しくは抗体断片の使用が開示される。いくつかの実施形態では、メソテリンの発現と関連している疾患は、増殖性疾患及び癌から選択される。いくつかの実施形態では、癌は、中皮腫、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、及びトリプルネガティブ乳癌から選択される。

【図面の簡単な説明】

【0056】

【図1A】本開示の例示的なシングルドメイン抗体についての代表的なＣＨＯ細胞結合用量曲線を示し、ここでは、ＣＨＯ細胞はヒトＭＳＬＮを発現する。

【図1B】本開示の例示的なシングルドメイン抗体についての代表的なＨｅＬａ細胞結合用量曲線を示す。

【図1C】本開示の例示的なシングルドメイン抗体についての代表的なＣＨＯ細胞結合用量曲線を示し、ここでは、ＣＨＯ細胞はＭＳＬＮタンパク質を発現しない。図１Ａ～１Ｃにおいて、ＰＥの平均蛍光強度は、バックグラウンド（すなわち、二次検出抗体のみとインキュベートされた細胞）に対する倍数としてプロットされた。

【図2A】本明細書に記載の抗体配列を含む抗ＭＳＬＮ細胞外結合ドメインを含むＣＡＲ－Ｔ構造の概略図である。

【図2B】ＣＨＯ－ｈｕＭＳＬＮ（＊＊ｐ＝０．００７５）及びＨｅＬａ（＊＊ｐ＝０．００１５）を含む抗ＭＳＬＮ３９４５５６ＣＡＲでトランスフェクトしたＪｕｒｋａｔ細胞のＴ細胞活性を示す。

【発明を実施するための形態】

【0057】

定義：
いくつかの実施形態では、「約」は、測定可能な数値変数に関連して使用される場合、変数の示された値及び示された値の実験誤差内（例えば、平均の９５％信頼区間内）又は示された値の±１０％のいずれか大きい方である変数の全ての値を指す。いくつかの実施形態では、数値範囲は、範囲を定義する数（すなわち、端点）を含む。

【0058】

値の範囲が提供される場合、文脈が別途明確に指示しない限り、その範囲の上限と下限との間の下限の単位の１０分の１までの各介在値及びその記載された範囲内の任意の他の記載された値又は介在値は、本開示内に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限及び下限は、記載された範囲内で特に除外される制限に従い、独立して、同様に本開示内に包含されるより小さい範囲に含まれ得る。記載された範囲が限界の一方又は両方を含む場合、それらの含まれる限界のいずれか又は両方を除外する範囲も本開示に含まれる。

【0059】

本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」という用語は、特に別段の指示がない限り、「１つ以上」を意味する。更に、「１つ以上」及び「少なくとも１つ」は、本明細書では互換的に使用される。更に、文脈上異なる解釈を要する場合を除き、単数形の用語は、複数形を含み、複数形の用語は、単数形を含む。

【0060】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、一般的に、２つの軽鎖ポリペプチド（例えば、それぞれ約２５ｋＤａである軽鎖ポリペプチドなど）と、２つの重鎖ポリペプチド（例えば、それぞれ約５０～７０ｋＤａである重鎖ポリペプチドなど）とを含む四量体免疫グロブリンタンパク質を指す。「軽鎖」又は「免疫グロブリン軽鎖」という用語は、本明細書で使用される場合、アミノ末端からカルボキシル末端へと、単一の免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）及び単一の免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含むポリペプチドを指す。免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）は、ヒトカッパ（κ）定常ドメイン又はヒトラムダ（λ）定常ドメインであり得る。「重鎖」又は「免疫グロブリン重鎖」という用語は、アミノ末端からカルボキシル末端へと、単一の免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）、免疫グロブリンヒンジ領域、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン２（ＣＨ２）、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン３（ＣＨ３）、及び任意選択的に免疫グロブリン重鎖定常ドメイン４（ＣＨ４）を含むポリペプチドを指す。重鎖は、ミュー（μ）、デルタ（Δ）、ガンマ（γ）、アルファ（α）及びイプシロン（ε）として分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥと定義する。ＩｇＧクラス及びＩｇＡクラス抗体は、それぞれサブクラス、すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４並びにＩｇＡ１及びＩｇＡ２に更に分けられる。ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＤ抗体の重鎖は、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）を有し、ＩｇＭ及びＩｇＥ抗体の重鎖は、４つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４）を有する。免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、サブタイプを含む任意の免疫グロブリンアイソタイプ由来であり得る。抗体鎖は、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間（即ち軽鎖と重鎖との間）及び２つの抗体重鎖のヒンジ領域間で、ポリペプチド間ジスルフィド結合を介して、互いに連結されている。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒト抗体又はヒト化抗体であり、ＩｇＧ１型、ＩｇＧ２型、ＩｇＧ３型、又はＩｇＧ４型のものであり得る。

【0061】

免疫グロブリン鎖の可変領域は、一般に、３つの超可変領域（「相補性決定領域」又はＣＤＲと呼ばれることの方が多い）によって接合された比較的保存されているフレームワーク領域（ＦＲ）を含む同一の全体構造を示す。それぞれの重鎖／軽鎖対の２本の鎖に由来するＣＤＲは、典型的には、フレームワーク領域によって整列されることで、標的タンパク質（例えば、ＭＳＬＮ又はＣＤ３）の特定のエピトープに特異的に結合する構造を形成する。Ｎ末端からＣ末端に、天然に存在する軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の両方は、典型的には、以下のこれらの要素の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４。これらのドメインのそれぞれにおいて位置を占めるアミノ酸に番号を割り当てるための付番方式が考案されている。このナンバリングシステムは、ＫａｂａｔＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ（１９８７ａｎｄ１９９１，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）、又はＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａｅｔａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７８－８８３において定義されている。所与の抗体のＣＤＲ及びＦＲが、この方式を使用して同定され得る。免疫グロブリン鎖のアミノ酸に関する他の付番方式としては、ＩＭＧＴ（登録商標）（ｔｈｅｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ；Ｌｅｆｒａｎｃｅｔａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：１８５－２０３；２００５）、及びＡＨｏ（ＨｏｎｅｇｇｅｒａｎｄＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０９（３）：６５７－６７０；２００１）が挙げられる。本開示のいくつかの実施形態では、「ＣＤＲ」は、Ｌｅｆｒａｎｃ，ＭＰｅｔａｌ．，ＩＭＧＴ，ｔｈｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓｄａｔａｂａｓｅ，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．，２７：２０９－２１２（１９９９）において定義されているような抗体の相補性決定領域を意味する。

【0062】

「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されるような超可変領域／ＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

【0063】

本明細書の抗体残基は、Ｋａｂａｔナンバリングシステム及びＥＵナンバリングシステムに従ってナンバリングされている。Ｋａｂａｔナンバリングシステムは、一般に、可変ドメインの残基（重鎖のおよそ１～１１３の残基）を指す場合に使用される（例えば、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）による）。「ＥＵナンバリングシステム」又は「ＥＵインデックス」は、一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域の残基を指す場合に使用される（例えば、Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，前出、において報告されるＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ＥＵ抗体の残基の番号付けを指す。本明細書において別段の記載がない限り、抗体の可変ドメイン中の残基番号への言及は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムによる残基番号付けを意味する。本明細書において別段の記載がない限り、抗体、シングルドメイン抗体、抗体断片などの定常ドメインの残基番号への言及は、ＥＵナンバリングシステムによる残基のナンバリングを意味する。

【0064】

本明細書で使用される場合、「抗メソテリン抗体」は、メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合する抗体である。

【0065】

本明細書中で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、即ち、集団を構成する個々の抗体は、わずかに存在し得る可能性のある天然に存在する変異を除いて同一である。典型的には、異なる決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体は、一般的に、抗原上の単一の決定基を対象とする。非限定的な例として、本開示によるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒｅｔａｌ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５により最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得、組換えタンパク質作製法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照されたい）によっても作製され得る。

【0066】

「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことを意図される。本開示のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位特異的突然変異誘発により導入される突然変異又はインビボでの体細胞突然変異により導入される突然変異）を含み得る。しかしながら、「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフトされている抗体を含むことを意図しない。

【0067】

本明細書で使用される場合、「抗体断片」は、一般的に、例えば、ＶＨ、ＶＨＨ、ＶＬ、（ｓ）ｄＡｂ、Ｆｖ、軽鎖（ＶＬ－ＣＬ）、Ｆｄ（ＶＨ－ＣＨ１）、重鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２又は「ｒＩｇＧ」（重鎖及び軽鎖からなる「半抗体」）などの完全長抗体の断片、又は完全長抗体の修飾された断片、例えば、三鎖抗体様分子、重鎖のみ抗体、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ｄｉ－ｓｃＦｖ若しくはｂｉ（ｓ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ｓｃＦｖ－ジッパー、単鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）、Ｆａｂ_２、Ｆａｂ_３、ダイアボディ、単鎖ダイアボディ、タンデムダイアボディ（Ｔａｎｄａｂｓ）、タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖ、以下：（ＶＨ－ＶＬ－ＣＨ３）_２、（ｓｃＦｖ－ＣＨ３）_２、（（ｓｃＦｖ）_２－ＣＨ３＋ＣＨ３）、（（ｓｃＦｖ）_２－ＣＨ３）又は（ｓｃＦｖ－ＣＨ３－ｓｃＦｖ）_２の通りの構造により例示される「ミニボディ」、マルチボディ（例えば、トリアボディ又はテトラボディ）及び単一ドメイン抗体（例えば、他の可変領域又はドメインと無関係に抗原又は標的に特異的に結合する、ＶＨＨ、ＶＨ又はＶＬであり得る１つの可変領域のみを含むナノボディ又は単一可変ドメイン抗体）を指す。

【0068】

本明細書で使用される場合、「重鎖のみ抗体」という用語は、２つの重鎖ポリペプチド（例えば、それぞれ約５０～７０ｋＤａである重鎖ポリペプチドなど）からなる二量体免疫グロブリンタンパク質を指す。「重鎖のみ抗体」は、従来の抗体で見出される２つの軽鎖ポリペプチドを欠如する抗体断片である。いくつかの実施形態では、「重鎖のみ抗体」は、ＣＨ１ドメインの非存在下で、ＶＨ抗原結合ドメインとＣＨ２及びＣＨ３定常ドメインとを含むホモ二量体抗体である。いくつかの実施形態では、重鎖のみ抗体は、フレームワーク１、ＣＤＲ１、フレームワーク２、ＣＤＲ２、フレームワーク３、ＣＤＲ３及びフレームワーク４から構成される可変領域抗原結合ドメインから構成される。いくつかの実施形態では、重鎖のみ抗体は、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域の少なくとも一部及びＣＨ２及びＣＨ３ドメインから構成される。いくつかの実施形態では、重鎖のみ抗体は、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域の少なくとも一部及びＣＨ２ドメインから構成される。いくつかの実施形態では、重鎖のみ抗体は、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域の少なくとも一部及びＣＨ３ドメインから構成される。ＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインがトランケートされている重鎖のみ抗体も本明細書中に含まれる。本明細書に記載の重鎖のみ抗体は、ＩｇＧサブクラスに属し得るが、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥサブクラスなどの他のサブクラスに属する重鎖のみ抗体も本明細書中に含まれる。いくつかの実施形態では、重鎖のみ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４サブタイプ、例えばＩｇＧ１又はＩｇＧ４サブタイプに属し得る。いくつかの実施形態では、重鎖のみ抗体は、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４サブタイプのものであり、ＣＨドメインの１つ以上が抗体のエフェクター機能を変化させるように修飾される。いくつかの実施形態では、重鎖のみ抗体は、ＩｇＧ４サブタイプのものであり、ＣＨドメインの１つ以上が抗体のエフェクター機能を変化させるように修飾される。いくつかの実施形態では、重鎖のみ抗体は、ＩｇＧ１サブタイプのものであり、ＣＨドメインの１つ以上が抗体のエフェクター機能を変化させるように修飾される。エフェクター機能を変化させるＣＨドメインの修飾は、本明細書中で更に記載される。重鎖のみ抗体の非限定的な例は、例えば、国際公開第２０１８／０３９１８０号パンフレットに記載されており、その開示は、その全体が参照により本明細書中に組み込まれる。

【0069】

本明細書で使用される場合、「シングルドメイン抗体」は、抗体の重鎖可変ドメインの全て若しくは一部、又は軽鎖可変ドメインの全て若しくは一部を含有する一本鎖ポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ヒトシングルドメイン抗体である。

【0070】

本明細書で使用される場合、「三鎖抗体様分子」又は「ＴＣＡ」という用語は、３つのポリペプチドサブユニットを含むか、本質的にそれらからなるか又はそれらからなり、そのうちの２つが、モノクローナル抗体の１本の重鎖及び１本の軽鎖又は抗原結合領域及び少なくとも１つのＣＨドメインを含むそのような抗体鎖の抗原結合断片を含むか、本質的にそれらからなるか又はそれらからなる抗体様分子を指す。この重鎖／軽鎖対は、第１の抗原に対する結合特異性を有する。第３のポリペプチドサブユニットは、ＣＨ１ドメインの非存在下でＣＨ２、及び／又はＣＨ３、及び／又はＣＨ４ドメインを含むＦｃ部分と、第２の抗原のエピトープ又は第１の抗原の異なるエピトープに結合する１つ以上の抗原結合ドメイン（例えば、２つの抗原結合ドメインなど）とを含み、そのような結合ドメインが抗体重鎖又は軽鎖の可変領域に由来するか又はそれと配列同一性を有する重鎖抗体を、含むか、本質的にそれからなるか又はそれからなる。そのような可変領域の一部は、Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌ遺伝子セグメント、Ｄ及びＪ_Ｈ遺伝子セグメント又はＪ_Ｌ遺伝子セグメントによってコードされ得る。可変領域は、再編成されたＶ_ＨＤＪ_Ｈ、Ｖ_ＬＤＪ_Ｈ、Ｖ_ＨＪ_Ｌ又はＶ_ＬＪ_Ｌ遺伝子セグメントによってコードされ得る。

【0071】

本明細書で使用される場合、「抗原結合断片」は、完全長の重鎖及び／又は軽鎖に存在するアミノ酸の少なくとも一部を欠くが、それでもなお抗原に特異的に結合し得る、抗体の一部のことである。抗原結合断片としては、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノボディ（例えば、ラクダ重鎖抗体のＶＨドメイン；ＶＨＨ断片、Ｃｏｒｔｅｚ－Ｒｅｔａｍｏｚｏｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｖｏｌ．６４：２８５３－５７，２００４を参照されたい）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｖ断片、Ｆｄ断片及びＣＤＲ断片が挙げられるが、これらに限定されず、ヒト、マウス、ラット、ウサギ又はラクダなどの任意の哺乳動物供給源に由来し得る。

【0072】

抗体をパパインで消化すると、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片（その各々が単一の抗原結合部位を有する）と、残部の「Ｆｃ」断片（免疫グロブリン重鎖定常領域の第１のドメイン以外の全てを含有する）が生成される。Ｆａｂ断片は、軽鎖及び重鎖由来の可変ドメイン並びに軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。このように、「Ｆａｂ断片」は、１つの免疫グロブリン軽鎖（軽鎖可変領域（ＶＬ）及び定常領域（ＣＬ））と１つの免疫グロブリン重鎖のＣＨ１領域及び可変領域（ＶＨ）とから構成される。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。「Ｆｄ断片」は、免疫グロブリン重鎖由来のＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインを含む。Ｆｄ断片は、Ｆａｂ断片の重鎖成分を表す。

【0073】

免疫グロブリンの「Ｆｃ断片」又は「Ｆｃ領域」は、一般に、２つの定常ドメイン、すなわちＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含み、任意選択によりＣＨ４ドメインを含む。本開示のいくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質（例えば、抗メソテリン抗体断片（例えば、ＴＣＡ又は重鎖のみ抗体など）など）は、免疫グロブリンに由来するＦｃ領域を含む。Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４免疫グロブリン由来のＦｃ領域であり得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ２免疫グロブリン由来のＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。Ｆｃ領域は、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び貪食などのエフェクター機能を保持し得る。他の実施形態では、Ｆｃ領域は、エフェクター機能を低減又は排除するように修飾され得る。

【0074】

「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を有する。エフェクター機能の非限定的な例としては、Ｃ１ｑ結合、ＣＤＣ；Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御などが挙げられる。そのようなエフェクター機能は、一般に、受容体、例えばＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ１、ＦｃγＲＩＩＢ２、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢ受容体、及び低親和性ＦｃＲｎ受容体などの受容体と相互作用するＦｃ領域を必要とし、当技術分野において知られる様々なアッセイを使用して評価することができる。

【0075】

「死滅した」又は「サイレンシングされた」Ｆｃは、例えば、血清半減期の延長に関して活性を保持するように突然変異されているが、高親和性Ｆｃ受容体を活性化しないか、又はＦｃ受容体に対する親和性が低下しているものである。

【0076】

「ネイティブ配列Ｆｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。ネイティブ配列ヒトＦｃ領域としては、例えば、天然配列ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）、ネイティブ配列ヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域、ネイティブ配列ヒトＩｇＧ３Ｆｃ領域及びネイティブ配列ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域並びにそれらの天然のバリアントが挙げられる。

【0077】

「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸の修飾、例えば１つ以上（例えば、２つ以上、３つ以上、４つ以上）のアミノ酸の置換により、ネイティブ配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列を含む。例示的には、いくつかの実施形態において、バリアントＦｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば約１～約１０個のアミノ酸置換、例えば天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域における約１～約５個のアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、例えば、それと少なくとも約８５％の相同性、例えば、それと少なくとも約９０％の相同性、例えば、それと少なくとも約９５％の相同性、例えば、それと少なくとも約９９％の相同性を有する。

【0078】

本明細書で使用される場合、「ヘテロ二量体化変化」は、ヘテロ二量体Ｆｃ領域、即ちＦｃ領域のＡ鎖及びＢ鎖が同一のアミノ酸配列を有さないＦｃ領域の形成を促進する、Ｆｃ領域のＡ鎖及びＢ鎖（即ちＦｃ領域を含む２つの鎖、ここで、一方の鎖は、本明細書では「Ａ」鎖と呼ばれ、他方は「Ｂ」鎖と呼ばれる）の変化を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体化変化は非対称であり得、即ち、特定の変化を有するＡ鎖は、異なる変化を有するＢ鎖と対形成し得る。これらの変化はヘテロ二量体化を促進し、ホモ二量体化を不利にする。ヘテロ－又はホモ－二量体が形成されたかどうかは、例えば、一方のポリエチレン鎖がダミーＦｃで他方がｓｃＦｖ－Ｆｃである状況においてポリアクリルアミドゲル電気泳動によって決定してサイズ差によって評価することができる。そのような対形成したヘテロ二量体化変化の１つの非限定的な例は、いわゆる「ノブ及びホール」置換である。例えば、米国特許第７，６９５，９３６号明細書及び米国特許出願公開第２００３／００７８３８５号明細書を参照されたい。本明細書で使用される場合、１対のノブ及びホール置換を含むＦｃ領域は、Ａ鎖中に１つの置換を含み、Ｂ鎖中に別の置換を含む。例えば、ＩｇＧ１Ｆｃ領域のＡ及びＢ鎖における以下のノブ及びホール置換が、未修飾のＡ及びＢ鎖で見出されるものと比較して、ヘテロ二量体形成を増加させることが見出されており、本開示の非限定的な実施形態において、採用され得る：１）一方の鎖におけるＹ４０７Ｔ及び他方の鎖におけるＴ３６６Ｙ；２）一方の鎖におけるＹ４０７Ａ及び他方の鎖におけるＴ３６６Ｗ；３）一方の鎖におけるＦ４０５Ａ及び他方の鎖におけるＴ３９４Ｗ；４）一方の鎖におけるＦ４０５Ｗ及び他方の鎖におけるＴ３９４Ｓ；５）一方の鎖におけるＹ４０７Ｔ及び他方の鎖におけるＴ３６６Ｙ；６）一方の鎖におけるＴ３６６ＹとＦ４０５Ａ及び他方の鎖におけるＴ３９４ＷとＹ４０７Ｔ；７）一方の鎖におけるＴ３６６ＷとＦ４０５Ｗ及び他方の鎖におけるＴ３９４ＳとＹ４０７Ａ；８）一方の鎖におけるＦ４０５ＷとＹ４０７Ａ及び他方の鎖におけるＴ３６６ＷとＴ３９４Ｓ；及び９）Ｆｃの一方のポリペプチドにおけるＴ３６６Ｗ及び他方のポリペプチドにおけるＴ３６６ＳとＬ３６８ＡとＹ４０７Ｖ。そのような変化の代わりに又はそれに加えて、新たなジスルフィド架橋を作り出す置換は、ヘテロ二量体形成を促進することができる。例えば、米国特許出願公開第２００３／００７８３８５号明細書を参照されたい。ＩｇＧ１Ｆｃ領域におけるそのような変化としては、限定されないが、以下の置換が挙げられる：一方のＦｃポリペプチド鎖におけるＹ３４９Ｃ及び他方のＦｃポリペプチド鎖におけるＳ３５４Ｃ；一方のＦｃポリペプチド鎖におけるＹ３４９Ｃ及び他方のＦｃポリペプチド鎖におけるＥ３５６Ｃ；一方のＦｃポリペプチド鎖におけるＹ３４９Ｃ及び他方のＦｃポリペプチド鎖におけるＥ３５７Ｃ；一方のＦｃポリペプチド鎖におけるＬ３５１Ｃ及び他方のＦｃポリペプチド鎖におけるＳ３５４Ｃ；一方のＦｃポリペプチド鎖におけるＴ３９４Ｃ及び他方のＦｃポリペプチド鎖におけるＥ３９７Ｃ；又は一方のＦｃポリペプチド鎖におけるＤ３９９Ｃ及び他方のＦｃポリペプチド鎖におけるＫ３９２Ｃ。追加的又は代替的に、例えば、ＣＨ３－ＣＨ３界面における１つ以上の残基の電荷を変化させる置換は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００９／０８９００４号パンフレットに記載されるように、ヘテロ二量体形成を増強することができる。そのような置換は本明細書では「電荷対置換」と呼ばれ、電荷対置換の１つの対を含むＦｃ領域は、Ａ鎖における１つの置換及びＢ鎖における異なる置換を含む。電荷対置換の非限定的な例としては、以下が挙げられる：１）一方の鎖におけるＫ４０９Ｄ又はＫ４０９Ｅプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｋ又はＤ３９９Ｒ；２）一方の鎖におけるＫ３９２Ｄ又はＫ３９２Ｅプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｋ又はＤ３９９Ｒ；３）一方の鎖におけるＫ４３９Ｄ又はＫ４３９Ｅプラス他方の鎖におけるＥ３５６Ｋ又はＥ３５６Ｒ；及び４）一方の鎖におけるＫ３７０Ｄ又はＫ３７０Ｅプラス他方の鎖におけるＥ３５７Ｋ又はＥ３５７Ｒ。更に、両方の鎖における置換Ｒ３５５Ｄ、Ｒ３５５Ｅ、Ｋ３６０Ｄ又はＫ３６０Ｒは、他のヘテロ二量体化変化と共に使用される場合、ヘテロ二量体を安定化することができる。特定の電荷対置換は、単独で又は他の電荷対置換と共に使用することができる。電荷対置換の単一の対及びそれらの組み合わせの特定の例としては、以下が挙げられる：１）一方の鎖におけるＫ４０９Ｅプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｋ；２）一方の鎖におけるＫ４０９Ｅプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｒ；３）一方の鎖におけるＫ４０９Ｄプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｋ；４）一方の鎖におけるＫ４０９Ｄプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｒ；５）一方の鎖におけるＫ３９２Ｅプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｒ；６）一方の鎖におけるＫ３９２Ｅプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｋ；７）一方の鎖におけるＫ３９２Ｄプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｒ；８）一方の鎖におけるＫ３９２Ｄプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｋ；９）一方の鎖におけるＫ４０９ＤとＫ３６０Ｄプラス他方の鎖におけるＤ３９９ＫとＥ３５６Ｋ；１０）一方の鎖におけるＫ４０９ＤとＫ３７０Ｄプラス他方の鎖におけるＤ３９９ＫとＥ３５７Ｋ；１１）一方の鎖におけるＫ４０９ＤとＫ３９２Ｄプラス他方の鎖におけるＤ３９９ＫとＥ３５６ＫとＥ３５７Ｋ；１２）一方の鎖でのＫ４０９ＤとＫ３９２Ｄ及び他方の鎖でのＤ３９９Ｋ；１３）一方の鎖でのＫ４０９ＤとＫ３９２Ｄプラス他方の鎖でのＤ３９９ＫとＥ３５６Ｋ；１４）一方の鎖でのＫ４０９ＤとＫ３９２Ｄプラス他方の鎖でのＤ３９９ＫとＤ３５７Ｋ；１５）一方の鎖でのＫ４０９ＤとＫ３７０Ｄプラス他方の鎖でのＤ３９９ＫとＤ３５７Ｋ；１６）一方の鎖でのＤ３９９Ｋプラス他方の鎖でのＫ４０９ＤとＫ３６０Ｄ；又は１７）一方の鎖でのＫ４０９ＤとＫ４３９Ｄプラス他方の鎖でのＤ３９９ＫとＥ３５６Ｋ。これらのヘテロ二量体化変化のいずれも、本明細書に記載のバリアントＦｃ領域を含むポリペプチドにおいて使用することができる。

【0079】

いくつかの非限定的な実施形態では、バリアントＦｃ配列は、ＥＵインデックス位置２３４、２３５及び２３７でＦｃγＲＩ結合を低減するためにＣＨ２領域に３つのアミノ酸置換を含み得る（Ｄｕｎｃａｎｅｔａｌ．，（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ３３２：５６３を参照）。ＥＵインデックス位置３３０及び３３１における補体Ｃ１ｑ結合部位における２つのアミノ酸置換は、補体結合を減少させる（Ｔａｏｅｔａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８：６６１（１９９３）及びＣａｎｆｉｅｌｄａｎｄＭｏｒｒｉｓｏｎ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１４８３（１９９１）を参照されたい）。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ２残基の２３３～２３６位での置換並びにＩｇＧ４残基の３２７、３３０及び３３１位での置換は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを大幅に低下させる（例えば、ＡｒｍｏｕｒＫＬ．ｅｔａｌ．，１９９９ＥｕｒＪＩｍｍｕｎｏｌ．２９（８）：２６１３－２４；及びＳｈｉｅｌｄｓＲ．Ｌ．ｅｔａｌ．，２００１．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．２７６（９）：６５９１－６０４を参照されたい）。ヒトＩｇＧ４のＦｃアミノ酸配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ番号Ｐ０１８６１）は、本明細書では配列番号７６として示される。サイレンシングされたＩｇＧ１は、例えば、Ｂｏｅｓｃｈ，Ａ．Ｗ．，ｅｔａｌ．，“ＨｉｇｈｌｙｐａｒａｌｌｅｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＩｇＧＦｃｂｉｎｄｉｎｇｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．”ＭＡｂｓ，２０１４．６（４）：ｐ．９１５－２７に記載されており、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0080】

ジスルフィド結合を形成することが可能な領域が欠失されているか、又は特定のアミノ酸残基がネイティブＦｃのＮ末端で除去されているか、又はメチオニン残基が付加されているものを含むが、限定されない、他のＦｃバリアントが可能である。従って、いくつかの実施形態では、抗体の１つ又は複数のＦｃ部分は、ジスルフィド結合を排除するために、ヒンジ領域に１つ又は複数の変異を含み得る。また別の実施形態では、Ｆｃのヒンジ領域を完全に除去し得る。更に別の実施形態では、抗体は、Ｆｃバリアントを含み得る。

【0081】

更に、Ｆｃバリアントは、補体結合又はＦｃ受容体結合をもたらすためにアミノ酸残基を置換（突然変異）、欠失又は付加することにより、エフェクター機能を除去するか又は実質的に低下させるように構築され得る。例えば、限定ではなく、欠失は、Ｃ１ｑ結合部位などの補体結合部位において生じ得る。免疫グロブリンＦｃ断片のこのような配列誘導体を調製するための技術は、国際公開第９７／３４６３１号パンフレット及び国際公開第９６／３２４７８号パンフレットで開示されている。更に、Ｆｃドメインは、リン酸化、硫酸化、アシル化、グリコシル化、メチル化、ファルネシル化、アセチル化、アミド化などによって修飾され得る。

【0082】

低下したエフェクター機能を有する抗体及び抗体断片には、ＥＵナンバリングによるＦｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９の１つ以上の置換を有するものが含まれるが、これらに限定されない（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号明細書を参照されたい）。いくつかの実施形態では、低下したエフェクター機能を有するバリアントＦｃ領域は、ＥＵナンバリングによるアミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７の２つ以上での置換を含み、これにはＥＵ番号によるアラニンへの残基２６５及び２９７の置換（即ちＥＵナンバリングによるＤ２６５Ａ及びＮ２９７Ａ）を伴う、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃバリアントが含まれる（例えば、米国特許第７，３３２，５８１号明細書を参照されたい）。いくつかの実施形態では、低下したエフェクター機能を有するバリアントＦｃ領域は、以下の２つのアミノ酸置換：Ｄ２６５Ａ及びＮ２９７Ａを含む。

【0083】

いくつかの実施形態では、エフェクター機能は、グリコシル化を排除する定常領域における突然変異、例えば「エフェクターレス突然変異」によって低下される。いくつかの実施形態では、エフェクターレス突然変異は、ＣＨ２領域におけるＮ２９７Ａ又はＤＡＮＡ突然変異（Ｄ２６５Ａ＋Ｎ２９７Ａ）である。Ｓｈｉｅｌｄｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（９）：６５９１－６６０４（２００１）。いくつかの実施形態では、エフェクターレス突然変異は、ＣＨ２領域におけるＮ２９７Ｇ又はＤＡＮＧ突然変異（Ｄ２６５Ａ＋Ｎ２９７Ｇ）である。いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ領域は、Ｎ２９７でグリコシル化を欠いており、例えば、バリアントＦｃ領域は、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１５３０６３号パンフレットに記載されているように、Ｎ２９７でグリコシル化を欠いているバリアントＦｃ領域である。或いは、低下された又は除去されたエフェクター機能をもたらす追加の突然変異としては、Ｋ３２２Ａ及びＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）が挙げられる。或いは、エフェクター機能は、生産技術、例えばグリコシル化しない宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））における発現又はエフェクター機能を促進するのに効果がないか又はあまり効果的でない変化したグリコシル化パターンをもたらす宿主細胞における発現を介して低下又は排除することができる（例えば、Ｓｈｉｎｋａｗａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（５）：３４６６－３４７３（２００３））。

【0084】

いくつかの実施形態では、野生型ヒトＦｃ領域の位置３２９（ＥＵナンバリング）のプロリン（Ｐ３２９）は、グリシン又はアルギニン又はＦｃのＰ３２９とＦｃｇＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｗ８７及びＷ１１０との間に形成されるＦｃ／Ｆｃγ受容体界面内のプロリンサンドイッチを破壊するのに十分な大きさのアミノ酸残基で置換される（Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ４０６，２６７－２７３（２０Ｊｕｌ．２０００））。いくつかのさらなる実施形態では、Ｆｃバリアント領域における少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ又はＰ３３１Ｓである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのさらなるアミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ又はヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅであり、全てＥＵナンバリングによる（例えば、その全体が参照により組み込まれる米国特許第８，９６９，５２６号明細書を参照されたい）。

【0085】

いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ領域は、グリシンで置換されたヒトＩｇＧＦｃ領域のＰ３２９を有し、バリアントＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域のＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ又はヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域のＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅにおいて少なくとも２つのさらなるアミノ酸置換を含み、残基は、ＥＵナンバリングに従って番号付けされる（例えば、米国特許第８，９６９，５２６号明細書を参照されたい）。いくつかの実施形態では、Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＥＵナンバリング）置換を含むバリアントＦｃ領域は、ヒトＦｃγＲＩＩＩＡ及びＦｃγＲＩＩＡに対する低減された親和性を示す。

【0086】

いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ領域は、三重突然変異：ＥＵナンバリングによる位置Ｐ３２９、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａにおけるアミノ酸置換（Ｐ３２９／ＬＡＬＡ）を含む（例えば、米国特許第８，９６９，５２６号明細書を参照されたい）。いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ領域は、以下のアミノ酸置換：ＥＵナンバリングによるＰ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａを含む。

【0087】

いくつかの実施形態では、抗体又は抗体断片は、Ｔ３６６Ｗ突然変異を含むバリアントヒトＩｇＧ４ＣＨ３ドメイン配列を含み、これは、本明細書中では、任意選択的にＩｇＧ４ＣＨ３ノブ配列と呼ばれ得る。いくつかの実施形態では、抗体又は抗体断片は、Ｔ３６６Ｓ突然変異、Ｌ３６８Ａ突然変異及びＹ４０７Ｖ突然変異を含むバリアントヒトＩｇＧ４ＣＨ３ドメイン配列を含み、これは、本明細書中では、任意選択的にＩｇＧ４ＣＨ３ホール配列と呼ばれ得る。本明細書中に記載のＩｇＧ４ＣＨ３変異は、抗体二量体中の第１の単量体の第１の重鎖定常領域に「ノブ」を置き、抗体二量体中の第２の単量体の第２の重鎖定常領域に「ホール」を置き、それによって抗体中の重鎖ポリペプチドサブユニットの所望の対の適切な対合（ヘテロ二量体化）を促進するために、いずれかの好適な方法で利用され得る。

【0088】

いくつかの実施形態では、抗体又は抗体断片は、Ｓ２２８Ｐ突然変異、Ｆ２３４Ａ突然変異、Ｌ２３５Ａ突然変異及びＴ３６６Ｗ突然変異（ノブ）を含むバリアントヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域を含む重鎖ポリペプチドサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗体断片は、Ｓ２２８Ｐ突然変異、Ｆ２３４Ａ突然変異、Ｌ２３５Ａ突然変異、Ｔ３６６Ｓ突然変異、Ｌ３６８Ａ突然変異及びＹ４０７Ｖ突然変異（ホール）を含むバリアントヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域を含む重鎖ポリペプチドサブユニットを含む。

【0089】

「Ｆａｂ’断片」は、ＣＨ１ドメインのＣ末端において、抗体ヒンジ領域に由来する１つ以上のシステイン残基を有するＦａｂ断片である。

【0090】

「Ｆ（ａｂ’）_２断片」は、ヒンジ領域において重鎖間のジスルフィド架橋によって連結されている２つのＦａｂ’断片を含む二価の断片である。

【0091】

「Ｆｖ」断片は、抗体由来の完全な抗原認識部位及び結合部位を含有する最小の断片である。この断片は、緊密な非共有結合状態にある、１つの免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）と１つの免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）との二量体からなる。この構成において、各可変領域の３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上で抗原結合部位が画定される。単一の軽鎖又は重鎖の可変領域（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖ断片の半分）は、ＶＨ及びＶＬの両方を含む結合部位全体よりも親和性が低いが、抗原を認識してこれに結合する能力を有する。

【0092】

「単鎖可変抗体断片」又は「ｓｃＦｖ断片」は、抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、これらの領域は、単一のポリペプチド鎖に存在し、任意選択により、Ｆｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするペプチドリンカーをＶＨ領域とＶＬ領域との間に含む（例えば、Ｂｉｒｄｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２４２：４２３－４２６，１９８８；及びＨｕｓｔｏｎｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，Ｖｏｌ．８５：５８７９－５８８３，１９８８を参照されたい）。

【0093】

「ナノボディ」は、重鎖抗体の重鎖可変領域である。そのような可変ドメインは、そのような重鎖抗体の完全に機能的な最小の抗原結合断片であり、分子質量は、わずか１５ｋＤａである。Ｃｏｒｔｅｚ－Ｒｅｔａｍｏｚｏｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ６４：２８５３－５７，２００４を参照されたい。軽鎖を欠く機能的重鎖抗体は、特定の種の動物、例えばコモリザメ、テンジクザメ並びにラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）、例えばラクダ、ヒトコブラクダ、アルパカ及びラマでは天然に生じる。これらの動物において、抗原結合部位は、単一ドメインであるＶＨＨドメインに縮小されている。これらの抗体は、重鎖可変領域のみを使用して抗原結合領域を形成し、即ち、これらの機能的抗体は、構造Ｈ_２Ｌ_２を有するのみの重鎖のホモ二量体（「重鎖抗体」又は「ＨＣＡｂｓ」と呼ぶ）である。ラクダ化ＶＨＨは、報告によれば、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含有し、ＣＨ１ドメインを欠くＩｇＧ２定常領域及びＩｇＧ３定常領域と再結合する。ラクダ化ＶＨＨドメインは、抗原に高親和性で結合し（Ｄｅｓｍｙｔｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７６：２６２８５－９０，２００１）、溶液で高い安定性を有する（Ｅｗｅｒｔｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．４１：３６２８－３６，２００２）ことが判明している。ラクダ化重鎖を有する抗体を生成する方法は、例えば、米国特許出願公開第２００５／０１３６０４９号明細書及び米国特許出願公開第２００５／００３７４２１号明細書に記載されている。別の足場は、サメＶ－ＮＡＲ足場とより密接に適合するヒト可変様ドメインから作製することができ、長い貫通性のループ構造のフレームワークを提供し得る。

【0094】

本明細書で使用される場合、「抗原結合タンパク質」という用語は、１つ以上の標的抗原に特異的に結合するタンパク質を指す。抗原結合タンパク質は、一般に、抗原に特異的に結合する抗原結合断片を含み、且つ任意選択的に、抗原結合断片が、抗原結合タンパク質の抗原への結合を促進するコンフォメーションをとることを可能にする骨格又はフレームワーク部分を含むタンパク質である。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は抗体又は抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、一本鎖ポリペプチドに、又は複数のポリペプチド鎖に組み込まれた１つ以上の抗原結合断片を含むタンパク質を含み得る。例えば、抗原結合タンパク質としては、ダイアボディ（例えば、欧州特許第４０４，０９７号明細書、国際公開第９３／１１１６１号パンフレット、及びＨｏＵｉｎｇｅｒｅｔａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，Ｖｏｌ．９０：６４４４－６４４８，１９９３参照）；イントラボディ；ドメイン抗体（単一のＶＬ若しくはＶＨドメイン、又はペプチドリンカーによって連結された２つ以上のＶＨドメイン；Ｗａｒｄｅｔａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．３４１：５４４－５４６，１９８９を参照されたい）；マキシボディ（Ｆｃ領域に融合した２つのｓｃＦｖ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋｓｅｔａｌ，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１７：９５－１０６，２００４及びＰｏｗｅｒｓｅｔａｌ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓ，Ｖｏｌ．２５１：１２３－１３５，２００１を参照されたい）；トリアボディ；テトラボディ；ミニボディ（ＣＨ３ドメインに融合したｓｃＦｖ；Ｏｌａｆｓｅｎｅｔａｌ，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇＤｅｓＳｅｌ．，Ｖｏｌ．１７：３１５－２３，２００４を参照されたい）；ペプチボディ（Ｆｃ領域に接続した１つ以上のペプチド、国際公開第００／２４７８２号パンフレットを参照されたい）；線形抗体（相補的軽鎖ポリペプチドと一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ－ＣＨｌ－ＶＨ－ＣＨｌ）、Ｚｚｊｐａｔｅ．ｅｔａｌ，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．，Ｖｏｌ．８：１０５７－１０６２，１９９５を参照されたい）；小モジュラー免疫薬（米国特許公開第２００３０１３３９３９号パンフレットを参照されたい）；並びに免疫グロブリン融合タンパク質（例えば、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ＩｇＧ－Ｆａｂ、２ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、４ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、ＶＨ－ＩｇＧ、ＩｇＧ－ＶＨ、及びＦａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ；例えば、Ｓｐｉｅｓｓｅｔａｌ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．６７（２ＰｔＡ）：９５－１０６，２０１５を参照されたい）を挙げることができるが、これらに限定されない。

【0095】

本明細書で使用される場合、「メソテリン結合タンパク質」は、メソテリンに特異的に結合する抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質はまた、メソテリン以外の１つ以上の標的抗原に結合してもよい。

【0096】

本開示の抗体及び抗体断片（例えば、重鎖のみ抗体及び三鎖抗体様分子など）は、２つ以上の結合特異性を有する抗体及び抗体断片である多重特異性抗体及び抗体断片を含む。本明細書で使用される場合、「多重特異性」という用語は、「二重特異性」（すなわち、２つの結合特異性）及び「三重特異性」（すなわち、３つの結合特異性）、並びに高次の独立した特異的結合親和性、例えば、高次のポリエピトープ特異性を含む。

【0097】

本明細書で使用される場合、「単離された」分子（例えば、抗体、抗体断片、シングルドメイン抗体、メソテリン結合タンパク質など）は、その天然環境の成分から同定且つ分離され、及び／又は回収された分子である。その天然環境の混入成分は、分子の診断的又は治療的使用を妨害し得る物質であり、例えば、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性又は非タンパク質性溶質であり得る。いくつかの実施形態では、単離された分子は、（１）ローリー法による決定で単離された分子が９５重量％を超えるまで、例えば、９９重量％を超えるまでなど、（２）スピニングカップ配列決定装置の使用によってＮ末端又は内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を十分に得られる程度まで、又は（３）クマシーブルー若しくは例えば、銀染色を用いて、還元条件下又は非還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって均質になるまで精製される。いくつかの実施形態では、単離された分子は、１つの精製工程を含むプロセスによって調製される。

【0098】

本明細書で使用される場合、「抗体－薬物複合体」は、別の部分、例えば、ペイロードなど、例えば、放射性核種などに結合される抗体又は抗体断片を指す。

【0099】

本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、単一の抗体又は抗体断片が結合する抗原分子の表面上の部位である。一般に、抗原は、数個又は多くの異なるエピトープを有し、多くの異なる抗体及び抗体断片と反応する。この用語には、具体的には、線状エピトープと立体構造エピトープとが含まれる。立体構造エピトープ及び非立体構造エピトープは、前者への結合が変性溶媒の存在下で喪失されるが、後者への結合は喪失されないという点で区別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基（エピトープの免疫優性成分とも呼ばれる）と、結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば、特異的な抗原結合ペプチドによって効果的にブロックされるアミノ酸残基など（言い換えれば、アミノ酸残基は、特異的な抗原結合ペプチドのフットプリント内にある）と、を含み得る。

【0100】

本明細書で使用される場合、「ポリエピトープ特異性」は、同じ又は異なる標的上の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する能力を指す。

【0101】

「対象」、「個体」及び「患者」という用語は、本明細書において交換可能に使用され、処置について評価され及び／又は処置されている哺乳動物を指す。対象はヒトであり得るが、他の哺乳動物、例えば、ヒトの疾患に対する実験室モデルとして有用な哺乳動物など、例えば、マウス、ラットなども含まれる。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。

【0102】

本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、患者における疾患の進行の遅延若しくは停止、対象の症状の数若しくは重症度の減少又は対象が疾患の症状を有さない持続期間の頻度若しくは長さの増加を含む、対象における疾患のあらゆる改善を包含する。

【0103】

本明細書中で使用される場合、「エフェクター細胞」という用語は、免疫応答の認識相及び活性化相とは対照的に、免疫応答のエフェクター相に関与する免疫細胞を指す。例示的免疫細胞としては、骨髄又はリンパ起源の細胞、例えば、リンパ球（例えば、Ｂ細胞及び細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を含むＴ細胞）、キラー細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、単球、好酸球、多形核細胞、例えば、好中球、顆粒球、肥満細胞及び好塩基球を含む。いくつかのエフェクター細胞は、特異的Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現して特異的免疫機能を果たす。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ナチュラルキラー細胞などのＡＤＣＣを誘導することができる。例えば、ＦｃＲを発現する単球、マクロファージは、標的細胞の特異的死滅及び免疫系の他の成分への抗原の提示又は抗原を提示する細胞への結合に関与する。

【0104】

本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、核酸分子において、この核酸分子が連結されている別の核酸の輸送が可能な核酸分子を指すことが意図される。ベクターの一種である「プラスミド」は、環状二本鎖ＤＮＡループを指し、追加のＤＮＡセグメントがこれに連結され得る。別のタイプのベクターはウイルスベクターであり、このウイルスベクターでは、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムに連結され得る。ある特定のベクターは、このベクターが導入された宿主細胞中での自律複製が可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクターなど）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクターなど）は、宿主細胞への導入時にこの宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それにより宿主のゲノムと一緒に複製される。更に、ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書においては、「組換え発現ベクター」と称する。いくつかの実施形態では、組換えＤＮＡ技術において使用するための発現ベクターは、プラスミドの形態である。

【0105】

本明細書で使用される場合、「宿主細胞」は、発現ベクターが導入されている細胞を指す。「宿主細胞」は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫も指す。ある特定の改変が変異又は環境的影響のいずれかに起因して後続世代において生じ得るため、そのような子孫は、事実上、親細胞と同一であり得ないが、依然として本明細書において使用される用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。例示的な組換え宿主細胞としては、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＮＳ／０細胞、及びリンパ球細胞などのトランスフェクトーマ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａｓ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0106】

「Ｋ_Ｄ」（Ｍ）という用語は、本明細書で使用される場合、ＯｃｔｅｔＱＫ３８４機器（ＦｏｒｔｅｂｉｏＩｎｃ．，ＭｅｎｌｏＰａｒｋ，ＣＡ）をキネティクスモードで使用して、バイオレイヤー干渉法によって決定される特定の抗原結合相互作用の解離平衡定数を指す。例えば、抗マウスＦｃセンサーにマウスＦｃ融合抗原を載せ、次いで、抗体含有ウェルに浸漬して、濃度依存性結合速度（ｋ_ｏｎ）を測定する。抗体解離速度（ｋ_ｏｆｆ）を最終段階で測定し、ここで、センサーを緩衝液のみを含有するウェルに浸漬する。Ｋ_Ｄは、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎの比である。（さらなる詳細については、Ｃｏｎｃｅｐｃｉｏｎ，Ｊ，ｅｔａｌ．，ＣｏｍｂＣｈｅｍＨｉｇｈＴｈｒｏｕｇｈｐｕｔＳｃｒｅｅｎ，１２（８），７９１－８００，２００９を参照されたい）。

【0107】

本明細書で使用される場合、分子（例えば、タンパク質、抗体、又は抗体断片など）は、類似の結合アッセイ条件下で、他の無関係なタンパク質に対する親和性と比較して、標的抗原に対してかなり高い結合親和性を有しており、その結果、標的抗原を識別することができる場合に、標的抗原に「特異的に結合する」。抗原に特異的に結合する分子は、≦１×１０^－６Ｍの平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）でその抗原に結合し得る。分子は、Ｋ_Ｄが≦１×１０^－８Ｍである場合、「高親和性」で抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の分子は、ヒトＭＳＬＮ及び／又はヒトＣＤ３に≦５×１０^－７ＭのＫ_Ｄで結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の分子は、ヒトＭＳＬＮ及び／又はヒトＣＤ３に≦１×１０^－７ＭのＫ_Ｄで結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の分子は、ヒトＭＳＬＮ及び／又はヒトＣＤ３に≦５×１０^－８ＭのＫ_Ｄで結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の分子は、ヒトＭＳＬＮ及び／又はヒトＣＤ３に≦２×１０^－８ＭのＫ_Ｄで結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の分子は、ヒトＭＳＬＮ及び／又はヒトＣＤ３に≦１×１０^－８ＭのＫ_Ｄで結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の分子は、ヒトＭＳＬＮ及び／又はヒトＣＤ３に≦１×１０^－９ＭのＫ_Ｄで結合する。

【0108】

親和性は、種々の技術を用いて判定されてもよく、その非限定的な例は、親和性ＥＬＩＳＡアッセイがある。いくつかの実施形態では、親和性は、表面プラズモン共鳴アッセイ（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）ベースのアッセイ）によって判定される。この方法論を用いて、結合速度定数（ｋ_ａ単位：Ｍ^－１ｓ^－１）及び解離速度定数（ｋ_ｄ単位：ｓ^－１）を測定することができる。次に、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ単位：Ｍ）は、運動速度定数の比（ｋ_ｄ／ｋ_ａ）から算出することができる。いくつかの実施形態では、親和性は、Ｒａｔｈａｎａｓｗａｍｉｅｔａｌ．，ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．３７３：５２－６０，２００８に記載されているような結合平衡除外法（ＫｉｎＥｘＡ）などの速度論的方法によって決定される。ＫｉｎＥｘＡアッセイを用いて、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ、Ｍ）及び結合速度定数（ｋ_ａ、Ｍ^－１ｓ^－１）を測定することができる。これらの値から、解離速度定数（ｋ_ｄ、ｓ^－１）を算出することができる（Ｋ_Ｄ×ｋ_ａ）。他の実施形態では、親和性は、Ｋｕｍａｒａｓｗａｍｙｅｔａｌ．，ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ．１２７８：１６５－８２，２０１５に記載され、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）システム（ＰａｌｌＦｏｒｔｅＢｉｏ）で用いられているようなバイオレイヤー干渉法により決定される。速度定数（ｋ_ａ及びｋ_ｄ）並びに親和性定数（Ｋ_Ｄ）は、バイオレイヤー干渉法を使用して実時間で算出することができる。

【0109】

本明細書で使用される場合、「［Ｙ］結合ＶＨＣＤＲ」は、ＶＨ領域のＣＤＲを指し、ここでは、ＶＨ領域は、標的［Ｙ］に特異的に結合する。

【0110】

本明細書で使用される場合、「アミノ酸」又は「アミノ酸残基」という用語は、アラニン（Ａｌａ又はＡ）；アルギニン（Ａｒｇ又はＲ）；アスパラギン（Ａｓｎ又はＮ）；アスパラギン酸（Ａｓｐ又はＤ）；システイン（Ｃｙｓ又はＣ）；グルタミン（Ｇｌｎ又はＱ）；グルタミン酸（Ｇｌｕ又はＥ）；グリシン（Ｇｌｙ又はＧ）；ヒスチジン（Ｈｉｓ又はＨ）；イソロイシン（Ｉｌｅ又はＩ）：ロイシン（Ｌｅｕ又はＬ）；リシン（Ｌｙｓ又はＫ）；メチオニン（Ｍｅｔ又はＭ）；フェニルアラニン（Ｐｈｅ又はＦ）；プロリン（Ｐｒｏ又はＰ）；セリン（Ｓｅｒ又はＳ）；スレオニン（Ｔｈｒ又はＴ）；トリプトファン（Ｔｒｐ又はＷ）；チロシン（Ｔｙｒ又はＹ）；及びバリン（Ｖａｌ又はＶ）からなる群から選択されるアミノ酸などの当該技術分野で認められる定義を有するアミノ酸を指すが、修飾、合成、又は希少アミノ酸が必要に応じて使用されてもよい。一般に、アミノ酸は、非極性側鎖（例えば、Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ）；負電荷側鎖（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）；正電荷側鎖（例えば、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ）；又は無電荷極性側鎖（例えば、Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ及びＴｙｒ）の存在によって分類することができる。

【0111】

本明細書で使用される場合、「アミノ酸修飾」としては、アミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又はそれらへの挿入、及び／又はそれらの置換が挙げられるが、これらに限定されない。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを行って、最終コンストラクトに至ることができるが、但し、最終コンストラクトは、所望の特性を有するものとする。アミノ酸の変化は、グリコシル化部位の数又は位置の変化などの抗体コンストラクトの翻訳後プロセスも変え得る。好ましい置換（又は置き換え）は、保存的置換である。しかしながら、最終コンストラクトが標的抗原に結合する能力を保持している限り、あらゆる置換（非保存的置換を含む）が想定される。

【0112】

当業者は、本明細書に記載の抗体及び抗体断片の保存的バリアントが産生され得ることを認識するであろう。ｄｓＦｖ断片又はｓｃＦｖ断片などの抗体断片において採用されるそのような保存的バリアントは、Ｖ_ＨとＶ_Ｌ領域との間の正確なフォールディング及び安定化のために必要な重要なアミノ酸残基を保持し、分子の低ｐＩ及び低毒性を保つために、残基の電荷特性を維持する。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換（例えば、最大１個、最大２個、最大３個、最大４個、又は最大５個のアミノ酸置換）は、収量を増加させるために、Ｖ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌ領域において行うことができる。例えば、表Ａ１に記載されるものなどの、機能的に類似したアミノ酸を提供する保存的アミノ酸置換の表は、当業者に周知である。

【0113】

【表1】

【0114】

本明細書で使用される場合、「合成免疫受容体」は、免疫エフェクター細胞上で発現され、且つ標的抗原に特異的に結合するように操作されている人工細胞受容体（例えば、人工Ｔ細胞受容体、人工ＮＫ細胞受容体など）である。

【0115】

本明細書で使用される場合、参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」又は「配列同一性パーセント（％）」は、配列をアラインさせ、必要であれば、最大の配列同一性％を達成するためにギャップを導入した後の、配列同一性の一部として保存的置換を考慮しない、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアライメントは、当業者の範囲内である様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成され得る。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするための適切なパラメータを決定し得る。しかしながら、本明細書の目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成される。

【0116】

「医薬組成物」という用語は、有効成分の生物学的活性が有効であることを可能にするような形態であり、製剤が投与される対象に対して許容できない毒性を有する追加成分を含有しない製剤を指す。そのような組成物は、無菌である。「薬学的に許容可能な」賦形剤（例えば、ビヒクル、添加剤）は、使用される有効成分の有効用量を提供するために対象哺乳動物に合理的に投与され得るものである。

【0117】

本明細書で使用される場合、「無菌」組成物は、無菌であるか、又は全ての生きている微生物及びそれらの胞子を含まないか若しくは基本的に含まない。本明細書で使用される場合、「凍結」組成物は、０℃未満の温度のものである。

【0118】

本明細書で使用される場合、「安定な」組成物は、その中のタンパク質が貯蔵時にその物理的安定性、及び／又は化学的安定性、及び／又は生物学的活性を基本的に保持するものである。いくつかの実施形態では、組成物は、貯蔵時、その物理的及び化学的安定性並びにその生物学的活性を基本的に保持する。保存期間は、一般に、組成物の意図された有効期間に基づいて選択される。タンパク質安定性を測定するための様々な分析技術が当技術分野で利用可能であり、例えばＰｅｐｔｉｄｅａｎｄＰｒｏｔｅｉｎＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ，２４７－３０１．ＶｉｎｃｅｎｔＬｅｅＥｄ．，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）及びＪｏｎｅｓ．Ａ．Ａｄｖ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＲｅｖ．１０：２９－９０）（１９９３）で概説されている。安定性は、選択された温度において、選択された期間にわたって測定され得る。安定性は、凝集体形成の評価（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを用いて濁度を測定することにより且つ／又は目視検査により）；陽イオン交換クロマトグラフィー、画像キャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）又はキャピラリーゾーン電気泳動を用いて電荷不均一性を評価することにより；アミノ末端又はカルボキシ末端配列の分析；質量分光分析；還元されたインタクトな抗体を比較するためのＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析；ペプチドマップ（例えば、トリプシン又はＬＹＳ－Ｃ）分析；抗体の生物学的活性又は抗原結合機能の評価などを含む様々な異なる方法で定性的及び／又は定量的に評価され得る。不安定性には、以下のいずれかの１つ又は複数が含まれ得る：凝集、脱アミド化（例えば、Ａｓｎ脱アミド化）、酸化（例えば、Ｍｅｔ酸化）、異性化（例えば、Ａｓｐ異性化）、クリッピング／加水分解／断片化（例えば、ヒンジ領域断片化）、スクシンイミド形成、不対システイン、Ｎ末端伸長、Ｃ末端プロセシング、グリコシル化の相違など。

【0119】

本開示のいくつかの実施形態は、メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体に関する。具体的には、本開示は、ヒトメソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体に密接と関連しているファミリーを提供する。このファミリーのシングルドメイン抗体は、本明細書に定義され、表Ｓ１及びＳ２に示すＣＤＲ配列のセットを含み、表Ｓ３に記載される配列番号１１～１９の提供される重鎖可変領域（ＶＨ）配列によって例示される。シングルドメイン抗体のこのファミリーは、臨床的治療剤としてのそれらの有用性に寄与する多くの利益を提供する。実例として、シングルドメイン抗体は、ある範囲の結合親和性を有するメンバーを含み、所望の結合親和性を有する特定の配列の選択を可能にする。

【0120】

【表2】

【0121】

【表3】

【0122】

【表4】

【0123】

【0124】

【0125】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１１のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１２のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１３のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１４のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１５のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１６のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１７のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１８のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１９のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0126】

【0127】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、（ｉ）配列番号１と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列番号２と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）配列番号３と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0128】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、（ｉ）配列番号１と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列番号２と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）配列番号４と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0129】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、（ｉ）配列番号１と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列番号２と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）配列番号５と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0130】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、（ｉ）配列番号１と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列番号２と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）配列番号６と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0131】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、（ｉ）配列番号１と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列番号７と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）配列番号８と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0132】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、（ｉ）配列番号９と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列番号２と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）配列番号６と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0133】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、（ｉ）配列番号９と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列番号２と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）配列番号４と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0134】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、（ｉ）配列番号１と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ１と、（ｉｉ）配列番号１０と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ２と、（ｉｉｉ）配列番号４と比べて、最大２個（例えば、１個、２個、０個）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0135】

【0136】

【0137】

【0138】

【0139】

【0140】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、それぞれ配列番号１、２、及び３の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、それぞれ配列番号１、２、及び４の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、それぞれ配列番号１、２、及び５の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、それぞれ配列番号１、２、及び６の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、それぞれ配列番号１、７、及び８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、それぞれ配列番号９、２、及び６の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、それぞれ配列番号９、２、及び４の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、それぞれ配列番号１、１０、及び４の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0141】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１１～１９のいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１５のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１９のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0142】

いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２及びＶＨＣＤＲ３配列は、ヒトＶＨフレームワーク中に存在する。

【0143】

【0144】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１１に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１２に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１３に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１４に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１５に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１６に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１７に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１８に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１９に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0145】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１１～１９から選択された重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0146】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１１の重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１２の重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１３の重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１４の重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１５の重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１６の重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１７の重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１８の重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１９の重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0147】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合する。

【0148】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、約１０^－９Ｍ～約１０^－６ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、≦５×１０^－７ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、≦１×１０^－７ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、≦５×１０^－８ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、≦２×１０^－８ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、≦１×１０^－８ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、≦１×１０^－９ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。

【0149】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ヒトシングルドメイン抗体である。

【0150】

いくつかの実施形態ではシングルドメイン抗体は、単離されたシングルドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、単離されたヒトシングルドメイン抗体である。

【0151】

本開示のいくつかの実施形態では、本明細書に記載されるメソテリンに特異的に結合するシングルドメイン抗体を含むメソテリン結合タンパク質に関する。

【0152】

【0153】

【0154】

【0155】

【0156】

【0157】

【0158】

【0159】

【0160】

【0161】

【0162】

【0163】

【0164】

【0165】

【0166】

【0167】

【0168】

【0169】

【0170】

【0171】

いくつかの実施形態では、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２及びＶＨＣＤＲ３配列は、ヒトＶＨフレームワーク中に存在する。

【0172】

【0173】

【0174】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、配列番号１１～１９から選択された重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0175】

【0176】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合する。

【0177】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、約１０^－９Ｍ～約１０^－６ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦５×１０^－７ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦１×１０^－７ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦５×１０^－８ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦２×１０^－８ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦１×１０^－８ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦１×１０^－９ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する。

【0178】

【0179】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、ＣＤ３に更に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、ヒトＣＤ３に更に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、約１０^－９Ｍ～約１０^－６ＭのＫ_ＤでヒトＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦５×１０^－７ＭのＫ_ＤでヒトＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦１×１０^－７ＭのＫ_ＤでヒトＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦５×１０^－８ＭのＫ_ＤでヒトＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦２×１０^－８ＭのＫ_ＤでヒトＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦１×１０^－８ＭのＫ_ＤでヒトＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦１×１０^－９ＭのＫ_ＤでヒトＣＤ３に結合する。

【0180】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、約１０^－９Ｍ～約１０^－６ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮ及び／又はＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦５×１０^－７ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮ及び／又はＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦１×１０^－７ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮ及び／又はＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦５×１０^－８ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮ及び／又はＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦２×１０^－８ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮ及び／又はＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦１×１０^－８ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮ及び／又はＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、≦１×１０^－９ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮ及び／又はＣＤ３に結合する。

【0181】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、ヒトＣＤ３イプシロンに更に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、ＣＤ３イプシロン（配列番号６９）：Ｋ７３及びＳ８３；並びにＣＤ３デルタ（配列番号７０）Ｋ８２及びＣ９３から選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤ３上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３上のエピトープは、Ｋ８２、Ｅ８３、Ｓ８４、Ｔ８５、Ｖ８６、Ｑ８７、Ｖ８８、Ｈ８９、Ｙ９０、Ｒ９１、Ｍ９２、Ｃ９３によって定義されるＣＤ３イプシロンの領域を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３上のエピトープは、Ｋ７３、Ｎ７４、１７５、Ｇ７６、Ｓ７７、Ｄ７８、Ｅ７９、Ｄ８０、Ｈ８１、Ｌ８２、Ｓ８３によって定義されるＣＤ３イプシロンの領域を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、ＣＤ３デルタ及びＣＤ３イプシロンの両方の残基を有する立体構造エピトープを含む。いくつかの実施形態では、立体構造エピトープは、残基ＣＤ３ε Ｋ７３及びＳ８３；ＣＤ３δ Ｋ８２及びＣ９３の各々を含む。

【0182】

【0183】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、ヒトＣＤ３に特異的に結合する密接と関連しているシングルドメイン抗体のファミリーに属すことができる。このファミリーのシングルドメイン抗体は、本明細書に定義され、表Ｓ４及びＳ５に示すＣＤＲ配列のセットを含み、表Ｓ６に記載される配列番号３１～４８の提供される重鎖可変領域（ＶＨ）配列によって例示される。これらのＣＤ３結合ＶＨドメイン及びそれらの関連する軽鎖可変ドメイン（表Ｓ７及びＳ８に記載されるような）を含む多重特異性分子は、例えば、公開されたＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１８／０５２５０３号パンフレットに記載されるような有利な特性を有しており、その開示は、その全体で参照により本明細書に組み込まれる。ＭＳＬＮに特異的に結合する本明細書に記載のシングルドメイン抗体のいずれも、ＣＤ３結合ドメイン及び本明細書に記載の固定された軽鎖ドメインと組み合わされて、多重特異性メソテリン結合タンパク質を生成することができる。

【0184】

【表5】

【0185】

【表6】

【0186】

【表7】

【0187】

【表8】

【0188】

【表9】

【0189】

【表10】

【0190】

【0191】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、（ｉ）配列番号２０と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、（ｉｉ）配列番号２６と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、（ｉｉｉ）配列番号２７と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２６の配列を含む。

【0192】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、（ｉ）配列番号２０と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、（ｉｉ）配列番号２６と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、（ｉｉｉ）配列番号２８と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２６の配列を含む。

【0193】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、（ｉ）配列番号２０と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、（ｉｉ）配列番号２６と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、（ｉｉｉ）配列番号２９と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２６の配列を含む。

【0194】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、（ｉ）配列番号２１と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、（ｉｉ）配列番号２６と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、（ｉｉｉ）配列番号２８と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２６の配列を含む。

【0195】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、（ｉ）配列番号２２と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、（ｉｉ）配列番号２６と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、（ｉｉｉ）配列番号２８と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２６の配列を含む。

【0196】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、（ｉ）配列番号２３と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、（ｉｉ）配列番号２６と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、（ｉｉｉ）配列番号２８と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２６の配列を含む。

【0197】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、（ｉ）配列番号２４と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、（ｉｉ）配列番号２６と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、（ｉｉｉ）配列番号２８と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２６の配列を含む。

【0198】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、（ｉ）配列番号２０と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、（ｉｉ）配列番号２６と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、（ｉｉｉ）配列番号３０と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２６の配列を含む。

【0199】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、（ｉ）配列番号２５と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、（ｉｉ）配列番号２６と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、（ｉｉｉ）配列番号２９と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２６の配列を含む。

【0200】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、（ｉ）配列番号２４と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、（ｉｉ）配列番号２６と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域２（ＣＤＲ２）と、（ｉｉｉ）配列番号２９と比べて、最大２個（例えば、０個、１個、又は２個など）のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）と、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２６の配列を含む。

【0201】

【0202】

【0203】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ１は、配列番号２０～２５から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ１は、配列番号２０の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ１は、配列番号２１の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ１は、配列番号２２の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ１は、配列番号２３の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ１は、配列番号２４の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ１は、配列番号２５の配列を含む。

【0204】

いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ２は、配列番号２６の配列を含む。

【0205】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ３は、配列番号２７～３０から選択される配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ３は、配列番号２７の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ３は、配列番号２８の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ３は、配列番号２９の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３結合ＶＨＣＤＲ３は、配列番号３０の配列を含む。

【0206】

【0207】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号３１のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号３２のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号３３のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号３４のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号３５のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号３６のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号３７のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号３８のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号３９のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号４０のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号４１のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号４２のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号４３のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号４４のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号４５のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号４６のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号４７のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）は、配列番号４８のＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。

【0208】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３結合ＶＨ領域は、配列番号３１～４８のいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３５のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３９のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４３のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４５のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４８のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。

【0209】

【0210】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、それぞれ配列番号２０、２６、及び２７の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、それぞれ配列番号２０、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、それぞれ配列番号２０、２６、及び２９の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、それぞれ配列番号２１、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、それぞれ配列番号２２、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、それぞれ配列番号２３、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、それぞれ配列番号２４、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、それぞれ配列番号２０、２６、及び３０の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、それぞれ配列番号２５、２６、及び２９の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、それぞれ配列番号２４、２６、及び２９の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む。

【0211】

【0212】

【0213】

【0214】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３１に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３２に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３３に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３４に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３５に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３６に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３７に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３８に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号３９に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４０に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４１に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４２に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４３に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４４に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４５に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４６に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４７に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨ領域は、配列番号４８に対して、少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％など）の配列同一性を有する。

【0215】

【0216】

【0217】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、抗メソテリン抗体又はその断片である。

【0218】

いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、モノクローナル抗体又はその断片である。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、単離されたモノクローナル抗体又はその断片である。

【0219】

いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、インタクトなＩｇＧ分子である。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、インタクトなＩｇＧ１分子である。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、インタクトなＩｇＧ２分子である。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体は、インタクトなＩｇＧ４分子である。

【0220】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、インタクトなＩｇＧ分子の免疫学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、インタクトなＩｇＧ１分子の免疫学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、インタクトなＩｇＧ２分子の免疫学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、インタクトなＩｇＧ４分子の免疫学的に活性な部分である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、重鎖のみ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、ＴＣＡである。

【0221】

いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体又はその断片は、Ｆｃ領域を更に含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体又はその断片は、バリアントＦｃ領域を更に含む。いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域との少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％）の相同性を有する。

【0222】

いくつかの実施形態では、バリアントＦｃ領域は、ヘテロ二量体化改変を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体化改変は、ノブアンドホール置換を含む（例えば、バリアントＩｇＧ１Ｆｃ領域において、１）一方の鎖におけるＹ４０７Ｔ及び他方の鎖におけるＴ３６６Ｙ；２）一方の鎖におけるＹ４０７Ａ及び他方の鎖におけるＴ３６６Ｗ；３）一方の鎖におけるＦ４０５Ａ及び他方の鎖におけるＴ３９４Ｗ；４）一方の鎖におけるＦ４０５Ｗ及び他方の鎖におけるＴ３９４Ｓ；５）一方の鎖におけるＹ４０７Ｔ及び他方の鎖におけるＴ３６６Ｙ；６）一方の鎖におけるＴ３６６ＹとＦ４０５Ａ及び他方の鎖におけるＴ３９４ＷとＹ４０７Ｔ；７）一方の鎖におけるＴ３６６ＷとＦ４０５Ｗ及び他方の鎖におけるＴ３９４ＳとＹ４０７Ａ；８）一方の鎖におけるＦ４０５ＷとＹ４０７Ａ及び他方の鎖におけるＴ３６６ＷとＴ３９４Ｓ；又は９）Ｆｃの一方のポリペプチドにおけるＴ３６６Ｗ及び他方のポリペプチドにおけるＴ３６６Ｓと、Ｌ３６８ＡとＹ４０７Ｖ）を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体化改変は、新しいジスルフィド架橋を作り出す置換を含む（例えば、バリアントＩｇＧ１Ｆｃ領域において、１）一方のＦｃポリペプチド鎖におけるＹ３４９Ｃ及び他方のポリペプチド鎖におけるＳ３５４Ｃ；２）一方のＦｃポリペプチド鎖におけるＹ３４９Ｃ及び他方のポリペプチド鎖におけるＥ３５６Ｃ；３）一方のＦｃポリペプチド鎖におけるＹ３４９Ｃ及び他方のポリペプチド鎖におけるＥ３５７Ｃ；４）一方のＦｃポリペプチド鎖におけるＬ３５１Ｃ及び他方のポリペプチド鎖におけるＳ３５４Ｃ；５）一方のＦｃポリペプチド鎖におけるＴ３９４Ｃ及び他方のポリペプチド鎖におけるＥ３９７Ｃ；又は６）一方のＦｃポリペプチド鎖におけるＤ３９９Ｃ及び他方のポリペプチド鎖におけるＫ３９２Ｃなど）。いくつかの実施形態では、ヘテロ二量体化改変は、電荷対置換を含む（例えば、１）一方の鎖におけるＫ４０９Ｅプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｋ；２）一方の鎖におけるＫ４０９Ｅプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｒ；３）一方の鎖におけるＫ４０９Ｄプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｋ；４）一方の鎖におけるＫ４０９Ｄプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｒ；５）一方の鎖におけるＫ３９２Ｅプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｒ；６）一方の鎖におけるＫ３９２Ｅプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｋ；７）一方の鎖におけるＫ３９２Ｄプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｒ；８）一方の鎖におけるＫ３９２Ｄプラス他方の鎖におけるＤ３９９Ｋ；９）一方の鎖におけるＫ４０９ＤとＫ３６０Ｄプラス他方の鎖におけるＤ３９９ＫとＥ３５６Ｋ；１０）一方の鎖におけるＫ４０９ＤとＫ３７０Ｄプラス他方の鎖におけるＤ３９９ＫとＥ３５７Ｋ；１１）一方の鎖におけるＫ４０９ＤとＫ３９２Ｄプラス他方の鎖におけるＤ３９９ＫとＥ３５６ＫとＥ３５７Ｋ；１２）一方の鎖でのＫ４０９ＤとＫ３９２Ｄ及び他方の鎖でのＤ３９９Ｋ；１３）一方の鎖でのＫ４０９ＤとＫ３９２Ｄプラス他方の鎖でのＤ３９９ＫとＥ３５６Ｋ；１４）一方の鎖でのＫ４０９ＤとＫ３９２Ｄプラス他方の鎖でのＤ３９９ＫとＤ３５７Ｋ；１５）一方の鎖でのＫ４０９ＤとＫ３７０Ｄプラス他方の鎖でのＤ３９９ＫとＤ３５７Ｋ；１６）一方の鎖でのＤ３９９Ｋプラス他方の鎖でのＫ４０９ＤとＫ３６０Ｄ；又は１７）一方の鎖でのＫ４０９ＤとＫ４３９Ｄプラス他方の鎖でのＤ３９９ＫとＥ３５６Ｋなど）。

【0223】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、サイレンシングされたＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、サイレンシングされたＦｃ領域は、ＥＵナンバリングに従うＦｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９の１つ以上（例えば、２つ以上など）の置換を含む。いくつかの実施形態では、サイレンシングされたＦｃ領域は、グリコシル化を変更する置換を含む。いくつかの実施形態では、サイレンシングされたＦｃ領域は、エフェクターレス突然変異（例えば、ＣＨ２領域におけるＮ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｇ、ＤＡＮＡ突然変異（Ｄ２６５Ａ＋Ｎ２９７Ａ）又はＤＡＮＧ突然変異（Ｄ２６５Ａ＋Ｎ２９７Ｇ）など）を含む。いくつかの実施形態では、サイレンシングされたＦｃ領域は、Ｋ３２２Ａ及びＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ突然変異を含む。

【0224】

いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体又はその断片は、ＣＨ１配列の非存在下で重鎖定常領域配列を更に含む。いくつかの実施形態では、抗メソテリン抗体又はその断片は、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、野生型ヒトＩｇＧ４ヒンジ領域配列（配列番号６１）を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、Ｓ２２８Ｐ突然変異を含むバリアントヒトＩｇＧ４ヒンジ領域配列（配列番号６２）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ４ＣＨ２ドメイン配列（配列番号６３）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ドメインは、Ｆ２３４Ａ突然変異、Ｌ２３５Ａ突然変異又はＦ２３４Ａ突然変異とＬ２３５Ａ突然変異の両方を含むバリアントヒトＩｇＧ４ＣＨ２ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、野生型ヒトＩｇＧ４ＣＨ３ドメイン配列（配列番号６５）を含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、Ｔ３６６Ｗ突然変異を含むバリアントヒトＩｇＧ４ＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ突然変異及びＹ４０７Ｖ突然変異を含むバリアントヒトＩｇＧ４ＣＨ３ドメイン配列を含む。

【0225】

表Ｓ９は、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ４Ｆｃ領域配列の配列、並びに本明細書に記載の抗メソテリン抗体及びその断片に追加の所望の特性を付与し得る追加の突然変異（バリアント）を組み込むこれらの配列のバージョンを提供する。表Ｓ１０は、例示的なヒトＣＤ３イプシロン及びＣＤ３デルタ配列を提供する。

【0226】

【表11】

【0227】

【表12】

【0228】

【表13】

【0229】

本開示のいくつかの実施形態は、本明細書に記載されるメソテリンに特異的に結合するシングルドメイン抗体をコードするポリヌクレオチドに関する。

【0230】

本開示のいくつかの実施形態は、本明細書に記載されるメソテリン結合タンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む組成物に関する。いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質は、抗メソテリン抗体又はその断片である。

【0231】

本開示のいくつかの実施形態は、本明細書に記載されるメソテリンに特異的に結合するシングルドメイン抗体を含む組換え発現ベクター、並びに組換え発現ベクターを含む宿主細胞に関する。

【0232】

本開示のいくつかの実施形態は、本明細書に記載のメソテリン結合タンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む１つ以上の組換え発現ベクター、並びに１つ以上の組換え発現ベクターを含む宿主細胞に関する。

【0233】

本開示のいくつかの実施形態は、本明細書に記載されるメソテリンに特異的に結合するシングルドメイン抗体を含む合成免疫受容体、並びに合成免疫受容体を含む細胞に関する。

【0234】

いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体は、ヒンジ領域を介して膜貫通ドメインに接続されており、例えば、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ５、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、又は４－１ＢＢから得られる機能的シグナル伝達ドメインなどの共刺激ドメインに更に接続されている。いくつかの実施形態では、合成免疫受容体は、例えば、４－１ＢＢ及び／又はＣＤ３ゼータなどの細胞内シグナル伝達ドメインをコードする配列を更に含む。

【0235】

本開示のいくつかの実施形態は、本明細書に記載のメソテリン結合タンパク質（例えば、抗メソテリン抗体又はその断片など）を産生することであって、本明細書に記載の細胞を抗体の発現を許容される条件下で増殖することと、メソテリン結合タンパク質（例えば、抗メソテリン抗体又はその断片など）を細胞から単離することと、を含む産生することに関する。

【0236】

本開示のいくつかの実施形態は、本明細書に記載されるメソテリンに特異的に結合するシングルドメイン抗体を含む抗体－薬物複合体に関する。いくつかの実施形態では、抗体－薬物複合体中の薬物は、化学療法剤である。いくつかの実施形態では、抗体－薬物複合体中の薬物は、放射性核種である。いくつかの実施形態では、抗体－薬物複合体は、例えば、メソテリンの発現と関連する疾患、例えば、増殖性疾患又は癌などの検出又は監視などの診断的用途で使用するためのものである。

【0237】

本開示のいくつかの実施形態は、メソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、又は抗メソテリン抗体若しくはその断片と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む医薬組成物に関する。

【0238】

薬学的に許容される賦形剤の非限定的な例としては、アジュバント、固体担体、水、緩衝液、又は治療的成分を保持するために当該技術分野において使用される他の担体、若しくはその組み合わせが挙げられる。

【0239】

本開示の医薬組成物は、保管のために、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態などにおいて、所望の純度を有するタンパク質を任意選択的な薬学的に許容可能な担体、賦形剤又は安定剤と混合することによって調製される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ１６ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ、Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）を参照されたい）。許容される担体、賦形剤又は安定剤は、使用する用量及び濃度でレシピエントに対して毒性がなく、それらには、限定されないが、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリシンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類及びグルコース、マンノース若しくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎタンパク質錯体）；並びに／又はＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）若しくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。

【0240】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、例えば、組成物のｐＨ、浸透圧、粘度、透明度、色、等張性、臭気、無菌性、安定性、溶解又は放出速度、吸着又は浸透を改変、維持又は保存するための製剤材料を含み得る。そのような実施形態では、好適な製剤材料としては、アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジンなど）；抗微生物剤；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム又は亜硫酸水素ナトリウムなど）；緩衝剤（例えば、ホウ酸塩、重炭酸塩、トリス－ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩又は他の有機酸など）；増量剤（例えば、マンニトール又はグリシンなど）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；錯化剤（例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ－シクロデキストリン又はヒドロキシプロピル－ベータ－シクロデキストリンなど）；充填剤；単糖類；二糖類；及び他の炭水化物（例えば、グルコース、マンノース又はデキストリンなど）；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリンなど）；着色剤、香味剤及び希釈剤；乳化剤；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドンなど）；低分子量ポリペプチド；塩形成対イオン（例えば、ナトリウムなど）；防腐剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸又は過酸化水素など）；溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールなど）；糖アルコール（例えば、マンニトール又はソルビトールなど）；懸濁剤；界面活性剤又は湿潤剤（例えば、ｐｌｕｒｏｎｉｃ、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパールなど）；安定性増強剤（例えば、スクロース又はソルビトール）；等張性増強剤（例えば、アルカリ金属ハロゲン化物、塩化ナトリウム又は塩化カリウム、マンニトール、ソルビトール）；送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤並びに／或いは医薬アジュバントが挙げられるが、これらに限定されない。治療使用のための分子を製剤化する方法及び好適な材料は医薬分野において知られており、例えばＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’ＳＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳＣＩＥＮＣＥＳ、１８ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｒｍｏ，ｅｄ．），１９９０，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙに記載されている。本開示の医薬組成物として、液体組成物、凍結組成物、及び凍結乾燥組成物が挙げられるが、これらに限定されない。

【0241】

非経口投与のための医薬組成物は、好ましくは、無菌であり且つ実質的に等張であり、適正製造基準（ＧＭＰ）条件下で製造される。医薬組成物は単位剤形（例えば、単回投与のための剤形など）で提供され得る。製剤は、選択される投与経路に依存する。本明細書に記載のメソテリン結合タンパク質（例えば、抗メソテリン抗体及びその断片など）並びに抗体－薬物複合体は、静脈内注射若しくは注入によって投与され得るか、又は皮下投与され得る。注射による投与については、本明細書に記載のメソテリン結合タンパク質（例えば、抗メソテリン抗体及びその断片など）並びに抗体－薬物複合体は、水溶液中で、好ましくは生理学的に適合性のある緩衝液中で製剤化され、注射部位における不快感を低減させることができる。溶液は、上記で論じられるように、担体、賦形剤又は安定剤を含有し得る。或いは、本明細書に記載のメソテリン結合タンパク質（例えば、抗メソテリン抗体及びその断片など）並びに抗体－薬物複合体は、使用前に、好適なビヒクル、例えば、滅菌パイロジェンフリー水で再構成するための凍結乾燥形態であり得る。この凍結乾燥材料を、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、又は凍結乾燥前にタンパク質が存在した同じ製剤中で再構成し得る。

【0242】

例えば米国特許第９，０３４，３２４号明細書において抗体製剤が開示される。同様な製剤が、本明細書に記載の抗メソテリン抗体及びその断片に使用され得る。皮下抗体製剤は、例えば、米国特許出願公開第２０１６０３５５５９１号明細書及び米国特許出願公開第２０１６０１６６６８９号明細書に記載されている。

【0243】

本開示のいくつかの実施形態は、メソテリンの発現と関連している疾患の治療を必要とする対象において治療を行う方法であって、対象に、治療有効用量の、本明細書に記載される少なくとも１つのメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片を投与することを含む、方法に関する。

【0244】

いくつかの実施形態では、投与は、腫瘍増殖又はメソテリン発現癌の転移の緩慢化若しくは阻害をもたらす。腫瘍細胞の増殖の低減の測定は、当該技術分野において周知である複数の異なる方法論によって決定することができる。非限定的な例としては、腫瘍寸法の直接測定、切除された腫瘍塊の測定及び対照被験者に対する比較、分析を向上させるための同位体又は発光性分子（例えば、ルシフェラーゼなど）を用いても用いなくてもよい画像診断技術（例えば、ＣＴ又はＭＲＩなど）、及び同種のものが挙げられる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片の投与は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％の対照抗原結合剤と比較した場合の腫瘍細胞のインビボ増殖の低減をもたらし、腫瘍増殖における１００％の低減は、腫瘍の完全な応答及び消失を示す。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片の投与は、約５０～１００％、約７５～１００％、又は約９０～１００％の対照抗原結合剤と比較した場合の腫瘍細胞のインビボ増殖の低減をもたらす。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片の投与は、約５０～６０％、約６０～７０％、約７０～８０％、約８０～９０％、又は約９０～１００％の対照抗原結合剤と比較した場合の腫瘍細胞のインビボ増殖の低減をもたらす。

【0245】

疾患の治療のための有効用量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるか又は動物であるか、他の薬剤の投与及び処置が予防的であるか又は治療的であるかを含む多くの異なる因子に依存して変動する。通常、患者はヒトであるが、非ヒト哺乳動物、例えば、イヌ、ネコ、ウマなどのコンパニオン動物、ウサギ、マウス、ラットなどの実験用哺乳動物も処置され得る。処置投与量は、安全性及び有効性を最適化するために用量設定され得る。

【0246】

投与量レベルは、通常の技術を有する臨床医によって容易に決定され得、必要に応じて、例えば治療に対する対象の応答を変更するために必要に応じて変更され得る。単一の剤形を生成させるために担体材料と組み合わされ得る有効成分の量は、処置される宿主及び特定の投与方式に応じて変動する。

【0247】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片は、患者に非経口投与される。非経口投与とは、胃腸管経由以外の経路による分子の投与を指し、腹腔内、筋肉内、静脈内、動脈内、皮内、皮下、脳内、脳室内及び髄腔内投与が含まれ得る。

【0248】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片は、対象に静脈内投与される。

【0249】

非経口又は静脈内投与は、注射（例えば、針及びシリンジを使用）又は注入（例えば、カテーテル及びポンプシステムを介して）によって実施され得る。本開示による投与は、静脈内注射又は静脈内注入によるものであることが想定される。通常、静脈内（ＩＶ）注入は、ライン、ポート若しくはカテーテル（小型の可撓性チューブ）、例えば中心静脈アクセス、又は大静脈に留置されるカテーテルである中心静脈カテーテル（ＣＶＣ）、又は末梢静脈に留置されるカテーテルである末梢静脈カテーテル（ＰＶＣ）を介して投与される。一般に、カテーテル又はラインは、頸部の静脈（内頸静脈）、胸部の静脈（鎖骨下静脈若しくは腋窩静脈）、鼠径部の静脈（大腿静脈）又は腕の静脈（ＰＩＣＣライン若しくは末梢挿入型中心静脈カテーテルとしても知られる）を通して留置され得る。中心ＩＶラインは、静脈を通して進められ、大型の中心静脈（通常、上大静脈、下大静脈）又は更に心臓の右心房に流入するカテーテルを有する。末梢静脈（ＰＩＶ）ラインは、末梢静脈（腕、手、脚及び足の静脈）において使用される。ポートは、外部コネクタがない中心静脈ラインであり、代わりに、これは、シリコーンゴムで被覆され、皮膚の下に埋め込まれた小型リザーバを有する。薬剤は、皮膚に小さい針を刺し、シリコーンを突き刺してリザーバに入れることにより、断続的に投与される。針が引き抜かれると、リザーバカバーは自然に再封止される。カバーは、その耐用期間中に何百回もの針刺しを許容し得る。

【0250】

いくつかの実施形態では、メソテリンの発現と関連している疾患は、増殖性疾患及び癌から選択される。

【0251】

いくつかの実施形態では、癌は、中皮腫、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、及びトリプルネガティブ乳癌から選択される。

【0252】

本明細書に記載されるメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片は、他の抗癌剤の投与又は治療的処置（腫瘍の外科的切除など）も伴うことができる。任意の好適な抗癌剤は、本明細書に開示されるメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片と組み合わせて投与することができる。抗癌剤の例としては、限定されないが、化学療法剤、例えば、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、インターカレーション抗生物質、増殖因子阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素、トポイソメラーゼ阻害剤、抗生存剤、生体応答調節剤、抗ホルモン剤（例えば、抗アンドロゲン剤など）及び抗血管新生剤などが挙げられる。他の抗癌治療としては、放射線療法及び標的癌細胞に特異的な他の抗体が挙げられる。

【0253】

いくつかの実施形態では、メソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片は、手術前、手術中、又は手術後に投与される。

【0254】

本開示のいくつかの実施形態は、メソテリンの発現と関連している疾患の治療で使用するための、本明細書に記載されるメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片に関する。いくつかの実施形態では、メソテリンの発現と関連している疾患は、増殖性疾患及び癌から選択される。いくつかの実施形態では、癌は、中皮腫、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、及びトリプルネガティブ乳癌から選択される。

【0255】

本開示のいくつかの実施形態は、メソテリンの発現と関連している疾患の治療のための医薬品の製造における、本明細書に記載されるメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片の使用に関する。いくつかの実施形態では、メソテリンの発現と関連している疾患は、増殖性疾患及び癌から選択される。いくつかの実施形態では、癌は、中皮腫、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、及びトリプルネガティブ乳癌から選択される。

【0256】

本開示のいくつかの実施形態は、癌と診断された対象からの試料を、本明細書に記載のシングルドメイン抗体又はメソテリン結合タンパク質と接触させ、シングルドメイン抗体又はメソテリン結合タンパク質の試料への結合を検出することによって、対象において、癌の診断を確定する方法に関する。対照試料へのシングルドメイン抗体又はメソテリン結合タンパク質の結合と比べて、試料へのシングルドメイン抗体又はメソテリン結合タンパク質の結合における増加は、癌の診断を確定する。いくつかの実施形態では、方法は、シングルドメイン抗体又はメソテリン結合タンパク質を特異的に認識する検出抗体を試料と接触させることと、検出抗体の結合を検出することと、を更に含む。

【0257】

本開示のいくつかの実施形態は、対象において、メソテリンの発現と関連している癌を検出する方法に関する。方法は、対象からの試料を本明細書に記載のシングルドメイン抗体又はメソテリン結合タンパク質と接触させることと、シングルドメイン抗体又はメソテリン結合タンパク質の試料への結合を検出することと、を含む。対照試料と比べて、シングルドメイン抗体又はメソテリン結合タンパク質の試料への結合の増加は、対象において癌を検出する。いくつかの実施形態では、方法は、シングルドメイン抗体又はメソテリン結合タンパク質を特異的に認識する検出抗体を試料と接触させることと、検出抗体の結合を検出することと、を更に含む。

【0258】

本開示のいくつかの実施形態は、本明細書に記載されるメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、若しくは抗体断片又はそれを含む医薬組成物と、使用説明書と、を含むキットに関する。キットは、少なくとも１つの追加の薬剤、例えば、化学療法薬などを更に含有し得る。キットは、典型的には、キットの内容物の意図される使用を示すラベルを含む。「ラベル」という用語は、本明細書で使用される場合、キット上で若しくはキットと共に供給されるか、又はそうでなければキットに添付される何らかの書面又は記録素材を含む。

【0259】

いくつかの実施形態では、キットは、診断用キットである。いくつかの実施形態では、キットは、生体試料、例えば、血液試料又は組織試料などにおいて、メソテリンを検出するために提供される。例えば、対象において、癌診断を確定するために、生検を実施して、組織学的検査用の組織試料を得ることができる。或いは、可溶性メソテリンタンパク質又は断片の存在を検出するために、血液試料を得ることができる。ポリペプチドを検出するためのキットは、典型的には、本開示によるシングルドメイン抗体又はメソテリン結合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、シングルドメイン抗体又はメソテリン結合タンパク質は、標識されている（例えば、蛍光標識、放射性標識、又は酵素標識など）。

【0260】

いくつかの実施形態では、キットは、標識を検出するための手段（例えば、酵素標識用の酵素基質、蛍光標識を検出するためのフィルターセット、二次抗体などの適切な二次標識、又は同種のものなど）を追加的に含んでもよい。キットは、緩衝液及び特定の方法の実践のために日常的に使用される他の試薬を更に含んでもよい。そのようなキット及び適切な内容物は、当業者に周知である。

【0261】

非限定的な例示的実施形態：
限定はされないが、本開示のいくつかの例示的な実施形態は、以下を含む。
１．メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、シングルドメイン抗体が、ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１１～１９のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。
２．ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１１～１９のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、実施形態１に記載のシングルドメイン抗体。
３．ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１１～１９のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、実施形態１又は２に記載のシングルドメイン抗体。
４．ＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号１１～１９のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、実施形態１～３のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
５．メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、シングルドメイン抗体が、
（ｉ）配列番号１又は配列番号９と比べて、最大２個のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、
（ｉｉ）配列番号２、配列番号７、又は配列番号１０と比べて、最大２個のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、又は配列番号８と比べて、最大２個のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。
６．各アミノ酸修飾が、あるとすれば、保存的アミノ酸置換である、実施形態５に記載のシングルドメイン抗体。
７．ＶＨＣＤＲ１が、配列番号１又は配列番号９と比べて、最大１個のアミノ酸修飾を有する配列を含む、実施形態５又は６に記載のシングルドメイン抗体。
８．ＶＨＣＤＲ２が、配列番号２、配列番号７、又は配列番号１０と比べて、最大１個のアミノ酸修飾を有する配列を含む、実施形態５～７のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
９．ＶＨＣＤＲ３が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、又は配列番号８と比べて、最大１個のアミノ酸修飾を有する配列を含む、実施形態５～８のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
１０．最大１個のアミノ酸修飾が、アミノ酸置換である、実施形態７～９のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
１１．最大１個のアミノ酸修飾が、保存的アミノ酸置換である、実施形態７～９のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
１２．最大１個のアミノ酸修飾が、アミノ酸欠失である、実施形態７～９のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
１３．最大１個のアミノ酸修飾が、アミノ酸付加である、実施形態７～９のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
１４．ＶＨＣＤＲ１が、配列番号１及び配列番号９から選択される配列を含む、実施形態１～１３のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
１５．ＶＨＣＤＲ２が、配列番号２、配列番号７、及び配列番号１０から選択される配列を含む、実施形態１～１４のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
１６．ＶＨＣＤＲ３が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、及び配列番号８から選択される配列を含む、実施形態１～１５のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
１７．メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、シングルドメイン抗体が、
（ｉ）配列
ＧＧＳＩＳＸ_１ＳＹＹ（配列番号５３）を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）であって、
式中、Ｘ_１がＮ又はＳである、ＶＨＣＤＲ１と、
（ｉｉ）配列
ＩＹＸ_２ＳＧＸ_３Ｘ_４（配列番号６８）を含むＶＨＣＤＲ２であって、
式中、Ｘ_２がＨ又はＹであり、Ｘ_３がＮ又はＳであり、且つＸ_４がＴ又はＩである、ＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）配列
Ｘ_５Ｘ_６ＱＸ_７ＧＶＧＡＴＴＴＥＥＹ（配列番号５４）を含むＶＨＣＤＲ３であって、
式中、Ｘ_５がＴ、Ｖ、又はＡであり、Ｘ_６がＳ又はＴであり、且つＸ_７がＤ又はＮである、ＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。
１８．メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、シングルドメイン抗体が、
（ｉ）配列番号１及び配列番号９から選択される配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、
（ｉｉ）配列番号２、配列番号７、及び配列番号１０から選択される配列を含むＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、及び配列番号８から選択される配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。
１９．メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、シングルドメイン抗体が、
（ａ）それぞれ配列番号１、２、及び３の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｂ）それぞれ配列番号１、２、及び４の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｃ）それぞれ配列番号１、２、及び５の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｄ）それぞれ配列番号１、２、及び６の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｅ）それぞれ配列番号１、７、及び８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｆ）それぞれ配列番号９、２、及び６の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｇ）それぞれ配列番号９、２、及び４の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；又は
（ｈ）それぞれ配列番号１、１０、及び４の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。
２０．メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、シングルドメイン抗体が、配列番号１１～１９のいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。
２１．ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、ヒトＶＨフレームワーク中に存在する、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
２２．メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、シングルドメイン抗体が、配列番号１１～１９のいずれか１つに対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。
２３．ＶＨ領域が、配列番号１１～１９のいずれか１つに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、実施形態１～２２のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
２４．ＶＨ領域が、配列番号１１～１９のいずれか１つに対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、実施形態１～２３のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
２５．ＶＨ領域が、配列番号１１～１９のいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、実施形態１～２４のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
２６．メソテリン（ＭＳＬＮ）に特異的に結合するシングルドメイン抗体であって、シングルドメイン抗体が、配列番号１１～１９から選択される重鎖可変（ＶＨ）領域を含む、シングルドメイン抗体。
２７．シングルドメイン抗体が、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
２８．シングルドメイン抗体が、約１０^－９Ｍ～約１０^－６ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する、実施形態１～２７のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
２９．シングルドメイン抗体が、単離されたシングルドメイン抗体である、実施形態１～２８のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体。
３０．実施形態１～２８のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体を含む、メソテリン結合タンパク質。
３１．メソテリン結合タンパク質が、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合する、実施形態３０に記載のメソテリン結合タンパク質。
３２．メソテリン結合タンパク質が、約１０^－９Ｍ～約１０^－６ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する、実施形態３０又は３１に記載のメソテリン結合タンパク質。
３３．メソテリン結合タンパク質が、ＣＤ３に更に特異的に結合する、実施形態３０～３２のいずれか１つに記載のメソテリン結合タンパク質。
３４．メソテリン結合タンパク質が、ヒトＣＤ３に更に特異的に結合する、実施形態３０～３３のいずれか１つに記載のメソテリン結合タンパク質。
３５．メソテリン結合タンパク質が、ヒトＣＤ３イプシロンに更に特異的に結合する、実施形態３０～３４のいずれか１つに記載のメソテリン結合タンパク質。
３６．メソテリン結合タンパク質が、ＣＤ３イプシロン（配列番号６９）：Ｋ７３及びＳ８３；並びにＣＤ３デルタ（配列番号７０）Ｋ８２及びＣ９３から選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤ３上のエピトープに結合する、実施形態３０～３４のいずれか１つに記載のメソテリン結合タンパク質。
３７．ＣＤ３上のエピトープが、Ｋ８２、Ｅ８３、Ｓ８４、Ｔ８５、Ｖ８６、Ｑ８７、Ｖ８８、Ｈ８９、Ｙ９０、Ｒ９１、Ｍ９２、Ｃ９３によって定義されるＣＤ３デルタの領域を含む、実施形態３６に記載のメソテリン結合タンパク質。
３８．ＣＤ３上のエピトープが、Ｋ７３、Ｎ７４、１７５、Ｇ７６、Ｓ７７、Ｄ７８、Ｅ７９、Ｄ８０、Ｈ８１、Ｌ８２、Ｓ８３によって定義されるＣＤ３イプシロンの領域を含む、実施形態３６又は３７に記載のメソテリン結合タンパク質。
３９．エピトープが、ＣＤ３デルタ及びＣＤ３イプシロンの両方の残基を有する立体構造エピトープを含む、実施形態３６～３８のいずれか１つに記載のメソテリン結合タンパク質。
４０．立体構造エピトープが、残基ＣＤ３εＫ７３及びＳ８３；ＣＤ３δＫ８２及びＣ９３の各々を含む、実施形態３６～３９のいずれか１つに記載のメソテリン結合タンパク質。
４１．メソテリン結合タンパク質が、モノクローナル抗体である、実施形態３０～４０のいずれか１つに記載のメソテリン結合タンパク質。
４２．メソテリン結合タンパク質が、単離されたモノクローナル抗体である、実施形態３０～４１のいずれか１つに記載のメソテリン結合タンパク質。
４３．実施形態１～２８のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体を含む、抗体－薬物複合体。
４４．実施形態１～２８のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体を含む、抗メソテリン抗体。
４５．抗メソテリン抗体が、エフェクター細胞に結合する、実施形態４４に記載の抗メソテリン抗体。
４６．抗メソテリン抗体が、多重特異性である、実施形態４４又は４５に記載の抗メソテリン抗体。
４７．抗メソテリン抗体が、ＭＳＬＮ以外の腫瘍特異的抗原に更に特異的に結合する、実施形態４４～４６のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
４８．抗メソテリン抗体が、二重特異性である、実施形態４４～４７のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
４９．抗メソテリン抗体が、ＣＤ３に更に特異的に結合する、実施形態４４～４８のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
５０．抗メソテリン抗体が、ヒトＣＤ３に更に特異的に結合する、実施形態４４～４９のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
５１．抗メソテリン抗体が、ヒトＣＤ３イプシロンに更に特異的に結合する、実施形態４４～５０のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
５２．抗メソテリン抗体が、ＣＤ３イプシロン（配列番号６９）：Ｋ７３及びＳ８３；並びにＣＤ３デルタ（配列番号７０）Ｋ８２及びＣ９３から選択される少なくとも１つの残基を含むＣＤ３上のイプシロンに結合する、実施形態４４～５０のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
５３．ＣＤ３上のエピトープが、Ｋ８２、Ｅ８３、Ｓ８４、Ｔ８５、Ｖ８６、Ｑ８７、Ｖ８８、Ｈ８９、Ｙ９０、Ｒ９１、Ｍ９２、Ｃ９３によって定義されるＣＤ３デルタの領域を含む、実施形態５２に記載の抗メソテリン抗体。
５４．ＣＤ３上のエピトープが、Ｋ７３、Ｎ７４、１７５、Ｇ７６、Ｓ７７、Ｄ７８、Ｅ７９、Ｄ８０、Ｈ８１、Ｌ８２、Ｓ８３によって定義されるＣＤ３イプシロンの領域を含む、実施形態５２又は５３に記載の抗メソテリン抗体。
５５．エピトープが、ＣＤ３デルタ及びＣＤ３イプシロンの両方の残基を有する立体構造エピトープを含む、実施形態５２～５４のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
５６．立体構造エピトープが、残基ＣＤ３εＫ７３及びＳ８３；ＣＤ３δＫ８２及びＣ９３の各々を含む、実施形態５５に記載の抗メソテリン抗体。
５７．抗メソテリン抗体が、ＣＤ３結合ＶＨ領域を更に含む、実施形態３０～５６のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
５８．抗メソテリン抗体が、ＩｇＧ４抗体である、実施形態３０～５７のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
５９．抗メソテリン抗体が、ＩｇＧ１抗体である、実施形態３０～５７のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
６０．抗メソテリン抗体が、軽鎖可変（ＬＶ）領域と対合しているＣＤ３結合ＶＨ領域を更に含む、実施形態３０～５８のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
６１．ＣＤ３結合ＶＨ領域が、
（ｉ）配列番号２０～２５のいずれか１つと比べて、最大２個のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、
（ｉｉ）配列番号２６と比べて、最大２個のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）配列番号２７～３０のいずれか１つと比べて、最大２個のアミノ酸修飾を有する配列を含むＶＨＣＤＲ３と、を含む、実施形態５７又は６０に記載の抗メソテリン抗体。
６２．ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ１が、配列番号２０～２５のいずれか１つと比べて、最大１個のアミノ酸修飾を有する配列を含む、実施形態６１に記載の抗メソテリン抗体。
６３．ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ２が、配列番号２６と比べて、最大１個のアミノ酸修飾を有する配列を含む、実施形態６１又は６２に記載の抗メソテリン抗体。
６４．ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ３が、配列番号２７～３０のいずれか１つと比べて、最大１個のアミノ酸修飾を有する配列を含む、実施形態６１～６３のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
６５．最大１個のアミノ酸修飾が、アミノ酸置換である、実施形態６２～６４のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
６６．最大１個のアミノ酸修飾が、保存的アミノ酸置換である、実施形態６２～６５のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
６７．最大１個のアミノ酸修飾が、アミノ酸欠失である、実施形態６２～６４のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
６８．最大１個のアミノ酸修飾が、アミノ酸付加である、実施形態６２～６４のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
６９．ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ１が、配列番号２０～２５から選択される配列を含む、実施形態６２～６８のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
７０．ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ２が、配列番号２６の配列を含む、実施形態６２～６９のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
７１．ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ３が、配列番号２７～３０から選択される配列を含む、実施形態６２～７０のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
７２．ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号３１～４８のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する、実施形態５７又は６０～７１のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
７３．ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号３１～４８のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、実施形態５７又は６０～７２のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
７４．ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号３１～４８のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、実施形態５７又は６０～７３のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
７５．ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号３１～４８のいずれか１つのＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、実施形態５７又は６０～７４のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
７６．ＣＤ３結合ＶＨ領域が、
（ｉ）配列
ＧＦＴＦＸ_８Ｘ_９ＹＡ（配列番号５５）を含むＶＨ相補性決定領域１（ＣＤＲ１）であって、
式中、Ｘ_８がＤ、Ａ、又はＨであり、且つＸ_９がＤ又はＮである、ＶＨＣＤＲ１と、
（ｉｉ）配列ＩＳＷＮＳＧＳＩ（配列番号２６）を含むＶＨＣＤＲ２と、
（ｉｉｉ）配列
ＡＫＤＳＲＧＹＧＸ_１０ＹＸ_１１Ｘ_１２ＧＧＡＹ（配列番号５６）を含むＶＨＣＤＲ３であって、
式中、Ｘ_１０がＤ又はＳであり、Ｘ_１１がＲ又はＳであり、且つＸ_１２がＬ又はＲである、ＶＨＣＤＲ３と、を含む、実施形態５７又は６０に記載の抗メソテリン抗体。
７７．ＣＤ３結合ＶＨ領域が、配列番号３１～４８のいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、実施形態５７又は６０に記載の抗メソテリン抗体。
７８．ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、ヒトＶＨフレームワーク中に存在する、実施形態５７～７７のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
７９．ＣＤ３結合ＶＨ領域が、配列番号３１～４８のいずれか１つに対して、少なくとも８０％の配列同一性を有する、実施形態５７～７８のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
８０．ＣＤ３結合ＶＨ領域が、配列番号３１～４８のいずれか１つに対して、少なくとも８５％の配列同一性を有する、実施形態５７～７９のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
８１．ＣＤ３結合ＶＨ領域が、配列番号３１～４８のいずれか１つに対して、少なくとも９０％の配列同一性を有する、実施形態５７～８０のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
８２．ＣＤ３結合ＶＨ領域が、配列番号３１～４８のいずれか１つに対して、少なくとも９５％の配列同一性を有する、実施形態５７～８１のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
８３．ＣＤ３結合ＶＨ領域が、
（ａ）それぞれ配列番号２０、２６、及び２７の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｂ）それぞれ配列番号２０、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｃ）それぞれ配列番号２０、２６、及び２９の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｄ）それぞれ配列番号２１、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｅ）それぞれ配列番号２２、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｆ）それぞれ配列番号２３、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｇ）それぞれ配列番号２４、２６、及び２８の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｈ）それぞれ配列番号２０、２６、及び３０の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；
（ｉ）それぞれ配列番号２５、２６、及び２９の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３；又は
（ｊ）それぞれ配列番号２４、２６、及び２９の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む、実施形態５７～８２のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
８４．ＣＤ３結合ＶＨ領域が、配列番号２０、２６、及び２７の配列を含むＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を含む、実施形態８３に記載の抗メソテリン抗体。
８５．軽鎖可変領域が、配列番号５２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、実施形態６０～８４のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
８６．軽鎖可変領域が、それぞれ配列番号４９、５０、及び５１の配列を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含む、実施形態６０～８５のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
８７．ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列が、ヒトＶＨフレームワーク中に存在する、実施形態６０～８６のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
８８．軽鎖可変領域が、配列番号５２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する、実施形態６０～８７のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
８９．軽鎖可変領域が、配列番号５２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、実施形態６０～８８のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
９０．軽鎖可変領域が、配列番号５２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する、実施形態６０～８９のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
９１．軽鎖可変領域が、配列番号５２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、実施形態６０～９０のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
９２．抗メソテリン抗体が、Ｆｃ領域を更に含む、実施形態４４～９１のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
９３．抗メソテリン抗体が、バリアントＦｃ領域を更に含む、実施形態４４～９２のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
９４．バリアントＦｃ領域が、ヘテロ二量体化改変を含む、実施形態９３に記載の抗メソテリン抗体。
９５．Ｆｃ領域が、サイレンシングされたＦｃ領域である、実施形態４４～９４のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
９６．抗メソテリン抗体が、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合する、実施形態４４～９５のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
９７．抗メソテリン抗体が、約１０^－９Ｍ～約１０^－６ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する、実施形態４４～９６のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
９８．抗メソテリン抗体が、単離された抗体である、実施形態４４～９７のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体。
９９．メソテリンに特異的に結合する抗体断片であって、抗体断片が、実施形態４４～９８のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体の断片を含む、抗体断片。
１００．抗体断片が、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合する、実施形態９９に記載の抗体断片。
１０１．抗体断片が、単離された抗体断片である、実施形態９９又は１００に記載の抗体断片。
１０２．実施形態１～２９のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体をコードする、ポリヌクレオチド。
１０３．実施形態３０～４２のいずれか１つに記載のメソテリン結合タンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む、組成物。
１０４．実施形態４４～９８のいずれか１つに記載の抗メソテリン抗体をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む、組成物。
１０５．実施形態１０２～１０４のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド又は組成物を含む、組換え発現ベクター。
１０６．実施形態１０５に記載の組換え発現ベクターを含む、宿主細胞。
１０７．実施形態１～２８のいずれか１つに記載のシングルドメイン抗体を含む、合成免疫受容体。
１０８．実施形態１０７に記載の合成免疫受容体を含む、細胞。
１０９．メソテリンの発現と関連している疾患の治療を必要とする対象において治療を行う方法であって、対象に、実施形態３０～１０１のいずれか１つに記載の少なくとも１つのメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片を投与することを含む、方法。
１１０．メソテリンの発現と関連している疾患の治療を必要とする対象において治療を行う方法であって、対象に、治療有効量の、実施形態３０～１０１のいずれか１つに記載の少なくとも１つのメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片を投与することを含む、方法。
１１１．メソテリンの発現と関連している疾患が、増殖性疾患及び癌から選択される、実施形態１１０に記載の方法。
１１２．癌が、中皮腫、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、及びトリプルネガティブ乳癌から選択される、実施形態１１１に記載の方法。
１１３．メソテリンの発現と関連している疾患の治療で使用するための、実施形態３０～１０１のいずれか１つに記載のメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片。
１１４．メソテリンの発現と関連している疾患が、増殖性疾患及び癌から選択される、実施形態１１３に記載の使用のためのメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片。
１１５．癌が、中皮腫、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、及びトリプルネガティブ乳癌から選択される、実施形態１１４に記載の使用のためのメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片。
１１６．メソテリンの発現と関連している疾患の治療のための医薬品の製造における、実施形態３０～１０１のいずれか１つに記載のメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片の使用。
１１７．メソテリンの発現と関連している疾患が、増殖性疾患及び癌から選択される、実施形態１１６に記載の使用。
１１８．癌が、中皮腫、膵臓癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、及びトリプルネガティブ乳癌から選択される、実施形態１１７に記載の使用。
１１９．実施形態３０～１０１のいずれか１つに記載の少なくとも１つのメソテリン結合タンパク質、抗体－薬物複合体、抗メソテリン抗体、又は抗体断片と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物。

【実施例】

【0262】

本開示がより完全に理解され得るように、以下の実施例が記載される。これらの実施例は、例示的な目的のためだけのものであり、いかなる方法によっても、本開示を限定するものと解釈されるべきではないことを理解されたい。

【0263】

実施例１．ＭＳＬＮ発現細胞株及びオフターゲット細胞株への結合
本開示の例示的な抗ＭＳＬＮシングルドメイン抗体についての細胞結合を、ヒトＭＳＬＮを発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ＿ｈｕＭＳＬＮ）及びＭＳＬＮタンパク質を発現しないＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－ＯＦＦｔｇｔ）を使用して評価した。ペレット状ＣＨＯ細胞を、フロー緩衝液（１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、及び０．１％ＮａＮ_３）中に１．２５×１０^６個／ｍＬで再懸濁した。抗体含有上清を、フロー緩衝液中で１：５に希釈し、４０μＬの細胞プラス１０μＬの希釈された抗体上清を４℃で３０分間インキュベートした。細胞をフロー緩衝液で洗浄し、１．２５μｇ／ｍＬにフロー緩衝液で希釈したフィコエリスリン（ＰＥ）コンジュゲート二次抗体（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ＃２０４２－０９）の５０μＬ中に再懸濁し、４℃で２０分間インキュベートした。２回の洗浄工程後に、細胞をフロー緩衝液中に再懸濁し、ＧｕａｖａｅａｓｙＣｙｔｅ８ＨＴシステムを使用して分析した。表Ｅ１は、抗ＭＳＬＮシングルドメイン抗体の標的結合活性をバックグラウンドのＭＦＩシグナルに対する倍数として要約する。

【0264】

【表14】

【0265】

実施例２．ＭＳＬＮ発現細胞株及びオフターゲット細胞株への結合
本明細書に記載の例示的な抗ＭＳＬＮシングルドメイン抗体についての細胞結合用量曲線を、ヒトＭＳＬＮを発現するＣＨＯ細胞（図１Ａ）、ＨｅＬａ細胞（図１Ｂ）、及びＣＨＯ－ＯＦＦｔｇｔ細胞（図１Ｃ）を使用して実施した。シングルドメイン抗体を、１５０ｎＭの出発濃度に続いて３倍連続希釈し、８点用量曲線で試験した。細胞、抗体、及び試薬の全ての洗浄並びに希釈は、フロー緩衝液（１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、及び０．１％ＮａＮ_３）を使用して実施した。細胞をペレット状にして、フロー緩衝液中に１×１０^６個細胞／ｍＬで再懸濁した。次いで、５０μＬの細胞を５０μＬの試験抗体と組み合わせて、４℃で３０分間インキュベートし、続いてフロー緩衝液による洗浄工程を２回行った。次いで、細胞を、１．２５μｇ／ｍＬに希釈したＰＥコンジュゲート二次抗体（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ＃２０４２－０９）の５０μＬ中に再懸濁し、４℃で２０分間インキュベートした。２回の洗浄工程後に、細胞をフロー緩衝液中に再懸濁し、ＢＤＣｅｌｅｓｔａシステムを使用して分析した。ＰＥ平均蛍光強度をバックグラウンド（二次検出抗体のみとインキュベートした細胞）の倍数としてプロットした。

【0266】

実施例３．ＭＳＬＮ発現細胞株での細胞結合ＥＣ５０値
本開示の例示的な抗ＭＳＬＮシングルドメイン抗体についての細胞結合ＥＣ５０値を決定するために、細胞結合用量曲線を、ＨｅＬａ細胞及びヒトＭＳＬＮを発現するＣＨＯ細胞で実施した。シングルドメイン抗体を、実施例２に記載されるように、１５０ｎＭの出発用量に続いて３倍連続希釈し、８点用量曲線で試験した。変換されたデータを、非線形回帰曲線フィット（ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ８．４．３で入手可能）を使用してｘｙグラフとしてプロットして、ＥＣ５０（ｎＭ）を得て、これを表Ｅ２に要約する。

【0267】

【表15】

【0268】

実施例４．結合親和性及びエピトープビニング
表Ｅ３は、本開示の例示的な抗ＭＳＬＮシングルドメイン抗体についての親和性及びエピトープビンの情報を要約している。各シングルドメイン抗体の組換えヒトＭＳＬＮ（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ、＃３２６５－ＭＳ）に対する親和性を、ＯｃｔｅｔＨＴＸを使用して、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって測定した。ＡＨＣ（Ａｎｔｉ－ｈＩｇＧＦｃＣａｐｔｕｒｅ）センサーを用いて、試験抗体を５μｇ／ｍＬで固定化した。ベースライン読み取り後に、センサーを抗原溶液に浸漬させた（５００ｎＭで出発し、続いて７点、２倍希釈系列）。会合及び解離を、それぞれ１８０秒間及び２４０秒間測定した。標準１：１結合モデルを使用して、ＯｃｔｅｔＤａｔａＡｎａｌｙｓｉｓｖ１１．０ＨＴ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）によりデータを分析した。シングルドメイン抗体に対するエピトープビンを、ＯｃｔｅｔＨＴＸを使用して、並行（ｉｎ－ｔａｎｄｅｍ）競合ＢＬＩ結合実験によって決定した。抗原（５μｇ／ｍＬ）を、センサー、Ｎｉ－ＮＴＡセンサーに装填し、その後キネティック緩衝液中でベースライン測定した。次いで、抗原被覆センターを、飽和濃度の抗体１中に浸漬させた。ここで、第２のベースライン測定を、３００秒間に設定した。次いで、抗原－抗体１複合体を、抗体２溶液中に１８０秒間浸漬させて、次いで、解離させた。

【0269】

【表16】

【0270】

実施例５．ヒト腫瘍細胞株によるＣＡＲ－Ｔ媒介Ｔ細胞活性化
ＣＡＲ－Ｔ細胞活性を、ＪｕｒｋａｔＴリンパ球細胞を抗ＭＳＬＮＣＡＲ及び６×ＮＦＡＴＴＫナノルシフェラーゼレポーターで製造業者のプロトコル（Ｌｏｎｚａ４Ｄ－ＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒＸ；ＳＥＣｅｌｌＬｉｎｅ４Ｄ－ＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒＸＫｉｔＬ，＃Ｖ４ＸＣ－１０１２；プログラムＣＬ－１２０）に従って、トランスフェクトすることによって測定した。図２Ａは、本開示の抗体配列を含む抗ＭＳＬＮ細胞外結合ドメインを含む例示的なＣＡＲ－Ｔ構造の概略図である。トランスフェクトされたＪｕｒｋａｔ細胞を、ヒトＭＳＬＮを発現するように安定してトランスフェクトされたＭＳＬＮ＋ＣＨＯ細胞、ＨｅＬａ、又はＭＳＬＮ陰性Ｋ５６２細胞と共に、加湿された、３７℃、８％ＣＯ_２のインキュベーター内で１０％ＦＢＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を有するＲＰＭＩ－１６４０（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）中で２４時間共培養した。ルシフェラーゼ活性を、ＰｒｏｍｅｇａＮａｎｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステムを使用して、製造業者のプロトコル（カタログ＃Ｎ１１１０）を使用して、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘｉ３ｘマルチモードマイクロプレートリーダー（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ）で測定し、データをＣＡＲトランスフェクトＪｕｒｋａｔ及びＭＳＬＮ陰性Ｋ５６２細胞株を含有する共培養に正規化した。対応のない両側ｔ検定を使用して統計的有意性を決定した。結果を図２Ｂに示す。

【0271】

特許、特許出願、論文、書籍及び学術論文が挙げられるが、これらに限定されない、本願で引用される全ての文書又は文書の一部は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。本開示の実施形態で記載されるものは、文脈が明確に別のことを示さない限り、本開示の１つ以上の他の実施形態と組み合わせることができる。

【0272】

開示される主題は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されることを意図するものではなく、代わりに、本開示の個々の態様の非限定的な例証として意図される。機能的に等価な方法及び構成要素は、本開示の範囲内である。実際、本明細書中に示され、記載されるものに加えて、開示される主題の様々な変更形態は、上記及び添付の図面から当業者には明らかであろう。そのような変更は、開示される主題の範囲内にあることが意図される。

【0273】

開示される主題の様々な実施形態及び／又は実施例の記載は、例証の目的で提示されているが、いかなる方法によっても網羅的又は限定的であることを意図していない。多くの変更及び変形形態は、記載される実施形態の範囲及び種子から逸脱することなく、当業者には明らかであろう。本明細書で使用される用語は、実施形態の原理、実際の応用、又は市場において見られる技術に対する技術的改善を最も上手く説明し、及び／或いは開示される主題の理解を、当業者に可能にするために選択されている。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2A】

【図2B】

【配列表】

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【手続補正書】

【提出日】2024-06-20

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

【請求項2】

【請求項3】

【請求項4】

【請求項5】

【請求項6】

【請求項7】

前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、ヒトＶＨフレームワーク中に存在する、請求項６に記載のシングルドメイン抗体。

【請求項8】

【請求項9】

【請求項10】

前記シングルドメイン抗体が、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合する、請求項１～９のいずれか一項に記載のシングルドメイン抗体。

【請求項11】

前記シングルドメイン抗体が、約１０^－９Ｍ～１０^－６ＭのＫ_ＤでヒトＭＳＬＮに結合する、請求項１０に記載のシングルドメイン抗体。

【請求項12】

前記シングルドメイン抗体が、単離されたシングルドメイン抗体である、請求項１１に記載のシングルドメイン抗体。

【請求項13】

請求項１～９のいずれか一項に記載のシングルドメイン抗体を含む、メソテリン結合タンパク質。

【請求項14】

前記メソテリン結合タンパク質が、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合する、請求項１３に記載のメソテリン結合タンパク質。

【請求項15】

前記メソテリン結合タンパク質が、ＣＤ３に更に特異的に結合する、請求項１３に記載のメソテリン結合タンパク質。

【請求項16】

前記メソテリン結合タンパク質が、ヒトＣＤ３に更に特異的に結合する、請求項１５に記載のメソテリン結合タンパク質。

【請求項17】

前記メソテリン結合タンパク質が、単離されたモノクローナル抗体である、請求項１３に記載のメソテリン結合タンパク質。

【請求項18】

請求項１～９のいずれか一項に記載のシングルドメイン抗体を含む、抗体－薬物複合体。

【請求項19】

請求項１～９のいずれか一項に記載のシングルドメイン抗体を含む、抗メソテリン抗体。

【請求項20】

前記抗メソテリン抗体が、多重特異性である、請求項１９に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項21】

前記抗メソテリン抗体が、ＭＳＬＮ以外の腫瘍特異的抗原に更に特異的に結合する、請求項１９に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項22】

前記抗メソテリン抗体が、二重特異性である、請求項２０に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項23】

前記抗メソテリン抗体が、ＣＤ３に更に特異的に結合する、請求項２１に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項24】

前記抗メソテリン抗体が、ヒトＣＤ３に更に特異的に結合する、請求項２３に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項25】

前記抗メソテリン抗体が、ＣＤ３結合ＶＨ領域を更に含む、請求項２３に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項26】

前記抗メソテリン抗体が、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４サブタイプのものである、請求項１９に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項27】

前記抗メソテリン抗体が、軽鎖可変（ＬＶ）領域と対合するＣＤ３結合ＶＨ領域を更に含む、請求項２５に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項28】

【請求項29】

前記ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ１が、配列番号２０～２５から選択される配列を含む、請求項２８に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項30】

前記ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ２が、配列番号２６の配列を含む、請求項２８に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項31】

前記ＣＤ３結合ＶＨＣＤＲ３が、配列番号２７～３０から選択される配列を含む、請求項２８に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項32】

前記ＣＤ３結合ＶＨ領域中のＶＨＣＤＲ１、２、及び３のフルセット（組み合わせ）が、配列番号３１～４８のいずれか１つの前記ＣＤＲ１、２、及び３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項２５に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項33】

【請求項34】

前記ＣＤ３結合ＶＨ領域が、配列番号３１～４８のいずれか１つの前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、請求項２５に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項35】

前記ＣＤ３結合ＶＨ領域中の前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、ヒトＶＨフレームワーク中に存在する、請求項２５に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項36】

前記ＣＤ３結合ＶＨ領域が、配列番号３１～４８のいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項２５に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項37】

【請求項38】

【請求項39】

前記軽鎖可変領域が、配列番号５２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、請求項２７に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項40】

前記軽鎖可変領域が、それぞれ配列番号４９、５０、及び５１の配列を含むＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を含む、請求項２７に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項41】

前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列が、ヒトＶＨフレームワーク中に存在する、請求項２７に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項42】

前記軽鎖可変領域が、配列番号５２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項２７に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項43】

前記抗メソテリン抗体が、ヒトＭＳＬＮに特異的に結合する、請求項１９に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項44】

前記抗メソテリン抗体が、単離された抗体である、請求項１９に記載の抗メソテリン抗体。

【請求項45】

メソテリンに特異的に結合する抗体断片であって、前記抗体断片が、請求項１９に記載の抗メソテリン抗体の断片を含む、抗体断片。

【請求項46】

前記抗体断片が、三鎖抗体様分子である、請求項４５に記載の抗体断片。

【請求項47】

請求項１３に記載の少なくとも１つのメソテリン結合タンパク質と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物。

【請求項48】

請求項１～９のいずれか一項に記載のシングルドメイン抗体をコードする、ポリヌクレオチド。

【請求項49】

請求項１３に記載のメソテリン結合タンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含む、組成物。

【請求項50】

請求項４８に記載のポリヌクレオチド又は組成物を含む、組換え発現ベクター。

【請求項51】

請求項５０に記載の組換え発現ベクターを含む、宿主細胞。

【請求項52】

請求項１３に記載の少なくとも１つのメソテリン結合タンパク質を含む、メソテリンの発現と関連している疾患の治療を必要とする対象における、メソテリンの発現と関連している疾患の治療のための医薬組成物。

【請求項53】

前記メソテリンの発現と関連している疾患が、中皮腫、膵臓がん、胃がん、卵巣がん、肺がん、及びトリプルネガティブ乳がんから選択される、請求項５２に記載の医薬組成物。

【請求項54】

請求項１９に記載の抗メソテリン抗体又はその抗体断片をコードする一以上のポリヌクレオチドを含む組成物。

【請求項55】

請求項５４に記載のポリヌクレオチド又は組成物を含む組換え発現ベクター。

【請求項56】

請求項５５に記載の組換え発現ベクターを含む宿主細胞。

【請求項57】

請求項１３に記載の少なくとも一つのメソテリン結合タンパク質と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。

【請求項58】

請求項１８に記載のシングルドメイン抗体を含む少なくとも一の抗体－薬物複合体と、薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。

【請求項59】

請求項１９に記載の少なくとも一つの抗メソテリン抗体と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。

【請求項60】

請求項１８に記載の少なくとも一つの抗体－薬物複合体を含む、メソテリンの発現に関連する疾患の治療を必要とする対象における、メソテリンの発現に関連している疾患の治療するための医薬組成物。

【請求項61】

前記メソテリンの発現に関連している疾患が、中皮腫、膵臓がん、胃がん、卵巣がん、肺がん、及びトリプルネガティブ乳がんから選択される、請求項６０に記載の医薬組成物。

【請求項62】

請求項１９に記載の少なくとも一つの抗メソテリン抗体又はその抗体断片を含む、メソテリンの発現に関連する疾患の治療を必要とする対象におけるメソテリンの発現に関連する疾患の治療のための医薬組成物。

【請求項63】

前記メソテリンの発現に関連している疾患が、中皮腫、膵臓がん、胃がん、卵巣がん、肺がん、及びトリプルネガティブ乳がんから選択される、請求項６２に記載の医薬組成物。

【国際調査報告】

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