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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-10-18
(54)【発明の名称】ステレオシリンプロモーター及びその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/63 20060101AFI20241010BHJP
C12N 15/113 20100101ALI20241010BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20241010BHJP
C12N 15/52 20060101ALI20241010BHJP
C12N 15/09 20060101ALI20241010BHJP
C12N 15/864 20060101ALI20241010BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241010BHJP
A61P 27/16 20060101ALI20241010BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20241010BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20241010BHJP
【ＦＩ】
C12N15/63 Z
C12N15/113 Z ZNA
C12N15/12
C12N15/52 Z
C12N15/09 100
C12N15/864 100Z
A61P43/00 105
A61P27/16
A61K48/00
A61P43/00 107
A61K31/7088
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024522122
(86)(22)【出願日】2022-10-12
(85)【翻訳文提出日】2024-05-29
(86)【国際出願番号】 US2022046444
(87)【国際公開番号】W WO2023064388
(87)【国際公開日】2023-04-20
(31)【優先権主張番号】63/254,930
(32)【優先日】2021-10-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/307,484
(32)【優先日】2022-02-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/338,605
(32)【優先日】2022-05-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520299511
【氏名又は名称】デシベル セラピューティクス インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＤＥＣＩＢＥＬ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ，ＩＮＣ．
(71)【出願人】
【識別番号】597160510
【氏名又は名称】リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＲＥＧＥＮＥＲＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】100105957
【弁理士】
【氏名又は名称】恩田 誠
(74)【代理人】
【識別番号】100068755
【弁理士】
【氏名又は名称】恩田 博宣
(74)【代理人】
【識別番号】100142907
【弁理士】
【氏名又は名称】本田 淳
(74)【代理人】
【識別番号】100152489
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 美樹
(72)【発明者】
【氏名】ベッカー、ラーズ
(72)【発明者】
【氏名】バーンズ、ジョセフ
(72)【発明者】
【氏名】ギブソン、タイラー
(72)【発明者】
【氏名】シュワンダー、マーティン
(72)【発明者】
【氏名】サビン、レア
(72)【発明者】
【氏名】ドラモンド サミュエルソン、メーガン
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA13
4C084MA56
4C084NA14
4C084ZA341
4C084ZA342
4C084ZB211
4C084ZB212
4C084ZB221
4C084ZB222
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086EA16
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA56
4C086NA14
4C086ZA34
4C086ZB21
4C086ZB22
(57)【要約】
本開示は、蝸牛及び前庭の有毛細胞を含め、ＳＴＲＣを内因性発現する有毛細胞に所望の発現産物を発現させるために使用することができる、ステレオシリン（ＳＴＲＣ）プロモーターならびにそれを含有するベクターを提供する。本明細書に記載されるＳＴＲＣプロモーターは、異種発現産物をコードする導入遺伝子等のポリヌクレオチドに機能的に連結され、難聴または前庭機能障害を有するかまたはそれらを発症するリスクのある対象の治療に使用され得る。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ポリヌクレオチドであって、異種発現産物をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された、配列番号４８または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＳＴＲＣプロモーターを含む、前記ポリヌクレオチド。
【請求項2】
ポリヌクレオチドであって、異種発現産物をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性、あるいは（ｉｉ）配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＳＴＲＣプロモーターを含む、前記ポリヌクレオチド。
【請求項3】
前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号４８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項4】
前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号４８の配列を有する、請求項１または３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項5】
前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項6】
前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項7】
前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項8】
前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項9】
前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１～５６０を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項10】
前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、請求項２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項11】
前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号１の配列を有する、請求項２または１０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項12】
前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性を有する、請求項２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項13】
前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７を含む、請求項２または１２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項14】
前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７を含む、請求項１３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項15】
前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０を含む、請求項２または１２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項16】
前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号２の配列を有する、請求項２または１２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項17】
前記異種発現産物が、タンパク質、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、遺伝子編集系の成分、またはマイクロＲＮＡである、請求項１～１６のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項18】
前記タンパク質が、アクチン・ガンマ１（Ａｃｔｉｎ Ｇａｍｍａ １）（ＡＣＴＧ１）、網膜Ｆａｓｃｉｎアクチン束化タンパク質２（Ｆａｓｃｉｎ Ａｃｔｉｎ－Ｂｕｎｄｌｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ ２、Ｒｅｔｉｎａｌ）（ＦＳＣＮ２）、ラディキシン（ＲＤＸ）、ＰＯＵクラス４ホメオボックス３（ＰＯＵ４Ｆ３）、ＴＲＩＯ及びＦ－アクチン結合タンパク質（ＴＲＩＯＢＰ）、Ｔａｐｅｒｉｎ（ＴＰＲＮ）、Ｘｉｎアクチン結合リピート含有２（Ｘｉｎ Ａｃｔｉｎ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｒｅｐｅａｔ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ２）（ＸＩＲＰ２）、アトーナル（Ａｔｏｎａｌ）ＢＨＬＨ転写因子１（ＡＴＯＨ１）、転写抑制因子Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ １（ＧＦＩ１）、コリン作動性ニコチン性受容体アルファ９サブユニット（ＣＨＲＮＡ９）、コリン作動性ニコチン性受容体アルファ１０サブユニット（ＣＨＲＮＡ１０）、カルシウム及びインテグリン結合ファミリーメンバー３（ＣＩＢ３）、カドヘリン２３（ＣＤＨ２３）、プロトカドヘリン１５（ＰＣＤＨ１５）、キノシリン（Ｋｉｎｏｃｉｌｉｎ）（ＫＮＣＮ）、Ｐｅｊｖａｋｉｎ（ＤＦＮＢ５９）、ＭＫＲＮ２ Ｏｐｐｏｓｉｔｅ Ｓｔｒａｎｄ（ＭＫＲＮ２ＯＳ）、ＬＩＭホメオボックスタンパク質３（ＬＨＸ３）、膜貫通チャネル様１（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃｈａｎｎｅｌ Ｌｉｋｅ １）（ＴＭＣ１）、ミオシン１５（ＭＹＯ１５）、ミオシン７Ａ（ＭＹＯ７Ａ）、ミオシン６（ＭＹＯ６）、ミオシンＩＩＩＡ（ＭＹＯ３Ａ）、ミオシンＩＩＩＢ（ＭＹＯ３Ｂ）、グルタレドキシンドメイン含有システインリッチタンパク質１（Ｇｌｕｔａｒｅｄｏｘｉｎ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｃｙｓｔｅｉｎｅ－Ｒｉｃｈ Ｐｒｏｔｅｉｎ １）（ＧＲＸＣＲ１）、プロテインチロシンホスファターゼ、受容体型Ｑ（ＰＴＰＲＱ）、後期角化膜（Ｌａｔｅ Ｃｏｒｎｉｆｉｅｄ Ｅｎｖｅｌｏｐｅ）６Ａ（ＬＣＥ６Ａ）、リポキシゲナーゼ相同ドメイン含有タンパク質１（Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ Ｈｏｍｏｌｏｇｙ Ｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ １）（ＬＯＸＨＤ１）、ＡＤＰ－リボシルトランスフェラーゼ１（ＡＲＴ１）、ＡＴＰアーゼ細胞膜Ｃａ２＋輸送２（ＡＴＰａｓｅ Ｐｌａｓｍａ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃａ２＋ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ ２）（ＡＴＰ２Ｂ２）、カルシウム及びインテグリン結合ファミリーメンバー２（ＣＩＢ２）、電位依存性カルシウムチャネル補助サブユニットアルファ２デルタ４（ＣＡＣＮＡ２Ｄ４）、上皮成長因子受容体経路基質８（ＥＰＳ８）、ＥＰＳ８様２（ＥＰＳ８Ｌ２）、エスピン（ＥＳＰＮ）、エスピン様（ＥＳＰＮＬ）、ペリフェリン２（ＰＲＰＨ２）、溶質輸送体ファミリー８メンバーＡ２（ＳＬＣ８Ａ２）、ジンクフィンガーＣＣＨＣタイプ含有タンパク質１２（Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ ＣＣＨＣ－Ｔｙｐｅ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ １２）（ＺＣＣＨＣ１２）、ロイシンリッチ膜貫通・Ｏ－メチルトランスフェラーゼドメイン含有（Ｌｅｕｃｉｎｅ Ｒｉｃｈ Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｄ Ｏ－ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）（ＬＲＴＯＭＴ２、ＬＲＴＯＭＴ１）、ＵＳＨ１タンパク質ネットワーク成分ハーモニン（ＵＳＨ１Ｃ）、溶質輸送体ファミリー２６メンバー５（ＳＬＣ２６Ａ５）、Ｐｉｅｚｏ型機械感受性イオンチャネル成分２（ＰＩＥＺＯ２）、細胞外ロイシンリッチリピート及びフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン含有１（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｌｅｕｃｉｎｅ Ｒｉｃｈ Ｒｅｐｅａｔ ａｎｄ Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ Ｔｙｐｅ ＩＩＩ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １）（ＥＬＦＮ１）、テトラトリコペプチドリピートタンパク質２４（ＴＴＣ２４）、Ｄｙｓｔｒｏｔｅｌｉｎ（ＤＹＴＮ）、コイルドコイルグルタミン酸リッチタンパク質２（ＣＣＥＲ２）、ロイシンリッチリピート及び膜貫通ドメイン含有タンパク質２（ＬＲＴＭ２）、電位依存性カリウムチャネルサブファミリーＡメンバー１０（ＫＣＮＡ１０）、クラリン１（Ｃｌａｒｉｎ １）（ＣＬＲＮ１）、クラリン２（Ｃｌａｒｉｎ ２）（ＣＬＲＮ２）、ＳＫＩファミリー転写コリプレッサー１（ＳＫＩ Ｆａｍｉｌｙ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｃｏｒｅｐｒｅｓｓｏｒ １）（ＳＫＯＲ１）、Ｔｃｔｅｘ１ドメイン含有タンパク質１（ＴＣＴＥＸ１Ｄ１）、Ｆｃ受容体様Ｂ（ＦＣＲＬＢ）、グルタレドキシンドメイン含有システインリッチタンパク質２（ＧＲＸＣＲ２）、セルピンファミリーＥメンバー３（ＳＥＲＰＩＮＥ３）、Ｎｅｓｃｉｅｎｔヘリックス－ループヘリックス１（Ｎｅｓｃｉｅｎｔ Ｈｅｌｉｘ－ｌｏｏｐ Ｈｅｌｉｘ １）（ＮＨＬＨ１）、熱ショックタンパク質７０（ＨＳＰ７０）、熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）、活性化転写因子６（ＡＴＦ６）、真核生物翻訳開始因子２アルファキナーゼ３（ＰＥＲＫ）、セリン／トレオニンプロテインキナーゼ／エンドリボヌクレアーゼＩＲＥ１（ＩＲＥ１）、ワーリン（Ｗｈｉｒｌｉｎ）（ＷＨＲＮ）、オンコモジュリン（ＯＣＭ）、ＬＩＭホメオボックス１（Ｉｓｌ１）、膜貫通及びテトラトリコペプチドリピート含有４（ＴＭＴＣ４）、結合免疫グロブリンタンパク質（ＢＩＰ）、または電位依存性カリウムチャネルサブファミリーＱメンバー４（ＫＣＮＱ４）である、請求項１７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項19】
請求項１～１８のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む、核酸ベクター。
【請求項20】
前記核酸ベクターが、ウイルスベクターである、請求項１９に記載の核酸ベクター。
【請求項21】
前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項２０に記載の核酸ベクター。
【請求項22】
ａ）第１の核酸ベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする第１のポリヌクレオチドに機能的に連結された、配列番号４８または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＳＴＲＣプロモーターを含む、前記第１の核酸ベクターと、ｂ）ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする第２のポリヌクレオチドを含む、第２の核酸ベクターと、を含む、２ベクター系。
【請求項23】
ａ）第１の核酸ベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする第１のポリヌクレオチドに機能的に連結された、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性、あるいは（ｉｉ）配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＳＴＲＣプロモーターを含む、前記第１の核酸ベクターと、ｂ）ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする第２のポリヌクレオチドを含む、第２の核酸ベクターと、を含む、２ベクター系。
【請求項24】
前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号４８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、請求項２２に記載の２ベクター系。
【請求項25】
前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号４８の配列を有する、請求項２２または２４に記載の２ベクター系。
【請求項26】
前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含む、請求項２２に記載の２ベクター系。
【請求項27】
前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４を含む、請求項２２に記載の２ベクター系。
【請求項28】
前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０を含む、請求項２２に記載の２ベクター系。
【請求項29】
前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４を含む、請求項２２に記載の２ベクター系。
【請求項30】
前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１～５６０を含む、請求項２２に記載の２ベクター系。
【請求項31】
前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する、請求項２３に記載の２ベクター系。
【請求項32】
前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号１の配列を有する、請求項２３または３１に記載の２ベクター系。
【請求項33】
前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性を有する、請求項２３に記載の２ベクター系。
【請求項34】
前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７を含む、請求項３３に記載の２ベクター系。
【請求項35】
前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７を含む、請求項３４に記載の２ベクター系。
【請求項36】
前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０を含む、請求項２３または３３に記載の２ベクター系。
【請求項37】
前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号２の配列を有する、請求項２３または３３に記載の２ベクター系。
【請求項38】
前記第１のポリヌクレオチドが前記第２のポリヌクレオチドと部分的に重複する、請求項２２～３７のいずれか１項に記載の２ベクター系。
【請求項39】
前記第１のポリヌクレオチド及び前記第２のポリヌクレオチドが、少なくとも２００塩基（ｂ）の長さの重複領域を有する、請求項２２～３８のいずれか１項に記載の２ベクター系。
【請求項40】
前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターが、哺乳類細胞に導入された場合、相同組換えを受けて、全長ステレオシリンタンパク質をコードする組換えポリヌクレオチドを形成する、請求項２２～３９のいずれか１項に記載の２ベクター系。
【請求項41】
前記第１の核酸ベクターが、前記第１のポリヌクレオチドの３’に位置するスプライスドナーシグナル配列を含み、前記第２の核酸ベクターが、前記第２のポリヌクレオチドの５’に位置するスプライスアクセプターシグナル配列を含む、請求項２２～３７のいずれか１項に記載の２ベクター系。
【請求項42】
前記第１の核酸ベクターが、前記第１のポリヌクレオチドの３’に位置するスプライスドナーシグナル配列及び前記スプライスドナーシグナル配列の３’に位置する第１の組換え誘導領域を含み、前記第２の核酸ベクターが、第２の組換え誘導領域と、前記組換え誘導領域の３’及び前記第２のポリヌクレオチドの５’に位置するスプライスアクセプターシグナル配列と、を含む、請求項２２～３７のいずれか１項に記載の２ベクター系。
【請求項43】
前記第１のポリヌクレオチドと前記第２のポリヌクレオチドは重複しない、請求項２２～３７、４１、及び４２のいずれか１項に記載の２ベクター系。
【請求項44】
前記第１の核酸ベクターが、前記組換え誘導領域の３’に位置する分解シグナル配列をさらに含み、前記第２の核酸ベクターが、前記組換え誘導領域と前記スプライスアクセプターシグナル配列との間に位置する分解シグナル配列をさらに含む、請求項４２または４３に記載の２ベクター系。
【請求項45】
前記第２の核酸ベクターが、前記第２のポリヌクレオチドに機能的に連結された、配列番号４８または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＳＴＲＣプロモーターをさらに含み、前記ＳＴＲＣプロモーターが、前記第２のポリヌクレオチドの５’に位置する、請求項２２～３７のいずれか１項に記載の２ベクター系。
【請求項46】
前記第２の核酸ベクターが、前記第２のポリヌクレオチドに機能的に連結された、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性、あるいは（ｉｉ）配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＳＴＲＣプロモーターをさらに含み、前記ＳＴＲＣプロモーターが、前記第２のポリヌクレオチドの５’に位置する、請求項２２～３７のいずれか１項に記載の２ベクター系。
【請求項47】
前記第１の核酸ベクターが、前記第１のポリヌクレオチドの３’に位置する、Ｎ末端インテイン（Ｎ－インテイン）をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項２２～３７、４５、及び４６のいずれか１項に記載の２ベクター系。
【請求項48】
前記第２の核酸ベクターが、前記ＳＴＲＣプロモーターと前記第２のポリヌクレオチドとの間に位置する、Ｃ末端インテイン（Ｃ－インテイン）をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項４５～４７のいずれか１項に記載の２ベクター系。
【請求項49】
前記Ｎ－インテイン及び前記Ｃ－インテインが、分割インテイントランススプライシング系の成分である、請求項４８に記載の２ベクター系。
【請求項50】
前記ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする前記第１のポリヌクレオチド及び前記ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする前記第２のポリヌクレオチドがイントロンを含まない、請求項２２～４９のいずれか１項に記載の２ベクター系。
【請求項51】
前記２ベクター系が、哺乳類の有毛細胞に全長ステレオシリンタンパク質の有毛細胞特異的発現を誘導する、請求項２２～５０のいずれか１項に記載の２ベクター系。
【請求項52】
前記ステレオシリンタンパク質が、配列番号３に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するヒトステレオシリンタンパク質である、請求項２２～５１のいずれか１項に記載の２ベクター系。
【請求項53】
前記第１のベクター及び前記第２のベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである、請求項２２～５２のいずれか１項に記載の２ベクター系。
【請求項54】
請求項１９～２１のいずれか１項に記載の核酸ベクターまたは請求項２２～５３のいずれか１項に記載の２ベクター系及び薬学的に許容される担体、希釈剤、もしくは賦形剤を含む、組成物。
【請求項55】
有毛細胞に異種発現産物を発現させる方法であって、前記有毛細胞を、請求項１９～２１のいずれか１項に記載の核酸ベクターと接触させることを含む、前記方法。
【請求項56】
ヒト有毛細胞にステレオシリンタンパク質を発現させる方法であって、前記ヒト有毛細胞を、請求項２２～５３のいずれか１項に記載の２ベクター系と接触させることを含む、前記方法。
【請求項57】
前記接触が、対象内において行われる、請求項５５または５６に記載の方法。
【請求項58】
感音性難聴を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を治療する方法であって、請求項１９～２１のいずれか１項に記載の核酸ベクター、請求項２２～５３のいずれか１項に記載の２ベクター系、または請求項５４に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【請求項59】
耳鳴を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を治療する方法であって、請求項１９～２１のいずれか１項に記載の核酸ベクターまたは請求項５４に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【請求項60】
前庭機能障害を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を治療する方法であって、請求項１９～２１のいずれか１項に記載の核酸ベクター、請求項２２～５３のいずれか１項に記載の２ベクター系、または請求項５４に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【請求項61】
有毛細胞再生の誘導または増加を必要とする対象においてそれを行う方法であって、請求項１９～２１のいずれか１項に記載の核酸ベクターまたは請求項５４に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【請求項62】
有毛細胞の成熟の誘導または増加を必要とする対象においてそれを行う方法であって、請求項１９～２１のいずれか１項に記載の核酸ベクターまたは請求項５４に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【請求項63】
有毛細胞の損傷または細胞死の阻止または減少を必要とする対象においてそれを行う方法であって、請求項１９～２１のいずれか１項に記載の核酸ベクター、請求項２２～５３のいずれか１項に記載の２ベクター系、または請求項５４に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【請求項64】
有毛細胞の生存の増加を必要とする対象においてそれを行う方法であって、請求項１９～２１のいずれか１項に記載の核酸ベクター、請求項２２～５３のいずれか１項に記載の２ベクター系、または請求項５４に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【請求項65】
有毛細胞機能の改善を必要とする対象においてそれを行う方法であって、請求項１９～２１のいずれか１項に記載の核酸ベクター、請求項２２～５３のいずれか１項に記載の２ベクター系、または請求項５４に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【請求項66】
ＳＴＲＣの発現の増加を必要とする対象においてそれを行う方法であって、請求項２２～５３のいずれか１項に記載の２ベクター系または請求項５４に記載の組成物を治療的有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【請求項67】
前記対象が、難聴を有するかまたはそれを発症するリスクがある、請求項６１～６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項68】
前記対象が、前庭機能障害を有するかまたはそれを発症するリスクがある、請求項６１～６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項69】
前記対象が、ＳＴＲＣの変異を有する、請求項５８、６０、及び６３～６８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項70】
前記対象が、ＳＴＲＣの変異を有すると特定されている、請求項５８、６０、及び６３～６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項71】
前記方法が、前記２ベクター系または前記組成物の投与前に、前記対象をＳＴＲＣの変異を有すると特定することをさらに含む、請求項５８、６０、及び６３～６９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項72】
前記対象が、聴覚消失、常染色体劣性１６（ＤＦＮＢ１６）を有する、請求項５８、６０、及び６３～７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項73】
前記核酸ベクター、前記２ベクター系、または前記組成物が、内耳に局所投与される、請求項５８～７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項74】
請求項１～１８のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド、請求項１９～２１のいずれか１項に記載の核酸ベクター、請求項２２～５３のいずれか１項に記載の２ベクター系、または請求項５４に記載の組成物を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【0001】
難聴は、公衆衛生上の主要な課題であり、学齢児童のほぼ１５％及び６５歳までの３人に１人が罹患していると推定されている。最も一般的なタイプの難聴は感音性難聴という、蝸牛有毛細胞等の内耳の細胞の異常または内耳から脳に投射する神経経路の異常により引き起こされるタイプの難聴である。感音性難聴は多くの場合、後天性であり、音響性外傷、疾患または感染症、頭部外傷、耳毒性薬物、及び加齢を含め、原因は様々である。また、内耳の発生及び機能に関与する遺伝子の変異等の遺伝的原因の感音性難聴もある。そのような９０超の遺伝子の変異が同定されており、これには、常染色体劣性、常染色体優性、及びＸ連鎖の様式で遺伝する変異が含まれる。そのような常染色体劣性型感音性難聴の１つはＳＴＲＣ遺伝子の変異と関連している。ステレオシリンは、染色体１５ｑ１５上のＳＴＲＣ遺伝子によってコードされる大型タンパク質であり、ゲノムの約１９ｋｂに及ぶ２９のエクソンを含有する。ＳＴＲＣ遺伝子は縦列重複し、その場合、第２のコピーがエクソン２０に未成熟終止コドンを含有し、それによりＳＴＲＣ偽遺伝子を生じさせる。先行研究では、常染色体劣性非症候性感音性難聴の家族においてＳＴＲＣの変異が同定されている（非特許文献１）。ステレオシリンタンパク質の発現は有毛細胞の毛束の不動毛に限られており、ステレオシリンタンパク質は、聴覚装置が正常に機能するために必要とされる先端部横方向のコネクター及び蓋膜接着クラウンを形成すると考えられている（非特許文献２、非特許文献３）。ステレオシリン欠損マウスは、接着欠損を伴う異常な有毛細胞束及び聴覚障害を示すことが示されている（非特許文献４）。
【0002】
蝸牛有毛細胞の発生、生存、または完全性を破壊する要因、例えば、遺伝子変異、疾患または感染症、耳毒性薬物、頭部外傷、及び加齢は同様に前庭有毛細胞に影響を与える場合があり、したがって、それらもまた、回転性めまい、浮動性めまい、及び平衡失調等の前庭機能障害に関与している。実際、有毛細胞の発生または機能を破壊する変異を有する患者は、難聴と前庭機能障害の両方、またはいずれかの障害を単独で呈し得る。米国の４０歳以上の成人の約３５％が平衡障害を示しており、この割合は年齢と共に劇的に増加し、日常活動の混乱、気分及び認知機能の低下、ならびに高齢者の転倒発生の増加をもたらす。
【0003】
近年、難聴及び前庭機能障害を治療するための取り組みでは、可能な解決法として遺伝子治療に対する注目が高まっているが、難聴及び前庭機能障害にそれぞれ頻繁に関与する蝸牛の有毛細胞または前庭系の有毛細胞を特異的に標的とする手法はほとんどない。感音性難聴及び前庭機能障害の治療のための、有毛細胞を標的とする新たな治療法が必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0004】
【非特許文献1】Ｖｅｒｐｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２９：３４５－９（２００１）
【非特許文献2】Ａｖａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １１６：２５９４８－５７（２０１９）
【非特許文献3】Ｖｅｒｐｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．５１９：１９４－２１０（２０１１）
【非特許文献4】Ｖｅｒｐｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４５６：２５５－８（２００８）
【発明の概要】
【0005】
本発明は、特定の細胞型において、目的遺伝子、例えば、有毛細胞の機能、再生、もしくは生存を促進または改善する遺伝子の発現を促進するための組成物及び方法を提供する。本明細書に記載の組成物及び方法は、内耳の蝸牛有毛細胞及び前庭有毛細胞において導入遺伝子の発現を誘導することができるポリヌクレオチドに関する。本明細書に記載のポリヌクレオチドは、例えば、タンパク質または抑制性ＲＮＡ等の所望の発現産物をコードするポリヌクレオチドに、機能的に連結され得、また、難聴（例えば、感音性難聴）または前庭機能障害（例えば、回転性めまい、浮動性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、もしくは平衡障害）を治療または予防するためにヒト対象等の対象に投与され得る。本発明はまた、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された本明細書に記載のポリヌクレオチドを含有する第１の核酸ベクターと、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドを含有する第２の核酸ベクターとが含まれる２ベクター系も提供し、それらを、ステレオシリン遺伝子（ＳＴＲＣ）の変異と関連する難聴または前庭機能障害を有するかまたはそれらを発症するリスクのある対象を治療するのに使用することができる。
【0006】
第１の態様では、本発明は、異種発現産物をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）、あるいは（ｉｉ）配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれるその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターが含まれる、ポリヌクレオチドを提供する。
【0007】
別の態様では、本発明は、異種発現産物をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された、配列番号４８または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０が含まれるその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターが含まれる、ポリヌクレオチドを提供する。
【0008】
別の態様では、本発明は、前述の態様のいずれかに記載のポリヌクレオチドを含有する核酸ベクターを提供する。
別の態様では、本発明は、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）、あるいは（ｉｉ）配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれるその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターを含有する、核酸ベクターを提供する。
別の態様では、本発明は、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）、あるいは（ｉｉ）配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれるその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターを含有する、核酸ベクターを提供する。
【0009】
別の態様では、本発明は、配列番号４８または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０が含まれるその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターを含有する、核酸ベクターを提供する。
【0010】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する。
【0011】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは配列番号１からなる。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれるその機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有する。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれるその機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有する。
【0012】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には配列番号２のヌクレオチド３５～５３０が含まれるか、またはそれからなる。
【0013】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは配列番号２からなる。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号４８に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号４８に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する。
【0014】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号４８の配列を有する。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド１～５６０が含まれるか、またはそれからなる。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド１～５６０が含まれるか、またはそれからなる。
【0015】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、異種発現産物をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されている。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、異種発現産物は、タンパク質、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、遺伝子編集系の成分（例えば、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、もしくはジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）等のヌクレアーゼ、またはガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ））、またはマイクロＲＮＡである。いくつかの実施形態では、タンパク質は、アクチン・ガンマ１（Ａｃｔｉｎ Ｇａｍｍａ １）（ＡＣＴＧ１）、網膜Ｆａｓｃｉｎアクチン束化タンパク質２（Ｆａｓｃｉｎ Ａｃｔｉｎ－Ｂｕｎｄｌｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ ２、Ｒｅｔｉｎａｌ）（ＦＳＣＮ２）、ラディキシン（ＲＤＸ）、ＰＯＵクラス４ホメオボックス３（ＰＯＵ４Ｆ３）、ＴＲＩＯ及びＦ－アクチン結合タンパク質（ＴＲＩＯＢＰ）、Ｔａｐｅｒｉｎ（ＴＰＲＮ）、Ｘｉｎアクチン結合リピート含有２（Ｘｉｎ Ａｃｔｉｎ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｒｅｐｅａｔ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ２）（ＸＩＲＰ２）、アトーナル（Ａｔｏｎａｌ）ＢＨＬＨ転写因子１（ＡＴＯＨ１）、転写抑制因子Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ １（ＧＦＩ１）、コリン作動性ニコチン性受容体アルファ９サブユニット（ＣＨＲＮＡ９）、コリン作動性ニコチン性受容体アルファ１０サブユニット（ＣＨＲＮＡ１０）、カルシウム及びインテグリン結合ファミリーメンバー３（ＣＩＢ３）、カドヘリン２３（ＣＤＨ２３）、プロトカドヘリン１５（ＰＣＤＨ１５）、キノシリン（Ｋｉｎｏｃｉｌｉｎ）（ＫＮＣＮ）、Ｐｅｊｖａｋｉｎ（ＤＦＮＢ５９）、ＭＫＲＮ２ Ｏｐｐｏｓｉｔｅ Ｓｔｒａｎｄ（ＭＫＲＮ２ＯＳ）、ＬＩＭホメオボックスタンパク質３（ＬＨＸ３）、膜貫通チャネル様１（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃｈａｎｎｅｌ Ｌｉｋｅ １）（ＴＭＣ１）、ミオシン１５（ＭＹＯ１５）、ミオシン７Ａ（ＭＹＯ７Ａ）、ミオシン６（ＭＹＯ６）、ミオシンＩＩＩＡ（ＭＹＯ３Ａ）、ミオシンＩＩＩＢ（ＭＹＯ３Ｂ）、グルタレドキシンドメイン含有システインリッチタンパク質１（Ｇｌｕｔａｒｅｄｏｘｉｎ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｃｙｓｔｅｉｎｅ－Ｒｉｃｈ Ｐｒｏｔｅｉｎ １）（ＧＲＸＣＲ１）、プロテインチロシンホスファターゼ、受容体型Ｑ（ＰＴＰＲＱ）、後期角化膜（Ｌａｔｅ Ｃｏｒｎｉｆｉｅｄ Ｅｎｖｅｌｏｐｅ）６Ａ（ＬＣＥ６Ａ）、リポキシゲナーゼ相同ドメイン含有タンパク質１（Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ Ｈｏｍｏｌｏｇｙ Ｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ １）（ＬＯＸＨＤ１）、ＡＤＰ－リボシルトランスフェラーゼ１（ＡＲＴ１）、ＡＴＰアーゼ細胞膜Ｃａ２＋輸送２（ＡＴＰａｓｅ Ｐｌａｓｍａ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃａ２＋ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ ２）（ＡＴＰ２Ｂ２）、カルシウム及びインテグリン結合ファミリーメンバー２（ＣＩＢ２）、電位依存性カルシウムチャネル補助サブユニットアルファ２デルタ４（ＣＡＣＮＡ２Ｄ４）、上皮成長因子受容体経路基質８（ＥＰＳ８）、ＥＰＳ８様２（ＥＰＳ８Ｌ２）、エスピン（ＥＳＰＮ）、エスピン様（ＥＳＰＮＬ）、ペリフェリン２（ＰＲＰＨ２）、溶質輸送体ファミリー８メンバーＡ２（ＳＬＣ８Ａ２）、ジンクフィンガーＣＣＨＣタイプ含有タンパク質１２（Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ ＣＣＨＣ－Ｔｙｐｅ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ １２）（ＺＣＣＨＣ１２）、ロイシンリッチ膜貫通・Ｏ－メチルトランスフェラーゼドメイン含有（Ｌｅｕｃｉｎｅ Ｒｉｃｈ Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｄ Ｏ－ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）（ＬＲＴＯＭＴ２、ＬＲＴＯＭＴ１）、ＵＳＨ１タンパク質ネットワーク成分ハーモニン（ＵＳＨ１Ｃ）、溶質輸送体ファミリー２６メンバー５（ＳＬＣ２６Ａ５）、Ｐｉｅｚｏ型機械感受性イオンチャネル成分２（ＰＩＥＺＯ２）、細胞外ロイシンリッチリピート及びフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン含有１（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｌｅｕｃｉｎｅ Ｒｉｃｈ Ｒｅｐｅａｔ ａｎｄ Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ Ｔｙｐｅ ＩＩＩ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １）（ＥＬＦＮ１）、テトラトリコペプチドリピートタンパク質２４（ＴＴＣ２４）、Ｄｙｓｔｒｏｔｅｌｉｎ（ＤＹＴＮ）、コイルドコイルグルタミン酸リッチタンパク質２（ＣＣＥＲ２）、ロイシンリッチリピート及び膜貫通ドメイン含有タンパク質２（ＬＲＴＭ２）、電位依存性カリウムチャネルサブファミリーＡメンバー１０（ＫＣＮＡ１０）、クラリン１（Ｃｌａｒｉｎ １）（ＣＬＲＮ１）、クラリン２（Ｃｌａｒｉｎ ２）（ＣＬＲＮ２）、ＳＫＩファミリー転写コリプレッサー１（ＳＫＩ Ｆａｍｉｌｙ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｃｏｒｅｐｒｅｓｓｏｒ １）（ＳＫＯＲ１）、Ｔｃｔｅｘ１ドメイン含有タンパク質１（ＴＣＴＥＸ１Ｄ１）、Ｆｃ受容体様Ｂ（ＦＣＲＬＢ）、グルタレドキシンドメイン含有システインリッチタンパク質２（ＧＲＸＣＲ２）、セルピンファミリーＥメンバー３（ＳＥＲＰＩＮＥ３）、Ｎｅｓｃｉｅｎｔヘリックス－ループヘリックス１（Ｎｅｓｃｉｅｎｔ Ｈｅｌｉｘ－ｌｏｏｐ Ｈｅｌｉｘ １）（ＮＨＬＨ１）、熱ショックタンパク質７０（ＨＳＰ７０）、熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）、活性化転写因子６（ＡＴＦ６）、真核生物翻訳開始因子２アルファキナーゼ３（ＰＥＲＫ）、セリン／トレオニンプロテインキナーゼ／エンドリボヌクレアーゼＩＲＥ１（ＩＲＥ１）、ワーリン（Ｗｈｉｒｌｉｎ）（ＷＨＲＮ）、オンコモジュリン（ＯＣＭ）、ＬＩＭホメオボックス１（Ｉｓｌ１）、膜貫通及びテトラトリコペプチドリピート含有４（ＴＭＴＣ４）、結合免疫グロブリンタンパク質（ＢＩＰ）、または電位依存性カリウムチャネルサブファミリーＱメンバー４（ＫＣＮＱ４）である。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、異種発現産物は、タンパク質、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、遺伝子編集系の成分（例えば、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、もしくはジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）等のヌクレアーゼ、またはガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ））、またはマイクロＲＮＡである。いくつかの実施形態では、タンパク質は、アクチン・ガンマ１（Ａｃｔｉｎ Ｇａｍｍａ １）（ＡＣＴＧ１）、網膜Ｆａｓｃｉｎアクチン束化タンパク質２（Ｆａｓｃｉｎ Ａｃｔｉｎ－Ｂｕｎｄｌｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ ２、Ｒｅｔｉｎａｌ）（ＦＳＣＮ２）、ラディキシン（ＲＤＸ）、ＰＯＵクラス４ホメオボックス３（ＰＯＵ４Ｆ３）、ＴＲＩＯ及びＦ－アクチン結合タンパク質（ＴＲＩＯＢＰ）、Ｔａｐｅｒｉｎ（ＴＰＲＮ）、Ｘｉｎアクチン結合リピート含有２（Ｘｉｎ Ａｃｔｉｎ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｒｅｐｅａｔ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ２）（ＸＩＲＰ２）、アトーナル（Ａｔｏｎａｌ）ＢＨＬＨ転写因子１（ＡＴＯＨ１）、転写抑制因子Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ １（ＧＦＩ１）、コリン作動性ニコチン性受容体アルファ９サブユニット（ＣＨＲＮＡ９）、コリン作動性ニコチン性受容体アルファ１０サブユニット（ＣＨＲＮＡ１０）、カルシウム及びインテグリン結合ファミリーメンバー３（ＣＩＢ３）、カドヘリン２３（ＣＤＨ２３）、プロトカドヘリン１５（ＰＣＤＨ１５）、キノシリン（Ｋｉｎｏｃｉｌｉｎ）（ＫＮＣＮ）、Ｐｅｊｖａｋｉｎ（ＤＦＮＢ５９）、ＭＫＲＮ２ Ｏｐｐｏｓｉｔｅ Ｓｔｒａｎｄ（ＭＫＲＮ２ＯＳ）、ＬＩＭホメオボックスタンパク質３（ＬＨＸ３）、膜貫通チャネル様１（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃｈａｎｎｅｌ Ｌｉｋｅ １）（ＴＭＣ１）、ミオシン１５（ＭＹＯ１５）、ミオシン７Ａ（ＭＹＯ７Ａ）、ミオシン６（ＭＹＯ６）、ミオシンＩＩＩＡ（ＭＹＯ３Ａ）、ミオシンＩＩＩＢ（ＭＹＯ３Ｂ）、グルタレドキシンドメイン含有システインリッチタンパク質１（Ｇｌｕｔａｒｅｄｏｘｉｎ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｃｙｓｔｅｉｎｅ－Ｒｉｃｈ Ｐｒｏｔｅｉｎ １）（ＧＲＸＣＲ１）、プロテインチロシンホスファターゼ、受容体型Ｑ（ＰＴＰＲＱ）、後期角化膜（Ｌａｔｅ Ｃｏｒｎｉｆｉｅｄ Ｅｎｖｅｌｏｐｅ）６Ａ（ＬＣＥ６Ａ）、リポキシゲナーゼ相同ドメイン含有タンパク質１（Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ Ｈｏｍｏｌｏｇｙ Ｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ １）（ＬＯＸＨＤ１）、ＡＤＰ－リボシルトランスフェラーゼ１（ＡＲＴ１）、ＡＴＰアーゼ細胞膜Ｃａ２＋輸送２（ＡＴＰａｓｅ Ｐｌａｓｍａ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃａ２＋ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ ２）（ＡＴＰ２Ｂ２）、カルシウム及びインテグリン結合ファミリーメンバー２（ＣＩＢ２）、電位依存性カルシウムチャネル補助サブユニットアルファ２デルタ４（ＣＡＣＮＡ２Ｄ４）、上皮成長因子受容体経路基質８（ＥＰＳ８）、ＥＰＳ８様２（ＥＰＳ８Ｌ２）、エスピン（ＥＳＰＮ）、エスピン様（ＥＳＰＮＬ）、ペリフェリン２（ＰＲＰＨ２）、溶質輸送体ファミリー８メンバーＡ２（ＳＬＣ８Ａ２）、ジンクフィンガーＣＣＨＣタイプ含有タンパク質１２（Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ ＣＣＨＣ－Ｔｙｐｅ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ １２）（ＺＣＣＨＣ１２）、ロイシンリッチ膜貫通・Ｏ－メチルトランスフェラーゼドメイン含有（Ｌｅｕｃｉｎｅ Ｒｉｃｈ Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｄ Ｏ－ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）（ＬＲＴＯＭＴ２、ＬＲＴＯＭＴ１）、ＵＳＨ１タンパク質ネットワーク成分ハーモニン（ＵＳＨ１Ｃ）、溶質輸送体ファミリー２６メンバー５（ＳＬＣ２６Ａ５）、Ｐｉｅｚｏ型機械感受性イオンチャネル成分２（ＰＩＥＺＯ２）、細胞外ロイシンリッチリピート及びフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン含有１（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｌｅｕｃｉｎｅ Ｒｉｃｈ Ｒｅｐｅａｔ ａｎｄ Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ Ｔｙｐｅ ＩＩＩ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １）（ＥＬＦＮ１）、テトラトリコペプチドリピートタンパク質２４（ＴＴＣ２４）、Ｄｙｓｔｒｏｔｅｌｉｎ（ＤＹＴＮ）、コイルドコイルグルタミン酸リッチタンパク質２（ＣＣＥＲ２）、ロイシンリッチリピート及び膜貫通ドメイン含有タンパク質２（ＬＲＴＭ２）、電位依存性カリウムチャネルサブファミリーＡメンバー１０（ＫＣＮＡ１０）、クラリン１（Ｃｌａｒｉｎ １）（ＣＬＲＮ１）、クラリン２（Ｃｌａｒｉｎ ２）（ＣＬＲＮ２）、ＳＫＩファミリー転写コリプレッサー１（ＳＫＩ Ｆａｍｉｌｙ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｃｏｒｅｐｒｅｓｓｏｒ １）（ＳＫＯＲ１）、Ｔｃｔｅｘ１ドメイン含有タンパク質１（ＴＣＴＥＸ１Ｄ１）、Ｆｃ受容体様Ｂ（ＦＣＲＬＢ）、グルタレドキシンドメイン含有システインリッチタンパク質２（ＧＲＸＣＲ２）、セルピンファミリーＥメンバー３（ＳＥＲＰＩＮＥ３）、Ｎｅｓｃｉｅｎｔヘリックス－ループヘリックス１（Ｎｅｓｃｉｅｎｔ Ｈｅｌｉｘ－ｌｏｏｐ Ｈｅｌｉｘ １）（ＮＨＬＨ１）、熱ショックタンパク質７０（ＨＳＰ７０）、熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）、活性化転写因子６（ＡＴＦ６）、真核生物翻訳開始因子２アルファキナーゼ３（ＰＥＲＫ）、セリン／トレオニンプロテインキナーゼ／エンドリボヌクレアーゼＩＲＥ１（ＩＲＥ１）、ワーリン（Ｗｈｉｒｌｉｎ）（ＷＨＲＮ）、オンコモジュリン（ＯＣＭ）、ＬＩＭホメオボックス１（Ｉｓｌ１）、膜貫通及びテトラトリコペプチドリピート含有４（ＴＭＴＣ４）、結合免疫グロブリンタンパク質（ＢＩＰ）、または電位依存性カリウムチャネルサブファミリーＱメンバー４（ＫＣＮＱ４）である。
【0016】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターの３’末端と、タンパク質をコードするポリヌクレオチドの５’開始部位（ＡＴＧ）とを連結するために連結ポリヌクレオチドが使用される。いくつかの実施形態では、連結ポリヌクレオチドには、コザック配列またはその一部が含まれる。いくつかの実施形態では、連結ポリヌクレオチドには、多重クローニング部位またはその一部が含まれる。
【0017】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、核酸ベクターは、ウイルスベクター、プラスミド、コスミド、または人工染色体である。いくつかの実施形態では、核酸ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、またはレンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶベクターである。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、ｒｈ７４、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／８、ＤＪ／９、７ｍ８、ＰＨＰ．Ｂ、ＰＨＰ．ｅＢ、またはＰＨＰ．Ｓのカプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１カプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ９カプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、７ｍ８カプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＰＨＰ．Ｓカプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、Ａｎｃ８０カプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、Ａｎｃ８０Ｌ６５カプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２カプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）カプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＰＨＰ．ｅＢカプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ３カプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ４カプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ５カプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ６カプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ７カプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ８カプシドを有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＰＨＰ．Ｂカプシドを有する。
【0018】
別の態様では、本発明は、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）、あるいは（ｉｉ）全長ステレオシリンタンパク質をコードしないでステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする第１のポリヌクレオチドに機能的に連結された、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれるその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターが含まれる、核酸ベクターを提供する。いくつかの実施形態では、核酸ベクターは、２ベクター系における第１の核酸ベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする第２のポリヌクレオチドを含有する第２の核酸ベクターがさらに含まれる、第１の核酸ベクターである。
【0019】
別の態様では、本発明は、全長ステレオシリンタンパク質をコードしないでステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする第１のポリヌクレオチドに機能的に連結された、配列番号４８または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０が含まれるその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターが含まれる、核酸ベクターを提供する。いくつかの実施形態では、核酸ベクターは、２ベクター系における第１の核酸ベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする第２のポリヌクレオチドを含有する第２の核酸ベクターがさらに含まれる、第１の核酸ベクターである。
【0020】
別の態様では、本発明は、（ａ）ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする第１のポリヌクレオチドに機能的に連結された、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）、あるいは（ｉｉ）配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれるその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターを含有する、第１の核酸ベクター、及び（ｂ）ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする第２のポリヌクレオチドを含有する第２の核酸ベクター、が含まれる２ベクター系を提供する。
【0021】
別の態様では、本発明は、（ａ）ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする第１のポリヌクレオチドに機能的に連結された、配列番号４８または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０が含まれるその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターを含有する、第１の核酸ベクター、及び（ｂ）ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする第２のポリヌクレオチドを含有する第２の核酸ベクター、が含まれる２ベクター系を提供する。
【0022】
いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレオチドと部分的に重複する。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドは、長さが少なくとも２００塩基（ｂ）（例えば、少なくとも２００ｂ、３００ｂ、４００ｂ、５００ｂ、６００ｂ、７００ｂ、８００ｂ、９００ｂ、１．０キロベース（ｋｂ）、１．１ｋｂ、１．２ｋｂ、１．３ｋｂ、１．４ｋｂ、１．５ｋｂまたはそれ以上）である重複領域を有する。いくつかの実施形態では、第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターは、哺乳類細胞に導入された場合、相同組換えを受けて、全長ステレオシリンタンパク質をコードする組換えポリヌクレオチドを形成する。
【0023】
いくつかの実施形態では、第１の核酸ベクターには、第１のポリヌクレオチドの３’に位置するスプライスドナーシグナル配列が含まれ、第２の核酸ベクターには、第２のポリヌクレオチドの５’に位置するスプライスアクセプターシグナル配列が含まれる。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドは重複しない。
【0024】
いくつかの実施形態では、第１の核酸ベクターには、第１のポリヌクレオチドの３’に位置するスプライスドナーシグナル配列及びスプライスドナーシグナル配列の３’に位置する第１の組換え誘導領域が含まれ、第２の核酸ベクターには、第２の組換え誘導領域、組換え誘導領域の３’に位置するスプライスアクセプターシグナル配列、及びスプライスアクセプターシグナル配列の３’に位置する第２のポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドは重複しない。いくつかの実施形態では、第１の組換え誘導領域と第２の組換え誘導領域は同じである。いくつかの実施形態では、第１の組換え誘導領域及び第２の組換え誘導領域の各々はＡＰ遺伝子断片である。いくつかの実施形態では、ＡＰ遺伝子断片には配列番号４２～４７のいずれか１つの配列が含まれるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ＡＰ遺伝子断片には配列番号４５の配列が含まれるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の核酸ベクターにはさらに、組換え誘導領域の３’に位置する分解シグナル配列が含まれ、第２の核酸ベクターにはさらに、組換え誘導領域とスプライスアクセプターシグナル配列との間に位置する分解シグナル配列が含まれる。
【0025】
いくつかの実施形態では、第２の核酸ベクターにはさらに、第２のポリヌクレオチドに機能的に連結された、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）、あるいは（ｉｉ）配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれるその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターが含まれ、かかるＳＴＲＣプロモーターは、第２のポリヌクレオチドの５’に位置している。
【0026】
いくつかの実施形態では、第２の核酸ベクターにはさらに、第２のポリヌクレオチドに機能的に連結された、配列番号４８または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０が含まれるその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターが含まれ、かかるＳＴＲＣプロモーターは、第２のポリヌクレオチドの５’に位置している。
【0027】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の核酸ベクター内のＳＴＲＣプロモーターは、第１の核酸ベクター内のＳＴＲＣプロモーターと同じである（すなわち、同じヌクレオチド配列を有する）。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の核酸ベクター内のＳＴＲＣプロモーターは、第１の核酸ベクター内のＳＴＲＣプロモーターとは異なるヌクレオチド配列を有する。
【0028】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する。
【0029】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは配列番号１からなる。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれるその機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有する。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれるその機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有する。
【0030】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には配列番号２のヌクレオチド３５～５３０が含まれるか、またはそれからなる。
【0031】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは配列番号２からなる。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号４８に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号４８に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する。
【0032】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号４８の配列を有する。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド１～５６０が含まれるか、またはそれからなる。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４が含まれるか、またはそれからなる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には配列番号４８のヌクレオチド１～５６０が含まれるか、またはそれからなる。
【0033】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の核酸ベクターにはさらに、第１のポリヌクレオチドの３’に位置し、かつ、それによるリーディングフレーム内にある、Ｎ末端インテイン（Ｎ－インテイン）をコードするポリヌクレオチドが含まれる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の核酸ベクターにはさらに、ＳＴＲＣプロモーターと第２のポリヌクレオチドとの間に位置し、かつ、第２のポリヌクレオチドによるリーディングフレーム内にある、Ｃ末端インテイン（Ｃ－インテイン）をコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテイン及びＣ－インテインは、分割インテイントランススプライシング系の成分である。
【0034】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第１及び／または第２のベクターにはインテイン分解シグナルが含まれる。いくつかの実施形態では、分解シグナルは、Ｎ－デグロン及び／またはＣ－デグロンである。いくつかの実施形態では、Ｎ－デグロン及び／またはＣ－デグロンは、独立して、ＣＬ１デグロン、ＰＢ２９デグロン、ＳＭＮデグロン、ＣＩＩＴＡデグロン、またはＯＤＣデグロンである。いくつかの実施形態では、分解シグナルは、Ｅ．ｃｏｌｉジヒドロ葉酸レダクターゼ（ｅｃＤＨＦＲ）分解シグナルである。いくつかの実施形態では分解シグナルは、ＦＫＢＰ１２分解ドメインである（Ｂａｎａｓｚｙｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １２６：９９５－１００４，２００６）。いくつかの実施形態では、分解シグナルは、ＰＥＳＴ分解ドメインである（Ｒｅｃｈｓｔｅｉｎｅｒ ａｎｄ Ｒｏｇｅｒｓ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ．２１：２６７－２７１，１９９６）。いくつかの実施形態では分解シグナルは、ＵｂＲタグユビキチン化シグナルである（Ｃｈａｓｓｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．１０：２０１３，２０１９）。いくつかの実施形態では分解シグナルは、ヒトＥＬＲＢＤの不安定化変異である（Ｍｉｙａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１３４：３９４２－３９４５，２０１２）。
【0035】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第１のベクター及び第２のベクターは、哺乳類（例えば、ヒト）の有毛細胞（例えば、内有毛細胞、外有毛細胞、Ｉ型前庭有毛細胞、またはＩＩ型前庭有毛細胞）に導入された場合、それぞれ、第１の融合タンパク質及び第２の融合タンパク質を生成し、第１の融合タンパク質には、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分とその３’に位置するＮ－インテインとが含まれ、第２の融合タンパク質には、Ｃ－インテインとその３’に位置するステレオシリンタンパク質のＣ末端部分とが含まれる。いくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質のＮ－インテインのＣ末端と、第２の融合タンパク質のＣ－インテインのＮ末端とは、ペプチド結合を形成して、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分、Ｎ－インテイン、Ｃ－インテイン、及びステレオシリンタンパク質のＣ末端部分が含まれるポリペプチドを生成することができ、結合したＮ－インテインとＣ－インテインは、自己を切除して、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分のＣ末端と、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分のＮ末端とを連結し、それにより全長ステレオシリンタンパク質を生成することができる。
【0036】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、分割インテイントランススプライシング系は、１つ以上の細菌のＤｎａＥ遺伝子に由来する。いくつかの実施形態では、１つ以上の細菌は、Ｎｏｓｔｏｃ ｐｕｎｃｔｉｆｏｒｍｅ（Ｎｐｕ）、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ．ＰＣＣ６８０３（Ｓｓｐ）、Ｆｉｓｃｈｅｒｅｌｌａ ｓｐ．ＰＣＣ９６０５（Ｆｓｐ）、Ｓｃｙｔｏｎｅｍａ ｔｏｌｙｐｏｔｈｒｉｃｈｏｉｄｅｓ（Ｓｔｏ）、Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ＳＷ＿９＿４７＿５、Ｎｏｄｕｌａｒｉａ ｓｐｕｍｉｇｅｎａ（Ｎｓｐ）、Ｎｏｓｔｏｃ ｆｌａｇｅｌｌｉｆｏｒｍｅ（Ｎｆｌ）、Ｃｒｏｃｏｓｐｈａｅｒａ ｗａｔｓｏｎｉｉ（Ｃｗａ）ＷＨ８５０２、Ｃｈｒｏｏｃｏｃｃｉｄｉｏｐｓｉｓ ｃｕｂａｎａ（Ｃｃｕ）ＣＣＡＬＡ０４３、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｓｍｉｕｍ ｅｒｙｔｈｒａｅｕｍ（Ｔｅｒ）、Ｒｈｏｄｏｔｈｅｒｍｕｓ ｍａｒｉｎｕｓ（Ｒｍａ）、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ（Ｓｃｅ）、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃａｓｔｅｌｌｉｉ（Ｓｃａ）、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｕｎｉｓｐｏｒｕｓ（Ｓｕｎ）、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓ（Ｚｂｉ）、Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ ｐｒｅｔｏｒｉｅｎｓｉｓ（Ｔｐｒ）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｍｔｕ）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ（Ｍｌｅ）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓ（Ｍｓｍ）、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ａｂｙｓｓｉ（Ｐａｂ）、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉ（Ｐｈｏ）、Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｔｉ（Ｃｂｕ）、Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ（Ｃｎｅ）、Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｇａｔｔｉｉ（Ｃｇａ）、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ（Ｈｃａ）、及びＰｏｒｐｈｙｒａ ｐｕｒｐｕｒｅａ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ（Ｐｐｕ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、分割インテイントランススプライシング系は、望ましい安定性及び活性を有する分割インテインを操作するためのコンセンサス設計（例えば、Ｃｆａ）を特定するためのＤｎａＥの多重配列アラインメント研究から誘導される。
【0037】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは、配列番号７、９、１２、１４、１６～２１、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４９、５１、５３、５５、及び５７のいずれか１つの配列を有し、Ｃ－インテインは、配列番号８、１０、１１、１３、１５、２２～２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、５０、５２、５４、５６、及び５８のいずれか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号７の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号８の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号７の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号１０の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号７の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号１１の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号９の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号８の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号９の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号１０の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号９の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号１１の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号１２の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号１３の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号１４の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号１５の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号１６の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号２２の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号１９の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号２３の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号２０の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号２４の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号２１の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号２５の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号２６の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号２７の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号２８の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号２９の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号３０の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号３１の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号３２の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号３３の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号３４の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号３５の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号３６の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号３７の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号３８の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号３９の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは、配列番号１６～２１のいずれか１つの配列を有し、Ｃ－インテインは、配列番号２２～２５のいずれか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号４９の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号５０の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号５１の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号５２の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号５３の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号５４の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号５５の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号５６の配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインは配列番号５７の配列を有し、Ｃ－インテインは配列番号５８の配列を有する。いくつかの実施形態では、分割インテイントランススプライシング系には、リガンドとの接触時にのみタンパク質のトランススプライシングを実行する１つ以上のインテインが含まれる。いくつかの実施形態では、リガンドは、４－ヒドロキシタモキシフェン、ペプチド、タンパク質、ポリヌクレオチド、アミノ酸、及びヌクレオチドからなる群から選択される。
【0038】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、連結ポリヌクレオチドは、ＳＴＲＣプロモーターの３’末端と、第１のポリヌクレオチド及び／またはＣ－インテインをコードするポリヌクレオチドの５’開始部位（ＡＴＧ）とを連結するために使用される。いくつかの実施形態では、連結ポリヌクレオチドには、コザック配列またはその一部が含まれる。いくつかの実施形態では、連結ポリヌクレオチドには、多重クローニング部位またはその一部が含まれる。
【0039】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の核酸ベクターにはさらに、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’及びフレーム内に配される。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の核酸ベクターにはさらに、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’及びフレーム内に配される。
【0040】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドも第２のポリヌクレオチドも全長ステレオシリンタンパク質をコードしない。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドの各々が、ステレオシリンタンパク質配列の約半分をコードする。
【0041】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の核酸ベクターにはさらに、第２のポリヌクレオチドの３’にポリ（Ａ）配列が含まれる。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターには、本明細書に記載されるプロモーターの一部ではないＳＴＲＣ非翻訳領域（ＵＴＲ）は含まれない。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターには、ＳＴＲＣ ＵＴＲが含まれる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の核酸ベクターには、第１のポリヌクレオチドの５’に５’ＳＴＲＣ ＵＴＲが含まれる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の核酸ベクターには、第２のポリヌクレオチドの３’に３’ＳＴＲＣ ＵＴＲが含まれる。
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターには、本明細書に記載されるプロモーターの一部ではないＳＴＲＣ非翻訳領域（ＵＴＲ）は含まれない。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターには、ＳＴＲＣ ＵＴＲが含まれる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第１の核酸ベクターには、第１のポリヌクレオチドの５’に５’ＳＴＲＣ ＵＴＲが含まれる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第２の核酸ベクターには、第２のポリヌクレオチドの３’に３’ＳＴＲＣ ＵＴＲが含まれる。
【0042】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質の部分をコードする第１及び第２のポリヌクレオチドにはイントロンが含まれない（例えば、第１及び第２のポリヌクレオチドが、ＳＴＲＣ ｃＤＮＡの部分である）。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質の部分をコードする第１及び第２のポリヌクレオチドには、イントロンが含まれる。
【0043】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、２ベクター系は、哺乳類の有毛細胞に全長ステレオシリンタンパク質の有毛細胞特異的発現を導くことができる。いくつかの実施形態では、哺乳類の有毛細胞はヒト有毛細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳類の有毛細胞はマウス有毛細胞である。いくつかの実施形態では、有毛細胞は、蝸牛有毛細胞である。いくつかの実施形態では、蝸牛有毛細胞は、外有毛細胞である。いくつかの実施形態では、蝸牛有毛細胞は、内有毛細胞である。いくつかの実施形態では、有毛細胞は、前庭有毛細胞である。いくつかの実施形態では、前庭有毛細胞は、Ｉ型前庭有毛細胞である。いくつかの実施形態では、前庭有毛細胞は、ＩＩ型前庭有毛細胞である。
【0044】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質は、配列番号３に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するヒトステレオシリンタンパク質である。いくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質は、配列番号３の配列を有する。いくつかの実施形態では、ヒトステレオシリンタンパク質は、配列番号５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの実施形態では、配列番号５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するポリヌクレオチドは、配列番号３のステレオシリンタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ヒトステレオシリンタンパク質は、配列番号５の配列を有するポリヌクレオチドによってコードされる。
【0045】
いくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質は、配列番号４に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するマウスステレオシリンタンパク質である。いくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質は、配列番号４の配列を有する。いくつかの実施形態では、マウスステレオシリンタンパク質は、配列番号６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる。いくつかの実施形態では、配列番号６に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するポリヌクレオチドは、配列番号４のステレオシリンタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、マウスステレオシリンタンパク質は、配列番号６の配列を有するポリヌクレオチドによってコードされる。
【0046】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、第１のベクター及び第２のベクターは、ウイルスベクター、プラスミド、コスミド、または人工染色体である。いくつかの実施形態では、第１のベクター及び第２のベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶベクター、アデノウイルスベクター、またはレンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、第１のベクター及び第２のベクターは、ＡＡＶベクターである。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、ｒｈ７４、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／８、ＤＪ／９、７ｍ８、ＰＨＰ．Ｂ、ＰＨＰ．ｅＢ、またはＰＨＰ．Ｓのカプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、ＡＡＶ１カプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、ＡＡＶ９カプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、７ｍ８カプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、ＰＨＰ．Ｓカプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、Ａｎｃ８０カプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、Ａｎｃ８０Ｌ６５カプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、ＡＡＶ２カプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）カプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、ＰＨＰ．ｅＢカプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、ＡＡＶ３カプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、ＡＡＶ４カプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、ＡＡＶ５カプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、ＡＡＶ６カプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、ＡＡＶ７カプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、ＡＡＶ８カプシドを有する。いくつかの実施形態では、第１のＡＡＶベクター及び第２のＡＡＶベクターの各々は、ＰＨＰ．Ｂカプシドを有する。
【0047】
別の態様では、本発明は、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクターまたは２ベクター系を含有する、組成物を提供する。いくつかの実施形態では、組成物にはさらに、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤が含まれる。
【0048】
別の態様では、本発明は、前述の態様または実施形態のいずれかに記載のポリヌクレオチド、核酸ベクター、または２ベクター系を含有する、細胞を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、有毛細胞である。いくつかの実施形態では、有毛細胞は、哺乳類の有毛細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳類の有毛細胞はヒト有毛細胞である。いくつかの実施形態では、有毛細胞は、蝸牛有毛細胞である。いくつかの実施形態では、蝸牛有毛細胞は、外有毛細胞である。いくつかの実施形態では、蝸牛有毛細胞は、内有毛細胞である。いくつかの実施形態では、有毛細胞は、前庭有毛細胞である。いくつかの実施形態では、前庭有毛細胞は、ＩＩ型前庭有毛細胞である。いくつかの実施形態では、前庭有毛細胞は、Ｉ型前庭有毛細胞である。
【0049】
別の態様では、本発明は、有毛細胞を、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクターまたは組成物と接触させることによって有毛細胞に異種発現産物を発現させる方法を提供する。いくつかの実施形態では、接触は、インビボ（例えば、対象の内部）で行われる。いくつかの実施形態では、発現産物は、有毛細胞で特異的に発現される。
【0050】
別の態様では、本発明は、有毛細胞を、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の２ベクター系または組成物と接触させることによって有毛細胞にステレオシリンタンパク質を発現させる方法を提供する。いくつかの実施形態では、接触は、インビボ（例えば、対象の内部）で行われる。いくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質は、有毛細胞で特異的に発現される。
【0051】
別の態様では、本発明は、難聴（例えば、感音性難聴、非症候性難聴、オーディトリー・ニューロパチー、または聴覚消失）を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクター、２ベクター系、または組成物を有効量にて対象の内耳に投与することによって治療する方法を提供する。
【0052】
別の態様では、本発明は、耳鳴を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクターまたは組成物を有効量にて対象の内耳に投与することによって治療する方法を提供する。
【0053】
別の態様では、本発明は、前庭機能障害を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクター、２ベクター系、または組成物を有効量にて対象の内耳に投与することによって治療する方法を提供する。
【0054】
別の態様では、本発明は、両側前庭障害を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクター、２ベクター系、または組成物を有効量にて対象の内耳に投与することによって治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、両側前庭障害は、耳毒性薬物誘発性両側前庭障害である。
【0055】
別の態様では、本発明は、動揺視を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクター、２ベクター系、または組成物を有効量にて対象の内耳に投与することによって治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、動揺視は、耳毒性薬物誘発性の動揺視である。
【0056】
別の態様では、本発明は、平衡障害を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクター、２ベクター系、または組成物を有効量にて対象の内耳に投与することによって治療する方法を提供する。
【0057】
別の態様では、本発明は、有毛細胞の再生の誘導または増加を必要とする対象において、それを、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクターまたは組成物を有効量にて対象の内耳に投与することによって行う方法を提供する。
【0058】
別の態様では、本発明は、有毛細胞の維持の増加を必要とする対象において、それを、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクター、２ベクター系、または組成物を有効量にて対象の内耳に投与することによって行う方法を提供する。
【0059】
別の態様では、本発明は、有毛細胞の生存の増加を必要とする対象において、それを、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクター、２ベクター系、または組成物を有効量にて対象の内耳に投与することによって行う方法を提供する。
【0060】
別の態様では、本発明は、有毛細胞の成熟の誘導または増加を必要とする対象において、それを、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクターまたは組成物を有効量にて対象の内耳に投与することによって行う方法を提供する。
【0061】
別の態様では、本発明は、耳毒性薬物誘発性の有毛細胞の損傷または細胞死の阻止または減少を必要とする対象において、それを、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクター、２ベクター系、または組成物を有効量にて対象の内耳に投与することによって行う方法を提供する。
【0062】
別の態様では、本発明は、有毛細胞の損傷または細胞死の阻止または減少を必要とする対象において、それを、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクター、２ベクター系、または組成物を有効量にて対象の内耳に投与することによって行う方法を提供する。
【0063】
別の態様では、本発明は、有毛細胞機能の改善を必要とする対象において、それを、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクター、２ベクター系、または組成物を有効量にて対象の内耳に投与することによって行う方法を提供する。
【0064】
別の態様では、本発明は、蓋膜への毛束の接着（例えば、ＯＨＣの毛束の接着）の増大または改善を必要とする対象において、それを行う方法であって、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の核酸ベクター、２ベクター系、または組成物を有効量にて対象の内耳に投与することが含まれる方法を提供する。
【0065】
別の態様では、本発明は、ＳＴＲＣの発現（例えば、野生型ステレオシリンタンパク質を生成するための、例えば、野生型ＳＴＲＣの発現）の増加を必要とする対象（例えば、対象の有毛細胞）において、それを、前述の態様または実施形態のいずれかに記載の２ベクター系または組成物を治療的有効量にて対象の内耳に投与することによって行う方法を提供する。
【0066】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、有毛細胞は、哺乳類の有毛細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳類の有毛細胞はヒト有毛細胞である。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、有毛細胞は、ＳＴＲＣを内因性発現する有毛細胞である。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、有毛細胞は、蝸牛有毛細胞である。いくつかの実施形態では、蝸牛有毛細胞は、外有毛細胞である。いくつかの実施形態では、蝸牛有毛細胞は、内有毛細胞である。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、有毛細胞は、前庭有毛細胞である。いくつかの実施形態では、前庭有毛細胞は、ＩＩ型前庭有毛細胞である。いくつかの実施形態では、前庭有毛細胞は、Ｉ型前庭有毛細胞である。
【0067】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、難聴（例えば、非症候性難聴、オーディトリー・ニューロパチー、または聴覚消失等の感音性難聴）を有するか、またはそれを発症するリスクがある。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、難聴は、遺伝性難聴である。いくつかの実施形態では、遺伝性難聴は、常染色体優性難聴、常染色体劣性難聴、またはＸ連鎖性難聴である。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、難聴は、後天性難聴である。いくつかの実施形態では、後天性難聴は、騒音性難聴、加齢性難聴、疾患もしくは感染症関連難聴、頭部外傷関連難聴、または耳毒性薬物誘発性難聴である。
【0068】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、前庭機能障害を有するか、またはそれを発症するリスクがある。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、前庭機能障害は、回転性めまい、浮動性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、または平衡障害である。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、前庭機能障害は、加齢性前庭機能障害、頭部外傷関連前庭機能障害、疾患もしくは感染症関連前庭機能障害、または耳毒性薬物誘発性前庭機能障害である。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、前庭機能障害は、遺伝子変異と関連する。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、前庭機能障害は、特発性前庭機能障害である。
【0069】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、耳毒性薬物は、アミノグリコシド（例えば、ゲンタマイシン、ネオマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、カナマイシン、バンコマイシン、もしくはアミカシン）、抗腫瘍薬（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、及びオキサリプラチン等の白金含有化学療法剤）、エタクリン酸、フロセミド、サリチル酸塩（例えば、アスピリン、特に高用量時）、またはキニーネである。
【0070】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、難聴、前庭機能障害、または耳鳴は、有毛細胞の消失、有毛細胞の損傷、または有毛細胞（例えば、蝸牛及び／または前庭の有毛細胞）の機能障害と関連する。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、難聴または前庭機能障害は、有毛細胞の不動毛束の異常な傾きまたは毛束（例えば、ＯＨＣの毛束）と蓋膜の間の結合性異常と関連する。
【0071】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、ＳＴＲＣの変異を有する。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、ＳＴＲＣの変異を有すると特定されている。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法にはさらに、２ベクター系または医薬組成物の投与前に、対象をＳＴＲＣの変異を有すると特定することが含まれる。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、聴覚消失、常染色体劣性１６（ＤＦＮＢ１６）を有する。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、ＤＦＮＢ１６を有すると特定されている。
【0072】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法にはさらに、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物の投与前に、対象の聴力を評価すること（例えば、聴力検査、聴性脳幹反応（ＡＢＲ）、蝸電図（ＥＣＯＧ）、または耳音響放射等の標準的検査を使用して聴力を評価すること）が含まれる。
【0073】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法にはさらに、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物の投与後に、対象の聴力を評価すること（例えば、聴力検査、ＡＢＲ、ＥＣＯＧ、または耳音響放射等の標準的検査を使用して聴力を評価すること）が含まれる。
【0074】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法にはさらに、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物の投与前に、対象の前庭機能を評価すること（例えば、電気眼振図（ＥＮＧ）もしくはビデオ式眼振計（ＶＮＧ）等の標準的検査、前庭動眼反射（ＶＯＲ）の検査（例えば、ベッドサイドでも、またビデオヘッドインパルス検査（ＶＨＩＴ）を使用しても実施することができるヘッドインパルス検査（Ｈａｌｍａｇｙｉ－Ｃｕｒｔｈｏｙｓ検査）、または温度反射検査（ｃａｌｏｒｉｃ ｒｅｆｌｅｘ ｔｅｓｔ））、重心動揺検査、回転椅子による検査（ｒｏｔａｒｙ－ｃｈａｉｒ ｔｅｓｔｉｎｇ）、ＥＣＯＧ、前庭誘発筋電位検査（ＶＥＭＰ）、またはＭａｎｃｉｎｉ ａｎｄ Ｈｏｒａｋ，Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈｙｓ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｍｅｄ，４６：２３９（２０１０）に記載があるもののような専門外来での平衡感覚検査を使用して前庭機能を評価すること）が含まれる。
【0075】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、方法にはさらに、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物の投与後に、対象の前庭機能を評価すること（例えば、ＥＮＧ、ＶＮＧ、ＶＯＲの検査、重心動揺検査、回転椅子による検査（ｒｏｔａｒｙ－ｃｈａｉｒ ｔｅｓｔｉｎｇ）、ＥＣＯＧ、ＶＥＭＰ、または専門外来での平衡感覚検査等の標準的検査を使用して前庭機能を評価すること）が含まれる。
【0076】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物は、局所投与される。いくつかの実施形態では、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物は、内耳に投与される。いくつかの実施形態では、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物は、中耳に投与される。いくつかの実施形態では、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物は、半規管に投与される。いくつかの実施形態では、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物は、経鼓室投与または鼓室内投与される。いくつかの実施形態では、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物は、外リンパ中に投与される。いくつかの実施形態では、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物は、内リンパ中に投与される。いくつかの実施形態では、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物は、卵円窓に対して、またはそれを介して投与される。いくつかの実施形態では、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物は、正円窓に対して、またはそれを介して投与される。
【0077】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、２ベクター系のベクターは、同時に投与される。前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、２ベクター系のベクターは、順次に投与される。
【0078】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物は、前庭機能障害を予防するかもしくは減少させる、前庭機能障害の発症を遅延させる、前庭機能障害の進行を減速させる、前庭機能を改善する、難聴を予防もしくは軽減する、耳鳴を予防もしくは軽減する、難聴の発症を遅延させる、難聴の進行を減速させる、聴力を改善する、語音弁別を改善する、有毛細胞機能を改善する、有毛細胞でのＳＴＲＣの発現を増加させる、蝸牛及び／または前庭の有毛細胞数を増加させる、蝸牛及び／または前庭の有毛細胞の成熟を高める、蝸牛及び／または前庭の有毛細胞の再生を増加させる、蝸牛及び／または前庭の有毛細胞の機能を改善する、蝸牛及び／または前庭の有毛細胞の損傷を阻止もしくは軽減する、蝸牛及び／または前庭の有毛細胞死を阻止するかもしくは減少させる、蓋膜への毛束の接着（例えば、ＯＨＣの毛束の接着）を改善する、あるいは蝸牛及び／または前庭の有毛細胞の生存を促進するかもしくは増加させるのに十分な量で投与される。
【0079】
前述の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、対象は、ヒト対象である。
別の態様では、本発明は、前述の態様または実施形態のいずれかに記載のポリヌクレオチド、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物を含有する、キットを提供する。
別の態様では、本発明は、前述の態様または実施形態のいずれかに記載のポリヌクレオチド、核酸ベクター、２ベクター系、または組成物を含有する、キットを提供する。
【0080】
定義
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、記載されている値を１０％以内で上回っているか下回っている値を指す。
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、記載されている値を１０％以内で上回っているか下回っている値を指す。
【0081】
本明細書で使用される場合、「投与」とは、治療剤（例えば、導入遺伝子に機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーターを含有する核酸ベクター）を任意の有効な経路によって対象に提供するかまたは与えることを指す。例示的な投与経路を本明細書において以下に記載する。
【0082】
本明細書で使用される場合、「内耳に投与すること」という表現は、内耳細胞への形質導入を可能にする任意の経路によって対象に対して本明細書に記載される治療剤を提供するかまたは与えることを指す。内耳への例示的な投与経路には、外リンパもしくは内リンパ中への投与、例えば、卵円窓、正円窓、もしくは半規管（例えば、水平半規管）への、もしくはそれを介した投与、または経鼓室注射もしくは鼓室内注射による投与、例えば、有毛細胞への投与が含まれる。
【0083】
本明細書で使用される場合、「細胞型」という用語は、遺伝子発現データに基づいて統計的に分けることができる表現型を共有している細胞の一群を指す。例えば、共通の細胞型の細胞は、同様の構造的及び／または機能的性質、例えば、同様の遺伝子活性化パターン及び抗原提示特性を共有し得る。共通の細胞型の細胞には、共通の組織（例えば、上皮組織、神経組織、結合組織、もしくは筋組織）から分離されるもの、及び／または生物における共通の器官、組織系、血管、もしくは他の構造及び／または領域から分離されるものが含まれ得る。
【0084】
本明細書で使用される場合、「蝸牛有毛細胞」という用語は、音の感知に関与する、内耳の特殊化した細胞群を指す。蝸牛有毛細胞には、内有毛細胞と外有毛細胞の２種類がある。蝸牛有毛細胞の損傷及び蝸牛有毛細胞機能を破壊する遺伝子変異は、難聴及び聴覚消失に関与している。
【0085】
本明細書で使用される場合、「保存的変異」、「保存的置換」、及び「保存的アミノ酸置換」という用語は、１つ以上のアミノ酸から、同様の物理化学的性質、例えば、極性、静電荷、及び立体体積を示す１つ以上の異なるアミノ酸への置換を指す。これらの性質を、天然に存在する２０のアミノ酸各々について下表１にまとめる。
【0086】
【表1】
【0087】
この表から、保存的アミノ酸ファミリーには、（ｉ）Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、及びＩ、（ｉｉ）Ｄ及びＥ、（ｉｉｉ）Ｃ、Ｓ及びＴ、（ｉｖ）Ｈ、Ｋ及びＲ、（ｖ）Ｎ及びＱ、ならびに（ｖｉ）Ｆ、Ｙ及びＷが含まれることが認識される。したがって、保存的な変異または置換は、あるアミノ酸を同じアミノ酸ファミリーメンバーで置換するものである（例えば、ＴｈｒをＳｅｒに、またはＡｒｇをＬｙｓに置換）。
【0088】
本明細書で使用される場合、「分解シグナル配列」という用語は、配列（例えば、アミノ酸配列に翻訳することができるヌクレオチド配列）であって、それを含有しているポリペプチドの分解を媒介する配列を指す。本開示の核酸ベクターに分解シグナル配列を含めて、組換え及び／またはスプライシングを受けなかったステレオシリンタンパク質の部分の発現を減少させるかもしくは阻止することができる。
【0089】
本明細書で使用される場合の「由来」及び「誘導体」という用語は、対応する全長野生型の核酸、ペプチド、もしくはタンパク質と比較して、１つ以上の変異及び／または化学修飾を含む核酸、ペプチド、もしくはタンパク質、またはそのバリアントもしくは類似体を指す。核酸が関与する化学修飾の非限定的な例としては、例えば、塩基部分、糖部分、リン酸部分、リン酸－糖骨格、またはそれらの組み合わせに対する修飾が挙げられる。
【0090】
本明細書で使用される場合、本明細書に記載の組成物、ベクターコンストラクト、またはウイルスベクターの「有効量」、「治療的有効量」、及び「十分な量」という用語は、哺乳類、例えば、ヒトを含め、対象に投与した場合に、臨床結果を含め、有益な結果または所望の結果を生じさせるのに十分な量を指し、したがって、「有効量」またはその同義語は、それが適用される状況に応じて異なる。例えば、感音性難聴または前庭機能障害の治療との関連では、それは、組成物、ベクターコンストラクト、またはウイルスベクターの投与がない場合に得られる反応と比較して治療反応を達成するのに十分な、その組成物、ベクターコンストラクト、またはウイルスベクターの量である。そのような量に相当する本明細書に記載される所与の組成物の量は、様々な要因、例えば、所与の薬剤、医薬製剤、投与経路、疾患または障害の種類、治療される対象または宿主の特徴（例えば、年齢、性別、重量）等によって異なってくるが、それにもかかわらず、当業者が日常的に決定することができる。また、本明細書で使用される場合、本開示の組成物、ベクターコンストラクト、またはウイルスベクターの「治療的有効量」は、対照と比較して、対象に有益な結果または所望の結果をもたらす量である。本明細書で定義されるように、本開示の組成物、ベクターコンストラクト、またはウイルスベクターの治療的有効量は、当該技術分野で公知の日常的な方法によって当業者により容易に決定され得る。投与レジメンは、最適な治療効果が得られるよう調整され得る。
【0091】
本明細書で使用される場合、「内在性」という用語は、特定の生物（例えば、ヒト）において、または生物内部の特定の位置（例えば、器官、組織、またはヒト細胞、例えば、ヒト有毛細胞等の細胞）において、天然に見出される分子（例えば、ポリペプチド、核酸、または補因子）を指す。
【0092】
本明細書で使用される場合、「発現する」という用語は、（１）ＤＮＡ配列からの（例えば、転写による）ＲＮＡ鋳型の生成、（２）ＲＮＡ転写産物の（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／または３’末端プロセシングによる）プロセシング、（３）ポリペプチドまたはタンパク質へのＲＮＡの翻訳、及び（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾というイベントのうちの１つ以上を指す。「発現産物」という用語は、これらのイベントのいずれかによって生成されるタンパク質またはＲＮＡ分子を指す。
【0093】
本明細書で使用される場合、「外因性」という用語は、特定の生物（例えば、ヒト）において、または生物内部の特定の位置（例えば、器官、組織、またはヒト細胞、例えば、ヒト有毛細胞等の細胞）において、天然には見出されない分子（例えば、ポリペプチド、核酸、または補因子）を表す。外因性材料には、生物またはそこから抽出された培養物質に対して外部供給源から提供されるものが含まれる。
【0094】
本明細書で使用される場合、「エクソン」という用語は、遺伝子のコード領域内の領域を指し、そのヌクレオチド配列が、対応するタンパク質のアミノ酸配列を決定する。エクソンという用語はまた、遺伝子から転写されたＲＮＡの対応する領域を指す。エクソンは、ｍＲＮＡ前駆体へと転写され、遺伝子の選択的スプライシングに応じて成熟ｍＲＮＡに含まれる場合がある。プロセシングの後に成熟ｍＲＮＡに含まれるエクソンは、タンパク質へと翻訳され、その場合、エクソンの配列がタンパク質のアミノ酸組成を決定する。
【0095】
本明細書で使用される場合、「機能的部分」という用語は、本明細書に記載されるプロモーター配列（例えば、ＳＴＲＣプロモーター配列）に言及している場合、表２に記載のプロモーター配列（例えば、配列番号２または配列番号４８）よりも短く、かつ、ＲＮＡポリメラーゼを動員して、自身が機能的に連結されている遺伝子の転写を駆動することができるヌクレオチド配列を指す。例えば、本開示との関連において、配列番号２のマウスＳＴＲＣプロモーター（５３７塩基（ｂ））の機能的部分は、配列番号２の配列を有する場合もあれば、そのヌクレオチド２５２～５３７を含む場合もある。配列番号２のＳＴＲＣプロモーターの他の機能的部分は、配列番号２の配列を有する場合もあれば、そのヌクレオチド１２０～５３７またはヌクレオチド３５～５３０を含む場合もある。別の例では、配列番号４８のヒトＳＴＲＣプロモーター（５６４塩基（ｂ））の機能的部分は、配列番号４８の配列を有する場合もあれば、そのヌクレオチド２８０～５６０を含む場合もある。配列番号４８のＳＴＲＣプロモーターの他の機能的部分は、配列番号４８の配列を有する場合もあれば、そのヌクレオチド２８０～５６４、ヌクレオチド１２４～５６０、ヌクレオチド１２４～５６４、ヌクレオチド６１～５６０（配列番号１に記載）、またはヌクレオチド１～５６０を含む場合もある。
【0096】
本明細書で使用される場合、「異種」という用語は、天然には存在しない、要素の組み合わせを指す。例えば、異種導入遺伝子とは、導入遺伝子であって、それが機能的に連結されているプロモーターによって天然で発現されることのない導入遺伝子を指す。
【0097】
本明細書で使用される場合、「有毛細胞」という用語は、聴覚（すなわち、蝸牛有毛細胞）の情報または前庭（すなわち、前庭有毛細胞）の情報を伝達する内耳の特殊化した感覚細胞を指す。有毛細胞は、細胞の頂端面から出ている不動毛の束を特徴とする。聴覚（すなわち、蝸牛の）有毛細胞の例には、内有毛細胞（ＩＨＣ）及び外有毛細胞（ＯＨＣ）が含まれる。前庭有毛細胞の例には、Ｉ型前庭有毛細胞及びＩＩ型前庭有毛細胞が含まれる。
【0098】
本明細書で使用される場合、「有毛細胞特異的な発現」という用語は、内耳の他の細胞型（例えば、ラセン神経節ニューロン、グリア、または他の内耳細胞型）と比較して、主に有毛細胞（例えば、蝸牛有毛細胞及び／または前庭有毛細胞）内でのＲＮＡ転写産物もしくはポリペプチドの生成を指す。導入遺伝子の有毛細胞特異的な発現は、内耳の様々な細胞型間（例えば、有毛細胞対非有毛細胞）の導入遺伝子発現（例えば、ＲＮＡまたはタンパク質の発現）を、任意の標準的技術（例えば、定量的ＲＴ ＰＣＲ、免疫組織化学染色、ウエスタンブロット分析、またはプロモーターに機能的に連結されたレポーター（例えば、ＧＦＰ）の蛍光の測定）を使用して比較することによって確認することができる。有毛細胞特異的プロモーターは、それが機能的に連結されている導入遺伝子の発現（例えば、ＲＮＡまたはタンパク質の発現）を有毛細胞に誘導し、これが、以下の内耳細胞型のうち少なくとも３つ（例えば、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、またはそれ以上）と比較して少なくとも５０％高い（例えば、５０％、７５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％またはそれ以上高い）：境界細胞、内指節細胞、内柱細胞、外柱細胞、第１列ダイテルス細胞、第２列ダイテルス細胞、第３列ダイテルス細胞、ヘンゼン細胞、クラウディウス細胞、内溝細胞、外溝細胞、ラセン隆起細胞、根細胞、歯間細胞、血管条の基底細胞、血管条の中間細胞、血管条の辺縁細胞、ラセン神経節ニューロン、シュワン細胞。有毛細胞特異的プロモーターは、必ずしもすべての有毛細胞に発現を誘導するわけではないが、内有毛細胞、外有毛細胞、Ｉ型前庭有毛細胞、またはＩＩ型前庭有毛細胞のうちの少なくとも１つの有毛細胞型に発現を誘導する。本明細書に記載されるＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、及び配列番号４８、及びそれらの一部）は、有毛細胞特異的プロモーターである。
【0099】
本明細書で使用される場合、「増加させること」及び「減少させること」という用語は、それぞれ、参照に比べて指標の機能、発現、または活性の量がより大きくまたは小さくなるよう調節することを指す。例えば、本明細書に記載の方法での組成物の投与後、本明細書に記載される指標（例えば、導入遺伝子発現）のマーカーの量は、対象において、投与前のマーカーの量と比べて少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９８％またはそれ以上増加または減少され得る。一般に、指標は、投与後に、治療レジメンが開始されてから投与により記述の効果があった時点で、例えば、少なくとも１週間後、１か月後、３か月後、または６か月後に測定される。
【0100】
本明細書で使用される場合、「タンパク質イントロン」とも呼ばれる「インテイン」という用語は、典型的には１００～９００アミノ酸残基長であり、かつ、自己切除及び隣接タンパク質断片（「エクステイン」）のペプチド結合によるライゲーションをすることができる、タンパク質の部分を指す。インテインは、タンパク質スプライシング時に生成される。用語「インテイン」には、マキシインテイン、ミニインテイン、トランススプライシングインテイン、及びアラニンインテインが含まれる、４つの異なるクラスのインテインが包含される。マキシインテインとは、エンドヌクレアーゼドメインを含有するタンパク質のＮ末端スプライシング領域及びＣ末端スプライシング領域を指す。エンドヌクレアーゼドメインは、「ホーミングエンドヌクレアーゼ遺伝子」または「ＨＥＧ」としても知られ、イントロン内部の独立型遺伝子として、他のタンパク質とのタンパク質融合体として、または自己スプライシングインテインとしてコードされるエンドヌクレアーゼのクラスを指す。ＨＥＧは一般に、非常に少ない、標的とされることが多いＤＮＡ領域を加水分解する。ＨＥＧがＤＮＡ断片を加水分解すると、ＨＥＧをコードする遺伝子は典型的には、自身を切断部位に組み込み、それによりそのアレル頻度を増加させる。ミニインテインとは、エンドヌクレアーゼドメインを欠く、Ｎ末端スプライシングドメイン及びＣ末端スプライシングドメインを指す。トランススプライシングインテインとは、２つ以上のドメインに分割され、それらがさらにＮ末端とＣ末端とに分割されるインテインを指す。アラニンインテインとは、システインまたはセリンではなくアラニンのスプライシング接合部を有するインテインを指す。前駆体タンパク質のインテインが２つの遺伝子から生じる場合があり、そのような場合、そのインテインは分割「インテイン」と命名される。
【0101】
本明細書で使用される場合、「イントロン」という用語は、遺伝子のコード領域内の領域であって、そのヌクレオチド配列が、対応するタンパク質のアミノ酸配列に翻訳されない領域を指す。イントロンという用語はまた、遺伝子から転写された、ＲＮＡの対応する領域も指す。イントロンは、ｍＲＮＡ前駆体へと転写されるが、プロセシング中に除去され、成熟ｍＲＮＡには含まれない。
【0102】
本明細書で使用される場合、「局所に」または「局所投与」とは、全身的作用ではなく局所的作用が意図される体の特定の部位における投与を意味する。局所投与の例は、対象の皮表、吸入、関節内、髄腔内、腟内、硝子体内、子宮内、病巣内の投与、リンパ節投与、腫瘍内投与、内耳への投与、及び粘膜への投与であり、かかる投与は、全身的作用ではなく局所的作用を有することが意図される。
【0103】
本明細書で使用される場合、「機能的に連結された」という用語は、第１の分子が第２の分子の機能に影響を与えるよう分子が配置されている、第２の分子に連結された第１の分子を指す。２つの分子は、単一の連続する分子の一部である場合もあればそうでない場合もあり、また、隣接する場合もあればそうでない場合もある。例えば、プロモーターが、細胞内の目的の転写可能ポリヌクレオチド分子の転写を調節する場合、そのプロモーターは、転写可能なポリヌクレオチド分子に機能的に連結されている。さらに、転写調節エレメントの２つの部分が連結されていて、一方の部分の転写活性化機能が、他方の部分の存在による悪影響を受けないようにされている場合、それらは互いに機能的に連結されている。２つの転写調節エレメントは、リンカーポリヌクレオチド（例えば、介在非コードポリヌクレオチド）により互いに機能的に連結されている場合もあれば、介在ヌクレオチドの存在を伴わずに互いに機能的に連結されている場合もある。
【0104】
本明細書で使用される場合、「プラスミド」という用語は、中に追加のＤＮＡセグメントが連結され得る染色体外環状二本鎖ＤＮＡ分子を指す。プラスミドは、核酸分子であるベクターの一種であり、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子である。ある特定のプラスミドは、それらが導入されている宿主細胞内で自律複製することができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌プラスミド及び哺乳類用エピソーム性プラスミド）。他のベクター（例えば、哺乳類用非エピソーム性ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノム内に組み込まれることが可能であり、それにより、宿主ゲノムと共に複製される。ある特定のプラスミドは、それらが機能的に連結されている遺伝子の発現を導くことができる。
【0105】
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオシドのポリマーを指す。典型的には、ポリヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により連結された、ＤＮＡまたはＲＮＡに天然に見出されるヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、及びデオキシシチジン）で構成される。この用語には、天然に存在する核酸中に見出されるか否かを問わず、化学的または生物学的に修飾された塩基、修飾された骨格等を含有するヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体を含む分子が包含され、そのような分子が、ある特定の用途に好ましい場合がある。本出願でポリヌクレオチドに言及されている場合、ＤＮＡ、ＲＮＡの両方、及びいずれの場合にも一本鎖と二本鎖の両方の形態（及び各一本鎖分子の相補鎖）が提供されることが理解される。本明細書で使用される場合の「ポリヌクレオチド配列」とは、ポリヌクレオチド材料それ自体、及び／または特定の核酸を生化学的に特徴付ける配列情報（すなわち、塩基の略語として使用される一連の文字）を指し得る。本明細書で提示されるポリヌクレオチド配列は、別段に示されていない限り、５’から３’の方向で提示される。
【0106】
本明細書で使用される場合、「プロモーター」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼが結合するＤＮＡ上の認識部位を指す。ポリメラーゼは導入遺伝子の転写を駆動する。
参照ポリヌクレオチドまたは参照ポリペプチド配列に関しての「配列同一性パーセント（％）」は、配列をアラインメントし、最大の配列同一性パーセントが達成されるよう必要に応じてギャップを導入した後に、参照ポリヌクレオチドまたは参照ポリペプチド配列中の核酸またはアミノ酸と同一である、候補配列中の核酸またはアミノ酸のパーセンテージと定義される。核酸またはアミノ酸の配列同一性パーセントの決定を目的としたアラインメントは、当業者の能力の範囲内である様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、またはＭｅｇａｌｉｇｎソフトウェア等の公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたり最大アラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含め、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができる。例えば、配列同一性パーセント値は、配列比較コンピュータプログラムＢＬＡＳＴを使用して生成され得る。実例として、所与の核酸またはアミノ酸の配列Ｂに対する（ｔｏ）、もしくはそれとの、もしくはそれに対する（ａｇａｉｎｓｔ）、所与の核酸またはアミノ酸の配列Ａの配列同一性パーセント（これは、代わりに、所与の核酸またはアミノ酸の配列Ｂに対して（ｔｏ）、もしくはそれと、もしくはそれに対して（ａｇａｉｎｓｔ）、ある特定の配列同一性パーセントを有する所与の核酸またはアミノ酸の配列Ａ、と表現することができる）は、以下のとおり計算され：
１００×（分数Ｘ／Ｙ）
式中、Ｘは、ＡとＢについて配列アラインメントプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ）のアラインメントにおいてそのプログラムにより完全な一致としてスコアリングされた、ヌクレオチドまたはアミノ酸の数であり、Ｙは、Ｂ中の核酸総数である。核酸またはアミノ酸の配列Ａの長さが核酸またはアミノ酸の配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡの配列同一性パーセントは、Ａに対するＢの配列同一性パーセントと等しくはならないことは認識されよう。
参照ポリヌクレオチドまたは参照ポリペプチド配列に関しての「配列同一性パーセント（％）」は、配列をアラインメントし、最大の配列同一性パーセントが達成されるよう必要に応じてギャップを導入した後に、参照ポリヌクレオチドまたは参照ポリペプチド配列中の核酸またはアミノ酸と同一である、候補配列中の核酸またはアミノ酸のパーセンテージと定義される。核酸またはアミノ酸の配列同一性パーセントの決定を目的としたアラインメントは、当業者の能力の範囲内である様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、またはＭｅｇａｌｉｇｎソフトウェア等の公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたり最大アラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含め、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができる。例えば、配列同一性パーセント値は、配列比較コンピュータプログラムＢＬＡＳＴを使用して生成され得る。実例として、所与の核酸またはアミノ酸の配列Ｂに対する（ｔｏ）、もしくはそれとの、もしくはそれに対する（ａｇａｉｎｓｔ）、所与の核酸またはアミノ酸の配列Ａの配列同一性パーセント（これは、代わりに、所与の核酸またはアミノ酸の配列Ｂに対して（ｔｏ）、もしくはそれと、もしくはそれに対して（ａｇａｉｎｓｔ）、ある特定の配列同一性パーセントを有する所与の核酸またはアミノ酸の配列Ａ、と表現することができる）は、以下のとおり計算され：
１００×（分数Ｘ／Ｙ）
式中、Ｘは、ＡとＢについて配列アラインメントプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ）のアラインメントにおいてそのプログラムにより完全な一致としてスコアリングされた、ヌクレオチドまたはアミノ酸の数であり、Ｙは、Ｂ中の核酸総数である。核酸またはアミノ酸の配列Ａの長さが核酸またはアミノ酸の配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡの配列同一性パーセントは、Ａに対するＢの配列同一性パーセントと等しくはならないことは認識されよう。
【0107】
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、対象を侵しているかもしくは侵し得る、特定の疾患または状態を予防、治療または管理するために哺乳類（例えば、ヒト）等の対象に投与される、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、及び／または担体と任意選択で組み合わせて治療剤を含有する、混合物を指す。
【0108】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、過渡の毒性、刺激、アレルギー反応、及び他の問題となる合併症を伴うことなく、妥当なベネフィット／リスク比に見合う、哺乳類（例えば、ヒト）等の対象の組織との接触に好適な化合物、材料、組成物及び／または剤形を指す。
【0109】
本明細書で使用される場合、「組換え誘導領域」という用語は、２つの異なる配列間の組換えを媒介する相同領域を指す。
本明細書で使用される場合、「調節配列」という用語には、プロモーター、エンハンサー、及び他の、ポリヌクレオチドの転写または翻訳を制御する発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）が含まれる。そのような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９０）（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
本明細書で使用される場合、「調節配列」という用語には、プロモーター、エンハンサー、及び他の、ポリヌクレオチドの転写または翻訳を制御する発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）が含まれる。そのような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９０）（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【0110】
本明細書で使用される場合、「試料」という用語は、対象から分離された検体（例えば、血液、血液成分（例えば、血清または血漿）、尿、唾液、羊水、脳脊髄液、組織（例えば、胎盤または真皮の）、膵液、絨毛膜絨毛試料、及び細胞）を指す。
【0111】
本明細書で使用される場合、「ステレオシリン」及び「ＳＴＲＣ」（ＤＦＮＢ１６としても知られる）という用語はそれぞれ、ＳＴＲＣ遺伝子によってコードされるタンパク質、及びこのタンパク質をコードする遺伝子を指す。ヒトでは、ＳＴＲＣ遺伝子は縦列重複し、その場合、第２のコピーがエクソン２０に未成熟終止コドンを含有し、それによりＳＴＲＣ偽遺伝子を生じさせる。本開示との関連では、ＳＴＲＣは、ＳＴＲＣ偽遺伝子を指さない。先行研究では、常染色体劣性非症候性感音性難聴のヒト患者においてＳＴＲＣの全長コピーにおける変異が同定されている（Ｖｅｒｐｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２９：３４５－９（２００１））。ステレオシリンタンパク質の発現は、有毛細胞の毛束の不動毛に限られている。ステレオシリンは、聴覚装置が正常に機能するために必要とされる先端部横方向のコネクター及び蓋膜接着クラウンを形成すると考えられている（Ａｖａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １１６：２５９４８－５７（２０１９）、Ｖｅｒｐｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．５１９：１９４－２１０（２０１１））。ステレオシリン欠損マウスは、接着欠損を伴う異常な有毛細胞束及び聴覚障害を示すことが示されている（Ｖｅｒｐｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４５６：２５５－８（２００８））。本開示は、全長ステレオシリンタンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供し、これは、本明細書に記載されるベクター系に組み込んだ場合、難聴（例えば、感音性難聴）または前庭機能障害（例えば、回転性めまい、浮動性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、もしくは平衡障害）の治療を必要とする対象においてそれを行うための治療剤として使用され得る。「ステレオシリン」及び「ＳＴＲＣ」という用語はまた、野生型ステレオシリンタンパク質及びそれをコードする核酸それぞれのバリアント、例えば、野生型ステレオシリンタンパク質のアミノ酸配列（例えば、配列番号３もしくは配列番号４）に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは９９．９％の同一性、もしくはそれ以上の配列同一性）を有するバリアントタンパク質、または野生型ＳＴＲＣ遺伝子の核酸配列（例えば、配列番号５もしくは配列番号６）に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは９９．９％の同一性、もしくはそれ以上の配列同一性）を有するポリヌクレオチドも指すが、ただし、コードされたステレオシリン類似体が野生型（ＷＴ）ステレオシリンの治療的機能を保持していることを条件とする。
【0112】
本明細書で使用される場合、「ＳＴＲＣプロモーター」という用語は、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２の機能的部分、例えば、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する部分等、または配列番号４８の機能的部分、例えば、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する部分等に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは９９．９％の同一性、もしくはそれ以上の配列同一性）を有するプロモーター配列を指す。
【0113】
本明細書で使用される場合、「転写調節エレメント」という用語は、少なくとも部分的に、目的遺伝子の転写を制御するポリヌクレオチドを指す。転写調節エレメントには、遺伝子転写を制御するかまたは制御を助ける、プロモーター、エンハンサー、及び他のポリヌクレオチド（例えば、ポリアデニル化シグナル）が含まれ得る。転写調節エレメントの例は、例えば、Ｌｏｒｅｎｃｅ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ｒｅｖｉｅｗｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，２０１２）に記載されている。
【0114】
本明細書で使用される場合、「トランスフェクション」という用語は、原核生物または真核生物の宿主細胞への外因性ＤＮＡの導入に一般的に使用される多種多様な技術、例えば、電気穿孔、リポフェクション法、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクション、ヌクレオフェクション、スクイーズポレーション（ｓｑｕｅｅｚｅ－ｐｏｒａｔｉｏｎ）、音響穿孔法、光学的トランスフェクション、マグネトフェクション、インペールフェクション等のいずれかを指す。
【0115】
本明細書で使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は、動物（例えば、ヒト等の哺乳類）を指す。本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、難聴（例えば、感音性難聴）または前庭機能障害（例えば、回転性めまい、浮動性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、もしくは平衡障害）と診断された者である場合もあれば、これらの状態のうちの１つまたは両方を発症するリスクのある者である場合もある。診断は、当該技術分野で公知の任意の方法または手法によって実施され得る。当業者は、本開示に従って治療される対象が、標準検査を受けている場合もあれば、検査をせずに、疾患または状態と関連する１つ以上の危険因子の存在によりリスクがある者として特定されている場合もあることを理解するであろう。
【0116】
本明細書で使用される場合、「形質導入」及び「形質導入する」という用語は、ベクターコンストラクトまたはその一部を細胞に導入する方法を指す。ベクターコンストラクトが、例えばＡＡＶベクター等のウイルスベクター内に含有されている場合には、形質導入は、細胞のウイルス感染、ならびにその後のベクターコンストラクトまたはその一部の細胞ゲノムへの導入及び組み込みを指す。
【0117】
本明細書で使用される場合、疾患または状態に関して「治療」及び「治療すること」とは、有益な結果または所望の結果、例えば、臨床結果を得るための手法を指す。有益な結果または所望の結果としては、検出可能か検出不能かにかかわらず、１つ以上の症状または状態の軽減または改善；疾患または状態の程度の減弱；疾患、障害、または状態の安定化（すなわち、悪化していない）状態；疾患または状態の拡大の阻止；疾患または状態の進行の遅延または減速；疾患または状態の改善または緩和；及び寛解（部分的か完全かを問わない）を挙げることができるが、これらに限定されない。疾患または状態を「改善すること」または「緩和すること」とは、治療が行われない場合の程度または時間経過と比較して、疾患、障害、もしくは状態の程度及び／または望ましくない臨床症状が低減されること、及び／または進行の時間経過が減速もしくは延長されることを意味する。「治療」はまた、治療を受けない場合に予測される生存期間と比較して生存期間を延長させることも意味し得る。治療を必要とする者には、すでに状態もしくは障害を有する者、及び状態もしくは障害を有する傾向がある者または状態もしくは障害が予防されるべき者が含まれる。
【0118】
本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、核酸ベクター、例えば、プラスミド、コスミド、もしくは人工染色体等のＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、ウイルス、または任意の他の好適なレプリコン（例えば、ウイルスベクター）等を指す。原核細胞または真核細胞に外因性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを送達するために多種多様なベクターが開発されている。そのような発現ベクターの例は、例えば、Ｇｅｌｌｉｓｓｅｎ，Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｎｏｖｅｌ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｎｄ Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｍａｒｂｌｅｈｅａｄ，ＭＡ，２００６）に記載されている。本明細書に記載の組成物及び方法と併せた使用に好適な発現ベクターは、ポリヌクレオチド配列、ならびに、例えば、タンパク質の発現及び／またはこれらのポリヌクレオチド配列の哺乳類細胞ゲノムへの組み込みに使用される、追加の配列エレメントを含有する。本明細書に記載される導入遺伝子の発現に使用することができる特定のベクターには、遺伝子転写を導くプロモーター領域及びエンハンサー領域等の、調節配列を含有するベクターが含まれる。導入遺伝子の発現のために有用な他のベクターは、導入遺伝子の翻訳率を高めるか、または遺伝子転写から生じるｍＲＮＡの安定性もしくは核外輸送を改善する、ポリヌクレオチド配列を含有する。これらの配列エレメントには、発現ベクター上に担持された遺伝子の効率的転写を導くために、例えば、５’及び３’の非翻訳領域ならびにポリアデニル化シグナル部位が含まれる。本明細書に記載の組成物及び方法と併せた使用に好適な発現ベクターはまた、そのようなベクターを含有する細胞の選択のためのマーカーをコードするポリヌクレオチドを含有し得る。好適なマーカーの例には、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、またはノーセオスリシン等の抗生物質に対する耐性をコードする遺伝子が含まれる。
【0119】
本明細書で使用される場合、「前庭有毛細胞」という用語は、運動の感知に関与し、平衡感覚及び空間識に寄与する、内耳の特殊化した細胞の一種を指す。前庭有毛細胞には、Ｉ型有毛細胞とＩＩ型有毛細胞の２種類がある。Ｉ型有毛細胞は、神経終末杯を有し、電位応答が速く、動的運動をコードする。ＩＩ型有毛細胞は、神経終末ボタンを有し、電位応答が遅く、遅いかまたは静的な運動をコードする。前庭有毛細胞は、内耳の半規管の終末器官及び耳石器に位置する。前庭有毛細胞の損傷及び前庭有毛細胞機能を破壊する遺伝子変異は、回転性めまい、浮動性めまい、平衡失調、両側前庭機能低下、動揺視、及び平衡障害等の前庭機能障害に関与している。
【0120】
本明細書で使用される場合、「野生型」という用語は、所与の生物における特定の遺伝子について頻度が最も高い遺伝子型を指す。
【図面の簡単な説明】
【0121】
【図1】プラスミドＰ１２０８のマップである。
【図2】プラスミドＰ１２０９のマップである。
【図3】配列番号２のヌクレオチド３５～５３０のＳＴＲＣプロモーターの制御下でＧＦＰを発現するプラスミドＰ１２０９由来ＡＡＶベクターを投与された、新生仔マウスのコルチ器からの一連の顕微鏡写真である。パネルＡ及びＢは、左から右に向かって基底部から先端部の、コルチ器の異なる平面からの複合連続断面を示す。パネルＡ及びＡ’は、Ｍｙｏ７ａの染色を示す。パネルＡ’は、パネルＡの長方形で示された領域の強拡大像である。パネルＢ及びＢ’は、ＧＦＰの染色を示す。パネルＢ’は、パネルＢの長方形で示された領域の強拡大像である。スケールバーは、パネルＡ及びＢでは１００μｍ、パネルＡ’及びＢ’では５０μｍを表す。
【図4】配列番号１のＳＴＲＣプロモーターの制御下でＧＦＰを発現するプラスミドＰ１２０８由来ＡＡＶベクターを投与された、新生仔マウスのコルチ器からの一連の顕微鏡写真である。パネルＡ及びＢは、左から右に向かって基底部から先端部の、コルチ器の異なる平面からの複合連続断面を示す。パネルＡ、Ａ’及びＡ’’は、Ｍｙｏ７ａの染色を示す。パネルＡ’は、パネルＡの実線長方形で示された領域の強拡大像である。パネルＡ’’は、パネルＡの破線正方形で示された領域の強拡大像である。パネルＢ、Ｂ’及びＢ’’は、ＧＦＰの染色を示す。パネルＢ’は、パネルＢの長方形で示された領域の強拡大像である。パネルＢ’’は、パネルＢの破線正方形で示された領域の強拡大像である。スケールバーは、パネルＡ及びＢでは１００μｍ、パネルＡ’、Ａ’’、Ｂ’及びＢ’’では５０μｍを表す。
【図5】配列番号２のヌクレオチド３５～５３０のＳＴＲＣプロモーターの制御下でＧＦＰを発現する同じプラスミドＰ１２０９由来ＡＡＶベクターを投与された、新生仔マウスの前庭の複合断面の一連の顕微鏡写真である。パネルＡ、Ａ’及びＡ’’は、Ｐｏｕ４ｆ３の染色を示す。パネルＢ、Ｂ’、及びＢ’’は、ＧＦＰの染色を示す。パネルＣ、Ｃ’及びＣ’’は、Ｓｏｘ２の染色を示す。パネルＡ’、Ｂ’及びＣ’は、パネルＡ、Ｂ及びＣの正方形の対応する領域の強拡大像を表す。パネルＡ’’、Ｂ’’及びＣ’’は、パネルＡ’、Ｂ’及びＣ’の破線内の対応する領域の強拡大像を表す。スケールバーは、パネルＡ、Ｂ及びＣでは１００μｍ、パネルＡ’、Ａ’’、Ｂ’、Ｂ’’、Ｃ’及びＣ’’では２５μｍを表す。
【図6】アクチン（左パネル）及び天然ステレオシリン（右パネル）について染色した未処置成体マウスの内有毛細胞及び外有毛細胞を示す、コルチ器の複合断面の一連の顕微鏡写真である。スケールバーは１０μｍを表す。
【図7】配列番号２のヌクレオチド３５～５３０のＳＴＲＣプロモーターの制御下でＧＦＰを発現するプラスミドＰ１２０９由来ＡＡＶベクターを投与された、成体マウスのコルチ器からの一連の顕微鏡写真である。パネルＡ及びＢは、左から右に向かって基底部から先端部の、コルチ器の異なる平面からの複合連続断面を示す。パネルＡ及びＡ’は、Ｍｙｏ７ａの染色を示す。パネルＡ’は、パネルＡの長方形で示された領域の強拡大像である。パネルＢ及びＢ’は、ＧＦＰの染色を示す。パネルＢ’は、パネルＢの長方形で示された領域の強拡大像である。スケールバーは、パネルＡ及びＢでは１００μｍ、パネルＡ’及びＢ’では５０μｍを表す。
【図8】配列番号１のＳＴＲＣプロモーターの制御下でＧＦＰを発現するプラスミドＰ１２０８由来ＡＡＶベクターを投与された、成体マウスのコルチ器からの一連の顕微鏡写真である。パネルＡ及びＢは、左から右に向かって基底部から先端部の、コルチ器の異なる平面からの複合連続断面を示す。パネルＡ、Ａ’及びＡ’’は、Ｍｙｏ７ａの染色を示す。パネルＡ’は、パネルＡの実線長方形で示された領域の強拡大像である。パネルＡ’’は、パネルＡの破線正方形で示された領域の強拡大像である。パネルＢ、Ｂ’及びＢ’’は、ＧＦＰの染色を示す。パネルＢ’は、パネルＢの長方形で示された領域の強拡大像である。パネルＢ’’は、パネルＢの破線正方形で示された領域の強拡大像である。スケールバーは、パネルＡ及びＢでは１００μｍ、パネルＡ’、Ａ’’、Ｂ’及びＢ’’では５０μｍを表す。
【図9】配列番号１のＳＴＲＣプロモーターの制御下でＨ２Ｂ－ＧＦＰを発現するプラスミドＰ１０１６由来ＡＡＶベクターを投与された非ヒト霊長類（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）のコルチ器からの一連の顕微鏡写真である。パネルＡ及びＢは、コルチ器中回転における異なる平面からの複合連続断面を示す。パネルＡは、内有毛細胞及び外有毛細胞の染色を示す。パネルＢは、ＧＦＰの抗体染色を示す。スケールバーは５０μｍを表す。位置確認のため内有毛細胞（ＩＨＣ）及び外有毛細胞（ＯＨＣ）が強調表示されている。
【図10】配列番号１のＳＴＲＣプロモーターの制御下でＨ２Ｂ－ＧＦＰを発現するプラスミドＰ１０１６由来ＡＡＶベクターを投与された、非ヒト霊長類（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）の蝸牛中回転からの単一パラフィン切片の顕微鏡画像である。パネルＡは、もともとは青にヘマトキシリン染色された核、及びもともとは赤に染色されたＨ２Ｂ－ＧＦＰ抗体を有する、コルチ器周辺領域のグレースケール変換を示す。パネルＢは、青のヘマトキシリンのシグナル除去後の残存シグナル；Ｈ２Ｂ－ＧＦＰ陽性（赤）の核が、グレースケール変換後に引き続き濃い色として見えることを示す。スケールバーは１００μｍを表す。位置確認のため内有毛細胞（ＩＨＣ）及び外有毛細胞（ＯＨＣ）が強調表示されている。
【図11】プラスミドＰ１０１６のプラスミドマップである。
【図12】１６ｋＨｚでの２００μｍ２のＲＯＩにおける、マウスコルチ器でのステレオシリン発現の一連の蛍光画像である。Ａは、野生型ＣＢＡ／ＣａＪマウスの外有毛細胞（ＯＨＣ）の不動毛の先端におけるステレオシリン抗体染色を示す。Ｂに示されるように、２３２ｂｐのＳＴＲＣノックアウト（ＫＯ）動物では抗体のシグナルを欠いていた。Ｃは、二重Ａｎｃ８０ベクターであって、第１のベクターがＣＭＶプロモーターとマウスＳＴＲＣ ｃＤＮＡのヌクレオチド１～３２００とを担持し、第２のベクターがヌクレオチド２２０１～５４３０を担持し、２つのベクターの２つのｃＤＮＡ間に１０００ｂｐの重複を生じさせたベクターを投与された、２３２ｂｐ ＳＴＲＣ ＫＯマウスにおけるステレオシリン抗体染色を示す。処置した２３２ｂｐ ＳＴＲＣ ＫＯマウスのコルチ器のＯＨＣ不動毛の先端及び内有毛細胞体内でステレオシリンタンパク質の新規発現を観察することができた。
【図13A】Ａｎｃ８０－ＣＭＶ－ｍＳｔｒｃで処置した２３２ｂｐ ＳＴＲＣ ＫＯマウスにおける聴覚機能の改善、及びＯＨＣのＳＴＲＣの発現との相関を示す一連のグラフである。未処置の対側耳では、ＯＨＣの機能の喪失を示す、ＤＰＯＡＥのほぼ不在及びＡＢＲ閾値の高上昇が示されたが（図１３Ａ及び図１３Ｂ、白丸）、処置された２３２ｂｐ ＳＴＲＣ ＫＯ動物では、聴力閾値の回復を示した（図１３Ａ及び図１３Ｂ、黒丸）。処置動物のうち最良レスポンダー（図１３Ａ及び図１３Ｂ、黒い四角）は、野生型（図１３Ａ及び図１３Ｂ、三角形）に近い聴力閾値を示した。
【図13B】Ａｎｃ８０－ＣＭＶ－ｍＳｔｒｃで処置した２３２ｂｐ ＳＴＲＣ ＫＯマウスにおける聴覚機能の改善、及びＯＨＣのＳＴＲＣの発現との相関を示す一連のグラフである。未処置の対側耳では、ＯＨＣの機能の喪失を示す、ＤＰＯＡＥのほぼ不在及びＡＢＲ閾値の高上昇が示されたが（図１３Ａ及び図１３Ｂ、白丸）、処置された２３２ｂｐ ＳＴＲＣ ＫＯ動物では、聴力閾値の回復を示した（図１３Ａ及び図１３Ｂ、黒丸）。処置動物のうち最良レスポンダー（図１３Ａ及び図１３Ｂ、黒い四角）は、野生型（図１３Ａ及び図１３Ｂ、三角形）に近い聴力閾値を示した。
【図13C】Ａｎｃ８０－ＣＭＶ－ｍＳｔｒｃで処置した２３２ｂｐ ＳＴＲＣ ＫＯマウスにおける聴覚機能の改善、及びＯＨＣのＳＴＲＣの発現との相関を示す一連のグラフである。ＡＡＶ－Ａｎｃ８０－ＣＭＶ－ｍＳｔｒｃによる処置後にステレオシリンを発現する２３２ｂｐ ＳＴＲＣ ＫＯマウスのＯＨＣの割合が高いことが、聴力回復を促進することが見出された。
【図14】２ベクター分割インテイン系のＨＥＫ２９３Ｔ細胞へのトランスフェクションが、全長ステレオシリンの再構成をもたらしたことを示す画像及びグラフである。Ａは、ステレオシリンタンパク質及びベータ－アクチンに対するウエスタンブロットの代表的画像である。Ｂは、アクチンと比べた全長ステレオシリンのバンド強度のデンシトメトリーによる定量化であり、陰性（ＧＦＰ）対照、陽性全長対照、及びＮｐｕインテインコンストラクトの全長ステレオシリンタンパク質の相対発現を示す。
【図15】ＨＥＫ２９３Ｔ細胞において単一プラスミドベクターまたはＡＡＶ二重ベクター系を使用して検出されたステレオシリンタンパク質の発現量を示すグラフである。全長対照は、全長マウスＳＴＲＣコード配列を含有するプラスミドＤＮＡであった。ＧＦＰもまたプラスミドを使用して発現させた。試験したＡＡＶ二重ハイブリッドベクターは、第１のベクターと第２のベクターとの間の、マウスＳＴＲＣ配列を分けるために使用した分割部位が異なった。ｘ軸上の値は、５’ベクターにおけるマウスＳＴＲＣの最終ヌクレオチドを示す（例えば、二重ハイブリッド１８００は、５’ベクターがマウスＳＴＲＣのヌクレオチド１～１８００を含有し、ヌクレオチド１８０１で開始するＳＴＲＣコード配列の残りのヌクレオチドが３’ベクターに含有された二重ハイブリッドベクター系である）。重複は、５’ベクターと３’ベクターがＳＴＲＣコード配列からの共通の１，０００ヌクレオチドを共有した重複二重ＡＡＶベクター系であった（５’ベクターがＮＭ＿０８０４５９のヌクレオチド７９～３２７８（配列番号６のヌクレオチド１～３２００に対応）を担持し、３’ベクターがヌクレオチド２２７９～５５０８（配列番号６のヌクレオチド２２０１～５４３０に対応）を担持した）。
【図16A】様々なＳＴＲＣプロモーターの制御下で高感度ＧＦＰを発現するＡＡＶベクターに感染させたマウス新生仔蝸牛外植片から撮像した一連の顕微鏡写真である。上段は、有毛細胞マーカーＭｙｏ７ａ及びＧＦＰの染色を示す。中段は、Ｍｙｏ７ａのみの染色を示す。下段は、ＧＦＰのみの染色を示す。対照の顕微鏡写真は、未処置（ＡＡＶ未感染）外植片から取得された。
【図16B】様々なＳＴＲＣプロモーターの制御下で高感度ＧＦＰを発現するＡＡＶベクターに感染させたマウス新生仔蝸牛外植片から撮像した一連の顕微鏡写真である。上段は、有毛細胞マーカーＭｙｏ７ａ及びＧＦＰの染色を示す。中段は、Ｍｙｏ７ａのみの染色を示す。下段は、ＧＦＰのみの染色を示す。対照の顕微鏡写真は、未処置（ＡＡＶ未感染）外植片から取得された。
【図17】様々なＳＴＲＣプロモーターの制御下で高感度ＧＦＰを発現するＡＡＶベクターに感染させたマウス新生仔蝸牛外植片においてＧＦＰ陽性であった有毛細胞のパーセントを定量化する棒グラフである。
【図18】様々なＳＴＲＣプロモーターの制御下で高感度ＧＦＰを発現するＡＡＶベクターに感染させたマウス新生仔蝸牛外植片においてＧＦＰ陽性であった内有毛細胞及び外有毛細胞のパーセントを別々に定量化する棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【0122】
本明細書では、有毛細胞（例えば、蝸牛及び前庭の有毛細胞）に特異的に導入遺伝子発現を誘導するための、組成物及び方法を記載する。本発明は、ＳＴＲＣを内因性発現する有毛細胞（例えば、外有毛細胞及び内有毛細胞等の蝸牛有毛細胞、ならびにＩ型及びＩＩ型の前庭有毛細胞等の前庭有毛細胞）に、発現産物（例えば、導入遺伝子または抑制性ＲＮＡ分子等のＲＮＡ分子によってコードされるタンパク質）の発現を誘導することができるＳＴＲＣプロモーターを特徴とする。本発明はまた、そのようなプロモーターを、発現産物をコードするポリヌクレオチド（例えば、タンパク質または抑制性ＲＮＡをコードするポリヌクレオチド）に機能的に連結させて含有する核酸ベクターを特徴とする。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、所望の発現産物（例えば、タンパク質、抑制性ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、または遺伝子編集系の成分）を有毛細胞に特異的に発現させることができ、したがって、本明細書に記載の組成物を対象（哺乳類の対象、例えば、ヒト等）に投与して、難聴及び前庭機能障害等の蝸牛または前庭の有毛細胞の機能障害により引き起こされる障害を治療することができる。
【0123】
有毛細胞
有毛細胞は、内耳に存在する聴覚系及び前庭系の感覚細胞である。蝸牛有毛細胞は、聴覚系の感覚細胞であり、主に２種類の細胞型、すなわち、音の感知に関与する内有毛細胞、及び小さい音を増幅させると考えられている外有毛細胞で構成される。前庭有毛細胞は、内耳の半規管の終末器官及び耳石器に位置し、平衡感覚及び空間識に寄与する運動感覚に関与している。有毛細胞は、細胞の頂端面から突出して有毛細胞束を形成する不動毛にちなんでその名が付けられている。不動毛の傾き（例えば、蝸牛有毛細胞では音波によるもの、または前庭有毛細胞では回転もしくは直鎖加速によるもの）が機械刺激依存性イオンチャネルを開かせ、これにより、有毛細胞は、神経伝達物質を放出して神経を活性化し、それによって機械的な音または運動シグナルを、脳へ伝達可能な電気的なシグナルに変換することができる。蝸牛有毛細胞は正常な聴力に不可欠であり、蝸牛有毛細胞の損傷またはその消失及び蝸牛有毛細胞機能を破壊する遺伝子変異は、難聴及び聴覚消失に関与している。前庭有毛細胞の損傷またはその消失及び前庭有毛細胞機能を破壊する遺伝子変異は、浮動性めまい、回転性めまい、平衡感覚の喪失、両側前庭障害（両側前庭機能低下としても知られる）、動揺視、及び平衡障害等の前庭機能障害に関与している。遺伝子治療は、近年、難聴及び前庭機能障害を治療するための魅力的な治療アプローチとして浮上しているが、この分野には、遺伝子治療に使用される核酸ベクターを有毛細胞に特異的に指向させる方法が必要とされている。
有毛細胞は、内耳に存在する聴覚系及び前庭系の感覚細胞である。蝸牛有毛細胞は、聴覚系の感覚細胞であり、主に２種類の細胞型、すなわち、音の感知に関与する内有毛細胞、及び小さい音を増幅させると考えられている外有毛細胞で構成される。前庭有毛細胞は、内耳の半規管の終末器官及び耳石器に位置し、平衡感覚及び空間識に寄与する運動感覚に関与している。有毛細胞は、細胞の頂端面から突出して有毛細胞束を形成する不動毛にちなんでその名が付けられている。不動毛の傾き（例えば、蝸牛有毛細胞では音波によるもの、または前庭有毛細胞では回転もしくは直鎖加速によるもの）が機械刺激依存性イオンチャネルを開かせ、これにより、有毛細胞は、神経伝達物質を放出して神経を活性化し、それによって機械的な音または運動シグナルを、脳へ伝達可能な電気的なシグナルに変換することができる。蝸牛有毛細胞は正常な聴力に不可欠であり、蝸牛有毛細胞の損傷またはその消失及び蝸牛有毛細胞機能を破壊する遺伝子変異は、難聴及び聴覚消失に関与している。前庭有毛細胞の損傷またはその消失及び前庭有毛細胞機能を破壊する遺伝子変異は、浮動性めまい、回転性めまい、平衡感覚の喪失、両側前庭障害（両側前庭機能低下としても知られる）、動揺視、及び平衡障害等の前庭機能障害に関与している。遺伝子治療は、近年、難聴及び前庭機能障害を治療するための魅力的な治療アプローチとして浮上しているが、この分野には、遺伝子治療に使用される核酸ベクターを有毛細胞に特異的に指向させる方法が必要とされている。
【0124】
本発明は、部分的には、ＳＴＲＣを内因性発現する有毛細胞（例えば、蝸牛及び前庭の有毛細胞）に遺伝子発現を誘導するために使用可能なＳＴＲＣプロモーター配列の発見に基づく。これらのＳＴＲＣプロモーターは、有毛細胞特異的プロモーターである。したがって、本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、有毛細胞に所望の発現産物、例えば、有毛細胞の発生、有毛細胞の機能、有毛細胞の運命決定、有毛細胞の再生、有毛細胞の生存、もしくは有毛細胞の維持に関与する遺伝子、または難聴もしくは前庭機能障害を有する対象において破壊されている、例えば、変異していることが知られている遺伝子等を発現させ、難聴（例えば、感音性難聴）、耳鳴、または前庭機能障害（例えば、浮動性めまい、回転性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、または平衡障害）を有するかまたはそれらを発症するリスクのある対象を治療することができる。
【0125】
ステレオシリン
ステレオシリン（ＤＦＮＢ１６としても知られる）は、染色体１５ｑ１５上のＳＴＲＣ遺伝子によってコードされるタンパク質であり、ゲノムの約１９ｋｂに及ぶ２９のエクソンを含有する。ＳＴＲＣ遺伝子は縦列重複し、その場合、第２のコピーがエクソン２０に未成熟終止コドンを含有し、それによりＳＴＲＣ偽遺伝子を生じさせる。先行研究では、常染色体劣性非症候性感音性難聴の２家系において、ＳＴＲＣの全長コピー内で２つのフレームシフト変異及び多くの欠失が同定されている（Ｖｅｒｐｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２９：３４５－９（２００１））。ステレオシリンタンパク質の発現は有毛細胞の毛束の不動毛に限られており、ステレオシリンは、聴覚装置が正常に機能するために必要とされる先端部横方向のコネクター及び蓋膜接着クラウンを形成すると考えられている（Ａｖａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １１６：２５９４８－５７（２０１９）、Ｖｅｒｐｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．５１９：１９４－２１０（２０１１））。ステレオシリン欠損マウスは、接着欠損を伴う異常な有毛細胞束及び聴覚障害を示すことが示されている（Ｖｅｒｐｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４５６：２５５－８（２００８））。
ステレオシリン（ＤＦＮＢ１６としても知られる）は、染色体１５ｑ１５上のＳＴＲＣ遺伝子によってコードされるタンパク質であり、ゲノムの約１９ｋｂに及ぶ２９のエクソンを含有する。ＳＴＲＣ遺伝子は縦列重複し、その場合、第２のコピーがエクソン２０に未成熟終止コドンを含有し、それによりＳＴＲＣ偽遺伝子を生じさせる。先行研究では、常染色体劣性非症候性感音性難聴の２家系において、ＳＴＲＣの全長コピー内で２つのフレームシフト変異及び多くの欠失が同定されている（Ｖｅｒｐｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２９：３４５－９（２００１））。ステレオシリンタンパク質の発現は有毛細胞の毛束の不動毛に限られており、ステレオシリンは、聴覚装置が正常に機能するために必要とされる先端部横方向のコネクター及び蓋膜接着クラウンを形成すると考えられている（Ａｖａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １１６：２５９４８－５７（２０１９）、Ｖｅｒｐｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．５１９：１９４－２１０（２０１１））。ステレオシリン欠損マウスは、接着欠損を伴う異常な有毛細胞束及び聴覚障害を示すことが示されている（Ｖｅｒｐｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４５６：２５５－８（２００８））。
【0126】
本発明は、部分的には、ＳＴＲＣを内因性発現する有毛細胞に遺伝子発現を誘導するために使用可能な、ヒトＳＴＲＣ翻訳開始部位の上流に位置する５００塩基対（ｂｐ）の領域、及びマウスＳＴＲＣ翻訳開始部位の上流に位置する５３７ｂｐの領域の発見に基づく。したがって、本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、有毛細胞（例えば、外有毛細胞もしくは内有毛細胞等の蝸牛有毛細胞、またはＩ型もしくはＩＩ型の有毛細胞等の前庭有毛細胞）に所望の発現産物、例えば、有毛細胞の発生、機能、細胞の運命決定、再生、生存、もしくは維持に関与する遺伝子、または難聴もしくは前庭機能障害を有する対象において破壊されている、例えば、変異していることが知られている遺伝子等を発現させ、難聴（例えば、感音性難聴）または前庭機能障害（例えば、浮動性めまい、回転性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、または平衡障害）を有するかまたはそれらを発症するリスクのある対象を治療することができる。内因性プロモーター活性を保持する可能な限り最小のＳＴＲＣプロモーターの発見は、核酸ベクターにおける使用、特に、最大パッケージング容量が約４．７ｋｂであると考えられているＡＡＶベクター等の、パッケージング容量が限られているベクターにおける使用に有利である。
【0127】
本明細書に記載の組成物及び方法には、表２に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、または配列番号４８）及びそれらの一部であって、ＳＴＲＣを内因性発現する有毛細胞（例えば、蝸牛及び前庭の有毛細胞）に特異的に所望の発現産物（例えば、導入遺伝子）を発現することができるもの、例えば、配列番号１、配列番号２、もしくは配列番号４８に対して、または配列番号２もしくは配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド配列が含まれる。いくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分は、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７が含まれる、より大きな配列番号２の部分、例えば、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７が含まれる部分である。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分は、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０が含まれる、より大きな配列番号４８の部分、例えば、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４、または配列番号４８のヌクレオチド１～５６０が含まれる部分である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法に使用するためのＳＴＲＣプロモーターには、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４、または配列番号４８のヌクレオチド１～５６０に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する部分が含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法に使用するためのＳＴＲＣプロモーターは、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４、または配列番号４８のヌクレオチド１～５６０の配列を有する。
【0128】
例示的なＳＴＲＣプロモーター配列を表２に記載する。
【0129】
【表2-1】
【0130】
【表2-2】
【0131】
前述のプロモーター配列を核酸ベクターに含めて、所望の発現産物をコードするポリヌクレオチド（例えば、目的タンパク質または抑制性ＲＮＡをコードするポリヌクレオチド）に機能的に連結し、有毛細胞に（例えば、蝸牛有毛細胞（例えば、外有毛細胞及び内有毛細胞）ならびに前庭有毛細胞（例えば、Ｉ型及びＩＩ型の前庭有毛細胞）等の、ＳＴＲＣを内因性発現する有毛細胞に）特異的に発現産物を発現させることができる。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結されるポリヌクレオチドは、有毛細胞の機能、有毛細胞の発生、有毛細胞の運命決定、有毛細胞の再生、有毛細胞の生存、もしくは有毛細胞の維持に関与するタンパク質をコードする導入遺伝子であるか、または難聴、聴覚消失、オーディトリー・ニューロパチー、耳鳴、もしくは前庭機能障害（例えば、浮動性めまい、回転性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、もしくは平衡障害）を有する対象において変異していることがわかっている遺伝子の野生型バージョンに対応する導入遺伝子である。本明細書に記載の方法によれば、所望の発現産物をコードするポリヌクレオチド、例えば、目的タンパク質をコードする導入遺伝子に、機能的に連結された前述のポリヌクレオチド（例えば、ＳＴＲＣプロモーター、例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）のうちの１つ以上を含有する組成物を、対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、導入遺伝子によってコードされるタンパク質は、アクチン・ガンマ１（Ａｃｔｉｎ Ｇａｍｍａ １）（ＡＣＴＧ１）、網膜Ｆａｓｃｉｎアクチン束化タンパク質２（Ｆａｓｃｉｎ Ａｃｔｉｎ－Ｂｕｎｄｌｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ ２、Ｒｅｔｉｎａｌ）（ＦＳＣＮ２）、ラディキシン（ＲＤＸ）、ＰＯＵクラス４ホメオボックス３（ＰＯＵ４Ｆ３）、ＴＲＩＯ及びＦ－アクチン結合タンパク質（ＴＲＩＯＢＰ）、Ｔａｐｅｒｉｎ（ＴＰＲＮ）、Ｘｉｎアクチン結合リピート含有２（Ｘｉｎ Ａｃｔｉｎ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｒｅｐｅａｔ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ２）（ＸＩＲＰ２）、アトーナル（Ａｔｏｎａｌ）ＢＨＬＨ転写因子１（ＡＴＯＨ１）、転写抑制因子Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ １（ＧＦＩ１）、コリン作動性ニコチン性受容体アルファ９サブユニット（ＣＨＲＮＡ９）、コリン作動性ニコチン性受容体アルファ１０サブユニット（ＣＨＲＮＡ１０）、カルシウム及びインテグリン結合ファミリーメンバー３（ＣＩＢ３）、カドヘリン２３（ＣＤＨ２３）、プロトカドヘリン１５（ＰＣＤＨ１５）、キノシリン（Ｋｉｎｏｃｉｌｉｎ）（ＫＮＣＮ）、Ｐｅｊｖａｋｉｎ（ＤＦＮＢ５９）、ＭＫＲＮ２ Ｏｐｐｏｓｉｔｅ Ｓｔｒａｎｄ（ＭＫＲＮ２ＯＳ）、ＬＩＭホメオボックスタンパク質３（ＬＨＸ３）、膜貫通チャネル様１（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃｈａｎｎｅｌ Ｌｉｋｅ １）（ＴＭＣ１）、ミオシン１５（ＭＹＯ１５）、ミオシン７Ａ（ＭＹＯ７Ａ）、ミオシン６（ＭＹＯ６）、ミオシンＩＩＩＡ（ＭＹＯ３Ａ）、ミオシンＩＩＩＢ（ＭＹＯ３Ｂ）、グルタレドキシンドメイン含有システインリッチタンパク質１（Ｇｌｕｔａｒｅｄｏｘｉｎ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｃｙｓｔｅｉｎｅ－Ｒｉｃｈ Ｐｒｏｔｅｉｎ １）（ＧＲＸＣＲ１）、プロテインチロシンホスファターゼ、受容体型Ｑ（ＰＴＰＲＱ）、後期角化膜（Ｌａｔｅ Ｃｏｒｎｉｆｉｅｄ Ｅｎｖｅｌｏｐｅ）６Ａ（ＬＣＥ６Ａ）、リポキシゲナーゼ相同ドメイン含有タンパク質１（Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ Ｈｏｍｏｌｏｇｙ Ｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ １）（ＬＯＸＨＤ１）、ＡＤＰ－リボシルトランスフェラーゼ１（ＡＲＴ１）、ＡＴＰアーゼ細胞膜Ｃａ２＋輸送２（ＡＴＰａｓｅ Ｐｌａｓｍａ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃａ２＋ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ ２）（ＡＴＰ２Ｂ２）、カルシウム及びインテグリン結合ファミリーメンバー２（ＣＩＢ２）、電位依存性カルシウムチャネル補助サブユニットアルファ２デルタ４（ＣＡＣＮＡ２Ｄ４）、上皮成長因子受容体経路基質８（ＥＰＳ８）、ＥＰＳ８様２（ＥＰＳ８Ｌ２）、エスピン（ＥＳＰＮ）、エスピン様（ＥＳＰＮＬ）、ペリフェリン２（ＰＲＰＨ２）、溶質輸送体ファミリー８メンバーＡ２（ＳＬＣ８Ａ２）、ジンクフィンガーＣＣＨＣタイプ含有タンパク質１２（Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ ＣＣＨＣ－Ｔｙｐｅ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ １２）（ＺＣＣＨＣ１２）、ロイシンリッチ膜貫通・Ｏ－メチルトランスフェラーゼドメイン含有（Ｌｅｕｃｉｎｅ Ｒｉｃｈ Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｄ Ｏ－ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）（ＬＲＴＯＭＴ２、ＬＲＴＯＭＴ１）、ＵＳＨ１タンパク質ネットワーク成分ハーモニン（ＵＳＨ１Ｃ）、溶質輸送体ファミリー２６メンバー５（ＳＬＣ２６Ａ５）、Ｐｉｅｚｏ型機械感受性イオンチャネル成分２（ＰＩＥＺＯ２）、細胞外ロイシンリッチリピート及びフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン含有１（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｌｅｕｃｉｎｅ Ｒｉｃｈ Ｒｅｐｅａｔ ａｎｄ Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ Ｔｙｐｅ ＩＩＩ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １）（ＥＬＦＮ１）、テトラトリコペプチドリピートタンパク質２４（ＴＴＣ２４）、Ｄｙｓｔｒｏｔｅｌｉｎ（ＤＹＴＮ）、コイルドコイルグルタミン酸リッチタンパク質２（ＣＣＥＲ２）、ロイシンリッチリピート及び膜貫通ドメイン含有タンパク質２（ＬＲＴＭ２）、電位依存性カリウムチャネルサブファミリーＡメンバー１０（ＫＣＮＡ１０）、クラリン１（Ｃｌａｒｉｎ １）（ＣＬＲＮ１）、クラリン２（Ｃｌａｒｉｎ ２）（ＣＬＲＮ２）、ＳＫＩファミリー転写コリプレッサー１（ＳＫＩ Ｆａｍｉｌｙ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｃｏｒｅｐｒｅｓｓｏｒ １）（ＳＫＯＲ１）、Ｔｃｔｅｘ１ドメイン含有タンパク質１（ＴＣＴＥＸ１Ｄ１）、Ｆｃ受容体様Ｂ（ＦＣＲＬＢ）、グルタレドキシンドメイン含有システインリッチタンパク質２（ＧＲＸＣＲ２）、セルピンファミリーＥメンバー３（ＳＥＲＰＩＮＥ３）、Ｎｅｓｃｉｅｎｔヘリックス－ループヘリックス１（Ｎｅｓｃｉｅｎｔ Ｈｅｌｉｘ－ｌｏｏｐ Ｈｅｌｉｘ １）（ＮＨＬＨ１）、熱ショックタンパク質７０（ＨＳＰ７０）、熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）、活性化転写因子６（ＡＴＦ６）、真核生物翻訳開始因子２アルファキナーゼ３（ＰＥＲＫ）、セリン／トレオニンプロテインキナーゼ／エンドリボヌクレアーゼＩＲＥ１（ＩＲＥ１）、ワーリン（Ｗｈｉｒｌｉｎ）（ＷＨＲＮ）、オンコモジュリン（ＯＣＭ）、ＬＩＭホメオボックス１（Ｉｓｌ１）、膜貫通及びテトラトリコペプチドリピート含有４（ＴＭＴＣ４）、または結合免疫グロブリンタンパク質（ＢＩＰ）、または電位依存性カリウムチャネルサブファミリーＱメンバー４（ＫＣＮＱ４）である。
【0132】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）は、ステレオシリンのＮ末端部分をコードするポリヌクレオチド（例えば、配列番号３または配列番号４のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチド）に機能的に連結され、２ベクター系内の第１のベクター内に組み込まれる。全長ステレオシリンコード配列は、遺伝子治療に一般的に使用されるタイプのベクター（例えば、ＡＡＶベクター）に含めるには大きすぎるが、この問題は、ステレオシリンコード配列を２つの異なる核酸ベクターの間で分けて、細胞（例えば、有毛細胞）内で全長ステレオシリン配列が再構成可能なようにすることで解決できる。そのような２ベクター系を使用して、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドを含有する第１の核酸ベクター、及びステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドを含有する第２の核酸ベクターを対象の内耳に投与することによって、対象における感音性難聴または前庭機能障害を治療することができる。これらの２ベクター系を使用して、ＳＴＲＣ遺伝子の１つ以上の変異、例えば、ステレオシリン発現を減少させるか、ステレオシリンの機能を低下させるか、または難聴もしくは前庭機能障害と関連している、ＳＴＲＣの変異を有する対象を治療することができる。第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターが組成物で投与される場合、ステレオシリンのＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドとＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドが細胞（例えば、ヒト細胞、例えば、蝸牛または前庭の有毛細胞）内で結合して、全長ステレオシリンコード配列を含有する単一ポリヌクレオチドを（例えば、相同組換え及び／またはスプライシングを介して）形成することができる。
【0133】
本明細書に記載の２ベクター系の核酸ベクターには、ＷＴステレオシリンをコードするポリヌクレオチド配列、またはそのバリアント、例えば、結合時に、ＷＴ哺乳類（例えば、ヒトまたはマウス）のステレオシリンのアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列等が含まれる。本明細書に記載の２ベクター系に使用されるポリヌクレオチドは、下表３にあるステレオシリンのアミノ酸配列のＮ末端部分及びＣ末端部分（例えば、結合時に、表３に記載の全長ステレオシリンのアミノ酸配列、例えば、配列番号３または配列番号４をコードする２つの部分）をコードする。
【0134】
【表3-1】
【0135】
【表3-2】
【0136】
【表3-3】
【0137】
【表3-4】
【0138】
【表3-5】
【0139】
【表3-6】
【0140】
【表3-7】
【0141】
【表3-8】
【0142】
本明細書に記載の方法によれば、配列番号３もしくは配列番号４のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列か、または配列番号３もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列か、または配列番号３もしくは配列番号４に対する１つ以上の保存的アミノ酸置換（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、もしくは１０、またはそれ以上の保存的アミノ酸置換）を含有するアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列のＮ末端部分及びＣ末端部分をそれぞれ含有する第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターを含有する組成物を、対象に投与することができるが、ただし、コードされたステレオシリン類似体がＷＴステレオシリンの治療的機能を保持していることを条件とする。いくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分中のアミノ酸の１０％以下、及びステレオシリンタンパク質のＣ末端部分中のアミノ酸の１０％以下が、保存的アミノ酸置換により置き換えられ得る。ステレオシリンタンパク質は、配列番号５または配列番号６の配列を有するポリヌクレオチドによってコードされ得る。ステレオシリンタンパク質はまた、ヒト対象において非病原性であることがわかっている一塩基多型（ＳＮＰ）を有するポリヌクレオチドによってもコードされ得る。ステレオシリンタンパク質は、ヒトステレオシリンタンパク質である場合もあれば、別の哺乳動物種（例えば、マウス、ラット、雌ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ロバ、ネコ、イヌ、ウサギ、モルモット、または他の哺乳類）からのヒトステレオシリンタンパク質のホモログである場合もある。
【0143】
いくつかの実施形態では、第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターは、二重ベクター発現系（例えば、重複二重ベクター、トランススプライシング二重ベクター、または二重ハイブリッドベクター）におけるの第１のベクター及び第２のベクターである。いくつかの実施形態では、第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターは、インテイン発現系における第１のベクター及び第２のベクターである。いくつかの実施形態では、第１のベクター及び第２のベクターは、リボザイム発現系（例えば、第１の核酸ベクターが、ステレオシリンのＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドと３’リボザイムとを含有し、第２のベクターが、ステレオシリンのＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドと５’リボザイムとを含有する系）における第１のベクター及び第２のベクターである。リボザイム発現系では、３’リボザイム及び５’リボザイムは、転写時に生成される第１のＲＮＡ分子及び第２のＲＮＡ分子から自身を触媒して３’末端及び５’末端を生じさせることができ、これらの末端が連結されて、第１のＲＮＡ分子のコード領域と第２のＲＮＡ分子のコード領域とを含有するＲＮＡ分子が形成され得る。いくつかの実施形態では、３’リボザイムは、ＨＤＶ（デルタ型肝炎ウイルス）ファミリーのリボザイムのメンバーであり、５’リボザイムは、ＨＨ（ハンマーヘッド）型ファミリーのリボザイムのメンバーである。例示的なリボザイム発現系は、国際出願公開第ＷＯ２０２１１５８９６４Ａ１号に記載されており、それらは、参照により本明細書に組み込まれる。
【0144】
二重ベクター発現系
重複二重ベクター
哺乳類細胞（例えば、有毛細胞）で大型タンパク質を発現させるための手法の１つでは、重複二重ベクターの使用を伴う。この手法は、２つの核酸ベクターの使用に基づいており、その各々が、目的タンパク質をコードするポリヌクレオチドの一部を含有し、かつポリヌクレオチドの他の部分との定義された配列重複領域を有する。相同組換えが重複領域で生じ、目的の全長タンパク質（例えば、配列番号３または配列番号４のステレオシリンタンパク質）をコードする単一ポリヌクレオチドの形成をもたらし得る。
重複二重ベクター
哺乳類細胞（例えば、有毛細胞）で大型タンパク質を発現させるための手法の１つでは、重複二重ベクターの使用を伴う。この手法は、２つの核酸ベクターの使用に基づいており、その各々が、目的タンパク質をコードするポリヌクレオチドの一部を含有し、かつポリヌクレオチドの他の部分との定義された配列重複領域を有する。相同組換えが重複領域で生じ、目的の全長タンパク質（例えば、配列番号３または配列番号４のステレオシリンタンパク質）をコードする単一ポリヌクレオチドの形成をもたらし得る。
【0145】
本明細書に記載の方法及び組成物に使用するための重複二重ベクターは、少なくとも２００塩基（ｂ）の重複する配列（例えば、少なくとも２００ｂ、３００ｂ、４００ｂ、５００ｂ、６００ｂ、７００ｂ、８００ｂ、９００ｂ、１．０キロベース（ｋｂ）、１．１ｋｂ、１．２ｋｂ、１．３ｋｂ、１．４ｋｂ、１．５ｋｂまたはそれ以上の重複する配列）を含有する。核酸ベクターは、重複領域が、ステレオシリンをコードするポリヌクレオチドの長さの約半分に相当するステレオシリンをコードするポリヌクレオチド内の中心位置またはその近傍にあり、中心位置のどちらの側の重複量も等しくなるよう設計される。また、ステレオシリンをコードするポリヌクレオチドにおけるプロモーターのサイズ及び目的の配列エレメントの位置に基づいて重複領域の中心を選択することもできる。いくつかの実施形態では、ステレオシリンをコードするポリヌクレオチドは、ある程度の重複（例えば、２００ｂ、２５０ｂ、３００ｂ、３５０ｂ、４００ｂ、４５０ｂ、５００ｂ、６００ｂ、７００ｂ、８００ｂ、９００ｂ、１ｋｂ、１．１ｋｂ、１．２ｋｂ、１．３ｋｂ、１．４ｋｂ、１．５ｋｂ、またはそれ以上）がある、ほぼ等しい長さに２分割され、ポリヌクレオチドの５’側半分がステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードし、ポリヌクレオチドの３’側半分がステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする。本明細書に記載の方法及び組成物に使用するための核酸ベクターはまた、ステレオシリンをコードするポリヌクレオチドの約半分が各ベクター内に含有される（例えば、各ベクターが、ステレオシリンタンパク質の約半分をコードするポリヌクレオチドを含有する）よう設計される。
【0146】
いくつかの実施形態では、第１の核酸ベクターは、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする。いくつかの実施形態では、第２の核酸ベクターは、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする。いくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質は、配列番号３の配列を有するか、またはそれに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質は、配列番号４の配列を有するか、またはそれに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、全長ヒトステレオシリンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５の配列を有するか、またはそれに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。いくつかの実施形態では、配列番号５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドは、配列番号３のステレオシリンタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、全長マウスステレオシリンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６の配列を有するか、またはそれに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。いくつかの実施形態では、配列番号６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドは、配列番号４のステレオシリンタンパク質をコードする。
【0147】
１つの例示的な重複二重ベクター系には、第１の核酸ベクターであって、中心位置として選択された位置の３’に隣接する５００ｂｐが含まれるステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、配列番号３または配列番号４のＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された本明細書で先に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーター）を含有する、第１の核酸ベクター、ならびにステレオシリンタンパク質をコードするポリヌクレオチドのＣ末端部分を含有する第２の核酸ベクターであって、中心位置として選択された位置の５’に隣接する５００ｂｐ、及びポリ（Ａ）配列（例えば、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリ（Ａ）シグナル配列）が含まれる、第２の核酸ベクター、が含まれる。核酸ベクターは、任意選択で、本明細書に開示のＳＴＲＣプロモーターの一部ではないＳＴＲＣ非翻訳領域（ＵＴＲ）を含有することができる。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号１の配列を有するポリヌクレオチドであるか、または配列番号１に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号２もしくはその機能的部分の配列を有するポリヌクレオチドであるか、または配列番号２もしくはその機能的部分に少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、ＳＴＲＣ遺伝子の発現を制御することができる、配列番号２の機能的部分である。いくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号４８もしくはその機能的部分の配列を有するポリヌクレオチドであるか、または配列番号４８もしくはその機能的部分に少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、ＳＴＲＣ遺伝子の発現を制御することができる、配列番号４８の機能的部分である。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド１～５６０の配列が含まれるか、またはそれを有する。
【0148】
トランススプライシング二重ベクター
哺乳類細胞で大型タンパク質を発現させるための第２の手法では、トランススプライシング二重ベクターの使用を伴う。この手法では、別個の核酸配列を含有する２つの核酸ベクターが使用され、目的タンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドと、目的タンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドとは重複しない。その代わり、第１の核酸ベクターには、目的タンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの３’にスプライスドナー配列が含まれ、第２の核酸ベクターには、目的タンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’にスプライスアクセプター配列が含まれる。第１の核酸と第２の核酸が同じ細胞内に存在する場合、それらのＩＴＲは連結可能であり、連結されたＩＴＲがスプライスドナーとスプライスアクセプターとの間に位置する単一の核酸構造が形成される。その後、転写中にトランススプライシングが起こり、目的タンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドとＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドが連続した核酸分子が生成され、それにより全長コード配列が形成される。
哺乳類細胞で大型タンパク質を発現させるための第２の手法では、トランススプライシング二重ベクターの使用を伴う。この手法では、別個の核酸配列を含有する２つの核酸ベクターが使用され、目的タンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドと、目的タンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドとは重複しない。その代わり、第１の核酸ベクターには、目的タンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの３’にスプライスドナー配列が含まれ、第２の核酸ベクターには、目的タンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’にスプライスアクセプター配列が含まれる。第１の核酸と第２の核酸が同じ細胞内に存在する場合、それらのＩＴＲは連結可能であり、連結されたＩＴＲがスプライスドナーとスプライスアクセプターとの間に位置する単一の核酸構造が形成される。その後、転写中にトランススプライシングが起こり、目的タンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドとＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドが連続した核酸分子が生成され、それにより全長コード配列が形成される。
【0149】
本明細書に記載の方法及び組成物に使用するためのトランススプライシング二重ベクターは、各ベクター内にステレオシリンコード配列の約半分が含有される（例えば、前述したように、各ベクターが、ステレオシリンタンパク質の約半分をコードするポリヌクレオチドを含有する）よう設計される。２つの核酸ベクター間でポリヌクレオチド配列を分割する方法の決定は、ステレオシリンタンパク質をコードするポリヌクレオチドにおけるプロモーターのサイズ及び目的の配列エレメント（例えば、ＳＴＲＣ遺伝子のエクソン）の位置に基づいて行われる。トランススプライシング二重ベクター系における第１のベクターは、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、配列番号３または配列番号４のステレオシリンタンパク質のＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチドの５’にプロモーター配列（例えば、ＳＴＲＣプロモーター配列、例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、または配列番号２もしくは配列番号４８の機能的部分）を含有することができる。核酸ベクターは、任意選択で、本明細書に記載されるプロモーターの一部ではないＳＴＲＣ ＵＴＲ（例えば、５’及び３’のＳＴＲＣ ＵＴＲの一方または両方、例えば、全長ＵＴＲ）を含有することができる。本明細書に記載の組成物及び方法に使用するための１つの例示的なトランススプライシング二重ベクター系には、第１の核酸ベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、ヒトステレオシリンタンパク質、例えば、配列番号３のＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された本明細書で先に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーター）、及びポリヌクレオチド配列の３’のスプライスドナー配列を含有する、第１の核酸ベクター、ならびに、第２の核酸ベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分（例えば、ヒトステレオシリンタンパク質、例えば、配列番号３のＣ末端部分）をコードするポリヌクレオチドの５’のスプライスアクセプター配列及びポリ（Ａ）配列を含有する、第２の核酸ベクター、が含まれる。代替的トランススプライシング二重ベクター系には、第１の核酸ベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、マウスステレオシリンタンパク質、例えば、配列番号４のＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された本明細書で先に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーター）、及びポリヌクレオチド配列の３’のスプライスドナー配列を含有する、第１の核酸ベクター、ならびに第２の核酸ベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分（例えば、マウスステレオシリンタンパク質、例えば、配列番号４のＣ末端部分）をコードするポリヌクレオチドの５’のスプライスアクセプター配列及びポリ（Ａ）配列を含有する、第２の核酸ベクター、が含まれる。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号１の配列を有するポリヌクレオチドであるか、または配列番号１に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号２もしくはその機能的部分の配列を有するポリヌクレオチド、または配列番号２もしくはその機能的部分に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、ＳＴＲＣ遺伝子の発現を制御することができる、配列番号２の機能的部分である。いくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号４８もしくはその機能的部分の配列を有するポリヌクレオチドであるか、または配列番号４８もしくはその機能的部分に少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、ＳＴＲＣ遺伝子の発現を制御することができる、配列番号４８の機能的部分である。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド１～５６０の配列が含まれるか、またはそれを有する。
【0150】
これらの核酸ベクターは、本明細書に記載のプロモーターの一部ではない全長５’ＳＴＲＣ ＵＴＲ及び／または全長３’ＳＴＲＣ ＵＴＲを、それぞれ、第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターに含有することもできる（例えば、第１の核酸ベクターは、ヒトステレオシリンをコードする二重ベクター系では５’ヒトＳＴＲＣ ＵＴＲを、またマウスステレオシリンをコードする二重ベクター系では５’マウスＵＴＲを含有することができ、第２の核酸ベクターは、ヒトステレオシリンをコードする二重ベクター系では３’ヒトＳＴＲＣ ＵＴＲを、またマウスステレオシリンをコードする二重ベクター系では３’マウスＳＴＲＣ ＵＴＲを含有することができる）。ＳＴＲＣ ＵＴＲを収容するために、ＳＴＲＣ ＵＴＲを含まないトランススプライシング二重ベクター系においてステレオシリンコード配列を分けるために使用した位置とは異なる位置でステレオシリンコード配列を分けることができる（例えば、第１のベクターが、５’ＵＴＲの長さ、プロモーター配列の長さ、及びステレオシリンのＮ末端部分をコードする配列の長さを収容できるような位置、及び／または、第２のベクターが、ステレオシリンのＣ末端部分の長さ及び３’ＵＴＲの長さを収容できるような位置でステレオシリンコード配列を分けることができる）。
【0151】
いくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質は、配列番号３の配列を有するか、またはそれに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質は、配列番号４の配列を有するか、またはそれに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、全長ヒトステレオシリンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５の配列を有するか、または配列番号５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。いくつかの実施形態では、配列番号５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドは、配列番号３のステレオシリンタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、全長マウスステレオシリンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６の配列を有するか、または配列番号６に少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。いくつかの実施形態では、配列番号６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドは、配列番号４のステレオシリンタンパク質をコードする。
【0152】
二重ハイブリッドベクター
哺乳類細胞（例えば、有毛細胞）で大型タンパク質を発現させるための第３の手法では、二重ハイブリッドベクターの使用を伴う。この手法は、重複二重ベクター戦略の要素とトランススプライシング戦略の要素を組み合わせており、相同組換えを生じることができる重複領域、ならびにスプライスドナー配列及びスプライスアクセプター配列の両方を特徴とする。二重ハイブリッドベクター系では、重複領域は、目的タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列の一部ではなく、第１の核酸ベクターと第２の核酸ベクターの両方に含有される組換え誘導領域であり、この手法では、目的タンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドと、目的タンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドとは重複しない。組換え誘導領域は、第１の核酸ベクター内のスプライスドナー配列の３’、及び第２の核酸配列内のスプライスアクセプター配列の５’である。第１の核酸配列と第２の核酸配列はその後連結して、（１）重複領域での組換え、または（２）ＩＴＲのコンカテマー化、という２つの機構のうちの１つに基づいて単一の配列を形成することができる。残っている組換え誘導領域（複数可）及び／またはコンカテマー化ＩＴＲは、スプライシングによって除去され、目的の全長タンパク質をコードする連続したポリヌクレオチド配列の形成がもたらされ得る。本明細書に記載されている組成物及び方法に使用され得る組換え誘導領域、スプライスドナー配列及びスプライスアクセプター配列には当業者に周知のものが含まれる。例示的な組換え誘導領域には、米国特許第１０，４９４，６４５号及び同第８，２３６，５５７号（これらは参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されているようなＦ１ファージＡＫ遺伝子及びアルカリホスファターゼ（ＡＰ）遺伝子の断片が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＡＰ遺伝子断片は、
ＣＣＣＣＧＧＧＴＧＣＧＣＧＧＣＧＴＣＧＧＴＧＧＴＧＣＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＣＡＧＧＴＣＧＣＡＧＧＣＧＧＴＧＴＡＧＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＧＧＣＧＧＣＧＡＡＧＧＣＣＡＴＧＡＣＧＴＧＣＧＣＴＡＴＧＡＡＧＧＴＣＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＧＴＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＣＧＣＣＴＧＣＧＧＧＣＣＧＣＧＣＧＣＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＡＣＧＴＣＣＴＣＧＣＣＴＧＣＧＴＧＧＧＴＣＴＣＴＴＣＧＴＣＣＡＧＧＧＧＣＡＣＴＧＣＴＧＡＣＴＧＣＴＧＣＣＧＡＴＡＣＴＣＧＧＧＧＣＴＣＣＣＧＣＴＣＴＣＧＣＴＣＴＣＧＧＴＡＡＣＡＴＣＣＧＧＣＣＧＧＧＣＧＣＣＧＴＣＣＴＴＧＡＧＣＡＣＡＴＡＧＣＣＴＧＧＡＣＣＧＴＴＴＣＣＧＴＡＴＡＧＧＡＧＧＡＣＣＧＴＧＴＡＧＧＣＣＴＴＣＣＴＧＴＣＣＣＧＧＧＣＣＴＴＧＣＣＡＧＣＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＴＧＡＡＧＧＡＧＣＴＣＣＣＴＣＧＣＡＧＧＧＧＧＴＡＧＣＣＴＣＣＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＣＧＴＧＧＧＡＧＴＧＧＴＣＧＧＣＡＧＴＧＡＣＧＡＧＧＣＴＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＴＣＣＴＣＧＣＴＧＧＴＧＡＧＣＴＧＧＣＣＣＧＣＣＣＴＣＴＣＡＡＴＧＧＣＧＴＣＧＴＣＧＡＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＣＴＣＡＧＴＣＡＧＴＧＣＣＣＧＧＴＡＡＧＣＣＣＴＧＣＴＴＴＣＡＴＧＡＴＧＡＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＴＧＣＧＡＣＣＡＣＣＣＴＣＣＡＣＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＧＧＴＧＴＣＴＧＣＴＣＡＧＣＡＧＧＣＧＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＡＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧＧＧＡＧＧＧＧＴＣＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＴＣＴＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＣＧＴＡＴＴＴＣＡＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＡＧＡＧＡＣＣＣＡＴＧＡＧＡＴＧＧＧＴＣＡＣＡＧＡＣＧＧＧＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＣＣＴＧＣＡＴＧＡＧＣＴＣＡＧＴＧＣＧＧＴＴＣＣＡＣＡＣＧＴＡＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＣＧＣＣＧＡＧＣＣＡＴＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＴＴＣＣＣＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＴＣＣＣＡＣＣＴＴＧＧＣＴＧＴＡＧＴＣＡＴＣＴＧＧＧＴＡＣＴＣＡＧＧＧＴＣＴＧＧＧＧＴＴＣＣＣＡＴＧＣＧＡＡＡＣＡＴＧＴＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＴＣＣＡ（配列番号４２）の配列を有する。
哺乳類細胞（例えば、有毛細胞）で大型タンパク質を発現させるための第３の手法では、二重ハイブリッドベクターの使用を伴う。この手法は、重複二重ベクター戦略の要素とトランススプライシング戦略の要素を組み合わせており、相同組換えを生じることができる重複領域、ならびにスプライスドナー配列及びスプライスアクセプター配列の両方を特徴とする。二重ハイブリッドベクター系では、重複領域は、目的タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列の一部ではなく、第１の核酸ベクターと第２の核酸ベクターの両方に含有される組換え誘導領域であり、この手法では、目的タンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドと、目的タンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドとは重複しない。組換え誘導領域は、第１の核酸ベクター内のスプライスドナー配列の３’、及び第２の核酸配列内のスプライスアクセプター配列の５’である。第１の核酸配列と第２の核酸配列はその後連結して、（１）重複領域での組換え、または（２）ＩＴＲのコンカテマー化、という２つの機構のうちの１つに基づいて単一の配列を形成することができる。残っている組換え誘導領域（複数可）及び／またはコンカテマー化ＩＴＲは、スプライシングによって除去され、目的の全長タンパク質をコードする連続したポリヌクレオチド配列の形成がもたらされ得る。本明細書に記載されている組成物及び方法に使用され得る組換え誘導領域、スプライスドナー配列及びスプライスアクセプター配列には当業者に周知のものが含まれる。例示的な組換え誘導領域には、米国特許第１０，４９４，６４５号及び同第８，２３６，５５７号（これらは参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されているようなＦ１ファージＡＫ遺伝子及びアルカリホスファターゼ（ＡＰ）遺伝子の断片が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＡＰ遺伝子断片は、
ＣＣＣＣＧＧＧＴＧＣＧＣＧＧＣＧＴＣＧＧＴＧＧＴＧＣＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＣＡＧＧＴＣＧＣＡＧＧＣＧＧＴＧＴＡＧＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＧＧＣＧＧＣＧＡＡＧＧＣＣＡＴＧＡＣＧＴＧＣＧＣＴＡＴＧＡＡＧＧＴＣＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＧＴＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＣＧＣＣＴＧＣＧＧＧＣＣＧＣＧＣＧＣＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＡＣＧＴＣＣＴＣＧＣＣＴＧＣＧＴＧＧＧＴＣＴＣＴＴＣＧＴＣＣＡＧＧＧＧＣＡＣＴＧＣＴＧＡＣＴＧＣＴＧＣＣＧＡＴＡＣＴＣＧＧＧＧＣＴＣＣＣＧＣＴＣＴＣＧＣＴＣＴＣＧＧＴＡＡＣＡＴＣＣＧＧＣＣＧＧＧＣＧＣＣＧＴＣＣＴＴＧＡＧＣＡＣＡＴＡＧＣＣＴＧＧＡＣＣＧＴＴＴＣＣＧＴＡＴＡＧＧＡＧＧＡＣＣＧＴＧＴＡＧＧＣＣＴＴＣＣＴＧＴＣＣＣＧＧＧＣＣＴＴＧＣＣＡＧＣＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＴＧＡＡＧＧＡＧＣＴＣＣＣＴＣＧＣＡＧＧＧＧＧＴＡＧＣＣＴＣＣＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＣＧＴＧＧＧＡＧＴＧＧＴＣＧＧＣＡＧＴＧＡＣＧＡＧＧＣＴＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＴＣＣＴＣＧＣＴＧＧＴＧＡＧＣＴＧＧＣＣＣＧＣＣＣＴＣＴＣＡＡＴＧＧＣＧＴＣＧＴＣＧＡＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＣＴＣＡＧＴＣＡＧＴＧＣＣＣＧＧＴＡＡＧＣＣＣＴＧＣＴＴＴＣＡＴＧＡＴＧＡＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＴＧＣＧＡＣＣＡＣＣＣＴＣＣＡＣＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＧＧＴＧＴＣＴＧＣＴＣＡＧＣＡＧＧＣＧＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＡＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧＧＧＡＧＧＧＧＴＣＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＴＣＴＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＣＧＴＡＴＴＴＣＡＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＡＧＡＧＡＣＣＣＡＴＧＡＧＡＴＧＧＧＴＣＡＣＡＧＡＣＧＧＧＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＣＣＴＧＣＡＴＧＡＧＣＴＣＡＧＴＧＣＧＧＴＴＣＣＡＣＡＣＧＴＡＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＣＧＣＣＧＡＧＣＣＡＴＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＴＴＣＣＣＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＴＣＣＣＡＣＣＴＴＧＧＣＴＧＴＡＧＴＣＡＴＣＴＧＧＧＴＡＣＴＣＡＧＧＧＴＣＴＧＧＧＧＴＴＣＣＣＡＴＧＣＧＡＡＡＣＡＴＧＴＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＴＣＣＡ（配列番号４２）の配列を有する。
【0153】
いくつかの実施形態では、ＡＰ遺伝子断片は、
ＣＣＣＣＧＧＧＴＧＣＧＣＧＧＣＧＴＣＧＧＴＧＧＴＧＣＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＣＡＧＧＴＣＧＣＡＧＧＣＧＧＴＧＴＡＧＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＧＧＣＧＧＣＧＡＡＧＧＣＣＡＴＧＡＣＧＴＧＣＧＣＴＡＴＧＡＡＧＧＴＣＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＧＴＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＣＧＣＣＴＧＣＧＧＧＣＣＧＣＧＣＧＣＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＡＣＧＴＣＣＴＣＧＣＣＴＧＣＧＴＧＧＧＴＣＴＣＴＴＣＧＴＣＣＡＧＧＧＧＣＡＣＴＧＣＴＧＡＣＴＧＣＴＧＣＣＧＡＴＡＣＴＣＧＧＧＧＣＴＣＣＣＧＣＴＣＴＣＧＣＴＣＴＣＧＧＴＡＡＣＡＴＣＣＧＧＣＣＧＧＧＣＧＣＣＧＴＣＣＴＴＧＡＧＣＡＣＡＴＡＧＣＣＴＧＧＡＣＣＧＴＴＴＣＣＧＴＡＴＡＧＧＡＧＧＡＣＣＧＴＧＴＡＧＧＣＣＴＴＣＣＴＧＴＣＣＣＧＧＧＣＣＴＴＧＣＣＡＧＣＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＴＧＡＡＧＧＡＧＣＴＣＣＣＴＣＧＣＡＧＧＧＧＧＴＡＧＣＣＴＣＣＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＣＧＴＧＧＧＡＧＴＧＧＴＣＧＧＣＡＧＴＧＡＣＧＡＧＧＣＴＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＴＣＣＴＣＧＣＴＧＧＴＧＡ（配列番号４３）の配列を有する。
ＣＣＣＣＧＧＧＴＧＣＧＣＧＧＣＧＴＣＧＧＴＧＧＴＧＣＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＣＡＧＧＴＣＧＣＡＧＧＣＧＧＴＧＴＡＧＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＧＧＣＧＧＣＧＡＡＧＧＣＣＡＴＧＡＣＧＴＧＣＧＣＴＡＴＧＡＡＧＧＴＣＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＧＴＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＣＧＣＣＴＧＣＧＧＧＣＣＧＣＧＣＧＣＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＡＣＧＴＣＣＴＣＧＣＣＴＧＣＧＴＧＧＧＴＣＴＣＴＴＣＧＴＣＣＡＧＧＧＧＣＡＣＴＧＣＴＧＡＣＴＧＣＴＧＣＣＧＡＴＡＣＴＣＧＧＧＧＣＴＣＣＣＧＣＴＣＴＣＧＣＴＣＴＣＧＧＴＡＡＣＡＴＣＣＧＧＣＣＧＧＧＣＧＣＣＧＴＣＣＴＴＧＡＧＣＡＣＡＴＡＧＣＣＴＧＧＡＣＣＧＴＴＴＣＣＧＴＡＴＡＧＧＡＧＧＡＣＣＧＴＧＴＡＧＧＣＣＴＴＣＣＴＧＴＣＣＣＧＧＧＣＣＴＴＧＣＣＡＧＣＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＴＧＡＡＧＧＡＧＣＴＣＣＣＴＣＧＣＡＧＧＧＧＧＴＡＧＣＣＴＣＣＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＣＧＴＧＧＧＡＧＴＧＧＴＣＧＧＣＡＧＴＧＡＣＧＡＧＧＣＴＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＴＣＣＴＣＧＣＴＧＧＴＧＡ（配列番号４３）の配列を有する。
【0154】
いくつかの実施形態では、ＡＰ遺伝子断片は、
ＧＣＴＧＧＣＣＣＧＣＣＣＴＣＴＣＡＡＴＧＧＣＧＴＣＧＴＣＧＡＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＣＴＣＡＧＴＣＡＧＴＧＣＣＣＧＧＴＡＡＧＣＣＣＴＧＣＴＴＴＣＡＴＧＡＴＧＡＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＴＧＣＧＡＣＣＡＣＣＣＴＣＣＡＣＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＧＧＴＧＴＣＴＧＣＴＣＡＧＣＡＧＧＣＧＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＡＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧＧＧＡＧＧＧＧＴＣＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＴＣＴＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＣＧＴＡＴＴＴＣＡＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＡＧＡＧＡＣＣＣＡＴＧＡＧＡＴＧＧＧＴＣＡＣＡＧＡＣＧＧＧＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＣＣＴＧＣＡＴＧＡＧＣＴＣＡＧＴＧＣＧＧＴＴＣＣＡＣＡＣＧＴＡＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＣＧＣＣＧＡＧＣＣＡＴＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＴＴＣＣＣＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＴＣＣＣＡＣＣＴＴＧＧＣＴＧＴＡＧＴＣＡＴＣＴＧＧＧＴＡＣＴＣＡＧＧＧＴＣＴＧＧＧＧＴＴＣＣＣＡＴＧＣＧＡＡＡＣＡＴＧＴＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＴＣＣＡ（配列番号４４）の配列を有する。
ＧＣＴＧＧＣＣＣＧＣＣＣＴＣＴＣＡＡＴＧＧＣＧＴＣＧＴＣＧＡＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＣＴＣＡＧＴＣＡＧＴＧＣＣＣＧＧＴＡＡＧＣＣＣＴＧＣＴＴＴＣＡＴＧＡＴＧＡＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＴＧＣＧＡＣＣＡＣＣＣＴＣＣＡＣＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＧＧＴＧＴＣＴＧＣＴＣＡＧＣＡＧＧＣＧＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＡＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧＧＧＡＧＧＧＧＴＣＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＴＣＴＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＣＧＴＡＴＴＴＣＡＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＡＧＡＧＡＣＣＣＡＴＧＡＧＡＴＧＧＧＴＣＡＣＡＧＡＣＧＧＧＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＣＣＴＧＣＡＴＧＡＧＣＴＣＡＧＴＧＣＧＧＴＴＣＣＡＣＡＣＧＴＡＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＣＧＣＣＧＡＧＣＣＡＴＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＴＴＣＣＣＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＴＣＣＣＡＣＣＴＴＧＧＣＴＧＴＡＧＴＣＡＴＣＴＧＧＧＴＡＣＴＣＡＧＧＧＴＣＴＧＧＧＧＴＴＣＣＣＡＴＧＣＧＡＡＡＣＡＴＧＴＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＴＣＣＡ（配列番号４４）の配列を有する。
【0155】
いくつかの実施形態では、ＡＰ遺伝子断片は、
ＣＣＣＣＧＧＧＴＧＣＧＣＧＧＣＧＴＣＧＧＴＧＧＴＧＣＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＣＡＧＧＴＣＧＣＡＧＧＣＧＧＴＧＴＡＧＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＧＧＣＧＧＣＧＡＡＧＧＣＣＡＴＧＡＣＧＴＧＣＧＣＴＡＴＧＡＡＧＧＴＣＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＧＴＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＣＧＣＣＴＧＣＧＧＧＣＣＧＣＧＣＧＣＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＡＣＧＴＣＣＴＣＧＣＣＴＧＣＧＴＧＧＧＴＣＴＣＴＴＣＧＴＣＣＡＧＧＧＧＣＡＣＴＧＣＴＧＡＣＴＧＣＴＧＣＣＧＡＴＡＣＴＣＧＧＧＧＣＴＣＣＣＧＣＴＣＴＣＧＣＴＣＴＣＧＧＴＡＡＣＡＴＣＣＧＧＣＣＧＧＧＣＧＣＣＧＴＣＣＴＴＧＡＧＣＡＣＡＴＡＧＣＣＴＧＧＡＣＣＧＴＴＴＣ（配列番号４５）の配列を有する。
ＣＣＣＣＧＧＧＴＧＣＧＣＧＧＣＧＴＣＧＧＴＧＧＴＧＣＣＧＧＣＧＧＧＧＧＧＣＧＣＣＡＧＧＴＣＧＣＡＧＧＣＧＧＴＧＴＡＧＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＧＧＣＧＧＣＧＡＡＧＧＣＣＡＴＧＡＣＧＴＧＣＧＣＴＡＴＧＡＡＧＧＴＣＴＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＧＴＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＣＧＣＣＴＧＣＧＧＧＣＣＧＣＧＣＧＣＧＡＡＣＡＣＣＧＣＣＡＣＧＴＣＣＴＣＧＣＣＴＧＣＧＴＧＧＧＴＣＴＣＴＴＣＧＴＣＣＡＧＧＧＧＣＡＣＴＧＣＴＧＡＣＴＧＣＴＧＣＣＧＡＴＡＣＴＣＧＧＧＧＣＴＣＣＣＧＣＴＣＴＣＧＣＴＣＴＣＧＧＴＡＡＣＡＴＣＣＧＧＣＣＧＧＧＣＧＣＣＧＴＣＣＴＴＧＡＧＣＡＣＡＴＡＧＣＣＴＧＧＡＣＣＧＴＴＴＣ（配列番号４５）の配列を有する。
【0156】
いくつかの実施形態では、ＡＰ遺伝子断片は、
ＣＧＴＡＴＡＧＧＡＧＧＡＣＣＧＴＧＴＡＧＧＣＣＴＴＣＣＴＧＴＣＣＣＧＧＧＣＣＴＴＧＣＣＡＧＣＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＴＧＡＡＧＧＡＧＣＴＣＣＣＴＣＧＣＡＧＧＧＧＧＴＡＧＣＣＴＣＣＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＣＧＴＧＧＧＡＧＴＧＧＴＣＧＧＣＡＧＴＧＡＣＧＡＧＧＣＴＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＴＣＣＴＣＧＣＴＧＧＴＧＡＧＣＴＧＧＣＣＣＧＣＣＣＴＣＴＣＡＡＴＧＧＣＧＴＣＧＴＣＧＡＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＣＴＣＡＧＴＣＡＧＴＧＣＣＣＧＧＴＡＡＧＣＣＣＴＧＣＴＴＴＣＡＴＧＡＴＧＡＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＴＧＣＧＡＣＣＡＣＣＣＴＣＣＡＣＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＧＧＴＧＴＣＴＧＣＴＣＡＧＣＡＧＧ（配列番号４６）の配列を有する。
ＣＧＴＡＴＡＧＧＡＧＧＡＣＣＧＴＧＴＡＧＧＣＣＴＴＣＣＴＧＴＣＣＣＧＧＧＣＣＴＴＧＣＣＡＧＣＧＧＣＣＡＧＣＣＣＧＡＴＧＡＡＧＧＡＧＣＴＣＣＣＴＣＧＣＡＧＧＧＧＧＴＡＧＣＣＴＣＣＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＡＣＧＴＧＧＧＡＧＴＧＧＴＣＧＧＣＡＧＴＧＡＣＧＡＧＧＣＴＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＴＣＣＴＣＧＣＴＧＧＴＧＡＧＣＴＧＧＣＣＣＧＣＣＣＴＣＴＣＡＡＴＧＧＣＧＴＣＧＴＣＧＡＡＣＡＴＧＡＴＣＧＴＣＴＣＡＧＴＣＡＧＴＧＣＣＣＧＧＴＡＡＧＣＣＣＴＧＣＴＴＴＣＡＴＧＡＴＧＡＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＴＧＣＧＡＣＣＡＣＣＣＴＣＣＡＣＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＧＧＴＧＴＣＴＧＣＴＣＡＧＣＡＧＧ（配列番号４６）の配列を有する。
【0157】
いくつかの実施形態では、ＡＰ遺伝子断片は、
ＣＧＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＡＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧＧＧＡＧＧＧＧＴＣＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＴＣＴＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＣＧＴＡＴＴＴＣＡＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＡＧＡＧＡＣＣＣＡＴＧＡＧＡＴＧＧＧＴＣＡＣＡＧＡＣＧＧＧＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＣＣＴＧＣＡＴＧＡＧＣＴＣＡＧＴＧＣＧＧＴＴＣＣＡＣＡＣＧＴＡＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＣＧＣＣＧＡＧＣＣＡＴＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＴＴＣＣＣＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＴＣＣＣＡＣＣＴＴＧＧＣＴＧＴＡＧＴＣＡＴＣＴＧＧＧＴＡＣＴＣＡＧＧＧＴＣＴＧＧＧＧＴＴＣＣＣＡＴＧＣＧＡＡＡＣＡＴＧＴＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＴＣＣＡ（配列番号４７）の配列を有する。
ＣＧＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＡＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧＧＧＡＧＧＧＧＴＣＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＴＣＴＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＣＧＴＡＴＴＴＣＡＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＡＧＡＧＡＣＣＣＡＴＧＡＧＡＴＧＧＧＴＣＡＣＡＧＡＣＧＧＧＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＣＣＴＧＣＡＴＧＡＧＣＴＣＡＧＴＧＣＧＧＴＴＣＣＡＣＡＣＧＴＡＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＣＧＴＴＣＧＣＣＧＡＧＣＣＡＴＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＡＴＴＣＴＴＣＣＣＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＴＣＣＣＡＣＣＴＴＧＧＣＴＧＴＡＧＴＣＡＴＣＴＧＧＧＴＡＣＴＣＡＧＧＧＴＣＴＧＧＧＧＴＴＣＣＣＡＴＧＣＧＡＡＡＣＡＴＧＴＡＣＴＴＴＣＧＧＣＣＴＣＣＡ（配列番号４７）の配列を有する。
【0158】
本明細書に記載の方法及び組成物に使用するための二重ハイブリッドベクターは、各ベクター内にステレオシリンコード配列の約半分が含有される（例えば、各ベクターが、ステレオシリンタンパク質の約半分をコードするポリヌクレオチドを含有する）よう設計される。２つの核酸ベクター間でポリヌクレオチド配列を分割する方法の決定は、ステレオシリンタンパク質をコードするポリヌクレオチドにおけるプロモーターのサイズ及び目的の配列エレメント（例えば、ＳＴＲＣ遺伝子のエクソン）の位置に基づいて行われる。二重ハイブリッドベクター系における第１のベクターは、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’にプロモーター配列を含有することができる。核酸ベクターは、任意選択で、本明細書に記載されるプロモーターの一部ではないＳＴＲＣ ＵＴＲ（例えば、全長５’ＵＴＲ及び／または全長３’ＵＴＲ）を含有することができる。１つの例示的な二重ハイブリッドベクター系には、第１の核酸ベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、ヒトステレオシリン、例えば、配列番号３のＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された本明細書で先に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーター）、ポリヌクレオチド配列の３’のスプライスドナー配列、及びスプライスドナー配列の３’の組換え誘導領域を含有する、第１の核酸ベクター、ならびに、第２の核酸ベクターであって、組換え誘導領域（例えば、第１のベクターに含まれる組換え誘導領域と同じもの）、組換え誘導領域の３’のスプライスアクセプター配列、スプライスアクセプター配列の３’のステレオシリンタンパク質のＣ末端部分（例えば、ヒトステレオシリン、例えば、配列番号３のＣ末端部分）をコードするポリヌクレオチド、及びポリ（Ａ）配列を含有する、第２の核酸ベクター、が含まれる。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号１の配列を有するポリヌクレオチドであるか、または配列番号１に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号２もしくはその機能的部分の配列を有するポリヌクレオチド、または配列番号２もしくはその機能的部分に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、ＳＴＲＣ遺伝子の発現を制御することができる、配列番号２の機能的部分である。いくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号４８もしくはその機能的部分の配列を有するポリヌクレオチドであるか、または配列番号４８もしくはその機能的部分に少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、ＳＴＲＣ遺伝子の発現を制御することができる、配列番号４８の機能的部分である。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド１～５６０の配列が含まれるか、またはそれを有する。第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターはそれぞれ、全長５’ＳＴＲＣ ＵＴＲ及び／または全長３’ＳＴＲＣ ＵＴＲを含有することもできる（例えば、ヒトＳＴＲＣ５’ＵＴＲを第１の核酸ベクターに含めることができ、ヒトＳＴＲＣ３’ＵＴＲを第２の核酸ベクターに含めることができる）。
【0159】
ＳＴＲＣプロモーターが含まれる別の例示的な二重ハイブリッドベクター系には、第１の核酸ベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、マウスステレオシリン、例えば、配列番号４のＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された本明細書で先に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーター）、ポリヌクレオチド配列の３’のスプライスドナー配列、及びスプライスドナー配列の３’の組換え誘導領域を含有する、第１の核酸ベクター、ならびに、第２の核酸ベクターであって、組換え誘導領域（例えば、第１のベクターに含まれる組換え誘導領域と同じもの）、組換え誘導領域の３’のスプライスアクセプター配列、スプライスアクセプター配列の３’のステレオシリンタンパク質のＣ末端部分（例えば、マウスステレオシリン、例えば、配列番号４のＣ末端部分）をコードするポリヌクレオチド、及びポリ（Ａ）配列を含有する、第２の核酸ベクター、が含まれる。第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターはそれぞれ、全長５’ＳＴＲＣ ＵＴＲ及び／または全長３’ＳＴＲＣ ＵＴＲを含有することもできる（例えば、マウスＳＴＲＣ５’ＵＴＲを第１の核酸ベクターに含めることができ、マウスＳＴＲＣ３’ＵＴＲを第２の核酸ベクターに含めることができる）。ＳＴＲＣ ＵＴＲを収容するために、ＳＴＲＣ ＵＴＲを含まない二重ハイブリッドベクター系における場合とは異なる位置でステレオシリンコード配列を分けることができる。
【0160】
いくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質は、配列番号３の配列を有するか、またはそれに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質は、配列番号４の配列を有するか、またはそれに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、全長ヒトステレオシリンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号５の配列を有するか、または配列番号５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。いくつかの実施形態では、配列番号５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドは、配列番号３のステレオシリンタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、全長マウスステレオシリンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、配列番号６の配列を有するか、または配列番号６に少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。いくつかの実施形態では、配列番号６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドは、配列番号４のステレオシリンタンパク質をコードする。
【0161】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法に使用するための、二重ハイブリッドベクター系における第１のベクターは、マウスステレオシリンをコードするポリヌクレオチドのヌクレオチド１～１８００（例えば、配列番号６のヌクレオチド１～１８００）を含有し、第２のベクターが、マウスステレオシリンをコードするポリヌクレオチドの残りのヌクレオチド（例えば、配列番号６のヌクレオチド１８０１～５４３０）を含有する。いくつかの実施形態では、マウスステレオシリンをコードするポリヌクレオチドを、ＳＴＲＣのエクソンの境界において第１のベクターと第２のベクターとに分ける。いくつかの実施形態では、エクソンの境界は、エクソン４／エクソン５の境界、エクソン５／エクソン６の境界、エクソン６／エクソン７の境界、またはエクソン７／エクソン８の境界である。マウスＳＴＲＣコード配列がエクソン４／エクソン５の境界において分けられる二重ハイブリッドベクター系では、第１のベクターが、ステレオシリンをコードするポリヌクレオチドのヌクレオチド１～２２４７（例えば、配列番号６のヌクレオチド１～２２４７）を含有し、第２のベクターが、ステレオシリンをコードするポリヌクレオチドの残りのヌクレオチド（例えば、配列番号６のヌクレオチド２２４８～５４３０）を含有する。マウスＳＴＲＣコード配列がエクソン５／エクソン６の境界において分けられる二重ハイブリッドベクター系では、第１のベクターが、ステレオシリンをコードするポリヌクレオチドのヌクレオチド１～２３１０（例えば、配列番号６のヌクレオチド１～２３１０）を含有し、第２のベクターが、ステレオシリンをコードするポリヌクレオチドの残りのヌクレオチド（例えば、配列番号６のヌクレオチド２３１１～５４３０）を含有する。マウスＳＴＲＣコード配列がエクソン６／エクソン７の境界において分けられる二重ハイブリッドベクター系では、第１のベクターが、ステレオシリンをコードするポリヌクレオチドのヌクレオチド１～２４２１（例えば、配列番号６のヌクレオチド１～２４２１）を含有し、第２のベクターが、ステレオシリンをコードするポリヌクレオチドの残りのヌクレオチド（例えば、配列番号６のヌクレオチド２４２２～５４３０）を含有する。マウスＳＴＲＣコード配列がエクソン７／エクソン８の境界において分けられる二重ハイブリッドベクター系では、第１のベクターが、ステレオシリンをコードするポリヌクレオチドのヌクレオチド１～２５８８（例えば、配列番号６のヌクレオチド１～２５８８）を含有し、第２のベクターが、ステレオシリンをコードするポリヌクレオチドの残りのヌクレオチド（例えば、配列番号６のヌクレオチド２５８９～５４３０）を含有する。
【0162】
本明細書に記載の方法及び組成物に使用される二重ハイブリッドベクターには、任意選択で、第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターの両方に分解シグナル配列を含めることができる。組み換えること及び／またはスプライシングを受けることができなかったポリヌクレオチドからのステレオシリンタンパク質の一部の発現を妨げるかまたは減少させるために分解シグナル配列を含めることができる。分解シグナル配列は、第１の核酸ベクターでは組換え誘導領域の３’に位置し、第２の核酸ベクターでは組換え誘導領域とスプライスアクセプターとの間に位置する。本明細書に記載の組成物及び方法に使用することができる好適な分解シグナル配列は当該技術分野で公知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれる国際出願公開第ＷＯ２０１６／１３９３２１号に記載されている。
【0163】
いくつかの実施形態では、二重ベクター系の第１のメンバーには、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれる配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分、あるいは配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれる配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分の核酸配列に対して、少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントのＳＴＲＣプロモーター（ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結される）が含まれる。ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチド配列は、発現について部分的または完全にコドン最適化が可能である。いくつかの実施形態では、二重ベクター系の第１のメンバーには、スプライスドナー配列が含まれる。いくつかの実施形態では、二重ベクター系の第１のメンバーには、本明細書に記載されるＡＰ遺伝子断片（例えば、配列番号４２～４７のいずれか１つ、例えば、配列番号４５）が含まれる。いくつかの実施形態では、二重ベクター系の第１のメンバーには、５’及び３’のいずれの側にもＩＴＲが隣接している。いくつかの実施形態では、隣接しているＩＴＲは、ＡＡＶ２ Ｒｅｐ遺伝子を持つプラスミドによってカプシドに包まれることが可能な、ＡＡＶ２末端逆方向反復配列の任意のバリアントである。（典型的には、導入プラスミドを、ウイルスベクター形成のための必要なＡＡＶ遺伝子を持つ他のプラスミドと共に細胞にトランスフェクトすることによって）ウイルスベクターを作製するために使用される導入プラスミドにおける任意の所与の対のＩＴＲ配列では、組換え時に、ＩＴＲが「フリップ」または「フロップ」の配向をとるためにウイルスベクター内の対応する配列が変化している可能性があることは、当業者には理解されるであろう。したがって、導入プラスミドにおけるＩＴＲの配列は、そこから調製されたウイルスベクターに見られる配列と必ずしも同じ配列ではない。
【0164】
いくつかの実施形態では、二重ベクター系の第２のメンバーには、直後に終止コドンが続くステレオシリンタンパク質Ｃ末端部分をコードするポリヌクレオチドが含まれる。ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチド配列は、発現について部分的または完全にコドン最適化が可能である。いくつかの実施形態では、二重ベクター系の第２のメンバーには、スプライスアクセプター配列が含まれる。いくつかの実施形態では、二重ベクター系の第２のメンバーには、本明細書に記載されるＡＰ遺伝子断片（例えば、配列番号４２～４７のいずれか１つ、例えば、配列番号４５）が含まれる。いくつかの実施形態では、二重ベクター系の第２のメンバーには、ポリ（Ａ）配列が含まれる。特定の実施形態では、二重ベクター系の第２のメンバーには、５’及び３’のいずれの側にもＩＴＲが隣接している。いくつかの実施形態では、隣接しているＩＴＲは、ＡＡＶ２ Ｒｅｐ遺伝子を持つプラスミドによってカプシドに包まれることが可能な、ＡＡＶ２ ＩＴＲの任意のバリアントである。（典型的には、導入プラスミドを、ウイルスベクター形成のための必要なＡＡＶ遺伝子を持つ他のプラスミドと共に細胞にトランスフェクトすることによって）ウイルスベクターを作製するために使用される導入プラスミドにおける任意の所与の対の末端逆方向反復配列配列では、組換え時に、ＩＴＲが「フリップ」または「フロップ」の配向をとるためにウイルスベクター内の対応する配列が変化している可能性があることは、当業者には理解されるであろう。したがって、導入プラスミドにおけるＩＴＲの配列は、そこから調製されたウイルスベクターに見られる配列と必ずしも同じ配列ではない。
【0165】
投与用の核酸ベクター（例えば、ＡＡＶベクター）を生成するために、導入プラスミド（例えば、核酸ベクターによって送達されるＤＮＡ配列、例えば、ＡＡＶによって送達されるＤＮＡ配列を含有するプラスミド）が、ヘルパープラスミド（例えば、ＡＡＶ製造に必要なタンパク質を提供するプラスミド）及びｒｅｐ／ｃａｐプラスミド（例えば、ＡＡＶカプシドタンパク質及び導入プラスミドＤＮＡ配列をカプシド殻内に挿入するタンパク質を提供するプラスミド）と共にプロデューサー細胞内に共送達され得る。核酸ベクター（例えば、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドを含有する核酸ベクター（例えば、ＡＡＶベクター）及びステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドを含有する核酸ベクター（例えば、ＡＡＶベクター））は、投与前に（例えば、単一製剤に）合わせることが可能である。
【0166】
重複、トランススプライシング、及び二重ハイブリッドのベクターの他の例示的な対を下表４に記載する。
【0167】
【表4-1】
【0168】
【表4-2】
【0169】
【表4-3】
【0170】
インテイン発現系
哺乳類細胞で大型タンパク質を発現させるための別の遺伝子治療法では、インテインの使用を伴う。「タンパク質イントロン」としても知られるインテインは、典型的には１００～９００アミノ酸残基長であり、かつ、自己切除及び隣接タンパク質断片（「エクステイン」）のＮ末端残基とＣ末端残基のライゲーションをすることができる、タンパク質の部分である。インテインは、マキシインテイン、ミニインテイン、及び分割インテインが含まれる３つの異なるクラスに分けることができる。マキシインテインとは、ホーミングエンドヌクレアーゼドメイン（ＨＥＧ）によって中断されているタンパク質のＮ末端スプライシング領域及びＣ末端スプライシング領域を指す。ＨＥＧとは、イントロン内部の独立型遺伝子として、他のタンパク質とのタンパク質融合体として、または自己スプライシングインテインとしてコードされるエンドヌクレアーゼのクラスを指す。ＨＥＧは一般に、非常に少ない選択ＤＮＡ領域を加水分解する。ＨＥＧがＤＮＡ断片を加水分解すると、ＨＥＧをコードする遺伝子は典型的には、自身を切断部位に組み込み、それによりそのアレル頻度を増加させる。「ミニインテイン」とは、ＨＥＧドメインを欠く、Ｎ末端スプライシングドメイン及びＣ末端スプライシングドメインを指す。「分割インテイン」とは、エクステインと連結される２つの別々のポリペプチドとして転写及び翻訳されるインテインを指す。アラニンインテインは、システインまたはセリンではなくアラニンのスプライシング接合部を有する別のクラスのインテインである。
哺乳類細胞で大型タンパク質を発現させるための別の遺伝子治療法では、インテインの使用を伴う。「タンパク質イントロン」としても知られるインテインは、典型的には１００～９００アミノ酸残基長であり、かつ、自己切除及び隣接タンパク質断片（「エクステイン」）のＮ末端残基とＣ末端残基のライゲーションをすることができる、タンパク質の部分である。インテインは、マキシインテイン、ミニインテイン、及び分割インテインが含まれる３つの異なるクラスに分けることができる。マキシインテインとは、ホーミングエンドヌクレアーゼドメイン（ＨＥＧ）によって中断されているタンパク質のＮ末端スプライシング領域及びＣ末端スプライシング領域を指す。ＨＥＧとは、イントロン内部の独立型遺伝子として、他のタンパク質とのタンパク質融合体として、または自己スプライシングインテインとしてコードされるエンドヌクレアーゼのクラスを指す。ＨＥＧは一般に、非常に少ない選択ＤＮＡ領域を加水分解する。ＨＥＧがＤＮＡ断片を加水分解すると、ＨＥＧをコードする遺伝子は典型的には、自身を切断部位に組み込み、それによりそのアレル頻度を増加させる。「ミニインテイン」とは、ＨＥＧドメインを欠く、Ｎ末端スプライシングドメイン及びＣ末端スプライシングドメインを指す。「分割インテイン」とは、エクステインと連結される２つの別々のポリペプチドとして転写及び翻訳されるインテインを指す。アラニンインテインは、システインまたはセリンではなくアラニンのスプライシング接合部を有する別のクラスのインテインである。
【0171】
インテインのスプライシングドメインは、２つのサブドメイン、すなわち、Ｎ末端スプライシングドメイン及びＣ末端スプライシングドメインを含有し、それらは、スプライシング活性を媒介する保存された残基による保存されたモチーフを含有する。Ｎ末端のスプライシングドメインは、Ａ、Ｎ２、Ｂ、及びＮ４の構造モチーフを含有し、Ｃ末端のスプライシングドメインは、Ｆ及びＧのモチーフを含有する。Ａモチーフは、保存された残基としてＣｙｓ／ＳｅｒまたはＴｈｒを含有し、Ｂモチーフには、Ｈｉｓ残基及びＴｈｒ残基が含まれ、Ｆモチーフは、Ａｓｐ残基及びＨｉｓ残基を含有し、Ｇモチーフは、最後から２番目のＨｉｓ及び末端のＡｓｎが含まれる２つの保存された残基を持つ。Ｃ、Ｄ、Ｅ、及びＨのモチーフは一般に、マキシインテイン内のＨＥＧドメインに関連する。
【0172】
インテインのスプライシングは、以下の３つの異なる戦略内に入る：１）（ａ）Ｎ末端スプライス接合部のペプチド結合をチオ（エステル）結合に転換する（Ｎ－Ｓ／Ｎ－Ｏ）アシルシフト、（ｂ）分岐した中間体を形成するエステル交換反応、（ｃ）Ｃ末端スプライス接合部を切断することによって分岐した中間体を除去するＡｓｎ環化、及び（ｄ）アミド結合の形成を介して隣接するエクステインセグメントを連結する第２の（Ｓ－Ｎ／Ｏ－Ｎ）アシルシフトを伴う、クラス１（または古典的／標準）インテインスプライシング、２）古典的スプライシング反応のステップ（ａ）を飛ばした、クラス２インテイン（アラニンインテインとしても知られる）、ならびに３）２つの分岐した中間体の形成を伴う、クラス３機構。
【0173】
上記の様々なインテイン系の中でも、分割インテインのトランススプライシング手法は、従来の遺伝子治療用ベクター（例えば、ＡＡＶ：最大サイズ限度が約４．７ｋｂ）のサイズ制限の克服に成功したことが実証されている。例えば、Ｓｕｂｒａｍａｎｙａｍ ｅｔ ａｌ．（ＰＮＡＳ １１０：１５４６１－６（２０１３））では、分割インテイン系を用いて、２つに分けられた部分から心筋細胞のＬ型カルシウムチャネルのα１Ｃ－サブユニットを再構成している。同様に、Ｔｒｕｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４３：６４５０－８（２０１５））では、分割インテイン系を使用した、Ｃａｓ９タンパク質の２つに分けた部分の再構成の成功が示されている。したがって、本開示は、ＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結されたステレオシリンコード配列のパッケージング及び送達のための分割インテイントランススプライシング系を提供する。この方法により、ＳＴＲＣ遺伝子の約２分の１を各々が含有し、それぞれにＮ－インテイン断片またはＣ－インテイン断片をコードするポリヌクレオチド配列が含まれている２つの別々のポリヌクレオチドが、２つの別々の発現ベクター（例えば、本明細書に開示の核酸ベクターのいずれか１つ）から発現されて翻訳後に再構成され、全長ステレオシリンタンパク質を生成することが可能になる。そのような系は、例えば、ｒＡＡＶベクター等の本明細書に開示の核酸発現ベクター内に組み込まれ得る。
【0174】
一例では、本開示は、２ベクター分割インテイン系を提供し、これは、ａ）第１の核酸ベクターであって、ヒトステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、配列番号３または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントのＮ末端部分）をコードする配列が含まれるポリヌクレオチドを含有し、ヒトステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする配列が、その３’末端に、Ｎ－インテインをコードするインフレームポリヌクレオチド配列を含む、第１の核酸ベクター、及びｂ）第２のベクターであって、ヒトステレオシリンタンパク質のＣ末端部分（例えば、配列番号３または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントのＣ末端部分）をコードする配列が含まれるポリヌクレオチドを含有し、ヒトステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする配列が、その５’末端に、Ｃ－インテインをコードするインフレームポリヌクレオチド配列を含む、第２のベクター、を含有する。
【0175】
別の例では、本開示は、２ベクター分割インテイン系を提供し、これは、ａ）第１のベクターであって、マウスステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、配列番号４または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントのＮ末端部分）をコードする配列が含まれるポリヌクレオチドを含有し、マウスステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする配列が、その３’末端に、Ｎ－インテインをコードするインフレームポリヌクレオチド配列を含む、第１のベクター、及びｂ）第２のベクターであって、マウスステレオシリンタンパク質のＣ末端部分（例えば、配列番号４または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントのＣ末端部分）をコードする配列が含まれるポリヌクレオチドを含有し、マウスステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする配列が、その５’末端に、Ｃ－インテインをコードするインフレーム核酸配列を含む、第２のベクター、を含有する。
【0176】
いくつかの実施形態では、マウスステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする配列は、ステレオシリンタンパク質のアミノ酸１～７３０（例えば、配列番号４のアミノ酸１～７３０）をコードする配列であり、マウスステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする配列は、ステレオシリンタンパク質の残りのアミノ酸（例えば、配列番号４のアミノ酸７３１～１８０９）をコードする。この実施形態では、Ｎ末端部分の配列は、マウスステレオシリンをコードするポリヌクレオチドのヌクレオチド１～２１９０（例えば、配列番号６のヌクレオチド１～２１９０）であり、Ｃ末端部分の配列は、ヌクレオチド２１９１から、マウスステレオシリンをコードするポリヌクレオチドのコード配列の３’末端まで（例えば、配列番号６の残りのヌクレオチド、例えば、ヌクレオチド２１９１～５４３０）である。いくつかの実施形態では、マウスステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする配列は、ステレオシリンタンパク質のアミノ酸１～７４６（例えば、配列番号４のアミノ酸１～７４６）をコードする配列であり、マウスステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする配列は、ステレオシリンタンパク質の残りのアミノ酸（例えば、配列番号４のアミノ酸７４７～１８０９）をコードする。この実施形態では、Ｎ末端部分の配列は、マウスステレオシリンをコードするポリヌクレオチドのヌクレオチド１～２２３８（例えば、配列番号６のヌクレオチド１～２２３８）であり、Ｃ末端部分の配列は、ヌクレオチド２２３９から、マウスステレオシリンをコードするポリヌクレオチドのコード配列の３’末端まで（例えば、配列番号６の残りのヌクレオチド、例えば、ヌクレオチド２２３９～５４３０）である。いくつかの実施形態では、マウスステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする配列は、ステレオシリンタンパク質のアミノ酸１～９６９（例えば、配列番号４のアミノ酸１～９６９）をコードする配列であり、マウスステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする配列は、ステレオシリンタンパク質の残りのアミノ酸（例えば、配列番号４のアミノ酸９７０～１８０９）をコードする。この実施形態では、Ｎ末端部分の配列は、マウスステレオシリンをコードするポリヌクレオチドのヌクレオチド１～２９０７（例えば、配列番号６のヌクレオチド１～２９０７）であり、Ｃ末端部分の配列は、ヌクレオチド２９０８から、マウスステレオシリンをコードするポリヌクレオチドのコード配列の３’末端まで（例えば、配列番号６の残りのヌクレオチド、例えば、ヌクレオチド２９０８～５４３０）である。いくつかの実施形態では、マウスステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする配列は、ステレオシリンタンパク質のアミノ酸１～１００２（例えば、配列番号４のアミノ酸１～１００２）をコードする配列であり、マウスステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする配列は、ステレオシリンタンパク質の残りのアミノ酸（例えば、配列番号４のアミノ酸１００３～１８０９）をコードする。この実施形態では、Ｎ末端部分の配列は、マウスステレオシリンをコードするポリヌクレオチドのヌクレオチド１～３００６（例えば、配列番号６のヌクレオチド１～３００６）であり、Ｃ末端部分の配列は、ヌクレオチド３００７から、マウスステレオシリンをコードするポリヌクレオチドのコード配列の３’末端まで（例えば、配列番号６の残りのヌクレオチド、例えば、ヌクレオチド３００７～５４３０）である。分割インテインは、全長タンパク質組換え時に標的タンパク質から切除されないエクステインのアミノ酸残基の存在を必要とすることから、ステレオシリンタンパク質のペプチド配列内の部分的エクステイン配列の同定に基づいて上記の分割部位を選択した。ある特定の分割部位（例えば、アミノ酸７３０及び１００２での分割部位）の場合、短いペプチドをコードする配列を分割部位に組み込んで、短いペプチドを分割部位でＳＴＲＣタンパク質に融合させ、それにより触媒アミノ酸残基をもたらすことによって、全長エクステイン配列を生成させることができる。
【0177】
いくつかの実施形態では、第１のベクター及び第２のベクターの両方にはさらに、プロモーター配列であって、例えば、第１の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの５’末端（Ｎ－インテインに融合したステレオシリンタンパク質のＮ末端部分）及び／または第２の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの５’末端（Ｃ－インテインに融合したステレオシリンタンパク質のＣ末端部分）に機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター配列（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれる配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分、あるいは配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれる配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分の核酸配列に対して、少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアント、のうちのいずれか１つのＳＴＲＣプロモーター配列）等の、プロモーター配列が含まれる。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号１の配列を有するか、または配列番号１に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号２もしくはその一部の配列を有するか、または配列番号２もしくはその一部に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、ＳＴＲＣ遺伝子の発現を制御することができる、配列番号２の機能的部分である。いくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号２の機能的部分には、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、配列番号４８もしくはその機能的部分の配列を有するポリヌクレオチドであるか、または配列番号４８もしくはその機能的部分に少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するバリアントである。いくつかの実施形態では、ＳＴＲＣプロモーターは、ＳＴＲＣ遺伝子の発現を制御することができる、配列番号４８の機能的部分である。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、配列番号４８の機能的部分には、配列番号４８のヌクレオチド１～５６０の配列が含まれるか、またはそれを有する。いくつかの実施形態では、第２の核酸ベクター内のＳＴＲＣプロモーターは、第１の核酸ベクター内のＳＴＲＣプロモーターと同じである（すなわち、同じヌクレオチド配列を有する）。いくつかの実施形態では、第２の核酸ベクター内のＳＴＲＣプロモーターは、第１の核酸ベクター内のＳＴＲＣプロモーターとは異なるヌクレオチド配列を有する。
【0178】
いくつかの実施形態では、Ｎ－インテイン及びＣ－インテインは、同じインテインかまたは分割インテインの遺伝子に由来する。別法として、Ｎ－インテイン及びＣ－インテインの配列は、タンパク質トランススプライシングをして全長ステレオシリンタンパク質を再構成することができる２つの異なるインテイン遺伝子に由来する。いくつかの実施形態では、同じ遺伝子は、同じ生物または異なる生物からのものである。一般的に使用される分割インテインは、様々な生物からのＤｎａＥ遺伝子に由来する。いくつかの実施形態では、ステレオシリンタンパク質をコードするポリヌクレオチドは２つの部分に分割され、各々が、全長遺伝子の全コード配列の約半分、すなわち、Ｎ末端部分及びＣ末端部分に対応する。ステレオシリンのＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドはその３’末端で、Ｎ－インテインをコードするポリヌクレオチドとインフレームで融合し、ステレオシリンのＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドはその５’末端で、Ｃ－インテインをコードするポリヌクレオチドとインフレームで融合する。
【0179】
いくつかの実施形態では、第１のベクター及び第２のベクターは、細胞（例えば、感音性難聴、例えば、ＤＦＮＢ１６の対象等の対象の細胞）に導入された場合に、第１の融合タンパク質及び第２の融合タンパク質を生成する。いくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質は、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分がそのＣ末端でＮ－インテインと融合したものを含有する。いくつかの実施形態では、第２の融合タンパク質は、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分がそのＮ末端でＣ－インテインと融合したものを含有する。いくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質のＮ－インテインと第２の融合タンパク質のＣ－インテインは選択的に結合して、第３の融合タンパク質を生成し、これは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分、Ｎ－インテインがそのＣ末端でＣ－インテインに結合したもの、及びステレオシリンタンパク質のＣ末端部分を含有する。いくつかの実施形態では、Ｃ－インテインに結合したＮ－インテインは、Ｎ－インテイン及びＣ－インテインを切除し、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分のＣ末端とＣ末端部分のＮ末端とを連結するトランススプライシング反応をすることができる。
【0180】
本明細書に記載の分割インテイン系には、２つの別々のインテイン断片（例えば、分割インテイン）をコードするよう後で日常的な方法を使用して操作される、１つの遺伝子によってコードされる分割インテインが含まれ得る。いくつかの実施形態では、分割インテインは、２つの別々の遺伝子によってコードされる。
【0181】
本開示の組成物及び方法の分割インテインは、シアノバクテリア、中でも特に、例えば、Ｎｏｓｔｏｃ ｐｕｎｃｔｉｆｏｒｍｅ（Ｎｐｕ）、Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ． ＰＣＣ６８０３（Ｓｓｐ）、Ｆｉｓｃｈｅｒｅｌｌａ ｓｐ． ＰＣＣ９６０５（Ｆｓｐ）、Ｓｃｙｔｏｎｅｍａ ｔｏｌｙｐｏｔｈｒｉｃｈｏｉｄｅｓ（Ｓｔｏ）、Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ＳＷ＿９＿４７＿５、Ｎｏｄｕｌａｒｉａ ｓｐｕｍｉｇｅｎａ（Ｎｓｐ）、Ｎｏｓｔｏｃ ｆｌａｇｅｌｌｉｆｏｒｍｅ（Ｎｆｌ）、Ｃｒｏｃｏｓｐｈａｅｒａ ｗａｔｓｏｎｉｉ（Ｃｗａ）ＷＨ８５０２、Ｃｈｒｏｏｃｏｃｃｉｄｉｏｐｓｉｓ ｃｕｂａｎａ（Ｃｃｕ）ＣＣＡＬＡ０４３、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｓｍｉｕｍ ｅｒｙｔｈｒａｅｕｍ（Ｔｅｒ）、Ｒｈｏｄｏｔｈｅｒｍｕｓ ｍａｒｉｎｕｓ（Ｒｍａ）、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ（Ｓｃｅ）、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃａｓｔｅｌｌｉｉ（Ｓｃａ）、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｕｎｉｓｐｏｒｕｓ（Ｓｕｎ）、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓ（Ｚｂｉ）、Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ ｐｒｅｔｏｒｉｅｎｓｉｓ（Ｔｐｒ）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｍｔｕ）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ（Ｍｌｅ）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓ（Ｍｓｍ）、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ａｂｙｓｓｉ（Ｐａｂ）、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉ（Ｐｈｏ）、Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｂｕｒｎｅｔｔｉ（Ｃｂｕ）、Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ（Ｃｎｅ）、Ｃｏｘｉｅｌｌａ ｇａｔｔｉｉ（Ｃｇａ）、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ（Ｈｃａ）、及びＰｏｒｐｈｙｒａ ｐｕｒｐｕｒｅａ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ（Ｐｐｕ）等からのＤｎａＥ遺伝子（例えば、ＤＮＡポリメラーゼＩＩＩサブユニットアルファ）に由来し得る。いくつかの実施形態では、分割インテインは、望ましい安定性及び活性を有する分割インテインを操作するためのコンセンサス設計（例えば、Ｃｆａ）を特定するためのＤｎａＥの多重配列アラインメント研究から誘導される（例えば、分割インテインはＣｆａインテインである）。本願に開示される組成物及び方法と併せた使用に好適な他の分割インテイン系には、国際特許出願公開第ＷＯ２０２０／２４９７２３号、同第ＷＯ２０２１／０９９６０７号、及び同第ＷＯ２０２１／０４７５５８号、米国特許出願公開第ＵＳ２０２１０３７１８７８Ａ１号、同第ＵＳ２０２２０２７５０２７Ａ１号、及び同第ＵＳ２０２００２７７３３３Ａ１号、ならびに米国特許第ＵＳ１０，０６６，０２７号、同第ＵＳ１０，５２６，４０１号、同第ＵＳ１１，１４２，５５０号、同第ＵＳ１１，３０６，３２４号、同第ＵＳ１０，１００，０８０号、及び同第ＵＳ８，３９４，６０４号に記載のものが含まれ、その各々は、分割インテイン系に関連して本明細書で参照することにより本明細書に組み込まれる。
【0182】
いくつかの実施形態では、第１のベクター及び第２のベクターの各々にはさらに、その５’末端に５’ＩＴＲ、及びその３’末端に３’ＩＴＲが含まれる。いくつかの実施形態では、５’ＩＴＲ及び３’ＩＴＲは、ＡＡＶのＩＴＲである。いくつかの実施形態では、ＡＡＶのＩＴＲは、ＡＡＶ２のＩＴＲである。
【0183】
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下が含まれる：ａ）第１のベクターであって、５’から３’に向かって、ｉ）任意選択で、５’ＩＴＲ（例えば、ＡＡＶ２の５’ＩＴＲ）；ｉｉ）ＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれる配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分、あるいは配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれる配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８９～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分の核酸配列に対して、少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアント、のうちのいずれか１つのＳＴＲＣプロモーター）を含有するポリヌクレオチド；ｉｉｉ）ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、配列番号３または配列番号４のステレオシリンタンパク質のＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチド；ｉｖ）Ｎ－インテインをコードするポリヌクレオチド；（ｖ）任意選択で、ポリ（Ａ）配列；及び（ｖｉ）任意選択で、３’ＩＴＲ（例えば、ＡＡＶ２の３’ＩＴＲ）を含有する、第１のベクター、ならびにｂ）第２のベクターであって、５’から３’に向かって、ｉ）任意選択で、５’ＩＴＲ（例えば、ＡＡＶ２の５’ＩＴＲ）；ｉｉ）ＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれる配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分、あるいは配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０が含まれる配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分の核酸配列に対して、少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアント、のうちのいずれか１つのＳＴＲＣプロモーター）を含有するポリヌクレオチド；ｉｉｉ）Ｃ－インテインをコードするポリヌクレオチド；ｉｖ）ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分（例えば、配列番号３または配列番号４のステレオシリンタンパク質のＣ末端部分）をコードするポリヌクレオチド；（ｖ）任意選択で、ポリ（Ａ）配列；及び（ｖｉ）任意選択で、３’ＩＴＲ（例えば、ＡＡＶ２の３’ＩＴＲ）を含有する、第２のベクター。
【0184】
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号７のアミノ酸配列を有するか、または配列番号７に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＮ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＣＬＳＹＤＴＥＩＬＴＶＥＹＧＦＬＰＩＧＫＩＶＥＥＲＩＥＣＴＶＹＴＶＤＫＮＧＦＶＹＴＱＰＩＡＱＷＨＮＲＧＥＱＥＶＦＥＹＣＬＥＤＧＳＩＩＲＡＴＫＤＨＫＦＭＴＴＤＧＱＭＬＰＩＤＥＩＦＥＲＧＬ（配列番号７）
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号８のアミノ酸配列を有するか、または配列番号８に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＣ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＶＫＩＩＳＲＫＳＬＧＴＱＮＶＹＤＩＧＶＥＫＤＨＮＦＬＬＫＮＧＬＶＡＳＮ（配列番号８）
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号９のアミノ酸配列を有するか、または配列番号９に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＮ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＣＬＳＹＤＴＥＩＬＴＶＥＹＧＦＬＰＩＧＫＩＶＥＥＲＩＥＣＴＶＹＴＶＤＫＮＧＦＶＹＴＱＰＩＡＱＷＨＮＲＧＥＱＥＶＦＥＹＣＬＥＤＧＳＩＩＲＡＴＫＤＨＫＦＭＴＴＤＧＱＭＬＰＩＤＥＩＦＥＲＧＬＤＬＫＱＶＤＧＬＰ（配列番号９）
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号１０のアミノ酸配列を有するか、または配列番号１０に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＣ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＭＶＫＩＩＳＲＫＳＬＧＴＱＮＶＹＤＩＧＶＥＫＤＨＮＦＬＬＫＮＧＬＶＡＳＮ（配列番号１０）
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号１１のアミノ酸配列を有するか、または配列番号１１に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＣ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＶＫＩＩＳＲＫＳＬＧＴＱＮＶＹＤＩＧＶＧＥＰＨＮＦＬＬＫＮＧＬＶＡＳＮ（配列番号１１）
いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号７または配列番号９のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの３’に位置する）が含まれる第１のベクター、及び配列番号８、配列番号１０、または配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’に位置する）が含まれる第２のベクター、が含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号７のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第１のベクター、及び配列番号８のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第２のベクターが含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号７のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第１のベクター、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第２のベクターが含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号７のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第１のベクター、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第２のベクターが含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号９のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第１のベクター、及び配列番号８のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第２のベクターが含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号９のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第１のベクター、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第２のベクターが含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号９のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第１のベクター、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第２のベクターが含まれる。
ＣＬＳＹＤＴＥＩＬＴＶＥＹＧＦＬＰＩＧＫＩＶＥＥＲＩＥＣＴＶＹＴＶＤＫＮＧＦＶＹＴＱＰＩＡＱＷＨＮＲＧＥＱＥＶＦＥＹＣＬＥＤＧＳＩＩＲＡＴＫＤＨＫＦＭＴＴＤＧＱＭＬＰＩＤＥＩＦＥＲＧＬ（配列番号７）
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号８のアミノ酸配列を有するか、または配列番号８に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＣ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＶＫＩＩＳＲＫＳＬＧＴＱＮＶＹＤＩＧＶＥＫＤＨＮＦＬＬＫＮＧＬＶＡＳＮ（配列番号８）
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号９のアミノ酸配列を有するか、または配列番号９に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＮ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＣＬＳＹＤＴＥＩＬＴＶＥＹＧＦＬＰＩＧＫＩＶＥＥＲＩＥＣＴＶＹＴＶＤＫＮＧＦＶＹＴＱＰＩＡＱＷＨＮＲＧＥＱＥＶＦＥＹＣＬＥＤＧＳＩＩＲＡＴＫＤＨＫＦＭＴＴＤＧＱＭＬＰＩＤＥＩＦＥＲＧＬＤＬＫＱＶＤＧＬＰ（配列番号９）
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号１０のアミノ酸配列を有するか、または配列番号１０に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＣ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＭＶＫＩＩＳＲＫＳＬＧＴＱＮＶＹＤＩＧＶＥＫＤＨＮＦＬＬＫＮＧＬＶＡＳＮ（配列番号１０）
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号１１のアミノ酸配列を有するか、または配列番号１１に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＣ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＶＫＩＩＳＲＫＳＬＧＴＱＮＶＹＤＩＧＶＧＥＰＨＮＦＬＬＫＮＧＬＶＡＳＮ（配列番号１１）
いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号７または配列番号９のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの３’に位置する）が含まれる第１のベクター、及び配列番号８、配列番号１０、または配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’に位置する）が含まれる第２のベクター、が含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号７のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第１のベクター、及び配列番号８のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第２のベクターが含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号７のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第１のベクター、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第２のベクターが含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号７のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第１のベクター、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第２のベクターが含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号９のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第１のベクター、及び配列番号８のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第２のベクターが含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号９のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第１のベクター、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第２のベクターが含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号９のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第１のベクター、及び配列番号１１のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる第２のベクターが含まれる。
【0185】
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号１２のアミノ酸配列を有するか、または配列番号１２に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＮ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＣＬＳＹＥＴＥＩＬＴＶＥＹＧＬＬＰＩＧＫＩＶＥＫＲＩＥＣＴＶＹＳＶＤＮＮＧＮＩＹＴＱＰＶＡＱＷＨＤＲＧＥＱＥＶＦＥＹＣＬＥＤＧＳＬＩＲＡＴＫＤＨＫＦＭＴＶＤＧＱＭＬＰＩＤＥＩＦＥＲＥＬＤＬＭＲＶＤＮＬＰＮ（配列番号１２）
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号１３のアミノ酸配列を有するか、または配列番号１３に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＣ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＭＩＫＩＡＴＲＫＹＬＧＫＱＮＶＹＤＩＧＶＥＲＤＨＮＦＡＬＫＮＧＦＩＡＳＮ（配列番号１３）
いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの３’に位置する）が含まれる第１のベクター、及び配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’に位置する）が含まれる第２のベクター、が含まれる。
ＣＬＳＹＥＴＥＩＬＴＶＥＹＧＬＬＰＩＧＫＩＶＥＫＲＩＥＣＴＶＹＳＶＤＮＮＧＮＩＹＴＱＰＶＡＱＷＨＤＲＧＥＱＥＶＦＥＹＣＬＥＤＧＳＬＩＲＡＴＫＤＨＫＦＭＴＶＤＧＱＭＬＰＩＤＥＩＦＥＲＥＬＤＬＭＲＶＤＮＬＰＮ（配列番号１２）
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号１３のアミノ酸配列を有するか、または配列番号１３に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＣ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＭＩＫＩＡＴＲＫＹＬＧＫＱＮＶＹＤＩＧＶＥＲＤＨＮＦＡＬＫＮＧＦＩＡＳＮ（配列番号１３）
いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの３’に位置する）が含まれる第１のベクター、及び配列番号１３のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’に位置する）が含まれる第２のベクター、が含まれる。
【0186】
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号１４のアミノ酸配列を有するか、または配列番号１４に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＮ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＣＬＳＹＤＴＥＩＬＴＶＥＹＧＦＬＰＩＧＫＩＶＥＥＲＩＥＣＴＶＹＴＶＤＫＮＧＦＶＹＴＱＰＩＡＱＷＨＮＲＧＥＱＥＶＦＥＹＣＬＥＤＧＳＩＩＲＡＴＫＤＨＫＦＭＴＴＤＧＱＭＬＰＩＤＥＩＦＥＲＧＬＤＬＫＱＶＤＧＬＰ（配列番号１４）
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号１５のアミノ酸配列を有するか、または配列番号１５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＣ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＭＫＲＴＡＤＧＳＥＦＥＳＰＫＫＫＲＫＶＫＩＩＳＲＫＳＬＧＴＱＮＶＹＤＩＧＶＥＫＤＨＮＦＬＬＫＮＧＬＶＡＳＮ（配列番号１５）
いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの３’に位置する）が含まれる第１のベクター、及び配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’に位置する）が含まれる第２のベクター、が含まれる。
ＣＬＳＹＤＴＥＩＬＴＶＥＹＧＦＬＰＩＧＫＩＶＥＥＲＩＥＣＴＶＹＴＶＤＫＮＧＦＶＹＴＱＰＩＡＱＷＨＮＲＧＥＱＥＶＦＥＹＣＬＥＤＧＳＩＩＲＡＴＫＤＨＫＦＭＴＴＤＧＱＭＬＰＩＤＥＩＦＥＲＧＬＤＬＫＱＶＤＧＬＰ（配列番号１４）
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下に示す配列番号１５のアミノ酸配列を有するか、または配列番号１５に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＣ－インテインペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが含まれる。
ＭＫＲＴＡＤＧＳＥＦＥＳＰＫＫＫＲＫＶＫＩＩＳＲＫＳＬＧＴＱＮＶＹＤＩＧＶＥＫＤＨＮＦＬＬＫＮＧＬＶＡＳＮ（配列番号１５）
いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの３’に位置する）が含まれる第１のベクター、及び配列番号１５のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’に位置する）が含まれる第２のベクター、が含まれる。
【0187】
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、ＣＦＳＧＤＴＬＶＡＬＴＤ（配列番号１６）のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、ＣＬＡＧＤＴＬＩＴＬＡ（配列番号１７）のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、ＣＬＱＮＧＴＲＬＬＲ（配列番号１８）のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、ＣＬＴＧＤＳＱＶＬＴＲ（配列番号１９）のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、ＣＬＴＹＥＴＥＩＭＴＶ（配列番号２０）のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、ＣＬＳＧＮＴＫＶＲＦＲＹ（配列番号２１）のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、配列番号１６～２１のいずれか１つに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。
【0188】
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、ＧＶＦＶＨＮ（配列番号２２）のアミノ酸配列を有するＣ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、ＧＬＬＶＨＮ（配列番号２３）のアミノ酸配列を有するＣ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、ＧＬＩＡＳＮ（配列番号２４）のアミノ酸配列を有するＣ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、ＧＬＶＶＨＮ（配列番号２５）のアミノ酸配列を有するＣ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、配列番号２２～２５のいずれか１つに対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチドが含まれる。
【0189】
いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号１６のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの３’に位置する）が含まれる第１のベクター、及び配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’に位置する）が含まれる第２のベクター、が含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの３’に位置する）が含まれる第１のベクター、及び配列番号２３のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’に位置する）が含まれる第２のベクター、が含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの３’に位置する）が含まれる第１のベクター、及び配列番号２４のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’に位置する）が含まれる第２のベクター、が含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、配列番号２１のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの３’に位置する）が含まれる第１のベクター、及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’に位置する）が含まれる第２のベクター、が含まれる。
【0190】
いくつかの実施形態では、本開示の２ベクター分割インテイン系には、以下の表５に記載のＮ－インテインとＣ－インテインの対をコードする１つ以上のポリヌクレオチド、または表５に記載のＮ－インテインとＣ－インテインの対に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するＮ－インテインとＣ－インテインの対をコードする１つ以上のポリヌクレオチドが、集合的に含まれる。いくつかの実施形態では、２ベクター分割インテイン系には、表５に記載のアミノ酸配列を有するＮ－インテインペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドの３’に位置する）が含まれる第１のベクター、及び表５のＮ－インテインのアミノ酸配列と同じ行に記載のアミノ酸配列を有するＣ－インテインポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’に位置する）が含まれる第２のベクター、が含まれる。
【0191】
【表5-1】
【0192】
【表5-2】
【0193】
【表5-3】
【0194】
配列番号２６のＮｐｕ Ｎ－インテインは、以下に示す配列番号４０のＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチドによってコードされ得る。
ＴＧＣＣＴＧＡＧＣＴＡＣＧＡＧＡＣＣＧＡＧＡＴＣＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＧＴＡＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＧＡＡＴＣＧＡＧＴＧＣＡＣＣＧＴＧＴＡＣＡＧＣＧＴＧＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＡＴＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＣＣＣＧＴＧＧＣＣＣＡＧＴＧＧＣＡＣＧＡＣＡＧＡＧＧＣＧＡＧＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＴＣＧＡＧＴＡＣＴＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧＴＴＣＡＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＣＡＧＡＴＧＣＴＧＣＣＣＡＴＣＧＡＣＧＡＧＡＴＣＴＴＣＧＡＧＡＧＡＧＡＧＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＴＧＡＧＡＧＴＧＧＡＣＡＡＣＣＴＧＣＣＣＡＡＣ（配列番号４０）
配列番号２７のＮｐｕ Ｃ－インテインは、以下に示す配列番号４１のＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチドによってコードされ得る。
ＡＴＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＡＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＡＡＣＧＴＧＴＡＣＧＡＣＡＴＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＡＧＡＧＡＣＣＡＣＡＡＣＴＴＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＡＣＧＧＣＴＴＣＡＴＣＧＣＣＡＧＣＡＡＴ（配列番号４１）
本開示の分割インテイン（すなわち、Ｎ－インテイン及びＣ－インテイン）には、トランススプライシング反応をすることができるそのＮ末端もしくはＣ末端、またはその近傍に、求核性アミノ酸を含めることができる。いくつかの実施形態では、求核性アミノ酸は、セリン、トレオニン、システイン、またはアラニンから選択される。
ＴＧＣＣＴＧＡＧＣＴＡＣＧＡＧＡＣＣＧＡＧＡＴＣＣＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＧＴＡＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＴＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＧＡＡＴＣＧＡＧＴＧＣＡＣＣＧＴＧＴＡＣＡＧＣＧＴＧＧＡＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＡＴＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＣＣＣＧＴＧＧＣＣＣＡＧＴＧＧＣＡＣＧＡＣＡＧＡＧＧＣＧＡＧＣＡＧＧＡＧＧＴＧＴＴＣＧＡＧＴＡＣＴＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＣＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＣＡＣＡＡＧＴＴＣＡＴＧＡＣＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＣＡＧＡＴＧＣＴＧＣＣＣＡＴＣＧＡＣＧＡＧＡＴＣＴＴＣＧＡＧＡＧＡＧＡＧＣＴＧＧＡＣＣＴＧＡＴＧＡＧＡＧＴＧＧＡＣＡＡＣＣＴＧＣＣＣＡＡＣ（配列番号４０）
配列番号２７のＮｐｕ Ｃ－インテインは、以下に示す配列番号４１のＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチドによってコードされ得る。
ＡＴＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＡＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧＣＡＧＡＡＣＧＴＧＴＡＣＧＡＣＡＴＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＡＧＡＧＡＣＣＡＣＡＡＣＴＴＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＡＣＧＧＣＴＴＣＡＴＣＧＣＣＡＧＣＡＡＴ（配列番号４１）
本開示の分割インテイン（すなわち、Ｎ－インテイン及びＣ－インテイン）には、トランススプライシング反応をすることができるそのＮ末端もしくはＣ末端、またはその近傍に、求核性アミノ酸を含めることができる。いくつかの実施形態では、求核性アミノ酸は、セリン、トレオニン、システイン、またはアラニンから選択される。
【0195】
いくつかの実施形態では、第１のベクター及び／または第２のベクターにはさらに、１つ以上の追加の調節配列、中でも特に、例えば、ＷＰＲＥ配列、エンハンサー配列、ポリ（Ａ）配列、終結因子配列、または分解シグナル等が含まれる。
【0196】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の分割インテイン系には、リガンド（例えば、４－ヒドロキシタモキシフェン、ペプチド、タンパク質、ポリヌクレオチド、アミノ酸、ヌクレオチド等のような小分子）との接触時にタンパク質スプライシングを行う、リガンド依存性インテインが含まれる。様々なリガンド依存性インテインがＵＳ２０１４／００６５７１１に記載されており、その開示は、リガンド依存性インテインに関連して参照することにより本明細書に組み込まれる。
【0197】
本開示は、ユビキチン－プロテアソーム系及び／またはオートファジー－リソソーム経路によってタンパク質分解を媒介する１つ以上の分解シグナルをインテイン（例えば、Ｎ－インテインまたはＣ－インテイン）ポリペプチド（複数可）内に含有するベクターを提供する。そのような配列は、標的細胞内での切除されたインテインタンパク質の蓄積を回避または低減するために本開示のベクター系内に組み込まれ得る。例示的な分解シグナルには、Ｎ－デグロン及びＣ－デグロンが含まれ、これらは、ポリユビキチン化及びその後の分解標的指向をすることができる、リジン残基を含有するモチーフを含有するペプチド配列である。いくつかの実施形態では、デグロンは、インテインのＮ末端でもＣ末端でもないインテイン内に位置する分解シグナルである。いくつかの実施形態では、Ｎ－インテインタンパク質には、１つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上）のデグロンが含まれる。いくつかの実施形態では、Ｃ－インテインタンパク質には、１つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上）のデグロンが含まれる。いくつかの実施形態では、デグロンは、ＣＬ１デグロンであり、これは、誤って折り畳まれたタンパク質と構造類似性を共有するＣ末端不安定化ペプチドであり、ユビキチン化系によって認識される。いくつかの実施形態では、デグロンは、ＰＢ２９デグロン、ＳＭＮデグロン、ＣＩＩＴＡデグロン、またはＯＤＣデグロンである。そのような分解シグナルは、分解シグナルに関連して参照することにより本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６／１３９３２に記載されている。分解シグナルの別の例には、ＷＯ２０２０／０７９０３４（参照により本明細書に組み込まれる）に記載のような、Ｅ．ｃｏｌｉジヒドロ葉酸レダクターゼ（ｅｃＤＨＦＲ）由来のデグロンが含まれる。追加の分解シグナルには、ＦＫＢＰ１２分解ドメイン（Ｂａｎａｓｚｙｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １２６：９９５－１００４，２００６）、ＰＥＳＴ分解ドメイン（Ｒｅｃｈｓｔｅｉｎｅｒ ａｎｄ Ｒｏｇｅｒｓ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｃｉ．２１：２６７－２７１，１９９６）、ＵｂＲタグユビキチン化シグナル（Ｃｈａｓｓｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．１０：２０１３，２０１９）、及びヒトＥＬＲＢＤの不安定化変異（Ｍｉｙａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１３４：３９４２－３９４５，２０１２）が含まれる。
【0198】
哺乳類細胞における外因性ポリヌクレオチドの発現
ＭＹＯ７Ａ、ＰＯＵ４Ｆ３、ＳＬＣ１７Ａ８、及びＴＭＣ１等の多種多様な遺伝子における変異が感音性難聴と関連付けられており、これらの変異のいくつか、例えば、ＭＹＯ７Ａの変異等は前庭機能障害とも関連している。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、目的タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列に機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）を含有する核酸ベクターを投与することによって、有毛細胞（例えば、蝸牛有毛細胞（例えば、外有毛細胞及び内有毛細胞）及び前庭有毛細胞（例えば、Ｉ型及びＩＩ型の前庭有毛細胞）等の、内因性ＳＴＲＣを発現する有毛細胞）に特異的に、目的遺伝子（例えば、難聴及び／または前庭機能障害に関与する遺伝子の野生型形態、あるいは有毛細胞の発生、機能、細胞の運命決定、再生、生存、または維持に関与する遺伝子）によってコードされるタンパク質の発現を誘導または増加させることができる。哺乳類細胞へのタンパク質の送達のため、及び哺乳類細胞においてタンパク質をコードする遺伝子の安定な発現のための多様な方法が確立されている。
ＭＹＯ７Ａ、ＰＯＵ４Ｆ３、ＳＬＣ１７Ａ８、及びＴＭＣ１等の多種多様な遺伝子における変異が感音性難聴と関連付けられており、これらの変異のいくつか、例えば、ＭＹＯ７Ａの変異等は前庭機能障害とも関連している。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、目的タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列に機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）を含有する核酸ベクターを投与することによって、有毛細胞（例えば、蝸牛有毛細胞（例えば、外有毛細胞及び内有毛細胞）及び前庭有毛細胞（例えば、Ｉ型及びＩＩ型の前庭有毛細胞）等の、内因性ＳＴＲＣを発現する有毛細胞）に特異的に、目的遺伝子（例えば、難聴及び／または前庭機能障害に関与する遺伝子の野生型形態、あるいは有毛細胞の発生、機能、細胞の運命決定、再生、生存、または維持に関与する遺伝子）によってコードされるタンパク質の発現を誘導または増加させることができる。哺乳類細胞へのタンパク質の送達のため、及び哺乳類細胞においてタンパク質をコードする遺伝子の安定な発現のための多様な方法が確立されている。
【0199】
本明細書に記載の組成物との関連で発現させることができるタンパク質（例えば、タンパク質をコードする導入遺伝子が、ＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）に機能的に連結されている場合）は、健常有毛細胞で発現されるタンパク質（例えば、蝸牛及び／または前庭の有毛細胞、例えば、有毛細胞の発生、機能、再生、細胞の運命決定、生存、もしくは維持において役割を果たすタンパク質、または感音性難聴もしくは前庭機能障害の対象において欠損しているタンパク質）であるか、あるいは他の治療用目的タンパク質である。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して有毛細胞で発現させることができるタンパク質には、ＡＣＴＧ１、ＦＳＣＮ２、ＲＤＸ、ＰＯＵ４Ｆ３、ＴＲＩＯＢＰ、ＴＰＲＮ、ＸＩＲＰ２、ＡＴＯＨ１、ＧＦＩ１、ＣＨＲＮＡ９、ＣＨＲＮＡ１０、ＣＩＢ３、ＣＤＨ２３、ＰＣＤＨ１５、ＫＮＣＮ、ＤＦＮＢ５９、ＭＫＲＮ２ＯＳ、ＬＨＸ３、ＴＭＣ１、ＭＹＯ１５、ＭＹＯ７Ａ、ＭＹＯ６、ＭＹＯ３Ａ、ＭＹＯ３Ｂ、ＧＲＸＣＲ１、ＰＴＰＲＱ、ＬＣＥ６Ａ、ＬＯＸＨＤ１、ＡＲＴ１、ＡＴＰ２Ｂ２、ＣＩＢ２、ＣＡＣＮＡ２Ｄ４、ＥＰＳ８、ＥＰＳ８Ｌ２、ＥＳＰＮ、ＥＳＰＮＬ、ＰＲＰＨ２、ＳＬＣ８Ａ２、ＺＣＣＨＣ１２、ＬＲＴＯＭＴ２、ＬＲＴＯＭＴ１、ＵＳＨ１Ｃ、ＳＬＣ２６Ａ５、ＰＩＥＺＯ２、ＥＬＦＮ１、ＴＴＣ２４、ＤＹＴＮ、ＣＣＥＲ２、ＬＲＴＭ２、ＫＣＮＡ１０、ＣＬＲＮ１、ＣＬＲＮ２、ＳＫＯＲ１、ＴＣＴＥＸ１Ｄ１、ＦＣＲＬＢ、ＧＲＸＣＲ２、ＳＥＲＰＩＮＥ３、ＮＨＬＨ１、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＡＴＦ６、ＰＥＲＫ、ＩＲＥ１、ＷＨＲＮ、ＯＣＭ、ＩＳＬ１、ＴＭＴＣ４、ＢＩＰ、及びＫＣＮＱ４が含まれる。本明細書に記載されるＳＴＲＣプロモーターを使用して、有毛細胞（例えば、蝸牛または前庭の有毛細胞）に短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、遺伝子編集系の成分（例えば、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、もしくはジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）等のヌクレアーゼ、またはガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ））、またはマイクロＲＮＡを発現させることもできる。さらに、本明細書に記載されるＳＴＲＣプロモーターを、本明細書に記載の２ベクター系に使用するためのステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、野生型ステレオシリンタンパク質、例えば、配列番号３または配列番号４のタンパク質のＮ末端部分等）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結させることができる。
【0200】
目的タンパク質をコードするポリヌクレオチド
哺乳類細胞において目的タンパク質の治療的に有効な細胞内濃度を達成するために使用することができるプラットフォームの１つは、目的タンパク質をコードする遺伝子の（例えば、哺乳類細胞の核ゲノムもしくはミトコンドリアゲノムへ組み込むことによるか、または哺乳類細胞の核におけるエピソームのコンカテマー形成による）安定な発現を介したものである。遺伝子は、対応するタンパク質の一次アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。哺乳類細胞内に外来遺伝子を導入するために、遺伝子をベクター内に組み込むことができる。ベクターは、形質転換、トランスフェクション、形質導入、直接取り込み、プロジェクタイル・ボンバードメント法（ｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）等の多種多様な方法によって、及びベクターのリポソーム内封入によって、細胞内に導入可能である。細胞をトランスフェクトまたは形質転換する好適な方法の例としては、リン酸カルシウム沈殿、電気穿孔、マイクロインジェクション、感染、リポフェクション法及び直接取り込みが挙げられる。そのような方法は、例えば、Ｇｒｅｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ２０１４）、及びＡｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ２０１５）にさらに詳述されており、その各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
哺乳類細胞において目的タンパク質の治療的に有効な細胞内濃度を達成するために使用することができるプラットフォームの１つは、目的タンパク質をコードする遺伝子の（例えば、哺乳類細胞の核ゲノムもしくはミトコンドリアゲノムへ組み込むことによるか、または哺乳類細胞の核におけるエピソームのコンカテマー形成による）安定な発現を介したものである。遺伝子は、対応するタンパク質の一次アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドである。哺乳類細胞内に外来遺伝子を導入するために、遺伝子をベクター内に組み込むことができる。ベクターは、形質転換、トランスフェクション、形質導入、直接取り込み、プロジェクタイル・ボンバードメント法（ｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）等の多種多様な方法によって、及びベクターのリポソーム内封入によって、細胞内に導入可能である。細胞をトランスフェクトまたは形質転換する好適な方法の例としては、リン酸カルシウム沈殿、電気穿孔、マイクロインジェクション、感染、リポフェクション法及び直接取り込みが挙げられる。そのような方法は、例えば、Ｇｒｅｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ２０１４）、及びＡｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ２０１５）にさらに詳述されており、その各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0201】
目的タンパク質はまた、目的タンパク質をコードする遺伝子を含有するベクターを細胞膜リン脂質へ指向させることによって哺乳類細胞内に導入することも可能である。例えば、すべての細胞膜リン脂質に対して親和性を有するウイルスタンパク質であるＶＳＶ－Ｇタンパク質にベクター分子を連結することによって、ベクターを細胞膜の細胞外表面上のリン脂質に指向させることができる。そのようなコンストラクトは、当業者に周知の方法を使用して生成可能である。
【0202】
哺乳類ＲＮＡポリメラーゼによる、目的タンパク質をコードするポリヌクレオチドの認識及び結合は、遺伝子発現にとって重要である。したがって、ＲＮＡポリメラーゼを動員し、転写開始部位での転写複合体のアセンブリを促進する転写因子に対して高親和性を示すポリヌクレオチド内に配列エレメントを含める場合がある。そのような配列エレメントとしては、例えば、特定の転写開始因子、最終的にはＲＮＡポリメラーゼが認識して結合することができる配列である、哺乳類のプロモーターが挙げられる。哺乳類のプロモーターの例は、Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｓｙｓ．Ｂｉｏｌ．，３：７３（オンライン公開）に記載されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の方法及び組成物に使用されるプロモーターは、ＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）である。
【0203】
目的タンパク質をコードするポリヌクレオチドが哺乳類細胞内に取り込まれた後は、当該技術分野で公知の方法によってこのポリヌクレオチドの転写を誘導することができる。例えば、外部の化学試薬、例えば、哺乳類プロモーターへの転写因子及び／またはＲＮＡポリメラーゼの結合を調節して、遺伝子発現を調節する薬剤等に、哺乳類細胞を曝露させることによって発現を誘導することができる。化学試薬は、例えば、プロモーターに結合したリプレッサータンパク質を除去することによって、哺乳類プロモーターへのＲＮＡポリメラーゼ及び／または転写因子の結合を促進するよう機能することができる。別法として、化学試薬は、化学試薬の存在下でプロモーターの下流に位置する遺伝子の転写速度が高まるよう、ＲＮＡポリメラーゼ及び／または転写因子に対する哺乳類プロモーターの親和性を増強させるよう機能することができる。上記の機序によってポリヌクレオチドの転写を増強させる化学試薬の例としては、テトラサイクリン及びドキシサイクリンが挙げられる。これらの試薬は市販されており（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、確立されたプロトコルに従って、遺伝子発現を促進するために哺乳類細胞に投与することができる。
【0204】
本明細書に記載の組成物及び方法に使用するためのポリヌクレオチドに含まれ得る他のＤＮＡ配列エレメントには、エンハンサー配列が含まれる。エンハンサーは、ＤＮＡが、転写開始部位における転写因子及びＲＮＡポリメラーゼの結合に好ましい三次元配向をとるよう、目的遺伝子を含有するポリヌクレオチドにコンホメーション変化を誘導する別のクラスの調節エレメントを表す。したがって、本明細書に記載の組成物及び方法に使用するためのポリヌクレオチドには、目的タンパク質をコードするものが含まれ、さらに、哺乳類のエンハンサー配列も含まれる。現在では多くのエンハンサー配列が哺乳類の遺伝子からわかっており、例としては、哺乳類のグロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、及びインスリンをコードする遺伝子からのエンハンサーが挙げられる。本明細書に記載の組成物及び方法に使用するためのエンハンサーには、真核細胞に感染することができるウイルスの遺伝物質に由来するものも含まれる。例としては、複製起点の後期側（塩基対１００～２７０）にあるＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側にあるポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。真核生物の遺伝子転写の活性化を誘導する追加のエンハンサー配列には、ＣＭＶエンハンサー及びＲＳＶエンハンサーが含まれる。エンハンサーは、目的タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含有するベクター内に、例えば、この遺伝子に対して５’位または３’位にスプライスされ得る。好ましい配向では、エンハンサーは、プロモーターの５’側に位置し、それにより、目的タンパク質をコードするポリヌクレオチドに対して５’に位置する。
【0205】
理論に拘束されることなく、本発明者らは、ＳＴＲＣプロモーターの３’末端と目的タンパク質をコードするポリヌクレオチドの５’開始部位（ＡＴＧ）とを連結するヌクレオチド配列が、目的タンパク質の発現においての役割を果たしている可能性があると考えている。いくつかの実施形態では、その連結配列には、コザック配列またはその一部が含まれる。いくつかの実施形態では、その連結配列には、目的タンパク質のＳＴＲＣプロモーター及び／またはコード配列をベクター内に挿入するために利用された、多重クローニング部位またはその一部が含まれる。
【0206】
本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーターを含有する核酸ベクターには、ウッドチャック転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）が含まれ得る。ＷＰＲＥは、転写産物の核外輸送を促進する、及び／または新生転写産物のポリアデニル化効率を高め、それにより細胞内のｍＲＮＡの総量を増加させることによって、ｍＲＮＡレベルで作用する。ベクターにＷＰＲＥを加えることにより、インビトロ及びインビボの両方で、いくつかの異なるプロモーターからの導入遺伝子発現量の実質的な改善をもたらすことができる。
【0207】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーターを含有する核酸ベクターには、レポーター配列が含まれ、これは、ＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結された遺伝子の、例えば、細胞及び組織（例えば、外有毛細胞及び内有毛細胞等の蝸牛有毛細胞、ならびにＩ型及びＩＩ型の前庭有毛細胞等の前庭有毛細胞）における発現を確認するのに有用であり得る。導入遺伝子内に提供され得るレポーター配列には、β－ラクタマーゼ、β－ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、アルカリホスファターゼ、チミジンキナーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、ルシフェラーゼ、及び他の当該技術分野において周知のものをコードするＤＮＡ配列が含まれる。それらの発現を誘導する、ＳＴＲＣプロモーター等の調節エレメントと結合すると、レポーター配列は、従来の手段、例えば、酵素アッセイ、放射線アッセイ、比色アッセイ、蛍光アッセイまたは他の分光アッセイ、蛍光活性化細胞分類アッセイ、ならびに酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、及び免疫組織化学染色等の免疫アッセイにより検出可能なシグナルをもたらす。例えば、マーカー配列がＬａｃＺ遺伝子である場合、シグナルを保持するベクターの存在は、β－ガラクトシダーゼ活性についてのアッセイにより検出される。導入遺伝子が、緑色蛍光タンパク質またはルシフェラーゼである場合、シグナルを保持するベクターは、発光光度計での色または光の生成により視覚的に測定され得る。
【0208】
標的細胞への外因性ポリヌクレオチドの送達のための方法
導入遺伝子、例えば、本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結された導入遺伝子を標的細胞（例えば、哺乳類細胞）に導入するために使用することができる技術は当該技術分野において周知である。例えば、電気穿孔を使用して、目的の細胞への静電ポテンシャルの印加により哺乳類細胞（例えば、ヒト標的細胞）を透過性にすることができる。この様態で外部電場に曝露されたヒト細胞等の哺乳類細胞は、その後、外因性ポリヌクレオチドを取り込みやすくなる。哺乳類細胞の電気穿孔は、例えば、Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １５：１３１１（１９８７）に詳述されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。同様の技術であるＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ（商標）では、真核細胞核内への外因性ポリヌクレオチドの取り込みを刺激するために、印加電場を利用する。Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ（商標）及びこの技術を実施するのに有用なプロトコルは、例えば、Ｄｉｓｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ １４：３１５（２００５）、及びＵＳ２０１０／０３１７１１４に詳述されており、その各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
導入遺伝子、例えば、本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結された導入遺伝子を標的細胞（例えば、哺乳類細胞）に導入するために使用することができる技術は当該技術分野において周知である。例えば、電気穿孔を使用して、目的の細胞への静電ポテンシャルの印加により哺乳類細胞（例えば、ヒト標的細胞）を透過性にすることができる。この様態で外部電場に曝露されたヒト細胞等の哺乳類細胞は、その後、外因性ポリヌクレオチドを取り込みやすくなる。哺乳類細胞の電気穿孔は、例えば、Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １５：１３１１（１９８７）に詳述されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。同様の技術であるＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ（商標）では、真核細胞核内への外因性ポリヌクレオチドの取り込みを刺激するために、印加電場を利用する。Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ（商標）及びこの技術を実施するのに有用なプロトコルは、例えば、Ｄｉｓｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ １４：３１５（２００５）、及びＵＳ２０１０／０３１７１１４に詳述されており、その各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0209】
標的細胞のトランスフェクションに有用なさらなる技術には、スクイーズポレーション（ｓｑｕｅｅｚｅ－ｐｏｒａｔｉｏｎ）法が含まれる。この技術では、加えられたストレスに応答して形成される膜孔を介した外因性ＤＮＡの取り込みを刺激するために、細胞の急速な機械的変形を誘導する。この技術は、ヒト標的細胞等の細胞内へのポリヌクレオチドの送達のためにベクターが必要ないという点で都合がよい。スクイーズポレーションは、例えば、Ｓｈａｒｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ８１：ｅ５０９８０（２０１３）に詳述されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0210】
リポフェクション法は、標的細胞のトランスフェクションに有用な別の技術である。この方法には、多くの場合にリポソーム外面に向かって第四級アミンまたはプロトン化アミン等のカチオン性官能基を提示するリポソーム内へのポリヌクレオチドの搭載を伴う。これにより、細胞膜の陰イオン性の性質のためにリポソームと細胞との間の静電相互作用が促進され、最終的に、外因性ポリヌクレオチドの取り込みが、例えば、リポソームと細胞膜との直接融合によって、または複合体のエンドサイトーシスによってもたらされる。リポフェクション法は、例えば、米国特許第７，４４２，３８６号に詳述されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。外来性ポリヌクレオチドの取り込みを誘発するために細胞膜とのイオン相互作用を利用する同様の技術には、カチオン性ポリマー－ポリヌクレオチド複合体と細胞を接触させることが含まれる。細胞膜との相互作用に好ましい正電荷を付与するようポリヌクレオチドと結合する例示的なカチオン分子には、活性化デンドリマー（例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれるＤｅｎｎｉｇ，Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２２８：２２７（２００３）に記載）ポリエチレンイミン、及びジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）－デキストラン（トランスフェクション剤としてのその使用は、例えば、Ｇｕｌｉｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ４０：Ｉ：９．２：９．２．１（１９９７）に詳述されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる）が含まれる。磁気ビーズは、この方法が、ポリヌクレオチドの取り込みを導くために印加磁場を利用することから、穏やかかつ効率的な様態で標的細胞にトランスフェクトするために使用することができる別のツールである。この技術は、例えば、ＵＳ２０１０／０２２７４０６に詳述されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0211】
標的細胞による外因性ポリヌクレオチドの取り込みを誘導するための別の有用なツールは、光学的トランスフェクションとも呼ばれるレーザーフェクションであり、細胞を穏やかに透過性にして、ポリヌクレオチドが細胞膜を貫通できるようにするために、特定の波長の電磁放射に細胞を曝露することを伴う技術である。この技術の生物活性は、電気穿孔と同様であり、場合によってはそれよりも優れていることがわかっている。
【0212】
インペールフェクションは、標的細胞に遺伝物質を送達するために使用することができる別の技術である。これは、カーボンナノファイバー、カーボンナノチューブ、及びハノワイヤー等のナノマテリアルの使用に依存する。針状ナノ構造体を基板の表面に対して垂直に合成する。細胞内送達が意図される遺伝子を含有するＤＮＡをナノ構造体表面に結合させる。次いで、これらの針を配列させたチップを細胞または組織に対して押し付ける。ナノ構造体によって突き刺された細胞は送達された遺伝子（複数可）を発現することができる。この技術の一例は、Ｓｈａｌｅｋ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １０７：１８７０（２０１０）に記載されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0213】
標的細胞にポリヌクレオチドを送達するためにマグネトフェクションを使用することもできる。マグネトフェクションの原理は、ポリヌクレオチドを陽イオン性磁性ナノ粒子と結合させることである。磁性ナノ粒子は酸化鉄でできており、完全に生物分解性であり、用途に応じて異なる特定の陽イオン性の独自の分子でコートされている。それらの粒子と、遺伝子ベクター（ＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ウイルスベクター等）との結合は、塩誘導性コロイド凝集及び静電相互作用により達成される。その後、磁石により発生した外部磁場の影響により、磁性粒子が標的細胞上に濃縮される。この技術は、Ｓｃｈｅｒｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ９：１０２（２００２）に詳述されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0214】
標的細胞による外因性ポリヌクレオチドの取り込みを誘導するための別の有用なツールは音響穿孔法であり、細胞を透過性にして、ポリヌクレオチドが細胞膜を貫通できるようにするために、細胞形質膜の透過性改変に音波（典型的には超音波周波数）を使用することを伴う技術である。この技術は、例えば、Ｒｈｏｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ８２：３０９（２００７）に詳述されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0215】
微小胞は、本明細書に記載の方法に従って標的細胞のゲノムを修飾するために使用することができる、別の潜在的なビヒクルを表す。例えば、糖タンパク質ＶＳＶ－Ｇと、例えば、ヌクレアーゼ等のゲノム修飾タンパク質との共過剰発現によって誘導された微小胞を使用してタンパク質を細胞内に効率的に送達することができ、その後、内因性ポリヌクレオチド配列の部位特異的切断が触媒され、細胞のゲノムが、目的のポリヌクレオチド、例えば、遺伝子または調節配列等の、共有結合による組み込みのために準備される。真核細胞の遺伝子改変のための、Ｇｅｓｉｃｌｅとも呼ばれるそのような小胞の使用は、例えば、Ｑｕｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｒｇｅｔ Ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｄｉｒｅｃｔ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ Ａｃｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ ［ａｂｓｔｒａｃｔ］．Ｉｎ： Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｅａｒｌｙ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ［ａｂｓｔｒａｃｔ］，ｉｎ：Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ １８ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ；２０１５ Ｍａｙ １３，Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．１２２に詳述されている。
【0216】
標的細胞に外因性ポリヌクレオチドを送達するためのベクター
高速の転写及び翻訳を達成することに加え、哺乳類細胞における外来遺伝子の安定な発現を、その遺伝子を含有するポリヌクレオチドを哺乳類細胞の核ゲノム内へ組み込むことによって達成することができる。哺乳類細胞の核ＤＮＡへの、外因性タンパク質をコードするポリヌクレオチドの送達及び組み込みのための多種多様なベクターが開発されている。発現ベクターの例は、例えば、Ｇｅｌｌｉｓｓｅｎ，Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｎｏｖｅｌ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｎｄ Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｍａｒｂｌｅｈｅａｄ，ＭＡ，２００６）に記載されている。本明細書に記載の組成物及び方法に使用するための発現ベクターは、所望の発現産物（例えば、目的タンパク質をコードするポリヌクレオチド、または抑制性ＲＮＡを生成するよう転写され得るポリヌクレオチド）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された、ＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）、ならびに、例えば、これらの物質の発現に使用される追加の配列エレメント及び／またはこれらのポリヌクレオチド配列の哺乳類細胞ゲノムへの組み込みに使用される追加の配列エレメントを含有する。所望の発現産物（例えば、目的タンパク質をコードする導入遺伝子）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーターを含有することができるベクターには、プラスミド（例えば、細胞内部で自律複製することができる環状ＤＮＡ分子）、コスミド（例えば、ｐＷＥベクターまたはｓＣｏｓベクター）、人工染色体（例えば、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ））、及びウイルスベクターが含まれる。所望の発現産物（例えば、目的タンパク質）の発現に使用することができる特定のベクターには、遺伝子転写を導く調節配列、例えば、エンハンサー領域を含有するプラスミドが含まれる。所望の発現産物（例えば、目的タンパク質）の発現に有用な他のベクターは、これらの遺伝子の翻訳率を高めるポリヌクレオチド配列、または遺伝子転写から生じるｍＲＮＡの安定性もしくは核外輸送を改善するポリヌクレオチド配列を含有する。これらの配列エレメントには、発現ベクター上に担持された遺伝子の効率的転写を導くために、例えば、５’及び３’の非翻訳領域、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、及びポリアデニル化シグナル部位が含まれる。本明細書に記載の組成物及び方法と併せた使用に好適な発現ベクターはまた、そのようなベクターを含有する細胞の選択のためのマーカーをコードするポリヌクレオチドを含有し得る。好適なマーカーの例には、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、またはノーセオスリシン等の抗生物質に対する耐性をコードする遺伝子が含まれる。
高速の転写及び翻訳を達成することに加え、哺乳類細胞における外来遺伝子の安定な発現を、その遺伝子を含有するポリヌクレオチドを哺乳類細胞の核ゲノム内へ組み込むことによって達成することができる。哺乳類細胞の核ＤＮＡへの、外因性タンパク質をコードするポリヌクレオチドの送達及び組み込みのための多種多様なベクターが開発されている。発現ベクターの例は、例えば、Ｇｅｌｌｉｓｓｅｎ，Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｎｏｖｅｌ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｎｄ Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｍａｒｂｌｅｈｅａｄ，ＭＡ，２００６）に記載されている。本明細書に記載の組成物及び方法に使用するための発現ベクターは、所望の発現産物（例えば、目的タンパク質をコードするポリヌクレオチド、または抑制性ＲＮＡを生成するよう転写され得るポリヌクレオチド）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された、ＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）、ならびに、例えば、これらの物質の発現に使用される追加の配列エレメント及び／またはこれらのポリヌクレオチド配列の哺乳類細胞ゲノムへの組み込みに使用される追加の配列エレメントを含有する。所望の発現産物（例えば、目的タンパク質をコードする導入遺伝子）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーターを含有することができるベクターには、プラスミド（例えば、細胞内部で自律複製することができる環状ＤＮＡ分子）、コスミド（例えば、ｐＷＥベクターまたはｓＣｏｓベクター）、人工染色体（例えば、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ））、及びウイルスベクターが含まれる。所望の発現産物（例えば、目的タンパク質）の発現に使用することができる特定のベクターには、遺伝子転写を導く調節配列、例えば、エンハンサー領域を含有するプラスミドが含まれる。所望の発現産物（例えば、目的タンパク質）の発現に有用な他のベクターは、これらの遺伝子の翻訳率を高めるポリヌクレオチド配列、または遺伝子転写から生じるｍＲＮＡの安定性もしくは核外輸送を改善するポリヌクレオチド配列を含有する。これらの配列エレメントには、発現ベクター上に担持された遺伝子の効率的転写を導くために、例えば、５’及び３’の非翻訳領域、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、及びポリアデニル化シグナル部位が含まれる。本明細書に記載の組成物及び方法と併せた使用に好適な発現ベクターはまた、そのようなベクターを含有する細胞の選択のためのマーカーをコードするポリヌクレオチドを含有し得る。好適なマーカーの例には、アンピシリン、クロラムフェニコール、カナマイシン、またはノーセオスリシン等の抗生物質に対する耐性をコードする遺伝子が含まれる。
【0217】
ポリヌクレオチド送達のためのウイルスベクター
ウイルスゲノムは、標的細胞（例えば、ヒト細胞等の哺乳類細胞）のゲノムへの目的遺伝子の効率的送達に使用することができるベクターの豊富な供給源となる。ウイルスゲノムは、そのようなゲノム内に含有されるポリヌクレオチドが、典型的には、一般化または特殊化した形質導入によって哺乳類細胞の核ゲノム内に組み込まれるため、遺伝子送達に特に有用なベクターである。これらの過程は、天然のウイルス複製サイクルの一部として起こり、遺伝子組み込みを誘導するために加えられるタンパク質または試薬を必要としない。ウイルスベクターの例としては、レトロウイルス（例えば、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ科のウイルスベクター）、アデノウイルス（例えば、Ａｄ５、Ａｄ２６、Ａｄ３４、Ａｄ３５、及びＡｄ４８）、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス）、コロナウイルス、マイナス鎖ＲＮＡウイルス、例えば、オルトミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病及び水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹及びセンダイ）、プラス鎖ＲＮＡウイルス、例えば、ピコルナウイルス及びアルファウイルス、ならびに二本鎖ＤＮＡウイルス、例えば、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス１型及び２型、エプスタイン－バーウイスル、サイトメガロウイルス）、及びポックスウイルス（例えば、ワクシニア、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）、鶏痘及びカナリア痘）が挙げられる。他のウイルスには、例えば、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポーバウイルス、ヘパドナウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒト泡沫状ウイルス、及び肝炎ウイルスが含まれる。レトロウイルスの例としては、トリ白血病・肉腫、トリＣ型ウイルス、哺乳類Ｃ型ウイルス、哺乳類Ｂ型ウイルス、哺乳類Ｄ型ウイルス、オンコレトロウイルス、ＨＴＬＶ－ＢＬＶ群、レンチウイルス、アルファレトロウイルス、ガンマレトロウイルス、スプーマウイルスが挙げられる（Ｃｏｆｆｉｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ：Ｔｈｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９６））。他の例としては、マウス白血病ウイルス、マウス肉腫ウイルス、マウス乳房腫瘍ウイルス、ウシ白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒヒ内在性ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、マソン・ファイザー・サルウイルス、サル免疫不全ウイルス、サル肉腫ウイルス、ラウス肉腫ウイルス及びレンチウイルスが挙げられる。ベクターの他の例は、例えば、米国特許第５，８０１，０３０号に記載されており、その開示は、遺伝子治療に使用するためのウイルスベクターに関連して参照することにより本明細書に組み込まれる。
ウイルスゲノムは、標的細胞（例えば、ヒト細胞等の哺乳類細胞）のゲノムへの目的遺伝子の効率的送達に使用することができるベクターの豊富な供給源となる。ウイルスゲノムは、そのようなゲノム内に含有されるポリヌクレオチドが、典型的には、一般化または特殊化した形質導入によって哺乳類細胞の核ゲノム内に組み込まれるため、遺伝子送達に特に有用なベクターである。これらの過程は、天然のウイルス複製サイクルの一部として起こり、遺伝子組み込みを誘導するために加えられるタンパク質または試薬を必要としない。ウイルスベクターの例としては、レトロウイルス（例えば、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ科のウイルスベクター）、アデノウイルス（例えば、Ａｄ５、Ａｄ２６、Ａｄ３４、Ａｄ３５、及びＡｄ４８）、パルボウイルス（例えば、アデノ随伴ウイルス）、コロナウイルス、マイナス鎖ＲＮＡウイルス、例えば、オルトミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病及び水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、麻疹及びセンダイ）、プラス鎖ＲＮＡウイルス、例えば、ピコルナウイルス及びアルファウイルス、ならびに二本鎖ＤＮＡウイルス、例えば、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス１型及び２型、エプスタイン－バーウイスル、サイトメガロウイルス）、及びポックスウイルス（例えば、ワクシニア、改変ワクシニアアンカラ（ＭＶＡ）、鶏痘及びカナリア痘）が挙げられる。他のウイルスには、例えば、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポーバウイルス、ヘパドナウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒト泡沫状ウイルス、及び肝炎ウイルスが含まれる。レトロウイルスの例としては、トリ白血病・肉腫、トリＣ型ウイルス、哺乳類Ｃ型ウイルス、哺乳類Ｂ型ウイルス、哺乳類Ｄ型ウイルス、オンコレトロウイルス、ＨＴＬＶ－ＢＬＶ群、レンチウイルス、アルファレトロウイルス、ガンマレトロウイルス、スプーマウイルスが挙げられる（Ｃｏｆｆｉｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ：Ｔｈｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９６））。他の例としては、マウス白血病ウイルス、マウス肉腫ウイルス、マウス乳房腫瘍ウイルス、ウシ白血病ウイルス、ネコ白血病ウイルス、ネコ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、ヒヒ内在性ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、マソン・ファイザー・サルウイルス、サル免疫不全ウイルス、サル肉腫ウイルス、ラウス肉腫ウイルス及びレンチウイルスが挙げられる。ベクターの他の例は、例えば、米国特許第５，８０１，０３０号に記載されており、その開示は、遺伝子治療に使用するためのウイルスベクターに関連して参照することにより本明細書に組み込まれる。
【0218】
ポリヌクレオチド送達のためのＡＡＶベクター
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法のポリヌクレオチドは、細胞内へのそれらの導入を促進するために、ｒＡＡＶベクター及び／またはビリオン内に組み込まれる。本明細書に記載の組成物及び方法に有用なｒＡＡＶベクターは、組換えポリヌクレオチドコンストラクトであって、（１）本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）、（２）発現させる配列（例えば、異種発現産物またはステレオシリンタンパク質の一部をコードするポリヌクレオチド）、ならびに（３）発現させる配列の組み込み及び発現を促進するウイルス配列が含まれる、組換えポリヌクレオチドコンストラクトである。ウイルス配列には、ＤＮＡの複製及びビリオンへのパッケージング（例えば、機能的ＩＴＲ）のためにシスで必要とされるＡＡＶの配列が含まれ得る。典型的な適用では、発現させる配列は、有毛細胞の発生、有毛細胞の機能、有毛細胞の再生、有毛細胞の運命決定、有毛細胞の生存、もしくは有毛細胞の維持を促進することができるタンパク質、または遺伝性難聴もしくは前庭機能障害の形態を有する対象において変異している有毛細胞タンパク質の野生型形態をコードし、これらは、難聴、聴覚消失、もしくは前庭機能障害（例えば、浮動性めまい、回転性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、または平衡障害）と関連した変異を有する対象の聴力または前庭機能を改善するのに有用であり得る。そのようなｒＡＡＶベクターは、マーカー遺伝子またはレポーター遺伝子も含有し得る。有用なｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ ＷＴ遺伝子のうちの１つ以上が全部または一部、欠失しているが、機能的隣接ＩＴＲ配列は保持している。ＡＡＶのＩＴＲは、特定の適用に好適な任意の血清型であり得る。本明細書に記載の方法及び組成物における使用の場合、ＩＴＲは、ＡＡＶ２のＩＴＲであり得る。ｒＡＡＶベクターを使用するための方法は、例えば、Ｔａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．７：２７９（２０００）、及びＭｏｎａｈａｎ ａｎｄ Ｓａｍｕｌｓｋｉ，Ｇｅｎｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ７：２４（２０００）に記載されており、その各々の開示は、遺伝子送達のためのＡＡＶベクターに関連して参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法のポリヌクレオチドは、細胞内へのそれらの導入を促進するために、ｒＡＡＶベクター及び／またはビリオン内に組み込まれる。本明細書に記載の組成物及び方法に有用なｒＡＡＶベクターは、組換えポリヌクレオチドコンストラクトであって、（１）本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）、（２）発現させる配列（例えば、異種発現産物またはステレオシリンタンパク質の一部をコードするポリヌクレオチド）、ならびに（３）発現させる配列の組み込み及び発現を促進するウイルス配列が含まれる、組換えポリヌクレオチドコンストラクトである。ウイルス配列には、ＤＮＡの複製及びビリオンへのパッケージング（例えば、機能的ＩＴＲ）のためにシスで必要とされるＡＡＶの配列が含まれ得る。典型的な適用では、発現させる配列は、有毛細胞の発生、有毛細胞の機能、有毛細胞の再生、有毛細胞の運命決定、有毛細胞の生存、もしくは有毛細胞の維持を促進することができるタンパク質、または遺伝性難聴もしくは前庭機能障害の形態を有する対象において変異している有毛細胞タンパク質の野生型形態をコードし、これらは、難聴、聴覚消失、もしくは前庭機能障害（例えば、浮動性めまい、回転性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、または平衡障害）と関連した変異を有する対象の聴力または前庭機能を改善するのに有用であり得る。そのようなｒＡＡＶベクターは、マーカー遺伝子またはレポーター遺伝子も含有し得る。有用なｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ ＷＴ遺伝子のうちの１つ以上が全部または一部、欠失しているが、機能的隣接ＩＴＲ配列は保持している。ＡＡＶのＩＴＲは、特定の適用に好適な任意の血清型であり得る。本明細書に記載の方法及び組成物における使用の場合、ＩＴＲは、ＡＡＶ２のＩＴＲであり得る。ｒＡＡＶベクターを使用するための方法は、例えば、Ｔａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．７：２７９（２０００）、及びＭｏｎａｈａｎ ａｎｄ Ｓａｍｕｌｓｋｉ，Ｇｅｎｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ７：２４（２０００）に記載されており、その各々の開示は、遺伝子送達のためのＡＡＶベクターに関連して参照により本明細書に組み込まれる。
【0219】
本明細書に記載のポリヌクレオチド及びベクター（例えば、目的タンパク質をコードする導入遺伝子に、またはＷＴステレオシリンタンパク質の一部をコードするポリヌクレオチドに、機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター）は、細胞へのポリヌクレオチドまたはベクターの導入を促進するためにｒＡＡＶビリオンに組み込み可能である。ＡＡＶのカプシドタンパク質は、ビリオンの外面の非核酸部分を構成し、ＡＡＶ ｃａｐ遺伝子によってコードされる。キャップ遺伝子は、ビリオンアセンブリに必要な３種のウイルスコートタンパク質のＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３をコードする。ｒＡＡＶビリオンの構築は、例えば、ＵＳ５，１７３，４１４、ＵＳ５，１３９，９４１、ＵＳ５，８６３，５４１、ＵＳ５，８６９，３０５、ＵＳ６，０５７，１５２、及びＵＳ６，３７６，２３７、ならびにＲａｂｉｎｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７６：７９１（２００２）及びＢｏｗｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７：４２３（２００３）に記載されており、その各々の開示は、遺伝子送達のためのＡＡＶベクターに関連して、参照により本明細書に組み込まれる。
【0220】
本明細書に記載の組成物及び方法と併用して有用なｒＡＡＶビリオンには、ＡＡＶの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、ｒｈ７４、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／８、ＤＪ／９、７ｍ８、ＰＨＰ．Ｂ、ＰＨＰ．ｅｂ、及びＰＨＰ．Ｓを含め、多種多様なＡＡＶ血清型に由来するものが含まれる。有毛細胞に指向させる場合、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／９、７ｍ８、及びＰＨＰ．Ｂが特に有用であり得る。網膜の形質導入について進化した血清型も、本明細書に記載の方法及び組成物に使用され得る。異なる血清型のＡＡＶベクター及びＡＡＶタンパク質の構築及び使用は、例えば、Ｃｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２：６１９（２０００）、Ｄａｖｉｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：３４２８（２０００）、Ｘｉａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：２２２４（１９９８）、Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：１５２４（２０００）、Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：６６１５（２００１）、及びＡｕｒｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎｅｔ．１０：３０７５（２００１）に記載されており、その各々の開示は、遺伝子送達のためのＡＡＶベクターに関連して、参照により本明細書に組み込まれる。
【0221】
偽型ｒＡＡＶベクターもまた、本明細書に記載の組成物及び方法と併用して有用である。偽型ベクターには、所与の血清型（例えば、ＡＡＶ９）のＡＡＶベクターが、所与の血清型以外の血清型（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８等）に由来するカプシド遺伝子を持つ偽型が含まれる。偽型ｒＡＡＶビリオンの構築及び使用を伴う技術は当該技術分野で公知であり、例えば、Ｄｕａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：７６６２（２００１）、Ｈａｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：１５２４（２０００）、Ｚｏｌｏｔｕｋｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２８：１５８（２００２）、及びＡｕｒｉｃｃｈｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎｅｔ．１０：３０７５（２００１）に記載されている。
【0222】
ビリオンカプシド内に変異を有するＡＡＶビリオンは、特定の細胞型に非変異カプシドビリオンよりも効果的に感染させるために使用され得る。例えば、好適なＡＡＶ変異体は、特定の細胞型へのＡＡＶの指向促進のためのリガンド挿入変異を有し得る。挿入変異体、アラニンスクリーニング変異体、及びエピトープタグ変異体等のＡＡＶカプシド変異体の構築及び特徴付けは、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：８６３５（２０００）に記載されている。本明細書に記載の方法に使用することができる他のｒＡＡＶビリオンには、ウイルスの分子育種によって、及びエクソンシャッフリングによって作製されるカプシドハイブリッドが含まれる。例えば、Ｓｏｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．，２５：４３６（２０００）及びＫｏｌｍａｎ ａｎｄ Ｓｔｅｍｍｅｒ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９：４２３（２００１）を参照のこと。
【0223】
医薬組成物
本明細書に記載されるＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）は、所望の発現産物をコードするポリヌクレオチド（例えば、目的タンパク質をコードする導入遺伝子）に、またはステレオシリンタンパク質の一部をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されて、感音性難聴及び／または前庭機能障害を患うヒト患者等の患者への投与のためのビヒクル内に組み込まれ得る。所望の発現産物をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーターを含有するウイルスベクター等のベクターを含有する医薬組成物は、当該技術分野で公知の方法を使用して調製可能である。例えば、そのような組成物は、例えば、生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定化剤（参照により本明細書に組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｌｌｅｎ，Ｌ．Ｅｄ．（２０１３））を使用して、所望の形態、例えば、凍結乾燥製剤または水溶液の形態に調製可能である。
本明細書に記載されるＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）は、所望の発現産物をコードするポリヌクレオチド（例えば、目的タンパク質をコードする導入遺伝子）に、またはステレオシリンタンパク質の一部をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されて、感音性難聴及び／または前庭機能障害を患うヒト患者等の患者への投与のためのビヒクル内に組み込まれ得る。所望の発現産物をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーターを含有するウイルスベクター等のベクターを含有する医薬組成物は、当該技術分野で公知の方法を使用して調製可能である。例えば、そのような組成物は、例えば、生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定化剤（参照により本明細書に組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｌｌｅｎ，Ｌ．Ｅｄ．（２０１３））を使用して、所望の形態、例えば、凍結乾燥製剤または水溶液の形態に調製可能である。
【0224】
所望の発現産物をコードするポリヌクレオチドに、またはステレオシリンタンパク質の一部をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）を含有する、核酸ベクター（例えば、ウイルスベクター）の混合物は、１つ以上の賦形剤、担体、または希釈剤と好適に混合された水で調製され得る。分散液はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びそれらの混合物で、及び油で調製され得る。通常の保存及び使用条件下では、これらの調製物は、微生物の増殖を防ぐために保存剤を含有し得る。注射用途に好適な剤形には、無菌の水溶液または分散液、及び無菌の注射液または分散液の用時調製用の無菌粉末（その開示が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ第５，４６６，４６８号に記載されている）が含まれる。いずれの場合も、製剤は無菌であり得、また注射針を容易に通過できる程度に流動性があり得る。製剤は、製造及び保管条件下で安定であり得、また、細菌及び真菌等の微生物の汚染作用に対して保存され得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、それらの好適な混合物、及び／または植物性油を含有する、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用、分散液の場合は必要粒径の維持、及び界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等によってもたらされ得る。多くの場合、等張化剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射用組成物の持続的吸収は、組成物における、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用によってもたらされ得る。
【0225】
例えば、本明細書に記載の医薬組成物を含有する溶液は、必要に応じて好適に緩衝され得、液体希釈剤は最初に十分な生理食塩水またはグルコースで等張性にされる。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、及び腹腔内の投与に特に好適である。これに関連して、用いられ得る無菌水性媒体は、本開示に鑑みて当業者に知られるであろう。例えば、１回投与量を１ｍｌの等張ＮａＣｌ溶液に溶解させ、１０００ｍｌの皮下注入液に加えても、または予定の注入部位に注射してもよい。治療される対象の状態に応じて、いくらかの投与量の変動が必然的に生じる。内耳への局所投与の場合、組成物は、合成外リンパ溶液を含有するよう製剤化され得る。例示的な合成外リンパ溶液には、２０～２００ｍＭ ＮａＣｌ、１～５ｍＭ ＫＣｌ、０．１～１０ｍＭ ＣａＣｌ２、１～１０ｍＭのグルコース、及び２～５０ｍＭ ＨＥＰＥが、ｐＨ約６～９、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧で含まれる。いずれにしても、投与担当者が、個々の対象の適切な用量を決定する。さらに、ヒトへの投与の場合、調製物は、ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓの基準で要求される、無菌性、発熱性、一般安全性、及び純度標準を満たし得る。
【0226】
治療方法
本明細書に記載の組成物は、感音性難聴及び／または前庭機能障害を有するかもしくはそれらを発症するリスクのある対象に対し、多種多様な経路によって、例えば、中耳もしくは内耳への局所投与（例えば、外リンパもしくは内リンパ中への投与、例えば、卵円窓、正円窓、もしくは半規管（例えば、水平半規管）への、もしくはそれを介した投与、または経鼓室注射もしくは鼓室内注射による投与、例えば、有毛細胞への投与）、静脈内、非経口、皮内、経皮、筋肉内、鼻腔内、皮下、経皮、気管内、腹腔内、動脈内、血管内、吸入、灌流、洗浄、及び経口投与によって投与され得る。任意の所与の場合における最も好適な投与経路は、投与される特定の組成物、患者、医薬製剤方法、投与方法（例えば、投与時間及び投与経路）、患者の年齢、体重、性別、治療される疾患の重症度、患者の食事、及び患者の排泄率に応じて異なる。組成物は、１回、または複数回（例えば、年１回、年２回、年３回、隔月、月１回、または隔週）投与され得る。２ベクター系に関連した実施形態では、第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターを、同時に（例えば、１つの組成物にして）投与することも、また順次に投与することもできる（例えば、１つの核酸ベクターがもう一方の核酸ベクターの直後か、または最初の核酸ベクターの５分後、１０分後、１５分後、２０分後、２５分後、３０分後、４５分後、１時間後、２時間後、もしくはそれ以上経過後に投与される）。第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターは、同じカプシドを有することも、異なるカプシド（例えば、ＡＡＶカプシド）を有することもできる。
本明細書に記載の組成物は、感音性難聴及び／または前庭機能障害を有するかもしくはそれらを発症するリスクのある対象に対し、多種多様な経路によって、例えば、中耳もしくは内耳への局所投与（例えば、外リンパもしくは内リンパ中への投与、例えば、卵円窓、正円窓、もしくは半規管（例えば、水平半規管）への、もしくはそれを介した投与、または経鼓室注射もしくは鼓室内注射による投与、例えば、有毛細胞への投与）、静脈内、非経口、皮内、経皮、筋肉内、鼻腔内、皮下、経皮、気管内、腹腔内、動脈内、血管内、吸入、灌流、洗浄、及び経口投与によって投与され得る。任意の所与の場合における最も好適な投与経路は、投与される特定の組成物、患者、医薬製剤方法、投与方法（例えば、投与時間及び投与経路）、患者の年齢、体重、性別、治療される疾患の重症度、患者の食事、及び患者の排泄率に応じて異なる。組成物は、１回、または複数回（例えば、年１回、年２回、年３回、隔月、月１回、または隔週）投与され得る。２ベクター系に関連した実施形態では、第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターを、同時に（例えば、１つの組成物にして）投与することも、また順次に投与することもできる（例えば、１つの核酸ベクターがもう一方の核酸ベクターの直後か、または最初の核酸ベクターの５分後、１０分後、１５分後、２０分後、２５分後、３０分後、４５分後、１時間後、２時間後、もしくはそれ以上経過後に投与される）。第１の核酸ベクター及び第２の核酸ベクターは、同じカプシドを有することも、異なるカプシド（例えば、ＡＡＶカプシド）を有することもできる。
【0227】
本明細書に記載のように治療され得る対象は、感音性難聴及び／または前庭機能障害を有するかまたはそれらを発症するリスクのある対象（例えば、難聴、前庭機能障害、または両方を有するかまたはそれらを発症するリスクのある対象）である。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、蝸牛有毛細胞の損傷（例えば、音響性外傷、疾患もしくは感染症、頭部外傷、耳毒性薬物、または加齢に関連した損傷）を有するかまたはそれらを発症するリスクのある対象、前庭有毛細胞の損傷（例えば、疾患もしくは感染症、頭部外傷、耳毒性薬物、または加齢に関連した損傷）を有するかまたはそれらを発症するリスクのある対象、感音性難聴、聴覚消失、もしくはオーディトリー・ニューロパチーを有するかまたはそれらを発症するリスクのある対象、前庭機能障害（例えば、浮動性めまい、回転性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、または平衡障害）を有するかまたはそれらを発症するリスクのある対象、耳鳴（例えば、耳鳴単独、または感音性難聴もしくは前庭機能障害と関連する耳鳴）を有する対象、難聴及び／または前庭機能障害と関連する遺伝子変異を有する対象、あるいは遺伝性難聴、聴覚消失、オーディトリー・ニューロパチー、耳鳴、または前庭機能障害の家族歴を有する対象、を治療することができる。いくつかの実施形態では、有毛細胞（例えば、蝸牛及び／または前庭の有毛細胞）の損傷または消失と関連する疾患は、自己免疫応答が有毛細胞の損傷または細胞死に寄与する自己免疫性の疾患または状態である。感音性難聴及び前庭機能障害と関連付けられる自己免疫疾患には、内耳自己免疫病（ＡＩＥＤ）、結節性多発動脈炎（ＰＡＮ）、コーガン症候群、再発性多発軟骨炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ウェゲナー肉芽腫症、シェーグレン症候群、及びベーチェット病が含まれる。一部の感染性状態、例えば、ライム病及び梅毒も、（例えば、自己抗体産生を誘発することによって）難聴及び前庭機能障害を引き起こす可能性がある。ウイルス感染症、例えば、風疹、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、ＨＳＶの１型及び２型、ウエストナイルウイルス（ＷＮＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、麻疹、及び流行性耳下腺炎もまた、難聴及び前庭機能障害を引き起こす可能性がある。いくつかの実施形態では、対象は、有毛細胞（例えば、蝸牛または前庭の有毛細胞）の消失と関連する、もしくはそれに起因する、難聴及び／または前庭機能障害を有するかまたはそれを発症するリスクがある。本明細書に記載のＳＴＲＣ２ベクター系を使用して、ＳＴＲＣの変異（例えば、ステレオシリンの機能もしくは発現を低下させる変異、または感音性難聴もしくは前庭機能障害と関連するＳＴＲＣの変異、例えば、非症候性難聴、例えば、ＤＦＮＢ１６を引き起こす変異）を有する対象、例えば、難聴もしくは前庭機能障害の症状を示すＳＴＲＣの変異を有する対象、及びまだ症状を呈していない対象（例えば、ＳＴＲＣ変異を有する対象の予防的治療）、あるいはＳＴＲＣの変異の状態及び／またはＳＴＲＣの活性レベルが不明な対象を治療することができる。本明細書に記載の方法には、本明細書に記載の組成物を用いた治療または投与の前に、難聴及び／または前庭機能障害と関連することが知られている１つ以上の遺伝子変異について対象のスクリーニングを行うステップが含まれ得る。当業者に公知の標準的な方法（例えば、遺伝子検査）を使用して遺伝子変異について対象のスクリーニングを行うことができる。本明細書に記載の方法には、本明細書に記載の組成物を用いた治療または投与の前に、対象における聴力及び／または前庭機能を評価するステップも含まれ得る。標準的検査、例えば、聴力検査、聴性脳幹反応（ＡＢＲ）、蝸電図（ＥＣＯＧ）、及び耳音響放射を使用して聴力を評価することができる。前庭機能は、標準的検査、例えば、眼球運動検査（例えば、電気眼振図（ＥＮＧ）またはビデオ式眼振計（ＶＮＧ））、前庭動眼反射（ＶＯＲ）の検査（例えば、ベッドサイドでも、またビデオヘッドインパルス検査（ＶＨＩＴ）を使用しても実施することができるヘッドインパルス検査（Ｈａｌｍａｇｙｉ－Ｃｕｒｔｈｏｙｓ検査）、または温度反射検査（ｃａｌｏｒｉｃ ｒｅｆｌｅｘ ｔｅｓｔ））、重心動揺検査、回転椅子による検査（ｒｏｔａｒｙ－ｃｈａｉｒ ｔｅｓｔｉｎｇ）、ＥＣＯＧ、前庭誘発筋電位検査（ＶＥＭＰ）、及びＭａｎｃｉｎｉ ａｎｄ Ｈｏｒａｋ，Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈｙｓ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｍｅｄ，４６：２３９（２０１０）に記載があるもののような専門外来での平衡感覚検査を使用して評価され得る。また、これらの試験を、本明細書に記載の組成物を用いた治療または投与後の、対象における聴力及び／または前庭機能を評価するために使用することもできる。本明細書に記載の組成物及び方法はまた、難聴及び／または前庭機能障害を発症するリスクのある患者、例えば、難聴もしくは前庭機能障害（例えば、遺伝性難聴もしくは前庭機能障害）の家族歴を有する患者、聴覚障害もしくは前庭機能障害をまだ示していない難聴もしくは前庭機能障害と関連する遺伝子変異を有する患者、あるいは後天性難聴（例えば、音響性外傷、疾患もしくは感染症、頭部外傷、耳毒性薬物、または加齢）または前庭機能障害（例えば、疾患もしくは感染症、頭部外傷、耳毒性薬物、または加齢）の危険因子に曝露されている患者に対して、予防的治療としても投与され得る。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、特発性前庭機能障害の対象を治療することもできる。
【0228】
本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、対象の有毛細胞（例えば、蝸牛及び／または前庭の有毛細胞の再生）の再生を誘導するかまたは増加させることができる。有毛細胞の再生を誘導するかまたは増加させる組成物による利益が得られる可能性のある対象には、有毛細胞の消失（例えば、外傷（例えば、音響性外傷もしくは頭部外傷）、疾患もしくは感染症、耳毒性薬物、または加齢に関連した有毛細胞の消失）の結果としての難聴もしくは前庭機能障害を患う対象、及び異常な有毛細胞（例えば、正常有毛細胞と比較した場合に適切に機能しない有毛細胞）、損傷有毛細胞（例えば、外傷（例えば、音響性外傷もしくは頭部外傷）、疾患もしくは感染症、耳毒性薬物、または加齢に関連した有毛細胞の損傷）を有するかまたは遺伝子変異もしくは先天異常により有毛細胞数が減少している対象が含まれる。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、有毛細胞の生存を促進するかまたは増加させる（例えば、有毛細胞の消失（例えば、年齢、大きな音への曝露、疾患もしくは感染症、頭部外傷、または耳毒性薬物による有毛細胞の消失）のリスクのある対象において、損傷有毛細胞の生存を増加させる、損傷有毛細胞の修復を促進する、または有毛細胞を保存する）こともできる。本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、有毛細胞の成熟を促進するかもしくは増加させること、有毛細胞の構造を改善すること（例えば、不動毛束の形態を改善すること）、または有毛細胞の機能を改善すること（例えば、不動毛束の傾きを改善すること）もでき、これにより、聴覚及び／または前庭機能の改善をもたらすことができる。
【0229】
本明細書に記載の組成物及び方法を使用して、耳毒性薬物による治療を受けたことがあるか、または治療を現在受けている、もしくはまもなく開始する対象において、耳毒性薬物誘発性の有毛細胞の損傷もしくは細胞死（例えば、蝸牛有毛細胞及び／または前庭有毛細胞の損傷もしくは細胞死）により引き起こされる難聴及び／または前庭機能障害を予防もしくは軽減することもできる。耳毒性薬物は、内耳の細胞に毒性を示し、感音性難聴、前庭機能障害（例えば、回転性めまい、浮動性めまい、平衡失調、両側前庭障害（両側前庭機能低下）、もしくは動揺視）、耳鳴、またはこれらの症状の組み合わせを引き起こし得る。耳毒性であることがわかっている薬物としては、アミノグリコシド系抗生物質（例えば、ゲンタマイシン、ネオマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、カナマイシン、バンコマイシン、及びアミカシン）、バイオマイシン、抗腫瘍薬（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、及びオキサリプラチン等の白金含有化学療法剤）、ループ利尿薬（例えば、エタクリン酸及びフロセミド）、サリチル酸塩（例えば、アスピリン、特に高用量時）、及びキニーネが挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物を使用して、両側前庭障害（両側前庭機能低下）または動揺視を治療することができる。両側前庭障害（両側前庭機能低下）及び動揺視は、アミノグリコシドによって誘発される可能性がある（例えば、本明細書に記載の方法及び組成物を使用して、アミノグリコシド誘発性の両側前庭障害（両側前庭機能低下）もしくは動揺視を有するかまたはそれらを発症するリスクのある対象における有毛細胞の再生を促進するかまたは増加させることができる）。
【0230】
本明細書に記載のような対象の治療のための、ＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）に機能的に連結されている、所望の発現産物をコードするポリヌクレオチドは、健常有毛細胞で発現されるタンパク質（例えば、有毛細胞の発生、有毛細胞の機能、有毛細胞の運命決定、有毛細胞の再生、有毛細胞の生存、もしくは有毛細胞の維持において役割を果たすタンパク質、または感音性難聴もしくは前庭機能障害の対象において欠損しているタンパク質）をコードする導入遺伝子、別の目的タンパク質（例えば、蛍光タンパク質、ｌａｃＺ、もしくはルシフェラーゼ等のレポータータンパク質）をコードする導入遺伝子、あるいは転写されて、ｓｈＲＮＡ、ＡＳＯ、遺伝子編集系の成分（例えば、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、もしくはジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）等のヌクレアーゼ、またはガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ））、またはマイクロＲＮＡを生成することができるポリヌクレオチドであり得る。導入遺伝子は、対象の難聴もしくは前庭機能障害の原因（例えば、対象の難聴もしくは前庭機能障害が特定の遺伝子変異と関連する場合、導入遺伝子は、対象において変異している遺伝子の野生型形態であり得、また対象が、有毛細胞の消失と関連する難聴及び／または前庭機能障害を有する場合、導入遺伝子は、有毛細胞の再生を促進するタンパク質をコードすることができる）、対象の難聴もしくは前庭機能障害の重症度、対象の有毛細胞の健康状態、対象の年齢、難聴もしくは前庭機能障害についての対象の家族歴、あるいは他の要因に基づいて選択され得る。本明細書に記載のような対象の治療のためのＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結された導入遺伝子によって発現され得るタンパク質としては、ＡＣＴＧ１、ＦＳＣＮ２、ＲＤＸ、ＰＯＵ４Ｆ３、ＴＲＩＯＢＰ、ＴＰＲＮ、ＸＩＲＰ２、ＡＴＯＨ１、ＧＦＩ１、ＣＨＲＮＡ９、ＣＨＲＮＡ１０、ＣＩＢ３、ＣＤＨ２３、ＰＣＤＨ１５、ＫＮＣＮ、ＤＦＮＢ５９、ＭＫＲＮ２ＯＳ、ＬＨＸ３、ＴＭＣ１、ＭＹＯ１５、ＭＹＯ７Ａ、ＭＹＯ６、ＭＹＯ３Ａ、ＭＹＯ３Ｂ、ＧＲＸＣＲ１、ＰＴＰＲＱ、ＬＣＥ６Ａ、ＬＯＸＨＤ１、ＡＲＴ１、ＡＴＰ２Ｂ２、ＣＩＢ２、ＣＡＣＮＡ２Ｄ４、ＥＰＳ８、ＥＰＳ８Ｌ２、ＥＳＰＮ、ＥＳＰＮＬ、ＰＲＰＨ２、ＳＬＣ８Ａ２、ＺＣＣＨＣ１２、ＬＲＴＯＭＴ２、ＬＲＴＯＭＴ１、ＵＳＨ１Ｃ、ＳＬＣ２６Ａ５、ＰＩＥＺＯ２、ＥＬＦＮ１、ＴＴＣ２４、ＤＹＴＮ、ＣＣＥＲ２、ＬＲＴＭ２、ＫＣＮＡ１０、ＣＬＲＮ１、ＣＬＲＮ２、ＳＫＯＲ１、ＴＣＴＥＸ１Ｄ１、ＦＣＲＬＢ、ＧＲＸＣＲ２、ＳＥＲＰＩＮＥ３、ＮＨＬＨ１、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＡＴＦ６、ＰＥＲＫ、ＩＲＥ１、ＷＨＲＮ、ＯＣＭ、ＩＳＬ１、ＴＭＴＣ４、ＢＩＰ、及びＫＣＮＱ４が挙げられる。ステレオシリンのＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドを、本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結させることもできる（例えば、２ベクター系内の第１のベクターの場合）。いくつかの実施形態では、Ｃ－インテインとステレオシリンのＣ末端部分とを含有する融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを、本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結させることができる（例えば、インテイン発現系の第２のベクターの場合）。
【0231】
治療には、本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーターを含有する核酸ベクター（例えば、ＡＡＶベクター）を含有する組成物の様々な単位用量での投与が含まれ得る。各単位用量は通常は、所定量の治療用組成物を含有する。投与される量、ならびに特定の投与経路及び製剤は、臨床分野の当業者の技能の範囲内である。単位用量を単回注射で投与する必要はないが、設定された期間にわたる持続注入を含み得る。投与は、内耳（例えば、蝸牛及び／または前庭系）への損傷を最小限に抑えるために、注入速度を制御するためのシリンジポンプを使用して実施され得る。核酸ベクターが、ＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、ｒｈ７４、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／８、ＤＪ／９、７ｍ８、ＰＨＰ．Ｂ、ＰＨＰ．ｅｂ、またはＰＨＰ．Ｓのベクター）である場合には、ウイルスベクターは、例えば、１μＬ～２００μＬ（例えば、１μＬ、２μＬ、３μＬ、５μＬ、６μＬ、７μＬ、８μＬ、９μＬ、１０μＬ、１５μＬ、２０μＬ、２５μＬ、３０μＬ、３５μＬ、４０μＬ、４５μＬ、５０μＬ、５５μＬ、６０μＬ、６５μＬ、７０μＬ、７５μＬ、８０μＬ、８５μＬ、９０μＬ、９５μＬ、１００μＬ、１１０μＬ、１２０μＬ、１３０μＬ、１４０μＬ、１５０μＬ、１６０μＬ、１７０μＬ、１８０μＬ、１９０μＬ、または２００μＬ）の体積中に約１×１０９ベクターゲノム（ＶＧ）／ｍＬ～約１×１０１６ＶＧ／ｍＬ（例えば、１×１０９ＶＧ／ｍＬ、２×１０９ＶＧ／ｍＬ、３×１０９ＶＧ／ｍＬ、４×１０９ＶＧ／ｍＬ、５×１０９ＶＧ／ｍＬ、６×１０９ＶＧ／ｍＬ、７×１０９ＶＧ／ｍＬ、８×１０９ＶＧ／ｍＬ、９×１０９ＶＧ／ｍＬ、１×１０１０ＶＧ／ｍＬ、２×１０１０ＶＧ／ｍＬ、３×１０１０ＶＧ／ｍＬ、４×１０１０ＶＧ／ｍＬ、５×１０１０ＶＧ／ｍＬ、６×１０１０ＶＧ／ｍＬ、７×１０１０ＶＧ／ｍＬ、８×１０１０ＶＧ／ｍＬ、９×１０１０ＶＧ／ｍＬ、１×１０１１ＶＧ／ｍＬ、２×１０１１ＶＧ／ｍＬ、３×１０１１ＶＧ／ｍＬ、４×１０１１ＶＧ／ｍＬ、５×１０１１ＶＧ／ｍＬ、６×１０１１ＶＧ／ｍＬ、７×１０１１ＶＧ／ｍＬ、８×１０１１ＶＧ／ｍＬ、９×１０１１ＶＧ／ｍＬ、１×１０１２ＶＧ／ｍＬ、２×１０１２ＶＧ／ｍＬ、３×１０１２ＶＧ／ｍＬ、４×１０１２ＶＧ／ｍＬ、５×１０１２ＶＧ／ｍＬ、６×１０１２ＶＧ／ｍＬ、７×１０１２ＶＧ／ｍＬ、８×１０１２ＶＧ／ｍＬ、９×１０１２ＶＧ／ｍＬ、１×１０１３ＶＧ／ｍＬ、２×１０１３ＶＧ／ｍＬ、３×１０１３ＶＧ／ｍＬ、４×１０１３ＶＧ／ｍＬ、５×１０１３ＶＧ／ｍＬ、６×１０１３ＶＧ／ｍＬ、７×１０１３ＶＧ／ｍＬ、８×１０１３ＶＧ／ｍＬ、９×１０１３ＶＧ／ｍＬ、１×１０１４ＶＧ／ｍＬ、２×１０１４ＶＧ／ｍＬ、３×１０１４ＶＧ／ｍＬ、４×１０１４ＶＧ／ｍＬ、５×１０１４ＶＧ／ｍＬ、６×１０１４ＶＧ／ｍＬ、７×１０１４ＶＧ／ｍＬ、８×１０１４ＶＧ／ｍＬ、９×１０１４ＶＧ／ｍＬ、１×１０１５ＶＧ／ｍＬ、２×１０１５ＶＧ／ｍＬ、３×１０１５ＶＧ／ｍＬ、４×１０１５ＶＧ／ｍＬ、５×１０１５ＶＧ／ｍＬ、６×１０１５ＶＧ／ｍＬ、７×１０１５ＶＧ／ｍＬ、８×１０１５ＶＧ／ｍＬ、９×１０１５ＶＧ／ｍＬ、または１×１０１６ＶＧ／ｍＬ）の用量で患者に投与され得る。ＡＡＶベクターは、約１×１０７ＶＧ／耳～約２×１０１５ＶＧ／耳（例えば、１×１０７ＶＧ／耳、２×１０７ＶＧ／耳、３×１０７ＶＧ／耳、４×１０７ＶＧ／耳、５×１０７ＶＧ／耳、６×１０７ＶＧ／耳、７×１０７ＶＧ／耳、８×１０７ＶＧ／耳、９×１０７ＶＧ／耳、１×１０８ＶＧ／耳、２×１０８ＶＧ／耳、３×１０８ＶＧ／耳、４×１０８ＶＧ／耳、５×１０８ＶＧ／耳、６×１０８ＶＧ／耳、７×１０８ＶＧ／耳、８×１０８ＶＧ／耳、９×１０８ＶＧ／耳、１×１０９ＶＧ／耳、２×１０９ＶＧ／耳、３×１０９ＶＧ／耳、４×１０９ＶＧ／耳、５×１０９ＶＧ／耳、６×１０９ＶＧ／耳、７×１０９ＶＧ／耳、８×１０９ＶＧ／耳、９×１０９ＶＧ／耳、１×１０１０ＶＧ／耳、２×１０１０ＶＧ／耳、３×１０１０ＶＧ／耳、４×１０１０ＶＧ／耳、５×１０１０ＶＧ／耳、６×１０１０ＶＧ／耳、７×１０１０ＶＧ／耳、８×１０１０ＶＧ／耳、９×１０１０ＶＧ／耳、１×１０１１ＶＧ／耳、２×１０１１ＶＧ／耳、３×１０１１ＶＧ／耳、４×１０１１ＶＧ／耳、５×１０１１ＶＧ／耳、６×１０１１ＶＧ／耳、７×１０１１ＶＧ／耳、８×１０１１ＶＧ／耳、９×１０１１ＶＧ／耳、１×１０１２ＶＧ／耳、２×１０１２ＶＧ／耳、３×１０１２ＶＧ／耳、４×１０１２ＶＧ／耳、５×１０１２ＶＧ／耳、６×１０１２ＶＧ／耳、７×１０１２ＶＧ／耳、８×１０１２ＶＧ／耳、９×１０１２ＶＧ／耳、１×１０１３ＶＧ／耳、２×１０１３ＶＧ／耳、３×１０１３ＶＧ／耳、４×１０１３ＶＧ／耳、５×１０１３ＶＧ／耳、６×１０１３ＶＧ／耳、７×１０１３ＶＧ／耳、８×１０１３ＶＧ／耳、９×１０１３ＶＧ／耳、１×１０１４ＶＧ／耳、２×１０１４ＶＧ／耳、３×１０１４ＶＧ／耳、４×１０１４ＶＧ／耳、５×１０１４ＶＧ／耳、６×１０１４ＶＧ／耳、７×１０１４ＶＧ／耳、８×１０１４ＶＧ／耳、９×１０１４ＶＧ／耳、１×１０１５ＶＧ／耳、または２×１０１５ＶＧ／耳）の用量で対象に投与され得る。
【0232】
本明細書に記載の組成物は、聴力を改善する、前庭機能を改善する（例えば、平衡感覚を改善する、または浮動性めまいもしくは回転性めまいを軽減する）、耳鳴を軽減する、両側前庭障害を治療する、動揺視を治療する、平衡障害を治療する、ＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結された導入遺伝子によってコードされるタンパク質の有毛細胞における発現を増加させるかもしくは誘導する、ＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結された導入遺伝子によってコードされるタンパク質の有毛細胞における機能を増大させる、有毛細胞の損傷（例えば、音響性外傷、頭部外傷、耳毒性薬物、疾患もしくは感染症、または加齢に関連した有毛細胞の損傷）を阻止するかもしくは減少させる、有毛細胞死（例えば、耳毒性薬物誘発性の有毛細胞死、騒音に関連した有毛細胞死、加齢に関連した有毛細胞死、疾患もしくは感染症に関連した有毛細胞死、または頭部外傷に関連した有毛細胞死）を阻止するかもしくは減少させる、有毛細胞の発生を促進するかもしくは増加させる、有毛細胞数を増加させる、有毛細胞の再生（例えば、蝸牛及び／または前庭の有毛細胞の再生）を誘導するかもしくは増加させる、有毛細胞の生存を促進するかもしくは増加させる、有毛細胞の成熟を促進するかもしくは増加させる、蓋膜への毛束の接着（例えば、ＯＨＣの毛束の接着）を改善する、有毛細胞の構造を改善する、あるいは有毛細胞機能を改善するのに、十分な量で投与される。聴力は、標準的な聴力検査（例えば、聴力検査、ＡＢＲ、蝸電図（ＥＣＯＧ）、及び耳音響放射）を使用して評価することができ、治療前に取得された聴力測定値と比較して５％またはそれ以上（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、２００％またはそれ以上）改善され得る。前庭機能は、平衡感覚及び回転性めまいについての標準検査（例えば、眼球運動検査（例えば、ＥＮＧもしくはＶＮＧ）、重心動揺検査、ＶＯＲ試験（例えば、ヘッドインパルス検査（Ｈａｌｍａｇｙｉ－Ｃｕｒｔｈｏｙｓ検査、例えば、ＶＨＩＴ）、または温度反射検査（ｃａｌｏｒｉｃ ｒｅｆｌｅｘ ｔｅｓｔｉｎｇ）、回転椅子による検査（ｒｏｔａｒｙ－ｃｈａｉｒ ｔｅｓｔｉｎｇ）、ＥＣＯＧ、ＶＥＭＰ、及び専門外来での平衡感覚検査）を使用して評価され得、治療前に取得された測定値と比較して５％またはそれ以上（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、２００％またはそれ以上）改善され得る。いくつかの実施形態では、組成物は、対象が語音を理解する能力を改善するのに十分な量で投与される。本明細書に記載の組成物はまた、（例えば、難聴または前庭機能障害と関連する遺伝子変異を有する対象であって、難聴もしくは前庭機能障害（例えば、遺伝性難聴もしくは前庭機能障害）の家族歴を有する対象、または難聴もしくは前庭機能障害と関連する危険因子（例えば、耳毒性薬物、頭部外傷、疾患もしくは感染症、または音響性外傷）に曝露されたことがあるが、聴覚障害もしくは前庭機能障害（例えば、回転性めまい、浮動性めまい、もしくは平衡失調）を示していない対象において、あるいは軽度から中等度の難聴もしくは前庭機能障害を示す対象において）感音性難聴及び／または前庭機能障害の発生もしくは進行を、減速させるかもしくは阻止するのに十分な量で投与され得る。対象に投与される核酸ベクターにおいてＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結された導入遺伝子によってコードされるタンパク質の発現は、免疫組織化学染色、ウエスタンブロット分析、定量的リアルタイムＰＣＲ、または検出用タンパク質もしくはｍＲＮＡについて当該技術分野で公知の他の方法を使用して評価され得、本明細書に記載の組成物の投与前の発現と比較して５％またはそれ以上（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、２００％またはそれ以上）増加し得る。有毛細胞数、有毛細胞の機能、有毛細胞の再生、または対象に投与される核酸ベクターにおいてＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結された導入遺伝子によってコードされるタンパク質の機能は、聴力検査または前庭機能の検査に基づいて間接的に評価され得、本明細書に記載の組成物の投与前の有毛細胞数、有毛細胞の機能、有毛細胞の再生、またはタンパク質の機能と比較して５％またはそれ以上（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、２００％またはそれ以上）増加し得る。有毛細胞の損傷または細胞死は、未治療対象において典型的に観察される有毛細胞の損傷及び細胞死と比較して５％またはそれ以上（例えば、５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２５％、１５０％、２００％またはそれ以上）減少し得る。これらの効果は、本明細書に記載の組成物の投与後、例えば、１週間以内、２週間以内、３週間以内、４週間以内、５週間以内、６週間以内、７週間以内、８週間以内、９週間以内、１０週間以内、１５週間以内、２０週間以内、２５週間以内、またはそれ以上の期間内に生じ得る。患者は、治療に使用した用量及び投与経路に応じて、組成物の投与から１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、またはそれ以上の期間後に評価され得る。評価の結果に応じて、患者は追加の治療を受ける場合がある。
【0233】
キット
本明細書に記載の組成物は、感音性難聴及び／または前庭機能障害の治療に使用するためのキットにして提供可能である。組成物には、本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）、そのようなポリヌクレオチドを含有する核酸ベクター、所望の発現産物をコードするポリヌクレオチド（例えば、目的タンパク質、例えば、難聴及び／または前庭機能障害を治療するための有毛細胞で発現可能なタンパク質をコードする導入遺伝子）に機能的に連結された本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーターを含有する核酸ベクター、ならびに本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーターが含まれる核酸ベクター系（例えば、本明細書に記載の２ベクター系）が含まれ得る。核酸ベクターは、ＡＡＶウイルスカプシド（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／９、７ｍ８、またはＰＨＰ．Ｂ）にパッケージングされ得る。キットにはさらに、医師等のキットの使用者に本明細書に記載の方法の実施を指示する添付文書を含めることができる。キットには任意選択で、組成物を投与するためのシリンジまたは他のデバイスが含まれる。
本明細書に記載の組成物は、感音性難聴及び／または前庭機能障害の治療に使用するためのキットにして提供可能である。組成物には、本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）、そのようなポリヌクレオチドを含有する核酸ベクター、所望の発現産物をコードするポリヌクレオチド（例えば、目的タンパク質、例えば、難聴及び／または前庭機能障害を治療するための有毛細胞で発現可能なタンパク質をコードする導入遺伝子）に機能的に連結された本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーターを含有する核酸ベクター、ならびに本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーターが含まれる核酸ベクター系（例えば、本明細書に記載の２ベクター系）が含まれ得る。核酸ベクターは、ＡＡＶウイルスカプシド（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／９、７ｍ８、またはＰＨＰ．Ｂ）にパッケージングされ得る。キットにはさらに、医師等のキットの使用者に本明細書に記載の方法の実施を指示する添付文書を含めることができる。キットには任意選択で、組成物を投与するためのシリンジまたは他のデバイスが含まれる。
【実施例】
【0234】
以下の実施例は、本明細書に記載の組成物及び方法をどのように使用、作製、及び評価することができるかについての説明を当業者に提供するために提示されており、本発明の単なる例示であることを意図し、発明者らが自身の発明であると見なすものの範囲を限定することは意図していない。
【0235】
実施例１．ＳＴＲＣプロモーターで誘導されたＧＦＰ発現は、マウスにおいてコルチ器の外有毛細胞に豊富であり、卵形嚢の有毛細胞に限定されている
インビボにおける本明細書に開示のＳＴＲＣプロモーターの特異性を試験するため、いくつかの本開示のＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結されたｅＧＦＰが含まれるＡＡＶベクターを野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに注射した。ＡＡＶベクター調製のための周知の方法を使用して、配列番号１のＳＴＲＣプロモーターの制御下でｅＧＦＰを発現するＡＡＶベクターを導入遺伝子プラスミドＰ１２０８（図１）から調製した。ＡＡＶベクター調製のための周知の方法を使用して、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０のＳＴＲＣプロモーターの制御下でｅＧＦＰを発現するＡＡＶベクターを導入遺伝子プラスミドＰ１２０９（図２）から調製した。
インビボにおける本明細書に開示のＳＴＲＣプロモーターの特異性を試験するため、いくつかの本開示のＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結されたｅＧＦＰが含まれるＡＡＶベクターを野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに注射した。ＡＡＶベクター調製のための周知の方法を使用して、配列番号１のＳＴＲＣプロモーターの制御下でｅＧＦＰを発現するＡＡＶベクターを導入遺伝子プラスミドＰ１２０８（図１）から調製した。ＡＡＶベクター調製のための周知の方法を使用して、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０のＳＴＲＣプロモーターの制御下でｅＧＦＰを発現するＡＡＶベクターを導入遺伝子プラスミドＰ１２０９（図２）から調製した。
【0236】
生後早期（生後２～３日）のマウスに、後半規管の開窓を介して２つのＡＡＶベクターのうちの１つを１μｌにて注射した（配列番号２のヌクレオチド３５～５３０のＳＴＲＣプロモーターの制御下でｅＧＦＰを発現するＡＡＶベクターでは１．６×１０１０ｖｇ／耳；配列番号１のＳＴＲＣプロモーターの制御下でｅＧＦＰを発現するＡＡＶベクターでは１．１×１０１０ｖｇ／耳）。
【0237】
６週齢の成体マウスに、後半規管の開窓を介して２つのＡＡＶベクターのうちの１つを２μｌにて注射した（配列番号２のヌクレオチド３５～５３０のＳＴＲＣプロモーターの制御下でｅＧＦＰを発現するＡＡＶベクターでは３．２×１０１０ｖｇ／耳；配列番号１のＳＴＲＣプロモーターの制御下でｅＧＦＰを発現するＡＡＶベクターでは２．２×１０１０ｖｇ／耳）。
【0238】
生後４週間の後、新生仔期に注射された動物を屠殺し、心灌流を介して１０％ＮＢＦに固定し、それらの側頭骨を採取してさらに１６時間、１０％ＮＢＦに保持した。成体マウスの場合、注射後２週間で動物を屠殺し、同じ手順を使用して側頭骨を採取した。８％ＥＤＴＡでの２日間の脱灰後、耳を顕微解剖し、卵形嚢及びコルチ器を免疫組織化学染色のために準備した。コルチ器の全載組織標本をＭｙｏｓｉｎ７ａ抗体で対比染色して全有毛細胞を視覚化し（図３、パネルＡ及びＡ’；図４のパネルＡ、Ａ’及びＡ’’；図７、パネルＡ及びＡ’；図８のパネルＡ、Ａ’及びＡ’’）、共焦点顕微鏡下（Ｌｅｉｃａ ＳＰ８、２０×／０．７５ ＮＡ、２ＡＵで２μｍのステップサイズ）でウイルス介在性野生型ＧＦＰ発現（図３、パネルＢ及びＢ’；図４のパネルＢ、Ｂ’及びＢ’’；図７、パネルＢ及びＢ’；図８のパネルＢ、Ｂ’及びＢ’’）と共に画像化した。
【0239】
新生仔の卵形嚢の全載標本をＰｏｕ４ｆ３抗体で対比染色して全有毛細胞核を標識し（図５、パネルＡ、Ａ’及びＡ’’）、Ｓｏｘ２抗体を使用して全支持細胞及びＩＩ型有毛細胞核を標識し（図５、パネルＣ、Ｃ’及びＣ’’）、共焦点顕微鏡下（Ｌｅｉｃａ ＳＰ８ ２０×／０．７５ ＮＡ、２ＡＵで１．５μｍのステップサイズ）でウイルス介在性野生型ＧＦＰ発現（図５、パネル、Ｂ、Ｂ’及びＢ’’）と共に画像化した。ＳＴＲＣプロモーターで誘導されたＧＦＰ発現がコルチ器の外有毛細胞で著しく豊富であり、卵形嚢の有毛細胞に限定されていた。コルチ器の一部の内有毛細胞でもわずかなＧＦＰ発現が検出された。
【0240】
マウスにおけるステレオシリン野生型発現を視覚化するため、成体ＣＢＡ／ＣａＪマウスを屠殺し、心灌流を介して１０％ＮＢＦに固定し、それらの側頭骨を採取してさらに１６時間、１０％ＮＢＦに保持した。８％ＥＤＴＡでの２日間の脱灰後、コルチ器を顕微解剖してステレオシリンに対する抗体で染色し、不動毛の線維状アクチンを標識するファロイジンで対比染色した。共焦点顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ８００、６３ｘ／１．４ ＮＡ、１ＡＵで０．３８μｍのステップサイズ）を使用して画像を取得した（図６）。
【0241】
実施例２．ＳＴＲＣプロモーターで誘導されたＧＦＰ発現は、コルチ器の外有毛細胞に豊富であり、非ヒト霊長類の有毛細胞に限定されている
インビボにおける本明細書に開示のＳＴＲＣプロモーターの特異性を試験するため、いくつかの本開示のＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結された核指向性Ｈ２Ｂ－ｅＧＦＰが含まれるＡＡＶベクターを非ヒト霊長類（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）の耳に注射した。ＡＡＶベクター調製のための周知の方法を使用して、配列番号１のＳＴＲＣプロモーターの制御下で核のＨ２Ｂ－ｅＧＦＰを発現するＡＡＶベクターを導入遺伝子プラスミドＰ１０１６（図１１）から調製した。成体の非ヒト霊長類に４０μｌのベクターを注射した（配列番号１のＳＴＲＣプロモーターの制御下でＨ２Ｂ－ｅＧＦＰを発現するＡＡＶベクターでは３．４１×１０１３ｖｇ／ｍｌを正円窓膜を介して行い、外側半規管の開窓により、手技中の外リンパの流出を可能にした）。
インビボにおける本明細書に開示のＳＴＲＣプロモーターの特異性を試験するため、いくつかの本開示のＳＴＲＣプロモーターに機能的に連結された核指向性Ｈ２Ｂ－ｅＧＦＰが含まれるＡＡＶベクターを非ヒト霊長類（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）の耳に注射した。ＡＡＶベクター調製のための周知の方法を使用して、配列番号１のＳＴＲＣプロモーターの制御下で核のＨ２Ｂ－ｅＧＦＰを発現するＡＡＶベクターを導入遺伝子プラスミドＰ１０１６（図１１）から調製した。成体の非ヒト霊長類に４０μｌのベクターを注射した（配列番号１のＳＴＲＣプロモーターの制御下でＨ２Ｂ－ｅＧＦＰを発現するＡＡＶベクターでは３．４１×１０１３ｖｇ／ｍｌを正円窓膜を介して行い、外側半規管の開窓により、手技中の外リンパの流出を可能にした）。
【0242】
生後４週間の後、動物を屠殺し、心灌流を介して１０％ＮＢＦに固定し、それらの側頭骨を採取して追加の４～１０日、１０％ＮＢＦに保持した。１４％ＥＤＴＡでの６週間の脱灰後、耳を顕微解剖して形嚢及びコルチ器を免疫組織化学染色のために準備するか、または耳をギ酸で６日間脱灰し、パラフィン包埋して５μｍ切片の薄片にした。
【0243】
コルチ器の全載組織標本をＰｏｕ４ｆ３抗体で対比染色して全有毛細胞を視覚化し（図９、パネルＡ）、共焦点顕微鏡下（Ｚｅｉｓｓ ＬＳＭ８８０、４０×／ＮＡ ０．９５、２ＡＵで１μｍのステップサイズ）で、ＧＦＰに対する抗体で対比染色したウイルス介在性ＧＦＰ発現と共に画像化した（図９、パネルＢ）。
【0244】
切片をＧＦＰに対する抗体で標識し、アルカリホスファターゼを結合させた二次抗体で染色したところ、二次抗体のアルカリホスファターゼとのファストレッド色素の反応によって赤色染色が発生した。切片をヘマトキシリンで青色に対比染色してすべての核を視覚化し、カラーカメラで２０×の拡大率にて画像化し、グレースケールに変換した（図１０、パネルＡ）。色の付いた抗ＧＦＰ染色の赤色シグナルを視覚化するため、画像処理ソフトウェアＧＩＭＰを使用して、色選択ツールを用いてすべての青（ヘマトキシリン）色をカラー画像から抽出し、それからグレースケールに変換した。赤色シグナルの核Ｈ２Ｂ－ＧＦＰのある核のみが可視状態で残った（図１０、パネルＢ）。
【0245】
実施例３．Ａｎｃ８０－ＣＭＶ－ｍＳｔｒｃ重複二重ベクター系はステレオシリン欠損マウスの聴力を回復させた
ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９技術を使用して、ＳＴＲＣの塩基対２３２位にフレームシフトを形成することによってＣＢＡ／ＣａＪバックグラウンド系統のステレオシリン欠損マウスを作製した。ＣＢＡ／ＣａＪバックグラウンド系統の野生型動物は、外有毛細胞（ＯＨＣ）の不動毛の先端において明確なステレオシリン抗体染色を示したが（図１２Ａ、下パネル）、２３２ｂｐ Ｓｔｒｃ－ＫＯ動物では抗体のシグナルを欠いた（図１２Ｂ、下パネル）。マウスＳＴＲＣを二重Ａｎｃ８０ベクターに封入し、その場合、第１のベクターがＣＭＶプロモーター及びマウスＳＴＲＣ ｃＤＮＡのヌクレオチド１～３２００を担持し、第２のベクターがアミノ酸２２０１～５４３０を担持し、２分された全長ｃＤＮＡの間に１０００ｂｐの重複を生成した。両ベクターを、生後早期の２３２ｂｐ Ｓｔｒｃ－ＫＯマウスの蝸牛に後半規管を介して１Ｅ１０ｖｇ／耳の濃度で送達した後、処置された２３２ｂｐ Ｓｔｒｃ－ＫＯマウスのコルチ器のＯＨＣの先端及び内有毛細胞体内でステレオシリンタンパク質の新規発現を観察することができた（図１２Ｃ、下パネル）。Ａｎｃ８０－ＣＭＶ－ｍＳｔｒｃ（重複）による治療の４週間後に、ＯＨＣの機能の直接的なリードアウトとして歪成分耳音響放射（ＤＰＯＡＥ）を評価し、完全な聴覚上行路の尺度として聴性脳幹反応（ＡＢＲ）を測定した。２３２ｂｐ Ｓｔｒｃ－ＫＯ動物の未処置の対側耳（「未処置耳」）は、ＯＨＣの機能の喪失を示す、ＤＰＯＡＥのほぼ不在及びＡＢＲ閾値の高上昇が示されたが（図１３Ａ及び図１３Ｂ、白丸）、処置された２３２ｂｐ Ｓｔｒｃ－ＫＯ動物（「処置ｈｏｍ」）は、聴力閾値の回復を示した（図１３Ａ及び図１３Ｂ、黒丸）。処置された２３２ｂｐ Ｓｔｒｃ－ＫＯ動物の最良レスポンダー（図１３Ａ及び図１３Ｂ、黒い四角）は、野生型（「ＣＢＡ／ＣａＪ」）（図１３Ａ及び図１３Ｂ、三角形）に近い聴力閾値を示した。ＡＡＶ－Ａｎｃ８０－ＣＭＶ－ｍＳｔｒｃによる処置後にステレオシリンを発現する２３２ｂｐ Ｓｔｒｃ－ＫＯマウスのＯＨＣの割合が高いことが、聴力回復を促進することが見出された（図１３Ｃ）。
ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９技術を使用して、ＳＴＲＣの塩基対２３２位にフレームシフトを形成することによってＣＢＡ／ＣａＪバックグラウンド系統のステレオシリン欠損マウスを作製した。ＣＢＡ／ＣａＪバックグラウンド系統の野生型動物は、外有毛細胞（ＯＨＣ）の不動毛の先端において明確なステレオシリン抗体染色を示したが（図１２Ａ、下パネル）、２３２ｂｐ Ｓｔｒｃ－ＫＯ動物では抗体のシグナルを欠いた（図１２Ｂ、下パネル）。マウスＳＴＲＣを二重Ａｎｃ８０ベクターに封入し、その場合、第１のベクターがＣＭＶプロモーター及びマウスＳＴＲＣ ｃＤＮＡのヌクレオチド１～３２００を担持し、第２のベクターがアミノ酸２２０１～５４３０を担持し、２分された全長ｃＤＮＡの間に１０００ｂｐの重複を生成した。両ベクターを、生後早期の２３２ｂｐ Ｓｔｒｃ－ＫＯマウスの蝸牛に後半規管を介して１Ｅ１０ｖｇ／耳の濃度で送達した後、処置された２３２ｂｐ Ｓｔｒｃ－ＫＯマウスのコルチ器のＯＨＣの先端及び内有毛細胞体内でステレオシリンタンパク質の新規発現を観察することができた（図１２Ｃ、下パネル）。Ａｎｃ８０－ＣＭＶ－ｍＳｔｒｃ（重複）による治療の４週間後に、ＯＨＣの機能の直接的なリードアウトとして歪成分耳音響放射（ＤＰＯＡＥ）を評価し、完全な聴覚上行路の尺度として聴性脳幹反応（ＡＢＲ）を測定した。２３２ｂｐ Ｓｔｒｃ－ＫＯ動物の未処置の対側耳（「未処置耳」）は、ＯＨＣの機能の喪失を示す、ＤＰＯＡＥのほぼ不在及びＡＢＲ閾値の高上昇が示されたが（図１３Ａ及び図１３Ｂ、白丸）、処置された２３２ｂｐ Ｓｔｒｃ－ＫＯ動物（「処置ｈｏｍ」）は、聴力閾値の回復を示した（図１３Ａ及び図１３Ｂ、黒丸）。処置された２３２ｂｐ Ｓｔｒｃ－ＫＯ動物の最良レスポンダー（図１３Ａ及び図１３Ｂ、黒い四角）は、野生型（「ＣＢＡ／ＣａＪ」）（図１３Ａ及び図１３Ｂ、三角形）に近い聴力閾値を示した。ＡＡＶ－Ａｎｃ８０－ＣＭＶ－ｍＳｔｒｃによる処置後にステレオシリンを発現する２３２ｂｐ Ｓｔｒｃ－ＫＯマウスのＯＨＣの割合が高いことが、聴力回復を促進することが見出された（図１３Ｃ）。
【0246】
実施例４．２ベクター分割インテイン系はインビトロで全長ステレオシリンを再構成した
実験的プラスミドを作製するため、ステレオシリンのアミノ酸１～７４６（「Ｎ－Ｓｔｒｃ」）をコードするＤＮＡを、Ｎｐｕ Ｎ－インテイン断片をコードするＤＮＡ（配列番号２６のＮｐｕ Ｎ－インテインをコードする、配列番号４０）と遺伝子操作により融合させ、恒常的に活性なＣＭＶプロモーターを含有するプラスミド内にクローニングして、ＣＭＶ．Ｎ－Ｓｔｒｃ－Ｎ－Ｎｐｕを作製した。ステレオシリンのアミノ酸７４７～１８０９（「Ｃ－Ｓｔｒｃ」）をコードするＤＮＡを、Ｎｐｕ Ｃ－インテイン断片をコードするＤＮＡ（配列番号２７のＮｐｕ Ｃ－インテインをコードする、配列番号４１）の下流に遺伝子操作により融合させ、ＣＭＶプロモーターを含有するプラスミド内にクローニングして、ＣＭＶ．Ｃ－Ｎｐｕ－Ｃ－Ｓｔｒｃを生成した。対照として、全長ステレオシリンコード配列（「ＦＬ－Ｓｔｒｃ」）もＣＭＶプラスミド内にクローニングしてＣＭＶ．ＦＬ－Ｓｔｒｃを作製した。ＣＭＶ．ＧＦＰを陰性対照として使用した。
実験的プラスミドを作製するため、ステレオシリンのアミノ酸１～７４６（「Ｎ－Ｓｔｒｃ」）をコードするＤＮＡを、Ｎｐｕ Ｎ－インテイン断片をコードするＤＮＡ（配列番号２６のＮｐｕ Ｎ－インテインをコードする、配列番号４０）と遺伝子操作により融合させ、恒常的に活性なＣＭＶプロモーターを含有するプラスミド内にクローニングして、ＣＭＶ．Ｎ－Ｓｔｒｃ－Ｎ－Ｎｐｕを作製した。ステレオシリンのアミノ酸７４７～１８０９（「Ｃ－Ｓｔｒｃ」）をコードするＤＮＡを、Ｎｐｕ Ｃ－インテイン断片をコードするＤＮＡ（配列番号２７のＮｐｕ Ｃ－インテインをコードする、配列番号４１）の下流に遺伝子操作により融合させ、ＣＭＶプロモーターを含有するプラスミド内にクローニングして、ＣＭＶ．Ｃ－Ｎｐｕ－Ｃ－Ｓｔｒｃを生成した。対照として、全長ステレオシリンコード配列（「ＦＬ－Ｓｔｒｃ」）もＣＭＶプラスミド内にクローニングしてＣＭＶ．ＦＬ－Ｓｔｒｃを作製した。ＣＭＶ．ＧＦＰを陰性対照として使用した。
【0247】
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００キット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、対照プラスミドまたはＮ－ＳｔｒｃプラスミドとＣ－Ｓｔｒｃプラスミドの組み合わせのいずれかをＨＥＫ２９３Ｔ細胞にトランスフェクトし、標準的細胞培養条件下で３日間インキュベートした。細胞培養物をＰＢＳですすぎ、細胞を溶解させ、タンパク質を抽出した。ＢＣＡアッセイを使用してタンパク質ライセート濃度を測定し、ベータアクチン及びステレオシリンに対する抗体を使用したウエスタンブロッティングに一定質量のタンパク質をロードした。タンパク質バンド強度のデンシトメトリー測定を使用して、試料からの全長ステレオシリンの相対量を決定した。
【0248】
図１４のＡ及びＢに示すように、試験したインテイン設計では全長ステレオシリンバンドが生成された。
実施例５．異なる二重ベクター系を使用したステレオシリンタンパク質発現の評価
ＳＴＲＣ分割部位の異なるＡＡＶ－ＤＪ－ＣＭＶ－ｍＳＴＲＣ二重ハイブリッドベクターを作製した。ヌクレオチド位置の１８００、２２４７、２３１０、２４２１、または２５８８にて５’ベクターと３’ベクターとに分離した（５’ベクターは、マウスＳＴＲＣのヌクレオチド１～１８００、１～２２４７、１～２３１０、１～２４２１、または１～２５８８を含有し、３’ベクターは、マウスＳＴＲＣコード配列の残りのヌクレオチド、例えば、ヌクレオチド１８０１～５４３０、２２４８～５４３０、２３１１～５４３０、２４２２～５４３０、または２５８９～５４３０を含有した）。二重ハイブリッドベクターに用いた組換え誘導領域はＡＰ遺伝子断片であった。５’ベクターと３’ベクターがマウスステレオシリンの１０００の共通ヌクレオチドを含有した重複二重ベクター系（５’ベクターがＮＭ＿０８０４５９のヌクレオチド７９～３２７８（配列番号６のヌクレオチド１～３２００に対応）を担持し、３’ベクターがヌクレオチド２２７９～５５０８（配列番号６のヌクレオチド２２０１～５４３０に対応）を担持した）もまた試験した。
実施例５．異なる二重ベクター系を使用したステレオシリンタンパク質発現の評価
ＳＴＲＣ分割部位の異なるＡＡＶ－ＤＪ－ＣＭＶ－ｍＳＴＲＣ二重ハイブリッドベクターを作製した。ヌクレオチド位置の１８００、２２４７、２３１０、２４２１、または２５８８にて５’ベクターと３’ベクターとに分離した（５’ベクターは、マウスＳＴＲＣのヌクレオチド１～１８００、１～２２４７、１～２３１０、１～２４２１、または１～２５８８を含有し、３’ベクターは、マウスＳＴＲＣコード配列の残りのヌクレオチド、例えば、ヌクレオチド１８０１～５４３０、２２４８～５４３０、２３１１～５４３０、２４２２～５４３０、または２５８９～５４３０を含有した）。二重ハイブリッドベクターに用いた組換え誘導領域はＡＰ遺伝子断片であった。５’ベクターと３’ベクターがマウスステレオシリンの１０００の共通ヌクレオチドを含有した重複二重ベクター系（５’ベクターがＮＭ＿０８０４５９のヌクレオチド７９～３２７８（配列番号６のヌクレオチド１～３２００に対応）を担持し、３’ベクターがヌクレオチド２２７９～５５０８（配列番号６のヌクレオチド２２０１～５４３０に対応）を担持した）もまた試験した。
【0249】
組織培養プレートにＨＥＫ２９３Ｔ細胞を播種した。細胞が接着した後、ＡＡＶを、細胞あたり１ｘ１０＾７ベクターゲノムの感染多重度（ＭＯＩ）で培養物に加えた（５’ベクターと３’ベクターを１：１の比で加えた）。ＧＦＰ対照及び全長ＳＴＲＣ対照を、ＡＡＶで処理する代わりに、導入遺伝子をコードするＤＮＡプラスミドを含有するＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００で処理した。処理した細胞を標準的細胞培養条件下で３日間インキュベートし、その後、細胞を溶解させ、総タンパク質を採取した。各試料について１５μｇのライセートを３～８％トリス酢酸／ＳＤＳゲルにロードし、標準的ウエスタンブロットを実施した。ステレオシリンタンパク質またはアクチンを特異的に検出するため、ブロットしたメンブレンを抗体で処理した。発現量の半定量的指標を得るため、検出されたバンドのデンシトメトリーを実施し、ステレオシリン検出とアクチン検出間の信号強度比を使用してステレオシリンタンパク質の発現量を概算した（図１５）。
【0250】
実施例６．マウス新生仔蝸牛外植片における、ＳＴＲＣプロモーターで誘導されたＧＦＰ発現
新生仔蝸牛有毛細胞における本明細書に開示のＳＴＲＣプロモーターの特異性を試験するため、Ｐ０－Ｐ２マウスから感覚上皮を切除し、マトリゲル処理済み＃０ １０ｍｍカバースリップ付きＭａｔＴｅｋ ３５ｍｍディッシュのディッシュ上に１～２つ播種した。ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１０μｇ／ｍＬのシプロフロキサシンを１５０～２００μＬにて各ディッシュに加えた。３７℃／５％ＣＯ２での１時間のインキュベーション後、本明細書に開示の様々なＳＴＲＣプロモーターの制御下で核指向性ｅＧＦＰ－Ｈ２Ｂ融合体を発現しているＡＡＶベクター（詳細は下表６を参照のこと）を各ディッシュに１×１０１１ｖｇの用量で加えた。その後、外植片を３７℃／５％ＣＯ２で２日間インキュベートした。２日後、ウイルスを含む培地を除去し、ウイルス不含の新鮮培地と交換した。その後、外植片をさらに３日間インキュベートし、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で室温にて２０分間固定した。
新生仔蝸牛有毛細胞における本明細書に開示のＳＴＲＣプロモーターの特異性を試験するため、Ｐ０－Ｐ２マウスから感覚上皮を切除し、マトリゲル処理済み＃０ １０ｍｍカバースリップ付きＭａｔＴｅｋ ３５ｍｍディッシュのディッシュ上に１～２つ播種した。ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１０μｇ／ｍＬのシプロフロキサシンを１５０～２００μＬにて各ディッシュに加えた。３７℃／５％ＣＯ２での１時間のインキュベーション後、本明細書に開示の様々なＳＴＲＣプロモーターの制御下で核指向性ｅＧＦＰ－Ｈ２Ｂ融合体を発現しているＡＡＶベクター（詳細は下表６を参照のこと）を各ディッシュに１×１０１１ｖｇの用量で加えた。その後、外植片を３７℃／５％ＣＯ２で２日間インキュベートした。２日後、ウイルスを含む培地を除去し、ウイルス不含の新鮮培地と交換した。その後、外植片をさらに３日間インキュベートし、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で室温にて２０分間固定した。
【0251】
ＰＦＡとのインキュベーション後、外植片をＰＢＳで３回洗浄し、その後、１０％正常ロバ血清（ＮＤＳ）含有ＰＢＳ中で２０分間インキュベートした。ＮＤＳを除去し、外植片を、Ｍｙｏ７ａ（蝸牛有毛細胞マーカー）に対する一次抗体（ＰＢＳで１：１０００に希釈）と共に４℃で一晩インキュベートした。翌日、外植片をＰＢＳで３回洗浄し、その後、蛍光標識した二次抗体（ＰＢＳで１：１０００に希釈）と共に室温で２～３時間インキュベートした。二次抗体中でインキュベートした後、外植片をＰＢＳで５回洗浄し、Ｆｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ封入剤を使用して顕微鏡スライドに封入した。その後、スライドを、２０×画像にはＺｅｉｓｓ Ｕｐｒｉｇｈｔ Ａｐｏｔｏｍｅ光学顕微鏡を、また４０×画像にはＺｅｉｓｓ ＬＳＭ ８８０共焦点顕微鏡を使用して画像化した。４０×画像の代表例を図１６Ａ及び図１６Ｂに示す。
【0252】
【表6】
【0253】
Ｕｐｒｉｇｈｔ Ａｐｏｔｏｍｅで取得した蝸牛全体の２０×画像を分析するためにＩｍａｒｉｓソフトウェアを使用して、感染後にＧＦＰを発現している細胞の定量化を行った。総有毛細胞数を定量化するため、Ｉｍａｒｉｓソフトウェアのスポット機能を使用してＭｙｏ７ａ＋の細胞を定量化した。その後、これらの細胞をＧＦＰチャネルの強度によりフィルター処理した。Ｍｙｏ７ａ及びＧＦＰを有するスポットのみが選択されるようフィルター閾値を手動で設定した。これにより、各試料中のＧＦＰ＋の有毛細胞の総数が得られた。結果を図１７に示す。
【0254】
内有毛細胞及び外有毛細胞の数を定量化するため、内有毛細胞及び外有毛細胞を表すＭｙｏ７ａ＋のスポットを手動で分離した。その後、これらのスポットをＧＦＰシグナルの強度によりフィルター処理し、ＧＦＰ＋の内有毛細胞及び外有毛細胞を別々に定量化した。結果を図１８に示す。
【0255】
実施例７．感音性難聴の対象に対する、ＳＴＲＣプロモーター含有核酸ベクターを含有する組成物の投与
本明細書に開示の方法によれば、当該技術分野の医師は、難聴（例えば、感音性難聴）の患者、例えば、ヒト患者を、聴力が改善または回復するように治療することができる。この目的に向け、当該技術分野の医師はヒト患者に対し、組成物であって、所望の発現産物（例えば、有毛細胞の発生、再生、細胞の運命決定、維持、機能、もしくは生存において役割を果たすタンパク質をコードする導入遺伝子、または対象において変異している難聴と関連する遺伝子の野生型バージョン）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、例えば、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）を含有するＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、ｒｈ７４、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／８、ＤＪ／９、７ｍ８、ＰＨＰ．Ｂ、ＰＨＰ．ｅＢ、またはＰＨＰ．Ｓのベクター）を含有する、組成物を投与することができる。ＡＡＶベクターを含有する組成物は、感音性難聴を治療するために、例えば、内耳への局所投与（例えば、外リンパ中への注射または正円窓膜を介した注射）によって、患者に投与され得る。
本明細書に開示の方法によれば、当該技術分野の医師は、難聴（例えば、感音性難聴）の患者、例えば、ヒト患者を、聴力が改善または回復するように治療することができる。この目的に向け、当該技術分野の医師はヒト患者に対し、組成物であって、所望の発現産物（例えば、有毛細胞の発生、再生、細胞の運命決定、維持、機能、もしくは生存において役割を果たすタンパク質をコードする導入遺伝子、または対象において変異している難聴と関連する遺伝子の野生型バージョン）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、例えば、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）を含有するＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、ｒｈ７４、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／８、ＤＪ／９、７ｍ８、ＰＨＰ．Ｂ、ＰＨＰ．ｅＢ、またはＰＨＰ．Ｓのベクター）を含有する、組成物を投与することができる。ＡＡＶベクターを含有する組成物は、感音性難聴を治療するために、例えば、内耳への局所投与（例えば、外リンパ中への注射または正円窓膜を介した注射）によって、患者に投与され得る。
【0256】
患者への組成物の投与後、当該技術分野の医師は、治療に反応した、患者の改善を多種多様な方法によってモニタリングすることができる。例えば、医師は、組成物の投与後に、聴力検査、ＡＢＲ、蝸電図（ＥＣＯＧ）、及び耳音響放射等の標準検査を実施することによって、患者の聴力をモニタリングすることができる。患者が、組成物の投与前の聴力検査結果と比較して、組成物の投与後の試験の１つ以上で聴力改善を示すという所見は、患者が治療に対して良好に反応していることを示す。必要に応じて後続用量を決定し、投与することができる。
【0257】
実施例８．前庭機能障害の対象に対する、ＳＴＲＣプロモーターを含有する核酸ベクターを含有する組成物の投与
本明細書に開示の方法によれば、当該技術分野の医師は、前庭機能障害（例えば、両側前庭障害）の患者、例えば、ヒト患者を、前庭機能が改善または回復する（例えば、平衡感覚が改善する、または転倒が減少する）ように治療することができる。この目的に向け、当該技術分野の医師はヒト患者に対し、組成物であって、所望の発現産物（例えば、有毛細胞の発生、再生、細胞の運命決定、維持、機能、もしくは生存において役割を果たすタンパク質をコードする導入遺伝子、または対象において変異している前庭機能障害と関連する遺伝子の野生型バージョン）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、例えば、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）を含有するＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、ｒｈ７４、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／８、ＤＪ／９、７ｍ８、ＰＨＰ．Ｂ、ＰＨＰ．ｅＢ、またはＰＨＰ．Ｓのベクター）を含有する、組成物を投与することができる。ＡＡＶベクターを含有する組成物は、前庭機能障害を治療するために、例えば、内耳への局所投与（例えば、水平半規管等の半規管内への注射）によって、患者に投与され得る。
本明細書に開示の方法によれば、当該技術分野の医師は、前庭機能障害（例えば、両側前庭障害）の患者、例えば、ヒト患者を、前庭機能が改善または回復する（例えば、平衡感覚が改善する、または転倒が減少する）ように治療することができる。この目的に向け、当該技術分野の医師はヒト患者に対し、組成物であって、所望の発現産物（例えば、有毛細胞の発生、再生、細胞の運命決定、維持、機能、もしくは生存において役割を果たすタンパク質をコードする導入遺伝子、または対象において変異している前庭機能障害と関連する遺伝子の野生型バージョン）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された本明細書に記載のＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、例えば、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）を含有するＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、ｒｈ７４、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／８、ＤＪ／９、７ｍ８、ＰＨＰ．Ｂ、ＰＨＰ．ｅＢ、またはＰＨＰ．Ｓのベクター）を含有する、組成物を投与することができる。ＡＡＶベクターを含有する組成物は、前庭機能障害を治療するために、例えば、内耳への局所投与（例えば、水平半規管等の半規管内への注射）によって、患者に投与され得る。
【0258】
患者への組成物の投与後、当該技術分野の医師は、治療に反応した、患者の改善を多種多様な方法によってモニタリングすることができる。例えば、医師は、標準検査、例えば、電気眼振検査、ビデオ式眼振検査、回転検査、ＶＯＲの検査、前庭誘発筋電位検査、またはコンピュータ化された動的重心動揺検査等を実施することによって、患者の前庭機能をモニタリングすることができる。患者が、組成物の投与前に得られた検査結果と比較して、組成物の投与後の試験の１つ以上で前庭機能の改善を示すという所見は、患者が治療に対して良好に反応していることを示す。必要に応じて後続用量を決定し、投与することができる。
【0259】
実施例９．感音性難聴の対象に対する、ステレオシリンコード配列に機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーターを含有する２ベクター系を含有する組成物の投与
本明細書に開示の方法によれば、当該技術分野の医師は、感音性難聴（例えば、ＤＦＮＢ１６等の、ＳＴＲＣの変異と関連する感音性難聴）の患者、例えば、ヒト患者を、聴力が改善または回復するように治療することができる。この目的に向け、当該技術分野の医師はヒト患者に対し、組成物であって、ＳＴＲＣ導入遺伝子に機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、例えば、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）が集合的に含まれる２つのＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／９、７ｍ８、またはＰＨＰ．Ｂのベクター）を利用する系のような２ベクター核酸発現系を含有する、組成物を投与することができる。
本明細書に開示の方法によれば、当該技術分野の医師は、感音性難聴（例えば、ＤＦＮＢ１６等の、ＳＴＲＣの変異と関連する感音性難聴）の患者、例えば、ヒト患者を、聴力が改善または回復するように治療することができる。この目的に向け、当該技術分野の医師はヒト患者に対し、組成物であって、ＳＴＲＣ導入遺伝子に機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、例えば、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）が集合的に含まれる２つのＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／９、７ｍ８、またはＰＨＰ．Ｂのベクター）を利用する系のような２ベクター核酸発現系を含有する、組成物を投与することができる。
【0260】
２ベクター系は、第１のＡＡＶベクターと第２のＡＡＶベクターとを含有する重複二重ベクター系であり得る。重複二重ベクター系には、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、配列番号３または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントのＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーターが含まれる第１のＡＡＶベクター、及びステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドが含まれる第２のＡＡＶベクターが含まれ得、ここで、第１のベクターのステレオシリンコード配列の３’末端は、第２のベクターのステレオシリンコード配列の５’末端と重複している。別の例では、２ベクター系は、第１のＡＡＶベクターと第２のＡＡＶベクターとを含有するトランススプライシング二重ベクター系であり得る。トランススプライシング二重ベクター系には、第１のＡＡＶベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、配列番号３または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントのＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター及びポリヌクレオチドの３’のスプライスドナーシグナル配列が含まれる、第１のＡＡＶベクター、ならびにステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’のスプライスアクセプターシグナル配列が含まれる第２のＡＡＶベクターが含まれ得る。別の例では、２ベクター系は、第１のＡＡＶベクターと第２のＡＡＶベクターとを含有する二重ハイブリッドベクター系であり得る。二重ハイブリッドベクター系には、第１のＡＡＶベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、配列番号３または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントのＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター、ポリヌクレオチドの３’のスプライスドナーシグナル配列、及びスプライスドナーシグナル配列の３’の第１の組換え誘導領域が含まれる、第１のＡＡＶベクター、ならびに第２のＡＡＶベクターであって、第２の組換え誘導領域、組換え誘導領域の３’のスプライスアクセプターシグナル配列、及びスプライスアクセプターシグナル配列の３’のステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドが含まれる、第２のＡＡＶベクター、が含まれ得る。さらに別の例では、２ベクター系は、第１のＡＡＶベクターと第２のＡＡＶベクターとが含まれる、分割インテイントランススプライシング系であり得る。分割インテインのトランススプライシング２ベクター系には、第１のＡＡＶベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、配列番号３または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントのＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター及びかかるポリヌクレオチドに対して３’のＮ末端インテイン（Ｎ－インテイン）をコードするポリヌクレオチドが含まれる、第１のＡＡＶベクター、ならびに第２のＡＡＶベクターであって、Ｃ末端インテイン（Ｃ－インテイン）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター及びかかるポリヌクレオチドに対して３’のステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドが含まれる、第２のＡＡＶベクター、が含まれ得る。前述の２ベクター系には、調節配列、例えば、エンハンサー、ポリ（Ａ）配列、ならびに本明細書に記載のプロモーターの一部ではないＳＴＲＣ非翻訳領域（ＵＴＲ、例えば、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ）等が追加で含まれ得る。
【0261】
ＡＡＶベクターを含有する組成物は、感音性難聴を治療するために、例えば、内耳への局所投与（例えば、外リンパ中への注射または正円窓膜を介した注射）によって、患者に投与され得る。
【0262】
患者への組成物の投与後、当該技術分野の医師は、導入遺伝子によってコードされた治療用タンパク質の発現、及び治療に反応した患者の改善を多種多様な方法によってモニタリングすることができる。例えば、医師は、組成物の投与後に、聴力検査、ＡＢＲ、蝸電図（ＥＣＯＧ）、及び耳音響放射等の標準検査を実施することによって、患者の聴力をモニタリングすることができる。患者が、組成物の投与前の聴力検査結果と比較して、組成物の投与後の試験の１つ以上で聴力改善を示すという所見は、患者が治療に対して良好に反応していることを示す。必要に応じて後続用量を決定し、投与することができる。
【0263】
実施例１０．前庭機能障害の対象に対する、ステレオシリンコード配列に機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーターを含有する２ベクター系を含有する組成物の投与
本明細書に開示の方法によれば、当該技術分野の医師は、前庭機能障害（例えば、ＳＴＲＣの変異と関連する前庭機能障害、例えば、回転性めまい、浮動性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、または平衡障害等）の患者、例えば、ヒト患者を、前庭機能が改善するように治療することができる。この目的に向け、当該技術分野の医師はヒト患者に対し、組成物であって、ＳＴＲＣ導入遺伝子に機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）が集合的に含まれる２つのＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／９、７ｍ８、またはＰＨＰ．Ｂのベクター）を利用する系のような２ベクター核酸発現系を含有する、組成物を投与することができる。
本明細書に開示の方法によれば、当該技術分野の医師は、前庭機能障害（例えば、ＳＴＲＣの変異と関連する前庭機能障害、例えば、回転性めまい、浮動性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、または平衡障害等）の患者、例えば、ヒト患者を、前庭機能が改善するように治療することができる。この目的に向け、当該技術分野の医師はヒト患者に対し、組成物であって、ＳＴＲＣ導入遺伝子に機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号４８、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含有する配列番号２の機能的部分、または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含有する配列番号４８の機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するポリヌクレオチド）が集合的に含まれる２つのＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／９、７ｍ８、またはＰＨＰ．Ｂのベクター）を利用する系のような２ベクター核酸発現系を含有する、組成物を投与することができる。
【0264】
２ベクター系は、第１のＡＡＶベクターと第２のＡＡＶベクターとを含有する重複二重ベクター系であり得る。重複二重ベクター系には、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、配列番号３または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントのＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーターが含まれる第１のＡＡＶベクター、及びステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドが含まれる第２のＡＡＶベクターが含まれ得、ここで、第１のベクターのステレオシリンコード配列の３’末端は、第２のベクターのステレオシリンコード配列の５’末端と重複している。別の例では、２ベクター系は、第１のＡＡＶベクターと第２のＡＡＶベクターとを含有するトランススプライシング二重ベクター系であり得る。トランススプライシング二重ベクター系には、第１のＡＡＶベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、配列番号３または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントのＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター及びポリヌクレオチドの３’のスプライスドナーシグナル配列が含まれる、第１のＡＡＶベクター、ならびにステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドの５’のスプライスアクセプターシグナル配列が含まれる第２のＡＡＶベクター、が含まれ得る。別の例では、２ベクター系は、第１のＡＡＶベクターと第２のＡＡＶベクターとを含有する二重ハイブリッドベクター系であり得る。二重ハイブリッドベクター系には、第１のＡＡＶベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、配列番号３または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントのＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター、ポリヌクレオチドの３’のスプライスドナーシグナル配列、及びスプライスドナーシグナル配列の３’の第１の組換え誘導領域が含まれる、第１のＡＡＶベクター、ならびに第２のＡＡＶベクターであって、第２の組換え誘導領域、組換え誘導領域の３’のスプライスアクセプターシグナル配列、及びスプライスアクセプターシグナル配列の３’のステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドが含まれる、第２のＡＡＶベクター、が含まれ得る。さらに別の例では、２ベクター系は、第１のＡＡＶベクターと第２のＡＡＶベクターとが含まれる、分割インテイントランススプライシング系であり得る。分割インテインのトランススプライシング２ベクター系には、第１のＡＡＶベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分（例えば、配列番号３または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上）の配列同一性を有するそのバリアントのＮ末端部分）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター及びかかるポリヌクレオチドに対して３’のＮ末端インテイン（Ｎ－インテイン）をコードするポリヌクレオチドが含まれる、第１のＡＡＶベクター、ならびに第２のＡＡＶベクターであって、Ｃ末端インテイン（Ｃ－インテイン）をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたＳＴＲＣプロモーター及びかかるポリヌクレオチドに対して３’のステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドが含まれる、第２のＡＡＶベクター、が含まれ得る。前述の２ベクター系には、調節配列、例えば、エンハンサー、ポリ（Ａ）配列、ならびに本明細書に記載のプロモーターの一部ではないＳＴＲＣ非翻訳領域（ＵＴＲ、例えば、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ）等が追加で含まれ得る。
【0265】
ＡＡＶベクターを含有する組成物は、前庭機能障害を治療するために、例えば、内耳への局所投与（例えば、半規管、例えば、水平半規管への注射）によって、患者に投与され得る。
【0266】
患者への組成物の投与後、当該技術分野の医師は、導入遺伝子によってコードされた治療用タンパク質の発現、及び治療に反応した患者の改善を多種多様な方法によってモニタリングすることができる。例えば、医師は、組成物の投与後に、例えば、眼球運動検査（例えば、電気眼振図（ＥＮＧ）またはビデオ式眼振計（ＶＮＧ））等の標準検査、前庭動眼反射（ＶＯＲ）の検査（例えば、ベッドサイドでも、またビデオヘッドインパルス検査（ＶＨＩＴ）を使用しても実施することができるヘッドインパルス検査（Ｈａｌｍａｇｙｉ－Ｃｕｒｔｈｏｙｓ検査）、または温度反射検査（ｃａｌｏｒｉｃ ｒｅｆｌｅｘ ｔｅｓｔ））、重心動揺検査、回転椅子による検査（ｒｏｔａｒｙ－ｃｈａｉｒ ｔｅｓｔｉｎｇ）、ＥＣＯＧ、前庭誘発筋電位検査（ＶＥＭＰ）、及びＭａｎｃｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈｙｓ Ｒｅｈａｂｉｌ Ｍｅｄ ４６：２３９（２０１０）に記載があるもののような専門外来での平衡感覚検査を実施することによって、患者の前庭機能をモニタリングすることができる。患者が、組成物の投与前の前庭機能検査結果と比較して、組成物の投与後の試験の１つ以上で前庭機能の改善を示すという所見は、患者が治療に対して良好に反応していることを示す。必要に応じて後続用量を決定し、投与することができる。
【0267】
本発明の例示的な実施形態を、以下に列挙する段落に記載する。
Ｅ１．ポリヌクレオチドであって、異種発現産物をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された、配列番号４８または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターを含む、前記ポリヌクレオチド。
Ｅ１．ポリヌクレオチドであって、異種発現産物をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された、配列番号４８または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターを含む、前記ポリヌクレオチド。
【0268】
Ｅ２．ポリヌクレオチドであって、異種発現産物をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結された、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）、あるいは（ｉｉ）配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターを含む、前記ポリヌクレオチド。
【0269】
Ｅ３．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号４８に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ１に記載のポリヌクレオチド。
【0270】
Ｅ４．前記ＳＴＲＣプロモーターが配列番号４８の配列を有する、Ｅ１またはＥ３に記載のポリヌクレオチド。
Ｅ５．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１に記載のポリヌクレオチド。
Ｅ５．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１に記載のポリヌクレオチド。
【0271】
Ｅ６．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４を含むかまたはそれからなる、Ｅ１に記載のポリヌクレオチド。
Ｅ７．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１に記載のポリヌクレオチド。
Ｅ７．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１に記載のポリヌクレオチド。
【0272】
Ｅ８．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４を含むかまたはそれからなる、Ｅ１に記載のポリヌクレオチド。
Ｅ９．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１に記載のポリヌクレオチド。
Ｅ９．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１に記載のポリヌクレオチド。
【0273】
Ｅ１０．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ２に記載のポリヌクレオチド。
【0274】
Ｅ１１．前記ＳＴＲＣプロモーターが配列番号１からなる、Ｅ２またはＥ１０に記載のポリヌクレオチド。
Ｅ１２．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ２に記載のポリヌクレオチド。
Ｅ１２．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ２に記載のポリヌクレオチド。
【0275】
Ｅ１３．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７を含むかまたはそれからなる、Ｅ２またはＥ１２に記載のポリヌクレオチド。
Ｅ１４．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７を含むかまたはそれからなる、Ｅ２またはＥ１２に記載のポリヌクレオチド。
Ｅ１４．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７を含むかまたはそれからなる、Ｅ２またはＥ１２に記載のポリヌクレオチド。
【0276】
Ｅ１５．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０を含むかまたはそれからなる、Ｅ２またはＥ１２に記載のポリヌクレオチド。
Ｅ１６．前記ＳＴＲＣプロモーターが配列番号２からなる、Ｅ２またはＥ１２に記載のポリヌクレオチド。
Ｅ１６．前記ＳＴＲＣプロモーターが配列番号２からなる、Ｅ２またはＥ１２に記載のポリヌクレオチド。
【0277】
Ｅ１７．前記異種発現産物が、タンパク質、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、遺伝子編集系の成分（例えば、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、もしくはジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）等のヌクレアーゼ、またはガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ））、またはマイクロＲＮＡである、Ｅ１～Ｅ１６のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド。
【0278】
Ｅ１８．前記タンパク質が、アクチン・ガンマ１（Ａｃｔｉｎ Ｇａｍｍａ １）（ＡＣＴＧ１）、網膜Ｆａｓｃｉｎアクチン束化タンパク質２（Ｆａｓｃｉｎ Ａｃｔｉｎ－Ｂｕｎｄｌｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ ２、Ｒｅｔｉｎａｌ）（ＦＳＣＮ２）、ラディキシン（ＲＤＸ）、ＰＯＵクラス４ホメオボックス３（ＰＯＵ４Ｆ３）、ＴＲＩＯ及びＦ－アクチン結合タンパク質（ＴＲＩＯＢＰ）、Ｔａｐｅｒｉｎ（ＴＰＲＮ）、Ｘｉｎアクチン結合リピート含有２（Ｘｉｎ Ａｃｔｉｎ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｒｅｐｅａｔ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ２）（ＸＩＲＰ２）、アトーナル（Ａｔｏｎａｌ）ＢＨＬＨ転写因子１（ＡＴＯＨ１）、転写抑制因子Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ １（ＧＦＩ１）、コリン作動性ニコチン性受容体アルファ９サブユニット（ＣＨＲＮＡ９）、コリン作動性ニコチン性受容体アルファ１０サブユニット（ＣＨＲＮＡ１０）、カルシウム及びインテグリン結合ファミリーメンバー３（ＣＩＢ３）、カドヘリン２３（ＣＤＨ２３）、プロトカドヘリン１５（ＰＣＤＨ１５）、キノシリン（Ｋｉｎｏｃｉｌｉｎ）（ＫＮＣＮ）、Ｐｅｊｖａｋｉｎ（ＤＦＮＢ５９）、ＭＫＲＮ２ Ｏｐｐｏｓｉｔｅ Ｓｔｒａｎｄ（ＭＫＲＮ２ＯＳ）、ＬＩＭホメオボックスタンパク質３（ＬＨＸ３）、膜貫通チャネル様１（Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃｈａｎｎｅｌ Ｌｉｋｅ １）（ＴＭＣ１）、ミオシン１５（ＭＹＯ１５）、ミオシン７Ａ（ＭＹＯ７Ａ）、ミオシン６（ＭＹＯ６）、ミオシンＩＩＩＡ（ＭＹＯ３Ａ）、ミオシンＩＩＩＢ（ＭＹＯ３Ｂ）、グルタレドキシンドメイン含有システインリッチタンパク質１（Ｇｌｕｔａｒｅｄｏｘｉｎ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｃｙｓｔｅｉｎｅ－Ｒｉｃｈ Ｐｒｏｔｅｉｎ １）（ＧＲＸＣＲ１）、プロテインチロシンホスファターゼ、受容体型Ｑ（ＰＴＰＲＱ）、後期角化膜（Ｌａｔｅ Ｃｏｒｎｉｆｉｅｄ Ｅｎｖｅｌｏｐｅ）６Ａ（ＬＣＥ６Ａ）、リポキシゲナーゼ相同ドメイン含有タンパク質１（Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ Ｈｏｍｏｌｏｇｙ Ｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ １）（ＬＯＸＨＤ１）、ＡＤＰ－リボシルトランスフェラーゼ１（ＡＲＴ１）、ＡＴＰアーゼ細胞膜Ｃａ２＋輸送２（ＡＴＰａｓｅ Ｐｌａｓｍａ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃａ２＋ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ ２）（ＡＴＰ２Ｂ２）、カルシウム及びインテグリン結合ファミリーメンバー２（ＣＩＢ２）、電位依存性カルシウムチャネル補助サブユニットアルファ２デルタ４（ＣＡＣＮＡ２Ｄ４）、上皮成長因子受容体経路基質８（ＥＰＳ８）、ＥＰＳ８様２（ＥＰＳ８Ｌ２）、エスピン（ＥＳＰＮ）、エスピン様（ＥＳＰＮＬ）、ペリフェリン２（ＰＲＰＨ２）、溶質輸送体ファミリー８メンバーＡ２（ＳＬＣ８Ａ２）、ジンクフィンガーＣＣＨＣタイプ含有タンパク質１２（Ｚｉｎｃ Ｆｉｎｇｅｒ ＣＣＨＣ－Ｔｙｐｅ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ １２）（ＺＣＣＨＣ１２）、ロイシンリッチ膜貫通・Ｏ－メチルトランスフェラーゼドメイン含有（Ｌｅｕｃｉｎｅ Ｒｉｃｈ Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｄ Ｏ－ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）（ＬＲＴＯＭＴ２、ＬＲＴＯＭＴ１）、ＵＳＨ１タンパク質ネットワーク成分ハーモニン（ＵＳＨ１Ｃ）、溶質輸送体ファミリー２６メンバー５（ＳＬＣ２６Ａ５）、Ｐｉｅｚｏ型機械感受性イオンチャネル成分２（ＰＩＥＺＯ２）、細胞外ロイシンリッチリピート及びフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン含有１（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｌｅｕｃｉｎｅ Ｒｉｃｈ Ｒｅｐｅａｔ ａｎｄ Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ Ｔｙｐｅ ＩＩＩ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １）（ＥＬＦＮ１）、テトラトリコペプチドリピートタンパク質２４（ＴＴＣ２４）、Ｄｙｓｔｒｏｔｅｌｉｎ（ＤＹＴＮ）、コイルドコイルグルタミン酸リッチタンパク質２（ＣＣＥＲ２）、ロイシンリッチリピート及び膜貫通ドメイン含有タンパク質２（ＬＲＴＭ２）、電位依存性カリウムチャネルサブファミリーＡメンバー１０（ＫＣＮＡ１０）、クラリン１（Ｃｌａｒｉｎ １）（ＣＬＲＮ１）、クラリン２（Ｃｌａｒｉｎ ２）（ＣＬＲＮ２）、ＳＫＩファミリー転写コリプレッサー１（ＳＫＩ Ｆａｍｉｌｙ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｃｏｒｅｐｒｅｓｓｏｒ １）（ＳＫＯＲ１）、Ｔｃｔｅｘ１ドメイン含有タンパク質１（ＴＣＴＥＸ１Ｄ１）、Ｆｃ受容体様Ｂ（ＦＣＲＬＢ）、グルタレドキシンドメイン含有システインリッチタンパク質２（ＧＲＸＣＲ２）、セルピンファミリーＥメンバー３（ＳＥＲＰＩＮＥ３）、Ｎｅｓｃｉｅｎｔヘリックス－ループヘリックス１（Ｎｅｓｃｉｅｎｔ Ｈｅｌｉｘ－ｌｏｏｐ Ｈｅｌｉｘ １）（ＮＨＬＨ１）、熱ショックタンパク質７０（ＨＳＰ７０）、熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）、活性化転写因子６（ＡＴＦ６）、真核生物翻訳開始因子２アルファキナーゼ３（ＰＥＲＫ）、セリン／トレオニンプロテインキナーゼ／エンドリボヌクレアーゼＩＲＥ１（ＩＲＥ１）、ワーリン（Ｗｈｉｒｌｉｎ）（ＷＨＲＮ）、オンコモジュリン（ＯＣＭ）、ＬＩＭホメオボックス１（Ｉｓｌ１）、膜貫通及びテトラトリコペプチドリピート含有４（ＴＭＴＣ４）、結合免疫グロブリンタンパク質（ＢＩＰ）、または電位依存性カリウムチャネルサブファミリーＱメンバー４（ＫＣＮＱ４）である、Ｅ１７に記載のポリヌクレオチド。
【0279】
Ｅ１９．Ｅ１～Ｅ１８のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドを含む、核酸ベクター。
Ｅ２０．配列番号４８または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むその機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターを含む、核酸ベクター。
Ｅ２０．配列番号４８または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むその機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターを含む、核酸ベクター。
【0280】
Ｅ２１．（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）、あるいは（ｉｉ）配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターを含む、核酸ベクター。
【0281】
Ｅ２２．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号４８に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ２０に記載の核酸ベクター。
【0282】
Ｅ２３．前記ＳＴＲＣプロモーターが配列番号４８の配列を有する、Ｅ２０またはＥ２２に記載の核酸ベクター。
Ｅ２４．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ２０に記載の核酸ベクター。
Ｅ２４．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ２０に記載の核酸ベクター。
【0283】
Ｅ２５．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４を含むかまたはそれからなる、Ｅ２０に記載の核酸ベクター。
Ｅ２６．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ２０に記載の核酸ベクター。
Ｅ２６．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ２０に記載の核酸ベクター。
【0284】
Ｅ２７．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４を含むかまたはそれからなる、Ｅ２０に記載の核酸ベクター。
Ｅ２８．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ２０に記載の核酸ベクター。
Ｅ２８．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ２０に記載の核酸ベクター。
【0285】
Ｅ２９．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ２１に記載の核酸ベクター。
【0286】
Ｅ３０．前記ＳＴＲＣプロモーターが配列番号１からなる、Ｅ２１またはＥ２９に記載の核酸ベクター。
Ｅ３１．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ２１に記載の核酸ベクター。
Ｅ３１．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ２１に記載の核酸ベクター。
【0287】
Ｅ３２．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７を含むかまたはそれからなる、Ｅ２１またはＥ３１に記載の核酸ベクター。
Ｅ３３．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７を含むかまたはそれからなる、Ｅ２１またはＥ３１に記載の核酸ベクター。
Ｅ３３．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７を含むかまたはそれからなる、Ｅ２１またはＥ３１に記載の核酸ベクター。
【0288】
Ｅ３４．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０を含むかまたはそれからなる、Ｅ２１またはＥ３１に記載の核酸ベクター。
Ｅ３５．前記ＳＴＲＣプロモーターが配列番号２からなる、Ｅ２０またはＥ３１に記載の核酸ベクター。
Ｅ３５．前記ＳＴＲＣプロモーターが配列番号２からなる、Ｅ２０またはＥ３１に記載の核酸ベクター。
【0289】
Ｅ３６．前記ＳＴＲＣプロモーターが、異種発現産物をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されている、Ｅ２０～Ｅ３５のいずれか１つに記載の核酸ベクター。
Ｅ３７．前記異種発現産物が、タンパク質、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、遺伝子編集系の成分（例えば、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、もしくはジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）等のヌクレアーゼ、またはガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ））、またはマイクロＲＮＡである、Ｅ３６に記載の核酸ベクター。
Ｅ３７．前記異種発現産物が、タンパク質、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、遺伝子編集系の成分（例えば、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質９（Ｃａｓ９）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、もしくはジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）等のヌクレアーゼ、またはガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ））、またはマイクロＲＮＡである、Ｅ３６に記載の核酸ベクター。
【0290】
Ｅ３８．前記タンパク質が、ＡＣＴＧ１、ＦＳＣＮ２、ＲＤＸ、ＰＯＵ４Ｆ３、ＴＲＩＯＢＰ、ＴＰＲＮ、ＸＩＲＰ２、ＡＴＯＨ１、ＧＦＩ１、ＣＨＲＮＡ９、ＣＨＲＮＡ１０、ＣＩＢ３、ＣＤＨ２３、ＰＣＤＨ１５、ＫＮＣＮ、ＤＦＮＢ５９、ＭＫＲＮ２ＯＳ、ＬＨＸ３、ＴＭＣ１、ＭＹＯ１５、ＭＹＯ７Ａ、ＭＹＯ６、ＭＹＯ３Ａ、ＭＹＯ３Ｂ、ＧＲＸＣＲ１、ＰＴＰＲＱ、ＬＣＥ６Ａ、ＬＯＸＨＤ１、ＡＲＴ１、ＡＴＰ２Ｂ２、ＣＩＢ２、ＣＡＣＮＡ２Ｄ４、ＥＰＳ８、ＥＰＳ８Ｌ２、ＥＳＰＮ、ＥＳＰＮＬ、ＰＲＰＨ２、ＳＬＣ８Ａ２、ＺＣＣＨＣ１２、ＬＲＴＯＭＴ２、ＬＲＴＯＭＴ１、ＵＳＨ１Ｃ、ＳＬＣ２６Ａ５、ＰＩＥＺＯ２、ＥＬＦＮ１、ＴＴＣ２４、ＤＹＴＮ、ＣＣＥＲ２、ＬＲＴＭ２、ＫＣＮＡ１０、ＣＬＲＮ１、ＣＬＲＮ２、ＳＫＯＲ１、ＴＣＴＥＸ１Ｄ１、ＦＣＲＬＢ、ＧＲＸＣＲ２、ＳＥＲＰＩＮＥ３、ＮＨＬＨ１、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０、ＡＴＦ６、ＰＥＲＫ、ＩＲＥ１、ＷＨＲＮ、ＯＣＭ、Ｉｓｌ１、ＴＭＴＣ４、ＢＩＰ、またはＫＣＮＱ４である、Ｅ３７に記載の核酸ベクター。
【0291】
Ｅ３９．前記ＳＴＲＣプロモーターが、全長ステレオシリンタンパク質をコードしないでステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されている、Ｅ２０～Ｅ３５のいずれか１つに記載の核酸ベクター。
【0292】
Ｅ４０．前記核酸ベクターが、２ベクター系における第１の核酸ベクターであり、全長ステレオシリンタンパク質をコードしないでステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードするポリヌクレオチドを含む第２の核酸ベクターをさらに含む、Ｅ３９に記載の核酸ベクター。
【0293】
Ｅ４１．前記核酸ベクターが、ウイルスベクター、プラスミド、コスミド、または人工染色体である、Ｅ１９～Ｅ４０のいずれか１つに記載の核酸ベクター。
Ｅ４２．前記核酸ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、及びレンチウイルスからなる群から選択されるウイルスベクターである、Ｅ４１に記載の核酸ベクター。
Ｅ４２．前記核酸ベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、及びレンチウイルスからなる群から選択されるウイルスベクターである、Ｅ４１に記載の核酸ベクター。
【0294】
Ｅ４３．前記ウイルスベクターがＡＡＶベクターである、Ｅ４２に記載の核酸ベクター。
Ｅ４４．前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、ｒｈ７４、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／８、ＤＪ／９、７ｍ８、ＰＨＰ．Ｂ、ＰＨＰ．ｅＢ、またはＰＨＰ．Ｓのカプシドを有する、Ｅ４３に記載の核酸ベクター。
Ｅ４４．前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、ｒｈ７４、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／８、ＤＪ／９、７ｍ８、ＰＨＰ．Ｂ、ＰＨＰ．ｅＢ、またはＰＨＰ．Ｓのカプシドを有する、Ｅ４３に記載の核酸ベクター。
【0295】
Ｅ４５．Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターを含む、組成物。
Ｅ４６．薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤をさらに含む、Ｅ４５に記載の組成物。
Ｅ４６．薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤をさらに含む、Ｅ４５に記載の組成物。
【0296】
Ｅ４７．Ｅ１～Ｅ１８のいずれか１つに記載のポリヌクレオチドまたはＥ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターを含む、細胞。
Ｅ４８．前記細胞が、有毛細胞である、Ｅ４７に記載の細胞。
Ｅ４８．前記細胞が、有毛細胞である、Ｅ４７に記載の細胞。
【0297】
Ｅ４９．前記有毛細胞が、哺乳類の有毛細胞である、Ｅ４８に記載の細胞。
Ｅ５０．前記哺乳類の有毛細胞が、ヒト有毛細胞である、Ｅ４９に記載の細胞。
Ｅ５１．前記有毛細胞が、蝸牛有毛細胞である、Ｅ４８～Ｅ５０のいずれか１つに記載の細胞。
Ｅ５０．前記哺乳類の有毛細胞が、ヒト有毛細胞である、Ｅ４９に記載の細胞。
Ｅ５１．前記有毛細胞が、蝸牛有毛細胞である、Ｅ４８～Ｅ５０のいずれか１つに記載の細胞。
【0298】
Ｅ５２．前記蝸牛有毛細胞が、外有毛細胞である、Ｅ５１に記載の細胞。
Ｅ５３．前記蝸牛有毛細胞が、内有毛細胞である、Ｅ５１に記載の細胞。
Ｅ５４．前記有毛細胞が、前庭有毛細胞である、Ｅ４８～Ｅ５０のいずれか１つに記載の細胞。
Ｅ５３．前記蝸牛有毛細胞が、内有毛細胞である、Ｅ５１に記載の細胞。
Ｅ５４．前記有毛細胞が、前庭有毛細胞である、Ｅ４８～Ｅ５０のいずれか１つに記載の細胞。
【0299】
Ｅ５５．前記前庭有毛細胞が、ＩＩ型前庭有毛細胞である、Ｅ５４に記載の細胞。
Ｅ５６．前記前庭有毛細胞が、Ｉ型前庭有毛細胞である、Ｅ５４に記載の細胞。
Ｅ５７．有毛細胞に異種発現産物を発現させる方法であって、前記有毛細胞を、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物と接触させることを含む、前記方法。
Ｅ５６．前記前庭有毛細胞が、Ｉ型前庭有毛細胞である、Ｅ５４に記載の細胞。
Ｅ５７．有毛細胞に異種発現産物を発現させる方法であって、前記有毛細胞を、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物と接触させることを含む、前記方法。
【0300】
Ｅ５８．前記発現産物が、有毛細胞で特異的に発現される、Ｅ５７に記載の方法。
Ｅ５９．難聴（例えば、感音性難聴、オーディトリー・ニューロパチー、または聴覚消失）を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
Ｅ５９．難聴（例えば、感音性難聴、オーディトリー・ニューロパチー、または聴覚消失）を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0301】
Ｅ６０．耳鳴を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0302】
Ｅ６１．前庭機能障害を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0303】
Ｅ６２．両側前庭障害を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0304】
Ｅ６３．前記両側前庭障害が、耳毒性薬物誘発性の両側前庭障害である、Ｅ６２に記載の方法。
Ｅ６４．動揺視を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
Ｅ６４．動揺視を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0305】
Ｅ６５．前記動揺視が、耳毒性薬物誘発性の動揺視である、Ｅ６４に記載の方法。
Ｅ６６．平衡障害を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
Ｅ６６．平衡障害を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0306】
Ｅ６７．有毛細胞再生の誘導または増加を必要とする対象においてそれを行う方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0307】
Ｅ６８．有毛細胞の維持の増加を必要とする対象においてそれを行う方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0308】
Ｅ６９．有毛細胞の生存の増加を必要とする対象においてそれを行う方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0309】
Ｅ７０．有毛細胞の成熟の誘導または増加を必要とする対象においてそれを行う方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0310】
Ｅ７１．耳毒性薬物誘発性の有毛細胞の損傷または細胞死の阻止または減少を必要とする対象においてそれを行う方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0311】
Ｅ７２．有毛細胞の損傷または細胞死の阻止または減少を必要とする対象においてそれを行う方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクターまたはＥ４５もしくはＥ４６に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0312】
Ｅ７３．前記有毛細胞が、哺乳類の有毛細胞である、Ｅ５７、Ｅ５８、及びＥ６７～Ｅ７２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７４．前記哺乳類の有毛細胞が、ヒト有毛細胞である、Ｅ７３に記載の方法。
Ｅ７４．前記哺乳類の有毛細胞が、ヒト有毛細胞である、Ｅ７３に記載の方法。
【0313】
Ｅ７５．前記有毛細胞が、蝸牛有毛細胞である、Ｅ５７、Ｅ５８、及びＥ６７～Ｅ７４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７６．前記蝸牛有毛細胞が、外有毛細胞である、Ｅ７５に記載の方法。
Ｅ７６．前記蝸牛有毛細胞が、外有毛細胞である、Ｅ７５に記載の方法。
【0314】
Ｅ７７．前記蝸牛有毛細胞が、内有毛細胞である、Ｅ７５に記載の方法。
Ｅ７８．前記有毛細胞が、前庭有毛細胞である、Ｅ５７、Ｅ５８、及びＥ６７～Ｅ７４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ７８．前記有毛細胞が、前庭有毛細胞である、Ｅ５７、Ｅ５８、及びＥ６７～Ｅ７４のいずれか１つに記載の方法。
【0315】
Ｅ７９．前記前庭有毛細胞が、ＩＩ型前庭有毛細胞である、Ｅ７８に記載の方法。
Ｅ８０．前記前庭有毛細胞が、Ｉ型前庭有毛細胞である、Ｅ７８に記載の方法。
Ｅ８１．前記対象が、難聴（例えば、感音性難聴）を有するかまたはそれを発症するリスクがある、Ｅ６７～Ｅ７７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８０．前記前庭有毛細胞が、Ｉ型前庭有毛細胞である、Ｅ７８に記載の方法。
Ｅ８１．前記対象が、難聴（例えば、感音性難聴）を有するかまたはそれを発症するリスクがある、Ｅ６７～Ｅ７７のいずれか１つに記載の方法。
【0316】
Ｅ８２．前記難聴が、遺伝性難聴である、Ｅ５９またはＥ８１に記載の方法。
Ｅ８３．前記遺伝性難聴が、常染色体優性難聴、常染色体劣性難聴、またはＸ連鎖性難聴である、Ｅ８２に記載の方法。
Ｅ８３．前記遺伝性難聴が、常染色体優性難聴、常染色体劣性難聴、またはＸ連鎖性難聴である、Ｅ８２に記載の方法。
【0317】
Ｅ８４．前記難聴が、後天性難聴である、Ｅ５９またはＥ８１に記載の方法。
Ｅ８５．前記後天性難聴が、騒音性難聴、加齢性難聴、疾患もしくは感染症関連難聴、頭部外傷関連難聴、または耳毒性薬物誘発性難聴である、Ｅ８４に記載の方法。
Ｅ８５．前記後天性難聴が、騒音性難聴、加齢性難聴、疾患もしくは感染症関連難聴、頭部外傷関連難聴、または耳毒性薬物誘発性難聴である、Ｅ８４に記載の方法。
【0318】
Ｅ８６．前記対象が、前庭機能障害を有するかまたはそれを発症するリスクがある、Ｅ６７～Ｅ７２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ８７．前記前庭機能障害が、回転性めまい、浮動性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、または平衡障害を含む、Ｅ６１またはＥ８６に記載の方法。
Ｅ８７．前記前庭機能障害が、回転性めまい、浮動性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、または平衡障害を含む、Ｅ６１またはＥ８６に記載の方法。
【0319】
Ｅ８８．前記前庭機能障害が、加齢性前庭機能障害、頭部外傷関連前庭機能障害、疾患もしくは感染症関連前庭機能障害、または耳毒性薬物誘発性前庭機能障害である、Ｅ６１、Ｅ８６、及びＥ８７のいずれか１つに記載の方法。
【0320】
Ｅ８９．前記前庭機能障害が遺伝子変異と関連する、Ｅ６１及びＥ８６～Ｅ８８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９０．前記前庭機能障害が、特発性前庭機能障害である、Ｅ６１、Ｅ８６、及びＥ８７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９０．前記前庭機能障害が、特発性前庭機能障害である、Ｅ６１、Ｅ８６、及びＥ８７のいずれか１つに記載の方法。
【0321】
Ｅ９１．前記耳毒性薬物が、アミノグリコシド、抗腫瘍薬、エタクリン酸、フロセミド、サリチル酸塩、またはキニーネである、Ｅ６３、Ｅ６５、Ｅ７１、Ｅ８５、及びＥ８８のいずれか１つに記載の方法。
【0322】
Ｅ９２．前記方法が、前記核酸ベクターまたは前記組成物の投与前に、前記対象の聴力を評価することをさらに含む、Ｅ５９、Ｅ６０、Ｅ６７～Ｅ７７、及びＥ８１～Ｅ８５のいずれか１つに記載の方法。
【0323】
Ｅ９３．前記方法が、前記核酸ベクターまたは前記組成物の投与後に、前記対象の聴力を評価することをさらに含む、Ｅ５９、Ｅ６０、Ｅ６７～Ｅ７７、Ｅ８１～Ｅ８５、及びＥ９２のいずれか１つに記載の方法。
【0324】
Ｅ９４．前記方法が、前記核酸ベクターまたは前記組成物の投与前に、前記対象の前記前庭機能を評価することをさらに含む、Ｅ６１～Ｅ７４、Ｅ７８～Ｅ８０、及びＥ８６～Ｅ９３のいずれか１つに記載の方法。
【0325】
Ｅ９５．前記方法が、前記核酸ベクターまたは前記組成物の投与後に、前記対象の前記前庭機能を評価することをさらに含む、Ｅ６１～Ｅ７４、Ｅ７８～Ｅ８０、及びＥ８６～Ｅ９４のいずれか１つに記載の方法。
【0326】
Ｅ９６．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、局所投与される、Ｅ５９～Ｅ９５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９７．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、内耳に投与される、Ｅ９６に記載の方法。
Ｅ９７．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、内耳に投与される、Ｅ９６に記載の方法。
【0327】
Ｅ９８．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、中耳に投与される、Ｅ９６に記載の方法。
Ｅ９９．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、半規管に投与される、Ｅ９６に記載の方法。
Ｅ９９．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、半規管に投与される、Ｅ９６に記載の方法。
【0328】
Ｅ１００．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、経鼓室投与または鼓室内投与される、Ｅ９６に記載の方法。
Ｅ１０１．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、外リンパ中に投与される、Ｅ９６に記載の方法。
Ｅ１０１．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、外リンパ中に投与される、Ｅ９６に記載の方法。
【0329】
Ｅ１０２．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、内リンパ中に投与される、Ｅ９６に記載の方法。
Ｅ１０３．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、卵円窓に対して、またはそれを介して投与される、Ｅ９６に記載の方法。
Ｅ１０３．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、卵円窓に対して、またはそれを介して投与される、Ｅ９６に記載の方法。
【0330】
Ｅ１０４．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、正円窓に対して、またはそれを介して投与される、Ｅ９６に記載の方法。
Ｅ１０５．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、前庭機能障害を予防するかもしくは減少させる、前庭機能障害の発症を遅延させる、前庭機能障害の進行を減速させる、前庭機能を改善する、難聴を予防もしくは軽減する、耳鳴を予防もしくは軽減する、難聴の発症を遅延させる、難聴の進行を減速させる、聴力を改善する、有毛細胞数を増加させる、有毛細胞の成熟を増加させる、有毛細胞の再生を増加させる、有毛細胞機能を改善する、有毛細胞の損傷を阻止するかもしくは減少させる、有毛細胞死を阻止するかもしくは減少させる、または有毛細胞の生存を促進するかもしくは増加させるのに、十分な量で投与される、Ｅ５９～Ｅ１０４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０５．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、前庭機能障害を予防するかもしくは減少させる、前庭機能障害の発症を遅延させる、前庭機能障害の進行を減速させる、前庭機能を改善する、難聴を予防もしくは軽減する、耳鳴を予防もしくは軽減する、難聴の発症を遅延させる、難聴の進行を減速させる、聴力を改善する、有毛細胞数を増加させる、有毛細胞の成熟を増加させる、有毛細胞の再生を増加させる、有毛細胞機能を改善する、有毛細胞の損傷を阻止するかもしくは減少させる、有毛細胞死を阻止するかもしくは減少させる、または有毛細胞の生存を促進するかもしくは増加させるのに、十分な量で投与される、Ｅ５９～Ｅ１０４のいずれか１つに記載の方法。
【0331】
Ｅ１０６．前記接触が、インビボ（対象の内部）で行われる、Ｅ５７またはＥ５８に記載の方法。
Ｅ１０７．前記対象が、ヒト対象である、Ｅ５９～Ｅ１０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０７．前記対象が、ヒト対象である、Ｅ５９～Ｅ１０６のいずれか１つに記載の方法。
【0332】
Ｅ１０８．ａ）第１の核酸ベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする第１のポリヌクレオチドに機能的に連結された、配列番号４８または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むその機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターを含む、前記第１の核酸ベクターと、
ｂ）ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする第２のポリヌクレオチドを含む、第２の核酸ベクターと、を含む、２ベクター系。
ｂ）ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする第２のポリヌクレオチドを含む、第２の核酸ベクターと、を含む、２ベクター系。
【0333】
Ｅ１０９．ａ）第１の核酸ベクターであって、ステレオシリンタンパク質のＮ末端部分をコードする第１のポリヌクレオチドに機能的に連結された、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）、あるいは（ｉｉ）配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターを含む、前記第１の核酸ベクターと、
ｂ）ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする第２のポリヌクレオチドを含む、第２の核酸ベクターと、を含む、２ベクター系。
ｂ）ステレオシリンタンパク質のＣ末端部分をコードする第２のポリヌクレオチドを含む、第２の核酸ベクターと、を含む、２ベクター系。
【0334】
Ｅ１１０．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号４８に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ１０８に記載の２ベクター系。
【0335】
Ｅ１１１．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号４８の配列を有する、Ｅ１０８またはＥ１１０に記載の２ベクター系。
Ｅ１１２．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１０８に記載の２ベクター系。
Ｅ１１２．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１０８に記載の２ベクター系。
【0336】
Ｅ１１３．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４を含むかまたはそれからなる、Ｅ１０８に記載の２ベクター系。
Ｅ１１４．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１０８に記載の２ベクター系。
Ｅ１１４．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１０８に記載の２ベクター系。
【0337】
Ｅ１１５．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４を含むかまたはそれからなる、Ｅ１０８に記載の２ベクター系。
Ｅ１１６．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１０８に記載の２ベクター系。
Ｅ１１６．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１０８に記載の２ベクター系。
【0338】
Ｅ１１７．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ１０９に記載の２ベクター系。
【0339】
Ｅ１１８．前記ＳＴＲＣプロモーターが配列番号１からなる、Ｅ１０９またはＥ１１７に記載の２ベクター系。
Ｅ１１９．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ１０９に記載の２ベクター系。
Ｅ１１９．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ１０９に記載の２ベクター系。
【0340】
Ｅ１２０．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７を含むかまたはそれからなる、Ｅ１０９またはＥ１１９に記載の２ベクター系。
Ｅ１２１．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７を含むかまたはそれからなる、Ｅ１０９またはＥ１１９に記載の２ベクター系。
Ｅ１２１．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７を含むかまたはそれからなる、Ｅ１０９またはＥ１１９に記載の２ベクター系。
【0341】
Ｅ１２２．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１０９またはＥ１１９に記載の２ベクター系。
Ｅ１２３．前記ＳＴＲＣプロモーターが配列番号２からなる、Ｅ１０９またはＥ１１９に記載の２ベクター系。
Ｅ１２３．前記ＳＴＲＣプロモーターが配列番号２からなる、Ｅ１０９またはＥ１１９に記載の２ベクター系。
【0342】
Ｅ１２４．前記第１のポリヌクレオチドが前記第２のポリヌクレオチドと部分的に重複する、Ｅ１０８～Ｅ１２３のいずれか１つに記載の２ベクター系。
Ｅ１２５．前記第１のポリヌクレオチド及び前記第２のポリヌクレオチドが、少なくとも２００塩基（ｂ）の長さの重複領域を有する、Ｅ１０８～Ｅ１２４のいずれか１つに記載の２ベクター系。
Ｅ１２５．前記第１のポリヌクレオチド及び前記第２のポリヌクレオチドが、少なくとも２００塩基（ｂ）の長さの重複領域を有する、Ｅ１０８～Ｅ１２４のいずれか１つに記載の２ベクター系。
【0343】
Ｅ１２６．前記第１の核酸ベクター及び前記第２の核酸ベクターが、哺乳類細胞に導入された場合、相同組換えを受けて、全長ステレオシリンタンパク質をコードする組換えポリヌクレオチドを形成する、Ｅ１０８～Ｅ１２５のいずれか１つに記載の２ベクター系。
【0344】
Ｅ１２７．前記第１の核酸ベクターが、前記第１のポリヌクレオチドの３’に位置するスプライスドナーシグナル配列を含み、前記第２の核酸ベクターが、前記第２のポリヌクレオチドの５’に位置するスプライスアクセプターシグナル配列を含む、Ｅ１０８～Ｅ１２３のいずれか１つに記載の２ベクター系。
【0345】
Ｅ１２８．前記第１の核酸ベクターが、前記第１のポリヌクレオチドの３’に位置するスプライスドナーシグナル配列及び前記スプライスドナーシグナル配列の３’に位置する第１の組換え誘導領域を含み、前記第２の核酸ベクターが、第２の組換え誘導領域、前記組換え誘導領域の３’に位置するスプライスアクセプターシグナル配列、及び前記スプライスアクセプターシグナル配列の３’に位置する前記第２のポリヌクレオチドを含む、Ｅ１０８～Ｅ１２３のいずれか１つに記載の２ベクター系。
【0346】
Ｅ１２９．前記第１のポリヌクレオチドと前記第２のポリヌクレオチドが重複しない、Ｅ１０８～Ｅ１２３、Ｅ１２７、及びＥ１２８のいずれか１つに記載の２ベクター系。
Ｅ１３０．前記第１の核酸ベクターが、前記組換え誘導領域の３’に位置する分解シグナル配列をさらに含み、前記第２の核酸ベクターが、前記組換え誘導領域と前記スプライスアクセプターシグナル配列との間に位置する分解シグナル配列をさらに含む、Ｅ１２８またはＥ１２９に記載の２ベクター系。
Ｅ１３０．前記第１の核酸ベクターが、前記組換え誘導領域の３’に位置する分解シグナル配列をさらに含み、前記第２の核酸ベクターが、前記組換え誘導領域と前記スプライスアクセプターシグナル配列との間に位置する分解シグナル配列をさらに含む、Ｅ１２８またはＥ１２９に記載の２ベクター系。
【0347】
Ｅ１３１．前記第２の核酸ベクターが、前記第２のポリヌクレオチドに機能的に連結された、配列番号４８または配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むその機能的部分に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターをさらに含み、前記ＳＴＲＣプロモーターが、前記第２のポリヌクレオチドの５’に位置する、Ｅ１０８～Ｅ１２３のいずれか１つに記載の２ベクター系。
【0348】
Ｅ１３２．前記第２の核酸ベクターが、前記第２のポリヌクレオチドに機能的に連結された、（ｉ）配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）、あるいは（ｉｉ）配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有するＳＴＲＣプロモーターをさらに含み、前記ＳＴＲＣプロモーターが、前記第２のポリヌクレオチドの５’に位置する、Ｅ１０８～Ｅ１２３のいずれか１つに記載の２ベクター系。
【0349】
Ｅ１３３．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号４８に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ１３１に記載の２ベクター系。
【0350】
Ｅ１３４．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号４８の配列を有する、Ｅ１３１またはＥ１３３に記載の２ベクター系。
Ｅ１３５．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１３１に記載の２ベクター系。
Ｅ１３５．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１３１に記載の２ベクター系。
【0351】
Ｅ１３６．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド２８０～５６４を含むかまたはそれからなる、Ｅ１３１に記載の２ベクター系。
Ｅ１３７．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１３１に記載の２ベクター系。
Ｅ１３７．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１３１に記載の２ベクター系。
【0352】
Ｅ１３８．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１２４～５６４を含むかまたはそれからなる、Ｅ１３１に記載の２ベクター系。
Ｅ１３９．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１３１に記載の２ベクター系。
Ｅ１３９．前記配列番号４８の機能的部分が、配列番号４８のヌクレオチド１～５６０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１３１に記載の２ベクター系。
【0353】
Ｅ１４０．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ１３２に記載の２ベクター系。
【0354】
Ｅ１４１．前記ＳＴＲＣプロモーターが配列番号１からなる、Ｅ１３２またはＥ１４０に記載の２ベクター系。
Ｅ１４２．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ１３２に記載の２ベクター系。
Ｅ１４２．前記ＳＴＲＣプロモーターが、配列番号２または配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７もしくは３５～５３０を含むその機能的部分に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の、配列同一性）を有する、Ｅ１３２に記載の２ベクター系。
【0355】
Ｅ１４３．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド２５２～５３７を含むかまたはそれからなる、Ｅ１３２またはＥ１４２に記載の２ベクター系。
Ｅ１４４．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７を含むかまたはそれからなる、Ｅ１３２またはＥ１４２に記載の２ベクター系。
Ｅ１４４．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド１２０～５３７を含むかまたはそれからなる、Ｅ１３２またはＥ１４２に記載の２ベクター系。
【0356】
Ｅ１４５．前記配列番号２の機能的部分が、配列番号２のヌクレオチド３５～５３０を含むかまたはそれからなる、Ｅ１３２またはＥ１４２に記載の２ベクター系。
Ｅ１４６．前記ＳＴＲＣプロモーターが配列番号２からなる、Ｅ１３２またはＥ１４２に記載の２ベクター系。
Ｅ１４６．前記ＳＴＲＣプロモーターが配列番号２からなる、Ｅ１３２またはＥ１４２に記載の２ベクター系。
【0357】
Ｅ１４７．前記第１の核酸ベクターが、前記第１のポリヌクレオチドの３’に位置する、Ｎ末端インテイン（Ｎ－インテイン）をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、Ｅ１０８～Ｅ１２３及びＥ１３１～Ｅ１４６のいずれか１つに記載の２ベクター系。
【0358】
Ｅ１４８．前記第２の核酸ベクターが、前記ＳＴＲＣプロモーターと前記第２のポリヌクレオチドとの間に位置する、Ｃ末端インテイン（Ｃ－インテイン）をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、Ｅ１３１～Ｅ１４７のいずれか１つに記載の２ベクター系。
【0359】
Ｅ１４９．前記Ｎ－インテイン及び前記Ｃ－インテインが、分割インテイントランススプライシング系の成分である、Ｅ１４８に記載の２ベクター系。
Ｅ１５０．前記分割インテイントランススプライシング系が、１つ以上の細菌のＤｎａＥ遺伝子に由来する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１５０．前記分割インテイントランススプライシング系が、１つ以上の細菌のＤｎａＥ遺伝子に由来する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
【0360】
Ｅ１５１．前記Ｎ－インテインが、配列番号７、９、１２、１４、１６～２１、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４９、５１、５３、５５、及び５７のいずれか１つの配列を有し、前記Ｃ－インテインが、配列番号８、１０、１１、１３、１５、２２～２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、５０、５２、５４、５６、及び５８のいずれか１つの配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
【0361】
Ｅ１５２．前記Ｎ－インテインが配列番号７の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号８の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１５３．前記Ｎ－インテインが配列番号７の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号１０の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１５３．前記Ｎ－インテインが配列番号７の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号１０の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
【0362】
Ｅ１５４．前記Ｎ－インテインが配列番号７の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号１１の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１５５．前記Ｎ－インテインが配列番号９の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号８の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１５５．前記Ｎ－インテインが配列番号９の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号８の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
【0363】
Ｅ１５６．前記Ｎ－インテインが配列番号９の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号１０の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１５７．前記Ｎ－インテインが配列番号９の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号１１の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１５７．前記Ｎ－インテインが配列番号９の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号１１の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
【0364】
Ｅ１５８．前記Ｎ－インテインが配列番号１２の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号１３の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１５９．前記Ｎ－インテインが配列番号１４の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号１５の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１５９．前記Ｎ－インテインが配列番号１４の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号１５の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
【0365】
Ｅ１６０．前記Ｎ－インテインが配列番号１６の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号２２の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１６１．前記Ｎ－インテインが配列番号１９の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号２３の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１６１．前記Ｎ－インテインが配列番号１９の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号２３の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
【0366】
Ｅ１６２．前記Ｎ－インテインが配列番号２０の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号２４の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１６３．前記Ｎ－インテインが配列番号２１の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号２５の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１６３．前記Ｎ－インテインが配列番号２１の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号２５の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
【0367】
Ｅ１６４．前記Ｎ－インテインが配列番号２６の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号２７の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１６５．前記Ｎ－インテインが配列番号２８の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号２９の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１６５．前記Ｎ－インテインが配列番号２８の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号２９の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
【0368】
Ｅ１６６．前記Ｎ－インテインが配列番号３０の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号３１の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１６７．前記Ｎ－インテインが配列番号３２の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号３３の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１６７．前記Ｎ－インテインが配列番号３２の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号３３の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
【0369】
Ｅ１６８．前記Ｎ－インテインが配列番号３４の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号３５の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１６９．前記Ｎ－インテインが配列番号３６の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号３７の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１６９．前記Ｎ－インテインが配列番号３６の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号３７の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
【0370】
Ｅ１７０．前記Ｎ－インテインが配列番号３８の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号３９の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１７１．前記Ｎ－インテインが、配列番号１６～２１のいずれか１つの配列を有し、前記Ｃ－インテインが、配列番号２２～２５のいずれか１つの配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１７１．前記Ｎ－インテインが、配列番号１６～２１のいずれか１つの配列を有し、前記Ｃ－インテインが、配列番号２２～２５のいずれか１つの配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
【0371】
Ｅ１７２．前記Ｎ－インテインが配列番号４９の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号５０の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１７３．前記Ｎ－インテインが配列番号５１の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号５２の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１７３．前記Ｎ－インテインが配列番号５１の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号５２の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
【0372】
Ｅ１７４．前記Ｎ－インテインが配列番号５３の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号５４の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１７５．前記Ｎ－インテインが配列番号５５の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号５６の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１７５．前記Ｎ－インテインが配列番号５５の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号５６の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
【0373】
Ｅ１７６．前記Ｎ－インテインが配列番号５７の配列を有し、前記Ｃ－インテインが配列番号５８の配列を有する、Ｅ１４９に記載の２ベクター系。
Ｅ１７７．前記２ベクター系が、哺乳類の有毛細胞に全長ステレオシリンタンパク質の有毛細胞特異的発現を誘導する、Ｅ１０８～Ｅ１７６のいずれか１つに記載の２ベクター系。
Ｅ１７７．前記２ベクター系が、哺乳類の有毛細胞に全長ステレオシリンタンパク質の有毛細胞特異的発現を誘導する、Ｅ１０８～Ｅ１７６のいずれか１つに記載の２ベクター系。
【0374】
Ｅ１７８．前記有毛細胞が、蝸牛有毛細胞である、Ｅ１７７に記載の２ベクター系。
Ｅ１７９．前記蝸牛有毛細胞が、外有毛細胞である、Ｅ１７８に記載の２ベクター系。
Ｅ１８０．前記蝸牛有毛細胞が、内有毛細胞である、Ｅ１７８に記載の２ベクター系。
Ｅ１７９．前記蝸牛有毛細胞が、外有毛細胞である、Ｅ１７８に記載の２ベクター系。
Ｅ１８０．前記蝸牛有毛細胞が、内有毛細胞である、Ｅ１７８に記載の２ベクター系。
【0375】
Ｅ１８１．前記有毛細胞が、前庭有毛細胞である、Ｅ１７７に記載の２ベクター系。
Ｅ１８２．前記前庭有毛細胞が、Ｉ型前庭有毛細胞である、Ｅ１８１に記載の２ベクター系。
Ｅ１８２．前記前庭有毛細胞が、Ｉ型前庭有毛細胞である、Ｅ１８１に記載の２ベクター系。
【0376】
Ｅ１８３．前記前庭有毛細胞が、ＩＩ型前庭有毛細胞である、Ｅ１８１に記載の２ベクター系。
Ｅ１８４．前記哺乳類の有毛細胞が、ヒト有毛細胞である、Ｅ１７７～Ｅ１８３のいずれか１つに記載の２ベクター系。
Ｅ１８４．前記哺乳類の有毛細胞が、ヒト有毛細胞である、Ｅ１７７～Ｅ１８３のいずれか１つに記載の２ベクター系。
【0377】
Ｅ１８５．前記ステレオシリンタンパク質が、配列番号３に対して少なくとも８５％の配列同一性（例えば、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の、配列同一性）を有するヒトステレオシリンタンパク質である、Ｅ１０８～Ｅ１８４のいずれか１つに記載の２ベクター系。
【0378】
Ｅ１８６．前記第１のベクター及び前記第２のベクターが、ウイルスベクター、プラスミド、コスミド、または人工染色体である、Ｅ１０８～Ｅ１８５のいずれか１つに記載の２ベクター系。
【0379】
Ｅ１８７．前記第１のベクター及び前記第２のベクターが、ＡＡＶベクター、アデノウイルスベクター、及びレンチウイルスベクターからなる群から選択されるウイルスベクターである、Ｅ１８６に記載の２ベクター系。
【0380】
Ｅ１８８．前記第１のベクター及び前記第２のベクターが、ＡＡＶベクターである、Ｅ１８７に記載の２ベクター系。
Ｅ１８９．前記ＡＡＶベクターの各々が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、ｒｈ７４、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／８、ＤＪ／９、７ｍ８、ＰＨＰ．Ｂ、ＰＨＰ．ｅＢ、またはＰＨＰ．Ｓのカプシドを有する、Ｅ１８８に記載の２ベクター系。
Ｅ１８９．前記ＡＡＶベクターの各々が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｑｕａｄ（Ｙ－Ｆ）、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、ｒｈ７４、Ａｎｃ８０、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＤＪ／８、ＤＪ／９、７ｍ８、ＰＨＰ．Ｂ、ＰＨＰ．ｅＢ、またはＰＨＰ．Ｓのカプシドを有する、Ｅ１８８に記載の２ベクター系。
【0381】
Ｅ１９０．Ｅ１０８～Ｅ１８９のいずれか１つに記載の２ベクター系を含む、組成物。
Ｅ１９１．薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤をさらに含む、Ｅ１９０に記載の組成物。
Ｅ１９１．薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤をさらに含む、Ｅ１９０に記載の組成物。
【0382】
Ｅ１９２．Ｅ１０８～Ｅ１８９のいずれか１つに記載の２ベクター系を含む、細胞。
Ｅ１９３．前記細胞が、有毛細胞である、Ｅ１９２に記載の細胞。
Ｅ１９４．前記有毛細胞が、哺乳類の有毛細胞である、Ｅ１９３に記載の細胞。
Ｅ１９３．前記細胞が、有毛細胞である、Ｅ１９２に記載の細胞。
Ｅ１９４．前記有毛細胞が、哺乳類の有毛細胞である、Ｅ１９３に記載の細胞。
【0383】
Ｅ１９５．前記哺乳類の有毛細胞が、ヒト有毛細胞である、Ｅ１９４に記載の細胞。
Ｅ１９６．前記有毛細胞が、蝸牛有毛細胞である、Ｅ１９２～Ｅ１９５のいずれか１つに記載の細胞。
Ｅ１９６．前記有毛細胞が、蝸牛有毛細胞である、Ｅ１９２～Ｅ１９５のいずれか１つに記載の細胞。
【0384】
Ｅ１９７．前記蝸牛有毛細胞が、外有毛細胞である、Ｅ１９６に記載の細胞。
Ｅ１９８．前記蝸牛有毛細胞が、内有毛細胞である、Ｅ１９６に記載の細胞。
Ｅ１９９．前記有毛細胞が、前庭有毛細胞である、Ｅ１９２～Ｅ１９５のいずれか１つに記載の細胞。
Ｅ１９８．前記蝸牛有毛細胞が、内有毛細胞である、Ｅ１９６に記載の細胞。
Ｅ１９９．前記有毛細胞が、前庭有毛細胞である、Ｅ１９２～Ｅ１９５のいずれか１つに記載の細胞。
【0385】
Ｅ２００．前記前庭有毛細胞が、ＩＩ型前庭有毛細胞である、Ｅ１９９に記載の細胞。
Ｅ２０１．前記前庭有毛細胞が、Ｉ型前庭有毛細胞である、Ｅ１９９に記載の細胞。
Ｅ２０２．有毛細胞にステレオシリンタンパク質を発現させる方法であって、前記有毛細胞を、Ｅ１０８～Ｅ１８９のいずれか１つに記載の２ベクター系またはＥ１９０もしくはＥ１９１に記載の組成物と接触させることを含む、前記方法。
Ｅ２０１．前記前庭有毛細胞が、Ｉ型前庭有毛細胞である、Ｅ１９９に記載の細胞。
Ｅ２０２．有毛細胞にステレオシリンタンパク質を発現させる方法であって、前記有毛細胞を、Ｅ１０８～Ｅ１８９のいずれか１つに記載の２ベクター系またはＥ１９０もしくはＥ１９１に記載の組成物と接触させることを含む、前記方法。
【0386】
Ｅ２０３．前記接触が、インビボ（例えば、対象の内部）で行われる、Ｅ２０２に記載の方法。
Ｅ２０４．前記ステレオシリンタンパク質が、有毛細胞で特異的に発現される、Ｅ２０２に記載の方法。
Ｅ２０４．前記ステレオシリンタンパク質が、有毛細胞で特異的に発現される、Ｅ２０２に記載の方法。
【0387】
Ｅ２０５．感音性難聴（例えば、非症候性難聴）を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１０８～Ｅ１８９のいずれか１つに記載の２ベクター系またはＥ１９０もしくはＥ１９１に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0388】
Ｅ２０６．前庭機能障害を有するかまたはそれを発症するリスクのある対象を治療する方法であって、Ｅ１０８～Ｅ１８９のいずれか１つに記載の２ベクター系またはＥ１９０もしくはＥ１９１に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0389】
Ｅ２０７．有毛細胞の生存の増加を必要とする対象においてそれを行う方法であって、Ｅ１０８～Ｅ１８９のいずれか１つに記載の２ベクター系またはＥ１９０もしくはＥ１９１に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0390】
Ｅ２０８．有毛細胞の損傷または細胞死の阻止または減少を必要とする対象においてそれを行う方法であって、Ｅ１０８～Ｅ１８９のいずれか１つに記載の２ベクター系またはＥ１９０もしくはＥ１９１に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0391】
Ｅ２０９．有毛細胞機能の改善を必要とする対象においてそれを行う方法であって、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクター、Ｅ１０８～Ｅ１８９のいずれか１つに記載の２ベクター系、またはＥ４５、Ｅ４６、Ｅ１９０、もしくはＥ１９１に記載の組成物を有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0392】
Ｅ２１０．前記有毛細胞が、哺乳類の有毛細胞である、Ｅ２０２～Ｅ２０４及びＥ２０７～Ｅ２０９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１１．前記哺乳類の有毛細胞が、ヒト有毛細胞である、Ｅ２１０に記載の方法。
Ｅ２１１．前記哺乳類の有毛細胞が、ヒト有毛細胞である、Ｅ２１０に記載の方法。
【0393】
Ｅ２１２．前記有毛細胞が、蝸牛有毛細胞である、Ｅ２０２～Ｅ２０４及びＥ２０７～Ｅ２１１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１３．前記蝸牛有毛細胞が、外有毛細胞である、Ｅ２１２に記載の方法。
Ｅ２１３．前記蝸牛有毛細胞が、外有毛細胞である、Ｅ２１２に記載の方法。
【0394】
Ｅ２１４．前記蝸牛有毛細胞が、内有毛細胞である、Ｅ２１２に記載の方法。
Ｅ２１５．前記有毛細胞が、前庭有毛細胞である、Ｅ２０２～Ｅ２０４及びＥ２０７～Ｅ２１１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１５．前記有毛細胞が、前庭有毛細胞である、Ｅ２０２～Ｅ２０４及びＥ２０７～Ｅ２１１のいずれか１つに記載の方法。
【0395】
Ｅ２１６．前記前庭有毛細胞が、ＩＩ型前庭有毛細胞である、Ｅ２１５に記載の方法。
Ｅ２１７．前記前庭有毛細胞が、Ｉ型前庭有毛細胞である、Ｅ２１５に記載の方法。
Ｅ２１８．ＳＴＲＣの発現の増加（ＳＴＲＣの発現）を必要とする対象においてそれを行う方法であって、Ｅ１０８～Ｅ１８９のいずれか１つに記載の２ベクター系またはＥ１９０もしくはＥ１９１に記載の組成物を治療的有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
Ｅ２１７．前記前庭有毛細胞が、Ｉ型前庭有毛細胞である、Ｅ２１５に記載の方法。
Ｅ２１８．ＳＴＲＣの発現の増加（ＳＴＲＣの発現）を必要とする対象においてそれを行う方法であって、Ｅ１０８～Ｅ１８９のいずれか１つに記載の２ベクター系またはＥ１９０もしくはＥ１９１に記載の組成物を治療的有効量にて前記対象の内耳に投与することを含む、前記方法。
【0396】
Ｅ２１９．前記対象が、難聴（例えば、感音性難聴）を有するかまたはそれを発症するリスクがある、Ｅ２０７～Ｅ２１４及びＥ２１８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２０．前記難聴が、遺伝性難聴である、Ｅ２０５またはＥ２１９に記載の方法。
Ｅ２２０．前記難聴が、遺伝性難聴である、Ｅ２０５またはＥ２１９に記載の方法。
【0397】
Ｅ２２１．前記遺伝性難聴が、常染色体劣性難聴である、Ｅ２２０に記載の方法。
Ｅ２２２．前記対象が、前庭機能障害を有するかまたはそれを発症するリスクがある、Ｅ２０７～Ｅ２１１及びＥ２１５～Ｅ２１８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２２．前記対象が、前庭機能障害を有するかまたはそれを発症するリスクがある、Ｅ２０７～Ｅ２１１及びＥ２１５～Ｅ２１８のいずれか１つに記載の方法。
【0398】
Ｅ２２３．前記前庭機能障害が、回転性めまい、浮動性めまい、平衡失調、両側前庭障害、動揺視、または平衡障害を含む、Ｅ２０６またはＥ２２２に記載の方法。
Ｅ２２４．前記前庭機能障害が遺伝子変異と関連する、Ｅ２０６、Ｅ２２２、及びＥ２２３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２４．前記前庭機能障害が遺伝子変異と関連する、Ｅ２０６、Ｅ２２２、及びＥ２２３のいずれか１つに記載の方法。
【0399】
Ｅ２２５．前記対象が、ＳＴＲＣの変異を有する、Ｅ２０５～Ｅ２２４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２６．前記対象が、ＳＴＲＣの変異を有すると特定されている、Ｅ２０５～Ｅ２２５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２６．前記対象が、ＳＴＲＣの変異を有すると特定されている、Ｅ２０５～Ｅ２２５のいずれか１つに記載の方法。
【0400】
Ｅ２２７．前記方法が、前記２ベクター系または前記組成物の投与前に、前記対象をＳＴＲＣの変異を有すると特定することをさらに含む、Ｅ２０５～Ｅ２２５のいずれか１つに記載の方法。
【0401】
Ｅ２２８．前記対象が、ＤＦＮＢ１６を有する、Ｅ２０５～Ｅ２２７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２９．前記対象が、ＤＦＮＢ１６を有すると特定されている、Ｅ２０５～Ｅ２２６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２９．前記対象が、ＤＦＮＢ１６を有すると特定されている、Ｅ２０５～Ｅ２２６のいずれか１つに記載の方法。
【0402】
Ｅ２３０．前記方法が、前記核酸ベクターまたは前記組成物の投与前に、前記対象の聴力を評価することをさらに含む、Ｅ２０５～Ｅ２２９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２３１．前記方法が、前記核酸ベクターまたは前記組成物の投与後に、前記対象の聴力を評価することをさらに含む、Ｅ２０５～Ｅ２３０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２３１．前記方法が、前記核酸ベクターまたは前記組成物の投与後に、前記対象の聴力を評価することをさらに含む、Ｅ２０５～Ｅ２３０のいずれか１つに記載の方法。
【0403】
Ｅ２３２．前記方法が、前記核酸ベクターまたは前記組成物の投与前に、前記対象の前記前庭機能を評価することをさらに含む、Ｅ２０５～Ｅ２３１のいずれか１つに記載の方法。
【0404】
Ｅ２３３．前記方法が、前記核酸ベクターまたは前記組成物の投与後に、前記対象の前記前庭機能を評価することをさらに含む、Ｅ２０５～Ｅ２３２のいずれか１つに記載の方法。
【0405】
Ｅ２３４．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、内耳に局所投与される、Ｅ２０５～Ｅ２３３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２３５．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、半規管に投与される、Ｅ２３４に記載の方法。
Ｅ２３５．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、半規管に投与される、Ｅ２３４に記載の方法。
【0406】
Ｅ２３６．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、経鼓室投与または鼓室内投与される、Ｅ２３４に記載の方法。
Ｅ２３７．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、外リンパ中に投与される、Ｅ２３４に記載の方法。
Ｅ２３７．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、外リンパ中に投与される、Ｅ２３４に記載の方法。
【0407】
Ｅ２３８．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、内リンパ中に投与される、Ｅ２３４に記載の方法。
Ｅ２３９．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、卵円窓に対して、またはそれを介して投与される、Ｅ２３４に記載の方法。
Ｅ２３９．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、卵円窓に対して、またはそれを介して投与される、Ｅ２３４に記載の方法。
【0408】
Ｅ２４０．前記核酸ベクターまたは前記組成物が、正円窓に対して、またはそれを介して投与される、Ｅ２３４に記載の方法。
Ｅ２４１．前記２ベクター系における前記ベクターが、同時に投与される、Ｅ２０５～Ｅ２４０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２４１．前記２ベクター系における前記ベクターが、同時に投与される、Ｅ２０５～Ｅ２４０のいずれか１つに記載の方法。
【0409】
Ｅ２４２．前記２ベクター系における前記ベクターが、順次に投与される、Ｅ２０５～Ｅ２４０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２４３．前記２ベクター系または医薬組成物が、難聴を予防もしくは軽減する、難聴の発症を遅延させる、難聴の進行を減速させる、聴力を改善する、語音弁別を改善する、前庭機能障害を阻止するかもしくは減少させる、前庭機能障害の発症を遅延させる、前庭機能障害の進行を減速させる、前庭機能を改善する、有毛細胞機能を改善する、有毛細胞の損傷を阻止するかもしくは減少させる、有毛細胞死を阻止するかもしくは減少させる、有毛細胞の生存を促進するかもしくは増加させる、または有毛細胞でのＳＴＲＣの発現を増加させるのに、十分な量で投与される、Ｅ２０５～Ｅ２４２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２４３．前記２ベクター系または医薬組成物が、難聴を予防もしくは軽減する、難聴の発症を遅延させる、難聴の進行を減速させる、聴力を改善する、語音弁別を改善する、前庭機能障害を阻止するかもしくは減少させる、前庭機能障害の発症を遅延させる、前庭機能障害の進行を減速させる、前庭機能を改善する、有毛細胞機能を改善する、有毛細胞の損傷を阻止するかもしくは減少させる、有毛細胞死を阻止するかもしくは減少させる、有毛細胞の生存を促進するかもしくは増加させる、または有毛細胞でのＳＴＲＣの発現を増加させるのに、十分な量で投与される、Ｅ２０５～Ｅ２４２のいずれか１つに記載の方法。
【0410】
Ｅ２４４．前記対象が、ヒト対象である、Ｅ２０５～Ｅ２４３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２４５．Ｅ１～Ｅ１８のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクター、Ｅ１０８～Ｅ１８９のいずれか１つに記載の２ベクター系、またはＥ４５、Ｅ４６、Ｅ１９０、もしくはＥ１９１に記載の組成物を含む、キット。
Ｅ２４５．Ｅ１～Ｅ１８のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、Ｅ１９～Ｅ４４のいずれか１つに記載の核酸ベクター、Ｅ１０８～Ｅ１８９のいずれか１つに記載の２ベクター系、またはＥ４５、Ｅ４６、Ｅ１９０、もしくはＥ１９１に記載の組成物を含む、キット。
【0411】
他の実施形態
記載の発明の様々な変更及び変形は、本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく当業者には明らかであろう。本発明は、具体的な実施形態との関連で記載されているが、特許請求の範囲に記載される本発明がそのような具体的な実施形態に不当に限定されるべきではないことを理解されるべきである。実際、当業者には明らかな、本発明を実施するための記載された様式の様々な変更は、本発明の範囲内であることが意図される。他の実施形態を、特許請求の範囲に記す。
記載の発明の様々な変更及び変形は、本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく当業者には明らかであろう。本発明は、具体的な実施形態との関連で記載されているが、特許請求の範囲に記載される本発明がそのような具体的な実施形態に不当に限定されるべきではないことを理解されるべきである。実際、当業者には明らかな、本発明を実施するための記載された様式の様々な変更は、本発明の範囲内であることが意図される。他の実施形態を、特許請求の範囲に記す。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10A】
【図10B】
【図11】
【図12】
【図13A】
【図13B】
【図13C】
【図14】
【図15】
【図16A】
【図16B】
【図17】
【図18】
【国際調査報告】