特表 2024-538116 キメラ抗原受容体のシグナル伝達ドメイン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-18

(54)【発明の名称】キメラ抗原受容体のシグナル伝達ドメイン

(51)【国際特許分類】

   C07K 19/00 20060101AFI20241010BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20241010BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20241010BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20241010BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20241010BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20241010BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241010BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241010BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20241010BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20241010BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241010BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00 ZNA

C07K16/28

C07K14/705

C12N15/12

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N5/10

A61K35/17

A61P35/02

A61P35/00

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024522398

(86)(22)【出願日】2022-10-18

(85)【翻訳文提出日】2024-04-12

(86)【国際出願番号】 US2022078283

(87)【国際公開番号】W WO2023069936

(87)【国際公開日】2023-04-27

(31)【優先権主張番号】63/256,956

(32)【優先日】2021-10-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】514266932

【氏名又は名称】カイト ファーマ インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】Ｋｉｔｅ Ｐｈａｒｍａ， Ｉｎｃ

(74)【代理人】

【識別番号】110000796

【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】アイヴァー リカルド

(72)【発明者】

【氏名】フォン ジュン

(72)【発明者】

【氏名】ゲバラ クラウディア アイ．

(72)【発明者】

【氏名】ムラカミ ジョディ

(72)【発明者】

【氏名】ナウイヘド ヘバ エヌ．

(72)【発明者】

【氏名】ワイマン サラ ケー．

【テーマコード（参考）】

4B065

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA43

4B065CA44

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB37

4C087BB65

4C087CA12

4C087NA14

4C087ZB26

4C087ZB27

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA09

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、及びＣＤ３εシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３γシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３δシグナル伝達ドメイン、又はＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインのうちの１つを含むシグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が開示される。ＣＡＲをコードする核酸及びそのような核酸を含む組換えベクターが開示される。このような核酸及び組換えベクターを含む宿主細胞、並びにこのような宿主細胞を含む医薬組成物が開示される。疾患の処置を必要とする患者において疾患を処置するか、又は対象において免疫応答を誘導するか、もしくは対象を癌に対して免疫する方法が開示される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
３つのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する抗ＣＤ１９結合ドメインを含み、ここで
前記ＨＣＤＲ１は、配列番号２～４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号５～７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号８～１０のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２～１４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号１５～１７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が、配列番号１８～２０のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むか、又は
前記ＨＣＤＲ１は、配列番号２４～２６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２７～２９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３０～３２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号３４～３６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号３７～３９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４０～４２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、
膜貫通ドメインと、
共刺激ドメインと、
ＣＤ３εシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３γシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３δシグナル伝達ドメイン、又はＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインのうちの１つを含むシグナル伝達ドメインと、を含む、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項2】

前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び前記ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン、並びに前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３を含む第１の軽鎖可変ドメインを含み、ここで：
前記重鎖可変ドメインが、配列番号１と少なくとも８０％同一であり、かつ
前記軽鎖可変ドメインが、配列番号１１と少なくとも８０％同一であるか、又は
前記重鎖可変ドメインが、配列番号２４と少なくとも８０％同一であり、かつ
前記軽鎖可変ドメインが、配列番号３３と少なくとも８０％同一である、請求項１に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項3】

前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、前記ＨＣＤＲ３、前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３が単一のポリペプチドに含まれる、請求項１又は２のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項4】

前記抗ＣＤ１９結合ドメインはｓｃＦｖを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項5】

前記ｓｃＦｖが、配列番号２１又は４３のうちの１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項6】

前記シグナル伝達ドメインが、配列番号５２に記載のアミノ酸配列を備えるＣＤ３εシグナル伝達ドメインを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項7】

前記シグナル伝達ドメインが、配列番号５７に記載のアミノ酸配列を備えるＣＤ３γシグナル伝達ドメインを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項8】

前記シグナル伝達ドメインが、配列番号５５に記載のアミノ酸配列を備えるＣＤ３δシグナル伝達ドメインを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項9】

前記シグナル伝達ドメインが、配列番号５９に記載のアミノ酸配列を備えるＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項10】

前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項11】

前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメインを含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項12】

配列番号６２、６５、６７、及び６９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項13】

請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲをコードする、核酸。

【請求項14】

請求項１３に記載の核酸を含む、組換えベクター。

【請求項15】

請求項１３に記載の核酸又は請求項１４に記載の組換えベクターで形質導入した、宿主細胞。

【請求項16】

前記宿主細胞が、Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞又はＮＫ細胞を含む、請求項１５に記載の宿主細胞。

【請求項17】

請求項１６に記載のＴ細胞、ｉＮＫＴ細胞及び／又はＮＫ細胞を含む、医薬組成物。

【請求項18】

疾患の処置を必要とする患者における疾患を処置する方法であって、請求項１６に記載のＴ細胞、ｉＮＫＴ細胞及び／若しくはＮＫ細胞又は請求項１７に記載の医薬組成物を前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項19】

対象において免疫応答を誘導するか又は対象を癌に対して免疫化する方法であって、請求項１６に記載のＴ細胞、ｉＮＫＴ細胞及び／若しくはＮＫ細胞を前記対象に、又は請求項１７に記載の医薬組成物を前記患者に投与することを含む、方法。

【請求項20】

前記癌が、急性リンパ芽球性前リンパ球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞性ＡＬＬを含む）、急性骨髄白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽細胞性形質細胞様樹状細胞腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性又は急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、毛様細胞白血病、ホジキン疾患、悪性リンパ増殖状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性ミエローマ、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖障害（無症候ミエローマ（くすぶり型多発性ミエローマ又は無痛性ミエローマ）を含む）、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫、形質細胞腫（形質細胞障害、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外形質細胞腫、及び多発性骨髄腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高槻病、及びＰＥＰ症候群としても知られる）、原発性縦隔大Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞又は大細胞濾胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞性急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞性リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫、又はワルデンシュトレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、形質転換濾胞性リンパ腫（ＴＦＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、多発性骨髄腫、毛様細胞リンパ腫／白血病、又はそれらの組み合わせである、請求項１８又は１９に記載の方法。

【請求項21】

配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項22】

７０７－ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＦＰ（アルファ（α）－フェトプロテイン）、ＡＲＴ－４（Ｔ４細胞によって認識される腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原、ｂ－カテニン／ｍ、ｂ－カテニン／変異型）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、Ｂｃｒ－ａｂｌ（易切断分類領域－Ａｂｅｌｓｏｎ）、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）、ＣＤ１９（分化分類１９）、ＣＤ２０（分化分類２０）、ＣＤ２２（分化分類２２）、ＣＤ３０（分化分類３０）、ＣＤ３３（分化分類３３）、ＣＤ４４ｖ７／８（分化分類４４、エクソン７／８）、ＣＡＭＥＬ（黒色腫上のＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ－１（癌胎児抗原ペプチド－１）、ＣＡＳＰ－８（カスパーゼ－８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７、変異型）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４、変異型）、ＣＥＡ（癌胎児抗原）、Ｃ－型レクチン様－１（ＣＬＬ－１）、ＣＴ（癌／精巣（抗原））、Ｃｙｐ－Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原、黒色腫）、ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子受容体、バリアントＩＩＩ）、ＥＧＰ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ－４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ－２、－３、４）、ＥＬＦ２Ｍ（伸長因子２、変異型）、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１（Ｅｔｓバリアント遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧＤ２（ジシアロガングリオシド２）、ＧＤ３（ジシアロガングリオシド３）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＧｎＴ－Ｖ（Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素Ｖ）、Ｇｐ１００（糖タンパク質１００ｋＤ）、ＨＡＧＥ（ヘリコース抗原）、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ（ヒト上皮受容体－２／神経性、ＥＧＦＲ２としても知られる）、ＨＬＡ－Ａ（ヒト白血球抗原－Ａ）、ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）、ＨＳＰ７０－２Ｍ（熱ショックタンパク質７０－２、変異型）、ＨＳＴ－２（ヒト印環腫瘍－２）、ｈＴＥＲＴ又はｈＴＲＴ（ヒトテロメラーゼ逆転写酵素）、ｉＣＥ（腸管カルボキシルエステラーゼ）、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２（インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、κ－軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ－Ｌ－フコース：ｂ－Ｄ－ガラクトシダーゼ２－ａ－Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬｅＹ（ルイス－Ｙ抗体）、Ｌ１ ＣＡＭ（Ｌ１細胞接着分子）、ＭＡＧＥ（黒色腫抗原）、ＭＡＧＥ－Ａ１（黒色腫関連抗原１）、メソセリン、マウスＣＭＶ感染細胞、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ（Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原－Ｉ／黒色腫抗原Ａ）、ＭＣ１ Ｒ（メラノコルチン１受容体）、Ｍｙｏｓｉｎ／ｍ（ミオシン、変異型）、ＭＵＣ１（ムチン１）、ＭＵＭ－１、－２、－３（黒色腫遍在性、変異型１、２、３）、ＮＡ８８－Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ ｃＤＮＡクローン）、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２、メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＢＲ－１（ニューヨーク乳房分化抗原１）、ＮＹ－ＥＳＯ－１（ニューヨーク食道扁平細胞カルシノーマ－１）、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、Ｐ１５（プロテイン１５）、ｐ１９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ（１９０ＫＤのｂｃｒ－ａｂｌタンパク質）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫の優先的発現抗原）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＡＧＥ（腎抗原）、ＲＵ１又はＲＵ２（腎偏在性１又は２）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＳＡＲＴ－１又はＳＡＲＴ－３（腫瘍を拒絶する扁平抗原１又は３）、ＳＳＸ１、－２、－３、４（滑膜肉腫Ｘ１、－２、－３、－４）、ＴＡＡ（腫瘍関連抗原）、ＴＡＧ－７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓ－ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースリン酸イソメラーゼ、変異型）、ＴＲＰ－１（チロシナーゼ関連タンパク質１、又はｇｐ７５）、ＴＲＰ－２（チロシナーゼ関連タンパク質２）、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ－２／イントロン２）、ＶＥＧＦ－Ｒ２（血管内皮増殖因子受容体２）、及びＷＴ１（ウィルムス腫瘍遺伝子）からなる群から選択される抗原に特異的な結合ドメインを含む、請求項２１に記載のＣＡＲ。

【請求項23】

バイシストロン性核酸構築物によってコードされる、請求項２１に記載のＣＡＲ。

【請求項24】

ＣＤ１９に特異的な結合ドメインを含む、請求項２１～２３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項25】

前記ＣＤ３εシグナル伝達ドメインが、配列番号７９、配列番号８０、及び配列番号８１からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する核酸によってコードされる、請求項２１に記載のＣＡＲ。

【請求項26】

前記ＣＡＲが細胞において発現される場合、前記ＣＡＲが、配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインの代わりに野生型ＣＤ３εシグナル伝達ドメインを有する対応するＣＡＲよりも高い程度の前記細胞膜への輸送を示す、請求項２１に記載のＣＡＲ。

【請求項27】

請求項２１に記載のＣＡＲをコードするポリヌクレオチド。

【請求項28】

請求項２７に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項29】

請求項２８に記載のベクターを含む宿主細胞。

【請求項30】

前記細胞は、Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞、又はＮＫ細胞からなる群から選択される、請求項２９に記載の宿主細胞。

【請求項31】

請求項２９に記載の宿主細胞を含む、医薬組成物。

【請求項32】

請求項２９に記載の宿主細胞を投与することを含む、それを必要とする患者において疾患又は状態を治療する方法。

【請求項33】

請求項２１に記載のＣＡＲの発現を提供することを含む、ＣＡＲ Ｔ細胞を作製する方法。

【請求項34】

配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。

【請求項35】

配列番号７９、配列番号８０、及び配列番号８１からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する核酸によってコードされる、請求項３４に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。

【請求項36】

前記ＣＤ３εシグナル伝達ドメインがキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に含まれる、請求項３４に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。

【請求項37】

前記ＣＡＲが、７０７－ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＦＰ（アルファ（α）－フェトプロテイン）、ＡＲＴ－４（Ｔ４細胞によって認識される腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原、ｂ－カテニン／ｍ、ｂ－カテニン／変異型）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、Ｂｃｒ－ａｂｌ（易切断分類領域－Ａｂｅｌｓｏｎ）、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）、ＣＤ１９（分化分類１９）、ＣＤ２０（分化分類２０）、ＣＤ２２（分化分類２２）、ＣＤ３０（分化分類３０）、ＣＤ３３（分化分類３３）、ＣＤ４４ｖ７／８（分化分類４４、エクソン７／８）、ＣＡＭＥＬ（黒色腫上のＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ－１（癌胎児抗原ペプチド－１）、ＣＡＳＰ－８（カスパーゼ－８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７、変異型）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４、変異型）、ＣＥＡ（癌胎児抗原）、Ｃ－型レクチン様－１（ＣＬＬ－１）、ＣＴ（癌／精巣（抗原））、Ｃｙｐ－Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原、黒色腫）、ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子受容体、バリアントＩＩＩ）、ＥＧＰ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ－４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ－２、－３、４）、ＥＬＦ２Ｍ（伸長因子２、変異型）、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１（Ｅｔｓバリアント遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧＤ２（ジシアロガングリオシド２）、ＧＤ３（ジシアロガングリオシド３）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＧｎＴ－Ｖ（Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素Ｖ）、Ｇｐ１００（糖タンパク質１００ｋＤ）、ＨＡＧＥ（ヘリコース抗原）、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ（ヒト上皮受容体－２／神経性、ＥＧＦＲ２としても知られる）、ＨＬＡ－Ａ（ヒト白血球抗原－Ａ）、ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）、ＨＳＰ７０－２Ｍ（熱ショックタンパク質７０－２、変異型）、ＨＳＴ－２（ヒト印環腫瘍－２）、ｈＴＥＲＴ又はｈＴＲＴ（ヒトテロメラーゼ逆転写酵素）、ｉＣＥ（腸管カルボキシルエステラーゼ）、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２（インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、κ－軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ－Ｌ－フコース：ｂ－Ｄ－ガラクトシダーゼ２－ａ－Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬｅＹ（ルイス－Ｙ抗体）、Ｌ１ ＣＡＭ（Ｌ１細胞接着分子）、ＭＡＧＥ（黒色腫抗原）、ＭＡＧＥ－Ａ１（黒色腫関連抗原１）、メソセリン、マウスＣＭＶ感染細胞、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ（Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原－Ｉ／黒色腫抗原Ａ）、ＭＣ１ Ｒ（メラノコルチン１受容体）、Ｍｙｏｓｉｎ／ｍ（ミオシン、変異型）、ＭＵＣ１（ムチン１）、ＭＵＭ－１、－２、－３（黒色腫遍在性、変異型１、２、３）、ＮＡ８８－Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ ｃＤＮＡクローン）、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２、メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＢＲ－１（ニューヨーク乳房分化抗原１）、ＮＹ－ＥＳＯ－１（ニューヨーク食道扁平細胞カルシノーマ－１）、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、Ｐ１５（プロテイン１５）、ｐ１９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ（１９０ＫＤのｂｃｒ－ａｂｌタンパク質）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫の優先的発現抗原）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＡＧＥ（腎抗原）、ＲＵ１又はＲＵ２（腎偏在性１又は２）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＳＡＲＴ－１又はＳＡＲＴ－３（腫瘍を拒絶する扁平抗原１又は３）、ＳＳＸ１、－２、－３、４（滑膜肉腫Ｘ１、－２、－３、－４）、ＴＡＡ（腫瘍関連抗原）、ＴＡＧ－７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓ－ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースリン酸イソメラーゼ、変異型）、ＴＲＰ－１（チロシナーゼ関連タンパク質１、又はｇｐ７５）、ＴＲＰ－２（チロシナーゼ関連タンパク質２）、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ－２／イントロン２）、ＶＥＧＦ－Ｒ２（血管内皮増殖因子受容体２）、及びＷＴ１（ウィルムス腫瘍遺伝子）からなる群から選択される抗原に特異的な結合ドメインを含む、請求項３６に記載のＣＡＲ。

【請求項38】

前記ＣＡＲが、バイシストロン性核酸構築物によってコードされる、請求項３６に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。

【請求項39】

前記ＣＡＲが、ＣＤ１９に特異的な結合ドメインを含む、請求項３６～３８のいずれか一項に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。

【請求項40】

前記ＣＡＲが細胞において発現される場合、前記ＣＡＲが、配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインの代わりに野生型ＣＤ３εシグナル伝達ドメインを有する対応するＣＡＲよりも大きな程度の前記細胞膜への輸送を示す、請求項３６に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。

【請求項41】

請求項３４に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチド。

【請求項42】

請求項４１に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項43】

請求項４２に記載のベクターを含む宿主細胞。

【請求項44】

前記細胞は、Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞、又はＮＫ細胞からなる群から選択される、請求項４３に記載の宿主細胞。

【請求項45】

請求項４３に記載の宿主細胞を投与することを含む、それを必要とする患者における疾患又は状態を治療する方法。

【請求項46】

請求項４３に記載の宿主細胞を含む、医薬組成物。

【請求項47】

ＣＡＲ Ｔ細胞を作製する方法であって、請求項３６に記載のＣＡＲの発現を提供することを含む、方法。

【請求項48】

ＣＡＲの細胞膜への輸送を改善する方法であって、前記ＣＡＲが、配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインを発現するように設計されている、方法。

【請求項49】

前記ＣＤ３εシグナル伝達ドメインが、配列番号７９、配列番号８０、及び配列番号８１からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する核酸によってコードされる、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

ＣＡＲの細胞膜への前記輸送を改善する方法であって、前記ＣＡＲが、野生型ＣＤ３εシグナル伝達ドメインに対する１つ以上の突然変異、欠失又は挿入を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインを含むように設計される、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２１年１０月１８日に出願され、「Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＣＡＲ）Ｔ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｙ」と題された、米国特許仮出願第６３／２５６，９５６号に対する優先権の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

（発明の分野）
本開示は、細胞療法の分野に関し、より具体的には、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）細胞治療に関する。

【背景技術】

【0003】

ヒト癌は、本質的に、遺伝子変換又はエピジェネティクス変換を起こして、異常な癌細胞になった正常細胞から構成される。そうすることで、癌細胞は、正常細胞によって発現されるものとは異なるタンパク質及び他の抗原を発現し始める。これらの異常な腫瘍抗原は、癌細胞を特異的に標的化して死滅させるために身体の自然免疫系によって使用され得る。しかしながら、癌細胞は様々なメカニズムを用いて、Ｔ及びＢリンパ球などの免疫細胞が正常に癌細胞を標的とするのを阻止する。

【0004】

現在のＴ細胞療法は、患者の癌細胞を標的とし、これを死滅させるように濃縮又は改変されたヒトＴ細胞に基づく。特定の癌細胞を標的とし、これを死滅させるＴ細胞の能力を増加させるために、Ｔ細胞を特定の標的癌細胞に指向する構築物を発現するようにＴ細胞を操作する方法が開発されてきた。特定の腫瘍抗原と相互作用することができる結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）により、Ｔ細胞は特定の腫瘍抗原を発現する癌細胞を標的化して死滅させる。

【0005】

自己又は同種異系環境において癌細胞を特異的に標的化し、死滅させるための抗原受容体改変Ｔ細胞を生成する改善された方法が必要とされている。

【発明の概要】

【0006】

少なくとも１つの抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、及びＣＤ３εシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３γシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３δシグナル伝達ドメイン、又はＤＡＰ－１２シグナル伝達ドメインのうちの１つを含むシグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が開示される。

【0007】

特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する抗ＣＤ１９結合ドメインを含み、ここで、ＨＣＤＲ１は、配列番号２～４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号５～７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号８～１０のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号１２～１４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号１５～１７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号１８～２０のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。

【0008】

特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する抗ＣＤ１９結合ドメインを含み、ここで、ＨＣＤＲ１は、配列番号２４～２６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号２７～２９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号３０～３２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号３４～３６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号３７～３９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４０～４２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。

【0009】

実施形態では、ＣＡＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン、及びＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む第一軽鎖可変ドメインを含み、ここで：重鎖可変ドメインは配列番号１と少なくとも８０％同一であり、軽鎖可変ドメインは配列番号１１と少なくとも８０％同一であるか、又は重鎖可変ドメインは配列番号２４と少なくとも８０％同一であり、軽鎖可変ドメインは配列番号３３と少なくとも８０％同一である。

【0010】

実施形態では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３が単一のポリペプチドに含まれる。

【0011】

実施態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインはｓｃＦｖを含む。実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１～４３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。

【0012】

実施形態では、シグナル伝達ドメインは、配列番号５２、配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインを含む。実施形態では、シグナル伝達ドメインは、配列番号５７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ３γシグナル伝達ドメインを含む。実施形態では、シグナル伝達ドメインは、配列番号５５に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ３δシグナル伝達ドメインを含む。実施形態では、シグナル伝達ドメインは、配列番号５９に記載のアミノ酸配列を含むＤＡＰ－１２シグナル伝達ドメインを含む。

【0013】

実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインである。実施形態では、共刺激ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメインを含む。

【0014】

実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号６２、６５、６７、６９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。

【0015】

本明細書に開示されるＣＡＲをコードする核酸が開示される。そのような核酸を含む組換えベクターが開示される。核酸及び組換えベクターで形質導入された宿主細胞が開示される。実施形態では、宿主細胞は、Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞又はＮＫ細胞を含む。

【0016】

Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞及び／又はＮＫ細胞を含む、医薬組成物が開示される。疾患の治療を必要とする患者における疾患を治療する方法であって、Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞及び／若しくはＮＫ細胞又は医薬組成物を患者に投与することを含む、方法が開示される。対象において免疫応答を誘導するか、又は対象を癌に対して免疫する方法であって、Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞及び／又はＮＫ細胞又は医薬組成物患者を対象に投与することを含む方法が開示される。実施形態では、癌は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬが含まれる）、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄性白血病、慢性若しくは急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、毛様細胞性白血病、ホジキン病、リンパ球増殖性悪性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性高γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、脊髄形成異常症及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性疾患（例えば、無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫又は無症候性骨髄腫））、形質芽細胞性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、プラズマ細胞腫（例えば、形質細胞異常増殖症、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外形質細胞腫、及び多発性骨髄腫）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高槻病、及びＰＥＰ症候群としても知られる）、原発性縦隔大Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞又は大細胞濾胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞性急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞性リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫、又はワルデンシュトレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、形質転換濾胞性リンパ腫（ＴＦＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、多発性骨髄腫、毛様細胞リンパ腫／白血病、又はそれらの組み合わせである。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】第二世代ＣＤ２０ ＣＤ３ゼータ（ＣＤ２０ｚ）ＣＡＲを有するバイシストロン性フォーマットの、ＣＤ３ゼータ、コドン最適化ＣＤ３イプシロン、コドン最適化イプシロン（Δ１８１－１８５）、コドン最適化イプシロン（Ｒ１８３Ｋ）、及びコドン最適化イプシロン（Ｓ１７８Ｎ．Ｒ１８３Ｋ）からなる群から選択されるシグナル伝達ドメインを有する抗ＣＤ１９ ＣＡＲの実施形態を示す。

【0018】

【図2】コドン最適化イプシロン（Δ１８１－１８５）、コドン最適化イプシロン（Ｒ１８３Ｋ）、及びコドン最適化イプシロン（Ｓ１７８Ｎ．Ｒ１８３Ｋ）からなる群から選択されるシグナル伝達ドメインを有する抗ＣＤ１９ ＣＡＲの実施形態を示す。

【0019】

【図3】ゼータ、ゼータ１ｘｘ、イプシロン、デルタ、ガンマ、Ｄａｐ１２、コドン最適化ゼータ、及びコドン最適化イプシロンからなる群から選択されるシグナル伝達ドメインを有する抗ＣＤ１９ ＣＡＲの実施形態を示す。

【発明を実施するための形態】

【0020】

用語
本開示をより容易に理解するために、特定の用語を以下で最初に定義する。以下の用語及び他の用語の追加の定義は、本明細書全体に記載されている。

【0021】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないことを指示しない限り、複数の指示対象を含む。

【0022】

本明細書で使用される場合、特に明記されるか、又は文脈から明らかでない限り、「又は」という用語は包括的であると理解され、「又は」及び「及び」の両方を包含する。

【0023】

本明細書で使用される「及び／又は」という用語は、他のものの有無にかかわらず、２つの指定された特徴又は構成要素の各々の具体的な開示として解釈されるべきである。したがって、本明細書で、「Ａ及び／又はＢ」などの語句で使用される「及び／又は」という用語は、Ａ及びＢ、Ａ又はＢ、Ａ（単独）、並びにＢ（単独）を含むことを意図している。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」などの語句で使用される「及び／又は」という用語は、次の態様、Ａ、Ｂ、及びＣ、Ａ、Ｂ、又はＣ、Ａ又はＣ、Ａ又はＢ、Ｂ又はＣ、Ａ及びＣ、Ａ及びＢ、Ｂ及びＣ、Ａ（単独）、Ｂ（単独）、並びにＣ（単独）の各々を包含することを意図している。

【0024】

本明細書で使用される場合、「例えば」という用語は、単に例として使用され、限定を意図するものではなく、本明細書で明示的に列挙された項目のみを指すと解釈されるべきではない。

【0025】

「以上」、「少なくとも」、「超」などの用語、例えば、「少なくとも１つ」は、限定するものではないが、記載された値より少なくとも、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、若しくは、１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、又はそれ以上を含むものと理解される。その間の任意のより大きい数又は分数も含まれる。

【0026】

逆に、「以下」という用語は、記載された値よりも小さい各値を含む。例えば、「１００個以下のヌクレオチド」には、１００、９９、９８、９７、９６、９５、９４、９３、９２、９１、９０、８９、８８、８７、８６、８５、８４、８３、８２、８１、８０、７９、７８、７７、７６、７５、７４、７３、７２、７１、７０、６９、６８、６７、６６、６５、６４、６３、６２、６１、６０、５９、５８、５７、５６、５５、５４、５３、５２、５１、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、及び０個のヌクレオチドが含まれる。その間の任意のより少ない数又は分数も含まれる。

【0027】

「複数」、「少なくとも２つ」、「２つ以上」、「少なくとも第２」などの用語は、限定するものではないが、少なくとも、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９ ２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、若しくは、１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、又はそれ以上を含むものと理解される。その間の任意のより大きい数又は分数も含まれる。

【0028】

本明細書全体を通して、「含む（comprising）」という語又は「含む（comprises）」若しくは「含む（comprising）」などの変化形は、記載された要素、整数若しくは工程、又は要素、整数若しくは工程の群を含むことを意味するが、任意の他の要素、整数若しくは工程、又は要素、整数若しくは工程の群を除外することを意味しないと理解される。態様が「含む（comprising）」という文言で本明細書に記載されている場合は常に、「からなる（consisting of）」及び／又は「から本質的になる（consisting essentially of）」という用語で記載されている他の類似の態様もまた提示されていることが理解される。

【0029】

具体的に述べられているか、又は文脈から明らかである場合を除き、「約」という用語は、当業者によって決定される特定の値又は組成について許容可能な誤差範囲内にある値又は組成を指し、これは、その値又は組成がどのように測定又は決定されるか、すなわち測定系の限界にある程度依存する。例えば、「約」又は「から本質的になる」は、当該技術分野の慣行によって１又は１超の標準偏差の範囲内であることを意味し得る。「約」又は「から本質的になる」は、最大１０％（すなわち、±１０％）の範囲を意味し得る。したがって、「約」は、記載された値よりも、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、０．０１％、又は０．００１％大きいか又は小さいと理解し得る。例えば、約５ｍｇは、４．５ｍｇ～５．５ｍｇの任意の量を含み得る。更に、特に生物学的な系又はプロセスに関して、この用語は、最大で１桁又は最大で５倍の値を意味し得る。本開示において特定の値又は組成が提示される場合、特に明記しない限り、「約」又は「から本質的になる」の意味は、その特定の値又は組成について許容可能な誤差範囲内にあると想定する必要がある。

【0030】

本明細書に記載されるように、任意の濃度範囲、パーセンテージ（百分率）範囲、比の範囲、又は整数の範囲は、特に明記しない限り、列挙された範囲内の任意の整数の値、及び適宜その分数（整数の１０分の１及び１００分の１など）を含むと理解されるべきである。

【0031】

本明細書で使用される単位、接頭辞及び記号は、Ｓｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）で受け入れられている形式を使用して提示される。数値範囲は、範囲を定義する数を含む。

【0032】

他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、Ｊｕｏ，「Ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」，２^ｎｄ ｅｄ．，（２００１），ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、「Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ＆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」，５^ｔｈ ｅｄ．，（２０１３），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、及び「Ｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」，Ｃａｍｍａｃｋ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，２^ｎｄ ｅｄ，（２００６），Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くについて一般的な辞書を当業者に提供している。

【0033】

「投与すること」は、当業者に既知の様々な方法及び送達システムのいずれかを使用した、対象への、本明細書で開示される操作されたＴ細胞などの薬剤の物理的導入を指す。本明細書中に開示される製剤のための例示的な投与経路としては、例えば、注射又は注入による、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊髄又は他の非経口投与経路が挙げられる。「非経口投与」という語句は、経腸及び局所投与以外の、通常は注射による投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内の注射及び注入、並びにインビボエレクトロポレーションを含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、製剤は、非経口でない経路を介して、例えば、経口的に投与される。他の非経口でない経路としては、局所、表皮又は粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、膣内、直腸、舌下、又は局所が挙げられる。投与はまた、例えば、１回、複数回、及び／又は１回以上の長期間にわたって行われ得る。

【0034】

「活性化された」及び「活性化」という用語は、検出可能な細胞増殖を誘導するために十分に刺激されたＴ細胞の状態を指す。一実施形態では、活性化はまた、誘導されたサイトカイン産生、及び検出可能なエフェクター機能に関連し得る。「活性化Ｔ細胞」という用語は、とりわけ、増殖しているＴ細胞を指す。ＴＣＲのみを介して生成されたシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化に不十分である可能性があり、１つ以上の二次又は共刺激シグナルも必要とされ得る。したがって、Ｔ細胞活性化は、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介した一次刺激シグナル及び１つ以上の二次共刺激シグナルを含む。共刺激は、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介した刺激などの一次活性化シグナルを受けたＴ細胞による増殖及び／又はサイトカイン産生によって証明され得る。

【0035】

「薬剤」という用語は、任意のクラスの分子若しくは実体、又は複数の分子若しくは実体を指すことができ、そのいずれも、例えば、ポリペプチド、核酸、糖類、脂質、小分子、金属、細胞（Ｔ細胞又はかかる細胞の前駆体など）、若しくは生物（例えば、その画分若しくは抽出物）又はその成分であり得る。いくつかの実施形態では、薬剤は、単離された形態又は純粋な形態で利用され得る。いくつかの実施形態では、薬剤は、粗形態又は不純形態で利用され得る。いくつかの実施形態では、薬剤は、例えば、その中に存在するメンバーを同定又は特徴付けるためにスクリーニングされ得る集団、集合又はライブラリとして提供され得る。

【0036】

「同種異系」という用語は、１つの個体に由来し、次いで同じ種の別の個体に導入される任意の材料、例えば、同種異系Ｔ細胞移植を指す。

【0037】

「自己」という用語は、後に再導入される同じ個体に由来する任意の材料を指す。例えば、本明細書に記載の操作された自己細胞療法（engineered autologous cell therapy）の方法は、患者からのリンパ球の採取を含み、次いで、それは、例えばＣＡＲ構築物を発現するように操作され、次いで、同じ患者に投与される。

【0038】

「抗体」（antibody、Ａｂ）という用語は、抗原に特異的に結合する糖タンパク質免疫グロブリンを含むが、これに限定されない。概して、及び抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２本の重（heavy、Ｈ）鎖及び２本の軽（light、Ｌ）鎖、又はその抗原結合分子を含み得る。各Ｈ鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略す）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つの定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略す）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つの定常ドメインＣＬを含む。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（framework region、ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域に組み入れられている、相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に更に細分することができる。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４の順序で配置される３つのＣＤＲ及び４つのＦＲを含む。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。Ａｂの定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。一般に、ヒト抗体は、通例「Ｙ字形状」構造と称されるものに互いに会合する２つの同一の重（Ｈ）鎖ポリペプチド（各々約５０ｋＤ）と、２つの同一の軽（Ｌ）鎖ポリペプチド（各々約２５ｋＤ）で構成される、約１５０ｋＤの四量体剤である。重鎖及び軽鎖は、単一のジスルフィド結合によって互いに連結又は接続され、他の２つのジスルフィド結合が重鎖ヒンジ領域を互いに接続し、その結果、二量体が互いに接続されて、四量体が形成される。天然に産生された抗体も、例えばこのＣＨ２ドメイン上で、グリコシル化される。

【0039】

「ヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリン配列、又はそれとは区別できない配列から生成、組み立て、又は誘導された可変及び定常ドメイン配列を有する抗体を含むことを意図している。いくつかの実施形態では、抗体（又は抗体成分）は、それらのアミノ酸配列が、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされていない残基又は要素（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位特異的変異誘発によって導入された又はインビボでの体細胞変異によって導入された変異）を含むとしても、「ヒト」であるとみなされ得る。「ヒト化」という用語は、非ヒト種の可変ドメイン（例えば、マウス）に由来する配列を有する可変ドメインを有し、ヒト生殖細胞系コード化配列とより類似するように改変されている抗体を含むことが意図される。いくつかの実施形態では、「ヒト化」抗体は、実質的にヒトフレームワークドメインのアミノ酸配列を有する１つ以上のフレームワークドメインと、実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列を有する１つ以上の相補性決定領域とを含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、概してヒト免疫グロブリン定常ドメインのものを含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト重鎖定常ドメインのＣ_Ｈ１、ヒンジ、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３、及び任意選択的に、Ｃ_Ｈ４領域を含み得る。

【0040】

抗体としては、例えば、モノクローナル抗体、組換え産生された抗体、単一特異的抗体、多重特異的抗体（二重特異的抗体を含む）、ヒト抗体、操作された抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖分子と２つの軽鎖分子とを含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖－抗体重鎖対、イントラボディ、抗体融合物（本明細書では「抗体結合」と称されることもある）、ヘテロ結合抗体、単一ドメイン抗体、一価抗体、単鎖抗体又は一本鎖Ｆｖ（single-chain Fv、ｓｃＦｖ）、ラクダ化（camelized）抗体、アフィボディ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体を含む）、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書では「抗体ミメティック」と称されることもある）、及び上記のいずれかの抗原結合断片を挙げることができる。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。抗体はまた、例えば、Ｆａｂ’断片、Ｆｄ’断片、Ｆｄ断片、単離されたＣＤＲ、一本鎖Ｆｖ、ポリペプチド－Ｆｃ融合体、単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲ又はその断片などのサメ単一ドメイン抗体）、ラクダ科動物抗体、単鎖若しくはタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））、Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）、Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）ミニボディ、ＢｉＴＥ（登録商標）、アンキリン反復タンパク質又はＤＡＲＰＩＮｓ（登録商標）、Ａｖｉｍｅｒｓ（登録商標）、ＤＡＲＴ、ＴＣＲ様抗体、Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（登録商標）、Ａｆｆｉｌｉｎｓ（登録商標）、Ｔｒａｎｓ－ｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、Ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）、ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎｓ、Ｆｙｎｏｍｅｒｓ（登録商標）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎｓ（登録商標）、及びＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）を含み得る。

【0041】

免疫グロブリンは、ＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、及びＩｇＭを含むがこれらに限定されない、一般的に既知のアイソタイプのうちのいずれかに由来し得る。ＩｇＧサブクラスはまた、当業者に周知であり、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含むが、これらに限定されない。「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされるＡｂクラス又はサブクラスを指す（例えば、ＩｇＭ又はＩｇＧ１）。「抗体」という用語は、例として、天然に存在する抗体及び天然に存在しない抗体の両方、モノクローナル及びポリクローナル抗体、キメラ及びヒト化抗体、ヒト又は非ヒト抗体、全合成抗体、並びに単鎖抗体を含む。非ヒト抗体は、ヒトにおけるその免疫原性を低減させる組換え法によってヒト化され得る。明示的に述べられていない場合、又文脈が別段の指示をしない限り、「抗体」という用語は、前述の免疫グロブリンのうちのいずれかの抗原結合断片又は抗原結合部分を含み、一価及び二価の断片又は部分、並びに単鎖抗体も含む。

【0042】

「抗原結合分子」、「抗原結合部分」、「抗原結合断片」又は「抗体断片」又は「抗原結合ドメイン」は、分子が由来する抗体の抗原結合部分（例えば、ＣＤＲ）を含む任意の分子を指す。抗原結合分子は、抗原相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、ｄＡｂ、線状抗体、ｓｃＦｖ抗体、及び抗原結合分子から形成された多重特異的抗体が挙げられるが、これらに限定されない。ペプチボディ（すなわち、ペプチド結合ドメインを含むＦｃ融合分子）は、好適な抗原結合分子の別の例である。いくつかの実施形態では、抗原結合分子は、腫瘍細胞上の抗原に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合分子は、過剰増殖性疾患に関与する細胞上の抗原又はウイルス抗原若しくは細菌抗原に結合する。特定の実施形態では、抗原結合分子は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。特定の実施形態では、抗原結合分子又はドメインは、ＣＤ１９に結合する。特定の実施形態では、抗原結合分子又はドメインは、抗原に特異的に結合する抗体断片であり、その相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの１つ以上を含む。更なる実施形態では、抗原結合分子は、一本鎖可変断片（single chain variable fragment、ｓｃＦｖ）である。

【0043】

いくつかの例では、ＣＤＲは、参照抗体（例えば、本開示の抗体）及び／又は本開示で提供されるＣＤＲの配列に見られるものと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、参照ＣＤＲと比較して、配列が同一であるか、又は１、２、３、４もしくは５個（例えば、１～５）のアミノ酸置換を含むかのいずれかで、参照ＣＤＲ（例えば、本開示において、例えば表４に提供されるＣＤＲ）と実質的に同一である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、参照ＣＤＲに対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性（例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を示すという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、参照ＣＤＲと少なくとも９６％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を示すという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、参照ＣＤＲと比較して、ＣＤＲ内の１個のアミノ酸が欠失、付加、又は置換されているが、同時にＣＤＲが、それ以外は参照ＣＤＲのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を有するという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、参照ＣＤＲと比較して、ＣＤＲ内の２、３、４、又は５（例えば、２～５）個のアミノ酸が、欠失、付加、又は置換されているが、同時にＣＤＲが、それ以外は参照ＣＤＲのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を有するという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。様々な実施形態では、抗原結合断片は、参照抗体と同じ抗原に結合する。様々な実施形態では、抗原結合断片は、参照抗体と交差競合し、例えば、参照抗体と実質的に同じ又は同一のエピトープに結合する。

【0044】

抗原結合断片は、任意の手段によって産生され得る。例えば、いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、無傷の抗体の断片化によって酵素的又は化学的に産生され得る。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、組換えにより産生され得る（操作された核酸配列の発現によってなど）。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、全体的又は部分的に合成により産生され得る。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０アミノ酸以上の長さを有してもよく、いくつかの実施形態では、少なくとも約２００アミノ酸（例えば、５０～１００、５０～１５０、５０～２００、又は１００～２００アミノ酸）の長さを有してもよい。

【0045】

「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、互換的に使用される。可変領域は、典型的には、抗体の一部、概して、軽鎖又は重鎖の一部、典型的には成熟重鎖のアミノ末端１１０～１２０アミノ酸及び成熟軽鎖の約９０～１１５アミノ酸を指し、これらは抗体間で配列が大きく異なり、その特定の抗原に対する特定の抗体の結合及び特異性に使用される。配列の変動性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中し、可変ドメイン内のより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。いかなる特定の機構又は理論にも束縛されることを望まないが、軽鎖及び重鎖のＣＤＲは、抗原との抗体の相互作用及び特異性を主に担うと考えられている。特定の実施形態では、可変領域は、ヒト可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、げっ歯類又はマウスＣＤＲ及びヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。実施形態では、可変領域は霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。特定の実施形態では、可変領域は、げっ歯類又はマウスＣＤＲ及び霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。

【0046】

「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」という用語は、抗体又はその抗原結合分子の軽鎖可変領域を指すために互換的に使用される。

【0047】

「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」という用語は、抗体又はその抗原結合分子の重鎖可変領域を指すために互換的に使用される。

【0048】

ＣＤＲの多くの定義が、一般に、使用されている：Ｋａｂａｔ番号付け、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付け、ＡｂＭ番号付け、又は接触番号付け。ＡｂＭ定義は、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ社のＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される２つの間の折衷案である。接触定義は、利用可能な複合結晶構造の分析に基づく。

【0049】

「Ｋａｂａｔ番号付け」などの用語は、当該技術分野で認識されており、抗体又はその抗原結合分子の重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸残基に番号付けするシステムを指す。特定の態様では、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って決定できる（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ ＆ Ｗｕ ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９０：３８２－３９１及びＫａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２を参照されたい）。Ｋａｂａｔ番号付けシステムを使用すると、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸位置３１～３５（任意選択的に３５に続いて１つ又は２つの追加のアミノ酸を含むことができる（Ｋａｂａｔ番号付けスキームでは、３５Ａ及び３５Ｂと称される））（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０～６５（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸位置９５～１０２（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔ番号付けシステムを使用すると、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸位置２４～３４（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０～５６（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸位置８９～９７（ＣＤＲ３）に存在する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームに従って決定されている。

【0050】

特定の態様では、抗体のＣＤＲは、免疫グロブリン構造ループの位置を指すＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームに従って決定することができる（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ ＆ Ｌｅｓｋ ＡＭ，（１９８７），Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－９１７、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７３：９２７－９４８、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２７：７９９－８１７、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ Ａ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５（１）：１７５－８２、及び米国特許第７，７０９，２２６号を参照されたい）。典型的には、Ｋａｂａｔ番号付け規則を使用する場合、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループは重鎖アミノ酸２６～３２、３３、又は３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ２ループは重鎖アミノ酸５２～５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ３ループは重鎖アミノ酸９５～１０２に存在し、一方、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ１ループは軽鎖アミノ酸２４～３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ２ループは軽鎖アミノ酸５０～５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｌ３ループは軽鎖アミノ酸８９～９７に存在する。Ｋａｂａｔ番号付け規則を使用して番号付けされた場合の、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－ＨＩループの終了は、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４との間で変化する（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームがＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を配置するためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終了し、３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終了し、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキームに従って決定されている。

【0051】

「定常領域」及び「定常ドメイン」という用語は交換可能であり、当該技術分野で一般的な意味を有する。定常領域は、抗体部分であり、例えば、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示すことができる、軽鎖及び／又は重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、概して、免疫グロブリン可変ドメインと比較してより保存されたアミノ酸配列を有する。

【0052】

抗体に関して使用される場合、「重鎖」という用語は、任意の異なるタイプ、例えば、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）及びミュー（μ）を指してもよく、これらのタイプは、ＩｇＧのサブクラス、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３及びＩｇＧ_４を含む、抗体のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭクラスをそれぞれ生成する。

【0053】

抗体に関して使用される場合、「軽鎖」という用語は、任意の異なるタイプ、例えば、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）又はラムダ（λ）を指してもよい。軽鎖アミノ酸配列は、当該技術分野で周知である。特定の実施形態では、軽鎖は、ヒト軽鎖である。

【0054】

「抗原」は、ヒト又は動物に注射又は吸収される組成物（腫瘍特異的タンパク質を含むものなど）を含む、ヒト又は動物における抗体の産生又はＴ細胞応答を刺激し得る化合物、組成物、又は物質を指す。抗原は、開示された抗原などの異種抗原によって誘発されるものを含む、特定の体液性又は細胞性免疫の産物と反応する。「標的抗原」又は「目的の標的抗原」は、他の正常な（所望の）細胞の表面に実質的に見られず、本明細書で企図されるＣＡＲの結合ドメインが結合するように設計されている抗原である。当業者は、事実上、全てのタンパク質又はペプチドを含む任意の巨大分子が抗原として機能し得ることを容易に理解するであろう。抗原は、内因的に発現、すなわちゲノムＤＮＡによって発現されても、又は組換えによって発現されてもよい。抗原は、癌細胞などの特定の組織に特異的であることも、又は広く発現されることもできる。更に、より大きな分子の断片が抗原として作用し得る。一実施形態では、抗原は、腫瘍抗原である。特定の一実施形態では、抗原は、ＣＤ１９の全て又は断片である。特定の実施形態では、抗原は、以下に限定されないが、７０７－ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＦＰ（α（ａ）－フェトタンパク質）、ＡＲＴ－４（Ｔ４細胞によって認識される腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原、ｂ－カテニン／ｍ、ｂ－カテニン／変異型）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、Ｂｃｒ－ａｂｌ（易切断分類領域－Ａｂｅｌｓｏｎ）、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）、ＣＤ１９（分化分類１９）、ＣＤ２０（分化分類２０）、ＣＤ２２（分化分類２２）、ＣＤ３０（分化分類３０）、ＣＤ３３（分化分類３３）、ＣＤ４４ｖ７／８（分化分類４４、エクソン７／８）、ＣＡＭＥＬ（黒色腫上のＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ－１（癌胎児抗原ペプチド－１）、ＣＡＳＰ－８（カスパーゼ－８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７、変異型）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４、変異型）、ＣＥＡ（癌胎児抗原）、Ｃ型レクチン様１（ＣＬＬ－１）、ＣＴ（癌／精巣（抗原））、Ｃｙｐ－Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原、黒色腫）、ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子受容体、バリアントＩＩＩ）、ＥＧＰ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ－４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ－２、－３、４）、ＥＬＦ２Ｍ（伸長因子２、変異型）、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１（Ｅｔｓバリアント遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧＤ２（ジシアロガングリオシド２）、ＧＤ３（ジシアロガングリオシド３）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＧｎＴ－Ｖ（Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素Ｖ）、Ｇｐ１００（糖タンパク質１００ｋＤ）、ＨＡＧＥ（ヘリコース抗原）、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ（ヒト上皮受容体－２／神経性、ＥＧＦＲ２としても知られる）、ＨＬＡ－Ａ（ヒト白血球抗原－Ａ）、ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）、ＨＳＰ７０－２Ｍ（熱ショックタンパク質７０－２、変異型）、ＨＳＴ－２（ヒト印環腫瘍－２）、ｈＴＥＲＴ又はｈＴＲＴ（ヒトテロメラーゼ逆転写酵素）、ｉＣＥ（腸管カルボキシルエステラーゼ）、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２（インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、κ－軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ－Ｌ－フコース：ｂ－Ｄ－ガラクトシダーゼ２－ａ－Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬｅＹ（ルイス－Ｙ抗体）、Ｌ１ ＣＡＭ（Ｌ１細胞接着分子）、ＭＡＧＥ（黒色腫抗原）、ＭＡＧＥ－Ａ１（黒色腫関連抗原１）、メソセリン、マウスＣＭＶ感染細胞、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ（Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原－Ｉ／黒色腫抗原Ａ）、ＭＣ１ Ｒ（メラノコルチン１受容体）、Ｍｙｏｓｉｎ／ｍ（ミオシン、変異型）、ＭＵＣ１（ムチン１）、ＭＵＭ－１、－２、－３（黒色腫遍在性、変異型１、２、３）、ＮＡ８８－Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ ｃＤＮＡクローン）、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２、メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＢＲ－１（ニューヨーク乳房分化抗原１）、ＮＹ－ＥＳＯ－１（ニューヨーク食道扁平細胞カルシノーマ－１）、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、Ｐ１５（プロテイン１５）、ｐ１９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ（１９０ＫＤのｂｃｒ－ａｂｌタンパク質）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫の優先的発現抗原）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＡＧＥ（腎抗原）、ＲＵ１又はＲＵ２（腎偏在性１又は２）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＳＡＲＴ－１又はＳＡＲＴ－３（腫瘍を拒絶する扁平抗原１又は３）、ＳＳＸ１、－２、－３、４（滑膜肉腫Ｘ１、－２、－３、－４）、ＴＡＡ（腫瘍関連抗原）、ＴＡＧ－７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓ－ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースリン酸イソメラーゼ、変異型）、ＴＲＰ－１（チロシナーゼ関連タンパク質１、又はｇｐ７５）、ＴＲＰ－２（チロシナーゼ関連タンパク質２）、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ－２／イントロン２）、ＶＥＧＦ－Ｒ２（血管内皮増殖因子受容体２）、又はＷＴ１（ウィルムス腫瘍遺伝子）を含み得る。

【0055】

「標的」は、結合ドメイン、抗原結合系、ＣＡＲ又は抗原結合剤、例えば、抗体によって結合された任意の分子である。

【0056】

「抗原特異的標的化領域」（Antigen-specific targeting region、ＡＳＴＲ）は、特異的抗原を標的とするＣＡＲの領域を指す。ＣＡＲ上の標的化領域は、細胞外である。いくつかの実施形態では、抗原特異的標的化領域は、抗体又はその機能的等価物又はその断片又はその誘導体を含み、標的化領域の各々は、異なる抗原を標的とする。標的化領域は、全長重鎖、Ｆａｂ断片、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、二価単鎖抗体又はダイアボディを含み得、これらの各々は、標的抗原に特異的である。しかしながら、連結されたサイトカイン（サイトカイン受容体を有する細胞の認識をもたらす）、アフィボディ、天然に存在する受容体由来のリガンド結合ドメイン、受容体（例えば、腫瘍細胞上の）に対する可溶性タンパク質／ペプチドリガンド、ペプチド、及び免疫応答を促すワクチンなどの多数の代替物が存在し、これらは各々、本開示の様々な実施形態において使用され得る。実際、当業者に理解されるように、所定の抗原に高い親和性で結合するほとんどの任意の分子は、抗原特異的標的化領域として使用され得る。

【0057】

「抗原提示細胞」又は「ＡＰＣ」は、Ｔ細胞に対して、抗原を処理し、提示する細胞を指す。例示的なＡＰＣは、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、特定の活性化上皮細胞、並びにＴＣＲ刺激及び適切なＴ細胞共刺激が可能な他の細胞型を含む。

【0058】

「抗腫瘍効果」は、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞の数の減少、腫瘍細胞増殖の減少、転移の数の減少、全生存期間又は無増悪生存期間の増加、平均余命の延長、又は腫瘍に関連する様々な生理学的症状の改善として提示され得る生物学的効果を指す。抗腫瘍効果はまた、腫瘍の発生の予防を指し得る。

【0059】

２つの事象又は実体は、一方の存在、レベル、及び／又は形態が他方の存在、レベル、及び／又は形態と相関する場合、互いに「会合」している。例えば、実体（例えば、ポリペプチド、遺伝子シグネチャー、代謝産物、微生物など）は、その存在、レベル、及び／又は形態が、疾患、障害、又は状態の発生率及び／又は感受性と（例えば、関連集団にわたって）相関する場合に、疾患、障害、又は状態と関連していると考えられる。例えば、２つ以上の実体は、それらが直接又は間接的に相互作用する場合、それらが互いに物理的に（例えば結合するなど）近接し、かつ／又は物理的に近接したままとなるように、互いに物理的に「会合」している。更なる例では、互いに物理的に会合している２つ以上の実体は、例えば、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、磁性、及びそれらの組み合わせによって、互いに共有結合的に連結若しくは接続されているか、又は非共有結合的に会合している。

【0060】

「結合親和性」とは、概して、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別段に指定しない限り、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は、概して、解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表され得る。親和性は、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）及び平衡会合定数（Ｋ_Ａ）を含むがこれらに限定されない、当該技術分野で既知の多くの方法で測定及び／又は表現され得る。Ｋ_Ｄは、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎの商から計算され、一方、Ｋ_Ａは、ｋ_ｏｎ／ｋ_ｏｆｆの商から計算される。ｋ_ｏｎは、例えば、抗原に対する抗体の会合速度定数を指し、ｋ_ｏｆｆは、例えば、抗原に対する抗体の解離を指す。ｋ_ｏｎ及びｋ_ｏｆｆは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）又はＫｉｎＥｘＡなどの当業者に既知の技術によって決定することができる。

【0061】

「ＫＤ」（Ｍ）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離平衡定数、又は抗原に結合する抗体若しくは抗体結合断片の解離平衡定数を指す。Ｋ_Ｄと結合親和性との間には反比例の関係があり、したがって、Ｋ_Ｄ値が小さいほど、親和性が高い、すなわち強い。したがって、「より高い親和性」又は「より強い親和性」という用語は、相互作用を形成するより高い能力、したがってより小さいＫ_Ｄ値に関し、逆に、「より低い親和性」又は「より弱い親和性」という用語は、相互作用を形成するより低い能力、したがってより大きいＫ_Ｄ値に関する。いくつかの状況では、別の相互作用パートナー分子（例えば、抗原Ｙ）に対する分子（例えば、抗体）の結合親和性と比較して、その相互作用パートナー分子（例えば、抗原Ｘ）に対する特定の分子（例えば、抗体）のより高い結合親和性（又はＫ_Ｄ）は、より大きいＫ_Ｄ（より低い、又はより弱い親和性）をより小さいＫ_Ｄ（より高い、又はより強い親和性）で割ることによって決定される結合比として表され得、例えば、場合によっては、５倍又は１０倍大きい結合親和性として表され得る。

【0062】

「ｋ_ｄ」（秒－１又は１／ｓ）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度定数、又は抗体若しくは抗体結合断片の解離速度定数を指す。当該値は、ｋ_０ｉｒ値とも称される。

【0063】

「ｋ_ａ」（Ｍ－１×秒－１又は１／Ｍ）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度定数、又は抗体若しくは抗体結合断片の会合速度定数を指す。

【0064】

「Ｋ_Ａ」（Ｍ－１又は１／Ｍ）という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の会合平衡定数、又は抗体若しくは抗体結合断片の会合平衡定数を指す。会合平衡定数は、ｋ_ａをｋ_ｄで割ることによって得られる。

【0065】

「結合」という用語は、一般に、２つ以上の実体間の非共有結合性会合を指す。直接結合は、実体又は部分間の物理的接触を伴う。「間接的な」結合は、１つ以上の中間実体との物理的接触による物理的相互作用を含む。２つ以上の実体間の結合は、例えば、相互作用する実体若しくは部分が単独で、又は（例えば、共有結合若しくは他の様式で担体実体と、及び／若しくは細胞のような生物学的系内で会合している間などの）より複雑な系において研究される場合などの様々な状況のいずれかにおいて評価され得る。

【0066】

「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」及び「特異的に認識する」という用語は、抗体の文脈において類似の用語であり、そのような結合が当業者によって理解されているように、抗原（例えば、エピトープ又は免疫複合体）に結合する分子を指す。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、他のペプチド又はポリペプチドに、例えば免疫アッセイ、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）、ＫｉｎＥｘＡ ３０００機器（Sapidyne Instruments、Boise，ＩＤ）、又は当該技術分野で既知の他のアッセイによって決定されるように、一般的により低い親和性で結合し得る。特定の実施形態では、ある抗原に特異的に結合する分子は、分子が別の抗原に結合するときのＫ_Ａよりも少なくとも２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、４ｌｏｇ、又はそれより大きいＫ_Ａでその抗原に結合する。結合は、結合ドメイン、抗体、又はＣＡＲと標的ではない実体（すなわち、非標的）との会合と比較して、結合ドメイン、抗体、又はＣＡＲと、結合ドメイン、抗体、又はＣＡＲの標的との優先的な会合を含み得る。いくつかの実施形態では、結合ドメイン、抗体、又はＣＡＲと標的との結合が、結合ドメイン、抗体、又はＣＡＲと非標的との結合と比較して、２倍超、５倍超、１０倍超、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、又は１００倍超である場合、結合ドメイン、抗体、又はＣＡＲは、標的に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、結合ドメイン、抗体、又はＣＡＲは、結合親和性が約１０^－５Ｍ未満、約１０^－６Ｍ未満、約１０^－７Ｍ未満、約１０^－８Ｍ未満、又は約１０^－９Ｍ未満である場合、標的に選択的に結合する。

【0067】

別の実施形態では、抗原に特異的に結合する分子は、約１×１０^－７Ｍの解離定数（Ｋ_ｄ）で結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合分子は、Ｋ_ｄが約１×１０^－９Ｍ～約５×１０^－９Ｍである場合、「高親和性」で抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合分子は、Ｋ_ｄが１×１０^－１０Ｍ～約５×１０^－１０Ｍである場合、「非常に高親和性」で抗原に特異的に結合する。一実施形態では、抗原結合分子は１０^－９ＭのＫ_ｄを有する。一実施形態では、解離速度は約１×１０^－５未満である。実施形態では、抗原結合分子は、約１×１０^－１０Ｍ～約５×１０^－１０ＭのＫ_ｄでＣＤ１９に結合する。

【0068】

特定の実施形態では、本明細書に提供されるのは、標的ヒト抗原に結合する抗体又はその抗原結合分子であり、例えば、特定の実施形態では、抗原結合分子は、例えば、ラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、又は速度論的排除アッセイによって測定された場合、別の種の標的抗原に対してよりも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、又はそれよりも高い親和性で、ＣＤ１９に結合する。特定の実施形態では、標的ヒト抗原に結合する、本明細書に記載の抗体又はその抗原結合分子は、例えば、ラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、又は速度論的排除アッセイによって測定された場合、抗体又はその抗原結合分子のヒト抗原への結合の１０％、１５％、又は２０％未満で、別の種の標的抗原に結合する。

【0069】

「癌」は、体内の異常細胞のコントロール不能な増殖を特徴とする様々な疾患の広範な群を指す。調節されない細胞分裂及び増殖は、隣接組織に侵入し、リンパ系又は血流を介して身体の遠位部分に転移することもある悪性腫瘍の形成をもたらす。「癌」又は「癌組織」は、腫瘍を含み得る。本開示の方法によって治療され得る癌の例としては、リンパ腫、白血病、骨髄腫及び他の白血球悪性腫瘍を含む免疫系の癌が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、例えば、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚又は眼内悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、多発性骨髄腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（non-Hodgkin’s lymphoma、ＮＨＬ）、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（primary mediastinal large B cell lymphoma、ＰＭＢＣ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（diffuse large B cell lymphoma、ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（follicular lymphoma、ＦＬ）、形質転換型濾胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫（splenic marginal zone lymphoma、ＳＭＺＬ）、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部肉腫、尿道癌、陰茎癌、慢性又は急性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病（acute lymphoblastic leukemia、ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、慢性リンパ性白血病（chronic lymphocytic leukemia、ＣＬＬ）、小児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓又は尿管の癌、腎盂癌、中枢神経系（central nervous system、ＣＮＳ）の新生物、中枢神経系原発リンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストによって誘発されたものを含む環境的に誘発された癌、他のＢ細胞悪性腫瘍、及び上記の癌の組み合わせに由来する腫瘍の腫瘍サイズを縮小するために使用され得る。１つの特定の実施形態では、癌は、多発性骨髄腫である。特定の癌は、化学療法又は放射線療法に反応性であり得、又は特定の癌は難治性であり得る。難治性癌は、外科的介入に適していない癌を指し、難治性癌は、最初から化学療法又は放射線療法に応答しないか、又は癌が時間の経過と共に非応答になるかのいずれかである。癌は更に、他に特定されないびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（diffuse large B-cell lymphoma、ＤＬＢＣＬ）、２選択以上の全身療法後の縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫から生じるＤＬＢＣＬ、及び濾胞性リンパ腫を含む、２選択以上の全身療法後の再発性又は難治性を含む。

【0070】

「ケモカイン」は、細胞の走化性又は方向性運動を媒介するサイトカインの一種である。ケモカインの例としては、ＩＬ－８、ＩＬ－１６、エオタキシン、エオタキシン－３、マクロファージ由来ケモカイン（macrophage-derived chemokine、ＭＤＣ又はＣＣＬ２２）、単球走化性タンパク質１（monocyte chemotactic protein 1、ＭＣＰ－１又はＣＣＬ２）、ＭＣＰ－４、マクロファージ炎症性タンパク質１α（macrophage inflammatory protein 1α、ＭＩＰ－１α、ＭＩＰ－１ａ）、ＭＩＰ－１β（ＭＩＰ－１ｂ）、ガンマ誘発性タンパク質１０（ＩＰ－１０）、並びに胸腺及び活性化制御ケモカイン（thymus and activation regulated chemokine、ＴＡＲＣ又はＣＣＬ１７）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0071】

「キメラ抗原受容体」又は「ＣＡＲ」は、抗原結合時に結合ドメイン及び免疫細胞（例えば、ナイーブＴ細胞、中央メモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞、ｉＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞又はそれらの組み合わせなどのＴ細胞）を活性化する手段を含むように操作された分子を指す。ＣＡＲは、人工Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、又はキメラ免疫受容体としても既知である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、結合ドメイン、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、１つ以上の共刺激ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作されたＴ細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞と称され得る。

【0072】

「細胞外ドメイン」（又は「ＥＣＤ」）は、ポリペプチドが細胞膜に存在する場合、細胞膜の外側、細胞外空間に存在すると理解されるポリペプチドの一部を指す。

【0073】

「細胞外リガンド結合ドメイン」という用語は、本明細書で使用される場合、リガンド、例えば、細胞表面分子に結合することができるオリゴ又はポリペプチドを指す。例えば、細胞外リガンド結合ドメインは、特定の疾患状態（例えば、癌）に関連する標的細胞上の細胞表面マーカーとして作用するリガンドを認識するように選択され得る。リガンドとして作用し得る細胞表面マーカーの例としては、ウイルス、細菌及び寄生虫感染、自己免疫疾患並びに癌細胞に関連するものが挙げられる。

【0074】

ＣＡＲの結合ドメインの後に、「スペーサー」又は「ヒンジ」が続く場合があり、これは、抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離れるように移動させて、適切な細胞／細胞接触、抗原結合、及び活性化を可能にする領域を指す（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１９９９、６：４１２－４１９）。ＣＡＲにおけるヒンジ領域は、概して、膜貫通（transmembrane、ＴＭ）ドメインと結合ドメインとの間にある。特定の実施形態では、ヒンジ領域は、免疫グロブリンヒンジ領域であり、野生型免疫グロブリンヒンジ領域又は改変された野生型免疫グロブリンヒンジ領域であり得る。本明細書に記載のＣＡＲにおいて使用される他の例示的なヒンジ領域は、ＣＤ８アルファ、ＣＤ４、ＣＤ２８、及びＣＤ７などの１型の膜タンパク質の細胞外領域に由来するヒンジ領域を含み、これらは、これらの分子の野生型ヒンジ領域であり得るか、又は変更され得る。

【0075】

「膜貫通」領域又はドメインは、細胞外結合部分を免疫エフェクター細胞の原形質膜に固定し、結合ドメインの標的抗原への結合を促進するＣＡＲの部分である。膜貫通ドメインは、ＣＤ３ゼータ膜貫通ドメインであり得るが、しかしながら、用いられ得る他の膜貫通ドメインとしては、ＣＤ８アルファ、ＣＤ４、ＣＤ２８、ＣＤ４５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、及びＣＤ１５４から得られるものが含まれる。一実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ１３７の膜貫通ドメインである。特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、合成であり、その場合、それはロイシン及びバリンなどの疎水性残基を主に含む。

【0076】

「細胞内シグナル伝達ドメイン」又は「シグナル伝達ドメイン」は、標的抗原に結合する効果的なＣＡＲのメッセージを免疫エフェクター細胞の内部に伝達して、ＣＡＲ結合標的細胞への細胞毒性因子の放出、又は細胞外ＣＡＲドメインへの抗原結合で誘発された他の細胞応答を含む、エフェクター細胞機能、例えば、活性化、サイトカイン産生、増殖、及び細胞毒性活性を誘発することに関与する、キメラ抗原受容体タンパク質の一部を指す。「エフェクター機能」という用語は、細胞の特殊な機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性又はサイトカインの分泌を含む援助若しくは活性であり得る。したがって、本明細書で互換的に使用される「細胞内シグナル伝達ドメイン」又は「シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞を特殊な機能を果たすように指向するタンパク質の部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体が用いられ得るが、多くの場合、ドメイン全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分が使用される限りにおいて、そのような切断部分は、エフェクター機能シグナルを変換する限り、ドメイン全体の代わりに使用され得る。細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切断部分を含むことを意味する。細胞内シグナル伝達ドメインは、「シグナル形質導入ドメイン」としても既知であり、典型的には、ヒトＣＤ３又はＦｃＲｙ鎖の部分に由来する。

【0077】

Ｔ細胞受容体のみを介して生成されたシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化に不十分であり、二次又は共刺激シグナルも必要とされることが既知である。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの異なるクラスの細胞質シグナル伝達配列：Ｔ細胞受容体を介して抗原依存的一次活性化を開始するもの（一次細胞質シグナル伝達配列）及び抗原非依存的な様式で作用して二次又は共刺激シグナルを提供するもの（二次細胞質シグナル伝達配列）によって媒介されると言うことができる。一次活性化様式で作用する細胞質シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして既知であるシグナル伝達モチーフを含有し得る。本開示において特に有用であるＩＴＡＭ含有一次細胞質シグナル伝達配列の例としては、ＤＡＰ－１２、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロンに由来するものが挙げられる。

【0078】

本明細書で使用される場合、「共刺激シグナル伝達ドメイン」又は「共刺激ドメイン」という用語は、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分を指す。共刺激分子は、抗原への結合時にＴリンパ球の効率的な活性化及び機能に必要とされる第２のシグナルを提供する、抗原受容体又はＦｃ受容体以外の細胞表面分子である。かかる共刺激分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＤ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ２及びＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが挙げられる。したがって、本開示は、ＣＤ２８及び４－１ＢＢに由来する例示的な共刺激ドメインを提供するが、他の共刺激ドメインは、本明細書に記載のＣＡＲとの使用のために企図される。１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインの包含は、ＣＡＲ受容体を発現するＴ細胞の有効性及び増殖を増強し得る。細胞内シグナル伝達及び共刺激シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメインのカルボキシル末端にタンデムで任意の順序で連結され得る。

【0079】

ＣＤ３又はＦｃＲガンマ由来のシグナル伝達ドメインを含有するように操作されたｓｃＦｖベースのＣＡＲは、Ｔ細胞活性化及びエフェクター機能のための強力なシグナルを送達することが示されているが、それらは、付随する共刺激シグナルの非存在下でＴ細胞生存及び増殖を促進するシグナルを誘発するのに十分ではない。１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４及びＣＤ２７８に由来する細胞内共刺激ドメイン）と一緒に、結合ドメイン、ヒンジ、膜貫通及びシグナル伝達ドメインを含有する他のＣＡＲは、インビトロでＣＡＲ発現Ｔ細胞において、並びに動物モデル及び癌患者において、抗腫瘍活性並びに増加したサイトカイン分泌、溶解活性、生存及び増殖をより効果的に指向し得る（Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２００９、１７：１４５３－１４６４、Ｚｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２０１０、１８：４１３－４２０、Ｃａｒｐｅｎｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２００９、１０６：３３６０－３３６５）。

【0080】

「共刺激シグナル」は、ＴＣＲ／ＣＤ３ライゲーションなどの一次シグナルと組み合わせて、限定するものではないが、重要な分子の増殖及び／又はアップレギュレーション又はダウンレギュレーションなどのＴ細胞応答をもたらすシグナルを指す。

【0081】

「共刺激リガンド」は、Ｔ細胞上の同族共刺激分子に特異的に結合する抗原提示細胞上の分子を含む。共刺激リガンドの結合は、限定するものではないが、増殖、活性化、分化などのＴ細胞応答を媒介するシグナルを提供する。共刺激リガンドは、刺激分子によって提供される一次シグナルに加えて、例えば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体と、ペプチドを負荷した主要組織適合遺伝子複合体（major histocompatibility complex、ＭＨＣ）分子との結合によって、シグナルを誘導する。共刺激リガンドとしては、限定するものではないが、３／ＴＲ６、４－１ＢＢリガンド、Ｔｏｌｌリガンド受容体に結合するアゴニスト又は抗体、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ４０、ＣＤ７、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（herpes virus entry mediator、ＨＶＥＭ）、ヒト白血球抗原Ｇ（human leukocyte antigen G、ＨＬＡ－Ｇ）、ＩＬＴ４、免疫グロブリン様転写物（immunoglobulin-like transcript、ＩＬＴ）３、誘導性共刺激リガンド（inducible costimulatory ligand、ＩＣＯＳ－Ｌ）、細胞間接着分子（intercellular adhesion molecule、ＩＣＡＭ）、Ｂ７－Ｈ３と特異的に結合するリガンド、リンホトキシンベータ受容体、ＭＨＣクラスＩ鎖関連タンパク質Ａ（MHC class I chain-related protein A、ＭＩＣＡ）、ＭＨＣクラスＩ鎖関連タンパク質Ｂ（MHC class I chain-related protein B、ＭＩＣＢ）、ＯＸ４０リガンド、ＰＤ－Ｌ２、又はプログラム死（programmed death、ＰＤ）Ｌ１を挙げることができる。共刺激リガンドとしては、限定するものではないが、Ｔ細胞上に存在する共刺激分子と特異的に結合する抗体、例えば、限定するものではないが、４－１ＢＢ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ７、ＩＣＯＳ、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、リンパ球機能関連抗原１（lymphocyte function-associated antigen-1、ＬＦＡ－１）、ナチュラルキラー細胞受容体Ｃ（ＮＫＧ２Ｃ）、ＯＸ４０、ＰＤ－１、又は腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４（tumor necrosis factor superfamily member 14、ＴＮＦＳＦ１４又はＬＩＧＨＴ）が挙げられる。

【0082】

「共刺激分子」は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それによってＴ細胞による共刺激応答、例えば、限定するものではないが、増殖を媒介するＴ細胞上の同族結合パートナーである。共刺激分子には、それだけに限らないが、「共刺激分子」が、共刺激リガンドと特異的に結合し、それによってＴ細胞による共刺激応答、例えば限定するものではないが、増殖を媒介するＴ細胞上の同族結合パートナーであることが含まれる。共刺激分子としては、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ ３３、ＣＤ ４５、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＣＤ１６、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３（アルファ、ベータ、デルタ、イプシロン、ガンマ、ゼータ）、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ４、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５、ＣＤ６４、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８０、ＣＤ８３リガンド、ＣＤ８４、ＣＤ８６、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤｌ－ｌａ、ＣＤｌ－ｌｂ、ＣＤｌ－ｌｃ、ＣＤｌ－ｌｄ、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴ ＡＭ、ＤＡＰ－１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢｌ、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－１、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４、ＴＮＦＳＦ１４）、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１（ＣＤｌ ｌａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラスＩ分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ－１、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦ、ＴＮＦｒ、ＴＮＦＲ２、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、若しくはＶＬＡ－６、又はそれらの断片、切断型、若しくは組み合わせが挙げられる。

【0083】

「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。特定の実施形態では、ＣＤＲ内又はその抗体又はその抗原結合分子のフレームワーク領域内の１つ以上のアミノ酸残基は、同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えることができる。一般に、２つの配列は、対応する位置に保存的アミノ酸置換を含有する場合、概して「実質的に同様」とみなされる。例えば、特定のアミノ酸は、概して、「疎水性」又は「親水性」アミノ酸として、及び／又は「極性」又は「非極性」側鎖を有するものとして分類される。同じ種類の別のアミノ酸の置換は、保存的置換とみなされ得る。例示的なアミノ酸分類を以下の表２及び表３に要約する。

【0084】

「併用療法」は、対象が２つ以上の治療レジメン（例えば、２つ以上の治療部分）に同時に曝露されるそれらの状況を指す。いくつかの実施形態では、２つ以上のレジメンは、同時に投与されてもよく、いくつかの実施形態では、そのようなレジメンは、連続して投与され得（例えば、第１のレジメンの全ての「用量」は、第２のレジメンの任意の用量の投与前に投与される）、いくつかの実施形態では、そのような薬剤は、重複する投与レジメンで投与される。いくつかの実施形態では、併用療法の「投与」は、組み合わせにおいて他の薬剤又はモダリティの投与を受ける対象への１つ以上の薬剤又はモダリティの投与を含み得る。明確にするために、併用療法は、個々の薬剤が単一の組成物で一緒に（又は必然的に同時に）投与されることを必要としないが、いくつかの実施形態では、２つ以上の薬剤又はその活性部分が、組み合わせ組成物で、又は組み合わせ化合物（例えば、単一の化学錯体又は共有結合実体の一部として）でさえ一緒に投与され得る。

【0085】

「に対応する」は、適切な参照分子又は組成物との比較を通して、分子又は組成物中の構造要素の位置／同一性を示すために使用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ポリマー中のモノマー残基（例えば、ポリペプチド中のアミノ酸残基又はポリヌクレオチド中の核酸残基）が、適切な参照ポリマー中の残基「に対応する」ものとして同定され得る。例えば、単純化の目的のために、ポリペプチド中の残基が、参照関連ポリペプチドに基づく標準的な番号付けシステムを使用して指定されてもよく、その結果、例えば、１００位の残基「に対応する」アミノ酸は、それが参照ポリペプチド中の１００位に見出される残基に対応する限り、実際にはアミノ酸鎖中の１００番目のアミノ酸である必要はない。例えば、本開示によるポリペプチド及び／又は核酸中の「対応する」残基を同定するために利用され得る、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＣＳ－ＢＬＡＳＴ、ＣＵＤＡＳＷ＋＋、ＤＩＡＭＯＮＤ、ＦＡＳＴＡ、ＧＧＳＥＡＲＣＨ／ＧＬＳＥＡＲＣＨ、Ｇｅｎｏｏｇｌｅ、ＨＭＭＥＲ、ＨＨｐｒｅｄ／ＨＨｓｅａｒｃｈ、ＩＤＦ、Ｉｎｆｅｒｎａｌ、ＫＬＡＳＴ、ＵＳＥＡＲＣＨ、ｐａｒａｓａｉｌ、ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ、ＰＳＩ－Ｓｅａｒｃｈ、ＳｃａｌａＢＬＡＳＴ、Ｓｅｑｕｉｌａｂ、ＳＡＭ、ＳＳＥＡＲＣＨ、ＳＷＡＰＨＩ、ＳＷＡＰＨＩ－ＬＳ、ＳＷＩＭＭ、又はＳＷＩＰＥなどのソフトウェアプログラムを含む、様々な配列アラインメント戦略が利用可能である。

【0086】

抗原と第１の抗原結合分子との間の相互作用が、参照結合分子の抗原と相互作用する能力を遮断、制限、阻害、又はさもなければ低減する場合、抗体、その抗原結合断片、ＣＡＲ又はＴＣＲなどの抗原結合分子は、抗体又はその抗原結合断片などの参照結合分子と「交差競合」する。交差競合は、完全であり得、例えば、抗原結合分子の抗原への結合は、参照結合分子の抗原に結合する能力を完全に遮断するか、又は部分的であり得、例えば、抗原結合分子の抗原への結合は、参照抗原結合分子の抗原に結合する能力を低減させる。特定の実施形態では、参照抗原結合分子と交差競合する抗原結合分子は、参照抗原結合分子と同じ又は重複するエピトープに結合する。他の実施形態では、参照抗原結合分子と交差競合する抗原結合分子は、参照抗原結合分子とは異なるエピトープに結合する。多くの種類の競合結合アッセイを使用して、１つの抗原結合分子が別の抗原結合分子と競合するかどうかを決定することができる：例えば、固相直接又は間接ラジオイムノアッセイ（radioimmunoassay、ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素イムノアッセイ（enzyme immunoassay、ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２－２５３）、固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４－３６１９）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ）、１－１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７－１５）、固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ，ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５５２）、及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７－８２）。

【0087】

「サイトカイン」は、特定の抗原との接触に応答して１つの細胞によって放出される非抗体タンパク質を指し、サイトカインは第２の細胞と相互作用して第２の細胞における応答を媒介する。サイトカインは、細胞によって内因的に発現され得、又は対象に投与され得る。サイトカインは、免疫応答を伝播するために、マクロファージ、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及び肥満細胞を含む免疫細胞によって放出され得る。サイトカインは、レシピエント細胞において様々な応答を誘導し得る。サイトカインには、恒常性サイトカイン、ケモカイン、炎症誘発性サイトカイン、エフェクター、及び急性期タンパク質が含まれ得る。例えば、インターロイキン（interleukin、ＩＬ）７及びＩＬ－１５などの恒常性サイトカインは、免疫細胞の生存及び増殖を促進し、炎症誘発性サイトカインは、炎症応答を促進し得る。恒常性サイトカインの例としては、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ４０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－１５、及びインターフェロン（interferon、ＩＦＮ）ガンマが挙げられるが、これらに限定されない。炎症誘発性サイトカインの例としては、ＩＬ－１ａ、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－６、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７ａ、腫瘍壊死因子（tumor necrosis factor、ＴＮＦ）－アルファ、ＴＮＦ－ベータ、線維芽細胞増殖因子（fibroblast growth factor、ＦＧＦ）２、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（granulocyte macrophage colony-stimulating factor、ＧＭ－ＣＳＦ）、可溶性細胞間接着分子１（soluble intercellular adhesion molecule 1、ｓＩＣＡＭ－１）、可溶性血管接着分子１（soluble vascular adhesion molecule 1、ｓＶＣＡＭ－１）、血管内皮増殖因子（vascular endothelial growth factor、ＶＥＧＦ）、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、及び胎盤増殖因子（placental growth factor、ＰＬＧＦ）が挙げられるが、これらに限定されない。エフェクターの例としては、グランザイムＡ、グランザイムＢ、可溶性Ｆａｓリガンド（soluble Fas ligand、ｓＦａｓＬ）、及びパーフォリンが挙げられるが、これらに限定されない。急性期タンパク質の例としては、Ｃ反応性タンパク質（C-reactive protein、ＣＲＰ）及び血清アミロイドＡ（serum amyloid A、ＳＡＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0088】

「減少する」又は「下げる」、又は「軽減する」、又は「低減する」又は「弱める」とは、概して、ビヒクル単独（すなわち、活性部分）又は対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較して、より低い生理学的応答（すなわち、下流効果）を生成するか、誘発するか、又は引き起こす、本明細書で企図される組成物の能力を指す。「減少」又は「低減された」量は、典型的には「統計的に有意な」量であり、対照組成物であるビヒクルによって生成される応答（参照応答）の、１．１、１．２、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１５、２０、３０倍、又はそれ以上（例えば、５００倍、１０００倍）（例えば、１．５、１．６、１．７．１．８などの１より上の、間にある全ての整数及び少数を含む）の減少を含み得る。

【0089】

「ドメイン」という用語は、実体の一部を指す。いくつかの実施形態では、「ドメイン」は、例えば、ドメインがその親実体の残りから物理的に分離されている場合に、ドメインが構造的及び／又は機能的特徴を実質的に又は完全に保持するように、実体の構造的及び／又は機能的特徴と関連付けられる。いくつかの実施形態では、ドメインは、その（親）実体から分離され、異なる（レシピエント）実体と連結又は接続された場合に、例えば、親実体で特徴付けられる１つ以上の構造的及び／又は機能的特徴をレシピエント実体で実質的に保持及び／又は付与する実体の一部を含み得る。いくつかの実施形態では、ドメインは、分子（例えば、小分子、炭水化物、脂質、核酸、又はポリペプチド）の一部である。いくつかの実施形態では、ドメインはポリペプチドの部分である。いくつかのそのような実施形態では、ドメインは、構造要素（例えば、アミノ酸配列若しくは配列モチーフ、α－ヘリックス特性、β－シート特性、コイルドコイル特性、ランダムコイル特性など）によって、及び／又は機能的特徴（例えば、結合活性、酵素活性、フォールディング活性、シグナル伝達活性など）によって特徴付けられる。

【0090】

「剤形」という用語は、対象に投与するための活性剤（例えば、抗原結合系又は抗体）の物理的に別個の単位を指すために使用され得る。概して、そのような各単位は、所定量の活性剤を含有する。いくつかの実施形態では、そのような量は、関連する集団に投与されたときに所望の又は有益な結果と相関することが決定された投与レジメンに従って投与するのに適切な単位投与量（又はその全部分）である。対象に投与される治療用組成物又は薬剤の総量は、１人以上の医師によって決定され、１つ以上の剤形の投与を含み得る。

【0091】

「投与レジメン」という用語は、対象に個別に投与される１つ以上の単位用量のセットを指すために使用され得る。いくつかの実施形態では、所与の治療薬は、１つ以上の用量を含み得る推奨投与レジメンを有する。いくつかの実施形態では、投与レジメンは、各々が他の用量から時間的に離されている複数の用量を含む。いくつかの実施形態では、投与レジメンは、複数の用量を含み、連続用量が、等しい長さの期間によって互いに離され、いくつかの実施形態では、投与レジメンは、複数の用量を含み、連続用量は、少なくとも２つの異なる長さの期間によって互いに離される。いくつかの実施形態では、投与レジメン内の全ての用量は、同じ単位用量量である。いくつかの実施形態では、投与レジメン内の異なる用量は、異なる量である。いくつかの実施形態では、投与レジメンは、第１の用量量で第１の用量を含み、続いて、第１の用量量とは異なる第２の用量量で１つ以上の追加用量を含む。いくつかの実施形態では、投与レジメンは、所望の又は有益な結果を達成するように定期的に調整される。

【0092】

「エフェクター細胞」は、１つ以上のＦｃ受容体を発現し、１つ以上のエフェクター機能を媒介する免疫系の細胞を指す。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、マスト細胞、血小板、大顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（natural killer、ＮＫ）細胞、Ｔリンパ球、及びＢリンパ球のうちの１つ以上を含み得るが、これらに限定されない。エフェクター細胞は、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルを含むが、これらに限定されない任意の生物のものであり得る。

【0093】

「エフェクター機能」は、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドとの相互作用の生物学的結果を指す。エフェクター機能は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity、ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性貪食作用（antibody-dependent cell-mediated phagocytosis、ＡＤＣＰ）、及び補体媒介性細胞傷害（complement-mediated cytotoxicity、ＣＭＣ）を含むが、これらに限定されない。エフェクター機能は、抗原結合依存性、抗原結合非依存性、又はその両方であり得る。ＡＤＣＣは、免疫エフェクター細胞による抗体結合標的細胞の溶解を指す。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、ＡＤＣＣは、概して、Ｆｃ受容体（Fc receptor、ＦｃＲ）を含むエフェクター細胞が、抗体コーティングされた標的細胞（例えば、抗体が結合している抗原をその表面に発現する細胞）を認識し、その後死滅させることに関与すると理解されている。ＡＤＣＣを媒介するエフェクター細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球、好酸球のうちの１つ以上を含むがこれらに更に限定されない免疫細胞を含み得る。

【0094】

「エピトープ」は、抗体が特異的に結合することができる抗原の局在化領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの連続アミノ酸（線形又は連続エピトープ）であり得るか、又はエピトープは、例えば、ポリペプチド又はポリペプチドの２つ以上の非連続領域（立体配座、非線形、不連続、又は非連続エピトープ）からの一緒になり得る。特定の実施形態では、抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析と組み合わせた水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイベースのオリゴペプチドスキャンニングアッセイ、及び／又は変異誘発マッピング（例えば、部位特異的変異誘発マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶学の場合、結晶化は、当該技術分野で既知の方法のいずれかを使用して達成され得る（例えば、Ｇｉｅｇｅ Ｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５０（Ｐｔ４）：３３９－３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９９０）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ １８９：１－２３、Ｃｈａｙｅｎ ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：１２６９－１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ Ａ（１９７６）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２５１：６３００－６３０３）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技術を使用して研究することができ、Ｘ－ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ Ｉｎｃ．によって配布、例えば、Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ １１４ ＆ １１５，ｅｄｓ Ｗｙｃｋｏｆｆ ＨＷ ｅｔ ａｌ，、米国特許出願公開第２００４／００１４１９４号）、及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ４９（Ｐｔ １）：３７－６０、Ｂｒｉｃｏｇｎｅ Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２７６Ａ：３６１－４２３，ｅｄ Ｃａｒｔｅｒ ＣＷ、Ｒｏｖｅｒｓｉ Ｐ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ５６（Ｐｔ １０）：１３１６－１３２３を参照されたい）などのコンピュータソフトウェアを使用して精密化することができる。変異誘発マッピング研究は、当業者に既知である任意の方法を使用して達成され得る。例えば、アラニンスキャニング変異誘発技術を含む変異誘発技術の説明についてはＣｈａｍｐｅ Ｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：１３８８－１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＣ ＆ Ｗｅｌｌｓ ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１－１０８５を参照されたい。

【0095】

遺伝子、タンパク質、及び／又は核酸に関する「内因性」とは、免疫細胞などの細胞におけるその遺伝子、タンパク質、及び／又は核酸の天然の存在を指す。

【0096】

「外因性」とは、核酸、遺伝子、又はタンパク質などの薬剤が、例えば、外部供給源から細胞に導入されることを指す。細胞に導入された核酸は、細胞中に天然に見出されるタンパク質をコードする場合であっても外因性である。タンパク質をコードする核酸のかかる外因性導入は、同様の条件下、例えば、外因性核酸の導入なしでの細胞において天然に見出されるレベルを超えてタンパク質の発現を増加させるために使用され得る。

【0097】

「賦形剤」という用語は、例えば、所望の一貫性又は安定化効果を提供する又はそれらに寄与するために、組成物中に含まれ得る薬剤を指す。いくつかの実施形態では、好適な賦形剤は、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、マルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどを含み得る。

【0098】

本明細書に記載の材料又は実体の「断片」又は「部分」は、例えば、物理的実体又は抽象的実体の、全体の個別の部分を含む構造を有する。いくつかの実施形態では、断片は、全体に見られる１つ以上の部分を欠く。いくつかの実施形態では、断片は、全体に見られる特徴的な構造的要素、ドメイン又は部分からなるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態では、ポリマー断片は、ポリマー全体に見られる、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３，１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００以上の単量体単位（例えば、残基）を含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、ポリマー断片は、ポリマー全体に見られる単量体単位（例えば残基）のうちの少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、２５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上を含むか、又はそれらからなる（例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）。材料又は実体全体は、いくつかの実施形態では、断片の「親」と称され得る。

【0099】

「融合ポリペプチド」又は「融合タンパク質」という用語は、概して、少なくとも２つのセグメントを含むポリペプチドを指す。概して、２つのセグメントが、（１）同じペプチドに、本質的に含まれていない部分、及び／又は（２）単一のポリペプチドに前もって互いに連結又は接続されていない部分、及び／又は（３）人間の手の作用を通じて互いに連結又は接続されている部分である場合、少なくとも２つのそのようなセグメントを含有するポリペプチドは融合ポリペプチドであるとみなされる。実施形態では、ＣＡＲは、融合タンパク質である。

【0100】

「遺伝子産物」又は「発現産物」という用語は、一般に、遺伝子から転写されたＲＮＡ（処理前及び／若しくは処理後）、又は遺伝子から転写されたＲＮＡによってコードされるポリペプチド（改変前及び／若しくは改変後）を指す。

【0101】

「遺伝子操作された」又は「操作された」という用語は、コード領域若しくは非コード領域若しくはその一部を削除すること、又はコード領域若しくはその一部を挿入することなどであるがこれらに限定されない、細胞のゲノムを改変する方法を指す。いくつかの実施形態では、改変された細胞は、リンパ球、例えば、Ｔ細胞であり、患者又はドナーのいずれかから得ることができる。細胞は、細胞のゲノムに組み込まれる外因性構築物、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように改変されてもよい。操作には、概して、人間の手による操作が含まれる。例えば、ポリヌクレオチドは、自然界ではその順序で連結又は接続されていない２つ以上の配列が、操作されたポリヌクレオチドにおいては互いに直接連結又は接続されるように人間の手によって操作される場合、「操作された」とみなされる。分子生物学の技術による細胞の操作の文脈では、細胞又は生物は、その遺伝情報が変更されるように操作された場合、「操作された」とみなされる（例えば、以前に存在しない新しい遺伝物質が、例えば、形質転換、体細胞ハイブリダイゼーション、トランスフェクション、形質導入、エレクトロポレーション、又は他のメカニズムによって導入されているか、又は以前に存在した遺伝物質が、例えば、置換若しくは欠失変異によって、又は他のプロトコルによって変化又は除去される）。いくつかの実施形態では、結合剤（binding agent）は、改変されたリンパ球、例えば、Ｔ細胞であり、患者又はドナーのいずれかから得ることができる。操作された細胞は、細胞のゲノムに組み込まれる外因性構築物、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように改変され得る。操作されたポリヌクレオチド又は結合剤の子孫は、概して、実際の操作が前の実体で実行されたとしても、「操作された」と称される。いくつかの実施形態では、「操作された」は、設計及び製造された実体を指す。「設計された」という用語は、（ｉ）その構造が人間の手によって選択されるか、若しくはそれによって選択された、（ｉｉ）人間の手を必要とするプロセスによって産生される、並びに／又は（ｉｉｉ）天然物質及び他の既知の薬剤とは異なる、薬剤を指す。

【0102】

「Ｔ細胞受容体」又は「ＴＣＲ」は、Ｔ細胞の表面上に存在する抗原認識分子を指す。正常なＴ細胞の発達中に、４つのＴＣＲ遺伝子、α、β、γ、及びδの各々は、再配置して非常に多様なＴＣＲタンパク質をもたらすことができる。実施形態において、本明細書に開示されるＴ細胞は、ＴＣＲ受容体のα鎖の表面発現を低減、排除及び／又は阻害するように操作されている。

【0103】

「異種」という用語は、天然に存在する配列以外の任意の供給源に由来することを意味する。例えば、共刺激タンパク質の一部として含まれる異種配列は、野生型ヒト共刺激タンパク質として天然に存在しない、すなわち、野生型ヒト同時刺激タンパク質と整列しないアミノ酸である。例えば、異種ヌクレオチド配列は、野生型ヒト共刺激タンパク質コード配列のヌクレオチド配列以外のヌクレオチド配列を指す。

【0104】

「同一性」という用語とは、ポリマー分子間、例えば、核酸分子間（例えばＤＮＡ分子及び／又はＲＮＡ分子）、及び／又はポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。提供される２つのポリペプチド配列間の同一性パーセントを計算するための方法が既知である。例えば、２つの核酸又はポリペプチド配列の同一性パーセントの計算は、最適な比較目的のために２つの配列を整列させることによって実行され得る（例えば、ギャップは、最適なアラインメントのために第１及び第２の配列の一方又は両方に導入され得、非同一の配列は、比較目的で無視され得る）。次いで、対応する位置でのヌクレオチド又はアミノ酸が比較される。第１の配列の位置が第２の配列における対応する位置と同じ残基（例えば、ヌクレオチド又はアミノ酸）で占められている場合は、分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、任意選択的に、ギャップの数、及び各ギャップの長さを考慮して、配列によって共有される同一位置の数の関数であり、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要があり得る。配列の比較又はアラインメント及び２つの配列間の同一性パーセントの決定は、ＢＬＡＳＴ（基本的なローカルアラインメント検索ツール）などの数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。いくつかの実施形態では、ポリマー分子は、それらの配列が、少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％同一である場合（例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）、互いに「相同」であるとみなされる。

【0105】

同一性パーセントを計算するために、比較される配列は、典型的には、配列間の最大の一致を与える方法で整列される。同一性パーセントを決定するために使用され得るコンピュータプログラムの一例は、ＧＣＧプログラムパッケージであり、これにはＧＡＰが含まれる（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１２：３８７、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）。コンピュータアルゴリズムＧＡＰは、配列同一性パーセントが決定されるべき２つのポリペプチド又はポリヌクレオチドを整列させるために使用される。配列は、それぞれのアミノ酸又はヌクレオチド（アルゴリズムによって決定される「一致したスパン」）の最適なマッチングのために整列される。特定の実施形態では、標準比較マトリックス（ＰＡＭ２５０比較マトリックスについては、Ｄａｙｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９７８，Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：３４５－３５２、ＢＬＯＳＵＭ６２比較マトリックスについては、Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：１０９１５－１０９１９を参照されたい）も、アルゴリズムで使用される。アミノ酸配列又は核酸配列の比較には他のアルゴリズムも利用可能であり、ヌクレオチド配列用のＢＬＡＳＴＮ及びアミノ酸配列用のＢＬＡＳＴＰ、ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ－ＢＬＡＳＴなどの市販のコンピュータプログラムで利用可能なものを含む。例示的なかかるプログラムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３－４１０，１９９０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．，「Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ ａｎｄ ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ：ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄａｔａｂａｓｅ ｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒａｍｓ，」Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２，１９９７、Ｂａｘｅｖａｎｉｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８、及びＭｉｓｅｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。類似の配列を特定することに加えて、上記のプログラムは、概して、類似度の指標を提供する。いくつかの実施形態では、対応する残基の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又はそれ以上が、関連するひと続き（relevant stretch）の残基にわたって類似及び／又は同一である場合（例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）、２つの配列は、実質的に類似しているとみなされる。いくつかの実施形態では、関連するひと続きは完全な配列である。いくつかの実施形態では、関連するひと続きは、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、少なくとも３５０、少なくとも３７５、少なくとも４００、少なくとも４２５、少なくとも４５０、少なくとも４７５、少なくとも５００以上の残基である。実質的な配列類似性を有する配列は、互いに相同体であり得る。

【0106】

「実質的同一性」又は「実質的に同一」という用語は、核酸又はその断片に言及する場合、別の核酸（又はその相補鎖）と適切なヌクレオチド挿入又は欠失を伴って最適に整列させた場合、以下に考察するように、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、又はＧａｐなどの配列同一性の任意の周知のアルゴリズムによって測定して、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９５％、より好ましくは少なくとも約９６％、９７％、９８％、又は９９％のヌクレオチド配列同一性が存在することを示す。参照核酸分子に対して実質的同一性を有する核酸分子は、特定の例では、参照核酸分子によってコードされるポリペプチドと同じ又は実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし得る。

【0107】

ポリペプチドに適用される場合、「実質的類似性」又は「実質的に類似」という用語は、２つのペプチド配列が、デフォルトギャップ重みを使用するプログラムＧＡＰ又はＢＥＳＴＦＩＴなどによって最適に整列された場合に、少なくとも９５％の配列同一性、更により好ましくは少なくとも９８％又は９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。

【0108】

「改善する」、「増加させる」、「阻害する」及び「低減する」という用語は、ベースライン又は他の参照基準値に対する値を示す。いくつかの実施形態では、適切な基準測定値は、薬剤若しくは治療の非存在下（例えば、前及び／若しくは後）、又は適切な同等の参照薬剤の存在下で、それ以外は同等の条件下での特定の系における（例えば、単一の個体における）測定を含み得る。いくつかの実施形態では、適切な基準測定値は、関連する薬剤又は治療の存在下で、同等の方法で応答することが既知であるか又は予想される同等の系での測定を含み得る。

【0109】

「免疫応答」は、免疫系の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞及び好中球）及びこれらの細胞又は肝臓のいずれかによって産生される可溶性巨大分子（Ａｂ、サイトカイン及び補体を含む）の作用であって、侵入している病原体、病原体に感染した細胞若しくは組織、癌性若しくは他の異常な細胞、又は自己免疫若しくは病理学的炎症の場合には正常なヒト細胞若しくは組織の、選択的標的化、結合、損傷、破壊、及び／又は脊椎動物の体からの排除をもたらす作用を指す。

【0110】

「免疫療法」という用語は、免疫応答を誘発する、増強する、抑制する、又は他の様態で改変することを含む、方法による、疾患に罹患しているか、又は疾患に罹るか若しくは疾患を再発するリスクがある対象の治療を指す。免疫療法の例としては、限定するものではないが、ＮＫ細胞、ｉＮＫＴ細胞及びＴ細胞療法が挙げられる。Ｔ細胞療法は、養子Ｔ細胞療法、腫瘍浸潤リンパ球（tumor-infiltrating lymphocyte、ＴＩＬ）免疫療法、自己細胞療法、操作された自己細胞療法（ｅＡＣＴ（商標））、及び同種異系Ｔ細胞移植を含み得る。Ｔ細胞療法の例は、米国特許出願公開第２０１４／０１５４２２８号及び同第２００２／０００６４０９号、米国特許第５，７２８，３８８号、及び国際公開第２００８／０８１０３５号に記載されている。

【0111】

免疫療法のＴ細胞は、当技術分野で公知の任意の供給源に由来し得る。例えば、Ｔ細胞は、造血幹細胞集団からインビトロで分化され得るか、又は例えば、操作後の第２の対象への移植のために、対象から得られ得る。Ｔ細胞は、例えば、末梢血単核細胞（peripheral blood mononuclear cells、ＰＢＭＣ）、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び腫瘍から得ることができる。更に、Ｔ細胞は、当該技術分野で利用可能な１つ以上のＴ細胞株に由来し得る。Ｔ細胞はまた、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離及び／又はアフェレーシスなどの当業者に既知の様々な技術を使用して、対象から採取された血液単位から得ることができる。Ｔ細胞療法のためにＴ細胞を単離する更なる方法は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３／０２８７７４８号に開示されている。

【0112】

「インビトロ」という用語は、多細胞生物内ではなく、人工環境、例えば試験管、反応容器、細胞培養などで起こる事象を指す。「インビトロ細胞」という用語は、エクスビボで培養される任意の細胞を指す。特に、インビトロ細胞は、Ｔ細胞を含み得る。「インビボ」という用語は、ヒト又は非ヒト動物などの多細胞生物内で起こる事象を指す。

【0113】

「単離された」という用語は、（１）物質が以前に会合していたか、又は別様には物質が会合していたであろう、少なくとも一部の成分から分離されている物質、及び／又は（２）限定された若しくは定義された量又は濃度の１つ以上の既知又は未知の汚染物質を含む組成物中に存在する物質を指す。単離された物質は、いくつかの実施形態では、物質が以前に会合していた、物質ではない他の成分、例えばその物質が以前に又は別様には会合したであろう他の成分又は汚染物質の、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超（例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）から分離されてもよい。特定の例では、物質は、それが、限定された若しくは低減された量又は濃度の同じ又は類似の種類の分子を含む組成物中に存在する場合に、単離される。例えば、特定の例では、核酸、ＤＮＡ、又はＲＮＡ物質は、それらが、限定された若しくは低減された量又は濃度の物質ではない核酸、ＤＮＡ、又はＲＮＡ分子を含む組成物中に存在する場合に、単離される。例えば、特定の例では、ポリペプチド物質は、それが限定された若しくは低減された量又は濃度の物質ではないポリペプチド分子を含む組成物中に存在する場合に、単離される。特定の実施形態では、量は、例えば、組成物中に存在する所望の物質の量に対して測定された量であり得る。特定の実施形態では、限定された量は、組成物中の物質の量の１００％以下である量、例えば、組成物中の物質の量の１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％以下（例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）である量であってもよい。特定の例では、組成物は、選択された物質に関して純粋又は実質的に純粋である。いくつかの実施形態では、単離された物質は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超（例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）の純度である。物質は、他の成分又は汚染物質を実質的に含まない場合、「純粋」である。いくつかの実施形態では、物質は、例えば、１つ以上の担体又は賦形剤など（例えば、緩衝液、溶媒、水など）の特定の他の成分と組み合わされた後であっても、まだ「単離された」又は「純粋な」とみなされてもよく、そのような実施形態では、物質の単離又は純度パーセントは、そのような担体又は賦形剤を含まずに計算される。

【0114】

「リンカー」（Ｌ）又は「リンカードメイン」又は「リンカー領域」は、例えば、ＣＡＲ、及び／若しくはｓｃＦｖのドメイン／領域のいずれか、又はこれらのポリペプチドの多くのうちのいつも１つを一緒に連結する、約１～１００アミノ酸長のオリゴ又はポリペプチド領域を指す。リンカーは、隣接するタンパク質ドメインが互いに対して自由に移動するように、グリシン及びセリンのような柔軟な残基から構成され得る。２つの隣接するドメインが互いに立体的に干渉しないことを確実にすることが望ましい場合には、より長いリンカーを使用してもよい。リンカーは、切断可能であっても切断不可能であってもよい。切断可能なリンカーの例としては、２Ａリンカー（例えば、Ｔ２Ａ）、２Ａ様リンカー又はそれらの機能的等価物、及びそれらの組み合わせが挙げられる。他のリンカーは当業者に明らかであり、本開示に関連して使用され得る。リンカーは、異なる要素を互いに接続する多要素薬剤の一部であり得る。例えば、２つ以上の機能的又は構造的ドメインを含むポリペプチドは、それらを互いに連結する、かかるドメイン間のアミノ酸のストレッチを含み得る。いくつかの実施形態では、リンカー要素を含むポリペプチドは、一般形態Ｓ１－Ｌ－Ｓ２の全体構造を有し、Ｓ１及びＳ２は、同じであっても異なっていてもよく、リンカーによって互いに関連付けられた２つのドメインを表す。いくつかの実施形態では、ポリペプチドリンカーは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００又はそれを超えるアミノ酸長（例えば、１～１０、１～２０、１～３０、１～４０、１～５０、１～６０、１～７０、１～８０、１～９０、１～１００、１０～２０、１０～３０、１０～４０、１０～５０、１０～６０、１０～７０、１０～８０、１０～９０、又は１０～１００アミノ酸長）である。いくつかの実施形態では、リンカーは、剛直な三次元構造をとらない傾向があり、代わりにポリペプチドに柔軟性を提供することを特徴とする。別の例において、それは、発現されるポリペプチド又は多くのポリペプチドに接続するために使用され得る。他のリンカーとしては、切断可能でないリンカーが挙げられる。本発明を実現するために、「柔軟なリンカー」を含む多数のリンカーが用いられる。後者は、グリシンに富んでいる。Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｖｏｌ．２７，Ｎｏ．１０，ｐｐ．３２５－３３０，２０１４、Ｐｒｉｙａｎｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．，２０１３ Ｆｅｂ、２２（２）：１５３－１６７。

【0115】

いくつかの実施形態では、リンカーは、合成リンカーである。合成リンカーは、約１０アミノ酸～約２００アミノ酸、例えば、１０～２５アミノ酸、２５～５０アミノ酸、５０～７５アミノ酸、７５～１００アミノ酸、１００～１２５アミノ酸、１２５～１５０アミノ酸、１５０～１７５アミノ酸、又は１７５～２００アミノ酸の長さを有し得る。合成リンカーは、１０～３０アミノ酸、例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０アミノ酸の長さを有し得る。合成リンカーは、３０～５０アミノ酸、例えば、３０～３５アミノ酸、３５～４０アミノ酸、４０～４５アミノ酸、又は４５～５０アミノ酸の長さを有し得る。

【0116】

いくつかの実施形態では、リンカーは、柔軟なリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン（Ｇｌｙ又はＧ）残基が豊富である。いくつかの実施形態では、リンカーは、セリン（Ｓｅｒ又はＳ）残基が豊富である。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン及びセリン残基が豊富である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１つ以上のグリシン－セリン残基対（ＧＳ）、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個又はそれ以上のＧＳ対を有する。

【0117】

「リンパ球」という用語には、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞、又はＢ細胞が含まれる。ＮＫ細胞は、遺伝免疫系の構成要素を代表する細胞毒性（細胞毒性）リンパ球の一種である。ＮＫ細胞は、腫瘍及びウイルスに感染した細胞を拒絶する。それは、アポトーシス又はプログラム細胞死の過程を通して作用する。それらは、細胞を死滅させるために活性化を必要としないので、「ナチュラルキラー」と呼ばれた。Ｔ細胞は、細胞媒介免疫（抗体関与なし）において役割を果たす。そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、他のリンパ球型から分化する。免疫系の分化した器官である胸腺は、主にＴ細胞の成熟化を担う。６つの種類のＴ細胞、すなわち、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞）、細胞毒性Ｔ細胞（ＴＣ、細胞毒性Ｔリンパ球、ＣＴＬ、Ｔキラー細胞、細胞溶解性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はキラーＴ細胞としても既知である）、メモリーＴ細胞（（ｉ）幹メモリーＴ_ＳＣＭ細胞は、ナイーブ細胞と同様に、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋（Ｌ－セレクチン）、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋及びＩＬ－７Ｒα＋であるが、それらは、大量のＣＤ９５、ＩＬ－２Ｒβ、ＣＸＣＲ３及びＬＦＡ－１も発現し、メモリー細胞独特の多数の機能的属性を示す）、（ｉｉ）セントラルメモリーＴ_ＣＭ細胞は、Ｌ－セレクチン及びＣＣＲ７を発現し、ＩＬ－２を分泌するが、それらは、ＩＦＮγ又はＩＬ－４を分泌しない、（ｉｉｉ）エフェクターメモリーＴ_ＥＭ細胞は、Ｌ－セレクチン又はＣＣＲ７を発現せず、ＩＦＮγ及びＩＬ－４などのエフェクターサイトカインを産生する）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ、サプレッサーＴ細胞、又はＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞（Natural Killer T cells、ＮＫＴ）及びガンマデルタＴ細胞が存在する。一方、Ｂ細胞は、体液性免疫（抗体の関与を伴う）において役割を果たす。Ｂ細胞は、抗体及び抗原を産生し、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の役割を果たし、抗原相互作用による活性化後にメモリーＢ細胞に変わる。哺乳動物では、未成熟Ｂ細胞は骨髄で形成され、その名称はここに由来する。

【0118】

「中和する」という用語は、リガンドに結合し、そのリガンドの生物学的作用を防止又は低減する抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はその断片を指す。いくつかの実施形態では、抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はその断片は、リガンド上の結合部位を直接遮断するか、さもなければ間接的手段（リガンドの構造的又はエネルギー的変化など）を介して結合するリガンドの能力を変化させる。いくつかの実施形態では、抗原結合分子、ｓｃＦｖ、抗体、又はその断片は、それが結合しているタンパク質が生物学的機能を果たすのを妨げる。

【0119】

「核酸」は、ヌクレオチドの任意のポリマー鎖を指す。核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はそれらの組み合わせであり得る。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の天然核酸残基を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の核酸類似体から構成される。いくつかの実施形態では、核酸は、天然源からの単離、相補的鋳型に基づく重合による酵素的合成（インビボ又はインビトロ）、組換え細胞又は系での再生、及び化学合成のうちの１つ以上によって調製される。いくつかの実施形態では、核酸は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、又はそれ以上の残基（例えば、２０～１００、２０～５００、２０～１０００、２０～２０００、又は２０～５０００、又はそれ以上の残基）の長さである。いくつかの実施形態では、核酸は、部分的又は全体的に一本鎖であり、いくつかの実施形態では、核酸は、部分的又は全体的に二本鎖である。いくつかの実施形態では、核酸は、ポリペプチドをコードする、又はポリペプチドをコードする配列の相補体である、少なくとも１つの要素を含むヌクレオチド配列を有する。

【0120】

「作動可能に連結された」とは、記載された構成要素がそれらの意図された様式で機能することを可能にする関係にある並置を指す。例えば、機能要素に「作動可能に連結された」制御要素は、機能要素の発現及び／又は活性が、制御要素と適合性のある条件下で達成されるように関連付けられる。

【0121】

「患者」は、癌（例えば、前立腺癌）に罹患している任意のヒトを含む。「対象」及び「患者」という用語は、本明細書において互換的に使用される。

【0122】

「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は互換的に使用され、ペプチド結合によって共有結合したアミノ酸残基から構成される化合物を指す。タンパク質又はペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含有し、タンパク質又はペプチドの配列を構成できるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いに結合した２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチド又はタンパク質を含む。本明細書で使用される場合、この用語は、例えば、当該技術分野で一般にペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーとも称される短鎖と、当該技術分野で概してタンパク質と称される長鎖の両方を指し、そのうち多くの種類がある。「ポリペプチド」には、例えば、とりわけ、生物学的に活性な断片、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドのバリアント、改変ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質が含まれる。ポリペプチドには、天然ペプチド、組換えペプチド、合成ペプチド、又はそれらの組み合わせが含まれる。

【0123】

「薬学的に許容される」という用語は、レシピエントに投与される場合、そのレシピエントに有害ではないか、又はそのレシピエントに対する利益が有害な影響を上回る、分子又は組成物を指す。本明細書に開示される組成物を製剤化するために使用される担体、希釈剤、又は賦形剤に関して、薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤は、組成物の他の成分と適合でなければならず、そのレシピエントに有害ではないか、又はレシピエントに対する利益がいかなる有害な影響をも上回る必要がある。「薬学的に許容される担体」という用語は、身体のある部分から別の部分への（例えば、ある臓器から別の臓器への）薬剤の運搬又は輸送に関与する、液体若しくは固体充填剤、希釈剤、賦形剤、又は溶媒封入材料などの薬学的に許容される材料、組成物、又はビヒクルを意味する。医薬組成物中に存在する各担体は、製剤の他の成分と適合性があり、患者に有害ではないという意味で「許容可能」でなければならず、又はレシピエントに対する利益が有害な影響を上回る必要がある。薬学的に許容される担体として機能し得る材料のいくつかの例は、ラクトース、グルコース、及びスクロースなどの糖、トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプンなどのデンプン、セルロース、並びにカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロースなどのその誘導体、トラガント末、麦芽、ゼラチン、タルク、カカオバター及び坐剤ワックスなどの賦形剤、落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、大豆油などの油、プロピレングリコールなどのグリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコールなどのポリオール、オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなどのエステル、寒天、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、アルギン酸、パイロジェンフリー水、等張性生理食塩水、リンゲル液、エチルアルコール、ｐＨ緩衝溶液、ポリエステル、ポリカーボネート及び／又はポリ無水物、並びに医薬製剤に用いられる他の非毒性の適合性物質、を含む。

【0124】

「医薬組成物」という用語は、活性剤が１つ以上の薬学的に許容される担体と一緒に製剤化される組成物を指す。いくつかの実施形態では、活性剤は、関連する対象又は集団に投与されたときに所定の治療効果を達成する統計的に有意な確率を示す治療レジメンにおける投与に適した単位用量量で存在する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、固体又は液体形態での投与のために製剤化されてもよく、これらに限定されないが、以下に対し適合された形態を含む：経口投与、例えば、水薬（水性若しくは非水溶液又は懸濁液）、錠剤、例えば、バッカル、舌下、及び全身吸収を標的とするもの、ボーラス、粉末剤、顆粒剤、舌に適用するためのペースト、非経口投与、例えば、滅菌溶液若しくは懸濁液、又は持続放出製剤としての例えば、皮下、筋肉内、静脈内、又は硬膜外注射による、局所投与、例えば、皮膚、肺、又は口腔に塗布される、クリーム、軟膏、又は徐放性パッチ又はスプレーとして、膣内又は直腸内、例えば、ペッサリー、クリーム、又は泡状物質（foam）として、舌下、眼に対する、経皮的、あるいは経鼻的、肺、及び他の粘膜表面に対するもの。

【0125】

「増殖」という用語は、細胞の対称的又は非対称的な分裂のいずれかで、細胞分裂の増加を指す。いくつかの実施形態では、「増殖」は、Ｔ細胞の対称的又は非対称的な分裂を指す。「増殖増加」は、非処理試料中の細胞と比較して、処理された試料中の細胞数が増加すると発生する。

【0126】

「参照」という用語は、比較が実施される標準又は対照を記載する。例えば、いくつかの実施形態では、目的の薬剤、動物、個体、集団、試料、配列、又は値は、薬剤、動物、個体、集団、試料、配列、又は値である参照又は対照と比較される。いくつかの実施形態では、参照又は対照は、目的の試験、測定、又は決定と実質的に同時に試験、測定、及び／又は決定される。いくつかの実施形態では、参照又は対照は、任意選択的に有形的媒体で具現化された過去からの参照又は対照である。概して、参照又は対照は、評価下にあるものと同等の条件又は状況下で決定又は特徴付けられる。類似性が、選択された参照又は対照に対する依存性及び／又はそれとの比較を正当とするのに十分である場合。

【0127】

「制御性Ｔ細胞」（「Ｔｒｅｇ」、「Ｔｒｅｇ細胞」、又は「Ｔｒｅｇ（複数）」）は、特定の免疫活性、例えば、自己免疫、アレルギー、及び感染に対する応答の制御に関与するＣＤ４＋Ｔリンパ球の系統を指す。制御性Ｔ細胞は、Ｔ細胞集団の活性を調節することができ、特定の自然免疫系細胞型に影響を及ぼすこともできる。Ｔｒｅｇは、バイオマーカーＣＤ４、ＣＤ２５及びＦｏｘｐ３の発現、並びにＣＤ１２７の低発現によって同定され得る。天然に存在するＴｒｅｇ細胞は、通常、末梢ＣＤ４＋Ｔリンパ球の約５～１０％を構成する。しかしながら、腫瘍微小環境内のＴｒｅｇ細胞（すなわち、腫瘍浸潤性Ｔｒｅｇ細胞）は、全ＣＤ４＋Ｔリンパ球集団の２０～３０％ものＴｒｅｇ細胞を構成し得る。

【0128】

「試料」という用語は、一般に、目的の供給源から得られた、又はこれに由来する材料のアリコートを指す。いくつかの実施形態では、目的の供給源は、生物学的供給源又は環境的供給源である。いくつかの実施形態では、目的の供給源は、細胞集団、組織、又は動物（例えば、ヒト）などの細胞又は生物を含み得る。いくつかの実施形態では、目的の供給源は、生物学的組織又は流体を含む。いくつかの実施形態では、生物学的組織又は流体は、羊水、房水、腹水、胆汁、骨髄、血液、母乳、脳脊髄液、耳垢、乳糜、糜粥、射精液、内リンパ液、滲出液、糞便、胃酸、胃液、リンパ液、粘液、心嚢液、外リンパ液、腹水、胸水、膿、カタル性分泌物、唾液、皮脂、精液、漿液、恥垢、痰、滑液、汗、涙、尿、膣分泌物、硝子体液、嘔吐物、及び／又はそれらの組み合わせ若しくは成分を含み得る。いくつかの実施形態では、生物学的流体は、細胞内液、細胞外液、脈管内流体（血漿）、間質液、リンパ液、及び／又は細胞通過液を含み得る。いくつかの実施形態では、生物学的流体は、植物滲出物を含み得る。いくつかの実施形態では、生物学的組織又は試料は、例えば、吸引、生検（例えば、細針又は組織生検）、スワブ（例えば、口腔スワブ、鼻腔スワブ、皮膚スワブ又は膣スワブ）、掻き取り、手術、洗濯又は洗浄（例えば気管支肺胞、管、鼻腔、眼、口腔、子宮、膣又は他の洗濯又は洗浄）によって得ることができる。いくつかの実施形態では、生物学的試料は、個体から得られた細胞を含む。いくつかの実施形態では、試料は、任意の適切な手段によって目的の供給源から直接得られた「一次試料」である。いくつかの実施形態では、文脈から明らかなように、「試料」という用語は、一次試料を処理することによって（例えば、一次試料の１つ以上の成分を除去することによって、及び／又は一次試料に１つ以上の薬剤を添加することによって）得られる調製物を指す。そのような「処理された試料」は、例えば、試料から抽出された、あるいは一次試料を核酸の増幅又は逆転写、特定の成分の単離及び／又は精製などの１つ以上の技法に供すること等によって得られた核酸又はタンパク質を含み得る。

【0129】

「一本鎖可変断片」、「単鎖抗体可変断片」又は「ｓｃＦｖ」抗体は、リンカーペプチドによって連結された重鎖及び軽鎖のみの可変領域を含む抗体の形態を指す。

【0130】

「癌の病期」という用語は、癌の進行のレベルの定性的又は定量的評価を指す。いくつかの実施形態では、癌の病期を決定するために使用される基準は、癌が身体のどこに位置するか、腫瘍サイズ、癌がリンパ節に広がっているかどうか、癌が身体の１つ以上の異なる部分に広がっているかどうかなどのうちの１つ以上を含み得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、癌はいわゆるＴＮＭシステムを使用して病期分類され得、これによると、Ｔは、通常は原発腫瘍と呼ばれる主な腫瘍のサイズ及び範囲を指し、Ｎは、癌を有する近くのリンパ節の数を指し、Ｍは、癌が転移したかどうかを指す。いくつかの実施形態では、癌は、ステージ０（異常細胞が近くの組織に拡散せずに存在し、癌腫インサイチュ又はＣＩＳとも呼ばれ、ＣＩＳは、癌ではないが、癌になり得る）、ステージＩ～ＩＩＩ（癌が存在し、数が大きいほど、腫瘍が大きくなり、近くの組織に広がっている）、又はステージＩＶ（癌が身体の離れた部分に広がっている）と称され得る。いくつかの実施形態では、癌は、以下からなる群から選択される病期に割り当てられ得る：インサイチュ、限局性（癌はそれが始まった場所に限定され、それが広がった徴候はない）、局所（癌が近くのリンパ節、組織、又は器官に広がっている）：遠位（癌が身体の離れた部分に広がっている）、及び未知（病期を決定するための十分な情報がない）。

【0131】

「刺激」は、刺激分子とその同族リガンドとの結合によって誘導される一次応答を指し、結合はシグナル形質導入事象を媒介する。「刺激分子」は、抗原存在細胞上に存在する同族刺激リガンドと特異的に結合する、Ｔ細胞上の分子、例えば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）／ＣＤ３複合体である。「刺激リガンド」は、抗原提示細胞（例えば、ＡＰＣ、樹状細胞、Ｂ細胞など）上に存在する場合、Ｔ細胞上の刺激分子と特異的に結合し、それによって、限定するものではないが、活性化、免疫応答の開始、増殖などの、Ｔ細胞による一次応答を媒介し得るリガンドである。刺激リガンドには、抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３など）、ペプチドを負荷したＭＨＣクラスＩ分子、スーパーアゴニスト抗ＣＤ２抗体、及びスーパーアゴニスト抗ＣＤ２８抗体が含まれるが、これらに限定されない。

【0132】

「治療薬」という語句は、生物に投与された場合に所望の薬理学的効果を誘発する任意の薬剤を指し得る。いくつかの実施形態では、薬剤は、適切な集団にわたって統計学的に有意な効果を示す場合には、治療薬であるとみなされる。いくつかの実施形態では、適切な集団は、モデル生物又はヒト対象の集団であり得る。いくつかの実施形態では、適切な集団は、バイオマーカーの有無等に応じて、特定の年齢群、性別、遺伝的背景、既存の臨床状態などの様々な基準によって定義することができる。いくつかの実施形態では、治療薬は、疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状又は特徴の緩和、改善、軽減、阻害、予防、発症の遅延、重症度の低減、及び／又は発生率の低減に使用することができる物質である。いくつかの実施形態では、治療薬は、ヒトへの投与のために市販され得る前に、政府機関によって承認されているか、又は承認される必要がある薬剤である。いくつかの実施形態では、治療薬は、ヒトへの投与のために医学的処方が必要とされる薬剤である。

【0133】

治療剤、例えば、操作されたＣＡＲ Ｔ細胞の「治療有効量」、「有効用量」、「有効量」又は「治療有効投与量」は、単独で又は別の治療薬と組み合わせて使用された場合に、対象を疾患の発症から保護するか、あるいは、疾患症状の重症度の低下、疾患症状のない期間の頻度及び期間の増加、又は疾患の罹患に起因する障害若しくは能力障害の予防によって証明される疾患の退縮を促進する任意の量である。疾患の退縮を促進する治療剤の能力は、臨床試験中のヒト対象において、ヒトにおける有効性を予測する動物モデル系において、又はインビトロアッセイにおいて薬剤の活性をアッセイすることによってなど、当業者に既知の様々な方法を使用して評価され得る。

【0134】

「形質導入」及び「形質導入された」という用語は、外来ＤＮＡがウイルスベクターを介して細胞に導入される過程を指す（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，「Ｇｅｎｅｔｉｃｓ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ，」Ｂｏｓｔｏｎ：Ｊｏｎｅｓ ＆ Ｂａｒｔｌｅｔｔ Ｐｕｂｌ．（１９９８）を参照されたい）。いくつかの実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクター、ＤＮＡベクター、ＲＮＡベクター、アデノウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルス関連ベクター、レンチウイルスベクター、又はそれらの任意の組み合わせである。

【0135】

「形質転換」は、外因性ＤＮＡが宿主細胞に導入される任意のプロセスを指す。変換は、様々な方法を使用して、天然又は人工条件下で起こり得る。形質転換は、原核宿主細胞又は真核宿主細胞への外来核酸配列の挿入のための任意の既知の方法を使用して達成され得る。いくつかの実施形態では、いくつかの形質転換方法論は、形質転換される宿主細胞及び／又は挿入される核酸に基づいて選択される。形質転換の方法は、ウイルス感染、エレクトロポレーション、及びリポフェクションを含み得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、「形質転換された」細胞は、挿入されたＤＮＡが、自律的に複製するプラスミド又は宿主染色体の一部として複製することができるという点で安定的に形質転換される。いくつかの実施形態では、形質転換細胞は、導入された核酸を発現し得る。

【0136】

対象の「治療」又は「治療すること」は、症状、合併症若しくは状態、又は疾患に関連する生化学的徴候の発症、進行、発展、重症度若しくは再発を逆転、緩和、改善、阻害、減速又は予防することを目的として、対象に対して行われる任意の種類の介入若しくはプロセス、又は対象への活性剤の投与を指す。一実施形態では、「治療」又は「治療すること」は、部分寛解を含む。別の実施形態では、「治療」又は「治療すること」は、完全寛解を含む。いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害及び／若しくは状態の徴候を示さない対象、並びに／又は疾患、障害及び／若しくは状態の初期徴候のみを示す対象の治療であり得る。いくつかの実施形態では、そのような治療は、関連する疾患、障害及び／又は状態の１つ以上の確定的な徴候を示す対象の治療であり得る。いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態に罹患していると診断された対象の治療であり得る。いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態の発症のリスクの増加と統計的に相関する１つ以上の感受性因子を有することが既知である対象の治療であり得る。

【0137】

「ベクター」という用語は、提供される核酸配列を含むか、又は組み込むように改変されたレシピエント核酸分子を指す。ベクターの１つのタイプは、追加のＤＮＡがライゲーションされ得る環状二本鎖ＤＮＡ分子を指す「プラスミド」である。別の種類のベクターは、ウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントは、ウイルスゲノムにライゲーションされ得る。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞で自律複製することができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれてもよく、それによって宿主ゲノムと共に複製される。更に、特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている挿入遺伝子の発現を指示する配列を含む。そのようなベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称され得る。標準技術が、ベクターの操作に使用することができ、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））に見られ、これは、参照により本明細書に組み込まれる。

【0138】

本開示の目的のための「遺伝子」は、遺伝子産物をコードするＤＮＡ領域（以下を参照）、及び遺伝子産物の産生を調節する全てのＤＮＡ領域を含み、かかる調節配列がコード配列及び／又は転写配列に隣接するか否かにかかわらない。したがって、遺伝子は、プロモーター配列、ターミネーター、リボソーム結合部位及び内部リボソーム進入部位などの翻訳調節配列、エンハンサー、サイレンサー、インスレーター、境界エレメント、複製起点、マトリックス付着部位及び遺伝子座制御領域を含むが、必ずしもこれらに限定されない。

【0139】

本開示は、特に反対に示されない限り、当該技術分野の技術の範囲内である、化学、生化学、有機化学、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ技術、遺伝学、免疫学、及び細胞生物学の方法を用いることができ、その多くは、例示の目的で以下に記載される。そのような技術は、文献において完全に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１）、Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８２）、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，ｕｐｄａｔｅｄ Ｊｕｌｙ ２００８）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｇｌｏｖｅｒ，ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ ＆ ＩＩ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８５）、Ａｎａｎｄ，Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｇｅｎｏｍｅｓ，（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９２）、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８４）、Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９８）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｑ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ ａｎｄ Ｗ．Ｓｔｒｏｂｅｒ，ｅｄｓ．，１９９１）、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、並びにＡｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙなどのジャーナルのモノグラフを参照されたい。

【0140】

再発性又は難治性（ｒ／ｒ）Ｂ細胞悪性腫瘍などのＢ細胞悪性腫瘍の治療のための、１つ以上の細胞表面抗原を標的とする次世代ＣＡＲ Ｔ細胞療法が本明細書に開示される。同種異系キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞は、健康なヒトドナーに由来するＴ細胞から操作され得る。自己キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞は、適切なヒト癌患者から操作され得る。これらの操作されたＴ細胞は、ＣＡＲ構築物、特定の局面において、抗ＣＤ１９ ＣＡＲの遺伝子をコードする操作されたレトロウイルスベクターの挿入を受ける。次世代ＣＡＲ構築物は、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、新規の改変されたＣＤ３ε又はＤＡＰ－１２を含む５つのシグナル伝達ドメインのうちの１つを、ＣＡＲにおいて標準であるＣＤ３ゼータの代替物として利用する。

【0141】

ＣＤ１９（分化分類１９、Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、Ｂ４、ＣＶＩＤ３、分化抗原ＣＤ１９としても知られる）は、ヒトにおいてＣＤ１９遺伝子によってコードされるタンパク質である。別途示されない限り、本開示におけるＣＤ１９への言及は、ヒトＣＤ１９に関することが理解される必要がある。それはＢ細胞の表面上に見出される。ＣＤ１９発現はＢ細胞の顕著な特徴であるので、それは、例えばＢ細胞及びＢ細胞から生じる癌細胞、例えばＢ細胞リンパ腫を認識する際の抗原として有用であり得る。抗ＣＤ１９抗体は、いくつかの非限定的な例を提供するために、例えば末梢血及び脾臓中のＢリンパ球、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）細胞、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）細胞、毛様細胞白血病（ＨＣＬ）細胞、一般的急性リンパ芽球性白血病（ＣＡＬＬ）細胞、プレＢ急性リンパ芽球性白血病（プレＢ－ＡＬＬ）細胞、及びＮＵＬＬ－急性リンパ芽球性白血病（ＮＵＬＬ－ＡＬＬ）細胞上で発現されるＣＤ１９に結合し得る。抗ＣＤ１９結合ドメインを含む抗原結合システムを含む例示的な医薬品は、医薬品ＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標）である。ＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標）は、ＣＤ１９指向の遺伝子組み換え自己Ｔ細胞免疫療法である（免疫療法に関連する方法及び組成物に関しては、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標）ＦＤＡ承認の添付文書を参照のこと）。抗ＣＤ１９結合ドメインを含む抗原結合システムを含む別の例示的な医薬品は、医薬品ＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標）である。

【0142】

ＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標）及びＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標）は両方とも、抗ヒトＣＤ１９抗体に由来する抗原結合ドメインを含む。多くの抗ＣＤ１９抗体は、ＣＤ１９遺伝子のエクソン４にコードされるＣＤ１９のエピトープに結合すると考えられている。他の抗ＣＤ１９結合ドメインは、ＣＤ１９の異なるエピトープ、又は異なる親和性を有する同じエピトープを認識し得る。

【0143】

本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に記載の抗体において見出される抗原結合配列を含み得る。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に提供される抗原結合断片を含む。

【0144】

様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に提供される少なくとも１つのＨＣＤＲ、例えば、表４又は表５に開示される少なくとも１つのＨＣＤＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に提供される２つのＨＣＤＲ、例えば、表４又は表５に開示される少なくとも２つのＨＣＤＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に提供される３つのＨＣＤＲ、例えば、表４又は表５に開示される３つのＨＣＤＲを含む。

【0145】

様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に提供される少なくとも１つのＬＣＤＲ、例えば、表４又は表５に開示される少なくとも１つのＬＣＤＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に提供される２つのＬＣＤＲ、例えば、表４又は表５に開示される少なくとも２つのＬＣＤＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に提供される３つのＬＣＤＲ、例えば、表４又は表５に開示される３つのＬＣＤＲを含む。

【0146】

様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に提供される少なくとも１つのＨＣＤＲ、例えば、表４又は表５に開示される少なくとも１つのＨＣＤＲと、本明細書に提供される少なくとも１つのＬＣＤＲ、例えば、表４又は表５に開示される少なくとも１つのＬＣＤＲと、を含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に提供される２つのＨＣＤＲ、例えば、表４又は表５に開示される少なくとも２つのＨＣＤＲと、本明細書に提供される２つのＬＣＤＲ、例えば、表４又は表５に開示される少なくとも２つのＬＣＤＲと、を含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に提供される３つのＨＣＤＲ、例えば、表４又は表５に開示される３つのＨＣＤＲと、本明細書に提供される３つのＬＣＤＲ、例えば、表４又は表５に開示される３つのＬＣＤＲと、を含む。

【0147】

様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域（重鎖ＦＲ）、例えば、表４又は表５に開示される重鎖可変ドメインの少なくとも１つの重鎖ＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの２つの重鎖ＦＲ、例えば、表４又は表５に開示される重鎖可変ドメインの少なくとも２つの重鎖ＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの３つの重鎖ＦＲ、例えば、表４又は表５に開示される重鎖可変ドメインの３つの重鎖ＦＲを含む。

【0148】

様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも１つの軽鎖ＦＲ、例えば、表４又は表５に開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも１つの軽鎖ＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの２つの軽鎖ＦＲ、例えば、表４又は表５に開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも２つの軽鎖ＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの３つの軽鎖ＦＲ、例えば、表４又は表５に開示される軽鎖可変ドメインの３つの軽鎖ＦＲを含む。

【0149】

様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの少なくとも１つの重鎖ＦＲ、例えば、表４又は表５に開示される重鎖可変ドメインの少なくとも１つの重鎖ＦＲと、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも１つの軽鎖ＦＲ、例えば、表４又は表５に開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも１つの軽鎖ＦＲと、を含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの２つの重鎖ＦＲ、例えば、表４又は表５に開示される重鎖可変ドメインの少なくとも２つの重鎖ＦＲと、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの２つの軽鎖ＦＲ、例えば、表４又は表５に開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも２つの軽鎖ＦＲと、を含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に開示される重鎖可変ドメインの３つの重鎖ＦＲ、例えば、表４又は表５に開示される重鎖可変ドメインの３つの重鎖ＦＲと、本明細書に開示される軽鎖可変ドメインの３つの軽鎖ＦＲ、例えば、表４又は表５に開示される軽鎖可変ドメインの少なくとも３つの軽鎖ＦＲと、を含む。

【0150】

様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、一緒に又はそれぞれ個別に少なくとも表４又は表５に開示されている重鎖可変ドメインの重鎖可変ドメインの対応するＦＲに対して少なくとも７５％の同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する１つ、２つ、又は３つのＦＲを含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、一緒に又はそれぞれ個別に少なくとも表４又は表５に開示されている軽鎖可変ドメインの軽鎖可変ドメインの対応するＦＲに対して少なくとも７５％の同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する１つ、２つ、又は３つのＦＲを含む。

【0151】

様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、表４又は表５に開示される重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性を有する少なくとも１つの重鎖可変ドメイン（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、表４又は表５に開示される重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性を各々有する２つの重鎖可変ドメイン（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を含み、重鎖可変ドメインは同じであっても異なっていてもよい。

【0152】

様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、表４又は表５に開示される軽鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性を有する少なくとも１つの軽鎖可変ドメイン（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を含む。様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、表４又は表５に開示される軽鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性を各々有する２つの軽鎖可変ドメイン（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を含み、軽鎖可変ドメインは同じであっても異なっていてもよい。

【0153】

様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、表４又は表５に開示される重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性を有する少なくとも１つの重鎖可変ドメイン（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）、並びに表４又は表５に開示される軽鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する少なくとも１つの軽鎖可変ドメインを含む。

【0154】

様々な実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、表４又は表５に開示される重鎖可変ドメインに対して少なくとも７５％の配列同一性を各々有する２つの重鎖可変ドメイン（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）と、表４又は表５に開示される軽鎖可変ドメインに対して各々が少なくとも７５％の配列同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を各々有する２つの軽鎖可変ドメインと、を含み、様々な実施形態では、（ｉ）重鎖可変ドメインの各々は、同じであっても異なっていてもよいか、（ｉｉ）軽鎖可変ドメインの各々は、同じであっても異なっていてもよい。

【0155】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、選択された抗原を標的とするようにＴ細胞（例えば、ドナーＴ細胞）を指向又は再指向させることができる操作された受容体である。ＣＡＲは、抗原を認識し、その抗原（ＣＤ１９など）に結合すると免疫細胞を活性化して、その抗原を有する細胞を攻撃し破壊するように操作され得る。これらの抗原が腫瘍細胞上に存在する場合、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、腫瘍細胞を標的化して死滅させ得る。ＣＡＲは、概して、抗原結合を媒介する細胞外結合ドメイン（例えば、抗ＣＤ１９結合ドメイン）、ＣＡＲが細胞表面又は細胞膜に存在する場合に細胞膜にわたるか又はこれにわたると理解される膜貫通ドメイン、及び細胞内（又は細胞質）シグナル伝達ドメインを含む。

【0156】

１つ以上の抗原結合ドメインが、抗原結合系の標的を決定する。結合ドメインは、任意の目的の抗原に対する結合ドメイン、例えば本開示によって提供される抗体、例えば本開示の結合モチーフを含み得る。結合ドメインは、他のＣＡＲ成分と共に一本鎖の一部として発現されるように操作され得るため、少なくとも部分的にキメラ抗原受容体において使用される。例えば、米国特許第７，７４１，４６５号及び同第６，３１９，４９４号、並びにＥｓｈｈａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ（１９９７）４５：１３１－１３６、Ｋｒａｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌｕｍｅ１８８，Ｎｏ．４，１９９８（６１９－６２６）、Ｆｉｎｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９８，１６１：２７９１－２７９７を参照されたく、これらの各々は、ＣＡＲにおける結合ドメインに関して参照により本明細書に組み込まれる。結合ドメイン又はｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む一本鎖抗原結合断片であり、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは互いに連結又は接続されている。例えば、米国特許第７，７４１，４６５号及び同第６，３１９，４９４号、並びにＥｓｈｈａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ（１９９７）４５：１３１－１３６を参照されたく、これらの各々は、結合ドメインに関して参照により本明細書に組み込まれる。親抗体に由来する場合、結合ドメインは、標的抗原の親抗体の結合の一部を保持しても、全てを保持しても、又は本質的に保持してもよい。いくつかの実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、癌細胞上に発現される抗原に結合するｓｃＦｖ（マウス、ヒト、又はヒト化ｓｃＦｖ）であり得る抗原特異的結合ドメインを含む。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、ＣＤ１９に結合する。

【0157】

特定の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、様々なドメイン間に、例えば、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、分子の適切な間隔立体配座のために追加されるリンカー残基を含み得る。本明細書で企図されるＣＡＲは、１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つ以上のリンカーを含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーの長さは、約１～約２５アミノ酸、約５～約２０アミノ酸、又は約１０～約２０アミノ酸、又は任意の介在する長さのアミノ酸である。いくつかの実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれ以上のアミノ酸長である。

【0158】

リンカーの例示的な例としては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン－セリンポリマー（Ｇ_１～５Ｓ_１～５）ｎ（式中、ｎは、少なくとも１、２、３、４、又は５の整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、及び当該技術分野で既知の他の柔軟なリンカーが挙げられる。グリシン及びグリシン－セリンポリマーは、比較的構造化されておらず、したがって、本明細書に記載のＣＡＲなどの融合タンパク質のドメイン間の中性テザーとして機能することができる。グリシンは、更にアラニンよりもファイ－プサイ空間にアクセスし、より長い側鎖を有する残基よりもはるかに制限が少ない（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍ．１１１７３－１４２（１９９２）を参照されたい）。本明細書で企図される他のリンカーとしては、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー（Ｗｈｉｔｌｏｗ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．６（８）：９８９－９５（１９９３）を参照されたい）が含まれる。当業者は、いくつかの実施形態におけるＣＡＲの設計が、全て又は部分的に柔軟なリンカーを含み得、それにより、リンカーが、柔軟リンカー、並びに所望のＣＡＲ構造を提供するようにより低い柔軟構造を付与する１つ以上の部分を含み得ることを認識するであろう。一実施形態では、本明細書に記載の構築物のいずれかは、「ＧＳ」リンカーを含み得る。別の実施形態では、本明細書に記載の構築物のいずれかは、「ＧＳＧ」リンカーを含む。一例において、グリシン－セリンリンカーは、アミノ酸配列ＧＳ（配列番号４５）を含むか、又はそれからなる。一例において、グリシン－セリンリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号４６）を含むか、又はそれからなる。別の実施形態では、配列番号２２のものに対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を含む。

【0159】

特定の実施形態では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、本開示の重鎖可変ドメインと、本開示の軽鎖可変ドメインと、配列番号２２に対して少なくとも７５％の配列同一性を有するリンカーと、を含む結合ドメイン（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を含む。特定の実施形態では、本開示の抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号２２に記載のリンカーを含む結合ドメインを含む。

【0160】

本明細書に記載の操作されたＣＡＲはまた、ｓｃＦｖ又は抗原結合ドメインのＮ末端にＮ末端シグナルペプチド又はタグを含み得る。一実施形態では、異種シグナルペプチドを使用することができる。抗原結合ドメイン又はｓｃＦＶは、新生タンパク質を小胞体に誘導し続いて細胞表面に移行させるリーダー又はシグナルペプチドに融合され得る。シグナルペプチドを含有するポリペプチドが細胞表面で発現されると、シグナルペプチドは、概して、小胞体内のポリペプチドの処理及び細胞表面への移行中にタンパク質分解的に除去されることが理解される。したがって、本明細書に記載のＣＡＲ構築物などのポリペプチドは、概して、シグナルペプチドを欠く成熟タンパク質として細胞表面で発現されるが、ポリペプチドの前駆体形態は、シグナルペプチドを含む。当該技術分野で既知の任意の好適なシグナル配列を使用することができる。同様に、当該技術分野で既知の任意の既知のタグ配列もまた使用してもよい。特定の実施形態では、本開示の結合ドメインは本開示の重鎖可変ドメイン、本開示の軽鎖可変ドメイン、及び配列番号４４と少なくとも７５％の配列同一性を有するシグナル配列（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）、ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号４４）を含む、抗ＣＤ１９結合ドメインを含む。

【0161】

実施形態では、ＣＡＲは、可変領域連結配列を更に含むｓｃＦｖを含む。「可変領域連結配列」は、重鎖可変領域を軽鎖可変領域に接続し、かつ得られたポリペプチドが同じ軽鎖及び重鎖可変領域を含む抗体と同じ標的分子への特異的結合親和性を保持するように、２つの亜結合ドメインの相互作用と適合性のあるスペーサー機能を提供するアミノ酸配列である。一実施形態では、可変領域連結配列は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又はそれ以上のアミノ酸長である。

【0162】

実施形態では、ＣＡＲの結合ドメインに続いて１つ以上の「スペーサードメイン」が続き、これは、抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離れるように移動させて、適切な細胞／細胞接触、抗原結合、及び活性化を可能にする領域を指す（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１９９９、６：４１２－４１９）。スペーサードメインは、天然、合成、半合成、又は組換え供給源のいずれかに由来し得る。特定の実施形態では、スペーサードメインは、免疫グロブリンの一部であり、これには、１つ以上の重鎖定常領域、例えばＣＨ２及びＣＨ３が含まれるが、これらに限定されない。スペーサードメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域又は改変された免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含み得る。

【0163】

ＣＡＲの結合ドメインは、概して、１つ以上の「ヒンジドメイン」が続くことができ、これは抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離して位置付けて適切な細胞／細胞接触、抗原結合、及び活性化を可能にする役割を果たす。ＣＡＲは、概して、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に１つ以上のヒンジドメインを含む。ヒンジドメインは、天然、合成、半合成、又は組換え供給源のいずれかに由来し得る。ヒンジドメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域又は改変された免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含み得る。

【0164】

いくつかの実施形態では、本開示の抗原結合系は、免疫グロブリン様ヒンジドメインであるか、それからであるか、又はそれに由来する（例えば、免疫グロブリン様ヒンジドメインの全て又は断片を含む）ヒンジを含み得る。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、免疫グロブリンからであるか、又は免疫グロブリンに由来する。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、若しくはＩｇＭのヒンジ、又はその断片から選択される。

【0165】

ヒンジは、天然の供給源又は合成の供給源に由来し得る。本明細書に記載のＣＡＲに使用するのに好適なヒンジドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ２８、及びＣＤ７などの１型の膜タンパク質の細胞外領域に由来するヒンジ領域を含み、これらは、これらの分子の野生型ヒンジ領域であり得るか、又は変更され得、例えば、切断型ＣＤ２８ヒンジドメインであってよい。ヒンジは、天然の供給源又は合成の供給源に由来し得る。いくつかの実施形態では、本開示の抗原結合システムは、ＣＤ２、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ（ＩＴＧＡＬ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＴＧＡＭ）、ＣＤ１１ｃ（ＩＴＧＡＸ）、ＣＤ１１ｄ（ＩＴＧＡＤ）、ＣＤ１８（ＩＴＧＢ２）、ＣＤ１９（Ｂ４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｔ、ＣＤ２９（ＩＴＧＢ１）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＣＤ４０（ＴＮＦＲＳＦ５）、ＣＤ４８（ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ４９ａ（ＩＴＧＡ１）、ＣＤ４９ｄ（ＩＴＧＡ４）、ＣＤ４９ｆ（ＩＴＧＡ６）、ＣＤ６６ａ（ＣＥＡＣＡＭ１）、ＣＤ６６ｂ（ＣＥＡＣＡＭ８）、ＣＤ６６ｃ（ＣＥＡＣＡＭ６）、ＣＤ６６ｄ（ＣＥＡＣＡＭ３）、ＣＤ６６ｅ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＤ６９（ＣＬＥＣ２）、ＣＤ７９Ａ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連アルファ鎖）、ＣＤ７９Ｂ（Ｂ細胞抗原受容体複合体関連ベータ鎖）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３（ＩＴＧＡＥ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５８Ａ（ＫＩＲ２ＤＬ１）、ＣＤ１５８Ｂ１（ＫＩＲ２ＤＬ２）、ＣＤ１５８Ｂ２（ＫＩＲ２ＤＬ３）、ＣＤ１５８Ｃ（ＫＩＲ３ＤＰ１）、ＣＤ１５８Ｄ（ＫＩＲＤＬ４）、ＣＤ１５８Ｆ１（ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ）、ＣＤ１５８Ｆ２（ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ）、ＣＤ１５８Ｋ（ＫＩＲ３ＤＬ２）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＳＥＬＰＬＧ）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２９（ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２４４（ＳＬＡＭＦ４）、ＣＤ２４７（ＣＤ３－ゼータ）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ）、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦＲ）、ＣＤ２７０（ＴＮＦＳＦ１４）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３３５（ＮＫ－ｐ４６）、ＣＤ３３６（ＮＫ－ｐ４４）、ＣＤ３３７（ＮＫ－ｐ３０）、ＣＤ３５２（ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ３５３（ＳＬＡＭＦ８）、ＣＤ３５５（ＣＲＴＡＭ）、ＣＤ３５７（ＴＮＦＲＳＦ１８）、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＮＫＧ２Ｃ，ＤＡＰ－１０、ＩＣＡＭ－１、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒアルファ、ＬＦＡ１－１、ＳＬＡＭＦ９、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ（ＧｒｐＬ）、ＳＬＰ－７６（ＬＣＰ２）、ＰＡＧ１／ＣＢＰ、ＣＤ８３リガンド、Ｆｃガンマ受容体、ＭＨＣクラス１分子、ＭＨＣクラス２分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリンタンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、活性化ＮＫ細胞受容体、若しくはＴｏｌｌリガンド受容体、又はそれらの断片若しくは組み合わせであるか、それらからであるか、又はそれらに由来する（例えば、これらの全て又は断片を含む）ヒンジを含み得る。実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジ領域を含む。実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号４７（ＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ（配列番号４７））に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有するＣＤ２８由来のヒンジドメインを含む。実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ２８Ｔヒンジ領域を含む。実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号４８（ＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ（配列番号４８））に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有するＣＤ２８由来のヒンジドメインを含む。実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８ａヒンジ領域を含む。実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号４９又は７７ＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（配列番号４９）ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（配列番号７７））に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有するＣＤ８ａ由来のヒンジドメインを含む。

【0166】

これらのヒンジドメインのポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列は既知である。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインをコードするポリヌクレオチドは、既知のヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％（例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）同一のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジドメインのポリペプチド配列は、既知のポリペプチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％（例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）同一のポリペプチド配列を含む。

【0167】

一般に、（例えば、抗原結合系の）「膜貫通ドメイン」は、細胞表面又は細胞膜の分子中に存在する場合に膜内に存在する（例えば、細胞膜の一部又は全部にわたる）という属性を有するドメインを指す。本開示の抗原結合系の共刺激ドメインは、膜貫通ドメイン及び／又は細胞内シグナル伝達ドメインを更に含んでもよい。膜貫通ドメイン中の全てのアミノ酸が膜内に存在する必要はない。例えば、いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、タンパク質の指定されたひと続き又は部分が実質的に膜内に位置することを特徴とする。アミノ酸配列又は核酸配列は、タンパク質の細胞内局在化（例えば、膜貫通局在化）を予測するための様々なアルゴリズムを使用して分析され得る。プログラムｐｓｏｒｔ（ＰＳＯＲＴ．ｏｒｇ）及びＰｒｏｓｉｔｅ（ｐｒｏｓｉｔｅ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ）は、そのようなプログラムの例である。

【0168】

本明細書に記載の抗原結合系に含まれる膜貫通ドメインのタイプは、いかなるタイプにも限定されない。いくつかの実施形態では、結合ドメイン及び／又は細胞内ドメインと天然に会合している膜貫通ドメインが選択される。いくつかの例では、膜貫通ドメインは、例えば、同じ又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのそのようなドメインの結合を回避して、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるために、１つ以上のアミノ酸の改変（例えば、欠失、挿入、及び／又は置換）を含む。膜貫通ドメインは、天然又は合成のいずれかの供給源に由来し得る。供給源が天然である場合、ドメインは、任意の膜結合タンパク質又は膜貫通タンパク質に由来し得る。例示的な膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ、又はゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＣＤ９、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＴＮＦＳＦＲ２５、ＣＤ１５４、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、活性化ＮＫ細胞受容体、免疫グロブリンタンパク質、Ｂ７－Ｈ３、ＢＡＦＦＲ、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＢＴＬＡ、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２、ＣＤ２４７、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ６９、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、サイトカイン受容体、ＤＡＰ－１０、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、Ｆｃガンマ受容体、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－１、Ｉｇアルファ（ＣＤ７９ａ）、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒアルファ、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、インテグリン、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＩＴＧＢ１、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－１、ＣＤ８３と結合するリガンド、ＬＩＧＨＴ、ＬＩＧＨＴ、ＬＴＢＲ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１、ＣＤ１－１ａ／ＣＤ１８）、ＭＨＣクラス１分子、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＯＸ－４０、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、プログラム死－１（ＰＤ－１）、ＰＳＧＬ１、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦ受容体タンパク質、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦＳＦ１４、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、若しくはＶＬＡ－６、又はそれらの断片、切断、若しくは組み合わせに由来し得る（例えば、少なくとも膜貫通ドメインを含み得る）。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは合成であり得る（並びに、例えば、ロイシン及びバリンなどの主に疎水性の残基を含むことができる）。いくつかの実施形態では、フェニルアラニン、トリプトファン、及びバリンのトリプレットは、合成膜貫通ドメインの両端に含まれる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞質ドメインに直接連結又は接続される。いくつかの実施形態では、短いオリゴ又はポリペプチドリンカー（例えば、２～１０アミノ酸長）は、膜貫通ドメインと細胞内ドメインとの間の連結を形成し得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン－セリンダブレットである。実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号５０（ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号５０））のものに対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有するＣＤ２８由来のＴＭドメインを含む。実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号５１又は配列番号７８の（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）に対して少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＣＤ８ａ由来のＴＭドメインを含む。
（ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮ（配列番号５１））。（ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ（配列番号７８））。

【0169】

本明細書で提供される膜貫通ドメインのポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列は既知である。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチドは、既知のヌクレオチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％（例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）同一のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインのポリペプチド配列は、既知のポリペプチド配列と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％（例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）同一のポリペプチド配列を含む。任意選択的に、短いスペーサーが、ＣＡＲの細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインのいずれか又はいくつかの間に連結を形成し得る。

【0170】

免疫細胞への抗原の結合時にシグナルを伝達し得る細胞内シグナル伝達ドメインは既知であり、そのいずれも本開示の抗原結合系に含まれ得る。例えば、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の細胞質配列は、抗原へのＴＣＲの結合後にシグナル形質導入を開始することが既知である（例えば、Ｂｒｏｗｎｌｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：２５７－２６９（２０１３））。

【0171】

実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、標的抗原に結合する効果的なＣＡＲのメッセージを免疫エフェクター細胞の内部に伝達して、ＣＡＲ結合標的細胞への細胞毒性因子の放出、又は細胞外ＣＡＲドメインへの抗原結合で誘発された他の細胞応答を含む、エフェクター細胞機能、例えば、活性化、サイトカイン産生、増殖、及び細胞毒性活性を誘発することに関与する、ＣＡＲの一部を指す。いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメイン及び／又は活性化ドメインは、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、もしくはＤＡＰ－１２、又はそれらの断片、切断型、もしくは組み合わせに由来する細胞質シグナル伝達ドメインを含む。

【0172】

「エフェクター機能」という用語は、細胞の特殊な機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性又はサイトカインの分泌を含む援助若しくは活性であり得る。したがって、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞を特殊な機能を果たすように指示するタンパク質の部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体が使用され得るが、多くの場合、ドメイン全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分が使用される限りにおいて、そのような切断部分は、エフェクター機能シグナルを変換する限り、ドメイン全体の代わりに使用され得る。細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切断部分を含むことを意味する。

【0173】

一実施形態では、ＣＡＲは、ＫＮＲＫＡＫＡＫＰＶＴＲＧＡＧＡＧＧＲＱＲＧＱＮＫＥＲＰＰＰＶＰＮＰＤＹＥＰＩＲＫＧＱＲＤＬＹＳＧＬＮＱＲＲＩ（配列番号５２）に従って少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有するＣＤ３εドメインを有する。
実施形態では、ＣＤ３εドメインは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＡＡＧＡＡＣＣＧＧＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＡＧＡＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＧＣＧＧＣＡＧＡＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＧＡＡＣＡＡＡＧＡＡＡＧＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＣＴＡＡＴＣＣＴＧＡＣＴＡＣＧＡＧＣＣＣＡＴＣＣＧＧＡＡＧＧＧＣＣＡＧＡＧＡＧＡＴＣＴＧＴＡＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＡＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＡＴＴ（配列番号５３）。
実施形態では、ＣＤ３εドメインは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＧＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＣＴＣＡＡＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＡＴＴ（配列番号５４）。

【0174】

一実施形態では、ＣＡＲは、以下に記載の配列に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有するイプシロン－ＣＯ（Δ１８１－１８５）と呼ばれる新規のＣＤ３εドメインを有する。
ＫＮＲＫＡＫＡＫＰＶＴＲＧＡＧＡＧＧＲＱＲＧＱＮＫＥＲＰＰＰＶＰＮＰＤＹＥＰＩＲＫＧＱＲＤＬＹＳＧＬ（配列番号８７）。実施形態では、イプシロン－ＣＯ（Δ１８１－１８５）と呼ばれるＣＤ３εドメインは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＧＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＣＴＣ（配列番号７９）。

【0175】

一実施形態では、ＣＡＲは、以下に記載の配列を有する少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有するイプシロン－ＣＯ（Ｒ１８３Ｋ）と呼ばれる新規のＣＤ３εドメインを有する。
ＫＮＲＫＡＫＡＫＰＶＴＲＧＡＧＡＧＧＲＱＲＧＱＮＫＥＲＰＰＰＶＰＮＰＤＹＥＰＩＲＫＧＱＲＤＬＹＳＧＬＮＱＲＲＩ（配列番号８８）。実施形態では、イプシロン－ＣＯ（Ｒ１８３Ｋ）と呼ばれるＣＤ３εドメインは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＧＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＣＴＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＧＡＡＴＴ（配列番号８０）。

【0176】

一実施形態では、ＣＡＲは、以下に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有するイプシロン－ＣＯ（Ｓ１７８Ｎ．Ｒ１８３Ｋ）と呼ばれる新規のＣＤ３εドメインを有する。
ＫＮＲＫＡＫＡＫＰＶＴＲＧＡＧＡＧＧＲＱＲＧＱＮＫＥＲＰＰＰＶＰＮＰＤＹＥＰＩＲＫＧＱＲＤＬＹＳＧＬＮＱＲＲＩ（配列番号８９）。実施形態では、ＣＤ３εドメインは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＧＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴＡＣＡＡＣＧＧＴＣＴＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＧＡＡＴＴ（配列番号８１）。

【0177】

特定の態様では、新規ＣＤ３εドメイン、イプシロン－ＣＯ（Δ１８１－１８５）、イプシロン－ＣＯ（Ｒ１８３Ｋ）、及びイプシロン－ＣＯ（Ｓ１７８Ｎ．Ｒ１８３Ｋ）は、細胞膜へのＣＡＲの輸送を改善する。

【0178】

一実施形態では、ＣＡＲは、以下に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有するＣＤ３εドメインを有する。
ＧＨＥＴＧＲＬＳＧＡＡＤＴＱＡＬＬＲＮＤＱＶＹＱＰＬＲＤＲＤＤＡＱＹＳＨＬＧＧＮＷＡＲＮＫ（配列番号５５）。実施形態では、ＣＤ３δドメインは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＧＧＡＣＡＣＧＡＡＡＣＡＧＧＣＡＧＡＣＴＴＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＣＴＧＡＴＡＣＡＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＴＧＡＧＡＡＡＣＧＡＣＣＡＧＧＴＧＴＡＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡＴＧＡＣＧＣＣＣＡＧＴＡＣＴＣＴＣＡＣＣＴＣＧＧＣＧＧＣＡＡＴＴＧＧＧＣＣＡＧＡＡＡＣＡＡＧ（配列番号５６）。

【0179】

一実施形態では、ＣＡＲは、以下に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有するＣＤ３γドメインを有する。
ＧＱＤＧＶＲＱＳＲＡＳＤＫＱＴＬＬＰＮＤＱＬＹＱＰＬＫＤＲＥＤＤＱＹＳＨＬＱＧＮＱＬＲＲＮ（配列番号５７）。
実施形態では、ＣＤ３γドメインは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＧＧＡＣＡＧＧＡＴＧＧＣＧＴＣＡＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧＡＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＡＡＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＴＡＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＡＧＧＡＣＡＧＡＧＡＧＧＡＣＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＣＡＧＣＴＧＣＧＧＡＧＡＡＡＣ（配列番号５８）。

【0180】

一実施形態では、ＣＡＲは、以下に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有するＤＡＰ－１２ドメインを有する。
ＹＦＬＧＲＬＶＰＲＧＲＧＡＡＥＡＡＴＲＫＱＲＩＴＥＴＥＳＰＹＱＥＬＱＧＱＲＳＤＶＹＳＤＬＮＴＱＲＰＹＹＫ（配列番号５９）。実施形態では、ＤＡＰ－１２ドメインは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＴＡＣＴＴＣＣＴＧＧＧＣＡＧＡＣＴＧＧＴＧＣＣＴＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＧＣＴＧＣＴＡＣＣＡＧＡＡＡＧＣＡＧＡＧＡＡＴＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＣＣＴＴＡＣＣＡＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＧＡＡＧＣＧＡＣＧＴＧＴＡＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＡＡＣＡＣＣＣＡＧＡＧＡＣＣＴＴＡＣＴＡＣＡＡＧ（配列番号６０）。

【0181】

ＴＣＲのみを介して生成されたシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化に不十分であり、二次又は共刺激シグナルも必要とされ得ることが既知である。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの異なるクラスの細胞内シグナル伝達ドメイン：ＴＣＲを介して抗原依存的に一次活性化を開始する一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）及び抗原非依存的に作用して二次又は共刺激シグナルを提供する共刺激シグナル伝達ドメインによって媒介されると言うことができる。いくつかの実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、１つ以上の「共刺激シグナル伝達ドメイン」及び「一次シグナル伝達ドメイン」を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0182】

本明細書で企図されるＣＡＲは、ＣＡＲ受容体を発現するＴ細胞の有効性及び増殖を増強するための１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。本明細書で使用される場合、「共刺激シグナル伝達ドメイン」又は「共刺激ドメイン」という用語は、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを指す。いくつかの実施形態では、共刺激分子は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－ＩＢＢ）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－Ｉ、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＴＬＡ４、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＴＲＩＭ、ＬＣＫ３、ＳＬＡＭ、ＤＡＰＩＯ、ＬＡＧ３、ＨＶＥＭ、及びＮＫＤ２Ｃ、及びＣＤ８３を含み得る。実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号６１に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有するＣＤ２８共刺激ドメインを含む。ＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳ（配列番号６１）。

【0183】

実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、配列番号７７に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有する４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥ（配列番号７７）。

【0184】

ＣＡＲの成分は、バイオテクノロジーの日常的な技術を使用して同等の成分と交換又は「スワップ」され得る。非限定的かつ部分的ないくつかの例では、本開示のＣＡＲは、本明細書で提供されるヒンジ及び本明細書で提供される共刺激ドメインと組み合わせて、本明細書で提供される結合ドメインを含み得る。特定の例では、本開示のＣＡＲは、本明細書で提供されるリーダー配列を、本明細書で提供される結合ドメインと一緒に、本明細書で提供されるヒンジ及び本明細書で提供される共刺激ドメインと組み合わせて含み得る。

【0185】

特定の態様では、本開示は、本明細書において提供される抗ＣＤ１９結合ドメインをコードする核酸を含む。特定の更なる態様では、本開示は、抗ＣＤ１９結合ドメインをコードする核酸を含むがこれに限定されない、本明細書で提供される抗体をコードする核酸を含む。特定の更なる態様では、本開示は、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体をコードする核酸を含むがこれに限定されない、本明細書で提供される抗原結合系をコードする核酸を含む。

【0186】

実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ構築物は、以下に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）でアミノ酸配列を含む。
ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＫＮＲＫＡＫＡＫＰＶＴＲＧＡＧＡＧＧＲＱＲＧＱＮＫＥＲＰＰＰＶＰＮＰＤＹＥＰＩＲＫＧＱＲＤＬＹＳＧＬＮＱＲＲＩ（配列番号６２）。実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、以下に記載のアミノ酸配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＧＡＴＡＴＡＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＡＡＣＧＡＣＧＴＣＴＡＧＣＣＴＣＡＧＴＧＣＧＴＣＡＣＴＣＧＧＧＧＡＴＣＧＧＧＴＧＡＣＡＡＴＴＡＧＣＴＧＣＡＧＧＧＣＴＡＧＣＣＡＧＧＡＴＡＴＴＴＣＡＡＡＡＴＡＴＣＴＴＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＧＣＣＡＧＡＴＧＧＡＡＣＣＧＴＡＡＡＡＣＴＧＣＴＣＡＴＡＴＡＣＣＡＣＡＣＣＡＧＴＣＧＣＣＴＧＣＡＴＴＣＡＧＧＧＧＴＴＣＣＧＡＧＣＣＧＣＴＴＴＴＣＴＧＧＧＡＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＡＡＣｔＧＡｔＴＡＴＡＧＣＴＴＧＡＣＡＡＴＡＡＧＣＡＡＣＣＴＣＧＡＧＣＡＧＧＡＡＧＡＣＡＴＴＧＣＧＡＣＧＴＡＣＴＴＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＧＧＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＣＣＧＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＣＴＡＡＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＣＧＧＧＡＴＣＴＡＣＧＴＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＣＣＡＣＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＧＴＣＡＡＧＴＴＧＣＡＡＧＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＧＴＣＴＣＧＴＧＧＣＡＣＣＴＴＣＡＣＡＧＴＣＡＣＴＣＴＣＣＧＴＴＡＣＣＴＧＴＡＣＣＧＴＡＴＣＴＧＧＡＧＴＴＴＣＡＣＴＴＣＣＣＧＡＣＴＡＴＧＧＣＧＴＧＴＣＡＴＧＧＡＴＡＣＧＣＣＡＡＣＣＡＣＣＧＣＧＡＡＡＡＧＧＴＣＴＴＧＡＡＴＧＧＣＴＧＧＧＣＧＴＴＡＴＣＴＧＧＧＧＡＴＣＣＧＡＡＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＡＡＣＴＣＴＧＣＧＣＴＣＡＡＧＴＣＡＣＧＧＣＴＧＡＣＴＡＴＴＡＴＡＡＡＧＧＡＣＡＡＴＴＣＡＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＴＧＡＴＧＡＣＡＣＴＧＣＡＡＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＴＡＴＴＡＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＴＡＣＧＣＧＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＡＡＣＡＧＴＣＡＧＣＴＣＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＧＡＣＡＡＴＧＡＡＡＡＡＴＣＣＡＡＴＧＧＣＡＣＡＡＴＡＡＴＴＣＡＴＧＴＡＡＡＧＧＧＣＡＡＡＣＡＣＴＴＧＴＧＴＣＣＴＡＧＣＣＣＡＣＴＣＴＴＴＣＣＴＧＧＴＣＣＧＴＣＴＡＡＡＣＣＧＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＣＧＴＴＧＴＧＧＴＴＧＧＡＧＧＣＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＴＴＡＣＴＣＴＣＴＧＴＴＧＧＴＧＡＣＴＧＴＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＡＴＡＴＴＣＴＧＧＧＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＡＣＧＡＡＧＴＡＧＧＣＴＴＴＴＡＣＡＴＴＣＡＧＡＣＴＡＴＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＡＣＣＡＡＧＡＣＧＣＣＣＣＧＧＣＣＣＣＡＣＡＡＧＡＡＡＡＣＡＣＴＡＴＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＴＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＣＴＴＡＣＣＧＡＡＧＣＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＧＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＣＴＣＡＡＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＡＴＴ（配列番号６３）。実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＧＡＣＡＴＣＣＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＣＴＴＧＧＡＧＡＣＣＧＡＧＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＣＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＴＡＣＴＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＡＣＧＧＡＡＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＡＣＡＣＡＴＣＣＣＧＧＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＧＣＧＴＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＴＴＣＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＣＡＴＣＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＡＧＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＡＧＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＧＧＣＣＣＣＣＴＣＡＣＡＡＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＴＧＡＧＣＧＧＣＧＴＧＴＣＣＣＴＴＣＣＴＧＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＡＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＣＧＡＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＴＣＴＣＣＡＡＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＣＴＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＡＧＣＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＡＧＧＡＡＧＣＴＡＣＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＡＡＣＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＡＧＣＡＣＣＴＧＴＧＣＣＣＣＴＣＴＣＣＴＣＴＧＴＴＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＣＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＧＡＧＧＡＧＴＧＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＣＴＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＧＡＧＡＡＧＣＡＧＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＣＣＣＴＡＧＡＡＧＧＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＣＣＡＧＡＡＡＧＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＧＣＴＣＣＴＣＣＴＡＧＡＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＣＴＴＡＣＡＧＡＡＧＣＡＡＧＡＡＣＣＧＧＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＡＧＡＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＧＣＧＧＣＡＧＡＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＧＡＡＣＡＡＡＧＡＡＡＧＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＣＴＡＡＴＣＣＴＧＡＣＴＡＣＧＡＧＣＣＣＡＴＣＣＧＧＡＡＧＧＧＣＣＡＧＡＧＡＧＡＴＣＴＧＴＡＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＡＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＡＴＴ（配列番号６４）。

【0187】

実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ構築物は、以下に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有する。
ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＧＨＥＴＧＲＬＳＧＡＡＤＴＱＡＬＬＲＮＤＱＶＹＱＰＬＲＤＲＤＤＡＱＹＳＨＬＧＧＮＷＡＲＮＫ（配列番号６５）。実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＧＡＣＡＴＣＣＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＣＴＴＧＧＡＧＡＣＣＧＡＧＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＣＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＴＡＣＴＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＡＣＧＧＡＡＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＡＣＡＣＡＴＣＣＣＧＧＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＧＣＧＴＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＴＴＣＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＣＡＴＣＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＡＧＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＡＧＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＧＧＣＣＣＣＣＴＣＡＣＡＡＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＴＧＡＧＣＧＧＣＧＴＧＴＣＣＣＴＴＣＣＴＧＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＡＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＣＧＡＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＴＣＴＣＣＡＡＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＣＴＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＡＧＣＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＡＧＧＡＡＧＣＴＡＣＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＡＡＣＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＡＧＣＡＣＣＴＧＴＧＣＣＣＣＴＣＴＣＣＴＣＴＧＴＴＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＣＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＧＡＧＧＡＧＴＧＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＣＴＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＧＡＧＡＡＧＣＡＧＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＣＣＣＴＡＧＡＡＧＧＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＣＣＡＧＡＡＡＧＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＧＣＴＣＣＴＣＣＴＡＧＡＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＣＴＴＡＣＡＧＡＡＧＣＧＧＡＣＡＣＧＡＡＡＣＡＧＧＣＡＧＡＣＴＴＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＣＴＧＡＴＡＣＡＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＴＧＡＧＡＡＡＣＧＡＣＣＡＧＧＴＧＴＡＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡＴＧＡＣＧＣＣＣＡＧＴＡＣＴＣＴＣＡＣＣＴＣＧＧＣＧＧＣＡＡＴＴＧＧＧＣＣＡＧＡＡＡＣＡＡＧ（配列番号６６）。

【0188】

実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ構築物は、以下に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有する。
ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＧＱＤＧＶＲＱＳＲＡＳＤＫＱＴＬＬＰＮＤＱＬＹＱＰＬＫＤＲＥＤＤＱＹＳＨＬＱＧＮＱＬＲＲＮ（配列番号６７）。

【0189】

実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＧＡＣＡＴＣＣＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＣＴＴＧＧＡＧＡＣＣＧＡＧＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＣＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＴＡＣＴＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＡＣＧＧＡＡＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＡＣＡＣＡＴＣＣＣＧＧＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＧＣＧＴＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＴＴＣＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＣＡＴＣＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＡＧＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＡＧＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＧＧＣＣＣＣＣＴＣＡＣＡＡＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＴＧＡＧＣＧＧＣＧＴＧＴＣＣＣＴＴＣＣＴＧＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＡＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＣＧＡＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＴＣＴＣＣＡＡＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＣＴＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＡＧＣＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＡＧＧＡＡＧＣＴＡＣＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＡＡＣＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＡＧＣＡＣＣＴＧＴＧＣＣＣＣＴＣＴＣＣＴＣＴＧＴＴＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＣＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＧＡＧＧＡＧＴＧＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＣＴＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＧＡＧＡＡＧＣＡＧＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＣＣＣＴＡＧＡＡＧＧＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＣＣＡＧＡＡＡＧＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＧＣＴＣＣＴＣＣＴＡＧＡＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＣＴＴＡＣＡＧＡＡＧＣＧＧＡＣＡＧＧＡＴＧＧＣＧＴＣＡＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧＡＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＡＡＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＴＡＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＡＧＧＡＣＡＧＡＧＡＧＧＡＣＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＣＡＧＣＴＧＣＧＧＡＧＡＡＡＣ（配列番号６８）。

【0190】

実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ構築物は、以下に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有する。
ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＹＦＬＧＲＬＶＰＲＧＲＧＡＡＥＡＡＴＲＫＱＲＩＴＥＴＥＳＰＹＱＥＬＱＧＱＲＳＤＶＹＳＤＬＮＴＱＲＰＹＹＫ（配列番号６９）。

【0191】

実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＧＡＣＡＴＣＣＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＣＴＴＧＧＡＧＡＣＣＧＡＧＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＣＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＴＡＣＴＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＡＣＧＧＡＡＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＡＣＡＣＡＴＣＣＣＧＧＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＧＣＧＴＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＴＴＣＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＣＡＴＣＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＡＧＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＡＧＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＧＧＣＣＣＣＣＴＣＡＣＡＡＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＴＧＡＧＣＧＧＣＧＴＧＴＣＣＣＴＴＣＣＴＧＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＡＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＣＧＡＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＴＣＴＣＣＡＡＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＣＴＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＡＧＣＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＡＧＧＡＡＧＣＴＡＣＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＡＡＣＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＡＧＣＡＣＣＴＧＴＧＣＣＣＣＴＣＴＣＣＴＣＴＧＴＴＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＣＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＧＡＧＧＡＧＴＧＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＣＴＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＧＡＧＡＡＧＣＡＧＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＣＣＣＴＡＧＡＡＧＧＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＣＣＡＧＡＡＡＧＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＧＣＴＣＣＴＣＣＴＡＧＡＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＣＴＴＡＣＡＧＡＡＧＣＴＡＣＴＴＣＣＴＧＧＧＣＡＧＡＣＴＧＧＴＧＣＣＴＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＧＣＴＧＣＴＡＣＣＡＧＡＡＡＧＣＡＧＡＧＡＡＴＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＣＣＴＴＡＣＣＡＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＧＡＡＧＣＧＡＣＧＴＧＴＡＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＡＡＣＡＣＣＣＡＧＡＧＡＣＣＴＴＡＣＴＡＣＡＡＧ（配列番号７０）。

【0192】

実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ構築物は、以下に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有する。
ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号７１）。

【0193】

実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＧＡＣＡＴＣＣＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＣＴＴＧＧＡＧＡＣＣＧＡＧＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＣＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＴＡＣＴＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＡＣＧＧＡＡＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＡＣＡＣＡＴＣＣＣＧＧＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＧＣＧＴＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＴＴＣＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＣＡＴＣＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＡＧＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＡＧＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＧＧＣＣＣＣＣＴＣＡＣＡＡＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＴＧＡＧＣＧＧＣＧＴＧＴＣＣＣＴＴＣＣＴＧＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＡＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＣＧＡＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＴＣＴＣＣＡＡＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＣＴＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＡＧＣＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＡＧＧＡＡＧＣＴＡＣＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＡＡＣＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＡＧＣＡＣＣＴＧＴＧＣＣＣＣＴＣＴＣＣＴＣＴＧＴＴＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＣＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＧＡＧＧＡＧＴＧＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＣＴＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＧＡＧＡＡＧＣＡＧＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＣＣＣＴＡＧＡＡＧＧＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＣＣＡＧＡＡＡＧＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＧＣＴＣＣＴＣＣＴＡＧＡＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＣＴＴＡＣＡＧＡＡＧＣＡＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧＣＧＣＴＧＡＣＧＣＴＣＣＴＧＣＴＴＡＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＡＡＣＣＡＡＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＣＣＴＧＧＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＡＴＡＣＧＡＣＧＴＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＡＧＧＡＡＡＧＣＣＡＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＡＧＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＣＡＡＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＡＧＧＣＴＴＡＣＴＣＣＧＡＧＡＴＣＧＧＡＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＣＧＧＡＣＴＧＴＡＣＣＡＡＧＧＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＧＣＴＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＡＡＧＣＣＣＴＧＣＣＴＣＣＴＡＧＧ（配列番号７２）。

【0194】

実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ構築物は、以下に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有する。
ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＦＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＦＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＦＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＦＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号７３）。

【0195】

実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＧＡＣＡＴＣＣＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＣＴＴＧＧＡＧＡＣＣＧＡＧＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＣＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＴＡＣＴＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＡＣＧＧＡＡＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＡＣＡＣＡＴＣＣＣＧＧＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＧＣＧＴＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＴＴＣＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＣＡＴＣＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＡＧＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＡＧＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＧＧＣＣＣＣＣＴＣＡＣＡＡＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＴＧＡＧＣＧＧＣＧＴＧＴＣＣＣＴＴＣＣＴＧＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＡＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＣＧＡＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＴＣＴＣＣＡＡＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＣＴＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＡＧＣＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＡＧＧＡＡＧＣＴＡＣＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＡＡＣＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＡＧＣＡＣＣＴＧＴＧＣＣＣＣＴＣＴＣＣＴＣＴＧＴＴＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＣＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＧＡＧＧＡＧＴＧＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＣＴＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＧＡＧＡＡＧＣＡＧＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＣＣＣＴＡＧＡＡＧＧＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＣＣＡＧＡＡＡＧＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＧＣＴＣＣＴＣＣＴＡＧＡＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＣＴＴＡＣＡＧＡＡＧＣＣＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧＣＧＣＴＧＡＣＧＣＴＣＣＴＧＣＴＴＡＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＡＡＣＣＡＡＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＣＣＴＧＧＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＡＴＡＣＧＡＣＧＴＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＡＧＧＡＡＡＧＣＣＡＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＡＧＡＧＧＧＣＣＴＧＴＴＴＡＡＣＧＡＧＣＴＧＣＡＡＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＡＧＧＣＴＴＴＣＴＣＣＧＡＧＡＴＣＧＧＡＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＣＧＧＡＣＴＧＴＴＣＣＡＡＧＧＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＧＣＴＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＴＣＧＡＣＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＡＡＧＣＣＣＴＧＣＣＴＣＣＴＡＧＧ（配列番号７４）。

【0196】

実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ構築物は、以下に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有するアミノ酸配列を有する。
ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＫＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＨＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＴＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＥＶＫＬＱＥＳＧＰＧＬＶＡＰＳＱＳＬＳＶＴＣＴＶＳＧＶＳＬＰＤＹＧＶＳＷＩＲＱＰＰＲＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＧＳＥＴＴＹＹＮＳＡＬＫＳＲＬＴＩＩＫＤＮＳＫＳＱＶＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＹＣＡＫＨＹＹＹＧＧＳＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＡＡＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号７５）。

【0197】

実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、以下に記載の配列を有する核酸に対して少なくとも７５％の配列同一性（少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％の同一性など、例えば、８５～９０％、８５～９５％、８５～１００％、９０～９５％、９０～１００％、又は９５～１００％）を有する核酸によってコードされる。
ＧＡＴＡＴＡＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＡＡＣＧＡＣＧＴＣＴＡＧＣＣＴＣＡＧＴＧＣＧＴＣＡＣＴＣＧＧＧＧＡＴＣＧＧＧＴＧＡＣＡＡＴＴＡＧＣＴＧＣＡＧＧＧＣＴＡＧＣＣＡＧＧＡＴＡＴＴＴＣＡＡＡＡＴＡＴＣＴＴＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＧＣＣＡＧＡＴＧＧＡＡＣＣＧＴＡＡＡＡＣＴＧＣＴＣＡＴＡＴＡＣＣＡＣＡＣＣＡＧＴＣＧＣＣＴＧＣＡＴＴＣＡＧＧＧＧＴＴＣＣＧＡＧＣＣＧＣＴＴＴＴＣＴＧＧＧＡＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＡＡＣｔＧＡｔＴＡＴＡＧＣＴＴＧＡＣＡＡＴＡＡＧＣＡＡＣＣＴＣＧＡＧＣＡＧＧＡＡＧＡＣＡＴＴＧＣＧＡＣＧＴＡＣＴＴＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＧＧＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＣＣＧＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＣＴＡＡＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＣＧＧＧＡＴＣＴＡＣＧＴＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＣＣＡＣＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＧＴＣＡＡＧＴＴＧＣＡＡＧＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＧＴＣＴＣＧＴＧＧＣＡＣＣＴＴＣＡＣＡＧＴＣＡＣＴＣＴＣＣＧＴＴＡＣＣＴＧＴＡＣＣＧＴＡＴＣＴＧＧＡＧＴＴＴＣＡＣＴＴＣＣＣＧＡＣＴＡＴＧＧＣＧＴＧＴＣＡＴＧＧＡＴＡＣＧＣＣＡＡＣＣＡＣＣＧＣＧＡＡＡＡＧＧＴＣＴＴＧＡＡＴＧＧＣＴＧＧＧＣＧＴＴＡＴＣＴＧＧＧＧＡＴＣＣＧＡＡＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＡＡＣＴＣＴＧＣＧＣＴＣＡＡＧＴＣＡＣＧＧＣＴＧＡＣＴＡＴＴＡＴＡＡＡＧＧＡＣＡＡＴＴＣＡＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＴＧＡＴＧＡＣＡＣＴＧＣＡＡＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＴＡＴＴＡＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＴＡＣＧＣＧＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＡＡＣＡＧＴＣＡＧＣＴＣＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＧＡＣＡＡＴＧＡＡＡＡＡＴＣＣＡＡＴＧＧＣＡＣＡＡＴＡＡＴＴＣＡＴＧＴＡＡＡＧＧＧＣＡＡＡＣＡＣＴＴＧＴＧＴＣＣＴＡＧＣＣＣＡＣＴＣＴＴＴＣＣＴＧＧＴＣＣＧＴＣＴＡＡＡＣＣＧＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＣＧＴＴＧＴＧＧＴＴＧＧＡＧＧＣＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＴＴＡＣＴＣＴＣＴＧＴＴＧＧＴＧＡＣＴＧＴＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＡＴＡＴＴＣＴＧＧＧＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＡＣＧＡＡＧＴＡＧＧＣＴＴＴＴＡＣＡＴＴＣＡＧＡＣＴＡＴＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＡＣＣＡＡＧＡＣＧＣＣＣＣＧＧＣＣＣＣＡＣＡＡＧＡＡＡＡＣＡＣＴＡＴＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＴＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＣＴＴＡＣＣＧＡＡＧＣＡＧＡＧＴＴＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＣＧＡＣＧＣＡＣＣＴＧＣＣＴＡＣＣＡａＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＡＴＣＡＡＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＣＣＴＧＧＧＣＡＧＡＣＧＧＧＡＧＧＡＡＴＡＣＧＡＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＧＡＧＡＧＧＣＡＧＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＡＴＧＧＧＣＧＧＣＡＡＡＣＣＴＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＡＣＣＣＣＣＡＧＧＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＴＡＡＴＧＡＧＣＴＣＣＡＧＡＡＧＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＣＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＧＧＣＡＴＧＡＡＧＧＧＣＧＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＣＣＴＣＴＡＣＣＡＧＧＧＣＴＴＡＡＧＣＡＣＡＧＣＴＡＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＡＡＧＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣＴＡＧＡ（配列番号７６）。

【0198】

概して、任意の適切なウイルスベクター又はベクターが、本明細書に記載の操作された構築物の形質導入に使用され得ることが理解される。本明細書に記載の一実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞）は、本明細書に記載の操作された抗ＣＤ１９ ＣＡＲをコードするレトロウイルスベクター、例えばγレトロウイルスベクターで形質導入される。

【0199】

本明細書で使用される場合、「レトロウイルス」という用語は、そのゲノムＲＮＡを直鎖状二本鎖ＤＮＡコピーに逆転写し、続いてそのゲノムＤＮＡを宿主ゲノムに共有結合的に統合するＲＮＡウイルスを指す。いくつかの実施形態での使用に好適な例示的なレトロウイルスには、以下が含まれるが、これらに限定されない：モロニーマウス白血病ウイルス（Moloney murine leukemia virus、Ｍ－ＭｕＬＶ）、モロニーマウス肉腫ウイルス（Moloney murine sarcoma virus、ＭｏＭＳＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（murine mammary tumor virus、ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳癌ウイルス（murine mammary tumor virus、ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（gibbon ape leukemia virus、ＧａＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（feline leukemia virus、ＦＬＶ）、スプーマウイルス、フレンドマウス白血病ウイルス、マウス幹細胞ウイルス（Murine Stem Cell Virus、ＭＳＣＶ）、ラウス肉腫ウイルス（Rous Sarcoma Virus、ＲＳＶ）及びレンチウイルス。

【0200】

本明細書で使用される場合、「レンチウイルス」という用語は、複合体レトロウイルスのグループ（又は属）を指す。例示的なレンチウイルスには、以下が含まれるが、これらに限定されない：ＨＩＶ（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ、ヒト免疫不全ウイルス、ＨＩＶ１型、及びＨＩＶ２型を含む）、ビスナ・マエディウイルス（visna-maedi virus、ＶＭＶ）ウイルス、ヤギ関節炎脳炎ウイルス（caprine arthritis encephalitis virus、ＣＡＥＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（equine infectious anemia virus、ＥＩＡＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（feline immunodeficiency virus、ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（bovine immune deficiency virus、ＢＩＶ）、及びサル免疫不全ウイルス（simian immunodeficiency virus、ＳＩＶ）。

【0201】

「ベクター」という用語は、本明細書では、別の核酸分子を移動又は輸送することができる核酸分子を指すために使用される。移された核酸は、概して、ベクター核酸分子に連結され、例えば、ベクター核酸分子に挿入される。ベクターは、細胞内で自律複製を指示する配列を含み得るか、又は宿主細胞ＤＮＡへの組込みを可能にするのに十分な配列を含み得る。有用なベクターには、例えば、プラスミド（例えば、ＤＮＡプラスミド又はＲＮＡプラスミド）、トランスポゾン、コスミド、細菌人工染色体、及びウイルスベクターが含まれる。有用なウイルスベクターには、例えば、複製欠損レトロウイルス及びレンチウイルスが含まれる。

【0202】

当業者には明らかであるように、「ウイルスベクター」という用語は、核酸分子の移動又は細胞のゲノムへの組込みを容易にするウイルス由来の核酸要素を含む核酸分子（例えば、トランスファープラスミド）、あるいは核酸移動を媒介するウイルス粒子のいずれかを指すのに広く使用されている。ウイルス粒子は、典型的には、核酸に加えて、様々なウイルス成分及び時には宿主細胞成分も含む。

【0203】

ウイルスベクターという用語は、核酸を細胞に移すことができるウイルス若しくはウイルス粒子又は移された核酸自体のいずれかを指し得る。ウイルスベクター及びトランスファープラスミドは、主にウイルスに由来する構造的及び／又は機能的遺伝的要素を含有する。「レトロウイルスベクター」という用語は、主にレトロウイルスに由来する構造的及び機能的遺伝的要素、又はその一部を含むウイルスベクター又はプラスミドを指す。「レンチウイルスベクター」という用語は、主にレンチウイルスに由来するＬＴＲを含む、構造的及び機能的遺伝的要素、又はその一部を含むウイルスベクター又はプラスミドを指す。「ハイブリッドベクター」という用語は、レトロウイルス、例えば、レンチウイルス、配列、及び非レトロウイルスのウイルス配列の両方を含有するベクター、ＬＴＲ、又は他の核酸を指す。一実施形態では、ハイブリッドベクターは、レトロウイルス、例えば、レンチウイルス、逆転写、複製、組み込み、及び／又はパッケージングのための配列を含む、ベクター又はトランスファープラスミドを指す。

【0204】

いくつかの実施形態では、「レンチウイルスベクター」、「レンチウイルス発現ベクター」という用語は、レンチウイルストランスファープラスミド及び／又は感染性レンチウイルス粒子を指すために使用され得る。本明細書で、クローニング部位、プロモーター、調節要素、異種核酸などの要素に対して言及される場合、これらの要素の配列は、本開示のレンチウイルス粒子中にＲＮＡ形態で存在し、本開示のＤＮＡプラスミド中にＤＮＡ形態で存在することを理解されたい。本明細書に記載の一実施形態では、発現ベクターは、レンチウイルス発現ベクターである。

【0205】

プロウイルスの両端には、「長い末端反復」又は「ＬＴＲ」と呼ばれる構造がある。「長い末端反復（long terminal repeat、ＬＴＲ）」という用語は、レトロウイルスＤＮＡの末端に位置する塩基対のドメインを指し、これは、それらの天然の配列構成において、ダイレクトリピートであり、Ｕ３、Ｒ及びＵ５領域を含有する。ＬＴＲは、概して、レトロウイルス遺伝子の発現（例えば、遺伝子転写物の促進、開始、及びポリアデニル化）及びウイルス複製に対する基本的な機能を提供する。ＬＴＲは、転写制御要素、ポリアデニル化シグナル、及びウイルスゲノムの複製及び組込みに必要な配列を含む多数の調節シグナルを含有する。ウイルスＬＴＲは、Ｕ３、Ｒ、及びＵ５と呼ばれる３つの領域に分割される。Ｕ３領域は、エンハンサー及びプロモーター要素を含有する。Ｕ５領域は、プライマー結合部位とＲ領域との間の配列であり、ポリアデニル化配列を含有する。Ｒ（ｒｅｐｅａｔ、繰り返し）領域は、Ｕ３及びＵ５領域に隣接している。ＬＴＲは、Ｕ３、Ｒ及びＵ５領域で構成され、ウイルスゲノムの５’及び３’末端の両方に現れる。５’ＬＴＲに隣接しているのは、ゲノムの逆転写（ｔＲＮＡプライマー結合部位）、及びウイルスＲＮＡの粒子への効率的なパッケージング（Ｐｓｉ部位）に必要な配列である。

【0206】

本明細書で使用される場合、「パッケージングシグナル」又は「パッケージング配列」という用語は、ウイルスＲＮＡのウイルスキャプシド又は粒子への挿入に必要なレトロウイルスゲノム内に位置する配列を指し、例えば、Ｃｌｅｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９５．Ｊ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６９，Ｎｏ．４、ｐｐ．２１０１－２１０９を参照されたい。いくつかのレトロウイルスベクターは、ウイルスゲノムのキャプシド形成に必要な最小パッケージングシグナル（ｐｓｉ［’Ｐ］配列とも称される）を使用する。したがって、本明細書で使用される場合、「パッケージング配列」、「パッケージングシグナル」、「ｐｓｉ」、及び記号「’Ｐ」という用語は、ウイルス粒子形成中のレトロウイルスＲＮＡ鎖のキャプシド形成に必要な非コード配列に関連して使用される。

【0207】

様々な実施形態では、ベクターは、改変された５’ＬＴＲ及び／又は３’ＬＴＲを含む。ＬＴＲのいずれか又は両方は、１つ以上の欠失、挿入、又は置換を含むがこれらに限定されない１つ以上の改変を含み得る。３’ＬＴＲの改変は、ウイルスの複製を欠陥にすることによってレンチウイルス又はレトロウイルス系の安全性を改善するためにしばしば行われる。本明細書で使用される場合、「複製欠陥」という用語は、感染性ビリオンが産生されないように完全で効果的な複製できないウイルス（例えば、複製欠陥レンチウイルス子孫）を指す。「複製能のある」という用語は、ウイルスのウイルス複製が感染背ビリオン（例えば、複製能のあるレンチウイルス子孫）を産生することができるように、複製が可能な野生型ウイルス又は変異ウイルスを指す。

【0208】

「自己不活性化」（Self-inactivating、ＳＩＮ）ベクターは、Ｕ３領域として知られている右（３’）ＬＴＲエンハンサー－プロモーター領域が、ウイルス複製の最初のラウンドを超えるウイルスの転写を防ぐように改変されている（例えば、欠失又は置換によって）、複製欠陥ベクター、例えばレトロウイルス又はレンチウイルスベクターを指す。これは、ウイルス複製中に、右（３’）ＬＴＲ Ｕ３領域が左（５’）ＬＴＲ Ｕ３領域の鋳型として使用され、したがって、Ｕ３エンハンサー－プロモーターなしではウイルス転写物が作製することができないためである。本開示の更なる実施形態では、３’ＬＴＲは、Ｕ５領域が、例えば、理想的なポリ（Ａ）配列で置き換えられるように改変される。３’ＬＴＲ、５’ＬＴＲ、又は３’及び５’ＬＴＲの両方への改変などのＬＴＲへの改変もまた、本明細書で企図されることに留意されたい。

【0209】

５’ＬＴＲのＵ３領域を異種プロモーターで置き換えてウイルス粒子の産生中にウイルスゲノムの転写を駆動することによって、更に安全性が強化される。使用され得る異種プロモーターの例としては、例えば、ウイルス性シミアンウイルス４０（simian virus 40、ＳＶ４０）（例えば、初期又は後期）、サイトメガロウイルス（cytomegalovirus、ＣＭＶ）（例えば、即時初期）、モロニーマウス白血病ウイルス（Moloney murine leukemia virus、ＭｏＭＬＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、及び単純ヘルペスウイルス（herpes simplex virus、ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）プロモーターが挙げられる。典型的なプロモーターは、Ｔａｔ非依存的な方法で高レベルの転写を駆動することができる。ウイルス産生システムに完全なＵ３配列がないため、この置換により、組換えによって複製能のあるウイルスが生成される可能性が低減する。特定の実施形態では、異種プロモーターは、ウイルスゲノムが転写される様式を制御する際に追加の利点を有する。例えば、異種プロモーターは、誘導因子が存在する場合にのみ、ウイルスゲノムの全部又は一部の転写が発生するように誘導性であり得る。誘導因子には、１つ以上の化学化合物、又は宿主細胞が培養される温度若しくはｐＨなどの生理学的条件が含まれるが、これらに限定されない。

【0210】

いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、ＴＡＲ要素を含む。「trans-activation response、ＴＡＲ」という用語は、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ）ＬＴＲのＲ領域に位置する「トランス活性化応答」遺伝的要素を指す。この要素は、レンチウイルストランス活性化因子（trans-activator、ｔａｔ）遺伝的要素と相互作用して、ウイルス複製を増強する。

【0211】

「Ｒ領域」は、キャッピンググループの開始時に始まり（すなわち、転写開始）、ポリＡトラクトの開始直前に終了するレトロウイルスＬＴＲ内の領域を指す。Ｒ領域はまた、Ｕ３及びＵ５領域に隣接するものとして定義される。Ｒ領域は、逆転写中に、ゲノムの一方の末端からもう一方の末端への新生ＤＮＡの移動を可能にする役割を果たす。

【0212】

本明細書で使用される場合、「ＦＬＡＰ要素」という用語は、配列に、レトロウイルス、例えば、ＨＩＶ－Ｉ又はＨＩＶ－２の中央ポリプリン管及び中央終端配列（ｃＰＰＴ及びＣＴＳ）が含まれる中央ポリプリン管及び中央終端配列（ｃＰＰＴ及びＣＴＳ）が含まれる核酸を指す。好適なＦＬＡＰ要素は、米国特許第６，６８２，９０７号及びＺｅｎｎｏｕ，ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ，１０１：１７３に記載されている。ＨＩＶ－Ｉ逆転写中、中央ポリプリン管（central polypurine tract、ｃＰＰＴ）でのプラス鎖ＤＮＡの中央開始及び中央終端配列（central termination sequence、ＣＴＳ）における中央終端により３本鎖ＤＮＡ構造の形成をもたらす：ＨＩＶ－Ｉ中央ＤＮＡフラップ。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、ＤＮＡフラップは、レンチウイルスゲノム核内移行のシス活性決定因子として作用し得、かつ／又はウイルスの力価を増加させ得る。

【0213】

一実施形態では、レトロウイルス又はレンチウイルストランスファーベクターは、１つ以上の輸出要素を含む。「輸出要素」という用語は、細胞の核から細胞質へのＲＮＡ転写物の輸送を調節するシス作用転写後調節要素を指す。ＲＮＡ輸出要素の例としては、ヒト免疫不全ウイルス（human immunodeficiency virus、ＨＩＶ）ｒｅｖ応答要素（rev response element、ＲＲＥ）（例えば、Ｃｕｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１．Ｊ Ｖｉｒｏｌ．６５：１０５３、及びＣｕｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１．Ｃｅｌｌ ５８：４２３を参照されたい）、及びＢ型肝炎ウイルスの転写後調節要素（hepatitis B virus post-transcriptional regulatory element、ＨＰＲＥ）が挙げられるが、これらに限定されない。概して、ＲＮＡ輸出要素は、遺伝子の３’ＵＴＲ内に配置され、１つ又は複数のコピーとして挿入され得る。

【0214】

他の実施形態では、ウイルスベクターにおける異種配列の発現は、転写後調節要素、効率的なポリアデニル化部位、及び任意選択的に転写終結シグナルをベクターに組み込むことによって増加する。様々な転写後調節要素が、タンパク質での異種核酸の発現を増加させる可能性があり、例えば、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節要素（ＷＰＲＥ、Ｚｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．，７３：２８８６）、Ｂ型肝炎ウイルスに存在する転写後調節要素（ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｅｌｅｍｅｎｔ ｐｒｅｓｅｎｔ、ＨＰＲＥ）（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：３８６４）、など（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，９：１７６６）である。

【0215】

いくつかの実施形態では、ベクターは、転写又は翻訳調節活性を有する調節オリゴヌクレオチドを含み得る。そのようなオリゴヌクレオチドは、発現の制御を調節するための様々な遺伝子発現構成で使用することができる。転写調節オリゴヌクレオチドは、組換え発現構築物の発現レベルを増加（増強）又は減少（サイレンシング）させることができる。調節オリゴヌクレオチドは、例えば、構成的又は誘導性の発現を含む、ポリヌクレオチドの組織特異的、発生段階特異的、又は同様の発現を付与するためのものを含む、文脈特異的様式での発現を選択的に調節することができる。本開示の調節オリゴヌクレオチドはまた、発現ベクターの成分又は発現可能なポリヌクレオチドに作動可能に連結された調節オリゴヌクレオチドを含む組換え核酸分子の成分であり得る。調節要素は、数ヌクレオチドから数百ヌクレオチドまでの様々な長さであり得る。

【0216】

異種核酸転写物の効率的な終結及びポリアデニル化を指示する要素は、異種遺伝子発現を増加させる。転写終結シグナルは、概して、ポリアデニル化シグナルの下流に見られる。いくつかの実施形態では、ベクターは、発現されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの３’のポリアデニル化配列を含む。本明細書で使用される「ポリＡ部位」又は「ポリＡ配列」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩによる新生ＲＮＡ転写物の終結及びポリアデニル化の両方を誘導するＤＮＡ配列を示す。ポリアデニル化配列は、コード配列の３’末端にポリＡテールを添加することによってｍＲＮＡの安定性を促進し得、したがって、翻訳効率の増加に寄与し得る。組換え転写物の効率的なポリアデニル化は、ポリＡテールを欠く転写物が不安定であり、急速に劣化するため、望ましい。本開示のベクターで使用され得るポリＡシグナルの例示的な例としては、理想的なポリＡ配列（例えば、ＡＡＴＡＡＡ、ＡＴＴＡＡＡ、ＡＧＴＡＡＡ）、ウシ成長ホルモンポリＡ配列（bovine growth hormone poly A sequence、ＢＧＨｐＡ）、ウサギβ－グロビンポリＡ配列（rabbit β-globin poly A sequence、ｒβｇｐＡ）、又は当該技術分野で既知の別の好適な異種若しくは内因性ポリＡ配列が挙げられる。

【0217】

本明細書には、「コドン最適化」核酸も記載されている。「コドン最適化」核酸は、コドンが特定のシステム（特定の種又は種の群など）における発現に最適であるように変更された核酸配列を指す。例えば、核酸配列は、哺乳動物細胞又は特定の哺乳動物種（ヒト細胞など）における発現のために、天然配列のコドンのうちの少なくとも１つ、１つ以上、又はかなりの数を、その種の遺伝子においてより頻繁に又は最も頻繁に使用されるコドンで置き換えることによって、最適化され得る。コドン最適化は、コード化タンパク質のアミノ酸配列を変更しない。

【0218】

本開示に提示されるコドン最適化ヌクレオチド配列は、発現有効性に関連する改善された特性を提示することができる。いくつかの実施形態では、転写されるＤＮＡ配列は、より効率的な転写及び／又は翻訳を促進するように最適化され得る。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ配列は、シス調節要素（例えば、ＴＡＴＡボックス、終結シグナル、及びタンパク質結合部位）、人工組換え部位、カイ部位、ＣｐＧジヌクレオチド含有量、陰性ＣｐＧアイランド、ＧＣ含有量、ポリメラーゼ滑り部位、及び／又は転写に関連する他の要素に関して最適化され得る。ＤＮＡ配列は、潜在（cryptic）スプライス部位、ｍＲＮＡ二次構造、ｍＲＮＡの安定した遊離エネルギー、反復配列、ＲＮＡ不安定性モチーフ、及び／又はｍＲＮＡ処理及び安定性に関連する他の要素に関して最適化され得る。ＤＮＡ配列は、コドン使用バイアス、コドン適合性、内部カイ部位、リボソーム結合部位（例えば、ＩＲＥＳ）、未成熟ポリＡ部位、シャイン・ダルガノ（Shine-Dalgarno、ＳＤ）配列、及び／又は翻訳に関連する他の要素に関して最適化されてもよく、かつ／又はＤＮＡ配列は、コドンコンテキスト、コドン－アンチコドン相互作用、翻訳静置部位、及び／又はタンパク質フォールディング関連する他の要素に関して最適化されてもよい。

【0219】

ベクターは、１つ以上のＬＴＲを有してもよく、いずれのＬＴＲも、１つ以上のヌクレオチド置換、付加、又は欠失などの１つ以上の改変を含む。ベクターは、形質導入効率（例えば、ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）、ウイルスパッケージング（例えば、Ｐｓｉ（Ψ）パッケージングシグナル、ＲＲＥ）、及び／又は治療用遺伝子発現（例えば、ポリ（Ａ）配列）を増加させる他の要素を増加させるための１つ以上のアクセサリ要素を更に含み得、任意選択的にＷＰＲＥ又はＨＰＲＥを含み得る。当業者は、多くの他の異なる実施形態が本開示の既存の実施形態から形成され得ることを理解するであろう。

【0220】

「宿主細胞」は、本開示の組換えベクター又はポリヌクレオチドで、インビボ、エクスビボ、又はインビトロでトランスフェクトされた、感染された、又は形質導入された細胞を含む。宿主細胞は、パッケージング細胞、プロデューサー細胞、及びウイルスベクターに感染した細胞を含み得る。いくつかの実施形態では、本開示のウイルスベクターに感染した宿主細胞は、治療を必要とする対象に投与される。特定の実施形態では、「標的細胞」という用語は、宿主細胞と互換的に使用され、所望の細胞型のトランスフェクトされた細胞、感染された細胞、又は形質導入された細胞を指す。いくつかの実施形態では、標的細胞はＴ細胞である。

【0221】

多くの場合、妥当なウイルス力価を達成するために、大規模なウイルス粒子産生が必要である。ウイルス粒子は、ウイルス構造遺伝子及び／又はアクセサリ遺伝子、例えば、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｖｐｘ、又はｎｅｆ遺伝子又は他のレトロウイルス遺伝子を含むパッケージング細胞株にトランスファーベクターを、トランスフェクトすることによって産生される。

【0222】

本明細書で使用される場合、「パッケージングベクター」という用語は、パッケージングシグナルを欠き、１つ、２つ、３つ、４つ以上のウイルス構造及び／又はアクセサリ遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクター又はウイルスベクターを指す。通常、パッケージングベクターは、パッケージング細胞に含まれ、トランスフェクション、形質導入、又は感染を介して細胞に導入される。トランスフェクション、形質導入、又は感染のための方法は、当業者によって周知である。本開示のレトロウイルス／レンチウイルストランスファーベクターは、トランスフェクション、形質導入、又は感染を介してパッケージング細胞株に導入されて、プロデューサー細胞又は細胞株を生成し得る。本開示のパッケージングベクターは、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、リポフェクション、又はエレクトロポレーションを含む一般的な方法によってヒト細胞又は細胞株に導入され得る。いくつかの実施形態では、パッケージングベクターは、ネオマイシン、ハイグロマイシン、ピューロマイシン、ブラストシジン、ゼオシン、チミジンキナーゼ、ＤＨＦＲ、Ｇｌｎシンテターゼ、又はＡＤＡなどの優性選択可能マーカーと共に細胞に導入され、その後、適切な薬物の存在下で選択し、クローンを単離する。選択可能なマーカー遺伝子は、パッケージングベクターによって、例えば、ＩＲＥＳ又は自己切断ウイルスペプチドによって、コードされる遺伝子に物理的に結合され得る。

【0223】

ウイルスエンベロープタンパク質（ｅｎｖ）は、細胞株から生成された組換えレトロウイルスによって最終的に感染及び形質転換され得る宿主細胞の範囲を決定する。ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、ＳＩＶ、ＦＩＶ、及びＥＩＶなどのレンチウイルスの場合、ｅｎｖタンパク質はｇｐ４１及びｇｐ１２０を含む。いくつかの実施形態では、本開示のパッケージング細胞によって発現されるウイルスｅｎｖタンパク質は、前述のように、ウイルスｇａｇ及びｐｏｌ遺伝子とは別個のベクター上にコードされる。

【0224】

本明細書に記載の実施形態で用いられ得るレトロウイルス由来ｅｎｖ遺伝子の例示的な例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＭＬＶエンベロープ、ＩＯＡＩエンベロープ、ＢＡＥＶ、ＦｅＬＶ－Ｂ、ＲＤＩ １４、ＳＳＡＶ、Ｅｂｏｌａ、Ｓｅｎｄａｉ、ＦＰＶ（トリペストウイルス）、及びインフルエンザウイルスエンベロープ。同様に、ＲＮＡウイルス（例えば、Ｐｉｃｏｍａｖｉｒｉｄａｅ、Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ、Ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ、Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ、Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｂｉｍａｖｉｒｉｄａｅ、ＲｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅのＲＮＡウイルスファミリー）由来並びにＤＮＡウイルス（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ、Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｏｘｙｉｒｉｄａｅ、及びＩｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅファミリー）由来のエンベロープをコードする遺伝子を利用することができる。代表的な例としては、ＦｅＬＶ、ＶＥＥ、ＨＦＶＷ、ＷＤＳＶ、ＳＦＶ、Ｒａｂｉｅｓ、ＡＬＶ、ＢＩＶ、ＢＬ Ｖ、ＥＢＶ、ＣＡＥＶ、ＳＮＶ、ＣｈＴＬ Ｖ、ＳＴＬＶ、ＭＰＭＶ ＳＭＲＶ、ＲＡＶ、ＦｕＳＶ、ＭＨ２、ＡＥＶ、ＡＭＶ、ＣＴＩＯ、及びＥＩＡＶが挙げられる。

【0225】

他の実施形態では、本開示のウイルスをシュードタイピングするためのエンベロープタンパク質には、以下のウイルスのいずれかが含まれるが、これらに限定されない：Ａ型インフルエンザウイルス例えば、Ｈ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ３Ｎ２、及びＨ５Ｎｌ（トリインフルエンザ）、Ｂ型インフルエンザウイルス、Ｃ型インフルエンザウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ロタウイルス、ノーウォークウイルスグループの任意のウイルス、腸内アデノウイルス、パルボウイルス、デング熱ウイルス、サル痘、モノネガウイルス目（Mononegavirales）、リッサウイルス例えば狂犬病ウイルス、ラゴスコウモリウイルス、モコラウイルス（Mokola virus）、デュベンヘイジウイルス、ヨーロッパコウモリウイルス１及び２、オーストラリアコウモリウイルス、エフェメロウイルス、ベジクロウイルス、水疱性口内炎ウイルス（Vesicular Stomatitis Virus、ＶＳＶ）、ヘルペスウイルス例えば単純ヘルペスウイルス１型及び２型、水痘帯状疱疹、サイトメガロウイルス、エプスタインバーウイルス（Epstein-Barr virus、ＥＢＶ）、ヒトヘルペスウイルス（human herpesvirus、ＨＨＶ）、ヒトヘルペスウイルス６型及び８型、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、乳頭腫ウイルス、ネズミガンマヘルペスウイルス、アレナウイルス、例えばアルゼンチン出血熱ウイルス、ボリビア出血熱ウイルス、サビア関連出血熱ウイルス、ベネズエラ出血熱ウイルス、ラッサ熱ウイルス、マチュポウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（Lymphocytic choriomeningitis virus、ＬＣＭＶ）、ブニヤウイルス科（Bunyaviridiae）例えばクリミア・コンゴ出血熱ウイルス、ハンタウイルス（Hantavirus）、腎症候群を引き起こす出血熱ウイルス、リフトバレー熱ウイルス、エボラ出血熱及びマールブルグ出血熱を含むフィロウイルス科（Filoviridae）（フィロウイルス）、カイサヌール（Kaysanur）森林病ウイルス、オムスク出血熱ウイルス、ダニ媒介性脳炎を引き起こすウイルスを含むフラビウイルス科（Flaviviridae）、パラミクソウイルス科（Paramyxoviridae）例えば、ヘンドラウイルス、ニパウイルス、大痘瘡及び小痘瘡（天然痘）、アルファウイルス例えば、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（SARS-associated coronavirus、ＳＡＲＳ－Ｃｏ Ｖ）、西ナイルウイルス、又はいずれかの脳炎を引き起こすウイルス。

【0226】

本明細書で使用される「偽型」又は「偽型タイピング」という用語は、ウイルスエンベロープタンパク質が他の特徴を有する別のウイルスのもので置換されているウイルスを指す。例えば、ＨＩＶは、水疱性口内炎ウイルスＧタンパク質（vesicular stomatitis virus G-protein、ＶＳＶ－Ｇ）エンベロープタンパク質で偽型化され得、これにより、ＨＩＶエンベロープタンパク質（ｅｎｖ遺伝子によってコードされる）が通常ウイルスをＣＤ４＋提示細胞に標的化するため、ＨＩＶはより広範囲の細胞に感染することができる。

【0227】

本明細書で使用される場合、「パッケージング細胞株」という用語は、パッケージングシグナルを含まないが、ウイルス粒子の正しいパッケージングに必要なウイルス構造タンパク質及び複製酵素（例えば、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ）を安定的に又は一時的に発現する細胞株に関して使用される。任意の好適な細胞株を用いて、本開示のパッケージング細胞を調製することができる。概して、細胞は哺乳動物細胞である。別の実施形態では、パッケージング細胞株を産生するために使用される細胞は、ヒト細胞である。パッケージング細胞株を生成するために使用され得る好適な細胞株としては、例えば、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＭＤＣＫ細胞、Ｃ３Ｈ １０Ｔｌ／２細胞、ＦＬＹ細胞、Ｐｓｉ－２細胞、ＢＯＳＣ２３細胞、Ｐ Ａ３１７細胞、ＷＥＨＩ細胞、ＣＯＳ細胞、ＢＳＣ１細胞、ＢＳＣ４０細胞、ＢＭＴ １０細胞、ＶＥＲＯ細胞、Ｗ１３８細胞、ＭＲＣ５細胞、Ａ５４９細胞、ＨＴＩ０８０細胞、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、Ｂ－５０細胞、３Ｔ３細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＨｅｐＧ２細胞、Ｓａｏｓ－２細胞、Ｈｕｈ７細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｗ１６３細胞、２１１細胞、及び２１１Ａ細胞が挙げられる。

【0228】

本明細書で使用される場合、「プロデューサー細胞株」という用語は、パッケージング細胞株及びパッケージングシグナルを含む転写ベクター構築物を含む組換えレトロウイルス粒子を産生することができる細胞株を指す。感染性ウイルス粒子及びウイルス原液の生成は、従来の技術を使用して実行され得る。ウイルス原液を調製する方法は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｙ．Ｓｏｎｅｏｋａ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３：６２８－６３３、及びＮ．Ｒ．Ｌａｎｄａｕ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ Ｖｉｒｏｌ．６６：５１１０－５１１３を参照されたい。感染性ウイルス粒子は、従来の技術を使用してパッケージング細胞から回収され得る。例えば、感染性粒子は、当該技術分野で既知であるように、細胞溶解、又は細胞培養物の上清の回収によって回収され得る。任意選択的に、必要に応じて、収集されたウイルス粒子を精製してもよい。好適な精製技術は、当業者に周知である。

【0229】

トランスフェクションではなく、ウイルス感染によるレトロウイルス又はレンチウイルスベクターを使用する遺伝子又は他のポリヌクレオチド配列の送達は、「形質導入」と称される。一実施形態では、レトロウイルスベクターは、感染及びプロウイルス組込みを介して細胞に形質導入される。特定の実施形態では、標的細胞、例えば、Ｔ細胞は、ウイルス又はレトロウイルスベクターを使用する感染によって細胞に送達される遺伝子又は他のポリヌクレオチド配列を含む場合、「形質導入される」。いくつかの実施形態では、形質導入細胞は、その細胞ゲノム中のレトロウイルス又はレンチウイルスベクターによって送達される１つ以上の遺伝子又は他のポリヌクレオチド配列を含む。

【0230】

いくつかの実施形態では、本開示の構築物（例えば、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ）の１つ以上を発現する宿主細胞。宿主細胞は、Ｔ細胞悪性腫瘍を治療及び／又は予防するために対象に投与され得る。本開示の特定の実施形態に従って利用され得る遺伝子療法におけるウイルスベクターの使用に関連する他の方法は、例えば、Ｋａｙ，Ｍ．Ａ．（１９９７）Ｃｈｅｓｔ １１１（６ Ｓｕｐｐ．）：１３８Ｓ－１４２Ｓ、Ｆｅｒｒｙ，Ｎ．ａｎｄ Ｈｅａｒｄ，Ｊ．Ｍ．（１９９８）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．９：１９７５－８１、Ｓｈｉｒａｔｏｒｙ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｌｉｖｅｒ １９：２６５－７４、Ｏｋａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．１１：１７９－８６、Ｔｈｕｌｅ，Ｐ．Ｍ．ａｎｄ Ｌｉｕ，Ｊ．Ｍ．（２０００）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．７：１７４４－５２、Ｙａｎｇ，Ｎ．Ｓ．（１９９２）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１２：３３５－５６、Ａｌｔ，Ｍ．（１９９５）Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ．２３：７４６－５８、Ｂｒｏｄｙ，Ｓ．Ｌ．ａｎｄ Ｃｒｙｓｔａｌ，Ｒ．Ｇ．（１９９４）Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７１６：９０－１０１、Ｓｔｒａｙｅｒ，Ｄ．Ｓ．（１９９９）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ８：２１５９－２１７２、Ｓｍｉｔｈ－Ａｒｉｃａ，Ｊ．Ｒ．ａｎｄ Ｂａｒｔｌｅｔｔ，Ｊ．Ｓ．（２００１）Ｃｕｒｒ．Ｃａｒｄｉｏｌ．Ｒｅｐ．３：４３－４９、及びＬｅｅ，Ｈ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８：４８３－８に見出され得る。

【0231】

ＣＡＲの導入に加えて、本開示の操作されたＴ細胞は、例えば、ＴＲＡＣ及びＢ２Ｍ 遺伝子を標的とする１つ以上のＺＦＮ又はＣＲＩＳＰＲ／ｓｇＲＮＡを使用するＴＣＲ及びＢ２Ｍαの発現を低減及び／又は排除するように更に操作され得る。ＺＦＮによって標的化される細胞の子孫は、それ自体、本明細書に記載される分子、ポリヌクレオチド及び／又はベクターを含まなくてもよいが、これらの細胞において、ＴＣＲ及び／又はＢ２Ｍ遺伝子が不活性化されることが理解される。

【0232】

本明細書に記載される組成物は、本明細書で企図されるＴ細胞組成物を含み得る。本明細書に記載される一実施形態は、ＴＣＲ及びＢ２Ｍの検出可能な表面発現などの発現が低減及び／又は排除されている、抗ＣＤ１９ ＣＡＲを発現する改変Ｔ細胞を含む組成物である。組成物には、医薬組成物が含まれるが、これらに限定されない。「医薬組成物」は、単独で、又は１つ以上の他の治療法と組み合わせて、細胞又は動物に投与するための薬学的に許容されるか又は生理学的に許容される溶液に製剤化された組成物を指す。必要に応じて、本開示の組成物は、例えば、サイトカイン、成長因子、ホルモン、小分子、化学療法薬、プロドラッグ、薬物、抗体、又は他の様々な薬剤活性剤などの他の薬剤と組み合わせて投与され得ることも理解されるであろう。追加の薬剤が、意図された療法を送達する組成物の能力に悪影響を及ぼさない限り、組成物に含まれ得る他の成分は実質的に制限されない。

【0233】

「薬学的に許容される」という語句は、本明細書では、合理的な利益／リスク比に相応する、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、又は他の問題若しくは合併症なしに、ヒト及び動物の組織と接触して使用するのに好適な、健全な医学的判断の範囲内にあるこれらの化合物、材料、組成物、及び／又は剤形を指すために用いられる。

【0234】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤」には、限定されないが、米国食品医薬品局によって、ヒト又は家畜での使用が許容されるものとして承認されている、任意のアジュバント、担体、賦形剤、滑剤、甘味剤、希釈剤、防腐剤、染料／着色剤、風味増強剤、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、安定剤、等張剤、溶媒、界面活性剤、又は乳化剤が含まれる。例示的な薬学的に許容される担体には、ラクトース、グルコース、及びスクロースなどの糖、トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプンなどのデンプン、セルロース、並びにカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロースなどのその誘導体、トラガカント、麦芽、ゼラチン、タルク、カカオバター、ワックス、動物及び植物性脂肪、パラフィン、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、酸化亜鉛、ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コム油（com oil）、及び大豆油などの油、プロピレングリコールなどのグリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコールなどのポリオール、オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなどのエステル、寒天、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、アルギン酸、発熱物質を含まない（pyrogen-free）水、等張性生理食塩水、リンゲル溶液、エチルアルコール、リン酸緩衝液、並びに医薬製剤で使用される任意の他の適合性物質が含まれるが、これらに限定されない。

【0235】

本明細書に記載の一実施形態では、本開示の組成物は、本明細書で企図される量の改変されたＴ細胞を含む。本明細書で企図されるＴ細胞を含む医薬組成物は、１０^２～１０^１０細胞／ｋｇ体重、１０^５～１０^９細胞／ｋｇ体重、１０^５～１０^８細胞／ｋｇ体重、１０^５～１０^７細胞／ｋｇ体重、１０^７～１０^９細胞／ｋｇ体重、又は１０^７～１０^８細胞／ｋｇ体重（これらの範囲内の全ての整数値を含む）の投与量で投与され得ると概して述べることができる。細胞の数は、その中に含まれる細胞の種類と同様に、組成物が意図される最終的な使用に依存するであろう。操作されたＴＣＲ又はＣＡＲを発現するように改変されたＴ細胞は、これらの範囲内の投与量で複数回投与され得る。細胞は、治療を受けている患者に対して同種異系であっても、同系であっても、異種であっても、自家であってもよい。所望される場合、治療はまた、注入されたＴ細胞の生着及び機能を増強するため、本明細書に記載されるように、マイトジェン（例えば、ＰＨＡ）又はリンホカイン、サイトカイン、及び／又はケモカインＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＴＮＦ－アルファ、ＩＬ－１８、及びＴＮＦ－ベータ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、Ｆｌｔ３－Ｌ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ１α、など）の投与も含まれ得る。

【0236】

概して、本明細書に記載されるように活性化及び増殖された細胞を含む組成物は、免疫無防備状態又は免疫抑制状態にある個体において生じる疾患の治療及び予防に利用され得る。いくつかの、本明細書で企図される改変されたＴ細胞を含む組成物は、癌の治療に使用される。本明細書に記載の改変されたＴ細胞は、単独で、又は担体、希釈剤、賦形剤、及び／又はＩＬ－２、ＩＬ－７、及び／若しくはＩＬ－１５若しくは他のサイトカイン若しくは細胞集団などの他の成分と組み合わせて医薬組成物として投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書で企図される医薬組成物は、１つ以上の薬学的又は生理学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と組み合わせて、ある量の遺伝子改変されたＴ細胞を含む。

【0237】

本明細書で企図される改変されたＴ細胞を含む医薬組成物は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液、グルコース、マンノース、スクロース、又はデキストラン、マンニトールなどの炭水化物、タンパク質、グリシンなどのポリペプチド又はアミノ酸、酸化防止剤、ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）、及び防腐剤、を更に含み得る。本開示の組成物は、非経口投与、例えば、血管内（静脈内又は動脈内）、腹腔内又は筋肉内投与用に製剤化され得る。

【0238】

液体医薬組成物は、溶液、懸濁液、又は他の同様の形態であるかにかかわらず、以下のうちの１つ以上を含み得る：注射用の水などの滅菌希釈剤、生理食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウムなどの生理食塩水、溶媒又は懸濁媒体として機能し得る合成モノ又はジグリセリドなどの固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の溶媒、ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸又は重亜硫酸ナトリウムなどの酸化防止剤、エチレンジアミン酸四酢酸などのキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩、又はホスフェートなどの緩衝液、及び塩化ナトリウム又はデキストロースなどの張度を調整するための薬剤。非経口調製物は、ガラス又はプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器又は複数回投与バイアルに封入され得る。滅菌注射用医薬組成物も含まれる。

【0239】

いくつかの実施形態では、本明細書で企図される組成物は、単独で又は１つ以上の治療薬と組み合わせて、有効量の増殖改変されたＴ細胞組成物を含む。したがって、Ｔ細胞組成物は、単独で、又は放射線療法、化学療法、移植、免疫療法、ホルモン療法、光動的療法などの他の既知の癌治療と組み合わせて投与され得る。組成物はまた、抗生物質及び抗ウイルス剤と組み合わせて投与され得る。そのような治療薬は、癌などの本明細書に記載の疾患状態の治療として当該技術分野で受け入れられ得る。一実施形態では、本明細書で企図される組成物はまた、ＴＧＦ－βの阻害剤、例えば、小分子阻害剤ＬＹ５５２９９と共に投与され得る。企図される例示的な治療薬としては、サイトカイン、増殖因子、ステロイド、ＮＳＡＩＤ、ＤＭＡＲＤ、抗炎症薬、化学療法薬、放射線治療薬、治療用抗体、又は他の活性及び補助剤が挙げられる。

【0240】

特定の実施形態では、本明細書で企図されるＴ細胞を含む組成物は、任意の数の化学療法剤と組み合わせて投与することができる。化学療法剤の例には、限定されないが、チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））などのアルキル化剤、アルキルスルホネート、例えば、ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファン、アジリジン、例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メトレドパ、及びウレドパ、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスファミド、トリメチロメラミンレジュームを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン、ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロフォスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン（novembichin）、フェネステリン（phenesterine）、プレドニムスチン、トロフォスファミド（trofosfamide）、ウラシルマスタード、ニトロソ尿素、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、抗生物質、例えば、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトレビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシン、代謝拮抗剤、例えば、メトトレキサート、及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキセート、プリン類似体、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフル、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５－ＦＵ、アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン、抗アドレナリン、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、葉酸補充剤、例えば、フロリン酸、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、エダトレキサート、デフォファミン、デメコルチン、ジアジクオン、エルホルミチン、酢酸エリプチニウム、エトグルシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシ尿素、レンチナン、ロニダミン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラクリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ポドフィリン酸、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ（登録商標）、ラゾキサン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン、ウレタン、ビンデシン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン、アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）及びドキセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）、クロラムブシル、ゲムシタビン、６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキサート、白金類似体、例えば、シスプラチン及びカルボプラチン、ビンブラスチン、白金、エトポシド（ＶＰ－１６）、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ナベルビン、ノバントロン、テニポシド、ダウノマイシン、アミノプテリン、ゼロダ、イバンドロネート；ＣＰＴ－１１、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＰＳ ２０００、ジフルオロメチルオミチン（ＤＭＦＯ）、Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）などのレチノイン酸誘導体、ＯＮＴＡＫ（商標）（デニロイキンジフチトクス）、エスペラマイシン、カペシタビン、並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体が挙げられる。また、この定義には、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）－イミダゾール、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含む抗エストロゲンなどの腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤、並びに、抗アンドロゲン剤、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリド、及びゴセレリン、並びに、上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体も含まれる。

【0241】

様々な他の治療薬を、本明細書中に記載の組成物と併せて使用することができる。一実施形態では、Ｔ細胞を含む組成物は、抗炎症剤と共に投与される。抗炎症剤又は薬物としては、ステロイド及びグルココルチコイド（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンを含む）、アスピリンを含む非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキサート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ薬、シクロホスファミド、及びミコフェノール酸が挙げられるが、これらに限定されない。

【0242】

いくつかの実施形態では、ＮＳＡＩＤは、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、ＶＩＯＸＸ（登録商標）（ロフェコキシブ）及びＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）（セレコキシブ）などのＣｏｘ－２阻害剤、並びにシアリレートからなる群から選択される。例示的な鎮痛剤は、アセトアミノフェン、オキシコドン、トラマドール、又はプロポキシフェン塩酸塩からなる群から選択される。例示的なグルココルチコイドは、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、又はプレドニゾンからなる群から選択される。例示的な生物学的応答調節剤としては、細胞表面マーカーに対する分子（例えば、ＣＤ４、ＣＤ５など）、サイトカイン阻害剤、例えば、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））及びインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、ケモカイン阻害剤、及び接着分子阻害剤が挙げられる。生物学的応答調節剤としては、モノクローナル抗体並びに分子の組換え形態が挙げられる。例示的な疾患改変性抗リウマチ薬（disease-modifying anti-rheumatic drug、ＤＭＡＲＤ）としては、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、金（経口（オーラノフィン）及び筋肉内）、及びミノサイクリンが挙げられる。

【0243】

他の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲ改変Ｔ細胞との組み合わせに好適な治療用抗体としては、アバゴボマブ、アデカツムマブ、アフツズマブ、アレムツズマブ、アルツモマブ、アマツキシマブ、アナツモマブ、アルシツモマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブ、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ、カンツズマブ、カツマキソマブ、セツキシマブ、シタツズマブ、シクスツムマブ、クリバツズマブ、コナツムマブ、ダラツムマブ、ドロジツマブ、デュリゴツマブ、デュシギツマブ、デツモマブ、ダセツズマブ、ダロツズマブ、エクロメキシマブ、エロツズマブ、エンシツキマブ（ensituximab）、エルツマキソマブ（ertumaxomab）、エタラシズマブ、ファリエツズマブ（farietuzumab）、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フランボツマブ、フツキシマブ、ガニツマブ、ゲムツズマブ、ギレンツキシマブ、グレムバツムマブ、イブリツモマブ、イゴボマブ、イマツズマブ、インダツキシマブ、イノツズマブ、インテツムマブ、イピリムマブ、イラツムマブ、ラベツズマブ、レキサツムマブ、リンツズマブ、ロルボツズマブ、ルカツムマブ、マパツムマブ、マツズマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モキセツモマブ、ナマツマブ、ナプツモマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、ノフェツモマブ、オカラツズマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オナツズマブ、オポルツズマブ、オレゴボマブ、パニツムマブ、パルサツズマブ、パトリツマブ、ペムツモマブ、ペルツズマブ、ピンツモマブ、プリツムマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ、サツモマブ、シブロツズマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、ソリトマブ、タカツズマブ、タプリツモマブ、テナツモマブ、テプロツムマブ、チガツズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、ツコツズマブ、ウブリツキシマブ、ベルツズマブ、ボルセツズマブ、ボツムマブ（votumumab）、ザルツムマブ（zalutumumab）、ＣＣ４９及び３Ｆ８、が含まれるがこれらに限定されない。

【0244】

いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される組成物は、サイトカインと共に投与される。本明細書で使用される場合、「サイトカイン」は、細胞間メディエーターとして別の細胞に作用する１つの細胞集団によって放出されるタンパク質の総称を意味する。そのようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、ケモカイン、及び従来のポリペプチドホルモンである。サイトカインには、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ－メチオニルヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモン、副甲状腺ホルモン、チロキシン、インスリン、プロインスリン、リラキシン、プロリラキシン、糖タンパク質ホルモン、例えば、卵胞刺激ホルモン（follicle stimulating hormone、ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（thyroid stimulating hormone、ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン（luteinizing hormone、ＬＨ）、肝増殖因子、線維芽細胞増殖因子、プロラクチン、胎盤ラクトゲン、腫瘍壊死因子－アルファ及び－ベータ、ミュラー管抑制因子、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、インヒビン、アクチビン、血管内皮成長因子、インテグリン、トロンボポエチン（thrombopoietin、ＴＰＯ）、神経成長因子、例えば、ＮＧＦ－ベータ、血小板増殖因子、形質転換増殖因子（transforming growth factor、ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦ－アルファ及びＴＧＦ－ベータ、インスリン様成長因子－Ｉ及び成長因子－ＩＩ、エリスロポエチン（erythropoietin、ＥＰＯ）、骨誘導因子、インターフェロン、例えば、インターフェロン－アルファ、ベータ、及びガンマ、コロニー刺激因子（colony stimulating factor、ＣＳＦ）、例えば、マクロファージ－ＣＳＦ（Ｍ－ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージＣＳＦ（granulocyte-macrophage-CSF、ＧＭ－ＣＳＦ）、及び顆粒球ＣＳＦ（granulocyte-CSF、Ｇ－ＣＳＦ）、インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、腫瘍壊死因子、例えば、ＴＮＦ－アルファ又はＴＮＦ－ベータ、並びにＬＩＦ及びｋｉｔリガンド（kit ligand、ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子が含まれる。本明細書で使用される場合、サイトカインという用語には、天然源又は組換え細胞培養物由来のタンパク質、及び天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物が含まれる。

【0245】

いずれの細胞も、本開示のポリヌクレオチド、ベクター、又はポリペプチドのための宿主細胞として使用することができる。いくつかの実施形態では、細胞は、原核細胞、真菌細胞、酵母細胞、又は哺乳動物細胞などのより高等な真核細胞であり得る。好適な原核細胞には、限定されないが、グラム陰性又はグラム陽性生物などの真性細菌、例えば、ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａなどのＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｈａｃｅａｅ、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｒｗｉｎｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、例えば、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、及びＳｈｉｇｅｌｌａ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ及びＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓなどのＢａｃｉｌｌｉ、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａなどのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、並びにＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓが含まれる。いくつかの実施形態では、細胞はヒト細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は免疫細胞である。

【0246】

いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ＴＣＲ発現細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞、顆粒球、自然リンパ細胞、巨核球、単球、マクロファージ、血小板、胸腺細胞、及び骨髄細胞からなる群から選択される。一実施形態では、免疫細胞は操作された同種異系Ｔ細胞である。抗体療法又は独立型ＣＡＲ改変Ｔ細胞とは異なり、抗ＣＤ１９ ＣＡＲを発現するように改変されたＴ細胞（又は上記の任意の細胞）は、インビボで複製することができ、したがって、持続的な癌療法をもたらし得る長期持続性に寄与する。

【0247】

別の実施形態では、抗ＣＤ１９ＣＡＲを発現するＴ細胞は、治療用Ｔ細胞の集団が残留又は長期間持続できるようにＴ細胞増殖を起こす可能性がある。したがって、本明細書に記載の別の実施形態は、Ｔ細胞の集団を増殖させる方法であり、それを必要とする対象に、治療有効量の本明細書に記載のＴ細胞を投与することを含む。

【0248】

本明細書に記載の一実施形態では、Ｔ細胞の集団は、７日後に約５０％～約１００％の間、７日後に約６０％～約９０％の間、又は７日後に約７０％～約８０％の間のままである。本明細書に記載の別の実施形態では、Ｔ細胞の集団は、７日後に約５０％、７日後に約６０％、７日後に約７０％、７日後に約８０％、７日後に約９０％又は７日後に約１００％のままである。

【0249】

本明細書に記載の別の実施形態は、本明細書に記載のＣＡＲを発現するＴ細胞を含む組成物の有効量、例えば、治療有効量を投与することを含む、治療を必要とする対象の癌を治療する方法である。投与の量及び頻度は、患者の状態、患者の疾患の種類及び重症度などの要因によって決定されるが、適切な投与量は、臨床試験によって決定され得る。

【0250】

本明細書に記載の別の実施形態は、本明細書に記載のＣＡＲ構築物を発現するＴ細胞を含む組成物の有効量、例えば、治療有効量を投与することを含む、治療を必要とする対象の肝癌を治療する方法である。投与の量及び頻度は、患者の状態、患者の疾患の種類及び重症度などの要因によって決定されるが、適切な投与量は、臨床試験によって決定され得る。

【0251】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲを発現するものをコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されたプロモーターを含むベクターで遺伝子改変されたＴ細胞を含む組成物は、様々な癌の治療において使用される。

【0252】

他の実施形態では、本明細書で企図される治療有効量の改変されたＴ細胞又はそれを含む組成物を、単独で、又は１つ以上の治療薬と組み合わせて、それを必要とする患者に投与することを含む、方法が提供される。特定の実施形態では、本開示の細胞は、癌を発症するリスクのある患者の治療に使用される。したがって、本開示は、癌の治療又は予防のための方法を提供し、それを必要とする対象に、治療有効量の本開示の改変Ｔ細胞を投与することを含む。

【0253】

当業者は、所望の治療に影響を及ぼすために本開示の組成物の複数回の投与が必要とされ得ることを認識するであろう。例えば、組成物は、１週間、２週間、３週間、１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、１年、２年、５年、１０年、又はそれ以上のスパンにわたって１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０回以上投与され得る。

【0254】

特定の実施形態では、活性化Ｔ細胞を対象に投与し、次いで、血液を再採取し（又はアフェレーシスを行う）、本開示に従ってそこからＴ細胞を活性化し、これらの活性化及び増殖されたＴ細胞を患者に再注入することが望ましい場合がある。このプロセスは、数週間毎に複数回実行され得る。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、１０ｃｃ～４００ｃｃの採血から活性化され得る。理論に束縛されるものではないが、この複数の採血／複数の再注入プロトコルを使用して、Ｔ細胞の特定の集団を選択するのに役立ち得る。

【0255】

本明細書で企図される組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸血、移植、又は移植を含む、任意の便利な方法で実施され得る。いくつかの実施形態では、組成物は非経口的に投与される。本明細書で使用される場合、「非経口投与」及び「非経口的に投与される」という語句は、経腸及び局所投与以外の、通常は注射による投与様式を意味し、血管内、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、腫瘍内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、及び、胸骨下の注射及び注入、を含むが、これらに限定されない。一実施形態では、本明細書で企図される組成物は、腫瘍、リンパ節、又は感染部位への直接注射によって対象に投与される。

【0256】

一実施形態では、それを必要とする対象は、対象における癌に対する細胞免疫応答を増加させるために有効量の組成物を投与される。免疫応答は、感染細胞を死滅させることができる細胞毒性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、及びヘルパーＴ細胞応答によって媒介される細胞免疫応答を含み得る。したがって、抗体産生をもたらすＢ細胞を活性化することができるヘルパーＴ細胞によって主に媒介される体液性免疫応答も誘導され得る。本開示の組成物によって誘発される免疫応答のタイプを分析するために、当該技術分野で十分に説明されている様々な技術を使用することができ、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ：Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａｄａ Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄａｖｉｄ Ｈ．Ｍａｒｇｕａｌｉｓ，Ｅｔｈａｎ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗａｒｒｅｎ Ｓｔｒｏｂｅｒ（２００１）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．に記載されている。

【0257】

Ｔ細胞媒介性殺傷の場合、ＣＡＲ－リガンド結合は、Ｔ細胞へのＣＡＲシグナル伝達を開始し、Ｔ細胞が、様々な機構によって標的細胞アポトーシスを誘導することができるタンパク質を産生する又は放出するように誘導する、様々なＴ細胞シグナル伝達経路の活性化をもたらす。これらのＴ細胞媒介メカニズムには、Ｔ細胞からの標的細胞への細胞内細胞毒性顆粒の移動、標的細胞殺滅を直接的に誘導し得る炎症誘発性サイトカインのＴ細胞分泌（又は他のキラーエフェクター細胞の動員を介して間接的に）、及び標的細胞上のそれらの同族死受容体（例えばＦａｓ）への結合後に標的細胞アポトーシスを誘導するＴ細胞表面上の死受容体リガンド（例えば、ＦａｓＬ）のアップレギュレーションが含まれる（しかし、これらに限定されない）。

【0258】

本明細書に記載の実施形態は、癌と診断された対象を治療する方法であって、ドナーからＴ細胞を取り出すことと、本明細書に記載のＣＡＲ構築物を操作して発現するものをコードする核酸を含むベクターで当該Ｔ細胞を遺伝子改変し、それによって改変されたＴ細胞の集団を産生することと、ドナーとは異なる患者に改変されたＴ細胞の集団を投与することと、を含む、方法である。

【0259】

本明細書に記載の細胞組成物を投与するための方法は、ｅｘ ｖｉｖｏで遺伝子改変された免疫エフェクター細胞を再導入するのに有効なあらゆる方法が含まれ、対象内で操作されたＣＡＲを直接発現するか、又は対象への導入により、本明細書に記載の操作された発現抗ＣＤ１９ＣＡＲ構築物を発現する成熟免疫エフェクター細胞に分化する免疫エフェクター細胞の遺伝子改変された前駆細胞の再導入のいずれかで発現する。

【0260】

前述の開示は、理解を明確にするために、例示及び例としてある程度詳細に説明されているが、本開示の教示に照らして、当業者には、添付の特許請求の範囲の趣旨又は範囲から逸脱することなく、特定の変更及び改変を加えることができることが容易に明らかになるであろう。以下の実施例は、限定するものではなく、例示としてのみ提供される。当業者は、本質的に同様の結果をもたらすために変更又は改変され得る様々な非重要なパラメータを容易に認識するであろう。

【実施例】

【0261】

実施例１

【0262】

ＩＴ ＡＭ含有ドメインを、次世代抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）としてＣＤ３ゼータの代わりにシグナル伝達ドメインとして選択して、治療可能性を増強した。抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８ヒンジ、ＣＤ２８膜貫通、ＣＤ２８コスチムドメイン及びＣＤ ３ゼータシグナル伝達ドメインの構造を有する抗ＣＤ１９第２世代キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を親鋳型として使用して、７つの娘構築物を操作及び合成した。これらの構築物は、以後、ＣＤ１９－ゼータ－１ｘｘ、ＣＤ１９－イプシロン、ＣＤ１９－デルタ、ＣＤ１９－ガンマ、ＣＤ１９－Ｄａｐ１２、ＣＤ１９－ゼータ－ＣＯ（コドン最適化）、及びＣＤ１９－イプシロン－ＣＯ（コドン最適化）と称される。娘構築物を生成するために、親鋳型の核酸３３１６～３６５１のＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを以下の配列で置き換えた。
ゼータ１ｘｘ：
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＦＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＦＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＦＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＦＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号７７）。
イプシロン：
ＫＮＲＫＡＫＡＫＰＶＴＲＧＡＧＡＧＧＲＱＲＧＱＮＫＥＲＰＰＰＶＰＮＰＤＹＥＰＩＲＫＧＱＲＤＬＹＳＧＬＮＱＲＲＩ，（配列番号５２）。
デルタ：
ＧＨＥＴＧＲＬＳＧＡＡＤＴＱＡＬＬＲＮＤＱＶＹＱＰＬＲＤＲＤＤＡＱＹＳＨＬＧＧＮＷＡＲＮＫ（配列番号５５）。
ガンマ：
ＧＱＤＧＶＲＱＳＲＡＳＤＫＱＴＬＬＰＮＤＱＬＹＱＰＬＫＤＲＥＤＤＱＹＳＨＬＱＧＮＱＬＲＲＮ（配列番号５７）。
Ｄａｐ１２：
ＹＦＬＧＲＬＶＰＲＧＲＧＡＡＥＡＡＴＲＫＱＲＩＴＥＴＥＳＰＹＱＥＬＱＧＱＲＳＤＶＹＳＤＬＮＴＱＲＰＹＹＫ，（配列番号５９）。
ゼータ－ＣＯ：
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号７８）。

【0263】

本明細書に記載されるＣＡＲ構築物を、ＣＡＲの構成的発現を駆動するためのマウス幹細胞ウイルス（ｍＳＣＶ）プロモーターを含むレンチウイルスベクター（ＬＶＶ）にクローニングした。

【0264】

以下の実施例で使用したＣＡＲは、上記のように、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ、ＣＤ２８ヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８コスチムドメイン及びシグナル伝達ドメインの構造を有するＣＤ ８αシグナル配列を含んでいた。
実施例２

【0265】

ＣＡＲ－Ｔ産物細胞を、健康なヒトドナー由来のアフェレーシス物質から製造した。回収したアフェレーシス物質を洗浄し、抗ＣＤ８抗体結合磁気ビーズと共にインキュベートし、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）細胞分離システム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を製造業者の指示に従って使用し、抗ＣＤ８抗体結合磁気ビーズを使用して処理し、ＣＤ８＋Ｔ細胞を濃縮し、次いでこれを凍結保存した。得られた陰性画分を洗浄し、抗ＣＤ４抗体結合磁気ビーズを用いて上記のように処理して、ＣＤ４＋Ｔ細胞を濃縮し、次いでこれを凍結保存した。単離されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋初代ヒトＴ細胞を、２．６％ＯｐＴｍｉｚｅｒ ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖サプリメント、２．５％ＣＴＳ免疫細胞血清代替物、１％ペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミン、及び３０５国際単位／ｍＬヒトインターロイキン（ＩＬ）－２を補充したＯｐＴｍｉｚｅｒ ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖基本培地（以後、完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地と呼ぶ）中で解凍した。Ｔ細胞を、１．６６μｇ／ｍＬの抗ＣＤ ２８抗体（クローン２８．２）を含有する完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地中に１．５×１０^６細胞／ｍＬの密度で再懸濁し、次いで、１．２３μｇ／ｍＬの抗ＣＤ ３抗体（クローンＯＫＴ３）で予めコーティングしたＴ－７５フラスコ中に播種して、Ｔ細胞活性化を誘導した（０日目）。活性化後１日目に、細胞に、親抗ＣＤ１９ ＣＡＲ又は娘構築物イプシロン、デルタ、ガンマ、及びＤａｐ１２をコードするＬＶＶを、感染多重度（ＭＯＩ）２０で形質導入した。ゼータＣＯ及びイプシロンＣＯ構築物からなる追加の実験群を５のＭＯＩで形質導入し、非形質導入（ＮＴＤ）試料を陰性対照として用いた。Ｔ細胞を３日目に完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地で洗浄し、正規化し、更に４日間（３～７日目）増殖させた。回収時点（７日目）で、細胞を将来の使用のために凍結保存した。増殖中の複数の時点で（３～７日目）、Ｖｉ－ＣＥＬＬを使用して細胞計数を行い、細胞密度を、完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地の添加によって０．５～１×１０^６細胞／ｍＬに正規化した。これらの時点で、平均細胞生存率、直径、及び細胞密度をＶｉ－ＣＥＬＬに記録した。

【0266】

細胞数、細胞生存率、及び細胞直径を、異なる実験群のそれぞれについて０日目から７日目まで追跡し、表６にまとめる。

【0267】

実験群当たり合計７．９×１０^６の細胞を０日目に刺激した。７日間の製造プロセスの終わりに、イプシロン、イプシロンＣＯ、及びＣＤ１９－ＲＶＶ構築物は、２００×１０^６の総細胞をわずかに超えて、最も少なく増殖した。生成物細胞の直径は、Ｔ細胞活性化の間接的尺度として使用され、製造中にいずれの群の間でも有意差を示さなかった。
実施例３

【0268】

ＣＡＲ発現を６日目及び７日目にフローサイトメトリーによって測定して、ＣＡＲ－Ｔ産物細胞の形質導入効率を決定した。Ｔ細胞を、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（ＣＡＲ）に対するフルオロフォア結合抗体のパネルで染色し、フローサイトメトリーによって特徴付けて、形質導入効率及びＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞比を決定した。ＣＡＲ発現（抗ＣＤ１９ ＣＡＲ）の評価は、抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖ中に存在するＷｈｉｔｌｏｗリンカーに対するフルオロフォア結合抗体によって可能になった。また、固定可能な細胞生存色素を使用して、生存細胞の特異的分析を可能にした。細胞を、適切な抗体混合物と共に４℃で２０分間インキュベートすることによって染色し、続いて染色緩衝液で２回洗浄し、その後、リン酸緩衝生理食塩水又はハンクス平衡塩溶液中の０．６％パラホルムアルデヒド中で室温で１０分間インキュベートすることによって固定した。全てのフローサイトメトリーデータをＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）機器で回収し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してデータを分析した。

【0269】

ＣＡＲ発現を、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー染色及びその後のフローサイトメトリー分析を使用して、製造の６日目及び７日目の両方で測定した（表７）。実験群は、６日目に８１．５％～９１．９％の範囲の同等のＣＡＲ発現を示し、７日目に比較的安定したままであった。唯一の例外は、６日目に７４．２％で最も低いＣＡＲ発現を有し、また７日目に５８．４％まで有意に低下したイプシロン構築物であった。

実施例４

【0270】

Ｔ細胞媒介性細胞毒性を、単独で播種された標的細胞によって放出されるシグナルと比較した、共培養ウェルにおける標的ルシフェラーゼシグナルの減少の関数として測定した。健康なドナーアフェレーシスに由来するＴ細胞から製造されたＴ細胞産物を、採取日（製造の７日目）に凍結保存した。共培養の０日目に、Ｔ細胞産物を解凍し、完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地中で一晩静置した後、標的細胞との共培養を開始した。共培養開始の直前に、各Ｔ細胞試料のアリコートを、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（ＣＡＲ）に対する抗体－フルオロフォアのパネルと共にインキュベートし、フローサイトメトリーによって分析して形質導入効率を評価した。総形質導入効率を、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の重鎖と軽鎖との間のＷｈｉｔｌｏｗリンカーに結合する特注の抗体を使用して評価した。次いで、Ｔ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）試薬で標識し、その後、Ｒ－１０％培地［１０％ウシ胎仔血清、ペニシリンストレプトマイシンＬ－グルタミン、及びＨＥＰＥＳを補充したＲＰＭＩ－１６４０培地］で洗浄した。ＣＴＶ標識試料の一部を固定し、４日目まで４℃で保存し、４日目の共培養試料と並行して試料をフローサイトメトリーによって分析して、ＣＴＶシグナルの初期レベル（ＣＴＶ Ｍａｘ）を評価した。Ｔ細胞産物及びルシフェラーゼ発現標的細胞を、Ｒ－１０％培地（共培養の０日目）中、３：１～１：２４３の範囲の（Ｅ：Ｔ）比で標的に対して異なるエフェクターで一緒に播種した。１ウェル当たりの標的細胞数を２０，０００細胞で一定に保ちながら、Ｔ細胞産物を３倍に連続希釈した。陽性標的細胞は、Ｎａｌｍ６（ＣＤ１９＋）及びＳＴ４８６（ＣＤ１９＋）を含んでいた。対照として、Ｔ細胞産物を任意の標的細胞の非存在下（すなわち、Ｔ細胞単独）で培養して、抗原刺激の非存在下でのＴ細胞機能の基礎レベルを評価した。共培養物を３７℃で１日又は４日間インキュベートし、以下に記載するように機能評価を行った。

【0271】

解凍して一晩静置した後、各実験群の試料をＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（ＣＡＲ）について染色して、それらの回収率及びＣＡＲ発現を評価した。次いで、群を、ＮＴＤ細胞の添加によって最低の形質導入パーセンテージ（４３．７％）まで正規化した。これは、全ての試料が下流アッセイにおいて同じ数のＣＡＲ＋試料を有することを確実にするために行った。生成物細胞は首尾よく正常化し、４１．０～４６．８パーセントの範囲であった（表８）。イプシロン構築物は、細胞表面上のＣＡＲを下方制御することが観察され、標的細胞との共培養開始の時間までに２７．７％ＣＡＲ＋に低下した。

【0272】

Ｔ細胞媒介性細胞毒性を、単独で播種された標的細胞によって放出されるシグナルと比較した、共培養ウェルにおける標的ルシフェラーゼシグナルの減少の関数として測定した。共培養開始後１日目及び４日目に、Ｄ－ルシフェリン基質を０．１４ｍｇ／ｍＬの最終濃度で共培養ウェルに添加し、３７℃で１０分間、暗所でインキュベートした。発光シグナルを、ＶａｒｉｏＳｋａｎ（商標）ＬＵＸ又はＶａｒｉｏＳｋａｎ（登録商標）Ｆｌａｓｈマルチモードマイクロプレートリーダーにおいて直後に読み取った。Ｔ細胞媒介性細胞毒性を以下のように計算した。
細胞毒性％＝［１－（対象試料／標的単独対照）のルシフェラーゼシグナル］^＊１００

【0273】

１日目（表９）及び４日目（表１０）の読み出しは、全ての両方の抗原発現細胞株（Ｎａｌｍ６及びＳＴ４８６）にわたって同等の用量依存的細胞毒性を示し、構築物間に有意差はなかった。

実施例５

【0274】

先の実施例に記載の共培養開始後１日目に、上清を回収し、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｖ－ＰＬＥＸ（登録商標）Ｐｒｏ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｐａｎｅｌ １ヒトキットを製造業者の説明書に従って使用してサイトカインレベルについて分析した。具体的には、抗原発現Ｎａｌｍ６及びＳＴ４８６との１：１ Ｅ：Ｔ比で播種したＴ細胞産物の共培養物からの上清を、抗原結合によって媒介されるインターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）、ＩＬ－２、及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）分泌のレベルについて分析した。標的細胞の非存在下で培養したＴ細胞（Ｔ細胞単独）からの上清を並行して分析して、抗原の非存在下でのサイトカイン産生の基礎レベルを評価した。全ての試料を検出範囲内になるように希釈した。

【0275】

１：１ Ｅ：Ｔ 比から上清を回収し、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、及びＴＮＦ－α分泌についてＭＳＤを介して分析した。分析により、全ての構築物が、抗原発現細胞株Ｎａｌｍ６及びＳＴ４８６と共培養した場合にサイトカインを分泌することが示された（表１１）。ゼータ１ｘｘ、イプシロン－ＣＯ、及びある程度のデルタはすべて、ゼータ及びゼータ－ＣＯベンチマーク対照と比較して、同等の高レベルの炎症促進性サイトカインを分泌した。イプシロン、ガンマ、及びＤａｐ１２は、ゼータ及びゼータ－ＣＯベンチマーク対照と比較して、より低いレベルのサイトカインを産生した。Ｎａｌｍ６細胞株との共培養は、ＳＴ４８６細胞株で分泌されたレベルと比較した場合、より高いレベルのサイトカインを誘発したが、構築物の全体的な階層的パターンは、両方の細胞株にわたって一貫していた。一方、ＮＴＤ対照群は、単独で又は抗原発現細胞株と共に培養した場合、測定可能なレベル又は有意なレベルのサイトカインを分泌しなかった。

実施例６

【0276】

共培養開始後４日目、標的細胞と１：１のＥ：Ｔ比で播種されたＴ細胞産物を回収し、抗体－フルオロフォアのパネルで染色してＴ細胞を同定し、フローサイトメトリーによって分析した。Ｔ細胞産物の増殖能力を、抗原発現標的細胞に応答したＣＴＶ色素の細胞分裂駆動性希釈物のフローサイトメトリー分析によって、単独で培養されたＴ細胞産物（Ｔ細胞単独）の増殖能力と比較して決定し、これを使用して刺激の非存在下での恒常性増殖の基礎レベルを評価した。共培養セットアップ（ＣＴＶ Ｍａｘ）の日に固定されたＣＴＶ標識Ｔ細胞を、フローサイトメトリーによって並行して分析して、細胞増殖前の初期ＣＴＶシグナルの強度を評価した。

【0277】

Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）標識の希釈を使用して増殖を評価した。生成物ＣＡＲ－Ｔ細胞が分裂するにつれて、色素は各分裂で希釈され、したがって、０日目の細胞と比較してより低いＣＴＶ ＭＦＩは増殖を示す。最小限の恒常性増殖又は抗原非依存性増殖が、単独で又は抗原発現細胞株と共に培養された場合、ＮＴＤ対照群において見られる。全ての他の構築物は、ＳＴ４８６細胞株に対して培養された場合、匹敵するＭＦＩレベルを示した。Ｎａｌｍ６細胞株と共に培養した場合、ゼータ－ＣＯ及びイプシロンは両方とも、より大きな増殖を示す最も低いＣＴＶ ＭＦＩを有した。全ての他の構築物は、この同じ標的株に対して匹敵するレベルの増殖を有した。完全な概要を表１２に示す。

実施例７

【0278】

インビボ研究のために、注射の１日前に、抗ＣＤ１９産物ＣＡＲ Ｔ細胞を上記のように調製し、凍結保存から取り出し、３７℃の水浴中で解凍し、予熱した完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地中に再懸濁した。細胞懸濁液のアリコートをトリパンブルーで希釈し、細胞を手動で計数した。細胞懸濁液を室温で５分間４００×ｇで遠心分離し、上清を吸引した。次いで、細胞を完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地中に２．０～５．０×１０^６細胞／ｍＬで再懸濁し、３７℃／５％ＣＯ^２インキュベーター中で一晩培養した。注射の日に、ＮＴＤ Ｔ細胞を、総細胞数によって試験群を正規化するために指定された比でＣＡＲ＋Ｔ細胞と共にプールした。均質な細胞懸濁液のアリコートをトリパンブルー溶液で希釈し、血球計数器を使用して細胞を手動で計数して、細胞の注射前生存率を決定した。次いで、細胞懸濁液を４℃で１０分間、２００×ｇで遠心分離した。各バイアルの上清を吸引し、細胞ペレットを室温でＤＰＢＳ中に再懸濁した。２つのＣＡＲ Ｔ細胞用量を試験した：１群当たり５．０×１０^５及び２．０×１０^６ＣＡＲ＋細胞。移植後、各懸濁液からの残存細胞のアリコートをトリパンブルー溶液で希釈し、計数して移植後細胞生存率を決定した。

【0279】

同じ総数のＴ細胞（２．４×１０^６細胞）を、処置群のそれぞれにおいてマウスに投与した。各処置群に投与される用量は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ形質導入効率に基づいて、各群について同じ総数のＴ細胞を送達するように正規化した。

【0280】

ＩＶＩＳ ５光学撮像システムを用いてインビボＢＬＩを実施した。動物を約１％～２％イソフルランガス麻酔下で撮像した。各マウスに０．２ ｍＬ／２０ ｇのＤ－ルシフェリンをＩＰ注射し、注射の１０分後に腹臥位、次いで仰臥位で撮像した。電荷結合素子（ＣＣＤ）チップの大規模なビニングを使用し、露光時間を調整して、画像中の各マウスにおいて観察可能な転移性腫瘍から少なくとも数百カウントを得て、ＣＣＤチップの飽和を回避した。ＢＬＩ画像は、６、１３、２０、２７、３４、４１、及び４８日目に回収した。Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅソフトウェアバージョン４．７．１を使用して画像を分析した。対象となる（ＲＯＩ）全身固定体積を各個々の動物について腹臥位及び仰臥位画像上に配置し、動物識別に基づいて標識した。全光束（光子／秒）を計算し、全てのＲＯＩについてエクスポートした。ここで、特注スクリプトは、群間の分析を容易にするために、各マウスについて見出された様々なシグナルを表にした。対象となる腹臥位及び仰臥位領域を合計して、全身腫瘍量を推定した。

【0281】

各実験群のＢＬＩを表１３に要約する。ビヒクル対照又はＮＴＤ細胞のいずれかを受けた群は、腫瘍制御を示さず、両方の群は、高い腫瘍負荷のために２０日目までに安楽死させた。全ての高用量構築物は、１３日目に有意かつ同等の有効性を示した。高用量群における腫瘍制御の喪失は、早くも２０日目に始まった。高用量群のイプシロン－ＣＯ、Ｄａｐ１２、及びゼータ１ｘｘは、４８日目の研究の終了まで腫瘍制御を維持した。

【0282】

低用量群における腫瘍制御は、試験開始時からより変動しやすかった。ゼータ１ｘｘは、初期に最良の腫瘍制御を有し、研究全体を通してその有効性を維持した。イプシロン－ＣＯは、最初の３回の読み出しを通して最小限の腫瘍制御を示したが、その後、２７日目に全てのマウスにわたって突然かつ完全な腫瘍制御を示し、研究の残りを通してこの腫瘍制御を維持した。イプシロンは、研究の終わりまで継続した５匹のマウスのうち３匹において３４日目に同様の後期腫瘍制御を示した。残りの２つは、高い腫瘍負荷のために最終的に安楽死させた。より多様であったが、Ｄａｐ１２は、低用量において、高用量試験と同様の腫瘍制御効力を示した。１匹のマウスは、特に、２７日目に開始して腫瘍制御を失うようであったが、その後、４８日目までに回復した。

実施例８

【0283】

ｅｘ ｖｉｖｏ ｄｄＰＣＲ分析のために、１００μｌの毎週の血液容量を後眼窩洞を介して回収し、氷上で保存した。動物を、Ｔ細胞注射の２４時間後に開始してサンプリングし、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、及び４３日目の研究期間を通して毎週続けた。ＫｉｎｇＦｉｓｈｅｒＴＭフレックス（小容量）を製造業者の指示に従って使用してＤＮＡ精製を行い、次いで、内部Ｋｉｔｅプロトコル及びＢｉｏ－Ｒａｄ機器を介して、精製されたＤＮＡにｄｄＰＣＲを行った。

【0284】

インビボでのＣＡＲ Ｔ細胞増殖及び持続性を評価するために、ＤＮＡ １μｇ当たりのＣＡＲコピーについて、ｄｄＰＣＲを介して末梢血を分析した（表１４）。分析は、改善された腫瘍制御を示した構築物（ゼータ１ｘｘ、Ｄａｐ１２及びイプシロン－ＣＯ）に限定した。ゼータは、Ｎａｌｍ６腫瘍モデルにおける本発明者らの標準的な抗ＣＤ１９ ＣＡＲについて予想されるように、マウスの末梢血においてほとんど又は全く増殖を示さなかった。しかしながら、イプシロン－ＣＯ並びにより少ない程度のゼータ１ｘｘ及びＤａｐ１２は、両方の処置用量において、マウスの末梢血におけるＣＡＲ Ｔ細胞ピーク拡大及び持続を増加させた。

実施例９

【0285】

以下の実施例は、ベンチマーク抗ＣＤ１９対照ＣＡＲにおけるＣＤ３ゼータの置換として、３つの新規ＣＤ１９＿ＣＤ３イプシロン－ＣＯ変異ドメインのうちの１つを利用する３つの新たな第二世代ＣＤ１９／ＣＤ２０バイシストロン性ＣＡＲ構築物を記載する。３つのＣＤ３イプシロン変異体は、ＣＤ２０ ＣＡＲを有するバイシストロン性構築物において、野生型ＣＤ３イプシロン－ＣＯと比較して、膜への改善されたＣＤ１９ ＣＡＲ発現を示した。全てが初代ヒトＴ細胞において首尾よく形質導入され、発現された。これらの新しいＣＡＲ構築物を、インビトロアッセイによって特徴付けた。

【0286】

構築物設計。抗ＣＤ１９ＣＤ３ゼータ第２世代キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（以下、ＣＤ１９ｚと呼ぶ）を使用して、配列ＡＴＧＧＣＡＣＴＴＣＣＡＧＴＣＡＣＣＧＣＡＣＴＣＴＴＧＣＴＴＣＣＡＣＴＧＧＣＣＴＴＧＴＴＧＣＴＧＣＡＴＧＣＴＧＣＧＣＧＧＣＣＡＧＡＴＡＴＡＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＡＡＣＧＡＣＧＴＣＴＡＧＣＣＴＣＡＧＴＧＣＧＴＣＡＣＴＣＧＧＧＧＡＴＣＧＧＧＴＧＡＣＡＡＴＴＡＧＣＴＧＣＡＧＧＧＣＴＡＧＣＣＡＧＧＡＴＡＴＴＴＣＡＡＡＡＴＡＴＣＴＴＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＧＣＣＡＧＡＴＧＧＡＡＣＣＧＴＡＡＡＡＣＴＧＣＴＣＡＴＡＴＡＣＣＡＣＡＣＣＡＧＴＣＧＣＣＴＧＣＡＴＴＣＡＧＧＧＧＴＴＣＣＧＡＧＣＣＧＣＴＴＴＴＣＴＧＧＧＡＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＡＡＣｔＧＡｔＴＡＴＡＧＣＴＴＧＡＣＡＡＴＡＡＧＣＡＡＣＣＴＣＧＡＧＣＡＧＧＡＡＧＡＣＡＴＴＧＣＧＡＣＧＴＡＣＴＴＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＧＧＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＣＣＧＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＣＴＡＡＡＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＣＧＧＧＡＴＣＴＡＣＧＴＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＧＡＴＣＣＡＣＴＡＡＡＧＧＣＧＡＡＧＴＣＡＡＧＴＴＧＣＡＡＧＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＴＧＧＴＣＴＣＧＴＧＧＣＡＣＣＴＴＣＡＣＡＧＴＣＡＣＴＣＴＣＣＧＴＴＡＣＣＴＧＴＡＣＣＧＴＡＴＣＴＧＧＡＧＴＴＴＣＡＣＴＴＣＣＣＧＡＣＴＡＴＧＧＣＧＴＧＴＣＡＴＧＧＡＴＡＣＧＣＣＡＡＣＣＡＣＣＧＣＧＡＡＡＡＧＧＴＣＴＴＧＡＡＴＧＧＣＴＧＧＧＣＧＴＴＡＴＣＴＧＧＧＧＡＴＣＣＧＡＡＡＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＡＡＣＴＣＴＧＣＧＣＴＣＡＡＧＴＣＡＣＧＧＣＴＧＡＣＴＡＴＴＡＴＡＡＡＧＧＡＣＡＡＴＴＣＡＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＣＴＧＡＴＧＡＣＡＣＴＧＣＡＡＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＴＡＴＴＡＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＴＡＣＧＣＧＡＴＧＧＡＴＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＡＡＣＡＧＴＣＡＧＣＴＣＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＧＧＡＣＡＡＴＧＡＡＡＡＡＴＣＣＡＡＴＧＧＣＡＣＡＡＴＡＡＴＴＣＡＴＧＴＡＡＡＧＧＧＣＡＡＡＣＡＣＴＴＧＴＧＴＣＣＴＡＧＣＣＣＡＣＴＣＴＴＴＣＣＴＧＧＴＣＣＧＴＣＴＡＡＡＣＣＧＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＣＧＴＴＧＴＧＧＴＴＧＧＡＧＧＣＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＴＴＡＣＴＣＴＣＴＧＴＴＧＧＴＧＡＣＴＧＴＡＧＣＣＴＴＴＡＴＡＡＴＡＴＴＣＴＧＧＧＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＡＣＧＡＡＧＴＡＧＧＣＴＴＴＴＡＣＡＴＴＣＡＧＡＣＴＡＴＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＡＣＣＡＡＧＡＣＧＣＣＣＣＧＧＣＣＣＣＡＣＡＡＧＡＡＡＡＣＡＣＴＡＴＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＴＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＣＴＴＡＣＣＧＡＡＧＣＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＧＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＣＴＣＡＡＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＡＴＴ（配列番号９０）を有する抗ＣＤ１９ ＣＤ３ イプシロン－ＣＯ構築物を生成し、それを親鋳型として使用して、イプシロン－ＣＯ（Δ１８１－１８５）、イプシロン－ＣＯ（Ｒ１８３Ｋ）、及びイプシロン－ＣＯ（Ｓ１７８Ｎ．Ｒ１８３Ｋ）と呼ばれるイプシロン－ＣＯシグナル伝達ドメイン内に変異を含む３つの娘構築物を操作した。元のＣＤ３ゼータシグナル伝達タンパク質から娘構築物を生成するために、親鋳型の核酸３３１６～３６５１を以下の配列で置き換えた。
イプシロン－ＣＯ：
ＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＧＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＣＴＣＡＡＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＡＴＴ（配列番号５４）。
イプシロン－ＣＯ（Δ１８１－１８５）：
ＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＧＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＣＴＣ（配列番号７９）。
イプシロン－ＣＯ（Ｒ１８３Ｋ）：
ＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＧＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＣＴＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＧＡＡＴＴ（配列番号８０）。
イプシロン－ＣＯ（Ｓ１７８Ｎ．Ｒ１８３Ｋ）
ＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＧＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴＡＣＡＡＣＧＧＴＣＴＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＧＡＡＴＴ（配列番号８１）。
次いで、ＣＤ１９ゼータＣＡＲ構築物、並びにＣＤ３イプシロン－ＣＯ及びＣＤ３イプシロンシグナル伝達ドメインにおける突然変異を含有する構築物を、Ｔ２Ａフューリン切断可能領域を第二世代ＣＤ２０ ＣＤ３ゼータ（ＣＤ２０ｚ）ＣＡＲに組み込むことによってバイシストロン性フォーマットに組み立て、以下、図１に示すように、ＣＤ１９ｚ／ＣＤ２０ｚ、ＣＤ１９イプシロン（Δ１８１－１８５）／ＣＤ２０ｚ、ＣＤ１９イプシロン（Ｒ１８３Ｋ）／ＣＤ２０ｚ及びＣＤ１９イプシロン（Ｓ１７８Ｎ．Ｒ１８３Ｋ）／ＣＤ２０ｚと称される、２つの異なるＣＡＲの共発現をもたらす。

【0287】

ＣＡＲ Ｔ細胞産物の製造。健康なヒトドナーからのアフェレーシス物質を洗浄し、抗ＣＤ８抗体結合磁気ビーズと共にインキュベートし、製造業者の指示に従ってＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）細胞分離システム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して処理して、ＣＤ８＋Ｔ細胞を濃縮し、次いでこれを凍結保存した。得られた陰性画分を洗浄し、抗ＣＤ４抗体結合磁気ビーズを用いて上記のように処理して、ＣＤ４＋Ｔ細胞を濃縮し、次いでこれを凍結保存した。単離されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋初代ヒトＴ細胞を、２．６％ＯｐＴｍｉｚｅｒ ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖サプリメント、２．５％ＣＴＳ免疫細胞血清代替物、１％ペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミン、及び３０５国際単位／ｍＬヒトインターロイキン（ＩＬ）－２を補充したＯｐＴｍｉｚｅｒ ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖基本培地（以後、完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地と呼ぶ）中で解凍した。Ｔ細胞を、１．６６μｇ／ｍＬの抗ＣＤ ２８抗体（クローン２８．２）を含有する完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地中に１．５×１０^６細胞／ｍＬの密度で再懸濁し、次いで、１．２３μｇ／ｍＬの抗ＣＤ ３抗体（クローンＯＫＴ３）で予めコーティングしたＰＬ０７バッグ中に播種して、Ｔ細胞活性化を誘導した（０日目）。活性化後１日目に、細胞に、親バイシストロニックＣＤ１９ｚ／ＣＤ２０ｚ ＣＡＲをコードするＬＶＶ及びＣＤ１９－イプシロン－ＣＯ／ＣＤ２０ｚ ＣＡＲを含有する構築物のいずれかを１０のＭＯＩで形質導入した。非形質導入（ＮＴＤ）試料は、陰性対照として機能した。Ｔ細胞を３日目に完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地で洗浄し、正規化し、更に９日間（３～９日目）増殖させた。回収時点（９日目）で、細胞を、将来の発現評価のために凍結保存した。増殖中の複数の時点で（３～９日目）、Ｖｉ－ＣＥＬＬを使用して細胞計数を行い、完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地を添加することによって細胞密度を０．５×１０^６細胞／ｍＬに正規化した。これらの時点で、平均細胞生存率、直径、及び細胞密度をＶｉ－ＣＥＬＬに記録した。

【0288】

ＣＤ３イプシロン－ＣＯ／ＣＤ ２０ ｚ ＣＡＲの発現決定。製造されたＤ９ ＣＤ１９ｚ／ＣＤ２０ｚ、ＣＤ１９－イプシロン－ＣＯ／ＣＤ ２０ ｚ及びＮＴＤ細胞を解凍し、ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地中で一晩静置して、ＣＡＲ発現を評価した。ｈｕＣＤ１９－Ｈｉｓ組換えペプチド及び抗イディオタイプ抗体（２４Ｃ１２）を使用して発現を評価し、それぞれＣＤ１９及びＣＤ２０ ＣＡＲの個々の発現を評価した。各ＣＡＲについての平行膜及び細胞内発現を評価した。

【0289】

ＣＡＲ Ｔ細胞産物の製造。健康なヒトドナーからのアフェレーシス物質を洗浄し、抗ＣＤ８抗体結合磁気ビーズと共にインキュベートし、製造業者の指示に従ってＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）細胞分離システム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して処理して、ＣＤ８＋Ｔ細胞を濃縮し、次いでこれを凍結保存した。得られた陰性画分を洗浄し、抗ＣＤ４抗体結合磁気ビーズを用いて上記のように処理して、ＣＤ４＋Ｔ細胞を濃縮し、次いでこれを凍結保存した。単離されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋初代ヒトＴ細胞を、２．６％ＯｐＴｍｉｚｅｒ ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖サプリメント、２．５％ＣＴＳ免疫細胞血清代替物、１％ペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミン、及び３０５国際単位／ｍＬヒトインターロイキン（ＩＬ）－２を補充したＯｐＴｍｉｚｅｒ ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖基本培地（以後、完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地と呼ぶ）中で解凍した。Ｔ細胞を、１．６６μｇ／ｍＬの抗ＣＤ ２８抗体（クローン２８．２）を含有する完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地中に１．５×１０^６細胞／ｍＬの密度で再懸濁し、次いで、１．２３μｇ／ｍＬの抗ＣＤ ３抗体（クローンＯＫＴ３）で予めコーティングしたＰＬ０７バッグ中に播種して、Ｔ細胞活性化を誘導した（０日目）。活性化後１日目に、細胞に、親バイシストロン性ＣＤ１９ｚ／ＣＤ２０ｚ ＣＡＲ、又はＣＤ１９－イプシロン－ＣＯ（Δ１８１－１８５）／ＣＤ２０ｚ、ＣＤ１９－イプシロン－ＣＯ（Ｒ１８３Ｋ）／ＣＤ２０ｚ、もしくはＣＤ１９－イプシロン－ＣＯ（Ｓ１７８Ｎ．Ｒ１８３Ｋ）／ＣＤ２０ｚを含有する構築物をコードするＬＶＶを１０のＭＯＩで形質導入した。非形質導入（ＮＴＤ）試料は、陰性対照として機能した。Ｔ細胞を３日目に完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地で洗浄し、正規化し、更に６日間（３～９日目）増殖させた。回収時点（９日目）で、細胞を将来の使用のために凍結保存した。増殖中の複数の時点で（３～９日目）、Ｖｉ－ＣＥＬＬを使用して細胞計数を行い、完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地を添加することによって細胞密度を０．５×１０^６細胞／ｍＬに正規化した。これらの時点で、平均細胞生存率、直径、及び細胞密度をＶｉ－ＣＥＬＬに記録した。

【0290】

ＣＡＲ発現を、７日目及び９日目にフローサイトメトリーによって測定した。Ｔ細胞をフルオロフォア結合抗体のパネルで染色し、フローサイトメトリーによって特徴付けて、形質導入効率及びＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞比を決定した。各ＣＡＲアームの発現評価は、フルオロフォア結合抗ＦＭＣ６３（抗ＣＤ１９ ＣＡＲに対するイディオタイプ、ＣＤＬとしても知られる）及び２４Ｃ１２（抗ＣＤ２０ ＣＡＲに対するイディオタイプ）抗体によって可能にした。ＣＤ１９及びＣＤ２０ ＣＡＲの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の重鎖と軽鎖との間のＷｈｉｔｌｏｗリンカーに結合する特注抗体であるＫＩＰ－１を使用して、総ＣＡＲ形質導入効率を評価した。固定可能な細胞生存色素は、生存細胞の特異的分析を可能にした。細胞を、適切な抗体混合物と共に４℃で３０分間インキュベートすることによって染色し、続いて染色緩衝液で２回洗浄し、その後、リン酸緩衝生理食塩水中のパラホルムアルデヒド中で室温で１０分間インキュベートすることによって固定した。全てのフローサイトメトリーデータをＡｔｔｕｎｅ ＮｘＴ機器で回収し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してデータを分析した。

【0291】

０日目の共培養セットアップ。健康なドナーアフェレーシスに由来するＴ細胞から製造されたＴ細胞産物を、採取日（製造の９日目）に凍結保存した。続いて、Ｔ細胞産物を解凍し、完全Ｒ－１０％培地［１０％ウシ胎児血清、ペニシリンストレプトマイシンＬ－グルタミン、及びＨＥＰＥＳを補充したＲＰＭＩ－１６４０培地］中で一晩静置した後、標的細胞との共培養を開始した。共培養開始の直前に、各Ｔ細胞試料のアリコートを抗体－フルオロフォアのパネルと共にインキュベートし、フローサイトメトリーによって分析して形質導入効率を評価した。各ＣＡＲアームの発現評価は、フルオロフォア結合抗ＦＭＣ６３（抗ＣＤ１９ ＣＡＲに対するイディオタイプ、ＣＤＬとしても知られる）及び２４Ｃ１２（抗ＣＤ２０ ＣＡＲに対するイディオタイプ）抗体によって可能にした。ＣＤ１９及びＣＤ２０ ＣＡＲの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の重鎖と軽鎖との間のＷｈｉｔｌｏｗリンカーに結合する特注抗体であるＫＩＰ－１を使用して、総ＣＡＲ形質導入効率を評価した。次いで、Ｔ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）試薬で標識し、続いてＲ－１０％培地で洗浄した。ＣＴＶ標識試料の一部を固定し、４日目まで４℃で保存し、４日目の共培養試料と並行して試料をフローサイトメトリーによって分析して、ＣＴＶシグナルの初期レベル（ＣＴＶ Ｍａｘ）を評価した。Ｔ細胞産物及びルシフェラーゼ発現標的細胞を、Ｒ－１０％培地（共培養の０日目）中、３：１～１：２４３の範囲の（Ｅ：Ｔ）比で標的に対して異なるエフェクターで一緒に播種した。１ウェル当たりの標的細胞数を２５，０００細胞で一定に保ちながら、Ｔ細胞産物を３倍に連続希釈した。陽性標的細胞はＲａｊｉ（ＣＤ１９＋／ＣＤ２０＋）Ｎａｌｍ６ ＭＨＣ Ｉ／ＩＩ ＫＯ（ＣＤ１９＋．ＣＤ２０＋）及びＳＴ４８６（ＣＤ１９＋／ＣＤ２０＋）を含み、一方、Ｒａｊｉ ＣＤ１９ ＫＯ（ＣＤ１９－／ＣＤ２０＋）、Ｒａｊｉ ＣＤ２０ ＫＯ（ＣＤ１９＋／ＣＤ２０－）及びＫ－５６２（ＣＤ１９－／ＣＤ２０－）は、抗原陰性対照として役立った。Ｔ細胞産物を、任意の標的細胞の非存在下（すなわち、Ｔ細胞単独）で培養して、抗原刺激の非存在下でのＴ細胞機能の基礎レベルを評価した。共培養物を３７℃で１日又は４日間インキュベートし、以下に記載するように機能評価を行った。

【0292】

１日目及び４日目細胞毒性。Ｔ細胞媒介性細胞毒性を、単独で播種された標的細胞によって放出されるシグナルと比較した、共培養ウェルにおける標的ルシフェラーゼシグナルの減少の関数として測定した。共培養開始後１日目及び４日目に、Ｄ－ルシフェリン基質を０．１４ｍｇ／ｍＬの最終濃度で共培養ウェルに添加し、プレートを３７℃で暗所で１０分間インキュベートした。発光シグナルを、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ＥｎＶｉｓｉｏｎ（登録商標）マルチモードマイクロプレートリーダーにおいて直後に読み取った。Ｔ細胞媒介性細胞毒性を以下のように計算した。
細胞毒性％＝［１－（対象試料／標的単独対照）のルシフェラーゼシグナル］^＊１００。

【0293】

１日目のサイトカイン産生。共培養開始後１日目に、上清を回収し、製造業者の指示に従ってＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｖ－ＰＬＥＸ Ｐｒｏ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｐａｎｅｌ １ヒトキットを使用してサイトカインレベルについて分析した。具体的には、抗原発現Ｒａｊｉ（ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋）、ＲａｊｉＣＤ１９ノックアウト（ＫＯ）（ＣＤ１９－ＣＤ２０＋）、ＲａｊｉＣＤ２０ノックアウト（ＫＯ）（ＣＤ１９＋ＣＤ２０－）、Ｎａｌｍ６ＭＨＣＩ／ＩＩノックアウト（ＫＯ）（ＣＤ１９＋ ＣＤ２０ｍｉｎｉｍａｌ）、ＳＴ４８６（ＣＤ１９＋ＣＤ２０＋）、及びＫ－５６２（ＣＤ１９－ＣＤ２０－）との１：１ Ｅ：Ｔ比で播種したＴ細胞産物の共培養物からの上清が、抗原結合によって媒介されるインターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）、ＩＬ－２、及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）分泌のレベルについて分析された。抗原陰性共培養物（Ｋ－５６２）からの上清を並行して分析して、抗原の非存在下でのサイトカイン産生の基礎レベルを評価した。全ての試料を検出範囲内になるように希釈した。

【0294】

４日目増殖。共培養開始後４日目に、標的細胞との３：１Ｅ：Ｔ比で播種したＴ細胞産物を、を回収し、抗体－フルオロフォアのパネルで染色してＴ細胞を同定し、フローサイトメトリーによって分析した。Ｔ細胞産物の増殖能力を、抗原発現標的細胞に応答したＣＴＶ色素の細胞分裂駆動性希釈物のフローサイトメトリー分析によって、単独で培養されたＴ細胞産物（Ｔ細胞単独）の増殖能力と比較して決定し、これを使用して刺激の非存在下での恒常性増殖の基礎レベルを評価した。共培養セットアップ（ＣＴＶ Ｍａｘ）の日に固定されたＣＴＶ標識Ｔ細胞を、フローサイトメトリーによって並行して分析して、細胞増殖前の初期ＣＴＶシグナルの強度を評価した。

【0295】

ＣＡＲ－Ｔ産物細胞の製造。細胞数、細胞生存率、及び細胞直径を、異なる実験群のそれぞれについて０日目から９日目まで追跡し、表１５にまとめる。

【0296】

９日目におけるＣＡＲ－Ｔ産物細胞の形質導入効率。各ＣＡＲを個々に検出するためにｈｕＣＤ１９－Ｈｉｓ組換えペプチド及び抗ＣＤ２０ ＣＡＲイディオタイプ（２４Ｃ１２）抗体を使用して、膜及び細胞内染色条件によって、解凍及び回収した一晩９日目の細胞でＣＡＲ発現を測定した。ＣＤ１９イプシロン－ＣＯ／ＣＤ ２０ ｚ構築物におけるＣＤ１９ ＣＡＲの発現は、膜透過化条件下で１４％から５３．５％に増加する。染色条件又は構築物のいずれかにおけるＣＤ２０ ＣＡＲの発現は、同様のままであり、膜透過性条件下で約１１～１２％増加した。形質導入パーセンテージを表１６に要約する。

【0297】

ＣＡＲ－Ｔ産物細胞の製造。細胞数、細胞生存率、及び細胞直径を、異なる実験群のそれぞれについて０日目から９日目まで追跡し、表１７にまとめる。

【0298】

ＣＡＲ－Ｔ産物細胞の形質導入効率。ＣＡＲ発現を、製造の７日目及び／又は９日目のいずれかに、ＫＩＰ－１（合計）、ＣＤＬ（ＣＤ１９ ＣＡＲ）及び２４Ｃ１２（ＣＤ２０ ＣＡＲ）染色並びにその後のフローサイトメトリー分析によって測定した（表１８）。実験群は、７日目に、ＣＤ３イプシロン－ＣＯ変異体発現構築物については８５％～９８％、ＣＤ１９ｚ／ＣＤ２０ｚについては４２～４９％の範囲の同等の全ＣＡＲ発現及び個々のＣＡＲ発現を示した。ＣＡＲ発現は、全ての構築物について９日目に比較的安定したままであった。

【0299】

共培養セットアップの０日目におけるＣＡＲ－Ｔ産物細胞の形質導入効率。解凍及び一晩の静置後、各実験群の試料を染色して、それらの回収率及びＣＡＲ発現を評価した。次いで、群を、ＮＴＤ細胞の添加によって、２４Ｃ１２発現当たりの最低形質導入パーセンテージ（３１％）まで正規化した。これは、全ての試料が下流アッセイにおいて同じ数のＣＡＲ＋試料を有することを確実にするために行った。生成物細胞を正規化し、ＣＤ２０ ＣＡＲ発現によって２２％～３２％の範囲であった（表１９）。

【0300】

細胞毒性。１日目（表２０）及び４日目（表２１）の読み出しは、抗原発現細胞株Ｒａｊｉにわたる用量依存的細胞毒性を示し、構築物間に有意差はなかった。

【0301】

１日目（表２２）及び４日目（表２３）の読み出しは、抗原発現細胞株Ｒａｊｉ ＣＤ１９ ＫＯにわたる用量依存的細胞毒性を示し、構築物間に有意差はなかった。

【0302】

１日目（表２４）及び４日目（表２５）の読み出しは、抗原発現細胞株Ｒａｊｉ ＣＤ２０ ＫＯにわたる用量依存的細胞毒性を示し、構築物間に有意差はなかった。

【0303】

１日目（表２６）及び４日目（表２７）の読み出しは、抗原発現細胞株Ｎａｌｍ６ ＭＨＣ Ｉ／ＩＩ ＫＯにわたる用量依存的な細胞毒性を示し、構築物間に有意差はなかった。

【0304】

１日目（表２６）及び４日目（表２７）の読み出しは、抗原発現細胞株ＳＴ４８６にわたって用量依存的細胞毒性を示し、構築物間に有意差はなかった。

【0305】

１日目（表２８）及び４日目（表２９）の読み出しは、抗原発現細胞株Ｋ－５６２にわたって用量依存的細胞毒性を示し、構築物間に有意差はなかった。

【0306】

１日目のサイトカイン産生。１：１ Ｅ：Ｔ 比から上清を回収し、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、及びＴＮＦ－α分泌についてＭＳＤを介して分析した。分析は、全ての構築物（表３０及び表３１）が、抗原発現細胞株Ｒａｊｉ、Ｒａｊｉ ＣＤ１９ ＫＯ、Ｒａｊｉ ＣＤ２０ ＫＯ、Ｎａｌｍ６ ＭＨＣ Ｉ／ＩＩ ＫＯ及びＳＴ４８６と共培養した場合にサイトカインを分泌したことを示した。ＣＤ３イプシロン－ＣＯ変異体構築物は全て、全ての細胞株にわたって同様のレベルのサイトカインを分泌した。Ｒａｊｉ及びＮａｌｍ６細胞株との共培養は、ＳＴ４８６細胞株で分泌されたレベルと比較した場合、より高いレベルのサイトカインを誘発したが、構築物の全体的な階層パターンは、全ての細胞株にわたって一貫していた。一方、ＮＴＤ対照群は、単独で又は抗原発現細胞株と共に培養した場合、測定可能なレベル又は有意なレベルのサイトカインを分泌しなかった。ＩＮＦγ＜１．７６ｐｇ／ｍＬ、ＩＬ－２＜０．８９０ｐｇ／ｍＬ及びＴＮＦα＜０．６９０ｐｇ／ｍＬについてのサイトカイン測定値は、アッセイについての定量限界未満であった（＜ＬＯＱ）。

【0307】

４日目増殖。Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ（商標）バイオレット（ＣＴＶ）標識の希釈を使用して増殖を評価した。生成物ＣＡＲ－Ｔ細胞が分裂するにつれて、色素は各分裂で希釈され、したがって、０日目の細胞と比較してより低いＣＴＶ ＭＦＩは増殖を示す。最小限の恒常性増殖又は抗原非依存性増殖が、単独で又は抗原発現細胞株と共に培養された場合、ＮＴＤ対照群において見られる。全ての構築物は、Ｒａｊｉ、Ｒａｊｉ ＣＤ１９ ＫＯ、Ｒａｊｉ ＣＤ２０ ＫＯ、Ｎａｌｍ６ ＭＨＣ Ｉ／ＩＩ ＫＯ、ＳＴ４８６及びＫ－５６２細胞株に対して培養された場合、同等のＭＦＩレベルを示した。完全な概要を表３２に示す。

実施例１０

【0308】

以下の実施例は、イプシロン－ＣＯ（Δ１８１－１８５）、イプシロン－ＣＯ（Ｒ１８３Ｋ）及びイプシロン－ＣＯ（Ｓ１７８Ｎ．Ｒ１８３Ｋ）シグナル伝達ドメインを利用する抗ＣＤ１９ ＣＡＲを記載し、これは、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを有するベンチマーク抗ＣＤ１９対照ＣＡＲと比較して、インビボで有意に改善された腫瘍制御を実証する。ＣＤ３イプシロンシグナル伝達ドメイン内に突然変異を有するこれらの新たな第二世代ＣＡＲ構築物を、元のＣＤ３イプシロン－ＣＯ構築物とも比較した。全てが初代ヒトＴ細胞において首尾よく形質導入され、発現された。インビボ研究は、ＣＤ３ゼータベンチマーク対照と比較した場合、イプシロン－ＣＯ及びイプシロン－ＣＯ突然変異体構築物による優れた腫瘍制御、ＣＡＲ拡大及び持続を実証し、ＣＤ３イプシロンシグナル伝達ドメインを利用する抗ＣＤ１９ ＣＡＲが増強された有効性インビボを有することを実証した。

【0309】

構築物設計。配列ＡＴＧＧＣＴＣＴＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＣＴＣＴＧＣＴＧＴＴＧＣＣＣＣＴＴＧＣＴＴＴＡＣＴＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＧＣＡＡＧＡＣＣＣＧＡＣＡＴＣＣＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＣＴＴＧＧＡＧＡＣＣＧＡＧＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＣＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＴＡＣＴＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＡＣＧＧＡＡＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＡＣＡＣＡＴＣＣＣＧＧＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＧＣＧＴＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＴＴＣＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＣＡＴＣＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＡＧＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＡＧＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＧＧＣＣＣＣＣＴＣＡＣＡＡＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＴＧＡＧＣＧＧＣＧＴＧＴＣＣＣＴＴＣＣＴＧＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＡＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＣＧＡＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＴＣＴＣＣＡＡＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＣＴＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＡＧＣＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＡＧＧＡＡＧＣＴＡＣＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＡＡＣＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＡＧＣＡＣＣＴＧＴＧＣＣＣＣＴＣＴＣＣＴＣＴＧＴＴＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＣＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＧＡＧＧＡＧＴＧＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＣＴＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＧＡＧＡＡＧＣＡＧＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＣＣＣＴＡＧＡＡＧＧＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＣＣＡＧＡＡＡＧＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＧＣＴＣＣＴＣＣＴＡＧＡＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＣＴＴＡＣＡＧＡＡＧＣＡＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧＣＧＣＴＧＡＣＧＣＴＣＣＴＧＣＴＴＡＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＡＡＣＣＡＡＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＣＣＴＧＧＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＡＴＡＣＧＡＣＧＴＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＡＧＧＡＡＡＧＣＣＡＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＡＧＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＣＡＡＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＡＧＧＣＴＴＡＣＴＣＣＧＡＧＡＴＣＧＧＡＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＣＧＧＡＣＴＧＴＡＣＣＡＡＧＧＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＧＣＴＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＡＡＧＣＣＣＴＧＣＣＴＣＣＴＡＧＧ（配列番号９１）を有する抗ＣＤ１９第２世代キメラ受容体（ＣＡＲ）（以後ゼータと呼ぶ）を親鋳型として使用して、娘構築物を操作及び合成した。イプシロン－ＣＯシグナル伝達ドメイン内に突然変異を含有する構築物も作製し、イプシロン－ＣＯ（Δ１８１－１８５）、イプシロン－ＣＯ（Ｒ１８３Ｋ）及びイプシロン－ＣＯ（Ｓ１７８Ｎ．Ｒ１８３Ｋ）と呼ぶ。娘構築物を生成するために、親鋳型の核酸３３１６～３６５１で開始するＣＤ３ゼータシグナル伝達タンパク質を、以下の配列で置き換えた（図２参照）。
イプシロン－ＣＯ（Δ１８１－１８５）：
ＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＧＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＣＴＣ（配列番号７９）。
イプシロン－ＣＯ（Ｒ１８３Ｋ）：
ＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＧＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＣＴＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＧＡＡＴＴ（配列番号８０）。
イプシロン－ＣＯ（Ｓ１７８Ｎ．Ｒ１８３Ｋ）
ＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＧＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴＡＣＡＡＣＧＧＴＣＴＣＡＡＴＣＡＧＡＡＧＣＧＡＡＴＴ（配列番号８１）。

【0310】

ＣＡＲ Ｔ細胞産物の製造。健康なヒトドナーからのアフェレーシス物質を洗浄し、抗ＣＤ８抗体結合磁気ビーズと共にインキュベートし、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）細胞分離システム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を製造業者の指示に従って使用して処理して、ＣＤ８＋Ｔ細胞を濃縮し、次いでこれを凍結保存した。得られた陰性画分を洗浄し、抗ＣＤ４抗体結合磁気ビーズを用いて上記のように処理して、ＣＤ４＋Ｔ細胞を濃縮し、次いでこれを凍結保存した。単離されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋初代ヒトＴ細胞を、２．６％ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）ＣＴＳ Ｔ細胞増殖サプリメント、２．５％ＣＴＳ免疫細胞血清代替物、１％ペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミン、及び３０５国際単位／ｍＬヒトインターロイキン（ＩＬ）－２を補充したＯｐＴｍｉｚｅｒ ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖基本培地（以後、完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地と呼ぶ）中で解凍した。Ｔ細胞を、１．６６μｇ／ｍＬの抗ＣＤ ２８抗体（クローン２８．２）を含有する完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地中に１．０×１０^６細胞／ｍＬの密度で再懸濁し、次いで、１．２３μｇ／ｍＬの抗ＣＤ ３抗体（クローンＯＫＴ３）で予めコーティングしたＴ－２５フラスコ中に播種して、Ｔ細胞活性化を誘導した（０日目）。活性化後１日目に、細胞に、親抗ＣＤ１９ ＣＡＲ又は娘構築物イプシロン－ＣＯ、イプシロン－ＣＯ（Δ１８１－１８５）、イプシロン－ＣＯ（Ｒ１８３Ｋ）、もしくはイプシロン－ＣＯ（Ｓ１７８Ｎ．Ｒ１８３Ｋ）をコードするＬＶＶを５又は１０のＭＯＩで形質導入した。非形質導入（ＮＴＤ）試料は、陰性対照として機能した。Ｔ細胞を３日目に完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地で洗浄し、正規化し、更に６日間（３～９日目）増殖させた。回収時点（９日目）で、細胞を将来の使用のために凍結保存した。増殖中の複数の時点で（３～９日目）、Ｖｉ－ＣＥＬＬを使用して細胞計数を行い、完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地を添加することによって細胞密度を０．５×１０^６細胞／ｍＬに正規化した。これらの時点で、平均細胞生存率、直径、及び細胞密度をＶｉ－ＣＥＬＬに記録した。

【0311】

ＣＡＲ発現を、６日目及び９日目にフローサイトメトリーによって測定した。Ｔ細胞をフルオロフォア結合抗体のパネルで染色し、フローサイトメトリーによって特徴付けて、形質導入効率及びＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞比を決定した。ＣＡＲ発現（抗ＣＤ１９ ＣＡＲ）の評価は、フルオロフォア結合ＫＩＰ－１によって可能になった。固定可能な細胞生存色素は、生存細胞の特異的分析を可能にした。細胞を、適切な抗体混合物と共に４℃で３０分間インキュベートすることによって染色し、続いて染色緩衝液で２回洗浄し、その後、リン酸緩衝生理食塩水中のパラホルムアルデヒド中で室温で１０分間インキュベートすることによって固定した。全てのフローサイトメトリーデータをＦｏｒｔｅｓｓａ－Ｘ２０機器で回収し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してデータを分析した。

【0312】

０日目の共培養セットアップ。健康なドナーアフェレーシスに由来するＴ細胞から製造されたＴ細胞産物を、採取日（製造の９日目）に凍結保存した。続いて、Ｔ細胞産物を解凍し、完全Ｒ－１０％培地［１０％ウシ胎児血清、ペニシリンストレプトマイシンＬ－グルタミン、及びＨＥＰＥＳを補充したＲＰＭＩ－１６４０培地］中で一晩静置した後、標的細胞との共培養を開始した。共培養開始の直前に、各Ｔ細胞試料のアリコートを抗体－フルオロフォアのパネルと共にインキュベートし、フローサイトメトリーによって分析して形質導入効率を評価した。総形質導入効率を、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の重鎖と軽鎖との間のＷｈｉｔｌｏｗリンカーに結合する特注抗体であるＫＩＰ－１を使用して評価した。次いで、Ｔ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）試薬で標識し、続いてＲ－１０％培地で洗浄した。ＣＴＶ標識試料の一部を固定し、４日目まで４℃で保存し、４日目の共培養試料と並行して試料をフローサイトメトリーによって分析して、ＣＴＶシグナルの初期レベル（ＣＴＶ Ｍａｘ）を評価した。Ｔ細胞産物及びルシフェラーゼ発現標的細胞を、Ｒ－１０％培地（共培養の０日目）中、３：１～１：２４３の範囲の（Ｅ：Ｔ）比で標的に対して異なるエフェクターで一緒に播種した。１ウェル当たりの標的細胞数を２５，０００細胞で一定に保ちながら、Ｔ細胞産物を３倍に連続希釈した。陽性標的細胞は、Ｒａｊｉ（ＣＤ１９＋）、Ｎａｌｍ６（ＣＤ１９＋）、ＳＴ４８６（ＣＤ１９＋）、及びＲａｊｉ ＣＤ１９ ＫＯ（ＣＤ１９－）又はＫ５６２（ＣＤ１９－）を含んでいた。対照として、Ｔ細胞産物を任意の標的細胞の非存在下（すなわち、Ｔ細胞単独）で培養して、抗原刺激の非存在下でのＴ細胞機能の基礎レベルを評価した。共培養物を３７℃で１日又は４日間インキュベートし、以下に記載するように機能評価を行った。

【0313】

１日目及び４日目細胞毒性。Ｔ細胞媒介性細胞毒性を、単独で播種された標的細胞によって放出されるシグナルと比較した、共培養ウェルにおける標的ルシフェラーゼシグナルの減少の関数として測定した。共培養開始後１日目及び４日目に、Ｄ－ルシフェリン基質を０．１４ｍｇ／ｍＬの最終濃度で共培養ウェルに添加し、プレートを３７℃で暗所で１０分間インキュベートした。発光シグナルを、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ＥｎＶｉｓｉｏｎ（登録商標）マルチモードマイクロプレートリーダーにおいて直後に読み取った。Ｔ細胞媒介性細胞毒性を以下のように計算した。
細胞毒性％＝［１－（対象試料／標的単独対照）のルシフェラーゼシグナル］^＊１００。

【0314】

１日目のサイトカイン産生。共培養開始後１日目に、上清を回収し、製造業者の指示に従ってＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｖ－ＰＬＥＸ Ｐｒｏ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｐａｎｅｌ １ヒトキットを使用してサイトカインレベルについて分析した。具体的には、抗原発現Ｒａｊｉ、Ｎａｌｍ６及びＳＴ４８６との１：１ Ｅ：Ｔ比で播種したＴ細胞産物の共培養物からの上清を、抗原結合によって媒介されるインターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）、ＩＬ－２、及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）分泌のレベルについて分析した。標的細胞の非存在下（Ｔ細胞単独）又は抗原陰性共培養（Ｒａｊｉ ＣＤ１９ ＫＯ又はＫ５６２）で培養したＴ細胞からの上清を並行して分析して、抗原の非存在下でのサイトカイン産生の基礎レベルを評価した。全ての試料を検出範囲内になるように希釈した。

【0315】

４日目増殖。共培養開始後４日目、標的細胞との１：１Ｅ：Ｔ比で播種したＴ細胞産物を回収し、抗体－フルオロフォアのパネルで染色してＴ細胞を同定し、フローサイトメトリーによって分析した。Ｔ細胞産物の増殖能力を、抗原発現標的細胞に応答したＣＴＶ色素の細胞分裂駆動性希釈物のフローサイトメトリー分析によって、単独で培養されたＴ細胞産物（Ｔ細胞単独）の増殖能力と比較して決定し、これを使用して刺激の非存在下での恒常性増殖の基礎レベルを評価した。共培養セットアップ（ＣＴＶ Ｍａｘ）の日に固定されたＣＴＶ標識Ｔ細胞を、フローサイトメトリーによって並行して分析して、細胞増殖前の初期ＣＴＶシグナルの強度を評価した。

【0316】

連続殺傷。産物ＣＡＲ－Ｔ細胞を、上記の共培養設定と同様に、０日目にＣＡＲ発現について正規化した。Ｔ細胞を、抗原発現Ｎａｌｍ６標的株とＲ－１０％培地中の１：１ Ｅ：Ｔで共培養した。３～４日毎に、新しいＲ－１０％培地中の追加の２５，０００個のＮａｌｍ６（ＣＤ１９＋）標的細胞で培養物をチャレンジした。細胞毒性（上記の細胞毒性と同様に評価される）及びＣＤ３＋Ｔ細胞数（Ａｔｔｕｎｅサイトメーターで分析される）を、より多くの標的細胞が添加されるラウンドごとに測定した。ラウンド９～１３では、Ｎａｌｍ６標的細胞を添加する前に、総ウェル体積を１／３に分割した。

【0317】

ＣＡＲ－Ｔ産物細胞の製造。細胞数、細胞生存率、及び細胞直径を、異なる実験群のそれぞれについて０日目から９日目まで追跡し、表３３及び表３４にまとめる。

【0318】

ＣＡＲ－Ｔ産物細胞の形質導入効率。ＣＡＲ発現を、ＫＩＰ－１染色及びその後のフローサイトメトリー分析を介して、製造の６日目又は７日目及び９日目のいずれかに測定した（表３５）。実験群は、７日目にドナー１について８３％～９５％の範囲で、６日目にドナー２について８２％～９６％の範囲で、同等のＣＡＲ発現を示した。ＣＡＲ発現は、両方のドナーについて９日目に比較的安定なままであった。

【0319】

共培養セットアップの０日目におけるＣＡＲ－Ｔ産物細胞の形質導入効率。解凍及び一晩の静置後、各実験群の試料を染色して、それらの回収率及びＣＡＲ発現を評価した。次いで、群を、ＮＴＤ細胞の添加によって、最も低い形質導入パーセンテージ（ドナー１について７５％及びドナー２について７４％）まで正規化した。これは、全ての試料が下流アッセイにおいて同じ数のＣＡＲ＋試料を有することを確実にするために行った。生成細胞は首尾よく正常化し、ドナー１では６８％～７３％、ドナー２では７３％～７８％の範囲であった（表３６）。

【0320】

細胞毒性。ドナー１からの１日目（表３７）及び４日目（表３８）の読み出しは、抗原発現細胞株Ｎａｌｍ６にわたって用量依存的細胞毒性を示し、構築物間に有意差はなかった。

【0321】

ドナー１からの１日目（表３９）及び４日目（表４０）の読み出しは、抗原発現細胞株Ｒａｊｉにわたる用量依存的細胞毒性を示し、構築物間に有意差はなかった。

【0322】

ドナー１からの１日目（表４１）及び４日目（表４２）の読み出しは、抗原発現細胞株ＳＴ４８６にわたって用量依存的細胞毒性を示し、構築物間に有意差はなかった。

【0323】

ドナー２からの１日目（表４３）及び４日目（表４４）の読み出しは、抗原発現細胞株Ｎａｌｍ６にわたって用量依存的細胞毒性を示し、構築物間に有意差はなかった。

【0324】

ドナー２からの１日目（表４５）及び４日目（表４６）の読み出しは、抗原発現細胞株Ｒａｊｉにわたる用量依存的細胞毒性を示し、構築物間に有意差はなかった。

【0325】

ドナー２からの１日目（表４７）及び４日目（表４８）の読み出しは、抗原発現細胞株ＳＴ４８６にわたって用量依存的細胞毒性を示し、構築物間に有意差はなかった。

【0326】

１日目のサイトカイン産生。１：１ Ｅ：Ｔ 比から上清を回収し、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、及びＴＮＦ－α分泌についてＭＳＤを介して分析した。分析は、ドナー１（表４９）及びドナー２（表５０）由来の全ての構築物が、抗原発現細胞株Ｒａｊｉ、Ｎａｌｍ６及びＳＴ４８６と共培養した場合にサイトカインを分泌したことを示した。イプシロン－ＣＯ構築物は全て、全ての細胞株にわたって同様のレベルのサイトカインを分泌した。Ｒａｊｉ及びＮａｌｍ６細胞株との共培養は、ＳＴ４８６細胞株で分泌されたレベルと比較した場合、より高いレベルのサイトカインを誘発したが、構築物の全体的な階層パターンは、全ての細胞株にわたって一貫していた。一方、ＮＴＤ対照群は、単独で又は抗原発現細胞株と共に培養した場合、測定可能なレベル又は有意なレベルのサイトカインを分泌しなかった。ＩＮＦγ＜１．７６ ｐｇ／ｍＬ、ＩＬ－２＜０．８９０ ｐｇ／ｍＬ及びＴＮＦα＜０．６９０ ｐｇ／ｍＬについてのサイトカイン測定値は、アッセイについての定量限界未満であった（＜ＬＯＱ）。

【0327】

４日目増殖。Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）標識の希釈を使用して増殖を評価した。生成物ＣＡＲ－Ｔ細胞が分裂するにつれて、色素は各分裂で希釈され、したがって、０日目の細胞と比較してより低いＣＴＶ ＭＦＩは増殖を示す。最小限の恒常性増殖又は抗原非依存性増殖が、単独で又は抗原発現細胞株と共に培養された場合、ＮＴＤ対照群において見られる。全ての構築物は、Ｒａｊｉ、Ｎａｌｍ６及びＳＴ４８６細胞株に対して培養された場合、同等のＭＦＩレベルを示した。完全な概要は、ドナー１については表５１に、ドナー２については表５２に見られる。

【0328】

連続殺傷。生成物ＣＡＲ－Ｔ細胞をＣＡＲ発現について正規化し、抗原発現Ｎａｌｍ６標的株と１：１ Ｅ：Ｔ比で共培養した。３～４日毎に、培養物をより多くのＮａｌｍ６標的細胞でチャレンジした。細胞毒性（表５３）及びＣＤ３＋Ｔ細胞数（表５４）を、より多くの標的細胞を添加したラウンドごとに測定した。１４ラウンド後、構築物間に有意差はなかった。

実施例１１

【0329】

本明細書に記載されるように、抗ＣＤ１９第２世代キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）におけるシグナル伝達ドメインとしてＣＤ３ゼータを置き換え、ＣＡＲ Ｔ細胞産物の治療可能性を増強することができる他のＩＴＡＭ含有タンパク質を評価した。５つの新規シグナル伝達ドメイン（ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３ガンマ及びＤａｐ１２を含む）のうちの１つを、ベンチマーク抗ＣＤ１９対照ＣＡＲにおけるＣＤ３ゼータの代わりとして利用する、５つの新しい第二世代ＣＡＲ構築物を設計した。全てが初代ヒトＴ細胞において首尾よく形質導入され、発現された。これらの新しいＣＡＲ構築物は、インビトロアッセイによって特徴付けられ、匹敵するＣＡＲ Ｔ細胞機能性を示した。インビボ研究は、ＣＤ３ゼータベンチマーク対照と比較した場合に、イプシロン－ＣＯ構築物による優れた腫瘍制御、ＣＡＲ拡大及び持続性を実証し、ＣＤ３イプシロンシグナル伝達ドメインを利用する抗ＣＤ１９ ＣＡＲが増強された有効性インビボを有することを実証した。ここで、ＣＤ３イプシロン、Ｄａｐ１２、ＣＤ３デルタ又はＣＤ３ガンマシグナル伝達ドメインを利用する抗ＣＤ１９ ＣＡＲが、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを有するベンチマーク抗ＣＤ１９対照ＣＡＲと比較して、インビボで有意に改善された腫瘍制御を実証したことが示される。

【0330】

構築物設計。配列ＡＴＧＧＣＴＣＴＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＣＴＣＴＧＣＴＧＴＴＧＣＣＣＣＴＴＧＣＴＴＴＡＣＴＣＣＴＧＣＡＣＧＣＣＧＣＡＡＧＡＣＣＣＧＡＣＡＴＣＣＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＣＴＴＧＧＡＧＡＣＣＧＡＧＴＴＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＣＧＡＧＣＴＴＣＴＣＡＡＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＴＡＣＴＴＧＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＡＣＧＧＡＡＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＡＣＡＣＡＴＣＣＣＧＧＣＴＧＣＡＣＴＣＴＧＧＣＧＴＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＴＴＣＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＡＡＧＡＧＧＡＣＡＴＣＧＣＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＴＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＣＣＧＧＡＡＧＣＡＣＡＡＧＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＡＡＧＣＣＴＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＡＧＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＡＧＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＴＧＧＡＴＴＧＧＴＧＧＣＣＣＣＣＴＣＡＣＡＡＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＴＴＡＣＡＴＧＣＡＣＴＧＴＧＡＧＣＧＧＣＧＴＧＴＣＣＣＴＴＣＣＴＧＡＣＴＡＣＧＧＣＧＴＴＴＣＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＡＡＧＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＣＧＡＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＣＡＡＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＡＧＴＧＴＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＴＣＴＣＣＡＡＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＣＧＣＴＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＡＧＣＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＡＧＧＡＡＧＣＴＡＣＧＣＴＡＴＧＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＡＧＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＴＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＡＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＣＧＧＡＡＣＣＡＴＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＡＡＧＧＧＡＡＡＧＣＡＣＣＴＧＴＧＣＣＣＣＴＣＴＣＣＴＣＴＧＴＴＣＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＣＴＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＧＡＧＧＡＧＴＧＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＣＴＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＴＡＧＡＡＧＣＡＡＧＡＧＡＡＧＣＡＧＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＣＣＣＴＡＧＡＡＧＧＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＣＣＡＧＡＡＡＧＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＣＴＴＡＣＧＣＴＣＣＴＣＣＴＡＧＡＧＡＣＴＴＣＧＣＴＧＣＴＴＡＣＡＧＡＡＧＣＡＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧＣＧＣＴＧＡＣＧＣＴＣＣＴＧＣＴＴＡＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＡＡＣＣＡＡＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＣＣＴＧＧＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＡＴＡＣＧＡＣＧＴＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＡＧＧＡＡＡＧＣＣＡＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＡＧＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＣＡＡＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＡＧＧＣＴＴＡＣＴＣＣＧＡＧＡＴＣＧＧＡＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＣＧＧＡＣＴＧＴＡＣＣＡＡＧＧＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＧＣＴＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＡＡＧＣＣＣＴＧＣＣＴＣＣＴＡＧＧ（配列番号９１）を有する抗ＣＤ１９第２世代キメラ受容体（ＣＡＲ）（以下、ゼータと呼ぶ）を親鋳型として使用して、７つの娘構築物を操作及び合成した。これらの構築物は、以下、ゼータ １ｘｘ、イプシロン、デルタ、ガンマ、Ｄａｐ１２、ゼータ－ＣＯ、及びイプシロン－ＣＯと称される。娘構築物を生成するために、親鋳型の核酸３３１６～３６５１のＣＤ３ゼータシグナル伝達タンパク質を以下の配列で置き換えた（図３を参照されたい）。
ゼータ１ｘｘ：
ＣＧＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧＣＧＣＴＧＡＣＧＣＴＣＣＴＧＣＴＴＡＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＡＡＣＣＡＡＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＣＣＴＧＧＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＡＴＡＣＧＡＣＧＴＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＡＧＧＡＡＡＧＣＣＡＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＡＧＡＧＧＧＣＣＴＧＴＴＴＡＡＣＧＡＧＣＴＧＣＡＡＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＡＧＧＣＴＴＴＣＴＣＣＧＡＧＡＴＣＧＧＡＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＣＧＧＡＣＴＧＴＴＣＣＡＡＧＧＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＧＣＴＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＴＣＧＡＣＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＡＡＧＣＣＣＴＧＣＣＴＣＣＴＡＧＧ（配列番号８２）。
イプシロン：
ＡＡＧＡＡＣＣＧＧＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＡＡＧＡＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＧＣＧＧＣＡＧＡＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＧＡＡＣＡＡＡＧＡＡＡＧＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＣＴＡＡＴＣＣＴＧＡＣＴＡＣＧＡＧＣＣＣＡＴＣＣＧＧＡＡＧＧＧＣＣＡＧＡＧＡＧＡＴＣＴＧＴＡＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＡＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＧＡＴＴ（配列番号５３）
デルタ：
ＧＧＡＣＡＣＧＡＡＡＣＡＧＧＣＡＧＡＣＴＴＴＣＴＧＧＣＧＣＣＧＣＴＧＡＴＡＣＡＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＴＧＡＧＡＡＡＣＧＡＣＣＡＧＧＴＧＴＡＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡＴＧＡＣＧＣＣＣＡＧＴＡＣＴＣＴＣＡＣＣＴＣＧＧＣＧＧＣＡＡＴＴＧＧＧＣＣＡＧＡＡＡＣＡＡＧ（配列番号８３）。
ガンマ：
ＧＧＡＣＡＧＧＡＴＧＧＣＧＴＣＡＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＧＡＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＡＡＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＴＡＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＡＡＧＧＡＣＡＧＡＧＡＧＧＡＣＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＣＡＧＣＴＧＣＧＧＡＧＡＡＡＣ（配列番号８４）
Ｄａｐ１２：
ＴＡＣＴＴＣＣＴＧＧＧＣＡＧＡＣＴＧＧＴＧＣＣＴＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＧＣＴＧＣＴＡＣＣＡＧＡＡＡＧＣＡＧＡＧＡＡＴＣＡＣＣＧＡＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＣＣＴＴＡＣＣＡＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＧＡＡＧＣＧＡＣＧＴＧＴＡＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＡＡＣＡＣＣＣＡＧＡＧＡＣＣＴＴＡＣＴＡＣＡＡＧ（配列番号８５）。
ゼータ－ＣＯ：
ＡＧＡＧＴＴＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＣＧＡＣＧＣＡＣＣＴＧＣＣＴＡＣＣＡａＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＡＴＣＡＡＣＴＧＴＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＡＣＣＴＧＧＧＣＡＧＡＣＧＧＧＡＧＧＡＡＴＡＣＧＡＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＧＡＧＡＧＧＣＡＧＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＡＴＧＧＧＣＧＧＣＡＡＡＣＣＴＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＡＣＣＣＣＣＡＧＧＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＴＡＡＴＧＡＧＣＴＣＣＡＧＡＡＧＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＣＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＧＧＣＡＴＧＡＡＧＧＧＣＧＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＡＣＧＡＣＧＧＣＣＴＣＴＡＣＣＡＧＧＧＣＴＴＡＡＧＣＡＣＡＧＣＴＡＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＴＧＣＡＡＧＣＴＣＴＧＣＣＣＣＣＴＡＧＡ（配列番号８６）。
イプシロン－ＣＯ：
ＡＡＧＡＡＣＣＧＣＡＡＡＧＣＡＡＡＧＧＣＡＡＡＡＣＣＣＧＴＣＡＣＡＣＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＧＡＣＡＡＣＧＣＧＧＴＣＡＧＡＡＴＡＡＧＧＡＡＣＧＣＣＣＧＣＣＴＣＣＡＧＴＡＣＣＡＡＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＡＡＣＣＡＡＴＴＣＧＧＡＡＧＧＧＡＣＡＡＣＧＣＧＡＴＣＴＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＣＴＣＡＡＴＣＡＧＡＧＧＣＧＡＡＴＴ（配列番号５４）。

【0331】

ＣＡＲ Ｔ細胞産物の製造。健康なヒトドナーからのアフェレーシス物質を洗浄し、抗ＣＤ８抗体結合磁気ビーズと共にインキュベートし、ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ（登録商標）細胞分離システム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を製造業者の指示に従って使用して処理して、ＣＤ８＋Ｔ細胞を濃縮し、次いでこれを凍結保存した。得られた陰性画分を洗浄し、抗ＣＤ４抗体結合磁気ビーズを用いて上記のように処理して、ＣＤ４＋Ｔ細胞を濃縮し、次いでこれを凍結保存した。単離されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋初代ヒトＴ細胞を、２．６％ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）ＣＴＳ Ｔ細胞増殖サプリメント、２．５％ＣＴＳ免疫細胞血清代替物、１％ペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミン、及び３０５国際単位／ｍＬヒトインターロイキン（ＩＬ）－２を補充したＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）ＣＴＳ Ｔ細胞増殖基本培地（以後、完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地と呼ぶ）中で解凍した。Ｔ細胞を、１．６６μｇ／ｍＬの抗ＣＤ ２８抗体（クローン２８．２）を含有する完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地中に１．５×１０^６細胞／ｍＬの密度で再懸濁し、次いで、１．２３μｇ／ｍＬの抗ＣＤ ３抗体（クローンＯＫＴ３）で予めコーティングしたＴ－７５フラスコ中に播種して、Ｔ細胞活性化を誘導した（０日目）。活性化後１日目に、細胞に、親抗ＣＤ１９ ＣＡＲ又は娘構築物イプシロン、デルタ、ガンマ、及びＤａｐ１２をコードするＬＶＶを２０のＭＯＩで形質導入した。ゼータＣＯ及びイプシロンＣＯ構築物からなる追加の実験群を５のＭＯＩで形質導入し、非形質導入（ＮＴＤ）試料を陰性対照として用いた。Ｔ細胞を３日目に完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地で洗浄し、正規化し、更に４日間（３～７日目）増殖させた。回収時点（７日目）で、細胞を将来の使用のために凍結保存した。増殖中の複数の時点で（３～７日目）、Ｖｉ－ＣＥＬＬを使用して細胞計数を行い、細胞密度を、完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地の添加によって０．５～１×１０^６細胞／ｍＬに正規化した。これらの時点で、平均細胞生存率、直径、及び細胞密度をＶｉ－ＣＥＬＬに記録した。

【0332】

ＣＡＲ発現を、６日目及び７日目にフローサイトメトリーによって測定した。Ｔ細胞をフルオロフォア結合抗体のパネルで染色し、フローサイトメトリーによって特徴付けて、形質導入効率及びＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞比を決定した。ＣＡＲ発現（抗ＣＤ１９ ＣＡＲ）の評価は、フルオロフォア結合ＫＩＰ－１によって可能になった。固定可能な細胞生存色素は、生存細胞の特異的分析を可能にした。細胞を、適切な抗体混合物と共に４℃で２０分間インキュベートすることによって染色し、続いて染色緩衝液で２回洗浄し、その後、リン酸緩衝生理食塩水又はハンクス平衡塩溶液中の０．６％パラホルムアルデヒド中で室温で１０分間インキュベートすることによって固定した。全てのフローサイトメトリーデータをＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ装置で回収し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してデータを分析した。

【0333】

０日目の共培養セットアップ。健康なドナーアフェレーシスに由来するＴ細胞から製造されたＴ細胞産物を、採取日（製造の７日目）に凍結保存した。続いて、Ｔ細胞産物を解凍し、完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地中で一晩静置した後、標的細胞との共培養を開始した。共培養開始の直前に、各Ｔ細胞試料のアリコートを抗体－フルオロフォアのパネルと共にインキュベートし、フローサイトメトリーによって分析して形質導入効率を評価した。総形質導入効率を、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の重鎖と軽鎖との間のＷｈｉｔｌｏｗリンカーに結合する特注抗体であるＫＩＰ－１を使用して評価した。次いで、Ｔ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）試薬で標識し、その後、Ｒ－１０％培地［１０％ウシ胎仔血清、ペニシリンストレプトマイシンＬ－グルタミン、及びＨＥＰＥＳを補充したＲＰＭＩ－１６４０培地］で洗浄した。ＣＴＶ標識試料の一部を固定し、４日目まで４℃で保存し、４日目の共培養試料と並行して試料をフローサイトメトリーによって分析して、ＣＴＶシグナルの初期レベル（ＣＴＶ Ｍａｘ）を評価した。Ｔ細胞産物及びルシフェラーゼ発現標的細胞を、Ｒ－１０％培地（共培養の０日目）中、３：１～１：２４３の範囲の（Ｅ：Ｔ）比で標的に対して異なるエフェクターで一緒に播種した。１ウェル当たりの標的細胞数を２０，０００細胞で一定に保ちながら、Ｔ細胞産物を３倍に連続希釈した。陽性標的細胞は、Ｎａｌｍ６（ＣＤ１９＋）及びＳＴ４８６（ＣＤ１９＋）を含んでいた。対照として、Ｔ細胞産物を任意の標的細胞の非存在下（すなわち、Ｔ細胞単独）で培養して、抗原刺激の非存在下でのＴ細胞機能の基礎レベルを評価した。共培養物を３７℃で１日又は４日間インキュベートし、以下に記載するように機能評価を行った。

【0334】

１日目細胞毒性。Ｔ細胞媒介性細胞毒性を、単独で播種された標的細胞によって放出されるシグナルと比較した、共培養ウェルにおける標的ルシフェラーゼシグナルの減少の関数として測定した。共培養開始後１日目及び４日目に、Ｄ－ルシフェリン基質を０．１４ｍｇ／ｍＬの最終濃度で共培養ウェルに添加し、プレートを３７℃で暗所で１０分間インキュベートした。発光シグナルを、ＶａｒｉｏＳｋａｎ（商標）ＬＵＸ又はＶａｒｉｏＳｋａｎ（登録商標）Ｆｌａｓｈマルチモードマイクロプレートリーダーにおいて直後に読み取った。Ｔ細胞媒介性細胞毒性を以下のように計算した。
細胞毒性％＝［１－（対象試料／標的単独対照）のルシフェラーゼシグナル］^＊１００。

【0335】

１日目のサイトカイン産生。共培養開始後１日目に、上清を回収し、製造業者の指示に従ってＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｖ－ＰＬＥＸ Ｐｒｏ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｐａｎｅｌ １ヒトキットを使用してサイトカインレベルについて分析した。具体的には、抗原発現Ｎａｌｍ６及びＳＴ４８６との１：１ Ｅ：Ｔ比で播種したＴ細胞産物の共培養物からの上清を、抗原結合によって媒介されるインターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）、ＩＬ－２、及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）分泌のレベルについて分析した。標的細胞の非存在下で培養したＴ細胞（Ｔ細胞単独）からの上清を並行して分析して、抗原の非存在下でのサイトカイン産生の基礎レベルを評価した。全ての試料を検出範囲内になるように希釈した。

【0336】

４日目増殖。共培養開始後４日目、標的細胞と１：１のＥ：Ｔ比で播種されたＴ細胞産物を回収し、抗体－フルオロフォアのパネルで染色してＴ細胞を同定し、フローサイトメトリーによって分析した。Ｔ細胞産物の増殖能力を、抗原発現標的細胞に応答したＣＴＶ色素の細胞分裂駆動性希釈物のフローサイトメトリー分析によって、単独で培養されたＴ細胞産物（Ｔ細胞単独）の増殖能力と比較して決定し、これを使用して刺激の非存在下での恒常性増殖の基礎レベルを評価した。共培養セットアップ（ＣＴＶ Ｍａｘ）の日に固定されたＣＴＶ標識Ｔ細胞を、フローサイトメトリーによって並行して分析して、細胞増殖前の初期ＣＴＶシグナルの強度を評価した。

【0337】

インビボ試験（投与量１－投与量２－投与量３）。抗ＣＤ１９産物ＣＡＲ Ｔ細胞及びＮＴＤ細胞を調製し、クライオバイアル中の凍結細胞をドライアイス上で輸送した。受け取ったら、クライオバイアルを液体窒素中で保存した。注射の前日に、バイアルを凍結保存から取り出し、３７℃の水浴中で解凍し、３０５国際単位（ＩＵ）／ｍＬのインターロイキン（ＩＬ）－２を含有する予め温めた完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地中に細胞を再懸濁した。細胞懸濁液を室温で５分間４００×ｇで遠心分離し、上清を吸引、廃棄した。次いで、細胞ペレットを完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地及び３０５ ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２に再懸濁し、細胞懸濁液のアリコートを、トリパンブルー色素排除法によるＶｉ－ＣＥＬＬ ＢＬＵ自動細胞カウンターを使用して、細胞計数及び生存率について分析した。次いで、細胞を、完全ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）培地及び３０５ ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２中に２．０～５．０×１０^６細胞／ｍＬで再懸濁し、培養フラスコに移し、３７℃／５％ＣＯ２インキュベーター中で一晩培養した。注入当日、細胞を再懸濁した後、各条件のアリコートを、Ｖｉ－ＣＥＬＬ ＢＬＵ自動細胞計数器を使用して計数して、細胞濃度及び細胞の注入前生存率を決定した。次いで、細胞懸濁液を４℃で５分間、４００×ｇで遠心分離した。上清を吸引して廃棄し、細胞ペレットを冷ＰＢＳに再懸濁した。試験後、異なるＣＡＲ Ｔ細胞用量を試験した。
投与量１の場合：群あたり１．０ｘ１０^７ＣＡＲ＋細胞の１回投与、
投与量２の場合：群あたり２．０ｘ１０^６ＣＡＲ＋細胞の１回投与、
投与量３の場合：群あたりＣＡＲ＋細胞の３回分の投与：１．０ｘ１０^６、２．０ｘ１０^５又は４．０ｘ１０^４。

【0338】

処置群及び用量正規化。各研究について、同じ総数のＴ細胞を各処置群のマウスに投与した。各処置群に投与された用量は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ形質導入効率に基づいて、各群について同じ総数のＴ細胞を送達するように正規化した。

【0339】

インビボ生物発光撮像。ＩＶＩＳ Ｌｕｍｉｎａ Ｓ５光学撮像システム（Ｘｅｎｏｇｅｎ，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）を使用してインビボＢＬＩを行った。５匹の動物を、約１％～２％イソフルランガス麻酔下で一度に撮像した。各マウスに１５０ｍｇ／ｋｇのＤ－ルシフェリンを腹腔内に（ＩＰ）注射し、注射の１５分後に腹臥位で撮像した。電荷結合素子（ＣＣＤ）チップの中程度のビニングが使用され、露光時間を調整（２秒～２分）して、画像中の各マウスにおいて観察可能な播種性腫瘍から少なくとも数百カウントを得て、ＣＣＤチップの飽和を回避した。ＢＬＩ画像を週に２回回収した。Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅソフトウェアバージョン４．７．３（Ｘｅｎｏｇｅｎ，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）を使用して画像を分析した。対象となる（ＲＯＩ）全身固定体積を各個々の動物について腹臥位画像上に配置し、動物識別に基づいて標識した。全光束（光子／秒）を計算し、全てのＲＯＩについてエクスポートした。

【0340】

ｅｘ ｖｉｖｏ ｄｄＰＣＲ及びフローサイトメトリー分析。１００μＬの毎週の血液容量を、後眼窩洞を介してＥＤＴＡ被覆管に回収し、その後のｄｄＰＣＲ分析のために直接凍結するか、又はフローサイトメトリーによって分析するために処理した。動物を、Ｔ細胞注射の２４時間後からサンプリングし、研究の期間を通して毎週続けた。ｄｄＰＣＲのために、全血からのゲノムＤＮＡ精製を、ＫｉｎｇＦｉｓｈｅｒ（商標）Ｆｌｅｘ（小容量）を製造業者の指示に従って使用して実施し、次いで、ｄｄＰＣＲを、内部Ｋｉｔｅプロトコル及びＢｉｏ－Ｒａｄ機器を介して精製されたＤＮＡに対して実施した。フローサイトメトリー分析のために、全血を、内部Ｋｉｔｅプロトコルに従って蛍光色素結合抗体を使用して染色し、次いでフローサイトメーターで分析した。フローサイトメトリー用のＣｏｕｎｔＢｒｉｇｈｔ（商標）Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｂｅａｄｓを使用して、血液中の絶対細胞数を得た。

【0341】

インビボ試験（用量１）。この研究は、インビボでの潜在的な抗原非依存性Ｔ細胞増殖及び持続性ＣＡＲ Ｔ細胞の機能性を評価した。処置開始時の初期値からの様々な時点での体重の変化を表６２に要約する。全ての群からの全てのマウスは、毒性の非存在と一致して、４９日目まで経時的に体重を増加させた。４９日目に、各群（イプシロン－ＣＯ群を除く）から４匹のマウスをｅｘ ｖｉｖｏ分析のために安楽死させ、５０日目に、各群の残りの４匹のマウスには、Ｎａｌｍ６－ｌｕｃ ＭＨＣＩ／ＩＩ二重ノックアウト（ＤＫＯ）腫瘍細胞を移植し（１００μＬ中５．０×１０^５を静脈内（ＩＶ））、残りのすべてのマウスの体重変化を、研究が終了する８５日目まで記録した。５０日目から８５日目まで、イプシロン－ＣＯ群からのマウスは、研究の終了まで体重増加を示したが、ビヒクル、ＮＴＤ、及びゼータ－ＣＯ群からのマウスは、マウスが７０日目までに研究のエンドポイントに到達するにつれて、腫瘍負荷に関連する体重変化が減少した。

【0342】

腫瘍量を、様々な時点でのＢＬＩ測定によって評価した（表６３）。各実験群の生物発光撮像（ＢＬＩ）を表６３に要約する。０日目にＮＴＤ細胞又はゼータ－ＣＯ ＣＡＲ Ｔ細胞のいずれかを受けたビヒクル対照群（複数可）は、腫瘍制御を示さず、Ｔ細胞注入後７０日目（腫瘍細胞移植後２０日目）までに高い腫瘍負荷に起因して安楽死させた。イプシロン－ＣＯ群のみが、８５日目（腫瘍細胞移植の３５日後）の研究の終了まで腫瘍成長を示さず、イプシロン－ＣＯ ＣＡＲ Ｔ細胞が、抗原の非存在下で５０日間それらの機能性及び抗腫瘍効力を持続及び維持し、その後、腫瘍負荷を効率的に除去することができ、ゼータＣＯベンチマーク対照と比較して腫瘍制御を有意に改善したことを実証した。

【0343】

ｅｘ ｖｉｖｏフローサイトメトリー分析。インビボでのＣＡＲ Ｔ細胞増殖及び持続性を評価するために、末梢血を、フローサイトメトリーを介して、経時的な血液のＣＤ３^＋ＣＡＲ^＋細胞／μＬの数について分析した（表６４）。ゼータ－ＣＯ群は、ＣＤ３^＋ＣＡＲ^＋細胞が着実に減少して２０日後＜１細胞／μＬに達したので、マウスの末梢血においてＣＡＲ Ｔ細胞増殖を示さなかった。しかしながら、イプシロン－ＣＯ群は、６２～７６日目まで持続的なＣＡＲ Ｔ細胞持続性を示し、その後、４匹のうち３匹のマウスが、血液中のＣＡＲ Ｔ細胞数の減少を示し始めた（表６４）。

【0344】

インビボ試験（投与量２）。この研究は、Ｎａｌｍ６ ＭＨＣ Ｉ／ＩＩ ＤＫＯ細胞による複数回の腫瘍再チャレンジ後のイプシロン－ＣＯ ＣＡＲ Ｔ細胞の持続性及び抗腫瘍有効性を評価した。処置開始時の初期値からの様々な時点での体重の変化を表６５に要約する。全てのＣＡＲ Ｔ細胞は良好な耐容性を示し、動物は試験期間中一貫した体重を維持した。各実験群のＢＬＩを表６６に要約する。ビヒクル群及びＮＴＤ群は、腫瘍制御を示さず、２１日目までに高い腫瘍負荷のために安楽死させた。ゼータ－ＣＯグループは、０日目の１回の最初の腫瘍移植後、又は２１、２８、３５、及び４２日目のＮａｌｍ６ＭＨＣＩ／ＩＩＤＫＯによるその後の４回の腫瘍再チャレンジ後のいずれかで、同等の有効性を示した。２０日目までは腫瘍を制御し、その後腫瘍が再発し、高い腫瘍負荷により４７日目までに安楽死した。対照的に、イプシロン－ＣＯ群は、０日目の１回の最初の腫瘍移植後、又は２１、２８、３５、４２及び６３日目のＮａｌｍ６ ＭＨＣ Ｉ／ＩＩ ＤＫＯによる５回のその後の腫瘍再チャレンジ後のいずれかで、８４日目の研究終了まで完全な腫瘍クリアランスを維持し、これらの細胞がゼータＣＯベンチマーク対照と比較して腫瘍制御を有意に改善したことを実証した。

【0345】

インビボ試験（用量３）。この研究は、イプシロン－ＣＯ ＣＡＲ Ｔ細胞対ゼータ１ｘｘ ＣＡＲ Ｔ細胞の抗腫瘍有効性及びＰＫを評価した。処置開始時の初期値からの様々な時点での体重の変化を表６７に要約する。以下の群：ビヒクル、ＮＴＤ、イプシロン－ＣＯ及びゼータ１ｘｘにおける４ｅ４及び２ｅ５用量での経時的な腫瘍量の増加は、平均体重減少及び／又は有害臨床徴候をもたらし、その後、全ての動物を研究から除外した。対照的に、１ｅ６用量のイプシロン－ＣＯ及びゼータ１ｘｘからの全てのマウスは、腫瘍負荷の有意な制御に起因して、研究の期間にわたって一貫した体重を維持した。

【0346】

各実験群のＢＬＩを表６８に要約する。ビヒクル群及びＮＴＤ群は、腫瘍制御を示さず、２６日目までに高い腫瘍負荷のために安楽死させた。４ｅ４用量群では、イプシロン－ＣＯ群の５匹中１～２匹のマウス及びゼータ１ｘｘ群の５匹中３匹のマウスは、腫瘍制御を示さず、高い腫瘍負荷のために安楽死させた。２ｅ５の用量では、ゼータ１ｘｘ群のみが、５匹中２匹のマウスにおいて腫瘍制御を示さなかった。対照的に、２ｅ５の用量のイプシロン－ＣＯマウスは全て、２６日目に死亡したことが見出された群７の１匹のマウスを除いて、５７日目のこの用量のエンドポイントまで腫瘍を制御した。全ての高用量構築物、１ｅ６でのイプシロン－ＣＯ及びゼータ１ｘｘは、５７日目まで腫瘍制御を維持し、その後、群をＮａｌｍ６ ＭＨＣ Ｉ／ＩＩ ＤＫＯ腫瘍移植で再チャレンジした。研究が終了した１０５日目まで、すべての再チャレンジ群、１ｅ６でのイプシロン－ＣＯ及びゼータ１ｘｘは、同様に完全な腫瘍クリアランスを維持した。

【0347】

ｅｘ ｖｉｖｏ ｄｄＰＣＲ分析。インビボでのＣＡＲ Ｔ細胞増殖及び持続性を評価するために、末梢血を、ｄｄＰＣＲを介して、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）μｇ当たりのＣＡＲコピーについて分析した（表６９）。ゼータ１ｘｘＣＡＲ Ｔ細胞は、マウスの末梢血中で検出されたが、イプシロン－ＣＯと比較して限られた増殖を示した。全てのイプシロン－ＣＯ群は、特に２ｅ５及び４ｅ４処置群において、マウスの末梢血におけるロバストなＣＡＲ Ｔ細胞の拡大及び持続を同様に実証した。

【0348】

一般に、以下の特許請求の範囲では、使用される用語は、本明細書及び特許請求の範囲に開示される特定の実施形態に特許請求の範囲を限定するものと解釈されるべきではなく、そのような特許請求の範囲が権利を有する均等物の全範囲と共に、全ての可能な実施形態を含むと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。

【図1】

【図2】

【図3】

【配列表】

2024538116000001.xml

【手続補正書】

【提出日】2024-04-23

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
３つのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する抗ＣＤ１９結合ドメインを含み、ここで
前記ＨＣＤＲ１は、配列番号２～４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号５～７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号８～１０のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２～１４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号１５～１７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、且つ前記ＬＣＤＲ３が、配列番号１８～２０のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むか、又は
前記ＨＣＤＲ１は、配列番号２４～２６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２７～２９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３０～３２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号３４～３６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号３７～３９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、且つ前記ＬＣＤＲ３は、配列番号４０～４２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、
膜貫通ドメインと、
共刺激ドメインと、
ＣＤ３εシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３γシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３δシグナル伝達ドメイン、又はＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインのうちの１つを含むシグナル伝達ドメインと、を含む、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項2】

前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び前記ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン、並びに前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３を含む第１の軽鎖可変ドメインを含み、ここで：
前記重鎖可変ドメインが、配列番号１と少なくとも８０％同一であり、かつ
前記軽鎖可変ドメインが、配列番号１１と少なくとも８０％同一であるか、又は
前記重鎖可変ドメインが、配列番号２４と少なくとも８０％同一であり、かつ
前記軽鎖可変ドメインが、配列番号３３と少なくとも８０％同一である、請求項１に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項3】

前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、前記ＨＣＤＲ３、前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３が単一のポリペプチドに含まれる、請求項１又は２のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項4】

前記抗ＣＤ１９結合ドメインはｓｃＦｖを含む、請求項１に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項5】

前記ｓｃＦｖが、配列番号２１又は４３のうちの１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項6】

前記シグナル伝達ドメインが、配列番号５２に記載のアミノ酸配列を備えるＣＤ３εシグナル伝達ドメインを含む、請求項１に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項7】

前記シグナル伝達ドメインが、配列番号５７に記載のアミノ酸配列を備えるＣＤ３γシグナル伝達ドメインを含む、請求項１に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項8】

前記シグナル伝達ドメインが、配列番号５５に記載のアミノ酸配列を備えるＣＤ３δシグナル伝達ドメインを含む、請求項１に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項9】

前記シグナル伝達ドメインが、配列番号５９に記載のアミノ酸配列を備えるＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む、請求項１に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項10】

前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む、請求項１に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項11】

前記共刺激ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメインを含む、請求項１に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項12】

配列番号６２、６５、６７、及び６９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。

【請求項13】

請求項１に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲをコードする、核酸。

【請求項14】

請求項１３に記載の核酸を含む、組換えベクター。

【請求項15】

請求項１３に記載の核酸又は請求項１４に記載の組換えベクターで形質導入した、宿主細胞。

【請求項16】

前記宿主細胞が、Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞又はＮＫ細胞を含む、請求項１５に記載の宿主細胞。

【請求項17】

請求項１６に記載の宿主細胞を含む、医薬組成物。

【請求項18】

疾患の処置を必要とする患者における疾患を処置するための、請求項１７に記載の医薬組成物。

【請求項19】

対象において免疫応答を誘導するか又は対象を癌に対して免疫化するための、請求項１７に記載の医薬組成物。

【請求項20】

前記癌が、急性リンパ芽球性前リンパ球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞性ＡＬＬを含む）、急性骨髄白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽細胞性形質細胞様樹状細胞腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性又は急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、毛様細胞白血病、ホジキン疾患、悪性リンパ増殖状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性ミエローマ、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖障害（無症候ミエローマ（くすぶり型多発性ミエローマ又は無痛性ミエローマ）を含む）、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫、形質細胞腫（形質細胞障害、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外形質細胞腫、及び多発性骨髄腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高槻病、及びＰＥＰ症候群としても知られる）、原発性縦隔大Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞又は大細胞濾胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞性急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞性リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫、又はワルデンシュトレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、形質転換濾胞性リンパ腫（ＴＦＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、多発性骨髄腫、毛様細胞リンパ腫／白血病、又はそれらの組み合わせである、請求項１９に記載の医薬組成物。

【請求項21】

配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項22】

７０７－ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＦＰ（アルファ（α）－フェトプロテイン）、ＡＲＴ－４（Ｔ４細胞によって認識される腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原、ｂ－カテニン／ｍ、ｂ－カテニン／変異型）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、Ｂｃｒ－ａｂｌ（易切断分類領域－Ａｂｅｌｓｏｎ）、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）、ＣＤ１９（分化分類１９）、ＣＤ２０（分化分類２０）、ＣＤ２２（分化分類２２）、ＣＤ３０（分化分類３０）、ＣＤ３３（分化分類３３）、ＣＤ４４ｖ７／８（分化分類４４、エクソン７／８）、ＣＡＭＥＬ（黒色腫上のＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ－１（癌胎児抗原ペプチド－１）、ＣＡＳＰ－８（カスパーゼ－８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７、変異型）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４、変異型）、ＣＥＡ（癌胎児抗原）、Ｃ－型レクチン様－１（ＣＬＬ－１）、ＣＴ（癌／精巣（抗原））、Ｃｙｐ－Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原、黒色腫）、ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子受容体、バリアントＩＩＩ）、ＥＧＰ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ－４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ－２、－３、４）、ＥＬＦ２Ｍ（伸長因子２、変異型）、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１（Ｅｔｓバリアント遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧＤ２（ジシアロガングリオシド２）、ＧＤ３（ジシアロガングリオシド３）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＧｎＴ－Ｖ（Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素Ｖ）、Ｇｐ１００（糖タンパク質１００ｋＤ）、ＨＡＧＥ（ヘリコース抗原）、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ（ヒト上皮受容体－２／神経性、ＥＧＦＲ２としても知られる）、ＨＬＡ－Ａ（ヒト白血球抗原－Ａ）、ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）、ＨＳＰ７０－２Ｍ（熱ショックタンパク質７０－２、変異型）、ＨＳＴ－２（ヒト印環腫瘍－２）、ｈＴＥＲＴ又はｈＴＲＴ（ヒトテロメラーゼ逆転写酵素）、ｉＣＥ（腸管カルボキシルエステラーゼ）、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２（インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、κ－軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ－Ｌ－フコース：ｂ－Ｄ－ガラクトシダーゼ２－ａ－Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬｅＹ（ルイス－Ｙ抗体）、Ｌ１ ＣＡＭ（Ｌ１細胞接着分子）、ＭＡＧＥ（黒色腫抗原）、ＭＡＧＥ－Ａ１（黒色腫関連抗原１）、メソセリン、マウスＣＭＶ感染細胞、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ（Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原－Ｉ／黒色腫抗原Ａ）、ＭＣ１ Ｒ（メラノコルチン１受容体）、Ｍｙｏｓｉｎ／ｍ（ミオシン、変異型）、ＭＵＣ１（ムチン１）、ＭＵＭ－１、－２、－３（黒色腫遍在性、変異型１、２、３）、ＮＡ８８－Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ ｃＤＮＡクローン）、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２、メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＢＲ－１（ニューヨーク乳房分化抗原１）、ＮＹ－ＥＳＯ－１（ニューヨーク食道扁平細胞カルシノーマ－１）、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、Ｐ１５（プロテイン１５）、ｐ１９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ（１９０ＫＤのｂｃｒ－ａｂｌタンパク質）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫の優先的発現抗原）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＡＧＥ（腎抗原）、ＲＵ１又はＲＵ２（腎偏在性１又は２）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＳＡＲＴ－１又はＳＡＲＴ－３（腫瘍を拒絶する扁平抗原１又は３）、ＳＳＸ１、－２、－３、４（滑膜肉腫Ｘ１、－２、－３、－４）、ＴＡＡ（腫瘍関連抗原）、ＴＡＧ－７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓ－ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースリン酸イソメラーゼ、変異型）、ＴＲＰ－１（チロシナーゼ関連タンパク質１、又はｇｐ７５）、ＴＲＰ－２（チロシナーゼ関連タンパク質２）、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ－２／イントロン２）、ＶＥＧＦ－Ｒ２（血管内皮増殖因子受容体２）、及びＷＴ１（ウィルムス腫瘍遺伝子）からなる群から選択される抗原に特異的な結合ドメインを含む、請求項２１に記載のＣＡＲ。

【請求項23】

バイシストロン性核酸構築物によってコードされる、請求項２１に記載のＣＡＲ。

【請求項24】

ＣＤ１９に特異的な結合ドメインを含む、請求項２１～２３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。

【請求項25】

前記ＣＤ３εシグナル伝達ドメインが、配列番号７９、配列番号８０、及び配列番号８１からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する核酸によってコードされる、請求項２１に記載のＣＡＲ。

【請求項26】

前記ＣＡＲが細胞において発現される場合、前記ＣＡＲが、配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインの代わりに野生型ＣＤ３εシグナル伝達ドメインを有する対応するＣＡＲよりも高い程度の前記細胞膜への輸送を示す、請求項２１に記載のＣＡＲ。

【請求項27】

請求項２１に記載のＣＡＲをコードするポリヌクレオチド。

【請求項28】

請求項２７に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項29】

請求項２８に記載のベクターを含む宿主細胞。

【請求項30】

前記宿主細胞は、Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞、又はＮＫ細胞からなる群から選択される、請求項２９に記載の宿主細胞。

【請求項31】

請求項２９に記載の宿主細胞を含む、医薬組成物。

【請求項32】

請求項２１に記載のＣＡＲの発現を提供することを含む、ＣＡＲ Ｔ細胞を作製する方法。

【請求項33】

配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。

【請求項34】

配列番号７９、配列番号８０、及び配列番号８１からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する核酸によってコードされる、請求項３３に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。

【請求項35】

前記ＣＤ３εシグナル伝達ドメインがキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に含まれる、請求項３３に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。

【請求項36】

前記ＣＡＲが、７０７－ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＦＰ（アルファ（α）－フェトプロテイン）、ＡＲＴ－４（Ｔ４細胞によって認識される腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原、ｂ－カテニン／ｍ、ｂ－カテニン／変異型）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、Ｂｃｒ－ａｂｌ（易切断分類領域－Ａｂｅｌｓｏｎ）、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）、ＣＤ１９（分化分類１９）、ＣＤ２０（分化分類２０）、ＣＤ２２（分化分類２２）、ＣＤ３０（分化分類３０）、ＣＤ３３（分化分類３３）、ＣＤ４４ｖ７／８（分化分類４４、エクソン７／８）、ＣＡＭＥＬ（黒色腫上のＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ－１（癌胎児抗原ペプチド－１）、ＣＡＳＰ－８（カスパーゼ－８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７、変異型）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４、変異型）、ＣＥＡ（癌胎児抗原）、Ｃ－型レクチン様－１（ＣＬＬ－１）、ＣＴ（癌／精巣（抗原））、Ｃｙｐ－Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原、黒色腫）、ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子受容体、バリアントＩＩＩ）、ＥＧＰ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ－４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ－２、－３、４）、ＥＬＦ２Ｍ（伸長因子２、変異型）、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１（Ｅｔｓバリアント遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧＤ２（ジシアロガングリオシド２）、ＧＤ３（ジシアロガングリオシド３）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＧｎＴ－Ｖ（Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素Ｖ）、Ｇｐ１００（糖タンパク質１００ｋＤ）、ＨＡＧＥ（ヘリコース抗原）、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ（ヒト上皮受容体－２／神経性、ＥＧＦＲ２としても知られる）、ＨＬＡ－Ａ（ヒト白血球抗原－Ａ）、ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）、ＨＳＰ７０－２Ｍ（熱ショックタンパク質７０－２、変異型）、ＨＳＴ－２（ヒト印環腫瘍－２）、ｈＴＥＲＴ又はｈＴＲＴ（ヒトテロメラーゼ逆転写酵素）、ｉＣＥ（腸管カルボキシルエステラーゼ）、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２（インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、κ－軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ－Ｌ－フコース：ｂ－Ｄ－ガラクトシダーゼ２－ａ－Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬｅＹ（ルイス－Ｙ抗体）、Ｌ１ ＣＡＭ（Ｌ１細胞接着分子）、ＭＡＧＥ（黒色腫抗原）、ＭＡＧＥ－Ａ１（黒色腫関連抗原１）、メソセリン、マウスＣＭＶ感染細胞、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ（Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原－Ｉ／黒色腫抗原Ａ）、ＭＣ１ Ｒ（メラノコルチン１受容体）、Ｍｙｏｓｉｎ／ｍ（ミオシン、変異型）、ＭＵＣ１（ムチン１）、ＭＵＭ－１、－２、－３（黒色腫遍在性、変異型１、２、３）、ＮＡ８８－Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ ｃＤＮＡクローン）、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２、メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＢＲ－１（ニューヨーク乳房分化抗原１）、ＮＹ－ＥＳＯ－１（ニューヨーク食道扁平細胞カルシノーマ－１）、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、Ｐ１５（プロテイン１５）、ｐ１９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ（１９０ＫＤのｂｃｒ－ａｂｌタンパク質）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫の優先的発現抗原）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＡＧＥ（腎抗原）、ＲＵ１又はＲＵ２（腎偏在性１又は２）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＳＡＲＴ－１又はＳＡＲＴ－３（腫瘍を拒絶する扁平抗原１又は３）、ＳＳＸ１、－２、－３、４（滑膜肉腫Ｘ１、－２、－３、－４）、ＴＡＡ（腫瘍関連抗原）、ＴＡＧ－７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓ－ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースリン酸イソメラーゼ、変異型）、ＴＲＰ－１（チロシナーゼ関連タンパク質１、又はｇｐ７５）、ＴＲＰ－２（チロシナーゼ関連タンパク質２）、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ－２／イントロン２）、ＶＥＧＦ－Ｒ２（血管内皮増殖因子受容体２）、及びＷＴ１（ウィルムス腫瘍遺伝子）からなる群から選択される抗原に特異的な結合ドメインを含む、請求項３５に記載のＣＡＲ。

【請求項37】

前記ＣＡＲが、バイシストロン性核酸構築物によってコードされる、請求項３５に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。

【請求項38】

前記ＣＡＲが、ＣＤ１９に特異的な結合ドメインを含む、請求項３５～３７のいずれか一項に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。

【請求項39】

前記ＣＡＲが細胞において発現される場合、前記ＣＡＲが、配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインの代わりに野生型ＣＤ３εシグナル伝達ドメインを有する対応するＣＡＲよりも大きな程度の前記細胞膜への輸送を示す、請求項３５に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。

【請求項40】

請求項３３に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチド。

【請求項41】

請求項４０に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項42】

請求項４１に記載のベクターを含む宿主細胞。

【請求項43】

前記宿主細胞は、Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞、又はＮＫ細胞からなる群から選択される、請求項４２に記載の宿主細胞。

【請求項44】

請求項４２に記載の宿主細胞を含む、医薬組成物。

【請求項45】

ＣＡＲ Ｔ細胞を作製する方法であって、請求項３５に記載のＣＡＲの発現を提供することを含む、方法。

【請求項46】

ＣＡＲの細胞膜への輸送を改善する方法であって、前記ＣＡＲが、配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインを発現するように設計されている、方法。

【請求項47】

前記ＣＤ３εシグナル伝達ドメインが、配列番号７９、配列番号８０、及び配列番号８１からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する核酸によってコードされる、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

ＣＡＲの細胞膜への輸送を改善する方法であって、前記ＣＡＲが、野生型ＣＤ３εシグナル伝達ドメインに対する１つ以上の突然変異、欠失又は挿入を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインを含むように設計される、方法。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０２６０

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0260】

前述の開示は、理解を明確にするために、例示及び例としてある程度詳細に説明されているが、本開示の教示に照らして、当業者には、添付の特許請求の範囲の趣旨又は範囲から逸脱することなく、特定の変更及び改変を加えることができることが容易に明らかになるであろう。以下の実施例は、限定するものではなく、例示としてのみ提供される。当業者は、本質的に同様の結果をもたらすために変更又は改変され得る様々な非重要なパラメータを容易に認識するであろう。
[項１]
抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、
３つのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する抗ＣＤ１９結合ドメインを含み、ここで
前記ＨＣＤＲ１は、配列番号２～４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号５～７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号８～１０のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号１２～１４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が、配列番号１５～１７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が、配列番号１８～２０のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むか、又は
前記ＨＣＤＲ１は、配列番号２４～２６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２は、配列番号２７～２９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３は、配列番号３０～３２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ１は、配列番号３４～３６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２は、配列番号３７～３９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号４０～４２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、
膜貫通ドメインと、
共刺激ドメインと、
ＣＤ３εシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３γシグナル伝達ドメイン、ＣＤ３δシグナル伝達ドメイン、又はＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインのうちの１つを含むシグナル伝達ドメインと、を含む、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
[項２]
前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、及び前記ＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン、並びに前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３を含む第１の軽鎖可変ドメインを含み、ここで：
前記重鎖可変ドメインが、配列番号１と少なくとも８０％同一であり、かつ
前記軽鎖可変ドメインが、配列番号１１と少なくとも８０％同一であるか、又は
前記重鎖可変ドメインが、配列番号２４と少なくとも８０％同一であり、かつ
前記軽鎖可変ドメインが、配列番号３３と少なくとも８０％同一である、項１に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。
[項３]
前記ＨＣＤＲ１、前記ＨＣＤＲ２、前記ＨＣＤＲ３、前記ＬＣＤＲ１、前記ＬＣＤＲ２、及び前記ＬＣＤＲ３が単一のポリペプチドに含まれる、項１又は２のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。
[項４]
前記抗ＣＤ１９結合ドメインはｓｃＦｖを含む、項１～３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。
[項５]
前記ｓｃＦｖが、配列番号２１又は４３のうちの１つに記載のアミノ酸配列を含む、項４に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。
[項６]
前記シグナル伝達ドメインが、配列番号５２に記載のアミノ酸配列を備えるＣＤ３εシグナル伝達ドメインを含む、項１～５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。
[項７]
前記シグナル伝達ドメインが、配列番号５７に記載のアミノ酸配列を備えるＣＤ３γシグナル伝達ドメインを含む、項１～５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。
[項８]
前記シグナル伝達ドメインが、配列番号５５に記載のアミノ酸配列を備えるＣＤ３δシグナル伝達ドメインを含む、項１～５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。
[項９]
前記シグナル伝達ドメインが、配列番号５９に記載のアミノ酸配列を備えるＤＡＰ１２シグナル伝達ドメインを含む、項１～５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。
[項１０]
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む、項１～９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。
[項１１]
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメインを含む、項１～１０のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。
[項１２]
配列番号６２、６５、６７、及び６９のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、項１～１１のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲ。
[項１３]
項１～１２のいずれか一項に記載の抗ＣＤ１９ ＣＡＲをコードする、核酸。
[項１４]
項１３に記載の核酸を含む、組換えベクター。
[項１５]
項１３に記載の核酸又は項１４に記載の組換えベクターで形質導入した、宿主細胞。
[項１６]
前記宿主細胞が、Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞又はＮＫ細胞を含む、項１５に記載の宿主細胞。
[項１７]
項１６に記載のＴ細胞、ｉＮＫＴ細胞及び／又はＮＫ細胞を含む、医薬組成物。
[項１８]
疾患の処置を必要とする患者における疾患を処置する方法であって、項１６に記載のＴ細胞、ｉＮＫＴ細胞及び／若しくはＮＫ細胞又は項１７に記載の医薬組成物を前記患者に投与することを含む、方法。
[項１９]
対象において免疫応答を誘導するか又は対象を癌に対して免疫化する方法であって、項１６に記載のＴ細胞、ｉＮＫＴ細胞及び／若しくはＮＫ細胞を前記対象に、又は項１７に記載の医薬組成物を前記患者に投与することを含む、方法。
[項２０]
前記癌が、急性リンパ芽球性前リンパ球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞性ＡＬＬを含む）、急性骨髄白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽細胞性形質細胞様樹状細胞腫、バーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性又は急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、毛様細胞白血病、ホジキン疾患、悪性リンパ増殖状態、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性ミエローマ、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖障害（無症候ミエローマ（くすぶり型多発性ミエローマ又は無痛性ミエローマ）を含む）、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫、形質細胞腫（形質細胞障害、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外形質細胞腫、及び多発性骨髄腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高槻病、及びＰＥＰ症候群としても知られる）、原発性縦隔大Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞又は大細胞濾胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞性急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞性リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫、又はワルデンシュトレームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、形質転換濾胞性リンパ腫（ＴＦＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、多発性骨髄腫、毛様細胞リンパ腫／白血病、又はそれらの組み合わせである、項１８又は１９に記載の方法。
[項２１]
配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインを含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
[項２２]
７０７－ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＦＰ（アルファ（α）－フェトプロテイン）、ＡＲＴ－４（Ｔ４細胞によって認識される腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原、ｂ－カテニン／ｍ、ｂ－カテニン／変異型）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、Ｂｃｒ－ａｂｌ（易切断分類領域－Ａｂｅｌｓｏｎ）、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）、ＣＤ１９（分化分類１９）、ＣＤ２０（分化分類２０）、ＣＤ２２（分化分類２２）、ＣＤ３０（分化分類３０）、ＣＤ３３（分化分類３３）、ＣＤ４４ｖ７／８（分化分類４４、エクソン７／８）、ＣＡＭＥＬ（黒色腫上のＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ－１（癌胎児抗原ペプチド－１）、ＣＡＳＰ－８（カスパーゼ－８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７、変異型）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４、変異型）、ＣＥＡ（癌胎児抗原）、Ｃ－型レクチン様－１（ＣＬＬ－１）、ＣＴ（癌／精巣（抗原））、Ｃｙｐ－Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原、黒色腫）、ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子受容体、バリアントＩＩＩ）、ＥＧＰ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ－４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ－２、－３、４）、ＥＬＦ２Ｍ（伸長因子２、変異型）、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１（Ｅｔｓバリアント遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧＤ２（ジシアロガングリオシド２）、ＧＤ３（ジシアロガングリオシド３）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＧｎＴ－Ｖ（Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素Ｖ）、Ｇｐ１００（糖タンパク質１００ｋＤ）、ＨＡＧＥ（ヘリコース抗原）、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ（ヒト上皮受容体－２／神経性、ＥＧＦＲ２としても知られる）、ＨＬＡ－Ａ（ヒト白血球抗原－Ａ）、ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）、ＨＳＰ７０－２Ｍ（熱ショックタンパク質７０－２、変異型）、ＨＳＴ－２（ヒト印環腫瘍－２）、ｈＴＥＲＴ又はｈＴＲＴ（ヒトテロメラーゼ逆転写酵素）、ｉＣＥ（腸管カルボキシルエステラーゼ）、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２（インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、κ－軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ－Ｌ－フコース：ｂ－Ｄ－ガラクトシダーゼ２－ａ－Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬｅＹ（ルイス－Ｙ抗体）、Ｌ１ ＣＡＭ（Ｌ１細胞接着分子）、ＭＡＧＥ（黒色腫抗原）、ＭＡＧＥ－Ａ１（黒色腫関連抗原１）、メソセリン、マウスＣＭＶ感染細胞、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ（Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原－Ｉ／黒色腫抗原Ａ）、ＭＣ１ Ｒ（メラノコルチン１受容体）、Ｍｙｏｓｉｎ／ｍ（ミオシン、変異型）、ＭＵＣ１（ムチン１）、ＭＵＭ－１、－２、－３（黒色腫遍在性、変異型１、２、３）、ＮＡ８８－Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ ｃＤＮＡクローン）、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２、メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＢＲ－１（ニューヨーク乳房分化抗原１）、ＮＹ－ＥＳＯ－１（ニューヨーク食道扁平細胞カルシノーマ－１）、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、Ｐ１５（プロテイン１５）、ｐ１９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ（１９０ＫＤのｂｃｒ－ａｂｌタンパク質）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫の優先的発現抗原）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＡＧＥ（腎抗原）、ＲＵ１又はＲＵ２（腎偏在性１又は２）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＳＡＲＴ－１又はＳＡＲＴ－３（腫瘍を拒絶する扁平抗原１又は３）、ＳＳＸ１、－２、－３、４（滑膜肉腫Ｘ１、－２、－３、－４）、ＴＡＡ（腫瘍関連抗原）、ＴＡＧ－７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓ－ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースリン酸イソメラーゼ、変異型）、ＴＲＰ－１（チロシナーゼ関連タンパク質１、又はｇｐ７５）、ＴＲＰ－２（チロシナーゼ関連タンパク質２）、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ－２／イントロン２）、ＶＥＧＦ－Ｒ２（血管内皮増殖因子受容体２）、及びＷＴ１（ウィルムス腫瘍遺伝子）からなる群から選択される抗原に特異的な結合ドメインを含む、項２１に記載のＣＡＲ。
[項２３]
バイシストロン性核酸構築物によってコードされる、項２１に記載のＣＡＲ。
[項２４]
ＣＤ１９に特異的な結合ドメインを含む、項２１～２３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
[項２５]
前記ＣＤ３εシグナル伝達ドメインが、配列番号７９、配列番号８０、及び配列番号８１からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する核酸によってコードされる、項２１に記載のＣＡＲ。
[項２６]
前記ＣＡＲが細胞において発現される場合、前記ＣＡＲが、配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインの代わりに野生型ＣＤ３εシグナル伝達ドメインを有する対応するＣＡＲよりも高い程度の前記細胞膜への輸送を示す、項２１に記載のＣＡＲ。
[項２７]
項２１に記載のＣＡＲをコードするポリヌクレオチド。
[項２８]
項２７に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
[項２９]
項２８に記載のベクターを含む宿主細胞。
[項３０]
前記細胞は、Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞、又はＮＫ細胞からなる群から選択される、項２９に記載の宿主細胞。
[項３１]
項２９に記載の宿主細胞を含む、医薬組成物。
[項３２]
項２９に記載の宿主細胞を投与することを含む、それを必要とする患者において疾患又は状態を治療する方法。
[項３３]
項２１に記載のＣＡＲの発現を提供することを含む、ＣＡＲ Ｔ細胞を作製する方法。
[項３４]
配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。
[項３５]
配列番号７９、配列番号８０、及び配列番号８１からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する核酸によってコードされる、項３４に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。
[項３６]
前記ＣＤ３εシグナル伝達ドメインがキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に含まれる、項３４に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。
[項３７]
前記ＣＡＲが、７０７－ＡＰ（７０７アラニンプロリン）、ＡＦＰ（アルファ（α）－フェトプロテイン）、ＡＲＴ－４（Ｔ４細胞によって認識される腺癌抗原）、ＢＡＧＥ（Ｂ抗原、ｂ－カテニン／ｍ、ｂ－カテニン／変異型）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、Ｂｃｒ－ａｂｌ（易切断分類領域－Ａｂｅｌｓｏｎ）、ＣＡＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）、ＣＤ１９（分化分類１９）、ＣＤ２０（分化分類２０）、ＣＤ２２（分化分類２２）、ＣＤ３０（分化分類３０）、ＣＤ３３（分化分類３３）、ＣＤ４４ｖ７／８（分化分類４４、エクソン７／８）、ＣＡＭＥＬ（黒色腫上のＣＴＬ認識抗原）、ＣＡＰ－１（癌胎児抗原ペプチド－１）、ＣＡＳＰ－８（カスパーゼ－８）、ＣＤＣ２７ｍ（細胞分裂周期２７、変異型）、ＣＤＫ４／ｍ（サイクリン依存性キナーゼ４、変異型）、ＣＥＡ（癌胎児抗原）、Ｃ－型レクチン様－１（ＣＬＬ－１）、ＣＴ（癌／精巣（抗原））、Ｃｙｐ－Ｂ（シクロフィリンＢ）、ＤＡＭ（分化抗原、黒色腫）、ＥＧＦＲ（上皮増殖因子受容体）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子受容体、バリアントＩＩＩ）、ＥＧＰ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＧＰ－４０（上皮糖タンパク質４０）、Ｅｒｂｂ２、３、４（赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ－２、－３、４）、ＥＬＦ２Ｍ（伸長因子２、変異型）、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１（Ｅｔｓバリアント遺伝子６／急性骨髄性白血病１遺伝子ＥＴＳ）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ｆＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、Ｇ２５０（糖タンパク質２５０）、ＧＡＧＥ（Ｇ抗原）、ＧＤ２（ジシアロガングリオシド２）、ＧＤ３（ジシアロガングリオシド３）、グリピカン３（ＧＰＣ３）、ＧｎＴ－Ｖ（Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素Ｖ）、Ｇｐ１００（糖タンパク質１００ｋＤ）、ＨＡＧＥ（ヘリコース抗原）、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ（ヒト上皮受容体－２／神経性、ＥＧＦＲ２としても知られる）、ＨＬＡ－Ａ（ヒト白血球抗原－Ａ）、ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）、ＨＳＰ７０－２Ｍ（熱ショックタンパク質７０－２、変異型）、ＨＳＴ－２（ヒト印環腫瘍－２）、ｈＴＥＲＴ又はｈＴＲＴ（ヒトテロメラーゼ逆転写酵素）、ｉＣＥ（腸管カルボキシルエステラーゼ）、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２（インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２）、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、κ－軽鎖、ＬＡＧＥ（Ｌ抗原）、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ（低密度脂質受容体／ＧＤＰ－Ｌ－フコース：ｂ－Ｄ－ガラクトシダーゼ２－ａ－Ｌフコシルトランスフェラーゼ）、ＬｅＹ（ルイス－Ｙ抗体）、Ｌ１ ＣＡＭ（Ｌ１細胞接着分子）、ＭＡＧＥ（黒色腫抗原）、ＭＡＧＥ－Ａ１（黒色腫関連抗原１）、メソセリン、マウスＣＭＶ感染細胞、ＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ（Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原－Ｉ／黒色腫抗原Ａ）、ＭＣ１ Ｒ（メラノコルチン１受容体）、Ｍｙｏｓｉｎ／ｍ（ミオシン、変異型）、ＭＵＣ１（ムチン１）、ＭＵＭ－１、－２、－３（黒色腫遍在性、変異型１、２、３）、ＮＡ８８－Ａ（患者Ｍ８８のＮＡ ｃＤＮＡクローン）、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２、メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＢＲ－１（ニューヨーク乳房分化抗原１）、ＮＹ－ＥＳＯ－１（ニューヨーク食道扁平細胞カルシノーマ－１）、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、Ｐ１５（プロテイン１５）、ｐ１９０ ｍｉｎｏｒ ｂｃｒ－ａｂｌ（１９０ＫＤのｂｃｒ－ａｂｌタンパク質）、Ｐｍｌ／ＲＡＲａ（前骨髄球性白血病／レチノイン酸受容体ａ）、ＰＲＡＭＥ（黒色腫の優先的発現抗原）、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＡＧＥ（腎抗原）、ＲＵ１又はＲＵ２（腎偏在性１又は２）、ＳＡＧＥ（肉腫抗原）、ＳＡＲＴ－１又はＳＡＲＴ－３（腫瘍を拒絶する扁平抗原１又は３）、ＳＳＸ１、－２、－３、４（滑膜肉腫Ｘ１、－２、－３、－４）、ＴＡＡ（腫瘍関連抗原）、ＴＡＧ－７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＥＬ／ＡＭＬ１（転座Ｅｔｓ－ファミリー白血病／急性骨髄性白血病１）、ＴＰＩ／ｍ（トリオースリン酸イソメラーゼ、変異型）、ＴＲＰ－１（チロシナーゼ関連タンパク質１、又はｇｐ７５）、ＴＲＰ－２（チロシナーゼ関連タンパク質２）、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２（ＴＲＰ－２／イントロン２）、ＶＥＧＦ－Ｒ２（血管内皮増殖因子受容体２）、及びＷＴ１（ウィルムス腫瘍遺伝子）からなる群から選択される抗原に特異的な結合ドメインを含む、項３６に記載のＣＡＲ。
[項３８]
前記ＣＡＲが、バイシストロン性核酸構築物によってコードされる、項３６に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。
[項３９]
前記ＣＡＲが、ＣＤ１９に特異的な結合ドメインを含む、項３６～３８のいずれか一項に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。
[項４０]
前記ＣＡＲが細胞において発現される場合、前記ＣＡＲが、配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインの代わりに野生型ＣＤ３εシグナル伝達ドメインを有する対応するＣＡＲよりも大きな程度の前記細胞膜への輸送を示す、項３６に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメイン。
[項４１]
項３４に記載のＣＤ３εシグナル伝達ドメインをコードするポリヌクレオチド。
[項４２]
項４１に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
[項４３]
項４２に記載のベクターを含む宿主細胞。
[項４４]
前記細胞は、Ｔ細胞、ｉＮＫＴ細胞、又はＮＫ細胞からなる群から選択される、項４３に記載の宿主細胞。
[項４５]
項４３に記載の宿主細胞を投与することを含む、それを必要とする患者における疾患又は状態を治療する方法。
[項４６]
項４３に記載の宿主細胞を含む、医薬組成物。
[項４７]
ＣＡＲ Ｔ細胞を作製する方法であって、項３６に記載のＣＡＲの発現を提供することを含む、方法。
[項４８]
ＣＡＲの細胞膜への輸送を改善する方法であって、前記ＣＡＲが、配列番号８７、配列番号８８、及び配列番号８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインを発現するように設計されている、方法。
[項４９]
前記ＣＤ３εシグナル伝達ドメインが、配列番号７９、配列番号８０、及び配列番号８１からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する核酸によってコードされる、項４８に記載の方法。
[項５０]
ＣＡＲの細胞膜への前記輸送を改善する方法であって、前記ＣＡＲが、野生型ＣＤ３εシグナル伝達ドメインに対する１つ以上の突然変異、欠失又は挿入を有するＣＤ３εシグナル伝達ドメインを含むように設計される、方法。

【国際調査報告】