特表 2024-538318 ハイドランジア（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ）栽培

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-18

(54)【発明の名称】ハイドランジア（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ）栽培

(51)【国際特許分類】

   A01H 3/00 20060101AFI20241010BHJP

   A01H 6/48 20180101ALI20241010BHJP

   A01G 7/00 20060101ALI20241010BHJP

   A01G 31/00 20180101ALI20241010BHJP

【ＦＩ】

A01H3/00

A01H6/48

A01G7/00 604Z

A01G31/00 612

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024525898

(86)(22)【出願日】2021-11-04

(85)【翻訳文提出日】2024-05-01

(86)【国際出願番号】 EP2021080643

(87)【国際公開番号】W WO2023078553

(87)【国際公開日】2023-05-11

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521397201

【氏名又は名称】シムライズ・アーゲー

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山 靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100133400

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 達彦

(72)【発明者】

【氏名】ヤコブ・ペーター・ライ

(72)【発明者】

【氏名】エスター－コリンナ・シュヴァルツェ

(72)【発明者】

【氏名】アンドレアス・ウルブリヒ

(72)【発明者】

【氏名】アンドレアス・タイゼン

(72)【発明者】

【氏名】マティアス・プロイシェ

【テーマコード（参考）】

2B314

【Ｆターム（参考）】

2B314MA38

2B314MA57

2B314MA67

2B314PB19

2B314PC04

2B314PC17

2B314PC18

2B314PC19

(57)【要約】

本発明は、フィロズルシンの産生を増加させるためのハイドランジア種の栽培（好ましくは、屋内）及び植物材料、好ましくは、フィロズルシンの含有量が増加した乾燥植物材料の準備に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

乾燥植物材料の総量に基づいて、少なくとも２．５ｗｔ％のフィロズルシン同等物の含有量を有する前記乾燥植物材料の調製のための方法であって、
ａ）ハイドランジア・マクロフィラ、好ましくは、亜種セラタ、より好ましくは、品種オオアマチャ、アマチャ及びアマギアマチャからなる群から選択される亜種セラタ、それらの雑種及び品種、特にオオアマチャ、アマチャ及びアマギアマチャから選択される品種とハイドランジア・マクロフィラの任意の他の品種との間の標的交配の結果の少なくとも１つの頭部及び／又はシュートの挿し穂を準備するステップと、
ｂ）前記少なくとも１つの頭部及び／又はシュートの挿し穂を、好ましくは、固体基材を用いない、土を用いない及び／又はピートを用いない基材において発根させるステップと、
ｃ）発根した前記少なくとも１つの頭部及び／又はシュートの挿し穂をハイドロポニック、エアロポニック又はフォグポニックシステムにおいて栽培し、得られた植物（複数可）に５から１５ｗｔ％の窒素源、２から１０ｗｔ％のリン源、５から２５ｗｔ％のカリウム源及び１から２０ｗｔ％のマグネシウム源を含むか、又はそれらからなる栄養液によって、栽培水１００Ｌ当たり５ｇから２５０ｇまでの投与計画、好ましくは、栽培水１００Ｌ当たり１０ｇから１５０ｇの投与計画で栽培中に少なくとも１回施肥するステップであって、
前記栽培は、フィルターされた、及び／又は遮光された自然光曝露或いはフィルターされた、及び／又は遮光された自然光曝露と追加の人工照明、或いは人工照明を用いて行われる、ステップと、
ｄ）２０から２００日、好ましくは３０から１２０日、とりわけ好ましくは４０から８０日の栽培期間後に前記植物（複数可）から茎及び／又は葉を収穫するステップと、
ｅ）収穫された前記茎及び／又は葉を２０から１１０℃の温度、好ましくは３０から７０℃の温度、とりわけ好ましくは４０から６０℃の温度で乾燥するステップと、
ｆ）乾燥植物材料の総量に基づいて、重量で少なくとも２．５ｗｔ％のフィロズルシン同等物を含む前記乾燥植物材料を得るステップと
を含むか、或いはそれらからなる、方法。

【請求項2】

前記植物（複数可）は、栽培中に少なくとも１回、好ましくは数回、人工的なストレス条件、好ましくは、標的ＵＶ光曝露及び／又は化学的ストレス、とりわけ好ましくは、ジャスモナートに曝露される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記植物（複数可）のジャスモナートへの前記曝露は、葉への適用及び／又は前記栽培水により、及び／又は気体形態で行われる、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記植物（複数可）は、栽培中に少なくとも１回、好ましくは数回、０．１ｍＭから１０ｍＭの総量のジャスモナートに曝露される、請求項２又は３に記載の方法。

【請求項5】

前記土及び／又はピートを用いない基材は、バーミキュライト、ロックウール、ココナツ繊維、パーライト、ポン、セラミス、火山灰、火山灰細粒、ススキ繊維、ゼオリス、溶岩、軽石から選択される、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記植物（複数可）は、１５から３０℃、好ましくは１８から２６℃の温度で栽培される、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記植物（複数可）は、１２から５時間の人工的な無照明時間に対して１２から１９時間の人工的な照明時間、好ましくは、７から９時間の人工的な無照明時間に対して１５から１７時間の人工的な照明時間で栽培される、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

複数の植物が栽培され、前記植物は、最大２５植物／ｍ２の栽植密度、好ましくは、最大２０植物／ｍ２の栽植密度で栽培される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記植物（複数可）は、エブアンドフロー、栄養膜、点滴灌漑、細流灌漑、ディープウォーター、エアロポニック又はアクアポニックシステムで栽培される、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

ステップｄ）は、前の収穫後の少なくとも２０日間の期間の後、少なくとも１回繰り返される、好ましくは、ステップｄ）は、それぞれ前の収穫後の少なくとも２０日間の期間の後、２、３、４、５回又はそれ以上繰り返される、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

茎及び葉がステップｄ）で収穫され、ステップｅ）で前記葉及び茎材料を乾燥した後、前記植物材料は、好ましくは、空気分離、空気浮遊又はふるい分けから選択される方法によって葉及び茎材料に分離されて、少なくとも７５ｗｔ％、好ましくは少なくとも８５ｗｔ％、とりわけ好ましくは少なくとも９５ｗｔ％の葉材料からなるか、又はそれを含む植物材料を得る、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

好ましくは、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法によって得ることができる、乾燥植物材料であって、
前記乾燥植物材料の総量に基づいて、少なくとも２．５ｗｔ％、好ましくは少なくとも３ｗｔ％、特に好ましくは少なくとも４ｗｔ％のフィロズルシン同等物の含有量を有し、
且つ／又は
前記乾燥植物材料は、前記乾燥植物材料の総量に基づいて２．０ｗｔ％未満、好ましくは１．５ｗｔ％未満、より好ましくは１ｗｔ％未満、特に好ましくは０．５ｗｔ％未満のヒドランゲノール同等物を含み、
好ましくは、前記乾燥植物材料は、主として葉からなる、乾燥植物材料。

【請求項13】

前記乾燥植物材料は、前記乾燥植物材料の総量により、２０ｗｔ％未満、好ましくは１０ｗｔ％未満の残存水分を有する、請求項１２に記載の乾燥植物材料。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、フィロズルシンの産生を増加させるためのハイドランジア種の栽培（好ましくは、屋内）及び植物材料、好ましくは、フィロズルシンの含有量が増加した乾燥植物材料の準備に関する。

【背景技術】

【0002】

消費者は、一般に、好ましい甘さ及びそれに関連する甘さプロフィールのため、大量の高カロリー糖、特にスクロース（サッカロース）、グルコース、フルクトース若しくはそれらの混合物を含む、食料品又は贅沢食品を強く好む。一方で、容易に代謝できる炭水化物の含有量が多いと血糖値の急上昇を引き起こし、脂肪沈着の形成につながり、最終的に過体重、肥満、インスリン抵抗性、加齢性糖尿病及びその合併症などの健康問題をもたらす可能性があることが一般に知られている。別の特有の深刻化する要素は、上記の炭水化物の多くは、口腔内において特定の種類の細菌により乳酸に分解され、例えば、乳歯又は成歯のエナメル質を侵食する（齲蝕）可能性があるため、歯の健康に対しても悪影響があり得ることである。

【0003】

したがって、食品又は飲料品の高カロリー糖の含有量を低減し、それを、甘味を与えるか、又は低濃度で甘味自体は示さずに低濃度の甘味にプラスの影響を及ぼすことができる他の物質（味覚修飾物質）で部分的又は完全に置き換えることが長く目標とされてきた。

【0004】

低甘味料製品用の味覚修飾物質としてのフィロズルシンの使用、そのための風味付け混合物、及びそのような製品を生産する方法が特許文献１に記載されている。

【0005】

フィロズルシンは、植物ハイドランジア・マクロフィラ（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ）の亜種で排他的に生じる天然化合物である。フィロズルシンは、化学合成又はバイオ工学的アプローチによって経済的に生成することができない。

【0006】

ハイドランジア・マクロフィラの葉は、主にお茶、特に、甘味のある日本茶であり、タンニンと、フィロズルシンを含むジヒドロイソクマリンとを含むアマチャを調製するために使用される。ハイドランジア・マクロフィラの葉は、一般に儀式的目的（花祭り）で日本及び韓国において使用される。

【0007】

東南アジアのハイドランジア・マクロフィラの原産地と欧州との間の気候条件は著しく異なる。それにもかかわらず、いくつかのハイドランジア・マクロフィラの雑種が、欧州で園芸植物として栽培されるよう作り出されてきた。これらの雑種は、観賞植物としてのみ使用されており、その大半は、いかなるフィロズルシンの存在も示さない。日本及び韓国以外でのハイドランジア・マクロフィラ亜種アマチャの商業栽培は今まで知られていない。

【0008】

葉におけるジヒドロイソクマリン及びフィロズルシンの分布は、遺伝子型に非常に依存的であるが、環境条件によるかはあまり明白でない。自由な受粉によって繁殖した野生植物は、フィロズルシン含有量が植物によって変動することがわかった（非特許文献１）。植物内でどのようにフィロズルシンが合成されるのか及びそれがどのような機能を持つのかについて最新の技術でも依然としてわかっていない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0009】

【特許文献1】欧州特許第２，２９８，０８４（Ｂ１）号

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】ウジハラ（Ｕｊｉｈａｒａ）．Ｍら、（１９９５年）、「ハイドランジア・セラタ（ｓｅｒｒａｔａ）の甘葉植物におけるフィロズルシンの蓄積及び専門のハモグリ植食者に対する防御におけるその中立性（Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈｙｌｌｏｄｕｌｃｉｎ ｉｎ Ｓｗｅｅｔ－Ｌｅａｆ Ｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ｈｙｄｒａｎｇｅａ ｓｅｒｒａｔａ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｎｅｕｔｒａｌｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｄｅｆｅｎｃｅ Ａｇａｉｎｓｔ ａ Ｓｐｅｃｉａｌｉｓｔ Ｌｅａｆｍｉｎｉｎｇ Ｈｅｒｂｉｖｏｒｅ）」リサーチーズ・オン・ポピュレーション・エコロジー（Ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ ｏｎ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ Ｅｃｏｌｏｇｙ）、第３７巻（２）：ｐ．２４９－２５７

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

したがって、フィロズルシンの産業生産のために特定のハイドランジア・マクロフィラ種を栽培するための方法があることは非常に有利である。

【0012】

したがって、ハイドランジア・マクロフィラ種の商業的大規模栽培のための方法及びその後の加工のための植物材料の準備を提供することが本発明の課題であった。

【課題を解決するための手段】

【0013】

この主要な課題は、乾燥植物材料の総量に基づいて、少なくとも２．５ｗｔ％のフィロズルシンの含有量を有する乾燥植物材料の調製のための方法を提供することによって解決され、本方法は、
ａ）ハイドランジア・マクロフィラ、好ましくは、亜種セラタ、より好ましくは、品種オオアマチャ、アマチャ及びアマギアマチャからなる群から選択される亜種セラタ、それらの雑種及び品種、特にオオアマチャ、アマチャ及びアマギアマチャから選択される品種とハイドランジア・マクロフィラの任意の他の品種との間の標的交配の結果の少なくとも１つの頭部及び／又はシュートの挿し穂を準備するステップと、
ｂ）少なくとも１つの頭部及び／又はシュートの挿し穂を、好ましくは、固体基材を用いない、土を用いない及び／又はピートを用いない基材において発根させるステップと、
ｃ）発根した少なくとも１つの頭部及び／又はシュートの挿し穂をハイドロポニック、エアロポニック又はフォグポニックシステムにおいて栽培し、得られた植物（複数可）に５から１５ｗｔ％の窒素源、２から１０ｗｔ％のリン源、５から２５ｗｔ％のカリウム源及び１から２０ｗｔ％のマグネシウム源を含むか、又はそれらからなる栄養液によって、栽培水１００Ｌ当たり５ｇから２５０ｇまでの投与計画、好ましくは、栽培水１００Ｌ当たりの１０ｇから１５０ｇの投与計画で栽培中に少なくとも１回施肥するステップであって、
栽培は、フィルターされた、及び／又は遮光された自然光曝露或いはフィルターされた、及び／又は遮光された自然光曝露と追加の人工照明、或いは人工照明を用いて行われる、ステップと、
ｄ）２０から２００日、好ましくは３０から１２０日、とりわけ好ましくは４０から８０日の栽培期間後に植物（複数可）から茎及び／又は葉を収穫するステップと、
ｅ）収穫された茎及び／又は葉を２０から１１０℃の温度、好ましくは３０から７０℃の温度、とりわけ好ましくは４０から６０℃の温度で乾燥するステップと、
ｆ）乾燥植物材料の総量に基づいて、重量で少なくとも２．５ｗｔ％のフィロズルシン同等物を含む乾燥植物材料を得るステップと
を含むか、或いはそれらからなる。

【0014】

頭部又はシュートの挿し穂とは、本発明に関しては、生長点を含む植物の末端部分からなるハイドランジア・マクロフィラ種の部分を意味する。ハイドランジア・マクロフィラのシュートの挿し穂は、繁殖することができる（例えば、生長点を有する）植物の任意の部分から得られる。本発明に関しては、頭部及び／又はシュートの挿し穂が、発根し、独立した植物を発育する能力を有することが重要である。

【0015】

特に、種「アマギアマチャ」（植物番号１１７７）は、畑作では十分に確立していないが、本発明による方法により栽培された場合、植物乾物中に６ｗｔ％までの非常に高いフィロズルシン値を得ることができる栽培変種である。

【0016】

本発明に関して、ハイドランジア・マクロフィラ亜種セラタ種、例えば、「オオアマチャ」、「アマチャ」及び「アマギアマチャ」を栽培するのに有利であるが、その雑種及び親植物として上で挙げた異なる種を組み合わせた標的交配種も本発明による方法により栽培することができる。例えば、ハイドランジア・マクロフィラの種は、ハイドランジア・マクロフィラ亜種セラタである「オオアマチャ」、「アマチャ」及び「アマギアマチャ」のうちの任意の１種と交配させることができる。ハイドランジア・マクロフィラの植物品種として本明細書で記述される植物品種「アマチャ」及び「アマギアマチャ」は、それぞれ品種ツンベルギイ（ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）又はアマギアナ（ａｍａｇｉａｎａ）としても知られている。

【0017】

本発明に関して「発根させること」という用語は、ステップａ）で準備された頭部及び／又はシュートの挿し穂が根を生やすことができる条件を提供することを意味する。挿し穂が根を生やしたら、植物と呼ばれる。当業者は、根の生長を可能にするため該当する条件及びそのような条件を実現する方法を十分に認識している。

【0018】

固体基材を用いない、土を用いない及び／又はピートを用いない基材においてステップａ）で準備された挿し穂を発根させることが特に有利であることが確認された。挿し穂はより多くの根を生やし、速く生長もするため、短時間で安定した植物をもたらすことができる。

【0019】

本発明に関して「栽培すること」とは、挿し穂又は発根させた植物を、それらが生長し、より多くの生物量を生じる条件に曝露することを意味する。当業者は、生物量増大を可能にするための該当する条件及びそのような条件を実現する方法を十分に認識している。

【0020】

「フィルターされた、及び／又は遮光された自然光曝露」という用語は、好ましくは、例えば、ガラス又は透明な高分子ガラス代替物によってフィルターされた、特に、ＵＶ－Ｂ及びＵＶ－Ａ光がフィルター除去された、及び／又は白色、灰色、黒色、緑色若しくはその他の色の遮光ネットによる遮光部によって途切れさせた日光を意味する。

【0021】

「人工照明」は、例えば、さまざまなスペクトル幅を有する、任意にＵＶ－Ｂ照射を低減するためにフィルターされた、古典的なフィラメントランプ、ガス放電若しくは金属放電ランプ、又はＬＥＤ（発光ダイオード）により発生させてもよい。全体的な照射は、少なくとも５０％の光合成有効放射（ＰＡＲ、３８０から７８０ｎｍの間）及び２５から８００、好適な５０から５００、特に５０から２５０μｍｏｌ光量子ｍ^－２ｓ^－１の光合成有効光量子束密度（ＰＰＦＤ）になるべきである。ＶＩＳ部分の分布は、日光と同様でも、或いは日光と異なって赤色及び／又は青色の比率が高く、黄色及び緑色の波長の強度が低くてもよい。

【0022】

好ましくは、栽培は、５℃から３５℃の間の日平均温度及び４０％から９０％までの相対湿度、より好ましくは、１５℃から３０℃の間の日平均温度及び５０％から８０％までの相対湿度、特に好適な１５℃から２５℃の間の日平均温度及び５０％から７５％までの相対湿度で行った。

【0023】

「ハイドロポニックシステム」が、植物が液膜に連続的に曝露されるピートを用いない基材において栽培される栽培システムであるのに対し、「エアロポニックシステム」は、植物がピートを用いない基材、好ましくは、ポン（ｐｏｎ）において栽培され、定期的に水が供給されるシステムである。「フォグポニック」システムは、植物が高湿度又は蒸気に曝露されるピートを用いない基材において栽培されるシステムを示す。その結果、植物の水供給は、蒸気部分により行われる。

【0024】

栽培中にすべての必要な栄養分を植物に供給することが特に好ましい。これは、本発明に関して「施肥すること」という用語によって理解される。（それぞれの場合、１００ｗｔ％の肥料（＝「栄養液」）に基づいて）５から１５ｗｔ％の窒素源、２から１０ｗｔ％のリン源、５から２５ｗｔ％のカリウム源及び１から２０ｗｔ％のマグネシウム源を含む肥料が使用され、ここで、「源」という用語は、市販の肥料溶液に存在し、対応する元素を提供することができる任意の化合物に関する。

【0025】

この肥料は、栽培水１００Ｌ当たり５ｇから２５０ｇまでの投与計画、好ましくは、栽培水１００Ｌ当たり１０ｇから１５０ｇの投与計画に使用される。

【0026】

本発明の特に好適な実施形態では、１５ｗｔ％の窒素源、７ｗｔ％のリン源、２２ｗｔ％のマグネシウム源及び追加の６ｗｔ％の酸化マグネシウムを含む１５－７－２２（＋６）Ｎ－Ｐ－Ｋ－肥料が、好ましくは、栽培水１００Ｌ当たり６５ｇの投与で使用される。

【0027】

本発明に関して「収穫すること」という用語は、生長した植物材料を植物から取り除くことを意味する。収穫は、（植物がそれ以上生長及び繁殖できないように）植物全体若しくは基本的に植物全体を使用することによって、又は例えば、葉などの植物の一部のみを部分的に収穫することによって行われてもよい。好適な一実施形態において、植物の上部の茎及び葉のみ、特に好適な葉のみが収穫される。

【0028】

次の乾燥するステップでは、収穫された植物材料、好ましくは、収穫された葉が乾燥され、したがって、水が植物材料から除去される。好ましくは、得られた乾燥植物材料は、最大２０ｗｔ％、好ましくは１０ｗｔ％、とりわけ好ましくは、最大５ｗｔ％の残存水分含有量を有する。残存水分含有量を決定するための方法は、当該技術分野において周知である。

【0029】

好ましくは、水分含有量は、例えば、乾燥マスバランス若しくは熱重量測定によって決定される乾燥減量（ＬＯＤ）法によって、又はカール・フィッシャー滴定によって決定される。

【0030】

一般に、「フィロズルシン」という用語は、アグリコンと分類される化学化合物を示す。しかしながら、自然界では、フィロズルシンは、グリコシドの形態で存在することが多く、いくつかのグリコシドが先行技術において当業者に知られている。「フィロズルシン同等物」という用語は、本明細書中で使用される場合、アグリコン及びフィロズルシングリコシドを示す。したがって、フィロズルシン同等物の量が決定される場合、それぞれ存在する限り、アグリコン及びフィロズルシングリコシドの両方が考慮されるべきであるが、脱グリコシル化によって実質的に遊離したフィロズルシンに基づいて計算される。

【0031】

典型的なフィロズルシンのグリコシドは、例えば、以下のものであるが、これらに限定されない。

【0032】

【化1】

【0033】

別の実施形態によると、好ましくは、「フィロズルシン同等物」という用語は、フィロズルシンエナンチオマー（及びそのグリコシド）の混合物を示し、エナンチオマー（２Ｒ）－フィロズルシンの量は、その他のエナンチオマーのそれぞれの量よりも多く、特に好ましくは、その他のエナンチオマーの合わせた量よりも多い。

【0034】

好適な一実施形態は、植物（複数可）が、栽培中に少なくとも１回、好ましくは数回、人工的なストレス条件、好ましくは、標的ＵＶ光曝露及び／又は化学的ストレス、とりわけ好ましくは、ジャスモナートに曝露される本発明の方法に関する。

【0035】

標的ＵＶ光曝露は、栽培時間の１～１００％、好ましくは１０～８０％、とりわけ好ましくは５０～１００％の間の、可視スペクトル（４００～７００ｎｍ）に加えて、特定の質及び量のＵＶ光、全発光スペクトル（ＵＶプラスＶＩＳ、３１５～７００ｎｍ）の１から２５％、好ましくは、２から１０％の好ましいＵＶ－Ａ（４００～３１５ｎｍ）光、とりわけ好ましくは、３４０～３８０ｎｍの波長範囲のＵＶ－Ａによる植物の連続的又はパルス曝露を意味する。

【0036】

「ジャスモナート」という用語は、一般にオキシリピッドの群からの脂質ベースの植物ホルモンを示す（アバンシ（Ａｖａｎｃｉ）ＮＣ、ルーチェ（Ｌｕｃｈｅ）ＤＤ、ゴールドマン（Ｇｏｌｄｍａｎ）ＧＨ、ゴールドマン．ＭＨ、「ジャスモナートは植物防御及び繁殖を含む複数の機能を有する植物ホルモンである（Ｊａｓｍｏｎａｔｅｓ ａｒｅ ｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｐｌａｎｔ ｄｅｆｅｎｓｅ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）」、ジェネティクス・アンド・モレキュラーリサーチ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２０１０年３月１６日、第９巻（１）：ｐ．４８４－５０５）。ジャスモナートのいくつかの誘導体、例えば、ジャスモン酸異性体、メチルジャスモナート異性体、１２－オキソフィトジエン酸並びにロイシン及びイソロイシンなどのいくつかのアミノ酸と結合したジャスモン酸異性体が当該技術分野において知られており、とりわけジャスモナートが植物界において一般的である。

【0037】

好適な一実施形態は、特に（－）－（３Ｒ，７Ｒ，９Ｚ）－ジャスモン酸、（＋）－（３Ｓ，７Ｓ，９Ｚ）－ジャスモン酸、（＋）－（３Ｒ，７Ｓ，９Ｚ）－エピジャスモン酸及び（－）－（３Ｓ，７Ｒ，９Ｚ）－エピジャスモン酸及び／又はそれらの混合物及び／又はそれらのそれぞれの塩及び／又はそれらのそれぞれのメチルエステルに関する。

【0038】

本発明に関して、メチルジャスモナート、好ましくは（－）－メチル－（３Ｒ，７Ｒ，９Ｚ）－ジャスモナート若しくは（＋）－メチル－（３Ｓ，７Ｓ，９Ｚ）－ジャスモナート又はそれらの混合物を使用することが特に好ましい。

【0039】

別の好適なジャスモナート誘導体は、特に、ジャスミンからの抽出物又は精油（ジャスミンアブソリュート（ａｂｓｏｌｕｅ））などの天然の供給源由来の（－）－メチル－（３Ｒ，７Ｒ，９Ｚ）－ジャスモナートである。

【0040】

驚くべきことに、ジャスモナートの適用により、収穫時に植物の葉中のジヒドリソクマリン（ｄｉｈｙｄｏｒｉｓｏｃｏｕｍａｒｉｎｅ）及び特にフィロズルシン同等物の含有量が増加することがわかった。この発見は、ジヒドリソクマリン（ｄｉｈｙｄｏｒｉｓｏｃｏｕｍａｒｉｎｅ）及びフィロズルシン合成のために植物内のどの経路でシグナル伝達されるかがわかっていないため、特に驚くべきことである。

【0041】

別の好適な実施形態は、植物（複数可）のジャスモナートへの曝露が葉への適用及び／又は栽培水により、及び／又は気体形態で行われる本発明の方法に関する。

【0042】

「葉への適用」は、物質がシリンジ又は同様に適した道具によって葉に直接適用される方法である。ジャスモナートはまた、所望の量を栽培水に単に加えることによって、又はそれを気体形態で植物に提供することによって適用されてもよい。

【0043】

好適な一実施形態は、植物（複数可）が栽培中に少なくとも１回、好ましくは数回、０．１ｍＭから１０ｍＭの総量のジャスモナートに曝露される本発明の方法に関する。

【0044】

さらに別の好適な実施形態は、土及び／又はピートを用いない基材が、バーミキュライト、ロックウール、ココナツ繊維、パーライト、ポン、セラミス、火山灰、火山灰細粒、ススキ繊維、ゼオリス、溶岩、軽石から選択される本発明による方法に関する。

【0045】

別の好適な実施形態は、植物（複数可）が１５から３０℃、好ましくは１８から２６℃の温度で栽培される本発明による方法に関する。

【0046】

さらに別の好適な実施形態は、植物（複数可）が、１２から５時間の人工的な無照明時間に対して１２から１９時間の人工的な照明時間、好ましくは、７から９時間の人工的な無照明時間に対して１５から１７時間の人工的な照明時間で栽培される本発明による方法に関する。

【0047】

本発明の特に好適な実施形態では、植物（複数可）は、８時間の人工的な無照明時間に対して１６時間の人工的な照明時間で栽培される。

【0048】

好適な一実施形態は、複数の植物が栽培され、植物が、最大２５植物／ｍ^２の栽植密度、好ましくは、最大２０植物／ｍ^２の栽植密度で栽培される本発明による方法に関する。

【0049】

別の好適な実施形態は、植物（複数可）がエブアンドフロー、栄養膜、点滴灌漑、細流灌漑、ディープウォーター、エアロポニック又はアクアポニックシステムで栽培される本発明による方法に関する。

【0050】

「エブアンドフロー」システムとは、植物が植栽トレイの底部から栽培水に連続的に曝露され、その後、植栽トレイが水に曝露されない期間が続くシステムを示す。

【0051】

「栄養膜」システムとは、栄養液が加えられた連続的な栽培水膜中に植栽トレイが立てられているシステムを示す。

【0052】

「点滴灌漑」システムとは、栽培水がバルブ、パイプ、管及び放出源のネットワークにより直接単一の植物に散布されるシステムを示す。「細流灌漑」システムとは、点滴灌漑システムの特定の実施形態を示す。

【0053】

「ディープウォーター」システムは、植物が栽培水中で栽培されるシステムを示す。これは、植栽トレイが栽培水で満たされたタンク中に立てられていることを意味する。

【0054】

好適な一実施形態は、ステップｄ）が前の収穫後の少なくとも２０日間の期間の後、少なくとも１回繰り返される、好ましくは、ステップｄ）がそれぞれ前の収穫後の少なくとも２０日間の期間の後、２、３、４、５回又はそれ以上繰り返される本発明による方法に関する。

【0055】

さらに別の好適な実施形態は、茎及び葉がステップｄ）で収穫され、ステップｅ）で葉及び茎材料を乾燥した後、植物材料が、好ましくは、空気分離、空気浮遊又はふるい分けから選択される方法によって葉及び茎材料に分離されて、少なくとも７５ｗｔ％、好ましくは少なくとも８５ｗｔ％、とりわけ好ましくは少なくとも９５ｗｔ％の葉材料からなるか、又はそれを含む植物材料を得る本発明による方法に関する。

【0056】

本発明の第２の態様は、好ましくは、本発明による方法によって得ることができる乾燥植物材料に関し、乾燥植物材料の総量に基づいて、少なくとも２．５ｗｔ％、好ましくは少なくとも３ｗｔ％、特に好ましくは少なくとも４ｗｔ％のフィロズルシン同等物の含有量を有し、且つ／又は乾燥植物材料は、乾燥植物材料の総量に基づいて、２．０ｗｔ％未満、好ましくは１．５ｗｔ％未満、より好ましくは１ｗｔ％未満、特に好ましくは０．５ｗｔ％未満のヒドランゲノール同等物を含み、好ましくは、乾燥植物材料が、葉からなるか、又は主として葉からなる。

【0057】

一般に、「ヒドランゲノール」という用語は、アグリコンと分類される化学化合物を示す。しかしながら、自然界では、ヒドランゲノールは、グリコシドの形態で存在することが多く、いくつかのグリコシドが先行技術において当業者に知られている。さらに、ヒドランゲノールは、開鎖型、いわゆる、ヒドランゲ酸又はそのグリコシドとして存在する場合もある。「ヒドランゲノール同等物」という用語は、本明細書中で使用される場合、アグリコン及びヒドランゲノールグリコシドを示す。したがって、ヒドランゲノール同等物の量が決定される場合、それぞれ存在する限り、アグリコン及びヒドランゲノールグリコシドの両方が考慮されるべきであるが、脱グリコシル化によって実質的に遊離したヒドランゲノールに基づいて計算される。

【0058】

典型的なヒドランゲノールのグリコシドは、例えば、以下のものであるが、これらに限定されない。

【0059】

【化2】

【0060】

好ましくは、「ヒドランゲノール」という用語は、上記のアグリコンのみを示す。この場合、ヒドランゲノールの量が決定されるとき、存在する場合はアグリコンのみが考慮されるべきである。

【0061】

好適な一実施形態は、乾燥植物材料の総量により、２０ｗｔ％未満、好ましくは１０ｗｔ％未満の残存水分を有する本発明による乾燥植物材料に関する。

【図面の簡単な説明】

【0062】

【図1】さまざまな濃度のメチルジャスモナート（ＭｅＪ）による処理後のフィロズルシン含有量を示す（＋／－標準偏差、アグリコン、乾燥し、再び湿らせた若葉の発酵後にＵＰＬＣにより決定された）を示す。ＭｅＪ適用直後；Ｃ＝対照：０ｍＭ；Ｖ１：０．１ｍＭ、Ｖ２：０．５ｍＭ、Ｖ３：１ｍＭ；Ｖ４：１０ｍＭのＭｅＪ（ｎ＝２４ｍ、ｐ＝０．０１；異なる文字は統計的有意性を意味する）。

【図2】遺伝子型アマギアマチャを用いたハイドロポニックシステムにおける対象の施肥及び栽培の影響を示す。

【図3】最大８日間の過程の最大５回のＭｅＪ適用（５ｍＭ）の影響を示す。最後の適用の１日後に植物サンプルを採取した。遺伝子型オオアマチャ。

【図4】最大９回のＭｅＪ適用の影響を示す。各サンプル採取日に、サンプルを対照及びＭｅＪ処理植物から採取した（各群の９０の個々の植物サンプルを採取した９回の適用後の最後のサンプル採取日を除いて、各サンプル採取日に各群に対して１８の複合サンプル）。

【図5】４回のＭｅＪ適用（５ｍＭ溶液）の影響を示す。最後の適用の１日後に植物サンプルを採取した。遺伝子型は、オオアマチャである。

【図6】４回のＭｅＪ適用（５ｍＭ溶液）の影響を示す。最後の適用の１日後に植物サンプルを採取した。遺伝子型は、アマギアマチャである。

【図7】４回のＭｅＪ適用（５ｍＭ溶液）の影響を示す。最後の適用の１日後に植物サンプルを採取した。遺伝子型は、アマギアマチャである。

【図8】ＵＶ－Ａ光及びＭｅＪ適用（５ｍＭ溶液）の影響を示す。最後の適用の１日後に植物サンプルを採取した。

【図9】ＵＶ－Ａ光及びＭｅＪ適用（５ｍＭ溶液）の影響を示す。最後の適用の３日後に植物サンプルを採取した。

【図10】ＵＶ－Ａピークを伴うＬＥＤパネルのスペクトル強度（Ａ）対ＵＶ－Ａピークを伴わない使用したＬＥＤパネルの波長（Ｂ）を示す。

【実施例】

【0063】

［実施例１］
フィロズルシン及びヒドランゲノール同等物の定量
フィロズルシン及びヒドランゲノール同等物の定量のために、採取した葉を４０℃で７２時間乾燥した。その後、分析前に、サンプルを、乳鉢を使用して均質化し、湿らせ、発酵させた。発酵を、水（２００μＬ）を加えることによって行い、最後にメタノール（１８００μＬ）で止め、続いて、３０分間の超音波抽出及びろ過（メンブランフィルターＣｈｒｏｍａｆｉｌ ＸｔｒａＰＴＦＥ－２０／２５）を行った。サンプルのＵＰＬＣ分析をＡｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ελＰＤＡ検出器及び市販の逆相Ｃ１８カラム（Ｌｕｎａ Ｏｍｅｇａ １．６μｍ ＰｏｌａｒＣ１８ ５０×２．１ｍｍ）を備えたＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（登録商標）Ｉ－クラスシステムにおいて行った。酸性化水（０．１％ギ酸）及びアセトニトリルからなる二成分溶媒系を使用した。検出波長は２５４ｎｍとし、クロマトグラフィーデータをＥｍｐｏｒｅ（商標）３Ｐｒｏ２０１０によって処理した。

【0064】

［実施例２］
メチルジャスモナートで処理されるハイドランジア・マクロフィラ亜種セラタ「オオアマチャ」の栽培
（会社Ｋｏｔｔｅｒｈｅｉｎｒｉｃｈ、レンゲリッヒ（Ｌｅｎｇｅｒｉｃｈ）が繁殖した）発根した挿し穂を、Ｏｓｎａｂｒｕｃｋ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ハステキャンパス（農業造園学科（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｌａｎｄｓｃａｐｅ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ））の試験農園の温室に置いた。１週間の順応後、植物をＫｌａｓｍａｎｎ－Ｄｅｉｌｍａｎｎ ＧｍｂＨの粘土基材を満たした１３ｃｍの鉢（容量約１リットル）に植えた。基材は、８０％のピート及び粘土並びに１リットル当たり２１０ｍｇの窒素、１５０ｍｇのホスファート、２７０ｍｇのカリウム、１００ｍｇのマグネシウム及び１５０ｍｇの硫黄の元肥、並びに微量元素からなるものであった。植物を５６植物／ｍ^２で四角形において、換気装置を夜間１８℃及び日中２０℃に設定した。

【0065】

６週間後に、２５の実験植物を選択し、実験設計のフリースマット及びＭｙＰｅｘフィルムを備えたテーブルに置いた。

【0066】

高い屋外温度及び高照射のため、温室の小室を実験の間中、遮光した。実験前及び実験中、手作業で植物に水をまいた。さらに、試験期間を除いて、全栽培期間の間、葉への適用として０．５ｗｔ％の濃度で週に１回、Ｐｌａｎｔａ Ｄｕｎｇｅｒｍｉｔｔｅｌ ＧｍｂＨの液体肥料Ｆｅｒｔｙ３Ｍｅｇａを適用した。

【0067】

その後、植物を異なる濃度のメチルジャスモナートに曝露させた。植物がフィロズルシン含有量に関して先天的に異なる可能性を排除するため、及び植物のこの先行する（侵襲的）サンプル採取（すなわち、葉の切り取り）が結果に影響を与えないことを確実にするために、最初のメチルジャスモナート適用前にすべての植物から葉のサンプルを採取した。

【0068】

さまざまな濃度のメチルジャスモナートの適用後にフィロズルシン含有量が増加することが確認できた（図１）。

【0069】

［実施例３］
ハイドロポニックシステムにおけるハイドランジア・マクロフィラ亜種セラタ「アマギアマチャ」の栽培
ハイドロポニック試験の出発材料は、遺伝子型「アマギアマチャ」のハイドランジア・マクロフィラ亜種セラタの植物である。選択した遺伝子型は、レンゲリッヒにある会社「Ｋｏｔｔｅｒｈｅｉｎｒｉｃｈ Ｈｏｒｔｅｎｓｉｅｎｋｕｌｔｕｒｅｎ」のお茶ハイドランジアコレクションからのものである。

【0070】

幼植物を発根させた後、遺伝子型「アマギアマチャ」の７５の植物を会社Ｆｌｏｒａｇｕａｒｄの農業用バーミキュライト基材に植え、ハイドロポニックシステムに移した。このハイドロポニックシステムは、栄養膜技術システム（ＮＦＴ）である。この技術は、薄い栄養膜により水及び栄養分を植物に供給するハイドロポニックシステムを示す。

【0071】

幼植物が順応したら、これらの植物にＣｏｍｐｏ Ｅｘｐｅｒｔの肥料溶液Ｈａｋａｐｈｏｓ（登録商標）ｂｌａｕ（１０ｗｔ％の窒素、４ｗｔ％のホスファート、７ｗｔ％のカリウム及び２ｗｔ％のマグネシウム）を与えた。

【0072】

最初の５週間は、植物を０．１ｗｔ％のＨａｋａｐｈｏｓ（登録商標）ｂｌａｕ栄養液及び５．８のｐＨでＮＦＴシステムにおいて２４時間栽培した。さらに２週間後、栄養液を０．２ｗｔ％のＨａｋａｐｈｏｓ（登録商標）ｂｌａｕに増加させた。その後、ＹａｒａＴｅｒａ（商標）ＫＲＩＳＴＡ ＭＡＧ（硝酸マグネシウムフレーク、低塩化物、スルファートフリー、完全に水溶性、１５ｗｔ％のＭｇＯ）を０．２ｗｔ％のＨａｋａｐｈｏｓ（登録商標）ｂｌａｕに添加した。ｐＨを全期間５．８に維持した。

【0073】

１８～２２℃の平均温度及び約６０％の湿度において、Ｆｕｔｕｒｅ ＬＥＤ（登録商標）のＰ１－５００－ＶＩＳ ＬＥＤランプにより２３８μｍｏｌ／（ｍ^２×ｓ）（日光に相当するＰＡＲ）で１６時間、植物に照射した。キノコバエ幼虫に対してＮｅｕｄｏｍｕｋ（登録商標）（Ｎｅｕｄｏｒｆｆ会社）による水処理を３週目の栽培に適用した。同様に、４週目の栽培にアブラムシ及びハダニに対して植物を処理する必要があり、ここでは、ＳｙｎｇｅｎｔａのＶｅｒｔｉｍｅｃ ｐｒｏ（登録商標）及びＰｒｏｇｅｍａのＳｐｕｚｉｔ（登録商標）の薬剤、接触及び採食効果によるダニ駆除剤及び殺虫剤の両方を使用した。新たな害虫の発生及び病気の葉に関する植物の定期的な検査を週に１回行った。ＮＦＴ植物及び隣接する領域の清潔も管理した。

【0074】

肥料による改良後の３時点に植物のサンプル採取を行った。分析のために実験室の乾燥キャビネットにサンプルを移し、ここで、植物を４０℃で４８時間乾燥した。植物は、良好に発育し、実施例１のピート基材において観察可能なものよりも多く、大きな根を形成した。

【0075】

ＵＰＬＣ測定のために調製したサンプルを、乳鉢で乳棒により均一にすりつぶした。乳鉢ですりつぶした後、代表的なサンプルをキャップ（２ｍＬ）に入れ計量し、平均して１０ｍｇから１７ｍｇの間であった。次に、０．２ｍＬの水を添加し、サンプルを４０℃で２時間インキュベートした。その後、１．８ｍＬのメタノールをサンプルに添加し、さらなるステップにおいて、サンプルを超音波浴で３０分抽出した。抽出後、ＵＰＬＣに充填する前にサンプルを０．２μｍメンブランフィルターに通す必要があった。ヒドランゲノール（ＨＧ）及びフィロズルシン（ＰＤ）の定量は、ｍｇ／ｍＬに外部較正してＵＰＬＣによって決定した。

【0076】

保持時間により、ＵＶ検出器によって物質の検出を行った。結果は、図２からわかる。

【0077】

［実施例４］
繰り返しのメチルジャスモナート適用後のフィロズルシン蓄積
実施例３に記載されているとおりに栽培した「オオアマチャ」ハイドランジアの１５の植物（又は９回のメチルジャスモナート適用の試験に関しては９０の植物）を、さまざまな時点（１回、３回、５回、７回及び９回）において５ｍＭのメチルジャスモナートで処理した。それを超えてさらに適用しても乾物中のフィロズルシン含有量に有意な効果がない、「飽和点」に達するために何回のメチルジャスモナート適用を要するかを試験する必要がある。

【0078】

１０ｍＭ未満のＭｅＪＡの適用に関して葉の重量、生育速度、乾物、光合成能、病気及び健康な生長などの生理学的効果は、どの試験でも検出できなかった。

【0079】

２回以上のメチルジャスモナート適用が、葉の乾物中のフィロズルシン含有量に対して有益な影響があることは図３から明らかである。これらの有益な効果は、各群に９０の植物を使用した、図４に示されるとおりの合計９回ＭｅＪを適用することによる２０２０年の別の実験において実証することができた。

【0080】

図４からわかるとおり、上記のＭｅＪ適用に関する「飽和点」は、合計３から５回の間の適用である。

【0081】

同様に、これらの結果は、図５に示されるとおり各群に１５の植物を使用した２０２１年に首尾よく確認された。

【0082】

葉の乾物中のフィロズルシン含有量に対するＭｅＪ適用の有益な効果はまた、図６に示されるとおり、別の遺伝子型（アマギアマチャ）を使用して２０２０年（各群の５０の個々の植物のサンプル採取）にも示された。

【0083】

同様に、２０２１年に各群の１５の個々の植物からサンプル採取することにより、図７に示される結果からわかるとおり、図６に示される結果が再現された。

【0084】

［実施例５］
ＵＶ－Ａ処理及びメチルジャスモナート適用の組み合わせ後のフィロズルシン蓄積。
既に記載されているものと同じ様式で、６４の植物（遺伝子型「オオアマチャ」）を温室で栽培した。それぞれ１６の植物を含む４群を無作為に構成した。１群を通常の条件下（人工光なし、ＭｅＪ適用なし）で栽培した。別の１群を、Ｓａｎｌｉｇｈｔ Ｍ３０モジュールを使用して追加の人工光（ＰＰＦ：１００～１３０μｍｏｌ／ｓ）下で栽培した。他の２群を追加の５．４９％のＵＶ－Ａ光作用（３７５ｎｍのＵＶ－Ａピーク、ＰＦＦ ３００～４００ｎｍ：３．５μｍｏｌ／ｓ；植物の高さで判断される合計ＰＰＦ：１００～１３０μｍｏｌ／ｓ）をもたらす改変されたＳａｎｌｉｇｈｔ Ｍ３０モジュール下で栽培した。これらの２群のうちの１群も既に記載されているものと同じ様式でＭｅＪで４回処理した。これらの条件下で４群のすべての栽培を７日間続けた後、最初のサンプルを採取した。

【0085】

図８に示される結果から、特にＵＶ＋ＭｅＪが乾燥葉中のフィロズルシン含有量に対して有益な効果を有すること、並びにＵＶ及びＭｅＪ処理の組み合わせが、収穫前にＭｅＪにより誘発された上昇したフィロズルシン含有量の一過性の性質を低下させること（図９）を結論づける。比較のために、使用したそれぞれのＵＶ－ＶＩＳ及びＶＩＳ ＬＥＤパネルのスペクトルを図１０に示す。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【国際調査報告】