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特表2024-538513バイオマーカーとして抱合胆汁酸を使用して気分障害及び／又は気分障害の状態の改善を検出及び／又は定量する方法、並びにその改善された方法及び組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-10-23
(54)【発明の名称】バイオマーカーとして抱合胆汁酸を使用して気分障害及び／又は気分障害の状態の改善を検出及び／又は定量する方法、並びにその改善された方法及び組成物
(51)【国際特許分類】
G01N 33/50 20060101AFI20241016BHJP
G01N 27/62 20210101ALI20241016BHJP
A61K 35/741 20150101ALI20241016BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20241016BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20241016BHJP
A61K 31/198 20060101ALI20241016BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241016BHJP
A23L 33/10 20160101ALI20241016BHJP
A23L 33/135 20160101ALI20241016BHJP
A61K 35/745 20150101ALI20241016BHJP
【ＦＩ】
G01N33/50 S
G01N27/62 V
G01N27/62 X
A61K35/741
A61P25/00
A61K47/18
A61K31/198
A61P43/00 121
A23L33/10
A23L33/135
A61K35/745
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024516532
(86)(22)【出願日】2022-09-23
(85)【翻訳文提出日】2024-03-13
(86)【国際出願番号】 EP2022076515
(87)【国際公開番号】W WO2023046897
(87)【国際公開日】2023-03-30
(31)【優先権主張番号】21198767.2
(32)【優先日】2021-09-24
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】590002013
【氏名又は名称】ソシエテ・デ・プロデュイ・ネスレ・エス・アー
(74)【代理人】
【識別番号】100088155
【弁理士】
【氏名又は名称】長谷川 芳樹
(74)【代理人】
【識別番号】100140453
【弁理士】
【氏名又は名称】戸津 洋介
(74)【代理人】
【識別番号】100200540
【弁理士】
【氏名又は名称】安藤 祐子
(72)【発明者】
【氏名】マーティン， フランソア‐ピエール
(72)【発明者】
【氏名】ベルゴンゼリ デゴンダ， ガブリエラ
(72)【発明者】
【氏名】コミネッティ アレンデ， オルネラ
【テーマコード（参考）】
2G041
2G045
4B018
4C076
4C087
4C206
【Ｆターム（参考）】
2G041CA01
2G041EA04
2G041FA10
2G041GA09
2G041HA01
2G041LA08
2G045AA25
2G045CA26
2G045CB03
2G045CB04
2G045DA07
2G045FA33
2G045FB06
4B018LB03
4B018LB08
4B018MD07
4B018MD10
4B018MD19
4B018MD87
4B018ME14
4C076BB01
4C076CC11
4C076DD51
4C076FF70
4C087AA01
4C087AA10
4C087BC59
4C087MA02
4C087MA52
4C087NA14
4C087ZA02
4C087ZC75
4C206AA01
4C206AA10
4C206FA53
4C206MA01
4C206MA02
4C206MA04
4C206MA05
4C206MA72
4C206NA14
4C206ZA02
4C206ZC75
(57)【要約】
本発明は、対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を検出及び／又は定量するためのバイオマーカーとしての、グリシン抱合胆汁酸の使用に関する。本発明はまた、対象の気分障害、気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を検出及び／又は定量するための方法、特に対象における気分障害の状態及び／又は過度の情動反応を治療又は寛解するための介入の進行をモニタリングするための方法であって、介入が、プロバイオティクスの投与を含む、方法にも関する。本発明はまた、必要とする対象における気分障害の状態及び／又は過度の情動反応を治療又は寛解するための改善された方法であって、プロバイオティクスをグリシン又はその誘導体と組み合わせた組成物の有効量を対象に投与することを含む、方法に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抱合胆汁酸である、バイオマーカー。
【請求項2】
対象の気分障害、前記気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を検出及び／又は定量するためのバイオマーカーとしての、少なくとも１種類の抱合胆汁酸の使用。
【請求項3】
対象の気分障害、前記気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を検出及び／又は定量する方法であって、検査を受ける対象から得られた生体試料中の少なくとも１種類の抱合胆汁酸の濃度を評価することと、
前記対象の抱合胆汁酸濃度を所定の参照値と比較することと、を含み、
ｉ）前記試料中の抱合胆汁酸コール酸（ＣＡ）及び／又はケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）の濃度が前記所定の参照値と比較して増加していること、及び／又は
ｉｉ）前記試料中の抱合胆汁酸ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）の濃度が前記所定の参照値と比較して減少していることは、
前記対象の前記気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を示す、方法。
【請求項4】
前記気分障害が、軽度から重度である、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項5】
前記所定の参照値が、同じ対象から以前に得られたものである、請求項３に記載の方法。
【請求項6】
前記所定の参照値が、対照集団における同様の体液中の平均抱合胆汁酸濃度に基づくものである、請求項３に記載の方法。
【請求項7】
前記試料中及び前記参照中の前記バイオマーカーの前記濃度が、タンデム質量分析に連結した超高速液体クロマトグラフィー又はガスクロマトグラフィーを用いて、質量分析法によって測定される、請求項３～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
前記所定の参照値が、検査を受ける対象から得られた生体試料中の抱合胆汁酸の濃度と同様の体液から得られた少なくとも１種類の抱合胆汁酸濃度に基づくものである、請求項３～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
前記対象の所定の参照値が、気分障害の状態及び／又は過度の情動反応を治療又は寛解するための介入が開始する前に前記対象から採取された生体試料から得られたものである、請求項３～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記対象の所定の参照値が、気分障害の状態及び／過度の情動反応を治療又は寛解するための介入中に、前記対象から採取された生体試料から得られたものであり、ただし前記対象から前記生体試料が得られるより少なくとも１週間前、例えば、少なくとも４週間前のものである、請求項３～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
前記生体試料が、糞便、全血、血清、及び血漿からなる群から選択される、請求項３～１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
前記方法が、対象における気分障害の状態及び／又は過度の情動反応を治療又は寛解するための介入の進行をモニタリングするためのものであり、前記介入が、プロバイオティクスの投与を含む、請求項３～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記プロバイオティクスが、ＢＬ ＮＣＣ３００１である、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記対象が、ヒト、又はコンパニオンアニマル、例えば、ネコ若しくはイヌである、請求項３～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
必要とする対象における気分障害の状態及び／又は過度の情動反応を治療又は寛解するための改善された方法であって、プロバイオティクスをグリシン又はその誘導体と組み合わせた組成物の有効量を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項16】
前記気分障害が、軽度から重度である、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
前記組成物の投与を開始する前に、請求項２～１４のいずれか一項に記載の方法を使用して前記対象を診断することを含む、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項18】
前記グリシンが、Ｌ－グリシンの形態、又はタンパク質、ペプチドなどのグリシンに富む任意の供給源の形態；又はグリシン誘導体の形態である、請求項１５又は１７に記載の方法。
【請求項19】
前記組成物が、経口投与される、請求項１５～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記組成物が、食品添加物、食品原材料、機能性食品、ダイエタリーサプリメント、医療用食品、ニュートラシューティカルズ、経口栄養補助食品（ＯＮＳ）若しくは栄養補助食品、又は乳児用フォーミュラを含む食品製品又は飲料製品である、請求項１５～１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記プロバイオティクスが、ＢＬ ＮＣＣ３００１である、請求項１５～２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
前記対象が、ヒト、又はコンパニオンアニマル、例えば、ネコ若しくはイヌである、請求項１５～２１のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を検出及び／又は定量するためのバイオマーカーとしての、グリシン抱合胆汁酸の使用に関する。本発明はまた、対象の気分障害、気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を検出及び／又は定量するための方法、特に対象における気分障害の状態及び／又は過度の情動反応を治療又は寛解するための介入の進行をモニタリングするための方法であって、介入が、プロバイオティクスの投与を含む、方法にも関する。本発明はまた、必要とする対象における気分障害の状態及び／又は過度の情動反応を治療又は寛解するための改善された方法であって、プロバイオティクスをグリシン又はその誘導体と組み合わせた組成物の有効量を対象に投与することを含む、方法に関する。
【0002】
世界保健機関（ＷＨＯ）が２０１８年に発表したファクトシートによれば、世界の３億人超が抑うつである（ＧＢＤ ２０１７ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｉｎｊｕｒｙ Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｏｒｓ（２０１８）。Ｇｌｏｂａｌ，ｒｅｇｉｏｎａｌ，ａｎｄ ｎａｔｉｏｎａｌ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ，ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ，ａｎｄ ｙｅａｒｓ ｌｉｖｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ ｆｏｒ ３５４ ｄｉｓｅａｓｅｓ ａｎｄ ｉｎｊｕｒｉｅｓ ｆｏｒ １９５ ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ ａｎｄ ｔｅｒｒｉｔｏｒｉｅｓ，１９９０－２０１７：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｇｌｏｂａｌ Ｂｕｒｄｅｎ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｓｔｕｄｙ ２０１７．Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ）。気分障害の１つである抑うつは、日常生活中の困難に対する気分及び一時的情動応答において、正常な変化と差異がある一般的な病気である。しかしながら、潜在性抑うつ、軽度の気分障害もまた、生活の質に影響を及ぼすことがある。
【0003】
気分障害は、患者、及び当該患者と定期的に交流がある人々に深刻な影響を及ぼすことがある。典型的な帰結は、職場又は学校での成績の不振、社会的交流の減少、個人的な悩み、及び友人又は家族との関係性に対する悪影響である。
【0004】
最悪の場合、気分障害は自殺につながることがある。自殺により毎年８００，０００人に迫る人々が亡くなっており、自殺は１５～２９歳で２番目に多い死因である（Ｓｕｉｃｉｄｅ ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ ｉｎ ２０１９：ｇｌｏｂａｌ ｈｅａｌｔｈ ｅｓｔｉｍａｔｅｓ．Ｇｅｎｅｖａ：Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ；２０２１．Ｌｉｃｅｎｃｅ：ＣＣ ＢＹ－ＮＣ－ＳＡ ３．０ ＩＧＯ）。
【0005】
気分障害は、男性よりも女性でよくみられるようであり（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，２００３；Ｊｕｎ １８．２８９（２３）：３０９５－１０５）、周産期、及び閉経期が特にかかりやすい時期である。また、小児も１，９００万人が抑うつと診断されている。特に、気分障害はまた、後に他の疾患につながることもある。例えば、気分障害により、冠動脈疾患を発症するリスクが大きくなることは公知である。
【0006】
現在、気分障害は、通常は十分に治療することができる。例えば、気分障害は、運動又は対話療法（ｔａｌｋｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｙ）によって、理想的にはサイコロジストによる指導を受けて、治療することができる。心理療法、例えば認知行動療法は、１つの選択肢である。現在では、抗うつ薬が薬剤としてうまく使用されている多くの場合、上記に参照したアプローチの組み合わせは、併用療法の枠組みで使用されている。最近の学術研究により、プロバイオティクスであるビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ、ＢＬ）ＮＣＣ３００１は、過敏性腸症候群の患者において抑うつスコア（ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｃｏｒｅ）を低下させることが明らかになった（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ２０１７；１５３：４４８－４５９）。
【0007】
現在では、医師は、患者との対話、及び典型症状のスクリーニングによって、気分障害を診断している。現在では、治療応答は、確立された自己評価尺度を用いて患者の応答を体系的にモニタリングすることによって測定する必要がある（Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１３ Ｊｕｌ；７４（７））。
【0008】
一方で、気分障害を検出すること、及び／又は気分障害を治療又は寛解する治療の成功を評価すること、更にはかかる治療を改善することを可能にする、生化学ツールを利用可能にすることが望ましい。
【0009】
本発明者らは、これらの課題に取り組んだ。
【0010】
本明細書における先行技術文献のいかなる参照も、かかる先行技術が周知であること、又は当該技術分野で共通の全般的な認識の一部を形成していることを認めるものとみなされるべきではない。
【0011】
このことから、本発明は現在の技術水準を改善することを目的とし、特に、対象の気分障害の診断又は気分障害の状態の改善及び／若しくは過度の情動反応の改善を可能にする生化学的ツールの提供、又は少なくとも有用な代替物の提供を目的とした。本発明はまた、対象における気分障害の状態及び／又は過度の情動反応を治療又は寛解するための方法を改善することも目的とする。
【0012】
本発明者らは、驚くべきことに、本発明の目的が独立請求項の主題によって達成され得ることを見出した。従属請求項は、本発明の着想を更に展開させるものである。
【0013】
したがって、一態様では、本発明は、血中で測定することができるバイオマーカーであって、抱合胆汁酸、特にグリシン抱合胆汁酸である、バイオマーカーを提供する。
【0014】
別の態様では、本発明は更に、対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を検出及び／又は定量するためのバイオマーカーとしての、抱合胆汁酸の使用を提供する。
【0015】
さらなる態様において、本発明は、対象の気分障害、気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を検出及び／又は定量する方法であって、検査を受ける対象から得られた生体試料中の少なくとも１種類の抱合胆汁酸の濃度を評価することと、対象の抱合胆汁酸濃度を所定の参照値と比較することと、を含み、
ｉ）試料中の抱合胆汁酸コール酸（ＣＡ）及び／又はケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）の濃度が所定の参照値と比較して増加していること、及び／又は
ｉｉ）試料中の抱合胆汁酸ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）の濃度が所定の参照値と比較して減少していることは、
対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を示す、方法を提供する。
ｉ）試料中の抱合胆汁酸コール酸（ＣＡ）及び／又はケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）の濃度が所定の参照値と比較して増加していること、及び／又は
ｉｉ）試料中の抱合胆汁酸ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）の濃度が所定の参照値と比較して減少していることは、
対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を示す、方法を提供する。
【0016】
最後の態様において、本発明は、対象における気分障害の状態及び／又は過度の情動反応を治療又は寛解するための改善された方法であって、プロバイオティクスとグリシン又はその誘導体とを組み合わせた組成物の有効量を、必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。
【0017】
本明細書で使用される場合、「含む／備える（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含んでいる／備えている（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という単語、及び類似の単語は、排他的又は網羅的な意味で解釈されるべきではない。換言すれば、これらは「含むが、これらに限定されない」ことを意味することを意図している。
【0018】
本明細書で使用される場合、疾患又は障害を「治療する」、「治療すること」又は「治療」は、次の１つ以上を達成することを意味する：（ａ）障害の重症度及び／又は持続期間を低減すること；（ｂ）治療される障害（複数可）に特徴的な症状の発症を制限又は予防すること；（ｃ）治療される障害に特徴的な症状の悪化を抑制すること；（ｄ）過去に障害（複数可）を有していた患者における障害（複数可）の再発を制限又は予防すること；及び（ｅ）過去に障害（複数可）の症状を示した患者における症状の再発を制限又は予防すること。本明細書で使用される場合、疾患又は障害の「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、「予防すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」、又は「発症予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）」は、対象において疾患又は障害が生じることを予防することを意味する。
【0019】
「有効量」又は「治療量」という用語は、研究者、獣医、医師又は他の臨床医によって求められている組織、系、動物又はヒトの生理学的応答を誘発する物質の量を意味することを意図する。「予防有効量」という用語は、研究者、獣医、医師又は他の臨床医によって、組織、系、動物又はヒトにおいて予防されることが求められる生物学的事象又は医学的事象の発生のリスクを予防又は低減する物質の量を意味することを意図する。
【0020】
本発明の目的で、「気分障害」という用語は、主に人の情動状態に影響する精神の健康問題を含むと理解されるものとする。気分障害には、躁エピソード（多動、会話心迫、及び自尊心の肥大を伴う、高揚した、開放的な、又は易怒的な気分）、又は抑うつエピソード（生活への無関心、虚無感、興味や喜びの喪失、悲しみ、食欲又は体重の変化、無気力又は気力低下、睡眠障害、焦燥／興奮（ａｇｉｔａｔｉｏｎ）、及び無価値感又は罪責感、無力感、思考力若しくは集中力の減退又は決断困難、絶望感、疲労感、倦怠感、記憶障害、涙ぐむ、を伴う、落ち込んだ気分）などの情動障害／撹乱を含み、多くの場合、これら２つの組み合わせを含む。
【0021】
用語「気分」とは、特定の時点における、感情の状態又は質（情動状態）を意味する。気分は、さほど具体的でない、さほど激しくない、及び特定の刺激又は出来事によりさほど誘発されないという点で、単純な情動とは異なる。臨床的抑うつ及び双極性障害は、気分障害（すなわち、気分の長期変調）の例である。気分障害は、精神疾患の診断・統計マニュアル（ＤＳＭ）の分類システムにおける診断群であり、気分における変調を主要な特徴とする。抑うつ障害の非限定的な例としては、うつ病のような重度の抑うつ、及び軽度から中等度の気分障害である潜在性抑うつ、重篤気分変調症、うつ病、単一及び再発エピソード、持続性抑うつ障害（気分変調症）、季節性感情障害（ＳＡＤ）、月経前不快気分障害、物質・医薬品誘発性抑うつ障害、他の医学的疾患による抑うつ障害、他の特定される抑うつ障害又は特定不能の抑うつ障害が挙げられる。
【0022】
本発明の目的に関し、「過度の情動反応」という用語は、過度の恐怖、不安、怒り、又は悲しみを特徴とする情動調節不全を含む。不安障害の非限定的な例としては、分離不安障害、場面緘黙、限局性恐怖症、社交不安障害（社交恐怖）、パニック障害、パニック発作、広場恐怖症、全般性不安障害、物質・医薬品誘発性不安障害、他の医学的疾患に起因した不安障害、他の特定される不安障害、又は特定不能の不安障害が挙げられる。過度の情動反応はまた、ストレス、過度のストレスの感覚、易怒性、不穏状態、又は身体的健康に対する過度の心配も指し得る。
【0023】
あるいは、気分障害は、神経障害、代謝異常、機能性胃腸障害、内分泌疾患、循環器疾患、肺疾患、がん、自己免疫性疾患、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される基礎疾患により発症した二次的疾患であり得る。例えば、気分障害は、基礎疾患から生じた１つ以上の抑うつ症状であり得る。
【0024】
本発明者らは、対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を検出及び／又は定量するためのバイオマーカーとして、抱合胆汁酸を使用することができることを示した。
【0025】
理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは現在、血中の抱合胆汁酸、特にグリシン抱合胆汁酸が、腸内微生物叢（ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ）によるタンパク質及び芳香族アミノ酸の代謝の推移を示す読み出し情報になり得、したがって、プロバイオティクスにより誘導され、気分障害の状態の改善に関連する、代謝による腸－脳相互作用を、直接的又は間接的に説明し得ると考えている。また、グリシン抱合胆汁酸、コール酸、ケノデオキシコール酸は、食事性脂肪の乳化に関与するなかでも最も豊富に存在する分子種であり、プロバイオティクスと共に増加する。いくつかの作用様式は、ＢＬ ＮＣ３００１などのプロバイオティクスによってもたらされる胆汁酸組成物の調節によって介される可能性があり、こうした調節には、例えば（ｉ）正常な神経伝達物質代謝のため、並びにその補給が気分及び認知の改善、及び睡眠に関連する、グリシンのバイオアベイラビリティに影響を与えること（Ｂａｎｎａｉ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｎｅｕｒｏｌ．２０１２；３：６１）、（ｉｉ）ＰＵＦＡなどの食事性脂肪が血液脳関門を通過し、気分、抑うつ及び不安に関わる脳機能に関与するための、乳化、吸収、及びバイオアベイラビリティの調節（Ｋｕａｎ－Ｐｉｎ Ｓｕ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１５ Ａｕｇ；１３（２）：１２９－１３７）、（ｉｉｉ）不安様挙動及び抑うつ様挙動、並びに疼痛知覚及び感覚変換を調節することが知られている、腸細胞におけるオレイルエタノールアミン脂質及びパルミトイルエタノールアミン脂質の合成の調節（Ｈｉｌｌ ＭＮ ｅｔ ａｌ．，Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．２００９ Ｓｅｐ；３４（８）：１２５７－６２、及びＣｏｐｐｏｌａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．２０１４ Ｍａｙ；８２（５）：５０７－１１）、（ｉｖ）及び受容体のＦＸＲ又はＴＧＲ５などの特異的受容体との直接相互作用によるもの（Ｋｉｒｉｙａｍａ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０１９）がある。
【0026】
本発明者らは、本明細書に示される治験を、プロバイオティクス、一例としてＢＬ ＮＣＣ３００１による介入を用いて実施した。結果として、本発明の目的のためには、プロバイオティクスは、ビフィドバクテリウム・ロンガム、例えば、ＢＬ ＮＣＣ３００１であってもよい。
【0027】
また、コンパニオンアニマルも気分障害になることがある。本発明の目的に関し、コンパニオンアニマルは、主に人の仲間として、喜びのため、又は思いやりのある行為として飼われている動物である。コンパニオンアニマルの典型的な例は、ネコ若しくはイヌ、更にウサギ、フェレット、ブタ、齧歯類、例えば、アレチネズミ、ハムスター、チンチラ、ラット、マウス、及びモルモット、又は鳥類である。例えば、イヌは、抑うつ状態になると、多くの場合引きこもり、遊びへの関心が失われ、及び／又は無気力若しくは悲しんでいるようにみえる。場合により、コンパニオンアニマルは、通常よりも少なく食べ及び／又は飲み、それにより様々な身体的疾患になることがある。結果として、今日では、コンパニオンアニマルも気分障害の治療を受ける。したがって、本発明の一実施形態では、対象は、ヒトであってよく、又はコンパニオンアニマル、例えば、ネコ若しくはイヌであってもよい。
【図面の簡単な説明】
【0028】
【0029】
結果として、本発明は、部分的には、抱合胆汁酸であるバイオマーカーに関する。抱合胆汁酸は、胆汁酸のタウリン抱合体又はグリシン抱合体、好ましくはグリシン抱合胆汁酸である。
【0030】
一実施形態では、胆汁酸は、コール酸（ＣＡ）、ケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、及びこれらのグリシン抱合体から選択される。
【0031】
バイオマーカーは、当業者に公知である。バイオマーカーは通常、正常な生物学的プロセス、発症プロセス、又は介入に対する応答の指標として客観的に測定及び評価される特徴として理解される。更なる手引きは、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ ＨＩＶ ＡＩＤＳ．２０１０ Ｎｏｖ；５（６）：４６３－４６６から得ることができる。
【0032】
本発明は、対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を検出及び／又は定量するためのバイオマーカーとしての、少なくとも１種類の抱合胆汁酸の使用にも関する。このことから、抱合胆汁酸は、気分障害を検出するためのバイオマーカーとして使用することができる。
【0033】
好ましい実施形態において、気分障害は軽度から重度である。病院不安抑うつ尺度（Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｎｘｉｅｔｙ ａｎｄ Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｃａｌｅ，ＨＡＤＳ）を使用して、気分障害のレベルを測定することができる。ＨＡＤＳは１４項目の自己評価尺度であり、７項目が抑うつサブスケールを形成し、別の７項目が不安を測定する（Ｚｉｇｍｏｎｄ＆Ｓｎａｉｔｈ，１９８３）。各項目は、０～３の範囲の４段階スケールで評価され、３はより高い症状頻度を意味する。各サブスケールの合計得点は０～２１の範囲であり、正常（０～７）、軽度（８～１０）、中等度（１１～１４）、又は重度（１５～２１）に分類される（Ｔｈｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｎｘｉｅｔｙ ａｎｄ Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｃａｌｅ，Ｏｃｃｕｐａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｅｃｉｎｅ ２０１４，６４：３９３－３９４）。
【0034】
更に、気分障害の状態の改善を検出及び／又は定量するために、抱合胆汁酸を使用することができる。
【0035】
更に、対象の気分障害の状態から生じる情動反応の改善を検出及び／又は定量するために、抱合胆汁酸を使用することができる。例えば、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ２０１７；１５３：４４８－４５９の著者は、扁桃体の関与の変化が気分障害スコアの変化と相関することを報告している。扁桃体は、情動応答において主要な役割を果たすので、気分障害の状態の改善は、対象の気分障害の状態から生じた情動的反応の改善に対応すると推論することができる。
【0036】
本発明の主題は更に、対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を検出及び／又は定量するための方法であって、
検査を受ける対象から得られた生体試料中の少なくとも１種類の抱合胆汁酸の濃度を評価することと、
対象の抱合胆汁酸濃度を所定の参照値と比較することと、を含み、
ｉ）試料中の抱合胆汁酸ＣＡ及び／又はＣＤＣＡの濃度が所定の参照値と比較して増加していること、及び／又は
ｉｉ）試料中の抱合胆汁酸ＵＤＣＡの濃度が所定の参照値と比較して減少していることは、
対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を示す、方法に関する。
検査を受ける対象から得られた生体試料中の少なくとも１種類の抱合胆汁酸の濃度を評価することと、
対象の抱合胆汁酸濃度を所定の参照値と比較することと、を含み、
ｉ）試料中の抱合胆汁酸ＣＡ及び／又はＣＤＣＡの濃度が所定の参照値と比較して増加していること、及び／又は
ｉｉ）試料中の抱合胆汁酸ＵＤＣＡの濃度が所定の参照値と比較して減少していることは、
対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を示す、方法に関する。
【0037】
本発明の主題は更に、対象における気分障害を検出するための方法であって、
検査を受ける対象から得られた生体試料中の少なくとも１種類の抱合胆汁酸の濃度を評価することと、
対象の抱合胆汁酸濃度を所定の参照値と比較することと、を含み、
ｉ）試料中の抱合胆汁酸ＣＡ及び／又はＣＤＣＡの濃度が所定の参照値と比較して増加していること、及び／又は
ｉｉ）試料中の抱合胆汁酸ＵＤＣＡの濃度が所定の参照値と比較して減少していることは、
対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を示す、方法に関する。
検査を受ける対象から得られた生体試料中の少なくとも１種類の抱合胆汁酸の濃度を評価することと、
対象の抱合胆汁酸濃度を所定の参照値と比較することと、を含み、
ｉ）試料中の抱合胆汁酸ＣＡ及び／又はＣＤＣＡの濃度が所定の参照値と比較して増加していること、及び／又は
ｉｉ）試料中の抱合胆汁酸ＵＤＣＡの濃度が所定の参照値と比較して減少していることは、
対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を示す、方法に関する。
【0038】
本発明の方法は、生体試料中のバイオマーカーの濃度又はバイオマーカーの濃度の変化に基づいて気分障害を診断することを可能にするという利点を有する。また、対象における気分障害の治療の成功を制御することも可能になる。したがって、このような生化学的方法は、気分障害を正確に診断する際に医師を支援するため、及び／又は医師が指示する治療の成功を追跡するため有用なツールになり得る一方で、この方法以外では、医師は主として主観的な問診票及び患者による症状の説明に頼るしかない。また、本発明の方法は、気分障害をはっきり伝えることができず、かつ気分障害になっている対象、例えば、コンパニオンアニマルを助けるのに非常に価値がある。
【0039】
本発明の方法では、検査を受ける対象から得られた生体試料中の少なくとも１種類の抱合胆汁酸の濃度を参照値と比較する。
【0040】
例えば、対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を検出及び／又は定量することを目的とする場合、参照値も治療される対象から得られたものであると好ましい場合がある。
【0041】
したがって、本発明の方法に関し、所定の参照値は、同じ対象から以前に得られたものであってもよい。このことは、現時点の抱合胆汁酸濃度を以前の抱合胆汁酸濃度と比較することによって、ある個体について、ＧＣＡ及びＧＣＤＣＡからなる群から選択される少なくとも１種類の抱合胆汁酸の濃度の増加、及び／又はＧＵＤＣＡなどの少なくとも１種類の抱合胆汁酸の濃度の減少を、高信頼度で測定することができるという利点を有する。
【0042】
あるいは、所定の参照値は、対照集団における同様の生体試料中の平均抱合胆汁酸濃度に基づくものであってもよい。このことは、ある個体について測定された抱合胆汁酸濃度を、一般に適用可能な標準と比較することができ、すなわち、ある個体の抱合胆汁酸濃度を全体平均と比較することができるという利点を有する。これにより、多くの個別患者における多くの測定値の容易な比較が可能になる。これによりまた、個別の参照値を得るための予めの検査の必要がないため、わずか１回の検査での迅速な評価も可能になる。
【0043】
生体試料中の少なくとも１種類の抱合胆汁酸濃度の分析は、当業者に公知の任意の好適な方法によって実施することができる。本発明者らは、質量分析を用いた。したがって、本発明の一実施形態では、試料中及び参照中のバイオマーカーの濃度は、質量分析によって測定することができる。速度上昇、精度、及びノイズ低減のために、質量分析は、質量分析に先立つクロマトグラフィーステップと連結することができる。例えば、試料中及び参照中のバイオマーカーの濃度は、タンデム質量分析に連結した超高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。更に、例えば、試料中及び参照中のバイオマーカーの濃度は、タンデム質量分析に連結したガスクロマトグラフィーによって測定することができる。例えば、試料中の抱合胆汁酸濃度の定量的測定は、タンデム質量分析に連結した超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）及び／又はガスクロマトグラフ－飛行時間型質量分析計（ＧＣ－ＴＯＦＭＳ）のいずれを用いて実施してもよい。
【0044】
有利なことに、参照値と生体試料から得られた抱合胆汁酸濃度との最適な比較能力を確保するために、参照値及び現時点の抱合胆汁酸濃度の両方を同様の生体試料から得ることができる。したがって、所定の参照値は、検査を受ける対象から得られた生体試料中の抱合胆汁酸の濃度と同様の生体試料から得られた抱合胆汁酸濃度に基づくものであってもよい。
【0045】
本発明の方法を用いて、気分障害治療の成功をモニタリングすることができる。モニタリングを行うために、現時点の抱合胆汁酸濃度を、治療を受ける対象から治療の開始前に得られた抱合胆汁酸濃度と比較可能であることが好ましい場合がある。したがって、例えば、対象の所定の参照値は、気分障害の状態及び／又は過度の情動反応の開始を治療又は寛解するための介入の前に対象から採取された生体試料から得ることができる。
【0046】
本発明が既に開始された後の、気分障害の状態の更なる改善を評価することが可能であるように、治療を受ける対象から得られた参照を利用可能にすることが更に好ましい場合がある。したがって、例えば、対象の所定の参照値は、気分障害の状態及び／又は過度の情動反応を治療又は寛解するための介入中に、対象から採取された生体試料から得られたものであってもよく、ただし、対象から生体試料が得られるより少なくとも１週間前、例えば、少なくとも２週間前、少なくとも４週間前、又は少なくとも６週間前のものである。このことは、気分障害の治療の継続的な進行を継続的にモニタリングすることができるという利点を有する。
【0047】
一般に、ＧＣＡ及びＧＣＤＣＡからなる群から選択される少なくとも１種類の抱合胆汁酸の検出濃度の増加、及び／又は１種類の抱合胆汁酸ＧＵＤＣＡの検出濃度の減少は、対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を示す。しかしながら、本発明のバイオマーカーの１つの利点は、成功した治療において測定することができる生体試料中のバイオマーカー濃度の差がかなり顕著であることである。したがって、例えば、本発明の方法では、試料中の抱合胆汁酸濃度の、所定の参照値と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、又は少なくとも３０％の増加及び／又は減少が、対象の気分障害の状態の改善及び／又は過度の情動反応の改善を示す。
【0048】
本発明者らは、本発明の目的のために使用することができる典型的な生体試料は、全血、血清、及び血漿からなる群から選択することができることを見出した。
【0049】
有利なことに、参照及び現時点の抱合胆汁酸濃度の両方は、いずれも同様の生体試料から得られ、例えば、参照及び現時点の抱合胆汁酸濃度の両方が、いずれも全血から得られ、参照及び現時点の抱合胆汁酸濃度の両方が、いずれも血清から得られ、又は、参照及び現時点の抱合胆汁酸濃度の両方が、いずれも血漿から得られる。
【0050】
例えば、血液、血清、又は血漿から、約５～１０ｍＬを採取することができる。十分に大きな試料サイズにより、アーチファクトが生じることを回避する。これらの試料から、約２０～１０μＬを更なる解析に用いることができる。
【0051】
全血、血清、及び／又は血漿は、検査されるバイオマーカーのシグナル対ノイズ比が特に高いという利点を有する。本発明の方法は、選択される生体試料を問わず、対象からかかる体液を得ることが十分に確立された手順であるという利点を有する。次いで、実際の診断方法は、身体外部において生体試料で実施される。
【0052】
本発明の方法は、気分障害の任意の治療の進行をモニタリングするのに好適である。例えば、気分障害の治療は、運動、会話療法、心理療法、認知行動療法、抗うつ薬投与、例えばプロバイオティクスを用いる栄養介入、及びそれらの組み合わせからなる群から選択することができる。
【0053】
プロバイオティクスは、気分障害の症状に効果があることが見出されている（Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｂｉｏｌｏｇｙ．２０１９ Ｆｅｂ １３：１－９）（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ２０１７；１５３：４４８－４５９）。これらのプロバイオティクスは、気分障害を含む、広範囲の精神の健康の状態を治療する助けになり得る。理論に束縛されることを望むものではないが、本発明者らは現時点で、脳腸軸により、胃腸管と脳との間の強いつながりがみられると考えている。したがって、本発明の一実施形態では、方法は、対象における気分障害の状態及び／又は過度の情動反応を治療又は寛解する介入の進行をモニタリングするためのものであり、介入は、プロバイオティクスの投与を含む。
【0054】
最後の態様において、本発明は、対象における気分障害の状態及び／又は過度の情動反応を治療又は寛解するための改善された方法であって、プロバイオティクスとグリシン又はその誘導体とを組み合わせた組成物の有効量を、必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。
【0055】
好ましい実施形態において、気分障害は軽度から重度である。
【0056】
組成物は、対象の気分障害の状態及び／又は過度の情動反応を改善するために投与することができる。したがって、本方法のいくつかの実施形態は、組成物の投与を開始する前に、対象を診断することを含む。
【0057】
一実施形態では、気分の改善は、抑うつレベルの低減、不安レベルの低減、ストレスレベルの低減、知覚エネルギーレベル（「活力」）の増大、より肯定的な情動状態、自尊感情の増強、否定的思考及び／又は否定的な緊張感（ｔｅｎｓｉｏｎ）の量の低減及び／又は強度の低減、気分変動のリスク低減、又は肯定的な気分の保持のうちの１つ以上を含み得る。
【0058】
更に、この点に関し、組成物を、不安及び／又はストレスを低減する必要のある個体において不安及び／又はストレスを低減するために投与することができる。方法は、不安を低減する及び／又はストレスを低減する必要があるものとして、個体を識別すること、を含み得る。
【0059】
上記のとおり、組成物を、過度の情動的苦痛を制御（例えば、恐怖症を予防又は治療）するために投与することができる。したがって、本明細書で開示される過度の情動的苦痛を制御する方法についてのいくつかの実施形態は、例えば、組成物の投与を開始する前に、過度の情動的苦痛を有する個体を診断すること、を含む。
【0060】
一実施形態では、グリシンは、Ｌ－グリシンの形態、又はタンパク質、ペプチドなどのグリシンに富む供給源の形態、若しくはグリシン誘導体の形態で提供される。
【0061】
好適なグリシンの機能性誘導体の非限定的な例としては、Ｄ－アリルグリシン、Ｎ－［ビス（メチルチオ）メチレン］グリシンメチルエステル、Ｂｏｃ－アリル－Ｇｌｙ－ＯＨ（ジシクロヘキシルアンモニウム）塩、Ｂｏｃ－Ｄ－Ｃｈｇ－ＯＨ、Ｂｏｃ－Ｃｈｇ－ＯＨ、（Ｒ）－Ｎ－Ｂｏｃ－（２’－クロロフェニル）グリシン、Ｂｏｃ－Ｌ－シクロプロピルグリシン、Ｂｏｃ－Ｌ－シクロプロピルグリシン、（Ｒ）－Ｎ－Ｂｏｃ－４－フルオロフェニルグリシン、Ｂｏｃ－Ｄ－プロパルギルグリシン、Ｂｏｃ－（Ｓ）－３－チエニルグリシン、Ｂｏｃ－（Ｒ）－３－チエニルグリシン、Ｄ－ａ－シクロヘキシルグリシン、Ｌ－ａ－シクロプロピルグリシン、Ｎ－（２－フルオロフェニル）－Ｎ－（メチルスルホニル）グリシン、Ｎ－（４－フルオロフェニル）－Ｎ－（メチルスルホニル）グリシン、Ｆｍｏｃ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｎ－（２－フロイル）グリシン、Ｌ－ａ－ネオペンチルグリシン、Ｄ－プロパルギルグリシン、サルコシン、Ｚ－ａ－ホスホノグリシントリメチルエステル、及びこれらの混合物が挙げられる。一実施形態では、グリシンは、ジペプチド、例えばＮ－アセチルシステイニルグリシン又はシステイニルグリシンとして提供され得る。
【0062】
グリシン（ＧＬＹ）又はその機能性誘導体は、対象の体重１キログラム（ｋｇ）当たり約０．１～１００ミリグラム（ｍｇ）のグリシン又はその機能性誘導体の量で投与することができる。実施形態では、グリシン又はその類似体は、約１０μｍｏｌ／ｋｇ体重～約５００ｍｍｏｌ／ｋｇ体重、好ましくは１０μｍｏｌ／ｋｇ体重～１００ｍｍｏｌ／ｋｇ体重、より好ましくは１０μｍｏｌ／ｋｇ体重～１０ｍｍｏｌ／ｋｇ体重、より好ましくは５０μｍｏｌ／ｋｇ体重～２ｍｍｏｌ／ｋｇ体重の用量で投与するために配合することもできる。
【0063】
一実施形態において、本発明のプロバイオティクスは、ビフィドバクテリウム・ロンガム、Ｂ．インファンティス（ｉｎｆａｎｔｉｓ）、Ｂ．アニマリス（ａｎｉｍａｌｉｓ）亜種ラクティス（ｌａｃｔｉｓ）、又はＢ．ブレーベ（ｂｒｅｖｅ）であり得る。最も好ましくは、ビフィドバクテリウム・ロンガム、例えば、Ｂ．ロンガム亜種ロンガム、Ｂ．ロンガム亜種インファンティス、又はＢ．ロンガム亜種スイス（ｓｕｉｓ）、好ましくは、Ｂ．ロンガム亜種ロンガムである。Ｂ．ロンガム亜種ロンガムは、Ｂ．ロンガムＡＴＣＣ ＢＡＡ－９９９、Ｂ．ロンガムＡＴＣＣ １５７０７、及びＢ．ロンガムＣＮＣＭ Ｉ－２６１８から選択することができる。最も好ましくは、Ｂ．ロンガムＡＴＣＣ ＢＡＡ－９９９（ＮＣＣ３００１）である。
【0064】
Ｂ．ロンガムＡＴＣＣ ＢＡＡ－９９９は、本願の譲受人によりＮＣＣ３００１として２００１年１月２９日にＩｎｓｔｉｔｕｔ Ｐａｓｔｅｕｒ，２８ｒｕｅ ｄｕ Ｄｏｃｔｅｕｒ Ｒｏｕｘ，Ｆ－７５０２４ Ｐａｒｉｓ Ｃｅｄｅｘ１５，Ｆｒａｎｃｅに寄託された。この寄託物に対する公衆による利用についての全ての制限は、本願特許の付与をもとに取り消し不能（ｉｒｒｅｖｏｃａｂｌｙ）の形で撤回され、生存活性のあるサンプルが受託者により頒布不能になった場合には、寄託物は新たに補充されることになる。
【0065】
Ｂ．ロンガムＡＴＣＣ ＢＡＡ－９９９は、任意の好適な方法を用いて培養され得る。Ｂ．ロンガムＡＴＣＣ ＢＡＡ－９９９は、例えば、組成物を形成するにあたり凍結乾燥形態又は噴霧乾燥形態で食品製品に添加され得る。
【0066】
理想的な用量が、例えば、治療する対象、その健康状態、性別、年齢、又は体重、及び投与経路によって異なることは、当業者には明らかである。その結果、理想的に使用される用量は様々であり得るが、当業者によって容易に決定することができる。
【0067】
しかしながら、一般に、本発明の組成物は、Ｂ．ロンガム亜種ロンガムを、１日用量当たり１０６～１０１０ｃｆｕ、及び／又は１０６～１０１０個で含む場合が好ましい。本発明の組成物はまた、Ｂ．ロンガム亜種ロンガムを、組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０６～１０１１ｃｆｕ、及び／又は１０６～１０１１個で含んでもよい。あるいは、組成物の１日用量は、好ましくは１０４～１０１２ｃｆｕ（コロニー形成単位）、より好ましくは１０４～１０１１ｃｆｕ、最も好ましくは１０４～１０１０ｃｆｕのＢ．ロンガム、例えば、ＡＴＣＣ ＢＡＡ－９９９を提供する。組成物は、組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０２～１０１０ｃｆｕ、好ましくは１０２～１０９ｃｆｕ、より好ましくは１０２～１０８ｃｆｕのＢ．ロンガム、例えば、ＡＴＣＣ ＢＡＡ－９９９を含んでよい。
【0068】
不活性化された、及び／又は非増殖性のＢ．ロンガム、例えば、ＡＴＣＣ ＢＡＡ－９９９の場合、組成物は、組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０２～１０１０個、好ましくは組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０３～１０８個、より好ましくは組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０５～１０８個の、Ｂ．ロンガムの非増殖性の細胞を含み得る。
【0069】
組成物は、１週間に少なくとも１日、好ましくは１週間に少なくとも２日、より好ましくは１週間に少なくとも３日若しくは４日（例えば、１日おき）、最も好ましくは１週間に少なくとも５日、１週間に６日、又は１週間に７日、投与してよい。投与期間は、少なくとも１週間、好ましくは少なくとも１カ月間、より好ましくは少なくとも２カ月間、最も好ましくは少なくとも３カ月間、例えば、少なくとも４カ月間であってもよい。一実施形態では、投与は少なくとも毎日であり、例えば、対象は１日に１回以上投与を受けてもよい。いくつかの実施形態では、投与は、個体の残りの寿命にわたって継続される。他の実施形態では、投与は、医学的状態について検出可能な症状がなくなるまで行われる。具体的な実施形態では、投与は、少なくとも１つの症状について検出可能な改善が生じるまで行われ、更なる場合においては、寛解を維持するために継続される。
【0070】
本明細書に開示される組成物及び方法のそれぞれにおいて、組成物は、好ましくは、食品添加物、食品原材料、機能性食品、ダイエタリーサプリメント、医療用食品、ニュートラシューティカルズ、経口栄養補助食品（ＯＮＳ）若しくは栄養補助食品、又は乳児用フォーミュラを含む食品製品又は飲料製品である。
【0071】
本明細書に開示される組成物は、経口投与、経腸投与、若しくは眼内投与、局所投与又は吸入投与により対象に投与され得る。したがって、組成物の形態の非限定的な例としては、自然食品、加工食品、天然果汁、濃縮物及び抽出物、マイクロカプセル、ナノカプセル、リポソーム、硬膏、吸入形態、点鼻スプレー、点鼻剤、点眼剤、舌下錠、及び持続放出性製剤が挙げられる。
【0072】
本明細書に開示される組成物には、治療目的での投与のための様々な製剤のいずれかを使用することができる。より詳細には、医薬組成物は、適切な薬理上許容可能な担体又は希釈剤を含むことができ、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、軟膏剤、液剤、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル剤、マイクロスフェア、及びエアゾール剤などの固体形態、半固体形態、液体形態又は気体形態の製剤として処方され得る。したがって、組成物の投与は、経口投与、バッカル投与、直腸投与、経腸投与、及び気管内投与を含む様々な方法で達成することができる。活性成分は、投与後に全身性のものであってもよく、又は局所投与の使用、壁内（ｉｎｔｒａｍｕｒａｌ）投与の使用、若しくは埋め込み部位において有効用量を保持するように作用する埋入物（インプラント）の使用によって局在化させてもよい。
【0073】
医薬の投与剤形では、化合物は、薬理上許容可能な塩として投与されてもよい。これらはまた、別の薬理上活性な化合物と適切に関連させて使用してもよい。以下の方法及び添加物は、単なる例示であり、決して限定するものではない。
【0074】
経口製剤では、化合物は、単独で使用することができ、又は、錠剤、散剤、顆粒剤若しくはカプセル剤を製造するための適切な添加剤との組み合わせ、例えば、乳糖、マンニトール、トウモロコシデンプン、若しくはジャガイモデンプンなどの従来の添加剤との組み合わせ、結晶セルロース、セルロース機能性誘導体、アラビアゴム、トウモロコシデンプン又はゼラチンなどのバインダーとの組み合わせ、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、又はカルボキシメチルセルロースナトリウムなどの崩壊剤との組み合わせ、タルク又はステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤との組み合わせ；並びに所望であれば、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存剤及び香味剤との組み合わせで、使用できる。
【0075】
非ヒト動物を対象とする組成物としては、動物の必要栄養量を補給する食品組成物、動物用トリート（例えば、ビスケット）、及び／又はダイエタリーサプリメントが挙げられる。組成物は、ドライ組成物（例えば、キブル）、セミモイスト組成物、ウェット組成物、又はそれらの任意の混合物であってよい。一実施形態では、組成物は、グレイビー、飲料水、飲料、ヨーグルト、粉末、顆粒、ペースト、懸濁液、噛むもの（ｃｈｅｗ）、一口で食べるもの（ｍｏｒｓｅｌ）、トリート、スナック、ペレット、丸薬、カプセル、錠剤、又は他の適切な送達形態のものなどのダイエタリーサプリメントである。ダイエタリーサプリメントは、動物に投与する前に、水又は他の希釈剤と混合する必要がある場合があり、又は混合することができる。
【0076】
当業者は、本明細書に開示される本発明の全ての特徴を自由に組み合わせることができることを理解するであろう。特に、本発明のバイオマーカーについて記載された特徴点は、本発明の使用及び本発明の方法と組み合わせることができ、逆もまた同様である。更に、本発明の異なる実施形態について記載された特徴を組み合わせてもよい。
【0077】
本発明を例で説明してきたが、特許請求の範囲で定義された本発明の範囲から逸脱することなく、変更及び改変を加えることができることが理解されるべきである。
【0078】
更に、既知の均等物が特定の特徴に対して存在する場合、かかる均等物は、本明細書で具体的に言及されているかのように組み込まれる。本発明の更なる利点及び特徴は、図面及び非限定的な実施例から明らかである。
【0079】
実施例
方法
試験監督
本発明者らは、非便秘型過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を有する患者において、無作為化、二重盲検プラセボ対照単施設パイロット試験を実施した（Ｐｉｎｔｏ－Ｓａｎｃｈｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ２０１７）。
方法
試験監督
本発明者らは、非便秘型過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を有する患者において、無作為化、二重盲検プラセボ対照単施設パイロット試験を実施した（Ｐｉｎｔｏ－Ｓａｎｃｈｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ２０１７）。
【0080】
参加者
本発明者らは、非便秘型ＩＢＳ（Ｒｏｍｅ ＩＩＩ診断基準（Ｌｏｎｇｓｔｒｅｔｈ ＧＦ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＷＧ，Ｃｈｅｙ ＷＤ，ｅｔ ａｌ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ２００６；１３０（５）：１４８０－９１）の診断を受け、且つ病院不安抑うつ（ＨＡＤ）尺度（Ｓｎａｉｔｈ ＲＰ，Ｚｉｇｍｏｎｄ ＡＳ．Ｔｈｅ ＨＡＤ ｓｃａｌｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｉｒｒｉｔａｂｉｌｉｔｙ ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ － ａｎｘｉｅｔｙ ｓｃａｌｅ ａｎｄ ｔｈｅ Ｌｅｅｄｓ ｓｉｔｕａｔｉｏｎａｌ ａｎｘｉｅｔｙ ｓｃａｌｅ ｍａｎｕａｌ．ＧＬ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｌｔｄ．により出版、１９９４）に基づく軽度から中等度の不安及び／又は抑うつスコア（ＨＡＤ－Ａ又はＨＡＤ－Ｄスコア８～１４）を有する、成人患者を募集した。器質性疾患、免疫不全、腹部の大手術、不安又は抑うつ以外の精神医学的状態、免疫抑制剤、グルココルチコステロイド、オピオイド、抗うつ剤又は抗不安剤の常用量での使用、アルコール又は違法薬物摂取の履歴を有する患者は除外した。ロペラミド及び緩下剤は、レスキュー薬として許可された。その他のいかなる形態のプロバイオティクスも、１ヶ月の導入期間及び試験の間、禁止された。抗菌剤は、導入期間及び試験前の３ケ月間、禁止された。
本発明者らは、非便秘型ＩＢＳ（Ｒｏｍｅ ＩＩＩ診断基準（Ｌｏｎｇｓｔｒｅｔｈ ＧＦ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＷＧ，Ｃｈｅｙ ＷＤ，ｅｔ ａｌ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ２００６；１３０（５）：１４８０－９１）の診断を受け、且つ病院不安抑うつ（ＨＡＤ）尺度（Ｓｎａｉｔｈ ＲＰ，Ｚｉｇｍｏｎｄ ＡＳ．Ｔｈｅ ＨＡＤ ｓｃａｌｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｉｒｒｉｔａｂｉｌｉｔｙ ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ － ａｎｘｉｅｔｙ ｓｃａｌｅ ａｎｄ ｔｈｅ Ｌｅｅｄｓ ｓｉｔｕａｔｉｏｎａｌ ａｎｘｉｅｔｙ ｓｃａｌｅ ｍａｎｕａｌ．ＧＬ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｌｔｄ．により出版、１９９４）に基づく軽度から中等度の不安及び／又は抑うつスコア（ＨＡＤ－Ａ又はＨＡＤ－Ｄスコア８～１４）を有する、成人患者を募集した。器質性疾患、免疫不全、腹部の大手術、不安又は抑うつ以外の精神医学的状態、免疫抑制剤、グルココルチコステロイド、オピオイド、抗うつ剤又は抗不安剤の常用量での使用、アルコール又は違法薬物摂取の履歴を有する患者は除外した。ロペラミド及び緩下剤は、レスキュー薬として許可された。その他のいかなる形態のプロバイオティクスも、１ヶ月の導入期間及び試験の間、禁止された。抗菌剤は、導入期間及び試験前の３ケ月間、禁止された。
【0081】
試験デザイン
この試験は、４回の通院を含んだ。スクリーニング来診時に、病歴及び症状を評価し、身体検査及び完全血液検査（ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｂｌｏｏｄｗｏｒｋ）を実施した。２回目の来診時（０週目）に、適格基準・除外基準及び症状を再評価し、糞便試料、尿試料及び血液試料を採取し、ｆＭＲＩ検査を実施した。
この試験は、４回の通院を含んだ。スクリーニング来診時に、病歴及び症状を評価し、身体検査及び完全血液検査（ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｂｌｏｏｄｗｏｒｋ）を実施した。２回目の来診時（０週目）に、適格基準・除外基準及び症状を再評価し、糞便試料、尿試料及び血液試料を採取し、ｆＭＲＩ検査を実施した。
【0082】
次いで患者に、噴霧乾燥したＢ．ロンガム（１グラムのマルトデキストリン当たり１．０Ｅ＋１０ＣＦＵ）、又は、１グラムのマルトデキストリンを含有するプラセボの、いずれかの小袋４２個を無作為に割り付けた。被験製品（Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｄｕｃｔ）を、包装、色、味、及び粘稠度により区別することはできなかった。患者に、小袋の内容物を、２０℃に予熱した１００～２００ｍＬのラクトースフリーミルク、豆乳、又はライスミルクに溶かすように指示した。患者に、各自の食習慣又は繊維摂取を変えないように求めた。参加者は被験製品の摂取を記録し、３回目の来診時（６週目）に、空の小袋を使用してコンプライアンスを評価し、参加者の症状を評価し、血液試料、尿試料及び糞便試料を採取し、ｆＭＲＩ試験を実施した。最後に、フォローアップ来診時（１０週目）に患者の症状を再評価した。
【0083】
定期的な通院に加えて、カナダ保健省の要求により、病院不安抑うつ尺度（ＨＡＤ）スコアも、治療の３週間目に評価した。ＨＡＤアンケートは、来診１回目には患者に渡し、その次は試験担当医師に郵送又は電子メールで送付した。
【0084】
試験エンドポイント
プライマリーエンドポイントは、６週目の時点での、ＨＡＤスケールで≧２ポイントの不安及び／又は抑うつスコアの低下とした（Ｌｏｎｇｓｔｒｅｔｈ ＧＦ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＷＧ，Ｃｈｅｙ ＷＤ，ｅｔ ａｌ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ２００６；１３０（５）：１４８０－９１）。これは、ＨＡＤスケールの不安スコア及び抑うつスコアについて過去に確立された臨床的に意味のある平均差である、それぞれ１．３及び１．４を根拠とした（Ｐｕｈａｎ Ｍ，Ｆｒｅｙ Ｍ，Ｂｕｃｈｉ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｍｉｎｉｍａｌ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｈｏｓｐｉｔａｌ ａｎｘｉｅｔｙ ａｎｄ ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｃａｌｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｈｅａｌｔｈ Ｑｕａｌ Ｌｉｆｅ Ｏｕｔｃｏｍｅｓ．２００８；６：４６．）。セカンダリーエンドポイントには、不安及び抑うつスコア（ＨＡＤ、連続データ）、不安（状態－特性不安尺度、ＳＴＡＩ）、ＩＢＳの全体的な十分な緩和、ＩＢＳ症状、身体化、生活の質、脳活性化パターンの変化（機能的磁気共鳴画像法、ｆＭＲＩ）、血清炎症マーカー、神経伝達物質及びＢＤＮＦ、並びに血漿メタボノミクス及び便微生物叢プロファイル、における改善が含まれた。
プライマリーエンドポイントは、６週目の時点での、ＨＡＤスケールで≧２ポイントの不安及び／又は抑うつスコアの低下とした（Ｌｏｎｇｓｔｒｅｔｈ ＧＦ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＷＧ，Ｃｈｅｙ ＷＤ，ｅｔ ａｌ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ２００６；１３０（５）：１４８０－９１）。これは、ＨＡＤスケールの不安スコア及び抑うつスコアについて過去に確立された臨床的に意味のある平均差である、それぞれ１．３及び１．４を根拠とした（Ｐｕｈａｎ Ｍ，Ｆｒｅｙ Ｍ，Ｂｕｃｈｉ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｍｉｎｉｍａｌ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｈｏｓｐｉｔａｌ ａｎｘｉｅｔｙ ａｎｄ ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｃａｌｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｈｅａｌｔｈ Ｑｕａｌ Ｌｉｆｅ Ｏｕｔｃｏｍｅｓ．２００８；６：４６．）。セカンダリーエンドポイントには、不安及び抑うつスコア（ＨＡＤ、連続データ）、不安（状態－特性不安尺度、ＳＴＡＩ）、ＩＢＳの全体的な十分な緩和、ＩＢＳ症状、身体化、生活の質、脳活性化パターンの変化（機能的磁気共鳴画像法、ｆＭＲＩ）、血清炎症マーカー、神経伝達物質及びＢＤＮＦ、並びに血漿メタボノミクス及び便微生物叢プロファイル、における改善が含まれた。
【0085】
無作為抽出
無作為化シーケンスは、コンピュータプログラム（Ｐｒｏｃ Ｐｌａｎ，ＳＡＳ，Ｖ．９．１）を用いて実施した。ブロック無作為化を性別とＩＢＳ状態（下痢又は混合型の糞便パターン）とによって層別化した。コードは、層に従って患者に割付けられた、密封した不透明な封筒内に保持された。無作為化シーケンスを用いて各パックに番号を割付けた。募集時に、患者を４つの層のうちの１つに割付け、その層に利用可能な次の連続無作為化番号を与えた。投与の割付は、参加者及び試験スタッフには秘匿した。
無作為化シーケンスは、コンピュータプログラム（Ｐｒｏｃ Ｐｌａｎ，ＳＡＳ，Ｖ．９．１）を用いて実施した。ブロック無作為化を性別とＩＢＳ状態（下痢又は混合型の糞便パターン）とによって層別化した。コードは、層に従って患者に割付けられた、密封した不透明な封筒内に保持された。無作為化シーケンスを用いて各パックに番号を割付けた。募集時に、患者を４つの層のうちの１つに割付け、その層に利用可能な次の連続無作為化番号を与えた。投与の割付は、参加者及び試験スタッフには秘匿した。
【0086】
パッケージ、色、味、及び粘稠度では区別できない被験製品を、１アーム当たり２つのノンスピーキング（ｎｏｎ－ｓｐｅａｋｉｎｇ）コードで識別した。識別情報は、対象、治験担当医師及びサポートスタッフに知らせなかった。
【0087】
試験評価
不安及び抑うつを、それぞれＨＡＤ－Ａ及びＨＡＤ－Ｄサブスコアによって評価した。不安のさらなる尺度として、本発明者らは、状態不安及び特性不安の両方を評価するＳＴＡＩ（Ｇａｕｄｒｙ Ｅ，Ｓｐｉｅｌｂｅｒｇｅｒ ＣＤ，Ｖａｇｇ Ｐ．Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｔｅ－ｔｒａｉｔ ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ａｎｘｉｅｔｙ ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ．Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ Ｂｅｈａｖ Ｒｅｓ １９７５；１０：３３１－４１）を使用した。
不安及び抑うつを、それぞれＨＡＤ－Ａ及びＨＡＤ－Ｄサブスコアによって評価した。不安のさらなる尺度として、本発明者らは、状態不安及び特性不安の両方を評価するＳＴＡＩ（Ｇａｕｄｒｙ Ｅ，Ｓｐｉｅｌｂｅｒｇｅｒ ＣＤ，Ｖａｇｇ Ｐ．Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｔｅ－ｔｒａｉｔ ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ａｎｘｉｅｔｙ ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ．Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ Ｂｅｈａｖ Ｒｅｓ １９７５；１０：３３１－４１）を使用した。
【0088】
脳活動は、３２のパラレルな受信チャネルを有する全身用ショートボアスキャナ、Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ ３－Ｔｅｓｌａ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＭＲ ７５０（Ｇｅｎｅｒａｌ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）を用いた機能的磁気共鳴画像法（ｆＭＲＩ）によって評価した。１時間のプロトコルは、７分間のＴ１強調構造スキャン後に、恐怖顔の逆行マスキングパラダイムの反復４回（Ｈａｌｌ ＧＢ，Ｄｏｙｌｅ ＫＡ，Ｇｏｌｄｂｅｒｇ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ａｍｙｇｄａｌａ ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｓｕｂｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎｘｉｏｕｓ ｆａｃｅ ｓｔｉｍｕｌｉ ｉｎ ａｄｕｌｔｓ ｗｉｔｈ Ａｕｔｉｓｍ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ：ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｉｎｓｉｇｈｔｓ．ＰｌｏＳ Ｏｎｅ ２０１０；５（５）：ｅ１０８０４）を、血中酸素レベルに依存したｆＭＲＩスキャン４回（Ｈｅ Ｘ，Ｙａｂｌｏｎｓｋｉｙ ＤＡ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＢＯＬＤ：ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｄｅｏｘｙｇｅｎａｔｅｄ ｂｌｏｏｄ ｖｏｌｕｍｅ ａｎｄ ｏｘｙｇｅｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒａｃｔｉｏｎ：ｄｅｆａｕｌｔ ｓｔａｔｅ．Ｍａｇｎ Ｒｅｓｏｎ Ｍｅｄ ２００７；５７：１１５－２６）（ＢＯＬＤ ＥＰＩ；ＴＲ／ＴＥ＝２８００／３５ｍｓ、フリップ角＝９０°、３ｍｍ厚のスライス、ギャップなし、視野＝２４ｃｍ、マトリックス＝６４×６４）中に含んだ。ＭＲＩデータの前処理は、Ｂｒａｉｎ Ｖｏｙａｇｅｒ ＱＸバージョン２．８．２、３２ビット（Ｂｒａｉｎ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，Ｍａａｓｔｒｉｃｈｔ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して完了した。解剖学的データ及び機能的データを検査し、アーチファクトを有するスキャン又は６つの平面いずれかにおいて５ｍｍを超える移動を有するｆＭＲＩスキャンを分析から除外した。解剖学的スキャンを標準矢状方向（ｓａｇｉｔｔａｌ ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ）に変換し、タライラッハ標準空間への空間標準化を行った。ｆＭＲＩデータに対してスライススキャンの時間補正及び３Ｄ動き補正を行い、ガウシアンフィルタ（ＦＷＨＭ＝６ｍｍ）を使用して空間の平滑化を適用した。扁桃体を関心領域（ＲＯＩ）として選択し、最初にＷＦＵＰｉｃｋ Ａｔｌａｓから導き出し、全群の平均を変換したＴ１画像上の解剖学的ランドマークに従って精密化した。
【0089】
一晩絶食後に血液試料を採取した。処理後、評価まで試料を－８０℃で保管した。
【0090】
特定の胆汁酸パネルを測定するために、血液でメタボノミクス分析を行った。試料を抽出し、過去に公開された方法（Ｘｉｅ，Ｚｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１３、Ｚｈａｏ，Ｎｉ ｅｔ ａｌ．２０１７）に従って調製した。胆汁酸分析のために、全ての標準をＳｔｅｒａｌｏｉｄｓ Ｉｎｃ．（Ｎｅｗｐｏｒｔ，ＲＩ）及びＴＲＣ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｔｏｒｏｎｔｏ，ＯＮ，Ｃａｎａｄａ）から入手し、９種類の安定同位体標識胆汁酸標準を入手した。較正曲線のサンプルをブランクマトリックスで調製し、実際の生体試料と同じ方法で処理した。タンデム質量分析計に連結した超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）システム（ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ－Ｘｅｖｏ ＴＱ－Ｓ、Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐ．、Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用して、過去に公開されたプロトコル（Ｘｉｅ，Ｚｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１３、Ｆｅｒｓｌｅｗ，Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ．２０１５）に基づいてヒト血漿試料／尿試料中の胆汁酸を定量した。ＭａｓｓＬｙｎｘバージョン４．１を使用してデータ取得を行い、ＴａｒｇｅｔＬｙｎｘアプリケーションマネージャバージョン４．１（Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用して胆汁酸の定量を実施した。
【0091】
統計解析
メタボノミクスデータに関する化学分析は、ソフトウェアパッケージＳＩＭＣＡ－Ｐ＋（バージョン１６．０、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて行った。主成分分析（ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ、ＰＣＡ）、及びフィッティングプロセス中に応答変数に対して直交するすべての情報を除去する部分的最小二乗回帰（Ｐａｒｔｉａｌ Ｌｅａｓｔ Ｓｑｕａｒｅｓ Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ、ＰＬＳＲ）の改良版を用いた。この変形であるＯ－ＰＬＳ（Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ Ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｌａｔｅｎｔ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ）（Ｔｒｙｇｇ ａｎｄ Ｗｏｌｄ ２００３）は、ＰＬＳＲと同程度の適合度でより狭いモデル（それらの解釈可能範囲の改善）を提供する。モデルにおける個々の変数の重みを強調するために、射影における変数重要度（Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｉｎ Ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ、ＶＩＰ）を使用し、１を超える値は慣例により閾値として使用した。対応のないｔ検定と対応のあるｔ検定とを使用して群比較のために一変量解析を実施し、代謝産物とＨＡＤ、ＳＴＡＩ、扁桃体エンドポイントとの間のスピアマン相関を計算し、細菌数を計算した。統計解析は、Ｒ４．０．５（２０２１－０３－３１）を用いて実施した。
メタボノミクスデータに関する化学分析は、ソフトウェアパッケージＳＩＭＣＡ－Ｐ＋（バージョン１６．０、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて行った。主成分分析（ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ、ＰＣＡ）、及びフィッティングプロセス中に応答変数に対して直交するすべての情報を除去する部分的最小二乗回帰（Ｐａｒｔｉａｌ Ｌｅａｓｔ Ｓｑｕａｒｅｓ Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ、ＰＬＳＲ）の改良版を用いた。この変形であるＯ－ＰＬＳ（Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ Ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｌａｔｅｎｔ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ）（Ｔｒｙｇｇ ａｎｄ Ｗｏｌｄ ２００３）は、ＰＬＳＲと同程度の適合度でより狭いモデル（それらの解釈可能範囲の改善）を提供する。モデルにおける個々の変数の重みを強調するために、射影における変数重要度（Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｉｎ Ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ、ＶＩＰ）を使用し、１を超える値は慣例により閾値として使用した。対応のないｔ検定と対応のあるｔ検定とを使用して群比較のために一変量解析を実施し、代謝産物とＨＡＤ、ＳＴＡＩ、扁桃体エンドポイントとの間のスピアマン相関を計算し、細菌数を計算した。統計解析は、Ｒ４．０．５（２０２１－０３－３１）を用いて実施した。
【0092】
結果
試験患者及び生物学的試料
試験を完了した３８名の被験患者（ＢＬ＝１８名、プラセボ＝２０名）のうち、介入前及び介入後の両方で試料が入手可能であった３６名の参加者（ＢＬ＝１８名、プラセボ＝１８名）に対して、血液試料のメタボノミクス分析を行うことができた。３５名の参加者（ＢＬ＝１６、プラセボ＝１９）で糞便中のＢＬの定量を実施した。
試験患者及び生物学的試料
試験を完了した３８名の被験患者（ＢＬ＝１８名、プラセボ＝２０名）のうち、介入前及び介入後の両方で試料が入手可能であった３６名の参加者（ＢＬ＝１８名、プラセボ＝１８名）に対して、血液試料のメタボノミクス分析を行うことができた。３５名の参加者（ＢＬ＝１６、プラセボ＝１９）で糞便中のＢＬの定量を実施した。
【0093】
糞便試料中のＢＬの定量と、臨床転帰との関連
多量のＢ．ロンガムは、プラセボ群の１名の対象を例外としてプロバイオティクス群でのみ検出され、介入の良好なコンプライアンスを示した。
多量のＢ．ロンガムは、プラセボ群の１名の対象を例外としてプロバイオティクス群でのみ検出され、介入の良好なコンプライアンスを示した。
【0094】
試験の成功基準としてのＨＡＤ－Ａサブスコア又はＨＡＤ－Ｄサブスコアのいずれかにおける２ポイント以上の低下は、ＢＬの存在量の増加と関連していた（それぞれｐ＝０．００３４及びｐ＝０．００２６）。いずれのスコアの減少も、糞便中のＢＬの存在量と相関した（それぞれ、ｒｈｏ＝－０．４、ｐ＝０．０１８及びｒｈｏ＝０．５５、ｐ＝６ｅ－０４）。ｆＲＭＩによって測定された、負の情動的刺激に応答した扁桃体活性化の減少も、ＢＬ存在量と相関した（ｒｈｏ＝０．４８、ｐ＝０．０１６）。
【0095】
治療及び血漿中代謝産物の表現型
１つの予測成分及び１つの直交成分を用いたＯＰＬＳ判別分析を適用して、２群間の血液代謝の差をモデル化した。モデルは、投与後分析についてのみ統計的にロバストであった（Ｒ２Ｘ＝０．１９、Ｒ２Ｙ＝０．７６、Ｑ２Ｙ＝０．２６、ここで、Ｒ２Ｘ：メタボノミクスデータ（尿代謝産物）における分散説明率、Ｒ２Ｙ：群分散説明率（ｅｘｐｌａｉｎｅｄ ｇｒｏｕｐ ｖａｒｉａｎｃｅ）（プラセボ及びプロバイオティクス）、及びＱ２Ｙ：モデルのロバスト性）。投与前に２群間に差はなかった（Ｑ２Ｙ＜０）。最も判別可能な変数（ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｎｔ ｖａｒｉａｂｌｅｓ）から、対応のあるｔ検定を使用して群間の統計学的有意差を検定し、結果を血液濃度及びＯＰＬＳ由来パラメータと共に表１に報告する。ＢＬ投与患者の方が、グリシン抱合胆汁酸種（ＧＣＡ、ＧＣＤＣＡ）の血中濃度が高く（ｐ＜０．１）、胆汁酸ＧＵＤＣＡの血中濃度が低かった（ｐ＝０．０．１０８）（図１）。
１つの予測成分及び１つの直交成分を用いたＯＰＬＳ判別分析を適用して、２群間の血液代謝の差をモデル化した。モデルは、投与後分析についてのみ統計的にロバストであった（Ｒ２Ｘ＝０．１９、Ｒ２Ｙ＝０．７６、Ｑ２Ｙ＝０．２６、ここで、Ｒ２Ｘ：メタボノミクスデータ（尿代謝産物）における分散説明率、Ｒ２Ｙ：群分散説明率（ｅｘｐｌａｉｎｅｄ ｇｒｏｕｐ ｖａｒｉａｎｃｅ）（プラセボ及びプロバイオティクス）、及びＱ２Ｙ：モデルのロバスト性）。投与前に２群間に差はなかった（Ｑ２Ｙ＜０）。最も判別可能な変数（ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｎｔ ｖａｒｉａｂｌｅｓ）から、対応のあるｔ検定を使用して群間の統計学的有意差を検定し、結果を血液濃度及びＯＰＬＳ由来パラメータと共に表１に報告する。ＢＬ投与患者の方が、グリシン抱合胆汁酸種（ＧＣＡ、ＧＣＤＣＡ）の血中濃度が高く（ｐ＜０．１）、胆汁酸ＧＵＤＣＡの血中濃度が低かった（ｐ＝０．０．１０８）（図１）。
【0096】
【表1】
【0097】
【表2】
【0098】
【表3】
【0099】
注目すべきことに、２種類の一次胆汁酸であるグリシン抱合コール酸（ＧＣＡ、ｒｈｏ＝０．４７、ｐ＝０．０５２）及びグリシン抱合ケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ、ｒｈｏ＝０．４４、ｐ＝０．０６５）の介入後血漿中濃度は、プロバイオティクス群のＩＢＳ対象における不安症状の改善と正に相関していた（表２）。したがって、ＢＬ ＮＣＣ３００１の摂取は、腸におけるこれらの胆汁酸の再吸収を増加させ、他の腸内細菌によるグリシン脱抱合を減少させると仮定される。
【0100】
グリシン抱合胆汁酸、コール酸、ケノデオキシコール酸は、食事性脂肪の乳化に関与する最も豊富に存在する分子種の一部であり、ＢＬ ＮＣＣ３００１と共に増加する。胆汁酸は、胆汁中に分泌される前に、アミノ酸のタウリン又はグリシンと結合する（Ｈｏｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．２０１０）。抱合は、生体膜を通した分子の受動的再吸収を実質的に低減させる。この再吸収の低減により、腸内の胆汁酸は、脂質の吸収に必要とされるミセルを形成する。そして、多種多様な腸内微生物は胆汁酸を脱抱合する能力を有しており、脱抱合した胆汁酸は再抱合のために肝臓に戻される（Ｈｏｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．２０１０）。いくつかの作用様式は、ＢＬ ＮＣ３００１などのプロバイオティクスによってもたらされる胆汁酸組成物の調節によって介される可能性があり、こうした調節には、例えば、
（ｉ）正常な神経伝達物質代謝のための、及びその補給が気分及び認知の改善、並びに睡眠に関連する、グリシンのバイオアベイラビリティに影響を与えること、（Ｂａｎｎａｉ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｎｅｕｒｏｌ．２０１２；３：６１）、
（ｉｉ）ＰＵＦＡなどの食事性脂肪が血液脳関門を通過し、気分、抑うつ及び不安に関わる脳機能に関与するための、乳化、吸収、及びバイオアベイラビリティの調節（Ｋｕａｎ－Ｐｉｎ Ｓｕ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１５ Ａｕｇ；１３（２）：１２９－１３７）、
（ｉｉｉ）不安様挙動及び抑うつ様挙動、並びに疼痛知覚及び感覚変換を調節することが知られている、腸細胞におけるオレイルエタノールアミン脂質及びパルミトイルエタノールアミン脂質の合成の調節（Ｈｉｌｌ ＭＮ ｅｔ ａｌ．，Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．２００９ Ｓｅｐ；３４（８）：１２５７－６２、及びＣｏｐｐｏｌａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．２０１４ Ｍａｙ；８２（５）：５０７－１１）、（ｉｖ）及び受容体ＦＸＲ又はＴＧＲ５などの特異的受容体との直接相互作用によるもの（Ｋｉｒｉｙａｍａ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０１９）がある。
（ｉ）正常な神経伝達物質代謝のための、及びその補給が気分及び認知の改善、並びに睡眠に関連する、グリシンのバイオアベイラビリティに影響を与えること、（Ｂａｎｎａｉ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｎｅｕｒｏｌ．２０１２；３：６１）、
（ｉｉ）ＰＵＦＡなどの食事性脂肪が血液脳関門を通過し、気分、抑うつ及び不安に関わる脳機能に関与するための、乳化、吸収、及びバイオアベイラビリティの調節（Ｋｕａｎ－Ｐｉｎ Ｓｕ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１５ Ａｕｇ；１３（２）：１２９－１３７）、
（ｉｉｉ）不安様挙動及び抑うつ様挙動、並びに疼痛知覚及び感覚変換を調節することが知られている、腸細胞におけるオレイルエタノールアミン脂質及びパルミトイルエタノールアミン脂質の合成の調節（Ｈｉｌｌ ＭＮ ｅｔ ａｌ．，Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．２００９ Ｓｅｐ；３４（８）：１２５７－６２、及びＣｏｐｐｏｌａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．２０１４ Ｍａｙ；８２（５）：５０７－１１）、（ｉｖ）及び受容体ＦＸＲ又はＴＧＲ５などの特異的受容体との直接相互作用によるもの（Ｋｉｒｉｙａｍａ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０１９）がある。
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【国際調査報告】