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特表2024-538619標的化放射線療法用途におけるリガンドとしての、大員環含有化合物およびその放射性標識錯体
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-10-23
(54)【発明の名称】標的化放射線療法用途におけるリガンドとしての、大員環含有化合物およびその放射性標識錯体
(51)【国際特許分類】
C07D 413/14 20060101AFI20241016BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241016BHJP
A61K 41/00 20200101ALI20241016BHJP
A61K 51/10 20060101ALI20241016BHJP
A61K 33/244 20190101ALI20241016BHJP
A61K 33/241 20190101ALI20241016BHJP
A61K 33/24 20190101ALI20241016BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20241016BHJP
A61K 33/34 20060101ALI20241016BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241016BHJP
C07K 16/18 20060101ALN20241016BHJP
【ＦＩ】
C07D413/14
A61P35/00
A61K41/00
A61K51/10 100
A61K33/244
A61K33/241
A61K33/24
A61K47/68
A61K33/34
A61K39/395 L
C07K16/18
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024519537
(86)(22)【出願日】2022-09-29
(85)【翻訳文提出日】2024-05-22
(86)【国際出願番号】 AU2022051165
(87)【国際公開番号】W WO2023049963
(87)【国際公開日】2023-04-06
(31)【優先権主張番号】2021903120
(32)【優先日】2021-09-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】304054507
【氏名又は名称】ザ ユニバーシティー オブ メルボルン
(71)【出願人】
【識別番号】521438320
【氏名又は名称】オリビア・ニュートン－ジョン・キャンサー・リサーチ・インスティテュート
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100129458
【弁理士】
【氏名又は名称】梶田 剛
(72)【発明者】
【氏名】モーガン，キャサリン・アン
(72)【発明者】
【氏名】ドネリー，ポール・スティーブン
(72)【発明者】
【氏名】ウィッチマン，クリスティアン・ワーナー
(72)【発明者】
【氏名】スコット，アンドリュー・マーク
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C085
4C086
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA95
4C076BB11
4C076BB13
4C076BB16
4C076CC27
4C076DD65
4C076EE41
4C076EE59
4C076FF67
4C084AA12
4C084MA55
4C084MA66
4C084NA05
4C084NA06
4C084NA13
4C084ZB261
4C085AA14
4C085AA26
4C085BB36
4C085CC23
4C085EE01
4C085GG02
4C085GG03
4C086AA01
4C086AA02
4C086HA03
4C086HA05
4C086HA06
4C086MA01
4C086MA05
4C086MA55
4C086MA66
4C086NA05
4C086NA06
4C086NA13
4C086ZB26
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA50
4H045BA52
4H045BA71
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA50
(57)【要約】
本発明は、放射線療法において金属錯体として使用される能力を有する式（Ｉ）の化合物に関する。
（式中、Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択され、Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーである）、またはその薬学的に許容される塩。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）の化合物【化1】
Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択され、
Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーである）、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
Ａが、ＣＯ２Ｒ１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
Ｂが、ＣＯ２Ｒ２である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項4】
Ｒ１が、Ｈである、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項5】
Ｒ２が、Ｈである、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項6】
各Ｒａが、Ｈである、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項7】
各Ｒｂが、Ｈである、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項8】
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ１２アルキルである、請求項１から７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項9】
Ｒ３が、メチル、エチル、プロピルおよびブチルからなる群から選択される、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項10】
Ｌが、式：－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－ＣＨ２ＣＨ２－
のリンカーであり、ここで、ｎは、０、１、２、３、４、および５からなる群からの整数である、請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項11】
ｎが、３である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項12】
式（Ｉａ）の化合物：【化2】
Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択され、
Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーであり、
Ｍは、放射性核種である）、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項13】
Ａが、ＣＯ２Ｒ１である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項14】
Ｂが、ＣＯ２Ｒ２である、請求項１２または１３に記載の化合物。
【請求項15】
Ｒ１が、Ｈである、請求項１２から１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項16】
Ｒ２が、Ｈである、請求項１２から１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項17】
各Ｒａが、Ｈである、請求項１２から１６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項18】
各Ｒｂが、Ｈである、請求項１２から１７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項19】
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ１２アルキルである、請求項１２から１８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項20】
Ｒ３が、メチル、エチル、プロピルおよびブチルからなる群から選択される、請求項１２から１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項21】
Ｌが、式：－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－ＣＨ２ＣＨ２－
のリンカーであり、ここで、ｎは、０、１、２、３、４、および５からなる群からの整数である、請求項１２から２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項22】
ｎが、３である、請求項２１に記載の化合物。
【請求項23】
請求項１２から２２のいずれか一項に記載の化合物であって、前記放射性核種が、アクチニウム－２２５、ルテチウム－１７７、ジルコニウム－８９、テルビウム－１４９、テルビウム－１５２、テルビウム－１５５、テルビウム－１６１、ラジウム－２２３、ビスマス－２１２、インジウム－１１１、イットリウム－８６、イットリウム－８９、イットリウム－９０、および鉛－２１２からなる群から選択される、化合物。
【請求項24】
Ｍが、アクチニウム－２２５である、請求項１２から２３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項25】
式（Ｉｂ）の化合物：【化3】
Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択され、
Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
Ｒ１、およびＲ２は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
Ｒ４は、モノクローナル抗体であり、
各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーであり、
Ｍは、放射性核種である）、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項26】
Ａが、ＣＯ２Ｒ１である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項27】
Ｂが、ＣＯ２Ｒ２である、請求項２５または２６に記載の化合物。
【請求項28】
Ｒ１が、Ｈである、請求項２５から２７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項29】
Ｒ２が、Ｈである、請求項２５から２８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項30】
各Ｒａが、Ｈである、請求項２５から２９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項31】
各Ｒｂが、Ｈである、請求項２５から３０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項32】
Ｌが、式：－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－ＣＨ２ＣＨ２－
のリンカーであり、ここで、ｎは、０、１、２、３、４、および５からなる群からの整数である、請求項２５から３１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項33】
ｎが、３である、請求項３２に記載の化合物。
【請求項34】
請求項２５から３３のいずれか一項に記載の化合物であって、前記放射性核種が、アクチニウム－２２５、ルテチウム－１７７、ジルコニウム－８９、テルビウム－１４９、テルビウム－１５２、テルビウム－１５５、テルビウム－１６１、ラジウム－２２３、ビスマス－２１２、インジウム－１１１、イットリウム－８６、イットリウム－８９、イットリウム－９０、および鉛－２１２からなる群から選択される、化合物。
【請求項35】
Ｍが、アクチニウム－２２５である、請求項２５から３４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項36】
請求項２５から３５のいずれか一項に記載の化合物であって、前記モノクローナル抗体が、ペンプリマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、オムブルタマブ、チソツマブ、レチファンリマブ、ウブリツキシマブ、アニフロルマブ、ロンカスツキシマブ、バルスチリマブ、ドスタルリマブ、オポルツズマブ、マルジェツキシマブ、ナキシタマブ、ベランタマブ、タファシタマブ、サシツズマブ、イサツキシマブ、トラスツズマブ（ハーセプチン）、ギレンツキシマブ、イファボツズマブ、デパツキシジマブ、エンホルツマブ、ポラツズマブ、エマパルマブ、セミプリマブ、モキセツモマブ、モガムリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ、オララツマブ、ダラツムマブ、エロツズマブ、ネシツムマブ、ジヌツキシマブ、ニボルマブ、ブリナツモマブ、ブリナツモマブ、ラムシルマブ、オビヌツズマブ、アド－トラスツズマブ、ペルツズマブ、ブレンツキシマブ、イピリムマブ、オファツムマブ、カツマキソマブ、パニツムマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、イブリツモマブ、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、エドレコロマブ、ニモツズマブ、プロルゴリマブ、およびセツキシマブからなる群から選択される、化合物。
【請求項37】
請求項２５から３６のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項38】
対象を処置する方法であって、有効量の請求項２５から３６のいずれか一項に記載の化合物を対象に投与する工程を含む、方法。
【請求項39】
前記対象が、がんを有する、請求項３８に記載の方法。
【請求項40】
式（Ｉ）の化合物：（式中、
【化4】
Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーである）、
またはその薬学的に許容される塩を合成するための方法であって、
（ａ）式（１０）の化合物：
【化5】
Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択される）を提供する工程、
（ｂ）式（１０）の化合物を、式（１１）の化合物：
【化6】
Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーである）と、
銅（Ｉ）触媒の存在下で反応させる工程
を含む、方法。
【請求項41】
Ａが、ＣＯ２Ｒ１である、請求項４０に記載の方法。
【請求項42】
Ｂが、ＣＯ２Ｒ２である、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項43】
Ｒ１が、Ｈである、請求項４０から４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項44】
Ｒ２が、Ｈである、請求項４０から４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項45】
各Ｒａが、Ｈである、請求項４０から４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項46】
各Ｒｂが、Ｈである、請求項４０から４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項47】
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ１２アルキルである、請求項４０から４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項48】
Ｒ３が、メチル、エチル、プロピルおよびブチルからなる群から選択される、請求項４０から４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項49】
Ｌが、式：－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－ＣＨ２ＣＨ２－
のリンカーであり、ここで、ｎは、０、１、２、３、４、および５からなる群からの整数である、請求項４０から４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項50】
ｎが、３である、請求項４９に記載の方法。
【請求項51】
工程（Ｂ）が、銅（Ｉ）配位子の存在下で行われる、請求項４０から５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項52】
請求項５１に記載の方法であって、前記銅（Ｉ）配位子が、ＴＢＴＡ、ＴＥＯＴＡ、ＴＨＰＴＡ、ＢＴＴＥＳ、ＢＴＴＡＡ、ＢＴＴＰ、ＢＴＴＰＳ、（ＢｉｍＨ）３、（Ｂｔｈ）３、ＢＰＳ、および４．４’－ジメチル－２，２’－ビピリミジンからなる群から選択される、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
[0001]本発明は、標的化放射線療法用途におけるリガンドとして使用され得る大員環含有化合物に関する。本発明はまた、これらの化合物のある特定の金属錯体およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【0002】
[0002]過去２００年の間、医学研究において著しい進歩が遂げられ、その結果、著しい数の疾患／状態に対する有効な医学的処置が開発されたことから、平均余命が劇的に延びている。残念なことに、ある特定の状態に対する改良された処置の提供における、この成功により、ヒトは今や、典型的には非常にゆっくり発症する状態または「高齢者」の疾患であることから以前は比較的まれであった他の状態を発症し、それに罹患するのに十分に長生きすることとなった。
【0003】
[0003]例えば、がんは、オーストラリアにおける疾病負担の最も大きな要因（１６％）であり、世界で２番目に多い死亡原因であると推定され、世界保健機関によれば、２０２０年に推定１０００万人ががんで死亡したが、この数は、開発途上国における潜在的な過少報告に起因して、実際の総数よりも著しく少ない可能性が高い。それにもかかわらず、２０２０年に、１８０万人が肺がんで死亡し、９３５，０００人が結腸直腸がんで死亡し、８３０，０００人が肝臓がんで死亡し、７６９，０００人が胃がんで死亡し、６８５，０００人が乳がんで死亡したと推定され、問題の大きさを強調している。したがって、がんの経済的影響は、重大であり、かつ増加している。がんに関連する世界の年間経済コストは、１．２兆米ドルを超過すると推定されるが、正確なコストは定量化することが難しい。この数字は、平均余命が延びるにつれて、またライフスタイル、食事および／または環境因子が経時的に変化するにつれて、増えると予想される。
【0004】
[0004]がんは、身体のいずれかの部分（ｐｏｒｔ）に影響を及ぼし得る疾患の大きな群を表すために使用されるやや一般的な用語である。ほぼすべてのがんに共通する特徴は、正常な境界を越えて成長し、次いで、身体の他の部分に侵入し得る異常細胞の身体による急速な産生である。したがって、がんは、身体の他の部位に侵入し、広がり得る、細胞の無制御な増殖と表され得る。がんの原因は、一般に、環境または遺伝因子にあると考えられる。１００を超える異なるタイプのがんが知られており、より多くの新たなタイプが毎年特徴付けられる。
【0005】
[0005]がん細胞は、いくつかの異なる形態で存在し得る。例えば、これらは、がん細胞が一緒にまとまった固形腫瘍として、または白血病のように分散して存在し得る。がん細胞は、際限なく分裂し、最終的に、近くの細胞を押しのけ、身体の他の部分に広がることから、「悪性」と呼ばれることが多い。がん細胞がある器官から別の器官にまたは身体のある部分から別の部分に広がる傾向は、がん細胞を、過成長するが他の器官または身体の他の部分に広がらない良性腫瘍細胞と区別する。悪性がん細胞は、最終的に、血流またはリンパ系を介して転移し、身体の他の部分に広がり、そこで、増殖し、新たな腫瘍を形成し得る。この種の腫瘍進行により、がんは死に至る疾患になる。
【0006】
[0006]がんの診断および処置が大幅に改良されてきたが、それでもなお、毎年多くの人ががんで死亡する。したがって、がん患者を処置するために使用されてきたいくつかの処置が開発され、さらなる改良されたがん処置を開発するための持続的な努力がなされている。
【0007】
[0007]関心が高まっている一領域は、がんの処置における放射線療法の使用である。放射線療法は、高い線量（ｄｏｅｓ）で、放射線ががん細胞を殺滅する、または放射線ががん細胞のＤＮＡを損傷する結果としてその成長を減速させるという観察に基づく。がん細胞は、他の細胞と同様に、ＤＮＡが修復できないほど損傷を受けると、分裂を停止し、死滅する。細胞死に続いて、細胞は破壊され、身体から除去される。
【0008】
[0008]放射線療法は、典型的には、２つの主要なタイプ、すなわち、（１）外部ビーム放射線療法および（２）内部放射線療法に分けられ、いずれの場合も、使用される放射線療法のタイプは、患者に特有のいくつかの因子に依存する。
【0009】
[0009]外部ビーム放射線療法は、患者におけるがんに放射線を当てる機械の使用を伴う。このタイプの放射線療法は、身体の特定の部分を処置することを目的とし、その結果、全身ではなくがんがある領域のみが放射線に曝される。このタイプの療法は、体内の深部にある腫瘍の場合に非常に奏功し得るが、体内のがん細胞を標的とすることから、一部の健康な細胞が放射線に曝露されることは必然である。
【0010】
[0010]内部放射線療法は、腫瘍の部位に放射性物質を播種することまたはがんの部位を「標的とする」化学療法剤を使用することのいずれかを含む。これらの標的化手法においては、放射性核種の配位子が、典型的には、処置されるべき特定のがんを標的とする抗体とコンジュゲート化される。例えば、軟部組織転移の処置のために標的化アルファ粒子療法が開発された。これらの療法においては、致死性のアルファ粒子を放射する放射性核種が、キレーターを使用して、腫瘍を標的とするベクターとコンジュゲート化される。この療法は、細胞毒性レベルのアルファ放射線の送達が、がん細胞（ｃａｎｃｅｒ ｃａｌｌｓ）に選択的に送達されることを可能にする。
【0011】
[0011]結果として、アルファ粒子を放射する放射性核種に結合するために使用され得、ひいては、がんを標的とする部分を含むようにさらに加工され得るコンジュゲートの開発に対して大きな研究上の関心が寄せられてきた。いくつかの潜在的コンジュゲートが開発された。
【0012】
[0012]現在用いられる最良のコンジュゲートの１種は、Ｈ４ＤＯＴＡ（１）である。
【0013】
【化1】
【0014】
[0013]このコンジュゲートは、比較的入手しやすいが、イオン性金属イオンが増加するにつれてＨ４ＤＯＴＡの錯体の熱力学的安定性が低下するという観察に悩まされており、その結果、周期表における最も大きなプラス３（三価）イオンであるＡｃ３＋などのすべての金属錯体に理想的に適しているとは限らない。加えて、この配位子の放射性標識反応速度は、一部の放射性核種（例えばＡｃ３＋）では比較的ゆっくりであり、それにより、短い標識時間が必要とされる場合は高温での標識が必要になる。
【0015】
[0014]結果として、代替的コンジュゲートの開発を対象とするいくつかの研究がなされてきた。開発された１種の代替的コンジュゲートは、Ｎ，Ｎ’－ビス［（６－カルボキシ－２－ピリジル）メチル］－４，１３－ジアザ－１８－クラウン－６（２）であり、これは、口語的表現ではＨ２ｍａｃｒｏｐａとして知られている。
【0016】
【化2】
【0017】
[0015]開発された別のコンジュゲートは、Ｈ２ｍａｃｒｏｐａの類似体である。すなわち、Ｈ２ｍａｃｒｏｐａ－ＮＣＳ（３）：
【0018】
【化3】
【0019】
である。
[0016]これらのコンジュゲートは、高温にする必要なく、より良好に放射性標識されることが可能であったが、コンジュゲートの凝集が起こることが観察されたことから、問題がないわけではなかった。
[0016]これらのコンジュゲートは、高温にする必要なく、より良好に放射性標識されることが可能であったが、コンジュゲートの凝集が起こることが観察されたことから、問題がないわけではなかった。
【0020】
[0017]したがって、標的化療法において放射性核種コンジュゲートとして使用できるさらなる化合物の開発に大きな関心が寄せられている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0021】
[0018]本出願人らは、潜在的放射性核種コンジュゲートとして使用でき、したがって、標的化療法において利用され得る化合物の開発を目的とする研究を実行した。
【課題を解決するための手段】
【0022】
[0019]これらの研究の結果として、本出願人らは、放射性核種のためのコンジュゲートとしての大きな潜在性を示す化合物を同定した。
[0020]したがって、一実施形態では、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
[0020]したがって、一実施形態では、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【0023】
【化4】
【0024】
[0021]（式中、
[0022]Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択され、
[0023]Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
[0024]Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
[0025]各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0026]各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0027]Ｌは、ノルマル鎖（ｎｏｒｍａｌ ｃｈａｉｎ）中に１から２０個の原子を有するリンカーである）、
[0028]またはその薬学的に許容される塩を提供する。
[0022]Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択され、
[0023]Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
[0024]Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
[0025]各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0026]各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0027]Ｌは、ノルマル鎖（ｎｏｒｍａｌ ｃｈａｉｎ）中に１から２０個の原子を有するリンカーである）、
[0028]またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0025】
[0029]本発明の化合物は、放射性核種と金属錯体を形成する能力を有し、ひいては、標的化療法において使用され得ることが見出された。
[0030]またなおさらなる態様では、本発明は、式（Ｉａ）の化合物：
[0030]またなおさらなる態様では、本発明は、式（Ｉａ）の化合物：
【0026】
【化5】
【0027】
[0031]（式中、
[0032]Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択され、
[0033]Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
[0034]Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
[0035]各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0036]各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0037]Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーであり、
[0038]Ｍは、放射性核種である）、
[0039]またはその薬学的に許容される塩を提供する。
[0032]Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択され、
[0033]Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
[0034]Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
[0035]各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0036]各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0037]Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーであり、
[0038]Ｍは、放射性核種である）、
[0039]またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0028】
[0040]本明細書に記載された式（Ｉ）または（Ｉａ）の化合物は、抗体と反応して、ターゲティングコンジュゲートを形成する能力を有する。したがって、またなおさらなる態様では、本発明は、式（Ｉｂ）の化合物：
【0029】
【化6】
【0030】
[0041]（式中、
[0042]Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択され、
[0043]Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
[0044]Ｒ１、およびＲ２は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
[0045]Ｒ４は、モノクローナル抗体であり、
[0046]各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0047]各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0048]Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーであり、
[0049]Ｍは、放射性核種である）、
[0050]またはその薬学的に許容される塩を提供する。
[0042]Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択され、
[0043]Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
[0044]Ｒ１、およびＲ２は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
[0045]Ｒ４は、モノクローナル抗体であり、
[0046]各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0047]各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0048]Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーであり、
[0049]Ｍは、放射性核種である）、
[0050]またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【0031】
[0051]またなおさらなる態様では、本発明は、上記の式（Ｉ）の化合物を合成するための方法であって、
[0052]（ａ）式（１０）の化合物：
[0052]（ａ）式（１０）の化合物：
【0032】
【化7】
【0033】
[0053]（Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択され、
[0054]Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
[0055]Ｒ１、およびＲ２は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
[0056]各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0057]各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択される）を用意する工程、
[0058]（ｂ）式（１０）の化合物を、式（１１）の化合物
[0054]Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
[0055]Ｒ１、およびＲ２は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
[0056]各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0057]各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択される）を用意する工程、
[0058]（ｂ）式（１０）の化合物を、式（１１）の化合物
【0034】
【化8】
【0035】
[0059]（式中、Ｒ３は、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
[0060]Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーである）と、
[0061]銅（Ｉ）触媒の存在下で反応させる工程
を含む、方法を提供する。
[0060]Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーである）と、
[0061]銅（Ｉ）触媒の存在下で反応させる工程
を含む、方法を提供する。
【0036】
[0062]またなおさらなる態様では、本発明は、式（Ｉ）、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）による化合物と、薬学的に許容される希釈剤、賦形剤または担体とを含む、医薬組成物を提供する。
【0037】
[0063]またなおさらなる態様では、本発明は、対象を処置する方法であって、治療有効量の式（Ｉｂ）の化合物を対象に投与する工程を含む、方法を提供する。ある特定の実施形態では、対象は、がんに罹患している。
【図面の簡単な説明】
【0038】
【図1】[0064]０．４Ｍクエン酸ナトリウムｐＨ４＋１０％メタノールを使用した遊離Ａｃ－２２５のＴＬＣ分析（原点は１５ｍｍ、溶媒先端は８０ｍｍにある；遊離Ａｃ－２２５は、溶媒先端：Ｒｆ＝０．８～１．０にある）を示す図である。
【図2】[0065]５０ｍＭクエン酸ｐＨ５を使用した遊離Ａｃ－２２５のｉＴＬＣ分析（原点は１５ｍｍ、溶媒先端は８０ｍｍにある；遊離Ａｃ－２２５は溶媒先端：Ｒｆ＝０．８～１．０にある）を示す図である。
【図3】[0066]０．４Ｍクエン酸ナトリウムｐＨ４＋１０％メタノールを使用した１０－３Ｍのキレーター濃度での粗製の［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａのＴＬＣ分析（原点は１０ｍｍ、溶媒先端は８０ｍｍにある；［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａは、原点：Ｒｆ＝０に留まる；遊離Ａｃ－２２５は、溶媒先端：Ｒｆ＝０．８～１．０にある）を示す図である。
【図4】[0067]別段の注記がない限り、周囲温度で２時間インキュベーションした、異なるキレーター濃度での様々なＡｃ－２２５標識キレーターの放射化学的収率の概要を示す図である。放射化学的収率は、０．４Ｍクエン酸ナトリウムｐＨ４＋１０％メタノールを使用した粗反応混合物のＴＬＣ分析によって決定した。
【図5】[0068]周囲温度でインキュベーションした、経時的な異なるキレーター濃度での［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３ＳｑＯＥｔの放射化学的収率の概要を示す図である。放射化学的収率は、０．４Ｍクエン酸ナトリウムｐＨ４＋１０％メタノールを使用した粗反応混合物のＴＬＣ分析によって決定した。
【図6】[0069]９０℃でインキュベーションした、経時的な異なるキレーター濃度での［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－メチルテトラジンの放射化学的収率の概要を示す図である。放射化学的収率は、０．４Ｍクエン酸ナトリウムｐＨ４＋１０％メタノールを使用した粗反応混合物のＴＬＣ分析によって決定した。
【図7A】[0070]周囲温度で１５分間インキュベーションした、１０－６Ｍの抗体濃度での（ａ）［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１および（ｂ）［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１のｉＴＬＣ分析（５０ｍＭクエン酸ｐＨ５；原点は１０ｍｍ、溶媒先端は８０ｍｍにある；［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体は、原点：Ｒｆ＝０に留まる；遊離Ａｃ－２２５は、溶媒先端：Ｒｆ＝０．８～１．０にある）を示す図である。
【図7B】周囲温度で１５分間インキュベーションした、１０－６Ｍの抗体濃度での（ａ）［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１および（ｂ）［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１のｉＴＬＣ分析（５０ｍＭクエン酸ｐＨ５；原点は１０ｍｍ、溶媒先端は８０ｍｍにある；［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体は、原点：Ｒｆ＝０に留まる；遊離Ａｃ－２２５は、溶媒先端：Ｒｆ＝０．８～１．０にある）を示す図である。
【図8】[0071]Ｈ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－イムノコンジュゲートのＳＥ－ＨＰＬＣクロマトグラム（ＵＶ２８０）を示す図である。
【図9】[0072]［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－イムノコンジュゲートのＳＥ－ＨＰＬＣクロマトグラム（ＵＶ２８０および放射線）を示す図である。
【図10】[0073]異なるキレーター－抗体比での［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－および［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－ｄｈＰｚＰＥＧ４－コンジュゲート化モノクローナル抗体の血清安定性研究を示す図であって、図１０Ａは、ｉＴＬＣ（５０ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ５）を使用して決定した放射化学的純度を示す図であり、図１０Ｂは、異なるキレーター－抗体比での［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－および［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－ｄｈＰｚＰＥＧ４－コンジュゲート化モノクローナル抗体の血清安定性研究を示す図であって、ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１およびＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１についてそれぞれＵ８７ＭＧ．ｄｅ２－７およびＵ２５１細胞を用いて決定した免疫反応性を示す図である。
【図11A】[0074]変動する量の［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１（０．２５～１．０μｇ／９．２５～３７．０ｋＢｑ）またはビヒクルで処置したＵ２５１マウス異種移植片（ｎ＝５）の（ａ）腫瘍成長曲線および（ｂ）カプラン・マイヤー生存率曲線を示す図である。
【図11B】変動する量の［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１（０．２５～１．０μｇ／９．２５～３７．０ｋＢｑ）またはビヒクルで処置したＵ２５１マウス異種移植片（ｎ＝５）の（ａ）腫瘍成長曲線および（ｂ）カプラン・マイヤー生存率曲線を示す図である。
【図12A】[0075]変動する量の［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１（０．２５～１．０μｇ／９．２５～３７．０ｋＢｑ）またはビヒクルで処置したＵ８７ＭＧ．ｄｅ２－７マウス異種移植片（ｎ＝５）の（ａ）腫瘍成長曲線および（ｂ）カプラン・マイヤー生存率曲線を示す図である。
【図12B】変動する量の［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１（０．２５～１．０μｇ／９．２５～３７．０ｋＢｑ）またはビヒクルで処置したＵ８７ＭＧ．ｄｅ２－７マウス異種移植片（ｎ＝５）の（ａ）腫瘍成長曲線および（ｂ）カプラン・マイヤー生存率曲線を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【0039】
[0076]本明細書では、当業者に周知であるいくつかの用語が使用される。それにもかかわらず、明確性のために、いくつかの用語が定義される。
[0077]下記のいくつかの置換基の定義において、「基は、末端基または架橋基であり得る」と記述される。これは、この用語の使用が、基が分子の他の２つの部分の間のリンカーである状況およびそれが末端部分である状況を包含することを意図していることを表すことを意図したものである。アルキルという用語を例として使用すると、一部の刊行物は、架橋基に「アルキレン」という用語を使用し、したがって、これらの他の刊行物では、「アルキル」という用語（末端基）と「アルキレン」という用語（架橋基）との間には区別がある。本出願では、そのような区別はされず、ほとんどの基は、架橋基または末端基のいずれかであり得る。
[0077]下記のいくつかの置換基の定義において、「基は、末端基または架橋基であり得る」と記述される。これは、この用語の使用が、基が分子の他の２つの部分の間のリンカーである状況およびそれが末端部分である状況を包含することを意図していることを表すことを意図したものである。アルキルという用語を例として使用すると、一部の刊行物は、架橋基に「アルキレン」という用語を使用し、したがって、これらの他の刊行物では、「アルキル」という用語（末端基）と「アルキレン」という用語（架橋基）との間には区別がある。本出願では、そのような区別はされず、ほとんどの基は、架橋基または末端基のいずれかであり得る。
【0040】
[0078]基または基の一部としての「アルキル」は、別段の注記がない限り、直鎖状または分枝状の脂肪族炭化水素基、好ましくはＣ１～Ｃ１２アルキル、より好ましくはＣ１～Ｃ１０アルキル、最も好ましくはＣ１～Ｃ６を指す。好適な直鎖状および分枝状のＣ１～Ｃ６アルキル置換基の例は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、２－プロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔ－ブチル、ヘキシルなどを含む。基は、末端基または架橋基であり得る。
【0041】
[0079]「ノルマル鎖」という用語は、連結部分の２つの端部をつなぐ直鎖を指す。
[0080]「薬学的に許容される塩」という用語は、上記で特定された化合物の所望の生物学的活性を保持し、薬学的に許容される酸付加塩および塩基付加塩を含む塩を指す。式（Ｉ）の化合物の好適な薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸からまたは有機酸から調製され得る。そのような無機酸の例は、塩酸、硫酸、およびリン酸である。適切な有機酸は、脂肪族、脂環式、芳香族、複素環式のカルボン酸およびスルホン酸クラスの有機酸から選択されてもよく、その例は、ギ酸、酢酸、プロパン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、アルキルスルホン酸、アリールスルホン酸である。同様に、塩基付加塩は、有機または無機塩基を使用して、当技術分野で周知の様式により調製され得る。好適な有機塩基の例は、単純なアミン、例えばメチルアミン、エチルアミン、トリエチルアミンなどを含む。好適な無機塩基の例は、ＮａＯＨ、ＫＯＨなどを含む。薬学的に許容される塩に関する追加の情報は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ １９９５に見出され得る。固体である薬剤の場合、本発明の化合物、薬剤および塩は、異なる結晶または多形形態で存在してもよく、そのすべてが、本発明および規定された式の範囲内にあることを意図していることが当業者により理解される。
[0080]「薬学的に許容される塩」という用語は、上記で特定された化合物の所望の生物学的活性を保持し、薬学的に許容される酸付加塩および塩基付加塩を含む塩を指す。式（Ｉ）の化合物の好適な薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸からまたは有機酸から調製され得る。そのような無機酸の例は、塩酸、硫酸、およびリン酸である。適切な有機酸は、脂肪族、脂環式、芳香族、複素環式のカルボン酸およびスルホン酸クラスの有機酸から選択されてもよく、その例は、ギ酸、酢酸、プロパン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、アルキルスルホン酸、アリールスルホン酸である。同様に、塩基付加塩は、有機または無機塩基を使用して、当技術分野で周知の様式により調製され得る。好適な有機塩基の例は、単純なアミン、例えばメチルアミン、エチルアミン、トリエチルアミンなどを含む。好適な無機塩基の例は、ＮａＯＨ、ＫＯＨなどを含む。薬学的に許容される塩に関する追加の情報は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ １９９５に見出され得る。固体である薬剤の場合、本発明の化合物、薬剤および塩は、異なる結晶または多形形態で存在してもよく、そのすべてが、本発明および規定された式の範囲内にあることを意図していることが当業者により理解される。
【0042】
[0081]「治療有効量」または「有効量」という用語は、有益なまたは所望の臨床結果をもたらすのに十分な量である。有効量は、１回または複数回の投与で投与され得る。有効量は、典型的には、病状を和らげる、改善する、安定化する、逆転させる、減速させるまたはその進行を遅らせるのに十分である。
【0043】
[0082]上述のとおり、本発明の化合物は、式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）を有する。特定の有用性を保有する構造的に関連する化合物の任意の群と同様に、式（Ｉ）、（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物の可変要素のある特定の実施形態は、その最終用途において特に有用である。
【0044】
[0083]本発明の化合物において、Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択される。一部の実施形態では、Ａは、ＣＯ２Ｒ１である。一部の実施形態では、Ａは、ＰＯ３Ｒ１である。
【0045】
[0084]本発明の化合物において、Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｂは、ＣＯ２Ｒ２である。一部の実施形態では、Ｂは、ＰＯ３Ｒ２である。
【0046】
[0085]本発明の化合物において、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択される。
[0086]一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｈである。一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ１２アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、メチル、エチル、イソプロピル、プロピル、２－エチル－プロピル、３，３－ジメチル－プロピル、ブチル、イソブチル、３，３－ジメチル－ブチル、２－エチル－ブチル、ペンチル、２－メチル、ペンチル、およびヘキシルからなる群から選択される。
[0086]一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｈである。一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ１２アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、メチル、エチル、イソプロピル、プロピル、２－エチル－プロピル、３，３－ジメチル－プロピル、ブチル、イソブチル、３，３－ジメチル－ブチル、２－エチル－ブチル、ペンチル、２－メチル、ペンチル、およびヘキシルからなる群から選択される。
【0047】
[0087]一部の実施形態では、Ｒ２は、Ｈである。一部の実施形態では、Ｒ２は、Ｃ１～Ｃ１２アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ２は、メチル、エチル、イソプロピル、プロピル、２－エチル－プロピル、３，３－ジメチル－プロピル、ブチル、イソブチル、３，３－ジメチル－ブチル、２－エチル－ブチル、ペンチル、２－メチル、ペンチル、およびヘキシルからなる群から選択される。
【0048】
[0088]本発明の化合物の一部の実施形態では、Ａは、ＣＯ２Ｒ１であり、Ｂは、ＣＯ２Ｒ２であり、Ｒ１は、Ｈであり、Ｒ２は、Ｈである。これは、それぞれ式（ＩＩ）、（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）の化合物を与える：
【0049】
【化9】
【0050】
[0089]（式中、Ｒａ、Ｒｂ、ＬおよびＲ３は、上記で定義されたとおりである）。
【0051】
【化10】
【0052】
[0090]（式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｌ Ｒ３およびＭは、上記で定義されたとおりである）。
【0053】
【化11】
【0054】
[0091]（式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｌ Ｒ４およびＭは、上記で定義されたとおりである）。
[0092]本発明の化合物において、各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択される。一部の実施形態では、各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、およびＣＮから選択される。一部の実施形態では、各Ｒａは、独立して、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、およびＯＨから選択される。一部の実施形態では、各Ｒａは、Ｈである。
[0092]本発明の化合物において、各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択される。一部の実施形態では、各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、およびＣＮから選択される。一部の実施形態では、各Ｒａは、独立して、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、およびＯＨから選択される。一部の実施形態では、各Ｒａは、Ｈである。
【0055】
[0093]本発明の化合物において、各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択される。一部の実施形態では、各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、およびＣＮから選択される。一部の実施形態では、各Ｒｂは、独立して、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、およびＯＨから選択される。一部の実施形態では、各Ｒｂは、Ｈである。
【0056】
[0094]本発明の化合物の一部の実施形態では、Ａは、ＣＯ２Ｒ１であり、Ｂは、ＣＯ２Ｒ２であり、Ｒ１は、Ｈであり、Ｒ２は、Ｈであり、各Ｒａは、Ｈであり、各Ｒｂは、Ｈである。これは、それぞれ式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）および（ＩＩＩｂ）の化合物を与える。
【0057】
【化12】
【0058】
[0095]（式中、ＬおよびＲ３は、上記で定義されたとおりである）。
【0059】
【化13】
【0060】
[0096]（式中、Ｌ Ｒ３およびＭは、上記で定義されたとおりである）。
【0061】
【化14】
【0062】
[0097]（式中、Ｌ、Ｒ４およびＭは、上記で定義されたとおりである）。
[0098]一部の実施形態では、Ｒ３は、Ｈである。一部の実施形態では、Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ１２アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ３は、メチル、エチル、イソプロピル、プロピル、２－エチル－プロピル、３，３－ジメチル－プロピル、ブチル、イソブチル、３，３－ジメチル－ブチル、２－エチル－ブチル、ペンチル、２－メチル、ペンチル、およびヘキシルからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｒ３は、メチルである。一部の実施形態では、Ｒ３は、エチルである。
[0098]一部の実施形態では、Ｒ３は、Ｈである。一部の実施形態では、Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ１２アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ３は、メチル、エチル、イソプロピル、プロピル、２－エチル－プロピル、３，３－ジメチル－プロピル、ブチル、イソブチル、３，３－ジメチル－ブチル、２－エチル－ブチル、ペンチル、２－メチル、ペンチル、およびヘキシルからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｒ３は、メチルである。一部の実施形態では、Ｒ３は、エチルである。
【0063】
[0099]Ｒ４部分を含有する本発明の化合物において、Ｒ４は、抗体である。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、Ｒ４は、ペンプリマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、オムブルタマブ、チソツマブ、レチファンリマブ、ウブリツキシマブ、アニフロルマブ、ロンカスツキシマブ、バルスチリマブ、ドスタルリマブ、オポルツズマブ、マルジェツキシマブ、ナキシタマブ、ベランタマブ、タファシタマブ、サシツズマブ、イサツキシマブ、トラスツズマブ（ハーセプチン）、ギレンツキシマブ、イファボツズマブ、デパツキシズマブ、エンホルツマブ、ポラツズマブ、エマパルマブ、セミプリマブ、モキセツモマブ、モガムリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ、オララツマブ、ダラツムマブ、エロツズマブ、ネシツムマブ、ジヌツキシマブ、ニボルマブ、ブリナツモマブ、ブリナツモマブ、ラムシルマブ、オビヌツズマブ、アド－トラスツズマブ、ペルツズマブ、ブレンツキシマブ、イピリムマブ、オファツムマブ、カツマキソマブ、パニツムマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、トシツモマブ－Ｉ１３１、イブリツモマブ、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、エドレコロマブ、ニモツズマブ、プロルゴリマブ、およびセツキシマブからなる群から選択される。
【0064】
[0100]一実施形態では、抗体は、ハーセプチンである。一実施形態では、抗体は、ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体は、ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗体は、アイソタイプ対照ＩｇＧ１である。
【0065】
[0101]本発明の化合物において、Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に２から１９個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に３から１８個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に４から１７個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に５から１６個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に６から１５個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に７から１４個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に８から１３個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に９から１２個の原子を有するリンカーである。
【0066】
[0102]一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に１個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に２個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に３個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に４個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に５個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に６個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に７個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に８個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に９個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に１０個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に１１個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に１２個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に１３個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に１４個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に１５個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に１６個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に１７個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に１８個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に１９個の原子を有するリンカーである。一部の実施形態では、Ｌは、ノルマル鎖中に２０個の原子を有するリンカーである。
【0067】
[0103]一部の実施形態では、Ｌは、式：
－（ＣＨ２）ｍ－
を有するリンカーであり、ここで、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９ １０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、および２０からなる群から選択される整数である。
－（ＣＨ２）ｍ－
を有するリンカーであり、ここで、ｍは、１、２、３、４、５、６、７、８、９ １０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、および２０からなる群から選択される整数である。
【0068】
[0104]一部の実施形態では、Ｌは、－（ＣＨ２）７－、－（ＣＨ２）８－、－（ＣＨ２）９－、－（ＣＨ２）１０－、－（ＣＨ２）１１－、－（ＣＨ２）１２－、－（ＣＨ２）１３－、－（ＣＨ２）１４－、および－（ＣＨ２）１５－からなる群から選択される。
【0069】
[0105]一部の実施形態では、Ｌは、式：
－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－ＣＨ２ＣＨ２－
[0106]のリンカーであり、ここで、ｎは、０、１、２、３、４、および５からなる群からの整数である。
－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－ＣＨ２ＣＨ２－
[0106]のリンカーであり、ここで、ｎは、０、１、２、３、４、および５からなる群からの整数である。
【0070】
[0107]一部の実施形態では、Ｌは、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）－ＣＨ２ＣＨ２－、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２ＣＨ２－、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３－ＣＨ２ＣＨ２－、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４－ＣＨ２ＣＨ２－および－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）５－ＣＨ２ＣＨ２－からなる群から選択される。
【0071】
[0108]一部の実施形態では、Ｌは、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）－ＣＨ２ＣＨ２－である。一部の実施形態では、Ｌは、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２－ＣＨ２ＣＨ２－である。一部の実施形態では、Ｌは、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３－ＣＨ２ＣＨ２－である。一部の実施形態では、Ｌは、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４－ＣＨ２ＣＨ２－である。一部の実施形態では、Ｌは、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）５－ＣＨ２ＣＨ－２である。
【0072】
[0109]特に好ましい実施形態では、Ｌは、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）３－ＣＨ２ＣＨ２－である。
[0110]本発明の大員環は、原理上、いくつかの金属に結合し得る。適用上、化合物は、放射線療法において使用され、したがって、Ｍは、放射性核種であることが好ましい。ある特定の実施形態では、Ｍは、アクチニウム－２２５、ルテチウム－１７７、ジルコニウム－８９、テルビウム－１４９、テルビウム－１５２、テルビウム－１５５、テルビウム－１６１、ラジウム－２２３、ビスマス－２１２、インジウム－１１１、イットリウム－８６、イットリウム－８９、イットリウム－９０、および鉛－２１２からなる群から選択される。
[0110]本発明の大員環は、原理上、いくつかの金属に結合し得る。適用上、化合物は、放射線療法において使用され、したがって、Ｍは、放射性核種であることが好ましい。ある特定の実施形態では、Ｍは、アクチニウム－２２５、ルテチウム－１７７、ジルコニウム－８９、テルビウム－１４９、テルビウム－１５２、テルビウム－１５５、テルビウム－１６１、ラジウム－２２３、ビスマス－２１２、インジウム－１１１、イットリウム－８６、イットリウム－８９、イットリウム－９０、および鉛－２１２からなる群から選択される。
【0073】
[0111]一部の実施形態では、Ｍは、アクチニウム－２２５である。一部の実施形態では、Ｍは、ルテチウム－１７７である。一部の実施形態では、Ｍは、ジルコニウム－８９である。一部の実施形態では、Ｍは、テルビウム－１４９である。一部の実施形態では、Ｍは、テルビウム－１５２である。一部の実施形態では、Ｍは、テルビウム－１５５である。一部の実施形態では、Ｍは、テルビウム－１６１である。一部の実施形態では、Ｍは、ラジウム－２２３である。一部の実施形態では、Ｍは、ビスマス－２１２である。一部の実施形態では、Ｍは、インジウム－１１１である。一部の実施形態では、Ｍは、イットリウム－８６である。一部の実施形態では、Ｍは、イットリウム－８９である。一部の実施形態では、Ｍは、イットリウム－９０である。一部の実施形態では、Ｍは、鉛－２１２である。
【0074】
[0112]特に好ましい実施形態では、Ｍは、アクチニウム－２２５である。
[0113]放射性核種Ｍを含有する本発明の化合物は、典型的には、金属を適切な式のコンジュゲートとともにインキュベーションすることにより形成される。インキュベーションは、任意の温度で行われ得るが、放射性核種の本発明の化合物との結合は、非常に急速であり、その結果、結合が室温で行われ得、それでもなお極めて急速であることが見出される。一旦結合すると、こうして形成された錯体は、非常に安定であることが見出される。
[0113]放射性核種Ｍを含有する本発明の化合物は、典型的には、金属を適切な式のコンジュゲートとともにインキュベーションすることにより形成される。インキュベーションは、任意の温度で行われ得るが、放射性核種の本発明の化合物との結合は、非常に急速であり、その結果、結合が室温で行われ得、それでもなお極めて急速であることが見出される。一旦結合すると、こうして形成された錯体は、非常に安定であることが見出される。
【0075】
[0114]原理上、金属は、抗体を含有する化合物とも錯体化され得るが、典型的には、抗体の添加前に放射性核種を化合物と錯体化することがより効率的であることが見出される。理論に拘泥することを望むものではないが、これは、抗体上の部位が金属に結合するために大員環と競合し得ることから、より効率的な錯体化を確実にすると思われる。したがって、抗体の添加前に錯体を放射性核種と反応させることが普通である。
【0076】
[0115]抗体を含有する化合物は、典型的には、式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩＩ）および（ＩＩＩａ）の化合物を抗体上のペンダントアミン基と反応させて、抗体を含有する化合物を形成することにより形成される。当業者により認識されるとおり、多くの抗体は、本発明の化合物上のスクアラミド部分との反応性に利用可能な複数のアミン残基を含有する。したがって、一部の実施形態では、各抗体は、２種以上の本発明の化合物とコンジュゲート化される。一部の実施形態では、各抗体は、２種の本発明の化合物とコンジュゲート化される。一部の実施形態では、各抗体は、３種の本発明の化合物とコンジュゲート化される。一部の実施形態では、各抗体は、４種の本発明の化合物とコンジュゲート化される。一部の実施形態では、各抗体は、５種の本発明の化合物とコンジュゲート化される。反応化学量論および一般反応条件の制御は、最終抗体コンジュゲートの形成を制御するために使用され得る。
【0077】
[0116]放射性核種（Ｍ）およびターゲティング抗体（Ｒ４）を含有する本発明の化合物は、がんの標的化放射線療法において使用される能力を有する。化合物上に抗体が存在する結果として、化合物は、がん細胞を標的とする（すなわち、それに選択的に結合する）。化合物ががん細胞に選択的に結合する結果として、放射性核種により生成される放射線は、がん細胞に近接して放出され、それにより、身体のその他の細胞ではなくがん細胞により大きな損傷を引き起こす。これは、放射性核種がアルファ粒子を放射する場合に特に有効であることが見出される。
【0078】
[0117]したがって、本発明の化合物は、がんの処置において有用な治療特性を有すると予想される。がんの例は、前立腺がん、乳がん、膵臓がん、結腸がん、非小細胞肺がん、肝細胞癌、肝内胆管癌、腎細胞癌、子宮内膜癌、食道癌、食道／食道胃接合部癌、骨肉腫、ウィルムス腫瘍、中皮腫、扁平上皮癌、多形性膠芽腫、黒色腫および卵巣癌を含む。
【0079】
[0118]本発明の化合物のヒトへの投与は、非経口投与のための認められた方式、例えば皮下、筋肉内、静脈内および皮内経路のいずれかによることができる。注射は、ボーラスまたは持続もしくは間欠注入によるものであり得る。活性化合物は、典型的には、薬学的に許容される担体または希釈剤中に、治療有効用量を患者に送達するのに十分な量で含まれる。
【0080】
[0119]本発明の化合物は、化合物を所望の標的細胞への結合に利用可能にする任意の形態または方式で投与され得る。製剤の調製の技術分野の当業者は、選択された化合物の特定の性質、処置されるべき状態、処置されるべき状態の病期および他の関連する事情に応じて、投与の適当な形態および方式を容易に選択することができる。さらなる情報については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（１９９５）を参照されたい。
【0081】
[0120]本発明の化合物は、単独で、または薬学的に許容される担体、希釈剤もしくは賦形剤と組み合わせた医薬組成物の形態で投与され得る。本発明の化合物は、それ自体有効であるが、典型的には、その薬学的に許容される塩の形態で製剤化および投与され、その理由は、これらの形態は、典型的には、より安定であり、より結晶化されやすく、溶解性が増加しているからである。
【0082】
[0121]しかしながら、化合物は、典型的には、所望の投与方式に応じて製剤化される医薬組成物の形態で使用される。したがって、一部の実施形態では、本発明は、本発明の化合物と、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。組成物は、当技術分野で周知の様式で調製される。
【0083】
[0122]非経口注射のための本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される滅菌水性または非水性溶液、分散液、懸濁液または乳濁液、および使用の直前に滅菌注射用溶液または分散液に再構成するための滅菌粉末を含む。好適な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例は、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物、植物油（例えばオリーブ油）、ならびに注射用有機エステル、例えばオレイン酸エチルを含む。適当な流動性は、例えば、コーティング材料、例えばレシチンの使用により、分散液の場合は必要とされる粒子サイズの維持により、および界面活性剤の使用により維持され得る。
【0084】
[0123]これらの組成物はまた、アジュバント、例えば保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤を含有し得る。微生物の作用の防止は、様々な抗菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含むことにより確実にされ得る。等張剤、例えば糖、塩化ナトリウムなどを含むことも望ましい場合がある。注射用医薬品形態の長期的吸収は、吸収を遅らせる作用物質、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含むことによりもたらされ得る。
【0085】
[0124]注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通した濾過により、または使用の直前に滅菌水もしくは他の滅菌注射用媒体に溶解もしくは分散され得る滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことにより滅菌され得る。
【0086】
[0125]投与される化合物の量は、好ましくは、状態を処置および軽減または緩和する。治療有効量は、担当診断医により、従来の技術を使用して、および類似の事情の下で得られた結果を観察することにより容易に決定され得る。治療有効量を決定する際には、動物の種、そのサイズ、年齢および全般的な健康状態、関与する具体的な状態、状態の重症度、処置に対する患者の応答、投与される特定の化合物、投与方式、投与される調製物のバイオアベイラビリティ、選択された投薬計画、他の薬物療法の使用ならびに他の関連する事情を含むがこれらに限定されない、いくつかの因子が考慮されるべきである。
【0087】
[0126]好ましい投薬量は、１日当たり体重１キログラム当たり約０．０１から３００ｍｇの範囲である。より好ましい投薬量は、１日当たり体重１キログラム当たり０．１から１００ｍｇ、より好ましくは１日当たり体重１キログラム当たり０．２から８０ｍｇ、なおより好ましくは１日当たり体重１キログラム当たり０．２から５０ｍｇの範囲内である。好適な用量は、１日当たり複数の部分用量で投与され得る。
本発明の化合物の合成
[0127]本発明の化合物は、公知の有機合成技術を使用して調製されてもよく、容易に利用可能である出発材料を使用して、当技術分野で利用可能な技術を用いて、下記の反応経路および合成スキームを含む多数の可能な合成経路のいずれかに従って合成され得る。実施形態の化合物の調製は、以下の実施例に詳細に記載されるが、当業者は、記載された化学反応を、様々な実施形態の他の薬剤を調製するために容易に適合させることができることを把握する。
本発明の化合物の合成
[0127]本発明の化合物は、公知の有機合成技術を使用して調製されてもよく、容易に利用可能である出発材料を使用して、当技術分野で利用可能な技術を用いて、下記の反応経路および合成スキームを含む多数の可能な合成経路のいずれかに従って合成され得る。実施形態の化合物の調製は、以下の実施例に詳細に記載されるが、当業者は、記載された化学反応を、様々な実施形態の他の薬剤を調製するために容易に適合させることができることを把握する。
【0088】
[0128]本発明の化合物を調製するための反応は、有機合成の技術分野の当業者により容易に選択され得る好適な溶媒中で行われ得る。好適な溶媒は、反応が行われる温度、例えば、溶媒の凍結温度から溶媒の沸騰温度までの範囲であり得る温度で、出発材料（反応物）、中間体、または生成物と実質的に非反応性であり得る。所与の反応は、１種の溶媒または２種以上の溶媒の混合物中で行われ得る。反応工程に応じて、特定の反応工程に好適な溶媒が当業者により選択され得る。
【0089】
[0129]本発明の化合物の調製は、様々な化学基の保護および脱保護を伴い得る。保護および脱保護の必要性、ならびに適切な保護基の選択は、当業者により容易に決定され得る。保護基の化学は、例えば、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）に見出され得、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0090】
[0130]反応は、当技術分野で公知の任意の好適な方法に従ってモニタリングされ得る。例えば、生成物の形成は、分光学的手段、例えば核磁気共鳴分光法（例えば、１Ｈもしくは１３Ｃ）、赤外分光法、分光光度法（例えば、紫外可視）、もしくは質量分析により、またはクロマトグラフィー、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）もしくは薄層クロマトグラフィーによりモニタリングされ得る。
【0091】
[0131]本明細書で使用される「周囲温度」、「室温」、および「ｒ．ｔ．」という表現は、当技術分野で理解され、一般に、反応が行われる部屋の温度付近である温度、例えば、反応温度を指し、例えば、約２０℃から約３０℃の温度を指す。
【0092】
[0132]またなおさらなる態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【0093】
【化15】
【0094】
[0133]（式中、
[0134]Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択され、
[0135]Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
[0136]Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
[0137]各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0138]各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0139]Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーである）、
[0140]またはその薬学的に許容される塩を合成するための方法であって、
[0141]
[0142]（ａ）式（ＩＩ）の化合物：
[0134]Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択され、
[0135]Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
[0136]Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
[0137]各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0138]各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0139]Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーである）、
[0140]またはその薬学的に許容される塩を合成するための方法であって、
[0141]
[0142]（ａ）式（ＩＩ）の化合物：
【0095】
【化16】
【0096】
[0143]（式中、Ａは、ＣＯ２Ｒ１、およびＰＯ３Ｒ１からなる群から選択され、
[0144]Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
[0145]Ｒ１、およびＲ２は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
[0146]各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0147]各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択される）を用意する工程、
[0148]（ｂ）式（ＩＩ）の化合物を、式（ＩＩＩ）の化合物：
[0144]Ｂは、ＣＯ２Ｒ２、およびＰＯ３Ｒ２からなる群から選択され、
[0145]Ｒ１、およびＲ２は、各々独立して、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
[0146]各Ｒａは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択され、
[0147]各Ｒｂは、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＨ、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＮＯ２、ＮＨ２、およびＣＮからなる群から選択される）を用意する工程、
[0148]（ｂ）式（ＩＩ）の化合物を、式（ＩＩＩ）の化合物：
【0097】
【化17】
【0098】
[0149]（式中、Ｒ３は、ＨおよびＣ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、
[0150]Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーである）と、
[0151]銅（Ｉ）触媒の存在下で反応させる工程
を含む、方法を提供する。
[0150]Ｌは、ノルマル鎖中に１から２０個の原子を有するリンカーである）と、
[0151]銅（Ｉ）触媒の存在下で反応させる工程
を含む、方法を提供する。
【0099】
[0152]反応は、任意の好適な溶媒中で行われ得る。好適な溶媒の例は、極性有機溶媒およびそれらの組合せを含む。使用され得る極性溶媒の例は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、アルコール（例えばメタノール、エタノール、プロパノールおよびｔ－ブタノール）、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフランおよびアセトニトリルを含む。一部の実施形態では、溶媒は、上記で論じられた極性有機溶媒と、水との組合せである。一部の実施形態では、極性有機溶媒対水の比は、１０：１から１：１である。一実施形態では、極性有機溶媒対水の比は、８：１から１：１である。一実施形態では、極性有機溶媒対水の比は、６：１から１：１である。一実施形態では、極性有機溶媒対水の比は、５：１から３：１である。一実施形態では、極性有機溶媒対水の比は、約４：１である。好ましい一実施形態では、溶媒は、４：１の体積比のＤＭＦ：水である。
【0100】
[0153]反応は、広範囲の温度にわたって行われ得る。一部の実施形態では、反応は、５℃から５０℃の温度で行われる。一実施形態では、反応は、１０℃から３０℃の温度で行われる。一実施形態では、反応は、１５℃から２５℃の温度で行われる。一実施形態では、反応は、２０℃から２５℃の温度で行われる。
【0101】
[0154]反応は、典型的には、出発材料の完全な反応を達成するのに十分な期間行われる。一部の実施形態では、反応は、１から２４時間実行される。一部の実施形態では、反応は、４から２０時間実行される。一部の実施形態では、反応は、８から１６時間実行される。一部の実施形態では、反応は、１０から１４時間実行される。
【0102】
[0155]上述のとおり、反応は、銅（Ｉ）触媒の存在下で行われる。好適な銅触媒の例は、銅（Ｉ）塩（ヨウ化物、臭化物、塩化物、酢酸塩）、銅（Ｉ）錯体：例えば［Ｃｕ（ＣＨ３ＣＮ）４］ＰＦ６および［Ｃｕ（ＣＨ３ＣＮ）４］ＢＦ４またはトリフレート対イオン、硫酸銅（ＩＩ）五水和物および酢酸銅（ＩＩ）を含む。一実施形態では、銅触媒は、硫酸銅の還元によりｉｎ ｓｉｔｕで発生させる。
【0103】
[0156]ある特定の実施形態では、反応は、銅（Ｉ）を溶液中で安定化するのに役立つ銅（Ｉ）配位子の存在下で行われ、この場合、銅（Ｉ）配位子は、ＴＢＴＡ、ＴＥＯＴＡ、ＴＨＰＴＡ、ＢＴＴＥＳ、ＢＴＴＡＡ、ＢＴＴＰ、ＢＴＴＰＳ、（ＢｉｍＨ）３、（Ｂｔｈ）３、ＢＰＳ、および４，４’－ジメチル；－２，２’－ビピリミジンからなる群から選択される。
【0104】
[0157]反応の完了に続いて、反応媒体を当技術分野で公知の様式で後処理し、得られた反応生成物を精製して、所望の最終生成物を得る。
[0158]本発明がこれから実施例によって例示されるが、実施例は、それらへの限定であると解釈されるべきではない。本明細書に記載された方法および合成プロトコルまたはその適切な変形もしくは修正を使用して、下記のもの以外の追加の化合物が調製され得る。
[0158]本発明がこれから実施例によって例示されるが、実施例は、それらへの限定であると解釈されるべきではない。本明細書に記載された方法および合成プロトコルまたはその適切な変形もしくは修正を使用して、下記のもの以外の追加の化合物が調製され得る。
【実施例】
【0105】
実験
材料および試薬
[0159]すべての溶媒および試薬は、標準的な商業的供給業者から購入し、受け取ったまま使用した。
機器
[0160]１Ｈ、１３Ｃ、ＣＯＳＹ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣはすべて、Ｖａｒｉａｎ ＦＴ ＮＭＲ５００のＦＴ－ＮＭＲ４００分光計（Ｖａｒｉａｎ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、米国）を使用して記録した。すべての１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、４００ＭＨｚまたは５００ＭＨｚで取得し、１３Ｃスペクトルは、１０１ＭＨｚまたは１２６ＭＨｚで取得した。報告されたピークはすべて、２５℃で１００万分の１のオーダーで溶媒ピークを基準とした。
材料および試薬
[0159]すべての溶媒および試薬は、標準的な商業的供給業者から購入し、受け取ったまま使用した。
機器
[0160]１Ｈ、１３Ｃ、ＣＯＳＹ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣはすべて、Ｖａｒｉａｎ ＦＴ ＮＭＲ５００のＦＴ－ＮＭＲ４００分光計（Ｖａｒｉａｎ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、米国）を使用して記録した。すべての１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、４００ＭＨｚまたは５００ＭＨｚで取得し、１３Ｃスペクトルは、１０１ＭＨｚまたは１２６ＭＨｚで取得した。報告されたピークはすべて、２５℃で１００万分の１のオーダーで溶媒ピークを基準とした。
【0106】
[0161]ＥＳＩ－ＱＴＯＦ ＭＳは、Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｐｌｕｓ Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ質量分析計（Ｅｘａｃｔｉｖｅシリーズ、２．８ Ｂｕｉｌｄ ２６８８０１、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）において収集した。分析は、Ｘｃａｌｉｂｕｒ ４．０．２７．１０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して実施した。
【0107】
[0162]タンパク質サンプルは、Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ ＬＣシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）に連結されたＡｇｉｌｅｎｔ ６２２０ ＥＳＩ－ＴＯＦ ＬＣ／ＭＳ質量分析計において分析した。すべてのデータは、デュアルスプレーエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）源によって取得し、基準質量補正した。取得は、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｍａｓｓ Ｈｕｎｔｅｒ ＡｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎソフトウェアバージョンＢ．０２．０１（Ｂ２１１６．３０）を使用して実施した。イオン化モード：エレクトロスプレーイオン化；乾燥ガス流量：７Ｌ／分；ネブライザー：２４１３１７Ｐａ（３５ｐｓｉ）；乾燥ガス温度：３２５℃；キャピラリー電圧（Ｖｃａｐ）：４０００Ｖ；フラグメンター：３００Ｖ；スキマー：６５Ｖ；ＯＣＴ ＲＦＶ：２５０Ｖ；取得スキャン範囲：３００～３２００ｍ／ｚ 内部基準イオン：陽イオンモード＝ｍ／ｚ＝１２１．０５０８７３および９２２．００９７９８。タンパク質の脱塩およびクロマトグラフィー分離は、廃棄につながれる、５％（ｖ／ｖ）アセトニトリルを使用する、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ Ｃ１８ ２．１×７５ｍｍ、５μｍカラムを使用して実施した（０～５分）。サンプルの脱塩後、０．２５ｍＬ／分で８分にわたる（５％（ｖ／ｖ）から１００％（ｖ／ｖ））アセトニトリル／０．１％ギ酸を用いた後続の勾配溶離のために流れを再びＥＳＩ源につないだ。分析は、Ｍａｓｓ ＨｕｎｔｅｒバージョンＢ．０６．００を最大エントロピータンパク質デコンボリューションアルゴリズムを使用するＢｉｏＣｏｎｆｉｒｍソフトウェアとともに使用し；質量ステップ１Ｄａ；ベースライン係数３．００；不確定に設定したピーク幅を使用して実施した。
【0108】
[0163]非放射性分析用ＨＰＬＣは、Ａｌｌｔｅｃｈ Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＢＤＳ－Ｃ１８（４．６×１５０ｎｍ、５μｍ、カラムＡ）またはＰｈｅｎｏｍｏｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）カラム（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、５μｍ、カラムＢ）およびＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＳｅｃｕｒｉｔｙＧｕａｒｄ（商標）Ｃ１８ガードカートリッジ（４ｍｍ×３０ｍｍ）を装着したＡｇｉｌｅｎｔ １２００シリーズＨＰＬＣシステムにおいて、１ｍＬ／分の流速；システムＡ：バッファーＡ＝Ｈ２Ｏ中０．１％ＴＦＡおよびバッファーＢ＝アセトニトリル中０．１％ＴＦＡの勾配溶離（２５分にわたりＡ中０から１００％Ｂ）ならびにλ２２０、２５４、２８０ｎｍおよび３５０ｎｍでのＵＶ検出で実施した。
【0109】
[0164]精製工程には、複数のクロマトグラフィーシステムを使用した。８ｍＬ／分の流速でのセミ分取ＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｌｕｎａｒ Ｃ１８カラム、１００Å ２１．２×２５０ｍｍ、５μｍにおけるＡｇｉｌｅｎｔ １２００シリーズＨＰＬＣシステム）。システムＢ：バッファーＡ＝Ｈ２Ｏ中０．１％ＴＦＡおよびバッファーＢ＝アセトニトリル中０．１％ＴＦＡの勾配溶離（３０分でＡ中０から４０％Ｂ、３５分でＡ中４０～１００％Ｂ、４０分で１００％Ｂ）ならびに２１４および２５４ｎｍでの検出。システムＣ：以下の勾配（４０分でＡ中０から１００％Ｂ、４４分で１００％Ｂ、４５分でＡ中１００から０％Ｂ）を用いたシステムＢ。
【0110】
[0165]放射能は、ｃａｌ＃１０８に設定したＣａｐｉｎｔｅｃ ＣＲＣ－５５ｔＰＥＴドーズキャリブレーターまたは３２０～５００ｋｅＶのエネルギーウィンドウ（Ｂｉ－２１３）に設定したＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｗｉｚａｒｄ ２－２４７０自動ガンマカウンターのいずれかを使用して測定した。
【0111】
[0166]タンパク質濃度は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＮａｎｏＤｒｏｐ Ｌｉｔｅ分光光度計を使用して決定し、測定前のそれぞれのビヒクルバッファーについてのブランク読み取り値を差し引いた。
【0112】
[0167]薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、裏面がアルミニウムのシリカゲル６０ Ｆ２５４ストリップ（Ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）および移動相としての０．４Ｍクエン酸ナトリウムｐＨ４＋１０％メタノールを使用して実施した。展開したＴＬＣストリップを、永続平衡状態（展開後最低８時間）でＥｌｙｓｉａ－Ｒａｙｔｅｓｔ Ｇｉｎａ Ｓｔａｒ ＴＬＣリーダーを使用して測定した。対照（すなわち、キレーターなし）のクロマトグラムを図１に示す。これは、予想されたとおり、アクチニウムを含有する溶液は、Ｈ２ｍａｃｒｏｐａまたはＨ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３ＳｑＯＥｔが存在しない場合、溶媒先端（Ｒｆ＝１）とともに移動することを示す。
【0113】
[0168]インスタントＴＬＣ（ｉＴＬＣ）は、ガラスマイクロファイバーｉＴＬＣ－ＳＧクロマトグラフィーペーパーストリップ（Ａｇｉｌｅｎｔ、ＣＡ、米国）および移動相としての５０ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ５または５０ｍＭクエン酸ｐＨ５のいずれかを使用して実施した。展開したｉＴＬＣストリップを、永続平衡状態（展開後最低８時間）でＥｌｙｓｉａ－Ｒａｙｔｅｓｔ Ｇｉｎａ Ｓｔａｒ ＴＬＣリーダーを使用して測定した。対照（すなわち、キレーターなし）のクロマトグラムを図２に示す。これは、予想されたとおり、アクチニウムを含有する溶液は、Ｈ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体が存在しない場合、溶媒先端（Ｒｆ＝１）とともに移動することを示す。
【0114】
[0169]サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）は、フラクションコレクターおよびダイオードアレイ検出器を備えた１２００シリーズＡｇｉｌｅｎｔシステムにおいて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＢｉｏＳｅｐ－ＳＥＣ－Ｓ３０００ ５μｍ ３００×７．８ｍｍカラムならびに５０ｍＭリン酸バッファーｐＨ７．２、０．２Ｍ ＮａＣｌ、５％イソプロパノール、および０．０２％ＮａＮ３からなる移動相を使用して、１ｍＬ／分の流速で実施した。
【0115】
[0170]免疫反応率（ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ）は、ラジオイムノコンジュゲート（２０ｎｇ）を関連する細胞株（５ｘ１０６個の細胞）中で周囲温度で４５分間インキュベーションし、続いて、細胞懸濁液をスピニングし（２分間２０００ｒｃｆ）、得られた細胞ペレットを培地（１ｍＬ）で洗浄することにより決定した。洗浄をさらに２回繰り返し、最終細胞ペレット中の放射能を、永続平衡状態（洗浄後最低８時間）で自動ガンマカウンターを使用して測定した。免疫反応性または免疫反応率（ＩＲＦ）を、ラジオイムノコンジュゲート（２０ｎｇ、５００μＬ、３連の平均）を用いて標準物質と比較した細胞ペレット中の放射能の比率として計算した。非特異的結合（ＮＳＢ）は、上記の手順に従ってラジオイムノコンジュゲート（２０ｎｇ）をそれぞれの非コンジュゲート化モノクローナル抗体（６０μｇ）とともにインキュベーションすることにより決定した。
【0116】
[0171]トリウム－２２９から生成されたＡｃ－２２５は、Ｏａｋ Ｒｉｄｇｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（米国）から硝酸塩として購入した。［２２５Ａｃ］Ａｃ－硝酸塩（およそ２５～３０ＭＢｑ）を、３０％Ｓｕｐｒａｐｕｒ ＨＣｌ（Ｓｉｇｍａ）をＵｌｔｒａｐｕｒ水（Ｓｉｇｍａ）で希釈することにより調製した塩酸（１００μＬ、０．２Ｍ）中で再構成した。同様の放射能濃度を有する再構成済み［２２５Ａｃ］Ａｃ－硝酸塩の保存溶液を、０．１５Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ５．５（Ａｃ－２２５の崩壊に応じて１：９～１：１）中で希釈することにより調製した。
【0117】
[0172]精製マウス－ヒトＩｇＧ１キメラモノクローナル抗体ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１、ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１、およびキメラＩｇＧ１アイソタイプ対照、およびヒト化ＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体は、Ｏｌｉｖｉａ Ｎｅｗｔｏｎ－Ｊｏｈｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅにより提供された。
【0118】
[0173]Ｕ２５１膠芽腫細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手し、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を含有するＲＰＭＩ培地中で培養した。Ｕ８７ＭＧ．ｄｅ２－７膠芽腫細胞株は、Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈにより提供され、以前に記載されている（Ｎｉｓｈｉｋａｗａ Ｒ、Ｊｉ ＸＤ、Ｈａｒｍｏｎ ＲＣ、Ｃ Ｓ Ｌａｚａｒ ＣＳ、Ｇｉｌｌ ＧＮ、Ｃａｖｅｎｅｅ ＷＫ、Ｈｕａｎｇ ＨＪ．Ａ ｍｕｔａｎｔ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｍｍｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇｌｉｏｍａ ｃｏｎｆｅｒｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｉｔｙ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９９４；９１：７７２７～３１）。細胞を、１０％ＦＣＳおよび０．４ｍｇ／ｍＬジェネティシンを含有するＤＭＥＭ培地中で培養した。ＳＫ－ＲＣ－５２腎細胞癌細胞株は、Ｃａｔｈｏｌｉｃ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎｉｊｍｅｇｅｎ（オランダ）により提供され、１０％ＦＣＳ、２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ）、ならびに１００単位／ｍＬのペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ培地中で培養した。すべての培養物は、３７℃で５％ＣＯ２でインキュベーションした。
[0174]材料の大半は、容易に利用可能な供給元から試薬グレードとして商業的に購入した。
[0174]材料の大半は、容易に利用可能な供給元から試薬グレードとして商業的に購入した。
【0119】
実施例１
ジメチルピリジン－２，６－ジカルボキシレート（１００）
ジメチルピリジン－２，６－ジカルボキシレート（１００）
【0120】
【化18】
【0121】
[0175]１００を、文献の手順（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２０１５、７１（３３）、５３２１～５３３６）を適合させたものに従って調製した。メタノール（３０ｍＬ）中のピリジン－２，６－ジカルボン酸（４．２３ｇ、２５．３ｍｍｏｌ）および硫酸（１ｍＬ）を還流状態で６時間加熱した。固体を無色結晶性固体として濾過した。減圧下で溶媒を除去することにより第２の収量を得、ジクロロメタン（１００ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２×５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧下で除去して、無色固体を得た（３．９４ｇ、８０％）。ＥＳＩ－ＭＳ｛Ｍ＋Ｈ＋｝：１９６．０５９９ （Ｃ９Ｈ１０ＮＯ４）＋の計算値：１９６．０６０５。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.30 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 8.01 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 4.01 (s, 6H).13C NMR (101 MHz, CDCl3)δ165.0, 148.2, 138.4, 128.0, 53.2. Rt= 9.70分 (方法A, カラムB).
【0122】
実施例２
メチル６－（ヒドロキシメチル）ピコリネート（１０１）
メチル６－（ヒドロキシメチル）ピコリネート（１０１）
【0123】
【化19】
【0124】
[0176]メチル６－（ヒドロキシメチル）ピコリネートを、適合させた文献のプロトコルを使用して合成した。Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００８、４７（１７）、７８４０～５１。０℃のメタノール（２００ｍＬ）中のジメチル２，６－ピリジン－２，６－ジカルボキシレート（６．０ｇ、３０．６ｍｍｏｌ）に、水素化ホウ素ナトリウム（２．３２ｇ、６２ｍｍｏｌ）を１時間にわたり添加した。反応混合物を室温で５時間撹拌した。溶液を０℃の飽和ＮＨ４Ｃｌ（１００ｍＬ）を使用してクエンチし、メタノールを減圧下で除去した。水層をジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧下で除去した。無色固体をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～２％ＭｅＯＨ）により精製して、化合物１０１を得た（３．３７ｇ、５７％）。ＥＳＩ－ＭＳ｛Ｍ＋Ｈ＋｝：１６８．０６５２ （Ｃ８Ｈ１０ＮＯ３）＋の計算値：１６８．０６５５。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.01 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.83 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.85 (s, 2H), 3.97 (d, J = 0.7 Hz, 3H). 13C NMR (125.7 MHz, CDCl3): δ 165.0, 148.2, 138.4, 128.0, 53.2. Rt= 6.67分 (方法A, カラムA).
【0125】
実施例３
メチル－６－クロロメチル－ピリジン－２－カルボキシレート（１０２）
メチル－６－クロロメチル－ピリジン－２－カルボキシレート（１０２）
【0126】
【化20】
【0127】
[0177]メチル－６－クロロメチル－ピリジン－２－カルボキシレートを、適合させた文献のプロトコルを使用して合成した。２塩化チオニル（６ｍＬ）を、Ｎ２雰囲気下０℃で、メチル－６－ヒドロキシメチル－２－ピリジンカルボキシレート（２．５ｇ、１５ｍｍｏｌ）にゆっくり添加し、１時間撹拌した。１時間後、塩化チオニルを真空中で除去した。残渣をトルエン（５０ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）で洗浄した。有機画分をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧下で除去して、油状物を得、これが沈殿して、オフホワイト色固体を生じた（２．４２ｇ、９０％）。ＥＳＩ－ＭＳ｛Ｍ＋Ｈ＋｝：１８６．０３１９ （Ｃ８Ｈ９ＣｌＮＯ２）＋の計算値：１８６．０２４４。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.09 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.91 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.79 (s, 2H), 4.02 (s, 3H). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 165.3, 157.2, 147.5, 138.1, 126.2, 124.5, 53.1, 46.3. Rt= 7.65分 (方法A, カラムA).
【0128】
実施例４
ジエチル－４－ヒドロキシピリジン－２，６－カルボキシレート（１０３）
ジエチル－４－ヒドロキシピリジン－２，６－カルボキシレート（１０３）
【0129】
【化21】
【0130】
[0178]ジエチル－４－ヒドロキシピリジン－２，６－カルボキシレートを、適合させた文献のプロトコルを使用して合成した。３ケリダム酸（４．０ｇ、２１．８ｍｍｏｌ）をエタノール（１５０ｍＬ）に溶解し、硫酸（６滴）を添加し、１６時間還流した。エタノールを減圧下で除去し、さらに精製することなく次の反応において使用した（３．９８ｇ、７６％）。ＥＳＩ－ＭＳ｛Ｍ＋Ｈ＋｝：２４０．０８６６ （Ｃ１１Ｈ１４ＮＯ５）＋の計算値：２４０．０８６７。１２４℃。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.40 (br, 1H), 7.45 (s, 2H), 4.45 (q, 4H), 1.41(t, 6H). Rt= 7.85分 (方法A, カラムA).
【0131】
実施例５
ジエチル４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）ピリジン－６－ジカルボキシレート（１０４）
ジエチル４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）ピリジン－６－ジカルボキシレート（１０４）
【0132】
【化22】
【0133】
[0179]ジエチル４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）ピリジン－２，６－ジカルボキシレートを、適合させた文献のプロトコルを使用して合成した。４ＤＭＦ（３０ｍｌ）中のケリダム酸ジエチル（４）（３．１５ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（３．６ｇ、２６．４ｍｍｏｌ）の懸濁液に、臭化プロパルギル溶液（トルエン中８０重量％－４．６９ｍＬ、５２．３ｍｍｏｌ）を添加した。溶解性を助けるために混合物を８０℃で３時間加熱し、次いで、室温で終夜撹拌した。次いで、混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０～２％ＭｅＯＨ）により精製して、化合物１０４を淡黄色または褐色のいずれかの固体として得た（２．４７ｇ、６８％）。ＥＳＩ－ＭＳ｛Ｍ＋Ｈ＋｝：２７８．１０２１ （Ｃ１４Ｈ１６ＮＯ５）＋の計算値：２７８．１０２３ 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.80 (s, 2H), 5.11 (s, 2H), 4.38 (q, J = 7.1 Hz, 4H), 3.75 (s, 1H), 1.34 (t, J = 7.1 Hz, 6H). 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 165.5, 164.4, 150.1, 114.9, 80.3, 78.1, 62.1, 57.0, 39.7, 14.5. Rt= 8.75分 (方法A, カラムA).
【0134】
実施例６
２－ヒドロキシメチル４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）ピリジン－６－エチルカルボキシレート（１０５）
２－ヒドロキシメチル４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）ピリジン－６－エチルカルボキシレート（１０５）
【0135】
【化23】
【0136】
[0180]２－ヒドロキシメチル４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）ピリジン－６－エチルカルボキシレートを、適合させた文献のプロトコルを使用して合成した。２０℃のエタノール（１００ｍＬ）中のジエチル４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）ピリジン－２，６－ジカルボキシレート（１．８１ｇ、６．４９ｍｍｏｌ）に、水素化ホウ素ナトリウム（０．３１９ｇ、８．４４ｍｍｏｌ）を０．５時間にわたり添加した。反応混合物を室温で３時間撹拌し、出発材料が残存しなくなるまでＭＳによってモニタリングした。溶液を０℃の飽和ＮＨ４Ｃｌ（５０ｍＬ）を使用してクエンチし、エタノールを減圧下で除去した。水層を酢酸エチル（３×７０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧下で除去して、オフホワイト色の化合物６をさらに精製することなく得た（１．２ｇ、７５％）。ＥＳＩ－ＭＳ｛Ｍ＋Ｈ＋｝：２３６．０９１９ （Ｃ１２Ｈ１４ＮＯ４）＋の計算値：２３６．０９１８。1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ 7.62 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 4.81 (s, 4H), 4.45 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.60 (t, J = 2.3 Hz, 1H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H). 13C NMR (126 MHz, クロロホルム-d) δ 165.2, 164.7, 162.1, 148.8, 111.4, 109.7, 76.7, 64.5, 62.1, 56.0, 14.3. Rt= 11.32分 (方法A, カラムA).
【0137】
実施例７
２－クロロメチル４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）ピリジン－６－エチルカルボキシレート（１０６）
２－クロロメチル４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）ピリジン－６－エチルカルボキシレート（１０６）
【0138】
【化24】
【0139】
[0181]塩化チオニル（６ｍＬ）を、Ｎ２雰囲気下０℃で、２－ヒドロキシメチル４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）ピリジン－６－エチルカルボキシレート（０．４ｇ、１．７ｍｍｏｌ）にゆっくり添加し、３時間撹拌した。３時間後、塩化チオニルを真空中で除去して、淡黄色残渣を得、これを酢酸エチル（２０ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）および水（３０ｍＬ）で洗浄した。有機画分をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧下で除去して、淡黄色粉末を得た（０．３３ｇ、７７％）。ＥＳＩ－ＭＳ｛Ｍ＋Ｈ＋｝：２５４．０５７８ （Ｃ１２Ｈ１４ＮＯ４）＋の計算値：２５４．０５７８。1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ 7.62 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 4.81 (s, 4H), 4.45 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.60 (t, J = 2.3 Hz, 1H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H). 13C NMR (126 MHz, クロロホルム-d) δ 165.2, 164.7, 162.1, 148.8, 111.4, 109.7, 76.7, 64.5, 62.1, 56.0, 14.3. Rt = 14.942分 (方法A, カラムB).
【0140】
実施例８
メチル６－（（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリネート（１０７）
メチル６－（（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリネート（１０７）
【0141】
【化25】
【0142】
[0182]メチル６－（（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリネートを、適合させた文献のプロトコルを使用して合成した。５７５℃の乾燥ＡＣＮ（３５０ｍＬ）中の１，７，１０，１６－テトラオキサ－４，１３－ジアザシクロオクタデカン（０．７７ｇ、３．０２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．３４ｇ、３．９３ｍｍｏｌ）の溶液に、乾燥ＡＣＮ（８０ｍＬ）中の１０２（０．３７ｇ、２．０３ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下で４時間にわたり滴下添加し、還流状態で４０時間加熱した。溶液を減圧下６０℃で濃縮して、淡黄色油状物とした。次いで、粗製の油状物をセミ分取ＨＰＬＣ（方法Ｃ）によって精製し、適切な画分を合わせ、凍結乾燥して、淡色油状物を得た（６２６ｍｇ、７６％）。ＥＳＩ－ＭＳ｛Ｍ＋２Ｈ＋｝：２０６．６２５７ （Ｃ２０Ｈ３３Ｎ３Ｏ６）２＋の計算値：２０６．６２５７。1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ 9.57 (s, 1H), 8.07 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.91 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.97 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.89 (s, 4H), 3.82 (s, 4H), 3.75 (s, 3H), 3.61 (s, 9H), 3.33 (s, 4H). 13C NMR (126 MHz, cdcl3) δ 165.0, 161.6-160.7 (TFA, q), 152.0, 146.9, 138.5, 128.5, 124.6, 119.6-112.6 (TFA, q), 70.1, 69.4, 65.8, 65.5, 54.5, 52.9, 52.5, 48.6. Rt= 7.26分 (方法A, カラムA).
【0143】
実施例９
エチル４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）－６－（（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリネート（１０８）
エチル４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）－６－（（１６－（（６－（メトキシカルボニル）ピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリネート（１０８）
【0144】
【化26】
【0145】
[0183]炭酸セシウム（０．６５ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のメチル６－（（１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリネート（０．１４９ｇ、０．４ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、室温で３０分間撹拌した。撹拌した反応混合物に、無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中の２－クロロメチル４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）ピリジン－６－エチルカルボキシレート（０．１３８ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）の溶液を窒素下で添加し、反応物を５０℃で４０時間加熱した。得られた溶液を濾過し、減圧下で乾固させて、橙色油状物を得、これをセミ分取ＨＰＬＣによって精製し、適切な画分を合わせ、凍結乾燥して、黄色油状物を得た。ＥＳＩ－ＭＳ｛Ｍ＋２Ｈ＋｝：３１５．１６２７ （Ｃ３２Ｈ４６Ｎ４Ｏ９）２＋の計算値：３１５．１６２７。1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.11 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.94 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.84 (s, 2H), 4.75 (s, 2H), 4.69 (s, 2H), 4.47 - 4.39 (m, 2H), 3.98 (d, J = 2.7 Hz, 3H), 3.95 (s, 8H), 3.65 (d, J = 3.0 Hz, 16H), 2.61 (s, 1H), 1.40 (t, J = 8.3 Hz, 3H). Rt= 10.23分 (方法A, カラムA).
【0146】
実施例１０
４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）－６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（１０９）
４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）－６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（１０９）
【0147】
【化27】
【0148】
[0184]４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）－６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸を、適合させた文献のプロトコルを使用して合成した。６ＤＣＭ（４５０μＬ）中の１０８（１８．５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の溶液に、メタノール（５０μＬ、３Ｍ）中のＮａＯＨの超音波処理懸濁液を、ＮａＯＨの最終濃度が０．３Ｍとなり、最終ＤＣＭ：ＭｅＯＨ比が９：１となるように添加した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで、溶媒を減圧下で除去し、さらに精製することなく次の工程において使用した。ＥＳＩ－ＭＳ｛Ｍ＋２Ｈ＋｝：２９４．１３９３ （Ｃ２９Ｈ４０Ｎ４Ｏ９）２＋の計算値：２９４．１３９３。Ｒｔ＝８．５３分（方法Ａ、カラムＡ）。
【0149】
実施例１１
Ｎ３－ＰＥＧ３－スクアレート（１１０）
Ｎ３－ＰＥＧ３－スクアレート（１１０）
【0150】
【化28】
【0151】
[0185]新たに調製したスクアリン酸ジエチル（０．２３ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）をエタノール（４ｍＬ）に溶解した後、１－アミノ－１１－アジド－３，６，９－トリオキサウンデカン（０．２８ｇ、１．２９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１当量）を窒素下で添加した。混合物を室温で８時間撹拌し、次いで、無色溶液を減圧下で乾固させ、セミ分取ＨＰＬＣ（方法Ｃ）によって精製した。画分を合わせ、凍結乾燥して、無色油状物を得た（２０９ｍｇ、４９％）。ＥＳＩ－ＭＳ｛Ｍ＋Ｈ＋｝：３４３．１６１３ （Ｃ１４Ｈ２３Ｎ４Ｏ６）＋の計算値：３４３．１６１２ 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ 4.75 (d, J = 6.7 Hz, 2H,), 3.66 (d, J = 8.9 Hz, 14H), 3.42 - 3.36 (m, 2H,), 1.45 (t, J = 7.1 Hz, 3H). 13-C NMR (126 MHz; cdcl3): δ 188.8, 183.3, 177.4, 177.2, 172.7, 70.7, 70.3, 70.0, 69.73, 69.61, 50.7, 44.4, 44.1, 15.8. RT= 7.23分 (方法A, カラムA).
【0152】
実施例１２
Ｎ３－ＰＥＧ３－スクアレートと４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）－６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（１１１）との間のＣｕＡＡＣ
Ｎ３－ＰＥＧ３－スクアレートと４－（プロパ－２－イン－１－イルオキシ）－６－（（１６－（（６－カルボキシピリジン－２－イル）メチル）－１，４，１０，１３－テトラオキサ－７，１６－ジアザシクロオクタデカン－７－イル）メチル）ピコリン酸（１１１）との間のＣｕＡＡＣ
【0153】
【化29】
【0154】
[0186]ＣｕＳＯ４（０．２２ｍｇ、０．００１４ｍｍｏｌ、８％ｍｍｏｌ）およびアスコルビン酸ナトリウム（０．６４ｍｇ、０．００３２ｍｍｏｌ、１８％ｍｍｏｌ）を合わせ、２分間振盪して、銅（Ｉ）種への完全な還元を確実にした。次いで、ＴＢＴＡ（２．８ｍｇ、０．００５７ｍｍｏｌ、ＤＭＦ中３２％ｍｍｏｌ）を安定化配位子としてＮ３－ＰＥＧ３－スクアレート（６．４２ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）とともに添加し、１０分間反応させた。１０９（１１ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を窒素気流で１５分間パージして、反応混合物中の酸素含有量を低減した。反応をＨＰＬＣ（２８０ｎｍ）によってモニタリングし、さらなる２％ｍｍｏｌ ＣｕＳＯ４および１８％ｍｍｏｌアスコルビン酸ナトリウムを１２時間後に添加して、反応が完了まで進んだことを確実にした。黄色溶液を減圧下で乾固させ、真空中で乾燥した。得られた沈殿物をセミ分取ＨＰＬＣによって精製し、画分を合わせ、凍結乾燥して、オフホワイト色粉末を得た（５ｍｇ、４０％）。ＥＳＩ－ＭＳ｛Ｍ＋２Ｈ＋｝：４６５．２１６１ （Ｃ４３Ｈ６２Ｎ８Ｏ１５）２＋の計算値：４６５．２１６２。1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ 8.11 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.94 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.84 (d, J = 2.8 Hz, 2H), 4.75 (s, 2H), 4.69 (s, 2H), 4.47 - 4.39 (m, 2H), 3.98 (d, J = 2.7 Hz, 3H), 3.95 (s, 8H), 3.72 - 3.58 (m, 16H), 2.61 (s, 1H), 1.40 (t, J = 8.3 Hz, 3H). Rt= 10.04分 (方法A, カラムA).
【0155】
実施例１３
タンパク質のコンジュゲート化－ハーセプチン
[0187]凍結乾燥したハーセプチン（トラスツズマブ－５００ｍｇ）を、ホウ酸バッファー（０．２Ｍ、ｐＨ９．０）中で、１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度に再構成した。Ｍａｃｒｏｐａ－ＰＥＧ３－ＳｑＯＥｔ（化合物１１１、ＤＭＳＯ中５ｍｇ／ｍＬ保存溶液６μＬ、１０当量）を添加し、過剰の試薬の除去の前に、反応物を暗所において室温で６時間インキュベーションした後、スピン濾過（５０ＫＤａのＭＷカットオフ）によってバッファー交換した（ＨＥＰＥＳ、０．１Ｍ、ｐＨ７．４）。
タンパク質のコンジュゲート化－ハーセプチン
[0187]凍結乾燥したハーセプチン（トラスツズマブ－５００ｍｇ）を、ホウ酸バッファー（０．２Ｍ、ｐＨ９．０）中で、１０ｍｇ／ｍＬの最終濃度に再構成した。Ｍａｃｒｏｐａ－ＰＥＧ３－ＳｑＯＥｔ（化合物１１１、ＤＭＳＯ中５ｍｇ／ｍＬ保存溶液６μＬ、１０当量）を添加し、過剰の試薬の除去の前に、反応物を暗所において室温で６時間インキュベーションした後、スピン濾過（５０ＫＤａのＭＷカットオフ）によってバッファー交換した（ＨＥＰＥＳ、０．１Ｍ、ｐＨ７．４）。
【0156】
実施例１４
ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１およびＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１抗体のコンジュゲート化
[0188]ＰＢＳ中のＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１（９．４ｍｇ／ｍＬ）およびＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１抗体（３．１．ｍｇ／ｍＬ；３ｍｇ、２．×１０－５ｍｍｏｌ）をホウ酸バッファー（０．２Ｍ、ｐＨ９．０）にバッファー交換し、２つの等量のアリコートに分けて、５ｍｇ／ｍＬの最終濃度とした（ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１については３００μＬ、ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１については３２０μＬの総体積。反応混合物に、Ｈ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ ＯＥｔ（１１１、ＤＭＳＯ中１０ｍｇ／ｍＬ保存溶液－最終ＤＭＳＯ濃度４％未満）を添加し、４℃で終夜振盪し、次いで、室温でさらに一晩振盪した。過剰の試薬を除去し、スピン濾過（５０ＫＤａのＭＷカットオフ）によってバッファー交換した（酢酸ナトリウム、０．１Ｍ、ｐＨ５．５）。
ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１およびＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１抗体のコンジュゲート化
[0188]ＰＢＳ中のＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１（９．４ｍｇ／ｍＬ）およびＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１抗体（３．１．ｍｇ／ｍＬ；３ｍｇ、２．×１０－５ｍｍｏｌ）をホウ酸バッファー（０．２Ｍ、ｐＨ９．０）にバッファー交換し、２つの等量のアリコートに分けて、５ｍｇ／ｍＬの最終濃度とした（ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１については３００μＬ、ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１については３２０μＬの総体積。反応混合物に、Ｈ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ ＯＥｔ（１１１、ＤＭＳＯ中１０ｍｇ／ｍＬ保存溶液－最終ＤＭＳＯ濃度４％未満）を添加し、４℃で終夜振盪し、次いで、室温でさらに一晩振盪した。過剰の試薬を除去し、スピン濾過（５０ＫＤａのＭＷカットオフ）によってバッファー交換した（酢酸ナトリウム、０．１Ｍ、ｐＨ５．５）。
【0157】
【表1】
【0158】
実施例１５
Ａｃ－２２５標識濃度研究
[0189]Ａｃ－２２５保存溶液（およそ７４ｋＢｑ、２．３μＬ）をＨ２ｍａｃｒｏｐａ、ＤＯＴＡ（２，２’，２’’，２’’’－（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトライル）四酢酸）、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミンペンタアセテート）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）およびバッファー対照の溶液に添加して、キレーター濃度が１０－３Ｍ～１０－１０Ｍの間である１００μＬの総体積の混合物を得た。反応混合物を、別段の注記がない限り、周囲温度で２時間インキュベーションし、ＴＬＣ分析（０．４Ｍクエン酸ナトリウムｐＨ４＋１０％ＭｅＯＨ、生成物Ｒｆ＝０）のためのサンプルを反応の終了時に採取した。［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａの例示的クロマトグラムを図３に示す。これは、アクチニウムが、ｍａｃｒｏｐａに錯体化されていることによって、ベースライン（すなわち、「原点」）に保持されたことを示す。放射化学的収率を図４に提示する。
Ａｃ－２２５標識濃度研究
[0189]Ａｃ－２２５保存溶液（およそ７４ｋＢｑ、２．３μＬ）をＨ２ｍａｃｒｏｐａ、ＤＯＴＡ（２，２’，２’’，２’’’－（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトライル）四酢酸）、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミンペンタアセテート）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）およびバッファー対照の溶液に添加して、キレーター濃度が１０－３Ｍ～１０－１０Ｍの間である１００μＬの総体積の混合物を得た。反応混合物を、別段の注記がない限り、周囲温度で２時間インキュベーションし、ＴＬＣ分析（０．４Ｍクエン酸ナトリウムｐＨ４＋１０％ＭｅＯＨ、生成物Ｒｆ＝０）のためのサンプルを反応の終了時に採取した。［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａの例示的クロマトグラムを図３に示す。これは、アクチニウムが、ｍａｃｒｏｐａに錯体化されていることによって、ベースライン（すなわち、「原点」）に保持されたことを示す。放射化学的収率を図４に提示する。
【0159】
[0190]［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａの放射化学的収率は、周囲温度で、調査されたその他のキレーターと比較して顕著に高い。Ｈ２ｍａｃｒｏｐａは、１０－６Ｍのキレーター濃度まで定量的に放射性標識され得る。他のキレーター、例えばＤＯＴＡ、ＤＴＰＡ、およびＥＤＴＡは、より低いキレーター濃度で［２２５Ａｃ］Ａｃの錯体化を示さず、対照（キレーターなし）と同様である。ＤＯＴＡの放射性標識は、９０℃に加熱した場合に定量的放射性標識収率を示すが、より低いキレーター濃度でＨ２ｍａｃｒｏｐａと比較してわずかに劣る。これらの知見は、公開された観察結果と合致している：Ｎ．Ａ．Ｔｈｉｅｌｅ、Ｖ．Ｂｒｏｗｎ、Ｊ．Ｍ．Ｋｅｌｌｙ、Ａ．Ａｍｏｒ－Ｃｏａｒａｓａ、Ｕ．Ｊｅｒｍｉｌｏｖａ、Ｓ．Ｎ．ＭａｃＭｉｌｌａｎ、Ａ．Ｎｉｋｏｌｏｐｏｕｌｏｕ、Ｓ．Ｐｏｎｎａｌａ、Ｃ．Ｆ．Ｒａｍｏｇｉｄａ、Ａ．Ｋ．Ｈ．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ、Ｃ．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ、Ｐ．Ｓｃｈａｆｆｅｒ、Ｃ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ、Ｊ．Ｗ．Ｂａｂｉｃｈ、Ｖ．Ｒａｄｃｈｅｎｋｏ、Ｊ．Ｊ．Ｗｉｌｓｏｎ、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１７、５６、１４７１２。
【0160】
実施例１６
化合物１１１とＡｃ－２２５との錯体化速度の比較研究
[0191]Ａｃ－２２５保存溶液（およそ７４ｋＢｑ、２．３μＬ）をＨ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３ＳｑＯＥｔまたはＤＯＴＡ－メチルテトラジンの溶液に添加して、キレーター濃度がそれぞれ１０－５Ｍ、１０－６Ｍ、１０－７Ｍおよび１０－４Ｍ、１０－５Ｍ、１０－６Ｍである１００μＬの総体積の混合物を得た。Ｈ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３ＳｑＯＥｔおよびＤＯＴＡ－メチルテトラジンの反応混合物を、それぞれ周囲温度および９０℃でインキュベーションし、ＴＬＣ分析（０．４Ｍクエン酸ナトリウムｐＨ４＋１０％ＭｅＯＨ、生成物Ｒｆ＝０）のためのサンプルを５、１５、３０、および６０分の時点で採取した。放射化学的収率を図５および図６に提示する。
化合物１１１とＡｃ－２２５との錯体化速度の比較研究
[0191]Ａｃ－２２５保存溶液（およそ７４ｋＢｑ、２．３μＬ）をＨ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３ＳｑＯＥｔまたはＤＯＴＡ－メチルテトラジンの溶液に添加して、キレーター濃度がそれぞれ１０－５Ｍ、１０－６Ｍ、１０－７Ｍおよび１０－４Ｍ、１０－５Ｍ、１０－６Ｍである１００μＬの総体積の混合物を得た。Ｈ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３ＳｑＯＥｔおよびＤＯＴＡ－メチルテトラジンの反応混合物を、それぞれ周囲温度および９０℃でインキュベーションし、ＴＬＣ分析（０．４Ｍクエン酸ナトリウムｐＨ４＋１０％ＭｅＯＨ、生成物Ｒｆ＝０）のためのサンプルを５、１５、３０、および６０分の時点で採取した。放射化学的収率を図５および図６に提示する。
【0161】
[0192]Ｈ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３ＳｑＯＥｔの放射性標識は、すべての濃度で１５分間のインキュベーションの後に定量的収率で進行した。１０－７Ｍのキレーター濃度では、放射化学的収率は、５分間のインキュベーションで下降し始めた。したがって、１０－７および１０－６Ｍのキレーター濃度ならびに周囲温度で１５分間のインキュベーションを、Ｈ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体を用いた放射性標識研究のために選択した。
【0162】
[0193]ＤＯＴＡ－メチルテトラジンの放射性標識は、１０－４Ｍのキレーター濃度ではすべてのインキュベーション時間で定量的収率で進行した。１０－５Ｍのキレーター濃度では、放射化学的収率は、１５分間のインキュベーションで８８．５％であり、１０－６Ｍでは、最大放射化学的収率が６０分間のインキュベーションで６５．３％という結果になった。したがって、１０－５および１０－４Ｍのキレーター濃度を、ＴＣＯＰＥＧ４－コンジュゲート化モノクローナル抗体（ここで、ＴＣＯＰＥＧ－＝「トランスシクロオクテンポリエチレングリコール」の略語である）を用いた放射性標識研究のために選択した。
【0163】
実施例１７
［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１および［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１の合成
[0194]Ａｃ－２２５保存溶液（５５５ｋＢｑ、３０μＬ）をＨ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体の溶液に添加して、コンジュゲート濃度が１０－７Ｍおよび１０－６Ｍである１００μＬの総体積の混合物を得た。反応混合物を周囲温度で１５分間インキュベーションし、放射化学的純度（ＲＰ；ｉＴＬＣ：５０ｍＭクエン酸ｐＨ５、生成物Ｒｆ＝０）および免疫反応性（ＩＲ）の決定のためにサンプルを採取した。Ａｃ－２２５の開始放射能をコンジュゲートの量で除し、放射化学的純度を乗じることにより、比放射能（ＳＡ）を計算した。結果を表１にまとめる。数値表示（２×、５×）は、各コンジュゲートの平均キレーター－抗体比を指す。［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１および［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１のクロマトグラムを、それぞれ図７Ａおよび図７Ｂに示す。これは、アクチニウムが、ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１またはｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１に錯体化されていることによって、ベースライン（すなわち、「原点」）に保持されたことを示す。
［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１および［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１の合成
[0194]Ａｃ－２２５保存溶液（５５５ｋＢｑ、３０μＬ）をＨ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体の溶液に添加して、コンジュゲート濃度が１０－７Ｍおよび１０－６Ｍである１００μＬの総体積の混合物を得た。反応混合物を周囲温度で１５分間インキュベーションし、放射化学的純度（ＲＰ；ｉＴＬＣ：５０ｍＭクエン酸ｐＨ５、生成物Ｒｆ＝０）および免疫反応性（ＩＲ）の決定のためにサンプルを採取した。Ａｃ－２２５の開始放射能をコンジュゲートの量で除し、放射化学的純度を乗じることにより、比放射能（ＳＡ）を計算した。結果を表１にまとめる。数値表示（２×、５×）は、各コンジュゲートの平均キレーター－抗体比を指す。［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１および［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１のクロマトグラムを、それぞれ図７Ａおよび図７Ｂに示す。これは、アクチニウムが、ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１またはｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１に錯体化されていることによって、ベースライン（すなわち、「原点」）に保持されたことを示す。
【0164】
[0195]Ａｃ－２２５によるＨ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体の放射性標識は、１０－６Ｍの抗体濃度で放射化学的収率＞９９．５％で進行した。この抗体濃度で、比放射能は、理論上の最大値である３７ＭＢｑ／ｍｇに近かった。１抗体当たり平均２つのキレーターを有するラジオイムノコンジュゲートでは、１抗体当たり平均５つのキレーターを有するラジオイムノコンジュゲートと比較して免疫反応性がより高いという結果になった。したがって、前者をさらなる研究のために選択した。
【0165】
[0196]
【0166】
【表2】
【0167】
実施例１８
様々なＨ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体のサイズ排除ＨＰＬＣ
[0197]Ｈ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体（２０μｇ）を、サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）を使用して分析した。保持時間を表２にまとめる。ＳＥ－ＨＰＬＣクロマトグラム（ＵＶ２８０ｎｍ）を図８に示す。
様々なＨ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体のサイズ排除ＨＰＬＣ
[0197]Ｈ２ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体（２０μｇ）を、サイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥ－ＨＰＬＣ）を使用して分析した。保持時間を表２にまとめる。ＳＥ－ＨＰＬＣクロマトグラム（ＵＶ２８０ｎｍ）を図８に示す。
【0168】
[0198]ＳＥ－ＨＰＬＣは、すべてのイムノコンジュゲートについて優れた抗体完全性を示し、凝集は無視できるレベルであった。
[0199]
[0199]
【0169】
【表3】
【0170】
実施例１９
様々なＡｃ２２５標識モノクローナル抗体のサイズ排除ＨＰＬＣ
[0200]［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体（３７ｋＢｑ、約１μｇ）を、ＳＥ－ＨＰＬＣを使用して分析した。ＨＰＬＣ画分を３０秒ごとに（０．５ｍＬ）エッペンドルフ管に連続して収集した。管中の放射能を、永続平衡状態（収集後最低８時間）で自動ガンマカウンターを使用して決定した。ＵＶ２８０ｎｍおよび放射線の保持時間を表３にまとめる。ＳＥ－ＨＰＬＣクロマトグラム（ＵＶ２８０ｎｍおよびＲＡＤ）を図９に示す。
様々なＡｃ２２５標識モノクローナル抗体のサイズ排除ＨＰＬＣ
[0200]［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体（３７ｋＢｑ、約１μｇ）を、ＳＥ－ＨＰＬＣを使用して分析した。ＨＰＬＣ画分を３０秒ごとに（０．５ｍＬ）エッペンドルフ管に連続して収集した。管中の放射能を、永続平衡状態（収集後最低８時間）で自動ガンマカウンターを使用して決定した。ＵＶ２８０ｎｍおよび放射線の保持時間を表３にまとめる。ＳＥ－ＨＰＬＣクロマトグラム（ＵＶ２８０ｎｍおよびＲＡＤ）を図９に示す。
【0171】
[0201]ＳＥ－ＨＰＬＣは、すべてのラジオイムノコンジュゲートについて優れた抗体完全性を示し、凝集は無視できるレベルであった。ＳＥ－ＨＰＬＣにより遊離Ａｃ－２２５は検出されず、これは、ｉＴＬＣ分析と一致している。
【0172】
[0202]
【0173】
【表4】
【0174】
実施例２０
［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１とＬａ３＋およびＥＤＴＡとの競合研究
[0203]［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１（３７ｋＢｑ、１μｇ、５μＬ）を、種々のゲンチジン酸塩（０／２５ｍｇ／ｍＬ）、Ｌａ３＋（抗体に対して５／５０／５００×モル過剰）、およびＥＤＴＡ（抗体に対して５０×モル過剰）を含有するＰＢＳ中の混合物に添加して、２０μＬの総体積を有する溶液を得た。混合物を周囲温度でインキュベーションし、ｉＴＬＣ（５０ｍＭクエン酸ｐＨ５、生成物Ｒｆ＝０）分析のためのサンプルを１、２４、４８、および１６８時間の時点で採取した。放射化学的純度を表４に提示する。
［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１とＬａ３＋およびＥＤＴＡとの競合研究
[0203]［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１（３７ｋＢｑ、１μｇ、５μＬ）を、種々のゲンチジン酸塩（０／２５ｍｇ／ｍＬ）、Ｌａ３＋（抗体に対して５／５０／５００×モル過剰）、およびＥＤＴＡ（抗体に対して５０×モル過剰）を含有するＰＢＳ中の混合物に添加して、２０μＬの総体積を有する溶液を得た。混合物を周囲温度でインキュベーションし、ｉＴＬＣ（５０ｍＭクエン酸ｐＨ５、生成物Ｒｆ＝０）分析のためのサンプルを１、２４、４８、および１６８時間の時点で採取した。放射化学的純度を表４に提示する。
【0175】
[0204]［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１は、ゲンチジン酸ナトリウムを含むおよび含まないＰＢＳ中で、５０倍モル過剰までのＬａ３＋と競合して、優れた安定性を示した。５００倍モル過剰のＬａ３＋および５０倍モル過剰のＥＤＴＡでは、放射化学的純度は、２４～４８時間の間で９５％未満に下降した。
【0176】
[0205]
【0177】
【表5】
【0178】
実施例２１
血清安定性分析および［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－ｄｈＰｚＰＥＧ４－コンジュゲート化モノクローナル抗体との比較
[0206]ＴＣＯＰＥＧ４－コンジュゲート化モノクローナル抗体を、Ｏ．Ｋｅｉｎａｎｅｎ、Ｋ．Ｆｕｎｇ、Ｊ．Ｐｏｕｒａｔ、Ｖ．Ｊａｌｌｉｎｏｊａ、Ｄ．Ｖｉｖｉｅｒ、Ｎ．Ｋ．Ｐｉｌｌａｒｓｅｔｔｙ、Ａ．Ｊ．Ａｉｒａｋｓｉｎｅｎ、Ｊ．Ｓ．Ｌｅｗｉｓ、Ｂ．Ｍ．Ｚｅｇｌｉｓ、Ｍ．Ｓａｒｐａｒａｎｔａ、ＥＪＮＭＭＩ Ｒｅｓ ２０１７、７、９５およびＺ．Ｚｈｏｕ、Ｎ．Ｄｅｖｏｏｇｄｔ、Ｍ．Ｒ．Ｚａｌｕｔｓｋｙ、Ｇ．Ｖａｉｄｙａｎａｔｈａｎ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．２０１８、２９、４０９０～４１０３による公開された手順と同様に調製した。簡潔に言えば、炭酸水素ナトリウム（０．１Ｍ、ｐＨ８．５）中のモノクローナル抗体をＴＣＯ－ＰＥＧ４－ＮＨＳ（４×／１０×／４０×モル当量）とともに３７℃で１時間インキュベーションし、続いて、酢酸ナトリウム（５０ｍＭ、ｐＨ５．６）、ソルビトール（５ｗ／ｖ％）、およびＴｗｅｅｎ ２０（０．０２ｗ／ｖ％）からなる製剤化バッファーを使用して、遠心濾過（５０ｋＤａのＭＷＣＯ）によって精製した。ＴＣＯＰＥＧ４－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１（１５０μｇ）およびＴＣＯＰＥＧ４－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１（１５０μｇ）を酢酸ナトリウム（０．１５Ｍ、ｐＨ５．５）中で［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－メチルテトラジン（５５５ｋＢｑ）とともに周囲温度で１５分間インキュベーションし、続いて、スピン濾過（１０ｋＤａのＭＷＣＯ）によって精製することにより、［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－ｄｈＰｚＰＥＧ４－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１および［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－ｄｈＰｚＰＥＧ４－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１（ここで、－ｄｈＰｚＰＥＧ－＝「メチルジヒドロピリダジンポリエチレングリコール」の略語である）を合成した。［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－および［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－ｄｈＰｚＰＥＧ４－コンジュゲート化モノクローナル抗体を、健康なドナーのヒト血清（１００μＬ）中で３７℃でインキュベーションした。サンプルをＥＯＳ時ならびに２、７、および１４日間のインキュベーション後に採取した。サンプルをｉＴＬＣ（５０ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ５、生成物Ｒｆ＝０）により分析し、免疫反応率を、ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１およびＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１ラジオイムノコンジュゲートについてそれぞれＵ８７ＭＧ．ｄｅ２－７およびＵ２５１細胞を用いて決定した。結果を放射化学的純度については図１０Ａ、免疫反応性については図１０Ｂに提示する。数値表示（２×、５×、１×、２×、９×）は、各コンジュゲートの平均キレーター－抗体比を指す。
血清安定性分析および［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－ｄｈＰｚＰＥＧ４－コンジュゲート化モノクローナル抗体との比較
[0206]ＴＣＯＰＥＧ４－コンジュゲート化モノクローナル抗体を、Ｏ．Ｋｅｉｎａｎｅｎ、Ｋ．Ｆｕｎｇ、Ｊ．Ｐｏｕｒａｔ、Ｖ．Ｊａｌｌｉｎｏｊａ、Ｄ．Ｖｉｖｉｅｒ、Ｎ．Ｋ．Ｐｉｌｌａｒｓｅｔｔｙ、Ａ．Ｊ．Ａｉｒａｋｓｉｎｅｎ、Ｊ．Ｓ．Ｌｅｗｉｓ、Ｂ．Ｍ．Ｚｅｇｌｉｓ、Ｍ．Ｓａｒｐａｒａｎｔａ、ＥＪＮＭＭＩ Ｒｅｓ ２０１７、７、９５およびＺ．Ｚｈｏｕ、Ｎ．Ｄｅｖｏｏｇｄｔ、Ｍ．Ｒ．Ｚａｌｕｔｓｋｙ、Ｇ．Ｖａｉｄｙａｎａｔｈａｎ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．２０１８、２９、４０９０～４１０３による公開された手順と同様に調製した。簡潔に言えば、炭酸水素ナトリウム（０．１Ｍ、ｐＨ８．５）中のモノクローナル抗体をＴＣＯ－ＰＥＧ４－ＮＨＳ（４×／１０×／４０×モル当量）とともに３７℃で１時間インキュベーションし、続いて、酢酸ナトリウム（５０ｍＭ、ｐＨ５．６）、ソルビトール（５ｗ／ｖ％）、およびＴｗｅｅｎ ２０（０．０２ｗ／ｖ％）からなる製剤化バッファーを使用して、遠心濾過（５０ｋＤａのＭＷＣＯ）によって精製した。ＴＣＯＰＥＧ４－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１（１５０μｇ）およびＴＣＯＰＥＧ４－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１（１５０μｇ）を酢酸ナトリウム（０．１５Ｍ、ｐＨ５．５）中で［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－メチルテトラジン（５５５ｋＢｑ）とともに周囲温度で１５分間インキュベーションし、続いて、スピン濾過（１０ｋＤａのＭＷＣＯ）によって精製することにより、［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－ｄｈＰｚＰＥＧ４－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１および［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－ｄｈＰｚＰＥＧ４－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１（ここで、－ｄｈＰｚＰＥＧ－＝「メチルジヒドロピリダジンポリエチレングリコール」の略語である）を合成した。［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－および［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－ｄｈＰｚＰＥＧ４－コンジュゲート化モノクローナル抗体を、健康なドナーのヒト血清（１００μＬ）中で３７℃でインキュベーションした。サンプルをＥＯＳ時ならびに２、７、および１４日間のインキュベーション後に採取した。サンプルをｉＴＬＣ（５０ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ５、生成物Ｒｆ＝０）により分析し、免疫反応率を、ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１およびＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１ラジオイムノコンジュゲートについてそれぞれＵ８７ＭＧ．ｄｅ２－７およびＵ２５１細胞を用いて決定した。結果を放射化学的純度については図１０Ａ、免疫反応性については図１０Ｂに提示する。数値表示（２×、５×、１×、２×、９×）は、各コンジュゲートの平均キレーター－抗体比を指す。
【0179】
[0207]ヒト血清中の［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１および［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１の放射化学的純度は、実験の終了時（１４日）に＞９５％であった。［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－ｄｈＰｚＰＥＧ４－コンジュゲート化モノクローナル抗体は、集合的に、調査された時間枠にわたりより劣る安定性を示した。平均キレーター－抗体比が９である［２２５Ａｃ］Ａｃ－ＤＯＴＡ－ｄｈＰｚＰＥＧ４－コンジュゲートがより劣る性質を示したことを除いて、他のラジオイムノコンジュゲート間で免疫反応性に基づいて区別はできなかった。平均キレーター－抗体比が２である［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲートを、実施例２３および実施例２４に記載されるｉｎ ｖｉｖｏ研究に使用した。
【0180】
実施例２２
血清安定性分析
[0208]平均キレーター－抗体比が２である［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体を、健康なドナーのヒト血清（１００μＬ）中で３７℃でインキュベーションした。サンプルをＥＯＳ時ならびに２、７、および１４日間のインキュベーション後に採取した。サンプルをｉＴＬＣ（５０ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ５、生成物Ｒｆ＝０）により分析し、免疫反応率を、Ｕ８７ＭＧ．ｄｅ２－７（ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１）、Ｕ２５１（ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１）、またはＳＫ－ＲＣ－５２（キメラアイソタイプ対照ＩｇＧ１）細胞を用いて決定した。結果を表５に提示する。
血清安定性分析
[0208]平均キレーター－抗体比が２である［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－コンジュゲート化モノクローナル抗体を、健康なドナーのヒト血清（１００μＬ）中で３７℃でインキュベーションした。サンプルをＥＯＳ時ならびに２、７、および１４日間のインキュベーション後に採取した。サンプルをｉＴＬＣ（５０ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ５、生成物Ｒｆ＝０）により分析し、免疫反応率を、Ｕ８７ＭＧ．ｄｅ２－７（ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１）、Ｕ２５１（ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１）、またはＳＫ－ＲＣ－５２（キメラアイソタイプ対照ＩｇＧ１）細胞を用いて決定した。結果を表５に提示する。
【0181】
[0209]放射化学的収率および比放射能は、３種すべてのラジオイムノコンジュゲートについて非常に一貫して高く、放射化学的純度は、調査された時間枠にわたり優れていた（１４日後に＞９９％）。免疫反応率は、すべてのラジオイムノコンジュゲートについて各時点で徐々に下降した。非特異的結合は、すべての場合において低かった。
【0182】
[0210]
【0183】
【表6】
【0184】
実施例２３
Ｕ２５１異種移植片を有するマウスにおける［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１の用量漸増研究
[0211]雌の４～６週齢のＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウス（Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｒｅ、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ａｕｓｔｒａｌｉａ、Ｐｅｒｔｈ、オーストラリア）にＰＢＳ中のＵ２５１細胞（５．５×１０＾６個の細胞）を接種して、左脇腹に皮下腫瘍を作製した。接種後１１または１４日の時点で、およそ１００ｍｍ３の腫瘍異種移植片を有するマウス（ｎ＝５）に、［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１（０．２５～１．０μｇ／９．２５～３７．０ｋＢｑ）またはビヒクルＰＢＳを静脈内注射した。ｍｍ３単位の腫瘍体積（ＴＶ）を少なくとも週２回（ｂｉｗｅｅｋｌｙ）測定し、以下の式：ＴＶ＝（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して計算した。データは、平均腫瘍体積±ＳＤとして表した。所与の時点で対応のないｔ検定を使用して統計解析を実施した。マウスを倫理的エンドポイント（ＴＶ＞１０００ｍｍ３または体重減少＞１０％）で人道的に安楽死させた。腫瘍成長曲線の結果および生存率データを、それぞれ図１１Ａおよび図１１Ｂに提示する。この研究プロジェクトは、Ａｕｓｔｉｎ Ｈｅａｌｔｈの動物倫理委員会により承認された。
Ｕ２５１異種移植片を有するマウスにおける［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１の用量漸増研究
[0211]雌の４～６週齢のＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウス（Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｒｅ、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ａｕｓｔｒａｌｉａ、Ｐｅｒｔｈ、オーストラリア）にＰＢＳ中のＵ２５１細胞（５．５×１０＾６個の細胞）を接種して、左脇腹に皮下腫瘍を作製した。接種後１１または１４日の時点で、およそ１００ｍｍ３の腫瘍異種移植片を有するマウス（ｎ＝５）に、［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１（０．２５～１．０μｇ／９．２５～３７．０ｋＢｑ）またはビヒクルＰＢＳを静脈内注射した。ｍｍ３単位の腫瘍体積（ＴＶ）を少なくとも週２回（ｂｉｗｅｅｋｌｙ）測定し、以下の式：ＴＶ＝（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して計算した。データは、平均腫瘍体積±ＳＤとして表した。所与の時点で対応のないｔ検定を使用して統計解析を実施した。マウスを倫理的エンドポイント（ＴＶ＞１０００ｍｍ３または体重減少＞１０％）で人道的に安楽死させた。腫瘍成長曲線の結果および生存率データを、それぞれ図１１Ａおよび図１１Ｂに提示する。この研究プロジェクトは、Ａｕｓｔｉｎ Ｈｅａｌｔｈの動物倫理委員会により承認された。
【0185】
[0212]［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１の単回投薬に続いて、処置から数日以内に腫瘍成長阻害について顕著な用量応答効果が観察された。ビヒクル対照群が腫瘍体積の倫理的エンドポイントに達した接種後３４日目の時点で、すべての処置群が対照と有意差があった（Ｐ≦０．０００２）。抗腫瘍効能の持続期間もまた、用量依存的であった。放射性毒性の影響は、体重減少によって実証された。１８．５ｋＢｑまでの用量では、放射性毒性は観察されなかった。最高用量である３７ｋＢｑでは、急性体重減少の形態の放射性毒性が処置後数日以内にコホートの６０％において観察された。２７．８ｋＢｑでは、放射性毒性が処置後１４日までにコホートの２０％において明白であった。１８．５ｋＢｑ／０．５μｇの［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥｐｈＡ３ ＩｇＧ１の用量が最大耐用量として決定された。
【0186】
実施例２４
Ｕ８７ＭＧ．ｄｅ２－７異種移植片を有するマウスにおける［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１の用量漸増研究
[0213]雌の４～６週齢のＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウス（Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｒｅ、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ａｕｓｔｒａｌｉａ、Ｐｅｒｔｈ、オーストラリア）にＵ８７ＭＧ．ｄｅ２－７細胞（２．２×１０＾６個の細胞）を接種して、左脇腹に皮下腫瘍を作製した。接種後７または１１日の時点で、およそ１００ｍｍ３の腫瘍異種移植片を有するマウス（ｎ＝５／群）に、［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１（０．２５～１．０μｇ／９．２５～３７．０ｋＢｑ）またはビヒクルＰＢＳを静脈内注射した。ｍｍ３単位の腫瘍体積（ＴＶ）を週２回測定し、以下の式：ＴＶ＝（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して計算した。データは、平均腫瘍体積±ＳＤとして表した。マウスを倫理的エンドポイント（ＴＶ＞１０００ｍｍ３または体重減少＞１０％）で人道的に安楽死させた。腫瘍成長曲線の結果および生存率データを、それぞれ図１２Ａおよび図１２Ｂに提示する。この研究プロジェクトは、Ａｕｓｔｉｎ Ｈｅａｌｔｈの動物倫理委員会により承認された。
Ｕ８７ＭＧ．ｄｅ２－７異種移植片を有するマウスにおける［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１の用量漸増研究
[0213]雌の４～６週齢のＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウス（Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｒｅ、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ａｕｓｔｒａｌｉａ、Ｐｅｒｔｈ、オーストラリア）にＵ８７ＭＧ．ｄｅ２－７細胞（２．２×１０＾６個の細胞）を接種して、左脇腹に皮下腫瘍を作製した。接種後７または１１日の時点で、およそ１００ｍｍ３の腫瘍異種移植片を有するマウス（ｎ＝５／群）に、［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１（０．２５～１．０μｇ／９．２５～３７．０ｋＢｑ）またはビヒクルＰＢＳを静脈内注射した。ｍｍ３単位の腫瘍体積（ＴＶ）を週２回測定し、以下の式：ＴＶ＝（Ｌ×Ｗ２）／２を使用して計算した。データは、平均腫瘍体積±ＳＤとして表した。マウスを倫理的エンドポイント（ＴＶ＞１０００ｍｍ３または体重減少＞１０％）で人道的に安楽死させた。腫瘍成長曲線の結果および生存率データを、それぞれ図１２Ａおよび図１２Ｂに提示する。この研究プロジェクトは、Ａｕｓｔｉｎ Ｈｅａｌｔｈの動物倫理委員会により承認された。
【0187】
[0214]急速に成長するＵ８７ＭＧ．ｄｅ２－７膠芽腫異種移植片では、抗腫瘍効能の用量応答は観察されず、最高用量である３７ｋＢｑのみがコホートの４０％における研究の持続期間にわたる腫瘍成長の長期的遅延を実証し、単回投薬処置から２週間以内にコホートの６０％において放射性毒性が再度観察された。１８．５ｋＢｑ／０．５μｇの［２２５Ａｃ］Ａｃ－ｍａｃｒｏｐａ－ｔｚＰＥＧ３Ｓｑ－ＥＧＦＲＶＩＩＩ ＩｇＧ１の用量が最大耐用量として決定された。
【0188】
[0215]本明細書の全体を通して、文脈上別段の必要がない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変化形は、記述された要素もしくは整数または要素もしくは整数の群を含むことを示唆するが、他のあらゆる要素もしくは整数または要素もしくは整数の群を排除することを示唆しないと理解される。
【0189】
[0216]値の範囲が表される場合、この範囲は、範囲の上限および下限、ならびにこれらの限界の間にあるすべての数値または部分範囲を、各数値および部分範囲が明示的に列挙された場合と同様に包含することが明確に理解されることに留意すべきである。「約Ｘ％からＹ％」という記述は、別段の表示がない限り、「約Ｘ％から約Ｙ％」と同じ意味を有する。
【0190】
[0217]本明細書で使用される「約」という用語は、およそまたは近くを意味し、本明細書に明記された数値または範囲の文脈では、列挙または特許請求された数値または範囲から＋／－１０％以下、＋／－５％以下、＋／－１％以下、または＋／－０．１％以下の変動を包含することを意図している。
【0191】
[0218]本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」という単数形は、文脈上既に別段の指示がない限り、複数の態様を含むことにも留意すべきである。
【0192】
[0219]本明細書で使用される見出しは、単に読み手が参照しやすくするために含まれ、本開示または特許請求の範囲の全体を通して見出される主題を限定するために使用されるべきではない。見出しは、特許請求の範囲または請求項の限定を解釈する際に使用されるべきではない。
【0193】
[0220]本明細書で提供される説明は、共通する性質および特徴を共有し得る複数の実施形態に関連する。一実施形態の１つまたは複数の特徴は、その他の実施形態の１つまたは複数の特徴と組合せ可能であり得ることが理解されるべきである。加えて、実施形態の単一の特徴または特徴の組合せは、追加の実施形態を構成し得る。
【0194】
[0221]本明細書に記載されたすべての方法は、本明細書に別段の表示がない限りまたは文脈上明確に矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施され得る。本明細書で提供されるあらゆる例、または例示的文言（例えば、「などの」）の使用は、実施形態の例をより十分に明らかにすることを意図したものにすぎず、別段の特許請求がない限り、特許請求された発明の範囲に限定を課すものではない。本明細書におけるいかなる文言も、いずれかの特許請求されていない要素を不可欠であると表示するものと解釈されるべきではない。
【0195】
[0222]本発明が明確性および理解のために幾分詳細に記載されてきたが、本明細書に開示された発明概念の範囲から逸脱することなく、本明細書に記載された実施形態および方法に対する様々な修正および変更が行われ得ることが当業者には明らかである。
【0196】
[0223]当業者は、本明細書に記載された発明について、具体的に記載されたもの以外の変形および修正が可能であることを認識する。本発明は、すべてのそのような変形および修正を含むことが理解されるべきである。本発明はまた、個々にまたは集合的に、本明細書で言及された、または表示された工程、特徴、組成物および化合物のすべて、ならびに工程または特徴のいずれか２つ以上のあらゆる組合せを含む。
【0197】
[0224]将来の特許出願が、オーストラリアまたは外国において、本出願に基づいて、例えば、本出願の優先権を主張することにより、分割状態を主張することにより、および／または継続状態を主張することにより出願され得る。以下の仮請求項は、単に例として提供され、そのようないかなる将来の出願において特許請求され得るものの範囲をも限定することを意図したものではないことが理解されるべきである。さらに、特許請求の範囲は、本開示に内在する本発明の理解を限定する（または他の理解を排除する）とみなされるべきではない。本発明をさらに定義するように、後日、特徴が仮請求項に追加され、またはそれから除外され得る。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11A】
【図11B】
【図12A】
【図12B】
【国際調査報告】