特表 2024-538708 免疫寛容を誘導するための組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-23

(54)【発明の名称】免疫寛容を誘導するための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20241016BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20241016BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 D

A61P37/08

A61K39/395 N

A61K39/395 Y

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024520942

(86)(22)【出願日】2022-10-06

(85)【翻訳文提出日】2024-06-04

(86)【国際出願番号】 US2022045853

(87)【国際公開番号】W WO2023059769

(87)【国際公開日】2023-04-13

(31)【優先権主張番号】63/253,431

(32)【優先日】2021-10-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/288,915

(32)【優先日】2021-12-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】511000957

【氏名又は名称】ザ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ミシガン

【氏名又は名称原語表記】ＴＨＥ ＲＥＧＥＮＴＳ ＯＦ ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＭＩＣＨＩＧＡＮ

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ルカーチ，ニコラス・ダブリュ

(72)【発明者】

【氏名】エレセラ，シュリーカーント

(72)【発明者】

【氏名】ホーガン，サイモン

【テーマコード（参考）】

4C085

【Ｆターム（参考）】

4C085AA13

4C085BB31

4C085BB33

4C085CC22

4C085DD61

4C085EE01

4C085GG08

(57)【要約】

本開示は、抗原特異的ＩｇＡ免疫複合体を含む組成物、及び本組成物を投与する前に１つ以上の粘膜部位において確立されたＴｈ２偏向免疫応答を有する対象において、アレルゲンに対する免疫寛容を誘導するために本組成物を使用する方法に向けられている。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象におけるアレルギー反応を阻害する方法であって、方法が、免疫複合体及び薬学的に許容される担体を含む組成物を対象に投与することを含み、免疫複合体が、アレルゲンに対して特異的なＩｇＡ免疫グロブリンに結合したアレルゲンを含み、対象が、組成物を投与する前に、１つ以上の粘膜部位において確立されたＴｈ２偏向免疫応答を有する、方法。

【請求項2】

アレルゲンが、食物アレルゲン、空中アレルゲン、動物製品、薬物、昆虫毒、又はラテックスである、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

アレルゲンが、ピーナッツアレルゲン、木の実アレルゲン、乳製品アレルゲン、小麦アレルゲン、大豆アレルゲン、卵アレルゲン、貝アレルゲン、肉アレルゲン、ゴマアレルゲン、及びトウモロコシアレルゲンから選択される食物アレルゲンである、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

対象がヒトである、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

組成物を投与することが、対象におけるＩＬ－１０、ＴＧＦ－β１、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１７、及び／又はＣＣＬ２の発現を増加させる、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

組成物を投与することが、対象における制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の発生を誘導する、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

対象に組成物を投与することが、対象におけるＴｈ１型サイトカインの発現を増加させる、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

組成物が、対象に経鼻投与される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

その後アレルゲンに曝露された対象において、アレルゲンに対する過敏性が減少する、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

対象における食物アレルゲンに対するアレルギー反応を阻害するための、薬学的に許容される担体、及びＩｇＡ免疫グロブリン若しくはその抗原結合断片に結合されたアレルゲンを含む、免疫複合体を含む組成物の使用であって、ＩｇＡ免疫グロブリンが、アレルゲンに対して特異的である、組成物の使用。

【請求項11】

アレルゲンが、食物アレルゲン、空中アレルゲン、動物製品、薬物、昆虫毒、又はラテックスである、請求項１０に記載の使用。

【請求項12】

アレルゲンが、ピーナッツアレルゲン、木の実アレルゲン、乳製品アレルゲン、小麦アレルゲン、大豆アレルゲン、卵アレルゲン、貝アレルゲン、肉アレルゲン、及びトウモロコシアレルゲンから選択される食物アレルゲンである、請求項１１に記載の使用。

【請求項13】

組成物が、経腸投与用に製剤化されている、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の使用。

【請求項14】

組成物が、経口投与用に製剤化されている、請求項１０～１３のいずれか一項に記載の使用。

【請求項15】

組成物が、粘膜投与用に製剤化されている、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、抗原特異的ＩｇＡ免疫複合体を含む組成物、及びアレルゲンに対する免疫寛容を誘導するために本組成物を使用する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

アトピー性皮膚炎、喘息、及び食物アレルギーなどのアレルギー疾患の割合は、過去３０年間に、特に西側諸国の乳児及び幼児において大幅に増加した。アレルギーの有病率の増加は、出生様式、母乳育児、及びマイクロバイオームの適切な構築を可能とする適切な環境への曝露を含む、いくつかの変数に起因すると考えられている。重篤な食物アレルギー関連反応は、食物誘発性アナフィラキシーとしても知られ、米国では年間３０，０００～１２０，０００件の救急外来受診、２，０００～３，０００件の入院、及び約１５０件の死亡の原因となる生命を脅かす重篤な反応である（Ｓａｍｐｓｏｎら、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ、１１１：１６０１～１６０８頁（２００３年）；及びＲｏｓｓら、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２１：１６６～１７１頁（２００８年））。症状の始まりは様々であり、食物アレルゲンに曝露してから数秒から数時間以内に起こり、多くの場合、消化器（ＧＩ）、皮膚、呼吸器、及び循環器を含む複数の臓器系が影響を受ける（Ｗａｎｇら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ、３７：６５１～６６０頁（２００７年））。皮膚症状（例えば、蕁麻疹及び血管浮腫）が最も一般的であり、症例の約８０％において生じる。けいれん、腹痛、吐き気、嘔吐、及び下痢を含む消化器症状が、４０％もの症例で生じる（Ｓａｍｐｓｏｎら、Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３２７：３８０～３８４頁（１９９２年））。最近の臨床データは、消化管の症状と、低血圧及び低酸素症を含む、より重篤なアナフィラキシー表現型との間の関連を示唆している（Ｓｃｈｒａｎｄｅｒら、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｎｕｔｒ．、１０：１８９～１９２頁（１９９０年）；Ｔｒｏｎｃｏｎｅら、Ａｌｌｅｒｇｙ、４９：１４２～１４６頁（１９９４年）；Ｖａｎ Ｅｌｂｕｒｇら、Ｐｅｄｉａｔｒ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ、４：７９～８５頁（１９９３年）；Ｃａｌｖａｎｉら、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２２：８１３～８１９頁 ＬＩＤ － ８１０．１１１１／ｊ．１３９９－３０３８．２０１１．０１２００．ｘ［ｄｏｉ］（２０１１年）；及びＢｒｏｗｎ，Ｓ．Ｇ．Ａ．、Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１１４：３７１～３７６頁（２００４年））。

【0003】

ＩｇＡは最も豊富な免疫グロブリンであり、主に粘膜表面に存在する。その機能は、病原体と結合して、病原微生物及び粘膜組織内の物質を凝集させて固定化し、肺及び腸管を含む下層の組織へのコロニー形成及び侵入を阻止することに関連していると思われる。多くの研究が、ＩｇＡレベルと修飾性又は免疫寛容誘発性の免疫反応の発現とを結びつけている。例えば、初乳中のＩｇＡの総量は、感染性生物に対する早期の防御を提供し、生後２年間におけるアトピー性皮膚炎の発症に逆相関することが示されている（Ｏｒｉｖｕｒｉ、ｃｌｉｎ ｅｘｐ ａｌｌｅｒｇｙ、２０１４年）。母乳はＴＧＦβ１も含んでいるが、これは、Ｂ細胞においてＩｇＡクラススイッチを促進し、炎症性免疫応答を低減させる。最後に、乳酸菌などの特定の細菌を補充することで、樹状細胞との相互作用やレチノイン酸の産生を介して粘膜組織における総ＩｇＡ及び特異的ＩｇＡのレベルが上昇し、アレルギー反応の減少につながることが示されている（Ｍｉｋｕｌｉｃら、Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４（６）：５４６～５５６頁（２０１７年）；及びＰｒｅｓｃｏｔｔら、Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ、３８（１０）：１６０６～１４頁（２００８年））。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0004】

【非特許文献1】Ｓａｍｐｓｏｎら、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ、１１１：１６０１～１６０８頁（２００３年）

【非特許文献2】Ｒｏｓｓら、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２１：１６６～１７１頁（２００８年）

【非特許文献3】Ｗａｎｇら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ、３７：６５１～６６０頁（２００７年）

【非特許文献4】Ｓａｍｐｓｏｎら、Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３２７：３８０～３８４頁（１９９２年）

【非特許文献5】Ｓｃｈｒａｎｄｅｒら、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｎｕｔｒ．、１０：１８９～１９２頁（１９９０年）

【非特許文献6】Ｔｒｏｎｃｏｎｅら、Ａｌｌｅｒｇｙ、４９：１４２～１４６頁（１９９４年）

【非特許文献7】Ｖａｎ Ｅｌｂｕｒｇら、Ｐｅｄｉａｔｒ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ、４：７９～８５頁（１９９３年）

【非特許文献8】Ｃａｌｖａｎｉら、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２２：８１３～８１９頁 ＬＩＤ － ８１０．１１１１／ｊ．１３９９－３０３８．２０１１．０１２００．ｘ［ｄｏｉ］（２０１１年）

【非特許文献9】Ｂｒｏｗｎ，Ｓ．Ｇ．Ａ．、Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１１４：３７１～３７６頁（２００４年）。

【非特許文献10】Ｏｒｉｖｕｒｉ、ｃｌｉｎ ｅｘｐ ａｌｌｅｒｇｙ、２０１４年

【非特許文献11】Ｍｉｋｕｌｉｃら、Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４（６）：５４６～５５６頁（２０１７年）

【非特許文献12】Ｐｒｅｓｃｏｔｔら、Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ、３８（１０）：１６０６～１４頁（２００８年）。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

食物アレルギーなどのアレルギーを治療するための方法及び組成物に対する需要が、なお存在している。

【課題を解決するための手段】

【0006】

（簡単な概要）
本開示は、対象における食物アレルゲンに対するアレルギー反応を阻害するための、薬学的に許容される担体、及びＩｇＡ免疫グロブリン又はその抗原結合断片に結合されたアレルゲンを含む、免疫複合体を含む組成物の使用であって、ＩｇＡ免疫グロブリンが、アレルゲンに対して特異的である、組成物の使用を提供する。本組成物は、局所及び全身送達を含む、１つ以上の投与経路用に製剤化されうる。例示的な製剤は、肺（例えば、吸入）投与用製剤、並びに経口投与用製剤を含む。

【0007】

本開示はまた、対象におけるアレルギー反応を阻害する方法を提供し、本方法は、免疫複合体及び薬学的に許容される担体を含む組成物を対象に投与することを含み、免疫複合体は、アレルゲンに特異的なＩｇＡ免疫グロブリンに結合したアレルゲンを含む。本開示の免疫複合体を含む組成物の投与は、対象におけるアレルギー性免疫応答を予防及び／又は低減（例えば、Ｔｈ２型免疫応答の予防及び／又は低減）するために、対象を予防的に処置するために使用されうる。本開示の免疫複合体を含む組成物の投与はまた、対象におけるアレルギー性免疫応答（例えば、１つ以上の粘膜部位におけるＴｈ２型免疫応答）を改善及び／又は低減するために、対象を治療的に処置するためにも使用されうる。本開示は、免疫複合体を含む組成物の投与経路又は投与手段によって限定されるものではない。投与経路の例は、肺投与（例えば、吸入による）、経腸投与（例えば、経口、胃又は十二指腸（例えば、栄養チューブ）、及び／又は直腸投与による）、並びに本明細書に記載される他の経路を含むが、これらに限定はされない。

【図面の簡単な説明】

【0008】

【図1】図１は、（Ａ）全身感作中のアレルギー動物の気道粘膜へのＩｇＡ免疫複合体の例示的な投与レジメンを示しており：（Ｂ及びＣ）それが、粘液分泌過多から動物を保護していること、（Ｄ）免疫サイトカイン応答を変化していること、及び（Ｅ）Ｔｒｅｇ細胞の総数が増加していることを示す。

【図2】図２は、（Ａ）感作中の気道粘膜へのＩｇＡ免疫複合体の例示的な投与レジメンが、チャレンジ時の食物アレルギーの発症から動物を保護することを示している：（Ｂ）それが、アナフィラキシーを指し示す臨床的に関連する下痢及び体温低下をブロックしていること、（Ｃ）全身性のＩｇＥ及び肥満細胞脱顆粒の証拠（ｍＭＣＰｔ１）を低減させていること、（Ｄ）抑制性のサイトカインであるＩＬ－１０を増加させながらＴｈ２サイトカインを低減させていることを示す。異なるアレルゲンであるピーナッツ（ＰＥ）での効果の欠如は、応答のアレルゲン特異性を実証している。

【図3】図３は、（Ａ）改変食物アレルギーモデルと、ＴＣＲトランスジェニックＤＯ１１ Ｂａｌｂ／ｃマウス由来のＴｈ２偏性細胞の移入がＴｒｅｇ細胞へと発生しないこと、並びにＩｇＡ免疫複合体が（Ｂ）有意な臨床的変化、及び（Ｃ）有意なサイトカイン変化を誘導すること、また、（Ｄ）ＩＬ－４＋の移入されたＤＯ１１ Ｔｈ２偏性細胞の低減が、寛容化応答中に発生したＦｏｘｐ３＋のＴｒｅｇ細胞と重なっていないことを示しており、これは、免疫複合体の寛容化効果に関連するＴｒｅｇ細胞の誘導が、非Ｔｈ２偏性細胞から生成されることを指し示している。

【図4】図４は、（Ａ）ＩｇＡ免疫複合体が、肥満細胞の蓄積を変化させ、（Ｂ）ＩｇＥ及びｍＭＣＰＴ－１を低減させ、及び（Ｃ）高度に偏ったアレルゲン特異的Ｔｈ２細胞を感作マウスに移入した場合でも、食物アレルギーマウスの腸において寛容原性環境を促進することを示している。

【図5】図５は、（Ａ）アナフィラキシーの臨床指標としての下痢及び体温低下の発生率が、ＩｇＡ－ＴＮＰ－ｏｖａ免疫複合体処置動物でのみ制御されたことを示している。（Ｂ）血清ＩｇＥ及びＭｃｐｔの測定により、肥満細胞活性化因子及び産物の両方のレベルが減少することを指し示した。（Ｃ）腸間膜リンパ節におけるＴｒｅｇ細胞の増加は、経口のＩｇＡ免疫複合体で処置した動物において非常に有意であった。データは１群あたり５～６匹のマウスからの平均±ＳＥを表している。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００５。

【図6】図６は、（Ａ）ＴＧＦｂ又は（Ｂ）ＩＬ－１０についてｑＰＣＲ分析によって評価された単離ｍＲＮＡを示している。（Ｃ）別の試験では、ＢＭＤＣがＩｇＡ免疫複合体又は適切な対照と共にインキュベートされ、一晩のインキュベート後、細胞が洗浄され、オボアルブミンのＴＣＲトランスジェニックであるＤＯ１１ ＩＬ－４－ＧＦＰレポーターマウス由来のナイーブ脾臓ＣＤ４＋ Ｔ細胞と組み合わせられ、ＴＮＰを伴わないオボアルブミンの存在下で４８時間インキュベートされた。データは３回の反復実験からの平均値±ＳＥを表している。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００５。

【発明を実施するための形態】

【0009】

（定義）
本技術の理解を容易にするために、数多くの用語及び語句が以下に定義される。追加の定義が、詳細な説明全体にわたって記載される。

【0010】

本明細書で使用される「アレルギー」という用語は、正常／健康な個体では通常無害である物質（すなわち、「アレルゲン」）に対する異常又は病的な免疫反応を伴う慢性状態を指す。アレルギーは、過敏反応と呼ばれる免疫系応答の一種である。本明細書で使用される「過敏症」及び「過敏反応」という用語は、組織傷害を生じ、重篤な疾患を引き起こしうる有害な免疫応答を指す。過敏反応は４つのタイプに分類されており、アレルギーはしばしばＩ型過敏症（ＩｇＥにより介される即時型過敏反応）と同一視される。「アレルゲン」とは、対象においてアレルギー反応を誘導するあらゆる物質（例えば、抗原）を指す。アレルゲンの例は、空中アレルゲン（例えば、ダニ、カビ、胞子、樹木、雑草、及び草の花粉などの植物花粉）、食品（牛乳、卵、大豆、小麦、ナッツ、又は魚のタンパク質）、動物産物（例えば、猫又は犬の毛）、薬物（例えば、ペニシリン）、昆虫毒、及びラテックスを含むが、これらに限定はされない。本明細書で使用される「アレルギー反応」という用語は、異物、典型的には無害な物質への個体の曝露によって引き起こされる免疫系の病理学的反応を指す。よって、アレルギー反応を「阻害する」とは、アレルゲンに対する病理学的反応の抑制、改善、又は予防を指す（例えば、対象（例えば、Ｔｈ２媒介性の疾患を有する対象）におけるＴｈ２偏向免疫応答をＴｈ１型の免疫応答へと向け直す（例えば、Ｔｈ１型の免疫応答へと偏性させる、及び／又は、よりバランスのとれたＴｈ１／Ｔｈ２型免疫応答を生成する）ことによる）。

【0011】

「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書において互換的に使用され、少なくとも２つ以上の連続したアミノ酸を含むアミノ酸のポリマー形態を指し、これは、コード化及び非コード化アミノ酸、化学的若しくは生化学的に修飾若しくは誘導体化されたアミノ酸、並びに修飾されたペプチド骨格を有するポリペプチドを含み得る。

【0012】

本明細書で使用される「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「治療している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」などの用語は、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることを指す。好ましくは、効果は治療的であり、すなわち、効果は、傷害、疾患、又は状態、及び／又は傷害、疾患、又は状態に起因する有害症状を部分的又は完全に緩和又は治癒する。同様に、「治療薬」は、それを必要とする対象に投与された場合に、傷害、疾患、状態及び／又は有害症状を緩和又は治癒することができる物質、分子、又は化合物である。この目的のために、本明細書に記載の方法は、ＩｇＡを含む免疫複合体の「治療上有効な量」を投与することを含むことが望ましい。「治療上有効な量」とは、所望の治療結果（例えば、アレルギー反応の抑制）を達成するために必要な投与量及び投与期間において有効な量を指す。治療上有効な量は、個体の疾患又は状態の重篤度、年齢、性別、及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発する治療薬の能力などの要因に従って変動しうる。

【0013】

本明細書で使用される場合、「免疫原」及び「抗原」という用語は、対象において免疫応答を誘発することができる活性作用剤（例えば、アレルゲン又は微生物（例えば、細菌、ウイルス又は真菌））及び／又はその部分若しくは成分を指す。

【0014】

本明細書で使用される場合、「免疫グロブリン」又は「抗体」という用語は、脊椎動物の血液又は他の体液中に見出されるタンパク質を指し、これは、細菌及びウイルスなどの異物を同定して中和するために免疫系によって使用される。典型的には、免疫グロブリン又は抗体は、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むタンパク質である。ＣＤＲは抗体の「超可変領域」を形成し、これが抗原結合を担う。免疫グロブリンの全体は典型的には、４つのポリペプチドからなる：重鎖（Ｈ）ポリペプチドの２つの同一のコピーと軽鎖（Ｌ）ポリペプチドの２つの同一のコピー。各重鎖は１つのＮ末端可変（Ｖ_Ｈ）領域と３つのＣ末端定常（Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３）領域を含み、各軽鎖は１つのＮ末端可変（Ｖ_Ｌ）領域と１つのＣ末端定常（Ｃ_Ｌ）領域を含む。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κ（カッパ）とλ（ラムダ）の２つの異なるタイプのいずれかに１つに分類され得る。典型的な抗体では、各軽鎖はジスルフィド結合によって重鎖に連結されており、２つの重鎖はジスルフィド結合によって互いに連結されている。軽鎖可変領域は、重鎖の可変領域と整列され、軽鎖定常領域は、重鎖の第１定常領域と整列される。重鎖の残りの定常領域は、互いに整列される。

【0015】

本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、抗原上の単一のエピトープに対して向けられたＢリンパ球の単一クローンによって産生される抗体を指す。モノクローナル抗体は典型的には、ＫｏｈｌｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、５：５１１～５１９頁（１９７６年）で最初に報告されたように、ハイブリドーマ技術を用いて生産される。モノクローナル抗体はまた、組換えＤＮＡ法を用いて産生されても（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）、ファージディスプレイ抗体ライブラリーから単離されても（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４～６２８頁（１９９１年）；及びＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１～５９７頁（１９９１年）を参照）、又は完全ヒト免疫グロブリン系を保有するトランスジェニックマウスから産生されたても（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、２３（９）：１１１７～２５頁（２００５年）、及びＬｏｎｂｅｒｇ、Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１８１：６９～９７頁（２００８年）を参照）よい。対照的に、「ポリクローナル」抗体は、動物内で異なるＢ細胞系列によって分泌される抗体である。ポリクローナル抗体は、同じ抗原上の複数のエピトープを認識する免疫グロブリン分子の集合体である。

【0016】

「抗体の断片」、「抗体断片」及び抗体の「抗原結合断片」という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指すために、本明細書では互換的に使用される（一般に、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．、２３（９）：１１２６～１１２９頁（２００５年）を参照）。抗体断片は、例えば、１つ以上のＣＤＲ、可変領域（又はその一部）、定常領域（又はその一部）、又はそれらの組み合わせを含むことが望ましい。抗体断片の例は、（ｉ）Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｌ、及びＣ_Ｈ１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド結合により連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）_２断片、（ｉｉｉ）抗体の単一のアームのＶ_Ｌ及びＶ_ＨドメインからなるＦｖ断片、（ｉｖ）穏やかな還元条件を用いてＦ（ａｂ’）_２断片のジスルフィド結合を切断した結果生じるＦａｂ’断片、（ｖ）ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ断片）、並びに（ｖｉ）抗原と特異的に結合する抗体単一可変領域ドメイン（Ｖ_Ｈ又はＶ_Ｌ）ポリペプチドであるドメイン抗体（ｄＡｂ）を含むが、これらに限定はされない。

【0017】

本明細書で使用される場合、抗体又は他の実体（例えば、抗原結合ドメイン）が、抗原又はエピトープを「特異的に認識する」、「特異的に結合する」、又は抗原又はエピトープに「特異的である」場合、それはタンパク質及び／又は高分子の複雑な混合物中の抗原を優先的に認識し、抗原又はエピトープを提示しない他の実体よりも実質的に高い親和性で抗原又はエピトープに結合する。この点に関して、「実質的に高い親和性」とは、所望のアッセイ又は測定装置を用いて、実体と区別される抗原又はエピトープの検出を可能にするのに十分高い親和性を意味する。典型的には、それは、少なくとも１０^７Ｍ^－１（例えば、＞１０^７Ｍ^－１、＞１０^８Ｍ^－１、＞１０^９Ｍ^－１、＞１０^１０Ｍ^－１、＞１０^１１Ｍ^－１、＞１０^１２Ｍ^－１、＞１０^１３Ｍ^－１など）の結合定数（Ｋ_ａ）を有する結合親和性を意味する。特定のそのような実施形態では、異なる抗原がその特定のエピトープを含んでいる限り、抗体は異なる抗原に結合することができる。特定の例では、例えば、異なる種由来の相同なタンパク質は、同じエピトープを含みうる。

【0018】

本明細書で使用される場合、「宿主」又は「対象」という用語は、本発明の組成物及び方法によって処置される（例えば、投与される）個体を指す。対象は、哺乳類（例えば、ネズミ、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）を含むが、それらに限定されるものではなく、最も好ましくはヒトを含む。本発明の文脈において、「対象」という用語は、一般に、アレルギー（例えば、食物アレルギー）に罹患している疑いがある、又は罹患していると診断された個人を指す。

【0019】

本明細書において使用される場合、「免疫応答」という用語は、対象の免疫系による応答を指す。例えば、免疫応答は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の活性化、リンホカイン（例えば、サイトカイン（例えば、Ｔｈ１又はＴｈ２型サイトカイン）若しくはケモカイン）の発現及び／又は分泌、マクロファージの活性化、樹状細胞の活性化、Ｔ細胞の活性化（例えば、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋ Ｔ細胞）、ＮＫ細胞の活性化、及び／又はＢ細胞の活性化（例えば、抗体の生成及び／又は分泌）における検出可能な変化（例えば、増加）を含むが、これらに限定はされない。免疫応答のさらなる例は、ＭＨＣ分子へ免疫原（例えば、抗原）が結合して、細胞傷害性Ｔリンパ球（「ＣＴＬ」）応答を誘導すること、Ｂ細胞応答（例えば、抗体産生）及び／又はＴヘルパーリンパ球応答、及び／又は免疫原性ポリペプチドが由来する抗原に対する遅延型過敏症（ＤＴＨ）応答、免疫系の細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞（例えば、任意の発生段階のもの（例えば、形質細胞）））の拡大（例えば、細胞集団の増殖）、並びに抗原提示細胞による抗原の処理及び提示の増加を誘導することを含む。免疫応答は、対象の免疫系が、異物として認識する免疫原（例えば、微生物（例えば、病原体）からの非自己抗原、又は異物として認識される自己抗原）に対するものでありうる。よって、本明細書で使用される場合、「免疫応答」とは、自然免疫応答（例えば、Ｔｏｌｌ受容体シグナル伝達カスケードの活性化）、細胞媒介性免疫応答（例えば、Ｔ細胞（例えば、抗原特異的Ｔ細胞）及び免疫系の非特異的細胞によって媒介される応答）、並びに体液性免疫応答（例えば、Ｂ細胞によって媒介される応答（例えば、抗体の生成並びに血漿、リンパ液、及び／又は組織液中への分泌を介するもの））を含むが、これらに限定されない、あらゆるタイプの免疫応答を指すと理解されるべきである。「免疫応答」という用語は、抗原及び／又は免疫原に応答する対象の免疫系の能力（例えば、免疫原（例えば、病原体）に対する初期応答と、適応免疫応答の結果である獲得（例えば、記憶）応答の両方）のあらゆる側面を包含することを意味する。

【0020】

本明細書で使用される場合、「粘膜免疫」という用語は、表皮、歯肉、鼻、腸、子宮及び前立腺などの環境と接触する表面で生じる免疫応答を指す。健康な状態では、粘膜免疫系は、病原体に対する保護を提供するが、無害な常在微生物及び良性の環境物質に対しては寛容性を維持する。

【0021】

本明細書で使用される場合、「免疫寛容」又は「寛容」という用語は、免疫応答を誘導する可能性を有する物質又は組織に対する免疫系の無応答状態を指す。「中枢性寛容」とは、免疫系が自己と非自己を区別する主要な方法であり、自己反応性リンパ球クローンが完全な免疫担当細胞へと発達する前に、それらを除去することによって確立される。中枢性寛容は、Ｔリンパ球及びＢリンパ球それぞれについて、胸腺及び骨髄におけるリンパ球の発達過程中に生じる。「末梢性寛容」は、様々な環境因子（アレルゲン、腸内微生物など）に対する免疫系の過剰反応を防ぐために重要であり、Ｔ細胞及びＢ細胞が成熟して末梢組織及びリンパ節に入った後に発生する。

【0022】

本明細書に記載されているように、任意の適切なサンプルタイプが、アレルギーを有すると疑われる対象から得られうる。対象（例えば、ヒト）が、アレルギーを経験する素因があるか、又はアレルギー症状を呈している場合、「アレルギーを有する疑い」がある。素因は、遺伝的なもの（例えば、アレルギーを経験する特定の遺伝的傾向）、又は他の要因（例えば、環境条件、特定の食品中存在する免疫原性化合物への曝露など）によるものでありうる。よって、本発明は、特定のリスクに限定されるものではなく、また、本発明は、特定のアレルギーに限定されるものでもない（例えば、あらゆるヒトが任意のアレルギーを経験しうる）。

【0023】

（詳細な説明）
本開示は、少なくとも部分的に、同族の抗原と複合体化したＩｇＡが、既存のアレルギー応答を有する動物において免疫寛容を提供するという発見に基づいている。本開示を実施するためにメカニズムの理解は必要とされず、本開示は特定のメカニズムに限定されないが、いくつかの態様において、抗原と複合体化したＩｇＡを含む組成物は、対象（例えば、既存のアレルギー応答を有する対象）において、寛容化シグナル及び／又は制御性Ｔ細胞（「Ｔｒｅｇ」又は「Ｔｒｅｇ細胞」）の生成を提供する。いくつかの態様において、本開示の組成物及び方法によって提供される免疫寛容（例えば、Ｔｒｅｇ細胞の誘導を介するもの）は、粘膜表面（例えば、肺及び腸）における慢性の重篤なアレルギー応答への進行を防ぎ、アナフィラキシーをブロックする。他の態様において、本開示の組成物及び方法によって提供される免疫寛容（例えば、Ｔｒｅｇ細胞の誘導を介するもの）は、対象内で全身的に生じる。

【0024】

いくつかの実施形態において、本開示は、対象におけるアレルギー反応を阻害する方法であって、方法が、免疫複合体及び薬学的に許容される担体を含む組成物を対象に投与することを含み、免疫複合体が、アレルゲンに対して特異的なＩｇＡ免疫グロブリンに結合したアレルゲンを含み、対象が、組成物を投与する前に、１つ以上の粘膜部位において確立されたＴｈ２極性化免疫応答を有する、方法を提供する。

【0025】

本明細書において使用される場合、「免疫複合体（ＩＣ）」という用語は、可溶性の抗原に結合した抗体を指す。免疫複合体は、「抗原－抗体複合体」又は「抗原－結合抗体」とも呼ばれうる。ＩｇＡは、産生される最も豊富な免疫グロブリンであり、主に粘膜表面に存在する。その機能は、病原体と結合して、病原微生物及び粘膜組織内の物質を凝集させて固定化し、肺及び腸管を含む下層の組織へのコロニー形成及び侵入を阻止することに関連していると思われる。ＩｇＡに加えて、粘膜表面は、タイトな上皮バリアを介した病原体からの保護と、粘液及びその他の物質の分泌を獲得して、コロニー形成を防いでいる。分泌型ＩｇＡの産生が部分的又は全体的に欠損している患者は、環境抗原（食品を含む）に対するアレルギーの増加、並びに自己免疫応答の有病率の増加を経験することが示されている。これら及び他のデータは、ＩｇＡが粘膜表面において免疫系応答の感作をブロックし、寛容性を誘導することに関与することを示唆している。特に、初乳及び母乳中のＩｇＡの総量は、感染性生物に対する早期の防御を提供することができ、また、生後２年間におけるアトピー性皮膚炎の発症に逆相関することも示されている（Ｏｒｉｖｕｒｉ、ｃｌｉｎ ｅｘｐ ａｌｌｅｒｇｙ、２０１４年）。母乳はＴＧＦβ１も含んでいるが、これは、Ｂ細胞においてＩｇＡクラススイッチを促進する。また、研究は、Ｔｒｅｇ細胞の発生、ＴＧＦβの産生、ＩｇＡレベル、及び寛容誘導の間には、動的な相関関係があることも見出している。

【0026】

本組成物の免疫複合体は、ＩｇＡ抗体全体、又は本明細書に記載の抗体断片のいずれかなど、ＩｇＡ抗体の抗原結合断片を含みうる。ＩｇＡ抗体又はその抗原結合断片が、１つ以上の抗原に特異的に結合される。いくつかの実施形態において、ＩｇＡ免疫複合体によって誘導される寛容化応答がアレルゲン特異的であることを指し示す本明細書に記載の実験において実証されているように、ＩｇＡ免疫グロブリンは単一のアレルゲンに対して特異的である。アレルゲンは、本明細書に開示されている、又は当該技術分野で知られている任意の適切なアレルゲンでありうる。いくつかの実施形態では、アレルゲンは、ダニ、カビ、胞子、樹木、雑草、及び草の花粉などの植物花粉などの空中アレルゲンである。他の実施形態では、アレルゲンは食物アレルゲンである。食物アレルギーは、セリアック病などの非アトピー性疾患とはメカニズム的に異なるアトピー性疾患であることが理解される。食物アレルギーは、ＩｇＥを介するもの、ＩｇＥ依存的経路とＩｇＥ非依存的経路の両方を介するもの（混合型）、及びＩｇＥを介さないものへと大別され得る。食物アレルギーの根底にある免疫メカニズムについては、例えば、Ｗｏｎｇら、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６（１２）：７５１～７６５頁（２０１６年）にさらに記載されている。免疫複合体は、ＩｇＡ免疫グロブリンと食物アレルゲンのいずれか１つ若しくは組み合わせを含みうる。例えば、食物アレルゲンは、ピーナッツアレルゲン、木の実アレルゲン、乳製品アレルゲン、小麦アレルゲン、ゴマアレルゲン、大豆アレルゲン、卵アレルゲン、貝アレルゲン、肉アレルゲン、及び／又はトウモロコシアレルゲンでありうる。

【0027】

いくつかの態様において、本組成物は、薬学的に許容される担体などの担体を含むことが望ましい。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、リン酸緩衝生理食塩水、水、及び様々なタイプの湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）、あらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、ラウリル硫酸ナトリウム、等張化剤及び吸収遅延剤、崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン又はデンプングリコール酸ナトリウム）、ポリエチレングリコールなどを含むが、これらに限定はされない標準的な薬学的担体のいずれかを指す。組成物はまた、安定剤及び保存剤も含み得る。担体、安定剤及びアジュバントの例は、記載されており、当技術分野で公知である（例えば、Ｍａｒｔｉｎ、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１５版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．、イーストン、ペンシルベニア州（１９７５年）を参照のこと）。

【0028】

担体の選択は、使用される特定の免疫複合体及び投与の方法によって部分的に決定される。例えば、医薬組成物は、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウム、及び塩化ベンザルコニウムなどの防腐剤を含んでいてもよい。任意選択的に、２種以上の保存剤の混合物が使用されうる。さらに、組成物中において緩衝剤が使用されてもよい。適切な緩衝剤は、例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸、リン酸カリウム、並びにその他の様々な酸及び塩を含む。任意選択的に２種以上の緩衝剤の混合物が使用されうる。投与可能な（例えば、非経口投与可能な）組成物を調製するための方法は、当業者に公知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；第２１版（２００５年５月１日）に詳細に記載されている。

【0029】

いくつかの実施形態において、組成物は、組成物の送達が、処置されるべき部位の感作を引き起こす前に、そして十分な時間内に起こるように、時間－放出、遅延放出、及び持続放出送達系を採用し得る。多くのタイプの放出送達系が利用可能であり、当業者に知られている。そのような系は、組成物の反復投与を回避することができ、それにより、対象及び医師の利便性を高め、特定の実施形態にとって特に好適となりうる。

【0030】

本組成物は、望ましくは、免疫複合体の「有効量」、すなわち、レシピエント（例えば、ヒト）において所望の免疫応答（例えば、寛容）を引き起こす免疫複合体の用量又は濃度を含む。例えば、組成物は、上述のように、治療上有効な量の免疫複合体を含みうる。代替的に、薬理学的及び／又は生理学的効果は、予防的であってもよく、すなわち、その効果は疾患若しくは状態又はその症状を完全に又は部分的に予防する。この点で、本開示の組成物は、「予防上有効な量」の免疫複合体を含む。「予防上有効な量」とは、所望の予防結果（例えば、アレルギー又はアレルギー反応の予防）を達成するために必要な投与量及び投与期間において有効な量を指す。例えば、免疫複合体を含む組成物が、アレルギーを発症する前に対象（例えば、乳児）に投与されうる。

【0031】

有効量は、１回以上の投与（例えば、同じ経路又は異なる経路を介するもの）又は適用において投与され得るが、特定の製剤又は投与経路に限定されることは意図されていない。有効量のＩｇＡ－アレルゲン免疫複合体を含む組成物は、経口投与、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、肺投与、経皮投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、頬投与、舌下投与、又は座薬投与を含む、標準的な投与技術を用いて、哺乳動物（例えば、ヒト）に投与され得る。組成物は、好ましくは非経口投与に適している。本明細書で使用される場合、「非経口投与」という用語は、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、直腸投与、膣内投与、及び腹腔内投与を含む。より好ましくは、本組成物は、静脈内、腹腔内又は皮下注射による末梢全身送達を用いて哺乳動物に投与される。いくつかの実施形態において、組成物は経鼻投与用に製剤化される。

【0032】

本開示は、本開示の免疫複合体を対象に提供する（例えば、それにより、Ｔｈ２型アレルギー免疫応答を低減及び／若しくは改善すること、並びに／又は対象においてＩｇＡ標的化アレルゲンに対する粘膜寛容を促進する）ことを含む、アレルギーを有するか又はアレルギーを経験する素因を有する対象を（例えば、予防的及び／又は治療的に）処置するための組成物及び方法を提供する。いくつかの実施形態では、免疫複合体を含む組成物が経腸的に送達される。他の実施形態では、免疫複合体を含む組成物は、肺投与により（例えば、吸入により）送達される。なおさらなる実施形態において、免疫複合体を含む組成物は、本明細書に記載の２種以上の経路で投与される。

【0033】

いくつかの実施形態において、経口投与によるＩｇＡ免疫複合体の直接送達及び／又はカプセル化は（例えば、腸内で局所的に、及び／又は気道内などの遠隔の粘膜部位において）粘膜寛容を促進するために使用される。ＩｇＡ免疫複合体の送達は、他の組成物に非依存的でありうる。いくつかの実施形態では、（例えば、生分解性微粒子による）カプセル化が使用されてもよい（例えば、胃の低いＰＨを通過する間のＩｇＡ免疫複合体の分解を緩和するため）。本開示は、特定のカプセル化技術に限定されるものではない。いくつかの実施形態において、免疫複合体のカプセル化は、ポリマーポリ（エチレングリコール）－ブロック－ポリカプロラクトン（ＰＥＧ－ｂ－ＰＣＬ）ベースのナノ粒子又は１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－（１’－ｒａｃ－グリセロール）（ＰＯＰＧ）などの試薬を利用する。

【0034】

本開示の方法によれば、免疫複合体を含む組成物は、望ましくは、組成物を投与する前に（例えば、１つ以上の粘膜部位において）Ｔｈ２偏向免疫応答が確立している対象に投与される。Ｔリンパ球には、ＣＤ４及びＣＤ８として知られる細胞表面分子の存在によって区別される、２つの主要なサブセットがあることが理解される。ＣＤ４を発現するＴリンパ球はヘルパーＴ細胞としても知られ、これは、最も多量にサイトカインを産生する細胞である。ＣＤ４＋ Ｔ細胞はさらに、Ｔｈ１細胞とＴｈ２細胞へと細分化され得るが、それらが産生するサイトカインは、Ｔｈ１型サイトカインとＴｈ２型サイトカインとして知られている。Ｔｈ１型サイトカイン（例えば、ＩＦＮ－γ及び／又は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ））は、細胞内寄生虫を殺し、自己免疫応答を持続させる原因となる炎症性応答を生成する傾向がある。過剰な炎症促進性の応答は、制御不能な組織損傷につながる可能性があるが、これは、Ｔｈ２型サイトカインによって打ち消されうる。Ｔｈ２型サイトカインは、アトピーにおけるＩｇＥ及び好酸球応答の促進に関連するインターロイキン４（ＩＬ－４）、５（ＩＬ－５）、及び１３（ＩＬ－１３）を含み、また、より抗炎症性の応答を示すインターロイキン１０も含む。よって、いくつかの実施形態において、ＩｇＡ免疫複合体を含む組成物を投与すると、対象におけるＩＬ－１０、ＴＧＦ－β１、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１７、及び／又はＣＣＬ２の発現が増加する。過剰になると、Ｔｈ２応答はＴｈ１が介在する殺微生物作用を打ち消す。ヒトは理想的には、バランスのとれたＴｈ１及びＴｈ２応答を生じる。Ｔｈ２免疫応答は、ＩｇＥ抗体の産生及び高レベルのＴｈ２サイトカインによって特徴づけられ、いくつかの病原体、並びに、がん、大腸炎、喘息、及びアレルギーに対する不十分な防御と関連している。Ｔｈ２細胞は、アレルギー及び喘息の患者のほとんどにおいて優勢であり、ＩＬ－４の影響下で未分化の前駆Ｔ細胞から分化する。Ｔｈ２細胞は、Ｔｈ２サイトカインであるＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－９、及びＩＬ－１３の放出を通してアレルギー性の炎症を制御する。

【0035】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の免疫複合体を含む組成物の投与は、対象における既存のＴｈ２免疫応答の調節をもたらす。例えば、本開示の方法は、対象をＩｇＡ免疫複合体に曝露することを介して、対象における（例えば、Ｔｈ２媒介性の疾患を有する対象における）Ｔｈ２に偏向した免疫応答をＴｈ１型の免疫応答へと向け直す（例えば、Ｔｈ１型の免疫応答へと偏向させる、及び／又は、よりバランスのとれたＴｈ１／Ｔｈ２型免疫応答を生成する）能力を提供する。いくつかの実施形態において、免疫複合体を含む組成物を対象に投与すると、対象におけるＴｈ１型サイトカイン（例えば、ＩＦＮ－γ及び／又は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ））の発現が増加する。よって、本開示の方法は、アレルギー（例えば、ピーナッツ又は他の食物アレルギー、呼吸器アレルギーなど）に対して、個人を予防接種するために使用されうる。１つの実施形態において、本発明は、従来的なアレルギー注射で達成される利益よりも、より効果的な利益を提供する（例えば、アレルギーの徴候、症状又は原因がより有意に低減される、又はアレルギーの徴候、症状又は状態がより長期間持続して低減される）。

【0036】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＩｇＡ免疫複合体を含む組成物の投与は、体液性免疫応答（例えば、特異的抗体の発生）及び細胞性免疫応答（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球）の両方の誘導をプライミング、可能化、及び／又は増強する（例えば、それによってアレルギー疾患の徴候、症状又は状態を改善する）。理想的には、ＩｇＡ免疫複合体組成物を投与すると、対象における制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の発生が誘導される。本明細書で使用される場合、「制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）」という用語は、免疫応答を抑制し、それによって恒常性と自己寛容を維持するように働く、Ｔ細胞の特殊な亜集団を指す。Ｔｒｅｇは、Ｔ細胞の増殖とサイトカインの産生を阻害することができ、自己免疫の予防に重要な役割を果たす。Ｔｒｅｇは、阻害性サイトカインによる抑制、細胞溶解による抑制、代謝の障害による抑制、樹状細胞（ＤＣ）の成熟若しくは機能の調節による抑制を介して、免疫応答を阻害し得る。阻害性サイトカインに関しては、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）、トランスフォーミング増殖因子－β（ＴＧＦβ）、及びＩＬ－３５がＴｒｅｇ細胞機能の重要なメディエーターである。マウス及びヒトのＴｒｅｇ細胞は両方とも、インビトロ及びインビボで、グランザイムＡ及び／又はグランザイムＢとパーフォリンを介して細胞溶解を媒介することが示されている。

【0037】

Ｔｒｅｇは、マスター転写因子であるフォークヘッドボックスＰ３（Ｆｏｘｐ３）の発現によって特徴づけられる。Ｆｏｘｐ３発現は、Ｔｒｅｇ系統のマーカーとして広く使われているが、最近のデータは、Ｔｒｅｇの運命がサイトカイン、核内因子、及びエピジェネティック修飾を含む多因子のシグナル伝達経路によって決定されることを示している。ＦＯＸＰ３とＣＤ４５ＲＡの発現レベルに基づいて、ヒトＴｒｅｇ細胞のいくつかの亜集団が同定されている。そのような亜集団は、ナイーブ／休止型（ＣＤ４５ＲＡ^＋ＦｏｘＰ３^ｌｏｗ）、エフェクター型（ＣＤ４５ＲＡ^－ＦｏｘＰ３^ｈｉｇｈ）、及びサイトカイン産生型（ＣＤ４５ＲＡ^－ＦｏｘＰ３^ｌｏｗ）として分類されている。ナイーブ型のＴｒｅｇは、完全に脱メチル化されたＦｏｘＰ３遺伝子座を有しており、胸腺から生じる。エフェクター型のＴｒｅｇは、インビボにおいて活性な集団である一方、サイトカイン産生型のＴｒｅｇは、ＩＬ－１７及びＩＦＮ－γのような炎症促進性サイトカインを産生しながらも、免疫応答を抑制することができる細胞を含んでいる。Ｔｒｅｇについては、例えば、Ｋｏｎｄｅｌｋｏｖａら、ＡＣＴＡ ＭＥＤＩＣＡ（Ｈｒａｄｅｃ Ｋｒａｌｏｖｅ）２０１０年；５３（２）：７３～７７頁；Ｖｉｇｎａｌｉら、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８年７月；８（７）：５２３～５３２頁．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｒｉ２３４３；及びＲｏｍａｎｏら、Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０１９年１月３１日；ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１９．０００４３にさらに記載されている。

【0038】

さらに、いくつかの実施形態において、ＩｇＡ免疫複合体を含む組成物は、（例えば、対象に投与された場合）全身性免疫応答と粘膜免疫応答の両方を誘導する（例えば、全身性免疫及び／又は粘膜免疫を生成する（例えば、それにより、アレルギー疾患の徴候、症状又は状態を低減又は予防する））。よって、いくつかの実施形態において、本開示の組成物の投与は、１種又は複数種のアレルゲン及び／又はアレルギー物質（例えば、食物アレルゲン）への曝露に対する保護をもたらす。理想的には、ＩｇＡ免疫複合体を含む組成物の投与は、その後アレルゲンに曝露された対象におけるアレルゲンに対する過敏性の低下をもたらす。

【0039】

本開示の方法は、患者において所望の生物学的効果を達成するために、他の治療方法との組み合わせで実施され得る。理想的には、本開示の方法は、１つ以上の粘膜部位におけるアレルギーの症状及び徴候並びに／又はＴｈ２偏向免疫応答を改善する１つ以上の治療薬又はレジメンを含む、又はそれらとの組み合わせで実施されうる。例えば、本開示の方法は、潜在的な食物アレルゲンに対する個体の減感作のために、１つ以上の免疫療法剤又は治療レジメンとの組み合わせで（例えば、同時に、同じ経路で、及び／又は同様な漸増用量スキームで）実施されうる。減感作免疫療法は一般に、舌下、経口、又は皮膚を通して送達される。舌下免疫療法、又はＳＬＩＴは、アレルゲンの液体抽出物を舌下に投与し、それを数分間保持することを含む。１日のアレルゲン投与量は、ミリグラム未満の範囲から始まり、数日又は数週間かけて徐々に増加する。食物アレルギーに対するＳＬＩＴの最初の二重盲検プラセボ対照試験は２００５年に発表され（Ｅｎｒｉｑｕｅら、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１６：１０７３～１０７９頁（２００５年））、２０１３年の大規模な多施設共同無作為化プラセボ対照二重盲検クロスオーバー試験が、ピーナッツアレルギーに対するＳＬＩＴを評価した（Ｆｌｅｉｓｃｈｅｒら、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３１：１１９～１２７頁（２０１３年））。経口免疫療法、又はＯＩＴでは、低用量（ミリグラムの範囲）のアレルゲンが毎日摂取され、数か月の期間をかけて（例えば２週間ごとに）徐々に投与量が増やされる。ＯＩＴでは、他の形態の免疫療法に比べてアレルゲンの投与量が多いため、患者はしばしば、偶発的な曝露による生命を脅かす反応を避けるのに十分な量のアレルゲンに減感作されるだけでなく、グラム単位の量のアレルゲン性食品を摂取できる程度にまで減感作され得る。表皮免疫療法、又はＥＰＩＴは、マイクログラム単位の量のアレルゲンを含む接着剤を用いて、抗原を皮膚表面に送達する。この投与経路は、ＯＩＴよりも副作用が少なく、副作用の程度も軽いようであり、一部の対象は、同じ食物アレルゲンを毎日経口摂取するよりも、皮膚パッチを貼ることを好みうる。

【0040】

他の実施形態では、本開示の方法は、モノクローナル抗体療法との組み合わせで実施されうる。アレルギー性免疫応答に関連するプロセスをブロックするために、いくつかのモノクローナル抗体が開発されている。例えば、モノクローナル抗体のオマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標））は、ＩｇＥ抗体のＦｃ領域に結合して、ＩｇＥのＦｃεＲＩへの結合をブロックし、よって、Ｆｃ受容体を介した肥満細胞及び好塩基球の活性化及び脱顆粒を防ぐ（Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎら、Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．、７：１１６１０頁（２０１６年））。オマリズマブはもともと、アレルギー性喘息の治療薬として承認されたが、食物アレルギーの治療薬としてＯＩＴとの併用が一連の小規模な試験でテストされている（Ｎａｄｅａｕら、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２７：１６２２～１６２４頁（２０１１年）；Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３２：１３６８～１３７４頁（２０１３年）；Ｗｏｏｄら、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３７：１１０３～１１１０頁（２０１６年）；及びＢｅｇｉｎら、Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｓｔｈｍａ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１０：７（２０１４年））。また、食物アレルギーの上流のメディエーターを標的とするモノクローナル抗体も、本明細書に記載の方法において使用されうる。例えば、メポリズマブ（ＮＵＣＡＬＡ（登録商標））及びレスリズマブ（ＣＩＮＱＡＩＲ（登録商標））などのＩＬ－５に結合するモノクローナル抗体は、牛乳アレルゲンによって誘発され得る好酸球性食道炎（ＥｏＥ）の治療について評価されている（Ａｓｓａ’ａｄら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１４１：１５９３～１６０４頁（２０１１年）；及びＳｐｅｒｇｅｌら、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２９：４５６～４６３頁（２０１２年））。治療用モノクローナル抗体は、上述の免疫療法との併用で投与されうる。食物アレルギーの現在及び将来における潜在的な治療薬が、例えば、Ｙｕら、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６（１２）：７５１～７６５頁（２０１６年）に詳細に記載されており、これらのいずれか１つ以上が、本明細書に開示の組成物及び方法との組み合わせで使用されうる。

【0041】

以下の実施例は、本発明をさらに説明するものであるが、もちろん、その範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。

【実施例】

【0042】

実施例に記載の実験では、以下の材料及び方法を使用した。

【0043】

マウス
６～８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスを、Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（バーハーバー、メイン州）から入手した。ＤＯ１１．１０－Ｌｋｙ－ＩＬ－４ＧＦＰマウスは、ミシガン大学医学部（アナーバー、ミシガン州）のＳｉｍｏｎ Ｈｏｇａｎ博士から寄贈された。マウスを清潔なバリア施設において維持し、ミシガン大学動物施設の動物実験委員会の承認を受けたプロトコールの下で取り扱った。

【0044】

試薬
ＤＮＰ－ＴＮＰ置換タンパク質を認識する、ＭＯＰＣ３１５細胞（ＥＣＡＣＣ ８５０２２１０６）からの精製ＩｇＡを、ＭＰ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ（米国）から購入した。オボアルブミンタンパク質にコンジュゲートした２，４，６－トリニトロフェニルハプテン（ＴＮＰ－Ｏｖａ）を、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（米国）から購入した。

【0045】

Ｏｖａ誘発腸アナフィラキシー
６～８週齢のマウスを、滅菌生理食塩水中のＯＶＡ（ミョウバン１ｍｇあたり５０μｇのＯＶＡ）に対して、０日目と１４日目に腹腔内注射により２回感作させた。２回目の感作の際、マウスを、ＩｇＡ＋ＴＮＰ－Ｏｖａ；ＩｇＡ単独；ＴＮＰ－Ｏｖａ単独；及び生理食塩水でそれぞれ、気管内投与（ｉ．ｔ）により処置した。処置から２週間後、マウスをＯＶＡ（生理食塩水２５０μｌ中５０ｍｇのＯＶＡ）を用いた繰り返しの強制経口投与（ｏ．ｇ．）チャレンジに付した。各Ｏ．ｇ．チャレンジの前に、マウスを４～５時間、絶食させた。直腸温度をチャレンジの前に測定し、その後６０分まで１５分ごとに測定した。ｏ．ｇ．チャレンジ後６０分までマウスを目視で観察することにより、下痢を評価し、大量の液状便を示したマウスを、下痢陽性として記録した。４回目のチャレンジ後に、アナフィラキシーの症状（＞１．５℃の体温低下の低体温と下痢）を示したマウスを、アレルギーとみなした。液状便を示したマウスを、下痢陽性として記録した。

【0046】

養子移入
Ｔリンパ球を、雌のＤＯ１１．１０－Ｌｋｙ－ＩＬ－４ＧＦＰ雌マウスの脾臓から採取した。脾臓を冷却したＲＰＭＩ１６４０（Ｂｉｏ－Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ、ウォーカーズビル、メリーランド州）中に置き、４０μｍのナイロンメッシュフィルターを通して細胞を単離した。赤血球溶解後、脾細胞をＲＰＭＩ１６４０中に再懸濁し、５×１０^６個の細胞をプレーティングし、インビトロのＴｈ２偏性条件（ＩＬ－４（２０ｎｇ／ｍＬ）；抗ＩＦＮ－γ（１０ｕｇ／ｍＬ）；ＩＬ－２（１０Ｕ／ｍＬ））でＯｖａペプチド（１００ｕｇ／ｍＬ）と共に７２～９６時間インキュベートした。ＣＤ４＋ＫＪ１．２６＋ＩＬ４－ＧＦＰ＋細胞を、セルソーター（ＢＤ Ｍｅｌｏｄｙ）を用いて選別し、養子移入の７日前にＯｖａ（ミョウバン１ｍｇあたり５０μｇのＯＶＡ、腹腔内）で感作したマウスに、マウス１匹あたり１×１０^６個の細胞を養子移入した。養子移入から２４時間後、マウスをＩｇＡ＋ＴＮＰ－Ｏｖａ；ＩｇＡ単独；ＴＮＰ－Ｏｖａ単独；及び生理食塩水でそれぞれ、気管内投与（ｉ．ｔ．）により処置した（８日目）。１４日目に、マウスをＯＶＡ（生理食塩水２５０μｌ中５０ｍｇのＯＶＡ）を用いた繰り返しの強制経口投与（ｏ．ｇ．）チャレンジに付し、直腸温度と下痢を、上記のように記録した。ＩＬ－４－ＧＦＰ細胞を同定するために、腸間膜リンパ節に対してフローサイトメトリー分析を行った。

【0047】

リンパ節再刺激
１ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼＡ（Ｒｏｃｈｅ）及び２０Ｕ／ｍｌのＤＮａｓｅＩ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して、肺流入領域リンパ節（ＬＤＬＮ）、腸間膜リンパ節、及びパイエル板を、１０％のＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０中、３７℃で４５分間酵素分解した。組織を、１８ゲージの針（１ｍｌシリンジ）でさらに分散させた。赤血球を溶解し、サンプルを１００μｍのナイロンメッシュを通して濾過した。ｍＬＮ細胞からの細胞（５×１０^５）を９６ウェルプレートに播種し、Ｏｖａで４８時間再刺激した。上清中のＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７Ａ及びＩＦＮ－γのレベルを、Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘサイトカインアッセイ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて測定した。

【0048】

定量的ＰＣＲ
肺組織を、ＴＲＩｚｏｌ試薬中でホモジェナイズし、ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバッド、カリフォルニア州）を使用してＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡを、マウス白血病ウイルス逆転写酵素（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、フォスターシティ、カリフォルニア州）を使用して合成し、３７℃で１時間インキュベートし、続いて反応を停止させるために９５℃で１０分間インキュベートした。Ｉｌ１０、ｆｏｘｐ３、Ｉｌ４、Ｉｌ５、Ｉｌ１３、Ｉｌ１７ａ、Ｉｆｎｇ、及びＣｃｌ２の転写を測定するために、ＦＡＭ結合プローブと共にＴａｑｍａｎプライマーを用いて、リアルタイム定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を多重化した。倍数変化を、１８ｓ ＲＮＡ又は未処置動物に対して正規化した２－ΔΔサイクル閾値（ＣＴ）法を使用して定量化した。Ｍｕｃ５ａｃとＧｏｂ５のｍＲＮＡレベルを測定するために、カスタムプライマーを記載のようにして設計した（Ｍｉｌｌｅｒら、２００４年）。すべての反応を、ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ７５００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、フォスターシティ、カリフォルニア州）上で行った。

【0049】

血清ＩｇＥ及びｍＭＣＰＴ－１アッセイ
心臓穿刺後に採取した血液の血清サンプルを、ＯＶＡ特異的ＩｇＥ（ＭＤ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、オークデール、ミネソタ州、米国）及びｍＭＣＰＴ－１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバッド、カリフォルニア州、米国）のＥＬＩＳＡキットを用いて分析した。製造元の指示に従って、総ＩｇＥ（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、サンディエゴ、カリフォルニア州、米国）及びｍＭＣＰＴ－１について定常状態分析を行った。

【0050】

フローサイトメトリー
肺を摘出し、ＲＰＭＩ１６４０中２．５ｍｇ／ｍｌのＬＩＢＥＲＡＳＥ（商標）（Ｒｏｃｈｅ）及び２０Ｕ／ｍｌのＤＮａｓｅＩ（Ｓｉｇｍａ、セントルイス、ミズーリ州）を用いて３７℃で４５分間、又はＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＣＳ中１ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼ（Ｒｏｃｈｅ）及び２０Ｕ／ｍｌのＤＮａｓｅＩ（Ｓｉｇｍａ、セントルイス、ミズーリ州）を用いて３７℃で６０分間、酵素消化することにより、単一細胞を単離した。組織を、１８ゲージの針（５ｍｌシリンジ）を通してさらに分散させ、赤血球を溶解し、サンプルを１００μｍのナイロンメッシュを通して２回濾過した。細胞を、ＰＢＳに再懸濁した。生細胞を、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｙｅｌｌｏｗ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ウォルサム、マサチューセッツ州）を用いて同定した後、洗浄し、１％ ＦＣＳを加えたＰＢＳ中に再懸濁した。Ｆｃレセプターを、精製抗ＣＤ１６／３２（クローン９３；ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、サンディエゴ、カリフォルニア州）でブロックした。表面マーカーを、以下の抗原（すべてＢｉｏＬｅｇｅｎｄから）に対する抗体（クローン）を用いて同定した：抗ＣＤ３（１４５－２Ｃ１１）、ＣＤ４（ＧＫ１．５）、ＣＤ８（５３－６．７）、ＣＤ２５（３Ｃ７）、ＣＤ６９（Ｈ１．２Ｆ３）、ＣＤ１９（１Ｄ３／ＣＤ１９）、Ｆ４／８０（ＢＭ８）、ＣＤ１１ｃ（Ｎ４１８）、ＭＨＣ ＩＩ（Ｍ５／１１４．１５．２）、ＣＤ１１ｂ（Ｍ１／７０）、ＣＤ４５（３０－Ｆ１１）、ＣＤ１２７（Ａ７Ｒ３４）、ＣＤ９０（３０－Ｈ１２）、ＳＴ２（ＤＩＨ４）、Ｇｒ－１（ＲＢ６－８Ｃ５）、Ｂ２２０（ＲＡ３－６Ｂ２）、及びＴｅｒ１１９（Ｔｅｒ－１１９）。自然リンパ球の染色のための系統マーカーは、抗ＣＤ３、ＣＤ１１ｂ、Ｂ２２０、Ｇｒ－１、及びＴＥＲ１１９であった。ＩＬＣ２：ＣＤ４５＋／Ｌｉｎ－／ＣＤ９０＋／ＳＴ２＋。データを、ＮｏｖｏＣｙｔｅフローサイトメーター（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．、サンディエゴ、カリフォルニア州）を用いて収集した。データ解析を、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ、オレゴン州、米国）を用いて実施した。

【0051】

固有層単核球の単離
パイエル板と腸間膜血管を除去するために、回腸ループ組織を縦に開き、ＬＰ濃縮画分を、Ｌｕｉｓｓｉｎｔら（２０１９年）による記載のようにして、機械的攪拌下、３７℃で酵素的に解離した。簡単に説明すると、２％ＦＢＳと５ｍＭ ＤＴＴ（Ｆｉｓｈｅｒ ＢｉｏＲｅａｇｅｎｔｓ）を補充したＰＢＳ中で組織を２０分間洗浄することにより、粘液を除去した。キレートバッファー（２％ＦＢＳと５ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ）中での１０分間、３回連続の洗浄により、ＩＥＣライニングを除去した。組織を細かく切り刻み、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ＬＩＢＥＲＡＳＥ（商標）（３７．５Ｕ／ｍＬ；Ｒｏｃｈｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ、インディアナポリス、インディアナ州）、ＤＮａｓｅ Ｉ（３００Ｋｕｎｔｚ ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）を補充したＨＢＳＳ＋で３０分間消化した。細胞懸濁液を濾過し、１０％ＦＢＳと２ｍＭ ＥＤＴＡを補充したＰＢＳ溶液中で洗浄し、細胞数を測定し、フローサイトメトリー解析のために染色した。

【0052】

組織学的検査
パラフィン包埋し、１０％ホルマリン固定した左肺、及びＨ＆Ｅで染色した小腸から、６μｍの連続切片を得た。代表的なスライドを選択するため、マウス１匹につき肺／小腸を２切片ずつ、１匹につき５枚の切片を分析した。気道における粘液を同定するために、ＰＡＳ染色を行った。小腸の肥満細胞を同定するために、クロロ酢酸エステラーゼ染色を実施した。

【0053】

統計分析
データを、Ｐｒｉｓｍ ７（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）によって分析した。提示されているデータは、平均値±ＳＥＭである。２つの群の比較を、対応のない両側スチューデントのｔ検定により実施した。３群以上の比較を、一元配置分散分析により解析し、その後、個々の比較を両側スチューデントのｔ検定により行った。ｐ値＜０．０５を有意とみなした。

【0054】

［実施例１］
この実施例は、ＩｇＡ免疫複合体の気道への投与が、マウスのアレルギー性喘息応答を阻害することを実証している。

【0055】

免疫応答の調節におけるＩｇＡの役割の検討は、これまでの研究では解決されていない。ＩｇＡが寛容原性及び阻害性応答に重要な役割を持つことの裏付けのほとんどは、状況証拠に基づくものであり、欠乏に関連するもの、又はＩｇＡレベルと相関するものであった。抗原を伴う、又は伴わない抗原特異的なＩｇＡが、進行中のアレルギー性免疫応答を変化させるか否かを検討した。この目的のために、２種類のミョウバン－オボアルブミン全身感作によるアレルギー性気道応答のモデルを用いて、強力なＴｈ２応答を惹起させた。２回目の腹腔内ミョウバン－オボアルブミン感作時に、動物に、ＴＮＰ－オボアルブミンを伴う、又は伴わないＴＮＰ特異的ＩｇＡの気管内補充を与えた。後者の免疫複合体は、ＩｇＡが抗原曝露中に粘膜表面で起こるものと同様な特定の応答を誘発することを可能とした。他の対照は、ＴＮＰ－ｏｖａのみ及び生理食塩水（ビヒクル）であった。２回目のミョウバン－オボアルブミンチャレンジの２週間後、動物に、２週間にわたり７回のオボアルブミンチャレンジを気道に与えた。最終的なオボアルブミン気道チャレンジの２４時間後、動物を、アレルギー性気道疾患の証拠について検討した（図１Ａ）。ＰＡＳで染色された病理組織学の検討は、ＩｇＡ－ＴＮＰ－ｏｖａ免疫複合体で処置した動物が、他のすべての群と比べて、気道を染色する粘液の低減を有することを示唆し（図１Ｂ）、これを、杯細胞によって肺において発現される主要なムチンであるｍｕｃ５ｂの発現を調べることによって確認した（図１Ｃ）。肺流入領域リンパ節細胞の再刺激は、ＩｇＡ／ＴＮＰ－ｏｖａ処置群が、Ｔｈ２サイトカインであるＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１３の有意な減少と、ＩＬ－１０の増加を有することを実証した（図１Ｄ）。さらに、リンパ節細胞のフローサイトメトリー分析は、ＩｇＡ／ＴＮＰ－ｏｖａ処置群でのみＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋ Ｔ細胞の有意な増加が認められ、生理食塩水対照で処置したアレルギー動物に比べて１０倍近い増加を実証した（図１Ｅ）。よって、ｏｖａに対する全身性のアレルギー応答を有する動物におけるＩｇＡ／ＴＮＰ－ｏｖａの粘膜局所投与は、Ｔｒｅｇ細胞の対応する増加を伴って、局所的なアレルゲンチャレンジから動物を保護した。

【0056】

上記の粘膜気道チャレンジに対するＩｇＡ－免疫複合体感作マウスにおける確立された免疫応答の低減は、Ｔｒｅｇ細胞応答の発生との関連を指し示した。この反応が局所的なものなのか、又は気道に適用されたＩｇＡ免疫複合体が全身的な影響を有するのかを理解するために、同様な戦略を用いて、腸の食物アレルギーを調査する試験を設計した。気道モデルと同様に、ミョウバン－オボアルブミンをＩＰ投与してアレルギー応答を誘導する全身感作モデルを用いて、同様なＩｇＡ免疫複合体の気道への適用を追跡した（図２Ａ）。さらに、アレルゲン特異的応答を確認するために、ミョウバンで沈殿させたピーナッツアレルゲン（Ｇｒｅｅｒ）でマウスを免疫した（図２Ａ）。２回目のミョウバン－ｏｖａ感作の直前に、動物に、免疫複合体又は適切な対照を気道（ＩＴ）に投与した。胃内オボアルブミン食物チャレンジを、２週間後に開始し、表示のように、４回の強制経口投与を行った。ＩｇＡ免疫複合体によるオボアルブミン応答の変化がアレルゲン特異的かどうかを確認するため、ピーナッツ－ミョウバン感作マウスに、ＰＥ－生理食塩水又はＰＥ－ＩｇＡ＋ＴＮＦ－Ｏｖａを与えた。

【0057】

応答の主要な転帰は、経口オボアルブミンチャレンジ後３０分以内の下痢の発症であった。異なる群における下痢の検討は、単独で気道に与えられたＴＮＰ－ｏｖａは進行中のアレルギー応答を変化させないが、ＩｇＡ－ＴＮＰ－ｏｖａ免疫複合体は下痢応答の発症を緩和することを実証した（図２Ｂ）。対照的に、ＩｇＡ－ＴＮＰ－ｏｖａ免疫複合体で処置したピーナッツ－ミョウバン感作マウスは、ピーナッツ対照マウスと比較して下痢の低減を示さなかった（図２Ｂ）。アナフィラキシーの別の徴候である体温の低減は、動物をチャレンジした場合に有意に低減したが、ＩｇＡ免疫複合体で処置した動物では見られなかった。アレルギー応答の発症をさらに調べるため、経口チャレンジ後６０分における血清中のＩｇＥを肥満細胞由来ＭＣＰｔと共に調べた（図２Ｃ）。オボアルブミンでチャレンジした動物の気道にＩｇＡ免疫複合体を曝露した動物においてのみ、ＩｇＥとＭＣＰｔの両方が有意に低減していた。また、腸流入領域リンパ節細胞をオボアルブミンで再刺激することにより、全体的な免疫反応も調べた。得られた上清は、ＩｇＡ免疫複合体で処置した動物において、ＩＬ－４とＩＬ－１３の有意な減少と、ＩＬ－１０の増加を実証した（図２Ｅ）。対照的に、ＩｇＥ、ＭＣＰＴ１、又はサイトカインを含む免疫パラメータはいずれも、ＩｇＡ－ＴＮＰ－ｏｖａ免疫複合体によってピーナッツ感作マウス及びチャレンジされたマウスでは変化していなかった（図２Ｃ～Ｅ）。合わせて、これらのデータは、全身のアレルギー応答中に気道ＩｇＡ／ＴＮＰ－ｏｖａ免疫複合体への曝露によって誘導される有意な変化が、重篤なＴｈ２誘発性の経口抗原応答から動物を保護し、それがアレルゲン特異的であることを実証している。

【0058】

ＩｇＡ免疫複合体が感作マウスのアレルギー応答をどのように変化させているかをよりよく理解するために、Ｔ細胞移入モデルを、Ｔｈ２偏性ＤＯ１１ ｏｖａ特異的ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞と共に利用した。このモデルを、ＧＦＰ ＩＬ－４レポーターＤＯ１１ナイーブ脾臓細胞を単離することによって構築した。ナイーブＤＯ１１マウスの脾臓細胞を、ｒＩＬ－４、抗ＩＦＮ、ｒＩＬ－２、及びＴＣＲ活性化（材料と方法を参照）を用いてインビトロで偏性し、ＧＦＰ発現について選別し、これは、ＩＬ－４の産生を指し示した。本モデルは、既に偏性したＴｈ細胞のサブセットを用いているため、免疫プロトコールを、ミョウバン－ｏｖａ感作を１回行った後、７日目に選別したＩＬ－４産生偏性Ｔ細胞のＢａｌｂ／ｃマウスへのＩＰ注射により動物を処置し、その２４時間後にＩｇＡ／ＴＮＰ－ｏｖａ免疫複合体を気道に投与するように修正した（図３Ａ）。１４日目に強制経口投与によるチャレンジを開始し、４回目のチャレンジ時に動物が下痢を発症していないか検査した。ＩｇＡ／ＴＮＰ－ｏｖａ組成物は、どちらもアナフィラキシーの徴候である激しい下痢と体温低下からマウスをほぼ完全に保護した（図３Ｂ）。流入領域リンパ節がエクスビボで再刺激されると、ＩＬ－４、ＩＬ－５、及びＩＬ－１３の有意な低減と、ＩＬ－１０の有意な増加が観察された（図３Ｃ）。ＧＦＰ＋ＩＬ－４＋ Ｔ細胞を同定するためにフローサイトメトリーを行った際には、ＩｇＡ／ＴＮＰ－ｏｖａ処置群で有意な低減と、対応するＦｏｘｐ３＋ Ｔｒｅｇ細胞の増加が見出された（図３Ｄ）。重要なことに、Ｆｏｘｐ３＋ Ｔ細胞はいずれもＩＬ－４＋ではなく、これは、それらがナイーブな宿主Ｔ細胞由来であり、Ｔｈ２偏性細胞由来ではないことを指し示している。

【0059】

疾患の病因をさらに説明するために、アナフィラキシー疾患応答の重症度と相関すると思われることから、小腸に蓄積した肥満細胞の数を調べるための試験を行った。ＩｇＡ／ＴＮＰ－ｏｖａ免疫複合体で処置した動物は、小腸の肥満細胞に有意な減少を示した（図４Ａ）。また、血清中のＩｇＥ及びｍＭＣＰｔ－１のレベルも、ＩｇＡ／ＴＮＰ－ｏｖａ免疫複合体で処置した動物においてのみ有意に低減し（図４Ｂ）、これは、Ｔｈ２と肥満細胞の活性化の低減をさらに実証している。さらに、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－β、及びｆｏｘｐ３の発現レベルを腸組織で調べた際には、これらの遺伝子の有意なアップレギュレーションが観察された（図４Ｃ）。よって、Ｔｈ２免疫応答を制御する能力は、アレルギーマウスの小腸における肥満細胞数の増加の進展に対応しており、アレルゲン特異的ＩｇＡ免疫複合体による粘膜の処置によって調節され得る。

【0060】

ＩｇＡ免疫複合体がどのようにして変化した応答を促進するのかの１つの潜在的なメカニズムは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、特に樹状細胞（ＤＣ）の差次的な活性化を介するものである。これを調べるため、骨髄由来ＤＣをＧＭ－ＣＳＦ中で６～７日間培養し、ＩｇＡ免疫複合体又は適切な対照に曝露した。一晩のインキュベーション後、ＤＣを、定量的ＰＣＲ分析によって自然免疫系サイトカインの発現、ＩＬ－１０及びＴＧＦβについて評価した（図６）。このデータは、ＩｇＡ免疫複合体がＴＧＦβ（図６Ａ）及びＩＬ－１０（図６Ｂ）のｍＲＮＡ発現の有意な増加を誘導した一方、ＩｇＡ単独は、はるかに少ない程度でそれらを増加させたことを実証している。免疫複合体の活性化が、抗原特異的一次免疫応答を引き起こすＤＣの能力を変化させるかどうかをよりよく理解するために、ＤＯ１１オボアルブミンペプチドトランスジェニックＴＣＲナイーブ脾臓ＣＤ４ Ｔ細胞を用いた。ＩｇＡ免疫複合体又は適切な対照と共に一晩インキュベートした後、ＤＣを洗浄し、プロセシングとＴ細胞への提示のために、新しいオボアルブミンを用いて、１：１０の割合でＤＯ１１ナイーブＣＤ４ Ｔ細胞と共に再播種した。図６Ｃのデータは、オボアルブミンに応答して、ＤＣのみの対照（オボアルブミン投与無し）と比較して、すべてのサイトカインの実質的な産生が生じた一方で、ＩｇＡ免疫複合体をプレインキュベートしたＤＣは、４８時間のインキュベーション後の上清において、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、及びＩＬ－１７の有意な減少と、ＩＬ－１０及びＩＦＮγの増加を有していたことを指し示している。合わせて、これらのデータは、ＩｇＡ免疫複合体が、Ｔ細胞応答の変化に対応する制御性サイトカインをＤＣにおいて誘導することを指し示している。

【0061】

［実施例２］
この実施例は、ＩｇＡ免疫複合体の経口投与について記述する。

【0062】

アナフィラキシー疾患における同様な調節効果を促進するために、ＴＮＰ－オボアルブミンとのＩｇＡ免疫複合体を、全身感作マウスに強制経口投与により与えた。全身感作動物に、１４日目において、２回目のミョウバン－オボアルブミンＩＰ感作の前に、ＩｇＡ：ＴＮＰ－オボアルブミン免疫複合体、又は適切な対照処置を強制経口投与により与えた。上記の図２のように、２回目のミョウバン－オボアルブミン感作から１４日後のプロトコール２８日目に、強制経口投与チャレンジをオボアルブミンにより与えた。最後のチャレンジの後、動物を、下痢と体温の変化について観察し、下痢の発生率と体温の変化により評価したところ、強制経口投与によってＩｇＡ ＩＣを投与した動物のみが、アナフィラキシー性疾患から保護されることを示した（図５）。さらに、ＩｇＥとＭＣＰＴ１も、ＩｇＡ－ＴＮＰ－ｏｖａ ＩＣ処置動物でのみ有意に減少していた。ＩｇＡ ＩＣで処置した動物のリンパ節では、Ｔｒｅｇ細胞が約５倍に増加していた一方、ＩｇＡのみでもＴｒｅｇ細胞はより緩やかに増加していたが、重篤なアナフィラキシー性ｏｖａ誘発疾患を変化させるには不十分であった。よって、重篤なアレルゲン誘発性後遺症から保護する調節応答を誘導するために、オボアルブミンに対するＩｇＡ ＩＣが、気道と腸粘膜表面の両方において供給され得る。

【0063】

本明細書で引用される刊行物、特許出願、及び特許を含むすべての参考文献は、各参考文献が参照により組み込まれることが個別に具体的に指し示され、その全体が本明細書に記載される場合と同じ程度にまで、参照により本明細書に組み込まれる。

【0064】

本発明を説明する文脈における（特に以下の特許請求の範囲の文脈における）「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」並びに「その（ｔｈｅ）」及び「少なくとも１つの（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」という用語及び類似の参照語の使用は、本明細書において別段の記載がない限り、又は文脈に明らかに矛盾しない限り、単数及び複数の両方を対象とするものと解釈されるべきである。「少なくとも１つ」という用語とその後に続く１つ以上の項目のリスト（例えば、「Ａ及びＢのうちの少なくとも１つ」）の使用は、本明細書において別段の記載がない限り、又は文脈に明らかに矛盾しない限り、リストされた項目から選択される１つの項目（Ａ又はＢ）、又はリストされた項目の２つ以上の任意の組み合わせ（Ａ及びＢ）を意味するものと解釈されるべきである。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」という用語は、別段の記載がない限り、制限的でない用語（つまり、「含むがそれに限定されない」を意味する）として解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の記載は単に、本明細書に別段の記載がない限り、その範囲内にあるそれぞれの個別の値を個別に参照する略記法として機能することを意図したものであり、各個別の値は、あたかも個別に本明細書に記載されているかのように、明細書に組み込まれる。本明細書に記載されているすべての方法は、本明細書に別段の記載がない限り、又は文脈によって明らかに矛盾しない限り、任意の適当な順序で実行することができる。本明細書で提供されるありとあらゆる例、又は例示的な文言（例えば、「などの（ｓｕｃｈ ａｓ）」）の使用は、単に本発明をよりよく明らかにすることを意図しており、別段の請求がない限り、本発明の範囲に限定を課すものではない。本明細書中のいかなる文言も、請求の範囲に記載されていない要素が本発明の実施に不可欠であることを示していると解釈すべきではない。

【0065】

本発明の好ましい実施形態が、本発明を実施するための本発明者らに既知の最良の態様を含めて、本明細書に記載されている。これらの好ましい実施形態の変形は、前述の説明を読めば、当業者には明らかとなりうる。本発明者らは、当業者が適宜そのような変形を採用することを期待しており、本発明者らは、本明細書に具体的に記載された以外の方法で本発明が実施されることを意図している。従って、本発明は、適用される法律によって許可される限り、添付の特許請求の範囲に記載された主題のあらゆる修正及び均等物を含む。さらに、本明細書に別段の記載がない限り、又は文脈に明らかに矛盾しない限り、上述の要素のあらゆる可能な変形におけるその組み合わせは、本発明により包含される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【国際調査報告】