特表 2024-538854 皮膚状態を治療するための組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-23

(54)【発明の名称】皮膚状態を治療するための組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 36/06 20060101AFI20241016BHJP

   A61K 38/18 20060101ALI20241016BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20241016BHJP

   A61K 38/55 20060101ALI20241016BHJP

   A61K 38/39 20060101ALI20241016BHJP

   A61K 38/20 20060101ALI20241016BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20241016BHJP

   A61P 17/02 20060101ALI20241016BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20241016BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20241016BHJP

   A61P 17/10 20060101ALI20241016BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20241016BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20241016BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20241016BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241016BHJP

   A61P 17/16 20060101ALI20241016BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20241016BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20241016BHJP

   A61K 36/064 20060101ALI20241016BHJP

   A61K 9/00 20060101ALI20241016BHJP

   C12N 1/15 20060101ALN20241016BHJP

   C12N 1/19 20060101ALN20241016BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20241016BHJP

【ＦＩ】

A61K36/06

A61K38/18

A61K38/19

A61K38/55

A61K38/39

A61K38/20

A61P17/00

A61P17/02

A61P3/10

A61P31/00

A61P17/10

A61P29/00

A61P17/06

A61P9/00

A61P35/00

A61P17/16

A61K9/06

A61K47/36

A61K36/064

A61K9/00

C12N1/15 ZNA

C12N1/19

C12N15/09 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024547170

(86)(22)【出願日】2022-10-17

(85)【翻訳文提出日】2024-06-05

(86)【国際出願番号】 US2022046921

(87)【国際公開番号】W WO2023064638

(87)【国際公開日】2023-04-20

(31)【優先権主張番号】63/256,484

(32)【優先日】2021-10-15

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/320,522

(32)【優先日】2022-03-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】508344512

【氏名又は名称】ザ トラスティーズ オブ コロンビア ユニバーシティ イン ザ シティ オブ ニューヨーク

【氏名又は名称原語表記】ＴＨＥ ＴＲＵＳＴＥＥＳ ＯＦ ＣＯＬＵＭＢＩＡ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＩＮ ＴＨＥ ＣＩＴＹ ＯＦ ＮＥＷ ＹＯＲＫ

(71)【出願人】

【識別番号】524145173

【氏名又は名称】コーニッシュ，ヴァージニア

(71)【出願人】

【識別番号】524145184

【氏名又は名称】ジャファリヤン，アミールホセイン

(74)【代理人】

【識別番号】100107766

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東 忠重

(74)【代理人】

【識別番号】100070150

【弁理士】

【氏名又は名称】伊東 忠彦

(72)【発明者】

【氏名】コーニッシュ，ヴァージニア

(72)【発明者】

【氏名】ジャファリヤン，アミールホセイン

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA57X

4B065AA60X

4B065AA65X

4B065AA67X

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4C087ZA89

4C087ZB11

4C087ZB26

4C087ZB31

4C087ZC35

(57)【要約】

開示される主題は、１つ以上の皮膚治療薬を自発的に生成及び／または分泌する遺伝子修飾された細胞、例えば、真菌細胞、ならびにそれらの使用方法を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、成長因子、プロテアーゼ阻害剤、サイトカイン及び／またはケモカインを生成及び分泌する遺伝子操作された真菌細胞、ならびに、例えば、皮膚状態を治療するための、それらの使用方法を提供する。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された生真菌細胞と、（ｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。

【請求項2】

前記皮膚治療薬が、前記真菌細胞の分泌経路によって前記真菌細胞から分泌される、請求項１に記載の薬学的組成物。

【請求項3】

前記皮膚治療薬が、タンパク質またはその機能的断片である、請求項１または２に記載の薬学的組成物。

【請求項4】

前記皮膚治療薬が、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項5】

前記皮膚治療薬が、成長因子もしくはその誘導体、または成長因子の阻害剤もしくはその誘導体である、請求項４に記載の薬学的組成物。

【請求項6】

前記成長因子が、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、形質転換成長因子－ベータ（ＴＧＦ－β）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項５に記載の薬学的組成物。

【請求項7】

前記成長因子が、ＥＧＦである、請求項６に記載の薬学的組成物。

【請求項8】

前記成長因子が、ＰＤＧＦである、請求項６に記載の薬学的組成物。

【請求項9】

前記成長因子が、ＴＧＦ－βである、請求項６に記載の薬学的組成物。

【請求項10】

前記成長因子が、ＶＥＧＦである、請求項６に記載の薬学的組成物。

【請求項11】

前記皮膚治療薬が、ケモカインまたはその誘導体である、請求項４に記載の薬学的組成物。

【請求項12】

前記ケモカインが、ＣＸＣＬ１２である、請求項１１に記載の薬学的組成物。

【請求項13】

前記皮膚治療薬が、サイトカインまたはその誘導体である、請求項４に記載の薬学的組成物。

【請求項14】

前記サイトカインが、レプチン、ＩＬ－４、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１３に記載の薬学的組成物。

【請求項15】

前記皮膚治療薬が、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体である、請求項４に記載の薬学的組成物。

【請求項16】

前記皮膚治療薬が、ＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１５に記載の薬学的組成物。

【請求項17】

前記皮膚治療薬が、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体である、請求項４に記載の薬学的組成物。

【請求項18】

前記皮膚治療薬が、ＶＩＩ型コラーゲン、エラスチン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１７に記載の薬学的組成物。

【請求項19】

前記皮膚治療薬が、抗菌及び／または抗炎症ペプチドである、請求項１または２に記載の薬学的組成物。

【請求項20】

前記抗菌及び／または抗炎症ペプチドが、カテリシジン抗菌ペプチド（ＬＬ－３７）またはその類似体、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ルシフェンシン、ルシフェンシンＩＩ、ルシリン、酢酸ペキシガナン（ＭＳＩ－７８）、Ｄ２Ａ２１／Ｄ４Ｅ１、グラニュリシン、合成グラニュリシン由来ペプチド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１９に記載の薬学的組成物。

【請求項21】

前記真菌細胞が、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ、Ｅｐｉｃｏｃｃｕｍ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｗａｌｌｅｍｉａ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｐｈｏｍａ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、Ｃｌａｖｉｓｐｏｒａ、Ｃｙｂｅｒｌｉｎｄｎｅｒａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される属からの種である、請求項１～２０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項22】

前記真菌細胞が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓである、請求項１～２１のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項23】

第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞を更に含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項24】

第３の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第３の生真菌細胞を更に含む、請求項２３に記載の薬学的組成物。

【請求項25】

第４の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第４の生真菌細胞を更に含む、請求項２４に記載の薬学的組成物。

【請求項26】

第５の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第５の生真菌細胞を更に含む、及び／または第６の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第６の生真菌細胞を更に含む、請求項２５に記載の薬学的組成物。

【請求項27】

前記薬学的組成物が、直腸投与、膣投与、または局所投与のために製剤化される、請求項１～２６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項28】

前記薬学的組成物が、局所投与のために製剤化される、請求項２７に記載の薬学的組成物。

【請求項29】

前記薬学的に許容される担体が、ヒドロゲルを含む、請求項１～２８のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項30】

前記ヒドロゲルが、約０．１％ｗ／ｖ～約５．０％ｗ／ｖの多糖を含む、請求項２９に記載の薬学的組成物。

【請求項31】

前記ヒドロゲルが、約０．１％ｗ／ｖ～約１．０％ｗ／ｖの多糖を含む、請求項３０に記載の薬学的組成物。

【請求項32】

前記多糖が、アガロースである、請求項３０または３１に記載の薬学的組成物。

【請求項33】

前記薬学的組成物が、治療効果量の前記遺伝子操作された生真菌細胞を含み、治療有効量が、約１×１０^３細胞／ｍｌ～約１×１０^１０細胞／ｍｌの前記遺伝子操作された生真菌細胞である、請求項１～３２のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項34】

前記治療有効量が、約１×１０^６細胞／ｍｌ～約２×１０^７細胞／ｍｌの前記遺伝子操作された生真菌細胞である、請求項３３に記載の薬学的組成物。

【請求項35】

前記治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞が、約１ｐｇ／ｍｌから及び約２００，０００ｐｇ／ｍｌの前記皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項36】

前記治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞が、約１００ｐｇ／ｍｌ～約２５，０００ｐｇ／ｍｌの前記皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む、請求項３５に記載の薬学的組成物。

【請求項37】

前記遺伝子操作された生真菌細胞が、投与後約２４時間～約２週間、前記皮膚治療薬を分泌及び発現する、請求項１～３６のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項38】

前記遺伝子操作された生真菌細胞が、投与後少なくとも約４８時間、前記皮膚治療薬を分泌及び発現する、請求項３７に記載の薬学的組成物。

【請求項39】

前記遺伝子操作された生真菌細胞が、投与後少なくとも約７２時間、前記皮膚治療薬を分泌及び発現する、請求項３８に記載の薬学的組成物。

【請求項40】

前記遺伝子操作された生真菌細胞が、投与後少なくとも約９６時間、前記皮膚治療薬を分泌及び発現する、請求項３９に記載の薬学的組成物。

【請求項41】

前記遺伝子操作された生真菌細胞が、前記皮膚治療薬を連続的に分泌及び発現する、請求項１～４０のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項42】

１つ以上の遺伝子操作された前記真菌細胞のための１つ以上の栄養素を更に含む、請求項１～４１のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項43】

皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された生真菌細胞を含むヒドロゲルを含む、局所用薬学的組成物。

【請求項44】

前記ヒドロゲルが、約０．１％ｗ／ｖ～約５．０％ｗ／ｖの多糖を含む、請求項４３に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項45】

前記ヒドロゲルが、約０．１％ｗ／ｖ～約１．０％ｗ／ｖの多糖を含む、請求項４４に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項46】

前記多糖が、アガロースである、請求項４４または４５に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項47】

皮膚に面する底層と、空気に面する上層と、を更に含み、前記皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された前記真菌細胞を含む前記ヒドロゲルが、前記底層と前記上層との間に配置されている、請求項４３～４６のいずれか１項に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項48】

前記遺伝子操作された真菌細胞が、前記底層を通過することができず、前記皮膚治療薬が、前記底層を通過することができる、請求項４７に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項49】

前記底層が、約０．０１～約１．０μｍの孔径を有する、請求項４７または４８に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項50】

前記局所用薬学的組成物が、治療有効量の前記遺伝子操作された生真菌細胞を含む、請求項４３～４９のいずれか１項に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項51】

前記治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞が、約１×１０^３細胞／ｍｌ～約１×１０^１０細胞／ｍｌの前記遺伝子操作された生真菌細胞を含む、請求項５０に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項52】

前記治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞が、約１ｐｇ／ｍｌから及び約２００，０００ｐｇ／ｍｌの前記皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む、請求項５０または５１に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項53】

前記遺伝子操作された真菌細胞が、対象への投与後少なくとも約１２時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約６０時間、少なくとも約７２時間、少なくとも約８４時間、少なくとも約９６時間、少なくとも約１０８時間、少なくとも約１２０時間、少なくとも約１３２時間、少なくとも約１４４時間、少なくとも約１５６時間、少なくとも約１６５時間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、または少なくとも約１４日間、前記皮膚治療薬を分泌する、請求項４３～５２のいずれか１項に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項54】

前記真菌細胞が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓである、請求項４３～５３のいずれか１項に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項55】

前記皮膚治療薬が、タンパク質またはその機能的断片である、請求項４３～５４のいずれか１項に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項56】

前記皮膚治療薬が、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項５５に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項57】

前記皮膚治療薬が、成長因子もしくはその誘導体、または成長因子の阻害剤もしくはその誘導体である、請求項５６に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項58】

前記成長因子が、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、形質転換成長因子－ベータ（ＴＧＦ－β）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項５７に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項59】

前記皮膚治療薬が、抗菌及び／または抗炎症ペプチドである、請求項４３～５４のいずれか１項に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項60】

前記抗菌及び／または抗炎症ペプチドが、カテリシジン抗菌ペプチド（ＬＬ－３７）またはその類似体、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ルシフェンシン、ルシフェンシンＩＩ、ルシリン、酢酸ペキシガナン（ＭＳＩ－７８）、Ｄ２Ａ２１／Ｄ４Ｅ１、グラニュリシン、合成グラニュリシン由来ペプチド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項５９に記載の局所用薬学的組成物。

【請求項61】

（ｉ）第１の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第１の生真菌細胞と、
（ｉｉ）第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞と、
（ｉｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含み、
前記第１の皮膚治療薬及び前記第２の皮膚治療薬が、異なる、薬学的組成物。

【請求項62】

前記第１の皮膚治療薬及び前記第２の皮膚治療薬が、独立して、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６１に記載の薬学的組成物。

【請求項63】

前記第１の皮膚治療薬が、成長因子を含み、前記第２の皮膚治療薬が、ケモカインを含む、請求項６２に記載の薬学的組成物。

【請求項64】

前記第１の皮膚治療薬が、成長因子を含み、前記第２の皮膚治療薬が、サイトカインを含む、請求項６２に記載の薬学的組成物。

【請求項65】

（ｉ）第１の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第１の生真菌細胞と、
（ｉｉ）第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞と、
（ｉｉｉ）第３の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第３の生真菌細胞と、
（ｉｖ）薬学的に許容される担体と、を含み、
前記第１の皮膚治療薬、前記第２の皮膚治療薬、及び前記第３の皮膚治療薬が、異なる、薬学的組成物。

【請求項66】

前記第１の皮膚治療薬、前記第２の皮膚治療薬、及び前記第３の皮膚治療薬が、独立して、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６５に記載の薬学的組成物。

【請求項67】

（ｉ）第１の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第１の生真菌細胞と、
（ｉｉ）第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞と、
（ｉｉｉ）第３の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第３の生真菌細胞と、
（ｉｖ）第４の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第４の生真菌細胞と、
（ｖ）薬学的に許容される担体と、を含み、
前記第１の皮膚治療薬、前記第２の皮膚治療薬、前記第３の皮膚治療薬、及び前記第４の皮膚治療薬が、異なる、薬学的組成物。

【請求項68】

前記第１の皮膚治療薬、前記第２の皮膚治療薬、前記第３の皮膚治療薬、及び前記第４の皮膚治療薬が、独立して、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６７に記載の薬学的組成物。

【請求項69】

（ｉ）第１の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第１の生真菌細胞と、
（ｉｉ）第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞と、
（ｉｉｉ）第３の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第３の生真菌細胞と、
（ｉｖ）第４の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第４の生真菌細胞と、
（ｖ）第５の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第５の生真菌細胞と、
（ｖｉ）薬学的に許容される担体と、を含み、
前記第１の皮膚治療薬、前記第２の皮膚治療薬、前記第３の皮膚治療薬、前記第４の皮膚治療薬、及び前記第５の皮膚治療薬が、異なる、薬学的組成物。

【請求項70】

前記第１の皮膚治療薬、前記第２の皮膚治療薬、前記第３の皮膚治療薬、前記第４の皮膚治療薬、及び前記第５の皮膚治療薬が、独立して、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６９に記載の薬学的組成物。

【請求項71】

治療を必要とする対象を治療するための方法であって、請求項１～７０のいずれか１項に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項72】

前記薬学的組成物が、局所投与のために製剤化される、請求項７１に記載の方法。

【請求項73】

前記薬学的組成物が、皮膚状態を治療するため、または美容処置を実行するために、前記対象に投与される、請求項７１または７２に記載の方法。

【請求項74】

前記皮膚状態が、創傷、感染症、にきび、線維性障害、水疱性障害、炎症性状態、血管病変、皮膚癌、色素性乾皮症、色素障害、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項７３に記載の方法。

【請求項75】

前記皮膚状態が、創傷である、請求項７４に記載の方法。

【請求項76】

前記創傷が、糖尿病性潰瘍である、請求項７５に記載の方法。

【請求項77】

前記皮膚状態が、感染症である、請求項７４に記載の方法。

【請求項78】

前記皮膚状態が、にきびである、請求項７４に記載の方法。

【請求項79】

前記皮膚状態が、線維性障害である、請求項７４に記載の方法。

【請求項80】

前記線維性障害が、強皮症である、請求項７９に記載の方法。

【請求項81】

前記皮膚状態が、水疱性障害である、請求項７４に記載の方法。

【請求項82】

前記水疱性障害が、表皮水疱症である、請求項８１に記載の方法。

【請求項83】

前記皮膚状態が、炎症性状態である、請求項７４に記載の方法。

【請求項84】

前記炎症性状態が、乾癬である、請求項８３に記載の方法。

【請求項85】

前記皮膚状態が、血管病変である、請求項７４に記載の方法。

【請求項86】

前記皮膚状態が、皮膚癌である、請求項７４に記載の方法。

【請求項87】

前記皮膚状態が、色素性乾皮症である、請求項７４に記載の方法。

【請求項88】

前記皮膚状態が、色素障害である、請求項７４に記載の方法。

【請求項89】

前記遺伝子操作された真菌細胞が、少なくとも約１２時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約６０時間、少なくとも約７２時間、少なくとも約８４時間、少なくとも約９６時間、少なくとも約１０８時間、少なくとも約１２０時間、少なくとも約１３２時間、少なくとも約１４４時間、少なくとも約１５６時間、少なくとも約１６５時間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、または少なくとも約１４日間、前記皮膚治療薬を分泌する、請求項７１～８８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項90】

前記遺伝子操作された真菌細胞が、前記対象への投与後少なくとも約７２時間、前記皮膚治療薬を分泌する、請求項８９に記載の方法。

【請求項91】

前記薬学的組成物を前記対象に投与することが、前記薬学的組成物を患部に適応することを含む、請求項７１～９０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項92】

前記薬学的組成物が、週に５回以下、週に４回以下、週に３回以下、週に２回以下、週に１回以下適応される、請求項９１に記載の方法。

【請求項93】

前記薬学的組成物が、週に３回以下適応される、請求項９２に記載の方法。

【請求項94】

前記薬学的組成物が、週に２回以下適応される、請求項９３に記載の方法。

【請求項95】

皮膚状態を治療するため、または美容処置を実行するための、請求項１～７０のいずれか１項に記載の薬学的組成物の使用。

【請求項96】

前記皮膚状態が、創傷、感染症、にきび、線維性障害、水疱性障害、炎症性状態、血管病変、皮膚癌、色素性乾皮症、色素障害、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９５に記載の使用。

【請求項97】

前記皮膚状態が、創傷である、請求項９６に記載の使用。

【請求項98】

請求項１～７０のいずれか１項に記載の薬学的組成物を含む、キット。

【請求項99】

請求項７１～９４のいずれか１項に記載の方法を実行するための、キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１０月１５日に出願された米国仮出願第６３／２５６，４８４号、及び２０２２年３月１６日に出願された米国仮出願第６３／３２０，５２２号の優先権を主張し、それらの各々の内容は、参照により本明細書に全体が組み込まれる。

【0002】

本開示は、皮膚状態の治療のための皮膚治療薬を発現する遺伝子操作された真菌細胞に関する。

【背景技術】

【0003】

局所創傷の治癒は、異なる細胞型の遊走、分化及び増殖を伴う多段階プロセスである。これらのプロセスは、様々なシグナル伝達分子及び創傷治癒剤の調整された作用により制御される。慢性創傷の治癒プロセスは、創傷のサイズ及び深さならびに創傷の微小環境に応じて、より困難であり得る。糖尿病患者では、成長因子及びサイトカインなどの活性創傷治癒剤が欠如しているか、またはより低いレベルであり、かつ創傷部位におけるプロテアーゼレベルがより高いと、正常な創傷治癒プロセスが妨げられ、慢性及び急性潰瘍は治癒されない。創傷治癒剤の局所適用は、健康な微小環境を再構築し、創傷治癒を促進するのに役立つことが示されている。

【0004】

成長因子は、炎症、組織形成、及び組織再形成段階の間に調節及び機能的役割を果たすため、創傷治癒プロセスにおいて最も重要な薬剤のうちの１つである。糖尿病性足潰瘍などの慢性及び急性創傷のタンパク質分解性微小環境は、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、形質転換成長因子－ベータ（ＴＧＦ－β）、及び血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）などの多くの重要な成長因子の分解をもたらす。この分解は、創傷床におけるこれらの薬剤のレベルの低下をもたらし得る。成長因子の局所適用は、これらの成長因子の低下したレベルを補完し、治癒プロセスを改善することができる。

【0005】

成長因子と同様に、サイトカイン及びケモカインも、それらのシグナル伝達機能のために創傷治癒プロセスにおいて重要な役割を果たす。間質細胞由来因子１タンパク質（ＣＸＣＬ１２）は、創傷治癒プロセスにおける細胞動員及び細胞分化の重要なシグナル伝達分子である。更に、ＣＸＣＬ１２のインサイチュ発現及び送達が、局所潰瘍の治癒を加速及び増強することができることが示されている。エネルギー恒常性を調節するのに重要なホルモンであるレプチン（ＬＥＰ）は、主に炎症段階で、創傷治癒プロセスにおけるサイトカインとして追加の調節的役割を果たす。ＣＸＣＬ１２と同様に、ＬＥＰの局所適用は、創傷治癒プロセスを加速するのに有利であることが証明された。

【0006】

しかしながら、成長因子などの精製された治療剤を毎日局所適用すると、創傷治癒は、一貫性のない、もしくは不十分なものとなるか、またはメラノーマなどの望ましくない副作用を引き起こす可能性がある。したがって、当該技術分野では、創傷またはがんを含む皮膚状態を治療するための皮膚治療薬を投与するためのより効果的な方法が必要である。

【発明の概要】

【0007】

開示された主題は、１つ以上の皮膚治療薬を自発的に生成及び／または分泌する遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された真菌細胞を提供する。本開示は更に、開示される遺伝子操作された細胞を含む薬学的組成物、及び治療を必要とする対象を治療するために、開示される遺伝子操作された細胞を投与する方法を提供する。

【0008】

一態様では、本開示は、開示される遺伝子操作された真菌細胞の薬学的組成物を提供する。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、（ｉ）皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された生真菌細胞と、（ｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、真菌細胞の分泌経路によって真菌細胞から分泌される。

【0009】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、タンパク質またはその機能的断片である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0010】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、成長因子もしくはその誘導体、または成長因子の阻害剤もしくはその誘導体である。ある特定の実施形態では、成長因子は、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、形質転換成長因子－ベータ（ＴＧＦ－β）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、成長因子は、ＥＧＦである。ある特定の実施形態では、成長因子は、ＰＤＧＦである。ある特定の実施形態では、成長因子は、ＴＧＦ－βである。ある特定の実施形態では、成長因子は、ＶＥＧＦである。

【0011】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、ケモカインまたはその誘導体である。ある特定の実施形態では、ケモカインは、ＣＸＣＬ１２である。

【0012】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、サイトカインまたはその誘導体である。ある特定の実施形態では、サイトカインは、レプチン、ＩＬ－４、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0013】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体である。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ阻害剤は、ＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0014】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、ＶＩＩ型コラーゲン、エラスチン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0015】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、抗菌及び／または抗炎症ペプチドである。ある特定の実施形態では、抗菌及び／または抗炎症ペプチドは、カテリシジン抗菌ペプチド（ＬＬ－３７）またはその類似体、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ルシフェンシン、ルシフェンシンＩＩ、ルシリン、酢酸ペキシガナン（ＭＳＩ－７８）、Ｄ２Ａ２１／Ｄ４Ｅ１、グラニュリシン、合成グラニュリシン由来ペプチド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0016】

ある特定の実施形態では、真菌細胞は、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ、Ｅｐｉｃｏｃｃｕｍ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｗａｌｌｅｍｉａ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｐｈｏｍａ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、Ｃｌａｖｉｓｐｏｒａ、Ｃｙｂｅｒｌｉｎｄｎｅｒａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される属からの種である。ある特定の実施形態では、真菌細胞は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓである。

【0017】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞を更に含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、第３の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第３の生真菌細胞を更に含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、第４の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第４の生真菌細胞を更に含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、第５の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第５の生真菌細胞を更に含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、第６の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第６の生真菌細胞を更に含む。ある特定の実施形態では、薬剤は、皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第７、第８、第９、及び／または第１０の生真菌細胞を更に含み得、各真菌細胞は、異なる皮膚治療薬を発現及び分泌する。

【0018】

ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、直腸投与、膣投与、または局所投与のために製剤化される。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、局所投与のために製剤化される。

【0019】

ある特定の実施形態では、薬学的に許容される担体は、ヒドロゲルを含む。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．１％ｗ／ｖ～約５．０％ｗ／ｖの多糖を含む。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．１％ｗ／ｖ～約１．０％ｗ／ｖの多糖を含む。ある特定の実施形態では、多糖は、アガロースである。

【0020】

ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、治療効果量の遺伝子操作された生真菌細胞を含む。ある特定の実施形態では、治療有効量は、約１×１０^３細胞／ｍｌ～約１×１０^１０細胞／ｍｌの遺伝子操作された生真菌細胞である。ある特定の実施形態では、治療有効量は、約１×１０^４細胞／ｍｌ～約１×１０^１０細胞／ｍｌの遺伝子操作された生真菌細胞である。ある特定の実施形態では、治療有効量は、約１×１０^３細胞／ｍｌ～約１×１０^９細胞／ｍｌの遺伝子操作された生真菌細胞である。ある特定の実施形態では、治療有効量は、約１×１０^４細胞／ｍｌ～約１×１０^８細胞／ｍｌの遺伝子操作された生真菌細胞である。ある特定の実施形態では、治療有効量は、約１×１０^６細胞／ｍｌ～約２×１０^７細胞／ｍｌの遺伝子操作された生真菌細胞である。ある特定の実施形態では、治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞は、約１ｐｇ／ｍｌから及び約２００，０００ｐｇ／ｍｌの皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む。ある特定の実施形態では、治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞は、約１００ｐｇ／ｍｌから及び約２５，０００ｐｇ／ｍｌの皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む。ある特定の実施形態では、治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞は、約１ｐｇ／ｍｌから及び約２，５００ｐｇ／ｍｌの皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む。ある特定の実施形態では、治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞は、約１００ｐｇ／ｍｌ～約２，５００ｐｇ／ｍｌの皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む。

【0021】

ある特定の実施形態では、遺伝子操作された生真菌細胞は、投与後約２４時間～約２週間、例えば、約１２０時間、皮膚治療薬を分泌及び発現する。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された生真菌細胞は、投与後少なくとも約４８時間、皮膚治療薬を分泌及び発現する。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された生真菌細胞は、投与後少なくとも約７２時間、皮膚治療薬を分泌及び発現する。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された生真菌細胞は、投与後少なくとも約９６時間、皮膚治療薬を分泌及び発現する。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された生真菌細胞は、投与後少なくとも約１０８時間、少なくとも約１２０時間、少なくとも約１３２時間、少なくとも約１４４時間、少なくとも約１５６時間、少なくとも約１６５時間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、または少なくとも約１４日間、皮膚治療薬を分泌及び発現する。

【0022】

ある特定の実施形態では、遺伝子操作された生真菌細胞は、皮膚治療薬を連続的に分泌及び発現する。

【0023】

ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、１つ以上の遺伝子操作された真菌細胞のための１つ以上の栄養素を更に含む。

【0024】

本開示は、局所用薬学的組成物を更に提供する。ある特定の実施形態では、局所用薬学的組成物は、皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された生真菌細胞を含むヒドロゲルを含む。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．１％ｗ／ｖ～約１０．０％ｗ／ｖの多糖を含む。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．１％ｗ／ｖ～約５．０％ｗ／ｖの多糖を含む。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．１％ｗ／ｖ～約１．０％ｗ／ｖの多糖を含む。ある特定の実施形態では、多糖は、アガロースである。

【0025】

ある特定の実施形態では、局所用薬学的組成物は、皮膚に面する底層と、空気に面する上層と、を更に含み、皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された真菌細胞を含むヒドロゲルが、底層と上層との間に配置されている。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された真菌細胞は、底層を通過することができず、皮膚治療薬が、底層を通過することができる。ある特定の実施形態では、底層は、約２μｍ、例えば、約２μｍ以下の孔径を有する。

【0026】

ある特定の実施形態では、局所用薬学的組成物は、治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞を含む。ある特定の実施形態では、治療有効量は、約１×１０^３細胞／ｍｌ～約１×１０^１０細胞／ｍｌの遺伝子操作された生真菌細胞である。ある特定の実施形態では、治療有効量は、約１×１０^４細胞／ｍｌ～約１×１０^１０細胞／ｍｌの遺伝子操作された生真菌細胞である。ある特定の実施形態では、治療有効量は、約１×１０^３細胞／ｍｌ～約１×１０^９細胞／ｍｌの遺伝子操作された生真菌細胞である。ある特定の実施形態では、治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞は、約１×１０^４細胞／ｍｌ～約１×１０^８細胞／ｍｌの遺伝子操作された生真菌細胞を含む。ある特定の実施形態では、治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞は、約１ｐｇ／ｍｌから及び約２００，０００ｐｇ／ｍｌの皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む。ある特定の実施形態では、治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞は、約１００ｐｇ／ｍｌから及び約２５，０００ｐｇ／ｍｌの皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む。ある特定の実施形態では、治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞は、約１ｐｇ／ｍｌから及び約２，５００ｐｇ／ｍｌの皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む。

【0027】

ある特定の実施形態では、遺伝子操作された真菌細胞は、対象への投与後少なくとも約１２時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約６０時間、少なくとも約７２時間、少なくとも約８４時間、少なくとも約９６時間、少なくとも約１０８時間、少なくとも約１２０時間、少なくとも約１３２時間、少なくとも約１４４時間、少なくとも約１５６時間、少なくとも約１６５時間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、または少なくとも約１４日間、皮膚治療薬を分泌する。

【0028】

ある特定の実施形態では、真菌細胞は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓである。

【0029】

本開示は更に、（ｉ）第１の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第１の生真菌細胞と、（ｉｉ）第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞と、（ｉｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物を提供する。ある特定の実施形態では、第１の皮膚治療薬及び第２の皮膚治療薬は、異なる。ある特定の実施形態では、第１の皮膚治療薬及び第２の皮膚治療薬は、独立して、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、第１の皮膚治療薬は、成長因子を含み、第２の皮膚治療薬は、ケモカインを含む。ある特定の実施形態では、第１の皮膚治療薬は、成長因子を含み、第２の皮膚治療薬は、サイトカインを含む。

【0030】

本開示は更に、（ｉ）第１の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第１の生真菌細胞と、（ｉｉ）第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞と、（ｉｉｉ）第３の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第３の生真菌細胞と、（ｉｖ）薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物を提供する。ある特定の実施形態では、第１の皮膚治療薬、第２の皮膚治療薬、及び第３の皮膚治療薬は、異なる。ある特定の実施形態では、第１の皮膚治療薬、第２の皮膚治療薬、及び第３の皮膚治療薬は、独立して、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0031】

本開示は更に、（ｉ）第１の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第１の生真菌細胞と、（ｉｉ）第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞と、（ｉｉｉ）第３の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第３の生真菌細胞と、（ｉｖ）第４の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第４の生真菌細胞と、（ｖ）薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物を提供する。ある特定の実施形態では、第１の皮膚治療薬、第２の皮膚治療薬、第３の皮膚治療薬、及び第４の皮膚治療薬は、異なる。ある特定の実施形態では、第１の皮膚治療薬、第２の皮膚治療薬、第３の皮膚治療薬、及び第４の皮膚治療薬は、独立して、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0032】

本開示は更に、（ｉ）第１の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第１の生真菌細胞と、（ｉｉ）第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞と、（ｉｉｉ）第３の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第３の生真菌細胞と、（ｉｖ）第４の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第４の生真菌細胞と、（ｖ）第５の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第５の生真菌細胞と、（ｖｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物を提供する。ある特定の実施形態では、第１の皮膚治療薬、第２の皮膚治療薬、第３の皮膚治療薬、第４の皮膚治療薬、及び第５の皮膚治療薬は、異なる。ある特定の実施形態では、第１の皮膚治療薬、第２の皮膚治療薬、第３の皮膚治療薬、第４の皮膚治療薬、及び第５の皮膚治療薬は、独立して、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0033】

本開示は更に、（ｉ）第１の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第１の生真菌細胞と、（ｉｉ）第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞と、（ｉｉｉ）第３の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第３の生真菌細胞と、（ｉｖ）第４の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第４の生真菌細胞と、（ｖ）第５の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第５の生真菌細胞と、（ｖｉ）第６の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第６の生真菌細胞と、（ｖｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物を提供する。ある特定の実施形態では、第１の皮膚治療薬、第２の皮膚治療薬、第３の皮膚治療薬、第４の皮膚治療薬、第５の皮膚治療薬、及び第６の皮膚治療薬は、異なる。ある特定の実施形態では、第１の皮膚治療薬、第２の皮膚治療薬、第３の皮膚治療薬、第４の皮膚治療薬、第５の皮膚治療薬、及び第６の皮膚治療薬は、独立して、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0034】

本開示は、治療を必要とする対象を治療するための方法を更に提供する。ある特定の実施形態では、方法は、本明細書に開示された薬学的組成物を対象に投与することを含む。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、局所投与のために製剤化される。

【0035】

ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、皮膚状態を治療するため、または美容処置を実行するために、対象に投与される。

【0036】

ある特定の実施形態では、美容処置は、皮膚の若返りである。

【0037】

ある特定の実施形態では、皮膚状態は、創傷、感染症、にきび、線維性障害、水疱性障害、炎症性状態、血管病変、皮膚癌、色素性乾皮症、色素障害、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、創傷である。ある特定の実施形態では、創傷は、糖尿病性潰瘍である。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、感染症である。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、にきびである。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、線維性障害である。ある特定の実施形態では、線維性障害は、強皮症である。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、水疱性障害である。ある特定の実施形態では、水疱性障害は、表皮水疱症である。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、炎症性状態である。ある特定の実施形態では、炎症性状態は、乾癬である。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、血管病変である。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、皮膚癌である。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、色素性乾皮症である。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、色素障害である。

【0038】

ある特定の実施形態では、本開示の方法によって投与される遺伝子操作された真菌細胞は、対象への投与後少なくとも約１２時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約６０時間、少なくとも約７２時間、少なくとも約８４時間、少なくとも約９６時間、少なくとも約１０８時間、少なくとも約１２０時間、少なくとも約１３２時間、少なくとも約１４４時間、少なくとも約１５６時間、少なくとも約１６５時間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、または少なくとも約１４日間、皮膚治療薬を分泌する。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された真菌細胞は、対象への投与後少なくとも約７２時間、皮膚治療薬を分泌する。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された真菌細胞は、対象への投与後少なくとも約７日間、皮膚治療薬を分泌する。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された真菌細胞は、対象への投与後少なくとも約２週間、皮膚治療薬を分泌する。ある特定の実施形態では、薬学的組成物を対象に投与することは、薬学的組成物を患部に適用することを含む。

【0039】

ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、週に５回以下、週に４回以下、週に３回以下、週に２回以下、週に１回以下適用される。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、週に３回以下適用される。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、週に２回以下適用される。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、１日に１回以下適用される。

【0040】

本開示は更に、皮膚状態を治療するため、または美容処置を実行するための、本明細書に開示された薬学的組成物の使用を提供する。ある特定の実施形態では、美容処置は、皮膚の若返りである。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、創傷、感染症、にきび、線維性障害、水疱性障害、炎症性状態、血管病変、皮膚癌、色素性乾皮症、色素障害、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、創傷である。

【0041】

本開示は、本明細書に開示された薬学的組成物を含む、キットを更に提供する。

【0042】

本開示は、本明細書に開示された方法を実行するための、キットを更に提供する。

【図面の簡単な説明】

【0043】

【図1】本開示の例示的な局所用組成物及びその用途を示す。

【図2】本開示の例示的な局所用ヒドロゲル組成物及びその用途を示す。

【図3】遺伝子操作された酵母から分泌されるｈＥＧＦ及びｈＬＥＰの濃度を測定するための定量的ウェスタンブロットの結果を提供する。Ｓｍｔ３を、陽性対照として使用した。次いで、較正曲線を使用して、試験ウェル（ここでは、ＦＬＡＧ－ｈＥＧＦ及びＦＬＡＧ－ｈＬＥＰ）における試験タンパク質の濃度を算出した。

【図4】ヒト皮膚線維芽細胞についてのインビトロ創傷治癒スクラッチアッセイの結果を提供する。Ｓｕｐ ０７はｙＡＪ０７由来の上清であり、Ｓｕｐ ０６はｙＡＪ０６由来の上清であり、Ｓｕｐ ３４はｙＡＪ３４由来の上清である。

【図5A】ＥＧＦ（ｙＡＪ０６）を分泌する遺伝子操作された酵母を線維芽細胞と共培養した、ヒト皮膚線維芽細胞についてのインビトロ創傷治癒スクラッチアッセイの結果を提供する。

【図5B】ヒト皮膚線維芽細胞をヒドロゲル包帯と共培養することによる、スクラッチ創傷治癒アッセイを使用した、細胞遊走及び細胞増殖についてのＥＧＦ分泌生酵母（ｙＡＪ０６）ヒドロゲル包帯の結果を示す。

【図6】分泌されたタンパク質が、ヒドロゲル内に自由に拡散することができることを示す。

【図7】遺伝子操作された酵母を含むヒドロゲル組成物の分析を提供する。Ａ～Ｄは、分泌された皮膚治療薬が、０．２μｍのＰＴＦＥ膜を通して拡散することができることを示す。Ａは、凡例であり、Ｂは、実験の概略図であり、Ｃは、２４時間インキュベートされたシステムであり、Ｄは、抗ＦＬＡＧ抗体を使用して開発されたブロットである。Ｅ～Ｈは、酵母細胞及び酵母胞子が、ＰＴＦＥ膜を通過することができないことを示す。Ｅは、ヒドロゲル組成物の概略図であり、Ｆは、２４時間インキュベートされたシステムであり、Ｇは、酵母寒天及びＰＴＦＥの除去であり、Ｈは、４８時間の更なるインキュベーション後のプレートの画像である。Ｉは、酵母分泌ＬＥＰ及びＣＸＣＬ１２が、ヒドロゲル及びＰＴＦＥ膜を通して拡散することができることを示す。

【図8】Ａ～Ｄは、切除創傷（図８Ａ）、ＰＴＦＥ膜の上部へのヒドロゲル（酵母ヒドロゲルまたは対照ヒドロゲル）の局所適用（図８Ｂ）、及びヒドロゲル包帯を覆うＴＥＧＡＤＥＲＭ（商標）包帯（図８Ｃ）の代表的なマウス画像を提供する。図８Ｄは、（ｉ）上部のポリウレタン（ＰＵＲ）膜（ＴＥＧＡＤＥＲＭ（商標）フィルム）であって、物理的バリアとして機能し、創傷上の包帯に接着する、ポリウレタン（ＰＵＲ）膜と、（ｉｉ）生酵母及び酵母の成長に必要な栄養素を含有する寒天ヒドロゲルと、（ｉｉｉ）生酵母ヒドロゲルと創傷床との間のバリアとしての孔径＝０．２μｍのポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）膜と、を含む３層ヒドロゲル包帯を描写する。

【図9】Ａ～Ｂは、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）投与されたＢ６糖尿病マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイのタイムラプス研究を提供する。創傷は、ＥＧＦ分泌生酵母ヒドロゲル包帯（ｍＥＧＦ分泌のためのｙＡＪ２８を含有する）または対照ヒドロゲル包帯（酵母株を含有しない）のいずれかで毎日処置した。図９Ａは、経時的に異なる条件で処置した創傷の代表的な画像を示す。図９Ｂは、経時的な創傷閉鎖％を示す（＊は、０．０５未満のｐ値を示す。スチューデントｔ検定を使用して測定した場合のｐ値）。各試験群についてｎ＝４。

【図10】８日間治癒させ、ｈＥＧＦを分泌する操作された生酵母（上）または対照寒天（下）のいずれかで処置した創傷の代表的な切片からのＨ＆Ｅ染色を提供する。両方の切片は、同じマウスからのものである。

【図11A】ｍＣＸＣＬ１２（ｙＡＪ３６）を発現及び分泌するように遺伝子操作された酵母から分泌されるｍＣＸＣＬ１２の力価を決定するためのＥＬＩＳＡアッセイの結果を提供する。ｙＡＪ３６は、ＭＦ－α分泌シグナルペプチドを使用してｍＣＸＣＬ１２を分泌する。

【図11B】ｈＣＸＣＬ１２（ｙＡＪ３５）を発現及び分泌するように遺伝子操作された酵母から分泌されるｈＣＸＣＬ１２の力価を決定するためのＥＬＩＳＡアッセイの結果を提供する。ｙＡＪ３５は、ＭＦ－α分泌シグナルペプチドを使用してｈＣＸＣＬ１２を分泌する。

【図12A】ｍＥＧＦ（ｙＡＪ２８）を発現及び分泌するように遺伝子操作された酵母から分泌されるｍＥＧＦの力価を決定するためのＥＬＩＳＡアッセイの結果を提供する。ｙＡＪ２８は、ＭＦ－α分泌シグナルペプチドを使用してｍＥＧＦを分泌する。

【図12B】ｈＥＧＦ（ｙＡＪ３９）を発現及び分泌するように遺伝子操作された酵母から分泌されるｈＥＧＦの力価を決定するためのＥＬＩＳＡアッセイの結果を提供する。ｙＡＪ３９は、ＭＦ－α分泌シグナルペプチドを使用してｈＥＧＦを分泌する。

【図13】４８時間の期間に４つの（４）遺伝子操作された酵母株の光学密度を提供する。ｙＡＪ２８、ｙＡＪ３５、ｙＡＪ３６、及びｙＡＪ３９は、それぞれ、ＭＦ－α分泌シグナルペプチドを使用して、ｍＥＧＦ、ｈＣＸＣＬ１２、ｍＣＸＣＬ１２、及びｈＥＧＦを分泌する。

【図14】５ｍｍ生検パンチを使用することによって生成される創傷サイズの範囲及び異なるサイズの創傷数を提供する。

【図15A】ヒドロゲル包帯に溶解された精製組換えｍＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）で処置された２４ｍｍ^２の創傷（ｎ＝３）、及び対照ヒドロゲル包帯で処置された２４ｍｍ^２の創傷（ｎ＝３）と比較した、ｍＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲル包帯で処置された２４ｍｍ^２の創傷（ｎ＝３）を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果を提供する。

【図15B】ヒドロゲル包帯に溶解された精製組換えｍＣＸＣＬ１２（１００ｎｇ／ｍｌ）で処置された２４ｍｍ^２の創傷（ｎ＝３）、及び対照ヒドロゲル包帯で処置された２４ｍｍ^２の創傷（ｎ＝３）と比較した、ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母ヒドロゲル包帯で処置された２４ｍｍ^２の創傷（ｎ＝３）を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果を提供する。

【図16A】ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母ヒドロゲル包帯またはｍＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲル包帯で処置された２４ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果の比較を提供する。ｎ＝３。

【図16B】ヒドロゲル包帯に溶解された組換えｍＣＸＣＬ１２（１００ｎｇ／ｍｌ）、またはヒドロゲル包帯に溶解された組換えｍＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）で処置された２４ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果の比較を提供する。ｎ＝３。

【図17A】ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母ヒドロゲル包帯またはｍＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲル包帯で処置された２８ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果の比較を提供する。ｎ＝２。

【図17B】ヒドロゲル包帯に溶解された組換えｍＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）で処置された２８ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与Ｂ６糖尿病マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果の比較を提供する。ｎ＝１。

【図17C】対照酵母ヒドロゲル包帯または対照ヒドロゲル包帯で処置された２４ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果の比較を提供する。ｎ＝２。

【図18】ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母及びｍＥＧＦ分泌酵母の群集（「酵母群集」）を有するヒドロゲル、ヒドロゲル包帯または対照ヒドロゲル包帯に溶解された組換えｍＣＸＣＬ１２（１００ｎｇ／ｍｌ）及びｍＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）の組み合わせで処理された２８ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果の比較を提供する。ｎ＝２。

【図19A】ｍＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲル包帯で処置された４０ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果を提供する。ｎ＝４。

【図19B】ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母ヒドロゲルで処置された４０ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果を提供する。ｎ＝２。

【図19C】ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母及びｍＥＧＦ分泌酵母の群集（「酵母群集」）を有するヒドロゲル包帯、または対照ヒドロゲル包帯で処置された４０ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果の比較を提供する。ｎ＝３。

【図19D】ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母及びｍＥＧＦ分泌酵母の群集（「酵母群集」）を有するヒドロゲル包帯、ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母ヒドロゲル包帯、ｍＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲル包帯、または対照ヒドロゲル包帯で処置された４０ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果の比較を提供する。ｎ＝３。

【図20A】ｍＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲル包帯で処置された６０ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果を提供する。ｎ＝４。

【図20B】ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母ヒドロゲル包帯で処置された６０ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果を提供する。ｎ＝４。

【図20C】ｍＣｈｅｒｒｙ発現酵母ヒドロゲル包帯で処置された６０ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果を提供する。ｎ＝４。

【図21A】ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母ヒドロゲルで処置された６０ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイのタイムラインを提供する。ｎ＝４。

【図21B】ｍＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲルで処置された６０ｍｍ^２の創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイのタイムラインを提供する。ｎ＝４。

【図22】遺伝子操作された酵母が、ヒドロゲルから処置されたマウスの血流に移動しないことを示す。遺伝子操作された酵母を、ＲＦＰを発現するように修飾し、次いで、創傷治癒酵母と同じ様式でマウスに適用した。これらのマウスから血液を収集し、蛍光を測定して、いずれかの酵母がマウスの循環に入ったかどうかを決定した。

【図23】ＳＴＺで５日間連続して処理したＳＫＨ－１マウスの体重及び血糖値を提供する。生検パンチを使用して、ＳＴＺ処置の１６日後にマウスを傷つけた。

【図24】５０ｍｍ^２の切除創傷処置されたＥＧＦ分泌酵母（ｙＡＪ２８）ヒドロゲルを有するＳＴＺ投与ＳＫＨ－１マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果を提供する。ｎ＝４。上のパネルは、経時的な創傷閉鎖％を示す（＊は、０．０５未満のｐ値を示し、＊＊は、０．０１未満のｐ値を示す。スチューデントｔ検定を使用して測定した場合のｐ値）。下のパネルは、経時的に異なる条件で処置した創傷の代表的な画像を示す。

【図25】５０ｍｍ^２の切除創傷処理されたＣＸＣＬ１２分泌酵母（ｙＡＪ３６）ヒドロゲルを有するＳＴＺ投与ＳＫＨ－１マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果を提供する。ｎ＝４。上のパネルは、経時的な創傷閉鎖％を示す（＊は、０．０５未満のｐ値を示し、＊＊は、０．０１未満のｐ値を示す。スチューデントｔ検定を使用して測定した場合のｐ値）。各試験群についてｎ＝４。下のパネルは、経時的に異なる条件で処置した創傷の代表的な画像を示す。

【図26A】ｍＥＧＦ分泌酵母（ｙＡＪ２８）を含むヒドロゲルで処置している２４ｍｍ^２、２８ｍｍ^２、及び４０ｍｍ^２のインビボ創傷治癒率に対する初期創傷サイズの影響を示す。

【図26B】ＣＸＣＬ１２分泌酵母（ｙＡＪ３６）を含むヒドロゲルで処置している２４ｍｍ^２、２８ｍｍ^２、及び４０ｍｍ^２のインビボ創傷治癒率に対する初期創傷サイズの影響を示す。

【図26C】対照ヒドロゲルで処置している２４ｍｍ^２、２８ｍｍ^２、及び４０ｍｍ^２のインビボ創傷治癒率に対する初期創傷サイズの影響を示す。

【図26D】ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母及びｍＥＧＦ分泌酵母の群集（「酵母群集」）を有するヒドロゲルで処置している２４ｍｍ^２、２８ｍｍ^２及び４０ｍｍ^２のインビボ創傷治癒率に対する初期創傷サイズの影響を示す。

【図27A】ｍＥＧＦ分泌酵母（ｙＡＪ２８）ヒドロゲルで処置された副木で補助された５０ｍｍ^２切除創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイのタイムラインを提供する。ｎ＝８。

【図27B】ｍＬＥＰ分泌酵母（ｙＡＪ３０）ヒドロゲルで処置された副木で補助された５０ｍｍ^２切除創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイのタイムラインを提供する。ｎ＝８。

【図28A】ＬＥＰ分泌酵母株のウェスタンブロットを提供する。ｙＡＪ３３及びｙＡＪ３４は、ＭＦ－α分泌シグナルペプチドを使用して、ＦＬＡＧ－ｍＬＥＰ及びＦＬＡＧ－ｈＬＥＰを分泌する。ＳＭＴ３は、陽性対照として使用された６ＸＨｉｓ－ＳＭＴ３－ＦＬＡＧタンパク質を示す。ブロットの下の黒い正方形の配置は、各ウェル中の試料が細胞ペレット（分泌タンパク質ではない）または培養上清（分泌タンパク質）からのものであるかどうかを示す。

【図28B】ＥＧＦ分泌酵母株のウェスタンブロットを提供する。ｙＡＪ２６は、ＭＦ－α分泌シグナルペプチドを使用して、ＦＬＡＧ－ｈＥＧＦを分泌し、ｙＡＪ４０は、Ｓｅｄ１分泌シグナルペプチドを使用してＦＬＡＧ－ｍＥＧＦを分泌する。ブロットの下の黒い正方形の配置は、各ウェル中の試料が細胞ペレット（分泌タンパク質ではない）または培養上清（分泌タンパク質）からのものであるかどうかを示す。

【図28C】ＣＸＣＬ１２分泌酵母株のウェスタンブロットを提供する。ｙＡＪ３５及びｙＡＪ３６はそれぞれ、ＭＦ－α分泌シグナルペプチドを使用して、ｈＣＸＣＬ１２及びｍＣＸＣＬ１２を分泌する。ｙＡＪ３７及びｙＡＪ３８はそれぞれ、ＭＦ－α分泌シグナルペプチドを使用して、ＦＬＡＧ－ｈＣＸＣＬ１２及びＦＬＡＧ－ｍＣＸＣＬ１２を分泌する。ブロットの下の黒い正方形の配置は、各ウェル中の試料が細胞ペレット（分泌タンパク質ではない）または培養上清（分泌タンパク質）からのものであるかどうかを示す。

【図29】ｈＬＥＰを発現及び分泌するように遺伝子操作された酵母から分泌されるｈＬＥＰの力価を決定するためのＥＬＩＳＡアッセイの結果を提供する。ｙＡＪ２７は、ＭＦ－α分泌シグナルペプチドを使用して、ｈＬＥＰを分泌する。

【図30A】ｈＬＥＰ（ｙＡＪ２７）を分泌する遺伝子操作された酵母を線維芽細胞と共培養した、ヒト皮膚線維芽細胞についてのインビトロ創傷治癒スクラッチアッセイの結果を提供する。

【図30B】ｈＣＸＣＬ１２（ｙＡＪ３５）を分泌する遺伝子操作された酵母を線維芽細胞と共培養した、ヒト皮膚線維芽細胞についてのインビトロ創傷治癒スクラッチアッセイの結果を提供する。

【図31A】ｈＥＧＦ（ｙＡＪ３９）を分泌する遺伝子操作された酵母を線維芽細胞と共培養した、ヒト皮膚線維芽細胞についてのインビトロ増殖アッセイの結果を提供する。

【図31B】ｈＬＥＰ（ｙＡＪ２７）を分泌する遺伝子操作された酵母を線維芽細胞と共培養した、ヒト皮膚線維芽細胞についてのインビトロ増殖アッセイの結果を提供する。

【図31C】ｈＣＸＣＬ１２（ｙＡＪ３５）を分泌する遺伝子操作された酵母を線維芽細胞と共培養した、ヒト皮膚線維芽細胞についてのインビトロ増殖アッセイの結果を提供する。

【図32A】ｍＬＥＰ分泌酵母（ｙＡＪ３０）ヒドロゲル包帯で処置した創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果を提供する。ｎ＝８。マウスは、副木で補助された切除創傷を有するＳＫＨ－１マウスであった。

【図32B】ｍＥＧＦ分泌酵母（ｙＡＪ２８）ヒドロゲル包帯で処置した創傷を有するＳＴＺ投与マウスについてのインビボ創傷治癒アッセイの結果を提供する。ｎ＝８。マウスは、副木で補助された切除創傷を有するＳＫＨ－１マウスであった。

【図33】ｍＬＥＰ分泌酵母（ｙＡＪ３０）を含有するヒドロゲル創傷包帯またはｍＥＧＦ分泌酵母（ｙＡＪ２８）を含有するヒドロゲル創傷包帯で処置された、健康なマウス及び傷をつけられたマウスの皮膚のＫ５及びＣＤ３１免疫組織化学を提供する。Ｋ５は、赤色で基底ケラチノサイトを示し、ＣＤ３１は、緑色で内皮細胞を示し、ＤＡＰＩは、青色で核を示す。

【図34】ｍＬＥＰ分泌酵母（ｙＡＪ３０）を含有するヒドロゲル創傷包帯またはｍＥＧＦ分泌酵母（ｙＡＪ２８）を含有するヒドロゲル創傷包帯で処置された、健康なマウス及び傷をつけられたマウスの皮膚のＫ１４及びＫｉ６７免疫組織化学を提供する。Ｋ１４は、赤色で基底ケラチノサイトを示し、Ｋｉ６７は、緑色で増殖細胞を示し、ＤＡＰＩは、青色で核を示す。

【図35】ｍＬＥＰ分泌酵母（ｙＡＪ３０）を含有するヒドロゲル創傷包帯またはｍＥＧＦ分泌酵母（ｙＡＪ２８）を含有するヒドロゲル創傷包帯で処置された、健康なマウス及び傷をつけられたマウスの皮膚のＫ１４及びＫ１０免疫組織化学を提供する。Ｋ１４は、赤色で基底ケラチノサイトを示し、Ｋ１０は、緑色で基底上ケラチノサイトを示し、ＤＡＰＩは、青色で核を示す。

【図36】ｍＬＥＰ分泌酵母（ｙＡＪ３０）を含有するヒドロゲル創傷包帯またはｍＥＧＦ分泌酵母（ｙＡＪ２８）を含有するヒドロゲル創傷包帯で処置された、健康なマウス及び傷をつけられたマウスの皮膚のロリクリン及びファロイジン免疫組織化学を提供する。ロリクリンは、緑色で顆粒層及び角質化層を示し、ファロイジンは、赤色で細胞骨格を示し、ＤＡＰＩは、青色で核を示す。

【発明を実施するための形態】

【0044】

本開示は、皮膚治療薬を自発的に生成及び／または分泌する遺伝子操作された真菌細胞を提供する。本発明は、治療を必要とする対象、例えば、皮膚状態、例えば、創傷に罹患している対象を治療するための、そのような遺伝子操作された真菌細胞の適用を更に提供する。

【0045】

遺伝子操作された真菌細胞、そのような真菌細胞の薬学的組成物、及び本明細書に記載の方法は、対象への投与前に遺伝子操作された細胞から皮膚治療薬の精製を必要とせずに、それを必要とする対象に皮膚治療薬を投与するためのより費用対効果の高い方法を提供する。例えば、限定するものではないが、遺伝子操作された細胞による皮膚治療薬のインサイチュ生成及びそのような細胞の投与は、製造、精製及び／または保存プロセス中に生じ得る皮膚治療薬の分解を回避、防止及び／または低減することができる。

【0046】

皮膚治療薬を連続的に分泌する、開示される遺伝子操作された真菌細胞、例えば、酵母細胞の適用はまた、製品の定期的な適用に対する患者のコンプライアンスへの依存を最小限に抑えることによって、皮膚状態、例えば、創傷の治癒を改善する可能性を有する。ある特定の実施形態では、開示される遺伝子操作された真菌細胞を介したオンサイト発現、分泌、及び送達による１つ以上の皮膚治療薬の持続送達は、これらの薬剤のバイオアベイラビリティを増加させ、増強された創傷治癒をもたらす。この持続送達は、精製剤を毎日局所投与することによって達成することはできないが、遺伝子操作された酵母は、そのような薬剤を患部に連続的に送達する。長時間の連続送達は、皮膚治療薬の漸進的な放出のためのスマートナノサイズ及びマクロサイズキャリアの適用などの他の技術によってアプローチ可能であるが、そのような技術は、より高いコスト及び保存の問題、ならびに劣悪な保存可能期間に苦しむであろう。

【0047】

真菌細胞は、治療用タンパク質を発現するために細菌細胞よりも優れているため、本開示で使用された。具体的には、真菌細胞は、哺乳動物細胞におけるのと同様のタンパク質折り畳みシャペロン、ジスルフィド結合形成及び翻訳後機構を有するため、酵母などの真菌細胞は、真核生物タンパク質の発現及び分泌に関して細菌よりも優れている。哺乳動物細胞と同様の細胞機構を有することは、真核生物タンパク質の適切な折り畳み及び翻訳後修飾、ならびに生物学的に活性である真核生物タンパク質の生成を確実にする。細菌は、そのような機械を含まない。実施例２及び４ならびに図５Ｂ、９Ａ～９Ｂ、及び３１Ａ～３１Ｃに示されるように、本開示の遺伝子操作された真菌細胞によって発現及び分泌される皮膚治療薬は、生物学的に活性であり、創傷の閉鎖及び治癒を増強する。加えて、細菌と比較して、酵母を大規模に発酵させ、乾燥した形態で送達及び保存することができ、それによって保存可能期間を延ばすことができる。更に、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅなどの真菌細胞は、多くの細菌とは異なり、安全であると認識されている（ＧＲＡＳ）生物であるため、ヒトによって安全に使用することができる。

【0048】

明確にするために、限定するものではないが、本明細書に開示された主題の詳細な説明は、以下のサブセクションに分割される。
Ｉ． 定義、
ＩＩ． 皮膚治療薬、
ＩＩＩ． 遺伝子操作された細胞、
ＩＶ． 薬学的組成物、
Ｖ． 皮膚状態、
ＶＩ． 使用方法、
ＶＩＩ． キット及び製品、及び
ＶＩＩＩ． 例示的な実施形態。

【0049】

Ｉ． 定義
本明細書で使用される用語は、概して、本開示の文脈内で、及び各用語が使用される特定の文脈において、当該技術分野におけるそれらの通常の意味を有する。ある特定の用語は、本開示の組成物及び方法ならびにそれらを製造及び使用する方法を説明する際に実践者に追加のガイダンスを提供するために、以下でまたは本明細書の他の場所で説明される。

【0050】

本明細書で使用される場合、特許請求の範囲及び／または明細書において「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語とともに使用されるときの「ａ」または「ａｎ」という単語の使用は、「１つ」を意味し得るが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」、及び「１つ以上」の意味とも一致する。

【0051】

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「できる（ｃａｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」という用語及びそれらの変形は、本明細書で使用される場合、追加の行為または構造を妨げない、オープンエンドな移行句、用語または語であることを意図する。本開示はまた、明示的に記載されているかどうかにかかわらず、本明細書に提示される実施形態または要素「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」、及び「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」他の実施形態も企図する。

【0052】

「約」または「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値の許容される誤差範囲内を意味し、これは、値がどのように測定または決定されるか、すなわち、測定系の限界に部分的に依存する。例えば、「約」は、当該技術分野における慣例に従って、３以内または３を超える標準偏差を意味し得る。代替的に、「約」は、所与の値の最大２０％、好ましくは最大１０％、より好ましくは最大５％、及び更により好ましくは最大１％の範囲を意味することができる。代替的に、特に生物学的な系またはプロセスに関して、本用語は、値の１桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味することができる。

【0053】

本明細書で使用される場合、「発現（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）」または「発現する（ｅｘｐｒｅｓｓｅｓ）」という用語は、細胞、例えば、酵母細胞内で生じる転写及び翻訳を指す。細胞内での遺伝子及び／または核酸の発現レベルは、細胞内に存在する対応するｍＲＮＡの量、または細胞によって産生される遺伝子及び／または核酸によってコードされるタンパク質の量のいずれかに基づいて決定され得る。例えば、遺伝子及び／または核酸から転写されたｍＲＮＡは、望ましくは、ノーザンハイブリダイゼーションによって定量される。Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｐｐ．７．３－７．５７（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９）。遺伝子及び／または核酸によってコードされるタンパク質は、タンパク質の生物学的活性をアッセイすることによって、またはそのような活性とは独立したアッセイ、例えば、タンパク質と反応することができる抗体を使用するウェスタンブロットまたはラジオイムノアッセイを用いることによって、定量することができる。Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｐｐ．１８．１－１８．８８（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９）。

【0054】

本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」は、概して、約３つ以上のアミノ酸を有するペプチド及びタンパク質を指す。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、細胞にとって内因性であってもよく、好ましくは、外因性であってもよく、これは、ポリペプチドが、利用されている細胞にとって異種、すなわち、外来であることを意味する。

【0055】

本明細書で使用される場合、「タンパク質」という用語は、鎖長がより高いレベルの三級及び／または四級構造を生成するのに十分なアミノ酸の配列を指す。これは、典型的にはそのような構造を有しない「ペプチド」と区別するためである。典型的には、本明細書におけるタンパク質は、少なくとも約４～１００ｋＤ、例えば、約１５ｋＤにより近い分子量を有する。ある特定の実施形態では、タンパク質は、少なくとも約２０個、約３０個、約４０個、約５０個、約６０個、約７０個、約８０個、約９０個、約１００個、約２００個、約３００個、約４００個、または約５００個のアミノ酸を含むことができる。本明細書の定義に包含されるタンパク質の例には、全てのタンパク質が含まれ、一般に、１つ以上の鎖間及び／または鎖内ジスルフィド結合を含む多鎖ポリペプチドを含む、１つ以上のジスルフィド結合を含有するタンパク質が含まれる。ある特定の実施形態では、タンパク質は、グリコシル化及び脂質化を含むがこれらに限定されない、他の翻訳後修飾を含むことができる。例えば、Ｐｒａｂａｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，ＷＩＲＥｓ Ｓｙｓｔ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ（２０１２）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。

【0056】

本明細書で使用される場合、「その機能的断片」という用語は、無傷及び／または全長の皮膚治療薬、例えば、タンパク質またはペプチドの活性の少なくとも一部分を保持する、皮膚治療薬、例えば、タンパク質またはペプチドの断片を指す。ある特定の実施形態では、機能的断片は、無傷及び／または全長の皮膚治療薬の活性の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％を保持する。

【0057】

本明細書で使用される場合、「アミノ酸」、「アミノ酸モノマー」または「アミノ酸残基」という用語は、アミン及びカルボン酸官能基と、各アミノ酸に特異的な側鎖とから構成される有機化合物を指す。具体的には、アルファ－またはα－アミノ酸は、アミン（－ＮＨ_２）がメチレン基（－ＣＨ_２）によってカルボン酸（－ＣＯＯＨ）から分離され、カルボン酸（－ＣＯＯＨ）に対してアルファであるこのメチレン基（－ＣＨ_２）に接続された各アミノ酸に特異的な側鎖がある有機化合物を指す。異なるアミノ酸は、異なる側鎖を有し、電荷、極性、芳香族性、還元電位、疎水性及びｐＫａなどの独特の特徴を有する。アミノ酸は、第１のアミノ酸のカルボン酸基と第２のアミノ酸のアミン基との反応によって、ペプチド結合を介してポリマーを形成するように共有結合され得る。本開示の意味におけるアミノ酸は、２０個以上の天然に存在するアミノ酸、非天然に存在するアミノ酸のうちのいずれかを指し、Ｄ及びＬ光学異性体の両方を含む。

【0058】

本明細書で使用される場合、「核酸」、「核酸分子」、または「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／または物質を指す。各ヌクレオチドは、塩基、具体的には、プリンまたはピリミジン塩基（すなわち、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ））、糖（すなわち、デオキシリボースまたはリボース）、及びリン酸基から構成される。多くの場合、核酸分子は、塩基の配列によって説明され、それにより、塩基は、核酸分子の一次構造（線形構造）を表す。塩基の配列は、典型的には、５’から３’で表される。本明細書において、核酸分子という用語は、例えば、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）及びゲノムＤＮＡ、リボ核酸（ＲＮＡ）、具体的には、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＤＮＡまたはＲＮＡの合成形態、ならびにこれらの分子のうちの２つ以上を含む混合ポリマーを含むデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を包含する。核酸分子は、直鎖状または環状であり得る。加えて、核酸分子という用語は、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方、ならびに一本鎖及び二本鎖形態を含む。更に、本明細書に記載の核酸分子は、天然または非天然に存在するヌクレオチドを含有し得る。非天然に存在するヌクレオチドの例としては、誘導体化糖またはリン酸骨格連結または化学的に修飾された残基を有する修飾ヌクレオチド塩基が挙げられる。核酸分子はまた、インビトロ及び／またはインビボ、例えば、酵母細胞において、本開示の核酸を直接発現するためのベクターとして好適であるＤＮＡ及びＲＮＡ分子を包含する。例えば、限定するものではないが、本開示の核酸は、皮膚治療薬をコードすることができる。そのようなＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）またはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ベクターは、修飾されていないか、または修飾されたものであり得る。例えば、ｍＲＮＡは、ＲＮＡベクターの安定性及び／またはコードされた分子の発現を増強するように化学的に修飾され得る。

【0059】

本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、それが連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指す。

【0060】

本明細書で使用される場合、「組換え細胞」という用語は、それらが由来する元の親細胞からいくつかの遺伝子修飾を有する細胞を指す。かかる細胞はまた、「遺伝子操作された細胞」と称され得る。そのような遺伝子組換えは、遺伝子産物、例えば、組換えタンパク質、例えば、皮膚治療薬の発現のための異種遺伝子（または核酸）の導入の結果であり得る。

【0061】

本明細書で使用される場合、「組換えタンパク質」という用語は、概して、ペプチド及びタンパク質を指す。そのような組換えタンパク質は、利用されている細胞にとって「異種」、すなわち、外来であり、例えば、酵母細胞によって産生される異種皮膚治療薬である。

【0062】

本明細書で使用される場合、２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の文脈における「配列同一性」または「同一性」は、特定の比較ウィンドウで最大限に一致するようにアラインさせたときに同じである２つの配列のヌクレオチド塩基またはアミノ酸残基について言及する。タンパク質に関して、配列同一性または類似性のパーセンテージを使用する場合、同一ではない残基位置は、多くの場合、保存的アミノ酸置換によって異なり、アミノ酸残基は、同様の理化学的特性を有するアミノ酸残基の機能的に等価な残基で置換されており、したがって、分子の機能的特性を変化させないことが認識される。

【0063】

本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」という用語は、例えば、Ｎ末端またはＣ末端で、第２のタンパク質または第２のタンパク質の一部分に連結されているタンパク質の全部または一部分を含むタンパク質を指す。ある特定の実施形態では、タンパク質の一部分は、タンパク質の機能的断片を含むことができる。

【0064】

当業者によって理解されるように、本明細書で使用される場合、「コドン最適化」という用語は、Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ門の種の細胞などの特定の生物のコドン使用バイアスに従って、その生物の発現系におけるタンパク質発現を改善するための、タンパク質コード遺伝子のコドンへの同義変異の導入を指す。「コドン使用バイアス」という用語は、コードＤＮＡにおける同義コドンの発生頻度の差を指す。異なる生物の遺伝子コードは、多くの場合、同じアミノ酸をコードするいくつかのコドンのうちの１つを他のコドンよりも使用することに偏っている。したがって、偶然に予想されるよりも高い頻度で、その１つのコドンが使用される。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅなどの微生物における最適化されたコドンは、それらのそれぞれのゲノムｔＲＮＡプールの組成を反映する。最適化されたコドンの使用は、より速い翻訳速度と高精度を達成するのに役立つ。

【0065】

バイオインフォマティクス及び計算生物学の分野では、多くの統計的方法が議論され、コドン使用バイアスを分析するために使用されている。「最適コドンの頻度」（Ｆｏｐ）、相対コドン適応（ＲＣＡ）、または「コドン適応指数」（ＣＡＩ）などの方法を使用して遺伝子発現レベルを予測し、「有効コドン数」（Ｎｃ）及び情報理論からのシャノンエントロピーなどの方法を使用してコドン使用均一性を測定する。対応分析及び主要構成要素分析などの多変量統計的方法は、遺伝子間のコドン使用の変動を分析するために広く使用されている。ＣｏｄｏｎＷ、ＧＣＵＡ、ＩＮＣＡ、及び当業者によって識別可能な他のものを含む、上記に列挙された統計分析を実装するための多くのコンピュータプログラムがある。いくつかのソフトウェアパッケージは、遺伝子配列のコドン最適化のためにオンラインで利用可能であり、これには、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、ＥｎＣｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃなどの企業によって提供されるものが含まれる。

【0066】

本明細書で使用される場合、「配列同一性のパーセンテージ」または「同一性のパーセンテージ」は、比較ウィンドウにわたって２つの最適にアラインされた配列を比較することによって決定される値を意味し、比較ウィンドウにおけるポリヌクレオチド配列の部分は、２つの配列の最適アラインメントのための（付加も欠失も含まない）参照配列と比較した場合に、付加または欠失（ギャップ）を含むことができる。パーセンテージは、同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が両方の配列中に発生する位置の数を決定して、一致した位置の数を得ることと、一致した位置の数を比較のウィンドウにおける位置の総数で割ることと、結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることと、によって計算される。

【0067】

当業者に理解されるように、任意の２つの配列間の同一性パーセントの決定は、ある特定の周知の数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。そのような数学的アルゴリズムの非限定的な例は、Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．の局所相同性アルゴリズムであるＭｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈの相同性アライメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎのｓｅａｒｃｈ－ｆｏｒ－ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ－ｍｅｔｈｏｄ、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌのアルゴリズム（Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌにおけるように修正されたもの）である。好適な数学的アルゴリズムのコンピュータ実装は、配列同一性を決定するために配列を比較するために利用され得る。そのような実装としては、特に、熟練者によって識別可能な、ＣＬＵＳＴＡＬ、ＡＬＩＧＮ、ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0068】

本明細書で使用される場合、「参照配列」は、配列比較の基礎として使用される定義された配列である。参照配列は、例えば、全長タンパク質またはタンパク質断片のセグメントとして、特定の配列のサブセットまたは全体であり得る。参照配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ及びＵｎｉＰｒｏｔなどのデータベースにおいて識別可能な配列、ならびに当業者に識別可能な他の配列であり得る。

【0069】

本明細書で使用される場合、遺伝子の調節配列に関して、「作動可能な連結（ｏｐｅｒａｔｉｖｅ ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ）」、「作動可能に連結された（ｏｐｅｒａｂｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）」、または「作動的に連結された（ｏｐｅｒａｔｉｖｅｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）」という用語は、適切な効果の生成を可能にする組み合わせにおける要素の配置を示す。遺伝子及び調節配列に関して、作用的接続は、調節配列が遺伝子の転写または翻訳を直接的または間接的に増加または減少させることを可能にする、調節配列に関する遺伝子の構成を示す。具体的には、ある特定の実施形態では、作動可能に連結された遺伝子の転写を直接増加させる調節配列は、典型的には、同じ鎖上に位置し、それらが転写を開始する遺伝子の転写開始部位に隣接するＤＮＡ配列の上流（センス鎖の５’領域に向かって）に位置するプロモーターを含む。ある特定の実施形態では、作動的に連結された遺伝子または遺伝子クラスターの転写を直接増加させる調節配列は、当業者によって理解されるように、プロモーターと比較して転写開始部位からより遠くに位置し得、調節された遺伝子の上流または下流のいずれかに位置し得るエンハンサーを含む。エンハンサーは、典型的には、特定の遺伝子の転写を増加させるために転写アクチベーターによって結合され得るＤＮＡの短い（５０～１５００ｂｐ）領域である。典型的には、エンハンサーは、遺伝子から最大１Ｍｂｐ離れて、開始部位の上流または下流に位置することができる。

【0070】

本明細書で使用される場合、「分泌可能」という用語は、分泌されることができることを意味し、本開示における分泌は、概して、細胞の内部、例えば、細胞の細胞質または細胞質ゾル内から、その外部、例えば、細胞の形質膜の外側への輸送または転座を指す。分泌は、ペプチドの酵素処理などの様々な細胞処理手順を含むいくつかの手順を含むことができる。ある特定の実施形態では、分泌は、酵母の古典的な分泌経路を利用することができる。ある特定の実施形態では、タンパク質、例えば、本明細書に開示されたタンパク質の分泌は、連続的であり得るか、または誘導され得る。

【0071】

本明細書で使用される場合、「検出する（ｄｅｔｅｃｔ）」または「検出（ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）」という用語は、試料、反応混合物、分子複合体、及び基質を含むが、これらに限定されない、限られた空間部分における標的の存在（ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ）及び／または存在（ｐｒｅｓｅｎｃｅ）の決定を示す。本明細書で使用される場合、「検出する」または「検出」は、相互作用する能力、具体的には、他の化合物を結合する能力、別の化合物を活性化させる能力、及び本開示を読んだときに当業者によって識別可能な追加の特性を含むが、これらに限定されない、標的の化学的特性及び／または生物学的特性の決定を含むことができる。検出は、定量的または定性的であり得る。検出は、標的またはシグナルの量または割合を決定するように設計された任意の分析を含むがこれらに限定されない、標的またはシグナルの量（ｑｕａｎｔｉｔｙ）または量（ａｍｏｕｎｔ）の測定について言及する、それに関連する、またはそれを含む場合には「定量的」である。検出は、定量されていない別の標的またはシグナルに対する相対的存在量の観点から、標的またはシグナルの質または種類の識別について言及する、それに関連する、またはそれを含む場合には「定性的」である。

【0072】

「誘導される（ｄｅｒｉｖｅｄ）」または「誘導する（ｄｅｒｉｖｅ）」という用語は、本明細書では、特定の供給源から得ることを意味するように使用される。

【0073】

本明細書で使用される場合、「分子」という用語は、一緒に結合された原子の群を指し、化学反応に関与することができる化合物の最小の基本単位を表す。

【0074】

本明細書で交換可能に使用される場合、「創傷治癒剤」及び「皮膚治療薬」という用語は、対象に投与することができ、創傷を含む皮膚状態の症状または病状を軽減、緩和、または排除するなどの治療効果を提供する任意の低分子、タンパク質、及びペプチドを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に開示された皮膚治療薬は、美容目的のために使用され得る。

【0075】

タンパク質、例えば、皮膚治療薬に関して本明細書で使用される場合、「誘導体」という用語は、タンパク質、例えば、皮膚治療薬の修飾形態を指す。そのような誘導体の非限定的な例としては、タンパク質の変異形態が挙げられる。例えば、限定するものではないが、本開示の皮膚治療薬は、野生型の皮膚治療薬と比較して、１つ以上のアミノ酸置換、例えば、１個以上、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、６個以上、７個以上、８個以上、９個以上、または１０個以上のアミノ酸置換を含むことができる。

【0076】

「薬学的に許容される担体」とは、本明細書で使用される場合、ある組織、器官、または身体の一部分から別の組織、器官、または身体の一部分へと、目的の化合物または組成物を運ぶか、または輸送することに関与する薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを指す。例えば、担体は、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、またはカプセル化材料、またはそれらの組み合わせであり得る。担体の各構成要素は、製剤の他の成分と適合性でなければならないという点で、「薬学的に許容され」なければならない。また、接触する可能性のある組織または器官との接触にも適していなければならず、毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、またはその治療上の利益を過度に上回る他の合併症のリスクを伴わないことを意味する。

【0077】

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、限定されないが、特定の治療の需要者であるヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類などを含む、任意の動物（例えば、哺乳動物）を指す。

【0078】

本明細書で使用される場合、用語「皮膚状態」は、表皮、真皮または皮下組織の損傷または不規則性または異常を指す。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、表皮、真皮、または皮下組織の構造的完全性に影響を与える損傷を含む。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、表皮、真皮、または皮下組織の構造の不規則性または異常を含む。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、表皮、真皮または皮下組織の水疱形成、真皮層のうちのいずれか１つにおける開口または亀裂、腫脹、色素沈着、変色、スケーリング、乾燥、真皮層の肥厚または瘢痕化、及び毛包閉塞を含む。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、創傷である。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、がんである。ある特定の実施形態では、皮膚状態は、美容状態である。

【0079】

「治療有効量」または「治療有効レベル」は、状態、例えば、皮膚状態の１つ以上の症状を予防、減少、緩和または排除することができる遺伝子操作された細胞及び／または遺伝子操作された細胞によって産生される皮膚治療薬の量を指す。

【0080】

本明細書で使用される場合、「修飾された」という用語は、生物、例えば、細胞について言及する場合、自然界に存在しない生物を指す。「組換え」または「操作された」という用語は、互換的に使用される。

【0081】

ＩＩ． 皮膚治療薬
本開示は、１つ以上の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する細胞を提供する。例えば、限定するものではないが、本開示の細胞、例えば、遺伝子操作された細胞は、１つの皮膚治療薬を産生及び／または分泌することができる。ある特定の実施形態では、本開示の細胞、例えば、遺伝子操作された細胞は、１つを超える皮膚治療薬、例えば、２つ以上の皮膚治療薬、３つ以上の皮膚治療薬、４つ以上の皮膚治療薬、または５つ以上の皮膚治療薬を産生及び／または分泌することができる。

【0082】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、タンパク質もしくはその誘導体、またはその機能的断片であり得る。本明細書に開示されたタンパク質は、鎖長がより高いレベルの三級及び／または四級構造を生成するのに十分なアミノ酸の配列を指す。これは、典型的にはそのような構造を有しない「ペプチド」と区別するためである。ある特定の実施形態では、タンパク質、例えば、タンパク質治療薬は、少なくとも約５～１００ｋＤ、例えば、約１５ｋＤにより近い分子量を有することができる。ある特定の実施形態では、タンパク質治療薬は、少なくとも約１０個、約２０個、約３０個、約４０個、約５０個、約６０個、約７０個、約８０個、約９０個、約１００個、約２００個、約３００個、約４００個、約５００個のアミノ酸、約１，０００個のアミノ酸、約１，５００個のアミノ酸、約２，０００個のアミノ酸、約２，５００個のアミノ酸、約３，０００個のアミノ酸、約３５，０００個のアミノ酸、または約４０，０００個のアミノ酸を含むことができる。タンパク質治療薬の非限定的な例には、全てのタンパク質が含まれ、一般に、１つ以上の鎖間及び／または鎖内ジスルフィド結合を含む多鎖ポリペプチドを含む、１つ以上のジスルフィド結合を含有するタンパク質が含まれる。ある特定の実施形態では、タンパク質治療薬は、グリコシル化及び脂質化を含むがこれらに限定されない、他の翻訳後修飾を含むことができる。例えば、Ｐｒａｂａｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，ＷＩＲＥｓ Ｓｙｓｔ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ（２０１２）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、ペプチドもしくはその誘導体、またはその機能的断片であり得る。

【0083】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、成長因子、ケモカイン及び／またはサイトカイン、またはその機能的断片であり得る。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、プロテアーゼ阻害剤またはその機能的断片である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、例えば、成長因子、サイトカイン、例えば、ケモカイン、及び／またはプロテアーゼ阻害剤、またはそれらの機能的断片の変異形態の誘導体であり得る。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、成長因子の阻害剤及び／またはサイトカインの阻害剤であり得る。

【0084】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、成長因子もしくはその誘導体、またはその機能的断片である。例えば、限定するものではないが、成長因子は、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）及び／または形質転換成長因子－ベータ（ＴＧＦ－β）であり得る。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、１つ以上の成長因子、例えば、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ、ＴＧＦ－β、ＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ２）、ＫＧＦ、ＮＧＦ、ＧＭＣＳＦ、ＧＣＳＦ、ＩＧＦ、ＴＰＯ、ＢＭＰ、ＳＧＦ、ＨＧＦ、ＧＤＦ、ＭＳＦ、エリスロポエチン及び／またはニューロトロフィンを発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＥＧＦを発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＰＤＧＦを発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＶＥＧＦを発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＴＧＦ－βを発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ、ＴＧＦ－β、ＦＧＦ、ＫＧＦ、ＮＧＦ、ＧＭＣＳＦ、ＧＣＳＦ、ＩＧＦ、ＴＰＯ、ＢＭＰ、ＳＧＦ、ＨＧＦ、ＧＤＦ、ＭＳＦ、エリスロポエチン及び／またはニューロトロフィンのうちの２つ以上、３つ、４つ以上、または全てを発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＥＧＦ及びＰＤＧＦを発現及び／または分泌する。

【0085】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、サイトカインもしくはその誘導体、またはその機能的断片である。例えば、限定するものではないが、サイトカインは、レプチンまたはインターロイキン、例えば、ＩＬ－４、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－１０及びＩＬ－１２、ならびにＴＮＦ－αであり得る。サイトカインの追加の非限定的な例は、Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ａｎ，Ｉｎｔ．Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．４５（２）：２７－３７（２００７）の表１に開示されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、サイトカインは、ケモカインであり得る。ある特定の実施形態では、サイトカインは、インターロイキンである。

【0086】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、１つ以上のサイトカイン、例えば、レプチンを発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、レプチンを発現及び／または分泌する。

【0087】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、成長因子の阻害剤を発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＶＥＧＦの阻害剤を発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、１つ以上のインターロイキン、例えば、ＩＬ－４を発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＩＬ－４を発現及び／または分泌する。本明細書に記載されるように、ＩＬ－４は、ＶＥＧＦの阻害剤として機能し得る。ＶＥＧＦ阻害剤の追加の非限定的な例は、Ｇｕｒｙａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ．１３（９）：１３３７（２０２１）ａｎｄ Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ２： Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ：１７０１０（２０１７）に開示されており、各々の内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、ペプチド、例えば、ＨＲＨＴＫＱＲＨＴＡＬＨ（配列番号５２）である。本明細書に記載されるように、ＶＥＧＦの阻害剤は、乾癬などの皮膚状態を治療するために使用され得る。

【0088】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、ＴＧＦ－βの阻害剤、例えば、ペプチド阻害剤である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、ＴＧＦ－βアイソフォームＴＧＦ－β１の阻害剤である。ある特定の実施形態では、ＴＧＦ－β１の阻害剤は、ＴＧＦ－β１のペプチド阻害剤である。ＴＧＦ－β１のペプチド阻害剤の非限定的な例は、ＷＯ２０１１／１０１４７８（例えば、表１）に開示されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＴＳＬＤＡＳＩＩＷＡＭＭＱＮ（配列番号９）を含む。本明細書に記載されるように、ＴＧＦ－β１の阻害剤は、皮膚線維症及び／または強皮症を治療するために使用され得る。

【0089】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、ケモカインもしくはその誘導体、またはその機能的断片である。例えば、限定するものではないが、ケモカインは、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ２４、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２及び／またはＣＸ３ＣＬ１であり得る。ある特定の実施形態では、ケモカインは、ＣＸＣＬ１２であり得る。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、２つ以上のケモカイン、例えば、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ２４、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２及び／またはＣＸ３ＣＬ１を発現及び／または分泌する。

【0090】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、プロテアーゼ阻害剤もしくはその誘導体、またはその機能的断片である。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ阻害剤は、創傷に通常存在するプロテアーゼの阻害剤である。創傷に存在し、創傷治癒に関与するプロテアーゼの非限定的な例は、ＭｃＣａｒｔｈｙ ａｎｄ Ｐｅｒｃｉｖａｌ，Ａｄｖ．Ｗｏｕｎｄ Ｃａｒｅ ２（８）：４３８－４４７（２０１３）ａｎｄ Ｗｅｓｔｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｃｈｒａｎｅ Ｄａｔａｂａｓｅ Ｓｙｓｔ．Ｒｅｖ．２０１８（９）：ＣＤ０１２８４１（２０１８）に開示されており、その内容は、その全体が本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ阻害剤は、セリンプロテアーゼの阻害剤である。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ阻害剤は、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の阻害剤及び／またはディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭＳ及びＡＤＡＭＴＳ）の阻害剤である。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ阻害剤は、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２である。

【0091】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、抗菌及び／または抗炎症剤である。ある特定の実施形態では、抗菌剤及び／または抗炎症剤は、抗菌及び／または抗炎症ペプチドまたはその機能的断片である。ある特定の実施形態では、抗菌及び／または抗炎症ペプチドは、カテリシジン抗菌ペプチド（ＬＬ－３７）またはその類似体である。抗菌ペプチドの追加の非限定的な例としては、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ルシフェンシン、ルシフェンシンＩＩ、ルシリン、酢酸ペキシガナン（ＭＳＩ－７８）、Ｄ２Ａ２１／Ｄ４Ｅ１、グラニュリシン及び合成グラニュリシン由来ペプチドが挙げられる。ある特定の実施形態では、抗菌ペプチドは、ディフェンシン、例えば、α－、β－またはθ－ディフェンシンである。ディフェンシンの非限定的な例としては、β－ディフェンシン－１（ｈＢＤ－１）、β－ディフェンシン－２（ｈＢＤ－２）、β－ディフェンシン－３（ｈＢＤ－３）、好中球ペプチド１（ＨＮＰ１）、好中球ペプチド２（ＨＮＰ２）、好中球ペプチド３（ＨＮＰ３）、好中球ペプチド４（ＨＮＰ４）、ヒトディフェンシン５（ＨＤ５）及びヒトディフェンシン６（ＨＤ６）が挙げられる。

【0092】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、毒素ペプチドである。ある特定の実施形態では、毒素ペプチドは、真菌細胞に由来する。ある特定の実施形態では、毒素ペプチドは、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅに由来するＫ１、Ｋ２またはＫ２８毒素ペプチドである。

【0093】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、ＲｅｌＡの阻害剤である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、ＲｅｌＡを標的とするＲＮＡｉである。

【0094】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、色素性乾皮症相補性タンパク質（ＸＰ）である。ＸＰｓの非限定的な例には、ＸＰＡ、ＸＰＢ、ＸＰＣ（ヒトＲＡＤ４）、ＸＰＤ、ＸＰＥ、ＸＰＦ、及びＸＰＧが含まれる。

【0095】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、細胞外マトリックスタンパク質である。細胞外マトリックスタンパク質の非限定的な例としては、コラーゲン、プロテオグリカン、フィブロネクチン、及びエラスチンが挙げられる（例えば、Ｙｕｅ，Ｊ．Ｇｌａｕｃｏｍａ Ｓ２０－Ｓ２３（２０１４）を参照されたい。その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、細胞外マトリックスタンパク質の断片である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、コラーゲンである。コラーゲンの非限定的な例としては、Ｉ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲン、ＩＶ型コラーゲン、Ｖ型コラーゲン、ＶＩ型コラーゲン、ＶＩＩ型コラーゲン、ＶＩＩＩ型コラーゲン、ＩＸ型コラーゲン、Ｘ型コラーゲン、ＸＩ型コラーゲン、ＸＩＩ型コラーゲン、ＸＩＩＩ型コラーゲン、ＸＩＶ型コラーゲン、ＸＶ型コラーゲン、ＸＶＩ型コラーゲン、ＸＶＩＩ型コラーゲン、ＸＶＩＩＩ型コラーゲン、ＸＩＸ型コラーゲン、ＸＸ型コラーゲン、ＸＸＩ型コラーゲン、ＸＸＩＩ型コラーゲン、ＸＸＩＩＩ型コラーゲン、ＸＩＶ型コラーゲン、ＸＸＶ型コラーゲン、ＸＸＶＩ型コラーゲン、ＸＸＶＩＩ型コラーゲン、及びＸＸＶＩＩＩ型コラーゲンが挙げられる（例えば、Ｙｕｅ、Ｊ．Ｇｌａｕｃｏｍａ Ｓ２０－Ｓ２３（２０１４）を参照されたい。その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、ＶＩＩ型コラーゲンまたはその断片である。本明細書に記載されるように、細胞外マトリックスタンパク質は、表皮水疱症を治療するために使用され得る。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、エラスチンである。

【0096】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、アゼライン酸である。

【0097】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、ヒアルロン酸である。

【0098】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、上述のペプチドまたはタンパク質のうちのいずれか１つの配列を含む配列と少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるアミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、本明細書に開示された皮膚治療薬のうちのいずれか１つの配列を含む配列と少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるアミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、表１または表２に提供される配列と少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、表１または表２に提供される配列と少なくとも約９７％相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、表１または表２に提供される配列と少なくとも約９８％相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、表１または表２に提供される配列と少なくとも約９９％相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、表１または表２に提供される配列と約９８％～約１００％相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、表１または表２に提供されるアミノ酸配列を含む。

【0099】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、配列番号１～９、１１～２１、及び５３～５６のうちのいずれか１つの配列を含む配列と少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同、例えば、約９７％～約１００％相同であるアミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、配列番号１～９、１１～２１、及び５３～５６の配列に少なくとも約９７％相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、配列番号１～９、１１～２１、及び５３～５６の配列に少なくとも約９８％相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、配列番号１～９、１１～２１、及び５３～５６の配列に少なくとも約９９％相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、配列番号１～９、１１～２１及び５３～５６の配列に約９８％～約１００％相同であるアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、配列番号１～９、１１～２１、及び５３～５６のアミノ酸配列を含む。

【0100】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、配列番号１の配列を含む配列に少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同、例えば、約９７％～約１００％相同であるアミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、配列番号２の配列を含む配列に少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同、例えば、約９７％～約１００％相同であるアミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、配列番号３の配列を含む配列に少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同、例えば、約９７％～約１００％相同であるアミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、配列番号４の配列を含む配列に少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同、例えば、約９７％～約１００％相同であるアミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、配列番号５の配列を含む配列に少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同、例えば、約９７％～約１００％相同であるアミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、配列番号６の配列を含む配列に少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同、例えば、約９７％～約１００％相同であるアミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、配列番号７の配列を含む配列に少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同、例えば、約９７％～約１００％相同であるアミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質である。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、配列番号８の配列を含む配列に少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同、例えば、約９７％～約１００％相同であるアミノ酸配列を含むペプチドまたはタンパク質である。

【表1】

【0101】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞によって発現される皮膚治療薬は、分泌可能である。例えば、限定するものではないが、皮膚治療薬は、細胞内で細胞内発現され、続いて細胞の形質膜に輸送され、細胞の外部、例えば、細胞の形質膜の外側に分泌され得る。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞によって発現される皮膚治療薬は、細胞によって連続的に分泌される。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞によって発現される皮膚治療薬は、誘導時に細胞によって分泌される。

【0102】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬の分泌は、真菌細胞、例えば、酵母において保存された分泌経路を使用して実行することができる。例えば、限定するものではないが、皮膚治療薬は、分泌シグナル配列にカップリングしているため、分泌可能である。分泌シグナル配列の非限定的な例は、交配因子アルファ－１、アルファ因子Ｋ、アルファ因子Ｔ、ＳＥＤ１、ＰＨＯ５、ＳＵＣ２、グリコアミラーゼ、イヌリナーゼ、インベルターゼ、リゾチーム、血清アルブミン、アルファ－アミラーゼ、キラータンパク質及び表６を含むタンパク質から得ることができる。ある特定の実施形態では、分泌シグナルペプチドは、交配因子アルファ－１である。ある特定の実施形態では、分泌シグナルペプチドは、ＳＥＤ１である。ある特定の実施形態では、分泌シグナルペプチドは、ＰＨＯ５である。ある特定の実施形態では、分泌シグナルペプチドは、ＳＵＣ２である。ある特定の実施形態では、分泌シグナル配列は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅタンパク質などの酵母タンパク質から得られる分泌シグナル配列である。ある特定の実施形態では、分泌シグナルペプチドは、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ交配因子アルファ－１から得られる。ある特定の実施形態では、分泌シグナルペプチドは、ＳＥＤ１である。追加的に、任意のシグナルペプチドの変異、置換及び切断も本開示の範囲内である。シグナルペプチドの追加の変異及び切断を含む選択及び設計は、当業者の能力及び裁量の範囲内である。ある特定の実施形態では、１つ以上の分泌シグナル配列は、皮膚治療薬のＮ末端に位置する。ある特定の実施形態では、Ｋｅｘ２プロセシング部位及び／またはＳｔｅ１３プロセシング部位またはその相同体は、分泌シグナル配列のアミノ酸配列と分泌可能なペプチドとの間に存在し得る。分泌シグナルの追加の非限定的な例は、米国特許第１０，７２５，０３６号に開示されており、その内容は、その全体が本明細書に開示されている。

【0103】

ＩＩＩ． 遺伝子操作された細胞
本開示は、例えば、本明細書に開示された皮膚治療薬を発現する、例えば、分泌するための細胞を提供する。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された細胞は、皮膚状態、例えば、創傷を治療するために対象に投与され得る。本開示の細胞によって産生することができる皮膚治療薬の非限定的な例は、セクションＩＩに開示される。

【0104】

本明細書に記載の皮膚治療薬を生成及び／または分泌するために使用される細胞は、例えば、遺伝子操作された細胞であり得る。皮膚治療薬の生成に使用するための遺伝子修飾された細胞は、哺乳動物細胞、植物細胞、細菌細胞、または真菌細胞であり得る。例えば、限定するものではないが、細胞は、哺乳動物細胞、例えば、遺伝子操作された哺乳動物細胞であり得る。ある特定の実施形態では、細胞は、植物細胞、例えば遺伝子操作された植物細胞であり得る。ある特定の実施形態では、細胞は、細菌細胞、例えば、遺伝子操作された細菌細胞であり得る。ある特定の実施形態では、細胞は、真菌細胞、例えば、遺伝子操作された真菌細胞であり得る。ある特定の実施形態では、細胞は、細菌細胞ではない。

【0105】

ある特定の実施形態では、本開示で使用するための細胞は、概して、安全であると認識されている（ＧＲＡＳ）ものとして米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって指定されている細胞であり得る。

【0106】

ある特定の実施形態では、細胞は、真菌細胞である。任意の真菌株が、本開示で使用され得る。ある特定の実施形態では、真菌細胞は、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ、Ｅｐｉｃｏｃｃｕｍ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｗａｌｌｅｍｉａ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｐｈｏｍａ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、Ｃｌａｖｉｓｐｏｒａ、Ｃｙｂｅｒｌｉｎｄｎｅｒａ、及びＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓを含むがこれらに限定されない属からの種であり得る。

【0107】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｉｃｉｃｏｌａ、Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓ ｏｌｉｇｏｓｐｏｒａ、Ａｓｈｂｙａ ａｃｅｒｉ、Ａｓｈｂｙａ ｇｏｓｓｙｐｉｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｃｌａｖａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｅ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｋａｗａｃｈｉｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｒｕｂｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ、Ｂａｕｄｏｉｎｉａ ｃｏｍｐｎｉａｃｅｎｓｉｓ、Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ、Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ ｐａｒｖａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａｌ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｄｕｂｌｉｎｉｅｎｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｅｎｕｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｐｒｏｎｉａ ｃｏｒｏｎａｔｅ、Ｃａｐｒｏｎｉａ ｅｐｉｍｙｃｅｓ、Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｇｌｏｂｏｓｕｍ、Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ、Ｃｈｒｙｐｈｏｎｅｃｔｒｉａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ、Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ ｐｕｒｐｕｒｅａ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ、Ｃｏｎｉｏｓｐｏｒｉｕｍ ａｐｏｌｌｉｎｉｓ、Ｄａｃｔｙｌｅｌｌｉｎａ ｈａｐｔｏｔｙｌａ、Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ ｈａｎｓｅｎｉｉ、Ｅｎｄｏｃａｒｐｏｎ ｐｕｓｉｌｌｕｍ、Ｅｒｅｍｏｔｈｅｃｉｕｍ ｃｙｍｂａｌａｒｉａｅ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ、Ｇａｅｕｍａｎｎｏｍｙｃｅｓ ｇｒａｍｉｎｉｓ、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ、Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ、Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｚｅａｅ、Ｇｌａｒｅａ ｌｏｚｏｙｅｎｓｉｓ、Ｇｒｏｓｍａｎｎｉａ ｃｌａｖｉｇｅｒａ、Ｋａｚａｃｈｓｔａｎｉａ Ａｆｒｉｃａｎａ、Ｋａｚａｃｈｓｔａｎｉａ ｎａｇａｎｉｓｈｉｉ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｍａｒｘｉａｎｕｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｗａｌｔｉｉ、Ｋｏｍａｇａｔａｅｌｌａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｋｕｒａｉｓｈｉａ ｃａｐｓｕｌａｔｅ、Ｌａｃｈａｎｃｅａ ｋｌｕｙｖｅｒｉ、Ｌａｃｈａｎｃｅａ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ、Ｌｏｄｄｅｒｏｍｙｃｅｓ ｅｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｓ、Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ、Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｐｏａｅ、Ｍａｒｓｓｏｎｉｎａ ｂｒｕｎｎｅａ、Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｃｒｉｄｕｍ、Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ、Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ、Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｐｉｎｉ、Ｎｅｃｔｒｉａ ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃａ、Ｎｅｏｓａｒｔｏｒｙａ ｆｉｓｃｈｅｒｉ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｔｅｔｒａｓｐｅｒｍａ、Ｏｇａｔａｅａ ｐａｒａｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ、Ｏｐｈｉｏｓｔｏｍａ ｐｉｃｅａｅ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｌｕｔｚｉｉ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄｉｇｉｔａｔｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｏｘａｌｉｃｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｒｏｑｕｅｆｏｒｔｉ、Ｐｈａｅｏｓｐｈａｅｒｉａ ｎｏｄｏｒｕｍ、Ｐｉｃｈｉａ ｓｏｒｂｉｔｏｐｈｉｌａ、Ｐｏｄｏｓｐｏｒａ ａｎｓｅｒｉｎｅ、Ｐｓｅｕｄｏｇｙｍｎｏａｓｃｕｓ ｄｅｓｔｒｕｃｔａｎｓ、Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ ｔｅｒｅｓ ｆ ｔｅｒｅｓ、Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ ｔｒｉｔｉｃｉ－ｒｅｐｅｎｔｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｙａｎｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃａｓｔｅｌｌｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｄａｉｒｅｎｅｎｓｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｍｉｋａｔａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐａｒａｄｏｘｉｓ、Ｓｃｈｅｆｆｅｒｓｏｍｙｃｅｓ ｓｔｉｐｉｔｅｓ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｏｃｔｏｓｐｏｒｕｓ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｂｏｒｅａｌｉｓ、Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ、Ｓｏｒｄａｒｉａ ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｔｅｔｒａｐｉｓｉｓｐｏｒａ ｂｌａｔｔａｅ、Ｔｅｔｒａｐｉｓｉｓｐｏｒａ ｐｈａｆｆｉｉ、Ｔｈｉｅｌａｖｉａ ｈｅｔｅｒｏｔｈａｌｌｉｃａ、Ｔｏｇｎｉｎｉａ ｍｉｎｉｍａ、Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ａｔｒｏｖｉｒｉｄｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｊｅｃｏｒｉｎａ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｅｎｓ、Ｔｕｂｅｒ ｍｅｌａｎｏｓｐｏｒｕｍ、Ｖａｎｄｅｒｗａｌｔｏｚｙｍａ ｐｏｌｙｓｐｏｒａ １、Ｖａｎｄｅｒｗａｌｔｏｚｙｍａ ｐｏｌｙｓｐｏｒａ ２、Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ａｌｆａｌｆａｅ、Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ、Ｗｉｃｋｅｒｈａｍｏｍｙｃｅｓ ｃｉｆｅｒｒｉｉ、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｉｌｉｉ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｒｏｕｘｉｉの細胞、及びそれらの組み合わせであり得る。

【0108】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ門の種である。ある特定の実施形態では、Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ門の種は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃａｓｔｅｌｌｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｖａｒ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ、Ｖａｎｄｅｒｗａｌｔｏｚｙｍａ ｐｏｌｙｓｐｏｒａ、Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｋｌｕｙｖｅｒｉ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｒｏｕｘｉｉ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｉｌｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ、Ａｓｈｂｙａ ｇｏｓｓｙｐｉｉ、Ｓｃｈｅｆｆｅｒｓｏｍｙｃｅｓ ｓｔｉｐｉｔｅｓ、Ｋｏｍａｇａｔａｅｌｌａ（Ｐｉｃｈｉａ） ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ（Ｐｉｃｈｉａ） ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｕｒｉｓ、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｃａｎｄｉｄａ（Ｃｌａｖｉｓｐｏｒａ） ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｅｎｕｉｓ、Ｌｏｄｄｅｒｏｍｙｃｅｓ ｅｌｏｎｇｉｓｐｏｒｏｕｓ、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ、Ｂａｕｄｏｉｎｉａ ｃｏｍｐｎｉａｃｅｎｓｉｓ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｏｃｔｏｓｐｏｒｕｓ、Ｔｕｂｅｒ ｍｅｌａｎｏｓｐｏｒｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（Ｎｅｏｓａｒｔｏｒｙａ） ｆｉｓｃｈｅｒｉ、Ｐｓｅｕｄｏｇｙｍｎｏａｓｃｕｓ ｄｅｓｔｒｕｃｔａｎｓ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ｐｈａｅｏｓｐｈａｅｒｉａ ｎｏｄｏｒｕｍ、Ｈｙｐｏｃｒｅａ ｊｅｃｏｒｉｎａ、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａｌ、Ｂｅａｕｖａｒｉａ ｂａｓｓｉａｎａ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｃｋｉｉ、Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚｅａ、Ｄａｃｔｙｌｅｌｌｉｎａ ｈａｐｔｏｔｙｌａ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ、Ｃａｐｒｏｎｉａ ｃｏｒｏｎａｔｅ、及びそれらの組み合わせから選択される。

【0109】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属の種である。ある特定の実施形態では、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属由来の種は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｙａｎｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃａｓｔｅｌｌｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｄａｉｒｅｎｅｎｓｉｓ、及びＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｍｉｋａｔａｅからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅである。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉである。

【0110】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、Ｐｉｃｈｉａ属由来の種である。ある特定の実施形態では、Ｐｉｃｈｉａ属由来の種は、Ｐｉｃｈｉａ ａｃａｃｉａ、Ｐｉｃｈｉａ ａｌｎｉ、Ｐｉｃｈｉａ ａｍｅｒｉｃａｎａ、Ｐｉｃｈｉａ ａｍｅｔｈｉｏｎｉｎａ、Ｐｉｃｈｉａ ａｍｙｌｏｐｈｉｌａ、Ｐｉｃｈｉａ ａｎｇｏｐｈｏｒａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ａｎｇｕｓｔａ、Ｐｉｃｈｉａ ａｎｏｍａｌａ、Ｐｉｃｈｉａ ａｎｔｉｌｌｅｎｓｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｂａｒｋｅｒｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｂｅｓｓｅｙｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｂｉｍｕｎｄａｌｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｂｉｓｐｏｒａ、Ｐｉｃｈｉａ ｂｏｖｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｃａｃｔｏｐｈｉｌａ、Ｐｉｃｈｉａ ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｃａｐｓｕｌａｔｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｃａｒｉｂａｅａ、Ｐｉｃｈｉａ ｃａｓｔｉｌｌａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｃｈａｍｂａｒｄｉｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｃｉｆｅｒｒｉｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｄｅｌｆｔｅｎｓｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ、Ｐｉｃｈｉａ ｄｒｙａｄｏｉｄｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｅｕｐｈｏｒｂｉａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｅｕｐｈｏｒｂｉｉｐｈｉｌａ、Ｐｉｃｈｉａ ｆａｂｉａｎｉｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｆａｒｉｎｏｓｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｆｉｎｌａｎｄｉｃａ、Ｐｉｃｈｉａ ｆｌｕｘｕｕｍ、Ｐｉｃｈｉａ ｇａｌａｅｉｆｏｒｍｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｇｌｕｃｏｚｙｍａ、Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｈａｍｐｓｈｉｒｅｎｓｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｈａｐｌｏｐｈｉｌａ、Ｐｉｃｈｉａ ｈｅｅｄｉｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｈｅｉｍｉｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｈｅｎｒｉｃｉｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｈｏｌｓｔｉｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｉｎｏｓｉｔｏｖｏｒａ、Ｐｉｃｈｉａ ｊａｄｉｎｉｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ、Ｐｉｃｈｉａ ｋｌｕｙｖｅｒｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｋｏｄａｍａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｌｙｎｆｅｒｄｉｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｍａｇａｎｉｓｈｉｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｄｉａ、Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎｉｆａｃｉｅｎｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ、Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈｙｌｉｖｏｒｉａ、Ｐｉｃｈｉａ Ｍｅｘｉｃａｎａ、Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｙｅｒａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｍｉｎｕｔａ、Ｐｉｃｈｉａ ｍｉｓｓｉｓｓｉｐｐｉｅｎｓｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｎａｋａｓｅｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｎａｋａｚａｗａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｎｏｒｖｅｇｅｎｓｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｏｆｕｎａｅｎｓｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｏｈｍｅｒｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｏｎｙｃｈｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｏｐｕｎｔｉａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｐｅｔｅｒｓｏｎｉｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｐｈｉｌｏｄｅｎｄｒａ、Ｐｉｃｈｉａ ｐｈｉｌｏｇａｅａ、Ｐｉｃｈｉａ ｐｉｊｐｅｒｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｐｉｎｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｐｏｐｕｌｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｐｓｅｕｄｏｃａｃｔｏｐｈｉｌａ、Ｐｉｃｈｉａ ｑｕｅｒｃｕｕｍ、Ｐｉｃｈｉａ ｒａｂａｕｌｅｎｓｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｒｈｏｄａｎｅｎｓｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｓａｌｉｃａｒｉａ、Ｐｉｃｈｉａ ｓｃｏｌｙｔｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｓｅｇｏｂｉｅｎｓｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｓｉｌｖｉｃｏｌａ、Ｐｉｃｈｉａ ｓｐａｒｔｉｎａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｓｔｉｐｉｔｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｓｔｒａｓｂｕｒｇｅｎｓｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｓｕｂｐｅｌｌｉｃｕｌｏｓａ、Ｐｉｃｈｉａ ｓｙｄｏｗｉｏｒｕｍ、Ｐｉｃｈｉａ ｔａｎｎｉｃｏｌａ、Ｐｉｃｈｉａ ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｔｏｌｅｔａｎａ、Ｐｉｃｈｉａ ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉｌａ、Ｐｉｃｈｉａ ｔｒｉａｎｇｕｌａｒｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｖｅｒｏｎａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉｉ、及びＰｉｃｈｉａ ｘｙｌｏｓａからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓである。

【0111】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属の種である。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓである。

【0112】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、細菌細胞である。細菌の非限定的な例としては、Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒ ｃｒｅｓｃｅｎｔｕｓ、Ｒｏｄｈｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ ｈａｌｏｐｌａｎｋｔｉｓ、Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ ｓｐ． ｓｔｒａｉｎ Ａｃ１０、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ ｅｌｏｎｇａｔａ、Ｃｈｒｏｍｏｈａｌｏｂａｃｔｅｒ ｓａｌｅｘｉｇｅｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｉｖｉｄａｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ ｌａｃｔａｍｄｕｒａｎｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｍｅｇｍａｔｉｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｍｍｏｎｉａｇｅｎｅｓ、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｏｆｅｒｍｅｎｔｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ、及びＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉが挙げられる。ある特定の実施形態では、細菌細胞は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉである。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、細菌細胞ではない。

【0113】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、哺乳動物細胞である。哺乳動物細胞の非限定的な例としては、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）、ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載の２９３または２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載のＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載のＴＲＩ細胞、ＭＲＣ ５細胞、ＦＳ４細胞、ＭＣＦ－７細胞、３Ｔ３細胞、Ｕ２ＳＯ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が挙げられる。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、哺乳動物細胞ではない。

【0114】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された真菌細胞は、少なくとも１つの成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦを発現及び／または分泌する。

【0115】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された真菌細胞は、少なくとも１つのサイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチンを発現及び／または分泌する。

【0116】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された真菌細胞は、少なくとも１つのサイトカインまたはその誘導体、例えば、ＩＬ－１２を発現及び／または分泌する。

【0117】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された真菌細胞は、少なくとも１つのインターフェロンまたはその誘導体を発現及び／または分泌する。

【0118】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された真菌細胞は、少なくとも１つのケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する。

【0119】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された真菌細胞は、少なくとも１つのプロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２を発現及び／または分泌する。

【0120】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された真菌細胞は、少なくとも１つの抗菌剤を発現及び／または分泌する。

【0121】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、ならびに（２）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチンを発現及び／または分泌する。

【0122】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、ならびに（２）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する。

【0123】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、ならびに（２）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する。

【0124】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、ならびに（２）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２を発現及び／または分泌する。

【0125】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、ならびに（２）抗菌剤を発現及び／または分泌する。

【0126】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２、ならびに（２）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する。

【0127】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２、ならびに（２）抗菌剤を発現及び／または分泌する。

【0128】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、及び（２）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２を発現及び／または分泌する。

【0129】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、ならびに（２）抗菌剤を発現及び／または分泌する。

【0130】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、（２）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、ならびに（３）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する。

【0131】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２、（２）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、ならびに（３）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現する及び／または分泌する。

【0132】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、（２）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２、ならびに（３）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現する及び／または分泌する。

【0133】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、（２）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、ならびに（３）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２を発現及び／または分泌する。

【0134】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、（２）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、（３）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２、ならびに（４）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する。

【0135】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、（２）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、（３）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２、ならびに（４）抗菌剤を発現及び／または分泌する。

【0136】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、（２）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、（３）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２、（４）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２、ならびに（５）抗菌剤を発現及び／または分泌する。

【0137】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、成長因子阻害剤を発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＶＥＧＦ阻害剤を発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＶＥＧＦ阻害剤、例えば、ＩＬ－４を発現及び／または分泌する。

【0138】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＴＧＦ－β阻害剤、例えば、ＴＧＦ－β１阻害剤を発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ペプチドＴＧＦ－β１阻害剤、例えば、ＴＳＬＤＡＳＩＩＷＡＭＭＱＮ（配列番号９）またはＴＳＬＤＡＳＩＩＷＡＭＭＱＮＡ（配列番号１２）を発現及び／または分泌する。

【0139】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、細胞外マトリックスタンパク質、例えば、コラーゲンを発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＶＩＩ型コラーゲンまたはその断片を発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、エラスチンを発現及び／または分泌する。

【0140】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、抗菌剤を発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、抗菌ペプチドを発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ルシフェンシン、ルシフェンシンＩＩ、ルシリン、酢酸ペキシガナン（ＭＳＩ－７８）、Ｄ２Ａ２１／Ｄ４Ｅ１、グラニュリシン、合成グラニュリシン由来ペプチド、カテリシジン抗菌ペプチド（ＬＬ－３７）またはその類似体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される抗菌ペプチドを発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、カテリシジン抗菌ペプチド（ＬＬ－３７）を発現及び／または分泌する。

【0141】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、キラー毒素を発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅからＫ１、Ｋ２及び／またはＫ２８を発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、Ｋ２を発現及び／または分泌する。

【0142】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ディフェンシン、例えば、α－、β－またはθ－ディフェンシンを発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、抗菌ペプチドは、β－ディフェンシン－１（ｈＢＤ－１）、β－ディフェンシン－２（ｈＢＤ－２）、β－ディフェンシン－３（ｈＢＤ－３）、好中球ペプチド１（ＨＮＰ１）、好中球ペプチド２（ＨＮＰ２）、好中球ペプチド３（ＨＮＰ３）、好中球ペプチド４（ＨＮＰ４）、ヒトディフェンシン５（ＨＤ５）、及び／またはヒトディフェンシン６（ＨＤ６）である。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、β－ディフェンシン－３（ｈＢＤ－３）を発現及び／または分泌する。

【0143】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＲｅｌＡの阻害剤を発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＲｅｌＡを標的とするＲＮＡｉを発現及び／または分泌する。

【0144】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、抗ブドウ球菌殺菌タンパク質を発現及び／または分泌する。

【0145】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、色素性乾皮症相補性タンパク質（ＸＰ）、例えば、ＸＰＡ、ＸＰＢ、ＸＰＣ（ヒトＲＡＤ４）、ＸＰＤ、ＸＰＥ、ＸＰＦまたはＸＰＧを発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ＸＰＡ、ＸＰＢ、ＸＰＣ（ヒトＲＡＤ４）、ＸＰＤ、ＸＰＥ、ＸＰＦ、及び／またはＸＰＧを発現及び／または分泌する。

【0146】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、アゼライン酸を発現及び／または分泌する。

【0147】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、ヒアルロン酸を発現及び／または分泌する。

【0148】

ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞は、高レベルで皮膚治療薬を発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞は、対象を治療するのに十分なレベルで皮膚治療薬を発現及び／または分泌する。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞は、治療有効量の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する。例えば、限定するものではないが、遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された細胞の集団によって約１～約２４時間以内に産生される皮膚治療薬の量は、約１ｐｇ～約１０ｇである。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された細胞の集団によって、約１～約４８時間または約１～約２４時間以内に分泌される皮膚治療薬の量は、約１ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、例えば、約１００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約５，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約２０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約３０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約４０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約５０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約６０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約７０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約８０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約９０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１１０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１２０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１３０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１４０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１５０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１９０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１８０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１７０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１６０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１５０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１４０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１３０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１２０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約９０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約８０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約７０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約６０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約５０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約４０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約３０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約２０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約５，０００ｐｇ／ｍｌ、約１，０００ｐｇ／ｍｌ～約１００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１，０００ｐｇ／ｍｌ～約５０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１，０００ｐｇ／ｍｌ～約２５，０００ｐｇ／ｍｌ、約１，０００ｐｇ／ｍｌ～約１０，０００ｐｇ／ｍｌまたは約１，０００ｐｇ／ｍｌ～約５，０００ｐｇ／ｍｌである。ある特定の実施形態では、約１～約４８時間または約１～約２４以内に、遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された細胞の集団によって分泌される皮膚治療薬の量は、約１０ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌである。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された細胞の集団によって、約１～約４８時間または約１～約２４時間以内に分泌される皮膚治療薬の量は、約１０ｐｇ／ｍｌ～約２５，０００ｐｇ／ｍｌである。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された細胞の集団によって、約１～約４８時間または約１～約２４時間以内に分泌される皮膚治療薬の量は、約１０ｐｇ／ｍｌ～約２，５００ｐｇ／ｍｌ、例えば、約１００ｐｇ／ｍｌ～約２，５００ｐｇ／ｍｌ、約１，０００ｐｇ／ｍｌ～約２，０００ｐｇ／ｍｌ、または約１，５００ｐｇ／ｍｌ～約２，５００ｐｇ／ｍｌである。ある特定の実施形態では、約１～約４８時間、または約１～約２４時間、例えば約２４時間以下以内に、遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された細胞の集団によって分泌される皮膚治療薬の量は、約０．１ｎｇ／ｍｌ～約１，０００ｎｇ／ｍｌである。ある特定の実施形態では、約１～約４８時間、または約１～約２４時間、例えば約２４時間以下以内に、遺伝子操作された細胞、例えば遺伝子操作された細胞の集団によって分泌される皮膚治療薬の量は、約０．１ｎｇ／ｍｌ～約５００ｎｇ／ｍｌである。ある特定の実施形態では、約１～約４８時間、または約１～約２４時間、例えば約２４時間以下以内に、遺伝子操作された細胞、例えば遺伝子操作された細胞の集団によって分泌される皮膚治療薬の量は、約１ｎｇ／ｍｌ～約４００ｎｇ／ｍｌである。ある特定の実施形態では、約１～約４８時間、または約１～約２４時間、例えば約２４時間以下以内に、遺伝子操作された細胞、例えば遺伝子操作された細胞の集団によって分泌される皮膚治療薬の量は、約１ｎｇ／ｍｌ～約３５０ｎｇ／ｍｌである。ある特定の実施形態では、約１～約４８時間、または約１～約２４時間、例えば約２４時間以下以内に、遺伝子操作された細胞、例えば遺伝子操作された細胞の集団によって分泌される皮膚治療薬の量は、約１ｎｇ／ｍｌ～約３００ｎｇ／ｍｌである。ある特定の実施形態では、約１～約４８時間、または約１～約２４時間、例えば約２４時間以下以内に、遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された細胞の集団によって分泌される皮膚治療薬の量は、約１ｎｇ／ｍｌ～約２５０ｎｇ／ｍｌである。ある特定の実施形態では、約１～約４８時間、または約１～約２４時間、例えば約２４時間以下以内に、遺伝子操作された細胞、例えば遺伝子操作された細胞の集団によって分泌される皮膚治療薬の量は、約１ｎｇ／ｍｌ～約２００ｎｇ／ｍｌである。ある特定の実施形態では、約１～約４８時間、または約１～約２４時間以内、例えば、約２４時間以下以内に、遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された細胞の集団によって分泌される皮膚治療薬の量は、約１０ｎｇ／ｍｌ～約３００ｎｇ／ｍｌである。ある特定の実施形態では、約１～約４８時間、または約１～約２４時間、例えば約２４時間以下以内に、遺伝子操作された細胞、例えば遺伝子操作された細胞の集団によって分泌される皮膚治療薬の量は、約５０ｎｇ／ｍｌ～約２５０ｎｇ／ｍｌである。

【0149】

ある特定の実施形態では、本開示の細胞は、本明細書に開示された１つ以上の皮膚治療薬をコードする核酸を含み得る。例えば、限定されないが、皮膚治療薬のうちの１つ以上をコードする本開示の核酸は、プラスミドベクターなどのベクター、及びエレクトロポレーション、熱ショックなどの当業者に既知の、本明細書に記載されている細胞形質転換技術を使用して、細胞、例えば酵母細胞に導入することができる。ある特定の実施形態では、遺伝的分子構成要素は、プラスミドとして持続するか、またはゲノムに組み込むために細胞に導入される。例えば、限定するものではないが、核酸は、遺伝子操作された細胞のゲノムに組み込まれ得る。ある特定の実施形態では、細胞は、本開示を読んだときに当業者によって識別可能な方法を使用して、本明細書に記載される１つ以上の遺伝的分子構成要素のポリヌクレオチドを染色体的に組み込むように操作され得る。ある特定の実施形態では、本開示の皮膚治療薬をコードする核酸、例えば、ペプチド及び／またはタンパク質を、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムを使用して遺伝子操作された細胞のゲノムに挿入することができる。

【0150】

ある特定の実施形態では、１つ以上の皮膚治療薬をコードする核酸は、構築物またはプラスミドのいずれかとして酵母細胞に導入される。ある特定の実施形態では、核酸は、１つ以上の調節領域、例えば、プロモーター、転写因子結合部位、オペレーター、活性化因子結合部位、リプレッサー結合部位、エンハンサー、タンパク質－タンパク質結合ドメイン、ＲＮＡ結合ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、及び当業者に既知の他の制御要素を含み得る。例えば、限定するものではないが、本開示の皮膚治療薬をコードする核酸は、酵母細胞内で活性なプロモーターに作動可能に連結されている、または好適なプロモーターに作動可能に連結されている位置で酵母細胞ゲノムに挿入される、構築物またはプラスミドのいずれかとして酵母細胞内に導入される。好適な酵母プロモーターの非限定的な例としては、構成的プロモーターｐＴｅｆ１、ｐＰｇｋ１、ｐＣｙｃ１、ｐＡｄｈ１、ｐＫｅｘ１、ｐＴｄｈ３、ｐＴｐｉ１、ｐＰｙｋ１、及びｐＨｘｔ７、ならびに誘導性プロモーターｐＧａｌ１、ｐＣｕｐ１、ｐＭｅｔ１５、ｐＦｉｇ１、ｐＦｕｓ１、ＧＡＰ、Ｐ ＧＣＷ１４、ならびにこれらのバリアントが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、Ｔｅｆ１のバリアントは、ｓｃＴｅｆ１である。ある特定の実施形態では、核酸は、構成的に活性なプロモーター、例えば、ｐＴｄｈ３を含むことができる。ある特定の実施形態では、核酸は、誘導性プロモーター、例えば、ｐＧａｌ１、ｐＦｕｓ１またはｐＦｉｇ１を含むことができる。ある特定の実施形態では、核酸は、誘導性プロモーター、例えば、ｐＧａｌ１を含み得る。ある特定の実施形態では、核酸は、構成的に活性なプロモーター、例えば、ｐＣｙｃ１を含むことができる。ある特定の実施形態では、核酸は、構成的に活性なプロモーター、例えば、ｐＴｅｆ１を含むことができる。例えば、限定するものではないが、皮膚治療薬をコードするヌクレオチド配列は、ｐＴｅｆ１プロモーターまたはそのバリアントにカップリングすることができる。ある特定の実施形態では、核酸は、構成的に活性なプロモーター、例えば、ｐＡｄｈ１を含むことができる。例えば、限定するものではないが、皮膚治療薬をコードするヌクレオチド配列は、ｐＡｄｈ１プロモーターまたはそのバリアントにカップリングすることができる。例えば、限定するものではないが、皮膚治療薬をコードするヌクレオチド配列は、ｐＴｄｈ３プロモーターまたはそのバリアントにカップリングすることができる。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、構成的に活性なプロモーターの制御下にあることによって連続的に発現される。

【0151】

ある特定の実施形態では、１つ以上の皮膚治療薬をコードする核酸は、核酸によってコードされる皮膚治療薬の調節発現のための転写因子を更に含むことができる。代替的に、及び／または追加的に、第２の核酸または追加の核酸を細胞に導入して、核酸によってコードされる皮膚治療薬の調節発現のための転写因子を発現することができる。そのような転写因子の非限定的な例としては、Ａｂｆ１ｐ、Ａｃａ１ｐ、Ａｃｅ２ｐ、Ａｄｒ１ｐ、Ａｆｔ１ｐ、Ａｆｔ２ｐ、Ａｒｇ８０ｐ、Ａｒｇ８１ｐ、Ａｒｒ１ｐ、Ａｓｈ１ｐ、Ａｚｆ１ｐ、Ｂａｓ１ｐ、Ｃａｄ１ｐ、Ｃａｔ８ｐ、Ｃｂｆ１ｐ、Ｃｈａ４ｐ、Ｃｈａ４ｐ、Ｃｉｎ５ｐ、Ｃｏｍ２ｐ、Ｃｒｚ１ｐ、Ｃｓｔ６ｐ、Ｃｕｐ２ｐ、Ｄａｌ８０ｐ、Ｄａｌ８１ｐ、Ｄａｌ８２ｐ、Ｅｃｍ２２ｐ、Ｆｋｈ１ｐ、Ｆｋｈ２ｐ、Ｆｌｏ８ｐ、Ｆｚｆ１ｐ、Ｇａｌ４ｐ、Ｇａｔ１ｐ、Ｇｃｎ４ｐ、Ｇｃｒ１ｐ、Ｇｉｓ１ｐ、Ｇｌｎ３ｐ、Ｇｏｎ３ｐ、Ｇｓｍ１ｐ、Ｇｚｆ３ｐ、Ｈａａ１ｐ、Ｈａｃ１ｐ、Ｈａｐ１ｐ、Ｈａｐ２ｐ、Ｈａｐ３ｐ、Ｈａｐ４ｐ、Ｈａｐ５ｐ、Ｈｃｍ１ｐ、Ｈｏｔ１ｐ、Ｈｓｆ１ｐ、Ｉｍｅ１ｐ、Ｉｎｏ２ｐ、Ｉｎｏ４ｐ、Ｉｎｏ４ｐ、Ｉｘｒ１ｐ、Ｋａｒ４ｐ、Ｌｅｕ３ｐ、Ｌｙｓ１４ｐ、Ｍａｃ１ｐ、Ｍａｌ６３ｐ、Ｍｂｐ１ｐ、Ｍｃｍ１ｐ、Ｍｅｔ３１ｐ、Ｍｅｔ３２ｐ、Ｍｅｔ４ｐ、Ｍｉｇ１ｐ、Ｍｉｇ２ｐ、Ｍｉｇ３ｐ、Ｍｏｔ２ｐ、Ｍｏｔ３ｐ、Ｍｓｎ２ｐ、Ｍｓｎ４ｐ、Ｍｓｓ１１ｐ、Ｎｄｔ８０ｐ、Ｎｒｇ１ｐ、Ｎｒｇ２ｐ、Ｏａｆ１ｐ、Ｐｄｒ１ｐ、Ｐｄｒ３ｐ、Ｐｄｒ８ｐ、Ｐｈｏ２ｐ、Ｐｈｏ４ｐ、Ｐｉｐ２ｐ、Ｐｐｒ１ｐ、Ｐｕｔ３ｐ、Ｒａｐ１ｐ、Ｒｃｓ１ｐ、Ｒｄｓ１ｐ、Ｒｅｂ１ｐ、Ｒｆｘ１ｐ、Ｒｇｔ１ｐ、Ｒｉｍ１０１ｐ、Ｒｌｍ１ｐ、Ｒｍｅ１ｐ、Ｒｏｆ１ｐ、Ｒｏｘ１ｐ、Ｒｐｈ１ｐ、Ｒｐｎ４ｐ、Ｒｔｇ１ｐ、Ｒｔｇ３ｐ、Ｓｆｌ１ｐ、Ｓｉｐ４ｐ、Ｓｋｎ７ｐ、Ｓｋｏ１ｐ、Ｓｍｐ１ｐ、Ｓｔｂ４ｐ、Ｓｔｂ５ｐ、Ｓｔｂ５ｐ、Ｓｔｅ１２ｐ、Ｓｔｐ１ｐ、Ｓｔｐ２ｐ、Ｓｕｍ１ｐ、Ｓｗｉ４ｐ、Ｓｗｉ５ｐ、Ｔｄａ９ｐ、Ｔｅａ１ｐ、Ｔｅｃ１ｐ、Ｔｙｅ７ｐ、Ｕｇａ３ｐ、Ｕｍｅ６ｐ、Ｕｐｃ２ｐ、Ｕｓｖ１ｐ、Ｗａｒ１ｐ、Ｘｂｐ１ｐ、ＹＥＲ１３０ｃ、ＹＦＬ０５２ｗ、ＹＨＲ１７７ｗ、ＹＪＬ１０３Ｃ、ＹＭＬ０８１ｗ、ＹＰＬ２３０ｗ、Ｙａｐ１ｐ、Ｙａｐ３ｐ、Ｙａｐ５ｐ、Ｙｒｒ１ｐ、Ｚａｐ１ｐ、及びＺｎｆ１ｐが挙げられる。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞に導入される核酸は、転写因子のための１つ以上のＤＮＡ結合ドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＤＮＡ結合ドメインは、亜鉛フィンガーＤＮＡ結合ドメインである。ある特定の実施形態では、亜鉛フィンガーＤＮＡ結合ドメインは、ＺＦ４３－８である。ある特定の実施形態では、転写因子は、異なるタンパク質由来の１つ以上のドメインを含む。例えば、限定するものではないが、本開示で使用するための転写因子は、誘導因子結合ドメイン、例えば、ヒトエストロゲン受容体に由来するβ－エストラジオール結合ドメイン、及び／または、例えば、ＶＰ６４に由来する転写活性化ドメインを含むことができる。

【0152】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬のうちの１つ以上をコードする核酸は、核酸によってコードされる分泌シグナルペプチドを更に含むことができる。分泌シグナルペプチドの非限定的な例を、本明細書のセクションＩＩ、表５及び実施例１に開示する。ある特定の実施形態では、分泌シグナルペプチドは、交配因子アルファ－１、ＳＥＤ１、またはＳＵＣ２である。ある特定の実施形態では、１つ以上の皮膚治療薬をコードする核酸は、核酸によってコードされる交配因子アルファ－１分泌シグナルペプチドを更に含むことができる。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬のうちの１つ以上をコードする核酸は、核酸によってコードされるＳＥＤ１分泌シグナルペプチドを更に含むことができる。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬のうちの１つ以上をコードする核酸は、核酸によってコードされるＳＵＣ２分泌シグナルペプチドを更に含むことができる。

【0153】

ある特定の実施形態では、１つ以上の皮膚治療薬をコードする核酸は、細胞、例えば、酵母細胞のゲノムに挿入され得る。例えば、限定するものではないが、本開示の皮膚治療薬をコードする１つ以上の核酸、例えば、ペプチド及び／またはタンパク質を、細胞のＳｔｅ２、Ｓｔｅ３及び／またはＨＯ遺伝子座に挿入してもよい。ある特定の実施形態では、１つ以上の核酸は、細胞に最小限に影響を与える１つ以上の遺伝子座、例えば、必須ではなく、及び／または成長、増殖、及び細胞シグナル伝達に影響を及ぼさない遺伝子座に挿入することができる。

【0154】

ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞の１つ以上の内因性遺伝子は、遺伝子操作システムによってノックアウト及び／または変異される、例えば、ノックアウトされることができる。代替的に、または追加的に、遺伝子操作された細胞の内因性遺伝子の余分なコピーは、例えば、遺伝子操作システムによってノックインされ得る。当技術分野で知られている様々な遺伝子走査システムを使用することができる。そのような系の非限定的な例としては、クラスター化された規則的な間隔を持つ短いパリンドロームリピート（ＣＲＩＳＰＲ）／Ｃａｓ系、亜鉛フィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）系、酵母の内因性相同組換えの使用、及び干渉ＲＮＡの使用が挙げられる。

【0155】

ある特定の非限定的実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系は、遺伝子操作された細胞中の１つ以上の内因性遺伝子をノックアウト及び／またはノックインするために使用される。ゲノム編集に利用される場合、システムは、Ｃａｓ９（そのガイドとしてｃｒＲＮＡを利用してＤＮＡを修飾することができるタンパク質）、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ、Ｃａｓ９と活性複合体を形成するｔｒａｃｒＲＮＡ（概して、ヘアピンループ形態）に結合する領域とともに、Ｃａｓ９がそれを宿主ＤＮＡの正しい区画に導くために使用するＲＮＡを含有する）、及びトランス活性化ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ、ｃｒＲＮＡに結合し、Ｃａｓ９と活性複合体を形成する）を含む。「ガイドＲＮＡ」及び「ｇＲＮＡ」という用語は、Ｃａｓ９などのＲＮＡ誘導ヌクレアーゼの、細胞内のゲノムまたはエピソーム配列などの標的配列への特異的会合（または「標的化」）を促進する任意の核酸を指す。ｇＲＮＡは、単一分子（単一のＲＮＡ分子を含み、代替的にキメラと称される）またはモジュラー（複数の、典型的には２つの別個のＲＮＡ分子（例えば、ｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡ）を含み、例えば、二重鎖形成によって通常互いに会合される）であり得る。

【0156】

ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、例えば、ジスルフィド結合を有する創傷治癒剤の分泌を増加させるために、ジスルフィド結合形成に関与するタンパク質の発現を増加させるように修飾され得る。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、例えば、ＰＤＩ１遺伝子の１つ以上の追加のコピーを遺伝子操作された細胞に組み込むことによって、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ１（ＰＤＩ１）の発現を増加させるように修飾され得る。例えば、限定するものではないが、ＰＤＩ１遺伝子の少なくとも１つの追加のコピーを、ゲノム編集系、例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓによって、本明細書に記載の遺伝子操作された細胞にノックすることができる。代替的に、そのような遺伝子の増加した発現は、遺伝子を含む核酸を遺伝子操作された細胞内に導入することによって達成され得る。ある特定の実施形態では、ＰＤＧＦ－ｂ（３つの鎖内ジスルフィド結合を有する）、ＥＧＦ（３つのジスルフィド結合を有する）、ＣＸＣＬ１２（２つのジスルフィド結合を有する）、及び／またはＬＥＰ（１つの鎖内ジスルフィド結合を有する）を発現するように遺伝子操作された真菌細胞は、例えば、ＰＤＩ１をコードする１つ以上の核酸、例えば、外因性核酸を遺伝子操作された細胞に組み込むことによって、ＰＤＩ１の発現を増加させるように更に修飾されている。

【0157】

ある特定の実施形態では、内因性遺伝子の発現は、下方調節され、排除され、及び／または減少され得る。例えば、限定するものではないが、Ｎ－グリコシル化に関与する遺伝子の発現は、下方調節され、排除され、及び／または減少され得る。ある特定の実施形態では、Ｏｃｈ１ｐ、空胞性プロテイナーゼＢ（ＰＲＢ１）、ＢａｒＩプロテイナーゼ及び／またはアスパラギン酸プロテイナーゼ３（ＹＡＰ３）の発現は、下方調節され、排除され、及び／または減少され得る。ある特定の実施形態では、Ｏｃｈ１ｐの発現は、下方調節され、排除され、及び／または減少され得る。ある特定の実施形態では、ＰＲＢ１の発現は、下方調節され、排除され、及び／または減少され得る。ある特定の実施形態では、ＢａｒＩプロテアーゼの発現は、下方調節され、排除され、及び／または減少され得る。ある特定の実施形態では、これらの遺伝子の発現は、ゲノム編集系、例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓによってこれらの遺伝子をノックアウトすることによって、下方調節され、排除され、及び／または減少され得る。ある特定の実施形態では、特定の遺伝子の発現は、下流または修飾タンパク質の過剰発現によって下方調節され得る。ある特定の実施形態では、ＸＩＳＴの発現は、例えば、ＸＩＳＴをコードする核酸を遺伝子操作された真菌細胞に導入することによって、上方調節され得る。例えば、限定するものではないが、ＸＩＳＴの過剰発現は、多数の遺伝子のｘ連結不活性化をもたらす。ある特定の実施形態では、ＧＣＧの発現は、例えば、ＧＣＧをコードする核酸を遺伝子操作された真菌細胞に導入することによって、上方調節され得る。ある特定の実施形態では、ＧＣＧの過剰発現は、インスリン産生の減少をもたらす。

【0158】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示されたヌクレオチド配列の相同体は、１つ以上のアミノ酸の置換をもたらすことができるが、ヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドまたはタンパク質の機能的特性に影響を与えない１つ以上のヌクレオチド塩基の変化を有するポリヌクレオチドであり得る。ホモログはまた、結果として生じるポリヌクレオチドまたは転写産物の機能的特性に実質的に影響を及ぼさない、ヌクレオチドの欠失、付加、または挿入などの修飾を有するポリヌクレオチドを含むことができる。所与の部位で化学的に等価なアミノ酸の産生をもたらすが、コードされたポリペプチドの機能的特性に影響を与えないポリヌクレオチドの変化は、当技術分野で周知である。

【0159】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示されたペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質の相同体は、１つ以上のアミノ酸に変化を有するが、皮膚治療薬の機能的特性には影響を与えないペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質であり得る。ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質の機能的特性に影響を与えないペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質の変化は、当該技術分野で周知であり、例えば、保存的置換である。したがって、本開示は、特定の例示的なポリヌクレオチドまたはアミノ酸配列以上のものを包含し、その機能的等価物を含むことが理解される。

【0160】

本開示で使用される細胞は、当業者に既知の組換え技術を使用して遺伝子操作され得る。本明細書に記載されるポリヌクレオチドの産生及び操作は、当該技術分野内にあり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．１９８９．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．ａｎｄ Ｉｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ）．１９９５．ＰＣＲ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏに記載される組換え技術に従って実施することができる。

【0161】

ＩＶ． 薬学的組成物
本開示は、開示される方法に従って使用するための、本明細書に記載される遺伝子操作された細胞を含む薬学的組成物を更に提供する。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、１つ以上の皮膚治療薬を発現する１つ以上の生の及び／または無傷の遺伝子操作された細胞、例えば、真菌細胞を含む。

【0162】

ある特定の実施形態では、本開示に従って使用するための薬学的組成物は、直腸投与、経口投与、膣投与、または局所投与のために製剤化され得る。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、局所投与のために製剤化される。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、経口投与されない、すなわち、経口投与のために製剤化されない。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、眼内投与されない、すなわち、眼内投与のために製剤化されない。

【0163】

ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞と、薬学的に許容される担体と、を含む。ある特定の実施形態では、薬学的に許容される担体は、活性成分、例えば、遺伝子操作された細胞及び／または皮膚治療薬の生物学的活性の有効性に干渉せず、それが投与される患者に毒性でない任意の担体を含む。好適な薬学的担体の非限定的な例としては、リン酸緩衝食塩水、水、油／水エマルションなどのエマルション、様々な種類の湿潤剤、及び無菌溶液が挙げられる。薬学的に許容される担体の追加の非限定的な例としては、ポリマー、ゲル、生体吸収性マトリックス材料、酵母及び／または任意の他の好適なビヒクルを含有する移植要素、送達または分配手段または材料が挙げられる。かかる担体は、従来の方法によって製剤化され得、対象に投与され得る。

【0164】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、少なくとも１つの成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された真菌細胞を含むことができる。

【0165】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、少なくとも１つのサイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチンを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された真菌細胞を含むことができる。

【0166】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、少なくとも１つのケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する、遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された真菌細胞を含むことができる。

【0167】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、少なくとも１つのプロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞、例えば、遺伝子操作された真菌細胞を含むことができる。

【0168】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、ならびに（２）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチンを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0169】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、ならびに（２）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0170】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、及び（２）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0171】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、ならびに（２）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0172】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２、ならびに（２）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0173】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、ならびに（２）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0174】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、（２）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、ならびに（３）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0175】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２、（２）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、ならびに（３）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0176】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、（２）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２、ならびに（３）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0177】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、（２）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、ならびに（３）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0178】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ、（２）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチン、（３）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２、ならびに（４）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0179】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、成長因子阻害剤を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、ＶＥＧＦ阻害剤、例えば、ＩＬ－４を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0180】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、ＴＧＦ－β１阻害剤を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、ペプチドＴＧＦ－β１阻害剤、例えば、ＴＳＬＤＡＳＩＩＷＡＭＭＱＮ（配列番号９）またはＴＳＬＤＡＳＩＩＷＡＭＭＱＮＡ（配列番号１２）を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0181】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、細胞外マトリックスタンパク質、例えば、コラーゲンを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、ＶＩＩ型コラーゲンまたはその断片を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含むことができる。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、エラスチンを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含む。

【0182】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、抗菌剤を発現及び／または分泌する本開示の遺伝子操作された細胞を含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、抗菌ペプチドを発現及び／または分泌する遺伝子操作を含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ルシフェンシン、ルシフェンシンＩＩ、ルシリン、酢酸ペキシガナン（ＭＳＩ－７８）、Ｄ２Ａ２１／Ｄ４Ｅ１、グラニュリシン、合成グラニュリシン由来ペプチド、カテリシジン抗菌ペプチド（ＬＬ－３７）またはその類似体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される抗菌ペプチドを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含む。

【0183】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、キラー毒素を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅからＫ１、Ｋ２、及び／またはＫ２８を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含む。

【0184】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、ディフェンシン、例えば、α－、β－またはθ－ディフェンシンを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、β－ディフェンシン－１（ｈＢＤ－１）、β－ディフェンシン－２（ｈＢＤ－２）、β－ディフェンシン－３（ｈＢＤ－３）、好中球ペプチド１（ＨＮＰ１）、好中球ペプチド２（ＨＮＰ２）、好中球ペプチド３（ＨＮＰ３）、好中球ペプチド４（ＨＮＰ４）、ヒトディフェンシン５（ＨＤ５）、及び／またはヒトディフェンシン６（ＨＤ６）を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、β－ディフェンシン－３（ｈＢＤ－３）を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含む。

【0185】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、ＲｅｌＡの阻害剤、例えば、ＲｅｌＡを標的とするＲＮＡｉを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含む。

【0186】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、抗ブドウ球菌殺菌タンパク質を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含む。

【0187】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、色素性乾皮症相補性タンパク質（ＸＰ）、例えば、ＸＰＡ、ＸＰＢ、ＸＰＣ（ヒトＲＡＤ４）、ＸＰＤ、ＸＰＥ、ＸＰＦまたはＸＰＧを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含む。

【0188】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、アゼライン酸を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含む。

【0189】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、ヒアルロン酸を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含む。

【0190】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、調整された様式で複数の構成要素のアセンブリを必要とする皮膚治療薬の生成のために使用することができる多細胞系を含み、各細胞は、皮膚治療薬の構成要素を産生するように構成される。ある特定の実施形態では、多細胞系は、複数の異なる皮膚治療薬の生成のために使用され得る。ある特定の実施形態では、多細胞系は、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０の異なる皮膚治療薬の生成及び／または分泌のために使用することができる。そのような多細胞系の非限定的な例は、ＰＣＴ／ＵＳ２０２０／０３０７９５に開示されており、その内容は、その全体が本明細書に組み込まれる。

【0191】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、各々が異なる皮膚治療薬を発現及び／または分泌する、２つ以上の遺伝子操作された細胞、例えば、３つ以上、４つ以上、または５つ以上を含むことができる。ある特定の実施形態では、各々が異なる皮膚治療薬を発現及び／または分泌する２つ以上の遺伝子操作された細胞を含む本開示の薬学的組成物は、単一の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞を含む薬学的組成物と比較して、状態を治療する上でより効果的である。

【0192】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）第１の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）第２の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、を含む。例えば、限定するものではないが、本開示の薬学的組成物は、（１）本明細書のセクションＩＩに開示される第１の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）本明細書のセクションＩＩに開示される第２の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、を含み、第１の皮膚治療薬及び第２の皮膚治療薬は、異なる。

【0193】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）第１の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）第２の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、（３）第３の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第３の遺伝子操作された細胞と、を含む。例えば、限定するものではないが、本開示の薬学的組成物は、（１）本明細書のセクションＩＩに開示される第１の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）本明細書のセクションＩＩに開示される第２の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、（３）本明細書のセクションＩＩに開示される第３の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第３の遺伝子操作された細胞と、を含み、第１、第２、及び第３の皮膚治療薬は、異なる。

【0194】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）第１の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）第２の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、（３）第３の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第３の遺伝子操作された細胞と、（４）第４の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第４の遺伝子操作された細胞と、を含む。例えば、限定するものではないが、本開示の薬学的組成物は、（１）本明細書のセクションＩＩに開示される第１の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）本明細書のセクションＩＩに開示される第２の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、（３）本明細書のセクションＩＩに開示される第３の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第３の遺伝子操作された細胞と、（４）本明細書のセクションＩＩに開示される第４の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第４の遺伝子操作された細胞と、を含み、第１、第２、第３、及び第４の皮膚治療薬は、異なる。

【0195】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）第１の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）第２の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、（３）第３の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第３の遺伝子操作された細胞と（４）第４の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第４の遺伝子操作された細胞と、（５）第５の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第５の遺伝子操作された細胞と、を含む。例えば、限定するものではないが、本開示の薬学的組成物は、（１）本明細書のセクションＩＩに開示される第１の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）本明細書のセクションＩＩに開示される第２の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、（３）本明細書のセクションＩＩに開示される第３の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第３の遺伝子操作された細胞と、（４）本明細書のセクションＩＩに開示される第４の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第４の遺伝子操作された細胞と、（５）本明細書のセクションＩＩに開示される第５の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第５の遺伝子操作された細胞と、を含み、第１、第２、第３、第４、及び第５の皮膚治療薬は、異なる。

【0196】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）第１の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）第２の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、（３）第３の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第３の遺伝子操作された細胞と、（４）第４の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第４の遺伝子操作された細胞と、（５）第５の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第５の遺伝子操作された細胞と、（６）第６の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第６の遺伝子操作された細胞と、を含む。例えば、限定するものではないが、本開示の薬学的組成物は、（１）本明細書のセクションＩＩに開示される第１の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）本明細書のセクションＩＩに開示される第２の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞、（３）本明細書のセクションＩＩに開示される第３の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第３の遺伝子操作された細胞と、（４）本明細書のセクションＩＩに開示される第４の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第４の遺伝子操作された細胞と、（５）本明細書のセクションＩＩに開示される第５の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第５の遺伝子操作された細胞と、（６）本明細書のセクションＩＩに開示される第６の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第６の遺伝子操作された細胞と、を含み、第１、第２、第３、第４、及び第５の皮膚治療薬は、異なる。

【0197】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、本明細書のセクションＩＩに開示される第４の皮膚治療薬を発現及び／または分泌する第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８、第９、第１０、第１１、第１２、第１３、第１４、第１５、第１６、第１７、第１８、第１９、第２０、第２１、第２２、第２３、第２４、及び／または第２５の遺伝子操作された細胞を含み、各遺伝子操作された細胞は、異なる皮膚治療薬を発現する。

【0198】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦを発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、を含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦを発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチンを発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、を含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチンを発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、を含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦを発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、を含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、を含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチンを発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、を含む。

【0199】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）ＥＧＦを発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、を含む。

【0200】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦを発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、（３）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチンを発現及び／または分泌する第３の遺伝子操作された細胞と、を含む。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦを発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、（３）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する第３の遺伝子操作された細胞と、を含む。

【0201】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、（１）成長因子またはその誘導体、例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦを発現及び／または分泌する第１の遺伝子操作された細胞と、（２）プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、例えば、ＴＩＭＰ１及び／またはＴＩＭＰ２を発現及び／または分泌する第２の遺伝子操作された細胞と、（３）ケモカインまたはその誘導体、例えば、ＣＸＣＬ１２を発現及び／または分泌する第３の遺伝子操作された細胞と、（４）サイトカインまたはその誘導体、例えば、レプチンを発現及び／または分泌する第４の遺伝子操作された細胞と、を含む。

【0202】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、組成物中に存在する１つ以上の遺伝子操作された細胞の成長を促進するための栄養素を含み得る。例えば、限定するものではないが、薬学的組成物は、ビタミン、例えば、水溶性ビタミン、炭水化物、ペプチド、アミノ酸、及び／または塩を含むことができる。

【0203】

ある特定の実施形態では、本開示での使用に適した薬学的組成物は、遺伝子操作された細胞が治療有効量で含まれる組成物を含むことができる。活性成分の治療有効量は、活性成分、例えば、遺伝子操作された細胞及び／または皮膚治療薬、使用される製剤、状態及びその重症度、ならびに治療される対象の年齢、体重などに応じて変動し得る。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、少なくとも約１０^２個、約１０^３個、約１０^４個、約１０^５個、約１０^６個、約１０^７個、約１０^８個、約１０^９個、または約１０^１０個の遺伝子操作された細胞を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１０^２細胞／ｍｌ、約１０^３細胞／ｍｌ、約１０^４細胞／ｍｌ、約１０^５細胞／ｍｌ、約１０^６細胞／ｍｌ、約１０^７細胞／ｍｌ、約１０^８細胞／ｍｌ、約１０^９細胞／ｍｌまたは約１０^１０細胞／ｍｌの濃度で遺伝子操作された細胞を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１×１０^３細胞／ｍｌ～約１×１０^１０細胞／ｍｌの濃度で遺伝子操作された細胞を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、遺伝子操作された生真菌細胞の約１×１０^４細胞／ｍｌ～約１×１０^１０細胞／ｍｌの濃度で遺伝子操作された細胞を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、遺伝子操作された生真菌細胞の約１×１０^３細胞／ｍｌ～約１×１０^９細胞／ｍｌの濃度で遺伝子操作された細胞を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１×１０^４細胞／ｍｌ～約１×１０^８細胞／ｍｌ、約１×１０^５細胞／ｍｌ～約１×１０^８細胞／ｍｌ、約１×１０^６細胞／ｍｌ～約１×１０^８細胞／ｍｌ、約１×１０^５細胞／ｍｌ～約１×１０^７細胞／ｍｌ、約１×１０^６細胞／ｍｌ～約１×１０^７細胞／ｍｌ、または約１×１０^４細胞／ｍｌ～約１×１０^７細胞／ｍｌの濃度で遺伝子操作された細胞を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、図５Ｂに示されるように、約１×１０^６細胞／ｍｌ～約２×１０^７細胞／ｍｌの濃度で遺伝子操作された細胞を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約２×１０^６細胞／ｍｌ～約２×１０^７細胞／ｍｌの濃度で遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0204】

ある特定の実施形態では、本開示での使用に適した薬学的組成物は、遺伝子操作された細胞が治療有効量で皮膚治療薬を発現及び／または分泌する組成物を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１～約２４時間以内に、約１ｐｇから及び約１０ｇの皮膚治療薬を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞の集団を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１時間～約２４時間以内に、約１ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、例えば、約１００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約５，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約２０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約３０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約４０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約５０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約６０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約７０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約８０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約９０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１１０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１２０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１３０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１４０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１５０，０００ｐｇ／ｍｌ～約２００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１９０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１８０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１７０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１６０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１５０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１４０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１３０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１２０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約９０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約８０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約７０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約６０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約５０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約４０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約３０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約２０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約１０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１００ｐｇ／ｍｌ～約５，０００ｐｇ／ｍｌ、約１，０００ｐｇ／ｍｌ～約１００，０００ｐｇ／ｍｌ、約１，０００ｐｇ／ｍｌ～約５０，０００ｐｇ／ｍｌ、約１，０００ｐｇ／ｍｌ～約２５，０００ｐｇ／ｍｌ、約１，０００ｐｇ／ｍｌ～約１０，０００ｐｇ／ｍｌ、または約１，０００ｐｇ／ｍｌ～約５，０００ｐｇ／ｍｌの皮膚治療薬を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞の集団を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１ｐｇ／ｍｌ～約２，５００ｐｇ／ｍｌ、例えば、約１００ｐｇ／ｍｌ～約２，５００ｐｇ／ｍｌ、約１，０００ｐｇ／ｍｌ～約２，０００ｐｇ／ｍｌ、または約１，５００ｐｇ／ｍｌ～約２，５００ｐｇ／ｍｌの皮膚治療薬を約１～約２４時間以内に発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞の集団を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１～約２４時間以内、例えば、約２４時間以下以内に、約０．１ｎｇ／ｍｌ～約１，０００ｎｇ／ｍｌの皮膚治療薬を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞の集団を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１～約２４時間以内、例えば、約２４時間以下以内に約０．１ｎｇ／ｍｌ～約５００ｎｇ／ｍｌの皮膚治療薬を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞の集団を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１～約２４時間以内、例えば、約２４時間以下以内に約１ｎｇ／ｍｌ～約４００ｎｇ／ｍｌの皮膚治療薬を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞の集団を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１～約２４時間以内、例えば、約２４時間以下以内に約１ｎｇ／ｍｌ～約３５０ｎｇ／ｍｌを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞の集団を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１～約２４時間以内、例えば、約２４時間以下以内に約１ｎｇ／ｍｌ～約３００ｎｇ／ｍｌを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞の集団を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１～約２４時間以内、例えば、約２４時間以下以内に約１ｎｇ／ｍｌ～約２５０ｎｇ／ｍｌを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞の集団を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１～約２４時間以内、例えば、約２４時間以下以内に約１ｎｇ／ｍｌ～約２００ｎｇ／ｍｌを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞の集団を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１～約２４時間以内、例えば、約２４時間以下以内に約１０ｎｇ／ｍｌ～約３００ｎｇ／ｍｌを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞の集団を含むことができる。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、約１～約２４時間、例えば、約２４時間以下以内に約５０ｎｇ／ｍｌ～約２５０ｎｇ／ｍｌを発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞の集団を含むことができる。

【0205】

ある特定の非限定的実施形態では、本開示の薬学的組成物は、直腸及び膣投与に好適な、当該技術分野で周知の薬学的に許容される担体を使用して製剤化され得る。かかる担体は、薬学的組成物を、治療される患者への局所、直腸及び／または経口投与のために、錠剤、丸薬、カプセル、液体（例えば、粘性液体）、ペースト、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液、坐剤などとして製剤化することを可能にする。

【0206】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、局所投与に好適な、当該技術分野で周知の薬学的に許容される担体を使用して製剤化され得る。かかる担体は、治療される患者への局所投与のために、薬学的組成物を液体、ゲル、クリーム、シロップ、ペースト、スラリー、分散性粉末、懸濁液、ローションなどとして製剤化することを可能にする。

【0207】

ある特定の実施形態では、１つ以上のデバイス、例えば、アプリケーターを使用して、開示される薬学的組成物のうちの１つ以上を投与することができる。

【0208】

ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、本開示の１つ以上の凍結乾燥またはフリーズドライされた遺伝子操作された細胞を含むことができる。

【0209】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、対象の状態を治療するための第２の薬剤を更に含むことができる。例えば、限定するものではないが、本開示の薬学的組成物は、薬学的組成物中の遺伝子操作された細胞から発現及び／または分泌される皮膚治療薬とは異なる抗菌剤及び／または抗炎症剤を更に含むことができる。ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、薬学的組成物中の遺伝子操作された細胞から発現及び／または分泌される皮膚治療薬と同じ抗菌剤及び／または抗炎症剤を更に含むことができる。

【0210】

ある特定の実施形態では、本開示の薬学的組成物は、図２、図６、図７Ｅ及び図８Ｄに示されるように、ゲル、例えば、ヒドロゲルを含むことができる。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ヒドロゲル内に懸濁され得る。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、多糖を含むことができる。多糖の非限定的な例には、アガロース、デンプン、ウルバン、カラギーナン、及びポルフィリンが含まれる。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、ポリビニルアルコール、ポリヒドロキシルアルキルメタクリレート、及びポリアクリレートなどの合成ポリマーまたは合成ポリマー形成剤を含むことができる。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、コラーゲン、キトサン、またはアルギネートなどのバイオポリマーを含むことができる。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．１％ｗ／ｖ～約１０．０％ｗ／ｖの多糖を含むことができる。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．１％ｗ／ｖ～約５．０％ｗ／ｖの多糖、例えば、約０．１％ｗ／ｖ～約１．０％ｗ／ｖの多糖を含むことができる。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．１％ｗ／ｖ～約１．０％ｗ／ｖの多糖を含むことができる。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．５％ｗ／ｖ～約１．０％ｗ／ｖの多糖を含むことができる。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．５％ｗ／ｖ～約０．７％ｗ／ｖの多糖を含むことができる。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．１％ｗ／ｖ～約１０．０％ｗ／ｖのアガロースを含むことができる。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．１％ｗ／ｖ～約５．０％ｗ／ｖのアガロース、例えば、約０．１％ｗ／ｖ～約１．０％ｗ／ｖのアガロースを含むことができる。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．１％ｗ／ｖ～約１．０％ｗ／ｖのアガロースを含むことができる。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．５％ｗ／ｖ～約１．０％ｗ／ｖのアガロースを含むことができる。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルは、約０．５％ｗ／ｖ～約０．７％ｗ／ｖのアガロースを含むことができる。

【0211】

ヒドロゲルを含む薬学的組成物の非限定的な例示的実施形態を、図２、図７Ｅ及び図８Ｄに示す。ある特定の実施形態では、ヒドロゲルベースの薬学的組成物は、（ｉ）外側及び／または接着剤層と、（ｉｉ）遺伝子操作された生真菌細胞を含有する培地、例えば、遺伝子操作された生真菌細胞を含有するヒドロゲルと、（ｉｉｉ）真菌細胞含有培地、例えば、ヒドロゲルと、治療される創傷床または皮膚との間の層と、を含むことができる。

【0212】

ある特定の実施形態では、外側及び／または接着剤層は、開放性創傷床（または治療される皮膚）と外側環境との間のバリアとして機能することができる。ある特定の実施形態では、外側及び／または接着剤層は、治療される創傷または皮膚上に遺伝子操作された細胞を保持するためのバリアとして機能することができる。ある特定の実施形態では、外側及び／または接着剤層は、薬学的組成物中の個々の遺伝子操作された細胞のサイズより小さい孔径を有する。ある特定の実施形態では、外側及び／または接着剤層は、ポリマー含有材料である。ある特定のポリマー含有材料には、ポリウレタン含有材料がある。ある特定のポリマー含有材料には、ポリウレタンまたはその共重合体を含む材料またはポリマーがある。

【0213】

ある特定の実施形態では、真菌細胞含有培地、例えば、ヒドロゲルは、遺伝子操作された生真菌細胞、栄養素、緩衝液、及び／または抗生物質などの潜在的な補助活性成分の集団を含有する。ある特定の実施形態では、真菌細胞含有培地、例えば、ヒドロゲルは、遺伝子操作された真菌細胞から分泌される１つ以上の治療薬の創傷床への拡散を可能にするが、真菌細胞が皮膚及び創傷床に到達するのを防ぐ。ある特定の実施形態では、真菌細胞含有培地、例えば、ヒドロゲルは、多糖を含む。ある特定の実施形態では、多糖は、アガロースである。

【0214】

ある特定の実施形態では、真菌細胞含有培地、例えば、ヒドロゲルと、治療される創傷床または皮膚との間の層は、培地中の真菌細胞によって発現される皮膚治療薬に対して透過性である。ある特定の実施形態では、真菌細胞含有培地、例えば、ヒドロゲルと、治療される創傷床または皮膚との間の層は、培地中の真菌細胞に対して透過性ではない。ある特定の実施形態では、真菌細胞含有培地、例えば、ヒドロゲルと、治療される創傷床または皮膚との間の層は、培地中の真菌細胞によって発現される皮膚治療薬に対して透過性であるが、そのような真菌細胞には透過性ではない。ある特定の実施形態では、真菌細胞含有媒体（例えば、ヒドロゲル）と、治療される創傷床または皮膚との間の層は、約１．０μｍ未満、例えば、約０．９μｍ未満、約０．８μｍ未満、約０．７μｍ未満、約０．６μｍ未満、約０．５μｍ未満、約０．４μｍ未満、約０．３μｍ未満、約０．２μｍ未満、または約０．１μｍ未満の孔径を有する。ある特定の実施形態では、真菌細胞含有培地、例えば、ヒドロゲルと、治療される創傷床または皮膚との間の層は、約０．０１～約１．０μｍ、例えば、約０．２μｍの孔径を有する。ある特定の実施形態では、真菌細胞含有培地、例えば、ヒドロゲルと、治療される創傷床または皮膚との間の層は、約０．０１～約０．２μｍの孔径を有する。ある特定の実施形態では、真菌細胞含有培地、例えば、ヒドロゲルと、治療される創傷床または皮膚との間の層は、約０．０１～約０．５μｍの孔径を有する。ある特定の実施形態では、真菌細胞含有培地、例えばヒドロゲルと、治療される創傷床または皮膚との間の層は、ポリマーである。ある特定の実施形態では、真菌細胞含有培地、例えば、ヒドロゲルと、治療される創傷床または皮膚との間の層は、約０．０１～約１．０μｍ、例えば、約０．２μｍの孔径を有する。ある特定の実施形態では、ポリマーは、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）である。

【0215】

Ｖ． 皮膚状態
本開示は更に、１つ以上の皮膚状態を治療するための遺伝子操作された細胞及び薬学的組成物を提供する。

【0216】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、皮膚を治療するために投与することができる。例えば、限定するものではないが、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、様々な状態、例えば、皮膚状態及び／または疾患を治療するために投与され得る。任意の皮膚状態は、開示される遺伝子操作された細胞を使用して治療され得る。

【0217】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、創傷を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、創傷は、対象の身体組織、例えば、皮膚の完全性に対する損傷である。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、慢性創傷の治癒を促進するために投与することができる。慢性創傷の非限定的な例には、潰瘍（例えば、糖尿病性潰瘍（例えば、糖尿病性足潰瘍）、静脈性潰瘍、動脈性潰瘍及び圧迫性潰瘍）、歯周病変、感染性創傷、虚血性創傷、外科的創傷、火傷創傷、皮膚水疱形成（例えば、表皮水疱症）、及び放射線中毒創傷が含まれる。

【0218】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、胃腸状態の治癒を促進するように投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、胃潰瘍の治癒を促進するために投与することができる。胃潰瘍の非限定的な例には、消化性潰瘍、胃潰瘍、食道潰瘍、及び十二指腸潰瘍が挙げられる。ある特定の実施形態では、状態は、胃腸状態ではない。

【0219】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、感染症、例えば、皮膚の感染症を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、真菌感染症（例えば、酵母感染症）、細菌感染症及び／または原虫感染症、例えば、真菌感染症（例えば、酵母感染症）、細菌感染症及び／または皮膚の原虫感染症を治療するために投与され得る。真菌（例えば、酵母）感染症の非限定的な例には、爪真菌症、カンジダ症、水虫、頑癬、皮膚糸状菌症／白癬、及びＴｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｕｍ及び他の真菌種感染症に関連する他の感染症が含まれる。細菌感染症の非限定的な例には、蜂巣炎、丹毒、膿疱疹、毛包炎、吹出物、及び癰（よう）が含まれる。原虫感染症の非限定的な例には、マラリア、ジアルジア症、回虫症、及びトキソプラズマ症が挙げられる。

【0220】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、にきびを治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、にきびは、皮膚の毛包及び皮脂腺の障害である。ある特定の実施形態では、にきびは、炎症性皮膚状態とみなされる。

【0221】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、炎症性障害を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、炎症性障害は、スティーブンス・ジョンソン症候群または炎症性皮膚障害であり得る。炎症性皮膚障害の非限定的な例としては、乾癬、狼瘡、化膿性汗腺炎、脂漏性皮膚炎、毛巣嚢胞、及びアトピー性皮膚炎（例えば、湿疹）が挙げられる。

【0222】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、線維性障害を治療するために投与することができる。線維性障害の非限定的な例には、皮膚線維症、肥厚性瘢痕、及び強皮症が挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、肥厚性瘢痕を治療するために投与することができる。

【0223】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示の遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、水疱形成に関連する障害を治療するために投与することができる。水疱性傷害の非限定的な例には、水疱性類天疱瘡、他の類天疱瘡バリアント、表皮水疱症、水疱性全身性エリテマトーデス、線形ＩｇＡ水疱性皮膚症、疱疹状皮膚炎、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、他の天疱瘡バリアント（紅斑性天疱瘡、疱疹状天疱瘡、増殖性天疱瘡、及びＩｇＡ天疱瘡）、ならびに腫瘍随伴性自己免疫多臓器症候群（腫瘍随伴性天疱瘡としても知られる）が含まれる。

【0224】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、血管病変を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、血管病変は、血管奇形である。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、血管病変に関連する障害を治療するために投与することができる。血管病変の非限定的な例には、先天性血管腫及びサクランボ色血管腫が挙げられる。

【0225】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、良性皮膚病変を治療するために投与することができる。良性皮膚病変は、非がん性皮膚成長である。良性皮膚病変の非限定的な例としては、黒子、そばかす、懸垂線維腫、良性黒子、日光黒子、ケロイド、及び脂漏性角化症が挙げられる。

【0226】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、皮膚癌を治療するために投与され得る。皮膚癌の非限定的な例としては、基底細胞癌、扁平上皮癌、脂腺癌、カポジ肉腫、皮膚血管肉腫、黒色腫、メルケル細胞癌、隆起性皮膚線維肉腫、及び皮膚リンパ腫が挙げられる。

【0227】

ある特定の実施形態では、本開示は、色素性乾皮症を治療するための方法を提供する。

【0228】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、色素沈着障害を治療するために投与することができる。色素沈着障害の非限定的な例には、色素沈着過剰（例えば、炎症後色素沈着過剰、肝斑、日光黒子、雀卵斑（そばかす）及びカフェオーレ斑）、ならびに色素沈着低下（例えば、白斑）が含まれる。

【0229】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、美容治療を実行するために投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、皮膚を若返らせるために投与することができる。

【0230】

ＶＩ． 使用方法
本開示は、本開示の遺伝子操作された細胞及び薬学的組成物を使用するための方法を更に提供する。本開示は、本開示の１つ以上の遺伝子操作された細胞またはその薬学的組成物を対象に投与することによって、治療を必要とする対象を治療するための方法を提供する。

【0231】

ある特定の実施形態では、本開示の方法は、１つ以上の皮膚治療薬を発現する１つ以上の生の及び／または無傷の遺伝子操作された細胞、例えば、真菌細胞、またはその組成物もしくは薬学的組成物を投与することを含む。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された生細胞は、無傷の細胞膜を有し、皮膚治療薬を増殖及び／または発現する能力を有する細胞を指す。本明細書に開示される遺伝子操作された真菌細胞の組成物または薬学的組成物の非限定的な例は、セクションＩＶに記載される。本開示の遺伝子操作された真菌細胞で治療することができる皮膚状態の非限定的な例は、セクションＶに記載されている。

【0232】

ある特定の実施形態では、本開示の方法は、対象を治療するための皮膚治療薬を生成及び分泌するために、それを必要とする対象に遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）を投与することを含む。ある特定の実施形態では、遺伝子操作は、インサイチュで皮膚治療薬を産生し、皮膚治療薬を分泌する真菌細胞である。遺伝子投与された細胞は、治療される障害及び／または状態に関連する任意の方法によって対象に投与され得る。例えば、限定するものではないが、遺伝子操作された細胞は、直腸投与、膣投与、経口投与、または局所投与によって投与され得る。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞は、経口投与されない。

【0233】

ある特定の実施形態では、対象に投与される遺伝子操作された細胞は、対象を治療するための皮膚治療薬を生成及び分泌する。生成及び分泌され得る皮膚治療薬の非限定的な例が、本明細書のセクションＩＩに開示される。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、成長因子、ケモカイン、サイトカイン、抗菌ペプチド、及び／またはプロテアーゼ阻害剤のうちの１つ以上であり得る。例えば、限定するものではないが、皮膚治療薬は、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ－β、ＣＸＣＬ１２、レプチン、ＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２、ＩＬ－４、ＶＩＩ型コラーゲン、ＴＧＦ－β１阻害剤、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ルシフェンシン、ルシフェンシンＩＩ、ルシリン、酢酸ペキシガナン（ＭＳＩ－７８）、Ｄ２Ａ２１／Ｄ４Ｅ１、グラニュリシン、合成グラニュリシン由来ペプチド、カテリシジン抗菌ペプチド（ＬＬ－３７）もしくはその類似体、Ｋ１毒素ペプチド、Ｋ２毒素ペプチド、Ｋ２８毒素ペプチド、ＲｅｌＡの阻害剤、ディフェンシン、抗ブドウ球菌殺菌タンパク質、色素性乾皮症相補性タンパク質（ＸＰ）、アゼライン酸、ヒアルロン酸、エラスチン、またはそれらの組み合わせであり得る。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＧＦ－β、ＣＸＣＬ１２、レプチン、ＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２、ＩＬ－４、ＶＩＩ型コラーゲン、及び／またはＴＧＦ－β１阻害剤であり得る。ある特定の実施形態では、皮膚治療薬は、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ルシフェンシン、ルシフェンシンＩＩ、ルシリン、酢酸ペキシガナン（ＭＳＩ－７８）、Ｄ２Ａ２１／Ｄ４Ｅ１、グラニュリシン、合成グラニュリシン由来ペプチド、カテリシジン抗菌ペプチド（ＬＬ－３７）もしくはその類似体、ＲｅｌＡの阻害剤、ディフェンシン、抗ブドウ球菌殺菌タンパク質、色素性乾皮症相補性タンパク質（ＸＰ）、アゼライン酸、ヒアルロン酸、エラスチン、またはそれらの組み合わせであり得る。

【0234】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、皮膚を治療するために投与することができる。例えば、限定するものではないが、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、様々な状態、例えば、皮膚状態及び／または疾患を治療するために投与され得る。任意の皮膚状態は、開示される遺伝子操作された細胞を使用して治療され得る。開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）を使用して治療することができる皮膚状態の非限定的な例としては、創傷、感染症、にきび、線維性障害、水疱性傷害、炎症性状態（例えば、炎症性皮膚状態）、血管病変、皮膚癌、色素性乾皮症、色素障害、及び美容処置が挙げられる。

【0235】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、痔核、裂肛、肛門周囲膿瘍、肛門瘻、肛門周囲感染症、びらん、潰瘍、創傷、にきび（例えば、細菌感染したにきび）、にきびによって引き起こされる炎症、単純疱疹、水疱、真菌性爪感染症、水虫、湿疹、日光性角化症、毛孔性苔癬、強皮症、発疹、酒さ、疥癬、癰（よう）、乾癬、表皮水疱症、蜂巣炎、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、黒色腫、接触皮膚炎、いぼ、皮膚線維症、及びそれらの組み合わせを含む皮膚状態を治療するために投与され得る。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、皮膚及び美容治療、例えば、顔及び毛髪治療に使用することができる。

【0236】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、創傷を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、創傷治癒を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、創傷は、対象の身体組織、例えば、皮膚の完全性に対する損傷である。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、開放性創傷の治癒を促進するために投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、慢性創傷の治癒を促進するために投与することができる。ある特定の実施形態では、慢性創傷は、秩序正しくタイムリーな様式で治癒プロセスを通して進行しない創傷である。慢性創傷の非限定的な例には、潰瘍（例えば、糖尿病性潰瘍（例えば、糖尿病性足潰瘍）、静脈性潰瘍、動脈性潰瘍及び圧迫性潰瘍）、歯周病変、感染性創傷、虚血性創傷、外科的創傷、火傷創傷、皮膚水疱形成（例えば、表皮水疱症）、及び放射線中毒創傷が含まれる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、潰瘍を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、糖尿病性潰瘍を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、成長因子（例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ）、サイトカイン（例えば、レプチン）、及び／またはプロテアーゼ阻害剤を発現及び分泌する本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、創傷の治癒を促進するために投与することができる。ある特定の実施形態では、本開示は、創傷、例えば、糖尿病性足潰瘍を治療するための方法であって、成長因子、例えば、ＥＧＦを分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、方法を提供する。ある特定の実施形態では、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、またはその両方を発現及び分泌する本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、創傷の治癒を促進するために投与することができる。ある特定の実施形態では、成長因子（例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ）及びプロテアーゼを発現及び分泌する、本明細書に開示する遺伝子操作された細胞は、創傷の治癒を促進するために投与することができる。ある特定の実施形態では、レプチン及びプロテアーゼを発現及び分泌する、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、創傷の治癒を促進するために投与することができる。ある特定の実施形態では、成長因子（例えば、ＥＧＦ及び／またはＰＤＧＦ）及びサイトカイン（例えば、レプチン）を発現及び分泌する、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、創傷の治癒を促進するために投与することができる。

【0237】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、胃腸状態の治癒を促進するように投与することができる。ある特定の実施形態では、胃腸障害は、対象の胃腸管の障害である。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、胃潰瘍の治癒を促進するために投与することができる。胃潰瘍の非限定的な例には、消化性潰瘍、胃潰瘍、食道潰瘍、及び十二指腸潰瘍が挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、胃腸状態を治療するために使用されない。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、胃腸状態を治療するために経口投与されない。

【0238】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、感染症、例えば、皮膚の感染症を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、真菌感染症（例えば、酵母感染症）、細菌感染症及び／または原虫感染症、例えば、真菌感染症（例えば、酵母感染症）、細菌感染症及び／または皮膚の原虫感染症を治療するために投与され得る。ある特定の実施形態では、１つ以上の抗菌剤、例えば、抗菌ペプチドを発現及び分泌する本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、感染症を治療するために投与され得る。抗菌ペプチドの非限定的な例としては、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ルシフェンシン、ルシフェンシンＩＩ、ルシリン、酢酸ペキシガナン（ＭＳＩ－７８）、及びＤ２Ａ２１／Ｄ４Ｅ１が挙げられる。

【0239】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、真菌（例えば、酵母）感染症、例えば、皮膚の真菌感染症（例えば、酵母感染症）を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、１つ以上の抗菌剤を発現及び分泌する本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、例えば、皮膚の真菌（例えば、酵母）感染症を治療するために投与することができる。真菌（例えば、酵母）感染症の非限定的な例には、爪真菌症、カンジダ症、水虫、頑癬、皮膚糸状菌症／白癬、及びＴｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｕｍ及び他の真菌種感染症に関連する他の感染症が含まれる。ある特定の実施形態では、真菌（例えば、酵母）感染症を治療するための抗菌剤は、抗菌ペプチド、例えば、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、及びＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩを含むことができる。ある特定の実施形態では、抗菌剤は、キラー毒素、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ由来のＫ１、Ｋ２、及び／またはＫ２８であり得る。

【0240】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、細菌感染症、例えば、皮膚の細菌感染症を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、１つ以上の抗菌剤を発現及び分泌する本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、例えば、皮膚の細菌感染症を治療するために投与することができる。細菌感染症の非限定的な例には、蜂巣炎、丹毒、膿疱疹、毛包炎、吹出物、及び癰（よう）が含まれる。ある特定の実施形態では、細菌感染症を治療するための抗菌剤、例えば、抗菌ペプチドとしては、ルシフェンシン、ルシフェンシンＩＩ、ルシリン、酢酸ペキシガナン（ＭＳＩ－７８）、及びＤ２Ａ２１／Ｄ４Ｅ１を挙げることができる。

【0241】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、原虫感染症、例えば、皮膚の原虫感染症を治療するために投与することができる。原虫感染症の非限定的な例には、マラリア、ジアルジア症、回虫症、及びトキソプラズマ症が挙げられる。

【0242】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、にきびを治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、にきびは、皮膚の毛包及び皮脂腺の障害である。ある特定の実施形態では、にきびは、炎症性皮膚状態とみなされる。ある特定の実施形態では、１つ以上の抗菌剤を発現及び分泌する本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、にきびに関連するＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍにきびを治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、１つ以上の抗菌薬を発現及び分泌する本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、にきびを治療するために投与することができる。にきびを治療するための抗菌剤の非限定的な例としては、グラニュリシン、合成グラニュリシン由来ペプチド、及びメリチンが挙げられる。ある特定の実施形態では、本開示は、メリチンを分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、にきびを治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、メリチンは、アミノ酸配列ＧＩＧＡＶＬＫＶＬＴＴＧＬＰＡＬＩＳＷＩＫＲＫＲＱＱ（配列番号５３）を含むか、またはそれからなる。ある特定の実施形態では、本開示は、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、例えば、カテリシジン抗菌ペプチド（ＬＬ－３７）もしくはその類似体、及び／または成長因子、例えば、ＴＧＦ－βを分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、にきびを治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、カテリシジン抗菌ペプチド（ＬＬ－３７）は、アミノ酸配列ＬＬＧＤＦＦＲＫＳＫＥＫＩＧＫＥＦＫＲＩＶＱＲＩＫＤＦＬＲＮＬＶＰＲＴＥＳ（配列番号５４）を含むか、またはそれからなる。本開示の遺伝子操作された細胞から発現及び分泌することができるＬＬ－３７類似体及び抗菌剤の追加の非限定的な例は、Ｋｕｒｏｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｏｎｃｏｌ．５：１４４（２０１５）（例えば、表１）に提供されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0243】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、炎症性障害を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、炎症性障害は、スティーブンス・ジョンソン症候群または炎症性皮膚障害であり得る。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、炎症性皮膚障害を治療するために投与することができる。炎症性皮膚障害の非限定的な例としては、乾癬、狼瘡、化膿性汗腺炎、脂漏性皮膚炎、毛巣嚢胞、及びアトピー性皮膚炎（例えば、湿疹）が挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、乾燥皮膚、かゆみを伴う皮膚、及び／またはかさついた皮膚に関連する皮膚障害を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、乾癬を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、本開示は、ディフェンシン、例えば、β－ディフェンシン－３（ｈＢＤ－３）、ＥＧＦ、ＶＥＧＦの阻害剤、またはＲｅｌＡの阻害剤を分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、炎症性皮膚状態を治療するための方法を提供する。ＲｅｌＡの阻害剤の非限定的な例としては、ＲｅｌＡを標的とするＲＮＡｉが挙げられ、ＶＥＧＦの阻害剤の非限定的な例としては、ＩＬ－４が挙げられる。ある特定の実施形態では、本開示は、ＲｅｌＡの阻害剤を分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、アトピー性皮膚炎を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ディフェンシンを分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、アトピー性皮膚炎を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＶＥＧＦの阻害剤、例えば、ＩＬ－４を分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、乾癬を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＥＧＦを分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、スティーブンス・ジョンソン症候群を治療するための方法を提供する。

【0244】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、線維性障害を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、線維性障害は、コラーゲン及び他の結合組織構成要素の過剰な沈着を特徴とする。線維性障害の非限定的な例には、皮膚線維症、肥厚性瘢痕、及び強皮症が挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、肥厚性瘢痕を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、本開示は、ＴＧＦ－β、例えば、ＴＧＦ－β１の阻害剤を分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、線維性障害（例えば、瘢痕（例えば、肥厚性瘢痕）、皮膚線維症及び強皮症）を治療するための方法を提供する。例えば、限定するものではないが、ＴＧＦ－β１の阻害剤は、ＴＧＦ－β１のペプチド阻害剤であり得る。ＴＧＦ－β１のペプチド阻害剤の非限定的な例としては、アミノ酸配列ＴＳＬＤＡＳＩＩＷＡＭＭＱＮ（配列番号９）を含むか、またはそれからなるペプチドが挙げられる。

【0245】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示の遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、水疱形成に関連する障害を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、水疱性障害、例えば、自己免疫水疱性障害を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、自己免疫水疱性障害は、対象の免疫系が自身の皮膚及び粘膜を攻撃して水疱を形成するときに生じる。水疱性傷害の非限定的な例には、水疱性類天疱瘡、他の類天疱瘡バリアント、表皮水疱症、水疱性全身性エリテマトーデス、線形ＩｇＡ水疱性皮膚症、疱疹状皮膚炎、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、他の天疱瘡バリアント（紅斑性天疱瘡、疱疹状天疱瘡、増殖性天疱瘡、及びＩｇＡ天疱瘡）、ならびに腫瘍随伴性自己免疫多臓器症候群（腫瘍随伴性天疱瘡としても知られる）が含まれる。ある特定の実施形態では、本開示は、細胞外マトリックスタンパク質、例えば、コラーゲンを分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、水疱性障害を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、細胞外マトリックスタンパク質、例えば、コラーゲンを分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、自己免疫水疱性障害を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、細胞外マトリックスタンパク質、例えば、コラーゲンを分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、表皮水疱症を治療するための方法を提供する。水疱性障害を治療するために使用され得るコラーゲンの非限定的な例が、本明細書に記載される。ある特定の実施形態では、コラーゲンは、ＶＩＩ型コラーゲンまたはその断片を含むことができる。

【0246】

ある特定の実施形態では、本開示は、血管病変を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、血管病変は、血管奇形である。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、血管病変に関連する障害を治療するために投与することができる。血管病変の非限定的な例には、先天性血管腫及びサクランボ色血管腫が挙げられる。ある特定の実施形態では、本開示は、ＶＥＧＦの阻害剤を分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、血管病変を治療するための方法を提供する。

【0247】

ある特定の実施形態では、本開示は、良性皮膚病変を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、良性皮膚病変は、非がん性皮膚成長である。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、良性皮膚病変を治療するために投与することができる。良性皮膚病変の非限定的な例としては、黒子、そばかす、懸垂線維腫、良性黒子、日光黒子、ケロイド、及び脂漏性角化症が挙げられる。

【0248】

ある特定の実施形態では、本開示は、皮膚癌を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、皮膚癌を治療するために投与することができる。ある特定の実施形態では、皮膚癌は、皮膚の扁平上皮細胞のがんである。ある特定の実施形態では、皮膚癌は、皮膚の基底細胞のがんである。皮膚癌の非限定的な例としては、基底細胞癌、扁平上皮癌、脂腺癌、カポジ肉腫、皮膚血管肉腫、黒色腫、メルケル細胞癌、隆起性皮膚線維肉腫、及び皮膚リンパ腫が挙げられる。ある特定の実施形態では、本開示は、皮膚癌を治療するための薬剤を分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、皮膚癌を治療するための方法を提供する。そのような薬剤の非限定的な例としては、メリチン、Ｔｏｌｌ様受容体阻害剤、ＶＥＧＦの阻害剤、標的療法または小分子、インターフェロン、インターロイキン、例えば、ＩＬ－１２、及び抗ブドウ球菌殺菌タンパク質が挙げられる。ある特定の実施形態では、本開示は、メリチンを分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、基底細胞がんを治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、Ｔｏｌｌ様受容体阻害剤、例えば、イミキモドまたはレシキモドを分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、扁平上皮癌を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ＶＥＧＦの阻害剤を分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、カポジ肉腫または血管肉腫を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、標的療法または小分子を分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、黒色腫またはメルケル細胞癌を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、インターフェロン、インターロイキン、例えば、ＩＬ－１２、及び／または抗ブドウ球菌殺菌タンパク質を分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、皮膚リンパ腫を治療するための方法を提供する。

【0249】

ある特定の実施形態では、本開示は、色素性乾皮症を治療するための方法を提供する。色素性乾皮症を治療するための薬剤の非限定的な例としては、色素性乾皮症群Ａ（ＸＰＡ）、ＸＰＢ、ＸＰＣ（ヒトＲＡＤ４）、ＸＰＤ、ＸＰＥ、ＸＰＦ、及びＸＰＧが挙げられる。ある特定の実施形態では、本開示は、ＸＰＡ、ＸＰＢ、ＸＰＣ（ヒトＲＡＤ４）、ＸＰＤ、ＸＰＥ、ＸＰＦ及び／またはＸＰＧを分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、色素性乾皮症を治療するための方法を提供する。

【0250】

ある特定の実施形態では、本開示は、色素沈着障害を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、色素沈着障害を治療するために投与することができる。色素沈着障害の非限定的な例には、色素沈着過剰（例えば、炎症後色素沈着過剰、肝斑、日光黒子、雀卵斑（そばかす）及びカフェオーレ斑）、ならびに色素沈着低下（例えば、白斑）が含まれる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示の遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、色素沈着過剰または色素沈着低下に関連する障害を治療するために投与することができる。色素沈着障害を治療するための療法の非限定的な例としては、アゼライン酸、及び酵母、例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅからのリソソーム抽出物が挙げられる。ある特定の実施形態では、本開示は、アゼライン酸を分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、色素沈着障害を治療するための方法を提供する。

【0251】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、美容治療を実行するために投与することができる。例えば、限定するものではないが、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、皮膚の外観を変更する及び／または高めるために投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、皮膚を若返らせるために投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、皮膚を若返らせるために投与することができる。ある特定の実施形態では、本開示は、細胞外マトリックスタンパク質、例えば、コラーゲン及び／またはエラスチンを分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、皮膚を若返らせるための方法を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ヒアルロン酸を分泌する遺伝子操作された細胞を投与することを含む、皮膚を若返らせるための方法を提供する。

【0252】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、局所投与され得る。例えば、限定するものではないが、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、創傷及び潰瘍などの皮膚疾患及び／または状態の治療、ならびに皮膚治癒を促進するために適用することができる。ある特定の実施形態では、本開示の方法は、皮膚状態、例えば、創傷、痛み、または潰瘍を有する対象を治療するために、限定されないが、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、及び／またはプロテアーゼ阻害剤などの皮膚治療薬を発現及び／または分泌するように遺伝子操作された細胞の投与を含む。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞は、治療が必要とされる領域に直接、例えば、創傷に直接、または罹患した皮膚に直接、適用される。

【0253】

ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、１日に１回、１日に２回、２日に１回、３日に１回、４日に１回、５日に１回、６日に１回、週に１回、週に２回、週に３回、週に４回、週に５回、週に６回、２週に１回、月に１回、月に２回、隔月に１回、または３ヶ月に１回投与され得る。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞は、週に２回投与することができる。例えば、限定するものではないが、本開示の遺伝子操作された細胞（またはその薬学的組成物）は、週に２回、週に３回、週に４回、週に５回、週に６回、２週に１回、月に１回、月に２回、隔月に１回、または３ヶ月に１回再適用することができる。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞は、１日１回投与することができる。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞は、２日に１回投与することができる。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞は、３日に１回投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、週に１回投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に開示される遺伝子操作された細胞は、約４週間、週に２回投与され得、次いで、治療の残りの期間、週に１回投与され得る。

【0254】

ある特定の実施形態では、皮膚治療薬（またはその薬学的組成物）を発現及び／または分泌する遺伝子操作された細胞の投与は、複数の投与を必要とせずに、皮膚治療薬による対象の連続治療を可能にする。例えば、限定するものではないが、本開示の遺伝子操作された細胞の投与は、対象への遺伝子操作された細胞の投与後、対象への投与後、少なくとも約１２時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約７２時間、少なくとも約９６時間、少なくとも約１０８時間、少なくとも約１２０時間、少なくとも約１３２時間、少なくとも約１４４時間、少なくとも約１５６時間、または少なくとも約１６５時間、皮膚治療薬の分泌、例えば、連続分泌を可能にする。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞の投与は、遺伝子操作された細胞の対象への投与後、対象への投与後、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、または少なくとも約１４日間、皮膚治療薬の分泌、例えば、連続分泌を可能にする。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、対象への投与後少なくとも４８時間、皮膚治療薬を分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、対象への投与後少なくとも７２時間、皮膚治療薬を分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、対象への投与後少なくとも９６時間、皮膚治療薬を分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、対象への投与後少なくとも１０８時間、皮膚治療薬を分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、対象への投与後少なくとも１２０時間、皮膚治療薬を分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、対象への投与後少なくとも１３２時間、皮膚治療薬を分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、対象への投与後少なくとも１４４時間、皮膚治療薬を分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、対象への投与後少なくとも１５６時間、皮膚治療薬を分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞は、対象への投与後少なくとも１６８時間、皮膚治療薬を分泌する。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞の投与は、対象への遺伝子操作された細胞の投与後、対象への投与後少なくとも約８日間、皮膚治療薬の分泌、例えば、連続分泌を可能にする。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞の投与は、対象への遺伝子操作された細胞の投与後、対象への投与後少なくとも約９日間、皮膚治療薬の分泌、例えば、連続分泌を可能にする。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞の投与は、対象への遺伝子操作された細胞の投与後、対象への投与後少なくとも約１０日間、皮膚治療薬の分泌、例えば、連続分泌を可能にする。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞の投与は、対象への遺伝子操作された細胞の投与後、対象への投与後少なくとも約１１日間、皮膚治療薬の分泌、例えば、連続分泌を可能にする。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞の投与は、対象への遺伝子操作された細胞の投与後、対象への投与後少なくとも約１２日間、皮膚治療薬の分泌、例えば、連続分泌を可能にする。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞の投与は、対象への遺伝子操作された細胞の投与後、対象への投与後少なくとも約１３日間、皮膚治療薬の分泌、例えば、連続分泌を可能にする。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞の投与は、対象への遺伝子操作された細胞の投与後、対象への投与後少なくとも約１４日間、皮膚治療薬の分泌、例えば、連続分泌を可能にする。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞の投与は、対象への遺伝子操作された細胞の投与後、対象への投与後少なくとも約１週間、皮膚治療薬の分泌、例えば、連続分泌を可能にする。ある特定の実施形態では、本開示の遺伝子操作された細胞の投与は、対象への遺伝子操作された細胞の投与後、対象への投与後少なくとも約２週間、皮膚治療薬の分泌、例えば、連続分泌を可能にする。

【0255】

ＶＩＩ． キット及び製品
本開示は、本開示での使用のためのキット及び製品を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の皮膚状態を治療するためのキット及び製品を提供する。例えば、限定するものではないが、本開示は、創傷、感染症、にきび、線維性障害、水疱性傷害、炎症性状態（例えば、炎症性皮膚状態）、血管病変、皮膚癌、色素性乾皮症、及び色素障害を治療するため、ならびに美容処置を実行するためのキット及び製品を提供する。

【0256】

ある特定の実施形態では、本開示のキット及び／または製品は、上述のように、１つ以上の遺伝子操作された細胞を含み得る。ある特定の実施形態では、遺伝子操作された細胞は、フリーズドライまたは凍結乾燥することができる。

【0257】

ある特定の実施形態では、キット及び／または製品は、遺伝子操作された細胞を活性化させるための食物源、例えば、培地、糖または寒天を更に含むことができる。ある特定の実施形態では、本開示のキット及び／または製品は、１つ以上の炭素源、１つ以上の窒素源、１つ以上の微量栄養源、及び／または１つ以上の追加の栄養源を含む、細胞生存率及び増殖を改善するための構成要素を含むことができる。

【0258】

ある特定の実施形態では、キット及び／または製品は、本明細書に記載の１つ以上の遺伝子操作された細胞を含む薬学的組成物を含むことができる。例えば、限定するものではないが、薬学的組成物は、本明細書に記載の１つ以上の遺伝子操作された細胞を含むヒドロゲルであり得る。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、局所投与のために製剤化することができる。

【0259】

ある特定の実施形態では、キット及び／または製品は、本開示の遺伝子操作された細胞を調製するための核酸を含むことができる。例えば、限定するものではないが、核酸は、本明細書に開示された１つ以上の皮膚治療薬をコードするヌクレオチド配列を含むことができる。

【0260】

ある特定の実施形態では、キット及び／または製品は、遺伝子操作された細胞またはそのような細胞を含む薬学的組成物を使用するための説明書を更に含むことができる。

【0261】

ＶＩＩＩ． 例示的な非限定的実施形態
Ａ．本開示は、（ｉ）皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された生真菌細胞と、（ｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物を提供する。

【0262】

Ａ１． 前記皮膚治療薬が、前記真菌細胞の分泌経路によって前記真菌細胞から分泌される、Ａの薬学的組成物。

【0263】

Ａ２． 前記皮膚治療薬が、タンパク質またはその機能的断片である、ＡまたはＡ１の薬学的組成物。

【0264】

Ａ３． 前記皮膚治療薬が、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ａ１またはＡ２の薬学的組成物。

【0265】

Ａ４によって結合される、同一のエピトープ（例えば、線状または立体構造エピトープ）に結合する。前記皮膚治療薬が、成長因子もしくはその誘導体、または成長因子の阻害剤もしくはその誘導体である、Ａ３の薬学的組成物。

【0266】

Ａ５． 前記成長因子が、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、形質転換成長因子－ベータ（ＴＧＦ－β）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ａ４の薬学的組成物。

【0267】

Ａ６． 前記成長因子が、ＥＧＦである、Ａ５の薬学的組成物。

【0268】

Ａ７． 前記成長因子が、ＰＤＧＦである、Ａ５の薬学的組成物。

【0269】

Ａ８． 前記成長因子が、ＴＧＦ－βである、Ａ５の薬学的組成物。

【0270】

Ａ９． 前記成長因子が、ＶＥＧＦである、Ａ５の薬学的組成物。

【0271】

Ａ１０． 前記皮膚治療薬が、ケモカインまたはその誘導体である、Ａ３の薬学的組成物。

【0272】

Ａ１１． 前記ケモカインが、ＣＸＣＬ１２である、Ａ１０の薬学的組成物。

【0273】

Ａ１２． 前記皮膚治療薬が、サイトカインまたはその誘導体である、Ａ３の薬学的組成物。

【0274】

Ａ１３． 前記サイトカインが、レプチン、ＩＬ－４、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ａ１２の薬学的組成物。

【0275】

Ａ１４． 前記皮膚治療薬が、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体である、Ａ３の薬学的組成物。

【0276】

Ａ１５． 前記皮膚治療薬が、ＴＩＭＰ１、ＴＩＭＰ２、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ａ１４の薬学的組成物。

【0277】

Ａ１６． 前記皮膚治療薬が、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体である、Ａ３の薬学的組成物。

【0278】

Ａ１７． 前記皮膚治療薬が、ＶＩＩ型コラーゲン、エラスチン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ａ１６の薬学的組成物。

【0279】

Ａ１８． 前記皮膚治療薬が、抗菌及び／または抗炎症ペプチドである、ＡまたはＡ１の薬学的組成物。

【0280】

Ａ１９． 前記抗菌及び／または抗炎症ペプチドが、カテリシジン抗菌ペプチド（ＬＬ－３７）またはその類似体、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ルシフェンシン、ルシフェンシンＩＩ、ルシリン、酢酸ペキシガナン（ＭＳＩ－７８）、Ｄ２Ａ２１／Ｄ４Ｅ１、グラニュリシン、合成グラニュリシン由来ペプチド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ａ１８の薬学的組成物。

【0281】

Ａ２０． 前記真菌細胞が、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ、Ｅｐｉｃｏｃｃｕｍ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｗａｌｌｅｍｉａ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｐｈｏｍａ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、Ｃｌａｖｉｓｐｏｒａ、Ｃｙｂｅｒｌｉｎｄｎｅｒａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される属からの種である、Ａ～Ａ１９のうちのいずれか１つの薬学的組成物。

【0282】

Ａ２１． 前記真菌細胞が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓである、Ａ～Ａ２０のうちのいずれか１つの薬学的組成物。

【0283】

Ａ２２． 第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞を更に含む、Ａ～Ａ２１のうちのいずれか１つの薬学的組成物。

【0284】

Ａ２３． 第３の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第３の生真菌細胞を更に含む、Ａ２２の薬学的組成物。

【0285】

Ａ２４． 第４の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第４の生真菌細胞を更に含む、Ａ２３の薬学的組成物。

【0286】

Ａ２５． 第５の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第５の生真菌細胞を更に含む、Ａ２４の薬学的組成物。

【0287】

Ａ２６． 前記薬学的組成物が、直腸投与、膣投与、または局所投与のために製剤化される、Ａ～Ａ２５のうちのいずれか１つの薬学的組成物。

【0288】

Ａ２７． 前記薬学的組成物が、局所投与のために製剤化される、Ａ２６の薬学的組成物。

【0289】

Ａ２８． 前記薬学的に許容される担体が、ヒドロゲルを含む、Ａ～Ａ２７のうちのいずれか１つの薬学的組成物。

【0290】

Ａ２９． 前記ヒドロゲルが、約０．１％ｗ／ｖ～約５．０％ｗ／ｖの多糖を含む、Ａ２８の薬学的組成物。

【0291】

Ａ３０． 前記ヒドロゲルが、約０．１％ｗ／ｖ～約１．０％ｗ／ｖの多糖を含む、Ａ２９の薬学的組成物。

【0292】

Ａ３１． 前記多糖が、アガロースである、Ａ２９またはＡ３０の薬学的組成物。

【0293】

Ａ３２． 前記薬学的組成物が、治療効果量の前記遺伝子操作された生真菌細胞を含み、治療有効量が、約１×１０^４細胞／ｍｌ～約１×１０^８細胞／ｍｌの前記遺伝子操作された生真菌細胞である、Ａ～Ａ３１のうちのいずれか１つの薬学的組成物。

【0294】

Ａ３３． 前記治療有効量が、約１×１０^６細胞／ｍｌ～約２×１０^７細胞／ｍｌの前記遺伝子操作された生真菌細胞である、Ａ３２の薬学的組成物。

【0295】

Ａ３４． 前記治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞が、約１ｐｇ／ｍｌから及び約２００，０００ｐｇ／ｍｌの前記皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む、Ａ～Ａ３３のうちのいずれか１つの薬学的組成物。

【0296】

Ａ３５． 前記治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞が、約１００ｐｇ／ｍｌ～約２５，０００ｐｇ／ｍｌの前記皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む、Ａ３４の薬学的組成物。

【0297】

Ａ３６． 前記遺伝子操作された生真菌細胞が、投与後約２４時間～約２週間、前記皮膚治療薬を分泌及び発現する、Ａ～Ａ３５のうちのいずれか１つの薬学的組成物。

【0298】

Ａ３７． 前記遺伝子操作された生真菌細胞が、投与後少なくとも約４８時間、前記皮膚治療薬を分泌及び発現する、Ａ３６の薬学的組成物。

【0299】

Ａ３８． 前記遺伝子操作された生真菌細胞が、投与後少なくとも約７２時間、前記皮膚治療薬を分泌及び発現する、Ａ３７の薬学的組成物。

【0300】

Ａ３９． 前記遺伝子操作された生真菌細胞が、投与後少なくとも約９６時間、前記皮膚治療薬を分泌及び発現する、Ａ３８の薬学的組成物。

【0301】

Ａ４０． 前記遺伝子操作された生真菌細胞が、投与後少なくとも２週間、前記皮膚治療薬を分泌及び発現する、Ａ３９の薬学的組成物。

【0302】

Ａ４１． 前記遺伝子操作された生真菌細胞が、前記皮膚治療薬を連続的に分泌及び発現する、Ａ～Ａ４０のうちのいずれか１つの薬学的組成物。

【0303】

Ａ４２． １つ以上の遺伝子操作された前記真菌細胞のための１つ以上の栄養素を更に含む、Ａ～Ａ４１のうちのいずれか１つの薬学的組成物。

【0304】

Ｂ．本開示は、皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された生真菌細胞を含むヒドロゲルを含む、局所用薬学的組成物を提供する。

【0305】

Ｂ１． 前記ヒドロゲルが、約０．１％ｗ／ｖ～約５．０％ｗ／ｖの多糖を含む、Ｂの局所用薬学的組成物。

【0306】

Ｂ２． 前記ヒドロゲルが、約０．１％ｗ／ｖ～約１．０％ｗ／ｖの多糖を含む、Ｂ１の局所用薬学的組成物。

【0307】

Ｂ３． 前記多糖が、アガロースである、Ｂ１またはＢ２の局所用薬学的組成物。

【0308】

Ｂ４． 皮膚に面する底層と、空気に面する上層と、を更に含み、前記皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された前記真菌細胞を含む前記ヒドロゲルが、前記底層と前記上層との間に配置されている、Ｂ～Ｂ３のうちのいずれか１つの局所用薬学的組成物。

【0309】

Ｂ５． 前記遺伝子操作された真菌細胞が、前記底層を通過することができず、前記皮膚治療薬が、前記底層を通過することができる、Ｂ４の局所用薬学的組成物。

【0310】

Ｂ６． 前記底層が、約２μｍの孔径を有する、Ｂ４またはＢ５の局所用薬学的組成物。

【0311】

Ｂ７． 前記局所用薬学的組成物が、治療有効量の前記遺伝子操作された生真菌細胞を含む、Ｂ～Ｂ６のうちのいずれか１つの局所用薬学的組成物。

【0312】

Ｂ８． 前記治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞が、約１×１０^３細胞／ｍｌ～約１×１０^１０細胞／ｍｌの前記遺伝子操作された生真菌細胞を含む、Ｂ７の局所用薬学的組成物。

【0313】

Ｂ９．前記治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞が、約１ｐｇ／ｍｌから及び約２００，０００ｐｇ／ｍｌの前記皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む、Ｂ７またはＢ８の局所用薬学的組成物。

【0314】

Ｂ９－１． 前記治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞が、約１００ｐｇ／ｍｌから及び約２５，０００ｐｇ／ｍｌの前記皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む、Ｂ７またはＢ８の局所用薬学的組成物。

【0315】

Ｂ９－２． 前記治療有効量の遺伝子操作された生真菌細胞が、約１００ｐｇ／ｍｌから及び約１０，０００ｐｇ／ｍｌの前記皮膚治療薬を約２４時間以内に発現及び分泌する遺伝子操作された生真菌細胞の量を含む、Ｂ７またはＢ８の局所用薬学的組成物。

【0316】

Ｂ１０． 前記遺伝子操作された真菌細胞が、対象への投与後少なくとも約１２時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約６０時間、少なくとも約７２時間、少なくとも約８４時間、少なくとも約９６時間、少なくとも約１０８時間、少なくとも約１２０時間、少なくとも約１３２時間、少なくとも約１４４時間、少なくとも約１５６時間、少なくとも約１６５時間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、または少なくとも約１４日間、前記皮膚治療薬を分泌する、Ｂ～Ｂ９－２のうちのいずれか１つの局所用薬学的組成物。

【0317】

Ｂ１１． 前記真菌細胞が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓである、Ｂ～Ｂ１０のうちのいずれか１つの局所用薬学的組成物。

【0318】

Ｂ１２． 前記皮膚治療薬が、タンパク質またはその機能的断片である、Ｂ～Ｂ１１のうちのいずれか１つの局所用薬学的組成物。

【0319】

Ｂ１３． 前記皮膚治療薬が、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｂ１２の局所用薬学的組成物。

【0320】

Ｂ１４． 前記皮膚治療薬が、成長因子もしくはその誘導体、または成長因子の阻害剤もしくはその誘導体である、Ｂ１３の局所用薬学的組成物。

【0321】

Ｂ１５． 前記成長因子が、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、形質転換成長因子－ベータ（ＴＧＦ－β）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｂ１４の局所用薬学的組成物。

【0322】

Ｂ１６． 前記皮膚治療薬が、抗菌及び／または抗炎症ペプチドである、Ｂ～Ｂ１５のうちのいずれか１つの局所用薬学的組成物。

【0323】

Ｂ１７． 前記抗菌及び／または抗炎症ペプチドが、カテリシジン抗菌ペプチド（ＬＬ－３７）またはその類似体、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ＲｃＡｌｂ－ＰｅｐＩＩ、ルシフェンシン、ルシフェンシンＩＩ、ルシリン、酢酸ペキシガナン（ＭＳＩ－７８）、Ｄ２Ａ２１／Ｄ４Ｅ１、グラニュリシン、合成グラニュリシン由来ペプチド、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｂ１６の局所用薬学的組成物。

【0324】

Ｃ．本開示は、（ｉ）第１の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第１の生真菌細胞と、（ｉｉ）第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞と、（ｉｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含み、前記第１の皮膚治療薬及び前記第２の皮膚治療薬が、異なる、薬学的組成物を提供する。

【0325】

Ｃ１． 前記第１の皮膚治療薬及び前記第２の皮膚治療薬が、独立して、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｃの薬学的組成物。

【0326】

Ｃ２． 前記第１の皮膚治療薬が、成長因子を含み、前記第２の皮膚治療薬が、ケモカインを含む、Ｃ１の薬学的組成物。

【0327】

Ｃ３． 前記第１の皮膚治療薬が、成長因子を含み、前記第２の皮膚治療薬が、サイトカインを含む、Ｃ２の薬学的組成物。

【0328】

Ｄ．本開示は、（ｉ）第１の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第１の生真菌細胞と、（ｉｉ）第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞と、（ｉｉｉ）第３の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第３の生真菌細胞と、（ｉｖ）薬学的に許容される担体と、を含み、前記第１の皮膚治療薬、前記第２の皮膚治療薬、及び前記第３の皮膚治療薬が、異なる、薬学的組成物を提供する。

【0329】

Ｄ１． 前記第１の皮膚治療薬、前記第２の皮膚治療薬、及び前記第３の皮膚治療薬が、独立して、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｄの薬学的組成物。

【0330】

Ｅ．本開示は、（ｉ）第１の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第１の生真菌細胞と、（ｉｉ）第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞と、（ｉｉｉ）第３の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第３の生真菌細胞と、（ｉｖ）第４の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第４の生真菌細胞と、（ｖ）薬学的に許容される担体と、を含み、前記第１の皮膚治療薬、前記第２の皮膚治療薬、前記第３の皮膚治療薬、及び前記第４の皮膚治療薬が、異なる、薬学的組成物を提供する。

【0331】

Ｅ１． 前記第１の皮膚治療薬、前記第２の皮膚治療薬、前記第３の皮膚治療薬、及び前記第４の皮膚治療薬が、独立して、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｅの薬学的組成物。

【0332】

Ｆ．本開示は、（ｉ）第１の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第１の生真菌細胞と、（ｉｉ）第２の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第２の生真菌細胞と、（ｉｉｉ）第３の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第３の生真菌細胞と、（ｉｖ）第４の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第４の生真菌細胞と、（ｖ）第５の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第５の生真菌細胞と、（ｖｉ）薬学的に許容される担体と、を含み、前記第１の皮膚治療薬、前記第２の皮膚治療薬、前記第３の皮膚治療薬、前記第４の皮膚治療薬、及び前記第５の皮膚治療薬が、異なる、薬学的組成物を提供する。

【0333】

Ｆ１． 前記第１の皮膚治療薬、前記第２の皮膚治療薬、前記第３の皮膚治療薬、前記第４の皮膚治療薬、及び前記第５の皮膚治療薬が、独立して、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｆの薬学的組成物。

【0334】

Ｆ２． 第６の皮膚治療薬を発現及び分泌するように遺伝子操作された第６の生真菌細胞を更に含み、前記第６の皮膚治療薬が、成長因子またはその誘導体、サイトカインまたはその誘導体、ケモカインまたはその誘導体、プロテアーゼ阻害剤またはその誘導体、細胞外マトリックスタンパク質またはその誘導体、成長因子の阻害剤またはその誘導体、抗菌及び／または抗炎症ペプチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｆの薬学的組成物。

【0335】

Ｇ．本開示は、治療を必要とする対象を治療するための方法であって、Ａ～Ｆ２のうちのいずれか１つの薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法を提供する。

【0336】

Ｇ１． 前記薬学的組成物が、局所投与のために製剤化される、Ｇの方法。

【0337】

Ｇ２． 前記薬学的組成物が、皮膚状態を治療するため、または美容処置を実行するために、前記対象に投与される、ＧまたはＧ１の方法。

【0338】

Ｇ３． 前記皮膚状態が、創傷、感染症、にきび、線維性障害、水疱性障害、炎症性状態、血管病変、皮膚癌、色素性乾皮症、色素障害、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｇ２の方法。

【0339】

Ｇ４． 前記皮膚状態が、創傷である、Ｇ３の方法。

【0340】

Ｇ５． 前記創傷が、糖尿病性潰瘍である、Ｇ４の方法。

【0341】

Ｇ６． 前記皮膚状態が、感染症である、Ｇ３の方法。

【0342】

Ｇ７． 前記皮膚状態が、にきびである、Ｇ３の方法。

【0343】

Ｇ８． 前記皮膚状態が、線維性障害である、Ｇ３の方法。

【0344】

Ｇ９． 前記線維性障害が、強皮症である、Ｇ８の方法。

【0345】

Ｇ１０． 前記皮膚状態が、水疱性障害である、Ｇ３の方法。

【0346】

Ｇ１１． 前記水疱性障害が、表皮水疱症である、Ｇ１０の方法。

【0347】

Ｇ１２． 前記皮膚状態が、炎症性状態である、Ｇ３の方法。

【0348】

Ｇ１３． 前記炎症性状態が、乾癬である、Ｇ１２の方法。

【0349】

Ｇ１４． 前記皮膚状態が、血管病変である、Ｇ３の方法。

【0350】

Ｇ１５． 前記皮膚状態が、皮膚癌である、Ｇ３の方法。

【0351】

Ｇ１６． 前記皮膚状態が、色素性乾皮症である、Ｇ３の方法。

【0352】

Ｇ１７． 前記皮膚状態が、色素障害である、Ｇ３の方法。

【0353】

Ｇ１８． 前記遺伝子操作された真菌細胞が、前記対象への投与後少なくとも約１２時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約６０時間、少なくとも約７２時間、少なくとも約８４時間、少なくとも約９６時間、少なくとも約１０８時間、少なくとも約１２０時間、前記対象への投与後少なくとも約１３２時間、少なくとも約１４４時間、少なくとも約１５６時間、少なくとも約１６５時間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、または少なくとも約１４日間、前記皮膚治療薬を分泌する、Ｇ～Ｇ１７のうちのいずれか１つの方法。

【0354】

Ｇ１９． 前記遺伝子操作された真菌細胞が、前記対象への投与後少なくとも約７２時間、前記皮膚治療薬を分泌する、Ｇ１８の方法。

【0355】

Ｇ２０． 前記薬学的組成物を前記対象に投与することが、前記薬学的組成物を患部に適応することを含む、Ｇ～Ｇ１７のうちのいずれか１つの方法。

【0356】

Ｇ２１． 前記薬学的組成物が、週に５回以下、週に４回以下、週に３回以下、週に２回以下、週に１回以下適応される、Ｇ２０の方法。

【0357】

Ｇ２２． 前記薬学的組成物が、週に３回以下適応される、Ｇ２１の方法。

【0358】

Ｇ２３． 前記薬学的組成物が、週に２回以下適応される、Ｇ２２の方法。

【0359】

Ｈ．本開示は、皮膚状態を治療するため、または美容処置を実行するための、Ａ～Ｆ２のうちのいずれか１つの薬学的組成物の使用を提供する。

【0360】

Ｈ１． 前記皮膚状態が、創傷、感染症、にきび、線維性障害、水疱性障害、炎症性状態、血管病変、皮膚癌、色素性乾皮症、色素障害、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、Ｈの使用。

【0361】

Ｈ２． 前記皮膚状態が、創傷である、Ｈ１の使用。

【0362】

Ｉ．本開示は、Ａ～Ｆ２の薬学的組成物を含む、キットを提供する。

【0363】

Ｊ．本開示は、Ｇ～Ｇ２３のうちのいずれか１つの方法を実行するための、キットを提供する。

【実施例】

【0364】

以下の実施例は、本明細書に開示された主題の単なる例示であり、決して限定事項とみなされるべきではない。

【0365】

実施例１：皮膚治療薬を発現及び分泌するための酵母の遺伝子修飾
この実施例は、真菌細胞における皮膚治療薬、ＥＧＦ及びレプチンの発現及び分泌を示す。酵母などの真菌細胞は、細菌細胞よりも優れているため、選択した。具体的には、酵母は大規模に発酵され、乾燥した形態で送達及び保存され、何世紀にもわたって家庭で人間によって安全に使用されてきた。主要な創傷治癒タンパク質因子は、真核生物タンパク質であり、酵母は、哺乳動物細胞内のそれらを模倣するために天然に類似し、かつ操作されたタンパク質折り畳みシャペロン、ジスルフィド結合形成、及び翻訳後機構を有するため、真核生物タンパク質の発現及び分泌に関して細菌よりも優れていることが周知である。酵母は、哺乳動物タンパク質の産生にも理想的であり、精製された哺乳動物タンパク質の大規模な商業生産のために産業界によって数十年間利用されてきた。細菌と同様に、酵母は、実験室で操作するための最も単純で最も強力な生物のうちの１つであり、酵母のために多くの合成生物学的ツールが開発されてきた。

【0366】

Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）は、創傷治癒タンパク質因子の送達のために選択されたのは、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅが単純な単細胞真核生物であるためである。Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、実験室でＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅを操作するための成長している合成生物学ツールボックスを含む強力な遺伝子ツールである。Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、発酵させ、乾燥させ、非常に大規模に安価かつ迅速に分配することができる。Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、真核生物であるため、より良好に適しており、翻訳後修飾された組換えヒトタンパク質の発現、例えばグリコシル化のために更に操作されている。これらの理由から、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、精製されたヒトタンパク質の大規模生産のために産業界で数十年間使用されてきた。加えて、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、多くの細菌とは異なり、概して、安全であると認識されている（ＧＲＡＳ）生物であるため、局所治療薬として理想的である。

【0367】

高コピー酵母プラスミドを、強い構成アルコールデヒドロゲナーゼ１プロモーター（ｐＡＤＨ１）、分泌経路のためのシグナルペプチド、Ｎ末端ＦＬＡＧタグ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号１０））、及び皮膚治療薬を用いて設計した。以下の皮膚治療薬を、高コピー酵母プラスミドにクローニングした：（１）表２及び３に示されるような、マウスＥＧＦ（ｍＥＧＦ）及びヒトＥＧＦ（ｈＥＧＦ）、（２）マウスレプチン（ｍＬｅｐｔｉｎ）及びヒトレプチン（ｈＬｅｐｔｉｎ）、（３）マウスＰＤＧＦ（ｍＰＤＧＦ）及びヒトＰＤＧＦ（ｈＰＤＧＦ）、ならびに（４）マウスＣＸＣＬ１２（ｍＣＸＣＬ１２）及びヒトＣＸＣＬ１２（ｈＣＸＣＬ１２）。表２は、生成されたプラスミド中の皮膚治療薬のアミノ酸及びヌクレオチド配列を提供し、表３は、生成されたプラスミドの要約を提供し、表４は、使用された株の概要を提供する。表５は、プロモーターのヌクレオチド配列を提供し、表６は、シグナルペプチドのアミノ酸及びヌクレオチド配列を提供する。

【表2-1】

【表2-2】

【表2-3】

【表2-4】

【表2-5】

【表2-6】

【表2-7】

【表2-8】

【表2-9】

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【表4】

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【表6-1】

【表6-2】

【0368】

Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株ＦＹ２５１を、ｐＡＤＨ１の構成的転写制御下での（１）ＦＬＡＧ－タグ－ヒト組換えＥＧＦキメラ、及び（２）ＦＬＡＧ－タグ－ヒトレプチンキメラの分泌のために、高いコピー数プラスミドで形質転換した。同様に、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株ＦＹ２５１を、マウス及びヒトＣＸＣＬ１２の分泌のために、高いコピー数プラスミドで形質転換した。ＦＹ２５１（ＭＡＴａ ｌｅｕ２Δ１ ｔｒｐΔ６３ ｕｒａ３－５２ ｈｉｓ３－２００）は、組換えタンパク質を分泌または発現しないため、親酵母株として使用した。酢酸リチウム法の修正版を使用して、酵母細胞を形質転換した。分泌ベクターにおいて、アルファ因子シグナルペプチドのｃＤＮＡは、プロモーターと、分泌される皮膚治療薬のｃＤＮＡとの間に位置付けられる。形質転換酵母を、標準条件下で２４時間、合成完全培地中で成長させ、その後、上清中のタンパク質発現レベルを分析した。定量的ウェスタンブロットを実行して、６ＸＨｉｓ－Ｓｍｔ３－ＦＬＡＧタンパク質の連続希釈を使用して、経時的な分泌タンパク質の濃度を定量し、これをＥ．ｃｏｌｉ内で発現させ、Ｎｉカラムを使用して精製し、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイを介して定量した。

【0369】

図３、図１１Ａ、図１１Ｂ、図１２Ａ、図１２Ｂ、図２８Ａ、図２８Ｂ、図２８Ｃ及び図２９に示されるように、操作酵母株は、創傷治癒製剤に必要な十分に高い力価でＥＧＦ、ＣＸＣＬ１２及びレプチンを分泌する。ｈＥＧＦの濃度は８０ｎｇ／ｍｌ、ｍＥＧＦの濃度は２００ｎｇ／ｍｌ、ｈＣＸＣＬ１２の濃度は４，０００ｐｇ／ｍｌ、ｍＣＸＣＬ１２の濃度は２，０００ｐｇ／ｍｌ、ｈＬＥＰの濃度は５５ｎｇ／ｍｌであった。

【0370】

ＥＬＩＳＡアッセイを実行して、遺伝子操作された酵母からのｍＣＸＣＬ１２、ｈＣＸＣＬ１２、ｍＬＥＰ、ｈＬＥＰ、ｍＥＧＦ及びｈＥＧＦの分泌を更に分析した。マウスＣＸＣＬ１２ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（参照番号：ａｂ１００７４１）、ヒトＣＸＣＬ１２ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（参照番号：ａｂ１００６３７）、マウスＥＧＦ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（参照番号：ａｂ２３４５６０）、及びヒトＥＧＦ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（参照番号：ａｂ１００５０４）をＡｂｃａｍから入手した。マウスＬｅｐｔｉｎ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（ＫＭＣ２２８１）及びヒトＬｅｐｔｉｎ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（ＫＡＣ２２８１）は、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）から入手した。ＤＹＫＤＤＤＤＫ－Ｔａｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ（Ｅ４７００）をＢｉｏＶｉｓｉｏｎから入手した。全てのアッセイは、製造業者の指示に従って行った。

【0371】

酵母株を最初に酵母選択培地中で２４時間インキュベートして、０．８のＯＤに到達させ、その後、０．１の開始ＯＤまで希釈し、３７℃で４８時間インキュベートした。試料を、インキュベート後２、５、７、１４、２４、及び４８時間で収集し、ＯＤを測定し、分泌タンパク質を含有する上清を収集し、遠心分離後－２０℃で保存した。ｍＥＧＦの分泌力価を測定するために、ｙＡＪ２８（ｐＡＪ２６で形質転換したＦＹ２５１）から上清を収集し、ｈＥＧＦの分泌力価を測定するために、ｙＡＪ３９（ｐＡＪ０２で形質転換したＦＹ２５１）から上清を収集し、ｍＣＸＣＬ１２の分泌力価を測定するために、ｙＡＪ３６（ｐＡＪ３７で形質転換したＦＹ２５１）から上清を収集し、ｈＬＥＰの分泌力価を測定するために、ｙＡＪ２７（ｐＡＪ２５で形質転換したＦＹ２５１）から上清を収集し、ｈＣＸＣＬ１２の分泌力価を測定するために、ｙＡＪ３５（ｐＡＪ３６で形質転換したＦＹ２５１）から上清を収集した。全ての試験を、３つの生体複製物において実行し、全ての試料を、低結合性エッペンドルフチューブ内で取り扱い、保存した。ＥＬＩＳＡアッセイを実行するために、収集した上清試料を、アッセイキットによって提供される対応する希釈緩衝液中で１０～１０，０００回更に希釈した。図１１Ａ及び１１Ｂに示されるように、遺伝子操作された酵母は、それぞれ、高い力価のｍＣＸＣＬ１２及びｈＣＸＣＬ１２を分泌した。同様に、遺伝子操作された酵母は、それぞれ図１２Ａ及び１２Ｂに示されるように、高い力価のｍＥＧＦ及びｈＥＧＦを分泌した。遺伝子操作された酵母はまた、図２９に示すように、高い力価のｈＬＥＰも分泌した。

【0372】

更なる分析を実行して、４８時間の期間、遺伝子操作された酵母の成長を分析した。図１３に示されるように、４つの操作酵母は全て、最初の５～６時間は遅滞期にあり、インキュベーションの５～６時間目からインキュベーションの１４時間までは対数期にあり、１４時間のインキュベーション後に定常期に達する。図１１Ａ、１１Ｂ、１２Ａ、及び１２Ｂに示される分泌力価と比較すると、組換えタンパク質の分泌力価は、酵母成長期と相関し、かつ比例している。

【0373】

実施例２：分泌された皮膚治療薬のインビトロでの生物学的活性
この実施例は、形質転換酵母によって発現及び分泌される皮膚治療薬が、インビトロで生物学的に活性であったことを示す。

【0374】

目的の分泌された皮膚治療薬の生物学的活性を検出するために、皮膚線維芽細胞及びケラチノサイト細胞を使用して、精製及び滅菌濾過された分泌タンパク質についてのインビトロ細胞ベースのアッセイを実行した。インビトロ創傷治癒スクラッチアッセイ及びｔｒａｎｓｗｅｌｌ遊走アッセイを、前述のように実行した。ＢｒｄＵ細胞増殖アッセイを実行し、細胞の増殖に対する標的剤の効果を研究する。

【0375】

分泌されたＦＬＡＧ－ｈＥＧＦ及びＦＬＡＧ－ＬＥＰキメラタンパク質の生物学的活性を試験するために、操作された酵母株を、３０℃で２４時間、５ｍｌの選択的培地中でインキュベートした。酵母培養物を遠心分離し、分泌剤を含む上清を収集した。Ａｍｉｃｏｎ遠心分離フィルター（３ｋＤａ）を使用して、分泌タンパク質を濃縮し、緩衝液交換した。次いで、濃縮溶液をＤＭＥＭ中で５ｍｌの最終濃度まで希釈した。

【0376】

スクラッチアッセイは、組織培養処理された６ウェルプレート中の原発性皮膚線維芽細胞（ＰＣＳ－２０１－０１０）に対して実行した。播種密度は、ウェル当たり０．３×１０^６個の細胞であり、細胞をＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ培地中で２４時間成長させ、７０～８０％のコンフルエンシーに達した。遺伝子操作された酵母の上清から得られた精製キメラタンパク質、ＦＬＡＧ－ｈＥＧＦ及びＦＬＡＧ－ＬＥＰを、その後、線維芽細胞に添加した。図４及び図３０Ａに示すように、ｈＥＧＦ及びｈＬＥＰは、培地単独中でインキュベートした細胞と比較して線維芽細胞の遊走を増強した。図４では、Ｓｕｐ ０７はｙＡＪ０７（ｈＥＧＦ）由来の上清であり、Ｓｕｐ ０６はｙＡＪ０６（ｈＥＧＦ）由来の上清であり、Ｓｕｐ ３４はｙＡＪ３４（ｈＬＥＰ）由来の上清である。同様に、ｈＣＸＣＬ１２は、図３０Ｂに示されるように、培地単独中でインキュベートした細胞と比較して、線維芽細胞の遊走を増強した。

【0377】

追加のスクラッチアッセイを、皮膚治療薬を発現及び分泌する酵母を線維芽細胞と共培養することによって実行した。このアッセイのために、線維芽細胞を４８時間インキュベートして、２４ウェルプレート中で８０％コンフルエンシーに達した。次に、２００μｌのピペットチップを使用して各ウェルにスクラッチを形成し、細胞を滅菌ＰＢＳで洗浄し、新しい成長培地を各ウェルに添加した。次に、細胞培養挿入物（孔径＝０．４５μｍ）をウェル内に入れ、線維芽細胞成長培地に溶解した操作酵母を挿入物内に添加した。酵母と線維芽細胞の２４時間の共培養後に、スクラッチの閉鎖を監視した。図５Ｂに示すように、０．１２（３．６×１０^６）～０．４（１．２×１０^７）のＯＤでＥＧＦ（ｙＡＪ０６）を分泌する遺伝子操作された酵母は、対照（ＯＤ＝１の酵母培養物、１ｍｌ当たり３×１０^７個の酵母細胞を含有する）と比較して創傷の閉鎖を改善した。

【0378】

細胞増殖アッセイを更に実行して、目的の因子の生体活性を研究した。増殖アッセイは、原発性皮膚線維芽細胞に対して実行した。図３１Ａ～３１Ｃに示されるように、遺伝子操作された酵母（それぞれ、ｙＡＪ３９、ｙＡＪ２７、及びｙＡＪ３５）の上清液由来のｈＥＧＦ、ｈＬＥＰ、及びｈＣＸＣＬ１２は、分泌タンパク質が生物学的に活性であることを確認する対照と比較して、線維芽細胞の増殖を増強し、細胞増殖を促進し、これは、創傷治癒及び皮膚状態の治療にとって重要である。

【0379】

実施例３：酵母ヒドロゲルの生成
この実施例は、酵母ヒドロゲルと創傷床との間の底層を含む生酵母寒天ヒドロゲルの生成を記載する。底層は、酵母から分泌されるタンパク質に対して透過性であるが、酵母細胞に対して透過性ではない。この層は、選択された酵母株が病原性ではなく、ＧＲＡＳであるにもかかわらず、酵母が創傷床に直接接触する可能性を低減する。細孔径０．２μｍの親水性ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）は、ＰＴＦＥが不活性で生体適合性があり、医学及び医療機器の構築に広く使用されているため、底層に選択された。

【0380】

実施例１からのｈＥＧＦを分泌する酵母を選択的培地中で３０℃で２４時間インキュベートし、次いで遠心分離を介してペーストに組み込んだ。次に、０．７％ｗ／ｖ寒天ヒドロゲルを、このペーストを、滅菌条件下で０．７％ｗ／ｖ寒天（Ｔ＜４０℃）を含有する新たに調製された選択的培地に溶解することによって調製した。０．７％ｗ／ｖ寒天溶液は、周囲温度に達したときにヒドロゲルを形成した（図６）。インビボ実験のための生酵母ヒドロゲル包帯を調製するために、酵母含有寒天溶液をピペットアウトし、オートクレーブ化した親水性ＰＴＦＥ膜（孔径＝０．２μｍ）上で固化させた。

【0381】

寒天ヒドロゲル中の分泌タンパク質の自由拡散を試験するために、生酵母を含有する０．７％ｗ／ｖ寒天スラブを含有する生酵母を、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜の上に３０℃で２４時間インキュベートした。ＰＶＤＦ膜は、アミノ酸及びタンパク質結合に対して非特異的かつ高い親和性を有し、ヒドロゲルを通って拡散する分泌タンパク質を結合し、固定化することができる。次に、抗ＦＬＡＧ抗体を使用したウェスタンブロットを使用して、タンパク質の拡散を調べた。酵母ヒドロゲルを取り除き、確立されたウェスタンブロットプロトコル及び抗ＦＬＡＧ抗体を使用してＰＶＤＦ膜を開発した。図６に示すように、分泌されたタンパク質は、２４時間の時間枠内に高い力価でヒドロゲルを通過した。これらのデータは、ＦＬＡＧ－ｈＥＧＦ及びＦＬＡＧ－ｈＬＥＰが寒天ヒドロゲル中で自由に拡散することができることを示す。

【0382】

同様の実験を上記と同じ条件下で実行したが、ＰＴＦＥ膜を酵母寒天ヒドロゲルとＰＶＤＦ膜との間に配置した。酵母ヒドロゲル及びＰＴＦＥ膜を取り除き、ＰＶＤＦ膜を開発した。図７Ａ～Ｄに示されるように、ｈＥＧＦは、寒天ヒドロゲルだけでなく、マウスへの適用に必要とされるＰＴＦＥ膜も容易に通過する。同様に、図７Ｉに示されるように、ＬＥＰ及びＣＸＣＬ１２は、ヒドロゲル及びＰＴＦＥ膜を通して自由に拡散することができる。

【0383】

次に、酵母細胞及び酵母胞子に対する親水性ＰＴＦＥ膜（孔径＝０．２μｍ）の不透過性を分析した。ＰＴＦＥ膜を酵母ヒドロゲルと寒天プレートとの間に挟んだ（図７Ｅ）。酵母ヒドロゲル及び寒天プレートは、同じ酵母栄養製剤及び寒天パーセンテージを含有した。このシステムを３０℃で２４時間インキュベートし、続いて酵母ヒドロゲル及びＰＴＦＥ膜を取り除き、寒天を３０℃で更に４８時間インキュベートした。酵母がＰＴＦＥ膜を通過することができる場合、酵母コロニーは寒天プレート上で成長する。図７Ｆ～Ｈに示すように、７２時間の成長後でも、寒天プレート上に酵母コロニーは見られなかった。これらのデータは、ＰＴＦＥ膜が酵母胞子及び細胞に対して透過性ではないことを示す。

【0384】

３層ヒドロゲル包帯を介して分泌されるタンパク質が生物学的に活性であるかどうかを確認するために、ヒト皮膚線維芽細胞（ＨＤＦ）についてインビトロスクラッチアッセイを実行した。細胞遊走を研究するために通常ボイデンチャンバーアッセイで使用されるウェル挿入物を使用した。ＨＤＦ細胞を下部チャンバ内で培養し、７０～８０％のコンフルエンシーに達した後にスクラッチを形成した。その時点で、生酵母包帯を上部チャンバ上に配置し、システムを、２４時間インキュベートした後、下部チャンバ内のギャップ（スクラッチ）サイズを測定した。図５Ｂに示されるように、高濃度では、酵母細胞は、哺乳動物細胞に対して毒性であった。酵母細胞は、その代謝と急速な倍増の結果として、（ｉ）培養培地から栄養素を枯渇させ、したがって哺乳動物細胞の成長を奪い、（ｉｉ）経時的に、培養培地のｐＨを哺乳動物細胞にとってより酸性かつ非理想的にし、（ｉｉｉ）感受性培養哺乳動物細胞に対して毒性であるエタノールを産生するため、この結果は、驚くべきことではなかった。しかしながら、低酵母濃度では、酵母分泌タンパク質因子の生物活性が酵母成長毒性を克服して、哺乳動物細胞の遊走及び増殖速度を向上させたことは驚くべきことであった（図５Ｂ）。図５Ｂに示されるように、１．５×１０^７細胞／ｍｌ以下の濃度が、創傷治癒に有益であった。

【0385】

上記の実験の結果に基づいて、３層の生酵母ヒドロゲル包帯を調製した。生酵母ヒドロゲル包帯は、（ｉ）開放性創傷床と外環境との間のバリアとなる外側／接着剤層、（ｉｉ）生酵母、栄養素、緩衝液、及び抗生物質などの潜在的な補助活性成分を含む生酵母含有培地（この培地は、分泌創傷治癒因子の拡散を可能にする）、ならびに（ｉｉｉ）分泌因子を創傷床に拡散させることを可能にするが、酵母細胞が皮膚及び創傷床に到達するのを阻止する、生酵母培地と創傷床との間の半透過性層を含む。

【0386】

この実施例では、図８Ｂに示されるように、生酵母ヒドロゲル包帯は、ａ）物理的バリアとして機能し、包帯を創傷の上部の所定の位置に保持するのを助ける上部のＴＥＧＡＤＥＲＭ（商標）フィルム（ポリウレタン膜で構成される）、ｂ）皮膚治療薬をインサイチュで分泌する生酵母ヒドロゲル、ならびにｃ）創傷床及び酵母ヒドロゲルの境界として位置する０．２μｍの孔径を有するＰＴＦＥ膜、の３つの層とともに含まれた。図７に示されるように、０．２μｍの孔径を有するＰＴＦＥ膜は、分泌タンパク質に対しては透過性であったが、酵母細胞に対しては不透過性であった。

【0387】

実施例４：酵母ヒドロゲル包帯によるマウスの創傷の治療
この実施例は、糖尿病マウスモデルにおける創傷を治療するための実施例３の３層酵母ヒドロゲル包帯（図８Ｄの概略図）の使用を示す。ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）処置糖尿病マウスは、糖尿病及び創傷治癒研究のための十分に確立されたモデルである。具体的には、ＳＴＺ投与マウスは、これらのマウスは創傷治癒が損なわれているため、優れたモデルである。

【0388】

実施例３の生酵母製剤の局所投与の効果下での糖尿病性創傷の治癒力学の変化を調べるために、ＳＴＺ（４０ｍｇ／ｋｇ）を５日間連続して腹腔内注射することによって、８匹のＣ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウスにおいて糖尿病を誘導した。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ストック番号：０００６６４｜Ｂ６）をＪａｘから入手した。この間、マウスに水中１０％スクロースを与えて、マウスが低血糖になった場合に任意に飲ませ、通常の飼料で維持した。図２３に示されるように、ＳＴＺを投与されたマウスにおいて、経時的な体重及び血糖濃度の増加が観察され、そのようなマウスが首尾よく糖尿病になったことが確認された。

【0389】

マウスを剃毛し、イソフルランを使用して麻酔し、ＳＴＺ処置の１４日後に背中正中線領域に沿って各側に直径８ｍｍの全厚切除創傷を設けた（図８Ａ）。創傷治癒有効性を評価するために、マウスに、ＰＴＦＥ上の陰性対照寒天ヒドロゲルまたはＰＴＦＥ上のＥＧＦ分泌酵母を含む寒天ヒドロゲルのいずれかを局所投与した（図８Ｂ～８Ｃ）。ＴＥＧＡＤＥＲＭ（商標）包帯をヒドロゲルの上部に使用して、製剤を所定の位置に保ち、自然な皮膚収縮を防止した。

【0390】

８匹のマウスのうちの５匹において、ＴＥＧＡＤＥＲＭ（商標）包帯は、３日間を超えて所定の位置には留まらなかった。この結果、創傷表面は空気に対して開放されたままであり、酵母処置または対照処置の局所包帯が外れ、治癒及び新しい皮膚層の形成のためではなく、自然な皮膚収縮の結果として創傷閉鎖をもたらした。これらの５匹のマウスからのデータを考慮せず、ＴＥＧＡＤＥＲＭ（商標）を所定の位置に維持した残りの３匹のマウスの創傷からのデータを分析した。創傷状態及びマウスのウェルビーイングを２４時間ごとに監視し、既存の包帯を取り外し、皮膚を洗浄した後、新しい製剤／包帯を各マウスに毎日適用した。各マウスの写真を毎日撮影し、ｉ）古い包帯を除去する前、及びｉｉ）古い包帯を取り外した後の各創傷部位を撮影して、創傷面積を定量した。創傷閉鎖は、０日目と比較した創傷面積の相対変化として表した。手術後８日目に、動物を安楽死させ、創傷を切除し、組織学的評価のために採取した。

【0391】

図９Ａ～９Ｂに示されるように、トランスジェニックＥＧＦ分泌酵母の局所適用は、処置されたマウスにおいて、いかなる感染症、炎症、または過酷な免疫応答も引き起こさなかった。加えて、生酵母創傷治癒製剤は、糖尿病マウスにおける創傷治癒を増強した。

【0392】

対照寒天の局所適用と比較して、トランスジェニック酵母の局所適用から生じる創傷修復の質を評価するために、ヘマトキシリン－エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を、実験の８日目に切除されたマウス創傷に対して実行した。図１０のＨ＆Ｅ染色からの画像は、細胞増殖、コラーゲン形成、堆積、及び再上皮化に関する情報を提供した。Ｈ＆Ｅ染色された切片の結果は、対照（図１０Ｂ）と比較して、ＥＧＦ分泌酵母処理を用いた試料（図１０Ａ）において、より良い細胞増殖、動員、及びより秩序正しい組織パターンを示した。

【0393】

これらのデータは、以下のことを示している。（ｉ）操作酵母は、ヒドロゲル製剤において高力価で創傷治癒因子を分泌することができ、（ｉｉ）分泌因子は、ヒドロゲル中で自由に拡散することができ、（ｉｉｉ）因子は、ＰＴＦＥ膜を通して拡散することができ、（ｉｖ）ＰＴＦＥ膜は、酵母細胞及び酵母胞子の両方に対して不透過性であり、（ｖ）生酵母ヒドロゲル製剤は、背側マウス創傷上の局所適用に使用することができ、（ｖｉ）酵母の局所適用は、マウス及び創傷部位において感染症、炎症、または徹底的な免疫応答を引き起こさず、（ｖｉｉ）両側的に傷をつけられたマウスにおける創傷治癒進行を定量し、制御し、処置された創傷を同じマウスで比較することができ、（ｖｉｉｉ）操作酵母ヒドロゲル包帯の局所適用は、糖尿病マウスにおける創傷治癒を加速させることができる。

【0394】

実施例５：創傷病変の全トランスクリプトーム分析
この実施例は、創傷治癒プロセス全体を通して異なる時点での創傷病変からのｍＲＮＡの分析を提供する。この分析は、どの経路が活性化され、どのプロセスが抑制されるかを決定することによって、適用された製剤の作用機構に関する情報を提供し、より高い解像度で治癒プロセスのより深い理解を与える。

【0395】

創傷／組織試料を、（病変のパラホルムアルデヒド固定の前に）ｍＲＮＡ配列決定のために切断する。試料を均質化し、ｍＲＮＡを、確立されたポリ（Ａ）選択に続いて、総ＲＮＡから濃縮する。Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＴｒｕＳｅｑ ＲＮＡ ｐｒｅｐ ｋｉｔをライブラリ調製に使用し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｈｉｓｅｑ２０００を配列決定に使用する。ヒトゲノムは、リードをマッピングするための参照として使用される。遺伝子発現データは、アノテーション、視覚化、及び統合された発見（ＤＡＶＩＤ）のためのデータベースを使用して、ゲノム情報及び遺伝子セット濃縮を外挿することによって、シグナル伝達経路の形態で評価される。これは、各トランスジェニック酵母製剤及びトランスジェニック酵母によって分泌される各創傷治癒因子の局所適用に応答して、通常の条件と比較してどの経路活性が上方／下方調節されるかを例証する。

【0396】

実施例６：酵母群集
創傷治癒のための生酵母ヒドロゲル製剤の主な利点は、合成生物学の分野の進歩に起因する設計のモジュール性である。相補的経路を介して作用する２つまたは３つの創傷治癒因子の共送達は、製剤を使用して、全体的な創傷治癒を改善することができる。例えば、ＰＤＧＦ結合及び二量体化時のＰＤＧＦＲのリン酸化は、ＰＬＣγ、ＰＩ３Ｋ及びいくつかのＭＡＰＫ経路を誘発し、ＥｒｂＢ１へのＥＧＦ結合は、細胞型に応じて、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ１／２、ＰＩ３Ｋ、Ｒａｃ－及びＥＲＫ依存性経路の活性化をもたらす。ＬＥＰへの結合時のＬＥＰＲの活性化は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、及びＥＲＫ１／２経路を誘発し、ＣＸＣＲ４へのＣＸＣＬ１２の結合は、Ｅｒｋ／ＥＬＫ、ＡＰ－１、及びＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路を活性化させる。

【0397】

それぞれが異なる皮膚治療薬を分泌する少なくとも２つの酵母株または２つ以上の創傷治癒因子を分泌する酵母株を含む酵母群集は、皮膚状態を治療するためのより多くの創傷治癒シグナル伝達経路を刺激するために投与され得る。例えば、ＥＧＦとＣＸＣＬ１２またはＰＤＧＦとレプチンの同時送達は、より多くの創傷治癒シグナル伝達経路を活性化させることができる。図１８に示されるように、ｍＥＧＦ分泌酵母及びｍＣＸＣＬ１２分泌酵母の混合物を含有する酵母群集で処置した２８ｍｍ^２の創傷は、対照ヒドロゲルで処置した創傷よりもはるかに速く治癒した。同様に、初期サイズが４０ｍｍ^２の創傷について、酵母群集（ｍＥＧＦ分泌酵母及びｍＣＸＣＬ１２分泌酵母の混合物）による処置は、対照ヒドロゲルを受けた創傷よりもはるかに速く治癒させた（図１９Ｃ及び１９Ｄ）。これらの結果は、酵母群集で処置した創傷が、１つの組換え創傷剤分泌酵母株のみで処置した創傷よりも良好で安定した治癒率を有することを示す（図１９Ｄ）。

【0398】

実施例７：糖尿病マウスの創傷の治療
ＣＸＣＬ１２またはＥＧＦを発現及び分泌する遺伝子操作された酵母を適用して糖尿病マウスの創傷を治療する有効性を分析するための追加の実験を実行した。１５匹のＳＫＨ１－Ｅｌｉｔｅマウス（皮膚科学研究で頻繁に使用される無毛マウス）をＳＴＺで処置して、実施例４に記載されるように糖尿病を誘発した。２週間後、図１４に示されるように、５ｍｍ生検パンチを使用して、各マウスの背部に４つの切除創傷を作成し、１８ｍｍ^２～５０ｍｍ^２の範囲切除創傷を合計６０個生成した。１０匹のマウスについて、各マウスにおいて、１つの創傷をｍＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲル包帯で、１つをｍＣＸＣＬ１２分泌ヒドロゲル包帯で、１つを酵母群集（ｍＥＧＦ分泌酵母及びｍＣＸＣＬ１２分泌酵母の混合物）を含有するヒドロゲル包帯で、及び対照寒天ヒドロゲル包帯で処置した。５匹のマウスについて、各マウスにおいて、実施例４に記載されるように、１つの創傷を、ヒドロゲル包帯に溶解した精製組換えｍＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）で処置し、１つの創傷を、ヒドロゲル包帯に溶解した精製組換えｍＣＸＣＬ１２（１００ｎｇ／ｍｌ）で処置し、１つの創傷を、ヒドロゲル包帯に溶解した精製組換えｍＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）及び精製組換えｍＣＸＣＬ１２（１００ｎｇ／ｍｌ）の両方の混合物で処置し、１つの創傷を、対照酵母ヒドロゲル包帯で処置した。

【0399】

初期サイズが２４ｍｍ^２の創傷の場合、ｍＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲルまたはｍＣＸＣＬ１２分泌酵母ヒドロゲルによる処置は、対照ヒドロゲルを受けた創傷よりも速くかつ良好に治癒した（図１５Ａ～１５Ｂ）。加えて、ヒドロゲル中の精製組換えｍＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）またはヒドロゲル中の精製組換えｍＣＸＣＬ１２（１００ｎｇ／ｍｌ）で処置した創傷も、対照ヒドロゲルを受けた創傷よりも速く及び良好に治癒した（図１５Ａ～１５Ｂ）。また、図１５Ａに示すように、ヒドロゲル中の精製組換えｍＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）で処置した創傷よりも、ｍＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲルで処置した創傷の方が早く治癒した。同様に、図１５Ｂに示すように、ヒドロゲル中の精製組換えｍＣＸＣＬ１２（１００ｎｇ／ｍｌ）で処置した創傷よりも、ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母ヒドロゲルで処置した創傷の方が早く治癒した。

【0400】

ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母の有効性を、ｍＥＧＦ分泌酵母と比較した。図１６Ａに示すように、初期サイズが２４ｍｍ^２の創傷については、ｍＥＧＦ分泌酵母による処置は、ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母で処置した創傷よりも早く治癒させた。同様に、組換えｍＥＧＦで処置した創傷は、組換えｍＣＸＣＬ１２で処置した創傷よりも速く治癒した（図１６Ｂ）。初期サイズが２８ｍｍ^２の創傷については、ｍＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲルまたはｍＣＸＣＬ１２分泌酵母ヒドロゲルによる処置は、対照寒天ヒドロゲルで処置した創傷よりも速く治癒させた（図１７Ａ）。加えて、組換えｍＥＧＦを受けた創傷は、対照ヒドロゲルを受けた創傷よりも早く治癒し（図１７Ｂ）、対照酵母ヒドロゲルで処置した創傷は、寒天ヒドロゲルを受けた創傷よりもわずかに速く治癒した（図１７Ｃ）。

【0401】

更なる実験を実行して、２つ以上の皮膚治療薬の投与の有効性を分析した。図１８に示すように、ｍＥＧＦ分泌酵母及びｍＣＸＣＬ１２分泌酵母の混合物を含有する酵母群集で処置した創傷は、対照ヒドロゲルを受けた創傷よりもはるかに速く治癒した。両方の組換え因子の混合物（組換えｍＥＧＦ（１００ｎｇ／ｍｌ）及び組換えｍＣＸＣＬ１２（１００ｎｇ／ｍｌ）の混合物）で処置した創傷は、対照ヒドロゲルを受けた創傷よりもはるかに速く治癒する（図１８）。

【0402】

初期サイズが４０ｍｍ^２の創傷の場合、ｍＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲルまたはｍＣＸＣＬ１２分泌酵母ヒドロゲルによる処置は、対照ヒドロゲルを受けた創傷よりも速く良好に治癒させた（図１９Ａ～１９Ｂ）。加えて、酵母群集（ｍＥＧＦ分泌酵母とｍＣＸＣＬ１２分泌酵母の混合物）で処置した創傷は、対照ヒドロゲルを受けた創傷よりもはるかに早く治癒した（図１９Ｃ及び１９Ｄ）。酵母群集で処置した創傷は、１つの組換え創傷剤分泌酵母株のみで処置した創傷よりも良好で安定した治癒率を有した（図１９Ｄ）。

【0403】

初期サイズが５０ｍｍ^２の創傷について、全厚創傷に関する４つの異なる条件（各群についてｎ＝４）を試験した。試験群は、（ｉ）ｍＥＧＦ分泌酵母を含有するｙＡＪ２８－ヒドロゲル包帯、（ｉｉ）ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母を含有するｙＡＪ３６－ヒドロゲル包帯、（ｉｉｉ）ＦＹ２５１－ヒドロゲル包帯（我々の対照生酵母ヒドロゲル包帯）、及び（ｉｖ）酵母を含有しない寒天－ヒドロゲル包帯であった。図２４は、ＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲル包帯で処置した創傷が、対照酵母ヒドロゲル包帯で処置した創傷よりもはるかに速く治癒したことを示す。同様に、図２５は、ＣＸＣＬ１２分泌酵母ヒドロゲル包帯で処置した創傷も、対照酵母ヒドロゲル包帯で処置した創傷よりも早く治癒することを示す。

【0404】

初期サイズが６０ｍｍ^２の創傷の場合、ｍＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲルまたはｍＣＸＣＬ１２分泌酵母ヒドロゲルによる処置は、対照ヒドロゲルを受けた創傷よりも速く良好に治癒させた（図２０Ａ～２０Ｂ）。図２０Ｃに提供されるデータは、対照酵母ヒドロゲルを受けた創傷の治癒を対照寒天ヒドロゲルと比較する。対照酵母は、ｍＣｈｅｒｒｙ蛍光タンパク質を発現するが、いかなる組換えタンパク質も分泌しない。

【0405】

ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母で処置した糖尿病マウスにおける創傷治癒プロセスのタイムラインは、各時点において、ｍＣＸＣＬ１２分泌酵母ヒドロゲルを受けた創傷が、対照で処置した創傷よりも早く治癒することを示した（図２１Ａ）。同様に、ｍＥＧＦ分泌酵母で処置した糖尿病マウスにおける創傷治癒プロセスのタイムライン中の各時点において、創傷は、対照で処置した創傷よりも早く治癒した。

【0406】

異なる治癒段階のタイミング及び治癒の異なる段階での細胞プロセスの質を更に研究するために、例えば、適切な治癒を確認するために、トランスジェニック酵母創傷病変の局所適用の結果を、染色のために収集し、各マウス研究群から免疫組織化学（ＩＨＣ）分析を異なる時点（２日目、４日目など）で実行した。

【0407】

これらの創傷病変を異なる時点で収集するために、各群からのマウスを、瘢痕化後の創傷病変の切除のために無作為に選択した。選択されたマウスは、将来の時点のために実験から外れた。創傷病変を、ＤＡＰＩ染色、ならびにＫ１４染色、Ｋ１０染色、ロリクリン、ファロジン、Ｋｉ６７染色及びＣＤ３１染色に基づくＩＨＣ分析で評価した。Ｋｉ６７染色を使用して、創傷部位での細胞増殖を視覚化し、ＣＤ３１免疫染色（病変内のマクロファージを標的とする）を使用して、創傷部位での動物の炎症応答を分析した。Ｋ１４を基底ケラチノサイトの研究に使用し、Ｋ１０を基底上ケラチノサイトの研究に使用し、ロリクリンを顆粒層及び角質化層の研究に使用し、Ｋｉ４７を増殖細胞の研究に使用し、ファロイジンをＦ－アクチン細胞骨格の研究に使用した。

【0408】

Ｋ５、Ｋ１０及びＫ１４染色は、ＥＧＦ分泌酵母ヒドロゲル包帯及びＬＥＰ分泌ヒドロゲル包帯で処置した創傷が、対照ヒドロゲル包帯で処置した創傷よりも表皮が厚いことを示した（図３３～３５）。ロリクリン染色は、全ての処理条件において角質化層の適切な形成を示す（図３６）。ＣＤ３１染色は、組換えタンパク質ヒドロゲル包帯で処置した創傷が最高の血管形成密度を含み、対照酵母ヒドロゲル包帯で処置した創傷が最小量の血管形成を有したことを示した（図３３）。同様に、ＥＧＦ分泌酵母で処置した創傷は、ＬＥＰ分泌酵母で処置した創傷よりも良好な血管形成を有した（図３３）。

【0409】

各処置の治癒率に対する初期創傷サイズの効果を視覚化するために、初期創傷サイズの群についての創傷サイズの進行または各処置をグラフ化した。予想通り、より小さな創傷サイズ（２４ｍｍ^２）の創傷は、より大きな初期創傷サイズ（４０ｍｍ^２）の創傷よりもはるかに速く治癒した（図２６Ａ～２６Ｄ）。

【0410】

開示された操作酵母で処置した創傷の治癒の増強が、皮膚収縮（ヒトではなくマウスでの創傷治癒中に起こる）ではなく、細胞増殖及び細胞遊走の増加などの機構から生じることを確実にするために、ヒドロゲル創傷包帯を、副木を施した（ｓｐｌｉｎｔｅｄ）創傷モデルに配置した。６つの異なる包帯を試験した：５０ｍｍ^２の切除創傷（各創傷がその周囲に縫合された医療グレードのシリコーンリング（副木）で支持されている）上の、（ｉ）ｙＡＪ２８－ヒドロゲル包帯（ＥＧＦ分泌酵母）、（ｉｉ）ｙＡＪ３０－ヒドロゲル包帯（ＬＥＰ分泌酵母）、（ｉｉｉ）ＦＹ２５１－ヒドロゲル包帯（対照酵母）、（ｉｖ）寒天－ヒドロゲル包帯、（ｖ）ｒｍＥＧＦヒドロゲル包帯、及び（ｖｉ）ｒｍＬＥＰヒドロゲル包帯（図３２Ａ）。以前の実験と同様に、ＳＫＨ－１マウスは、ＳＴＺ処置され、傷をつける前に安定して糖尿病であり、各マウスの背部に２つの全厚創傷を作成した。各試験群を８回繰り返して研究した。結果（図３２Ａ～３２Ｂ）は、操作酵母包帯（ｙＡＪ２８またはｙＡＪ３０を含有する）で処置した創傷が、対照酵母包帯で処置した創傷よりも急速に縮小したことを示した。更に、操作酵母包帯で処置した創傷は、１００ｎｇ／ｍｌの組換えタンパク質を含有する包帯で処置した創傷よりもわずかに速く閉鎖した。更に、この研究（副木を施した創傷）では、治癒プロセス中に切除創傷の上部に外層の形成が観察された。この層は、創傷後１日目～５日目に形成された。特定の理論に限定されることなく、この層は、肉芽組織またはかさぶたのいずれかであり得る。興味深いことに、この層は、寒天ヒドロゲル包帯または対照酵母ヒドロゲル包帯で処置した創傷よりも、操作酵母ヒドロゲル包帯（ｙＡＪ２８またはｙＡＪ３０を含有する包帯）で処置した創傷で早く出現した。特定の理論に限定されることなく、この層の形成は積極的な治癒の兆候であり得る。

【0411】

更なる分析を実行して、ヒドロゲル中に存在する酵母がヒドロゲルから創傷床を通って、処置したマウスの血流に拡散したかどうかを決定した。処置からの酵母が創傷床を介してマウスの身体に拡散した場合、それは血液中に存在し、対照酵母がｍＣｈｅｒｒｙを発現するため、ｍＣｈｅｒｒｙ蛍光を測定することによって検出することができる。８日間の処置後、ｍＣｈｅｒｒｙ酵母対照ヒドロゲルで処置した４匹のマウスの顎下静脈から１００μｌの血液を採取し、血液を５ｍｌの酵母成長培地中で混合し、３０℃で２４時間及び４８時間インキュベートし、各時点で蛍光を測定した。図２２に示されるように、ｍＣｈｅｒｒｙ蛍光は、マウス血液試料から検出されず、酵母が創傷床を介して循環に入らなかったことを確認した。

【0412】

この実施例で実行された実験の結果は、操作された生酵母包帯で処置した創傷が、対照包帯で処置した創傷よりも早く治癒することを示す。加えて、処置した組織の染色は、操作された生酵母ヒドロゲル包帯の適用が、創傷床、新しく形成された皮膚層、及び治癒プロセス全体の顕微鏡レベルの改善をもたらすことを示す。

【0413】

実施例８：乾癬の治療
乾癬は、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスの調節解除によって引き起こされる典型的な自己免疫疾患であり、乾癬に対する免疫療法は、臨床的に有効であることが示されている。血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は、血管新生の強力なメディエーターである。乾癬療法には、典型的には、抗体ベースまたは融合タンパク質ベースの生物学的療法が含まれる。これらには、Ｔ細胞機能を妨害する生物学的作用物質、ＴＮＦ－αアンタゴニスト、抗ＩＬ－１７作用物質、ならびにＩＬ－１２及びＩＬ－２３の相互サブユニットｐ４０を結合することによってそれらの作用を防止する作用物質が含まれる。

【0414】

この実施例は、乾癬の治療のためのＩＬ－４の使用を示す。ＩＬ－４は、１２９アミノ酸のタンパク質であり、２つのアルギニン残基（３８位及び１０５位）でグリコシル化され、３つのジスルフィド結合を含む。ＩＬ－４は、ＩＬ－４を発現及び分泌するように遺伝子操作された局所適用される酵母によって、患部に局所投与される。ＩＬ－４を発現及び分泌するために、酵母は、強い構成アルコールデヒドロゲナーゼ１プロモーター（ｐＡＤＨ１）または他の酵母プロモーター、酵母アルファ因子プレプロシグナルペプチドなどの分泌経路のためのシグナルペプチド、及びＩＬ－４をコードする遺伝子で設計された高コピー酵母プラスミドで形質転換される。タンパク質分泌及び分泌力価を研究するために、ウェスタンブロッティング及びＥＬＩＳＡアッセイを利用する。生物学的活性を評価するために、細胞増殖アッセイは、ＴＦ－１ヒトまたはマウス赤白血病細胞を使用して実行される。

【0415】

実施例９：表皮水疱症の治療
表皮水疱症は、皮膚の構造タンパク質の遺伝的欠陥によって引き起こされる障害のファミリーであり、皮膚及び粘膜が異常に脆弱になり、簡単に破れて水疱を形成する。米国表皮水疱症登録簿（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｐｉｄｅｒｍｏｌｙｓｉｓ Ｂｕｌｌｏｓａ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ）を通じて収集された統計に基づいて、米国では１００万人の生児当たり２０人の新生児にＥＢが発生すると推定されている。ＥＢ有病率は、１／１８，０００生児と推定される。ＥＢを持つ人の正確な数は不明であるが、米国では２５，０００～５０，０００人がＥＢを持っていることが推定されている。

【0416】

表皮水疱症の主な種類には、単純性表皮水疱症、半接着斑表皮水疱症（ｈｅｍｉｄｅｓｍｏｓｏｍａｌ ｅｐｉｄｅｒｍｏｌｙｓｉｓ ｂｕｌｌｏｓａ）、接合部型表皮水疱症、及び栄養障害型表皮水疱症が含まれる。劣性栄養障害型ＥＢ（ＲＤＥＢ）として知られるＥＢの１つの特に重篤な形態は、ＶＩＩ型コラーゲンと呼ばれるタンパク質をコードする遺伝子が欠損または欠失している場合に生じる。このタンパク質がなければ、皮膚の２つの主な層は真皮・上皮接合部（ＤＥＪ）に適切に接着せず、分離する傾向があり、水疱及び感染症のリスクを引き起こす。

【0417】

この実施例は、ＥＢの治療のためのＶＩＩ型コラーゲンの使用を示す。ＶＩＩ型コラーゲンは、ＶＩＩ型コラーゲンを発現及び分泌するように遺伝子操作された局所適用される酵母によって、患部に局所投与される。

【0418】

実施例１０：皮膚線維症及び強皮症の治療
皮膚線維症は、皮膚制限性障害及び全身性障害で一般的に見られる重篤な臨床状態である。皮膚線維症治療の目標は、過剰な量の細胞外マトリックスを産生する異常に活性化された皮膚線維芽細胞の回復である。皮膚線維症は、ＴＧＦ－β１のペプチド阻害剤で治療することができる。ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＴＳＬＤＡＳＩＩＷＡＭＭＱＮ（配列番号９）またはＴＳＬＤＡＳＩＩＷＡＭＭＱＮＡ（配列番号１２）を有することができる。

【0419】

酵母を、ＴＤＨ３プロモーターの制御下でＴＳＬＤＡＳＩＩＷＡＭＭＱを発現するように遺伝子操作し、プレプロ（Ｋｅｘ２）シグナルペプチドを使用して細胞から分泌させた。ＴＳＬＤＡＳＩＩＷＡＭＭＱＮＡ（配列番号１２）をコードするヌクレオチド配列は、ＡＣＴＴＣＡＴＴＡＧＡＣＧＣＣＴＣＡＡＴＡＡＴＣＴＧＧＧＣＧＡＴＧＡＴＧＣＡＧＡＡＴＧＣＴ（配列番号５９）である。

【0420】

この実施例は、皮膚線維症及び強皮症を治療するためのＴＧＦ－β１のペプチド阻害剤の使用を示す。アミノ酸配列ＴＳＬＤＡＳＩＩＷＡＭＭＱＮ（配列番号９）またはＴＳＬＤＡＳＩＩＷＡＭＭＱＮＡ（配列番号１２）を有するＴＧＦ－β１のペプチド阻害剤は、このペプチドを発現及び分泌するように遺伝子操作された局所適用される酵母によって、患部に局所投与される。

【0421】

実施例１１：真菌感染症及び酵母感染症の治療
酵母を、ＡＤＨ１プロモーターの制御下でＲｃＡＬＢ－ＰｅｐＩを発現するように遺伝子操作し、交配因子アルファ－１を使用して細胞から分泌させて、真菌、例えば、酵母感染症を治療した。ＲｃＡＬＢ－ＰｅｐＩのアミノ酸配列は、ヌクレオチド配列ＧＣＴＡＡＡＴＴＧＡＴＴＣＣＡＡＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴＧＡＣＴ（配列番号６０）によってコードされるＡＫＬＩＰＴＩＡＬ（配列番号５５）である。

【0422】

実施例１２：細菌感染症の治療
酵母を、ＡＤＨ１プロモーターの制御下で酢酸ペキシガナン（ＭＳＩ－７８）を発現するように遺伝子操作し、交配因子アルファ－１を使用して細胞から分泌させて、細菌感染症を治療した。遺伝子操作された酵母によって発現される酢酸ペキシガナン（ＭＳＩ－７８）のアミノ酸配列は、ＧＧＴＡＴＴＧＧＡＡＡＡＴＴＴＴＴＧＡＡＧＡＡＡＧＣＴＡＡＡＡＡＧＴＴＴＧＧＴＡＡＧＧＣＴＴＴＴＧＴＡＡＡＡＡＴＡＣＴＧＡＡＡＡＡＧＧＧＴ（配列番号６４）によってコードされるＧＩＧＫＦＬＫＫＡＫＫＦＧＫＡＦＶＫＩＬＫＫＧ（配列番号５６）である。

【0423】

実施例１３：にきびの治療
酵母を、ＴＤＨ３プロモーターの制御下でメリチンを発現するように遺伝子操作し、Ｐｒｅ－Ｐｒｏ－（Ｋｅｘ２）シグナルペプチドを使用して酵母細胞から分泌させて、にきびを治療した。遺伝子操作された酵母によって発現されるメリチンのアミノ酸配列は、ＧＧＧＡＴＴＧＧＧＧＣＣＧＴＧＴＴＧＡＡＡＧＴＴＣＴＴＡＣＧＡＣＴＧＧＴＴＴＡＣＣＧＧＣＣＣＴＡＡＴＣＴＣＡＴＧＧＡＴＣＡＡＡＡＧＧＡＡＧＡＧＧＣＡＧＣＡＧ（配列番号６１）によってコードされるＧＩＧＡＶＬＫＶＬＴＴＧＬＰＡＬＩＳＷＩＫＲＫＲＱＱ（配列番号５３）である。

【0424】

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７０． Ｓａｔｔａｒ ＭＭ，Ｐａｔｅｌ Ｍ，Ａｌａｎｉ Ａ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｏｌｙｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌｅｎｅ （ＰＴＦＥ）ｔａｐｅ ｉｎ ｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ ｄｅｎｔｉｓｔｒｙ． Ｂｒ Ｄｅｎｔ Ｊ．２０１７；２２２（３）：１５１－８．

【0425】

本出願を通して引用された全ての図面、ならびに全ての参考文献、特許、及び公開特許出願、ならびに受託番号の内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11A】

【図11B】

【図12A】

【図12B】

【図13】

【図14】

【図15A】

【図15B】

【図16A】

【図16B】

【図17A】

【図17B】

【図17C】

【図18】

【図19A】

【図19B】

【図19C】

【図19D】

【図20A】

【図20B】

【図20C】

【図21A】

【図21B】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26A】

【図26B】

【図26C】

【図26D】

【図27A】

【図27B】

【図28A】

【図28B】

【図28C】

【図29】

【図30A】

【図30B】

【図31A】

【図31B】

【図31C】

【図32A】

【図32B】

【図33】

【図34】

【図35】

【図36】

【国際調査報告】