特表 2024-538958 ガンマデルタＴ細胞活性化抗体の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-28

(54)【発明の名称】ガンマデルタＴ細胞活性化抗体の使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20241018BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241018BHJP

   A61P 19/10 20060101ALI20241018BHJP

   A61P 19/08 20060101ALI20241018BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20241018BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241018BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20241018BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20241018BHJP

   A61P 13/08 20060101ALI20241018BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20241018BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20241018BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20241018BHJP

   A61K 31/663 20060101ALI20241018BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20241018BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20241018BHJP

   C07K 16/30 20060101ALI20241018BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P19/10

A61P19/08

A61P3/00

A61P43/00 121

A61K45/00

A61K39/395 U

A61K39/395 T

A61K39/395 E

A61K39/395 D

A61P15/00

A61P13/08

A61P25/00

A61P11/00

A61P13/12

A61K31/663

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C07K16/30

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024520602

(86)(22)【出願日】2022-10-21

(85)【翻訳文提出日】2024-04-26

(86)【国際出願番号】 EP2022079374

(87)【国際公開番号】W WO2023067138

(87)【国際公開日】2023-04-27

(31)【優先権主張番号】21204014.1

(32)【優先日】2021-10-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】63/270,267

(32)【優先日】2021-10-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/274,711

(32)【優先日】2021-11-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517262346

【氏名又は名称】ラヴァ・セラピューティクス・エヌ・ヴイ

(74)【代理人】

【識別番号】100079108

【弁理士】

【氏名又は名称】稲葉 良幸

(74)【代理人】

【識別番号】100109346

【弁理士】

【氏名又は名称】大貫 敏史

(74)【代理人】

【識別番号】100117189

【弁理士】

【氏名又は名称】江口 昭彦

(74)【代理人】

【識別番号】100134120

【弁理士】

【氏名又は名称】内藤 和彦

(72)【発明者】

【氏名】ヴァン デル ヴリット，ヨハネス ジェレ

(72)【発明者】

【氏名】パーレン，ポール ウィレム アンリ イダ

(72)【発明者】

【氏名】ルーベン，ジャーレン マタイス

(72)【発明者】

【氏名】エンシング，エリック

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084NA05

4C084ZA02

4C084ZA59

4C084ZA81

4C084ZA96

4C084ZA97

4C084ZB26

4C084ZC21

4C084ZC75

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB31

4C085CC22

4C085CC23

4C085EE03

4C086AA01

4C086AA02

4C086DA34

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086ZA02

4C086ZA59

4C086ZA81

4C086ZA96

4C086ZA97

4C086ZB26

4C086ZC21

4C086ZC75

4H045AA11

4H045DA76

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、ガンマデルタＴ細胞活性化抗体の新規な使用、特に、アミノビスホスホネート、またはファルネシルピロリン酸合成酵素もしくはメバロン酸経路のさらに下流にある酵素を阻害するメバロン酸経路の他の阻害剤でも治療中であるか、または治療を受けた患者におけるそのような抗体の使用に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト対象におけるがんの治療に使用するための、ヒトＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体に結合する第１の抗原結合領域、及び腫瘍細胞上に発現する標的に結合する第２の抗原結合領域を含む多重特異性抗体であって、
前記ヒト対象は、アミノビスホスホネート（ＮＢＰ）、またはメバロン酸経路の他の阻害剤でも治療中であるか、または治療を受けており、前記阻害剤は、フファルネシルピロリン酸合成酵素または前記経路のさらに下流の酵素を阻害し、
前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与は、前記ヒト対象が前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の投与を２回以上受けた後に行われる、前記多重特異性抗体。

【請求項2】

前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与が、前記ヒト対象が、前記ＮＢＰまたは他の阻害剤を、３回以上（４回以上など）、例えば、５回以上（６回以上、７回以上、８回以上、９回以上または１０回以上など）受けた後に行われる、請求項１に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項3】

前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与が、前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の投与から２年以内（１年以内など）、例えば、６か月以内（４か月以内など）、例えば、３か月以内（２か月以内など）、例えば、１か月以内に行われる、請求項１または２に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項4】

前記多重特異性抗体の第１の投与が、前記ヒト対象が前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の投与を２回以上受けた後に行われる、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項5】

前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の前記投与が、静脈内投与である、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項6】

前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与が、前記ヒト対象が、前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の２回以上の投与を、２週間～１６週間の間隔、例えば、２週間～１２週間（３週間～５週間など）、例えば、３週間または４週間の間隔で受けた後に行われる、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項7】

前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与が、前記ヒト対象が、４か月～１４か月の間隔、例えば、６か月～１２か月の間隔で、前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の投与を２回以上受けた後に行われる、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項8】

前記ヒト対象が、ＮＢＰで治療され、前記ＮＢＰは、クロドロネート、エチドロネート、パミドロネート、アレンドロネート、イバンドロネート、ゾレドロネート及びリセドロネートから選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項9】

前記ＮＢＰが、パミドロネートまたはゾレドロネートである、請求項８に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項10】

前記ＮＢＰがパミドロネートであり、前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与が、前記ヒト対象が、パミドロネートの投与を２回以上受けた後に行われ、少なくとも２回またはすべての前記パミドロネート投与は、２週間～６週間の間隔（３週間～５週間の間隔など）、例えば、３週間～４週間の間隔である、請求項９に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項11】

前記ＮＢＰがゾレドロネートであり、前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与が、前記ヒト対象が、ゾレドロネートの投与を２回以上受けた後に行われ、少なくとも２回またはすべての前記ゾレドロネート投与は、２週間～１６週間の間隔、例えば、１か月～３か月の間隔（１、２もしくは３か月の間隔など）、または４、８、もしくは１２週間の間隔である、請求項９に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項12】

前記ＮＢＰがゾレドロネートであり、前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与が、前記ヒト対象が、ゾレドロネートの投与を２回以上受けた後に行われ、少なくとも２回またはすべての前記ゾレドロネート投与は、４か月～１４か月の間隔、例えば、６か月～１２か月の間隔である、請求項９に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項13】

ＮＢＰまたは他の阻害剤による前記治療が、前記多重特異性抗体の投与後に継続する、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項14】

前記治療が、複数回（２回～１００回など）、例えば、２回～５０回、例えば、２回～２５回、例えば、６回～２５回、または６回～１２回の、例えば、週に２回、毎週、隔週、または３～４週間の間隔での前記多重特異性抗体の投与を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項15】

前記ヒト対象が、乳癌、前立腺癌、神経膠芽腫、肺癌、腎臓癌または多発性骨髄腫と診断されている、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項16】

前記ヒト対象が、骨粗鬆症、骨のパジェット病、または高カルシウム血症と診断されている、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項17】

腫瘍細胞上で発現される前記標的が、ＣＤ１ｄ、ＰＳＭＡ、ＥＧＦＲ、ＣＤ４０及びＣＤ１２３から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のための多重特異性抗体。

【請求項18】

前記多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の使用のための多重特異性抗体。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ガンマデルタ（γδ）Ｔ細胞活性化抗体の新規な使用、特に、アミノビスホスホネート、またはファルネシルピロリン酸合成酵素（ＦＰＰＳ）もしくはメバロン酸経路のさらに下流にある酵素を阻害するメバロン酸経路の他の阻害剤でも治療中であるか、または治療を受けた患者におけるそのような抗体の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

ゾレドロネート及びアレンドロネートなどのアミノビスホスホネート（ＮＢＰ）は、骨粗鬆症、高カルシウム血症、固形腫瘍（例えば、乳癌及び前立腺癌）または血液腫瘍（例えば、多発性骨髄腫）の転移による溶骨破壊の治療または予防に頻繁に使用される化合物である。

【0003】

ＮＢＰは、ＦＰＰＳの酵素活性を選択的に妨害する。ＮＢＰは（ＨＭＧＣｏＡＲの下流のＦＰＰＳを標的とするため）イソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰ）の細胞内レベルを増加させ、細胞外空間でのその放出を刺激する。興味深いことに、ＩＰＰは、Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の天然リガンドに非常に似ており、微生物、及びストレスを受けて形質転換された細胞に対する自然免疫応答に深く関与する非標準的Ｔ細胞のユニークなサブセットによって発現される。

【0004】

ＮＢＰは、患者のこのＴ細胞サブセット、特にＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞を活性化して増殖させるために、γδＴ細胞ベースの免疫療法で使用されている。

【0005】

γδＴ細胞が関与するさらなる潜在的ながん治療は、γδＴ細胞による腫瘍細胞の死滅を媒介する、γδＴ細胞エンゲージャー（γδＴＣＥ、すなわち、γδＴ細胞受容体と腫瘍細胞標的とを結合する多重特異性抗体）の使用である。

【0006】

ＮＢＰによる反復治療は、γδＴ細胞の消耗、アネルギー、枯渇を引き起こすことが観察されている（Ｓｉｃａｒｄ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７５：５４７１、またＯｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１４，５：１でも論じられる）。したがって、本発明までは、γδＴ細胞は、ＮＢＰによる反復治療の後、γδＴＣＥに対して反応しなくなるであろうと考えられていた。

【発明の概要】

【0007】

驚くべきことに、ＮＢＰによる反復治療を受けた患者のＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞含有末梢血単核球（ＰＢＭＣ）が、依然としてγδＴＣＥに反応しており、γδＴＣＥがそのような患者のＰＢＭＣによる腫瘍細胞の死滅を媒介できることが判明した。さらに、驚くべきことに、ＮＢＰによる反復治療を受けた患者のγδＴ細胞は両方とも、γδＴＣＥの存在下で腫瘍細胞を死滅させることができ、γδＴＣＥの存在下で増殖することができた。

【0008】

これにより、反復的なＮＢＰ治療も同時に受けている、または受けた患者にγδＴＣＥを投与するがん治療レジメンが可能になる。特に、γδＴＣＥ治療は、高カルシウム血症または溶骨破壊を回避するためにＮＢＰで治療されているがん患者、または骨粗鬆症またはその予防のために同様に治療されている患者にとっても有益であることが期待される。

【0009】

第１の態様では、本発明は、ヒト対象におけるがんの治療に使用するための、ヒトＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体に結合する第１の抗原結合領域、及び腫瘍細胞上に発現する標的に結合する第２の抗原結合領域を含む多重特異性抗体に関し、
前記ヒト対象は、アミノビスホスホネート（ＮＢＰ）、またはメバロン酸経路の他の阻害剤でも治療中であるか、または治療を受けており、阻害剤は、フファルネシルピロリン酸合成酵素または前記経路のさらに下流の酵素を阻害し、
前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与は、ヒト対象が前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の投与を２回以上受けた後に行われる。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1A】Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞の脱顆粒を、γδＴＣＥまたは培地対照（－）の存在下で、ＰＢＭＣとＭＭ１ｓ．ＣＤ１ｄ標的細胞との一晩共培養後に評価した。Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞上のＣＤ１０７ａ発現を、脱顆粒の尺度としてフローサイトメトリーによって評価した（ｎ＝８）。

【図1B】同じデータを示しているが、個々の患者のγδＴＣＥありとなしのデータを関連付けている。黒丸はゾレドロネート治療患者（ｎ＝４）を表し、白四角はパミドロネート治療患者（ｎ＝３）を表し、三角はクロドロン酸治療患者（ｎ＝１）を表す。

【図2】γδＴＣＥまたは培地対照（－）の存在下でＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞と７日間共培養した後のＭＭ１ｓ．ＣＤ１ｄの相対溶解。

【図3】ＰＢＭＣ及びＭＭ１ｓ．ＣＤ１ｄ標的細胞を、γδＴＣＥまたは培地対照（－）の存在下で７日間及び１４日間培養することにより、Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞の増殖を０日目と比較して評価した。

【図4】ＰＢＭＣ及びＭＭ１ｓ．ＣＤ１ｄ標的細胞を、ＩＬ－２及びγδＴＣＥまたは培地対照（－）の存在下で７日間及び１４日間培養することにより、Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞の増殖を０日目と比較して評価した。

【発明を実施するための形態】

【0011】

定義
「アミノビスホスホネート」（ＮＢＰと略す）という用語は、本明細書で使用する場合、酸素原子の代わりに炭素を含むピロリン酸の窒素含有類似体を指す。ＮＢＰは次の一般構造を持ち、式中、Ｒ１とＲ２の少なくとも１つは窒素を含む。

【化1】

【0012】

「ヒトＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒトγδＴ細胞上に見出されるＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体を指す。

【0013】

「γδＴ細胞エンゲージャー」（γδＴＣＥと略す）という用語は、γδＴ細胞上の標的に対する結合特異性、及び腫瘍細胞上の標的に対するさらなる結合特異性を有する分子を指す。これらの両方の標的に結合することにより、γδＴＣＥはＴ細胞を腫瘍細胞または腫瘍環境に動員する。

【0014】

「ヒトＶδ２」という用語は、本明細書で使用される場合、Ｖγ９Ｖδ２－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の再配列δ２鎖を指す。ＧｅｎＢａｎｋ：ＣＡＡ５１１６６．１には、δ２配列の例が示される。ＴＲＤＶ２、Ｔ細胞受容体デルタ変数２は、可変領域を表す（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ａ０ＪＤ３６（Ａ０ＪＤ３６＿ＨＵＭＡＮ）はＴＲＤＶ２配列の例を示す）。「Ｖγ９Ｖδ２－ＴＣＲのＶδ２鎖に結合する」とは、抗体が別個の分子として、及び／またはＶγ９Ｖδ２－ＴＣＲ（Ｔ細胞受容体）の一部としてＶδ２鎖に結合できることを意味する。しかしながら、抗体は、別個の分子としてＶγ９鎖と結合しない。

【0015】

「ヒトＶγ９」という用語は、本明細書で使用される場合、Ｖγ９Ｖδ２－Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の再配列ｙ９鎖を指す。ＧｅｎＢａｎｋ：ＮＧ＿００１３３６．２は、γ９配列の例を示している。ＴＲＧＶ９、Ｔ細胞受容体ガンマ変数９は可変領域を表す（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ＝Ｑ９９６０３＿ＨＵＭＡＮはＴＲＧＶ９配列の例を示す）。

【0016】

本明細書で使用される「免疫グロブリン」という用語は、典型的には、２対のポリペプチド鎖、１対の軽（Ｌ）鎖、及び１対の重（Ｈ）鎖からなる構造的に関連する糖タンパク質のクラスを指すことを意図しており、４つ全ては、ジスルフィド結合によって潜在的に相互接続されているが、一部の哺乳動物種は、軽鎖を生成せず、重鎖抗体のみを作製する。本明細書で使用される「免疫グロブリン重鎖」、「免疫グロブリンの重鎖」または「重鎖」という用語は、免疫グロブリンの鎖のうちの１つを指すことが意図されている。重鎖は、典型的には、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略される）と、免疫グロブリンのアイソタイプを定義する重鎖定常領域（本明細書ではＣＨと略される）とからなる。重鎖定常領域は、典型的には、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３からなる。重鎖定常領域は、ヒンジ領域をさらに含む。免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）の構造内では、２つの重鎖は、ヒンジ領域内のジスルフィド結合を介して相互接続される。重鎖と同様に、各軽鎖は、典型的には、いくつかの領域、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）からなる。さらに、ＶＨ及びＶＬ領域は、超可変性の領域（または、配列において超可変であり得る及び／または構造的に画定されたループを形成し得る超可変領域）、また相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称され、より保存性の高い領域が散在し、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される超可変性の領域に細分化され得る。各ＶＨ及びＶＬは、典型的には、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端へと、次の順序で配列される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。ＣＤＲ配列は、様々な方法、例えば、Ｃｈｏｉｔｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１またはＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ｆｉｆｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ．ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ．によって提供される方法を使用して決定され得る。ＣＤＲ決定及びアミノ酸番号付けのための様々な方法は、ｗｗｗ．ａｂｙｓｉｓ．ｏｒｇ（ＵＣＬ）上で比較することができる。

【0017】

「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の断片、またはそれらのいずれかの誘導体を指すことが意図され、これは、典型的な生理学的条件下で、重要な期間、例えば、少なくとも約３０分、少なくとも約１時間、少なくとも約２時間、少なくとも約８時間、少なくとも約１２時間、約２４時間以上、約４８時間以上、約３、４、５、６、７日、もしくはそれ以上などの半減期、または任意の他の関連する機能的に定義される期間（例えば、抗原に結合する抗体に関連する生理学的応答を誘導、促進、増強、及び／または調節するのに十分な時間、及び／または抗体がエフェクター活性を獲得するのに十分な時間）で、抗原に特異的に結合する能力を有する。抗原と相互作用する抗原結合領域は、免疫グロブリン分子の重鎖及び軽鎖の両方の可変領域を含み得るか、または単一ドメイン抗原結合領域、例えば、重鎖可変領域のみを含み得るか、またはそれからなり得る。免疫グロブリンの「Ｆｃ領」は、典型的には、免疫グロブリンの２つのＣＨ２－ＣＨ３領域及び接続領域（例えば、ヒンジ領域）を含むパパインによる抗体の消化後に生成される抗体の断片として定義される。抗体重鎖の定常ドメインは、抗体アイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤ、またはＩｇＥを定義する。Ｆｃ領域は、補体系のＦｃ受容体及びタンパク質と呼ばれる細胞表面受容体とともに、抗体のエフェクター機能を媒介する。

【0018】

本明細書で使用される「ヒンジ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のヒンジ領域を指すことを意図している。したがって、例えば、ヒトＩｇＧ１抗体のヒンジ領域は、ＥＵ付番に従うアミノ酸２１６～２３０に対応する。

【0019】

本明細書で使用される「ＣＨ２領域」または「ＣＨ２ドメイン」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣＨ２領域を指すことが意図される。したがって、例えば、ヒトＩｇＧ１抗体のＣＨ２領域は、ＥＵ付番に従うアミノ酸２３１～３４０に対応する。しかしながら、ＣＨ２領域はまた、本明細書に記載の他のサブタイプのいずれであってもよい。

【0020】

本明細書で使用される「ＣＨ３領域」または「ＣＨ３ドメイン」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣＨ３領域を指すことが意図される。したがって、例えば、ヒトＩｇＧ１抗体のＣＨ３領域は、ＥＵ付番に従うアミノ酸３４１～４４７に対応する。しかしながら、ＣＨ３領域はまた、本明細書に記載の他のサブタイプのいずれであってもよい。

【0021】

本発明におけるＦｃ領域／Ｆｃドメインにおけるアミノ酸位置への言及は、ＥＵ番号付けによるものである（Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１９６９ Ｍａｙ；６３（１）：７８－８５、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ－１９９１ ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２）。

【0022】

本明細書で使用される「アイソタイプ」という用語は、免疫グロブリン（サブ）クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ）、または重鎖定常領域遺伝子によってコードされるＩｇＧ１ｍ（ｚａ）及びＩｇＧ１ｍ（ｆ）などのその任意のアロタイプを指す。各重鎖アイソタイプは、カッパ（κ）またはラムダ（λ）軽鎖のいずれかと組み合わせることができる。本発明で使用されるアイソタイプを有することができる。

【0023】

上記に示されるように、本明細書で使用される抗体という用語は、別段の記載がない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、抗原と特異的に結合する能力を保持する抗体の断片を含む。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって行われ得ることが示されてきた。「抗体」という用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ’またはＦａｂ断片、すなわち、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片、またはＷＯ２００７０５９７８２に記載されている一価抗体；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、すなわち、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインから本質的になるＦｄ断片；ならびに（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインから本質的になるＦｖ断片が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬ及びＶＨは、別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え法を使用して、それらが単一のタンパク質鎖として作製されることを可能にする合成リンカーによって接合することができ、ＶＬ及びＶＨ領域は対となって、一価の分子（一本鎖抗体または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）を形成する（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２，４２３－４２６（１９８８）及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８５，５８７９－５８８３（１９８８）参照）。かかる一本鎖抗体は、文脈によって明らかに示されない限り、抗体という用語に包含される。抗体という用語は、別途指定されない限り、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、キメラ抗体及びヒト化抗体、ならびに酵素切断、ペプチド合成、及び組換え技術などの任意の既知の技術によって提供される抗体断片も含む。

【0024】

本発明で使用される抗体のいくつかの実施形態では、第１の抗原結合領域または第２の抗原結合領域、またはその両方は、単一ドメイン抗体である。単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、Ｎａｎｏｂｏｄｙ（登録商標）とも呼ばれる、またはＶＨＨ）は、当業者に周知であり、例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６、Ｒｏｏｖｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ９：３２７及びＫｒａｈ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ ３８：２１を参照されたい。単一ドメイン抗体は、単一のＣＤＲ１、単一のＣＤＲ２及び単一のＣＤＲ３を含む。単一ドメイン抗体の例は、重鎖のみの抗体、軽鎖を天然に含まない抗体、従来の抗体に由来する単一ドメイン抗体、及び操作された抗体の可変断片である。単一ドメイン抗体は、マウス、ヒト、ラクダ、ラマ、サメ、ヤギ、ウサギ、及びウシを含む任意の種に由来し得る。例えば、天然由来のＶＨＨ分子は、ラクダ科の種、例えば、ラクダ、ヒトコブラクダ、ラマ、アルパカ、及びグアナコにおいて産生される、抗体に由来し得る。全抗体と同様に、単一ドメイン抗体は、特異的抗原に選択的に結合することができる。単一ドメイン抗体は、免疫グロブリン鎖の可変ドメイン、すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ならびにフレームワーク領域のみを含み得る。

【0025】

「親抗体」という用語は、本発明で使用される抗体と同一であるが、親抗体が特定の変異のうちの１つ以上を有しない抗体として理解されるべきである。本発明で使用される「バリアント」または「抗体バリアント」または「親抗体のバリアント」は、「親抗体」と比較して１つ以上の変異を含む抗体分子である。アミノ酸置換は、天然アミノ酸を別の天然に存在するアミノ酸、または天然に存在しないアミノ酸誘導体と交換し得る。アミノ酸置換は保存的であっても非保存的であってもよい。本発明の文脈において、保存的置換は、以下の３つの表のうちの１つ以上に反映されるアミノ酸のクラス内の置換によって画定され得る。

【表1】

【表2】

【表3】

【0026】

本発明の文脈において、バリアントにおける置換は、以下のように示される：
元のアミノ酸－位置－置換アミノ酸；
アミノ酸残基を示すために、コードＸａａ及びＸを含む３文字コード、または１文字コードが使用される。したがって、表記「Ｔ３６６Ｗ」は、バリアントが、親抗体における３６６位のアミノ酸に対応するバリアントアミノ酸位置において、トリプトファンによるスレオニンの置換を含むことを意味する。

【0027】

さらに、「置換」という用語は、他の１９個の天然アミノ酸のいずれか１つへの置換、または非天然アミノ酸等の他のアミノ酸への置換を包含する。例えば、３６６位のアミノ酸Ｔの置換には、以下の置換のそれぞれが含まれる：３６６Ａ、３６６Ｃ、３６６Ｄ、３６６Ｇ、３６６Ｈ、３６６Ｆ、３６６Ｉ、３６６Ｋ、３６６Ｌ、３６６Ｍ、３６６Ｎ、３６６Ｐ、３６６Ｑ、３６６Ｒ、３６６Ｓ、３６６Ｅ、３６６Ｖ、３６６Ｗ、及び３６６Ｙ。

【0028】

「配列同一性％」は、本明細書で使用する場合、異なる配列が共有する同一のヌクレオチドまたはアミノ酸位置の数（すなわち、同一性％＝同一の位置の＃／位置の総＃×１００）を指し、最適なアラインメントのために導入する必要のあるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮する。２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の同一性パーセントは、例えば、ＰＡＭ１２０重み残基表、ギャップ長さペナルティ１２及びギャップペナルティ４を使用、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）中に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ ４，１１－１７（１９８８）のアルゴリズムを用いて決定され得る。

【0029】

「全長抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、そのアイソタイプの野生型抗体に通常見出されるものに対応する全ての重鎖及び軽鎖定常及び可変ドメインを含む抗体を指す。

【0030】

「キメラ抗体」という用語は、可変領域が非ヒト種（例えば、げっ歯類に由来する）に由来し、定常領域がヒトなどの異なる種に由来する抗体を指す。キメラ抗体は、遺伝子工学によって生成され得る。治療用途のためのキメラモノクローナル抗体は、抗体免疫原性を低減するために開発される。

【0031】

「ヒト化抗体」という用語は、ヒト抗体定常ドメイン、及びヒト可変ドメインと高レベルの配列相同性を含有するように改変された非ヒト可変ドメインを含有する遺伝子操作された非ヒト抗体を指す。これは、一緒に抗原結合部位を形成する６つの非ヒト抗体相補性決定領域（ＣＤＲ）を相同ヒトアクセプターフレームワーク領域（ＦＲ）に移植することによって達成することができる。親抗体の結合親和性及び特異性を完全に再構築するために、親抗体（すなわち、非ヒト抗体）からのフレームワーク残基のヒトフレームワーク領域への置換（逆変異）が必要とされ得る。構造相同性モデリングは、抗体の結合特性に重要なフレームワーク領域内のアミノ酸残基を同定するのに役立ち得る。したがって、ヒト化抗体は、非ヒトＣＤＲ配列、主に、非ヒトアミノ酸配列に対する１つ以上のアミノ酸逆変異を任意選択で含むヒトフレームワーク領域、及び任意選択で完全ヒト定常領域を含んでもよい。任意選択で、必ずしも逆変異ではない追加のアミノ酸修飾を導入して、親和性及び生化学的特性等の好ましい特性を有するヒト化抗体を得ることができる。非ヒト治療抗体のヒト化は、ヒトにおけるその免疫原性を最小限に抑えるために行われるが、そのようなヒト化抗体は同時に、非ヒト由来の抗体の特異性及び結合親和性を維持する。

【0032】

「多重特異性抗体」という用語は、２つ以上の抗原結合領域の存在に起因する、少なくとも２つの異なる、例えば少なくとも３つの、典型的には重複しないエピトープに対する特異性を有する抗体を指す。そのようなエピトープは、同じ標的抗原上にあっても、異なる標的抗原上にあってもよい。エピトープが異なる標的上にある場合、そのような標的は同じ細胞上にある場合もあれば、異なる細胞または細胞型上にある場合もある。

【0033】

「二重特異性抗体」という用語は、２つの抗原結合領域の存在に起因して、２つの異なる、典型的には重複しないエピトープに対する特異性を有する抗体を指す。そのようなエピトープは、同じ標的上にあっても、異なる標的上にあってもよい。エピトープが異なる標的上にある場合、そのような標的は同じ細胞上にある場合もあれば、異なる細胞または細胞型上にある場合もある。

【0034】

異なるクラスの二重特異性抗体の例としては、限定されないが、（ｉ）ヘテロ二量体化を強制するための相補性ＣＨ３ドメインを有するＩｇＧ様分子、（ｉｉ）組換えＩｇＧ様二重標的分子（分子の２つの側面がそれぞれ、少なくとも２つの異なる抗体のＦａｂ断片またはＦａｂ断片の一部を含有する）（ｉｉｉ）ＩｇＧ融合分子（全長ＩｇＧ抗体が余分なＦａｂ断片またはＦａｂ断片の一部に融合される）（ｉｖ）Ｆｃ融合分子（単鎖Ｆｖ分子または安定化ダイアボディが重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域またはその一部に融合される）、（ｖ）Ｆａｂ融合分子（異なるＦａｂ断片が一緒に融合され、重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域またはその一部に融合される）及び（ｖｉ）ｓｃＦｖ及びダイアボディベースの抗体及び重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標））（異なる単鎖Ｆｖ分子もしくは異なるダイアボディ抗体もしくは異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標））が互いに、または別のタンパク質に融合されるか、または担体分子が重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域もしくはその一部に融合される）が挙げられる。

【0035】

相補的なＣＨ３ドメイン分子を有するＩｇＧ様分子の例としては、限定されないが、Ｔｒｉｏｍａｂ（登録商標）（Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的にマッチングした（Ａｍｇｅｎ，Ｃｈｕｇａｉ，Ｏｎｃｏｍｅｄ）、ＬＵＺ－Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｗｒａｎｉｋ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１２，２８７（５２）：４３３３１－９，ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ１１２．３９７８６９． Ｅｐｕｂ ２０１２ Ｎｏｖ １）、ＤＩＧ－ｂｏｄｙ ａｎｄ ＰＩＧ－ｂｏｄｙ（Ｐｈａｒｍａｂｃｉｎｅ，ＷＯ２０１０１３４６６６，ＷＯ２０１４０８１２０２）、Ｓｔｒａｎｄ Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｄｏｍａｉｎ ｂｏｄｙ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃｓ（Ｍｅｒｕｓ，ＷＯ２０１３１５７９５３）、ＦｃΔＡｄｐ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）、二重特異性ＩｇＧ１及びＩｇＧ２（Ｐｆｉｚｅｒ／Ｒｉｎａｔ），Ａｚｙｍｅｔｒｉｃ ｓｃａｆｆｏｌｄ（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ／Ｍｅｒｃｋ）、ｍＡｂ－Ｆｖ（Ｘｅｎｃｏｒ）、二価の二重特異性抗体（Ｒｏｃｈｅ，ＷＯ２００９０８０２５４）及びＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）分子（Ｇｅｎｍａｂ）が挙げられる。

【0036】

組換えＩｇＧ様二重標的分子の例としては、限定されないが、Ｄｕａｌ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（ＤＴ）－Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ、ＷＯ２００９０５８３８３）、Ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｂｏｓｔｒｏｍ，ｅｔ ａｌ ２００９．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２３，１６１０－１６１４）、Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｄ Ｍａｂｓ（Ｋａｒｍａｎｏｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ－Ｓｔａｒ）、Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（商標）（Ｚｙｎｇｅｎｉａ，ＬａＦｌｅｕｒ ｅｔ ａｌ．ＭＡｂｓ．２０１３ Ｍａｒ－Ａｐｒ；５（２）：２０８－１８）、共通軽鎖によるアプローチ、κλＢｏｄｉｅｓ（ＮｏｖＩｍｍｕｎｅ，ＷＯ２０１２０２３０５３）及びＣｏｖＸ－ｂｏｄｙ（登録商標）（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ，Ｄｏｐｐａｌａｐｕｄｉ，Ｖ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ ２００７． Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１７，５０１－５０６）が挙げられる。

【0037】

ＩｇＧ融合分子の例としては、限定されないが、Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ（ＤＶＤ）－Ｉｇ（Ａｂｂｏｔｔ）、Ｄｕａｌ ｄｏｍａｉｎ ｄｏｕｂｌｅ ｈｅａｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｕｎｉｌｅｖｅｒ、Ｓａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＩｇＧ－ｌｉｋｅ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（ＩｍＣｌｏｎｅ／Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ，Ｌｅｗｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１４ Ｆｅｂ；３２（２）：１９１－８）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ，Ｄｉｍａｓｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００９ Ｏｃｔ ３０；３９３（３）：６７２－９２）及びＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，ＷＯ２０１０１１１６２５）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、ｓｃＦｖ融合（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ｓｃＦｖ融合（Ｃｈａｎｇｚｈｏｕ Ａｄａｍ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ）及びＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。

【0038】

Ｆｃ融合分子の例としては、限定されないが、ｓｃＦｖ／Ｆｃ融合（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ，Ｐｅａｒｃｅ ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｉｎｔ．１９９７ Ｓｅｐ；４２（６）：１１７９），ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ，Ｂｌａｎｋｅｎｓｈｉｐ ＪＷ，ｅｔ ａｌ．ＡＡＣＲ １００ｔｈ Ａｎｎｕａｌ ｍｅｅｔｉｎｇ ２００９（Ａｂｓｔｒａｃｔ ＃５４６５）、Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ，ＷＯ２０１０１１１６２５）、Ｄｕａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｆｃ－ＤＡＲＴＴＭ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）及びＤｕａｌ（ＳｃＦｖ）２－Ｆａｂ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ－Ｃｈｉｎａ）が挙げられる。

【0039】

Ｆａｂ融合二重特異性抗体の例としては、限定されないが、Ｆ（ａｂ）２（Ｍｅｄａｒｅｘ／ＡＭＧＥＮ）、Ｄｕａｌ－Ａｃｔｉｏｎ ｏｒ Ｂｉｓ－Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｄｏｃｋ－ａｎｄ－Ｌｏｃｋ（登録商標）（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、Ｂｉｖａｌｅｎｔ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）及びＦａｂ－Ｆｖ（ＵＣＢ－Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）が挙げられる。

【0040】

ｓｃＦｖ抗体、ダイアボディベース抗体、及びドメイン抗体の例としては、限定されないが、Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｎｇａｇｅｒ（ＢｉＴＥ（登録商標））（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ，Ｔａｎｄｅｍ Ｄｉａｂｏｄｙ（Ｔａｎｄａｂ）（Ａｆｆｉｍｅｄ）、Ｄｕａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＤＡＲＴＴＭ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、Ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎ Ｄｉａｂｏｄｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ，Ｌａｗｒｅｎｃｅ ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．１９９８ Ａｐｒ３；４２５（３）：４７９－８４）、ＴＣＲ－ｌｉｋｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ＡＩＴ，ＲｅｃｅｐｔｏｒＬｏｇｉｃｓ）、Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ ＳｃＦｖ Ｆｕｓｉｏｎ（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ，ＷＯ２０１００５９３１５）及びＣＯＭＢＯＤＹ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（Ｅｐｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｚｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２０１０Ａｕｇ；８８（６）：６６７－７５）、ｄｕａｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）（Ａｂｌｙｎｘ，Ｈｍｉｌａ ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．２０１０）、ｄｕａｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｏｎｌｙ ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓが挙げられる。

【0041】

いくつかの実施形態では、本発明に使用される多重特異性抗体は、ＶＨＨ－Ｆｃフォーマットであり、すなわち、抗体は、ヒトＦｃ領域二量体を介して互いに連結されている２つ以上の単一ドメイン抗原結合領域を含む。このフォーマットでは、各単一ドメイン抗原結合領域は、Ｆｃ領域ポリペプチドに融合され、２つの融合ポリペプチドは、ヒンジ領域内のジスルフィド架橋を介して二量体二重特異性抗体を形成する。かかる構築物は、典型的には、完全な、または任意のＣＨ１または軽鎖配列を含有しない。ＷＯ０６０６４１３６の図１２Ｂは、本実施形態の一例の例示を提供する。

【0042】

抗原に結合する抗体の文脈において、「結合する」または「特異的に結合する」という用語は、所定の抗原または標的（例えば、ヒトＶδ２）に対する抗体の結合を指し、その結合は、通常、例えば、本明細書の実施例に記載のフローサイトメトリーを使用して測定した場合の約１０^－６Ｍ以下、例えば１０^－７Ｍ以下、例えば約１０^－８Ｍ以下、例えば約１０^－９Ｍ以下、約１０^－１０Ｍ以下、または約１０^－１１Ｍ以下のＫ_Ｄに対応する親和性である。あるいは、Ｋ_Ｄ値は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ３０００の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術を使用して、抗原をリガンドとして、結合部分または結合分子を分析物として使用して決定することができる。特異的結合とは、抗体が、所定の抗原または密接に関連する抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）との結合に対する親和性よりも少なくとも１０倍低い、例えば、少なくとも１００倍低い、例えば、少なくとも１，０００倍低い、例えば、少なくとも１０，０００倍低い、例えば、少なくとも１００，０００倍低い、Ｋ_Ｄに対応する親和性で所定の抗原と結合することを意味する。親和性が低い程度は、結合部分または結合分子のＫ_Ｄに依存するため、結合部分または結合分子のＫ_Ｄが非常に低い場合（すなわち、結合部分または結合分子が非常に特異的である場合）、抗原に対する親和性が非特異的抗原に対する親和性よりも低い程度は、少なくとも１０，０００倍であり得る。「Ｋ_Ｄ」（Ｍ）という用語は、本明細書で使用される場合、抗原と結合部分または結合分子との間の特定の相互作用の解離平衡定数を指す。

【0043】

「Ｖγ９Ｖδ２－ＴＣＲのＶδ２鎖に結合することができる」または「Ｖγ９Ｖδ２－ＴＣＲのＶδ２鎖に結合する」とは、抗体が別個の分子として、及び／またはＶγ９Ｖδ２－ＴＣＲの一部として、Ｖδ２鎖に結合することができることを意味する。しかしながら、抗体は、別個の分子としてＶγ９鎖と結合しない。

【0044】

「第１の」及び「第２の」抗原結合領域という用語は、本明細書で使用される場合、抗体におけるそれらの向き／位置を指さず、すなわち、それらは、Ｎ末端またはＣ末端に関して意味を持たない。「第１の」及び「第２の」という用語は、特許請求の範囲及び説明における２つの異なる抗原結合領域を正確かつ一貫して指すようにのみ機能する。

【0045】

【表4-1】

【表4-2】

【表4-3】

【表4-4】

【表4-5】

【0046】

本発明の更なる態様及び実施形態
上記のように、第１の態様では、本発明は、ヒト対象におけるがんの治療に使用するための、ヒトＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体に結合する第１の抗原結合領域、及び腫瘍細胞上に発現する標的に結合する第２の抗原結合領域を含む多重特異性抗体に関し、
前記ヒト対象は、アミノビスホスホネート（ＮＢＰ）、またはメバロン酸経路の他の阻害剤でも治療中であるか、または治療を受けており、阻害剤は、フファルネシルピロリン酸合成酵素または前記経路のさらに下流の酵素を阻害し、
前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与は、ヒト対象が前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の投与を２回以上受けた後に行われる。

【0047】

したがって、同様に、本発明は、ヒト対象におけるがんの治療に使用するための、ヒトＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体に結合する第１の抗原結合領域、及び腫瘍細胞上に発現する標的に結合する第２の抗原結合領域を含む多重特異性抗体に関し、前記ヒト対象は、ＮＢＰ、またはそのようなメバロン酸経路の他の阻害剤の投与を２回以上受けている。

【0048】

したがって、同様に、本発明は、ヒト対象におけるがんの治療に使用するための、ヒトＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体に結合する第１の抗原結合領域、及び腫瘍細胞上に発現する標的に結合する第２の抗原結合領域を含む多重特異性抗体に関し、前記ヒト対象は、前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与の前に、ＮＢＰまたはそのようなメバロン酸経路の他の阻害剤の投与を、前記２回以上受けている。

【0049】

したがって、同様に、本発明は、ＮＢＰまたはそのようなメバロン酸経路の他の阻害剤と組み合わせた、ヒト対象におけるがんの治療に使用するための、ヒトＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体に結合する第１の抗原結合領域、及び腫瘍細胞上に発現する標的に結合する第２の抗原結合領域を含む多重特異性抗体に関し、前記ヒト対象は、前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与の前に、前記ＮＢＰまたはメバロン酸経路の他の阻害剤の投与を２回以上受ける。

【0050】

同様に、本発明は、がんの治療のための方法に関し、本方法は、ヒト対象への、ヒトＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体に結合する第１の抗原結合領域、及び腫瘍細胞上に発現する標的に結合する第２の抗原結合領域を含む多重特異性抗体の投与を含み、
前記ヒト対象は、アミノビスホスホネート（ＮＢＰ）またはメバロン酸経路の他の阻害剤でも治療中であるか、または治療を受けており、阻害剤は、ファルネシルピロリン酸合成酵素または前記経路のさらに下流の酵素を阻害し、前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与は、ヒト対象が２回以上の前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の投与を受けた後に行われる。

【0051】

同様に、本発明は、がんの治療のための方法に関し、本方法は、ヒト対象への、ヒトＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体に結合する第１の抗原結合領域、及び腫瘍細胞上に発現する標的に結合する第２の抗原結合領域を含む多重特異性抗体の投与を含み、前記方法は、
（ｉ）ＮＢＰまたはメバロン酸経路の他の阻害剤で治療中であるか、または治療を受けたヒト対象を選択するステップであって、阻害剤は、ファルネシルピロリン酸合成酵素または前記経路のさらに下流にある酵素を阻害し、対象は、前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の投与を２回以上受けている、ステップと、
（ｉｉ）前記多重特異性抗体を投与するステップと、を含む。

【0052】

したがって、ヒト対象は、前記多重特異性抗体による治療に適格な対象の部分集団に属し、前記部分集団は、ＮＢＰまたはそのような他の阻害剤で治療を受けている、または治療を受けた対象を含む。

【0053】

上述したように、ＮＢＰによる反復治療を受けた患者のＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞含有ＰＢＭＣが、依然としてγδＴＣＥに反応しており、γδＴＣＥがそのような患者のＰＢＭＣによる腫瘍細胞の死滅を媒介できることが判明した。これにより、反復的なＮＢＰ治療も同時に受けている、または受けた患者にγδＴＣＥを投与するがん治療レジメンが可能になる。

【0054】

したがって、γδＴＣＥ治療は、ＮＢＰ（または機能的に類似した阻害剤）による反復治療後に施すことができるか、または、γδＴＣＥによる治療とＮＢＰ（または他の阻害剤）による治療とを同時に行うことができる。「反復」という用語は、本明細書で使用される場合、複数回、すなわち２回以上を意味する。

【0055】

一実施形態では、前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与は、ヒト対象が、前記ＮＢＰまたは他の阻害剤を、３回以上（４回以上など）、例えば、５回以上（６回以上、７回以上、８回以上、９回以上または１０回以上など）受けた後に行われる。

【0056】

別の実施形態では、前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与は、前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の投与から２年以内（１年以内など）、例えば、６か月以内（４か月以内など）、例えば、３か月以内（２か月以内など）、例えば、１か月以内に行われる。

【0057】

別の実施形態では、前記多重特異性抗体の第１の投与は、ヒト対象が前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の投与を２回以上受けた後に行われる。

【0058】

パミドロネートやゾレドロネートなどの一部のＮＢＰは、通常、静脈内に投与される。したがって、一実施形態では、前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の前記投与は静脈内投与である。別の実施形態では、前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の前記投与は、経口投与ではない。

【0059】

ＮＢＰの投与頻度は通常、化合物及び投与方法によって異なる。例えば、パミドロネートなどのＮＢＰは、３週間に１回または４週間に１回投与され得る。例えば、ゾレドロネートは、１、２もしくは３か月に１回、または６～１２か月に１回投与され得る。

【0060】

したがって、一実施形態では、前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与は、ヒト対象が、前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の２回以上の投与を、２週間～１６週間の間隔、例えば、２週間～１２週間（３週間～５週間など）、例えば、３週間または４週間の間隔で受けた後に行われる。

【0061】

一実施形態では、多重特異性抗体の第１の投与は、ヒト対象が、３週間または４週間の間隔で（すなわち、ＮＢＰ投与の間に３週間または４週間の時間間隔をあけて）ＮＢＰの投与を２回以上受けた後に行われ、多重特異性抗体の第１の投与は、ＮＢＰの投与後６か月以内、例えば、３か月もしくは２か月以内、または１か月以内に行われる。

【0062】

別の実施形態では、前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与は、ヒト対象が、４か月～１４か月の間隔、例えば、６か月～１２か月の間隔で、前記ＮＢＰまたは他の阻害剤の投与を２回以上受けた後に行われる。

【0063】

別の実施形態では、多重特異性抗体の第１の投与は、ヒト対象が、６週間または１２週間の間隔でＮＢＰの投与を２回以上受けた後に行われ、多重特異性抗体の第１の投与は、ＮＢＰの投与後６か月以内、例えば、３か月もしくは２か月以内、または１か月以内に行われる。

【0064】

いくつかのＮＢＰが医療目的で記載されている。本発明の使用の一実施形態では、ヒト対象は、クロドロネート、エチドロネート、パミドロネート、アレンドロネート、イバンドロネート、ゾレドロネート及びリセドロネートから選択されるＮＢＰで治療される。さらなる実施形態では、ＮＢＰは、パミドロネートまたはゾレドロネートである。

【0065】

一実施形態では、ＮＢＰはパミドロネートであり、前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与は、ヒト対象が、パミドロネートの投与を２回以上受けた後に行われ、少なくとも２回またはすべてのパミドロネート投与は、２週間～６週間の間隔（３週間～５週間の間隔など）、例えば、３週間～４週間の間隔であった。

【0066】

一実施形態では、多重特異性抗体の第１の投与は、ヒト対象が、３週間または４週間の間隔でパミドロネートの投与を２回以上受けた後に行われ、多重特異性抗体の第１の投与は、パミドロネートの投与後６か月以内、例えば、３か月もしくは２か月以内、または１か月以内に行われる。一実施形態では、パミドロネートは、３０ｍｇまたは９０ｍｇの用量で投与される。

【0067】

別の実施形態では、ＮＢＰはゾレドロネートであり、前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与は、ヒト対象が、ゾレドロネートの投与を２回以上受けた後に行われ、少なくとも２回またはすべてのゾレドロネート投与は、２週間～１６週間の間隔、例えば、１か月～３か月の間隔（１、２もしくは３か月の間隔など）、または４、８、もしくは１２週間の間隔であった。

【0068】

一実施形態では、多重特異性抗体の第１の投与は、ヒト対象が、１、２、または３か月の間隔でゾレドロネートの投与を２回以上受けた後に行われ、多重特異性抗体の第１の投与は、ゾレドロネートの投与後６か月以内、例えば、３か月もしくは２か月以内、または１か月以内に行われる。一実施形態では、ゾレドロネートは４ｍｇの用量で投与される。

【0069】

別の実施形態では、ＮＢＰはゾレドロネートであり、前記多重特異性抗体の第１の投与またはその後の投与は、ヒト対象が、ゾレドロネートの投与を２回以上受けた後に行われ、少なくとも２回またはすべてのゾレドロネート投与は、４か月～１４か月の間隔、例えば、６か月～１２か月の間隔であった。

【0070】

本発明による上記の使用のさらなる実施形態では、多重特異性抗体の投与後、ＮＢＰまたは他の阻害剤による治療が継続する。したがって、多重特異性抗体による治療の開始後、ＮＢＰまたは他の阻害剤は、多重特異性抗体の投与後に少なくとももう１回、例えば、２、３、４、５、６回以上投与される。したがって、ＮＢＰと抗体との治療は同時となる。

【0071】

一実施形態では、ヒト対象は、少なくとも６か月間（少なくとも９か月など）、例えば、１２か月間のＮＢＰまたは他の阻害剤治療を受けているか、またはそれに登録されている。

【0072】

さらに、多重特異性抗体は必要に応じて何度でも投与することができる。一実施形態では、治療は、複数回（２回～１００回など）、例えば、２回～５０回、例えば、２回～２５回、例えば、６回～２５回、または６回～１２回の、例えば、週に２回、毎週、隔週、または３～４週間の間隔での多重特異性抗体の投与を含む。

【0073】

したがって、例えば、一実施形態では、ＮＢＰ（または他の阻害剤）及び多重特異性抗体による治療は同時であり得る。例えば、３～４週間の間隔で２回以上のＮＢＰ投与を受けた患者は、ＮＢＰによる週３～４回の治療を継続しながら、一定期間、例えば、３～１２か月の多重特異性抗体による治療を開始する。同様に、多重特異性抗体による治療を受けた患者は、多重特異性抗体による治療を継続しながら、ＮＢＰによる３～４週間の治療を開始することができる。

【0074】

上述のように、いくつかの実施形態では、患者はＮＢＰ（のみ）で治療されるのではなく、メバロン酸経路の別の阻害剤で（も）治療され、阻害剤は、ファルネシルピロリン酸合成酵素（ＦＰＰＳ）またはメバロン酸経路のさらに下流の酵素を阻害する。一実施形態では、そのような他の阻害剤による治療は、イソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰ）の蓄積をもたらす。

【0075】

一実施形態では、阻害剤は、ＦＰＰＳ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１４３２４（ＦＰＰＳ＿ＨＵＭＡＮ））の阻害剤である。一実施形態では、阻害剤は、カルノシン酸である（Ｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１９，６２，２３，１０８６７－１０８９６）。別の実施形態では、阻害剤は、イソブチルアミンまたはｓｅｃ－ブチルアミンなどのアルキルアミンである（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，１０７：６５１，２００６）。別の実施形態では、阻害剤は、ゲラニル二リン酸合成酵素の阻害剤である。別の実施形態では、阻害剤は、イソペンテミルイソメラーゼの阻害剤である（Ｗａｎｇ Ｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１１；１８７：５０９９－５１１３）。別の実施形態では、阻害剤の組み合わせ、例えば、スクアレン合成酵素、ゲラニルゲラニルＰＰ合成酵素、及びファルネシルトランスフェラーゼの阻害剤の組み合わせが使用される。

【0076】

臨床適応症
ＮＢＰは、骨粗鬆症、高カルシウム血症、固形腫瘍（例えば、乳癌及び前立腺癌）または血液腫瘍（例えば、多発性骨髄腫）の転移による溶骨破壊の治療または予防に頻繁に使用される。

【0077】

前立腺癌及び乳癌患者におけるアミノビスホスホネートを含むビスホスホネートの使用は、Ｃｏｌｅｍａｎ（２０２０）Ｂｏｎｅ１４０：１１５５７０及びＤ’Ｏｒｏｎｚｏ ｅｔ ａｌ．（２０２１）Ｂｏｎｅ１４７：１１５９０７によって総説されており、Ｍｈａｓｋａｒ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｃｏｃｈｒａｎｅ Ｄａｔａｂａｓｅ Ｓｙｓｔ Ｒｅｖ１２（１２）ＣＤ００３１８８は、多発性骨髄腫におけるそれらの使用の総説を提供している（すべて参照により本明細書に組み込まれる）。

【0078】

本発明の使用の一実施形態では、治療されるヒト対象は、乳癌、前立腺癌、神経膠芽腫、肺癌、腎臓癌、または多発性骨髄腫と診断されている。

【0079】

骨粗鬆症の治療または予防におけるＮＢＰの使用は、例えば、Ｇｒｅｙ ａｎｄ Ｒｉｅｄ Ｔｈｅｒ Ｃｌｉｎ Ｒｉｓｋ Ｍａｎａｇ．２００６Ｍａｒ；２（１）：７７－８６によって総説されており、Ｄｒａｋｅ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎ Ｐｒｏｃ．２００８Ｓｅｐ；８３（９）：１０３２－１０４５による総説では、骨のパジェット病、骨に転移性の悪性腫瘍、多発性骨髄腫、及び悪性腫瘍の高カルシウム血症におけるＮＢＰの使用も総説されている。

【0080】

本発明の使用の一実施形態では、ヒト対象は、骨粗鬆症、骨のパジェット病、または悪性腫瘍の高カルシウム血症などの高カルシウム血症と診断されている。

【0081】

いくつかの実施形態では、ヒト対象は、骨粗鬆症、骨のパジェット病、または悪性腫瘍の高カルシウム血症などの高カルシウム血症の治療または予防のためにＮＢＰまたは他の阻害剤による治療を受けており、かつ、その後、（さらなる）がん疾患を診断され、前記（さらなる）がん疾患を本明細書に記載の多重特異性抗体にて治療を受ける対象である。

【0082】

多重特異性抗体
上記のように、本発明は、ヒトＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体に結合する第１の抗原結合領域、及び腫瘍細胞上に発現する標的に結合する第２の抗原結合領域を含む多重特異性抗体の使用に関する。

【0083】

一実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。一実施形態では、多重特異性抗体は、ヒトＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体のＶδ２鎖に結合する。一実施形態では、多重特異性抗体は、ヒトＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体のＶγ９鎖に結合する。

【0084】

一実施形態では、第１の抗原結合領域は単一ドメイン抗体である、及び／または、第２の抗原結合領域は単一ドメイン抗体である。

【0085】

一実施形態では、第１の抗原結合領域は、ＷＯ２０１５１５６６７３（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている抗体の群から選択される単一ドメイン抗体である。

【0086】

一実施形態では、第１の抗原結合領域は単一ドメイン抗体であり、以下のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む：
ａ）それぞれ配列番号１、２、及び３；
ｂ）それぞれ配列番号４、５、及び６；
ｃ）それぞれ配列番号７、８、及び９；
ｄ）それぞれ配列番号１０、１１、及び１２
ｅ）それぞれ配列番号１３、１４、及び１５；
ｆ）それぞれ配列番号１６、１７、及び１８；
ｇ）それぞれ配列番号１９、２０、及び２１；または
ｈ）それぞれ配列番号２２、２３、及び２４。

【0087】

一実施形態では、第１の抗原結合領域は、配列番号２５～３４から選択される配列を含む。別の実施形態では、第１の抗原結合領域は、配列番号２５～ＸＸから選択される配列のバリアントを含み、そのようなバリアントは、配列番号２５～ＸＸからなる群から選択される配列と、少なくとも９０％（少なくとも９２％など）例えば、少なくとも９４％（少なくとも９６％など）、例えば、少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む。

【0088】

一実施形態では、腫瘍細胞上で発現される標的は、ＣＤ１ｄ、ＥＧＦＲ、ＣＤ４０、ＰＳＭＡ及びＣＤ１２３からなる群から選択される。

【0089】

「ＣＤ１ｄ」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒトＣＤ１ｄタンパク質（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１５８１３（ＣＤ１Ｄ＿ＨＵＭＡＮ））を指す。

【0090】

「ＥＧＦＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒトＥＧＦＲタンパク質（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ００５３３（ＥＧＦＲ＿ＨＵＭＡＮ））を指す。

【0091】

「ＣＤ４０」という用語は、本明細書で使用される場合、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ２５９４２（ＴＮＲ５＿ＨＵＭＡＮ））、アイソフォームＩとしても知られるＣＤ４０タンパク質を指す。

【0092】

「ＰＳＭＡ」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒト前立腺特異的膜抗原タンパク質（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ０４６０９（ＦＯＬＨ１＿ＨＵＭＡＮ））を指す。

【0093】

「ＣＤ１２３」という用語は、本明細書で使用される場合、インターロイキン－３受容体アルファ鎖（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００２１７４．１）とも呼ばれるヒトＣＤ１２３タンパク質を指す。

【0094】

さらなる実施形態では、第２の抗原結合領域は単一ドメイン抗体であり、腫瘍細胞上で発現される標的は、ＣＤ１ｄ、ＰＳＭＡ、ＥＧＦＲ、ＣＤ４０、及びＣＤ１２３からなる群から選択される。

【0095】

一実施形態では、腫瘍細胞上で発現される標的はＣＤ１ｄであり、すなわち、第２の抗原結合領域はＣＤ１ｄに結合し、抗体で治療されるがんは、Ｔ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、くすぶり型骨髄腫、ホジキンリンパ腫、骨髄単球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、ヘアリー細胞白血病、及び脾辺縁帯リンパ腫などの血液系腫瘍、または腎細胞癌、黒色腫、結腸直腸癌、頭頸部癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、膵臓癌、胃食道癌、小腸癌、中枢神経系腫瘍、髄芽腫、肝細胞癌、卵巣癌、神経膠腫、神経芽腫、尿路上皮癌、膀胱癌、肉腫、陰茎癌、基底細胞癌、メルケル細胞癌、神経内分泌癌、神経内分泌腫瘍、原発不明癌（ＣＵＰ）、胸腺腫、外陰癌、子宮頸癌、精巣癌、胆管癌、虫垂癌、中皮腫、膨大部癌、肛門癌、絨毛癌などの固形腫瘍から選択される。

【0096】

一実施形態では、第２の抗原結合領域は、ヒトＣＤ１ｄに結合する単一ドメイン抗体であり、それぞれ配列番号３５、３６、及び３７のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。そのような単一ドメイン抗体は、ＷＯ２０１６１２２３２０及びＷＯ２０２００６０４０５（両方とも参照により組み込まれる）に記載されている。一実施形態では、抗体は、配列番号３８に記載の配列を含む。別の実施形態では、第２の抗原結合領域は、配列番号３８のバリアントを含み、そのようなバリアントは、配列番号３８に記載の配列と少なくとも９０％（少なくとも９２％など）、例えば、少なくとも９４％（少なくとも９６％など）、例えば、少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号３９に記載の配列を含む。別の実施形態では、抗体は、配列番号３９のバリアントを含み、そのようなバリアントは、配列番号３９に記載の配列と少なくとも９０％（少なくとも９２％など）、例えば、少なくとも９４％（少なくとも９６％など）、例えば、少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む。

【0097】

一実施形態では、腫瘍細胞上で発現される標的はＥＧＦＲである、すなわち、第２の抗原結合領域はＥＧＦＲに結合する。一実施形態では、第２の抗原結合領域は、ヒトＥＧＦＲに結合する単一ドメイン抗体であり、それぞれ配列番号４０、４１、及び４２のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。そのような単一ドメイン抗体は、ＷＯ２０２１０５２９９５（参照により組み込まれる）に記載されている。一実施形態では、抗体は、配列番号４３に記載の配列を含む。別の実施形態では、第２の抗原結合領域は、配列番号４３のバリアントを含み、そのようなバリアントは、配列番号４３に記載の配列と少なくとも９０％（少なくとも９２％など）、例えば、少なくとも９４％（少なくとも９６％など）、例えば、少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む。

【0098】

一実施形態では、腫瘍細胞上で発現される標的はＣＤ４０であり、すなわち第２の抗原結合領域はＣＤ４０に結合し、抗体で治療されるがんは慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、頭頸部癌、膵臓癌、卵巣癌、肺癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、Ｂ細胞リンパ腫／白血病、バーキットリンパ腫またはＢ型急性リンパ芽球性白血病である。

【0099】

一実施形態では、第２の抗原結合領域は、ヒトＣＤ４０に結合する単一ドメイン抗体であり、それぞれ配列番号４４、４５、及び４６のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。そのような単一ドメイン抗体は、ＷＯ２０２０１５９３６８（参照により組み込まれる）に記載されている。一実施形態では、抗体は、配列番号４７に記載の配列を含む。別の実施形態では、第２の抗原結合領域は、配列番号４７のバリアントを含み、そのようなバリアントは、配列番号４７に記載の配列と少なくとも９０％（少なくとも９２％など）、例えば、少なくとも９４％（少なくとも９６％など）、例えば、少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む。

【0100】

一実施形態では、腫瘍細胞上で発現される標的はＰＳＭＡであり、すなわち、第２の抗原結合領域はＰＳＭＡに結合し、抗体で治療されるがんは、前立腺癌、結腸直腸癌、肺癌、乳癌、子宮内膜癌及び卵巣癌、胃癌、腎細胞癌、尿路上皮癌、肝細胞癌、口腔扁平上皮癌、甲状腺腫瘍または神経膠芽腫である。

【0101】

一実施形態では、第２の抗原結合領域は、ヒトＰＳＭＡに結合する単一ドメイン抗体であり、それぞれ配列番号４８、４９、及び５０のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号５１に記載の配列を含む。別の実施形態では、第２の抗原結合領域は、配列番号５１のバリアントを含み、そのようなバリアントは、配列番号５１に記載の配列と少なくとも９０％（少なくとも９２％など）、例えば、少なくとも９４％（少なくとも９６％など）、例えば、少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む。

【0102】

一実施形態では、腫瘍細胞上で発現される標的はＣＤ１２３であり、すなわち、第２の抗原結合領域はＣＤ１２３に結合し、治療されるがんの抗体は、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、有毛細胞白血病、ホジキンリンパ腫、芽細胞性形質細胞様樹状突起腫瘍、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞慢性リンパ増殖性疾患または骨髄異形成症候群の治療に使用するための抗体である。

【0103】

一実施形態では、第２の抗原結合領域は、ヒトＣＤ１２３に結合する単一ドメイン抗体であり、それぞれ配列番号５２、５３、及び５４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。一実施形態では、抗体は、配列番号５５に記載の配列を含む。別の実施形態では、第２の抗原結合領域は、配列番号５５のバリアントを含み、そのようなバリアントは、配列番号５５に記載の配列と少なくとも９０％（少なくとも９２％など）、例えば、少なくとも９４％（少なくとも９６％など）、例えば、少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む。

【0104】

本発明で使用される多重特異性抗体は、本明細書に記載される二重特異性形式などの多重特異性のいずれかであり得、ヒト、ヒト化もしくはキメラ、またはこれらの組み合わせ、例えば、一方の抗原結合領域がヒト化され、他方がヒト化されていないものであり得る。

【0105】

本発明で使用される多重特異性抗体は、Ｆｃ領域などの定常領域配列を含んでもよいか、または含まなくてもよい。抗体の定常領域は、存在する場合、免疫系の様々な細胞（エフェクター細胞及びＴ細胞など）、ならびに補体活性化の古典的経路における第１の構成要素であるＣ１ｑなどの補体系の構成要素を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。しかしながら、いくつかの実施形態では、本抗体のＦｃ領域は不活性になるように修飾されており、「不活性」とは、個々の抗体の２つのＦｃ領域を介して、任意のＦｃγ受容体に結合したり、ＦｃＲのＦｃ媒介性架橋を誘導したり、または標的抗原のＦｃＲ媒介性架橋を誘導したりすることが少なくともできないＦｃ領域を意味する。更なる実施形態では、不活性Ｆｃ領域は、加えて、Ｃ１ｑに結合することができない。一実施形態では、抗体は、２３４位及び２３５位に変異（Ｃａｎｆｉｅｌｄ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９９１）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １７３：１４８３）、例えば、２３４位にＬｅｕからＰｈｅへの変異、及び２３５位にＬｅｕからＧｌｕへの変異を含有する（ＥＵ付番に従う、以下を参照されたい）。別の実施形態では、抗体は、２３４位にＬｅｕからＡｌａへの変異、２３５位にＬｅｕからＡｌａへの変異、及び３２９位にＰｒｏからＧｌｙへの変異を含有する。別の実施形態では、抗体は、２３４位にＬｅｕからＰｈｅへの変異、２３５位にＬｅｕからＧｌｕへの変異、及び２６５位にＡｓｐからＡｌａへの変異を含有する。

【0106】

本明細書に引用されるすべての参考文献、記事、刊行物、特許、特許公報、及び特許出願は、参照によりそれらの全体があらゆる目的で本明細書に組み込まれる。しかしながら、本明細書で引用されるいずれの参考文献、論文、刊行物、特許、特許公報、及び特許出願の言及も、それらが有効な先行技術を構成するか、または世界のいずれかの国で共通の一般知識の一部を形成するという承認または何らか形態の示唆ではなく、そのようにみなされるべきではない。

【実施例】

【0107】

末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、転移性乳癌と診断され、３か月～２．５年の範囲の間ＮＢＰで治療を受けた７人の患者から単離した。これらの患者のうち、３人はパミドロネート、３人はゾレドロネート、１人の患者は経口クロドロン酸で治療を受けていた。さらに、ＰＭＢＣを、１年間毎月ゾレドロネートの投与を受けていた多形膠芽細胞腫患者から単離した。６人の対象から、最後のＮＢＰ投与後２週間～１２週間の間にＰＭＢＣを単離した。

【0108】

使用した抗体は、Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞受容体のＶδ２鎖及び腫瘍標的ＣＤ１ｄに結合する二重特異性γδＴＣＥであった。抗体は、ＷＯ２０２００６０４０５の配列番号８７に記載されている。

【0109】

１０＾５個のＰＢＭＣを、標的γδＴＣＥまたは培地対照の存在下で、２．５＊１０＾４ ＭＭ１ｓ．ＣＤ１ｄ標的細胞（Ｌａｍｅｒｉｓ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ（２０２０）Ｎａｔ Ｃａｎｃｅｒ １，１０５４－１０６５）と共培養した。一晩培養した後、脱顆粒の尺度としてフローサイトメトリーを使用して、Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞上のＣＤ１０７ａ曝露を評価した。ＰＢＭＣを標的細胞株と共培養すると、Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞上で２０．２％の平均ＣＤ１０７ａ発現が誘導され、γδＴＣＥの存在下では６８．８％まで有意に増加した（ｐ＝０．０００９、ｎ＝８）（図１Ａ）。各個人の患者では、γδＴＣＥの存在下でＣＤ１０７ａ発現が増加した（図１Ｂ）。

【0110】

これは、そのようなＮＢＰで前治療を受けた患者由来のＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞が、γδＴＣＥによる活性化に応答することを示している。

【0111】

Ｖγ９Ｖδ２Ｔ 細胞結合後の相対標的細胞溶解を、γδＴＣＥ対培地対照（－）の存在下で、１０＾５個のＰＢＭＣを２．５＊１０＾４個のＭＭ１ｓ．ＣＤ１ｄ標的細胞と７日間共培養することによって決定した。フローサイトメトリー用の計数ビーズを使用して、生存可能な（７ＡＡＤ－）標的細胞の絶対数を定量した。ＭＭ１ｓ．ＣＤ１ｄ標的細胞の相対生存率は、培地対照と比較して、γδＴＣＥの存在下で平均５５．６％まで有意に減少した（ｐ＝０．００３、ｎ＝８）（図２）。

【0112】

これは、そのようなＮＢＰで前治療を受けた患者由来のＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞含有ＰＢＭＣが、γδＴＣＥの存在下で標的腫瘍細胞を死滅させることができたことを示している。

【0113】

γδＴＣＥまたは培地対照を用いて、ＰＢＭＣをＭＭ１ｓ．ＣＤ１ｄ標的細胞と４：１の比率で共培養した。フローサイトメトリー用の計数ビーズを使用して、Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞の絶対数を定量した。Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞の増殖を７日目と１４日目に評価し、０日目と比較してプロットした。

【0114】

培地対照と比較して、γδＴＣＥ結合後のＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞数の増加が７日目（１．１倍対１．８倍）及び１４日目（１．１倍対５．１倍）に観察された（ｐ＝ｎｓ、ｎ＝８）（図３）。

【0115】

同様の実験において、１００Ｕ／ｍｌ ＩＬ－２の存在下で、γδＴＣＥまたは培地対照を用いて、ＰＢＭＣをＭＭ１ｓ．ＣＤ１ｄ標的細胞と４：１の比率で共培養した。フローサイトメトリー用の計数ビーズを使用して、Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞の絶対数を定量した。Ｖγ９Ｖδ２Ｔ細胞の増殖を７日目と１４日目に評価し、０日目と比較してプロットした。培地対照と比較して、γδＴＣＥ結合後にＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞数の強い増加が７日目（１．０倍対７．３倍）及び１４日目（１．０倍ｖｓ５４．７倍）に観察された（ｎ＝１）（図４）。

【0116】

これは、そのようなＮＢＰで前治療を受けた患者由来のＶγ９Ｖδ２Ｔ細胞が、γδＴＣＥの存在下で増殖することができたことを示している。これらのインビトロ条件では、ＩＬ－２を添加すると増殖がより強くなった。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

2024538958000001.xml

【国際調査報告】