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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-10-28
(54)【発明の名称】Ｏ－ＧＬＣＮＡＣＡＳＥ（ＯＧＡ）阻害剤組合せ療法
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20241018BHJP
A61K 31/454 20060101ALI20241018BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20241018BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20241018BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241018BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20241018BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N
A61K31/454
A61P25/00
A61P25/28
A61K39/395 D
A61P43/00 121
A61P43/00 111
C07K16/18 ZNA
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024523928
(86)(22)【出願日】2022-10-21
(85)【翻訳文提出日】2024-04-22
(86)【国際出願番号】 US2022078475
(87)【国際公開番号】W WO2023070064
(87)【国際公開日】2023-04-27
(31)【優先権主張番号】63/270,820
(32)【優先日】2021-10-22
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100126778
【弁理士】
【氏名又は名称】品川 永敏
(74)【代理人】
【識別番号】100162684
【弁理士】
【氏名又は名称】呉 英燦
(72)【発明者】
【氏名】ビグラン，ケビン
(72)【発明者】
【氏名】フライシャー，アダム エス
(72)【発明者】
【氏名】マーゴット，ダスティン ジェイムズ
(72)【発明者】
【氏名】ナッサル，ヒュー エヌ
【テーマコード（参考）】
4C085
4C086
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB11
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC82
4C086GA07
4C086GA09
4C086GA10
4C086GA15
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA05
4C086ZA02
4C086ZA16
4C086ZC20
4C086ZC75
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA09
4H045BA72
4H045DA76
4H045DA83
4H045EA20
(57)【要約】
本発明は、アミロイドベータ沈着物を特徴とする疾患並びに／あるいはアミロイドベータ沈着物及び異常なタウ凝集を特徴とする疾患の進行を遅延させ、治療し、かつ／又は予防する方法を提供する。そのような方法は、そのような治療を必要とする患者に、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体及び有効量のＯＧＡ阻害剤を投与することを含む。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
アミロイドベータ（Ａβ）沈着物を特徴とする疾患を有する患者を治療する方法であって、それを必要とする前記患者に、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含み、前記ＯＧＡ阻害剤は、式：
【化1】
【請求項2】
前記アミロイドベータ（Ａβ）沈着物を特徴とする疾患が、前臨床的アルツハイマー病（ＡＤ）、臨床的ＡＤ、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ認知症、中等度ＡＤ認知症、重度ＡＤ認知症、ダウン症候群、臨床的脳アミロイド血管症、及び前臨床的脳アミロイド血管症からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルが、以下のピペリジン環上の４位の酸素に対してシス配置にある、請求項１に記載の方法。【化2】
【請求項4】
前記ＯＧＡ阻害剤が、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドである、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
前記ＯＧＡ阻害剤が、結晶性である、請求項４に記載の方法。
【請求項6】
前記化合物が、１５．３°、２１．６°、２２．２°、２２．７°、２３．５°、２４．３°、及び２６．８°からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせた、１２．１°の回折角２－シータでのＸ線粉末回折スペクトルのピークを特徴とし、前記回折角の許容誤差が、０．２度である、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲが相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲがＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１０によって与えられる、又は
ｉｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号２０によって与えられる、請求項１に記載の方法。
【請求項8】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号２によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１２によって与えられる、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を含み、ｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号４によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１４によって与えられる、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
アミロイドベータ（Ａβ）沈着物を特徴とする疾患を有する患者を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含み、前記ＯＧＡ阻害剤が、式：【化3】
【請求項11】
前記アミロイドベータ（Ａβ）沈着物を特徴とする疾患が、前臨床的アルツハイマー病、臨床的ＡＤ、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ認知症、中等度ＡＤ認知症、重度ＡＤ認知症、ダウン症候群、臨床的脳アミロイド血管症、及び前臨床的脳アミロイド血管症からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルが、以下のピペリジン環上の４位の酸素に対してシス配置にある、請求項１０に記載の方法。【化4】
【請求項13】
前記ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルが、以下のピペリジン環上の４位の酸素に対してトランス配置にある、請求項１０に記載の方法。【化5】
【請求項14】
前記ＯＧＡ阻害剤が、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドである、請求項１２に記載の方法。
【請求項15】
前記ＯＧＡ阻害剤が、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドである、請求項１３に記載の方法。
【請求項16】
前記ＯＧＡ阻害剤が、結晶性である、請求項１４に記載の方法。
【請求項17】
前記ＯＧＡ阻害剤が、５．８°、１３．０°、１４．３°、１７．５°、２０．４°、２１．４°、及び２２．２°からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせた、１３．５°の回折角２－シータでのＸ線粉末回折スペクトルのピークを特徴とし、前記回折角の許容誤差が、０．２度である、請求項１５に記載の方法。
【請求項18】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲが相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲがＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１０によって与えられる、又は
ｉｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号２０によって与えられる、請求項１０に記載の方法。
【請求項19】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号２によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１２によって与えられる、請求項１８に記載の方法。
【請求項20】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を含み、ｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号４によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１４によって与えられる、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
アミロイドベータ（Ａβ）沈着物及び異常なタウ凝集を特徴とする疾患を有する患者を治療する方法であって、それを必要とする前記患者に、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含み、前記ＯＧＡ阻害剤は、式：
【化6】
【請求項22】
前記アミロイドベータ（Ａβ）沈着物及び異常なタウ凝集を特徴とする疾患が、前臨床的アルツハイマー病（ＡＤ）、臨床的ＡＤ、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ認知症、中等度ＡＤ認知症、重度ＡＤ認知症、ダウン症候群、臨床的脳アミロイド血管症、及び前臨床的脳アミロイド血管症からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項23】
前記ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルが、以下のピペリジン環上の４位の酸素に対してシス配置にある、請求項２１に記載の方法。【化7】
【請求項24】
前記ＯＧＡ阻害剤が、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドである、請求項２３に記載の方法。
【請求項25】
前記ＯＧＡ阻害剤が、結晶性である、請求項２４に記載の方法。
【請求項26】
前記化合物が、１５．３°、２１．６°、２２．２°、２２．７°、２３．５°、２４．３°、及び２６．８°からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせた、１２．１°の回折角２－シータでのＸ線粉末回折スペクトルのピークを特徴とし、前記回折角の許容誤差が、０．２度である、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲが相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲがＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１０によって与えられる、又は
ｉｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号２０によって与えられる、
請求項２１に記載の方法。
【請求項28】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号２によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１２によって与えられる、請求項２７に記載の方法。
【請求項29】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を含み、ｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号４によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１４によって与えられる、請求項２８に記載の方法。
【請求項30】
アミロイドベータ（Ａβ）沈着物及び異常なタウ凝集を特徴とする疾患を有する患者を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含み、前記ＯＧＡ阻害剤が、式：【化8】
【請求項31】
前記アミロイドベータ（Ａβ）沈着物及び異常なタウ凝集を特徴とする疾患が、前臨床的アルツハイマー病、臨床的ＡＤ、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ認知症、中等度ＡＤ認知症、重度ＡＤ認知症、ダウン症候群、臨床的脳アミロイド血管症、及び前臨床的脳アミロイド血管症からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項32】
前記ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルが、以下のピペリジン環上の４位の酸素に対してシス配置にある、請求項３０に記載の方法。【化9】
【請求項33】
前記ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルが、以下のピペリジン環上の４位の酸素に対してトランス配置にある、請求項３０に記載の方法。【化10】
【請求項34】
前記ＯＧＡ阻害剤が、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドである、請求項３２に記載の方法。
【請求項35】
前記ＯＧＡ阻害剤が、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドである、請求項３３に記載の方法。
【請求項36】
前記ＯＧＡ阻害剤が、結晶性である、請求項３４に記載の方法。
【請求項37】
前記ＯＧＡ阻害剤が、５．８°、１３．０°、１４．３°、１７．５°、２０．４°、２１．４°、及び２２．２°からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせた、１３．５°の回折角２－シータでのＸ線粉末回折スペクトルのピークを特徴とし、前記回折角の許容誤差が、０．２度である、請求項３５に記載の方法。
【請求項38】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲが相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲがＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１０によって与えられる、又は
ｉｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号２０によって与えられる、請求項３０に記載の方法。
【請求項39】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号２によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１２によって与えられる、請求項３８に記載の方法。
【請求項40】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を含み、ｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号４によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１４によって与えられる、請求項３９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、１つ以上のＯ－ＧｌｃＮＡｃａｓｅ（「ＯＧＡ」）阻害剤と１つ以上の抗Ｎ３ｐＧｌｕアミロイドβ（抗Ｎ３ｐＧ Ａβ）抗体との組合せ、並びにｉ）アミロイドベータ（Ａβ）沈着物及び／又はｉｉ）アミロイドベータ（Ａβ）沈着物とタウ媒介性神経変性との組合せを特徴とする障害の治療のためにそれを使用する方法に関する。本開示のいくつかの態様は、アルツハイマー病（ＡＤ）の治療に関する。
【0002】
アルツハイマー病は、アミロイドベータ沈着物及び／又は異常なタウ凝集によって病理学的に特徴付けられる破壊的な神経変性疾患である。ＡＤは世界中で何百万人もの人々に影響を及ぼしており、ＡＤの治療は社会の最も重要な満たされていないニーズの１つである。ＡＤの神経病理学的特徴は、過剰リン酸化タウタンパク質を含む細胞内神経原線維変化の存在である。ＡＤの別の病理学的特徴は、アミロイドベータ（Ａβ）沈着物の存在である。タウとＡβ病理との間の相互作用は、依然として解明されている最中である。Ａβがタウ病理を引き起こし、Ａβとタウとの間のより複雑で相乗的な相互作用が後の段階で現れ、疾患の進行を促進する可能性がある（Ｂｕｓｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ２３：１１８３－９３（２０２０））。
【0003】
脳浸透性であるＯＧＡ阻害剤が、アルツハイマー病などのタウ媒介性神経変性障害のための治療を提供することが望まれる。Ａβを標的とする抗体（抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体など）は、対象の脳におけるアミロイド沈着物の除去において有望であることが示されており、アルツハイマー病の治療薬として使用／開発されている。本開示は、ｉ）抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体と組み合わせたＯＧＡの阻害剤である特定の化合物、並びにｉｉ）異常なタウ及び／又はアミロイド沈着物によって媒介される疾患、例えばＡＤを治療する関連方法を提供する。
【0004】
対形成したらせん状フィラメント（ＰＨＦ）及び直線状又はねじれ状フィラメントのような、神経原線維変化（ＮＦＴ）及び神経絨毛糸（ＮＴ）を生じさせるフィラメント状構造への微小管関連タンパク質タウのオリゴマー化は、アルツハイマー病及び他のタウオパチーの決定的な病理学的特徴の１つである。アルツハイマー病を有する個体の脳におけるＮＦＴの数は、疾患の重症度と密接に相関する。これは、タウがニューロン機能不全及び神経変性において重要な役割を有することを示唆する（Ｎｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ．，７１（５），３６２－３８１（２０１２））。タウ病理は、ＰＳＰにおける疾患期間と相関することが示されており、より攻撃的な疾患経過を有する症例は、より遅い進行を有する症例よりも高いタウ負荷を有する。（Ｗｉｌｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ，１３０，１５６６－７６（２００７））。近年の研究（Ｙｕｚｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ，４（８），４８３－４９０（２００８））は、アルツハイマー病及び関連するタウ媒介性神経変性障害の治療においてタウ過剰リン酸化及び病理学的タウへの凝集を制限するためのＯ－ＧｌｃＮＡｃａｓｅ（ＯＧＡ）阻害剤の治療可能性を支持している。具体的には、ＯＧＡ阻害剤であるチアメット－Ｇは、ＪＮＰＬ３タウマウスモデルにおける運動神経喪失の遅延（Ｙｕｚｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ，８，３９３－３９９（２０１２））、並びにＴｇ４５１０タウマウスモデルにおけるタウ病理及び変性神経突起の低減（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，７９，３０７－３１３（２０１４））に関連している。したがって、ＯＧＡ阻害剤は、ＮＦＴ及びＮＴなどの過剰リン酸化病理形態のタウの蓄積を低減させるための有効な治療アプローチとして認識されている。米国特許第９，１２０，７８１号は、ＯＧＡ阻害活性を有し、ＯＧＡの欠乏若しくは過剰発現、及び／又は２－アセトアミド－２－デオキシ－５β－Ｄ－グルコピラノシド（Ｏ－ＧｌｃＮＡｃ）の蓄積若しくは欠乏に関する疾患及び障害を治療する上で有用であるとして更に開示される、ヘキサヒドロベンゾオキサゾール及びヘキサヒドロベンゾチアゾール誘導体を開示している。更に、ＵＳ２０１６／００３１８７１は、アルツハイマー病を治療するためのある特定のグリコシダーゼ阻害剤を開示している。
【0005】
脳アミロイド沈着物の形態でのアミロイド－βペプチドの蓄積は、アルツハイマー病における初期の必須事象であり、神経変性をもたらし、その結果、認知及び機能障害等の臨床症状の発症をもたらす（Ｓｅｌｋｏｅ，ＪＡＭＡ ２８３：１６１５－７（２０００）；Ｈａｒｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９７：３５３－６（２００２）；Ｍａｓｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｉｓ．Ｐｒｉｍｅｒｓ １：１５０５６（２０１５）；及びＳｅｌｋｏｅ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８：５９５－６０８（２０１６））。アミロイドベータは、アミロイド前駆体タンパク質（amyloid precursor protein：ＡＰＰ）と呼ばれるより大きな糖タンパク質のタンパク質分解的切断によって形成される。ＡＰＰは、多くの組織において、しかし特にニューロンシナプスにおいて発現される、内在性膜タンパク質である。ＡＰＰは、γ－セクレターゼによって切断されて、３７～４９アミノ酸残基のサイズの範囲にわたるペプチドの群を包含するＡβペプチドを放出する。Ａβモノマーは、オリゴマー、プロトフィブリル及びアミロイド原線維を含む、様々な種類の高次構造に凝集する。アミロイドオリゴマーは可溶性であり、脳全体に広がり得るが、一方でアミロイド原線維はより大きくかつ不溶性であり、更に凝集してアミロイド沈着物又はプラークを形成し得る。ヒト患者に見られるアミロイド沈着物は、Ａβペプチドの異種混合物を含み、その一部はＮ末端短縮化を含み、更に、Ｎ末端修飾、例えばＮ末端ピログルタミン酸残基（ｐＧｌｕ）などを含み得る。ヒト患者において見出されるアミロイド沈着物は、Ａβペプチドの不均一混合物を含む。Ｎ３ｐＧｌｕＡβ（Ｎ３ｐＧＡβ、Ｎ３ｐＥＡβ、ＡβｐＥ３－４２、又はＡβｐ３－４２とも呼ばれる）は、Ａβペプチドの切形形態であり、アミロイド沈着物中にのみ認められる。Ｎ３ｐＧｌｕＡβは、ヒトＡβのＮ末端における最初の２つのアミノ酸残基を欠失しており、Ａβの第３のアミノ酸位置におけるグルタミン酸に由来したピログルタミン酸塩を有する。Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβペプチドは、脳の中に沈着したＡβの微量構成要素であるが、研究は、Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβペプチドが積極的な凝集特性を有し、沈着カスケードにおいて早期に蓄積することを示唆している。
【0006】
Ｎ３ｐＧｌｕＡβに対する抗体は、当該技術分野において既知である。例えば、米国特許第８，６７９，４９８号、米国特許第８，９６１，９７２号、米国特許第１０，６４７，７５９号及び米国特許第１１，０７８，２６１号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）は、抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体、抗体を作製する方法、抗体製剤、及びそのような抗体を用いてアルツハイマー病などの疾患を治療する方法を開示している。
【0007】
沈着物に見られる、Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβを含むＡβに対する抗体の長期慢性投与による受動免疫は、様々な動物モデルにおける脳内のＡβ凝集体を破壊し、沈着物のクリアランスを促進することが示されている。ドナネマブ（米国特許第８，６７９，４９８号に開示されている）は、脳内のアミロイド沈着物にのみ存在するアミロイドベータ（Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ）エピトープの３番目のアミノ酸のピログルタマート改変に対する抗体である。
【0008】
ドナネマブの治療及び予防戦略は、既存の脳アミロイド負荷を有する早期症候性ＡＤ患者の集団におけるアミロイド沈着物に特異的なＮ３ｐＧｌｕ Ａβを標的とすることを含む。この理論的根拠は、Ａβの産生及び沈着がＡＤの病因における早期の必要な事象であることを述べているＡＤのアミロイド仮説に基づいている。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＳｅｌｋｏｅ，ＪＡＭＡ ２８３：１６１５－１６１７（２０００）を参照されたい。ドナネマブは近年、アミロイド沈着物の除去及びＡＤ進行の遅延において有効性／効力を示している。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＭｉｎｔｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３８４．１８：１６９１－１７０４（２０２１）を参照されたい。
【0009】
抗Ｎ３ｐＧ Ａβに特異的に結合し、ヒト対象の脳内のアミロイドベータを減少させる抗体とＯＧＡ阻害剤との組合せは、ＡＤなどの疾患の治療を提供することが望ましい。そのような組合せは、病原性タウ種及びタウ凝集体の減少並びにアミロイドベータ（Ａβ）の減少を可能にする。そのような組合せはまた、好ましくは、いずれかの分子単独よりも効果的であろう。例えば、そのような組合せによる治療は、単独で使用される各分子と比較して、いずれか又は両方の分子のより低い用量の使用を可能にし、効能を維持しながら、より低い副作用（又は一方若しくは他方の療法のより短い期間）をもたらす可能性がある。本明細書で提供される組合せは、アミロイドベータを減少させるだけでなく、異常なタウ、病理学的タウへのタウ凝集、及びＡＤなどの疾患の治療のためのその増殖も減少させると考えられる。
【0010】
一態様では、本開示は、アミロイドベータ（Ａβ）沈着物を特徴とする疾患を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、アミロイドベータ沈着物及び異常なタウ凝集を特徴とする疾患を有する患者を治療する方法に関する。この方法は、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて、それを必要とする患者に投与することを含み、ＯＧＡ阻害剤は、式：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルは、ピペリジン環の４位の酸素に対してシス配置である：
【化1】
【化2】
【0011】
いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドである。いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は結晶性である。いくつかの実施形態では、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドは、１２．１°の回折角２θにおけるＸ線粉末回折スペクトルのピークと、１５．３°、２１．６°、２２．２°、２２．７°、２３．５°、２４．３°及び２６．８°からなる群から選択される１つ以上のピークとの組合せを特徴とし、回折角の許容範囲は０．２度である。本開示の別の態様は、アミロイドベータ（Ａβ）沈着物を特徴とする疾患を有する患者を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含む、方法に関し、ＯＧＡ阻害剤は、式：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、本開示は、アミロイドベータ沈着物及び異常なタウ凝集を特徴とする疾患を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルは、ピペリジン環の４位の酸素に対してシス配置である：
【化3】
【化4】
【0012】
いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルは、ピペリジン環の４位の酸素に対してトランス配置である：
【化5】
【0013】
いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドである。実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドである。いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は結晶性である。いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は、５．８°、１３．０°、１４．３°、１７．５°、２０．４°、２１．４°、及び２２．２°からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせた、１３．５°の回折角２－シータでのＸ線粉末回折スペクトルのピークを特徴とし、回折角の許容誤差が、０．２度である。
【0014】
本開示の別の態様は、アミロイドベータ（Ａβ）沈着物を特徴とする疾患を有する患者を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含む、方法に関し、ＯＧＡ阻害剤は、式：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、本開示は、アミロイドベータ沈着物及び異常なタウ凝集を特徴とする疾患を有する患者を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤の５位のメチルは、ピペリジン環の３位の酸素に対してシス配置である：
【化6】
【化7】
【0015】
いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤の５位のメチルは、ピペリジン環の３位の酸素に対してトランス配置である：
【化8】
【0016】
いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は、１－（２－（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（６－フルオロ－２－メチルベンゾ［ｄ］チアゾール－５－イル）メチル）－５－メチルピロリジン－３－イル）オキシ）－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－６－イル）エタン－１－オンである。いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は結晶性である。
【0017】
本開示の更に別の態様は、アミロイドベータ沈着物及び／又は異常なタウ凝集を特徴とする疾患を有する患者を治療する方法であって、それを必要とする患者に有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含む、方法に関し、ＯＧＡ阻害剤が式：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルは、ピペリジン環の４位の酸素に対してシス配置である：
【化9】
【化10】
【0018】
いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドである。いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は結晶性である。いくつかの実施形態では、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドは、１２．１°の回折角２θにおけるＸ線粉末回折スペクトルのピークと、１５．３°、２１．６°、２２．２°、２２．７°、２３．５°、２４．３°及び２６．８°からなる群から選択される１つ以上のピークとの組合せを特徴とし、回折角の許容範囲は０．２度である。
【0019】
本開示の更に別の態様は、アミロイドベータ沈着物及び／又は異常なタウ凝集を特徴とする疾患を有する患者を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含む、方法に関し、ＯＧＡ阻害剤は、以下の式：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルは、ピペリジン環の４位の酸素に対してシス配置である：
【化11】
【化12】
【0020】
いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルは、ピペリジン環の４位の酸素に対してトランス配置である：
【化13】
【0021】
いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドである。実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドである。いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は結晶性である。いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は、５．８°、１３．０°、１４．３°、１７．５°、２０．４°、２１．４°、及び２２．２°からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせた、１３．５°の回折角２－シータでのＸ線粉末回折スペクトルのピークを特徴とし、回折角の許容誤差が、０．２度である。
【0022】
本開示の更に別の態様は、アミロイドベータ沈着物及び／又は異常なタウ凝集を特徴とする疾患を有する患者を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含む、方法に関し、ＯＧＡ阻害剤は、以下の式：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤の５位のメチルは、ピペリジン環の３位の酸素に対してシス配置である：
【化14】
【化15】
【0023】
いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤の５位のメチルは、ピペリジン環の３位の酸素に対してトランス配置である：
【化16】
【0024】
いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は、１－（２－（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（６－フルオロ－２－メチルベンゾ［ｄ］チアゾール－５－イル）メチル）－５－メチルピロリジン－３－イル）オキシ）－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－６－イル）エタン－１－オンである。いくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は結晶性である。
【0025】
本発明はまた、認知疾患又は神経変性疾患を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体を含む治療を有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。本発明は更に、臨床的又は前臨床的ＡＤを治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体を含む治療を有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。本発明はまた、前駆期ＡＤ（軽度認知障害、又はＭＣＩとも呼ばれることがある）、軽度ＡＤ認知症、中等度ＡＤ認知症及び／又は重度ＡＤ認知症を治療する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体を含む治療を有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
【0026】
いくつかの実施形態では、本開示は、前臨床的アルツハイマー病（ＡＤ）（発症前ＡＤとも呼ばれる）、臨床的ＡＤ、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ認知症、中等度ＡＤ認知症、重度ＡＤ認知症、ダウン症候群、臨床的脳アミロイド血管症、又は前臨床的脳アミロイド血管症と診断された患者における機能／認知低下を治療、予防、又は遅延させる方法を提供する。そのような方法は、そのような治療を必要とする患者に、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を有効量の本明細書に開示されるＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含む。本発明は更に、脳脊髄液（ＣＳＦ）中のＡβ１－４２のレベルが低い若しくは非常に低い、及び／又は脳内のＡβ沈着物が低い若しくは非常に低い、臨床的に無症候性の対象における記憶喪失、認知低下、又は機能低下を予防する方法であって、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を、有効量の本明細書に開示されるＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、臨床的に無症候性の対象は、アルツハイマー病を引き起こす遺伝子変異を有することが知られている。本開示において、「アルツハイマー病を引き起こす遺伝子変異を有することが知られている臨床的に無症候性の対象」は、ＰＳＥＮ１ Ｅ２８０Ａアルツハイマー病を引き起こす遺伝子変異（Ｐａｉｓａ変異）、常染色体優性アルツハイマー病を引き起こす遺伝子変異、又は１つ若しくは２つのＡＰＯＥ ｅ４対立遺伝子を保有することによってＡＤを発症するリスクがより高い遺伝子変異を有することが知られている患者を含む。いくつかの実施形態では、本開示は、ＰＳＥＮ １ Ｅ２８０Ａアルツハイマー病を引き起こす遺伝子変異（Ｐａｉｓａ変異）、常染色体優性アルツハイマー病を引き起こす遺伝子変異、又は１つ若しくは２つのＡＰＯＥ ｅ４対立遺伝子を保有することが知られている患者の認知／機能低下を治療、予防、又は遅らせる方法であって、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を有効量の本明細書に開示されるＯＧＡ阻害剤と組み合わせてそのような治療を必要とする患者に投与することを含む方法を提供する。
【0027】
いくつかの実施形態では、本開示はまた、前臨床的アルツハイマー病（ＡＤ）、臨床的ＡＤ、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ認知症、中等度ＡＤ認知症、及び重度ＡＤ認知症と診断された患者の認知／機能低下を治療、予防、又は遅らせる方法であって、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を本明細書に開示される有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせてそのような治療を必要とする患者に投与することを含む方法を提供する。本発明は更に、脳内の低レベルのＮＦＴ及び／又は脳内の低レベルのアミロイド沈着物を有する臨床的に無症候性の患者における記憶喪失又は認知／機能低下を予防する方法であって、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を本明細書に開示される有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
【0028】
本発明の別の実施形態は、軽度認知障害のＡＤへの進行を予防するための方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を有効量のＯＧＡ阻害剤と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
【0029】
本実施形態はまた、療法で使用するために、ＯＧＡ阻害剤との同時、別個、又は連続的な組合せで使用するための抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を提供する。
【0030】
本発明は、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を有するＯＧＡ阻害剤の医薬組成物と組み合わせて、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を有する抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を含む医薬組成物を更に提供する。
【0031】
更に、本発明は、抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体及びＯＧＡ阻害剤を含むキットを提供する。本発明は、（１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と共に）抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を含む医薬組成物と、（１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と共に）ＯＧＡ阻害剤を含む医薬組成物と、を含むキットを更に提供する。本明細書で使用される場合、「キット」は、各成分の別個の容器を含み、単一のパッケージの中で、１つの成分は抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体であり、別の成分はＯＧＡ阻害剤である。「キット」はまた、各成分の別個の容器を含み得、別個のパッケージの中で１つの成分は抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体であり、別の成分はＯＧＡ阻害剤であり、各成分を組み合わせて投与するための指示書を有する。
【0032】
本発明は、ＡＤ、軽度ＡＤ、前駆期ＡＤの治療のための、又は軽度認知障害のＡＤへの進行の防止のための医薬品の製造のための抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体の使用を更に提供し、医薬品は、ＯＧＡ阻害剤と同時に、別々に、又は順次に投与される。
【0033】
本開示のいくつかの実施形態では、抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体は、重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含み、ＨＣは、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＬＣは、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含み、当該ＨＣＶＲは、相補性決定領域（ＣＤＲ）のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、当該ＬＣＶＲは、ＣＤＲのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本発明の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体は、配列番号５によって与えられるＬＣＤＲ１のアミノ酸配列、配列番号６によって与えられるＬＣＤＲ２のアミノ酸配列、配列番号７によって与えられるＬＣＤＲ３のアミノ酸配列、配列番号８によって与えられるＨＣＤＲ１のアミノ酸配列、配列番号９によって与えられるＨＣＤＲ２のアミノ酸配列、及び配列番号１０によって与えられるＨＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する。
【0034】
一実施形態では、本発明は、ＬＣＶＲ及びＨＣＶＲを含む抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を提供し、ＬＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号１によって与えられ、ＨＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号２によって与えられる。更なる実施形態では、本発明は、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を含む抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を提供し、ＬＣのアミノ酸配列は配列番号３によって与えられ、ＨＣのアミノ酸配列は配列番号４によって与えられる。
【0035】
いくつかの実施形態では、本発明の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体は、配列番号１５によって与えられるＬＣＤＲ１のアミノ酸配列、配列番号１６によって与えられるＬＣＤＲ２のアミノ酸配列、配列番号１７によって与えられるＬＣＤＲ３のアミノ酸配列、配列番号１８によって与えられるＨＣＤＲ１のアミノ酸配列、配列番号１９によって与えられるＨＣＤＲ２のアミノ酸配列、及び配列番号２０によって与えられるＨＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する。一実施形態では、本発明は、ＬＣＶＲ及びＨＣＶＲを含む抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を提供し、ＬＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号１１によって与えられ、ＨＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号１２によって与えられる。更なる実施形態では、本発明は、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を含む抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体を提供し、ＬＣのアミノ酸配列は配列番号１３によって与えられ、ＨＣのアミノ酸配列は配列番号１４によって与えられる。
【0036】
本発明の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体は、公知の方法を用いて調製及び精製することができる。例えば、抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体のＨＣをコードするｃＤＮＡ配列及び抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体のＬＣをコードするｃＤＮＡ配列をクローニングし、ＧＳ（グルタミンシンテターゼ）発現ベクター中に操作してもよい。次に、操作した免疫グロブリン発現ベクターを、ＣＨＯ細胞に安定的にトランスフェクトし得る。当業者が理解するように、抗体の哺乳動物発現は、典型的にはＦｃ領域の高度に保存されたＮ－グリコシル化部位でグリコシル化をもたらすであろう。安定なクローンは、アミロイド沈着物又はＮ３ｐＧ Ａβに特異的に結合する抗体の発現について検証され得る。陽性クローンを、バイオリアクターでの抗体産生のために無血清培養培地中に拡大し得る。抗体が分泌された培地を、従来の技術によって精製し得る。例えば、培地を、リン酸緩衝生理食塩水などの適合性のある緩衝液で平衡化されたプロテインＡ又はＧ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦカラムに都合よく適用し得る。カラムは、非特異的結合成分を除去するために洗浄され得る。結合した抗体は、例えばｐＨ勾配によって溶離され得、抗体画分は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥなどの技術を使用して検出され得、その後プールされ得る。抗体を、一般的な技術を使用して濃縮及び／又は滅菌濾過し得る。可溶性凝集体及び多量体を、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む一般的な技術によって効果的に除去し得る。生成物を、例えば－７０℃で直ちに凍結し得るか、又は凍結乾燥し得る。
【0037】
本発明の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体は、ヒトＮ３ｐＧ Ａβ（Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβともいう）に結合する。一実施形態では、本発明の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体は、ヒトＮ３ｐＧ Ａβの立体配座エピトープに結合する。
【0038】
本明細書で使用する場合、「抗体」とは、ジスルフィド結合によって相互に接続される２つの重鎖（ＨＣ）と、２つの軽鎖（ＬＣ）と、を含む、免疫グロブリン分子である。各ＬＣ及びＨＣのアミノ末端部分は、そこに含まれる相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）を介した抗原認識に関与する可変領域を含む。ＣＤＲには、フレームワーク領域と呼ばれる、より保存された領域が点在している。本発明の抗体のＬＣＶＲ及びＨＣＶＲ領域内のＣＤＲドメインへのアミノ酸の割り当ては、次のようなＫａｂａｔ番号付け規則（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２－９３（１９７１）；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１））、及びＮｏｒｔｈ番号付け法（Ｎｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ａ Ｎｅｗ Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＤＲ Ｌｏｏｐ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４０６：２２８－２５６（２０１１））に基づく。上記の方法に従って、本発明の抗体のＣＤＲを決定した。
【0039】
本発明の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体には、カッパＬＣ及びＩｇＧ ＨＣが含まれる。特定の実施形態では、本発明の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプのものである。
【0040】
本発明の抗体は、モノクローナル抗体（「ｍＡｂ」）である。モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ技術、組換え技術、ファージ提示技術、合成技術、例えば、ＣＤＲ移植、又はそのような技術若しくは当該技術分野で既知の他の技術の組合せにより産生することができる。本発明のモノクローナル抗体は、ヒト抗体又はヒト化抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト抗体に由来するＣＤＲを取り囲む１つ以上のヒトフレームワーク領域（又は実質的にヒトフレームワーク領域）を含有するように操作することができる。ヒトフレームワークの生殖系列配列は、ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ（登録商標））からそのウェブサイト（ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ）を通して、又はＴｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ＦａｃｔｓＢｏｏｋ ｂｙ Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ ａｎｄ Ｇｅｒａｒｄ Ｌｅｆｒａｎｃ，Ａｃａｄｅｍｉｃ ２５ Ｐｒｅｓｓ，２００１，ＩＳＢＮ ０１２４４１３５１から得ることができる。本発明の別の実施形態では、抗体又は抗体をコードする核酸は単離形態で提供される。本明細書で使用する場合、「単離」という用語は、細胞環境に見出される任意の他の高分子種を含まないか、又は実質的に含まない、タンパク質、ペプチド、又は核酸を指す。「実質的に含まない」とは、本明細書中で使用する場合、目的のタンパク質、ペプチド、又は核酸が（モル基準で）８０％超、好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超の対象の高分子種を含むことを意味する。
【0041】
本発明の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体又はそのＯＧＡ阻害剤との組合せは、医薬組成物として投与される。本発明の医薬組成物は、非経口経路（例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内）によって、本明細書に記載の疾患又は障害のリスクがあるか、又はそれを示す患者に投与することができる。皮下及び静脈内経路が好ましい。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、静脈内注入によって投与される。
【0042】
「治療」、「治療すること」又は「治療する」などの用語には、患者の既存の症状、状態、疾患、又は障害の進行又は重症度の抑制、遅延、又は停止が含まれる。「患者」又は「対象」という用語は、ヒトを指す。
【0043】
用語「予防」は、疾患の発症又は進行を予防するための無症候性患者又は前臨床的アルツハイマー病を有する患者への本発明の抗体の予防的投与を意味する。
【0044】
「Ａβの沈着を特徴とする疾患」又は「Ａβ沈着物を特徴とする疾患」という用語は、対象の脳内又は脳脈管構造内のＡβ沈着物を病理学的に特徴とする疾患である。これには、アルツハイマー病（ＡＤ）、ダウン症候群（ＤＳ）、及び脳アミロイド血管症（ＣＡＡ）などの疾患が含まれる。アルツハイマー病の臨床診断、病期分類又は進行は、既知の技術を使用し、結果を観察することにより、当業者のような担当診断医又は医療専門家によって容易に判定され得る。これには通常、何らかの形態の脳プラークイメージング、精神的又は認知的評価（例えば、臨床的認知症重症度判定尺度の合計点数（Clinical Dementia Rating-summary of boxes（ＣＤＲ－ＳＢ））、簡易認知機能検査（Mini-Mental State Exam（ＭＭＳＥ））又はアルツハイマー病評価尺度の認知機能評価（Alzheimer's Disease Assessment Scale-Cognitive（ＡＤＡＳ－Ｃｏｇ）））又は機能的評価（例えば、アルツハイマー病共同研究－日常生活動作評価（Alzheimer's Disease Cooperative Study-Activities of Daily Living（ＡＤＣＳ－ＡＤＬ）））が含まれる。認知及び機能評価を使用して、患者の認知（例えば、認知低下）及び機能（例えば、機能低下）の変化を決定することができる。本明細書で使用される「臨床的アルツハイマー病」は、アルツハイマー病の診断された段階である。それには、前駆期アルツハイマー病、軽度アルツハイマー病認知症、中等度アルツハイマー病認知症、及び重度アルツハイマー病認知症と診断された状態が含まれる。「前臨床的アルツハイマー病」という用語は、臨床的アルツハイマー病に先行する段階であり、バイオマーカーの測定可能な変化（ＣＳＦＡβ４２レベル又はアミロイドＰＥＴによる沈着した脳プラーク負荷など）は、臨床的アルツハイマー病に進行する、アルツハイマー病の患者の最も初期の兆候を示す。これは通常、記憶喪失及び混乱のような症状が顕著となる前である。前臨床的アルツハイマー病には、１つ又は２つのＡＰＯＥ ｅ４対立遺伝子を保持するためにＡＤを発症するリスクが高い患者だけでなく、発症前の常染色体優性保因者も含まれる。「臨床的ＡＤ」という用語は、認知的兆候及び症状が検出可能な疾患の段階である。
【0045】
いくつかの実施形態では、放射性標識ＰＥＴ化合物を用いたアミロイドイメージング、又はＡβ若しくはＡβのバイオマーカーを検出する診断法を使用するなどの方法によって脳内でアミロイドが検出された場合、対象はアミロイド沈着物が陽性である。脳アミロイドロード／負荷を測定するために本開示において使用することができる例示的な方法としては、例えば、フロルベタピル（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，「Ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙ ＩＮＤ ｉｎ ｔｈｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ １８Ｆ－ＰＥＴ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ｆｏｒ Ａｍｙｌｏｉｄ Ｉｍａｇｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ Ｂｒａｉｎ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｏｎｅ Ｃｏｍｐａｎｙ’ｓ Ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ，」Ｔｈｅ Ｑｕａｒｔｅｒｌｙ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ ５３．４：３８７（２００９）、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）；フロルベタベン（Ｆｌｏｒｂｅｔａｂｅｎ）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｙｅｄ ｅｔ ａｌ．，「［１８Ｆ］Ｆｌｏｒｂｅｔａｂｅｎ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ ｉｎβ－Ａｍｙｌｏｉｄ ＰＥＴ Ｉｍａｇｉｎｇ ｉｎ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ，」ＣＮＳ Ｄｒｕｇｓ ２９，６０５－６１３（２０１５））、及びフルテメタモル（Ｆｌｕｔｅｍｅｔａｍｏｌ）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｈｅｕｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，「Ｉｍａｇｉｎｇβ－ａｍｙｌｏｉｄ Ｕｓｉｎｇ［１８Ｆ］Ｆｌｕｔｅｍｅｔａｍｏｌ Ｐｏｓｉｔｒｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ：Ｆｒｏｍ Ｄｏｓｉｍｅｔｒｙ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，」Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ ４３．２：３６２－３７３（２０１６））が挙げられる。
【0046】
［１８Ｆ］－フロルベタピルは、前駆期ＡＤ又は軽度ＡＤ認知症の患者を含む患者の脳プラークロードの定性的及び定量的測定を提供することができる。例えば、目視読み取りにおいて有意な［１８Ｆ］－フロルベタピルシグナルが存在しないことは、認知機能障害を臨床的に示す患者がアミロイドプラークをほとんど又は全く有していないことを示す。したがって、［１８Ｆ］－フロルベタピルはまた、アミロイド病理の確認も提供する。［１８Ｆ］－フロルベタピルＰＥＴはまた、脳内の原線維アミロイドプラークの定量的評価を提供し、いくつかの実施形態では、本開示の抗体による脳からのアミロイドプラーク減少を評価するために使用することができる。
【0047】
放射性標識ＰＥＴ化合物によるアミロイドイメージングを使用して、ヒト患者の脳内のＡβ沈着物が減少しているか又は増加しているかを決定することもまたできる（例えば、治療後のＡβ沈着物の減少割合を計算するため、又はＡＤの進行を評価するため）。当業者は、アミロイドイメージング（放射性標識ＰＥＴ化合物による）から得られた標準化取込値比率（ＳＵＶｒ）値を相関させて、治療前後の患者の脳内のＡβ沈着物の減少％を計算することができる。ＳＵＶｒ値を標準化されたセンチロイド単位へと変換することができ、ここで、１００とはＡＤについての平均であり、０とは若齢対照についての平均であり、これにより、アミロイドＰＥＴトレーサー間の比較可能性、及びセンチロイド単位による減少の計算が可能になる（Ｋｌｕｎｋら、「Ｔｈｅ Ｃｅｎｔｉｌｏｉｄ Ｐｒｏｊｅｃｔ：Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｉｎｇ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ａｍｙｌｏｉｄ Ｐｌａｑｕｅ Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｂｙ ＰＥＴ」、Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ＆ Ｄｅｍｅｎｔｉａ、第１１．１巻：第１～１５頁（２０１５年）、及びＮａｖｉｔｓｋｙら、「Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｙｌｏｉｄ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｆｌｏｒｂｅｔａｐｉｒ Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ Ｕｐｔａｋｅ Ｖａｌｕｅ Ｒａｔｉｏｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｃｅｎｔｉｌｏｉｄ Ｓｃａｌｅ」、Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ＆ Ｄｅｍｅｎｔｉａ、第１４．１２巻：第１５６５～１５７１頁（２０１８年）、これらは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、ベースラインからの脳アミロイドプラーク沈着の変化は、［１８Ｆ］－フロルベタピルＰＥＴスキャンによって測定される。
【0048】
β－アミロイドの脳脊髄液又は血漿ベースの分析をまた使用して、本開示の目的のために、アミロイドロード／負荷を測定することもできる。例えば、Ａβ４２を使用して脳のアミロイドを測定することができる（Ｐａｌｍｑｖｉｓｔ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，「Ａｃｃｕｒａｃｙ ｏｆ Ｂｒａｉｎ Ａｍｙｌｏｉｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｕｓｉｎｇ Ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ Ｆｌｕｉｄ Ｂｅｔａ－ａｍｙｌｏｉｄ ４２：ａ Ｃｒｏｓｓ－ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ Ｓｔｕｄｙ Ａｇａｉｎｓｔ Ａｍｙｌｏｉｄ Ｐｏｓｉｔｒｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ．ＪＡＭＡ Ｎｅｕｒｏｌ ７１，１２８２－１２８９（２０１４））。いくつかの実施形態では、Ａβ４２／Ａβ４０又はＡβ４２／Ａβ３８の比は、アミロイドベータのバイオマーカーとして使用することができる（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｊａｎｅｌｉｄｚｅ ｅｔ ａｌ．，「ＣＳＦ Ａｂｅｔａ４２／Ａｂｅｔａ４０ ａｎｄ Ａｂｅｔａ４２／Ａｂｅｔａ３８ Ｒａｔｉｏｓ：Ｂｅｔｔｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ，」Ａｎｎ Ｃｌｉｎ Ｔｒａｎｓｌ Ｎｅｕｒｏｌ ３，１５４－１６５（２０１６））。
【0049】
いくつかの実施形態では、沈着した脳アミロイドプラーク又はＣＳＦ若しくは血漿中のＡβは、対象を群へと層別化するために、及び対象のどの群が、本明細書に記載される抗体、又は方法を用いて疾患（本明細書中に記載されるような）の治療／予防に対して応答性であるかを識別するために、使用され得る。
【0050】
ヒト対象の脳におけるタウレベルは、放射性標識ＰＥＴ化合物を用いたタウイメージング（Ｌｅｕｚｙら、「Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ ＲＯ９４８ Ｆ１８ Ｔａｕ Ｐｏｓｉｔｒｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ ｉｎ ｔｈｅ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ ｆｒｏｍ Ｏｔｈｅｒ Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、ＪＡＭＡ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、第７７．８巻：第９５５～９６５頁（２０２０年）；Ｏｓｓｅｎｋｏｐｐｅｌｅ ｅｔ ａｌ．，「Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｖｅ Ａｃｃｕｒａｃｙ ｏｆ［１８Ｆ］－ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ Ｐｏｓｉｔｒｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ ｆｏｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ ｖｓ Ｏｔｈｅｒ Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，」ＪＡＭＡ ３２０，１１５１－１１６２，（２０１８）、これらはその全体が参照により本明細書に組み込まれる）などの方法を用いて決定され得る。
【0051】
いくつかの実施形態では、ＰＥＴリガンドであるバイオマーカー［１８Ｆ］－フロルブタウシピルを、本開示の目的のために使用してもよい。ＰＥＴタウ画像は、例えば、公開された方法によってＳＵＶｒ（標準化取込値比）を推定するために（Ｐｏｎｔｅｃｏｒｖｏ ｅｔ ａｌ．，「Ａ Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ Ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ（１８Ｆ）ｉｎ Ｎｏｒｍａｌ Ａｇｅｉｎｇ，Ｍｉｌｄ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｄｅｍｅｎｔｉａ，」Ｂｒａｉｎ １４２：１７２３－３５（２０１９）；Ｄｅｖｏｕｓ ｅｔ ａｌ．，「Ｔｅｓｔ－Ｒｅｔｅｓｔ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔａｕ ＰＥＴ Ｉｍａｇｉｎｇ Ａｇｅｎｔ Ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ Ｆ１８，」Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５９：９３７－４３（２０１８）；Ｓｏｕｔｈｅｋａｌ ｅｔ ａｌ．，「Ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ Ｆ１８ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ Ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｉｇｎａｌ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ，」Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．５９：９４４－５１（２０１８）、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、及び／又は患者を視覚的に評価するため、例えば、患者がＡＤパターンを有するかどうかを判定するため定量的に評価することができる（Ｆｌｅｉｓｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，「Ｐｏｓｉｔｒｏｎ Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｗｉｔｈ［１８Ｆ］－ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ ａｎｄ Ｐｏｓｔｍｏｒｔｅｍ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ Ｃｈａｎｇｅｓ，」ＪＡＭＡ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ７７：８２９－３９（２０２０）、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＳＵＶｒ値が低いほどタウ負荷が少ないことを示し、ＳＵＶｒ値が高いほどタウ負荷が高いことを示す。実施形態では、ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒスキャンによる定量的評価は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｏｕｔｈｅｋａｌ ｅｔ ａｌ．，「Ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ Ｆ１８ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ Ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｉｇｎａｌ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ，」Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．５９：９４４－９５１（２０１８）に記載される自動画像処理パイプラインによって達成される。いくつかの実施形態では、脳内の特定の標的領域内のカウント（例えば、マルチブロック重心判別分析又はＭＵＢＡＤＡ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｄｅｖｏｕｓ ｅｔ ａｌ，「Ｔｅｓｔ－Ｒｅｔｅｓｔ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔａｕ ＰＥＴ Ｉｍａｇｉｎｇ Ａｇｅｎｔ Ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ Ｆ１８，」Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．５９：９３７－９４３（２０１８）を参照されたい）を参照領域と比較し、参照領域は、例えば、小脳全体（ｗｈｏｌｅＣｅｒｅ）、小脳ＧＭ（ｃｅｒｅＣｒｕｓ）、アトラス－ベースの白質（ａｔｌａｓＷＭ）、対象固有のＷＭ（ｓｓＷＭ、例えば、参照シグナル強度のパラメトリック推定（ＰＥＲＳＩ）、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｏｕｔｈｅｋａｌ ｅｔ ａｌ．，「Ｆｌｏｒｔａｕｃｉｐｉｒ Ｆ１８ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ Ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｉｇｎａｌ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ，」Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．５９：９４４－９５１（２０１８））である。タウ負荷を決定する好ましい方法は、標準化取込値比率（ＳＵＶｒ）として報告される定量分析であり、これは、参照領域（例えば、ＰＥＲＳＩを用いる）と比較した場合、脳内の目的の特定の標的領域内のカウント（例えば、ＭＵＢＡＤＡ）を表す。
【0052】
いくつかの実施形態では、リン酸化タウ（Ｐ－タウ；トレオニン１８１又は２１７でリン酸化されたいずれか）を使用して、本開示の目的のためにタウロード／負荷を測定することができる（Ｂａｒｔｈｅｌｅｍｙ ｅｔ ａｌ．，「Ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ Ｆｌｕｉｄ Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｔａｕ Ｔ２１７ Ｏｕｔｐｅｒｆｏｒｍｓ Ｔ１８１ ａｓ ａ Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ＰＥＴ Ａｍｙｌｏｉｄ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｐａｔｉｅｎｔ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，」Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．１２，２６（２０２０）；Ｍａｔｔｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，「ＡβＤｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｉｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｉｎ Ｓｏｌｕｂｌｅ ａｎｄ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ Ｔａｕ ｔｈａｔ Ｐｒｅｃｅｄｅ ａ Ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｔａｕ ＰＥＴ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ，」Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｄｖａｎｃｅｓ ６（１６），（２０２０）；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、残基２１７のトレオニンでリン酸化されたヒトタウに対する抗体を使用して、本開示の目的のために対象におけるタウロード／負荷を測定することができる（参照によりその全体が組み込まれる、国際公開第２０２０／２４２９６３号を参照）。本開示は、いくつかの実施形態では、国際公開２０２０／２４２９６３に開示された抗タウ抗体を使用して、対象におけるタウロード／負荷を測定することを含む。国際公開第２０２０／２４２９６３号に開示された抗タウ抗体は、ＣＮＳにおいて発現されるヒトタウのアイソフォームに対して作られる（例えば、ＣＮＳにおいて発現されるアイソフォームを認識し、もっぱらＣＮＳの外側で発現されるヒトタウのアイソフォームを認識しない）。ＣＮＳにおいて発現されるヒトタウのアイソフォームに対するそのような抗体は、患者を、（ｉ）本明細書中に開示される疾患を有すること、（ｉｉ）本明細書に開示される疾患を有するリスクがある；（ｉｉｉ）本明細書に開示される疾患の治療を必要とする；又は（ｉｖ）神経学的イメージングを必要とする、のうち１つ以上として識別／選択する方法において使用することができる。
【0053】
認知低下の軽減又は遅延は、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）又はアルツハイマー病評価尺度－認知（ＡＤＡＳ－Ｃｏｇ）などの認知評価によって測定することができる。機能低下の減少又は遅延は、アルツハイマー病共同研究－日常生活動作（ＡＤＣＳ－ＡＤＬ）などの機能評価によって測定することができる。機能的及び認知的低下の減少又は遅延は、臨床的認知症評価－ボックスの要約（ＣＤＲ－ＳＢ）又は統合アルツハイマー病評価尺度（ｉＡＤＲＳ）などの複合尺度によって測定することができる。
【0054】
本明細書で使用される場合、「ｍｇ／ｋｇ」とは、キログラム単位の体重に基づいて、患者に投与される抗体又は薬物のミリグラム単位の量を意味する。用量を１回与える。例えば、体重７０ｋｇの患者に対する抗体の１０ｍｇ／ｋｇ用量は、単回投与で投与される抗体の単回７００ｍｇ用量である。体重７０ｋｇの患者に対する２０ｍｇ／ｋｇの用量の抗体は、単回投与で与えられる１４００ｍｇの単回用量の抗体である。同様に、体重８０ｋｇの患者に対する４０ｍｇ／ｋｇ用量の抗体は、単回投与で投与される抗体の３２００ｍｇ用量となる。
【0055】
本明細書中で使用される場合、句「と組み合わせて」とは、本発明の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体を、別の分子（「組合せ分子」、例えば、ＯＧＡ阻害剤、対症薬剤、又はＡβ抗体）と共に、同時に、又は任意の順序で連続して、あるいはそれらの任意の組合せで投与することをいう。いくつかの実施形態では、「と組み合わせて」という句は、本発明の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体とＯＧＡ阻害剤とを同時に、又は任意の順序で順次、又はそれらの任意の組合せで投与することを指す。２つの分子は、同じ医薬組成物の一部として又は別個の医薬組成物としてのいずれかで投与され得る。抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体は、ＯＧＡ阻害剤の投与前、投与と同時に、若しくは投与後に、又はそれらの何らかの組合せで投与することができる。組合せが反復間隔（例えば、標準的な治療過程の間に）で投与される場合、抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体は、ＯＧＡ阻害剤、又はそれらの何らかの組合せの各投与の前、同時期、若しくは投与後に、又はＯＧＡ阻害剤による治療に関連して異なる間隔で、又はＯＧＡ阻害剤による治療の前、治療中の任意の時点、若しくは治療の経過後に単回若しくは一連の用量で投与することができる。
【0056】
本発明の特定の実施形態では、抗体及び抗体フラグメント（例えば、抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体）、又はそれらをコードする核酸は、単離された形態で提供され得る。本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、自然界には見られず、細胞環境に見られる他の高分子種を含まないか、又は実質的に含まないタンパク質、ペプチド、又は核酸を指す。「実質的に含まない」とは、本明細書中で使用する場合、目的のタンパク質、ペプチド、又は核酸が（モル基準で）８０％超、好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超の対象の高分子種を含むことを意味する。
【0057】
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、細胞培養物において発現される。本発明の抗体及び抗体フラグメントの発現及び／又は分泌に続いて、培地は清澄化されて細胞が除去され、清澄化された培地は、多くの一般的に使用される技術のいずれかを使用して精製される。精製された抗体及び抗体フラグメントは、非経口投与、特に皮下、髄腔内、又は静脈内投与のためのタンパク質及び抗体を処方するための周知の方法に従って医薬組成物に処方され得る。抗体及び抗体フラグメントは、適切な薬学的に許容される賦形剤と共に凍結乾燥され、使用前に水ベースの希釈剤で再構成され得る。あるいは、抗体及び抗体フラグメントは、水溶液中で処方され、使用前に保存され得る。いずれの場合も、抗体及び抗体フラグメントの医薬組成物の保存形態及び注射形態は、抗体及び抗体フラグメント以外の成分である、薬学的に許容される賦形剤（複数可）を含有するであろう。成分が薬学的に許容可能であるかどうかは、医薬組成物の安全性及び有効性、又は安全性、純度、及び効力に対するその効果に依存する。成分が安全性又は有効性（又は安全性、純度、若しくは効力）に十分に不利な効果を有し、ヒトへの投与用の組成物に使用されないことを是認して、判断された場合、それを抗体及び抗体フラグメントの医薬組成物で使用することは薬学的に許容されない。
【0058】
本発明の新規の組合せ及び方法は、脳浸透性であるＯＧＡ阻害剤を含む。本発明の新規の組合せ及び方法のいくつかの実施形態では、ＯＧＡ阻害剤は、式Ｉ：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩を含む。
【化17】
【0059】
いくつかの実施形態では、本発明の新規の組合せ及び方法のＯＧＡ阻害剤は、式Ｉａ：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩である。
【化18】
【0060】
本発明の新規の組合せ及び方法のＯＧＡ阻害剤の実施形態を含む式Ｉの特定の構成は、
並びにその薬学的に許容される塩を更に含む。
【化19】
【0061】
式Ｉの５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル化合物（式中、ピペリジン環上のメチル及び酸素置換基がシス又はトランス配置にある）、又はその薬学的に許容される塩は、本発明の新規の組合せのＯＧＡ阻害剤の範囲に含まれる。本発明の新規の組合せはまた、全ての個々のエナンチオマー及びジアステレオマー、並びにラセミ体を含む本発明の５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル化合物のエナンチオマーの混合物を企図する。本明細書で提供される新規の組合せ及び方法の５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル化合物の絶対構成は、
Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド、及びその薬学的に許容される塩を含み、
Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドが特に好ましい。
Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド、及びその薬学的に許容される塩を含み、
Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドが特に好ましい。
【0062】
本発明の５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イルＯＧＡ阻害剤化合物又はその塩は、当業者に既知の様々な手順によって調製され得る。当業者は、本発明の化合物又はその塩を調製するために、記載される経路の各々に対する特定の合成ステップを異なる様式で組み合わせることができるか、又は異なるスキームからのステップと併せることができることを認識している。以下の各工程の生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、及び結晶化を含む、当技術分野で周知の従来の方法によって回収され得る。下記のスキームにおいて、全ての置換基は、特に指示のない限り、以前に定義されているとおりである。試薬及び出発物質は、当業者であれば容易に入手可能なものである。本発明の範囲を限定することなく、本発明を更に例証するために、以下の調製及び実施例が提供される。更に、当業者は、式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、及びＩｄの化合物が、当業者によって調製され得る対応する立体化学的構成を有する出発物質を使用することによって調製され得ることを理解する。例えば、以下の調製物は、最終的に式Ｉａに対応する構成を有する出発物質を利用する。
【0063】
以下の調製及び実施例は、本発明を説明することを意図しているが、本発明を限定するものではなく、当業者によって様々な改変がなされ得ることを意図している。以下の実施例及びアッセイは、本発明の抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、アルツハイマー病、ダウン症候群、及びＣＡＡなどのＡβの沈着を特徴とする疾患の治療に有用であることを示している。
【0064】
調製１：ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－フルオロ－５－ホルミル－チアゾール－２－イル）カルバマートの合成。
フッ化セシウム（２２７ｇ、１４８０ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－クロロ－５－ホルミル－チアゾール－２－イル）カルバマート（３８．８ｇ、１４８ｍｍｏｌ；ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－クロロ－５－ホルミル－チアゾール－２－イル）カルバマートの調製のために、例えば、Ｎ．Ｍａｓｕｄａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，１２，６１７１－６１８２（２００４）を参照されたい）のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、７７６ｍＬ）中溶液に室温で添加する。反応混合物を、１４５℃の加熱ブロック内で、１３３℃の内部温度で４８時間撹拌し、混合物を氷水浴で冷却する。混合物に飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）及び酢酸エチル（５００ｍＬ）を添加する。混合物を室温で１０分間撹拌し、珪藻土で濾過し、酢酸エチル（５００ｍＬ）で洗浄する。濾液を分液漏斗に移し、層を分離し、次に水層を酢酸エチル（１Ｌ）で抽出する。合わせた有機物を飽和ＮａＣｌ水溶液（１Ｌ）で洗浄し、次いで、飽和ＮａＣｌ水溶液層を酢酸エチル（３００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して残渣を得る。残渣をシリカゲルのパッド（３３０ｇ）に通し、５％酢酸エチルのジクロロメタン溶液（１．５Ｌ）で溶離し、濾液を減圧下で濃縮して残渣（２４．２ｇ）を得る。
【化20】
【0065】
残渣（合わせたロット３２．７ｇ、１３３ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（３０３ｍＬ）に溶解し、濾過し、ＩＣカラム（セルロース多糖誘導体：トリス（３，５－ジクロロフェニルカルバマート、３０×２５０ｍｍ，５μｍ）及び１０％イソプロピルアルコール（添加剤なし）を３ｍＬの注入で１８０ｍＬ／分で使用するＳＦＣ（超臨界流体クロマトグラフィー）によって精製する。生成物含有画分を濃縮して、表題化合物（１６．１ｇ、収率４８％）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ ２４７．０（Ｍ＋Ｈ）。
【0066】
調製２：合成Ｎ－（４－フルオロ－５－ホルミル－チアゾール－２－イル）アセトアミド（方法Ａ）。
ジャケット付き容器内で、臭化亜鉛（９１．９ｇ、４０８ｍｍｏｌ）を室温でｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－フルオロ－５－ホルミル－チアゾール－２－イル）カルバマート（３３．５ｇ、１３６ｍｍｏｌ）とジクロロメタン（５０３ｍＬ）との混合物に一度に添加する。反応混合物を３７℃の内部温度で一晩撹拌し、次にジャケット温度を－１０℃に設定し、内部温度を６℃未満に維持しながら、テトラヒドロフラン（１１１ｍＬ）を１５分かけて滴下する。次に、ジャケット温度を－３０℃に設定し、内部温度を５℃未満に維持しながら、ピリジン（１１０ｍＬ、１３６０ｍｍｏｌ）を５分かけて滴下する。ジャケット温度を０℃に設定し、無水酢酸（１１６ｍＬ、１２２０ｍｍｏｌ）を５分かけて滴下する。反応混合物を３７℃の内部温度で一晩撹拌し、室温に冷却し、珪藻土の短いパッドに通過させ、テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）で溶離する。濾液をフラスコに移し、混合物を減圧下で濃縮して残渣を得、これを更にトルエン（５０ｍＬ）から濃縮する。残渣に、クエン酸一水和物（５７．２ｇ、２７２ｍｍｏｌ）の水（４００ｍＬ）及び２－メチルテトラヒドロフラン（４００ｍＬ）中溶液を添加し、混合物を４０℃で５分間撹拌する。混合物を珪藻土の短いパッドに通過させ、２－メチルテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）で溶離する。濾液を分液漏斗に移し、層を分離する。水層を２－メチルテトラヒドロフラン（２×２５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物を水（５００ｍＬ）で希釈する。混合物に、ガスの発生が止まるまで撹拌しながら５分かけて固体重炭酸ナトリウムを少しずつ添加する。混合物を分離漏斗に移し、層を分離し、水層を２－メチルテトラヒドロフラン（２００ｍＬ及び１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得、これを２－メチルテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）で希釈し、混合物をシリカゲルの短いパッド（２５０ｇ）に通し、２－メチルテトラヒドロフラン（２．５Ｌ）で溶離する。濾液を減圧下で濃縮して残渣を得、これをジクロロメタンとヘプタンとの１：１混合物（２０２ｍＬ）に懸濁する。混合物を室温で３０分間撹拌し、濾過する。濾過した固体を回収し、真空下４０℃で２時間乾燥させて、表題化合物（１８．０ｇ、収率７０％）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ １８９．０（Ｍ＋Ｈ）。
【化21】
【0067】
Ｎ－（４－フルオロ－５－ホルミル－チアゾール－２－イル）アセトアミドの代替合成（方法Ｂ）。
ジクロロメタン（１３２５ｇ、１５．６ｍｏｌ）を２－アミノ－４－クロロチアゾール－５－カルバルデヒド（１００ｇ、０．６１ｍｏｌ）及びピリジン（１９４．６ｇ、２．４６ｍｏｌ）に添加し、０～５℃に冷却する。温度を０～５℃に維持しながら、無水酢酸（１８８．４ｇ、１．８５ｍｏｌ）を滴下する。添加が完了したら、温度を２０～２５℃に調整し、４１時間撹拌する。減圧下で濃縮した後、温度を４０℃未満に維持しながら、３５％ＨＣｌ水溶液（２００ｍＬ）及び水（１．５Ｌ）を添加する。２０～２５℃に冷却し、１８時間撹拌する。得られた混合物を濾過し、回収した固体を水で洗浄する。固体を６０～６５℃で２４時間乾燥させて、Ｎ－（４－クロロ－５－ホルミルチアゾール－２－イル）アセトアミド（７５ｇ、収率６６％）を得る。
ジクロロメタン（１３２５ｇ、１５．６ｍｏｌ）を２－アミノ－４－クロロチアゾール－５－カルバルデヒド（１００ｇ、０．６１ｍｏｌ）及びピリジン（１９４．６ｇ、２．４６ｍｏｌ）に添加し、０～５℃に冷却する。温度を０～５℃に維持しながら、無水酢酸（１８８．４ｇ、１．８５ｍｏｌ）を滴下する。添加が完了したら、温度を２０～２５℃に調整し、４１時間撹拌する。減圧下で濃縮した後、温度を４０℃未満に維持しながら、３５％ＨＣｌ水溶液（２００ｍＬ）及び水（１．５Ｌ）を添加する。２０～２５℃に冷却し、１８時間撹拌する。得られた混合物を濾過し、回収した固体を水で洗浄する。固体を６０～６５℃で２４時間乾燥させて、Ｎ－（４－クロロ－５－ホルミルチアゾール－２－イル）アセトアミド（７５ｇ、収率６６％）を得る。
【0068】
不活性雰囲気下、スルホラン（１０００ｍＬ）をＮ－（４－クロロ－５－ホルミルチアゾール－２－イル）アセトアミド（５０ｇ、０．２４ｍｏｌ、上で直接調製）、塩化テトラメチルアンモニウム（１０７．１ｇ、０．９８ｍｏｌ）及びフッ化セシウム（３７０．６ｇ、２．４ｍｏｌ）に加える。１３０℃に加熱し、２３時間撹拌する。ＨＰＬＣ分析は７５％の変換を示し、その場での収率は４５％の表題化合物である。
【0069】
Ｎ－（４－フルオロ－５－ホルミル－チアゾール－２－イル）アセトアミドの代替合成（方法Ｃ）。
２－プロパノール（１５０ｍＬ）をフッ化テトラメチルアンモニウム四水和物（１０．２ｇ、１０９．０ｍｍｏｌ）に添加し、内部温度を７０℃に維持しながら真空下で混合物を約半分の体積に濃縮して水を除去する。２－プロパノール（２００ｍＬ）を添加し、混合物を真空下で約半分の体積に濃縮する。更に２回繰り返す。ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、２００ｍＬ）を添加し、真空下で約半分の体積に濃縮する。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、２００ｍＬ）を添加し、約半分の体積に濃縮する。更に２回繰り返す。Ｎ－（４－クロロ－５－ホルミルチアゾール－２－イル）アセトアミド（１．２２ｇ、６．０ｍｍｏｌ、上の方法Ｂで調製したもの）及びＤＭＦ（１２ｍＬ）を充填する。１１０℃に加熱し、１２時間撹拌する。反応混合物を２５℃に冷却する。２－メチルテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）及び水（４０ｍＬ）を添加する。得られた層を分離し、水層を２－メチルテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）で抽出する。層を分離し、合わせた有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄する。層を分離し、有機層を減圧下で濃縮する。酢酸エチル（２０ｍＬ）及び水（５ｍＬ）を添加し、得られた層を分離し、有機層を濃縮して溶媒を除去する。酢酸エチル（２ｍＬ）及びヘプタン（２ｍＬ）を添加し、得られた混合物を濾過する。濾過した固体を真空下、５５℃で１８時間乾燥させて、Ｎ－（４－クロロ－５－ホルミルチアゾール－２－イル）アセトアミドとの９３％混合物として、表題化合物を得る。
２－プロパノール（１５０ｍＬ）をフッ化テトラメチルアンモニウム四水和物（１０．２ｇ、１０９．０ｍｍｏｌ）に添加し、内部温度を７０℃に維持しながら真空下で混合物を約半分の体積に濃縮して水を除去する。２－プロパノール（２００ｍＬ）を添加し、混合物を真空下で約半分の体積に濃縮する。更に２回繰り返す。ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、２００ｍＬ）を添加し、真空下で約半分の体積に濃縮する。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、２００ｍＬ）を添加し、約半分の体積に濃縮する。更に２回繰り返す。Ｎ－（４－クロロ－５－ホルミルチアゾール－２－イル）アセトアミド（１．２２ｇ、６．０ｍｍｏｌ、上の方法Ｂで調製したもの）及びＤＭＦ（１２ｍＬ）を充填する。１１０℃に加熱し、１２時間撹拌する。反応混合物を２５℃に冷却する。２－メチルテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）及び水（４０ｍＬ）を添加する。得られた層を分離し、水層を２－メチルテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）で抽出する。層を分離し、合わせた有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄する。層を分離し、有機層を減圧下で濃縮する。酢酸エチル（２０ｍＬ）及び水（５ｍＬ）を添加し、得られた層を分離し、有機層を濃縮して溶媒を除去する。酢酸エチル（２ｍＬ）及びヘプタン（２ｍＬ）を添加し、得られた混合物を濾過する。濾過した固体を真空下、５５℃で１８時間乾燥させて、Ｎ－（４－クロロ－５－ホルミルチアゾール－２－イル）アセトアミドとの９３％混合物として、表題化合物を得る。
【0070】
調製３：ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－ヒドロキシ－２－メチル－ピペリジン－１－カルボキシラートの合成。
フラスコに、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－２－メチル－４－オキソ－ピペリジン－１－カルボキシラート（５０ｇ、２３４．４ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（５００ｍＬ）を添加する。混合物を窒素雰囲気下で－６５℃に冷却し、水素化ホウ素リチウムトリ（ｓｅｃ－ブチル）（３０４．７７ｍＬ、３０４．８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン中１Ｍ溶液を４５分かけて滴下し、内部温度を－６０℃未満に維持する。反応混合物を室温で１時間撹拌し、－３０℃に冷却する。内部温度を－２０℃未満に維持しながら、反応混合物に水（２５．３ｍＬ）とテトラヒドロフラン（１００．２ｍＬ）との混合物を添加する。内部温度を１０℃未満に維持しながら、３０％重量／重量過酸化水素（１１８．９ｍＬ、１．２ｍｏｌ）の水溶液（１２６．７０ｍＬ）を１時間かけて滴下する。混合物に５Ｍ ＨＣｌ水溶液（４６．９ｍＬ、２３４．４ｍｍｏｌ）及びメチルｔ－ブチルエーテル（１Ｌ）を添加し、混合物を室温に加温する。層を分離し、水（５００ｍＬ）中で有機相をメタ重亜硫酸ナトリウム（２２２．８ｇ、１．１７ｍｏｌ）の溶液と室温で１０分間撹拌する。層を分離し、有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮する。残渣を、０～５０％メチルｔ－ブチルエーテル／イソヘキサン）で溶離するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、生成物含有画分を合わせ、減圧下で濃縮して、表題化合物（４０．４ｇ、収率７８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ２３８（Ｍ＋Ｎａ）。
【化22】
【0071】
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－ヒドロキシ－２－メチル－ピペリジン－１－カルボキシラートの代替合成。
脱イオン水（４６０Ｌ）とリン酸二水素カリウム（６．５ｋｇ、０．４１当量）とを含有するガラスライニング反応器に、２０℃でＤＭＳＯ（２７．４ｋｇ、１．０体積）及びＤ－（＋）－グルコース一水和物（２８．９ｋｇ、１．２５当量）を充填する。内部温度を３０℃に調整し、８％水酸化ナトリウム水溶液（１５Ｌ、０．３当量）の添加によって反応物のｐＨを６．９に調整する。反応器に、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ）－２－メチル－４－オキソ－ピペリジン－１－カルボキシラート（２４．９ｋｇ、１．０当量（９９．１％ｅｅ））を装入し、混合物を３０℃で１５分間撹拌する。ケトレダクターゼ（ＫＲＥＤ－１３０、２５０ｇ、１％重量／重量）、グルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ－１０１、２５０ｇ、１％重量／重量）、及びＮＡＤＰナトリウム塩（６３ｇ、０．２５％重量／重量）を開放ポートを介して反応混合物に直接装入する。混合物を、ＮａＨＣＯ３の８％水溶液の添加によって３０℃の温度及びｐＨ７．０±０．２に維持する。１６．５時間撹拌した後、反応物に珪藻土（１２．５ｋｇ、５０％重量／重量）及びトルエン（１２５Ｌ、５容量）を加える。３０℃で３０分間撹拌した後、混合物をインラインＧＡＦフィルター（４ソケット）を介して別の２０００Ｌ反応器に１時間かけて移す。混合物を撹拌せずに３０分間放置し、層を分離し、水層をトルエン（２×１２５Ｌ）で逆抽出する。合わせた有機層を濾過し（インラインＧＡＦフィルター）、トルエン混合物を２５℃で２５％塩化ナトリウム水溶液（１２５Ｌ、５体積）で洗浄する。得られたトルエン溶液を０．１０重量／重量％の水に共沸乾燥（部分真空、内部温度＜６０℃）し、２０℃に冷却する。混合物を、カートリッジフィルターを介して反応器から濾過し、正の窒素圧下で清浄なドラムに入れる。次に反応混合物をドラムから５００Ｌのガラス内張り容器に移し、真空下（＜６０℃）で、目標とする残留容積約５６Ｌ（２．２５体積）に濃縮する。ｎ－ヘプタン（１６９ｋｇ、１０体積）を４０℃で入れ、混合物に、２５ｇのｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－ヒドロキシ－２－メチル－ピペリジン－１－カルボキシラートを加える。得られた濃厚なスラリーを追加のｎ－ヘプタン（２５Ｌ、１体積）で希釈し、４時間かけて１６℃に冷却する。生成物を遠心分離により単離し、ｎ－ヘプタン（１回転当たり２５Ｌ；４回転必要）で洗浄して、２０．３ｋｇ（収率８１％；＞９９．９％ｅｅ）を、３０℃のトレイ乾燥機で１１時間乾燥させた後に得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ ２３８（Ｍ＋Ｎａ）。
【化23】
【0072】
調製４：ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］ピペリジン－１－カルボキシラートの合成。
３－（クロロメチル）－５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール（４３．５ｇ、３０１ｍｍｏｌ）を、室温でアセトニトリル（５９０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－ヒドロキシ－２－メチル－ピペリジン－１－カルボキシラート（２９．５ｇ、１３７ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を氷水浴中で撹拌し、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（５４．３ｇ、５４８ｍｍｏｌ）を１０分かけて小分けで添加し、内部温度を１０℃未満に維持する。反応混合物を氷水浴中で、５℃の内部温度で９時間撹拌し、ゆっくりと室温に温め、一晩撹拌する。反応混合物を氷水浴で冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液（２００ｍＬ）を５分かけて添加し、添加中、内部温度を１０℃未満に維持する。次に、混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、室温に温める。混合物をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（２×３００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３００ｍＬ）で洗浄する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して残渣を得る。残渣を、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（１Ｌ）で溶離するシリカゲル（３００ｇ）のパッドに素早く通し、濾液を減圧下で濃縮して、表題化合物（４６．５ｇ、＞９９％収率）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ ３３４．０（Ｍ＋Ｎａ）。
【化24】
【0073】
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］ピペリジン－１－カルボキシラートの代替合成。
窒素下０℃のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－ヒドロキシ－２－メチル－ピペリジン－１－カルボキシラート（０．２５ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）及び３－（クロロメチル）－５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール（３０８ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中溶液に、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（０．３５ｇ、３．５ｍｍｏｌ）を５分間にわたって少しずつ添加する。反応混合物を室温で１０分間及び４０℃で１２時間撹拌する。反応混合物を室温に冷却し、水（１０ｍＬ）でクエンチする。層を分離し、水相をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（２×１０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を５％塩化リチウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（０．４９ｇ、収率８１％、純度６０％）を褐色油として得る。ＭＳ ｍ／ｚ ３３４．０（Ｍ＋Ｎａ）。
【化25】
【0074】
調製５：５－メチル－３－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－ピペリジル］オキシメチル］－１，２，４－オキサジアゾール塩酸塩の合成。
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］ピペリジン－１－カルボキシラート（４．０ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）を含むフラスコを氷水浴に沈める。このフラスコに、１，４－ジオキサン（２５．９ｍＬ、１０４ｍｍｏｌ）中の塩酸の４Ｍの溶液を、撹拌しながら５分かけて滴下し、添加中、内部温度を２０℃未満に維持する。反応混合物を室温で１時間撹拌し、減圧下で濃縮して、表題化合物（３．５ｇ、１Ｈ ＮＭＲによって測定した純度８３％に基づいて収率９２％）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ ２１２．０（Ｍ＋Ｈ）。
【化26】
【0075】
５－メチル－３－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－ピペリジル］オキシメチル］－１，２，４－オキサジアゾール塩酸塩の代替合成。
メタノール（５０ｍＬ）をｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］ピペリジン－１－カルボキシラート（１２．９ｇ、０．０４ｍｏｌ）に添加する。混合物を０℃に冷却する。内部温度を２０℃未満に維持しながら、メタノール中の塩酸の４Ｍ溶液（８０ｍＬ）を冷却した混合物に滴下する。反応混合物を室温で１８時間撹拌する。混合物を濃縮して、溶媒を除去する。アセトン（１０ｍＬ）を添加し、混合物を２０分間撹拌する。テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）を添加し、混合物を３時間撹拌する。固体を窒素下で濾過することによって回収し、濾過した固体ケーキをテトラヒドロフランですすぐ。濾過した固体を真空下４５℃で２時間乾燥させて、純度９０％の表題化合物を得る。アセトンを使用した再結晶によって、表題化合物の純度を９５％に増加させることができる。
メタノール（５０ｍＬ）をｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］ピペリジン－１－カルボキシラート（１２．９ｇ、０．０４ｍｏｌ）に添加する。混合物を０℃に冷却する。内部温度を２０℃未満に維持しながら、メタノール中の塩酸の４Ｍ溶液（８０ｍＬ）を冷却した混合物に滴下する。反応混合物を室温で１８時間撹拌する。混合物を濃縮して、溶媒を除去する。アセトン（１０ｍＬ）を添加し、混合物を２０分間撹拌する。テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）を添加し、混合物を３時間撹拌する。固体を窒素下で濾過することによって回収し、濾過した固体ケーキをテトラヒドロフランですすぐ。濾過した固体を真空下４５℃で２時間乾燥させて、純度９０％の表題化合物を得る。アセトンを使用した再結晶によって、表題化合物の純度を９５％に増加させることができる。
【0076】
調製６：５－メチル－３－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－ピペリジル］オキシメチル］－１，２，４－オキサジアゾールの合成。
窒素下、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］ピペリジン－１－カルボキシラート（０．４９ｇ、１．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（１．８ｍＬ、２３ｍｍｏｌ）を添加する。この混合物を室温で３時間撹拌する。混合物を減圧下で濃縮して、黄色の油を得る。残渣をメタノール（５ｍＬ）に溶解し、カチオン交換カートリッジに注ぎ、メタノール（２×１０ｍＬ）及びメタノール中アンモニアの２Ｍ溶液（１０ｍＬ）で順次溶離する。濾液を減圧下で濃縮して、表題化合物（０．３ｇ、収率９１％）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ ２１２．０（Ｍ＋Ｈ）。
【化27】
【0077】
本発明の新規の組合せ及び方法の他の実施形態では、ＯＧＡ阻害剤、式Ｘ：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【化28】
【0078】
更に、本発明は、式Ｘａ：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【化29】
【0079】
本発明の新規の組合せ及び方法のＯＧＡ阻害剤の実施形態を含む式Ｘの特定の構成は、
並びにその薬学的に許容される塩を更に含む。
【化30】
【0080】
式Ｘの５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル化合物（式中、ピペリジン環上のメチル及び酸素置換基がシス又はトランス配置である）、又はその薬学的に許容される塩は、本発明の新規の組合せのＯＧＡ阻害剤の範囲に含まれる。本発明の新規の組合せはまた、全ての個々のエナンチオマー及びジアステレオマー、並びにラセミ体を含む本発明の５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル化合物のエナンチオマーの混合物を企図する。本明細書で提供される新規の組合せ及び方法の５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル化合物の絶対構成は、
Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド、及び遊離塩基を含み、結晶形態を含む、その薬学的に許容される塩を含む。
Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド、及び遊離塩基を含み、結晶形態を含む、その薬学的に許容される塩を含む。
【0081】
本発明の新規の組合せ及び方法の５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル化合物、又はその塩は、当業者に既知の様々な手順によって調製され得、そのうちのいくつかは、以下のスキーム、調製、及び実施例で例証される。当業者は、本発明の化合物又はその塩を調製するために、記載される経路の各々に対する特定の合成ステップを異なる様式で組み合わせることができるか、又は異なるスキームからのステップと併せることができることを認識している。以下の各工程の生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、及び結晶化を含む、当技術分野で周知の従来の方法によって回収され得る。以下のスキームにおいて、全ての置換基は、別途示されない限り、以前に定義されたとおりである。試薬及び出発物質は、当業者であれば容易に入手可能なものである。本発明の範囲を限定することなく、本発明を更に説明するために以下のスキーム、調製及び実施例を提供する。更に、当業者は、式Ｘａ、Ｘｂ、Ｘｃ、及びＸｄの化合物が、当業者によって調製され得る対応する立体化学的構成を有する出発物質を使用することによって調製され得ることを理解する。例えば、以下の調製物は、最終的に式Ｘａに対応する構成を有する出発物質を利用する。
【0082】
調製７：２－［［（２Ｓ，４Ｓ）－１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－２－メチル－４－ピペリジル］オキシ］酢酸の合成。
２－クロロ－１－モルホリノ－エタノン（５９．４ｇ、３６３ｍｍｏｌ）を、室温でアセトニトリル（５２１ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－ヒドロキシ－２－メチル－ピペリジン－１－カルボキシラート（５２．１ｇ、２４２ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を氷水浴中で撹拌し、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（４８．０ｇ、４８４ｍｍｏｌ）を１０分かけて小分けで添加し、内部温度を１５℃未満に維持する。反応混合物を室温で２時間撹拌し、氷水浴冷却で飽和塩化アンモニウム水溶液（２５０ｍＬ）及び水（２５０ｍＬ）を含む別のフラスコに５分かけて添加し、添加中、内部温度を１５℃未満に維持する。混合物を室温に加温し、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（２×５００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を飽和ＮａＣｌ水溶液（３００ｍＬ）で洗浄する。合わせた有機物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、残渣を得、これを室温で２－プロパノール（４１４ｍＬ）及び２Ｍの水酸化ナトリウム水溶液（３０３ｍＬ、６０５ｍｍｏｌ）と組み合わせる。反応混合物を４７℃の加熱ブロック内で、４５℃の内部温度で一晩撹拌する。反応混合物を室温に冷却し、濃縮して、２－プロパノールを除去し、混合物を水（５０ｍＬ）で希釈する。混合物をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（２５０ｍＬ）で抽出し、水層を氷水浴で冷却し、酢酸（５５．６ｍＬ、９６８ｍｍｏｌ）で酸性化する。水性混合物を酢酸エチル（４×２５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して残渣を得、これをトルエン（３×１００ｍＬ）から濃縮して、表題化合物（７９．８ｇ、＞９９％収率）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ ２７２．０（Ｍ＋Ｈ）。
【化31】
【0083】
調製８：ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－［２－（２－アセチルヒドラジノ）－２－オキソ－エトキシ］－２－メチル－ピペリジン－１－カルボキシラートの合成。
２－［［（２Ｓ，４Ｓ）－１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－２－メチル－４－ピペリジル］オキシ］酢酸（７９．８ｇ、２２４ｍｍｏｌ）を含有するフラスコにテトラヒドロフラン（７９８ｍＬ）を加え、混合物を内部温度５℃の氷水浴で撹拌する。混合物に、１，１’－カルボニルジイミダゾール（４３．５ｇ、２６８ｍｍｏｌ）を一度に添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌する。１，１’－カルボニルジイミダゾールの追加分（７．２５ｇ、４４．７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で３０分間撹拌する。反応混合物を氷水浴に浸し、アセトヒドラジド（２１．５ｇ、２９１ｍｍｏｌ）を一度に添加する。反応混合物を室温で一晩撹拌する。反応混合物を氷水浴中で撹拌しながら冷却し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）を２分かけて添加し、内部温度を１５℃未満に維持する。混合物を水（３００ｍＬ）で希釈し、得られた混合物を減圧下で濃縮してテトラヒドロフランを除去する。得られた水性混合物を２－メチルテトラヒドロフラン（４×５００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得て、これを酢酸エチル（２００ｍＬ）及びヘプタン（２００ｍＬ）と合わせる。混合物を室温で３０分間撹拌し、ヘプタン（２００ｍＬ）で希釈し、室温で更に３０分間激しく撹拌し、濾過する。濾過した固体を真空下、４０℃で２時間乾燥させて、表題化合物の第１の収穫物を得る（７１．５ｇ）。濾液を再濾過し、濾過した固体を窒素ガス流下、室温で１５分間乾燥させて、表題化合物の第２の収穫物を得る（１．９８ｇ）。生成物の第１の収穫物（７１．１ｇ、２１６ｍｍｏｌ）及び生成物の第２の収穫物（１．９７ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）の大部分をｔｅｒｔ－ブチルメチルエーテル（７３１ｍＬ）と合わせ、混合物を４５℃の加熱ブロック中、内部温度４０℃で３０分間撹拌し、撹拌しながら１時間にわたって室温に冷却し、濾過する。濾過した固体を真空下、窒素ガス流下、室温で３０分間乾燥させて、表題化合物（５３．７ｇ、収率７１％）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ ３５２．０（Ｍ＋Ｎａ）。
【化32】
【0084】
調製９：ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］ピペリジン－１－カルボキシラートの合成。
窒素下、室温で、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－ヒドロキシ－２－メチル－ピペリジン－１－カルボキシラート（０．５ｇ、２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中溶液に、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（９２０ｍｇ、９．３ｍｍｏｌ）を少しずつ添加する。得られた反応混合物を室温で４０分間撹拌する。反応混合物を０℃に冷却し、２－（クロロメチル）－５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール（４１６ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）を添加する。得られた溶液を室温で一晩撹拌する。反応混合物を減圧下で濃縮し、得られた残渣を水で希釈する。混合物を酢酸エチルで３回抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗油を得る。
【化33】
【0085】
残渣をジメチルスルホキシド（総体積２ｍＬまで）に溶解し、１５％（ＣＨ３ＣＮ及び１０ｍＭ重炭酸アンモニウムを水酸化アンモニウムでｐＨ９に調整した水）～１００％ＣＨ３ＣＮの勾配で（５０ｍＬ／分、１回注入、２０４ｎｍ）７分間にわたって溶離する分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ １０ Ｍｉｃｒｏｎ ３０×１００ｍｍ Ｃ－１８）によって精製して、表題化合物（２８ｍｇ、収率４％）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ ３１２（Ｍ＋Ｈ）。
【0086】
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］ピペリジン－１－カルボキシラートの代替合成。
フラスコに、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－４－［２－（２－アセチルヒドラジノ）－２－オキソ－エトキシ］－２－メチル－ピペリジン－１－カルボキシラート（５３．７ｇ、１６３ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル（５３７ｍＬ）を添加し、スラリーを室温で撹拌する。混合物に、水浴冷却下で５分間にわたって、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１１４ｍＬ、６５２ｍｍｏｌ）を１回で添加し、ｐ－トルエンスルホニルクロリド（７７．７ｇ、４０８ｍｍｏｌ）を３回に分けて添加する。反応混合物を室温で一晩撹拌し、次いで、氷水浴中で冷却する。Ｎ’，Ｎ’－ジメチルエタン－１，２－ジアミン（２１．８ｇ、２４５ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下し、内部温度を１５℃未満に維持する。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、室温で飽和クエン酸水溶液（５０ｍＬ）、酢酸エチル（５００ｍＬ）及び水（４５０ｍＬ）で希釈する。層を分離し、有機層を飽和クエン酸水溶液（５０ｍＬ）と水（４５０ｍＬ）との混合物で洗浄する。有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、次に水層を酢酸エチル（５００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して残渣を得て、これをヘプタン中２５％酢酸エチル（２×５００ｍＬ画分）及び酢酸エチル（５×５００ｍＬ画分）で順次溶離するシリカゲルの短いパッド（４００ｇ）に通す。生成物含有画分を濃縮して、表題化合物（５３．３ｇ、＞９９％収率）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ ３１２．２（Ｍ＋Ｈ）。
【化34】
【0087】
調製１０：５－メチル－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－ピペリジル］オキシメチル］－１，３，４－オキサジアゾール２，２，２－トリフルオロ酢酸の合成。
窒素下、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］ピペリジン－１－カルボキシラート（２７．５ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（０．０３５ｍＬ、０．４５ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を室温で一晩撹拌する。混合物を減圧下で濃縮して、表題化合物（０．０４ｇ、収率８４％）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ ２１２．０（Ｍ＋Ｈ）。
【化35】
【0088】
調製１１：２－メチル－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－ピペリジル］オキシメチル］－１，３，４－オキサジアゾールの合成。
フラスコに、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］ピペリジン－１－カルボキシラート（５２．９ｇ、１７０ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（２６５ｍＬ）を室温で添加する。反応混合物を内部温度５℃の氷水浴中で撹拌し、トリフルオロ酢酸（２６５ｍＬ、３５００ｍｍｏｌ）を内部温度を１０℃未満に維持しながら５分間にわたって滴下する。反応混合物を室温で１５分間撹拌し、濃縮して残渣を得、これを水（３００ｍＬ）及びメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（３００ｍＬ）で希釈する。層を分離し、水層を氷水浴中で撹拌し、５０％水酸化ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）で塩基性化し、添加中、内部温度を１０℃未満に維持する。混合物をジクロロメタン（４×３００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題化合物（３０．５ｇ、収率８５％）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ ２１２．２（Ｍ＋Ｈ）。
【化36】
【0089】
本発明の新規の組合せ及び方法の他の実施形態では、ＯＧＡ阻害剤、式ＸＸ：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩。
【化37】
【0090】
更に、本発明は、式ＸＸａ：
の化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【化38】
【0091】
本発明の新規の組合せ及び方法のＯＧＡ阻害剤の実施形態を含む式Ｘの特定の構成は、
並びにその薬学的に許容される塩を更に含む。
【化39】
【0092】
ピロリジン環上のメチル及び酸素置換基がシス又はトランス配置にある式ＸＸの５－（メチルピロリジン－３－イル）オキシ化合物又はその薬学的に許容される塩は、本発明の新規組合せのＯＧＡ阻害剤の範囲内に含まれる。本発明の新規な組合せはまた、全ての個々のエナンチオマー及びジアステレオマー、並びにラセミ体を含む本発明の５－（メチルピロリジン－３－イル）オキシ化合物のエナンチオマーの混合物を意図する。本明細書で提供される新規な組合せ及び方法の５－（メチルピロリジン－３－イル）オキシ化合物の絶対構成には、
遊離塩基を含み、結晶形態を含む、１－（２－（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（６－フルオロ－２－メチルベンゾ［ｄ］チアゾール－５－イル）メチル）－５－メチルピロリジン－３－イル）オキシ）－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－６－イル）エタン－１－オン及びその薬学的に許容される塩を含む。
遊離塩基を含み、結晶形態を含む、１－（２－（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（６－フルオロ－２－メチルベンゾ［ｄ］チアゾール－５－イル）メチル）－５－メチルピロリジン－３－イル）オキシ）－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－６－イル）エタン－１－オン及びその薬学的に許容される塩を含む。
【0093】
本発明の新規な組合せ及び方法の５－（メチルピロリジン－３－イル）オキシ化合物又はその塩は、当業者に公知の様々な手順によって調製することができ、そのいくつかは以下のスキーム、調製及び実施例に示される。当業者は、本発明の化合物又はその塩を調製するために、記載される経路の各々に対する特定の合成ステップを異なる様式で組み合わせることができるか、又は異なるスキームからのステップと併せることができることを認識している。以下の各工程の生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、及び結晶化を含む、当技術分野で周知の従来の方法によって回収され得る。以下のスキームにおいて、全ての置換基は、別途示されない限り、以前に定義されたとおりである。試薬及び出発物質は、当業者であれば容易に入手可能なものである。本発明の範囲を限定することなく、本発明を更に説明するために以下のスキーム、調製及び実施例を提供する。更に、当業者は、式ＸＸａ、ＸＸｂ、ＸＸｃ、及びＸＸｄの化合物が、当業者によって調製され得る対応する立体化学的構成を有する出発物質を使用することによって調製され得ることを理解する。例えば、以下の調製物は、最終的に式ＸＸａに対応する構成を有する出発物質を利用する。
【0094】
調製１２：１－（２－クロロ－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－６－イル）エタン－１－オン
Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、３．６ｍＬ、２１ｍｍｏｌ）及び塩化アセチル（０．４ｍＬ、６ｍｍｏｌ）を、２－クロロ－６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］ピリジン塩酸塩（１．０ｇ、５．２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（ＤＣＭ、１３ｍＬ）中０℃溶液に滴下する。反応混合物を室温で２４時間撹拌する。得られた混合物をＤＣＭ（２０ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍＬ）で希釈する。水層をＤＣＭ（３０ｍＬ中２×）で抽出する。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣をＤＣＭに溶解し、珪藻土に吸着させ、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中５０～１００％アセトンの勾配で溶離して、所望のクロマトグラフィー画分の溶媒蒸発後に表題化合物（０．９５ｇ、収率９２％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：１９７（Ｍ＋Ｈ）。
【化40】
【0095】
調製１３：ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｒ）－４－（（６－アセチル－６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－２－イル）オキシ）－２－メチルピロリジン－１－カルボキシラート。
室温（ＲＴ）でｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－メチル－ピロリジン－１－カルボキシラート（０．４１ｇ、２．０３ｍｍｏｌ）、１－（２－クロロ－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－６－イル）エタン－１－オン（０．４７ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、８ｍＬ）の溶液に、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（ＫＯ－ｔ－Ｂｕ、０．４５ｇ、４ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、混合物を５０℃で４．５時間撹拌する。反応混合物を水（５０ｍＬ）及び酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ、５０ｍＬ）で希釈する。水層をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ中２回）で抽出し、合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣をＤＣＭに溶解させ、ヘキサン中４０～１００％アセトンの勾配で溶離させる、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望のクロマトグラフィー画分の溶媒蒸発後に表題化合物を得る（０．３４ｇ、収率４７％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：２６２（Ｍ＋Ｈ－Ｃ４Ｈ９）．
【化41】
【0096】
調製１４：１－（２－（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－メチルピロリジン－３－イル）オキシ）－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－６－イル）エタン－１－オン塩酸塩。
ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｒ）－４－（（６－アセチル－６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－２－イル）オキシ）－２－メチルピロリジン－１－カルボキシラート（０．３４ｇ、０．９４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５．０ｍＬ）中溶液に、ＨＣｌの１，４－ジオキサン中４Ｍ溶液（１．２ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）を加える。得られた混合物を室温で３時間撹拌する。得られた懸濁液を減圧下で濃縮し、得られた残渣を真空下に１時間置いて、表題化合物（０．２８ｇ、＞９９％収率）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：２６２（Ｍ＋Ｈ）。
【化42】
【0097】
調製１５：Ｎ－（５－ブロモ－２，４－ジフルオロフェニル）アセトアミド。
フラスコに、約６１℃（内部温度６０℃）の加熱ブロック中で撹拌しながら無水酢酸（Ａｃ２Ｏ、３８９ｍＬ）を添加する。フラスコに５－ブロモ－２，４－ジフルオロアニリン（７７．７ｇ、３７４ｍｍｏｌ）を３０分間にわたって少量ずつ添加し、添加中は内部温度を６５℃未満に維持する。反応混合物を加熱ブロック内で約６１℃にて１０分間撹拌し、ＲＴまで冷却して残渣を得て、これをトルエン（４×２００ｍＬ）から濃縮して淡褐色／ピンク色固体を得る。濃縮した固体をヘプタン（８０ｍＬ）に懸濁させ、混合物を５０℃の水浴内で回転蒸発器にて大気圧で１５分間撹拌し、ＲＴまで冷却し、濾過する。濾過した固体を回収し、４０℃にて真空下で２時間乾燥させて、表題化合物（８９．６ｇ、収率９５％）をオフホワイト色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：２５０（Ｍ＋Ｈ）。
【化43】
【0098】
調製１６：Ｎ－（５－ブロモ－２，４－ジフルオロフェニル）チオアセトアミド。
Ｎ－（５－ブロモ－２，４－ジフルオロフェニル）アセトアミド（８９．６ｇ、３５８ｍｍｏｌ）の無水アセトニトリル（ＡＣＮ、８９６ｍＬ）中溶液に、ピリジン－１－イウム－１－イル－［ピリジン－１－イウム－１－イル（スルフィド）ホスフィノチオイル］スルファニル－スルフィド－チオキソ－ホスファン（６８．２ｇ、１７９ｍｍｏｌ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．７６，１５４６－１５５３（２０１１））を室温で添加する。スラリーを８５℃の加熱ブロック内で一晩（内部温度８０℃）撹拌し、ＲＴまで冷却し、氷（２００ｇ）及び飽和ＮａＣｌ水溶液（７００ｍＬ）の混合物に注ぐ。混合物をＥｔＯＡｃ（９００ｍＬ）で希釈し、ＲＴにて１０分間撹拌し、層を分離し、水層を更にＥｔＯＡｃ（９００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を飽和ＮａＣｌ水溶液（９００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、表題化合物を暗褐色油として得て、これをＲＴにてＤＭＦ（９５３ｍＬ）に溶解させて、更に精製せずに使用する。
【化44】
【0099】
調製１７：５－ブロモ－６－フルオロ－２－メチル－１，３－ベンゾチアゾール。
Ｎ－（５－ブロモ－２，４－ジフルオロフェニル）チオアセトアミドのＤＭＦ溶液に、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（ＮａＯ－ｔ－Ｂｕ、４２．６ｇ、４３０ｍｍｏｌ）を撹拌しながら２０分間にわたって少しずつ添加し、内部温度を３０℃未満に維持する。反応混合物をＲＴにて５分間撹拌し、４２℃の加熱ブロック（内部温度４０℃）中で一晩撹拌し、ＲＴまで冷却する。反応混合物を氷（２５０ｇ）及びＨ２Ｏ（７００ｍＬ）の混合物に５分間にわたって滴下し、内部温度を２０℃未満に維持する。混合物をＲＴにて１０分間撹拌し、濾過する。濾過した固体を４０℃にて一晩真空下で乾燥させ、５０％ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（４８０ｍＬ）に懸濁させる。混合物を４５℃の加熱ブロック内で１５分間撹拌し、ＲＴまで冷却し、濾過する。濾過した固体を真空下４０℃にて７２時間乾燥させて、淡褐色固体を得る。材料をＥｔＯＡｃ（７００ｍＬ）と合わせ、混合物をＲＴにて１０分間撹拌し、Ｈ２Ｏ（７００ｍＬ）を添加し、層を分離する。水層をＥｔＯＡｃ（７００ｍＬ）で抽出し、次に合わせた有機抽出物を飽和ＮａＣｌ水溶液（７００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、表題化合物（６２．７ｇ、収率７１％）を褐色固体として得る。１Ｈ ＮＭＲ（ｄ６－ＤＭＳＯ）δ：２．８２（ｓ，３Ｈ），７．５７（ｍ，１Ｈ），８．１２（ｍ，１Ｈ）。
【化45】
【0100】
調製１８：６－フルオロ－２－メチル－１，３－ベンゾチアゾール－５－カルバルデヒド。
ＤＭＦ（１００９ｍＬ）中の５－ブロモ－６－フルオロ－２－メチル－１，３－ベンゾチアゾール（１００．９ｇ、４１０ｍｍｏｌ）を、撹拌しながら室温で５分間Ｎ２でスパージする。ギ酸カリウム（５２．３ｇ、６１５．０ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（２．８２ｇ、１２．３０ｍｍｏｌ）、２－（ジ－ｔｅｒｔ－ブチルホスフィノ）ビフェニル（５．１９ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）及び１，１，３，３－テトラメチルブチルイソシアニド（９０．８ｍＬ、４９２．０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を撹拌しながらＲＴにてＮ２で３０分間スパージする。反応混合物を６５℃の内部温度にて一晩撹拌し、２０～２５℃まで冷却し、２Ｍ ＨＣｌ水溶液（８２０ｍＬ）を３０分間にわたって滴下し、内部温度を３０℃未満に維持する。得られた混合物を２０～２５℃で２時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（１．５Ｌ）及びＨ２Ｏ（１Ｌ）で希釈する。層を分離し、有機層を１０％Ｎ－アセチル－システイン水溶液（２×１Ｌ）、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（７５０ｍＬ×２）及び飽和ＮａＣｌ水溶液（７５０ｍＬ）で洗浄し、有機抽出物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗製材料の第１のバッチを得る。最初の抽出物からの水性ＨＣｌ層を更にＥｔＯＡｃ（１Ｌ、次に５００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を飽和ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗製材料の第２のバッチを得る。次いで、合わせたＮ－アセチル－システイン水層をＥｔＯＡｃ（１Ｌ、次いで５００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物を飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液（５００ｍＬ）及び飽和ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）で順次洗浄し、合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗製材料の第３のバッチを得る。粗製材料の３つのバッチを、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、２５０ｍＬ）及びヘプタン（２５０ｍＬ）中で合わせ、得られたスラリーを室温で２０分間撹拌する。得られた沈殿物を濾過し、ヘプタン（２５０ｍＬ）で洗浄する。濾過した固体を４５℃で真空下で乾燥させて、生成物の第１のバッチを得る。濾液を濃縮し、残渣を、０～１００％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンの勾配で溶離させる、シリカでのカラムクロマトグラフィーによって精製する。生成物含有画分を合わせ、約４００ｍＬの体積まで濃縮し、得られたスラリーをＲＴにて１５分間撹拌し、濾過し、濾過した固体をヘプタン（２００ｍＬ）で洗浄して、生成物の第２のバッチを得る。生成物の第１及び第２のバッチをヘプタン（５００ｍＬ）と合わせ、ＲＴにてスラリー化し、濾過して、濾過した固体をヘプタン（２５０ｍＬ）で洗浄する。濾過した固体を真空下で４５℃にて一晩乾燥させて、表題化合物（６３．５ｇ、収率７９％）を得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：１９６（Ｍ＋Ｈ）。
【化46】
【0101】
本発明の新規の組合せ及び方法の一部として本明細書で提供されるＯＧＡ阻害剤化合物の個々の異性体、エナンチオマー、及びジアステレオマーは、選択的結晶化技術又はキラルクロマトグラフィーなどの方法による本発明の化合物の合成において、任意の都合のよい時点で当業者によって分離又は分解され得ることを理解されるべきである（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔ ａｌ．，「Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，」Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１，ａｎｄ Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ ａｎｄ Ｓ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，」Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４を参照されたい）。
【0102】
本発明のＯＧＡ阻害剤化合物の薬学的に許容される塩は、例えば、当技術分野で周知の標準的な条件下での好適な溶媒中で、本発明の化合物の適切な遊離塩基と適切な薬学的に許容される酸との反応によって形成され得る。そのような塩の形成は、当該技術分野で周知であり、理解されている。例えば、Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．，「Ｓａｌｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｂａｓｉｃ ｄｒｕｇｓ，」Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３３：２０１－２１７（１９８６）、Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．「Ｓａｌｔ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｎｅｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｔｉｔｉｅｓ，」Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４：４２７－４３５（２０００）、及びＢｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，」Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１－１９，（１９７７）．
【0103】
実施例１：ＯＧＡ阻害剤Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド（式Ｉａ）の合成。
この化合物及びその合成は、米国特許第１０，０８１，６２５号に開示されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【化47】
【0104】
Ｎ－（４－フルオロ－５－ホルミル－チアゾール－２－イル）アセトアミド（２８．３ｇ、１５０ｍｍｏｌ）を、室温で酢酸エチル（７０７ｍＬ）中の５－メチル－３－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－ピペリジル］オキシメチル］－１，２，４－オキサジアゾール塩酸塩（４８．７ｇ、１８５ｍｍｏｌ、純度９４％）に添加する。反応混合物を室温で撹拌し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（３４．１ｍＬ、１９５ｍｍｏｌ）を１分かけて滴下し、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（９８．５ｇ、４５１ｍｍｏｌ）を一度に添加する。反応混合物を、３１℃の加熱ブロック内で、３０℃の内部温度で一晩撹拌し、氷水浴中で５℃の内部温度に冷却する。内部温度を１０℃未満に維持しながら、混合物に２Ｍの塩酸水溶液（２２６ｍＬ）を１５分かけて添加する。混合物に水（２５０ｍＬ）を添加し、混合物を室温で５分間撹拌する。層を分離し、有機層を水（５０ｍＬ）中の２Ｍの塩酸水溶液（２８ｍＬ）の混合物で抽出する。第１の水層を氷水浴中で撹拌し、内部温度を１０℃未満に維持しながら、５０％水酸化ナトリウム水溶液（２５．７ｍＬ）を１０分かけて滴下する。混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で希釈し、次に室温で１０分間撹拌し、酢酸エチル（３×４００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して残渣を得る。水性塩酸で抽出した第２の水層を２－メチルテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）で希釈し、混合物を珪藻土の短いパッドに通過させる。濾液を分液漏斗に移し、層を分離する。水層を氷水浴中で撹拌し、内部温度を１０℃未満に維持しながら、５０％水酸化ナトリウム水溶液（３．１５ｍＬ）を５分かけて滴下する。混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、次に室温で５分間撹拌し、次に酢酸エチル（３×４０ｍＬ）及び酢酸エチル中の１０％イソプロパノール（１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、残渣を得、これを処理した第１の部分からの残渣と組み合わせる。組み合わせた残渣をシリカゲル（３５０ｇ）のパッドに通過させ、酢酸エチル（３．５Ｌ）で溶離し、濾液を濃縮して、残渣（４５．８ｇ）を得る。残渣（合わせたロット４７．５ｇ、１２３．９ｍｍｏｌ）を、ヘプタン中５０～１００％酢酸エチルで溶離するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製する。生成物含有画分を残渣に濃縮し、これを、メチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルとヘプタンとの１：１混合物（４４８ｍＬ）に懸濁する。混合物を４６℃の加熱ブロック内で、４５℃の内部温度で３０分間撹拌し、撹拌しながら２時間かけて室温に冷却する。混合物を濾過し、回収した固体をメチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルとヘプタンとの１：１混合物（３０ｍＬ）で洗浄する。濾過した固体を真空下４０℃で一晩乾燥させて、表題化合物（２８．５ｇ、収率４９％）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ ３８４．０（Ｍ＋Ｈ）。旋光度［α］Ｄ
２０＝＋３３．４°（Ｃ＝０．２６，メタノール）．
【0105】
Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドの代替合成。
窒素下、Ｎ－（４－フルオロ－５－ホルミル－チアゾール－２－イル）アセトアミド（５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）及び５－メチル－３－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－ピペリジル］オキシメチル］－１，２，４－オキサジアゾール（４０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍＬ、０．５７ｍｍｏｌ）及びトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１２０ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で１２時間撹拌する。反応混合物を重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（１０ｍＬ）に注ぐ。層を分離し、水相をジクロロメタン（２×１０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、オレンジ色の油を得る。残渣をメタノール（総体積９．８ｍＬまで）に溶解し、濾過し、１５％（ＣＨ３ＣＮ及び１０ｍＭ重炭酸アンモニウムを水酸化アンモニウムでｐＨ９に調整した水）～１００％ＣＨ３ＣＮの勾配（１１０ｍＬ／分、１回注入、２７１／２０４ｎｍ）で１０分間にわたって溶離する分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ １０ Ｍｉｃｒｏｎ ５０×１５０ｍｍ Ｃ－１８）によって精製して、表題化合物（２０ｍｇ、収率２８％）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ ３８４．２（Ｍ＋Ｈ）。
窒素下、Ｎ－（４－フルオロ－５－ホルミル－チアゾール－２－イル）アセトアミド（５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）及び５－メチル－３－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－ピペリジル］オキシメチル］－１，２，４－オキサジアゾール（４０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍＬ、０．５７ｍｍｏｌ）及びトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１２０ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で１２時間撹拌する。反応混合物を重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（１０ｍＬ）に注ぐ。層を分離し、水相をジクロロメタン（２×１０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、オレンジ色の油を得る。残渣をメタノール（総体積９．８ｍＬまで）に溶解し、濾過し、１５％（ＣＨ３ＣＮ及び１０ｍＭ重炭酸アンモニウムを水酸化アンモニウムでｐＨ９に調整した水）～１００％ＣＨ３ＣＮの勾配（１１０ｍＬ／分、１回注入、２７１／２０４ｎｍ）で１０分間にわたって溶離する分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ １０ Ｍｉｃｒｏｎ ５０×１５０ｍｍ Ｃ－１８）によって精製して、表題化合物（２０ｍｇ、収率２８％）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ ３８４．２（Ｍ＋Ｈ）。
【0106】
実施例１Ａ：結晶性Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド。
ヘプタン中の４４８ｍＬの５０％メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル中の粗Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド（２９．９ｇ）を４６℃で３０分間懸濁する。混合物を撹拌し、２時間かけて１９℃に冷却してから濾過し、続いてヘプタン中の３０ｍＬの５０％メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルで洗浄して、表題化合物（２８．５ｇ、９５％収率）を提供する。
ヘプタン中の４４８ｍＬの５０％メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル中の粗Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド（２９．９ｇ）を４６℃で３０分間懸濁する。混合物を撹拌し、２時間かけて１９℃に冷却してから濾過し、続いてヘプタン中の３０ｍＬの５０％メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルで洗浄して、表題化合物（２８．５ｇ、９５％収率）を提供する。
【0107】
実施例１ＡのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）。
結晶性固体のＸＲＰＤパターンは、３５ｋＶ及び５０ｍＡで作動する、ＣｕＫａ源（λ＝１．５４０６０Å）及びＶａｎｔｅｃ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒ Ｄ４ Ｅｎｄｅａｖｏｒ Ｘ線粉末回折計において得られる。試料は、２θで４°～４０°の間、２θで０．００８７°の工程サイズ及び０．５秒／工程の走査速度で、０．６ｍｍの発散、５．２８ｍｍの固定散乱防止、及び９．５ｍｍの検出器スリットで走査される。乾燥粉末は、石英試料ホルダーに充填され、滑らかな表面は、ガラススライドを使用して得られる。結晶学の分野において、任意の所与の結晶形態に関して、結晶形態及び晶癖などの要因から生じる好ましい配向に起因して、回折ピークの相対強度が変化し得ることは周知である。優先配向の効果が存在する場合、ピーク強度は改変されるが、多形体の特徴的なピーク位置は不変である。例えば、米国薬局方３８－Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ ３５ Ｃｈａｐｔｅｒ ９４１、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）公式２０１５年５月１日による結晶性及び部分的に結晶性の固体の特性評価を参照されたい。更に、所与の任意の結晶形態について、角ピーク位置がわずかに変化し得ることも、結晶学の分野において周知である。例えば、ピーク位置は、試料が分析される温度若しくは湿度の変動、試料の変位、又は内部標準の有無に起因して変動し得る。この場合、２θの±０．２のピーク位置変動は、示された結晶形態の明確な識別を妨げることなく、これらの潜在的な変動を考慮する。結晶形態の確認は、特徴的なピーク（単位は°２θ）、典型的にはより顕著なピークの任意の独自の組合せに基づいて行われ得る。周囲温度及び相対湿度で収集された結晶形態の回折パターンは、８．８５度及び２６．７７度の２－シータでのＮＩＳＴ６７５標準ピークに基づいて調整される。
結晶性固体のＸＲＰＤパターンは、３５ｋＶ及び５０ｍＡで作動する、ＣｕＫａ源（λ＝１．５４０６０Å）及びＶａｎｔｅｃ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒ Ｄ４ Ｅｎｄｅａｖｏｒ Ｘ線粉末回折計において得られる。試料は、２θで４°～４０°の間、２θで０．００８７°の工程サイズ及び０．５秒／工程の走査速度で、０．６ｍｍの発散、５．２８ｍｍの固定散乱防止、及び９．５ｍｍの検出器スリットで走査される。乾燥粉末は、石英試料ホルダーに充填され、滑らかな表面は、ガラススライドを使用して得られる。結晶学の分野において、任意の所与の結晶形態に関して、結晶形態及び晶癖などの要因から生じる好ましい配向に起因して、回折ピークの相対強度が変化し得ることは周知である。優先配向の効果が存在する場合、ピーク強度は改変されるが、多形体の特徴的なピーク位置は不変である。例えば、米国薬局方３８－Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ ３５ Ｃｈａｐｔｅｒ ９４１、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）公式２０１５年５月１日による結晶性及び部分的に結晶性の固体の特性評価を参照されたい。更に、所与の任意の結晶形態について、角ピーク位置がわずかに変化し得ることも、結晶学の分野において周知である。例えば、ピーク位置は、試料が分析される温度若しくは湿度の変動、試料の変位、又は内部標準の有無に起因して変動し得る。この場合、２θの±０．２のピーク位置変動は、示された結晶形態の明確な識別を妨げることなく、これらの潜在的な変動を考慮する。結晶形態の確認は、特徴的なピーク（単位は°２θ）、典型的にはより顕著なピークの任意の独自の組合せに基づいて行われ得る。周囲温度及び相対湿度で収集された結晶形態の回折パターンは、８．８５度及び２６．７７度の２－シータでのＮＩＳＴ６７５標準ピークに基づいて調整される。
【0108】
結晶性Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドの調製試料は、以下の表１に記載されるように、回折ピーク（２－シータ値）を有するときにＣｕＫａ放射線を使用したＸＲＰＤパターンを特徴とする。具体的には、パターンは、１５．３°、２１．６°、２２．２°、２２．７°、２３．５°、２４．３°、及び２６．８°からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせた、１２．１°でピークを含み、回折角の許容誤差は０．２度である。
【0109】
【表1】
【0110】
実施例２：ＯＧＡ阻害剤Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド（式Ｘａ）の合成。
この化合物及びその合成は、米国特許第１０，０８１，６２５号に開示されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【化48】
【0111】
２－メチル－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－ピペリジル］オキシメチル］－１，３，４－オキサジアゾール２，２，２－トリフルオロ酢酸（１６０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（１ｍＬ）中溶液に、窒素下、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２１０μＬ、０．１２ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を５分間撹拌する。Ｎ－（４－フルオロ－５－ホルミル－チアゾール－２－イル）アセトアミド（４０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を添加し、５分間撹拌し、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（５５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を４０℃に加温し、一晩撹拌する。混合物を減圧下で濃縮して、褐色の固体を得る。残渣をジメチルスルホキシドに溶かし（総量１ｍＬまで）、１５％（ＣＨ３ＣＮ及び１０ｍＭの重炭酸アンモニウムを水酸化アンモニウムでｐＨ９に調整した水）～１００％のＣＨ３ＣＮの勾配で１２分かけて（１００ｍＬ／分、１回注入、２７１／２０４ｎｍ）で溶離するｐｒｅｐ－ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ １０ Ｍｉｃｒｏｎ ３０＊１００ｍｍ Ｃ－１８）により精製して、表題化合物（７ｍｇ、１４％）を得る。ＭＳ ｍ／ｚ ３８４．２（Ｍ＋Ｈ）。
【0112】
結晶性Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドの代替合成。
トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（５９．１ｇ、２７９ｍｍｏｌ）を２－メチル－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－ピペリジル］オキシメチル］－１，３，４－オキサジアゾール（２３．３ｇ、９３．０ｍｍｏｌ）、酢酸エチル（４３８ｍＬ）、及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（３２．４ｍＬ、１８６ｍｍｏｌ）の混合物に室温で添加する。反応混合物を３１℃の加熱ブロック内で、３０℃の内部温度で１５分間撹拌し、次にＮ－（４－フルオロ－５－ホルミル－チアゾール－２－イル）アセトアミド（１７．５ｇ、９３．０ｍｍｏｌ）を５分かけて少しずつ添加する。反応混合物を、３１℃の加熱ブロック内で、３０℃の内部温度で一晩撹拌し、氷水浴中で５℃の内部温度に冷却する。内部温度を１０℃未満に維持しながら、混合物に２Ｍの塩酸水溶液（１４０ｍＬ）を１５分かけて添加する。混合物を室温で１５分間撹拌し、水（５０ｍＬ）及び酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈し、層を分離する。有機層を水（１００ｍＬ）中の２Ｍの塩酸水溶液（３５ｍＬ）の混合物で抽出する。組み合わせた水層を氷水浴中で撹拌し、内部温度を１０℃未満に維持しながら、５０％水酸化ナトリウム水溶液（１９．５ｍＬ）を１０分かけて滴下する。混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で希釈し、２－メチルテトラヒドロフラン（３×２００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して残渣を得、これをジクロロメタン中０～１５％２－プロパノールで溶離するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製する。生成物含有画分を濃縮して、残基を得、これをヘプタン（１００ｍＬ）から濃縮する。濃縮した材料をヘプタン（４５７ｍＬ）中の４０％酢酸エチルと組み合わせ、混合物を５０℃の加熱ブロック内で１時間撹拌し、室温に冷却し、濾過する。濾過した固体を真空下、４０℃で１時間乾燥させて、生成物の第１の収穫物（２２．９ｇ）を得る。濾液を濃縮して、残渣を得、これをヘプタン（５０ｍＬ）中の４０％酢酸エチルと組み合わせ、混合物を５０℃の加熱ブロック内で３０分間撹拌し、室温に冷却し、濾過する。濾過した固体をヘプタン（３３ｍＬ）中の５０％酢酸エチルと組み合わせ、混合物を５０℃の加熱ブロック内で１時間撹拌し、室温に冷却し、濾過する。濾過した固体を真空下、４０℃で１時間乾燥させて、生成物の第２の収穫物（２．５０ｇ）を得る。
【化49】
【0113】
生成物の第１及び第２の収穫物（２９．３ｇ）を含むロットの組合せを、室温で酢酸エチル（１１７ｍＬ）及びヘプタン（１１７ｍＬ）と組み合わせる。混合物を５１℃の加熱ブロック中、内部温度５０℃で３０分間撹拌し、続いて室温に冷却し、濾過する。濾過した固体を真空下４０℃で一晩乾燥させて、表題化合物（２６．７ｇ、収率７５％）を結晶性固体として得る。ＭＳ ｍ／ｚ ３８４．０（Ｍ＋Ｈ）。旋光度［α］Ｄ
２０＝＋３９°（Ｃ＝０．２，メタノール）．
【0114】
結晶性Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドのＸ粉末線回折（ＸＲＰＤ）。
結晶性Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド（２１８ｍｇ）を１．２５ｍＬのメタノールに６０℃で５分間溶解する。溶液を２０分間撹拌しながら周囲温度に冷却する。得られた固体を真空濾過によって単離する。最終的な固体生成物は、１６３ｍｇ又は７５％の収率である。
結晶性Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド（２１８ｍｇ）を１．２５ｍＬのメタノールに６０℃で５分間溶解する。溶液を２０分間撹拌しながら周囲温度に冷却する。得られた固体を真空濾過によって単離する。最終的な固体生成物は、１６３ｍｇ又は７５％の収率である。
【0115】
結晶性固体のＸＲＰＤパターンは、３５ｋＶ及び５０ｍＡで作動する、ＣｕＫａ源（λ＝１．５４０６０Å）及びＶａｎｔｅｃ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒ Ｄ４ Ｅｎｄｅａｖｏｒ Ｘ線粉末回折計において得られる。試料は、２θで４°～４０°の間、２θで０．００８７°の工程サイズ及び０．５秒／工程の走査速度で、０．６ｍｍの発散、５．２８ｍｍの固定散乱防止、及び９．５ｍｍの検出器スリットで走査される。乾燥粉末は、石英試料ホルダーに充填され、滑らかな表面は、ガラススライドを使用して得られる。結晶学の分野において、任意の所与の結晶形態に関して、結晶形態及び晶癖などの要因から生じる好ましい配向に起因して、回折ピークの相対強度が変化し得ることは周知である。優先配向の効果が存在する場合、ピーク強度は改変されるが、多形体の特徴的なピーク位置は不変である。例えば、米国薬局方３８－Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ ３５ Ｃｈａｐｔｅｒ＜９４１＞、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）公式２０１５年５月１日による結晶性及び部分的に結晶性の固体の特性評価を参照されたい。更に、所与の任意の結晶形態について、角ピーク位置がわずかに変化し得ることも、結晶学の分野において周知である。例えば、ピーク位置は、試料が分析される温度若しくは湿度の変動、試料の変位、又は内部標準の有無に起因して変動し得る。この場合、２θの±０．２のピーク位置変動は、示された結晶形態の明確な識別を妨げることなく、これらの潜在的な変動を考慮する。結晶形態の確認は、特徴的なピーク（単位は°２θ）、典型的にはより顕著なピークの任意の独自の組合せに基づいて行われ得る。周囲温度及び相対湿度で収集された結晶形態の回折パターンは、８．８５度及び２６．７７度の２－シータでのＮＩＳＴ６７５標準ピークに基づいて調整された。
【0116】
したがって、結晶性Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミドは、表２に記載されるように、回折ピーク（２－シータ値）を有するときにＣｕＫａ放射線を使用したＸＲＰＤパターンを特徴とする。より具体的には、パターンは、好ましくは、５．８°、１３．０°、１４．３°、１７．５°、２０．４°、２１．４°、及び２２．２°からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせた、１３．５°でピークを含み、回折角の許容誤差は０．２度である。
【0117】
【表2】
【0118】
インビトロヒトＯＧＡ酵素アッセイ
ＯＧＡタンパク質の生成
全長ヒトＯ－ＧｌｃＮＡｃ－β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ（ＮＭ＿０１２２１５）をコードするヌクレオチド配列を、Ｎ末端ポリヒスチジン（ＨＩＳ）タグと共にｐＦａｓｔＢａｃ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ベクターに挿入する。バキュロウイルス（Baculovirus）生成を、Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃバキュロウイルス発現システム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）プロトコルに従って行う。Ｓｆ９細胞を、培養液１リットル当たり１０ｍＬのＰ１ウイルスを用いて１．５×１０６個／ｍＬで感染させ、２８℃で４８時間インキュベートする。細胞を遠心沈降させ、ＰＢＳですすぎ、ペレットを－８０℃で保存する。
ＯＧＡタンパク質の生成
全長ヒトＯ－ＧｌｃＮＡｃ－β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ（ＮＭ＿０１２２１５）をコードするヌクレオチド配列を、Ｎ末端ポリヒスチジン（ＨＩＳ）タグと共にｐＦａｓｔＢａｃ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ベクターに挿入する。バキュロウイルス（Baculovirus）生成を、Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃバキュロウイルス発現システム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）プロトコルに従って行う。Ｓｆ９細胞を、培養液１リットル当たり１０ｍＬのＰ１ウイルスを用いて１．５×１０６個／ｍＬで感染させ、２８℃で４８時間インキュベートする。細胞を遠心沈降させ、ＰＢＳですすぎ、ペレットを－８０℃で保存する。
【0119】
上述のＯＧＡタンパク質（Ｈｉｓ－ＯＧＡ）を次のように精製する。細胞４Ｌを、５０ｍＭトリス、ｐＨ８．０、３００ｍＭ ＮａＣｌ、１０％グリセロール、１０ｍＭイミダゾール、１ｍＭジチオトレイトール（ＤＴＴ）、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００、プロテアーゼ阻害剤４錠（完全ＥＤＴＡ非含有、Ｒｏｃｈｅ）を含有する緩衝液２００ｍＬ中で、４℃にて４５分間溶解させる。次に、この細胞溶解物を１６５００ｒｐｍ、４℃で４０分間スピンし、上清を６ｍＬのＮｉ－ＮＴＡ樹脂（ニッケル－ニトリロ三酢酸）を用いて４℃で２時間インキュベートする。
【0120】
次に、樹脂をカラムに充填し、５０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１０ｍＭのイミダゾール、０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００、１ｍＭのＤＴＴで洗浄し、続いて、５０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのイミダゾール、１０％のグリセロール、１ｍＭのＤＴＴで洗浄する。タンパク質を、５０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３００ｍＭのイミダゾール、１０％グリセロール、１ｍＭのＤＴＴで溶離する。プールしたＨｉｓ－ＯＧＡ含有画分を６ｍＬに濃縮し、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５に添加する（１６／６０）。タンパク質を５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０％グリセロール、２ｍＭ ＤＴＴで溶離させる。Ｈｉｓ－ＯＧＡ含有画分をプールし、タンパク質濃度をＢＣＡ（Ｂｒａｄｆｏｒｄ比色アッセイ）で測定する。
【0121】
ＯＧＡ酵素アッセイ
ＯＧＡ酵素は、核細胞質タンパク質からのＯ－ＧｌｃＮＡｃの除去を触媒する。この活性を測定するために、フルオレセインジ－Ｎ－アセチル－β－Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミニド（ＦＤ－ＧｌｃＮＡｃ，Ｋｉｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００６），３４１（８），９７１－９８２）を１０μＭ（９６ウェルアッセイフォーマット）又は６．７μＭ（３８４ウェルアッセイフォーマット）の最終濃度で基質として使用する。この蛍光発生基質は、ＯＧＡによる切断の際に蛍光性となるので、酵素活性は、５３５ｎｍ（４８５ｎｍでの励起）で検出される蛍光の増大によって測定することができる。
ＯＧＡ酵素は、核細胞質タンパク質からのＯ－ＧｌｃＮＡｃの除去を触媒する。この活性を測定するために、フルオレセインジ－Ｎ－アセチル－β－Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミニド（ＦＤ－ＧｌｃＮＡｃ，Ｋｉｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００６），３４１（８），９７１－９８２）を１０μＭ（９６ウェルアッセイフォーマット）又は６．７μＭ（３８４ウェルアッセイフォーマット）の最終濃度で基質として使用する。この蛍光発生基質は、ＯＧＡによる切断の際に蛍光性となるので、酵素活性は、５３５ｎｍ（４８５ｎｍでの励起）で検出される蛍光の増大によって測定することができる。
【0122】
アッセイ緩衝液を調製し、５０ｍＭのＨ２ＮａＰＯ３－ＨＮａ２ＰＯ３、０．０１％のウシ血清アルブミン、及び０．０１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００の水中での最終濃度、ｐＨ７を得る。最終的な酵素濃度は、３ｎＭ（９６ウェルアッセイフォーマット）又は３．２４ｎＭ（３８４ウェルアッセイフォーマット）である。両方のアッセイフォーマットから本質的に同等の結果が得られる。
【0123】
試験化合物を、１０点濃度応答曲線を用いて、純粋なジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に希釈する。反応混合物中の最大化合物濃度は、３０μＭである。基質の添加によって反応が開始する前に、適切な濃度の化合物をＯＧＡ酵素と共に３０分間プレインキュベートする。反応を室温で６０分間進行させる。次いで、反応を停止させずに、蛍光を読み取る。化合物の正規化されたデータと対数とをプロットし、４つのパラメータのロジスティック方程式を使用してデータを適合することによって、ＩＣ５０値を計算する。
【0124】
実施例１の化合物を本質的に上記のように試験して、１．９７ｎＭ±１．２２（ｎ＝９）のＩＣ５０を示した。このデータは、実施例１の化合物がインビトロでＯＧＡ酵素活性を阻害することを示す。
【0125】
実施例２の化合物もまた本質的に上記のように試験すると、２．１３ｎＭ±０．８９（ｎ＝５）のＩＣ５０を示した。この結果は、実施例２の化合物がインビトロでＯＧＡ酵素活性を阻害することを示す。
【0126】
ＯＧＡ酵素活性の阻害を測定するための全細胞アッセイ
細胞プレーティング：
当技術分野で既知の標準条件を利用して、微小管関連タンパク質タウのＰ３０１Ｓ－１Ｎ４Ｒ形態の誘発性発現のために改変されたＴＲｅｘ－２９３細胞を生成し、１０％テトラサイクリン不含ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｓｉｇｍａ Ｆ２４４２）、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５μｇ／ｍＬのブラスチシジン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃Ａ１１１３９－０３）、及び２００μｇ／ｍＬのゼオシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃Ｒ２５０－０１）で補足したＤＭＥＭ高グルコース（Ｓｉｇｍａ＃Ｄ５７９６）からなる成長培地で維持する。実験のために、細胞をポリ－Ｄ－リジンでコーティングされたＣｏｒｎｉｎｇ Ｂｉｏｃｏａｔ（３５６６６３）３８４ウェルプレートのウェル当たり１０，０００～１４，０００細胞で成長培地にプレーティングし、３７℃／５％ＣＯ２の細胞インキュベーターで２０～２４時間インキュベートする。タウ発現を誘発せずに実験を行う。
細胞プレーティング：
当技術分野で既知の標準条件を利用して、微小管関連タンパク質タウのＰ３０１Ｓ－１Ｎ４Ｒ形態の誘発性発現のために改変されたＴＲｅｘ－２９３細胞を生成し、１０％テトラサイクリン不含ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｓｉｇｍａ Ｆ２４４２）、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５μｇ／ｍＬのブラスチシジン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃Ａ１１１３９－０３）、及び２００μｇ／ｍＬのゼオシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃Ｒ２５０－０１）で補足したＤＭＥＭ高グルコース（Ｓｉｇｍａ＃Ｄ５７９６）からなる成長培地で維持する。実験のために、細胞をポリ－Ｄ－リジンでコーティングされたＣｏｒｎｉｎｇ Ｂｉｏｃｏａｔ（３５６６６３）３８４ウェルプレートのウェル当たり１０，０００～１４，０００細胞で成長培地にプレーティングし、３７℃／５％ＣＯ２の細胞インキュベーターで２０～２４時間インキュベートする。タウ発現を誘発せずに実験を行う。
【0127】
化合物処理：
試験する化合物を、１０点の濃度応答曲線を使用して純粋なＤＭＳＯ中で１／３に段階希釈し、成長培地で更に希釈する。プレーティングの２０～２４時間後、細胞を増殖培地中の試験化合物で処理し、最大化合物濃度は１５μＭ（０．１５％ＤＭＳＯ）である。最大阻害は１５μＭのチアメットＧの反復測定によって定義され、最小阻害は０．１５％ＤＭＳＯ処理の反復測定によって定義される。細胞を３７℃／５％ＣＯ２のインキュベーターに２０～２４時間戻す。化合物を各プレート内で２回ずつ試験する。
試験する化合物を、１０点の濃度応答曲線を使用して純粋なＤＭＳＯ中で１／３に段階希釈し、成長培地で更に希釈する。プレーティングの２０～２４時間後、細胞を増殖培地中の試験化合物で処理し、最大化合物濃度は１５μＭ（０．１５％ＤＭＳＯ）である。最大阻害は１５μＭのチアメットＧの反復測定によって定義され、最小阻害は０．１５％ＤＭＳＯ処理の反復測定によって定義される。細胞を３７℃／５％ＣＯ２のインキュベーターに２０～２４時間戻す。化合物を各プレート内で２回ずつ試験する。
【0128】
免疫染色：
２０～２４時間の化合物処理後、培地をアッセイプレートから除去し、ＤＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ＃Ｄ８５３７；ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水）中の２５μＬの３．７％ホルムアルデヒド溶液（Ｓｉｇｍａ＃Ｆ１６３５）を各ウェルに添加し、３０分間インキュベートする。次いで、細胞をＤＰＢＳで１回洗浄し、次いで０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ＃Ｔ９２８４）で透過処理する。３０分後、細胞をＤＰＢＳで２回洗浄し、次いでブロッキング溶液（１％のＢＳＡ／ＤＰＢＳ／０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００）を各ウェルに添加し、６０分間インキュベートする。ブロッキング溶液を除去し、ブロッキング溶液中のＯ－ＧｌｃＮＡｃタンパク質抗体（ＲＬ２クローン、Ｔｈｅｒｍｏ、ＭＡ１０７２）の０．４０～０．３３μｇ／ｍＬの溶液を細胞に添加し、２～８℃で一晩静置する。翌日、細胞をＤＰＢＳで２回洗浄し、ＤＰＢＳ中の２μｇ／ｍＬの二次抗体であるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃Ａ１１００１）を各ウェルに添加し、室温で９０分間静置する。二次抗体を除去し、細胞をＤＰＢＳ及びＤＡＰＩ（Ｓｉｇｍａ＃Ｄ９５６４；４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール、ジラクテート）及びＲＮａｓｅ（Ｓｉｇｍａ、Ｒ６５１３））のＤＰＢＳ中溶液で２回洗浄し、それぞれ１及び５０μｇ／ｍＬの濃度で各ウェルに添加する。プレートを密封し、１時間インキュベートし、Ａｃｕｍｅｎ ｅＸ３ ｈｃｉ（ＴＴＰ Ｌａｂｔｅｃｈ）で分析する。上記の全てのインキュベーション及び洗浄工程は、一次抗体を除いて、室温で行う。
２０～２４時間の化合物処理後、培地をアッセイプレートから除去し、ＤＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ＃Ｄ８５３７；ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水）中の２５μＬの３．７％ホルムアルデヒド溶液（Ｓｉｇｍａ＃Ｆ１６３５）を各ウェルに添加し、３０分間インキュベートする。次いで、細胞をＤＰＢＳで１回洗浄し、次いで０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ＃Ｔ９２８４）で透過処理する。３０分後、細胞をＤＰＢＳで２回洗浄し、次いでブロッキング溶液（１％のＢＳＡ／ＤＰＢＳ／０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００）を各ウェルに添加し、６０分間インキュベートする。ブロッキング溶液を除去し、ブロッキング溶液中のＯ－ＧｌｃＮＡｃタンパク質抗体（ＲＬ２クローン、Ｔｈｅｒｍｏ、ＭＡ１０７２）の０．４０～０．３３μｇ／ｍＬの溶液を細胞に添加し、２～８℃で一晩静置する。翌日、細胞をＤＰＢＳで２回洗浄し、ＤＰＢＳ中の２μｇ／ｍＬの二次抗体であるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃Ａ１１００１）を各ウェルに添加し、室温で９０分間静置する。二次抗体を除去し、細胞をＤＰＢＳ及びＤＡＰＩ（Ｓｉｇｍａ＃Ｄ９５６４；４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール、ジラクテート）及びＲＮａｓｅ（Ｓｉｇｍａ、Ｒ６５１３））のＤＰＢＳ中溶液で２回洗浄し、それぞれ１及び５０μｇ／ｍＬの濃度で各ウェルに添加する。プレートを密封し、１時間インキュベートし、Ａｃｕｍｅｎ ｅＸ３ ｈｃｉ（ＴＴＰ Ｌａｂｔｅｃｈ）で分析する。上記の全てのインキュベーション及び洗浄工程は、一次抗体を除いて、室温で行う。
【0129】
分析及び結果：
プレートをＡｃｕｍｅｎ ｅＸ３機器で４８８及び４０５ｎｍ励起レーザー、並びに２つの発光フィルターＦＬ２（５００～５３０ｎｍ）及びＦＬ１（４２０～４９０ｎｍ）を使用して分析する。ＦＬ２フィルターはＯ－ＧｌｃＮＡｃタンパク質抗体（ＲＬ２クローン）に対応するシグナルであり、ＦＬ１フィルターは細胞核（ＤＡＰＩ）に対応するシグナルである。総ＦＬ２／総ＦＬ１（オブジェクト又は集団を選択しない各ウェルの総蛍光）の比率をデータ分析に使用する。データをチアメットＧの１５μＭ処理によって参照される最大阻害及び０．１５％ＤＭＳＯ処理によって達成される最小阻害に正規化する。データを非線形曲線適合アプリケーション（４パラメータロジスティック方程式）で適合し、ＩＣ５０値を計算及び報告する。
プレートをＡｃｕｍｅｎ ｅＸ３機器で４８８及び４０５ｎｍ励起レーザー、並びに２つの発光フィルターＦＬ２（５００～５３０ｎｍ）及びＦＬ１（４２０～４９０ｎｍ）を使用して分析する。ＦＬ２フィルターはＯ－ＧｌｃＮＡｃタンパク質抗体（ＲＬ２クローン）に対応するシグナルであり、ＦＬ１フィルターは細胞核（ＤＡＰＩ）に対応するシグナルである。総ＦＬ２／総ＦＬ１（オブジェクト又は集団を選択しない各ウェルの総蛍光）の比率をデータ分析に使用する。データをチアメットＧの１５μＭ処理によって参照される最大阻害及び０．１５％ＤＭＳＯ処理によって達成される最小阻害に正規化する。データを非線形曲線適合アプリケーション（４パラメータロジスティック方程式）で適合し、ＩＣ５０値を計算及び報告する。
【0130】
実施例１の化合物を本質的に上記のように試験して、２１．９ｎＭ±７．３（ｎ＝５）のＩＣ５０を示した。このデータは、実施例１の化合物が細胞アッセイにおいてＯＧＡ酵素活性を阻害することを示す。
【0131】
実施例２の化合物もまた本質的に上記のように試験すると、２２．６ｎＭ±７．３（ｎ＝３）のＩＣ５０を示した。この結果は、実施例２の化合物が細胞アッセイにおいてＯＧＡ酵素活性を阻害することを示す。
【0132】
実施例１の化合物の安全性及び薬物動態を評価するための健常被験者における単回漸増用量試験
健常被験者における実施例１の化合物の安全性、忍容性、及び薬物動態（ＰＫ）を評価するために、第１相、単一施設、被験者及び治験責任医師盲検、単回漸増用量、プラセボ対照、クロスオーバー、無作為研究を行う。当該研究を、６つの用量レベルにわたって最大３つの研究期間で２つの交互コホート（コホート１及び２）に行う。被験者を各コホートにおいて３つの治療順序のうちの１つに無作為に割り付け、各順序は、３つの試験期間にわたる実施例１の化合物の投与２回及びプラセボの投与１回を完全クロスオーバー様式で含む。臨床研究のデザインを表３に要約する。
健常被験者における実施例１の化合物の安全性、忍容性、及び薬物動態（ＰＫ）を評価するために、第１相、単一施設、被験者及び治験責任医師盲検、単回漸増用量、プラセボ対照、クロスオーバー、無作為研究を行う。当該研究を、６つの用量レベルにわたって最大３つの研究期間で２つの交互コホート（コホート１及び２）に行う。被験者を各コホートにおいて３つの治療順序のうちの１つに無作為に割り付け、各順序は、３つの試験期間にわたる実施例１の化合物の投与２回及びプラセボの投与１回を完全クロスオーバー様式で含む。臨床研究のデザインを表３に要約する。
【0133】
【表3】
【0134】
少なくとも８時間の夜間絶食後、経口カプセル剤を座位で各投与日の朝に約２４０ｍＬの室温の水で投与する。０．１５ｍｇ～２ｍｇの用量を、経口カプセル剤投与と同様に、水を含む経口投与シリンジにより実施例１の化合物の経口溶剤として投与する。表４ａ及び表４ｂは、治療レジメンを要約したものである。
【0135】
【表4】
【0136】
【表5】
【0137】
実施例１の化合物を含むカプセル剤を即時調製する。０．１５ｍｇ～２ｍｇの実施例１の化合物の経口用量を薬溶剤として即座調製する。任意の特定のコホート／投与期間について、投与されるカプセルの総数は、プラセボ又は実施例１の化合物に割り当てられているかどうかにかかわらず、全ての被験者について同じである。しかしながら、カプセルの数は、投与期間とコホートとの間で異なり得る。これは、盲検を維持するために即時調製された経口投与溶剤の場合も同様である。実施例１の化合物を、即時調製のために不活性成分を含まない遊離塩基の形態で供給する。実施例１の化合物を含まない経口溶剤ビヒクルの適合体積を、０．１５ｍｇ～２ｍｇの用量のプラセボとして使用する。
【0138】
静脈血各約３ｍＬの試料を採取して、実施例１の化合物の血漿中濃度を決定する。実施例１の化合物の濃度を、タンデム質量分析法による有効な液体クロマトグラフィーを使用してアッセイする。実施例１の化合物のＰＫパラメータ推定値を標準の非コンパートメント分析法を使用して計算する。実施例１の化合物の血漿中濃度を、実施例１の化合物の投与量及びＰＫ血液試料採取のおおよその時間によって要約する。本質的に上記の手順に従って、健常被験者における実施例１の化合物の単一漸増用量のＰＫデータを表５及び表６に示す。
【0139】
【表6】
【0140】
【表7】
２ 投与する実施例１の化合物の量
３ Ｎ＝被験者数
４ ＣＬ／Ｆ＝経口投与後に計算した見かけのクリアランス
５ ＡＵＣ（０－∞）＝時間ゼロから無限大までの濃度対時間曲線下面積
６ Ｃｍａｘ＝観察された最大薬物濃度
７ Ｖｚ／Ｆ＝経口投与後の見かけの分布容積
８ ｔ１／２＝終末相半減期（幾何平均（最小－最大））
９ ｔｍａｘ＝観察された最大薬物濃度の時間；中央値（最小－最大）
１０ Ａｅ０－２４＝投与後２４時間までに尿中に排泄された実施例１の化合物の量
１１ ＣＬｒ＝腎クリアランス
１２ Ｎ＝５
１３ Ｎ＝３
１４ ＮＣ＝計算されず
【0141】
データは、ＡＵＣ（０－∞）及びＣｍａｘが、実施例１の化合物０．６ｍｇ～１６ｍｇの用量範囲にわたってほぼ用量比例的に増加することを明らかにしている。実施例１の化合物のｔｍａｘ中央値は約１時間であり、ｔ１／２中央値は約６時間である。
【0142】
健常被験者における放射性リガンド［１８Ｆ］ＬＳＮ３３１６６１２を用いた陽電子放出断層撮影法によって測定される、実施例１の化合物の単回経口投与後の脳Ｏ－ＧｌｃＮＡｃａｓｅ酵素占有率の評価
０．２５ｍｇ、１ｍｇ、及び５ｍｇのＮ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド（式Ｉの化合物）の単回経口投与後の脳Ｏ－ＧｌｃＮＡｃａｓｅ（ＯＧＡ）の脳透過性及び標的関与を実証する単一施設、非盲検、非無作為化、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）研究が、本質的に以下に記載するように当業者により行われる。［１８Ｆ］ＬＳＮ３３１６６１２は、脳内のＯＧＡのインビボ撮像用の陽電子放出放射性医薬品であり、ＯＧＡを阻害する化合物の標的関与を評価するために使用される。ＰＥＴ放射性リガンドとしての１８Ｆ－ＬＳＮ３３１６６１２の調製及び使用は、例えば、Ｓ．Ｌｕ，ｅｔ．ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１２，（２０２０）に記載されているように、当該技術分野で知られている。［１８Ｆ］ＬＳＮ３３１６６１２トレーサーを使用したこの単回投与ＰＥＴ研究では、安全で忍容性が高いことが実証されている好適な用量範囲にわたって脳ＯＧＡ酵素占有率（ＥＯ）を評価する。
０．２５ｍｇ、１ｍｇ、及び５ｍｇのＮ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド（式Ｉの化合物）の単回経口投与後の脳Ｏ－ＧｌｃＮＡｃａｓｅ（ＯＧＡ）の脳透過性及び標的関与を実証する単一施設、非盲検、非無作為化、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）研究が、本質的に以下に記載するように当業者により行われる。［１８Ｆ］ＬＳＮ３３１６６１２は、脳内のＯＧＡのインビボ撮像用の陽電子放出放射性医薬品であり、ＯＧＡを阻害する化合物の標的関与を評価するために使用される。ＰＥＴ放射性リガンドとしての１８Ｆ－ＬＳＮ３３１６６１２の調製及び使用は、例えば、Ｓ．Ｌｕ，ｅｔ．ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１２，（２０２０）に記載されているように、当該技術分野で知られている。［１８Ｆ］ＬＳＮ３３１６６１２トレーサーを使用したこの単回投与ＰＥＴ研究では、安全で忍容性が高いことが実証されている好適な用量範囲にわたって脳ＯＧＡ酵素占有率（ＥＯ）を評価する。
【0143】
健常被験者を４つのコホートのうちの１つに割り付け、各コホートの４名の被験者が本研究を完了する。全ての被験者は、１回のベースラインＰＥＴスキャン及び２回の投与後ＰＥＴスキャンを受ける。ベースラインＰＥＴスキャンは、実施例１の化合物の投与の最大約１４日前から実施される。全体として、各被験者は、実施例１の化合物の単回投与及び［１８Ｆ］ＬＳＮ３３１６６１２ ＰＥＴトレーサーの３回投与を受ける。実施例１の化合物の投与をベースラインＰＥＴスキャンの完了後に行う。走査は、実施例１の化合物の０．２５ｍｇ及び５ｍｇの用量については投与のおよそ２時間後及び２４時間後に、実施例１の化合物の１ｍｇの用量については投与のおよそ２時間後及び２４時間後又は３０時間後及び５４時間後に行う。脳の動的ＰＥＴデータは、トレーサー注入直後に１２０分間にわたって取得される。ＥＯを実施例１の化合物の用量及びおおよその走査時間によって要約する。
【0144】
実施例１の化合物をカプセル製剤で３ｍｇ以上の用量で経口投与する。３ｍｇ未満の用量の場合、実施例１の化合物を適切な容器に秤量し、適切な体積の脱気したＳｐｒｉｔｅ（登録商標）又は希釈剤に溶解する。
【0145】
［１８Ｆ］ＬＳＮ３３１６６１２を、各ＰＥＴスキャンの日に非放射性前駆体から臨床現場の放射化学施設で生成する。［１８Ｆ］ＬＳＮ３３１６６１２注射剤は、エタノール、注射用滅菌水、及びアスコルビン酸ナトリウムを含む生理食塩水で製剤化した静脈内注射用の透明な溶液である。［１８Ｆ］ＬＳＮ３３１６６１２を、およそ３．３％（ｖ／ｖ）のエタノール（ＥｔＯＨ）及びアスコルビン酸ナトリウム（４．６７ｍｇ／ｍＬ）を含むように製剤化した生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）に入れる。［１８Ｆ］ＬＳＮ３３１６６１２を、注入ポンプを使用して３分間の注入期間にわたって静脈内投与し、その後、１０ｍＬの生理食塩水を流す。ＰＥＴ撮像前に、標準の臨床診療に従って、静脈内カテーテル（放射性トレーサー注入用）を被験者に挿入する。各被験体は、画像検査毎に［１８Ｆ］ＬＳＮ３３１６６１２の単回注射を受ける。放射性医薬品を、およそ５ｍＣｉ（６ｍＣｉ以下）の線量で、最大質量線量１０μｇ及び最大体積１０ｍＬで静脈内注射する。
【0146】
各ＰＥＴスキャンについて、放射化学研究所は、Ｌｅｅ，Ｊ．，Ｌｉｏｗ，Ｊ．，Ｐａｕｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．「ＰＥＴ Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｒａｉｎ Ｏ－ＧｌｃＮＡｃａｓｅ Ｗｉｔｈ［１８Ｆ］ＬＳＮ３３１６６１２ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈｙ Ｈｕｍａｎ Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ，」ＥＪＮＭＭＩ Ｒｅｓ １０，２０（２０２０）に記載されているものなどの当技術分野で公知のＰＥＴユニット製造プロトコルに従って前駆体から放射性リガンドを合成する。
【0147】
動脈血試料を各ＰＥＴスキャン中に全ての被験者から採取して放射能を測定して、ＰＥＴトレーサー動態分析用の情報を提供する。実施例１の化合物を投与した後に静脈血試料を採取し、タンデム質量分析アッセイを伴う検証された液体クロマトグラフィーを用いて実施例１の化合物の血漿中濃度を測定する。
【0148】
［１８Ｆ］ＬＳＮ３３１６６１２ ＰＥＴの撮像主要アウトカムは、皮質領域、基底核領域、視床領域、及び小脳領域を含むＯＧＡが存在する領域で決定される総分布容積（ＶＴ）である。分析では、異なる脳領域における減衰補正した時間放射能データを使用する。撮像データを、動脈入力関数を用いて２組織コンパートメントモデルで分析して、ＶＴを決定する。実施例１の化合物の単回投与後のＯＧＡ ＥＯを、占有プロットに従ってグラフ解析を用いて得る。
ＶＴ（ベースライン）－ＶＴ（投与）＝占有率＊（ＶＴ（ベースライン）－ＶＮＤ）、
式中、ＶＴ（ベースライン）及びＶＴ（投与）は、それぞれベースライン及び実施例１の化合物投与後に得られたいくつかの領域の総分布容積である。占有率をプロットの線形回帰の勾配として決定し、非変位分布容積ＶＮＤをｘ切片として決定する。
ＶＴ（ベースライン）－ＶＴ（投与）＝占有率＊（ＶＴ（ベースライン）－ＶＮＤ）、
式中、ＶＴ（ベースライン）及びＶＴ（投与）は、それぞれベースライン及び実施例１の化合物投与後に得られたいくつかの領域の総分布容積である。占有率をプロットの線形回帰の勾配として決定し、非変位分布容積ＶＮＤをｘ切片として決定する。
【0149】
本質的に上記の手順の後、実施例１の化合物０．２５ｍｇ、１ｍｇ及び５ｍｇの単回経口投与後の脳ＯＧＡの目標係合を表７ａ～７ｃに示す。
【0150】
【表8】
【0151】
【表9】
【0152】
【表10】
【0153】
上記の表７ａ～７ｃに提供されたデータは、実施例１の化合物の５ｍｇ用量についてのＥＯが投与後２４時間で９０％ＥＯを超える脳ＯＧＡ ＥＯの血漿中濃度依存的変化を開示している。１ｍｇ用量の実施例１の化合物は、投与後２４時間時点でＥＯ８０．６％であり、投与後５４時間時点でＥＯ３０．３％であることが分かった。０．２５ｍｇ用量の実施例１の化合物は、投与後２４時間時点でＥＯ４６％であることが分かった。
【0154】
上に開示される実施例１の化合物の単回経口投与後の脳浸透及び脳ＯＧＡの標的関与を実証する、健常被験者における実施例１の化合物の単回漸増用量研究及びＰＥＴ研究からのＰＫデータを利用して、ＡＤ及び他の神経変性タウオパチーを含む神経変性疾患を実施例１の化合物で治療するための低用量及び投与レジメンを以下に記載する。
【0155】
実施例１の化合物の総用量０．２５ｍｇ／日～５ｍｇ／日。
【0156】
実施例１の化合物の総用量０．１ｍｇ／日～３ｍｇ／日。
【0157】
実施例１の化合物の総用量０．２５ｍｇ／日～３ｍｇ／日。
【0158】
実施例１の化合物の総用量０．１ｍｇ／日～２ｍｇ／日。
【0159】
実施例１の化合物の総用量０．２５ｍｇ／日～２ｍｇ／日。
【0160】
実施例１の化合物の総用量０．１ｍｇ／日～１ｍｇ／日。
【0161】
実施例１の化合物の総用量０．２５ｍｇ／日～１ｍｇ／日。
【0162】
実施例１の化合物の総用量５ｍｇ／日。
【0163】
実施例１の化合物の総用量３ｍｇ／日。
【0164】
実施例１の化合物の総用量２ｍｇ／日。
【0165】
実施例１の化合物の総用量１ｍｇ／日。
【0166】
実施例１の化合物の総用量０．２５ｍｇ／日。
【0167】
実施例１の化合物の総用量０．１ｍｇ／日。
【0168】
投与される実施例１の化合物の１日総用量が１単位用量であることが好ましい。
【0169】
投与される実施例１の化合物の１日総用量が２単位用量であることが更に好ましい。実施例１の化合物の総１日用量は、各用量が等量の実施例１の化合物を含有する２単位用量で投与されることが好ましい。実施例１の化合物の１日総用量を２回の単位用量で投与する場合、各単位用量の投与は少なくとも８時間離すことが好ましい。
【0170】
加えて、医薬組成物中の実施例１の化合物の総用量を以下に記載する。
【0171】
実施例１の化合物の総用量は０．２５ｍｇ～５ｍｇである。
【0172】
実施例１の化合物の総用量は０．１ｍｇ～３ｍｇである。
【0173】
実施例１の化合物の総用量は０．２５ｍｇ～３ｍｇである。
【0174】
実施例１の化合物の総用量は０．１ｍｇ～２ｍｇである。
【0175】
実施例１の化合物の総用量は０．２５ｍｇ～２ｍｇである。
【0176】
実施例１の化合物の総用量は０．１ｍｇ～１ｍｇである。
【0177】
実施例１の化合物の総用量は０．２５ｍｇ～１ｍｇである。
【0178】
実施例１の化合物の総用量は３ｍｇである。
【0179】
実施例１の化合物の総用量は２ｍｇである。
【0180】
実施例１の化合物の総用量は１ｍｇである。
【0181】
実施例１の化合物の総用量は０．２５ｍｇである。
【0182】
加えて、実施例１の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物の総用量が１単位用量で含まれることが好ましい。
【0183】
実施例１の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物の総用量が１単位用量で含まれ、１単位用量が１日１回投与されることが更に好ましい。
【0184】
実施例１の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物の総用量が２単位用量で含まれることも好ましい。
【0185】
実施例１の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物の総用量が２単位用量で含まれ、各単位用量が等量の実施例１の化合物を含むことが好ましい。
【0186】
実施例１の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物の総用量が２単位用量で含まれ、各用量が１日で投与されることが更に好ましい。
【0187】
実施例１の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物の総用量が２単位用量で含まれ、各単位用量が等量の実施例１の化合物を含み、各用量が好ましくは少なくとも８時間空けて１日で投与されることが更に好ましい。
【0188】
実施例３：操作された抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体の発現及び精製
Ｎ３ｐＧｌｕＡβに対する抗体は、当該技術分野において既知である。例えば、米国特許第８，６７９，４９８号、米国特許第８，９６１，９７２号、米国特許第１０，６４７，７５９号及び米国特許第１１，０７８，２６１号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）は、抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体、抗体を作製する方法、抗体製剤、及びそのような抗体を用いてアルツハイマー病などの疾患を治療する方法を開示している。例示的な抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体のアミノ酸配列を以下の表８に提供する。
Ｎ３ｐＧｌｕＡβに対する抗体は、当該技術分野において既知である。例えば、米国特許第８，６７９，４９８号、米国特許第８，９６１，９７２号、米国特許第１０，６４７，７５９号及び米国特許第１１，０７８，２６１号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）は、抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体、抗体を作製する方法、抗体製剤、及びそのような抗体を用いてアルツハイマー病などの疾患を治療する方法を開示している。例示的な抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体のアミノ酸配列を以下の表８に提供する。
【0189】
【表11】
【0190】
本発明の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａ抗体は、本質的に以下のようにして作製及び精製することができる。抗体Ｉの場合、ＨＥＫ ２９３ ＥＢＮＡ又はＣＨＯなどの適切な宿主細胞に、最適な所定のＨＣ：ＬＣベクター比、又は配列番号２２などのＨＣ及び配列番号２１などのＬＣの両方をコードする単一ベクター系を使用して抗体を分泌するための発現系を一過性又は安定にトランスフェクトする。抗体が分泌された清澄化培地を、多くの一般的に使用される技術のいずれかを使用して精製する。例えば、培地は、適合する緩衝液、例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）等で平衡化したプロテインＡ又はＧのセファロースＦＦカラムに都合よく適用され得る。カラムを洗浄して、非特異的結合構成成分を除去する。結合した抗体を、例えば、ｐＨ勾配（例えば、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．８）から０．１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）へ）によって、溶出される。抗体画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥなどにより検出し、次いでプールする。意図する使用に応じて、更なる精製は任意選択的である。抗体を、一般的な技術を使用して濃縮及び／又は滅菌濾過し得る。可溶性凝集体及び多量体を、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、又はヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む一般的な技術によって効果的に除去し得る。これらのクロマトグラフィー工程後の抗体Ｉの純度は、９９％を上回る。生成物は、－７０℃ですぐに凍結されてもよいか、又は凍結乾燥されてもよい。
【0191】
抗体ＩＩは、本質的に以下のように発現及び精製され得る。配列番号２４のＨＣアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列、及び配列番号２３のＬＣアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列を含むグルタミンシンテターゼ（ＧＳ）発現ベクターを用いて、エレクトロポレーションによりチャイニーズハムスター卵巣細胞株（ＣＨＯ）をトランスフェクトする。発現ベクターは、ＳＶ Ｅａｒｌｙ（Ｓｉｍｉａｎ Ｖｉｒｕｓ ４０Ｅ）プロモーター及びＧＳの遺伝子をコードする。トランスフェクション後、細胞は、０～５０μＭのＬ－メチオニンスルホキシミン（ＭＳＸ）を用いたバルク選択を受ける。その後、選択されたバルク細胞又はマスターウェルが無血清懸濁培養で増殖させて、産生で使用される。抗体が分泌された清澄化培地を、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）などの適合性緩衝液で平衡化したタンパク質Ａ親和性カラムに適用する。このカラムは１Ｍ ＮａＣｌで洗浄して、非特異的結合構成成分を除去する。結合したＮ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体を、例えば、ｐＨ（およそ）３．５のクエン酸ナトリウムを用いて溶離し、画分を１Ｍトリス緩衝液で中和する。抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体画分を、例えばＳＤＳ－ＰＡＧＥ又は分析的サイズ排除によって検出し、プールする。抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体ＩＩを、ｐＨ７．４のＰＢＳ緩衝液又はｐＨ約６の１０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液、１５０ｍＭ ＮａＣｌのいずれかで濃縮する。最終材料は、一般的な技法を使用して滅菌濾過され得る。抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体ＩＩの純度は９５％超である。本発明の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体ＩＩは、直ちに－７０℃で凍結してもよいし、４℃で数ヶ月間保存してもよい。
【0192】
実施例４：抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体の結合親和性及び動態。
ｐＥ３－４２ Ａβペプチドに対する本発明の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体（抗体Ｉ又は抗体ＩＩ）の結合親和性及び動態は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いた表面プラズモン共鳴によって測定される。結合親和性は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）ＣＭＳチップ上の固定化プロテインＡを介して抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体を捕捉し、１００ ｎＭから出発して３．１２５ｎＭまで２倍段階希釈でｐＥ３－４２ Ａβペプチドを流すことによって測定する。実験は、２５℃で、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＢＲ１００６６９；１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）で実施する。
ｐＥ３－４２ Ａβペプチドに対する本発明の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体（抗体Ｉ又は抗体ＩＩ）の結合親和性及び動態は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いた表面プラズモン共鳴によって測定される。結合親和性は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）ＣＭＳチップ上の固定化プロテインＡを介して抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体を捕捉し、１００ ｎＭから出発して３．１２５ｎＭまで２倍段階希釈でｐＥ３－４２ Ａβペプチドを流すことによって測定する。実験は、２５℃で、ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＢＲ１００６６９；１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）で実施する。
【0193】
各サイクルについて、抗体は、１０μＬ／分の流量での１０μｇ／ｍＬの濃度の抗体溶液の５μＬ注入により捕捉される。ペプチドは、５０μＬ／分での２５０μＬ注入により結合され、その後１０分間解離される。チップ表面は、１０μＬ／ｍＬの流量でグリシン緩衝液（ｐＨ１．５）の５μＬ注入で再生される。データは、１：１ラングミュア結合モデルに適合され、ｋｏｎ及びｋｏｆｆを導出し、ＫＤを計算する。本質的に上記のような手順の後、以下のパラメータ（表９に示す）が観察される。
【0194】
【表12】
【0195】
これらのデータは、本発明の抗体がｐＥ３－４２ Ａβに結合することを示している。
【0196】
実施例５：エクスビボ標的係合
固定されたＰＤＡＰＰ脳からの脳切片に対するエクスビボ標的関与を明らかにするために、本発明の外因的に付加された抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体（抗体Ｉ又は抗体ＩＩ）を用いて免疫組織化学的分析を行う。老齢のＰＤＡＰＰマウス（２５月齢）から得られるクライオスタット連続冠状切片を、２０μｇ／ｍＬの本発明の例示的な抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体とインキュベーションする。ヒトＩｇＧに特異的な二次ＨＲＰ試薬を用い、沈着したプラークをＤＡＢ－Ｐｌｕｓ（ＤＡＫＯ）で可視化する。ビオチン化マウス３Ｄ６抗体、続いて、Ｓｔｅｐ－ＨＲＰ二次抗体を陽性対照として使用する。陽性対照抗体（ビオチン化３Ｄ６）は、ＰＤＡＰＰ海馬中のかなりの量の沈着したＡβを標識し、抗Ｎ３ｐＧｌｕＡβ抗体（抗体Ｉ又は抗体ＩＩ）は、沈着物のサブセットを標識した。これらの組織学的試験は、本発明の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体が堆積したＡβ標的をエクスビボで関与させることを実証した。
固定されたＰＤＡＰＰ脳からの脳切片に対するエクスビボ標的関与を明らかにするために、本発明の外因的に付加された抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体（抗体Ｉ又は抗体ＩＩ）を用いて免疫組織化学的分析を行う。老齢のＰＤＡＰＰマウス（２５月齢）から得られるクライオスタット連続冠状切片を、２０μｇ／ｍＬの本発明の例示的な抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体とインキュベーションする。ヒトＩｇＧに特異的な二次ＨＲＰ試薬を用い、沈着したプラークをＤＡＢ－Ｐｌｕｓ（ＤＡＫＯ）で可視化する。ビオチン化マウス３Ｄ６抗体、続いて、Ｓｔｅｐ－ＨＲＰ二次抗体を陽性対照として使用する。陽性対照抗体（ビオチン化３Ｄ６）は、ＰＤＡＰＰ海馬中のかなりの量の沈着したＡβを標識し、抗Ｎ３ｐＧｌｕＡβ抗体（抗体Ｉ又は抗体ＩＩ）は、沈着物のサブセットを標識した。これらの組織学的試験は、本発明の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体が堆積したＡβ標的をエクスビボで関与させることを実証した。
【0197】
実施例６：インビボ標的係合研究
本開示の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体が血液脳関門を通過し、堆積したプラークにインビボで結合する能力を測定する。老齢ＰＤＡＰＰトランスジェニックマウス（１８．５月齢～３２月齢）に、抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体（例えば、抗体Ｉ又は抗体ＩＩ）又は陰性コントロールＩｇＧを腹腔内注射する。１群当たり６匹のマウスは、１日目及び３日目に抗体の４０ｍｇ／ｋｇ注射を１回受ける。マウスを屠殺し、組織化学分析のために脳を回収する６日目に、インビボでの標的係合を決定する。
本開示の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体が血液脳関門を通過し、堆積したプラークにインビボで結合する能力を測定する。老齢ＰＤＡＰＰトランスジェニックマウス（１８．５月齢～３２月齢）に、抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体（例えば、抗体Ｉ又は抗体ＩＩ）又は陰性コントロールＩｇＧを腹腔内注射する。１群当たり６匹のマウスは、１日目及び３日目に抗体の４０ｍｇ／ｋｇ注射を１回受ける。マウスを屠殺し、組織化学分析のために脳を回収する６日目に、インビボでの標的係合を決定する。
【0198】
インビボ標的係合の程度は、シスター切片に対する外因性対照抗体免疫染色によって定義される総プラーク面積に対して正規化されたインビボ抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体係合について陽性のパーセント面積として定量化される（ＴＥ比）。ＴＥ比は、抗体が結合する面積の割合を測定し、可能性のある標的の面積の合計割合（シスター切片上の陽性対照抗体（３Ｄ６）を用いた外因性免疫組織化学によって視覚化された総沈着Ａβ）に対して値を正規化することによって生成される。
【0199】
本質的に上記のような手順の後、抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体Ｉ及びＩＩの両方が沈着したプラークに係合することが見出される。これらの結果は、末梢投与された場合の抗Ｎ３ｐＧｌｕ抗体Ｉ及びＩＩが血液脳関門を通過し、沈着したＡβの意図された標的と係合することができることを実証している。
【0200】
実施例７：ＯＧＡ阻害剤１－（２－（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（６－フルオロ－２－メチルベンゾ［ｄ］チアゾール－５－イル）メチル）－５－メチルピロリジン－３－イル）オキシ）－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－６－イル）エタン－１－オンの調製。
この化合物及びその合成は、米国特許第１０，７５２，３６２号に開示されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【化50】
【0201】
６－フルオロ－２－メチル－１，３－ベンゾチアゾール－５－カルバルデヒド（０．１９ｇ、０．９５ｍｍｏｌ）及び１－（２－（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－メチルピロリジン－３－イル）オキシ）－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－６－イル）エタン－１－オンヒドロクロリド（０．２８ｇ、０．９４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（９ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．４５ｍＬ、２．６ｍｍｏｌ）を添加する。得られた溶液を室温で４０分間撹拌する。溶液に（ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３、０．６５ｇ、３．０４ｍｍｏｌ）を添加する。得られた溶液をＲＴで１７時間撹拌する。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ）でゆっくりとクエンチする。水層をＤＣＭ（２×５ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣をＤＣＭに溶解させ、ヘキサン中４０～１００％アセトンの勾配で溶離させる、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望のクロマトグラフィー画分の溶媒蒸発後に表題化合物を得る（０．２７ｇ、収率６５％）。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：４４１（Ｍ＋Ｈ）；［α］Ｄ
２０＝＋１０１．４°（ｃ＝０．２，ＭｅＯＨ）．
【0202】
ＯＧＡ阻害剤１－（２－（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（６－フルオロ－２－メチルベンゾ［ｄ］チアゾール－５－イル）メチル）－５－メチルピロリジン－３－イル）オキシ）－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－６－イル）エタン－１－オンの代替調製：
４－メチルベンゼンスルホン酸；（３Ｒ，５Ｓ）－５－メチルピロリジン－３－オールの調製。
フラスコに、ｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－メチル－ピロリジン－１－カルボキシラート（５３．０ｇ、２６３ｍｍｏｌ）及び２－プロパノール（２６５ｍＬ）を室温にて添加する。混合物を室温（内部温度２０℃）で撹拌し、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（６０．１ｇ、３１６ｍｍｏｌ）を一度に添加する。反応混合物を６２℃の加熱ブロック内で一晩撹拌し、次に室温まで冷却して、総量約１５０ｍＬまで濃縮する。混合物をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、５３０ｍＬ）で希釈し、混合物を室温で３０分間激しく撹拌し、次いで、Ｎ２ガス流下で濾過する。濾過した固体を真空下４０℃で２時間乾燥させて、４－メチルベンゼンスルホン酸；（３Ｒ，５Ｓ）－５－メチルピロリジン－３－オール（６７．６ｇ、収率９３％）を白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：１０２（Ｍ＋Ｈ）。
４－メチルベンゼンスルホン酸；（３Ｒ，５Ｓ）－５－メチルピロリジン－３－オールの調製。
【化51】
【0203】
（３Ｒ，５Ｓ）－１－［（６－フルオロ－２－メチル－１，３－ベンゾチアゾール－５－イル）メチル］－５－メチル－ピロリジン－３－オールの調製。
フラスコに、４－メチルベンゼンスルホン酸；（３Ｒ，５Ｓ）－５－メチルピロリジン－３－オール（６１．９ｇ、２２６ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＡｃ（８５０ｍＬ）及び６－フルオロ－２－メチル－１，３－ベンゾチアゾール－５－カルバルデヒド（４２．５ｇ、２１６ｍｍｏｌ）を室温にて添加する。反応混合物を氷水浴（内部温度３℃）中で撹拌し、トリエチルアミン（６０．１ｍＬ、４３１ｍｍｏｌ）を一度に添加する。反応混合物を氷水浴中で３０分間撹拌し、次にトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（９１．４ｇ、４３１ｍｍｏｌ）を一度に添加する。反応混合物を氷水浴中で１０分間、次に室温にて２時間（内部温度２０℃）撹拌する。反応混合物を氷水浴中で撹拌し、１５％ＫＨＳＯ４水溶液（６５０ｍＬ）を５分かけて添加し、添加中に内部温度を１５℃未満に維持する。混合物を室温で１時間激しく撹拌し、次いで、飽和クエン酸水溶液（１００ｍＬ）を添加し、混合物を室温で５分間撹拌し、次いで、層を分離する。水層をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で洗浄し、次に水層を氷水浴中で撹拌し、固体Ｎａ２ＣＯ３（８０ｇ）を、ｐＨ＝１０（ｐＨ紙によって測定）まで激しく撹拌しながら１０分間にわたって少量ずつ添加する。次に、水層をＥｔＯＡｃ（３×４００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して得られた残渣を、乳棒及び乳鉢を使用して粉砕して微細粉末とし、次に２５％ＭＴＢＥ／ヘプタン（２８０ｍＬ）と合わせる。混合物を４５℃の加熱ブロック内で１時間、次に室温にて１時間激しく撹拌し、次に濾過して、濾過した固体の最初のバッチを得る。濾液を濃縮し、次に残渣を２５％ＭＴＢＥ／ヘプタン（４０ｍＬ）と合わせ、混合物を室温にて３０分間激しく撹拌し、次に濾過して、濾過した固体の第２のバッチを得る。濾過した固体の第１及び第２のバッチを合わせ、混合物をスパチュラで粉砕し、次に真空下、室温にて一晩乾燥させて、（３Ｒ，５Ｓ）－１－［（６－フルオロ－２－メチル－１，３－ベンゾチアゾール－５－イル）メチル］－５－メチル－ピロリジン－３－オール（５３．３ｇ、収率８７％）をクリーム色固体として得た。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：２８１（Ｍ＋Ｈ）。
【化52】
【0204】
ＯＧＡ阻害剤１－（２－（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（６－フルオロ－２－メチルベンゾ［ｄ］チアゾール－５－イル）メチル）－５－メチルピロリジン－３－イル）オキシ）－５，７－ジヒドロ－６Ｈ－ピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－６－イル）エタン－１－オンの代替調製。
フラスコに（３Ｒ，５Ｓ）－１－［（６－フルオロ－２－メチル－１，３－ベンゾチアゾール－５－イル）メチル］－５－メチル－ピロリジン－３－オール（２６．９ｇ、９５．０ｍｍｏｌ）、１－（２－クロロ－５，７－ジヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－６－イル）エタノン（２２．１ｇ、１０９ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（９２．８ｇ、２８５ｍｍｏｌ）、ＭｏｒＤａｌＰｈｏｓ（１．７６ｇ、３．８０ｍｍｏｌ）、パラジウム（ＩＩ）（π－シンナミル）クロリドダイマー（９８４ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）及びトルエン（５３８ｍＬ）を室温にて添加する。混合物にＮ２ガスを室温にて３０分間撹拌しながらバブリングし、次に反応混合物を８６℃の加熱ブロック内で一晩撹拌する（内部温度８０℃）。反応混合物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（２６９ｍＬ）で希釈し、珪藻土（２７ｇ）を添加する。混合物を室温にて５分間撹拌し、次いで珪藻土で濾過し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で洗浄する。濾液を濃縮して残渣を得、これをＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解させ、ＥｔＯＡｃ（２Ｌ）、次に２０％イソプロパノール／ＥｔＯＡｃ（ＩＰＡ／ＥｔＯＡｃ、２Ｌ）で溶離させるシリカゲルの短いパッド（３００ｇ）に、混合物を通す。ＩＰＡ／ＥｔＯＡｃ画分を濃縮して残渣を得て、これを真空下、室温にて１時間乾燥させて、表題化合物（４２．１ｇ、収率８８％、純度８８質量％）を淡褐色泡状物として得る。
フラスコに（３Ｒ，５Ｓ）－１－［（６－フルオロ－２－メチル－１，３－ベンゾチアゾール－５－イル）メチル］－５－メチル－ピロリジン－３－オール（２６．９ｇ、９５．０ｍｍｏｌ）、１－（２－クロロ－５，７－ジヒドロピロロ［３，４－ｂ］ピリジン－６－イル）エタノン（２２．１ｇ、１０９ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（９２．８ｇ、２８５ｍｍｏｌ）、ＭｏｒＤａｌＰｈｏｓ（１．７６ｇ、３．８０ｍｍｏｌ）、パラジウム（ＩＩ）（π－シンナミル）クロリドダイマー（９８４ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ）及びトルエン（５３８ｍＬ）を室温にて添加する。混合物にＮ２ガスを室温にて３０分間撹拌しながらバブリングし、次に反応混合物を８６℃の加熱ブロック内で一晩撹拌する（内部温度８０℃）。反応混合物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（２６９ｍＬ）で希釈し、珪藻土（２７ｇ）を添加する。混合物を室温にて５分間撹拌し、次いで珪藻土で濾過し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で洗浄する。濾液を濃縮して残渣を得、これをＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解させ、ＥｔＯＡｃ（２Ｌ）、次に２０％イソプロパノール／ＥｔＯＡｃ（ＩＰＡ／ＥｔＯＡｃ、２Ｌ）で溶離させるシリカゲルの短いパッド（３００ｇ）に、混合物を通す。ＩＰＡ／ＥｔＯＡｃ画分を濃縮して残渣を得て、これを真空下、室温にて１時間乾燥させて、表題化合物（４２．１ｇ、収率８８％、純度８８質量％）を淡褐色泡状物として得る。
【0205】
泡状物を同じ純度の別のロットと合わせて、合わせた材料（４６．０ｇ、９２．３ｍｍｏｌ）を室温にてＭＴＢＥ（２３０ｍＬ）及びヘプタン（２３０ｍＬ）と合わせる。混合物を４５℃の加熱ブロック内で１時間、次に室温にて３０分間激しく撹拌し、次に濾過する。濾過した固体をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）と合わせ、ＳｉｌｉａＭｅｔＳ（登録商標）チオール（４０ｇ）を添加する。混合物を回転蒸発器で室温にて１時間撹拌し、次に濾過する。濾液を濃縮して残渣を得て、これを２５％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（４００ｍＬ）と合わせ、混合物を５０℃の加熱ブロック内で１時間、次に室温にて１０分間激しく撹拌し、次に濾過して、濾液の第１のバッチを取り置く。濾過した固体を３５％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（４００ｍＬ）と混合し、混合物を５０℃の加熱ブロック内で１時間、次に室温にて１０分間激しく撹拌し、次に濾過し、濾液の第２のバッチを取り置く。濾過した固体をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）及び１５％ＫＨＳＯ４水溶液（５００ｍＬ）と合わせる。混合物を室温にて１５分間激しく撹拌し、次に分液漏斗に移し、層を分離して、有機物中にラグ層を残す。有機層を更に１５％ＫＨＳＯ４水溶液（１００ｍＬ）で抽出し、有機物中にラグ層を残す。ラグ層を有機物から除去し、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）及び１５％ＫＨＳＯ４水溶液（１００ｍＬ）で希釈し、層を分離する。合わせた水層を氷水浴中で撹拌し、固体Ｎａ２ＣＯ３（１００ｇ）を撹拌しながら５分間にわたって少量ずつ添加する（ｐＨはｐＨ紙により１０と測定される）。混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２×５００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させて、濃縮して、粗生成物の第１のバッチを得る。濾液からの濾液の第１及び第２のバッチを合わせて濃縮し、次いで、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）及び１５％ＫＨＳＯ４水溶液（１００ｍＬ）と合わせる。混合物を室温にて１５分間激しく撹拌し、次に分液漏斗に移し、層を分離する。水層を氷水浴中で撹拌し、固体Ｎａ２ＣＯ３（１５ｇ）を撹拌しながら５分間にわたって少量ずつ添加する（ｐＨはｐＨ紙により１０と測定）。混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して残渣を得て、これを２５％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（８０ｍＬ）と合わせ、混合物を５０℃の加熱ブロック内で３０分間、次に室温で１０分間加熱し、次に濾過して、粗生成物の第２のバッチを得る。粗生成物の２つのバッチを２５％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（４００ｍＬ）と合わせ、混合物を５０℃の加熱ブロック内で３０分間、次に室温にて１０分間激しく撹拌し、次に濾過する。濾過した固体を真空下、室温にて３日間乾燥させて、最終表題化合物（３７．４ｇ、収率９０％）を白色固体として得る。ＥＳ／ＭＳ ｍ／ｚ：４４１（Ｍ＋Ｈ）。旋光度［α］Ｄ２０＝＋１０４．０°（ｃ＝０．２，ＭｅＯＨ）．
実施例７の化合物を、インビトロヒトＯＧＡ酵素アッセイについて本質的に上記のように試験したところ、０．２１４ ｎＭ±０．０３７（ｎ＝４）のＩＣ５０を示した。このデータは、実施例７の化合物がインビトロでＯＧＡ酵素活性を阻害することを示す。実施例７の化合物を、ＯＧＡ酵素の活性の阻害を測定するためのホールセルアッセイについて本質的に上記のように試験したところ、７０．５ｎＭ＋０．００２（ｎ＝２）のＩＣ５０を示した。このデータは、実施例７の化合物が細胞アッセイにおいてＯＧＡ酵素活性を阻害することを示す。
実施例７の化合物を、インビトロヒトＯＧＡ酵素アッセイについて本質的に上記のように試験したところ、０．２１４ ｎＭ±０．０３７（ｎ＝４）のＩＣ５０を示した。このデータは、実施例７の化合物がインビトロでＯＧＡ酵素活性を阻害することを示す。実施例７の化合物を、ＯＧＡ酵素の活性の阻害を測定するためのホールセルアッセイについて本質的に上記のように試験したところ、７０．５ｎＭ＋０．００２（ｎ＝２）のＩＣ５０を示した。このデータは、実施例７の化合物が細胞アッセイにおいてＯＧＡ酵素活性を阻害することを示す。
【0206】
実施例８：インビボ併用研究
以下の実施例は、本開示の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体と組み合わせた本開示のＯＧＡ阻害剤の組合せが、ＡＤなどのアミロイド沈着物及び／又は異常なタウ凝集を特徴とする疾患の治療に有用であり得ることを検証するために研究をどのように設計することができるかを実証する。しかしながら、以下の説明は例示であって限定するものではなく、様々な改変が当業者によって行われ得ることを理解されるべきである。
以下の実施例は、本開示の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体と組み合わせた本開示のＯＧＡ阻害剤の組合せが、ＡＤなどのアミロイド沈着物及び／又は異常なタウ凝集を特徴とする疾患の治療に有用であり得ることを検証するために研究をどのように設計することができるかを実証する。しかしながら、以下の説明は例示であって限定するものではなく、様々な改変が当業者によって行われ得ることを理解されるべきである。
【0207】
例示されるＯＧＡ阻害剤によるタウ過剰リン酸化及び凝集減少、並びに抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体によって例示されるアミロイドベータ沈着物減少の影響を評価するために、本明細書中に記載されるような併用療法において、疾患進行の遅延が、バイオマーカーによって、並びに／あるいは、検証された評価尺度を使用する認知及び機能の低下評価によって評価される場合がある。
【0208】
患者は、二重盲検プラセボ群及び併用療法群からなる治療群に分けることができる。併用療法群は、有効量の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体と組み合わせて、有効量のＯＧＡ阻害剤を投与される。単剤療法群（併用群のＯＧＡ阻害剤と同じ用量のＯＧＡ阻害剤の単剤療法群、及び併用療法群の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体と同じ用量の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体の単剤療法群）を、疾患の修正に対する各個々の分子の寄与を更に解明するために含めることができる。更に、治療群は、前臨床的若しくは臨床的ＡＤの診断に基づいて、又は患者が（ＡＤの無症候性ではあるが）ＡＤ疾患を引き起こす遺伝子変異を有しているという診断に基づいて特徴付けることができる。例えば、群は、（ａ）無症候性であるがＡＤを引き起こす遺伝子変異陽性；（ｂ）前駆期ＡＤ；（ｃ）軽度ＡＤ認知症；（ｄ）中等度ＡＤ認知症；及び（ｅ）重度ＡＤ認知症のうちの１つ以上を含み得る。各治療群は、９ヶ月～１８ヶ月の治療期間にわたってそれぞれの治療（例えば、抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体については４週間毎に、ＯＧＡ阻害剤については毎日）を受けることができる。
【0209】
治療期間後、ＡＤ神経変性は、以下のバイオマーカー評価のうちの１つ以上を通して評価され得る：（ａ）アミロイドＰＥＴイメージング；（ｂ）リン酸化タウ（Ｐ－タウ；トレオニン１８１又は２１７でリン酸化されたかのいずれか）；（ｃ）タウＰＥＴイメージング（ＮＦＴ蓄積の評価）；（ｄ）容積測定ＭＲＩ（神経解剖学的萎縮の評価）；（ｅ）ＦＤＧ－ＰＥＧ ＰＥＴイメージング（代謝低下の評価）；（ｆ）フロルベタピル灌流ＰＥＴイメージング（代謝低下の評価）；（ｇ）ＣＳＦタウ濃度（神経変性の評価）；及び／又は（ｉ）ＣＳＦリン酸化タウ濃度（神経変性の評価）。更に、各治療群の認知及び機能低下を評価する１つ以上の検証済みの評価尺度、例えば、ＡＤＡＳ－ｃｏｇ、ＭＭＳＥ、ＣＤＲ－ＳＢ、ＡＤＣＳ－ＡＤＬ、及び機能的活動アンケート（ＦＡＱ）が適用され得る。
【0210】
この試験は、本発明のＯＧＡ阻害剤と本発明の抗Ｎ３ｐＧｌｕ Ａβ抗体との併用療法が、ＡＤなどの疾患の治療のために、Ａβプラークの減少をもたらし、タウ過剰リン酸化及びＮＦＴなどの病理学的タウへのニューロン内凝集を制限し得ることを示し得る。
【0211】
配列
配列番号１抗体ＩのＬＣＶＲ
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＲＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＡＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＶＱＧＴＨＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１抗体ＩのＬＣＶＲ
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＲＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＡＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＶＱＧＴＨＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
【0212】
配列番号２抗体ＩのＨＣＶＲ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＤＦＴＲＹＹＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＧＳＧＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＩＴＶＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＤＦＴＲＹＹＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＧＳＧＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＩＴＶＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
【0213】
配列番号３抗体ＩのＬＣ
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＲＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＡＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＶＱＧＴＨＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＲＧＫＴＹＬＮＷＬＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＡＶＳＫＬＤＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＶＱＧＴＨＹＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【0214】
配列番号４抗体ＩのＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＤＦＴＲＹＹＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＧＳＧＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＩＴＶＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＤＦＴＲＹＹＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＧＳＧＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＩＴＶＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
【0215】
配列番号５抗体ＩのＬＣＤＲ１
ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＲＧＫＴＹＬＮ
ＫＳＳＱＳＬＬＹＳＲＧＫＴＹＬＮ
【0216】
配列番号６抗体ＩのＬＣＤＲ２
ＡＶＳＫＬＤＳ
ＡＶＳＫＬＤＳ
【0217】
配列番号７抗体ＩのＬＣＤＲ３
ＶＱＧＴＨＹＰＦＴ
ＶＱＧＴＨＹＰＦＴ
【0218】
配列番号８抗体ＩのＨＣＤＲ１
ＧＹＤＦＴＲＹＹＩＮ
ＧＹＤＦＴＲＹＹＩＮ
【0219】
配列番号９抗体ＩのＨＣＤＲ２
ＷＩＮＰＧＳＧＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧ
ＷＩＮＰＧＳＧＮＴＫＹＮＥＫＦＫＧ
【0220】
配列番号１０抗体ＩのＨＣＤＲ３
ＥＧＩＴＶＹ
ＥＧＩＴＶＹ
【0221】
配列番号１１抗体ＩＩのＬＣＶＲ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＬＧＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＱＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＨＹＫＧＳＦＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＬＧＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＱＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＨＹＫＧＳＦＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【0222】
配列番号１２抗体ＩＩのＨＣＶＲ
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＰＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＳＧＳＹＹＮＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＰＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＳＧＳＹＹＮＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【0223】
配列番号１３抗体ＩＩのＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＬＧＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＱＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＨＹＫＧＳＦＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＬＧＮＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＱＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＨＹＫＧＳＦＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【0224】
配列番号１４抗体ＩＩのＨＣ
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＰＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＧＳＧＳＹＹＮＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
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【0225】
配列番号１５抗体ＩＩのＬＣＤＲ１
ＲＡＳＱＳＬＧＮＷＬＡ
ＲＡＳＱＳＬＧＮＷＬＡ
【0226】
配列番号１６抗体ＩＩのＬＣＤＲ２
ＹＱＡＳＴＬＥＳ
ＹＱＡＳＴＬＥＳ
【0227】
配列番号１７抗体ＩＩのＬＣＤＲ３
ＱＨＹＫＧＳＦＷＴ
ＱＨＹＫＧＳＦＷＴ
【0228】
配列番号１８抗体ＩＩのＨＣＤＲ１
ＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＰＭＳ
ＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＰＭＳ
【0229】
配列番号１９抗体ＩＩのＨＣＤＲ２
ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
【0230】
配列番号２０抗体ＩＩのＨＣＤＲ３
ＡＲＥＧＧＳＧＳＹＹＮＧＦＤＹ
ＡＲＥＧＧＳＧＳＹＹＮＧＦＤＹ
【0231】
配列番号２１抗体ＩのＬＣ ＤＮＡ配列
ｇａｔａｔｔｇｔｇａｔｇａｃｔｃａｇａｃｔｃｃａｃｔｃｔｃｃｃｔｇｔｃｃｇｔｃａｃｃｃｃｔｇｇａｃａｇｃｃｇｇｃｃｔｃｃａｔｃｔｃｃｔｇｃａａｇｔｃａａｇｔｃａｇａｇｃｃｔｃｔｔａｔａｔａｇｔｃｇｃｇｇａａａａａｃｃｔａｔｔｔｇａａｔｔｇｇｃｔｃｃｔｇｃａｇａａｇｃｃａｇｇｃｃａａｔｃｔｃｃａｃａｇｃｔｃｃｔａａｔｔｔａｔｇｃｇｇｔｇｔｃｔａａａｃｔｇｇａｃｔｃｔｇｇｇｇｔｃｃｃａｇａｃａｇａｔｔｃａｇｃｇｇｃａｇｔｇｇｇｔｃａｇｇｃａｃａｇａｔｔｔｃａｃａｃｔｇａａａａｔｃａｇｃａｇｇｇｔｇｇａｇｇｃｃｇａａｇａｔｇｔｔｇｇｇｇｔｔｔａｔｔａｃｔｇｃｇｔｇｃａａｇｇｔａｃａｃａｔｔａｃｃｃａｔｔｃａｃｇｔｔｔｇｇｃｃａａｇｇｇａｃｃａａｇｃｔｇｇａｇａｔｃａａａｃｇａａｃｔｇｔｇｇｃｔｇｃａｃｃａｔｃｔｇｔｃｔｔｃａｔｃｔｔｃｃｃｇｃｃａｔｃｔｇａｔｇａｇｃａｇｔｔｇａａａｔｃｔｇｇａａｃｔｇｃｃｔｃｔｇｔｔｇｔｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇａａｔａａｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇａｇａｇｇｃｃａａａｇｔａｃａｇｔｇｇａａｇｇｔｇｇａｔａａｃｇｃｃｃｔｃｃａａｔｃｇｇｇｔａａｃｔｃｃｃａｇｇａｇａｇｔｇｔｃａｃａｇａｇｃａｇｇａｃａｇｃａａｇｇａｃａｇｃａｃｃｔａｃａｇｃｃｔｃａｇｃａｇｃａｃｃｃｔｇａｃｇｃｔｇａｇｃａａａｇｃａｇａｃｔａｃｇａｇａａａｃａｃａａａｇｔｃｔａｃｇｃｃｔｇｃｇａａｇｔｃａｃｃｃａｔｃａｇｇｇｃｃｔｇａｇｃｔｃｇｃｃｃｇｔｃａｃａａａｇａｇｃｔｔｃａａｃａｇｇｇｇａｇａｇｔｇｃ
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【0232】
配列番号２２抗体ＩのＨＣ ＤＮＡ配列
ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｃａｇｔｃｔｇｇｇｇｃｔｇａｇｇｔｇａａｇａａｇｃｃｔｇｇｇｔｃｃｔｃａｇｔｇａａｇｇｔｔｔｃｃｔｇｃａａｇｇｃａｔｃｔｇｇｔｔａｃｇａｃｔｔｃａｃｔａｇａｔａｃｔａｔａｔａａａｃｔｇｇｇｔｇｃｇａｃａｇｇｃｃｃｃｔｇｇａｃａａｇｇｇｃｔｔｇａｇｔｇｇａｔｇｇｇａｔｇｇａｔｔａａｔｃｃｔｇｇａａｇｃｇｇｔａａｔａｃｔａａｇｔａｃａａｔｇａｇａａａｔｔｃａａｇｇｇｃａｇａｇｔｃａｃｃａｔｔａｃｃｇｃｇｇａｃｇａａｔｃｃａｃｇａｇｃａｃａｇｃｃｔａｃａｔｇｇａｇｃｔｇａｇｃａｇｃｃｔｇａｇａｔｃｔｇａｇｇａｃａｃｇｇｃｃｇｔｇｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃｇａｇａｇａａｇｇｃａｔｃａｃｇｇｔｃｔａｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｇａｃｃａｃｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａｇｃｃｔｃｃａｃｃａａｇｇｇｃｃｃａｔｃｇｇｔｃｔｔｃｃｃｇｃｔａｇｃａｃｃｃｔｃｃｔｃｃａａｇａｇｃａｃｃｔｃｔｇｇｇｇｇｃａｃａｇｃｇｇｃｃｃｔｇｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａｇｇａｃｔａｃｔｔｃｃｃｃｇａａｃｃｇｇｔｇａｃｇｇｔｇｔｃｇｔｇｇａａｃｔｃａｇｇｃｇｃｃｃｔｇａｃｃａｇｃｇｇｃｇｔｇｃａｃａｃｃｔｔｃｃｃｇｇｃｔｇｔｃｃｔａｃａｇｔｃｃｔｃａｇｇａｃｔｃｔａｃｔｃｃｃｔｃａｇｃａｇｃｇｔｇｇｔｇａｃｃｇｔｇｃｃｃｔｃｃａｇｃａｇｃｔｔｇｇｇｃａｃｃｃａｇａｃｃｔａｃａｔｃｔｇｃａａｃｇｔｇａａｔｃａｃａａｇｃｃｃａｇｃａａｃａｃｃａａｇｇｔｇｇａｃａａｇａａａｇｔｔｇａｇｃｃｃａａａｔｃｔｔｇｔｇａｃａａａａｃｔｃａｃａｃａｔｇｃｃｃａｃｃｇｔｇｃｃｃａｇｃａｃｃｔｇａａｃｔｃｃｔｇｇｇｇｇｇａｃｃｇｔｃａｇｔｃｔｔｃｃｔｃｔｔｃｃｃｃｃｃａａａａｃｃｃａａｇｇａｃａｃｃｃｔｃａｔｇａｔｃｔｃｃｃｇｇａｃｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａｃａｔｇｃｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｃｇｔｇａｇｃｃａｃｇａａｇａｃｃｃｔｇａｇｇｔｃａａｇｔｔｃａａｃｔｇｇｔａｃｇｔｇｇａｃｇｇｃｇｔｇｇａｇｇｔｇｃａｔａａｔｇｃｃａａｇａｃａａａｇｃｃｇｃｇｇｇａｇｇａｇｃａｇｔａｃａａｃａｇｃａｃｇｔａｃｃｇｔｇｔｇｇｔｃａｇｃｇｔｃｃｔｃａｃｃｇｔｃｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｃｔｇｇｃｔｇａａｔｇｇｃａａｇｇａｇｔａｃａａｇｔｇｃａａｇｇｔｃｔｃｃａａｃａａａｇｃｃｃｔｃｃｃａｇｃｃｃｃｃａｔｃｇａｇａａａａｃｃａｔｃｔｃｃａａａｇｃｃａａａｇｇｇｃａｇｃｃｃｃｇａｇａａｃｃａｃａｇｇｔｇｔａｃａｃｃｃｔｇｃｃｃｃｃａｔｃｃｃｇｇｇａｃｇａｇｃｔｇａｃｃａａｇａａｃｃａｇｇｔｃａｇｃｃｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃａａａｇｇｃｔｔｃｔａｔｃｃｃａｇｃｇａｃａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａｇｔｇｇｇａｇａｇｃａａｔｇｇｇｃａｇｃｃｇｇａｇａａｃａａｃｔａｃａａｇａｃｃａｃｇｃｃｃｃｃｃｇｔｇｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｃｇｇｃｔｃｃｔｔｃｔｔｃｃｔｃｔａｔａｇｃａａｇｃｔｃａｃｃｇｔｇｇａｃａａｇａｇｃａｇｇｔｇｇｃａｇｃａｇｇｇｇａａｃｇｔｃｔｔｃｔｃａｔｇｃｔｃｃｇｔｇａｔｇｃａｔｇａｇｇｃｔｃｔｇｃａｃａａｃｃａｃｔａｃａｃｇｃａｇａａｇａｇｃｃｔｃｔｃｃｃｔｇｔｃｔｃｃｇｇｇｔ
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【0233】
配列番号２３抗体ＩＩのＬＣ ＤＮＡ配列
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【0234】
配列番号２４抗体ＩＩのＨＣ ＤＮＡ配列
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【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-04-22
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
アミロイドベータ（Ａβ）沈着物を特徴とする疾患を有する患者を治療するための薬剤であって、前記薬剤が、抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体及びＯＧＡ阻害剤を組み合わせて前記患者に投与されることを特徴とし、前記ＯＧＡ阻害剤が、式：
【化1】
【請求項2】
前記アミロイドベータ（Ａβ）沈着物を特徴とする疾患が、前臨床的アルツハイマー病（ＡＤ）、臨床的ＡＤ、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ認知症、中等度ＡＤ認知症、重度ＡＤ認知症、ダウン症候群、臨床的脳アミロイド血管症、及び前臨床的脳アミロイド血管症からなる群から選択される、請求項１に記載の薬剤。
【請求項3】
前記ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルが、以下のピペリジン環上の４位の酸素に対してシス配置にある、請求項１に記載の薬剤。【化2】
【請求項4】
前記ＯＧＡ阻害剤が、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド又はその薬学的に許容される塩である、請求項３に記載の薬剤。
【請求項5】
前記ＯＧＡ阻害剤が、結晶性である、請求項４に記載の薬剤。
【請求項6】
前記化合物が、１５．３°、２１．６°、２２．２°、２２．７°、２３．５°、２４．３°、及び２６．８°からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせた、１２．１°の回折角２－シータでのＸ線粉末回折スペクトルのピークを特徴とし、前記回折角の許容誤差が、０．２度である、請求項５に記載の薬剤。
【請求項7】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲが相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲがＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１０によって与えられる、又は
ｉｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号２０によって与えられる、請求項１に記載の薬剤。
【請求項8】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号２によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１２によって与えられる、請求項７に記載の薬剤。
【請求項9】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を含み、ｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号４によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１４によって与えられる、請求項８に記載の薬剤。
【請求項10】
アミロイドベータ（Ａβ）沈着物を特徴とする疾患を有する患者を治療するための薬剤であって、前記薬剤が、抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体及びＯＧＡ阻害剤を組み合わせて前記患者に投与されることを特徴とし、前記ＯＧＡ阻害剤が、式：【化3】
【請求項11】
前記アミロイドベータ（Ａβ）沈着物を特徴とする疾患が、前臨床的アルツハイマー病、臨床的ＡＤ、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ認知症、中等度ＡＤ認知症、重度ＡＤ認知症、ダウン症候群、臨床的脳アミロイド血管症、及び前臨床的脳アミロイド血管症からなる群から選択される、請求項１０に記載の薬剤。
【請求項12】
前記ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルが、以下のピペリジン環上の４位の酸素に対してシス配置にある、請求項１０に記載の薬剤。【化4】
【請求項13】
前記ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルが、以下のピペリジン環上の４位の酸素に対してトランス配置にある、請求項１０に記載の薬剤。【化5】
【請求項14】
前記ＯＧＡ阻害剤が、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド又はその薬学的に許容される塩である、請求項１２に記載の薬剤。
【請求項15】
前記ＯＧＡ阻害剤が、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド又はその薬学的に許容される塩である、請求項１３に記載の薬剤。
【請求項16】
前記ＯＧＡ阻害剤が、結晶性である、請求項１４に記載の薬剤。
【請求項17】
前記ＯＧＡ阻害剤が、５．８°、１３．０°、１４．３°、１７．５°、２０．４°、２１．４°、及び２２．２°からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせた、１３．５°の回折角２－シータでのＸ線粉末回折スペクトルのピークを特徴とし、前記回折角の許容誤差が、０．２度である、請求項１５に記載の薬剤。
【請求項18】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲが相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲがＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１０によって与えられる、又は
ｉｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号２０によって与えられる、請求項１０に記載の薬剤。
【請求項19】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号２によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１２によって与えられる、請求項１８に記載の薬剤。
【請求項20】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を含み、ｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号４によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１４によって与えられる、請求項１９に記載の薬剤。
【請求項21】
アミロイドベータ（Ａβ）沈着物及び異常なタウ凝集を特徴とする疾患を有する患者を治療するための薬剤であって、前記薬剤が、抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体及びＯＧＡ阻害剤を組み合わせて前記患者に投与されることを特徴とし、前記ＯＧＡ阻害剤が、式：
【化6】
【請求項22】
前記アミロイドベータ（Ａβ）沈着物及び異常なタウ凝集を特徴とする疾患が、前臨床的アルツハイマー病（ＡＤ）、臨床的ＡＤ、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ認知症、中等度ＡＤ認知症、重度ＡＤ認知症、ダウン症候群、臨床的脳アミロイド血管症、及び前臨床的脳アミロイド血管症からなる群から選択される、請求項２１に記載の薬剤。
【請求項23】
前記ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルが、以下のピペリジン環上の４位の酸素に対してシス配置にある、請求項２１に記載の薬剤。【化7】
【請求項24】
前記ＯＧＡ阻害剤が、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，２，４－オキサジアゾール－３－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド又はその薬学的に許容される塩である、請求項２３に記載の薬剤。
【請求項25】
前記ＯＧＡ阻害剤が、結晶性である、請求項２４に記載の薬剤。
【請求項26】
前記化合物が、１５．３°、２１．６°、２２．２°、２２．７°、２３．５°、２４．３°、及び２６．８°からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせた、１２．１°の回折角２－シータでのＸ線粉末回折スペクトルのピークを特徴とし、前記回折角の許容誤差が、０．２度である、請求項２５に記載の薬剤。
【請求項27】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲが相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲがＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１０によって与えられる、又は
ｉｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号２０によって与えられる、
請求項２１に記載の薬剤。
【請求項28】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号２によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１２によって与えられる、請求項２７に記載の薬剤。
【請求項29】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を含み、ｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号４によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１４によって与えられる、請求項２８に記載の薬剤。
【請求項30】
アミロイドベータ（Ａβ）沈着物及び異常なタウ凝集を特徴とする疾患を有する患者を治療するための薬剤であって、前記薬剤が、抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体及びＯＧＡ阻害剤を組み合わせて前記患者に投与されることを特徴とし、前記ＯＧＡ阻害剤が、式：【化8】
【請求項31】
前記アミロイドベータ（Ａβ）沈着物及び異常なタウ凝集を特徴とする疾患が、前臨床的アルツハイマー病、臨床的ＡＤ、前駆期ＡＤ、軽度ＡＤ認知症、中等度ＡＤ認知症、重度ＡＤ認知症、ダウン症候群、臨床的脳アミロイド血管症、及び前臨床的脳アミロイド血管症からなる群から選択される、請求項３０に記載の薬剤。
【請求項32】
前記ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルが、以下のピペリジン環上の４位の酸素に対してシス配置にある、請求項３０に記載の薬剤。【化9】
【請求項33】
前記ＯＧＡ阻害剤の２位のメチルが、以下のピペリジン環上の４位の酸素に対してトランス配置にある、請求項３０に記載の薬剤。【化10】
【請求項34】
前記ＯＧＡ阻害剤が、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド又はその薬学的に許容される塩である、請求項３２に記載の薬剤。
【請求項35】
前記ＯＧＡ阻害剤が、Ｎ－［４－フルオロ－５－［［（２Ｓ，４Ｓ）－２－メチル－４－［（５－メチル－１，３，４－オキサジアゾール－２－イル）メトキシ］－１－ピペリジル］メチル］チアゾール－２－イル］アセトアミド又はその薬学的に許容される塩である、請求項３３に記載の薬剤。
【請求項36】
前記ＯＧＡ阻害剤が、結晶性である、請求項３４に記載の薬剤。
【請求項37】
前記ＯＧＡ阻害剤が、５．８°、１３．０°、１４．３°、１７．５°、２０．４°、２１．４°、及び２２．２°からなる群から選択される１つ以上のピークと組み合わせた、１３．５°の回折角２－シータでのＸ線粉末回折スペクトルのピークを特徴とし、前記回折角の許容誤差が、０．２度である、請求項３５に記載の薬剤。
【請求項38】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、前記ＬＣＶＲが相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲがＣＤＲ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１０によって与えられる、又は
ｉｉ）ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１５によって与えられ、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１６によって与えられ、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号１７によって与えられ、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列が配列番号１８によって与えられ、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列が配列番号１９によって与えられ、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列が配列番号２０によって与えられる、請求項３０に記載の薬剤。
【請求項39】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号２によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１１によって与えられ、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列が配列番号１２によって与えられる、請求項３８に記載の薬剤。
【請求項40】
前記抗Ｎ３ｐＧ Ａβ抗体が、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）を含み、ｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号４によって与えられる、又は
ｉｉ）前記ＬＣのアミノ酸配列が配列番号１３によって与えられ、前記ＨＣのアミノ酸配列が配列番号１４によって与えられる、請求項３９に記載の薬剤。
【国際調査報告】