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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-10-28
(54)【発明の名称】キメラサイトカイン受容体
(51)【国際特許分類】
C07K 19/00 20060101AFI20241018BHJP
C07K 16/24 20060101ALI20241018BHJP
C07K 14/54 20060101ALI20241018BHJP
C12N 5/0783 20100101ALI20241018BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20241018BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20241018BHJP
C12N 15/24 20060101ALI20241018BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20241018BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20241018BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20241018BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20241018BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241018BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241018BHJP
A61P 37/00 20060101ALI20241018BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20241018BHJP
A61K 35/12 20150101ALI20241018BHJP
【ＦＩ】
C07K19/00 ZNA
C07K16/24
C07K14/54
C12N5/0783
C12N5/10
C12N15/12
C12N15/24
C12N15/62 Z
C12N15/63 Z
A61K38/16
A61K48/00
A61K39/395 N
A61P35/00
A61P37/00
A61P37/08
A61K35/12
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024524636
(86)(22)【出願日】2022-10-24
(85)【翻訳文提出日】2024-06-21
(86)【国際出願番号】 GB2022052707
(87)【国際公開番号】W WO2023073352
(87)【国際公開日】2023-05-04
(31)【優先権主張番号】2115329.1
(32)【優先日】2021-10-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】517215973
【氏名又は名称】オートラス リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】110000796
【氏名又は名称】弁理士法人三枝国際特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】リーギ， マッテオ
(72)【発明者】
【氏名】コルドバ， ショーン
(72)【発明者】
【氏名】プーレ， マーティン
【テーマコード（参考）】
4B065
4C084
4C085
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA94X
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA44
4C084AA02
4C084AA13
4C084DA45
4C084NA14
4C084ZB131
4C084ZB132
4C084ZB261
4C084ZB262
4C085AA14
4C085AA16
4C085EE01
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB63
4C087BB64
4C087BB65
4C087CA12
4C087NA14
4C087ZB13
4C087ZB26
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA51
4H045EA22
4H045FA72
4H045FA74
(57)【要約】
本発明は、２つのポリペプチド：（ｉ）（ａ）第１の二量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；（ｂ）インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメインを含む第１のポリペプチド；および（ｉｉ）（ａ）第２の二量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；（ｂ）インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）細胞内ドメインを含む第２のポリペプチドを含む、キメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）を提供する。第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、自発的に二量体化して、ＩＬ１８Ｒ１およびＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインを介して生じるＩＬ１８型シグナル伝達を引き起こす。本発明はまた、そのようなＣＣＲおよび必要に応じて、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む細胞ならびに例えば、がんまたは自己免疫疾患の処置におけるそのような細胞の使用も提供する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
２つのポリペプチド：（ｉ）（ａ）第１の二量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメイン
を含む第１のポリペプチド；および
（ｉｉ）（ａ）前記第１の二量体化ドメインと自発的に二量体化する第２の二量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）細胞内ドメイン
を含む第２のポリペプチド
を含む、キメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）。
【請求項2】
前記第１および第２の二量体化ドメインの一方が重鎖定常ドメイン（ＣＨ）を含み、他方が軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含む、請求項１に記載のＣＣＲ。
【請求項3】
前記第１および第２の二量体化ドメインがコイルドコイルドメインを含む、請求項１に記載のＣＣＲ。
【請求項4】
前記第１および第２の二量体化ドメインがロイシンジッパードメインを含む、請求項３に記載のＣＣＲ。
【請求項5】
前記第１および第２の二量体化ドメインがＦｏｓ／Ｊｕｎまたはドッキングドメイン（ＤＤＤ１）／アンカードメイン（ＡＤ１）ロイシンジッパードメインを含む、請求項４に記載のＣＣＲ。
【請求項6】
４つのポリペプチド：（ｉ）（ａ）第１の四量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメイン
を含む第１のポリペプチド；
（ｉｉ）（ａ）第２の四量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）細胞内ドメイン
を含む第２のポリペプチド；
（ｉ）（ａ）第３の四量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメイン
を含む第３のポリペプチド；
（ｉｉ）（ａ）第４の四量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）細胞内ドメイン
を含む第４のポリペプチドを含み、
前記四量体化ドメインがＳＮＡＰ－２５／ＳＮＡＲＥヘテロ四量体複合体のＡ、Ｂ、ＣおよびＤ鎖を含む、請求項３に記載のＣＣＲ。
【請求項7】
先行する請求項のいずれかに記載のキメラサイトカイン受容体を含む細胞。
【請求項8】
キメラ抗原受容体も含む、請求項７に記載の細胞。
【請求項9】
核酸構築物が、前記第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列および前記第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列を含む、請求項１から５のいずれかに記載のキメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）をコードする核酸構築物。
【請求項10】
核酸構築物が、前記第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列；前記第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列；前記第３のポリペプチドをコードする第３の核酸配列；および前記第４のポリペプチドをコードする第４の核酸配列を含む、請求項６に記載のキメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）をコードする核酸構築物。
【請求項11】
キメラ抗原受容体をコードする核酸配列も含む、請求項９または１０に記載の核酸構築物。
【請求項12】
請求項９から１１のいずれかに記載の核酸構築物を含むベクター。
【請求項13】
ｉ）請求項１から５のいずれかで定義された第１のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター；およびｉｉ）請求項１から５のいずれかで定義された第２のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター
を含むキット。
【請求項14】
ｉ）請求項６で定義された第１のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター；ｉｉ）請求項６で定義された第２のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター；
ｉｉｉ）請求項６で定義された第３のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター；および
ｉｖ）請求項６で定義された第４のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター
を含むキット。
【請求項15】
請求項９から１１のいずれかに記載の核酸構築物；請求項１２に記載のベクター；または請求項１３もしくは１４に記載のベクターのキットを、ｅｘ ｖｉｖｏで細胞中に導入するステップを含む、請求項７または８に記載の細胞を作製するための方法。
【請求項16】
請求項７または８に記載の複数の細胞を含む医薬組成物。
【請求項17】
がんまたは自己免疫疾患の処置における使用のための請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項18】
請求項１６に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む、がんまたは自己免疫疾患を処置するための方法。
【請求項19】
がんまたは自己免疫疾患の処置のための医薬組成物の製造における使用のための、請求項７または８に記載の複数の細胞の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
発明の分野
本発明は、ＩＬ－１８受容体細胞内ドメインを有するキメラサイトカイン受容体に関する。
本発明は、ＩＬ－１８受容体細胞内ドメインを有するキメラサイトカイン受容体に関する。
【背景技術】
【0002】
発明の背景
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
治療的モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーおよびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などのいくつかの免疫治療剤が、がん処置における使用のために記載されている。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
治療的モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーおよびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などのいくつかの免疫治療剤が、がん処置における使用のために記載されている。
【0003】
キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞のエフェクター機能に対してモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の特異性を移植するタンパク質である。その通常の形態は、Ｔ細胞生存および活性化シグナルを伝達する化合物細胞内ドメインに全て接続された、抗原認識アミノ末端、スペーサー、膜貫通ドメインを有するＩ型膜貫通ドメインタンパク質のものである。
【0004】
これらの分子の最も一般的な形態は、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介してシグナル伝達細胞内ドメインに融合された標的抗原を認識するモノクローナル抗体に由来する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の融合物である。そのような分子は、その標的のｓｃＦｖによる認識に応答してＴ細胞の活性化をもたらす。Ｔ細胞がそのようなＣＡＲを発現する場合、それらは標的抗原を発現する標的細胞を認識し、殺傷する。いくつかのＣＡＲは腫瘍関連抗原に対して生じ、そのようなＣＡＲを発現するＴ細胞を使用する養子移入手法は、現在、種々のがんの処置のための臨床試験中である。
【0005】
今まで、ＣＡＲ Ｔ細胞の成功の大部分は血液悪性腫瘍におけるものであった。Ｂ細胞抗原ＣＤ１９に標的化されたＣＡＲは、慢性リンパ芽球性白血病（ＣＬＬ）を処置するために初めて上手く使用された。２０１７年８月に、ＦＤＡは、小児再発性または不応性急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を処置するためのＣＡＲＴ１９（Ｋｙｍｒｉａｈ）の使用を認可し、同じ年の１０月には、成人再発性または不応性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫について別のＣＤ１９を標的とするＣＡＲ（Ｙｅｓｃａｒｔａ）がＦＤＡによって認可された。さらに、欧州医薬品庁（ＥＭＡ）も、２０１８年の６月に両方のこれらの薬物の使用を認可した。しかしながら、大規模な研究にも拘わらず、固形腫瘍のためのＣＡＲ Ｔ細胞療法は、ほぼ成功していない。
【0006】
固形がんの細胞に基づく免疫治療処置の成功のために克服する必要がある重要なハードルの１つは、Ｔ細胞にとって不利なものとして広く特徴付けられた腫瘍微小環境（ＴＭＥ）である。ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＴＭＥ内に生着し、拡大できない場合がある。
ＣＡＲ Ｔ細胞の持続性および活性は、サイトカインの投与によって、またはサイトカインを構成的に産生するＣＡＲ Ｔ細胞によって増強させることができる。しかしながら、これらの手法は制限がある：サイトカインの全身投与は毒性的であり得る；サイトカインの構成的産生は制御されていない増殖および形質転換をもたらし得る（Nagarkatti et al (1994) PNAS 91:7638-7642；Hassuneh et al (1997) Blood 89:610-620）。
キメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）
ＷＯ２０１７／０２９５１２は、Ｆａｂ様細胞外ドメインおよびＩＬ２またはＩＬ７受容体の細胞内ドメインを有する構成的に活性な「キメラサイトカイン受容体」（ＣＣＲ）を記載する。ＩＬ７ ＣＣＲと、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）との同時発現は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＡＲ Ｔ細胞の生着および拡大を助けることが示された（Achkova et al Society for the Immunotherapy of Cancer (SITC) meeting 2019 Abstract P146）。
ＣＡＲ Ｔ細胞の持続性および活性は、サイトカインの投与によって、またはサイトカインを構成的に産生するＣＡＲ Ｔ細胞によって増強させることができる。しかしながら、これらの手法は制限がある：サイトカインの全身投与は毒性的であり得る；サイトカインの構成的産生は制御されていない増殖および形質転換をもたらし得る（Nagarkatti et al (1994) PNAS 91:7638-7642；Hassuneh et al (1997) Blood 89:610-620）。
キメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）
ＷＯ２０１７／０２９５１２は、Ｆａｂ様細胞外ドメインおよびＩＬ２またはＩＬ７受容体の細胞内ドメインを有する構成的に活性な「キメラサイトカイン受容体」（ＣＣＲ）を記載する。ＩＬ７ ＣＣＲと、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）との同時発現は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＡＲ Ｔ細胞の生着および拡大を助けることが示された（Achkova et al Society for the Immunotherapy of Cancer (SITC) meeting 2019 Abstract P146）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0007】
【特許文献1】国際公開第２０１７／０２９５１２号
【非特許文献】
【0008】
【非特許文献1】Nagarkatti et al (1994) PNAS 91:7638-7642
【非特許文献2】Hassuneh et al (1997) Blood 89:610-620
【非特許文献3】Achkova et al Society for the Immunotherapy of Cancer (SITC) meeting 2019 Abstract P146
【図面の簡単な説明】
【0009】
【図1-1】ＩＬ－１８キメラサイトカイン受容体を例示する模式図。Ａ．係留されたＩＬ１８－ＣＣＲ：可撓性リンカーを用いてＩＬ１８Ｒ１またはＩＬ１８ＲＡＰのいずれかに連結されたトランケートされたＩＬ１８。Ｂ．リガンド誘導性ＩＬ１８－ＣＣＲ：リガンド（例えば、ＰＳＡ）特異的ｓｃＦｖは、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介してＩＬ１８Ｒ１またはＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインに連結されている。Ｃ．ＴＧＦβ－ＩＬ１８スイッチ受容体：ＩＬ１８Ｒ１またはＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインは、ＴＧＦβＲ１またはＴＧＦβＲ２細胞外ドメインのいずれかに融合されている。Ｄ．ＴＧＦβ－ＩＬ１８ ＣＡＲエンハンサー：ＴＧＦβは活性化されたＩＬ１８受容体に結合し、第１世代のＣＡＲを増強する。Ｅ．構成的に活性なＩＬ１８－ＣＣＲ：ＩＬ１８Ｒ１またはＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインに連結された抗体に由来する重鎖定常ドメイン（ＣＨ）および軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）。
【図1-2】同上。
【図3】ｉｎ ｖｉｖｏ試験におけるＣＴ２６－ＧＤ２＋免疫応答性動物モデルの実験概要を例示する模式図。
【図4】ＧＤ２ ＣＡＲのみを発現する、またはＧＤ２ ＣＡＲとＩＬ２、ＩＬ７またはＩＬ１８ ＣＣＲとを同時発現する細胞を用いた処置後のＣＴ２６－ＧＤ２＋免疫応答性モデルマウスにおける腫瘍体積を示すグラフ。
【図5】ＧＤ２ ＣＡＲのみを発現する、またはＧＤ２ ＣＡＲとＩＬ２、ＩＬ７またはＩＬ１８ ＣＣＲとを同時発現する細胞を用いた処置後のＣＴ２６－ＧＤ２＋免疫応答性モデルマウスの末梢血中のＴ細胞を示すグラフ。
【図6】ＧＤ２ ＣＡＲのみを発現する、またはＧＤ２ ＣＡＲとＩＬ２、ＩＬ７またはＩＬ１８ ＣＣＲとを同時発現する細胞を用いた処置後のＣＴ２６－ＧＤ２＋免疫応答性モデルマウスのＫａｐｌａｎ Ｍｅｙｅｒの生存曲線。
【図7】ＩＬ７－またはＩＬ１８－ＣＣＲのいずれかを発現する活性化および非活性化ＣＡＲ－Ｔ細胞に関する８００個の遺伝子のＣＡＲ Ｔ細胞パネルの分析により算出された、主成分分析（ＰＣＡ）の結果を示すプロット。
【図8-1】ＩＬ１８－ＣＣＲを発現する活性化および非活性化ＣＡＲ－Ｔ細胞中での遺伝子発現を示すＶｏｌｃａｎｏプロット。ＩＬ７ ＣＣＲを、示差的遺伝子発現の計算のためのベースラインとして使用した。
【図8-2】ＩＬ１８－ＣＣＲを発現する活性化および非活性化ＣＡＲ－Ｔ細胞中での遺伝子発現を示すＶｏｌｃａｎｏプロット。ＩＬ７ ＣＣＲを、示差的遺伝子発現の計算のためのベースラインとして使用した。
【図9】１：４のＥ：Ｔ比の、ＩＬ７－またはＩＬ１８－ＣＣＲのいずれかを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞と、ＳｕｐＴ１ ＧＤ２＋標的細胞との同時培養に由来するＣＢＡアッセイを示すグラフ。
【図10】酸／塩基ロイシンジッパーに由来するコイルドコイルドメインを使用して作製されたＩＬ－１８ ＣＣＲの概略図。ＣＣＲの一方のポリペプチドは、アルファヘリックスのコイルドコイルの第１のペア（コイルドコイル１、例えば、酸ジッパー）を含み、他方は第２のペア（コイルドコイル２、例えば、塩基ジッパー）を含む。これらのドメインは自発的に二量体化し、ＩＬ１８Ｒ１およびＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインを一緒にし、構成的なＩＬ－１８シグナル伝達を与える。
【図11】ＳＮＡＰ－２５／ＳＮＡＲＥヘテロ四量体複合体に由来するコイルドコイルドメインを使用して作製されたＩＬ－１８ ＣＣＲの概略図。この系では、ＣＣＲの１つのポリペプチドは、ＳＮＡＰ－２５／ＳＮＡＲＥヘテロ四量体複合体のＡ鎖を含み；１つのポリペプチドは、ＳＮＡＰ－２５／ＳＮＡＲＥヘテロ四量体複合体のＢ鎖を含み；１つのポリペプチドは、ＳＮＡＰ－２５／ＳＮＡＲＥヘテロ四量体複合体のＣ鎖を含み；１つのポリペプチドは、ＳＮＡＰ－２５／ＳＮＡＲＥヘテロ四量体複合体のＤ鎖を含む。これらのドメインは自発的にヘテロ二量体化し、２コピーのＩＬ１８Ｒ１およびＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインを一緒にし、構成的なＩＬ－１８シグナル伝達を与える。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0010】
発明の態様の概要
本発明者らは驚くべきことに、ＣＡＲおよびＩＬ－１８受容体細胞内ドメインを有するＣＣＲを同時発現する細胞が、ＣＡＲおよびＩＬ－７またはＩＬ－２ ＣＣＲを同時発現する同等の細胞よりも、免疫応答性動物モデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏでＣＡＲ－Ｔ細胞の持続性および抗腫瘍活性の改善を示すことを見出した。
本発明者らは驚くべきことに、ＣＡＲおよびＩＬ－１８受容体細胞内ドメインを有するＣＣＲを同時発現する細胞が、ＣＡＲおよびＩＬ－７またはＩＬ－２ ＣＣＲを同時発現する同等の細胞よりも、免疫応答性動物モデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏでＣＡＲ－Ｔ細胞の持続性および抗腫瘍活性の改善を示すことを見出した。
【0011】
かくして、第１の態様では、本発明は、２つのポリペプチド：
（ｉ）（ａ）第１の二量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメイン
を含む第１のポリペプチド；および
（ｉｉ）（ａ）第１の二量体化ドメインと自発的に二量体化する第２の二量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）細胞内ドメイン
を含む第２のポリペプチド
を含むキメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）を提供する。
（ｉ）（ａ）第１の二量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメイン
を含む第１のポリペプチド；および
（ｉｉ）（ａ）第１の二量体化ドメインと自発的に二量体化する第２の二量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）細胞内ドメイン
を含む第２のポリペプチド
を含むキメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）を提供する。
【0012】
二量体化ドメインは、抗体の二量体化ドメインに基づくものであってよい。この点において、第１および第２の二量体化ドメインの一方は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）を含んでもよく、他方は軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含んでもよい。
【0013】
あるいは、第１および第２の二量体化ドメインは、コイルドコイルドメインを含んでもよい。
【0014】
例えば、第１および第２の二量体化ドメインは、Ｆｏｓ／Ｊｕｎドメインまたはドッキングドメイン（ＤＤＤ１）／アンカードメイン（ＡＤ１）ロイシンジッパードメインなどの、ロイシンジッパードメインを含んでもよい。
【0015】
ＣＣＲは、四量体であってもよい。この実施形態では、ＣＣＲは、４つのポリペプチド：
（ｉ）（ａ）第１の四量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメイン
を含む第１のポリペプチド；
（ｉｉ）（ａ）第２の四量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）細胞内ドメイン
を含む第２のポリペプチド；
（ｉ）（ａ）第３の四量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメイン
を含む第３のポリペプチド；
（ｉｉ）（ａ）第４の四量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）細胞内ドメイン
を含む第４のポリペプチド
を含む。
（ｉ）（ａ）第１の四量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメイン
を含む第１のポリペプチド；
（ｉｉ）（ａ）第２の四量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）細胞内ドメイン
を含む第２のポリペプチド；
（ｉ）（ａ）第３の四量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメイン
を含む第３のポリペプチド；
（ｉｉ）（ａ）第４の四量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）細胞内ドメイン
を含む第４のポリペプチド
を含む。
【0016】
この実施形態では、四量体化ドメインは、例えば、ＳＮＡＰ－２５／ＳＮＡＲＥヘテロ四量体複合体のＡ、Ｂ、ＣおよびＤ鎖を含んでもよい。
【0017】
第２の態様では、本発明は、本発明の第１の態様によるキメラサイトカイン受容体を含む細胞を提供する。
【0018】
細胞はまた、キメラ抗原受容体を含んでもよい。
【0019】
第３の態様では、本発明の第１の態様によるキメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）をコードする核酸構築物であって、第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列および第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列を含む、核酸構築物が提供される。
【0020】
四量体ＣＣＲを生産するために、核酸構築物は、第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列；第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列；第３のポリペプチドをコードする第３の核酸配列；および第４のポリペプチドをコードする第４の核酸配列を含んでもよい。
【0021】
核酸構築物はまた、キメラ抗原受容体をコードする核酸配列を含んでもよい。
【0022】
第４の態様では、本発明の第３の態様による核酸構築物を含むベクターが提供される。
【0023】
第５の態様では、
ｉ）上で定義された第１のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター；および
ｉｉ）上で定義された第２のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター
を含むキットが提供される。
ｉ）上で定義された第１のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター；および
ｉｉ）上で定義された第２のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター
を含むキットが提供される。
【0024】
四量体ＣＣＲを生産するために、キットは、
ｉ）上で定義された第１のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター；
ｉｉ）上で定義された第２のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター；
ｉｉｉ）上で定義された第３のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター；および
ｉｖ）上で定義された第４のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター
を含んでもよい。
ｉ）上で定義された第１のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター；
ｉｉ）上で定義された第２のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター；
ｉｉｉ）上で定義された第３のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター；および
ｉｖ）上で定義された第４のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター
を含んでもよい。
【0025】
第６の態様では、本発明の第２の態様による細胞を作製するための方法であって、本発明の第３の態様による核酸構築物；本発明の第４の態様によるベクター；または本発明の第５の態様によるベクターのキットを、ｅｘ ｖｉｖｏで細胞中に導入するステップを含む、方法が提供される。
【0026】
第７の態様では、本発明の第２の態様による複数の細胞を含む医薬組成物が提供される。
【0027】
第８の態様では、がんまたは自己免疫疾患の処置における使用のための本発明の第７の態様による医薬組成物が提供される。
【0028】
第９の態様では、がんまたは自己免疫疾患を処置するための方法であって、本発明の第７の態様による医薬組成物を対象に投与するステップを含む、方法が提供される。
【0029】
第１１の態様では、がんまたは自己免疫疾患の処置のための医薬組成物の製造における使用のための、本発明の第２の態様による複数の細胞の使用が提供される。
【0030】
本発明のさらなる態様
本発明のさらなる態様は、以下の番号付き段落に提示される：
１．２つのポリペプチド：
（ｉ）（ａ）第１の二量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメイン
を含む第１のポリペプチド；および
（ｉｉ）（ａ）第２の二量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）細胞内ドメイン
を含む第２のポリペプチド
を含む、キメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）。
２．第１および第２の二量体化ドメインが自発的に二量体化する、段落１に記載のＣＣＲ。
３．第１および第２の二量体化ドメインの一方が重鎖定常ドメイン（ＣＨ）を含み、他方が軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含む、段落２に記載のＣＣＲ。
４．第１および第２の二量体化ドメインがリガンドの存在下で二量体化する、段落１に記載のＣＣＲ。
５．第１および第２の二量体化ドメインが、リガンドに独立に結合する、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）または単一ドメイン結合剤（ｄＡｂ）である、段落４に記載のＣＣＲ。
６．第１および第２の二量体化ドメインの一方が重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、他方が軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、一緒にリガンドに結合する、段落４に記載のＣＣＲ。
７．第１および第２の二量体化ドメインの一方がトランスフォーミング増殖因子ベータ受容体Ｉ（ＴＢＲＩ）の細胞外領域を含み、他方がトランスフォーミング増殖因子ベータ受容体ＩＩ（ＴＢＲＩＩ）の細胞外領域を含み、リガンドがトランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）である、段落４に記載のＣＣＲ。
８．第１のポリペプチドが、
（ｉ）抗原結合性ドメイン、
（ｉｉ）リンカー、
（ｉｉｉ）第１のトランスフォーミング増殖因子ベータ受容体（ＴＢＲ）の細胞外領域、
（ｉｖ）第１の膜貫通ドメイン、
（ｖ）インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメイン、および
（ｖｉ）ＣＤ３ｚ細胞内ドメイン
を含み、
第２のポリペプチドが、
（ｉ）第２のＴＢＲの細胞外領域、
（ｉｉ）第２の膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）細胞内ドメイン
を含む、
または第１のポリペプチドが、
（ｉ）抗原結合性ドメイン、
（ｉｉ）リンカー、
（ｉｉｉ）第１のトランスフォーミング増殖因子ベータ受容体（ＴＢＲ）の細胞外領域、
（ｉｖ）第１の膜貫通ドメイン、および
（ｖ）ＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメイン、および
（ｖｉ）ＣＤ３ｚ細胞内ドメイン
を含み、
第２のポリペプチドが、
（ｉ）第２のＴＢＲの細胞外領域、
（ｉｉ）第２の膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ１８Ｒ１細胞内ドメイン
を含む、段落８に記載のＣＣＲ。
９．先行する段落のいずれかに記載のキメラサイトカイン受容体を含む細胞。
１０．キメラ抗原受容体も含む、段落６に記載の細胞。
１１．核酸構築物が、第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列および第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列を含む、段落１～８のいずれかに記載のキメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）をコードする核酸構築物。
１２．段落１１に記載の核酸構築物を含むベクター。
１３．ｉ）段落１～８のいずれかで定義された第１のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター；および
ｉｉ）段落１～８のいずれかで定義された第２のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター
を含むキット。
１４．段落１１に記載の核酸構築物；段落１２に記載のベクター；または段落１３に記載のベクターのキットを、ｅｘ ｖｉｖｏで細胞中に導入するステップを含む、段落９または１０に記載の細胞を作製するための方法。
１５．段落１１または１２に記載の複数の細胞を含む医薬組成物。
１６．がんまたは自己免疫疾患の処置における使用のための段落１５に記載の医薬組成物。
１７．段落１５に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む、がんまたは自己免疫疾患を処置するための方法。
１８．がんまたは自己免疫疾患の処置のための医薬組成物の製造における使用のための、段落９または１０に記載の複数の細胞の使用。
本発明のさらなる態様は、以下の番号付き段落に提示される：
１．２つのポリペプチド：
（ｉ）（ａ）第１の二量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメイン
を含む第１のポリペプチド；および
（ｉｉ）（ａ）第２の二量体化ドメインを含む細胞外ドメイン；
（ｂ）インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）細胞内ドメイン
を含む第２のポリペプチド
を含む、キメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）。
２．第１および第２の二量体化ドメインが自発的に二量体化する、段落１に記載のＣＣＲ。
３．第１および第２の二量体化ドメインの一方が重鎖定常ドメイン（ＣＨ）を含み、他方が軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含む、段落２に記載のＣＣＲ。
４．第１および第２の二量体化ドメインがリガンドの存在下で二量体化する、段落１に記載のＣＣＲ。
５．第１および第２の二量体化ドメインが、リガンドに独立に結合する、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）または単一ドメイン結合剤（ｄＡｂ）である、段落４に記載のＣＣＲ。
６．第１および第２の二量体化ドメインの一方が重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、他方が軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、一緒にリガンドに結合する、段落４に記載のＣＣＲ。
７．第１および第２の二量体化ドメインの一方がトランスフォーミング増殖因子ベータ受容体Ｉ（ＴＢＲＩ）の細胞外領域を含み、他方がトランスフォーミング増殖因子ベータ受容体ＩＩ（ＴＢＲＩＩ）の細胞外領域を含み、リガンドがトランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）である、段落４に記載のＣＣＲ。
８．第１のポリペプチドが、
（ｉ）抗原結合性ドメイン、
（ｉｉ）リンカー、
（ｉｉｉ）第１のトランスフォーミング増殖因子ベータ受容体（ＴＢＲ）の細胞外領域、
（ｉｖ）第１の膜貫通ドメイン、
（ｖ）インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメイン、および
（ｖｉ）ＣＤ３ｚ細胞内ドメイン
を含み、
第２のポリペプチドが、
（ｉ）第２のＴＢＲの細胞外領域、
（ｉｉ）第２の膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）細胞内ドメイン
を含む、
または第１のポリペプチドが、
（ｉ）抗原結合性ドメイン、
（ｉｉ）リンカー、
（ｉｉｉ）第１のトランスフォーミング増殖因子ベータ受容体（ＴＢＲ）の細胞外領域、
（ｉｖ）第１の膜貫通ドメイン、および
（ｖ）ＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメイン、および
（ｖｉ）ＣＤ３ｚ細胞内ドメイン
を含み、
第２のポリペプチドが、
（ｉ）第２のＴＢＲの細胞外領域、
（ｉｉ）第２の膜貫通ドメイン、および
（ｉｉｉ）ＩＬ１８Ｒ１細胞内ドメイン
を含む、段落８に記載のＣＣＲ。
９．先行する段落のいずれかに記載のキメラサイトカイン受容体を含む細胞。
１０．キメラ抗原受容体も含む、段落６に記載の細胞。
１１．核酸構築物が、第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列および第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列を含む、段落１～８のいずれかに記載のキメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）をコードする核酸構築物。
１２．段落１１に記載の核酸構築物を含むベクター。
１３．ｉ）段落１～８のいずれかで定義された第１のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター；および
ｉｉ）段落１～８のいずれかで定義された第２のポリペプチドをコードする核酸配列を含むベクター
を含むキット。
１４．段落１１に記載の核酸構築物；段落１２に記載のベクター；または段落１３に記載のベクターのキットを、ｅｘ ｖｉｖｏで細胞中に導入するステップを含む、段落９または１０に記載の細胞を作製するための方法。
１５．段落１１または１２に記載の複数の細胞を含む医薬組成物。
１６．がんまたは自己免疫疾患の処置における使用のための段落１５に記載の医薬組成物。
１７．段落１５に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む、がんまたは自己免疫疾患を処置するための方法。
１８．がんまたは自己免疫疾患の処置のための医薬組成物の製造における使用のための、段落９または１０に記載の複数の細胞の使用。
【発明を実施するための形態】
【0031】
詳細な説明
キメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）
キメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）は、サイトカイン受容体細胞内ドメインおよび細胞外ドメインを含む分子である。細胞外ドメインは、サイトカイン受容体以外のタンパク質に由来してもよい。細胞外ドメインは、ＩＬ－１８受容体以外のタンパク質に由来してもよい。
キメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）
キメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）は、サイトカイン受容体細胞内ドメインおよび細胞外ドメインを含む分子である。細胞外ドメインは、サイトカイン受容体以外のタンパク質に由来してもよい。細胞外ドメインは、ＩＬ－１８受容体以外のタンパク質に由来してもよい。
【0032】
細胞外ドメインは、キメラサイトカイン受容体を構成的に活性にしてもよい。例えば、ＣＣＲは、自発的に二量体化する細胞外ドメインを含んでもよい。
【0033】
図１Ｅに概略的に示される配置では、ＣＣＲの一方のポリペプチドは重鎖定常ドメイン（ＣＨ）を含み、他方は軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含む。これらのドメインは自発的に二量体化し、ＩＬ１８Ｒ１およびＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインを一緒にし、構成的なＩＬ－１８シグナル伝達を与える。
【0034】
あるいは、構成的に活性な本発明のＣＣＲは、自発的な二量体化または多量体化（例えば、四量体化）を与えるコイルドコイルドメインを含んでもよい。
【0035】
図１０に概略的に示される配置では、ＣＣＲの一方のポリペプチドは、アルファヘリックスのコイルドコイルの第１のペア（コイルドコイル１、例えば、酸ジッパー）を含み、他方は第２のペア（コイルドコイル２、例えば、塩基ジッパー）を含む。これらのドメインは自発的に二量体化し、ＩＬ１８Ｒ１およびＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインを一緒にし、構成的なＩＬ－１８シグナル伝達を与える。
【0036】
図１１に概略的に示される配置では、ＣＣＲの１つのポリペプチドは、ＳＮＡＰ－２５／ＳＮＡＲＥヘテロ四量体複合体のＡ鎖を含み；１つのポリペプチドは、ＳＮＡＰ－２５／ＳＮＡＲＥヘテロ四量体複合体のＢ鎖を含み；１つのポリペプチドは、ＳＮＡＰ－２５／ＳＮＡＲＥヘテロ四量体複合体のＣ鎖を含み；１つのポリペプチドは、ＳＮＡＰ－２５／ＳＮＡＲＥヘテロ四量体複合体のＤ鎖を含む。これらのドメインは自発的にヘテロ二量体化し、２コピーのＩＬ１８Ｒ１およびＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインを一緒にし、構成的なＩＬ－１８シグナル伝達を与える。
【0037】
図１Ａに概略的に示される配置では、受容体はＩＬ－１８Ｒαおよびβ鎖を含み、鎖の１つはまた、リンカーによってポリペプチドに係留されたＩＬ－１８分子を含む。係留されたＩＬ－１８は、その永続的な物理的近接性のため、ＩＬ１８Ｒ１およびＩＬ１８ＲＡＰ鎖に結合し、二量体化して、構成的なＩＬ－１８シグナル伝達を与える。
【0038】
あるいは、細胞外ドメインは、二量体化の化学的誘導因子（ＣＩＤ）またはリガンドの存在下でキメラサイトカイン受容体を活性にしてもよい。
【0039】
図１Ｂに概略的に示される配置では、ＣＣＲの第１および第２のポリペプチドは、それぞれ、リガンドに結合する、ｓｃＦｖまたはｄＡｂなどの結合性ドメインをそれぞれ含む。リガンドの存在下では、細胞外ドメインは両方とも結合し、細胞内ドメインを一緒にし、リガンド依存的ＩＬ－１８シグナル伝達を与える。
【0040】
リガンドは、例えば、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）および血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）またはＣＡ１２５などの腫瘍により分泌される因子であってもよい。
【0041】
図１Ｃに概略的に示される配置では、ＣＣＲの第１および第２のポリペプチドはそれぞれ、ＴＧＦβ受容体に由来する細胞外ドメインを含む。例えば、一方のポリペプチドはＴＧＦβ受容体Ｉに由来する細胞外ドメインを含み、他方のポリペプチドはＴＧＦβ受容体ＩＩに由来する細胞外ドメインを含んでもよい。ＴＧＦβの存在下では、２つのＴＧＦβ受容体細胞内ドメインは一体化して、ＩＬ－１８型シグナル伝達を引き起こす。
【0042】
図１Ｄに概略的に示される配置も、ＩＬ－１８型シグナル伝達であり、これもＴＧＦβの存在によって誘発される。この配置では、一方のポリペプチドは、ＩＴＡＭ含有細胞内ドメインおよび抗原結合性ドメインを含む。このポリペプチドは、それが標的抗原の存在下で細胞の活性化を誘導する点でＣＡＲのように作用する。このポリペプチドはまた、ＩＬ－１８受容体細胞内ドメインの１つおよびＴＧＦβ受容体細胞外ドメインも含む。ＣＣＲ中の他方のポリペプチドは、第２のＴＧＦβ受容体細胞外ドメインおよび他のＩＬ－１８受容体細胞内ドメイン鎖を含む。ＴＧＦβの存在下では、２つのＴＧＦβ受容体細胞内ドメインは一体化して、ＩＬ－１８型シグナル伝達を引き起こす。ＴＧＦβと標的抗原との両方の存在下で、細胞は活性化シグナルとＩＬ－１８型増殖シグナルとの両方を受け取る。
【0043】
ＩＬ１８受容体細胞内ドメイン
ＩＬ－１８は、ＩＬ－１スーパーファミリーに属し、主にマクロファージによって産生されるが、他の細胞型によっても産生され、細胞刺激における多面的な機能を有する。ＩＬ－１８は、１型応答を容易にする炎症性サイトカインである。ＩＬ－１２と共に、それはリポ多糖（ＬＰＳ）のような微生物生成物と共に感染後の細胞媒介性免疫を誘導する。ＩＬ－１８は、ＩＬ１２と共に、ＣＤ４、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞に対して作用して、マクロファージまたは他の細胞の活性化において重要な役割を果たすＩＩ型インターフェロンであるＩＦＮγの産生を誘導する。このＩＬ－１８とＩＬ－１２との組合せは、Ｂ細胞中でＩＬ－４依存的ＩｇＥおよびＩｇＧ１産生を阻害し、ＩｇＧ２ａ産生を増強することが示されている。ｉｎ ｖｉｖｏで、ＩＬ－１２またはＩＬ－１５がない場合、ＩＬ－１８はＩＦＮγ産生を誘導しないが、ナイーブなＴ細胞のＴｈ２細胞への分化において重要な役割を果たし、肥満細胞および好塩基球を刺激して、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、およびヒスタミンなどの化学メディエーターを産生させる。
ＩＬ－１８は、ＩＬ－１スーパーファミリーに属し、主にマクロファージによって産生されるが、他の細胞型によっても産生され、細胞刺激における多面的な機能を有する。ＩＬ－１８は、１型応答を容易にする炎症性サイトカインである。ＩＬ－１２と共に、それはリポ多糖（ＬＰＳ）のような微生物生成物と共に感染後の細胞媒介性免疫を誘導する。ＩＬ－１８は、ＩＬ１２と共に、ＣＤ４、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞に対して作用して、マクロファージまたは他の細胞の活性化において重要な役割を果たすＩＩ型インターフェロンであるＩＦＮγの産生を誘導する。このＩＬ－１８とＩＬ－１２との組合せは、Ｂ細胞中でＩＬ－４依存的ＩｇＥおよびＩｇＧ１産生を阻害し、ＩｇＧ２ａ産生を増強することが示されている。ｉｎ ｖｉｖｏで、ＩＬ－１２またはＩＬ－１５がない場合、ＩＬ－１８はＩＦＮγ産生を誘導しないが、ナイーブなＴ細胞のＴｈ２細胞への分化において重要な役割を果たし、肥満細胞および好塩基球を刺激して、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、およびヒスタミンなどの化学メディエーターを産生させる。
【0044】
ＩＬ－１８受容体は、誘導性成分である、低い親和性で成熟ＩＬ－１８に結合するインターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）および構成的に発現される共受容体インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）からなる。ＩＬ－１８は、リガンド受容体ＩＬ１８Ｒ１に結合し、ＩＬ１８ＲＡＰの動員を誘導して、ｔｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメインを介してシグナル伝達する高親和性複合体を形成する。このシグナル伝達ドメインは、炎症促進性プログラムおよびＮＦ－κＢ経路を活性化するＭｙＤ８８アダプタータンパク質を動員する。
【0045】
ヒトＩＬ１８受容体１（ＩＬ１８受容体α鎖としても公知である）のアミノ酸配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ１３４７８から入手可能であり、配列番号１として以下に示される。この配列において、残基２２～３２９は細胞外ドメインを表し、残基３３０～３５０は膜貫通ドメインを表し、残基３５１～５４１は細胞質ドメインを表す。
【化1】
【0046】
１つのポリペプチドがＩＬ１８Ｒ１細胞外ドメインおよび細胞内ドメインを含む本発明の実施形態、例えば、図１Ａに例示される実施形態について、ポリペプチドは、配列番号１の残基２２～５４１を含んでもよい。
【0047】
１つのポリペプチドがＩＬ１８Ｒ１細胞内ドメインおよび異種細胞外ドメインを含む本発明の実施形態について、ポリペプチドは、配列番号１の残基３３０～５４１（ポリペプチドがＩＬ１８Ｒ１膜貫通ドメインを含む場合－以下の配列番号８および９）または残基３５１～５４１（ポリペプチドが異種膜貫通ドメインを有する場合）を含んでもよい。
【0048】
本発明のＣＣＲは、配列番号１として示される配列の一部または全部のバリアントを含んでもよく、バリアントは、バリアント配列を含むポリペプチドが、ＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインを含むポリペプチドと二量体化した場合、細胞中でＩＬ－１８シグナルを誘発する能力を保持するという条件で、例えば、配列番号１として示される配列（またはその同定された部分）に対する７０、８０、９０、９５または９９％の同一性を有してもよい。
【0049】
ヒトＩＬ１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ１８受容体β鎖としても公知である）のアミノ酸配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｏ９５２５６から入手可能であり、配列番号２として以下に示される。この配列において、残基２０～３５６は細胞外ドメインを表し、残基３５７～３７７は膜貫通ドメインを表し、残基３７８～５９９は細胞質ドメインを表す。
【化2】
【0050】
１つのポリペプチドがＩＬ１８ＲＡＰ細胞外ドメインおよび細胞内ドメインを含む本発明の実施形態、例えば、図１Ａに例示される実施形態について、ポリペプチドは、配列番号２の残基２０～５９９を含んでもよい。
【0051】
１つのポリペプチドがＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインおよび異種細胞外ドメインを含む本発明の実施形態、例えば、図１Ｂ～Ｅに例示される実施形態について、ポリペプチドは、配列番号２の残基３５７～５９９（ポリペプチドがＩＬ１８ＲＡＰ膜貫通ドメインを含む場合－以下の配列番号１２および１３を参照されたい）または残基３７８～５９９（ポリペプチドが異種膜貫通ドメインを有する場合）を含んでもよい。
【0052】
本発明のＣＣＲは、配列番号２として示される配列の一部または全部のバリアントを含んでもよく、バリアントは、バリアント配列を含むポリペプチドが、ＩＬ１８Ｒ１細胞内ドメインを含むポリペプチドと二量体化した場合、細胞中でＩＬ－１８シグナルを誘発する能力を保持するという条件で、例えば、配列番号２として示される配列（またはその同定された部分）に対する７０、８０、９０、９５または９９％の同一性を有してもよい。
【0053】
ＩＬ１８細胞内ドメインのトランケーション
一部のＩ型サイトカイン受容体細胞内ドメインのトランケーションは、ＣＣＲが野生型バージョンに関してＴ細胞中で発現される場合に増殖を増加させ得ることが公知である。ＷＯ２０２１／０２３９８７は、構成的に活性なＣＣＲのＩＬ－２受容体β鎖が連続する２０ｍｅｒの欠失を与えられた試験を記載する。ｃｃｒはＴ細胞中で発現され、生きた、形質導入された細胞の絶対数は、フローサイトメトリーによって評価された。ＩＬ－２受容体β鎖細胞内ドメインの、２０または４０アミノ酸（すなわち、それぞれ、アミノ酸２６６～５５１から２６６～５３１および２６６～５１１まで）によるトランケーションは、増殖を増加させ、最も高いレベルの増殖は、ＩＬ２Ｒベータａａ２６６～５１１について観察された。ＩＬ－２受容体β鎖細胞内ドメインのさらなるトランケーションは、ａａ２６６～４７１＞ａａ２６６～４５１＞ａａ２６６～４１１＞ａａ２６６～３９１＞ａａ２６６～３７１の順で増殖の段階的減少をもたらし、その点でそれは増殖レベルの有意な効果を有しないさらなる欠失に関してプラトーに達した。したがって、一方または両方のサイトカイン受容体細胞内ドメインのトランケーションによってキメラサイトカイン受容体の活性を減少させることができる。また、所望のレベルの活性を与える細胞内ドメインのトランケーションを選択することによって、所望のレベルのサイトカイン産生を有するようにＣＣＲを「調整」することもできる。
一部のＩ型サイトカイン受容体細胞内ドメインのトランケーションは、ＣＣＲが野生型バージョンに関してＴ細胞中で発現される場合に増殖を増加させ得ることが公知である。ＷＯ２０２１／０２３９８７は、構成的に活性なＣＣＲのＩＬ－２受容体β鎖が連続する２０ｍｅｒの欠失を与えられた試験を記載する。ｃｃｒはＴ細胞中で発現され、生きた、形質導入された細胞の絶対数は、フローサイトメトリーによって評価された。ＩＬ－２受容体β鎖細胞内ドメインの、２０または４０アミノ酸（すなわち、それぞれ、アミノ酸２６６～５５１から２６６～５３１および２６６～５１１まで）によるトランケーションは、増殖を増加させ、最も高いレベルの増殖は、ＩＬ２Ｒベータａａ２６６～５１１について観察された。ＩＬ－２受容体β鎖細胞内ドメインのさらなるトランケーションは、ａａ２６６～４７１＞ａａ２６６～４５１＞ａａ２６６～４１１＞ａａ２６６～３９１＞ａａ２６６～３７１の順で増殖の段階的減少をもたらし、その点でそれは増殖レベルの有意な効果を有しないさらなる欠失に関してプラトーに達した。したがって、一方または両方のサイトカイン受容体細胞内ドメインのトランケーションによってキメラサイトカイン受容体の活性を減少させることができる。また、所望のレベルの活性を与える細胞内ドメインのトランケーションを選択することによって、所望のレベルのサイトカイン産生を有するようにＣＣＲを「調整」することもできる。
【0054】
トランケート型のＩＬ１８Ｒ１またはＩＬ１８ＲＡＰは、Ｃ末端から１０～１８０アミノ酸、例えば、２０～１７０アミノ酸、４０～１６０、６０～１５０、８０～１３０または１００～１２０アミノ酸のトランケーションを有してもよい。トランケーションは、Ｃ末端から１～４０アミノ酸、例えば、Ｃ末端から５～３５、１０～３０、または１５～２５アミノ酸の除去を含んでもよい。
【0055】
表１は、ＩＬ１８Ｒ１およびＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメイン配列のトランケーションを示す。本発明のＣＣＲは、表１に示されるトランケート型のＩＬ１８Ｒ１および／またはＩＬ１８ＲＡＰの１つを含んでもよい。トランケート型のＩＬ１８Ｒ１および／またはＩＬ１８ＲＡＰは、配列番号３６～５３、および６２として示される配列の１つを有してもよい。トランケート型のＩＬ１８Ｒ１および／またはＩＬ１８ＲＡＰは、表１に示される２つのトランケートされた配列「間」の配列を有してもよく、例えば、細胞内ドメイン配列の最後の１１アミノ酸を失っているＩＬ１８Ｒ１トランケーション１０（配列番号４４）と、細胞内ドメイン配列の最後の３１アミノ酸を失っているＩＬ１８Ｒ１トランケーション９（配列番号４３）との「間」の配列は、ＩＬ１８Ｒ１細胞内ドメイン配列の最後の３０、２９、２８．．．など．．．１４、１３および１２アミノ酸のトランケーションである。
【0056】
トランケーションは、トランケート型のＩＬ１８Ｒ１またはＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインを用いて作製されたＣＣＲが、Ｔ細胞中で発現された場合、野生型（すなわち、トランケートされていない）細胞内ドメイン配列を有する同等のＣＣＲを発現する同等の細胞と比較して、Ｔ細胞の増殖を増加させるようなものであってよい。
【表1-1】
【表1-2】
【0057】
細胞外ドメインの二量体化
本発明のキメラサイトカイン受容体は、二量体化して、ＩＬ１８Ｒ１およびＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインを一緒にする第１および第２のポリペプチドを含む。
本発明のキメラサイトカイン受容体は、二量体化して、ＩＬ１８Ｒ１およびＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインを一緒にする第１および第２のポリペプチドを含む。
【0058】
二量体化は、自発的に起こってもよく、その場合、キメラ膜貫通タンパク質は構成的に活性となるであろう。あるいは、二量体化は、二量体化の化学誘導因子（ＣＩＤ）またはリガンドの存在下でのみ起こってもよく、その場合、膜貫通タンパク質は、ＣＩＤまたはリガンドの存在下でのみサイトカイン型シグナル伝達を引き起こす。
【0059】
構成的に活性な系
二量体化ドメインが自発的にヘテロ二量体化する場合、それは抗体の二量体化ドメインに基づくものであってよい。特に、それは、重鎖定常ドメイン（ＣＨ）および軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）の二量体化部分を含んでもよい。定常ドメインの「二量体化部分」は、鎖間ジスルフィド結合を形成する配列の部分である。
二量体化ドメインが自発的にヘテロ二量体化する場合、それは抗体の二量体化ドメインに基づくものであってよい。特に、それは、重鎖定常ドメイン（ＣＨ）および軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）の二量体化部分を含んでもよい。定常ドメインの「二量体化部分」は、鎖間ジスルフィド結合を形成する配列の部分である。
【0060】
「Ｆａｂ」型細胞外ドメインを有するそのようなＣＣＲの好適な配置は、図１Ｅに概略的に示されている。
【0061】
軽鎖定常ドメインは、配列番号３として示される配列を含んでもよく、重鎖定常ドメインは、配列番号４として示される配列を含んでもよい。
【化3】
【0062】
図１Ｅに示される「Ｆａｂ型」ＣＣＲの例示的配列は、以下に示され、個々の成分が同定される。
【0063】
「Ｆａｂ型」ＣＣＲ
【化4-1】
【化4-2】
【0064】
自発的に二量体化（または多量体化）する別の型のＣＣＲは、コイルドコイルドメインを含むものである。
【0065】
コイルドコイルは、２～７個のアルファヘリックスがロープの鎖のように一緒に巻かれている構造モチーフである。コイルドコイルは通常、７回反復と称される、反復パターン、ｈｘｘｈｃｘｃの疎水性（ｈ）および荷電（ｃ）アミノ酸残基を含有する。コイルドコイル境界面でのパッキングは例外的に緊密であり、側鎖間でほぼ完全なファンデルワールス接触を示す。多くの内因性タンパク質は、ロイシンジッパーなどの、コイルドコイルドメインを含む。
【0066】
ロイシンジッパーは、二量体化ドメインとして機能するスーパー二次構造である。それらの存在は、平行なアルファヘリックスにおいて接着力を生成する。単一のロイシンジッパーは、およそ７残基間隔の複数のロイシン残基からなり、一方の側に沿って走る疎水性領域と両親媒性アルファヘリックスを形成する。この疎水性領域は、二量体化のための領域を提供し、モチーフが一緒に「ジッパーで留まる」のを可能にする。ロイシンジッパーは、典型的には、２０～４０アミノ酸の長さ、例えば、およそ３０アミノ酸である。そのようなロイシンジッパーは、ｃ－ｆｏｓおよびｃ－ｊｕｎなどの転写因子に見出され、アダプタータンパク質－１転写複合体を形成する。Ｊｕｎ－Ｆｏｓロイシンジッパーは、ｓｃＦｖ抗体、インターフェロンγ受容体βサブユニットならびにサイトカイン顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子および増殖ホルモンのための受容体を二量体化させるために以前に使用されていた。
【0067】
第１および／または第２のヘテロ二量体化ドメインは、配列番号５４または５５として示される配列を含んでもよい。第１のヘテロ二量体化ドメインは、配列番号５４として示される配列を含んでもよく、第２のヘテロ二量体化ドメインは、配列番号５５として示される配列を含んでもよく、またはその逆も同様である。
配列番号５４：QLEKELQALEKENAQLEWELQALEKELAQ
配列番号５５：QLEKKLQALKKKNAQLKWKLQALKKKLAQ
配列番号５４：QLEKELQALEKENAQLEWELQALEKELAQ
配列番号５５：QLEKKLQALKKKNAQLKWKLQALKKKLAQ
【0068】
ある特定の実施形態では、第１および第２のヘテロ二量体化ドメインは、酸性（例えば、配列番号５４）または塩基性（例えば、配列番号５５）ロイシンジッパーであってもよい。特に、第１のヘテロ二量体化ドメインが酸性ロイシンジッパーである場合、第２のヘテロ二量体化は塩基性ロイシンジッパーであり、およびその逆も同様である。
【0069】
第１および第２のヘテロ二量体化ドメインは、二量体化およびドッキングドメイン（ＤＤＤ１）およびアンカードメイン（ＡＤ１）であってもよい。
【0070】
ＤＤＤ１は、タンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ）に由来する短いアルファヘリックス構造である。ＡＤ１は、Ａ－キナーゼアンカータンパク質（ＡＫＡＰ）に由来する短いアルファヘリックス構造である。
【0071】
ＤＤＤ１ドメインは、配列番号５６として示される配列を含んでもよい。
配列番号５６：SHIQIPPGLTELLQGYTVEVLRQQPPDLVEFAVEYFTRLREARA
配列番号５６：SHIQIPPGLTELLQGYTVEVLRQQPPDLVEFAVEYFTRLREARA
【0072】
ＡＤ１ドメインは、配列番号５７として示される配列を含んでもよい。
配列番号５７：VQIEYLAKQIVDNAIQQA
配列番号５７：VQIEYLAKQIVDNAIQQA
【0073】
コイルドコイルドメインは、二量体または多量体、特に、２の位数である多量体（例えば、２、４、６または８個の鎖）を形成してもよい。ＣＣＲは、例えば、ＳＮＡＰ－２５／ＳＮＡＲＥヘテロ四量体複合体に由来するコイルドコイルドメインを使用することによって四量体を形成してもよい。この複合体は、以下に示されるような、４個の鎖：鎖Ａ、鎖Ｂ、鎖Ｃおよび鎖Ｄを含む。
ＳＮＡＰ－２５およびＳＮＡＲＥ：平行ヘテロ四量体
ＳＮＡＰ－２５およびＳＮＡＲＥ：平行ヘテロ四量体
【化5】
【0074】
図１１に概略的に示されるように、ＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインを含むこれらの鎖の２つと、ＩＬ１８ＢＲ１細胞内ドメインを含むこれらの鎖の２つとの四量体化ドメインを連結することによって、２コピーのＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインは、２コピーのＩＬ１８ＢＲ１細胞内ドメインと一体化し、構成的なＩＬ－８シグナル伝達を与える。
【0075】
別の構成的に活性なＣＣＲは、第１または第２のポリペプチドが不可欠のＩＬ－１８分子を含むものである。そのような配置は図１Ａに概略的に示され、受容体はＩＬ－１８Ｒαおよびβ鎖を含み、鎖の１つはまた、リンカーによってポリペプチドに係留されたＩＬ－１８分子を含む。係留されたＩＬ－１８は、その永続的な物理的近接性のため、ＩＬ１８Ｒ１およびＩＬ１８ＲＡＰ鎖に結合し、二量体化して、構成的なＩＬ－１８シグナル伝達を与える。
【0076】
ヒトＩＬ－１８の配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ１４１１６から入手可能であり、配列番号１４として以下に示される。本発明のＣＣＲは、シグナル配列を欠く、トランケート型のＩＬ－１８を含んでもよい。そのようなトランケートされた配列は、配列番号１５として以下に示される。
【化6】
【0077】
ＩＬ－１８分子、またはトランケートされたＩＬ－１８分子を、第１または第２のポリペプチドに係留することができる。それは、ＩＬ１８Ｒ１細胞外ドメインまたはＩＬ１８ＲＡＰ細胞外ドメインに対してＮ末端であってもよい。それを、セリン－グリシンリンカーなどのリンカーによって係留することができる。リンカーは、例えば、１０～４０アミノ酸の長さ、例えば、２０～３０または２４～２８アミノ酸の長さであってもよい。
【0078】
図１Ａに示されるＣＣＲを作出するための２つの例示的配列は、以下に示され、個々の成分が同定される。第１の配列において、トランケートされたＩＬ－１８分子は、ＩＬ１８Ｒ１のＮ末端に結合し、第２の配列において、トランケートされたＩＬ－１８分子は、ＩＬ１８ＲＡＰのＮ末端に結合している。
【0079】
係留されたＩＬ－１８－バージョン１
【化7】
【0080】
係留されたＩＬ－１８－バージョン２
【化8-1】
【化8-2】
【0081】
図１Ａに例示される型のＣＣＲを生成するためには、連結されたＩＬ－１８分子を含有するポリペプチド鎖を組換え的に発現させることのみが必要である。このポリペプチドは、ＩＬ１８受容体の相補的部分の内因性の鎖と対合して、ＣＣＲを産生するであろう。したがって、ＩＬ－１８がリンカーを介してＩＬ１８Ｒ１に係留されている上記のバージョン１は、内因性ＩＬ１８ＲＡＰと対合するであろう；およびＩＬ－１８がリンカーを介してＩＬ１８ＲＡＰに係留されている上記のバージョン２は、内因性ＩＬ１８Ｒ１と対合するであろう。
【0082】
ＣＩＤ／リガンド活性化系
構成的に活性な系の代替として、二量体化は、二量体化の化学誘導因子（ＣＩＤ）またはリガンドの存在下でのみ起こってもよく、その場合、膜貫通タンパク質は、ＣＩＤまたはリガンドの存在下でのみサイトカイン型シグナル伝達を引き起こす。
構成的に活性な系の代替として、二量体化は、二量体化の化学誘導因子（ＣＩＤ）またはリガンドの存在下でのみ起こってもよく、その場合、膜貫通タンパク質は、ＣＩＤまたはリガンドの存在下でのみサイトカイン型シグナル伝達を引き起こす。
【0083】
好適な二量体化ドメインおよびＣＩＤは、ＷＯ２０１５／１５０７７１に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【0084】
例えば、一方の二量体化ドメインはＦＫ結合性タンパク質１２（ＦＫＢＰ１２）のラパマイシン結合性ドメインを含んでもよく、他方はｍＴＯＲのＦＫＢＰ１２－ラパマイシン結合（ＦＲＢ）ドメインを含んでもよく；ＣＩＤはラパマイシンまたはその誘導体であってもよい。
【0085】
一方の二量体化ドメインはＦＫ結合性タンパク質１２（ＦＫＢＰ１２）のＦＫ５０６（タクロリムス）結合性ドメインを含んでもよく、他方の二量体化ドメインはシクロフィリンＡのシクロスポリン結合性ドメインを含んでもよく；ＣＩＤはＦＫ５０６／シクロスポリン融合物またはその誘導体であってもよい。
【0086】
一方の二量体化ドメインはエストロゲン結合性ドメイン（ＥＢＤ）を含んでもよく、他方の二量体化ドメインはストレプトアビジン結合性ドメインを含んでもよく；ＣＩＤはエストロン／ビオチン融合タンパク質またはその誘導体であってもよい。
【0087】
一方の二量体化ドメインは糖質コルチコイド結合性ドメイン（ＧＢＤ）を含んでもよく、他方の二量体化ドメインはジヒドロ葉酸リダクターゼ（ＤＨＦＲ）結合性ドメインを含んでもよく；ＣＩＤはデキサメタゾン／メトトレキサート融合タンパク質またはその誘導体であってもよい。
【0088】
一方の二量体化ドメインはＯ６－アルキルグアニン－ＤＮＡアルキルトランスフェラーゼ（ＡＧＴ）結合性ドメインを含んでもよく、他方の二量体化ドメインはジヒドロ葉酸リダクターゼ（ＤＨＦＲ）結合性ドメインを含んでもよく；ＣＩＤはＯ６－ベンジルグアニン誘導体／メトトレキサート融合タンパク質またはその誘導体であってもよい。
【0089】
一方の二量体化ドメインはレチノイン酸受容体ドメインを含んでもよく、他方の二量体化ドメインはエコジソン（ecodysone）受容体ドメインを含んでもよく；ＣＩＤはＲＳＬ１またはその誘導体であってもよい。
【0090】
患者に外部的に投与される二量体化の化学誘導因子によって活性化されるよりもむしろ、ＣＣＲは、腫瘍により分泌される因子またはＴＧＦβなどの、天然に存在するリガンドの存在下で二量体化してもよい。
【0091】
図１Ｂに概略的に示される配置では、ＣＣＲの第１および第２のポリペプチドは、それぞれがリガンドに結合する、ｓｖＦｖまたはｄＡｂなどの結合性ドメインをそれぞれ含む。リガンドの存在下では、細胞外ドメインは両方とも結合し、細胞内ドメインを一緒にし、リガンド依存的ＩＬ－１８シグナル伝達を与える。
【0092】
リガンドは、例えば、腫瘍により分泌される因子またはケモカインまたは細胞表面抗原であってもよい。
【0093】
いくつかのリガンド結合性ドメインが当業界で公知であり、抗体、抗体模倣物質、およびＴ細胞受容体の抗原結合部位に基づくものを含む。例えば、抗原結合性ドメインは、モノクローナル抗体に由来する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）；標的抗原に対する天然の受容体に由来する結合性ドメイン；標的リガンドに対する十分な親和性を有するペプチド；ラクダ科などの単一ドメイン結合剤；Ｄａｒｐｉｎとしての単一の人工結合剤；またはＴ細胞受容体に由来する単鎖を含んでもよい。
【0094】
用語「リガンド」は、ＣＣＲの抗原結合性ドメインによって特異的に認識および結合される実体を意味するように「抗原」と同義的に使用される。
【0095】
リガンドは、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）および血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）またはＣＡ１２５などの腫瘍により分泌される因子であってもよい。
【0096】
図１Ｂに示されるようなＰＳＡを感知するＣＣＲを作出するための２つの例示的配列は、以下に示され、個々の成分が同定される。ＣＣＲのＰＳＡ結合性ドメインは、ＷＯ２０１７／０２９５１２に記載されている５Ｄ３Ｄ１１および５Ｄ５Ａ５である。第１のバージョンでは、５Ｄ３Ｄ１１ ｓｃＦｖは、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介して、ＩＬ１８Ｒ１細胞内ドメインに結合しており；５Ｄ５Ａ５ ｓｃＦｖは、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介して、ＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインに結合している。第２のバージョンでは、５Ｄ５Ａ５ ｓｃＦｖは、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介して、ＩＬ１８Ｒ１細胞内ドメインに結合しており；５Ｄ３Ｄ１１ ｓｃＦｖは、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介して、ＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインに結合している。
【0097】
ＰＳＡ感知－バージョン１
【化9-1】
【化9-2】
【化9-3】
【0098】
ＰＳＡ感知－バージョン２
【化10-1】
【化10-2】
【0099】
本発明のＣＣＲは、細胞外環境においてＴＧＦβの存在によって誘発され得る。例えば、図１Ｃに概略的に示される配置では、ＣＣＲの第１および第２のポリペプチドはそれぞれ、ＴＧＦβ受容体に由来する細胞外ドメインを含む。例えば、一方のポリペプチドはＴＧＦβ受容体Ｉに由来する細胞外ドメインを含んでもよく、他方のポリペプチドはＴＧＦβ受容体ＩＩに由来する細胞外ドメインを含んでもよい。ＴＧＦβの存在下では、２つのＴＧＦβ受容体細胞内ドメインは一体化して、ＩＬ－１８型シグナル伝達を引き起こす。
【0100】
図１Ｃに示されるようなＴＧＦβにより誘発されるＣＣＲを作出するための２つの例示的配列は、以下に示され、個々の成分が同定される。第１のバージョンでは、ＴＧＦβＲ２細胞外ドメインは、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介して、ＩＬ１８Ｒ１細胞内ドメインに結合しており；ＴＧＦβＲ１細胞外ドメインは、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介して、ＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインに結合している。第２のバージョンでは、ＴＧＦβＲ１細胞外ドメインは、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介して、ＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインに結合しており；ＴＧＦβＲ２細胞外ドメインは、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介して、ＩＬ１８Ｒ１細胞内ドメインに結合している。
【0101】
ＴＧＦベータ－ＩＬ１８スイッチ受容体：バージョン１
【化11-1】
【化11-2】
【0102】
ＴＧＦベータ－ＩＬ１８スイッチ受容体－バージョン２
【化12】
【0103】
図１Ｄに概略的に示される配置も、ＴＧＦβの存在によって誘発される。この配置では、一方のポリペプチドは、ＩＴＡＭ含有細胞内ドメインおよび抗原結合性ドメインを含む。このポリペプチドは、それが標的抗原の存在下で細胞の活性化を誘導する点でＣＡＲのように作用する。このポリペプチドはまた、ＩＬ－１８受容体細胞内ドメインの１つおよびＴＧＦβ受容体細胞外ドメインも含む。ＣＣＲ中の他方のポリペプチドは、第２のＴＧＦβ受容体細胞外ドメインおよび他のＩＬ－１８受容体細胞内ドメイン鎖を含む。ＴＧＦβの存在下では、２つのＴＧＦβ受容体細胞内ドメインは一体化して、ＩＬ－１８型シグナル伝達を引き起こす。ＴＧＦβと標的抗原との両方の存在下で、細胞は活性化シグナルとＩＬ－１８型増殖シグナルとの両方を受け取る。
【0104】
そのようなＴＧＦベータ－ＩＬ１８ ＣＡＲエンハンサーを作出するための２つの例示的配列は、以下に示され、個々の成分が同定される。この系は、抗原結合性ドメインとして抗ＥＧＦＲｖＩＩＩドメイン抗体（ｄＡｂ）を含み、したがって、ＥＧＦＲｖＩＩＩを、モデル標的抗原として使用することができる。ｄＡｂまたはｓｃＦｖ中で他の結合特異性と交換することによって他の標的抗原を標的とする同等の系を作出することができる。以下に示される第１のバージョンの配列では、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ ｄＡｂおよびＴＧＦβＲ２細胞外ドメインは、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介して、ＩＬ１８Ｒ１およびＣＤ３ｚ細胞内ドメインに結合しており；ＴＧＦβＲ１細胞外ドメインは、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介して、ＩＬ１８ＲＡＰ細胞内ドメインに結合している。第２のバージョンでは、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ ｄＡｂおよびＴＧＦβＲ１細胞外ドメインは、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介して、ＩＬ１８ＲＡＰおよびＣＤ３ｚ細胞内ドメインに結合しており；ＴＧＦβＲ２細胞外ドメインは、スペーサーおよび膜貫通ドメインを介して、ＩＬ１８Ｒ１細胞内ドメインに結合している。
【0105】
ＴＧＦベータ－ＩＬ１８ ＣＡＲエンハンサー－バージョン１
【化13-1】
【化13-2】
【0106】
ＴＧＦベータ－ＩＬ１８ ＣＡＲエンハンサー－バージョン２
【化14-1】
【化14-2】
【0107】
スペーサー
本発明のキメラサイトカイン受容体、特に、図１Ｂに概略的に示されるリガンド活性化バージョンは、リガンド結合性ドメインを膜貫通ドメインと接続し、リガンド結合性ドメインを細胞内ドメインから空間的に隔てるためのスペーサーを含んでもよい。可撓性スペーサーは、リガンド結合性ドメインを異なる方向に向けさせて、抗原結合を可能にする。
本発明のキメラサイトカイン受容体、特に、図１Ｂに概略的に示されるリガンド活性化バージョンは、リガンド結合性ドメインを膜貫通ドメインと接続し、リガンド結合性ドメインを細胞内ドメインから空間的に隔てるためのスペーサーを含んでもよい。可撓性スペーサーは、リガンド結合性ドメインを異なる方向に向けさせて、抗原結合を可能にする。
【0108】
本発明の細胞が２つまたはそれより多いキメラサイトカイン受容体を含む場合、スペーサーは同じであるか、または異なっていてもよい。本発明の細胞がキメラサイトカイン受容体（ＣＣＲ）およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む場合、ＣＣＲおよびＣＡＲのスペーサーは異なっていてもよく、例えば、異なる長さを有してもよい。ＣＡＲのスペーサーは、ＣＣＲまたはそれぞれのＣＣＲのスペーサーよりも長くてもよい。
【0109】
スペーサー配列は、例えば、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域、ＩｇＧ１ヒンジまたはＣＤ８ストークを含んでもよい。あるいは、リンカーは、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域、ＩｇＧ１ヒンジまたはＣＤ８ストークと類似する長さおよび／またはドメイン間隔特性を有する代替的なリンカー配列を含んでもよい。
【0110】
ヒトＩｇＧ１スペーサーを変化させて、Ｆｃ結合性モチーフを除去することができる。
【0111】
スペーサーを改変して、それが単量体であるように、システイン残基を除去することができる。単量体ＣＤ８ストークの配列は、配列番号２４として上に示されている。
【0112】
膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインは、膜に広がるＣＣＲの配列である。それは疎水性アルファヘリックスを含んでもよい。膜貫通ドメインは、ＣＤ２８に由来してもよく、良好な受容体安定性を与える。
膜貫通ドメインは、膜に広がるＣＣＲの配列である。それは疎水性アルファヘリックスを含んでもよい。膜貫通ドメインは、ＣＤ２８に由来してもよく、良好な受容体安定性を与える。
【0113】
図１Ａおよび図１Ｅに概略的に示される構成的に活性なＣＣＲならびに図１Ｂに概略的に示されるリガンドにより活性化されたＣＣＲは、それぞれ、配列番号８および１２として上に示されているＩＬ１８Ｒ１およびＩＬ１８ＲＡＰ膜貫通ドメインを含んでもよい。あるいは、一方または両方の鎖のＴＭドメインを、異なるＴＭドメイン配列に交換してもよい。
【0114】
図１Ｃおよび図１Ｄに概略的に示されるＴＧＦβにより活性化されたＣＣＲ系は、それぞれ、配列番号３２および３０として上に示されているＴＧＦβ１およびＴＧＦβ２膜貫通ドメインを含んでもよい。あるいは、一方または両方の鎖のＴＭドメインを、異なるＴＭドメイン配列に交換してもよい。
【0115】
リガンド
図１Ｂに概略的に示されるＣＣＲ型の第１および第２のポリペプチドは、リガンドに特異的に結合する。
図１Ｂに概略的に示されるＣＣＲ型の第１および第２のポリペプチドは、リガンドに特異的に結合する。
【0116】
リガンドは、腫瘍により分泌される因子またはケモカインなどの可溶性リガンドであってもよい。
【0117】
あるいは、リガンドは、細胞表面抗原などの膜結合リガンドであってもよい。
【0118】
用語「可溶性リガンド」は、細胞の一部ではない、または細胞に結合していないが、細胞外空間中で、例えば、目的の組織の体液中で自由に移動するリガンドまたは抗原を示すために使用される。可溶性リガンドは、個体の血清、血漿または他の体液中に無細胞状態で存在してもよい。
【0119】
可溶性リガンドは、がんなどの特定の疾患の存在または病理と関連していてもよい。
【0120】
可溶性リガンドは、がんセクレトーム、すなわち、がん幹細胞、非幹細胞または周囲の間質に由来する、腫瘍によって分泌される因子の収集物の一部であってもよい。可溶性リガンドは、腫瘍細胞によって分泌または発散され得る（次の小節を参照されたい）。
【0121】
可溶性リガンドは、疾患または疾患組織に特徴的であってよい。それは、健康な対象に対して疾患を有する対象において、または健康な組織に対して疾患組織において、専ら、またはより高レベルで見出され得る。可溶性リガンドは、健康な対象に対して疾患を有する対象において、または健康な組織に対して疾患組織において、少なくとも２倍、５倍、１０倍、１００倍、１０００倍、１０，０００倍または１００，０００倍高いレベルで発現され得る。
【0122】
用語「細胞表面抗原」および「細胞表面リガンド」は、「膜結合抗原」および「膜結合リガンド」と同義的に使用され、細胞の表面上に結合または発現しているリガンドを意味する。細胞表面リガンドは、例えば、膜貫通タンパク質であってもよい。
【0123】
細胞表面リガンドが見出される細胞は、がん細胞などの標的細胞であってもよい。
【0124】
細胞表面リガンドは、がんなどの特定の疾患の存在または病理と関連していてもよい。あるいは、細胞表面リガンドは、疾患状態と必ずしも関連することなく、標的細胞（例えば、Ｂ細胞）の細胞型に特徴的であってもよい。
【0125】
細胞表面リガンドが疾患または疾患組織に特徴的である場合、それは、健康な対象に対して疾患を有する対象において、または健康な組織に対して疾患組織において、関連細胞上で専ら、またはより高レベルで見出され得る。細胞表面リガンドは、健康な対象に対して疾患を有する対象の細胞上で、または健康な組織に対して疾患組織において、少なくとも２倍、５倍、１０倍、１００倍、１０００倍、１０，０００倍または１００，０００倍高いレベルで発現され得る。
【0126】
腫瘍により分泌される因子
ＣＣＲによって認識されるリガンドは、腫瘍によって分泌されるか、または腫瘍から発散される可溶性リガンドであってもよい。
ＣＣＲによって認識されるリガンドは、腫瘍によって分泌されるか、または腫瘍から発散される可溶性リガンドであってもよい。
【0127】
この「腫瘍により分泌される因子」は、例えば、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）またはがん抗原－１２５（ＣＡ－１２５）であってもよい。
【0128】
腫瘍により分泌される因子は、サイトカインではない可溶性リガンドであってもよい。したがって、本発明のＣＣＲは、非サイトカインリガンドに対する結合特異性を、サイトカイン受容体の細胞内ドメイン上に移植する。
【0129】
前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）
可溶性リガンドは、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）であってもよい。
可溶性リガンドは、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）であってもよい。
【0130】
ガンマ－セミノタンパク質またはカリクレイン－３（ＫＬＫ３）としても公知である前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）は、ＫＬＫ３遺伝子によってヒトにおいてコードされる糖タンパク質酵素である。ＰＳＡは、カリクレイン関連ペプチダーゼファミリーのメンバーであり、前立腺の上皮細胞によって分泌される。
【0131】
ＰＳＡは、健康な前立腺を有する男性の血清中に少量で存在するが、前立腺がんおよび他の前立腺障害を有する個体においては上昇する。
【0132】
ＰＳＡは、２３７残基の糖タンパク質であり、ＫＬＫ２によって活性化される。その生理学的役割は、精子の放出をもたらす精液の凝固物成分の液化である。がんにおいては、ＰＳＡは新生物の増殖および転移のプロセスに関与し得る。
【0133】
ＰＳＡは、典型的なＨｉｓ－Ａｓｐ－Ｓｅｒトライアドおよび他のカリクレイン関連ペプチダーゼのものと類似する触媒ドメインを有するキモトリプシン様セリンプロテアーゼである。ＰＳＡの結晶構造は、ｉ）モノクローナル抗体（ｍＡｂ）８Ｇ８Ｆ５との複合体ならびにｉｉ）ｍＡｂ ５Ｄ５Ａ５および５Ｄ３Ｄ１１とのサンドイッチ複合体中で得られた（Stura et al (J. Mol. Biol. (2011) 414:530-544）。
【0134】
Bavat et al Avicenna J. Med. Biotechnol. 2015, 7:2-7およびLeinonen (2004) 289:157-67に記載されたクローン２Ｇ２－Ｂ２、２Ｄ８－Ｅ８、ＩｇＧ１／Ｋを含む、様々なモノクローナル抗体が公知である。
【0135】
本発明のＣＣＲは、例えば、８Ｇ８Ｆ５、５Ｄ５Ａ５または５Ｄ３Ｄ１１などのＰＳＡ結合ｍＡｂに由来する６個のＣＤＲまたはＶＨおよび／もしくはＶＬドメインを含んでもよい。
【0136】
ＣＣＲが、ＰＳＡ上の異なるエピトープに結合する、２つの抗原結合特異性を含む場合、１つは例えば、５Ｄ３Ｄ１１に基づいてもよく、１つは例えば、５Ｄ５Ａ５に基づいてもよい。
【0137】
５Ｄ３Ｄ１１および５Ｄ５Ａ５のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列は、配列番号２１、２３、２６および２７として上に示されている。
【0138】
癌胎児性抗原（ＣＥＡ）
可溶性リガンドは、ＣＥＡであってもよい。
可溶性リガンドは、ＣＥＡであってもよい。
【0139】
癌胎児性抗原（ＣＥＡ）は、細胞接着に関与する高度に関連する糖タンパク質のセットを記載する。ＣＥＡは通常、胎児発生中の消化管組織において産生されるが、誕生前に産生は停止する。したがって、ＣＥＡは通常、健康な成人の血液中にごく低レベルでのみ存在する。しかしながら、一部の型のがんにおいてはその血清レベルは上昇し、これは、それを臨床試験における腫瘍マーカーとして使用することができることを意味する。
【0140】
ＣＥＡは、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）細胞表面アンカー糖タンパク質であり、その特殊なシアロフコシル化された糖型は、機能的な結腸癌Ｌ－セレクチンおよびＥ－セレクチンリガンドとして働き、結腸癌細胞の転移性播種にとって重要であり得る。免疫学的には、それらは分化抗原群ＣＤ６６のメンバーとして特徴付けられている。
【0141】
ＣＥＡおよび関連遺伝子は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属するＣＥＡファミリーを構成する。ヒトにおいては、癌胎児性抗原ファミリーは、２９種の遺伝子からなり、そのうちの１８種は正常に発現される。以下は、癌胎児性抗原関連細胞接着タンパク質をコードするヒト遺伝子の一覧である：ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＥＡＣＡＭ３、ＣＥＡＣＡＭ４、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＥＡＣＡＭ７、ＣＥＡＣＡＭ８、ＣＥＡＣＡＭ１６、ＣＥＡＣＡＭ１８、ＣＥＡＣＡＭ１９、ＣＥＡＣＡＭ２０、ＣＥＡＣＡＭ２１
【0142】
ＣＥＡを標的とする様々な抗体がＷＯ２０１１／０３４６６０に記載されている。
【0143】
ＣＥＡに対するＣＣＲを発現する細胞は、例えば、結腸直腸がんの処置において有用であり得る。
【0144】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）
可溶性リガンドは、ＶＥＧＦであってもよい。
可溶性リガンドは、ＶＥＧＦであってもよい。
【0145】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、血管形成および血管新生を刺激する細胞によって産生されるシグナルタンパク質である。それは、血液循環が不十分である場合に組織への酸素供給を回復させる系の一部である。ＶＥＧＦの血清濃度は、気管支喘息および糖尿病において高い。ＶＥＧＦの正常な機能は、胚発生の間の新血管、傷害後の新血管、運動後の筋肉、および遮断された血管をバイパスするための新血管（副行循環）を作出することである。
【0146】
ＶＥＧＦが過剰発現される場合、それは疾患に寄与し得る。固形がんは、十分な血液供給なく限られたサイズを超えて増殖することができない；ＶＥＧＦを発現することができるがんは、増殖および転移することができる。
【0147】
ＶＥＧＦは、システイン－ノット増殖因子の血小板由来増殖因子ファミリーのサブファミリーである。それらは、血管形成（胚性循環系のｄｅ ｎｏｖｏでの形成）と、血管新生（元々存在する血管系からの血管の増殖）との両方に関与する重要なシグナル伝達タンパク質である。
【0148】
ＶＥＧＦファミリーは、哺乳動物においては、５つのメンバー：ＶＥＧＦ－Ａ、胎盤増殖因子（ＰＧＦ）、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－ＣおよびＶＥＧＦ－Ｄを含む。
【0149】
ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）およびラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ）などの、ＶＥＧＦに対する様々な抗体が公知である。
【0150】
がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）
ＣＡ－１２５は、卵巣がんと関連し、卵巣がん検出のための最も頻繁に使用されるバイオマーカーである。ＣＡ－１２５は卵巣がんのためのマーカーとして最も知られているが、それは子宮内膜がん、卵管がん、肺がん、乳がんおよび消化管がんを含む他のがんにおいても上昇することがある。
ＣＡ－１２５は、卵巣がんと関連し、卵巣がん検出のための最も頻繁に使用されるバイオマーカーである。ＣＡ－１２５は卵巣がんのためのマーカーとして最も知られているが、それは子宮内膜がん、卵管がん、肺がん、乳がんおよび消化管がんを含む他のがんにおいても上昇することがある。
【0151】
ヒトＣＡ－１２５（ムチン－１６としても公知である）の配列は、ＮＣＢＩ受託番号０７８９６６から入手可能である。
【0152】
ＯＣ１２５およびＭ１１を含む、いくつかのＣＡ１２５結合性モノクローナル抗体が公知である（Nustad et al 1996, Tumour Biol. 17:196-329）。この研究では、ＣＡ１２５抗原に対する２６種のモノクローナル抗体の特異性が調査された。ＣＡ１２５抗原は、ＯＣ１２５様（Ａ群）またはＭ１１様（Ｂ群）として抗体を分類する、ただ２つの主要な抗原性ドメインを担持することが見出された。
【0153】
本発明のキメラサイトカイン受容体は、そのような抗体に由来する抗原結合性ドメインを含んでもよい。そのようなＣＣＲを含む細胞は、例えば、卵巣がんの処置において有用であり得る。
【0154】
腫瘍により分泌される因子（または、膜結合型の場合、膜貫通タンパク質）は、以下の非網羅的な一覧から選択され得る：
【0155】
ＡＬＫ遺伝子再配置および過剰発現を与える突然変異型のＡＬＫタンパク質
アルファ－フェトタンパク質（ＡＦＰ）
ベータ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）
ベータ－ヒト絨毛ゴナドトロピン（ベータ－ｈＣＧ）
ＢＲＡＦ Ｖ６００突然変異を与える突然変異Ｂ－ＲＥＦタンパク質
Ｃ－ｋｉｔ／ＣＤ１１７
ＣＡ１５－３／ＣＡ２７．２９
ＣＡ１９－９
カルシトニン
ＣＤ２０
クロモグラニンＡ（ＣｇＡ）
サイトケラチン断片２１－１
ＥＧＦＲ遺伝子突然変異分析
エストロゲン受容体（ＥＲ）／プロゲステロン受容体（ＰＲ）
フィブリン／フィブリノゲン
ＨＥ４
ＨＥＲ２／ｎｅｕ遺伝子増幅またはタンパク質過剰発現
免疫グロブリン
ＫＲＡＳ遺伝子突然変異分析
乳酸デヒドロゲナーゼ
ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）
核マトリクスタンパク質２２
プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）
サイログロブリン
ウロキナーゼプラスミノゲンアクチベーター（ｕＰＡ）およびプラスミノゲンアクチベーター阻害因子（ＰＡＩ－１）
アルファ－フェトタンパク質（ＡＦＰ）
ベータ－２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）
ベータ－ヒト絨毛ゴナドトロピン（ベータ－ｈＣＧ）
ＢＲＡＦ Ｖ６００突然変異を与える突然変異Ｂ－ＲＥＦタンパク質
Ｃ－ｋｉｔ／ＣＤ１１７
ＣＡ１５－３／ＣＡ２７．２９
ＣＡ１９－９
カルシトニン
ＣＤ２０
クロモグラニンＡ（ＣｇＡ）
サイトケラチン断片２１－１
ＥＧＦＲ遺伝子突然変異分析
エストロゲン受容体（ＥＲ）／プロゲステロン受容体（ＰＲ）
フィブリン／フィブリノゲン
ＨＥ４
ＨＥＲ２／ｎｅｕ遺伝子増幅またはタンパク質過剰発現
免疫グロブリン
ＫＲＡＳ遺伝子突然変異分析
乳酸デヒドロゲナーゼ
ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）
核マトリクスタンパク質２２
プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）
サイログロブリン
ウロキナーゼプラスミノゲンアクチベーター（ｕＰＡ）およびプラスミノゲンアクチベーター阻害因子（ＰＡＩ－１）
【0156】
ケモカイン
ケモカインは、走化性サイトカインである。細胞遊走は、細胞外基質中に埋め込まれ、固定されたケモカイン勾配によって導かれる。ＣＸＣＬ１２のような正に荷電したケモカインは、負に荷電したＥＣＭ分子に結合する。これらの勾配は、がん細胞および免疫細胞帰巣のための通り道を提供する。Ｔ細胞に対する作用は、細胞傷害性Ｔ細胞の帰巣にとって阻害的であると考えられるが、調節性Ｔ細胞は誘引されると考えられる。
ケモカインは、走化性サイトカインである。細胞遊走は、細胞外基質中に埋め込まれ、固定されたケモカイン勾配によって導かれる。ＣＸＣＬ１２のような正に荷電したケモカインは、負に荷電したＥＣＭ分子に結合する。これらの勾配は、がん細胞および免疫細胞帰巣のための通り道を提供する。Ｔ細胞に対する作用は、細胞傷害性Ｔ細胞の帰巣にとって阻害的であると考えられるが、調節性Ｔ細胞は誘引されると考えられる。
【0157】
ケモカインは、質量およそ８～１０キロダルトンであり、その３次元形状を形成するための鍵である保存された位置に４個のシステイン残基を有する。
【0158】
一部のケモカインは、炎症促進性であると考えられ、免疫系の細胞を感染部位に動員するための免疫応答中に誘導され得るが、他のものは恒常的であると考えられ、組織維持または発達の正常なプロセスの間に細胞の遊走を制御するのに関与している。
【0159】
ケモカインは、４つの主なサブファミリー：ＣＸＣ、ＣＣ、ＣＸ３ＣおよびＸＣに分類されている。これらのタンパク質は全て、その標的細胞の表面上に選択的に見出されるケモカイン受容体と呼ばれるＧタンパク質結合膜貫通受容体と相互作用することによってその生物学的効果を発揮する。
【0160】
ケモカインの主な役割は、細胞の遊走を導く化学誘引物質として作用することである。ケモカインによって誘引される細胞は、ケモカインの供給源に向かう増大するケモカイン濃度のシグナルを辿る。一部のケモカインは、リンパ球をリンパ節に方向付けることなど、免疫監視のプロセス中に免疫系の細胞を制御し、それらがこれらの組織中に存在する抗原提示細胞と相互作用することによって病原体の侵入についてスクリーニングすることができるようにする。他のケモカインは炎症性であり、細菌感染、ウイルスおよび他の薬剤に応答して様々な細胞から放出される。それらの放出は、インターロイキン１などの炎症性サイトカインによって刺激されることが多い。炎症性ケモカインは、白血球のための化学誘引物質として主に機能し、単球、好中球および他のエフェクター細胞を、血液から、感染部位または組織損傷の部位に動員する。ある特定の炎症性ケモカインは、細胞を活性化して、免疫応答を開始させるか、または創傷治癒を促進する。それらは多くの異なる細胞型によって放出され、自然免疫系と適応免疫系との両方の細胞を導くように働く。
【0161】
ＣＣケモカイン
ＣＣケモカイン（またはβ－ケモカイン）タンパク質は、そのアミノ末端の近くに、２個の隣接するシステイン（アミノ酸）を有する。ＣＣケモカインリガンド（ＣＣＬ）－１～－２８と呼ばれる、哺乳動物について報告されたこのサブグループの少なくとも２７種の異なるメンバーがあった；ＣＣＬ１０は、ＣＣＬ９と同じである。このサブファミリーのケモカインは通常、４個のシステイン（Ｃ４－ＣＣケモカイン）を含有するが、少数のＣＣケモカインは、６個のシステインを有する（Ｃ６－ＣＣケモカイン）。Ｃ６－ＣＣケモカインは、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２３およびＣＣＬ２８を含む。ＣＣケモカインは、単球ならびにＮＫ細胞および樹状細胞などの他の細胞型の遊走を誘導する。
ＣＣケモカイン（またはβ－ケモカイン）タンパク質は、そのアミノ末端の近くに、２個の隣接するシステイン（アミノ酸）を有する。ＣＣケモカインリガンド（ＣＣＬ）－１～－２８と呼ばれる、哺乳動物について報告されたこのサブグループの少なくとも２７種の異なるメンバーがあった；ＣＣＬ１０は、ＣＣＬ９と同じである。このサブファミリーのケモカインは通常、４個のシステイン（Ｃ４－ＣＣケモカイン）を含有するが、少数のＣＣケモカインは、６個のシステインを有する（Ｃ６－ＣＣケモカイン）。Ｃ６－ＣＣケモカインは、ＣＣＬ１、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２３およびＣＣＬ２８を含む。ＣＣケモカインは、単球ならびにＮＫ細胞および樹状細胞などの他の細胞型の遊走を誘導する。
【0162】
ＣＣケモカインの例としては、単球が血流を出て、周囲の組織に進入して、組織マクロファージになるのを誘導する、単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１またはＣＣＬ２）が挙げられる。
【0163】
ＣＣＬ５（またはＲＡＮＴＥＳ）は、受容体ＣＣＲ５を発現するＴ細胞、好酸球および好塩基球などの細胞を誘引する。
【0164】
ＣＸＣケモカイン
ＣＸＣケモカイン（またはα－ケモカイン）の２個のＮ末端システインは、この名称において「Ｘ」を用いて表される、１個のアミノ酸によって隔てられている。哺乳動物において記載された１７種の異なるＣＸＣケモカインが存在し、ＣＸＣモチーフの最初のシステインの直前にグルタミン酸－ロイシン－アルギニン（または略してＥＬＲ）の特定のアミノ酸配列（またはモチーフ）を有するもの（ＥＬＲ陽性）と、ＥＬＲモチーフを有しないもの（ＥＬＲ陰性）との２つのカテゴリーに細分される。ＥＬＲ陽性ＣＸＣケモカインは、好中球の遊走を特異的に誘導し、ケモカイン受容体ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２と相互作用する。
ＣＸＣケモカイン（またはα－ケモカイン）の２個のＮ末端システインは、この名称において「Ｘ」を用いて表される、１個のアミノ酸によって隔てられている。哺乳動物において記載された１７種の異なるＣＸＣケモカインが存在し、ＣＸＣモチーフの最初のシステインの直前にグルタミン酸－ロイシン－アルギニン（または略してＥＬＲ）の特定のアミノ酸配列（またはモチーフ）を有するもの（ＥＬＲ陽性）と、ＥＬＲモチーフを有しないもの（ＥＬＲ陰性）との２つのカテゴリーに細分される。ＥＬＲ陽性ＣＸＣケモカインは、好中球の遊走を特異的に誘導し、ケモカイン受容体ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２と相互作用する。
【0165】
Ｃケモカイン
ケモカインの第３の群は、Ｃケモカイン（またはγケモカイン）として公知であり、それがわずか２個のシステイン；１個のＮ末端システインおよび下流の１個のシステインを有する点で他の全てのケモカインと異なる。２個のケモカインは、このサブグループについて記載されており、ＸＣＬ１（リンホタクチン－α）およびＸＣＬ２（リンホタクチン－β）と呼ばれる。
ケモカインの第３の群は、Ｃケモカイン（またはγケモカイン）として公知であり、それがわずか２個のシステイン；１個のＮ末端システインおよび下流の１個のシステインを有する点で他の全てのケモカインと異なる。２個のケモカインは、このサブグループについて記載されており、ＸＣＬ１（リンホタクチン－α）およびＸＣＬ２（リンホタクチン－β）と呼ばれる。
【0166】
ＣＸ３Ｃケモカイン
ＣＸ３Ｃケモカインは、２個のシステインの間に３個のアミノ酸を有する。現在のところ発見された唯一のＣＸ３Ｃケモカインは、フラクタルキン（またはＣＸ３ＣＬ１）と呼ばれる。それは、いずれもそれを発現する細胞の表面に分泌および係留され、それによって、化学誘引物質および接着分子としての両方として働く。
ＣＸ３Ｃケモカインは、２個のシステインの間に３個のアミノ酸を有する。現在のところ発見された唯一のＣＸ３Ｃケモカインは、フラクタルキン（またはＣＸ３ＣＬ１）と呼ばれる。それは、いずれもそれを発現する細胞の表面に分泌および係留され、それによって、化学誘引物質および接着分子としての両方として働く。
【0167】
ケモカイン受容体は、白血球の表面上に見出される７回膜貫通ドメインを含有するＧタンパク質共役受容体である。現在までおよそ１９種の異なるケモカイン受容体が特徴付けられており、それらが結合するケモカインの型に応じて４つのファミリー；ＣＸＣケモカインに結合するＣＸＣＲ、ＣＣケモカインに結合するＣＣＲ、唯一のＣＸ３Ｃケモカイン（ＣＸ３ＣＬ１）に結合するＣＸ３ＣＲ１、および２種のＸＣケモカイン（ＸＣＬ１およびＸＣＬ２）に結合するＸＣＲ１に分割される。それらは多くの構造的特徴を共有する；それらは、サイズ（約３５０アミノ酸を有する）において類似しており、短い酸性のＮ末端、３個の細胞内および３個の細胞外親水性ループを有する、７個のらせん状膜貫通ドメイン、ならびに受容体調節にとって重要なセリンおよびトレオニン残基を含有する細胞内Ｃ末端を有する。ケモカイン受容体の最初の２個の細胞外ループはそれぞれ、これらのループの間でのジスルフィド架橋の形成を可能にする保存されたシステイン残基を有する。Ｇタンパク質は、ケモカイン受容体のＣ末端と共役して、受容体活性化後の細胞内シグナル伝達を可能にするが、ケモカイン受容体のＮ末端ドメインは、リガンド結合特異性を決定する。
【0168】
ＣＸＣＬ１２
ＣＸＣＬ１２は、リンパ球に対して強く走化性である。ＣＸＣＬ１２は、ＣＸＣＲ４依存的機構を介して骨髄から内皮前駆細胞（ＥＰＣ）を動員することによって血管新生において重要な役割を果たす。発癌および腫瘍進行と関連する新血管形成における非常に重要な因子にすることがＣＸＣＬ１２のこの機能である。ＣＸＣＬ１２はまた、受容体ＣＸＣＲ４を発現するがん細胞がリガンドＣＸＣＬ１２を放出する転移標的組織に誘引される腫瘍転移における役割も有する。
ＣＸＣＬ１２は、リンパ球に対して強く走化性である。ＣＸＣＬ１２は、ＣＸＣＲ４依存的機構を介して骨髄から内皮前駆細胞（ＥＰＣ）を動員することによって血管新生において重要な役割を果たす。発癌および腫瘍進行と関連する新血管形成における非常に重要な因子にすることがＣＸＣＬ１２のこの機能である。ＣＸＣＬ１２はまた、受容体ＣＸＣＲ４を発現するがん細胞がリガンドＣＸＣＬ１２を放出する転移標的組織に誘引される腫瘍転移における役割も有する。
【0169】
ＣＸＣＬ１２の受容体は、ＣＸＣＲ４である。本発明のＣＣＲは、ＩＬ－２受容体などのサイトカイン受容体に由来する細胞内ドメインに連結されたＣＸＣＲ４に由来するＣＸＣＬ１２結合性ドメインを含んでもよい。
【0170】
ＩＬ２のＣＸＣＲ４共役発現は、がん療法のための治療的Ｔ細胞の生着を支援する。多発性骨髄腫では、そのようなＣＣＲを発現する細胞は、細胞を移動させ、骨髄環境を変化させ得る。そのような細胞はまた、固形腫瘍微小環境を改変することによって固形がんの処置において有用である。
【0171】
ＣＸＣＲ７もまた、ＣＸＣＬ１２に結合する。
【0172】
ＣＣＬ２
ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２）はまた、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）および低分子誘導性サイトカインＡ２とも称される。ＣＣＬ２は、単球、記憶Ｔ細胞、および樹状細胞を、組織傷害または感染のいずれかによって作られる炎症部位に動員する。
ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２）はまた、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）および低分子誘導性サイトカインＡ２とも称される。ＣＣＬ２は、単球、記憶Ｔ細胞、および樹状細胞を、組織傷害または感染のいずれかによって作られる炎症部位に動員する。
【0173】
ＣＣＲ２およびＣＣＲ４は、ＣＣＬ２に結合する２つの細胞表面受容体である。
【0174】
本発明のＣＣＲは、そのリガンド結合性ドメイン中にＣＣＲ２またはＣＣＲ４のＣＣＬ２結合部位を含んでもよい。
【0175】
細胞表面抗原
リガンドは、膜貫通タンパク質などの細胞表面抗原であってもよい。
リガンドは、膜貫通タンパク質などの細胞表面抗原であってもよい。
【0176】
細胞表面抗原は、ＣＤ２２であってもよい。
【0177】
ＣＤ２２、または分化抗原群－２２は、レクチンのＳＩＧＬＥＣファミリーに属する分子である。それは成熟Ｂ細胞の表面上に見出され、比較的程度は低いが一部の未熟Ｂ細胞上にも見出される。一般的に言えば、ＣＤ２２は、免疫系の過剰活性化および自己免疫疾患の発症を防止する調節分子である。
【0178】
ＣＤ２２は、シアル酸に特異的に結合する糖結合性膜貫通タンパク質であり、そのＮ末端に免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインが位置する。Ｉｇドメインの存在は、ＣＤ２２を、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーにする。ＣＤ２２は、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）シグナル伝達のための阻害的受容体として機能する。
【0179】
ＣＤ２２の発現の増加は、非ホジキンリンパ腫および他のリンパ腫において見られる。エプラツズマブ、イノツズマブオゾガマイシン、ｍ９７１およびｍ９７２を含む、ＣＤ２２を標的とする種々のモノクローナル抗体が公知である。
【0180】
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本発明の細胞はまた、１つまたは複数のキメラ抗原受容体を含んでもよい。ＣＡＲは、腫瘍関連抗原に特異的であってよい。あるいは、ＣＡＲは、それが病原性Ｂ細胞によって産生される自己抗体に結合するような、自己抗原、またはその一部を、その細胞外ドメイン中に含んでもよい。
本発明の細胞はまた、１つまたは複数のキメラ抗原受容体を含んでもよい。ＣＡＲは、腫瘍関連抗原に特異的であってよい。あるいは、ＣＡＲは、それが病原性Ｂ細胞によって産生される自己抗体に結合するような、自己抗原、またはその一部を、その細胞外ドメイン中に含んでもよい。
【0181】
古典的なＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメイン（結合剤）を細胞内シグナル伝達ドメイン（細胞内ドメイン）に接続するキメラＩ型膜貫通タンパク質である。結合剤は、典型的には、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）に由来する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であるが、それは抗体のような、またはリガンドに基づく抗原結合部位を含む他の形式に基づくものであってよい。膜貫通ドメインは、細胞膜中にタンパク質を固定し、細胞内ドメインにスペーサーを接続する。
【0182】
初期のＣＡＲ設計は、ＦｃεＲ１またはＣＤ３ζのいずれかのγ鎖の細胞内部分に由来する細胞内ドメインを有していた。結果として、これらの第１世代の受容体は免疫学的シグナル１を伝達し、これは同族標的細胞のＴ細胞死滅を誘発するのに十分なものであったが、増殖および生存するようにＴ細胞を完全に活性化することはできなかった。この制限を克服するために、複合細胞内ドメインを構築した：Ｔ細胞共刺激分子の細胞内部分と、ＣＤ３ζのものとの融合物は、抗原認識後に同時的に活性化および共刺激シグナルを伝達することができる第２世代の受容体をもたらす。最も一般的に使用される共刺激ドメインは、ＣＤ２８のものである。これは、最も強力な共刺激シグナル、すなわち、Ｔ細胞増殖を誘発する免疫学的シグナル２を供給する。生存シグナルを伝達する、密接に関連するＯＸ４０および４１ＢＢなどの、ＴＮＦ受容体ファミリー細胞内ドメインを含む、一部の受容体も記載されている。活性化、増殖および生存シグナルを伝達することができる細胞内ドメインを有する、さらにより強力な第３世代のＣＡＲがここで記載されている。
【0183】
ＣＡＲをコードする核酸を、例えば、レトロウイルスベクターを使用してＴ細胞に移行させることできる。このように、多数の抗原特異的Ｔ細胞を、養子細胞移入のために生成することができる。ＣＡＲが標的抗原に結合する場合、これは、活性化シグナルの、それが発現されるＴ細胞への伝達をもたらす。かくして、ＣＡＲは、Ｔ細胞の特異性および細胞傷害性を、標的抗原を発現する細胞に対して方向付ける。
【0184】
本発明の細胞は、１つまたは複数のＣＡＲを含んでもよい。
【0185】
ＣＡＲは、抗原結合性ドメイン、スペーサードメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含んでもよい。細胞内ドメインは、Ｔ細胞活性化シグナルを伝達するドメインを含むか、またはそれと会合してもよい。
【0186】
ＣＡＲ抗原結合性ドメイン
抗原結合性ドメインは、抗原を認識するＣＡＲの部分である。
抗原結合性ドメインは、抗原を認識するＣＡＲの部分である。
【0187】
いくつかの抗原結合性ドメインが当業界で公知であり、抗体、抗体模倣物質、およびＴ細胞受容体の抗原結合部位に基づくものを含む。例えば、抗原結合性ドメインは、モノクローナル抗体に由来する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）；標的抗原の天然のリガンド；標的に対する十分な親和性を有するペプチド；ラクダ科などの単一ドメイン結合剤；Ｄａｒｐｉｎとしての単一の人工結合剤；またはＴ細胞受容体に由来する単鎖を含んでもよい。
【0188】
細胞表面抗原
ＣＡＲは、細胞表面抗原、すなわち、腫瘍細胞などの標的細胞の表面上で発現される膜貫通タンパク質などの実体を認識してもよい。
ＣＡＲは、細胞表面抗原、すなわち、腫瘍細胞などの標的細胞の表面上で発現される膜貫通タンパク質などの実体を認識してもよい。
【0189】
ＣＡＲは、腫瘍関連細胞表面抗原に特異的に結合することができる。
【0190】
種々の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）が公知であり、その一部は表２に示される。本発明において使用される抗原結合性ドメインは、そこに示されるようなＴＡＡに結合することができるドメインであってもよい。
【表2】
【0191】
ＣＡＲがＢ細胞リンパ腫または白血病抗原（ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５２、ＣＤ１６０またはＣＤ５など）を認識する場合、ＣＣＲは、ＣＤ２２などの別のＢ細胞抗原を認識してもよい。
【0192】
前立腺がん関連抗原
ＣＡＲは、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）または前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）などの、前立腺がんと関連する細胞表面抗原に特異的に結合してもよい。
ＣＡＲは、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）または前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）などの、前立腺がんと関連する細胞表面抗原に特異的に結合してもよい。
【0193】
ＰＳＣＡは、グリコシルホスファチジルイノシトールアンカー細胞膜糖タンパク質である。それは、前立腺がんの大部分において上方調節され、膀胱および膵臓のがんにおいても検出される。
【0194】
７Ｆ５（Morgenroth et al (Prostate (2007) 67:1121-1131）；１Ｇ８（Hillerdal et al (2014) BMC Cancer 14:30）；およびＨａ１－４．１１７（Abate-Daga et al (2014) 25:1003-1012）などの、様々な抗ＰＳＣＡ抗体が公知である。
【0195】
本発明のＣＣＲ発現細胞はまた、これらの抗体の１つに基づく抗原結合性ドメインを含んでもよい抗ＰＳＣＡ ＣＡＲを発現してもよい。
【0196】
ＰＳＭＡは、膜に存在する亜鉛金属酵素である。ＰＳＭＡは、ヒト前立腺において強力に発現され、多くの他の組織における発現よりも１００倍多い。がんにおいては、その発現は上方調節され、前立腺がんにおいては２番目に最も上方調節される遺伝子と呼ばれており、非がん性前立腺と比較して８～１２倍増加する。ヒト前立腺および前立腺がんにおける発現に加えて、ＰＳＭＡは、例えば腎臓、乳房、結腸などのあらゆる型の固形腫瘍の正常な血管系ではなく、腫瘍新血管において高度に発現されることもわかっている。
【0197】
７Ｅ１１、Ｊ５９１、Ｊ４１５、およびＨｙｂｒｉｔｅｃｈ ＰＥＱ２２６．５およびＰＭ２Ｊ００４．５などの様々な抗ＰＳＭＡ抗体が公知であり、それぞれＰＳＭＡの異なるエピトープに結合する（Chang et al (1999) Cancer Res 15:3192-8）。
【0198】
本発明のＣＣＲ発現細胞はまた、これらの抗体の１つに基づく抗原結合性ドメインを含んでもよい抗ＰＳＭＡ ＣＡＲを発現してもよい。
【0199】
例えば、ＣＣＲは、配列番号３５として示される配列を有する、Ｊ５９１に基づくｓｃＦｖを含んでもよい。
【化15】
【0200】
自己抗体受容体
自己免疫疾患は、機能する身体部分に対する異常な免疫応答から生じる状態である。自己免疫は、それから生じる損傷または病状を有する、または有しない、自己反応性免疫応答（例えば、自己抗体、自己反応性Ｔ細胞）の存在である。自己抗体は、多くの自己免疫障害の特質である。
自己免疫疾患は、機能する身体部分に対する異常な免疫応答から生じる状態である。自己免疫は、それから生じる損傷または病状を有する、または有しない、自己反応性免疫応答（例えば、自己抗体、自己反応性Ｔ細胞）の存在である。自己抗体は、多くの自己免疫障害の特質である。
【0201】
ＣＡＲに基づく手法を使用して、異常な、または望ましくない免疫応答と関連する、自己免疫疾患および他の障害を処置することができる。自己免疫疾患と関連する病原性Ｂ細胞を同定し、死滅させるために、ＣＡＲ細胞外ドメインは、１つまたは複数の自己抗体に結合してもよい。細胞外ドメインは、例えば、抗イディオタイプ抗体などの自己抗体結合実体を含んでもよいか、またはそれは単に自己抗原自体、またはその一部を含んでもよい。
【0202】
自己免疫障害としては、セリアック病、１型糖尿病、グレーブス病、炎症性腸疾患、多発性硬化症（ＭＳ）、円形脱毛症、アジソン病、悪性貧血、乾癬、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、粘膜尋常性天疱瘡（ｍＰＶ）、皮膚粘膜尋常性天疱瘡（ｍｃＰＶ）、膜性腎症（ＭＮ）および重症筋無力症（ＭＧ）が挙げられる。
【0203】
ＣＡＲの細胞外ドメインは、自己抗原の全部または一部、例えば、細胞接着タンパク質デスモグレイン３（ＤＳＧ３）またはＤＳＧ１；筋肉特異的受容体チロシンキナーゼ（ＭｕＳＫ）；アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）；ホスホリパーゼ（Phosphlipase）Ａ２受容体（ＰＬＡ２Ｒ）またはアクアポリン－４（ＡＱＰ４）を含有してもよい。
【0204】
他の望ましくない免疫応答としては、アレルギー、宿主対移植片応答および第ＶＩＩＩ因子に対する抗体を生じる血友病Ａ患者などの、療法に対する免疫応答が挙げられる。この後者の例では、その細胞外ドメインとしてＦＶＩＩＩの一部または全部を含むＣＡＲの使用は、ＦＶＩＩＩ凝固因子を中和する抗体およびＢ細胞を破壊し得る。
【0205】
ＣＡＲ膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインは、膜に広がるＣＡＲの配列である。それは疎水性アルファヘリックスを含んでもよい。ＣＡＲ膜貫通ドメインは、ＣＤ２８に由来してもよく、良好な受容体安定性を与える。
膜貫通ドメインは、膜に広がるＣＡＲの配列である。それは疎水性アルファヘリックスを含んでもよい。ＣＡＲ膜貫通ドメインは、ＣＤ２８に由来してもよく、良好な受容体安定性を与える。
【0206】
ＣＡＲシグナルペプチド
本明細書に記載のＣＡＲおよびＣＣＲは、それがＴ細胞などの細胞中で発現される場合、新生タンパク質が、小胞体、および次いで、細胞表面に方向付けられ、そこでそれが発現されるようなシグナルペプチドを含んでもよい。
本明細書に記載のＣＡＲおよびＣＣＲは、それがＴ細胞などの細胞中で発現される場合、新生タンパク質が、小胞体、および次いで、細胞表面に方向付けられ、そこでそれが発現されるようなシグナルペプチドを含んでもよい。
【0207】
シグナルペプチドのコアは、単一のアルファヘリックスを形成する傾向を有する疎水性アミノ酸の長い伸長物を含有してもよい。シグナルペプチドは、転位の間にポリペプチドの適切なトポロジーを強化するのを助ける、アミノ酸の短い正に荷電した伸長物から始まってもよい。シグナルペプチドの終わりに、典型的には、シグナルペプチダーゼによって認識および切断されるアミノ酸の伸長物が存在する。シグナルペプチダーゼは、転位の完了の間または後のいずれかで切断して、遊離シグナルペプチドおよび成熟タンパク質を生成することができる。次いで、遊離シグナルペプチドは、特定のプロテアーゼによって消化される。
【0208】
シグナルペプチドは、分子のアミノ末端にあってもよい。
【0209】
シグナルペプチドは、上に配列番号５または１１として示された配列を含んでもよい。
【0210】
ＣＡＲ細胞内ドメイン
細胞内ドメインは、ＣＡＲのシグナル伝達部分である。それはＣＡＲの細胞内ドメインの一部であるか、またはそれと会合してもよい。抗原認識後、受容体クラスター、天然のＣＤ４５およびＣＤ１４８は、シナプスから排除され、シグナルは細胞に伝達される。最も一般的に使用される細胞内ドメイン成分は、３つのＩＴＡＭを含有するＣＤ３－ゼータのものである。これは、抗原が結合した後、Ｔ細胞に活性化シグナルを伝達する。ＣＤ３－ゼータは、完全に能力のある活性化シグナルを提供することができず、さらなる共刺激シグナル伝達が必要とされ得る。共刺激シグナルは、Ｔ細胞の増殖および生存を促進する。２つの主な型の共刺激シグナル：Ｉｇファミリー（ＣＤ２８、ＩＣＯＳ）およびＴＮＦファミリー（ＯＸ４０、４１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲなど）に属するものが存在する。例えば、キメラＣＤ２８およびＯＸ４０を、ＣＤ３－ゼータと共に使用して、増殖／生存シグナルを伝達することができるか、または３つ全部を一緒に使用することができる。
細胞内ドメインは、ＣＡＲのシグナル伝達部分である。それはＣＡＲの細胞内ドメインの一部であるか、またはそれと会合してもよい。抗原認識後、受容体クラスター、天然のＣＤ４５およびＣＤ１４８は、シナプスから排除され、シグナルは細胞に伝達される。最も一般的に使用される細胞内ドメイン成分は、３つのＩＴＡＭを含有するＣＤ３－ゼータのものである。これは、抗原が結合した後、Ｔ細胞に活性化シグナルを伝達する。ＣＤ３－ゼータは、完全に能力のある活性化シグナルを提供することができず、さらなる共刺激シグナル伝達が必要とされ得る。共刺激シグナルは、Ｔ細胞の増殖および生存を促進する。２つの主な型の共刺激シグナル：Ｉｇファミリー（ＣＤ２８、ＩＣＯＳ）およびＴＮＦファミリー（ＯＸ４０、４１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲなど）に属するものが存在する。例えば、キメラＣＤ２８およびＯＸ４０を、ＣＤ３－ゼータと共に使用して、増殖／生存シグナルを伝達することができるか、または３つ全部を一緒に使用することができる。
【0211】
細胞内ドメインは、
（ｉ）ＣＤ３ゼータに由来する細胞内ドメインなどの、ＩＴＡＭ含有細胞内ドメイン；および／または
（ｉｉ）ＣＤ２８もしくはＩＣＯＳに由来する細胞内ドメインなどの、共刺激ドメイン；および／または
（ｉｉｉ）生存シグナルを伝達するドメイン、例えば、ＯＸ－４０、４－１ＢＢ、ＣＤ２７もしくはＧＩＴＲなどのＴＮＦ受容体ファミリー細胞内ドメイン
を含んでもよい。
（ｉ）ＣＤ３ゼータに由来する細胞内ドメインなどの、ＩＴＡＭ含有細胞内ドメイン；および／または
（ｉｉ）ＣＤ２８もしくはＩＣＯＳに由来する細胞内ドメインなどの、共刺激ドメイン；および／または
（ｉｉｉ）生存シグナルを伝達するドメイン、例えば、ＯＸ－４０、４－１ＢＢ、ＣＤ２７もしくはＧＩＴＲなどのＴＮＦ受容体ファミリー細胞内ドメイン
を含んでもよい。
【0212】
ＷＯ２０１５／１５０７７１；ＷＯ２０１６／１２４９３０およびＷＯ２０１６／０３０６９１に記載されたものなどの、抗原認識部分がシグナル伝達部分に由来する別々の分子上にある、いくつかの系が記載されている。本発明のＣＡＲはしたがって、シグナル伝達ドメインを含む別々の細胞内シグナル伝達成分と相互作用することができる、抗原結合性ドメインおよび膜貫通ドメインを含む抗原結合成分を含んでもよい。本発明のベクターは、そのような抗原結合性成分および細胞内シグナル伝達成分を含むＣＡＲシグナル伝達系を発現してもよい。
【0213】
核酸配列／構築物
本発明はまた、本発明のＣＣＲをコードする核酸配列および核酸構築物を提供する。
本発明はまた、本発明のＣＣＲをコードする核酸配列および核酸構築物を提供する。
【0214】
本発明は、図１Ａに概略的に示されるキメラサイトカイン受容体を生産するための核酸配列を提供する。上で説明された通り、組換え手段によってこのＣＣＲの２つの鎖のうちの一方をコードすることだけが必要であるが、これは、それが細胞内で相補的内因性鎖と会合するであろうためである。核酸配列は、ＩＬ－１８分子に係留されたインターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）またはインターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）を含むポリペプチドをコードし、以下の一般構造：
ＩＬ１８－Ｌ－ＩＬ１８Ｒ１ｅｃｔｏ－ＴＭ－ＩＬ１８Ｒ１ｅｎｄｏまたは
ＩＬ１８－Ｌ－ＩＬ１８ＲＡＰｅｃｔｏ－ＴＭ－ＩＬ１８ＲＡＰｅｎｄｏ
（ここで、
ＩＬ１８は、トランケートされた、または非機能的なシグナルペプチドと共にＩＬ１８分子をコードする核酸配列であり、
Ｌは、可撓性リンカーをコードする核酸配列であり、
ＩＬ１８Ｒ１ｅｃｔｏは、インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞外ドメインをコードする核酸配列であり、
ＴＭは、膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり、
ＩＬ１８Ｒ１ｅｎｄｏは、ＩＬ１８Ｒ１細胞内ドメインをコードする核酸配列であり、
ＩＬ１８ＲＡＰｅｃｔｏは、インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）の細胞外ドメインをコードする核酸配列であり、
ＩＬ１８ＲＡＰｅｎｄｏは、ＩＬ１８ＲＡＰの細胞内ドメインをコードする核酸配列である）
を有してもよい。
ＩＬ１８－Ｌ－ＩＬ１８Ｒ１ｅｃｔｏ－ＴＭ－ＩＬ１８Ｒ１ｅｎｄｏまたは
ＩＬ１８－Ｌ－ＩＬ１８ＲＡＰｅｃｔｏ－ＴＭ－ＩＬ１８ＲＡＰｅｎｄｏ
（ここで、
ＩＬ１８は、トランケートされた、または非機能的なシグナルペプチドと共にＩＬ１８分子をコードする核酸配列であり、
Ｌは、可撓性リンカーをコードする核酸配列であり、
ＩＬ１８Ｒ１ｅｃｔｏは、インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞外ドメインをコードする核酸配列であり、
ＴＭは、膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり、
ＩＬ１８Ｒ１ｅｎｄｏは、ＩＬ１８Ｒ１細胞内ドメインをコードする核酸配列であり、
ＩＬ１８ＲＡＰｅｃｔｏは、インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）の細胞外ドメインをコードする核酸配列であり、
ＩＬ１８ＲＡＰｅｎｄｏは、ＩＬ１８ＲＡＰの細胞内ドメインをコードする核酸配列である）
を有してもよい。
【0215】
本発明の核酸構築物は、第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列、および第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列を含んでもよい。
【0216】
核酸構築物は、以下の構造：
ｅｃｔｏ１－スペーサー１－ＴＭ１－ＩＬ１８Ｒ１ｅｎｄｏ－ｃｏｅｘｐｒ－ｅｃｔｏ２－スペーサー２－ＴＭ２－ＩＬ１８ＲＡＰｅｎｄｏ、または
ｅｃｔｏ１－スペーサー１－ＴＭ１－ＩＬ１８ＲＡＰｅｎｄｏ－ｃｏｅｘｐｒ－ｅｃｔｏ２－スペーサー２－ＴＭ２－ＩＬ１８Ｒ１ｅｎｄｏ
（ここで、
ｅｃｔｏ１は、第１のポリペプチドの細胞外ドメインをコードする核酸配列であり、
スペーサー１は、第１のポリペプチドのスペーサーをコードする核酸配列であり、
ＴＭ１は、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり、
ＩＬ１８Ｒ１ｅｎｄｏは、インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメインをコードする核酸配列であり、
ｃｏｅｘｐｒは、別の実体として両方のポリペプチドの同時発現を可能にする核酸配列であり、
ｅｃｔｏ２は、第２のポリペプチドの細胞外ドメインをコードする核酸配列であり、
スペーサー２は、第２のポリペプチドのスペーサーをコードする核酸配列であり、
ＴＭ２は、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり、
ＩＬ１８ＲＡＰｅｎｄｏは、インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）の細胞内ドメインをコードする核酸配列である）
を有してもよい。
ｅｃｔｏ１－スペーサー１－ＴＭ１－ＩＬ１８Ｒ１ｅｎｄｏ－ｃｏｅｘｐｒ－ｅｃｔｏ２－スペーサー２－ＴＭ２－ＩＬ１８ＲＡＰｅｎｄｏ、または
ｅｃｔｏ１－スペーサー１－ＴＭ１－ＩＬ１８ＲＡＰｅｎｄｏ－ｃｏｅｘｐｒ－ｅｃｔｏ２－スペーサー２－ＴＭ２－ＩＬ１８Ｒ１ｅｎｄｏ
（ここで、
ｅｃｔｏ１は、第１のポリペプチドの細胞外ドメインをコードする核酸配列であり、
スペーサー１は、第１のポリペプチドのスペーサーをコードする核酸配列であり、
ＴＭ１は、第１のポリペプチドの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり、
ＩＬ１８Ｒ１ｅｎｄｏは、インターロイキン－１８受容体１（ＩＬ１８Ｒ１）細胞内ドメインをコードする核酸配列であり、
ｃｏｅｘｐｒは、別の実体として両方のポリペプチドの同時発現を可能にする核酸配列であり、
ｅｃｔｏ２は、第２のポリペプチドの細胞外ドメインをコードする核酸配列であり、
スペーサー２は、第２のポリペプチドのスペーサーをコードする核酸配列であり、
ＴＭ２は、第２のポリペプチドの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり、
ＩＬ１８ＲＡＰｅｎｄｏは、インターロイキン－１８受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ１８ＲＡＰ）の細胞内ドメインをコードする核酸配列である）
を有してもよい。
【0217】
第１および第２のポリペプチドの細胞外ドメインは、自発的に二量体化して、構成的に活性なＣＣＲを産生することができてもよい。ｅｎｄｏ１およびｅｎｄｏ２は、例えば、いずれかの順序の重鎖定常ドメイン（ＨＣ）および軽鎖定常ドメイン（ＬＣ）；またはロイシンジッパーなどの、コイルドコイル構造を形成することができる２つのドメインをコードしてもよい。
【0218】
核酸構築物がＴ細胞などの細胞中で発現される場合、それは第１および第２のポリペプチドが細胞表面で同時発現されるような切断部位で切断されるポリペプチドをコードする。
【0219】
本発明はまた、本発明の第１および第２のポリペプチドならびにＣＡＲをコードする核酸構築物を提供する。そのような構築物は、構造：
（ｉ）ＣＣＲｅｃｔｏ１－ＣＣＲスペーサー１－ＣＣＲＴＭ１－ＣＣＲｅｎｄｏ１－ｃｏｅｘｐｒ１－ＣＣＲｅｃｔｏ２－ＣＣＲスペーサー２－ＣＣＲＴＭ２－ＣＣＲｅｎｄｏ２－ｃｏｅｘｐｒ２－ＣＡＲＡｇＢ－ＣＡＲスペーサー－ＣＡＲＴＭ－ＣＡＲｅｎｄｏ；
（ｉｉ）ＣＣＲｅｃｔｏ１－ＣＣＲスペーサー１－ＣＣＲＴＭ１－ＣＣＲｅｎｄｏ１－ｃｏｅｘｐｒ１－ＣＡＲＡｇＢ－ＣＡＲスペーサー－ＣＡＲＴＭ－ＣＡＲｅｎｄｏ－ｃｏｅｘｐｒ２－ＣＣＲｅｃｔｏ２－ＣＣＲスペーサー２－ＣＣＲＴＭ２－ＣＣＲｅｎｄｏ２；または
（ｉｉｉ）ＣＡＲＡｇＢ－ＣＡＲスペーサー－ＣＡＲＴＭ－ＣＡＲｅｎｄｏ－ｃｏｅｘｐｒ１－ＣＣＲｅｃｔｏ１－ＣＣＲスペーサー１－ＣＣＲＴＭ１－ＣＣＲｅｎｄｏ１－ｃｏｅｘｐｒ２－ＣＣＲｅｃｔｏ２－ＣＣＲスペーサー２－ＣＣＲＴＭ２－ＣＣＲｅｎｄｏ２
（ここで、
ＣＣＲｅｃｔｏ１は、ＣＣＲの第１のポリペプチドの細胞外ドメインをコードする核酸配列であり、
ＣＣＲスペーサー１は、ＣＣＲの第１のポリペプチドのスペーサーをコードする核酸配列であり、
ＣＣＲＴＭ１は、ＣＣＲの第１のポリペプチドの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり、
ＣＣＲｅｎｄｏ１は、ＣＣＲの第１のポリペプチドの細胞内ドメインをコードする核酸配列であり、
ＣＣＲｅｃｔｏ２は、ＣＣＲの第２のポリペプチドの細胞外ドメインをコードする核酸配列であり、
ＣＣＲスペーサー２は、ＣＣＲの第２のポリペプチドのスペーサーをコードする核酸配列であり、
ＣＣＲＴＭ２は、ＣＣＲの第２のポリペプチドの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり、
ＣＣＲｅｎｄｏ２は、ＣＣＲの第２のポリペプチドの細胞内ドメインをコードする核酸配列であり、
ｃｏｅｘｐｒ１およびｃｏｅｘｐｒ２は、２つのフランキング配列の同時発現を可能にする、同じか、または異なっていてもよい核酸配列であり、
ＣＡＲＡｇＢは、ＣＡＲの抗原結合性ドメインをコードする核酸配列であり、
ＣＡＲスペーサーは、ＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり、
ＣＡＲＴＭは、ＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり、
ＣＡＲｅｎｄｏは、ＣＡＲの細胞内ドメインをコードする核酸配列である）
を有してもよい。
（ｉ）ＣＣＲｅｃｔｏ１－ＣＣＲスペーサー１－ＣＣＲＴＭ１－ＣＣＲｅｎｄｏ１－ｃｏｅｘｐｒ１－ＣＣＲｅｃｔｏ２－ＣＣＲスペーサー２－ＣＣＲＴＭ２－ＣＣＲｅｎｄｏ２－ｃｏｅｘｐｒ２－ＣＡＲＡｇＢ－ＣＡＲスペーサー－ＣＡＲＴＭ－ＣＡＲｅｎｄｏ；
（ｉｉ）ＣＣＲｅｃｔｏ１－ＣＣＲスペーサー１－ＣＣＲＴＭ１－ＣＣＲｅｎｄｏ１－ｃｏｅｘｐｒ１－ＣＡＲＡｇＢ－ＣＡＲスペーサー－ＣＡＲＴＭ－ＣＡＲｅｎｄｏ－ｃｏｅｘｐｒ２－ＣＣＲｅｃｔｏ２－ＣＣＲスペーサー２－ＣＣＲＴＭ２－ＣＣＲｅｎｄｏ２；または
（ｉｉｉ）ＣＡＲＡｇＢ－ＣＡＲスペーサー－ＣＡＲＴＭ－ＣＡＲｅｎｄｏ－ｃｏｅｘｐｒ１－ＣＣＲｅｃｔｏ１－ＣＣＲスペーサー１－ＣＣＲＴＭ１－ＣＣＲｅｎｄｏ１－ｃｏｅｘｐｒ２－ＣＣＲｅｃｔｏ２－ＣＣＲスペーサー２－ＣＣＲＴＭ２－ＣＣＲｅｎｄｏ２
（ここで、
ＣＣＲｅｃｔｏ１は、ＣＣＲの第１のポリペプチドの細胞外ドメインをコードする核酸配列であり、
ＣＣＲスペーサー１は、ＣＣＲの第１のポリペプチドのスペーサーをコードする核酸配列であり、
ＣＣＲＴＭ１は、ＣＣＲの第１のポリペプチドの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり、
ＣＣＲｅｎｄｏ１は、ＣＣＲの第１のポリペプチドの細胞内ドメインをコードする核酸配列であり、
ＣＣＲｅｃｔｏ２は、ＣＣＲの第２のポリペプチドの細胞外ドメインをコードする核酸配列であり、
ＣＣＲスペーサー２は、ＣＣＲの第２のポリペプチドのスペーサーをコードする核酸配列であり、
ＣＣＲＴＭ２は、ＣＣＲの第２のポリペプチドの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり、
ＣＣＲｅｎｄｏ２は、ＣＣＲの第２のポリペプチドの細胞内ドメインをコードする核酸配列であり、
ｃｏｅｘｐｒ１およびｃｏｅｘｐｒ２は、２つのフランキング配列の同時発現を可能にする、同じか、または異なっていてもよい核酸配列であり、
ＣＡＲＡｇＢは、ＣＡＲの抗原結合性ドメインをコードする核酸配列であり、
ＣＡＲスペーサーは、ＣＡＲのスペーサーをコードする核酸配列であり、
ＣＡＲＴＭは、ＣＡＲの膜貫通ドメインをコードする核酸配列であり、
ＣＡＲｅｎｄｏは、ＣＡＲの細胞内ドメインをコードする核酸配列である）
を有してもよい。
【0220】
本明細書で使用される場合、用語「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」、および「核酸」は、互いに同義であることが意図される。
【0221】
当業者であれば、いくつかの異なるポリヌクレオチドおよび核酸が、遺伝子コードの縮重性の結果として同じポリペプチドをコードし得ることを理解するであろう。さらに、当業者であれば、日常的な技術を使用して、ポリペプチドが発現される任意の特定の宿主生物のコドン使用を反映するように、本明細書に記載のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド配列に影響しないヌクレオチド置換を作製することができることが理解されるべきである。
【0222】
本発明による核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡを含んでもよい。それらは、一本鎖または二本鎖であってもよい。それらはまた、その中に合成または改変ヌクレオチドを含むポリヌクレオチドであってもよい。オリゴヌクレオチドに対するいくつかの異なる型の改変が当業界で公知である。これらのものとしては、メチルホスホネートおよびホスホロチオエート骨格、分子の３’および／または５’末端でのアクリジンまたはポリリシン鎖の付加が挙げられる。本明細書に記載される使用の目的のために、ポリヌクレオチドを当業界で利用可能な任意の方法によって改変することができることが理解されるべきである。そのような改変を実行して、目的のポリヌクレオチドのｉｎ ｖｉｖｏでの活性または寿命を増強することができる。
【0223】
ヌクレオチド配列と関連する用語「バリアント」、「ホモログ」または「誘導体」は、配列からの、または配列に対する、１個（または複数）の核酸の任意の置換、変形形態、改変、置き換え、欠失または付加を含む。
【0224】
上の構造において、「ｃｏｅｘｐｒ」は、第１および第２の両方のＣＡＲの同時発現を可能にする核酸配列である。それは、核酸構築物が切断部位によって結合された、２つもしくはそれより多いＣＣＲ、または１つのＣＣＲと、ＣＡＲとを含むような、切断部位をコードする配列であってもよい。切断部位は、ポリペプチドが産生される場合に、それがいかなる外部的な切断活性も必要とせずに個々のペプチドに即時に切断されるような、自己切断性であってもよい。
【0225】
切断部位は、ＣＣＲの第１および第２のポリペプチド；またはＣＣＲおよびＣＡＲが分離されるのを可能にする任意の配列であってもよい。
【0226】
用語「切断」は、便宜上本明細書で使用されるが、切断部位は、古典的な切断以外の機構によってペプチドを個々の実体に分離させ得る。例えば、手足口病ウイルス（ＦＭＤＶ）２Ａ自己切断性ペプチド（以下を参照されたい）について、「切断」活性：宿主細胞プロテイナーゼによるタンパク質分解、自己タンパク質分解または翻訳効果を説明するための様々なモデルが提唱されている（Donnelly et al (2001) J. Gen. Virol. 82:1027-1041）。切断部位が、タンパク質をコードする核酸配列間に位置する場合、タンパク質を別々の実体として発現させる限り、そのような「切断」の正確な機構は本発明の目的にとって重要ではない。
【0227】
切断部位は、フューリン切断部位であってもよい。
【0228】
フューリンは、スブチリシン様プロタンパク質変換酵素ファミリーに属する酵素である。このファミリーのメンバーは、潜在性前駆体タンパク質をその生物学的に活性な生成物にプロセシングするプロタンパク質変換酵素である。フューリンは、その対合した塩基性アミノ酸プロセシング部位で前駆体タンパク質を効率的に切断することができるカルシウム依存性セリンエンドプロテアーゼである。フューリン基質の例としては、プロ副甲状腺ホルモン、トランスフォーミング増殖因子ベータ１前駆体、プロアルブミン、プロ－ベータ－セクレターゼ、膜型マトリックスメタロプロテイナーゼ１、プロ神経増殖因子のベータサブユニットおよびフォン・ヴィレブランド因子が挙げられる。フューリンは、塩基性アミノ酸標的配列（標準的には、Ａｒｇ－Ｘ－（Ａｒｇ／Ｌｙｓ）－Ａｒｇ’）のすぐ下流でタンパク質を切断し、ゴルジ装置中で豊富である。
【0229】
切断部位は、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）切断部位であってもよい。
【0230】
ＴＥＶプロテアーゼは、キモトリプシン様プロテアーゼである高度に配列特異的なシステインプロテアーゼである。それは、その標的切断部位に非常に特異的であり、したがって、ｉｎ ｖｉｔｒｏとｉｎ ｖｉｖｏとの両方において融合タンパク質の制御された切断のために頻繁に使用される。コンセンサスＴＥＶ切断部位は、ＥＮＬＹＦＱ＼Ｓ（式中、「＼」は切断されるペプチド結合を示す）である。ヒト細胞などの哺乳動物細胞は、ＴＥＶプロテアーゼを発現しない。かくして、本発明の核酸構築物がＴＥＶ切断部位を含み、哺乳動物細胞中で発現される実施形態では、外因性ＴＥＶプロテアーゼも哺乳動物細胞中で発現されなければならない。
【0231】
切断部位は、自己切断性ペプチドをコードしてもよい。
【0232】
「自己切断性ペプチド」とは、タンパク質および自己切断性ペプチドを含むポリペプチドが産生される場合、それがいかなる外部的な切断活性も必要とすることなく、異なる個別の第１および第２のポリペプチドに即時に「切断」されるか、または分離されるように機能するペプチドを指す。
【0233】
自己切断性ペプチドは、アフトウイルスまたはカルジオウイルスに由来する２Ａ自己切断性ペプチドであってもよい。アフトウイルスおよびカルジオウイルスの一次２Ａ／２Ｂ切断は、それ自身のＣ末端での２Ａ「切断」によって媒介される。手足口病ウイルス（ＦＭＤＶ）およびウマ鼻炎Ａウイルスなどのアフトウイルスでは、２Ａ領域は、約１８アミノ酸の短いセクションであり、タンパク質２ＢのＮ末端残基（保存的プロリン残基）と一緒になって、それ自身のＣ末端での「切断」を媒介することができる自律エレメントを表す（上記のDonelly et al (2001)）。
【0234】
「２Ａ様」配列は、アフトウイルスまたはカルジオウイルス以外のピコルナウイルス、「ピコルナウイルス様」昆虫ウイルス、Ｃ型ロタウイルスならびにトリパノソーマ種内の反復配列および細菌配列に見出されている（上記のDonnelly et al (2001)）。本発明の核酸構築物は、１つまたはこれらの２Ａ様切断配列をコードしてもよい。好適な配列は、上に与えられている（配列番号１０）。
【0235】
ベクター
本発明はまた、本発明によるＣＣＲおよび必要に応じて、１つまたは複数のＣＡＲをコードする１つまたは複数の核酸配列を含む、ベクター、またはベクターのキットを提供する。そのようなベクターを使用して、それが本発明によるＣＣＲを発現するように宿主細胞中に核酸配列を導入することができる。
本発明はまた、本発明によるＣＣＲおよび必要に応じて、１つまたは複数のＣＡＲをコードする１つまたは複数の核酸配列を含む、ベクター、またはベクターのキットを提供する。そのようなベクターを使用して、それが本発明によるＣＣＲを発現するように宿主細胞中に核酸配列を導入することができる。
【0236】
ベクターは、例えば、プラスミドまたはウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクターもしくはレンチウイルスベクター、またはトランスポゾンに基づくベクターまたは合成ｍＲＮＡであってもよい。
【0237】
ベクターは、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などの細胞をトランスフェクトまたは形質導入することができてもよい。
【0238】
細胞
本発明は、本発明のＣＣＲおよび必要に応じて、１つまたは複数のＣＡＲを含む細胞を提供する。
本発明は、本発明のＣＣＲおよび必要に応じて、１つまたは複数のＣＡＲを含む細胞を提供する。
【0239】
細胞は、本発明の核酸またはベクターを含んでもよい。
【0240】
細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などの細胞溶解性免疫細胞であってもよい。
【0241】
Ｔ細胞またはＴリンパ球は、細胞性免疫において中心的な役割を果たすリンパ球の型である。それらは、細胞表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の存在によって、Ｂ細胞およびナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）などの他のリンパ球から識別することができる。以下にまとめられるように、様々な型のＴ細胞が存在する。
【0242】
ヘルパーＴヘルパー細胞（ＴＨ細胞）は、Ｂ細胞の形質細胞および記憶Ｂ細胞への成熟、ならびに細胞傷害性Ｔ細胞およびマクロファージの活性化を含む、免疫学的プロセスにおいて他の白血球を支援する。ＴＨ細胞は、その表面上にＣＤ４を発現する。ＴＨ細胞は、それらが抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上にＭＨＣクラスＩＩ分子によってペプチド抗原と共に提示された時に活性化する。これらの細胞は、異なる型の免疫応答を容易にするために異なるサイトカインを分泌する、ＴＨ１、ＴＨ２、ＴＨ３、ＴＨ１７、Ｔｈ９、またはＴＦＨを含む、いくつかのサブタイプの１つに分化することができる。
【0243】
細胞溶解性Ｔ細胞（ＴＣ細胞、またはＣＴＬ）は、ウイルスに感染した細胞および腫瘍細胞を破壊し、移植片拒絶にも関与している。ＣＴＬは、その表面にＣＤ８を発現する。これらの細胞は、全ての有核細胞の表面上に存在する、ＭＨＣクラスＩと会合した抗原に結合することによってその標的を認識する。調節性Ｔ細胞によって分泌されるＩＬ－１０は、アデノシンおよび他の分子を介して、ＣＤ８＋細胞を、実験的自己免疫性脳脊髄炎などの自己免疫疾患を防止する、アネルギー状態に不活化することができる。
【0244】
記憶Ｔ細胞は、感染が解消した後も長期間持続する抗原特異的Ｔ細胞のサブセットである。それらはその同種抗原への再曝露の際に多数のエフェクターＴ細胞に急速に拡大し、かくして、免疫系に過去の感染に対する「記憶」を提供する。記憶Ｔ細胞は、３つのサブタイプ：中心記憶Ｔ細胞（ＴＣＭ細胞）および２つの型のエフェクター記憶Ｔ細胞（ＴＥＭ細胞およびＴＥＭＲＡ細胞）を含む。記憶細胞は、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋のいずれかであってもよい。記憶Ｔ細胞は、典型的には、細胞表面タンパク質ＣＤ４５ＲＯを発現する。
【0245】
以前はサプレッサーＴ細胞として知られた、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）は、免疫寛容の維持にとって重要である。その主な役割は、免疫反応の終わりに向かってＴ細胞性免疫をシャットダウンすること、および胸腺における陰性選択のプロセスを逃れた自己反応性Ｔ細胞を抑制することである。
【0246】
２つの主なクラスのＣＤ４＋Ｔｒｅｇ細胞が記載されている－天然に存在するＴｒｅｇ細胞および適応性Ｔｒｅｇ細胞。
【0247】
天然に存在するＴｒｅｇ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞としても公知である）は、胸腺中で生じ、発生中のＴ細胞と、ＴＳＬＰにより活性化された骨髄（ＣＤ１１ｃ＋）および形質細胞様（ＣＤ１２３＋）樹状細胞の両方との間の相互作用と関連している。天然に存在するＴｒｅｇ細胞は、ＦｏｘＰ３と呼ばれる細胞内分子の存在によって他のＴ細胞から識別することができる。ＦＯＸＰ３遺伝子の突然変異は、調節性Ｔ細胞発生を防止し、致命的な自己免疫疾患ＩＰＥＸを引き起こし得る。
【0248】
適応性Ｔｒｅｇ細胞（Ｔｒ１細胞またはＴｈ３細胞としても公知である）は、正常な免疫応答の間に生じ得る。
【0249】
細胞は、ナチュラルキラー細胞（またはＮＫ細胞）であってもよい。ＮＫ細胞は、自然免疫系の一部を形成する。ＮＫ細胞は、ＭＨＣ非依存的様式でウイルス感染細胞に由来する自然シグナルに対する迅速な応答をもたらす。
【0250】
ＮＫ細胞（自然リンパ球の群に属する）は、大型顆粒リンパ球（ＬＧＬ）と定義されており、ＢおよびＴリンパ球を生成する共通のリンパ前駆細胞から分化した第３の種類の細胞を構成する。ＮＫ細胞は、骨髄、リンパ節、脾臓、扁桃腺および胸腺において分化および成熟した後、循環中に入ることが公知である。
【0251】
本発明のＣＣＲ発現細胞は、上記の細胞型のいずれかであってもよい。
【0252】
本発明の第１の態様によるＴまたはＮＫ細胞は、患者自身の末梢血（第１の団体）から、またはドナーの末梢血に由来する造血幹細胞移植の設定で（第２の団体）、または関係のないドナーに由来する末梢血（第３の団体）からのいずれかでｅｘ ｖｉｖｏで作出することができる。
【0253】
あるいは、本発明の第１の態様によるＴまたはＮＫ細胞は、誘導性前駆細胞または胚性前駆細胞のＴまたはＮＫ細胞へのｅｘ ｖｉｖｏでの分化に由来してもよい。あるいは、その溶解機能を保持し、治療剤として作用し得る不死化Ｔ細胞系を使用することができる。
【0254】
これら全ての実施形態では、ＣＣＲ発現細胞は、ウイルスベクターを用いた形質導入、ＤＮＡまたはＲＮＡのトランスフェクションを含む多くの手段のうちの１つによって、ＣＣＲまたはそれぞれのＣＣＲをコードするＤＮＡまたはＲＮＡを導入することによって生成される。
【0255】
本発明の細胞は、対象に由来するｅｘ ｖｉｖｏのＴまたはＮＫ細胞であってもよい。ＴまたはＮＫ細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）試料に由来してもよい。ＴまたはＮＫ細胞を、例えば、抗ＣＤ３モノクローナル抗体を用いた処理により、本発明の第１の態様によるＣＣＲを提供する分子をコードする核酸を形質導入する前に活性化および／または拡大することができる。
【0256】
本発明のＴまたはＮＫ細胞を、
（ｉ）対象または上に列挙された他の供給源に由来するＴまたはＮＫ細胞含有試料の単離；および
（ｉｉ）ＣＣＲをコードする１つまたは複数の核酸配列を用いたＴまたはＮＫ細胞の形質導入またはトランスフェクション
によって作製することができる。
（ｉ）対象または上に列挙された他の供給源に由来するＴまたはＮＫ細胞含有試料の単離；および
（ｉｉ）ＣＣＲをコードする１つまたは複数の核酸配列を用いたＴまたはＮＫ細胞の形質導入またはトランスフェクション
によって作製することができる。
【0257】
次いで、ＴまたはＮＫ細胞を、抗原結合性ポリペプチドの抗原結合性ドメインの発現に基づいて精製、例えば、選択することができる。
【0258】
医薬組成物
本発明はまた、本発明による複数の細胞を含有する医薬組成物にも関する。
本発明はまた、本発明による複数の細胞を含有する医薬組成物にも関する。
【0259】
医薬組成物は、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤をさらに含んでもよい。医薬組成物は、必要に応じて、１つまたは複数のさらなる薬学的に活性なポリペプチドおよび／または化合物を含んでもよい。そのような製剤は、例えば、静脈内輸注にとって好適な形態であってもよい。
【0260】
処置方法
本発明は、本発明の細胞（例えば、上記の医薬組成物中の）を対象に投与するステップを含む、疾患を処置および／または防止するための方法を提供する。
本発明は、本発明の細胞（例えば、上記の医薬組成物中の）を対象に投与するステップを含む、疾患を処置および／または防止するための方法を提供する。
【0261】
疾患を処置するための方法は、本発明の細胞の治療的使用に関する。疾患と関連する少なくとも１つの症状を軽減する、低減させる、もしくは改善するため、および／または疾患の進行を減速させる、低減させる、もしくは遮断するために、細胞を存在する疾患または状態を有する対象に投与することができる。
【0262】
疾患を防止するための方法は、本発明の細胞の予防的使用に関する。疾患の原因を防止するか、もしくは弱めるため、または疾患と関連する少なくとも１つの症状の発生を減少させる、もしくは防止するために、そのような細胞を、疾患にまだ罹ったことがない、および／または疾患のいかなる症状も示していない対象に投与してもよい。対象は、疾患の素因を有してもよい、または疾患を発症するリスクがあると考えられる。
【0263】
方法は、
（ｉ）ＴまたはＮＫ細胞含有試料を単離するステップ；
（ｉｉ）本発明によって提供される核酸配列またはベクターを用いてそのような細胞を形質導入またはトランスフェクトするステップ；
（ｉｉｉ）（ｉｉ）に由来する細胞を対象に投与するステップ
を含んでもよい。
（ｉ）ＴまたはＮＫ細胞含有試料を単離するステップ；
（ｉｉ）本発明によって提供される核酸配列またはベクターを用いてそのような細胞を形質導入またはトランスフェクトするステップ；
（ｉｉｉ）（ｉｉ）に由来する細胞を対象に投与するステップ
を含んでもよい。
【0264】
ＴまたはＮＫ細胞含有試料を、例えば、上記のように、対象から、または他の供給源から単離することができる。ＴまたはＮＫ細胞を、対象自身の末梢血（第１の団体）から、またはドナーの末梢血に由来する造血幹細胞移植の設定で（第２の団体）、または関係のないドナーに由来する末梢血（第３の団体）から単離することができる。
【0265】
本発明は、疾患の処置および／または防止における使用のための本発明のＣＣＲ発現細胞を提供する。
【0266】
本発明はまた、疾患の処置および／または防止のための医薬の製造における本発明のＣＣＲ発現細胞の使用にも関する。
【0267】
本発明の方法によって処置および／または防止される疾患は、膀胱がん、乳がん、結腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん（腎細胞）、白血病、肺がん、黒色腫、非ホジキンリンパ腫、膵がん、前立腺がんおよび甲状腺がんなどのがん性疾患であってもよい。
【0268】
具体的には、がんは、固形がんであってよい。がんは、いわゆる「冷たい腫瘍（cold tumour）」、すなわち、強力な免疫応答を誘発する可能性が低い腫瘍をもたらしてもよい。冷たい腫瘍は、腫瘍細胞を攻撃し、それらを死滅させないようＴ細胞を抑制することができる細胞によって取り囲まれている傾向がある。冷たい腫瘍は、低い免疫浸潤を有し、通常、免疫療法に応答しない。冷たい腫瘍の例としては、結腸、前立腺、卵巣および膵臓のがん、神経芽腫および神経膠芽腫が挙げられる。
【0269】
がんは、比較的低いレベルの新抗原を含むがんであってもよい。新抗原は、細胞形質転換の間に生じる非同義突然変異によって生成される腫瘍特異的抗原である。それらは宿主ゲノムにとって外来であるため、それらは中枢性トレランスを受けず、高度に免疫原性であり得る。低レベルの新抗原を含むがんの例としては、前立腺がん、膵がんおよび卵巣がん、神経芽腫、腎癌およびメルケル細胞癌が挙げられる。
【0270】
ＣＣＲがリガンドＰＳＡによって活性化される場合、がんは前立腺がんであってもよい。
【0271】
本発明の細胞は、がん細胞などの標的細胞を死滅させることができてもよい。標的細胞は、標的細胞の近くにある腫瘍により分泌されるリガンドまたはケモカインリガンドの存在を特徴としてもよい。標的細胞は、標的細胞表面での腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の発現と共に可溶性リガンドの存在を特徴としてもよい。
【0272】
本発明の方法によって処置および／または防止される疾患は、自己免疫疾患、アレルギー、または不適切な、もしくは望ましくない免疫応答と関連する他の状態であってもよい。
【0273】
自己免疫障害としては、セリアック病、１型糖尿病、グレーブス病、炎症性腸疾患、多発性硬化症（ＭＳ）、円形脱毛症、アジソン病、悪性貧血、乾癬、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、粘膜尋常性天疱瘡（ｍＰＶ）、皮膚粘膜尋常性天疱瘡（ｍｃＰＶ）、膜性腎症（ＭＮ）および重症筋無力症（ＭＧ）が挙げられる。
【0274】
本発明の細胞は、自己反応性または他の望ましくない抗体（移植片または処置に対する抗体など）を産生する細胞であることができ得る。本発明の細胞は、自己抗体を産生するＢ細胞を死滅させることができてもよい。標的細胞は、自己抗体などの望ましくない抗体の発現および／またはそれらを分泌する能力を特徴としてもよい。
【0275】
本発明の細胞および医薬組成物は、上記の疾患の処置および／または防止における使用のためのものであってよい。
【0276】
本発明の細胞および医薬組成物は、上記の方法のいずれかにおける使用のためのものであってよい。
【0277】
本発明は、ここで実施例を用いてさらに説明されるが、実施例は、本発明の実行において当業者を支援するのに役立つことを意味し、いかなる方法であっても本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【0278】
（実施例１）
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＣＡＲとＩＬ－１８ ＣＣＲとの同時発現の効果の調査
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＣＡＲとＩＬ－１８ ＣＣＲとの同時発現の効果の調査
【0279】
構成的に活性なＩＬ－１８シグナル伝達キメラサイトカイン受容体を、ＩＬ－１８受容体細胞内ドメインを「Ｆａｂ」型細胞外ドメインに連結することによって生産した（図１Ｅに概略的に示される実施形態を参照されたい）。この構造は、抗体の天然の二量体化成分、すなわち、重鎖および軽鎖定常領域に由来する二量体化ドメインを使用する。キメラサイトカイン受容体は、２つの鎖；抗体κ軽鎖（配列番号３として示される）およびＩＬ１８Ｒ１ ＴＭドメイン（配列番号８）および細胞内ドメイン（配列番号９）を含む第１のポリペプチド；ならびに抗体重鎖ＣＨ１（配列番号４）およびＩＬ１８ＲＡＰ ＴＭドメイン（配列番号１２）および細胞内ドメイン（配列番号１３として示される）を含む第２のポリペプチドを有する。
【0280】
２Ａペプチドコード配列によって隔たれた、これらの２つのポリペプチドをコードする核酸配列を、インフレームにクローニングした。
【0281】
ベクターを、図２Ａに概略的に例示されるように構築した。両方のベクターは、ａ）ＷＯ２０１３／１５３３９１に記載されている選別自殺遺伝子ＲＱＲ８；ならびにｂ）ＷＯ２０１５／１３２６０４に記載されたＧＤ２結合性ドメインおよび４１ＢＢ－ＣＤ３ｚ細胞内ドメインを有する第２世代のＣＡＲを発現した。一方のベクターは、ＩＬ－１８ ＣＣＲも発現した。
【0282】
Ｔ細胞にこれらの構築物を形質導入した後、野生型ＳｕｐＴ１細胞（ＧＤ２を発現しない）またはＧＤ２を発現するように形質導入されたＳｕｐＴ１標的細胞のいずれかと同時培養した。簡単に述べると、１２．５×１０４個の形質導入されたＣＡＲ Ｔ細胞を、５×１０４個の標的細胞と同時培養し、１：４のＥ：Ｔ比を得た。標的細胞死滅をＦＡＣＳによって分析し、ＩＬ２およびＩＦＮγの上清中への放出をＥＬＩＳＡによって分析した。その結果を、図２Ｂに示す。ＩＬ－１８ ＣＣＲの同時発現は標的細胞死滅を維持したが、ＣＡＲのみを発現する細胞と比較してサイトカイン放出を改善した。
【0283】
（実施例２）
ＣＴ２６－ＧＤ２＋結腸癌動物モデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏでのＩＬ２、ＩＬ７またはＩＬ１８ ＣＣＲの同時発現の効果の比較
Ｂａｌｂ／ｃマウスにおける確立された結腸癌免疫応答性モデルにおいてＣＡＲおよびＣＣＲを同時発現するマウスＴ細胞の生着および抗腫瘍活性を評価するためのｉｎ ｖｉｖｏでの実験を行った。
ＣＴ２６－ＧＤ２＋結腸癌動物モデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏでのＩＬ２、ＩＬ７またはＩＬ１８ ＣＣＲの同時発現の効果の比較
Ｂａｌｂ／ｃマウスにおける確立された結腸癌免疫応答性モデルにおいてＣＡＲおよびＣＣＲを同時発現するマウスＴ細胞の生着および抗腫瘍活性を評価するためのｉｎ ｖｉｖｏでの実験を行った。
【0284】
実験設計は、図３に概略的に示されている。簡単に述べると、６～８週齢のＢａｌｂ／ｃ雌マウスに、ＧＤ２を発現するように改変された１×１０６個のＣＴ２６結腸癌細胞を皮下注射した。９日間にわたる腫瘍生着後、マウスに５Ｇｙの全身照射（ＴＢＩ）を亜致死的に照射した。ＧＤ２ ＣＡＲを発現する単一ベクター（ＧＤ２ ＣＡＲ）；またはＧＤ２ ＣＡＲと、ＩＬ２－ＣＣＲ、ＩＬ－７ ＣＣＲまたはＩＬ－１８ ＣＣＲのうちの１つを同時発現する２シストロン性ベクターのいずれかを細胞に形質導入することによって、マウスＣＡＲ－Ｔ細胞を作製した。ＴＢＩの１日後、１×１０６個の形質導入されたＣＡＲ Ｔ細胞を、静脈内注射によって投与した。腫瘍増殖を、カリパスによって週２回モニタリングした。末梢血を７日毎に採取し、マーカーＣＤ３およびＴｈｙ１．１によって形質導入されたＣＡＲ Ｔ細胞の存在について分析した。ＣＤ３マーカーを使用して、総ＣＤ４５＋免疫細胞内のリンパ球集団を同定した。ＴＨＹ１．１を使用して、総Ｔ細胞集団内の形質導入されたＣＤ３ Ｔ細胞を同定した。腫瘍が１ｃｍ３の最大の長さもしくは幅に達した時、またはマウスの体重が突然２０％以上減少した時、マウスを安楽死させた。ＣＡＲ Ｔ細胞追跡のために安楽死の時点で脾臓および腫瘍を収集した。
【0285】
【0286】
ＣＴ２６ ＧＤ２＋腫瘍は、ＧＤ２ ＣＡＲのみを発現する細胞またはＩＬ２－ＣＣＲもしくはＩＬ７－ＣＣＲと共にＧＤ２ ＣＡＲを同時発現する細胞によって使われなかった。対照的に、ＩＬ１８－ＣＣＲを発現する２シストロン性ベクターを形質導入されたＣＡＲ Ｔ細胞は、強力な抗腫瘍活性を示し、確立された腫瘍負荷を有するＢａｌｂ／ｃマウスの生存を延長させたと共に、８匹のマウスのうちの４匹において５０日目まで腫瘍が検出不可能であった。
【0287】
ＩＬ１８－ＣＣＲ ＧＤ２ ＣＡＲ Ｔ細胞による腫瘍制御の増強はまた、ＣＡＲ Ｔ細胞のより高い生着も伴っていた。ＩＬ１８ ＣＣＲ ＣＡＲ Ｔ細胞は、最も高い程度の生着を示し、輸注後１０日目でピークに達し、実験の終了まで形質導入されたＣＡＲ Ｔ細胞の高い末梢持続性を持続させた。
【0288】
Ｋａｐｌａｎ Ｍｅｙｅｒ生存曲線（図６）は、ＩＬ２またはＩＬ７ ＣＣＲを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞を受ける動物における生存改善の程度を示したが、これはＩＬ１８ ＣＣＲを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞を受ける動物において大きく増加した。ＩＬ１８ ＣＣＲ形質導入コホートにおけるマウスの５０％が、ＣＡＲ Ｔ細胞注射後、５０日目まで生存していた。
【0289】
（実施例３）
ＩＬ７またはＩＬ－１８ ＣＣＲを発現する活性化および非活性化ＣＡＲ－Ｔ細胞中での遺伝子発現の差異の調査
ＩＬ７－またはＩＬ－１８ ＣＣＲを発現する活性化および非活性化ＣＡＲ－Ｔ細胞について、８００種の遺伝子パネルの発現を分析した。主成分分析（ＰＣＡ）の結果を、図７に示す。非活性化状態と活性化状態との両方において、ＩＬ７－またはＩＬ－１８ ＣＣＲを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞間で明確な差異が観察された。
ＩＬ７またはＩＬ－１８ ＣＣＲを発現する活性化および非活性化ＣＡＲ－Ｔ細胞中での遺伝子発現の差異の調査
ＩＬ７－またはＩＬ－１８ ＣＣＲを発現する活性化および非活性化ＣＡＲ－Ｔ細胞について、８００種の遺伝子パネルの発現を分析した。主成分分析（ＰＣＡ）の結果を、図７に示す。非活性化状態と活性化状態との両方において、ＩＬ７－またはＩＬ－１８ ＣＣＲを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞間で明確な差異が観察された。
【0290】
これをさらに調査するために、個々の遺伝子に関する発現の変化を、示差遺伝子発現計算のためのベースラインとしてＩＬ７ ＣＣＲを使用して、活性化状態と非活性化状態との両方においてＩＬ１８ ＣＣＲ発現細胞について分析した。
【0291】
その結果を、図８に示す。一部の遺伝子、とりわけ、ケモカインＣＣＬ２２、ＣＣＬ１７、ＣＸＣＬ８およびインターロイキンＩＬ１Ａをコードする遺伝子の発現は、ＩＬ－７ ＣＣＲを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、ＩＬ－１８ ＣＣＲを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞において有意に上方調節される。
【0292】
この観察は、ＩＬ－７およびＩＬ－１８ ＣＣＲがＣＡＲ－Ｔ機能を支援する機構は根本的に異なってもよいことを示唆する。理論によって束縛されることを望むものではないが、本発明者らは、ＩＬ－１８ ＣＣＲが、ＣＡＲ－Ｔ細胞自体に対する直接効果を有することよりもむしろ、宿主免疫系と相互作用することによって機能すると予測する。これは、サイトカインとしてのＩＬ－１８が、ＩＬ－７と違って、Ｔ細胞増殖を直接誘導しないという事実と一致している。ＣＣＬ２２、ＣＸＣＬ８およびＣＣＬ１７などのケモカインの示差的発現は、ＩＬ－１８ ＣＣＲが、主に宿主免疫系の細胞を腫瘍部位に動員することによって機能することを示唆する。
【0293】
この機構は、ＣＴ－２６－ＧＤ２＋マウスモデルにおける観察された結果を支持すると考えられる。この免疫応答性動物モデルは、冷たい腫瘍、すなわち、免疫障害がある可能性が高いものと考えることができる。冷たい腫瘍は、Ｔ細胞を抑制することができる細胞によって取り囲まれている傾向があり、それらは典型的には、免疫療法に応答しない。免疫応答性動物モデルはまた、低レベルの新抗原を有する。このモデルを使用して、ＩＬ－１８ ＣＣＲを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＩＬ－７ ＣＣＲを発現するＣＡＲ Ｔ細胞よりも腫瘍の制御において有意に良好であった。ＩＬ－１８ ＣＣＲを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍部位への宿主免疫細胞の動員は、ＣＡＲ－Ｔ細胞自体の活性をブーストするよりもこの結腸癌腫瘍モデルに取り組むのに重要であり得る。
【0294】
対照的に、強力な免疫応答を誘発する可能性が高い熱い腫瘍（hot tumour）、または新抗原に誘導される腫瘍殺傷活性を誘発することができるより高いレベルの新抗原が存在する腫瘍は、例えば、ＩＬ２－またはＩＬ７－ＣＣＲの増殖効果によってブーストされる可能性が高い。
【0295】
上記の明細書に記載された全ての刊行物は、参照により本明細書に組み込まれる。本発明の記載された方法およびシステムの様々な改変および変更が、本発明の範囲および趣旨から逸脱することなく、当業者には明らかとなるであろう。本発明を特定の好ましい実施形態と関連して記載してきたが、特許請求される本発明がそのような特定の実施形態に不当に限定されるべきではないことが理解されるべきである。実際、本発明を実行するための記載された様式の様々な改変は、分子生物学または関連する分野の当業者には自明であり、以下の特許請求の範囲内にあることが意図される。
【図1-1】
【図1-2】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8-1】
【図8-2】
【図9】
【図10】
【図11】
【配列表】
【国際調査報告】