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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-10-28
(54)【発明の名称】操作されたＰＤ－１抗体及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20241018BHJP
C12N 15/13 20060101ALI20241018BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20241018BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20241018BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20241018BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20241018BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20241018BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20241018BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20241018BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20241018BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20241018BHJP
A61P 17/14 20060101ALI20241018BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20241018BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20241018BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20241018BHJP
A61P 11/06 20060101ALI20241018BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20241018BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20241018BHJP
A61P 7/06 20060101ALI20241018BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20241018BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20241018BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20241018BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20241018BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20241018BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20241018BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20241018BHJP
A61P 21/04 20060101ALI20241018BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20241018BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20241018BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20241018BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20241018BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20241018BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
C12N15/13
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
A61K39/395 U
A61K39/395 Y
A61P29/00
A61P37/08
A61P17/14
A61P25/28
A61P9/00
A61P25/00
A61P11/06
A61P17/00
A61P37/06
A61P7/06
A61P1/16
A61P1/00
A61P3/10
A61P35/02
A61P13/12
A61P19/02
A61P35/00
A61P21/04
A61P21/00
A61P17/06
A61P29/00 101
A61P1/04
A61P27/02
A61P43/00 105
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2024529781
(86)(22)【出願日】2022-11-17
(85)【翻訳文提出日】2024-05-20
(86)【国際出願番号】 IB2022000705
(87)【国際公開番号】W WO2023089377
(87)【国際公開日】2023-05-25
(31)【優先権主張番号】63/281,404
(32)【優先日】2021-11-19
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521263087
【氏名又は名称】ミロバイオ・リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】パラッチ， クリストファー
(72)【発明者】
【氏名】マリー， リン
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B065AA01
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA90X
4B065AB01
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C085AA14
4C085AA16
4C085AA25
4C085BB11
4C085BB36
4C085CC23
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA72
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA72
4H045FA74
(57)【要約】
いくつかの態様では、ＰＤ－１に結合する抗体が本明細書で提供される。本明細書に提供される抗体は、いくつかの場合では、ＰＤ－１シグナル伝達をアゴナイズする。本明細書で提供される抗体は、いくつかの場合では、修飾されたＦｃ領域を有する。他の態様では、ＰＤ－１に結合する抗体に関する、組成物、使用方法、作製方法及びキットが本明細書で提供される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、前記免疫細胞を、ＰＤ－１に特異的に結合し、前記免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達をアゴナイズする、抗体と接触させることを含み、前記抗体が、アミノ酸置換を含むＦｃ領域を含み、前記アミノ酸置換が、前記アミノ酸置換を欠く親分子と比較して、前記対象におけるＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の低減をもたらし、前記抗体が、前記親分子と比較して、前記免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高いアゴニスト効果を有する、方法。
【請求項2】
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、前記免疫細胞を、ＰＤ－１に特異的に結合し、前記免疫細胞の表面上の前記ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する、抗体と接触させることを含む、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法。
【請求項3】
前記抗体がＦｃ領域を含み、前記Ｆｃ領域がアミノ酸置換を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項4】
前記アミノ酸置換が、前記アミノ酸置換を欠く親分子と比較して、前記対象におけるＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の低減をもたらし、前記抗体が、前記親分子と比較して、前記免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高いアゴニスト効果を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
前記ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対するＡＤＣＣが、実施例７に記載されるナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように低減される、請求項１又は４に記載の方法。
【請求項6】
前記抗体が、実施例７に記載のナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように、前記ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する有意なＡＤＣＣをもたらさない、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記抗体がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化しない、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
前記抗体が、重鎖可変領域を含む重鎖と、軽鎖可変領域を含む軽鎖とを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
前記重鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、請求項３～９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、前記免疫細胞を、重鎖、軽鎖、及びＦｃ領域を含む抗体と接触させることを含み、（ｉ）前記重鎖が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む重鎖可変領域を含み、
（ｉｉ）前記軽鎖が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含み、
（ｉｉｉ）前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法。
【請求項12】
前記軽鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む、請求項８～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記重鎖可変領域が、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３が、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号１～３に示される配列を含む、請求項８～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記軽鎖可変領域が、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６に示される配列を含む、請求項８～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記重鎖可変領域がＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３がそれぞれ配列番号１～３に示される配列を含む、請求項８～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記軽鎖可変領域がＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３がそれぞれ配列番号４～６に記載の配列を含む、請求項８～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記重鎖可変領域が、配列番号７～１１のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、請求項８～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記軽鎖可変領域が、配列番号１２～１６のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、請求項８～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記重鎖が、配列番号１８に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、請求項８～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記軽鎖が、配列番号１９に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、請求項８～１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記Ｆｃ領域がヒトＩｇＧ１に由来する、請求項３～２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
前記Ｆｃ領域が、配列番号１７に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、請求項３～２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２及びダイアボディからなる群から選択される構造を形成する、請求項８～２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項24】
前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、前記Ｆｃ領域に作動可能に連結された単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）を形成する、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項25】
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び多重特異性抗体からなる群から選択される、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
前記抗体がモノクローナルである、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項27】
前記抗体が、前記免疫細胞の活性化を少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、又は５０％減少させる、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
前記抗体が、前記免疫細胞の活性化を約１０％～５０％、１０％～４０％、１０％～３０％、１０％～２０％、１０％～１５％、２０％～５０％、２０％～４０％、又は２０％～３０％減少させる、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はマクロファージを含む、請求項２～２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
前記免疫細胞が抗原特異的Ｔ細胞を含む、請求項２～２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記Ｆｃ領域がＦｃγＲ２Ｂに選択的に結合する、請求項３～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ、４μＭ、３μＭ、又は２μＭ未満のＫＤでヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ又は１０μＭを超えるＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する、請求項３１又は３２に記載の方法。
【請求項34】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも１５μＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する、請求項３１又は３２に記載の方法。
【請求項35】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも５０μＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する、請求項３１～３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項36】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも８０μＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する、請求項３１～３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項37】
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも２：１、３：１、４：１、５：１、又は６：１である、請求項３１～３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項38】
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも６：１である、請求項３１～３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項39】
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、約６：１である、請求項３１～３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項40】
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも１０：１、１５：１、２０：１、４０：１、又は５０：１である、請求項３１～３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項41】
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも４０：１である、請求項３１～３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項42】
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、約４０：１である、請求項３１～３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項43】
前記比が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される、請求項３７～４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項44】
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合し、ＰＤ－１シグナル伝達をアゴナイズする、単離された抗体であって、前記抗体は、重鎖、軽鎖、及びＦｃ領域を含み、前記重鎖が重鎖可変領域を含み、
前記軽鎖が軽鎖可変領域を含み、
前記Ｆｃ領域が、置換を欠く親分子と比較して、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少をもたらすアミノ酸置換を含み、
前記抗体が、前記親分子と比較して、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高い不可知論的効果を有する、単離された抗体。
【請求項45】
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体は、重鎖、軽鎖、及びＦｃ領域を含み、前記重鎖が重鎖可変領域を含み、
前記軽鎖が軽鎖可変領域を含み、
前記抗体は、免疫細胞の表面に発現するＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する、
単離された抗体。
【請求項46】
前記Ｆｃ領域が、前記アミノ酸置換を欠く親分子と比較して、前記対象におけるＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少をもたらすアミノ酸置換を含み、前記抗体が、前記親分子と比較して、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じか又はより高い不可知論的効果を有する、請求項４５に記載の抗体。
【請求項47】
前記重鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む、請求項４４～４６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項48】
前記軽鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む、請求項４４～４７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項49】
前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、請求項４４～４８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項50】
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体は、重鎖、軽鎖、及びＦｃ領域を含み、前記重鎖が重鎖可変領域を含み、
前記軽鎖が軽鎖可変領域を含み、
（ｉ）前記重鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含み、
（ｉｉ）前記軽鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含み、
（ｉｉｉ）前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する単離された抗体。
【請求項51】
前記抗体が、免疫細胞の表面上に発現されたＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する、請求項５０に記載の抗体。
【請求項52】
ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間における前記相互作用が、実施例１０に記載されるようなアッセイによって決定される場合に増強される、請求項４５、４６又は５１に記載の抗体。
【請求項53】
前記抗体が、前記ＩｇＧ１のＦｃ領域を含む他の点では同じ分子と比較して、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少を誘導し、前記抗体が、他の点では同じ分子と比較して、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高い不可知論的効果を有する、請求項５０～５２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項54】
前記ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する前記ＡＤＣＣが、実施例７に記載されるナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように低減される、請求項４４、４６又は５３に記載の抗体。
【請求項55】
前記抗体が、実施例７に記載のナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように、前記ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する有意なＡＤＣＣをもたらさない、請求項４４、４６、５３、又は５４に記載の抗体。
【請求項56】
前記抗体が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化しない、請求項４４、４６又は５３～５５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項57】
前記重鎖可変領域が、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３が、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号１～３に示される配列を含む、請求項４４～５５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項58】
前記軽鎖可変領域が、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６に示される配列を含む、請求項４４～５７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項59】
前記重鎖可変領域がＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３がそれぞれ配列番号１～３に示される配列を含む、請求項４４～５８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項60】
前記軽鎖可変領域がＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３がそれぞれ配列番号４～６に記載の配列を含む、請求項４４～５９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項61】
前記重鎖可変領域が、配列番号７～１１のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、請求項４４～６０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項62】
前記軽鎖可変領域が、配列番号１２～１６のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、請求項４４～６１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項63】
前記重鎖が、配列番号１８に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、請求項４４～６２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項64】
前記軽鎖が、配列番号１９に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、請求項４４～６３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項65】
前記Ｆｃ領域がヒトＩｇＧ１に由来する、請求項４４～６４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項66】
前記Ｆｃ領域が、配列番号１７に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、請求項４４～６２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項67】
前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２及びダイアボディからなる群から選択される構造を形成する、請求項４４～６６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項68】
前記抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、前記Ｆｃ領域に作動可能に連結された前記重鎖可変領域を含み、前記軽鎖が、前記軽鎖可変領域を含む、請求項４４～６６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項69】
前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、前記Ｆｃ領域に作動可能に連結された単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）を形成する、請求項４４～６６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項70】
前記抗体が、ヒト化抗体である、請求項４４～６９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項71】
前記抗体が、ヒト抗体である、請求項４４～６９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項72】
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び多重特異性抗体からなる群から選択される、請求項４４～６９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項73】
前記抗体が、モノクローナルである、請求項４４～７２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項74】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、２００ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、８０ｎＭ未満、６０ｎＭ未満又は４０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する、請求項４４～７３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項75】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、６０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する、請求項４４～７３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項76】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、４０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する、請求項４４～７３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項77】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、５０００ｎＭ、４０００ｎＭ、２０００ｎＭ、１０００ｎＭ、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ又は２００ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＰＤ－１に結合する、請求項４４～７６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項78】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、６００ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＰＤ－１に結合する、請求項４４～７６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項79】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、３００ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＰＤ－１に結合する、請求項４４～７６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項80】
前記抗体が、免疫細胞の表面上に発現されるヒトＰＤ－１をアゴナイズする、請求項４４～７９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項81】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、請求項８０に記載の抗体。
【請求項82】
免疫細胞の表面上に発現されたヒトＰＤ－１への前記抗体の結合が、前記抗体によって結合されていない同等の免疫細胞と比較して、前記細胞の増殖を減少させる、請求項４４～８１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項83】
前記細胞がＴ細胞である、請求項８２に記載の抗体。
【請求項84】
細胞活性化の前記減少が、実施例４に記載されるＮＦＡＴレポーターアッセイによって測定される、請求項８２又は８３に記載の抗体。
【請求項85】
細胞活性化の前記減少が、実施例５に記載の破傷風トキソイド活性化アッセイ又はウイルスペプチド活性化アッセイによって測定される、請求項８２又は８３に記載の抗体。
【請求項86】
細胞増殖の前記減少が、実施例６に記載される抗ＣＤ３／２８活性化アッセイによって測定される、請求項８２又は８３に記載の抗体。
【請求項87】
細胞増殖の前記減少が、前記免疫細胞がＰＤ－Ｌ１発現細胞に近接しているときに測定される、請求項８２又は８３に記載の抗体。
【請求項88】
細胞増殖の前記減少が、実施例８に記載されるアッセイによって測定される、請求項８７に記載の抗体。
【請求項89】
細胞増殖の前記減少がインビトロ又はインビボで測定される、請求項８２又は８３に記載の抗体。
【請求項90】
細胞増殖の前記減少が、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％又は５０％である、請求項８２～８９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項91】
細胞増殖の前記減少が、約１０％～５０％、１０％～４０％、１０％～３０％、１０％～２０％、１０％～１５％、２０％～５０％、２０％～４０％、又は２０％～３０％である、請求項８２～８９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項92】
前記Ｆｃ領域がＦｃγＲ２Ｂに選択的に結合する、請求項４４～９１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項93】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ、４μＭ、３μＭ、又は２μＭ未満のＫＤでヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する、請求項９２に記載の抗体。
【請求項94】
前記抗体が、少なくとも２μＭ、１μＭ、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、８０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、又は５ｎＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する、請求項９２又は９３に記載の抗体。
【請求項95】
前記抗体が、ヒトＦｃγＲ２Ｂに、２００ｎＭ～５μＭ、４００ｎＭ～４μＭ、５００ｎＭ～３．５μＭ、８００ｎＭ～３μＭ、１μＭ～５μＭ、１μＭ～４．５μＭ、１μＭ～４μＭ、１μＭ～３．５μＭ、１μＭ～３μＭ、１μＭ～２．５μＭ、又は１μＭ～２μＭのＫＤで結合する、請求項９２に記載の抗体。
【請求項96】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ又は１０μＭを超えるＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する、請求項９２～９５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項97】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも１５μＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する、請求項９２～９５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項98】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも５０μＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する、請求項９２～９７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項99】
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも８０μＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する、請求項９２～９７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項100】
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも２：１、３：１、４：１、５：１、又は６：１である、請求項９２～９９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項101】
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも６：１である、請求項９２～９９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項102】
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、約６：１である、請求項９２～９９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項103】
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも１０：１、１５：１、２０：１、４０：１、又は５０：１である、請求項９２～１０２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項104】
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも４０：１である、請求項９２～１０２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項105】
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、約４０：１である、請求項９２～１０２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項106】
前記比が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される、請求項１００～１０５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項107】
請求項４４～１０６のいずれか一項に記載される抗体を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
【請求項108】
請求項４４～１０６のいずれか一項に記載される抗体を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含むベクター。
【請求項109】
発現された場合、請求項４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体を形成することができる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列をコードする１つ以上の核酸分子を含む宿主細胞。
【請求項110】
請求項１０９に記載される宿主細胞を、前記抗体を産生するための条件下で培養することを含む方法。
【請求項111】
方法であって、（ａ）発現された場合、請求項４４～１０６のいずれか一項に記載される抗体を形成することができる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列をコードする１つ以上の核酸分子を含む宿主細胞を提供することと、
（ｂ）前記コードされたアミノ酸配列を発現する前記宿主細胞を培養することと、
（ｃ）前記抗体を単離することと、
を含む、方法。
【請求項112】
薬剤とコンジュゲートした請求項４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体を含む免疫コンジュゲート。
【請求項113】
治療有効量の請求項４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１１２に記載の免疫コンジュゲートと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項114】
疾患又は状態を治療するのに使用するための医薬組成物であって、治療有効量の請求項４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１１２に記載の免疫コンジュゲートと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項115】
容器内に請求項４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１１２に記載の免疫コンジュゲートを含むキット。
【請求項116】
請求項４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１１２に記載の免疫コンジュゲートの使用説明書を含有する情報材料を更に含む、請求項１１５に記載のキット。
【請求項117】
疾患又は状態の治療を必要とする対象の疾患又は状態を治療する方法であって、治療有効量の請求項４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体若しくは請求項１１２に記載の免疫コンジュゲートを前記対象に投与すること、又は請求項１１３に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、疾患又は状態の治療を必要とする対象の疾患又は状態を治療する方法。
【請求項118】
前記疾患又は状態が、ＰＤ－１に関連する疾患又は状態を含む、請求項１１７に記載の方法。
【請求項119】
前記疾患又は状態が、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、アレルギー、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、ＡＮＣＡ血管炎、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性多内分泌症候群、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、脳マラリア、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、セリアック病、クローン病、クッシング症候群、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、１型糖尿病、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、胆嚢疾患、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、ＩｇＧ４関連疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、炎症性線維症、過敏性腸症候群、若年性関節炎、川崎病、白血病、ループス腎炎、ライム関節炎、リンパ腫、リンパ増殖性障害、髄膜脳炎、多発性硬化症、重症筋無力症、骨髄腫、Ｘ線基準を満たさない体軸性脊椎関節炎（ｎｒ－ＡｘＳｐＡ）、視神経脊髄炎、変形性関節症、骨盤内炎症性疾患、天疱瘡、腹膜炎、毛巣嚢胞疾患、多発性筋炎、原発性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、高安動脈炎、側頭動脈炎、移植拒絶反応、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑及びフォークト・小柳・原田病を含む、請求項１１７又は１１８に記載の方法。
【請求項120】
前記対象が、ヒト対象である、請求項１１７～１１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項121】
対象における免疫応答を下方制御する方法であって、前記対象に請求項４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体を投与すること、前記対象に請求項１１２に記載の免疫コンジュゲートを投与すること、又は前記対象に請求項１１３に記載の医薬組成物を投与すること、を含む方法。
【請求項122】
ＰＤ－１を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、前記免疫細胞を請求項４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１１２に記載の免疫コンジュゲートと接触させることを含む方法。
【請求項123】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞又はマクロファージを含む、請求項１２２に記載の方法。
【請求項124】
前記免疫細胞が抗原特異的Ｔ細胞を含む、請求項１２２に記載の方法。
【請求項125】
前記対象が、ヒト対象である、請求項１２２～１２４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
相互参照
本出願は、２０２１年１１月１９日に出願された米国仮特許出願第６３／２８１，４０４号の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年１１月１９日に出願された米国仮特許出願第６３／２８１，４０４号の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
配列表の参照
本出願は、ＸＭＬフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２２年１１月７日に作成された当該ＸＭＬコピーは、５６２７０＿７１８６０１＿ＳＬ．ｘｍｌという名前であり、サイズが１９，４７９バイトである。
本出願は、ＸＭＬフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２２年１１月７日に作成された当該ＸＭＬコピーは、５６２７０＿７１８６０１＿ＳＬ．ｘｍｌという名前であり、サイズが１９，４７９バイトである。
【発明の概要】
【0003】
いくつかの態様では、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、免疫細胞を、ＰＤ－１に特異的に結合し、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達をアゴナイズする抗体と接触させることを含み、抗体が、アミノ酸置換を含むＦｃ領域を含み、アミノ酸置換が、アミノ酸置換を欠く親分子と比較して、対象におけるＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の低減をもたらし、抗体が、親分子と比較して、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高いアゴニスト効果を有する、方法が本明細書で開示される。
【0004】
いくつかの態様では、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、免疫細胞を、ＰＤ－１に特異的に結合し、免疫細胞の表面上のＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する抗体と接触させることを含む、方法が本明細書で開示される。いくつかの場合では、抗体がＦｃ領域を含み、Ｆｃ領域がアミノ酸置換を含む。いくつかの場合では、アミノ酸置換が、アミノ酸置換を欠く親分子と比較して、対象におけるＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の低減をもたらし、抗体が、親分子と比較して、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高いアゴニスト効果を有する。
【0005】
方法のいくつかの実施形態では、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対するＡＤＣＣは、実施例７に記載されるナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように低減される。
【0006】
方法のいくつかの実施形態では、抗体は、実施例７に記載のナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する有意なＡＤＣＣをもたらさない。
【0007】
方法のいくつかの実施形態では、抗体はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化しない。
【0008】
方法のいくつかの実施形態では、抗体は、重鎖可変領域を含む重鎖と、軽鎖可変領域を含む軽鎖とを含む。方法のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【0009】
方法のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む。
【0010】
いくつかの態様では、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、免疫細胞を、重鎖、軽鎖、及びＦｃ領域を含む抗体と接触させることを含み、（ｉ）重鎖が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３の１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む重鎖可変領域を含み、（ｉｉ）軽鎖は、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含み、（ｉｉｉ）Ｆｃ領域がＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた位置２３８にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、方法が本明細書で開示される。
【0011】
方法のいくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む。
【0012】
方法のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３は、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号１～３に示される配列を含む。
【0013】
方法のいくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６に示される配列を含む。
【0014】
方法のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域がＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３がそれぞれ配列番号１～３に示される配列を含む。
【0015】
方法のいくつかの実施形態では、軽鎖可変領域がＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３がそれぞれ配列番号４～６に記載の配列を含む。
【0016】
方法のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７～１１のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む。
【0017】
方法のいくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１２～１６のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む。
【0018】
方法のいくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１８に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む。
【0019】
方法のいくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１９に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む。
【0020】
方法のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１に由来する。方法のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号１７に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む。
【0021】
方法のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２及びダイアボディからなる群から選択される構造を形成する。
【0022】
方法のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、Ｆｃ領域に作動可能に連結された単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）を形成する。
【0023】
方法のいくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び多重特異性抗体からなる群から選択される。方法のいくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナルである。
【0024】
方法のいくつかの実施形態では、抗体は、免疫細胞の活性化を少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、又は５０％減少させる。
【0025】
方法のいくつかの実施形態では、抗体は、免疫細胞の活性化を約１０％～５０％、１０％～４０％、１０％～３０％、１０％～２０％、１０％～１５％、２０％～５０％、２０％～４０％、又は２０％～３０％低下させる。
【0026】
方法のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞又はマクロファージを含む。方法のいくつかの実施形態では、免疫細胞は抗原特異的Ｔ細胞を含む。
【0027】
方法のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＦｃγＲ２Ｂに選択的に結合する。方法のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ、４μＭ、３μＭ、又は２μＭ未満のＫＤでヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する。方法のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ又は１０μＭを超えるＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する。方法のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも１５μＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する。方法のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも５０μＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する。方法のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも８０μＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する。方法のいくつかの実施形態では、ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比は、少なくとも２：１、３：１、４：１、５：１、又は６：１である。方法のいくつかの実施形態では、ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比は、少なくとも６：１である。方法のいくつかの実施形態では、ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比は、約６：１である。方法のいくつかの実施形態では、ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比は、少なくとも１０：１、１５：１、２０：１、４０：１、又は５０：１である。方法のいくつかの実施形態では、ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比は、少なくとも４０：１である。方法のいくつかの実施形態では、ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比は、約４０：１である。方法のいくつかの実施形態では、比は、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される。
【0028】
いくつかの態様では、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合し、ＰＤ－１シグナル伝達をアゴナイズする単離された抗体が本明細書で開示され、ここで、抗体は、重鎖、軽鎖、及びＦｃ領域を含み、重鎖は、重鎖可変領域を含み、軽鎖は、軽鎖可変領域を含み、Ｆｃ領域は、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を、その置換を欠く親分子と比較して低下させるアミノ酸置換を含み、抗体は、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して、その親分子と比較して同じ又はより高い不可知論的効果を有する。
【0029】
いくつかの態様では、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する単離された抗体が本明細書に開示され、ここで、抗体は、重鎖、軽鎖及びＦｃ領域を含み、重鎖は重鎖可変領域を含み、軽鎖は軽鎖可変領域を含み、抗体は、免疫細胞の表面上に発現されるＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する。抗体のいくつかの場合では、Ｆｃ領域は、アミノ酸置換を欠く親分子と比較して、対象におけるＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少をもたらすアミノ酸置換を含み、抗体は、親分子と比較して、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じか又はより高い不可知論的効果を有する。
【0030】
抗体のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む。抗体のいくつかの実施形態では、軽鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む。抗体のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む。
【0031】
いくつかの態様では、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する単離された抗体であって、重鎖、軽鎖及びＦｃ領域を含み、重鎖が重鎖可変領域を含み、軽鎖が軽鎖可変領域を含み、かつ、（ｉ）重鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示されるような配列を含むＣＤＲを含み、（ｉｉ）軽鎖可変領域は、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含み、（ｉｉｉ）Ｆｃ領域がＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた位置２３８にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、単離された抗体が本明細書に開示される。
【0032】
抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、免疫細胞の表面に発現するＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する。
【0033】
抗体のいくつかの実施形態では、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間における相互作用は、実施例１０に記載されるようなアッセイによって求められる場合に増強される。
【0034】
抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１のＦｃ領域を含む他の点では同じ分子と比較して、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少を誘導し、抗体は、他の点では同じ分子と比較して、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高い不可知論的効果を有する。抗体のいくつかの実施形態では、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対するＡＤＣＣは、実施例７に記載されるナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように低減される。抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、実施例７に記載のナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する有意なＡＤＣＣをもたらさない。
【0035】
抗体のいくつかの実施形態では、抗体はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化しない。
【0036】
抗体のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３は、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号１～３に示される配列を含む。
【0037】
抗体のいくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３は、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６に示される配列を含む。
【0038】
抗体のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域がＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３がそれぞれ配列番号１～３に示される配列を含む。
【0039】
抗体のいくつかの実施形態では、軽鎖可変領域がＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３がそれぞれ配列番号４～６に記載の配列を含む。
【0040】
抗体のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７～１１のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む。
【0041】
抗体のいくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号１２～１６のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む。
【0042】
抗体のいくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１８に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む。
【0043】
抗体のいくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号１９に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む。
【0044】
抗体のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１に由来する。抗体のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号１７に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む。
【0045】
抗体のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２及びダイアボディからなる群から選択される構造を形成する。
【0046】
抗体のいくつかの実施形態では、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は、Ｆｃ領域に作動可能に連結された重鎖可変領域を含み、軽鎖は、軽鎖可変領域を含む。
【0047】
抗体のいくつかの実施形態では、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、Ｆｃ領域に作動可能に連結された単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）を形成する。
【0048】
抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。
【0049】
抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体である。
【0050】
抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び多重特異性抗体からなる群から選択される。
【0051】
抗体のいくつかの実施形態では、抗体はモノクローナルである。
【0052】
抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、２００ｎＭ、１００ｎＭ、８０ｎＭ、６０ｎＭ又は４０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する。
【0053】
抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定して６０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する。
【0054】
抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定して４０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する。
【0055】
抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、５０００ｎＭ、４０００ｎＭ、２０００ｎＭ、１０００ｎＭ、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ又は２００ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＰＤ－１に結合する。
【0056】
抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定して６００ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＰＤ－１に結合する。
【0057】
抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定して３００ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＰＤ－１に結合する。
【0058】
抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、免疫細胞の表面上に発現されるヒトＰＤ－１をアゴナイズする。
【0059】
抗体のいくつかの実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。
【0060】
抗体のいくつかの実施形態では、免疫細胞の表面上に発現されたヒトＰＤ－１への抗体の結合が、抗体によって結合されていない同等の免疫細胞と比較して、細胞の増殖を減少させる。抗体のいくつかの実施形態では、細胞はＴ細胞である。抗体のいくつかの実施形態では、細胞活性化の減少を、実施例４に記載のＮＦＡＴレポーターアッセイによって測定する。抗体のいくつかの実施形態では、細胞活性化の減少は、破傷風トキソイド活性化アッセイ又は実施例５に記載のウイルスペプチド活性化アッセイによって測定される。抗体のいくつかの実施形態では、細胞増殖の減少は、実施例６に記載される抗ＣＤ３／２８活性化アッセイによって測定される。抗体のいくつかの実施形態では、細胞増殖の減少は、免疫細胞がＰＤ－Ｌ１発現細胞に近接しているときに測定される。抗体のいくつかの実施形態では、細胞増殖の減少は、実施例８に記載されるアッセイによって測定される。抗体のいくつかの実施形態では、細胞増殖の減少がインビトロ又はインビボで測定される。抗体のいくつかの実施形態では、当該細胞増殖の減少は、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、又は５０％である。抗体のいくつかの実施形態では、当該細胞増殖の減少は、約１０％～５０％、１０％～４０％、１０％～３０％、１０％～２０％、１０％～１５％、２０％～５０％、２０％～４０％、又は２０％～３０％である。
【0061】
抗体のいくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＦｃγＲ２Ｂに選択的に結合する。抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ、４μＭ、３μＭ、又は２μＭ未満のＫＤでヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する。抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、少なくとも２μＭ、１μＭ、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、８０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ又は５ｎＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する。抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、２００ｎＭ～５μＭ、４００ｎＭ～４μＭ、５００ｎＭ～３．５μＭ、８００ｎＭ～３μＭ、１μＭ～５μＭ、１μＭ～４．５μＭ、１μＭ～４μＭ、１μＭ～３．５μＭ、１μＭ～３μＭ、１μＭ～２．５μＭ、又は１μＭ～２μＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する。抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ又は１０μＭを超えるＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する。抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも１５μＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する。抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも５０μＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する。抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも８０μＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する。抗体のいくつかの実施形態では、ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比は、少なくとも２：１、３：１、４：１、５：１、又は６：１である。抗体のいくつかの実施形態では、ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比は、少なくとも６：１である。抗体のいくつかの実施形態では、ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比は、約６：１である。抗体のいくつかの実施形態では、ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比は、少なくとも１０：１、１５：１、２０：１、４０：１、又は５０：１である。抗体のいくつかの実施形態では、ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比は、少なくとも４０：１である。抗体のいくつかの実施形態では、ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比は、約４０：１である。抗体のいくつかの実施形態では、上記比は、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される。
【0062】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗体を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む単離された核酸が本明細書に開示される。
【0063】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗体を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含むベクターが本明細書に開示される。
【0064】
本明細書では、いくつかの態様では、発現されると本明細書に開示される抗体を形成することができる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列をコードする１つ以上の核酸分子を含む宿主細胞が開示される。
【0065】
いくつかの態様では、本明細書に開示されるのは、本明細書に開示される宿主細胞を抗体の産生のための条件下で培養することを含む方法である。
【0066】
いくつかの態様では、（ａ）発現されたときに本明細書に開示される抗体を形成することができる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列をコードする１つ以上の核酸分子を含む宿主細胞を提供することと、（ｂ）コードされたアミノ酸配列を発現する宿主細胞を培養することと、（ｃ）抗体を単離することと、を含む方法が、本明細書に開示される。
【0067】
いくつかの態様では、薬剤とコンジュゲートされた本明細書に開示される抗体を含む免疫コンジュゲートが本明細書に開示される。
【0068】
いくつかの態様では、治療有効量の本明細書に開示される抗体又は本明細書に開示される免疫コンジュゲートと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物が本明細書に開示される。
【0069】
いくつかの態様では、治療有効量の本明細書に開示される抗体又は本明細書に開示される免疫コンジュゲート、及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む、疾患又は状態を治療する際に使用するための医薬組成物が本明細書に開示される。
【0070】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗体又は本明細書に開示される免疫コンジュゲートを容器に含むキットが本明細書に開示される。
【0071】
キットのいくつかの場合では、キットは、本明細書に開示される抗体又は本明細書に開示される免疫コンジュゲートの使用説明書を含有する情報材料を更に含む。
【0072】
いくつかの態様では、治療有効量の本明細書に開示される抗体若しくは本明細書に開示される免疫コンジュゲートを対象に投与すること、又は本明細書に開示される医薬組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象の疾患又は状態を治療する方法が本明細書に開示される。方法のいくつかの場合では、疾患又は状態は、ＰＤ－１に関連する疾患又は状態を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態が、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、アレルギー、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、ＡＮＣＡ血管炎、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性多内分泌症候群、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、脳マラリア、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、セリアック病、クローン病、クッシング症候群、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、１型糖尿病、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、胆嚢疾患、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、ＩｇＧ４関連疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、炎症性線維症、過敏性腸症候群、若年性関節炎、川崎病、白血病、ループス腎炎、ライム関節炎、リンパ腫、リンパ増殖性障害、髄膜脳炎、多発性硬化症、重症筋無力症、骨髄腫、Ｘ線基準を満たさない体軸性脊椎関節炎（ｎｒ－ＡｘＳｐＡ）、視神経脊髄炎、変形性関節症、骨盤内炎症性疾患、天疱瘡、腹膜炎、毛巣嚢胞疾患、多発性筋炎、原発性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、高安動脈炎、側頭動脈炎、移植拒絶反応、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑及びフォークト・小柳・原田病を含む。いくつかの場合では、対象はヒト対象である。
【0073】
いくつかの態様では、対象に本明細書に開示される抗体を投与すること、本明細書に開示される免疫コンジュゲートを対象に投与すること、又は本明細書に開示される医薬組成物を対象に投与することを含む、対象における免疫応答を下方制御する方法が本明細書に開示される。
【0074】
いくつかの態様では、ＰＤ－１を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、免疫細胞を本明細書に開示される抗体又は本明細書に開示される免疫コンジュゲートと接触させることを含む方法が本明細書に開示される。いくつかの場合では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はマクロファージを含む。いくつかの場合では、免疫細胞は、抗原特異的Ｔ細胞を含む。いくつかの場合では、対象はヒト対象である。
【0075】
参照による組み込み
本明細書中で言及される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各個々の刊行物、特許、又は特許出願が参照により組み込まれることを具体的かつ個別に示した場合と同程度に、参照により本明細書中に組み込まれる。
本明細書中で言及される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各個々の刊行物、特許、又は特許出願が参照により組み込まれることを具体的かつ個別に示した場合と同程度に、参照により本明細書中に組み込まれる。
【0076】
本開示の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載されている。本開示の特徴及び利点のより良い理解は、本開示の原理が利用される例示的な実施形態を説明する以下の詳細な説明、及び添付の図面を参照することによって得られるであろう。
【図面の簡単な説明】
【0077】
【図1A】ＦｃＲを発現するａＡＰＣ（人工抗原提示細胞）、並びにＰＤ－１及びＴＣＲ（Ｔ細胞受容体）を提示する対向する細胞膜を示す概略図（左）、並びにＦｃＲを発現するａＡＰＣの存在下で、例示的抗体クローン１９ ｍＩｇＧ１による治療が、ルシフェラーゼシグナルの減少によって示されるように、Ｔ細胞の阻害をもたらしたが、ｍＩｇＧ１アイソタイプ対照の治療は、Ｔ細胞活性化に有意に影響しなかったことを実証するグラフ（右）を含む。この実験では、ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターＪｕｒｋａｔ細胞を、漸増濃度の抗ＰＤ－１クローン１９ ｍＩｇＧ１又はアイソタイプ対照と共にマウスＦｃγＲ２Ｂを発現する刺激因子細胞と共培養し、Ｔ細胞活性化の読み出しとして発光を測定した。
【0078】
【0079】
【図2A】ＪｕｒｋａｔレポーターアッセイにおいてＮＦＡＴシグナルによって決定される、Ｔ細胞活性化に対する例示的抗体の効果を実証するグラフを示す。この図は、アイソタイプ対照ではなく、全てのＰＤ－１抗体及びＰ２３８Ｄ変異バージョンのｈｕｍＣＬ１９ｖ１（表２参照）による細胞の治療が、Ｔ細胞活性化を有意に抑制したことを示し、ｈｕｍＣＬ１９ｖ１抗体の野生型ＩｇＧ１バージョンとｈｕｍＣＬ１９ｖ抗体のＰ２３８Ｄ変異バージョンとの間に有意差は検出されなかった。この実験では、ＰＤ－１発現ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼＪｕｒｋａｔレポーター細胞を、ヒトＦｃγＲ２Ｂ発現刺激因子細胞と、１０μｇ／ｍｌの単一濃度の種々の抗ＰＤ－１抗体の存在下で６時間共培養し、次いで、ＮＦＡＴ活性を発光定量によって測定した。
【0080】
【図2B】抗ＣＤ３「Ｔ細胞刺激因子」を発現するヒトＨＥＫ２９３Ｔ刺激因子細胞を使用してＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞の活性化を刺激した別のＴ細胞レポーターアッセイにおけるＮＦＡＴシグナルによって決定される、Ｔ細胞活性化に対する例示的抗体の効果を実証するグラフを示す。グラフは、Ｐ２３８Ｄ変異バージョンのｈｕｍＣＬ１９ｖ１による細胞の治療がＴ細胞活性化を有意に抑制したが、そのＰ２３８Ｄアイソタイプ対照は抑制しなかったことを示す。
【0081】
【図3A】破傷風トキソイド（ＴＴ）活性化アッセイにおけるＩＦＮγ放出によって決定される、Ｔ細胞活性化に対する例示的抗体の効果を実証するグラフを示す。ＰＤ－Ｌ１／２遮断抗体の存在下での破傷風トキソイド活性化アッセイ後の末梢血単核細胞によるＩＦＮγ放出は、ＩｇＧ１アイソタイプ対照治療と比較して、ＰＤ－１抗体及びＰ２３８Ｄ変異バージョンによる治療後に有意により抑制された。この実験では、６人の健康ドナー由来のヒトＰＢＭＣを、１μｇ／ｍｌの単回用量で様々なＰＤ－１抗体の存在下で破傷風トキソイドで刺激した。ＩＦＮｇ産生を上清のＥＬＩＳＡによって９６時間後に評価し、各ドナーについて、試験抗体の非存在下で刺激された細胞におけるＩＦＮｇレベルに対して正規化した。＊一元配置ＡＮＯＶＡを使用したアイソタイプ対照に対してｐ＜０．０５。
【0082】
【図3B】ウイルスペプチド活性化アッセイにおけるＩＦＮγ産生によって決定される、Ｔ細胞活性化に対する例示的抗体の効果を実証するグラフを示す。ブレフェルジンＡの存在下でのＣＥＦ ＨＬＡクラスＩペプチドによる刺激後の末梢血単核細胞によるＩＦＮγ産生は、ＩｇＧ１アイソタイプ対照治療と比較して、Ｐ２３８Ｄ変異型ｈｕｍＣＬ１９ｖ１による治療後に有意に抑制された。
【0083】
【図4】末梢血単核細胞の抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８刺激によるＣＤ２５の誘導後の、ＣＤ２５発現に対する例示的抗体の効果を実証するグラフを示す。アイソタイプ対照とは異なり、Ｐ２３８Ｄ変異ｈｕｍＣＬ１９ｖ１抗体は、ＩｇＧ１抗体と同様に、初代Ｔ細胞活性化（ＣＤ２５）発現を効果的に抑制した。この実験では、３人の健康ドナー由来のヒトＰＢＭＣを、１μｇ／ｍｌの単回用量で様々なＰＤ－１抗体の存在下で可溶性抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体で刺激した。ＣＤ４ Ｔ細胞上のＣＤ２５発現をフローサイトメトリによって７２時間後に評価し、各ドナーデータについて、試験抗体の非存在下で刺激された細胞におけるＣＤ２５発現レベルに対して正規化した。＊一元配置ＡＮＯＶＡを使用したアイソタイプ対照に対してｐ＜０．０５。
【0084】
【図5】ＰＤ－１抗体の存在下で、精製ＮＫ細胞と制御性Ｔ細胞との１：５の比での制御性Ｔ細胞との共培養によって誘導されたナチュラルキラー細胞（抗体依存性細胞傷害性、又はＡＤＣＣ）によるインビトロ脱顆粒を示す。ＩｇＧ１アイソタイプ対照とは異なり、全てのＩｇＧ１アイソタイプ抗ＰＤ－１抗体が、制御性Ｔ細胞の有意なＡＤＣＣ殺傷、したがって細胞の脱顆粒をもたらしたが、Ｐ２３８Ｄ変異ＰＤ－１抗体（ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄ）はもたらさなかった。この実験では、２０，０００個の健康なドナーＮＫ細胞を、１ｕｇ／ｍｌの示された抗体と共に、制御性Ｔ細胞と共にインキュベートした。１つの研究当たり１つのＴｒｅｇドナー及び３つの異なるＮＫ細胞ドナーを用いた２つの別々の研究からデータを示す。各異なるアイコンは異なるＮＫ細胞ドナーを表し、ＮＫ細胞脱顆粒はそのドナーの抗体なし設定に対して正規化されている。＊一元配置ＡＮＯＶＡを使用するアイソタイプ対照に対するｐ＜０．０５。
【0085】
【図6】ＪｕｒｋａｔレポーターアッセイにおいてＮＦＡＴシグナルによって測定した場合、ｈｕｍＣＬＶ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄ ＰＤ－１抗体のみが高ＰＤ－Ｌ１の存在下でＴ細胞活性化を阻害することができたが、他の全ての抗ＰＤ－１アゴニスト抗体は阻害しなかったことを示す。Ｔ細胞刺激因子構築物を含有するＰＤ－Ｌ１発現細胞をＰＤ－１発現Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞とインキュベートして、他のＰＤ－１抗体と比較してＰ２３８Ｄ変異ｈｕｍＣＬ１９ｖ１の影響を試験した場合、変異Ｐ２３８Ｄ ＰＤ－１抗体のみがＴ細胞活性化を有意に抑制した。この実験では、ＰＤ－１発現Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞を、様々なＰＤ－１抗体の存在下でＰＤ－Ｌ１発現刺激因子細胞と共培養し、Ｔ細胞活性化をルシフェラーゼ産生によって評価した。
【0086】
【図7A】それぞれ、ＣＤ２５発現（図７Ａ）、ＩＣＯＳ発現（図７Ｂ）、ＩＦＮγ（図７Ｃ、図中の「ＩＦＮｇ」）、ＩＬ－１７Ｆ（図７Ｄ）、及びＴＮＦα（図７Ｅ、図中の「ＴＮＦａ」）によって測定される、ＲＡ ＰＢＭＣ、線維芽細胞共培養物におけるＴ細胞活性化に対する例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体の効果を実証するグラフである。この実験では、ＲＡ患者由来のＰＢＭＣを線維芽細胞様滑膜細胞と共培養し、異なるＰＤ－１抗体又はアイソタイプ対照の存在下で抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８で刺激した。細胞及び上清を７２時間で評価した。ＣＤ４ Ｔ細胞上のＣＤ２５及びＩＣＯＳ発現をフローサイトメトリによって評価した。培養上清中のＩＦＮｇ、ＩＬ－１７Ｆ及びＴＮＦαのレベルをサイトメトリービーズアレイによって評価した。各記号は、そのドナーの抗体なし設定に対して正規化された異なるＰＢＭＣドナーを表す。＊一元配置ＡＮＯＶＡを使用するアイソタイプ対照に対するｐ＜０．０５。
【図7B】それぞれ、ＣＤ２５発現（図７Ａ）、ＩＣＯＳ発現（図７Ｂ）、ＩＦＮγ（図７Ｃ、図中の「ＩＦＮｇ」）、ＩＬ－１７Ｆ（図７Ｄ）、及びＴＮＦα（図７Ｅ、図中の「ＴＮＦａ」）によって測定される、ＲＡ ＰＢＭＣ、線維芽細胞共培養物におけるＴ細胞活性化に対する例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体の効果を実証するグラフである。この実験では、ＲＡ患者由来のＰＢＭＣを線維芽細胞様滑膜細胞と共培養し、異なるＰＤ－１抗体又はアイソタイプ対照の存在下で抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８で刺激した。細胞及び上清を７２時間で評価した。ＣＤ４ Ｔ細胞上のＣＤ２５及びＩＣＯＳ発現をフローサイトメトリによって評価した。培養上清中のＩＦＮｇ、ＩＬ－１７Ｆ及びＴＮＦαのレベルをサイトメトリービーズアレイによって評価した。各記号は、そのドナーの抗体なし設定に対して正規化された異なるＰＢＭＣドナーを表す。＊一元配置ＡＮＯＶＡを使用するアイソタイプ対照に対するｐ＜０．０５。
【図7C】それぞれ、ＣＤ２５発現（図７Ａ）、ＩＣＯＳ発現（図７Ｂ）、ＩＦＮγ（図７Ｃ、図中の「ＩＦＮｇ」）、ＩＬ－１７Ｆ（図７Ｄ）、及びＴＮＦα（図７Ｅ、図中の「ＴＮＦａ」）によって測定される、ＲＡ ＰＢＭＣ、線維芽細胞共培養物におけるＴ細胞活性化に対する例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体の効果を実証するグラフである。この実験では、ＲＡ患者由来のＰＢＭＣを線維芽細胞様滑膜細胞と共培養し、異なるＰＤ－１抗体又はアイソタイプ対照の存在下で抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８で刺激した。細胞及び上清を７２時間で評価した。ＣＤ４ Ｔ細胞上のＣＤ２５及びＩＣＯＳ発現をフローサイトメトリによって評価した。培養上清中のＩＦＮｇ、ＩＬ－１７Ｆ及びＴＮＦαのレベルをサイトメトリービーズアレイによって評価した。各記号は、そのドナーの抗体なし設定に対して正規化された異なるＰＢＭＣドナーを表す。＊一元配置ＡＮＯＶＡを使用するアイソタイプ対照に対するｐ＜０．０５。
【図7D】それぞれ、ＣＤ２５発現（図７Ａ）、ＩＣＯＳ発現（図７Ｂ）、ＩＦＮγ（図７Ｃ、図中の「ＩＦＮｇ」）、ＩＬ－１７Ｆ（図７Ｄ）、及びＴＮＦα（図７Ｅ、図中の「ＴＮＦａ」）によって測定される、ＲＡ ＰＢＭＣ、線維芽細胞共培養物におけるＴ細胞活性化に対する例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体の効果を実証するグラフである。この実験では、ＲＡ患者由来のＰＢＭＣを線維芽細胞様滑膜細胞と共培養し、異なるＰＤ－１抗体又はアイソタイプ対照の存在下で抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８で刺激した。細胞及び上清を７２時間で評価した。ＣＤ４ Ｔ細胞上のＣＤ２５及びＩＣＯＳ発現をフローサイトメトリによって評価した。培養上清中のＩＦＮｇ、ＩＬ－１７Ｆ及びＴＮＦαのレベルをサイトメトリービーズアレイによって評価した。各記号は、そのドナーの抗体なし設定に対して正規化された異なるＰＢＭＣドナーを表す。＊一元配置ＡＮＯＶＡを使用するアイソタイプ対照に対するｐ＜０．０５。
【図7E】それぞれ、ＣＤ２５発現（図７Ａ）、ＩＣＯＳ発現（図７Ｂ）、ＩＦＮγ（図７Ｃ、図中の「ＩＦＮｇ」）、ＩＬ－１７Ｆ（図７Ｄ）、及びＴＮＦα（図７Ｅ、図中の「ＴＮＦａ」）によって測定される、ＲＡ ＰＢＭＣ、線維芽細胞共培養物におけるＴ細胞活性化に対する例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体の効果を実証するグラフである。この実験では、ＲＡ患者由来のＰＢＭＣを線維芽細胞様滑膜細胞と共培養し、異なるＰＤ－１抗体又はアイソタイプ対照の存在下で抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８で刺激した。細胞及び上清を７２時間で評価した。ＣＤ４ Ｔ細胞上のＣＤ２５及びＩＣＯＳ発現をフローサイトメトリによって評価した。培養上清中のＩＦＮｇ、ＩＬ－１７Ｆ及びＴＮＦαのレベルをサイトメトリービーズアレイによって評価した。各記号は、そのドナーの抗体なし設定に対して正規化された異なるＰＢＭＣドナーを表す。＊一元配置ＡＮＯＶＡを使用するアイソタイプ対照に対するｐ＜０．０５。
【0087】
【図8】様々なＰＤ－１抗体とプレインキュベートしたＰＤ－１発現Ｊｕｒｋａｔ細胞へのＰＤＬ１－Ｆｃの結合に対する例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体の効果を示すグラフである。ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄのみが、ＰＤ－１発現Ｊｕｒｋａｔ細胞へのＰＤＬ１－Ｆｃの結合を増加させることが示された。この実験では、ＰＤ－１発現Ｊｕｒｋａｔ細胞を氷上で１０μｇ／ｍｌで１時間プレインキュベートし、次いで漸増濃度のＡＦ６４７コンジュゲートＰＤＬ１－Ｆｃで染色した。
【0088】
【図9A】ＰＤ－１アゴニストによって下方制御される遺伝子が自己免疫に関連することを実証する。図９Ａは、ルシフェラーゼ活性によって測定される、ＰＤ－Ｌ１の非存在下であるが、例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体（クローン１９ ｍＩｇＧ１）又はアイソタイプ対照の存在下での、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞の活性化を示すグラフである。ＰＤ－１発現Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞を、５μｇ／ｍｌクローン１９ ｍＩｇＧ１又はアイソタイプ対照の存在下でＦｃＲ発現刺激因子細胞と共培養し、各ウェル由来の細胞の一部を採取して、Ｔ細胞活性化の読み出しとしてルシフェラーゼ産生を評価した。図９Ｂは、磁気選別前後の活性化Ｊｕｒｋａｔ細胞の代表的なフローサイトメトリプロットを示す。磁気ビーズを用いたネガティブ選択によってＪｕｒｋａｔ細胞を刺激因子細胞から分離し、精製Ｊｕｒｋａｔの純度をフローサイトメトリによって評価した。図９Ｃは、ＧｅｎｅＷｉｚを用いた精製Ｊｕｒｋａｔ細胞のバルクＲＮＡ配列決定によって、ＰＤ－１アゴニストの存在下で活性化されたＪｕｒｋａｔについて示差的に発現した遺伝子をアイソタイプ対照に対して示すボルケーノプロットである。図９Ｄは、ＰＤ－１アゴニズムによって有意に下方制御される遺伝子の兆候を示す。異なる形質に関連する遺伝子の濃縮を同定するために、遺伝子をＥＢＩ ＧＷＡＳカタログにマッピングした。
【図9B】ＰＤ－１アゴニストによって下方制御される遺伝子が自己免疫に関連することを実証する。図９Ａは、ルシフェラーゼ活性によって測定される、ＰＤ－Ｌ１の非存在下であるが、例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体（クローン１９ ｍＩｇＧ１）又はアイソタイプ対照の存在下での、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞の活性化を示すグラフである。ＰＤ－１発現Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞を、５μｇ／ｍｌクローン１９ ｍＩｇＧ１又はアイソタイプ対照の存在下でＦｃＲ発現刺激因子細胞と共培養し、各ウェル由来の細胞の一部を採取して、Ｔ細胞活性化の読み出しとしてルシフェラーゼ産生を評価した。図９Ｂは、磁気選別前後の活性化Ｊｕｒｋａｔ細胞の代表的なフローサイトメトリプロットを示す。磁気ビーズを用いたネガティブ選択によってＪｕｒｋａｔ細胞を刺激因子細胞から分離し、精製Ｊｕｒｋａｔの純度をフローサイトメトリによって評価した。図９Ｃは、ＧｅｎｅＷｉｚを用いた精製Ｊｕｒｋａｔ細胞のバルクＲＮＡ配列決定によって、ＰＤ－１アゴニストの存在下で活性化されたＪｕｒｋａｔについて示差的に発現した遺伝子をアイソタイプ対照に対して示すボルケーノプロットである。図９Ｄは、ＰＤ－１アゴニズムによって有意に下方制御される遺伝子の兆候を示す。異なる形質に関連する遺伝子の濃縮を同定するために、遺伝子をＥＢＩ ＧＷＡＳカタログにマッピングした。
【図9C】ＰＤ－１アゴニストによって下方制御される遺伝子が自己免疫に関連することを実証する。図９Ａは、ルシフェラーゼ活性によって測定される、ＰＤ－Ｌ１の非存在下であるが、例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体（クローン１９ ｍＩｇＧ１）又はアイソタイプ対照の存在下での、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞の活性化を示すグラフである。ＰＤ－１発現Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞を、５μｇ／ｍｌクローン１９ ｍＩｇＧ１又はアイソタイプ対照の存在下でＦｃＲ発現刺激因子細胞と共培養し、各ウェル由来の細胞の一部を採取して、Ｔ細胞活性化の読み出しとしてルシフェラーゼ産生を評価した。図９Ｂは、磁気選別前後の活性化Ｊｕｒｋａｔ細胞の代表的なフローサイトメトリプロットを示す。磁気ビーズを用いたネガティブ選択によってＪｕｒｋａｔ細胞を刺激因子細胞から分離し、精製Ｊｕｒｋａｔの純度をフローサイトメトリによって評価した。図９Ｃは、ＧｅｎｅＷｉｚを用いた精製Ｊｕｒｋａｔ細胞のバルクＲＮＡ配列決定によって、ＰＤ－１アゴニストの存在下で活性化されたＪｕｒｋａｔについて示差的に発現した遺伝子をアイソタイプ対照に対して示すボルケーノプロットである。図９Ｄは、ＰＤ－１アゴニズムによって有意に下方制御される遺伝子の兆候を示す。異なる形質に関連する遺伝子の濃縮を同定するために、遺伝子をＥＢＩ ＧＷＡＳカタログにマッピングした。
【図9D】ＰＤ－１アゴニストによって下方制御される遺伝子が自己免疫に関連することを実証する。図９Ａは、ルシフェラーゼ活性によって測定される、ＰＤ－Ｌ１の非存在下であるが、例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体（クローン１９ ｍＩｇＧ１）又はアイソタイプ対照の存在下での、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞の活性化を示すグラフである。ＰＤ－１発現Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞を、５μｇ／ｍｌクローン１９ ｍＩｇＧ１又はアイソタイプ対照の存在下でＦｃＲ発現刺激因子細胞と共培養し、各ウェル由来の細胞の一部を採取して、Ｔ細胞活性化の読み出しとしてルシフェラーゼ産生を評価した。図９Ｂは、磁気選別前後の活性化Ｊｕｒｋａｔ細胞の代表的なフローサイトメトリプロットを示す。磁気ビーズを用いたネガティブ選択によってＪｕｒｋａｔ細胞を刺激因子細胞から分離し、精製Ｊｕｒｋａｔの純度をフローサイトメトリによって評価した。図９Ｃは、ＧｅｎｅＷｉｚを用いた精製Ｊｕｒｋａｔ細胞のバルクＲＮＡ配列決定によって、ＰＤ－１アゴニストの存在下で活性化されたＪｕｒｋａｔについて示差的に発現した遺伝子をアイソタイプ対照に対して示すボルケーノプロットである。図９Ｄは、ＰＤ－１アゴニズムによって有意に下方制御される遺伝子の兆候を示す。異なる形質に関連する遺伝子の濃縮を同定するために、遺伝子をＥＢＩ ＧＷＡＳカタログにマッピングした。
【0089】
【図10A】総抗ヒストンＩｇＧレベル（図１０Ａ）、細胞移入後３５日目の血清中の抗ｄｓＤＮＡ ＩｇＧのレベル（図１０Ｂ）、３５日目の脾臓におけるＴｆｈ細胞頻度（総ＣＤ４のパーセントとしてのＣＸＣＲ５＋ＩＣＯＳ＋）（図１０Ｃ）、及び３５日目の試験終了時の脾臓重量（図１０Ｄ）によって測定される、ＳＬＥのマウスモデルにおける例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体、クローン１９の効果を示すグラフである。抗ｄｓＤＮＡ ＩｇＧのレベルをＥＬＩＳＡによって評価し、プール血清の標準曲線を使用して任意単位として定量した。
【図10B】総抗ヒストンＩｇＧレベル（図１０Ａ）、細胞移入後３５日目の血清中の抗ｄｓＤＮＡ ＩｇＧのレベル（図１０Ｂ）、３５日目の脾臓におけるＴｆｈ細胞頻度（総ＣＤ４のパーセントとしてのＣＸＣＲ５＋ＩＣＯＳ＋）（図１０Ｃ）、及び３５日目の試験終了時の脾臓重量（図１０Ｄ）によって測定される、ＳＬＥのマウスモデルにおける例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体、クローン１９の効果を示すグラフである。抗ｄｓＤＮＡ ＩｇＧのレベルをＥＬＩＳＡによって評価し、プール血清の標準曲線を使用して任意単位として定量した。
【0090】
【0091】
【図12A】例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体であるクローン１９が、マウスにおいて遅延型過敏反応を阻害することを示す。図１２Ａは、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）誘発性遅延型過敏症（ＤＴＨ）に対するクローン１９の効果を示す。マウスを、１０ｍｇ／ｋｇのクローン１９又はアイソタイプ対照抗体による治療の１時間後の０日目にＫＬＨ抗原で免疫化し、次いで、５日目に片耳で皮内チャレンジした。６日目に測定した、異なる治療群におけるチャレンジされた、及びチャレンジされていない耳の生検重量の差を図に示す。図１２Ｂは、マウスを同様に治療したが、様々な用量のクローン１９で治療した別の実験の結果を示す。各ドットは個々のマウスを表す。＊上記の群は、クラスカル・ウォリス、ダンの多重比較検定を用いてアイソタイプ対照に対してｐ＜０．０５を表す。
【図12B】例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体であるクローン１９が、マウスにおいて遅延型過敏反応を阻害することを示す。図１２Ａは、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）誘発性遅延型過敏症（ＤＴＨ）に対するクローン１９の効果を示す。マウスを、１０ｍｇ／ｋｇのクローン１９又はアイソタイプ対照抗体による治療の１時間後の０日目にＫＬＨ抗原で免疫化し、次いで、５日目に片耳で皮内チャレンジした。６日目に測定した、異なる治療群におけるチャレンジされた、及びチャレンジされていない耳の生検重量の差を図に示す。図１２Ｂは、マウスを同様に治療したが、様々な用量のクローン１９で治療した別の実験の結果を示す。各ドットは個々のマウスを表す。＊上記の群は、クラスカル・ウォリス、ダンの多重比較検定を用いてアイソタイプ対照に対してｐ＜０．０５を表す。
【0092】
【図13A】例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体であるｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄが、マウスモデルにおいて移植片対宿主病の症状を改善することを示す。照射されたマウスにヒト抹消血単核細胞（ＰＢＭＣ）を注射し、次いで、ＰＢＭＣ注射後０日目、並びに７、１４及び２１日目に、１０ｍｇ／ｋｇのｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄ又はＰ２３８Ｄ変異ｈＩｇＧ１アイソタイプによる治療を受けた。ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄは、アイソタイプ対照と比較して、牌臓重量（図１３Ａ）、牌臓におけるヒト免疫細胞増殖（図１３Ｂ）及び肝臓におけるヒト免疫細胞増殖（図１３Ｃ）、並びに血清中炎症サイトカインレベル（図１３Ｄ）を有意に低下させることが示された。図１３Ｅは、ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄがまた、肝臓及び脾臓におけるヒト免疫細胞の細胞内フローサイトメトリによって評価されるように、細胞当たりのベースでＣＤ４及びＣＤ８サイトカイン産生を低下させたことを示す。
【図13B】例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体であるｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄが、マウスモデルにおいて移植片対宿主病の症状を改善することを示す。照射されたマウスにヒト抹消血単核細胞（ＰＢＭＣ）を注射し、次いで、ＰＢＭＣ注射後０日目、並びに７、１４及び２１日目に、１０ｍｇ／ｋｇのｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄ又はＰ２３８Ｄ変異ｈＩｇＧ１アイソタイプによる治療を受けた。ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄは、アイソタイプ対照と比較して、牌臓重量（図１３Ａ）、牌臓におけるヒト免疫細胞増殖（図１３Ｂ）及び肝臓におけるヒト免疫細胞増殖（図１３Ｃ）、並びに血清中炎症サイトカインレベル（図１３Ｄ）を有意に低下させることが示された。図１３Ｅは、ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄがまた、肝臓及び脾臓におけるヒト免疫細胞の細胞内フローサイトメトリによって評価されるように、細胞当たりのベースでＣＤ４及びＣＤ８サイトカイン産生を低下させたことを示す。
【図13C】例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体であるｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄが、マウスモデルにおいて移植片対宿主病の症状を改善することを示す。照射されたマウスにヒト抹消血単核細胞（ＰＢＭＣ）を注射し、次いで、ＰＢＭＣ注射後０日目、並びに７、１４及び２１日目に、１０ｍｇ／ｋｇのｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄ又はＰ２３８Ｄ変異ｈＩｇＧ１アイソタイプによる治療を受けた。ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄは、アイソタイプ対照と比較して、牌臓重量（図１３Ａ）、牌臓におけるヒト免疫細胞増殖（図１３Ｂ）及び肝臓におけるヒト免疫細胞増殖（図１３Ｃ）、並びに血清中炎症サイトカインレベル（図１３Ｄ）を有意に低下させることが示された。図１３Ｅは、ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄがまた、肝臓及び脾臓におけるヒト免疫細胞の細胞内フローサイトメトリによって評価されるように、細胞当たりのベースでＣＤ４及びＣＤ８サイトカイン産生を低下させたことを示す。
【図13D】例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体であるｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄが、マウスモデルにおいて移植片対宿主病の症状を改善することを示す。照射されたマウスにヒト抹消血単核細胞（ＰＢＭＣ）を注射し、次いで、ＰＢＭＣ注射後０日目、並びに７、１４及び２１日目に、１０ｍｇ／ｋｇのｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄ又はＰ２３８Ｄ変異ｈＩｇＧ１アイソタイプによる治療を受けた。ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄは、アイソタイプ対照と比較して、牌臓重量（図１３Ａ）、牌臓におけるヒト免疫細胞増殖（図１３Ｂ）及び肝臓におけるヒト免疫細胞増殖（図１３Ｃ）、並びに血清中炎症サイトカインレベル（図１３Ｄ）を有意に低下させることが示された。図１３Ｅは、ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄがまた、肝臓及び脾臓におけるヒト免疫細胞の細胞内フローサイトメトリによって評価されるように、細胞当たりのベースでＣＤ４及びＣＤ８サイトカイン産生を低下させたことを示す。
【図13E】例示的なＰＤ－１アゴニスト抗体であるｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄが、マウスモデルにおいて移植片対宿主病の症状を改善することを示す。照射されたマウスにヒト抹消血単核細胞（ＰＢＭＣ）を注射し、次いで、ＰＢＭＣ注射後０日目、並びに７、１４及び２１日目に、１０ｍｇ／ｋｇのｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄ又はＰ２３８Ｄ変異ｈＩｇＧ１アイソタイプによる治療を受けた。ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄは、アイソタイプ対照と比較して、牌臓重量（図１３Ａ）、牌臓におけるヒト免疫細胞増殖（図１３Ｂ）及び肝臓におけるヒト免疫細胞増殖（図１３Ｃ）、並びに血清中炎症サイトカインレベル（図１３Ｄ）を有意に低下させることが示された。図１３Ｅは、ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄがまた、肝臓及び脾臓におけるヒト免疫細胞の細胞内フローサイトメトリによって評価されるように、細胞当たりのベースでＣＤ４及びＣＤ８サイトカイン産生を低下させたことを示す。
【発明を実施するための形態】
【0093】
いくつかの態様では、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合し、ＰＤ－１シグナル伝達をアゴナイズする抗体が本明細書に開示される。いくつかの場合では、本明細書に開示されるＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１のアゴニストとして作用し、それによってＰＤ－１によって調節される免疫応答を調節することができる。
【0094】
いくつかの場合では、本明細書に開示されるアゴニスト抗ＰＤ－１抗体は、Ｆｃ領域アミノ酸置換を有するＦｃ領域を含み、その結果、Ｆｃ領域アミノ酸置換を欠く親分子と比較して、対象におけるＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）が減少するが、親分子と比較して、ＰＤ－１シグナル伝達に対する抗体のアゴニスト効果を維持又は増強する。いくつかの場合では、本明細書に開示される抗ＰＤ－１抗体のＦｃ領域アミノ酸置換は、ＦｃγＲ２Ｂに対する結合選択性の向上をもたらし、例えば、ＦｃγＲ２Ｂに対する結合親和性が他のタイプのＦｃ受容体と比較して相対的に高く、結合親和性の差がアミノ酸置換を欠く親分子よりも高い。「ＦｃγＲ２Ｂ」、「ＦｃｇＲ２Ｂ」、「ＦｃγＲ２Ｂ」及び「ＦｃγＲＩＩＢ」という用語は、本明細書では互換的に使用され、Ｆｃ受容体の同じサブタイプを指す。
【0095】
特定の理論に拘束されることを望むものではないが、本明細書に開示される抗ＰＤ－１抗体のＦｃ領域アミノ酸置換は、ＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合選択性を高めることができる。ヒトでは、１つの阻害性Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ２Ｂ）が存在するが、他のＦｃガンマ受容体は全て免疫活性化シグナルを送達し得る（例えば、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ３Ａ及びＦｃγＲ３Ｂ）。これらの活性化ＦｃＲは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）に寄与することができ、標的発現細胞の枯渇をもたらし得る。ＦｃγＲ２ＢへのＦｃ結合の選択性を増加させることにより、炎症性ＦｃＲシグナル伝達を誘発することなく、またＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞を枯渇させることなく、免疫応答を抑制する際の本明細書に開示されるＰＤ－１アゴニスト抗体の有効性を高めることができると考えられる。更に、いくつかの場合では、ＦｃγＲ２Ｂへの選択的結合は、ＰＤ－１発現細胞上のＰＤ－１及びＦｃγＲ２Ｂ発現細胞上のＦｃγＲ２Ｂを介して双方向阻害シグナル伝達を促進することができ、これは抗体の免疫抑制効果を強化することができる。逆に、いくつかの場合では、ＦｃγＲ２Ｂに対する非常に高い親和性は、７．７４ｎＭのＫＤでＦｃγＲ２Ｂに結合するＦｃγＲ２Ｂ増強ＩｇＧ１抗体ＸｍＡｂ７１９５によって実証されたように、肝臓類洞上皮細胞における受容体の代謝回転に起因して抗体半減期に悪影響を及ぼし得（Ｇａｎｅｓａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２ Ｎｏｖ １５；１８９（１０）：４９８１－８．ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１２０２０１７）（Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２ Ａｐｒ；１２９（４）：１１０２－１５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊａｃｉ．２０１１．１１．０２９．）、Ｘｅｎｃｏｒによって、野生型ＩｇＧ１の平均半減期が約２１日であるのと比較して、第１ａ相試験（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ（ＡＴＳ）２０１６ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ－Ａ６４７６：Ｐｏｓｔｅｒ Ｂｏａｒｄ Ｎｕｍｂｅｒ ４０７）では平均インビボ半減期が３．９日であると報告された（Ｍｏｒｅｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９７０；４９（４）：６７３－６８０．ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣＩ１０６２７９）。したがって、ＦｃγＲ２Ｂに対する選択性及びアゴニズムを支持するのに十分な結合がＰＤ－１アゴニスト抗体にとって望ましいかもしれないが、ＦｃγＲ２Ｂに対する過度に高い親和性は、潜在的な結果としての短縮された半減期がより頻繁な投与を必要とする可能性があるので、治療状況において望ましくないかもしれない。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、本明細書に開示される抗ＰＤ－１抗体のＦｃ領域アミノ酸置換は、ＦｃγＲ２Ｂに対する過度に高い親和性を回避し、抗体の望ましい半減期を維持しながら、ＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合選択性を高めることができる。
【0096】
いくつかの場合では、開示されるアゴニスト抗ＰＤ－１抗体は、免疫細胞及び／又は免疫系に対する阻害性シグナル伝達を促進し、免疫細胞応答を下方制御する点で、現在の抗体よりも有効である。いくつかの場合では、本明細書に開示されるＰＤ－１抗体は、ＰＤ－Ｌ１に対するＰＤ－１の結合を増強する。いくつかの場合では、本明細書に開示されるＰＤ－１抗体は、ＰＤ－Ｌ１の近傍においてさえ、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達を促進する。本明細書に開示されるＰＤ－１抗体は、免疫系媒介障害及び／又はＰＤ－１関連障害、あるいは異常な免疫病態によって生じる疾患又は癌性起源を有する疾患の治療において特に有用であり得る。ＰＤ－１関連障害には、症状の１つとして１つ以上の種類の免疫細胞における調節不全のＰＤ－１発現及び／若しくは活性を示す障害、又は１つ以上の種類の免疫細胞におけるＰＤ－１発現及び／若しくは活性の調節不全によって引き起こされる障害が含まれ得る。
【0097】
いくつかの態様では、ＰＤ－１抗体に関連する方法、システム、医薬組成物、組成物、治療方法、キット及び製造方法が本明細書に開示される。
【0098】
本明細書に記載される様々な実施形態の特性のうちの１つ、いくつか、又は全ては、内容が明確に別様に指示しない限り、任意の態様に適用され得ることを理解されたい。更に、様々な実施形態を組み合わせて、本発明の他の実施形態を形成することができる。本発明のこれらの態様及び他の態様は、当業者に明らかになるであろう。本発明のこれらの実施形態及び他の実施形態は、以下の詳細な説明によって更に説明される。
【0099】
定義
本明細書で使用される「アゴニスト」、「アゴニスト」、「アゴナイズする」及び他の文法上の等価物という用語は、受容体又は任意の他のタンパク質標的に結合し、受容体又はタンパク質標的の活性を活性化又は増強するか、又はその活性化の開始を助けることができる薬剤を指すか、又はそれに関する。いくつかの場合では、アゴニストは、それが結合する受容体又は他のタンパク質標的を促進して、生物学的応答、例えばシグナル伝達又は細胞活性の他の変化を誘導することができる。本明細書で使用される場合、ＰＤ－１アゴニスト抗体（又は抗体断片）は、免疫細胞の表面に発現されるＰＤ－１に結合し、限定されないが、Ｔ細胞、マクロファージ及び／又はＢ細胞を含む免疫細胞に対するその阻害シグナルを増強する抗体（又は抗体断片）を指す。
本明細書で使用される「アゴニスト」、「アゴニスト」、「アゴナイズする」及び他の文法上の等価物という用語は、受容体又は任意の他のタンパク質標的に結合し、受容体又はタンパク質標的の活性を活性化又は増強するか、又はその活性化の開始を助けることができる薬剤を指すか、又はそれに関する。いくつかの場合では、アゴニストは、それが結合する受容体又は他のタンパク質標的を促進して、生物学的応答、例えばシグナル伝達又は細胞活性の他の変化を誘導することができる。本明細書で使用される場合、ＰＤ－１アゴニスト抗体（又は抗体断片）は、免疫細胞の表面に発現されるＰＤ－１に結合し、限定されないが、Ｔ細胞、マクロファージ及び／又はＢ細胞を含む免疫細胞に対するその阻害シグナルを増強する抗体（又は抗体断片）を指す。
【0100】
本開示では、態様が「含む（comprising）」という文言で本明細書に記載されている場合は常に、「からなる（consisting of）」及び／又は「から本質的になる（consisting essentially of）」という用語で記載されている他の類似の態様もまた提供される。本明細書に記載の全ての定義は、具体的に言及されているか否かにかかわらず、本明細書及び添付の特許請求の範囲を通して使用される定義を指すと解釈されるべきである。
【0101】
本明細書及び添付の特許請求の範囲を通して、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないことを指示しない限り、複数の言及を含む。例えば、「細胞（a cell）」という用語は、それらの混合物を含む複数の細胞を含む。
【0102】
本開示では、本明細書に記載される様々な実施形態の特性のうちの１つ、いくつか、又は全ては、内容が明確に別様に指示しない限り、任意の態様に適用され得る。更に、様々な実施形態を組み合わせて、本発明の他の実施形態を形成することができる。本発明のこれらの態様及び他の態様は、当業者に明らかになるであろう。本発明のこれら及び他の実施形態は、本明細書の詳細な説明によって更に説明される。
【0103】
本明細書及び添付の特許請求の範囲を通して、特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、及びｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くの一般的な辞書を、当業者に提供する。
【0104】
アミノ酸は、本明細書において、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ生化学命名委員会によって推奨されるそれらの一般的に知られている３文字記号又は１文字記号のいずれかによって言及され得る。ヌクレオチドは、同様に、それらの一般的に受け入れられている１文字コードによって言及され得る。
【0105】
抗体の可変ドメイン、ＣＤＲ及びフレームワーク領域（ＦＲ）におけるアミノ酸の番号付けは、別段示されない限り、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）に記載されているＫａｂａｔの定義に従う。
【0106】
「約（about）」又は「およそ（approximately）」という用語は、当業者によって決定される特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味し、これは値がどのように測定又は決定されるか、すなわち測定システムの制限に部分的に依存する。例えば、「約」は、当技術分野の慣例に従って、１標準偏差以内又は１標準偏差を超えることを意味することができる。あるいは、「約」は、所与の値の最大２０％、最大１０％、最大５％、又は最大１％の範囲を意味することができる。あるいは、特に生物学的システム又はプロセスに関して、この用語は、一桁以内、例えば、値の５倍以内、又は２倍以内を意味し得る。特定の値が本出願及び特許請求の範囲に記載されている場合、特に明記しない限り、「約」という用語は、特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味すると仮定されるべきである。
【0107】
「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書では互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは直鎖又は分岐鎖であってもよく、修飾アミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸によって中断されてもよい。この用語はまた、天然に又は介入によって修飾されたアミノ酸ポリマーを包含し、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は標識成分とのコンジュゲーションなどの任意の他の操作若しくは修飾が挙げられる。例えば、アミノ酸の１つ又はそれを超える類似体（例えば、非天然アミノ酸などを含む。）、並びに当技術分野で公知の他の修飾を含有するポリペプチドも定義に含まれる。本明細書に記載のポリペプチドは抗体に基づくので、ポリペプチドは単鎖又は関連鎖として存在し得ることが理解される。
【0108】
「アミノ酸」という用語は、Ｄ又はＬ光学異性体、並びにアミノ酸類似体及びペプチド模倣体の両方を含むがこれらに限定されない、天然、非天然及び合成アミノ酸を指す。標準的な１文字又は３文字コードを使用してアミノ酸を指定する。
【0109】
タンパク質に適用される場合の「バリアント」は、生物学的に活性なタンパク質の治療活性及び／又は生物学的活性の少なくとも一部を保持する天然の生物学的に活性なタンパク質と配列相同性を有するタンパク質である。例えば、バリアントタンパク質は、参照生物学的に活性なタンパク質又は少なくとも７０％～７５％の間の任意の範囲と比較して、少なくとも７０％、９９％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％のアミノ酸配列同一性を共有し得る。本明細書で使用される場合、「生物学的に活性なタンパク質部分」という用語は、例えば部位特異的変異誘発、コード遺伝子の合成、挿入、又は変異によって偶発的に修飾されたタンパク質を含む。
【0110】
ポリペプチドの文脈では、「直鎖状配列」又は「配列」は、配列中で互いに隣接する残基がポリペプチドの一次構造中で連続しているアミノからカルボキシル末端方向のポリペプチド中のアミノ酸の順序である。「部分配列」は、一方向又は両方向に更なる残基を含むことが知られているポリペプチドの一部の直鎖配列である。
【0111】
本明細書で互換的に使用される「ポリヌクレオチド」又は「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド若しくは塩基、及び／又はそれらの類似体、又はＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼによってポリマーに組み込むことができる任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾は、ポリマーの構築前又は後に付与され得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断されてもよい。ポリヌクレオチドは、標識成分とのコンジュゲーションなどによって、重合後に更に修飾され得る。他のタイプの修飾としては、例えば、「キャップ」、類似体による１つ以上の天然に存在するヌクレオチドの置換、ヌクレオチド間修飾、例えば、非荷電結合を有する修飾（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメートなど）及び荷電結合を有する修飾（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）、ペンダント部分を含む修飾、例えば、タンパク質を含む修飾（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ－Ｌ－リジンリジンなど）、インターカレーターを含むもの（例えば、アクリジン、ソラレンなど）、キレート剤を含むもの（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）、アルキル化剤を含むもの、修飾結合を有するもの（例えば、アルファアノマー核酸など）、並びにポリヌクレオチドの非修飾形態が挙げられる。更に、糖中に通常存在する任意のヒドロキシル基は、例えば、ホスホネート基、ホスフェート基によって置換されていてもよく、標準的な保護基によって保護されていてもよく、又は活性化されて更なるヌクレオチドへの更なる結合を調製してもよく、又は固体支持体にコンジュゲートされていてもよい。５’及び３’末端ＯＨは、リン酸化されていてもよく、又は１から２０個の炭素原子のアミン又は有機キャッピング基部分で置換されていてもよい。他のヒドロキシルもまた、標準的な保護基に誘導体化され得る。ポリヌクレオチドはまた、例えば、２’－Ｏ－メチル－、２’－Ｏ－アリル、２’－フルオロ－又は２’－アジド－リボース、炭素環式糖類似体、α－アノマー糖、アラビノースなどのエピマー糖、キシロース又はリキソ糖、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体及びメチルリボシドなどの非塩基性ヌクレオシド類似体を含む、当技術分野で一般的に知られているリボース又はデオキシリボース糖の類似形態を含むことができる。１つ以上のホスホジエステル結合は、代替の連結基によって置換され得る。これらの代替の連結基としては、ホスフェートがＰ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ又はＣＨ２（「ホルムアセタール」）によって置換される実施形態が挙げられるが、これらに限定されず、ここで、各Ｒ又はＲ’は、独立して、Ｈ又は置換若しくは非置換のアルキル（１～２０Ｃ）（必要に応じてエーテル（－Ｏ－）結合を含む）、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル又はアラルジルである。ポリヌクレオチド中の全ての結合が同一である必要はない。上記の説明は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む、本明細書で言及される全てのポリヌクレオチドに適用される。
【0112】
抗体の「可変領域」とは、単独で又は組み合わせて、抗体軽鎖の可変領域又は抗体重鎖の可変領域を指す。重鎖及び軽鎖の可変領域はそれぞれ、超可変領域としても知られる３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって連結された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。各鎖のＣＤＲは、ＦＲによって近接して一緒に保持され、他方の鎖のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定するための少なくとも２つの技術がある：（１）種間配列可変性（すなわち、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，（５ｔｈ ｅｄ．，１９９１，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ））に基づくアプローチ；及び（２）抗原－抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（Ａｌ－ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８））。本明細書で使用される場合、ＣＤＲは、いずれかのアプローチ又は両方のアプローチの組合せによって定義されるＣＤＲを指し得る。
【0113】
抗体の「定常領域」とは、単独で又は組み合わせて、抗体軽鎖の定常領域又は抗体重鎖の定常領域を指す。
【0114】
「宿主細胞」は、外因性ポリヌクレオチドを含むベクターのレシピエントであり得るか又はレシピエントであった個々の細胞又は細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、子孫は、自然、偶発的、又は意図的な変異により、元の親細胞とは（形態学又はゲノムＤＮＡ補体において）必ずしも完全に同一ではない場合がある。宿主細胞は、本開示のポリヌクレオチドでインビボでトランスフェクトされた細胞を含む。
【0115】
「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。「Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域又はバリアントＦｃ領域であり得る。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、位置Ｃｙｓ２２６のアミノ酸残基又はＰｒｏ２３０のアミノ酸残基からそのカルボキシル末端まで伸びるように定義される。Ｆｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスの番号付けである。（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１．免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、２つの定常ドメイン、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。
【0116】
「天然配列Ｆｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾によって天然配列Ｆｃ領域のものとは異なるアミノ酸配列を含み、また、天然配列Ｆｃ領域の少なくとも１つのエフェクタ機能を保持する。いくつかの場合では、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域における約１～約１０個のアミノ酸置換、例えば約１～約５個のアミノ酸置換を有する。いくつかの場合では、本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の配列同一性を有する。いくつかの場合では、本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約９０％の配列同一性を有する。いくつかの場合では、本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、ネイティブ配列Ｆｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域との当該範囲の間に、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％の配列同一性及び配列同一性を有する。
【0117】
「個体」又は「対象」は、哺乳動物、例えばヒトである。哺乳動物には、家畜、スポーツ動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウス及びラットも含まれるが、これらに限定されない。
【0118】
本明細書で使用される場合、「ベクター」は、宿主細胞中の１つ以上の目的の遺伝子又は配列を送達及び発現することができる構築物を意味する。ベクターの例としては、ウイルスベクター、裸のＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミド又はファージベクター、カチオン性縮合剤と会合したＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、リポソームに封入されたＤＮＡ又はＲＮＡ発現ベクター、及びプロデューサー細胞などの特定の真核細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【0119】
「有効量」又は「治療有効量」という用語は、有益な又は所望の結果をもたらすのに十分な薬剤の量を指す。治療有効量は、治療される対象及び疾患状態、対象の体重及び年齢、疾患状態の重症度、投与様式などのうちの１つ以上に応じて変動し得、これらは当業者によって容易に決定され得る。用語「有効量」はまた、適切な撮像方法による検出のための画像を提供する線量にも適用される。具体的な用量は、選択される特定の薬剤、従うべき投薬レジメン、他の化合物と組み合わせて投与されるかどうか、投与のタイミング、画像化される組織、及びそれが担持される物理的送達系のうちの１つ以上に応じて変化し得る。有効量の活性剤は、単回用量又は複数回用量で投与され得る。抗体の治療有効量は、約０．００１～約２５ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、約０．０１～約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、又は約１～約１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。投与量は、必要に応じて、治療の観察された効果に適合するように、及び／又は当業者によって決定されるように、治癒、予防、症状の制御などを提供するのに最も効果的であるように調整され得る。適切な用量は、治療する医師又は当業者による臨床適応症に基づいて選択される。構成要素は、本明細書に記載される任意のものなど、特定の目標又は目的に関連するものなどの所望の結果を生成するために少なくとも有効な量、又は少なくとも有効な量を有するものとして本明細書に記載され得る。本明細書における所望の治療結果は、限定されないが、本明細書及び／又は添付の特許請求の範囲に記載の障害、癌、免疫関連疾患、ＰＤ－１関連障害、及び／又は免疫関連病変などからの任意の症状を治療、緩和、又は治癒することを含み得る。
【0120】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」又は「薬学的に許容可能な賦形剤」は、有効成分と組み合わせた場合に、その成分が生物学的活性を保持することを可能にし、対象の免疫系と非反応性である任意の材料を含む。例としては、リン酸緩衝生理食塩水、水、油／水エマルジョンなどのエマルジョン、及び様々な種類の湿潤剤などの標準的な医薬担体のいずれかが挙げられるが、これらに限定されない。エアロゾル又は非経口投与のための例示的な希釈剤は、リン酸緩衝生理食塩水又は通常の（０．９％）生理食塩水である。いくつかの場合では、そのような担体を含む組成物は、周知の従来の方法によって製剤化される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄ．Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０００を参照されたい）。
【0121】
本明細書及び添付の特許請求の範囲を通して、本明細書に記載される本開示の方法及びシステムは、別段の指示がない限り、当業者の技能の範囲内である、分子生物学（組換え技術を含む）、細胞生物学、生化学、マイクロアレイ及び配列決定技術の従来の技術及び説明を使用し得る。そのような従来の技術には、ポリマーアレイ合成、オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション及びライゲーション、オリゴヌクレオチドの配列決定、並びに標識を使用したハイブリダイゼーションの検出が含まれる。適切な技術の具体的な例示は、本明細書の実施例を参照することによって得ることができる。しかしながら、同等の従来の手順ももちろん使用することができる。そのような従来の技術及び説明は、Ｇｒｅｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ（Ｖｏｌｓ．Ｉ－ＩＶ）（１９９９）；Ｗｅｉｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｖａｒｉａｔｉｏｎ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２００７）；Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈ，Ｄｖｅｋｓｌｅｒ，Ｅｄｓ．，ＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２００３）；Ｂｏｗｔｅｌｌ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＤＮＡ Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ：Ａ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ（２００３）；Ｍｏｕｎｔ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ （２００４）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｒｏｍ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２００６）；及びＳａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２０１２）（全てＣｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓから）；Ｓｔｒｙｅｒ，Ｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（４ｔｈ Ｅｄ．）Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｎ．Ｙ．（１９９５）；Ｇａｉｔ，「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ（１９８４）；Ｎｅｌｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｘ，Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，６ｔｈ Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｕｂ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（２０１２）；Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，６ｔｈ Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙ－Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ（２０１０）；及びＢｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｕｂ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（２００２）等の標準的な実験的マニュアルにおいて見出され得、これらの全ては、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。本発明の組成物、研究ツール及びシステム及び方法が記載される前に、本開示は、記載される特定のシステム及び方法、組成物、標的及び使用に限定されず、したがって当然のことながら変化し得ることが理解されるべきである。本明細書で使用される用語は、特定の態様のみを説明するためのものであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本開示の範囲を限定することを意図するものではないことも理解されたい。
【0122】
本明細書で使用される「抗ＰＤ－１抗体」又は分子という用語は、特に明記しない限り、ＰＤ－１への特異的結合が可能な抗体又はその結合断片のいずれかを指す。
【0123】
本開示では、「抗体」は、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に特異的に結合することができる免疫グロブリン分子を指す。本明細書で使用される場合、この用語は、抗原に特異的に結合し、機能的であってもなくてもよいＦｃＲ結合部位を含む免疫グロブリン分子を含む。本開示で使用される場合、この用語は、無傷のポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体だけでなく、その断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ）Ｆｖ断片、及び抗原認識部位又は抗原結合部位を含み、抗原に結合する能力を有する一本鎖（ＳｃＦｖ）変異体も包含する。抗原結合抗体又は免疫グロブリン断片は当技術分野で周知であり、このような断片は、機能的又は非機能的Ｆｃレセプター結合部位を有し得る。更に、本明細書で使用される場合、この用語は、インタクトなポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体、二重特異性などの多重特異性抗体、又は少なくとも２つのインタクトな抗体から生成された多重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、一本鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、変異、移植抗体、ヒト抗体、及び抗体が所望の生物学的活性を示す限り、抗原結合部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子に限定されない。
【0124】
免疫グロブリンには５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に更に分割され得る。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ及びミューと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元立体配置は周知である。文脈上の制約による別段の指示がない限り、本発明の抗体は、抗体のこれらのクラス又はサブクラスのうちの１つに由来し得る。異なるクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは、典型的には、それぞれ対応する小文字のギリシャ文字α、δ、ε、γ、及びμによって示される。任意の脊椎動物種由来の抗体の軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの明確に異なる型のうちの１つに割り当てることができる。
【0125】
本明細書及び添付の特許請求の範囲を通して、「Ｆｃ受容体」及び「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載する。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，１９９１，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７－９２；Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，４：２５－３４；及びｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，１２６：３３０－４１に概説される。「ＦｃＲ」には、母体ＩｇＧの胎児への移行を担う新生児型受容体ＦｃＲｎも含まれる（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１７：５８７；及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２４９）。
【0126】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す。一般に、集団を含む個々の抗体は、少量存在し得る可能性のある天然に存在する変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、非常に特異的であり、単一の抗原部位に対して指向されている。更に、典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して指向された異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向されている。「モノクローナル」という修飾語句は、実質的に均質な抗体集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、本開示に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、又は米国特許第第４，８１６，５６７号に記載されるように組換えＤＮＡにより作製され得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４に記載されている技術を使用して生成されたファージライブラリから単離され得る。
【0127】
本明細書で使用される場合、「抗体依存性細胞傷害性」及び「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球及びマクロファージ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応を指す。目的の分子のＡＤＣＣ活性は、米国特許第５，５００，３６２号若しくは第５，８２１，３３７号に記載されているもの、又は本開示の実施例７に記載されているものなどのインビトロＡＤＣＣアッセイを使用して評価することができる。そのようなアッセイに有用なエフェクタ細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びＮＫ細胞が挙げられる。代替的又は追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），９５：６５２－６５６に開示されているような動物モデルで評価され得る。
【0128】
「補体依存性細胞傷害」及び「ＣＤＣ」は、補体の存在下での標的の溶解を指す。補体活性化経路は、補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）が同族抗原と複合体化した分子（例えば、抗体）に結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）において記載されるＣＤＣアッセイが実施され得る。
【0129】
エピトープに「特異的に結合する」という用語は、当該技術分野で十分に理解されており、かかる特異的結合を決定する方法もまた、当該技術分野で周知である。分子が、代替的な細胞、タンパク質、又は物質よりも、特定の細胞、タンパク質、又は物質と、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間、かつ／又はより大きな親和性で、反応又は会合する場合、その分子は「特異的結合」を示すと言われる。抗体は、他の物質に結合するよりも高い親和性、結合力、より容易に、及び／又はより長い持続時間で結合する場合、標的に「特異的に結合する」か、又は「優先的に結合する」。例えば、ＰＤ－１に特異的又は優先的に結合する抗体は、他のエピトープに結合するよりも高い親和性、結合活性で、より容易に、及び／又はより長い期間でこのエピトープに結合する抗体である。更なる例として、第１の標的に特異的又は優先的に結合する抗体（又は他の部分）は、第２の標的に特異的又は優先的に結合してもしなくてもよい。したがって、「特異的結合」又は「優先的結合」は、排他的な結合を必ずしも必要としない（しかし、それを含むことができる）。必ずしもそうではないが、概して、結合への言及は、優先的結合を意味する。
【0130】
「断片」は、タンパク質に適用される場合、治療活性及び／又は生物学的活性の少なくとも一部を保持してもしなくてもよい天然の生物学的に活性なタンパク質の切断型である。本明細書では、「抗体断片」、「その抗原結合断片」、及び「断片」という用語は、抗体に関して使用される場合、互換的に使用される。
【0131】
配列同一性
抗ＰＤ－１抗体配列又は本明細書中で同定される任意の他のアミノ酸配列に関する配列同一性は、最大パーセント配列同一性を達成するために配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、第２の参照ポリペプチド配列又はその一部のアミノ酸残基と同一であるクエリ配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当技術分野の技術の範囲内である様々な方法で達成され得る。当業者は、比較される配列の完全長にわたって最大のラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。同一性パーセントは、定義されたポリペプチド配列全体の長さにわたって測定され得るか、又はより短い長さにわたって、例えば、より大きな定義されたポリペプチド配列から得られる断片、例えば、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７０又は少なくとも１５０個の連続残基の断片の長さにわたって測定され得る。そのような長さは例示にすぎず、表、図又は配列表において本明細書に示される配列によって支持される任意の断片長を使用して、同一性パーセントが測定され得る長さを記載し得ることが理解される。いくつかの実施形態では、同一性パーセントは、本明細書に提供される配列などの言及された参照配列の全長に関して決定される。例えば、本開示の２つのアミノ酸配列（又はそのより短い長さ）間の配列比較は、ＮａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）によってオンラインで提供されるコンピュータプログラムＢｌａｓｔｐ（タンパク質－タンパク質ＢＬＡＳＴ）によって行われ得る。所与のアミノ酸配列Ｂに対する所与のアミノ酸配列Ａのパーセンテージアミノ酸配列同一性（これは、代替的に、所与のアミノ酸配列Ｂに対して一定の％アミノ酸配列同一性を有する所与のアミノ酸配列Ａと言い換えることができる）は、以下の式によって計算される。
ここで、Ｘは、ＡとＢのプログラムのアラインメントにおいて配列アラインメントプログラムＢＬＡＳＴによって同一のマッチとしてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ａ又はＢのいずれか短い方のアミノ酸残基の総数である。
抗ＰＤ－１抗体配列又は本明細書中で同定される任意の他のアミノ酸配列に関する配列同一性は、最大パーセント配列同一性を達成するために配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、第２の参照ポリペプチド配列又はその一部のアミノ酸残基と同一であるクエリ配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当技術分野の技術の範囲内である様々な方法で達成され得る。当業者は、比較される配列の完全長にわたって最大のラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。同一性パーセントは、定義されたポリペプチド配列全体の長さにわたって測定され得るか、又はより短い長さにわたって、例えば、より大きな定義されたポリペプチド配列から得られる断片、例えば、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７０又は少なくとも１５０個の連続残基の断片の長さにわたって測定され得る。そのような長さは例示にすぎず、表、図又は配列表において本明細書に示される配列によって支持される任意の断片長を使用して、同一性パーセントが測定され得る長さを記載し得ることが理解される。いくつかの実施形態では、同一性パーセントは、本明細書に提供される配列などの言及された参照配列の全長に関して決定される。例えば、本開示の２つのアミノ酸配列（又はそのより短い長さ）間の配列比較は、ＮａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）によってオンラインで提供されるコンピュータプログラムＢｌａｓｔｐ（タンパク質－タンパク質ＢＬＡＳＴ）によって行われ得る。所与のアミノ酸配列Ｂに対する所与のアミノ酸配列Ａのパーセンテージアミノ酸配列同一性（これは、代替的に、所与のアミノ酸配列Ｂに対して一定の％アミノ酸配列同一性を有する所与のアミノ酸配列Ａと言い換えることができる）は、以下の式によって計算される。
【数1】
ここで、Ｘは、ＡとＢのプログラムのアラインメントにおいて配列アラインメントプログラムＢＬＡＳＴによって同一のマッチとしてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ａ又はＢのいずれか短い方のアミノ酸残基の総数である。
【0132】
２つのポリヌクレオチド又はポリペプチド配列は、２つの配列中のヌクレオチド又はアミノ酸の配列が、最大の対応のためにアラインメントされたときに同じである場合、「同一」であると言われる。２つの配列間の比較は、典型的には、配列類似性の局所領域を特定及び比較するために、比較ウインドウにわたって比較することによって行われる。
【0133】
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）
いくつかの態様では、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞及び単球を含む活性化リンパ球の表面及び骨髄細胞の表面に存在し得る受容体であるＰＤ－１に結合し、これをアゴナイズする抗体又はその抗原結合断片に関する組成物及び方法が本明細書で提供される。ＰＤ－１経路は、ＰＤ－１発現免疫細胞の応答を調節するための重要な免疫チェックポイントであり得る。
いくつかの態様では、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞及び単球を含む活性化リンパ球の表面及び骨髄細胞の表面に存在し得る受容体であるＰＤ－１に結合し、これをアゴナイズする抗体又はその抗原結合断片に関する組成物及び方法が本明細書で提供される。ＰＤ－１経路は、ＰＤ－１発現免疫細胞の応答を調節するための重要な免疫チェックポイントであり得る。
【0134】
特定の理論に拘束されることを望むものではないが、ＰＤ－１経路の活性化は、免疫細胞活性化の阻害をもたらし得る。ＰＤ－１シグナル伝達を遮断する抗体は、抗腫瘍免疫応答を促進するために癌患者において使用される。
【0135】
プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１又はＣＤ２７９）は、免疫グロブリンスーパーファミリ（ＩｇＳＦ）タンパク質であり、Ｂ７－ＣＤ２８ファミリのメンバーである。それは、単一の細胞外ＩｇＶ様ドメイン、シングルパス膜貫通領域、並びにＩＴＩＭ及びＩＴＳＭを含有する細胞質尾部からなり得る。いくつかの場合では、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４及びＩＣＯＳに見られるこれらの分子が共有結合ホモ二量体を形成することを可能にする細胞外システインを欠くため、細胞表面上で単量体である。いくつかの場合では、ＰＤ－１は、ＣＤ４ Ｔ細胞、ＣＤ８ Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫＴ細胞、単球、マクロファージ及び樹状細胞を含む免疫系全体の細胞上にも発現される。これは、急性的に活性化されたＴ細胞では短時間上方制御され、疲弊したＴ細胞では持続的に上方制御され得る。ＰＤ－１は、ＰＤ－Ｌ１（ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２７９又はＢ７－Ｈ１）及びＰＤＬ－２（ＣＤ２７３又はＢ７－ＤＣ）と呼ばれる２つのリガンドに結合することができ、それぞれがそれらの細胞外領域に２つのＩｇＳＦドメインを含む。ＰＤ－Ｌ１は、ＤＣ、マクロファージ及びＢ細胞などのプロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に構成的に発現させることができ、炎症中に非造血細胞上で誘導して組織損傷を制限することができるが、しばしば癌細胞上でアップレギュレートされ、癌細胞が抗腫瘍免疫応答を減衰させることを可能にする。
【0136】
そのリガンドに結合すると、ＰＤ－１の細胞内チロシンモチーフはリン酸化され、リン酸化ＩＴＳＭはタンパク質ホスファターゼＳＨＰ２（及びおそらくＳＨＰ１）を動員することができる。細胞表面に動員されると、ＳＨＰ２は、活性化受容体（特にＣＤ２８）のＩＴＡＭ及び活性化シグナル伝達の他の下流メディエーターを脱リン酸化することによって細胞シグナル伝達を負に調節する。ＰＤ－１シグナル伝達は、Ｔ細胞の活性化を抑制するだけでなく、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の生成においても役割を果たすことができる。本明細書で使用される「ＰＤ－１シグナル伝達」という用語は、ＰＤ－１の細胞内チロシンモチーフのリン酸化、プロテインホスファターゼＳＨＰ２及び／又はＳＨＰ１の動員、又は活性化受容体のＩＴＡＭ若しくは活性化シグナル伝達の他の下流メディエーターの脱リン酸化の１つ以上を指し得る。本明細書に開示される抗体は、いくつかの場合では、ＰＤ－１シグナル伝達を促進し、例えば、抗体が結合するＰＤ－１分子、又は抗体が結合しないが、同じ細胞表面上に発現される別のＰＤ－１分子に結合するＰＤ－１分子の細胞内チロシンモチーフのリン酸化、ＳＨＰ２及び／又はＳＨＰ１の動員、又は活性化受容体のＩＴＡＭ若しくは活性化シグナル伝達の他の下流メディエーターの脱リン酸化の１つ以上を促進する。
【0137】
いくつかの態様では、既存の抗ＰＤ－１抗体に関連する当技術分野で公知の前述及び他の問題のいくつかを回避することができる抗体、組成物、その使用、及びその作製方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞を枯渇させることなく、又はＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する最小限の枯渇効果で、エフェクタＴ細胞上のＰＤ－Ｌ１に結合するようにＰＤ－１シグナル伝達をトリガーすることができるＰＤ－１アゴニスト抗体が本明細書で提供される。
【0138】
特定の理論に拘束されることを望むものではないが、自己免疫疾患では、ＰＤ－Ｌ１発現は炎症性環境（Ｋｅｉｒら、２００８）によって上方制御され得（Ｇａｒｃｉａ－Ｄｉａｚ他２０１７）、これは、ＰＤ－１がこれらの病理学的条件下で既に完全に関与している可能性を高め、したがって、アゴニスト抗体の更なる利益のための限定された範囲を提供する。しかし、いくつかの態様では、その天然リガンドＰＤ－Ｌ１による受容体結合の存在下でさえ更なる阻害シグナルを提供することができるＰＤ－１アゴニスト抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＰＤ－１アゴニスト抗体は、ＰＤ－Ｌ１発現細胞又はＰＤ－Ｌ１自体の近傍にある、ＰＤ－Ｌ１と接触している、又はＰＤ－Ｌ１と係合しているＰＤ－１受容体を有するＰＤ－１発現免疫細胞に対する阻害効果を有する。
【0139】
抗体配列
本開示では、Ｆｃ領域（ＦｃＲ）に変異を有するＰＤ－１アゴニスト抗体又はその抗原結合断片若しくは機能的断片を産生するための組成物、治療剤、キット、ベクター、核酸配列、製造、培養及び／又は方法であって、阻害性Ｆｃ受容体ＦｃγＲ２Ｂ（ＣＤ２３Ｂ）に対する選択性を増強し、それによりＰＤ－１活性化の生物学的効果を増強する、例えば抗体が結合するＰＤ－１分子を発現する免疫細胞の活性若しくは増殖を阻害する、又はＰＤ－１発現免疫細胞応答の下方制御を促進する、組成物、治療剤、キット、ベクター、核酸配列、製造、製造、培養及び／又は方法が本明細書で提供される。いくつかの場合では、ＰＤ－１アゴニスト抗体は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を増強する。いくつかの場合では、ＰＤ－１アゴニスト抗体は、ＰＤ－Ｌ１結合によって引き起こされるＰＤ－１の下流シグナル伝達を促進する。いくつかの場合では、ＰＤ－１アゴニスト抗体は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を増加又は増強することなく、ＰＤ－１の下流シグナル伝達を促進する。いくつかの場合では、ＰＤ－１アゴニスト抗体は、ＰＤ－１へのＰＤ－Ｌ１結合の非存在下でＰＤ－１シグナル伝達を活性化又は増強する。
本開示では、Ｆｃ領域（ＦｃＲ）に変異を有するＰＤ－１アゴニスト抗体又はその抗原結合断片若しくは機能的断片を産生するための組成物、治療剤、キット、ベクター、核酸配列、製造、培養及び／又は方法であって、阻害性Ｆｃ受容体ＦｃγＲ２Ｂ（ＣＤ２３Ｂ）に対する選択性を増強し、それによりＰＤ－１活性化の生物学的効果を増強する、例えば抗体が結合するＰＤ－１分子を発現する免疫細胞の活性若しくは増殖を阻害する、又はＰＤ－１発現免疫細胞応答の下方制御を促進する、組成物、治療剤、キット、ベクター、核酸配列、製造、製造、培養及び／又は方法が本明細書で提供される。いくつかの場合では、ＰＤ－１アゴニスト抗体は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を増強する。いくつかの場合では、ＰＤ－１アゴニスト抗体は、ＰＤ－Ｌ１結合によって引き起こされるＰＤ－１の下流シグナル伝達を促進する。いくつかの場合では、ＰＤ－１アゴニスト抗体は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用を増加又は増強することなく、ＰＤ－１の下流シグナル伝達を促進する。いくつかの場合では、ＰＤ－１アゴニスト抗体は、ＰＤ－１へのＰＤ－Ｌ１結合の非存在下でＰＤ－１シグナル伝達を活性化又は増強する。
【0140】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体又は抗原結合断片（例えば、単離された抗体）は、ＰＤ－１に特異的に結合し、免疫細胞の表面に発現されたＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する。
【0141】
いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体又は抗原結合断片（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域、軽鎖可変領域及びＦｃ領域を含むＰＤ－１抗体であり、ＰＤ－１抗体のＦｃ領域は、阻害性Ｆｃ受容体ＦｃγＲ２Ｂに対する選択性を高めるアミノ酸置換を含み、それによってＰＤ－Ｌ１媒介性のＰＤ－１のトリガーを増強し、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用を増大させて、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を、その置換を欠く親分子と比較して減少させる。
【0142】
いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体又は抗体断片（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域、軽鎖可変領域及びＦｃ領域を含むＰＤ－１抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１抗体の重鎖可変領域は、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１抗体の重鎖可変領域は、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１抗体の軽鎖可変領域は、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に記載の配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列を含むＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１抗体の軽鎖可変領域は、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１抗体のＦｃ領域は、ＩｇＧ１分子（例えば、ヒトＩｇＧ１分子）に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた位置２３８におけるプロリン（Ｐ）からアスパラギン酸（Ｄ）へのアミノ酸置換を含む。
【0143】
いくつかの場合では、抗体の重鎖可変領域のＣＤＲ（又は抗原結合断片（以下、「抗体」と呼ぶ）は、完全長抗体又は抗体の抗原結合断片を表す。）は、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの場合では、抗体の重鎖可変領域のＣＤＲは、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含む。いくつかの場合では、抗体のＣＤＲは、１つのアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含む。いくつかの場合では、抗体の重鎖可変領域のＣＤＲは、２つのアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含む。いくつかの場合では、抗体の重鎖可変領域のＣＤＲは、３つのアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含む。
【0144】
いくつかの場合では、本明細書において提供される抗体は、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１は、配列番号１に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２は、配列番号２に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３は、０から３個のアミノ酸修飾を伴って、配列番号３に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体は、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含む重鎖可変領域を含み、ここで、０～３個のアミノ酸修飾を伴って、ＣＤＲＨ１は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの場合では、抗体の重鎖可変領域では、ＣＤＲＨ１は配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２は配列番号２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３は配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの場合では、抗体の重鎖可変領域では、１個のアミノ酸修飾を伴って、ＣＤＲＨ１は配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２は配列番号２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３は配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの場合では、抗体の重鎖可変領域では、２個のアミノ酸修飾を伴って、ＣＤＲＨ１は配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２は配列番号２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３は配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの場合では、抗体の重鎖可変領域では、３個のアミノ酸修飾を伴って、ＣＤＲＨ１は配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２は配列番号２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３は配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する。
【0145】
いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体は、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示されるようなアミノ酸配列を有するＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの場合では、抗体の軽鎖可変領域のＣＤＲは、配列番号４～６の１つ以上に示される配列を含む。いくつかの場合では、抗体の軽鎖可変領域のＣＤＲは、１つのアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６の１つ以上に示される配列を含む。いくつかの場合では、抗体の軽鎖可変領域のＣＤＲは、２つのアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６の１つ以上に示される配列を含む。いくつかの場合では、抗体の軽鎖可変領域のＣＤＲは、３つのアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６の１つ以上に示される配列を含む。
【0146】
いくつかの場合では、本明細書において提供される抗体は、３つの軽鎖相補性決定領域を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号４に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２は、配列番号５に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３は、０～３個のアミノ酸修飾を伴って、配列番号６に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体は、３つの軽鎖相補性決定領域を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、ＣＤＲＬ１は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３は、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３個のアミノ酸修飾を有する。いくつかの場合では、抗体の軽鎖可変領域では、ＣＤＲＬ１は配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２は配列番号５に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３は配列番号６に示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの場合では、抗体の軽鎖可変領域では、１個のアミノ酸修飾を伴って、ＣＤＲＬ１は配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２は配列番号５に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３は配列番号６に示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの場合では、抗体の軽鎖可変領域では、２個のアミノ酸修飾を伴って、ＣＤＲＬ１は配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２は配列番号５に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３は配列番号６に示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの場合では、抗体の軽鎖可変領域では、３個のアミノ酸修飾を伴って、ＣＤＲＬ１は配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２は配列番号５に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３は配列番号６に示されるアミノ酸配列を有する。
【0147】
いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲＨ）を含み、ＣＤＲＨ１は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３は、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３は、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの場合では、ＣＤＲＨ１は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２は、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖可変領域は、３つの軽鎖相補性決定領域を含み、ＣＤＲＬ１は、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３は、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有する。
【0148】
いくつかの場合では、本明細書において提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％又は９９％又は１００％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【0149】
いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、以下では単離された抗体又は「抗体」）は、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％又は９９％又は１００％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの場合では、本明細書において提供される抗体は、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの場合では、本明細書において提供される抗体は、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列と少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの場合では、本明細書において提供される抗体は、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの場合では、本明細書において提供される抗体は、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの場合では、本明細書において提供される抗体は、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの場合では、本明細書において提供される抗体は、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列と少なくとも１００％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの場合では、本明細書において提供される抗体は、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％及び最大１００％の同一性の間の任意の範囲を有する配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
【0150】
いくつかの場合では、本明細書において提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％又は９９％又は１００％の同一性を有する配列を含み、ＶＬは、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％又は９９％又は１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、ＶＨは、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１のいずれか１つに示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、ＶＨは、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１のいずれか１つに示される配列と少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、ＶＨは、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１のいずれか１つに示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、ＶＨは、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１のいずれか１つに示される配列と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、ＶＨは、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１のいずれか１つに示される配列と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、ＶＨは、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１のいずれか１つに示される配列と少なくとも１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、ＶＬは、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％又は９９％又は１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、ＶＬは、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、ＶＬは、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列と少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、ＶＬは、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、ＶＬは、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、ＶＬは、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ここで、ＶＬは、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列と少なくとも１００％の同一性を有する配列を含む。
【0151】
いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体（例えば、単離された抗体）は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０及び配列番号１１のいずれか１つに示される配列を含み、ＶＬは配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のいずれか１つに示される配列を含む。
【0152】
特定の実施形態では、本明細書及び添付の特許請求の範囲に開示される重鎖又は軽鎖はまた、定常領域を含み得る。分子が完全長ＩｇＧ型抗体分子である場合、重鎖は、３つの定常ドメインを含み得る。
【0153】
一態様では、本明細書に提供される抗体はＦｃ領域を含み、当該Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ１に由来する。いくつかの場合では、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域は、プロリンが、ＥＵインデックスに従って番号付けされる位置２３８においてアスパラギン酸（Ｄ）で置き換えられるアミノ酸置換を含む。一態様では、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域は、プロリンがＥＵインデックスに従って番号付けされた位置２３８においてアスパラギン酸（Ｄ）で置き換えられたアミノ酸置換を含み、配列番号１７に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、若しくは９９％、又は１００％の同一性を有する配列を更に含む。他の態様では、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域は、プロリンがＥＵインデックスに従って番号付けされた位置２３８においてアスパラギン酸（Ｄ）で置き換えられたアミノ酸置換を含み、配列番号１７に示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列を更に含む。一態様では、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域は、プロリンがＥＵインデックスに従って番号付けされた位置２３８においてアスパラギン酸（Ｄ）で置き換えられたアミノ酸置換を含み、配列番号１７に示される配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列を更に含む。一態様では、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域は、プロリンがＥＵインデックスに従って番号付けされた位置２３８においてアスパラギン酸（Ｄ）で置き換えられたアミノ酸置換を含み、配列番号１７に示される配列と少なくとも８５％の同一性を有する配列を更に含む。一態様では、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域は、プロリンがＥＵインデックスに従って番号付けされた位置２３８においてアスパラギン酸（Ｄ）で置き換えられたアミノ酸置換を含み、配列番号１７に示される配列と少なくとも９０％の同一性を有する配列を更に含む。一態様では、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域は、プロリンがＥＵインデックスに従って番号付けされた位置２３８においてアスパラギン酸（Ｄ）で置き換えられたアミノ酸置換を含み、配列番号１７に示される配列と少なくとも９５％の同一性を有する配列を更に含む。一態様では、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域は、プロリンがＥＵインデックスに従って番号付けされた位置２３８においてアスパラギン酸（Ｄ）で置き換えられたアミノ酸置換を含み、配列番号１７に示される配列と少なくとも９９％の同一性を有する配列を更に含む。一態様では、Ｆｃ領域は、配列番号１７に示される配列と少なくとも１００％の同一性を有する配列を含む。
【0154】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、重鎖可変領域と、アミノ酸置換を含むＦｃ領域とを含み、重鎖可変領域は、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号１～３のうちの１つ以上に示されるような配列を含むＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）と、アミノ酸置換を含むＦｃ領域とを含み、ＶＨは、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む。いくつかの場合では、アゴニスト抗体は、ＶＨ及びアミノ酸置換を含むＦｃ領域を含み、ＶＨは、１つのアミノ酸修飾を有する配列番号１～３のうちの１つ以上に記載の配列を含むＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗体は、ＶＨ及びアミノ酸置換を含むＦｃ領域を含み、ＶＨは、２つのアミノ酸修飾を有する配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む。いくつかの場合では、抗体は、ＶＨ及びアミノ酸置換を含むＦｃ領域を含み、ＶＨは、３つのアミノ酸修飾を有する配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む。
【0155】
いくつかの場合では、アゴニスト抗体は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、アミノ酸置換を含むＦｃ領域とを含み、軽鎖可変領域は、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６のうちの１つ以上に記載の配列を含むＣＤＲを含む。本実施形態の一態様では、アゴニスト抗体は、ＶＬと、アミノ酸置換を含むＦｃ領域とを含み、ＶＬ領域は、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む。実施形態の一態様では、アゴニスト抗体は、ＶＬと、アミノ酸置換を含むＦｃ領域とを含み、ＶＬ領域は、１個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６のうちの１つ以上に記載の配列を含むＣＤＲを含む。実施形態の一態様では、アゴニスト抗体は、ＶＬと、アミノ酸置換を含むＦｃ領域とを含み、ＶＬ領域は、２個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６のうちの１つ以上に記載の配列を含むＣＤＲを含む。実施形態の一態様では、アゴニスト抗体は、ＶＬと、アミノ酸置換を含むＦｃ領域とを含み、ＶＬ領域は、３個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６のうちの１つ以上に記載の配列を含むＣＤＲを含む。
【0156】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体又は抗原結合断片は、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２及びダイアボディからなる群から選択される構造を形成する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
【0157】
エフェクタ機能
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、ＰＤ－１、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞又はマクロファージなどの免疫細胞の表面上に発現されるヒトＰＤ－１をアゴナイズする。いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、エフェクタ免疫細胞の表面上に発現されるＰＤ－１に結合し、当該抗体に結合していない同等の免疫細胞と比較してエフェクター免疫細胞の活性化及び／又は増殖を減少させる。
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、ＰＤ－１、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞又はマクロファージなどの免疫細胞の表面上に発現されるヒトＰＤ－１をアゴナイズする。いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、エフェクタ免疫細胞の表面上に発現されるＰＤ－１に結合し、当該抗体に結合していない同等の免疫細胞と比較してエフェクター免疫細胞の活性化及び／又は増殖を減少させる。
【0158】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、免疫細胞上に発現されるＰＤ－１に結合し、細胞の活性化及び／又は増殖を阻害する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体は、免疫細胞上に発現されるＰＤ－１に結合し、免疫細胞がＰＤ－Ｌ１発現細胞に近接している場合、免疫細胞の活性化及び／又は増殖を減少させる。いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、周囲環境における大量のＰＤ－Ｌ１の存在下での免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対するアゴニスト作用を有する。ある特定の理論に拘束されることを望むものではないが、いくつかの場合では、自己免疫疾患では、ＰＤ－Ｌ１発現は炎症性環境によって上方制御され（Ｋｅｉｒ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８；２６：６７７－７０４．ｄｏｉ：１０．１１４６／ ａｎｎｕｒｅｖ．ｉｍｍｕｎｏｌ．２６．０２１６０７．０９０３３１；Ｇａｒｃｉａ－Ｄｉａｚ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．２０１７ Ｍａｙ ９；１９（６）：１１８９－１２０１．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｒｅｐ．２０１７．０４．０３１）、したがって、そのような炎症性環境では、ＰＤ－１は既に周囲のＰＤ－Ｌ１と完全に係合しており、ＰＤ－１を標的とする既知のアゴニスト抗体の更なる利益のための範囲は限られている可能性がある。本開示のいくつかの実施形態による抗体は、ＰＤ－Ｌ１発現細胞の近傍であっても免疫細胞においてＰＤ－１シグナル伝達を更に促進することができ、本明細書に開示される抗体は、例えば自己免疫疾患との関連では、免疫応答を下方制御するために特に有用であり得、したがって過剰な免疫応答に関連する障害、例えば自己免疫疾患の治療に有用であり得ることを示唆している。
【0159】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体は、免疫細胞上に発現されるＰＤ－１に結合し、抗体が結合するＰＤ－１分子へのＰＤ－Ｌ１結合の非存在下で免疫細胞の活性化及び／又は増殖を減少させる。
【0160】
いくつかの場合では、免疫細胞の活性化及び／又は増殖に対する本明細書に開示される抗体の阻害効果は、実施例４に記載されるものなどのＮＦＡＴレポーターアッセイによって測定することができる。例えば、ＮＦＡＴレポーターアッセイは、ＮＦＡＴ応答エレメントの制御下でルシフェラーゼを発現するように操作されたＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を用いて行うことができる。いくつかの場合では、ＮＦＡＴ応答エレメントの制御下でルシフェラーゼを発現するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を、Ｊｒｕｋａｔ Ｔ細胞を刺激するように構成された刺激因子細胞、例えば、以前に記載されたような抗ＣＤ３「Ｔ細胞刺激因子」（ＴＣＳ）構築物を発現し（Ｌｅｉｔｎｅｒら、２０１０）、ヒトＦｃγＲ２Ｂを発現するマウスＢＷ５１４７細胞、又は以前に記載されたような抗ＣＤ３「Ｔ細胞刺激因子」（ＴＣＳ）構築物を発現し（Ｌｅｉｔｎｅｒら、２０１０）、ヒトＦｃγＲ２Ｂを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞と共に培養する。Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を刺激因子細胞、加えて、試験抗体（例えば、本開示のいくつかの実施形態による例示的なＰＤ－１抗体）、又はアイソタイプ対照、又はいくつかの他のコントロールＰＤ－１抗体のいずれかと一定期間共培養する。試験抗体又は対照と一定期間（例えば、３時間、６時間、９時間、又は１２時間）インキュベートした後、ルシフェラーゼアッセイのために細胞を収集することができる。Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞の活性化の指標として発光シグナルを定量することができる。
【0161】
いくつかの場合では、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化及び／又は増殖に対する本明細書に開示される抗体の阻害効果は、実施例５に記載されるものなどの免疫細胞活性化アッセイ（例えば、破傷風トキソイド活性化アッセイ又はウイルスペプチド活性化アッセイ）によって測定することができる。例えば、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）などの免疫細胞を収集し、ＰＤ－Ｌ１／２遮断抗体（例えば、それぞれ５μｇ／ｍＬ）及び一定濃度の試験ＰＤ－１抗体（例えば、本明細書中のいくつかの実施形態による例示的抗体）、又はアイソタイプ対照、又はいくつかの他のコントロール抗体の存在下で破傷風トキソイド（例えば、０．５μｇ／ｍＬ）又はウイルスペプチド（例えば、ＣＥＦ ＨＬＡクラスＩペプチド－サイトメガロウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス及びインフルエンザ由来のペプチドの市販のプールされた混合物）で刺激することができる。細胞（例えば、上清又は細胞培養培地中で）からのインターフェロン（例えば、ＩＦＮγ）放出は、一定期間（例えば、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、又は１週間）試験抗体とのインキュベーション後にＥＬＩＳＡ又は任意の他の適切な方法によって評価することができる。インターフェロン放出は、免疫細胞の活性化の指標として測定することができる。いくつかの場合では、刺激治療を伴わないインターフェロン産生（例えば、破傷風トキソイド治療又はウイルスペプチド治療）もまた、治療を伴うインターフェロン産生から刺激されていないバックグラウンドとして差し引くことができる。
【0162】
いくつかの場合では、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化及び／又は増殖に対する本明細書に開示される抗体の阻害効果は、実施例６に記載されるような抗ＣＤ３／２８活性化アッセイによって測定することができる。例えば、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）などの免疫細胞を収集し、試験ＰＤ－１抗体（例えば、本明細書中のいくつかの実施形態による例示的抗体）、又はアイソタイプ対照、又は特定の濃度の他のいくつかのコントロール抗体の存在下で可溶性抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体（例えば、それぞれの最終濃度０．５ｎｇ／ｍＬ）で刺激することができる。ＣＤ４ Ｔ細胞上のＣＤ２５発現は、抗体と一定期間（例えば、２４時間、４８時間、７２時間、又は９６時間）インキュベートした後、フローサイトメトリ又はＴ細胞活性化のマーカーとしての任意の他の方法によって評価することができる。
【0163】
いくつかの場合では、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の活性化及び／又は増殖に対する本明細書に開示される抗体の阻害効果は、免疫細胞の細胞増殖、サイトカイン産生、ケモカイン産生、又は任意の他の活性化マーカーによって測定することができる。本明細書に記載される阻害率は、他の点では同じ細胞に対して対象抗体で治療されたがアイソタイプ対照で治療されたか又は対象抗体で治療されなかった細胞における免疫細胞活性化マーカーの読み出しを正常化することによって測定される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体は、免疫細胞上に発現されるＰＤ－１に結合し、免疫細胞の活性化及び／又は増殖を少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％又は５０％低下させる。
【0164】
いくつかの場合では、免疫細胞活性化（例えば、Ｔ細胞活性化）の阻害に関して、本明細書に開示される抗体は、最大で約０．５ｎＭ、最大で約０．２ｎＭ、最大で約０．１５ｎＭ、最大で約０．１ｎＭ、最大で約０．０９ｎＭ、最大で約０．０８ｎＭ、最大で約０．０７ｎＭ、最大で約０．０６ｎＭ、最大で約０．０５ｎＭ、最大で約０．０４ｎＭ、最大で約０．０３ｎＭ、最大で約０．０２Ｍ、又は最大で約０．０１ｎＭのＩＣ５０を有する。いくつかの場合では、免疫細胞活性化（例えば、Ｔ細胞活性化）の阻害に関して、本明細書に開示される抗体は、約０．５ｎＭ、約０．２ｎＭ、約０．１５ｎＭ、約０．１ｎＭ、約０．０９ｎＭ、約０．０８ｎＭ、約０．０７ｎＭ、約０．０６ｎＭ、約０．０５ｎＭ、約０．０４ｎＭ、約０．０３ｎＭ、約０．０２Ｍ、又は約０．０１ｎＭのＩＣ５０を有する。免疫細胞活性化（例えば、Ｔ細胞活性化）の阻害に関して本明細書に開示される抗体のＩＣ５０は、上記及び実施例に記載されるものなどの免疫細胞アッセイで測定することができる。
【0165】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体を使用してＰＤ－１を発現する免疫細胞を抑制する方法が本明細書に提供される。この方法は、ＰＤ－１を発現する免疫細胞を抗体と接触させること、及び免疫細胞の活性化及び／又は増殖を約１０％～５０％低下させることを含み得る。いくつかの場合では、方法は、免疫細胞の活性化及び／又は増殖の約１０％～４０％の減少をもたらす。いくつかの場合では、方法は、免疫細胞の活性化及び／又は増殖の約１０％～３０％の減少をもたらす。いくつかの場合では、方法は、免疫細胞の活性化及び／又は増殖の約１０％～２０％の減少をもたらす。いくつかの場合では、方法は、免疫細胞の活性化及び／又は増殖の約１０％～１５％の減少をもたらす。いくつかの場合では、方法は、免疫細胞の活性化及び／又は増殖の約２０％～５０％の減少をもたらす。いくつかの場合では、方法は、免疫細胞の活性化及び／又は増殖の約２０％～４０％の減少をもたらす。いくつかの場合では、方法は、免疫細胞の活性化及び／又は増殖の約又は２０％～３０％の減少をもたらす。
【0166】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、免疫細胞の表面に発現されるＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する。例えば、いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、抗体が結合するＰＤ－１分子に対するＰＤ－Ｌ１の結合を増強する。いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、抗体によって結合されない免疫細胞の表面上の１つ以上のＰＤ－１分子に対するＰＤ－Ｌ１の結合を増強し、一方、抗体は免疫細胞の表面上の他のＰＤ－１分子に結合する。一実施形態では、本明細書に開示される抗体は、実施例１０に記載されるアッセイなどのアッセイによって決定されるように、免疫細胞の表面に発現されるＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する。いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、免疫細胞の表面上に発現されるＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、１８０％、２００％、３００％、４００％、５００％、又はそれ以上増強する。
【0167】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、ＩｇＧ１の非修飾Ｆｃ領域を含む他の点では同一の分子と比較して、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の誘導が低減しており、一方で、ＩｇＧ１の非修飾Ｆｃ領域を含む他の点では同一の分子と比較して、ＰＤ－１シグナル伝達に対する同じ又は増強されたアゴニスト効果を有する。いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、ナチュラルキラー細胞活性化アッセイ（例えば、実施例７に記載されるアッセイなど）によって測定される場合、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する低下したＡＤＣＣを有する。いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、実施例７に記載されるようなインビトロアッセイ、又は抗体が対象に投与されるときのインビボのいずれかによって測定される場合、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する有意なＡＤＣＣをもたらさない。いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、ナチュラルキラー細胞の脱顆粒を引き起こさないか、又はＩｇＧ１の非修飾Ｆｃ領域を含む他の点では同一の分子と比較して、低下したレベルの脱顆粒を引き起こす。いくつかの例では、本明細書に開示される抗体は、ＩｇＧ１の非修飾Ｆｃ領域を含む他の点では同一の分子と比較して、制御性Ｔ細胞の死をもたらさないか、又は制御性Ｔ細胞の死のレベルの低下をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体は、ＩｇＧ１の未修飾Ｆｃ領域を含む他の点では同一の分子と比較して、ナチュラルキラー細胞の脱顆粒若しくは制御性Ｔ細胞の死を引き起こさないか、又はナチュラルキラー細胞の脱顆粒若しくは制御性Ｔ細胞の死の減少を引き起こす。ナチュラルキラー細胞の脱顆粒及び／又は制御性Ｔ細胞の死に対する効果は、インビボ又はインビトロで、例えば、実施例７に記載のアッセイによって測定することができる。
【0168】
結合親和性
ヒト又はカニクイザルＰＤ－１受容体又は別の動物のＰＤ－１に対するヒト化抗ＰＤ－１抗体バリアントの結合親和性は、ｋａ、ｋｄ又はＫＤによって特徴付けられ得る。本明細書で使用される「ｋａ」という用語は、抗体と抗原との会合の速度定数を指すことを意図している。本明細書で使用される「ｋｄ」という用語は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離の速度定数を指すことを意図している。本明細書で互換的に使用される「ＫＤ」又は「ＫＤ」という用語は、抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指すことを意図している。本開示の目的のために、ＫＤは、２つの速度定数ｋａ／ｋｄの比として定義される。平衡解離定数が小さいほど、対象の抗体とＰＤ－１とがより緊密に結合する。
ヒト又はカニクイザルＰＤ－１受容体又は別の動物のＰＤ－１に対するヒト化抗ＰＤ－１抗体バリアントの結合親和性は、ｋａ、ｋｄ又はＫＤによって特徴付けられ得る。本明細書で使用される「ｋａ」という用語は、抗体と抗原との会合の速度定数を指すことを意図している。本明細書で使用される「ｋｄ」という用語は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離の速度定数を指すことを意図している。本明細書で互換的に使用される「ＫＤ」又は「ＫＤ」という用語は、抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指すことを意図している。本開示の目的のために、ＫＤは、２つの速度定数ｋａ／ｋｄの比として定義される。平衡解離定数が小さいほど、対象の抗体とＰＤ－１とがより緊密に結合する。
【0169】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定される場合、２００ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、８０ｎＭ未満、６０ｎＭ未満又は４０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤ－１に結合する。一態様では、本明細書に開示される抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、５０００ｎＭ、４０００ｎＭ、２０００ｎＭ、１０００ｎＭ、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ又は２００ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＰＤ－１に結合する。
【0170】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ領域置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２Ｂへの結合の増加及びＦｃγＲ２Ａ（例えば、１３１Ｒアロタイプ又は１３１Ｈアロタイプ）又はＦｃγＲ１Ａなどの１つ以上の活性化Ｆｃγ受容体への結合の減少を有する。
【0171】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ領域アミノ酸置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２Ｂ／ＦｃγＲ２Ａ（例えば、１３１Ｒアロタイプ又は１３１Ｈアロタイプ）への増加した結合比を有する。いくつかの場合では、結合ＦｃγＲ２Ｂ／ＦｃγＲ２Ａ（例えば、１３１Ｒアロタイプ又は１３１Ｈアロタイプ）の増加した比は、Ｆｃ領域置換を欠く親分子と比較して、少なくとも１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．８、２、２．２、２．５、３、３．５、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０又は１５０倍である。
【0172】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体又はその抗原結合断片のＦｃ領域は、上記のアミノ酸置換を欠くＦｃ領域を含む同等の対照抗体と比較して、より高い親和性でＦｃγＲ２Ｂに結合する。いくつかの場合では、抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、最大で約５μＭ、例えば約５μＭ～０．１μＭの解離定数（ＫＤ）でＦｃγＲ２Ｂに結合する。
【0173】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体又は抗原結合断片のＦｃ領域（ＦｃＲ）は、ＦｃγＲ２Ｂに選択的に結合する。いくつかの場合では、抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、最大で５μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ｂに結合する。
【0174】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体又は抗原結合断片は、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ、４μＭ、３μＭ又は２μＭ未満のＫＤでヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する。いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体又は抗原結合断片は、少なくとも２μＭ、１μＭ、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、８０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ又は５ｎＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する。いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体又は抗原結合断片は、２００ｎＭ～５μＭ、４００ｎＭ～４μＭ、５００ｎＭ～３．５μＭ、８００ｎＭ～３μＭ、１μＭ～５μＭ、１μＭ～４．５μＭ、１μＭ～４μＭ、１μＭ～３．５μＭ、１μＭ～３μＭ、１μＭ～２．５μＭ、又は１μＭ～２μＭのＫＤでヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する。
【0175】
いくつかの場合では、抗体は、親分子と比較してより低い又は等しい親和性でＦｃγＲ２Ａ（例えば、１３１Ｒアロタイプ又は１３１Ｈアロタイプ）に結合し、親分子は、ＦｃγＲ２Ｂに対する結合の増加、したがってＦｃγＲ２Ｂのシグナル伝達の増強を抗体分子に付与するＦｃ置換を欠く等価な抗体である。
【0176】
いくつかの場合では、抗体がＰ２３８Ｄ置換を含む場合、抗体は、位置２３８にプロリンを含むＦｃ領域を含む同等の対照抗体（ＥＵインデックス）と比較して低い又は等しい親和性でＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する。
【0177】
いくつかの場合では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、５μＭを超えるＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する。いくつかの場合では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１０μＭを超えるＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する。いくつかの場合では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも１５μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する。いくつかの場合では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも２０μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する。いくつかの場合では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、約１５μＭ～２５μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する。
【0178】
いくつかの場合では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも５０μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する。いくつかの場合では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも７５μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する。いくつかの場合では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも８０μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する。いくつかの場合では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも９０μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する。いくつかの場合では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、約５０μＭ～約１００μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する。いくつかの場合では、抗体は、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、約７５μＭ～約１２５μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する。
【0179】
いくつかの場合では、抗体は、３以上、例えば少なくとも４、５、６、７、８、９又は１０の［ＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒ）に対する抗体のＫＤ値／ＦｃγＲ２Ｂに対する抗体のＫＤ値］を有する。好適には、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される。
【0180】
いくつかの場合では、抗体は、１０以上、例えば少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０の［ＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈ）に対する抗体のＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対する抗体のＫＤ値］を有する。好適には、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される。
【0181】
いくつかの場合では、抗体は、３以上、例えば少なくとも４、５、６、７、８、９又は１０の［ＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒ）に対する抗体のＫＤ値／ＦｃγＲ２Ｂに対する抗体のＫＤ値］、及び／又は１０以上、例えば少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５又は５０の［ＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈ）に対する抗体のＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対する抗体のＫＤ値］を有する。好適には、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される。
【0182】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体又はその抗原結合断片は、野生型配列よりもＦｃ領域置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２Ｂ／ＦｃγＲ１Ａに対する結合比が増加している。いくつかの場合では、結合ＦｃγＲ２Ｂ／ＦｃγＲ１Ａの増加した比は、Ｆｃ領域置換を欠く親分子と比較して、少なくとも１．１、１．２、１．５、２、５、１０、５０、１００、１５０、２００、２５０倍である。
【0183】
Ｆｃ領域置換を欠く親分子と比較してとは、野生型Ｆｃに対するＦｃ置換を表す、特許請求の範囲に列挙されたアミノ酸以外の同じアミノ酸配列を有する抗体分子と比較することを意味する。したがって、ＦｃγＲ２Ｂへの列挙されたＦｃ置換の有無にかかわらず、抗体分子の結合を測定することができ、場合により、ＦｃγＲ２Ａ（例えば、１３１Ｒアロタイプ又は１３１Ｈアロタイプ）又はＦｃγＲ１Ａなどの活性化Ｆｃγ受容体への列挙されたＦｃ置換の有無にかかわらず、抗体分子の結合を、例えばＳＰＲによって測定することができる。
【0184】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体又はその抗原結合断片は、野生型配列よりもＦｃ領域置換を欠く親分子と比較して、［ＦｃγＲ１Ａの結合についてのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂの結合についてのＫＤ値］の比が増加している。いくつかの場合では、バリアント分子についての［ＦｃγＲ１Ａの結合についてのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂの結合についてのＫＤ値］の比は、Ｆｃ領域置換を欠く親分子についての［ＦｃγＲ１Ａの結合についてのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂの結合についてのＫＤ値］の比の少なくとも１．１、１．２、１．５、２、５、６、７、８、１０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、１０００、１５００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、又は１００００倍である。
【0185】
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体又はその抗原結合断片は、野生型配列よりもＦｃ領域置換を欠く親分子と比較して、［ＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒ）の結合についてのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂの結合についてのＫＤ値］の比が増加している。いくつかの場合では、バリアント分子についての［ＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒ）の結合についてのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂの結合についてのＫＤ値］の比は、Ｆｃ領域置換を欠く親分子についての［ＦｃγＲ１Ａの結合についてのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂの結合についてのＫＤ値］の比の少なくとも１．１、１．２、１．５、２、５、１０、５０、又は１００倍である。
【0186】
本明細書で提供されるいくつかの実施形態では、別の動物のヒトＰＤ－１、カニクイザルＰＤ－１又はＰＤ－１に対する抗ＰＤ－１抗体のヒト化バリアントのそれぞれに対する結合親和性は、表面プラズモン共鳴によって測定される。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃｈｉｃａｇｏ ＩＬ）を使用して、対象抗体の結合親和性を測定することができる。例示的なＳＰＲ分析システムには、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｘ１００、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００、Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００又はＢｉａｃｏｒｅ ４０００機器、及び市販のセンサチップシリーズが含まれるが、これらに限定されない。Ｂｉａｃｏｒｅシステムの典型的な用途では、ある範囲の分析物濃度にわたって時間の関数として相互作用を監視し、次いでデータセット全体を相互作用を記述する数学モデルに当てはめることによって、相互作用動態が分析される。会合相（試料注入中）は、会合プロセスと解離プロセスの両方に関する情報を含み、解離相（試料注入後、バッファフローが解離した分析物分子を除去する場合）中には解離のみが起こる。当業者は、製造業者のマニュアルに従って結合親和性アッセイを実施するための適切なパラメータ及び／又は条件を選択又は決定することができる。いくつかの実施形態では、対象抗体の結合親和性は、３７℃における表面プラズモン共鳴によって決定される。いくつかの場合では、ヒト又はカニクイザルＰＤ－１に対するヒト化抗体バリアントの結合親和性及び動態は、実施例２に開示されているように、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ（Ｃｙｔｉｖａ）を使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される。
【0187】
抗体操作
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、ヒト抗体を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体は、モノクローナルヒト化抗体、キメラ抗体、又は多重特異性抗体を含む。いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、モノクローナル抗体を含む。
いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、ヒト抗体を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体は、モノクローナルヒト化抗体、キメラ抗体、又は多重特異性抗体を含む。いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、モノクローナル抗体を含む。
【0188】
本明細書で実施される抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト又はヒト化抗体であり得る。本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、フレームワーク領域とＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことを意図している。更に、抗体が定常領域を含む場合、その定常領域もヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位特異的変異誘発又はインビボでの体細胞変異によって導入された変異）を含み得る。しかし、本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含むことを意図しない。「ヒト化抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフトされている抗体を指すことを意図する。ヒトフレームワーク配列内で更なるフレームワーク領域修飾を行うことができる。「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を指すことを意図する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、モノクローナル抗体である。
【0189】
主題抗体は、ハイブリドーマプロセス又は組換えＤＮＡプロセスによって調製することができる。ハイブリドーマを作製する細胞融合工程で用いられる抗体産生細胞は、Ｋｏｈｌｅｒ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５））の方法に記載されているように、抗原（ＰＤ－１、その部分ペプチド、又はそれらを発現する細胞）で免疫した動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、サル、ヤギ）の脾臓細胞、リンパ節細胞、末梢血白血球等である。また、非免疫動物から予め単離された上記細胞又はリンパ球に、培地中で抗原を作用させて得られる抗体産生細胞を用いることもできる。骨髄腫細胞としては、公知の種々の細胞株を用いることができる。抗体産生細胞及び骨髄腫細胞は、互いに融合可能であれば、異なる動物種に由来し得る。いくつかの場合では、それらは同じ動物種起源のものである。ハイブリドーマは、例えば、抗原免疫したマウスから得られた脾臓細胞とマウス骨髄腫細胞との細胞融合によって産生され、その後のスクリーニングにより、ＰＤ－１に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを得ることができる。ＰＤ－１に対するモノクローナル抗体は、ハイブリドーマの培養によって、又はハイブリドーマを投与した哺乳動物の腹水から産生され得る。
【0190】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体は、ヒト化抗体を含む。ヒト化抗体の作製では、フレームワーク残基の選択は、高い結合親和性を保持する上で重要であり得る。原則として、任意のＨｕＡｂ由来のフレームワーク配列は、ＣＤＲグラフト化のための鋳型として役立ち得、しかしながら、そのようなフレームワークへの直接的なＣＤＲ置換は、抗原に対する結合親和性の有意な喪失をもたらし得ることが実証されている。Ｇｌａｓｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：２６０６；Ｔｅｍｐｅｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６；及びＳｈａｌａｂｙ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７：２１７．ＨｕＡｂが元のｍｕＡｂとより相同であるほど、ヒトフレームワークが親和性を低下させ得るマウスＣＤＲに歪みを導入する可能性は低くなる。抗体配列データベースに対する配列相同性検索に基づいて、ＨｕＡｂ ＩＣ４は、ｍｕＭ４ＴＳ．２２に対して良好なフレームワーク相同性を提供するが、他の高度に相同なＨｕＡｂ、特にヒトサブグループＩ由来のカッパーＬ鎖又はヒトサブグループＩＩＩ由来のＨ鎖も同様に適している。Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９８７）．Ｖ領域の理想的な配列を予測するために、ＥＮＣＡＤ（Ｌｅｖｉｔｔら（１９８３）Ｊ．Ｍｏｌ．生物１６８：５９５）などの様々なコンピュータプログラムが利用可能である。したがって、本発明は、異なるＶ領域を有するＨｕＡｂを包含する。適切なＶ領域配列を決定し、これらの配列を最適化することは、当業者の技能の範囲内である。免疫原性が低下した抗体を得るための方法は、米国特許第５，２７０，２０２号及び欧州特許第６９９，７５５号にも記載されている。
【0191】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体は重鎖可変領域を含み、当該軽鎖可変領域は、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２及びダイアボディからなる群から選択される構造を形成する。
【0192】
一態様では、本明細書に開示される抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は当該Ｆｃ領域に作動可能に連結された当該重鎖可変領域を含み、軽鎖は当該軽鎖可変領域を含む。１つの特徴では、本明細書に開示される抗体は、ヒト化抗体を含む。一態様では、本明細書に開示される抗体は、ヒト抗体を含む。別の実施形態では、本明細書に開示される抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び多重特異性抗体からなる群から選択される。いくつかの場合では、本明細書に開示される抗体は、モノクローナル抗体である。
【0193】
ヒト化
いくつかの実施形態では、ヒト化ＶＨ及びＶＬドメインの任意の潜在的な組合せを含む抗体バリアントが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトフレームワーク配列を含むＰＤ－１アゴニスト抗体のＶＨのヒト化バリアントを含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、ヒトフレームワーク配列を含むＰＤ－１アゴニスト抗体のＶＬのヒト化バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、ヒト化ＶＨ及びＶＬドメインの任意の潜在的な組合せを含む抗体バリアントが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒトフレームワーク配列を含むＰＤ－１アゴニスト抗体のＶＨのヒト化バリアントを含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、ヒトフレームワーク配列を含むＰＤ－１アゴニスト抗体のＶＬのヒト化バリアントを含む。
【0194】
ヒト化された抗体は、抗原に対する高い親和性及び他の好ましい生物学的特性を保持することができる。この目的を達成するために、１つの例では、ＰＤ－１ヒト化抗体は、親配列及びヒト化配列の３次元モデルを使用して、親配列及び種々の概念的ヒト化産物を分析するプロセスによって調製される。三次元免疫グロブリンモデルは当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の可能性のある三次元立体配座構造を図示及び表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらのディスプレイの検査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性のある役割、及び候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析を可能にする。このようにして、ＦＲ残基をコンセンサス配列及びインポート配列から選択し、組み合わせて、標的抗原に対する親和性の増加などの所望の抗体特性を達成することができる。
【0195】
いくつかの場合では、可変重（ＶＨ）鎖は、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、ヒト化ＶＨ鎖は、ヒトフレームワークＩＧＨＶ１－２４＊０１を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＶＨ鎖は、配列番号８に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＶＨ鎖は、配列番号９に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。更に別の実施形態では、ヒト化ＶＨ鎖はヒトフレームワークＩＧＨＶ７－４－１＊０２を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＶＨ鎖は、配列番号１０に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＶＨ鎖は、配列番号１１に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0196】
いくつかの場合では、可変軽（ＶＬ）鎖は、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、ヒト化ＶＬ鎖は、ヒトフレームワークＩＧＫＶ１－３９＊０１を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＶＬ鎖は、配列番号１３に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、ヒト化ＶＬ鎖は、ヒトフレームワークＩＧＫＶ３－１１＊０１を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＶＬ鎖は、配列番号１４に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＶＬ鎖は、配列番号１５に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化ＶＬ鎖は、配列番号１６に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0197】
変異
本明細書で提供されるいくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＰＤ－１抗体は、参照配列に関して１つ以上の変異又は修飾を有し得る。変異又は修飾は、欠失、挿入若しくは付加、又はアミノ酸残基の置換若しくは置換であり得る。「欠失」は、１つ以上のアミノ酸残基の非存在に起因するアミノ酸配列の変化を指す。「挿入」又は「付加」は、参照配列と比較して１つ以上のアミノ酸残基の付加をもたらすアミノ酸配列の変化を指す。「置換」又は「置換」は、異なるアミノ酸による１つ以上のアミノ酸の置換を指す。本開示の文脈では、参照配列に対する対象抗体又はその画分の変異は、対象抗体又はその画分を参照配列と比較することによって決定され得る。比較のための配列の最適なアラインメントは、当技術分野における公知の方法のいずれかに従って行われ得る。
本明細書で提供されるいくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＰＤ－１抗体は、参照配列に関して１つ以上の変異又は修飾を有し得る。変異又は修飾は、欠失、挿入若しくは付加、又はアミノ酸残基の置換若しくは置換であり得る。「欠失」は、１つ以上のアミノ酸残基の非存在に起因するアミノ酸配列の変化を指す。「挿入」又は「付加」は、参照配列と比較して１つ以上のアミノ酸残基の付加をもたらすアミノ酸配列の変化を指す。「置換」又は「置換」は、異なるアミノ酸による１つ以上のアミノ酸の置換を指す。本開示の文脈では、参照配列に対する対象抗体又はその画分の変異は、対象抗体又はその画分を参照配列と比較することによって決定され得る。比較のための配列の最適なアラインメントは、当技術分野における公知の方法のいずれかに従って行われ得る。
【0198】
変異は、変異部位によって特定され得る。変異部位は、欠失、付加、置換などの修飾が起こる参照配列上の位置である。参照配列上のアミノ酸残基は、Ｎ末端からＣ末端に向かって番号付けされ、変異部位は、欠失、付加又は置換が起こるアミノ酸残基の番号付けである。例えば、参照配列上の位置２６は、Ｎ末端から数えて２６番目のアミノ酸残基が存在する位置である。
【0199】
抗体コンジュゲート
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体又はその断片は、血清アルブミンに融合される。血清アルブミンへの融合は、本明細書に記載されるような対象抗体の薬物動態を改善することができる。例えば、主題抗体又はその断片は、血清アルブミンと融合され得る。血清アルブミンは、哺乳動物において最も豊富な血液タンパク質である球状タンパク質である。血清アルブミンは肝臓で産生され、血清タンパク質の約半分を構成する。それは単量体であり、血液に可溶性である。いくつかの実施形態では、主題抗体又はその断片は、血清アルブミンに融合され得る。更なる実施形態では、血清アルブミンは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体又はその断片は、血清アルブミンに融合される。血清アルブミンへの融合は、本明細書に記載されるような対象抗体の薬物動態を改善することができる。例えば、主題抗体又はその断片は、血清アルブミンと融合され得る。血清アルブミンは、哺乳動物において最も豊富な血液タンパク質である球状タンパク質である。血清アルブミンは肝臓で産生され、血清タンパク質の約半分を構成する。それは単量体であり、血液に可溶性である。いくつかの実施形態では、主題抗体又はその断片は、血清アルブミンに融合され得る。更なる実施形態では、血清アルブミンは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）である。
【0200】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗体又はその断片は、血清アルブミンに対する結合活性を示して対象抗体又はその断片の半減期を延長するアルブミン結合ペプチドに融合される。本明細書で使用することができるアルブミン結合ペプチドには、例えば、Ｄｅｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：３５０３５－３５０４３，２００２及びＭｉｙａｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１０２：３１１０－３１１８，２０１３が挙げられるが、これに限定されない。いくつかの実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、本明細書に記載される主題抗体又はその断片に遺伝的に融合される。更なる実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、化学的手段、例えば化学的コンジュゲーションによって、本明細書に記載の主題抗体又はその断片に結合する。いくつかの実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、本明細書に記載される主題抗体又はその断片のＮ末端又はＣ末端に融合される場合がある。アルブミン結合ペプチドのＣ末端は、ペプチド結合を介して対象抗体のＮ末端に直接融合され得る。あるいは、アルブミン結合ペプチドのＮ末端は、ペプチド結合を介して対象抗体又はその断片のＣ末端に直接融合され得る。更なる実施形態では、アルブミン結合ペプチドのＣ末端のカルボン酸は、従来の化学的コンジュゲーション技術を使用して、主題抗体又はその断片の内部アミノ酸残基に融合され得る。
【0201】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＰＤ－１抗体又はその断片は、ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に融合される。抗体又はその断片は、例えば、抗体又はその断片の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させるためにペグ化することができる。抗体をペグ化するために、抗体又はその断片は、典型的には、１つ以上のＰＥＧ基が抗体又は抗体断片に結合するようになる条件下で、ＰＥＧの反応性エステル又はアルデヒド誘導体などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応する。いくつかの場合では、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（又は類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応又はアルキル化反応を介して行われる。本明細書で使用される場合、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（Ｃ１～Ｃ１０）アルコキシ－若しくはアリールオキシ－ポリエチレングリコール又はポリエチレングリコール－マレイミドなどの他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの形態のいずれかを包含することを意図している。タンパク質をペグ化するための方法、例えば、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．による欧州特許第０ １５４ ３１６号明細書及びＩｓｈｉｋａｗａ ｅｔ ａｌによる欧州特許第０ ４０１ ３８４号明細書に開示されているものなどを使用することができる。いくつかの実施形態では、ポリマー、例えばＰＥＧは、従来の化学的方法、例えば化学的コンジュゲーションを使用して、Ｎ末端若しくはＣ末端又は内部位置のいずれかで、本明細書に記載の対象抗体又はその断片に共有結合し得る。理論に束縛されるものではないが、ＰＥＧ部分は、本明細書に記載の抗体に結合すると、水溶性、溶液中での高い移動度、毒性の欠如及び低い免疫原性、循環寿命の延長、安定性の増加、体からのクリアランスの準備、及び体内分布の変化に寄与し得る。
【0202】
対象抗体又はその断片の血清半減期を延長するために使用され得る他の半減期延長技術としては、限定されないが、ＸＴＥＮ（Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７：１１８６－１１９２，２００９）及びＡｌｂｕ ｔａｇ（Ｔｒｕｓｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．２０：２２８６－２２９２，２００９）が挙げられる。
【0203】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるａＰＤ－１抗体又はその断片は、化学的に官能性の部分にコンジュゲートされる。典型的には、部分は、検出可能なシグナルを生成することができる標識である。これらのコンジュゲート抗体又はその断片は、例えば、腫瘍負荷量の定量、転移巣のイメージング及び腫瘍イメージングなどの検出システムにおいて有用である。そのような標識は当技術分野で公知であり、放射性同位体、酵素、蛍光化合物、化学発光化合物、生物発光化合物基質補因子及び阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。そのような標識の使用を記載している特許の例については、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号、及び同第４，３６６，２４１号を参照されたい。部分は、本明細書に記載の抗体又はその断片に共有結合されてもよく、組換え結合されてもよく、又は二次試薬、例えば第２の抗体、プロテインＡ、又はビオチン－アビジン複合体を介して抗体又はその断片にコンジュゲートされてもよい。
【0204】
他の官能性部分としては、シグナルペプチド、免疫学的反応性を増強又は低下させる薬剤、固体支持体とのカップリングを促進する薬剤、ワクチン担体、生体応答調節剤、常磁性標識及び薬物が挙げられる。シグナルペプチドは、細胞膜、通常は真核細胞の小胞体、並びに細菌の内膜又は内膜と外膜の両方のいずれかを通して新たに合成されたタンパク質を導く短いアミノ酸配列である。シグナルペプチドは、典型的には、ポリペプチドのＮ末端部分にあり、典型的には、生合成と細胞からのポリペプチドの分泌との間で酵素的に除去される。そのようなペプチドは、合成された分子の分泌を可能にするために、対象抗体又はその断片に組み込むことができる。
【0205】
免疫学的反応性を増強する薬剤としては、細菌スーパー抗原が挙げられるが、これに限定されない。固体支持体へのカップリングを促進する薬剤としては、ビオチン又はアビジンが挙げられるが、これらに限定されない。免疫原担体としては、限定されないが、任意の生理学的に許容される緩衝液が挙げられる。生体応答調節剤には、サイトカイン、特に腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、インターロイキン－２、インターロイキン－４、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子及びガンマ－インターフェロンが含まれる。
【0206】
免疫学的反応性を低下させる薬剤には、抗炎症剤及び免疫抑制剤が含まれるが、これらに限定されない。抗炎症剤には、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）及びコルチコステロイドが含まれる。ＮＳＡＩＤには、サリチル酸、例えばアセチルサリチル酸；ジフルニサル、サリチル酸、及びサルサレート；プロピオン酸誘導体、例えばイブプロフェン；ナプロキセン；デキシブプロフェン、デクスケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、フェノプロフェン、ロキソプロフェン、及びケトプロフェン；酢酸誘導体、例えば、インドメタシン、ジクロフェナク、トルメチン、アセクロフェナク、スリンダク、ナブメトン、エトドラク、及びケトロラック；ピロキシカム、ロルノキシカム、メロキシカム、イソキシカム、テノキシカム、フェニルブタゾン、及びドロキシカム等のエノール酸誘導体；メフェナム酸、フルフェナム酸、メクロフェナム酸、及びトルフェナム酸等のアントラニル酸誘導体；セレコキシブ、ルミラコキシブ、ロフェコキシブ、エトリコキシブ、バルデコキシブ、フィロコキシブ及びパレコキシブなどの選択的ＣＯＸ－２阻害剤；スルホンアニリド、例えばニメスリド；及びその他、クロニキシン、リコフェロン等が含まれるが、これらに限定されない。コルチコステロイドには、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン及びプレドニゾロンが含まれるが、これらに限定されない。免疫抑制剤としては、限定されないが、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、レフルノミド、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、Ｄ－ペニシラミン、経口金化合物、注射可能な金化合物（筋肉内注射）、ミノサイクリン、金チオリンゴ酸ナトリウム、オーラノフィン、Ｄ－ペニシラミン、ロベンザリット、ブシラミン、アクタリット、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキサート、ミゾリビン、シクロスポリン及びタクロリムスが挙げられる。
【0207】
適切な薬物部分には、抗新生物剤が含まれる。非限定的な例は、放射性同位体、ビンブラスチン、ビンクリスチン及びビンデシン硫酸塩などのビンカアルカロイド、アドリアマイシン、硫酸ブレオマイシン、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、塩酸デュアノルビシン、塩酸ドキソルビシン、エトポシド、フルオロウラシル、ロムスチン、塩酸メクロロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトタン、ペントスタチン、ピポブロマン、プロカルベイズ塩酸塩、ストレプトゾトシン、タキソール、チオグアニン、及びウラシルマスタードである。
【0208】
一本鎖分子を含む免疫毒素は、組換え手段によって産生することができる。様々な免疫毒素が利用可能であり、方法は、例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｔｏｘｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｉｍｉｎｇ ｔｈｅ Ｍａｇｉｃ Ｂｕｌｌｅｔ，Ｔｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１６８－１９０；Ｖｉｔａｔｔａ（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８－１１０４；及びＷｉｎｔｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３４９：２９３－２９９に見出され得る。適切な毒素としては、限定されないが、リシン、放射性核種、アカザ抗ウイルスタンパク質、シュードモナス外毒素Ａ、ジフテリア毒素、リシンＡ鎖、リストリクトシンなどの真菌毒素及びホスホリパーゼ酵素が挙げられる。一般に、「Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ｔｏｘｉｎｓ，」Ｏｌｓｎｅｓ ａｎｄ Ｐｉｈｌ，Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．１５：３５５－３８１（１９８１）；ａｎｄ「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，」ｅｄｓ．Ｂａｌｄｗｉｎ ａｎｄ Ｂｙｅｒｓ，ｐｐ．１５９－１７９，２２４－２６６，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９８５）を参照されたい。
【0209】
化学官能性部分は、例えば抗体及び官能性部分をコードする融合遺伝子を作製することによって組換え的に作製することができる。あるいは、抗体又はその断片は、様々な十分に確立された化学的手順のいずれかによって部分に化学的に結合することができる。例えば、部分がタンパク質である場合、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣｌなど）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレートなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス－アジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（例えば、トリエン２，６－ジイソシアネート）、及びビス－活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン）などの様々なカップリング剤を使用することができる。リンカーは、細胞内での細胞傷害性薬物の放出を促進する「開裂可能なリンカー」であり得る。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、ジメチルリンカー、又はジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５２：１２７－１３１（１９９２））が使用され得る。部分は、第２の抗体、プロテインＡ、又はビオチン－アビジン複合体などの二次試薬を介して共有結合又はコンジュゲートされ得る。常磁性部分及びその抗体へのコンジュゲーションの例については、例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ １１：２３１－２３８を参照されたい。
【0210】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＰＤ－１抗体又はその断片は、二重特異性抗体である。二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。本明細書に記載の二重特異性抗体は、ＰＤ－１上の異なるエピトープを認識する二重特異性抗体であってもよいし、一方の抗原結合部位がＰＤ－１を認識し、他方の抗原結合部位がＰＤ－１以外の抗原を認識する二重特異性抗体であってもよい。
【0211】
核酸分子
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、１つ以上の核酸分子によってコードされる。１つの場合では、抗体は単一の核酸分子によってコードされる。他の場合では、抗体は、２つ以上の核酸分子によってコードされる。例えば、抗原結合部位が重鎖可変ポリペプチド領域と軽鎖可変ポリペプチド領域とが一緒になることによって形成されるので、２つの可変（重及び軽）ポリペプチド領域は別々の核酸分子によってコードされる。あるいは、例えばＳｃＦｖの場合、それらは同じ核酸分子によってコードされる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、１つ以上の核酸分子によってコードされる。１つの場合では、抗体は単一の核酸分子によってコードされる。他の場合では、抗体は、２つ以上の核酸分子によってコードされる。例えば、抗原結合部位が重鎖可変ポリペプチド領域と軽鎖可変ポリペプチド領域とが一緒になることによって形成されるので、２つの可変（重及び軽）ポリペプチド領域は別々の核酸分子によってコードされる。あるいは、例えばＳｃＦｖの場合、それらは同じ核酸分子によってコードされる。
【0212】
本開示のいくつかの態様によれば、本開示のいくつかの実施形態による抗体又はその抗原結合断片をコードする１つ以上の核酸分子が提供される。
【0213】
本明細書で提供される抗体をコードするポリペプチドの一次アミノ酸配列から、当業者は、ポリペプチドをコードする適切なヌクレオチド配列、及び所望であればコドン最適化されたものを決定することができる（例えば、Ｍａｕｒｏ ａｎｄ Ｃｈａｐｐｅｌｌ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２０（１１）：６０４－６１３，２０１４を参照されたい）。
【0214】
本開示のいくつかの態様によれば、本開示の重鎖可変領域ポリペプチド又は軽鎖可変領域ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸が提供される。本開示の重鎖可変ポリペプチド又は軽鎖可変ポリペプチドは、抗原結合部位の一部を構成するアミノ酸を含む個々のポリペプチド鎖を指す。いくつかの場合では、ポリペプチドは、定常ドメイン、ヒンジ領域、及びＦｃ領域、例えば１つ以上のＦｃ受容体結合部位を含むものなどの他のドメインも含む。
【0215】
本開示のいくつかの態様によれば、本開示の抗体又は抗原結合断片を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む単離された核酸が提供される。特定の実施形態では、ポリペプチドは、定常ドメイン、ヒンジ領域、及びＦｃ領域（１つ以上のＦｃ受容体結合部位を含むものなど）の他のドメインを含んでもよい。
【0216】
１つの場合では、核酸分子は、抗体又はその断片のＶＬドメインを含むポリペプチド配列のみをコードする。いくつかの場合では、核酸分子は、抗体又はその断片のＶＨドメインを含むポリペプチド配列のみをコードする。他の場合では、核酸分子は、本開示の抗体又はその抗体断片を形成することができるＶＨドメイン含有ポリペプチド配列及びＶＬドメイン含有ポリペプチド配列の両方をコードする。
【0217】
本開示の抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸分子は、１つ以上のプロモータ、１つ以上の起点又は複製、１つ以上の選択マーカー、及び発現ベクターに典型的に見られる１つ以上の他の要素などの他の機能領域（要素）を含み得るベクター（例えば、プラスミドベクター、コスミドベクター若しくはウイルスベクター、又は人工染色体）であり得るか、又はその一部であり得る。抗体を含むタンパク質をコードする核酸のクローニング及び発現は十分に確立されており、十分に当業者の技術の範囲内である。
【0218】
ベクター
本開示のいくつかの態様によれば、本開示のいくつかの実施形態による核酸を含むベクターが提供される。特定の実施形態では、ベクターは、プラスミドベクター、コスミドベクター、ウイルスベクター、又は人工染色体である。
本開示のいくつかの態様によれば、本開示のいくつかの実施形態による核酸を含むベクターが提供される。特定の実施形態では、ベクターは、プラスミドベクター、コスミドベクター、ウイルスベクター、又は人工染色体である。
【0219】
本開示の抗体又はその抗原結合断片を形成することができるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むベクター核酸を含む本開示の核酸は、精製／単離された形態であり得る。
【0220】
本開示の抗体又はその抗原結合断片をコードする単離／精製核酸は、そのような調製がインビトロ又はインビボで実施される組換えＤＮＡ技術によるものである場合、それらが天然に関連する材料、例えば、それらがそれらの天然環境又はそれらが調製される環境（例えば、細胞培養）で見出される他のタンパク質又は核酸を含まないか、又は実質的に含まない。
【0221】
いくつかの実施形態では、本開示の核酸は、９０％超、９５％超、９７％超及び９９％超など、８０％超純粋である。
【0222】
したがって、本開示のいくつかの態様によれば、本開示の重鎖可変ポリペプチド又は軽鎖可変ポリペプチドをコードする核酸又はヌクレオチド配列を含むベクターが提供される。特定の実施形態、ベクターは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、定常ドメイン、ヒンジ領域、及びＦｃ領域などの他のドメイン、例えば１つ以上のＦｃ受容体結合部位を含むものを含む。
【0223】
いくつかの実施形態では、本開示の核酸及び／又はベクターは、宿主細胞に導入される。真核細胞の場合、例えば、適切な技術としては、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム媒介性トランスフェクション及びレトロウイルス若しくは他のウイルス、例えばワクシニアを用いた形質導入、又は昆虫細胞の場合、バキュロウイルスが挙げられる。一態様では、宿主細胞、特に真核細胞に核酸を導入することは、ウイルス又はプラスミドベースの系を使用する。いくつかの場合では、プラスミド系はエピソームとして維持される。他の場合には、プラスミド系を宿主細胞又は人工染色体に組み込む。特定の実施形態では、組み込みは、単一又は複数の遺伝子座における１つ以上のコピーのランダムな組み込みによるものである。いくつかの実施形態では、組み込みは、単一又は複数の遺伝子座における１つ以上のコピーの標的化された組み込みによるものである。細菌細胞の場合、適切な技術としては、例えば、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション及びバクテリオファージを用いたトランスフェクションが挙げられる。
【0224】
一実施形態では、本開示の核酸は、宿主細胞のゲノム（例えば、染色体）に組み込まれる。特定の実施形態では、組み込みは、標準的な技術に従って、ゲノムとの組換えを促進する配列を含めることによって促進される。
【0225】
宿主細胞
本開示の更なる態様は、本明細書に開示される核酸を含有する宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、そのような宿主細胞はインビトロである。いくつかの実施形態では、そのような宿主細胞は培養中である。
本開示の更なる態様は、本明細書に開示される核酸を含有する宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、そのような宿主細胞はインビトロである。いくつかの実施形態では、そのような宿主細胞は培養中である。
【0226】
いくつかの場合では、宿主細胞は、細菌又は酵母などの任意の種に由来する。他の場合では、宿主細胞は、ヒト細胞又はげっ歯類細胞などの哺乳動物細胞、例えばＨＥＫ２９３Ｔ細胞又はＣＨＯ－Ｋ１細胞である。
【0227】
したがって、本開示のいくつかの態様によれば、本開示のいくつかの実施形態による核酸配列又はベクターを含む宿主細胞が提供される。
【0228】
いくつかの場合では、宿主細胞は、例えば、コード核酸の発現のための条件下で宿主細胞を培養することによって、核酸から本開示のタンパク質の発現を引き起こす又は可能にするように処理される。いくつかの実施形態では、発現産物の精製は、当業者に公知の方法によって達成される。
【0229】
いくつかの実施形態では、本開示の抗体又はその抗原結合断片のためのポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むベクター核酸を含む本開示の核酸は、単離された宿主細胞中に存在する。いくつかの場合では、宿主細胞は、宿主細胞のクローン集団の一部である。本明細書で使用される場合、宿主細胞への言及は、細胞のクローン集団も包含する。クローン集団は、単一の親宿主細胞から増殖されたものである。いくつかの場合では、宿主細胞は、任意の適切な生物に由来する。いくつかの場合では、宿主細胞は、例えば、細菌、真菌又は哺乳動物細胞である。
【0230】
いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ベクター核酸を（例えばプラスミドを用いて）増幅するのを助ける。特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載されるＰＤ－１抗体又はその断片を形成する本開示のポリペプチドを発現するための生物学的工場として働く。一例では、ベクター核酸を増幅するための適切な宿主は、細菌又は真菌細胞、例えば大腸菌（Escherichia coli）細胞又はサッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）細胞である。他の場合では、本開示のタンパク質（すなわち、本開示のＰＤ－１抗体又はその断片を構成するポリペプチド）を発現するための適切な宿主は、ＨＥＫ２９３Ｔ又はＣＨＯ－Ｋ１細胞などの哺乳動物細胞である。特定の実施形態では、宿主細胞は、ＨＥＫ２９３Ｔ又はＣＨＯ－Ｋ１細胞などの哺乳動物細胞である。
【0231】
種々の宿主発現ベクター系が、本明細書に記載のＰＤ－１抗体又はその断片を発現させるのに適している。異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後プロセシング及び改変のための特徴的かつ特異的な機構を有する。適切な細胞株又は宿主系は、本開示のタンパク質の正しい修飾及びプロセシングを確実にするように選択される。いくつかの実施形態では、遺伝子産物の一次転写物、グリコシル化及びリン酸化の適切なプロセシングのための細胞機構を有する真核宿主細胞が使用される。このような哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＨＥＫ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ及びＴ４７Ｄ、ＮＳ０、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【0232】
抗体の製造
本明細書に開示されるＰＤ－１抗体又はその断片は、ハイブリドーマ若しくはＢ細胞又は任意の形態の抗体及び／又は抗体断片ライブラリから対象抗体又はペプチドをコードするＤＮＡをクローニングし、クローンを適切なベクターに組み込み、ベクターを宿主細胞に形質導入することによって、組換え抗体として産生することができる（例えば、Ｐ．Ｊ．Ｄｅｌｖｅｓ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ：Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９７ ＷＩＬＥＹ，Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，２０００ ＯＸＦＯＲＤ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＰＲＥＳＳ，Ｖａｎｄａｍｍｅ Ａ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９２：７６７－７７５（１９９０））。したがって、一態様では、本開示の抗体又はその断片をコードする単離されたポリヌクレオチドが本明細書で提供される。
本明細書に開示されるＰＤ－１抗体又はその断片は、ハイブリドーマ若しくはＢ細胞又は任意の形態の抗体及び／又は抗体断片ライブラリから対象抗体又はペプチドをコードするＤＮＡをクローニングし、クローンを適切なベクターに組み込み、ベクターを宿主細胞に形質導入することによって、組換え抗体として産生することができる（例えば、Ｐ．Ｊ．Ｄｅｌｖｅｓ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ：Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９７ ＷＩＬＥＹ，Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，２０００ ＯＸＦＯＲＤ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＰＲＥＳＳ，Ｖａｎｄａｍｍｅ Ａ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９２：７６７－７７５（１９９０））。したがって、一態様では、本開示の抗体又はその断片をコードする単離されたポリヌクレオチドが本明細書で提供される。
【0233】
既存の抗体のＬ鎖又はＨ鎖の様々な領域に対応するヌクレオチド配列は、ハイブリダイゼーション、ＰＣＲ、及びＤＮＡ配列決定を含むがこれらに限定されない従来の技術を使用して容易に得られ、配列決定することができる。モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、抗体ヌクレオチド配列の１つの供給源として働く。一連のモノクローナル抗体を産生する膨大な数のハイブリドーマ細胞は、公的又は私的なリポジトリから入手することができる。最大の寄託機関は、十分に特徴付けられたハイブリドーマ細胞株の多様なコレクションを提供するＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎである。あるいは、抗体ヌクレオチドは、免疫化又は非免疫化げっ歯類又はヒトから、並びに脾臓及び末梢血リンパ球などの臓器から得ることができる。抗体ヌクレオチドを抽出及び合成するために適用可能な特定の技術は、Ｏｒｌａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ ８６：３８３３－３８３７，Ｌａｒｒｉｃｋ ｅｔ ａｌ．１９８９）ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１６０：１２５０－１２５５；Ｓａｓｔｒｙ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：５７２８－５７３２；及び米国特許第５，９６９，１０８号に記載される。
【0234】
ＰＤ－１抗体ヌクレオチド配列はまた、例えば、相同な非ヒト配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖定常領域のコード配列を置換することによって修飾され得る。そのようにして、元の抗体の結合特異性を保持するキメラ抗体が調製される。
【0235】
更に、ＰＤ－１抗体又はその機能的断片の重鎖及び／又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドをコドン最適化に供して、所望の宿主細胞における主題抗体又はその機能的断片の最適化された発現を達成することができる。例えば、コドン最適化の１つの方法では、天然のコドンが遺伝子の参照セットからの最も高頻度のコドンで置換され、各アミノ酸に対するコドン翻訳の速度が高くなるように設計される。ＰＤ－１抗体又はその機能的断片の重鎖及び／又は軽鎖に適用することができる所望のタンパク質を発現させるためのコドン最適化ポリヌクレオチドを作製するための更なる例示的な方法は、Ｋａｎａｙａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，２３８：１４３－１５５（１９９９），Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．，１８（５）：７９２－８００（２００１）、米国特許第５，７９５，７３７号、米国特許公開第２００８／００７６１６１号及び国際公開第２００８／０００６３２号に記載される。
【0236】
本開示のＰＤ－１抗体のポリヌクレオチドには、例示されたポリペプチドの機能的等価物及びその断片をコードするものが含まれる。機能的等価物は、保存的アミノ酸置換を有するポリペプチド、融合物を含む類似体、及び変異体であり得る。
【0237】
遺伝暗号の縮重のために、Ｌ配列及びＨ配列のヌクレオチド、並びに本開示のポリヌクレオチド及びベクターの構築に適したヘテロ二量体化配列にはかなりのばらつきがあり得る。これらの変形は、本開示によって包含される。
【0238】
所望であれば、組換えポリヌクレオチドは、遺伝子産物の発現及び精製の検出を容易にする異種配列を含むことができる。そのような配列の例としては、β－ガラクトシダーゼ、β－ラクタマーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及びそれらの誘導体などのレポータータンパク質をコードするものが挙げられる。精製を促進する他の異種配列は、Ｍｙｃ、ＨＡ（インフルエンザウイルス赤血球凝集素に由来する）、Ｈｉｓ－６、ＦＬＡＧ、又は免疫グロブリンのＦｃ部分、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、及びマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）などのエピトープをコードし得る。
【0239】
ポリヌクレオチドは、上記のように様々な化学官能性部分にコンジュゲートさせることができる。一般的に使用される部分には、検出可能なシグナルを生成することができる標識、シグナルペプチド、免疫学的反応性を増強又は低下させる薬剤、固体支持体とのカップリングを促進する薬剤、ワクチン担体、生体応答調節剤、常磁性標識及び薬物が含まれる。部分は、組換え的に又は当技術分野で公知の他の手段によってポリヌクレオチドに共有結合され得る。
【0240】
ポリヌクレオチドは、更なる配列、例えば、同じ転写単位内の更なるコード配列、制御エレメント、例えば、プロモータ、リボソーム結合部位及びポリアデニル化部位、同じプロモータ又は異なるプロモータの制御下の更なる転写単位、宿主細胞のクローニング、発現及び形質転換を可能にする配列、並びに本明細書に記載される種々の実施形態のいずれかに従って望ましい場合があるような任意のそのような構築物を含むことができる。
【0241】
ポリヌクレオチドは、化学合成、組換えクローニング法、ＰＣＲ、又はそれらの任意の組合せを使用して得ることができる。当業者は、本明細書で提供される配列データを使用して、ＤＮＡ合成機を使用することによって、又は商業サービスから注文することによって所望のポリヌクレオチドを得ることができる。
【0242】
所望の配列を含むポリヌクレオチドを適切なベクターに挿入することができ、次いで、これを複製、増幅及び発現のために適切な宿主細胞に導入することができる。したがって、１つの態様では、本開示のポリヌクレオチドの１つ以上を含む様々なベクターが本明細書に提供される。対象抗体をコードする少なくとも１つのベクターを含む発現ベクターの選択可能なライブラリも提供される。
【0243】
いくつかの態様では、本明細書に開示される抗体又はその断片の重鎖又は軽鎖の少なくとも一部をコードするポリヌクレオチド配列が本明細書で提供される。いくつかの態様では、本明細書に開示されるポリヌクレオチド配列を含むベクターが本明細書で提供される。
【0244】
本開示のベクターは、一般に、クローニングベクター及び発現ベクターに分類される。クローニングベクターは、それらが含有するポリヌクレオチドの複製コピーを得るために、又は将来の回復のためにポリヌクレオチドを寄託機関に保存する手段として有用である。発現ベクター（及びこれらの発現ベクターを含有する宿主細胞）を使用して、それらが含有するポリヌクレオチドから産生されるポリペプチドを得ることができる。適切なクローニングベクター及び発現ベクターには、当技術分野で公知の任意のもの、例えば、細菌、哺乳動物、酵母、昆虫及びファージディスプレイ発現系で使用するためのものが含まれる。
【0245】
適切なクローニングベクターは、標準的な技術に従って構築することができ、又は当技術分野で利用可能な多数のクローニングベクターから選択することができる。選択されるクローニングベクターは、使用されることが意図される宿主細胞に応じて異なり得るが、有用なクローニングベクターは、一般に、自己複製する能力を有するか、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一の標的を有するか、又はマーカー遺伝子を保有し得る。適切な例としては、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ｐＵＣ１８、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ファージＤＮＡ（糸状及び非糸状ファージＤＮＡを含む）、並びにシャトルベクター、例えばｐＳＡ３及びｐＡＴ２８が挙げられる。これら及び他のクローニングベクターは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、ＢｉＯＲａｄ、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの商業的供給業者から入手可能である。
【0246】
これらの核酸を含む発現ベクターは、タンパク質及びポリペプチドを産生するための宿主ベクター系を得るのに有用である。典型的には、これらの発現ベクターは、エピソームとして、又は染色体ＤＮＡの不可欠な部分としてのいずれかで、宿主生物において複製可能である。適切な発現ベクターには、プラスミド、ファージミドを含むウイルスベクター、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、コスミドなどが含まれる。酵母、鳥類、及び哺乳動物細胞を含む真核細胞での発現に適した多数の発現ベクターが利用可能である。発現ベクターの一例はｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（カリフォルニア州サンディエゴ）。）であり、ここで、転写はサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期プロモータ／エンハンサーによって駆動される。本明細書に記載の主題抗体を発現させるための特に有用な２種類の発現ベクターは、ファージディスプレイベクター及び細菌ディスプレイベクターである。
【0247】
本開示のベクターは、コードされた抗体を発現させるために必要な転写又は翻訳制御配列を含むことができる。適切な転写又は翻訳制御配列には、複製起点、プロモータ、エンハンサー、リプレッサー結合領域、転写開始部位、リボソーム結合部位、翻訳開始部位、並びに転写及び翻訳のための終結部位が含まれるが、これらに限定されない。
【0248】
発現ベクターを宿主細胞に移入することができ、次いで、トランスフェクトされた細胞を培養して、対象抗体又はその機能的断片を産生する。したがって、一態様では、異種プロモータに作動可能に連結された対象抗体又はその機能的断片をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞が本明細書で提供される。宿主細胞は、重鎖由来ポリペプチドをコードする第１のベクター及び軽鎖由来ポリペプチドをコードする第２のベクターの２つの発現ベクターで同時トランスフェクトすることができる。２つのベクターは、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする同一の選択マーカーを含むことができる。あるいは、重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、発現することができる単一のベクターを使用することができる。そのような状況では、過剰な毒性のない重鎖を避けるために、軽鎖を重鎖の前に配置することができる（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：５２；及びＫｏｈｌｅｒ，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：２１９７－２１９９）。
【0249】
対象抗体又はその機能的断片（例えば、第５，８０７，７１５号）を発現させるために、様々な宿主発現ベクター系を利用することができる。そのような宿主発現系は、目的のコード配列を産生し、続いて精製することができるビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換又はトランスフェクトした場合に対象抗体分子をｉｎ ｓｉｔｕで発現することができる細胞も表す。これらには、抗体コード配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ又はコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、大腸菌及び枯草菌）；抗体コード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、サッカロミセス・ピキア（Saccharomyces Pichia））；抗体コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）、又は抗体コード配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換されたもの；哺乳動物細胞（例えば、メタロチオネインプロモータ）又は哺乳動物ウイルス（例えば、アデノウイルス後期プロモータ）のゲノムに由来するプロモータを含有する組換え発現構築物を有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、ＮＳＯ及び３Ｔ３細胞）；（ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモータ）などの微生物が含まれるが、これらに限定されない。例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）などの哺乳動物細胞は、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中間初期遺伝子プロモータ要素などのベクターと組み合わせて、抗体の有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｇｅｎｅ ４５：１０１；及びＣｏｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：２）。いくつかの実施形態では、抗体又はその断片は、ＣＨＯ細胞において産生される。
【0250】
細菌系の場合、発現される抗体分子に意図される用途に応じて、多数の発現ベクターが有利に選択され得る。例えば、抗体分子の医薬組成物の生成のために、大量のそのような抗体又はその断片を産生する場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を指示するベクターが望ましい場合がある。そのようなベクターとしては、限定されないが、融合タンパク質が産生されるように、抗体コード配列をｌａｃ Ｚコード領域とインフレームでベクターに個別に連結することができる大腸菌発現ベクターｐＵＲ２７８（ｕｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８３，ＥＭＢＯ １２：１７９１）；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ ＆ Ｉｎｏｕｙｅ，１９８５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３１０１－３１０９；Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ ＆ Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３－５５０９）；などが挙げられる。ｐＧＥＸベクターを使用して、外来ポリペプチドをグルタチオン５－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として発現させることもできる。一般に、そのような融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズへの吸着及び結合、続いて遊離グルタチオンの存在下での溶出によって溶解細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、クローン化された標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出され得るように、トロンビン又は第Ｘａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計される。
【0251】
昆虫系では、外来遺伝子を発現させるためのベクターとして、オートグラファ・カリフォルニカ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）を使用することができる。このウイルスはスポドプテラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda）細胞で増殖する。抗体又は機能的断片コード配列は、ウイルスの非必須領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）に個別にクローニングし、ＡｃＮＰＶプロモータ（例えば、ポリヘドリンプロモータ）の制御下に置くことができる。
【0252】
哺乳動物宿主細胞では、多数のウイルスベースの発現系を利用することができる。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、目的の抗体コード配列は、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体、例えば、後期プロモータ及び三者リーダー配列に連結され得る。次いで、このキメラ遺伝子を、インビトロ又はインビボ組換えによってアデノウイルスゲノムに挿入することができる。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１又はＥ３）への挿入は、生存可能であり、感染宿主において抗体分子を発現することができる組換えウイルスをもたらすであろう（例えば、Ｌｏｇａｎ ＆ Ｓｈｅｎｋ，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８ １：３５５－３５９を参照されたい）。特異的開始シグナルは、挿入された抗体コード配列の効率的な翻訳にも使用することができる。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドン及び隣接配列を含む。更に、開始コドンは、インサート全体の翻訳を確実にするために所望のコード配列のリーディングフレームと同相でなければならない。これらの外因性翻訳制御シグナル及び開始コドンは、天然及び合成の両方の様々な起源のものであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネータなどを含めることによって高めることができる（例えば、Ｂｉｔｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１－５４４を参照されたい）。
【0253】
植物細胞については、種々のベクター送達技術が当該分野で利用可能である。宿主細胞は、植物全体、単離された細胞又はプロトプラストの形態であり得る。ベクターを植物細胞に導入するための例示的な手順には、アグロバクテリウム媒介植物形質転換、プロトプラスト形質転換、花粉への遺伝子導入、生殖器官への注入及び未成熟胚への注入が含まれる。当業者に明らかなように、これらの方法の各々は、明確な利点及び欠点を有する。したがって、特定の植物種にベクターを導入する１つの特定の方法は、必ずしも別の植物種にとって最も効果的であるとは限らない。
【0254】
更に、挿入された配列の発現を調節するか、又は所望の特定の様式で遺伝子産物を修飾及び処理する宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のそのような修飾（例えば、グリコシル化）及びプロセシング（例えば、切断）は、抗体又は機能性断片の機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後プロセシング及び改変のための特徴的かつ特異的な機構を有する。適切な細胞株又は宿主系を選択して、発現された外来タンパク質の正しい修飾及びプロセシングを確実にすることができる。この目的のために、遺伝子産物の一次転写産物の適切なプロセシング、グリコシル化及びリン酸化のための細胞機構を有する真核宿主細胞を使用することができる。そのような哺乳動物宿主細胞には、ＣＨＯ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ及びＴ４７Ｄ、ＮＳＯ（免疫グロブリン鎖を内因的に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が含まれるが、これらに限定されない。
【0255】
組換えタンパク質の長期間の高収率生産のためには、安定な発現が好ましい。例えば、抗体又はその機能的断片を安定に発現する細胞株を操作することができる。ウイルス複製起点を含有する発現ベクターを使用するのではなく、宿主細胞を、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモータ、エンハンサー、配列、転写ターミネータ、ポリアデニル化部位など）及び選択マーカーによって制御されるＤＮＡで形質転換することができる。外来ＤＮＡの導入後、操作された細胞を富化培地中で１～２日間増殖させ、次いで選択培地に切り替えることができる。組換えプラスミド中の選択マーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞がプラスミドをそれらの染色体に安定に組み込み、増殖してフォーカスを形成することを可能にし、次いでこれをクローン化し、細胞株に増殖させることができる。この方法は、抗体分子を発現する細胞株を操作するために有利に使用することができる。
【0256】
単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７７，Ｃｅｌｌ １１：２２３）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ ＆ Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ４８：２０２）、及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ｏｗｙ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｃｅｌｌ ２２：８－１７）遺伝子をそれぞれｔｋ－、ｈｇｐｒｔ－又はａｐｒｔ－細胞において使用するシステムが挙げられるが、これらに限定されない。また、代謝拮抗薬耐性は、以下の遺伝子に対する選択の基礎として使用することができる：メトトレキサートに対する耐性を付与するｄｈｆ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．７７（６）：３５６７－７０；Ｏ’Ｈａｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：１５２７）；グルタメート及びアンモニアを用いたグルタミンの生合成に関与するグルタミンシンセターゼ（ＧＳ）（Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｂｉｕｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６９）；ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＆ Ｂｅｒｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：２０７２）；アミノグリコシドＧ－４１８に対する耐性を付与するｎｅｏ（Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，１９９１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ３：８７－９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３－５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２；及びＭｏｒｇａｎ ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１－２１７；Ｍａｙ，１９９３，ＴＩＢ ＴＥＣＨ １１（５）：１５５－２１５）；並びにハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｇｅｎｅ ３０：１４７）。組換えＤＮＡ技術方法は、所望の組換えクローンを選択するために適用することができ、そのような方法は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）；Ｃｈａｐｔｅｒｓ １２ ａｎｄ １３，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ－Ｇａｒａｐｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１に記載され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅（総説については、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ，Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｖｅｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照されたい）によって増加させることができる。抗体又はその機能的断片を発現するベクター系中のマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養中に存在する阻害剤のレベルの増加は、マーカー遺伝子のコピー数を増加させる。増幅された領域は抗体遺伝子と関連しているので、抗体の産生も増加する（Ｃｒｏｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２５７）。
【0257】
抗体分子が組換え発現によって産生されると、それは、免疫グロブリン分子の精製のための任意の好適な方法によって、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特にプロテインＡ後の特定の抗原に対する親和性による親和性、及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差的溶解度によって、又はタンパク質の精製のための任意の他の標準的な技術によって精製され得る。更に、主題抗体又はその機能的断片は、精製を容易にするために、本明細書に提供されるか、そうでなければ当該分野で公知の異種ポリペプチド配列に融合され得る。例えば、対象抗体又はその機能的断片は、市販されているポリ－ヒスチジンタグ（Ｈｉｓタグ）、ＦＬＡＧタグ、ヘマグルチニンタグ（ＨＡタグ）又はｍｙｃタグなどを組換え的に付加することによって、適切な精製方法を利用して精製することができる。
【0258】
治療方法
別の態様では、本明細書に提供されるのは、免疫細胞をインビトロ、エクスビボ、又はインビボで抑制するために、本明細書に開示される抗体又はその機能的断片を使用する方法である。いくつかの場合では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、又は任意の他の免疫細胞である。いくつかの場合では、免疫細胞はエフェクタＴ細胞である。いくつかの場合では、免疫細胞は、抗原特異的Ｔ細胞である。いくつかの場合では、本明細書に開示される方法は、それを必要とする対象を治療するために適用可能である。いくつかの場合では、方法は、本明細書に開示される抗体又はその断片を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの場合では、方法は、免疫細胞をインビトロで抑制すること、及び免疫細胞をそれを必要とする対象に移入すること、を含む。
別の態様では、本明細書に提供されるのは、免疫細胞をインビトロ、エクスビボ、又はインビボで抑制するために、本明細書に開示される抗体又はその機能的断片を使用する方法である。いくつかの場合では、免疫細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、又は任意の他の免疫細胞である。いくつかの場合では、免疫細胞はエフェクタＴ細胞である。いくつかの場合では、免疫細胞は、抗原特異的Ｔ細胞である。いくつかの場合では、本明細書に開示される方法は、それを必要とする対象を治療するために適用可能である。いくつかの場合では、方法は、本明細書に開示される抗体又はその断片を、それを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの場合では、方法は、免疫細胞をインビトロで抑制すること、及び免疫細胞をそれを必要とする対象に移入すること、を含む。
【0259】
別の態様では、本発明の抗体は、ＰＤ－１を発現する細胞への別の治療剤又は細胞毒性剤（例えば、毒素）の送達のための標的剤として使用することができる。方法は、治療剤若しくは細胞毒性剤にカップリングされた抗ＰＤ－１抗体を、又は細胞表面上に発現されたＰＤ－１への抗体の結合を可能にする条件下で投与することを含む。
【0260】
別の態様では、本明細書に開示される抗体又はその機能的断片を使用して、それを必要とする対象の疾患又は状態を治療する方法が本明細書で提供される。いくつかの場合では、主題の方法が適用可能な疾患又は状態は、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１シグナル伝達に関連する。いくつかの場合では、疾患又は状態は、炎症性障害、自己免疫障害であり、及び／又は過剰な若しくは望ましくない免疫応答に関連する。
いくつかの実施形態では、本開示は、治療有効量の本開示の抗体を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物、例えばそれを必要とするヒトにおける炎症性障害を治療する方法を提供する。いくつかの場合では、炎症性障害は、多発性硬化症である。他の場合では、炎症性障害は自己免疫疾患である。いくつかの場合では、疾患又は状態は成人発症スチル病；アルコール性肝炎、アルコール性脂肪性肝炎、アルコール性肝疾患、アレルゲン誘発性喘息を含む喘息、水疱性類天疱瘡（ＢＰ）喘息、非アレルゲン誘発性喘息、アレルギー及びアレルギー性状態、例えばアレルギー性気管支肺アスペルギルス症、アレルギー性結膜炎、アレルギー性脳脊髄炎及びアレルギー性神経炎、食物アレルギー、同種移植片拒絶、アルコール性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）、ＡＮＣＡ血管炎、抗糸球体基底膜疾患（抗－ＧＢＭ）、抗リン脂質症候群、アフタ性口内炎、虫垂炎、関節炎、自己免疫疾患、萎縮性甲状腺炎、自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間ヘモグロビン尿症）、自己免疫性多腺性内分泌不全症、自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫介在性血小板減少症）、自己免疫性肝炎、悪性貧血（アジソン病）及び自己免疫性甲状腺障害、自己炎症性疾患、自己染色体優性多発性嚢胞腎疾患（ＡＤＰＫＤ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、ベーチェット病又は症候群、ハチ刺傷誘発性炎症、ブラウ症候群、滑液包炎、バレット食道、ブレオマイシン誘発性肺線維症、閉塞性細気管支炎；心肥大、グルテン過敏性腸症（セリアック病）、化学刺激薬誘発性炎症、網脈絡膜炎、リポジストロフィー及び高温を伴う慢性非定型好中球性皮膚症（ＣＡＮＤＬＥ）症候群、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性膵炎、慢性前立腺炎、慢性再発性多巣性骨髄炎、瘢痕性脱毛症、大腸炎、複合局所疼痛症候群、慢性肝内又は肝外胆汁うっ滞性疾患、結膜炎、結合組織病、結合組織病関連間質性肺疾患（ＣＴＤ－ＩＬＤ）、角膜潰瘍、クリオピリン関連周期性症候群、皮膚エリテマトーデス（ＣＬＥ）、嚢胞性線維症、インターロイキン－１受容体アンタゴニスト（ＤＩＲＡ）の欠損、ＩＬ３６Ｒアンタゴニスト（ＤＩＴＲＡ）の欠損、皮膚炎、糖尿病性腎疾患（ＤＫＤ）（糖尿病性腎症）、憩室炎、円板状エリテマトーデス、薬物誘発性遅延型アレルギー性皮膚炎、脳炎、好酸球性胃腸障害（ＥＧＩＤ）、例えば好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、好酸球性胃腸炎、好酸球性大腸炎；家族性寒冷蕁麻疹、家族性地中海熱、瘻性クローン病、巨細胞性動脈炎、糸球体腎炎、痛風、痛風性関節炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、肉芽腫性肝炎、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、グレーブス病、橋本甲状腺炎；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、化膿性汗腺炎（ＨＳ）、ヒアリン膜疾患、炎症反応亢進、好酸球増加症候群（ＨＥＳ）、再発性発熱を伴う高免疫グロブリン血症Ｄ（ＨＩＤＳ）、過敏性肺炎（ＨＰ）、免疫グロブリン（ＩｇＡ）腎症、ＩｇＧ４関連疾患、免疫複合腎炎、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、炎症、ＣＮＳの炎症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、気道の炎症性疾患（上又は下）、例えば炎症性肺疾患、気管支炎、副鼻腔炎、脳卒中又は心停止などの炎症性虚血事象、炎症性肝疾患、炎症性筋障害、炎症性ニューロパシー、炎症性疼痛、虫刺痛誘発性炎症、間質性膀胱炎、虹彩炎、刺激性炎症、若年性関節炎、若年性関節リウマチ、角膜炎、腎移植拒絶反応、腎臓疾患、腎線維症、腎不全、白血球接着不全、レフラー症候群、狼瘡、ループス腎炎（ＬＮ）、肝線維症、脂肪肝；肝臓虚血；脂質及びリポタンパク質障害；肥満細胞活性化症候群、肥満細胞症、髄膜炎、顕微鏡的大腸炎、混合性結合組織病、モルフェア又はモルフェアバリアント、マックル・ウェルズ症候群（蕁麻疹難聴アミロイドーシス）、粘膜炎、脊髄炎、心筋炎、筋炎、壊死性腸炎、新生児発症多系統炎症性疾患（ＮＯＭＩＤ）、鼻ポリープ、血管新生緑内障、神経炎、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、Ｘ線基準を満たさない体軸性脊椎関節炎（ｎｒ－ＡｘＳｐＡ）、非嚢胞性線維症気管支拡張症（非ＣＦＢ）、肝臓の閉塞性又は慢性炎症性障害；眼性アレルギー、視神経炎、臓器移植拒絶反応、変形性関節症（ＯＡ）、耳炎、膵炎、汎結腸炎、骨盤炎症性疾患、尋常性天疱瘡（ＰＶ）、水疱性類天疱瘡（ＢＰ）、心膜炎、歯周炎、ＰＦＡＰＡ（周期性発熱、アフタ性口内炎、咽頭炎、腺炎）、植物刺激薬誘発性炎症、ニューモシスチス感染、肺炎、肺臓炎、ツタウルシ／ウルシオール油誘発性炎症、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多発性嚢胞腎疾患（ＰＣＫＤ）、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、嚢炎、直腸炎、直腸強膜炎、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）、肺線維症、化膿性無菌性関節炎、掻痒症、再灌流傷害及び移植拒絶反応、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、レイノー病、ライター病、反応性関節炎、腎移植拒絶反応、再灌流傷害、リウマチ性心炎、リウマチ性疾患、リウマチ熱、関節リウマチ（ＲＡ）、鼻炎、乾癬性鼻炎、サルコイドーシス、シュニッツラー症候群、強膜炎、硬化症、例えば全身性硬化症（ＳＳｃ）、脂漏、敗血症、敗血症性ショック、シェーグレン症候群、炎症性皮膚疾患又は状態、例えばざ瘡、円形脱毛症、アトピー性皮膚炎、酒さ、湿疹、皮膚炎、皮膚炎エンドトキシン血症、皮膚筋炎、うっ滞性皮膚炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、皮膚刺激性、皮膚発疹、皮膚感作（接触皮膚炎又はアレルギー性接触皮膚炎）、強皮症、乾癬、尋常性乾癬、乾癬性関節炎；脊柱管狭窄症、脊椎関節症、滑膜炎症、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、全身性肥満細胞疾患（ＳＭＣＤ）、全身性血管炎、全身発症若年性特発性関節炎、側頭動脈炎、腱炎、腱滑膜炎、甲状腺炎、移植拒絶反応、尿細管間質性腎炎、尿細管機能障害、高安動脈炎、中毒性表皮壊死症、蕁麻疹、子宮類線維腫、ブドウ膜炎、網膜ブドウ膜炎、血管炎、血管炎（ＮＨＬＢＩ）、白斑、又はウェゲナー肉芽腫症である。いくつかの場合では、疾患又は状態は、ざ瘡、酸誘発性肺損傷、アジソン病、副腎過形成、副腎皮質機能低下、加齢性黄斑変性症、老化、アルコール性肝疾患、アルツハイマー症、狭心症、血管線維腫、汗腺外胚葉性異形成症、腹水、アスペルギルス症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化プラーク、アミロイドーシス、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、血管性浮腫、急性心筋梗塞；抗原抗体複合体媒介疾患、α１－抗トリプシン欠損症；背部痛、炭疽菌感染症、ベル麻痺、ベリリウム症、骨痛、火傷、水疱性類天疱瘡、癌、手根管症候群、キャッスルマン病、異化障害、白内障、脳動脈瘤、臓器移植の合併症、角膜移植片血管新生、クリプトコックス症、非悪性過剰増殖性障害；悪性過剰増殖性障害；肝細胞癌；結腸腺腫；ポリポーシス；結腸腺癌；乳癌；膵臓腺癌、慢性心不全、未熟児慢性肺疾患、心血管代謝症候群、心血管疾患、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、糖尿病性黄斑浮腫、脂質異常症；子宮内膜症、内毒素血症、好酸球性ＧＩ疾患（ＥＧＩＤ）、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、好酸球性肺炎、上顆炎、表皮水疱症、多形性紅斑、赤芽球減少症、家族性アミロイドーシス性多発神経障害、胎児成長遅延、線維筋痛症、緑内障、神経膠芽腫、糸球体疾患、腸疾患、成長板損傷、脱毛、帯状疱疹及び単純、低形成性及び他の貧血、頭部損傷、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型及びＥ型肝炎、ヘルペス；頭痛、難聴、心疾患、血管腫、血友病性関節、遺伝性周期熱症候群、結合組織の遺伝性障害、ホジキン病、ハンチントン病、高アンモニア血症、高カルシウム血症、高コレステロール血症、溶血性貧血、肝炎、股関節置換術、高張性骨形成、過敏性肺炎、遺伝性フルクトース不耐性、高血圧、高尿酸血症、特発性脱髄性多発ニューロパチー、ＡＩＤＳ（ＨＩＶ感染症）などのウイルス性疾患を含む感染性疾患、魚鱗癬、色素失調症（ＩＰ、Ｂｌｏｃｈ－Ｓｉｅｍｅｎｓ症候群）、特発性血小板減少性紫斑病、感染性単核症、虚血／再灌流、インスリン抵抗性、関節置換術、寄生虫感染によって引き起こされる腎損傷、レプトスピラ症、硬化性苔癬（ＬＳ）、扁平苔癬、ランバート－イートン筋無力症候群、ライム病、急性肝不全を含む肝不全、筋萎縮、筋ジストロフィー、マルファン症候群（ＭＦＳ）、髄膜腫、中皮腫、多臓器損傷症候群、重症筋無力症（ＭＧ）、骨髄異形成症候群、メタボリックシンドローム、多発性硬化症、腎症候群、神経病理学的疾患、核因子カッパＢエッセンシャルモジュレーター（ＮＥＭＯ）欠損症症候群、肥満、オスラー・ウェーバー症候群、骨形成不全症、骨壊死、骨粗鬆症、先天性厚膜症、パジェット病、骨パジェット病、パーキンソン病、周期熱、百日咳、原発性肺高血圧症、壊疽性膿皮症、化膿性肉芽腫、後水晶体線維形成症、腹膜子宮内膜症、結節性掻痒症、精神病性ストレス疾患、肺疾患、肺高血圧症、呼吸窮迫症候群、腎疾患、網膜疾患、後線維形成症、腎移植拒絶反応、ファンコーニ症候群を誘発する薬物に対する腎保護、呼吸器合胞体ウイルスによって引き起こされる気道疾患、鼻副鼻腔炎；放射線誘発線維症、サルコイドーシス、重度の疼痛、睡眠時無呼吸、脊柱側弯症、鎌状赤血球貧血、スポーツ傷害、捻挫及び挫傷、日焼け、脊髄損傷、セザリー症候群、シリカ誘発性疾患（ケイコーシス）、くも膜下出血、結核、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）、血栓症；外傷性脳損傷、組織移植、１型又は２型糖尿病からの合併症、トキソプラズマ症、血小板減少症、トラコーマ、血管再狭窄、人工呼吸器誘発性肺損傷；ウィップル病又は２，８－ジヒドロキシアデニン腎症である。
いくつかの実施形態では、本開示は、治療有効量の本開示の抗体を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物、例えばそれを必要とするヒトにおける炎症性障害を治療する方法を提供する。いくつかの場合では、炎症性障害は、多発性硬化症である。他の場合では、炎症性障害は自己免疫疾患である。いくつかの場合では、疾患又は状態は成人発症スチル病；アルコール性肝炎、アルコール性脂肪性肝炎、アルコール性肝疾患、アレルゲン誘発性喘息を含む喘息、水疱性類天疱瘡（ＢＰ）喘息、非アレルゲン誘発性喘息、アレルギー及びアレルギー性状態、例えばアレルギー性気管支肺アスペルギルス症、アレルギー性結膜炎、アレルギー性脳脊髄炎及びアレルギー性神経炎、食物アレルギー、同種移植片拒絶、アルコール性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）、ＡＮＣＡ血管炎、抗糸球体基底膜疾患（抗－ＧＢＭ）、抗リン脂質症候群、アフタ性口内炎、虫垂炎、関節炎、自己免疫疾患、萎縮性甲状腺炎、自己免疫性溶血性貧血（免疫性汎血球減少症、発作性夜間ヘモグロビン尿症）、自己免疫性多腺性内分泌不全症、自己免疫性血小板減少症（特発性血小板減少性紫斑病、免疫介在性血小板減少症）、自己免疫性肝炎、悪性貧血（アジソン病）及び自己免疫性甲状腺障害、自己炎症性疾患、自己染色体優性多発性嚢胞腎疾患（ＡＤＰＫＤ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、ベーチェット病又は症候群、ハチ刺傷誘発性炎症、ブラウ症候群、滑液包炎、バレット食道、ブレオマイシン誘発性肺線維症、閉塞性細気管支炎；心肥大、グルテン過敏性腸症（セリアック病）、化学刺激薬誘発性炎症、網脈絡膜炎、リポジストロフィー及び高温を伴う慢性非定型好中球性皮膚症（ＣＡＮＤＬＥ）症候群、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性膵炎、慢性前立腺炎、慢性再発性多巣性骨髄炎、瘢痕性脱毛症、大腸炎、複合局所疼痛症候群、慢性肝内又は肝外胆汁うっ滞性疾患、結膜炎、結合組織病、結合組織病関連間質性肺疾患（ＣＴＤ－ＩＬＤ）、角膜潰瘍、クリオピリン関連周期性症候群、皮膚エリテマトーデス（ＣＬＥ）、嚢胞性線維症、インターロイキン－１受容体アンタゴニスト（ＤＩＲＡ）の欠損、ＩＬ３６Ｒアンタゴニスト（ＤＩＴＲＡ）の欠損、皮膚炎、糖尿病性腎疾患（ＤＫＤ）（糖尿病性腎症）、憩室炎、円板状エリテマトーデス、薬物誘発性遅延型アレルギー性皮膚炎、脳炎、好酸球性胃腸障害（ＥＧＩＤ）、例えば好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、好酸球性胃腸炎、好酸球性大腸炎；家族性寒冷蕁麻疹、家族性地中海熱、瘻性クローン病、巨細胞性動脈炎、糸球体腎炎、痛風、痛風性関節炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、肉芽腫性肝炎、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、グレーブス病、橋本甲状腺炎；ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、化膿性汗腺炎（ＨＳ）、ヒアリン膜疾患、炎症反応亢進、好酸球増加症候群（ＨＥＳ）、再発性発熱を伴う高免疫グロブリン血症Ｄ（ＨＩＤＳ）、過敏性肺炎（ＨＰ）、免疫グロブリン（ＩｇＡ）腎症、ＩｇＧ４関連疾患、免疫複合腎炎、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、炎症、ＣＮＳの炎症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、気道の炎症性疾患（上又は下）、例えば炎症性肺疾患、気管支炎、副鼻腔炎、脳卒中又は心停止などの炎症性虚血事象、炎症性肝疾患、炎症性筋障害、炎症性ニューロパシー、炎症性疼痛、虫刺痛誘発性炎症、間質性膀胱炎、虹彩炎、刺激性炎症、若年性関節炎、若年性関節リウマチ、角膜炎、腎移植拒絶反応、腎臓疾患、腎線維症、腎不全、白血球接着不全、レフラー症候群、狼瘡、ループス腎炎（ＬＮ）、肝線維症、脂肪肝；肝臓虚血；脂質及びリポタンパク質障害；肥満細胞活性化症候群、肥満細胞症、髄膜炎、顕微鏡的大腸炎、混合性結合組織病、モルフェア又はモルフェアバリアント、マックル・ウェルズ症候群（蕁麻疹難聴アミロイドーシス）、粘膜炎、脊髄炎、心筋炎、筋炎、壊死性腸炎、新生児発症多系統炎症性疾患（ＮＯＭＩＤ）、鼻ポリープ、血管新生緑内障、神経炎、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、Ｘ線基準を満たさない体軸性脊椎関節炎（ｎｒ－ＡｘＳｐＡ）、非嚢胞性線維症気管支拡張症（非ＣＦＢ）、肝臓の閉塞性又は慢性炎症性障害；眼性アレルギー、視神経炎、臓器移植拒絶反応、変形性関節症（ＯＡ）、耳炎、膵炎、汎結腸炎、骨盤炎症性疾患、尋常性天疱瘡（ＰＶ）、水疱性類天疱瘡（ＢＰ）、心膜炎、歯周炎、ＰＦＡＰＡ（周期性発熱、アフタ性口内炎、咽頭炎、腺炎）、植物刺激薬誘発性炎症、ニューモシスチス感染、肺炎、肺臓炎、ツタウルシ／ウルシオール油誘発性炎症、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多発性嚢胞腎疾患（ＰＣＫＤ）、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、嚢炎、直腸炎、直腸強膜炎、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）、肺線維症、化膿性無菌性関節炎、掻痒症、再灌流傷害及び移植拒絶反応、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、レイノー病、ライター病、反応性関節炎、腎移植拒絶反応、再灌流傷害、リウマチ性心炎、リウマチ性疾患、リウマチ熱、関節リウマチ（ＲＡ）、鼻炎、乾癬性鼻炎、サルコイドーシス、シュニッツラー症候群、強膜炎、硬化症、例えば全身性硬化症（ＳＳｃ）、脂漏、敗血症、敗血症性ショック、シェーグレン症候群、炎症性皮膚疾患又は状態、例えばざ瘡、円形脱毛症、アトピー性皮膚炎、酒さ、湿疹、皮膚炎、皮膚炎エンドトキシン血症、皮膚筋炎、うっ滞性皮膚炎、スティーブンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、皮膚刺激性、皮膚発疹、皮膚感作（接触皮膚炎又はアレルギー性接触皮膚炎）、強皮症、乾癬、尋常性乾癬、乾癬性関節炎；脊柱管狭窄症、脊椎関節症、滑膜炎症、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、全身性肥満細胞疾患（ＳＭＣＤ）、全身性血管炎、全身発症若年性特発性関節炎、側頭動脈炎、腱炎、腱滑膜炎、甲状腺炎、移植拒絶反応、尿細管間質性腎炎、尿細管機能障害、高安動脈炎、中毒性表皮壊死症、蕁麻疹、子宮類線維腫、ブドウ膜炎、網膜ブドウ膜炎、血管炎、血管炎（ＮＨＬＢＩ）、白斑、又はウェゲナー肉芽腫症である。いくつかの場合では、疾患又は状態は、ざ瘡、酸誘発性肺損傷、アジソン病、副腎過形成、副腎皮質機能低下、加齢性黄斑変性症、老化、アルコール性肝疾患、アルツハイマー症、狭心症、血管線維腫、汗腺外胚葉性異形成症、腹水、アスペルギルス症、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化プラーク、アミロイドーシス、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、血管性浮腫、急性心筋梗塞；抗原抗体複合体媒介疾患、α１－抗トリプシン欠損症；背部痛、炭疽菌感染症、ベル麻痺、ベリリウム症、骨痛、火傷、水疱性類天疱瘡、癌、手根管症候群、キャッスルマン病、異化障害、白内障、脳動脈瘤、臓器移植の合併症、角膜移植片血管新生、クリプトコックス症、非悪性過剰増殖性障害；悪性過剰増殖性障害；肝細胞癌；結腸腺腫；ポリポーシス；結腸腺癌；乳癌；膵臓腺癌、慢性心不全、未熟児慢性肺疾患、心血管代謝症候群、心血管疾患、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、糖尿病性黄斑浮腫、脂質異常症；子宮内膜症、内毒素血症、好酸球性ＧＩ疾患（ＥＧＩＤ）、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、好酸球性肺炎、上顆炎、表皮水疱症、多形性紅斑、赤芽球減少症、家族性アミロイドーシス性多発神経障害、胎児成長遅延、線維筋痛症、緑内障、神経膠芽腫、糸球体疾患、腸疾患、成長板損傷、脱毛、帯状疱疹及び単純、低形成性及び他の貧血、頭部損傷、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型及びＥ型肝炎、ヘルペス；頭痛、難聴、心疾患、血管腫、血友病性関節、遺伝性周期熱症候群、結合組織の遺伝性障害、ホジキン病、ハンチントン病、高アンモニア血症、高カルシウム血症、高コレステロール血症、溶血性貧血、肝炎、股関節置換術、高張性骨形成、過敏性肺炎、遺伝性フルクトース不耐性、高血圧、高尿酸血症、特発性脱髄性多発ニューロパチー、ＡＩＤＳ（ＨＩＶ感染症）などのウイルス性疾患を含む感染性疾患、魚鱗癬、色素失調症（ＩＰ、Ｂｌｏｃｈ－Ｓｉｅｍｅｎｓ症候群）、特発性血小板減少性紫斑病、感染性単核症、虚血／再灌流、インスリン抵抗性、関節置換術、寄生虫感染によって引き起こされる腎損傷、レプトスピラ症、硬化性苔癬（ＬＳ）、扁平苔癬、ランバート－イートン筋無力症候群、ライム病、急性肝不全を含む肝不全、筋萎縮、筋ジストロフィー、マルファン症候群（ＭＦＳ）、髄膜腫、中皮腫、多臓器損傷症候群、重症筋無力症（ＭＧ）、骨髄異形成症候群、メタボリックシンドローム、多発性硬化症、腎症候群、神経病理学的疾患、核因子カッパＢエッセンシャルモジュレーター（ＮＥＭＯ）欠損症症候群、肥満、オスラー・ウェーバー症候群、骨形成不全症、骨壊死、骨粗鬆症、先天性厚膜症、パジェット病、骨パジェット病、パーキンソン病、周期熱、百日咳、原発性肺高血圧症、壊疽性膿皮症、化膿性肉芽腫、後水晶体線維形成症、腹膜子宮内膜症、結節性掻痒症、精神病性ストレス疾患、肺疾患、肺高血圧症、呼吸窮迫症候群、腎疾患、網膜疾患、後線維形成症、腎移植拒絶反応、ファンコーニ症候群を誘発する薬物に対する腎保護、呼吸器合胞体ウイルスによって引き起こされる気道疾患、鼻副鼻腔炎；放射線誘発線維症、サルコイドーシス、重度の疼痛、睡眠時無呼吸、脊柱側弯症、鎌状赤血球貧血、スポーツ傷害、捻挫及び挫傷、日焼け、脊髄損傷、セザリー症候群、シリカ誘発性疾患（ケイコーシス）、くも膜下出血、結核、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）、血栓症；外傷性脳損傷、組織移植、１型又は２型糖尿病からの合併症、トキソプラズマ症、血小板減少症、トラコーマ、血管再狭窄、人工呼吸器誘発性肺損傷；ウィップル病又は２，８－ジヒドロキシアデニン腎症である。
【0261】
対象抗体が治療することのできる疾患又は状態の例としては、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、アレルギー、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、ＡＮＣＡ血管炎、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、喘息（アレルギー性喘息を含む）、アトピー性皮膚炎、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性多内分泌症候群、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、脳マラリア、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、セリアック病、クローン病、クッシング症候群、皮膚筋炎、１型糖尿病、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、ＩｇＧ４関連疾患、炎症性線維症（例えば、強皮症、肺線維症及び肝硬変）、若年性関節炎、川崎病、白血病、ループス腎炎、リンパ腫、リンパ増殖性障害、多発性硬化症、重症筋無力症、骨髄腫、Ｘ線基準を満たさない体軸性脊椎関節炎（ｎｒ－ＡｘＳｐＡ）、視神経脊髄炎、変形性関節症、天疱瘡、多発性筋炎、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、高安動脈炎、側頭動脈炎、移植拒絶反応、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑及びフォークト・小柳・原田病が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの場合では、疾患又は状態は、関節リウマチを含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、多発性硬化症を含む。
【0262】
いくつかの場合では、疾患又は状態の治療を必要とする対象において疾患又は状態を治療する方法は、治療有効量の本明細書に開示されるアゴニスト抗体を対象に投与すること、治療有効量の本明細書に開示される抗体又は免疫コンジュゲート及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を対象に投与すること、を含み、ここで、疾患又は状態は、感染、感染に関連する内毒素性ショック、関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、全身発症若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、全身性硬化症、喘息、アトピー性皮膚炎、骨盤炎症性疾患、アルツハイマー病、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、多発性硬化症、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、ブドウ膜炎、ペロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛巣嚢胞疾患、乾癬、血管炎、外科的癒着、脳卒中、Ｉ型糖尿病、ライム関節炎、髄膜脳炎、中枢神経系及び末梢神経系の免疫媒介性炎症性障害、自己免疫障害、膵炎、外科手術による外傷、移植片対宿主病、移植拒絶、心疾患、骨吸収、火傷患者、心筋梗塞、パジェット病、骨粗鬆症、敗血症、肝／肺線維症、歯周炎、低塩酸症、固形腫瘍（腎細胞癌）、肝癌、多発性骨髄腫、前立腺癌、膀胱癌、膵臓癌、神経癌、及びＢ細胞悪性腫瘍（例えば、キャッスルマン病、特定のリンパ腫、慢性リンパ性白血病、及び多発性骨髄腫）、ループス腎炎、及び変形性関節症を更に含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、シェーグレン症候群を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、ループス腎炎（ＬＮ）を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連（ＡＮＣＡ）血管炎などの血管炎を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、１型糖尿病を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態はベーチェット症候群を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、敗血症を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、変形性関節症（ＯＡ）を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、全身性硬化症（ＳＳｃ）を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、皮膚筋炎を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、ＩｇＧ４関連疾患を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、Ｘ線基準を満たさない体軸性脊椎関節炎（ｎｒ－ＡｘＳｐＡ）を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は、多発性筋炎を含む。いくつかの場合では、疾患又は状態は高安動脈炎を含む。
【0263】
いくつかの実施形態では、本開示は、癌の治療を必要とする哺乳動物において癌を治療する方法であって、治療有効量の本開示の抗体を哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。いくつかの場合では、癌は肝細胞癌である。他の場合、癌は、急性骨髄性白血病、胸腺、脳、肺、扁平上皮、皮膚、眼、網膜芽細胞腫、眼内黒色腫、口腔及び中咽頭、膀胱、胃、胃、胃、膵臓、膀胱、乳房、子宮頸部、頭頸部、腎臓、肝臓、卵巣、前立腺、結腸直腸、食道、精巣、婦人科、甲状腺、ＣＮＳ、ＰＮＳ、ＡＩＤＳ関連（例えば、リンパ腫及びカポジ肉腫）又はウイルス誘発癌である。
【0264】
いくつかの実施形態では、治療される対象は、ヒトなどの哺乳動物である。いくつかの実施形態では、治療される対象はヒトである。他の場合では、哺乳動物は、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ウシ、ヤギ、スナネズミ、ハムスター、モルモット、サル又は任意の他の哺乳動物である。多くのそのような哺乳動物は、炎症性疾患、固形腫瘍及び／又は他の癌を含む特定の疾患又は障害の前臨床モデルとして当技術分野で公知の対象であり得る（例えば、Ｔａｌｍａｄｇｅ ｅｔ ａｌ．，２００７ Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１７０：７９３；Ｋｅｒｂｅｌ，２００３ Ｃａｎｃ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒａｐ．２（４ Ｓｕｐｐｌ １）：Ｓ１３４；Ｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２００７ Ｃａｎｃ．Ｍｅｔ．Ｒｅｖ．２６：７３７；Ｃｅｓｐｅｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，２００６ Ｃｌｉｎ．ＴｒａｎｓＬ Ｏｎｃｏｌ．８：３１８）。
【0265】
別の態様では、本開示は、哺乳動物における疾患又は状態を第２の薬剤と併せて治療するために本開示のＰＤ－１抗体を使用する方法を提供する。第２の薬剤は、抗体と一緒に、その前に、又はその後に投与することができる。いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、本明細書に記載の炎症状態の症状を軽減するように作用する薬剤である。抗炎症剤には、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）及びコルチコステロイドが含まれる。ＮＳＡＩＤには、サリチル酸、例えばアセチルサリチル酸；ジフルニサル、サリチル酸、及びサルサレート；プロピオン酸誘導体、例えばイブプロフェン；ナプロキセン；デキシブプロフェン、デクスケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、フェノプロフェン、ロキソプロフェン、及びケトプロフェン；酢酸誘導体、例えば、インドメタシン、ジクロフェナク、トルメチン、アセクロフェナク、スリンダク、ナブメトン、エトドラク、及びケトロラック；ピロキシカム、ロルノキシカム、メロキシカム、イソキシカム、テノキシカム、フェニルブタゾン、及びドロキシカム等のエノール酸誘導体；メフェナム酸、フルフェナム酸、メクロフェナム酸、及びトルフェナム酸等のアントラニル酸誘導体；セレコキシブ、ルミラコキシブ、ロフェコキシブ、エトリコキシブ、バルデコキシブ、フィロコキシブ及びパレコキシブなどの選択的ＣＯＸ－２阻害剤；スルホンアニリド、例えばニメスリド；及びその他、クロニキシン、リコフェロン等が含まれるが、これらに限定されない。コルチコステロイドには、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン及びプレドニゾロンが含まれるが、これらに限定されない。
【0266】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は免疫抑制剤である。対象抗体と組み合わせて使用することができる免疫抑制剤には、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、レフルノミド、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、Ｄ－ペニシラミン、経口金化合物、注射可能な金化合物（筋肉内注射）、ミノサイクリン、金チオリンゴ酸ナトリウム、オーラノフィン、Ｄ－ペニシラミン、ロベンザリット、ブシラミン、アクタリット、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキサート、ミゾリビン、シクロスポリン及びタクロリムスが挙げられるが、これらに限定されない。
【0267】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、関節リウマチの治療及び／又は予防に有用である。そのような薬剤の非限定的な例としては、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、メトトレキサート及びレフルノミドなどの疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤＳ）；ＴＮＦ阻害剤（例えば、エタネルセプト、アダリムマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブペゴール）、Ｔ細胞共刺激阻害剤、（例えば、アバタセプト）、ＩＬ－６受容体阻害剤（例えば、トシリズマブ、サリルマブ）、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）；及びＪＡＫ阻害剤（例えば、トファシチニブ、バリシチニブ、ウパダシチニブ）；ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン、ナプロキセン及びジクロフェナク；ＣＯＸ－２阻害剤、例えばセレコキシブ及びエトリコキシブ；ステロイド及びコルチコステロイド、例えばプレドニゾロン及びコルチゾン；及びそのような症状の治療及び／又は予防に公知の生物学的薬剤、例えばエタネルセプト（例えば、ＥＮＢＲＥＬ）、インフリキシマブ（例えば、ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、アダリムマブ（例えば、ＨＵＭＩＲＡ）、アナキンラ（例えば、ＫＩＮＡＲＥＴ）、アバタセプト（ＯＲＥＮＣＩＡ）、リツキシマブ（例えば、ＲＩＴＵＸＡＮ）、セルトリズマブ（例えば、ＣＩＭＺＩＡ）、ゴリムマブ（例えば、ＳＩＭＰＯＮＩ）及びトシリズマブ（例えば、アクテムラ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、本開示の化合物は、リウマチ学的状態の治療及び／又は予防に有用な２つの更なる治療薬と共に投与される。いくつかの実施形態では、リウマチ学的状態の治療及び／又は予防に有用な薬剤には、本開示の化合物並びに２つの更なる治療剤、例えば、メトトレキサート＋レフルノミド、メトトレキサート＋スルファサラジン、メトトレキサート＋シクロスポリン、メトトレキサート＋ヒドロキシクロロキン及び三剤併用療法治療ヒドロキシクロロキン＋スルファサラジン＋メトトレキサート、ヒドロキシクロロキン＋スルファサラジン＋レフルノミドが含まれる。
【0268】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）又はループス腎炎（ＬＮ）の治療及び／又は予防に有用である。そのような薬剤の非限定的な例としては、免疫系の活性を阻害する免疫抑制薬及びＳＬＥの治療のために承認された薬剤、例えばヒドロキシクロロキン、ステロイド及びコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン）、ベリムマブ、アザチオプリン、メトトレキサート、シクロホスファミド、ミコフェノレート及びミコフェノレートモフェチル、シクロスポリン、レフルノミド、ボクロスポリン、アバタセプト、アニフロルマブ、リツキシマブ、ＮＳＡＩＤ、例えばナプロキセンナトリウム及びイブプロフェン、抗マラリア薬、例えばヒドロキシクロロキン、カルシニューリン阻害剤及びタクロリムスが挙げられる。
【0269】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、プレドニゾン＋ミコフェノール酸類似体、プレドニゾン＋ミコフェノール酸ナトリウムプレドニゾン＋シクロホスファミド、プレドニゾン＋タクロリムス、プレドニゾン＋ボクロスポリン、プレドニゾン＋ベリムマブ＋ミコフェノール酸類似体、プレドニゾン＋ベリムマブ＋シクロホスファミド、プレドニゾン＋リツキシマブなどのＬＮの治療に有用である。
【0270】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、プレドニゾン＋ミコフェノール酸類似体、プレドニゾン＋ミコフェノール酸ナトリウム、プレドニゾン＋アザチオプリン、プレドニゾン＋タクロリムス、プレドニゾン＋シクロスポリン、プレドニゾン＋ミゾリビンなどのＬＮの治療に有用である。
【0271】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、変形性関節症（ＯＡ）の治療及び／又は予防に有用である。このような薬剤の非限定的な例としては、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、局所カプサイチン、関節中グルココルチコイド注射、アセトアミノフェン、ジュロキセチン、トラマドール、並びに注射可能なコルチコステロイド、例えば、酢酸メチルプレドニゾロン、酢酸トリアムシノロン、酢酸ベタメタゾン及び酢酸ベタメタゾンリンナトリウム、トリアムシノロンヘキサセトニド、並びにデキサメタゾンが挙げられる。
【0272】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）又はクローン病（ＣＤ）などの胃腸病の状態の治療及び／又は予防に有用である。そのような薬剤の非限定的な例としては、インフリキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ、ベドリズマブ、トファシチニブ、ウステキヌマブ、ナタリズマブ、メサラミン、ジアゾ結合５－ＡＳＡ、スルファサラジン、バルサラジド、オルサラジン、ブデソニド、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン及びプレドニゾンなどのコルチコステロイド；アザチオプリン及び６－メルカプトプリン、シクロスポリン、並びにメトトレキサートなどの免疫抑制剤又は免疫調節剤が挙げられる。
【0273】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）又は間質性肺疾患（ＩＬＤ）などの肺症状の治療及び／又は予防に有用である。そのような薬剤の非限定的な例としては、ニテンダニブ、ピルフェニドン、プレドニゾンなどのコルチコステロイド、ミコフェノレート（例えば、ＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標））、アザチオプリン（例えば、Ｉｍｕｒａｎ（登録商標））、レフルノミド（例えば、ＡＲＡＶＡ（登録商標））、リツキシマブ（例えば、ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、シクロホスファミド（例えば、ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、タクロリムス（例えば、ＰＲＯＧＲＡＦ（登録商標））を含む他のリウマチ薬、ランソプラゾール（例えば、ＰＲＥＶＡＣＩＤ（登録商標）２４ＨＲ）、オメプラゾール（例えば、Ｐｒｉｌｏｓｅｃ ＯＴＣ）及びパントプラゾール（例えば、ＰＲＯＴＯＮＩＸ（登録商標））などのＨ－２受容体アンタゴニスト又はプロトンポンプ阻害剤などの胃酸を減少させる医薬品が挙げられる。
【0274】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、ＤＫＤ、又はＣＫＤなどのヘプタトロジック又は腎症状の治療及び／又は予防に有用である。そのような薬剤の非限定的な例としては、メトホルミン、ナトリウムグルコース共輸送体－２阻害剤（sodium-glucose cotransporter-2 inhibitor、ＳＧＬＴ２ｉ）、血糖コントロールのための薬物治療、ＤＰＰ－４阻害剤、インスリン、スルホニル尿素、ＴＺＤ（thiazolidinedione、チアゾリジンジオン）、α－グルコシダーゼ阻害剤、ＳＧＬＴ２阻害剤（例えば、エンパグリフロジン、カナグリフロジン、ｄａｐａｇｌｉｆｌｏｚ）、グルカゴン様ペプチド－１受容体アゴニスト（glucagon-like peptide-1 receptor agonist、ＧＬＰ－１ ＲＡ）（例えば、リキシセナチド、リラグルチド、セマグルチド、エクセナチド、アルビグルチド、デュラグルチド）、ＤＰＰ－４阻害剤（例えば、サクサグリプチン、アログリプチン、シタグリプチン、リナグリプチン）、アンジオテンシン変換酵素（angiotensin-converting enzyme、ＡＣＥ）阻害剤及びアンジオテンシン２受容体遮断薬（angiotensin 2 receptor blocker、ＡＲＢ）などの高血圧を治療するために使用される１つ以上の薬剤、体重減少を支援する薬剤又は血糖の制御のための薬剤、コレステロール低下薬（例えば、スタチン）、ファインレノン、及びα－グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース、ミグリトール、ボグリボース）などの真性糖尿病の治療のための薬剤が挙げられる。
【0275】
いくつかの実施形態では、第２の薬剤は、アトピー性皮膚炎（ＡＤ）などの皮膚状態の治療及び／又は予防に有用である。このような薬剤の非限定的な例としては、局所コルチコステロイド（ＴＣＳ）（例えば、デソニド、ハイドロコルチゾン、フルオシノロン、トリアムシノロン、ジプロピオン酸ベタメタゾン）、局所カルシニューリン阻害剤（ＴＣＩ）（例えば、タクロリマス、ピメクロリムス）、局所抗菌剤及び防腐剤、シクロスポリン、メトトレキサート、ミコフェノレートモフェチル、インターフェロンγ、ホスホジエステラーゼ４（ＰＤＥ４）阻害剤、例えばクリサボロール、ＪＡＫ阻害剤（例えば、ルクソリチニブ、ウパダチニブ、ａｂｒｏｃｉｔｉｎｉｂ）、全身グルココルチコイド（例えば、プレドニゾン）、デュピルマブ、及び抗ＩＬ－１３抗体（例えば、トラロキヌマブ）が挙げられる。
【0276】
本発明の更に他の態様は、生体試料中のＰＤ－１の存在を検出するための開示された抗体の使用を提供する。検出されたＰＤ－１の量は、ＰＤ－１の発現レベルと相関し得、これは、対象における免疫細胞（例えば、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞及び単球）の活性化状態と相関する。
【0277】
治療のために対象に投与される本明細書に開示される抗体の具体的な用量は、選択される特定の抗体、従うべき投薬レジメン、それが他の薬剤と組み合わせて投与されるかどうか、投与のタイミング、それが投与される組織、及びそれが担持される物理的送達系に応じて変化し得る。いくつかの実施形態では、抗体は、治療サイクルの過程にわたって平均して週当たり約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００ｍｇの範囲内で対象に投与される。
【0278】
いくつかの実施形態では、抗体は、治療サイクルの過程にわたって平均して１日当たり１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、又は１０ｍｇを超える量で対象に投与される。例えば、抗体は、治療サイクルの過程にわたって平均して１日当たり約６～１０ｍｇ、約６．５～９．５ｍｇ、約６．５～８．５ｍｇ、約６．５～８ｍｇ、又は約７～９ｍｇの量で対象に投与される。
【0279】
いくつかの実施形態では、対象に投与される抗体の単回用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇの範囲内、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．０７ｍｇ／ｋｇ、０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０９ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、又は５０ｍｇ／ｋｇ、又は約それら未満で対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体の単回用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内、例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ～０．１ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ～０．１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ、又は５ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇで対象に投与される。抗体の用量は、約、少なくとも約、又は多くとも約、０．１、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、１０００ｍｇ若しくはｍｇ／ｋｇ、又はこれらから導き出せる任意の範囲であり得る。ｍｇ／ｋｇの投与量は、対象の総体重１ｋｇ当たりの抗体のｍｇ量を指すと考えられる。複数の用量が患者に投与される場合、用量は量が異なっていてもよく、又はそれらは同じであってもよいことが企図される。
【0280】
いくつかの実施形態では、抗体は、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇの範囲内で、例えば、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．０７ｍｇ／ｋｇ、０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０９ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、又は５０ｍｇ／ｋｇ、それら未満で対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体は、週当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ～４００ｍｇ／ｋｇの範囲内で、例えば、週当たり、約０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、又は４００ｍｇ／ｋｇ、それら未満、又はそれらを超えて対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体は、月当たり、約０．４ｍｇ／ｋｇ～１５００ｍｇ／ｋｇの範囲内、例えば、月当たり約０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、４５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、５５０ｍｇ／ｋｇ、６００ｍｇ／ｋｇ、６５０ｍｇ／ｋｇ、７００ｍｇ／ｋｇ、７５０ｍｇ／ｋｇ、８００ｍｇ／ｋｇ、８５０ｍｇ／ｋｇ、９００ｍｇ／ｋｇ、９５０ｍｇ／ｋｇ、又は１０００ｍｇ／ｋｇ、又はそれ未満、又はそれを超えて対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗体は、週当たり約０．１ｍｇ／ｍ２～２００ｍｇ／ｍ２、例えば、週当たり、約１ｍｇ／ｍ２、５ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２，１５ｍｇ／ｍ２、２０ｍｇ／ｍ２、２５ｍｇ／ｍ２、３０ｍｇ／ｍ２、３５ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２、４５ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、５５ｍｇ／ｍ２、６０ｍｇ／ｍ２、６５ｍｇ／ｍ２、７０ｍｇ／ｍ２、７５ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、１２５ｍｇ／ｍ２、１５０ｍｇ／ｍ２、１７５ｍｇ／ｍ２、又は２００ｍｇ／ｍ２、又はそれ未満、又はそれを超えて対象に投与される。目標用量は、単回用量で投与され得る。あるいは、標的用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０又はそれ以上の用量で投与され得る。例えば、約１ｍｇ／ｋｇ／週の用量は、毎週約１ｍｇ／ｋｇ、２週間ごとに投与される約２ｍｇ／ｋｇ、又は４週間ごとに投与される約４ｍｇ／ｋｇの用量で週の経過にわたって毎週送達され得る。投与スケジュールは、本明細書に記載の任意の投与スケジュールを含む、本明細書に記載の任意のレジメンに従って繰り返すことができる。いくつかの実施形態では、抗体は、約０．１ｍｇ／ｍ２～５００ｍｇ／ｍ２、例えば、約１ｍｇ／ｍ２、５ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２、１５ｍｇ／ｍ２、２０ｍｇ／ｍ２、２５ｍｇ／ｍ２、３０ｍｇ／ｍ２、３５ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２、４５ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２、５５ｍｇ／ｍ２、６０ｍｇ／ｍ２、６５ｍｇ／ｍ２、７０ｍｇ／ｍ２、７５ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、１３０ｍｇ／ｍ２、１３５ｍｇ／ｍ２、１５５ｍｇ／ｍ２、１７５ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、２２５ｍｇ／ｍ２、２５０ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２、３５０ｍｇ／ｍ２、４００ｍｇ／ｍ２、４２０ｍｇ／ｍ２、４５０ｍｇ／ｍ２、又は５００ｍｇ／ｍ２、又はそれ未満、又はそれを超えて対象に投与される。
【0281】
医薬組成物
別の態様では、本明細書に開示される抗ＰＤ－１抗体又はその機能性断片と、薬学的に許容される担体又は賦形剤とを含む医薬組成物が本明細書で提供される。薬学的に許容される担体又は賦形剤には、不活性固体希釈剤及び充填剤、希釈剤、滅菌水溶液及び様々な有機溶媒、透過増強剤、可溶化剤及びアジュバントが含まれ得るが、これらに限定されない。これらの組成物は、薬学的に有用な組成物を調製するための公知の方法に従って製剤化することができる。製剤は、周知であり、当業者に容易に入手可能ないくつかの供給源に記載されている。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｍａｒｔｉｎ Ｅ．Ｗ．，Ｅａｓｔｏｎ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９ｔｈ ｅｄ．，１９９５）には、本発明に関連して使用することができる製剤が記載されている。
別の態様では、本明細書に開示される抗ＰＤ－１抗体又はその機能性断片と、薬学的に許容される担体又は賦形剤とを含む医薬組成物が本明細書で提供される。薬学的に許容される担体又は賦形剤には、不活性固体希釈剤及び充填剤、希釈剤、滅菌水溶液及び様々な有機溶媒、透過増強剤、可溶化剤及びアジュバントが含まれ得るが、これらに限定されない。これらの組成物は、薬学的に有用な組成物を調製するための公知の方法に従って製剤化することができる。製剤は、周知であり、当業者に容易に入手可能ないくつかの供給源に記載されている。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｍａｒｔｉｎ Ｅ．Ｗ．，Ｅａｓｔｏｎ Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９ｔｈ ｅｄ．，１９９５）には、本発明に関連して使用することができる製剤が記載されている。
【0282】
本明細書に開示される医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、徐放性製剤、溶液、懸濁液としての経口投与、滅菌溶液、懸濁液若しくはエマルジョンとしての非経口注射、軟膏若しくはクリームとしての局所投与、又は坐剤としての直腸投与に適した形態であり得る。持続放出調製物の適切な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは、成形物品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ－グルタミン酸とγエチル－Ｌ－グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン－酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸コポリマーと酢酸リュープロリドからなる注射用ミクロスフェア）などの分解性乳酸－グリコール酸コポリマー、及びポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が挙げられる。いくつかの持続放出製剤は、数週間から数ヶ月、又は数年までにわたって分子の放出を可能にする。いくつかの実施形態では、主題の医薬組成物は、本明細書に記載の主題の抗体を少なくとも数週間、例えば少なくとも１週間、２週間、３週間又は４週間放出する。更なる実施形態では、主題の医薬組成物は、数ヶ月にわたって、例えば少なくとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月又は６ヶ月にわたって、本明細書に記載の主題の抗体を放出する。
【0283】
本明細書に開示される医薬組成物は、正確な投与量の単回投与に適した単位剤形であり得る。医薬組成物は、活性成分として抗体又はその機能性断片を更に含むことができ、従来の医薬担体又は賦形剤を含むことができる。更に、それは、他の医薬品又は医薬品、担体、アジュバントなどを含み得る。
【0284】
例示的な非経口投与形態には、滅菌水溶液、例えばプロピレングリコール水溶液又はデキストロース水溶液中の活性ポリペプチド及び／又はＰＥＧ修飾ポリペプチドの溶液又は懸濁液が含まれる。そのような剤形は、必要に応じて、ヒスチジン及び／又はリン酸塩などの塩で適切に緩衝することができる。
【0285】
投与に適した製剤には、例えば、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、及び製剤を意図するレシピエントの血液と等張にする溶質を含有し得る滅菌注射水溶液、及び懸濁化剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性滅菌懸濁液が挙げられる。
【0286】
製剤は、単位用量又は複数用量容器、例えば密封されたアンプル及びバイアルで提供されてもよく、使用前に滅菌液体担体、例えば注射用水の状態のみを必要とする凍結乾燥（凍結乾燥）状態で保存されてもよい。即時注射溶液及び懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、錠剤などから調製され得る。
【0287】
いくつかの実施形態では、本開示は、対象抗体又はその機能的断片及び注射に適した医薬賦形剤を含有する注射用医薬組成物を提供する。そのような組成物中の薬剤の例示的な成分及び量は、本明細書に記載の通りである。
【0288】
本開示の組成物を注射による投与のために組み込むことができる形態としては、水性懸濁液又は油性懸濁液又はエマルジョン（ゴマ油、コーン油、綿実油又はピーナッツ油を有する）、並びにエリキシル、マンニトール、デキストロース、又は滅菌水溶液、及び類似の医薬ビヒクルが挙げられる。
【0289】
注射には生理食塩水の水溶液を使用することができる。エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等（及びこれらの好適な混合物）、シクロデキストリン誘導体、及び植物油も使用され得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散液の場合には必要な粒径の維持、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の予防は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等によってもたらされ得る。
【0290】
滅菌注射用溶液は、上に列挙した種々の他の成分を含む適切な溶媒中に所望の量の本開示の抗体又はその機能的断片を組み込み、続いて濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散液は、種々の滅菌された活性成分を、塩基性分散媒及び他の成分を含有する滅菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。滅菌注射液の調製のための滅菌粉末の場合、特定の望ましい調製方法は、活性成分＋任意の更なる所望の成分の粉末をその以前に滅菌濾過された溶液から得る真空乾燥及び凍結乾燥技術である。
【0291】
いくつかの実施形態では、本開示は、本開示の抗体又はその機能的断片、及び経口投与に適した医薬賦形剤を含有する、経口投与のための医薬組成物を提供する。
【0292】
いくつかの実施形態では、（ｉ）有効量の本開示の抗体又はその機能的断片；場合により（ｉｉ）有効量の第２の薬剤；及び（ｉｉｉ）経口投与に適した医薬賦形剤を含有する、経口投与用の固体医薬組成物が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、組成物は、（ｉｖ）有効量の第３の薬剤を更に含む。
【0293】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、経口摂取に適した液体医薬組成物である。経口投与に適した医薬組成物は、それぞれが所定量の活性成分を粉末として又は顆粒、溶液若しくは懸濁液として水性若しくは非水性液体、水中油型エマルジョン若しくは油中水型液体エマルジョン中に含有するカプセル、カシェ剤若しくは錠剤、又は液体若しくはエアロゾルスプレーなどの個別の剤形として提供することができる。そのような剤形は、薬学の方法のいずれかによって調製することができ、典型的には、１つ以上の必要な成分を構成する担体と活性成分を会合させる工程を含む。一般に、組成物は、活性成分を液体担体又は細かく分割された固体担体又はその両方と均一かつ完全に混合し、次いで、必要に応じて、生成物を所望の形態に成形することによって調製される。
【0294】
水はいくつかのポリペプチドの分解を促進することができるので、本開示は、活性成分を含む無水医薬組成物及び剤形を更に包含する。例えば、貯蔵寿命又は経時的な製剤の安定性などの特性を決定するために、長期貯蔵をシミュレートする手段として製薬技術において水を添加することができる（例えば、５％）。無水医薬組成物及び剤形は、無水又は低水分含有成分及び低水分又は低湿度条件を使用して調製することができる。ラクトースを含有する医薬組成物及び剤形は、製造、包装及び／又は貯蔵中の水分及び／又は湿度との実質的な接触が予想される場合、無水にすることができる。無水医薬組成物は、その無水性が維持されるように調製及び保存され得る。したがって、無水組成物は、好適な処方キットに含まれ得るように、水への曝露を防止することが知られている材料を使用してパッケージングされ得る。適切な包装の例としては、これらに限定されないが、密封ホイル、プラスチックなど、単位用量容器、ブリスターパック、及びストリップパックが挙げられる。
【0295】
本開示の抗体は、従来の医薬配合技術に従って医薬担体と密接に混合して組み合わせることができる。担体は、投与に望ましい調製物の形態に応じて多種多様な形態をとることができる。経口剤形のための組成物を調製する際に、通常の医薬媒体のいずれか、例えば、経口液体製剤（懸濁液、溶液、及びエリキシル剤など）又はエアロゾルの場合、水、グリコール、油、アルコール、香味剤、保存剤、着色剤などを担体として使用することができる。又は担体、例えばデンプン、糖、微結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤及び崩壊剤は、経口固形製剤の場合に、いくつかの実施形態ではラクトースの使用を用いずに使用することができる。例えば、適切な担体としては、固体経口製剤を含む散剤、カプセル剤及び錠剤が挙げられる。所望される場合、錠剤は、標準的な水性又は非水性技術によってコーティングされ得る。
【0296】
医薬組成物及び剤形に使用するのに適した結合剤には、コーンスターチ、ジャガイモデンプン又は他のデンプン、ゼラチン、アカシアなどの天然及び合成ゴム、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、他のアルギネート、粉末トラガカント、グアーガム、セルロース及びその誘導体（例えば、エチルセルロース、酢酸セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、及びそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。
【0297】
医薬組成物及び剤形に使用するのに適した充填剤の例には、タルク、炭酸カルシウム（例えば、顆粒又は粉末）、微結晶セルロース、粉末セルロース、デキストレート、カオリン、マンニトール、ケイ酸、ソルビトール、デンプン、アルファ化デンプン、及びそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。
【0298】
崩壊剤を組成物中で使用して、水性環境に曝露されたときに崩壊する錠剤を提供することができる。崩壊剤が多すぎると、ボトル内で崩壊する可能性のある錠剤が生成される可能性がある。少なすぎると、崩壊が起こるには不十分であり得、したがって、剤形からの活性成分の放出速度及び放出範囲を変化させ得る。したがって、活性成分の放出を有害に変化させるには少なすぎず、多すぎない十分な量の崩壊剤を使用して剤形を形成することができる。使用される崩壊剤の量は、製剤の種類及び投与様式に基づいて変化し得、当業者には容易に認識され得る。約０．５～約１５重量％の崩壊剤、又は約１～約５重量％の崩壊剤を医薬組成物に使用してもよい。医薬組成物及び剤形を形成するために使用することができる崩壊剤としては、寒天、アルギン酸、炭酸カルシウム、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポラクリリンカリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ジャガイモ又はタピオカデンプン、他のデンプン、アルファ化デンプン、他のデンプン、粘土、他のアルギン、他のセルロース、ガム又はそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【0299】
医薬組成物及び剤形を形成するために使用することができる潤滑剤には、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、鉱油、軽質鉱油、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、他のグリコール、ステアリン酸、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、水素化植物油（例えば、落花生油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、及び大豆油）、ステアリン酸亜鉛、オレイン酸エチル、ラウリン酸エチル、寒天、又はそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。追加の潤滑剤としては、例えば、シロイドシリカゲル、合成シリカの凝固エアロゾル、又はそれらの混合物が挙げられる。潤滑剤は、場合により、医薬組成物の約１重量％未満の量で添加することができる。
【0300】
水性懸濁液及び／又はエリキシル剤が経口投与に望ましい場合、その中の活性成分は、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン及びそれらの様々な組合せなどの希釈剤と共に、様々な甘味剤又は香味剤、色素又は染料、及び必要に応じて乳化剤及び／又は懸濁化剤と組み合わせてもよい。
【0301】
錠剤は、コーティングされていなくてもよく、又は胃腸管内での崩壊及び吸収を遅延させ、それによってより長期間にわたって持続的な作用を提供するための公知の技術によってコーティングされていてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリル又はジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料が、用いられ得る。経口使用のための製剤はまた、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム若しくはカオリンと混合される硬ゼラチンカプセルとして、又は活性成分が水若しくは油性媒体、例えば落花生油、流動パラフィン若しくはオリーブ油と混合される軟ゼラチンカプセルとして提供することもできる。
【0302】
医薬組成物及び剤形を形成するために使用することができる界面活性剤には、親水性界面活性剤、親油性界面活性剤、及びそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。すなわち、親水性界面活性剤の混合物を使用してもよく、親油性界面活性剤の混合物を使用してもよく、又は少なくとも１つの親水性界面活性剤と少なくとも１つの親油性界面活性剤との混合物を使用してもよい。
【0303】
ＨＬＢ値が低い界面活性剤は、より親油性又は疎水性であり、油中でより高い溶解度を有し、ＨＬＢ値が高い界面活性剤は、より親水性であり、水溶液中でより高い溶解度を有する。親水性界面活性剤は、一般に、約１０を超えるＨＬＢ値を有する化合物、及びＨＬＢ尺度が一般に適用可能ではないアニオン性、カチオン性、又は双性イオン性化合物であると考えられる。同様に、親油性（すなわち、疎水性）界面活性剤は、約１０以下のＨＬＢ値を有する化合物である。しかしながら、界面活性剤のＨＬＢ値は、工業用、医用、及び化粧品用乳液の製剤化を可能にするために一般に使用されるおおよその指針にすぎない。
【0304】
親水性界面活性剤は、イオン性又は非イオン性のいずれかであり得る。好適なイオン性界面活性剤としては、アルキルアンモニウム塩、フシジン酸塩、アミノ酸、オリゴペプチド、及びポリペプチドの脂肪酸誘導体、アミノ酸、オリゴペプチド、及びポリペプチドのグリセリド誘導体、レシチン及び水添レシチン、リゾレシチン及び水添リゾレシチン、リン脂質及びその誘導体、リゾホスホリン脂質及びその誘導体、カルニチン脂肪酸エステル塩、アルキルサルフェートの塩、脂肪酸塩、ドクサートナトリウム、アシルラクチレート、モノ及びジグリセリドのモノ及びジアセチル化酒石酸エステル、スクシニル化モノ及びジグリセリド、モノ及びジグリセリドのクエン酸エステル、並びにそれらの混合物が挙げられる。
【0305】
前述の群内で、イオン性界面活性剤としては、例えば、レシチン、リゾレシチン、リン脂質、リゾホスホリン脂質、及びそれらの誘導体、カルニチン脂肪酸エステル塩、アルキルサルフェートの塩、脂肪酸塩、ドクサートナトリウム、アシルラクチレート；モノ及びジグリセリドのモノ及びジアセチル化酒石酸エステル、スクシニル化モノ及びジグリセリド、モノ及びジグリセリドのクエン酸エステル、並びにそれらの混合物が挙げられる。
【0306】
イオン性界面活性剤は、レシチン、リゾレシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルグリセロール、リゾホスファチジン酸、リゾホスファチジルセリン、ＰＥＧ－ホスファチジルエタノールアミン、ＰＶＰ－ホスファチジルエタノールアミン、脂肪酸の乳酸エステル、ステアロイル－２－ラクチレート、ステアロイルラクチレート、スクシニル化モノグリセリド、モノ／ジグリセリドのモノ／ジアセチル化酒石酸エステル、モノ／ジグリセリドのクエン酸エステル、コリルサルコシン、カプロエート、カプリレ－ト、カプレ－ト、ラウレ－ト、ミリステート、パルミテート、オレエート、リシノレート、リノレート、リノレネート、ステアレート、ラウリルサルフェート、テトラセシルサルフェート、ドクサート、ラウロイルカルニチン、パルミトイルカルニチン、ミリストイルカルニチンのイオン化形態、並びにそれらの塩及び混合物であり得る。
【0307】
親水性非イオン性界面活性剤としては、限定されないが、アルキルグルコシド、アルキルマルトシド、アルキルチオグルコシド、ラウリルマクロゴルグリセリド、ポリエチレングリコールアルキルエーテルなどのポリオキシアルキレンアルキルエーテル、ポリエチレングリコールアルキルフェノールなどのポリオキシアルキレンアルキルフェノール、ポリエチレングリコール脂肪酸モノエステル及びポリエチレングリコール脂肪酸ジエステルなどのポリオキシアルキレンアルキルフェノール脂肪酸エステル、ポリエチレングリコールグリセロール脂肪酸エステル、ポリグリセロール脂肪酸エステル、ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステルなどのポリオキシアルキレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオールとグリセリド、植物油、水添植物油、脂肪酸、及びステロールからなる群の少なくとも１つのメンバーとの親水性エステル交換生成物、ポリオキシエチレンステロール、誘導体、及びそれらの類似体、ポリオキシエチル化ビタミン及びその誘導体、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンブロックコポリマー及びそれらの混合物、ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル、並びにポリオールとトリグリセリド、植物油、及び水添植物油からなる群の少なくとも１つのメンバーとの親水性エステル交換生成物を挙げることができるが、これらに限定されない。ポリオールは、グリセロール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、プロピレングリコール、ペンタエリスリトール、又はサッカライドであり得る。
【0308】
他の親水性非イオン性界面活性剤としては、ＰＥＧ－１０ラウレート、ＰＥＧ－１２ラウレート、ＰＥＧ－２０ラウレート、ＰＥＧ－３２ラウレート、ＰＥＧ－３２ジラウレート、ＰＥＧ－１２オレエート、ＰＥＧ－１５オレエート、ＰＥＧ－２０オレエート、ＰＥＧ－２０ジオレエート、ＰＥＧ－３２オレエート、ＰＥＧ－２００オレエート、ＰＥＧ－４００オレエート、ＰＥＧ－１５ステアレート、ＰＥＧ－３２ジステアレート、ＰＥＧ－４０ステアレート、ＰＥＧ－１００ステアレート、ＰＥＧ－２０ジラウレート、ＰＥＧ－２５グリセリルトリオレエート、ＰＥＧ－３２ジオレエート、ＰＥＧ－２０グリセリルラウレート、ＰＥＧ－３０グリセリルラウレート、ＰＥＧ－２０グリセリルステアレート、ＰＥＧ－２０グリセリルオレエート、ＰＥＧ－３０グリセリルオレエート、ＰＥＧ－３０グリセリルラウレート、ＰＥＧ－４０グリセリルラウレート、ＰＥＧ－４０パーム核油、ＰＥＧ－５０水添ヒマシ油、ＰＥＧ－４０ヒマシ油、ＰＥＧ－３５ヒマシ油、ＰＥＧ－６０ヒマシ油、ＰＥＧ－４０水添ヒマシ油、ＰＥＧ－６０水添ヒマシ油、ＰＥＧ－６０コーン油、ＰＥＧ－６カプレート／カプリレートグリセリド、ＰＥＧ－８カプレート／カプリレートグリセリド、ポリグリセリル－１０ラウレート、ＰＥＧ－３０コレステロール、ＰＥＧ－２５フィトステロール、ＰＥＧ－３０大豆ステロール、ＰＥＧ－２０トリオレエート、ＰＥＧ－４０ソルビタンオレエート、ＰＥＧ－８０ソルビタンラウレート、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ＰＯＥ－９ラウリルエーテル、ＰＯＥ－２３ラウリルエーテル、ＰＯＥ－１０オレイルエーテル、ＰＯＥ－２０オレイルエーテル、ＰＯＥ－２０ステアリルエーテル、トコフェリルＰＥＧ－１００スクシネート、ＰＥＧ－２４コレステロール、ポリグリセリル－１０オレエート、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）４０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０、スクロースモノステアレート、スクロースモノラウレート、スクロースモノパルミテート、ＰＥＧ １０－１００ノニルフェノールシリーズ、ＰＥＧ １５－１００オクチルフェノールシリーズ、及びポロキサマーが挙げられるが、これらに限定されない。
【0309】
好適な親油性界面活性剤としては、例としてのみ、脂肪アルコール、グリセロール脂肪酸エステル、アセチル化グリセロール脂肪酸エステル、低級アルコール脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル、ステロール及びステロール誘導体、ポリオキシエチル化ステロール及びステロール誘導体、ポリエチレングリコールアルキルエーテル、糖エステル、糖エーテル、モノ及びジグリセリドの乳酸誘導体、ポリオールとグリセリド、植物油、水添植物油、脂肪酸、及びステロールからなる群の少なくとも１つのメンバーとの疎水性エステル交換生成物、油溶性ビタミン／ビタミン誘導体、並びにそれらの混合物が挙げられる。この群内では、例示的な親油性界面活性剤は、グリセロール脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、及びそれらの混合物を含むか、又は植物油、水添植物油、及びトリグリセリドからなる基の少なくとも１つのメンバーを有するポリオールの疎水性エステル交換生成物である。
【0310】
いくつかの場合では、組成物は、化合物の良好な可溶化及び／又は溶解を確実にし、化合物の沈殿を最小限に抑えるための可溶化剤を含む。これは、非経口使用のための組成物、例えば注射用組成物に特に有利であり得る。親水性薬物及び／又は界面活性剤などの他の成分の溶解度を高めるために、又は組成物を安定な又は均一な溶液又は分散液として維持するために、可溶化剤を添加することもできる。
【0311】
適切な可溶化剤の例としては、以下のもの、アルコール及びポリオール、例えばエタノール、イソプロパノール、ブタノール、ベンジルアルコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブタンジオール及びその異性体、グリセロール、ペンタエリスリトール、ソルビトール、マンニトール、トランスクトール、ジメチルイソソルビド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及び他のセルロース誘導体、シクロデキストリン及びシクロデキストリン誘導体；約２００～約６０００の平均分子量を有するポリエチレングリコールのエーテル、例えばテトラヒドロフルフリルアルコールＰＥＧエーテル（グリコフロール）又はメトキシＰＥＧ；アミド及び他の窒素含有化合物、例えば２－ピロリドン、２－ピペリドン、ε－カプロラクタム、Ｎ－アルキルピロリドン、Ｎ－ヒドロキシアルキルピロリドン、Ｎ－アルキルピペリドン、Ｎ－アルキルカプロラクタム、ジメチルアセトアミド及びポリビニルピロリドン；プロピオン酸エチル、クエン酸トリブチル、クエン酸アセチルトリエチル、クエン酸アセチルトリブチル、クエン酸トリエチル、オレイン酸エチル、カプリル酸エチル、酪酸エチル、トリアセチン、プロピレングリコールモノアセテート、プロピレングリコールジアセテート、ε－カプロラクトン及びその異性体、δ－バレロラクトン及びその異性体、β－ブチロラクトン及びその異性体等のエステル類；及びジメチルアセトアミド、ジメチルイソソルビド、Ｎ－メチルピロリドン、モノオクタノイン、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、及び水などの当技術分野で公知の他の可溶化剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【0312】
可溶化剤の混合物も使用され得る。例としては、トリアセチン、クエン酸トリエチル、オレイン酸エチル、カプリル酸エチル、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチルピロリドン、Ｎ－ヒドロキシエチルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、エタノール、ポリエチレングリコール２００～１００、グリコフロール、トランスクトール、プロピレングリコール、及びジメチルイソソルビドが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な可溶化剤としては、ソルビトール、グリセロール、トリアセチン、エチルアルコール、ＰＥＧ－４００、グリコフロール及びプロピレングリコールが挙げられる。
【0313】
含まれ得る可溶化剤の量は、特に限定されない。所与の可溶化剤の量は、当業者によって容易に決定され得る生物学的に許容され得る量に制限され得る。いくつかの状況では、生物学的に許容可能な量をはるかに超える量の可溶化剤を含むこと、例えば薬物の濃度を最大にすることが有利であり得、過剰な可溶化剤は、蒸留又は蒸発などの従来の技術を使用して組成物を対象に提供する前に除去される。したがって、存在する場合、可溶化剤は、薬物及び他の賦形剤の合計重量を基準として、重量で１０％、２５％、５０％、１００％、又は約２００％までであり得る。必要に応じて、５％、２％、１％又はそれ以下などの非常に少量の可溶化剤を使用することもできる。典型的には、可溶化剤は、重量で、約１％～約１００％、より典型的には約５％～約２５％の量で存在してもよい。
【0314】
組成物は、１つ以上の薬学的に許容される添加剤及び賦形剤を更に含むことができる。そのような添加剤及び賦形剤には、粘着防止剤、消泡剤、緩衝剤、ポリマー、酸化防止剤、防腐剤、キレート剤、粘調節剤、等張化剤、香味剤、着色剤、臭気剤、乳白剤、懸濁化剤、結合剤、充填剤、可塑剤、潤滑剤、及びそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。
【0315】
更に、加工を容易にするため、安定性を高めるため、又は他の理由で、酸又は塩基を組成物に組み込むことができる。薬学的に許容される塩基の例としては、アミノ酸、アミノ酸エステル、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化アルミニウム、炭酸カルシウム、水酸化マグネシウム、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、合成ケイ酸アルミニウム、合成ヒドロカルサイト、水酸化マグネシウムアルミニウム、ジイソプロピルエチルアミン、エタノールアミン、エチレンジアミン、トリエタノールアミン、トリエチルアミン、トリイソプロパノールアミン、トリメチルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）などが挙げられる。酢酸、アクリル酸、アジピン酸、アルギン酸、アルカンスルホン酸、アミノ酸、アスコルビン酸、安息香酸、ホウ酸、酪酸、炭酸、クエン酸、脂肪酸、ギ酸、フマル酸、グルコン酸、ヒドロキノスルホン酸、イソアスコルビン酸、乳酸、マレイン酸、シュウ酸、パラ－ブロモフェニルスルホン酸、プロピオン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、タンニン酸、酒石酸、チオグリコール酸、トルエンスルホン酸、尿酸などの薬学的に許容される酸の塩である塩基も適している。リン酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、及びリン酸二水素ナトリウムなどの多塩基酸の塩も使用することができる。塩基が塩である場合、カチオンは、アンモニウム、アルカリ金属、アルカリ土類金属などの任意の便利で薬学的に許容されるカチオンであり得る。例としては、ナトリウム、カリウム、リチウム、マグネシウム、カルシウム及びアンモニウムが挙げられ得るが、これらに限定されない。
【0316】
適切な酸は、薬学的に許容可能な有機酸又は無機酸である。適切な無機酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、ホウ酸、リン酸などが挙げられる。好適な有機酸の例としては、酢酸、アクリル酸、アジピン酸、アルギン酸、アルカンスルホン酸、アミノ酸、アスコルビン酸、安息香酸、ホウ酸、酪酸、炭酸、クエン酸、脂肪酸、ギ酸、フマル酸、グルコン酸、ヒドロキノスルホン酸、イソアスコルビン酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、パラブロモフェニルスルホン酸、プロピオン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、タンニン酸、酒石酸、チオグリコール酸、トルエンスルホン酸、トルエンスルホン酸などが挙げられる。
【0317】
本開示の別の態様では、本開示の抗体組成物を含有する単位用量及び使用説明書を含むキットが提供される。キットは、１つ又はそれを超える更なる試薬、例えば上記の免疫抑制試薬、又は本明細書に記載の１つ又はそれを超える更なる抗体（例えば、第１のヒト抗体とは異なる抗原中のエピトープに結合する相補的活性を有するヒト抗体）を含有する１つ又はそれを超える単位用量を更に含むことができる。キットは、典型的には、キットの内容物の使用目的を示すラベルを含む。ラベルという用語には、キットに添付される、又はキットと共に供給される、又は別の方法でキットに付随する任意の書き込み、又は記録された材料が含まれる。
【0318】
本開示のキットはまた、診断薬及び／又は他の治療剤を含み得る。いくつかの場合では、キットは、本開示の抗体と、本明細書に記載されるような対象における疾患、状態又は障害の状態又は存在を診断するための診断方法において使用され得る診断剤とを含む。
医療用途
医療用途
【0319】
別の態様では、治療に使用するための本開示の抗体又は抗原結合断片又は免疫コンジュゲート、本開示の抗体又は抗原結合断片又は免疫コンジュゲートを含む医薬組成物が本明細書で提供される。適切には、本明細書に開示される治療方法で使用するための、本開示の抗体若しくは抗原結合断片若しくは免疫コンジュゲート、又は本開示の抗体若しくは抗原結合断片若しくは免疫コンジュゲートを含む医薬組成物が本明細書で提供される。
【0320】
別の態様では、治療に使用するための医薬品、例えば本明細書に開示される治療方法に使用するための医薬品の製造における、本開示の抗体若しくは抗原結合断片若しくは免疫コンジュゲート、又は本開示の抗体若しくは抗原結合断片若しくは免疫コンジュゲートを含む医薬組成物の使用が本明細書で提供される。
配列表
配列番号１、ＣＤＲＨ１、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＴＹＰＩＥ
配列番号２、ＣＤＲＨ２、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＮＦＨＰＹＮＤＤＴＫＹＮＥＫＦＱＧ
配列番号３、ＣＤＲＨ３、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＥＮＹＧＳＨＧＧＦＶＹ
配列番号４、ＣＤＲＬ１、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＲＡＳＳＳＶＩＳＳＹＬＨ
配列番号５、ＣＤＲＬ２、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＳＴＳＮＬＡＳ
配列番号６、ＣＤＲＬ３、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ
配列番号１７、Ｐ２３８Ｄ変異を有するヒトＩｇＧ１のＦｃ、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＤＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１８、重鎖、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＦＧＹＴＦＴＴＹＰＩＥＷＭＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＮＦＨＰＹＮＤＤＴＫＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＳＴＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＮＹＧＳＨＧＧＦＶＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＤＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１９、軽鎖、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＥＮＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＩＳＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列表
配列番号１、ＣＤＲＨ１、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＴＹＰＩＥ
配列番号２、ＣＤＲＨ２、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＮＦＨＰＹＮＤＤＴＫＹＮＥＫＦＱＧ
配列番号３、ＣＤＲＨ３、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＥＮＹＧＳＨＧＧＦＶＹ
配列番号４、ＣＤＲＬ１、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＲＡＳＳＳＶＩＳＳＹＬＨ
配列番号５、ＣＤＲＬ２、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＳＴＳＮＬＡＳ
配列番号６、ＣＤＲＬ３、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＱＱＹＮＳＹＰＬＴ
配列番号１７、Ｐ２３８Ｄ変異を有するヒトＩｇＧ１のＦｃ、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＤＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１８、重鎖、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＦＧＹＴＦＴＴＹＰＩＥＷＭＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＮＦＨＰＹＮＤＤＴＫＹＮＥＫＦＱＧＲＶＴＬＴＶＤＫＳＳＴＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＮＹＧＳＨＧＧＦＶＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＤＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１９、軽鎖、分子タイプ：タンパク質、生物：合成構築物
ＥＮＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＩＳＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【実施例】
【0321】
以下の実施例は、本開示のいくつかの実施形態を更に例示するために提供されるが、本開示の範囲を限定することを意図するものではない。それらの例示的な性質によって、当業者に知られている他の手順、方法論、又は技法が代替的に使用され得ることが理解されるであろう。
【0322】
実施例１：例示的な抗ＰＤ－１抗体のアゴニスト機能に対するＦｃ受容体相互作用の効果
例示的な抗ヒトＰＤ－１アゴニスト抗体（２０１５年１１月１０日発行の米国特許第９，１８１，３４２号に記載されるクローン１９マウスＩｇＧ１）のシグナル伝達効果を、ＮＦＡＴ応答エレメントの制御下でルシフェラーゼを産生するＰＤ－１発現Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を、以前に記載されたように（Ｌｅｉｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１０）、抗ＣＤ３「Ｔ細胞刺激因子」（ＴＣＳ）構築物を発現するＢＷ５１４７細胞と共に培養するレポーターアッセイにおいて調査した。抗体アゴニズムにおけるＦｃ受容体相互作用の役割を調べるために、ＴＣＳ構築物のみを発現するＢＷ５１４７細胞、又はマウスＦｃγＲ２Ｂを発現するようにもトランスフェクトされたＢＷ５１４７細胞のいずれかでアッセイを行った。
例示的な抗ヒトＰＤ－１アゴニスト抗体（２０１５年１１月１０日発行の米国特許第９，１８１，３４２号に記載されるクローン１９マウスＩｇＧ１）のシグナル伝達効果を、ＮＦＡＴ応答エレメントの制御下でルシフェラーゼを産生するＰＤ－１発現Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を、以前に記載されたように（Ｌｅｉｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１０）、抗ＣＤ３「Ｔ細胞刺激因子」（ＴＣＳ）構築物を発現するＢＷ５１４７細胞と共に培養するレポーターアッセイにおいて調査した。抗体アゴニズムにおけるＦｃ受容体相互作用の役割を調べるために、ＴＣＳ構築物のみを発現するＢＷ５１４７細胞、又はマウスＦｃγＲ２Ｂを発現するようにもトランスフェクトされたＢＷ５１４７細胞のいずれかでアッセイを行った。
【0323】
９６ウェルＵ底プレート中、ウェル当たり５×１０４個のＪｕｒｋａｔレポーター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｊ１２５０ｂ）を添加し、総体積８０μＬのアッセイ緩衝液（ＲＰＭＩ １６４０＋１％ＦＣＳ）中、５×１０４個のＢＷ５１４７細胞、並びにＰＤ－１抗体又はアイソタイプ対照のいずれかと共培養した。抗体の９点希釈系列を、２００ｎＭから３分の１希釈で行った。３７℃の加湿ＣＯ２インキュベータ内で６時間インキュベートした後、プレートをインキュベータから取り出し、１０分間室温に平衡化した。産生されたルシフェラーゼの量を、Ｂｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して（Ｔ細胞活性化の尺度として）定量し、８０μｌのＢｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ試薬を各ウェルに添加し、プレートを室温で１０分間インキュベートした。ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ Ｐｌｕｓ（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）を使用して発光を定量化した。
【0324】
マウスＦｃγＲ２Ｂを発現した刺激因子細胞を使用した場合、ＰＤ－１抗体クローン１９は、０．１３ｎＭのＩＣ５０でＴ細胞活性化の有意な低下を引き起こした（図１Ａ）。Ｆｃ受容体を発現しなかった刺激因子細胞を使用した場合、クローン１９はＴ細胞活性化に影響を及ぼさなかった（図１Ｂ）。
【0325】
実施例２：例示的な抗ＰＤ－１抗体のヒト化
クローン１９のＶＨ及びＶＬ配列をヒト生殖系列配列のデータベースにアラインメントし、相同配列をヒト化のためのフレームワークとして選択した。ＩＧＨＶ１－２４＊０１又はＩＧＨＶ７－４－１＊０２をＶＨドメインのフレームワークとして使用し、ＩＧＫＶ１－３９＊０１又はＩＧＫＶ３－１１＊０１をＶＬドメインのフレームワークとして使用した。
クローン１９のＶＨ及びＶＬ配列をヒト生殖系列配列のデータベースにアラインメントし、相同配列をヒト化のためのフレームワークとして選択した。ＩＧＨＶ１－２４＊０１又はＩＧＨＶ７－４－１＊０２をＶＨドメインのフレームワークとして使用し、ＩＧＫＶ１－３９＊０１又はＩＧＫＶ３－１１＊０１をＶＬドメインのフレームワークとして使用した。
【0326】
ＶＨ及びＶＬ配列をＣＤＲグラフトアルゴリズムに通して、マウス抗体クローン１９から選択されたヒト生殖系列配列にＣＤＲを移入した。構造誘導ヒト化を可能にするために、クローン１９マウスＶＨ及びＶＬのモデルを構築し、構造誘導アプローチを使用して、結合完全性を保持するために、どのフレームワークアミノ酸をヒト化抗体フレームに保持するかを決定した。表１は、生成されたＶＨ及びＶＬ配列を要約する。
【0327】
ヒト化ＶＨ及びＶＬドメインの全ての可能性のある組合せからなる抗体バリアントを作製した。バリアントをヒトＩｇＧ１カッパアイソタイプで産生した。ヒト又はカニクイザルＰＤ－１に対するヒト化抗体バリアントの結合親和性及び動態を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ（Ｃｙｔｉｖａ）を使用して表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定した。ヒト抗体捕捉キット（Ｃｙｔｉｖａ）を使用して、シリーズＳ ＣＭ５センサーチップ（Ｃｙｔｉｖａ）をポリクローナル抗ヒトＩｇＧで被覆した。次いで、抗ＰＤ－１抗体をバイオセンサ表面に捕捉し、アイソタイプ対照抗体を参照チャネルに捕捉した。次いで、様々な濃度の単量体可溶性ヒトＰＤ－１細胞外ドメイン又は可溶性カニクイザルＰＤ－１細胞外ドメインを、単一サイクル速度論分析では、緩衝液１０ｍＭのＨｅｐｅｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．００５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４（ＨＢＳ－Ｐ）中の固定化抗体上に３７℃で注入した。参照及びブランク減算後に、ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｃｙｔｉｖａ）を使用して会合速度及び解離速度を適合させ、解離定数を計算した。表２は、ヒト及びカニクイザルＰＤ－１に対する各ヒト化バリアントの結合ＫＤを示す。
【表1】
【表2】
【0328】
実施例３：ＦｃγＲ２Ｂへの結合の選択性に対するＦｃ変異の影響
ヒト化バリアントｈｕｍＣＬ１９ｖ１をｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ４又はある範囲の異なるＦｃ変異ｈＩｇＧ１定常領域上で組換え生産し、ヒトＦｃγＲ２Ｂ又は２つの高度に相同なＦｃγＲ２Ａアロタイプへのそれらの結合を表面プラズモン共鳴（緩衝液ＨＢＳ－ＥＰ＋、ｐＨ７．４中３７℃で）によって評価した。
ヒト化バリアントｈｕｍＣＬ１９ｖ１をｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ４又はある範囲の異なるＦｃ変異ｈＩｇＧ１定常領域上で組換え生産し、ヒトＦｃγＲ２Ｂ又は２つの高度に相同なＦｃγＲ２Ａアロタイプへのそれらの結合を表面プラズモン共鳴（緩衝液ＨＢＳ－ＥＰ＋、ｐＨ７．４中３７℃で）によって評価した。
【0329】
相互作用は、分析物として組換え発現ＦｃＲ（細胞外ドメインのみ）を有するＢｉａｃｏｒｅ ８Ｋを使用した表面プラズモン共鳴によって評価した。簡潔には、組換えヒトＰＤ－１細胞外ドメインを、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅアミンカップリングキットを使用してＣＭ５ Ｓｅｒｉｅｓ Ｓセンサーチップの全てのチャネルの両方のフローセルに共有結合的に固定化した。次いで、評価すべきｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｆｃバリアントを各チャネルのフローセル２に捕捉した（約５００～１０００個の応答ユニット）。次いで、様々な濃度のＦｃＲを注入し、平衡結合を測定することによって、定常状態の親和性分析を行った。二重参照を使用した（参照Ｆｃ１におけるシグナルを差し引き、ブランクの濃度０の注入からのシグナルも差し引く）。ＫＤ値をラングミュア曲線から計算した（平衡結合を分析物濃度に対してプロットして、最大結合の半分に必要な濃度を決定した）。各バリアントの異なるＦｃ受容体への結合ＫＤ値を表３に示す。試験したＦｃバリアントのうち、Ｐ２３８Ｄ変異のみが、両方のＦｃγＲ２Ａアロタイプに対してＦｃγＲ２Ｂへの結合の選択性を高めた。この変異は、ＦｃγＲ２Ｂへの結合の中程度の増加及びＦｃγＲ２Ａアロタイプの両方への結合の有意な減少をもたらした。
【表3】
【0330】
実施例４：Ｐ２３８Ｄ変異ＰＤ－１抗体は、ＮＦＡレポーターアッセイにおけるＴ細胞活性化の抑制においてＩｇＧ１抗体と同様に有効である
Ｐ２３８Ｄ変異がｈｕｍＣＬ１９ｖ１のアゴニスト機能に影響を及ぼすかどうかを評価するために、Ｊｕｒｋａｔレポーターアッセイを使用した。ｈｕｍＣＬ１９ｖ１の非変異ＩｇＧ１バージョンと、ＰＤ１ＡＢ６（国際公開第２０１７／０５８８５９号）、ＰＤ１Ｂ１０９４（国際公開第２０１８／２２６５８０号）、抗体１（国際公開第２０１９／１６８７４５号）及びＡＮＢ０３０（国際公開第２０２０／２４７６２８号）を含む以前に記載されたＩｇＧ１アイソタイプアゴニスト抗体の両方とを比較した。これらの抗体は、それぞれの特許出願で提供された配列から組換え生産された。ＮＦＡＴ応答エレメントの制御下でルシフェラーゼを産生するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を、以前に記載されたような抗ＣＤ３「Ｔ細胞刺激因子」（ＴＣＳ）構築物を発現し（Ｌｅｉｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１０）、ヒトＦｃγＲ２Ｂを発現するＢＷ５１４７細胞と共に培養した。
Ｐ２３８Ｄ変異がｈｕｍＣＬ１９ｖ１のアゴニスト機能に影響を及ぼすかどうかを評価するために、Ｊｕｒｋａｔレポーターアッセイを使用した。ｈｕｍＣＬ１９ｖ１の非変異ＩｇＧ１バージョンと、ＰＤ１ＡＢ６（国際公開第２０１７／０５８８５９号）、ＰＤ１Ｂ１０９４（国際公開第２０１８／２２６５８０号）、抗体１（国際公開第２０１９／１６８７４５号）及びＡＮＢ０３０（国際公開第２０２０／２４７６２８号）を含む以前に記載されたＩｇＧ１アイソタイプアゴニスト抗体の両方とを比較した。これらの抗体は、それぞれの特許出願で提供された配列から組換え生産された。ＮＦＡＴ応答エレメントの制御下でルシフェラーゼを産生するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を、以前に記載されたような抗ＣＤ３「Ｔ細胞刺激因子」（ＴＣＳ）構築物を発現し（Ｌｅｉｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１０）、ヒトＦｃγＲ２Ｂを発現するＢＷ５１４７細胞と共に培養した。
【0331】
９６ウェルＵ底プレート中、ウェル当たり５ｘ１０＾４個のＪｕｒｋａｔレポーター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｊ１２５０ｂ）を添加し、総容量８０μＬのアッセイ緩衝液（ＲＰＭＩ １６４０＋１％ＦＣＳ）中、５×１０４個のＢＷ５１４７細胞、並びにＰＤ－１抗体又はアイソタイプ対照のいずれかと共培養した。単回高用量の各ＰＤ－１抗体（１０μｇ／ｍｌ）を試験した。
【0332】
３７℃の加湿ＣＯ２インキュベータ内で６時間インキュベートした後、プレートをインキュベータから取り出し、１０分間室温に平衡化した。産生されたルシフェラーゼの量を、Ｂｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して（Ｔ細胞活性化の尺度として）定量し、８０μｌのＢｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ試薬を各ウェルに添加し、プレートを室温で１０分間インキュベートした。ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ Ｐｌｕｓ（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）を使用して発光を定量化した。
【0333】
試験した全てのＰＤ－１抗体は、アイソタイプ対照と比較してＴ細胞活性化を有意に減少させた。ｈｕｍＣＬ１９ｖ１の野生型ＩｇＧ１又はＰ２３８Ｄ変異バージョンの間に有意差はなかった（図２Ａ）。
【0334】
別の一連の実験では、最適化されたＴ細胞レポーターアッセイを使用して、ｈｕｍａＣＬ１９ｖ１のＰ２３８Ｄ変異バージョンの効力を評価した。Ｔ細胞レポーターアッセイは、この実施例において上記のアッセイと同様であったが、マウスＢＷ５１４７刺激因子細胞をヒトＨＥＫ２９３Ｔ刺激因子細胞で置き換えた。ＮＦＡＴ応答エレメントの制御下でルシフェラーゼを産生するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞を、以前に記載されたような抗ＣＤ３「Ｔ細胞刺激因子」（ＴＣＳ）構築物を発現し（Ｌｅｉｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１０）、ヒトＦｃγＲ２Ｂを発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞と共に培養した。
【0335】
４ｘ１０＾４個のＨＥＫ２９３Ｔ刺激因子細胞を、平底９６ウェルプレートのウェル当たりに播種した。１６時間後、培地を除去し、１ウェル当たり５ｘ１０＾４個のＪｕｒｋａｔレポーター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ ｃａｔ＃Ｊ１２５０ｂ）に加えて、ＰＤ－１抗体又はアイソタイプ対照のいずれかを、総容量８０μＬのアッセイ緩衝液（ＲＰＭＩ １６４０＋１％ＦＣＳ）中で加えた。抗体の５倍連続希釈を５μｇ／ｍｌから開始して試験した。
【0336】
３７℃の加湿ＣＯ２インキュベータ内で６時間インキュベートした後、プレートをインキュベータから取り出し、１０分間室温に平衡化した。産生されたルシフェラーゼの量を、Ｂｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して（Ｔ細胞活性化の尺度として）定量し、８０μｌのＢｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ試薬を各ウェルに添加し、プレートを室温で１０分間インキュベートした。ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ Ｐｌｕｓ（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）を使用して発光を定量化した。図２Ｂに示すように、ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄは、ＮＦＡＴ誘導性発光シグナルによって評価した場合、Ｔ細胞活性化を最大８４％阻害し、ＩＣ５０は０．０２７８ｎＭであった。
【0337】
実施例５：Ｐ２３８Ｄ変異ＰＤ－１抗体は、Ｔ細胞活性化アッセイにおける初代Ｔ細胞活性化の抑制においてＩｇＧ１抗体と同様に有効である
１組の実験では、破傷風トキソイド活性化アッセイを使用して、Ｔ細胞活性化に対する例示的抗体の阻害効果を評価した。健康ドナー由来の全ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（９６ Ｕ底プレートのウェル当たり４００，０００細胞）を、ＰＤ－Ｌ１／２遮断抗体（それぞれ５μｇ／ｍＬ）及び１μｇ／ｍｌのＰＤ－１アゴニスト抗体又はアイソタイプ対照の存在下で破傷風トキソイド（０．５μｇ／ｍＬ）で刺激した。ＩＦＮγ放出を、３７℃、５％ＣＯ２で９６時間インキュベートした後の上清のＥＬＩＳＡによって評価した。６人のドナーを評価し、試験抗体の非存在下で破傷風トキソイドで活性化した細胞において各ドナーをＩＦＮｇレベルに正規化することによってデータを照合した。
１組の実験では、破傷風トキソイド活性化アッセイを使用して、Ｔ細胞活性化に対する例示的抗体の阻害効果を評価した。健康ドナー由来の全ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（９６ Ｕ底プレートのウェル当たり４００，０００細胞）を、ＰＤ－Ｌ１／２遮断抗体（それぞれ５μｇ／ｍＬ）及び１μｇ／ｍｌのＰＤ－１アゴニスト抗体又はアイソタイプ対照の存在下で破傷風トキソイド（０．５μｇ／ｍＬ）で刺激した。ＩＦＮγ放出を、３７℃、５％ＣＯ２で９６時間インキュベートした後の上清のＥＬＩＳＡによって評価した。６人のドナーを評価し、試験抗体の非存在下で破傷風トキソイドで活性化した細胞において各ドナーをＩＦＮｇレベルに正規化することによってデータを照合した。
【0338】
試験した抗体には、Ｐ２３８Ｄ変異したｈｕｍＣＬ１９ｖ１、ｈｕｍＣＬ１９ｖ１の非変異ＩｇＧ１バージョン、及びＰＤ１ＡＢ６（国際公開第２０１７／０５８８５９号）及び抗体１（国際公開第２０１９／１６８７４５号）を含む以前に記載されたＩｇＧ１アイソタイプアゴニスト抗体が含まれた。これらの抗体は、それぞれの特許に提供された配列から組換え生産された。
【0339】
試験したドナー全体で平均すると、破傷風トキソイド（ＴＴ）は、ＴＴを含まないＰＢＭＣ培養物と比較してＩＦＮｇ産生の約２倍の増加を誘導した。ＩｇＧ１アイソタイプ対照は、ＩＦＮｇ産生をわずかに減少させた。ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄ、ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ ＩｇＧ１及びＰＤ１ＡＢ６は全て、アイソタイプ対照と比較してＩＦＮｇ産生を有意に減少させた。ｈｕｍＣＬ１９ｖ１の野生型ＩｇＧ１又はＰ２３８Ｄ変異バージョンの間に有意差はなかった（図３Ａ）。
【0340】
別の一連の実験では、ウイルスペプチド活性化アッセイを使用して、免疫細胞活性化に対する例示的抗体の阻害効果を評価した。健康ドナー由来の全ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（９６ Ｕ底プレートのウェル当たり５００，０００細胞）を、５μｇ／ｍＬのブレフェルジンＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号４２０６０１）及び１μｇ／ｍＬのＰＤ－１抗体又はＰ２３８Ｄ変異ｈＩｇＧ１アイソタイプ対照の存在下、又は抗体なしで、２μｇ／ｍＬのＣＥＦ ＨＬＡクラスＩペプチド（サイトメガロウイルス、エプスタイン・バー・ウイルス及びインフルエンザ由来のペプチドのプールされた混合物、Ｍａｂｔｅｃｈ ｃａｔ＃３６１８－１）で刺激した。ＣＤ８ Ｔ細胞集団内のＩＦＮγ産生細胞のパーセンテージを、３７℃、５％ＣＯ２での１６時間のインキュベーション後に細胞内フローサイトメトリを用いて評価した。１８人のドナーを評価した。以下の式を使用して各ドナーを正規化することによってデータを照合した：
（抗体の存在下でのサイトカイン産生－非刺激バックグラウンド）／（抗体なしの刺激細胞でのサイトカイン産生－非刺激バックグラウンド）。
（抗体の存在下でのサイトカイン産生－非刺激バックグラウンド）／（抗体なしの刺激細胞でのサイトカイン産生－非刺激バックグラウンド）。
【0341】
試験したドナー全体で平均すると、ＣＥＦペプチドは、ＣＥＦペプチドを含まないＰＢＭＣ培養物と比較して、ＣＤ８ ＩＦＮｇ産生Ｔ細胞の４倍の増加を誘導した。ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄは、抗体なし対照と比較してＩＦＮｇを平均で６３％有意に減少させた。（図３Ｂ）。
【0342】
実施例６：Ｐ２３８Ｄ変異ＰＤ－１抗体は抗ＣＤ３／２８活性化アッセイにおいて初代Ｔ細胞活性化を抑制する際にＩｇＧ１抗体と同様に有効である
健康ドナー由来の全ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（９６ Ｕ底プレートのウェル当たり１００，０００細胞）を、１μｇ／ｍｌ ＰＤ－１アゴニスト抗体又はアイソタイプ対照の存在下で可溶性抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体（それぞれの最終濃度０．５ｎｇ／ｍＬ）で刺激した。ＣＤ４ Ｔ細胞上のＣＤ２５発現を、３７℃、５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした後のＴ細胞活性化のマーカーとしてフローサイトメトリによって評価した。試験抗体の非存在下で抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８で活性化された細胞では、各ドナーをＣＤ２５ジオメアンに正規化することによって、複数のドナーからデータを照合した。
健康ドナー由来の全ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（９６ Ｕ底プレートのウェル当たり１００，０００細胞）を、１μｇ／ｍｌ ＰＤ－１アゴニスト抗体又はアイソタイプ対照の存在下で可溶性抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体（それぞれの最終濃度０．５ｎｇ／ｍＬ）で刺激した。ＣＤ４ Ｔ細胞上のＣＤ２５発現を、３７℃、５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした後のＴ細胞活性化のマーカーとしてフローサイトメトリによって評価した。試験抗体の非存在下で抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８で活性化された細胞では、各ドナーをＣＤ２５ジオメアンに正規化することによって、複数のドナーからデータを照合した。
【0343】
試験した抗体には、ＰＤ１ＡＢ６（国際公開第２０１７／０５８８５９号）及び抗体１（国際公開第２０１９／１６８７４５号）を含む以前に記載されているＰ２３８Ｄ変異ｈｕｍＣＬ１９ｖ１及びＩｇＧ１アゴニスト抗体が含まれた。これらの抗体は、それぞれの特許に提供された配列から組換え生産された。
【0344】
抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８は、試験した全てのＰＤ－１抗体によって有意に阻害されたＣＤ２５発現の有意な増加をもたらした（図４）。
【0345】
実施例７：ＩｇＧ１アイソタイプ抗ＰＤ－１抗体はインビトロで制御性Ｔ細胞のＡＤＣＣ殺傷をもたらすが、Ｐ２３８Ｄ変異ＰＤ－１抗体はそれをもたらさない
インビトロＮＫ細胞脱顆粒アッセイを使用して、ＡＤＣＣによって制御性Ｔ細胞を枯渇させる抗ＰＤ－１抗体の可能性を研究した。Ｍｉｌｔｅｎｙｉ製のヒトＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ／－制御性Ｔ細胞単離キットＩＩ（カタログ番号１３０－０９４－７７５）を使用して、健康ドナーのＰＢＭＣからの磁気単離によってＴｒｅｇを精製した。Ｍｉｌｔｅｎｙｉ製のヒトＮＫ単離キット（カタログ番号１３０－０９２－６５７）を使用してＮＫ細胞を同様に精製した。
インビトロＮＫ細胞脱顆粒アッセイを使用して、ＡＤＣＣによって制御性Ｔ細胞を枯渇させる抗ＰＤ－１抗体の可能性を研究した。Ｍｉｌｔｅｎｙｉ製のヒトＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１２７ｄｉｍ／－制御性Ｔ細胞単離キットＩＩ（カタログ番号１３０－０９４－７７５）を使用して、健康ドナーのＰＢＭＣからの磁気単離によってＴｒｅｇを精製した。Ｍｉｌｔｅｎｙｉ製のヒトＮＫ単離キット（カタログ番号１３０－０９２－６５７）を使用してＮＫ細胞を同様に精製した。
【0346】
２０，０００個の単離されたＮＫ細胞を、１ｕｇ／ｍｌの異なる抗ＰＤ－１抗体又はＩｇＧ１アイソタイプ対照を含む９６ウェルＵ底プレートにウェル当たりプレーティングした。試験した抗体には、Ｐ２３８Ｄ変異したｈｕｍＣＬ１９ｖ１、ｈｕｍＣＬ１９ｖ１の非変異ＩｇＧ１バージョン、並びにＰＤ１Ｂ１０９４（国際公開第２０１８／２２６５８０号）及び抗体１（国際公開第２０１９／１６８７４５号）を含む以前に記載されたＩｇＧ１アイソタイプアゴニスト抗体が含まれた。これらの抗体は、それぞれの特許出願で提供された配列から組換え生産された。
【0347】
ウェル当たり１００，０００個のＴｒｅｇ細胞を添加して、１：５のエフェクタ：標的比を得た。最後に、抗ＣＤ１０７ａ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ＃３２８６３８）を、モネンシン（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ＃４２０７０１）及びブレフェルジン（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ＃４２０６０１）と共に、１００分の１の最終希釈のために各ウェルに添加して、それぞれの最終１ｘ濃度を得た。最終ウェル体積は２００μｌであった。アッセイを５％ＣＯ２中３７℃で６時間インキュベートした。次いで、アッセイを、ＣＤ３、死細胞マーカー、及びＣＤ５６を含む抗体パネルで染色し、１％ホルムアルデヒドで固定し、フローサイトメトリによって評価した。生成されたデータをＦｌｏｗＪｏ Ｖ１０で分析した。脱顆粒化ＮＫ細胞をＣＤ１０７＋ＣＤ５６＋細胞として同定した。死滅Ｔｒｅｇ細胞を、死滅細胞マーカーに対して陽性のＣＤ３＋細胞として同定した。
【0348】
ＩｇＧ１アイソタイプ抗ＰＤ－１抗体は、ＮＫ細胞脱顆粒の有意な活性化をもたらした（図５）。Ｐ２３８Ｄ変異ｈｕｍＣＬ１９ｖ１は、ＮＫ細胞の脱顆粒又はＴｒｅｇ死を引き起こさなかった。
【0349】
実施例８：ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄは高レベルのＰＤ－Ｌ１の存在下でＴ細胞活性化を更に阻害することができるが、他のＰＤ－１アゴニスト抗体は阻害しない
ＰＤ－１レポーター細胞株を使用して、ＰＤ－Ｌ１が高度に発現される状況では、以前に記載されたＰＤ－１アゴニスト抗体と比較して、Ｐ２３８Ｄ変異ｈｕｍＣＬ１９ｖ１の影響を評価した。
ＰＤ－１レポーター細胞株を使用して、ＰＤ－Ｌ１が高度に発現される状況では、以前に記載されたＰＤ－１アゴニスト抗体と比較して、Ｐ２３８Ｄ変異ｈｕｍＣＬ１９ｖ１の影響を評価した。
【0350】
Ｔ細胞刺激因子構築物（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ番号Ｊ１２５０ａ）を発現するＰＤ－Ｌ１発現ＣＨＯＫ１細胞を４０，０００細胞／ウェルで９６ウェル平底プレートに播種し、一晩インキュベートしてプレートに接着させた。翌日、上清を除去し、ＮＦＡＴ応答エレメントの制御下でルシフェラーゼを発現する５０，０００個のＰＤ－１発現Ｊｕｒｋａｔレポーター細胞をＰＤ－１抗体又はアイソタイプ対照と一緒に添加した。ＰＤ－１抗体の用量滴定を、１０ｕｇ／ｍｌから８０μｌの総容量まで４倍希釈を用いて評価した。３７℃で６時間インキュベートした後、８０μｌのＢｉｏ－Ｇｌｏをウェル当たり添加し、１５分間インキュベートし、次いでホタルルシフェラーゼ設定を使用してＣｌａｒｉｏｓｔａｒプレートリーダーで読み取ってルシフェラーゼ産生を定量した。
【0351】
試験した抗体には、ＰＤ１ＡＢ６（国際公開第２０１７／０５８８５９号）、ＰＤ１Ｂ１０９４（国際公開第２０１８／２２６５８０号）、抗体１（国際公開第２０１９／１６８７４５号）及びＡＮＢ０３０（国際公開第２０２０／２４７６２８号）を含む、以前に記載されたＰ２３８Ｄ変異ｈｕｍＣＬ１９ｖ１及びＩｇＧ１アイソタイプアゴニスト抗体が含まれた。これらの抗体は、それぞれの特許に提供された配列から組換え生産された。対照として、ＰＤ－１遮断抗体ニボルマブのバイオシミラーも評価した。
【0352】
予想通り、ニボルマブは、ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との相互作用を遮断することによって、Ｔ細胞活性化の有意な用量応答性増加をもたらした。予想外にも、Ｐ２３８Ｄ変異型ｈｕｍＣＬ１９ｖ１抗体のみが、（ＰＤ－１とのＰＤ－Ｌ１相互作用によって既に提供された阻害を超えて）Ｔ細胞活性化を更に抑制する能力を示した。試験した他のＰＤ－１抗体はいずれもＴ細胞活性化に影響を及ぼさなかった（図６）。
【0353】
実施例９：ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄは、ＲＡ ＰＢＭＣ、線維芽細胞共培養物におけるＴ細胞活性化を阻害することができる
関節リウマチ（ＲＡ）患者由来のＴ細胞に対するＰＤ－１アゴニストの影響を試験するために、ＲＡを有する４名のドナー由来のＰＢＭＣを、ＲＡ線維芽細胞様滑膜細胞（Ｔｅｂｕ－ｂｉｏ＃４０８ＲＡＫ－０５ａからのＦＬＳ）との共培養環境において活性化した。線維芽細胞などの間質細胞はＰＤ－Ｌ１及びＰＤＬ－２を発現するので、このアッセイはＰＤ－１のリガンドが存在する生理学的状況を表す（Ｄｅｚｕｔｔｅｒ－Ｄａｍｂｕｙａｎｔ ｅｔ ａｌ．２０１６）。
関節リウマチ（ＲＡ）患者由来のＴ細胞に対するＰＤ－１アゴニストの影響を試験するために、ＲＡを有する４名のドナー由来のＰＢＭＣを、ＲＡ線維芽細胞様滑膜細胞（Ｔｅｂｕ－ｂｉｏ＃４０８ＲＡＫ－０５ａからのＦＬＳ）との共培養環境において活性化した。線維芽細胞などの間質細胞はＰＤ－Ｌ１及びＰＤＬ－２を発現するので、このアッセイはＰＤ－１のリガンドが存在する生理学的状況を表す（Ｄｅｚｕｔｔｅｒ－Ｄａｍｂｕｙａｎｔ ｅｔ ａｌ．２０１６）。
【0354】
平らな９６ウェルプレートでは、１０，０００個のＦＬＳ細胞を５０μｌの培地に蒔き、２時間接着させたままにした。次いで、１００，０００個のＰＢＭＣを５０μｌの培地に添加した。抗ＰＤ－１抗体（ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄ又はＷＯ ２０１９／１６８７４５ Ａ１からの抗体１）又はアイソタイプ対照を５０μｌの培地に１μｇ／ｍｌの最終濃度で加えた。最後に、抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８（クローンＣＤ２８．２）をそれぞれ０．５ｎｇ／ｍｌの最終濃度で５０μｌの培地に添加した。３７℃で３日間インキュベートした後、５％ＣＯ２上清を回収し、サイトメトリービーズアレイ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ Ｔｈ１７パネル番号７４１０３２）によって評価し、細胞をマーカーＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ２５及びＩＣＯＳを用いてフローサイトメトリによって評価した。アゴニストｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄは、ＣＤ２５（図７Ａ）及びＩＣＯＳ（図７Ｂ）を含むＣＤ４ Ｔ細胞上のＴ細胞活性化マーカーの有意な減少、並びにＩＦＮｇ（図７Ｃ）、ＩＬ１７Ｆ（図７Ｄ）及びＴＮＦα（図７Ｅ）を含む炎症性サイトカイン産生の有意な減少をもたらした。参照アゴニスト抗体１は、これらの読み出しのいずれにも有意な影響を及ぼさなかった。これらのデータは、ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄが、ＰＤ－１のリガンドが発現される状況では活性であり得るが、他の記載されたＰＤ－１アゴニストは、これらの状況では無効であり得ることを示唆している。
【0355】
実施例１０．ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄは、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１との相互作用を増強する
ＰＤ－１発現細胞へのＰＤ－Ｌ１の結合を、種々のＰＤ－１抗体の存在下で評価した。ＰＤ－１発現Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を、ＰＤ－１抗体又はアイソタイプ対照と共に、氷上で１０μｇ／ｍｌの濃度で１時間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、コンジュゲーションキット（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ番号Ａ２０１８６）を使用してＡＦ６４７にコンジュゲートさせた漸増濃度のＰＤＬ１－Ｆｃ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号７６２５０６）と共に３０分間インキュベートした。次いで、細胞を再度洗浄し、フローサイトメトリによって評価した。ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄとプレインキュベートした細胞は、抗体なし、アイソタイプ対照又は他の記載されたＰＤ－１抗体でプレインキュベートした細胞よりもＰＤＬ１－Ｆｃでより明るい染色を示した（図８）。ニボルマブとプレインキュベートした細胞は、そのリガンドブロッキングエピトープのために予想されるようにＰＤＬ１－Ｆｃへの結合を示さなかった。これらのデータは、ＰＤ－１へのｈｕｍＣＬ１９ｖ１の結合がＰＤ－Ｌ１とのその相互作用を増強することを示唆している。
ＰＤ－１発現細胞へのＰＤ－Ｌ１の結合を、種々のＰＤ－１抗体の存在下で評価した。ＰＤ－１発現Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を、ＰＤ－１抗体又はアイソタイプ対照と共に、氷上で１０μｇ／ｍｌの濃度で１時間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、コンジュゲーションキット（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ番号Ａ２０１８６）を使用してＡＦ６４７にコンジュゲートさせた漸増濃度のＰＤＬ１－Ｆｃ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号７６２５０６）と共に３０分間インキュベートした。次いで、細胞を再度洗浄し、フローサイトメトリによって評価した。ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄとプレインキュベートした細胞は、抗体なし、アイソタイプ対照又は他の記載されたＰＤ－１抗体でプレインキュベートした細胞よりもＰＤＬ１－Ｆｃでより明るい染色を示した（図８）。ニボルマブとプレインキュベートした細胞は、そのリガンドブロッキングエピトープのために予想されるようにＰＤＬ１－Ｆｃへの結合を示さなかった。これらのデータは、ＰＤ－１へのｈｕｍＣＬ１９ｖ１の結合がＰＤ－Ｌ１とのその相互作用を増強することを示唆している。
【0356】
実施例１１ＰＤ－１アゴニストによって下方制御される遺伝子は自己免疫に関連する
実施例１に記載されるものと同様の方法を使用して、クローン１９によるＰＤ－１アゴニズムの転写シグネチャーを定義した。１０μｇ／ｍｌの試験抗体を含有する１ｍｌのアッセイ緩衝液（ＲＰＭＩ １％ＦＣＳ）中の６ウェル平底プレートの１ウェル当たり１．５百万個のＰＤ－１発現レポーターＪｕｒｋａｔを添加し、次いで、１ｍｌのアッセイ緩衝液中で１５０万個のＦｃＲ発現刺激因子細胞を添加した（５μｇ／ｍｌの最終抗体濃度を生成するため）。静止試料については、１５０万個のＪｕｒｋａｔを２ｍｌのアッセイバッファー中で空のウェルに添加した。全ての条件を６回の技術的反復で実施した。全ての試料を３７℃で１８時間インキュベートした。次いで、各試料からの８０μｌの細胞をルシフェラーゼ評価（実施例１に記載）のために白色９６ウェルプレートに移し（図９Ａ）、８０μｌをフローサイトメトリ評価のために９６ウェルプレートに移し、次いで、残りの試料刺激因子細胞から、ＭｏｊｏｓｏｒｔマウスＣＤ４５ナノビーズ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ＃４８００２８）を使用したネガティブ選択によって細胞を枯渇させた。残りの細胞から、８０μｌをフローサイトメトリ評価のために９６ウェルプレートに移してＪｕｒｋａｔ細胞純度を確認した（図９Ｂ）。残りを遠心分離によってペレット化し、上清を吸引し、次いで－８０で細胞を凍結した。試料当たり少なくとも２０Ｍリードの配列決定深度目標を有する鎖状ライブラリ調製プロトコルを使用して、ＧｅｎｅＷｉｚで試料をＲＮＡ抽出及び配列決定した。
実施例１に記載されるものと同様の方法を使用して、クローン１９によるＰＤ－１アゴニズムの転写シグネチャーを定義した。１０μｇ／ｍｌの試験抗体を含有する１ｍｌのアッセイ緩衝液（ＲＰＭＩ １％ＦＣＳ）中の６ウェル平底プレートの１ウェル当たり１．５百万個のＰＤ－１発現レポーターＪｕｒｋａｔを添加し、次いで、１ｍｌのアッセイ緩衝液中で１５０万個のＦｃＲ発現刺激因子細胞を添加した（５μｇ／ｍｌの最終抗体濃度を生成するため）。静止試料については、１５０万個のＪｕｒｋａｔを２ｍｌのアッセイバッファー中で空のウェルに添加した。全ての条件を６回の技術的反復で実施した。全ての試料を３７℃で１８時間インキュベートした。次いで、各試料からの８０μｌの細胞をルシフェラーゼ評価（実施例１に記載）のために白色９６ウェルプレートに移し（図９Ａ）、８０μｌをフローサイトメトリ評価のために９６ウェルプレートに移し、次いで、残りの試料刺激因子細胞から、ＭｏｊｏｓｏｒｔマウスＣＤ４５ナノビーズ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ＃４８００２８）を使用したネガティブ選択によって細胞を枯渇させた。残りの細胞から、８０μｌをフローサイトメトリ評価のために９６ウェルプレートに移してＪｕｒｋａｔ細胞純度を確認した（図９Ｂ）。残りを遠心分離によってペレット化し、上清を吸引し、次いで－８０で細胞を凍結した。試料当たり少なくとも２０Ｍリードの配列決定深度目標を有する鎖状ライブラリ調製プロトコルを使用して、ＧｅｎｅＷｉｚで試料をＲＮＡ抽出及び配列決定した。
【0357】
ＧｅｎｅＷｉｚからのＲＮＡ配列決定ファイルを、ｎｆコア内のｒｎａｓｅｑ（ｖ３．１）Ｎｅｘｔｆｌｏｗパイプラインを用いて処理した。ＦａｓｔＱＣを使用して配列決定の質を確認し、Ｓａｌｍｏｎを使用してヒトゲノムに対する転写物を列挙した（ＧＲＣｈ３８ ｖ９６）。推定された転写物存在量から遺伝子カウントを生成するためにｔｘｉｍｐｏｒｔを使用し、群間で差次的発現を実施するためにＤＥＳｅｑ２を使用し（追加の共変量を調整せずに）、群間で発現が有意に高い又は低い遺伝子セットについて遺伝子セット濃縮分析を実施するためにＥｎｒｉｃｈＲパッケージを使用して、その後の全ての分析を実施するために社内の差次的発現パイプラインを使用した。Ｅｎｒｉｃｈｒを介して様々な異なる遺伝子セットデータベースを使用する。有意に高い又は低い遺伝子セットは、遺伝子ＦＤＲ正しいｐ値が０．０５未満であったＤＥＳｅｑ２分析におけるそれらのｌｏｇ倍数変化に基づいて定義された群である。アイソタイプ対照の存在下での活性化と比較して、ＰＤ－１アゴニストの存在下で活性化された細胞では、１２２７個の遺伝子が有意に下方制御された（図９Ｃ）。この下方制御された遺伝子の集合をＥＢＩ ＧＷＡＳカタログにマッピングすることにより、自己免疫疾患、特に血清陽性関節リウマチに関連する遺伝子の濃縮が明らかになった（図９Ｄ）。これらのデータは、ＰＤ－１経路の抗体アゴニズムが、自己免疫に関連する炎症遺伝子経路を下方制御し得ることを示唆する。
【0358】
実施例１２．全身性エリテマトーデスのマウスモデルの治療
ＳＬＥ疾患モデルの治療における例示的抗体クローン１９の有効性を、Ｈ２－Ａｂ１ｂｍ１２レシピエントマウスにおいてヒト化ＰＤ－１マウスからの部分的ＭＨＣ－ＩＩミスマッチ脾細胞の移入によって疾患が誘導される移入モデルにおいて試験した。全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、自己寛容の破壊並びにクロマチン及びＤＮＡなどの核抗原に対する自己抗体の産生を特徴とする慢性自己免疫疾患である。腎臓及び皮膚を含む様々な器官における免疫複合体の沈着は、多様な臨床症状をもたらす。妊娠可能年齢の女性、及びアフリカ系アメリカ人、アジア人、スペイン人、及びネイティブアメリカ人を含む特定の民族において頻度が増加した人口の約０．１％に発症する可能性がある（Ｉｚｍｉｒｌｙ ｅｔ ａｌ．，２０２１）。既存の治療法には、抗炎症剤及びコルチコステロイドなどの免疫抑制剤が含まれ、これらは症状の管理に役立ち得るが、疾患の治療法はなく、より効果的な治療法が依然として必要とされている。
ＳＬＥ疾患モデルの治療における例示的抗体クローン１９の有効性を、Ｈ２－Ａｂ１ｂｍ１２レシピエントマウスにおいてヒト化ＰＤ－１マウスからの部分的ＭＨＣ－ＩＩミスマッチ脾細胞の移入によって疾患が誘導される移入モデルにおいて試験した。全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、自己寛容の破壊並びにクロマチン及びＤＮＡなどの核抗原に対する自己抗体の産生を特徴とする慢性自己免疫疾患である。腎臓及び皮膚を含む様々な器官における免疫複合体の沈着は、多様な臨床症状をもたらす。妊娠可能年齢の女性、及びアフリカ系アメリカ人、アジア人、スペイン人、及びネイティブアメリカ人を含む特定の民族において頻度が増加した人口の約０．１％に発症する可能性がある（Ｉｚｍｉｒｌｙ ｅｔ ａｌ．，２０２１）。既存の治療法には、抗炎症剤及びコルチコステロイドなどの免疫抑制剤が含まれ、これらは症状の管理に役立ち得るが、疾患の治療法はなく、より効果的な治療法が依然として必要とされている。
【0359】
疾患の改善におけるクローン１９の有効性を、ＳＬＥのマウスモデルにおいて試験した。疾患が、ドナーｂｍ１２マウスからＣ５７ＢＬ／６レシピエントマウスへの、又はその逆の未分画脾細胞の移入によって誘導されるＳＬＥの移入モデルが以前に記載されている（Ｋｌａｒｑｕｉｓｔ ＆ Ｊａｎｓｓｅｎ，２０１５）。Ｂｍ１２マウスは、ＭＨＣクラスＩＩ抗原Ｈ－２Ａにおいて３アミノ酸がＣ５７ＢＬ／６マウスと異なる。このＭＨＣミスマッチは、ドナーＣＤ４ Ｔ細胞が活性化され、濾胞性ヘルパー細胞（Ｔｆｈ）に分化し、自己抗体の産生を伴う胚中心形成を推進する同種異系応答をもたらす。抗ヒトＰＤ－１アゴニスト抗体Ｃｌｏｎｅ １９の評価を可能にするために、ＰＤ－１遺伝子座でヒト化されたＣ５７ＢＬ／６マウスにドナー脾細胞を誘導する適合プロトコルを使用した。これらのマウスは、Ｂｉｌｌｕｒ Ａｋｋａｙａの博士論文（Ａｋｋａｙａ、２０１２年）に以前に記載され、特徴付けられている。これは、いくつかの疾患を伝播する免疫細胞（レシピエントのＢ細胞など）はヒトＰＤ－１を発現しないが、疾患開始Ｔ細胞が抗ヒト抗体で標的化可能であるモデルを提供する。
【0360】
ＰＤ－１遺伝子座でヒト化したドナーＣ５７ＢＬ／６マウスを屠殺し、脾臓をＲＰＭＩ培地＋２％ＦＣＳ＋Ｐ／Ｓ／Ｎに採取した。ｂｍ１２マウスも屠殺して、疾患のない対照用のドナー脾細胞を提供した。５ｍｌシリンジのプランジャーを用いて７０μＭナイロン細胞ストレーナーでプレスすることによって、脾臓を単一細胞懸濁液に加工した。次いで、細胞をペレット化し、２億細胞／ｍｌの濃度でＰＢＳに再懸濁した。次いで、２００μｌのこの細胞懸濁液をレシピエントマウス当たり腹腔内注射した（マウス当たり４０００万細胞）。成体ｂｍ１２マウス（Ｊａｘストック番号：００１１６）をレシピエントとして使用した。雌レシピエントは雌ドナーから細胞を受け、雄レシピエントは雄ドナーから細胞を受けた。試験抗体及び対照抗体を滅菌ＰＢＳで１ｍｇ／ｍｌに希釈し、ＩＰ注射した。ケージ効果の混乱を避けるために、群をケージ間に分配した。デキサメタゾンを飲料水で対照群に投与した（したがって、これらのマウスを同じケージに群分けしなければならなかった）。約０．５ｍｇ／ｋｇ／日を提供するために、０．２ｍｌ／ｇの平均１日摂取量が想定された。デキサメタゾンを最初に１００％エタノール中１０ｍｇ／ｍｌで再構成し、次いで飲料水で２．５μｇ／ｍｌ（４０００分の１）に希釈した。
【0361】
第１の研究では、細胞移入後１及び２２日目に、マウスに２００μｇの試験抗体又はｍＩｇＧ１アイソタイプ対照を腹腔内投与した。対照群には、１日目から３５日目の終了まで飲料水中デキサメタゾンを投与した。血清自己抗体ＥＬＩＳＡについては２２日目及び研究を終了した３５日目に、尾静脈静脈静脈採血前投与によってマウスから採血した。脾臓も収集し、フローサイトメトリによって評価して、ドナーＴｆｈ細胞（ＣＤ４＋ＣＸＣＲ５＋ＩＣＯＳ＋細胞としてゲートされる）の増殖を含む免疫細胞増殖を定量化した。クローン１９は、自己抗体レベル（図１０Ａ～図１０Ｂ）、Ｔｆｈ頻度（図１０Ｃ）又は脾腫（図１０Ｄ）によって評価されるように、疾患のほぼ完全な予防をもたらした。効果の大きさは、研究を通して投与されたデキサメタゾンと同等であった。未治療マウス間には高度の変動性があり、いくつかはドナー細胞を生着させることができなかった。効果の大きさは、研究を通して投与されたデキサメタゾンと同等であった。
【0362】
別の実験では、クローン１９を異なる時点で投与し、０日目の投与は、ドナーＴｆＨの拡大を再び完全に防止し、疾患発症の他のマーカーを有意に減少させた（図１１Ａ～１１Ｂ）。１４日目の投与は、疾患マーカーの部分的な減少をもたらした。２８日目（３０日目の研究終了前）の投与は、Ｔｆｈ細胞頻度を含むいかなるマーカーの有意な減少ももたらさなかった。Ｔｆｈ細胞は高レベルのヒトＰＤ－１を発現するので、クローン１９がＡＤＣＣ又はＣＤＣを介して枯渇抗体として作用していた場合、この４８時間の時間枠内で有意に枯渇すると予想される。
【0363】
実施例１３．ＰＤ－１アゴニストはヒト化マウスにおける遅延型過敏反応を阻害する
ＰＤ－１遺伝子座でヒト化されたＣ５７ＢＬ／６マウスを使用して、自己免疫性皮膚疾患に関連する皮膚チャレンジモデルにおける遅延型過敏反応に対するＰＤ－１アゴニストであるクローン１９の影響を評価した。０日目に、マウスを完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）で免疫した。エマルジョンは、ＰＢＳ中のＫＬＨ（Ｓｉｇｍａ）の混合物であり、ＣＦＡ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に１：１の比で添加した。ＫＬＨの最終濃度は４ｍｇ／ｍＬであった。動物を、１～２つの部位に皮下注射された１００μＬの免疫化エマルジョンで免疫化した。抗原刺激されていない対照群にはＰＢＳのみを投与した。０日目にも、マウスを、免疫化の１時間前に、１０ｍｇ／ｋｇの単回用量で、ｍＩｇＧ１アイソタイプ対照（クローンＭｏｐｃ２１）又は抗ＰＤ－１クローン１９ ｍＩｇＧ１のいずれかで腹腔内治療した。抗原刺激されていない対照群にはＰＢＳのみを投与した。陽性治療対照群の動物を、０～５日目から１日１回、３ｍｇ／ｋｇの用量のＣｓＡで経口胃管栄養法によって治療した。ＣｓＡを調製するために、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｏｒａｌ溶液（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を０．５％メチルセルロース４００ｃｐ（Ｓｉｇｍａ）で０．３ｍｇ／ｍｌに希釈した。免疫化の５日後、マウスを２０μＬの４ｍｇ／ｍＬ抗原溶液で（麻酔下で）左耳の耳介にチャレンジした。非チャレンジ対照群には、左耳の耳介に２０μＬのＰＢＳを投与した。耳チャレンジの１日後、耳の厚さをデジタルキャリパーを使用して測定した。耳の厚さを測定した後、動物を人道的に屠殺し、死後、全群の各動物の左右の耳から生検パンチを使用して直径８ｍｍの円を切断した。正確な分析天秤で耳を秤量した。耳浮腫を、左（抗原刺激）耳重量と右（対照）耳重量との差として評価した。ＰＤ－１アゴニストのクローン１９は、耳腫大を有意に阻害した（図１２Ａ）。
ＰＤ－１遺伝子座でヒト化されたＣ５７ＢＬ／６マウスを使用して、自己免疫性皮膚疾患に関連する皮膚チャレンジモデルにおける遅延型過敏反応に対するＰＤ－１アゴニストであるクローン１９の影響を評価した。０日目に、マウスを完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）で免疫した。エマルジョンは、ＰＢＳ中のＫＬＨ（Ｓｉｇｍａ）の混合物であり、ＣＦＡ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に１：１の比で添加した。ＫＬＨの最終濃度は４ｍｇ／ｍＬであった。動物を、１～２つの部位に皮下注射された１００μＬの免疫化エマルジョンで免疫化した。抗原刺激されていない対照群にはＰＢＳのみを投与した。０日目にも、マウスを、免疫化の１時間前に、１０ｍｇ／ｋｇの単回用量で、ｍＩｇＧ１アイソタイプ対照（クローンＭｏｐｃ２１）又は抗ＰＤ－１クローン１９ ｍＩｇＧ１のいずれかで腹腔内治療した。抗原刺激されていない対照群にはＰＢＳのみを投与した。陽性治療対照群の動物を、０～５日目から１日１回、３ｍｇ／ｋｇの用量のＣｓＡで経口胃管栄養法によって治療した。ＣｓＡを調製するために、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ Ｎｅｏｒａｌ溶液（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を０．５％メチルセルロース４００ｃｐ（Ｓｉｇｍａ）で０．３ｍｇ／ｍｌに希釈した。免疫化の５日後、マウスを２０μＬの４ｍｇ／ｍＬ抗原溶液で（麻酔下で）左耳の耳介にチャレンジした。非チャレンジ対照群には、左耳の耳介に２０μＬのＰＢＳを投与した。耳チャレンジの１日後、耳の厚さをデジタルキャリパーを使用して測定した。耳の厚さを測定した後、動物を人道的に屠殺し、死後、全群の各動物の左右の耳から生検パンチを使用して直径８ｍｍの円を切断した。正確な分析天秤で耳を秤量した。耳浮腫を、左（抗原刺激）耳重量と右（対照）耳重量との差として評価した。ＰＤ－１アゴニストのクローン１９は、耳腫大を有意に阻害した（図１２Ａ）。
【0364】
別の実験では、マウスを免疫化の０、１時間前に、１０、１、０．１、又は０．０１ｍｇ／ｋｇのクローン１９のいずれかで腹腔内治療した。この試験では、ＣＴＬＡ－Ｉｇ融合タンパク質（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号５９１９０８）を陽性対照として使用し、０日目の免疫化の１時間前に１０ｍｇ／ｋｇ ＩＰの用量で投与した。１０ｍｇ／ｋｇ又は１ｍｇ／ｋｇの用量のクローン１９は、ＣＴＬＡ４－Ｉｇの効果に匹敵する、耳腫大の有意な阻害をもたらした（図１２Ｂ）。
【0365】
実施例１４．ＰＤ－１アゴニストはマウスモデルにおいて移植片対宿主病の症状を改善する
１組の実験では、ヒトＰＢＭＣ主導移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）に対するｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄの影響をインビボで決定した。簡潔には、およそ８～１０週齢の雌ＮＳＧマウス（ＪＡＸ Ｌａｂｓ、ストック番号０５５５７）に２．４Ｇｙの全身照射を行った（－１日目）。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｋ）（Ｔｉｓｓｕｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓから注文したＨｅｍａＣａｒｅ製品）から単離し、１ｍｌのＰＢＳ当たり２５×１０６細胞で再懸濁した。マウスに、２００μｌの細胞懸濁液（５×１０６個のＰＢＭＣ）を、照射１日後（０日目）に尾部注射によって静脈内（ＩＶ）注射した。０日目、並びに７、１４及び２１日目にも、マウスを腹腔内注射によって１０ｍｇ／ｋｇのｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄ又はＰ２３８Ｄ変異ｈＩｇＧ１アイソタイプ対照で治療した。マウスを定期的に体重測定し、１５％体重減少したとき又は２８日後に安楽死させた。研究終了時に、サイトメトリービーズアレイによる炎症性サイトカインの評価のために末梢血を採取した。脾臓を秤量し、ヒトＰＢＭＣの肝臓及び脾臓への浸潤を、ｈＣＤ４５、ｈＣＤ４、ｈＣＤ８、ｈＣＤ２０、ｈＣＤ２５及びＦＯＸＰ３に対するマーカーを使用してフローサイトメトリによって定量化した。脾臓及び肝臓におけるＣＤ８及びＣＤ４ Ｔ細胞によるＩＦＮｇの産生も、細胞内フローサイトメトリによって評価した。
１組の実験では、ヒトＰＢＭＣ主導移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）に対するｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄの影響をインビボで決定した。簡潔には、およそ８～１０週齢の雌ＮＳＧマウス（ＪＡＸ Ｌａｂｓ、ストック番号０５５５７）に２．４Ｇｙの全身照射を行った（－１日目）。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｋ）（Ｔｉｓｓｕｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓから注文したＨｅｍａＣａｒｅ製品）から単離し、１ｍｌのＰＢＳ当たり２５×１０６細胞で再懸濁した。マウスに、２００μｌの細胞懸濁液（５×１０６個のＰＢＭＣ）を、照射１日後（０日目）に尾部注射によって静脈内（ＩＶ）注射した。０日目、並びに７、１４及び２１日目にも、マウスを腹腔内注射によって１０ｍｇ／ｋｇのｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄ又はＰ２３８Ｄ変異ｈＩｇＧ１アイソタイプ対照で治療した。マウスを定期的に体重測定し、１５％体重減少したとき又は２８日後に安楽死させた。研究終了時に、サイトメトリービーズアレイによる炎症性サイトカインの評価のために末梢血を採取した。脾臓を秤量し、ヒトＰＢＭＣの肝臓及び脾臓への浸潤を、ｈＣＤ４５、ｈＣＤ４、ｈＣＤ８、ｈＣＤ２０、ｈＣＤ２５及びＦＯＸＰ３に対するマーカーを使用してフローサイトメトリによって定量化した。脾臓及び肝臓におけるＣＤ８及びＣＤ４ Ｔ細胞によるＩＦＮｇの産生も、細胞内フローサイトメトリによって評価した。
【0366】
上記の手順に従って、ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄは、アイソタイプ対照と比較して、脾臓重量（図１３Ａ）、脾臓（図１３Ｂ）及び肝臓（図１３Ｃ）におけるヒト免疫細胞増殖、並びに血清炎症性サイトカインレベル（図１３Ｄ）を有意に減少させた。更に、全体的なサイトカインレベルを減少させることに加えて、ｈｕｍＣＬ１９ｖ１ Ｐ２３８Ｄはまた、肝臓及び脾臓におけるヒト免疫細胞の細胞内フローサイトメトリによって評価されるように、細胞当たりのベースでＣＤ４及びＣＤ８サイトカイン産生を減少させた（図１３Ｅ）。
【0367】
本開示の好ましい実施形態を本明細書に示し説明してきたが、そのような実施形態が例としてのみ提供されることは当業者には明らかであろう。本開示から逸脱することなく、当業者には多数の変形、変更、及び置換が思い浮かぶであろう。本開示を実施する際に、本開示の実施形態に対する様々な代替形態を使用することができることを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本開示の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法及び構造並びにそれらの均等物がそれによって包含されることが意図される。
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図7E】
【図8】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【図9D】
【図10A】
【図10B】
【図10C】
【図10D】
【図11A】
【図11B】
【図12A】
【図12B】
【図13A】
【図13B】
【図13C】
【図13D】
【図13E】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2024-05-20
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体は、重鎖、及び軽鎖を含み、前記重鎖が重鎖可変領域を含み、
前記軽鎖が軽鎖可変領域を含み、
（ｉ）前記重鎖可変領域が、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３が、それぞれ配列番号１～３に示される配列を含み、
（ｉｉ）前記軽鎖可変領域が、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ配列番号４～６に示される配列を含み、
前記重鎖が、必要に応じてＦｃ領域を含む、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する単離された抗体。
【請求項2】
前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項3】
（ｉ）前記抗体が、免疫細胞の表面上に発現されたＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する；
（ｉｉ）ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間における前記相互作用が、実施例１０に記載されるようなアッセイによって決定される場合に増強される；
（ｉｉｉ）前記抗体が、前記ＩｇＧ１のＦｃ領域を含む他の点では同じ分子と比較して、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少を誘導し、前記抗体が、他の点では同じ分子と比較して、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高い不可知論的効果を有する；
（ｉｖ）前記ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する前記ＡＤＣＣが、実施例７に記載されるナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように低減される；
（ｖ）前記抗体が、実施例７に記載のナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように、前記ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する有意なＡＤＣＣをもたらさない；及び／又は
（ｖｉ）前記抗体が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化しない、請求項１又は２に記載の抗体。
【請求項4】
（ａ）前記重鎖可変領域が、配列番号８のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１３のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む；
（ｂ）前記重鎖が、配列番号１８に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含み、前記軽鎖が、配列番号１９に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む；及び／又は
（ｃ）前記Ｆｃ領域がヒトＩｇＧ１に由来する；あるいは
前記Ｆｃ領域が、配列番号１７に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項5】
（ｉ）前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２及びダイアボディからなる群から選択される構造を形成する；
（ｉｉ）前記抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、前記Ｆｃ領域に作動可能に連結された前記重鎖可変領域を含み、前記軽鎖が、前記軽鎖可変領域を含む；又は
（ｉｉｉ）前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、前記Ｆｃ領域に作動可能に連結された単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）を形成し、
前記抗体が、ヒト化抗体、ヒト抗体であるか、又はヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び多重特異性抗体からなる群から選択される；及び／又は前記抗体が、モノクローナルである、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項6】
前記抗体が、（ｉ）３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、２００ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、８０ｎＭ未満、６０ｎＭ未満又は４０ｎＭ未満；
（ｉｉ）３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、６０ｎＭ未満；又は
（ｉｉｉ）３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、４０ｎＭ未満
のＫＤでヒトＰＤ－１に結合し、必要に応じて
前記抗体が、
（ｉｖ）３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、５０００ｎＭ未満、４０００ｎＭ未満、２０００ｎＭ未満、１０００ｎＭ未満、８００ｎＭ未満、６００ｎＭ未満、５００ｎＭ未満、４００ｎＭ未満、３００ｎＭ未満又は２００ｎＭ未満；
（ｖ）３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、６００ｎＭ未満；又は
（ｖｉ）３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、３００ｎＭ未満
のＫ Ｄ でカニクイザルＰＤ－１に結合し、
必要に応じて前記抗体が、免疫細胞の表面上に発現されるヒトＰＤ－１をアゴナイズし、必要に応じて前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項7】
免疫細胞の表面上に発現されたヒトＰＤ－１への前記抗体の結合が、前記抗体によって結合されていない同等の免疫細胞と比較して、前記細胞の増殖を減少させ、
前記細胞がＴ細胞であり、細胞活性化の前記減少が、
（ｉ）実施例４に記載されるＮＦＡＴレポーターアッセイによって；
（ｉｉ）実施例５に記載の破傷風トキソイド活性化アッセイ又はウイルスペプチド活性化アッセイによって；
（ｉｉｉ）実施例６に記載される抗ＣＤ３／２８活性化アッセイによって；
（ｉｖ）前記免疫細胞がＰＤ－Ｌ１発現細胞に近接している（必要に応じて細胞増殖の前記減少が、実施例８に記載されるアッセイによって測定される）ときに；又は
（ｖ）インビトロ又はインビボで
測定される、；及び／又は
細胞増殖の前記減少が、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％若しくは５０％であるか、又は細胞増殖の前記減少が、約１０％～５０％、１０％～４０％、１０％～３０％、１０％～２０％、１０％～１５％、２０％～５０％、２０％～４０％、若しくは２０％～３０％である、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項8】
前記Ｆｃ領域がＦｃγＲ２Ｂに選択的に結合し；
（ｉ）前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ未満、４μＭ未満、３μＭ未満、又は２μＭ未満のＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ｂに結合し、必要に応じて前記抗体が、少なくとも２μＭ、１μＭ、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、８０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、又は５ｎＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する；
（ｉｉ）前記抗体が、ヒトＦｃγＲ２Ｂに、２００ｎＭ～５μＭ、４００ｎＭ～４μＭ、５００ｎＭ～３．５μＭ、８００ｎＭ～３μＭ、１μＭ～５μＭ、１μＭ～４．５μＭ、１μＭ～４μＭ、１μＭ～３．５μＭ、１μＭ～３μＭ、１μＭ～２．５μＭ、又は１μＭ～２μＭのＫ Ｄ で結合する；
（ｉｉｉ）前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ若しくは１０μＭを超える、又は少なくとも１５μＭ、少なくとも５０μＭ、若しくは少なくとも８０μＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する；
（ｉｖ）ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも２：１、３：１、４：１、５：１、若しくは６：１、少なくとも６：１、又は約６：１であり、必要に応じて前記比が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される；及び／又は
（ｖ）ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも１０：１、１５：１、２０：１、４０：１、若しくは５０：１、少なくとも４０：１、又は約４０：１であり、必要に応じて前記比が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項9】
請求項１～８のいずれか一項に記載される抗体を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
【請求項10】
請求項１～８のいずれか一項に記載される抗体を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含むベクター。
【請求項11】
発現された場合、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体を形成することができる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列をコードする１つ以上の核酸分子を含む宿主細胞。
【請求項12】
方法であって、（ａ）発現された場合、請求項１～８のいずれか一項に記載される抗体を形成することができる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列をコードする１つ以上の核酸分子を含む宿主細胞を培養することであって、前記宿主細胞は、前記コードされたアミノ酸配列を発現する、培養することと、
（ｂ）前記抗体を単離することと、
を含む、方法。
【請求項13】
薬剤とコンジュゲートした請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体を含む免疫コンジュゲート。
【請求項14】
治療有効量の請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１３に記載の免疫コンジュゲートと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項15】
疾患又は状態を治療するのに使用するための医薬組成物であって、治療有効量の請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１３に記載の免疫コンジュゲートと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項16】
容器内に請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１３に記載の免疫コンジュゲートを含むキット。
【請求項17】
請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１３に記載の免疫コンジュゲートの使用説明書を含有する情報材料を更に含む、請求項１６に記載のキット。
【請求項18】
疾患又は状態の治療を必要とする対象の疾患又は状態を治療するための、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体若しくは請求項１３に記載の免疫コンジュゲートを含む組成物、又は請求項１４に記載の医薬組成物であって、
（ｉ）前記疾患又は状態が、ＰＤ－１に関連する疾患又は状態を含む；及び／又は
（ｉｉ）前記対象が、ヒト対象である、組成物又は医薬組成物。
【請求項19】
前記疾患又は状態が、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、アレルギー、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、ＡＮＣＡ血管炎、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性多内分泌症候群、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、脳マラリア、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、セリアック病、クローン病、クッシング症候群、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、１型糖尿病、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、胆嚢疾患、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、ＩｇＧ４関連疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、炎症性線維症、過敏性腸症候群、若年性関節炎、川崎病、白血病、ループス腎炎、ライム関節炎、リンパ腫、リンパ増殖性障害、髄膜脳炎、多発性硬化症、重症筋無力症、骨髄腫、Ｘ線基準を満たさない体軸性脊椎関節炎（ｎｒ－ＡｘＳｐＡ）、視神経脊髄炎、変形性関節症、骨盤内炎症性疾患、天疱瘡、腹膜炎、毛巣嚢胞疾患、多発性筋炎、原発性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、高安動脈炎、側頭動脈炎、移植拒絶反応、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑及びフォークト・小柳・原田病を含む、請求項１８に記載の組成物又は医薬組成物。
【請求項20】
対象における免疫応答を下方制御するための、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体若しくは請求項１３に記載の免疫コンジュゲートを含む組成物、又は請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項21】
ＰＤ－１を発現する免疫細胞を抑制する方法における使用のための、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体若しくは請求項１３に記載の免疫コンジュゲートを含む組成物、又は請求項１４に記載の医薬組成物であって、前記方法は、前記免疫細胞を前記抗体、前記免疫コンジュゲート、又は前記医薬組成物と接触させることを含む、組成物又は医薬組成物。
【請求項22】
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、又は抗原特異的Ｔ細胞を含み、必要に応じて前記対象が、ヒト対象である、請求項２１に記載の組成物又は医薬組成物。【手続補正2】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【0367】
本開示の好ましい実施形態を本明細書に示し説明してきたが、そのような実施形態が例としてのみ提供されることは当業者には明らかであろう。本開示から逸脱することなく、当業者には多数の変形、変更、及び置換が思い浮かぶであろう。本開示を実施する際に、本開示の実施形態に対する様々な代替形態を使用することができることを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本開示の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法及び構造並びにそれらの均等物がそれによって包含されることが意図される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、前記免疫細胞を、ＰＤ－１に特異的に結合し、前記免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達をアゴナイズする、抗体と接触させることを含み、前記抗体が、アミノ酸置換を含むＦｃ領域を含み、前記アミノ酸置換が、前記アミノ酸置換を欠く親分子と比較して、前記対象におけるＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の低減をもたらし、前記抗体が、前記親分子と比較して、前記免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高いアゴニスト効果を有する、方法。
（項目２）
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、前記免疫細胞を、ＰＤ－１に特異的に結合し、前記免疫細胞の表面上の前記ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する、抗体と接触させることを含む、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法。
（項目３）
前記抗体がＦｃ領域を含み、前記Ｆｃ領域がアミノ酸置換を含む、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記アミノ酸置換が、前記アミノ酸置換を欠く親分子と比較して、前記対象におけるＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の低減をもたらし、前記抗体が、前記親分子と比較して、前記免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高いアゴニスト効果を有する、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対するＡＤＣＣが、実施例７に記載されるナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように低減される、項目１又は４に記載の方法。
（項目６）
前記抗体が、実施例７に記載のナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように、前記ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する有意なＡＤＣＣをもたらさない、項目１～５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記抗体がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化しない、項目１～６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記抗体が、重鎖可変領域を含む重鎖と、軽鎖可変領域を含む軽鎖とを含む、項目１～７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記重鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、項目３～９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、前記免疫細胞を、重鎖、軽鎖、及びＦｃ領域を含む抗体と接触させることを含み、
（ｉ）前記重鎖が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む重鎖可変領域を含み、
（ｉｉ）前記軽鎖が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含み、
（ｉｉｉ）前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法。
（項目１２）
前記軽鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む、項目８～１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記重鎖可変領域が、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３が、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号１～３に示される配列を含む、項目８～１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記軽鎖可変領域が、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６に示される配列を含む、項目８～１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記重鎖可変領域がＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３がそれぞれ配列番号１～３に示される配列を含む、項目８～１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記軽鎖可変領域がＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３がそれぞれ配列番号４～６に記載の配列を含む、項目８～１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記重鎖可変領域が、配列番号７～１１のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目８～１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記軽鎖可変領域が、配列番号１２～１６のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目８～１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記重鎖が、配列番号１８に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目８～１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記軽鎖が、配列番号１９に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目８～１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記Ｆｃ領域がヒトＩｇＧ１に由来する、項目３～２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記Ｆｃ領域が、配列番号１７に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目３～２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２及びダイアボディからなる群から選択される構造を形成する、項目８～２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、前記Ｆｃ領域に作動可能に連結された単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）を形成する、項目１～２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び多重特異性抗体からなる群から選択される、項目１～２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記抗体がモノクローナルである、項目１～２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記抗体が、前記免疫細胞の活性化を少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、又は５０％減少させる、項目１～２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記抗体が、前記免疫細胞の活性化を約１０％～５０％、１０％～４０％、１０％～３０％、１０％～２０％、１０％～１５％、２０％～５０％、２０％～４０％、又は２０％～３０％減少させる、項目１～２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はマクロファージを含む、項目２～２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記免疫細胞が抗原特異的Ｔ細胞を含む、項目２～２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記Ｆｃ領域がＦｃγＲ２Ｂに選択的に結合する、項目３～３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ、４μＭ、３μＭ、又は２μＭ未満のＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ又は１０μＭを超えるＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する、項目３１又は３２に記載の方法。
（項目３４）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも１５μＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する、項目３１又は３２に記載の方法。
（項目３５）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも５０μＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する、項目３１～３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも８０μＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する、項目３１～３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも２：１、３：１、４：１、５：１、又は６：１である、項目３１～３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも６：１である、項目３１～３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、約６：１である、項目３１～３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも１０：１、１５：１、２０：１、４０：１、又は５０：１である、項目３１～３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも４０：１である、項目３１～３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、約４０：１である、項目３１～３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記比が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される、項目３７～４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合し、ＰＤ－１シグナル伝達をアゴナイズする、単離された抗体であって、前記抗体は、重鎖、軽鎖、及びＦｃ領域を含み、
前記重鎖が重鎖可変領域を含み、
前記軽鎖が軽鎖可変領域を含み、
前記Ｆｃ領域が、置換を欠く親分子と比較して、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少をもたらすアミノ酸置換を含み、
前記抗体が、前記親分子と比較して、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高い不可知論的効果を有する、単離された抗体。
（項目４５）
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体は、重鎖、軽鎖、及びＦｃ領域を含み、
前記重鎖が重鎖可変領域を含み、
前記軽鎖が軽鎖可変領域を含み、
前記抗体は、免疫細胞の表面に発現するＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する、
単離された抗体。
（項目４６）
前記Ｆｃ領域が、前記アミノ酸置換を欠く親分子と比較して、前記対象におけるＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少をもたらすアミノ酸置換を含み、前記抗体が、前記親分子と比較して、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じか又はより高い不可知論的効果を有する、項目４５に記載の抗体。
（項目４７）
前記重鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む、項目４４～４６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目４８）
前記軽鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む、項目４４～４７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目４９）
前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、項目４４～４８のいずれか一項に記載の抗体。
（項目５０）
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体は、重鎖、軽鎖、及びＦｃ領域を含み、
前記重鎖が重鎖可変領域を含み、
前記軽鎖が軽鎖可変領域を含み、
（ｉ）前記重鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含み、
（ｉｉ）前記軽鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含み、
（ｉｉｉ）前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する単離された抗体。
（項目５１）
前記抗体が、免疫細胞の表面上に発現されたＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する、項目５０に記載の抗体。
（項目５２）
ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間における前記相互作用が、実施例１０に記載されるようなアッセイによって決定される場合に増強される、項目４５、４６又は５１に記載の抗体。
（項目５３）
前記抗体が、前記ＩｇＧ１のＦｃ領域を含む他の点では同じ分子と比較して、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少を誘導し、前記抗体が、他の点では同じ分子と比較して、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高い不可知論的効果を有する、項目５０～５２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目５４）
前記ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する前記ＡＤＣＣが、実施例７に記載されるナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように低減される、項目４４、４６又は５３に記載の抗体。
（項目５５）
前記抗体が、実施例７に記載のナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように、前記ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する有意なＡＤＣＣをもたらさない、項目４４、４６、５３、又は５４に記載の抗体。
（項目５６）
前記抗体が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化しない、項目４４、４６又は５３～５５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目５７）
前記重鎖可変領域が、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３が、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号１～３に示される配列を含む、項目４４～５５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目５８）
前記軽鎖可変領域が、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６に示される配列を含む、項目４４～５７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目５９）
前記重鎖可変領域がＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３がそれぞれ配列番号１～３に示される配列を含む、項目４４～５８のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６０）
前記軽鎖可変領域がＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３がそれぞれ配列番号４～６に記載の配列を含む、項目４４～５９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６１）
前記重鎖可変領域が、配列番号７～１１のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目４４～６０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６２）
前記軽鎖可変領域が、配列番号１２～１６のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目４４～６１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６３）
前記重鎖が、配列番号１８に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目４４～６２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６４）
前記軽鎖が、配列番号１９に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目４４～６３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６５）
前記Ｆｃ領域がヒトＩｇＧ１に由来する、項目４４～６４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６６）
前記Ｆｃ領域が、配列番号１７に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目４４～６２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６７）
前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２及びダイアボディからなる群から選択される構造を形成する、項目４４～６６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６８）
前記抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、前記Ｆｃ領域に作動可能に連結された前記重鎖可変領域を含み、前記軽鎖が、前記軽鎖可変領域を含む、項目４４～６６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６９）
前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、前記Ｆｃ領域に作動可能に連結された単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）を形成する、項目４４～６６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７０）
前記抗体が、ヒト化抗体である、項目４４～６９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７１）
前記抗体が、ヒト抗体である、項目４４～６９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７２）
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び多重特異性抗体からなる群から選択される、項目４４～６９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７３）
前記抗体が、モノクローナルである、項目４４～７２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７４）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、２００ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、８０ｎＭ未満、６０ｎＭ未満又は４０ｎＭ未満のＫ Ｄ でヒトＰＤ－１に結合する、項目４４～７３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７５）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、６０ｎＭ未満のＫ Ｄ でヒトＰＤ－１に結合する、項目４４～７３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７６）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、４０ｎＭ未満のＫ Ｄ でヒトＰＤ－１に結合する、項目４４～７３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７７）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、５０００ｎＭ、４０００ｎＭ、２０００ｎＭ、１０００ｎＭ、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ又は２００ｎＭ未満のＫ Ｄ でカニクイザルＰＤ－１に結合する、項目４４～７６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７８）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、６００ｎＭ未満のＫ Ｄ でカニクイザルＰＤ－１に結合する、項目４４～７６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７９）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、３００ｎＭ未満のＫ Ｄ でカニクイザルＰＤ－１に結合する、項目４４～７６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８０）
前記抗体が、免疫細胞の表面上に発現されるヒトＰＤ－１をアゴナイズする、項目４４～７９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８１）
前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、項目８０に記載の抗体。
（項目８２）
免疫細胞の表面上に発現されたヒトＰＤ－１への前記抗体の結合が、前記抗体によって結合されていない同等の免疫細胞と比較して、前記細胞の増殖を減少させる、項目４４～８１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８３）
前記細胞がＴ細胞である、項目８２に記載の抗体。
（項目８４）
細胞活性化の前記減少が、実施例４に記載されるＮＦＡＴレポーターアッセイによって測定される、項目８２又は８３に記載の抗体。
（項目８５）
細胞活性化の前記減少が、実施例５に記載の破傷風トキソイド活性化アッセイ又はウイルスペプチド活性化アッセイによって測定される、項目８２又は８３に記載の抗体。
（項目８６）
細胞増殖の前記減少が、実施例６に記載される抗ＣＤ３／２８活性化アッセイによって測定される、項目８２又は８３に記載の抗体。
（項目８７）
細胞増殖の前記減少が、前記免疫細胞がＰＤ－Ｌ１発現細胞に近接しているときに測定される、項目８２又は８３に記載の抗体。
（項目８８）
細胞増殖の前記減少が、実施例８に記載されるアッセイによって測定される、項目８７に記載の抗体。
（項目８９）
細胞増殖の前記減少がインビトロ又はインビボで測定される、項目８２又は８３に記載の抗体。
（項目９０）
細胞増殖の前記減少が、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％又は５０％である、項目８２～８９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９１）
細胞増殖の前記減少が、約１０％～５０％、１０％～４０％、１０％～３０％、１０％～２０％、１０％～１５％、２０％～５０％、２０％～４０％、又は２０％～３０％である、項目８２～８９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９２）
前記Ｆｃ領域がＦｃγＲ２Ｂに選択的に結合する、項目４４～９１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９３）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ、４μＭ、３μＭ、又は２μＭ未満のＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する、項目９２に記載の抗体。
（項目９４）
前記抗体が、少なくとも２μＭ、１μＭ、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、８０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、又は５ｎＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する、項目９２又は９３に記載の抗体。
（項目９５）
前記抗体が、ヒトＦｃγＲ２Ｂに、２００ｎＭ～５μＭ、４００ｎＭ～４μＭ、５００ｎＭ～３．５μＭ、８００ｎＭ～３μＭ、１μＭ～５μＭ、１μＭ～４．５μＭ、１μＭ～４μＭ、１μＭ～３．５μＭ、１μＭ～３μＭ、１μＭ～２．５μＭ、又は１μＭ～２μＭのＫ Ｄ で結合する、項目９２に記載の抗体。
（項目９６）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ又は１０μＭを超えるＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する、項目９２～９５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９７）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも１５μＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する、項目９２～９５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９８）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも５０μＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する、項目９２～９７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９９）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも８０μＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する、項目９２～９７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１００）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも２：１、３：１、４：１、５：１、又は６：１である、項目９２～９９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０１）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも６：１である、項目９２～９９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０２）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、約６：１である、項目９２～９９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０３）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも１０：１、１５：１、２０：１、４０：１、又は５０：１である、項目９２～１０２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０４）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも４０：１である、項目９２～１０２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０５）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、約４０：１である、項目９２～１０２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０６）
前記比が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される、項目１００～１０５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０７）
項目４４～１０６のいずれか一項に記載される抗体を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
（項目１０８）
項目４４～１０６のいずれか一項に記載される抗体を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含むベクター。
（項目１０９）
発現された場合、項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体を形成することができる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列をコードする１つ以上の核酸分子を含む宿主細胞。
（項目１１０）
項目１０９に記載される宿主細胞を、前記抗体を産生するための条件下で培養することを含む方法。
（項目１１１）
方法であって、
（ａ）発現された場合、項目４４～１０６のいずれか一項に記載される抗体を形成することができる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列をコードする１つ以上の核酸分子を含む宿主細胞を提供することと、
（ｂ）前記コードされたアミノ酸配列を発現する前記宿主細胞を培養することと、
（ｃ）前記抗体を単離することと、
を含む、方法。
（項目１１２）
薬剤とコンジュゲートした項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体を含む免疫コンジュゲート。
（項目１１３）
治療有効量の項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は項目１１２に記載の免疫コンジュゲートと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
（項目１１４）
疾患又は状態を治療するのに使用するための医薬組成物であって、治療有効量の項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は項目１１２に記載の免疫コンジュゲートと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
（項目１１５）
容器内に項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は項目１１２に記載の免疫コンジュゲートを含むキット。
（項目１１６）
項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は項目１１２に記載の免疫コンジュゲートの使用説明書を含有する情報材料を更に含む、項目１１５に記載のキット。
（項目１１７）
疾患又は状態の治療を必要とする対象の疾患又は状態を治療する方法であって、治療有効量の項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体若しくは項目１１２に記載の免疫コンジュゲートを前記対象に投与すること、又は項目１１３に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、疾患又は状態の治療を必要とする対象の疾患又は状態を治療する方法。
（項目１１８）
前記疾患又は状態が、ＰＤ－１に関連する疾患又は状態を含む、項目１１７に記載の方法。
（項目１１９）
前記疾患又は状態が、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、アレルギー、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、ＡＮＣＡ血管炎、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性多内分泌症候群、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、脳マラリア、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、セリアック病、クローン病、クッシング症候群、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、１型糖尿病、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、胆嚢疾患、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、ＩｇＧ４関連疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、炎症性線維症、過敏性腸症候群、若年性関節炎、川崎病、白血病、ループス腎炎、ライム関節炎、リンパ腫、リンパ増殖性障害、髄膜脳炎、多発性硬化症、重症筋無力症、骨髄腫、Ｘ線基準を満たさない体軸性脊椎関節炎（ｎｒ－ＡｘＳｐＡ）、視神経脊髄炎、変形性関節症、骨盤内炎症性疾患、天疱瘡、腹膜炎、毛巣嚢胞疾患、多発性筋炎、原発性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、高安動脈炎、側頭動脈炎、移植拒絶反応、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑及びフォークト・小柳・原田病を含む、項目１１７又は１１８に記載の方法。
（項目１２０）
前記対象が、ヒト対象である、項目１１７～１１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２１）
対象における免疫応答を下方制御する方法であって、前記対象に項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体を投与すること、前記対象に項目１１２に記載の免疫コンジュゲートを投与すること、又は前記対象に項目１１３に記載の医薬組成物を投与すること、を含む方法。
（項目１２２）
ＰＤ－１を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、前記免疫細胞を項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は項目１１２に記載の免疫コンジュゲートと接触させることを含む方法。
（項目１２３）
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞又はマクロファージを含む、項目１２２に記載の方法。
（項目１２４）
前記免疫細胞が抗原特異的Ｔ細胞を含む、項目１２２に記載の方法。
（項目１２５）
前記対象が、ヒト対象である、項目１２２～１２４のいずれか一項に記載の方法。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、前記免疫細胞を、ＰＤ－１に特異的に結合し、前記免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達をアゴナイズする、抗体と接触させることを含み、前記抗体が、アミノ酸置換を含むＦｃ領域を含み、前記アミノ酸置換が、前記アミノ酸置換を欠く親分子と比較して、前記対象におけるＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の低減をもたらし、前記抗体が、前記親分子と比較して、前記免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高いアゴニスト効果を有する、方法。
（項目２）
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、前記免疫細胞を、ＰＤ－１に特異的に結合し、前記免疫細胞の表面上の前記ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する、抗体と接触させることを含む、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法。
（項目３）
前記抗体がＦｃ領域を含み、前記Ｆｃ領域がアミノ酸置換を含む、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記アミノ酸置換が、前記アミノ酸置換を欠く親分子と比較して、前記対象におけるＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の低減をもたらし、前記抗体が、前記親分子と比較して、前記免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高いアゴニスト効果を有する、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対するＡＤＣＣが、実施例７に記載されるナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように低減される、項目１又は４に記載の方法。
（項目６）
前記抗体が、実施例７に記載のナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように、前記ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する有意なＡＤＣＣをもたらさない、項目１～５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記抗体がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化しない、項目１～６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記抗体が、重鎖可変領域を含む重鎖と、軽鎖可変領域を含む軽鎖とを含む、項目１～７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記重鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、項目３～９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、前記免疫細胞を、重鎖、軽鎖、及びＦｃ領域を含む抗体と接触させることを含み、
（ｉ）前記重鎖が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む重鎖可変領域を含み、
（ｉｉ）前記軽鎖が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含み、
（ｉｉｉ）前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）を発現する免疫細胞を抑制する方法。
（項目１２）
前記軽鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む、項目８～１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記重鎖可変領域が、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３が、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号１～３に示される配列を含む、項目８～１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記軽鎖可変領域が、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６に示される配列を含む、項目８～１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記重鎖可変領域がＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３がそれぞれ配列番号１～３に示される配列を含む、項目８～１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記軽鎖可変領域がＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３がそれぞれ配列番号４～６に記載の配列を含む、項目８～１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記重鎖可変領域が、配列番号７～１１のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目８～１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記軽鎖可変領域が、配列番号１２～１６のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目８～１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記重鎖が、配列番号１８に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目８～１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記軽鎖が、配列番号１９に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目８～１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記Ｆｃ領域がヒトＩｇＧ１に由来する、項目３～２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記Ｆｃ領域が、配列番号１７に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目３～２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２及びダイアボディからなる群から選択される構造を形成する、項目８～２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、前記Ｆｃ領域に作動可能に連結された単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）を形成する、項目１～２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び多重特異性抗体からなる群から選択される、項目１～２４のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記抗体がモノクローナルである、項目１～２５のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記抗体が、前記免疫細胞の活性化を少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、又は５０％減少させる、項目１～２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記抗体が、前記免疫細胞の活性化を約１０％～５０％、１０％～４０％、１０％～３０％、１０％～２０％、１０％～１５％、２０％～５０％、２０％～４０％、又は２０％～３０％減少させる、項目１～２６のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はマクロファージを含む、項目２～２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記免疫細胞が抗原特異的Ｔ細胞を含む、項目２～２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
前記Ｆｃ領域がＦｃγＲ２Ｂに選択的に結合する、項目３～３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ、４μＭ、３μＭ、又は２μＭ未満のＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ又は１０μＭを超えるＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する、項目３１又は３２に記載の方法。
（項目３４）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも１５μＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する、項目３１又は３２に記載の方法。
（項目３５）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも５０μＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する、項目３１～３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも８０μＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する、項目３１～３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも２：１、３：１、４：１、５：１、又は６：１である、項目３１～３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも６：１である、項目３１～３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、約６：１である、項目３１～３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも１０：１、１５：１、２０：１、４０：１、又は５０：１である、項目３１～３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも４０：１である、項目３１～３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、約４０：１である、項目３１～３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
前記比が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される、項目３７～４２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合し、ＰＤ－１シグナル伝達をアゴナイズする、単離された抗体であって、前記抗体は、重鎖、軽鎖、及びＦｃ領域を含み、
前記重鎖が重鎖可変領域を含み、
前記軽鎖が軽鎖可変領域を含み、
前記Ｆｃ領域が、置換を欠く親分子と比較して、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少をもたらすアミノ酸置換を含み、
前記抗体が、前記親分子と比較して、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高い不可知論的効果を有する、単離された抗体。
（項目４５）
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体は、重鎖、軽鎖、及びＦｃ領域を含み、
前記重鎖が重鎖可変領域を含み、
前記軽鎖が軽鎖可変領域を含み、
前記抗体は、免疫細胞の表面に発現するＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する、
単離された抗体。
（項目４６）
前記Ｆｃ領域が、前記アミノ酸置換を欠く親分子と比較して、前記対象におけるＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少をもたらすアミノ酸置換を含み、前記抗体が、前記親分子と比較して、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じか又はより高い不可知論的効果を有する、項目４５に記載の抗体。
（項目４７）
前記重鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む、項目４４～４６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目４８）
前記軽鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含む、項目４４～４７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目４９）
前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、項目４４～４８のいずれか一項に記載の抗体。
（項目５０）
プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体は、重鎖、軽鎖、及びＦｃ領域を含み、
前記重鎖が重鎖可変領域を含み、
前記軽鎖が軽鎖可変領域を含み、
（ｉ）前記重鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号１～３のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含み、
（ｉｉ）前記軽鎖可変領域が、０～３個のアミノ酸修飾を有する、配列番号４～６のうちの１つ以上に示される配列を含むＣＤＲを含み、
（ｉｉｉ）前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１に由来し、ＥＵインデックスに従って番号付けされた２３８位にアスパラギン酸（Ｄ）を含む、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）に特異的に結合する単離された抗体。
（項目５１）
前記抗体が、免疫細胞の表面上に発現されたＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を増強する、項目５０に記載の抗体。
（項目５２）
ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間における前記相互作用が、実施例１０に記載されるようなアッセイによって決定される場合に増強される、項目４５、４６又は５１に記載の抗体。
（項目５３）
前記抗体が、前記ＩｇＧ１のＦｃ領域を含む他の点では同じ分子と比較して、ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少を誘導し、前記抗体が、他の点では同じ分子と比較して、免疫細胞におけるＰＤ－１シグナル伝達に対して同じ又はより高い不可知論的効果を有する、項目５０～５２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目５４）
前記ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する前記ＡＤＣＣが、実施例７に記載されるナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように低減される、項目４４、４６又は５３に記載の抗体。
（項目５５）
前記抗体が、実施例７に記載のナチュラルキラー細胞活性化アッセイによって決定されるように、前記ＰＤ－１発現制御性Ｔ細胞に対する有意なＡＤＣＣをもたらさない、項目４４、４６、５３、又は５４に記載の抗体。
（項目５６）
前記抗体が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化しない、項目４４、４６又は５３～５５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目５７）
前記重鎖可変領域が、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３が、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号１～３に示される配列を含む、項目４４～５５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目５８）
前記軽鎖可変領域が、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、０～３個のアミノ酸修飾を有する配列番号４～６に示される配列を含む、項目４４～５７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目５９）
前記重鎖可変領域がＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３がそれぞれ配列番号１～３に示される配列を含む、項目４４～５８のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６０）
前記軽鎖可変領域がＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３がそれぞれ配列番号４～６に記載の配列を含む、項目４４～５９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６１）
前記重鎖可変領域が、配列番号７～１１のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目４４～６０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６２）
前記軽鎖可変領域が、配列番号１２～１６のいずれか１つに示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目４４～６１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６３）
前記重鎖が、配列番号１８に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目４４～６２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６４）
前記軽鎖が、配列番号１９に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目４４～６３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６５）
前記Ｆｃ領域がヒトＩｇＧ１に由来する、項目４４～６４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６６）
前記Ｆｃ領域が、配列番号１７に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％、又は１００％の同一性を有する配列を含む、項目４４～６２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６７）
前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２及びダイアボディからなる群から選択される構造を形成する、項目４４～６６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６８）
前記抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、前記Ｆｃ領域に作動可能に連結された前記重鎖可変領域を含み、前記軽鎖が、前記軽鎖可変領域を含む、項目４４～６６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６９）
前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域が、前記Ｆｃ領域に作動可能に連結された単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）を形成する、項目４４～６６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７０）
前記抗体が、ヒト化抗体である、項目４４～６９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７１）
前記抗体が、ヒト抗体である、項目４４～６９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７２）
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び多重特異性抗体からなる群から選択される、項目４４～６９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７３）
前記抗体が、モノクローナルである、項目４４～７２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７４）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、２００ｎＭ未満、１００ｎＭ未満、８０ｎＭ未満、６０ｎＭ未満又は４０ｎＭ未満のＫ Ｄ でヒトＰＤ－１に結合する、項目４４～７３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７５）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、６０ｎＭ未満のＫ Ｄ でヒトＰＤ－１に結合する、項目４４～７３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７６）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、４０ｎＭ未満のＫ Ｄ でヒトＰＤ－１に結合する、項目４４～７３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７７）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、５０００ｎＭ、４０００ｎＭ、２０００ｎＭ、１０００ｎＭ、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ又は２００ｎＭ未満のＫ Ｄ でカニクイザルＰＤ－１に結合する、項目４４～７６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７８）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、６００ｎＭ未満のＫ Ｄ でカニクイザルＰＤ－１に結合する、項目４４～７６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７９）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、３００ｎＭ未満のＫ Ｄ でカニクイザルＰＤ－１に結合する、項目４４～７６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８０）
前記抗体が、免疫細胞の表面上に発現されるヒトＰＤ－１をアゴナイズする、項目４４～７９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８１）
前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、項目８０に記載の抗体。
（項目８２）
免疫細胞の表面上に発現されたヒトＰＤ－１への前記抗体の結合が、前記抗体によって結合されていない同等の免疫細胞と比較して、前記細胞の増殖を減少させる、項目４４～８１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８３）
前記細胞がＴ細胞である、項目８２に記載の抗体。
（項目８４）
細胞活性化の前記減少が、実施例４に記載されるＮＦＡＴレポーターアッセイによって測定される、項目８２又は８３に記載の抗体。
（項目８５）
細胞活性化の前記減少が、実施例５に記載の破傷風トキソイド活性化アッセイ又はウイルスペプチド活性化アッセイによって測定される、項目８２又は８３に記載の抗体。
（項目８６）
細胞増殖の前記減少が、実施例６に記載される抗ＣＤ３／２８活性化アッセイによって測定される、項目８２又は８３に記載の抗体。
（項目８７）
細胞増殖の前記減少が、前記免疫細胞がＰＤ－Ｌ１発現細胞に近接しているときに測定される、項目８２又は８３に記載の抗体。
（項目８８）
細胞増殖の前記減少が、実施例８に記載されるアッセイによって測定される、項目８７に記載の抗体。
（項目８９）
細胞増殖の前記減少がインビトロ又はインビボで測定される、項目８２又は８３に記載の抗体。
（項目９０）
細胞増殖の前記減少が、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％又は５０％である、項目８２～８９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９１）
細胞増殖の前記減少が、約１０％～５０％、１０％～４０％、１０％～３０％、１０％～２０％、１０％～１５％、２０％～５０％、２０％～４０％、又は２０％～３０％である、項目８２～８９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９２）
前記Ｆｃ領域がＦｃγＲ２Ｂに選択的に結合する、項目４４～９１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９３）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ、４μＭ、３μＭ、又は２μＭ未満のＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する、項目９２に記載の抗体。
（項目９４）
前記抗体が、少なくとも２μＭ、１μＭ、８００ｎＭ、６００ｎＭ、５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、８０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、又は５ｎＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ｂに結合する、項目９２又は９３に記載の抗体。
（項目９５）
前記抗体が、ヒトＦｃγＲ２Ｂに、２００ｎＭ～５μＭ、４００ｎＭ～４μＭ、５００ｎＭ～３．５μＭ、８００ｎＭ～３μＭ、１μＭ～５μＭ、１μＭ～４．５μＭ、１μＭ～４μＭ、１μＭ～３．５μＭ、１μＭ～３μＭ、１μＭ～２．５μＭ、又は１μＭ～２μＭのＫ Ｄ で結合する、項目９２に記載の抗体。
（項目９６）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５μＭ又は１０μＭを超えるＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する、項目９２～９５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９７）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも１５μＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する、項目９２～９５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９８）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも５０μＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する、項目９２～９７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９９）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される場合、少なくとも８０μＭのＫ Ｄ でヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する、項目９２～９７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１００）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも２：１、３：１、４：１、５：１、又は６：１である、項目９２～９９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０１）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも６：１である、項目９２～９９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０２）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、約６：１である、項目９２～９９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０３）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも１０：１、１５：１、２０：１、４０：１、又は５０：１である、項目９２～１０２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０４）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、少なくとも４０：１である、項目９２～１０２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０５）
ヒトＦｃγＲ２Ｂに対する抗体の結合親和性とヒトＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対する抗体の結合親和性との比が、約４０：１である、項目９２～１０２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０６）
前記比が、３７℃での表面プラズモン共鳴によって決定される、項目１００～１０５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１０７）
項目４４～１０６のいずれか一項に記載される抗体を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む単離された核酸。
（項目１０８）
項目４４～１０６のいずれか一項に記載される抗体を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含むベクター。
（項目１０９）
発現された場合、項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体を形成することができる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列をコードする１つ以上の核酸分子を含む宿主細胞。
（項目１１０）
項目１０９に記載される宿主細胞を、前記抗体を産生するための条件下で培養することを含む方法。
（項目１１１）
方法であって、
（ａ）発現された場合、項目４４～１０６のいずれか一項に記載される抗体を形成することができる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列をコードする１つ以上の核酸分子を含む宿主細胞を提供することと、
（ｂ）前記コードされたアミノ酸配列を発現する前記宿主細胞を培養することと、
（ｃ）前記抗体を単離することと、
を含む、方法。
（項目１１２）
薬剤とコンジュゲートした項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体を含む免疫コンジュゲート。
（項目１１３）
治療有効量の項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は項目１１２に記載の免疫コンジュゲートと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
（項目１１４）
疾患又は状態を治療するのに使用するための医薬組成物であって、治療有効量の項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は項目１１２に記載の免疫コンジュゲートと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
（項目１１５）
容器内に項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は項目１１２に記載の免疫コンジュゲートを含むキット。
（項目１１６）
項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は項目１１２に記載の免疫コンジュゲートの使用説明書を含有する情報材料を更に含む、項目１１５に記載のキット。
（項目１１７）
疾患又は状態の治療を必要とする対象の疾患又は状態を治療する方法であって、治療有効量の項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体若しくは項目１１２に記載の免疫コンジュゲートを前記対象に投与すること、又は項目１１３に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、疾患又は状態の治療を必要とする対象の疾患又は状態を治療する方法。
（項目１１８）
前記疾患又は状態が、ＰＤ－１に関連する疾患又は状態を含む、項目１１７に記載の方法。
（項目１１９）
前記疾患又は状態が、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、アレルギー、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、ＡＮＣＡ血管炎、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、自己免疫性多内分泌症候群、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、脳マラリア、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、セリアック病、クローン病、クッシング症候群、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、１型糖尿病、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、胆嚢疾患、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、ＩｇＧ４関連疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、炎症性線維症、過敏性腸症候群、若年性関節炎、川崎病、白血病、ループス腎炎、ライム関節炎、リンパ腫、リンパ増殖性障害、髄膜脳炎、多発性硬化症、重症筋無力症、骨髄腫、Ｘ線基準を満たさない体軸性脊椎関節炎（ｎｒ－ＡｘＳｐＡ）、視神経脊髄炎、変形性関節症、骨盤内炎症性疾患、天疱瘡、腹膜炎、毛巣嚢胞疾患、多発性筋炎、原発性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、高安動脈炎、側頭動脈炎、移植拒絶反応、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑及びフォークト・小柳・原田病を含む、項目１１７又は１１８に記載の方法。
（項目１２０）
前記対象が、ヒト対象である、項目１１７～１１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２１）
対象における免疫応答を下方制御する方法であって、前記対象に項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体を投与すること、前記対象に項目１１２に記載の免疫コンジュゲートを投与すること、又は前記対象に項目１１３に記載の医薬組成物を投与すること、を含む方法。
（項目１２２）
ＰＤ－１を発現する免疫細胞を抑制する方法であって、前記免疫細胞を項目４４～１０６のいずれか一項に記載の抗体又は項目１１２に記載の免疫コンジュゲートと接触させることを含む方法。
（項目１２３）
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、Ｂ細胞又はマクロファージを含む、項目１２２に記載の方法。
（項目１２４）
前記免疫細胞が抗原特異的Ｔ細胞を含む、項目１２２に記載の方法。
（項目１２５）
前記対象が、ヒト対象である、項目１２２～１２４のいずれか一項に記載の方法。
【国際調査報告】