特表 2024-539749 新規な抗体－サイトカイン融合タンパク質及びその製造方法と使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-29

(54)【発明の名称】新規な抗体－サイトカイン融合タンパク質及びその製造方法と使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 19/00 20060101AFI20241022BHJP

   C07K 14/55 20060101ALI20241022BHJP

   C07K 16/24 20060101ALI20241022BHJP

   A61K 38/20 20060101ALI20241022BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20241022BHJP

   A61K 35/768 20150101ALI20241022BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241022BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20241022BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20241022BHJP

   A61P 31/18 20060101ALI20241022BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20241022BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20241022BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20241022BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20241022BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241022BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20241022BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20241022BHJP

   C12N 15/26 20060101ALN20241022BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20241022BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00 ZNA

C07K14/55

C07K16/24

A61K38/20

A61K47/68

A61K35/768

A61P35/00

A61K45/00

A61P43/00 121

A61P31/18

A61P31/12

A61P37/04

A61P35/02

A61K35/17

A61K39/395 N

A61K39/00 H

C12N15/62 Z

C12N15/26

C12N15/13

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024546350

(86)(22)【出願日】2022-08-03

(85)【翻訳文提出日】2024-06-13

(86)【国際出願番号】 CN2022109997

(87)【国際公開番号】W WO2023061005

(87)【国際公開日】2023-04-20

(31)【優先権主張番号】202111196510.7

(32)【優先日】2021-10-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】524144822

【氏名又は名称】ラッティコン （スージョウ） バイオファーマシューティカルズ カンパニー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100118256

【弁理士】

【氏名又は名称】小野寺 隆

(74)【代理人】

【識別番号】100166338

【弁理士】

【氏名又は名称】関口 正夫

(72)【発明者】

【氏名】リー ジョン ユエファ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC07

4C076CC27

4C076CC35

4C076CC41

4C076CC42

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF34

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA07

4C084AA19

4C084BA42

4C084BA44

4C084DA12

4C084MA01

4C084MA02

4C084NA05

4C084NA13

4C084NA14

4C084NA15

4C084ZB09

4C084ZB26

4C084ZB27

4C084ZB33

4C084ZC75

4C085AA03

4C085AA14

4C085DD62

4C085EE01

4C085EE03

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087BB65

4C087BC83

4C087MA01

4C087MA02

4C087NA13

4C087NA14

4C087NA15

4C087ZB09

4C087ZB26

4C087ZB27

4C087ZB33

4C087ZC75

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA04

4H045DA76

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

新規な抗体－サイトカイン融合タンパク質を提供する。該抗体－サイトカイン融合タンパク質を含む二重特異性分子、免疫コンジュゲート、該抗体－サイトカイン融合タンパク質をコードする核酸分子、並びに該核酸分子を含むベクター及び宿主細胞を更に提供する。該抗体－サイトカイン融合タンパク質を製造する方法、該抗体－サイトカイン融合タンパク質を含む医薬組成物、該抗体－サイトカイン融合タンパク質又はその医薬組成物を用いた疾患の治療方法並びに疾患の治療における該抗体－サイトカイン融合タンパク質又はその医薬組成物の使用を更に提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトインターロイキン－２（ｈＩＬ－２）変異タンパク質であって、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、以下の特性、
（１）前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対して少なくとも１つのアミノ酸変異を含む、
（２）前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２と比較して、抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片に結合する能力を得る、及び
（３）前記アミノ酸変異はｈＩＬ－２の生物学的活性に顕著な影響を与えない
のうちの少なくとも１つを含み、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は前記野生型ｈＩＬ－２の生物学的活性を保持し、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片は、ＩＬ－２受容体αサブユニット（ＩＬ２Ｒα）と競合して前記ｈＩＬ－２変異タンパク質に結合することができ、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片との結合は、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記ＩＬ２Ｒαとの結合をブロックすることができるか、
又は、好ましくは、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２と９０％以上のアミノ酸配列同一性、より好ましくは９３％以上のアミノ酸配列同一性を有するか、
又は、好ましくは、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対して１つ以上のアミノ酸変異を含む、ｈＩＬ－２変異タンパク質。

【請求項2】

前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の前記アミノ酸変異は、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との結合界面に位置し、好ましくは、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対して第６４位、第９０位及び／又は第１０４位に１つ以上のアミノ酸変異を含む、請求項１に記載のｈＩＬ－２変異タンパク質。

【請求項3】

配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対して、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、以下の変異、（１）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第６４位におけるＫのＧ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｎ若しくはＱへの変異、（２）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第９０位におけるＮのＲ、Ｋ若しくはＨへの変異、又は（３）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第１０４位におけるＭのＥ若しくはＤへの変異、のうちの少なくとも１つを含む、請求項１又は請求項２に記載のｈＩＬ－２変異タンパク質。

【請求項4】

前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対して、以下のアミノ酸変異、
（１）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第６４位におけるアミノ酸変異Ｋ６４Ｇ、
（２）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第９０位におけるアミノ酸変異Ｎ９０Ｒ、及び
（３）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第１０４位におけるアミノ酸変異Ｍ１０４Ｅ
のうちの１つ以上を含み、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応するＫ６４Ｇ及び／若しくはＮ９０Ｒのアミノ酸変異を有するか、
又は、好ましくは、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応するＫ６４Ｇ、Ｎ９０Ｒ及びＭ１０４Ｅのアミノ酸変異を有するか、
より好ましくは、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応するＫ６４Ｇ及びＮ９０Ｒのアミノ酸変異を有する、請求項１から請求項３のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２変異タンパク質。

【請求項5】

前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の前記アミノ酸変異は、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との結合界面の外に位置し、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対してアミノ酸配列のＮ末端の最初の３つ若しくは５つのアミノ酸の削除を含むか、若しくは配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対して前記アミノ酸配列のＮ末端の３番目のアミノ酸残基のアミノ酸変異を含み、かつ／若しくは配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対して第１２５位にアミノ酸変異を有するか、
又は、好ましくは、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質はアミノ酸変異を含み、前記アミノ酸変異は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列の最初の３つのＮ末端アミノ酸の削除、及び／若しくは配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第１２５位におけるアミノ酸変異Ｃ１２５Ａ、Ｃ１２５Ｌ、Ｃ１２５Ｓ、Ｃ１２５Ｑ若しくはＣ１２５Ｖを含む、請求項１から請求項４のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２変異タンパク質。

【請求項6】

抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の特性、
（１）前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片は、ＩＬ２Ｒαと競合して請求項１から請求項５のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２変異タンパク質に結合することができ、請求項１から請求項５のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２変異タンパク質とＩＬ２Ｒα若しくは前記ＩＬ２Ｒαサブユニットを含むＩＬ－２受容体複合体との結合を競合的にブロックすることができる、
（２）前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片と請求項１から請求項５のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性値（Ｋ_Ｄ）は＜５×１０^－８Ｍ、若しくは好ましくは＜１×１０^－８Ｍ、＜５×１０^－９Ｍ、若しくは＜１×１０^－９Ｍ、若しくは＜５×１０^－１０Ｍ、若しくはより好ましくは＜６×１０^－１０Ｍである、及び／又は
（３）前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片と請求項１から請求項５のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２変異タンパク質との解離速度定数（Ｋ_ｄｉｓ若しくはＫ_ｏｆｆ）は＜５×１０^－３ｓ^－１、＜１×１０^－３ｓ^－１、＜５×１０^－４ｓ^－１、若しくは＜３×１０^－４ｓ^－１である
のうちの少なくとも１つを含む、抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片。

【請求項7】

前記抗ＩＬ－２抗体は、抗マウスＩＬ－２（ｍＩＬ－２）抗体及びそのヒト化抗体からなる群から選択され、更に、前記抗ｍＩＬ－２抗体は、ｍＩＬ－２とマウスＩＬ２Ｒα（ｍＩＬ２Ｒα）との結合部位を特異的に識別する抗ｍＩＬ－２抗体から選択され、前記抗ｍＩＬ－２抗体は請求項１から請求項５のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２変異タンパク質と交差反応することができるか、
又は、好ましくは、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、（１）アミノ酸配列がＸ１ＹＹＸ２Ｈ（Ｘ１＝Ａ若しくはＤ、Ｘ２＝Ｌ若しくはＭ）であるＨＣＤＲ１、（２）アミノ酸配列がＲＩＤＰＺ１ＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＸ３（Ｚ１＝Ｅ若しくはＤ、Ｘ３＝Ｎ、Ｓ若しくはＧ）であるＨＣＤＲ２、（３）アミノ酸配列がＺ２ＴＦＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ、Ｉ、Ｒ若しくはＴ、Ｚ３＝Ｙ、Ｌ、Ｈ若しくはＷ、Ｚ４＝Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、Ｙ若しくはＶ、若しくは好ましくは、Ｚ２＝Ｖ若しくはＩ、Ｚ３＝Ｙ若しくはＬ、Ｚ４＝Ｓ若しくはＴ）であるＨＣＤＲ３、（４）アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ、Ｙ、Ｎ、Ｈ、Ｉ、Ｌ若しくはＦ、Ｚ６＝Ｇ、Ｓ、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｉ、Ｌ、Ｔ若しくはＤ、若しくは好ましくは、Ｚ５＝Ｄ若しくはＹ、Ｚ６＝Ｇ若しくはＳ）であるＬＣＤＲ１、（５）アミノ酸配列がＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｗ若しくはＹ、Ｚ８＝Ｔ若しくはＧ、Ｘ４＝Ｄ、Ｓ若しくはＴ、若しくは好ましくは、Ｚ７＝Ｓ若しくはＱ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）であるＬＣＤＲ２、及び（６）アミノ酸配列がＬＱＨＹＳＴＰＹＴ（配列番号１２に示される）であるＬＣＤＲ３を含む
請求項６に記載の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片。

【請求項8】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７、配列番号１３又は配列番号１４に示されるＨＣＤＲ１、配列番号８、配列番号１５、配列番号１６又は配列番号１９に示されるＨＣＤＲ２、配列番号９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２９又は配列番号３４に示されるＨＣＤＲ３、及び配列番号１０、配列番号２６、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３又は配列番号４４に示されるＬＣＤＲ１、配列番号１１、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３２又は配列番号３３に示されるＬＣＤＲ２、配列番号１２又は配列番号３８に示されるＬＣＤＲ３を含む、請求項６又は請求項７に記載の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片。

【請求項9】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、
（１）配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）配列番号１３若しくは配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５若しくは配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（５）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項６から請求項８のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片。

【請求項10】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、（１）アミノ酸配列がＸ１ＹＹＸ２Ｈ（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）であるＨＣＤＲ１、（２）アミノ酸配列がＲＩＤＰＺ１ＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＸ３（Ｚ１＝Ｅ又はＤ、Ｘ３＝Ｇ）であるＨＣＤＲ２、（３）アミノ酸配列がＺ２ＴＦＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ、Ｉ、Ｒ若しくはＴ、Ｚ３＝Ｙ、Ｌ、Ｈ若しくはＷ、Ｚ４＝Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、Ｙ若しくはＶ、又は好ましくはＺ２＝Ｖ若しくはＩ、Ｚ３＝Ｙ若しくはＬ、Ｚ４＝Ｓ若しくはＴ）であるＨＣＤＲ３、（４）アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ、Ｙ、Ｎ、Ｈ、Ｉ、Ｌ若しくはＦ、Ｚ６＝Ｇ、Ｓ、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｉ、Ｌ、Ｔ若しくはＤ、又は好ましくはＺ５＝Ｄ若しくはＹ、Ｚ６＝Ｇ若しくはＳ）であるＬＣＤＲ１、（５）アミノ酸配列がＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｗ若しくはＹ、Ｚ８＝Ｔ若しくはＧ、Ｘ４＝Ｄ、Ｓ若しくはＴ、又は好ましくはＺ７＝Ｓ若しくはＱ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）であるＬＣＤＲ２、及び（６）アミノ酸配列がＬＱＨＹＳＴＰＹＴ（配列番号１２に示される）であるＬＣＤＲ３を含む、請求項６から請求項９のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片。

【請求項11】

前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、
（１）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、若しくは
（２）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４若しくは配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、若しくは
（３）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２４若しくは配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含むか、
又は、好ましくは、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、
（１）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４若しくは配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、若しくは
（２）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４若しくは配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含むか、
又はより好ましくは、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片は、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、即ち、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む
請求項１０に記載の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片。

【請求項12】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、
配列番号５、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号８６又は配列番号１１２に示される配列と少なくとも８５％の同一性を有する重鎖可変領域ＶＨ、及び
配列番号６、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６４、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０又は配列番号１１１に示される配列と少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖可変領域ＶＬ
を含む、請求項６から請求項１１のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片。

【請求項13】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、並びに／又は以下のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域、
（１）それぞれ配列番号４５、配列番号４７若しくは配列番号４９に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号４６、配列番号４８若しくは配列番号５０に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、若しくは好ましくは、それぞれ配列番号４９に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号４８若しくは配列番号５０に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号４８に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号４９に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号５９、配列番号６０若しくは配列番号６２に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号６３に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号６４に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含むか、
あるいは、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、並びに／又は以下のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域、即ち、それぞれ配列番号６３及び配列番号６５～配列番号７５のいずれかに示されるＶＨ、及び／又は配列番号７６～配列番号７９のいずれかに示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、
あるいは、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、並びに／又は以下のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域、
（１）それぞれ配列番号７１に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号７６に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号７２に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号７７に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号７２若しくは配列番号７４に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号７６若しくは配列番号７９に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号７４若しくは配列番号７５に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号７７若しくは配列番号７８に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項６から請求項１２のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片。

【請求項14】

ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質であって、
（１）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２、又はその変異タンパク質と、
（２）抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と、
（３）ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面に含まれるジスルフィド結合と
を含み、
前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質に特異的に結合することができ、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質とＩＬ２Ｒα又はＩＬ２Ｒαを含むＩＬ－２受容体複合体（即ち、ＩＬ２Ｒα／β又はＩＬ２Ｒα／β／γ）との結合を競合的にブロックすることができ、
前記ジスルフィド結合は、前記抗原－抗体結合界面の前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質における少なくとも１つのシステイン変異及び前記抗原－抗体結合界面の前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片における少なくとも１つのシステイン変異を導入することによって形成され、
前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＩＬ２Ｒα、又はαβヘテロ二量体（即ち、ＩＬ２Ｒα／β）、又はαβγヘテロ三量体（即ち、ＩＬ２Ｒα／β／γ）に結合できないが、ＩＬ２Ｒβ及びγから構成される二量体受容体（即ち、ＩＬ２Ｒβ／γ）への結合活性及び機能活性を保持する、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項15】

前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片と前記ｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性（Ｋ_Ｄ）は＜５×１０^－８Ｍ、若しくは好ましくは、＜１×１０^－８Ｍ、＜５×１０^－９Ｍ、若しくは＜１×１０^－９Ｍ、若しくは＜５×１０^－１０Ｍ、若しくはより好ましくは、＜６×１０^－１０Ｍであり、かつ／又は前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片と前記ｈＩＬ－２変異タンパク質との解離速度定数（Ｋ_ｄｉｓ若しくはＫ_ｏｆｆ）は＜５×１０^－３ｓ^－１、＜１×１０^－３ｓ^－１、＜５×１０^－４ｓ^－１、若しくは＜３×１０^－４ｓ^－１である、請求項１４に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項16】

前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、ｈＩＬ－２若しくはその変異タンパク質とＩＬ２Ｒαとの結合界面を包含するか、又は前記抗原－抗体結合界面は、ｈＩＬ－２若しくはその変異タンパク質とＩＬ２Ｒαとの前記結合界面に部分的に重なるか、
あるいは、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のＡＢループ、Ｂヘリックス、Ｃヘリックス、ＢＣループ及び／若しくはＣＤループに位置し、又は好ましくはＡＢループ、Ｂヘリックス、Ｃヘリックス及びＣＤループに位置し、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のＩＬ２Ｒα結合界面は、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のＡＢループ及びＢヘリックスに位置するか、
あるいは、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質の第３０位～第４５位若しくはその隣接するアミノ酸残基、第５７位～第７７位若しくはその隣接するアミノ酸残基、及び／又は第９０位～第１１１位若しくはその隣接するアミノ酸残基に位置する、請求項１４又は請求項１５に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項17】

前記ｈＩＬ－２変異タンパク質のアミノ酸変異は、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片との前記結合界面に位置するか、又は好ましくは、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対して第６４位、第９０位及び／若しくは第１０４位に１つ以上のアミノ酸変異を含む、請求項１４から請求項１６のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項18】

配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対して、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、以下の変異、（１）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第６４位におけるＫのＧ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｎ若しくはＱへの変異、（２）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第９０位におけるＮのＲ、Ｋ若しくはＨへの変異、又は（３）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第１０４位におけるＭのＥ若しくはＤへの変異、のうちの少なくとも１つを含む、請求項１４から請求項１７のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２変異タンパク質。

【請求項19】

前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対する以下のアミノ酸変異、
（１）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第６４位におけるアミノ酸変異Ｋ６４Ｇ、
（２）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第９０位におけるアミノ酸変異Ｎ９０Ｒ、及び
（３）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第１０４位におけるアミノ酸変異Ｍ１０４Ｅ
のうちの１つ以上を含み、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応するアミノ酸変異Ｋ６４Ｇ及び／若しくはＮ９０Ｒを有し、若しくは好ましくは、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応するアミノ酸変異Ｋ６４Ｇ、Ｎ９０Ｒ及びＭ１０４Ｅ（配列番号３に示される）を有するか、
又はより好ましくは、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応するアミノ酸変異Ｋ６４Ｇ及びＮ９０Ｒ（配列番号２に示される）を有する、請求項１４から請求項１８のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項20】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、抗マウスＩＬ－２（ｍＩＬ－２）抗体及びそのヒト化抗体からなる群から選択され、更に、前記抗ｍＩＬ－２抗体は、ｍＩＬ－２とマウスＩＬ２Ｒα（ｍＩＬ２Ｒα）との結合部位を特異的に識別する抗ｍＩＬ－２抗体から選択され、前記抗ｍＩＬ－２抗体は前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と交差反応することができ、前記抗ＩＬ－２抗体は、ｈＩＬ－２のＩＬ２Ｒα結合部位を特異的に識別することができる他の抗ＩＬ－２ヒト化抗体、若しくはその抗原結合断片であることもでき、又は好ましくは前記他の抗ＩＬ－２ヒト化抗体はＮＡＲＡ１及びＴＣＢ２から選択され、
好ましくは、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、即ち、（１）アミノ酸配列がＸ１ＹＹＸ２Ｈ（Ｘ１＝Ａ又はＤ、Ｘ２＝Ｌ又はＭ）であるＨＣＤＲ１、（２）アミノ酸配列がＲＩＤＰＺ１ＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＸ３（Ｚ１＝Ｅ又はＤ、Ｘ３＝Ｎ、Ｓ又はＧ）であるＨＣＤＲ２、（３）アミノ酸配列がＺ２ＴＦＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ、Ｉ、Ｒ若しくはＴ、Ｚ３＝Ｙ、Ｌ、Ｈ若しくはＷ、Ｚ４＝Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、Ｙ若しくはＶ、又は好ましくはＺ２＝Ｖ若しくはＩ、Ｚ３＝Ｙ若しくはＬ、Ｚ４＝Ｓ若しくはＴ）であるＨＣＤＲ３、（４）アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ、Ｙ、Ｎ、Ｈ、Ｉ、Ｌ若しくはＦ、Ｚ６＝Ｇ、Ｓ、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｉ、Ｌ、Ｔ若しくはＤ、又は好ましくは、Ｚ５＝Ｄ若しくはＹ、Ｚ６＝Ｇ若しくはＳ）であるＬＣＤＲ１、（５）アミノ酸配列がＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｗ又はＹ、Ｚ８＝Ｔ又はＧ、Ｘ４＝Ｄ、Ｓ又はＴ、好ましくは、Ｚ７＝Ｓ又はＱ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）であるＬＣＤＲ２、及び（６）アミノ酸配列がＬＱＨＹＳＴＰＹＴ（配列番号１２に示される）であるＬＣＤＲ３を含む、請求項１４から請求項１９のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項21】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、
配列番号７、配列番号１３又は配列番号１４に示されるＨＣＤＲ１、配列番号８、配列番号１５、配列番号１６又は配列番号１９に示されるＨＣＤＲ２、配列番号９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２９又は配列番号３４に示されるＨＣＤＲ３、
配列番号１０、配列番号２６、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３又は配列番号４４に示されるＬＣＤＲ１、配列番号１１、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３２又は配列番号３３に示されるＬＣＤＲ２、及び配列番号１２又は配列番号３８に示されるＬＣＤＲ３
を含む、請求項１４から請求項２０のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項22】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、
（１）配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）配列番号１３若しくは配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５若しくは配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（５）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含み、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質中の前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、即ち、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸を有するＬＣＤＲ３、又はそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２０又は請求項２１に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項23】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、（１）アミノ酸配列がＸ１ＹＹＸ２Ｈ（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）であるＨＣＤＲ１、（２）アミノ酸配列がＲＩＤＰＺ１ＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＸ３（Ｚ１＝Ｅ又はＤ、Ｘ３＝Ｇ）であるＨＣＤＲ２、（３）アミノ酸配列がＺ２ＴＦＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ、Ｉ、Ｒ又はＴ、Ｚ３＝Ｙ、Ｌ、Ｈ又はＷ、Ｚ４＝Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、Ｙ又はＶ、好ましくは、Ｚ２＝Ｖ又はＩ、Ｚ３＝Ｙ又はＬ、Ｚ４＝Ｓ又はＴ）であるＨＣＤＲ３、（４）アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ、Ｙ、Ｎ、Ｈ、Ｉ、Ｌ又はＦ、Ｚ６＝Ｇ、Ｓ、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｉ、Ｌ、Ｔ又はＤ、好ましくは、Ｚ５＝Ｄ又はＹ、Ｚ６＝Ｇ又はＳ）であるＬＣＤＲ１、（５）アミノ酸配列がＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｗ又はＹ、Ｚ８＝Ｔ又はＧ、Ｘ４＝Ｄ、Ｓ又はＴ、好ましくは、Ｚ７＝Ｓ又はＱ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）であるＬＣＤＲ２、及び（６）アミノ酸配列がＬＱＨＹＳＴＰＹＴであるＬＣＤＲ３を含み、
好ましくは、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに以下の軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、
（１）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４若しくは配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２４若しくは配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含むか、
あるいは、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、
（１）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４若しくは配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４若しくは配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、若しくはそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含み、
好ましくは、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、即ち、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又はそれぞれ前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２０から請求項２２のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項24】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、
配列番号５、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号８６又は配列番号１１２に示される配列と少なくとも８５％の同一性を有する重鎖可変領域ＶＨ、及び
配列番号６、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６４、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０又は配列番号１１１に示される配列と少なくとも８５％の同一性を有する軽鎖可変領域ＶＬ
を含む、請求項１４から請求項２３のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項25】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、並びに以下のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域、
（１）それぞれ配列番号４５、配列番号４７若しくは配列番号４９に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号４６、配列番号４８若しくは配列番号５０に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、好ましくは、それぞれ配列番号４９に示されるＶＨアミノ酸配列、及び／若しくは配列番号４８若しくは配列番号５０に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号４８に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号４９に示されるＶＨアミノ酸配列、及び／若しくは配列番号５９、配列番号６０若しくは配列番号６２に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号６３に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号６４に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含むか、
あるいは、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、並びに／又は以下のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域、即ち、それぞれ配列番号６３及び配列番号６５～配列番号７５のいずれかに示されるＶＨ、並びに／又は配列番号７６～配列番号７９のいずれかに示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、
あるいは、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、並びに／又は以下のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域、
（１）それぞれ配列番号７１に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号７６に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号７２に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号７７に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号７２若しくは配列番号７４に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号７６若しくは配列番号７９に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号７４若しくは配列番号７５に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号７７若しくは配列番号７８に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１４から請求項２４のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項26】

前記ＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面はジスルフィド結合を含み、前記抗原－抗体結合界面は、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質とＩＬ２Ｒαとの結合界面に重なり、更に、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質のＡＢループ、Ｂヘリックス、Ｃヘリックス、ＢＣループ及びＣＤループに位置し、好ましくは前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第４１位～第４５位若しくはその隣接するアミノ酸残基、第５７位～第６８位若しくはその隣接するアミノ酸残基、及び／又は第９０位～第１０７位若しくはその隣接するアミノ酸残基に位置し、前記ジスルフィド結合は、前記抗原－抗体結合界面の前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片に導入された少なくとも１つのシステイン残基及び前記抗原－抗体結合界面の前記ｈＩＬ－２変異タンパク質に導入された少なくとも１つのシステイン残基によって形成され、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、前記ジスルフィド結合を形成するために導入された２つ以上のシステイン残基を含む
請求項１４から請求項２５のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項27】

前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、第１システイン残基を導入するために、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第４２位、第６０位、第６１位、第６４位、第６５位、第１０２位、及び第１０４位に１つ以上のアミノ酸変異を有する、請求項２６に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項28】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、（１）アミノ酸配列がＸ１ＹＹＸ２Ｈ（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）であるＨＣＤＲ１、（２）アミノ酸配列がＲＩＤＰＺ１ＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＸ３（Ｚ１＝Ｅ又はＤ、Ｘ３＝Ｇ）であるＨＣＤＲ２、（３）アミノ酸配列がＺ２ＴＦＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ又はＩ、Ｚ３＝Ｙ又はＬ、Ｚ４＝Ｓ又はＴ）であるＨＣＤＲ３、（４）アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ又はＹ、Ｚ６＝Ｇ又はＳ）であるＬＣＤＲ１、（５）アミノ酸配列がＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ又はＱ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）であるＬＣＤＲ２、及び（６）アミノ酸配列がＬＱＨＹＳＴＰＹＴ（配列番号１２に示される）であるＬＣＤＲ３を含み、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、第２システイン残基を導入するために、ＨＣＤＲ３の第３位、ＬＣＤＲ１の第７位、第８位及び／若しくは第９位、ＬＣＤＲ２の第１位及び第３位、又はＬＣＤＲ３の第４位に１つ以上のアミノ酸変異を有する、請求項２６に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項29】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、並びに／又は以下のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域、
（１）それぞれ配列番号６３に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号６４に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号６３及び配列番号６５～配列番号７５のいずれかに示されるＶＨ及び／若しくは配列番号７６～配列番号７９のいずれかに示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含み、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、第２システイン残基を導入するために、前記軽鎖可変領域のフレームワーク領域に１つ以上のアミノ酸変異を有し、前記アミノ酸変異は、前記軽鎖可変領域の第６７位及び／又は第６８位に位置する、請求項２６に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項30】

前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の前記抗原－抗体結合界面の前記ｈＩＬ－２変異タンパク質にアミノ酸変異の方式で導入され、前記第２システインは、前記抗原－抗体結合界面の前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片にアミノ酸変異の方式で導入され、好ましくは、前記アミノ酸変異はアミノ酸の置換、挿入又は付加であり、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質における前記第１システイン残基を導入するための部位及び前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片における前記第２システインを導入するための部位は正確にペアリングされることが可能であり、正確にペアリングされた前記部位は、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面に位置し、ペアリングされたアミノ酸残基間の空間的距離は１０オングストローム（１ｎｍ）より小さく、好ましくは、前記空間的距離は５オングストローム（０．５ｎｍ）より小さい、請求項２６から請求項２９のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項31】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記ヒト化抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面にジスルフィド結合を形成するための前記第１システイン残基及び前記第２システイン残基のペアは、以下のペアリングされたアミノ酸変異、
（１）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第４２位における変異Ｆ４２Ｃ、第６４位における変異Ｋ６４Ｃ、若しくは第６５位における変異Ｐ６５Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片における、アミノ酸配列がＺ２ＴＦＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ若しくはＩ、Ｚ３＝Ｙ若しくはＬ、Ｚ４＝Ｓ若しくはＴ）であるＨＣＤＲ３の第３位における変異Ｆ３Ｃによって導入される、及び／又は
（２）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第６０位における変異Ｅ６０Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片における、アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ若しくはＹ、Ｚ６＝Ｇ若しくはＳ）であるＬＣＤＲ１の第７位における変異Ｇ７Ｃ若しくはＳ７Ｃによって導入される、及び／又は
（３）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第６１位における変異Ｅ６１Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片における、アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ若しくはＹ、Ｚ６＝Ｇ若しくはＳ）であるＬＣＤＲ１の第７位における変異Ｇ７Ｃ若しくはＳ７Ｃによって導入されるか、若しくは前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片における、アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ若しくはＹ、Ｚ６＝Ｇ若しくはＳ）であるＬＣＤＲ１の第８位における変異Ｎ８Ｃによって導入されるか、若しくは前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片における、アミノ酸配列がＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ若しくはＱ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）であるＬＣＤＲ２の第１位における変異Ｓ１Ｃ若しくはＱ１Ｃによって導入される、及び／又は
（４）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０４位における変異Ｍ１０４Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片における、アミノ酸配列がＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ若しくはＱ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）であるＬＣＤＲ２の第３位における変異Ｔ３Ｃによって導入される、及び／又は
（５）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０２位における変異Ｔ１０２Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片の軽鎖可変領域の第６７位における変異Ｓ６７Ｃによって導入されるか、若しくは前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片の前記軽鎖可変領域の第６８位における変異Ｇ６８Ｃによって導入される、及び／又は
（６）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第６４位における変異Ｋ６４Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片における、アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ若しくはＹ、Ｚ６＝Ｇ若しくはＳ）であるＬＣＤＲ１の第９位における変異Ｙ９Ｃによって導入されるか、若しくは前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片の、アミノ酸配列がＬＱＨＹＳＴＰＹＴ（配列番号１２）であるＬＣＤＲ３の第４位における変異Ｙ４Ｃによって導入される
のうちの１つ以上から選択されるか、
あるいは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記ヒト化抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面に前記ジスルフィド結合を形成するための前記第１システイン残基及び前記第２システイン残基のペアは、以下のペアリングされたアミノ酸変異、
（１）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０４位における変異Ｍ１０４Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ２の第３位における変異Ｔ３Ｃによって導入され、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む、並びに／又は
（２）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０２位における変異Ｔ１０２Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片の前記軽鎖可変領域の第６７位における変異Ｓ６７Ｃによって導入され、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその結合断片は、配列番号７７に示されるＶＬと８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくは前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片の前記軽鎖可変領域の第６８位における変異Ｇ６８Ｃによって導入され、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその結合断片は、配列番号７７に示されるＶＬと８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、並びに／又は
（３）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第４２位における変異Ｆ４２Ｃ、第６４位における変異Ｋ６４Ｃ、若しくは第６５位における変異Ｐ６５Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片における、アミノ酸配列がＺ２ＴＦＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ若しくはＩ、Ｚ３＝Ｙ若しくはＬ、Ｚ４＝Ｓ若しくはＴ）であるＨＣＤＲ３の第３位における変異Ｆ３Ｃによって導入され、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む
のうちの１つ以上から選択される、請求項２６から請求項３０のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項32】

ジスルフィド結合は、野生型ｈＩＬ－２とｈＩＬ－２のＩＬ２Ｒα結合部位を特異的に識別する他の抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片とによって形成される抗原－抗体複合体の結合界面において導入され、前記抗原－抗体複合体は、ｈＩＬ－２：ＮＡＲＡ１抗原－抗体複合体及びｈＩＬ－２：ＴＣＢ２抗原－抗体複合体から選択され、
前記ＮＡＲＡ１抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、
前記ＴＣＢ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む
請求項１４から請求項２０のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項33】

前記ｈＩＬ－２：ＮＡＲＡ１抗原－抗体複合体の結合界面は、ｈＩＬ－２とＩＬ２Ｒａとの結合界面を包含し、前記ｈＩＬ－２：ＮＡＲＡ１抗原－抗体複合体の前記結合界面は、前記ｈＩＬ－２のＡＢループ、Ｂヘリックス及びＢＣループに位置し、更に、前記ｈＩＬ－２：ＮＡＲＡ１抗原－抗体複合体の前記結合界面は、前記ｈＩＬ－２における第３０位～第４３位又はその隣接するアミノ酸残基及び第７１位～第７７位又はその隣接するアミノ酸残基に位置する、請求項３２に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項34】

前記ｈＩＬ－２：ＮＡＲＡ１抗原－抗体複合体の結合界面は、前記ジスルフィド結合を形成するように２つ以上のシステイン残基を含み、前記ｈＩＬ－２は、前記第１システイン残基を導入するために、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対して第３４位、第３７位、第４１位、第４２位、第６８位、第７３位、第７５位、第７７位及び第１１１位に１つ以上のアミノ酸変異を有し、前記ＮＡＲＡ１抗体又はその抗原結合断片は、前記第２システイン残基を導入するために、ＣＤＲ及び／又はＦＲ領域の特定の位置に１つ以上のアミノ酸変異を有し、前記アミノ酸変異は、前記ＮＡＲＡ１抗体又はその抗原結合断片のＨＣＤＲ１の第１位、並びに／又はＨＣＤＲ２の第２位、第６位及び／若しくは第８位、並びに／又はＨＣＤＲ３の第３位及び／若しくは第８位、並びに／又はＬＣＤＲ１の第９位、並びに／又はＬＣＤＲ３の第３位、第４位、及び／若しくは第６位に位置するアミノ酸変異を含む、請求項３２又は請求項３３に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項35】

前記ｈＩＬ－２：ＮＡＲＡ１抗原－抗体複合体の前記結合界面に前記ジスルフィド結合を形成するための前記第１システイン残基及び前記第２システイン残基のペアは、以下のペアリングされたアミノ酸変異、
（１）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３４位における変異Ｐ３４Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ３の第８位における変異Ａ８Ｃによって導入されるか、若しくは前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ３の第３位若しくは第４位における変異Ｓ３Ｃ若しくはＮ４Ｃによって導入される、並びに／又は
（２）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３７位における変異Ｔ３７Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ３の第６位における変異Ｄ６Ｃによって導入される、並びに／又は
（３）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第４１位における変異Ｔ４１Ｃであり、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ２の第２位における変異Ｉ２Ｃによって導入される、並びに／又は
（４）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第４２位における変異Ｆ４２Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ２の第８位における変異Ｇ８Ｃによって導入される、並びに／又は
（５）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第６８位における変異Ｅ６８Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ１の第１位における変異Ｎ１Ｃによって導入される、並びに／又は
（６）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第７３位における変異Ａ７３Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ３の第３位における変異Ｇ３Ｃによって導入される、並びに／又は
（７）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第７５位若しくは第７７位における変異Ｓ７５Ｃ若しくはＮ７７Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ１の第９位におけるアミノ酸変異Ｄ９Ｃによって導入される、並びに／又は
（８）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第１１１位における変異Ｔ１１１Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ２の第６位における変異Ｓ６Ｃによって導入される
のうちの１つ以上から選択され、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２：ＮＡＲＡ１抗原－抗体複合体の前記結合界面に前記ジスルフィド結合を形成するための前記第１システイン残基及び前記第２システイン残基のペアは、以下のペアリングされたアミノ酸変異、
（１）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３７位における変異Ｔ３７Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ３の第６位における変異Ｄ６Ｃによって導入される、又は
（２）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第６８位における変異Ｅ６８Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ１の第１位における変異Ｎ１Ｃによって導入される、又は
（３）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第７５位若しくは第７７位における変異Ｓ７５Ｃ若しくはＮ７７Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ１の第９位における変異Ｄ９Ｃによって導入される、及び／又は
（４）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第１１１位における変異Ｔ１１１Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ２の第６位における変異Ｓ６Ｃによって導入される
のうちの１つ以上から選択される請求項３２から請求項３４のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項36】

前記ｈＩＬ－２：ＴＣＢ２抗原－抗体複合体の結合界面は、ｈＩＬ－２とＩＬ２Ｒαとの結合界面を包含し、前記ｈＩＬ－２：ＴＣＢ２抗原－抗体複合体の前記結合界面は、前記ｈＩＬ－２のＡＢループ、Ｂヘリックス及びＣＤループに位置し、更に、前記ｈＩＬ－２：ＴＣＢ２抗原－抗体複合体の前記結合界面は、前記ｈＩＬ－２における第３４位～第４５位又はその隣接するアミノ酸残基、第６２位～第７６位又はその隣接するアミノ酸残基、及び第１１１位又は隣接するアミノ酸残基に位置する、請求項３２に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項37】

前記ｈＩＬ－２：ＴＣＢ２抗原－抗体複合体の結合界面は、前記ジスルフィド結合を形成するように２つ以上のシステイン残基を含み、前記ｈＩＬ－２は、前記第１システイン残基を導入するために、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対して第３４位、第３６位、第３７位、第４２位、第６８位及び第１０９位に１つ以上のアミノ酸変異を有し、前記ＴＣＢ２抗体又はその抗原結合断片は、第２システイン残基を導入するために、ＣＤＲ及び／又はフレームワーク領域の特定の位置に１つ以上のアミノ酸変異を有し、前記アミノ酸変異は、前記ＴＣＢ２抗体又はその抗原結合断片のＨＣＤＲ２の第６位、並びに／又はＨＣＤＲ３の第３位、第５位、第６位及び／若しくは第７位、並びに／又はＬＣＤＲ１の第４位、並びに／又はＬＣＤＲ３の第４位、第５位、及び／若しくは第６位に位置するアミノ酸変異を含む、請求項３２又は請求項３６に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項38】

前記ｈＩＬ－２：ＴＣＢ２抗原－抗体複合体の前記結合界面に前記ジスルフィド結合を形成するための前記第１システイン残基及び前記第２システイン残基のペアは、以下のペアリングされたアミノ酸変異、
（１）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３４位における変異Ｐ３４Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ１の第４位における変異Ｔ４Ｃによって導入されるか、若しくは前記第２システインは、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ３の第４位若しくは第５位における変異Ｄ４Ｃ若しくはＮ５Ｃによって導入される、及び／又は
（２）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３６位における変異Ｌ３６Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ３の第５位における変異Ｎ５Ｃによって導入される、及び／又は
（３）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３７位における変異Ｔ３７Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ３の第５位若しくは第６位における変異Ｎ５Ｃ若しくはＬ６Ｃによって導入される、及び／又は
（４）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３８位における変異Ｒ３８Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ３の第７位における変異Ｆ７Ｃによって導入される、及び／又は
（５）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第４２位における変異Ｆ４２Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ３の第５位における変異Ｒ５Ｃによって導入される、及び／又は
（６）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第６８位における変異Ｅ６８Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ３の第３位若しくは第６位における変異Ａ３Ｃ若しくはＧ６Ｃによって導入される、及び／又は
（７）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第１０９位における変異Ｄ１０９Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ２の第６位における変異Ｄ６Ｃによって導入される
のうちの１つ以上から選択され、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２：ＴＣＢ２抗原－抗体複合体の前記結合界面に前記ジスルフィド結合を形成するための前記第１システイン残基及び前記第２システイン残基のペアは、以下のペアリングされたアミノ酸変異、
（１）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３４位における変異Ｐ３４Ｃによって導入され、前記第２システインは、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ３の第４位若しくは第５位における変異Ｄ４Ｃ若しくはＮ５Ｃによって導入される、又は
（２）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３６位における変異Ｌ３６Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ３の第５位における変異Ｎ５Ｃによって導入される、又は
（３）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３７位における変異Ｔ３７Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ３の第６位における変異Ｌ６Ｃによって導入される、又は
（４）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第４２位における変異Ｆ４２Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ３の第５位における変異Ｒ５Ｃによって導入される、及び／又は
（５）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第６８位における変異Ｅ６８Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ３の第３位における変異Ａ３Ｃによって導入される
のうちの１つ以上から選択される、請求項３２、請求項３６及び請求項３７のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項39】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３は１つ以上のシステイン残基変異を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、（１）アミノ酸配列がＸ１ＹＹＸ２Ｈ（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ、配列番号１４に示される）であるＨＣＤＲ１、（２）アミノ酸配列がＲＩＤＰＺ１ＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＸ３（Ｚ１＝Ｅ又はＤ、Ｘ３＝Ｇ）であるＨＣＤＲ２、（３）アミノ酸配列がＺ２ＴＸ_ＩＩＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ又はＩ、Ｘ_ＩＩ＝Ｆ又はＣ、Ｚ３＝Ｙ又はＬ、Ｚ４＝Ｓ又はＴ）であるＨＣＤＲ３、（４）アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６Ｘ_ＩＸ_ＩＶＬＳ（Ｚ５＝Ｄ又はＹ、Ｚ６＝Ｇ、Ｓ又はＣ、Ｘ_Ｉ＝Ｎ又はＣ、Ｘ_ＩＶ＝Ｙ又はＣ）であるＬＣＤＲ１、（５）アミノ酸配列がＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ、Ｑ又はＣ、Ｚ８＝Ｔ又はＣ、Ｘ４＝Ｓ）であるＬＣＤＲ２、及び（６）アミノ酸配列がＬＱＨＸ_ＩＩＩＳＴＰＹＴ（Ｘ_ＩＩＩ＝Ｙ又はＣ）であるＬＣＤＲ３を含む、請求項１４から請求項３１のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項40】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３は１つ以上のシステイン残基変異を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、
（１）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号３０若しくは配列番号３１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（２）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７、配列番号３２若しくは配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（３）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（４）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号３５若しくは配列番号３６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（５）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７、配列番号３２若しくは配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（６）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（７）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号３８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（８）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含み、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、
（１）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（２）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含む、請求項３９に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項41】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、軽鎖可変領域の第１位又は前記抗ＩＬ－２抗体のＬＣＤＲ１の第４位にもアミノ酸変異を有することができ、前記アミノ酸変異は、Ｄ１Ｅ、Ｑ４Ｄ、Ｑ４Ｅ、Ｑ４Ｓ、Ｑ４Ｇ、Ｑ４Ｋ、又はＱ４Ｒを含み、好ましくは、前記アミノ酸変異は、Ｄ１Ｅ、Ｑ４Ｄ、Ｑ４Ｅ、Ｑ４Ｓ、又はＱ４Ｇを含む、請求項１４から請求項３１、請求項３９及び請求項４０のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項42】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、及び／又はＬＣＤＲ３は１つ以上のシステイン変異を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、（１）配列番号１４２又は配列番号１４８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、（２）配列番号１４３、配列番号１４９、配列番号１５０又は配列番号１５１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、（３）配列番号１４４、配列番号１５２又は配列番号１５３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、（４）配列番号１４５又は配列番号１５４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、（５）配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、（６）配列番号１４７、配列番号１５５、配列番号１５６又は配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、
更に、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３並びに前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、
（１）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（２）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１５２若しくは配列番号１５３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（３）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１５４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（４）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１５５、配列番号１５６若しくは配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（５）配列番号１４８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（６）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５０若しくは配列番号１５１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含み、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、
（１）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（２）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１５４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（３）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（４）配列番号１４８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含む、請求項１４から請求項２０及び請求項３２から請求項３５のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項43】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、及び／又はＬＣＤＲ３は１つ以上のシステイン変異を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、（１）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、（２）配列番号１７１又は配列番号１７６に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、（３）配列番号１７２、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９又は配列番号１８０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、（４）配列番号１７３又は配列番号１８１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、（５）配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、（６）配列番号１７５、配列番号１８２、配列番号１８３又は配列番号１８４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、
更に、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、
（１）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９若しくは配列番号１８０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４としてのアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（２）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７６に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（３）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１８１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（４）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１８２、配列番号１８３若しくは配列番号１８４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含み、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、
（１）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７７若しくは配列番号１７８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（２）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１８２、配列番号１８３若しくは配列番号１８４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含む、請求項１４から請求項２０、請求項３２、及び請求項３６から請求項３８のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項44】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域並びに／又はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号６３、配列番号８６、配列番号７４若しくは配列番号１１２に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号６４、配列番号７７、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０若しくは配列番号１１１に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
好ましくは、前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号８６若しくは配列番号７４に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号６４、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号１０７、配列番号１０８若しくは配列番号１０９に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、
あるいは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、
（１）それぞれ配列番号８６に示される重鎖可変領域及び配列番号６４、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０若しくは配列番号９１に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号７４に示される重鎖可変領域及び配列番号１０７、配列番号１０８若しくは配列番号１０９に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１４から請求項３１、請求項３９及び請求項４０のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項45】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域並びに／又はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１４０、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２若しくは配列番号１６３に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１４１、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６若しくは配列番号１６７に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
更に、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域は、
（１）それぞれ配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２若しくは配列番号１６３に示される重鎖可変領域及び配列番号１４１に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号１４０に示される重鎖可変領域及び配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６若しくは配列番号１６７に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含み、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、
（１）それぞれ配列番号１５８若しくは配列番号１６１に示される重鎖可変領域及び配列番号１４１に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号１４０に示される重鎖可変領域及び配列番号１６４若しくは配列番号１６７に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１４から請求項２０、請求項３２から請求項３５及び請求項４２のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項46】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域並びに／又はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１６８、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７、配列番号１８８若しくは配列番号１８９に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１６９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２若しくは配列番号１９３に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
更に、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、
（１）それぞれ配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７、配列番号１８８若しくは配列番号１８９に示される重鎖可変領域及び配列番号１６９に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号１６８に示される重鎖可変領域及び配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２若しくは配列番号１９３に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含み、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、
（１）それぞれ配列番号１８５若しくは配列番号１８６に示される重鎖可変領域及び配列番号１６９に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号１６８に示される重鎖可変領域と及び配列番号１９１、配列番号１９２若しくは配列番号１９３に示される軽鎖可変領域少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１４から請求項２０、請求項３２、請求項３６から請求項３８及び請求項４３のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項47】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、リンカーによってｈＩＬ－２又はその変異タンパク質に連結されることができ、前記リンカーは（Ｇ４Ｓ）_４、（Ｇ４Ｓ）_３、（ＧＡＦ）_２から選択され、好ましくは、前記リンカーは（Ｇ４Ｓ）_４である、請求項１４から請求項４６のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項48】

前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質は、以下の１つ以上のアミノ酸変異、
（１）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応するＮ末端の最初の３つ若しくは５つのアミノ酸の削除、又は
（２）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応するＮ末端の３番目のアミノ酸残基におけるアミノ酸変異、及び／又は
（３）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第１２５位におけるアミノ酸変異Ｃ１２５Ａ、Ｃ１２５Ｌ、Ｃ１２５Ｓ、Ｃ１２５Ｑ、若しくはＣ１２５Ｖ
を更に含み、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質は、以下のアミノ酸変異、即ち、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する、最初の３つのＮ末端アミノ酸の削除、及び／又は第１２５位におけるアミノ酸変異Ｃ１２５Ａ、Ｃ１２５Ｌ、Ｃ１２５Ｓ、Ｃ１２５Ｑ、若しくはＣ１２５Ｖを含む
請求項１４から請求項４７のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項49】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は第１ポリペプチドを含み、前記第１ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０、配列番号２１１、配列番号２１２、配列番号２１３、配列番号２１４、配列番号２１５、配列番号２１６、配列番号２１７、配列番号２１８、配列番号２１９、配列番号２２０、配列番号２２１、配列番号２２２、配列番号２２３、配列番号２２４、配列番号２２５又は配列番号２２６と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有する、請求項１４から請求項４８のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項50】

前記ＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドを含み、前記第１ポリペプチドは、システイン変異を有するｈＩＬ－２又はその変異タンパク質を含み、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質は前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の１つの可変領域に操作可能に連結され、前記第２ポリペプチドは、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の別の可変領域を含み、
更に、前記第１ポリペプチドは、前記システイン残基の変異を有するｈＩＬ－２又はその変異タンパク質、リンカー及び前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の１つの可変領域を含み、別のシステイン変異が前記第１ポリペプチドにおける前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片の１つの可変領域及び／又は前記第２ポリペプチドにおける前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片の前記別の可変領域に配置されることが可能であることにより、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質における前記システイン変異と正確にペアリングされて安定なジスルフィド結合が形成されることが可能であり、前記ジスルフィド結合は、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面に位置する
請求項１４から請求項４９のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項51】

前記第１ポリペプチドは、システイン残基変異を有する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質、リンカー及び前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の重鎖可変領域を含み、前記第２ポリペプチドは前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の軽鎖可変領域を含み、前記第１ポリペプチドは、配列番号９５～配列番号１０３、配列番号１１３～配列番号１２０、若しくは配列番号１３３～配列番号１３８のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は前記第２ポリペプチドは、配列番号６４、配列番号７７、配列番号８０～配列番号８５、配列番号８７～配列番号９３、若しくは配列番号１０４～配列番号１１１のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４９又は請求項５０に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項52】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の第１ポリペプチド及び第２ポリペプチド、
（１）それぞれ配列番号９５に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８０に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号９６に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８１に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号９７に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８２に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号９８に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８３に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（５）それぞれ配列番号９９に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８４に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（６）それぞれ配列番号１００に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８５に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（７）それぞれ配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３及び配列番号１３３～配列番号１３８のいずれかに示される前記第１ポリペプチド及び配列番号６４に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（８）それぞれ配列番号１０２に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８７～配列番号９３のいずれかに示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（９）それぞれ配列番号１１３に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１０４、配列番号１０５若しくは配列番号１０６に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１０）それぞれ配列番号１１４に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１０７に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１１）それぞれ配列番号１１５に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１０８若しくは配列番号１０９に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１２）それぞれ配列番号１１６、配列番号１１７若しくは配列番号１１９に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号７７に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１３）それぞれ配列番号１１８に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１１０に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１４）それぞれ配列番号１２０に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１０４に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１５）それぞれ配列番号１１８に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１１１に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含み、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の第１及び第２のポリペプチド、
（１）それぞれ配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３及び配列番号１３３～配列番号１３８のいずれかに示される前記第１ポリペプチド及び配列番号６４に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号１０２に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８７～配列番号９１のいずれかに示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号１１４に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１０７に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号１１５に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１０８若しくは配列番号１０９に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項５１に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項53】

前記第１ポリペプチドは、システイン変異を有するｈＩＬ－２変異タンパク質、リンカー及び前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の軽鎖可変領域を含み、前記第２ポリペプチドは前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の重鎖可変領域を含み、前記第１ポリペプチドは、配列番号２０６～配列番号２２６のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は前記第２ポリペプチドは、配列番号１４０、配列番号１５８～配列番号１６３、配列番号１６８若しくは配列番号１８５～配列番号１８９のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項４９又は請求項５０に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項54】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の第１及び第２のポリペプチド、
（１）それぞれ配列番号２０６に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１５８に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号２０７に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１５９に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号２０８に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１６０に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号２０９～配列番号２１３のいずれかに示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１４０に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（５）それぞれ配列番号２１４に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１６１に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（６）それぞれ配列番号２１５に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１６２に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（７）それぞれ配列番号２１６に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１６３に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（８）それぞれ配列番号２１７に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１８５若しくは配列番号１８７に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（９）それぞれ配列番号２１８に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１８６に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１０）それぞれ配列番号２１９に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１８８に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１１）それぞれ配列番号２２０に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１８９に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１２）それぞれ配列番号２２１～配列番号２２６のいずれかに示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１６８に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含み、
好ましくは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の第１及び第２のポリペプチド、
（１）それぞれ配列番号２０６に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１５８に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号２０９、配列番号２１０若しくは配列番号２１３に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１４０に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号２１４に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１６１に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号２１７に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１８５に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（５）それぞれ配列番号２１８に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１８６に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（６）それぞれ配列番号２２２、配列番号２２３、配列番号２２４若しくは配列番号２２６に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１６８に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項５３に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項55】

ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質であって、
（１）請求項１から請求項５のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２変異タンパク質と、
（２）請求項６から請求項１３のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と、
（３）前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面に含まれるジスルフィド結合と
を含み、
前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、ＩＬ２Ｒαと競合して前記ｈＩＬ－２変異タンパク質に結合することができ、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質とＩＬ２Ｒα又は前記ＩＬ２Ｒαサブユニットを含むＩＬ－２受容体複合体（即ち、ＩＬ２Ｒα／β又はＩＬ２Ｒα／β／γ）との結合をブロックすることができ、
前記抗原－抗体結合界面は、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質とＩＬ２Ｒαとの結合界面に部分的に重なり、前記ジスルフィド結合は、前記抗原－抗体結合界面の前記ｈＩＬ－２変異タンパク質に導入された少なくとも１つのシステイン残基及び前記抗原－抗体結合界面の前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片に導入された少なくとも１つのシステイン残基によって形成され、
前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＩＬ２Ｒのαサブユニット、又はα／βヘテロ二量体、又はα／β／γヘテロ三量体に結合できないが、ＩＬ２Ｒβ及びγｃから構成されるヘテロ二量体受容体（即ち、ＩＬ２Ｒβ／γ）への結合活性及び機能活性を保持する、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項56】

前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質のＡＢループ、Ｂヘリックス、Ｃヘリックス、ＢＣループ及び／又はＣＤループに位置し、好ましくは前記ｈＩＬ－２変異タンパク質のＡＢループ、Ｂヘリックス、Ｃヘリックス及びＣＤループに位置し、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質のＩＬ２Ｒα結合界面は、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質のＡＢループ及びＢヘリックスに位置する、請求項５５に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項57】

前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第３０位～第４５位若しくはその隣接するアミノ酸残基、第５７位～第７７位若しくはその隣接するアミノ酸残基、及び／又は第９０位～第１１１位若しくはその隣接するアミノ酸残基に位置し、好ましくは、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第４１位～第４５位若しくはその隣接するアミノ酸残基、第５７位～第６８位若しくはその隣接するアミノ酸残基、及び／又は第９０位～第１０７位若しくはその隣接するアミノ酸残基に位置する、請求項５５又は請求項５６に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項58】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質中の前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、以下のシステイン残基を導入することによって形成された２つ以上のジスルフィド結合を含み、
（１）前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、第１システイン残基を導入するために、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第４２位、第６４位、第６５位、第１０２位、及び第１０４位に１つ以上のアミノ酸変異を有し、かつ
（２）請求項６から請求項１３のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片は、第２システイン残基を導入するために、ＨＣＤＲ３の第３位及びＬＣＤＲ２の第３位に１つ若しくは２つのアミノ酸変異を有するか、又は、請求項１３に記載の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片は、第２システイン残基を導入するために、軽鎖可変領域のフレームワーク領域に１つ若しくは２つのアミノ酸変異を有し、前記アミノ酸変異は、前記軽鎖可変領域の第６７位及び／又は第６８位に位置し、
前記ｈＩＬ－２変異タンパク質における前記第１システイン残基を導入するための部位及び前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片における前記第２システインを導入するための部位は正確にペアリングされることが可能であり、正確にペアリングされた前記部位は、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面に位置し、ペアリングされたアミノ酸残基間の空間的距離は１０オングストローム（１ｎｍ）より小さく、好ましくは、５オングストローム（０．５ｎｍ）より小さい
請求項５５から請求項５７のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項59】

前記ＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質中の前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面にジスルフィド結合を形成するための前記第１システイン残基及び前記第２システイン残基のペアリングは、以下のペアリングされたアミノ酸変異、
（１）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０４位におけるアミノ酸変異Ｍ１０４Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ２の第３位におけるアミノ酸変異Ｔ３Ｃによって導入され、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む、並びに／又は
（２）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０２位におけるアミノ酸変異Ｔ１０２Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片の軽鎖可変領域の第６７位におけるアミノ酸変異Ｓ６７Ｃによって導入され、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその結合断片は、配列番号７７に示されるＶＬと８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、若しくは前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片の軽鎖可変領域の第６８位におけるアミノ酸変異Ｇ６８Ｃによって導入され、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその結合断片は、配列番号７７に示されるＶＬと８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、並びに／又は
（３）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第４２位アミノ酸残基におけるアミノ酸変異Ｆ４２Ｃ、若しくは第６４位アミノ酸残基におけるＫ６４Ｃ、若しくは第６５位におけるＰ６５Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ３の第３位におけるアミノ酸変異Ｆ３Ｃによって導入され、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号３９～配列番号４２のいずれかに示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む
のうちの１つ以上から選択される、請求項５５から請求項５８のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項60】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域及びＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、前記ＨＣＤＲ３及び／又はＬＣＤＲ２はシステイン変異を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、
（１）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０若しくは配列番号３９～配列番号４２のいずれかに示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又は
（２）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含む、請求項５５から請求項５９のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項61】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、並びに／又はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号８６若しくは配列番号７４に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号６４、配列番号８７～配列番号９１、配列番号１０７、配列番号１０８若しくは配列番号１０９のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
更に、前記重鎖可変領域及び前記軽鎖可変領域は、
（１）それぞれ配列番号８６に示される重鎖可変領域及び配列番号６４若しくは配列番号８７～配列番号９１のいずれかに示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号７４に示される重鎖可変領域及び配列番号１０７、配列番号１０８若しくは配列番号１０９に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項５５から請求項６０のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項62】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、抗体の重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含む定常領域も含み、前記重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域のＦｃ領域の天然及び変異体の形態を含み、二量体形成を促進するヒンジ領域を含むポリペプチドの切断形態を更に含み、好ましいＦｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含むヒトＩｇＧに由来し、
更に、前記Ｆｃ領域は工学的に改変されたヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含み、前記工学的に改変されたヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、以下の１つ以上のアミノ酸置換変異、
（１）前記Ｆｃ領域とＦｃγＲ及びＣ１ｑとの結合活性を低減するＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ（ＥＵ番号システム）、並びに／又は
（２）前記ｈＩＬ－２／抗ＩＬ－２融合タンパク質の血漿／血清半減期を延長するＮ２０３Ｄ／Ｋ２７４Ｑ／Ｑ４１９Ｅ（ＥＵ番号システム）
を含む、請求項１４から請求項６１のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項63】

請求項１から請求項５のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２変異タンパク質、請求項６から請求項１３のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項１４から請求項６２のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質をコードする核酸。

【請求項64】

請求項６３に記載の核酸を発現することができる発現ベクター。

【請求項65】

請求項６３に記載の核酸又は請求項６４に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。

【請求項66】

請求項６５に記載の宿主細胞を使用して、請求項１から請求項５のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２変異タンパク質、請求項６から請求項１３のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項１４から請求項６２のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を製造する方法であって、（１）前記ｈＩＬ－２変異タンパク質、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又は前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を前記宿主細胞において発現する工程と、（２）前記ｈＩＬ－２変異タンパク質、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又は前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を前記宿主細胞又は細胞培養液から単離する工程とを含む、方法。

【請求項67】

請求項６から請求項１３のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項１４から請求項６２のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む二重特異性分子であって、前記二重特異性抗体の２つのアームの１つは、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又は前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含み、もう１つのアームは、ｈＩＬ－２以外の抗原、好ましくは癌に関連する抗原若しくは免疫チェックポイントタンパク質抗原に特異性を有する抗体を含むか、又は免疫エフェクター細胞に関連する抗原に特異的に結合する抗体若しくはその抗原結合断片を含み、前記癌に関連する抗原は、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＢＣＭＡ、ＳＬＡＭＦ７、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥｐｈＢ２、Ｅ－セレクチン、ＥｐＣａｍ、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＡ、ＥＲＢｂ３、ｃ－ＭＥＴ、ＩＬＴ３、ＩＬＴ７、５Ｔ４、ＧＰＣ－３、ＤＬＬ３などから選択されてもよく、前記免疫チェックポイントタンパク質抗原は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＣＤ１６０、２Ｂ４、又はＴＧＦＲから選択されてもよい、二重特異性分子。

【請求項68】

請求項６から請求項１３のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項１４から請求項６２のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む、免疫コンジュゲート、キメラ抗原受容体、工学的に改変されたＴ細胞受容体、又は腫瘍溶解性ウイルス。

【請求項69】

請求項６から請求項１３のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、請求項１４から請求項６２のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、請求項６７に記載の二重特異性分子、又は請求項６８に記載の免疫コンジュゲート、キメラ抗原受容体、工学的に改変されたＴ細胞受容体若しくは腫瘍溶解性ウイルスと、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。

【請求項70】

請求項６９に記載の医薬組成物と、任意選択で別の抗癌剤及び／又は免疫調節剤とを含む薬入れであって、前記抗癌剤は、微小管破壊剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡインターカレータ、アルキル化剤、ホルモン療法剤、キナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤、ＩＧＦＲ阻害剤及びＭｅｔ阻害剤を含めたチロシンキナーゼ阻害剤）、受容体拮抗剤、腫瘍細胞アポトーシスの活性化剤（ＩＡＰ阻害剤、Ｂｃｌ２阻害剤、ＭＣ１１阻害剤、ＴＲＡＩＬ阻害剤、ＣＨＫ阻害剤を含む）、又はいずれかの抗血管新生薬を含み、前記免疫調節剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、又はＴＧＦＲ阻害剤を含む、薬入れ。

【請求項71】

有効量の請求項６から請求項１３のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項１４から請求項６２のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、又は請求項６９に記載の医薬組成物を含むキット。

【請求項72】

増殖性疾患、感染性疾患及び免疫不全疾患を含めた疾患を治療するための医薬組成物又は製剤の製造における請求項６から請求項１３のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項１４から請求項６２のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の使用であって、前記増殖性疾患は癌及び他の細胞増殖性障害を含む、使用。

【請求項73】

前記癌は、黒色腫、肺癌、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、腎臓癌、肝臓癌、脳癌、食道癌、胆嚢癌、膵臓癌、胃癌、甲状腺癌、膀胱癌及びリンパ腫を含み、前記免疫不全疾患はＨＩＶ陽性、免疫抑制疾患、慢性感染性疾患を含む、請求項７２に記載の使用。

【請求項74】

宿主の免疫応答を改善することによって疾患、病状又は障害を治療する方法であって、請求項６から請求項１３のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項１４から請求項６２のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、又は請求項６９に記載の医薬組成物、又は請求項７０に記載の薬入れ、又は請求項７１に記載のキットを対象に治療有効量で投与して、ＩＬ２Ｒβ／γを発現するエフェクター細胞（例えば、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞）を特異的に活性化することによって、疾患状態を改善することを含む、方法。

【請求項75】

免疫系を刺激する方法であって、請求項６から請求項１３のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項１４から請求項６２のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、又は請求項６９に記載の医薬組成物、又は請求項７０に記載の薬入れ、又は請求項７１に記載のキットを対象に治療有効量で投与して前記免疫系を刺激することを含み、前記免疫系の刺激は、前記対象における、免疫の全般的な増加、Ｔ細胞機能の増加、Ｂ細胞機能の増加、リンパ球機能の回復、ＩＬ２Ｒβ／γ発現の増加、Ｔ細胞応答性の増加、ナチュラルキラー細胞活性又はリンホカイン活性化キラー細胞活性の増加、ＣＤ８^＋Ｔ細胞とＣＤ４^＋Ｔ細胞との比率の増加を含む、方法。

【請求項76】

宿主免疫系に対する刺激が有益である疾患状態を治療するか、緩和するか又は予防する方法であって、請求項６から請求項１３のいずれか１項に記載の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又は請求項１４から請求項６２のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、又は請求項６９に記載の医薬組成物、又は請求項７０に記載の薬入れ、又は請求項７１に記載のキットを対象に治療有効量で投与して、前記対象の細胞免疫反応を増強することにより疾患状態を改善することを含み、前記疾患状態は、宿主免疫応答不足又は免疫不全を含み、更に前記疾患状態は、増殖性疾患、感染性疾患又は免疫不全疾患であり、前記増殖性疾患は癌及び他の細胞増殖性障害を含む、方法。

【請求項77】

前記癌は、扁平上皮癌（例えば、上皮系扁平上皮癌）、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、及び肺扁平上皮癌を含む）、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌（胃腸癌及び胃腸間質癌を含む）、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿道癌、肝腫瘍、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌又は子宮体癌、唾液腺癌、腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、表在拡大型黒色腫、悪性黒子型黒色腫、末端黒子型黒色腫、結節型黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（Ｎｏｎ－Ｈｏｄｇｋｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｍａ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病、及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、並びにケロイド疾患、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連する）及びメイグス症候群に関連する異常な血管増殖、脳腫瘍及び脳癌、並びに頭頸部癌から選択される、請求項７６に記載の方法。

【請求項78】

免疫チェックポイント阻害剤、抗原特異的免疫治療剤、化学療法剤、エピジェネティックス修飾剤、サイトカイン、成長因子、阻害剤、腫瘍抗原を標的とする抗体、腫瘍ワクチン、及び／又は他の癌療法を投与することを更に含み、
前記免疫チェックポイントは、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、又はＴＧＦＲを含み、
前記抗原特異的免疫治療剤は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、キメラ抗原受容体ＮＫ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ細胞）、及び／又は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含み、
前記他の癌療法は、外科手術、化学療法、細胞傷害性薬物、光線力学的療法、免疫調節又は放射線療法を含む
請求項７６に記載の方法。

【請求項79】

前記免疫不全疾患は、ＨＩＶ陽性、免疫抑制疾患、慢性感染性疾患を含む、請求項７６に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本願は、抗体－サイトカイン融合タンパク質及びその使用に関する。具体的には、本願は、インターロイキン－２（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２、ＩＬ－２）と抗ＩＬ－２抗体との融合タンパク質（ＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質）に関し、前記融合タンパク質は、ＩＬ－２受容体αサブユニット（ＩＬ２Ｒα、ＣＤ２５）及びαサブユニットを含むＩＬ－２受容体複合体（即ち、ＩＬ２Ｒα／β又はＩＬ２Ｒα／β／γ）と結合しないが、ＩＬ－２受容体β、γサブユニット二量体（ＩＬ２Ｒβ／γ）と結合でき、該二量体によって媒介されるシグナル伝達経路を活性化することができる。本願は、更に、該ＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む二重特異性分子及び免疫コンジュゲート、該ＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質をコードする核酸分子、並びに該核酸分子を含む発現ベクター及び宿主細胞に関する。本願はまた、該ＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を製造する方法、該ＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む医薬組成物、該ＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質又はその医薬組成物を用いた疾患の治療方法並びに疾患の治療における該ＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質又はその医薬組成物の使用を提供する。

【背景技術】

【0002】

インターロイキン－２（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２、ＩＬ－２）は、分子量が約１５．５ｋＤａの球状糖タンパク質であり、免疫抑制反応及び免疫活性化反応を誘導する二重機能を同時に備え、多種の免疫細胞の生成、生存、増殖及び定常状態の調節において重要な作用を発揮する。成熟したＩＬ－２タンパク質は、１３３個のアミノ酸残基を含み、該アミノ酸残基は４つの逆平行な両親媒性αヘリックスに折り畳まれ、更に該４つのαヘリックスが折り畳まれてその機能活性に不可欠な高次構造を形成する（Ｓｍｉｔｈ、Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８、２４０：１１６９－１１７６；Ｂａｚａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９２、２５７：４１０－４１３）。

【0003】

ＩＬ－２は、インビボで、細胞表面のＩＬ－２受容体（ＩＬ２Ｒ）と結合して下流のシグナル伝達カスケードを誘発することにより、免疫調節機能を発揮する（Ｋｒｅｉｇ、ＰＮＡＳ ２０１０、１０７：１１９０６－１１９１１）。ＩＬ２Ｒは、高親和性と中親和性の２つの組み合わせ形態が存在し、高親和性ＩＬ２Ｒは、ＩＬ－２受容体α鎖（ＩＬ２Ｒα、ＣＤ２５）、ＩＬ－２受容体β鎖（ＩＬ２Ｒβ、ＣＤ１２２）及び共通γ鎖（γｃ、ＣＤ１３２）で構成されるヘテロ三量体であり、ＩＬ－２との結合親和性（Ｋ_Ｄ）が約１０^－１１Ｍであり、中親和性ＩＬ２Ｒは、ＩＬ２Ｒβ及びγｃのみで構成されるヘテロ二量体であり、ＩＬ－２との結合親和性（Ｋ_Ｄ）が約１０^－９Ｍである（Ｗａｎｇ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００５、３１０：１１５９－１１６３；Ｂｏｙｍａｎ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１２、１２：１８０－１９０；Ａｒｅｎａｓ－ｒａｍｉｒｅｚ Ｎ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１５、３６：７６３－７７７）。異なるＩＬ２Ｒは、異なる免疫細胞表面に発現し、高親和性ＩＬ２Ｒは、構成性が高く、ＣＤ４^＋Ｆｏｘｐ３^＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）に発現し、また、活性化されたＴ細胞（ＣＤ４^＋Ｔ細胞及びＣＤ８^＋Ｔ細胞）においても一過性に誘導されて発現し、中親和性ＩＬ２Ｒは、静止している（又はナイーブ）エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）、例えば、ＣＤ８^＋Ｔｅｆｆ細胞において発現量が低いにもかかわらず、抗原刺激を受けたＣＤ８^＋Ｔｅｆｆ細胞及びメモリー表現型（ｍｅｍｏｒｙ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ、ＭＰ）ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞において高発現する（Ｆｏｎｔｅｎｏｔ、Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００５、６：１１４２－１１５１；Ｊｏｓｅｆｏｗｉｃｚ、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１２、３０：５３１－５６４；Ｍａｌｅｋ及びＢａｙｅｒ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００４、４：６６５－６７４）。

【0004】

ＩＬ－２によって誘発されるシグナル伝達の活性化は、ＩＬ２Ｒβとγｃとの間を結合してヘテロ二量体の形成を誘導して開始され、これが更に下流の複数のキナーゼカスケードを活性化する。αサブユニットは、ＩＬ－２とＩＬ２Ｒとの結合親和性の増加に特に重要であるが、免疫細胞のシグナル伝達には機能しない（Ｋｒｅｉｇ、ＰＮＡＳ ２０１０、１０７：１１９０６－１１９１１）。

【0005】

ＩＬ－２は、主に、活性化されたＴ細胞、特にＣＤ４^＋ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞により産生され、自己分泌又は傍分泌の方式でＩＬ２Ｒを発現する隣接細胞に作用して免疫反応を活性化するか、又は生体免疫系の正常な調節防御機構の定常状態を維持する。研究により、ＩＬ－２は、ヘルパーＴ細胞の増殖及び分化を刺激し（Ｚｈｕ、Ａｎｎｕａｌ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０１０、２８：４４５－４８９；Ｌｉａｏ、Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００８、９：１２８８－１２９６；Ｌｉａｏ、Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１１、１２：５５１－５５９）、Ｔｒｅｇ細胞の発育及びその定常状態増殖を維持し（Ｃｈｅｎｇ、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２０１１、２４１：６３－７６）、細胞傷害性Ｔリンパ球（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ、ＣＴＬ）の産生を誘導してその細胞傷害性を増強し、末梢血リンパ球細胞を細胞傷害性細胞及びリンホカイン活性化キラー（ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｋｉｌｌｅｒ、ＬＡＫ）細胞に分化することを誘導し（Ｌｉａｏ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２０１３、３８：１３－２５）、腫瘍浸潤リンパ球（Ｔｕｍｏｒ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ、ＴＩＬ）の免疫機能を増強し、Ｂ細胞の増殖及び分化を促進し、活性化Ｂ細胞による免疫グロブリンの産生を増強し、ＮＫ細胞の産生、増殖及び活性化などを刺激する（Ｗａｌｄｍａｎｎ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏ ２００６、６：５９５－６０１；Ｍａｌｅｋ、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００８、２６：４５３－４７９；Ｌｉａｏ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２０１３、３８：１３－２５）一連の生物学的機能を有することが示されている。

【0006】

ＩＬ－２は、インビボで上記リンパ球亜群を増殖させ、特にエフェクター細胞（ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞を含む）を刺激及び活性化することにより抗腫瘍作用を発揮し、ＩＬ－２のこの特性により、ＩＬ－２免疫療法は、様々な悪性腫瘍を治療する有効な手段の１つとなる。組換えヒトＩＬ－２タンパク質（ｒｈＩＬ－２）医薬品のアルデスロイキン（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ、商品名Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））は、前世紀９０年代に転移性腎細胞癌及び悪性黒色腫の治療薬として承認された。アルデスロイキンは、工学的に改変されたｒｈＩＬ－２であり、その構造は、アルデスロイキンにグリコシル化修飾がなく、Ｎ末端アラニンが欠損しており、その第１２５位のシステイン残基がセリン残基で置換される点で、野生型ヒトＩＬ－２タンパク質（ｈＩＬ－２）と異なる。転移性腎細胞癌及び悪性黒色腫を治療する様々な臨床試験におけるアルデスロイキンの完全奏効率（ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｒａｔｅ）は、非常に低く、約７％である（Ａｔｋｉｎｓ、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １９９９、１７：２１０５－２１１６；Ｆｉｓｈｅｒ、Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｓｃｉ Ａｍ ２０００、６ Ｓｕｐｐｌ １：Ｓ５５－Ｓ５７；Ｋｌａｐｐｅｒ、Ｃａｎｃｅｒ ２００８、１１３：２９３－３０１）。その原因を考察すると、主に以下の（１）～（４）がある。（１）インビボでのアルデスロイキンの半減期が短く、抗腫瘍活性を有するＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞は、中親和性ＩＬ２Ｒを発現するため、高用量のアルデスロイキンを投与する必要があってこそ、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞を効果的に活性化することができる。しかしながら、高用量のアルデスロイキンは、内皮細胞及びＩＩ型先天性リンパ様細胞（Ｔｙｐｅ－２ ｉｎｎａｔｅ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｃｅｌｌｓ、ＩＬＣ２）に発現する高親和性ＩＬ２Ｒを結合して活性化することにより、血管漏出症候群（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｌｅａｋ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ、ＶＬＳ）を引き起こし、その特徴は、血管透過性が増加して、血漿タンパク質及び血管内液が血管外空間及び複数の器官に浸透することを引き起こし、血圧低下及び心拍補償性の向上、肺部及び皮膚の浮腫、並びに肝細胞損傷を引き起こすことである（Ｋｒｉｅｇ、Ｐｒｏｃ Ｎａｔ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２０１０、１０７：１１９０６－１１９１１；Ｂｏｙｍａｎ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１２、１２：１８０－１９０）。したがって、高用量のアルデスロイキンの治療を受ける患者には、重篤な心血管イベント、並びに肺、肝臓、胃腸管、神経及び血液学的毒性がよく現れる（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）［ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ］Ｐａｃｋａｇｅ Ｉｎｓｅｒｔ、２０１２）。これらの治療過程に伴う深刻な毒性又は副作用により、多くの患者は、臨床的に有効用量に耐えられないため、その臨床応用が制限される。（２）アルデスロイキン療法の低い奏効率は、ＩＬ－２が免疫細胞の定常状態の維持において二重作用を有することにも関連する。ＩＬ－２は、エフェクター細胞の活性化と増殖を促進するだけでなく、Ｔｒｅｇ細胞を調節することによって末梢性免疫寛容を維持する。Ｔｒｅｇ細胞は、高親和性ＩＬ２Ｒを高発現し、ＩＬ－２は、優先的にＴｒｅｇ細胞に結合し、末梢性Ｔｒｅｇ細胞の増殖及び活性化を促進するため、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞によって媒介される抗腫瘍免疫活性を抑制する（Ｆｏｎｔｅｎｏｔ、Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００５、６：１１４２－１１５１；Ｄ’Ｃｒｕｚ、Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００５、６：１１５２－１１５９；Ｍａｌｏｙ、Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００５、９７：１８９－１９２；Ｂｏｙｍａｎ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１２、１２：１８０－１９０；Ｆａｃｃｉａｂｅｎｅ、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１２、７２：２１６２－２１７１）。これから分かるように、ＩＬ－２の免疫調節における二重作用により、アルデスロイキン療法において活性化されたエフェクター細胞の抗腫瘍免疫活性がＩＬ－２依存性Ｔｒｅｇ細胞によって抑制され、その臨床治療効果が制限される。

【0007】

現在、ＩＬ－２療法の抗腫瘍活性を増強し、その毒性又は副作用を低減するために、改変された様々なＩＬ－２変異体分子が研究開発されており、これらの改変された技術手段は、以下の（１）～（４）に分類される。（１）ＩＬ－２配列におけるＩＬ２Ｒの各サブユニットに結合する重要なアミノ酸残基を変異させることにより、ＩＬ２Ｒαとの結合を低下させて、高親和性ＩＬ２Ｒによる毒性及びＴｒｅｇへの活性化を弱めるか、又はＩＬ２Ｒβ及び／又はγｃとの結合を最適化して、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞への増殖及び活性化を増強し、抗腫瘍活性を増強する。例えば、Ｇｉｌｌｉｅｓらが特許出願国際公開第２００８００３４４７３号パンフレットで開示したように、Ｒ３８Ｗ及びＦ４２Ｋを含むアミノ酸変異をＩＬ－２に導入してＩＬ２Ｒαと結合する重要な部位を変化させることにより、ＩＬ２Ｒαとの相互作用を低減するため、Ｔｒｅｇ細胞への活性化を低減し、抗腫瘍免疫効果への抑制を減少させ、Ｇａｒｃｉａらは、ＩＬ－２に変異を導入することによって「ＩＬ－２ Ｓｕｐｅｒｋｉｎｅ」と呼ばれる変異タンパク質を構築し、ＩＬ２Ｒβとの親和性を増強し、ＩＬ２Ｒαの発現に対するＩＬ－２の依存性を減少させ、更に、より強いエフェクター細胞（ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞）の増殖と活性化を誘導する（Ｌｅｖｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ ２０１２、４８４：５２９－５３３）。（２）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）でＩＬ－２を修飾し、例えば、Ｎｅｋｔａｒ社のＢｅｍｐｅｇａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎは、アルデスロイキンと平均６個の解離可能なＰＥＧ基とのカップリングにより構成され、その結果、ＩＬ－２の半減期を延長できるだけでなく、ＩＬ２Ｒα結合部位近傍のリジン残基にカップリングされたＰＥＧ基によりＩＬ－２と高親和性ＩＬ－２Ｒとの相互作用を阻害することができ（Ｄｅｂｏｒａｈ Ｈ、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１６、２２：６８０－６９０）、また、Ｓｙｎｔｈｏｒｘ社が開発したＴＨＯＲ－７０７については、もう１つの方式を使用してＩＬ－２のＰＥＧによる修飾を実現し、ＩＬ－２タンパク質配列に非天然アミノ酸残基を取り込み、工学的に改変した細菌を利用してタンパク質を発現し、解離不可能なＰＥＧ基を非天然アミノ酸残基にカップリングすることにより、均質性を有するＰＥＧで修飾された「非α」ＩＬ－２分子を生成し、Ｓｙｎｔｈｏｒｘは、該分子がＴｒｅｇ細胞を増殖させずに末梢性ナイーブＴ細胞とＮＫ細胞の増殖を誘導できることを報告した（Ｊａｎｋｕ、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ２０２０、１３８Ｓ２：Ｓ１１）。（３）Ａｌｋｅｒｍｅｓ社のＮｅｍｖａｌｅｕｋｉｎ ａｌｆａは、ＩＬ－２変異体とＩＬ２Ｒα（ＣＤ２５）細胞外ドメインで融合して形成されることにより、該候補医薬品とＴｒｅｇ細胞上のＩＬ２Ｒαとの相互作用をブロックする（Ｂｏｎｉ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０２１、３９：１５ Ｓｕｐｐｌ、２５１３）。また、Ｂｏｙｍａｎらは、ＩＬ－２と抗ＩＬ－２抗体により抗原－抗体複合体を形成し、ＩＬ－２とＩＬ２Ｒαとの結合をブロックすることにより、中親和性ＩＬ２Ｒを発現するＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞を選択的に活性化して抗腫瘍活性を増強する（Ｋａｍｉｍｕｒａ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００６、１７７：３０６－３１４；Ｂｏｙｍａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００６、３１１：１９２４－１９２７；Ｌｅｅ、Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０２０、９：ｅ１６８１８６９）。（４）Ｔｒｉｎｋｌｅｉｎらは、抗ＩＬ２Ｒβ及びγｃ二重特異性抗体を構築することにより、中親和性ＩＬ２Ｒによって媒介される下流シグナル経路を特異的に活性化し、ＣＤ８^＋Ｔ及びＮＫ細胞の増殖を誘導する目的を達成することを報告した（Ｈａｒｒｉｓ ＫＥ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２０２１、１１：１－１５）。

【0008】

しかしながら、上記技術手段には、いずれもそれぞれの欠点があり、ＩＬ－２とＩＬ２Ｒαとの結合をブロックするためのドメインは、通常、修飾されたＩＬ－２と会合－解離の動的平衡にあり、高親和性ＩＬ２ＲとＩＬ－２との超強結合能力のため、修飾されたＩＬ－２変異体は、高親和性ＩＬ２Ｒによって競合的に結合することを完全に回避することができず、次に、一部の変異タンパク質において、ＩＬ－２配列に変異が導入されているため、免疫原性を増加させ、誘導により産生された中和性抗薬物抗体（ａｎｔｉ－ｄｒｕｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＡＤＡ）は、ＩＬ－２製品の臨床応用を制限するだけでなく、内因性ＩＬ－２の免疫調節機能を抑制して安全上の潜在的なリスクを引き起こす可能性がある。例えば、アルデスロイキンは、大腸菌により発現された非グリコシル化修飾タンパク質であり、両性分子であり、平均２７個のｒｈＩＬ－２分子を凝集して産生されたミクロ凝集体の形態で存在し、臨床試験において６０％～７５％の被験患者の体内にＡＤＡが存在することが発見されており（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）注射液の説明書）、ＢＡＹ ５０－４７９において、ｈＩＬ－２の第８８位のアスパラギン残基をアルギニンに変異させ（即ちＮ８８Ｒ）、第１相臨床試験において該部位を識別するＡＤＡが現れており（Ｍａｒｇｏｌｉｎ、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００７、１３：３３１２－３３１９）、ＴＨＯＲ－７０７は、非天然アミノ酸配列を含み、通常、生体により外来タンパク質として識別され、多用量注射後に生体にＡＤＡを産生することを引き起こす可能性がある（Ｌｅｖｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ ２０１２、４８４：５２９－５３３）。もう１つのＰＥＧで修飾されたＩＬ－２分子、ＮＫＴＲ－２１４は、ＩＬ－２の動力学的な緩慢な放出を提供するが、ポリエチレングリコール化もＩＬ－２とＩＬ－２Ｒβ及びγｃとの結合を干渉することにより、ＩＬ－２の抗腫瘍エフェクター細胞に対する刺激を阻害する（Ｓｉｌｖａ、Ｎａｔｕｒｅ ２０１９、５６５：１８６－１９１）。抗ＩＬ２Ｒβ及びγｃ二重特異性抗体は、活性化されたＩＬ２Ｒ下流シグナル経路において、中親和性ＩＬ２Ｒと高親和性ＩＬ２Ｒとを選択的に区別することができないため、Ｔｒｅｇ細胞及びエフェクター細胞の活性化及び増殖を無差別に誘導する。

【0009】

したがって、本分野では、依然として、特異的に中親和性ＩＬ２Ｒに結合してエフェクター細胞（ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞）を活性化することができるが、高親和性ＩＬ２Ｒに結合せずＴｒｅｇ細胞、血管内皮細胞及びＩＬＣ２を活性化しない製品を開発する必要がある。このようにして、そのような製品は、従来のＩＬ－２療法において高親和性ＩＬ２Ｒに結合することによる全身性毒性又は副作用及びＴｒｅｇ細胞の活性化による腫瘍免疫抑制を含む上記ＩＬ－２製品の関連欠陥を解消して、従来のＩＬ－２療法が解決していない臨床ニーズを満たす。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0010】

【特許文献1】国際公開第２００８００３４４７３号パンフレット

【非特許文献】

【0011】

【非特許文献1】Ｓｍｉｔｈ、Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８、２４０：１１６９－１１７６

【非特許文献2】Ｂａｚａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９２、２５７：４１０－４１３

【非特許文献3】Ｋｒｉｅｇ、Ｐｒｏｃ Ｎａｔ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２０１０、１０７：１１９０６－１１９１１

【非特許文献4】Ｗａｎｇ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００５、３１０：１１５９－１１６３

【非特許文献5】Ｂｏｙｍａｎ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１２、１２：１８０－１９０

【非特許文献6】Ａｒｅｎａｓ－ｒａｍｉｒｅｚ Ｎ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１５、３６：７６３－７７７

【非特許文献7】Ｆｏｎｔｅｎｏｔ、Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００５、６：１１４２－１１５１

【非特許文献8】Ｊｏｓｅｆｏｗｉｃｚ、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１２、３０：５３１－５６４

【非特許文献9】Ｍａｌｅｋ及びＢａｙｅｒ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００４、４：６６５－６７４

【非特許文献10】Ｚｈｕ、Ａｎｎｕａｌ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０１０、２８：４４５－４８９

【非特許文献11】Ｌｉａｏ、Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００８、９：１２８８－１２９６

【非特許文献12】Ｌｉａｏ、Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１１、１２：５５１－５５９

【非特許文献13】Ｃｈｅｎｇ、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ ２０１１、２４１：６３－７６

【非特許文献14】Ｌｉａｏ、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２０１３、３８：１３－２５

【非特許文献15】Ｗａｌｄｍａｎｎ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏ ２００６、６：５９５－６０１

【非特許文献16】Ｍａｌｅｋ、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００８、２６：４５３－４７９

【非特許文献17】Ａｔｋｉｎｓ、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １９９９、１７：２１０５－２１１６

【非特許文献18】Ｆｉｓｈｅｒ、Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｓｃｉ Ａｍ ２０００、６ Ｓｕｐｐｌ １：Ｓ５５－Ｓ５７

【非特許文献19】Ｋｌａｐｐｅｒ、Ｃａｎｃｅｒ ２００８、１１３：２９３－３０１

【非特許文献20】Ｄ’Ｃｒｕｚ、Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００５、６：１１５２－１１５９

【非特許文献21】Ｍａｌｏｙ、Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００５、９７：１８９－１９２

【非特許文献22】Ｆａｃｃｉａｂｅｎｅ、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１２、７２：２１６２－２１７１

【非特許文献23】Ｌｅｖｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ ２０１２、４８４：５２９－５３３

【非特許文献24】Ｄｅｂｏｒａｈ Ｈ、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１６、２２：６８０－６９０

【非特許文献25】Ｊａｎｋｕ、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ２０２０、１３８Ｓ２：Ｓ１１

【非特許文献26】Ｂｏｎｉ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０２１、３９：１５ Ｓｕｐｐｌ、２５１３

【非特許文献27】Ｋａｍｉｍｕｒａ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００６、１７７：３０６－３１４

【非特許文献28】Ｂｏｙｍａｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００６、３１１：１９２４－１９２７

【非特許文献29】Ｌｅｅ、Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０２０、９：ｅ１６８１８６９

【非特許文献30】Ｈａｒｒｉｓ ＫＥ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２０２１、１１：１－１５

【非特許文献31】Ｍａｒｇｏｌｉｎ、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００７、１３：３３１２－３３１９

【非特許文献32】Ｓｉｌｖａ、Ｎａｔｕｒｅ ２０１９、５６５：１８６－１９１

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0012】

本願は、以下の１～５の技術的問題を回避して、満たされていない臨床ニーズを解決するために、ＩＬ２Ｒα、及びαサブユニットを含むＩＬ－２受容体複合体（即ち、ＩＬ２Ｒα／β又はＩＬ２Ｒα／β／γ）に結合せず、ＩＬ２Ｒβ／γのみに選択的に結合し、ＩＬ２Ｒβ／γ受容体によって媒介されるシグナル伝達経路を活性化することができる新規なＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を提供する。

【0013】

１． 用量制限毒性（Ｄｏｓｅ Ｌｉｍｉｔｉｎｇ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ、ＤＬＴ）の問題について、従来のＩＬ－２製品及び／又は研究中の製品は、インビボで高親和性ＩＬ２Ｒを活性化するため、正常な組織及び器官に対して全身性毒性又は副作用を発生させ、例えば、市販されたアルデスロイキン及び／又は従来の研究中のＩＬ－２製品は、血管内皮細胞及びＩＬＣ２細胞における高親和性ＩＬ２Ｒを活性化し、全身性血管漏出症候群（ＶＬＳ）を引き起こす可能性がある。

【0014】

２． Ｔｒｅｇ細胞によって媒介される腫瘍免疫抑制について、従来のＩＬ－２製品及び／又は研究中のＩＬ－２製品は、腫瘍組織又は腫瘍微小環境におけるＴｒｅｇ細胞表面の高親和性ＩＬ２Ｒに結合してＴｒｅｇ細胞を活性化し、その増殖を促進し、更に腫瘍微小環境における他の免疫抑制細胞の増殖を促進し、腫瘍免疫抑制作用を発生させることにより、治療効果に影響を与える。

【0015】

３． 従来のＩＬ－２製品及び／又は研究中のＩＬ－２製品の免疫原性の問題について、例えば、市販されたＩＬ－２製品であるアルデスロイキンは、大腸菌により発現された非グリコシル化修飾タンパク質であり、かつ天然に微凝集体の形態で存在するため、該医薬品がインビボで投与される時にＡＤＡの産生を誘導することを引き起こす。研究中のＩＬ－２製品、例えば、ＩＬ２Ｒα結合部位にアミノ酸変異が導入されたＩＬ－２変異タンパク質、及びＰＥＧ部位特異的修飾部位に非天然アミノ酸残基が導入されたＩＬ－２変異タンパク質などは、ヒトに応用される場合、生体にＡＤＡを産生させる可能性がある。ＩＬ－２及び／又はＩＬ－２変異タンパク質に対するＡＤＡは、ＩＬ－２製品の臨床上の応用を制限するだけでなく、内因性ＩＬ－２と作用して安全上のリスクを引き起こす可能性もある。

【0016】

４． 従来のＩＬ－２製品の半減期が短く、治療ウィンドウが狭いという問題について、例えば、市販されたＩＬ－２製品であるアルデスロイキンの血清半減期は、わずか８５分間であり、抗腫瘍活性を有するＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞が中親和性ＩＬ２Ｒを発現するため、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の抗腫瘍活性を活性化するために高用量のアルデスロイキンを投与する必要があるが、高用量のアルデスロイキンは、免疫抑制反応を優先的に活性化し、全身性毒性又は副作用を誘発するため、アルデスロイキンの治療ウィンドウは、極めて狭い。他の研究中のＩＬ－２製品は、相対的に選択的に中親和性ＩＬ２Ｒに結合することができるが、依然として高親和性ＩＬ２Ｒに結合して免疫抑制を活性化し、全身性毒性を誘導することができるため、臨床治療に応用する場合に投与量を制限することにより、治療ウィンドウが狭くなり、患者の投与コンプライアンスが低い。

【0017】

５． 従来のＩＬ－２製品及び／又は研究中のＩＬ－２製品の分子には、構造が不安定であるか又は解離しやすく（例えば、ＩＬ－２と抗ＩＬ－２抗体との複合体）、高い均質性を有する製品として産生されて製造されにくいという問題が更に存在する。

【課題を解決するための手段】

【0018】

一態様では、本願は、ヒトインターロイキン－２（ｈＩＬ－２）変異タンパク質を提供する。前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、野生型ｈＩＬ－２（配列番号１に示される）がアミノ酸で変異され、本願の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片に結合できるものであり、前記変異は、ＩＬ－２の生物学的活性に顕著な影響を与えない。

【0019】

一態様では、本願に係る単離された抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、ＩＬ２Ｒαと競合して本願のｈＩＬ－２変異タンパク質に結合し、かつ前記ｈＩＬ－２変異タンパク質とＩＬ２Ｒαとの結合をブロックすることができ、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と本願のｈＩＬ－２変異タンパク質とは、結合親和性が高く、解離しにくい。

【0020】

一態様では、本願に係る新規なＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、
（１）配列番号１に示される野生型ヒトインターロイキン２（ｈＩＬ－２）又はｈＩＬ－２変異タンパク質と、
（２）ＩＬ２Ｒαと競合して前記ｈＩＬ－２又は前記ｈＩＬ－２変異タンパク質に結合することができる抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と、
（３）抗原－抗体複合体の解離を回避するために、前記ｈＩＬ－２又は前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面に含まれるジスルフィド結合（複数可）と、を含む。

【0021】

本願に係るｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、
（ｉ）前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と抗ＩＬ－２抗体との間に超安定した複合体構造を形成し、
（ｉｉ）前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のＩＬ２Ｒα結合部位が前記融合タンパク質の分子内に埋め込まれ、
（ｉｉｉ）ＩＬ２Ｒα、又はαサブユニットを含むＩＬ－２受容体複合体、即ち、ＩＬ２Ｒα／β又はＩＬ２Ｒα／β／γ、に結合せず、
（ｉｖ）ＩＬ２Ｒβ及びγ受容体サブユニット二量体（ＩＬ２Ｒβ／γ）に対する結合活性及び機能活性を保持する
という特性を有する。

【0022】

いくつかの実施形態では、前記ｈＩＬ－２は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２であり、別のいくつかの実施形態では、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２と比較して、システインへの変異以外の少なくとも１つ、２つ、又は３つ以上の他のアミノ酸変異を含み、該変異タンパク質は、ＩＬ２Ｒに特異的に結合できる能力を保持している。一実施形態では、前記アミノ酸変異は、前記ｈＩＬ－２又は前記変異タンパク質と抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面に位置する。１つの具体的な実施形態では、前記アミノ酸変異は前記抗原－抗体結合界面内に位置する。一実施形態では、前記アミノ酸変異は抗原－抗体結合界面外に位置する。一実施形態では、前記アミノ酸変異は前記抗原－抗体結合界面の内外に位置する。

【0023】

いくつかの実施形態では、前記抗ＩＬ－２抗体は、抗マウスＩＬ－２（ｍＩＬ－２）抗体又はそれから誘導されるキメラ抗体及び／若しくはヒト化抗体（例えば、Ｓ４Ｂ６抗体及びそのヒト化抗体）、抗ＩＬ－２ヒト化抗体（例えば、ＮＡＲＡ１抗体及びＴＣＢ２抗体）、又は抗ｈＩＬ－２抗体を含む。一実施形態では、前記抗ｍＩＬ－２抗体若しくはそれから誘導されるキメラ抗体若しくはヒト化抗体又はその抗原結合断片は、ＩＬ２Ｒαと競合して前記ｈＩＬ－２変異タンパク質に結合することができ、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質とＩＬ２Ｒα、又はαサブユニットを含むＩＬ－２受容体複合体（即ち、ＩＬ２Ｒα／β又はＩＬ２Ｒα／β／γ）との結合をブロックすることができる。一実施形態では、前記抗ｈＩＬ－２抗体は、前記ｈＩＬ－２のＩＬ２Ｒα結合部位を特異的に識別し、かつｈＩＬ－２に特異的に結合することができる。

【0024】

いくつかの実施形態では、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質との抗原－抗体結合界面は、ジスルフィド結合を含み、前記ジスルフィド結合は、前記抗原－抗体結合界面の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の配列に少なくとも１つのシステイン残基を導入し、前記抗原－抗体結合界面の前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質の配列に少なくとも１つのシステイン残基を導入することにより形成される。一実施形態では、前記少なくとも１つのシステイン残基の導入は、アミノ酸置換若しくは点変異、挿入若しくは付加、又はこれらの任意の組み合わせによって少なくとも１つのシステイン残基を導入することである。

【0025】

別の態様では、本願は、本明細書のｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片、及びｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質をコードする単離核酸分子（「ポリヌクレオチド」とも呼ばれる）、前記核酸を含む発現ベクター、並びに前記核酸又は発現ベクターを含む宿主細胞に関する。本願は更に、前記宿主細胞を使用して、本明細書のｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片、及びｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を製造する方法に関する。

【0026】

別の態様では、本願は、本明細書の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む二重特異性分子、免疫コンジュゲート、キメラ抗原受容体、工学的に改変されたＴ細胞受容体、又は腫瘍溶解性ウイルスに関する。

【0027】

別の態様では、本願は、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、又は、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む二重特異性分子、免疫コンジュゲート、キメラ抗原受容体、工学的に改変されたＴ細胞受容体、若しくは腫瘍溶解性ウイルスと、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物に関する。

【0028】

別の態様では、本願は、有効量の本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、若しくは、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む医薬組成物、並びに／又は別の抗癌剤及び／若しくは免疫調節剤を含む薬入れに関し、前記抗癌剤は、微小管破壊剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡインターカレータ、アルキル化剤、ホルモン療法剤、キナーゼ阻害剤（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤は、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤、ＩＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤及びＭｅｔ阻害剤を含むが、これらに限定されない）、受容体拮抗剤、腫瘍細胞アポトーシスの活性化剤（ＩＡＰ阻害剤、Ｂｃｌ２阻害剤、ＭＣ１１阻害剤、ＴＲＡＩＬ阻害剤、ＣＨＫ阻害剤を含むが、これらに限定されない）、又はいずれかの抗血管新生薬を含むが、これらに限定されず、前記免疫調節剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＣＤ４７、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４又はＴＧＦＲ阻害剤を含むが、これらに限定されない。

【0029】

別の態様では、本願は、有効量の本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、又は本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む医薬組成物を含むキットに関する。

【0030】

別の態様では、本願は、本明細書の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の、疾患を治療するための医薬組成物又は製剤の製造における使用に関し、前記疾患は、増殖性疾患、感染性疾患又は免疫不全疾患を含むが、これらに限定されず、前記増殖性疾患は、癌及び他の細胞増殖性障害を含むが、これらに限定されない。或いは、本願は、増殖性疾患、感染性疾患又は免疫不全疾患を治療するための本明細書の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、又はそれらを含む医薬組成物の使用に関する。或いは、本願は、本明細書の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、又はそれを含む医薬組成物を必要とする対象（被験者）に投与する工程を含む、増殖性疾患、感染性疾患又は免疫不全疾患を治療する方法に関する。

【0031】

別の態様では、本願は、宿主の免疫応答を改善することによって疾患、病状又は障害を治療する方法であって、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、又は本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む医薬組成物、又は本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む薬入れ若しくはキットを対象に有効量で投与することによって、ＩＬ２Ｒβ／γ受容体を発現するエフェクター細胞（例えば、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞）の生物学的活性を特異的に活性化して、疾患状態を改善する工程を含む方法に関する。

【0032】

別の態様では、本願は、免疫系を刺激する方法であって、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、又は本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む医薬組成物、又は本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む薬入れ若しくはキットを対象に有効量で投与して、免疫系を刺激する工程を含む方法に関する。

【0033】

別の態様では、本願は、宿主免疫系に対する刺激が有益である（即ち、宿主免疫系を刺激することにより疾患状態を改善する）疾患状態を治療するか、緩和するか又は予防する方法であって、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、又は本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む医薬組成物、又は本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む薬入れ若しくはキットを対象に治療有効量で投与して、前記対象の細胞免疫応答を増強することにより疾患状態を改善する工程を含む方法に関し、前記疾患状態は、宿主免疫応答不足又は免疫不全を含み、更に前記疾患状態は、増殖性疾患又は感染性疾患である。前記増殖性疾患は、癌及び免疫不全疾患を含む。

【0034】

以下の図面及び具体的な実施形態により本願を更に説明し、本願に開示された他の特徴及び利点は明らかであり、これらの図面及び具体的な実施形態は、本願の範囲を限定するものと見なされるべきではなく、当業者が容易に想到し得る変更は、本願の精神及び添付の特許請求の範囲の保護範囲に含まれる。本願において引用された全ての参考文献、例えば、公開出版物、特許及び特許出願は、参照によって本明細書に組み込まれる。

【図面の簡単な説明】

【0035】

【図1】ＣＴＬＬ－２細胞（図１Ａ）とＮＫ－９２細胞（図１Ｂ）のｈＩＬ－２変異体（ｈＩＬ２－ＤＭとｈＩＬ２－ＴＭ）及び対照（ｍＩＬ－２とｈＩＬ－２）に対する増殖応答を示す。

【図2】ＥＬＩＳＡにより測定された、Ｓ４Ｂ６ヒト化抗体と抗原ｍＩＬ２－ｈｉｓ又はｈＩＬ２－ｈｉｓとの結合活性を示す。

【図3】Ｆｏｒｔｅｂｉｏにより測定された、ｈＩＬ２変異タンパク質ｈＩＬ２－ＤＭがＫ２Ｇ１１に結合した後のｈＩＬ２Ｒα及びｈＩＬ２Ｒβへの結合活性を示す。

【図4】本願の代表的なｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の概略構成図、及び例示的なｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の抗原－抗体結合界面の三次元概略図である。ｈＩＬ－２又はｈＩＬ－２変異タンパク質のＣ末端は、リンカーを介してｈＩＬ－２抗体の重鎖Ｎ末端に連結され、ｈＩＬ－２又はｈＩＬ－２変異タンパク質とｈＩＬ－２抗体との間のジスルフィド結合（破線で示す）は、抗原－抗体結合界面に位置し（図４Ａ）、例示的なｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質におけるｈＩＬ－２変異タンパク質（Ｋ６４Ｇ及びＮ９０Ｒを有する）と抗ＩＬ－２ヒト化抗体との結合界面のジスルフィド結合は、ｈＩＬ－２変異タンパク質（Ｋ６４Ｇ及びＮ９０Ｒを有する）と抗ＩＬ－２ヒト化抗体にそれぞれ１つのシステイン残基を導入することにより形成される（図４Ｂ）。

【図5】ＥＬＩＳＡにより測定された、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質ＩＣ－Ｃｙ０８及び対照（ｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃ）とｈＣＤ２５（図５Ａ）及びｈＣＤ１２２（図５Ｂ）とのそれぞれの結合活性を示す。

【図6】ジスルフィド結合を含むＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質ＩＣ－Ｃｙ０８及び対照（ｈＩＬ－２）に対するＣＴＬＬ－２細胞（図６Ａ）及びＮＫ－９２細胞（図６Ｂ）の増殖応答を示す。

【図7】フローサイトメトリーにより測定された、ＣＴＬＬ－２細胞の、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質ＩＣ－Ｃｙ０８及び対照（ｈＩＬ－２）の作用下での、そのＩＬ－２シグナル経路におけるＳＴＡＴ５のリン酸化を示す。

【図8】ＥＬＩＳＡにより、抗体軽鎖で最適化された、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質ＩＣ－Ｃｙ０８変異体及び対照（ｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃ及び母体ＩＣ－Ｃｙ０８）とｈＣＤ２５（図８Ａ）及びｈＣＤ１２２（図８Ｂ）とのそれぞれの結合活性を示す。

【図9】抗体軽鎖で最適化された、ジスルフィド結合を含むＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質ＩＣ－Ｃｙ０８変異体及び対照（ｈＩＬ－２及び母体ＩＣ－Ｃｙ０８）に対するＣＴＬＬ－２細胞（図９Ａ）及びＮＫ－９２細胞（図９Ｂ）の増殖応答を示す。

【図10】ｈＩＬ－２アミノ酸配列最適化を経た、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質ＩＣ－Ｃｙ０８変異体及び対照（ｈＩＬ－２及び母体ＩＣ－Ｃｙ０８）に対するＣＴＬＬ－２細胞（図１０Ａ）及びＮＫ－９２細胞（図１０Ｂ）の増殖応答を示す。

【図11】抗体重鎖定常領域がｐＩ変異及びＴＭ変異されたｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質ＩＣ－Ｃｙ０８－ｐＩＴＭ及び対照（ｈＩＬ－２及び母体ＩＣ－Ｃｙ０８）に対するＣＴＬＬ－２細胞（図１１Ａ）及びＮＫ－９２細胞（図１１Ｂ）の増殖応答を示す。

【図12】ＥＬＩＳＡにより測定された、Ｋ２Ｇ１１に基づく、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０６及び対照群（Ｈ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ０８及びＨ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ１０を含む）のｈＣＤ２５（図１２Ａ）及びｈＣＤ１２２（図１２Ｂ）とのそれぞれの結合活性を示す。

【図13】Ｋ２Ｇ１１に基づく、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０６並びに対照（Ｈ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ０８、Ｈ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ１０、及びＫ２Ｇ１１とｈＩＬ２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ）で形成された抗原－抗体複合体を含む）に対するＣＴＬＬ－２細胞（図１３Ａ）及びＮＫ－９２細胞（図１３Ｂ）の増殖応答を示す。

【図14】Ｆｏｒｔｅｂｉｏにより測定された、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５とｈＩＬ２Ｒα、ｈＩＬ２Ｒα／β及びｈＩＬ２Ｒα／β／γとの結合活性を示す。

【図15】ＥＬＩＳＡにより決定された、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質（Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５）及び対照（ＮＡＲＡ１ｌｅｕｋｉｎ）とｈＣＤ２５との結合活性を示す。

【図16】レポーター遺伝子法（図１６Ａ）と細胞増殖法（ＣＴＬＬ－２細胞及びＣＤ２５をノックアウトしたＮＫ－９２［ＮＫ－９２（ＣＤ２５－ＫＯ）］細胞、図１６Ｂ）により決定された、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質（Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５）及び対照（ＮＡＲＡ１ｌｅｕｋｉｎ及び野生型ｈＩＬ－２）の刺激に応答したＩＬ２Ｒα／β／γ及び／又はｈＩＬ２Ｒβ／γ受容体の活性化を示す。

【図17(1)】ＦｏｒｔｅＢｉｏにより決定された、重鎖定常領域にｐＩ変異及びＴＭ変異された抗ＩＬ－２ヒト化抗体（Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭ）、これに基づいて構築された、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質（Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５）、及び対照抗体（Ｋ２Ｇ１１）とＦｃ受容体、Ｃ１ｑ及びＦｃＲｎとのそれぞれの結合動力学を示す。

【図17(2)】図１７（１）の続きである。

【図18】レポーター遺伝子法により決定された、抗体定常領域にｐＩ変異及びＴＭ変異が導入された、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質（Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５）のＡＤＣＣ活性を示し、抗ＥＧＦＲ抗体（即ち、セツキシマブ）は陽性対照群である。

【図19】ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質（Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５）をカニクイザル血清（Ｍ６、Ｍ７）又は健常人血清（Ｈ２、Ｈ３）で異なる時間インキュベート処理した後、ＮＫ－９２細胞増殖法（図１９Ａ及び図１９Ｂ）及びレポーター遺伝子法（図１９Ｃ）により決定された、サンプルの生物学的活性の変化を示し、図中、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５と表記された曲線は、血清で処理されていない対照サンプルを示す。

【図20】重鎖定常領域が工学的に改変された抗ＩＬ－２抗体Ｋ２Ｇ１１－ＰＩＴＭ及び重鎖定常領域が工学的に改変されていない抗ＩＬ－２抗体Ｋ２Ｇ１１のＢＡＬＢ／ｃマウスにおける血漿薬物濃度時間曲線を示す。

【図21】フローサイトメトリーにより決定された、重鎖定常領域が工学的に改変された、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５の投与を受けた後の、カニクイザルの末梢血サンプルにおけるＣＤ８^＋Ｔ、ＮＫ及びＴｒｅｇ細胞の数の変化、並びにその増殖マーカーＫｉ－６７の発現（即ち、Ｋｉ６７^＋細胞割合）の変化を示す。図中の矢印は、投与時点を示す。

【図22(1)】フローサイトメトリーにより決定された、重鎖定常領域が工学的に改変された、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５の投与を受けた後の、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脾臓におけるＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＦｏｘＰ３^＋Ｔｒｅｇ細胞数、ＣＤ８^＋ＣＤ４４^ｈｉｇｈＴ細胞数、ＮＫ１．１^＋細胞数の変化（図２２Ａ）、通常のＣＤ４^＋Ｔ細胞数の変化（図２２Ｃ）、ＣＤ８^＋ＣＤ４４^ｈｉｇｈＴ細胞とＴｒｅｇ細胞との絶対計数比、及びＮＫ１．１^＋細胞とＴｒｅｇ細胞との絶対計数比の変化（図２２Ｂ）、並びに各投与群のマウスの体重の変化（図２２Ｄ）を示す。

【図22(2)】図２２（１）の続きである。

【図23】異なる用量での、重鎖定常領域が工学的に改変された、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５及びその対照分子ＮＡＲＡ１ｌｅｕｋｉｎのマウスＣＴ２６結腸癌モデルにおける抗腫瘍活性を示す。

【図24】ＥＬＩＳＡにより決定された、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＮＡＲＡ１抗体融合タンパク質及び対照分子（ｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃ）とｈＣＤ２５（図２４Ａ）及びｈＣＤ１２２（図２４Ｂ）とのそれぞれの結合活性を示す。

【図25】ＥＬＩＳＡにより決定された、ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＴＣＢ２抗体融合タンパク質及び対照分子（ｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃ）とｈＣＤ２５（図２５Ａ）及びｈＣＤ１２２（図２５Ｂ）とのそれぞれの結合活性を示す。

【図26】ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＮＡＲＡ１抗体融合タンパク質及び対照分子（野生型ｈＩＬ－２）に対するＣＴＬＬ－２細胞（図２６Ａ）及びＮＫ－９２細胞（図２６Ｂ）の増殖応答を示す。

【図27】ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＴＣＢ２抗体融合タンパク質及び対照分子（野生型ｈＩＬ－２）に対するＣＴＬＬ－２細胞（図２７Ａ）及びＮＫ－９２細胞（図２７Ｂ）の増殖応答を示す。

【発明を実施するための形態】

【0036】

定義
別に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、いずれも当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本願の目的のために、以下の用語を以下に定義する。

【0037】

本明細書では、「インターロイキン－２（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２）」又は「ＩＬ－２」又は「ＩＬ２」は、互換的に使用されてもよく、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯動物（例えば、マウス）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物からの任意の天然のＩＬ－２を意味する。該用語は、未加工のＩＬ－２及び細胞発現に由来する任意の形態のＩＬ－２を含む。該用語は、天然に存在するＩＬ－２対立遺伝子変異体及びスプライス変異体、アイソタイプ、ホモログ、及び種ホモログを更に含む。本明細書に記載のヒトＩＬ－２（ｈＩＬ－２）とは、「野生型ｈＩＬ－２」又は「野生型ＩＬ－２」又は「ＷＴ ＩＬ－２」とも呼ばれる成熟したヒトＩＬ－２タンパク質を指し、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１）というアミノ酸配列のポリペプチドを有する。

【0038】

未加工のヒトＩＬ－２は、Ｎ末端の２０個のアミノ酸のシグナルペプチドを更に含み、配列番号２２９の配列を有し、成熟した（又は加工された）ＩＬ－２タンパク質は、上記シグナルペプチドが除去されたポリペプチドである。

【0039】

本明細書に記載のｈＩＬ－２変異タンパク質（又はＩＬ－２変異体）は、野生型ｈＩＬ－２の変異物であり、この変異タンパク質は、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列内に１つ、２つ、又は３つ以上のアミノ酸変異を含んでもよく、上記アミノ酸変異は、アミノ酸の置換、削除（欠失）、挿入及び付加であってもよい。いくつかの実施形態では、好ましいアミノ酸変異は、アミノ酸の置換、挿入、付加、又はそれらの組み合わせである。別のいくつかの実施形態では、好ましいアミノ酸変異は、アミノ酸削除である。いくつかの実施形態では、本願に記載の具体的な変異アミノ酸の位置に変異を導入することによって、本願に記載の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と増強された結合親和性を有するｈＩＬ－２変異タンパク質が得られ、上記増強された結合親和性は、上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と交差反応できない野生型ＩＬ－２がアミノ酸変異を経た後に上記抗ＩＬ－２抗体又は抗原結合断片との交差反応性を獲得するか、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質が上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片に対して中結合親和性であるか（例えば、１０^－８Ｍ未満）、又は高結合親和性（例えば、１０^－９Ｍ未満、更には１０^－１０Ｍ未満）であるということであってもよい。いくつかの実施形態では、本願に記載の具体的な変異アミノ酸の位置に変異を導入して、本願に記載の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と超安定した複合体を形成できるｈＩＬ－２変異タンパク質を得る。いくつかの実施形態では、本願に記載の具体的な変異アミノ酸の位置に変異を導入して、グリコシル化修飾が除去されたｈＩＬ－２変異タンパク質を得る。いくつかの実施形態では、本願に記載の特定のシステイン残基の位置に変異を導入して、遊離システインが除去されたｈＩＬ－２変異タンパク質を得る。

【0040】

本明細書では、ＩＬ－２タンパク質のアミノ酸位置については、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２タンパク質のアミノ酸配列を参照することにより決定される。アミノ酸配列の比較（例えば、ＢＬＡＳＴ、即ち、ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ？ＰＲＯＧＲＡＭ＝ｂｌａｓｔｐ＆ＰＡＧＥ＿ＴＹＰＥ＝ＢｌａｓｔＳｅａｒｃｈ＆ＬＩＮＫ＿ＬＯＣ＝ｂｌａｓｔｈｏｍｅから取得可能なＢａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌにより、デフォルトパラメータを使用して比較する）により、他のＩＬ－２タンパク質又はポリペプチド（全長配列又は切断された断片を含む）上の対応するアミノ酸の位置を同定することができる。したがって、本願では、ＩＬ－２タンパク質又はポリペプチド中のアミノ酸の位置は、別段の記載がない限り、配列番号１に従って番号付けされたアミノ酸の位置である。例えば、「Ｋ６４」とは、配列番号１に示されるアミノ酸配列の第６４位のリジン残基（Ｋ）、又は比較した後の他のＩＬ－２ポリペプチド配列上の対応する位置にあるアミノ酸残基を意味する。

【0041】

本明細書では、ｈＩＬ－２変異タンパク質に言及する場合、変異を次のように説明する。アミノ酸置換は、「元のアミノ酸残基／位置／置換したアミノ酸残基」と表される。例えば、野生型ｈＩＬ－２の第９０位のアスパラギン（Ｎ）をアルギニン（Ｒ）に置換することはＮ９０Ｒと表すことができる。

【0042】

本明細書では、「ＩＬ２Ｒ」又は「ＩＬ－２Ｒ」とは、ＩＬ－２受容体を意味する。高親和性ＩＬ２Ｒは、ＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５とも呼ばれる）、ＩＬ－２Ｒβ（ＣＤ１２２とも呼ばれる）、及び共通γ鎖、即ちγｃ（ＣＤ１３２とも呼ばれる）の３つの鎖又はサブユニットで構成される。高親和性ＩＬ２Ｒは、「ＩＬ２Ｒαβγ」又は「ＩＬ２Ｒα／β／γ」と表記することができる。用語「ＩＬ－２Ｒβ及びγｃ」とは、用語「ＩＬ－２Ｒβγ」又は「ＩＬ２Ｒβ／γ」と互換的に使用でき、αサブユニットを欠き、かつβ及びγサブユニットを含む中親和性ＩＬ－２Ｒを意味する。

【0043】

本明細書では、「ＩＬ２Ｒα結合部位（ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅｓ）」又は「ＩＬ２Ｒα結合領域」とは、解析された結晶構造により観察されるＩＬ－２タンパク質とＩＬ２Ｒαタンパク質とが互いに接触し、作用する領域を意味する。

【0044】

用語「親和性」又は「結合親和性」とは、分子（例えば、受容体又は抗原）とその相手（例えば、リガンド又は抗体）との間の相互作用の内在的な結合能力、即ち、全ての非共有結合相互作用の合計の強度を意味する。特に明記しない限り、本明細書で使用される「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、受容体とリガンド又は抗原と抗体）の間の１：１相互作用を反映するための内在的な結合親和性である。分子Ｘのその結合相手Ｙに対する親和性は、通常、解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）で表すことができ、解離平衡定数は、解離速度定数及び会合速度定数（それぞれ、Ｋ解離（Ｋ_ｄｉｓ又はＫ_ｏｆｆ）とＫ会合（Ｋａ又はＫｏｎ）との比である。親和性は、本分野で公知の一般的な方法により測定することができ、該方法は、本願で使用される方法を含む。

【0045】

用語「制御性Ｔ細胞」又は「Ｔｒｅｇ細胞」とは、他のＴ細胞（例えばエフェクターＴ細胞）の応答を抑制することができる特別なＣＤ４^＋Ｔ細胞タイプを意味する。制御性Ｔ細胞は、ＩＬ２Ｒα及び転写因子ＦＯＸＰ３を構成的に高発現し、抗原（腫瘍抗原を含む）に対する末梢自己寛容の誘導及び維持に重要な役割を果たすことを特徴とする。制御性Ｔ細胞は、エフェクターＴ細胞に対する抑制性機能活性の活性化を誘導するためにＩＬ－２を必要とする。

【0046】

本明細書では、「抗体」とは、免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子の断片によって実質的に又は部分的にコードされる１つ以上のタンパク質を含むものを意味する。公知の免疫グロブリン遺伝子は、κ、λ、α、γ、δ、ε及びμ定常領域遺伝子、並びに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。軽鎖は、κ又はλに分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ又はεに分類され、これらは、更に、免疫グロブリンクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥをそれぞれ定義する。抗体は、任意のアイソタイプ／クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥ）又は任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）であってもよい。典型的な免疫グロブリン（例えば抗体）の構造単位は、四量体を含む。各四量体は、同じ二対のポリペプチド鎖で構成され、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）と１つの「重」鎖（約５０ｋＤ～７０ｋＤ）を有する。軽鎖と重鎖の両方を構造的相同性領域と機能的相同性領域に分ける。上記用語「定常」及び「可変」は、構造的及び機能的に使用されるものである。各鎖のＮ末端は、主に抗原識別を担当する、約１００～１１０個以上のアミノ酸を有する可変（Ｖ）領域又はドメインを定義する。本明細書で使用される「抗体」は、最も広義であり、所望の抗原結合活性を示すことができる限り、様々な抗体構造を含み、上記抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及び抗体断片を含むが、これらに限定されない。

【0047】

抗体は、完全な免疫グロブリンの形態で存在するか、又はプロテアーゼ消化によって産生される、十分に特徴付けられた複数の断片の形態で存在する。本明細書では、抗体の用語「抗原結合断片」（又は「抗体部分」又は「抗体断片」と略称される）とは、１つ、又は２つ以上のＣＤＲを含む抗体部分、又は結合抗原（例えば、ＩＬ－２タンパク質）に結合できるが、完全な抗体構造を有さない他の任意の抗体断片を意味する。抗原結合断片は、完全な抗体と同じ抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、特定のヒト抗体に由来する１つ、又は２つ以上のＣＤＲを含み、１つ、又は２つ以上の異なるヒト抗体に由来するフレームワーク領域に移着することができる。抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、Ｆｄ断片、ジスルフィド結合安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド結合安定化二機能性抗体（ｄｓ二機能性抗体）、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価の二機能性抗体）、二価一本鎖抗体（ＢｓＦｖ）、ラクダ化単一ドメイン抗体（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、ナノ抗体、ドメイン抗体及び二機能性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）を含むが、これらに限定されない。例えば、抗体の「Ｆａｂ」断片とは、１つの軽鎖（軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域を含む）と１つの重鎖の可変領域及びＣＨ１とがジスルフィド結合により結合した抗体断片を意味する。「Ｆａｂ’」断片とは、部分ヒンジ領域を含むＦａｂ断片を意味する。「Ｆ（ａｂ’）２」とは、Ｆａｂの二量体を意味する。抗体の「Ｆｃ」断片は、重鎖のＣＨ２とＣＨ３とがジスルフィド結合により結合して形成された抗体断片である。抗体のＦｃ断片は、複数の異なるエフェクター機能を担当し、例えば、インビボでの血清における抗体の半減期の決定、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ、ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ、ＣＤＣ）又は抗体依存性細胞貧食（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ、ＡＤＣＰ）などの免疫応答の媒介であるが、抗原の結合に関与しない。抗体の「Ｆｖ」断片とは、完全な抗原結合部位を含む最小抗体断片を意味する。Ｆｖ断片は、１つの軽鎖の可変領域と１つの重鎖の可変領域で構成される。抗体の「Ｆｄ断片」とは、ＶＨ、ＣＨ１及び部分ヒンジ領域を含む、Ｆａｂ断片における重鎖部分を意味する。「一本鎖Ｆｖ抗体（ｓｃＦｖ）」とは、軽鎖可変領域と重鎖可変領域とが直接連結するか又は１つのペプチド鎖を介して連結して形成された工学的に改変された抗体（Ｈｕｓｔｏｎ ＪＳら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８８、８５：５８７９－５８８３）を意味する。「（ｄｓＦｖ）２」が３つのペプチド鎖を含むことは、２つのＶＨ基が１つのポリペプチドリンカーによって連結され、ジスルフィド結合によって２つのＶＬ基に結合することを意味する。「二重特異性ｄｓ二機能性抗体」は、ＶＬ１－ＶＨ２（１つのポリペプチドリンカーを介して連結される）とＶＨ１－ＶＬ２（同じく１つのポリペプチドリンカーを介して連結される）とを含み、両者は、ＶＨ１とＶＬ１との間にジスルフィド結合により結合する。「二重特異性ｄｓＦｖ」又は「ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ」は、３つのポリペプチド鎖を含み、即ち、ＶＨ１－ＶＨ２断片を含み、そのうちの２つの重鎖は、ポリペプチドリンカー（例えば、長い柔軟なリンカー）を介して連結され、それぞれがジスルフィド結合によりＶＬ１とＶＬ２断片に結合し、ジスルフィド結合によりペアリングされた重鎖軽鎖の各ペアは、異なる抗原特異性を有する。「ｓｃＦｖ二量体」は、二価二機能性抗体又は二価一本鎖抗体（ＢｓＦｖ）であり、二量化された２つのＶＨ－ＶＬ（ポリペプチドリンカーを介して連結される）断片を含み、そのうちの１つの断片のＶＨともう１つの断片のＶＬが協働して２つの結合部位を形成し、この２つの結合部位には、同じ抗原（又は抗原結合エピトープ）又は異なる抗原（又は抗原結合エピトープ）を標的結合することができる。別のいくつかの実施形態では、「ｓｃＦｖ二量体」は、互いに連結されたＶＬ１－ＶＨ２（ポリペプチドリンカーを介して連結される）及びＶＨ１－ＶＬ２（ポリペプチドリンカーを介して連結される）を含む二重特異性二機能性抗体であり、そのうち、ＶＨ１とＶＬ１とが協働し、ＶＨ２とＶＬ２とが協働し、各協働ペアリングが異なる抗原特異性を有する。「一本鎖抗体Ｆｖ－Ｆｃ（ｓｃＦｖ－Ｆｃ）」とは、ｓｃＦｖと抗体Ｆｃ断片で構成された工学的に改変された抗体を意味する。「ラクダ化単一ドメイン抗体（Ｃａｍｅｌｉｚｅｄ ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」、「重鎖抗体」又は「ＨＣＡｂ（Ｈｅａｖｙ－ｃｈａｉｎ－ｏｎｌｙ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ＨＣＡｂ）」とは、いずれも２つのＶＨドメインを含み、軽鎖を含まない抗体を意味する（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ及びＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １９９９、２３１：２５－３８；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ、Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００１、７４：２７７－３０２、特許出願国際公開第９４／０４６７８号、特許出願国際公開第９４／２５５９１号、米国特許第６００５０７９号）。重鎖抗体は、最初に、ラクダ科（ラクダ、ヒトコブラクダ、及びラマを含む）において発見された。軽鎖が欠失しているが、ラクダ化抗体（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）は、抗原結合の全ての機能を有する（Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ Ｃら、Ｎａｔｕｒｅ １９９３、３６３：４４６－４４８；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫら、Ｈｅａｖｙ－ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｃａｍｅｌｉｄａｅ：ａ ｃａｓｅ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ ２００２、５４：３９－４７；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２００３、１０９：９３－１０１）。重鎖抗体の可変領域（ＶＨＨドメイン）は、現在知られている後天性免疫によって産生される最小の抗原結合単位である（Ｋｏｃｈ－Ｎｏｌｔｅ Ｆら、ＦＡＳＥＢ Ｊ ２００７、２１：３４９０－３４９８）。「ナノ抗体」は、１つの重鎖抗体由来のＶＨＨドメインと２つの定常領域のＣＨ２及びＣＨ３で構成された抗体断片である。「ドメイン抗体」とは、１つの重鎖可変領域又は１つの軽鎖可変領域のみを含む抗体断片を意味する。いくつかの場合、２つ又は３つ以上のＶＨドメインは、１つのポリペプチドリンカーによって共有結合されて、二価ドメイン抗体を形成する。二価ドメイン抗体の２つのＶＨドメインは、同じ又は異なる抗原に標的作用することができる。「二機能性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）」は、２つの抗原結合部位を有する小さい抗体断片を含み、該断片は、同一のポリペプチド鎖に連結されたＶＨドメインとＶＬドメインを含む（例えば、ＶＨ－ＶＬ又はＶＬ－ＶＨ）（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ Ｐら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９９３、９０：６４４４－６４４８、欧州特許出願公開第４０４０９７号、特許出願国際公開第９３／１１１６１号）。２つのドメインの間のリンカーが短いため、同一の鎖における２つのドメインが互いにペアリングできないことにより、２つのドメインを他の鎖の相補ドメインと強制的にペアリングさせて、２つの抗体結合部位を形成する。この２つの抗体結合部位は、同じ又は異なる抗原（又は抗原結合エピトープ）を標的結合することができる。

【0048】

本願の抗ＩＬ－２抗体又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の抗体ドメインは、全長抗体の全部又はその抗原結合断片（上記の定義を参照）を含み、ＩＬ２Ｒαと競合してＩＬ－２に結合することができる抗体可変領域の全部又は一部を任意に含み、かつＶ遺伝子及び／又はＤ遺伝子及び／又はＪ遺伝子によってコードされる１つ、又は２つ以上の領域を任意に含む。

【0049】

本明細書では、用語「免疫グロブリン分子」とは、天然に存在する抗体構造を有するタンパク質を意味する。例えば、ＩｇＧ類の免疫グロブリンは、約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、ジスルフィド結合を介して連結された２つの軽鎖と２つの重鎖で構成される。Ｎ末端からＣ末端へ、各重鎖は、可変領域（ＶＨ、可変重ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる）と、続いて、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３、重鎖定常領域とも呼ばれる）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端へ、各軽鎖は、可変領域（ＶＬ、可変軽ドメイン又は軽鎖可変ドメイン又は軽鎖可変領域とも呼ばれる）と、続いて、定常軽ドメイン（軽鎖定常領域、ＣＬとも呼ばれる）を有する。免疫グロブリンの重鎖は、α（ＩｇＡ）、δ（ＩｇＤ）、ε（ＩｇＥ）、γ（ＩｇＧ）又はμ（ＩｇＭ）に分けることができ、そのうちの一部は、更に、サブクラス、例えば、γ１（ＩｇＧ１）、γ２（ＩｇＧ２）、γ３（ＩｇＧ３）、γ４（ＩｇＧ４）、α１（ＩｇＡ１）及びα２（ＩｇＡ２）に分けることができる。免疫グロブリンの軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）に分けられる。免疫グロブリンは、一般的に、免疫グロブリンヒンジ領域によって連結された２つのＦａｂ分子とＦｃドメインで構成される。

【0050】

本明細書では、用語「軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）」及び「重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）」とは、それぞれＶ_Ｌ又はＶ_Ｈを含むポリペプチドを意味する。Ｖ_ＨとＶ_Ｌがペアリングされると、単一の抗原結合部位が形成される。内因性Ｖ_Ｌは、遺伝子領域Ｖ（可変）及びＪ（連結）によりコードされ、内因性Ｖ_Ｈは、Ｖ、Ｄ（多様性）及びＪによりコードされる。Ｖ_Ｌ又はＶ_Ｈは、いずれも超可変領域ＣＤＲ（相補性決定領域）とフレームワーク領域（ＦＲ）とを含む。用語「可変領域」又は「Ｖ領域」とは、互換的に使用されてもよく、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を含む重鎖可変領域又は軽鎖可変領域を意味する。Ｖ領域は、天然に存在するもの、組み換えられるもの、又は合成されるものであってもよい。本明細書では、抗体軽鎖可変領域及び／又は抗体重鎖可変領域は、「抗体可変領域」又は「抗体鎖」と総称される場合がある。本明細書で提供され更に説明されるように、「抗体軽鎖可変領域」又は「抗体重鎖可変領域」及び／又は「抗体可変領域」及び／又は「抗体鎖」は、システイン残基が導入されたポリペプチド配列を任意に含む。

【0051】

本明細書では、用語「相補性決定領域（ＣＤＲ）」又は「超可変領域（ＨＶＲ）」は、互換的に使用されてもよく、抗体可変領域において配列が超可変であり、かつ／又は構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する各領域を意味する。ＣＤＲは、抗体の標的タンパク質結合部位であり、ＣＤＲが構造的に標的タンパク質のエピトープに相補的であるため、該結合部位は、このような標的タンパク質に結合する特異性を有する。通常、天然の４本鎖抗体は、Ｖ_Ｈに３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）とＶ_Ｌに３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）との６つのＣＤＲを含む。ＣＤＲを除く残りのＶＬ又はＶＨ領域、即ちフレームワーク領域（ＦＲ）は、アミノ酸配列変異が少ない（Ｋｕｂｙ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版、第４章、Ｗ Ｈ Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．、２０００）。

【0052】

ＣＤＲ及びＦＲの位置は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ及びＣｏｎｔａｃｔ（例えば、Ｋａｂａｔら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ公開番号９１－３２４２、Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２００１、２９：２０５－２０６；Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９８７、１９６：９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ １９８９、３４２：８７７－８８３；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９９２、２２７：７９９－８１７；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９９７、２７３：９２７－７４８；Ｌｅｆｒａｎｃ ＭＰら、ＩＭＧＴ 、Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍｍｕｎｏＧｅｎｅｔｉｃｓ Ｄａｔａｂａｓｅ；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９９９、２７：２０９－２１２；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ＲＭら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９９６、２６２：７３２－７４５を参照）などの、本分野で周知の様々な定義方法を使用して決定することができる。抗原結合部位の定義は、更に、Ｒｕｉｚら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２０００、２８：２１９－２２１；Ｌｅｆｒａｎ ＭＰ、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２００１、２９：２０７－２０９；Ｌｅｆｒａｎｃ ＭＰ、Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ １９９９、７：１３２－１３６；Ｌｅｆｒａｎｃ ＭＰら、Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００３、２７：５５－７７；ＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９９６、２６２：７３２－７４５；Ｍａｒｔｉｎら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８９、８６：９２６８－９２７２；Ｍａｒｔｉｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ １９９１、２０３：１２１－１５３；Ｒｅｅｓら、Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ Ｍ Ｊ Ｅ（編集）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、オックスフォード、１４１－１７２（１９９６）という文献に記載されている。本願は、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の抗体部分又は本願の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片におけるＣＤＲを決定する任意の定義方法を含み、表１は、異なる定義方法を使用して決定された抗体ＣＤＲのアミノ酸残基を示す。特定のＣＤＲをカバーする正確なアミノ酸残基の数は、ＣＤＲの配列によって変化する。抗体可変領域のアミノ酸配列が明らかである場合、当業者は、上記定義の従来の方法を含むがこれらに限定されない方法によって抗体のＣＤＲを決定することができる。

【0053】

【表1】

【0054】

また、Ｋａｂａｔらは、更に、いずれも任意の抗体に応用できる、可変領域配列に対する番号システムを定義する。当業者は、抗体配列自体以外の任意の実験データに依存して可変領域配列を決定する必要がなく、この「Ｋａｂａｔ番号」システムを任意の抗体の可変領域配列に明確に応用することができる。特に説明しない限り、本願の抗ＩＬ－２抗体又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の抗体部分の可変領域における特定のアミノ酸残基の位置の番号は、Ｋａｂａｔ番号システムに従って決定される。

【0055】

本明細書では、用語「Ｆｃ領域」又は「Ｆｃドメイン」とは、少なくとも定常領域の一部、例えば第１定常領域（ＣＨ１）以外の免疫グロブリン重鎖の定常領域を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を意味する。本明細書で使用されるＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域及び／又はＦｃ領域変異体を含み、本願の抗ＩＬ－２抗体又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の一部であってもよい。本分野において理解されるように、Ｆｃ領域の境界は、変化してもよいが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、ＥＵ番号システム／スキーム（Ｋａｂａｔら、１９９１、ＮＩＨ公開９１－３２４２、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ、スプリングフィールド、バージニア州）に基づくと、通常、そのカルボキシル末端の第２２６位のシステイン残基又は第２３０位のプロリン残基を含むと定義される。

【0056】

本明細書では、用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質性を有する抗体群から得られる抗体を意味し、即ち、少量で存在する可能性がある自然な変異を除いて、抗体群を構成する各抗体は、同じである。モノクローナル抗体は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示す。

【0057】

本明細書では、用語「キメラ抗体」とは、２つの異なる抗体に由来する配列を含む抗体（例えば、米国特許第４８１６５６７号）を意味し、上記抗体は、通常、異なる種に由来する。例えば、キメラ抗体は、ヒト及びげっ歯動物の抗体断片、通常、ヒト定常領域及びマウス可変領域を含む。キメラ抗体を産生するための方法は、当業者に知られている従来の組換えＤＮＡ及び遺伝子トランスフェクション技術（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８４、８１：６８５１－６８５５；米国特許第５２０２２３８号及び米国特許第５２０４２４４号）を含む。

【0058】

本明細書では、用語「ヒト化抗体又は抗原結合断片」とは、非ヒト動物由来のＣＤＲ、ヒト由来のＦＲ領域、及びヒト由来の定常領域を含む抗体又は抗原結合断片を意味する。ヒト化抗体又は抗原結合断片は、低下した免疫原性を有するため、ヒト治療剤として使用することができる。いくつかの実施形態では、上記非ヒト動物は、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモット又はハムスターなどの哺乳動物である。いくつかの実施形態では、上記ヒト化抗体又は抗原結合断片は、ＣＤＲ配列が非ヒト由来である以外、抗体の他の部分が実質的に全てヒト由来配列で構成される。いくつかの実施形態では、上記ヒト由来ＦＲ領域は、それが由来するヒト抗体と同じアミノ酸配列を含んでもよく、いくつかのアミノ酸変化、例えば、１０、９、８、７、６、５、４、３、２若しくは１個以下のアミノ酸変化を含んでもよい。いくつかの実施形態では、該アミノ酸変化は、重鎖ＦＲ領域のみ、軽鎖ＦＲ領域のみ、又は同時に２つの鎖に存在してもよい。

【0059】

本明細書では、用語「対応するヒト生殖系列配列」とは、抗体可変領域のアミノ酸配列又はサブ配列を意味し、他の既知の全てのヒト生殖系列免疫グロブリン可変領域のアミノ酸配列と比較して、該抗体可変領域のアミノ酸配列又はサブ配列と参照されたヒト生殖系列免疫グロブリン可変領域のアミノ酸配列とは、最も高いアミノ酸配列同一性を有する。対応するヒト生殖系列配列は、フレームワーク領域、相補性決定領域、フレームワーク領域及び相補性決定領域、可変領域、可変領域配列又はサブ配列の他の組み合わせのみであってもよい。本明細書に記載の方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ又は本分野で公知の他の比較アルゴリズムを使用して２つの配列を比較し、配列同一性を決定することができる。対応するヒト生殖系列核酸配列又はヒト生殖系列アミノ酸配列は、参照されたヒト生殖系列免疫グロブリン可変領域のアミノ酸配列と少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有してもよい。

【0060】

本願の抗ＩＬ－２抗体又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の抗体部分は、ヒトＩＬ２Ｒαと競合してｈＩＬ－２又はその変異タンパク質に結合でき、ヒトＩＬ２ＲαとｈＩＬ－２又はその変異タンパク質との結合をブロック（抑制）することができるとともに、ＩＬ２Ｒβ／γに対するｈＩＬ－２又はその変異タンパク質の結合活性及び機能活性を保持することができる限り、キメラ形式、非ヒト形式、ヒト化形式又は全ヒト形式を含む任意の１つ、２つ又は３つ以上の形式から選択されてもよい。

【0061】

本明細書では、用語「特異的結合」又は「結合特異的」又は「．．．に対して特異性を有する」又は「結合」とは、結合反応を意味し、該結合反応は、タンパク質と他の生物剤（バイオ製剤）との異質集団（例えば、生体サンプル（例えば、血液、血清、血漿又は組織サンプル））において、標的分子（又はタンパク質又は抗原）の存在を決定し、即ち、この結合は、標的分子に対して選択性を有し、それらの望ましくない相互作用又は非特異的な相互作用を区別することができる。例えば、標的分子（抗原であってもよい）に特異的に結合する抗体は、他の非標的分子に結合する抗体と比較すると、該抗体が該標的分子に結合する場合に、より大きい親和性及び結合活性を有し、より容易であり、かつ／又は持続時間がより長い。いくつかの実施形態では、抗体と標的抗原との特異的結合の解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）値は、＜１μＭ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、又は＜０．１ｎＭである。

【0062】

本明細書では、用語「抗原－抗体結合界面」とは、抗体が抗原に特異的に結合する場合に、抗原－抗体相互作用（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、立体分布により）に関与するアミノ酸残基によって形成される立体構造領域を意味し、該立体領域は、抗原エピトープ及び抗体の抗原結合領域を含む。抗原－抗体結合界面のアミノ酸残基は、連続した配列にあってもよく、連続した配列になくてもよい。例えば、上記界面が３次元的である場合、上記界面内のアミノ酸残基は、直鎖状配列上の異なる位置に分けて位置することができる。本明細書で使用される場合、用語「エピトープ」とは、抗体に特異的に結合できるタンパク質決定領域を意味する。エピトープは、通常、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面群で構成され、通常、特定の３次元構造特性及び特定の電荷特性を有する。立体構造エピトープと非立体構造エピトープとは、変性溶媒の存在下で抗体と前者との結合が失われるが、後者との結合が失われないという点で相違する。

【0063】

本明細書で使用される場合、用語「エピトープ結合ドメイン」又は「抗原結合ドメイン」又は「抗原結合領域」とは、互換的に使用されてもよく、標的エピトープ上の結合部位に特異的に相互作用する（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、立体分布により）結合分子（例えば、抗体又はそのエピトープ結合断片又は誘導体）の部分を意味する。本願では、「抗原結合領域」とは、ＩＬ－２エピトープとの特異的相互作用を（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、立体分布により）保持する抗体の１つ、又は２つ以上の断片も意味する。

【0064】

本明細書では、用語「融合」又は「融合された」とは、アミノ酸配列（例えば、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質）に使用される場合、例えば、化学結合又は組換え手段により、２つ以上のアミノ酸配列を、天然に存在しない単一のアミノ酸配列に組み合わせることを意味する。融合ポリペプチドは、２つのアミノ酸配列をコードする２つのポリヌクレオチドの組換え、及びそれに続く組換えポリヌクレオチドを含む発現構築物を宿主細胞に導入することにより産生することができる。

【0065】

本明細書では、用語「抗体変異体」又は「抗体変異タンパク質」とは、参照された抗体可変領域に少なくとも１つのアミノ酸変異を含む抗体ポリペプチド配列を意味する。変異物は、未修飾の抗体と実質的に相同又は実質的に同一であってもよい。いくつかの実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の抗体部分の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、及び／又は６つのＣＤＲにおいてアミノ酸変異を行うことにより、上記抗体若しくは抗体部分のヒト化度を向上させ、ＩＬ－２変異タンパク質に対する特異性若しくは親和性を増強し、かつ／又はＩＬ－２若しくはその変異タンパク質と超安定した複合構造を形成する。いくつかの実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の抗体部分の１つ、２つ、３つ、及び／又は４つのＦＲにおいてアミノ酸変異を行うことにより、上記抗体若しくは抗体部分のヒト化度を向上させ、かつ／又はＩＬ－２若しくはその変異タンパク質と超安定した複合構造を形成する。いくつかの実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の抗体部分のＣＤＲ及びＦＲにおいて１つ又は２つ以上のアミノ酸変異を行うことにより、上記抗体若しくは抗体部分のヒト化度を向上させ、ＩＬ－２若しくはその変異タンパク質に対する特異性若しくは親和性を増強し、かつ／又はＩＬ－２若しくはその変異タンパク質と超安定した複合構造を形成する。いくつかの実施形態では、上記アミノ酸変異は、アミノ酸の置換、削除、挿入、又はそれらの任意の組み合わせを含む。

【0066】

アミノ酸置換は、アミノ酸の保存的置換及びアミノ酸の非保存的置換を含み、アミノ酸の保存的置換は、同じクラス（例えば、化学的特性又は機能的類似）のうちの別のアミノ酸で置換することに関し、非保存的置換は、このクラスのうちの１つのアミノ酸を別のクラスのアミノ酸で置換することに関する。当業者は、係る残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性及び／又は両親媒性の類似性に基づいてアミノ酸の保存的置換を行うことができる。例えば、（ｉ）非極性（疎水性）アミノ酸としては、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、バリン（Ｖａｌ、Ｖ）、プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）、トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）及びメチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）が挙げられ、（ｉｉ）極性中性アミノ酸としては、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、トレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）及びグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）が挙げられ、（ｉｉｉ）正電荷を帯びた（塩基性）アミノ酸としては、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）及びヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）が挙げられ、（ｉｖ）負電荷を帯びた（酸性）アミノ酸としては、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）及びグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）が挙げられる。アミノ酸の非保存的置換は、生体高分子の特性又は機能を大きく変化させる可能性がある。一般的に、ポリペプチドの特性を最大限変化させることが期待される置換としては、（ａ）セリン又はトレオニンなどの親水性残基で、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、バリン、アラニンなどの疎水性残基を置換する（又は親水性残基が疎水性残基で置換される）こと、（ｂ）システイン又はプロリンで他のアミノ酸残基を置換する（又はシステイン又はプロリンが他のアミノ酸残基で置換される）こと、（ｃ）リジル基、アルギニル基、ヒスチジル基などの電気陽性側鎖を有する残基で、グルタミル基又はアスパルチル基などの電気陰性残基を置換する（又は電気陽性側鎖を有する残基が電気陰性残基で置換される）こと、（ｄ）フェニルアラニンなどの嵩高い側鎖を有する残基で、グリシンなどの側鎖のない残基を置換する（又は嵩高い側鎖を有する残基が側鎖のない残基で置換される）ことが挙げられるが、これらに限定されない。アミノ酸配列の変異が導入された部位又は領域は予め決定されてもよいが、非保存的置換による潜在的な生体高分子の特性又は機能の変化は予測できない。いくつかの実施形態では、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質は、野生型ｈＩＬ－２に基づいてアミノ酸の非保存的置換を導入することによって、意図しない機能上の大きな改変が達成され、例えば、本願の抗ＩＬ－２抗体と結合できないｈＩＬ－２が、アミノ酸の非保存的置換によって結合活性を取得する。

【0067】

いくつかの実施形態では、抗原－抗体結合界面にシステイン残基を導入することについて、上記第１及び第２は、システインが導入される位置の区別を容易にするためにのみ使用される。明示的に記載されていない限り、これらの用語の使用は、特定のアミノ酸残基をシステイン残基に置換するか、又はシステイン残基を付加若しくは挿入する特定の順序を与えることを意図していない。

【0068】

本明細書では、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列において、用語「同一」又は「同一性」又は「同一性百分率」又は「百分率配列同一性」は、互換的に使用されてもよく、アミノ酸配列（又は核酸配列）の比較を行い、必要に応じて間隔を導入して同じアミノ酸（又は核酸）の数を最大にした後、候補配列において、参照配列と同じアミノ酸（又は核酸）残基が上記候補配列のアミノ酸（又は核酸）残基に占める百分率を意味する。上記アミノ酸残基の保存的置換は、同じ残基と考えられてもよく、同じ残基と考えられなくてもよい。本分野で開示されたツール、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴｐ（アメリカ国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）ウェブサイト、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ＳＦら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９９０、２１５：４０３－４１０；Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｆら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ １９９７、２５：３３８９－３４０２を参照してもよい）、ＣｌｕｓｔａｌＷ２（欧州バイオインフォマティクス研究所ウェブサイト、Ｈｉｇｇｉｎｓ ＤＧら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １９９６、２６６：３８３－４０２；Ｌａｒｋｉｎ ＭＡら、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２００７、２３：２９４７－２９４８を参照してもよい）、及びＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアによって、配列を比較してアミノ酸（又は核酸）配列の百分率配列同一性を決定してもよい。当業者は、上記ツールのデフォルトパラメータを使用するか、又は比較要件に従って、例えば、適切なアルゴリズムを選択することによって、パラメータを適切に調整することができる。

【0069】

本明細書では、核酸（又はポリヌクレオチド）又はタンパク質に関する場合、用語「単離された」は、該核酸又はタンパク質が、天然状態でそれに結合する他の細胞成分を実質的に含まず、好ましくは均質状態にあることを意味し、例えば、単離された核酸又はタンパク質は、天然又は自然環境から取り出されてもよい。単離された核酸又はタンパク質は、凍結乾燥したもの又は水溶液であってもよい。通常、該単離された核酸又はタンパク質の純度及び均質性は、分析化学技術（例えばポリアクリルアミドゲル電気泳動又は高速液体クロマトグラフィー）を使用して決定されてもよい。該単離された核酸又はタンパク質は、製剤中の主成分とする。タンパク質は、実質的に精製により得られる。用語「精製された」とは、核酸又はタンパク質が電気泳動ゲルにおいて実質的に１つのバンドを生成することを意味する。特に、これは、核酸又はタンパク質の純度が少なくとも８５％で、より好ましくは少なくとも９５％で、最も好ましくは少なくとも９９％であることを意味する。本願では、いくつかの実施形態では、宿主細胞において発現される組換えタンパク質は、単離されたものと見なされ、同様に、これは、当業者に周知の技術によって単離され、分画（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅ）されるか、又は部分的もしくは実質的に精製された天然又は組換えタンパク質にも当てはまる。いくつかの実施形態では、「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体（例えば、ｈＩＬ－２に特異的に結合する単離された抗体は、ｈＩＬ－２以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）を意味する。しかしながら、ｈＩＬ－２に特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原（例えば、他の種に由来するＩＬ－２分子、例えばマウスＩＬ－２）と交差反応性を有してもよい。また、単離された抗体は、他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、ベクターに含まれる、本願のポリペプチド又はタンパク質（例えば、ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質）をコードする組換えポリヌクレオチドは、単離されたものと見なされる。単離されたポリヌクレオチドの他の例として、異種宿主細胞に含まれる組換えポリヌクレオチド又は溶液中の（部分的又は実質的に）精製されたポリヌクレオチドが挙げられる。単離されたポリヌクレオチドは、該ポリヌクレオチド分子を一般的に含む細胞に含まれるポリヌクレオチド分子を含むが、該ポリヌクレオチド分子は、染色体外又はその天然染色体位置とは異なる他の染色体位置に存在する。本願の単離されたポリヌクレオチド又は核酸は、合成により生成されたこのような分子を更に含む。また、ポリヌクレオチド又は核酸は、プロモーター、リボソーム結合部位又は転写ターミネーターなどの調節エレメントであってもよく、プロモーター、リボソーム結合部位又は転写ターミネーターなどの調節エレメントを含んでもよい。

【0070】

本明細書では、用語「工学的に改変」は、ポリペプチド又はタンパク質主鎖に対する任意の操作、又は天然若しくは組換えタンパク質若しくはポリペプチド若しくはその断片に対する翻訳後修飾を含むと解釈される。工学的な改変としては、アミノ酸配列への変異、グリコシル化パターン又は各アミノ酸側鎖基の修飾、及びこれらの方法の組み合わせが挙げられる。

【0071】

本明細書で使用される場合、用語「ポリペプチド」は、アミノ酸及びその等価物のポリマーを意味し、生成物の具体的な長さを意味しないため、「ペプチド」及び「タンパク質」は、ポリペプチドの定義に含まれる。ポリペプチドの定義には、本明細書で定義される「抗体」も含まれる。

【0072】

文脈が別段の指示を有さない限り、「誘導体」は、第２ポリペプチドに対して１つ、若しくは２つ以上のアミノ酸の非保存的若しくは保存的置換を有するポリペプチド若しくはその断片（「変異体」とも呼ばれる）であるか、又は第２分子を共有結合することにより、例えば異種ポリペプチドを連結することにより、又はグリコシル化、アセチル化、リン酸化などにより修飾されたポリペプチド若しくはその断片である。「誘導体」の定義は、例えば、１つ以上のアミノ酸の類似体（例えば、非天然アミノ酸など）を含むポリペプチド、非置換の連結、及び本分野で公知の（天然及び非天然の）他の修飾を有するポリペプチドを更に含んでもよい。

【0073】

本明細書では、用語「発現ベクター」又は「ベクター」とは、あるタンパク質をコードするポリヌクレオチド又は核酸を操作的にその中に挿入し、該タンパク質を発現させることができる媒体を意味する。ベクターは、宿主細胞の形質転換、形質導入又はトランスフェクションに使用され、該ベクターに担持された遺伝物質エレメントを宿主細胞内に発現させることができる。

【0074】

本明細書では、用語「宿主細胞」とは、外来ポリヌクレオチド若しくは核酸及び／又はベクターが導入される細胞を意味する。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換細胞」を含み、これらは、初代形質転換された細胞及びそれに由来する後代を含み、継代の数を考慮しない。後代は、核酸内容が親細胞の核酸内容と完全に同一ではないかもしれず、変異を含む場合がある。本願では、最初に形質転換された細胞から同じ機能又は生物学的活性について選別されるか又は選択される変異体の子孫が含まれる。

【0075】

本明細書では、用語「対象」、「被験者」、「患者」又は「個体」は、互換的に使用されてもよく、ヒト、非ヒト霊長類動物（例えば、サル）、マウス、ブタ、ウシ、ヤギ、ウサギ、ラット、モルモット、ハムスター、ウマ、サル、ヒツジ又は他の非ヒト哺乳動物を含む哺乳動物と、鳥（例えば、鶏又はアヒル）又は魚などの非哺乳類脊椎動物を含む非哺乳動物と、非哺乳類無脊椎動物とを含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本願の使用又は方法に係る対象及び医薬組成物は、非ヒト動物の（予防的及び／又は治療的）処置に使用される。

【0076】

本明細書では、ある疾患又は病状に対する「治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ又はｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」とは、ある疾患若しくは病状の軽減、ある疾患若しくは病状の発生若しくは発症の速度の低下、ある疾患若しくは病状の発症リスクの低減、ある疾患若しくは病状に関連する症状発症の遅延、ある疾患若しくは病状に関連する症状の軽減若しくは終結、ある疾患若しくは病状の完全若しくは一部の逆転の発生、ある疾患若しくは病状の治癒、又は以上の組み合わせを意味する。

【0077】

本明細書では、「予防」は、疾患若しくは障害、又は特定の疾患若しくは障害の症状の発生又は発症の抑制を含む。いくつかの実施形態では、家族の病歴を有する対象は、予防案の候補である。通常、用語「予防」とは、病徴又は症状の発生前、特にリスクのある対象の発症前の薬物投与を意味する。

【0078】

用語「治療有効量」又は「有効用量」とは、必要な用量で、必要な期間にわたって、疾患若しくは障害に関連する症状を予防するか若しくは改善し、かつ／又は疾患若しくは障害の重症度を軽減するのに有効な用量又は濃度を意味する。本願の製剤、抗体若しくはその抗原結合断片若しくは融合タンパク質又はその組成物の治療有効量は、疾患状態、個体の年齢、性別及び体重、並びに抗体若しくは抗体部分又は融合タンパク質が個体において所望の反応を励起する能力などの複数の要因に応じて変化してもよい。治療有効量はまた、製剤、抗体若しくはその抗原結合断片若しくは融合タンパク質又はその組成物の任意の有毒又は有害作用が治療有益作用より低いと考えられる。用語「有効量」とは、対象に臨床上の利益（疾患、障害若しくはその関連症状の改善、緩和又は軽減、疾患の進行の遅延又は停止を含むが、これらに限定されない）を提供するのに十分な活性成分又は薬剤の量を意味する。

【0079】

本明細書では、用語「薬学的に許容できる」又は「薬学的に許容可能な」とは、一般的に化学的及び／又は物理的に製剤中の他の配合剤に適合し、生理的に対象に適合する、意図された担体、ビヒクル、希釈剤、賦形剤及び／又は塩を意味する。

【0080】

用語「約」とは、数値と組み合わせて使用される場合、指定された数値より５％小さい下限及び５％大きい上限を有する範囲内の数値、又は一実施形態では１０％小さい下限及び１０％大きい上限、又は別の実施形態では１５％小さい下限及び１５％大きい上限、又は別の実施形態では２０％小さい下限及び２０％大きい上限を有する範囲内の数値を包含することを意味する。

【0081】

用語「及び／又は」は、オプションのいずれか１つ又はオプションのいずれか２つ以上の組み合わせを意味すると理解されるべきである。

【0082】

本明細書で使用される場合、用語「含み」、「含む」、「含有」、「有する」、又は「関与する」は、互換的に使用されてもよく、要素、整数又は工程を含むが、任意の他の要素、整数又は工程を排除しないことを意味する。本明細書では、用語「含み」、「含む」、「含有する」、「有する」、又は「関与する」が使用される場合、特に断らない限り、上記要素、整数又は工程で構成された状況も包含される。

【0083】

本明細書で言及される「いくつかの実施形態」、「一実施形態」、「１つの具体的な実施形態」、「具体的な実施形態」又はそれらの組み合わせは、記載された実施形態に関連する特定の特徴、構造、又は特性が、本願の少なくとも１つの実施形態に含まれることを示す。したがって、本明細書の全文に現れる前述の用語は、必ずしも同一の実施形態を指すものではない。また、上記特定の特徴、構造、又は特性は、１つ以上の実施形態において任意の適切な方式で組み合わされてもよい。

【0084】

文脈が明確に指示しない限り、単数用語は、複数の指示対象を包含し、その逆も同様である。

【0085】

全ての特許、特許出願及び他の出版物は、記載及び開示の目的のために、参照により本明細書に明確に組み込まれる。これらの出版物は、それらの開示が本願の出願日より前に行われたという理由のみで提供されている。これらの文書の日付の記述又はこれらの文書の内容の表現に関する全ての記述は、出願人が入手可能な情報に基づくものであり、これらの文書の日付又はこれらの文書の内容の正確性についての何らかの承認を構成するものではない。また、あらゆる国で、本明細書においてこれらの出版物に対するあらゆる引用は、該出版物が本分野の公知常識の一部となっていることについての承認を構成するものではない。

【0086】

以下の段落において、本願の各態様について詳細に説明する。

【0087】

１． 本願のｈＩＬ－２変異タンパク質
一態様では、本願に係るｈＩＬ－２変異タンパク質は、野生型ｈＩＬ－２（配列番号１に示される）に対して、本願の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片に結合する能力を得て、かつ上記変異がｈＩＬ－２の生物学的活性に顕著な影響を与えない。

【0088】

本願のｈＩＬ－２変異タンパク質と本明細書の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との結合親和性（Ｋ_Ｄ）値は、＜５×１０^－８Ｍであり、好ましくは、＜１×１０^－８Ｍ、＜５×１０^－９Ｍ、又は＜１×１０^－９Ｍであり、より好ましくは、＜６×１０^－１０Ｍである。本願のｈＩＬ－２変異タンパク質と本明細書の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片とのＫ_Ｄ値は、約５×１０^－８Ｍ～５×１０^－１０Ｍ、又は例えば、１×１０^－８Ｍ～１×１０^－１０Ｍ、１．５×１０^－８Ｍ～１×１０^－１０Ｍ、１×１０^－８Ｍ～１０×１０^－１０Ｍ、１×１０^－９Ｍ～１×１０^－１０Ｍである。

【0089】

本願のｈＩＬ－２変異タンパク質は、（ｉ）ｈＩＬ－２とｈＩＬ２Ｒβ／γとの結合活性及び生物学的機能を保持し、（ｉｉ）本願の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片が、ＩＬ２Ｒαと競合して本願のｈＩＬ－２変異タンパク質に結合することができ、（ｉｉｉ）本願の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片が、ｈＩＬ－２変異タンパク質とＩＬ－２Ｒαとの結合をブロックすることができるという他の機能特性を更に含む。

【0090】

本願のｈＩＬ－２変異タンパク質は、他の改善された特性、例えば、その変異部位が抗原－抗体結合界面内に位置し、抗原－抗体結合界面外に露出しないため、ＡＤＡ（ａｎｔｉ－ｄｒｕｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ、抗薬物抗体）を誘発する潜在的なリスクを顕著に低減するという特性を更に含む。

【0091】

いくつかの実施形態では、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質は、野生型ｈＩＬ－２（配列番号１に示される）と比較して、９０％以上のアミノ酸配列同一性を有し、好ましくは、９３％以上のアミノ酸配列同一性を有するが、配列同一性が１００％より小さい。いくつかの実施形態では、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質は、野生型ｈＩＬ－２に対して、少なくとも１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を含む。いくつかの実施形態では、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質は、野生型ｈＩＬ－２に対して、少なくとも１つ、又は２つ以上のアミノ酸置換及び／又は削除を含む。いくつかの実施形態では、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質は、野生型ｈＩＬ－２に対して、システイン残基への置換以外の少なくとも１つ、又は２つ以上の他のアミノ酸置換を含む。一実施形態では、上記アミノ酸変異は、上記抗原－抗体結合界面に位置する。

【0092】

１つの具体的な実施形態では、上記アミノ酸変異は、上記抗原－抗体結合界面内に位置する。１つの具体的な実施形態では、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質の変異部位は、上記変異タンパク質と上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との結合界面内に埋め込まれており、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質の上記結合界面外に露出する部分は、野生型ｈＩＬ－２と同じアミノ酸配列を保持することにより、ｈＩＬ－２の生物学的活性に大きな影響を与えないだけでなく、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の免疫原性を顕著に低下させ、即ち、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と抗原－抗体複合体を形成した後、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の潜在的ＡＤＡリスクを顕著に低減する。上記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対して、第６４位、第９０位及び／又は第１０４位に１つ、２つ又は３つ以上のアミノ酸変異を含む。いくつかの実施形態では、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、野生型ｈＩＬ－２に対して、Ｋ６４、Ｎ９０及びＭ１０４から選択される１つ、２つ又は３つの位置でのアミノ酸変異を含む。いくつかの実施形態では、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対して、（１）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第６４位のアミノ酸残基におけるＫのＧ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｎ又はＱへの変異と、（２）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第９０位のアミノ酸残基におけるＮのＲ、Ｋ又はＨへの変異と、（３）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第１０４位のアミノ酸残基におけるＭのＥ又はＤへの変異とのうちの少なくとも１つを含む。

【0093】

１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対して、（ａ）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第６４位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｋ６４Ｇ、（ｂ）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第９０位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｎ９０Ｒ、又は、（ｃ）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第１０４位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｍ１０４Ｅのうちの１つ、２つ又は３つ以上を含み、好ましくは、上記アミノ酸変異は、Ｋ６４Ｇ及び／又はＮ９０Ｒ、或いはＫ６４Ｇ、Ｎ９０Ｒ及びＭ１０４Ｅであり、より好ましくは、上記アミノ酸変異は、Ｋ６４Ｇ及びＮ９０Ｒである。

【0094】

一実施形態では、上記アミノ酸変異は、抗原－抗体結合界面外に位置することにより、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の下流産生及び制御過程で発生し得る問題を解決する。１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の産生及び製造過程においてグリコシル化異性体が発生する問題を解決するために、野生型ｈＩＬ－２に対してアミノ酸変異を行ってグリコシル化修飾を除去し、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対してＮ末端の最初の３つ又は５つのアミノ酸残基が削除されるか、又は配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対して第３位において点変異を有し、好ましくは、アミノ酸変異は、野生型ｈＩＬ－２のＮ末端の最初の３つのアミノ酸残基の削除である。１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の産生及び製造過程においてシステイン残基のミスマッチが発生する可能性がある問題を解決するために、野生型ｈＩＬ－２に対してアミノ酸変異を行って遊離システイン残基を除去し、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対して第１２５位においてアミノ酸変異が発生し、好ましくは、アミノ酸変異は、Ｃ１２５Ａ、Ｃ１２５Ｌ、Ｃ１２５Ｓ、Ｃ１２５Ｑ又はＣ１２５Ｖである。

【0095】

一実施形態では、上記アミノ酸変異は、上記抗原－抗体結合界面の内外に位置する。１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対して、Ｎ末端の最初の３つ若しくは５つ、又は第３位、第６４位、第９０位、第１０４位、若しくは第１２５位に１つ以上のアミノ酸変異を有する。いくつかの実施形態では、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対して、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、Ｎ末端の最初の３つのアミノ酸の削除変異と、Ｋ６４、Ｎ９０及びＭ１０４から選択される１つ以上の位置での置換変異と、Ｃ１２５位置での置換変異とを含み、好ましくは、アミノ酸変異は、Ｋ６４Ｇ及び／又はＮ９０Ｒ、Ｎ末端の最初の３つのアミノ酸残基の削除、及びＣ１２５Ａ、Ｃ１２５Ｌ、Ｃ１２５Ｓ、Ｃ１２５Ｑ又はＣ１２５Ｖから選択されるいずれか１つ、或いは、Ｋ６４Ｇ、Ｎ９０Ｒ、Ｍ１０４Ｅ及びＮ末端の最初の３つのアミノ酸残基の削除、及びＣ１２５Ａ、Ｃ１２５Ｌ、Ｃ１２５Ｓ、Ｃ１２５Ｑ又はＣ１２５Ｖから選択されるいずれか１つの組み合わせである。より好ましくは、アミノ酸変異は、Ｋ６４Ｇ、Ｎ９０Ｒ、Ｎ末端の最初の３つのアミノ酸残基の削除及びＣ１２５Ｌの組み合わせである。

【0096】

２． 本願の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片
一態様では、本願に係る抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、ＩＬ２Ｒαと競合して本願のｈＩＬ－２変異タンパク質に結合し、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質とＩＬ２Ｒα又はαサブユニットを含むＩＬ－２受容体複合体（即ち、ＩＬ２Ｒα／β又はＩＬ２Ｒα／β／γ）との結合をブロックすることができ、かつ本願のｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性が高く、解離しにくい。

【0097】

本願の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と本願のｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性（Ｋ_Ｄ）値は、＜５×１０^－８Ｍであり、好ましくは、＜１×１０^－８Ｍ、＜５×１０^－９Ｍ、又は＜１×１０^－９Ｍであり、より好ましくは、＜６×１０^－１０Ｍである。本願の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と本願のｈＩＬ－２変異タンパク質のＫ_Ｄ値は、約５×１０^－８Ｍ～５×１０^－１０Ｍ、又は例えば、１×１０^－８Ｍ～１×１０^－１０Ｍ、１．５×１０^－８Ｍ～１×１０^－１０Ｍ、１×１０^－８Ｍ～１０×１０^－１０Ｍ、１×１０^－９Ｍ～１×１０^－１０Ｍである。本願の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と本願のｈＩＬ－２変異タンパク質との解離速度定数（Ｋ_ｄｉｓ）は、＜５×１０^－３ｓ^－１、１×１０^－３ｓ^－１、＜５×１０^－４ｓ^－１又は＜３×１０^－４ｓ^－１である。

【0098】

本願の抗体は、ＩＬ２Ｒαと競合してｈＩＬ－２又はその変異タンパク質に結合することができる。特定の実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質配列におけるＩＬ２Ｒα結合部位を特異的に識別することができる。本願の抗体は、好ましくは、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体などを含んでもよい。本願の抗体は、ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のＩＬ２Ｒα結合部位を特異的に識別でき、ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質とＩＬ２Ｒαとの結合をブロックできる限り、キメラ抗体、ヒト化抗体、全ヒト抗体であってもよく、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体及び抗体断片であってもよい。いくつかの実施形態では、上記抗ＩＬ－２抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、上記抗ＩＬ－２抗体は、抗マウスＩＬ－２抗体及びそのヒト化抗体から選択される。特定の実施形態では、上記抗マウスＩＬ－２抗体は、マウスＩＬ－２（ｍＩＬ－２）とマウスＩＬ２Ｒα（ｍＩＬ２Ｒα）との結合部位を特異的に識別する抗ｍＩＬ－２抗体から選択され、上記抗ｍＩＬ－２抗体は、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質と交差反応することができる。

【0099】

別の態様では、本願の抗ＩＬ－２抗体は、ＶＨ及びＶＬを含む。いくつかの実施形態では、本願の抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号６に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗ＩＬ－２抗体から誘導され、ｈＩＬ－２変異タンパク質に特異的に結合でき、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質とＩＬ２Ｒαとの結合をブロックすることができる。

【0100】

いくつかの実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体は、以下の配列番号５に示されるアミノ酸配列を有するＶＨを含む抗体から誘導される。
ＥＶＱＬＱＥＳＧＡＥＬＶＲＰＧＴＳＶＫＬＳＣＫＶＳＧＤＴＩＴＡＹＹＬＨＦＶＲＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＲＩＤＰＥＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＮＫＡＴＦＴＡＤＡＳＳＮＴＡＹＬＲＬＳＳＬＴＳＥＤＴＡＴＹＦＣＴＴＶＴＦＹＹＳＲＥＬＲＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５）

【0101】

いくつかの実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体は、以下の配列番号６に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗体から誘導される。
ＤＩＱＶＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＥＥＩＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＧＮＹＬＳＷＹＱＱＫＬＧＫＳＰＱＬＬＩＨＳＡＴＳＬＡＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＲＬＱＶＥＤＴＧＩＹＹＣＬＱＨＹＳＴＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号６）

【0102】

いくつかの実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を有するＶＨの１つ、若しくは２つ以上のＣＤＲ、又は配列番号７、配列番号８、及び配列番号９に示されるアミノ酸配列若しくはそれらの変異体を含み、上記変異体は、ヒト化抗体又は本願に記載の任意の他の変異体を含む。いくつかの実施形態では、上記抗ＩＬ－２抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を有するＶＨのＨＣＤＲ１（配列番号７に示される）、ＨＣＤＲ２（配列番号８に示される）、及びＨＣＤＲ３（配列番号９に示される）を含む。

【0103】

いくつかの実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体は、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有するＶＬの１つ、若しくは２つ以上のＣＤＲ、又は配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列若しくはそれらの変異体を含み、上記変異体は、ヒト化抗体又は本願に記載の任意の他の変異体を含む。いくつかの実施形態では、上記抗ＩＬ－２抗体は、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ１（配列番号１０に示される）、ＬＣＤＲ２（配列番号１１に示される）及びＬＣＤＲ３（配列番号１２に示される）を含む。

【0104】

いくつかの実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を有するＶＨの１つ、若しくは２つ以上のＣＤＲ、又は配列番号７、配列番号８及び配列番号９に示されるアミノ酸配列若しくはそれらの変異体と、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有するＶＬの１つ、若しくは２つ以上のＣＤＲ、又は配列番号１０、配列番号１１、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列若しくはそれらの変異体とを含み、上記変異体は、ヒト化抗体又は本願に記載の任意の他の変異体を含む。いくつかの実施形態では、上記抗ＩＬ－２抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を有するＶＨのＨＣＤＲ１（配列番号７に示される）、ＨＣＤＲ２（配列番号８に示される）及びＨＣＤＲ３（配列番号９に示される）と、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有するＶＬのＬＣＤＲ１（配列番号１０に示される）、ＬＣＤＲ２（配列番号１１に示される）及びＬＣＤＲ３（配列番号１２に示される）とを含む。いくつかの実施形態では、上記抗ＩＬ－２抗体は、配列番号７に示されるＨＣＤＲ１、配列番号８に示されるＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるＬＣＤＲ１、配列番号１１に示されるＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるＬＣＤＲ３を含む。

【0105】

別の態様では、本願の抗ＩＬ－２抗体のＶＨ及び／又はＶＬを出発材料として使用して工学的に改変して、ヒトに応用可能な本明細書に記載の抗体を製造してもよい。１つ又は２つの可変領域（即ち、ＶＨ及び／又はＶＬ）内の１つ、又は２つ以上のアミノ酸残基を変異させること、例えば、１つ、若しくは２つ以上のＣＤＲ領域及び／又は１つ、若しくは２つ以上のフレームワーク領域内の１つ、若しくは２つ以上のアミノ酸残基を変異させることによって抗体を工学的に改変してもよい。

【0106】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ移植によって本願の抗ＩＬ－２抗体の可変領域を工学的に改変する。抗体は、主に重鎖及び軽鎖の６つのＣＤＲのアミノ酸残基を介して標的抗原と相互作用する。したがって、各抗体間のＣＤＲ領域内のアミノ酸配列は、ＣＤＲ領域以外の配列（例えばＦＲ）より多様である。ＣＤＲ領域のアミノ酸配列が抗体と抗原との大部分の相互作用を担うため、特定の天然に存在する抗体に由来するＣＤＲ配列を、異なる特性を有する別の抗体のＦＲ配列に移植したものを含む発現ベクターを構築することにより、組換え抗体を発現して、特定の天然に存在する抗体の特性を模倣することができる（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ １９９８、３３２：３２３－３２７；Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ １９８６、３２１：５２２－５２５；Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８９、８６：１００２９－１００３３を参照する。米国特許第５，２２５，５３９号、米国特許第５，５３０，１０１号、米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６２号及び米国特許第６，１８０，３７０号も参照）。

【0107】

いくつかの実施形態では、本願は、単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関し、上記抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含み、上記重鎖可変領域は、本願に記載のＨＣＤＲ１領域、ＨＣＤＲ２領域及びＨＣＤＲ３領域のアミノ酸配列を含み、該軽鎖可変領域は、本願に記載のＬＣＤＲ１領域、ＬＣＤＲ２領域及びＬＣＤＲ３領域のアミノ酸配列を含む。上記抗体は、本願のモノクローナル抗体のＶ_Ｈ及びＶ_ＬのＣＤＲ領域配列を含むが、異なるフレームワーク領域配列を含んでもよい。

【0108】

このようなフレームワーク領域配列は、ＤＮＡ公共データベース又は既に公開されている、生殖系列抗体遺伝子配列に関する参考文献から取得されてもよい。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖系列データベース（インターネット上でｗｗｗ．ｍｒｃ－ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅから取得できる）；Ｋａｂａｔら、１９９１、前出；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９９２、２２７：７７６－７９８；及びＣｏｘら、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９４、２４：８２７－８３６に見られ、これらの内容は、参照によりそれぞれの内容を本明細書に明確に組み込まれる。別の例として、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、ＩＭＧＴデータベースに見られる。例えば、ヒト免疫グロブリンにおいて発見された以下の重鎖生殖系列配列（４－５９＊０２（Ｍ２９８１２）、１－６９－２＊０１（ＫＦ６９８７３４、ＩＭＧＴ００００３５又はＺ１２３０５）は、ＩＭＧＴ登録番号によって取得することができる。別の例として、ヒト免疫グロブリンにおいて発見された以下の軽鎖生殖系列配列３－２０＊０１（Ｘ１２６８６、Ｍ１５０３８、Ｍ１５０３９、Ｘ５６５９３又はＸ９３６３９）、３－１１＊０１（Ｘ０１６６８、Ｌ３７７２６又はＸ９２３４２）、１－３９＊０１（Ｘ５９３１５又はＸ９３６２７）は、ＩＭＧＴ登録番号によって取得することができる。

【0109】

当業者に周知のＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴと呼ばれる配列類似性検索方法のうちの１つを使用して、コンパイルされたタンパク質配列データベースに基づいて抗体アミノ酸配列を比較してもよい（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７、上記参照）。

【0110】

本願の抗ＩＬ－２抗体の重鎖ＣＤＲ領域、軽鎖ＣＤＲ領域並びに重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列番号を表２にまとめる。表２では、重鎖可変領域ＣＤＲ及び軽鎖可変領域ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号システムにより定義される。しかしながら、本分野で周知のように、ＣＤＲ領域は、重鎖／軽鎖可変領域配列の他の、例えばＣｈｏｔｈｉａ及びＩＭＧＴ、ＡｂＭ又はＣｏｎｔａｃｔ番号システム／方法に基づいて定義されてもよく、異なる番号システム／方法により定義されたＣＤＲ領域は、僅かに異なるが、当業者は、従来の方法に従って決定することができ、他の番号システム／方法により定義されたＣＤＲ領域と本願で採用されるＫａｂａｔによって定義されたＣＤＲ領域とは、いずれも本願の保護範囲内にある。

【0111】

【表2(1)】

【表2(2)】

【表2(3)】

【表2(4)】

【表2(5)】

【0112】

本願に使用される抗ＩＬ－２抗体における好ましいフレームワーク配列は、本願の親抗体フレームワーク配列と構造的に類似する（又は相同性の高い）受容体フレームワーク領域である。いくつかの実施形態では、ＶＨ又はＶＬのＣＤＲ１領域配列、ＣＤＲ２領域配列及びＣＤＲ３領域配列をそれぞれ受容体フレームワーク領域に移植してもよく、上記受容体フレームワーク領域は、その生殖系列免疫グロブリン遺伝子と同じであるか又は相同性の最も高い配列を有する。１つの具体的な実施形態では、本願は、配列番号５に示されるＶＨのＣＤＲ領域と配列番号６に示されるＶＬのＣＤＲ領域をそれぞれヒトＩｇＧ ＦＲ領域に移植して、ヒト化抗体を得ることを選択し、上記ヒト化抗体は、配列番号５に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号６に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む母体抗体と類似する抗原結合活性を保持することができる。

【0113】

また、ｈＩＬ－２に結合する他の抗ＩＬ－２抗体のＶＨ及びＶＬ配列（又はＣＤＲ配列）と、本願の抗ＩＬ－２抗体のＶＨ及びＶＬ配列（又はＣＤＲ配列）とを「混合してマッチング」してもよい。好ましくは、ＶＨ鎖とＶＬ鎖（又はこれらの鎖内のＣＤＲ）を混合してマッチングする場合、特定のＶＨ／ＶＬペアからのＶＨ配列は、構造的に類似したＶＨ配列によって置換される。同様に、好ましくは、特定のＶＨ／ＶＬペアからのＶＬ配列は、構造的に類似したＶＬ配列によって置換される。

【0114】

したがって、一実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、
（ａ）表２に示すアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）表２に示すアミノ酸配列又は別の抗ＩＬ－２抗体のＶＬを含む軽鎖可変領域であって、該別の抗体はｈＩＬ－２変異タンパク質に特異的に結合する、軽鎖可変領域と
を含む。

【0115】

１つの具体的な実施形態では、本願のヒト化抗体は、配列番号４５、配列番号４７又は配列番号４９に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するＶＨアミノ酸配列を含む。

【0116】

１つの具体的な実施形態では、本願のヒト化抗体は、配列番号４６、配列番号４８又は配列番号５０に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するＶＬアミノ酸配列を含む。

【0117】

１つの具体的な実施形態では、本願のヒト化抗体は、配列番号４５、配列番号４７又は配列番号４９に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するＶＨアミノ酸配列、及び配列番号４６、配列番号４８又は配列番号５０に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するＶＬアミノ酸配列を含む。

【0118】

より具体的な実施形態では、本願のヒト化抗体は、配列番号４５に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するＶＨアミノ酸配列、及び配列番号４６に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するＶＬアミノ酸配列、又は配列番号４７に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するＶＨアミノ酸配列、及び配列番号４８に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するＶＬアミノ酸配列、又は配列番号４９に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するＶＨアミノ酸配列、及び配列番号４８に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するＶＬアミノ酸配列、又は配列番号４９に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するＶＨアミノ酸配列、及び配列番号５０に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するＶＬアミノ酸配列を含む。好ましくは、ヒト化抗体は、配列番号４５に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するＶＨアミノ酸配列、及び配列番号４６に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するＶＬアミノ酸配列、又は配列番号４９に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するＶＨアミノ酸配列、及び配列番号４８若しくは配列番号５０に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するＶＬアミノ酸配列を含む。より好ましくは、ヒト化抗体は、配列番号４９に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するＶＨアミノ酸配列、及び配列番号４８に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するＶＬアミノ酸配列を含む。

【0119】

いくつかの実施形態では、ＣＤＲ配列を、生殖系列配列と比較して１つ、又は２つ以上の変異を含むフレームワーク領域に移植してもよい。例えば、フレームワーク領域内のアミノ酸残基を変異させることにより、抗体の抗原結合能力を維持するか又は増強することができることが見出された（例えば、米国特許、米国特許第５５３０１０１号、米国特許第５５８５０８９号、米国特許第５６９３７６２号及び米国特許第６１８０３７０号を参照）。いくつかの実施形態では、本願に記載の親抗体のＣＤＲを、生殖系列配列と比較して１つ、又は２つ以上の変異を有する受容体フレームワーク領域に移植することにより、本願の抗ＩＬ－２抗体のヒト化度を向上させることができる。具体的な実施形態では、配列番号４９に示されるＶＨのＦＲ領域に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を行い、ＦＲ１、ＦＲ２、又はＦＲ３に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を更に行い、更にＦＲ１、ＦＲ２、又はＦＲ３に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異をそれぞれ行うことにより、本願の抗ＩＬ－２抗体のヒト化度を向上させることができる。好ましくは、ＦＲ１の第２７位のアスパラギン酸残基、ＦＲ１の第２９位のイソロイシン残基、ＦＲ２の第１３位（配列番号４９に示されるＶＨアミノ酸配列の第４８位に対応する）のイソロイシン残基、及び／又はＦＲ３の第１１位（配列番号４９に示されるＶＨアミノ酸配列の第７６位に対応する）のアスパラギン残基を変異させる。具体的な実施形態では、配列番号４８に示されるＶＬのＦＲ領域に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を行い、ＦＲ３に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を行うことを選択することにより、本願の抗ＩＬ－２抗体のヒト化度を向上させることができる。好ましくは、ＦＲ３の第１０位（配列番号４８に示されるアミノ酸配列を有するＶＬの第６６位に対応する）のアルギニン残基及び／又はＦＲ３の第１５位（配列番号４８に示されるアミノ酸配列を有するＶＬの第７１位に対応する）のチロシン残基を変異させる。

【0120】

いくつかの実施形態では、ヒト化抗体のＶＨ及び／又はＶＬのＣＤＲ領域にアミノ酸変異を行うことにより、標的抗体の１つ以上の特性を改善してもよい（例えば、ヒト化度を向上させ、発現量を向上させ、潜在的異性化リスクを低減し、結合特性を改善する）。部位特異的変異又はＰＣＲ誘導変異を行い、かつ本分野で公知のインビトロ又はインビボでの検出方法により、上記変異の抗体結合能力又は他の機能的特性への影響を評価することができる。変異は、アミノ酸の置換、付加又は削除であってもよく、好ましくは、アミノ酸置換である。特に、ＣＤＲ領域において、１つ、２つ、３つ、４つ又は５つ以下のアミノ酸残基で変異が行われる。１つの具体的な実施形態では、配列番号４９に示されるＶＨのＣＤＲ領域に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を行い、更にＨＣＤＲ１及び／又はＨＣＤＲ２に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を行ってもよく、好ましくは、ＨＣＤＲ１の第１位（配列番号４９に示されるＶＨの第３１位に対応する）のアラニン残基、第４位（配列番号４９に示されるＶＨの第３４位に対応する）のロイシン残基及び／又はＨＣＤＲ２の第１７位（配列番号４９に示されるＶＨの第６５位に対応する）のアスパラギン残基に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を行ってもよい。

【0121】

別のいくつかの実施形態では、本願は、更に、抗体に対して異性化改変を行うことに関する。異性化は、抗体コンフォメーションの変化を引き起こすため、抗体表面の電荷を変化させて、抗体電荷の異質性を引き起こす。好ましい実施形態では、本願の抗体は、アスパラギン酸異性化部位を含まない。アスパラギン酸異性化は、Ｄ－Ｇ配列において発生することにより、イソアスパラギン酸残基を生成することができ、該アミノ酸残基が結合手をポリペプチド鎖に導入するため、該ポリペプチド鎖の安定性が低下する（イソアスパラギン酸効果とも呼ばれる）。一実施形態では、配列番号４８に示されるＶＬのＣＤＲ領域に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を行い、更にＬＣＤＲ２に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を行い、好ましくは、ＬＣＤＲ２の第７位（配列番号４８に示されるＶＬの第５６位に対応する）のアスパラギン酸残基にアミノ酸変異を行うことにより、アスパラギン酸異性化のリスクを低減する。

【0122】

いくつかの実施形態では、更に、ヒト化抗体の可変領域のＣＤＲ領域及びフレームワーク領域に組み合わせたアミノ酸変異を行うことにより、標的抗体の１つ以上の特性をより大きく改善する（例えば、ヒト化度を向上させ、結合特性を改善し、潜在的異性化リスクを低減し、発現量を向上させる）ことができる。１つの具体的な実施形態では、上記ヒト化抗体の配列番号４９に示されるＶＨの２つのＣＤＲ領域、１つのＦＲ領域及び配列番号４８に示されるＶＬの１つのＣＤＲ領域、及び１つのＦＲ領域に複数のアミノ酸変異を行うことにより、好ましくは、上記配列番号４９に示されるＶＨのＨＣＤＲ１の第４位のロイシン残基（配列番号４９に示されるＶＨの第３４位に対応し、例えば、変異後のアミノ酸配列が配列番号１４に示されるＨＣＤＲ１であってもよい）、ＨＣＤＲ２の第１７位のアスパラギン残基（配列番号４９に示されるＶＨの第６５位に対応し、例えば、変異後のアミノ酸配列が配列番号１５又は配列番号１６に示されるＨＣＤＲ２であってもよい）、ＦＲ３の第１１位のアスパラギン残基（配列番号４９に示されるＶＨのアミノ酸配列の第７６位に対応し、例えば、変異後のアミノ酸配列が配列番号５８に示されるＶＨであってもよい）、配列番号４８に示されるＶＬのＬＣＤＲ２の第７位のアスパラギン酸残基（配列番号４８に示されるＶＬの第５６位に対応し、例えば、変異後のアミノ酸配列が配列番号１７又は配列番号１８に示されるＬＣＤＲ２であってもよい）、及びＦＲ３の第１５位のチロシン残基（配列番号４８に示されるＶＬのアミノ酸配列の第７１位に対応し、例えば、変異後のアミノ酸配列が配列番号６２に示されるＶＬであってもよい）に組み合わせた複数のアミノ酸変異を行うことにより、本願のヒト化抗体がより高いヒト化レベルを有するだけでなく、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性（Ｋ_Ｄ値約１０^－８Ｍ）を保持するとともに、アスパラギン酸異性化のリスクを低減する。

【0123】

別のいくつかの実施形態では、本願に係る単離された抗ＩＬ－２モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、上記重鎖可変領域は、（ａ）本願の配列又は１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ１領域と、（ｂ）本願の配列又は１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ２領域と、（ｃ）本願の配列又は１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むＶ_ＨＣＤＲ３領域と、（ｄ）本願の配列又は１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ１領域と、（ｅ）本願の配列又は１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ２領域と、（ｆ）本願の配列又は１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つのアミノ酸変異を有するアミノ酸配列を含むＶ_ＬＣＤＲ３領域と、を含む。

【0124】

いくつかの具体的な実施形態では、例えば、＜５×１０^－９Ｍ、又は＜１×１０^－９Ｍであり、より好ましくは、＜６×１０^－１０Ｍである、上記抗ＩＬ－２モノクローナル抗体と本願のｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性を更に向上させるために、上記抗ＩＬ－２抗体の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲにおける特定部位にアミノ酸変異を行う。ＣＤＲ３（特にＨＣＤＲ３）ドメインは、ＣＤＲ１ドメイン及び／又はＣＤＲ２ドメインに依存せず、抗原への結合特異性が非常に重要であり、かつ他の２つのＣＤＲドメインに対してより大きな多様性を有するため、１つの具体的な実施形態では、本願は、配列番号９に示されるＨＣＤＲ３に１つ、２つ及び／又は３つのアミノ酸変異を行い、上記アミノ酸変異は、配列番号９に示されるＨＣＤＲ３の第１位のバリン残基、第４位のチロシン残基、及び／又は第６位のセリン残基に発生し、好ましくは、上記アミノ酸変異は、Ｖ１Ｒ、Ｖ１Ｉ、Ｖ１Ｔ、Ｙ４Ｈ、Ｙ４Ｌ、Ｙ４Ｗ又はＳ６Ａ、Ｓ６Ｒ、Ｓ６Ｎ、Ｓ６Ｄ、Ｓ６Ｑ、Ｓ６Ｅ、Ｓ６Ｈ、Ｓ６Ｉ、Ｓ６Ｌ、Ｓ６Ｋ、Ｓ６Ｆ、Ｓ６Ｐ、Ｓ６Ｔ、Ｓ６Ｗ、Ｓ６Ｙ、Ｓ６Ｖを含む。１つの具体的な実施形態では、本願は、更に配列番号１５に示されるＨＣＤＲ２に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を行い、好ましくは、１つのアミノ酸変異を行い、上記アミノ酸変異は、配列番号１５に示されるＨＣＤＲ２の第５位のグルタミン酸残基に発生し、好ましくは、アミノ酸変異は、Ｅ５Ｄである。１つの具体的な実施形態では、更に配列番号９に示されるＨＣＤＲ３における１つ、２つ及び／又は３つのアミノ酸変異と配列番号１５に示されるＨＣＤＲ２におけるアミノ酸変異とを組み合わせ、好ましくは、アミノ酸変異は、配列番号９に示されるＨＣＤＲ３におけるＶ１Ｉ、Ｙ４Ｌ、Ｓ６Ｔの１つ、２つ及び／又は３つのアミノ酸変異と配列番号１５に示されるＨＣＤＲ２におけるアミノ酸変異Ｅ５Ｄとの組み合わせである。１つの具体的な実施形態では、本願は、配列番号１０に示されるＬＣＤＲ１及び／又は配列番号１７に示されるＬＣＤＲ２に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を行い、上記アミノ酸変異は、配列番号１０に示されるＬＣＤＲ１の第５位のアスパラギン酸残基若しくは第７位のグリシン残基、及び／又は配列番号１７に示されるＬＣＤＲ２の第１位のセリン残基若しくは第３位のトレオニン残基に発生し、上記アミノ酸変異は、配列番号１０に示されるＬＣＤＲ１におけるＤ５Ｎ、Ｄ５Ｈ、Ｄ５Ｉ、Ｄ５Ｌ、Ｄ５Ｆ、Ｄ５Ｙ及び／若しくはＧ７Ａ、Ｇ７Ｒ、Ｇ７Ｎ、Ｇ７Ｑ、Ｇ７Ｉ、Ｇ７Ｌ、Ｇ７Ｓ、Ｇ７Ｔ、Ｇ７Ｄ、並びに／又は配列番号１７に示されるＬＣＤＲ２におけるＳ１Ｒ、Ｓ１Ｑ、Ｓ１Ｔ、Ｓ１Ｗ、Ｓ１Ｙ若しくはＴ３Ｇを含み、好ましくは、アミノ酸変異は、配列番号１０に示されるＬＣＤＲ１におけるＤ５Ｎ、Ｄ５Ｈ、Ｄ５Ｌ、Ｄ５Ｙ及び／若しくはＧ７Ｉ、Ｇ７Ｌ、Ｇ７Ｓ、Ｇ７Ｔ、並びに／又は配列番号１７に示されるＬＣＤＲ２におけるＳ１Ｑ若しくはＴ３Ｇを含む。

【0125】

１つの具体的な実施形態では、上記任意の１つ、若しくは２つ以上の上記重鎖ＣＤＲ領域の変異及び／又は任意の１つ、若しくは２つ以上の上記軽鎖ＣＤＲ領域の変異を選択することができる。任意の１つの上記重鎖ＣＤＲ領域の変異と任意の１つの上記軽鎖ＣＤＲ領域の変異とを選択して組み合わせた場合、配列番号６３に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号６４に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む本願の抗ＩＬ－２ヒト化抗体と本願のｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性を保持することができる。２つ、又は３つ以上の上記重鎖ＣＤＲ領域の変異及び／又は任意の１つ、又は２つ以上の上記軽鎖ＣＤＲ領域の変異を選択して組み合わせた場合、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体とｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性を＜１０^－９Ｍ、更に＜６×１０^－１０Ｍに顕著に向上させることができる。

【0126】

一実施形態では、上記軽鎖ＣＤＲ領域の１つの変異を選択するか、又は上記重鎖ＣＤＲ領域の任意の１つ、２つ、３つ又は４つの変異との組み合わせを選択してもよく、上記軽鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異は、Ｄ２８Ｙ（配列番号６４に示されるアミノ酸配列を有するＶＬの第２８位のアスパラギン酸に発生し、配列番号１０に示されるＬＣＤＲ１の第５位に対応する）を含み、上記重鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異は、Ｖ９５Ｉ（配列番号９に示されるＨＣＤＲ３の第１位のバリン残基に発生し、配列番号６３に示されるアミノ酸配列を有するＶＨの第９５位に対応する）、Ｅ５３Ｄ（配列番号１５に示されるＨＣＤＲ２の第５位のグルタミン酸残基に発生し、配列番号６３に示されるアミノ酸配列を有するＶＨの第５３位に対応する）、Ｓ１００Ｔ（配列番号９に示されるＨＣＤＲ３の第６位のセリン残基に発生し、配列番号６３に示されるアミノ酸配列を有するＶＨの第１００位に対応する）及びＹ９８Ｌ（配列番号９に示されるＨＣＤＲ３の第４位のチロシン残基に発生し、配列番号６３に示されるアミノ酸配列を有するＶＨの第９８位に対応する）を含み、上記重鎖ＣＤＲ領域の２つのアミノ酸変異は、Ｖ９５Ｉと、Ｅ５３Ｄ、Ｓ１００Ｔ又はＹ９８Ｌから選択される任意の１つを含み、上記重鎖ＣＤＲ領域の３つのアミノ酸変異は、Ｖ９５Ｉと、Ｅ５３Ｄ、Ｓ１００Ｔ又はＹ９８Ｌから選択される任意の２つを含み、上記重鎖ＣＤＲ領域の４つのアミノ酸変異は、Ｖ９５Ｉ、Ｅ５３Ｄ、Ｓ１００Ｔ及びＹ９８Ｌを含む。

【0127】

別の実施形態では、上記軽鎖ＣＤＲ領域の２つのアミノ酸変異を選択するか、又は上記重鎖ＣＤＲ領域の任意の１つ、２つ、３つ又は４つのアミノ酸変異との組み合わせを選択し、上記軽鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異は、Ｄ２８ＹとＧ３０Ｓ（配列番号６４に示されるアミノ酸配列を有するＶＬの第３０位のグリシンに発生し、配列番号１０に示されるＬＣＤＲ１の第７位に対応する）又はＳ５０Ｑ（配列番号６４に示されるアミノ酸配列を有するＶＬの第５０位のセリンに発生し、配列番号１７に示されるＬＣＤＲ２の第１位に対応する）を含み、上記重鎖ＣＤＲ領域の１つのアミノ酸変異は、Ｖ９５Ｉ、Ｅ５３Ｄ、Ｙ９８Ｌ又はＳ１００Ｔを含み、上記重鎖ＣＤＲ領域の２つのアミノ酸変異は、Ｖ９５Ｉと、Ｅ５３Ｄ、Ｓ１００Ｔ又はＹ９８Ｌから選択される任意の１つとを含み、上記重鎖ＣＤＲ領域の３つのアミノ酸変異は、Ｖ９５Ｉと、Ｅ５３Ｄ、Ｓ１００Ｔ又はＹ９８Ｌから選択される任意の２つとを含み、上記重鎖ＣＤＲ領域の４つのアミノ酸変異は、Ｖ９５Ｉ、Ｅ５３Ｄ、Ｓ１００Ｔ及びＹ９８Ｌを含む。

【0128】

別の実施形態では、上記軽鎖ＣＤＲ領域の３つの変異を選択するか、又は上記重鎖ＣＤＲ領域の任意の１つ、２つ、３つ又は４つの変異との組み合わせを選択し、上記軽鎖ＣＤＲ領域の変異は、Ｄ２８Ｙ、Ｇ３０Ｓ及びＳ５０Ｑを含み、上記重鎖ＣＤＲ領域の１つのアミノ酸変異は、Ｖ９５Ｉ、Ｅ５３Ｄ、Ｙ９８Ｌ又はＳ１００Ｔを含み、上記重鎖ＣＤＲ領域の２つの変異は、Ｖ９５Ｉと、Ｅ５３Ｄ、Ｓ１００Ｔ又はＹ９８Ｌから選択される任意の１つとを含み、上記重鎖ＣＤＲ領域の３つの変異は、Ｖ９５Ｉと、Ｅ５３Ｄ、Ｓ１００Ｔ又はＹ９８Ｌから選択される任意の２つとを含み、上記重鎖ＣＤＲ領域の４つのアミノ酸変異は、Ｖ９５Ｉ、Ｅ５３Ｄ、Ｓ１００Ｔ及びＹ９８Ｌを含む。

【0129】

別の実施形態では、上記重鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異と軽鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異との組み合わせは、上記重鎖ＣＤＲ領域の４つのアミノ酸変異と軽鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異Ｄ２８Ｙとの組み合わせ、又は重鎖ＣＤＲ領域の３つ若しくは４つのアミノ酸変異と軽鎖ＣＤＲ領域の２つのアミノ酸変異Ｄ２８Ｙ及びＳ５０Ｑ若しくはＧ３０Ｓとの組み合わせを含み、上記重鎖ＣＤＲ領域の３つのアミノ酸変異は、Ｖ９５Ｉと、Ｅ５３Ｄ、Ｓ１００Ｔ若しくはＹ９８Ｌから選択される任意の２つであるか、又は重鎖ＣＤＲ領域の２つ、３つ若しくは４つのアミノ酸変異と軽鎖ＣＤＲ領域の３つのアミノ酸変異Ｄ２８Ｙ、Ｇ３０Ｓ及びＳ５０Ｑとの組み合わせであり、上記重鎖ＣＤＲ領域の２つのアミノ酸変異は、Ｖ９５Ｉ及びＹ９８Ｌであり、上記重鎖ＣＤＲ領域の３つのアミノ酸変異は、Ｖ９５Ｉと、Ｅ５３Ｄ、Ｓ１００Ｔ又はＹ９８Ｌから選択される任意の２つであり、具体的には、重鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異Ｖ９５Ｉ、Ｓ１００Ｔ、Ｙ９８Ｌ及びＥ５３Ｄと軽鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異Ｄ２８Ｙ、重鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異Ｖ９５Ｉ、Ｅ５３Ｄ及びＹ９８Ｌと軽鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異Ｄ２８Ｙ及びＳ５０Ｑ、重鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異Ｖ９５Ｉ、及びＥ５３Ｄ、Ｓ１００Ｔ若しくはＹ９８Ｌから選択される任意の２つと軽鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異Ｄ２８Ｙ及びＧ３０Ｓ、重鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異Ｖ９５Ｉ、Ｓ１００Ｔ、Ｙ９８Ｌ及びＥ５３Ｄと軽鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異Ｄ２８Ｙ及びＧ３０Ｓ、重鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異Ｖ９５Ｉ及びＹ９８Ｌと軽鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異Ｄ２８Ｙ、Ｇ３０Ｓ及びＳ５０Ｑ、重鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異Ｖ９５Ｉ、Ｅ５３Ｄ、Ｓ１００Ｔ若しくはＹ９８Ｌから選択される任意の２つと軽鎖ＣＤＲ領域のアミノ酸変異Ｄ２８Ｙ、Ｇ３０Ｓ及びＳ５０Ｑ、又は重鎖ＣＤＲ領域の変異Ｖ９５Ｉ、Ｓ１００Ｔ、Ｙ９８Ｌ及びＥ５３Ｄと軽鎖ＣＤＲ領域の変異Ｄ２８Ｙ、Ｇ３０Ｓ及びＳ５０Ｑを含む。上記変異の組み合わせは、いずれも本願の配列番号６３に示されるアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号６４に示されるアミノ酸配列を有するＶＬを含む抗ＩＬ－２ヒト化抗体と本願のｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性を最大約５×１０^－１０Ｍまで顕著に向上させ、かつ上記ヒト化抗体と上記ｈＩＬ－２変異タンパク質との解離速度定数（Ｋ_ｄｉｓ）を約１０^－３ｓ^－１以下、更には＜３×１０^－４ｓ^－１まで顕著に低下させるか、又は上記ヒト化抗体と上記ｈＩＬ－２変異タンパク質との解離平衡定数（Ｋ_Ｄ）を２桁以上、更には３桁以上低下させることができる。

【0130】

一実施形態では、本願の抗体は、ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、並びに／又はＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列及びＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含み、
（ａ）重鎖可変領域ＣＤＲ１配列は、表２に示す配列及び／若しくはその保存的修飾を含み、かつ／又は
（ｂ）重鎖可変領域ＣＤＲ２配列は、表２に示す配列及び／若しくはその保存的修飾を含み、かつ／又は
（ｃ）重鎖可変領域ＣＤＲ３配列は、表２に示す配列及びその保存的修飾を含み、かつ／又は
（ｄ）軽鎖可変領域ＣＤＲ１配列及び／又はＣＤＲ２配列及び／又はＣＤＲ３配列は、表２に示す配列及び／又はその保存的修飾を含み、また、
（ｅ）上記抗体は、ＩＬ２Ｒαと競合して本願のｈＩＬ－２変異タンパク質に結合し、かつ上記ｈＩＬ－２変異タンパク質とＩＬ２Ｒαとの結合をブロックする。

【0131】

いくつかの実施形態では、本願の抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７、配列番号１３又は配列番号１４に示されるＨＣＤＲ１と、配列番号８、配列番号１５、配列番号１６又は配列番号１９に示されるＨＣＤＲ２と、配列番号９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２９又は配列番号３４に示されるＨＣＤＲ３と、
配列番号１０、配列番号２６、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３又は配列番号４４に示されるＬＣＤＲ１と、配列番号１１、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３２又は配列番号３３に示されるＬＣＤＲ２と、配列番号１２又は配列番号３８に示されるＬＣＤＲ３と、を含む。

【0132】

いくつかの具体的な実施形態では、本願の抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７又は配列番号１４に示されるＨＣＤＲ１と、配列番号８、配列番号１５、配列番号１６又は配列番号１９に示されるＨＣＤＲ２と、配列番号９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４又は配列番号２５に示されるＨＣＤＲ３と、
配列番号１０、配列番号２６又は配列番号２７に示されるＬＣＤＲ１と、配列番号１１、配列番号１７、配列番号１８又は配列番号２８に示されるＬＣＤＲ２と、配列番号１２に示されるＬＣＤＲ３と、を含む。

【0133】

いくつかの実施形態では、本願の抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号８６又は配列番号１１２に示される配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）の同一性を有する重鎖可変領域ＶＨと、配列番号６、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６４、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０又は配列番号１１１に示される配列と少なくとも８５％（例えば、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）の同一性を有する軽鎖可変領域ＶＬと、を含む。

【0134】

本願の抗ＩＬ－２ヒト化抗体は、１つ以上の以下の機能的特性を更に有し、例えば、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性が約５×１０^－１０Ｍに達することができ、より重要なことに、上記ヒト化抗体と上記ｈＩＬ－２変異タンパク質とは、解離速度定数が約３×１０^－４１／ｓに低下することにより、両者が相対的により解離しにくくなり、両者の解離によりｈＩＬ－２のＩＬ２Ｒα結合部位が露出する確率を顕著に低下させ、本願の抗体のヒト化度が更に向上し、かつ本願のｈＩＬ－２変異タンパク質上の変異アミノ酸残基がいずれも抗原－抗体結合界面内に埋め込まれた状態であるため、ＡＤＡ誘導のリスクを大幅に低減する。

【0135】

３． 本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質
一態様では、更に、本願に係るｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ｈＩＬ－２又は本願のｈＩＬ－２変異タンパク質と抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面の設計においてジスルフィド結合を導入することにより、両者の間に超安定した共有結合構造を形成し、ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のαサブユニット受容体結合部位が構築された融合タンパク質分子の内部に常に埋め込まれて抗原－抗体複合体の解離によって露出されず、かつ抗原－抗体の親和性が十分に強くないことにより高親和性のＩＬ２Ｒによって競合的に結合することがないことを確保する。

【0136】

本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、
（１）配列番号１に示される野生型ヒトインターロイキン２（ｈＩＬ－２）又は本願のｈＩＬ－２変異タンパク質と、
（２）ＩＬ２Ｒαと競合して上記ｈＩＬ－２又は本願のｈＩＬ－２変異タンパク質に結合する抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と、
（３）上記ｈＩＬ－２又は本願のｈＩＬ－２変異タンパク質と上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面に含まれるジスルフィド結合と
を含む。

【0137】

本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＩＬ２Ｒのαサブユニット、又はα／β二量体、又はα／β／γ三量体に結合しないが、ＩＬ２Ｒβ及びγｃ受容体サブユニット二量体（ＩＬ２Ｒβ／γ）への結合活性及び機能活性を保持する。

【0138】

したがって、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の（ｉ）～（ｖｉｉ）の機能的特性を有する。
（ｉ）本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、Ｔｒｅｇ細胞表面の高親和性ＩＬ２Ｒに結合しないことにより、Ｔｒｅｇ細胞によって媒介される腫瘍免疫抑制作用を効果的に回避する。
（ｉｉ）本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、正常組織（例えば、血管内皮、肺毛細血管内皮など）又はＩＬＣ２細胞（Ｔｙｐｅ－２ ｉｎｎａｔｅ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｃｅｌｌｓ、ＩＩ型先天性リンパ様細胞）における高親和性ＩＬ２Ｒに結合しないことにより、従来のＩＬ－２製品のインビボで誘導される毒性又は副作用（例えば、ＶＬＳ、肺浮腫、低血圧など）を顕著に改善する。
（ｉｉｉ）本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、安定した分子構造を有し、従来技術における、ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－２抗体複合体が解離する場合がないことにより、ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－２抗体複合体が解離によりｈＩＬ－２のＩＬ２Ｒα結合部位を露出させることを効果的に回避するため、高親和性ＩＬ－２Ｒによって媒介される潜在的な毒性及びＴｒｅｇ活性化による治療ウィンドウの狭小化の問題を回避する。
（ｉｖ）本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）細胞（例えば、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞）及び／又はＮＫ細胞に特異的に結合でき、Ｔｅｆｆ細胞及び／又はＮＫ細胞の増殖を促進できるだけでなく、Ｔｅｆｆ細胞及び／又はＮＫ細胞におけるＩＬ－２シグナル伝達を誘導し、その腫瘍殺傷活性を活性化することができるが、Ｔｒｅｇ細胞におけるＩＬ－２シグナル伝達及びその細胞活性を活性化することがなく、かつ従来のＣＤ４^＋Ｔ細胞（ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ＣＤ４^＋Ｔ ｃｅｌｌｓ、Ｔｃｏｎｖ）に悪影響を与えることがない。
（ｖ）本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は免疫原性が低く、全ての変異配列が抗原－抗体結合界面内に埋め込まれて、潜在的なＡＤＡリスクを顕著に低減する。
（ｖｉ）本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、安定性に優れ、産生し製造しやすく、かつ発現量が高く、産生コストの低減に有利である。
（ｖｉｉ）本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、長い血清半減期を有し、インビボで有効で持続的な免疫刺激作用及び抗腫瘍活性を有し、かつ生体の腫瘍免疫抑制作用を不活性化しないか又は誘導しない。

【0139】

上記ｈＩＬ－２又は本願のｈＩＬ－２変異タンパク質と抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面は、ジスルフィド結合を含み、上記ジスルフィド結合は、上記抗原－抗体結合界面の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の配列に導入された少なくとも１つのシステイン残基と、上記抗原－抗体結合界面のｈＩＬ－２又はその変異タンパク質の配列に導入された少なくとも１つのシステイン残基とによって形成される。

【0140】

上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、ＩＬ２Ｒαと競合して上記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質に結合し、かつ上記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質とＩＬ２Ｒα又はαサブユニットを含むＩＬ－２受容体複合体（即ち、ＩＬ２Ｒα／γ又はＩＬ２Ｒα／β／γ）との結合をブロックすることができる。いくつかの実施形態では、上記抗ＩＬ－２抗体は、上記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のＩＬ２Ｒα結合部位に特異的に結合することができる。いくつかの実施形態では、上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片とｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性（Ｋ_Ｄ）は、＜５×１０^－８Ｍであり、好ましくは、＜１×１０^－８Ｍで、＜５×１０^－９Ｍであるか、又は＜１×１０^－９Ｍであり、より好ましくは、＜６×１０^－１０Ｍである。いくつかの実施形態では、上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片とｈＩＬ－２変異タンパク質との解離速度定数（Ｋ_ｄｉｓ）は、＜５×１０^－３ｓ^－１、１×１０^－３ｓ^－１、＜５×１０^－４ｓ^－１又は＜３×１０^－４ｓ^－１である。

【0141】

上記ｈＩＬ－２又は本願のｈＩＬ－２変異タンパク質と抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面は、ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質とＩＬ２Ｒαとの結合界面を包含するか、又はｈＩＬ－２又は本願のｈＩＬ－２変異タンパク質とＩＬ２Ｒαとの結合界面に部分的に重なる。いくつかの実施形態では、上記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面は、上記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のＡＢループ、Ｂヘリックス、Ｃヘリックス、ＢＣループ及び／又はＣＤループに位置し、好ましくは、上記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のＡＢループ、Ｂヘリックス、Ｃヘリックス及びＣＤループに位置し、上記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のＩＬ２Ｒα結合界面は、ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のＡＢループ及びＢヘリックスに位置する。具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との結合界面は、上記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質の第３０位～第４５位若しくはその隣接するアミノ酸残基、第５７位～第７７位若しくはその隣接するアミノ酸残基、及び／又は第９０位～１１１位若しくはその隣接するアミノ酸残基に位置する。いくつかの実施形態では、上記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との結合界面は、上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の可変領域に位置する。

【0142】

いくつかの実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質におけるｈＩＬ－２変異タンパク質は、前述の本願のｈＩＬ－２変異タンパク質を含み、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対して、（ａ）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第６４位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｋ６４Ｇ、（ｂ）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第９０位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｎ９０Ｒ、又は、（ｃ）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第１０４位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｍ１０４Ｅのうちの１つ以上のアミノ酸変異を含み、好ましくは、アミノ酸変異は、Ｋ６４Ｇ及び／又はＮ９０Ｒ、或いはＫ６４Ｇ、Ｎ９０Ｒ及びＭ１０４Ｅであり、より好ましくは、アミノ酸変異は、Ｋ６４Ｇ及びＮ９０Ｒである。具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号２又は配列番号３に示されるアミノ酸配列を含む。

【0143】

いくつかの実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、前述の本願の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と、ｈＩＬ－２上のＩＬ２Ｒα結合部位を特異的に識別できる他の抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片とを含み、好ましくは、他の抗ＩＬ－２ヒト化抗体は、ＰＣＴ国際公開第２０１６００５９５０号パンフレットに記載のＮＡＲＡ１及びＰＣＴ国際公開第２０１８２１７０５８号パンフレットに記載のＴＣＢ２から選択される。

【0144】

具体的な実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含むか、又はそれぞれ上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0145】

具体的な実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、（１）アミノ酸配列がＸ１ＹＹＸ２Ｈ（Ｘ１＝Ａ又はＤ、Ｘ２＝Ｌ又はＭ）であるＨＣＤＲ１、（２）アミノ酸配列が配列番号２３０に示されるＲＩＤＰＺ１ＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＸ３（Ｚ１＝Ｅ又はＤ、Ｘ３＝Ｎ、Ｓ又はＧ）であるＨＣＤＲ２、（３）アミノ酸配列が配列番号２３１に示されるＺ２ＴＦＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ、Ｉ、Ｒ又はＴ、Ｚ３＝Ｙ、Ｌ、Ｈ又はＷ、Ｚ４＝Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、Ｙ又はＶ、好ましくは、Ｚ２＝Ｖ又はＩ、Ｚ３＝Ｙ又はＬ、Ｚ４＝Ｓ又はＴ）であるＨＣＤＲ３、（４）アミノ酸配列が配列番号２３２に示されるＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ、Ｙ、Ｎ、Ｈ、Ｉ、Ｌ又はＦ、Ｚ６＝Ｇ、Ｓ、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｉ、Ｌ、Ｔ又はＤ、好ましくは、Ｚ５＝Ｄ又はＹ、Ｚ６＝Ｇ又はＳ）であるＬＣＤＲ１、（５）アミノ酸配列が配列番号２３３に示されるＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｗ又はＹ、Ｚ８＝Ｔ又はＧ、Ｘ４＝Ｄ、Ｓ又はＴ、好ましくは、Ｚ７＝Ｓ又はＱ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）であるＬＣＤＲ２、及び（６）アミノ酸配列が配列番号１２に示されるＬＱＨＹＳＴＰＹＴであるＬＣＤＲ３を含むか、又はそれぞれ上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0146】

いくつかの実施形態では、上記抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７、配列番号１３又は配列番号１４に示されるＨＣＤＲ１と、配列番号８、配列番号１５、配列番号１６又は配列番号１９に示されるＨＣＤＲ２と、配列番号９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２９又は配列番号３４に示されるＨＣＤＲ３と、
配列番号１０、配列番号２６、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３又は配列番号４４に示されるＬＣＤＲ１と、配列番号１１、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３２又は配列番号３３に示されるＬＣＤＲ２と、配列番号１２又は配列番号３８に示されるＬＣＤＲ３と
を含む。

【0147】

いくつかの実施形態では、上記抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７又は配列番号１４に示されるＨＣＤＲ１と、配列番号８、配列番号１５、配列番号１６又は配列番号１９に示されるＨＣＤＲ２と、配列番号９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２９又は配列番号３４に示されるＨＣＤＲ３と、
配列番号１０、配列番号２６、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３５、配列番号３６又は配列番号３７に示されるＬＣＤＲ１と、配列番号１１、配列番号１７、配列番号１８、配列番号２８、配列番号３２又は配列番号３３に示されるＬＣＤＲ２と、配列番号１２又は配列番号３８に示されるＬＣＤＲ３と
を含む。

【0148】

１つの具体的な実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
（１）配列番号１３（Ｘ１＝Ｄ、Ｘ２＝Ｌ）若しくは配列番号１４（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号８（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｎ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９（Ｚ２＝Ｖ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０（Ｚ５＝Ｄ、Ｚ６＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１１（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｄ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又はそれぞれ上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、或いは
（２）配列番号７（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｌ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｇ）若しくは配列番号１６（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９（Ｚ２＝Ｖ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０（Ｚ５＝Ｄ、Ｚ６＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１１（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｄ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又はそれぞれ上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、或いは
（３）配列番号７（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｌ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号８（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｎ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９（Ｚ２＝Ｖ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０（Ｚ５＝Ｄ、Ｚ６＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）若しくは配列番号１８（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｔ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又はそれぞれ上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、或いは
（４）配列番号１４（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９（Ｚ２＝Ｖ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０（Ｚ５＝Ｄ、Ｚ６＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又はそれぞれ上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0149】

一実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、配列番号１４（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９（Ｚ２＝Ｖ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０（Ｚ５＝Ｄ、Ｚ６＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又はそれぞれ上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0150】

具体的な実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、（１）アミノ酸配列がＸ１ＹＹＸ２Ｈ（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ、即ち、配列番号１４に示される配列）であるＨＣＤＲ１、（２）アミノ酸配列がＲＩＤＰＺ１ＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＸ３（Ｚ１＝Ｅ又はＤ、Ｘ３＝Ｇ、即ち、配列番号１５又は配列番号１９に示される配列）であるＨＣＤＲ２、（３）アミノ酸配列がＺ２ＴＦＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ、Ｉ、Ｒ又はＴ、Ｚ３＝Ｙ、Ｌ、Ｈ又はＷ、Ｚ４＝Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、Ｙ又はＶ、配列番号２３１、好ましくは、Ｚ２＝Ｖ又はＩ、Ｚ３＝Ｙ又はＬ、Ｚ４＝Ｓ又はＴ）であるＨＣＤＲ３、（４）アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ、Ｙ、Ｎ、Ｈ、Ｉ、Ｌ又はＦ、Ｚ６＝Ｇ、Ｓ、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｉ、Ｌ、Ｔ又はＤ、配列番号２３２、好ましくは、Ｚ５＝Ｄ又はＹ、Ｚ６＝Ｇ又はＳ）であるＬＣＤＲ１、（５）アミノ酸配列がＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｗ又はＹ、Ｚ８＝Ｔ又はＧ、Ｘ４＝Ｄ、Ｓ又はＴ、配列番号２３３、好ましくは、Ｚ７＝Ｓ又はＱ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）であるＬＣＤＲ２、及び（６）アミノ酸配列がＬＱＨＹＳＴＰＹＴ（配列番号１２に示される）であるＬＣＤＲ３を含むか、又はそれぞれ上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0151】

１つの具体的な実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、即ち
（１）配列番号１４（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９（Ｚ２＝Ｖ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｓ）又は配列番号２７（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）又は配列番号２８（Ｚ７＝Ｑ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又はそれぞれ上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、或いは
（２）配列番号１４（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２０（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）、配列番号２１（Ｚ２＝Ｖ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｓ）、配列番号２２（Ｚ２＝Ｖ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｔ）、配列番号２３（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｔ）、配列番号２４（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｓ）又は配列番号２５（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｔ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｓ）又は配列番号２７（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）又は配列番号２８（Ｚ７＝Ｑ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又はそれぞれ上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、或いは
（３）配列番号１４（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９（Ｚ１＝Ｄ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９（Ｚ２＝Ｖ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）、配列番号２０（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）、配列番号２３（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｔ）、配列番号２４（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｓ）若しくは配列番号２５（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｔ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｓ）又は配列番号２７（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）又は配列番号２８（Ｚ７＝Ｑ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又はそれぞれ上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0152】

一実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、
（１）配列番号１４（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｓ）若しくは配列番号２５（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｔ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｓ）若しくは配列番号２７（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）若しくは配列番号２８（Ｚ７＝Ｑ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又はそれぞれ上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、或いは
（２）配列番号１４（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９（Ｚ１＝Ｄ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｓ）若しくは配列番号２５（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｔ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｓ）若しくは配列番号２７（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）若しくは配列番号２８（Ｚ７＝Ｑ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又はそれぞれ上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0153】

より好ましくは、上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９（Ｚ１＝Ｄ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含むか、又はそれぞれ上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0154】

いくつかの実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域と、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域とを更に含む。

【0155】

いくつかの実施形態では、本願の抗体又はその抗原結合断片は、配列番号５、配列番号４５、配列番号４７、配列番号４９、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号８６又は配列番号１１２に示される配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）の同一性を有する重鎖可変領域ＶＨと、配列番号６、配列番号４６、配列番号４８、配列番号５０、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６４、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０又は配列番号１１１に示される配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）の同一性を有する軽鎖可変領域ＶＬと、を含む。

【0156】

１つの具体的な実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域と、上記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域とを含み、これらは、それぞれ配列番号４５、配列番号４７又は配列番号４９に示されるＶＨ及び配列番号４６、配列番号４８又は配列番号５０に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、好ましくは、それぞれ配列番号４９に示されるＶＨ及び配列番号４８又は配列番号５０に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0157】

１つの具体的な実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域と、上記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域とを含み、これらは、それぞれ配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８に示されるＶＨ及び配列番号４８に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれぞれ配列番号４９に示されるＶＨ及び配列番号５９、配列番号６０若しくは配列番号６２に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0158】

一実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域と、上記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域とを含み、これらは、それぞれ配列番号６３に示されるＶＨ及び配列番号６４に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0159】

１つの具体的な実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域と、上記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域とを含み、これらは、それぞれ配列番号６３、配列番号６５～配列番号７５のいずれかに示されるＶＨ及び配列番号７６～配列番号７９のいずれかに示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0160】

一実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域と、上記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域とを含み、これらは、それぞれ配列番号７１に示されるＶＨ及び配列番号７６に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0161】

一実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域と、上記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域とを含み、これらは、それぞれ配列番号７２に示されるＶＨ及び配列番号７７に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0162】

一実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域と、上記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域とを含み、これらは、それぞれ配列番号７２又は配列番号７４に示されるＶＨ及び配列番号７６又は配列番号７９に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0163】

一実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域と、上記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域とを含み、これらは、それぞれ配列番号７４又は配列番号７５に示されるＶＨ及び配列番号７７又は配列番号７８に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0164】

いくつかの実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質におけるｈＩＬ－２変異タンパク質と抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面はジスルフィド結合を含み、上記抗原－抗体結合界面は、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質とＩＬ２Ｒαとの結合界面に重なる。１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質と上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面は、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質のＡＢループ、Ｂヘリックス、Ｃヘリックス及びＣＤループに位置し、好ましくは、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第４１位～第４５位又はその隣接するアミノ酸残基、第５７位～第６８位又はその隣接するアミノ酸残基及び第９０位～第１０７位又はその隣接するアミノ酸残基に位置する。

【0165】

いくつかの実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質におけるｈＩＬ－２変異タンパク質と抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面はジスルフィド結合を含み、上記ジスルフィド結合は、上記抗原－抗体結合界面の抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の配列に導入された少なくとも１つのシステイン残基と、上記抗原－抗体結合界面のｈＩＬ－２変異タンパク質の配列に導入された少なくとも１つのシステイン残基とによって形成される。

【0166】

本願のための「導入」又は「導入された」とは、母体ポリペプチド（例えば、本願に記載の野生型ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片）における対応するネイティブ又は天然のアミノ酸残基を変異させることを意味し、上記変異は、置換、挿入又は付加を含む。例えば、母体ポリペプチド（例えば、本願に記載の野生型ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片）の特定部位におけるアミノ酸残基を「ネイティブ」又は「天然」のアミノ酸残基と呼ぶと、それに対応する導入されたシステイン残基は、上記ネイティブのアミノ酸残基とは異なるが上記母体ポリペプチド上の同じ位置にあるシステイン残基である。いくつかの実施形態では、導入されたシステイン残基は、同じ位置でネイティブの残基を置換したシステイン残基である。いくつかの実施形態では、導入されたシステイン残基は、同じ位置又は隣接位置に挿入されたか又は付加されたシステイン残基又はシステイン残基を含むポリペプチド断片である。

【0167】

一実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質におけるｈＩＬ－２変異タンパク質と上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面は、ジスルフィド結合を形成するために導入された２つ以上のシステイン残基を含む。１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、第１システイン残基を導入するために、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対して、第４２位、第６０位、第６１位、第６４位、第６５位、第１０２位及び第１０４位のアミノ酸残基に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を有する。一実施形態では、上記抗ＩＬ－２抗体は、本願の抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片から選択され、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片は、（１）アミノ酸配列がＸ１ＹＹＸ２Ｈ（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ、即ち、配列番号１４に示される配列）であるＨＣＤＲ１、（２）アミノ酸配列がＲＩＤＰＺ１ＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＸ３（Ｚ１＝Ｅ又はＤ、Ｘ３＝Ｇ、即ち、配列番号１５又は配列番号１９に示される配列）であるＨＣＤＲ２、（３）アミノ酸配列がＺ２ＴＦＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ又はＩ、Ｚ３＝Ｙ又はＬ、Ｚ４＝Ｓ又はＴ、例えば、配列番号９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４又は配列番号２５に示される配列を含む）であるＨＣＤＲ３、（４）アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ又はＹ、Ｚ６＝Ｇ又はＳ、例えば、配列番号１０、配列番号２６又は配列番号２７に示される配列を含む）であるＬＣＤＲ１、（５）アミノ酸配列がＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ又はＱ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ、即ち、配列番号１７又は配列番号２８に示される配列）であるＬＣＤＲ２、及び（６）アミノ酸配列が配列番号１２に示されるＬＱＨＹＳＴＰＹＴであるＬＣＤＲ３を含み、上記抗体又はその抗原結合断片は、第２システイン残基を導入するために、ＨＣＤＲ３の第３位のアミノ酸残基、ＬＣＤＲ１の第７位、第８位及び／若しくは第９位のアミノ酸残基、ＬＣＤＲ２の第１位、第３位のアミノ酸残基、又はＬＣＤＲ３の第４位のアミノ酸残基に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を有する。１つの具体的な実施形態では、上記抗ＩＬ－２抗体は、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域並びに／又は上記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含む本願の抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片から選択され、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片は、それぞれ配列番号６３に示されるＶＨ及び／若しくは配列番号６４に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれぞれ配列番号６３、配列番号６５～配列番号７５のいずれかに示されるＶＨ及び／若しくは配列番号７６～配列番号７９のいずれかに示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ上記抗体又はその抗原結合断片は、第２システイン残基を導入するために、その軽鎖可変領域のフレームワーク領域に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を有し、上記アミノ酸変異は、上記軽鎖可変領域の第６７位及び／又は第６８位のアミノ酸残基に発生する。

【0168】

上記ｈＩＬ－２変異タンパク質及び／又は抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片における特定部位のアミノ酸残基をシステイン残基に変異させるために、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質及び／又は抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片のコード配列を操作して、例えば、天然の残基をコードするコドンを、システイン残基をコードするコドンに置換するか、又は天然の残基をコードする位置又はその隣接位置に、システイン残基をコードするコドンを挿入するか又は付加してもよい。

【0169】

１つの具体的な実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の抗原－抗体結合界面のｈＩＬ－２変異タンパク質にアミノ酸変異の方式で第１システイン残基を導入し、上記抗原－抗体結合界面の抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片にアミノ酸変異の方式で第２システイン残基を導入し、好ましくは、アミノ酸変異は、アミノ酸の置換、挿入又は付加であり、例えば、非システイン残基がシステイン残基に置換されてもよく、又は非システイン残基の位置若しくはその隣接位置にシステイン残基又はシステイン残基を含むポリペプチド断片が挿入又は付加されてもよく、置換された位置、又は挿入若しくは付加された位置には、上記非システイン残基がシステイン残基に置換されるか、又はシステイン残基若しくはシステイン残基を含むポリペプチド断片が挿入又は付加された後、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の抗原－抗体結合界面のｈＩＬ－２変異タンパク質と上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片との間にジスルフィド結合を形成できるように決定してもよい。そのため、例えばジスルフィド結合を形成するシステイン残基が十分に近接していること、及び／又は上記置換若しくは挿入若しくは付加が上記ｈＩＬ－２変異タンパク質、又は抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又は上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質自体の三次構造を顕著に破壊しないこと、形成されたジスルフィド結合が抗原－抗体結合界面に位置すべきこと、を含む複数の要因が考えられる。

【0170】

当業者であれば、光電検出の距離スペクトル、コンピュータモデリング、ＮＭＲスペクトル又はＸ線結晶回折により、２つの変異対象のアミノ酸残基の間の距離及び角度を決定することを含むがこれらに限定されない、本分野で周知の適切な方法を使用することができる。一実施形態では、標的タンパク質（例えば、ＩＬ－２と抗ＩＬ－２抗体によって形成された抗原－抗体複合体）について、そのタンパク質結晶構造は、共通のデータベース（例えば、ＰＤＢデータベース）から取得されてもよく、Ｘ線結晶回折などの方法を使用することによって解明されてもよく、コンピュータソフトウェアを使用することによって、タンパク質結晶構造データに基づいてアミノ酸残基間の距離及び角度を決定してもよい。更に、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質における第１システイン残基を導入するための部位と、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体又は抗原結合断片における第２システイン残基を導入するための部位とが正確にペアリングできることを保証する必要があり、これにより、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質と上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面に安定的に連結されたジスルフィド結合を形成し、それがインビボで解離し、産生及び製造過程でミスマッチが発生するというリスクを低減することができる。一実施形態では、正確にペアリングできる上記部位は、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質と上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面に位置し、ペアリングされたアミノ酸残基は、十分に近接し、例えばペアリングされたアミノ酸残基間の空間的距離は１０オングストローム（１ｎｍ）より小さく、好ましくは、空間的距離は５オングストローム（０．５ｎｍ）より小さい。

【0171】

上記ＩＬ－２と抗ＩＬ－２抗体から形成された抗原－抗体複合体に関する公開された結晶構造データから、ｍＩＬ－２／Ｓ４Ｂ６抗原－抗体複合体結晶構造（例えばＰＤＢ ＩＤ：４ＹＵＥに示される）におけるｍＩＬ－２とＳ４Ｂ６の各アミノ酸残基との距離を取得することにより、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質と上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原断片にそれぞれ第１システイン残基と第２システイン残基を導入するのに適した部位を選択し、それらの部位を正確にペアリングすることができる。システイン残基が導入されるペアリング部位又は変異されるペアリングアミノ酸残基が決定されると、当業者であれば、本分野で周知の方法（例えば、ＰＣＲ変異誘発）によって、変異対象のコドンをシステインコドンに容易に変異させることができる。

【0172】

上記ジスルフィド結合の形成は、該分野で周知の適切な方法によって検証することができる。例えば、質量分析の方法で判断する。

【0173】

上記ジスルフィド結合は、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を安定化させることができ、このような安定化効果は、様々な面に反映される。例えば、上記ジスルフィド結合により、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、より高い割合を有する単量体成分として発現し、かつ／又は高い熱安定性及び血清安定性を有し、かつ／又は特定の生物学的活性を有する（例えば、ｈＩＬ－２変異タンパク質とＩＬ２Ｒのαサブユニット、α／β二量体、又はα／β／γ三量体との結合をよりよくブロックし、ＩＬ２Ｒβ／γに対する結合活性及び機能活性を保持することができる）安定した融合タンパク質として構築し、かつ／又は特定の生物学的活性及び特定の安定性を有する融合タンパク質として発現して構築することができる。

【0174】

１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質におけるｈＩＬ－２変異タンパク質と抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面にジスルフィド結合を形成する第１システイン残基と第２システイン残基とのペアは、以下の（１）～（６）のうちの１つ、又は２つ以上のペアリングされたアミノ酸変異の組み合わせから選択される。
（１）上記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対する上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第４２位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｆ４２Ｃ、第６４位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｋ６４Ｃ、若しくは第６５位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｐ６５Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、アミノ酸配列がＺ２ＴＦＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ若しくはＩ、Ｚ３＝Ｙ若しくはＬ、Ｚ４＝Ｓ若しくはＴ、例えば配列番号９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４若しくは配列番号２５に示される配列を含む）であるＨＣＤＲ３の第３位にアミノ酸変異Ｆ３Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（２）上記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対する上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第６０位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｅ６０Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ若しくはＹ、Ｚ６＝Ｇ若しくはＳ、例えば配列番号１０、配列番号２６若しくは配列番号２７に示される配列を含む）であるＬＣＤＲ１の第７位にアミノ酸変異Ｇ７Ｃ若しくはＳ７Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（３）上記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対する上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第６１位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｅ６１Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ若しくはＹ、Ｚ６＝Ｇ若しくはＳ、例えば配列番号１０、配列番号２６若しくは配列番号２７に示される配列を含む）であるＬＣＤＲ１の第７位にアミノ酸変異Ｇ７Ｃ若しくはＳ７Ｃを導入することによって得られるものであるか、若しくは
上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ若しくはＹ、Ｚ６＝Ｇ若しくはＳ、例えば配列番号１０、配列番号２６若しくは配列番号２７に示される配列を含む）であるＬＣＤＲ１の第８位にアミノ酸変異Ｎ８Ｃを導入することによって得られるものであるか、若しくは
上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、アミノ酸配列がＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ若しくはＱ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ、即ち、配列番号１７若しくは配列番号２８に示される配列を含む）であるＬＣＤＲ２の第１位にアミノ酸変異Ｓ１Ｃ若しくはＱ１Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（４）上記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対する上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０４位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｍ１０４Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、アミノ酸配列がＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ若しくはＱ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ、即ち、配列番号１７若しくは配列番号２８に示される配列）であるＬＣＤＲ２の第３位にアミノ酸変異Ｔ３Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（５）上記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対する上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０２位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｔ１０２Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、その軽鎖可変領域の第６７位にアミノ酸変異Ｓ６７Ｃを導入することによって得られるものであるか、若しくは
上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、その軽鎖可変領域の第６８位にアミノ酸変異Ｇ６８Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（６）上記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対する上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第６４位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｋ６４Ｃであり、
上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ５ＩＺ６ＮＹＬＳ（Ｚ５＝Ｄ若しくはＹ、Ｚ６＝Ｇ若しくはＳ、例えば配列番号１０、配列番号２６若しくは配列番号２７に示される配列を含む）であるＬＣＤＲ１の第９位にアミノ酸変異Ｙ９Ｃを導入することによって得られるものであるか、若しくは
上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、アミノ酸配列がＬＱＨＹＳＴＰＹＴ（配列番号１２）であるＬＣＤＲ３の第４位にアミノ酸変異Ｙ４Ｃを導入することによって得られるものである。

【0175】

更に、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片とｈＩＬ－２変異タンパク質との抗原－抗体結合界面にジスルフィド結合を形成する第１システイン残基と第２システイン残基とのペアは、以下の（１）～（３）のうちの１つ、又は２つ以上のペアリングされたアミノ酸変異の組み合わせから選択され、
（１）上記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対する上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０４位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｍ１０４Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＬＣＤＲ２の第３位にアミノ酸変異Ｔ３Ｃを導入することによって得られるものであり、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片は、配列番号１４（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号１９（Ｚ１＝Ｄ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号２４（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、配列番号２６（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３とを含み、並びに／又は
（２）上記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対する上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０２位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｔ１０２Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、その軽鎖可変領域の第６７位にアミノ酸変異Ｓ６７Ｃを導入することによって得られるものであり、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその結合断片は、配列番号７７に示されるＶＬと８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、若しくは
上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、その軽鎖可変領域の第６８位にアミノ酸変異Ｇ６８Ｃを導入することによって得られるものであり、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその結合断片は、配列番号７７に示されるＶＬと８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、並びに／又は
（３）上記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対する上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第４２位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｆ４２Ｃ、若しくは第６４位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｋ６４Ｃ、若しくは第６５位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｐ６５Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、アミノ酸配列がＺ２ＴＦＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ若しくはＩ、Ｚ３＝Ｙ若しくはＬ、Ｚ４＝Ｓ若しくはＴ、例えば配列番号９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４若しくは配列番号２５に示される配列を含む）であるＨＣＤＲ３の第３位にアミノ酸変異Ｆ３Ｃを導入することによって得られるものであり、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片は、配列番号１４（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９（Ｚ２＝Ｖ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０（Ｚ５＝Ｄ、Ｚ６＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、並びに／若しくは
より好ましくは、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片とｈＩＬ－２変異タンパク質との抗原－抗体結合界面にジスルフィド結合を形成する第１システイン残基と第２システイン残基とのペアは、以下の（１）～（４）のうちの１つ、若しくは２つ以上のペアリングされたアミノ酸変異の組み合わせから選択され、
（１）上記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対する上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０４位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｍ１０４Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、アミノ酸配列がＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ若しくはＱ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ、即ち、配列番号１７若しくは配列番号２８に示される配列）であるＬＣＤＲ２の第３位にアミノ酸変異Ｔ３Ｃを導入することによって得られるものであり、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片は、配列番号１４（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９（Ｚ１＝Ｄ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４（Ｚ２＝Ｉ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、並びに／又は
（２）上記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対する上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０２位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｔ１０２Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、その軽鎖可変領域の第６７位にアミノ酸変異Ｓ６７Ｃを導入することによって得られるものであり、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその結合断片は、配列番号７７に示されるＶＬと８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、若しくは
上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、その軽鎖可変領域の第６８位にアミノ酸変異Ｇ６８Ｃを導入することによって得られるものであり、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその結合断片は、配列番号７７に示されるＶＬと８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、並びに／又は
（３）上記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対する上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第６５位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｐ６５Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、アミノ酸配列がＺ２ＴＦＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ若しくはＩ、Ｚ３＝Ｙ若しくはＬ、Ｚ４＝Ｓ若しくはＴ、例えば配列番号９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４若しくは配列番号２５に示される配列を含む）であるＨＣＤＲ３の第３位にアミノ酸変異Ｆ３Ｃを導入することによって得られるものであり、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片は、配列番号１４（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９（Ｚ２＝Ｖ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０（Ｚ５＝Ｄ、Ｚ６＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、並びに／又は
（４）上記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対する上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第４２位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｆ４２Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片において、アミノ酸配列がＺ２ＴＦＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ若しくはＩ、Ｚ３＝Ｙ若しくはＬ、Ｚ４＝Ｓ若しくはＴ、例えば配列番号９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４若しくは配列番号２５に示される配列を含む）であるＨＣＤＲ３の第３位にアミノ酸変異Ｆ３Ｃを導入することによって得られるものであり、上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体若しくはその抗原結合断片は、配列番号１４（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９（Ｚ２＝Ｖ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０（Ｚ５＝Ｄ、Ｚ６＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む。

【0176】

上記ペアリングされたアミノ酸変異を使用することによって、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片とｈＩＬ－２変異タンパク質との抗原－抗体結合界面に設計されたジスルフィド結合連結を形成することを保証するだけでなく、ｈＩＬ－２変異タンパク質のα受容体結合部位がＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質分子の内部（即ち、抗原－抗体結合界面）に全て埋め込まれることを保証することができ、かつ上記融合タンパク質をインビボで応用して治療する場合に抗原－抗体の解離によるｈＩＬ－２変異タンパク質のαサブユニット受容体結合部位の露出が発生することがなく、インビボでの高親和性ＩＬ２ＲによってｈＩＬ－２変異タンパク質に競合的に結合することができないことにより、高親和性ＩＬ２Ｒの活性化による全身性毒性又は副作用及びＴｒｅｇ細胞によって媒介される免疫抑制作用を顕著に低減する。

【0177】

上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＩＬ－２及び抗ＩＬ－２抗体によって形成される抗原－抗体複合体とは異なる。実際、ＩＬ－２及び抗ＩＬ－２抗体によって形成される抗原－抗体複合体は、解離しやすく、かつ高親和性ＩＬ２ＲによりＩＬ－２に競合的に結合しやすく、例えば、インビボ及びインビトロでＣＤ２５を高発現するＴｒｅｇ細胞の増殖を刺激し、かつ免疫抑制反応を促進することができる。

【0178】

いくつかの実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、上記ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３は、１つ、又は２つ以上のシステイン残基変異を含み、上記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、（１）アミノ酸配列がＸ１ＹＹＸ２Ｈ（Ｘ１＝Ａ、Ｘ２＝Ｍ、即ち、配列番号１４に示される配列）であるＨＣＤＲ１と、（２）アミノ酸配列がＲＩＤＰＺ１ＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＸ３（Ｚ１＝Ｅ又はＤ、Ｘ３＝Ｇ、即ち、配列番号１５又は配列番号１９に示される配列）であるＨＣＤＲ２と、（３）アミノ酸配列が配列番号２３４に示されるＺ２ＴＸ_ＩＩＺ３ＹＺ４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ２＝Ｖ又はＩ、Ｘ_ＩＩ＝Ｆ又はＣ、Ｚ３＝Ｙ又はＬ、Ｚ４＝Ｓ又はＴ）であるＨＣＤＲ３と、（４）アミノ酸配列が配列番号２３５に示されるＱＡＳＱＺ５ＩＺ６Ｘ_ＩＸ_ＩＶＬＳ（Ｚ５＝Ｄ又はＹ、Ｚ６＝Ｇ、Ｓ又はＣ、Ｘ_Ｉ＝Ｎ又はＣ、Ｘ_ＩＶ＝Ｙ又はＣ）であるＬＣＤＲ１と、（５）アミノ酸配列が配列番号２３６に示されるＺ７ＡＺ８ＳＬＡＸ４（Ｚ７＝Ｓ、Ｑ又はＣ、Ｚ８＝Ｔ又はＣ、Ｘ４＝Ｓ）であるＬＣＤＲ２と、（６）アミノ酸配列が配列番号２３７に示されるＬＱＨＸ_ＩＩＩＳＴＰＹＴ（Ｘ_ＩＩＩ＝Ｙ又はＣ）であるＬＣＤＲ３と、を含む。

【0179】

１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、上記ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３は、１つ、又は２つ以上のシステイン残基変異を含み、上記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、
（１）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９（Ｚ２＝Ｖ、Ｘ_ＩＩ＝Ｆ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号３０（Ｚ５＝Ｄ、Ｚ６＝Ｃ、Ｘ_Ｉ＝Ｎ、Ｘ_ＩＶ＝Ｙ）若しくは配列番号３１（Ｚ５＝Ｄ、Ｚ６＝Ｇ、Ｘ_Ｉ＝Ｃ、Ｘ_ＩＶ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１２（Ｘ_ＩＩＩ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（２）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９（Ｚ２＝Ｖ、Ｘ_ＩＩ＝Ｆ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０（Ｚ５＝Ｄ、Ｚ６＝Ｇ、Ｘ_Ｉ＝Ｎ、Ｘ_ＩＶ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）、配列番号３２（Ｚ７＝Ｃ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）若しくは配列番号３３（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｃ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１２（Ｘ_ＩＩＩ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（３）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２９（Ｚ２＝Ｖ、Ｘ_ＩＩ＝Ｃ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０（Ｚ５＝Ｄ、Ｚ６＝Ｇ、Ｘ_Ｉ＝Ｎ、Ｘ_ＩＶ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１２（Ｘ_ＩＩＩ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（４）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９（Ｚ１＝Ｄ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４（Ｚ２＝Ｉ、Ｘ_ＩＩ＝Ｆ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号３５（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｃ、Ｘ_Ｉ＝Ｎ、Ｘ_ＩＶ＝Ｙ）若しくは配列番号３６（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｓ、Ｘ_Ｉ＝Ｃ、Ｘ_ＩＶ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１２（Ｘ_ＩＩＩ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（５）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９（Ｚ１＝Ｄ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４（Ｚ２＝Ｉ、Ｘ_ＩＩ＝Ｆ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｓ、Ｘ_Ｉ＝Ｎ、Ｘ_ＩＶ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）、配列番号３２（Ｚ７＝Ｃ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）若しくは配列番号３３（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｃ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１２（Ｘ_ＩＩＩ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（６）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９（Ｚ１＝Ｄ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号３４（Ｚ２＝Ｉ、Ｘ_ＩＩ＝Ｃ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｓ、Ｘ_Ｉ＝Ｎ、Ｘ_ＩＶ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１２（Ｘ_ＩＩＩ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（７）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９（Ｚ１＝Ｄ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４（Ｚ２＝Ｉ、Ｘ_ＩＩ＝Ｆ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｓ、Ｘ_Ｉ＝Ｎ、Ｘ_ＩＶ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号３８（Ｘ_ＩＩＩ＝Ｃ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（８）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９（Ｚ１＝Ｄ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４（Ｚ２＝Ｉ、Ｘ_ＩＩ＝Ｆ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号３７（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｓ、Ｘ_Ｉ＝Ｎ、Ｘ_ＩＶ＝Ｃ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１２（Ｘ_ＩＩＩ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含む。

【0180】

好ましくは、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、即ち
（１）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５（Ｚ１＝Ｅ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２９（Ｚ２＝Ｖ、Ｘ_ＩＩ＝Ｃ、Ｚ３＝Ｙ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０（Ｚ５＝Ｄ、Ｚ６＝Ｇ、Ｘ_Ｉ＝Ｎ、Ｘ_ＩＶ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１２（Ｘ_ＩＩＩ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（２）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９（Ｚ１＝Ｄ、Ｘ３＝Ｇ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４（Ｚ２＝Ｉ、Ｘ_ＩＩ＝Ｆ、Ｚ３＝Ｌ、Ｚ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６（Ｚ５＝Ｙ、Ｚ６＝Ｓ、Ｘ_Ｉ＝Ｎ、Ｘ_ＩＶ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｔ、Ｘ４＝Ｓ）若しくは配列番号３３（Ｚ７＝Ｓ、Ｚ８＝Ｃ、Ｘ４＝Ｓ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１２（Ｘ_ＩＩＩ＝Ｙ）に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含む。

【0181】

１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、並びに／又は上記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、上記ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／又はＬＣＤＲ３は、１つ、又は２つ以上のシステイン残基変異を含み、上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号６３、配列番号８６、配列番号７４若しくは配列番号１１２に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号６４、配列番号７７、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０若しくは配列番号１１１に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0182】

好ましくは、上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号８６若しくは配列番号７４に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号６４、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号１０７、配列番号１０８若しくは配列番号１０９に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0183】

より好ましくは、上記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号８６に示される重鎖可変領域及び配列番号６４、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０若しくは配列番号９１に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれぞれ配列番号７４に示される重鎖可変領域及び配列番号１０７、配列番号１０８若しくは配列番号１０９に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0184】

本願のｈＩＬ－２変異タンパク質と本願の抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片との結合界面にジスルフィド結合を導入する。上記ｈＩＬ－２変異タンパク質と上記抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面に位置する、空間的距離が１０オングストローム（１ｎｍ）より小さい（好ましくは５オングストローム（０．５ｎｍ）より小さい）アミノ酸残基のペアをシステイン残基に変異させるように選択することにより、ｈＩＬ－２変異タンパク質とヒト化ＩＬ－２抗体との間のジスルフィド結合を介して本願の上記分子の構造を更に安定化させることを実現し、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質のＩＬ２Ｒα結合部位が常に上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質分子の内部（即ち、抗原－抗体結合界面）に埋め込まれ、かつインビボで応用して治療する場合に解離によるｈＩＬ－２変異タンパク質のαサブユニット受容体結合部位の露出が発生することがなく、インビボでの高親和性ＩＬ２ＲによってｈＩＬ－２変異タンパク質に競合的に結合されることができないことを効果的に保証する。これらの特徴に基づいて、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、インビボで応用される場合、Ｔｅｆｆ細胞及び／又はＮＫ細胞の増殖を顕著に促進するだけでなく、Ｔｅｆｆ細胞及び／又はＮＫ細胞におけるＩＬ－２シグナル伝達を誘導し、その腫瘍殺傷活性を活性化することができ、それとともに、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＩＬ２Ｒのαサブユニット、α／β二量体、又はα／β／γ三量体に結合しないため、Ｔｒｅｇ細胞表面の高親和性ＩＬ２Ｒとの結合をブロックし、Ｔｒｅｇ細胞を活性化して腫瘍免疫抑制作用を誘導することがないだけでなく、ＣＤ２５を高発現するか又は高親和性ＩＬ２Ｒを発現する細胞又は組織に結合することもないため、従来のＩＬ－２製品のインビボでの毒性又は副作用（例えば、ＶＬＳ、肺浮腫、低血圧など）を顕著に低減する。また、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の投与が従来のＣＤ４^＋Ｔ細胞（Ｔｃｏｎｖ）に悪影響を与えるということは発見されなかった。

【0185】

いくつかの実施形態では、本願は、野生型ｈＩＬ－２と、ｈＩＬ－２のＩＬ２Ｒα部位を特異的に識別する他の抗ＩＬ－２ヒト化抗体とによって形成される抗原－抗体複合体の結合界面にジスルフィド結合を更に導入することを開示し、上記抗原－抗体複合体は、ｈＩＬ－２：ＮＡＲＡ１抗原－抗体複合体及びｈＩＬ－２：ＴＣＢ２抗原－抗体複合体から選択される。上記複合体の抗原－抗体結合界面における各アミノ酸間の空間的距離が１０オングストローム（１ｎｍ）より小さい（好ましくは５オングストローム（０．５ｎｍ）より小さい）アミノ酸残基のペアをシステイン残基ペアに変異させてジスルフィド結合を構築して形成することにより、同様にＩＬ－２のｈＩＬ２Ｒα結合部位を抗原－抗体結合界面により安定的に埋め込み、上記抗原－抗体複合体とＩＬ２Ｒα又は高親和性ＩＬ２Ｒとの競合的結合の活性を更に低減するか又は除去し、かつｈＩＬ－２とＩＬ２Ｒβ／γとの結合活性を維持することを実現することができる。

【0186】

いくつかの実施形態では、上記ｈＩＬ－２：ＮＡＲＡ１抗原－抗体複合体の結合界面は、ｈＩＬ－２とＩＬ２Ｒαとの結合界面を包含し、ｈＩＬ－２のＡＢループ、Ｂヘリックス、及びＢＣループに位置する。具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２：ＮＡＲＡ１抗原－抗体複合体の結合界面は、上記ｈＩＬ－２の第３０位～第４３位又はその隣接するアミノ酸残基及び第７１位～第７７位又はその隣接するアミノ酸残基に位置する。

【0187】

一実施形態では、上記ｈＩＬ－２：ＮＡＲＡ１抗原－抗体複合体の結合界面は、ジスルフィド結合を形成するために２つ、又は３つ以上のシステイン残基を含む。１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２は、第１システイン残基を導入するために、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対して、第３４位、第３７位、第４１位、第４２位、第６８位、第７３位、第７５位、第７７位及び第１１１位のアミノ酸残基に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を有する。１つの具体的な実施形態では、ＮＡＲＡ１抗体又はその抗原結合断片は、第２システイン残基を導入するために、ＣＤＲ領域において、特定のアミノ酸位置（アミノ酸残基）に１つ、又は２つ以上のシステイン変異を有し、上記アミノ酸変異は、ＮＡＲＡ１又はその抗原結合断片のＨＣＤＲ１の第１位のアミノ酸残基、並びに／又はＨＣＤＲ２の第２位、第６位及び／若しくは第８位のアミノ酸残基、並びに／又はＨＣＤＲ３の第３位及び／若しくは第８位のアミノ酸残基、並びに／又はＬＣＤＲ１の第９位のアミノ酸残基、及び／又はＬＣＤＲ３の第３位、第４位及び／若しくは第６位のアミノ酸残基に発生する。

【0188】

一実施形態では、上記ｈＩＬ－２：ＮＡＲＡ１抗原－抗体複合体の結合界面にジスルフィド結合を形成する第１システイン残基と第２システイン残基とのペアは、以下の（１）～（８）のうちの１つ、又は２つ以上のペアリングされたアミノ酸変異の組み合わせから選択される。
（１）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第３４位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｐ３４Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＨＣＤＲ３の第８位にアミノ酸変異Ａ８Ｃを導入することによって得られるものであるか、若しくは上記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片において、ＬＣＤＲ３の第３位若しくは第４位にそれぞれアミノ酸変異Ｓ３Ｃ若しくはＮ４Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（２）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第３７位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｔ３７Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＬＣＤＲ３の第６位にアミノ酸変異Ｄ６Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（３）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第４１位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｔ４１Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＨＣＤＲ２の第２位にアミノ酸変異Ｉ２Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（４）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第４２位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｆ４２Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＨＣＤＲ２の第８位にアミノ酸変異Ｇ８Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（５）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第６８位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｅ６８Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＮＡＲＡ１若しくはその抗原結合断片において、そのＨＣＤＲ１の第１位にアミノ酸変異Ｎ１Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（６）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第７３位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ａ７３Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＮＡＲＡ１若しくはその抗原結合断片において、そのＨＣＤＲ３の第３位にアミノ酸変異Ｇ３Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（７）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第７５位若しくは第７７位のアミノ酸残基にそれぞれ発生するアミノ酸変異Ｓ７５Ｃ若しくはＮ７７Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＮＡＲＡ１若しくはその抗原結合断片において、そのＬＣＤＲ１の第９位にアミノ酸変異Ｄ９Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（８）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第１１１位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｔ１１１Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＨＣＤＲ２の第６位にアミノ酸変異Ｓ６Ｃを導入することによって得られるものである。

【0189】

好ましくは、上記ｈＩＬ－２：ＮＡＲＡ１抗原－抗体複合体の結合界面にジスルフィド結合を形成する第１システイン残基と第２システイン残基とのペアは、以下の（１）～（４）のうちの１つ、又は２つ以上のペアリングされたアミノ酸変異の組み合わせから選択される。
（１）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第３７位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｔ３７Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＬＣＤＲ３の第６位にアミノ酸変異Ｄ６Ｃを導入することによって得られるものであり、又は
（２）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第６８位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｅ６８Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＨＣＤＲ１の第１位にアミノ酸変異Ｎ１Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（３）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第７５位若しくは第７７位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｓ７５Ｃ若しくはＮ７７Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＬＣＤＲ１の第９位にアミノ酸変異Ｄ９Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（４）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第１１１位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｔ１１１Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＨＣＤＲ２の第６位にアミノ酸変異Ｓ６Ｃを導入することによって得られるものである。

【0190】

いくつかの実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＮＡＲＡ１抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、及び／又はＬＣＤＲ３は、１つ、又は２つ以上のシステイン残基置換を含み、上記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、（１）配列番号１４２又は配列番号１４８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、（２）配列番号１４３、配列番号１４９、配列番号１５０又は配列番号１５１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、（３）配列番号１４４、配列番号１５２又は配列番号１５３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、（４）配列番号１４５又は配列番号１５４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、（５）配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、（６）配列番号１４７、配列番号１５５、配列番号１５６又は配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含み、
更に、上記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、
（１）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（２）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１５２若しくは配列番号１５３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（３）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１５４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（４）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１５５、配列番号１５６若しくは配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（５）配列番号１４８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（６）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５０若しくは配列番号１５１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含む。

【0191】

好ましくは、上記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、
（１）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（２）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１５４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（３）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（４）配列番号１４８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含む。

【0192】

いくつかの実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＮＡＲＡ１抗体融合タンパク質は、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域、並びに／又は上記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、及び／又はＬＣＤＲ３は、１つ、又は２つ以上のシステイン残基変異を含み、上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１４０、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２若しくは配列番号１６３に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１４１、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６若しくは配列番号１６７に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、更に、上記ｈＩＬ－２／ＮＡＲＡ１抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、上記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、
（１）それぞれ配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２若しくは配列番号１６３に示される重鎖可変領域及び配列番号１４１に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号１４０に示される重鎖可変領域及び配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６若しくは配列番号１６７に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0193】

好ましくは、上記ｈＩＬ－２／ＮＡＲＡ１抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、上記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、
（１）それぞれ配列番号１５８、若しくは配列番号１６１に示される重鎖可変領域及び配列番号１４１に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号１４０に示される重鎖可変領域及び配列番号１６４若しくは配列番号１６７に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0194】

本願に記載のｈＩＬ－２／ＮＡＲＡ１抗体融合タンパク質は、ＩＬ２Ｒαとの結合活性を有さないが、ＩＬ２Ｒβ／γとの結合活性を保持する。

【0195】

いくつかの実施形態では、上記ｈＩＬ－２：ＴＣＢ２抗原－抗体複合体の結合界面は、ｈＩＬ－２とＩＬ２Ｒαとの結合界面を包含し、ｈＩＬ－２のＡＢループ、Ｂヘリックス、及びＣＤループに位置する。具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２：ＴＣＢ２抗原－抗体複合体の結合界面は、上記ｈＩＬ－２の第３４位～第４５位又はその隣接するアミノ酸残基、第６２位～第７６位又はその隣接するアミノ酸残基、及び第１１１位又はその隣接するアミノ酸残基に位置する。

【0196】

一実施形態では、上記ｈＩＬ－２：ＴＣＢ２抗原－抗体複合体の結合界面は、ジスルフィド結合を形成するために２つ、又は２つ以上のシステイン残基を含む。１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２は、第１システイン残基を導入するために、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対して、第３４位、第３６位、第３７位、第３８位、第４２位、第６８位及び第１０９位のアミノ酸残基に１つ、又は２つ以上のアミノ酸変異を有する。１つの具体的な実施形態では、ＴＣＢ２抗体又はその抗原結合断片は、第２システイン残基を導入するために、ＣＤＲ領域において、特定のアミノ酸位置に１つ、又は２つ以上のシステイン変異を有し、上記アミノ酸変異は、ＴＣＢ２又はその抗原結合断片のＨＣＤＲ２の第６位のアミノ酸残基、並びに／又はＨＣＤＲ３の第３位、第５位、第６位及び／若しくは第７位のアミノ酸残基、並びに／又はＬＣＤＲ１の第４位のアミノ酸残基、並びに／又はＬＣＤＲ３の第４位、第５位及び／若しくは第６位のアミノ酸残基に発生する。

【0197】

一実施形態では、上記ｈＩＬ－２：ＴＣＢ２抗原－抗体複合体の結合界面にジスルフィド結合を形成する第１システイン残基と第２システイン残基とのペアは、以下の（１）～（７）のうちの１つ、又は２つ以上のペアリングされたアミノ酸変異の組み合わせから選択される。
（１）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第３４位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｐ３４Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＴＣＢ２若しくはその抗原結合断片において、そのＬＣＤＲ１の第４位にアミノ酸変異Ｔ４Ｃを導入することによって得られるものであるか、若しくは上記ＴＣＢ２若しくはその抗原結合断片において、そのＬＣＤＲ３の第４位若しくは第５位にそれぞれアミノ酸変異Ｄ４Ｃ若しくはＮ５Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（２）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第３６位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｌ３６Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＬＣＤＲ３の第５位にアミノ酸変異Ｎ５Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（３）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第３７位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｔ３７Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＬＣＤＲ３の第５位若しくは第６位にそれぞれアミノ酸変異Ｎ５Ｃ若しくはＬ６Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（４）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第３８位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｒ３８Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＨＣＤＲ３の第７位にアミノ酸変異Ｆ７Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（５）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第４２位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｆ４２Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＨＣＤＲ３の第５位にアミノ酸変異Ｒ５Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（６）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第６８位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｅ６８Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＨＣＤＲ３の第３位若しくは第６位にそれぞれアミノ酸変異Ａ３Ｃ若しくはＧ６Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（７）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第１０９位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｄ１０９Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片において、そのＨＣＤＲ２の第６位にアミノ酸変異Ｄ６Ｃを導入することによって得られるものである。

【0198】

好ましくは、上記ｈＩＬ－２：ＴＣＢ２抗原－抗体複合体の結合界面にジスルフィド結合を形成する第１システイン残基と第２システイン残基のペアは、以下の（１）～（５）のうちの１つ、又は２つ以上のペアリングされたアミノ酸変異の組み合わせから選択される。
（１）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第３４位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｐ３４Ｃであり、上記第２システインは、上記ＴＣＢ２抗体又はその抗原結合断片において、そのＬＣＤＲ３の第４位又は第５位にそれぞれアミノ酸変異Ｄ４Ｃ又はＮ５Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（２）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第３６位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｌ３６Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＴＣＢ２抗体又はその抗原結合断片において、そのＬＣＤＲ３の第５位にアミノ酸変異Ｎ５Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（３）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第３７位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｔ３７Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＴＣＢ２抗体又はその抗原結合断片において、そのＬＣＤＲ３の第６位にアミノ酸変異Ｌ６Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（４）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第４２位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｆ４２Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＴＣＢ２抗体又はその抗原結合断片において、そのＨＣＤＲ３の第５位にアミノ酸変異Ｒ５Ｃを導入することによって得られるものであり、かつ／又は
（５）上記第１システイン残基は、上記ｈＩＬ－２の第６８位のアミノ酸残基に発生するアミノ酸変異Ｅ６８Ｃであり、上記第２システイン残基は、上記ＴＣＢ２抗体又はその抗原結合断片において、そのＨＣＤＲ３の第３位にアミノ酸変異Ａ３Ｃを導入することによって得られるものである。

【0199】

いくつかの実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＴＣＢ２抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、上記ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、及び／又はＬＣＤＲ３は、１つ、又は２つ以上のシステイン残基置換を含み、上記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３は、（１）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、（２）配列番号１７１又は配列番号１７６に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、（３）配列番号１７２、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９又は配列番号１８０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、（４）配列番号１７３又は配列番号１８１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、（５）配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、（６）配列番号１７５、配列番号１８２、配列番号１８３又は配列番号１８４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む。

【0200】

一実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＴＣＢ２抗体融合タンパク質は、上記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、即ち
（１）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９若しくは配列番号１８０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（２）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７６に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（３）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１８１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（４）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１８２、配列番号１８３若しくは配列番号１８４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含む。

【0201】

１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＴＣＢ２抗体融合タンパク質は、上記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、即ち
（１）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７７若しくは配列番号１７８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、及び／又は
（２）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号１８２、配列番号１８３若しくは配列番号１８４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含む。

【0202】

いくつかの実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＴＣＢ２抗体融合タンパク質は、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域並びに／又は上記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、上記ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、及び／又はＬＣＤＲ３は、１つ、２つ、又は３つ以上のシステイン残基変異を含み、上記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１６８、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７、配列番号１８８若しくは配列番号１８９に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１６９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２若しくは配列番号１９３に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0203】

一実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＴＣＢ２抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、上記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、
（１）それぞれ配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７、配列番号１８８若しくは配列番号１８９に示される重鎖可変領域及び配列番号１６９に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号１６８に示される重鎖可変領域及び配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２若しくは配列番号１９３に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0204】

１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＴＣＢ２抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、上記重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、
（１）それぞれ配列番号１８５若しくは配列番号１８６に示される重鎖可変領域及び配列番号１６９に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号１６８に示される重鎖可変領域及び配列番号１９１、配列番号１９２若しくは配列番号１９３に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0205】

本願に記載のｈＩＬ－２／ＴＣＢ２抗体融合タンパク質は、ＩＬ２Ｒαとの結合活性を有さないが、ＩＬ２Ｒβ／γとの結合活性を保持するか又は増強する。

【0206】

本願の例示的なｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の抗体又はその抗原結合断片部分の重鎖可変領域及びそのＣＤＲ領域、並びに軽鎖可変領域及びそのＣＤＲ領域（Ｋａｂａｔ番号システムにより定義される）の番号は、表３に示される。

【0207】

【表3(1)】

【表3(2)】

【表3(3)】

【0208】

これから分かるように、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質により、ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のＩＬ２Ｒα結合部位を本願の上記分子内部（即ち、抗原－抗体結合界面）に常に埋め込み、ＩＬ－２又はその変異タンパク質のＩＬ２Ｒβ／γ結合部位を上記分子外部に保持することにより、ＩＬ２Ｒβ／γとの結合親和性及びＩＬ２Ｒβ／γを特異的に活性化する生物学的活性（Ｔｅｆｆ細胞及び／又はＮＫ細胞の増殖を促進し、Ｔｅｆｆ細胞及び／又はＮＫ細胞の腫瘍殺傷活性を活性化することを含む）を維持するとともに、高親和性ＩＬ２Ｒとの結合及びそれに関連する毒性（正常組織及び／又はＩＬＣ２細胞に発現する高親和性ＩＬ２ＲがｈＩＬ－２又はその変異タンパク質に結合した後に引き起こされるＶＬＳ、肺浮腫、低血圧などを含む）並びに治療効果への悪影響（高親和性ＩＬ２Ｒを発現するＴｒｅｇ細胞によって媒介される腫瘍免疫抑制作用を含む）を除去することができる一方で、本願に記載の分子構造を安定化させ、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体複合体と同様の解離を引き起こさず、かつ高親和性ＩＬ２ＲによってｈＩＬ－２又はその変異タンパク質に競合的に結合することができないことにより、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体複合体の潜在的な臨床応用リスクを顕著に低減し、第３態様では、構築された分子の免疫原性が低く、ＡＤＡリスクを大幅に低減し、第４態様では、構築された分子は、産生されて製造されやすく、得られた生成物は、高い均質性を有し、品質の制御に有利であるだけでなく、安定性が高く、凝集しにくく、製品の品質に起因する潜在的な悪影響を顕著に低減する。

【0209】

リンカー
本願の特定の実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、上記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質がリンカー配列を介して本願に係る抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片に融合されるか又は操作可能に連結される重鎖可変領域又は軽鎖可変領域を更に含む。本願は、ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質が抗ＩＬ－２抗体又はその結合断片に連結する位置、リンカーのタイプ及び長さ、並びにリンカーがｈＩＬ－２又はその変異タンパク質とＩＬ２Ｒβ／γとの結合活性に影響を与えるか否かを考察し、選択されたリンカーは、低免疫原性を更に有するべきである。本明細書では、リンカーとして柔軟なペプチドを選択することができる。いくつかの実施形態では、上記リンカー配列は、Ｇ４Ｓ又はＧＡＦを含み、リンカーの１つ、又は２つ以上コピーを使用してもよい。他の実施形態では、本明細書において、Ｇ４Ｓ若しくはＧＡＦリンカー、又は本明細書で開示される融合タンパク質に適した本分野で公知の任意の他のリンカー配列の２つ、３つ、４つ若しくは５つのコピーを使用してもよい。好ましくは、リンカーは、（Ｇ４Ｓ）_４、（Ｇ４Ｓ）_３、（ＧＡＦ）_２を含み、構築されたＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の内部構造の安定性を保証でき、より好ましくは、リンカーは、（Ｇ４Ｓ）_４である。

【0210】

本明細書で使用される場合、用語「リンカー」は、２つのポリペプチドなどの２つの化合物を連結する分子（未修飾又は修飾されたアミノ酸又はアミノ酸配列を含むが、それらに限定されない）を意味する。リンカーは、１つ、又は２つ以上のリンカー分子で構成されてもよく、リンカー分子と、リンカー分子と化合物とを特定の距離で単離するための少なくとも１つのスペーサー分子とを含んでもよい。

【0211】

いくつかの実施形態では、「操作可能に連結される」とは、異なる機能的特性を有するアミノ酸配列、ペプチド又はタンパク質の連結、例えば、本明細書に記載のリンカー配列を介してｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片とを連結することを意味する。

【0212】

いくつかの実施形態では、本願では、リンカーを介して上記ｈＩＬ－２変異タンパク質を本願の抗ＩＬ－２ヒト化抗体の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域に連結する。１つの具体的な実施形態では、上記リンカーは、ｈＩＬ－２変異タンパク質のＣ末端及び抗ＩＬ－２抗体の重鎖Ｎ末端に連結されることにより、ｈＩＬ－２変異タンパク質とＩＬ２Ｒβ／γとの結合に対する影響が小さいことを保証することができる。

【0213】

いくつかの実施形態では、本願では、リンカーを介して、ｈＩＬ－２を、ｈＩＬ－２のＩＬ２Ｒα結合部位を特異的に識別する他の抗ＩＬ－２ヒト化抗体の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域に更に連結する。１つの具体的な実施形態では、上記リンカーは、ｈＩＬ－２のＣ末端及びＮＡＲＡ１抗体の軽鎖可変領域のＮ末端に連結されることにより、ｈＩＬ－２とＩＬ２Ｒβ／γとの結合に対する影響が小さいことを保証することができる。１つの具体的な実施形態では、ｈＩＬ－２のＣ末端及びＮＡＲＡ１抗体の重鎖可変領域のＮ末端を連結するように４コピー以上のリンカーを選択することができ、同様にｈＩＬ－２とＩＬ２Ｒβ／γとの結合活性に顕著な影響を与えない。１つの具体的な実施形態では、上記リンカーは、ｈＩＬ－２のＣ末端及びＴＣＢ２抗体の軽鎖可変領域のＮ末端を連結することにより、ｈＩＬ－２とＩＬ２Ｒβ／γとの結合に対する影響が小さいことを保証することができる。１つの具体的な実施形態では、ｈＩＬ－２のＣ末端及びＴＣＢ２抗体の重鎖可変領域のＮ末端を連結するように４コピー以上のリンカーを選択することができ、ｈＩＬ－２とＩＬ２Ｒβ／γとの結合活性に顕著な影響を与えない。

【0214】

本願で選択されるリンカーは、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質分子の構造の安定化、均質性生成物の産生製造及び生成に有利であるだけでなく、低免疫原性を有する。

【0215】

本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の更なる最適化
本願では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質に基づいて、融合タンパク質分子における抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の最適化及びｈＩＬ－２変異タンパク質の最適化を含む更なる最適化を行っている。

【0216】

いくつかの実施形態では、本願では、上記抗ＩＬ－２抗体（抗ｍＩＬ－２抗体及びそれから誘導される各ヒト化抗体を含む）の軽鎖可変領域の第１位のアスパラギン酸又は第２７位のグルタミン（軽鎖ＣＤＲ１に位置する）にアミノ酸変異を行い、上記アミノ酸変異は、Ｄ１Ｅ、Ｑ２７Ｄ、Ｑ２７Ｅ、Ｑ２７Ｓ、Ｑ２７Ｇ、Ｑ２７Ｋ又はＱ２７Ｒを含み、好ましくは、アミノ酸変異は、Ｄ１Ｅ、Ｑ２７Ｄ、Ｑ２７Ｅ、Ｑ２７Ｓ又はＱ２７Ｇを含み、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の発現量を顕著に向上させることができる。

【0217】

いくつかの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、即ち、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、配列番号３９～配列番号４４のいずれかに示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む。

【0218】

１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、及びＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、即ち、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、配列番号３９～配列番号４２のいずれかに示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む。

【0219】

いくつかの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含み、上記重鎖可変領域は、配列番号８６に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号８７～配列番号９３のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0220】

１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含み、上記重鎖可変領域は、配列番号８６に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号８７～配列番号９１のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0221】

いくつかの実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の産生及び製造に有利であり、発現収率を向上させ、品質制御及び均質性生成物の生成に有利であり、潜在的なＡＤＡリスクを低減するために、本願では、ｈＩＬ－２変異タンパク質分子を更に最適化することは、以下の（ｉ）及び／又は（ｉｉ）を含む。
（ｉ）産生及び製造過程におけるグリコシル化異性体の出現を回避するためのグリコシル化修飾の除去
いくつかの実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質において、ｈＩＬ－２変異タンパク質に存在するグリコシル化部位は、変異（例えば、削除）されてもよく、変化しないままであってもよい。本願における用語「グリコシル化部位」は、ポリペプチド配列に使用される場合、側鎖が炭水化物部分（例えば、オリゴ糖構造）に連結できるアミノ酸残基を意味し、このアミノ酸残基を変異させることで天然グリコシル化修飾の除去を容易に実現することができる。
いくつかの具体的な実施形態では、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質において、少なくとも１つの天然グリコシル化部位は、ｈＩＬ－２変異タンパク質に存在しないか、又は存在する。一実施形態では、本願に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質において、上記ｈＩＬ－２変異タンパク質の一部のグリコシル化部位が削除されることは、ｈＩＬ－２変異タンパク質のＮ末端の最初の３つ若しくは５つのアミノ酸残基を削除すること、若しくは第３位のトレオニン残基を変異させることを含み、好ましくは、Ｎ末端の最初の３つのアミノ酸残基を削除すること（例えば、配列番号１３４に示される）を含む。かつ／又は
（ｉｉ）ミスマッチジスルフィド結合の形成を回避するための遊離システイン残基の除去。即ち、ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１２５位のシステイン残基をアラニン、ロイシン、セリン、グルタミン又はバリンに変異させる。

【0222】

本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の第１ポリペプチド及び第２ポリペプチド
本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドを含み、上記第１ポリペプチドは、上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片に由来する可変領域に操作可能に連結されたシステイン残基の変異を有するｈＩＬ－２又はその変異タンパク質を含み、第２ポリペプチドは、上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の別の可変領域を含む。更に、上記第１ポリペプチドは、システイン残基の変異を有するｈＩＬ－２又はその変異タンパク質、リンカー及び上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の１つの可変領域を含み、別のシステイン変異が上記第１ポリペプチドにおける抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片の１つの可変領域及び／又は第２ポリペプチドにおける抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片の別の可変領域に配置されることが可能であることにより、ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質におけるシステイン変異と正確にペアリングされて安定なジスルフィド結合が形成されることが可能であり、かつ上記ジスルフィド結合は、上記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面に位置する。

【0223】

いくつかの実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドを含み、上記第１ポリペプチドは、システイン残基の変異を有するｈＩＬ－２変異タンパク質、リンカー、及び上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の重鎖可変領域を含み、第２ポリペプチドは、上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の軽鎖可変領域を含む。

【0224】

更に、上記第１ポリペプチドは、配列番号９５～配列番号１０３、配列番号１１３～配列番号１２０、若しくは配列番号１３３～配列番号１３８のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は上記第２ポリペプチドは、配列番号６４、配列番号７７、配列番号８０～配列番号８５、配列番号８７～配列番号９３、若しくは配列番号１０４～配列番号１１１のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0225】

１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドを含み、該第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドは、
（１）それぞれ配列番号９５に示される第１ポリペプチド及び配列番号８０に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号９６に示される第１ポリペプチド及び配列番号８１に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号９７に示される第１ポリペプチド及び配列番号８２に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号９８に示される第１ポリペプチド及び配列番号８３に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（５）それぞれ配列番号９９に示される第１ポリペプチド及び配列番号８４に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（６）それぞれ配列番号１００に示される第１ポリペプチド及び配列番号８５に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（７）それぞれ配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１３３～配列番号１３８のいずれかに示される第１ポリペプチド及び配列番号６４に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（８）それぞれ配列番号１０２に示される第１ポリペプチド及び配列番号８７～配列番号９３のいずれかに示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0226】

好ましくは、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドを含み、該第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドは、
（１）それぞれ配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１３３～配列番号１３８のいずれかに示される第１ポリペプチド及び配列番号６４に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号１０２に示される第１ポリペプチド及び配列番号８７～配列番号９１のいずれかに示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0227】

１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドを含み、該第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドは、
（１）それぞれ配列番号１１３に示される第１ポリペプチド及び配列番号１０４、配列番号１０５若しくは配列番号１０６に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号１１４に示される第１ポリペプチド及び配列番号１０７に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号１１５に示される第１ポリペプチド及び配列番号１０８若しくは配列番号１０９に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号１１６、配列番号１１７若しくは配列番号１１９に示される第１ポリペプチド及び配列番号７７に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（５）それぞれ配列番号１１８に示される第１ポリペプチド及び配列番号１１０に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（６）それぞれ配列番号１２０に示される第１ポリペプチド及び配列番号１０４に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（７）それぞれ配列番号１１８に示される第１ポリペプチド及び配列番号１１１に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0228】

好ましくは、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドを含み、該第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドは、
（１）それぞれ配列番号１１４に示される第１ポリペプチド及び配列番号１０７に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号１１５に示される第１ポリペプチド及び配列番号１０８若しくは配列番号１０９に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0229】

いくつかの実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドを含み、上記第１ポリペプチドは、システイン残基の変異を有するｈＩＬ－２、リンカー、及び上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の軽鎖可変領域を含み、第２ポリペプチドは、上記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の重鎖可変領域を含む。

【0230】

更に、上記第１ポリペプチドは、配列番号２０６～配列番号２２６のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は上記第２ポリペプチドは、配列番号１４０、配列番号１５８～配列番号１６３、配列番号１６８、若しくは配列番号１８５～配列番号１８９のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0231】

１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドを含み、該第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドは、
（１）それぞれ配列番号２０６に示される第１ポリペプチド及び配列番号１５８に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号２０７に示される第１ポリペプチド及び配列番号１５９に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号２０８に示される第１ポリペプチド及び配列番号１６０に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号２０９～配列番号２１３のいずれかに示される第１ポリペプチド及び配列番号１４０に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（５）それぞれ配列番号２１４に示される第１ポリペプチド及び配列番号１６１に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（６）それぞれ配列番号２１５に示される第１ポリペプチド及び配列番号１６２に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（７）それぞれ配列番号２１６に示される第１ポリペプチド及び配列番号１６３に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0232】

好ましくは、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドを含み、該第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドは、
（１）それぞれ配列番号２０６に示される第１ポリペプチド及び配列番号１５８に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号２０９、配列番号２１０若しくは配列番号２１３に示される第１ポリペプチド及び配列番号１４０に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号２１４に示される第１ポリペプチド及び配列番号１６１に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0233】

１つの具体的な実施形態では、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドを含み、該第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドは、
（１）それぞれ配列番号２１７に示される第１ポリペプチド及び配列番号１８５若しくは配列番号１８７に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号２１８に示される第１ポリペプチド及び配列番号１８６に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号２１９に示される第１ポリペプチド及び配列番号１８８に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号２２０のいずれかに示される第１ポリペプチド及び配列番号１８９に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（５）それぞれ配列番号２２１～配列番号２２６のいずれかに示される第１ポリペプチド及び配列番号１６８に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0234】

好ましくは、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドを含み、該第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドは、
（１）それぞれ配列番号２１７に示される第１ポリペプチド及び配列番号１８５に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号２１８に示される第１ポリペプチド及び配列番号１８６に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号２２２、配列番号２２３、配列番号２２４若しくは配列番号２２６に示される第１ポリペプチド及び配列番号１６８に示される第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む。

【0235】

４． 定常領域
本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片及び／又は本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、抗体の重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含む定常領域を更に含んでもよい。本願の重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域のＦｃ領域の天然及び変異体の形態を含み、更に二量体形成を促進するヒンジ領域を含むポリペプチドの切断形態を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、抗体のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。Ｆｃ部分を含む融合タンパク質（及びそれにより形成されるオリゴマー）は、プロテインＡ又はプロテインＧによるアフィニティークロマトグラフィー精製が容易であるという利点、及び血清半減期を延長するという利点を提供する。好ましくは、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧに由来し、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む。本明細書では、Ｆｃ領域の特定のアミノ酸残基の位置は、ＥＵ番号システムに従って決定される。

【0236】

抗体のＦｃ領域の１つの機能は、抗体がその標的に結合する場合に免疫系と「エフェクター機能」を生成し、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生成することを含む。ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰは、Ｆｃと免疫細胞の表面上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）との結合により媒介され（Ｒａｇｈａｖａｎら、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ １９９６、１２：１８１－２２０；Ｇｈｅｔｉｅら、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０００、１８：７３９－７６６；Ｒａｖｅｔｃｈら、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００１、１９：２７５－２９０）、上記免疫細胞は、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、肥満細胞、血小板、Ｂ細胞、大顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ＮＫ細胞及びＴ細胞を含む。ＣＤＣは、ＦｃとＣ１ｑなどの補体系のタンパク質との結合によって媒介される（Ｗａｒｄら、Ｔｈｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９５、２：７７－９４）。

【0237】

いくつかの実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体及び／又は本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、Ｆｃ領域によって媒介されるエフェクター機能を低下させるために工学的に改変されたＩｇＧ Ｆｃ領域を含む。低下したエフェクター機能を有する例示的なＦｃ分子は、以下のアミノ酸置換を有するＦｃ分子を含む。
Ｎ２９７Ａ又はＮ２９７Ｑ（ＩｇＧ１）
Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（ＩｇＧ１）
Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ（ＩｇＧ２）
Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｅ３１８Ａ（ＩｇＧ４）
Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ａ３３１Ｓ（ＩｇＧ２）
Ｃ２２０Ｓ／Ｃ２２６Ｓ／Ｃ２２９Ｓ／Ｐ２３８Ｓ（ＩｇＧ１）
Ｃ２２６Ｓ／Ｃ２２９Ｓ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ（ＩｇＧ１）
Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ（ＩｇＧ１）
Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ（ＩｇＧ１）

【0238】

好ましい工学的に改変されたＦｃ領域は、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ（ＥＵ番号システム）アミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃであり、Ｆｃ領域と１つ以上のＦｃγＲ及びＣ１ｑとの結合活性を低減することができる（Ｏｇａｎｅｓｙａｎ Ｖら、Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ ２００８、６４：７００－７０４、米国特許番号：米国特許第５６２４８２１号、米国特許第６１９４５５１号）。ＦｃγＲタンパク質ファミリーは、アイソフォームＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、及びＦｃγＲＩｃを含むＦｃγＲＩ（ＣＤ６４とも呼ばれる）とアイソフォームＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ及びＦｃγＲＩＩｃを含むＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２とも呼ばれる）と、アイソフォームＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂを含むＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６とも呼ばれる）と、を含む（Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ２００２、８２：５７－６５）。ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｃ及びＦｃγＲＩＩＩａは、ＡＤＣＣ、エンドサイトーシス、食作用及び／又はサイトカイン放出を誘導することができる。結合特性は、結合特異性、結合親和性定数（Ｋ_Ｄ）、解離速度と会合速度（それぞれＫ_ｄｉｓとＫ_ａ）及び結合親和性を含むがこれらに限定されず、当業者であれば、任意の１つ以上の結合特性によって、工学的に改変されたＦｃ領域が変化したＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ活性を有するか否かを分析することができる。

【0239】

いくつかの実施形態では、重鎖定常領域に導入されたＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓを含む本願の抗ＩＬ－２抗体及び／又は本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、１つ以上のＦｃγＲに対して低下した結合親和性を有し、上記ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ（１５８Ｆ）及びＦｃγＲＩＩＩａ（１５８Ｖ）であってもよい。一実施形態では、重鎖定常領域にＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ変異を導入することにより、抗ＩＬ－２抗体及び／又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ（１５８Ｆ）及び／又はＦｃγＲＩＩＩａ（１５８Ｖ）に実質的に結合しない。一実施形態では、重鎖定常領域にＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ変異を導入することにより、抗ＩＬ－２抗体及び／又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、Ｃ１ｑに実質的に結合しない。一実施形態では、重鎖定常領域にＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ変異を導入することは、抗ＩＬ－２抗体及び／又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質とＦｃＲｎとの結合親和性に影響を与えない。

【0240】

好ましくは、工学的に改変されたＦｃ領域は、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ（ＥＵ番号システム）アミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域にＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓを導入することにより、本願の抗ＩＬ－２抗体及び／又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質のＡＤＣＣ活性を顕著に低下させることができる。一実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体及び／又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、Ｆｃ領域にアミノ酸変異を有さない抗体と比較して、ＡＤＣＣ活性が顕著に低下するか又は除去される。一実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体及び／又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、そのＡＤＣＣ活性が検出不能まで低下することを示し、ＡＤＣＣ活性の低下又は除去は、本願の抗体及び／又は融合タンパク質のＦｃγＲに対する親和性が顕著に低下することによって引き起こされる可能性がある。

【0241】

いくつかの実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体及び／又は本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、工学的に改変されたＩｇＧ１定常領域を含み、上記抗体及び／又は融合タンパク質の等電点（ｐＩ）を低下させることにより、そのインビボでの半減期を延長する。抗体及び／又は融合タンパク質の等電点の変化は、その組織分布及び薬物動態（ＰＫ）特性に影響を与え、通常、ｐＩの低下は、非特異的組織の吸収と代謝／分解の減少及びインビボでの半減期の延長を引き起こす（Ｂｏｓｗｅｌｌ ＣＡら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ ２０１０、２１：２１５３－２１６３；Ｌｉら、ＭＡｂｓ ２０１４、６：１２５５－１２６４）。いくつかの実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体及び／又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の重鎖定常領域の特定部位のアミノ酸を変異させ、例えば、酸性アミノ酸（例えばアスパラギン酸又はグルタミン酸）で塩基性アミノ酸（例えばリジン又はアルギニン）又は中性アミノ酸（例えばアスパラギン又はグルタミン）を置換することによって、上記抗体及び／又は抗体融合タンパク質のｐＩを低下させることができる。具体的な変異部位の選択は、上記抗体及び／又は融合タンパク質ドメインにおける位置、機能作用及び潜在的な免疫原性などを含む様々な要因に依存する。上記変異は、上記抗体及び／又は融合タンパク質ドメインの生物物理学的特性に顕著な影響を与えない。一実施形態では、上記変異による免疫原性リスクを最小化する１つの方法は、ヒトタンパク質の天然アイソタイプ間のアミノ酸配列差を利用して置換することである。本願の抗ＩＬ－２抗体及び／又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の重鎖定常領域の変異部位の選択について、ヒトＩｇＧサブクラス（即ち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４）の間のアイソタイプ差は、免疫原性のリスクが低い変異を提供する。具体的には、上記変異については、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４定常領域のアミノ酸配列を比較することにより、ＩｇＧ１定常領域における非酸性又は塩基性アミノ酸残基を他のＩｇＧサブクラスの対応する部位において酸性又は非塩基性であるアミノ酸残基に変異させることができ、例えば、表４に示すように、上記変異は、ＩｇＧ１タンパク質のｐＩ値を低下させるように、Ｎ２０３Ｄ、Ｋ２７４Ｑ及びＱ４１９Ｅから選択される１つ以上であってもよい。一実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体及び／又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、Ｎ２０３Ｄ／Ｋ２７４Ｑ／Ｑ４１９Ｅ（ＥＵ番号システム）を含む変異を有する重鎖定常領域を含み、重鎖定常領域の該変異を有さない抗体及び／又は融合タンパク質に対して、本願の抗ＩＬ－２抗体及び／又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質のｐＩ値は、約１～２単位低下した。上記ｐＩ値は、理論計算又は実験測定により得られてもよい。一実施形態では、ｐＩ値が低下した本願の抗ＩＬ－２抗体及び／又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、顕著に改善された薬物動態特徴を示し、上記特徴は、変異を有さない抗体及び／又は融合タンパク質に対して、本願の抗ＩＬ－２抗体及び／又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質が少なくとも２～３倍以上増加した消失半減期（ｔ_１／２）、及び／又は３０％以上増加した薬物時間曲線下面積（ＡＵＣ）を得ることを含む。

【0242】

【表4】

【0243】

５． ポリヌクレオチド、ベクター及び宿主細胞
一態様では、本願は、ｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質をコードする核酸を提供する。本願は、本明細書に記載のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド変異体を更に含む。

【0244】

本願に記載のアミノ酸配列に対応し、核酸単離のためのプローブ若しくはプライマーとして使用されるか又はデータベースで検索できるヌクレオチド配列は、アミノ酸配列の逆翻訳によって得られてもよい。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）手順を使用して、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片、及びｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質をコードするＤＮＡ配列を単離して増幅してもよい。ＤＮＡ断片の組み合わせの所望の末端を規定するオリゴヌクレオチドは、５’及び３’プライマーとして使用される。オリゴヌクレオチドは、増殖されたＤＮＡ断片の組み合わせの発現ベクターへの挿入を促進するために、エンドヌクレアーゼを制限する識別部位を更に含んでもよい。ＰＣＲ技術については、Ｓａｉｋｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８、２３９：４８７－４９１；Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ、Ｗｕら編集、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、サンディエゴ（１９８９）、１８９～１９６頁、ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｉｎｎｉｓら編集、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９９０）を参照されたい。

【0245】

本願の核酸分子は、一本鎖及び二本鎖形態のＤＮＡ及びＲＮＡと、単離された核酸分子を含む対応する相補配列とを含み、好ましくは、実質的に純粋な形式で、かつ標準生化学法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、コールド・スプリング・ハーバー（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ）、ニューヨーク州（１９８９）に記載の方法）によりその成分のヌクレオチド配列を同定、操作及び回収できる数又は濃度で少なくとも１回単離されたＤＮＡ又はＲＮＡを含む。好ましくは、このような配列は、真核遺伝子に一般的に存在しない内部非翻訳配列又はイントロン中断のオープンリーディングフレームの形態で提供及び／又は構築される配列を含む。非翻訳ＤＮＡの配列は、オープンリーディングフレームの５’又は３’に存在してもよく、上記配列は、コード領域の操作又は発現に干渉しない。

【0246】

本願のｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片、及びｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＰＣＲ変異誘発又は当業者に知られている他の技術を使用してｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質をコードするＤＮＡにおけるヌクレオチドに対して部位特異的変異誘発を行って変異体をコードするＤＮＡを生成した後、本明細書に概説されている細胞培養物において組換えＤＮＡを発現する工程により製造される。また、ｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片、及びｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、確立された技術を使用してインビトロで合成することによって製造されてもよい。

【0247】

当業者に知られているように、遺伝暗号の縮重により、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、極めて大量の核酸によってコードされ、各部分の核酸は、いずれも本願の範囲内にあり、標準技術を使用して製造されてもよい。したがって、特定のアミノ酸配列を同定しており、当業者であれば、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質のアミノ酸配列を変更しない方法で、それぞれのコード配列に対して１つ、又は２つ以上のコドン修飾を簡単に行うことにより、多くの異なる核酸を製造することができる。

【0248】

別の態様では、本願は、本明細書のｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質をコードする核酸の発現ベクターを更に提供する。

【0249】

本願のｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質をコードする核酸を適切なベクターに構築して、宿主細胞に導入して標的タンパク質の発現を行ってもよい。ベクター成分は、通常、シグナル配列、複製開始点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター及び転写終結配列のうちの１つ以上を含むが、これらに限定されない。ベクターにおける標的タンパク質をコードする核酸は、プロモーターに操作可能に連結される。

【0250】

本明細書で使用される場合、用語「操作可能に連結される」は、核酸発現制御配列（例えば、プロモーター、シグナル配列又は転写調節因子結合部位の配列）と別の核酸配列との間の機能的連結を意味するため、該制御配列は、別の核酸配列の転写及び／又は翻訳を制御する。

【0251】

適切なベクターは、プラスミド、ファージミド、コスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）又はＰ１由来の人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体、λファージ又はＭ１３ファージなどのファージ、及び動物ウイルスなどを含む。ベクターとして使用される動物ウイルスの種類としては、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルスなど）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、パポーバウイルス（ＳＶ４０など）が挙げられる。ベクターは、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択エレメント及びレポーター遺伝子を含む、発現を制御する様々なエレメントを含んでもよい。また、ベクターは、複製開始部位を更に含んでもよい。ベクターは、ウイルス粒子、リポソーム又はタンパク質コートを含むがこれらに限定されない、細胞への侵入を促進する成分を更に含んでもよい。

【0252】

別の態様では、本願は、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質をコードする核酸又は発現ベクターを含む宿主細胞を更に提供する。

【0253】

細胞は、真核細胞、例えば、ＳＶ４０形質転換サル腎臓細胞ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ、ＣＲＬ－１６５１）、ヒト胎児腎臓細胞（２９３又は浮遊培養中の２９３細胞サブクローン、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ １９７７、３６：５９－７４）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ－２１、ＡＴＣＣ、ＣＣＬ－１０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９８０、７７：４２１６－４２２０）、マウス精巣セルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ １９８０、２３：２４３－２５１）、サル腎臓細胞（ＣＶ１、ＡＴＣＣ、ＣＣＬ－７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ、ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ、ＣＣＬ－２）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ、ＣＣＬ－３４）、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ、ＣＲＬ－１４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ、ＣＣＬ－７５）、ヒト肝臓癌細胞（ＨｅｐＧ２、ＡＴＣＣ、ＨＢ－８０６５）、マウス乳癌（ＭＭＴ０６０５６２、ＡＴＣＣ、ＣＣＬ－５１）、ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９８２、３８３：４４－６８）、ＭＲＣ５細胞、又はＦＳ４細胞を含むがこれらに限定されない哺乳動物宿主細胞であってもよい。

【0254】

６． 製造方法
本願は、上記宿主細胞を使用して、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、及びｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を製造する方法を提供する。

【0255】

上記方法は、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質をコードする核酸又は発現ベクターを宿主細胞にトランスフェクションし、培地中で宿主細胞を一定時間培養して本願のｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を発現することを含む。培地としては、特に限定されず、市販の培地を使用してもよい。

【0256】

好ましくは、発現されたｈＩＬ－２変異タンパク質、抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、増殖するように宿主細胞を培養する培地に分泌されてもよい。遠心分離又は限外濾過による不純物の除去、又はアフィニティークロマトグラフィーによる得られた物質の精製などの標準タンパク質精製の方法を使用して培地から抗体を回収し、アニオン又はカチオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー及びヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーなどの他の精製技術を使用してもよい。

【0257】

７． 二重特異性分子
また、本願に係る二重特異性抗体は、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含み、上記二重特異性抗体の２つのアームのうちの１つは、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含み、もう１つのアームは、ｈＩＬ－２以外の抗原（好ましくは癌に関連する抗原又は免疫チェックポイントタンパク質抗原）に特異性を有する抗体、又は免疫エフェクター細胞に関連する抗原に特異的に結合する抗体若しくはその抗原結合断片を含む。癌に関連する上記抗原は、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＢＣＭＡ、ＳＬＡＭＦ７、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥｐｈＢ２、Ｅ－セレクチン、ＥｐＣａｍ、ＣＥＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＡ、ＥＲＢｂ３、ｃ－ＭＥＴ、ＩＬＴ３、ＩＬＴ７、５Ｔ４、ＧＰＣ－３、ＤＬＬ３などから選択されてもよく、上記免疫チェックポイントタンパク質抗原は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＣＤ４７、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＣＤ１６０、２Ｂ４又はＴＧＦＲから選択されてもよい。

【0258】

本願の二重特異性分子は多くの異なる形態を有してもよい。例えば、二重特異性分子は、従来の抗体形態を保持するものであり、異なるのは、同じ特異性を有する２つの結合アームを有さず、異なる特異性を有する２つの結合アームを有することであり、各結合アームは、ペプチド鎖を介して連結された２つの一本鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）で構成されて、二重特異性分子、即ちＢｓ（ｓｃＦｖ）２構造として構築されてもよい。二重特異性分子は、ペプチドリンカーを介して連結された２つの異なるＦ（ａｂ）断片を更に含んでもよい。これらの二重特異性分子及び他の形態の二重特異性分子は、遺伝子工学、体細胞ハイブリダイゼーション又は化学合成の方法によって製造されてもよい。例えば、Ｋｕｆｅｒら、前出、Ｃａｏ及びＳｕｒｅｓｈら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９８、９：６３５－６４４、ｖａｎ Ｓｐｒｉｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ２０００、２１：３９１－３９７、及びそれらに引用された参考文献を参照。

【0259】

８． 免疫コンジュゲート、キメラ抗原受容体、工学的に改変されたＴ細胞受容体、又は腫瘍溶解性ウイルス
一態様では、本願は、本明細書の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む免疫コンジュゲートを提供する。

【0260】

本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、治療剤に結合して、抗体－薬物結合体（ＡＤＣ）などの免疫結合体を形成することができる。適切な治療剤は、細胞毒素、アルキル化剤、ＤＮＡマイナーグルーブバインダ、ＤＮＡインターカレータ、ＤＮＡ架橋剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、核外輸送阻害剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼＩ又はＩＩ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、抗生物質及び抗有糸分裂剤を含む。ＡＤＣにおいて、抗体を治療剤にカップリングするリンカーは、ペプチドリンカー、ジスルフィド結合又はヒドラゾンリンカーなどの切断可能リンカー（Ｃｌｅａｖａｂｌｅ ｌｉｎｋｅｒ）を選択してもよく、切断不可能リンカー（Ｎｏｎ－ｃｌｅａｖａｂｌｅ ｌｉｎｋｅｒ）を選択してもよい。米国特許第７０８７６００号、米国特許第６９８９４５２号及び米国特許第７１２９２６１号、国際公開第０２／０９６９１０号、国際公開第０７／０３８６５８号、国際公開第０７／０５１０８１号、国際公開第０７／０５９４０４号、国際公開第０８／０８３３１２号及び国際公開第０８／１０３６９３号、米国特許出願公開第２００６００２４３１７号、米国特許出願公開第２００６０００４０８１号及び米国特許出願公開第２００６０２４７２９５号に記載の方法によってＡＤＣを製造してもよく、これらの開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0261】

別の態様では、本願は、本明細書における抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含むキメラ抗原受容体、工学的に改変されたＴ細胞受容体、又は腫瘍溶解性ウイルスを更に提供する。

【0262】

９． 医薬組成物
本願に係る医薬組成物は、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質（免疫コンジュゲート、二重特異性分子、キメラ抗原受容体、工学的に改変されたＴ細胞受容体、若しくは腫瘍溶解性ウイルス）と、薬学的に許容できる担体とを含む。

【0263】

上記医薬組成物は、任意のタイプの賦形剤を含んでもよい。使用可能な賦形剤は、担体、界面活性剤、増粘剤若しくは乳化剤、固体結合剤、分散若しくは懸濁助剤、可溶化剤、着色剤、矯味矯臭剤、コーティング剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、保存剤、等張化剤又はこれらの組み合わせを含む。Ｇｅｎｎａｒｏ編著、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ２００３）において、適切な賦形剤を選択して使用することが教示されており、その開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0264】

好ましくは、医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊柱又は表皮投与（例えば、注射又は輸液により）に適する。異なる投与経路を考慮して、活性成分を材料中にコーティングして、活性成分を不活性化する可能性のある酸又は他の自然条件から保護してもよい。本願で使用される場合、用語「非経口投与」は、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊柱内、硬膜外及び胸骨内の注射及び輸液を含むがこれらに限定されない、非腸内及び局所的投与方式である。或いは、本願の抗体は、非経口経路（例えば、局所、表皮又は粘膜投与経路）、例えば、鼻腔内、経口、膣、直腸、舌下又は局所投与によって投与されてもよい。

【0265】

医薬組成物は、無菌水性溶液又は分散剤であってもよい。これらの医薬組成物は、マイクロエマルション、リポソーム、又は高薬物濃度に適した他の秩序構造の組み合わせ形態を形成することもできる。

【0266】

担体材料と組み合わせて単一の剤形を形成することができる活性成分の量は、対象及び特定の投与方法に応じて決定され、通常、治療効果をもたらすことができる組成物の量である。通常、薬学的に許容できる担体と形成される組成物は、約０．０１％～９９％の活性成分、好ましくは約０．１％～７０％、最も好ましくは約１％～３０％の活性成分を含む。

【0267】

最適な期待応答（例えば、治療応答）を提供するために、用量計画が調整される。例えば、一回投与してもよく、複数回投与してもよく、治療状況に応じて投与量を比例的に減少させるか又は増加させてもよい。投与が便利で投与量が均一であるために用量単位の形態で非経口投与する組成物を製造することが特に有利である。本願で使用される場合、用量単位の形態とは、対象を治療する単位用量として適する物理的に離散的な単位を意味し、各単位用量は、活性成分を所望の薬物担体とともに投与することによって達成される期待される治療効果を計算することによって得られる所定量の活性成分を含む。また、本願の抗ＩＬ－２抗体、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、徐放性製剤として投与されてもよく、これにより、投与頻度を減少させることができる。

【0268】

抗ＩＬ－２抗体、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質又は抗ＩＬ－２抗体若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む組成物の投与量の範囲は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ体重で、通常０．００１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ体重であってもよい。

【0269】

本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、二重特異性分子、免疫コンジュゲート、キメラ抗原受容体、工学的に改変されたＴ細胞受容体、又は腫瘍溶解性ウイルスの「治療有効用量」は、好ましくは、疾患症状の重症度を低下させ、疾患症状の無発症期の頻度及び持続時間を増加させるか、又は疾患障害による生体損傷若しくは失能を予防することができるものである。例えば、未治療対象に対して、腫瘍担持対象の「治療有効用量」は、好ましくは、腫瘍増殖を少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、更により好ましくは少なくとも約６０％、更により好ましくは少なくとも約８０％抑制することができる。治療用抗体の治療有効量により、腫瘍の大きさを減少させるか、又は対象の症状を改善することができ、上記対象は、通常、ヒト又は他の哺乳動物である。「治療有効用量」は、更に、様々な要因に基づいて異なる方法で決定されてもよく、上記様々な要因は、製造方法、投与方法、患者の年齢、身体、体重、性別又は病理状態、食事、投与時間、投与間隔、投与経路、排泄率及び反応感受性を含むが、これらに限定されない。

【0270】

医薬組成物としては、インプラント、経皮貼付剤及びマイクロカプセル化送達システムを含む放出制御製剤を選択してもよい。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性生体適合性ポリマーを使用してもよい。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、ニューヨーク、１９７８を参照。

【0271】

治療用医薬組成物は、（１）無針皮下注射装置（例えば、米国特許第５３９９１６３号、米国特許第５３８３８５１号、米国特許第５３１２３３５号、米国特許第５０６４４１３号、米国特許第４９４１８８０号、米国特許第４７９０８２４号及び米国特許第４５９６５５６号）、（２）マイクロ輸液ポンプ（米国特許第４４８７６０３号）、（３）経皮装置（米国特許第４４８６１９４号）、（４）輸液装置（米国特許第４４４７２３３号及び米国特許第４４４７２２４号）、及び（５）浸透装置（米国特許第４４３９１９６号及び米国特許第４４７５１９６号）から選択される医療装置によって送達されてもよい。これらの開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0272】

いくつかの実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を製造して、インビボでの生物分布を確保してもよい。例えば、本願の治療用抗体又は抗体融合タンパク質が血液脳関門を通過することを確保するために、該治療用抗体又は抗体融合タンパク質をリポソームに製剤化してもよく、上記リポソームは、特定の細胞又は器官への選択的送達を増強するために標的部分を更に含んでもよい。例えば、米国特許第４５２２８１１号、米国特許第５３７４５４８号、米国特許第５４１６０１６号及び米国特許第５３９９３３１号；Ｒａｎａｄｅ ＶＶ、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １９８９、２９：６８５－６９４；Ｕｍｅｚａｗａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １９８８、１５３：１０３８－１０４４；Ｂｌｏｅｍａｎら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ １９９５、３５７：１４０－１４４；Ｏｗａｉｓ Ｍら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ １９９５、３９：１８０－１８４；Ｂｒｉｓｃｏｅら、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ １９９５、２６８：Ｌ３７４－３８０；Ｓｃｈｒｅｉｅｒら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９９４、２６９：９０９０－９０９８；Ｋｅｉｎａｎｅｎ及びＬａｕｋｋａｎｅｎら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ １９９４、３４６：１２３－１２６；並びにＫｉｌｌｉｏｎ及びＦｉｄｌｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ １９９４、４：２７３－２７９を参照。

【0273】

１０． 薬入れ／組み合わせ製品、キット
一態様では、本願に係る薬入れ（ｋｉｔ ｓｅｔ）は、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくは抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の医薬組成物と、別の抗癌剤及び／又は免疫調節剤とを含み、上記抗癌剤は、微小管破壊剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ＤＮＡインターカレータ、アルキル化剤、ホルモン療法剤、キナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ＨＥＲ３阻害剤、ＩＧＦＲ阻害剤及びＭｅｔ阻害剤を含むがこれらに限定されない、チロシンキナーゼ阻害剤）、受容体拮抗剤、腫瘍細胞アポトーシスの活性化剤（ＩＡＰ阻害剤、Ｂｃｌ２阻害剤、ＭＣ１１阻害剤、ＴＲＡＩＬ阻害剤、ＣＨＫ阻害剤を含むがこれらに限定されない）、又は任意の抗血管新生薬を含むが、これらに限定されず、上記免疫調節剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＣＤ４７、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４又はＴＧＦＲ阻害剤を含むが、これらに限定されない。

【0274】

別の態様では、本願は、有効量の本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、又は本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む医薬組成物を含むキットに関する。

【0275】

１１． 治療方法及び使用
一態様では、本願は、本明細書における抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の、疾患を治療するための医薬組成物又は製剤の製造における使用に関し、上記疾患は、増殖性疾患、感染性疾患又は免疫不全疾患を含むがこれらに限定されず、前記増殖性疾患は、癌及び他の細胞増殖性障害を含むがこれらに限定されない。

【0276】

或いは、本願は、増殖性疾患、感染性疾患又は免疫不全疾患を治療するための本明細書の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片、又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、又はそれらを含む医薬組成物に関する。

【0277】

いくつかの実施形態では、上記癌は、黒色腫、肺癌、結腸直腸癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頸癌、腎臓癌、肝臓癌、脳癌、食道癌、胆嚢癌、膵臓癌、胃癌、甲状腺癌、膀胱癌及びリンパ腫を含むが、これらに限定されない。

【0278】

いくつかの実施形態では、上記他の細胞増殖性障害は、高ガンマグロブリン血症（ｈｙｐｅｒｇａｍｍａｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、リンパ増殖性疾患、異常タンパク質血症（ｐａｒａｐｒｏｔｅｉｎｅｍｉａｓ）、紫斑病（ｐｕｒｐｕｒａ）、結節病、セザリー症候群（Ｓｅｚａｒｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、原発性マクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｒｓｔｒｏｅｍ ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、組織細胞増殖（Ｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ）、並びに腹部、骨、乳房、消化系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、副甲状腺、下垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺など）、眼、頭及び首、神経系、リンパ系、骨盤、皮膚、軟部組織、脾臓、及び泌尿生殖系に位置する任意の腫瘍形成（ｎｅｏｐｌａｓｉａ）以外の細胞増殖疾患を含むが、これらに限定されない。

【0279】

いくつかの実施形態では、上記免疫不全疾患は、ＨＩＶ陽性、免疫抑制疾患、慢性感染性疾患を含むが、これらに限定されない。

【0280】

別の態様では、本願は、宿主の免疫応答を改善することによって疾患、病状又は障害を治療する方法であって、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む医薬組成物、又は本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む薬入れ若しくはキットを対象に有効量で投与することによって、ＩＬ２Ｒβ／γ受容体を発現するエフェクター細胞（例えば、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞）を特異的に活性化して、疾患状態を改善することを含む方法に関する。

【0281】

別の態様では、本願は、免疫系を刺激する方法であって、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む医薬組成物、又は本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む薬入れ若しくはキットを対象に有効量で投与して免疫系を刺激することを含む方法に関し、免疫系を刺激することは、免疫機能の全般的な増加、Ｔ細胞機能の増加、Ｂ細胞機能の増加、リンパ球機能の回復、ＩＬ２Ｒβ／γ発現の増加、Ｔ細胞応答性の増加、ナチュラルキラー細胞活性又はリンホカイン活性化キラー細胞活性の増加、対象のインビボでのＣＤ８＋Ｔ細胞とＣＤ４＋Ｔ細胞との比率の増加などを含む。

【0282】

別の態様では、本願は、宿主免疫系に対する刺激が有益である疾患状態を治療するか、緩和するか又は予防する方法であって、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む医薬組成物、又は本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む薬入れ若しくはキットを上記対象に治療有効量で投与して、前記対象の細胞免疫応答を増強することにより疾患状態を改善することを含む方法に関し、上記疾患状態は、宿主免疫応答不足又は免疫不全を含み、更に上記疾患状態は、増殖性疾患又は感染性疾患、免疫不全疾患である。上記増殖性疾患は、癌及び他の細胞増殖性障害を含む。

【0283】

いくつかの実施形態では、上記癌は、扁平上皮癌（例えば、上皮系扁平上皮癌）、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、及び肺扁平上皮癌を含む）、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌（胃腸癌及び胃腸間質癌を含む）、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿道癌、肝腫瘍、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌又は子宮体癌、唾液腺癌、腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、表在拡大型黒色腫、悪性黒子型黒色腫、末端黒子型黒色腫、結節型黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（Ｎｏｎ－Ｈｏｄｇｋｉｎ ｌｙｍｐｈｏｍａ、ＮＨＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ケロイド疾患（母斑症）、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連する）及びメイグス症候群（Ｍｅｉｇｓ）に関連する異常な血管増殖、脳腫瘍及び脳癌、並びに頭頸部癌から選択される。

【0284】

いくつかの実施形態では、宿主免疫系に対する刺激が有益である疾患状態を治療するか、緩和するか又は予防する上記方法は、免疫チェックポイント阻害剤、抗原特異的免疫治療剤、化学療法剤、エピジェネティックス修飾剤、サイトカイン、成長因子、阻害剤、腫瘍抗原を標的とする抗体、腫瘍ワクチン、及び／又は他の癌療法を投与することを更に含む。一実施形態では、上記免疫チェックポイントは、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＣＤ４７、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４又はＴＧＦＲを含むが、これらに限定されない。一実施形態では、上記抗原特異的免疫治療剤は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、キメラ抗原受容体ＮＫ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ細胞）、及び／又は腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を含む。一実施形態では、上記他の癌療法は、外科手術、化学療法、細胞傷害性薬物、光線力学的療法、免疫調節又は放射線療法を含むが、これらに限定されない。

【0285】

一実施形態では、本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片又はｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質、又は本願の抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片若しくはｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を含む医薬組成物は、他の治療剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤、抗原特異的免疫治療剤、化学療法剤、エピジェネティックス修飾剤、サイトカイン、成長因子、阻害剤、腫瘍抗原を標的とする抗体、及び／又は腫瘍ワクチン）と組み合わせてもよく、かつ同時に、逐次的に、又は逆の順序で投与することができる。

【0286】

本願は、以下の実施例によって更に説明されるが、実施例は更なる限定として解釈されるべきではない。本願の明細書において引用された全ての図面及び全ての参考文献、特許及び特許出願の内容は、参照により本明細書に明確に組み込まれる。

【実施例】

【0287】

実施例１ ヒトＩＬ－２（ｈＩＬ－２）に対する改変
１．１ ｈＩＬ－２変異タンパク質の選別、構築及び発現
ＭＯＥ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ）ソフトウェアを用いた分析により、ｍＩＬ－２とｈＩＬ－２の三次構造がほぼ一致し、ラット抗マウスＩＬ－２抗体Ｓ４Ｂ６（Ｓ４Ｂ６）との重要な接触部位において、ｍＩＬ－２の第７８位のグリシン（ｍＩＬ－２／Ｇ７８）に対応するｈＩＬ－２の第６４位のリジン（ｈＩＬ－２／Ｋ６４）とｍＩＬ－２の第１０５位のアルギニン（ｍＩＬ－２／Ｒ１０５）に対応するｈＩＬ－２の第９０位のアスパラギン（ｈＩＬ－２／Ｎ９０）という２つの明らかな相違点のみが存在し、この２つの部位の相違点がｈＩＬ－２とＳ４Ｂ６抗体との結合を阻害する可能性があり、そのうち、ｈＩＬ－２／Ｎ９０部位が特に重要であり、それに対応するｍＩＬ－２／Ｒ１０５とＳ４Ｂ６には複数の相互作用力、例えば、塩結合と水素結合が存在し、ｈＩＬ－２／Ｋ６４とＳ４Ｂ６の軽鎖ＣＤＲ３が深刻な阻害／衝突（ｃｌａｓｈ）を形成することが示された。加えて、ｍＩＬ－２の第１１９位のグルタミン酸（ｍＩＬ－２／Ｅ１１９）と比較して、それに対応するｈＩＬ－２の第１０４位のメチオニン残基（ｈＩＬ－２／Ｍ１０４）は、側鎖が僅かに長いため、抗体の結合を阻害する可能性もある。

【0288】

上記分析結果に基づいて、Ｋ６４Ｇ及びＮ９０Ｒの２つの点変異を含むｈＩＬ－２変異タンパク質（該変異タンパク質は、ｈｉｓタグを有し、ｈＩＬ２－ＤＭ－ｈｉｓと命名する）と、Ｋ６４Ｇ、Ｎ９０Ｒ及びＭ１０４Ｅの３つの点変異を含むｈＩＬ－２変異タンパク質（該変異タンパク質は、ｈｉｓタグを有し、ｈＩＬ２－ＴＭ－ｈｉｓと命名する）をそれぞれ構築し、発現し、野生型マウスＩＬ－２（ｈｉｓタグを有し、ｍＩＬ２－ｈｉｓと命名する）を対照群とした。各ｈＩＬ－２変異タンパク質の構築、発現及び精製の方法は、遺伝子合成により野生型ｈＩＬ－２をコードする遺伝子配列を得て、ＰＣＲによりｈＩＬ－２にＫ６４Ｇ、Ｎ９０Ｒ及び／又はＭ１０４Ｅの部位特異的変異を行い、異なる部位特異的変異を含むｈＩＬ－２標的断片をｐｃＤＮＡ３．１発現ベクターに挿入し、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ、Ａ２９１２７）への一過性トランスフェクションを行い、無血清発現培養を行い、ＡＫＴＡ Ｐｕｒｅシステムによりニッケルカラム親和性クロマトグラフィー精製を行うことを含む。

【0289】

１．２ ｈＩＬ－２変異タンパク質とｃｈＳ４Ｂ６との結合動力学的検出
分子相互作用分析装置（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、型番Ｒ８）により上記３種類のＩＬ－２抗原とＳ４Ｂ６キメラ抗体（ｃｈＳ４Ｂ６、Ｓ４Ｂ６抗体の可変領域とヒトＩｇＧ１の定常領域で構成される）に対してそれぞれ結合動力学的検出を行った。具体的な方法は、１×ＰＢＳ溶液で検出対象抗体ｃｈＳ４Ｂ６を５μｇ／ｍＬに希釈し、２００μＬ／ウェルで９６ウェルの黒色プレート内に加え、その後、１×ＰＢＳ溶液で検出対象抗原を１００ｎＭから１：２で段階的に希釈した後、２００μＬ／ウェルで同一の９６ウェルの黒色プレート内に加え、検出対象サンプルが収容された９６ウェルの黒色プレートとプロテインＡ検出プローブを機器内に置き、プログラムを設定することにより、プロテインＡプローブを検出対象抗体ｃｈＳ４Ｂ６に結合した後、検出対象抗原との会合及び解離検出を行い、各回の会合と解離サイクルが完了した後、プローブを１０ｍＭのグリシン緩衝液（ｐＨ１．５）に浸漬してプローブを再生させ、次のサイクル検出を開始するように設定し、検出が完了した後、分析ソフトウェアを使用して対応する抗体と抗原との間の会合速度定数及び解離速度定数に対してフィッティング計算を行い、親和性定数（Ｋ_Ｄ）の値を得ることを含む。

【0290】

検出結果は、表５に示すように、ｈＩＬ－２を変異させて得られたｈＩＬ－２変異タンパク質がｃｈＳ４Ｂ６に結合できることを示す。

【0291】

【表5】

【0292】

１．３ ｈＩＬ－２変異タンパク質の生物学的活性の検出
それぞれＣＴＬＬ－２細胞（ＡＴＣＣから購入）とＮＫ－９２細胞（ＡＴＣＣから購入）を使用してｈＩＬ－２変異タンパク質の生物学的活性を検出し、検出方法は、１０００ｒｐｍで遠心分離して対数増殖期にあるＣＴＬＬ－２細胞又はＮＫ－９２細胞を収集した後、ｈＩＬ－２を加えていない完全培地で細胞を再懸濁し、１×１０^４個／ウェルの細胞を９６ウェルの細胞培養白色プレートに接種し、ｈＩＬ－２を加えていない完全培地で検出対象サンプルｈＩＬ－２変異タンパク質（ｈＩＬ２－ＤＭ－ｈｉｓ及びｈＩＬ２－ＴＭ－ｈｉｓを含む）と、対照群サンプルｍＩＬ２－ｈｉｓ及びｈＩＬ－２（Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎ）を５００ｎＭ（ＣＴＬＬ－２細胞に使用する）又は５０ｎＭ（ＮＫ－９２細胞に使用する）に希釈し、１：５で段階的に希釈し、希釈した検出対象サンプルを、２０μＬ／ウェルで、細胞を含有する９６ウェルの細胞培養白色プレートに加え、タッピングして均一に混合し、細胞培養プレートを３７℃／５％ＣＯ_２インキュベーターに置いて３日間静置培養した後、細胞培養プレートをインキュベーターから取り出し、細胞培養プレートを室温まで降温させた後、各ウェルに検出試薬Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ－Ｌｉｔｅ ２．０（Ｎａｎｊｉｎｇ Ｖａｚｙｍｅ）を加え、細胞培養プレートを振とうして１０分間静置した後、多機能マイクロプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ）で検出し、各ウェルの化学発光値を読み取り、サンプルウェルと対照ウェルとの比を計算することを含む。

【0293】

検出結果については、図１及び表６に示すように、ｈＩＬ２－ＤＭ－ｈｉｓ及びｈＩＬ２－ＴＭ－ｈｉｓは、いずれもＣＴＬＬ－２細胞及びＮＫ－９２細胞の増殖を促進でき、かつ増殖活性（ＥＣ５０値）は、対照群ｈＩＬ－２に同等であり、これは、本願のｈＩＬ－２変異タンパク質がいずれもｈＩＬ－２の生物学的活性を保持したことを示す。

【0294】

【表6】

【0295】

これにより、野生型ｈＩＬ－２における、ＩＬ－２抗原と上記ＩＬ－２抗体との結合部位のアミノ酸である重要な部位の変異により、本願は、ｍＩＬ－２抗体Ｓ４Ｂ６に結合でき、かつｈＩＬ－２の生物学的活性を保持するｈＩＬ－２変異タンパク質を得た。

【0296】

実施例２ ラット抗マウスＩＬ－２抗体Ｓ４Ｂ６に対するヒト化改変
ラット抗マウスＩＬ－２抗体Ｓ４Ｂ６に対する宿主の免疫応答を減少させるために、Ｓ４Ｂ６をヒト化改変することにより、ヒトに応用することができる。

【0297】

２．１ ＣＤＲ移植
ＣＤＲ移植方法を使用してＳ４Ｂ６抗体に対してヒト化改変を行った。具体的には、Ｓ４Ｂ６アミノ酸配列に基づいて、ＭＯＥソフトウェア分析推奨テンプレートに従ってＣＤＲ移植を行い、即ち、Ｓ４Ｂ６の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域とヒト免疫グロブリン遺伝子データベースとに対してＢｌａｓｔ比較を行い、Ｓ４Ｂ６抗体と相同性が最も高いヒト生殖系列（ｇｅｒｍｌｉｎｅ）ＩＧＶＨ及びＩＧＶＫをヒト化改変のための受容体フレームワークとして選択し、Ｓ４Ｂ６抗体の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域のＣＤＲを、選択したヒト生殖系列フレームワーク領域に移植し、表７に示す４つのヒト化ｈＳ４Ｂ６抗体のアミノ酸配列を得た。

【0298】

【表7】

【0299】

表７に示す各ヒト化抗体をコードする遺伝子配列を合成し、各コード配列をそれぞれｐｃＤＮＡ３．１発現ベクターに挿入し、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ細胞への一過性トランスフェクションを行って無血清発現培養を行い、ＡＫＴＡ ｐｕｒｅシステムによりプロテインＡ親和性クロマトグラフィー精製を行い、表７に示すヒト化抗体を得た後、それぞれＥＬＩＳＡとＦｏｒｔｅＢｉｏを使用してｈＳ４Ｂ６ヒト化抗体と抗原ｍＩＬ２－ｈｉｓ又はｈＩＬ２－ｈｉｓとの結合活性及び結合親和性を動力学的に検出した。

【0300】

２．１．１ ＥＬＩＳＡによるｈＳ４Ｂ６ヒト化抗体と抗原ｍＩＬ２－ｈｉｓ又はｈＩＬ２－ｈｉｓとの結合活性の検出
ＥＬＩＳＡ検出方法は、１×ＰＢＳ緩衝液でヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）を１μｇ／ｍＬに希釈し、１００μＬ／ウェルでＥＬＩＳＡプレートに加え、４℃で一晩インキュベートし、ＰＢＳでプレートを洗浄した後、各ウェルにブロッキング溶液（１％ＢＳＡを含むＰＢＳＴ）を加え、室温で静置して１時間インキュベートし、ＰＢＳＴでプレートを洗浄した後、最終濃度が１３．３ｎＭである検出対象サンプル（ｈＳ４Ｂ６ヒト化抗体及び対照キメラ抗体ｃｈＳ４Ｂ６を含む）を各ウェルに加え、室温で２時間静置してインキュベートし、ＰＢＳＴでプレートを洗浄した後、１００μＬの段階希釈後の異なる濃度のＩＬ－２抗原（ｍＩＬ２－ｈｉｓ又はｈＩＬ２－ｈｉｓ）を含むブロッキング溶液を各ウェルに加え、室温で静置して２時間インキュベートし、ＰＢＳＴでプレートを洗浄した後、１：１００００でブロッキング溶液内に希釈したＨＲＰ－標識抗６×Ｈｉｓタグ二次抗体（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ）を各ウェルに加え、室温で静置して１時間インキュベートし、ＰＢＳＴでプレートを洗浄した後、ＴＭＢ発色液（Ｔｈｅｒｍｏ）を各ウェルに加え、室温で暗所で３－１０分間インキュベートし、停止液（２Ｍ ＨＣｌ）を各ウェルに加えた後、多機能マイクロプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ）でＯＤ（４５０～５７０）値を読み取ることを含む。

【0301】

検出結果については、図２及び表８に示すように、初期ヒト化を経た後のＩＬ－２抗体において、ヒト化抗体Ｈ６Ｋ３とｍＩＬ－２との結合活性は、ｃｈＳ４Ｂ６に同等であり、Ｈ１Ｋ１及びＨ６Ｋ７とｍＩＬ－２との結合活性は、ｃｈＳ４Ｂ６より僅かに低く、これにより、この３つのヒト化抗体がマウス抗体Ｓ４Ｂ６とｍＩＬ－２との結合活性を保持し、Ｈ６Ｋ３がＳ４Ｂ６とｍＩＬ－２との結合活性を最大限保持し、Ｈ１Ｋ１とＨ６Ｋ７がそれに続いていることが示唆されている。

【0302】

【表8】

【0303】

２．１．２ ｈＳ４Ｂ６ヒト化抗体と抗原ｍＩＬ２－ｈｉｓとの結合動力学的検出
実施例１における１．２に記載の方法でｈＳ４Ｂ６ヒト化抗体及び対照キメラ抗体ｃｈＳ４Ｂ６と抗原ｍＩＬ２－ｈｉｓとの結合動力学を検出した。結果については、表９に示すように、初期ヒト化を経た後の抗ＩＬ－２抗体において、Ｈ６Ｋ３及びＨ６Ｋ７がいずれも高親和性でｍＩＬ－２に結合することができ、Ｈ１Ｋ１及びＨ３Ｋ３がいずれも中親和性でｍＩＬ－２に結合することにより、初期ヒト化後のｈＳ４Ｂ６抗体がいずれもｍＩＬ－２に特異的に結合することができることが示されている。

【0304】

【表9】

【0305】

２．１．３ ヒト化抗体Ｈ６Ｋ３と抗原ｈＩＬ－２変異タンパク質との結合動力学的検出
実施例１における１．２に記載の方法でヒト化抗体Ｈ６Ｋ３と抗原ｈＩＬ－２変異タンパク質（ｈＩＬ２－ＤＭ－ｈｉｓ又はｈＩＬ２－ＴＭ－ｈｉｓ）との結合動力学を検出した。結果については、表１０に示すように、ヒト化抗体Ｈ６Ｋ３と２つのｈＩＬ－２変異タンパク質がいずれも良好な結合動力学的特徴を有し、かつＨ６Ｋ３とｈＩＬ２－ＤＭ－ｈｉｓ及びｈＩＬ２－ＴＭ－ｈｉｓとの結合親和性に有意な差がなかった。これに対して、図２に示すように、ヒト化抗体Ｈ６Ｋ３は、ｈＩＬ－２に実質的に結合せず、これにより、上記抗原ｈＩＬ－２変異タンパク質が抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片に結合する能力を獲得することが示されている。

【0306】

【表10】

【0307】

２．２ さらなるヒト化
上記抗体のヒト化度を更に向上させるために、オンラインウェブサイトａｂＹｓｉｓ（ｈｔｔｐ：／／ａｂｙｓｉｓ．ｏｒｇ／ａｂｙｓｉｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）及びＭＯＥソフトウェアにより、ヒト化抗体Ｈ６Ｋ３の軽鎖、重鎖のＣＤＲ配列における比較的低頻度のアミノ酸残基及びＦＲ領域におけるマウス由来のアミノ酸残基を分析し、さらなるヒト化研究を行った。さらなるヒト化のための変異部位を表１１に示す。

【0308】

【表11】

【0309】

実施例２における２．１に記載の方法に従って、表１１における１２個のさらなるヒト化抗体サンプルを構築し、発現し、さらなるヒト化により改変された各抗体は、いずれも高い発現量を有する。更に精製して１２個のさらなるヒト化抗体サンプルを得た後、実施例１における１．２に記載の方法でさらなるヒト化抗体と抗原ｈＩＬ２－ＤＭ－ｈｉｓとの結合動力学を検出した。検出結果については、表１２に示すように、さらなるヒト化抗体Ｈ６Ｋ３－ｈｕ０４、Ｈ６Ｋ３－ｈｕ０６、Ｈ６Ｋ３－ｈｕ０７、Ｈ６Ｋ３－ｈｕ０８、Ｈ６Ｋ３－ｈｕ０９、Ｈ６Ｋ３－ｈｕ１０及びＨ６Ｋ３－ｈｕ１２は、いずれもｈＩＬ２－ＤＭ－ｈｉｓに結合することができ、かつ良好な結合動力学的特徴を有し、これにより、これらのさらなるヒト化抗体がｈＩＬ－２変異タンパク質ｈＩＬ２－ＤＭに特異的に結合できることが示されている。

【0310】

【表12】

【0311】

表１２に示す結果によれば、Ｈ６Ｋ３－ｈｕ０４（変異部位がＬ３４Ｍである）、Ｈ６Ｋ３－ｈｕ０７（変異部位がＮ６５Ｇである）及びＨ６Ｋ３－ｈｕ０８（変異部位がＮ７６Ｄである）の変異の組み合わせを、さらなるヒト化抗体の重鎖可変領域として選択し、Ｈ６Ｋ３－ｈｕ０９（変異部位がＤ５６Ｓである）及びＨ６Ｋ３－ｈｕ１２（変異部位がＹ７１Ｆである）の組み合わせを軽鎖可変領域として選択し、かつこれらの変異の組み合わせを含むヒト化抗体をｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）と命名し、該ヒト化抗体も、産生及び製造過程におけるアスパラギン酸異性化の潜在的なリスクを有意に低減することができる。

【0312】

実施例２における２．１に記載の方法に従って、ｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）抗体サンプルを構築し、発現して精製した後、実施例１における１．２に記載の方法でｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）と抗原ｈＩＬ２－ＤＭ－ｈｉｓ、ｈＩＬ２－ＴＭ－ｈｉｓ又は対照ｍＩＬ２－ｈｉｓとの結合動力学を検出した。検出結果については、表１３に示すように、ｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）抗体は、より高いレベルのヒト化を有するだけでなく、ｈＩＬ－２変異タンパク質に特異的に結合する生物学的特性を保持した。

【0313】

【表13】

【0314】

実施例３ 抗体ｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）の親和性成熟
抗体ｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）とｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性を更に増強するために、分析されたＳ４Ｂ６：ｍＩＬ２抗体－抗原複合体の結晶構造に基づいて、ＭＯＥソフトウェアにより抗体ｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）の重鎖ＣＤＲ領域及び軽鎖ＣＤＲ領域における部位特異的変異の部位をシミュレーション計算した。実施例２における２．１に記載の方法に従って、重鎖ＣＤＲ領域又は軽鎖ＣＤＲ領域に単点変異を有する抗体ｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）サンプルを構築し、発現し、実施例１における１．２に記載の方法で、ｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）親和性成熟単点変異タンパク質と抗原ｈＩＬ２－ＤＭ－ｈｉｓとの結合動力学を検出することにより、重鎖親和性成熟変異Ｅ５３Ｄ、Ｖ９５Ｉ、Ｙ９８Ｌ又はＳ１００Ｔ、及び軽鎖親和性成熟変異Ｄ２８Ｎ、Ｄ２８Ｈ、Ｄ２８Ｌ、Ｄ２８Ｙ、Ｇ３０Ｉ、Ｇ３０Ｓ、Ｇ３０Ｔ、Ｓ５０Ｑ又はＴ５２Ｇを含むｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）は、いずれも母体抗体ｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）とｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性より優れている結合親和性を示すことが判明した。

【0315】

更に上記重鎖ＣＤＲ領域と軽鎖ＣＤＲ領域の単点変異を組み合わせ、実施例２における２．１に記載の方法に従って、親和性成熟ヒト化抗体サンプルを構築し、発現し、実施例１における１．２に記載の方法で、ｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）及び／又はその親和性成熟抗体と抗原ｈＩＬ２－ＤＭ－ｈｉｓとの結合動力学を検出し、検出結果を表１４に示す。母体抗体ｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）の軽鎖ＣＤＲ領域での変異Ｄ２８Ｙ、若しくはＤ２８Ｙ／Ｓ５０Ｑ、若しくはＤ２８Ｙ／Ｇ３０Ｓ、若しくはＤ２８Ｙ／Ｇ３０Ｓ／Ｓ５０Ｑを選択するか、又はそれと上記重鎖ＣＤＲ領域での変異との組み合わせを選択し、得られた親和性成熟抗体は、いずれもｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性を有意に向上させ、かつｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）親和性成熟抗体とｈＩＬ－２変異タンパク質との結合親和性（解離平衡定数Ｋ_Ｄ）が１０^－９Ｍ、更には１０^－１０Ｍに達することができる。

【0316】

【表14(1)】

【表14(2)】

【0317】

分子相互作用分析装置（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、型番Ｑｋｅ）によりｈＩＬ２－ＤＭを抗体Ｋ２Ｇ１１に結合して複合体を形成した後にｈＩＬ２－ＤＭとＩＬ２Ｒα及びＩＬ２Ｒβとの結合活性を検出し、具体的な方法は、１×ＰＢＳ溶液で検出対象抗体Ｋ２Ｇ１１を５μｇ／ｍＬに希釈し、２００μＬ／ウェルで９６ウェルの黒色プレートに加えた後、１×ＰＢＳ溶液で抗原ｈＩＬ２－ＤＭを１００ｎＭに希釈し、２００μＬ／ウェルで上記９６ウェルの黒色プレートに加え、１×ＰＢＳ溶液で受容体タンパク質ＩＬ２Ｒα及びＩＬ２Ｒβを１０００ｎＭに希釈し、１：２で段階的に希釈した後、２００μＬ／ウェルで上記９６ウェルの黒色プレートに加え、検出対象サンプルが収容された９６ウェルの黒色プレート及びプロテインＡ検出プローブを機器内に置き、プログラムを設定することにより、プロテインＡプローブを検出対象抗体Ｋ２Ｇ１１に結合した後、抗原ｈＩＬ２－ＤＭと飽和するまで結合し、更に順に受容体タンパク質ＣＤ２５及びＣＤ１２２と会合－解離検出を行い、各回の会合－解離サイクルが完了した後、プローブを１０ｍＭのグリシン緩衝液（ｐＨ１．５）に浸漬してプローブを再生させ、次のサイクル検出を開始することを含む。

【0318】

検出結果については、図３に示すように、抗体Ｋ２Ｇ１１がｈＩＬ２－ＤＭとｈＩＬ２Ｒαとの結合をブロックできるが（図３Ａ）、ｈＩＬ２Ｒβとの結合に影響を与えない（図３Ｂ）ことが示されている。

【0319】

実施例４ ＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の構築及び生物学的活性検出
４．１ リンカーの選別
ＭＯＥソフトウェアにより、ｈＩＬ２－ＤＭを抗体ｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）に連結する位置、リンカーのタイプ及び長さを決定し、並びにリンカーがｈＩＬ２－ＤＭとｈＩＬ２Ｒβ／γとの結合活性に影響を与えるか否かをシミュレーション分析した結果、（Ｇ４Ｓ）_４、（Ｇ４Ｓ）_３、（ＧＡＦ）_２配列をリンカーとして選択した場合、構築した融合タンパク質の内部構造の安定性を保証できるだけでなく、上記リンカーがｈＩＬ２－ＤＭのＣ末端及び抗体の重鎖Ｎ末端に連結される場合、ｈＩＬ２－ＤＭとｈＩＬ２Ｒβとの結合への影響が小さく、上記リンカーがｈＩＬ２－ＤＭのＣ末端及び抗体の軽鎖Ｎ末端に連結される場合、ｈＩＬ２－ＤＭとｈＩＬ２Ｒβとの結合への影響が大きく、かつ上記融合タンパク質の収量に影響を与え、また、（Ｇ４Ｓ）_４配列のリンカーが低免疫原性を更に有することが示されている。したがって、４つのタンデムＧ４Ｓ配列を有するリンカーを、抗体の重鎖Ｎ末端にｈＩＬ２－ＤＭを融合することによってＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質を構築するために選択した。

【0320】

４．２ ジスルフィド結合の選別
構築した融合タンパク質における抗原－抗体複合体がインビボで安定した結合状態にあり、解離せず、かつ高親和性ＩＬ２ＲによってＩＬ－２に競合的に結合できないことを確保するために、ＭＯＥソフトウェアによってＳ４Ｂ６／ｍＩＬ－２抗原－抗体複合体の結晶構造における各アミノ酸残基間の距離を計算し、かつ空間的距離が１０オングストローム（１ｎｍ）の範囲内にある一部のアミノ酸残基を選択してシステインに変異させることにより、ｈＩＬ－２変異タンパク質とｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）抗体との間がジスルフィド結合を形成することによって更に強固に結合する。表１５は、ｈＩＬ－２変異タンパク質とｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）抗体との間のジスルフィド結合形成部位のアミノ酸変異部位を示す。ジスルフィド結合を含む構築物構造を図４に示す。

【0321】

【表15】

【0322】

表１５における構築物を実施例２における２．１に記載の方法に従って構築し、発現し精製した後、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析により、安定した単量体を形成できるｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質ＩＣ－Ｃｙ０７（即ち、Ｈ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ０７）及びＩＣ－Ｃｙ０８（即ち、Ｈ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ０８）を選択して更なる研究を行った。

【0323】

４．２．１ ＥＬＩＳＡによるＩＣ－Ｃｙ０７及びＩＣ－Ｃｙ０８とｈＩＬ２α（ｈＣＤ２５）及びｈＩＬ２β（ｈＣＤ１２２）との結合活性のそれぞれの検出
実施例２における２．１．１に記載のＥＬＩＳＡ検出方法に従って、抗原をそれぞれｈＣＤ２５（Ａｃｒｏ）とｈＣＤ１２２（Ａｃｒｏ）に置換し、ＩＣ－Ｃｙ０７及びＩＣ－Ｃｙ０８とｈＣＤ２５及びｈＣＤ１２２との結合活性をそれぞれ検出し、ｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃを対照群とした。ｈＣＤ２５との結合活性は、図５Ａに示すとおりであり、対照ｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃと比較して、ＩＣ－Ｃｙ０８は、ｈＣＤ２５にほとんど結合しないのに対して、ＩＣ－Ｃｙ０７は、わずかに低下するｈＣＤ２５結合活性のみを有し、ｈＣＤ１２２との結合活性は、図５Ｂに示すとおりであり、対照群ｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃと比較して、ＩＣ－Ｃｙ０８及びＩＣ－Ｃｙ０７とｈＣＤ１２２との結合活性は、いずれもある程度増強され、該結果は、文献報告と一致し、即ち、Ｓ４Ｂ６と結合した後にｍＩＬ－２のＣ－ヘリックスが変形してｍＣＤ１２２との結合を増強することを示唆する。また、ＩＣ－Ｃｙ０８とｈＣＤ１２２との結合活性は、ＩＣ－Ｃｙ０７とｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃとの結合活性より有意に高かった。

【0324】

以上より、ＩＣ－Ｃｙ０８及びＩＣ－Ｃｙ０７は、いずれもｈＣＤ１２２に対する増強された結合活性を有し、かつＩＣ－Ｃｙ０８は、ｈＣＤ２５に結合する能力をほぼ完全に喪失し、これは、ＩＣ－Ｃｙ０８におけるｈＩＬ－２変異タンパク質のα受容体結合部位が抗体融合タンパク質分子の内部に完全に埋め込まれ、解離しにくいため、ｈＣＤ２５に結合できないことを更に示している。

【0325】

４．２．２ ＩＣ－Ｃｙ０７及びＩＣ－Ｃｙ０８の生物学的活性の検出
実施例１における１．３に記載の方法に従って、ＣＴＬＬ－２細胞とＮＫ－９２細胞の増殖実験によりそれぞれＩＣ－Ｃｙ０７とＩＣ－Ｃｙ０８の生物学的活性を検出し、対照群は、野生型ｈＩＬ－２である。検出結果については、図６に示すように、ＣＤ２５を高発現するＣＴＬＬ－２細胞の増殖を促進するＩＣ－Ｃｙ０８の活性（ＥＣ５０値）は、対照群ｈＩＬ－２の活性より有意に低く（図６Ａ及び表１６）、ＣＤ２５を低発現するＮＫ－９２細胞の増殖を促進するＩＣ－Ｃｙ０８の活性は、対照群ｈＩＬ－２の活性に同等であり（図６Ｂ及び表１６）、ＩＣ－Ｃｙ０７は、ＣＴＬＬ－２細胞に対する増殖活性が対照群ｈＩＬ－２に同等であり（図６Ａ及び表１６）、ＮＫ－９２細胞に対する増殖活性が対照群ｈＩＬ－２より僅かに高い（図６Ｂ及び表１６）。

【0326】

【表16】

【0327】

４．２．３ フローサイトメトリーによるＩＣ－Ｃｙ０８のＣＴＬＬ－２細胞におけるＩＬ－２シグナル伝達経路に対する活性化作用の検出
ＩＬ－２とＩＬ２Ｒとの結合により、細胞内ＪＡＫキナーゼの活性化を誘導し、更にシグナル伝達及び転写活性化因子５（Ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ５、ＳＴＡＴ５）をリン酸化して活性化し、最終的に細胞プロセス（例えば、増殖、生存及びアポトーシス）に関与する様々な遺伝子の発現を調節することができる。高親和性ＩＬ２Ｒを発現するＣＴＬＬ２細胞におけるＳＴＡＴ５のリン酸化状況を検出することによって、ジスルフィド結合を含むＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質ＩＣ－Ｃｙ０８のＩＬ－２シグナル経路に対する活性化作用を評価した。具体的な方法は、遠心分離によりＣＴＬＬ－２細胞を収集した後、完全培地で細胞を再懸濁し、３７℃／５％ＣＯ_２インキュベーターに置いて４時間静置して飢餓培養し、遠心分離により細胞を収集し、再び完全培地で細胞を再懸濁し、５×１０^５個／ウェルの細胞を９６ウェルの細胞培養Ｕ型プレートに播き、完全培地で１：５の割合で検出対象サンプル（ＩＣ－Ｃｙ０８及び対照群野生型ｈＩＬ－２）を段階的に希釈し、ウェルあたり５０μＬの体積で上記細胞培養プレートに加えた後、細胞培養プレートを３７℃／５％ＣＯ_２インキュベーターに置いて１５～３０分間静置培養し、３７℃で予熱した固定緩衝液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を各ウェルに加え、十分に均一に混合した後、３７℃で１５～３０分間静置し、遠心分離により細胞を収集し、ＦＡＣＳ緩衝液（１％ＢＳＡを含む１×ＰＢＳ）で細胞を２回洗浄し、－２０℃で予冷したＴｒｕｅ－Ｐｈｏｓ Ｐｅｒｍ緩衝液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を各ウェルに加え、十分に均一に混合した後、－２０℃で１時間静置し、遠心分離により細胞を収集し、ＦＡＣＳ緩衝液で細胞を２回洗浄した後、ＦＡＣＳ緩衝液に１：５０で希釈した１００μＬのａｎｔｉ－ｐＳＴＡＴ５（Ｔｙｒ６９４）－ＰＥ抗体（Ｔｈｅｒｍｏ）を各ウェルに加え、細胞を再懸濁した後、氷上で４０分間インキュベートし、遠心分離により細胞を収集し、ＦＡＣＳ緩衝液で細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液で細胞を再懸濁してフローサイトメーターに置いて検出することを含む。

【0328】

検出結果については、図７及び表１７に示すように、対照群ｈＩＬ－２に対して、ＣＴＬＬ－２細胞は、ＩＣ－Ｃｙ０８の作用下で有意に低下したｐＳＴＡＴ５レベルを示し、これにより、ジスルフィド結合を含む複合体構築物ＩＣ－Ｃｙ０８分子におけるｈＩＬ－２変異タンパク質のα受容体結合部位が抗体に部分的に安定して結合して分子表面に露出しないため、ｈＩＬ－２変異タンパク質とＣＴＬＬ－２細胞表面の高親和性ＩＬ２Ｒとの結合が有意に低下することにより、細胞内のＩＬ－２シグナル経路の伝達が低下することを更に示している。

【0329】

【表17】

【0330】

実施例５ ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質構造の更なる最適化
５．１ Ｓ４Ｂ６抗体及びＣＤ１２２の立体障害分析及び最適化
Ｓ４Ｂ６／ｍＩＬ－２抗原－抗体複合体の結晶構造（ＰＤＢ：４ＹＵＥ）を分析することによって、抗体軽鎖の第２７位のＧｌｎ（ＬＣＤＲ１に位置する）がＣＤ１２２の第４３位のＡｒｇと立体障害を形成する可能性があり、更に本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質におけるｈＩＬ－２とｈＣＤ１２２との結合を抑制することを発見した。該立体障害が実際に存在するか否か、かつＩＣ－Ｃｙ０８の生物学的活性に影響を与えるか否かを検出するために、ＩＣ－Ｃｙ０８抗体軽鎖を点変異させた一連の変異体を設計して構築し、発現し、更に抗体軽鎖の第１位のＡｓｐを変異させることにより（表１８に示す）、これらの変異タンパク質とｈＣＤ１２２との結合活性及び生物学的活性を評価した。

【0331】

【表18】

【0332】

５．１．１ ＥＬＩＳＡによるＩＣ－Ｃｙ０８変異体とｈＩＬ２Ｒα（ｈＣＤ２５）との結合活性及びＩＣ－Ｃｙ０８変異体とｈＩＬ２Ｒβ（ｈＣＤ１２２）との結合活性のそれぞれの検出
実施例２における２．１．１に記載のＥＬＩＳＡ検出方法に従って、抗原をｈＣＤ２５（Ａｃｒｏ）とｈＣＤ１２２（Ａｃｒｏ）にそれぞれ置換し、表１８におけるＩＣ－Ｃｙ０８変異体とｈＩＬ２Ｒα（ｈＣＤ２５）との結合活性及びＩＣ－Ｃｙ０８変異体とｈＩＬ２Ｒβ（ｈＣＤ１２２）との結合活性をそれぞれ検出し、ｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃを対照群とした。ＩＣ－Ｃｙ０８変異体とｈＣＤ２５との結合活性は、図８Ａに示すとおりであり、各変異タンパク質は、母体ＩＣ－Ｃｙ０８と比較してｈＣＤ２５との結合活性が有意に変化せず、対照群ｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃと比較して有意に低下したｈＣＤ２５結合活性を有する。しかしながら、変異体ＩＣ－Ｃｙ０８－ＱＳ、ＩＣ－Ｃｙ０８－ＱＧ、ＩＣ－Ｃｙ０８－ＱＫ及びＩＣ－Ｃｙ０８－ＱＲは、母体ＩＣ－Ｃｙ０８に対してある程度低下したｈＣＤ１２２結合活性を示し、かつ対照群ｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃに同等であるｈＣＤ１２２結合活性を有し、他の３つの変異体ＩＣ－Ｃｙ０８－ＤＥ、ＩＣ－Ｃｙ０８－ＱＤ及びＩＣ－Ｃｙ０８－ＱＥは、母体ＩＣ－Ｃｙ０８に同等であるｈＣＤ１２２結合活性を有し、かつ対照群ｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃより増加したｈＣＤ１２２結合活性を有する（図８Ｂ）。

【0333】

５．１．２ ＩＣ－Ｃｙ０８変異体の生物学的活性の検出
実施例１における１．３に記載の方法に従って、ＣＴＬＬ－２細胞とＮＫ－９２細胞の増殖実験によりＩＣ－Ｃｙ０８変異体の生物学的活性をそれぞれ検出し、対照群は、野生型ｈＩＬ－２である。検出結果については、図９に示すように、７つのＩＣ－Ｃｙ０８変異体は、いずれも母体ＩＣ－Ｃｙ０８と類似のＣＴＬＬ－２細胞（図９Ａ及び表１９）及びＮＫ－９２細胞（図９Ｂ及び表１９）に対する増殖促進活性を保持し、かつ対照群ｈＩＬ－２と比較して、７つのＩＣ－Ｃｙ０８変異体及び母体ＩＣ－Ｃｙ０８は、いずれも有意に低下したＣＴＬＬ－２細胞に対する増殖促進活性（図９Ａ及び表１９）及び同等のＮＫ－９２細胞に対する増殖活性（図９Ｂ及び表１９）を有する。

【0334】

【表19】

【0335】

ＩＣ－Ｃｙ０８－ＱＳ、ＩＣ－Ｃｙ０８－ＱＧ、ＩＣ－Ｃｙ０８－ＱＫ及びＩＣ－Ｃｙ０８－ＱＲは、母体ＩＣ－Ｃｙ０８と比較して低下したｈＣＤ１２２結合活性を示すが、ＣＴＬＬ－２細胞及びＮＫ細胞に対する増殖活性がＩＣ－Ｃｙ０８と同等であり、即ち、ＣＴＬＬ－２細胞及びＮＫ細胞に対する増殖活性が低下しなかった。これにより、ＩＣ－Ｃｙ０８分子における抗体の軽鎖の第２７位のＧｌｎは、ｈＩＬ２とｈＣＤ１２２との結合活性及びその機能活性に有意な影響を与えないことが示されている。

【0336】

また、上記ＩＣ－Ｃｙ０８変異体サンプルを発現して製造した場合、ＩＣ－Ｃｙ０８－ＱＤ、ＩＣ－Ｃｙ０８－ＱＥ、ＩＣ－Ｃｙ０８－ＱＳ及びＩＣ－Ｃｙ０８－ＱＧの発現量は、母体ＩＣ－Ｃｙ０８と比較して、いずれも数倍増加していることが判明した（表２０）。

【0337】

【表20】

【0338】

５．２ ｈＩＬ－２アミノ酸配列の最適化
ｈＩＬ－２アミノ酸配列を分析することにより、その第３位のトレオニン残基は、真核細胞の発現過程においてグリコシル化修飾が発生し、かつ第１２５位に遊離システイン残基が存在し、下流産生及び製造過程においてジスルフィド結合ミスマッチが発生して凝集する可能性があり、製品の品質制御に不利であることが判明した。したがって、Ｎ末端の最初の３つのアミノ酸を削除し、ｈＩＬ－２の第１２５位のシステイン残基を変異させる方式を使用して、これらの部位による悪影響を除去する。表２１に示すように、本願は、ｈＩＬ－２－ＤＭのＮ末端の最初の３つのアミノ酸を削除し、第１２５位のシステインに対して異なるアミノ酸置換を行う一連のＩＣ－Ｃｙ０８変異体を設計した。

【0339】

【表21】

【0340】

実施例２における２．１に記載の方法に従って、表２１における各ＩＣ－Ｃｙ０８変異体を発現し、精製し、かつ実施例１における１．３に記載の方法に従って、そのＣＴＬＬ－２とＮＫ－９２細胞に対する増殖活性をそれぞれ検出した。実験結果については、図１０に示すように、各ＩＣ－Ｃｙ０８変異体は、ＣＴＬＬ－２細胞（図１０Ａ及び表２２）及びＮＫ－９２細胞（図１０Ｂ及び表２２）に対する増殖活性が母体ＩＣ－Ｃｙ０８に同等であり、かつ対照群ｈＩＬ－２と比較して、有意に低下したＣＴＬＬ－２細胞に対する増殖活性（図１０Ａ及び表２２）及び僅かに低下したＮＫ－９２細胞に対する増殖活性（図１０Ｂ及び表２２）を有する。これにより、ｈＩＬ－２のＮ末端の最初の３つのアミノ酸を削除し、第１２５位のシステインを変異させることにより、活性に有意な影響を与えない前提で該分子の産生及び製造過程における潜在的なリスクを解決できることが示されている。

【0341】

【表22】

【0342】

５．３ ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質における抗体部分の重鎖定常領域の改変
本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質のインビボでの半減期を延長し、抗体Ｆｃ領域によって媒介されるエフェクター機能が標的細胞又は非標的細胞に対して殺傷作用をもたらすことを防止するために、上記分子中の抗体部分の重鎖定常領域に対して工学的改変を行った。

【0343】

５．３．１ 抗体重鎖定常領域に対する等電点（ｐＩ）工学的改変
本願の融合タンパク質のインビボでの半減期を延長するために、ＩＣ－Ｃｙ０８の抗体部分の重鎖ｈＩｇＧ１定常領域にＮ２０３Ｄ／Ｋ２７４Ｑ／Ｑ４１９Ｅ（ＥＵ番号付け）変異（「ｐＩ変異」と定義する）を導入した。

【0344】

５．３．２ 抗体Ｆｃ断片に対する工学的改変
抗体Ｆｃ領域によって媒介されるエフェクター機能が本願の融合タンパク質の標的細胞又は非標的細胞に対して殺傷作用をもたらすことを防止するために、Ｆｃ領域にＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ（ＥＵ番号付け）変異（「ＴＭ変異」と定義する）を導入することによって、Ｆｃ領域とＦｃγＲ及びＣ１ｑとの結合を低下させて、Ｆｃによって媒介されるエフェクター機能を除去した。

【0345】

５．３．３ 抗体部分の重鎖定常領域のｐＩ変異及びＴＭ変異を経た後のＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の生物学的活性
実施例２における２．１に記載の方法に従って、上記抗体部分の重鎖定常領域のｐＩ変異及びＴＭ変異を経た後のＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質ＩＣ－Ｃｙ０８－ｐＩＴＭを発現し、精製し、実施例１における１．３に記載の方法に従って、そのＣＴＬＬ－２とＮＫ－９２細胞に対する増殖活性をそれぞれ検出した。実験結果については、図１１に示すように、ＩＣ－Ｃｙ０８－ｐＩＴＭは、母体ＩＣ－Ｃｙ０８とほぼ同じであるＣＴＬＬ－２（図１１Ａ及び表２３）及びＮＫ－９２（図１１Ｂ及び表２３）細胞に対する増殖促進活性を有する。

【0346】

【表23】

【0347】

実施例６ ｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）親和性成熟抗体で構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質及びその生物学的活性の検出
６．１ ジスルフィド結合の選別
ｈＩＬ２－ＤＭへの結合を有意に増強するｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）親和性成熟抗体Ｋ２Ｇ１１を選別して得た後、実施例４に記載の方法に従ってｈＩＬ２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ）とＫ２Ｇ１１との抗原－抗体融合タンパク質を構築して、構造がより安定した候補分子を得る。融合タンパク質の構築では、（Ｇ４Ｓ）_４をリンカーとして選択し、かつｈＩＬ２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ）のＣ末端を介してＫ２Ｇ１１抗体の重鎖のＮ末端に連結した。ジスルフィド結合が正確に形成される可能性を更に評価するために、ｈＩＬ２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ）とＫ２Ｇ１１抗体とのジスルフィド結合形成部位のアミノ酸変異部位を表２４に示す。ジスルフィド結合を含むｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の構造を図４に示す。

【0348】

【表24】

【0349】

実施例２における２．１に記載の方法に従って、表２４における構築物を構築し、発現し精製した後、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析により、安定した単量体を形成できるｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０６を選択して更なる研究を行い、かつ母体ｈＳ４Ｂ６－Ｈ６Ｋ３（Ｈ）抗体に基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質ＩＣ－Ｃｙ０８（Ｈ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ０８）及びＨ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ１０を対照とした。

【0350】

６．２ ＥＬＩＳＡによる、Ｋ２Ｇ１１に基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質とｈＩＬ２Ｒα（ｈＣＤ２５）及びｈＩＬ２Ｒβ（ｈＣＤ１２２）との結合活性の検出
実施例４における４．２．１に記載のＥＬＩＳＡ検出方法に従って、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０６とｈＣＤ２５及びｈＣＤ１２２との結合活性をそれぞれ検出し、ｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃ、Ｈ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ０８及びＨ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ１０を対照群とし、検出結果については、図１２Ａに示すように、対照ｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃと比較して、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０６及びＨ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ１０がほとんどｈＣＤ２５に結合せず、Ｈ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ０８が高濃度で小さなｈＣＤ２５結合活性を示し、ｈＣＤ１２２との結合活性が図１２Ｂに示すとおりであり、各サンプルがいずれも有意な差のない結合活性を示した。

【0351】

以上より、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０６及びＨ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ１０は、Ｈ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ０８と比較して、高濃度でもｈＩＬ－２変異タンパク質とｈＣＤ２５との結合を完全に抑制することができ、これは、これらのＩＬ－２のαサブユニット受容体結合部位が、ｈＣＤ２５によって競合的に結合することなく、抗体融合タンパク質分子の内部により安定的に埋め込まれることを更に示している。

【0352】

６．３ Ｋ２Ｇ１１に基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の生物学的活性の検出
実施例１における１．３に記載の方法に従って、ＣＴＬＬ－２細胞とＮＫ－９２細胞の増殖実験により、Ｋ２Ｇ１１抗体とｈＩＬ２－ＤＭ（△３、１２５Ｌ）に基づくｈＩＬ２／ＩＬ２抗体融合タンパク質の生物学的活性を検出した。検出結果については、図１３に示すように、対照群ｈＩＬ－２（Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎから購入）、ｈＩＬ－２変異タンパク質ｈＩＬ２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ）、並びにＫ２Ｇ１１抗体及びｈＩＬ２－ＤＭ（△３、１２５Ｌ）をプレインキュベートして形成した抗原－抗体複合体と比較して、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０６及びＨ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ１０は、ＣＤ２５を高発現するＣＴＬＬ－２細胞の増殖促進活性（ＥＣ５０値）において有意な低下を示し、かつ低下の程度がＨ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ０８（図１３Ａ、表２５）より有意に大きいが、ＣＤ２５を低発現するＮＫ－９２細胞において、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０６及びＨ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ１０は、対照群ｈＩＬ－２、ｈＩＬ－２変異タンパク質ｈＩＬ２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ）及びＫ２Ｇ１１：ｈＩＬ２－ＤＭ（△３、１２５Ｌ）抗原－抗体複合体において示された細胞の増殖活性と比較して有意な差がなく（図１３Ｂ、表２５）、該結果から、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０６及びＨ６Ｋ３（Ｈ）－Ｃｙ１０分子中のＩＬ－２のαサブユニット受容体結合部位が、ジスルフィド結合の形成により、より安定的に分子の内部に埋め込まれ、高親和性ＩＬ２Ｒによって競合的に結合することがないことが分かった。

【0353】

【表25】

【0354】

実施例７ ＦｏｒｔｅＢｉｏによる、Ｋ２Ｇ１１に基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質とｈＩＬ２Ｒα、ｈＩＬ２Ｒα／β及びｈＩＬ２Ｒα／β／γとの結合の検出
分子相互作用分析装置（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、型番Ｑｋｅ）によりＫ２Ｇ１１とｈＩＬ２－ＤＭ（△３、１２５Ｌ）に基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質とＩＬ２Ｒα、ＩＬ２Ｒα／β及びＩＬ２Ｒα／β／γとの結合を検出した。具体的な方法は、１×ＰＢＳ溶液でＢｉｏｔｉｎ－ＣＤ２５（Ａｃｒｏ）を５μｇ／ｍＬに希釈し、２００μＬ／ウェルで９６ウェルの黒色プレートに加え、次に、１×ＰＢＳ溶液でｈＩＬ２Ｒβ（Ａｃｒｏ）を５μｇ／ｍＬに希釈し、２００μＬ／ウェルで上記９６ウェルの黒色プレートに加え、更に、１×ＰＢＳ、５μｇ／ｍＬのｈＩＬ２Ｒβ（Ａｃｒｏ）及び５μｇ／ｍＬ ｈＩＬ２Ｒγ（Ａｃｒｏ）でサンプルｈＩＬ２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ）及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５を１００ｎＭに希釈し、２００μＬ／ウェルで上記９６ウェルの黒色プレートに加え、検出対象サンプルが収容された９６ウェルの黒色プレートとＳＡ検出プローブを機器内に置き、プログラムを設定することにより、まずＳＡプローブをＢｉｏｔｉｎ－ＣＤ２５（Ａｃｒｏ）に結合した後、ｈＩＬ２Ｒβ（Ａｃｒｏ）と飽和するまで結合し、更にプローブをサンプルウェルに浸漬し、結合シグナルをリアルタイムに検出し、各回の会合－解離サイクルが完了した後、プローブを５００ｍＭのリン酸緩衝液に浸漬してプローブを再生させ、次のサイクル検出を開始することを含む。

【0355】

検出結果については、図１４に示すように、Ｋ２Ｇ１１とｈＩＬ２－ＤＭ（△３、１２５Ｌ）に基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５は、ｈＩＬ２Ｒαとの結合を抑制するだけでなく（図１４Ａ）、立体障害効果によりｈＩＬ２Ｒαサブユニットを含むｈＩＬ２Ｒα／β（図１４Ｂ）及びｈＩＬ２Ｒα／β／γ（図１４Ｃ）重合体との結合を抑制することが示されている。

【0356】

実施例８ ＥＬＩＳＡによるｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５及びＮＡＲＡ１ｌｅｕｋｉｎとｈＣＤ２５との結合の比較
ｈＣＤ２５（Ａｃｒｏ）でＥＬＩＳＡプレートをコーティングし、かつＨＲＰ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＩｇＧ Ｆｃ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）を二次抗体とし、実施例４における４．２．１に記載の方法に従って、実施例６で製造したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５及び特許出願国際公開第２０１７１２２１３０号に記載の方法で製造したＮＡＲＡ１ｌｅｕｋｉｎタンパク質とＣＤ２５との結合活性を検出した。

【0357】

検出結果については、図１５に示すように、抗体濃度の増加に伴い、ＮＡＲＡ１ｌｅｕｋｉｎは、徐々にｈＣＤ２５との結合を示したが、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５は、検出範囲内に、いずれもｈＣＤ２５との結合を示さず、これにより、本願に使用されるジスルフィド結合共有連結方式により構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、その分子内部のｈＩＬ－２変異タンパク質と抗ＩＬ－２抗体との間の結合がより安定しており、ｈＣＤ２５と融合タンパク質中のＩＬ－２成分との競合的な結合をより大幅に阻止できることが示されている。

【0358】

実施例９ レポーター遺伝子法及び細胞増殖法による本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の生物学的活性の検出
９．１ レポーター遺伝子法による検出
レポーター遺伝子法により、ＣＤ２５を高発現する細胞におけるＩＬ－２下流シグナル経路の活性化における実施例６で製造したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５の活性を検出し、ＮＡＲＡ１ｌｅｕｋｉｎタンパク質を対照分子とした。具体的な方法は、遠心分離によりＩＬ－２Ｂｉｏａｓｓａｙ細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）を収集し、培地で８×１０^５細胞／ｍＬに再懸濁した後、９６ウェルの白色プレートに加え、３７℃／５％ＣＯ_２で一晩インキュベートし、培地でＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５とＮＡＲＡ１ｌｅｕｋｉｎを段階的に希釈し、野生型ｈＩＬ－２を陽性対照とし、希釈したサンプルを上記９６ウェルの白色プレートに加え、かつ３７℃／５％ＣＯ_２で６時間インキュベートし、９６ウェルのプレートを室温で３０分間平衡させた後、検出試薬Ｏｎｅ－Ｌｉｔｅ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｇｅｎｔ（Ｎａｎｊｉｎｇ Ｖａｚｙｍｅ、南京）を加え、かつ多機能マイクロプレートリーダーで化学発光値を読み取ることを含む。

【0359】

検出結果については、図１６Ａに示すように、ＣＤ２５を高発現する細胞において、ＮＡＲＡ１ｌｅｕｋｉｎは、高濃度でＩＬ－２の下流シグナル経路を活性化する一定の活性を示すが、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５は、検出範囲内に、いずれもシグナル経路を活性化する明らかな活性を示しなかった。

【0360】

９．２ 細胞増殖法による検出
実施例１における１．３に記載の方法に従って、ＣＴＬＬ－２細胞及びＣＤ２５ノックアウトＮＫ－９２（ＣＤ２５－ＫＯ）細胞の増殖実験により、ｈＩＬ２／ＩＬ２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５及びＮＡＲＡ１ｌｅｕｋｉｎの生物学的活性を検出した。検出結果について、図１６Ｂ及び表２６に示すように、対照群ｈＩＬ－２と比較して、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５は、ＣＤ２５を高発現するＣＴＬＬ－２細胞に対する増殖促進活性が大幅に低下し、かつ低下の程度がＮＡＲＡ１ｌｅｕｋｉｎより有意に大きいが、ＣＤ２５ノックアウトＮＫ－９２（ＣＤ２５－ＫＯ）細胞では、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５とＮＡＲＡ１ｌｅｕｋｉｎの細胞増殖促進活性は、ｈＩＬ－２と比較して有意な差がなかった。

【0361】

以上の結果から、本願に使用されるジスルフィド結合の連結方式により、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の構造をよりうまく安定化させ、かつｈＣＤ２５と本願の融合タンパク質におけるＩＬ－２成分との競合的結合をより大きく阻止することができることが更に証明されている。

【0362】

【表26】

【0363】

実施例１０ 抗体部分の重鎖定常領域にｐＩ変異及びＴＭ変異を有する抗ＩＬ－２抗体及びこの抗体に基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の熱安定性の検出
ｎａｎｏＴｅｍｐｅｒ Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ Ｐａｎｔａを利用して抗体部分の重鎖定常領域にｐＩ変異及びＴＭ変異を有する抗ＩＬ－２抗体及びこれに基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の熱安定性を検出することにより、重鎖定常領域にｐＩ変異及びＴＭ変異を導入することによる上記抗ＩＬ－２抗体の安定性への影響、並びにこの抗体及びｈＩＬ－２変異タンパク質（ｈＩＬ２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ））に基づいて、その分子の内部に導入されたジスルフィド結合を伴って構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質が安定するか否かを調べた。重鎖定常領域にｐＩ変異及びＴＭ変異を有する抗ＩＬ－２抗体Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭは、実施例５に記載の方法に従って構築し、その対照は、実施例３で得た、重鎖定常領域に変異を有さない抗ＩＬ－２ヒト化抗体Ｋ２Ｇ１１であり、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、実施例６に記載の方法に従って製造した、抗体部分の重鎖定常領域にｐＩ変異及びＴＭ変異を有するＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０４、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０６である。具体的な検出方法は、各サンプルをそれぞれ１×ＰＢＳで１ｍｇ／ｍＬに希釈し、４℃で１５分間遠心分離した後、キャピラリー検出チューブでサンプルの上清を吸い取って検出台に置き、各サンプルを２つのチューブで繰り返し検出し、検出プログラムを設定し、温度範囲を２５℃～９５℃に設定し、プログラムを実行してデータを記録する。プログラムの実行が完了した後、分析ソフトウェアを使用してデータを分析することを含む。

【0364】

抗ＩＬ－２抗体の安定性検出の結果について、表２７に示すように、Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭのＴ_ｍ１値（６５．９４℃）は、対照抗体Ｋ２Ｇ１１（７０．４４℃）より低下したが、全体的に見ると、Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭのＴ_開始値とＴ_濁度値は、それぞれ約６０℃と約８０℃であり、対照抗体Ｋ２Ｇ１１に同等であり、抗体が示す正常範囲に属する。したがって、重鎖定常領域にｐＩ変異及びＴＭ変異を導入することは、本願の抗ＩＬ－２抗体の安定性に深刻な影響を与えない。

【0365】

ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質に対する安定性検出の結果について、表２８に示すように、抗体部分の重鎖定常領域にｐＩ変異及びＴＭ変異を有するｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０６のＴ_ｍ１値は、約６５℃であり、抗ＩＬ－２ヒト化抗体Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭの値と類似し、いずれも抗体部分の重鎖定常領域のＣＨ２ドメインの変性温度であり、３つのｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質サンプルの抗体部分Ｆａｂ領域とｈＩＬ－２変異タンパク質（ｈＩＬ２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ））との結合安定性を反映するＴ_ｍ２値は、いずれも８０℃以上であり、かつ分子全体のＴ_濁度値は、Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭの値より有意に向上し、これにより、抗ＩＬ－２ヒト化抗体とｈＩＬ－２変異タンパク質にそれぞれ導入したシステイン残基置換は、両者の間に安定したジスルフィド結合を形成するだけでなく、これにより構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質分子の安定性を有意に向上させることができることが示されている。

【0366】

【表27】

【0367】

【表28】

【0368】

実施例１１ 重鎖定常領域にｐＩ変異及びＴＭ変異を有する抗ＩＬ－２ヒト化抗体及びこれに基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質とＦｃ受容体及びＦｃＲｎとの結合動力学的検出
実施例１の１．２に記載の方法を使用して重鎖定常領域にｐＩ変異及びＴＭ変異を有する抗ＩＬ－２ヒト化抗体Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭ、これに基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５及び対照抗体Ｋ２Ｇ１１とＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ－１５８Ｆ、ＦｃγＲＩＩＩａ－１５８Ｖ、ＦｃＲｎ、Ｃ１ｑ及びＦｃＲｎとの結合動力学を検出した。

【0369】

検出結果については、図１７に示すように、対照抗体Ｋ２Ｇ１１と比較して、Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭ及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５は、いずれもＦｃ受容体（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ－１５８Ｆ及びＦｃγＲＩＩＩａ－１５８Ｖを含む）並びにＣ１ｑに実質的に結合しないが（図１７Ａ及び図１７Ｂ）、ＦｃＲｎとの結合親和性に有意な差がなく（図１７Ｃ）、これにより、重鎖定常領域にＴＭ変異を導入することによって抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体との結合を低下させて、抗体及び／又は抗体融合タンパク質のＦｃ末端によって媒介されるエフェクター機能（ＡＤＣＣ及びＣＤＣ作用を含む）を低下させるが、ｐＩＴＭ変異は、ＦｃＲｎとの結合に影響を与えないことが示されている。

【0370】

実施例１２ レポーター遺伝子法によるｈＩＬ－２／ｈＩＬ－２抗体融合タンパク質のＡＤＣＣ活性の検出
抗体部分の重鎖定常領域にＴＭ変異を導入することによりＦｃによって媒介されるエフェクター機能を低下させることができることを更に検証するために、本願は、ＦｃγＲＩＩＩａ－１５８Ｖ及びＮＦＡＴ反応エレメントを発現してホタルルシフェラーゼの発現を調節するＪｕｒｋａｔ細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）をエフェクター細胞として利用し、ＩＬ２Ｒを発現するＮＫ－９２細胞を標的細胞として利用し、実施例６で製造した抗体部分の重鎖定常領域にＴＭ変異を有するＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５のＡＤＣＣ活性をレポーター遺伝子法により検出し、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブ及びＡ４３１細胞を陽性対照群とした。具体的な方法は、遠心分離によりＮＫ－９２細胞とＡ４３１細胞をそれぞれ収集し、ＡＤＣＣ検出緩衝液（０．５％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ－１６４０）で再懸濁した後、１．５×１０^４細胞／ウェルで９６ウェルの白色プレートに加え、ＡＤＣＣ検出緩衝液で検出対象サンプルを段階的に希釈し、２５μＬ／ウェルで上記９６ウェルプレートに加え、遠心分離によりエフェクター細胞（Ｊｕｒｋａｔ細胞）を収集し、ＡＤＣＣ検出緩衝液で再懸濁した後、１．５×１０^５細胞／ウェルで上記９６ウェルのプレートに加え、更に３７℃／５％ＣＯ_２インキュベーターで一晩インキュベートし、２日目に、９６ウェルのプレートを室温で平衡させた後、検出試薬Ｏｎｅ－Ｌｉｔｅ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｇｅｎｔ（Ｎａｎｊｉｎｇ Ｖａｚｙｍｅ）を加え、多機能マイクロプレートリーダーで化学発光値を読み取ることを含む。

【0371】

検出結果については、図１８に示すように、陽性対照群（セツキシマブ＋Ａ４３１細胞）と比較して、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５は、最高濃度でもエフェクター細胞におけるルシフェラーゼの発現を有意に刺激せず、これにより、抗体部分の重鎖定常領域にＴＭ変異を導入して、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質とＦｃ受容体との親和性を有意に低下させることにより、上記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質のＦｃによって媒介されるＡＤＣＣの活性を有意に低下させることができることが示されている。

【0372】

実施例１３ ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質のカニクイザル及び健常人の血清におけるそれぞれの安定性
本実験により、実施例６で製造したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５のカニクイザル血清及び健常人血清における安定性を研究した。

【0373】

１３．１ ＮＫ－９２細胞による、それぞれカニクイザル血清とヒト血清でインキュベート処理した後のＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０４とＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５の生物学的活性の変化の検出
具体的な方法は、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４とＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５をそれぞれ２匹のカニクイザル（１匹の雌及び１匹の雄、Ｍ６及びＭ７と命名）と２人の健常人（Ｈ２及びＨ３と命名）から収集した血清に希釈し、最終濃度を１００μｇ／ｍＬとし、均一に混合して遠心管に分注し、カニクイザル血清で処理したサンプルＭ６－Ｃｙ０４、Ｍ７－Ｃｙ０４、Ｍ６－Ｃｙ０５及びＭ７－Ｃｙ０５、並びに健常人血清で処理したサンプルＨ２－Ｃｙ０４、Ｈ３－Ｃｙ０４、Ｈ２－Ｃｙ０５及びＨ３－Ｃｙ０５をそれぞれ製造し、３７℃のインキュベーターに置いて静置してインキュベートし、インキュベートし始める時点を０日目（０時間）と定義し、それぞれ所定の時点でサンプリングして、検出のために－８０℃に保存し、カニクイザル血清で処理したサンプルのサンプリング時点を３日目（７２時間）、７日目（１６８時間）及び１４日目（３３６時間）とし、健常人血清で処理したサンプルのサンプリング時点を７日目（１６８時間）、１４日目（３３６時間）及び２１日目（５０４時間）とし、全てのサンプルの収集が完了した後、実施例１に記載の方法に従って、ＮＫ－９２細胞を利用して各サンプルの生物学的活性を検出し、血清で処理していないｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質サンプルＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０４及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５、並びにｈＩＬ－２を対照群とすることを含む。

【0374】

検出結果については、表２９、表３０、図１９Ａ及び図１９Ｂに示すように、血清で処理していないサンプルと比較して、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５は、３７℃でカニクイザル血清において１４日間（図１９Ａ）、又はヒト血清（図１９Ｂ）において２１日間処理しても、その生物学的活性を完全に保持することができ、これにより、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質が高い血清安定性を有することが示されている。

【0375】

【表29】

【0376】

【表30】

【0377】

１３．２ レポーター遺伝子法による、健常人血清でインキュベート処理した後のＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０４とＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５のそれぞれの生物学的活性の変化の検出
実施例９に記載の方法に従って、健常人血清で処理した上記サンプルＨ２－Ｃｙ０４、Ｈ３－Ｃｙ０４、Ｈ２－Ｃｙ０５及びＨ３－Ｃｙ０５の、ＣＤ２５を高発現する細胞におけるＩＬ－２下流シグナル経路の活性の活性化を検出する。

【0378】

検出結果については、図１９Ｃに示すように、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４とＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５は、それぞれ３７℃でヒト血清で２１日と７日処理しても、そのＣＤ２５を高発現する細胞におけるＩＬ－２下流シグナル経路の活性の活性化は、処理していないサンプル（Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５）と比較して有意な差がなく、これにより、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４とＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５をそれぞれヒト血清で２１日と７日処理した後、そのＩＬ－２成分と抗ＩＬ－２抗体成分との結合界面の構造安定性に影響を与えず、依然として上記融合タンパク質中のＩＬ－２成分が高親和性ＩＬ２Ｒに結合しないように保護できることが示されている。したがって、本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、高い血清安定性を有する。

【0379】

実施例１４ 本願のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質におけるジスルフィド結合の検出
液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ）により、実施例６で製造したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５におけるｈＩＬ－２変異タンパク質と抗ＩＬ－２ヒト化抗体Ｋ２Ｇ１１との間に正確にペアリングされたジスルフィド結合が形成されるか否かを検出した。具体的な方法は、以下のとおりであった。

【0380】

Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４におけるジスルフィド結合検出について、サンプルを塩酸グアニジンで変性し、Ｎ－エチルマレイミド（ＮＥＭ）でアルキル化し、液体交換して脱塩した後、トリプシン（Ｔｒｙｐｓｉｎ）（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｖ５１１３）で酵素切断し、一部の酵素切断サンプルをＤＴＴで還元した後、ＴＦＡ（Ｔｈｅｒｍｏ、２８９０４）を加えて反応を停止し、他の一部の酵素切断サンプルにＴＦＡを直接的に加えて停止し、最終サンプルを得た後、ＬＣ－ＭＳ検出を行った。ＵＮＩＦＩソフトウェアによりデータを分析して実測ジスルフィド結合連結データを得た。

【0381】

Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５におけるジスルフィド結合検出について、サンプルを塩酸グアニジンで変性し、Ｎ－エチルマレイミド（ＮＥＭ）でアルキル化し、液体交換して脱塩した後、まず、トリプシンで酵素切断し、トリプシンで酵素切断したサンプルをいずれも２つの部分に分け、１つの部分にキモトリプシン（Ｃｈｙｍｏｔｒｙｐｓｉｎ）（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｖ１０６Ａ）を追加して酵素切断を継続し、もう１つの部分にＧｌｕＣ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｖ１６５Ａ）を追加して酵素切断を継続し、全ての酵素切断が完了した後、ＴＦＡを直接的に加えて終了し、最終サンプルを得てＬＣ－ＭＳ検出を行った。ＵＮＩＦＩソフトウェアによりデータを分析して実測ジスルフィド結合連結データを得た。

【0382】

検出結果については、表３１及び表３２に示すように、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０４及びＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５は、いずれも酵素切断された後に理論断片の大きさと同じである吸収ピークが検出され、これにより、本願で構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質がｈＩＬ－２変異タンパク質と抗ＩＬ－２ヒト化抗体Ｋ２Ｇ１１との抗原－抗体結合界面にシステイン残基置換を導入することによって正確にペアリングされたジスルフィド結合を形成できることが示されている。

【0383】

【表31】

【0384】

【表32】

【0385】

実施例１５ 重鎖定常領域にｐＩ変異及びＴＭ変異を有する抗ＩＬ－２抗体の薬物動態学的検出
重鎖定常領域にｐＩ変異を導入して、抗ＩＬ－２抗体Ｋ２Ｇ１１のｐＩ値を７．５６（計算値）から６．５４（計算値）に低下させることにより、インビボでのその半減期を延長できるか否かを検証するために、ＢＡＬＢ／ｃマウスを利用して、ｐＩ変異されていない抗ＩＬ－２抗体Ｋ２Ｇ１１、及び重鎖定常領域にｐＩ変異及びＴＭ変異を導入した抗ＩＬ－２抗体Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭの半減期を検出した。具体的な方法は、ＢＡＬＢ／ｃマウスに尾静脈を介してＫ２Ｇ１１とＫ２Ｇ１１－ｐＩＴＭをそれぞれ単回注射し、投与量をそれぞれ１０ｍｇ／ｋｇと１ｍｇ／ｋｇとし、投与が完了した後の０．２５時間、１時間、３時間、８時間、２４時間、４８時間、９６時間、１６８時間、２４０時間、３３６時間、４０８時間及び５０４時間で投与されたマウスから採血し、４℃で遠心分離した後、上清血漿を収集して－８０℃に保存し、全ての血液サンプルの収集が完了した後、統一検出することを含む。マウス血漿中の薬物濃度の検出について、ＥＬＩＳＡ方法を使用し、該方法は、具体的には、ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ断片抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）をＰＢＳで１μｇ／ｍＬに希釈し、５０μＬ／ウェルで９６ウェルのＥＬＩＳＡプレートにコーティングし、４℃で一晩静置してコーティングし、ＰＢＳでプレートを洗浄した後、各ウェルに１％ＢＳＡを加えてブロッキングし、室温で１時間静置し、１％ＢＳＡで検出対象マウスの血漿サンプルを希釈するとともに、希釈後の検出対象サンプル中の血漿基質濃度と一致するように、１％ＢＳＡでマウスブランク血漿を希釈し、かつ緩衝液としてＫ２Ｇ１１及びＫ２Ｇ１１－ｐＩＴＭ標準品を１μｇ／ｍＬに希釈した後、３倍希釈を行って標準サンプルを製造し、１ウェルあたり５０μＬで、希釈した検出対象サンプルと標準サンプルを上記ＥＬＩＳＡプレートに加え、室温で２時間静置してインキュベートし、ＰＢＳＴ（ＰＢＳ、ｐＨ７．４、０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０）でプレートを洗浄した後、１：１００００で希釈したＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆ（ａｂ）_２断片二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）を各ウェルに５０μＬ加え、室温で１時間インキュベートし、ＰＢＳＴでプレートを洗浄した後、ＴＭＢ発色液を各ウェルに加え、室温で暗所で３～１０分間インキュベートした後、２Ｍ ＨＣｌを加えて反応を停止し、多機能マイクロプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ）により各ウェルのＯＤ４５０及びＯＤ５７０の吸光値を読み取り、ＯＤ４５０値からＯＤ５７０値を引いてＯＤ（４５０／５７０）値を得て、標準曲線の理論濃度を横軸とし、ＯＤ（４５０／５７０）値を縦軸とし、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ９ソフトウェアを使用して標準曲線を作成し、標準サンプルの回収率を計算し、回収率偏差＝［（測定濃度－理論濃度）／理論濃度］×１００％、±１０％を許容できる回収率偏差として定量範囲を決定し、検出対象サンプルのＯＤ（４５０／５７０）の値が標準曲線の定量範囲内にある場合、血漿サンプル中の薬物濃度を代入して算出し、定量範囲内にない場合、読み値に基づいて血漿サンプルの希釈割合を調整してＥＬＩＳＡ検出を再度行い、検出対象サンプルＯＤ（４５０－５７０）の値を標準曲線に代入し、算出された濃度を希釈割合によって計算した後、サンプリング時間に基づいて薬物－時間曲線図を作成し、薬物動態学分析では、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ ＥＸＣＥＬ（登録商標）ソフトウェアにおけるＰＫＳｏｌｖｅｒ ２．０プラグインを使用し、薬物動態学パラメータの計算では、静脈注射投与に対するコンパートメントモデルを使用することを含む。

【0386】

薬物－時間曲線を図２０に示す。重鎖定常領域にｐＩ変異を導入することにより、抗ＩＬ－２抗体Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭは、重鎖定常領域にｐＩ変異が導入されていないＫ２Ｇ１１抗体と比較して、有意に改善された薬物動態学的特徴を有し、投与量が１ｍｇ／ｋｇであるＫ２Ｇ１１－ｐＩＴＭ群の消失半減期（ｔ_１／２）と薬物時間曲線下面積（ＡＵＣ）は、それぞれ同じ投与量のＫ２Ｇ１１群の約２．５倍と１．３倍であり、投与量が１０ｍｇ／ｋｇであるＫ２Ｇ１１－ｐＩＴＭ群の半減期とＡＵＣは、それぞれ同じ投与量のＫ２Ｇ１１群の約３．３倍と１．４倍であった。これにより、重鎖定常領域にｐＩ変異を導入することにより、抗ＩＬ－２抗体Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭのｐＩ値を低下させるため、そのマウスのインビボでの半減期が有意に延長し、ＡＵＣが有意に増加することをもたらすことが示されている。

【0387】

実施例１６ ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－２抗体融合タンパク質のインビボでの薬効評価
１６．１ ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－２抗体融合タンパク質のカニクイザルのインビボでの薬効評価
以下のように、実施例６で製造したｈＩＬ－２／ｈＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５を投与したカニクイザルの末梢血において、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞及びＴｒｅｇ細胞の数並びに増殖マーカーＫｉ－６７の発現変化を測定した。具体的な方法は、以下のとおりである。

【0388】

投与及びサンプル収集について、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５を１匹の雌及び１匹の雄２匹のカニクイザルに静脈注射し、７日おきに用量が逓増する方式で順に１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ及び３００μｇ／ｋｇ投与し、各用量で１回投与し、投与前、投与後の２４時間、７２時間、１６８時間で末梢血を収集し、高用量（３００μｇ／ｋｇ）で投与後の３３６時間で更に末梢血を１回収集した。サンプリング当日に末梢血サンプルに対してフローサイトメトリー検出分析を行う。

【0389】

フローサイトメトリー検出分析方法について、フローチューブに５μＬのＨｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を加え、各フローチューブに１００μＬの抗凝固剤含有全血を加え、室温で１０分間静置してインキュベートした。フローサイトメトリー染色抗体ＢＶ５１０ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＣＤ３（ＢＤ）、ＦＩＴＣ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＣＤ４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＡＰＣ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＣＤ２５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＡＦ７００ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＣＤ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及びＰＥ－Ｃｙ７ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ ＣＤ１６（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を混合した後、フローチューブに加え、均一に混合して氷上で静置して６０分間インキュベートした。ＲＢＣ緩衝液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を１×に希釈した後、上記フローチューブに加え、穏やかに振とうした後、室温で暗所で１０～３０分間インキュベートした。遠心分離により細胞を収集し、予冷ＦＡＣＳ緩衝液（１％ＢＳＡを含むＰＢＳ緩衝液）を加えて１回洗浄した。各チューブにＴｒｕｅ－Ｎｕｃｌｅａｒ １×Ｆｉｘ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を加え、穏やかに振とうした後、室温で暗所で６０分間インキュベートし、更に各チューブにＴｒｕｅ－Ｎｕｃｌｅａｒ １×Ｐｅｒｍ緩衝液を加え、遠心分離により上清を除去し、このステップを１回繰り返した。各チューブの中の細胞をＴｒｕｅ－Ｎｕｃｌｅａｒ １×Ｐｅｒｍ緩衝液で再懸濁し、ＰＥ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ Ｆｏｘｐ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）とｅＦｌｕｏｒ ４５０ ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ Ｋｉ－６７（Ｔｈｅｒｍｏ）フロー抗体を加え、室温で暗所で４０分間インキュベートした。各チューブにおける細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、次にフローサイトメトリー（Ａｇｉｌｅｎｔ、ＮｏｖｏＣｙｔｅ ３００５）に置いて検出した。

【0390】

検出結果については、図２１に示すように、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５は、カニクイザルの末梢血におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞（図２１Ａ）及びＮＫ細胞（図２１Ｂ）の増殖を有意に活性化して向上させることができ、Ｔｒｅｇ細胞の数は、中、高用量の投与によって一過性で小幅に増加しただけであり、Ｋｉ－６７発現は実質的に変化しないままであり（図２１Ｃ）、これは、内因性ＩＬ－２のフィードバック調節によって引き起こされる可能性がある。これから分かるように、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５は、カニクイザル体内でＩＬ２Ｒβ／γを発現するＣＤ８^＋Ｔ細胞とＮＫ細胞に選択的に作用し、ＩＬ２Ｒα／β／γによりＴｒｅｇ細胞を有意に活性化することなく、これら細胞の増殖を促進することができる。実験期間、被験動物の体重は大幅には変化せず、臨床症状に深刻な有害反応は観察されなかった。

【0391】

１６．２ ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－２抗体融合タンパク質のＣ５７ＢＬ／６マウスのインビボでの薬効評価
以下のように、実施例６で製造したｈＩＬ－２／ｈＩＬ－２抗体融合タンパク質Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５を投与したＣ５７ＢＬ／６マウスの脾臓組織において、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、従来のＣＤ４^＋Ｔ細胞の数を測定し、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞とＴｒｅｇ細胞との比率、及びＮＫ細胞とＴｒｅｇ細胞との比率を計算し、各試験マウスの体重変化を統計した。具体的な方法は、以下のとおりである。

【0392】

試験群分け及び投与方法について、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを無作為に８群（各群５匹のマウス）に分け、具体的には、１群の陰性対照群では、ＰＢＳを投与し、１群の陽性対照群では、ｈＩＬ－２（７５μｇ／ｋｇ）を投与し、３群の実験対照群では、ｈＩＬ－２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ）と抗ＩＬ－２抗体Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭとがモル比２：１で形成したｈＩＬ－２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ）：Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭ免疫複合体を投与し（ｈＩＬ－２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ）の用量は１．５μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ及び１５μｇ／ｋｇである）、３群の実験群では、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５（１０μｇ／ｋｇ、３０μｇ／ｋｇ及び１００μｇ／ｋｇ）を投与した。ＰＢＳ群及びｈＩＬ－２群について、毎日尾静脈により１回投与し、合計４回投与し、実験対照群に対するｈＩＬ－２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ）：Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭ免疫複合体及び実験群に対するＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５を、２日毎に尾静脈により１回投与し、合計２回投与した。各群のマウスの体重を１日おきに測定した。全ての群のマウスに対して、最終投与の２日目に安楽死を行い、マウスの脾臓細胞を抽出してフローサイトメトリー検出分析を行った。

【0393】

フローサイトメトリー検出分析方法について、マウスの脾臓を秤量した後、予冷ＰＢＳで洗浄し、２００メッシュ（７５μｍ）の細胞スクリーン（１５－１０７０－ＺＸ、Ｂｉｏｌｏｇｉｘ）に置いてすり潰し、脾臓単細胞懸濁液を製造した。遠心分離により細胞を収集した後、各チューブに１×ＲＢＣ緩衝液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を加え、穏やかに振とうした後、室温で５分間静置し、その後、予冷ＰＢＳを加えて反応を停止し、４℃で遠心分離により細胞を収集し、予冷ＰＢＳで１回洗浄し、細胞を予冷ＰＢＳに再懸濁し、かつ９６ウェルのＵ型ディープウェルプレートに加え、各サンプルに１つの複製ウェルを加えた。予冷ＰＢＳで１：５００倍に希釈したＺｏｍｂｉｅ Ｙｅｌｌｏｗ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を各ウェルに加えて、室温で暗所で１５分間インキュベートして死活細胞染色を行った。各ウェルにＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４、１％ＢＳＡ、２ｍＭのＥＤＴＡ）を加えて染色を停止し、遠心分離により細胞を収集した。Ｆｃ受容体ブロッキング試薬を調製し、２μＬのマウスＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）／４０μＬのＦＡＣＳ緩衝液／ウェルで細胞を再懸濁し、氷上で１０分間静置した。フローサイトメトリー染色抗体ＦＩＴＣ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＢＶ６５０ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＡＦ７００ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ８ａ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＡＰＣ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＮＫ１．１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＰＥ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ２５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及びＢＶ５１０ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ ＣＤ４４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を混合し、２μＬ／ウェルの各抗体の用量で、上記各ウェルに加えた後、氷上で４０分間静置してインキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で細胞を１回洗浄した後、各ウェルにＴｒｕｅ－Ｎｕｃｌｅａｒ １×Ｆｉｘを加え、室温で振とうして暗所で６０分間インキュベートした後、各ウェルにＴｒｕｅ－Ｎｕｃｌｅａｒ １×Ｐｅｒｍ緩衝液を加え、遠心分離により上清を除去し、このステップを１回繰り返した。Ｔｒｕｅ－Ｎｕｃｌｅａｒ １×Ｐｅｒｍ緩衝液でＢＶ４２１ ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ Ｆｏｘｐ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を調製し、抗体の用量２μＬ／５０μＬ緩衝液／ウェルで細胞を再懸濁した後、室温で６０分間静置した。Ｔｒｕｅ－Ｎｕｃｌｅａｒ １×Ｐｅｒｍ緩衝液で細胞を２回洗浄した後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、フローサイトメーター（Ａｇｉｌｅｎｔ ＮｏｖｏＣｙｔｅ ３００５）により検出して分析した。実験データをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９ソフトウェアにより統計して分析し、各実験群間のデータ差異に対して一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を行った後、各実験群と溶媒対照群との差異に対してＤｕｎｎｅｔｔ検定を行い、ｐ値が０．０５より小さいと、両者の間に有意な統計学的差異があるとみなした。

【0394】

検出結果については、図２２に示すように、ＰＢＳ対照群と比較して、ｈＩＬ－２投与群のマウスのインビボでのＴｒｅｇ細胞の数は、極めて有意に増加し（ｐ＜０．０００１）（図２２Ａ）、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞（ＣＤ８^＋ＣＤ４４^ｈｉｇｈ）の細胞数（図２２Ａ）及びＮＫ細胞数（図２２Ａ）もいくらか増加したが、統計学的有意差がなく、これにより、高用量のｈＩＬ－２は、インビボでＴｒｅｇ細胞の増殖を優先的に刺激し促進することが示されている。Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５の各用量群のマウスにおいて発見されているように、そのインビボでのメモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞（図２２Ａ）及びＮＫ細胞（図２２Ａ）の絶対数は、ＰＢＳ対照群及びｈＩＬ－２群と比較して極めて有意に増加し（ｐ＜０．０００１）、用量依存性を示し、Ｔｒｅｇ細胞の絶対数（図２２Ａ）も若干の増加を示したが、ＰＢＳ対照群と比較して、いずれも統計学的有意差がなく、用量依存性もなく、かついずれもｈＩＬ－２投与群のマウスより低く、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞とＴｒｅｇ細胞との絶対計数比（図２２Ｂ）及びＮＫ細胞とＴｒｅｇ細胞との絶対計数比（図２２Ｂ）は、それぞれ最高で約１００及び約４０に達することができ、これにより、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５がインビボでメモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の増殖を選択的に活性化し促進することが示されている。ｈＩＬ－２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ）：Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭ免疫複合体投与群については、ｈＩＬ－２投与群と比較して、免疫複合体は、高用量（１５μｇ／ｋｇ）のみで、ある程度はＮＫ細胞を選択的に活性化したが（ｐ＜０．０５）、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＴｒｅｇ細胞の絶対計数にいずれも有意な差がないことを示し、他の２つの用量群におけるマウスのメモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞及びＴｒｅｇ細胞の絶対計数は、ｈＩＬ－２投与群と比較して、いずれも統計学的差異がなかった。ｈＩＬ－２－ＤＭ（△３、Ｃ１２５Ｌ）：Ｋ２Ｇ１１－ｐＩＴＭ免疫複合体の各用量群は、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５の各用量群と比較して、ｈＩＬ－２の投与量が同等であるが、後者は、メモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の増殖を誘導する点で、効果が前者より有意に優れていた。各群におけるマウスの従来のＣＤ４^＋Ｔ細胞の数は、いずれも有意に変化せず（図２２Ｃ）、かつ各群におけるマウスは、実験過程においていずれも死亡せず、臨床症状におけるいずれの有害反応も観察されず、かつ体重変化が顕著ではない（図２２Ｄ）ため、Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５のインビボでの安全性が高いことが示されている。

【0395】

１６．３ ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－２抗体融合タンパク質のＣＴ２６マウス腫瘍モデルにおける抗腫瘍作用
５×１０^５のＣＴ２６結腸癌細胞をＢａｌｂ／Ｃマウスに皮下注射し、平均腫瘍体積が約１００ｍｍ^３に到達した日を１日目として記録し、かつ腫瘍担持マウスを、対照群ＰＢＳ及びＮＡＲＡ１ｌｅｕｋｉｎ（０．３ｍｇ／ｋｇ）、並びに試験群Ｋ２Ｇ１１－Ｃｙ０５（０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ及び０．３ｍｇ／ｋｇ）を含む合計５群に群分けし、各群は８匹のマウスを含んだ。各群の腫瘍担持マウスにそれぞれ１日目、４日目、８日目及び１１日目に尾静脈により１回投与し、投与当日に腫瘍担持マウスの腫瘍の大きさを測定し、体積＝（長さ）×（幅）^２×０．５という式に基づいて腫瘍体積を計算した。

【0396】

実験結果については、図２３に示すように、腫瘍担持マウスの腫瘍に対するＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５の各用量群の増殖抑制作用は、用量依存性を示し、かつＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５投与量０．３ｍｇ／ｋｇ群のマウスの腫瘍体積は、ＰＢＳ対照群より有意に小さい。また、同じ用量で、腫瘍増殖に対するＫ２Ｇ１１－Ｃｙ０５の抑制作用は、ＮＡＲＡ１ｌｅｕｋｉｎより優れた。これにより、本願のｈＩＬ－２／ｈＩＬ－２抗体融合タンパク質は、インビボでメモリーＣＤ８^＋Ｔ細胞及びＮＫ細胞の増殖を選択的に活性化し促進することにより、良好な抗腫瘍作用を発揮することが示されている。

【0397】

実施例１７ ジスルフィド結合を介して他のｈＩＬ－２抗体とｈＩＬ－２とを連結して安定したｈＩＬ－２／ｈＩＬ－２抗体融合タンパク質を構築すること
１７．１ ｈＩＬ－２／ＮＡＲＡ１抗体融合タンパク質及びｈＩＬ－２／ＴＣＢ２抗体融合タンパク質の構築
実施例４に記載の方法に従って、ｈＩＬ－２／ＮＡＲＡ１抗体融合タンパク質とｈＩＬ－２／ＴＣＢ２抗体融合タンパク質をそれぞれ構築し、簡単に言えば、まず、直列連結された４つのＧ４Ｓ配列を介してｈＩＬ－２をＮＡＲＡ１又はＴＣＢ２軽鎖のＮ末端に連結した。このリンカーの長さは、構築した融合タンパク質の内部構造の安定性を保証することができ、上記融合タンパク質のｈＩＬ－２とｈＩＬ２Ｒβとの結合に対する影響が小さい。その後、ｈＩＬ－２／ＮＡＲＡ１又はｈＩＬ－２／ＴＣＢ２抗原－抗体複合体の抗原－抗体結合界面において、空間的距離が５オングストローム（０．５ｎｍ）の範囲内にある一部のアミノ酸残基を特定してシステインに変異させることにより、ｈＩＬ－２とＮＡＲＡ１又はＴＣＢ２抗体との間がジスルフィド結合を介して更に安定的に結合する。構築したｈＩＬ－２／ｈＩＬ－２抗体融合タンパク質の構造を図４に示す。表３３と表３４は、ｈＩＬ－２とＮＡＲＡ１及びＴＣＢ２抗体との間のジスルフィド結合形成部位のアミノ酸変異部位をそれぞれ示す。

【0398】

【表33】

【0399】

【表34】

【0400】

実施例２における２．１に記載の方法に従って、表３３及び表３４における構築物を構築し、発現し精製した後、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ分析により、安定した単量体を形成できるｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質ＮＡＲＡ１－Ｃｙ０１、ＮＡＲＡ１－Ｃｙ０４、ＮＡＲＡ１－Ｃｙ０５、ＮＡＲＡ１－Ｃｙ０８及びＮＡＲＡ１－Ｃｙ０９、又はＴＣＢ２－Ｃｙ０１、ＴＣＢ２－Ｃｙ０２、ＴＣＢ２－Ｃｙ０７、ＴＣＢ２－Ｃｙ０８、ＴＣＢ２－Ｃｙ０９及びＴＣＢ２－Ｃｙ１１を選択して更なる研究を行った。

【0401】

１７．２ ＥＬＩＳＡによる、ＮＡＲＡ１又はＴＣＢ２抗体に基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質とｈＩＬ２Ｒα（ｈＣＤ２５）及びｈＩＬ２Ｒβ（ｈＣＤ１２２）との結合活性の検出
実施例２における２．１．１に記載のＥＬＩＳＡ検出方法に従って、抗原をそれぞれｈＣＤ２５とｈＣＤ１２２に置換し、ＮＡＲＡ１又はＴＣＢ２抗体に基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質とｈＣＤ２５及びｈＣＤ１２２との結合活性をそれぞれ検出し、ｈＩＬ２－ＤＭ－Ｆｃを対照群とした。

【0402】

検出結果については、図２４及び図２５に示すように、ＮＡＲＡ１又はＴＣＢ２抗体に基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、対照群と比較して、いずれも有意に低下したｈＣＤ２５との結合活性を示し（図２４Ａ及び図２５Ａ）、ｈＣＤ１２２との結合活性が更にある程度増強されることを示し（図２４Ｂ及び図２５Ｂ）、これにより、ＮＡＲＡ１又はＴＣＢ２抗体に基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、いずれもｈＩＬ－２とｈＣＤ１２２との結合活性を維持するか又は増強することができ、かつｈＩＬ－２とｈＣＤ２５との結合をある程度抑制することができることが示されており、ｈＩＬ－２／ＮＡＲＡ１又はｈＩＬ－２／ＴＣＢ２抗原－抗体複合体の抗原－抗体結合部位にジスルフィド結合を導入することにより、ｈＩＬ－２のα受容体結合部位が抗体融合タンパク質分子の内部に埋め込むことができ、解離によりｈＣＤ２５に競合的に結合しにくいことが更に示されている。

【0403】

１７．３ ＮＡＲＡ１又はＴＣＢ２抗体に基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の生物学的活性の検出
実施例１における１．３に記載の方法に従って、ＣＴＬＬ－２細胞及びＮＫ－９２細胞の増殖実験により、ＮＡＲＡ１又はＴＣＢ２抗体に基づいて構築したｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の生物学的活性をそれぞれ検出し、対照群を野生型ｈＩＬ－２とした。

【0404】

検出結果から、ｈＩＬ－２／ＮＡＲＡ１抗体融合タンパク質（図２６Ａ及び表３５）及びｈＩＬ－２／ＴＣＢ２抗体融合タンパク質（図２７Ａ及び表３６）は、ＣＤ２５を高発現するＣＴＬＬ－２細胞の増殖活性（ＥＣ５０値）の促進において、対照群ｈＩＬ－２と比較して、異なる程度の低下を示し、ＣＤ２５を低発現するＮＫ－９２細胞の増殖活性の促進において、対照群ｈＩＬ－２に同等である（図２６Ｂ及び表３５、図２７Ｂ及び表３６）ことが分かった。

【0405】

【表35】

【0406】

【表36】

【0407】

以上をまとめると、ｈＩＬ－２とＩＬ－２を特異的に識別するＩＬ２Ｒα結合部位の抗ＩＬ－２抗体（例えばＮＡＲＡ１又はＴＣＢ２）との結合界面にジスルフィド結合を導入することにより、ｈＩＬ－２と抗ＩＬ－２抗体とに超安定した複合体構造を形成させ、ｈＩＬ－２とＩＬ２Ｒαとの結合を抑制することができるだけでなく、ｈＩＬ－２とｈＩＬ２Ｒβ／γとの結合に影響を与えない。

【0408】

本願は、１つ、又は２つ以上の実施形態によって説明されたが、本願は、これらの実施形態に限定されず、本願の明細書は、添付の特許請求の範囲の精神及び広い範囲内にある全ての代替、修正、及び変更を含むことを意図することを理解されたい。本願で引用される全ての参考文献は、その全体が参照により本願に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17(1)】

【図17(2)】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22(1)】

【図22(2)】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【図27】

【配列表】

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【手続補正書】

【提出日】2024-06-18

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質であって、
（１）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２、又はその変異タンパク質と、
（２）抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片と、
（３）前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との抗原－抗体結合界面に含まれるジスルフィド結合と
を含み、
前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質に特異的に結合することができ、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質とＩＬ２Ｒα又はＩＬ２Ｒαを含むＩＬ－２受容体複合体（即ち、ＩＬ２Ｒα／β又はＩＬ２Ｒα／β／γ）との結合を競合的にブロックすることができ、
前記ジスルフィド結合は、前記抗原－抗体結合界面の前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質における少なくとも１つのシステイン変異及び前記抗原－抗体結合界面の前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片における少なくとも１つのシステイン変異を導入することによって形成され、
前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＩＬ２Ｒα、又はαβヘテロ二量体（即ち、ＩＬ２Ｒα／β）、又はαβγヘテロ三量体（即ち、ＩＬ２Ｒα／β／γ）に結合できないが、ＩＬ２Ｒβ及びγから構成される二量体受容体（即ち、ＩＬ２Ｒβ／γ）への結合活性及び機能活性を保持する、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項2】

（１）前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、ｈＩＬ－２若しくはその変異タンパク質とＩＬ２Ｒαとの結合界面を包含するか、又は部分的に重なるか、
あるいは、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のＡＢループ、Ｂヘリックス、Ｃヘリックス、ＢＣループ及び／若しくはＣＤループに位置し、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のＩＬ２Ｒα結合界面は、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質のＡＢループ及びＢヘリックスに位置するか、
あるいは、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質の第３０位～第４５位若しくはその隣接するアミノ酸残基、第５７位～第７７位若しくはその隣接するアミノ酸残基、及び／又は第９０位～第１１１位若しくはその隣接するアミノ酸残基に位置する、
（２）前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、抗マウスＩＬ－２（ｍＩＬ－２）抗体及びそのヒト化抗体からなる群から選択され、前記抗ｍＩＬ－２抗体は、ｍＩＬ－２とマウスＩＬ２Ｒα（ｍＩＬ２Ｒα）との結合部位を特異的に識別し、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と交差反応することができ、前記抗ＩＬ－２抗体は、ｈＩＬ－２のＩＬ２Ｒα結合部位を特異的に識別することができる他の抗ＩＬ－２ヒト化抗体、若しくはその抗原結合断片からなる群からも選択される、
（３）第１システイン残基及び第２システイン残基が、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の前記抗原－抗体結合界面にアミノ酸変異の方式で導入され、前記融合タンパク質の前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質における第１システイン残基を導入するための部位と、前記融合タンパク質の前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片における第２システイン残基を導入するための部位とは正確にペアリングでき、ペアリングされた前記第１システイン残基と前記第２システイン残基との間の空間的距離は５オングストローム（０．５ｎｍ）より小さい、
という特徴の少なくとも１つを含む、請求項１に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項3】

前記ｈＩＬ－２変異タンパク質のアミノ酸変異は、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記結合界面に位置し、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対して、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、以下の変異、（１）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第６４位におけるＫのＧ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｎ若しくはＱへの変異、（２）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第９０位におけるＮのＲ、Ｋ若しくはＨへの変異、又は（３）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２に対応する第１０４位におけるＭのＥ若しくはＤへの変異、のうちの少なくとも１つを含み、
任意に、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対する以下のアミノ酸変異、
（１）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第６４位におけるアミノ酸変異Ｋ６４Ｇ、
（２）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第９０位におけるアミノ酸変異Ｎ９０Ｒ、及び
（３）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第１０４位におけるアミノ酸変異Ｍ１０４Ｅ
のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項4】

前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、以下のアミノ酸変異、即ち、（１）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応するＮ末端の最初の３つ若しくは５つのアミノ酸残基の削除、（２）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応するＮ末端の第３位のアミノ酸残基におけるアミノ酸変異、及び／又は（３）配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第１２５位におけるアミノ酸変異Ｃ１２５Ａ、Ｃ１２５Ｌ、Ｃ１２５Ｓ、Ｃ１２５Ｑ若しくはＣ１２５Ｖ、の１つ以上をさらに含み、
任意に、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応するＮ末端の最初の３つのアミノ酸の削除、及び／又は第１２５位におけるアミノ酸変異Ｃ１２５Ａ、Ｃ１２５Ｌ、Ｃ１２５Ｓ、Ｃ１２５Ｑ若しくはＣ１２５Ｖを含む、請求項３に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項5】

前記ＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対して、前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第４１位～第４５位若しくはその隣接するアミノ酸残基、第５７位～第６８位若しくはその隣接するアミノ酸残基、及び／又は第９０位～第１０７位若しくはその隣接するアミノ酸残基に位置し、任意に、前記第１システイン残基は前記抗原－抗体結合界面の前記ｈＩＬ－２変異タンパク質における１つ以上のシステイン残基によって導入され、
前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、抗マウスＩＬ－２（ｍＩＬ－２）抗体及びそのヒト化抗体からなる群から選択され、任意に、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、即ち、（１）アミノ酸配列がＸ_１ＹＹＸ_２Ｈ（Ｘ_１＝Ａ又はＤ、Ｘ_２＝Ｌ又はＭ）であるＨＣＤＲ１、（２）アミノ酸配列がＲＩＤＰＺ_１ＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＸ_３（Ｚ_１＝Ｅ又はＤ、Ｘ_３＝Ｎ、Ｓ又はＧ、配列番号２３０に示される）であるＨＣＤＲ２、（３）アミノ酸配列がＺ_２ＴＦＺ_３ＹＺ_４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ_２＝Ｖ、Ｉ、Ｒ又はＴ、Ｚ_３＝Ｙ、Ｌ、Ｈ又はＷ、Ｚ_４＝Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、Ｙ若しくはＶ、配列番号２３１に示される）であるＨＣＤＲ３、（４）アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ_５ＩＺ_６ＮＹＬＳ（Ｚ_５＝Ｄ、Ｙ、Ｎ、Ｈ、Ｉ、Ｌ又はＦ、Ｚ_６＝Ｇ、Ｓ、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｑ、Ｉ、Ｌ、Ｔ又はＤ、配列番号２３２に示される）であるＬＣＤＲ１、（５）アミノ酸配列がＺ_７ＡＺ_８ＳＬＡＸ_４（Ｚ_７＝Ｓ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｗ又はＹ、Ｚ_８＝Ｔ又はＧ、Ｘ_４＝Ｄ、Ｓ又はＴ、配列番号２３３に示される）であるＬＣＤＲ２、及び（６）アミノ酸配列がＬＱＨＹＳＴＰＹＴ（配列番号１２に示される）であるＬＣＤＲ３を含み、任意に、前記第２システイン残基は前記抗原－抗体結合界面の前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片における１つ以上のアミノ酸残基によって導入される、請求項２に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項6】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、即ち、（１）アミノ酸配列がＸ _１ ＹＹＸ _２ Ｈ（Ｘ _１ ＝Ａ、Ｘ _２ ＝Ｌ又はＭ）であるＨＣＤＲ１、（２）アミノ酸配列がＲＩＤＰＺ _１ ＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＸ _３ （Ｚ _１ ＝Ｅ又はＤ、Ｘ _３ ＝Ｎ、Ｓ又はＧ）であるＨＣＤＲ２、（３）アミノ酸配列がＺ _２ ＴＦＺ _３ ＹＺ _４ ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ _２ ＝Ｖ又はＩ、Ｚ _３ ＝Ｙ又はＬ、Ｚ _４ ＝Ｓ又はＴ）であるＨＣＤＲ３、（４）アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ _５ ＩＺ _６ ＮＹＬＳ（Ｚ _５ ＝Ｄ又はＹ、Ｚ _６ ＝Ｇ又はＳ）であるＬＣＤＲ１、（５）アミノ酸配列がＺ _７ ＡＺ _８ ＳＬＡＸ _４ （Ｚ _７ ＝Ｓ又はＱ、Ｚ _８ ＝Ｔ、Ｘ _４ ＝Ｄ、Ｓ又はＴ）であるＬＣＤＲ２、及び（６）アミノ酸配列がＬＱＨＹＳＴＰＹＴであるＬＣＤＲ３を含む、請求項５に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項7】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、
（１）配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又は
（２）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又は
（３）配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５若しくは配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又は
（４）配列番号７に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又は
（５）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、
（６）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又は
（７）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４若しくは配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又は
（８）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９、配列番号２０、配列番号２３、配列番号２４若しくは配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含むか、
あるいは、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３、
（１）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４若しくは配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又は
（２）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２３、配列番号２４若しくは配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６若しくは配列番号２７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号２８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又は
（３）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含む、請求項６に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項8】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、
配列番号４９、配列番号５１、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号６３、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４又は配列番号７５に示される配列と少なくとも８５％の同一性を有するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域ＶＨ、並びに
配列番号４８、配列番号５０、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８又は配列番号７９に示される配列と少なくとも８５％の同一性を有するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域ＶＬ
を含むか、
あるいは、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、即ち、配列番号６３及び配列番号６５～配列番号６７のいずれかに示されるＶＨ並びに配列番号６４及び配列番号７６～配列番号７９のいずれかに示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項9】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、
（１）それぞれ配列番号４９に示されるＶＨアミノ酸配列、及び配列番号４８若しくは配列番号５０に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８に示されるＶＨ及び配列番号４８に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号４９に示されるＶＨアミノ酸配列、及び配列番号５９、配列番号６０若しくは配列番号６２に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号６３に示されるＶＨ及び配列番号６４に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（５）それぞれ配列番号６３及び配列番号６５～配列番号７５のいずれかに示されるＶＨ、及び配列番号７６に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（６）それぞれ配列番号６３及び配列番号６５～配列番号７５のいずれかに示されるＶＨ、及び配列番号７７に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（７）それぞれ配列番号６３及び配列番号６５～配列番号７５のいずれかに示されるＶＨ、及び配列番号７８に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（８）それぞれ配列番号６３及び配列番号６５～配列番号７５のいずれかに示されるＶＨ、及び配列番号７９に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含むか、
あるいは、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、以下の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、
（１）それぞれ配列番号６３に示されるＶＨ及び配列番号６４に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号７１～配列番号７５のいずれかに示されるＶＨ及び配列番号７６に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号７２～配列番号７５のいずれかに示されるＶＨ及び配列番号７７に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号７４に示されるＶＨ及び配列番号７８に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（５）それぞれ配列番号７５に示されるＶＨ及び配列番号７９に示されるＶＬと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項８に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項10】

前記融合タンパク質の前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、前記ジスルフィド結合を形成するために導入された２つ以上のシステイン変異を含み、
前記ｈＩＬ－２変異タンパク質は、前記第１システイン残基を導入するために、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する第４２位、第６０位、第６１位、第６４位、第６５位、第１０２位、及び第１０４位に１つ以上のシステイン変異を有し、
前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、（１）アミノ酸配列がＸ_１ＹＹＸ_２Ｈ（Ｘ_１＝Ａ、Ｘ_２＝Ｍ、配列番号１４に示される）であるＨＣＤＲ１、（２）アミノ酸配列がＲＩＤＰＺ_１ＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＸ_３（Ｚ_１＝Ｅ又はＤ、Ｘ_３＝Ｇ）であるＨＣＤＲ２、（３）アミノ酸配列がＺ_２ＴＦＺ_３ＹＺ_４ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ_２＝Ｖ又はＩ、Ｚ_３＝Ｙ又はＬ、Ｚ_４＝Ｓ又はＴ）であるＨＣＤＲ３、（４）アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ_５ＩＺ_６ＮＹＬＳ（Ｚ_５＝Ｄ又はＹ、Ｚ_６＝Ｇ又はＳ）であるＬＣＤＲ１、（５）アミノ酸配列がＺ_７ＡＺ_８ＳＬＡＸ_４（Ｚ_７＝Ｓ又はＱ、Ｚ_８＝Ｔ、Ｘ_４＝Ｓ）であるＬＣＤＲ２、及び（６）アミノ酸配列がＬＱＨＹＳＴＰＹＴ（配列番号１２に示される）であるＬＣＤＲ３を含み、前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、前記第２システイン残基を導入するために、ＨＣＤＲ３の第３位、ＬＣＤＲ１の第７位、第８位及び／若しくは第９位、ＬＣＤＲ２の第１位及び第３位、ＬＣＤＲ３の第４位、並びに／又は前記軽鎖可変領域の第６７位及び／若しくは第６８位に１つ以上のシステイン変異を有する、請求項５に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項11】

前記融合タンパク質の前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面にジスルフィド結合を形成するための前記第１システイン残基及び前記第２システイン残基のペアは、以下のペアリングされたアミノ酸変異、
（１）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第４２位における変異Ｆ４２Ｃ、第６４位における変異Ｋ６４Ｃ、若しくは第６５位における変異Ｐ６５Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片におけるＨＣＤＲ３の第３位における変異Ｆ３Ｃによって導入される、
（２）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第６０位における変異Ｅ６０Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片におけるＬＣＤＲ１の第７位における変異Ｇ７Ｃ若しくはＳ７Ｃによって導入される、
（３）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第６１位における変異Ｅ６１Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片における、ＬＣＤＲ１の第７位における変異Ｇ７Ｃ若しくはＳ７Ｃ、若しくはＬＣＤＲ１の第８位における変異Ｎ８Ｃ、若しくはＬＣＤＲ２の第１位における変異Ｓ１Ｃ若しくはＱ１Ｃによって導入される、
（４）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０４位における変異Ｍ１０４Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片におけるＬＣＤＲ２の第３位における変異Ｔ３Ｃによって導入される、
（５）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０２位における変異Ｔ１０２Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片の軽鎖可変領域の第６７位における変異Ｓ６７Ｃ、若しくは前記軽鎖可変領域の第６８位における変異Ｇ６８Ｃによって導入される、及び／又は
（６）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第６４位における変異Ｋ６４Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片におけるＬＣＤＲ１の第９位における変異Ｙ９Ｃ、若しくはＬＣＤＲ３の第４位における変異Ｙ４Ｃによって導入される
のうちの１つ以上から選択されるか、
あるいは、前記融合タンパク質の前記ｈＩＬ－２変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面に前記ジスルフィド結合を形成するための前記第１システイン残基及び前記第２システイン残基のペアは、以下のペアリングされたアミノ酸変異、
（１）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０４位における変異Ｍ１０４Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ２の第３位における変異Ｔ３Ｃによって導入され、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む、
（２）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第１０２位における変異Ｔ１０２Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片の前記軽鎖可変領域の第６７位における変異Ｓ６７Ｃ、若しくは第６８位における変異Ｇ６８Ｃによって導入され、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片は、配列番号７７に示されるＶＬと８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、
（３）前記第１システイン残基は、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対応する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質の第４２位における変異Ｆ４２Ｃ、第６４位における変異Ｋ６４Ｃ、若しくは第６５位における変異Ｐ６５Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片におけるＨＣＤＲ３の第３位における変異Ｆ３Ｃによって導入され、前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片は、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む
のうちの１つ以上から選択される、請求項１０に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項12】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３及び／又は前記軽鎖可変領域は１つ以上の導入されたシステイン残基変異を含み、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、（１）アミノ酸配列がＸ _１ ＹＹＸ _２ Ｈ（Ｘ _１ ＝Ａ、Ｘ _２ ＝Ｍ、配列番号１４に示される）であるＨＣＤＲ１、（２）アミノ酸配列がＲＩＤＰＺ _１ ＤＤＳＴＫＹＡＥＮＦＫＸ _３ （Ｚ _１ ＝Ｅ又はＤ、Ｘ _３ ＝Ｇ）であるＨＣＤＲ２、（３）アミノ酸配列がＺ _２ ＴＸ _ＩＩ Ｚ _３ ＹＺ _４ ＲＥＬＲＷＦＡＹ（Ｚ _２ ＝Ｖ又はＩ、Ｘ _ＩＩ ＝Ｆ又はＣ、Ｚ _３ ＝Ｙ又はＬ、Ｚ _４ ＝Ｓ又はＴ）であるＨＣＤＲ３、（４）アミノ酸配列がＱＡＳＱＺ _５ ＩＺ _６ Ｘ _Ｉ Ｘ _ＩＶ ＬＳ（Ｚ _５ ＝Ｄ又はＹ、Ｚ _６ ＝Ｇ、Ｓ又はＣ、Ｘ _Ｉ ＝Ｎ又はＣ、Ｘ _ＩＶ ＝Ｙ又はＣ）であるＬＣＤＲ１、（５）アミノ酸配列がＺ _７ ＡＺ _８ ＳＬＡＸ _４ （Ｚ _７ ＝Ｓ、Ｑ又はＣ、Ｚ _８ ＝Ｔ又はＣ、Ｘ _４ ＝Ｓ）であるＬＣＤＲ２、及び（６）アミノ酸配列がＬＱＨＸ _ＩＩＩ ＳＴＰＹＴ（Ｘ _ＩＩＩ ＝Ｙ又はＣ）であるＬＣＤＲ３を含むか、
あるいは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、軽鎖可変領域の第１位又は前記抗ＩＬ－２抗体若しくはそのその抗原結合断片のＬＣＤＲ１の第４位にアミノ酸変異をさらに有し、前記アミノ酸変異は、軽鎖可変領域の第１位におけるＤ１Ｅ、又はＬＣＤＲ１の第４位におけるＱ４Ｄ、Ｑ４Ｅ、Ｑ４Ｓ、Ｑ４Ｇ、Ｑ４Ｋ、若しくはＱ４Ｒを含み、任意に、前記アミノ酸変異は、軽鎖可変領域の第１位におけるＤ１Ｅ、又はＬＣＤＲ１の第４位におけるＱ４Ｄ、Ｑ４Ｅ、Ｑ４Ｓ、若しくはＱ４Ｇを含む
請求項５に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項13】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３及び前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、
（１）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号３０若しくは配列番号３１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、
（２）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７、配列番号３２若しくは配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、
（３）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３若しくは配列番号４４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、
（４）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号３５、配列番号３６若しくは配列番号３７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、
（５）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７、配列番号３２若しくは配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、
（６）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、並びに／又は
（７）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号３８に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含み、
任意に、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、
（１）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１０、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１若しくは配列番号４２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又は
（２）配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７若しくは配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含む、請求項１２に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項14】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号６３、配列番号８６、配列番号７４若しくは配列番号１１２に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号６４、配列番号７７、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号９２、配列番号９３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０若しくは配列番号１１１に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
任意に、前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号８６若しくは配列番号７４に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号６４、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、配列番号９１、配列番号１０７、配列番号１０８若しくは配列番号１０９に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、
あるいは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、
（１）それぞれ配列番号８６に示される重鎖可変領域及び配列番号６４、配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０若しくは配列番号９１に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号７４に示される重鎖可変領域及び配列番号１０７、配列番号１０８若しくは配列番号１０９に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１０に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項15】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、野生型ｈＩＬ－２とｈＩＬ－２のＩＬ２Ｒα結合部位を特異的に識別する他の抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片とを含み、前記融合タンパク質の前記野生型ｈＩＬ－２と前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面は、導入されたジスルフィド結合を含み、前記抗ＩＬ－２ヒト化抗体は、ＮＡＲＡ１抗体及びＴＣＢ２抗体から選択され、
前記ＮＡＲＡ１抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、
前記ＴＣＢ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含み、
前記ＮＡＲＡ１抗体又はその抗原結合断片を含む前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の前記抗原－抗体結合界面は、前記ｈＩＬ－２のＡＢループ、Ｂヘリックス及びＢＣループに位置し、任意に、前記抗原－抗体結合界面は、前記ｈＩＬ－２における第３０位～第４３位又はその隣接するアミノ酸残基及び第７１位～第７７位又はその隣接するアミノ酸残基に位置し、
前記ＴＣＢ２抗体又はその抗原結合断片を含む前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の前記抗原－抗体結合界面は、前記ｈＩＬ－２のＡＢループ、Ｂヘリックス及びＢＣループに位置し、任意に、前記抗原－抗体結合界面は、前記ｈＩＬ－２における第３４位～第４５位又はその隣接するアミノ酸残基、第６２位～第７６位又はその隣接するアミノ酸残基、及び第１１１位又は隣接するアミノ酸残基に位置する
請求項２に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項16】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質の前記ｈＩＬ－２と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の前記抗原－抗体結合界面は、前記ジスルフィド結合を形成するための２つ以上の導入されたシステイン残基を含み、前記ｈＩＬ－２は、前記第１システイン残基を導入するために、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対して第３４位、第３７位、第４１位、第４２位、第６８位、第７３位、第７５位、第７７位及び第１１１位に１つ以上のシステイン変異を有し、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片は、前記第２システイン残基を導入するために、ＨＣＤＲ１の第１位、ＨＣＤＲ２の第２位、第６位及び／若しくは第８位、ＨＣＤＲ３の第３位及び／若しくは第８位、ＬＣＤＲ１の第９位、並びに／若しくはＬＣＤＲ３の第３位、第４位、及び／若しくは第６位に１つ以上のシステイン変異を含むか、又は
前記ｈＩＬ－２は、前記第１システイン残基を導入するために、配列番号１に示される野生型ｈＩＬ－２のアミノ酸配列に対して第３４位、第３６位、第３７位、第３８位、第４２位、第６８位及び第１０９位に１つ以上のアミノ酸変異を有し、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片は、第２システイン残基を導入するために、ＨＣＤＲ２の第６位、ＨＣＤＲ３の第３位、第５位、第６位及び／若しくは第７位、ＬＣＤＲ１の第４位、並びに／若しくはＬＣＤＲ３の第４位、第５位、及び／若しくは第６位に１つ以上のシステイン変異を含む
請求項１５に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項17】

前記ｈＩＬ－２と前記ＮＡＲＡ１抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面に前記ジスルフィド結合を形成するための前記第１システイン残基及び前記第２システイン残基のペアは、以下のペアリングされたアミノ酸変異、
（１）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３４位における変異Ｐ３４Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ３の第８位における変異Ａ８Ｃ、若しくはＬＣＤＲ３の第３位若しくは第４位における変異Ｓ３Ｃ若しくはＮ４Ｃによって導入される、
（２）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３７位における変異Ｔ３７Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ３の第６位における変異Ｄ６Ｃによって導入される、
（３）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第４１位における変異Ｔ４１Ｃであり、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ２の第２位における変異Ｉ２Ｃによって導入される、
（４）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第４２位における変異Ｆ４２Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ２の第８位における変異Ｇ８Ｃによって導入される、
（５）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第６８位における変異Ｅ６８Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ１の第１位における変異Ｎ１Ｃによって導入される、
（６）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第７３位における変異Ａ７３Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ３の第３位における変異Ｇ３Ｃによって導入される、
（７）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第７５位若しくは第７７位における変異Ｓ７５Ｃ若しくはＮ７７Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ１の第９位における変異Ｄ９Ｃによって導入される、並びに／又は
（８）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第１１１位における変異Ｔ１１１Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＮＡＲＡ１抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ２の第６位における変異Ｓ６Ｃによって導入される
のうちの１つ以上から選択されるか、
あるいは、前記ｈＩＬ－２と前記ＴＣＢ２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面に前記ジスルフィド結合を形成するための前記第１システイン残基及び前記第２システイン残基のペアは、以下のペアリングされたアミノ酸変異、
（１）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３４位における変異Ｐ３４Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ１の第４位における変異Ｔ４Ｃ、若しくはＬＣＤＲ３の第４位若しくは第５位における変異Ｄ４Ｃ若しくはＮ５Ｃによって導入される、
（２）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３６位における変異Ｌ３６Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ３の第５位における変異Ｎ５Ｃによって導入される、
（３）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３７位における変異Ｔ３７Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＬＣＤＲ３の第５位若しくは第６位における変異Ｎ５Ｃ若しくはＬ６Ｃによって導入される、
（４）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第３８位における変異Ｒ３８Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ３の第７位における変異Ｆ７Ｃによって導入される、
（５）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第４２位における変異Ｆ４２Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ３の第５位における変異Ｒ５Ｃによって導入される、
（６）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第６８位における変異Ｅ６８Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ３の第３位若しくは第６位における変異Ａ３Ｃ若しくはＧ６Ｃによって導入される、及び／又は
（７）前記第１システイン残基は、前記ｈＩＬ－２の第１０９位における変異Ｄ１０９Ｃによって導入され、前記第２システイン残基は、前記ＴＣＢ２抗体若しくはその抗原結合断片のＨＣＤＲ２の第６位における変異Ｄ６Ｃによって導入される
のうちの１つ以上から選択される、請求項１６に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項18】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、及び／又はＬＣＤＲ３は１つ以上のシステイン変異を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、
（１）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４９に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、
（２）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１５２若しくは配列番号１５３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、
（３）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１５４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、
（４）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１５５、配列番号１５６若しくは配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、
（５）配列番号１４８に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、又は
（６）配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１５０若しくは配列番号１５１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含むか、
あるいは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、及び／又はＬＣＤＲ３は１つ以上のシステイン変異を含み、前記重鎖可変領域のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３、並びに前記軽鎖可変領域のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３は、
（１）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９若しくは配列番号１８０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４としてのアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、
（２）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７６に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、
（３）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１８１に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３、
（４）配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、及び配列番号１８２、配列番号１８３若しくは配列番号１８４に示されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３
を含む、請求項１７に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項19】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域並びに／又はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１４０、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２若しくは配列番号１６３に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１４１、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６若しくは配列番号１６７に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
任意に、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、
（１）それぞれ配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２若しくは配列番号１６３に示される重鎖可変領域及び配列番号１４１に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号１４０に示される重鎖可変領域及び配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６若しくは配列番号１６７に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含むか、
あるいは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は、それぞれ配列番号１６８、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７、配列番号１８８若しくは配列番号１８９に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、それぞれ配列番号１６９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２若しくは配列番号１９３に示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
任意に、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、
（１）それぞれ配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７、配列番号１８８若しくは配列番号１８９に示される重鎖可変領域及び配列番号１６９に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号１６８に示される重鎖可変領域及び配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２若しくは配列番号１９３に示される軽鎖可変領域と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項１７に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項20】

前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片は、リンカーによってｈＩＬ－２又はその変異タンパク質に連結され、任意に、前記リンカーは（Ｇ４Ｓ）_４、（Ｇ４Ｓ）_３、（ＧＡＦ）_２から選択される、請求項１に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項21】

前記ＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドを含み、前記第１ポリペプチドは、前記システイン残基の変異を有するｈＩＬ－２又はその変異タンパク質、リンカー及び前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の１つの可変領域を含み、別のシステイン変異が前記第１ポリペプチドにおける前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片の１つの可変領域及び／又は前記第２ポリペプチドにおける前記抗ＩＬ－２抗体若しくはその抗原結合断片の前記別の可変領域に配置されることにより、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質における前記システイン変異と正確にペアリングされて安定なジスルフィド結合が形成され、前記ジスルフィド結合は、前記ｈＩＬ－２又はその変異タンパク質と前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片との前記抗原－抗体結合界面に位置し、
任意に、前記第１ポリペプチドは、システイン変異を有する前記ｈＩＬ－２変異タンパク質、リンカー及び前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の重鎖可変領域を含み、前記第２ポリペプチドは前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の軽鎖可変領域を含み、前記第１ポリペプチドは、配列番号９５～配列番号１０３、配列番号１１３～配列番号１２０、若しくは配列番号１３３～配列番号１３８のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記第２ポリペプチドは、配列番号６４、配列番号７７、配列番号８０～配列番号８５、配列番号８７～配列番号９３、若しくは配列番号１０４～配列番号１１１のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、
前記第１ポリペプチドは、システイン変異を有するｈＩＬ－２変異タンパク質、リンカー及び前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の軽鎖可変領域を含み、前記第２ポリペプチドは前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の重鎖可変領域を含み、前記第１ポリペプチドは、配列番号２０６～配列番号２１６のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記第２ポリペプチドは、配列番号１４０若しくは配列番号１５８～配列番号１６３のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又は
前記第１ポリペプチドは、システイン変異を有するｈＩＬ－２変異タンパク質、リンカー及び前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の軽鎖可変領域を含み、前記第２ポリペプチドは前記抗ＩＬ－２抗体又はその抗原結合断片の重鎖可変領域を含み、前記第１ポリペプチドは、配列番号２１７～配列番号２２６のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ／又は前記第２ポリペプチドは、配列番号１６８若しくは配列番号１８５～配列番号１８９のいずれかに示される配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む
請求項１に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項22】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の第１ポリペプチド及び第２ポリペプチド、
（１）それぞれ配列番号９５に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８０に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号９６に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８１に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号９７に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８２に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号９８に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８３に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（５）それぞれ配列番号９９に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８４に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（６）それぞれ配列番号１００に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８５に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（７）それぞれ配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３及び配列番号１３３～配列番号１３８のいずれかに示される前記第１ポリペプチド及び配列番号６４に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（８）それぞれ配列番号１０２に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号８７～配列番号９３のいずれかに示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（９）それぞれ配列番号１１３に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１０４、配列番号１０５若しくは配列番号１０６に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１０）それぞれ配列番号１１４に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１０７に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１１）それぞれ配列番号１１５に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１０８若しくは配列番号１０９に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１２）それぞれ配列番号１１６、配列番号１１７若しくは配列番号１１９に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号７７に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１３）それぞれ配列番号１１８に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１１０に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１４）それぞれ配列番号１２０に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１０４に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（１５）それぞれ配列番号１１８に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１１１に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含むか、
あるいは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の第１及び第２のポリペプチド、
（１）それぞれ配列番号２０６に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１５８に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号２０７に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１５９に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号２０８に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１６０に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号２０９～配列番号２１３のいずれかに示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１４０に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（５）それぞれ配列番号２１４に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１６１に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（６）それぞれ配列番号２１５に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１６２に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（７）それぞれ配列番号２１６に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１６３に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含むか、あるいは、前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、以下の第１及び第２のポリペプチド、
（１）それぞれ配列番号２１７に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１８５若しくは配列番号１８７に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（２）それぞれ配列番号２１８に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１８６に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（３）それぞれ配列番号２１９に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１８８に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（４）それぞれ配列番号２２０に示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１８９に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列、又は
（５）それぞれ配列番号２２１～配列番号２２６のいずれかに示される前記第１ポリペプチド及び配列番号１６８に示される前記第２ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列
を含む、請求項２１に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項23】

前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質は、抗体の重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含み、前記重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域のＦｃ領域の天然及び変異体の形態を含み、二量体形成を促進するヒンジ領域を含むポリペプチドの切断形態を更に含み、
任意に、前記Ｆｃ領域は工学的に改変されたヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含み、前記工学的に改変されたヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、以下の１つ以上のアミノ酸置換変異、
（１）Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ（ＥＵ番号システム）、及び／又は
（２）Ｎ２０３Ｄ／Ｋ２７４Ｑ／Ｑ４１９Ｅ（ＥＵ番号システム）
を含み、任意に、前記重鎖定常領域は、配列番号２２７又は配列番号２２８に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質。

【請求項24】

請求項１から請求項２３のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。

【請求項25】

宿主の免疫応答を改善することによって疾患、病状若しくは障害を治療すること、又は免疫系を刺激すること、又は宿主免疫系に対する刺激が有益である疾患状態を治療するか、緩和するか若しくは予防することに使用するための、請求項１から請求項２３のいずれか１項に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質又はその医薬組成物であって、前記疾患、病状、障害又は疾患状態は、増殖性疾患、感染性疾患及び免疫不全疾患を含み、前記増殖性疾患は癌及び他の細胞増殖性障害を含み、前記癌は、扁平上皮癌、肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿道癌、肝腫瘍、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌又は子宮体癌、唾液腺癌、腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、表在拡大型黒色腫、悪性黒子型黒色腫、末端黒子型黒色腫、結節型黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病、及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、並びにケロイド疾患、浮腫及びメイグス症候群に関連する異常な血管増殖、脳腫瘍及び脳癌、並びに頭頸部癌から選択され、前記免疫不全疾患はＨＩＶ陽性、免疫抑制疾患、慢性感染性疾患を含む、ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質又はその医薬組成物。

【請求項26】

使用するための前記ｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質又はその医薬組成物は、免疫チェックポイント阻害剤、抗原特異的免疫治療剤、化学療法剤、エピジェネティックス修飾剤、サイトカイン、成長因子、阻害剤、腫瘍抗原を標的とする抗体、腫瘍ワクチン、及び／又は他の癌療法からなる群から選択される１つ以上と組み合わされる、請求項２５に記載のｈＩＬ－２／ＩＬ－２抗体融合タンパク質又はその医薬組成物。

【国際調査報告】