特表 2024-539993 システイン変異抗体を含むＴＬＲアゴニスト免疫複合体、及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-31

(54)【発明の名称】システイン変異抗体を含むＴＬＲアゴニスト免疫複合体、及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20241024BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20241024BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 31/55 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 31/4745 20060101ALI20241024BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

C07K19/00

A61K45/00

A61K47/68

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61P35/00

A61K31/55

A61K31/4745

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024524982

(86)(22)【出願日】2022-10-28

(85)【翻訳文提出日】2024-06-13

(86)【国際出願番号】 US2022048224

(87)【国際公開番号】W WO2023076599

(87)【国際公開日】2023-05-04

(31)【優先権主張番号】63/273,379

(32)【優先日】2021-10-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519211672

【氏名又は名称】ボルト バイオセラピューティクス、インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】アッカーマン， シェリー エリン

(72)【発明者】

【氏名】アロンソ， マイケル エヌ．

(72)【発明者】

【氏名】グリューネバルト， ヤン

(72)【発明者】

【氏名】クディルカ， ロマス

(72)【発明者】

【氏名】サフィナ， ブライアン

(72)【発明者】

【氏名】サルマ， ガナパティ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076BB13

4C076BB16

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE59

4C084AA17

4C084MA65

4C084MA66

4C084MA70

4C084NA14

4C084ZB261

4C084ZC512

4C085AA13

4C085BB11

4C085GG02

4C085GG04

4C085GG10

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC31

4C086CB05

4C086GA07

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA65

4C086MA66

4C086NA13

4C086NA14

4C086ZB26

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA11

4H045BA12

4H045BA13

4H045BA41

4H045BA50

4H045CA40

4H045DA75

4H045EA20

4H045FA10

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、１つ以上のＴＬＲアゴニスト部分にリンカーによって共有結合したシステイン変異抗体を含む免疫複合体を提供する。本発明はさらに、免疫複合体によりがんを治療する方法を提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

１つ以上のＴＬＲアゴニスト部分にリンカーによって共有結合したシステイン変異抗体を含む、免疫複合体。

【請求項2】

前記システイン変異抗体は、ヒンジ領域にシステイン変異を含む、請求項１に記載の免疫複合体。

【請求項3】

前記システイン変異抗体は、ＥＵ方式に従って番号が付けられたＫ１４５Ｃ、Ｓ１１４Ｃ、Ｅ１０５Ｃ、Ｓ１５７Ｃ、Ｌ１７４Ｃ、Ｇ１７８Ｃ、Ｓ１５９Ｃ、Ｖ１９１Ｃ、Ｌ２０１Ｃ、Ｓ１１９Ｃ、Ｖ１６７Ｃ、Ｉ１９９Ｃ、Ｔ１２９Ｃ、Ｑ１９６Ｃ、Ａ３７８Ｃ、Ｋ１４９Ｃ、Ｋ１８８Ｃ、及びＡ１４０Ｃから成る群から選択されるシステイン変異を含む、請求項１に記載の免疫複合体。

【請求項4】

前記システイン変異抗体は、以下からなる群から選択される配列に軽鎖システイン変異を含む、請求項３に記載の免疫複合体。

【表1】

【請求項5】

前記システイン変異抗体の重鎖は、配列番号２０の配列を有する、請求項４に記載の免疫複合体。

【請求項6】

前記システイン変異抗体の軽鎖は、配列番号２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、及び３２から選択される、請求項４に記載の免疫複合体。

【請求項7】

前記システイン変異抗体は、以下からなる群から選択される配列に重鎖システイン変異を含む、請求項３に記載の免疫複合体。

【表2】

【請求項8】

前記システイン変異抗体の軽鎖は、配列番号２１の配列を有する、請求項７に記載の免疫複合体。

【請求項9】

前記システイン変異抗体の重鎖は、配列番号３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、及び４１から選択される、請求項７に記載の免疫複合体。

【請求項10】

前記システイン変異抗体は、以下からなる群から選択される配列に軽鎖システイン変異を含む、請求項３に記載の免疫複合体。

【表3】

【請求項11】

前記システイン変異抗体の重鎖は、配列番号２２の配列を有する、請求項１０に記載の免疫複合体。

【請求項12】

前記システイン変異抗体の軽鎖は、配列番号４２、４３、及び４４から選択される、請求項１０に記載の免疫複合体。

【請求項13】

前記システイン変異抗体は、以下の配列に重鎖システイン変異を含む、請求項３に記載の免疫複合体。

【表4】

【請求項14】

前記システイン変異抗体の軽鎖は、配列番号２３の配列を有する、請求項１３に記載の免疫複合体。

【請求項15】

前記システイン変異抗体の重鎖は、配列番号４５の配列を有する、請求項１３に記載の免疫複合体。

【請求項16】

前記システイン変異抗体は、ＰＤ－Ｌ１、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、及びＴＲＯＰ２から選択される抗原に結合する、請求項１に記載の免疫複合体。

【請求項17】

前記システイン変異抗体は、ＨＥＲ２に結合し、
配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１と、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１と、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３とを含む、請求項１６に記載の免疫複合体。

【請求項18】

前記システイン変異抗体は、ＴＲＯＰ２に結合し、
ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１と、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１と、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３とを含むか、または
ｂ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１と、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１と、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３とを含む、請求項１６に記載の免疫複合体。

【請求項19】

前記システイン変異抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、
配列番号８９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１と、配列番号９１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１と、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３とを含む、請求項１６に記載の免疫複合体。

【請求項20】

前記システイン変異抗体は、ＣＥＡに結合し、
配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１と、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３と、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１と、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３とを含む、請求項１６に記載の免疫複合体。

【請求項21】

式Ｉ：
Ａｂ－［Ｌ－Ｄ］_ｐ Ｉ
またはその薬学的に許容される塩を有し、
式中、
Ａｂは、前記システイン変異抗体であり；
ｐは、１～８の整数であり；
Ｌは、前記リンカーであり；
Ｄは、式ａ～ｆ：

【化1】

から選択される前記ＴＬＲアゴニスト部分であり；
Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３及びＸ^４は、独立して、結合、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）、Ｏ、Ｎ（Ｒ^５）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）_２、及びＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^５）から成る群から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、及びＲ^４は、独立して、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２～Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル、及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールからなる群から選択され、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールは、独立して、任意に
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＲ^５；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５）ＮＲ^５－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリール）；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリル）；
－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリル）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）ＮＲ^５－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－ＮＲ^５－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリール）；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^５；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｒ^５；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_８アルキルジイル）－ＮＲ^５（Ｃ_２～Ｃ_５ヘテロアリール）；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^５；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５；
－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２（Ｒ^５）－＊；
－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｒ^５；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_２～Ｃ_５ヘテロアリール）；
－Ｎ（Ｒ^５）－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）；
－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）；
－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－＊；及び
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＨから選択される１つ以上の基で置換され；
またはＲ^２及びＲ^３は、一緒に５もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し；
Ｒ^５は、Ｈ、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル、Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリル、Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、及びＣ_１～Ｃ_１２アルキルジイルから成る群から選択されるか、または２つのＲ^５基は一緒に５員もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し；
Ｒ^５ａは、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールから成る群から選択され；
ここで、アスタリスク＊はＬの結合部位を示し、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４の１つがＬに結合し；
Ｌは、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ^＋（Ｒ^６）_２－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－から成る群から選択される前記リンカーであり；
Ｒ^６は、独立してＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルであり；
ＰＥＧは、式：－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－を有し；ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり；
Ｇｌｕｃは、式：

【化2】

を有し；
ＰＥＰは、式：

【化3】

を有し、ＡＡは独立して天然のまたは非天然のアミノ酸側鎖から選択され、またはＡＡの１以上と隣接する窒素原子とが５員環プロリンアミノ酸を形成し、波線は結合点を示し；
Ｃｙｃは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ_２、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３及び以下の構造を有するグルクロン酸から選択される１以上の基によって任意で置換されるＣ_６－Ｃ_２０アリールジイル及びＣ_１－Ｃ_２０ヘテロアリールジイルから選択され、

【化4】

Ｒ^７は－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２Ｎ（Ｒ^８）－、及び－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－から成る群から選択され、Ｒ^８はＨ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^９）_２から選択され、Ｒ^９は独立してＨ、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキル、及び－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＯＨから成る群から選択され、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ^９基は一緒に５もしくは６員環のヘテロシクリル環を形成し；
ｙは２～１２の整数であり；
ｚは０または１であり；
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール及びヘテロアリールジイルは任意に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨＦ_２、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＨＦ_２、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＮＨＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＮＨＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯＣＨ_３、－ＣＯ_２ＣＨ_３、－ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、－ＣＯＮＨ_２、－ＣＯＮＨＣＨ_３、－ＣＯＮ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＨＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＮＨＣＯＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＯＣＨ_３、－ＮＨＳ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＯ_２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＳＣＨ_３、－Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、及び－Ｓ（Ｏ）_３Ｈから独立して選択される１以上の基で置換される、請求項１～２０のいずれか１項に記載の免疫複合体。

【請求項22】

前記ＴＬＲアゴニスト部分は、式ａ：

【化5】

を有する、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項23】

前記ＴＬＲアゴニスト部分は、式ｂ：

【化6】

を有する、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項24】

前記ＴＬＲアゴニスト部分は、式ｃ：

【化7】

を有する、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項25】

前記ＴＬＲアゴニスト部分は、式ｄ：

【化8】

を有する、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項26】

前記ＴＬＲアゴニスト部分は、式ｅ：

【化9】

を有する、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項27】

前記ＴＬＲアゴニスト部分は、式ｆ：

【化10】

を有する、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項28】

Ｘ^１は結合であり、Ｒ^１はＨである、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項29】

Ｘ^２は結合であり、Ｒ^２はＣ_１～Ｃ_８アルキルである、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項30】

Ｘ^２及びＸ^３はそれぞれ結合であり、Ｒ^２及びＲ^３は、Ｃ_１～Ｃ_８アルキル、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）、－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＲ^５、－（Ｃ_１～Ｃ_８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５、－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５、及び－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２から独立して選択される、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項31】

Ｒ^２は、Ｃ_１～Ｃ_８アルキルであり、Ｒ^３は、－（Ｃ_１～Ｃ_８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^４であることを含む、請求項３０に記載の免疫複合体。

【請求項32】

Ｒ^２は、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３であり、Ｒ^３は、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣＯ_２（ｔ－Ｂｕ）、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣＯ_２（シクロブチル）、及び－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣＯ_２（シクロブチル）から選択される、請求項３０に記載の免疫複合体。

【請求項33】

Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立して－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＦ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、及び－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨから選択される、請求項３０に記載の免疫複合体。

【請求項34】

Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３である、請求項３０に記載の免疫複合体。

【請求項35】

Ｒ^２は、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３であり、Ｒ^３は、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３である、請求項３０に記載の免疫複合体。

【請求項36】

Ｘ^３－Ｒ^３は、

【化11】

から成る群から選択される、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項37】

Ｒ^２またはＲ^３は、Ｌに結合している、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項38】

Ｘ^３－Ｒ^３－Ｌは、

【化12】

から成る群から選択され、波線はＮとの結合点を示す、請求項３７に記載の免疫複合体。

【請求項39】

Ｒ^４は、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルである、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項40】

Ｒ^４は、－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊であり、アスタリスク＊は、Ｌの結合部位を示す、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項41】

Ｌは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－または－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－である、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項42】

Ｌは、前記抗体のシステインチオールに結合している、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項43】

前記ＰＥＧについて、ｍは１または２であり、ｎは２～１０の整数である、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項44】

ｎは１０である、請求項４３に記載の免疫複合体。

【請求項45】

Ｌは、ＰＥＰを含み、ＰＥＰはジペプチドであり、式：

【化13】

を有する、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項46】

ＡＡ_１及びＡＡ_２は、Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２（Ｃ_６Ｈ_５）、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ_２、－ＣＨＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＳＯ_３Ｈ、及び－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２から独立して選択されるか、またはＡＡ_１及びＡＡ_２は、５員環プロリンアミノ酸を形成する、請求項４５に記載の免疫複合体。

【請求項47】

ＡＡ_１は、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２であり、ＡＡ_２は、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２である、請求項４５に記載の免疫複合体。

【請求項48】

ＡＡ_１及びＡＡ_２は、ＧｌｃＮＡｃアスパラギン酸、－ＣＨ_２ＳＯ_３Ｈ、及び－ＣＨ_２ＯＰＯ_３Ｈから独立して選択される、請求項４５に記載の免疫複合体。

【請求項49】

ＰＥＰは、式：

【化14】

を有し、ここでＡＡ_１及びＡＡ_２は独立して、天然に存在するアミノ酸の側鎖から選択される、請求項４５に記載の免疫複合体。

【請求項50】

Ｌは、ＰＥＰを含み、ＰＥＰはトリペプチドであり、式：

【化15】

を有する、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項51】

Ｌは、ＰＥＰを含み、ＰＥＰはテトラペプチドであり、式：

【化16】

を有する、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項52】

ＡＡ_１はＡｂｕ、Ａｌａ及びＶａｌから成る群から選択され；
ＡＡ_２はＮｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）、Ｏｉｃ及びＰｒｏから成る群から選択され；
ＡＡ_３はＡｌａ及びＭｅｔ（Ｏ）_２から成る群から選択され；
ＡＡ_４はＯｉｃ、Ａｒｇ（ＮＯ_２）、Ｂｐａ、及びＮｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）から成る群から選択される、請求項５１に記載の免疫複合体。

【請求項53】

Ｌは、ＰＥＰを含み、ＰＥＰはＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、及びＡｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｖａから成る群から選択される、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項54】

Ｌは、ＰＥＰを含み、ＰＥＰは、構造：

【化17】

から選択される、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項55】

Ｌは、構造：

【化18】

から選択され、波線はＲ^５との結合を示す、請求項２１に記載の免疫複合体。

【請求項56】

ＴＬＲアゴニスト－リンカー化合物とのシステイン変異抗体のコンジュゲーションによって調製される、免疫複合体。

【請求項57】

前記ＴＬＲアゴニスト－リンカー化合物は、式ａ～ｆ：

【化19】

から選択され；
Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３及びＸ^４は、独立して、結合、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）、Ｏ、Ｎ（Ｒ^５）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）_２、及びＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^５）から成る群から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、及びＲ^４は、独立して、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２～Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル、及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールからなる群から選択され、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールは、独立して、任意に
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＲ^５；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５）ＮＲ^５－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリール）；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリル）；
－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリル）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）ＮＲ^５－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－ＮＲ^５－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリール）；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^５；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｒ^５；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_８アルキルジイル）－ＮＲ^５（Ｃ_２～Ｃ_５ヘテロアリール）；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^５；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５；
－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２（Ｒ^５）－＊；
－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｒ^５；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_２～Ｃ_５ヘテロアリール）；
－Ｎ（Ｒ^５）－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）；
－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）；
－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－＊；及び
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＨから選択される１つ以上の基で置換され；
またはＲ^２及びＲ^３は、一緒に５もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し；
Ｒ^５は、Ｈ、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル、Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリル、Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、及びＣ_１～Ｃ_１２アルキルジイルから成る群から選択されるか、または２つのＲ^５基は一緒に５員もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し；
Ｒ^５ａは、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールから成る群から選択され；
ここで、アスタリスク＊はＬの結合部位を示し、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４の１つがＬに結合し；
Ｌは、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ^＋（Ｒ^６）_２－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル－ＯＣ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル－から成る群から選択されるリンカーであり；
Ｒ^６は、独立してＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルであり；
ＰＥＧは、式：－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－を有し；ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり；
Ｇｌｕｃは、式：

【化20】

を有し；
ＰＥＰは、式：

【化21】

を有し、ＡＡは独立して天然のまたは非天然のアミノ酸側鎖から選択され、またはＡＡの１以上と隣接する窒素原子とが５員環プロリンアミノ酸を形成し、波線は結合点を示し；
Ｃｙｃは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ_２、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３及び以下の構造を有するグルクロン酸から選択される１以上の基によって任意で置換されるＣ_６－Ｃ_２０アリールジイル及びＣ_１－Ｃ_２０ヘテロアリールジイルから選択され、

【化22】

Ｒ^７は－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２Ｎ（Ｒ^８）－、及び－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－から成る群から選択され、Ｒ^８はＨ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^９）_２から選択され、Ｒ^９は独立してＨ、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキル、及び－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＯＨから成る群から選択され、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ^９基は一緒に５もしくは６員環のヘテロシクリル環を形成し；
ｙは２～１２の整数であり；
ｚは０または１であり；
Ｑは、マレイミド、ブロモアセトアミド、及びピリジルジスルフィドから成る群から選択され；
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール及びヘテロアリールジイルは任意に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨＦ_２、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＨＦ_２、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＮＨＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＮＨＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯＣＨ_３、－ＣＯ_２ＣＨ_３、－ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、－ＣＯＮＨ_２、－ＣＯＮＨＣＨ_３、－ＣＯＮ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＨＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＮＨＣＯＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＯＣＨ_３、－ＮＨＳ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＯ_２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＳＣＨ_３、－Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、及び－Ｓ（Ｏ）_３Ｈから独立して選択される１以上の基で置換される、請求項５６に記載の免疫複合体。

【請求項58】

Ｑは、マレイミドである、請求項５７に記載の免疫複合体。

【請求項59】

請求項１に記載の免疫複合体を調製する方法であって、ＴＬＲアゴニスト－リンカー化合物は、前記システイン変異抗体とコンジュゲートされる、前記方法。

【請求項60】

前記ＴＬＲアゴニスト－リンカー化合物は、請求項５７に記載のＴＬＲアゴニスト－リンカー化合物である、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

治療有効量の請求項１～５８のいずれか１項に記載の免疫複合体と、１つ以上の薬学的に許容される希釈剤、ビヒクル、担体または賦形剤とを含む、医薬組成物。

【請求項62】

がんを治療するための方法であって、治療有効量の請求項１～５８のいずれか１項に記載の免疫複合体を、それを必要とする患者に投与することを含む、前記方法。

【請求項63】

前記がんは、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８アゴニズムによって誘発される炎症誘発性応答に感受性である、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

前記がんは、ＰＤ－Ｌ１発現がんである、請求項６２に記載の方法。

【請求項65】

前記がんは、ＨＥＲ２発現がんである、請求項６２に記載の方法。

【請求項66】

前記がんは、ＣＥＡ発現がんである、請求項６２に記載の方法。

【請求項67】

前記がんは、ＴＲＯＰ２発現がんである、請求項６２に記載の方法。

【請求項68】

前記がんは、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、食道癌、膀胱癌、尿路癌、尿路上皮癌、肺癌、非小細胞肺癌、メルケル細胞癌、結腸癌、大腸癌、胃癌、及び乳癌から選択される、請求項６２～６７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項69】

前記乳癌は、トリプルネガティブ乳癌である、請求項６８に記載の方法。

【請求項70】

前記メルケル細胞癌は、転移性メルケル細胞癌である、請求項６８に記載の方法。

【請求項71】

前記胃癌は、ＨＥＲ２過剰発現胃癌である、請求項６８に記載の方法。

【請求項72】

前記がんは、胃食道接合部腺癌である、請求項６８に記載の方法。

【請求項73】

前記免疫複合体は、前記患者に静脈内、腫瘍内、または皮下投与される、請求項６２に記載の方法。

【請求項74】

前記免疫複合体は、体重１ｋｇ当たり約０．０１～２０ｍｇの用量で前記患者に投与される、請求項６２に記載の方法。

【請求項75】

がんを治療するための、請求項１～５８のいずれか１項に記載の免疫複合体の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本非仮出願は、２０２１年１０月２９日に出願された米国仮出願第６３／２７３，３７９号に対する優先権の利益を主張するものであり、参照によってその全体が組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、Ｐａｔｅｎｔ Ｃｅｎｔｅｒを介してＸＭＬ形式で提出されており、参照により全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０２２年１０月２８日に作成された上記ＸＭＬコピーは、ＳＴ２６－１７０１９．０１９ＷＯ１．ｘｍｌという名前であり、４０，６６８バイトのサイズである。

【0003】

発明の分野
本発明は、概して、１つ以上のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト部分にコンジュゲートされたシステイン変異抗体を含む免疫複合体に関する。

【背景技術】

【0004】

アクセスできない腫瘍に到達するため、及び／またはがん患者及び他の対象の治療選択肢を拡大するために、抗体及び免疫アジュバントを送達するための新規の組成物及び方法が必要とされている。本発明は、そのような組成物及び方法を提供する。

【発明の概要】

【0005】

本発明は、概して１つ以上のＴＬＲアゴニスト部分にリンカーによって共有結合したシステイン変異抗体を含む免疫複合体に関する。

【0006】

本発明の別の態様は、システイン変異抗体との１つ以上のＴＬＲアゴニスト－リンカー化合物のコンジュゲーションによって免疫複合体を調製する方法である。

【0007】

本発明の別の態様は、１つ以上のＴＬＲアゴニスト部分にリンカーによって共有結合したシステイン変異抗体を含む、治療有効量の免疫複合体と、１つ以上の薬学的に許容される希釈剤、ビヒクル、担体または賦形剤とを含む医薬組成物である。

【0008】

本発明の別の態様は、１つ以上のＴＬＲアゴニスト部分にリンカーによって共有結合したシステイン変異抗体を含む、治療有効量の免疫複合体を投与することを含むがんを治療するための方法である。

【0009】

本発明の別の態様は、疾病、特にがんの治療における１つ以上のＴＬＲアゴニスト部分にリンカーによって共有結合したシステイン変異抗体を含む免疫複合体の使用である。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1】システイン変異免疫複合体Ｌｙｓ ＩＣ－１（表１１）、ＩＣ－２、ＩＣ－３、ＩＣ－４、ＩＣ－８、ＩＣ－１０、ＩＣ－１３、ＩＣ－１６、ＩＣ－１７及びＩＣ－１８（表１０）ならびに非コンジュゲート抗体、トラスツズマブを用いたヒト血液から新たに単離され、ＨＣＣ１９５４腫瘍細胞と共培養された濃縮ヒトｃＤＣ（従来型樹状細胞）の活性化後のＩＬ－１２ｐ７０分泌を示すグラフを示す。ＩＬ－１２ｐ７０の対数産生は、免疫複合体及びトラスツズマブの濃度増加とともにプロットされる。

【図2】システイン変異免疫複合体ＩＣ－１、ＩＣ－１２、ＩＣ－６、ＩＣ－１１、ＩＣ－５、ＩＣ－９、ＩＣ－７、ＩＣ－１４、及びＩＣ－１５（表１０）、Ｌｙｓ ＩＣ－１（表１１）、ならびに非コンジュゲート抗体、トラスツズマブを用いたヒト血液から新たに単離され、ＨＣＣ１９５４腫瘍細胞と共培養された濃縮ヒトｃＤＣ（従来型樹状細胞）の活性化後のＩＬ－１２ｐ７０分泌を示すグラフを示す。ＩＬ－１２ｐ７０の対数産生は、免疫複合体及びトラスツズマブの濃度増加とともにプロットされる。

【図3】システイン変異抗ＨＥＲ２免疫複合体ＩＣ－８、ＩＣ－１３、ＩＣ－１７、及びＩＣ－１０、ならびに対照アミド結合抗ＨＥＲ２複合体Ｌｙｓ ＩＣ－１を用いたヒト血液から新たに単離され、ＨＣＣ１９５４腫瘍細胞と共培養された濃縮ヒトｃＤＣ（従来型樹状細胞）の活性化後のＩＬ－１２ｐ７０分泌を示すグラフを示す。

【図4】システイン変異抗－ＰＤ－Ｌ１免疫複合体ＩＣ－３０、ＩＣ－３１、及び対照アミド結合抗－ＰＤ－Ｌ１複合体Ｌｙｓ ＩＣ－３を用いたヒト血液から新たに単離され、ＰＤ－Ｌ１を過剰発現する改変されたＨＣＣ１９５４細胞株と共培養された濃縮ヒトｃＤＣ（従来型樹状細胞）の活性化後のＩＬ－１２ｐ７０分泌を示すグラフを示す。

【図5】システイン変異抗－ＴＲＯＰ２免疫複合体ＩＣ－２７、ＩＣ－２８、ＩＣ－２９、ＩＣ－３２、及び対照アミド結合抗－ＴＲＯＰ２複合体Ｌｙｓ ＩＣ－２を用いたヒト血液から新たに単離され、ＨＰＡＦ ＩＩ膵臓癌腫瘍細胞と共培養された濃縮ヒトｃＤＣ（従来型樹状細胞）の活性化後のＩＬ－１２ｐ７０分泌を示すグラフを示す。

【発明を実施するための形態】

【0011】

これより本発明の特定の実施形態を詳細に参照するが、それらの例は、添付の構造及び式に例証されている。本発明は、列挙される実施形態と組み合わせて説明されるが、それらは、本発明をそれらの実施形態に限定することを意図するものではないことを理解されたい。逆に、本発明は、すべての代替形、修正形、及び同等物を網羅することが意図されており、それらは、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれ得る。

【0012】

当業者であれば、本発明の実施に使用することができる、本明細書に記載されているものに類似または同等である多くの方法及び材料を理解するであろう。本発明は、決して記載されている方法及び材料に限定されるものではない。

【0013】

定義
「Ｔｏｌｌ様受容体」及び「ＴＬＲ」という用語は、病原体関連分子パターンを認識し、自然免疫における重要なシグナル伝達要素として機能する、高度に保存された哺乳動物タンパク質のファミリーのメンバーを指す。ＴＬＲポリペプチドは、ロイシンリッチリピートを有する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＴＬＲシグナル伝達に関与する細胞内ドメインを含む、特徴的な構造を共有している。

【0014】

「Ｔｏｌｌ様受容体７」及び「ＴＬＲ７」という用語は、公的に入手可能なＴＬＲ７配列、例えば、ヒトＴＬＲ７ポリペプチドのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＺ９９０２６またはマウスＴＬＲ７ポリペプチドのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＫ６２６７６に対して、少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上の配列同一性を共有する核酸またはポリペプチドを指す。

【0015】

「Ｔｏｌｌ様受容体８」及び「ＴＬＲ８」という用語は、公的に入手可能なＴＬＲ８配列、例えば、ヒトＴＬＲ８ポリペプチドのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＺ９５４４１またはマウスＴＬＲ７ポリペプチドのＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＡＫ６２６７７に対して、少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上の配列同一性を共有する核酸またはポリペプチドを指す。

【0016】

「ＴＬＲアゴニスト」は、ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８）に直接的または間接的に結合して、ＴＬＲシグナル伝達を誘導する化合物である。ＴＬＲシグナル伝達におけるあらゆる検出可能な差異は、アゴニストがＴＬＲを刺激または活性化することを示すことができる。シグナル伝達の差異は、例えば、標的遺伝子の発現の変化、シグナル伝達成分のリン酸化の変化、核因子－κＢ（ＮＦ－κＢ）などの下流要素の細胞内局在の変化、特定の成分（ＩＬ－１受容体関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）など）と他のタンパク質もしくは細胞内構造との関連の変化、またはキナーゼなどの成分（マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）など）の生化学的活性の変化として現れる可能性がある。

【0017】

「抗体」は、免疫グロブリン遺伝子またはその断片からの抗原結合領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む）を含む、ポリペプチドを指す。「抗体」という用語は具体的には、所望の生物活性を示す、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を包含する。例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖対で構成され、各対は、ジスルフィド結合によって接続される、１つの「軽鎖」（約２５ｋＤａ）及び１つの「重鎖」（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖は、免疫グロブリンドメインと呼ばれる構造ドメインから構成される。これらのドメインは、例えば、軽鎖及び重鎖の可変ドメインまたは領域（それぞれＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）、軽鎖及び重鎖の定常ドメインまたは領域（それぞれＣ_Ｌ及びＣ_Ｈ）など、サイズと機能によって様々なカテゴリーに分類される。各鎖のＮ－末端は、抗原認識を主に担う、パラトープと称される、約１００～１１０個以上のアミノ酸の可変領域、すなわち抗原結合ドメインを画定する。軽鎖は、κまたはλのいずれかに分類される。重鎖は、γ、μ、α、δまたはεとして分類され、そして、これらの重鎖によって、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥという免疫グロブリンの分類が定められる。ＩｇＧ抗体は、４つのペプチド鎖で構成される約１５０ｋＤａの大きな分子である。ＩｇＧ抗体は、約５０ｋＤａの２つの同一のクラスγ重鎖と約２５ｋＤａの２つの同一の軽鎖を含み、したがって四量体の四次構造を含む。２つの重鎖は互いに結合され、それぞれジスルフィド結合によって軽鎖に結合されている。得られた四量体は２つの同じの半分部分を持ち、これらが一緒になってＹ字型の形状を形成する。枝分かれした両端には、同じの抗原結合ドメインが含まれている。ヒトには４つのＩｇＧサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）があり、血清中の存在量の順に名前がつけられている（つまり、ＩｇＧ１が最も豊富である）。通常、抗体の抗原結合ドメインは、がん細胞への結合の特異性及び親和性において最も重要である。

【0018】

「二重特異性」抗体（ｂｓＡｂ）は、２つの異なるエピトープをがんに結合する抗体である（Ｓｕｕｒｓ Ｆ．Ｖ．ｅｔ ａｌ（２０１９）Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ２０１：１０３－１１９）。二重特異性抗体は、免疫細胞に係合して腫瘍細胞を破壊し、ペイロードを腫瘍に送達することができ、及び／または腫瘍シグナル伝達経路を遮断することができる。特定の抗原を標的にする抗体は、特定の抗原を標的にする少なくとも１つの抗原結合領域を有する二重特異性または多重特異性抗体を含む。いくつかの実施形態では、標的モノクローナル抗体は、腫瘍細胞を標的とする少なくとも１つの抗原結合領域を有する二重特異性抗体である。そのような抗原としては、メソテリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＨＥＲ２、ＴＲＯＰ２、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ、５Ｔ４、ネクチン４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４（０８Ｅとしても公知）、タンパク質チロシンキナーゼ７（ＰＴＫ７）、グリピカン３、ＲＧ１、フコシルＧＭｌ、ＣＴＬＡ－４、及びＣＤ４４（ＷＯ２０１７／１９６５９８）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0019】

「抗体コンストラクト」とは、（ｉ）抗原結合ドメイン及び（ｉｉ）Ｆｃドメインを含む、抗体または融合タンパク質を指す。

【0020】

「免疫複合体」という用語は、リンカーを介してアジュバント部分に共有結合している抗体コンストラクトを指す。免疫複合体は、標的抗原が結合している間に、活性アジュバント部分を標的とした送達を可能にする。

【0021】

「アジュバント」とは、アジュバントに曝露された対象において免疫応答を誘発することができる物質を指す。「アジュバント部分」という用語は、本明細書に記載されているように、例えば、リンカーを介して抗体コンストラクトに共有結合されるアジュバントを指す。アジュバント部分は、抗体コンストラクトに結合している間、または対象への免疫複合体の投与後の抗体コンストラクトからの切断（例えば、酵素的切断）後に免疫応答を誘発することができる。

【0022】

いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトは、抗原結合抗体「断片」であり、これは、抗体の少なくとも抗原結合領域を、単独で、または抗体コンストラクトを一緒に構成する他の成分とともに含む。例えば、（ｉ）Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｌ、及びＣＨ_１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片からなる二価の断片であるＦ（ａｂ’）_２断片、（ｉｉｉ）抗体の単一アームのＶ_Ｌ及びＶ_ＨドメインからなるＦｖ断片、（ｉｖ）軽度の還元条件を使用してＦ（ａｂ’）_２断片のジスルフィド架橋を破壊することから生じるＦａｂ’断片、（ｖ）ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、及び（ｖｉ）２つのドメインが、単一のポリペプチド鎖として合成されることを可能にする合成リンカーによって結合される、Ｆｖ断片の２つのドメイン（すなわち、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈ）からなる一価の分子である単一鎖（ｓｃＦｖ）を含む、多くの異なる種類の抗体「断片」が、当該技術分野で知られている。

【0023】

抗体または抗体断片は、より大きなコンストラクト、例えば、抗体断片の追加の領域との結合または融合コンストラクトの一部であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、抗体断片は、本明細書に記載されているようにＦｃ領域に融合することができる。他の実施形態では、抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）は、例えば、膜貫通ドメインへの融合（任意選択で介在するリンカーまたは「ストーク」（例えば、ヒンジ領域）により）及び任意選択の細胞間シグナル伝達ドメインへの融合によって、キメラ抗原受容体またはキメラＴ細胞受容体の一部であり得る。例えば、抗体断片は、ｔ細胞受容体のγ鎖及び／またはδ鎖に融合され、ＰＤ－Ｌ１を結合するＴ細胞受容体様コンストラクトを提供し得る。更に別の実施形態では、抗体断片は、ＣＤ１またはＣＤ３結合ドメイン及びリンカーを含む二重特異性Ｔ細胞誘導（ＢｉＴＥ）の一部である。

【0024】

「システイン変異抗体」とは、抗体の１つ以上のアミノ酸残基がシステイン残基で置換されている抗体である。システイン変異抗体は、抗体工学法により親抗体から調製することができる（Ｊｕｎｕｔｕｌａ，ｅｔ ａｌ．，（２００８ｂ）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５－９３２；Ｄｏｒｎａｎ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｂｌｏｏｄ１１４（１３）：２７２１－２７２９；米国特許第７５２１５４１号；同第７７２３４８５号；同第２０１２／０１２１６１５号；ＷＯ２００９／０５２２４９）。システイン残基は、操作されたシステイン部位での反応性システインチオール基を介した抗体へのＴＬＲアゴニストなどのアジュバントの部位特異的コンジュゲーションを提供するが、免疫グロブリンの折り畳み及びアセンブリーを妨害しないか、または抗原結合及びエフェクター機能を変化させない。システイン変異抗体は、免疫複合体の均一な化学量論（例えば、単一の操作された変異システイン部位を有する抗体における抗体１つ当たり最大２つのＴＬＲアゴニスト部分）により、ＴＬＲアゴニストリンカー化合物にコンジュゲートすることができる。ＴＬＲアゴニスト－リンカー化合物は、システイン変異抗体の遊離システインチオール基と特異的に反応する反応性求電子基を有する。

【0025】

「エピトープ」とは、抗原結合ドメインが結合する抗原の任意の抗原決定基またはエピトープ決定基（すなわち、抗原結合ドメインのパラトープで）を意味する。抗原決定基は通常、アミノ酸または糖側鎖のような分子の化学的に活性がある表面群化から成り、通常、特定の３次元構造特性及び特定の電荷特性を有する。

【0026】

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を指す。Ｆｃ受容体には３つの主要なクラス：（１）ＩｇＧに結合するＦｃγＲ、（２）ＩｇＡに結合するＦｃαＲ、及び（３）ＩｇＥに結合するＦｃεＲがある。ＦｃγＲファミリーには、ＦｃγＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）及びＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６Ｂ）のようないくつかのメンバーが含まれる。Ｆｃγ受容体はＩｇＧに対する親和性が異なり、ＩｇＧサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）に対する親和性も異なる。

【0027】

核酸またはアミノ酸配列「同一性」は、本明細書で言及される場合、対象の核酸またはアミノ酸配列を、参照核酸またはアミノ酸配列と比較することによって判定することができる。同一性パーセントは、最適に整列された対象の配列と最長の配列の長さ（すなわち、対象の配列または参照配列のいずれかの長さ、いずれか長い方）で割った参照配列との間で同じ（すなわち、同一）であるヌクレオチドまたはアミノ酸残基の数である。配列のアラインメント及び同一性パーセントの計算は、利用可能なソフトウェアプログラムを使用して実行することができる。そのようなプログラムの例としては、ＣＬＵＳＴＡＬ－Ｗ、Ｔ－Ｃｏｆｆｅｅ、及びＡＬＩＧＮ（核酸及びアミノ酸配列のアラインメントのため）、ＢＬＡＳＴプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ２．１、ＢＬ２ＳＥＱ、ＢＬＡＳＴｐ、ＢＬＡＳＴｎなど）、及びＦＡＳＴＡプログラム（例えば、ＦＡＳＴＡ３ｘ、ＦＡＳＴＭ及びＳＳＥＡＲＣＨ）（配列アラインメント及び配列相似性検索のため）が挙げられる。配列アラインメントアルゴリズムはまた、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３－４１０（１９９０），Ｂｅｉｇｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０６（１０）：３７７０－３７７５（２００９），Ｄｕｒｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ｐｒｏｂａｌｉｓｔｉｃ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ（２００９），Ｓｏｄｉｎｇ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，２１（７）：９５１－９６０（２００５），Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５（１７）：３３８９－３４０２ （１９９７）及びＧｕｓｆｉｅｌｄ，Ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ ｏｎ Ｓｔｒｉｎｇｓ，Ｔｒｅｅｓ ａｎｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＵＫ（１９９７）に開示されている。配列の同一性パーセント（％）はまた、例えば、１００×［（同一の位置）／ｍｉｎ（ＴＧ_Ａ、ＴＧ_Ｂ）］として計算することができ、ＴＧ_Ａ及びＴＧ_Ｂは、ＴＧ_Ａ及びＴＧ_Ｂを最小化するアラインメントにおけるペプチド配列Ａ及びＢにおける残基及び内部ギャップ位置の数の合計である（Ｒｕｓｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＭｏｌＢｉｏｌ．，２４４：３３２－３５０（１９９４））。

【0028】

「抗体コンストラクト」または「結合剤」は、一緒に抗原結合部位を形成するＩｇ重鎖及び軽鎖可変領域ポリペプチドを含む。重鎖及び軽鎖可変領域の各々は、フレームワーク領域によって連結された３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含むポリペプチドである。抗体コンストラクトは、Ｉｇ重鎖及び軽鎖を含む、当該技術分野で既知の様々な種類の結合剤のいずれかであり得る。例えば、結合剤は、抗体、抗原結合抗体「断片」、またはＴ細胞受容体であり得る。

【0029】

「バイオシミラー」とは、例えば、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ（商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及びアベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（商標）、ＥＭＤＳｅｒｏｎｏ、Ｐｆｉｚｅｒ）などの以前に承認されたＰＤ－Ｌ１標的化抗体コンストラクト；トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．）及びペルツズマブ（ＰＥＲＪＥＴＡ（商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．）などの以前に承認されたＨＥＲ２標的化抗体コンストラクト；またはラベツズマブ（ＣＥＡ－ＣＩＤＥ（商標）、ＭＮ－１４、ｈＭＮ１４、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）ＣＡＳ登録番号２１９６４９－０７－７）などのＣＥＡ標的化抗体と同様の活性特性を有する、承認された抗体コンストラクトを指す。

【0030】

「バイオベター」とは、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ及びラベツズマブなどの以前に承認された抗体コンストラクトを改善したものである、承認された抗体コンストラクトを指す。バイオベターは、以前に承認された抗体コンストラクトに対して１つ以上の修飾（例えば、変更されたグリカンプロファイル、または固有のエピトープ）を有することができる。

【0031】

「アミノ酸」とは、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質に組み込むことができる任意のモノマー単位を指す。アミノ酸には、天然に存在するα－アミノ酸及びその立体異性体、ならびに非天然（天然に存在しない）アミノ酸及びその立体異性体が含まれる。所与のアミノ酸の「立体異性体」は、同じ分子式及び分子内結合を有するが、結合及び原子の異なる三次元配置を有する異性体（例えば、Ｌ－アミノ酸及び対応するＤ－アミノ酸）を指す。アミノ酸は、グリコシル化（例えば、Ｎ－結合型グリカン、Ｏ－結合型グリカン、ホスホグリカン、Ｃ－結合型グリカン、またはグリピケーション）または脱グリコシル化することができる。アミノ酸は、本明細書では、広く知られている３文字の記号、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨されている１文字の記号のいずれかによって表され得る。

【0032】

天然に存在するアミノ酸は、遺伝子コードによってコードされるもの、ならびに後で修飾されるアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタミン酸、及びＯ－ホスホセリンである。天然に存在するα－アミノ酸としては、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リシン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。天然に存在するα－アミノ酸の立体異性体としては、Ｄ－アラニン（Ｄ－Ａｌａ）、Ｄ－システイン（Ｄ－Ｃｙｓ）、Ｄ－アスパラギン酸（Ｄ－Ａｓｐ）、Ｄ－グルタミン酸（Ｄ－Ｇｌｕ）、Ｄ－フェニルアラニン（Ｄ－Ｐｈｅ）、Ｄ－ヒスチジン（Ｄ－Ｈｉｓ）、Ｄ－イソロイシン（Ｄ－Ｉｌｅ）、Ｄ－アルギニン（Ｄ－Ａｒｇ）、Ｄ－リシン（Ｄ－Ｌｙｓ）、Ｄ－ロイシン（Ｄ－Ｌｅｕ）、Ｄ－メチオニン（Ｄ－Ｍｅｔ）、Ｄ－アスパラギン（Ｄ－Ａｓｎ）、Ｄ－プロリン（Ｄプロ）、Ｄ－グルタミン（Ｄ－Ｇｌｎ）、Ｄ－セリン（Ｄ－Ｓｅｒ）、Ｄ－トレオニン（Ｄ－Ｔｈｒ）、Ｄ－バリン（Ｄ－Ｖａｌ）、Ｄ－トリプトファン（Ｄ－Ｔｒｐ）、Ｄ－チロシン（Ｄ－Ｔｙｒ）及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0033】

天然に存在するアミノ酸には、シトルリン（Ｃｉｔ）などの翻訳後修飾によってタンパク質中に形成されるものが含まれる。

【0034】

非天然（天然に存在しない）アミノ酸としては、限定されないが、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能するＬまたはＤ構成のいずれかのアミノ酸類似体、アミノ酸模倣物、合成アミノ酸、Ｎ置換グリシン、及びＮ－メチルアミノ酸が挙げられる。例えば、「アミノ酸類似体」は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造（すなわち、水素、カルボキシル基、アミノ基に結合した炭素）を有するが、修飾された側鎖基または修飾されたペプチド骨格を有する非天然アミノ酸、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、及びメチオニンメチルスルホニウムであり得る。「アミノ酸模倣物」とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能する化合物を指す。

【0035】

「リンカー」とは、化合物または材料の２つ以上の部分を共有結合する官能基を指す。例えば、連結部位は、アジュバント部分を免疫複合体の抗体コンストラクトに共有結合させるのに役立つことができる。

【0036】

「連結部位」とは、化合物や材料中の２つ以上の部分を共有結合させる官能基を指す。例えば、連結部位は、アジュバント部分を免疫複合体の抗体に共有結合させる役割を果たすことができる。連結部位をタンパク質及び他の材料に接続するための有用な結合には、アミド、アミン、エステル、カルバミン酸、尿素、チオエーテル、チオカルバミン酸、チオカーボネート、及びチオ尿素が含まれるが、これらに限定されない。

【0037】

「二価」とは、２つの官能基を連結するための２つの結合点を含む、化学部位を指す。多価連結部位は、さらなる官能基を連結するための追加の結合点を有することができる。二価ラジカルは、接尾辞「ジイル」で示され得る。例えば、二価連結部位には、二価ポリ（エチレングリコール）、二価シクロアルキル、二価ヘテロシクロアルキル、二価アリール、及び二価ヘテロアリール基のような二価ポリマー部位が含まれる。「二価シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基」とは、分子または材料中の２つの部分を共有結合させるための２つの結合点を有するシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基を指す。シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基は、置換型または非置換型であり得る。シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１以上の基で置換することができる。

【0038】

波線（「

【化1】

」）は、特定の化学部位の結合点を表す。特定の化学部位に２本の波線（「

【化2】

」）が存在する場合、化学部位は双方で、つまり左から右または右から左に読み取って使用できることが理解される。いくつかの実施形態では、存在する２つの波線（「

【化3】

」）を有する特定の部位は、左から右へと読み取られるように使用されると見なされる。

【0039】

「アルキル」とは、示された炭素原子の数を有する、直鎖（線状）または分岐した飽和脂肪族ラジカルを指す。アルキルには、例えば１～１２つの任意の数の炭素を含むことができる。アルキル基の例としては、メチル（Ｍｅ、－ＣＨ_３）、エチル（Ｅｔ、－ＣＨ_２ＣＨ_３）、１－プロピル（ｎ－Ｐｒ、ｎ－プロピル、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－プロピル（ｉ－Ｐｒ、ｉ－プロピル、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、１－ブチル（ｎ－Ｂｕ、ｎ－ブチル、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－メチル－１－プロピル（ｉ－Ｂｕ、ｉ－ブチル、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、２－ブチル（ｓ－Ｂｕ、ｓ－ブチル、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－メチル－２－プロピル（ｔ－Ｂｕ、ｔ－ブチル、－Ｃ（ＣＨ_３）_３）、１－ペンチル（ｎ－ペンチル、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２）、２－メチル－２－ブチル（－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３－メチル－２－ブチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、３－メチル－１－ブチル（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、２－メチル－１－ブチル（－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_３）、１－ヘキシル（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－ヘキシル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３－ヘキシル（－ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３））、２－メチル－２－ペンチル（－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３－メチル－２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_３）、４－メチル－２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、３－メチル－３－ペンチル（－Ｃ（ＣＨ_３）（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２）、２－メチル－３－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、２，３－ジメチル－２－ブチル（－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、３，３－ジメチル－２－ブチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_３、１－ヘプチル、１－オクチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、置換型でも非置換型でもよい。「置換アルキル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換することができる。

【0040】

「アルキルジイル」という用語は、二価のアルキル基を意味する。アルキルジイル基の例としては、メチレン（－ＣＨ_２－）、エチレン（－ＣＨ_２ＣＨ_２－）、プロピレン（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－）などが挙げられるが、これらに限定されない。アルキルジイル基は、「アルキレン」基とも呼ばれることがある。

【0041】

「アルケニル」とは、示された炭素原子の数及び少なくとも１つの炭素－炭素二重結合、ｓｐを有する、直鎖（線状）または分岐した不飽和脂肪族ラジカルを指す。アルケニルは、２～約１２以上の炭素原子を含むことができる。アルケニル基は、「シス」及び「トランス」配向、代替的に「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有するラジカルである。例としては、エチレニルまたはビニル（－ＣＨ＝ＣＨ_２）、アリル（－ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２）、ブテニル、ペンテニル、及びこれらの異性体を含むが、これらに限定されない。アルケニル基は、非置換型または置換型であり得る。「置換アルケニル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換することができる。

【0042】

「アルケニレン」または「アルケニルジイル」という用語は、直鎖または分岐鎖の二価の炭化水素ラジカルを指す。例としては、エチレニレンまたはビニレン（－ＣＨ＝ＣＨ－）、アリル（－ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ－）などがあるが、これらに限定されない。

【0043】

「アルキニル」とは、示された炭素原子の数及び少なくとも１つの炭素－炭素三重結合、ｓｐを有する、直鎖（線状）または分岐した不飽和脂肪族ラジカルを指す。アルキニルは、２～約１２個以上の炭素原子を含むことができる。例えば、Ｃ_２－Ｃ_６アルキニルには、エチニル（－Ｃ≡ＣＨ）、プロピニル（プロパルギル、－ＣＨ_２Ｃ≡ＣＨ）、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、及びこれらの異性体が含まれるが、これらに限定されない。アルキニル基は置換型または非置換型であり得る。「置換アルキニル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１以上の基で置換することができる。

【0044】

「アルキニレン」または「アルキニルジイル」という用語は、二価のアルキニルラジカルを指す。

【0045】

「カルボサイクル」、「カルボシクリル」、「炭素環」及び「シクロアルキル」という用語は、３～１２個の環原子または示された原子数を含む、飽和もしくは部分的に不飽和の単環式、縮合二環式または架橋多環集合体を指す。飽和単環式炭素環には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロオクチルが含まれる。飽和二環式及び多環式炭素環には、例えば、ノルボルナン、［２．２．２］ビシクロオクタン、デカヒドロナフタレン及びアダマンタンが含まれる。炭素環式基は部分的に不飽和であり、環に１以上の二重結合または三重結合を有する場合もある。部分的に不飽和である代表的な炭素環式基には、シクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘキサジエン（１，３－及び１，４－異性体）、シクロヘプテン、シクロヘプタジエン、シクロオクテン、シクロオクタジエン（１，３－、１，４－及び１，５－異性体）、ノルボルネン、及びノルボルナジエンが含まれるが、これらに限定されない。

【0046】

「シクロアルキルジイル」という用語は、二価のシクロアルキルラジカルを指す。

【0047】

「アリール」とは、親の芳香環系の１つの炭素原子から１つの水素原子を除去することによって誘導される、６～２０個の炭素原子（Ｃ_６－Ｃ_２０）の一価の芳香族炭化水素ラジカルを意味する。アリール基は、単環式である、縮合して二環式もしくは三環式基を形成する、または結合によって連結してビアリール基を形成することができる。代表的なアリール基には、フェニル、ナフチル、ビフェニルが含まれる。他のアリール基には、メチレン連結基を有するベンジルが含まれる。フェニル、ナフタレンまたはビフェニルなど、一部のアリール基には６～１２個の環員がある。他のアリール基には、フェニルまたはナフチルのような６～１０個の環員がある。

【0048】

「アリーレン」または「アリールジイル」とは、親の芳香環系の２個の炭素原子から２個の水素原子を除去することによって誘導される、６～２０個の炭素原子（Ｃ_６－Ｃ_２０）の二価の芳香族炭化水素ラジカルを意味する。いくつかのアリールジイル基は、例示的構造で「Ａｒ」と表される。アリールジイルは、飽和環、部分的不飽和環、または芳香族炭素環と縮合した芳香環を含む、二環式ラジカルを含む。典型的なアリールジイル基としては、ベンゼン（フェニレン）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニレン、インデニレン、インダニレン、１，２－ジヒドロナフタレン、１，２，３，４－テトラヒドロナフチルなどに由来するラジカルが挙げられるが、これらに限定されない。アリールジイル基は「アリーレン」とも称され、任意選択で、本明細書に記載される１つ以上の置換基で置換される。

【0049】

「複素環」、「ヘテロシクリル」及び「複素環式環」という用語は、本明細書において同義で用いられ、３～約２０個の環原子の飽和または部分的に不飽和（すなわち１つ以上の二重及び／または三重結合を環の中に有する）の炭素環式ラジカルを指し、少なくとも１つの環原子は、窒素、酸素、リン、及び硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子はＣであり、１つ以上の環原子は、任意選択で、以下に記載される１つ以上の置換基で独立して置換される。複素環は、３～７員環（２～６個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～４個のヘテロ原子）の単環または７～１０員環（４～９個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～６個のヘテロ原子）の二環、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、もしくは［６，６］系であってよい。複素環は、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ Ａ．，″Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ″（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６８）の特に第１章、第３章、第４章、第６章、第７章、及び第９章、″Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ″（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９５０～現在）の特に第１３巻、第１４巻、第１６巻、第１９巻、及び第２８巻、ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。「ヘテロシクリル」は、複素環ラジカルが、飽和環、部分的不飽和環、または芳香族炭素環式環もしくは複素環式環と縮合したラジカルも含む。複素環式環としては、例えば、モルホリン－４－イル、ピペリジン－１－イル、ピペラジニル、ピペラジン－４－イル－２－オン、ピペラジン－４－イル－３－オン、ピロリジン－１－イル、チオモルホリン－４－イル、Ｓ－ジオキソチオモルホリン－４－イル、アゾカン－１－イル、アゼチジン－１－イル、オクタヒドロピリド［１，２－ａ］ピラジン－２－イル、［１，４］ジアゼパン－１－イル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２－ピロリニル、３－ピロリニル、インドリニル、２Ｈ－ピラニル、４Ｈ－ピラニル、ジオキサニル、１，３－ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリニルイミダゾリニル、イミダゾリニル、３－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、３－アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、アザビシクロ［２．２．２］ヘキサニル、３Ｈ－インドリルキノリジニル、及びＮ－ピリジルウレアが挙げられるが、これらに限定されない。スピロヘテロシクリル部位も、本定義の範囲内に含まれる。スピロヘテロシクリル部位の例には、アザスピロ［２．５］オクタニル及びアザスピロ［２．４］ヘプタニルが挙げられる。２つの環原子がオキソ（＝Ｏ）部位で置換された複素環式基の例は、ピリミジノニル及び１，１－ジオキソ－チオモルホリニルである。本明細書の複素環基は、任意選択で、本明細書に記載されている１以上の置換基で独立して置換される。

【0050】

「ヘテロシクリルジイル」という用語は、３～約２０個の環原子の二価の飽和または部分的に不飽和（すなわち１以上の二重及び／または三重結合を環の中に有する）の炭素環式ラジカルを指し、少なくとも１つの環原子は、窒素、酸素、リン、及びイオウから選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子はＣであり、１以上の環原子は、任意選択で、記載されている１以上の置換基で、独立して置換される。５員及び６員のヘテロシクリルジイルとしては、モルホリニルジイル、ピペリジニルジイル、ピペラジニルジイル、ピロリジニルジイル、ジオキサニルジイル、チオモルホリニルジイル、及びＳ－ジオキソチオモルホリニルジイルが挙げられる。

【0051】

「ヘテロアリール」という用語は、５、６または７員環の一価の芳香族ラジカルを指し、窒素、酸素及びイオウから独立して選択される１以上のヘテロ原子を含む５～２０個の原子の縮合環系（その少なくとも１つは芳香族である）を含む。ヘテロアリール基の例は、ピリジニル（例えば２－ヒドロキシピリジニルを含む）、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、ピリミジニル（例えば４－ヒドロキシピリミジニルを含む）、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、及びフロピリジニルである。ヘテロアリール基は、任意選択で、本明細書に記載されている１以上の置換基で独立して置換される。

【0052】

「ヘテロアリールジイル」という用語は、５、６または７員環の二価の芳香族ラジカルを指し、窒素、酸素及びイオウから独立して選択される１以上のヘテロ原子を含む５～２０個の原子の縮合環系（その少なくとも１つは芳香族である）を含む。５員及び６員のヘテロアリールジイルの例には、ピリジルジイル、イミダゾリルジイル、ピリミジニルジイル、ピラゾリルジイル、トリアゾリルジイル、ピラジニルジイル、テトラゾリルジイル、フリルジイル、チエニルジイル、イソオキサゾリルジイル、チアゾリルジイル、オキサジアゾリルジイル、オキサゾリルジイル、イソチアゾリルジイル及びピロリルジイルが含まれる。

【0053】

複素環またはヘテロアリール基は、可能であれば、炭素（炭素結合した）または窒素（窒素結合した）結合してもよい。例として、限定されないが、炭素結合した複素環またはヘテロアリールは、ピリジンの２、３、４、５もしくは６位、ピリダジンの３、４、５もしくは６位、ピリミジンの２、４、５もしくは６位、ピラジンの２、３、５もしくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、もしくはテトラヒドロピロールの２、３、４もしくは５位、オキサゾール、イミダゾール、もしくはチアゾールの２、４もしくは５位、イソキサゾール、ピラゾール、もしくはイソチアゾールの３、４もしくは５位、アジリジンの２もしくは３位、アゼチジンの２、３もしくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７もしくは８位、またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７もしくは８位で結合される。

【0054】

例として、限定されないが、窒素結合した複素環またはヘテロアリールは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２－ピロリン、３－ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２－イミダゾリン、３－イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２－ピラゾリン、３－ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ－インダゾールの１位、イソインドールまたはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾ－ルまたはβ－カルボリンの９位で結合される。

【0055】

単独または別の置換基の一部としての「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を指す。

【0056】

単独でまたは別の置換基の一部としての「カルボニル」という用語は、Ｃ（＝Ｏ）また－Ｃ（＝Ｏ）－、すなわち、酸素に二重結合し、カルボニルを有する部分の他の２つの基に結合した炭素原子を指す。

【0057】

本明細書で使用する場合、「第四級アンモニウム塩」という語句は、アルキル置換基（例えば、メチル、エチル、プロピル、またはブチルのようなＣ_１－Ｃ_４アルキル）で四級化された第三級アミンを指す。

【0058】

「治療する」、「治療」及び「治療すること」という用語は、傷害、病態、状態（例えば、がん）もしくは症状（例えば、認知障害）の治療または寛解における任意の成功の兆候を指し、緩解、寛解、症状の軽減、もしくは症状、傷害、病態もしくは状態を患者にとってより耐えられるものにする、症状の進行速度の減少、症状もしくは状態の頻度、もしくは期間の減少、または状況によっては症状の発症の防止など、任意の客観的または主観的パラメータが含まれる。症状の治療または寛解は、身体検査の結果を含む、任意の客観的または主観的パラメータに基づくことができる。

【0059】

「がん」、「新生物」、及び「腫瘍」という用語は本明細書で、細胞増殖の制御を著しく失うことを特徴とする異常な増殖表現型を示すような、自律的で制御されない増殖を示す細胞を指すために使用される。本発明の文脈において検出、分析、及び／または治療の対象となる細胞には、がん細胞（例えば、がんを有する個体からのがん細胞）、悪性がん細胞、前転移性がん細胞、転移性がん細胞、及び非転移性がん細胞が含まれる。実質的にすべての組織のがんは、知られている。「がん負荷量」という語句は、対象中のがん細胞量またはがん体積を指す。したがって、がん負荷量を減少させることは、対象中のがん細胞数またはがん細胞体積を減少させることを指す。本明細書で使用される「がん細胞」という用語は、がん細胞（例えば、個体を治療することができる任意のがんから、例えば、がんを有する個体から単離された）である、またはがん細胞に由来する任意の細胞（例えば、がん細胞のクローン）を指す。例えば、がん細胞は、確立されたがん細胞株からのものであってもよく、がんを有する個体から単離された初代細胞であってもよく、がんを有する個体から単離された初代細胞からの子孫細胞であってもよい、などである。いくつかの実施形態では、この用語はまた、がん細胞の細胞内部分、細胞膜部分、または細胞溶解物のようながん細胞の一部を指すことができる。細胞腫、肉腫、膠芽腫、メラノーマ、リンパ腫及び骨髄腫のような固形腫瘍、ならびに白血病のような循環癌を含む、多くの種類のがんは、当業者に知られている。

【0060】

本明細書で使用する場合、「がん」という用語は、これらに限定されないが、固形腫瘍がん（例えば、皮膚、肺、前立腺、乳房、胃、膀胱、結腸、卵巣、膵臓、腎臓、肝臓、神経膠芽腫、髄芽腫、平滑筋肉腫、頭頸部扁平上皮癌、黒色腫、及び神経内分泌）、及び液状がん（例えば、血液癌）；がん腫；軟部組織腫瘍；肉腫；奇形腫；黒色腫；白血病；リンパ腫；ならびに脳癌を含み、微小残存病変を含み、ならびに原発腫瘍と転移腫瘍の両方を含む、任意の形態のがんを含む。

【0061】

「ＰＤ－Ｌ１発現」とは、細胞表面にＰＤ－Ｌ１受容体を有する細胞を指す。本明細書で使用する場合、「ＰＤ－Ｌ１過剰発現」とは、対応する非がん細胞と比較してより多くのＰＤ－Ｌ１受容体を有する細胞を指す。
「ＨＥＲ２」とは、タンパク質ヒト上皮成長因子受容体２を指す。

【0062】

「ＨＥＲ２発現」とは、細胞の表面にＨＥＲ２受容体を有する細胞を指す。例えば、細胞は、細胞の表面上に約２０，０００～約５０，０００のＨＥＲ２受容体を有し得る。本明細書で使用する場合、「ＨＥＲ２過剰発現」は、約５０，０００を超えるＨＥＲ２受容体を有する細胞を指す。例えば、細胞は、対応する非がん細胞（例えば、約１００万または２００万のＨＥＲ２受容体）と比較して、ＨＥＲ２受容体の数の２、５、１０、１００、１，０００、１０，０００、１００，０００、または１，０００，０００倍である。ＨＥＲ２は、乳癌で約２５％～約３０％過剰発現していると推定される。

【0063】

がんの「病態」には、患者の健康状態を損なうすべての現象が含まれる。これには、異常または制御不能な細胞増殖、転移、隣接する細胞の正常な機能の阻害、異常なレベルでのサイトカインまたは他の分泌物の放出、炎症または免疫反応の抑制または悪化、新生物、前悪性、悪性腫瘍、及びリンパ節のような周辺または遠隔組織または器官への浸潤が含まれるが、これらに限定されない。

【0064】

本明細書で使用する場合、「がん再発」及び「腫瘍再発」という語句、ならびにそれらの文法的変形は、がんの診断後の腫瘍またはがん細胞のさらなる増殖を指す。特に、がん組織でさらなるがん細胞増殖が起こると再発が起こり得る。同様に「腫瘍の広がり」は、腫瘍の細胞が局所または遠隔組織や臓器に散在するときに発生し、したがって、腫瘍の広がりには腫瘍の転移が含まれる。「腫瘍浸潤」は、腫瘍の増殖が局所的に広がり、正常な臓器機能を圧迫、破壊または阻止することによって関係する組織の機能を損なうときに発生する。

【0065】

本明細書で使用する場合、「転移」という用語は、がん腫瘍のある器官に直接接続していない、器官または身体部分で癌腫瘍が増殖することを指す。転移は、がん腫瘍のある器官に直接接続していない器官または身体部分での検出不可能な量のがん細胞の存在である、微小転移を含むと理解されるであろう。転移は、がん細胞が元の腫瘍部位から離れること、がん細胞が身体の他の部位に移動及び／または浸潤することなど、いくつかの段階のプロセスとして定義することもできる。

【0066】

「有効量」及び「治療有効量」という語句は、それが投与される治療効果を生み出す免疫複合体のような物質の投与量または量を指す。実際の投与量は、治療の目的に依存し、また当業者であれば既知の技術を使用して確認可能であろう（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１－３，１９９２）；Ｌｌｏｙｄ，Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）；Ｐｉｃｋａｒ，Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）；Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１１ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，２００６）；ａｎｄ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，２０１２）を参照）。がんの場合、治療有効量の免疫複合体は、がん細胞の数を低下、腫瘍サイズを低下、末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害（すなわち、ある程度の減速及び好ましくは停止）、腫瘍転移を阻害（すなわち、ある程度の減速及び好ましくは停止）、腫瘍増殖をある程度阻害、及び／またはがんに関連する症状のうちの１以上をある程度軽減し得る。免疫複合体が、存在するがん細胞の増殖を阻害し得る、及び／またはそれらを死滅させ得る限り、それは、細胞増殖抑制性及び／または細胞毒性であり得る。がん療法に関して、有効性は、例えば、疾患進行までの時間（ＴＴＰ）の評価及び／または奏効率（ＲＲ）の決定によって測定することができる。

【0067】

「レシピエント」「個体」「対象」「宿主」及び「患者」という用語は同じ意味で使用され、診断、処置または治療が所望される任意の哺乳類対象（例えば、ヒト）を指す。治療目的のための「哺乳動物」とは、ヒト、飼育動物及び畜産動物、動物園、競技用、愛玩動物、例えば犬、馬、猫、牛、羊、山羊、豚、ラクダなどを含む哺乳動物に分類される任意の動物を指す。特定の実施形態では、哺乳動物はヒトである。

【0068】

本発明の文脈における「相乗的アジュバント」または「相乗的組み合わせ」という語句は、受容体アゴニスト、サイトカイン、及びアジュバントポリペプチドのような２つの免疫調節因子の組み合わせを含み、これらは組み合わせて、単独で投与される場合と比較して免疫に対する相乗効果を誘発する。特に、本明細書に開示される免疫複合体は、特許請求されたアジュバント及び抗体コンストラクトの相乗的組み合わせを含む。投与時のこれらの相乗的組み合わせは、例えば、抗体コンストラクトまたはアジュバントが他の部分の非存在下で投与される場合と比較して、免疫に対してより大きな効果を誘発する。さらに、抗体コンストラクトまたはアジュバントのいずれかと単独で投与した場合と比較して、減少した量の免疫複合体を投与してもよい（免疫複合体の一部として投与される抗体コンストラクトの総数またはアジュバントの総数によって測定される）。

【0069】

本明細書で使用する場合、「投与する」という用語は、非経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、病巣内、鼻腔内もしくは皮下投与、経口投与、座薬としての投与、局所接触、クモ膜下投与、または徐放出装置、例えば小型浸透ポンプを対象に埋め込むことを意味する。

【0070】

本明細書で数値を修正するために使用される「約」及び「およそ」という用語は、その数値の周囲にある近い範囲を示す。したがって、「Ｘ」が値である場合、「約Ｘ」または「およそＸ」は、０．９Ｘ～１．１Ｘ、例えば、０．９５Ｘ～１．０５Ｘ、または０．９９Ｘ～１．０１Ｘの値を示す。「約Ｘ」または「およそＸ」への言及は特に、少なくとも値Ｘ、０．９５Ｘ、０．９６Ｘ、０．９７Ｘ、０．９８Ｘ、０．９９Ｘ、１．０１Ｘ、１．０２Ｘ、１．０３Ｘ、１．０４Ｘ、及び１．０５Ｘを示す。したがって、「約Ｘ」及び「およそＸ」は、例えば「０．９８Ｘ」のクレーム限定について本明細書のサポートを教示及び提供することを意図している。

【0071】

抗体標的
いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体は、５Ｔ４、ＡＢＬ、ＡＢＣＦ１、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ２、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲＬ１、ＡＤＯＲＡ２Ａ、アグレカン、ＡＧＲ２、ＡＩＣＤＡ、ＡＩＦ１、ＡＩＧＩ、ＡＫＡＰ１、ＡＫＡＰ２、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＰＥＰ、ＡＰＣ、ＡＰＯＣ１、ＡＲ、アロマターゼ、ＡＴＸ、ＡＸ１、ＡＺＧＰ１（亜鉛－ａ－糖タンパク質）、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７－Ｈ１、ＢＡＤ、ＢＡＦＦ、ＢＡＧ１、ＢＡＩ１、ＢＣＲ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、ＢＤＮＦ、ＢＬＮＫ、ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）、ＢＩｙＳ、ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦＩＯ）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ８、ＢＭＰＲＴＡ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、ＢＰＡＧ１（プレクチン）、ＢＲＣＡ１、Ｃ１９ｏｒｆｌＯ（ＩＬ２７ｗ）、Ｃ３、Ｃ４Ａ、Ｃ５、Ｃ５Ｒ１、ＣＡＮＴ１、ＣＡＰＲＩＮ－１、ＣＡＳＰ１、ＣＡＳＰ４、ＣＡＶ１、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＬＩ（１－３０９）、ＣＣＬＩ１（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ＭＣＰ－４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ－Ｉｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ－４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ－３ｂ）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＭＣＡＦ、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ－３ａ）、ＣＣＬ２１（ＭＥＰ－２）、ＳＬＣ、エクソダス－２、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ－１）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ－Ｉ）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ－２／エオタキシン－２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン－３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３（ＭＩＰ－Ｉａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰＩｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ－３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ－２）、ＣＣＮＡ１、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＥ２、ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ－ＩＲＢ／ＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ－Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）、ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲＩ／ＣＫＲ－Ｌ１）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ－９－６）、ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ－ＣＣＲ）、ＣＤ１６４、ＣＤ１９、ＣＤＩＣ、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２００、ＣＤ－２２、ＣＤ２４、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３３、ＣＤ３５、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ４、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４７、ＣＤ５２、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ２７４、ＣＤＨ１（エカドヘリン）、ＣＤＨ１Ｏ、ＣＤＨ１２、ＣＤＨ１３、ＣＤＨ１８、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２Ｏ、ＣＤＨ５、ＣＤＨ７、ＣＤＨ８、ＣＤＨ９、ＣＤＫ２、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＣＥＢＰＢ、ＣＥＲＩ、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、チチナーゼ、ＣＨＳＴ１Ｏ、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦ５、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦ８、ＣＬＤＮ３、ＣＬＤＮ７（クラウジン－７）、ＣＬＤＮ１８．２（クラウジン１８．２）、ＣＬＮ３、ＣＬＵ（クラステリン）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＮＲ１、ＣＯＬ１８Ａ１、ＣＯＬＩＡ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＲ２、Ｃｒｉｐｔｏ、ＣＲＰ、ＣＳＦ１（Ｍ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ－ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＣＴＬ８、ＣＴＮＮＢ１（ｂ－カテニン）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）、ＣＸＣＬ１（ＧＲＯ１）、ＣＸＣＬ１Ｏ（ＩＰ－ＩＯ）、ＣＸＣＬＩ１（１－ＴＡＣ／ＩＰ－９）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ２（ＧＲＯ２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲＯ３）、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ－７８／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ－２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ－Ｌ２）、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＣＹＢ５、ＣＹＣ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＤＡＢ２ＩＰ、ＤＥＳ、ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８、ＤＮＣＬ１、ＤＰＰ４、Ｅ２Ｆ１、エンゲル、エッジ、フェンネル、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥＬＡＣ２、ＥＮＧ、エノラ、ＥＮＯ２、ＥＮＯ３、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ３、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ５、ＥＰＨＡ６、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８、ＥＰＨＡ９、ＥＰＲＡ１０、ＥＰＨＢ１、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＨＢ５、ＥＰＨＢ６、ＥＰＨＲＩＮ－Ａ１、ＥＰＨＲＩＮ－Ａ２、ＥＰＨＲＩＮＡ３、ＥＰＨＲＩＮ－Ａ４、ＥＰＨＲＩＮ－Ａ５、ＥＰＨＲＩＮ－Ａ６、ＥＰＨＲＩＮ－Ｂ１、ＥＰＨＲＩＮ－Ｂ２、ＥＰＨＲＩＮ－Ｂ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＧ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ－２）、ＥＲＥＧ、ＥＲＫ８、エストロゲン受容体、Ｅａｒｌ、ＥＳＲ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＡＤＤ、ファメシルトランスフェラーゼ、ＦａｓＬ、ＦＡＳＮｆ、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＧＦ、ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）．ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３（ｉｎｔ－２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６（ＨＳＴ－２）、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦＲ３、ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＦＩＬＩ（ＥＰＳＩＬＯＮ）、ＦＢＬ１（ＺＥＴＡ）、ＦＬＪ１２５８４、ＦＬＪ２５５３０、ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）、ＦＬＴ１、ＦＬＴ－３、ＦＯＳ、ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ－１）、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＡＧＥＢ１、ＧＡＧＥＣ１、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ－６ＳＴ、ＧＡＴＡ３、ＧＤ２、ＧＤＦ５、ＧＦＩ１、ＧＧＴ１、ＧＭ－ＣＳＦ、ＧＮＡＳ１、ＧＮＲＨ１、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ４４、ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）、ＧＲＣＣ１Ｏ（Ｃ１Ｏ）、ＧＲＰ、ＧＳＮ（ゲルソリン）、ＧＳＴＰ１、ＨＡＶＣＲ２、ＨＤＡＣ、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ヘッジホッグ、ＨＧＦ、ＨＩＦ１Ａ、ＨＩＰ１、ヒスタミン及びヒスタミン受容体、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＭ７４、ＨＭＯＸＩ、ＨＳＰ９０、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤ２、ＩＦＮ－ａ、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＥＦＮＡ６、ＢＦＮＡ７、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮγ、ＩＦＮＷ１、ＩＧＢＰ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦＩＲ、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＤＬ－１、ＩＬＩＯ、ＩＬＩＯＲＡ、ＩＬＩＯＲＢ、ＩＬ－１、ＩＬ１Ｒ１（ＣＤ１２１ａ）、ＩＬ１Ｒ２（ＣＤ１２１ｂ）、ＩＬ－ＩＲＡ、ＩＬ－２、ＩＬ２ＲＡ（ＣＤ２５）、ＩＬ２ＲＢ（ＣＤ１２２）、ＩＬ２ＲＧ（ＣＤ１３２）、ＩＬ－４、ＩＬ－４Ｒ（ＣＤ１２３）、ＩＬ－５、ＩＬ５ＲＡ（ＣＤ１２５）、ＩＬ３ＲＢ（ＣＤ１３１）、ＩＬ－６、ＩＬ６ＲＡ、（ＣＤ１２６）、ＩＲ６ＲＢ（ＣＤ１３０）、ＩＬ－７、ＩＬ７ＲＡ（ＣＤ１２７）、ＩＬ－８、ＣＸＣＲ１（ＩＬ８ＲＡ）、ＣＸＣＲ２、（ＩＬ８ＲＢ／ＣＤ１２８）、ＩＬ－９、ＩＬ９Ｒ（ＣＤ１２９）、ＩＬ－１０、ＩＬ１０ＲＡ（ＣＤ２１０）、ＩＬ１０ＲＢ（ＣＤＷ２１０Ｂ）、ＩＬ－１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ－１２、ＩＬ－１２Ａ、ＩＬ－１２Ｂ、ＩＬ－１２ＲＢ１、ＩＬ－１２ＲＢ２、ＩＬ－１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８、ＩＬ１８ＢＰ、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ１９、ＩＬＩＡ、ＩＬＩＢ、ＩＬＩＦ１０、ＩＬＩＦ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬＩＦ７、ＩＬ１Ｆ８、ＤＬ１Ｆ９、ＩＬＩＨＹＩ、ＩＬＩＲ１、ＩＬＩＲ２、ＩＬＩＲＡＰ、ＩＬＩＲＡＰＬＩ、ＩＬＩＲＡＰＬ２、ＩＬＩＲＬ１、ＩＬ１ＲＬ２、ＩＬＩＲＮ、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ２２ＲＡ２、ＩＬ２３、ＤＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８Ａ、ＩＬ２８Ｂ、ＩＬ２９、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ３０、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４、ＩＬ４、ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）、ＩＬＫ、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＴＧＡ１、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ６（α６インテグリン）、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４（β４インテグリン）、ＪＡＧ１、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＪＴＢ、ＪＵＮ、Ｋ６ＨＦ、ＫＡＩ１、ＫＤＲ、ＫＩＴＬＧ、ＫＬＦ５（ＧＣ Ｂｏｘ ＢＰ）、ＫＬＦ６、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１５、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＫＲＴ１、ＫＲＴ１９（ケラチン１９）、ＫＲＴ２Ａ、ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的ＩＩ型ケラチン）、ＬＡＭＡ５、ＬＥＰ（レプチン）、Ｌｉｎｇｏ－ｐ７５、Ｌｉｎｇｏ－Ｔｒｏｙ、ＬＰＳ、ＬＲＲＣ１５、ＬＴＡ（ＴＮＦ－ｂ））、ＬＴＢ、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＬＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＧまたはＯＭｇｐ、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ－Ｊｕｎ）、ＭＣＰ－１、ＭＤＫ、ＭＩＢ１、ミッドカイン、ＭＩＦ、ＭＩＳＲＩＩ、ＭＪＰ－２、ＭＫ、ＭＫＩ６７（Ｋｉ－６７）、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳ４Ａ１、ＭＳＭＢ、ＭＴ３（メタロチオネクチン－ＵＩ）、ｍＴＯＲ、ＭＴＳＳ１、ＭＵＣ１（ムチン）、ＭＹＣ、ＭＹＤ８８、ＮＣＫ２、ニューロカン、ネクチン－４、ＮＦＫＢＩ、ＮＦＫＢ２、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮｇＲ－Ｌｉｎｇｏ、ＮｇＲＮｏｇｏ６６、（Ｎｏｇｏ）、ＮｇＲ－ｐ７５、ＮｇＲ－Ｔｒｏｙ、ＮＭＥＩ（ＮＭ２３Ａ）、ＮＯＴＣＨ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＸ５、ＮＰＰＢ、ＮＲＯＢ１、ＮＲＯＢ２、ＮＲＩＤ１、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲ１Ｈ２、ＮＲ１Ｈ３、ＮＲ１Ｈ４、ＮＲ１１２、ＮＲ１１３、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ４Ａ３、ＮＲ５Ａ１、ＮＲ５Ａ２、ＮＲ６Ａ１、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＮＴ５Ｅ、ＮＴＮ４、ＯＤＺＩ、ＯＰＲＤＩ、Ｐ２ＲＸ７、ＰＡＰ、ＰＡＲＴ１、ＰＡＴＥ、ＰＡＷＲ、ＰＣＡ３、ＰＣＤＧＦ、ＰＣＮＡ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＥＣＡＭＩ、ペグ－アスパラギナーゼ、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＧＦ、ＰＧＲ、ホスファカン、ＰＩＡＳ２、ＰＩ３キナーゼ、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＬＧ、ＰＬＸＤＣＩ、ＰＫＣ、ＰＫＣ－ベータ、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＰＰＩＤ、ＰＲ１、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤ１、ＰＲＬ、ＰＲＯＣ、ＰＲＯＫ２、ＰＳＡＰ、ＰＳＣＡ、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＥＮ、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ－２）、ＰＩＮ、ＲＡＣ２（Ｐ２１Ｒａｃ２）、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫリガンド、ＲＡＲＢ、ＲＧＳ１、ＲＧＳ１３、ＲＧＳ３、ＲＮＦＩ１Ｏ（ＺＮＦ１４４）、Ｒｏｎ、ＲＯＢＯ２、ＲＸＲ、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）、ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）、ＳＤＦ２、ＳＥＲＰＥＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）、ＳＥＲＰＩＮＥＩ（ＰＡＩ－Ｉ）、ＳＥＲＰＩＮＦＩ、ＳＨＩＰ－１、ＳＨＩＰ－２、ＳＨＢ１、ＳＨＢ２、ＳＨＢＧ、ＳｆｃＡＺ、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＬＩＴ２、ＳＰＰ１、ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）、ＳＴ６ＧＡＬ１、ＳＴＡＢ１、ＳＴＡＴＥ、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ２、ＴＢ４Ｒ２、ＴＢＸ２１、ＴＣＰ１Ｏ、ＴＤＧＦ１
、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＥＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨＩＬ、ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン－１）、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ４、ＴＨＰＯ、ＴＩＥ（Ｔｉｅ－１）、ＴＩＭＰ３、組織因子、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＮＦ、ＴＮＦ－ａ、ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＳＦ１Ｏ（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰＯ３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＳＦ１４（ＨＶＥＭ－Ｌ）、ＴＮＦＲＳＦ１４（ＨＶＥＭ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）．ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４－１ＢＢリガンド）、ＴＯＬＬＩＰ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼ１ｉａ）、ＴＰ５３、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、ＴＲＡＦ５、ＴＲＡＦ６、ＴＲＫＡ、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＴＲＯＰ２、ＴＲＰＣ６、ＴＳＬＰ、ＴＷＥＡＫ、チロシナーゼ、ｕＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ベルシカン、ＶＨＬＣ５、ＶＬＡ－４、Ｗｎｔ－１、ＸＣＬ１（チムホタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ－Ｉｂ）、ＸＣＲＩ（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）、ＹＹＩ、ＺＦＰＭ２、ＣＬＥＣ４Ｃ（ＢＤＣＡ－２、ＤＬＥＣ、ＣＤ３０３、ＣＬＥＣＳＦ７）、ＣＬＥＣ４Ｄ（ＭＣＬ、ＣＬＥＣＳＦ８）、ＣＬＥＣ４Ｅ（ミンクル）、ＣＬＥＣ６Ａ（デクチン－２）．ＣＬＥＣ５Ａ（ＭＤＬ－１、ＣＬＥＣＳＦ５）、ＣＬＥＣ１Ｂ（ＣＬＥＣ－２）、ＣＬＥＣ９Ａ（ＤＮＧＲ－１）、ＣＬＥＣ７Ａ（デクチン－１）、ＰＤＧＦＲａ、ＳＬＡＭＦ７、ＧＰ６（ＧＰＶＩ）、ＬＩＬＲＡ１（ＣＤ８５Ｉ）、ＬＩＬＲＡ２（ＣＤ８５Ｈ、ＩＬＴ１）、ＬＩＬＲＡ４（ＣＤ８５Ｇ、ＩＬＴ７）、ＬＩＬＲＡ５（ＣＤ８５Ｆ、ＩＬＴ１１）、ＬＩＬＲＡ６（ＣＤ８５ｂ、ＩＬＴ８）、ＮＣＲ１（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３７、ＮＫｐ３０）、ＯＳＣＡＲ、ＴＡＲＭ１、ＣＤ３００Ｃ、ＣＤ３００Ｅ、ＣＤ３００ＬＢ（ＣＤ３００Ｂ）、ＣＤ３００ＬＤ（ＣＤ３００Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＬ４（ＣＤ１５８Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＳ、ＫＬＲＣ２（ＣＤ１５９Ｃ、ＮＫＧ２Ｃ）、ＫＬＲＫ１（ＣＤ３１４、ＮＫＧ２Ｄ）、ＮＣＲ２（ＣＤ３３６、ＮＫｐ４４）、ＰＩＬＲＢ、ＳＩＧＬＥＣ１（ＣＤ１６９、ＳＮ）、ＳＩＧＬＥＣ１４、ＳＩＧＬＥＣ１５（ＣＤ３３Ｌ３）、ＳＩＧＬＥＣ１６、ＳＩＲＰＢ１（ＣＤ１７２Ｂ）、ＴＲＥＭ１（ＣＤ３５４）、ＴＲＥＭ２、及びＬＲＦ１（ＮＫｐ８０）から選択される１以上の標的に結合することができる（例えば、それらから選択される標的に特異的に結合する）。

【0072】

いくつかの実施形態では、抗体はＦｃＲ．ガンマ結合受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲ．ガンマ共役受容体は、ＧＰ６（ＧＰＶＩ）、ＬＩＬＲＡ１（ＣＤ８５Ｉ）、ＬＩＬＲＡ２（ＣＤ８５Ｈ、ＩＬＴ１）、ＬＩＬＲＡ４（ＣＤ８５Ｇ、ＩＬＴ７）、ＬＩＬＲＡ５（ＣＤ８５Ｆ、ＩＬＴ１１）、ＬＩＬＲＡ６（ＣＤ８５ｂ、ＩＬＴ８）、ＮＣＲ１（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３５、ＬＹ９４、ＮＫｐ４６）、ＮＣＲ３（ＣＤ３３７、ＮＫｐ３０）、ＯＳＣＡＲ及びＴＡＲＭ１から成る群から選択される。

【0073】

いくつかの実施形態では、抗体はＤＡＰ１２共役受容体に結合する。いくつかの実施形態では、ＤＡＰ１２共役受容体は、ＣＤ３００Ｃ、ＣＤ３００Ｅ、ＣＤ３００ＬＢ（ＣＤ３００Ｂ）、ＣＤ３００ＬＤ（ＣＤ３００Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＬ４（ＣＤ１５８Ｄ）、ＫＩＲ２ＤＳ、ＫＬＲＣ２（ＣＤ１５９Ｃ、ＮＫＧ２Ｃ）、ＫＬＲＫ１（ＣＤ３１４、ＮＫＧ２Ｄ）、ＮＣＲ２（ＣＤ３３６、ＮＫｐ４４）、ＰＩＬＲＢ、ＳＩＧＬＥＣ１（ＣＤ１６９、ＳＮ）、ＳＩＧＬＥＣ１４、ＳＩＧＬＥＣ１５（ＣＤ３３Ｌ３）、ＳＩＧＬＥＣ１６、ＳＩＲＰＢ１（ＣＤ１７２Ｂ）、ＴＲＥＭ１（ＣＤ３５４）、及びＴＲＥＭ２から成る群から選択される。

【0074】

いくつかの実施形態では、抗体は、ヘムＩＴＡＭ含有受容体に結合する。いくつかの実施形態では、当該ヘムＩＴＡＭ含有受容体はＫＬＲＦ１（ＮＫｐ８０）である

【0075】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＬＥＣ４Ｃ（ＢＤＣＡ－２、ＤＬＥＣ、ＣＤ３０３、ＣＬＥＣＳＦ７）、ＣＬＥＣ４Ｄ（ＭＣＬ、ＣＬＥＣＳＦ８）、ＣＬＥＣ４Ｅ（ミンクル）、ＣＬＥＣ６Ａ（デクチン－２）、ＣＬＥＣ５Ａ（ＭＤＬ－１、ＣＬＥＣＳＦ５）、ＣＬＥＣ１Ｂ（ＣＬＥＣ－２）、ＣＬＥＣ９Ａ（ＤＮＧＲ－１）及びＣＬＥＣ７Ａ（デクチン－１）から選択される１以上の標的に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗体はＣＬＥＣ６Ａ（デクチン－２）またはＣＬＥＣ５Ａに結合することができる。いくつかの実施形態では、抗体はＣＬＥＣ６Ａ（デクチン－２）に結合することができる。

【0076】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＡＴＰ５Ｉ（Ｑ０６１８５）、ＯＡＴ（Ｐ２９７５８）、ＡＩＦＭ１（Ｑ９Ｚ０Ｘ１）、ＡＯＦＡ（Ｑ６４１３３）、ＭＴＤＣ（Ｐ１８１５５）、ＣＭＣ１（Ｑ８ＢＨ５９）、ＰＲＥＰ（Ｑ８Ｋ４１１）、ＹＭＥＬ１（Ｏ８８９６７）、ＬＰＰＲＣ（Ｑ６ＰＢ６６）、ＬＯＮＭ（Ｑ８ＣＧＫ３）、ＡＣＯＮ（Ｑ９９ＫＩ０）、ＯＤＯ１（Ｑ６０５９７）、ＩＤＨＰ（Ｐ５４０７１）、ＡＬＤＨ２（Ｐ４７７３８）、ＡＴＰＢ（Ｐ５６４８０）、ＡＡＴＭ（Ｐ０５２０２）、ＴＭＭ９３（Ｑ９ＣＱＷ０）、ＥＲＧＩ３（Ｑ９ＣＱＥ７）、ＲＴＮ４（Ｑ９９Ｐ７２）、ＣＬ０４１（Ｑ８ＢＱＲ４）、ＥＲＬＮ２（Ｑ８ＢＦＺ９）、ＴＥＲＡ（Ｑ０１８５３）、ＤＡＤ１（Ｐ６１８０４）、ＣＡＬＸ（Ｐ３５５６４）、ＣＡＬＵ（Ｏ３５８８７）、ＶＡＰＡ（Ｑ９ＷＶ５５）、ＭＯＧＳ（Ｑ８０ＵＭ７）、ＧＡＮＡＢ（Ｑ８ＢＨＮ３）、ＥＲＯ１Ａ（Ｑ８Ｒ１８０）、ＵＧＧＧ１（Ｑ６Ｐ５Ｅ４）、Ｐ４ＨＡ１（Ｑ６０７１５）、ＨＹＥＰ（Ｑ９Ｄ３７９）、ＣＡＬＲ（Ｐ１４２１１）、ＡＴ２Ａ２（Ｏ５５１４３）、ＰＤＩＡ４（Ｐ０８００３）、ＰＤＩＡ１（Ｐ０９１０３）、ＰＤＩＡ３（Ｐ２７７７３）、ＰＤＩＡ６（Ｑ９２２Ｒ８）、ＣＬＨ（Ｑ６８ＦＤ５）、ＰＰＩＢ（Ｐ２４３６９）、ＴＣＰＧ（Ｐ８０３１８）、ＭＯＴ４（Ｐ５７７８７）、ＮＩＣＡ（Ｐ５７７１６）、ＢＡＳＩ（Ｐ１８５７２）、ＶＡＰＡ（Ｑ９ＷＶ５５）、ＥＮＶ２（Ｐ１１３７０）、ＶＡＴ１（Ｑ６２４６５）、４Ｆ２（Ｐ１０８５２）、ＥＮＯＡ（Ｐ１７１８２）、ＩＬＫ（Ｏ５５２２２）、ＧＰＮＭＢ（Ｑ９９Ｐ９１）、ＥＮＶ１（Ｐ１０４０４）、ＥＲＯ１Ａ（Ｑ８Ｒ１８０）、ＣＬＨ、（Ｑ６８ＦＤ５）、ＤＳＧ１Ａ（Ｑ６１４９５）、ＡＴ１Ａ１（Ｑ８ＶＤＮ２）、ＨＹＯＵ１（Ｑ９ＪＫＲ６）、ＴＲＡＰ１（Ｑ９ＣＱＮ１）、ＧＲＰ７５（Ｐ３８６４７）、ＥＮＰＬ（Ｐ０８１１３）、ＣＨ６０（Ｐ６３０３８）、及びＣＨ１０（Ｑ６４４３３）から選択される１以上の標的に結合することができる（例えば、それらから選択される標的に特異的に結合する）。先行するリストでは、受入番号を括弧内で示す。

【0077】

いくつかの実施形態では、抗体は、ＣＤＨ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２、ＳＬＡＭＦ７及びｇｐ７５から選択される抗原に結合する。いくつかの実施形態では、抗原はＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ４７、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、及びＨｅｒ２から選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｔｎ抗原及びトムゼン－フリーデンライヒ抗原から選択される抗原に結合する。

【0078】

いくつかの実施形態では、抗体またはＦｃ融合タンパク質は、アバゴボマブ、アバタセプト（ＯＲＥＮＣＩＡ（登録商標）としても知られている）、アブシキシマブ（ＲＥＯＰＲＯ（登録商標）としても知られている）、ｃ７Ｅ３Ｆａｂ）、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）としても知られている）、アデカツムマブ、アレンツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）としても知られている）、ＭａｂＣａｍｐａｔｈまたはＣａｍｐａｔｈ－１Ｈ）、アルツモマブ、アフェリモマブ、アナツモマブ、マフェナトックス、アネツムマブ、アンルキズマブ、アポリズマブ、アクチルモマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、アトロリムマブ、バピネズマブ、バシリキシマブ（ＳＩＭＵＬＥＣＴ（登録商標）としても知られている）、バビツキシマブ、ベクツモマブ（ＬＹＭＰＨＳＣＡＮ（登録商標）としても知られている）、ベリムマブ（ＬＹＭＰＨＯ－ＳＴＡＴ－Ｂ（登録商標）としても知られている）、ベルチリムマブ、ベシリソマブ、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）しても知られている）、ビシロマブ、ブラロバルビタール、ビバツズマブメルタンシン、カムパス、カナキヌマブ（ＡＣＺ８８５としても知られている）、カンツズマブメルタンシン、カプロマブ（ＰＲＯＳＴＡＳＣＩＮＴ（登録商標）としても知られている）、カツマキソマブ（ＲＥＭＯＶＡＢ（登録商標）としても知られている）、セデリズマブ（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標）としても知られている）、セルトリズマブペゴール、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）としても知られている）、クレノリキシマブ、デカツズマブ、ダクリキシマブ、ダクリズマブ（ＺＥＮＡＰＡＸ（登録商標）としても知られている）、デノスマブ（ＡＭＧ１６２としても知られている）、デツモマブ、ドリモマブアリトックス、ドリキシズマブ、ダンツマブ、デュリムルマブ、デュルムマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ（ＳＯＬＩＲＩＳ（登録商標）としても知られている）、エドバコマブ、エドレコロマブ（Ｍａｂ１７－１Ａ、ＰＡＮＯＲＥＸ（登録商標）としても知られている）、エファリズマブ（ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標）としても知られている）、エフンギュマブ（ＭＹＣＯＧＲＡＢ（登録商標）としても知られている）、エルシリモマブ、エンリモマブペゴール、エピツモマブシツキセタン、エファリズマブ、エピツモマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマキソマブ（ＲＥＸＯＭＵＮ（登録商標）としても知られている）、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）としても知られている）、エタラシズマブ（エタラツズマブ、ＶＩＴＡＸＩＮ（登録商標）、ＡＢＥＧＲＩＮ（登録商標）としても知られている）、エクスビビルマブ、ファノレソマブ（ＮＥＵＴＲＯＳＰＥＣ（登録商標）としても知られている）、ファラリモマブ、フェリズマブ、フォントリズマブ（ＨＵＺＡＦ（登録商標）としても知られている）、ガリキシマブ、ガンテネルマブ、ガビリモマブ（ＡＢＸＣＢＬ（登録商標）としても知られている）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）としても知られている）、ゴリムマブ（ＣＮＴＯ１４８としても知られている）、ゴミリキシマブ、イバリズマブ（ＴＮＸ－３５５としても知られている）、イブリツモマブチウキセタン（ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）としても知られている）、イゴボマブ、イムシロマブ、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）としても知られている）、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１としても知られている）、イラツムマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ、レマレソマブ、レブリリズマブ、レルデリムマブ、レクサツムマブ（ＨＧＳ－ＥＴＲ２、ＥＴＲ２－ＳＴ０１としても知られている）、レキシツムマブ、リビビルマブ、リンツズマブ、ルカツムマブ、ルミリキシマブ、マパツムマブ（ＨＧＳＥＴＲ１、ＴＲＭ－１としても知られている）、マスリモマブ、マツズマブ（ＥＭＤ７２０００としても知られている）、メポリズマブ（ＢＯＳＡＴＲＩＡ（登録商標）としても知られている）、メテリムマブ、ミラツムマブ、ミンレツモマブ、ミツモマブ、モロリムマブ、モタビズマブ（ＮＵＭＡＸ（登録商標）としても知られている）、ムロモナブ（ＯＫＴ３としても知られている）、ナコロマブタフェナトックス、ナプツモマブエスタフェナトックス、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）、ＡＮＴＥＧＲＥＮ（登録商標）としても知られている）、ネバクマブ、ネレリモマブ、ニモツマブ（ＴＨＥＲＡＣＩＭ ｈＲ３（登録商標）、ＴＨＥＲＡ－ＣＩＭ－ｈＲ３（登録商標）、ＴＨＥＲＡＬＯＣ（登録商標）としても知られている）、ノフェツモマブメルペンタン（ＶＥＲＬＵＭＡ（登録商標）としても知られている）、オクレリズマブ、オデュリモマブ、オファツムマブ、オマリズマブ（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）としても知られている）、オレゴボマブ（ＯＶＡＲＥＸ（登録商標）としても知られている）、オテリキシズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）としても知られている）、パニツムマブ（ＡＢＸ－ＥＧＦ、ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）としても知られている）、パスコリズマブ、ペムツモマブ（ＴＨＥＲＡＧＹＮ（登録商標）としても知られている）、ペルツズマブ（２Ｃ４、ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）としても知られている）、ペクセリズマブ、ピンツモマブ、プリリキシマブ、プリツムマブ、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）としても知られている）、ラキシバクマブ、レガビルマブ、レスリズマブ、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、ＭａｂＴＨＥＲＡ（登録商標）としても知られている）、ロベリズマブ、ルピズマブ、サツモマブ、セビルマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ（ＭＥＤＩ－５０７としても知られている）、ソンツズマブ、スタムルマブ（ＭＹＯ－０２９としても知られている）、スレソマブ（ＬＥＵＫＯＳＣＡＮ（登録商標）としても知られている）、タカツズマブ、テトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タプリツモマブ、パプトックス、テフィバズマブ（ＡＵＲＥＸＩＳ（登録商標）としても知られている）、テリモマブアリトックス、テネリキシマブ、テプリズマブ、チシリムマブ、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標）としても知られている）、トラリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）としても知られている）、トレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６としても知られている）、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ（ＣＮＴＯ１２７５としても知られている）、バパリキシマブ、ベルツズマブ、バパリモマブ、ビシリズマブ（ＮＵＶＩＯＮ（登録商標）としても知られている）、ボロシキシマブ（Ｍ２００も知られている）、ボツムマブ（ＨＵＭＡＳＰＥＣＴ（登録商標）としても知られている）、ザルツムマブ、ザノリムマブ（ＨｕＭＡＸ－ＣＤ４としても知られている）、ジルアリムマブ、ゾリモマブアリトックス、ダラツムマブ、エロツクスマブ、オビンツンズマブ、オララツマブ、ブレンツキシマブベドチン、アフィベルセプト、アバタセプト、ベラタセプト、アフィベルセプト、エタネルセプト、ロミプロスチム、ＳＢＴ－０４０（ＵＳ２０１７／０１５８７７２にて列挙された配列）から選択される。いくつかの実施形態では、抗体はリツキシマブである。

【0079】

システイン変異抗体
本発明の免疫複合体は、システイン変異抗体を含む。

【0080】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ＥＵ方式に従って番号が付けられたＫ１４５Ｃ、Ｓ１１４Ｃ、Ｅ１０５Ｃ、Ｓ１５７Ｃ、Ｌ１７４Ｃ、Ｇ１７８Ｃ、Ｓ１５９Ｃ、Ｖ１９１Ｃ、Ｌ２０１Ｃ、Ｓ１１９Ｃ、Ｖ１６７Ｃ、Ｉ１９９Ｃ、Ｔ１２９Ｃ、Ｑ１９６Ｃ、Ａ３７８Ｃ、Ｋ１４９Ｃ、Ｋ１８８Ｃ、及びＡ１４０Ｃから成る群から選択されるシステイン変異を有するシステイン変異抗体を含む。

【0081】

いくつかの実施形態では、システイン変異抗体は、抗体または抗体断片の重鎖の特定の位置から選択される１つ以上のアミノ酸のシステインによる置換を含み、以下に限定されないが、表３、４、７のものが挙げられ、この位置は、ＥＵ方式に従って番号が付けられている。

【0082】

いくつかの実施形態では、システイン変異抗体は、抗体または抗体断片の軽鎖の特定の位置から選択されるその定常領域に１つ以上のアミノ酸のシステインによる置換を含み、以下に限定されないが、表１、２、５、６のものが挙げられ、この位置は、ＥＵシステムに従って番号が付けられており、軽鎖は、ヒトκ軽鎖である。

【0083】

一実施形態では、ヒンジ領域のシステイン残基の数が変えられる、増加または減少させられるよう、ＣＨ１のヒンジ領域が修飾される（ＵＳ５６７７４２５）。ＣＨ１のヒンジ領域のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖及び重鎖の組み立てを促進するか、または抗体の安定性を増加もしくは低下させるために変えられてもよい。システイン置換の部位は、安定で均一な複合体が得られるように選択される。修飾された抗体または断片は、２つ以上のシステイン置換を有してもよく、これらの置換は、本明細書に記載されるとおり他の抗体修飾及びコンジュゲーション方法と組み合わせて使用されてもよい。抗体の特定の位置にシステインを挿入するための方法は当該技術分野において知られており、例えば、Ｌｙｏｎｓ ｅｔ ａｌ，（１９９０）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，３：７０３－７０８、ＷＯ２０１１／００５４８１、ＷＯ２０１４／１２４３１６、ＷＯ２０１５／１３８６１５を参照されたい。

【0084】

本発明の実施形態の範囲には、本明細書に記載のシステイン変異抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインの機能的変異体が含まれる。本明細書で使用されるとき「機能的変異体」という用語は、親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインと実質的なまたは有意な配列同一性または類似性を有する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトを指し、この機能的変異体は、それが変異体である抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインの生物活性を保持する。機能的変異体は、例えば、親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインと同様の程度に、同じ程度に、またはより高い程度に、例えば、以下に限定されないが、ＰＤ－Ｌ１、ＨＥＲ２、ＣＥＡまたはＴＲＯＰ２を発現する標的細胞を認識する能力を保持する、本明細書に記載の抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメイン（親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメイン）の変異体を包含する。

【0085】

抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインに関して、機能的変異体は、アミノ酸配列が抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインと、例えば、少なくとも約３０％、約５０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上同一であることができる。

【0086】

機能的変異体は、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含むことができる。あるいはまたはさらに、機能的変異体は、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換が機能的変異体の生物活性を妨害または阻害しないことが好ましい。非保存的アミノ酸置換は、機能的変異体の生物活性を増強してもよいので、機能的変異体の生物活性は、親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインと比較して上昇する。

【0087】

本発明の免疫複合体を含む抗体はＦｃ操作された変異体を含む。いくつかの実施形態では、１以上のＦｃ受容体への調節された結合をもたらすＦｃ領域の変異は、以下の変異：ＳＤ（Ｓ２３９Ｄ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＥ（Ｓ２６７Ｅ）、ＳＥＬＦ（Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＤＩＥＡＬ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ）、ＧＡ（Ｇ２３６Ａ）、ＡＬＩＥ（Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、ＧＡＳＤＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、Ｖ９（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）及びＶ１１（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）の１以上、及び／または以下のアミノ酸：Ｅ３４５Ｒ、Ｅ２３３、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｈ２６８、Ｐ２７１、Ｌ３２８及びＡ３３０での１以上の変異を含むことができる。Ｆｃ受容体結合を調節するためのさらなるＦｃ領域の修飾は、例えば、ＵＳ２０１６／０１４５３５０、ＵＳ７４１６７２６及びＵＳ５６２４８２１に記載されており、これらは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。

【0088】

本発明の免疫複合体を含む抗体は脱フコシル化のようなグリカン変異体を含む。いくつかの実施形態では、結合剤のＦｃ領域は、ネイティブの非修飾Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃ領域のグリコシル化パターンの変化を有するように修飾される。

【0089】

本発明の抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインのアミノ酸置換は、好ましくは保存的アミノ酸置換である。保存的アミノ酸置換は当該技術分野で公知であり、特定の物理的及び／または化学的特性を有する１つのアミノ酸を、同じまたは類似の化学的または物理的特性を有する別のアミノ酸に交換するアミノ酸置換が含まれる。例えば、保存的アミノ酸置換は、別の酸性／負に帯電した極性アミノ酸に置換された酸性／負に帯電した極性アミノ酸（例えば、ＡｓｐまたはＧｌｕ）、非極性側鎖を有する別のアミノ酸に置換された正に帯電したアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｖａｌなど）、別の塩基性／正に帯電した極性アミノ酸に置換された塩基性／正に帯電した極性アミノ酸（例えば、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇなど）、極性側鎖を有する他の非荷電性アミノ酸に置換された極性側鎖を有する非荷電性アミノ酸（例えば、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）、ベータ分岐側鎖を有する別のアミノ酸に置換されたベータ分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ及びＶａｌ）、芳香族側鎖を有する別のアミノ酸に置換された芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ及びＴｙｒ）などであり得る。

【0090】

抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、他の成分、例えば他のアミノ酸が抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメイン機能的変異体の生物活性を実質的に変化させないように、本明細書に記載されている特定のアミノ酸配列（複数可）から本質的になり得る。

【0091】

いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、修飾Ｆｃ領域を含み、修飾は１以上のＦｃ受容体へのＦｃ領域の結合を調節する。

【0092】

いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体（例えば、少なくとも２つのアジュバント部分に結合された抗体）は、Ｆｃ領域の変異が欠如している天然抗体と比較して、１以上のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）及び／またはＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ））に調節された結合（例えば、結合の増加または結合の減少）をもたらす、Ｆｃ領域の１以上の修飾（例えば、アミノ酸の挿入、欠失及び／または置換）を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、抗体のＦｃ領域のＦｃγＲＩＩＢへの結合を減少させる、Ｆｃ領域の１以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失及び／または置換）を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、Ｆｃ領域の変異が欠如している天然抗体と比較して、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）及び／またはＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）への同じ結合または増加した結合を維持しながら、ＦｃγＲＩＩＢへの抗体の結合を減少させる、抗体のＦｃ領域の１以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失及び／または置換）を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、ＦｃγＲＩＩＢへの抗体のＦｃ領域の結合を増加させる、Ｆｃ領域の１以上の修飾を含む。

【0093】

いくつかの実施形態では、調節された結合は、抗体の天然Ｆｃ領域と比較した抗体のＦｃ領域の変異によって提供される。変異は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはこれらの組み合わせにあり得る。「天然Ｆｃ領域」は「野生型Ｆｃ領域」と同義であり、自然界に見いだされるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一の、または天然抗体（例えば、セツキシマブ）に見いだされるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域、ならびにこれらの天然に存在する変異型が含まれる。天然配列Ｆｃには、Ｆｃの種々のアロタイプが含まれる（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，（２００９）ｍＡｂｓ，１（４）：３３２－３３８）。

【0094】

いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体のＦｃ領域は、天然の非修飾Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃ領域のグリコシル化パターンの変化を有するように修飾される。ヒト免疫グロブリンは、各重鎖のＣγ２ドメインのＡｓｎ２９７残基でグリコシル化される。このＮ－結合型オリゴ糖は、コア七糖であるＮ－アセチルグルコサミン４マンノース３（ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３）から成る。エンドグリコシダーゼまたはＰＮＧａｓｅＦによる七糖の除去は、抗体Ｆｃ領域の配座変化を引き起こすことが知られており、ＦｃγＲの活性化に対する抗体結合親和性を大幅に低下させ、エフェクター機能を低下させる可能性がある。コア七糖は、ガラクトース、バイセクトＧｌｃＮＡｃ、フコース、またはシアル酸で修飾されることが多く、活性型ＦｃγＲ及び抑制型ＦｃγＲへのＦｃ結合に異なる影響を与える。さらに、α２，６－シアリル化は生体内で抗炎症活性を増強する一方で、脱フコシル化はＦｃγＲＩＩＩａ結合を改善し、且つ抗体依存性細胞傷害及び抗体依存性食作用の１０倍の上昇をもたらすことが実証されている。したがって、特定のグリコシル化パターンを使用して、炎症性エフェクター機能を制御することができる。

【0095】

いくつかの実施形態では、グリコシル化パターンを変更するための修飾は突然変異である。例えば、Ａｓｎ２９７での置換。いくつかの実施形態では、Ａｓｎ２９７は、グルタミン（Ｎ２９７Ｑ）に変異している。ＦｃγＲ制御シグナル伝達を調節する抗体による免疫応答を制御するための方法は、例えば、ＵＳ７，４１６，７２６、ＵＳ２００７／００１４７９５及びＵＳ２００８／０２８６８１９に記載されており、これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0096】

いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体は、天然に存在しないグリコシル化パターンを有する操作されたＦａｂ領域を含有するように修飾される。例えば、ハイブリドーマは、ＦｃＲγＩＩＩａ結合及びエフェクター機能の増加を可能にする特定の変異を有する脱フコシル化ｍＡｂ、脱シアリル化ｍＡｂまたは脱グリコシル化Ｆｃを分泌するように遺伝子操作することができる。いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体は、脱フコシル化されるように操作される。

【0097】

いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体の全Ｆｃ領域は、異なるＦｃ領域と交換され、その結果、抗体のＦａｂ領域は、非天然Ｆｃ領域に結合される。例えば、通常はＩｇＧ１Ｆｃ領域を含むセツキシマブのＦａｂ領域は、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＡに結合できる、または通常はＩｇＧ４Ｆｃ領域を含むニボルマブのＦａｂ領域をＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１またはＩｇＧ２に結合できる。いくつかの実施形態では、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ修飾抗体はまた、記載されたＦｃドメインの安定性を調節する、ＩｇＧ４ Ｆｃ内のＳ２２８Ｐ変異のような１以上のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ修飾抗体はまた、ＦｃＲへのＦｃ結合を調節する、本明細書に記載されている１以上のアミノ酸修飾を含む。

【0098】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＦｃＲへの結合を調節する修飾は、天然の非修飾抗体と比較した場合、抗体のＦａｂ領域のその抗原への結合を変化させない。他の実施形態では、Ｆｃ領域のＦｃＲへの結合を調節する修飾はまた、天然の非修飾抗体と比較した場合、抗体のＦａｂ領域のその抗原への結合を増加させる。

【0099】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、ＰＤ－Ｌ１を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む、抗体コンストラクトを含む。

【0100】

プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１、分化抗原群２７４、ＣＤ２７４、Ｂ７－ホモログ１、またはＢ７－Ｈ１）は、Ｂ７タンパク質スーパーファミリーに属し、且つプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１、ＰＤＣＤ１、分化抗原群２７９、またはＣＤ２７９）のリガンドである。ＰＤ－Ｌ１はまた、Ｂ７．１（ＣＤ８０）と相互作用することができ、そのような相互作用は、Ｔ細胞のプライミングを阻害すると考えられている。ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１軸は、適応免疫応答の抑制に大きな役割を果たす。より具体的には、ＰＤ－Ｌ１とその受容体であるＰＤ－１との結合は、Ｔ細胞の活性化及び増殖を阻害するシグナルをもたらすと考えられている。ＰＤ－Ｌ１に結合し、リガンドがＰＤ－１受容体に結合するのを防ぐ薬剤は、この免疫抑制を妨げ、したがって、必要に応じて、例えばがんまたは感染症の治療のために、免疫応答を増強することができる。ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１経路はまた、自己免疫の予防に寄与し、したがって、ＰＤ－Ｌ１に対するアゴニスト剤、または免疫阻害ペイロードを送達する薬剤は、自己免疫障害の治療に役立ち得る。

【0101】

アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標））、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ（商標））及びアベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（商標））を含む、ＰＤ－Ｌ１を標的とするいくつかの抗体が、がんの治療のために開発された。それにもかかわらず、ＰＤ－Ｌ１と高い親和性で結合し、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１シグナル伝達を効果的に妨げる薬剤、及びＰＤ－Ｌ１発現細胞に治療ペイロードを送達することができる薬剤を含む、新規のＰＤ－Ｌ１抗体コンストラクトが依然として必要とされている。さらに、自己免疫障害及び感染を治療するための新規のＰＤ－Ｌ１結合剤が必要とされている。

【0102】

ＴＬＲアゴニストペイロードを、ＰＤ－Ｌ１を発現する細胞に送達する方法であって、当該細胞または当該細胞を含む哺乳動物に、１つ以上のＴＬＲアゴニスト部分に共有結合したリンカーに共有結合したシステイン変異抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む免疫複合体を投与することを含む、方法が提供される。

【0103】

本発明はまた、ＰＤ－Ｌ１阻害に応答する哺乳動物における免疫応答を増強または低減または阻害するための方法、及び哺乳動物の疾患、障害または状態を治療するための方法を提供し、本方法は、哺乳動物にＰＤ－Ｌ１免疫複合体を投与することを含む。

【0104】

本発明は、免疫グロブリン重鎖可変領域ポリペプチド及び免疫グロブリン軽鎖可変領域ポリペプチドを含む、ＰＤ－Ｌ１抗体を提供する。ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する。抗体の結合特異性により、ＰＤ－Ｌ１を発現する細胞を標的とし、例えば、そのような細胞に治療用ペイロードを送達することが可能になる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、ヒトＰＤ－Ｌ１に結合する。しかしながら、任意のＰＤ－Ｌ１断片、ホモログまたはパラログに結合する抗体も包含される。

【0105】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＤ－Ｌ１がその受容体であるＰＤ－１に結合することを実質的に阻害または防止することなく、ＰＤ－Ｌ１に結合する。しかしながら、他の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＤ－Ｌ１のその受容体であるＰＤ－１への結合を完全にまたは部分的に遮断（阻害または防止）することができ、（例えば、治療目的のために）ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１シグナル伝達を阻害するために抗体を使用することができる。抗体または抗原結合抗体断片は、ＰＤ－Ｌ１に対して単一特異的であり得るか、または二重特異的もしくは多重特異的であってよい。例えば、２価または多価の抗体または抗体断片において、結合ドメインは、同じ抗原の異なるエピトープを標的とするか、または異なる抗原を標的とする、異なるものであってもよい。多価結合コンストラクトを構築する方法は、当技術分野で公知である。二重特異性及び多重特異性抗体は、当技術分野で公知である。更に、ポリペプチド鎖の二量体、三量体または四量体である、ダイアボディ、トリアボディまたはテトラボディを提供することができ、それぞれは、同じポリペプチド鎖上のＶ_ＨとＶ_Ｌの間の対形成を可能にするには短すぎるペプチドリンカーによってＶ_Ｌに接続されたＶ_Ｈを含み、それによって、異なるＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌポリペプチド鎖上の相補的ドメイン間の対形成を駆動し、２、３または４個の機能的な抗原結合部位を有する多量体分子を生成する。また、２つの異なる可変領域を有する小さなｓｃＦｖ断片であるビス－ｓｃＦｖ断片を生成し、２つの異なるエピトープを結合することが可能な二重特異性ビス－ｓｃＦｖ断片を生成することができる。Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）及びＦａｂ三量体（Ｆａｂ３）は、Ｆａｂ断片に基づく多特異的コンストラクトを作成するために、遺伝子工学法を用いて生成することができる。

【0106】

ＰＤ－Ｌ１抗体は、ヒト抗体、非ヒト抗体、ヒト化抗体もしくはキメラ抗体、または対応する抗体断片であってもよいし、それらから得ることもできる。「キメラ」抗体は、典型的には、ヒト定常領域及び非ヒト可変領域を含む抗体またはその断片である。「ヒト化」抗体は、典型的にはヒト抗体足場を含むが、少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５または６つのＣＤＲすべて）における非ヒト由来アミノ酸または配列を含む、モノクローナル抗体である。

【0107】

ＰＤ－Ｌ１抗体は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０２１／１５０７０１に記載されるように内部移行することができるか、またはＰＤ－Ｌ１抗体は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０２１／１５０７０２に記載されるように非内部移行であることができる。

【0108】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、ＨＥＲ２を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む抗体コンストラクトを含む。

【0109】

特定の実施形態では、本発明の免疫複合体は、実施例２０１の方法によって調製されたものなどの、システイン変異抗ＨＥＲ２抗体を含む。本発明の一実施形態では、本発明の免疫複合体の抗ＨＥＲ２抗体は、参照によって本明細書に特に組み込まれるＵＳ５８２１３３７の表３に記載されている、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－７及びｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８のシステイン変異型を含む。これらの抗体は、ＨＥＲ２に結合するマウス抗体（４Ｄ５）の相補性決定領域を有するヒトフレームワーク領域を含む。ヒト化抗体ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８はトラスツズマブとも呼ばれ、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）の商品名で市販されている。

【0110】

トラスツズマブ（ＣＡＳ １８０２８８－６９－１、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８、ｒｈｕＭＡｂ ＨＥＲ２、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は、細胞に基づくアッセイにて、ＨＥＲ２の細胞外ドメインに高親和性で選択的に結合する（Ｋｄ＝５ｎＭ）マウス抗ＨＥＲ２抗体（４Ｄ５）のヒト化型である、組換えＤＮＡ由来のＩｇＧ１κ、モノクローナル抗体である（米国特許第５６７７１７１号、同第５８２１３３７号、同第６０５４２９７号、同第６１６５４６４号、同第６３３９１４２号、同第６４０７２１３号、同第６６３９０５５号、同第６７１９９７１号、同第６８００７３８号、同第７０７４４０４号、Ｃｏｕｓｓｅｎｓ ｅｔ ａｌ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１１３２－９、Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：７０７－１２、Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２）。

【0111】

本発明の一実施形態では、抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、トラスツズマブのＣＤＲ領域を含む。本発明の一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブのフレームワーク領域をさらに含む。本発明の一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブの一方または双方の可変領域をさらに含む。

【0112】

本発明の別の実施形態では、本発明の免疫複合体の抗ＨＥＲ２抗体は、米国特許第７８６２８１７号に記載されているように、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、ヒト化２Ｃ４を含む。例示的なヒト化２Ｃ４抗体は、ペルツズマブである（ＣＡＳ登録番号３８０６１０－２７－５）、ＰＥＲＪＥＴＡ（商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．）。ペルツズマブはＨＥＲ二量体化阻害剤（ＨＤＩ）であり、他のＨＥＲ受容体（例えば、ＥＧＦＲ／ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３及びＨＥＲ４）と活性なヘテロ二量体またはホモ二量体を形成する能力を阻害する機能を有する。例えば、Ｈａｒａｒｉ ａｎｄ Ｙａｒｄｅｎ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １９：６１０２－１４（２０００）、Ｙａｒｄｅｎ ａｎｄ Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２：１２７－３７（２００１）；Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ，Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．１０：１５８－９（２００３）；Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，４２１：７５６－６０（２００３）；及びＭａｌｉｋ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４４：１７６－７（２００３）を参照のこと。ＰＥＲＪＥＴＡ（商標）は乳癌の治療薬として承認されている。

【0113】

本発明の一実施形態では、抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ペルツズマブのＣＤＲ領域を含む。本発明の一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ペルツズマブのフレームワーク領域をさらに含む。本発明の一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ペルツズマブの一方または両方の可変領域をさらに含む。

【0114】

（ＭＧＡＨ２２とも呼ばれる）マルゲツキシマブは、別の抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体である。マルゲツキシマブのＦｃ領域は、免疫エフェクター細胞上の活性化ＦｃγＲへの結合を増加させるが、抑制性Ｆｃ．γ．Ｒへの結合を減少させるように最適化されている。マルゲツキシマブは、再発または難治性の進行乳癌で、その腫瘍が免疫組織化学により２＋レベルでＨＥＲ２を発現しており、ＦＩＳＨによるＨＥＲ２遺伝子増幅の証拠がない患者の治療についてＦＤＡによって承認されている。

【0115】

ＨＴ－１９は、トラスツズマブまたはペルツズマブのエピトープとは異なるヒトＨＥＲ２のエピトープに結合する、別の抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体である。ＨＴ－１９は、トラスツズマブと同等にＨＥＲ２シグナル伝達を阻害し、トラスツズマブ及びペルツズマブと組み合わせてＨＥＲ２の分解を増強することが示された（Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ Ｄ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．；７５：ＬＢ－２３１）。

【0116】

本発明の一実施形態では、免疫複合体は、表１から選択される軽鎖配列を有するシステイン変異抗体を含む。

【表1】

【0117】

本発明の一実施態様では、システイン変異ＨＥＲ２標的化抗体は、配列番号２０の重鎖（ＨＣ）を含む。

【0118】

ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＹＰＴＮＧＹＴＲＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＷＧＧＤＧＦＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２０

【0119】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＨＥＲ２標的化抗体の軽鎖（ＬＣ）は、表２の配列番号２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、及び３２から選択される。

【表2-1】

【表2-2】

【0120】

本発明の一実施形態では、免疫複合体は、表３から選択される重鎖配列を有するシステイン変異抗体を含む。

【表3】

【0121】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＨＥＲ２標的化抗体の軽鎖は、配列番号２１の配列を有する。

【0122】

ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２１

【0123】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＨＥＲ２標的化抗体の重鎖（ＨＣ）は、表４の配列番号３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、及び４１から選択される。

【表4-1】

【表4-2】

【表4-3】

【0124】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、カプリン－１を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む、システイン変異抗体コンストラクトを含む（Ｅｌｌｉｓ ＪＡ，Ｌｕｚｉｏ ＪＰ（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７０（３５）：２０７１７－２３；Ｗａｎｇ Ｂ，ｅｔ ａｌ（２００５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５（７）：４２７４－８２；Ｓｏｌｏｍｏｎ Ｓ，ｅｔ ａｌ（２００７）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２７（６）：２３２４－４２）。カプリン－１はＧＰＩＡＰ１、ＧＰＩＰ１３７、ＧＲＩＰ１３７、Ｍ１１Ｓ１、ＲＮＧ１０５、ｐ１３７ＧＰＩ、及び細胞周期関連タンパク質１としても知られている。

【0125】

細胞質活性化／増殖関連タンパク質－１（カプリン－１）は、細胞周期制御関連遺伝子の調節に関与するＲＮＡ結合タンパク質である。カプリン－１は、ｃ－Ｍｙｃ及びサイクリンＤ２のｍＲＮＡに選択的に結合し、Ｇ_１期を通ってＳ期への細胞の進行を加速し、細胞生存率を高め、細胞増殖を促進する。これは、それが腫瘍形成にて重要な役割を果たす場合があることを示している（Ｗａｎｇ Ｂ，ｅｔ ａｌ．（２００５），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５：４２７４－４２８２）。カプリン－１は、単独で、またはＲａｓＧＡＰ ＳＨ３ドメイン結合タンパク質１及び脆弱Ｘ精神遅滞タンパク質のような他のＲＮＡ結合タンパク質と組み合わせて作用する。腫瘍形成過程では、カプリン－１は、主に細胞増殖を活性化し、免疫チェックポイントタンパク質の発現を上方調節することによって機能する。ストレス性顆粒の形成を介して、カプリン－１はまた、腫瘍細胞が有害条件に適応する過程にも関与しており、これは放射線及び化学療法の耐性に寄与する。種々の臨床悪性腫瘍におけるその役割を考慮すると、カプリン－１は、バイオマーカーとして、及び新規治療薬開発の標的として使用される可能性がある。（Ｙａｎｇ， Ｚ－Ｓ， ｅｔ ａｌ （２０１９），Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１８：１５－２１）。

【0126】

治療及び検出のためのカプリン－１を標的とする抗体が記載されている（ＷＯ２０１１／０９６５１９；ＷＯ２０１３／１２５６５４；ＷＯ２０１３／１２５６３６；ＷＯ２０１３／１２５６４０；ＷＯ２０１３／１２５６３０；ＷＯ２０１３／０１８８８９；ＷＯ２０１３／０１８８９１；ＷＯ２０１３／０１８８８３；ＷＯ２０１３／０１８８９２；ＷＯ２０１４／０１４０８２；ＷＯ２０１４／０１４０８６；ＷＯ２０１５／０２０２１２；ＷＯ２０１８／０７９７４０）。

【0127】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、ＣＥＡを特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含むシステイン変異抗体コンストラクトを含む。がん胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）は、ＣＤ６６ｅ（分化抗原群６６ｅ）としても知られ、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）遺伝子ファミリーのメンバーである。

【0128】

がん胎児性抗原（ＣＥＡ、ＣＤ６６ｅ、ＣＥＡＣＡＭ５）の発現の上昇は、特に腫瘍細胞の接着、転移、細胞免疫機構の遮断、及び抗アポトーシス機能を有するなど、腫瘍の様々な生物学的側面に関係している。ＣＥＡはまた、多くの癌腫の血液マーカーとしても使用されている。ＭＮ－１４及びｈＭＮ１４としても知られている、ラベツズマブ（ＣＥＡ－ＣＩＤＥ（商標）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ、ＣＡＳ登録番号２１９６４９－０７－７）は、ヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体であり、結腸直腸癌の治療のために研究されている（Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ，Ｒ．ｅｔ ａｌ（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ５４（４）：３１５－３２７）。カンプトテシン類似体（ラベツズマブゴビテカン、ＩＭＭＵ－１３０）に結合したラベツズマブは、がん胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）を標的とし、再発性または難治性の転移性大腸癌の患者で研究されている（Ｓｈａｒｋｅｙ，Ｒ．ｅｔ ａｌ，（２０１８），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １７（１）：１９６－２０３；Ｃａｒｄｉｌｌｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ（２０１８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １７（１）：１５０－１６０）。本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ６６７６９２４に開示されている、ｈＭＮ－１４／ラベツズマブの可変軽鎖（ＶＬκ）を含む。

【0129】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、ＴＲＯＰ２を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含むシステイン変異抗体コンストラクトを含む。腫瘍関連カルシウムシグナル伝達因子２（ＴＲＯＰ－２）は、ＴＡＣＳＴＤ２遺伝子によってコードされる膜貫通糖タンパク質である（Ｌｉｎｎｅｎｂａｃｈ ＡＪ，ｅｔ ａｌ（１９９３）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１３（３）：１５０７－１５；Ｃａｌａｂｒｅｓｅ Ｇ，ｅｔ ａｌ（２００１）Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔ．９２（１－２）：１６４－５）。ＴＲＯＰ２は細胞内カルシウムシグナル伝達因子であり、多くのがんで発現が異なり、細胞に自己複製、増殖、浸潤、及び生存のためにシグナルを伝達する。ＴＲＯＰ２は幹細胞マーカーと考えられており、多くの正常組織で発現しているが、対照的に多くのがんでは過剰発現している（Ｏｈｍａｃｈｉ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，（２００６），Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１２（１０），３０５７－３０６３；Ｍｕｈｌｍａｎｎ Ｇ，ｅｔ ａｌ．，（２００９），Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．，６２（２），１５２－１５８；Ｆｏｎｇ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，（２００８），Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，９９（８），１２９０－１２９５；Ｆｏｎｇ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｍｏｄ． Ｐａｔｈｏｌ．，２１（２），１８６－１９１；Ｎｉｎｇ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，（２０１３）Ｎｅｕｒｏｌ． Ｓｃｉ．，３４（１０），１７４５－１７５０）。ＴＲＯＰ２の過剰発現は、予後的意義がある。ＴＲＯＰ２と相互作用するいくつかのリガンドが提案されている。ＴＲＯＰ２は、異なる経路を介して細胞にシグナル伝達し、それは、いくつかの転写因子の複雑なネットワークによって転写的に調節されている。

【0130】

ヒトＴＲＯＰ２（ＴＡＣＳＴＤ２：腫瘍関連カルシウムシグナル伝達因子２、ＧＡ７３３－１、ＥＧＰ－１、Ｍ１Ｓ１；以下、ｈＴＲＯＰ２という）は、３２３アミノ酸残基からなる単回膜貫通１型細胞膜タンパク質である。ヒト栄養膜細胞及びがん細胞に共通する（Ｆａｕｌｋ Ｗ Ｐ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７５（４）：１９４７－１９５１（１９７８））免疫抵抗性に関与する細胞膜タンパク質の存在が以前から示唆されいる一方で、ヒト絨毛癌細胞株における細胞膜タンパク質に対するモノクローナル抗体によって認識される抗原分子が同定され、ヒト栄養膜細胞で発現される分子の１つとしてＴＲＯＰ２と命名された（Ｌｉｐｉｎｓｋｉ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７８（８），５１４７－５１５０（１９８１））。この分子はまた、胃癌細胞株での免疫によって得られた、マウスモノクローナル抗体ＧＡ７３３（Ｌｉｎｎｅｎｂａｃｈ Ａ Ｊ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６（１），２７－３１（１９８９））によって認識される腫瘍抗原ＧＡ７３３－１とも表された、または非小細胞肺癌細胞での免疫によって得られたマウスモノクローナル抗体ＲＳ７－３Ｇ１１によって認識される上皮糖タンパク質（ＥＧＰ－１；Ｂａｓｕ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６２（４），４７２－４７９（１９９５））とも表された。しかしながら、１９９５年にＴＲＯＰ２遺伝子がクローニングされ、これらの分子はすべて同一の分子であることが確認された（Ｆｏｒｎａｒｏ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６２（５），６１０－６１８（１９９５））。ｈＴＲＯＰ２のＤＮＡ配列及びアミノ酸配列は公開データベースに公開されており、例えば、受託番号ＮＭ＿００２３５３及びＮＰ＿００２３４４（ＮＣＢＩ）で参照することができる。

【0131】

がんとの関連を示唆するこのような情報を受けて、これまでに複数の抗ｈＴＲＯＰ２抗体が確立されており、その抗腫瘍効果が研究されてきた。これらの抗体の中でも、例えば、ヌードマウス異種移植片モデルにおいてそれ自体で腫瘍活性を示す非結合抗体（ＷＯ２００８／１４４８９１；ＷＯ２０１１／１４５７４４；ＷＯ２０１１／１５５５７９；ＷＯ２０１３／０７７４５８）、及び細胞傷害性薬とともにＡＤＣとしての抗腫瘍活性を示す抗体（ＷＯ２００３／０７４５６６；ＷＯ２０１１／０６８８４５；ＷＯ２０１３／０６８９４６；ＵＳ７９９９０８３）が開示されている。しかしながら、それらの活性の強度または適用範囲は依然として不十分であり、ｈＴＲＯＰ２を治療標的とする医学的な要求が満たされていない。

【0132】

がん細胞におけるＴＲＯＰ２発現は薬剤耐性と相関している。いくつかの戦略は、抗体、抗体融合タンパク質、化学阻害剤、ナノ粒子などを含むがん細胞上のＴＲＯＰ２を標的としている。これらの様々な治療的処置を用いたインビトロ研究及び前臨床研究によって、マウスにおけるインビトロ及びインビボの両方で腫瘍細胞の増殖が有意に阻害された。臨床研究によって、予後バイオマーカー、及び耐性を逆行させるための治療標的の両方としてＴＲＯＰ２の適用の可能性が調査されてきた。

【0133】

サシツズマブゴビテカン（ＴＲＯＤＥＬＶＹ（登録商標）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ、ＩＭＭＵ－１３２）、トポイソメラーゼ阻害剤に連結されたＴＲＯＰ２を標的とする抗体を含む抗体薬物複合体は、少なくとも２回の先行治療を受けた成人患者における転移性トリプルネガティブ乳癌（ｍＴＮＢＣ）の治療に適応される。サシツズマブゴビテカン中のＴＲＯＰ２抗体は、イリノテカンの活性代謝物であるＳＮ－３８にコンジュゲートされている（ＵＳ２０１６／０２９７８９０；ＷＯ２０１５／０９８０９９）。

【0134】

本発明の一実施形態では、ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＲＳ７（ヒト化ＲＳ７）（参照により本明細書に組み込まれるＵＳ７２３８７８５）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）を含む。

【0135】

本発明の一実施形態では、免疫複合体は、表５から選択される軽鎖配列を有するシステイン変異抗体を含む。

【表5】

【0136】

本発明の一実施態様では、システイン変異ＴＲＯＰ２標的化抗体は、配列番号２２の重鎖（ＨＣ）を含む。

【0137】

ＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２２

【0138】

本発明の一実施形態では、ＴＲＯＰ２標的化抗体の軽鎖（ＬＣ）は、表６の配列番号４２、４３、及び４４から選択される。

【表6】

【0139】

本発明の一実施形態では、免疫複合体は、表７から選択される重鎖配列を有するシステイン変異抗体を含む。

【表7】

【0140】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＴＲＯＰ２標的化抗体の軽鎖（ＬＣ）は、配列番号２３の配列を有する。

【0141】

ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＩＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２３

【0142】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＴＲＯＰ２標的化抗体の重鎖（ＨＣ）は、配列番号４５の配列を有する。

【0143】

ＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＣＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号４５

【0144】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＨＥＲ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号４６～５２から選択される軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。

【表8】

【0145】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＨＥＲ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号５３～５９から選択される重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。

【表9】

【0146】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号６０～６６から選択される軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。

【表10】

【0147】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号６７～７３から選択される重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。

【表11】

【0148】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号７４～８０から選択される軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。

【表12】

【0149】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号８１～８７から選択される重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。

【表13】

【0150】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＰＤ－Ｌ１標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号８８～９４から選択される軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。

【表14】

【0151】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＰＤ－Ｌ１標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号９５～１０１から選択される重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。

【表15】

【0152】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号１０２～１０８から選択される軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。

【表16】

【0153】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号１０９～１１５から選択される重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。

【表17】

【0154】

ＴＬＲアゴニストアジュバント化合物
本発明の免疫複合体は、免疫賦活性ＴＬＲアゴニストアジュバント部分を含む。本明細書に記載されているアジュバント部分は、免疫応答を誘発する化合物（すなわち、免疫賦活剤）である。概ね、本明細書に記載のアジュバント部位は、ＴＬＲアゴニストである。ＴＬＲは、脊椎動物の自然免疫応答の開始に関与するＩ型膜貫通タンパク質である。ＴＬＲは、細菌、ウイルス、真菌からの様々な病原体関連分子パターンを認識し、侵入する病原体に対する防御の第一線として機能する。ＴＬＲは、細胞発現とそれらが開始するシグナル伝達経路の違いにより、重複しているが異なる生物学的応答を誘発する。作動すると（例えば、自然刺激または合成ＴＬＲアゴニストによって）、ＴＬＲはシグナル伝達カスケードを開始し、アダプタータンパク質である骨髄分化一次応答遺伝子８８（ＭｙＤ８８）を介して核因子－κＢ（ＮＦ－κＢ）の活性化、及びＩＬ－１受容体関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）の動員をもたらす。そうしてＩＲＡＫのリン酸化は、ＴＮＦ受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）の動員につながり、その結果、ＮＦ－κＢ阻害剤Ｉ－κＢがリン酸化される。その結果、ＮＦ－κＢが細胞核に入り、そのプロモーターがサイトカインなどのＮＦ－κＢ結合部位を含む、遺伝子の転写を開始させる。ＴＬＲシグナル伝達の追加の調節モードには、ＴＩＲドメイン含有アダプター誘導型インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）依存的なＴＮＦ受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）の誘導、ならびにＴＲＩＦ及びＴＲＡＦ３を介したＭｙＤ８８非依存経路の活性化が含まれ、インターフェロン応答因子３（ＩＲＦ３）のリン酸化をもたらす。同様に、ＭｙＤ８８依存経路もＩＲＦ及びＩＲＦ７を含むいくつかのＩＲＦファミリーメンバーを活性化し、ＴＲＩＦ依存経路もＮＦ－κＢ経路を活性化する。

【0155】

通常、本明細書に記載のアジュバント部位は、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８アゴニストである。ＴＬＲ７及びＴＬＲ８は、どちらも単球及び樹状細胞で発現する。ヒトでは、ＴＬＲ７は形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及びＢ細胞でも発現する。ＴＬＲ８は、主に骨髄由来の細胞、すなわち単球、顆粒球及び骨髄樹状細胞で発現する。ＴＬＲ７及びＴＬＲ８は、ウイルスの侵入に応答する手段として、細胞内の「外来」一本鎖ＲＮＡの存在を検出することができる。ＴＬＲ８アゴニストによるＴＬＲ８発現細胞の治療は、高レベルのＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６及び他の炎症性サイトカインの産生をもたらすことができる。同様に、ＴＬＲ７アゴニストによるｐＤＣなどのＴＬＲ７発現細胞の刺激は、高レベルのＩＦＮ－α及び他の炎症性サイトカインの産生をもたらすことができる。ＴＬＲ７／ＴＬＲ８関与とその結果としてのサイトカイン産生は、樹状細胞及び他の抗原提示細胞を活性化し、腫瘍破壊につながる多様な自然及び獲得免疫応答メカニズムを促進する。

【0156】

ＴＬＲアゴニストアジュバント部分としては、式ａ～ｆを有する以下の化合物が挙げられるが、これらに限定されない：（ａ）イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－４－アミン（ＷＯ２０２０／１９０７６２、ＷＯ２０２０／１９０７２５、ＷＯ２０１９／２２２６７６、ＷＯ２０１８／１１２１０８、ＷＯ２０１８／００９９１６）；（ｂ）キノリン－２－アミン（ＷＯ２０２１／０４６１１２）；（ｃ）２－アミノ－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド（ＷＯ２０２０／２５２２５４、ＷＯ２０２０／２５２２９４）；（ｄ）５－アミノ－６Ｈ－チエノ［３，２－ｂ］アゼピン－７－カルボキサミド（ＷＯ２０２１／０８１４０７、ＷＯ２０２１／０８１４０２）；（ｅ）５－アミノ－１，６－ジヒドロピラゾロ［４，３－ｂ］アゼピン－７－カルボキサミド；及び（ｆ）５－アミノ－２，６－ジヒドロピラゾロ［４，３－ｂ］アゼピン－７－カルボキサミド、

【化4】

本明細書に記載のとおりのＲ^１～４及びＸ^１～４置換基を有する。

【0157】

ＴＬＲアゴニスト－リンカー化合物
本発明の免疫複合体は、ＴＬＲアゴニスト－リンカー（ＴＬＲ－Ｌ）化合物とのシステイン変異抗体のコンジュゲーションによって調製される。ＴＬＲ－Ｌ化合物は、リンカーユニットと共有結合したＴＬＲアゴニスト部分を含む。リンカーユニットは、免疫複合体の安定性、透過性、溶解性、及び他の薬物動態、安全性、及び有効性の特性に影響を与える官能基ならびにサブユニットを含む。リンカーユニットは、システイン変異抗体の反応性システインチオール基と反応、すなわち、結合して免疫複合体を形成するマレイミドまたはブロモアセトアミドなどの反応性求電子官能基を含む。

【0158】

反応性求電子官能基がマレイミドである場合、リンカー中に得られるスクシンイミド環は、とりわけ、高いｐＨ及び高温における加水分解により開環反応を受けやすくなる。スクシンイミド環が開環されると、インビボ安定性及び治療活性が調節される場合もある（Ｚｈｅｎｇ，Ｋ．ｅｔ ａｌ（２０１９）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ，１０８（１）：１３３－１４１）。

【0159】

ＴＬＲ－Ｌ化合物に適した求電子性反応官能基としては、マレイミド（チオール反応性）；ハロゲン化アセトアミド、例えば、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、及びクロロアセトアミド（チオール反応性）；ビニルスルホン（チオール、アミン、及びヒドロキシル反応性）；ならびにピリジルジスルフィド（チオール反応性）が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる試薬としては、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，２００８に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。

【0160】

本発明は、免疫複合体の設計、調製及び使用に対する制限ならびに課題に対する解決策を提供する。いくつかのリンカーは、血流中で不安定であり、それにより、標的細胞での内部移行前に許容できない量のアジュバント／薬物を放出する可能性がある（Ｋｈｏｔ，Ａ．ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｂｉｏａｎａｌｙｓｉｓ７（１３）：１６３３－１６４８）。他のリンカーは、血流中では安定性を提供し得るが、細胞内放出の有効性に悪影響が及ぼされ得る。所望の細胞内放出を提供するリンカーは通常、血流中での安定性に乏しい。換言すると、血流安定性及び細胞内放出は通常、反比例関係にある。さらに、標準的な結合プロセスで、抗体上に負荷されたアジュバント／薬物部分の量（すなわち、薬物負荷）、結合反応で形成される凝集体の量、及び得ることができる最終精製結合の収率は、相関する。例えば、凝集体の形成は一般に、抗体に結合されるアジュバント／薬物部分及びその誘導体の当量数に正相関する。高い薬物負荷のもとでは、形成された凝集体は治療用途については除去されなければならない。結果として、薬物負荷が介在する凝集体形成は、免疫複合体の収率を低下させ、プロセスの規模拡大を困難し得る。

【0161】

本発明の免疫複合体の設計のための要件は、（１）生体内循環中のＴＬＲアゴニスト部分の早期放出を防ぐこと及び（２）ＴＬＲアゴニスト部分の生物活性形態が所望の作用部位において適切な速度で放出されることを保証することを含む。その機能的特性と合わせた免疫複合体の複雑な構造は、抗体、結合部位、リンカー構造、及びピラゾロアゼピン化合物を含む分子のあらゆる構成成分の慎重な設計と選択を必要とする。リンカーはアジュバント放出のメカニズムと速度を決定する。

【0162】

一般に、リンカーユニット（Ｌ）は切断可能であってもよく、または切断可能でなくてもよい。切断可能なリンカーユニットは、ペプチドリンカーユニットを認識して切断し、ＴＬＲアゴニストを抗体から分離するカテプシンなどの特定のプロテアーゼの基質であるペプチド配列を含んでもよい（Ｃａｃｕｌｉｔａｎ ＮＧ，ｅｔ ａｌ．（２０１７），Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ．７７（２４）：７０２７－７０３７）。

【0163】

切断可能なリンカーユニットは、酸感受性ジスルフィド基などの不安定な官能基を含んでもよい（Ｋｅｌｌｏｇｇ，ＢＡ ｅｔ ａｌ（２０１１）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２２，７１７－７２７；Ｒｉｃａｒｔ，Ａ．Ｄ．ｅｔ ａｌ（２０１１）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１７，６４１７－６４２７；Ｐｉｌｌｏｗ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ（２０１７）Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．８，３６６－３７０；Ｚｈａｎｇ Ｄ，ｅｔ ａｌ（２０１６）ＡＣＳ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ．７（１１）：９８８－９９３）。

【0164】

いくつかの実施形態では、リンカーは、生理的条件下で切断可能ではない。本明細書で使用されるとき、「生理的条件」という用語は、摂氏２０～４０度の温度範囲、大気圧（すなわち１気圧）、約６～約８のｐＨ、及び１以上の生理学的酵素、プロテアーゼ、酸、及び塩基を指す。免疫複合体における抗体とＴＬＲアゴニスト部分との間の切断可能でないリンカーの１つの利点は、早期のペイロード放出及び対応する毒性を最小限に抑えることである。

【0165】

一実施形態では、本発明は、細胞結合剤と免疫賦活性ＴＬＲアゴニスト部分との間に、カテプシン、腫瘍関連エラスターゼ酵素、またはプロテアーゼ様もしくはエラスターゼ様活性がある酵素などのプロテアーゼによって選択的に切断され得る特定のアミノ酸残基の直鎖配列に基づくペプチドラジカルを含むペプチド連結ユニットＰＥＰを含む。ペプチドラジカルは約２～約１２のアミノ酸であってもよい。ペプチドリンカー内の結合の酵素的切断により、免疫賦活性ＴＬＲアゴニスト部分の活性形態が放出される。このことは、本発明による複合体の組織特異性の増大につながるため、他の組織型における本発明による複合体の毒性のさらなる低下につながる。

【0166】

例示的な一実施形態では、ＰＥＰは、以下から成る群から選択されるアミノ酸のアミノ酸残基（ＡＡ）から構成される：

【化5】

【0167】

例示的な実施形態では、ＰＥＰは、Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、及びＡｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｖａから成る群から選択される。

【0168】

例示的な一実施形態では、ＰＥＰは式：

【化6】

を有する。

【0169】

例示的な一実施形態では、ＰＥＰは式：

【化7】

を有する。

【0170】

例示的な一実施形態では、ＰＥＰは式：

【化8】

から選択される。

【0171】

リンカーは、生体媒体、例えば、培養培地または血清において免疫複合体の十分な安定性を提供し、同時に、免疫賦活性ＴＬＲアゴニスト部分、すなわち「ペイロード」の放出を伴うその特異的な酵素切断性または加水分解切断性の結果として腫瘍組織内で所望の細胞内作用を提供する。

【0172】

プロテアーゼ、カテプシンまたはエラスターゼの酵素活性は、生理的条件下で免疫複合体の共有結合の切断を触媒することができる。酵素活性は腫瘍組織に関連する細胞の発現産物である。ターゲッティングペプチドの切断部位での酵素活性が免疫複合体をターゲッティングペプチド及び連結基を含まない活性がある免疫賦活薬に変換する。切断部位は酵素によって特異的に認識されてもよい。カテプシンまたはエラスターゼは、特定のペプチドのＣ末端アミノ酸残基と免疫複合体の免疫賦活性ＴＬＲアゴニスト部分との間の特定のペプチジル結合の切断を触媒することができる。

【0173】

一実施形態では、ＴＬＲアゴニスト－リンカー（ＴＬＲ－Ｌ）化合物は、細胞結合剤とＴＬＲアゴニスト部分との間に、グルクロニダーゼ（Ｊｅｆｆｒｅｙ ＳＣ，ｅｔ ａｌ（２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１７（３）：８３１－４０）またはスルファターゼ（Ｂａｒｇｈ ＪＤ，ｅｔ ａｌ（２０２０）Ｃｈｅｍ Ｓｃｉ．１１（９）：２３７５－２３８０）切断に対する基質を含む連結ユニット、すなわち、Ｌまたはリンカーを含む。特に、ＬはＧｌｕｃユニットを含み、且つ以下から選択される式を含む：

【化9】

【0174】

本発明の免疫複合体の特異的切断は、免疫系の腫瘍浸潤細胞及び白血球分泌酵素の存在を利用して、腫瘍部位での抗癌剤の活性化を促進する。

【0175】

ＴＬＲアゴニストリンカー（ＴＬＲ－Ｌ）化合物の例示的な実施形態は、式ａ～ｆ：

【化10】

から選択され；
Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３及びＸ^４は、独立して、結合、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）、Ｏ、Ｎ（Ｒ^５）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）_２、及びＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^５）から成る群から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、及びＲ^４は、独立して、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２～Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル、及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールからなる群から選択され、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールは、独立して、任意に
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＲ^５；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５）ＮＲ^５－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリール）；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリル）；
－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリル）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）ＮＲ^５－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－ＮＲ^５－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリール）；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^５；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｒ^５；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_８アルキルジイル）－ＮＲ^５（Ｃ_２～Ｃ_５ヘテロアリール）；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^５；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５；
－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２（Ｒ^５）－＊；
－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｒ^５；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_２～Ｃ_５ヘテロアリール）；
－Ｎ（Ｒ^５）－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）；
－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）；
－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－＊；及び
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＨから選択される１つ以上の基で置換され；
またはＲ^２及びＲ^３は、一緒に５もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し；
Ｒ^５は、Ｈ、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル、Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリル、Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、及びＣ_１～Ｃ_１２アルキルジイルから成る群から選択されるか、または２つのＲ^５基は一緒に５員もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し；
Ｒ^５ａは、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールから成る群から選択され；
ここで、アスタリスク＊はＬの結合部位を示し、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４の１つがＬに結合し；
Ｌは、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）－（Ｃ^１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ^＋（Ｒ^６）_２－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル－ＯＣ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル－から成る群から選択されるリンカーであり；
Ｒ^６は、独立してＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルであり；
ＰＥＧは、式：－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－を有し；ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり；
Ｇｌｕｃは、式：

【化11】

を有し；
ＰＥＰは、式：

【化12】

を有し、ＡＡは独立して天然のまたは非天然のアミノ酸側鎖から選択され、またはＡＡの１以上と隣接する窒素原子とが５員環プロリンアミノ酸を形成し、波線は結合点を示し；
Ｃｙｃは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ_２、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３及び以下の構造を有するグルクロン酸から選択される１以上の基によって任意で置換されるＣ_６－Ｃ_２０アリールジイル及びＣ_１－Ｃ_２０ヘテロアリールジイルから選択され、

【化13】

Ｒ^７は－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２Ｎ（Ｒ^８）－、及び－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－から成る群から選択され、Ｒ^８はＨ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^９）_２から選択され、Ｒ^９は独立してＨ、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキル、及び－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＯＨから成る群から選択され、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ^９基は一緒に５もしくは６員環のヘテロシクリル環を形成し；
ｙは２～１２の整数であり；
ｚは０または１であり；
Ｑは、マレイミド、ブロモアセトアミド、及びピリジルジスルフィドから成る群から選択され；
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール及びヘテロアリールジイルは任意に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨＦ_２、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＨＦ_２、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＮＨＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＮＨＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯＣＨ_３、－ＣＯ_２ＣＨ_３、－ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、－ＣＯＮＨ_２、－ＣＯＮＨＣＨ_３、－ＣＯＮ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＨＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＮＨＣＯＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＯＣＨ_３、－ＮＨＳ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＯ_２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＳＣＨ_３、－Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、及び－Ｓ（Ｏ）_３Ｈから独立して選択される１以上の基で置換される。

【0176】

ＴＬＲアゴニスト－リンカー（ＴＬＲ－Ｌ）化合物の例示的な実施形態は、Ｑがマレイミドであることを含む。

【0177】

ＴＬＲアゴニスト－リンカー（ＴＬＲ－Ｌ）化合物の例示的な実施形態は、表８から選択される。それぞれのＴＬＲ－Ｌ化合物は、質量分析によって特徴付けされ、示された質量を有することが示された。表８及び９のＴＬＲ－Ｌ化合物は、がん及び他の障害を治療するための有用な治療活性を予測し得る、ＴＬＲ８アゴニスト選択性の驚くべき予想外の特性を示す。

【0178】

表９の比較化合物は、活性化エステル、テトラフルオロフェニルまたはスルホテトラフルオロフェニル基を有し、これが抗体のリシン残基と反応して、実施例２０３による抗体とＴＬＲアゴニスト－リンカー部分との間にアミド結合を有する免疫複合体を形成する。

【表18-1】

【表18-2】

【表18-3】

【表19】

【0179】

免疫複合体
本発明の免疫複合体は、１つ以上のＴＬＲアゴニスト部分にリンカーによって共有結合したシステイン変異抗体を含む。

【0180】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ヒンジ領域にシステイン変異を有するシステイン変異抗体を含む。

【0181】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ＥＵ方式に従って番号が付けられたＫ１４５Ｃ、Ｓ１１４Ｃ、Ｅ１０５Ｃ、Ｓ１５７Ｃ、Ｌ１７４Ｃ、Ｇ１７８Ｃ、Ｓ１５９Ｃ、Ｖ１９１Ｃ、Ｌ２０１Ｃ、Ｓ１１９Ｃ、Ｖ１６７Ｃ、Ｉ１９９Ｃ、Ｔ１２９Ｃ、Ｑ１９６Ｃ、Ａ３７８Ｃ、Ｋ１４９Ｃ、Ｋ１８８Ｃ、及びＡ１４０Ｃから成る群から選択されるシステイン変異を有するシステイン変異抗体を含む。

【0182】

免疫複合体の例示的な実施形態は、式Ｉ：
Ａｂ－［Ｌ－Ｄ］_ｐ Ｉ
またはその薬学的に許容される塩を有し、
式中、
Ａｂは、システイン変異抗体であり；
ｐは、１～８の整数であり；
Ｌは、リンカーであり；
Ｄは、式ａ～ｆ：

【化14】

から選択されるＴＬＲアゴニスト部分であり；
Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３及びＸ^４は、独立して、結合、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）、Ｏ、Ｎ（Ｒ^５）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）_２、及びＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^５）から成る群から選択され；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、及びＲ^４は、独立して、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２～Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル、及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールからなる群から選択され、アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、及びヘテロアリールは、独立して、任意に
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＲ^５；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５）ＮＲ^５－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリール）；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリル）；
－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリル）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）ＮＲ^５－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－ＮＲ^５－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル）－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリール）；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^５；
－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｒ^５；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_８アルキルジイル）－ＮＲ^５（Ｃ_２～Ｃ_５ヘテロアリール）；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^５－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^５；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５；
－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２（Ｒ^５）－＊；
－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－ＮＲ^５Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）Ｒ^５；
－Ｎ（Ｒ^５）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_２～Ｃ_５ヘテロアリール）；
－Ｎ（Ｒ^５）－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）；
－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）；
－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２；
－ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）_２；
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＮＲ^５－＊；及び
－Ｓ（＝Ｏ）_２－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＨから選択される１つ以上の基で置換され；
またはＲ^２及びＲ^３は、一緒に５もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し；
Ｒ^５は、Ｈ、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル、Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリル、Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、及びＣ_１～Ｃ_１２アルキルジイルから成る群から選択されるか、または２つのＲ^５基は一緒に５員もしくは６員ヘテロシクリル環を形成し；
Ｒ^５ａは、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールから成る群から選択され；
ここで、アスタリスク＊はＬの結合部位を示し、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４の１つがＬに結合し；
Ｌは、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ^＋（Ｒ^６）_２－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２－Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－から成る群から選択される前記リンカーであり；
Ｒ^６は、独立してＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルであり；
ＰＥＧは、式：－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－を有し；ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり；
Ｇｌｕｃは、式：

【化15】

を有し；
ＰＥＰは、式：

【化16】

を有し、ＡＡは独立して天然のまたは非天然のアミノ酸側鎖から選択され、またはＡＡの１以上と隣接する窒素原子とが５員環プロリンアミノ酸を形成し、波線は結合点を示し；
Ｃｙｃは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ_２、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３及び以下の構造を有するグルクロン酸から選択される１以上の基によって任意で置換されるＣ_６－Ｃ_２０アリールジイル及びＣ_１－Ｃ_２０ヘテロアリールジイルから選択され、

【化17】

Ｒ^７は－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２Ｎ（Ｒ^８）－、及び－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－から成る群から選択され、Ｒ^８はＨ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^９）_２から選択され、Ｒ^９は独立してＨ、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキル、及び－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＯＨから成る群から選択され、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ^９基は一緒に５もしくは６員環のヘテロシクリル環を形成し；
ｙは２～１２の整数であり；
ｚは０または１であり；
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール及びヘテロアリールジイルは任意に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－Ｃ≡ＣＨ、－Ｃ≡ＣＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨＦ_２、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＨＦ_２、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＮＨＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＮＨＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯＣＨ_３、－ＣＯ_２ＣＨ_３、－ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、－ＣＯＮＨ_２、－ＣＯＮＨＣＨ_３、－ＣＯＮ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＨＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＮＨＣＯＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＯＣＨ_３、－ＮＨＳ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＯ_２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＳＣＨ_３、－Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、及び－Ｓ（Ｏ）_３Ｈから独立して選択される１以上の基で置換される。

【0183】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ^１が結合であり、Ｒ^１がＨであることを含む。

【0184】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ^２が結合であり、Ｒ^２がＣ_１～Ｃ_８アルキルであることを含む。

【0185】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ^２及びＸ^３がそれぞれ結合であり、Ｒ^２及びＲ^３が、Ｃ_１～Ｃ_８アルキル、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）、－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＲ^５、－（Ｃ_１～Ｃ_８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５、－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５、及び－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２から独立して選択されることを含む。

【0186】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ^２がＣ_１～Ｃ_８アルキルであり、Ｒ^３が－（Ｃ_１～Ｃ_８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^４であることを含む。

【0187】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ^２が－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３であり、Ｒ^３が－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣＯ_２（ｔ－Ｂｕ）、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣＯ_２（シクロブチル）、及び－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣＯ_２（シクロブチル）から選択されることを含む。

【0188】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ^２及びＲ^３が、それぞれ独立して－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＦ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、及び－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨから選択されることを含む。

【0189】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ^２及びＲ^３がそれぞれ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３であることを含む。

【0190】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ^２が－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３であり、Ｒ^３が－ＯＣＨ_２ＣＨ_３であることを含む。

【0191】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ^３－Ｒ^３が、

【化18】

からなる群から選択されることを含む。

【0192】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ^２またはＲ^３がＬに結合していることを含む。

【0193】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ^３－Ｒ^３－Ｌが、

【化19】

からなる群から選択されることを含み、波線はＮとの結合点を示す。

【0194】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ^４がＣ_１～Ｃ_１２アルキルである。

【0195】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ^４が－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊であることを含み、アスタリスク＊は、Ｌの結合部位を示す。

【0196】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｌが－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－または－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－であることを含む。

【0197】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｌが抗体のシステインチオールに結合していることを含む。

【0198】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ＰＥＧについて、ｍが１または２であり、ｎが２～１０の整数であることを含む。

【0199】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ｎが１０であることを含む。

【0200】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ＬがＰＥＰを含み、ＰＥＰがジペプチドであり、式：

【化20】

を有することを含む。

【0201】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ＰＥＰが式：

【化21】

を有することを含み、ＡＡ_１及びＡＡ_２は独立して、天然に存在するアミノ酸の側鎖から選択される。

【0202】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ＡＡ_１及びＡＡ_２が、独立して、Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２（Ｃ_６Ｈ_５）、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ_２、－ＣＨＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＳＯ_３Ｈ、及び－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２から選択されるか、またはＡＡ_１及びＡＡ_２が、５員環プロリンアミノ酸を形成することを含む。

【0203】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ＡＡ_１が－ＣＨ（ＣＨ_３）_２であり、ＡＡ_２が－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２であることを含む。

【0204】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ＡＡ_１及びＡＡ_２が、独立して、ＧｌｃＮＡｃアスパラギン酸、－ＣＨ_２ＳＯ_３Ｈ、及び－ＣＨ_２ＯＰＯ_３Ｈから選択されることを含む。

【0205】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ＬがＰＥＰを含み、ＰＥＰがトリペプチドであり、式：

【化22】

を有することを含む。

【0206】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ＬがＰＥＰを含み、ＰＥＰがテトラペプチドであり、式：

【化23】

を有することを含む。

【0207】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ＰＥＰテトラペプチドが以下から選択されることを含む：
ＡＡ_１はＡｂｕ、Ａｌａ及びＶａｌから成る群から選択され；
ＡＡ_２はＮｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）、Ｏｉｃ及びＰｒｏから成る群から選択され；
ＡＡ_３はＡｌａ及びＭｅｔ（Ｏ）_２から成る群から選択され；
ＡＡ_４はＯｉｃ、Ａｒｇ（ＮＯ_２）、Ｂｐａ、及びＮｌｅ（Ｏ－Ｂｚｌ）から成る群から選択される。

【0208】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ＬがＰＥＰを含み、ＰＥＰがＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｓｎ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ、及びＡｌａ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｖａから成る群から選択されることを含む。

【0209】

免疫複合体の例示的な実施形態は、ＬがＰＥＰを含み、ＰＥＰが構造：

【化24】

から選択されることを含む。

【0210】

免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｌが構造：

【化25】

から選択されることを含み、波線はＲ^５との結合を示す。

【0211】

表１０の本発明の免疫複合体の例示的な実施形態は、表８のＴＬＲアゴニスト－リンカー化合物とのシステイン変異抗体のコンジュゲーションによって調製された。

【0212】

表１１の比較アミド結合免疫複合体Ｌｙｓ ＩＣ－１は、表９のＴＬＲアゴニスト－リンカー比較化合物Ｃ－１とのトラスツズマブのコンジュゲーションによって調製された。

【0213】

表１０ａ、１０ｂ及び１１のそれぞれの免疫複合体は、それぞれ実施例２０２及び２０３の方法に従って調製され、ＨＰＬＣによって精製され、質量分析によって特徴付けられた。

【表20-1】

【表20-2】

【表21】

【表22】

【0214】

免疫複合体の生物学的活性
表１０ａ、１０ｂ及び１１の免疫複合体を実施例２０４のアッセイによって活性に関して試験した。樹状細胞ベースのアッセイが、がん免疫療法の評価に有用である。樹状細胞（ＤＣ）は、自然免疫系と獲得免疫系を橋渡しし、免疫及び寛容を媒介する特殊な抗原提示細胞である。免疫複合体は、実施例２０４に記載の従来型／古典的樹状細胞（ｃＤＣ）アッセイによってアッセイした。

【0215】

図１は、免疫複合体Ｌｙｓ ＩＣ－１（表１１）、ＩＣ－２、ＩＣ－３、ＩＣ－４、ＩＣ－８、ＩＣ－１０、ＩＣ－１３、ＩＣ－１６、ＩＣ－１７及びＩＣ－１８（表１０）ならびに非コンジュゲート抗体、トラスツズマブを用いたヒト血液から新たに単離され、ＨＣＣ１９５４腫瘍細胞と共培養された濃縮ヒトｃＤＣ（従来型樹状細胞）の活性化後のＩＬ－１２ｐ７０分泌を示すグラフを示す。ＩＬ－１２ｐ７０の対数産生は、免疫複合体及びトラスツズマブの濃度増加とともにプロットされる。

【0216】

図２は、免疫複合体ＩＣ－１、ＩＣ－１２、ＩＣ－６、ＩＣ－１１、ＩＣ－５、ＩＣ－９、ＩＣ－７、ＩＣ－１４、及びＩＣ－１５（表１０）、Ｌｙｓ ＩＣ－１（表１１）、ならびに非コンジュゲート抗体、トラスツズマブを用いたヒト血液から新たに単離され、ＨＣＣ１９５４腫瘍細胞と共培養された濃縮ヒトｃＤＣ（従来型樹状細胞）の活性化後のＩＬ－１２ｐ７０分泌を示すグラフを示す。ＩＬ－１２ｐ７０の対数産生は、免疫複合体及びトラスツズマブの濃度増加とともにプロットされる。

【0217】

図１及び２の結果は、表１０ａの特定のシステイン変異免疫複合体がｃＤＣアッセイでより高いレベルのＩＬ－１２ｐ７０を誘導し、表１１の比較アミド結合免疫複合体Ｌｙｓ ＩＣ－１、及び非コンジュゲート抗体トラスツズマブよりも強力な骨髄作用を引き起こすことを示している。

【0218】

図３は、システイン変異抗ＨＥＲ２免疫複合体ＩＣ－８、ＩＣ－１３、ＩＣ－１７、及びＩＣ－１０、ならびに対照アミド結合抗ＨＥＲ２複合体Ｌｙｓ ＩＣ－１を用いたヒト血液から新たに単離され、ＨＣＣ１９５４乳癌腫瘍細胞と共培養された濃縮ヒトｃＤＣ（従来型樹状細胞）の活性化後のＩＬ－１２ｐ７０分泌を示すグラフを示す。図３の結果は、表１０ｂの特定のシステイン変異免疫複合体が乳癌アッセイでより高いレベルのＩＬ－１２ｐ７０を誘導し、表１１の比較アミド結合免疫複合体Ｌｙｓ ＩＣ－１よりも強力な骨髄作用を引き起こすことを示している。Ｋ１８８Ｃ変異ＩＣ－１７は、最高レベルのＩＬ－１２ｐ７０を誘導した。

【0219】

図４は、システイン変異抗－ＰＤ－Ｌ１免疫複合体ＩＣ－３０、ＩＣ－３１、及び対照アミド結合抗ＰＤ－Ｌ１複合体Ｌｙｓ ＩＣ－３を用いたヒト血液から新たに単離され、ＰＤ－Ｌ１を過剰発現する改変されたＨＣＣ１９５４細胞株と共培養された濃縮ヒトｃＤＣ（従来型樹状細胞）の活性化後のＩＬ－１２ｐ７０分泌を示すグラフを示す。図４の結果は、表１０ｂの特定のシステイン変異免疫複合体が乳癌アッセイでより高いレベルのＩＬ－１２ｐ７０を誘導し、表１１の比較アミド結合免疫複合体Ｌｙｓ ＩＣ－３よりも強力な骨髄作用を引き起こすことを示している。Ｋ１８８Ｃ変異ＩＣ－３１は、最高レベルのＩＬ－１２ｐ７０を誘導した。

【0220】

図５は、システイン変異抗－ＴＲＯＰ２免疫複合体ＩＣ－２７、ＩＣ－２８、ＩＣ－２９、ＩＣ－３２、及び対照アミド結合抗－ＴＲＯＰ２複合体Ｌｙｓ ＩＣ－２を用いたヒト血液から新たに単離され、ＨＰＡＦ ＩＩ膵臓癌腫瘍細胞と共培養された濃縮ヒトｃＤＣ（従来型樹状細胞）の活性化後のＩＬ－１２ｐ７０分泌を示すグラフを示す。この例では、対照アミド結合抗－ＴＲＯＰ２複合体Ｌｙｓ ＩＣ－２が乳癌アッセイでより高いレベルのＩＬ－１２ｐ７０を誘導し、表１０ｂの特定のシステイン変異免疫複合体よりも強力な骨髄作用を引き起こしたことを示している。

【0221】

図１～５の結果は、本発明の免疫複合体が骨髄活性化を誘発するのに有効であり、したがってがんの治療に有用であり得ることを示している。

【0222】

免疫複合体の組成物
本発明は、本明細書に記載されている複数の免疫複合体と、任意でそのための担体、例えば、薬学的または薬理学的に許容される担体とを含む、組成物、例えば、薬学的または薬理学的に許容される組成物または製剤を提供する。免疫複合体は、組成物中で同じであっても異なっていてもよく、すなわち、組成物は、抗体コンストラクト上の同じ位置に連結された同じ数のアジュバントを有する免疫複合体を含むことができ、及び／またはシステイン変異抗体コンストラクトの異なる位置に連結された同じ数のＴＬＲアゴニストアジュバントを有する、抗体コンストラクトの同じ位置に連結された異なる数のアジュバントを有する、もしくは抗体コンストラクトの異なる位置に連結された異なる数のアジュバントを有する免疫複合体を含むことができる。

【0223】

例示的な実施形態では、免疫複合体化合物を含む組成物は免疫複合体化合物の混合物を含み、この場合、免疫複合体化合物の混合物における１システイン変異抗体当たりの平均薬物（ＴＬＲアゴニスト）負荷は、約２である。

【0224】

本発明の免疫複合体の組成物は、システイン変異部位の数及びコンジュゲーションのためのシステイン変異抗体を調製する条件、及びコンジュゲーション条件に応じて、約０．４から約１０の平均アジュバント対抗体コンストラクト比（ＤＡＲ）を有してもよい。当業者は、システイン変異抗体コンストラクトにコンジュゲートしたＴＬＲアゴニストアジュバントの数が、本発明の複数の免疫複合体を含む組成物中の免疫複合体によって変化する可能性があるため、アジュバント対抗体コンストラクト（例えば、抗体）比は、薬物対抗体比（ＤＡＲ）と呼ばれることもある平均として測定できることを認識するであろう。アジュバント対抗体コンストラクト（例えば、抗体）比は、任意の適した手段によって評価することができ、その多くは当技術分野において知られている。

【0225】

結合反応から免疫複合体を調製する際の１抗体当たりのアジュバント部分の平均数（ＤＡＲ）は、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣのような従来の手段によって特徴付けることができる。ｐの観点から組成物中の免疫複合体の定量的分布もまた、決定することができる。いくつかの事例で、ｐが特定の値である均一の免疫複合体の、他の薬物負荷を有する免疫複合体からの分離、精製、及び特性評価は、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって達成され得る。

【0226】

いくつかの実施形態では、組成物は更に、１つ以上の薬学的にまたは薬理学的に許容される賦形剤を含む。例えば、本発明の免疫複合体は、ＩＶ投与または体腔もしくは臓器の内腔への投与などの非経口投与用に調製されることができる。あるいは、免疫複合体を腫瘍内に注射することができる。注射用の組成物は一般に、薬学的に許容される担体に溶解された免疫複合体の溶液を含むであろう。用いられ得る許容されるビヒクル及び溶媒の中には、水、及び塩化ナトリウムのような１以上の塩の等張液、例えばリンゲル溶液がある。さらに、減菌された固定油を、溶媒または懸濁媒質として従来どおり使用することができる。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無刺激性固定油を使用できる。さらに、オレイン酸のような脂肪酸が、注射剤の調製において同様に使用され得る。これらの組成物は、望ましくは滅菌されており、一般に望ましくない物質を含まない。これらの組成物は、従来の周知の滅菌技法によって滅菌され得る。組成物は、生理学的条件に近似させるために必要とされる、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、等張化剤のような薬学的に許容される補助物質、例えば酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含有してもよい。

【0227】

組成物は、任意の適切な濃度の免疫複合体を含むことができる。組成物中の免疫複合体の濃度は大きく変動する可能性があり、選択された特定の投与様式及び患者のニーズに従って、主に流体量、粘度、体重などに基づいて選択される。特定の実施形態では、注射用の溶液製剤中の免疫複合体の濃度は、約０．１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）の範囲である。

【0228】

免疫複合体によるがんの治療法
本発明は、がんを治療するための方法を提供する。当該方法は、治療有効量の本明細書に記載されている免疫複合体（例えば、本明細書に記載されている組成物）を、それを必要とする対象、例えば、がんを有し、がんの治療を必要とする対象に投与することを含む。前記方法は、表９から選択される治療有効量の免疫複合体（ＩＣ）を投与することを含む。

【0229】

本発明の免疫複合体は、種々の過剰増殖性の疾患または障害、例えば、腫瘍抗原の過剰発現を特徴とするものを治療するのに使用されてもよいことが企図される。例示的な過剰増殖性障害としては、良性または悪性の固形腫瘍、ならびに血液疾患（白血病及びリンパ系腫瘍など）が挙げられる。

【0230】

別の態様では、薬物として使用するための免疫複合体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、有効量の免疫複合体を個体に投与することを含む、個体を治療する方法で使用するための免疫複合体を提供する。そのような一実施形態では、この方法は、例えば、本明細書に記載されている、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。

【0231】

さらなる態様では、本発明は、薬物の製造または調製での、免疫複合体の使用を提供する。一実施形態では、薬物は、がんの治療のためのものであり、その方法は、がんを有する個体に有効量の薬物を投与することを含む。そのような一実施形態では、この方法は、例えば、本明細書に記載されている、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。

【0232】

癌腫とは、上皮組織から生じる悪性腫瘍である。上皮細胞は、体の外側表面を覆い、内部空洞を覆い、且つ腺組織の内層を形成する。癌腫の例として、腺癌（腺（分泌）細胞、例えば、乳、膵臓、肺、前立腺、胃、胃食道接合部及び結腸で始まる癌）；副腎皮質癌；肝細胞癌；腎細胞癌；卵巣癌；上皮内癌；腺管癌；乳癌；基底細胞癌；扁平上皮癌；移行細胞癌；結腸癌；鼻咽頭癌；多房嚢腫性腎細胞癌；燕麦細胞癌；大細胞肺癌；小細胞肺癌；非小細胞肺癌などを含むが、これらに限定されない。癌腫は、前立腺、膵臓、結腸、脳（通常、続発性転移として）、肺、乳房、及び皮膚に見られることもある。いくつかの実施形態では、非小細胞肺癌を治療するための方法は、ＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベターのシステイン変異類似体）を含む免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、乳癌を治療するための方法は、ＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベターのシステイン変異類似体）を含む免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、トリプルネガティブ乳癌を治療するための方法は、ＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベターのシステイン変異類似体）を含む免疫複合体を投与することを含む。

【0233】

軟部組織腫瘍は、結合組織に由来するまれな腫瘍の非常に多様な群である。軟部腫瘍の例としては、胞状軟部肉腫、類血管腫型線維性組織球腫、軟骨粘液線維腫、骨格軟骨肉腫、骨外性粘液型軟骨肉腫、明細胞肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、隆起性皮膚線維肉腫、子宮内膜間質腫瘍、ユーイング肉腫、線維腫症（デスモイド）、乳児性線維腫腫、消化管間質腫瘍、骨巨細胞腫、腱鞘巨細胞腫、炎症性筋線維芽細胞性腫瘍、子宮筋腫、平滑細胞腫、脂肪芽細胞腫、典型的な脂肪腫、紡錘細胞または多形脂肪腫、異型脂肪腫、軟骨様脂肪腫、高分化脂肪肉腫、粘液様／円形細胞脂肪肉腫、多形脂肪肉腫、粘液型悪性線維性組織球腫、高悪性線維組織球腫、粘液線維肉腫、悪性末梢神経鞘腫、中皮腫、神経芽細胞腫、骨軟骨腫、骨肉腫、原始神経外胚葉性腫瘍、胞巣状横紋筋肉腫、胎児性横紋筋肉腫、良性または悪性シュワン腫、滑膜肉腫、エヴァンズ腫瘍、結節性筋膜炎、デスモイド型線維腫症、孤立性線維性腫瘍、隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）、血管肉腫、類上皮血管内皮腫、腱鞘巨細胞腫（ＴＧＣＴ）、色素性絨毛結節性滑膜炎（ＰＶＮＳ）、線維性骨異形成症、粘液線維肉腫、滑膜肉腫、悪性末梢神経鞘腫、神経線維腫、軟組織の多形腺腫、ならびに線維芽細胞、筋線維芽細胞、組織球、血管細胞／内皮細胞及び神経鞘細胞に由来する腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。

【0234】

肉腫は、間葉起源の細胞で、例えば骨で、または軟骨、脂肪、筋肉、血管、線維組織、もしくは他の結合組織もしくは支持組織を含む体の軟部組織で生じる、まれなタイプのがんである。異なる種類の肉腫は、がんが形成する場所に基づく。例えば、骨肉腫は骨に生じ、脂肪肉腫は脂肪に生じ、横紋筋肉腫は筋肉に生じる。肉腫の例には、アスキン腫瘍；ブドウ状肉腫；軟骨肉腫；ユーイング肉腫；悪性血管内皮腫；悪性神経鞘腫；骨肉腫；及び軟部組織肉腫（例えば、胞状軟部肉腫；血管肉腫；葉状嚢肉腫；隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）；類腱腫；線維形成性小円形細胞腫；類上皮肉腫；骨外性軟骨肉腫；骨外性骨肉腫；線維肉腫；胃腸間質腫瘍（ＧＩＳＴ）；血管外皮細胞腫；血管肉腫（より一般的には「血管肉腫」と呼ばれる）；カポジ肉腫；平滑筋肉腫；脂肪肉腫；リンパ管肉腫；悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）；神経芽肉腫；滑膜肉腫；及び未分化多形性肉腫）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0235】

奇形腫は、例えば、毛髪、筋肉、及び骨を含むいくつかの異なる種類の組織（例えば、３つの胚葉：内胚葉、中胚葉、及び外胚葉のうちのいずれか及び／またはすべてに由来する組織を含むことができる）を含有してもよい生殖細胞腫瘍の一種である。奇形腫は、女性においては卵巣に、男性においては精巣に、及び小児においては尾骨に、最もよく発生する。

【0236】

黒色腫は、メラノサイト（色素メラニンを作る細胞）で発生するがんの形態である。黒色腫は、ほくろ（皮膚黒色腫）において始まる場合があるが、眼の中または腸の中のような他の色素組織でも始まる場合がある。

【0237】

メルケル細胞癌はまれなタイプの皮膚癌であり、通常、顔、頭もしくは首に肉色または青みがかった赤色の結節として現れる。メルケル細胞癌は、皮膚の神経内分泌癌とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、メルケル細胞癌を治療するための方法は、ＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベター）を含む免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、メルケル細胞癌は、投与が行われるときに転移している。

【0238】

白血病は、骨髄のような血液形成組織から発生し、多数の異常血球の生成及び血流への侵入を引き起こすがん細胞である。例えば、白血病は、通常であれば血流中で成熟する骨髄由来の細胞で発生する可能性がある。白血病は、病気の発生と進行の速さ（例、急性と慢性）、及び影響を受ける白血球の種類（例、骨髄性とリンパ性）にちなんで名付けられる。骨髄性白血病は、骨髄性白血病または骨髄芽球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病は、リンパ芽球性白血病またはリンパ球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病細胞はリンパ節に集まり、腫れることがある。白血病の例としては、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含むが、これらに限定されない。

【0239】

リンパ腫は、免疫系の細胞から始まるがんである。例えば、リンパ腫は、通常であればリンパ系で成熟する骨髄由来細胞に発生する可能性がある。リンパ腫には２つの基本的なカテゴリーがある。リンパ腫の１つのカテゴリーはホジキンリンパ腫（ＨＬ）であり、リードステルンベルク細胞と呼ばれる種類の細胞の存在によって特徴付けられる。現在、ＨＬには６つの認識されている種類がある。ホジキンリンパ腫の例としては、結節性硬化型古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、混合細胞型ＣＨＬ、リンパ球減少型ＣＨＬ、リンパ球豊富型ＣＨＬ、及び結節性リンパ球優位型ＨＬが挙げられる。

【0240】

リンパ腫の他のカテゴリーは非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であり、これには免疫系細胞のがんの大規模で多様な群が含まれる。非ホジキンリンパ腫はさらに、緩徐な（成長の遅い）経過をたどる癌と、攻撃的な（成長の速い）経過をたどる癌に分けることができる。現在、ＮＨＬには６１つの認識されている種類がある。非ホジキンリンパ腫の例は、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、血液免疫芽細胞性リンパ腫、芽細胞性ＮＫ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキット様リンパ腫（小型非開裂細胞性リンパ腫）、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、肝脾ガンマ・デルタＴ細胞リンパ腫、Ｔ細胞白血病、リンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、鼻Ｔ細胞リンパ腫、小児リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、形質転換リンパ腫、処置関連Ｔ細胞リンパ腫、及びワルデンストレームマクログロブリン血症を含むが、これらに限定されない。

【0241】

脳腫瘍には、脳組織の癌が含まれる。脳腫瘍の例には、神経膠腫（例えば、神経膠芽腫、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫など）、髄膜腫、下垂体腺腫、及び前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍（髄芽細胞腫）が含まれるが、これらに限定されない。

【0242】

本発明の免疫複合体は、治療にて、単独で、または他の薬剤と組み合わせてのいずれかで使用することができる。例えば、本発明の免疫複合体は、化学療法剤のような少なくとも１つの追加の治療剤と共に同時投与され得る。このような併用療法は、組み合わせた投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）、及び別個の投与を包含し、別個の投与の場合、免疫複合体の投与は、追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与の前、それと同時、及び／またはその後に生じ得る。免疫複合体はまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。

【0243】

本発明の免疫複合体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに局所療法のために所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、投与が短期であるか、または長期であるかに部分的に依存して、任意の適した経路、例えば、静脈内または皮下注入のような注入によることができる。単回投与または種々の時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス点滴を含むが、これらに限定されない種々の投薬スケジュールが本明細書にて企図される。一実施形態では、免疫複合体は、患者に静脈内、腫瘍内、または皮下投与される。

【0244】

本発明の免疫複合体は、がん、特に乳癌、とりわけ、トリプルネガティブ（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、及び過剰なＨＥＲ２タンパク質の検査で陰性）乳癌、膀胱癌、及びメルケル細胞癌の治療に有用である可能性がある。本明細書に記載の免疫複合体は、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、及びそれらのバイオベターなどの治療のために認可された裸の抗体として同じ種類のがん、特に乳癌、とりわけトリプルネガティブ（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、及び過剰なＨＥＲ２タンパク質の検査で陰性）乳癌、膀胱癌、及びメルケル細胞癌を治療するために使用できる。

【0245】

免疫複合体は、任意の適した投与計画を使用して任意の治療有効量でそれを必要とする対象に投与される。例えば、この方法は、約１００ｎｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの用量を対象に提供するために免疫複合体を投与することを含むことができる。免疫複合体の用量は、約５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、または約１００μｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。免疫複合体の用量は、約１００、２００、３００、４００、または５００μｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体の用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体の用量は、特定の複合体、及び治療される癌の種類と重症度に応じて、これらの範囲外になることもある。投与の頻度は、１週当たり単回投与から複数回投与まで、またはより頻繁に及び得る。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、月に約１回から週に約５回まで投与される。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、週に１回投与される。

【0246】

別の態様では、本発明は、がんを防ぐための方法を提供する。この方法は、治療有効量の免疫複合体を（例えば、上記のような組成物として）対象に投与することを含む。特定の実施形態では、対象は、予防されるべき特定のがんに感受性である。例えば、この方法は、約１００ｎｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの用量を対象に提供するために免疫複合体を投与することを含むことができる。免疫複合体の用量は、約５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、または約１００μｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。免疫複合体の用量は、約１００、２００、３００、４００、または５００μｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体の用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇであり得る。一実施形態では、免疫複合体は、体重１ｋｇ当たり約０．０１～２０ｍｇの用量で患者に投与される。免疫複合体の用量は、特定の複合体、ならびに治療されるがんの種類及び重症度に応じて、これらの範囲外になることもある。投与の頻度は、１週当たり単回投与から複数回投与まで、またはより頻繁に及び得る。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、治療計画または治療の過程で月に約１回から週に約５回まで投与される。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、週に１回投与される。

【0247】

本発明のいくつかの実施形態は、上記のようながんを治療するための方法を提供し、そこでがんは乳癌である。乳癌は乳房の様々な領域から生じる可能性があり、様々な種類の乳癌が特性評価されている。例えば、本発明の免疫複合体は、非浸潤性乳管癌；浸潤性乳管癌（例えば、乳房の管状癌、髄様癌、粘液癌、乳頭癌、または篩状癌）；非浸潤性小葉癌；浸潤性小葉癌；炎症性乳癌；トリプルネガティブ（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、及び過剰なＨＥＲ２タンパク質の検査で陰性）乳癌のような他の形態の乳癌を治療するために使用することができる。いくつかの実施形態では、乳癌を治療するための方法は、ＨＥＲ２に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベターのシステイン変異類似体）、ＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベターのシステイン変異類似体）、またはＴＲＯＰ２に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、サシツズマブ、サシツズマブゴビチカン（ＴＲＯＤＥＬＶＹ（登録商標）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ、ＩＭＭＵ－１３２）、それらのバイオシミラーまたはバイオベターのシステイン変異類似体）を含む免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、結腸癌、肺癌、腎癌、膵臓癌、胃癌、及び食道癌を治療するための方法は、ＣＥＡ、またはＣＥＡを過剰発現する腫瘍に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、ラベツズマブ、それらのバイオシミラー、またはバイオベター）を含む免疫複合体を投与することを含む。

【0248】

いくつかの実施形態では、がんは、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８によって誘発される炎症誘発性応答に感受性である。

【0249】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、またはＴＲＯＰ２を発現するがんの治療を必要とする患者に治療有効量の免疫複合体が投与される。

【0250】

いくつかの実施形態では、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、食道癌、膀胱癌、尿路癌、尿路上皮癌、肺癌、非小細胞肺癌、メルケル細胞癌、結腸癌、大腸癌、胃癌、または乳癌の治療を必要とする患者に治療有効量の免疫複合体が投与される。メルケル細胞癌は、転移性メルケル細胞癌であり得る。乳癌は、トリプルネガティブ乳癌であり得る。食道癌は、胃食道接合部腺癌であり得る。

【実施例】

【0251】

実施例Ｃ－１ ４－（（１－（５－（２－アミノ－４－（エトキシ（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）ピリミジン－２－イル）－３－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－２－アザヘキサトリアコンタン－３６－オイル）オキシ）－２，３，５，６－テトラフルオロベンゼンスルホン酸、Ｃ－１

【化26】

【0252】

５－ブロモ－２－（ブロモメチル）ピリミジン、Ｃ－１ｂの調製
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の（５－ブロモピリミジン－２－イル）メタノール、Ｃ－１ａ（３００ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＰＰｈ_３（４９９ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ、１．２当量）及びＣＢｒ_４（６３１ｍｇ、１．９０ｍｍｏｌ、１．２当量）をＮ_２下、０℃で一度に添加した。混合物を２０℃で１０時間撹拌した。水（１０ｍＬ）を添加し、水相を酢酸エチルで抽出し（１０ｍＬ×３）、合わせた有機相をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高さ：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００－２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０、８／１）によって精製して、Ｃ－１ｂ（２９０ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、収率７２．４％）を白色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ８．８１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．５９ （ｓ， ２Ｈ）。

【0253】

ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［（５－ブロモピリミジン－２－イル）メチル］－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－カルバマート、Ｃ－１ｃの調製
ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＣ－１ｂ（２９０ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、１．０当量）及びｔｅｒｔ－ブチルＮ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルカルバマート（２５０ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、Ｃｓ_２ＣＯ_３（５６２ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ、１．５当量）をＮ_２下、２０°Ｃで少しずつ添加し、混合物を２０°Ｃで２．５時間撹拌した。水（５ｍＬ）を添加し、水相を酢酸エチルで抽出し（５ｍＬ×３）、合わせた有機相をブライン（５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高さ：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００－２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０、５／１）によって精製して、Ｃ－１ｃ（３５０ｍｇ、９０１ｕｍｏｌ、収率７８．３％）を白色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３） δ８．７４ （ｓ， ２Ｈ）， ５．０１ （ｓ， ２Ｈ）， １．４８ （ｓ， １８Ｈ）。

【0254】

ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチル］－Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－カルバマート、Ｃ－１ｄの調製
ジオキサン（１０ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（２ｍＬ）中のＣ－１ｃ（１８４ｍｇ、４７３ｕｍｏｌ、１．０当量）及び２－アミノ－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－８－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボキサミド（１９５ｍｇ、４７４ｕｍｏｌ、１．０当量）の混合物にＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２・ＣＨ_２Ｃｌ_２（１９．３ｍｇ、２３．７ｕｍｏｌ、０．０５当量）及びＫ_２ＣＯ_３（１６３ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ、２．５当量）をＮ_２下で一度に添加し、混合物を脱気し、Ｎ_２下で９０℃に２時間加熱した。ジオキサン（１０ｍＬ）を真空除去し、水（２０ｍＬ）を添加し、水相を酢酸エチルで抽出し（１０ｍＬ×３）、合わせた有機相をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、真空中で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高さ：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００－２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１０／１、０／１から酢酸エチル／メタノール＝１０／１）によって精製し、Ｃ－１ｄ（２８０ｍｇ、４７０．８３ｕｍｏｌ、収率９９．３５％）を灰色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ９．０８ （ｓ， ２Ｈ）， ７．６１ （ｓ， １Ｈ）， ７．５９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．８ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３８ （ｓ， １Ｈ）， ５．０８ （ｓ， ２Ｈ）， ３．９８ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．７６ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．８３－１．７５ （ｍ， ２Ｈ）， １．４７ （ｓ， １８Ｈ）， １．２０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．０２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）。

【0255】

２－アミノ－８－［２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル］－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボキサミド、Ｃ－１ｅの調製

【0256】

ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中のＣ－１ｄ（２０．０ｍｇ、３３．６ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、８．４１ｕＬ、１．０当量）をＮ_２下、２０℃で一度に添加し、混合物を２０℃で１時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０×２５×１０ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１％～３０％、８分）によって精製して、Ｃ－１ｅ（６．２ｍｇ、９．８４ｕｍｏｌ、収率２９．２％、純度９８．８％、２ＴＦＡ）を白色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ９．２２ （ｓ， ２Ｈ）， ７．８２ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７９－７．７５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４７ （ｓ， １Ｈ）， ４．４９ （ｓ， ２Ｈ）， ４．００ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．７８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４６ （ｓ， ２Ｈ）， １．８５－１．７７ （ｍ， ２Ｈ）， １．２２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．０３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ ３９５．２（計算値）；ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ ３９５．１（実測値）。

【0257】

３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、Ｃ－１ｆの調製
ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＣ－１ｅ（７０ｍｇ、１４９ｕｍｏｌ、１．０当量、２ＨＣｌ）及び３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－オキソ－３－（２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシ）プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（１２７ｍｇ、１７９ｕｍｏｌ、１．２当量）の混合物に、ジイソプロピルエチルアミン、ＤＩＥＡ（７７．４ｍｇ、５９９ｕｍｏｌ、１０４ｕＬ、４．０当量）をＮ_２下、２５°Ｃで一度に添加し、混合物を２５°Ｃで０．５時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ８０×４０ｍｍ×３マイクロメートル（μｍ）；移動相：［水（０．０４％ＨＣｌ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１２％～３９％、５．５分）によって精製して、Ｃ－１ｆ（５０．０ｍｇ、５３．４ｕｍｏｌ、収率３５．７％）を黄色の油として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ９．１４ （ｓ， ２Ｈ）， ７．８６－７．８１ （ｍ， １Ｈ）， ７．７８－７．７４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４８ （ｓ， １Ｈ）， ４．７２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．００ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８５－３．７１ （ｍ， ８Ｈ）， ３．６９－３．５８ （ｍ， ３８Ｈ）， ３．４７ （ｓ， ２Ｈ）， ２．６２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．５５ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．８５－１．７６ （ｍ， ２Ｈ）， １．２３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．０３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）。

【0258】

Ｃ－１の調製
ジクロロメタン、ＤＣＭ（２ｍＬ）及びジメチルアセトアミド、ＤＭＡ（０．５ｍＬ）中のＣ－１ｆ（６０ｍｇ、６１．７ｕｍｏｌ、１．０当量、ＨＣｌ）及び（２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－フェニル）スルホニルオキシナトリウム（９９．３ｍｇ、３７０ｕｍｏｌ、６．０当量）の混合物に、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、ＥＤＣＩ、ＣＡＳ登録番号１８９２－５７－５（７１．０ｍｇ、３７０ｕｍｏｌ、６．０当量）をＮ_２下、２５℃で一度に添加し、混合物を２５℃で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ Ｃ１８ １５０×２５×１０ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：２０％～４５％、８分）によって精製して、Ｃ－１（３８．０ｍｇ、３０．５ｕｍｏｌ、収率４９．３％、純度９３．３％）を黄色の油として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＭｅＯＤ） δ９．１１ （ｓ， ２Ｈ）， ７．８３－７．７９ （ｍ， １Ｈ）， ７．７７ （ｓ， １Ｈ）， ７．７６－７．７１ （ｍ， １Ｈ）， ７．４７ （ｓ， １Ｈ）， ４．７１ （ｓ， ２Ｈ）， ４．００ （ｑ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８８ （ｔ， Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．８５－３．７５ （ｍ， ５Ｈ）， ３．７０－３．５７ （ｍ， ３８Ｈ）， ３．４７ （ｓ， ２Ｈ）， ２．９９ （ｔ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．６２ （ｔ， Ｊ ＝ ４ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．８５－１．７５ （ｍ， ２Ｈ）， １．２３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．０２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， ３Ｈ）。ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １１６３．３（計算値）；ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １１６３．３（実測値）。

【0259】

実施例Ｃ－２ ２，３，５，６－テトラフルオロフェニル１－（５－（２－アミノ－４－（エトキシ（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－イル）ピリミジン－２－イル）－３－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－２－アザヘキサトリアコンタン－３６－オアート、Ｃ－２

【化27】

実施例Ｃ－１の手順後に、５０ｍＬのＤＣＭ中の３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［３－［［５－［２－アミノ－４－［エトキシ（プロピル）カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－８－イル］ピリミジン－２－イル］メチルアミノ］－３－オキソ－プロポキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、Ｃ－１ｆ（５．００ｇ、５．３５ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、２，３，５，６－テトラフルオロフェノール（１．７７ｇ、１０．７ｍｍｏｌ、２．００当量）、プロパンホスホン酸無水物（ＰＰＡＡ、Ｔ３Ｐ）、ＣＡＳ登録番号６８９５７－９４－８（ＭｅＣＮ中の５０ｗｔ％溶液、１７．０ｇの溶液、２６．８ｍｍｏｌ、５．００当量）及びＮ－メチルイミダゾール、ＮＭＩ（２．１５ｍＬ、２６．８ｍｍｏｌ、５．００当量）を連続的に添加した。混合物を２０℃で２時間撹拌した後、２０％ＮａＣｌ水溶液（５０ｍＬ）で希釈した。水層をＤＣＭ（２５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を水（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、真空中で濃縮して、粗製Ｃ－２を暗褐色の油の形態で得た。材料をＢｉｏｔａｇｅカラム（２：８、ｖ／ｖのＭｅＣＮ／水中の２５０ｍＬの７．５ｍＭ ＨＣｌ）に充填し、勾配段階（２０カラム容積 ＭｅＣＮ／水 ２：８、次に、１５カラム容積 ＭｅＣＮ／水 ３：７）を使用して精製した。所望の画分を合わせた後、抽出（２×３００ｍＬ ＤＣＭ）し、真空中で濃縮して、純粋なＣ－２（５．３４ｇ、ｑＮＭＲによる純度５５．６ｗｔ％、収率５６％）を暗黄色の油の形態で得、これを窒素下、－２０°Ｃで保存した後、ＤＭＡで希釈して、Ｃ－２の２０ｍＭ溶液を生成した。ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １０８３．１（計算値）；ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １０８３．１（実測値）。

【0260】

実施例ＴＬＲ－Ｌ－１ ２－アミノ－８－（２－（３８－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－３，３７－ジオキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－２，３６－ジアザオクタトリアコンチル）ピリミジン－５－イル）－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド、ＴＬＲ－Ｌ－１

【化28】

２－アミノ－８－（２－（アミノメチル）ピリミジン－５－イル）－Ｎ－エトキシ－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド、Ｃ－１ｅ（０．０２８３ｇ、０．０７２ｍｍｏｌ、１当量）及び１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－３－アザヘキサトリアコンタン－３６－酸、ＴＬＲ－Ｌ－１ａ（０．０４７８ｇ、０．０７２ｍｍｏｌ、１当量）をジメチルホルムアミド、ＤＭＦに溶解させた。ジイソプロピルエチルアミン、ＤＩＰＥＡ（０．０７５ｍｏｌ、０．４３ｍｍｏｌ、６当量）を、続いて（（７－アザベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート）、ＰｙＡＯＰ、ＣＡＳ登録番号１５６３１１－８３－０（０．０９１ｇ、０．１８ｍｍｏｌ、２．４当量）を添加した。反応物を室温で撹拌した後、濃縮し、ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製して、ＴＬＲ－Ｌ－１（０．０３４６ｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、４６％）を得た。ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １０４３．５３（計算値）；ＬＣ／ＭＳ ［Ｍ＋Ｈ］ １０４３．８４（実測値）。

【0261】

実施例２０１ 特定のシステイン（Ｃｙｓ）変異を有する抗ＨＥＲ２抗体の調製
部位特異的なシステイン変異を有する抗ＨＥＲ２抗体、例えば、トラスツズマブの調製についてＵＳ１０，９７３，８２６、ＷＯ２０１４／１２４３１６、及びＷＯ２０１５／１３８６１５に記載されており、そのそれぞれが参照により本明細書に組み込まれる。抗ＨＥＲ２抗体、例えば、トラスツズマブの重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを、化学合成し、ヒトＩｇＧ１及びヒトκ軽鎖の定常領域を含む２つの哺乳動物発現ベクター、ｐＯＧ－ＨＣ及びｐＯＧ－ＬＣにクローン化する。ベクターは、ＣＭＶプロモーター及びシグナル配列を含む。オリゴヌクレオチド指定変異誘発を利用して、抗ＨＥＲ２抗体のＣｙｓ変異コンストラクトを調製し、Ｃｙｓ変異コンストラクトの配列をＤＮＡ配列決定によって確認した。例えば、システインは、抗ＨＥＲ２抗体の以下の１つ以上の位置（すべての位置はＥＵの番号付けによる）に導入されてもよい：（ａ）抗体重鎖の位置Ｓ１５７、Ｌ１７４、Ｇ１７８、Ｓ１１９、Ｖ１６７、Ｉ１９９、Ｑ１９６、Ａ３７８及びＡ１４０、ならびに（ｂ）抗体軽鎖の位置Ｋ１４５、Ｓ１１４、Ｅ１０５、Ｓ１５９、Ｖ１９１、Ｌ２０１、Ｔ１２９、Ｋ１４９及びＫ１８８。例えば、システインを、重鎖の位置Ｓ１５７（表３）に導入して、抗ＨＥＲ２ ｍＡｂを得ることができ、これは、配列番号２１の軽鎖配列及び配列番号３３の重鎖配列（表４）を有する。

【0262】

抗ＨＥＲ２抗体のＣｙｓ変異体は、記載されているとおりに一過性トランスフェクション法を使用して重鎖及び軽鎖プラスミドをコトランスフェクトすることによって２９３ Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ（商標）細胞において発現させることができる（Ｍｅｉｓｓｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．７５：１９７－２０３）。発現された抗体を標準的なプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって細胞上清から精製する。

【0263】

同様の方法を使用して、ＣＨＯ細胞における発現のためにトラスツズマブの重鎖及び軽鎖の可変領域を２つのベクターにクローン化する。重鎖ベクターは、ヒトＩｇＧ１抗体の定常領域をコードし、シグナルペプチド、重鎖を発現させるためのＣＭＶプロモーター、ならびにＣＨＯ細胞への安定なトランスフェクションに適したシグナル及び選択配列を含む。軽鎖ベクターは、ヒトκ軽鎖の定常領域をコードし、シグナルペプチド、軽鎖を発現させるためのＣＭＶプロモーター、ならびにＣＨＯ細胞への安定なトランスフェクションに適したシグナル及び選択配列を含む。抗体を生成するために、重鎖ベクター及び軽鎖ベクターをＣＨＯ細胞株にコトランスフェクトする。細胞を選択し、次に、安定的にトランスフェクトされた細胞を抗体生成のために最適化された条件下で培養する。抗体を標準的なプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって細胞上清から精製する。

【0264】

システイン変異抗ＨＥＲ２抗体の還元、再酸化及びＴＬＲ７アゴニストとの結合
（ＴＬＲ－Ｌ）などのリンカーを含む本発明のＴＬＲアゴニストを、Ｊｕｎｕｔｕｌａ Ｊ Ｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２６：９２５－９３２（２００８）、及び実施例２０２に記載されている方法を使用して操作して抗体に導入されたシステイン（Ｃｙｓ）残基にコンジュゲートする。哺乳動物細胞で発現される抗体中の操作されたＣｙｓ残基は生合成中にグルタチオン（ＧＳＨ）及び／またはシステインなどの付加物（ジスルフィド）によって修飾されるため、初めに発現されたとおりの修飾Ｃｙｓは、マレイミドまたはブロモアセトアミドまたはヨードアセトアミド基などのチオール反応性試薬に対して非反応性である。操作されたＣｙｓ残基をコンジュゲートするために、グルタチオンまたはシステイン付加物を、ジスルフィドを還元することによって除去し、これは、一般に発現された抗体中のすべてのジスルフィドの還元を伴う。まず抗体をジチオスレイトール（ＤＴＴ）またはＴＣＥＰなどの還元剤に曝露することによって還元を達成し、続いて抗体のすべての天然のジスルフィド結合の再酸化を行って、機能的な抗体構造を取り戻す、及び／または安定させる。したがって、天然のジスルフィド結合及び操作されたＣｙｓ残基（複数可）のシステインまたはＧＳＨ付加物間のジスルフィド結合を還元するために、新たに調製したＤＴＴをトラスツズマブの予め精製したＣｙｓ変異体に添加して、１０ｍＭまたは２０ｍＭの最終濃度にした。抗体をＤＴＴと３７℃で１時間インキュベートした後、混合物を毎日バッファー交換して３日間ＰＢＳに対して透析して、還元剤及び副産物、例えば、ＤＴＴを除去し、天然のジスルフィド結合を再酸化する。再酸化プロセスを逆相ＨＰＬＣによって監視し、これは、個々の重鎖及び軽鎖分子から抗体の四量体を分離することができる。反応を８０℃に加熱したＰＲＬＰ－Ｓ ４０００Ａカラム（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ）において分析し、０．１％ＴＦＡを含む水中の３０～６０％アセトニトリルの直線勾配によって１．５ｍｌ／分の流量でカラム溶出を行う。カラムからのタンパク質の溶出を２８０ｎｍで監視する。再酸化が完了するまで透析を継続させる。再酸化により鎖内及び鎖間のジスルフィドが元に戻ると同時に、透析により新たに導入されたＣｙｓ残基（複数可）に結合したシステイン及びグルタチオンが透析で除去される。

【0265】

再酸化が完了、またはほぼ完了したら、ＴＬＲアゴニストリンカーマレイミド含有中間化合物（ＴＬＲ－Ｌ）を、一般に操作されたＣｙｓに対して１．５：１、２：１、または５：１の比率でＰＢＳバッファー（ｐＨ７．２）中の再酸化された抗体に添加し、インキュベーションを約１時間行う。一般に、過剰な遊離ＴＬＲ－Ｌを、標準的な方法によるプロテインＡ樹脂における精製によって除去し、続いてＰＢＳにバッファー交換する。

【0266】

あるいは、抗ＨＥＲ２抗体、例えば、トラスツズマブのＣｙｓ変異体を、オンレジン法を使用して還元及び再酸化する。プロテインＡセファロースビーズ（抗体１０ｍｇ当たり１ｍｌ）をＰＢＳ（カルシウムまたはマグネシウム塩なし）中で平衡化した後、バッチ方式で抗体サンプルに添加した。０．５Ｍのシステインのストックを、３．４ｇのＮａＯＨを２５０ｍＬの０．５Ｍリン酸ナトリウムｐＨ８．０に添加することによって調製した１０ｍＬの溶液に８５０ｍｇのシステインＨＣｌを溶解させることによって調製した後、２０ｍＭのシステインを抗体／ビーズスラリーに添加し、室温で３０～６０分間穏やかに混合する。ビーズをグラビティカラムに充填し、５０倍の通水倍率のＰＢＳで３０分未満洗浄した後、カラムを１倍の通水倍率のＰＢＳ中に再懸濁したビーズでキャップした。再酸化の速度を調節するために、５０ｎＭから１μＭ（マイクロモル）の塩化銅を任意に添加する。再酸化の進行は、樹脂の小さな試験サンプルを取り出し、ＩｇＧ溶出バッファー（Ｔｈｅｒｍｏ）に溶出し、上記のとおりＲＰ－ＨＰＬＣにより分析することによって監視する。再酸化が所望の完成度まで進行したら、コンジュゲーションを、２～３モル過剰なＴＬＲ－Ｌ化合物を操作されたシステインに添加することによってすぐに開始し、混合物を室温で５～１０分間反応させた後、カラムを少なくとも２０カラム容積のＰＢＳで洗浄した。抗体複合体をＩｇＧ溶出バッファーで溶出し、０．１容積の０．５Ｍリン酸ナトリウムｐＨ８．０で中和し、ＰＢＳにバッファー交換する。あるいは、樹脂上での抗体とのコンジュゲーションを開始するかわりに、カラムを少なくとも２０カラム容積のＰＢＳで洗浄し、抗体をＩｇＧ溶出バッファーで溶出し、バッファーｐＨ８．０で中和する。次に、抗体をコンジュゲーション反応のために使用するか、または後で使用するために急速冷凍する。

【0267】

実施例２０２ システイン変異免疫複合体（ＩＣ）の調製
システイン変異ベースのコンジュゲーションの準備のために、抗体をＺｅｂａ（商標）スピン脱塩カラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してｐＨ７．２の２ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含むリン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）にバッファー交換する。バッファー交換した抗体の濃度を、約５～２５ｍｇ／ｍｌに調節し、滅菌濾過した。最初のステップとして、２０～４０倍モル過剰な還元剤、例えば、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）またはトリス－（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）を抗体に添加して、すべてのジスルフィド結合を還元し、グルタチオン及び／またはシステイン付加物を除去した。還元は、３０℃または３７℃で３０分～２時間行った。Ｚｅｂａスピン脱塩カラムを使用して過剰な還元試薬を除去した。２０～４０倍モル過剰なデヒドロアスコルビン酸（ｄｈＡＡ）を使用して室温で６０分～２時間Ａｂを再酸化することによって天然のジスルフィドを元に戻した。再酸化の完了後、リンカー－ペイロードを含むマレイミドを再酸化された抗体に５～１２倍モル過剰な量で室温で１時間添加した。Ｚｅｂａスピン脱塩カラムを使用して適した製剤バッファーにバッファー交換することによって過剰なリンカー－ペイロードを除去した。コンジュゲーション後、得られたＩＣのスクシンイミド環を加水分解して、より大きな安定性を付与してもよい（Ｚｈｅｎｇ，Ｋ．ｅｔ ａｌ（２０１９）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ，１０８（１）：１３３－１４１）。

【0268】

コンジュゲーション後に、場合によっては未反応のＴＬＲ－Ｌ及び／または高分子量の凝集物を除去するために、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、限外濾過、遠心限外濾過、タンジェンシャルフロー濾過、及びこれらの組み合わせをさらに使用してＩＣを精製してもよい。

【0269】

コンジュゲーションについては、抗体の安定性または抗原結合特異性に悪影響を及ぼさない、当該技術分野で既知の水性バッファー系に抗体を溶解させてもよい。リン酸緩衝生理食塩水を使用してもよい。ＴＬＲ－Ｌは、本明細書の別の箇所に記載されている少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒を含む溶媒系に溶解される。いくつかのそのような態様では、ＴＬＲ－Ｌは、ｐＨ８トリスバッファー（例えば、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ）中に約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、または約５０ｍＭ、及びこれらの範囲内、例えば、約５ｍＭ～約５０ｍＭまたは約１０ｍＭ～約３０ｍＭの濃度まで溶解される。いくつかの態様では、ＴＬＲ－Ｌは、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）、またはアセトニトリル、または別の好適な双極性非プロトン性溶媒に溶解される。

【0270】

あるいはコンジュゲーション反応では、当量過剰のＴＬＲ－Ｌ溶液を希釈し、抗体溶液と合わせてもよい。ＴＬＲ－Ｌ溶液は好適には、少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒及び少なくとも１つの極性プロトン性溶媒で希釈されてもよく、これらの例には、水、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、及び酢酸が挙げられる。抗体に対するＴＬＲ－Ｌのモル当量は、約１．５：１、約３：１、約５：１、約１０：１、約１５：１または約２０：１、及びこれらの範囲内、例えば、約１．５：１～約２０：１、約１．５：１～約１５：１、約１．５：１～約１０：１、約３：１～約１５：１、約３：１～約１０：１、約５：１～約１５：１、または約５：１～約１０：１であり得る。反応の完了は、ＬＣ－ＭＳなどの当該技術分野において既知の方法によって適切に監視されてもよい。コンジュゲーション反応は通常、約１時間～約１６時間の範囲内で完了する。反応が完了した後、試薬を反応混合物に加えて、反応を停止させてもよい。抗体チオール基がＴＬＲ－Ｌのマレイミドなどのチオール反応性基と反応する場合、未反応の抗体チオール基はキャッピング試薬と反応させてもよい。好適なキャッピング試薬の例はエチルマレイミドである。

【0271】

結合後に、免疫複合体は、例えば、これらに限定されないが、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、クロマト分画、限外濾過、遠心限外濾過、接線濾過、及びこれらの組み合わせのような当該技術分野で既知の精製方法によって精製され、結合されていない反応物質及び／または結合凝集体から分離されてもよい。例えば、精製の前に、免疫複合体を２０ｍＭコハク酸ナトリウム、ｐＨ５などで希釈することができる。希釈した溶液を陽イオン交換カラムに適用した後、例えば少なくとも１０カラム容量の２０ｍＭコハク酸ナトリウム、ｐＨ５で洗浄する。複合体は、ＰＢＳなどのバッファーで適切に溶出できる。

【0272】

実施例２０３ 比較アミド結合免疫複合体の調製
表１１の比較Ｌｙｓ ＩＣ－１などのリシン結合免疫複合体を調製するために、抗体は、Ｇ－２５ ＳＥＰＨＡＤＥＸ（登録商標）脱塩カラム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）またはＺｅｂａ（商標）スピン脱塩カラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、ｐＨ８．３で、１００ｍＭのホウ酸、５０ｍＭの塩化ナトリウム、１ｍＭのエチレンジアミン四酢酸を含有する、コンジュゲーションバッファーにバッファー交換する。次にバッファーを使用して、溶出液をそれぞれ約１～１０ｍｇ／ｍｌのバッファー交換した抗体の濃度に調節した後、滅菌濾過する。抗体を２０～３０℃に予め温め、表９の２，３，５，６－テトラフルオロフェニルエステルまたは４－スルホ、２，３，５，６－テトラフルオロフェニルエステルなどの活性エステルを含むＴＬＲアゴニスト－リンカー比較化合物の２～２０（例えば、７～１０）モル当量と素早く混合して、抗体とのアミド結合を形成する。反応を３０℃で約１６時間進行させ、ｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で平衡化した２つの連続するＧ－２５脱塩カラムに通して免疫複合体（ＩＣ）を反応物から分離して、表２の免疫複合体（ＩＣ）を得る。アジュバント対抗体比（ＤＡＲ）は、ＸＥＶＯ（商標）Ｇ２－ＸＳ ＴＯＦ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に接続されたＡＣＱＵＩＴＹ（商標）ＵＰＬＣ Ｈクラス（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）のＣ４逆相カラムを使用した液体クロマトグラフィー質量分析によって決定される。

【0273】

あるいは、式ａ～ｆの活性エステルＴＬＲアゴニスト－リンカー（ＴＬＲ－Ｌ）化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）に溶解させて、５～２０ｍＭの濃度にする。コンジュゲーションのために、抗体を４～２０モル当量のＴＬＲ－Ｌと混合する。場合によっては、２０％（ｖ／ｖ）までの追加のＤＭＡまたはＤＭＳＯを加え、コンジュゲーションバッファー中におけるＴＬＲ－Ｌの溶解度を改善した。反応を、２０℃または３０℃または３７℃で約３０分～４時間進行させる。得られた複合体を、２つの連続するＺｅｂａ（商標）スピン脱塩カラムを使用して、未反応のＢＢＩ－Ｌから精製する。カラムをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．２で予め平衡化する。アジュバント対抗体比（ＤＡＲ）を、ＸＥＶＯ（商標）Ｇ２－ＸＳ ＴＯＦ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に接続されたＡＣＱＵＩＴＹ（商標）ＵＰＬＣ Ｈ－ｃｌａｓｓ（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）のＣ４逆相カラムを使用した液体クロマトグラフィー質量分析によって推定する。

【0274】

実施例２０４ インビトロにおける免疫複合体活性の評価
この実施例は、本発明の免疫複合体が樹状細胞などの骨髄活性化を誘発するのに有効であり、したがって、がんの治療に有用であることを示している。

【0275】

ヒト通常型樹状細胞の単離：ヒト通常型樹状細胞（ｃＤＣ）は、密度勾配遠心分離によって健康な血液ドナー（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から得られたヒト末梢血からネガティブに選択された。簡単に説明すると、細胞を最初に、ＲＯＳＥＴＴＥＳＥＰ（商標）ヒトＣＤ３枯渇カクテル（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）を使用して富化し、細胞調製物からＴ細胞を除去する。次にｃＤＣを、ＥＡＳＹＳＥＰ（商標）ヒト骨髄ＤＣ富化キット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ネガティブ選択によって更に富化する。

【0276】

ｃＤＣ活性化アッセイ：８×１０４個のＡＰＣを、ＩＳＡＣ標的抗原を発現する腫瘍細胞と共に１０：１のエフェクター（ｃＤＣ）対標的（腫瘍細胞）比で共培養した。細胞を、１０％のＦＢＳ及び示される場合には、様々な濃度の本発明の指示された免疫複合体（上記の実施例に従って調製）を加えたＲＰＭＩ－１６４０培地を入れた９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）中でインキュベートした。約１８時間の一晩のインキュベーション後、無細胞上清を収集し、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＬＥＧＥＮＤＰＬＥＸサイトカインビーズアレイを使用して（ＴＮＦα及び／またはＩＬ－１２ｐ７０を含む）サイトカイン分泌について分析した。

【0277】

骨髄細胞型の活性化を、様々な骨髄集団を利用する記載のアッセイに加えて、様々なスクリーニングアッセイを用いて測定することができる。これらは、健康なドナー血液から単離された単球、Ｍ－ＣＳＦ分化マクロファージ、ＧＭ－ＣＳＦ分化マクロファージ、ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－４単球由来樹状細胞、健康なドナー血液から単離された従来の樹状細胞（ｃＤＣ）、及び免疫抑制状態に分極した骨髄細胞（骨髄由来抑制細胞またはＭＤＳＣとも呼ばれる）を含み得る。ＭＤＳＣ分極細胞としては、例えばＭ２ａΜΦ（ＩＬ４／ＩＬ１３）、Ｍ２ｃΜΦ（ＩＬ１０／ＴＧＦｂ）、ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ６ＭＤＳＣ、腫瘍教育単球（ＴＥＭ）などの免疫抑制状態に向けて分化した単球が挙げられる。ＴＥＭ分化は、腫瘍馴化培地（例えば、７８６．Ｏ、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＨＣＣ１９５４）を用いて行うことができる。原発性腫瘍関連骨髄細胞はまた、解離した腫瘍細胞懸濁液に存在する初代細胞を含み得る（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）。

【0278】

骨髄細胞の記載された集団の活性化の評価は、単培養として、またはＩＳＡＣが抗体のＣＤＲ領域を介して結合できる目的の抗原を発現する細胞との共培養として行うことができる。１８～４８時間のインキュベーション後に、フローサイトメトリーを用いた細胞表面共刺激分子の上方制御、または分泌された炎症性サイトカインの測定により活性化を評価することができる。サイトカイン測定の場合、無細胞上清を採取し、フローサイトメトリーを用いてサイトカインビーズアレイ（例えば、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ製ＬｅｇｅｎｄＰｌｅｘ）により分析する。

【0279】

本明細書において引用されている、刊行物、特許出願及び特許を含むすべての参考文献は、参照することにより、それらの参考文献のそれぞれが参照することにより組み込まれるべき旨の個別具体的な表示があるかのように、かつ、その全体が本明細書に規定されているかのように、本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【配列表】

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【国際調査報告】