特表 2024-540083 抗ＮＲＰ２ａ抗体を含む組成物及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-31

(54)【発明の名称】抗ＮＲＰ２ａ抗体を含む組成物及び方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/28 20060101AFI20241024BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 38/22 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 35/768 20150101ALI20241024BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20241024BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 9/99 20060101ALI20241024BHJP

   C12Q 1/02 20060101ALI20241024BHJP

   C07K 1/13 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241024BHJP

   C12M 3/00 20060101ALI20241024BHJP

   G01N 33/577 20060101ALI20241024BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20241024BHJP

   G01N 33/574 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20241024BHJP

【ＦＩ】

C07K16/28 ZNA

A61K39/395 T

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P35/02

A61P37/02

A61P29/00

A61P21/00

A61K45/00

A61K39/00 H

A61K38/19

A61K38/22

A61K35/768

A61K39/395 U

A61P35/04

C07K16/46

C12N9/99

C12Q1/02

C07K1/13

C12N5/10

C12M3/00 Z

C12M3/00 A

G01N33/577 B

G01N33/53 D

G01N33/574 A

C12N15/13

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024525338

(86)(22)【出願日】2022-10-27

(85)【翻訳文提出日】2024-06-11

(86)【国際出願番号】 US2022078780

(87)【国際公開番号】W WO2023076998

(87)【国際公開日】2023-05-04

(31)【優先権主張番号】63/272,374

(32)【優先日】2021-10-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】512264080

【氏名又は名称】エータイアー ファーマ， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】バーマン， ルーク ジー．

(72)【発明者】

【氏名】チョン， イーティン

(72)【発明者】

【氏名】ラウチ， ケイトリン

(72)【発明者】

【氏名】ナングル， レスリー エー．

【テーマコード（参考）】

4B029

4B063

4B065

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B029AA02

4B029AA08

4B029BB11

4B029CC01

4B029CC02

4B029CC08

4B029GA02

4B063QA01

4B063QA05

4B063QA18

4B063QQ08

4B063QQ13

4B063QQ43

4B063QQ79

4B063QR33

4B063QR48

4B063QR77

4B063QR80

4B063QS33

4B063QS38

4B065AA91X

4B065AA93X

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA01

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA46

4C084AA02

4C084AA19

4C084BA44

4C084DA01

4C084DB01

4C084NA05

4C084ZB071

4C084ZB092

4C084ZB111

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZC032

4C084ZC202

4C084ZC752

4C085AA03

4C085AA14

4C085BB01

4C085BB33

4C085BB34

4C085BB35

4C085BB36

4C085BB37

4C085BB44

4C085EE01

4C085EE03

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG06

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC83

4C087CA09

4C087MA02

4C087MA56

4C087MA66

4C087NA05

4C087ZB26

4C087ZB27

4C087ZC75

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA70

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA28

4H045EA50

4H045EA51

4H045EA54

(57)【要約】

提供されるのは、他のＮＲＰ２ａアイソフォーム又はＮＲＰ２ｂアイソフォームと比べて、ヒトニューロピリン－２ａ（ＮＲＰ２ａ）バリアント１（ｖ１）及び／又はバリアント２（ｖ２）に優先的又は選択的に結合し、ＮＲＰ２ａ ｖ１／ｖ２リガンドと下流シグナル伝達事象の間での結合相互作用を調節する、抗体及びその抗原結合断片である。また、含まれるのは、疾患、例えば癌ならびに炎症性及び自己免疫疾患などを治療するための関連する治療用組成物及び方法である。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

表Ｎ２から選択される配列の約又は少なくとも約８、９、１０、１１、又は１２もしくはそれ以上の連続アミノ酸を含む、表Ｎ２から選択される配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になるエピトープでニューロピリン－２Ａ（ＮＲＰ２ａ）バリアント１（ｖ１）又はバリアント２（ｖ２）ポリペプチドに結合する、抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項2】

前記エピトープは、配列番号９６～１０４から選択される配列の約又は少なくとも約８、９、１０、１１、又は１２の連続アミノ酸を含む、配列番号９６～１０４から選択される配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる、請求項１の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項3】

前記エピトープが、配列番号１００、又は配列番号１００の約もしくは少なくとも約８、９、１０、１１もしくは１２の連続アミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる、請求項１又は２に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項4】

相補的決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）配列ならびに相補的決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含み、
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３、１２７、及びＧＸ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５を含み（Ｘ_１はＧ、Ａ、又はＳであり、Ｘ_２はＹ、Ｆ、Ｋ、Ｌ、又はＲであり、Ｘ_３はＴ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｑ、又はＶであり、Ｘ_４はＤ、Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、又はＳであり、及びＸ_５はＹ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＶである）、ならびに前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１６、１７、及びＸ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３を含む（Ｘ_６はＳ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｐ、Ｔ、又はＶであり、Ｘ_７はＱ、Ａ、Ｇ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ_８はＳ、Ａ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｑ、又はＴであり、Ｘ_９はＴ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、又はＹであり、Ｘ_１０はＨ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＹであり、Ｘ_１１はＶ、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＹであり、Ｘ_１２はＬ、Ａ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、又はＶであり、及びＸ_１３はＴ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、又はＶである）（また、表Ｅ６及び表Ｅ７を参照のこと）；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３０～１３２を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３３～１３５を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３６～１３８を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３９～１４１を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１４２～１４４を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１４５～１４７を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１４８～１５０を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１５１～１５３を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１５４～１５６を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１５７～１５９を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１～３を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号４～６を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号７～９を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１０～１２を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３～１５を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１６～１８を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１９～２１を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号２２～２４を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号２５～２７を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号２８～３０を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号３１～３３を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号３４～３６を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号３７～３９を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号４０～４２を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号４３～４５を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号４６～４８を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号４９～５１を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号５２～５４を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号５５～５７を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号５８～６０を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；又は
前記ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号６１～６３を含み、前記ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号６４～６６を含み、前記ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項5】

前記ＶＨ配列が配列番号１７０を含み、前記ＶＬ配列が配列番号１７１を含む；
前記ＶＨ配列が、配列番号１６０と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号１６１と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
前記ＶＨ配列が、配列番号１６２と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号１６３と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
前記ＶＨ配列が、配列番号１６４と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号１６５と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
前記ＶＨ配列が、配列番号１６６と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号１６７と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
前記ＶＨ配列が、配列番号１６８と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号１６９と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
前記ＶＨ配列が、配列番号６７と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号６８と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
前記ＶＨ配列が、配列番号６９と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号７０と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
前記ＶＨ配列が、配列番号７１と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号７２と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
前記ＶＨ配列が、配列番号７３と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号７４と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
前記ＶＨ配列が、配列番号７５と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号７６と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
前記ＶＨ配列が、配列番号７７と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号７８と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
前記ＶＨ配列が、配列番号７９と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号８０と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
前記ＶＨ配列が、配列番号８１と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号８２と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
前記ＶＨ配列が、配列番号８３と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号８４と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
前記ＶＨ配列が、配列番号８５と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号８６と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；又は
前記ＶＨ配列が、配列番号８７と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、前記ＶＬ配列が、配列番号８８と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である、請求項４に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項6】

ヒトニューロピリン－２Ｂ（ＮＲＰ２ｂ）バリアント４（ｖ４）ポリペプチド及び／又はヒトＮＲＰ２ｂバリアント５（ｖ５）ポリペプチドに実質的に結合しない、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項7】

前記ＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチド、あるいは前記エピトープに、約１０ｐＭ～約５００ｐＭもしくは約５０ｎＭまで、又は約、少なくとも約、もしくは約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、２５ｎＭ、又は５０ｎＭ以下の親和性を伴って、あるいは、場合により、約１０ｐＭ～約５００ｐＭ、約１０ｐＭ～約４００ｐＭ、約１０ｐＭ～約３００ｐＭ、約１０ｐＭ～約２００ｐＭ、約１０ｐＭ～約１００ｐＭ、約１０ｐＭ～約５０ｐＭ、又は約２０ｐＭ～約５００ｐＭ、約２０ｐＭ～約４００ｐＭ、約２０ｐＭ～約３００ｐＭ、約２０ｐＭ～約２００ｐＭ、約２０ｐＭ～約１００ｐＭ、約２０ｐＭ～約５０ｐＭ、又は約３０ｐＭ～約５００ｐＭ、約３０ｐＭ～約４００ｐＭ、約３０ｐＭ～約３００ｐＭ、約３０ｐＭ～約２００ｐＭ、約３０ｐＭ～約１００ｐＭ、約３０ｐＭ～約５０ｐＭ、又は約２０ｐＭ～約２００ｐＭ、約３０ｐＭ～約３００ｐＭ、約４０ｐＭ～約４００ｐＭ、約５０ｐＭ～約５００ｐＭ、約６０ｐＭ～約６００ｐＭ、約７０ｐＭ～約７００ｐＭ、約８０ｐＭ～約８００ｐＭ、約９０ｐＭ～約９００ｐＭ、約１００ｐＭ～約１ｎＭ、約１ｎＭ～約５ｎＭ、約５ｎＭ～約１０ｎＭ、約１０ｎＭ～２５ｎＭ、又は約２５ｎＭ～約５０ｎＭの範囲の親和性を伴って結合する、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項8】

前記ＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドについての前記抗体、又はその抗原結合断片の結合親和性が、ＮＲＰ２ａ ｖ３ポリペプチド、ＮＲＰ２ｂ ｖ４ポリペプチド、及び／又はＮＲＰ２ｂ ｖ５ポリペプチドについてのその結合親和性より少なくとも約１．５倍、２倍、４倍、６倍、８倍、１０倍、２０倍、４０倍、６０倍、８０倍、１００倍、２００倍、４００倍、６００倍、８００倍、又は１０００倍強い、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項9】

前記ＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドとそのリガンドの間での結合を遮断する、又は他の方法で低下させ、場合により、前記リガンドが表Ｌ１又は表Ｌ２から選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項10】

場合によりインビトロ結合アッセイ、インビトロもしくはエクスビボ細胞ベースのアッセイ、又はインビボにおいて、前記ＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドとケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２１（ＣＣＬ２１）ポリペプチドの間での結合を遮断する、又は他の方法で低下させる、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項11】

対照又は参照と比べて、約又は少なくとも約２０～１００％又はそれ以上（場合により約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％もしくはそれ以上）だけ、前記ＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドと前記ＣＣＬ２１ポリペプチドの間での結合を遮断する、又は他の方法で低下させる、請求項１０に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項12】

場合によりインビトロ結合アッセイ、インビトロもしくはエクスビボ細胞ベースのアッセイ、又はインビボで、前記ＮＲＰ２ａ ｖ１もしくはｖ２ポリペプチドとＣ－Ｃケモカイン受容体７型（ＣＣＲ７）ポリペプチドの間での二量体化を含む結合を遮断する、又は他の方法で低下させる、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項13】

対照又は参照と比べて、約又は少なくとも約２０～１００％又はそれ以上（場合により約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％もしくはそれ以上）だけ、前記ＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドと前記ＣＣＲ７ポリペプチドの間での二量体化を含む結合を遮断する、又は他の方法で低下させる、請求項１２に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項14】

対照又は参照と比べて、場合により、約又は少なくとも約２０～１００％又はそれ以上（場合により約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％もしくはそれ以上）だけ、前記ＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドとＣＣＬ２１及び／又はＣＣＲ７ポリペプチドの間でのシグナル伝達活性を調節する（場合により拮抗する）、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項15】

前記シグナル伝達活性が、免疫細胞移動、場合により樹状細胞もしくは成熟Ｔ細胞の誘導を含み、前記抗体、又はその抗原結合断片が、前記シグナル伝達活性を低下させる；ならびに／あるいは、前記シグナル伝達活性が、腫瘍細胞移動の誘導を含み、前記抗体、又はその抗原結合断片が、前記シグナル伝達活性を低下させる、請求項１４に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項16】

ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１及びＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む）、又はＩｇＭ Ｆｃドメイン、場合によりヒトＦｃドメイン、あるいはそのハイブリッド及び／又はバリアントを含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項17】

ヒトにおいて高いエフェクター機能を伴うＩｇＧ Ｆｃドメイン、場合によりＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３ Ｆｃドメインを含む、又は、ヒトにおいて低いエフェクター機能を伴うＩｇＧ Ｆｃドメイン、場合によりＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項18】

場合により表Ｆ１から選択されるＩｇＧ１又はＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項19】

モノクローナル抗体である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項20】

ヒト化抗体である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項21】

Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ポリペプチド、アドネクチン、アンチカリン、アプタマー、アビマー、ラクダ科抗体、設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）、ミニボディ、ナノボディ、又はユニボディである、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片。

【請求項22】

医薬的に許容可能な担体と、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片と、を含む、治療用組成物。

【請求項23】

前記組成物が、前記少なくとも一つの抗体、又はその抗原結合断片に関して、タンパク質ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％の純度を有し、実質的に凝集体を含まない、請求項２２に記載の治療用組成物。

【請求項24】

前記治療用組成物が、実質的にエンドトキシンを含まない、請求項２２又は２３に記載の治療用組成物。

【請求項25】

前記治療用組成物が、場合により静脈内、筋肉内、皮下、又は腹腔内投与のために適切な滅菌注射溶液である、請求項２２～２４のいずれか一項に記載の治療用組成物。

【請求項26】

癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、及びキナーゼ阻害剤の一つ又は複数から選択される少なくとも一つの追加の薬剤をさらに含む、請求項２２～２５のいずれか一項に記載の治療用組成物。

【請求項27】

請求項２２～２６のいずれか一項に記載の治療用組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする前記対象において疾患又は状態を治療する方法。

【請求項28】

前記疾患又は状態が、ニューロピリン２（ＮＲＰ２）関連疾患又は状態、場合によりＮＲＰ２ａ関連疾患又は状態である、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記疾患又は状態が、癌、炎症性疾患、自己免疫性疾患、リンパ性疾患又は関連付けられる状態、線維性疾患、及び低下した平滑筋収縮性に関連付けられる疾患から選択される、請求項２７又は２８に記載の方法。

【請求項30】

前記疾患が癌であり、場合により、前記癌が、ＮＲＰ２を発現又は過剰発現し、場合により、前記癌が、ＮＲＰ２依存的成長、ＮＲＰ２依存的接着、ＮＲＰ２依存的遊走、及び／又はＮＲＰ２依存的浸潤を呈する、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

前記癌がＮＲＰ２を発現又は過剰発現するが、しかし、ニューロピリン－１（ＮＲＰ１）を実質的に発現しない、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

それを必要とする対象において癌の再出現を低下又は予防するためであって、前記治療用組成物の投与によって、前記癌への免疫記憶の生成が可能になる、請求項３０又は３１に記載の方法。

【請求項33】

前記対象がリンパ浮腫を有する、請求項３０～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記対象に、癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、及びキナーゼ阻害剤の一つ又は複数から選択される少なくとも一つの追加の薬剤を投与することを含む、請求項３０～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記少なくとも一つの抗ＮＲＰａ２抗体又はその抗原結合断片及び前記少なくとも一つの薬剤が、別々の組成物として別々に投与される、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記少なくとも一つの抗ＮＲＰ２抗体及び前記少なくとも一つの薬剤が、同じ治療用組成物の一部として、場合により、請求項４６～６４のいずれか一項に記載の治療用組成物として一緒に投与される、請求項３４に記載の方法。

【請求項37】

前記癌免疫療法剤が、免疫チェックポイント調節剤、癌ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、及び細胞ベースの免疫療法の一つ又は複数から選択される、請求項３４～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記免疫チェックポイント調節剤が、ポリペプチド、場合により、抗体もしくはその抗原結合断片、又はリガンド、又は小分子である、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記免疫チェックポイント調節剤が、
（ａ）阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト；又は
（ｂ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストを含み、
場合により、前記免疫チェックポイント調節剤が、前記免疫チェックポイント分子に特異的に結合する、請求項３７又は３８に記載の方法。

【請求項40】

前記阻害性免疫チェックポイント分子が、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、プログラム死１（ＰＤ－１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トリプトファン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ及びＴリンパ球減衰因子（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、ならびにＩｇ及びＩＴＩＭドメインを伴うＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の一つ又は複数から選択される、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

前記アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、及びデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）の一つ又は複数から場合により選択されるＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２アンタゴニストであり、場合により、前記癌が、結腸直腸癌、黒色腫、乳癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、及び腎細胞癌の一つ又は複数から選択される；
前記アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４ＰＤＲ００１、及びピジリズマブの一つ又は複数から場合により選択されるＰＤ－１アンタゴニストであり、場合により、前記ＰＤ－１アンタゴニストがニボルマブであり、前記癌が、ホジキンリンパ腫、黒色腫、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、及び卵巣癌の一つ又は複数から場合により選択される；
前記ＰＤ－１アンタゴニストがペムブロリズマブであり、前記癌が、黒色腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頸部癌、及び尿路上皮癌の一つ又は複数から場合により選択される；
前記アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子、イピリムマブ、トレメリムマブの一つ又は複数から場合により選択されるＣＴＬＡ－４アンタゴニストであり、場合により、前記癌が、黒色腫、前立腺癌、肺癌、及び膀胱癌の一つ又は複数から選択される；
前記アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子、インドキシモド（ＮＬＧ－８１８９）、１‐メチル‐トリプトファン（１ＭＴ）、β‐カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ‐ピリド［３，４‐ｂ］インドール）、ロスマリン酸、及びエパカドスタットの一つ又は複数から場合により選択されるＩＤＯアンタゴニストであり、前記癌は転移性乳癌及び脳癌の一つ又は複数から場合により選択され、場合により多形神経膠芽腫、神経膠腫、神経膠肉腫又は悪性脳腫瘍である；
前記アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子、６８０Ｃ９１、及びＬＭ１０の一つ又は複数から場合により選択されるＴＤＯアンタゴニストである；
前記アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子の一つ又は複数から場合により選択されるＴＩＭ－３アンタゴニストである；
前記アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子、及びＢＭＳ－９８６０１６の一つ又は複数から場合により選択されるＬＡＧ－３アンタゴニストである；
前記アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子の一つ又は複数から場合により選択されるＶＩＳＴＡアンタゴニストである；
前記アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子の一つ又は複数から場合により選択されるＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、及び／又はＨＶＥＭアンタゴニストである；
前記アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子の一つ又は複数から場合により選択されるＴＩＧＩＴアンタゴニストである、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

前記刺激性免疫チェックポイント分子が、ＯＸ４０、ＣＤ４０、グルココルチコイド誘導ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、及びヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）の一つ又は複数から選択される、請求項３９に記載の方法。

【請求項43】

前記アゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ＯＸ８６、Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ、及びＧＳＫ３１７４９９８の一つ又は複数から場合により選択されるＯＸ４０アゴニストである；
前記アゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ＣＰ－８７０，８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ Ｌｏｂ ７／４、ＡＤＣ－１０１３、及びｒｈＣＤ４０Ｌの一つ又は複数から場合により選択されるＣＤ４０アゴニストであり、前記癌が、黒色腫、膵臓癌腫、中皮腫、及び血液癌の一つ又は複数から場合により選択され、場合によりリンパ腫、例えば非ホジキンリンパ腫などである；
前記アゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ－１及びＭＥＤＩ１８７３の一つ又は複数から場合により選択されるＧＩＴＲアゴニストである；
前記アゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ウトミルマブ、及び４－１ＢＢリガンドの一つ又は複数から場合により選択されるＣＤ１３７アゴニストである；
前記アゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、バルリルマブ、及びＣＤＸ－１１２７（１Ｆ５）の一つ又は複数から場合により選択されるＣＤ２７アゴニストである；
前記アゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、及びＴＡＢ０８の一つ又は複数から場合により選択されるＣＤ２８アゴニストである；ならびに／あるいは
前記アゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンドの一つ又は複数から場合により選択されるＨＶＥＭアゴニストである、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記癌ワクチンが、オンコファージ、ヒトパピローマウイルスＨＰＶワクチン、場合により、Ｇａｒｄａｓｉｌ又はＣｅｒｖａｒｉｘ、Ｂ型肝炎ワクチン、場合により、Ｅｎｇｅｒｉｘ－Ｂ、Ｒｅｃｏｍｂｉｖａｘ ＨＢ、又はＴｗｉｎｒｉｘ、及びｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ－Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ）の一つ又は複数から選択される、あるいは、ヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＭＡＧＥ－３、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ－６、ＩＬ－１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例、ＶＥＧＦ－Ａ）ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＴＬＡ－４、ＮＰＣ－１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ－１Ｒ）、アルファフェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ－ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、グアニリルシクラーゼＣ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｐ５３、サバイビン、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通型糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ－７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（又はＣＡ－１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、ＮＲ－ＬＵ－１３抗原、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ又はＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０汎癌腫抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７－１Ａ）、プログラム死－１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝臓ホスファターゼ３（ＰＲＬ－３）、前立腺酸性ホスファターゼ、Ｌｅｗｉｓ－Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上に発現されるジシアロガングリオシド）、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、及びメソテリンの一つ又は複数から選択される癌抗原を含み、場合により、前記対象が、対応する癌抗原を含む癌を有する、又は有するリスクがある、請求項３７に記載の方法。

【請求項45】

前記腫瘍溶解性ウイルスが、タリモジェンラヘルパレプベック（Ｔ－ＶＥＣ）、コクサッキーウイルスＡ２１（ＣＡＶＡＴＡＫ（商標））、オンコリン（Ｈ１０１）、ペラレオレプ（ＲＥＯＬＹＳＩＮ（登録商標））、セネカバレーウイルス（ＮＴＸ－０１０）、セネカウイルスＳＶＶ－００１、ＣｏｌｏＡｄ１、ＳＥＰＲＥＨＶＩＲ（ＨＳＶ－１７１６）、ＣＧＴＧ－１０２（Ａｄ５／３－Ｄ２４－ＧＭＣＳＦ）、ＧＬ－ＯＮＣ１、ＭＶ－ＮＩＳ、及びＤＮＸ－２４０１の一つ又は複数から選択される、請求項３７に記載の方法。

【請求項46】

前記サイトカインが、インターフェロン（ＩＦＮ）－α、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）の一つ又は複数から選択される、請求項３７記載の方法。

【請求項47】

前記細胞ベースの免疫療法剤は、癌抗原特異的Ｔ細胞、場合により、エクスビボ由来Ｔ細胞を含む、請求項３７に記載の方法。

【請求項48】

前記癌抗原特異的Ｔ細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞、及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、及びペプチド誘導Ｔ細胞の一つ又は複数から選択される、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

前記少なくとも一つの化学療法剤が、アルキル化剤、抗代謝剤、細胞傷害性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤（１型又はＩＩ型）、及び抗微小管剤の一つ又は複数から選択される、請求項３４～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

前記アルキル化剤が、窒素マスタード（場合により、メクロレタミン、シクロホスファミド、ムスチン、メルファラン、クロラムブシル、イホスファミド、及びブスルファン）、ニトロソ尿素（場合により、Ｎ－ニトロソ－Ｎ－メチル尿素（ＭＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（ＭｅＣＣＮＵ）、フォテムスチン、及びストレプトゾトシン）、テトラジン（場合により、ダカルバジン、ミトゾロミド、及びテモゾロミド）、アジリジン（場合により、チオテパ、マイトマイシン、及びジアジコン（ＡＺＱ））、シスプラチン及びその誘導体（場合により、カルボプラチン及びオキサリプラチン）、ならびに非古典的アルキル化剤（場合により、プロカルバジン及びヘキサメチルメラミン）の一つ又は複数から選択される；
前記抗代謝剤が、抗葉酸（場合により、メトトレキサート及びペメトレキセド）、フルオロピリミジン（場合により、５－フルオロウラシル及びカペシタビン）、デオキシヌクレオシド類似体（場合により、アシタビン、エノシタビン、シタラビン、ゲムシタビン、デシタビン、アザシチジン、フルダラビン、ネララビン、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、及びペントスタチン）、及びチオプリン（場合により、チオグアニン及びメルカプトプリン）の一つ又は複数から選択される；
前記細胞傷害性抗生物質が、アントラサイクリン（場合により、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ピラルビシン、アクラルビシン、及びミトキサントロン）、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、及びアクチノマイシンの一つ又は複数から選択される；
前記トポイソメラーゼ阻害剤が、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ドキソルビシン、ミトキサントロン、テニポシド、ノボビオシン、メルバロン、及びアクラルビシンの一つ又は複数から選択される；ならびに／あるいは
前記抗微小管剤が、タキサン（場合によりパクリタキセル及びドセタキセル）及びビンカアルカロイド（場合によりビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）の一つ又は複数から選択される、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記少なくとも一つのホルモン治療剤が、ホルモンアゴニスト又はホルモンアンタゴニストである、請求項３４～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

前記ホルモンアゴニストが、プロゲストゲン（プロゲスチン）、コルチコステロイド（場合により、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、又はデキサメタゾン）、インスリン様成長因子、ＶＥＧＦ由来の血管新生因子及びリンパ管新生因子（場合により、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ａ１４５、ＶＥＧＦ－Ａ１６５、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、ＰＩＧＦ－２）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、ガレクチン、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）－ベータ、アンドロゲン、エストロゲン、ならびにソマトスタチン類似体の一つ又は複数から選択される、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

前記ホルモンアンタゴニストが、ホルモン合成阻害剤、場合により、アロマターゼ阻害剤又はゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）又はその類似体、及びホルモン受容体アンタゴニスト、場合により、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）又は抗アンドロゲン、あるいはホルモン受容体に対して向けられた抗体、場合により、シクスツムマブ、ダロツズマブ、フィギツムマブ、ガニツマブ、イスチラツマブ、ロバツムマブ、アラシズマブペゴル、ベバシズマブ、イクルクマブ、ラムシルマブ、フレソリムマブ、メテリムマブ、ナキシタマブ、セツキシマブ、デパツキシズマブマホドチン、フツキシマブ、イムガツズマブ、ラプリツキシマブエムタンシン、マツズマブ、モドツキシマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、トムゾツキシマブ、ザルツムマブ、アプルツマブイクサドチン、ベマリツズマブ、オララツマブ、あるいはトベツマブの一つ又は複数から選択される、請求項５１に記載の方法。

【請求項54】

前記キナーゼ阻害剤が、アダボセルチブ、アファニチブ、アフリベルセプト、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、カボザンチニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エントレクチニブ、エルダフィチニブ、エルロチニブ、フォスタミチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ポナチニブ、ラニビズマブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トファシチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、及びベムアフェニブの一つ又は複数から選択される、請求項３４～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項55】

前記癌が原発性癌である、請求項３０～５４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項56】

前記癌が、転移性癌、場合により、ＮＲＰ２ａ及び／又はＮＲＰ２ｂを発現する転移性癌である、請求項３０～５５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項57】

前記癌が、黒色腫（例、転移性黒色腫）、膵臓癌、骨癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、白血病（例、リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、再発性急性骨髄性白血病）、リンパ腫、肝細胞癌（肝細胞癌腫）、肉腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌、神経膠腫、多形神経膠芽腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原始神経外胚葉腫瘍（髄芽腫）、腎臓癌（例、腎細胞癌腫）、膀胱癌、子宮癌、食道癌、脳癌、頭頸部癌、子宮頸癌、精巣癌、甲状腺癌、及び胃癌の一つ又は複数から選択される、請求項３０～５６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項58】

前記転移性癌が、
（ａ）骨、肝臓、及び／又は肺に転移した膀胱癌；
（ｂ）骨、脳、肝臓、及び／又は肺に転移した乳癌；
（ｃ）肝臓、肺、及び／又は腹膜に転移した結腸直腸癌；
（ｄ）副腎、骨、脳、肝臓、及び／又は肺に転移した腎臓癌；
（ｅ）副腎、骨、脳、肝臓、及び／又は他の肺部位に転移した肺癌；
（ｆ）骨、脳、肝臓、肺、及び／又は皮膚／筋肉に転移した黒色腫；
（ｇ）肝臓、肺、及び／又は腹膜に転移した卵巣癌；
（ｈ）肝臓、肺、及び／又は腹膜に転移した膵臓癌；
（ｉ）副腎、骨、肝臓、及び／又は肺に転移した前立腺癌；
（ｊ）肝臓、肺、及び／又は腹膜に転移した胃癌；
（ｌ）骨、肝臓、及び／又は肺に転移した甲状腺癌；ならびに
（ｍ）骨、肝臓、肺、腹膜、及び／又は膣に転移した子宮癌の一つ又は複数から選択される、請求項５６又は５７に記載の方法。

【請求項59】

（ａ）請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片；及び、場合により、
（ｂ）癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、及びキナーゼ阻害剤から選択される少なくとも一つの追加の薬剤を含む、患者ケアキット。

【請求項60】

（ａ）及び（ｂ）が別々の治療用組成物中にある、請求項５９に記載の患者ケアキット。

【請求項61】

（ａ）及び（ｂ）が同じ治療用組成物中にある、請求項５９に記載の患者ケアキット。

【請求項62】

前記少なくとも一つの化学療法剤が、アルキル化剤、抗代謝剤、細胞傷害性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤（１型又はＩＩ型）、及び抗微小管剤の一つ又は複数から選択される、請求項５９～６１のいずれか一項に記載の患者ケアキット。

【請求項63】

請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体、又はその抗原結合断片、及び細胞表面上にヒトＮＲＰ２ポリペプチドを発現する宿主細胞株を含む、バイオアッセイ系。

【請求項64】

前記ＮＲＰ２ポリペプチドが、検出可能な標識を用いて標識される、請求項６３に記載のバイオアッセイ系。

【請求項65】

前記抗体、又はその抗原結合断片が、検出可能な標識を用いて標識される、請求項６３又は６４に記載のバイオアッセイ系。

【請求項66】

前記ＮＲＰ２ポリペプチドが、読み出し又はインジケータ、例えば前記ＮＲＰ２ポリペプチドの生物学的活性の蛍光又は発光インジケータなどに機能的に共役される、請求項６３～３５のいずれか一項に記載のバイオアッセイ系。

【請求項67】

前記ＮＲＰ２ポリペプチドが、表Ｎ１、場合によりＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドから選択される、請求項６３～６６のいずれか一項に記載のバイオアッセイ系。

【請求項68】

少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンド、場合により表Ｌ１又は表Ｌ２から選択されるＮＲＰ２ａリガンドを含み、場合により、前記宿主細胞が、前記少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドを発現する、請求項６３～６７のいずれか一項に記載のバイオアッセイ系。

【請求項69】

ヒトニューロピリン２ａ（ＮＲＰ２ａ）ポリペプチド、少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンド、及び請求項１～２１のいずれか一項に記載されるヒトもしくはヒト化抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片を発現する細胞を含み、前記ＮＲＰ２ａポリペプチドと前記少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドの間での相互作用を調節する、検出系。

【請求項70】

前記抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片が、検出可能な標識を用いて標識される、請求項６９に記載の検出系。

【請求項71】

前記ＮＲＰ２ａポリペプチドが、表Ｎ１から選択されるＮＲＰ２ａバリアント１及び／又はバリアント２ポリペプチドである、請求項６９又は７０に記載の検出系。

【請求項72】

前記少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドが、表Ｌ１又は表Ｌ２から選択される、請求項６９～７１のいずれか一項に記載の検出系。

【請求項73】

前記ＮＲＰ２ａポリペプチド及び／又は前記少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドが、読み出し又はインジケータ、例えば前記ＮＲＰ２ａポリペプチド又は前記少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドの生物学的活性の蛍光又は発光インジケータなどに機能的に共役される、請求項６９～７２のいずれか一項に記載の検出系。

【請求項74】

少なくとも一つの細胞が、請求項１～２１のいずれか一項に記載のヒトもしくはヒト化抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片をコードする一つ又は複数のポリヌクレオチドを含む、操作された細胞集団を含み、前記細胞が、無血清培地中で成長させることが可能である、細胞組成物。

【請求項75】

請求項１～２１のいずれか一項に記載のヒトもしくはヒト化抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片と、少なくとも一つの細胞が、前記抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片をコードする一つ又は複数のポリヌクレオチドを含む、操作された細胞集団と、少なくとも約１０リットルの無血清成長培地と、滅菌容器と、を含む、細胞成長デバイス。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願への相互参照
本出願は、２０２１年１０月２７日に出願された米国仮特許出願第６３／２７２，３７４号の３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．§ １１９（ｅ）の下の利益を主張し、それは、その全体において参照により組み入れられる。

【0002】

配列表に関する記述
本出願に関連付けられる配列表ＸＭＬは、ＸＭＬファイルフォーマット中で提供され、参照により本明細書中に組み入れられる。配列表ＸＭＬを含むＸＭＬファイルの名前は、ＡＴＹＲ＿１３７＿０１ＷＯ＿ＳＴ２６．ｘｍｌである。ＸＭＬファイルは約２２２，０８６バイトであり、２０２２年１０月２６日に作成され、ＵＳＰＴＯ特許センターを介して電子的に提出されている。

【0003】

本開示は、ＮＲＰ２ｂアイソフォームと比べて、ヒトニューロピリン－２ａ（ＮＲＰ２ａ）バリアント１（ｖ１）及び／又はバリアント２（ｖ２）アイソフォームに優先的又は選択的に結合し、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１／ｖ２リガンドと下流シグナル伝達事象の間での結合相互作用を選択的に調節する、抗体及びその抗原結合断片に関する。また、含まれるのは、疾患、例えば癌ならびに炎症性及び自己免疫疾患などを治療するための関連する治療用組成物及び方法である。

【背景技術】

【0004】

関連技術の説明
ＮＲＰ２は、ＦＬＴ－４、ＫＤＲ、及びｃＭＥＴなどの成長因子受容体を含む、多数の他の形質膜受容体とヘテロ二量体複合体を形成する単一通過膜貫通タンパク質（Ｎａｒａｒｒｅ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）ＯｎｃｏＴａｒｇｅｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ｄｏｉ：１０．２１４７／ＯＴＴ．Ｓ３７７７４４）、ならびにインテグリン及び他のシグナル伝達系（Ｇｏｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ １２５ ５９７－５０６，２０１２）である。ＮＲＰ２の細胞外ドメインは、ＶＥＧＦ及びセマホリンファミリーのリガンドに結合する一方で、その短い細胞内ドメインは、様々なタンパク質－タンパク質相互作用において関与する。これらの相互作用は、細胞が、変化する環境及び細胞ストレスに迅速に応答し、適応することを可能にする他のプロセスの間で、細胞可塑性を促進するために、成長因子受容体、インテグリン、及び他の共受容体の細胞内輸送及びシグナル伝達出力を増強又は調節するように思われる（Ｆａｖｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ｄｏｉ：１０．１１８２／ ｂｌｏｏｄ－２００５－１１－４４４７）。

【0005】

ＮＲＰ２は、典型的には、様々な密接に関連するスプライスバリアントの混合物としてインビボで発現され、それは、典型的には、バリアントｖ１、ｖ２、及びｖ３を含むＮＲＰ２ａ、ならびにバリアントｖ４及びｖ５を含むＮＲＰ２ｂとして一緒にグループ化される。バリアントｖ６は、循環内に見出されるＮＲＰ２の可溶性形態である。ＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂは、それらの表面曝露ドメインの大部分（しかし、全てではない）にわたって配列同一性を共有する一方で、ＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂバリアントは、それらの膜近傍領域、膜貫通領域、及び細胞内Ｃ末端領域において有意に異なる。ＮＲＰ２ａの全ての三つのスプライスバリアントにおいて、固有のｃ末端ドメインは、４２のアミノ酸、及びＣ末端ＳＥＡアミノ酸配列モチーフを伴う細胞内ＰＤＺ結合ドメインを含む。対照的に、ＮＲＰ２ｂの二つのスプライスバリアントは、Ｃ末端ＳＥＡを欠く４６のアミノ酸細胞質ドメイン領域を含む。ＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂは、それらの細胞内配列、膜近傍配列、及び膜貫通配列の間で約１１％の配列相同性のみを共有する。

【0006】

増加するエビデンスは、ＮＲＰ２のＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂスプライスバリアントが、細胞内局在化及びシグナル伝達の差次的パターンに向けて、細胞機能を調節する際に、異なる役割を果たすことを示唆する。新たなデータは、特定の組織においてＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂの発現の比率が、正常状態及び病態生理状態の両方において、細胞ストレス及び活性化状態に基づいて、経時的に変動することを示唆する。したがって、ＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂ選択抗体の開発は、新世代の、より選択的で強力な治療剤及び診断剤を開発する機会を提供する。
しかし、アイソフォーム特異的治療試薬及び診断試薬を開発することへの主な限定は、適切なアイソフォーム選択的抗体、高親和性抗体、及び機能遮断抗体の欠如であった。この限定は、本明細書中に記載されるＮＲＰ２ａ特異的抗体の開発及び検証により克服されている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】Ｎａｒａｒｒｅ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）ＯｎｃｏＴａｒｇｅｔｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ｄｏｉ：１０．２１４７／ＯＴＴ．Ｓ３７７７４４

【非特許文献2】Ｇｏｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ １２５ ５９７－５０６，２０１２

【非特許文献3】Ｆａｖｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ｄｏｉ：１０．１１８２／ ｂｌｏｏｄ－２００５－１１－４４４７

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0008】

本開示の実施形態は、抗体又は、その抗原結合断片を含み、それは、表Ｎ２から選択される配列の約又は少なくとも約８、９、１０、１１、又は１２もしくはそれ以上の連続アミノ酸を含む、表Ｎ２から選択される配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になるエピトープでニューロピリン－２Ａ（ＮＲＰ２ａ）バリアント１（ｖ１）又はバリアント２（ｖ２）ポリペプチドに結合する。一部の実施形態では、エピトープは、配列番号９６～１０４から選択される配列の約又は少なくとも約８、９、１０、１１、又は１２の連続アミノ酸を含む、配列番号９６～１０４から選択される配列を含む、それからなる、又はそれらから本質的になる。特定の実施形態では、エピトープは、配列番号１００、あるいは配列番号１００の約又は少なくとも約８、９、１０、１１、又は１２の連続アミノ酸を含む、それからなる、又はそれから本質的になる。

【0009】

特定の実施形態では、抗体、又はその抗原結合断片は、相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）配列ならびに相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含み、それにおいて：
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３、１２７、及びＧＸ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５を含み（それにおいて、Ｘ_１はＧ、Ａ、又はＳであり、Ｘ_２はＹ、Ｆ、Ｋ、Ｌ、又はＲであり、Ｘ_３はＴ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｑ、又はＶであり、Ｘ_４はＤ、Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、又はＳであり、及びＸ_５はＹ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＶである）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１６、１７、及びＸ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３を含む（それにおいて、Ｘ_６はＳ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｐ、Ｔ、又はＶであり、Ｘ_７はＱ、Ａ、Ｇ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ_８はＳ、Ａ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｑ、又はＴであり、Ｘ_９はＴ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、又はＹであり、Ｘ_１０はＨ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＹであり、Ｘ_１１はＶ、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＹであり、Ｘ_１２はＬ、Ａ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、又はＶであり、及びＸ_１３はＴ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、又はＶである）；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３０～１３２を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３３～１３５を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３６～１３８を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３９～１４１を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１４２～１４４を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１４５～１４７を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１４８～１５０を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１５１～１５３を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１５４～１５６を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１５７～１５９を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１～３を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号４～６を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号７～９を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１０～１２を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３～１５を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１６～１８を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１９～２１を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号２２～２４を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号２５～２７を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号２８～３０を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号３１～３３を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号３４～３６を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号３７～３９を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号４０～４２を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号４３～４５を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号４６～４８を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号４９～５１を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号５２～５４を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号５５～５７を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号５８～６０を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；又は
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号６１～６３を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号６４～６６を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む。

【0010】

特定の実施形態では、
ＶＨ配列が配列番号１７０を含み、ＶＬ配列が配列番号１７１を含む；
ＶＨ配列が、配列番号１６０と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号１６１と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号１６２と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号１６３と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号１６４と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号１６５と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号１６６と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号１６７と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号１６８と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号１６９と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号６７と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号６８と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号６９と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号７０と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号７１と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号７２と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号７３と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号７４と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号７５と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号７６と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号７７と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号７８と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号７９と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号８０と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号８１と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号８２と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号８３と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号８４と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号８５と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号８６と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；又は
ＶＨ配列が、配列番号８７と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号８８と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である。

【0011】

一部の実施形態では、抗体、又はその抗原結合断片は、ヒトニューロピリン－２Ｂ（ＮＲＰ２ｂ）バリアント４（ｖ４）ポリペプチド、及び／又はヒトＮＲＰ２ｂバリアント５（ｖ５）ポリペプチドに実質的に結合しない。一部の実施形態では、抗体、又はその抗原結合断片は、ＮＲＰ２ａ ｖ１もしくはｖ２ポリペプチド、又はエピトープに約１０ｐＭ～約５００ｐＭもしくは約５０ｎＭまで、又は約、少なくとも約、もしくは約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、２５ｎＭ、又は５０ｎＭ以下の親和性を伴って、あるいは、場合により、約１０ｐＭ～約５００ｐＭ、約１０ｐＭ～約４００ｐＭ、約１０ｐＭ～約３００ｐＭ、約１０ｐＭ～約２００ｐＭ、約１０ｐＭ～約１００ｐＭ、約１０ｐＭ～約５０ｐＭ、又は約２０ｐＭ～約５００ｐＭ、約２０ｐＭ～約４００ｐＭ、約２０ｐＭ～約３００ｐＭ、約２０ｐＭ～約２００ｐＭ、約２０ｐＭ～約１００ｐＭ、約２０ｐＭ～約５０ｐＭ、又は約３０ｐＭ～約５００ｐＭ、約３０ｐＭ～約４００ｐＭ、約３０ｐＭ～約３００ｐＭ、約３０ｐＭ～約２００ｐＭ、約３０ｐＭ～約１００ｐＭ、約３０ｐＭ～約５０ｐＭ、又は約２０ｐＭ～約２００ｐＭ、約３０ｐＭ～約３００ｐＭ、約４０ｐＭ～約４００ｐＭ、約５０ｐＭ～約５００ｐＭ、約６０ｐＭ～約６００ｐＭ、約７０ｐＭ～約７００ｐＭ、約８０ｐＭ～約８００ｐＭ、約９０ｐＭ～約９００ｐＭ、約１００ｐＭ～約１ｎＭ、約１ｎＭ～約５ｎＭ、約５ｎＭ～約１０ｎＭ、約１０ｎＭ～２５ｎＭ、又は約２５ｎＭ～約５０ｎＭの範囲の親和性を伴って結合する。

【0012】

特定の実施形態では、ＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドについての抗体、又はその抗原結合断片の結合親和性は、ＮＲＰ２ｂ ｖ４ポリペプチド、及び／又はＮＲＰ２ｂ ｖ５ポリペプチドについてのその結合親和性よりも少なくとも約１．５倍、２倍、４倍、６倍、８倍、１０倍、２０倍、４０倍、６０倍、８０倍、１００倍、２００倍、４００倍、６００倍、８００倍、又は１０００倍強い。

【0013】

一部の実施形態では、抗体、又はその抗原結合断片は、ＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドとそのリガンドの間での結合を遮断する、又は他の方法で低下させ、場合により、それにおいて、リガンドは表Ｌ１又は表Ｌ２から選択される。一部の実施形態では、抗体、又はその抗原結合断片は、場合によりインビトロ結合アッセイ、インビトロもしくはエクスビボ細胞ベースのアッセイ、又はインビボにおいて、ＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドとケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２１（ＣＣＬ２１）ポリペプチドの間での結合を遮断する、又は他の方法で低下させる。一部の実施形態では、抗体、又はその抗原結合断片は、対照又は参照と比べて、約又は少なくとも約２０～１００％又はそれ以上（場合により約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％もしくはそれ以上）だけ、ＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドとＣＣＬ２１ポリペプチドの間での結合を遮断する、又は他の方法で低下させる。特定の実施形態では、抗体、又はその抗原結合断片は、場合によりインビトロ結合アッセイ、インビトロもしくはエクスビボ細胞ベースのアッセイ、又はインビボで、ＮＲＰ２ａ ｖ１もしくはｖ２ポリペプチドとＣ－Ｃケモカイン受容体７型（ＣＣＲ７）ポリペプチドの間での二量体化を含む結合を遮断する、又は他の方法で低下させる。特定の実施形態では、抗体、又はその抗原結合断片は、対照又は参照と比べて、約又は少なくとも約２０～１００％又はそれ以上（場合により約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％もしくはそれ以上）だけ、ＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドとＣＣＲ７ポリペプチドの間での二量体化を含む結合を遮断する、又は他の方法で低下させる。

【0014】

一部の実施形態では、抗体、又はその抗原結合断片は、対照又は参照と比べて、場合により、約又は少なくとも約２０～１００％又はそれ以上（場合により約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％もしくはそれ以上）だけ、ＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドとＣＣＬ２１及び／又はＣＣＲ７ポリペプチドの間でのシグナル伝達活性を調節する（場合により拮抗する）。特定の実施形態では、シグナル伝達活性は、免疫細胞移動、場合により樹状細胞もしくは成熟Ｔ細胞の誘導を含み、それにおいて、抗体、又はその抗原結合断片は、シグナル伝達活性を低下させる；ならびに／あるいは、それにおいて、シグナル伝達活性は、腫瘍細胞移動の誘導を含み、ならびに、それにおいて、抗体、又はその抗原結合断片は、シグナル伝達活性を低下させる。

【0015】

一部の実施形態では、抗体、又はその抗原結合断片は、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１及びＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む）、又はＩｇＭ Ｆｃドメイン、場合によりヒトＦｃドメイン、あるいはそのハイブリッド及び／又はバリアントを含む。一部の実施形態では、抗体、又はその抗原結合断片は、ヒトにおいて高いエフェクター機能を伴うＩｇＧ Ｆｃドメイン、場合によりＩｇＧ１もしくはＩｇＧ３ Ｆｃドメインを含み；又はそれは、ヒトにおいて低いエフェクター機能を伴うＩｇＧ Ｆｃドメイン、場合によりＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む。一部の実施形態では、抗体、又はその抗原結合断片は、場合により表Ｆ１から選択されるＩｇＧ１又はＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む。

【0016】

特定の実施形態は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ポリペプチド、アドネクチン、アンチカリン、アプタマー、アビマー、ラクダ科抗体、設計されたアンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）、ミニボディ、ナノボディ、及び／又はユニボディを含む。

【0017】

また、含まれるのは、本明細書中に記載されるように、医薬的に許容可能な担体及び抗体、又はその抗原結合断片を含む治療用組成物である。一部の実施形態では、組成物は、少なくとも一つの抗体、又はその抗原結合断片に関して、タンパク質ベースで少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％の純度を有し、実質的に凝集体を含まない。一部の実施形態では、治療用組成物は、実質的にエンドトキシンを含まない。一部の実施形態では、治療用組成物は、場合により静脈内、筋肉内、皮下、又は腹腔内投与のために適切な滅菌注射溶液である。癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、及びキナーゼ阻害剤の一つ又は複数から選択される少なくとも一つの追加の薬剤をさらに含む、特定の治療用組成物及び方法。

【0018】

また、含まれるのは、本明細書中に記載される治療用組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする対象において疾患又は状態を治療する方法である。一部の実施形態では、疾患又は状態は、ニューロピリン２（ＮＲＰ２）関連疾患又は状態、場合によりＮＲＰ２ａ関連疾患又は状態である。一部の実施形態では、疾患又は状態は、癌、炎症性疾患、自己免疫疾患、リンパ性疾患又は関連付けられる状態、線維性疾患、及び低下した平滑筋収縮性に関連付けられる疾患から選択される。

【0019】

特定の実施形態では、疾患は癌であり、場合により、癌は、ＮＲＰ２を発現又は過剰発現し、場合により、癌は、ＮＲＰ２依存的成長、ＮＲＰ２依存的接着、ＮＲＰ２依存的遊走、及び／又はＮＲＰ２依存的浸潤を呈する。特定の実施形態では、癌は、ＮＲＰ２を発現又は過剰発現するが、しかし、ニューロピリン－１（ＮＲＰ１）を実質的に発現しない。特定の方法は、それを必要とする対象において癌の再出現を低下又は予防するためであって、治療用組成物の投与によって、癌への免疫記憶の生成が可能になる。一部の実施形態では、対象はリンパ浮腫を有する。

【0020】

特定の実施形態は、対象に、癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、及びキナーゼ阻害剤の一つ又は複数から選択される少なくとも一つの追加の薬剤を投与することを含む。一部の実施形態では、少なくとも一つの抗ＮＲＰａ２抗体又はその抗原結合断片及び少なくとも一つの薬剤は、別々の組成物として別々に投与される。一部の実施形態では、少なくとも一つの抗ＮＲＰ２抗体及び少なくとも一つの薬剤は、同じ治療用組成物の一部として、場合により、本明細書中に記載される治療用組成物として一緒に投与される。

【0021】

一部の実施形態では、癌免疫療法剤は、免疫チェックポイント調節剤、癌ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、及び細胞ベースの免疫療法の一つ又は複数から選択される。特定の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、ポリペプチド、場合により抗体もしくはその抗原結合断片、又はリガンド、又は小分子である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、
（ａ）阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト；又は
（ｂ）刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストを含み、
場合により、免疫チェックポイント調節剤は、免疫チェックポイント分子に特異的に結合する。

【0022】

一部の実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子が、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、プログラム死１（ＰＤ－１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トリプトファン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ及びＴリンパ球減衰因子（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、ならびにＩｇ及びＩＴＩＭドメインを伴うＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）の一つ又は複数から選択される。特定の実施形態では、
アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子、アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、及びデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）の一つ又は複数から場合により選択されるＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２アンタゴニストであり、場合により、癌は、結腸直腸癌、黒色腫、乳癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、及び腎細胞癌の一つ又は複数から選択される；
アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４ＰＤＲ００１、及びピジリズマブの一つ又は複数から場合により選択されるＰＤ－１アンタゴニストであり、場合により、ＰＤ－１アンタゴニストがニボルマブであり、癌が、ホジキンリンパ腫、黒色腫、非小細胞肺癌、肝細胞癌、腎細胞癌、及び卵巣癌の一つ又は複数から場合により選択される；
ＰＤ－１アンタゴニストがペムブロリズマブであり、癌が、黒色腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頸部癌、及び尿路上皮癌の一つ又は複数から場合により選択される；
アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子、イピリムマブ、トレメリムマブの一つ又は複数から場合により選択されるＣＴＬＡ－４アンタゴニストであり、場合により、癌が、黒色腫、前立腺癌、肺癌、及び膀胱癌の一つ又は複数から選択される；
アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子、インドキシモド（ＮＬＧ－８１８９）、１‐メチル‐トリプトファン（１ＭＴ）、β‐カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ‐ピリド［３，４‐ｂ］インドール）、ロスマリン酸、及びエパカドスタットの一つ又は複数から場合により選択されるＩＤＯアンタゴニストであり、癌は転移性乳癌及び脳癌の一つ又は複数から場合により選択され、場合により多形神経膠芽腫、神経膠腫、神経膠肉腫又は悪性脳腫瘍である；
アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子、６８０Ｃ９１、及びＬＭ１０の一つ又は複数から場合により選択されるＴＤＯアンタゴニストである；
アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子の一つ又は複数から場合により選択されるＴＩＭ－３アンタゴニストである；
アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子、及びＢＭＳ－９８６０１６の一つ又は複数から場合により選択されるＬＡＧ－３アンタゴニストである；
アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子の一つ又は複数から場合により選択されるＶＩＳＴＡアンタゴニストである；
アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子の一つ又は複数から場合により選択されるＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、及び／又はＨＶＥＭアンタゴニストである；
アンタゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子の一つ又は複数から場合により選択されるＴＩＧＩＴアンタゴニストである。

【0023】

一部の実施形態では、刺激性免疫チェックポイント分子は、ＯＸ４０、ＣＤ４０、グルココルチコイド誘導ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、及びヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）の一つ又は複数から選択される。特定の実施形態では、
アゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ＯＸ８６、Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ、及びＧＳＫ３１７４９９８の一つ又は複数から場合により選択されるＯＸ４０アゴニストである；
アゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ＣＰ－８７０，８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ Ｌｏｂ ７／４、ＡＤＣ－１０１３、及びｒｈＣＤ４０Ｌの一つ又は複数から場合により選択されるＣＤ４０アゴニストであり、癌が、黒色腫、膵臓癌腫、中皮腫、及び血液癌の一つ又は複数から場合により選択され、場合によりリンパ腫、例えば非ホジキンリンパ腫などである；
アゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ－１及びＭＥＤＩ１８７３の一つ又は複数から場合により選択されるＧＩＴＲアゴニストである；
アゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、ウトミルマブ、及び４－１ＢＢリガンドの一つ又は複数から場合により選択されるＣＤ１３７アゴニストである；
アゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、バルリルマブ、及びＣＤＸ－１１２７（１Ｆ５）の一つ又は複数から場合により選択されるＣＤ２７アゴニストである；
アゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンド、及びＴＡＢ０８の一つ又は複数から場合により選択されるＣＤ２８アゴニストである；ならびに／あるいは
アゴニストが、抗体もしくは抗原結合断片、又はそれに特異的に結合する小分子もしくはリガンドの一つ又は複数から場合により選択されるＨＶＥＭアゴニストである。

【0024】

一部の実施形態では、癌ワクチンは、オンコファージ、ヒトパピローマウイルスＨＰＶワクチン、場合により、Ｇａｒｄａｓｉｌ又はＣｅｒｖａｒｉｘ、Ｂ型肝炎ワクチン、場合により、Ｅｎｇｅｒｉｘ－Ｂ、Ｒｅｃｏｍｂｉｖａｘ ＨＢ、又はＴｗｉｎｒｉｘ、及びｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ－Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ）の一つ又は複数から選択される、あるいは、ヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＭＡＧＥ－３、Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ－６、ＩＬ－１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例、ＶＥＧＦ－Ａ）ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＴＬＡ－４、ＮＰＣ－１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ－１Ｒ）、アルファフェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）、炭酸脱水酵素９（ＣＡ－ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、グアニリルシクラーゼＣ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｐ５３、サバイビン、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通型糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ－７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（又はＣＡ－１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、ＮＲ－ＬＵ－１３抗原、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ又はＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０汎癌腫抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７－１Ａ）、プログラム死－１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝臓ホスファターゼ３（ＰＲＬ－３）、前立腺酸性ホスファターゼ、Ｌｅｗｉｓ－Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上に発現されるジシアロガングリオシド）、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、及びメソテリンの一つ又は複数から選択される癌抗原を含み、場合により、対象は、対応する癌抗原を含む癌を有する、又は有するリスクがある。

【0025】

一部の実施形態では、タリモジェンラヘルパレプベック（Ｔ－ＶＥＣ）、コクサッキーウイルスＡ２１（ＣＡＶＡＴＡＫ（商標））、オンコリン（Ｈ１０１）、ペラレオレプ（ＲＥＯＬＹＳＩＮ（登録商標））、セネカバレーウイルス（ＮＴＸ－０１０）、セネカウイルスＳＶＶ－００１、ＣｏｌｏＡｄ１、ＳＥＰＲＥＨＶＩＲ（ＨＳＶ－１７１６）、ＣＧＴＧ－１０２（Ａｄ５／３－Ｄ２４－ＧＭＣＳＦ）、ＧＬ－ＯＮＣ１、ＭＶ－ＮＩＳ、及びＤＮＸ－２４０１の一つ又は複数から選択される腫瘍溶解性ウイルス。一部の実施形態では、インターフェロン（ＩＦＮ）－α、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）の一つ又は複数から選択されるサイトカイン。一部の実施形態では、細胞ベースの免疫療法剤は、癌抗原特異的Ｔ細胞、場合により、エクスビボ由来Ｔ細胞を含む。一部の実施形態では、癌抗原特異的Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞、及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、及びペプチド誘導Ｔ細胞の一つ又は複数から選択される。

【0026】

特定の実施形態では、少なくとも一つの化学療法剤は、アルキル化剤、抗代謝剤、細胞傷害性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤（１型又はＩＩ型）、及び抗微小管剤の一つ又は複数から選択される。一部の実施形態では、
アルキル化剤が、窒素マスタード（場合により、メクロレタミン、シクロホスファミド、ムスチン、メルファラン、クロラムブシル、イホスファミド、及びブスルファン）、ニトロソ尿素（場合により、Ｎ－ニトロソ－Ｎ－メチル尿素（ＭＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（ＭｅＣＣＮＵ）、フォテムスチン、及びストレプトゾトシン）、テトラジン（場合により、ダカルバジン、ミトゾロミド、及びテモゾロミド）、アジリジン（場合により、チオテパ、マイトマイシン、及びジアジコン（ＡＺＱ））、シスプラチン及びその誘導体（場合により、カルボプラチン及びオキサリプラチン）、ならびに非古典的アルキル化剤（場合により、プロカルバジン及びヘキサメチルメラミン）の一つ又は複数から選択される；
抗代謝剤が、抗葉酸（場合により、メトトレキサート及びペメトレキセド）、フルオロピリミジン（場合により、５－フルオロウラシル及びカペシタビン）、デオキシヌクレオシド類似体（場合により、アシタビン、エノシタビン、シタラビン、ゲムシタビン、デシタビン、アザシチジン、フルダラビン、ネララビン、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、及びペントスタチン）、及びチオプリン（場合により、チオグアニン及びメルカプトプリン）の一つ又は複数から選択される；
細胞傷害性抗生物質が、アントラサイクリン（場合により、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ピラルビシン、アクラルビシン、及びミトキサントロン）、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、及びアクチノマイシンの一つ又は複数から選択される；
トポイソメラーゼ阻害剤が、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ドキソルビシン、ミトキサントロン、テニポシド、ノボビオシン、メルバロン、及びアクラルビシンの一つ又は複数から選択される；ならびに／あるいは
抗微小管剤が、タキサン（場合によりパクリタキセル及びドセタキセル）及びビンカアルカロイド（場合によりビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）の一つ又は複数から選択される。

【0027】

一部の実施形態では、少なくとも一つのホルモン治療剤は、ホルモンアゴニスト又はホルモンアンタゴニストである。特定の実施形態では、ホルモンアゴニストは、プロゲストゲン（プロゲスチン）、コルチコステロイド（場合により、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、又はデキサメタゾン）、インスリン様成長因子、ＶＥＧＦ由来の血管新生因子及びリンパ管新生因子（場合により、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ａ１４５、ＶＥＧＦ－Ａ１６５、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、ＰＩＧＦ－２）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、ガレクチン、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）－ベータ、アンドロゲン、エストロゲン、ならびにソマトスタチン類似体の一つ又は複数から選択される。一部の実施形態では、ホルモンアンタゴニストが、ホルモン合成阻害剤、場合により、アロマターゼ阻害剤又はゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）又はその類似体、及びホルモン受容体アンタゴニスト、場合により、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）又は抗アンドロゲン、あるいはホルモン受容体に対して向けられた抗体、場合により、シクスツムマブ、ダロツズマブ、フィギツムマブ、ガニツマブ、イスチラツマブ、ロバツムマブ、アラシズマブペゴル、ベバシズマブ、イクルクマブ、ラムシルマブ、フレソリムマブ、メテリムマブ、ナキシタマブ、セツキシマブ、デパツキシズマブマホドチン、フツキシマブ、イムガツズマブ、ラプリツキシマブエムタンシン、マツズマブ、モドツキシマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、トムゾツキシマブ、ザルツムマブ、アプルツマブイクサドチン、ベマリツズマブ、オララツマブ、あるいはトベツマブの一つ又は複数から選択される。

【0028】

一部の実施形態では、キナーゼ阻害剤が、アダボセルチブ、アファニチブ、アフリベルセプト、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、カボザンチニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エントレクチニブ、エルダフィチニブ、エルロチニブ、フォスタミチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ポナチニブ、ラニビズマブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トファシチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、及びベムアフェニブの一つ又は複数から選択される。

【0029】

一部の実施形態では、癌は原発性癌である。特定の実施形態では、癌は、転移性癌、場合により、ＮＲＰ２ａ及び／又はＮＲＰ２ｂを発現する転移性癌である。

【0030】

一部の実施形態では、癌が、黒色腫（例、転移性黒色腫）、膵臓癌、骨癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、白血病（例、リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、再発性急性骨髄性白血病）、リンパ腫、肝細胞癌（肝細胞癌腫）、肉腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌、神経膠腫、多形神経膠芽腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原始神経外胚葉腫瘍（髄芽腫）、腎臓癌（例、腎細胞癌腫）、膀胱癌、子宮癌、食道癌、脳癌、頭頸部癌、子宮頸癌、精巣癌、甲状腺癌、及び胃癌の一つ又は複数から選択される。

【0031】

一部の実施形態では、転移性癌は、以下の一つ又は複数から選択される：
（ａ）骨、肝臓、及び／又は肺に転移した膀胱癌；
（ｂ）骨、脳、肝臓、及び／又は肺に転移した乳癌；
（ｃ）肝臓、肺、及び／又は腹膜に転移した結腸直腸癌；
（ｄ）副腎、骨、脳、肝臓、及び／又は肺に転移した腎臓癌；
（ｅ）副腎、骨、脳、肝臓、及び／又は他の肺部位に転移した肺癌；
（ｆ）骨、脳、肝臓、肺、及び／又は皮膚／筋肉に転移した黒色腫；
（ｇ）肝臓、肺、及び／又は腹膜に転移した卵巣癌；
（ｈ）肝臓、肺、及び／又は腹膜に転移した膵臓癌；
（ｉ）副腎、骨、肝臓、及び／又は肺に転移した前立腺癌；
（ｊ）肝臓、肺、及び／又は腹膜に転移した胃癌；
（ｌ）骨、肝臓、及び／又は肺に転移した甲状腺癌；ならびに
（ｍ）骨、肝臓、肺、腹膜、及び／又は膣に転移した子宮癌。

【0032】

また、含まれるのは、以下を含む患者ケアキットである：
（ａ）本明細書中に記載される抗体、又はその抗原結合断片；及び場合により、
（ｂ）癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、及びキナーゼ阻害剤から選択される少なくとも一つの追加の薬剤。

【0033】

一部の実施形態では、（ａ）及び（ｂ）は、別々の治療用組成物中にある。一部の実施形態では、（ａ）及び（ｂ）は、同じ治療用組成物中にある。一部の実施形態では、少なくとも一つの化学療法剤は、アルキル化剤、抗代謝剤、細胞傷害性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤（１型又はＩＩ型）、及び抗微小管剤の一つ又は複数から選択される。

【0034】

特定の実施形態は、本明細書中に記載される抗体、又はその抗原結合断片を含むバイオアッセイ系、及び細胞表面上にヒトＮＲＰ２ポリペプチドを発現する宿主細胞株を含む。一部の実施形態では、ＮＲＰ２ポリペプチドは、検出可能な標識を用いて標識される。一部の実施形態では、抗体、又はその抗原結合断片は、検出可能な標識を用いて標識される。一部の実施形態では、ＮＲＰ２ポリペプチドは、読み出し又はインジケータ、例えばＮＲＰ２ポリペプチドの生物学的活性の蛍光又は発光インジケータなどに機能的に共役される。特定の実施形態では、ＮＲＰ２ポリペプチドは、表Ｎ１、場合によりＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドから選択される。特定のバイオアッセイ系は、少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンド、場合により表Ｌ１又は表Ｌ２から選択されるＮＲＰ２ａリガンドを含み、場合により、それにおいて、宿主細胞は、少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドを発現する。

【0035】

特定の実施形態は、ヒトニューロピリン２ａ（ＮＲＰ２ａ）ポリペプチド、少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンド、及び本明細書中に記載されるヒトもしくはヒト化抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片を発現する細胞を含む検出系を含み、それは、ＮＲＰ２ａポリペプチドと少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドの間での相互作用を調節する。一部の実施形態では、抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片は、検出可能な標識を用いて標識される。一部の実施形態では、ＮＲＰ２ａポリペプチドは、表Ｎ１から選択されるＮＲＰ２ａバリアント１及び／又はバリアント２ポリペプチドである。一部の実施形態では、少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドは、表Ｌ１又は表Ｌ２から選択される。一部の実施形態では、ＮＲＰ２ａポリペプチド及び／又は少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドは、読み出し又はインジケータ、例えばＮＲＰ２ａポリペプチド又は少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドの生物学的活性の蛍光又は発光インジケータなどに機能的に共役される。

【0036】

また、含まれるのは、少なくとも一つの細胞が、本明細書中に記載されるヒトもしくはヒト化抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片をコードする一つ又は複数のポリヌクレオチドを含む、操作された細胞集団を含む細胞組成物であって、それにおいて、細胞は無血清培地中で成長させることが可能である。

【0037】

一部の実施形態は、本明細書中に記載されるヒトもしくはヒト化抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片を含む細胞成長デバイス、少なくとも一つの細胞が、当該抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片をコードする一つ又は複数のポリヌクレオチドを含む、操作された細胞集団、少なくとも約１０リットルの無血清増殖培地、及び滅菌容器を含む。

【図面の簡単な説明】

【0038】

【図1】図１は、ＮＲＰ２ａ ｖ１／ｖ２とＣＣＬ２１及びＣＣＲ７との相互作用のモデルを示す。ＮＲＰ２ａ ｖ３及びＮＲＰ２ｂ ｖ４／ｖ５は、部分的には、これらのＮＲＰ２アイソフォームが膜近傍ドメイン内にＣＣＬ２１相互作用配列を欠くため、ＣＣＬ２１又はＣＣＲ７と有意に相互作用しない。

【図2A】図２Ａ～２Ｅは、ＣＣＬ２１又はＣＣＬ１９の存在における、ＮＲＰ２ａ ｖ１／ｖ２アイソフォームとＣＣＲ７の間での会合を示す。

【図2B】同上。

【図2C】同上。

【図2D】同上。

【図2E】同上。

【図3A】図３Ａ～３Ｅは、ＮＲＰ２ａ及びＣＣＲ７のリガンド誘導性二量体化に関するＮＲＰ２ａのＣＣＬ２１結合部位における変異の効果を示す。

【図3B】同上。

【図3C】同上。

【図3D】同上。

【図3E】同上。

【図4A】図４Ａ～４Ｃは、ヒト及びマウスＮＲＰ２Ａ（４Ａ）、ヒトＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂ（４Ｂ）、ならびにヒトＮＲＰ２ａ ｖ２及びＮＲＰ２ａ ｖ３（４Ｃ）への抗体の相対的結合を示す。

【図4B】同上。

【図4C】同上。

【図5A】図５Ａ～５Ｄは、ＮＲＰ２ａ／ＣＣＲ７－ＣＣＬ２１誘導受容体二量体化を遮断する抗体の能力を示す。

【図5B】同上。

【図5C】同上。

【図5D】同上。

【図6】図６は、例示的な抗ＮＲＰ２ａ抗体エピトープ（配列番号９５（ＮＲＰ２ａ）、及び対応する相同マウス配列、配列番号１２４（ｍＮＲＰ２ａ））の配列解析を示す。

【図7A】図７Ａ～７Ｂは、インビボ樹状細胞遊走アッセイのワークフロー（７Ａ）及びゲーティング戦略（７Ｂ）を示す。

【図7B】同上。

【図7C】図７Ｃは、野生型マウスと比べた、ＮＲＰ２ ＫＯのリンパ節におけるＦＩＴＣ＋樹状細胞の結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0039】

他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中に記載されるものと類似又は等価の任意の方法、材料、組成物、試薬、細胞を、本開示の主題の実施又はテストにおいて使用することができるが、好ましい方法及び材料が記載される。全ての刊行物及び参考文献は、限定されないが、本明細書中に引用される特許及び特許出願を含むが、各個々の刊行物又は参考文献が、完全に記載されるものとして参照により本明細書中に組み入れられることが具体的かつ個別に示されているかのように、それらの全体において参照により本明細書中に組み入れられる。本出願が優先権を主張する任意の特許出願はまた、刊行物及び参考文献について上に記載される様式において、その全体において参照により本明細書中に組み入れられる。

【0040】

標準的な技術が、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養及び形質転換（例、エレクトロポレーション、リポフェクション）において使用され得る。酵素反応及び精製技術は、製造業者の仕様に従って、又は当技術分野において一般に達成される、又は本明細書中に記載されるように実施され得る。これら及び関連する技術及び手順は、当技術分野において周知の従来的な方法に従って、及び本明細書全体を通して引用及び考察される様々な一般的及びより具体的な参考文献において記載されるように、一般的に実施され得る。具体的な定義が提供されない限り、本明細書中に記載される分子生物学、分析化学、合成有機化学、ならびに医薬及び医薬化学との関連において利用される命名法、ならびにそれらの実験室手順及び技術は、当技術分野において周知であり、一般に使用されるものである。標準的な技術は、組換え技術、分子生物学的、微生物学的、化学合成、化学分析、医薬調製、製剤化、及び送達、ならびに患者の治療のために使用され得る。

【0041】

本開示の目的のために、以下の用語が以下に定義される。

【0042】

冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、本明細書中では、物品の文法的な物体の一つ又は一つを上回る（即ち、少なくとも一つ）を指すために使用される。一例として、「要素」は、「一つの要素」、「一つ又は複数の要素」、及び／又は「少なくとも一つの要素」を含む。

【0043】

「約」により、基準量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量又は長さに対して２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２又は１％ほど変動する量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量又は長さを意味する。

【0044】

用語「抗原」は、選択的結合剤、例えば抗体などにより結合されることが可能で、加えて、動物において使用されて、その抗原のエピトープに結合することが可能な抗体を産生することが可能な分子又は分子の一部を指す。抗原は、一つ又は複数のエピトープを有し得る。本明細書中で使用される場合、用語「抗原」は、適した条件下で、物質に対する免疫応答を誘導し、免疫応答の産物と反応することが可能である物質を含む。例えば、抗原は、抗体（液性免疫応答）もしくは感作Ｔリンパ球（Ｔヘルパー又は細胞媒介性免疫応答）、又はその両方により認識されることができる。抗原は、可溶性物質、例えば毒素及び外来タンパク質など、又は粒子、例えば細菌及び組織細胞などであり得るが；しかし、抗原決定基（エピトープ）として公知のタンパク質又は多糖分子の部分のみが、リンパ球上の抗体又は特定の受容体と組み合わされる。より広くは、用語「抗原」は、その物質が免疫原性であるか否かにかかわらず、抗体が結合する、又は抗体が望ましい任意の物質を含む。そのような抗原については、抗体は、任意の免疫応答とは独立的に、組換え方法により同定することができる。

【0045】

「アンタゴニスト」は、別の薬剤又は分子の生理学的作用に干渉する、又はそうでなければそれを低下させる生物学的構造又は化学薬剤を指す。一部の例では、アンタゴニストは、他の薬剤又は分子に特異的に結合する。含まれるのは、完全及び部分アンタゴニストである。

【0046】

「アゴニスト」は、別の薬剤又は分子の生理学的作用を増加又は増強する生物学的構造又は化学薬剤を指す。一部の例では、アゴニストは、他の薬剤又は分子に特異的に結合する。含まれるのは、完全及び部分アゴニストである。

【0047】

用語「アネルギー」は、抗原による再刺激に対するＴ細胞、又はＢ細胞の応答の機能的不活性化を指す。

【0048】

本明細書中で使用される場合、用語「アミノ酸」は、天然及び非天然アミノ酸の両方、ならびにアミノ酸類似体及び模倣体を意味することが意図される。天然アミノ酸は、タンパク質生合成中に利用される２０の（Ｌ）アミノ酸、ならびに、例えば、他、例えば４－ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリジン、デスモシン、イソデスモシン、ホモシステイン、シトルリン、及びオルニチンなどを含む。非天然アミノ酸は、例えば、（Ｄ）－アミノ酸、ノルロイシン、ノルバリン、ｐ－フルオロフェニルアラニン、エチオニン及び同様のものを含み、それらは、当業者に公知である。アミノ酸類似体は、天然及び非天然アミノ酸の修飾形態を含む。そのような修飾は、例えば、アミノ酸上の化学基及び部分の置換もしくは交換を含み得る、又はアミノ酸の誘導体化により得る。アミノ酸模倣体は、例えば、機能的に類似した特性、例えば参照アミノ酸の電荷及び電荷間隔特徴などを示す有機構造を含む。例えば、アルギニン（Ａｒｇ又はＲ）を模倣する有機構造は、類似の分子空間中に位置し、天然Ａｒｇアミノ酸の側鎖のｅ－アミノ基と同じ程度の可動性を有する正電荷部分を有するであろう。模倣体はまた、アミノ酸の又はアミノ酸官能基の最適な間隔及び電荷相互作用を維持するように、制約された構造を含む。当業者は、どの構造が、機能的に等価なアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を構成するかを知っている、又は決定することができる。

【0049】

本明細書中で使用される場合、用語「抗体」は、インタクトなポリクローナル又はモノクローナル抗体だけでなく、しかし、また、それらの断片（例えばｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、一本鎖（ｓｃＦｖ）、それらの合成バリアント、天然バリアント、要求される特異性の抗原結合断片を伴う抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び要求される特異性の抗原結合部位又は断片（エピトープ認識部位）を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変された構成を含む。抗体（及びそれらの抗原結合断片）の特定の特色及び特徴は、本明細書中でより詳細に記載される。

【0050】

抗体又は抗原結合断片は、本質的に任意の種類であり得る。当技術分野において周知のように、抗体は、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する、少なくとも一つのエピトープ認識部位を通じて、標的、例えば免疫チェックポイント分子などに特異的に結合することが可能な免疫グロブリン分子である。

【0051】

本明細書中で使用される用語「抗原結合断片」は、目的の抗原に結合する免疫グロブリン重鎖及び／又は軽鎖の少なくとも一つのＣＤＲを含むポリペプチド断片を指す。これに関して、本明細書中に記載される抗体の抗原結合断片は、標的分子に結合する抗体からのＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列の１、２、３、４、５、又は全て６つのＣＤＲを含み得る。

【0052】

抗体及びそれらの抗原結合断片の結合特性は、当技術分野において周知の方法を使用して定量化することができる（Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９：４３９－４７３，１９９０を参照のこと）。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片が、標的分子、例えば、ＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチド、あるいはそのエピトープ又は複合体に、約≦１０^－７Ｍ～約１０^－８Ｍである、又はその範囲である平衡解離定数を伴って特異的に結合する。一部の実施形態では、平衡解離定数は、約≦１０^－９Ｍ～約≦１０^－１０Ｍである、又はその範囲である。特定の例証的な実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約、少なくとも約、又は約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、又は５０ｎＭ未満の、標的分子（それが特異的に結合する）についての親和性（Ｋｄ又はＥＣ_５０）を有する。

【0053】

分子、例えばポリペプチド又は抗体などは、それが、代替的な細胞もしくは物質、又はエピトープとするよりも、より頻繁に、より迅速に、より大きな持続時間を伴って、及び／又はより大きな親和性を伴って、特定の細胞、物質、又は特定のエピトープと反応又は会合する場合、「特異的結合」又は「優先的結合」を示すと言われる。抗体は、それが、例えば、統計的に有意な量だけ、他の物質又はエピトープに結合するよりも大きな親和性、結合力を伴って、より容易に、及び／又はより大きな持続時間を伴って結合する場合、標的分子又はエピトープに「特異的に結合する」又は「優先的に結合する」。典型的には、特異的結合を示す一対の分子の一つのメンバーは、その表面上の領域、又は空洞を有し、それは、一対の分子の他のメンバーの特定の空間的及び／又は極性構造に特異的に結合し、従って、相補的である。このように、対のメンバーは、互いに特異的に結合する特性を有する。例えば、特定のエピトープに特異的又は優先的に結合する抗体は、それが他のエピトープに結合するよりも、より大きな親和性、結合力を伴って、より容易に、及び／又はより大きな持続時間を伴って、その特定のエピトープに結合する抗体である。また、例えば、第一の標的に特異的又は優先的に結合する抗体（又は部分もしくはエピトープ）が、第二の標的に特異的又は優先的に結合し得る、又はしないであろうということが、この定義を読むことにより理解される。この用語はまた、例えば、抗体が、多数の抗原により担持される特定のエピトープについて特異的である場合に適用可能であり、その場合では、抗原結合断片又はドメインを担持する特異的結合部材は、エピトープを担持する様々な抗原に結合することができ；例えば、それは、共通エピトープを共有する複数の種からの標的抗原の多数の異なる形態に対して交差反応性であり得る。

【0054】

免疫学的結合は、一般的に、免疫グロブリン分子と、免疫グロブリンが特異的である抗原との間に生じる種類の非共有結合的な相互作用を指し、例えば、例証により、限定ではなく、静電、イオン、親水性、及び／又は疎水性引力もしくは反発力、立体力、水素結合、ファンデルワールス力、及び他の相互作用の結果としてである。免疫学的結合相互作用の強度、又は親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）の観点から表現することができ、それにおいて、より小さいＫｄは、より大きな親和性を表す。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性は、当技術分野において周知の方法を使用して定量化することができる。一つのそのような方法は、抗原結合部位／抗原複合体形成及び解離の速度を測定することを伴い、それにおいて、それらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性に、及び両方の方向における速度に等しく影響を及ぼす幾何学的パラメータに依存する。このように、「オン速度定数」（Ｋｏｎ）及び「オフ速度定数」（Ｋｏｆｆ）の両方が、濃度ならびに会合及び解離の実際の速度の計算により決定することができる。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比率によって、親和性に関連しない全てのパラメータの取り消しが可能になり、このように、解離定数Ｋｄと等しい。本明細書中で使用される場合、用語「親和性」は、二つの薬剤の可逆的結合についての平衡定数を含み、Ｋｄ又はＥＣ_５０として表現される。リガンドへの結合タンパク質の親和性、例えばエピトープについての抗体の親和性などは、例えば、約１００ナノモル（ｎＭ）～約０．１ｎＭ、約１００ｎＭ～約１ピコモル（ｐＭ）、又は約１００ｎＭ～約１フェムトモル（ｆＭ）であることができる。本明細書中で使用される場合、用語「結合力」は、希釈後の解離に対する二つ又はそれ以上の薬剤の複合体の耐性を指す。一部の実施形態では、親和性は、半最大有効濃度（ＥＣ_５０）の観点で表現され、それは、本明細書中に開示される薬剤、例えば抗ＮＲＰ２ａ抗体などの濃度を指し、それは、特定された曝露時間後のベースラインと最大値の間での中間の応答を誘導する。ＥＣ_５０は、抗体の効力の尺度として一般に使用される。

【0055】

抗体は、当業者に公知の様々な技術のいずれかにより調製され得る。例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照のこと。目的のポリペプチドについて特異的なモノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１－５１９，１９７６、及びそれらに対する改善を使用して調製され得る。また、含まれるのは、トランスジェニック動物、例えばマウスなどを利用してヒト抗体を発現する方法である。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８２６，１９９６；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３：４９－１０１，１９９４；及びＬｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １３：６５－９３，１９９５を参照のこと。特定の例は、ＲＥＧＥＮＥＲＥＸ（登録商標）によるＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）プラットフォームを含む（例、米国特許第６，５９６，５４１号を参照のこと）。

【0056】

抗体はまた、ファージディスプレイライブラリー又は酵母ディスプレイライブラリーの使用により生成又は同定することができる（例、米国特許第７，２４４，５９２号；Ｃｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．１：７５５－７６８，２００６を参照のこと）。利用可能なライブラリーの非限定的な例は、クローン化又は合成ライブラリー、例えばヒトコンビナトリアル抗体ライブラリー（ＨｕＣＡＬ）などを含み、それにおいて、ヒト抗体レパートリーの構造的多様性が、七つの重鎖及び七つの軽鎖可変領域遺伝子により表される。これらの遺伝子の組み合わせは、マスターライブラリー中に４９のフレームワークを生じさせる。これらのフレームワーク上に高度に可変な遺伝子カセット（ＣＤＲ＝相補性決定領域）を重ねることにより、広大なヒト抗体レパートリーを再現することができる。また、含まれるのは、軽鎖可変領域、重鎖ＣＤＲ－３、重鎖ＣＤＲ－１における多様性をコードする合成ＤＮＡ、及び重鎖ＣＤＲ－２における多様性をコードする合成ＤＮＡをコードするヒトドナー供給断片を用いて設計されたヒトライブラリーである。使用のために適切な他のライブラリーは、当業者には明らかであろう。

【0057】

特定の実施形態では、本明細書中に記載される抗体及びその抗原結合断片は、重鎖及び軽鎖のＣＤＲセットをそれぞれ含み、ＣＤＲに対して支持を提供し、互いに対するＣＤＲの空間的関係を定める重鎖及び軽鎖フレームワーク領域（ＦＲ）セットの間に介在する。本明細書中で使用される場合、用語「ＣＤＲセット」は、重鎖又は軽鎖Ｖ領域の三つの超可変領域を指す。重鎖又は軽鎖のＮ末端から進むと、これらの領域は、それぞれ「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、及び「ＣＤＲ３」として表示される。抗原結合部位は、従って、重鎖及び軽鎖Ｖ領域の各々からのＣＤＲセットを含む、六つのＣＤＲを含む。単一のＣＤＲ（例、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３）を含むポリペプチドは、本明細書中では「分子認識単位」として言及される。多数の抗原－抗体複合体の結晶学的分析によって、ＣＤＲのアミノ酸残基が、結合抗原との広範な接触を形成し、それにおいて、最も広範な抗原接触が、重鎖ＣＤＲ３とであることが実証されている。このように、分子認識単位は、主に抗原結合部位の特異性について関与する。

【0058】

本明細書中で使用される場合、用語「ＦＲセット」は、重鎖又は軽鎖Ｖ領域のＣＤＲセットのＣＤＲをフレーム化する、四つの隣接するアミノ酸配列を指す。一部のＦＲ残基は、結合抗原と接触し得るが；しかし、ＦＲは、主に、Ｖ領域を抗原結合部位、特にＣＤＲに直接隣接するＦＲ残基中にフォールディングすることについて関与する。ＦＲ内では、特定のアミノ残基及び特定の構造的特色は、非常に高度に保存されている。これに関して、全てのＶ領域配列は、約９０のアミノ酸残基の内部ジスルフィドループを含む。Ｖ領域が結合部位中に折り畳まれる場合、ＣＤＲは、抗原結合表面を形成する突出ループモチーフとして呈示される。正確なＣＤＲアミノ酸配列に関係なく、特定の「正準」構造中へのＣＤＲループの折り畳まれた形状に影響を及ぼす、ＦＲの保存された構造領域があることが一般的に認識される。さらに、特定のＦＲ残基が、抗体重鎖及び軽鎖の相互作用を安定化させる非共有結合ドメイン間接触において関与することが公知である。

【0059】

免疫グロブリン可変ドメインの構造及び位置は、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ．１９８７、及びその更新への参照により決定され得る。

【0060】

また、含まれるのは、「モノクローナル」抗体であって、それは、均質な抗体集団を指し、それにおいて、モノクローナル抗体は、エピトープの選択的結合において含まれるアミノ酸（天然及び非天然）で構成される。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一のエピトープに対して向けられる。用語「モノクローナル抗体」は、インタクトなモノクローナル抗体及び全長モノクローナル抗体だけでなく、しかし、また、それらの断片（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、一本鎖（ｓｃＦｖ）、それらのバリアント、抗原結合部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ならびに要求される特異性、及びエピトープに結合する能力の抗原結合断片（エピトープ認識部位）を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変された構成を含む。抗体の供給源、又はそれが作製される様式（例、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物による）に関して限定されることは意図されない。この用語は、全免疫グロブリン、ならびに「抗体」の定義の下に上に記載される断片などを含む。

【0061】

タンパク質分解酵素パパインは、ＩｇＧ分子を優先的に切断していくつかの断片をもたらし、そのうちの二つ（Ｆ（ａｂ）断片）は、各々が、インタクトな抗原結合部位を含む共有結合的なヘテロ二量体を含む。酵素ペプシンはまた、ＩｇＧ分子を切断して、両方の抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２断片を含む、いくつかの断片を提供することができる。特定の実施形態による使用のためのＦｖ断片は、ＩｇＭの、及び稀な場合では、ＩｇＧ又はＩｇＡ免疫グロブリン分子の優先的なタンパク質分解切断により産生されることができる。Ｆｖ断片は、しかし、当技術分野において公知の組み換え技術を使用してより一般に導き出される。Ｆｖ断片は、天然抗体分子の抗原認識及び結合能力の大部分を保持する抗原結合部位を含む、非共有結合的なＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を含む。Ｉｎｂａｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ．６９：２６５９－２６６２，１９７２；Ｈｏｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５：２７０６－２７１０，１９７６；及びＥｈｒｌｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９：４０９１－４０９６，１９８０を参照のこと。

【0062】

特定の実施形態では、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦＶ）抗体が企図される。例えば、カッパ体（Ｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：９４９－５７，１９９７）；ミニボディ（Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ １３：５３０５－９，１９９４）；ダイアボディ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９０：６４４４－８，１９９３）；又はＪａｎｕｓｉｎｓ（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ １０：３６５５－５９，１９９１；及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｐｐｌ．７：５１－５２，１９９２）は、所望の特異性を有する抗体の選択に関する本出願の教示に従って、標準的な分子生物学技術を使用して調製されてもよい。

【0063】

一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）ポリペプチドは、共有結合的に連結されたＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体であり、それは、ペプチドをコードするリンカーにより連結されたＶＨ及びＶＬコード遺伝子を含む遺伝子融合体から発現される。Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（ＰＮＡＳ ＵＳＡ．８５（１６）：５８７９－５８８３，１９８８）。天然に凝集したが、しかし、化学的に分離された軽鎖及び重鎖ポリペプチド鎖を、抗体Ｖ領域から、抗原結合部位の構造と実質的に類似の三次元構造へと折り畳まれるｓｃＦｖ分子に変換するための化学構造を識別するための多数の方法が記載されている。例えば、Ｈｕｓｔｏｎらへの米国特許第５，０９１，５１３号及び第５，１３２，４０５号；ならびにＬａｄｎｅｒらへの米国特許第４，９４６，７７８号を参照のこと。

【0064】

特定の実施形態では、本明細書中に記載される抗体又は抗原結合断片は、「ダイアボディ」の形態である。ダイアボディはポリペプチドの多量体であり、各ポリペプチドが、免疫グロブリン軽鎖の結合領域を含む第一のドメイン及び免疫グロブリン重鎖の結合領域を含む第二のドメインを含み、二つのドメインが（例、ペプチドリンカーにより）連結されているが、しかし、互いに会合して抗原結合部位を形成することができない：抗原結合部位は、多量体内の一つのポリペプチドの第一のドメインと、多量体内の別のポリペプチドの第二のドメインとの会合により形成される（ＷＯ９４／１３８０４）。抗体のｄＡｂ断片は、ＶＨドメインからなる（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６，１９８９）。ダイアボディ及び他の多価又は多重特異性断片は、例えば、遺伝子融合により構築することができる（ＷＯ９４／１３８０４；及びＨｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ．９０：６４４４－６４４８，１９９３）を参照のこと）。

【0065】

ＣＨ３ドメインに連結されたｓｃＦｖを含むミニボディがまた、含まれる（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５６：３０５５－３０６１，１９９６を参照のこと）。また、Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．３４１：５４４－５４６，１９８９；Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２４２：４２３－４２６，１９８８；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ．８５：５８７９－５８８３，１９８８）；ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５；ＷＯ９４／１３８０４；及びＲｅｉｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：１２３９－１２４５，１９９６を参照のこと。

【0066】

二重特異性抗体が使用される場合、これらは従来の二重特異性抗体であってもよく、それらは、様々な方法において製造されることができ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４：４４６－４４９，１９９３）、例えば、化学的に、又はハイブリッドハイブリドーマから調製されることができ、又は上で言及する二重特異性抗体断片のいずれかであり得る。ダイアボディ及びｓｃＦｖは、可変ドメインのみを使用し、Ｆｃ領域を伴うことなく構築することができ、抗イディオタイプ反応の効果を潜在的に低下させる。

【0067】

二重特異性ダイアボディはまた、二重特異性全抗体とは対照的に、特に有用であり得る。なぜなら、それらは、大腸菌中で容易に構築及び発現させることができるためである。適した結合特異性のダイアボディ（及び多くの他のポリペプチド、例えば抗体断片など）は、ライブラリーからのファージディスプレイ（ＷＯ９４／１３８０４）を使用して容易に選択することができる。ダイアボディの一つのアームが、例えば、抗原Ｘに対して向けられた特異性を伴って、一定に保たれる場合、次にライブラリーを作製することができ、ここで、他のアームが変動し、適した特異性の抗体が選択される。二重特異性全抗体は、ノブイントゥホールエンジニアリングにより作製され得る（Ｒｉｄｇｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，９：６１６－６２１，１９９６）。

【0068】

特定の実施形態では、本明細書中に記載される抗体又は抗原結合断片は、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）の形態である。ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、除去されたヒンジ領域を伴うＩｇＧ４抗体である（ＧｅｎＭａｂ Ｕｔｒｅｃｈｔ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓを参照のこと；また、例えば、ＵＳ２００９０２２６４２１を参照のこと）。この抗体技術によって、現在の小さな抗体フォーマットよりも、予想されるより長い治療ウィンドウを伴う、安定で、より小さな抗体フォーマットが作製される。ＩｇＧ４抗体は不活性と考えられ、このように、免疫系と相互作用しない。完全ヒトＩｇＧ４抗体は、抗体のヒンジ領域を排除して、対応するインタクトなＩｇＧ４（ＧｅｎＭａｂ、Ｕｔｒｅｃｈｔ）と比べて、異なる安定性特性を有する半分子断片を得ることにより修飾され得る。ＩｇＧ４分子を半減させることは、同族抗原（例、疾患標的）に結合することができるＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）上に一つの領域のみを残し、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）は、従って、標的細胞上の一つの部位にのみ一価で結合する。特定の癌細胞表面抗原については、この一価結合は、同じ抗原特異性を有する二価抗体を使用して見られ得るように、癌細胞を刺激して成長させないであろうが、それ故に、ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）技術は、従来の抗体を用いた治療に難治性であり得る一部の種類の癌について治療選択肢を与え得る。ＵｎｉＢｏｄｙ（登録商標）の小さなサイズは、一部の形態の癌を治療する際に大きな利益となり得るが、より大きな固形腫瘍を上回る分子のより良好な分布を可能にし、潜在的に有効性を増加させる。

【0069】

特定の実施形態では、本明細書中に記載される抗体及び抗原結合断片は、ナノボディの形態である。ミニボディは、単一の遺伝子によりコードされ、ほぼ全ての原核宿主及び真核宿主、例えば、大腸菌（米国特許第６，７６５，０８７号を参照のこと）、カビ（例えば、アスペルギルス又はトリコデルマ）、及び酵母（例えば、サッカロミセス、クルイヴェルミセス、ハンセヌラ又はピキア（米国特許第６，８３８，２５４号を参照のこと）において効率的に産生される。産生プロセスは拡張可能であり、マルチキログラムの量のナノボディが産生されている。ナノボディは、長い保存期間を有する、すぐに使用できる溶液として製剤化され得る。ナノクローン方法（ＷＯ０６／０７９３７２を参照のこと）は、Ｂ細胞の自動ハイスループット選択に基づいて、所望の標的に対してナノボディを生成するための専有の方法である。

【0070】

一部の実施形態では、本明細書中に記載される抗体又は抗原結合断片は、アプタマーの形態である（例、参照により組み入れられる、Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．３４６，８１８－２２，１９９０；及びＴｕｅｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２４９，５０５－１０，１９９０を参照のこと）。アプタマーの例は、核酸アプタマー（例、ＤＮＡアプタマー、ＲＮＡアプタマー）及びペプチドアプタマーを含む。核酸アプタマーは、一般的に、インビトロ選択の反復ラウンド、又は同等の方法、例えばＳＥＬＥＸ（指数関数的濃縮によるリガンドの系統的進化）などを通じて操作され、様々な分子標的、例えば小分子、タンパク質、核酸、ならびにさらには細胞、組織、及び生物などに結合する核酸種を指す。例えば、参照により組み入れられる、米国特許第６，３７６，１９０号；及び第６，３８７，６２０号を参照のこと。

【0071】

ペプチドアプタマーは、典型的には、両方の末端でタンパク質足場に付着された可変ペプチドループを含み、典型的には、ペプチドアプタマーの結合親和性を、抗体のもの（例、ナノモル範囲）と同等のレベルまで増加させる二重構造制約である。特定の実施形態では、可変ループ長は、約１０～２０のアミノ酸（その間の全ての整数を含む）で構成されてもよく、足場は、良好な溶解性及び容量特性を有する任意のタンパク質を含み得る。特定の例示的な実施形態は、細菌タンパク質チオレドキシンＡを足場タンパク質として利用し、可変ループは、還元活性部位（野生型タンパク質中の－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－ループ）内に挿入され、二つのシステイン側鎖はジスルフィド架橋を形成することができる。ペプチドアプタマーを同定するための方法は、例えば、参照により組み入れられる米国特許出願第２００３／０１０８５３２号において記載されている。ペプチドアプタマー選択は、酵母ツーハイブリッド系を含む、当技術分野において公知の異なる系を使用して実施することができる。

【0072】

一部の実施形態では、本明細書中に記載される抗体又は抗原結合断片は、アビマーの形態である。アビマーは、インビトロエクソンシャッフリング及びファージディスプレイを使用して操作された多量体結合タンパク質又はペプチドを指す。複数の結合ドメインが連結され、単一エピトープ免疫グロブリンドメインと比較して、より大きな親和性及び特異性をもたらす。例えば、参照により組み入れられる、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２３：１５５６－１５６１，２００５；米国特許第７，１６６，６９７号；ならびに米国特許出願第２００４／０１７５７５６号、第２００５／００４８５１２号、第２００５／００５３９７３号、第２００５／００８９９３２号、及び第２００５／０２２１３８４号を参照のこと。

【0073】

一部の実施形態では、本明細書中に記載される抗体又は抗原結合断片は、アドネクチンの形態である。アドネクチンは、他のタンパク質に天然に結合する豊富な細胞外タンパク質であるヒトフィブロネクチンから由来する、標的化される生物製剤のクラスを指す。例えば、参照により組み入れられる、米国特許出願第２００７／００８２３６５号；第２００８／０１３９７９１号；及び第２００８／０２２００４９号を参照のこと。アドネクチンは、典型的には、天然フィブロネクチン骨格、ならびにヒトフィブロネクチンの特定の部分の複数の標的化ドメインからなる。標的化ドメインは、アドネクチンが、ＮＲＰ２ポリペプチド又はそのエピトープを特異的に認識することを可能にするように操作することができる。

【0074】

一部の実施形態では、本明細書中に記載される抗体又は抗原結合断片は、アンチカリンの形態である。アンチカリンは、構造的に剛直なフレームワークにより支持される超可変ループ領域を伴う結合タンパク質のファミリーであるヒトリポカリンから典型的には合成される抗体模倣体のクラスを指す。例えば、米国特許出願第２００６／００５８５１０号を参照のこと。アンチカリンは、典型的には、約２０ｋＤａのサイズを有する。アンチカリンは、四つのペプチドループ及び付着α－ヘリックスにより対で接続される八つの逆平行β鎖（安定なβ－バレル足場）により形成されるバレル構造により特徴付けられることができる。特定の態様では、特異的結合を達成するための立体構造的な逸脱が、超可変ループ領域中に作製される。例えば、参照により組み入れられる、Ｓｋｅｒｒａ，ＦＥＢＳ Ｊ．２７５：２６７７－８３，２００８を参照のこと。

【0075】

一部の実施形態では、本明細書中に記載される抗体又は抗原結合断片は、設計されたアンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）の形態である。ＤＡＲＰｉｎｓは、創薬及び薬物開発における標的結合について、抗体を上回る利点を提供することができる非免疫グロブリンタンパク質のクラスを含む。他の使用の間で、ＤＡＲＰｉｎｓは、小サイズ及び高い安定性を含む、それらの好ましい分子特性のため、毒素又は他の治療ペイロードのインビボ撮像又は送達のために理想的に適している。細菌における低コストの産生及び多くの標的特異的ＤＡＲＰｉｎの迅速な生成によって、ＤＡＲＰｉｎアプローチは創薬のために有用となる。加えて、ＤＡＲＰｉｎｓは、多特異的フォーマットにおいて簡単に生成することができ、エフェクターＤＡＲＰｉｎを特定の器官に標的化する、又はいくつかのＤＡＲＰｉｎで構成される一つの分子を用いて複数の受容体を標的化する潜在能を提供している。例えば、参照により組み入れられる、Ｓｔｕｍｐｐ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｄｅｖｅｌ．１０：１５３－１５９，２００７；米国特許出願第２００９／００８２２７４号；及びＰＣＴ／ＥＰ２００１／１０４５４号を参照のこと。

【0076】

また、含まれるのは、重鎖二量体、例えばラクダ類及びサメからの抗体などである。ラクダ類抗体及びサメ抗体は、Ｖ様及びＣ様ドメインの二つの鎖（いずれも軽鎖を有さない）のホモ二量体対を含む。ラクダ類における重鎖二量体ＩｇＧのＶＨ領域は、軽鎖と疎水性相互作用を作らなくてもよいため、軽鎖に通常接触する重鎖中の領域は、ラクダ類において親水性アミノ酸残基に変化する。重鎖二量体ＩｇＧのＶＨドメインは、ＶＨＨドメインと呼ばれる。サメＩｇ－ＮＡＲは、一つの可変ドメイン（Ｖ－ＮＡＲドメインと称される）及び五つのＣ様定常ドメイン（Ｃ－ＮＡＲドメイン）のホモ二量体を含む。

【0077】

ラクダ類では、抗体レパートリーの多様性は、ＶＨ又はＶＨＨ領域中の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３により決定される。ラクダＶＨＨ領域中のＣＤＲ３は、平均１６アミノ酸のその比較的長い長さにより特徴付けられる（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（９）：１１２９）。これは、多くの他の種の抗体のＣＤＲ３領域とは対照的である。例えば、マウスＶＨのＣＤＲ３は、平均９のアミノ酸を有する。ラクダ由来抗体可変領域のライブラリーは、ラクダ類の可変領域のインビボ多様性を維持し、例えば、米国特許出願第２００５００３７４２１号、２００５年２月１７日公開、において開示される方法により作製することができる。

【0078】

特定の実施形態では、抗体又はそれらの抗原結合断片はヒト化される。これらの実施形態は、一般的に組換え技術を使用して調製され、非ヒト種からの免疫グロブリンから由来する抗原結合部位、及びヒト免疫グロブリンの構造及び／又は配列に基づく分子の残りの免疫グロブリン構造を有するキメラ分子を指す。抗原結合部位は、定常ドメイン上に融合された完全な可変ドメイン、又は可変ドメイン中の適したフレームワーク領域上に移植されたＣＤＲのみのいずれかを含み得る。エピトープ結合部位は、野生型であってもよく、あるいは一つ又は複数のアミノ酸置換により修飾されてもよい。これによって、ヒト個体における免疫原としての定常領域が排除されるが、しかし、外来性可変領域に対する免疫応答の可能性は、依然として残っている（ＬｏＢｕｇｌｉｏ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８６：４２２０－４２２４，１９８９；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ．８６：１００２９－１００３３，１９８８；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．３３２：３２３－３２７，１９８８）。抗体のヒト化のための例証的な方法は、米国特許第７，４６２，６９７号において記載される方法を含む。

【0079】

別のアプローチは、ヒト由来定常領域を提供することだけでなく、しかし、可変領域も改変して、ヒト形態に可能な限り密接にそれらを再形成することに焦点を当てる。重鎖及び軽鎖の両方の可変領域が、問題のエピトープへの応答において変動し、結合能力を決定する、所与の種において比較的保存され、ＣＤＲについての足場を推定的に提供する四つのフレームワーク領域（ＦＲ）により隣接される、三つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むことが公知である。非ヒト抗体が特定のエピトープに関して調製される場合、可変領域は、改変されるヒト抗体中に存在するＦＲ上に、非ヒト抗体から由来するＣＤＲを移植することにより、「再形成」又は「ヒト化」することができる。様々な抗体へのこのアプローチの適用は、Ｓａｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：８５１－８５６，１９９３；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６，１９８８；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．４：７７３－３７８３，１９９１；Ｍａｅｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ２：１２４－１３４，１９９１；Ｇｏｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ．８８：４１８１－４１８５，１９９１；Ｔｅｍｐｅｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６－２７１，１９９１；Ｃｏ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ．８８：２８６９－２８７３，１９９１；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ．８９：４２８５－４２８９，１９９２；及びＣｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９－１１５４，１９９２により報告されている。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、全てのＣＤＲ配列（例えば、マウス抗体からの全ての六つのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）を保っている。他の実施形態では、ヒト化抗体は、本来の抗体に関して改変されている一つ又は複数のＣＤＲ（一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、六つ）を有し、それらはまた、本来の抗体からの一つ又は複数のＣＤＲ「から由来する」一つ又は複数のＣＤＲと呼ばれる。

【0080】

特定の実施形態では、抗体は「キメラ」抗体である。これに関して、キメラ抗体は、異なる抗体の異種Ｆｃ部分に動作可能に連結された、又はそうでなければ融合された抗体の抗原結合断片で構成される。特定の実施形態では、Ｆｃドメイン又は異種Ｆｃドメインはヒト起源である。特定の実施形態では、Ｆｃドメイン又は異種Ｆｃドメインはマウス起源である。他の実施形態では、異種Ｆｃドメインは、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１及びＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む）、及びＩｇＭを含む、親抗体とは異なるＩｇクラスからであり得る。さらなる実施形態では、異種Ｆｃドメインは、異なるＩｇクラスの一つ又は複数からのＣＨ２及びＣＨ３ドメインで構成され得る。ヒト化抗体に関して上に記述するように、キメラ抗体の抗原結合断片は、本明細書中に記載される抗体のＣＤＲの一つ又は複数のみを含み得る（例、本明細書中に記載される抗体の１、２、３、４、５、又は６のＣＤＲ）、又は可変ドメイン全体を含み得る（ＶＬ、ＶＨ、又は両方）。

【0081】

本明細書中で使用される場合、疾患、又は有害反応を発生する「リスクのある」対象は、検出可能な疾患、又は疾患の症状を有し得る、又は有さないであろう、及び本明細書中に記載される治療方法の前に検出可能な疾患、又は疾患の症状を呈し得る、又は呈さないであろう。「リスクのある」は、対象が一つ又は複数のリスク因子を有することを意味し、それらは、本明細書中に記載される、当技術分野において公知の、疾患の発生と相関する測定可能なパラメータである。これらのリスク因子の一つ又は複数を有する対象は、これらのリスク因子の一つ又は複数を伴わない対象よりも高い、疾患、又は有害反応を発生する確率を有する。

【0082】

「生体適合性」は、細胞又は対象の生物学的機能に一般的に損傷を与えるものではなく、アレルゲン性及び疾患状態を含む、許容可能ではない毒性の任意の程度をもたらさない材料又は化合物を指す。

【0083】

用語「結合」は、例えば、相互作用、例えば塩架橋及び水架橋などを含む、共有結合、静電、疎水性、ならびにイオン及び／又は水素結合の相互作用に起因する、二つの分子間の直接的な会合を指す。

【0084】

用語「化学療法耐性」は、癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、及び／又はキナーゼ阻害剤の少なくとも一つに対する耐性を含む、化学療法への曝露後の経時的な癌細胞集団の治療感受性における変化を指す。最終的に、化学療法耐性は、癌の再発及び／又は転移に導き、癌患者についての臨床転帰の改善に挑戦する。それは、長期的な成功裏の癌治療への依然として主な障害である。例えば、早期乳癌と診断された女性の約３０パーセントが、究極的に耐性を発生し、最終的に転移性乳癌に進行する。化学療法耐性の分子機構は、トランスポーターポンプの誘導、癌遺伝子、腫瘍抑制遺伝子、ミトコンドリア改変、ＤＮＡ修復、オートファジー、上皮間葉移行（ＥＭＴ）、癌幹細胞性、及びエクソソーム産生を含む。これらのプロセスは、単独で、又は互いの組み合わせにおいて、異なる機構を介して動作し得るが、しかし、究極的には、特定の標的化された化学療法剤への応答において細胞死を防止するように調整される。例えば、そのようなプロセスは、代替的な成長促進シグナルを提供し、及び／又はアポトーシス経路を排除する、もしくはそうでなければ低下させる。したがって、化学療法耐性を低下させる薬剤は、化学療法耐性癌の治療又は低下において有用性を見出すことができ得る。

【0085】

「コード配列」により、遺伝子のポリペプチド産物についてのコードに寄与する任意の核酸配列を意味する。対照的に、用語「非コード配列」は、遺伝子のポリペプチド産物についてのコードに直接的に寄与しない任意の核酸配列を指す。

【0086】

本開示全体を通して、文脈が他に要求しない限り、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、記載された工程又は要素あるいは工程又は要素の群の包含を意味するが、しかし、任意の他の工程又は要素あるいは工程又は要素の群の除外を意味しないと理解されるであろう。

【0087】

「からなる（ｃｏｎｓｉｓｉｎｇ ｏｆ）」は、語句「からなる」に従うものは何でも含み、それらに限定されることを意味する。このように、語句「からなる」は、列挙された要素が要求される又は必須であり、他の要素が存在しないであろうことを示す。「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」により、語句の後に列挙される任意の要素を含み、列挙された要素について本開示において特定される活性又は作用に干渉又は寄与しない他の要素に限定されることを意味する。このように、語句「から本質的になる」は、列挙された要素が要求される又は必須であること、しかし、他の要素が場合によりあり、それらが、列挙された要素の活性又は作用に実質的に影響するか否かに依存して、存在してもよく、又は存在しなくてもよい。

【0088】

抗体の文脈における用語「エフェクター機能」、又は「ＡＤＣＣエフェクター機能」は、例えば、古典的補体経路の活性化を含め、又はＦｃ受容体の会合を通じて、免疫系の他のアームと会合するその抗体の能力を指す。補体依存的経路は、Ｃ１ｑと、クラスター化抗体Ｆｃドメインを伴うＣ１複合体との相互作用により主に駆動される。抗体依存的細胞傷害（ＡＤＣＣ）は、それ自体が標的細胞に結合されるＩｇＧのＦｃ領域に結合するエフェクター細胞（ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、単球、及び好酸球）の表面上でのＦｃ受容体（ＦｃＲ）の相互作用により主に駆動される。Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）は、抗体媒介性（液性）免疫応答を細胞エフェクター機能に接続する、重要な免疫調節受容体である。免疫グロブリンの全てのクラスについての受容体が特定されており、ＦｃγＲ（ＩｇＧ）、ＦｃεＲＩ（ＩｇＥ）、ＦｃαＲＩ（ＩｇＡ）、ＦｃμＲ（ＩｇＭ）、及びＦｃδＲ（ＩｇＤ）を含む。白血球上に見出されるヒトＩｇＧについての受容体の少なくとも三つのクラスがある：ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）、ＣＤ３２（ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ及びＦｃγＲＩＩｃ）ならびにＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂ）。ＦｃγＲＩは、高親和性受容体（ナノモル範囲ＫＤ）として分類される一方でＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩは、低～中間親和性（マイクロモル範囲ＫＤ）である。Ｆｃ結合時に、シグナル伝達経路が誘発され、それは、様々な物質、例えば溶解酵素、パーフォリン、グランザイム、及び腫瘍壊死因子などの分泌をもたらし、それらは、標的細胞の破壊を媒介する。ヒトＩｇＧサブタイプについて様々なＡＤＣＣエフェクター機能のレベル。これは、アロタイプ及び特異的ＦｃｖＲに依存的であるが、単純に言えば、ＡＤＣＣエフェクター機能は、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３については「高」であり、ならびにＩｇＧ２及びＩｇＧ４については「低」である。

【0089】

用語「エンドトキシンを含まない」又は「エンドトキシンを実質的に含まない」は、一般的に、最も微量（例、対象に臨床的に有害な生理学的効果を有さない量）のエンドトキシン、及び好ましくは検出不可能な量のエンドトキシンを含む組成物、溶媒、及び／又は容器に関する。エンドトキシンは、特定の微生物、例えば細菌、典型的にはグラム陰性細菌などに関連付けられる毒素であるが、エンドトキシンは、グラム陽性細菌、例えばリステリア・モノサイトゲネスなどにおいて見出されうる。最も蔓延しているエンドトキシンは、様々なグラム陰性細菌の外膜中に見出されるリポ多糖類（ＬＰＳ）又はリポオリゴ糖類（ＬＯＳ）であり、それらは、疾患を起こすこれらの細菌の能力における中心的な病原性特色を表す。ヒトにおける少量のエンドトキシンは、他の有害な生理学的効果の中でも、発熱、血圧の低下、ならびに炎症及び凝固の活性化を産生し得る。

【0090】

従って、医薬品産生では、しばしば、薬物産物及び／又は薬物容器から大半の又は全ての微量のエンドトキシンを除去することが望ましい。なぜなら、少量であってもヒトにおいて有害効果を起こし得るためである。脱水素オーブンがこの目的のために使用され得る。なぜなら、３００℃を超える温度が、典型的には、大半のエンドトキシンを分解するために要求されるためである。例えば、一次包装材料、例えばシリンジ又はバイアルなどに基づいて、２５０℃のガラス温度及び３０分の保持時間の組み合わせは、しばしば、エンドトキシンレベルにおける３対数低下を達成するために十分である。エンドトキシンを除去する他の方法が企図され、例えば、本明細書中に記載され、当技術分野において公知のクロマトグラフィー及び濾過方法を含む。

【0091】

エンドトキシンは、当技術分野において公知のルーチン的な技術を使用して検出することができる。例えば、リムルス・アメボサイト溶解アッセイは、カブトガニからの血液を利用し、エンドトキシンの存在を検出するための非常に高感度のアッセイである。このテストでは、非常に低いレベルのＬＰＳが、この反応を増幅する強力な酵素カスケードに起因して、リムルス溶解物の検出可能な凝固を起こすことができる。エンドトキシンはまた、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により定量化することができる。実質的にエンドトキシンを含まないように、エンドトキシンレベルは、約０．００１、０．００５、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０８、０．０９、０．１、０．５、１．０、１．５、２、２．５、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ＥＵ／ｍｇ未満の活性化合物であり得る。典型的には、１ｎｇのリポ多糖類（ＬＰＳ）は、約１～１０ＥＵに対応する。

【0092】

用語「エピトープ」は、免疫グロブリン又はＴ細胞受容体への特異的な結合が可能な任意の決定基、好ましくはポリペプチド決定基を含む。エピトープは、抗体により結合される抗原の領域を含む。特定の実施形態では、エピトープ決定基は、分子、例えばアミノ酸、糖側鎖、ホスホリル又はスルホニルなどの化学的に活性な表面基を含み、特定の実施形態では、特定の三次元構造特徴、及び／又は特定の電荷特徴を有し得る。エピトープは、抗原の一次構造、例えば、ＮＲＰ２ポリペプチドに関して連続的又は非連続的であり得る。特定の実施形態では、エピトープは、本明細書中に記載される参照配列（例、表Ｎ１、表Ｎ２を参照のこと）又は標的分子の約、少なくとも約、又は約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０以下の連続アミノ酸（即ち、直鎖状エピトープ）又は非連続アミノ酸（即ち、立体構造エピトープ）を含む、それらからなる、又はそれらから本質的になる。

【0093】

「エピトープ」は、結合タンパク質の可変領域結合ポケットと相互作用する結合相互作用を形成することが可能な抗原又は他の高分子のその部分を含む。そのような結合相互作用は、ＣＤＲの一つ又は複数のアミノ酸残基との分子間接触として現れ得る。抗原結合は、ＣＤＲ３又はＣＤＲ３対を含むことができる。エピトープは、直鎖状ペプチド配列（即ち、「連続的」）であることができる、又は非連続アミノ酸配列（即ち、「立体構造的」又は非連続的）で構成されることができる。結合タンパク質は、一つ又は複数のアミノ酸配列を認識することができ；従って、エピトープは、１を上回る異なるアミノ酸配列を定義することができる。結合タンパク質により認識されるエピトープは、当業者に周知のペプチドマッピング及び配列解析技術により決定することができる。「潜在性エピトープ」又は「潜在性結合部位」は、未修飾ポリペプチド内の認識から曝露されない、又は実質的に保護されないが、しかし、変性又はタンパク質分解ポリペプチドの結合タンパク質により認識されることが可能であるタンパク質配列のエピトープ又は結合部位である。未修飾ポリペプチド構造において曝露されない、又は部分的にのみ曝露されるアミノ酸配列は、潜在的な潜在性エピトープである。エピトープが曝露されない場合、又は部分的にのみ曝露される場合、それは、ポリペプチドの内部内に埋め込まれる可能性が高い。候補潜在性エピトープは、例えば、未修飾ポリペプチドの三次元構造を調べることにより同定することができる。

【0094】

用語「最大有効濃度の半分」又は「ＥＣ_５０」は、一部の指定された曝露時間後にベースラインと最大値の間の中間での応答を誘導する、本明細書中に記載される薬剤（例、抗体）の濃度を指し；段階用量応答曲線のＥＣ_５０は、従って、その最大効果の５０％が観察される化合物の濃度を表す。ＥＣ５０はまた、インビボで最大効果の５０％を得るために要求される血漿濃度を表す。同様に、「ＥＣ_９０」は、その最大効果の９０％が観察される薬剤又は組成物の濃度を指す。「ＥＣ_９０」は、「ＥＣ５０」及びヒルスロープから計算することができる、又は当技術分野におけるルーチン的な知識を使用して、データから直接決定することができる。一部の実施形態では、薬剤（例、抗体）のＥＣ５０は、約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００又は５００ｎＭ未満である。一部の実施形態では、薬剤は、約１ｎＭ又はそれ以下のＥＣ_５０値を有する。

【0095】

「免疫応答」は、細胞性及び上腕骨、先天的及び適応免疫系からの応答を含む、免疫系から由来する任意の免疫学的応答を意味する。例示的な細胞性免疫細胞は、例えば、リンパ球、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、好酸球、樹状細胞、マスト細胞、単球、及びそれらの全てのサブセットを含む。細胞応答は、例えば、エフェクター機能、サイトカイン放出、食作用、エフェロサイトーシス、転座、輸送、増殖、分化、活性化、抑制、細胞間相互作用、アポトーシスなどを含む。上腕骨応答は、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、応答及びそれらの対応するエフェクター機能を含む。

【0096】

薬剤、例えば抗体などの「半減期」は、薬剤が、生物の血清もしくは組織中への投与時でのそのような活性と比べて、又は任意の他の定義された時間点と比較べて、その薬理学的、生理学的、もしくは他の活性の半分を失う時間を指すことができる。「半減期」はまた、薬剤の量又は濃度を、生物の血清もしくは組織中への投与時でのそのような量又は濃度と比べて、又は任意の他の定義された時間点と比べて、生物の血清もしくは組織中に投与される開始量の半分だけ低下させる時間を指すことができる。半減期は、血清及び／又は任意の一つ又は複数の選択された組織中で測定することができる。

【0097】

用語「調節すること」及び「改変すること」は、典型的には対照と比べて統計的に有意な又は生理学的に有意な量又は程度において「増加すること」、「増強すること」又は「刺激すること」、ならびに「減少すること」又は「低下すること」を含む。「増加した」、「刺激した」、又は「増強した」量は、典型的には、「統計的に有意な」量であり、組成物なし（例、薬剤の非存在）又は対照組成物により産生される量の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００倍又はそれ以上（例、５００、１０００倍）（全ての整数及びその間の範囲、例、１．５、１．６、１．７、１．８などを含む）である増加を含み得る。「減少した」又は「低下した」量は、典型的には、「統計的に有意な」量であり、組成物なし（例、薬剤の非存在）又は対照組成物により産生される量における１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％減少（全ての整数及びそれらの間の範囲を含む）を含み得る。比較及び「統計的に有意な」量の例が、本明細書中に記載されている。

【0098】

用語「遊走細胞」は、刺激への応答において、一つの場所から別への移動が可能である細胞を指す。例示的な遊走細胞は、免疫細胞、例えば単球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞（未熟又は成熟）、樹状細胞のサブセット、骨髄細胞、形質細胞様（また、リンパ球と呼ばれる）、及びランゲルハンス細胞を含む、マクロファージ、例えば組織球など、組織常在マクロファージ、例えばクッパー細胞、ＣＮＳ中のミクログリア細胞、肺胞マクロファージ、及び腹膜マクロファージなど、マクロファージサブタイプ、例えばＭ０、Ｍ１、Ｍｏｘ、Ｍ２ａ、Ｍ２ｂ、及びＭ２ｃマクロファージなど、好中球、好酸球、マスト細胞、好塩基球、Ｂ細胞、形質Ｂ細胞、記憶Ｂ細胞、Ｂ－１細胞、Ｂ－２細胞を含む、ＣＤ４５ＲＯ（ナイーブＴ）細胞、ＣＤ４５ＲＡ（メモリーＴ）細胞、ＣＤ４ヘルパーＴ細胞Ｔｈ１、Ｔｈ２、及びＴｒ１／Ｔｈ３細胞を含む、ＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、及び胸腺細胞を含む。遊走性細胞のさらなる例は、線維芽細胞、線維細胞、腫瘍細胞、及び幹細胞を含む。用語「細胞遊走」は、遊走細胞の移動を指し、用語「細胞遊走の調節」は、任意のそのような遊走細胞の移動の調節を指す。

【0099】

用語「ポリペプチド」、「タンパク質」、及び「ペプチド」は、互換的に使用され、任意の特定の長さに限定されないアミノ酸のポリマーを意味する。用語「酵素」は、ポリペプチド又はタンパク質触媒を含む。この用語は、修飾、例えばミリストイル化、硫酸化、グリコシル化、リン酸化、及びシグナル配列の付加又は欠失などを含む。用語「ポリペプチド」又は「タンパク質」は、一つ又は複数のアミノ酸の鎖を意味し、それにおいて、各鎖はペプチド結合により共有結合的に連結されたアミノ酸を含み、ならびに、それにおいて、当該ポリペプチド又はタンパク質は、ペプチド結合により非共有結合的に及び／又は共有結合的に一緒に連結された複数の鎖を含むことができ、天然タンパク質、すなわち、天然の及び具体的には非組換え細胞、又は遺伝子操作細胞もしくは組換え細胞により産生されるタンパク質の配列を有し、天然タンパク質のアミノ酸配列を有する分子、あるいは天然配列の一つ又は複数のアミノ酸からの欠失、それへの付加、及び／又はその置換を有する分子を含む。特定の実施形態では、ポリペプチドは、一つ又は複数の組換えＤＮＡ分子を含む組換え細胞により産生される「組換え」ポリペプチドであって、それは、典型的には、異種ポリヌクレオチド配列、又はそうでなければ細胞中に見出されないであろうポリヌクレオチド配列の組み合わせで作製される。

【0100】

用語「ポリヌクレオチド」及び「核酸」は、ｍＲＮＡ、ＲＮＡ、ｃＲＮＡ、ｃＤＮＡ、及びＤＮＡを含む。この用語は、典型的には、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれか、又はいずれかの種類のヌクレオチドの修飾形態の少なくとも１０塩基長のヌクレオチドのポリマー形態を指す。この用語は、一本鎖及び二本鎖形態のＤＮＡを含む。用語「単離ＤＮＡ」及び「単離ポリヌクレオチド」及び「単離核酸」は、特定の種の全ゲノムＤＮＡを含まずに単離された分子を指す。従って、ポリペプチドをコードする単離ＤＮＡセグメントは、ＤＮＡセグメントが得られる種の全ゲノムＤＮＡから別に実質的に単離された、又はそれを含まずに精製された、一つ又は複数のコード配列を含むＤＮＡセグメントを指す。また、含まれるのは、ポリペプチドをコードしない非コードポリヌクレオチド（例、プライマー、プローブ、オリゴヌクレオチド）である。また、含まれるのは、例えば、発現ベクター、ウイルスベクター、プラスミド、コスミド、ファージミド、ファージ、ウイルス、及び同様のものを含む、組換えベクターである。

【0101】

追加のコード配列又は非コード配列は、本明細書中に記載されるポリヌクレオチド内に存在してもよいが、しかし、そうである必要はなく、ポリヌクレオチドは、他の分子及び／又は支持材料に連結されてもよいが、しかし、そうである必要はない。それ故に、ポリヌクレオチド又は発現可能なポリヌクレオチドは、コード配列自体の長さにかかわらず、他の配列、例えば、発現制御配列と組み合わされてもよい。

【0102】

「発現制御配列」は、核酸、又は対応するアミノ酸の調節配列、例えばプロモーター、リーダー、エンハンサー、イントロン、ＲＮＡ又はＤＮＡ結合タンパク質についての認識モチーフ、ポリアデニル化シグナル、ターミネーター、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、分泌シグナル、細胞内局在シグナル、及び同様のものを含み、それらは、宿主細胞中のコード配列の転写もしくは翻訳、細胞内、又は細胞の位置に影響を及ぼす能力を有する。例示的な発現制御配列は、Ｇｏｅｄｄｅｌ；Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）において記載されている。

【0103】

「プロモーター」は、細胞中でＲＮＡポリメラーゼに結合し、下流（３’方向）コード配列の転写を開始することが可能なＤＮＡ調節領域である。本明細書中で使用される場合、プロモーター配列は、転写開始部位によりその３’末端で境界付けられ、上流（５’方向）に伸長し、バックグラウンドを超えて検出可能なレベルで転写を開始するのに必要な最小数の塩基又はエレメントを含む。転写開始部位（ヌクレアーゼＳ１を用いたマッピングにより便利に定義される）は、プロモーター配列、ならびにＲＮＡポリメラーゼの結合のために関与するタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）内に見出すことができる。真核プロモーターは、しばしば、しかし、常にではないが、「ＴＡＴＡ」ボックス及び「ＣＡＴ」ボックスを含むことができる。原核生物プロモーターは、－１０及び－３５コンセンサス配列に加えて、シャイン－ダルガノ配列を含む。

【0104】

様々な異なる供給源からの構成的、誘導性、及び抑制性プロモーターを含む、多数のプロモーターが、当技術分野において周知である。代表的な供給源は、例えば、ウイルス、哺乳動物、昆虫、植物、酵母、及び細菌細胞型を含み）、これらの供給源からの適切なプロモーターは、オンラインで、又は、例えば、保管所、例えばＡＴＣＣなど、ならびに他の商業的又は個々の供給源から公的に入手可能な配列に基づいて、容易に利用可能である、又は合成的に作製することができる。プロモーターは、一方向性（即ち、一つの方向において転写を開始する）又は双方向性（即ち、３’又は５’方向のいずれかにおいて転写を開始する）であり得る。プロモーターの非限定的な例は、例えば、Ｔ７細菌発現系、ｐＢＡＤ（ａｒａＡ）細菌発現系、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーターを含む。誘導性プロモーターは、Ｔｅｔ系（米国特許第５，４６４，７５８号及び第５，８１４，６１８号）、エクジソン誘導系（Ｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９６）９３（８）：３３４６－３３５１；Ｔ－ＲＥｘＴＭ系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールスバッド）、ＬａｃＳｗｉｔｃｈ（登録商標）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，（カリフォルニア州サンディエゴ）、及びＣｒｅ－ＥＲＴタモキシフェン誘導性リコンビナーゼ系（Ｉｎｄｒａ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．（１９９９）２７（２２）：４３２４－４３２７；Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．（２０００）２８（２３）：ｅ９９；米国特許第７，１１２，７１５号；及びＫｒａｍｅｒ＆Ｆｕｓｓｅｎｅｇｇｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２００５）３０８：１２３－１４４）、又は所望の細胞における発現のために適切な、当技術分野において公知の任意のプロモーターを含む。

【0105】

「発現可能なポリヌクレオチド」は、少なくとも一つのコード配列、及び場合により少なくとも一つの発現制御配列、例えば、転写及び／又は翻訳調節エレメントを含み、細胞、例えば、対象中の細胞中への導入時に、コードされたポリペプチドを発現することができるｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、又は他のポリヌクレオチドを含む。

【0106】

発現可能なポリヌクレオチドを送達するために利用することができる様々なウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、及びレトロウイルスベクターを含む。一部の例では、レトロウイルスベクターは、マウス又は鳥類レトロウイルスの誘導体である、又はレンチウイルスベクターである。単一の外来遺伝子を挿入することができるレトロウイルスベクターの例は、以下を含むが、しかし、それらに限定されない：モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＨＩＶ、及びラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）。多数の追加のレトロウイルスベクターは、複数の遺伝子を組み入れることができる。これらのベクターの全てが、選択マーカーのための遺伝子を移入する又は組み込むことができ、形質導入された細胞を同定及び生成することができる。目的のポリペプチド配列をウイルスベクター中に、特定の標的細胞上の受容体についてのリガンドをコードする別の遺伝子と共に挿入することにより、例えば、ベクターを標的特異的に作ってもよい。レトロウイルスベクターは、例えば、タンパク質をコードするポリヌクレオチドを挿入することにより標的特異的にすることができる。例示的な標的化は、抗体を使用してレトロウイルスベクターを標的化することにより達成され得る。当業者は、過度の実験を伴うことなく、レトロウイルスゲノム中に挿入されて、レトロウイルスベクターの標的特異的送達を可能にすることができる特定のポリヌクレオチド配列を知っている、又は容易に確認することができるであろう。

【0107】

特定の実施形態では、発現可能なポリヌクレオチドは、修飾ＲＮＡ又は修飾ｍＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、非天然ＲＮＡ類似体である。特定の実施形態では、修飾ＲＮＡ又はｍＲＮＡポリペプチドは、一つ又は複数の修飾又は非天然塩基、例えば、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、及び／又はウラシル（Ｕ）以外のヌクレオチド塩基を含む。一部の実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、一つ又は複数の修飾又は非天然ヌクレオチド間連結を含む。コードされる治療用ポリペプチドを送達するための発現可能なＲＮＡポリヌクレオチドは、例えば、Ｋｏｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２９：１５４－７，２０１１；ならびに米国特許出願第２０１５／０１１１２４８号；第２０１４／０２４３３９９号；第２０１４／０１４７４５４号；及び第２０１３／０２４５１０４号において記載されており、それらは、参照によりそれらの全体において組み入れられる。

【0108】

本明細書中で言及される用語「単離」ポリペプチド又はタンパク質は、対象タンパク質が、（１）典型的には自然界において見出されるであろう少なくとも一部の他のタンパク質を含まず、（２）同じ供給源からの、例えば、同じ種からの他のタンパク質を本質的に含まず、（３）異なる種からの細胞により発現され、（４）ポリヌクレオチド、脂質、糖類、又は自然界において関連付けられる他の材料の少なくとも約５０パーセントから分離されており、（５）「単離タンパク質」が自然界において関連付けられるタンパク質の一部と（共有結合的又は非共有結合的な相互作用により）会合しておらず、（６）自然界において関連付けられないポリペプチドと動作可能に（共有結合的又は非共有結合的な相互作用により）会合しており、あるいは（７）自然界において生じないことを意味する。そのような単離タンパク質は、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、又は他のＲＮＡによりコードされることができ、あるいは合成起源、又はそれらの任意の組み合わせであり得る。特定の実施形態では、単離タンパク質は、その使用（治療、診断、予防、研究、又は他の方法）に干渉するであろうタンパク質もしくはポリペプチド、又はその天然環境において見出される他の混入物を実質的に含まない。

【0109】

特定の実施形態では、組成物中の任意の所与の薬剤（例、ポリペプチド、例えば抗体など）の「純度」が定義され得る。例えば、特定の組成物は、例えば、決して限定されないが、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、化合物を分離、同定、及び定量化するために生化学及び分析化学において頻繁に使用される周知の形態のカラムクロマトグラフィーにより測定される、全ての小数及びその間の範囲を含む、タンパク質基準もしくは重量基準で少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％純粋である薬剤、例えばポリペプチド薬剤などを含み得る。

【0110】

「脂質ナノ粒子」又は「固体脂質ナノ粒子」は、約１０～約１０００ナノメートルの間の平均直径を伴い、親油性分子を可溶化することができる固体脂質コアマトリックスを含む、一つ又は複数の球状ナノ粒子を指す。脂質コアは、界面活性剤（例、乳化剤）により安定化され、トリグリセリド（例、トリステアリン）、ジグリセリド（例、バヘン酸グリセロール）、モノグリセリド（例、モノステアリン酸グリセロール）、脂肪酸（例、ステアリン酸）、ステロイド（例、コレステロール）、及びワックス（例、パルミチン酸セチル）の一つ又は複数を含むことができ、これらの組み合わせを含む。脂質ナノ粒子は、例えば、Ｐｅｔｒｉｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：８４７－５５，２０１４；ならびに米国特許第６，２１７，９１２号；第６，８８１，４２１号；第７，４０２，５７３号；第７，４０４，９６９号；第７，５５０，４４１号；第７，７２７，９６９号；第８，００３，６２１号；第８，６９１，７５０号；第８，８７１，５０９号；第９，０１７，７２６号；第９，１７３，８５３号；第９，２２０，７７９号；第９，２２７，９１７号；及び第９，２７８，１３０号において記載されており、それらは、それらの全体において参照により組み入れられる。本明細書中に記載される特定の組成物は、一つ又は複数の脂質ナノ粒子を用いて製剤化される。

【0111】

用語又は「ニューロピリン２関連疾患」又は「ＮＲＰ２関連疾患」は、ＮＲＰ２活性、発現、及び／又は空間分布が、その疾患又は状態の病態生理学において役割を果たす疾患及び状態を指す。一部の例では、ＮＲＰ２関連疾患は、ＮＲＰ２と少なくとも一つのＮＲＰ２リガンドとの相互作用を改変させることにより本開示の抗ＮＲＰ２抗体により調節され、それにより、ＮＲＰ２活性、シグナル伝達、発現、及び／又は空間分布に影響を及ぼす。特定の実施形態では、ＮＲＰ２はＮＲＰ２ａバリアント１又はバリアント２であり、ＮＲＰ２リガンドはＣＣＬ２１及び／又はＣＣＲ７である。このように、特定の実施形態では、ＮＲＰ２関連疾患又は状態は、「ＮＲＰ２ａ関連疾患又は状態」である。例示的なＮＲＰ２関連疾患及び状態は、限定されないが、癌細胞成長、癌開始、癌移動、癌細胞接着、浸潤、化学療法耐性、及び転移を含む、癌ならびに癌に関連付けられる疾患又は病理を含む。また、含まれるのは、炎症及び自己免疫に関連付けられる疾患、ならびに関連する炎症性疾患であって、不適切な免疫細胞の活性化又は遊走に関連付けられる疾患、例えば移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）などを含む。特定の実施形態は、リンパ管の発生、リンパ管新生、及びリンパ管損傷に関連付けられる疾患、例えば、浮腫、リンパ浮腫、続発性リンパ浮腫、不適切な脂肪吸収及び蓄積、過剰な脂肪蓄積、ならびに血管透過性を含み；感染に関連付けられる疾患、潜伏感染を含み；アレルギー性障害／疾患、アレルギー応答に関連付けられる疾患、例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好中球性喘息、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連全身性血管炎、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、インフラマソーム関連疾患、及び皮膚関連好中球媒介性疾患、例えば壊疽性膿皮症など；肉芽腫性炎症性疾患に関連付けられる疾患、サルコイドーシス及び肉芽腫を含み；線維症に関連付けられる疾患、線維性疾患、線維症、内皮間葉移行（ＥＭＴ）、及び創傷治癒を含み；不適切な平滑筋収縮性、平滑筋の代償及び代償不全、ならびに不適切な血管平滑筋細胞遊走及び接着に関連付けられる疾患；不適切なオートファジー、食作用、及びエフェロサイトーシスに関連付けられる疾患；神経疾患、末梢神経系リモデリング、及び疼痛知覚に関連付けられる疾患；骨発生及び骨リモデリングに関連付けられる疾患を含む。典型的には、用語「不適切」は、病理もしくは疾患状態と関連する、又はそれを起こす活性又は特徴を指す。

【0112】

用語「参照配列」は、一般的に、核酸コード配列、又はアミノ酸配列を指し、それに対して、別の配列が比較されている。本明細書中に記載される全てのポリペプチド及びポリヌクレオチド配列は、参照配列として含まれ、名称により記載されるもの、ならびに表及び配列表中に記載されるものを含む。

【0113】

特定の実施形態は、本明細書中に記載されるポリペプチド（例、抗体）の生物学的に活性な「バリアント」及び「断片」、ならびに同をコードするポリヌクレオチドを含む。「バリアント」は、参照ポリペプチド又はポリヌクレオチドと比べて一つ又は複数の置換、付加、欠失、及び／又は挿入を含む（例、表及び配列表を参照のこと）。バリアントポリペプチド又はポリヌクレオチドは、本明細書中に記載されるように、参照配列と少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上の配列同一性又は類似性又は相同性を伴うアミノ酸又はヌクレオチド配列を含み、その参照配列の活性を実質的に保持する。また、含まれるのは、参照配列からなる、又はそれとは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０もしくはそれ以上のアミノ酸もしくはヌクレオチドの付加、欠失、挿入、又は置換により異なり、その参照配列の活性を実質的に保持する配列である。特定の実施形態では、付加又は欠失は、Ｃ末端及び／又はＮ末端の付加及び／又は欠失を含む。

【0114】

用語「配列同一性」は、又は、例えば、「と５０％同一の配列」を含み、本明細書中で使用される場合、配列が、比較のウィンドウにわたってヌクレオチドごとに又はアミノ酸ごとに同一である程度を指す。このように、「配列同一性のパーセンテージ」は、二つの最適に整列された配列を比較のウィンドウにわたり比較し、同一の核酸塩基（例、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）又は同一のアミノ酸残基（例、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｙｓ、及びＭｅｔ）が両方の配列中に生じて、一致する位置の数をもたらし、一致した位置の数を比較のウィンドウ中の位置の総数（即ち、ウィンドウサイズ）により割り、その結果に１００を掛けて、配列同一性のパーセンテージをもたらすことにより計算され得る。比較ウィンドウを整列させるための配列の最適な整列が、アルゴリズムのコンピューター化された実装（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ７．０，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ、米国ウィスコンシン州マディソンにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）により、又は検査、及び選択された様々な方法のいずれかにより生成される最良のアライメント（即ち、比較ウィンドウにわたる最も高い相同性パーセンテージをもたらす）により行われ得る。参照がまた、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９，１９９７により開示されるプログラムのＢＬＡＳＴファミリーに作られ得る。

【0115】

用語「溶解性」は、液体溶媒中に溶解し、均質な溶液を形成するための、本明細書中に提供される薬剤（例、抗体）の特性を指す。溶解性は、典型的には、溶媒の単位体積当たりの溶質の質量（溶媒１ｋｇ当たりの溶質のｇ、ｄＬ当たりのｇ（１００ｍＬ）、ｍｇ／ｍｌなど）、容積モル濃度、重量モル濃度、モル分画、又は濃度の他の類似の説明のいずれかによる濃度として表現される。溶媒の量当たり溶解することができる溶質の最大平衡量は、温度、圧力、ｐＨ、及び溶媒の性質を含む特定の条件下でのその溶媒中の溶質の溶解性である。特定の実施形態では、溶解性は、生理学的ｐＨ、又は他のｐＨ、例えば、ｐＨ５．０、ｐＨ６．０、ｐＨ７．０、ｐＨ７．４、ｐＨ７．６、ｐＨ７．８、又はｐＨ８．０（例、約ｐＨ５～８）で測定される。特定の実施形態では、溶解性は、水又は生理学的緩衝液、例えばＰＢＳもしくはＮａＣｌなど（ＮａＰＯ_４を伴う又は伴わない）中で測定される。特定の実施形態では、溶解性は、比較的低いｐＨ（例、ｐＨ６．０）及び比較的高い塩（例、５００ｍＭ ＮａＣｌ及び１０ｍＭ ＮａＰＯ_４）で測定される。特定の実施形態では、溶解性は、生物学的液体（溶媒）、例えば血液又は血清などの中で測定される。特定の実施形態では、温度は、約室温（例、約２０、２１、２２、２３、２４、２５℃）又はほぼ身体温度（３７℃）とすることができる。特定の実施形態では、薬剤は、室温で又は３７℃で少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０又は１００ｍｇ／ｍｌの溶解性を有する。

【0116】

「対象」もしくは「その必要のある対象」又は「患者」もしくは「その必要のある患者」は、哺乳動物対象、例えばヒト対象などを含む。

【0117】

「実質的に」又は「本質的に」は、ほぼ全く又は完全に、例えば、一部の所与の量の９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上を意味する。

【0118】

「統計的に有意」により、それは、結果が偶然に生じた可能性が低いことを意味する。統計的有意性は、当技術分野において公知の任意の方法により決定することができる。一般に使用される有意性の尺度は、ｐ値を含み、それは、帰無仮説が真である場合に、観察された事象が生じ得る頻度又は確率である。得られたｐ値が有意性レベルよりも小さい場合、次に帰無仮説は拒絶される。単純な場合では、有意性レベルは、０．０５又はそれ以下のｐ値で定義される。

【0119】

「治療応答」は、一つ又は複数の治療剤の投与に基づく症状の改善（持続するか否かにかかわらず）を指す。

【0120】

本明細書中で使用される場合、用語「治療有効量」、「治療用量」、「予防有効量」、又は「診断有効量」は、投与後に所望の生物学的応答を誘発するために必要な薬剤（例、抗ＮＲＰ２ａ抗体、免疫療法剤）の量である。

【0121】

本明細書中で使用される場合、対象（例、哺乳動物、例えばヒトなど）又は細胞の「治療」は、個体又は細胞の自然な経過を改変させる試みにおいて使用される任意の種類の介入である。治療は、限定されないが、医薬組成物の投与を含み、予防的に、又は病理学的事象の開始もしくは病因的薬剤との接触に続発して、のいずれかに実施され得る。また、含まれるのは、「予防的」治療であって、それは、治療されている疾患もしくは状態の進行の速度を低下させること、その疾患もしくは状態の発症を遅延させること、又はその発症の重症度を低下させることに向けることができる。「治療」又は「予防」は、疾患もしくは状態、又はその関連症状の完全な根絶、治癒、又は防止を必ずしも示さない。

【0122】

用語「野生型」は、集団において最も頻繁に観察され、このように、遺伝子の「正常」又は「野生型」形態で任意に設計される遺伝子又は遺伝子産物（例、ポリペプチド）を指す。

【0123】

本明細書中の各実施形態は、他に明示的に記述されない限り、すべての他の実施形態に適用される。

【0124】

抗ＮＲＰ２ａ抗体
特定の実施形態は、抗体、及びそれらの抗原結合断片を含み、それらは、ヒトニューロピリン２ａ（ＮＲＰ２ａ）ポリペプチド、具体的にはヒトＮＲＰ２ａバリアント１（ｖ１）及び／又はバリアント２（ｖ２）ポリペプチドに結合する。特定の実施形態では、抗体、及びそれらの抗原結合断片は、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及びｖ２ポリペプチドに特異的に結合し、また、ヒトＮＲＰ２ａバリアント３（ｖ３）ポリペプチドに結合する。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンド、例えば形質膜受容体、成長因子、シグナル伝達分子、インテグリン、プレキシン、又は他のリガンドなどへの、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドの結合を選択的に調節する（例、直接的又は間接的に干渉する、阻害する、低下させる、刺激する、増加させる）。ＮＲＰ２ａリガンドの具体的な例は、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２１（ＣＣＬ２１）ポリペプチド及び／又はＣ－Ｃケモカイン受容体７型（ＣＣＲ７）ポリペプチドを含む。

【0125】

ＮＲＰ２は、二つのＣＵＢドメイン（ａ１／ａ２組み合わせドメイン）、二つの第Ｖ／ＶＩＩＩ因子相同ドメイン（ｂ１／ｂ２組み合わせドメイン）、ＭＡＭドメイン（ｃドメイン）（図１Ａ－１Ｂを参照のこと）、及びｃドメインを膜貫通ドメイン（細胞膜を横断する）に接続する短い膜近傍領域を含む優性細胞外領域を伴う単一の膜貫通受容体である。ＮＲＰ２は、典型的には、様々な密接に関連するスプライスバリアントの混合物としてインビボで発現され、それは、しばしば、バリアントｖ１、ｖ２、及びｖ３を含むＮＲＰ２ａ、ならびにバリアントｖ４及びｖ５を含むＮＲＰ２ｂとして一緒にグループ化される。バリアントｖ６は、循環中に見出されるＮＲＰ２の可溶性形態である。

【0126】

ＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂスプライスバリアントは、ａ１、ａ２、ｂ１、ｂ２及びｃドメインにわたって同一のアミノ酸配列を有するが、しかし、膜近傍領域、膜貫通領域、及び細胞質領域にわたって配列において異なる。ＮＲＰ２ａバリアントｖ１、ｖ２、及びｖ３はまた、選択的スプライシングのそれらのパターンに基づいて、これらの領域にわたりアミノ酸配列において異なり、ＮＲＰ２ａ ｖ１（９３１ａａ）及びＮＲＰ２ａ ｖ２（９２６ａａ）を伴い、比較的より小さなＮＲＰ２ａバリアント３（９０９ａａ）と比較して、より大きな挿入を有する。これらの選択的にスプライシングされた形態のＮＲＰ２ａの異なるサイズは、ｖ１からｖ２の膜近傍配列のＮ末端での５アミノ酸ストレッチの喪失、次にｖ３バリアントにおける５アミノ酸欠失の直ぐＣ末端の１７アミノ酸のさらなる喪失を反映する。膜近傍領域、膜貫通ヘリックス、及び細胞質ドメインのＣ末端半分は、全ての三つのＮＲＰ２ａバリアントにおいて同一のままである。

【0127】

ＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂの両方において、ＮＲＰ２のａ１ａ２組み合わせドメインは、セマホリンのｓｅｍａ領域と相互作用し、ｂ１ドメインは、セマホリンＰＳＩ及びＩｇ様ドメインと相互作用する。ＮＲＰ２は、ＳＥＭＡ３Ｆ及び３Ｇについてより高い親和性を有し、対照的に、ＳＥＭＡ３Ａ，３Ｂ、及び３Ｅは、ＮＲＰ１と優先的に相互作用する。ＮＲＰ１及びＮＲＰ２の両方が、ＳＥＭＡ ３Ｃについて類似の親和性を有する。ＮＲＰ２のｂ１ｂ２組み合わせドメインは、ＶＥＧＦ Ｃ＆Ｄ、胎盤成長因子（ＰＩＧＦ）－２、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、ガレクチン、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、及び形質転換成長因子（ＴＧＦ）－ベータを含む、ヘパリン結合ドメインを含むいくつかの成長因子と相互作用する（例、Ｐｒｕｄ’ｈｏｍｍｅ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．３：９２１－９３９，２０１２を参照のこと）。ＮＲＰ２はまた、様々な成長因子特異的受容体と相互作用し、これらの受容体との相互作用は、ＳＥＭＡへの結合とは独立して生じ得る。この文脈では、インテグリンならびにＶＥＧＦＲ２及びＶＥＧＦＲ３、ＴＧＦ－ベータ受容体、ｃ－Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲなどの成長因子受容体は、ＮＲＰと相互作用し、一般的に、その受容体についての各リガンドの親和性を増加させ、下流シグナル伝達を調節するように見えることが示されている。ｃドメイン（Ｍａｍ）ドメインは、リガンド結合のために直接的に要求されないように見えるが、しかし、リガンド特異性、受容体シグナル伝達、及びＮＲＰ２二量体化に影響を及ぼし得る。

【0128】

ニューロピリン－２は、様々なリガンドについての必須の細胞表面受容体及び共受容体としてのその役割を通して、広範な細胞機能を調節する（例、Ｇｕｏ ａｎｄ Ｖａｎｄｅｒ Ｋｏｏｉ，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２９０ Ｎｏ ４９：２９１２０－２９１２６，２０１５を参照のこと）。加えて、最近のデータは、ＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂが正常組織中で及び特定の病理学的状態において差次的に発現されることを示唆し、ＮＲＰ２スプライスバリアントの相対発現が、複数のＮＲＰ２関連疾患における状況依存的な様式において受容体クロストークを駆動する際に重要な役割を果たすことを示唆している。ＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂはまた、広範囲の細胞機能において異なる、及び時折、反対の役割を果たすように見える。このように、アイソフォーム特異的抗体の開発は、ＮＲＰ２ａバリアントの活性を選択的に調節するという約束を保持し、これらのアイソフォームの間で区別することができない他の抗ＮＲＰ２抗体と比較して、有意に増強された細胞型選択性、アイソタイプ特異性、より高い効力、及び低下した毒性を伴う新世代の治療剤を作製する機会を提供する。

【0129】

ニューロピリン－２発現は、正常細胞及び癌細胞の両方における増加した細胞可塑性、及び上皮から間葉への移行（ＥＭＴ）と関連付けられ、それにより、癌治療中での細胞生存及び化学療法耐性の発生を増加させる（例、Ｇａｎｄｃｌｅｍｅｎｔ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ６（７）ｅ２０４４４，２０１１を参照のこと）。加えて、ＮＲＰ２発現は、線維芽細胞及び内皮細胞におけるＥＭＴ及び線維症の発生の両方に導くＴＧＦ－ベータ曝露により増加される（例、Ｐａｒｄａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．１８：２１５７，２０１７）。したがって、ＮＲＰ２ａ特異的抗体の開発は、細胞可塑性及び生存、化学療法耐性、ならびに線維症の発生を選択的に調節する可能性を提供する。

【0130】

ニューロピリン－２発現はリンパ血管新生を促進し（例、Ｄｏｃｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７５：２９３７－２９４８，２０１５を参照のこと）、ＮＲＰ２中の一塩基多型（ＳＮＰ）はリンパ浮腫と関連付けられる（例、Ｍｉａｓｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８（４）ｅ６０１６４，２０１３を参照のこと）。したがって、ＮＲＰ２ａ特異的抗体の開発は、リンパ管新生を調節し、リンパ浮腫を治療するために、これらのアイソフォームの機能を選択的に調節する可能性を提供する。ＮＲＰ２はまた、平滑筋収縮性及び平滑筋緊張を調節し（例、Ｂｉｅｌｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１８１：５４８－５５９，２０１２を参照のこと）、したがって、ＮＲＰ２ａ特異的抗体の開発は、平滑筋収縮性、及び筋緊張を調節するためにこれらのアイソフォームの機能を選択的に調節する可能性を提供する。

【0131】

ＮＲＰ２は、癌幹細胞の維持、ならびに増加した腫瘍開始に導く生存、生存、化学及び放射線耐性の発生、ならびに転移に直接的に寄与する（例、Ｇｏｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．５：４８８－５０８，２０１３；及びＳａｍｕｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ６（１０）ｅ２３２０８，２０１１）、Ｐｒｕｄ’ｈｏｍｍｅ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ３：９２１－９３９，２０１２を参照のこと）。したがって、ＮＲＰ２ａ特異的抗体の開発は、癌幹細胞の成長、生存、化学及び放射線耐性の発生ならびに転移を調節するために、これらのアイソフォームの機能を選択的に調節する可能性を提供する。

【0132】

ニューロピリン－２は、リンパ細胞、例えばＢ及びＴ細胞など、ならびに骨髄細胞、例えば好塩基球、好酸球、単球、樹状細胞、ＮＫ細胞、好中球、及び組織特異的マクロファージ、例えば、肺胞マクロファージを含むマクロファージを含む、免疫系の様々な細胞において発現される。それはまた、肺及び他の組織における内皮細胞及び上皮細胞において、ならびに筋細胞において発現される（例、Ｂｉｅｌｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１８１：５４８－５５９，２０１２；Ａｕｎｇ，ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ １１（２）ｅ０１４７３５８，２０１６；Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｕｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍ ９０：２３９－２４４，２０１７；及びＷｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈ．９３：８１－１０３，２０１２を参照のこと）。ＮＲＰ２は、免疫細胞の活性化及び遊走を調節する（例、Ｍｅｎｄｅｓ－ｄａ－Ｃｒｕｚ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ９（７）ｅ１０３４０５，２０１４を参照のこと）。したがって、ＮＲＰ２ａ特異的抗体の開発は、免疫細胞の活性化及び遊走を調節するためにこれらのアイソフォームの機能を選択的に調節する可能性を提供し、それにより、炎症及び自己免疫に対する抗炎症剤及び免疫調節剤を提供又は開発する。

【0133】

ニューロピリン－２はまた、例えば、感染及びアポトーシス細胞のクリアランスにそれぞれ寄与する食作用及びエフェロサイトーシスの重要な態様である後期エンドソーム成熟を調節することにより、オートファジー、エンドソーム発生において重要な役割を果たす（例、Ｄｉａｚ－Ｖｅｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．１３０：６９７－７１１，２０１７；Ｄｕｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７６：４１８－４２８，２０１６を参照のこと）。したがって、ＮＲＰ２ａ特異的抗体の開発は、これらのアイソフォームの機能を選択的に調節して、エンドソームの発生、貪食、エフェロサイトーシス、及びオートファジーを調節する可能性を提供する。

【0134】

ニューロピリン－２は、多くの疾患（例、本明細書中に記載される「ＮＲＰ２関連疾患」）の病態生理学において重要なプレーヤーであることが公知であり、セマホリン３Ｆ、ＶＥＧＦ－Ｃ及びＤ、ならびにＴＧＦ－ベータ（例えば、表Ｌ１及び表Ｌ２を参照のこと）を含む可溶性リガンドの広範なアレイ、ならびに細胞受容体及び共因子のアレイと相互作用する。ＮＲＰ２はまた、樹状細胞上でポリシアリル化され、ケモカインＣＣＬ２１及びその受容体ＣＣＲ７と能動的に相互作用して免疫細胞移動を媒介し、それについては、ＩＬＤ及びＲＡに関連付けられる一塩基多型が記載されている（例、Ｒｅｙ－Ｇａｌｌａｒｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０：１１３９－１１４６，２０１０；Ｓｔａｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４２：５０８－５１４，２０１３；及びＭｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．６５：３２３９－３２４７を参照のこと）。加えて、ＮＲＰ－２の可溶性の循環形態が公知である（例、Ｐａｒｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２３（４）６７７－６８７，２０１５を参照のこと）。したがって、広範囲の疾患における病態生理学においてＮＲＰ２により果たされる中心的な役割を考慮すると、ＮＲＰ２とＮＲＰ２リガンド（例えば、表Ｌ１及び表Ｌ２からのＮＲＰ２リガンド）の間での相互作用、及び対応する生物学的活性を選択的に変化させるための、ＮＲＰ２に対する抗体とのそれらの相互作用の調節によって、ＮＲＰ２関連疾患を含む、疾患の治療のための広範な潜在能が提供されることは明らかである。

【0135】

特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、他のＮＲＰ２アイソフォームポリペプチドと比べて、ヒトニューロピリン－２Ｂ（ＮＲＰ２ｂ）バリアント４（ｖ４）ポリペプチド及び／又はヒトＮＲＰ２ｂバリアント５（ｖ５）ポリペプチドと比べて、を含み、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドに選択的又は優先的に結合する。すなわち、一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＮＲＰ２ｂ ｖ４ポリペプチド又はＮＲＰ２ｂ ｖ５ポリペプチドに実質的に結合しない。特定の抗体又はその抗原結合断片はまた、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ３ポリペプチドに結合し、特定の抗体及びその抗原結合断片は、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ３ポリペプチドに実質的に結合しない（例、図４Ｃを参照のこと）。ＮＲＰ２ポリペプチドの例示的なアミノ酸配列を、以下の表Ｎ１中に提供する。

【表N1-1】

【表N1-2】

【表N1-3】

【0136】

このように、特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、表Ｎ１からのヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドに選択的又は優先的に結合し、例えば、表Ｎ１からのヒトＮＲＰ２ｂ ｖ４ポリペプチド、又はヒトＮＲＰ２ｂ ｖ５ポリペプチドに実質的に結合しない。特定の抗体又はそれらの抗原結合断片はまた、表Ｎ１からのヒトＮＲＰ２ａ ｖ３ポリペプチドに結合し、一部の抗体及びそれらの抗原結合断片は、表Ｎ１からのヒトＮＲＰ２ａ ｖ３ポリペプチドに実質的に結合しない。

【0137】

特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、膜近傍ドメイン中の固有のエピトープ、すなわち、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２中に存在するが、しかし、ヒトＮＲＰ２ｂ ｖ４又はＮＲＰ２ｂ ｖ５中には存在しないエピトープで、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドに結合する。一部の例では、固有のエピトープは、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ３中に存在し、一部の例では、固有のエピトープは、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ３中に存在しない。例示的な固有の膜近傍エピトープを以下の表Ｎ２中に提供する。

【表N2】

【0138】

このように、一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、表Ｎ２からの配列又はエピトープで、ＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドに結合する。一部の実施形態では、エピトープは、表Ｎ２からの配列又はエピトープの少なくとも約８、９、１０、１１、又は１２の連続アミノ酸、例えば、配列番号９４～１０４のいずれか、それらの組み合わせを含む、を含む。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、表Ｎ２からのエピトープを含む、連続エピトープに結合する。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、表Ｎ２からの一つ又は複数のエピトープを含む、不連続エピトープに結合する。特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１００、又は配列番号１００の約もしくは少なくとも約８、９、１０、１１、もしくは１２の連続アミノ酸に結合する。

【0139】

一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号９４において定義されるように、ＮＲＰ２ａ ｖ１のニューロピリン膜近傍ドメイン中のエピトープ、例えば、残基８０３～８６４、８１３～８６４、８２３～８６４、８３３～８６４、８４３～８６４、８５３～８６４；８０３～８５４、８０３～８４４、８０３～８３４、８０３～８２４、及び／又は８０３～８１４に結合する。一部の実施形態では、少なくとも一つの抗体又はその抗原結合断片は、配列番号９５において定義されるように、ＮＲＰ２ａ ｖ２のニューロピリン膜近傍ドメイン中の少なくとも一つのエピトープ、例えば、残基８０３～８５９、８１３～８５９、８２３～８５９、８３３～８５９、８４３～８５９、８５３～８５９；８０３～８４９、８０３～８３９、８０３～８２９、８０３～８１９、及び／又は８０３～８０９に特異的に結合する。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号９５において定義されるように、ＮＲＰ２ａ ｖ１／ｖ２のニューロピリン膜近傍ドメイン中の少なくとも一つのエピトープ、例えば、残基８１８～８３２、８２０～８３２、８２２～８３２、８２４～８３２、８２６～８３２、８１８～８３０、８１８～８２８、８１８～８２６、及び／又は８１８～８２４に結合する。

【0140】

一部の実施形態では、少なくとも一つの抗体又はその抗原結合断片は、配列番号９５において定義されるように、ＮＲＰ２ａ ｖ１／ｖ２のニューロピリン膜近傍ドメイン中の少なくとも一つのエピトープ、例えば、残基８１８～８３２、８２０～８３２、８２２～８３２、８２４～８３２、８２６～８３２、又は８１８～８３０、８１８～８２８、８１８～８２６、及び／又は８１８～８２４に特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１００に結合する。

【0141】

一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチド、ならびに、場合により、ＮＲＰ２ａ ｖ３ポリペプチド、例えば、表Ｎ１からの配列及び／又は表Ｎ２からのエピトープに、約１０ｐＭ～約５００ｐＭもしくは約５０ｎＭまで、又は約、少なくとも約、もしくは約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、２５ｎＭ、又は５０ｎＭ以下の親和性を伴って、あるいは、場合により、約１０ｐＭ～約５００ｐＭ、約１０ｐＭ～約４００ｐＭ、約１０ｐＭ～約３００ｐＭ、約１０ｐＭ～約２００ｐＭ、約１０ｐＭ～約１００ｐＭ、約１０ｐＭ～約５０ｐＭ、又は約２０ｐＭ～約５００ｐＭ、約２０ｐＭ～約４００ｐＭ、約２０ｐＭ～約３００ｐＭ、約２０ｐＭ～約２００ｐＭ、約２０ｐＭ～約１００ｐＭ、約２０ｐＭ～約５０ｐＭ、又は約３０ｐＭ～約５００ｐＭ、約３０ｐＭ～約４００ｐＭ、約３０ｐＭ～約３００ｐＭ、約３０ｐＭ～約２００ｐＭ、約３０ｐＭ～約１００ｐＭ、約３０ｐＭ～約５０ｐＭ、又は約２０ｐＭ～約２００ｐＭ、約３０ｐＭ～約３００ｐＭ、約４０ｐＭ～約４００ｐＭ、約５０ｐＭ～約５００ｐＭ、約６０ｐＭ～約６００ｐＭ、約７０ｐＭ～約７００ｐＭ、約８０ｐＭ～約８００ｐＭ、約９０ｐＭ～約９００ｐＭ、約１００ｐＭ～約１ｎＭ、約１ｎＭ～約５ｎＭ、約５ｎＭ～約１０ｎＭ、約１０ｎＭ～２５ｎＭ、又は約２５ｎＭ～約５０ｎＭの範囲の親和性を伴って結合する。

【0142】

特定の実施形態では、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドについての抗体、又はその抗原結合断片の結合親和性（表Ｎ１を参照のこと）は、ＮＲＰ２ａ ｖ３リペプチド、ＮＲＰ２ｂ ｖ４ポリペプチド、及び／又はＮＲＰ２ｂ ｖ５ポリペプチドについてのその結合親和性（表Ｎ１を参照のこと）より少なくとも約１．５倍、２倍、４倍、６倍、８倍、１０倍、２０倍、４０倍、６０倍、８０倍、１００倍、２００倍、４００倍、６００倍、８００倍、又は１０００倍強い。

【0143】

一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２と相互作用する、あるいは可逆的に結合するが、しかし、ＮＲＰ２ｂ ｖ４又はＮＲＰ２ｂ ｖ５と実質的に相互作用又は結合しない任意の分子を含む、少なくとも一つの「ＮＲＰ２ａリガンド」に結合又は相互作用するヒトＮＲＰ２ａポリペプチドの領域内の少なくとも一つのエピトープに特異的に結合する。ＮＲＰ２リガンドの一般的な例を、表Ｌ１中に提供する。

【表L1】

【0144】

このように、特定の実施形態では、少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドは、表Ｌ１から選択される。「ＮＲＰ２ａリガンド」の具体的な例は、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２１（ＣＣＬ２１）ポリペプチド及びＣ－Ｃケモカイン受容体７型（ＣＣＲ７）ポリペプチドを含む。例示的なＮＲＰ２ａリガンドのアミノ酸配列を、以下の表Ｌ２中に提供する。

【表L2】

【0145】

このように、特定の実施形態では、少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドは、表Ｌ２から選択され、抗ＮＲＰ２ａ抗体又はその抗原結合断片は、表Ｌ１もしくは表Ｌ２からのＮＲＰ２ａリガンド、又はその生物学的に活性な断片もしくはバリアントへのヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチド（例えば、表Ｎ１から選択される）の結合を調節する（例、それに干渉する、阻害する、低下させる）。

【0146】

一部の態様では、少なくとも一つのＮＲＰ２リガンドは、ＣＣＬ２１及びその受容体ＣＣＲ７から選択される。ＣＣＲ７活性は、慢性炎症性状態（Ｍｏｓｃｈｏｖａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２：１９４９－５５）、アテローム性動脈硬化症（Ｌｕｃｈｔｅｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １２２：１６２１－２８）、ＨＩＶ感染（Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．２３：１５１－５７）、及び癌（Ｂｅｎ－Ｂａｒｕｃｈ，２００９，Ｃｅｌｌ Ａｄｈｅｓｉｏｎ Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ３：３２８－３３）を含む、多様な疾患状態において関係付けられてきた。ＣＣＲ７活性は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、例えばクローン病及び潰瘍性大腸炎、組織又は臓器移植拒絶反応、喘息、アレルギー性気道炎症、気道平滑筋過形成、ならびに線維性肺疾患などを含む炎症性障害において関係付けられてきた（Ｇｏｍｐｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ．８２：４４９－５６；Ｋａｗａｋａｍｉ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２５７５：２４－３２；Ｓａｕｎｄｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ ３９：１６８４－９２）。ＣＣＲ７活性はまた、関節リウマチにおいて関係付けられてきた（Ｍｏｓｃｈｏｖａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２：１９４９－５５）。ＣＣＲ７活性は、多発性硬化症（Ａｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．２２６：１５８－６４）、乾癬（Ｆａｎ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ Ｖｅｎｅｒｅｏｌ Ｌｅｐｒｏｌ．７４（５）：５５０；Ｂｏｓｅ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，１８３（２）：４１３－４２１）、及びアテローム性動脈硬化症（Ｌｕｃｈｔｅｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０ １２２：１６２１－２８）において関係付けられてきた。ＣＣＲ７活性は、ライシュマニア・ドノバニ感染を含む慢性及び潜伏感染を含む、ＨＩＶ感染及び他の感染において関係付けられてきた（Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．２３：１５１－５７）。

【0147】

様々な試験によって、ＣＣＲ７が多種多様な腫瘍細胞、例えば、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、ホジキン病、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、菌状息肉症、慢性骨髄増殖性症候群の急性転化、骨髄異形成症候群の急性転化、癌、例えば乳癌、非小細胞肺癌、黒色腫、胃癌又は頭頸部扁平上皮癌及び結腸癌など、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫、乳癌細胞及び悪性乳腺腫瘍（例えば、ＷＯ２００７／００３４２６を参照のこと）を含む、において発現されることが明らかになっている。ＣＣＲ７はまた、様々な癌のリンパ節転移において役割を果たす（例、Ｖｉｏｌａ ａｎｄ Ｌｕｓｔｅｒ，２００８，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ．４８：１７１－９７を参照のこと）。

【0148】

したがって、ＣＣＬ２１結合、又はＣＣＲ７受容体のシグナル伝達のいずれかを直接的に調節する抗ＮＲＰ２ａ抗体は、炎症性障害、癌、組織又は臓器移植拒絶反応、気道炎症、ＲＡの治療のため、ならびに潜伏感染及び持続性感染の治療及び予防のため、を含む、これらの疾患及び障害の一つ又は複数を調節する際での有用性が見出されることが予測され得る。

【0149】

特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は「遮断抗体」であって、それは、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドと、ＮＲＰ２ａリガンド、例えばヒトＣＣＬ２１及び／又はＣＣＲ７などの間での結合を完全に又は実質的に阻害する。一部の実施形態では、「遮断抗体」は、実質的に化学量論的に等価な量のＮＲＰ２ａポリペプチドとの「遮断抗体」のプレインキュベーション後のＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドとＮＲＰ２ａリガンドとの間の理論上の最大結合の約又は少なくとも約８０～１００％（例、８０、８５、９０、９５、又は１００％）を阻害する。本明細書中で使用される場合、「化学量論的に等価な量」は、一つの物質（例、抗ＮＲＰ２ａ抗体）のモル数が、所与の式又は反応における少なくとも一つの他の物質（例、ＮＲＰ２ａポリペプチド）のモル数と同等又は実質的に等価である状況を指す。

【0150】

特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は「部分遮断抗体」であって、それは、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドと、ＮＲＰ２ａリガンド、例えばヒトＣＣＬ２１及び／又はＣＣＲ７などの間での結合を少なくとも部分的に、しかし、完全にではなく阻害する。一部の実施形態では、「部分遮断抗体」は、実質的に化学量論的に等量のＮＲＰ２ａポリペプチドとの「部分遮断抗体」のプレインキュベーション後に、ＮＲＰ２ａポリペプチドとＮＲＰ２ａリガンドの間での理論上の最大結合の約又は少なくとも約２０～８０％（例、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、又は８０％）阻害する。

【0151】

特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、例えば、インビトロ結合アッセイ、インビトロもしくはエクスビボ細胞ベースのアッセイ、又はインビボで、ＮＲＰ２ａ ｖ１又はｖ２ポリペプチドとヒトＣＣＬ２１ポリペプチドの間での結合を阻害する、遮断する、又はそうでなければ低下させる。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、例えば、実質的に化学量論的に等価な量の抗ＮＲＰ２ａポリペプチドとの抗ＮＲＰ２ａ抗体のプレインキュベーション後、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドと、ヒトＣＣＬ２１ ＮＲＰ２ａ ポリペプチドの間での理論上の最大結合に、約又は少なくとも約２０～１００％（例、約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％）拮抗する又はそれを低下させる。

【0152】

一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、例えば、インビトロ結合アッセイ、インビトロもしくはエクスビボ細胞ベースのアッセイ、又はインビボで、ＮＲＰ２ａ ｖ１もしくはｖ２ポリペプチドとヒトＣＣＲ７ポリペプチドの間での結合（例、二量体化）を特異的に阻害する、遮断する、又はそうでなければ低下させる。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、例えば、実質的に化学量論的に等価な量の抗ＮＲＰ２ａポリペプチドとの抗ＮＲＰ２ａ抗体のプレインキュベーション後、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドとヒトＣＣＲ７ポリペプチドの間での理論上の最大結合に、約又は少なくとも約２０～１００％（例えば、約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％）拮抗する又はそれを低下させる。

【0153】

一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、対照と比べて、例えば、約又は少なくとも約２０～１００％（例、約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、又は１００％）だけＣＣＬ２１／ＣＣＲ７媒介シグナル伝達を調節する。ＣＣＬ２１／ＣＣＲ７媒介シグナル伝達活性の例は、限定されないが、樹状細胞又は成熟Ｔ細胞を含む免疫細胞遊走の誘導、未成熟Ｔ細胞の阻害、及び腫瘍又は癌細胞遊走の誘導を含む。例示的な免疫細胞及び腫瘍細胞／癌細胞が、本明細書中に記載されている。

【0154】

一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチド、ならびに（ｉｉ）カニクイザルＮＲＰ２ポリペプチドの対応する領域（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｇ７ＰＬ９１を参照のこと）の各々についての親和性（Ｋｄ又はＥＣ_５０）を有し、それにおいて、（ｉ）及び（ｉｉ）についての親和性が、約２０ｐＭ～約２００ｐＭ、約３０ｐＭ～約３００ｐＭ、約４０ｐＭ～約４００ｐＭ、約５０ｐＭ～約５００ｐＭ、約６０ｐＭ～約６００ｐＭ、約７０ｐＭ～約７００ｐＭ、約８０ｐＭ～約８００ｐＭ、約９０ｐＭ～約９００ｐＭ、約１００ｐＭ～約１ｎＭ、約０．４～約１．２ｎＭ、約０．９～約５．５ｎＭ、約０．９～約５ｎＭ、又は約１ｎＭ～約１０ｎＭの範囲内である。

【0155】

一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、（ｉ）ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチド、ならびに（ｉｉ）マウスＮＲＰ２ポリペプチドの対応する領域の各々についての親和性（Ｋｄ又はＥＣ_５０）を有し、それにおいて、（ｉ）及び（ｉｉ）についての親和性が、約２０ｐＭ～約２００ｐＭ、約３０ｐＭ～約３００ｐＭ、約４０ｐＭ～約４００ｐＭ、約５０ｐＭ～約５００ｐＭ、約６０ｐＭ～約６００ｐＭ、約７０ｐＭ～約７００ｐＭ、約８０ｐＭ～約８００ｐＭ、約９０ｐＭ～約９００ｐＭ、約１００ｐＭ～約１ｎＭ、又は約１ｎＭ～約１０ｎＭの範囲内である。

【0156】

特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、対応するマウスＮＲＰ２ポリペプチドと比べて、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチド（表Ｎ１を参照のこと）に選択的に結合し、例えば、ここで、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドについてのその親和性は、対応するマウスＮＲＰ２ポリペプチドについてのその親和性よりも、例えば、約又は少なくとも約２、５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、５００、又は１０００倍又はそれ以上だけ有意に強い。特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドに選択的に結合し、対応するマウスＮＲＰ２ポリペプチドに実質的に結合しない。特定の例示的なマウスＮＲＰ２ポリペプチドは、ハツカネズミＮＲＰ２ポリペプチドを含む（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｏ３５３７５を参照のこと）。

【0157】

特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）配列、ならびに相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）配列により特徴付けられる、又はそれを含む。例示的なＶＨ、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬ、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列を、以下の表Ａ１及び表Ａ２中に提供する。

【表A1-1】

【表A1-2】

【表A1-3】

【表A2-1】

【表A2-2】

【表A2-3】

【0158】

このように、特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、
表Ａ１から選択される相補性決定領域ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）配列ならびにヒトＮＲＰ２ａポリペプチド又はそのエピトープに特異的に結合するそれらのバリアント（例えば、表Ｎ１、表Ｎ２から選択される）；及び
表Ａ１から選択される相補性決定領域ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＨ）配列ならびにヒトＮＲＰ２ポリペプチド又はそのエピトープに特異的に結合するそれらのバリアント（例えば、表Ｎ１、表Ｎ２から選択される）。

【0159】

特定の実施形態では、ＣＤＲ配列は、以下の通りである：
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３０～１３２を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３３～１３５を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３６～１３８を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３９～１４１を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１４２～１４４を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１４５～１４７を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１４８～１５０を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１５１～１５３を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１５４～１５６を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１５７～１５９を含み、ＣＤＲ領域の全てにわたり合計１、２、３、４、５、もしくは６の改変を有するそれらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号１～３を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号４～６を含み、それらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号７～９を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号１０～１２を含み、それらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号１３～１５を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号１６～１８を含み、それらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号１９～２１を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号２２～２４を含み、それらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号２５～２７を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号２８～３０を含み、それらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号３１～３３を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号３４～３６を含み、それらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号３７～３９を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号４０～４２を含み、それらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号４３～４５を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号４６～４８を含み、それらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号４９～５１を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号５２～５４を含み、それらのバリアントを含む；
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号５５～５７を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号５８～６０を含み、それらのバリアントを含む；又は
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号６１～６３を含み、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列が、それぞれ配列番号６４～６６を含み、それらのバリアントを含む。

【0160】

特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片（例、４０１抗体又はその抗原結合断片のバリアント）が、ＣＤＲコンセンサス配列を含み、例えば、それにおいて、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１３、１２７、及びＧＸ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５を含み（それにおいて、Ｘ_１はＧ、Ａ、又はＳであり、Ｘ_２はＹ、Ｆ、Ｋ、Ｌ、又はＲであり、Ｘ_３はＴ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｑ、又はＶであり、Ｘ_４はＤ、Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、又はＳであり、及びＸ_５はＹ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＶである）、ならびにＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３配列は、それぞれ配列番号１６、１７、及びＸ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３を含む（それにおいて、Ｘ_６はＳ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｐ、Ｔ、又はＶであり、Ｘ_７は Ｑ、Ａ、Ｇ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ_８はＳ、Ａ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｑ、又はＴであり、Ｘ_９はＴ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、又はＹであり、Ｘ_１０はＨ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＹであり、Ｘ_１１はＶ、Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＹであり、Ｘ_１２はＬ、Ａ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、又はＶであり、及びＸ_１３はＴ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、又はＶである）（「Ｘ」残基の定義については、表Ｅ７を参照のこと）；
また、含まれるのは、それらのバリアントであって、ヒトＮＲＰ２ａポリペプチド又はそのエピトープに結合する親和性成熟バリアント（例えば、表Ｎ１、表Ｎ２を参照のこと）、例えば、ＣＤＲ領域の全てにわたって１、２、３、４、５、又は６の全改変、例えば、本明細書中に記載されるＶ_Ｈ ＣＤＲ１、Ｖ_Ｈ ＣＤＲ２、Ｖ_Ｈ ＣＤＲ３、Ｖ_Ｌ ＣＤＲ１、Ｖ_Ｌ ＣＤＲ２、及び／又はＶ_Ｌ ＣＤＲ３配列の一つ又は複数を有するバリアントを含む。例示的な「改変」は、アミノ酸置換、付加、及び欠失を含む。

【0161】

特定の実施形態では、ＶＨ配列は、表Ａ２から選択される配列と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、又は１００％同一であり、例えば、それにおいて、ＶＨ配列が、一つ又は複数のフレームワーク領域中に１、２、３、４、又は５つの改変を有することを含む。

【0162】

一部の実施形態では、ＶＬ配列は、表Ａ２から選択される配列と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、又は１００％同一であり、例えば、それにおいて、ＶＬ配列が、一つ又は複数のフレームワーク領域中に１、２、３、４、又は５つの改変を有することを含む。

【0163】

一部の実施形態では、抗体又は抗原結合断片のＶＨ及びＶＬ配列は、以下の通りである：
ＶＨ配列が、配列番号１６０と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号１６１と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号１６２と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号１６３と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号１６４と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号１６５と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号１６６と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号１６７と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号１６８と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号１６９と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号６７と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号６８と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号６９と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号７０と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号７１と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号７２と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号７３と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号７４と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号７５と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号７６と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号７７と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号７８と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号７９と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号８０と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号８１と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号８２と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号８３と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号８４と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；
ＶＨ配列が、配列番号８５と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号８６と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である；又は
ＶＨ配列が、配列番号８７と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一であり、ＶＬ配列が、配列番号８８と少なくとも８０、８５、９０、９５、９７、９８、９９、もしくは１００％同一である。

【0164】

一部の実施形態では、抗体又は抗原結合断片のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列は、以下の通りである：
Ｖ_Ｈ配列は配列番号１７０を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号１７１を含む（「Ｘ」残基の定義については、表Ｅ７を参照のこと）；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号１６０を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号１６１を含む；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号１６２を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号１６３を含む；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号１６４を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号１６５を含む；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号１６６を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号１６７を含む；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号１６８を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号１６９を含む；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号６７を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号６８を含む；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号６９を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号７０を含む；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号７１を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号７２を含む；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号７３を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号７４を含む；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号７５を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号７６を含む；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号７７を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号７８を含む；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号７９を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号８０を含む；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号８１を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号８２を含む；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号８３を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号８４を含む；
Ｖ_Ｈ配列は配列番号８５を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号８６を含む；又は
Ｖ_Ｈ配列は配列番号８７を含み、Ｖ_Ｌ配列は配列番号８８を含む。

【0165】

また、含まれるのは、それらのバリアント、例えば、ヒトＮＲＰ２ａポリペプチド又はそのエピトープに結合する、一つ又は複数のフレームワーク領域中に１、２、３、４、又は５の改変を有するバリアントである（例えば、表Ｎ１、表Ｎ２を参照のこと）。例示的な「改変」は、アミノ酸置換、付加、及び欠失を含む。

【0166】

単に例証的な目的のために、抗体もしくはその抗原結合断片、ヒトＮＲＰ２ａポリペプチド（例、ＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２）、及び／又はＮＲＰ２リガンド（例、ＣＣＬ２１、ＣＣＲ７）間の結合相互作用は、様々なルーチン的な方法を使用して検出及び定量化することができ、オクテットアッセイ及びＢｉａｃｏｒｅアッセイ（例えば、適切にタグ付けされた可溶性試薬を用いて、センサーチップに結合される）、細胞表面上にＮＲＰ２ａポリペプチドを発現する細胞を用いたＦＡＣＳ分析（天然、又は組換え体のいずれか）、イムノアッセイ、蛍光染色アッセイ、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びマイクロカロリメトリーアプローチ、例えばＩＴＣ（等温滴定熱量測定）などを含む。また、実施例を参照のこと。

【0167】

特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、野生型Ｆｃ領域と比較して改変された特性又は生物学的活性を有するものを含む、バリアント又は他の方法で修飾されたＦｃ領域を含む。修飾Ｆｃ領域の例は、例えば、野生型配列と比べて、一つ又は複数のアミノ酸の置換、挿入、欠失、又は切断により変異配列を有するもの、異なる免疫グロブリンクラス／サブクラスからのドメインで構成されるハイブリッドＦｃポリペプチド、改変されたグリコシル化／シアル化パターンを有するＦｃポリペプチド、及び、例えば、ビオチン化（例、米国特許出願第２０１０／０２０９４２４号を参照のこと）、リン酸化、硫酸化など、又は前述の任意の組み合わせにより修飾又は誘導体化されるＦｃポリペプチドを含む。そのような修飾を用いて、一つ又は複数の特定のＦｃＲ（例、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩｂ、ＦｃＲｎ）へのＦｃ領域の結合特性、その薬物動態特性（例、安定性又は半減期、バイオアベイラビリティ、組織分布、分布の容積、濃度、排出速度定数、排出速度、曲線下面積（ＡＵＣ）、クリアランス、Ｃ_ｍａｘ、ｔ_ｍａｘ、Ｃ_ｍｉｎ、変動）、その免疫原性、その補体固定又は活性化、及び／又はＦｃ領域のＣＤＣ／ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ関連活性を、本明細書中に記載されている他の特性の中でもとりわけ、抗体又はその抗原結合断片の対応する野生型Ｆｃ配列と比べて改変（例、増加、減少）させることができる。含まれるのは、ヒト及び／又はマウス起源の修飾Ｆｃ領域である。

【0168】

また、含まれるのは、ハイブリッドＦｃ領域、例えば、異なる種（例、ヒト、マウス）、異なるＩｇクラス、及び／又は異なるＩｇサブクラスの免疫グロブリンからのＦｃドメイン（例、ヒンジ、ＣＨ_２、ＣＨ_３、ＣＨ_４）の組み合わせを含むＦｃ領域を含む抗体又はその抗原結合断片である。一般的な例は、ＣＨ_２／ＣＨ_３ドメインの以下の組み合わせを含む、それからなる、又はそれから本質的になるハイブリッドＦｃ領域を含む：ＩｇＡ１／ＩｇＡ１、ＩｇＡ１／ＩｇＡ２、ＩｇＡ１／ＩｇＤ、ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＧ１、ＩｇＡ１／ＩｇＧ２、ＩｇＡ１／ＩｇＧ３、ＩｇＡ１／ＩｇＧ４、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＡ１、ＩｇＡ２／ＩｇＡ２、ＩｇＡ２／ＩｇＤ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＧ１、ＩｇＡ２／ＩｇＧ２、ＩｇＡ２／ＩｇＧ３、ＩｇＡ２／ＩｇＧ４、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＡ１、ＩｇＤ／ＩｇＡ２、ＩｇＤ／ＩｇＤ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＧ１、ＩｇＤ／ＩｇＧ２、ＩｇＤ／ＩｇＧ３、ＩｇＤ／ＩｇＧ４、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＥ／ＩｇＡ１、ＩｇＥ／ＩｇＡ２、ＩｇＥ／ＩｇＤ、ＩｇＥ／ＩｇＥ、ＩｇＥ／ＩｇＧ１、ＩｇＥ／ＩｇＧ２、ＩｇＥ／ＩｇＧ３、ＩｇＥ／ＩｇＧ４、ＩｇＥ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＡ１、ＩｇＧ１／ＩｇＡ２、ＩｇＧ１／ＩｇＤ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＡ１、ＩｇＧ２／ＩｇＡ２、ＩｇＧ２／ＩｇＤ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ２／ＩｇＧ３、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＡ１、ＩｇＧ３／ＩｇＡ２、ＩｇＧ３／ＩｇＤ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＧ１、ＩｇＧ３／ＩｇＧ２、ＩｇＧ３／ＩｇＧ３、ＩｇＧ３／ＩｇＧ４、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＡ１、ＩｇＧ４／ＩｇＡ２、ＩｇＧ４／ＩｇＤ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＧ１、ＩｇＧ４／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ３、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４、ＩｇＧ４／ＩｇＭ、ＩｇＭ／ＩｇＡ１、ＩｇＭ／ＩｇＡ２、ＩｇＭ／ＩｇＤ、ＩｇＭ／ＩｇＥ、ＩｇＭ／ＩｇＧ１、ＩｇＭ／ＩｇＧ２、ＩｇＭ／ＩｇＧ３、ＩｇＭ／ＩｇＧ４、ＩｇＭ／ＩｇＭ（又はそれらの断片もしくはバリアント）、場合により、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４の一つ又は複数からのヒンジ、ならびに／あるいはＩｇＥ及び／又はＩｇＭからのＣＨ_４ドメインを含む。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ_２、ＣＨ_３、及びＣＨ_４ドメインは、ヒトＩｇからである。

【0169】

追加の例は、ＣＨ_２／ＣＨ_４ドメインの以下の組み合わせを含む、それからなる、又はそれから本質的になるハイブリッドＦｃ領域を含む：ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＥ／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＭ／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＥ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＭ、ＩｇＭ／ＩｇＭ（又はそれらの断片もしくはバリアント）、場合により、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４の一つ又は複数からのヒンジ、ならびに／あるいはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又はＩｇＭの一つ又は複数からのＣＨ_３ドメインを含む。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ_２、ＣＨ_３、及びＣＨ_４ドメインは、ヒトＩｇからである。

【0170】

特定の例は、ＣＨ_３／ＣＨ_４ドメインの以下の組み合わせを含む、それからなる、又はそれから本質的になるハイブリッドＦｃ領域を含む：ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＥ／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＭ／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＥ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＭ、ＩｇＭ／ＩｇＭ（又はそれらの断片もしくはバリアント）、場合により、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４の一つ又は複数からのヒンジ、ならびに／あるいはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又はＩｇＭの一つ又は複数からのＣＨ_２ドメインを含む。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ_２、ＣＨ_３、及びＣＨ_４ドメインは、ヒトＩｇからである。

【0171】

特定の例は、ヒンジ／ＣＨ_２ドメインの以下の組み合わせを含む、それからなる、又はそれから本質的になるハイブリッドＦｃ領域を含む：ＩｇＡ１／ＩｇＡ１、ＩｇＡ１／ＩｇＡ２、ＩｇＡ１／ＩｇＤ、ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＧ１、ＩｇＡ１／ＩｇＧ２、ＩｇＡ１／ＩｇＧ３、ＩｇＡ１／ＩｇＧ４、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＡ１、ＩｇＡ２／ＩｇＡ２、ＩｇＡ２／ＩｇＤ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＧ１、ＩｇＡ２／ＩｇＧ２、ＩｇＡ２／ＩｇＧ３、ＩｇＡ２／ＩｇＧ４、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＡ１、ＩｇＤ／ＩｇＡ２、ＩｇＤ／ＩｇＤ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＧ１、ＩｇＤ／ＩｇＧ２、ＩｇＤ／ＩｇＧ３、ＩｇＤ／ＩｇＧ４、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＡ１、ＩｇＧ１／ＩｇＡ２、ＩｇＧ１／ＩｇＤ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＡ１、ＩｇＧ２／ＩｇＡ２、ＩｇＧ２／ＩｇＤ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ２／ＩｇＧ３、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＡ１、ＩｇＧ３／ＩｇＡ２、ＩｇＧ３／ＩｇＤ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＧ１、ＩｇＧ３／ＩｇＧ２、ＩｇＧ３／ＩｇＧ３、ＩｇＧ３／ＩｇＧ４、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＡ１、ＩｇＧ４／ＩｇＡ２、ＩｇＧ４／ＩｇＤ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＧ１、ＩｇＧ４／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ３、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４、ＩｇＧ４／ＩｇＭ（又はその断片もしくはバリアント）、場合により、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又はＩｇＭの一つ又は複数からのＣＨ_３ドメイン、ならびに／あるいはＩｇＥ及び／又はＩｇＭのＣＨ_４ドメインを含む。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ_２、ＣＨ_３、及びＣＨ_４ドメインは、ヒトＩｇからである。

【0172】

特定の例は、ヒンジ／ＣＨ_３ドメインの以下の組み合わせを含む、それからなる、又はそれから本質的になるハイブリッドＦｃ領域を含む：ＩｇＡ１／ＩｇＡ１、ＩｇＡ１／ＩｇＡ２、ＩｇＡ１／ＩｇＤ、ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＧ１、ＩｇＡ１／ＩｇＧ２、ＩｇＡ１／ＩｇＧ３、ＩｇＡ１／ＩｇＧ４、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＡ１、ＩｇＡ２／ＩｇＡ２、ＩｇＡ２／ＩｇＤ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＧ１、ＩｇＡ２／ＩｇＧ２、ＩｇＡ２／ＩｇＧ３、ＩｇＡ２／ＩｇＧ４、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＡ１、ＩｇＤ／ＩｇＡ２、ＩｇＤ／ＩｇＤ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＧ１、ＩｇＤ／ＩｇＧ２、ＩｇＤ／ＩｇＧ３、ＩｇＤ／ＩｇＧ４、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＡ１、ＩｇＧ１／ＩｇＡ２、ＩｇＧ１／ＩｇＤ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＧ１、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３、ＩｇＧ１／ＩｇＧ４、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＡ１、ＩｇＧ２／ＩｇＡ２、ＩｇＧ２／ＩｇＤ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＧ１、ＩｇＧ２／ＩｇＧ２、ＩｇＧ２／ＩｇＧ３、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＡ１、ＩｇＧ３／ＩｇＡ２、ＩｇＧ３／ＩｇＤ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＧ１、ＩｇＧ３／ＩｇＧ２、ＩｇＧ３／ＩｇＧ３、ＩｇＧ３／ＩｇＧ４、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＡ１、ＩｇＧ４／ＩｇＡ２、ＩｇＧ４／ＩｇＤ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＧ１、ＩｇＧ４／ＩｇＧ２、ＩｇＧ４／ＩｇＧ３、ＩｇＧ４／ＩｇＧ４、ＩｇＧ４／ＩｇＭ（又はそれらの断片もしくはバリアント）、場合により、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又はＩｇＭの一つ又は複数からのＣＨ_２ドメイン、ならびに／あるいはＩｇＥ及び／又はＩｇＭからのＣＨ_４ドメインを含む。特定の実施形態では、ヒンジ、ＣＨ_２、ＣＨ_３、及びＣＨ_４ドメインは、ヒトＩｇからである。

【0173】

一部の例は、ヒンジ／ＣＨ_４ドメインの以下の組み合わせを含む、それからなる、又はそれから本質的になるハイブリッドＦｃ領域を含む：ＩｇＡ１／ＩｇＥ、ＩｇＡ１／ＩｇＭ、ＩｇＡ２／ＩｇＥ、ＩｇＡ２／ＩｇＭ、ＩｇＤ／ＩｇＥ、ＩｇＤ／ＩｇＭ、ＩｇＧ１／ＩｇＥ、ＩｇＧ１／ＩｇＭ、ＩｇＧ２／ＩｇＥ、ＩｇＧ２／ＩｇＭ、ＩｇＧ３／ＩｇＥ、ＩｇＧ３／ＩｇＭ、ＩｇＧ４／ＩｇＥ、ＩｇＧ４／ＩｇＭ（又はその断片もしくはバリアント）、場合により、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又はＩｇＭの一つ又は複数からのＣＨ_２ドメイン、ならびに／あるいはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又はＩｇＭの一つ又は複数からのＣＨ_３ドメインを含む。

【0174】

ハイブリッドＦｃ領域の具体的な例は、例えば、ＷＯ２００８／１４７１４３において見出すことができ、それは、ＩｇＧサブクラスの組み合わせ又はヒトＩｇＤ及びＩｇＧの組み合わせから由来する。

【0175】

また、含まれるのは、誘導体化された又は別の方法で修飾されたＦｃ領域を有する抗体又はその抗原結合断片である。特定の態様では、Ｆｃ領域は、例えば、野生型又は天然のＦｃ領域と比べて、リン酸化、硫酸化、アクリル化、グリコシル化、メチル化、ファルネシル化、アセチル化、アミド化、及び同様のものにより修飾され得る。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、野生型又は天然グリコシル化パターンを含んでもよく、又は、あるいは、天然形態と比べて増加したグリコシル化、天然形態と比べて減少したグリコシル化を含んでもよく、又はそれは、完全に脱グリコシル化されてもよい。修飾Ｆｃグリコフォームの一例として、Ｆｃ領域の減少したグリコシル化は、第一の補体成分Ｃ１のＣ１ｑ領域への結合、ＡＤＣＣ関連活性における減少、及び／又はＣＤＣ関連活性における減少を低下させる。特定の実施形態は、このように、脱グリコシル化又は非グリコシル化Ｆｃ領域を用いる。例示的な非グリコシル化Ｆｃ領域の産生については、例えば、ＷＯ２００５／０４７３３７を参照のこと。Ｆｃ領域グリコフォームの別の例は、Ｋａｂａｔらのナンバリングシステムに従って、Ｑ２９５位置をシステイン残基で置換することにより生成することができる（例、米国特許出願第２０１０／００８０７９４号を参照のこと）。特定の実施形態は、Ｆｃ領域中の糖タンパク質の約８０～１００％が、フルクトースを欠く成熟コア糖構造を含むＦｃ領域を含み得る（例、米国特許出願第２０１０／０２５５０１３号を参照のこと）。一部の実施形態は、例えば、Ｆｃ γＲＩ、Ｆｃ γＲＩａ、もしくはＦｃ γＲＩＩＩａについての親和性を増加させるために、及び／又はＦｃ γＲＩＩａ発現細胞による貪食を改善するために、フコシル化のレベルを低下させるために置換又は欠失により最適化されるＦｃ領域を含む（米国特許出願第２０１０／０２４９３８２号及び第２００７／０１４８１７０号を参照のこと）。

【0176】

修飾Ｆｃグリコフォームの別の例として、抗体又はその抗原結合断片のＦｃ領域は、オリゴマンノース型Ｎ－グリカンを含んでもよく、及び、場合により、以下の一つ又は複数を有する：複合型Ｎ－グリカンを含む対応するＦｃ領域と比べて、増加したＡＤＣＣエフェクター活性、ＦｃγＲＩＩＩＡ（及び特定の他のＦｃＲ）についての増加した結合親和性、ＮＲＰ２ａポリペプチドの標的についての同様の又は増加した結合特異性、ＮＲＰ２ａポリペプチドの標的についての同様の又はより高い結合親和性、ならびに／あるいはマンノース受容体についての同様の又はより低い結合親和性（例、米国特許出願第２００７／００９２５２１号及び米国特許第７，７００，３２１号を参照のこと）。別の例として、ＦｃγＲについてのＦｃ領域の増強した親和性は、操作又はバリアント細胞株における抗体の発現により生成された操作グリコフォームを使用して達成されている（例、Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：１７６－１８０，１９９９；Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ．７４：２８８－２９４，２００１；Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－２６７４０，２００２；Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７８：３４６６－３４７３，２００３；及び米国特許出願第２００７／０１１１２８１号を参照のこと）。特定のＦｃ領域グリコフォームは、増加した割合のＮ－グリコシド結合型複合体糖鎖を含み、それは、糖鎖の還元末端でＮ－アセチルグルコサミンの６位に結合したフコースの１位を有さない（例、米国特許出願第２０１０／００９２９９７号を参照のこと）。特定の実施形態は、α－２，６連結により、それぞれの末端シアル酸部分に接続された少なくとも一つのガラクトース部分を伴ってグリコシル化されるＩｇＧ Ｆｃ領域を含み得るが、場合により、ここで、Ｆｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ領域と比べて、より高い抗炎症活性を有する（米国特許出願第２００８／０２０６２４６号を参照のこと）。これらの及び関連する改変グリコシル化アプローチの特定のものが、本明細書中に記載されるように、ＦｃＲ、例えばＦｃγＲＩＩＩなどに選択的に結合し、ＡＤＣＣを媒介し、Ｆｃ領域の他の特性を改変させるＦｃ領域の能力の実質的な増強を生成した。

【0177】

抗体又はその抗原結合断片の特定のバリアント、断片、ハイブリッド、又は別の方法で修飾されたＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列（例、同じ種、同じＩｇクラス、同じＩｇサブクラス）と比べて、一つ又は複数のＦｃＲへの改変された結合、ならびに／あるいはエフェクター機能への対応する変化を有し得る。例えば、そのようなＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃε受容体、及び／又は新生児Ｆｃ受容体の一つ又は複数への増加した結合を有し得る。他の実施形態では、バリアント、断片、ハイブリッド、又は修飾Ｆｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃε受容体、及び／又は新生児Ｆｃ受容体の一つ又は複数への減少した結合を有し得る。特定のＦｃＲが、本明細書中の他の箇所に記載されている。

【0178】

一部の実施形態では、抗体は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃε受容体、及び／又は新生児Ｆｃ受容体の一つ又は複数への結合を増加させるための一つ又は複数の変異を含むＦｃドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃε受容体、及び／又は新生児Ｆｃ受容体の一つ又は複数への結合を増加させるための一つ又は複数の変異を含むＩｇＧ１又はＩｇＧ３ Ｆｃドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、エフェクター機能を増加させるための一つ又は複数の変異を含むＦｃドメインを含む。一部の実施形態では、少なくとも一つの抗体は、エフェクター機能を増加させるための一つ又は複数の変異を含む、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３から選択されるＦｃドメインを含む。

【0179】

一部の実施形態では、抗体は、高いエフェクター活性を伴うＦｃドメインを含む遮断抗体である。一部の実施形態では、遮断抗体は、エフェクター機能を増加させるための一つ又は複数の変異を含む、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３から選択されるＦｃドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、高いエフェクター活性を伴うＦｃドメインを含む部分遮断抗体である。一部の実施形態では、部分遮断抗体は、エフェクター機能を増加させるための一つ又は複数の変異を含む、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３から選択されるＦｃドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、高いエフェクター活性を伴うＦｃドメインを含む非遮断抗体である。一部の実施形態では、非遮断抗体は、エフェクター機能を増加させるための一つ又は複数の変異を含む、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３から選択されるＦｃドメインを含む。

【0180】

一部の実施形態では、抗体は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃε受容体、及び／又は新生児Ｆｃ受容体の一つ又は複数への結合を減少させるための一つ又は複数の変異を含むＦｃドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃε受容体、及び／又は新生児Ｆｃ受容体の一つ又は複数への結合を減少させるための一つ又は複数の変異を含むＩｇＧ１又はＩｇＧ３ Ｆｃドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、エフェクター機能を減少させるための一つ又は複数の変異を含むＦｃドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、エフェクター機能を減少させるための一つ又は複数の変異を含む、ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４から選択されるＦｃドメインを含む。

【0181】

一部の実施形態では、抗体は、低いエフェクター活性を伴うＦｃドメインを含む遮断抗体である。一部の実施形態では、遮断抗体は、エフェクター機能を減少させるための一つ又は複数の変異を含む、ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４から選択されるＦｃドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、低いエフェクター活性を伴うＦｃドメインを含む部分遮断抗体である。一部の実施形態では、部分遮断抗体は、エフェクター機能を減少させるための一つ又は複数の変異を含む、ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４から選択されるＦｃドメインを含む。一部の実施形態では、抗体は、低いエフェクター活性を伴うＦｃドメインを含む非遮断抗体である。一部の実施形態では、非遮断抗体は、エフェクター機能を減少させるための一つ又は複数の変異を含む、ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４から選択されるＦｃドメインを含む。

【0182】

改変された（例、増加した、減少した）エフェクター機能／ＦｃＲ結合を有するＦｃバリアントの具体的な例は、例えば、米国特許第５，６２４，８２１号及び第７，４２５，６１９号；米国特許出願第２００９／００１７０２３号、第２００９／００１０９２１号、及び第２０１０／０２０３０４６号；ならびにＷＯ２０００／４２０７２号及びＷＯ２００４／０１６７５０号において見出すことができる。特定の例は、位置２９８、３３３、及び／又は３３４に一つ又は複数の置換を有するヒトＦｃ領域、例えば、Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、及び／又はＫ３３４Ａ（ＫａｂａｔらのＥＵインデックスのナンバリングに基づく）を含み、それらは、活性化受容体ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を増加させ、阻害受容体ＦｃγＲＩＩｂへの結合を低下させることが示されている。これらの変異を組み合わせて、ＦｃＲへの結合のさらなる改善を有する二重及び三重変異バリアントを得ることができる。特定の実施形態はＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ三重変異体を含み、それは、ＦｃγＲＩＩＩａへの増加した結合、ＦｃγＲＩＩｂへの減少した結合、及び増加したＡＤＣＣを有する（例、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６６０４，２００１；及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ．３０：４８７－４９０，２００２を参照のこと）。また、Ｕｍａｎａら、上記；及び米国特許第７，６６２，９２５号において開示されているように、ＦｃＲへの増加した結合を有する、操作されたＦｃグリコフォームを参照のこと。一部の実施形態は、ＫａｂａｔらのＥＵインデックスに基づいて、４３４Ｓ、２５２Ｙ／４２８Ｌ、２５２Ｙ／４３４Ｓ、及び４２８Ｌ／４３４Ｓから選択される一つ又は複数の置換を含むＦｃ領域を含む（米国出願第２００９／０１６３６９９号及び第２００６０１７３１７０号を参照のこと）。

【0183】

特定のバリアント、断片、ハイブリッド、又は修飾Ｆｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、改変されたエフェクター機能を有し得る。例えば、そのようなＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、増加した補体固定もしくは活性化、増加したＣｌｑ結合親和性、増加したＣＤＣ関連活性、増加したＡＤＣＣ関連活性、及び／又は増加したＡＤＣＰ関連活性を有し得る。他の実施形態では、そのようなＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、減少した補体固定もしくは活性化、減少したＣｌｑ結合親和性、減少したＣＤＣ関連活性、減少したＡＤＣＣ関連活性、及び／又は減少したＡＤＣＰ関連活性を有し得る。単に一つの例証的な例として、Ｆｃ領域は、補体結合部位、例えばＣ１ｑ結合部位などにおける欠失もしくは置換、及び／又はＡＤＣＣ部位における欠失もしくは置換を含み得る。そのような欠失／置換の例は、例えば、米国特許第７，０３０，２２６号において記載されている。多くのＦｃエフェクター機能、例えばＡＤＣＣなどが、当技術分野におけるルーチン的な技術に従ってアッセイすることができる（例、Ｚｕｃｋｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７：１－２６，１９７８を参照のこと）。そのようなアッセイのための有用なエフェクター細胞は、限定されないが、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、及び他の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含む。代わりに、又は加えて、特定のＦｃエフェクター機能は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ．９５：６５２－６５６，１９９８において記載されている動物モデルを用いることにより、インビボで評価することができる。

【0184】

特定のバリアントハイブリッド、又は修飾Ｆｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、改変した安定性又は半減期を有し得る。特定の実施形態では、そのようなＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、増加した半減期を有し得る。他の実施形態では、バリアントハイブリッド、又は修飾Ｆｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、減少した半減期を有し得る。半減期は、当技術分野におけるルーチン的な技術、例えば放射性標識、ＥＬＩＳＡ、又は他の方法などに従って、インビトロ（例、生理学的条件下で）又はインビボで測定することができる。安定性又は半減期のインビボ測定値は、血液、血清、血漿、尿、もしくは脳脊髄液を含む、一つ又は複数の体液、又は所与の組織、例えば肝臓、腎臓、筋肉、中枢神経系組織、骨などにおいて測定することができる。一例として、ＦｃＲｎに結合するその能力を改変させる、Ｆｃ領域への修飾は、インビボでのその半減期を改変させることができる。インビボ薬物動態特性（例、インビボ平均排出半減期）を測定するためのアッセイ、及びＦｃＲｎへのその結合を改変させるＦｃ修飾の非限定的な例が、例えば、米国特許第７，２１７，７９７号及び第７，７３２，５７０号；ならびに米国特許出願第 ＵＳ ２０１０／０１４３２５４及び２０１０／０１４３２５４において記載されている。

【0185】

安定性又は半減期を改変させるための修飾の追加の非限定的な例は、Ｋａｂａｔらのナンバリングシステムによる、ＣＨ_２ドメイン中の２５１～２５６、２８５～２９０、及び３０８～３１４、ならびにＣＨ_３ドメイン中の３８５～３８９及び４２８～４３６から選択されるアミノ酸残基の一つ又は複数における置換／欠失を含む。米国特許出願第２００３／０１９０３１１号を参照のこと。具体的な例は、２５１位のロイシンでの置換、２５２位のチロシン、トリプトファン又はフェニルアラニンでの置換、２５４位のスレオニン又はセリンでの置換、２５５位のアルギニンでの置換、２５６位のグルタミン、アルギニン、セリン、スレオニン、又はグルタミン酸での置換、３０８位のスレオニンでの置換、３０９位のプロリンでの置換、３１１位のセリンでの置換、３１２位のアスパラギン酸での置換、３１４位のロイシンでの置換、３８５位のアルギニン、アスパラギン酸、又はセリンでの置換、３８６位のスレオニン又はプロリンでの置換、３８７位のアルギニン又はプロリンでの置換、３８９位のプロリン、アスパラギン、又はセリンでの置換、４２８位のメチオニン又はスレオニンでの置換、４３４位のチロシン又はフェニルアラニンでの置換、４３３位のヒスチジン、アルギニン、リジン、又はセリンでの置換、ならびに／あるいは４３６位のヒスチジン、チロシン、アルギニン、又はスレオニンでの置換、これらの任意の組み合わせを含む、を含む。そのような修飾は、場合により、ＦｃＲｎについてのＦｃ領域の親和性を増加させ、それにより、対応する野生型Ｆｃ領域と比べて、半減期を増加させる。

【0186】

特定のバリアントハイブリッド、又は修飾Ｆｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、改変された溶解性を有し得る。特定の実施形態では、そのようなＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、増加した溶解性を有し得る。他の実施形態では、バリアントハイブリッド、又は修飾Ｆｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ配列と比べて、減少した溶解性を有し得る。溶解性は、例えば、当技術分野におけるルーチン的な技術に従って、インビトロで（例、生理学的条件下で）測定することができる。例示的な溶解性測定値が、本明細書中の他の箇所に記載されている。

【0187】

バリアントの追加の例は、重鎖の２５０位、３１４位、又は４２８位の一つ又は複数で、あるいはそれらの任意の組み合わせ、例えば２５０位及び４２８位、又は２５０位及び３１４位、又は３１４位及び４２８位、又は２５０位、３１４位、及び４２８位などで保存的置換又は非保存的置換（本明細書中の他の箇所で記載されている）を有するＩｇＧ Ｆｃ領域を含む（例、米国特許出願第２０１１／０１８３４１２号を参照のこと）。特定の実施形態では、２５０位での残基は、グルタミン酸もしくはグルタミンで置換され、及び／又は４２８位の残基は、ロイシンもしくはフェニルアラニンで置換される。ＩｇＧ Ｆｃバリアントの別の例証的な例として、２１４位～２３８位、２９７位～２９９位、３１８位～３２２位、及び／又は３２７位～３３１位でのアミノ酸残基の任意の一つ又は複数を、修飾（例、保存的又は非保存的置換、欠失）のための適切な標的として使用してもよい。特定の実施形態では、ＩｇＧ ＦｃバリアントＣＨ_２ドメインは、２２８位、２３４位、２３５位、及び／又は３３１位でのアミノ酸置換を含み（例、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ及びＬｅｕ２３５Ａｌａ変異を伴うヒトＩｇＧ４を参照のこと）、Ｆｃ領域のエフェクター機能を減弱させる（例、米国特許第７，０３０，２２６号を参照のこと）。ここで、重鎖中の残基のナンバリングは、ＥＵインデックスのナンバリングである（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５^ｔｈ Ｅｄ．，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。これらの及び関連する実施形態の特定のものは、場合により、低下したエフェクター機能、例えばＡＤＣＣ又はＣＤＣ関連活性などを伴うことなく、改変（例、増加、減少）したＦｃＲｎ結合及び／又は血清半減期を有する。

【0188】

追加の例は、野生型Ｆｃ領域の２７９位、３４１位、３４３位、もしくは３７３位、又はそれらの任意の組み合わせで一つ又は複数のアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域を含む（例、米国特許出願第２００７／０２２４１８８号を参照のこと）。ヒトＩｇＧについてのこれらの位置での野生型アミノ酸残基は、バリン（２７９）、グリシン（３４１）、プロリン（３４３）、及びチロシン（３７３）である。置換は、保存的又は非保存的であることができる、あるいは本明細書中に記載されるように、非天然アミノ酸又は模倣体を含むことができる。単独で又はこれらの置換との組み合わせにおいて、特定の実施形態はまた、以下から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれ以上のアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域を用いてもよい：２３５Ｇ、２３５Ｒ、２３６Ｆ、２３６Ｒ、２３６Ｙ、２３７Ｋ、２３７Ｎ、２３７Ｒ、２３８Ｅ、２３８Ｇ、２３８Ｈ、２３８Ｉ、２３８Ｌ、２３８Ｖ、２３８Ｗ、２３８Ｙ、２４４Ｌ、２４５Ｒ、２４７Ａ、２４７Ｄ、２４７Ｅ、２４７Ｆ、２４７Ｍ、２４７Ｎ、２４７Ｑ、２４７Ｒ、２４７Ｓ、２４７Ｔ、２４７Ｗ、２４７Ｙ、２４８Ｆ、２４８Ｐ、２４８Ｑ、２４８Ｗ、２４９Ｌ、２４９Ｍ、２４９Ｎ、２４９Ｐ、２４９Ｙ、２５１Ｈ、２５１Ｉ、２５１Ｗ、２５４Ｄ、２５４Ｅ、２５４Ｆ、２５４Ｇ、２５４Ｈ、２５４Ｉ、２５４Ｋ、２５４Ｌ、２５４Ｍ、２５４Ｎ、２５４Ｐ、２５４Ｑ、２５４Ｒ、２５４Ｖ、２５４Ｗ、２５４Ｙ、２５５Ｋ、２５５Ｎ、２５６Ｈ、２５６Ｉ、２５６Ｋ、２５６Ｌ、２５６Ｖ、２５６Ｗ、２５６Ｙ、２５７Ａ、２５７Ｉ、２５７Ｍ、２５７Ｎ、２５７Ｓ、２５８Ｄ、２６０Ｓ、２６２Ｌ、２６４Ｓ、２６５Ｋ、２６５Ｓ、２６７Ｈ、２６７Ｉ、２６７Ｋ、２６８Ｋ、２６９Ｎ、２６９Ｑ、２７１Ｔ、２７２Ｈ、２７２Ｋ、２７２Ｌ、２７２Ｒ、２７９Ａ、２７９Ｄ、２７９Ｆ、２７９Ｇ、２７９Ｈ、２７９Ｉ、２７９Ｋ、２７９Ｌ、２７９Ｍ、２７９Ｎ、２７９Ｑ、２７９Ｒ、２７９Ｓ、２７９Ｔ、２７９Ｗ、２７９Ｙ、２８０Ｔ、２８３Ｆ、２８３Ｇ、２８３Ｈ、２８３Ｉ、２８３Ｋ、２８３Ｌ、２８３Ｍ、２８３Ｐ、２８３Ｒ、２８３Ｔ、２８３Ｗ、２８３Ｙ、２８５Ｎ、２８６Ｆ、２８８Ｎ、２８８Ｐ、２９２Ｅ、２９２Ｆ、２９２Ｇ、２９２Ｉ、２９２Ｌ、２９３Ｓ、２９３Ｖ、３０１Ｗ、３０４Ｅ、３０７Ｅ、３０７Ｍ、３１２Ｐ、３１５Ｆ、３１５Ｋ、３１５Ｌ、３１５Ｐ、３１５Ｒ、３１６Ｆ、３１６Ｋ、３１７Ｐ、３１７Ｔ、３１８Ｎ、３１８Ｐ、３１８Ｔ、３３２Ｆ、３３２Ｇ、３３２Ｌ、３３２Ｍ、３３２Ｓ、３３２Ｖ、３３２Ｗ、３３９Ｄ、３３９Ｅ、３３９Ｆ、３３９Ｇ、３３９Ｈ、３３９Ｉ、３３９Ｋ、３３９Ｌ、３３９Ｍ、３３９Ｎ、３３９Ｑ、３３９Ｒ、３３９Ｓ、３３９Ｗ、３３９Ｙ、３４１Ｄ、３４１Ｅ、３４１Ｆ、３４１Ｈ、３４１Ｉ、３４１Ｋ、３４１Ｌ、３４１Ｍ、３４１Ｎ、３４１Ｐ、３４１Ｑ、３４１Ｒ、３４１Ｓ、３４１Ｔ、３４１Ｖ、３４１Ｗ、３４１Ｙ、３４３Ａ、３４３Ｄ、３４３Ｅ、３４３Ｆ、３４３Ｇ、３４３Ｈ、３４３Ｉ、３４３Ｋ、３４３Ｌ、３４３Ｍ、３４３Ｎ、３４３Ｑ、３４３Ｒ、３４３Ｓ、３４３Ｔ、３４３Ｖ、３４３Ｗ、３４３Ｙ、３７３Ｄ、３７３Ｅ、３７３Ｆ、３７３Ｇ、３７３Ｈ、３７３Ｉ、３７３Ｋ、３７３Ｌ、３７３Ｍ、３７３Ｎ、３７３Ｑ、３７３Ｒ、３７３Ｓ、３７３Ｔ、３７３Ｖ、３７３Ｗ、３７５Ｒ、３７６Ｅ、３７６Ｆ、３７６Ｇ、３７６Ｈ、３７６Ｉ、３７６Ｌ、３７６Ｍ、３７６Ｎ、３７６Ｐ、３７６Ｑ、３７６Ｒ、３７６Ｓ、３７６Ｔ、３７６Ｖ、３７６Ｗ、３７６Ｙ、３７７Ｇ、３７７Ｋ、３７７Ｐ、３７８Ｎ、３７９Ｎ、３７９Ｑ、３７９Ｓ、３７９Ｔ、３８０Ｄ、３８０Ｎ、３８０Ｓ、３８０Ｔ、３８２Ｄ、３８２Ｆ、３８２Ｈ、３８２Ｉ、３８２Ｋ、３８２Ｌ、３８２Ｍ、３８２Ｎ、３８２Ｐ、３８２Ｑ、３８２Ｒ、３８２Ｓ、３８２Ｔ、３８２Ｖ、３８２Ｗ、３８２Ｙ、３８５Ｅ、３８５Ｐ、３８６Ｋ、４２３Ｎ、４２４Ｈ、４２４Ｍ、４２４Ｖ、４２６Ｄ、４２６Ｌ、４２７Ｎ、４２９Ａ、４２９Ｆ、４２９Ｍ、４３０Ａ、４３０Ｄ、４３０Ｆ、４３０Ｇ、４３０Ｈ、４３０Ｉ、４３０Ｋ、４３０Ｌ、４３０Ｍ、４３０Ｎ、４３０Ｐ、４３０Ｑ、４３０Ｒ、４３０Ｓ、４３０Ｔ、４３０Ｖ、４３０Ｗ、４３０Ｙ、４３１Ｈ、４３１Ｋ、４３１Ｐ、４３２Ｒ、４３２Ｓ、４３８Ｇ、４３８Ｋ、４３８Ｌ、４３８Ｔ、４３８Ｗ、４３９Ｅ、４３９Ｈ、４３９Ｑ、４４０Ｄ、４４０Ｅ、４４０Ｆ、４４０Ｇ、４４０Ｈ、４４０Ｉ、４４０Ｋ、４４０Ｌ、４４０Ｍ、４４０Ｑ、４４０Ｔ、４４０Ｖ又は４４２Ｋ。上の通り、重鎖中の残基のナンバリングは、ＥＵインデックスのナンバリングである（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，上記を参照のこと）。そのようなバリアントＦｃ領域は、典型的には、バリアントＦｃ領域が動作可能に付着する抗体に対して、改変されたエフェクター機能又は改変された血清半減期を付与する。好ましくは、改変されたエフェクター機能は、そのようなアミノ酸置換を欠く対応するＦｃ領域と比較した、ＡＤＣＣにおける増加、ＡＤＣＣにおける減少、ＣＤＣにおける増加、ＣＤＣにおける減少、Ｃｌｑ結合親和性における増加、Ｃｌｑ結合親和性における減少、ＦｃＲ（好ましくはＦｃＲｎ）結合親和性における増加、又はＦｃＲ（好ましくはＦｃＲｎ）結合親和性における減少である。

【0189】

追加の例は、２２１位、２２２位、２２４位、２２７位、２２８位、２３０位、２３１位、２２３位、２３３位、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２３８位、２３９位、２４０位、２４１位、２４３位、２４４位、２４５位、２４６位、２４７位、２４９位、２５０位、２５８位、２６２位、２６３位、２６４位、２６５位、２６６位、２６７位、２６８位、２６９位、２７０位、２７１位、２７２位、２７３位、２７４位、２７５位、２７６位、２７８位、２８０位、２８１位、２８３位、２８５位、２８６位、２８８位、２９０位、２９１位、２９３位、２９４位、２９５位、２９６位、２９７位、２９８位、２９９位、３００位、３０２位、３１３位、３１７位、３１８位、３２０位、３２２位、３２３位、３２４位、３２５位、３２６位、３２７位、３２８位、３２９位、３３０位、３３１位、３３２位、３３３位、３３４位、３３５位、３３６位及び／又は４２８位の一つ又は複数にアミノ酸置換を含むバリアントＦｃ領域を含む（例、米国特許第７，６６２，９２５号を参照のこと）。特定の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、以下からなる群から選択される少なくとも一つのアミノ酸置換を含む：Ｐ２３０Ａ、Ｅ２３３Ｄ、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｙ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｅ、Ｓ２３９Ｎ、Ｓ２３９Ｑ、Ｓ２３９Ｔ、Ｖ２４０Ｉ、Ｖ２４０Ｍ、Ｆ２４３Ｌ、Ｖ２６４Ｉ、Ｖ２６４Ｔ、Ｖ２６４Ｙ、Ｖ２６６Ｉ、Ｅ２７２Ｙ、Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｌ、Ｋ２７４Ｙ、Ｆ２７５Ｗ、Ｎ２７６Ｌ、Ｙ２７８Ｔ、Ｖ３０２Ｉ、Ｅ３１８Ｒ、Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４Ｉ、Ｓ３２４Ｖ、Ｎ３２５Ｔ、Ｋ３２６Ｉ、Ｋ３２６Ｔ、Ｌ３２８Ｍ、Ｌ３２８Ｉ、Ｌ３２８Ｑ、Ｌ３２８Ｄ、Ｌ３２８Ｖ、Ｌ３２８Ｔ、Ａ３３０Ｙ、Ａ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｉ、Ｉ３３２Ｄ、Ｉ３３２Ｅ、Ｉ３３２Ｎ、Ｉ３３２Ｑ、Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５Ｒ、及びＴ３３５Ｙ。他の特定の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、以下からなる群から選択される少なくとも一つのアミノ酸置換を含む：Ｖ２６４Ｉ、Ｆ２４３Ｌ／Ｖ２６４Ｉ、Ｌ３２８Ｍ、Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｍ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ、Ａ３３０Ｙ、Ｉ３３２Ｄ、Ｌ３２８Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｑ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｔ、Ｖ２４０Ｉ、Ｖ２６６Ｉ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｎ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｑ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｎ、Ｓ２３９Ｅ／Ｉ３３２Ｑ、Ｓ２３９Ｎ／Ｉ３３２Ｄ、Ｓ２３９Ｎ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｉ３３２Ｄ、Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ２３４Ｅ、Ｌ２３４Ｙ、Ｌ２３４Ｉ、Ｌ２３５Ｄ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｙ、Ｌ２３５Ｉ、Ｓ２３９Ｔ、Ｖ２４０Ｍ、Ｖ２６４Ｙ、Ａ３３０Ｉ、Ｎ３２５Ｔ、Ｌ３２８Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｖ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｔ／Ｉ３３２Ｅ、Ｌ３２８Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｑ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｉ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｎ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ｓ２９８Ａ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｖ２６４Ｉ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｉ、Ｐ２３０Ａ、Ｐ２３０Ａ／Ｅ２３３Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｅ２７２Ｙ、Ｋ２７４Ｔ、Ｋ２７４Ｅ、Ｋ２７４Ｒ、Ｋ２７４Ｌ、Ｋ２７４Ｙ、Ｆ２７５Ｗ、Ｎ２７６Ｌ、Ｙ２７８Ｔ、Ｖ３０２Ｉ、Ｅ３１８Ｒ、Ｓ３２４Ｄ、Ｓ３２４Ｉ、Ｓ３２４Ｖ、Ｋ３２６Ｉ、Ｋ３２６Ｔ、Ｔ３３５Ｄ、Ｔ３３５Ｒ、Ｔ３３５Ｙ、Ｖ２４０Ｉ／Ｖ２６６Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｌ２３４Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｌ２３５Ｄ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｖ２４０Ｉ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｖ２６４Ｔ、Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｋ３２６Ｅ、及びＳ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ／Ｋ３２６Ｔ。より具体的な実施形態では、バリアントＦｃ領域は、以下からなる群から選択される一連の置換を含む：Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｆ２４１Ｙ／Ｆ２４３Ｙ／Ｖ２６２Ｔ／Ｖ２６４Ｔ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｅ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｙ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｈ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｖ２６４Ｅ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｙ２９６Ｎ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｎ２９７Ｄ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｖ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｄ２６５Ｉ／Ｎ２９７Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、及びＮ２９７Ｄ／Ｓ２９８Ａ／Ａ３３０Ｙ／Ｉ３３２Ｅ。特定の実施形態では、バリアントＦｃ領域は、３３２位にアミノ酸置換を含む（ＥＵインデックス、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、上記を参照のこと）。置換の例は、３３２Ａ、３３２Ｄ、３３２Ｅ、３３２Ｆ、３３２Ｇ、３３２Ｈ、３３２Ｋ、３３２Ｌ、３３２Ｍ、３３２Ｎ、３３２Ｐ、３３２Ｑ、３３２Ｒ、３３２Ｓ、３３２Ｔ、３３２Ｖ、３３２Ｗ及び３３２Ｙを含む。Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、ＫａｂａｔらのＥＵインデックスのナンバリングである。本明細書中に記載される他の特性の間で、そのようなバリアントＦｃ領域は、対応する野生型Ｆｃ領域と比べて、ＦｃγＲについての増加した親和性、増加した安定性、及び／又は増加した溶解性を有し得る。

【0190】

さらなる例は、以下のアミノ酸置換の一つ又は複数を含むバリアントＦｃ領域を含む：２２４Ｎ／Ｙ、２２５Ａ、２２８Ｌ、２３０Ｓ、２３９Ｐ、２４０Ａ、２４１Ｌ、２４３Ｓ／Ｌ／Ｇ／Ｈ／Ｉ、２４４Ｌ、２４６Ｅ、２４７Ｌ／Ａ、２５２Ｔ、２５４Ｔ／Ｐ、２５８Ｋ、２６１Ｙ、２６５Ｖ、２６６Ａ、２６７Ｇ／Ｎ、２６８Ｎ、２６９Ｋ／Ｇ、２７３Ａ、２７６Ｄ、２７８Ｈ、２７９Ｍ、２８０Ｎ、２８３Ｇ、２８５Ｒ、２８８Ｒ、２８９Ａ、２９０Ｅ、２９１Ｌ、２９２Ｑ、２９７Ｄ、２９９Ａ、３００Ｈ、３０１Ｃ、３０４Ｇ、３０５Ａ、３０６Ｉ／Ｆ、３１１Ｒ、３１２Ｎ、３１５Ｄ／Ｋ／Ｓ、３２０Ｒ、３２２Ｅ、３２３Ａ、３２４Ｔ、３２５Ｓ、３２６Ｅ／Ｒ、３３２Ｔ、３３３Ｄ／Ｇ、３３５Ｉ、３３８Ｒ、３３９Ｔ、３４０Ｑ、３４１Ｅ、３４２Ｒ、３４４Ｑ、３４７Ｒ、３５１Ｓ、３５２Ａ、３５４Ａ、３５５Ｗ、３５６Ｇ、３５８Ｔ、３６１Ｄ／Ｙ、３６２Ｌ、３６４Ｃ、３６５Ｑ／Ｐ、３７０Ｒ、３７２Ｌ、３７７Ｖ、３７８Ｔ、３８３Ｎ、３８９Ｓ、３９０Ｄ、３９１Ｃ、３９３Ａ、３９４Ａ、３９９Ｇ、４０４Ｓ、４０８Ｇ、４０９Ｒ、４１１Ｉ、４１２Ａ、４１４Ｍ、４２１Ｓ、４２２Ｉ、４２６Ｆ／Ｐ、４２８Ｔ、４３０Ｋ、４３１Ｓ、４３２Ｐ、４３３Ｐ、４３８Ｌ、４３９Ｅ／Ｒ、４４０Ｇ、４４１Ｆ、４４２Ｔ、４４５Ｒ、４４６Ａ、４４７Ｅ、場合により、バリアントは、親Ｆｃポリペプチドと比較して、改変された、Ｆｃリガンドの認識及び／又は改変されたエフェクター機能を有し、それにおいて、残基のナンバリングは、ＫａｂａｔらにおけるＥＵインデックスのナンバリングである。これらの及び関連する実施形態の具体的な例は、以下の置換のセットを含む、又はそれらからなるバリアントＦｃ領域を含む：（１）Ｎ２７６Ｄ、Ｒ２９２Ｑ、Ｖ３０５Ａ、Ｉ３７７Ｖ、Ｔ３９４Ａ、Ｖ４１２Ａ及びＫ４３９Ｅ；（２）Ｐ２４４Ｌ、Ｋ２４６Ｅ、Ｄ３９９Ｇ及びＫ４０９Ｒ；（３）Ｓ３０４Ｇ、Ｋ３２０Ｒ、Ｓ３２４Ｔ、Ｋ３２６Ｅ及びＭ３５８Ｔ；（４）Ｆ２４３Ｓ、Ｐ２４７Ｌ、Ｄ２６５Ｖ、Ｖ２６６Ａ、Ｓ３８３Ｎ及びＴ４１１Ｉ；（５）Ｈ２２４Ｎ、Ｆ２４３Ｌ、Ｔ３９３Ａ及びＨ４３３Ｐ；（６）Ｖ２４０Ａ、Ｓ２６７Ｇ、Ｇ３４１Ｅ及びＥ３５６Ｇ；（７）Ｍ２５２Ｔ、Ｐ２９１Ｌ、Ｐ３５２Ａ、Ｒ３５５Ｗ、Ｎ３９０Ｄ、Ｓ４０８Ｇ、Ｓ４２６Ｆ及びＡ４３１Ｓ；（８）Ｐ２２８Ｌ、Ｔ２８９Ａ、Ｌ３６５Ｑ、Ｎ３８９Ｓ及び５４４０Ｇ；（９）Ｆ２４１Ｌ、Ｖ２７３Ａ、Ｋ３４０Ｑ及びＬ４４１Ｆ；（１０）Ｆ２４１Ｌ、Ｔ２９９Ａ、Ｉ３３２Ｔ及びＭ４２８Ｔ；（１１）Ｅ２６９Ｋ、Ｙ３００Ｈ、Ｑ３４２Ｒ、Ｖ４２２Ｉ及びＧ４４６Ａ；（１２）Ｔ２２５Ａ、Ｒ３０１ｃ、Ｓ３０４Ｇ、Ｄ３１２Ｎ、Ｎ３１５Ｄ、Ｌ３５１Ｓ及びＮ４２１Ｓ；（１３）Ｓ２５４Ｔ、Ｌ３０６Ｉ、Ｋ３２６Ｒ及びＱ３６２Ｌ；（１４）Ｈ２２４Ｙ、Ｐ２３０Ｓ、Ｖ３２３Ａ、Ｅ３３３Ｄ、Ｋ３３８Ｒ及びＳ３６４Ｃ；（１５）Ｔ３３５Ｉ、Ｋ４１４Ｍ及びＰ４４５Ｒ；（１６）Ｔ３３５Ｉ及びＫ４１４Ｍ；（１７）Ｐ２４７Ａ、Ｅ２５８Ｋ、Ｄ２８０Ｎ、Ｋ２８８Ｒ、Ｎ２９７Ｄ、Ｔ２９９Ａ、Ｋ３２２Ｅ、Ｑ３４２Ｒ、Ｓ３５４Ａ及びＬ３６５Ｐ；（１８）Ｈ２６８Ｎ、Ｖ２７９Ｍ、Ａ３３９Ｔ、Ｎ３６１Ｄ及びＳ４２６Ｐ；（１９）Ｃ２６１Ｙ、Ｋ２９０Ｅ、Ｌ３０６Ｆ、Ｑ３１１Ｒ、Ｅ３３３Ｇ及びＱ４３８Ｌ；（２０）Ｅ２８３Ｇ、Ｎ３１５Ｋ、Ｅ３３３Ｇ、Ｒ３４４Ｑ、Ｌ３６５Ｐ及びＳ４４２Ｔ；（２１）Ｑ３４７Ｒ、Ｎ３６１Ｙ及びＫ４３９Ｒ；（２２）Ｓ２３９Ｐ、Ｓ２５４Ｐ、Ｓ２６７Ｎ、Ｈ２８５Ｒ、Ｎ３１５Ｓ、Ｆ３７２Ｌ、Ａ３７８Ｔ、Ｎ３９０Ｄ、Ｙ３９１Ｃ、Ｆ４０４Ｓ、Ｅ４３０Ｋ、Ｌ４３２Ｐ及びＫ４４７Ｅ；ならびに（２３）Ｅ２６９Ｇ、Ｙ２７８Ｈ、Ｎ３２５Ｓ及びＫ３７０Ｒ、それにおいて、残基のナンバリングは、ＫａｂａｔらにおけるようにＥＵインデックスのナンバリングである（例、米国特許出願第２０１０／０１８４９５９号を参照のこと）。

【0191】

バリアントＦｃ領域はまた、例えば、米国特許出願第２００３／０１１８５９２号において記載されるように、一つ又は複数の変異ヒンジ領域を有することができる。例えば、ヒンジ領域中の一つ又は複数のシステインは、欠失される、又は異なるアミノ酸で置換されることができる。変異ヒンジ領域は、システイン残基を含まない、又はそれは、対応する野生型ヒンジ領域よりも１、２、又は３つ少ないシステイン残基を含むことができる。一部の実施形態では、この種類の変異ヒンジ領域を有するＦｃ領域は、野生型Ｉｇヒンジ領域と比べて、二量体化する、低下した能力を示す。

【0192】

特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４からのＦｃ（例、Ａｌｌｂｅｒｓｅ ａｎｄ Ｓｃｈｕｕｒｍａｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１０５：９－１９，２００２を参照のこと）、又はその断片もしくはバリアントを含む、又はそれからなる、又は本質的になる。下の表Ｆ１は、ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ４からの例示的な配列（ＣＨ１、ヒンジ（下線）、ＣＨ２、及びＣＨ３領域）を提供する。用いることができるバリアントＩｇＧ４配列の例は、例えば、Ｐｅｔｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，ＪＢＣ．２８７：２４５２５－２４５３３，２０１２において記載されており、Ｃ２２７、Ｃ２３０、Ｃ１２７（例、Ｃ１２７Ｓ）、及びＣ１３１（例、Ｃ１３１Ｓ）での置換を含む。使用することができる他のバリアントは、ＩｇＧ４中のＬ４４５Ｐ置換（ＩｇＧ４－２として表示される）、又はＩｇＧ１中のＤ３５６Ｅ及びＬ３５８Ｍ置換（ＩｇＧ１ｍ（ｚｆ）として表示される）を含む。

【表P1】

【0193】

上に記述するように、改変Ｆｃ領域を有する抗体は、典型的には、対応する野生型Ｆｃ領域と比べて、改変（例、改善、増加、減少）された薬物動態特性を有する。薬物動態特性の例は、安定性又は半減期、バイオアベイラビリティ（吸収される薬物の割合）、組織分布、分布の体積（薬物が、それが静脈内注射され、血漿と周囲の組織の間で平衡化された直後に分布する見掛けの体積）、濃度（血漿中の薬物の初期又は定常状態濃度）、排出速度定数（薬物が身体から除去される速度）、排出速度（排出のバランスを取るために要求される注入の速度）、曲線下面積（ＡＵＣ又は曝露；濃度－時間曲線の積分、単一用量後又は定常状態での）、クリアランス（単位時間当たりの薬物の除去された血漿の容積）、Ｃ_ｍａｘ（経口投与後の薬物のピーク血漿濃度）、ｔ_ｍａｘ（Ｃ_ｍａｘに達する時間）、Ｃ_ｍｉｎ（薬物が、次の用量が投与される前に達する最低濃度）、及び変動（定常状態での一つの投薬間隔内のピークトラフ変動）を含む。

【0194】

特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約ｐＨ７．４で、ほぼ生理学的ｐＨで、約２５℃もしくは室温で、及び／又は約３７℃もしくはヒト身体温度（例、インビボ、血清中、所与の組織中、所与の種、例えばラット、マウス、サル、又はヒトにおいて、など）で、約又は少なくとも約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約１２時間、約１８時間、約２０時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４０時間、約４８時間、約５０時間、約６０時間、約７０時間、約７２時間、約８０時間、約８４時間、約９０時間、約９６時間、約１２０時間、又は約１４４時間もしくはそれ以上、あるいは約１週間、又は約２週間、又は約３週間、又は約４週間、又は約５週間、又は約６週間もしくはそれ以上、あるいは任意の介在する半減期、その間の全ての範囲を含む、生物学的半減期を有する。

【0195】

一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約又は少なくとも約６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、又は７５℃のＴ_ｍを有する。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、約６０℃又はそれ以上のＴ_ｍを有する。

【0196】

一部の実施形態では、一つ又は複数の細胞傷害性薬剤又は化学療法剤にコンジュゲートされた抗体又はその抗原結合断片。細胞傷害性薬剤又は化学療法剤の一般的な例は、限定されないが、アルキル化剤、抗代謝剤、アントラサイクリン、抗腫瘍抗生物質、白金、Ｉ型トポイソメラーゼ阻害剤、ＩＩ型トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイド、及びタキサンを含む。細胞傷害性薬剤又は化学療法剤の具体的な例は、限定されないが、シクロホスファミド、シレンジタイド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メルファラン、プロカルバジン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、エンザスタウリン、ブスルファン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ゲフィチニブ、エルロチニブイダルビシン、テモゾロミド、エピルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド、テムシロリムス、エベロリムス、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ＣＴ５２９２３、パクリタキセル、イマチニブ、ダサチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブ、スニトニブ、バタラニブ、ゲフチニブ、エルロチニブ、ＡＥＥ－７８８、ジクロロ酢酸、タモキシフェン、ファスジル、ＳＢ－６８１３２３、セマキサニブ、ドネペジル、ガランタミン、メマンチン、リバスチグミン、タクリン、ラシギリン、ナルトレキソン、ルビプロストン、サフィナミド、イストラデフィリン、ピマバンセリン、ピトリサント、イスラジピン、プリドピジン（ＡＣＲ１６）、テトラベナジン、ベキサロテン、酢酸グラチリマー、フィンゴリモド、及びミトキサントロン、それらの医薬的に許容可能な塩及び酸を含む、を含む。細胞傷害性薬剤又は化学療法薬剤のさらなる例は、アルキル化剤、例えばチオテパ、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））など；アルキルスルホネート、例えばブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファンなど；アジリジン、例えばベンゾドーパ、カルボクオン、メツレドーパ、及びウレドーパなど；エチレンイミン及びメチルアメラミン、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド及びトリメチロールメラミンを含む；ナイトロジェンマスタード、例えばクロランブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなど；ニトロスレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）、例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなど；抗生物質、例えばアクラシノミシン、アクチノマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチアミシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ドーノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシンなど；抗代謝剤、例えばメトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）など；葉酸類似体、例えばデノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなど；プリン類似体、例えばフルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなど；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５－ＦＵなど；アンドロゲン、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなど；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなど；葉酸補給剤、例えばフロリン酸など；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォアミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルホルミチン；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、ニュージャージー州プリンストン）及びドキセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、フランス、アントニー）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；プラチナ類似体、例えばシスプラチン及びカルボプラチンなど；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼロダ；イバンドロネート；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸誘導体、例えばＴａｒｇｒｅｔｉｎ（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）など；ＯＮＴＡＫ（商標）（デニロイキンディフティトックス）；エスペラマイシン；カペシタビン；ならびに上のいずれかの医薬的に許容可能な塩、酸又は誘導体を含む。

【0197】

抗体又はその抗原結合断片は、本明細書中に記載される組成物、方法、及び／又はキットのいずれかにおいて使用され、本明細書中に記載される免疫療法剤の一つ又は複数と組み合わされることができる。

【0198】

追加の治療剤及び組成物
特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、及びキナーゼ阻害剤を含む、一つ又は複数の追加の治療剤との組み合わせにおいて使用される。

【0199】

免疫療法剤。特定の実施形態は、一つ又は複数の癌免疫療法剤を用いる。特定の例では、免疫療法剤は、例えば、癌関連又は癌特異的免疫応答を増加又は維持するために、対象の免疫応答を調節し、それにより、癌細胞の、増加した免疫細胞阻害又は低下をもたらす。例示的な免疫療法剤は、ポリペプチド、例えば、抗体及びその抗原結合断片、リガンド、及び小ペプチド、ならびにそれらの混合物を含む。また、免疫療法剤として含まれるのは、小分子、細胞（例、免疫細胞、例えばＴ細胞など）、様々な癌ワクチン、遺伝子治療又は他のポリヌクレオチドベースの薬剤、ウイルス剤、例えば腫瘍溶解性ウイルスなどを含む、及び当技術分野において公知の他を含む。このように、特定の実施形態では、癌免疫療法剤は、免疫チェックポイント調節剤、癌ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、サイトカイン、及び細胞ベースの免疫療法の一つ又は複数から選択される。

【0200】

特定の実施形態では、癌免疫療法剤は免疫チェックポイント調節剤である。特定の例は、一つ又は複数の阻害性免疫チェックポイント分子の「アンタゴニスト」、及び一つ又は複数の刺激性免疫チェックポイント分子の「アゴニスト」を含む。一般的に、免疫チェックポイント分子は、シグナルを上げる（共刺激分子）、又はシグナルを下げる、のいずれかの免疫系の構成要素であり、癌細胞が免疫チェックポイント分子の天然機能を妨害することができるため、その標的化は癌において治療能力を有する（例、Ｓｈａｒｍａ ａｎｄ Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．３４８：５６－６１，２０１５；Ｔｏｐａｌｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２７：４５０－４６１，２０１５；Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ．１２：２５２－２６４，２０１２を参照のこと）。一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤（例、アンタゴニスト、アゴニスト）は、本明細書中に記載されるように、一つ又は複数の免疫チェックポイント分子に「結合する」、又は「特異的に結合する」。

【0201】

特定の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤はポリペプチド又はペプチドである。用語「ペプチド」及び「ポリペプチド」は、本明細書中では互換的に使用されるが、しかし、特定の例では、用語「ペプチド」は、より短いポリペプチド、例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０のアミノ酸からなるポリペプチドなどを指すことができ、その間の全ての整数及び範囲（例、５～１０、８～１２、１０～１５）を含む。ポリペプチド及びペプチドは、本明細書中に記載されるように、天然アミノ酸及び／又は非天然アミノ酸で構成されることができる。

【0202】

抗体はまた、ポリペプチドとして含まれる。このように、一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節ポリペプチド薬剤は、本明細書中の他の箇所に記載される抗体又はその抗原結合断片である。

【0203】

一部の実施形態では、薬剤は、免疫チェックポイント分子の「リガンド」、例えば、天然リガンドである、又はそれを含む。「リガンド」は、一般的に、生物学的な目的を果たすために標的分子（例、生体分子）と複合体を形成する物質又は分子を指し、「タンパク質リガンド」を含み、それは、一般的に、標的分子又は標的タンパク質上の部位に結合することによりシグナルを産生する。このように、特定の薬剤は、自然において、免疫チェックポイント分子に結合し、シグナルを産生するタンパク質リガンドである。また、含まれるのは、「修飾リガンド」であって、例えば、免疫グロブリンから由来するＦｃ領域といった薬物動態調節剤に融合されるタンパク質リガンドである。

【0204】

ポリペプチドの結合特性は、当技術分野において周知の方法を使用して定量化することができる（Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９：４３９－４７３，１９９０を参照のこと）。一部の実施形態では、ポリペプチドは、標的分子、例えば、免疫チェックポイント分子又はそのエピトープに特異的に結合し、約≦１０－７～約１０－８Ｍである、又はその範囲である平衡解離定数を伴う。一部の実施形態では、平衡解離定数は約≦１０－９Ｍから約≦１０－１０Ｍである、又はその範囲である。特定の例証的な実施形態では、ポリペプチドは、本明細書中に記載される標的（それが特異的に結合する）について、約、少なくとも約、又は約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、又は５０ｎＭの親和性（Ｋｄ又はＥＣ_５０）を有する。

【0205】

一部の実施形態では、薬剤は「小分子」であり、それは、合成的又は生物学的起源（生体分子）である有機化合物を指すが、しかし、典型的にはポリマーではない。有機化合物は、その分子が炭素を含む、大きなクラスの化学化合物を指し、典型的には、炭酸塩、炭素の単純な酸化物、又はシアン化物のみを含むものを除外する。「生体分子」は、一般的に、大きな高分子分子（バイオポリマー）、例えばペプチド、多糖類、及び核酸など、ならびに小分子、例えば一次二次代謝物、脂質、リン脂質、糖脂質、ステロール、グリセロ脂質、ビタミン、及びホルモンなどを含む、生きた生物により産生される有機分子を指す。「ポリマー」は、一般的に、典型的には共有結合的な化学結合により接続される、繰り返し構造単位で構成される大分子又は高分子を指す。

【0206】

特定の実施形態では、小分子は、約１０００～２０００ダルトン又はそれ以下、典型的には約３００～７００ダルトンの間の分子量を有し、約５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、５００、６５０、６００、７５０、７００、８５０、８００、９５０、１０００、又は２０００ダルトン又はそれ以下を含む。

【0207】

特定の小分子は、本明細書中のポリペプチド、例えば抗体などについて記載される「特異的結合」の特徴を有することができる。例えば、一部の実施形態では、小分子は、例えば免疫チェックポイント分子などの標的に、約、少なくとも約、又は約０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、４０、又は５０の結合親和性（Ｋｄ又はＥＣ_５０）を伴って特異的に結合する。

【0208】

一部の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、一つ又は複数の阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニスト又は阻害剤である。例示的な阻害性免疫チェックポイント分子は、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）、プログラム死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）、プログラム死１（ＰＤ－１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、トリプトファン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、Ｂ及びＴリンパ球減衰因子（ＢＴＬＡ）、ＣＤ１６０、ならびにＩｇ及びＩＴＩＭドメインを伴うＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）を含む。

【0209】

特定の実施形態では、薬剤は、ＰＤ－１（受容体）アンタゴニスト又は阻害剤であり、その標的化は、腫瘍環境中の免疫機能を回復させることが示されている（例、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：３９－４６，２０１５を参照のこと）。ＰＤ－１は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、Ｔ細胞及びプロＢ細胞上で発現される細胞表面受容体である。ＰＤ－１は、二つのリガンド、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２と相互作用する。ＰＤ－１は、例えば、Ｔ細胞の活性化を低下又は防止することにより、阻害性免疫チェックポイント分子として機能し、それは次に自己免疫を低下させ、自己寛容を促す。ＰＤ－１の阻害効果は、少なくとも部分的に、リンパ節中の抗原特異的Ｔ細胞におけるアポトーシスを促す一方で、また、調節性Ｔ細胞（抑制剤Ｔ細胞）におけるアポトーシスを低下させる二重機構を通して達成される。ＰＤ－１アンタゴニスト又は阻害剤の一部の例は、ＰＤ－１に特異的に結合し、その免疫抑制活性、例えば、その下流シグナル伝達又はＰＤ－Ｌ１とのその相互作用の一つ又は複数を低下させる抗体又は抗原結合断片又は小分子を含む。ＰＤ－１アンタゴニスト又は阻害剤の具体的な例は、抗体ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＰＤＲ００１，ＭＫ－３４７５、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４、及びピジリズマブ、ならびにそれらの抗原結合断片を含む（例、米国特許第８，００８，４４９号；第８，９９３，７３１号；第９，０７３，９９４号；第９，０８４，７７６号；第９，１０２，７２７号；第９，１０２，７２８号；第９，１８１，３４２号；第９，２１７，０３４号；第９，３８７，２４７号；第９，４９２，５３９号；第９，４９２，５４０号；及び米国出願第２０１２／００３９９０６号；第２０１５／０２０３５７９号を参照のこと）。

【0210】

一部の実施形態では、薬剤はＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト又は阻害剤である。上に記述するように、ＰＤ－Ｌ１は、ＰＤ－１受容体についての天然リガンドの一つである。ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト又は阻害剤の一般的な例は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合して、その免疫抑制活性の一つ又は複数、例えば、ＰＤ－１受容体へのその結合を低下させる抗体又は抗原結合断片又は小分子を含む。ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストの具体的な例は、抗体アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、及びデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ならびにそれらの抗原結合断片を含む（例、米国特許第９，１０２，７２５号；第９，３９３，３０１号；第９，４０２，８９９号；第９，４３９，９６２号を参照のこと）。

【0211】

一部の実施形態では、薬剤はＰＤ－Ｌ２アンタゴニスト又は阻害剤である。上に記述するように、ＰＤ－Ｌ２は、ＰＤ－１受容体についての天然リガンドの一つである。ＰＤ－Ｌ２アンタゴニスト又は阻害剤の一般的な例は、ＰＤ－Ｌ２に特異的に結合し、その免疫抑制活性の一つ又は複数、例えば、ＰＤ－１受容体へのその結合を低下させる抗体又は抗原結合断片又は小分子を含む。

【0212】

一部の実施形態では、薬剤はＣＴＬＡ－４アンタゴニスト又は阻害剤である。ＣＴＬＡ４又はＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）は、また、ＣＤ１５２（分化クラスター１５２）として公知であり、例えば、それが、抗原提示細胞の表面上でＣＤ８０又はＣＤ８６に結合した場合に阻害シグナルをＴ細胞に伝達することにより、阻害性免疫チェックポイント分子として機能するタンパク質受容体である。ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト又は阻害剤の一般的な例は、ＣＴＬＡ－４に特異的に結合する抗体又は抗原結合断片又は小分子を含む。特定の例は、抗体イピリムマブ及びトレメリムマブ、ならびにそれらの抗原結合断片を含む。イピリムマブの活性の少なくとも一部は、ＣＴＬＡ－４を発現するサプレッサーＴｒｅｇの抗体依存的細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）死滅により媒介されると考えられる。

【0213】

一部の実施形態では、薬剤は、ＩＤＯアンタゴニストもしくは阻害剤、又はＴＤＯアンタゴニストもしくは阻害剤である。ＩＤＯ及びＴＤＯは、免疫阻害特性を伴うトリプトファン異化酵素である。例えば、ＩＤＯは、Ｔ細胞及びＮＫ細胞を抑制し、Ｔｒｅｇ及び骨髄由来抑制細胞を生成及び活性化し、腫瘍血管新生を促すことが公知である。ＩＤＯ及びＴＤＯアンタゴニスト又は阻害剤の一般的な例は、ＩＤＯ又はＴＤＯに特異的に結合し（例、Ｐｌａｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：６７３，２０１４を参照のこと）、一つ又は複数の免疫抑制活性を低下又は阻害する抗体又は抗原結合断片又は小分子を含む。ＩＤＯアンタゴニスト又は阻害剤の具体的な例は、インドキシモド（ＮＬＧ－８１８９）、１－メチル－トリプトファン（１ＭＴ）、β－カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ－ピリド［３，４－ｂ］インドール）、ロスマリン酸、及びエパカドスタットを含む（例、Ｓｅｒｉｄａｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．３３：３２１－３２２，２０１５を参照のこと）。ＴＤＯアンタゴニスト又は阻害剤の具体的な例は、６８０Ｃ９１及びＬＭ１０を含む（例、Ｐｉｌｏｔｔｅ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ．１０９：２４９７－２５０２，２０１２を参照のこと）。

【0214】

一部の実施形態において、薬剤はＴＩＭ－３アンタゴニスト又は阻害剤である。Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）は、活性化ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞上で発現され、Ｔｈ１及びＴｈ１７サイトカインを調節する。ＴＩＭ－３はまた、そのリガンドであるガレクチン－９との相互作用時に細胞死を誘発することにより、Ｔｈ１／Ｔｃ１機能の負の調節因子として作用する。ＴＩＭ－３は、抑制性腫瘍微小環境に寄与し、その過剰発現は、様々な癌における予後不良と関連付けられる（例、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｏｎｃｏｌ．５４：１７０６－１３，２０１５を参照のこと）。ＴＩＭ－３アンタゴニスト又は阻害剤の一般的な例は、ＴＩＭ－３に特異的に結合し、その免疫抑制活性の一つ又は複数を低下又は阻害する抗体又は抗原結合断片又は小分子を含む。

【0215】

一部の実施形態では、薬剤はＬＡＧ－３アンタゴニスト又は阻害剤である。リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）は、活性化Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、及び形質細胞様樹状細胞上で発現される。それは、ＣＴＬＡ－４及びＰＤ－１と同様の様式において、Ｔ細胞の細胞増殖、活性化、及び恒常性を負に調節し（例、Ｗｏｒｋｍａｎ ａｎｄ Ｖｉｇｎａｌｉ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎ．３３：９７０－９，２００３；及びＷｏｒｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎ．１７２：５４５０－５，２００４を参照のこと）、Ｔｒｅｇ抑制機能において役割を果たすことが報告されている（例、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２１：５０３－１３，２００４を参照のこと）。ＬＡＧ３はまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞を耐容性状態中に維持し、ＰＤ－１と組み合わせてＣＤ８ Ｔ細胞消耗を維持する。ＬＡＧ－３アンタゴニスト又は阻害剤の一般的な例は、ＬＡＧ－３に特異的に結合し、その免疫抑制活性の一つ又は複数を阻害する抗体又は抗原結合断片又は小分子を含む。具体的な例は、抗体ＢＭＳ－９８６０１６、及びその抗原結合断片を含む。

【0216】

一部の実施形態では、薬剤はＶＩＳＴＡアンタゴニスト又は阻害剤である。Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）は、主に造血細胞上で発現され、Ｔ細胞活性化を抑制し、Ｆｏｘｐ３発現を誘導し、それが抗腫瘍Ｔ細胞応答を抑制する腫瘍微小環境内で高度に発現される阻害性免疫チェックポイント調節因子である（例、Ｌｉｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７４：１９２４－３２，２０１４を参照のこと）。ＶＩＳＴＡアンタゴニスト又は阻害剤の一般的な例は、ＶＩＳＴＡに特異的に結合し、その免疫抑制活性の一つ又は複数を低下させる抗体又は抗原結合断片又は小分子を含む。

【0217】

一部の実施形態では、薬剤はＢＴＬＡアンタゴニスト又は阻害剤である。Ｂ及びＴリンパ球減衰因子（ＢＴＬＡ；ＣＤ２７２）発現は、Ｔ細胞の活性化中に誘導され、それは、腫瘍壊死ファミリー受容体（ＴＮＦ－Ｒ）及び細胞表面受容体のＢ７ファミリーとの相互作用を介してＴ細胞を阻害する。ＢＴＬＡは、腫瘍壊死因子（受容体）スーパーファミリー、メンバー１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）についてのリガンドであり、また、ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）として公知である。ＢＴＬＡ－ＨＶＥＭ複合体は、例えば、ヒトＣＤ８＋癌特異的Ｔ細胞の機能を阻害することにより、Ｔ細胞免疫応答を負に調節する（例、Ｄｅｒｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １２０：１５７－６７，２００９を参照のこと）。ＢＴＬＡアンタゴニスト又は阻害剤の一般的な例は、ＢＴＬＡ－４に特異的に結合し、その免疫抑制活性の一つ又は複数を低下させる抗体又は抗原結合断片又は小分子を含む。

【0218】

一部の実施形態では、薬剤は、ＨＶＥＭアンタゴニスト又は阻害剤、例えば、ＨＶＥＭに特異的に結合し、ＢＴＬＡ又はＣＤ１６０とのその相互作用に干渉するアンタゴニスト又は阻害剤である。ＨＶＥＭアンタゴニスト又は阻害剤の一般的な例は、ＨＶＥＭに特異的に結合し、場合により、ＨＶＥＭ／ＢＴＬＡ及び／又はＨＶＥＭ／ＣＤ１６０相互作用を低下させ、それにより、ＨＶＥＭの免疫抑制活性の一つ又は複数を低下させる抗体又は抗原結合断片又は小分子を含む。

【0219】

一部の実施形態では、薬剤は、ＣＤ１６０アンタゴニスト又は阻害剤、例えば、ＣＤ１６０に特異的に結合し、ＨＶＥＭとのその相互作用に干渉するアンタゴニスト又は阻害剤である。ＣＤ１６０アンタゴニスト又は阻害剤の一般的な例は、ＣＤ１６０に特異的に結合し、場合により、ＣＤ１６０／ＨＶＥＭ相互作用を低下させ、それにより、その免疫抑制活性の一つ又は複数を低下させる又は阻害する抗体又は抗原結合断片又は小分子を含む。

【0220】

一部の実施形態では、薬剤はＴＩＧＩＴアンタゴニスト又は阻害剤である。Ｔ細胞Ｉｇ及びＩＴＩＭドメイン（ＴＩＧＩＴ）は、様々なリンパ細胞の表面上に見出され、例えば、Ｔｒｅｇを介して抗腫瘍免疫を抑制する共阻害受容体である（Ｋｕｒｔｕｌｕｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１２５：４０５３－４０６２，２０１５）。ＴＩＧＩＴアンタゴニスト又は阻害剤の一般的な例は、ＴＩＧＩＴに特異的に結合し、その免疫抑制活性の一つ又は複数を低下させる抗体又は抗原結合断片又は小分子を含む（例、Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２６：９２３－３７，２０１４を参照のこと）。

【0221】

特定の実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、一つ又は複数の刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストである。例示的な刺激性免疫チェックポイント分子は、ＯＸ４０、ＣＤ４０、グルココルチコイド誘導ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２２６、及びヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）を含む。

【0222】

一部の実施形態では、薬剤はＯＸ４０アゴニストである。ＯＸ４０（ＣＤ１３４）は、エフェクター及びメモリーＴ細胞の増殖を促し、Ｔ調節細胞の分化及び活性を抑制する（例、Ｃｒｏｆｔ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２２９：１７３－９１，２００９を参照のこと）。そのリガンドはＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）である。ＯＸ４０シグナル伝達は、Ｔ細胞活性化及び生存の両方に影響を及ぼすため、それは、リンパ節における抗腫瘍免疫応答の開始において、及び腫瘍微小環境における抗腫瘍免疫応答の維持において重要な役割を果たしている。ＯＸ４０アゴニストの一般的な例は、ＯＸ４０に特異的に結合し、その免疫刺激活性の一つ又は複数を増加させる、抗体又は抗原結合断片又は小分子又はリガンドを含む。具体的な例は、ＯＸ８６、ＯＸ－４０Ｌ、Ｆｃ－ＯＸ４０Ｌ、ＧＳＫ３１７４９９８、ＭＥＤＩ０５６２（ヒト化ＯＸ４０アゴニスト）、ＭＥＤＩ６４６９（マウスＯＸ４アゴニスト）、及びＭＥＤＩ６３８３（ＯＸ４０アゴニスト）、ならびにそれらの抗原結合断片を含む。

【0223】

一部の実施形態では、薬剤はＣＤ４０アゴニストである。ＣＤ４０は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）及び一部の悪性腫瘍上で発現される。そのリガンドはＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）である。ＡＰＣ上では、ライゲーションは共刺激分子の上方調節をもたらし、抗腫瘍免疫応答におけるＴ細胞支援についての必要性を潜在的に迂回する。ＣＤ４０アゴニスト治療は、ＡＰＣ成熟及び腫瘍からリンパ節へのそれらの移動において重要な役割を果たし、上昇した抗原提示及びＴ細胞活性化をもたらす。抗ＣＤ４０アゴニスト抗体は、動物モデルにおいて実質的な応答及び持続的な抗癌免疫を産生し、少なくとも部分的に細胞傷害性Ｔ細胞により媒介される効果である（例、Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２１：１３２１－１３２８，２０１５；及びＶｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ ａｎｄ Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９：１０３５－４３，２０１３を参照のこと）。ＣＤ４０アゴニストの一般的な例は、ＣＤ４０に特異的に結合し、その免疫刺激活性の一つ又は複数を増加させる抗体又は抗原結合断片又は小分子又はリガンドを含む。具体的な例は、ＣＰ－８７０，８９３、ダセツズマブ、Ｃｈｉ Ｌｏｂ ７／４、ＡＤＣ－１０１３、ＣＤ４０Ｌ、ｒｈＣＤ４０Ｌ、及びそれらの抗原結合断片を含む。

【0224】

一部の実施形態では、薬剤はＧＩＴＲアゴニストである。グルココルチコイド誘導ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）は、Ｔ細胞増殖を増加させ、Ｔｒｅｇの抑制活性を阻害し、Ｔエフェクター細胞の生存を延長させる。ＧＩＴＲアゴニストは、Ｔｒｅｇ系統の安定性の喪失を通じて抗腫瘍応答を促すことが示されている（例、Ｓｃｈａｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ．１：３２０－３１，２０１３を参照のこと）。これらの多様な機構は、ＧＩＴＲがリンパ節における免疫応答の開始及び腫瘍組織における免疫応答の維持において重要な役割を果たしていることを示す。そのリガンドはＧＩＴＲＬである。ＧＩＴＲアゴニストの一般的な例は、ＧＩＴＲに特異的に結合し、その免疫刺激活性の一つ又は複数を増加させる抗体又は抗原結合断片又は小分子又はリガンドを含む。具体的な例は、ＧＩＴＲＬ、ＩＮＣＡＧＮ０１８７６、ＤＴＡ－１、ＭＥＤＩ１８７３、及びそれらの抗原結合断片を含む。

【0225】

一部の実施形態では、薬剤はＣＤ１３７アゴニストである。ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーのメンバーであり、ＣＤ１３７の架橋は、Ｔ細胞増殖、ＩＬ－２分泌、生存、及び細胞溶解活性を増強する。ＣＤ１３７媒介性シグナル伝達はまた、Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞などを、活性化誘導性細胞死から保護する。ＣＤ１３７アゴニストの一般的な例は、ＣＤ１３７に特異的に結合し、その免疫刺激活性の一つ又は複数を増加させる抗体又は抗原結合断片又は小分子又はリガンドを含む。具体的な例は、ＣＤ１３７（又は４－１ＢＢ）リガンド（例、Ｓｈａｏ ａｎｄ Ｓｃｈｗａｒｚ，Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ．８９：２１－９，２０１１を参照のこと）及び抗体ウトミルマブ、その抗原結合断片を含む、を含む。

【0226】

一部の実施形態では、薬剤はＣＤ２７アゴニストである。ＣＤ２７の刺激は、ナイーブＴ細胞の抗原特異的増殖を増加させ、Ｔ細胞メモリー及びＴ細胞免疫の長期維持に寄与する。そのリガンドはＣＤ７０である。アゴニスト抗体を用いたヒトＣＤ２７の標的化は、Ｔ細胞活性化及び抗腫瘍免疫を刺激する（例、Ｔｈｏｍａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１４；３：ｅ２７２５５．ｄｏｉ：１０．４１６１／ｏｎｃｉ．２７２５５；及びＨｅ ｅｔ ａｌ ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９１：４１７４－８３，２０１３を参照のこと）。ＣＤ２７アゴニストの一般的な例は、ＣＤ２７に特異的に結合し、その免疫刺激活性の一つ又は複数を増加させる抗体又は抗原結合断片又は小分子又はリガンドを含む。具体的な例は、ＣＤ７０、ならびに抗体ヴァリルマブ及びＣＤＸ－１１２７（１Ｆ５）、それらの抗原結合断片を含む、を含む。

【0227】

一部の実施形態では、薬剤はＣＤ２８アゴニストである。ＣＤ２８は、構成的に発現されるＣＤ４＋Ｔ細胞、一部のＣＤ８＋Ｔ細胞である。そのリガンドはＣＤ８０及びＣＤ８６を含み、その刺激はＴ細胞増殖を増加させる。ＣＤ２８アゴニストの一般的な例は、ＣＤ２８に特異的に結合し、その免疫刺激活性の一つ又は複数を増加させる抗体又は抗原結合断片又は小分子又はリガンドを含む。具体的な例は、ＣＤ８０、ＣＤ８６、抗体ＴＡＢ０８、及びそれらの抗原結合断片を含む。

【0228】

一部の実施形態では、薬剤はＣＤ２２６アゴニストである。ＣＤ２２６は、ＴＩＧＩＴとリガンドを共有し、ＴＩＧＩＴとは反対の刺激受容体であり、ＣＤ２２６の会合は、Ｔ細胞活性化を増強する（例、Ｋｕｒｔｕｌｕｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１２５：４０５３－４０６２，２０１５；Ｂｏｔｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９８４：５５７－５６７，２００３；及びＴａｈａｒａ－Ｈａｎａｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：５３３－５３８，２００４を参照のこと）。ＣＤ２２６アゴニストの一般的な例は、ＣＤ２２６に特異的に結合し、その免疫刺激活性の一つ又は複数を増加させる抗体又は抗原結合断片又は小分子又はリガンド（例、ＣＤ１１２、ＣＤ１５５）を含む。

【0229】

一部の実施形態では、薬剤はＨＶＥＭアゴニストである。ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）は、また、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）として公知であり、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのヒト細胞表面受容体である。ＨＶＥＭは、Ｔ細胞、ＡＰＣ、及び他の免疫細胞を含む、様々な細胞で見出される。他の受容体とは異なり、ＨＶＥＭは、静止Ｔ細胞上で高レベルで発現され、活性化時に下方調節される。ＨＶＥＭシグナル伝達は、Ｔ細胞活性化の初期段階において、及びリンパ節における腫瘍特異的リンパ球集団の増殖中に重要な役割を果たしていることが示されている。ＨＶＥＭアゴニストの一般的な例は、ＨＶＥＭに特異的に結合し、その免疫刺激活性の一つ又は複数を増加させる抗体又は抗原結合断片又は小分子又はリガンドを含む。

【0230】

特定の実施形態では、癌免疫療法剤は癌ワクチンである。例示的な癌ワクチンは、オンコファージ、ヒトパピローマウイルスＨＰＶワクチン、例えばガーダシル又はセルバリックスなど、Ｂ型肝炎ワクチン、例えばエンゲリックス－Ｂ、リコンビバックスＨＢ、又はツインリックスなど、及びシプルセル－Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ）を含む。一部の実施形態では、癌ワクチンは、一つ又は複数の癌抗原、又は癌関連ｄ抗原を含む、又はそれを利用する。例示的な癌抗原は、限定されないが、ヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＭＡＧＥ－３ Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ－６、ＩＬ－１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例、ＶＥＧＦ－Ａ）ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＶＥＧＦＲ－３、ＮＲＰ２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＴＬＡ－４、ＮＰＣ－１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ－１Ｒ）、アルファ－フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）、炭酸脱水素酵素９（ＣＡ－ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、グアニリルシクラーゼＣ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｐ５３、サバイビン、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ－７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（又はＣＡ－１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＮＲ－ＬＵ－１３抗原、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ又はＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０汎癌腫抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７－１Ａ）、プログラム死－１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝臓３のホスファターゼ（ＰＲＬ－３）、前立腺酸性ホスファターゼ、Ｌｅｗｉｓｓ－Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上で発現されるジシアロガングリオシド）、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、及びメソテリンを含む。

【0231】

特定の実施形態では、癌免疫療法剤は、腫瘍溶解性ウイルスである。腫瘍溶解性ウイルスは、癌細胞に優先的に感染し、死滅させるウイルスである。含まれるのは、天然及び人造又は操作腫瘍溶解性ウイルスである。大半の腫瘍溶解性ウイルスが、腫瘍選択性について操作されているが、天然の例、例えばレオウイルス及びＳＶＶ－００１セネカバレーウイルスなどがある。腫瘍溶解性ウイルスの一般的な例は、ＶＳＶ、ポリオウイルス、レオウイルス、セネカウイルス、及びＲＩＧＶＩＲ、ならびにそれらの操作バージョンを含む。腫瘍溶解性ウイルスの非限定的な例は、とりわけ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）及びその操作バージョン、タリモゲン・ラヘルパレプベック（Ｔ－ＶＥＣ）、コクサッキーウイルスＡ２１（ＣＡＶＡＴＡＫ（商標））、オンコリン（Ｈ１０１）、ペラレオレプ（ＲＥＯＬＹＳＩＮ（登録商標））、セネカバレーウイルス（ＮＴＸ－０１０）、セネカウイルスＳＶＶ－００１、ＣｏｌｏＡｄ１、ＳＥＰＲＥＨＶＩＲ（ＨＳＶ－１７１６）、ＣＧＴＧ－１０２（Ａｄ５／３－Ｄ２４－ＧＭＣＳＦ）、ＧＬ－ＯＮＣ１、ＭＶ－ＮＩＳ、及びＤＮＸ－２４０１を含む。

【0232】

特定の実施形態では、癌免疫療法剤はサイトカインである。例示的なサイトカインは、インターフェロン（ＩＦＮ）－α、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む。

【0233】

特定の実施形態では、癌免疫療法剤は、細胞ベースの免疫療法、例えば、Ｔ細胞ベースの養子免疫療法である。一部の実施形態では、細胞ベースの免疫療法は、癌抗原特異的Ｔ細胞、場合によりエクスビボ由来Ｔ細胞を含む。一部の実施形態では、癌抗原特異的Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞、及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、及びペプチド誘導Ｔ細胞の一つ又は複数から選択される。特定の実施形態では、ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、ＣＤ－１９に対して標的化される（例、Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１２５：４０１７－４０２３，２０１５を参照のこと）。

【0234】

特定の例では、治療される癌は、癌抗原と関連付けられる、すなわち、癌抗原特異的Ｔ細胞は、治療される癌と関連付けられることが公知である少なくとも一つの抗原に対して標的化される、又はそれについて濃縮される。一部の実施形態では、癌抗原は、ＣＤ１９、ヒトＨｅｒ２／ｎｅｕ、Ｈｅｒ１／ＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）、Ｈｅｒ３、Ａ３３抗原、Ｂ７Ｈ３、ＣＤ５、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＭＡＧＥ－３ Ｃ２４２抗原、５Ｔ４、ＩＬ－６、ＩＬ－１３、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ（例、ＶＥＧＦ－Ａ）ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１５２、ＣＤ２００、ＣＤ２２１、ＣＣＲ４、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＴＬＡ－４、ＮＰＣ－１Ｃ、テネイシン、ビメンチン、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦ－１Ｒ）、アルファ－フェトプロテイン、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）、炭酸脱水素酵素９（ＣＡ－ＩＸ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、グアニリルシクラーゼＣ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｐ５３、サバイビン、インテグリンαｖβ３、インテグリンα５β１、葉酸受容体１、膜貫通糖タンパク質ＮＭＢ、線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）、糖タンパク質７５、ＴＡＧ－７２、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６（又はＣＡ－１２５）、ホスファチジルセリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＭＳＡ）、ＮＲ－ＬＵ－１３抗原、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ（ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ又はＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、ＳＬＡＭファミリーメンバー７（ＳＬＡＭＦ７）、ＥＧＰ４０汎癌腫抗原、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、血小板由来成長因子受容体、糖タンパク質ＥｐＣＡＭ（１７－１Ａ）、プログラム死－１、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ）、再生肝臓３のホスファターゼ（ＰＲＬ－３）、前立腺酸性ホスファターゼ、Ｌｅｗｉｓｓ－Ｙ抗原、ＧＤ２（神経外胚葉起源の腫瘍上で発現されるジシアロガングリオシド）、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、及びメソテリンの一つ又は複数から選択される。

【0235】

追加の例示的な癌抗原は、５Ｔ４、７０７－ＡＰ、９Ｄ７、ＡＦＰ、ＡｌｂＶＤＣ ＨＰＧ１、アルファ－５－ベータ－１－インテグリン、アルファ－５－ベータ－６－インテグリン、アルファ－アクチニン－４／ｍ、アルファ－メチルアシル－コエンザイムＡラセマーゼ、ＡＲＴ－４、ＡＲＴＣ１／ｍ、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ－１、ＢＣＬ－２、ｂｃｒ／ａｂｌ、ベータ－カテニン／ｍ、ＢＩＮＧ－４、ＢＲＣＡ１／ｍ、ＢＲＣＡ２／ｍ、ＣＡ １５－３／ＣＡ ２７－２９、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡ１２５、カルレティキュリン、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＳＰ－８／ｍ、カテプシンＢ、カテプシンＬ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ／ｍ、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、ＣＭＬ２８、ＣＭＬ６６、ＣＯＡ－１／ｍ、コラクトシン様タンパク質、コラージュＸＸＩＩＩ、ＣＯＸ－２、ＣＴ－９／ＢＲＤ６、Ｃｔｅｎ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ１、ｃｙｐ－Ｂ、ＣＹＰＢ１、ＤＡＭ－１０、ＤＡＭ－６、ＤＥＫ－ＣＡＮ、ＥＦＴＵＤ２／ｍ、ＥＧＦＲ、ＥＬＦ２／ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｒｂＢ３、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１、ＥＺＨ２、ＦＧＦ－５、ＦＮ、Ｆｒａｕ－１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ７ｂ、ＧＡＧＥ－８、ＧＤＥＰ、ＧｎＴ－Ｖ、ｇｐ１００、ＧＰＣ３、ＧＰＮＭＢ／ｍ、ＨＡＧＥ、ＨＡＳＴ－２、ヘプシン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＨＥＲＶ－Ｋ－ＭＥＬ、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１－Ｒ１ ７Ｉ、ＨＬＡ－Ａ１ １／ｍ、ＨＬＡ－Ａ２／ｍ、ＨＮＥ、ホメオボックスＮＫＸ３．１、ＨＯＭ－ＴＥＳ－１４／ＳＣＰ－１、ＨＯＭ－ＴＥＳ－８５、ＨＰＶ－Ｅ６、ＨＰＶ－Ｅ７、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＧＦ－１ Ｒ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－５、未成熟ラミニン受容体、カリクレイン－２、カリクレイン－４、Ｋｉ６７、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＩＡＡ０２０５／ｍ、ＫＫ－ＬＣ－１、Ｋ－Ｒａｓ／ｍ、ＬＡＧＥ－Ａ１、ＬＤＬＲ－ＦＵＴ、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｂ１、ＭＡＧＥ－Ｂ２、ＭＡＧＥ－Ｂ３、ＭＡＧＥ－Ｂ４、ＭＡＧＥ－Ｂ５、ＭＡＧＥ－Ｂ６、ＭＡＧＥ－Ｂ１０、ＭＡＧＥ－Ｂ１ ６、ＭＡＧＥ－Ｂ１ ７、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｄ１、ＭＡＧＥ－Ｄ２、ＭＡＧＥ－Ｄ４、ＭＡＧＥ－Ｅ１、ＭＡＧＥ－Ｅ２、ＭＡＧＥ－Ｆ１、ＭＡＧＥ－Ｈ１、ＭＡＧＥＬ２、マンマグロビンＡ、ＭＡＲＴ－１／メラン－Ａ、ＭＡＲＴ－２、ＭＡＲＴ－２／ｍ、マトリックスタンパク質２２、ＭＣＩ Ｒ、Ｍ－ＣＳＦ、ＭＥ１／ｍ、メソテリン、ＭＧ５０／ＰＸＤＮ、ＭＭＰ１ １、ＭＮ／ＣＡ ＩＸ－抗原、ＭＲＰ－３、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＭ－１／ｍ、ＭＵＭ－２／ｍ、ＭＵＭ－３／ｍ、ミオシンクラスｌ／ｍ、ＮＡ８８－Ａ、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ－Ｖ、Ｎｅｏ－ＰＡＰ、Ｎｅｏ－ＰＡＰ／ｍ、ＮＦＹＣ／ｍ、ＮＧＥＰ、ＮＭＰ２２、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ－Ｒａｓ／ｍ、ＮＳＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－Ｂ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＯＡ１、ＯＦＡ－ｉＬＲＰ、ＯＧＴ、ＯＧＴ／ｍ、ＯＳ－９、ＯＳ－９／ｍ、オステオカルシン、オステオポンチン、ｐｉ ５、ｐ１９０マイナーｂｃｒ－ａｂｌ、ｐ５３、ｐ５３／ｍ、ＰＡＧＥ－４、ＰＡＩ－１、ＰＡＩ－２、ＰＡＰ、ＰＡＲＴ－１、ＰＡＴＥ、ＰＤＥＦ、Ｐｉｍ－１キナーゼ、Ｐｉｎ－１、Ｐｍｌ／ＰＡＲアルファ、ＰＯＴＥ、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＤＸ５／ｍ、プロステイン、プロテイナーゼ－３、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＧＲ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ／ｍ、ＲＡＧＥ－１、ＲＢＡＦ６００／ｍ、ＲＨＡＭＭ／ＣＤ１ ６８、ＲＵ１、ＲＵ２、Ｓ－１００、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－２、ＳＡＲＴ－３、ＳＣＣ、ＳＩＲＴ２／ｍ、Ｓｐ１ ７、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２／ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０、ＳＳＸ－４、ＳＴＡＭＰ－１、ＳＴＥＡＰ－１、サバイビン、サバイビン－２Ｂ、ＳＹＴ－ＳＳＸ－１、ＳＹＴ－ＳＳＸ－２、ＴＡ－９０、ＴＡＧ－７２、ＴＡＲＰ、ＴＥＬ－ＡＭＬ１、ＴＧＦ－ベータ、ＴＧＦベータＲＩＩ、ＴＧＭ－４、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＡＧ－３、ＴＲＧ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２／６ｂ、ＴＲＰ／ＩＮＴ２、ＴＲＰ－ｐ８、チロシナーゼ、ＵＰＡ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ－２／ＦＬＫ－１、及びＷＴ１を含む。特定の好ましい抗原は、ｐ５３、ＣＡ１２５、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ＰＡＰ、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、メソテリン、ＭＵＣ－１、ＧＰ１００、ＭＡＲＴ－１、チロシナーゼ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＳＴＥＡＰ－１、Ｒａｓ、ＣＥＡ及びＷＴ１、より好ましくはＰＡＰ、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＷＴ１、及びＭＵＣ－１を含む。

【0236】

一部の実施形態では、抗原は、ＭＡＧＥ－Ａ１（例、受入番号Ｍ７７４８１によるＭＡＧＥ－Ａ１）、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６（例、受入番号ＮＭ＿００５３６３によるＭＡＧＥ－Ａ６）、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、メランＡ（例、受入番号ＮＭ＿００５５１ １によるメランＡ）、ＧＰ１００（例、受入番号Ｍ７７３４８によるＧＰ１００）、チロシナーゼ（例、受入番号ＮＭ＿０００３７２によるチロシナーゼ）、サバイビン（例、受入番号ＡＦ０７７３５０によるサバイビン）、ＣＥＡ（例、受入番号ＮＭ＿００４３６３によるＣＥＡ）、Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ（例、受入番号Ｍ１ １ ７３０によるＨｅｒ－２／ｎｅｕ）、ＷＴ１（例、受入番号ＮＭ＿０００３７８によるＷＴ１）、ＰＲＡＭＥ（例、受入番号ＮＭ＿００６１ １５によるＰＲＡＭＥ）、ＥＧＦＲＩ（上皮成長因子受容体１）（例、受入番号ＡＦ２８８７３８によるＥＧＦＲＩ（上皮成長因子受容体１））、ＭＵＣ１、ムチン－１（例、受入番号ＮＭ＿００２４５６によるムチン－１）、ＳＥＣ６１ Ｇ（例、受入番号ＮＭ＿０１４３０２によるＳＥＣ６１ Ｇ）、ｈＴＥＲＴ（例、ｈＴＥＲＴ受入番号ＮＭ＿１９８２５３）、５Ｔ４（例、受入番号ＮＭ＿００６６７０による５Ｔ４）、ＴＲＰ－２（例、受入番号ＮＭ＿００１ ９２２によるＴＲＰ－２）、ＳＴＥＡＰ１（前立腺１の６膜貫通上皮抗原）、ＰＳＣＡ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、などから選択される。

【0237】

一部の実施形態では、癌抗原は、ＰＣＡ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＳＴＥＡＰ、及び場合によりＭＵＣ－１、それらの断片、バリアント、及び誘導体を含む、から選択される。一部の実施形態では、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、サバイビン、５Ｔ４、及び場合によりＭＵＣ－１、それらの断片、バリアント、及び誘導体を含む、から選択される癌抗原。

【0238】

一部の例では、癌抗原は、癌又は腫瘍疾患、特にリンパ腫又はリンパ腫関連疾患に関連付けられるイディオタイプ抗原を包含し、例えば、それにおいて、イディオタイプ抗原は、リンパ血液細胞の免疫グロブリンイディオタイプ又はリンパ血液細胞のＴ細胞受容体イディオタイプである。

【0239】

一部の例では、癌抗原特異的Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）改変Ｔ細胞（例、癌抗原に対して標的化される）、及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）改変Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、及びペプチド誘導性Ｔ細胞の一つ又は複数から選択される。

【0240】

当業者は、本明細書中に記載される様々な癌免疫療法剤を、本明細書中に記載される様々な抗ＮＲＰ２ａ抗体（それらの抗原結合断片を含む）の任意の一つ又は複数と組み合わせて、本明細書中に記載される方法又は組成物の任意の一つ又は複数に従って使用することができることを理解するであろう。

【0241】

化学療法剤。特定の実施形態は、一つ又は複数の化学療法剤、例えば、小分子化学療法剤を用いる。化学療法剤の非限定的な例は、とりわけ、アルキル化剤、抗代謝剤、細胞傷害性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤（１型又はＩＩ型）、抗微小管剤を含む。

【0242】

アルキル化剤の例は、窒素マスタード（例、メクロレタミン、シクロホスファミド、ムスチン、メルファラン、クロラムブシル、イホスファミド、及びブスルファン）、ニトロソ尿素（例、Ｎ－ニトロソ－Ｎ－メチル尿素（ＭＮＵ）、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、セムスチン（ＭｅＣＣＮＵ）、フォテムスチン、及びストレプトゾトシン）、テトラジン（例、ダカルバジン、ミトゾロミド、及びテモゾロミド）、アジリジン（例、チオテパ、マイトマイシン、及びジアジコン（ＡＺＱ））、シスプラチン及びその誘導体（例、カルボプラチン及びオキサリプラチン）、ならびに非古典的なアルキル化剤（場合によりプロカルバジン及びヘキサメチルメラミン）を含む。

【0243】

抗代謝剤の例は、抗葉酸（例、メトトレキサート及びペメトレキセド）、フルオロピリミジン（例、５－フルオロウラシル及びカペシタビン）、デオキシヌクレオシド類似体（例、アシタビン、エノシタビン、シタラビン、ゲムシタビン、デシタビン、アザシチジン、フルダラビン、ネララビン、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、及びペントスタチン）、ならびにチオプリン（例、チオグアニン及びメルカプトプリン）を含む；
細胞傷害性抗生物質の例は、アントラサイクリン（例、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ピラルビシン、アクラルビシン、及びミトキサントロン）、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、及びアクチノマイシンを含む。トポイソメラーゼ阻害剤の例は、カンプトテシン、イリノテカン、トポテカン、エトポシド、ドキソルビシン、ミトキサントロン、テニポシド、ノボビオシン、メルバロン、及びアクラルビシンを含む。

【0244】

抗微小管剤の例は、タキサン（例、パクリタキセル及びドセタキセル）及びビンカアルカロイド（例、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）を含む。

【0245】

当業者は、本明細書中に記載される様々な化学療法剤を、本明細書中に記載される様々な抗ＮＲＰ２ａ抗体（それらの抗原結合断片を含む）のいずれか一つ又は複数と組み合わせて、本明細書中に記載される方法又は組成物のいずれか一つ又は複数に従って使用することができることを理解するであろう。

【0246】

ホルモン治療剤。特定の実施形態は、少なくとも一つのホルモン治療剤を用いる。ホルモン治療剤の一般的な例は、ホルモンアゴニスト及びホルモンアンタゴニストを含む。ホルモンアゴニストの特定の例は、プロゲストゲン（プロゲスチン）、コルチコステロイド（例、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン）、インスリン様成長因子、ＶＥＧＦ由来血管新生因子及びリンパ管新生因子（例、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ａ１４５，ＶＥＧＦ－Ａ１６５、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、ＰＩＧＦ－２）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、ガレクチン、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、形質転換成長因子（ＴＧＦ）－ベータ、アンドロゲン、エストロゲン、ＣＣＬ２１、及びソマトスタチン類似体を含む。ホルモンアンタゴニストの例は、ホルモン合成阻害剤、例えばアロマターゼ阻害剤及びゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）アゴニスト（例、リュープロリド、ゴセレリン、トリプトレリン、ヒストレリン）などを含み、それらの類似体を含む。また、含まれるのは、ホルモン受容体アンタゴニスト、例えば選択的エストロゲン受容体調節因子（ＳＥＲＭ；例、タモキシフェン、ラロキシフェン、トレミフェン）及び抗アンドロゲン剤（例、フルタミド、ビカルタミド、ニルタミド）などである。

【0247】

また、含まれるのは、ホルモン経路阻害剤、例えばホルモン受容体に対して向けられる抗体などである。例は、ＩＧＦ受容体の阻害剤（例、ＩＧＦ－ＩＲ１）、例えばシクスツムマブ、ダロツズマブ、フィギツムマブ、ガニツマブ、イスチラツマブ、及びロバツムマブなど；血管内皮成長因子受容体１、２、もしくは３（ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２もしくはＶＥＧＦＲ３）の阻害剤又はそれらのリガンド、例えばアラシズマブペゴル、ベバシズマブ、イクルクマブ、ラムシルマブなど；ＴＧＦ－ベータ受容体Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３の阻害剤、例えばフレソリムマブ及びメテリムマブなど；ｃ－Ｍｅｔの阻害剤、例えばナキシタマブなど；ＥＧＦ受容体の阻害剤、例えばセツキシマブ、デパツキシズマブマホドチン、フツキシマブ、イムガツズマブ、ラプリツキシマブエムタンシン、マツズマブ、モドツキシマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ、パニツムマブ、トムゾツキシマブ、及びザルツムマブなど；ＦＧＦ受容体の阻害剤、例えばアプルツマブイクサドチン及びベマリツズマブなど；ＣＣＲ７の阻害剤；ならびにＰＤＧＦ受容体の阻害剤、例えばオララツマブ及びトベツマブなどを含む。

【0248】

当業者は、本明細書中に記載される様々なホルモン治療剤を、本明細書中に記載される様々な抗ＮＲＰ２ａ抗体（それらの抗原結合断片を含む）のいずれか一つ又は複数と組み合わせて、本明細書中に記載される方法又は組成物のいずれか一つ又は複数に従って使用することができることを理解するであろう。

【0249】

キナーゼ阻害剤。特定の実施形態は、チロシンキナーゼ阻害剤を含む、少なくとも一つのキナーゼ阻害剤を用いる。キナーゼ阻害剤の例は、限定を伴わずに、アダボセルチブ、アファニチブ、アフリベルセプト、アキシチニブ、ベバシズマブ、ボスチニブ、カボザンチニブ、セツキシマブ、コビメチニブ、クリゾチニブ、ダサチニブ、エントレクチニブ、エルダフィチニブ、エルロチニブ、フォスタミチニブ、ゲフィチニブ、イブルチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レンバチニブ、ムブリチニブ、ニロチニブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペガプタニブ、ポナチニブ、ラニビズマブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＳＵ６６５６、トファシチニブ、トラスツズマブ、バンデタニブ、及びベムアフェニブを含む、例示的なＰＩ３キナーゼ阻害剤は、アルペリシブ、ブパルリシブ、コパンリシブ、ＣＵＤＣ－９０７、ダクトリシブ、デュベリシブ、ＧＮＥ－４７７、イデラシブ、ＩＰＩ－５４９、ＬＹ２９４００２、ＭＥ－４０１、ペリホシン、ＰＩ－１０３、ピクチリシブ、ＰＷＴ３３５９７、ＲＰ６５０３、タセリシブ、ウムブラリシブ、ボクスタリシブ、ワートマンニン、及びＸＬ１４７を含む。

【0250】

当業者は、本明細書中に記載される様々なキナーゼ阻害剤を、本明細書中に記載される様々な抗ＮＲＰ２ａ抗体（それらの抗原結合断片を含む）のいずれか一つ又は複数と組み合わせて、本明細書中に記載される方法又は組成物のいずれか一つ又は複数に従って使用することができることを理解するであろう。

【0251】

使用の方法及び治療用組成物
本開示の実施形態は、特定のヒトニューロピリン２（ＮＲＰ２）ポリペプチド、具体的にはＮＲＰ２ａ ｖ１及びｖ２が、ＮＲＰ２ａ ｖ１／ｖ２リガンド、例えばＣＣＬ２１及び／又はＣＣＲ７などとの結合相互作用を媒介する固有の膜近傍ドメイン配列を含むという発見に部分的に関する。そのようなＣＣＬ２１／ＣＣＲ７相互作用ドメインは、ヒトＮＲＰ２ｂ ｖ４及びＮＲＰ２ｂ ｖ５ポリペプチド中で見出されず、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ３中で部分的にのみ存在している。したがって、ＮＲＰ２ｂ ｖ４及びＮＲＰ２ｂ ｖ５と比べて、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２に選択的に結合し、ＮＲＰ２ａ ｖ１／ｖ２とＣＣＬ２１／ＣＣＲ７の間での結合を阻害する、又はそうでなければ干渉する抗体を使用して、これらの経路の下流シグナル伝達事象を調節することができる。そのような抗体は、ＮＲＰ２関連疾患を含む疾患の治療における単独治療として、又は本明細書中に記載される他の治療剤との組み合わせにおいて使用することができる。

【0252】

特定の実施形態は、従って、それを必要とする対象において疾患又は状態を治療する、その症状を寛解させる、及び／又はその進行を低下させる方法を含み、本明細書中に記載されるように、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドに結合する少なくとも一つの抗体又はその抗原結合断片を対象に投与することを含む。一部の例では、抗体又はその抗原結合断片は、ＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドとＣＣＬ２１及び／又はＣＣＲ７の間での結合を調節する（例、拮抗する）。一部の実施形態では、抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片は、ＮＲＰ２ａバリアント１及び／又は２アイソフォームに選択的に結合し、ＮＲＰ２ｂ ｖ４及びｖ５アイソフォームには実質的に結合しない。一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドとＮＲＰ２ａリガンド、例えばＣＣＬ２１／ＣＣＲ７などとの間での相互作用からもたらされるシグナル伝達活性を調節する。

【0253】

一部の実施形態は、抗ＮＲＰ２ａ抗体又はその抗原結合断片を、約１ｎＭ～約１μＭ、約１ｎＭ～約１００ｎＭ、約１ｎＭ～約１０ｎＭ、又は約１ｎＭ～約３μＭの抗ＮＲＰ２ａ抗体又はその抗原結合断片の定常状態濃度、又は平均循環濃度を達成するのに十分な量で、及び頻度で投与することを含む。

【0254】

特定の実施形態では、疾患又は状態は、ＮＲＰ２関連疾患又は状態である。一部の実施形態では、ＮＲＰ２に関連付けられる疾患又は状態は、癌、ならびに癌に関連付けられる疾患及び経路の一つ又は複数から選択され、癌細胞の成長、開始、遊走、接着、浸潤、化学療法耐性、及び／又は転移；炎症、自己免疫、及び関連する炎症性疾患に関連付けられる疾患、不適切な免疫細胞の活性化又は遊走に関連付けられる疾患、例えば移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）などを含む；リンパ管の発生、リンパ管新生、及びリンパ管損傷に関連付けられる疾患、例えば、浮腫、リンパ浮腫、続発性リンパ浮腫、不適切な脂肪吸収及び蓄積、過剰な脂肪蓄積、ならびに血管透過性を含み；感染に関連付けられる疾患、潜伏感染を含む；アレルギー性障害／疾患、アレルギー応答に関連付けられる疾患、例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好中球性喘息、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連全身性血管炎、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、インフラマソーム関連疾患、及び皮膚関連好中球媒介性疾患、例えば壊疽性膿皮症など；肉芽腫性炎症性疾患に関連付けられる疾患、サルコイドーシス及び肉芽腫を含む；線維症に関連付けられる疾患、線維性疾患、線維症、内皮間葉移行（ＥＭＴ）、及び創傷治癒を含む；不適切な平滑筋収縮性、平滑筋の代償及び代償不全、ならびに不適切な血管平滑筋細胞遊走及び接着に関連付けられる疾患；不適切なオートファジー、食作用、及びエフェロサイトーシスに関連付けられる疾患；神経疾患、末梢神経系リモデリング、及び疼痛知覚に関連付けられる疾患；骨発生及び骨リモデリングに関連付けられる疾患を含む。

【0255】

一部の実施形態では、疾患は癌である。特定の実施形態は、このように、それを必要とする対象において癌を治療する、その症状を寛解させる、又はその進行を阻害する方法を含み、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドに特異的に結合し、ならびにヒトＮＲＰ２ａリガンド（例えば、表Ｎ２からのＮＲＰ２ａリガンド、例えばＣＣＬ２１及び／又はＣＣＲ７など）へのヒトＮＲＰ２ａポリペプチドの結合を調節する（例、それに干渉する）、少なくとも一つの抗体又はその抗原結合断片（抗ＮＲＰ２ａ抗体）を対象に投与することを含む。特定の実施形態は、それを必要とする対象において癌、例えば、転移性癌及び／又は化学療法耐性癌の再出現を低下又は防止することを含み、それにおいて、治療用組成物の投与は、癌への免疫記憶の生成を可能にする。

【0256】

一部の例では、抗ＮＲＰ２ａ抗体又はその抗原結合断片は、未処置対照と比べて、癌開始、癌細胞移動、接着、又は癌細胞転移を、約又は少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％又はそれ以上だけ低下させる。一部の例では、抗ＮＲＰ２ａ抗体又はその抗原結合断片は、未処置対照と比べて、癌媒介性リンパ管新生を約又は少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％又はそれ以上だけ低下させる。一部の実施形態では、抗ＮＲＰ２ａ抗体又はその抗原結合断片は、癌又は遊走性細胞（例えば、生検又はインビトロで成長させた他のサンプルから単離された癌又は免疫細胞）の移動又は運動の速度を、未処置対照と比べて、約又は少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％又はそれ以上だけ阻害又は低下させる。一部の実施形態では、抗ＮＲＰ２ａ抗体又はその抗原結合断片は、癌（例えば、生検又はインビトロで成長させた他のサンプルから単離された癌細胞）の侵襲性を、未処置対照と比べて、約又は少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％又はそれ以上だけ低下させる。

【0257】

一部の実施形態では、抗ＮＲＰ２ａ抗体又はその抗原結合断片は、追加の薬剤（例えば、化学療法剤、ホルモン治療剤、及び又はキナーゼ阻害剤）に対する癌の感受性を、追加の薬剤単独と比べて、約又は少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％又はそれ以上だけ増強させる。一部の実施形態では、抗ＮＲＰ２ａ抗体又はその抗原結合断片は、癌免疫療法剤の抗腫瘍及び／又は免疫刺激活性を、癌免疫療法剤単独と比べて、約又は少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％又はそれ以上だけ増強させる。

【0258】

また、含まれるのは、癌を治療するための併用治療であって、それを必要とする対象において癌を治療する、その症状を寛解させる、又はその進行を阻害する方法を含み、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドに特異的に結合する少なくとも一つの抗体又はその抗原結合断片（抗ＮＲＰ２ａ抗体）を、少なくとも一つの追加の薬剤、例えば、癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、及び／又はキナーゼ阻害剤との組み合わせにおいて、対象に投与することを含む。例示的な癌免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、及びキナーゼ阻害剤が、本明細書中の他の箇所に記載されている。

【0259】

一部の例では、抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片、及び少なくとも一つの追加の薬剤は、例えば、別々の治療用組成物中で、及び同じ又は異なる時間に、別々に投与される。一部の実施形態では、抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片、及び少なくとも一つの追加の薬剤は、同じ治療用組成物の一部として同時に投与される。

【0260】

特定の方法は、併用治療レジメンの一部として（即ち、それに加えて）、一つ又は複数の抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片を用いる。例示的な併用レジメンを以下の表Ｍ１中に提供する。

【表M1】

【0261】

一部の実施形態では、本明細書中に記載される方法及び治療用組成物（例えば、抗ＮＲＰ２ａ抗体、単独で、又は少なくとも一つの追加の薬剤との組み合わせにおいて）は、対象の生存期間の中央値を４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１５週間、２０週間、２５週間、３０週間、４０週間だけ、又はより長く増加させる。特定の実施形態では、本明細書中に記載される方法及び治療用組成物（例えば、抗ＮＲＰ２ａ抗体、単独で、又は少なくとも一つの追加の薬剤との組み合わせにおいて）は、対象の生存期間の中央値を１年、２年、３年だけ、又はより長く増加させる。一部の実施形態では、本明細書中に記載される方法及び治療用組成物（例えば、抗ＮＲＰ２ａ抗体を単独で、又は癌免疫療法剤との組み合わせにおいて）は、無増悪生存期間を２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間だけ、又はより長く増加させる。特定の実施形態では、本明細書中に記載される方法又は治療用組成物は、無増悪生存期間を１年、２年、３年だけ、又はより長く増加させる。

【0262】

特定の実施形態では、本明細書中に記載される方法及び治療用組成物（例えば、抗ＮＲＰ２ａ抗体、単独で、又は少なくとも一つの追加の薬剤との組み合わせにおいて）は、生存腫瘍の量における統計的に有意な減少、例えば、腫瘍質量における少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％又はより大きな減少により、あるいは改変された（例、統計的有意性を伴って減少した）スキャン寸法により示されるように、腫瘍退縮をもたらすのに十分である。特定の実施形態では、本明細書中に記載される方法及び治療用組成物（例えば、抗ＮＲＰ２ａ抗体、単独で、又は少なくとも一つの追加の薬剤との組み合わせにおいて）は、安定した疾患をもたらすのに十分である。特定の実施形態では、本明細書中に記載される方法及び治療用組成物（例えば、抗ＮＲＰ２ａ抗体、単独で、又は癌免疫療法剤との組み合わせにおいて）は、当業者に公知の特定の疾患適応症の症状における臨床的に関連する低下をもたらすのに十分である。

【0263】

一部の実施形態では、抗ＮＲＰ２ａ抗体は、癌免疫療法剤単独と比べて、癌免疫療法剤の抗腫瘍活性及び／又は免疫刺激活性を増加させる、補う、又はそうでなければ増強する。一部の実施形態では、抗ＮＲＰ２ａ抗体は、癌免疫療法剤単独と比べて、癌免疫療法剤の抗腫瘍活性及び／又は免疫刺激活性を、約、又は少なくとも約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００％又はそれ以上だけ増強する。

【0264】

本明細書中に記載される方法及び治療用組成物は、任意の様々な癌又は腫瘍の治療において使用することができる。一部の実施形態では、癌は、原発性癌、即ち、腫瘍進行が開始し、癌性腫瘤をもたらした解剖学的部位で成長する癌である。一部の実施形態では、癌は、二次癌又は転移性癌、即ち、原発部位又は起源の組織から、一つ又は複数の異なる部位又は組織中に広がった癌である。一部の実施形態では、癌は、ＮＲＰ２を発現又は過剰発現する。一部の実施形態では、対象又は患者は、黒色腫（例、転移性黒色腫）、上皮又は上皮由来腫瘍、膵臓癌、骨癌、前立腺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、白血病（例、リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、再発性急性骨髄性白血病）、リンパ腫、肝細胞癌（肝細胞癌腫又はＨＣＣ）、肉腫、Ｂ細胞悪性腫瘍、乳癌（例えば、エストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）、エストロゲン受容体陰性（ＥＲ－）、Ｈｅｒ２陽性（Ｈｅｒ２＋）、Ｈｅｒ２陰性（Ｈｅｒ２－）；又はそれらの組み合わせ、例、ＥＲ＋／Ｈｅｒ２＋、ＥＲ＋／Ｈｅｒ２－、ＥＲ－／Ｈｅｒ２＋、又はＥＲ－／Ｈｅｒ２－；又はエストロゲン受容体陰性、プロゲステロン受容体陰性、及びＨＥＲ２ 陰性である「トリプルネガティブ」乳癌）、卵巣癌、結腸直腸癌、神経膠腫（例、星状細胞腫、希突起膠腫、上衣腫、又は脈絡叢乳頭腫）、多形神経膠芽腫（例、巨細胞膠芽腫又は神経膠肉腫）、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、原始神経外胚葉腫瘍（髄芽腫）、腎臓癌（例、腎細胞癌腫）、膀胱癌、子宮癌、食道癌、脳癌、頭頸部癌、子宮頸癌、精巣癌、甲状腺癌、胃癌、ウイルス誘発性腫瘍、例えば、パピローマウイルス誘発癌腫（例、子宮頸癌腫、子宮頸癌）、腺癌、ヘルペスウイルス誘発腫瘍（例、バーキットリンパ腫、ＥＢＶ誘発Ｂ細胞リンパ腫）、Ｂ型肝炎誘発腫瘍（肝細胞癌腫）、ＨＴＬＶ－１誘発及びＨＴＬＶ－２誘発リンパ腫、聴神経腫瘍、肺癌（例、肺癌腫、気管支癌腫）、小細胞肺癌腫、咽頭癌、肛門癌腫、神経膠芽腫、直腸癌腫、リンパ管腫、星状細胞腫、脳腫瘍、網膜芽細胞腫、基底細胞腫、脳転移、髄芽腫、膣癌、膵臓癌、精巣癌、ホジキン症候群、髄膜腫、シュネーベルガー病、下垂体腫瘍、菌状息肉症、カルチノイド、神経鞘腫、脊髄腫、バーキットリンパ腫、喉頭癌、腎臓癌、胸腺腫、体癌腫、骨癌、非ホジキンリンパ腫、尿道癌、ＣＵＰ症候群、頭頸部腫瘍、希突起膠腫、外陰癌、腸癌、結腸癌腫、食道癌（例：食道癌腫）、いぼ併発、小腸の腫瘍、頭蓋咽頭腫、卵巣癌腫、生殖器腫瘍、卵巣癌（例、卵巣癌腫）、膵臓癌（例、膵臓癌腫）、子宮内膜癌腫、肝転移、陰茎癌、舌癌、胆嚢癌、白血病、形質細胞腫、眼瞼腫瘍の一つ又は複数から選択される癌を有する。

【0265】

一部の実施形態では、上に記述するように、癌又は腫瘍は、転移性癌、例えば、ＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２を発現する転移性癌である。上の癌に加えて、例示的な転移性癌は、限定されないが、骨、肝臓、及び／又は肺に転移した膀胱癌；骨、脳、肝臓、及び／又は肺に転移した乳癌；肝臓、肺、及び／又は腹膜に転移した結腸直腸癌；副腎、骨、脳、肝臓、及び／又は肺に転移した腎臓癌；副腎、骨、脳、肝臓、及び／又は他の肺部位に転移した肺癌；骨、脳、肝臓、肺、及び／又は皮膚／筋肉に転移した黒色腫；肝臓、肺、及び／又は腹膜に転移した卵巣癌；肝臓、肺、及び／又は腹膜に転移した膵臓癌；副腎、骨、肝臓、及び／又は肺に転移した前立腺癌；肝臓、肺、及び／又は腹膜に転移した胃癌；骨、肝臓、及び／又は肺に転移した甲状腺癌；ならびに骨、肝臓、肺、腹膜、及び／又は膣に転移した子宮癌をとりわけ含む。

【0266】

一部の実施形態では、例えば、癌免疫療法剤がＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト又は阻害剤である場合、対象は、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１阻害剤療法について適切となる一つ又は複数のバイオマーカー（例、細胞、例えば癌細胞又は癌特異的ＣＴＬなどにおける、増加したＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１レベル）を有する。例えば、一部の実施形態では、対象は、腫瘍浸潤性ＣＤ８＋Ｔ細胞サブセット内のプログラム細胞死１高／細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４高（例、ＰＤ－１^ｈｉ ＣＴＬＡ－４^ｈｉ）細胞の増加した分画を有する（例、Ｄａｕｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１２６：３４４７－３４５２，２０１６を参照のこと）。別の例として、一部の実施形態では、対象は、循環腫瘍反応性（例、ＰＤ－１^＋ＣＤ１１ａ^ｈｉＣＤ８^＋）Ｔ細胞におけるＢｉｍ（Ｂ細胞リンパ腫２相互作用（Ｂｃｌ２相互作用）メディエーター）の増加レベルを有し、場合により転移性黒色腫を有する（例、Ｄｒｏｎｃａ ｅｔ ａｌ．，ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ．Ｍａｙ ５；１（６）：ｅ８６０１４，２０１６を参照のこと）。

【0267】

特定の具体的な組み合わせは、結腸直腸癌、黒色腫、乳癌、非小細胞肺癌腫、膀胱癌、及び腎細胞癌腫の一つ又は複数から選択される癌を治療するための、抗ＮＲＰ２ａ抗体ならびにＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト又は阻害剤、例えばアテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、及びデュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）などを含む。

【0268】

一部の特定の組み合わせは、ホジキンリンパ腫、黒色腫、非小細胞肺癌、肝細胞癌腫、腎細胞癌腫、及び卵巣癌の一つ又は複数から選択される癌を治療するための、抗ＮＲＰ２ａ抗体及びＰＤ－１アンタゴニスト、例えば、ニボルマブを含む。

【0269】

特定の具体的な組み合わせは、黒色腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、頭頸部癌、及び尿路上皮癌の一つ又は複数から選択される癌を治療するための、抗ＮＲＰ２ａ抗体及びＰＤ－１アンタゴニスト、例えば、ペムブロリズマブを含む。

【0270】

特定の具体的な組み合わせは、黒色腫、前立腺癌、肺癌、及び膀胱癌の一つ又は複数から選択される癌を治療するための、抗ＮＲＰ２ａ抗体ならびにＣＴＬＡ－４アンタゴニスト、例えば、イピリムマブ及びトレメリムマブを含む。

【0271】

一部の特定の組み合わせは、転移性乳癌及び脳癌、場合により多形神経膠芽腫、神経膠腫、神経膠肉腫又は悪性脳腫瘍の一つ又は複数から選択される癌を治療するための、抗ＮＲＰ２ａ抗体及びＩＤＯアンタゴニスト、例えば、インドキシモド（ＮＬＧ－８１８９）、１－メチル－トリプトファン（１ＭＴ）、β－カルボリン（ノルハルマン；９Ｈ－ピリド［３，４－ｂ］インドール）、ロスマリン酸、又はエパカドスタットを含む。

【0272】

特定の具体的な組み合わせは、黒色腫、カポジ肉腫、及び血液癌を治療するための抗ＮＲＰ２ａ抗体及びサイトカインＩＮＦ－αを含む。また、含まれるのは、転移性腎臓癌又は転移性黒色腫を治療するための抗ＮＲＰ２ａ抗体及びＩＬ－２（例、アルデスロイキン）の組み合わせである。

【0273】

一部の特定の組み合わせは、血液癌、例えば急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、及びＢ細胞新生物などを治療するための、抗ＮＲＰ２ａ抗体、ならびに、例えば、ＣＤ－１９に対して標的化されたＣＡＲ改変Ｔ細胞を含むＴ細胞ベースの養子免疫療法を含む（例、Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５，上記；Ｌｏｒｅｎｔｚｅｎ ａｎｄ Ｓｔｒａｔｅｎ，Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．８２：３０７－１９，２０１５；及びＲａｍｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．２０：１１２－１１８，２０１４を参照のこと）。

【0274】

癌を治療するための方法は、他の治療モダリティと組み合わせることができる。例えば、本明細書中に記載される併用治療は、対症療法、放射線療法、手術、移植、ホルモン治療、光線力学的治療、抗生物質治療、又はそれらの任意の組み合わせを含む、他の治療的介入の前、中、又は後に対象に投与することができる。対症療法は、脳浮腫、頭痛、認知機能障害、及び嘔吐を低下させるためのコルチコステロイドの投与、ならびに発作を低下させるための抗痙攣薬の投与を含む。放射線療法は、全脳照射、分割放射線療法、及び放射線手術、例えば定位放射線手術などを含み、それは、従来の手術とさらに組み合わせることができる。

【0275】

特定の実施形態は、リンパ管新生を調節し、関連するリンパ性疾患又は関連付けられる状態、例えばリンパ浮腫又は腫瘍転移などを治療するための、本明細書中に記載される抗ＮＲＰ２ａ抗体の使用を含む。リンパ系は、血管系からろ過された体液及びタンパク質を吸収し、収集し、輸送する、相互接続された毛細血管、収集管、及びリンパ節のネットワークからなる。この系は重要な恒常性機能を提供する：ヒトでは、リンパ管は、１日当たり＞４リットルの液体及び相当量のタンパク質を頸部の大静脈中に戻す。

【0276】

リンパ性血管機能不全（リンパ浮腫）は、間質における過剰な液体の蓄積（浮腫）をもたらす。リンパ性浮腫は、典型的には生命を脅かすものではないが、それは、疼痛、不動、線維症、炎症、脂肪組織蓄積、及び組織損傷を含む、深刻な健康結果を有する。リンパ系はまた、免疫応答の重大な成分であるため、リンパ浮腫は、典型的には、感染及び他の免疫系の問題の増加リスクにより伴われる。

【0277】

リンパ管新生は、既存のリンパ管からの新たなリンパ管の形成であり、転移性播種、移植片拒絶（例、角膜、腎臓及び心臓）、２型糖尿病、肥満、高血圧、及びリンパ浮腫を含む多様な病理学的状態と関連付けられる（例、Ａｌｉｔａｌｏ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ４３８：９４６－９５３，２００５；Ｋａｒａｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １２４：９２２－９２８，２０１４；Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １２４：９３６－９４２，２０１４；Ｍａｂｙ－Ｅｌ Ｈａｊｊａｍｉ ｅｔ ａｌ．，Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １３０：１０６３－１０７，２００８；Ｍａｃｈｎｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ １５：５４５－５５２；Ｍｏｒｔｉｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１４．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １２４：９１５－９２１；Ｓｋｏｂｅ ｅｔ ａｌ．，２００９．Ｎａｔ Ｍｅｄ １５：９９３－９９４を参照のこと）。

【0278】

血管の浸潤と比較した原発性腫瘍中での及びその周辺でのリンパ管浸潤は、様々な種類の癌の侵襲性の予後マーカーである。リンパ管の成長はまた、移植片拒絶において含まれる（Ｄｉｅｔｒｉｃｈ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８４：５３５－５３９，２０１０、Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ Ｈｅａｄ Ｎｅｃｋ Ｓｕｒｇ １２９：７１６－７１９，２００３．；Ｍａｕｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６３：１９２０－１９２６，２００３；Ｍｉｙａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｕｒｏｌ １７６：３４８－３５３，２００６；Ｓａａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｄ Ｐａｔｈｏｌ １９：１３１７－１３２３，２００６；Ｓｃｈｏｐｐｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ Ｓｕｒｇ ２４０：３０６－３１２，２００４；Ｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｓｔａｔｅ ６５：２２２－２３０，２００５）。

【0279】

抗リンパ管新生剤は、例えば、リンパ管の成長が角膜移植片拒絶の主要な理由であり、加齢関連の黄斑変性に関連付けられる血管新生の主要な寄与因子である、眼の衰弱性疾患を治療するために有用である（Ｄｉｅｔｒｉｃｈ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８４：５３５－５３９，２０１０）。特に、全層角質移植は、固体組織移植の最も一般的な形態であり、米国においては毎年約４０，０００の角膜移植が実施される。全層角質移植の成功率は、無血管の低リスク床において実施される無併発性の第一の移植片では９０％と高い。しかし、高リスクの血管形成された宿主床において配置された角膜移植片の拒絶率は極めて高い（７０％～９０％）。このように、特定の実施形態は、リンパ管新生を阻害し、それにより移植片の生存を促し、血管新生を阻害するための抗ＮＲＰ２ａ抗体を含む。

【0280】

抗リンパ管新生薬物はまた、ドライアイ疾患の治療のために有用である。リンパ新生促進因子（例、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、及びＶＥＧＦＲ－３）の有意な上方調節ならびに血管の同時成長を伴わないリンパ管の選択的成長が、ドライアイ疾患を伴う角膜において実証されている（Ｇｏｙａｌ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ １２８：８１９－８２４，２０１０）。ドライアイ疾患は、約５００万人のアメリカ人に影響を及ぼす免疫媒介性障害である。それは、視覚関連の生活の質に重度の影響を及ぼし、症状は衰弱性であり得る。ドライアイ疾患についての現在の治療選択肢は限定されており、大半が緩和的であり、高価である。一部の実施形態は、このように、ドライアイ疾患の治療のためのリンパ管新生阻害剤として抗ＮＲＰ２ａ抗体を含む。

【0281】

転移は、固形腫瘍からの死亡の大部分（９０％）について原因となっている（Ｇｕｐｔａ ａｎｄ Ｍａｓｓａｇｕｅ，Ｃｅｌｌ １２７，６７９－６９５，２００６）。転移の複雑なプロセスは、原発腫瘍からの腫瘍細胞の解離、リンパ管又は血管中への腫瘍細胞の血管内浸潤、ならびに二次部位中での腫瘍細胞の血管外遊走及び成長を含む、一連の異なる工程を含む。多くの腫瘍型における所属リンパ節の分析は、リンパ管構造が、ヒト癌の播種のための重要な経路であることを示唆する。さらに、ほぼ全ての癌腫において、リンパ節における腫瘍細胞の存在が、最も重要な有害予後因子である。そのような転移は、腫瘍近くの既存のリンパ管に沿った悪性細胞の通過を排他的に含むと以前は考えられていた一方で、最近の実験的試験及び臨床病理学的報告（例、Ａｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ９４，１３５５－１３６０，２００６及びＮａｔｈａｎｓｏｎ，Ｃａｎｃｅｒ ９８，４１３－４２３，２００３を参照のこと）は、リンパ管新生が固形腫瘍により誘導されることができ、腫瘍拡大を促すことができることを示唆する。一部の実施形態は、このように、癌転移の発生を制限するための治療戦略として、リンパ管及びリンパ管新生を標的化するための抗ＮＲＰ２ａ抗体の使用を含む。

【0282】

したがって、本明細書中に記載される方法及び組成物を使用して、リンパ新生促進因子の活性を阻害し、それにより移植片拒絶、ドライアイ疾患、腫瘍転移、リンパ浮腫、及び関連する炎症状態を治療することができる。

【0283】

一部の実施形態は、平滑筋収縮性を調節し、関連する状態を治療するための、本明細書中に記載される抗ＮＲＰ２抗体の使用を含む。膀胱における低下した平滑筋（ＳＭ）収縮性は、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）に続発する部分的閉塞、後部尿道弁、真性糖尿病、多発性硬化症、脊髄損傷、又は特発性原因を含む、多数の病因から生じ得る。（例、Ｄｒａｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｕｒｏｌ．１１（８）：４５４－４６４，２０１４を参照のこと）。状態、例えばＢＰＨ又は後部尿道弁などでは、膀胱は、閉塞した出口に対して収縮する。初期応答は適応性であり、増加した力生成によって、増加した出口抵抗を克服することを可能にするＳＭ肥大の代償段階を含む。要求が膀胱の適応能力を凌ぐ場合、収縮性能はより低い効率となり、残留体積が増加し、膀胱がリモデリングされ、最終的に、膀胱が代償するにつれて、排尿筋収縮性の喪失に導く。（例、Ｚｄｅｒｉｃ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．１６（２）：２０３－２１７，２０１２を参照のこと）。不活性な排尿筋機能の有病率は、成人において４８％と高いことが報告されている（Ｏｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｕｒｏｌ；６５（２）：３８９－３９８，２０１４）。さらに、ＳＭ収縮の回復のための既存の薬理学的治療、例えばムスカリンアゴニスト又はコリンエステラーゼ阻害剤などは、限定的な有効性及び有害効果を示している（Ｂａｒｅｎｄｒｅｃｈｔ ｅｔ ａｌ．，ＢＪＵ Ｉｎｔ．９９（４）：７４９－７５２，２００７）。

【0284】

最近の試験によって、ＮＲＰ２発現の主要部位として膀胱平滑筋が特定され、ＲｈｏＡ及び細胞骨格硬直の阻害が実証され、インビボでのＮＲＰ２のユビキタスな又は平滑筋特異的な欠失を伴うマウスからの膀胱ＳＭ細片の増加した収縮性が、ＮＲＰ２インタクト同腹仔対照からの組織と比較した場合に観察された（例、Ｂｉｅｌｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１８１ ５４８－５５９，２０１２；及びＶａｓｑｕｅｚ ｅｔ ａｌ．，ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ ２（３）ｅ９０６１７，２０１７を参照のこと）。

【0285】

さらに、最近の試験によって、代償不全を受けている膀胱においてＮＲＰ２を標的化することが、進行中の閉塞にもかかわらず収縮性を回復させる潜在能を有することが示されている。（Ｖａｓｑｕｅｚ ｅｔ ａｌ．，ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ ２（３）ｅ９０６１７，２０１７）。これらの知見によって、ＮＲＰ２軸が、部分的な膀胱出口閉塞症候群におけるＳＭ収縮性の回復のための潜在的に新規の薬理学的標的を表し、ＮＲＰ２機能の抗体ベースのモジュレーターの開発のための重要な治療機会を提供することが論じられている。

【0286】

今日までの減少した排尿筋収縮性の薬理学的管理は、膀胱収縮性を増強するための副交感作用活性の刺激、及び膀胱排出を促進するための流出抵抗の低下に焦点を当てている（Ｃｈａｎｃｅｌｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｕｒｏｌｏｇｙ ７２（５）９６６－９６７，２００８）。しかし、不良な収縮性の膀胱を伴う患者における副交感神経模倣薬物の１０の無作為化臨床治験の分析は、症状の悪化又は有意な改善の欠如のいずれかを明らかにした（Ｂａｒｅｎｄｒｅｃｈｔ ｅｔ ａｌ．，ＢＪＵ Ｉｎｔ．９９（４）７４９－７５２，２００７）。代償不全膀胱におけるＮＲＰ２欠失後の収縮性における増加は、ＮＲＰ２が、慢性閉塞の条件下での低下した排尿筋収縮性を軽減するための有用な標的であり得ることを示唆する。

【0287】

このプロセスにおけるＮＲＰ２の役割を考慮すると、特定の実施形態は、例えば、膀胱における低下した平滑筋（ＳＭ）収縮性、より具体的には、部分的な膀胱出口閉塞症候群に関連付けられる症候群の治療における、を含む、平滑筋収縮性を調節するための、本明細書中に記載される抗ＮＲＰ２抗体の使用を含む。一部の実施形態は、このように、それを必要とする対象において部分的な膀胱出口閉塞症候群を治療する、その症状を寛解させる、又はその進行を阻害する方法を含み、ヒトＮＲＰ２ａポリペプチドに特異的に結合する、本明細書中に記載される少なくとも一つの抗体、又はその抗原結合断片を対象に投与することを含む。特定の実施形態は、それを必要とする対象において平滑筋収縮性を調節する（例、増加させる、低下させる）方法を含み、本明細書中に記載されるように、抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片を対象に投与することを含む。特定の実施形態は、それを必要とする対象において低下した平滑筋収縮性を治療すること、その症状を寛解させること、及び／又はその進行を低下させることを含み、本明細書中に記載される抗ＮＲＰ２ａ抗体、又はその抗原結合断片を対象に投与することを含む。

【0288】

ＮＲＰ２発現は、線維症の発生と関連付けられてきた。一部の実施形態は、このように、線維症、例えば、組織線維症を治療するための、本明細書中に記載される抗ＮＲＰ２ａ抗体の使用を含む。組織線維症の例は、他の繊維性疾患の中でもとりわけ、肝線維症、腎線維症、肺線維症、皮膚線維症、心血管線維症、及び胃腸線維症からなる群から選択される線維症を含む。肝線維症の例は、肝硬変、虚血再灌流、肝移植後障害、壊死性肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、原発性胆汁性肝硬変、及び原発性硬化性胆管炎を含む。一部の態様では、肝硬変は、アルコール、薬物、及び／又は他の化学物質による誘導に関連する。腎線維症の例は、増殖性糸球体腎炎、硬化性糸球体腎炎、腎原性線維性皮膚症、糖尿病性腎症、腎細管間質性線維症、及び巣状分節性糸球体硬化症を含む。肺線維症の例は、肺間質性線維症、薬物誘発性サルコイドーシス、肺線維症、特発性肺線維症、喘息、慢性閉塞性肺疾患、びまん性肺胞傷害疾患、肺高血圧症、及び新生児気管支肺異形成症を含む。皮膚線維症の例は、強皮症、ケロイド瘢痕化、乾癬、肥大瘢痕化、及び擬似強皮症を含む。心血管系線維症の例は、アテローム性動脈硬化症、冠動脈再狭窄、うっ血性心筋症、心不全、心臓移植、及び心筋線維症を含む。胃腸線維症の例は、コラーゲン性大腸炎、絨毛性萎縮、陰窩過形成、ポリープ形成、クローン病の線維症、胃潰瘍治癒、及び腹部接着手術後の瘢痕を含む。また、含まれるのは、骨関連線維化疾患及びリウマチ性パンヌス形成から生じる線維性状態である。

【0289】

本明細書中に記載される疾患又は状態の一つ又は複数を伴う対象を特定する方法は、当技術分野において公知である。一部の実施形態では、対象は、健康な対照と比べて、少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンド、例えばＣＣＬ２１及び／又はＣＣＲ７など、ならびに／あるいはそれらのコードｍＲＮＡの増加レベル又は発現に関連付けられる疾患を有する、及び／又は有することに基づいて治療のために選択される。例えば、一部の実施形態では、疾患対象、細胞、又は組織における少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドのレベルは、健康な対照における少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドのレベルの約又は少なくとも約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１０００倍又はそれ以上である。一部の実施形態では、対象は、非癌性対照細胞又は組織と比べて、少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンド及び／又はそれらのコードｍＲＮＡの増加レベル又は発現を有する癌を有する、及び／又は有することに基づいて治療のために選択される。例えば、一部の実施形態では、癌細胞又は組織中の少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンドのレベルは、非癌性対照又は標準におけるＮＲＰ２ａリガンドのレベルの約又は少なくとも約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１０００倍又はそれ以上である。このように、特定の実施形態では、治療のために対象を選択する方法を含み、（ｉ）対照又は参照と比べて、対象における少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンド及び／又はコードｍＲＮＡの増加発現レベルを検出すること、ならびに（ｉｉ）本明細書中に記載されるように、少なくとも一つの抗ＮＲＰ２ａ抗体又はその抗原結合断片を含む治療用組成物を対象に投与することを含む。特定の実施形態では、ＮＲＰ２ａリガンドはＣＣＬ２１及び／又はＣＣＲ７である。

【0290】

一部の実施形態では、対象は、対象の健康な対照集団又は一致した対照集団のレベルと比べて、ＮＲＰ２ａポリペプチド、例えば可溶性ＮＲＰ２ａポリペプチド（例えば、表Ｎ１から選択される）などの増加循環レベル又は血清レベルを有する、及び／又は有することに基づいて治療のために選択される。例えば、特定の実施形態では、循環レベルもしくは血清レベルが、約又は少なくとも約１０、２０、３０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、３０００、４０００、５０００ｐＭの可溶性ＮＲＰ２ａポリペプチドである、又は循環レベルもしくは血清レベルが、約３０～５０、５０～１００、１００～２０００、２００～２０００、３００～２０００、４００～２０００、５００～２０００、６００～２０００、７００～２０００、８００～２０００、９００～２０００、１０００～２０００、２０００～３０００、３０００～４０００、４０００～５０００ｐＭの可溶性ＮＲＰ２ａポリペプチドである。

【0291】

特定の実施形態では、対象は、健康な対照（例、ＮＲＰ２関連疾患）と比べて、ＮＲＰ２ａポリペプチド（場合により表Ｎ１から選択される）及び／又はそのコードｍＲＮＡの増加レベル又は発現に関連付けられる疾患を有する、及び／又は有することに基づいて治療のために選択される。一部の実施形態では、ＮＲＰ２ａポリペプチドは、ＮＲＰ２ａバリアント１もしくはバリアント２アイソフォーム、又はその断片である。例えば、特定の実施形態では、罹患した対象、細胞、又は組織におけるＮＲＰ２ａポリペプチドのレベルは、健康な対照におけるＮＲＰ２ａポリペプチドのレベルの約又は少なくとも約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍又はそれ以上である。一部の実施形態では、対象は、対照細胞又は組織と比べて、場合により、癌と同じ種類の非癌性細胞又は組織と比べて、ＮＲＰ２ａポリペプチド（例えば、表Ｎ１から選択される）及び／又はそのコードｍＲＮＡの増加レベルもしくは発現を有する癌を有する、及び／又は有することに基づいて治療のために選択される。例えば、一部の実施形態では、癌細胞又は組織におけるＮＲＰ２ａポリペプチドのレベルは、非癌性対照又は標準におけるＮＲＰ２ａポリペプチドのレベルの約又は少なくとも約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍又はそれ以上である。一部の実施形態は、このように、（ｉ）対照又は参照と比べて、対象におけるＮＲＰ２ａポリペプチド及び／又はそのコードｍＲＮＡの増加発現レベルを検出すること、ならびに（ｉｉ）本明細書中に記載されるように、少なくとも一つの抗ＮＲＰ２ａ抗体又はその抗原結合断片を含む治療用組成物を対象に投与することを含む、治療のために対象を選択する方法を含む。

【0292】

一部の実施形態では、対象は、健康な対照もしくは一致した対照標準又は対象の集団と比べて、ＮＲＰ２ａの増加レベルもしくは発現と関連付けられる疾患（例えば、表Ｎ１のバリアント１及び／又は２）、又はＮＲＰ２ａ：ＮＲＰ２ｂ発現の改変された比率を有する、及び／又は有することに基づいて治療のために選択される。一部の実施形態では、対象は、健康な対照もしくは一致した対照標準又は対象の集団と比べて、有意により高いＮＲＰ２ａの発現又はレベルを有する。一部の実施形態では、ＮＲＰ２ａのレベルは、健康な対照もしくは一致した対照標準又は対象の集団と比べて、約又は少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％、１０００％だけ増加する。特定の実施形態は、従って、癌治療のために対象を選択する方法を含み、（ｉ）対照又は参照と比べて対象におけるＮＲＰ２ａの増加発現レベルを検出すること、及び（ｉｉ）本明細書中に記載される抗抗ＮＲＰ２ａ抗体又はその抗原結合断片を含む治療用組成物を対象に投与することを含む。

【0293】

一部の実施形態では、健康な対照もしくは一致した対照標準又は対象の集団は、同じ種類の罹患又は非罹患細胞又は組織の、年齢が一致したサンプルについての平均範囲を含み、それらは、特定の特徴、例えば薬物耐性、転移能、侵襲性、遺伝シグネチャ（例、ｐ５３変異、ＰＴＥＮ欠失、ＩＧＦＲ発現）、及び／又は発現パターンなどを含む。

【0294】

上に記述するように、ヒト又は非ヒト哺乳動物の疾患の治療又は検査のためのインビボ使用のために、本明細書中に記載される薬剤は、獣医学的治療用組成物を含む、投与前に一つ又は複数の治療用組成物又は医薬組成物中に一般的に組み入れられる。

【0295】

このように、特定の実施形態は、本明細書中に記載されるように、ヒトＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドに特異的に結合する少なくとも一つの抗体又はその抗原結合断片を含む治療用組成物に関する。一部の例では、治療用又は医薬組成物は、医薬的に又は生理学的に許容可能な担体又は賦形剤との組み合わせにおいて、本明細書中に記載される薬剤の一つ又は複数を含む。特定の治療用組成物は、本明細書中に記載されるように、少なくとも一つの癌免疫療法剤をさらに含む。

【0296】

一部の治療用組成物は、一つの抗ＮＲＰ２ａ抗体又はその抗原結合断片のみを含む（及び特定の方法が利用する）。特定の治療用組成物は、少なくとも二つ、三つ、四つ、又は五つの異なる抗ＮＲＰ２ａ抗体又はその抗原結合断片の混合物を含む（及び特定の方法が利用する）。

【0297】

例えば、特定の治療用組成物は少なくとも二つの抗ＮＲＰ２抗体を含み、ヒトＮＲＰ２ａポリペプチドの少なくとも一つの第一のエピトープに特異的に結合する第一の抗体又はその抗原結合断片、及び同じ又は異なるヒトＮＲＰ２ポリペプチドの少なくとも一つの第二のエピトープに特異的に結合する第二の抗体又はその抗原結合断片を含み、それにおいて、少なくとも一つの第一のエピトープは、少なくとも一つの第二のエピトープとは異なる。一部の実施形態では、第一及び第二の抗体又はその抗原結合断片は、ＮＲＰ２ポリペプチドの同じドメインに特異的に及び非競合的に結合する。一部の実施形態では、第一の抗ＮＲＰ２抗体又はその抗原結合断片は、ＮＲＰ２ａアイソフォーム（例、表Ｎ１のバリアント１及び／又は２）に特異的である第一のエピトープに選択的に結合し、第二の抗ＮＲＰ２抗体又はその抗原結合断片は、ＮＲＰ２ｂアイソフォーム（例、表Ｎ１のバリアント４及び／又は５）に特異的である、あるいはＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂアイソフォームの両方に共通する（例、全長ＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂにより共有される、共通の、表面に曝露されたａ１、ａ２、ｂ１、ｂ２又はｃドメイン中に位置する）第二のエピトープに選択的に結合する。

【0298】

一部の実施形態では、第一及び第二の抗体又はその抗原結合断片は、ＮＲＰ２ポリペプチドの異なるドメインに特異的に及び非競合的に結合する。一部の実施形態では、第一の抗体は、ＮＲＰ２ａポリペプチドと少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンド、例えば、ＣＣＬ２１及び／又はＣＣＲ７の間でのシグナル伝達活性を調節する。

【0299】

一部の実施形態では、第一及び第二の抗体又はその抗原結合断片は、両方とも、例えば、少なくとも二つの異なるＮＲＰ２リガンドについての遮断抗体である。一部の実施形態では、第一及び第二の抗体又はその抗原結合断片は、両方とも、例えば、少なくとも二つの異なるＮＲＰ２リガンドについての部分遮断抗体である。一部の例では、第一及び第二の抗体又はその抗原結合断片は、両方とも、例えば、少なくとも二つの異なるＮＲＰ２リガンドに関して、非遮断抗体である。

【0300】

一部の例では、第一の抗体又はその抗原結合断片は遮断抗体であり、第二の抗体又はその抗原結合断片は部分遮断抗体である。特定の例では、第一の抗体又はその抗原結合断片は遮断抗体であり、第二の抗体又はその抗原結合断片は非遮断抗体である。

【0301】

一部の実施形態では、第一及び第二の抗体又はその抗原結合断片は、両方とも、ヒトにおいて高いエフェクター機能を伴うＩｇＧ Ｆｃドメイン、例えば、ＩｇＧ１又はＩｇＧ３ Ｆｃドメインを含む。一部の実施形態では、第一及び第二の抗体又はその抗原結合断片は、ヒトにおいて低いエフェクター機能を伴うＩｇＧ Ｆｃドメイン、例えば、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む。

【0302】

一部の例では、第一の抗体又はその抗原結合断片は、ヒトにおいて高いエフェクター機能を伴うＩｇＧ Ｆｃドメイン、例えば、ＩｇＧ１又はＩｇＧ３ Ｆｃドメインを含み、第二の抗体又はその抗原結合断片は、ヒトにおいて低いエフェクター機能を伴うＩｇＧ Ｆｃドメイン、例えば、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む。

【0303】

特定の実施形態では、薬剤、例えば抗ＮＲＰ２ａ抗体又は他のポリペプチド薬剤などを含む治療用組成物は、タンパク質基準又は重量－重量基準で実質的に純粋であり、例えば、組成物は、タンパク質基準又は重量－重量基準で少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％の純度を有する。

【0304】

一部の実施形態では、本明細書中で提供される抗体（例、抗ＮＲＰ２ａ抗体）又は他のポリペプチド薬剤は、本明細書中に記載される、及び当技術分野において公知のように、凝集体を形成しない、所望の溶解性を有する、及び／又はヒトにおける使用のために適切である免疫原性プロファイルを有する。このように、一部の実施形態では、ポリペプチド薬剤（例えば、抗ＮＲＰ２ａ抗体）を含む治療用組成物は、実質的に凝集体を含まない。例えば、特定の組成物は、約１０％未満（タンパク質基準）の高分子量凝集タンパク質、又は約５％未満の高分子量凝集タンパク質、又は約４％未満の高分子量凝集タンパク質、又は約３％未満の高分子量凝集タンパク質、又は約２％未満の高分子量凝集タンパク質、又は約１％未満の高分子量凝集タンパク質を含む。一部の組成物は、その見掛けの分子量に対して少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％又は約９５％の単分散であるポリペプチド薬剤（例、抗体、例えば抗ＮＲＰ２ａ抗体など）を含む。

【0305】

一部の実施形態では、ポリペプチド薬剤、例えば抗体（例、抗ＮＲＰ２ａ抗体）などは、約又は少なくとも約０．１ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．６、０．７、０．８、０．９、１ｍｇ／ｍｌ、２ｍｇ／ｍｌ、３ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、７ｍｇ／ｍｌ、８ｍｇ／ｍｌ、９ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１１、１２、１３、１４、又は１５ｍｇ／ｍｌに濃縮され、生物療法的な使用のために製剤化される。

【0306】

治療用組成物又は医薬組成物を調製するために、有効な又は所望の量の一つ又は複数の薬剤を、特定の薬剤及び／又は投与の様式のために適切であることが当業者に公知の任意の医薬担体又は賦形剤と混合する。医薬担体は、液体、半液体、又は固体であり得る。非経口、皮内、眼内、皮下、膀胱中への直接点滴、又は局所適用のために使用される溶液又は懸濁液は、例えば、滅菌希釈剤（例えば水など）、生理食塩水（例、リン酸緩衝生理食塩水；ＰＢＳ）、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒；抗菌剤（例えばベンジルアルコール及びメチルパラベンなど）；酸化防止剤（例えばアスコルビン酸及び亜硫酸水素ナトリウムなど）及びキレート剤（例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；緩衝液（例えば酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩など）を含み得る。静脈内に（例、ＩＶ注入により）投与される場合、適切な担体は、生理食塩水又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ならびに増粘剤及び可溶化剤、例えばグルコース、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、及びそれらの混合物などを含む溶液を含む。

【0307】

純粋な形態における、又は適した治療用組成物もしくは医薬組成物における、本明細書中に記載される薬剤の投与は、類似の有用性を果たすための薬剤の許容される投与の様式のいずれかを介して行うことができる。治療用組成物又は医薬組成物は、薬剤含有組成物を、適した生理学的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤と組み合わせることにより調製することができ、固体、半固体、液体、又は気体の形態、例えば錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、座薬、注射、吸入剤、ゲル、マイクロスフェア、及びエアロゾルなどの調製物に製剤化することができる。また、他の医薬的に活性な成分（本明細書中の他の箇所に記載される他の小分子を含む）ならびに／あるいは適切な賦形剤、例えば塩、緩衝剤、及び安定剤などは、組成物内に存在してもよいが、しかし、そうである必要はない。

【0308】

投与は、経口、非経口、経鼻、静脈内、眼内、皮内、筋肉内、皮下、膀胱中への設置、又は局所を含む、様々な異なる経路により達成され得る。好ましい投与様式は、治療又は予防される状態の性質に依存する。特定の実施形態は、ＩＶ注入による投与を含む。

【0309】

担体は、例えば、用いられる投与量及び濃度でそれに曝露されている細胞又は哺乳動物に非毒性である、医薬的又は生理学的に許容可能な担体、賦形剤、又は安定剤を含むことができる。しばしば、生理学的に許容可能な担体は、水性ｐＨ緩衝溶液である。生理学的に許容可能な担体の例は、緩衝剤、例えばリン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸など；アスコルビン酸を含む抗酸化物質；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリンなど；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドンなど；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、又はリジンなど；グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の糖類；キレート剤、例えばＥＤＴＡなど；糖アルコール、例えばマンニトール又はソルビトールなど；塩形成対イオン、例えばナトリウムなど；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート ２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標））、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びポロキサマー（ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標））など、ならびに同様のものを含む。

【0310】

一部の実施形態では、一つ又は複数の薬剤は、例えば、コアセルベーション技術により、もしくは界面重合により調製されたマイクロカプセル（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ－（メチルメタシル酸）マイクロカプセル）中に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中に、又はマクロエマルション中に封入することができる。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｌｏ，Ａ．，Ｅｄ．，（１９８０）において開示されている。粒子又はリポソームは、他の治療剤又は診断剤をさらに含み得る。

【0311】

治療の正確な投与量及び持続時間は、治療されている疾患の関数であり、公知のテストプロトコールを使用して経験的に、又は当技術分野において公知のモデル系において組成物をテストし、そこから外挿することにより決定され得る。対照臨床治験がまた、実施され得る。用量はまた、軽減される状態の重症度で変動し得る。医薬組成物は、一般的に、望ましくない副作用を最小化しながら、治療的に有用な効果を発揮するように製剤化及び投与される。組成物は、一回投与されてもよく、又は一定間隔で投与される多数のより小さな用量中に分割されてもよい。任意の特定の対象について、特定の投薬レジメンは、個々の必要性に従って経時的に調整され得る。

【0312】

これら及び関連する治療用組成物又は医薬組成物を投与する典型的な経路は、このように、限定されないが、経口、局所、経皮、吸入、非経口、舌下、頬側、眼、直腸、膣、及び鼻腔内を含む。本明細書中で使用される用語「非経口」は、皮下注射、静脈内、膀胱中への注入、筋肉内、胸骨内注射、又は注入技術を含む。本開示の特定の実施形態による治療用組成物又は医薬組成物は、その中に含まれる活性成分が、対象又は患者への組成物の投与時に生物学的に利用可能となるように製剤化される。対象又は患者に投与される組成物は、一つ又は複数の投与単位の形態を取り得るが、ここで、例えば、錠剤は、単一投与単位であってもよく、エアロゾル形態の本明細書中に記載される薬剤の容器は、複数の投与単位を保持し得る。そのような投薬形態を調製する実際の方法は、当業者に公知である、又は明らかであろう；例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００）を参照のこと。投与される組成物は、典型的には、目的の疾患又は状態の治療のための、本明細書中に記載される薬剤の治療有効量を含む。

【0313】

治療用組成物又は医薬組成物は、固体又は液体の形態であってもよい。一実施形態では、担体は粒子状であり、組成物は、例えば、錠剤又は粉末の形態であるようにする。担体は液体であってもよく、組成物は、例えば、経口油、注射可能な液体又はエアロゾルであり、それは、例えば、吸入投与において有用である。経口投与のために意図される場合、医薬組成物は、好ましくは、固体形態又は液体形態のいずれかであり、ここで、半固体、半液体、懸濁液、及びゲル形態は、固体又は液体のいずれかとして本明細書中で考慮される形態内に含まれる。特定の実施形態は、滅菌注射溶液を含む。

【0314】

経口投与用の固形組成物として、医薬組成物は、粉末、顆粒、ゲル、圧縮錠剤、丸剤、カプセル剤、チューインガム、ウエハー又は同様のものに製剤化されてもよい。そのような固体組成物は、典型的には、一つ又は複数の不活性希釈剤又は食用担体を含む。また、以下の一つ又は複数が存在し得る：結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微結晶セルロース、トラガカントゴム、又はゼラチンなど；賦形剤、例えばデンプン、ラクトース、又はデキストリンなど、崩壊剤、例えばアルギン酸、アルギン酸ナトリウム、プリモゲル、コーンスターチ及び同様のもの；潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム又はステレオテックスなど；滑剤、例えばコロイド状二酸化ケイ素など；甘味剤、例えばスクロース又はサッカリンなど；香味剤、例えばペパーミント、サリチル酸メチル、又はオレンジ香料など；及び着色剤。医薬組成物が、カプセル、例えば、ゼラチンカプセルの形態である場合、それは、上の種類の材料に加えて、液体担体、例えばポリエチレングリコール又は油などを含んでもよい。

【0315】

治療用組成物又は医薬組成物は、液体、例えば、エリキシル、シロップ、溶液、ゲル、エマルション、又は懸濁液の形態であってもよい。液体は、二つの例として、経口投与用又は注射による送達用であってもよい。経口投与について意図される場合、好ましい組成物は、本化合物に加えて、甘味剤、防腐剤、染料／着色剤、及び香味増強剤の一つ又は複数を含む。注射により投与されることが意図される組成物中では、界面活性剤、防腐剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、緩衝剤、安定剤、及び等張剤の一つ又は複数が含まれ得る。

【0316】

液体治療用組成物又は医薬組成物は、それらが、溶液、懸濁液又は他の類似の形態であるかを問わず、以下のアジュバントの一つ又は複数を含み得る：無菌希釈剤、例えば注射用水、生理食塩水、好ましくは生理学的食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウムなど、固定油、例えば溶媒又は懸濁培地としての役割を果たし得る合成モノ又はジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の溶媒など；抗菌剤、例えばベンジルアルコール又はメチルパラベンなど；抗酸化物質、例えばアスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなど；キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸など；緩衝剤、例えば酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩など、及び張性の調整用薬剤、例えば塩化ナトリウム又はブドウ糖など。非経口調製物は、アンプル、使い捨てシリンジ、又はガラスもしくはプラスチックで作製された複数用量バイアル中に封入することができる。生理食塩水は好ましいアジュバントである。注射用医薬組成物は、好ましくは、無菌である。

【0317】

非経口投与、眼内投与、又は経口投与のいずれかについて意図される液体治療用組成物又は医薬組成物は、適切な投与量が得られるように、ある量の薬剤を含むべきである。典型的には、この量は、組成物中の目的の薬剤の少なくとも０．０１％である。経口投与について意図される場合、この量は、組成物の重量の０．１～約７０％の間であるように変動し得る。特定の経口治療用組成物又は医薬組成物は、約４％～約７５％の間の目的の薬剤を含む。特定の実施形態では、治療用組成物又は医薬組成物及び調製物は、非経口投薬単位が、希釈前に０．０１～１０重量％の間の目的の薬剤を含むように調製される。

【0318】

治療用組成物又は医薬組成物は、局所投与について意図されてもよく、その場合では、担体は、適切には、溶液、エマルション、軟膏、又はゲル基剤を含み得る。基剤は、例えば、以下の一つ又は複数を含んでもよい：ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、ミツロウ、鉱油、希釈剤、例えば水及びアルコールなど、ならびに乳化剤及び安定剤。増粘剤は、局所投与のための治療用組成物又は医薬組成物中に存在してもよい。経皮投与について意図される場合、組成物は経皮パッチ又はイオン導入デバイスを含みうる。

【0319】

治療用組成物又は医薬組成物は、例えば、直腸中で溶解し、薬物を放出する座薬の形態における直腸投与について意図され得る。直腸投与のための組成物は、適切な非刺激性賦形剤として油性基剤を含み得る。そのような基剤は、限定されないが、ラノリン、ココアバター、及びポリエチレングリコールを含む。

【0320】

治療用組成物又は医薬組成物は、様々な材料を含み得るが、それらは、固体又は液体投薬単位の物理的形態を改変する。例えば、組成物は、活性成分の周りにコーティングシェルを形成する材料を含み得る。コーティングシェルを形成する材料は、典型的には不活性であり、例えば、糖、シェラック、及び他の腸溶コーティング剤から選択され得る。あるいは、活性成分は、ゼラチンカプセル中に封入されてもよい。固体又は液体形態における治療用組成物又は医薬組成物は、薬剤に結合し、それにより、化合物の送達を支援する成分を含み得る。この能力において作用し得る適切な成分は、モノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体、一つ又は複数のタンパク質、又はリポソームを含む。

【0321】

治療用組成物又は医薬組成物は、エアロゾルとして投与することができる投薬単位から本質的になり得る。用語「エアロゾル」は、コロイド性質のものから、加圧パッケージからなる系に及ぶ様々な系を意味するために使用される。送達は、液化ガスもしくは圧縮ガスにより、又は活性成分を分注する適切なポンプ系により得る。エアロゾルは、活性成分を送達するために、単相、二相、又は三相系において送達されてもよい。エアロゾルの送達は、必要な容器、活性化剤、弁、サブコンテナ、及び同様のものを含み、それらは一緒にキットを形成し得る。当業者は、過度の実験なしに、好ましいエアロゾルを決定し得る。

【0322】

本明細書中に記載される組成物は、身体からの迅速な排除に対して薬剤を保護する担体、例えば徐放性製剤又はコーティングなどを用いて調製されてもよい。そのような担体は、制御放出製剤、例えば、限定されないが、インプラント及びマイクロカプセル化送達系など、ならびに生分解性生体適合性ポリマー、例えばエチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、ポリオルトエステル、ポリ乳酸及び当業者に公知の他のものなどを含む。

【0323】

治療用組成物又は医薬組成物は、医薬技術分野において周知の方法論により調製されてもよい。例えば、注射により投与されることが意図される治療用組成物又は医薬組成物は、溶液を形成するために、滅菌蒸留水を伴う塩、緩衝剤及び／又は安定剤の一つ又は複数を含み得る。界面活性剤を加えて、均質な溶液又は懸濁液の形成を促進し得る。界面活性剤は、水性送達系において薬剤の溶解又は均質な懸濁を促進するために、薬剤と非共有結合的に相互作用する化合物である。

【0324】

治療用組成物又は医薬組成物は、治療有効量において投与されてもよく、それは、様々な因子、用いられる特定の化合物の活性；化合物の代謝安定性及び作用の長さ；対象の年齢、体重、一般的な健康、性別、及び食事；投与の様式及び時間；排泄の速度；薬物の組み合わせ；特定の障害又は状態の重症度；治療を受けている対象を含む、に依存して変動し得る。一部の例では、治療有効一日用量は、（７０ｋｇの哺乳動物について）約０．００１ｍｇ／ｋｇ（即ち、約０．０７ｍｇ）～約１００ｍｇ／ｋｇ（即ち、約７．０ｇ）であり；好ましくは、治療有効用量は（７０ｋｇの哺乳動物について）約０．０１ｍｇ／ｋｇ（即ち、約０．７ｍｇ）～約５０ｍｇ／ｋｇ（即ち、約３．５ｇ）であり；より好ましくは、治療有効用量は（７０ｋｇの哺乳動物について）約１ｍｇ／ｋｇ（即ち、約７０ｍｇ）～約２５ｍｇ／ｋｇ（即ち、約１．７５ｇ）である。一部の実施形態では、治療有効用量は、毎週、隔週、又は毎月投与される。特定の実施形態では、治療有効用量は、毎週、隔週、又は毎月、例えば、約１～１０又は１～５ｍｇ／ｋｇ、あるいは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

【0325】

本明細書中に記載される併用治療は、抗ＮＲＰ２ａ抗体及び追加の治療剤（例、免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、キナーゼ阻害剤）を含む単一医薬投与製剤の投与、ならびに抗ＮＲＰ２ａ抗体及び追加の治療剤をそれ自体の別々の医薬投与製剤中に含む組成物の投与を含み得る。例えば、本明細書中に記載される抗ＮＲＰ２ａ抗体及び追加の治療剤は、単一経口投薬組成物、例えば錠剤もしくはカプセルなど、又は別々の経口投薬製剤中で投与される各薬剤中で、対象に一緒に投与することができる。同様に、本明細書中に記載される抗ＮＲＰ２ａ抗体及び追加の治療剤は、単一の非経口投与組成物中で、例えば生理食塩水もしくは他の生理学的に許容可能な溶液中などで一緒に対象に投与することができる、又は各薬剤を、別々の非経口投与製剤中で投与することができる。別の例として、細胞ベースの治療については、抗ＮＲＰ２ａ抗体は、投与前に細胞と混合することができる、別々の組成物の一部として投与することができる、又は両方であることができる。別々の投与製剤が使用される場合、組成物は、本質的に同じ時間に、即ち、同時に、又は別々にずらされた時間で、即ち、連続的に及び任意の順序において投与することができる；併用治療は、これら全てのレジメンを含むと理解される。

【0326】

また、含まれるのは、患者ケアキットであって、（ａ）本明細書中に記載されるように、ヒトＮＲＰ２ａバリアント１及び／又はバリアント２ポリペプチドに特異的に結合する少なくとも一つの抗体又はその抗原結合断片（抗ＮＲＰ２ａ抗体）；ならびに、場合により、（ｂ）少なくとも一つの追加の治療剤（例、免疫療法剤、化学療法剤、ホルモン治療剤、キナーゼ阻害剤）を含む。特定のキットでは、（ａ）及び（ｂ）は別々の治療用組成物中にある。一部のキットでは、（ａ）及び（ｂ）は同じ治療用組成物中にある。

【0327】

本明細書中のキットはまた、治療されている適応症について、又は所望の診断適用について適切な、又は所望の一つ又は複数の追加の治療薬剤又は他の成分を含み得る。本明細書中のキットはまた、意図される送達様式（例、ステント、移植可能なデポなど）を促進するために必要な又は望ましい一つ又は複数のシリンジ又は他の成分を含むことができる。

【0328】

一部の実施形態では、患者ケアキットは、組成物及び情報材料のための別々の容器、仕切り、又は区画を含む。例えば、組成物は、ボトル、バイアル、又はシリンジ中に含まれることができ、情報材料は、容器との関連において含まれることができる。一部の実施形態では、キットの別々の要素は、単一の、分割されていない容器内に含まれる。例えば、組成物は、ラベルの形態において情報材料をそれに付着したボトル、バイアル、又はシリンジ中に含まれる。一部の実施形態では、キットは、複数の（例、パック）個々の容器を含み、各々が、抗ＮＲＰ２ａ抗体の一つ又は複数の単位投薬形態（例、本明細書中に記載される投薬形態）、及び場合により少なくとも一つの追加の治療剤を含む。例えば、キットは、複数のシリンジ、アンプル、ホイルパケット、又はブリスターパックを含み、各々が抗ＮＲＰ２ａ抗体の単一単位用量、及び場合により少なくとも一つの追加の治療剤を含む。キットの容器は、気密性、防水性（例、水分又は蒸発における変化に対して不透過性）、及び／又は遮光性であることができる。

【0329】

患者ケアキットは、場合により、組成物の投与のために適切なデバイス、例えば、シリンジ、吸入剤、ドロッパ（例、点眼器）、スワブ（例、綿スワブ又は木製スワブ）、又は任意のそのような送達デバイスを含む。一部の実施形態では、デバイスは、薬剤の定用量を分注する移植可能なデバイスである。また、含まれるのは、例えば、本明細書中に記載される構成要素を組み合わせることにより、キットを提供する方法である。

【0330】

薬剤放出アッセイならびに製品仕様、診断、及び試薬のためのバイオアッセイ及び分析アッセイ
また、含まれるのは、抗ＮＲＰ２ａ抗体ならびに関連薬剤、例えば治療試薬及び診断試薬などに関連するバイオアッセイである。例は、とりわけ、純度、生物学的活性、親和性、溶解性、ｐＨ、エンドトキシンレベルを測定するバイオアッセイ及び分析アッセイを含む、その多くが本明細書中に記載されている。また、含まれるのは、用量応答曲線を確立する、及び／又は抗体の異なるバッチ間の比較のために一つ又は複数の基礎を提供するアッセイである。バッチ比較は、化学的特徴付け、生物学的特徴付け、及び臨床的特徴付けのいずれか一つ又は複数に基づくことができる。また、含まれるのは、選択された抗体の効力、安定性、薬物動態、及び免疫原性を評価する方法である。他の使用の間で、これら及び他の方法は、本明細書中に記載される抗ＮＲＰ２ａ抗体を含む、生物剤又は化学薬剤のロット放出テストのために使用することができる。

【0331】

特定の実施形態は、バイオアフィニティアッセイの使用を含む。そのようなアッセイを使用して、例えば、抗ＮＲＰ２ａ抗体と少なくとも一つのＮＲＰ２リガンド（例えば、ＮＲＰ２ａリガンド、例えばＣＣＬ２１及び／又はＣＣＲ７など）の間での結合親和性、ヒトＮＲＰ２ａポリペプチドと少なくとも一つのＮＲＰ２ａリガンド、又は他の細胞結合パートナーの間での相互作用に干渉するその能力を含む、を評価することができる。特定の例示的な結合親和性アッセイは、本明細書中に記載され、当技術分野において公知の他のタンパク質相補アッセイ及びアプローチの中でもとりわけ、ＥＬＩＳＡアッセイ又はタンパク質間相互作用アッセイ、例えばＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）タンパク質：タンパク質相互作用系（Ｐｒｏｍｅｇａ）などを利用し得る。特定のアッセイは、高性能受容体結合クロマトグラフィーを利用する（例、Ｒｏｓｗａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ．２４：２５－３９，１９９６を参照のこと）。他の例示的な結合親和性アッセイは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースの技術を利用し得る。例はＢＩＡＣｏｒｅ技術を含み、それらの特定のものは、ＳＰＲ技術をマイクロ流体系と統合して、ｐＭ～ｍＭの範囲の濃度で分子相互作用をリアルタイムでモニターする。また、含まれるのは、ＫＩＮＥＸＡ（商標）アッセイであり、それは、結合特異性、結合親和性、及び結合動態／速度定数の正確な測定を提供する。

【0332】

特定の実施形態は、抗ＮＲＰ２ａ抗体の免疫原性を評価又は最適化するためのイムノアッセイに関する。例は、治療用タンパク質の免疫原性能に関する有用な情報を提供するためのエクスビボヒト細胞アッセイ及びインビトロ免疫酵素アッセイを含む。エクスビボ細胞応答アッセイを使用して、例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）とＴ細胞の間での細胞共作用を再現し、それにより、目的のタンパク質との接触後のＴ細胞活性化を測定することができる。特定のインビトロ酵素アッセイは、関連するヒト集団の大部分をカバーする組換えＨＬＡ－ＤＲ分子のコレクションを利用してもよく、ＨＬＡ－ＤＲ分子とのペプチドの結合（治療用タンパク質の断片化から由来する）をテストするための自動免疫酵素アッセイを含んでもよい。また、含まれるのは、抗ＮＲＰ２ａ抗体から一つ又は複数のＴ細胞エピトープを特定し、次に除去又は改変するために、これらの及び関連する方法を使用することなどにより、選択されたタンパク質の免疫原性を低下させる方法である。

【0333】

また、含まれるのは、パラメータ、例えば特定の生物学的活性、結合特徴、ＮＲＰ２受容体二量体化及びヘテロ二量体化、又はシグナル伝達、受容体局在化、ＮＲＰ２ポリペプチドの内部移行もしくは時間空間動態における変化など、ならびに、あるいは他のパラメータ、例えば可塑性、成長、及び／又は細胞傷害性などを測定するための生物学的放出アッセイ（例、細胞ベースのアッセイ）である。特定の特異的生物学的アッセイは、例えば、細胞結合パートナー、例えば、細胞表面受容体、例えばＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチドなど、異なるＮＲＰ２ポリペプチド（表Ｎ１を参照のこと）、及び／又は細胞表面上に存在する少なくとも一つのＮＲＰ２リガンド、例えばＣＣＬ２１及び／又はＣＣＲ７など、それは、内因性に、又は細胞表面上に組換え発現され、それは、本明細書中に記載されるように、読み取り、例えばＮＲＰ２もしくはＮＲＰ２リガンド結合の蛍光又は発光インジケータなど、又は機能活性に機能的に共役される、を利用する細胞ベースのアッセイを含む。

【0334】

例えば、特定の実施形態は、本明細書中に記載されるＮＲＰ２ポリペプチドの一つ又は複数に結合する抗ＮＲＰ２ａ抗体の能力の評価を可能にする、ヒトＮＲＰ２ポリペプチド（例、細胞表面上のＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチド、あるいは他のＮＲＰ２ポリペプチド）を内因性に又は組換えのいずれかで発現する細胞を含む。一部の実施形態では、抗ＮＲＰ２ａ抗体及び／又はＮＲＰ２ポリペプチドは、ＮＲＰ２ポリペプチドの結合及び／又は生物学的活性を測定するために、読み出し又はインジケータ、例えば蛍光又は発光インジケータなどに機能的に共役される。抗ＮＲＰ２ａ抗体への応答において、ＮＲＰ２ａポリペプチドとＮＲＰ２ａリガンドとの相互作用をモニターすることが可能である例示的なタンパク質－タンパク質間相互作用アッセイは、分割センサー系、例えばＮａｎｏＢｉＴ（登録商標）タンパク質：タンパク質相互作用系（Ｐｒｏｍｅｇａ）などを含む。一部の実施形態では、細胞はまた、少なくとも一つのＮＲＰ２リガンド（例えば、表Ｎ２からのＮＲＰ２ａリガンド、例えばＣＣＲ７など）を発現し、それにおいて、少なくとも一つのＮＲＰ２リガンドは、読み出し又はインジケータ、例えばＮＲＰ２ａポリペプチドへの少なくとも一つのＮＲＰ２リガンドの結合及び／又は生物学的活性の蛍光又は発光インジケータなどに共役される。

【0335】

また、含まれるのは、抗ＮＲＰ２ａ抗体の薬物動態を特徴付けるためのインビボ生物学的アッセイであって、典型的には、操作された、又は野生型マウス、ラット、サル、又は他の哺乳動物を利用する（例、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．２８１：１４３１－１４３９，１９９７を参照のこと）。細胞傷害性ベースの生物学的アッセイの例は、とりわけ、用量応答曲線、バッチテスト、又は様々な規制当局、例えば食品医薬品局（ＦＤＡ）などによる承認に関連する他の特性を確立するか否かを問わず、抗ＮＲＰ２ａ抗体の細胞傷害性を評価することができる放出アッセイ（例、アポトーシスを測定するためのクロム又はユーロピウム放出アッセイ；例えば、ｖｏｎ Ｚｏｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｄｉａｇｎ Ｌａｂ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：２０２－２０７，１９９７を参照のこと）を含む。また、含まれるのは、免疫細胞、例えば、樹状細胞に対する抗ＮＲＰ２ａ抗体の効果を評価するためのアッセイである。

【0336】

特定の実施形態は、単一のモノクローナル抗ＮＲＰ２ａ抗体ならびに少なくとも一つのヒトＮＲＰ２ａ ｖ１／及び又はｖ２ポリペプチドを含むアッセイ系を含み、それにおいて、抗ＮＲＰ２ａ抗体はＮＲＰ２ａポリペプチドに結合する。一部の例では、少なくとも一つの抗体は、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む。

【0337】

また、含まれるのは、精製ＮＲＰ２ポリペプチド（例、ＮＲＰ２ａ ｖ１及び／又はｖ２ポリペプチド）を含むテスト材料であり、それにおいて、当該精製ＮＲＰ２ポリペプチドは、抗体結合検出を可能にする様式において固体基質に結合される。

【0338】

そのようなアッセイ及び材料は、例えば、選択された抗ＮＲＰ２ａ抗体についての用量応答曲線を開発するために、及び／又はタンパク質もしくは他の薬剤の異なるバッチの用量応答曲線を比較するために使用することができる。用量応答曲線は、ストレッサーの大きさを、受容体の応答、例えばＮＲＰ２－ＮＲＰ２リガンド（例えば、表Ｎ２からのＮＲＰ２ａリガンド）相互作用などに関連付けるＸ－Ｙ グラフである；応答は、生理学的又は生化学的応答、例えばインビトロの細胞又はインビボの細胞もしくは組織における非正準の生物学的活性、インビボで測定される治療有効量（例、ＥＣ_５０により測定される）、あるいはインビトロ又はインビボで測定されたかを問わない死（例、細胞死、生物死など）などであり得る。死は通常、モデル集団の５０％に致死的である統計的に導出された用量であるＬＤ_５０として示されるが、それは、ＬＣ_０１（動物テスト集団の１％についての致死用量）、ＬＣ_１００（動物テスト集団の１００％についての致死用量）、又はＬＣ_ＬＯ（致死性を起こす最低用量）により示すことができる。ほぼ任意の所望の効果又はエンドポイントを、この様式において特徴付けることができる。

【0339】

応答曲線の測定用量は、典型的にはＸ軸上にプロットされ、応答はＹ軸上にプロットされる。より典型的には、用量の対数は、Ｘ軸上にプロットされ、最もしばしば、真ん中に最も急勾配部分を伴うシグモイド曲線を生成する。無影響量（ＮＯＥＬ）は、測定可能な効果が観察されない最低実験用量を指し、閾値用量は、ゼロを上回る応答を示すグラフに沿った第一の点を指す。原則として、より強い薬物は、より急勾配の用量応答曲線を生成する。多くの薬物について、望ましい効果は、閾値用量よりもわずかに大きな用量で見出され、しばしば、なぜなら、より低い用量は比較的無効であり、より高い用量は望ましくない副作用に導くためである。インビボで生成された用量応答曲線については、曲線は、望ましい場合、値、例えばμｇ／ｋｇ、ｍｇ／ｋｇ、又はｇ／ｋｇの体重などにより特徴付けることができる。

【0340】

バッチ比較については、異なるバッチの異なる用量応答曲線間（例、抗ＮＲＰ２ａ抗体の異なるバッチ間）の変動係数（ＣＶ）を計算することが有用であり得る。部分的には、なぜなら、ＣＶによって、異なる単位又は異なる手段を伴うデータセットの間での比較が可能になるためである。例えば、特定の例示的な実施形態では、抗ＮＲＰ２ａ抗体又は他の薬剤の二つ又は三つ又はそれ以上の異なるバッチは、４、５、６、７、又は８点用量曲線について、それらの間に約３０％、２０％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、又は１％未満のＣＶを有する。特定の実施形態では、用量応答曲線は、細胞ベースのアッセイにおいて測定され、その読み出しは、抗ＮＲＰ２ａ抗体の選択された活性における増加又は減少に関連する。特定の実施形態では、用量応答曲線は、細胞放出アッセイ又は動物モデル（例、マウスモデル）において測定され、その読み出しは、細胞死又は動物死に関連する。他のバリエーションが、当業者に明らかであろう。

【0341】

発現系及び精製系
特定の実施形態は、本明細書中に記載される抗ＮＲＰ２ａ抗体又は他のポリペプチドベースの薬剤を発現及び精製するための方法及び関連する組成物を含む。そのような組換え抗ＮＲＰ２ａ抗体は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，（１９８９，上記）、特にセクション１６及び１７；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９４，上記）、特にチャプター１０及び１６；ならびにＣｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．１９９５－１９９７）、特にチャプター１、５及び６において記載される標準プロトコールを使用して簡便に調製することができる。一つの一般的な例として、抗ＮＲＰ２ａ抗体は、（ａ）抗ＮＲＰ２ａ抗体重鎖及び軽鎖をコードし、調節エレメントに動作可能に連結されたポリヌクレオチド配列を含む構築物を調製すること；（ｂ）構築物を宿主細胞中に導入すること；（ｃ）抗ＮＲＰ２ａ抗体を発現するように宿主細胞を培養すること；ならびに（ｄ）抗ＮＲＰ２ａ抗体を宿主細胞から単離することの一つ又は複数を含む手順により調製され得る。

【0342】

抗ＮＲＰ２ａ抗体ポリヌクレオチドは、本明細書中の他の箇所に記載されている。所望のポリペプチドを発現するために、抗ＮＲＰ２ａ抗体をコードするヌクレオチド配列、又は機能的等価物は、適した発現ベクター、即ち、挿入されたコード配列の転写及び翻訳のための必要なエレメントを含むベクター中に挿入されてもよい。当業者に周知である方法を使用して、目的のポリペプチドをコードする配列、ならびに適した転写及び翻訳制御エレメントを含む発現ベクターを構築してもよい。これらの方法は、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、及びインビボ遺伝子組み換えを含む。そのような技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９８９）、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８９）において記載されている。

【0343】

様々な発現ベクター／宿主系が公知であり、ポリヌクレオチド配列を含み、発現するために利用され得る。これらは、限定されないが、微生物、例えば組換えバクテリオファージ、プラスミド、又はコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌など；酵母発現ベクターで形質転換された酵母；ウイルス発現ベクター（例、バキュロウイルス）で感染された昆虫細胞系；ウイルス発現ベクター（例、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）又は細菌発現ベクター（例、Ｔｉ又はｐＢＲ３２２プラスミド）で形質転換された植物細胞系；あるいは動物細胞系、哺乳動物細胞、より具体的にはヒト細胞系を含む、を含む。

【0344】

発現ベクター中に存在する「制御エレメント」又は「調節配列」は、転写及び翻訳を行うための、宿主細胞タンパク質と相互作用するベクター－エンハンサー、プロモーター、５’及び３’非翻訳領域の非翻訳領域である。そのようなエレメントは、それらの強度及び特異性において変動し得る。利用されるベクター系及び宿主に依存して、構成的及び誘導性プロモーターを含む、任意の数の適切な転写及び翻訳エレメントが使用され得る。例えば、細菌系においてクローニングする場合、誘導性プロモーター、例えばＰＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴファージミド（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、カリフォルニア州ラ・ホーヤ）又はＰＳＰＯＲＴ１プラスミド（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ、メリーランド州ゲイザースバーグ）のハイブリッドｌａｃＺプロモーターなどが使用され得る。哺乳動物細胞系では、哺乳動物遺伝子からの又は哺乳動物ウイルスからのプロモーターが一般的に好ましい。ポリペプチドをコードする配列の複数のコピーを含む細胞株を生成することが必要である場合、ＳＶ４０又はＥＢＶに基づくベクターを、適した選択マーカーと有利に使用してもよい。

【0345】

細菌系では、多数の発現ベクターが、発現ポリペプチドについて意図される使用に依存して選択されてもよい。例えば、大量が必要とされる場合、容易に精製される融合タンパク質の高レベル発現を向けるベクターが使用され得る。そのようなベクターは、限定されないが、多機能性大腸菌クローニング及び発現ベクター、例えばＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、それにおいて、目的のポリペプチドをコードする配列は、アミノ末端Ｍｅｔ及びその後のβ－ガラクトシダーゼの７残基についての配列とインフレームでベクター中にライゲーションされてもよく、それによりハイブリッドタンパク質が産生される；ｐＩＮベクター（Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ ＆ Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：５５０３ ５５０９（１９８９））；及び同様のものなどを含む。ｐＧＥＸベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ、ウィスコンシン州マディソン）を使用して、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現させてもよい。一般的に、そのような融合タンパク質は可溶性であり、グルタチオン－アガロースビーズへの吸着、続いて遊離グルタチオンの存在における溶出により、溶解した細胞から簡単に精製することができる。そのような系において作製されたタンパク質は、ヘパリン、トロンビン、又は第ＸＡ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計されてもよく、目的のクローン化されたポリペプチドを、随意にＧＳＴ部分から放出することができるようにする。

【0346】

特定の実施形態は、大腸菌ベースの発現系を用いてもよい（例、Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ．５：１３５－１４６，２００８を参照のこと）。これらの及び関連する実施形態は、ライゲーション非依存的クローニング（ＬＩＣ）に部分的又は完全に頼り、適切な発現ベクターを産生し得る。特定の実施形態では、タンパク質発現は、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼ（例、ｐＥＴベクターシリーズ）により制御され得る。これらの及び関連する実施形態は、Ｔ７媒介性発現を支持し、改善された標的タンパク質安定性のためにｌｏｎ及びｏｍｐＴプロテアーゼにおいて欠損しているＢＬ２１のλＤＥ３溶原菌である、発現宿主株ＢＬ２１（ＤＥ３）を利用し得る。また、含まれるのは、大腸菌、例えばＲＯＳＥＴＴＡ（商標）（ＤＥ３）株及びＲｏｓｅｔｔａ ２（ＤＥ３）株などにおいて稀にしか使用されないｔＲＮＡをコードするプラスミドを担持する発現宿主株である。細胞溶解及びサンプルの取り扱いはまた、商標ＢＥＮＺＯＮＡＳＥ（登録商標）ヌクレアーゼ及びＢＵＧＢＵＳＴＥＲ（登録商標）タンパク質抽出試薬の下で販売されている試薬を使用して改善され得る。細胞培養については、自動誘導培地は、ハイスループット発現系を含む、多くの発現系の効率を改善することができる。この種類の培地（例、ＯＶＥＲＮＩＧＨＴ ＥＸＰＲＥＳＳ（商標）自動誘導系）は、人工誘導剤、例えばＩＰＴＧなどの添加なく、代謝シフトを通じてタンパク質発現を徐々に惹起させる。特定の実施形態は、ヘキサヒスチジンタグ（例えば商標ＨＩＳ・ＴＡＧ（登録商標）融合物の下で販売されるものなど）を用い、固定化金属親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）精製、又は関連する技術が続く。特定の態様では、しかし、臨床グレードのタンパク質は、親和性タグの使用を伴わず又は伴わず、大腸菌封入体から単離することができる（例、Ｓｈｉｍｐ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ．５０：５８－６７，２００６を参照のこと）。さらなる例として、特定の実施形態は、コールドショック誘導性大腸菌高収率産生系を用いうる。なぜなら、低温での大腸菌中のタンパク質の過剰発現が、それらの溶解性及び安定性を改善するためである（例、Ｑｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２２：８７７－８８２，２００４を参照のこと）。

【0347】

また、含まれるのは、高密度細菌発酵系である。例えば、ラルストニア・ユートロファの高細胞密度培養によって、１５０ｇ／Ｌを上回る細胞密度でのタンパク質産生、及び１０ｇ／Ｌを超える力価での組み換え型タンパク質の発現が可能になる。

【0348】

酵母サッカロマイセス・セレビシエでは、構成的又は誘導性プロモーター、例えばアルファ因子、アルコールオキシダーゼ、及びＰＧＨなどを含む多数のベクターが使用され得る。総説については、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（上記）及びＧｒａｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６－５４４（１９８７）を参照のこと。また、含まれるのは、ピキア・パンドリス発現系である（例、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２４，２１０－２１５，２００６；及びＨａｍｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０１：１２４４，２００３を参照のこと）。特定の実施形態は、とりわけ、ヒト化Ｎ－グリコシル化経路を有する酵母を含む、タンパク質を選択的にグリコシル化するように操作されている酵母系を含む（例、Ｈａｍｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．３１３：１４４１－１４４３，２００６；Ｗｉｌｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３：１１９－２８，２００５；及びＧｅｒｎｇｒｏｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ－Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２２：１４０９－１４１４，２００４；米国特許第７，６２９，１６３号；第７，３２６，６８１号；及び第７，０２９，８７２号を参照のこと）。単に例として、組換え酵母培養物を、とりわけ、フェルンバッハフラスコ又は１５Ｌ、５０Ｌ、１００Ｌ及び２００Ｌの発酵体中で成長させることができる。

【0349】

植物発現ベクターが使用される場合では、ポリペプチドをコードする配列の発現は、多数のプロモーターのいずれかにより駆動され得る。例えば、ウイルスプロモーター、例えばＣａＭＶの３５Ｓ及び１９Ｓプロモーターなどは、単独で、又はＴＭＶからのオメガリーダー配列との組み合わせにおいて使用され得る（Ｔａｋａｍａｔｓｕ，ＥＭＢＯ Ｊ．６：３０７－３１１（１９８７））。あるいは、植物プロモーター、例えばＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニット又は熱ショックプロモーターなどが使用され得る（Ｃｏｒｕｚｚｉ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．３：１６７１－１６８０（１９８４）；Ｂｒｏｇｌｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４：８３８－８４３（１９８４）；及びＷｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｐｒｏｂｌ．Ｃｅｌｌ Ｄｉｆｆｅｒ．１７：８５－１０５（１９９１））。これらの構築物は、直接的なＤＮＡ形質転換又は病原体媒介性トランスフェクションにより植物細胞中に導入することができる。そのような技術は、多くの一般的に入手可能な総説において記載されている（例、Ｈｏｂｂｂｓ ｉｎ ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ，Ｙｅａｒｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｐｐ．１９１－１９６（１９９２）を参照のこと）。

【0350】

昆虫系を使用して、目的のポリペプチドを発現してもよい。例えば、一つのそのような系では、オートグラファ・カリフォルニカ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が、スポドプテラ・フルギペルダ細胞において又はトリコプルシア細胞において外来遺伝子を発現するためのベクターとして使用される。ポリペプチドをコードする配列は、ウイルスの非必須領域、例えばポリヘドリン遺伝子などの中にクローニングされ、ポリヘドリンプロモーターの制御下に置かれてもよい。ポリペプチドコード配列の成功裏の挿入によって、ポリヘドリン遺伝子が不活性になり、コートタンパク質を欠く組換えウイルスが産生される。組換えウイルスを次に使用して、例えば、目的のポリペプチドが発現され得るＳ．フルギペルダ細胞又はトリコプルシア細胞を感染させてもよい（Ｅｎｇｅｌｈａｒｄ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：３２２４－３２２７（１９９４））。また、含まれるのは、ＳＦ９、ＳＦ２１及びＴ．ｎｉ細胞を利用するものを含む、バキュロウイルス発現系である（例、Ｍｕｒｐｈｙ ａｎｄ Ｐｉｗｎｉｃａ‐Ｗｏｒｍｓ，Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．Ｃｈａｐｔｅｒ ５：Ｕｎｉｔ５．４，２００１を参照のこと）。昆虫系は、哺乳動物系に類似する翻訳後修飾を提供することができる。

【0351】

哺乳動物宿主細胞では、多くのウイルスベースの発現系が一般的に利用可能である。例えば、アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合では、目的のポリペプチドをコードする配列は、後期プロモーター及び三要素リーダー配列からなるアデノウイルス転写／翻訳複合体中にライゲーションされ得る。ウイルスゲノムの非必須Ｅ１又はＥ３領域中での挿入を使用して、感染宿主細胞においてポリペプチドを発現することが可能である生育可能なウイルスを得てもよい（Ｌｏｇａｎ ＆ Ｓｈｅｎｋ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１：３６５５－３６５９（１９８４））。また、転写エンハンサー、例えばラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）エンハンサーなどを使用して、哺乳動物宿主細胞における発現を増加させてもよい。

【0352】

有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚性腎臓株（懸濁培養物中での成長のためにサブクローニングされた２９３又は２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ，ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０））；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲ１細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２））；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞；及びヒト肝腫株（Ｈｅｐ Ｇ２）を含む。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））；ならびに骨髄腫細胞株、例えばＮＳＯ及びＳｐ２／０などを含む。抗体産生のための適切な特定の哺乳動物宿主細胞株の総説については、例えば、Ｙａａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３），ｐｐ．２５５－２６８を参照のこと。特定の好ましい哺乳動物細胞発現系は、ＣＨＯ及びＨＥＫ２９３細胞ベースの発現系を含む。哺乳動物発現系は、例えば、Ｔフラスコ、ローラーボトル、もしくは細胞工場、又は懸濁培養物、例えば、当技術分野において公知の他の中でもとりわけ、１Ｌ及び５Ｌのスピナー、５Ｌ、１４Ｌ、４０Ｌ、１００Ｌ及び２００Ｌの撹拌タンクバイオリアクター、又は２０／５０Ｌ及び１００／２００ＬのＷＡＶＥバイオリアクターにおいて付着細胞株を利用することができる。

【0353】

また、含まれるのは、タンパク質の無細胞発現である。これらの及び関連する実施形態は、典型的には、精製ＲＮＡポリメラーゼ、リボソーム、ｔＲＮＡ及びリボヌクレオチドを利用し；これらの試薬は、細胞からの又は細胞ベースの発現系からの抽出により産生され得る。

【0354】

特定の開始シグナルをまた、使用して、目的のポリペプチドをコードする配列のより効率的な翻訳を達成してもよい。そのようなシグナルは、ＡＴＧ開始コドン及び隣接配列を含む。ポリペプチドをコードする配列、その開始コドン、及び上流配列が、適した発現ベクター中に挿入される場合、追加の転写又は翻訳制御シグナルは必要とされないことがあり得る。しかし、コード配列、又はその一部のみが挿入される場合では、ＡＴＧ開始コドンを含む外因性翻訳制御シグナルが提供されるべきである。さらに、開始コドンは、インサート全体の翻訳を確実にするために、正確なリーディングフレーム中にあるべきである。外因性翻訳エレメント及び開始コドンは、天然及び合成の両方の様々な起源のものであり得る。発現の効率は、使用される特定の細胞系について適したエンハンサー、例えば文献において記載されるものなどの包含により増強され得る（Ｓｃｈａｒｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｐｒｏｂｌ．Ｃｅｌｌ Ｄｉｆｆｅｒ．２０：１２５－１６２（１９９４））。

【0355】

また、宿主細胞株は、挿入配列の発現を調節する、又は発現されたタンパク質を所望の様式において処理するその能力について選んでもよい。ポリペプチドのそのような修飾は、限定されないが、翻訳後修飾、例えばアセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、及びアシル化などを含む。タンパク質の「プレプロ」形態を切断する翻訳後処理をまた使用して、正確な挿入、折り畳み、及び／又は機能を促進し得る。異なる宿主細胞、例えば酵母、ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ２９３、及びＷ１３８などは、そのような翻訳後活性のための特定の細胞機構及び特徴的な機構を有する、又はさらには欠く細菌細胞に加えて、外来タンパク質の正確な修飾及びプロセシングを確実にするように選ばれ得る。

【0356】

組換えタンパク質の長期の高収率産生のために、安定した発現が一般的に好まれる。例えば、目的のポリヌクレオチドを安定的に発現する細胞株は、ウイルス複製起源及び／又は内因性発現エレメント、ならびに同じ又は別々のベクター上の選択マーカー遺伝子を含み得る発現ベクターを使用して形質転換され得る。ベクターの導入後、細胞を、それらを選択的培地へ切り替える前に、濃縮培地中で約１～２日間にわたり成長させてもよい。選択マーカーの目的は、選択に対する耐性を付与することであり、その存在によって、導入された配列を成功裏に発現する細胞の成長及び回復が可能になる。安定的に形質転換された細胞の耐性クローンは、細胞型に適した組織培養技術を使用して増殖され得る。例えば一過性トランスフェクション又は感染などによる一過性産生をまた、用いることができる。一過性産生のために適切である、例示的な哺乳動物発現系は、ＨＥＫ２９３及びＣＨＯベースの系を含む。

【0357】

任意の数の選択系を使用して、形質転換又は形質導入された細胞株を回収してもよい。これらは、限定されないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １１：２２３－２３２（１９７７））及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ２２：８１７－８２３（１９９０））遺伝子を含み、それらは、それぞれｔｋ－細胞又はａｐｒｔ－細胞において用いることができる。また、抗代謝剤、抗生物質、又は除草剤耐性は、選択についての基礎として使用することができる。例えば、メトトレキサートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ．７７：３５６７－７０（１９８０））；アミノグリコシド、ネオマイシン、及びＧ－４１８に対する耐性を付与するｎｐｔ（Ｃｏｌｂｅｒｅ－Ｇａｒａｐｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１－１４（１９８１））；ならびにそれぞれクロルスルフロン及びホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼに対する耐性を付与するａｌｓ又はｐａｔ（Ｍｕｒｒｙ、上記）。追加の選択可能な遺伝子、例えば、細胞がトリプトファンの代わりにインドールを利用することを可能にするｔｒｐＢ、又は細胞がヒスチジンの代わりにヒスチノールを利用することを可能にするｈｉｓＤが記載されている（Ｈａｒｔｍａｎ ＆ Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：８０４７－５１（１９８８））。可視マーカーの使用は、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及び他の蛍光タンパク質（例、ＲＦＰ、ＹＦＰ）、アントシアニン、β－グルクロニダーゼ及びその基質ＧＵＳ、ならびにルシフェラーゼ及びその基質ルシフェリンなどのマーカーで人気を得ており、形質転換体を同定するだけでなく、特定のベクター系に起因する一過性又は安定なタンパク質発現の量を定量化するためにも広く使用されている（例、Ｒｈｏｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５５：１２１－１３１（１９９５））。

【0358】

また、含まれるのは、ハイスループットタンパク質産生系、又はマイクロ産生系である。特定の態様は、例えば、金属キレート改変スライド表面又はＭａｇｎｅＨｉｓ Ｎｉ－粒子上のタンパク質発現及び精製のためのヘキサヒスチジン融合タグを利用し得る（例、Ｋｗｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．９：７２，２００９；及びＬｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．４９８：１２９－４１，２００９を参照のこと）。また、含まれるのは、ハイスループット無細胞タンパク質発現系である（例、Ｓｉｔａｒａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．４９８：２２９－４４，２００９を参照のこと）。これら及び関連する実施形態を使用して、例えば、抗ＮＲＰ２ａ抗体のマイクロアレイを生成することができ、それを次に、ライブラリーをスクリーニングして、目的のＮＲＰ２ポリペプチドと相互作用する抗体及び抗原結合ドメインを同定するために使用することができる。

【0359】

結合剤又は抗体、例えば産物について特異的なポリクローナル抗体もしくはモノクローナル抗体などを使用して、ポリヌクレオチドコード産物の発現を検出及び測定するための様々なプロトコールが、当技術分野において公知である。例は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタン免疫ブロット、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、及び蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）を含む。これらの及び他のアッセイは、とりわけ、Ｈａｍｐｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（１９９０）及びＭａｄｄｏｘ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５８：１２１１－１２１６（１９８３）において記載されている。

【0360】

多種多様な標識及びコンジュゲーション技術が、当業者により公知であり、様々な核酸及びアミノ酸アッセイにおいて使用され得る。ポリヌクレオチドに関連する配列を検出するための、標識されたハイブリダイゼーション又はＰＣＲプローブを産生するための手段は、標識されたヌクレオチドを使用したオリゴ標識、ニック翻訳、末端標識、又はＰＣＲ増幅を含む。あるいは、配列、又はその任意の部分は、ｍＲＮＡプローブの産生のためにベクター中にクローニングされてもよい。そのようなベクターは、当技術分野において公知であり、商業的に入手可能であり、適したＲＮＡポリメラーゼ、例えばＴＴ７、Ｔ３、又はＳＰ６など、及び標識ヌクレオチドの添加により、インビトロでＲＮＡプローブを合成するために使用され得る。これらの手順は、様々な商業的に入手可能なキットを使用して行ってもよい。使用され得る、適切なレポーター分子又は標識は、放射性核種、酵素、蛍光剤、化学発光剤、又は発色剤、ならびに基質、補因子、阻害剤、磁性粒子、及び同様のものを含む。

【0361】

目的のポリヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞は、細胞培養からのタンパク質の発現及び回収のために適切な条件下で培養されてもよい。特定の具体的な実施形態は、無血清細胞発現系を利用する。例は、無血清培地上で成長させることができるＨＥＫ２９３細胞及びＣＨＯ細胞を含む（例、Ｒｏｓｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ．Ｐｕｒｉｆ．４０：２３７－４３，２００５；及び米国特許第６，２１０，９２２号を参照のこと）。

【0362】

組換え細胞により産生される抗体又はその抗原結合断片は、使用される配列及び／又はベクターに依存して細胞内に分泌又は含まれてもよい。当業者により理解されるように、ポリヌクレオチドを含む発現ベクターは、原核細胞膜又は真核細胞膜を通して、コードされたポリペプチドの分泌に向けるシグナル配列を含むように設計されてもよい。他の組換え構築を使用して、目的のポリペプチドをコードする配列を、可溶性タンパク質の精製及び／又は検出を促進するポリペプチドドメインをコードするヌクレオチド配列に連結してもよい。そのようなドメインの例は、切断可能及び非切断可能な親和性精製ならびにエピトープタグ、例えばアビジン、ＦＬＡＧタグ、ポリヒスチジンタグ（例、６ｘＨｉｓ）、ｃＭｙｃタグ、Ｖ５タグ、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ、及び他を含む。

【0363】

組換え細胞により産生されるタンパク質は、当技術分野において公知の様々な技術に従って精製及び特徴付けすることができる。タンパク質精製を実施する及びタンパク質純度を分析するための例示的な系は、高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）（例、ＡＫＴＡ及びＢｉｏ－Ｒａｄ ＦＰＬＣシステム）、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（例、Ｂｅｃｋｍａｎ及びＷａｔｅｒｓ ＨＰＬＣ）を含む。精製のための例示的な化学物質は、当技術分野において公知のものの中でもとりわけ、イオン交換クロマトグラフィー（例、Ｑ、Ｓ）、サイズ排除クロマトグラフィー、塩勾配、親和性精製（例、Ｎｉ、Ｃｏ、ＦＬＡＧ、マルトース、グルタチオン、プロテインＡ／Ｇ）、ゲル濾過、逆相、セラミックＨＹＰＥＲＤ（登録商標）イオン交換クロマトグラフィー、及び疎水性相互作用カラム（ＨＩＣ）などを含む。また、含まれるのは、分析方法、例えばＳＤＳ－ＰＡＧＥ（例、クーマシー、銀染色）、イムノブロット、ブラッドフォード、及びＥＬＩＳＡなどであって、それらは、典型的にはタンパク質組成物の純度を測定するために、産生又は精製プロセスの任意の工程中に利用され得る。

【0364】

また、含まれるのは、抗ＮＲＰ２ａ抗体及びその抗原結合断片を濃縮する方法、ならびに濃縮可溶性タンパク質を含む組成物である。異なる態様では、抗ＮＲＰ２ａ抗体のそのような濃縮溶液は、約５ｍｇ／ｍＬ；又は約８ｍｇ／ｍＬ；又は約１０ｍｇ／ｍＬ；約１５ｍｇ／ｍＬ；又は約２０ｍｇ／ｍＬの濃度でタンパク質を含み得る。

【0365】

一部の態様では、そのような組成物は、実質的に単分散であってもよく、少なくとも一つの抗ＮＲＰ２ａ抗体が、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、動的光散乱、又は分析超遠心分離により評価された場合、一つの見掛け上の分子量形態で主に（即ち、少なくとも約９０％又はそれ以上）存在することを意味する。

【0366】

一部の態様では、そのような組成物は、少なくとも約９０％の純度（タンパク質ベース）、又は一部の態様では、少なくとも約９５％純度、又は一部の実施形態では、少なくとも９８％純度を有する。純度は、当技術分野において公知の任意のルーチン的な分析方法を介して決定され得る。

【0367】

一部の態様では、そのような組成物は、存在するタンパク質の総量と比較して、約１０％未満の高分子量凝集体含量を有し、又は一部の実施形態では、そのような組成物は、約５％未満の高分子量凝集体含量を有し、又は一部の態様では、そのような組成物は、約３％未満の高分子量凝集体含量を有し、又は一部の実施形態では、約１％未満の高分子量凝集体含量を有する。高分子量凝集体含量は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、動的光散乱、又は分析超遠心分離を含む様々な分析技術を介して決定され得る。

【0368】

本明細書中に企図される濃縮アプローチの例は、凍結乾燥を含む、それは、溶液が、目的のタンパク質以外の可溶性成分をほとんど含まない場合に典型的に使用される。凍結乾燥は、しばしば、ＨＰＬＣ実行後に実施され、混合物から大半の又は全ての揮発性成分を除去することができる。また、含まれるのは、限外濾過技術であり、それは、典型的には、タンパク質溶液を濃縮するために一つ又は複数の選択的透過性膜を用いる。膜は、水及び小分子が通過し、タンパク質を保持することを可能にする；溶液は、他の技術の中でもとりわけ、機械的ポンプ、ガス圧力、又は遠心分離により膜に対して強いられ得る。

【0369】

特定の実施形態では、試薬、抗ＮＲＰ２ａ抗体、又は関連薬剤は、当技術分野におけるルーチン的な技術に従って測定した場合、少なくとも約９０％の純度を有する。特定の実施形態、例えば診断組成物又は特定の治療用組成物などでは、抗ＮＲＰ２ａ抗体組成物は、少なくとも約９５％の純度を有する。特定の実施形態、例えば治療用組成物又は医薬組成物などでは、抗ＮＲＰ２ａ抗体組成物は、少なくとも約９７％又は９８％又は９９％の純度を有する。他の実施形態、例えば参照試薬又は研究試薬として使用される場合などでは、抗ＮＲＰ２ａ抗体は、より低い純度でもよく、少なくとも約５０％、６０％、７０％、又は８０％の純度を有してもよい。純度は、全体的に、又は選択された成分、例えば他のタンパク質などに関連して測定することができ、例えば、タンパク質ベースの純度である。

【0370】

精製された抗ＮＲＰ２ａ抗体はまた、それらの生物学的特徴に従って特徴付けることができる。結合親和性及び結合動態は、当技術分野において公知の様々な技術、例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）、及び非標識相互作用物質をリアルタイムで検出することを可能にする光学現象である表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を利用する関連技術などに従って測定することができる。ＳＰＲベースのバイオセンサーは、活性濃度の決定、親和性及び動態の両方の観点でのスクリーニング及び特徴付けにおいて使用することができる。一つ又は複数の正準又は非正準の生物学的活性の存在又はレベルは、本明細書中に記載されるように、読み出し又はインジケータ、例えば生物学的活性の蛍光又は発光インジケータなどに機能的に共役される、選択された抗ＮＲＰ２ａ抗体の細胞結合パートナーを利用するアッセイを含む、細胞ベースのアッセイに従って測定することができる。

【0371】

特定の実施形態では、上に記述されるように、抗ＮＲＰ２ａ抗体組成物は、実質的にエンドトキシンを含まず、例えば、約９５％エンドトキシンを含まない、好ましくは約９９％エンドトキシンを含まない、より好ましくは約９９．９９％エンドトキシンを含まない、を含む。エンドトキシンの存在は、本明細書中に記載されるように、当技術分野におけるルーチン的な技術に従って検出することができる。特定の実施形態では、抗ＮＲＰ２ａ抗体組成物は、実質的に無血清の培地中の真核細胞、例えば哺乳動物又はヒト細胞などから作製される。特定の実施形態では、本明細書中に記述されるように、抗ＮＲＰ２ａ抗体組成物は、約１０ＥＵ／ｍｇ未満の抗ＮＲＰ２ａ抗体、又は約５ＥＵ／ｍｇ未満の抗ＮＲＰ２ａ抗体、約３ＥＵ／ｍｇ未満の抗ＮＲＰ２ａ抗体、又は約１ＥＵ／ｍｇ未満の抗ＮＲＰ２ａ抗体のエンドトキシン含量を有する。

【0372】

特定の実施形態では、抗ＮＲＰ２ａ抗体組成物は、約１０重量／重量％未満の高分子量凝集体、又は約５重量／重量％未満の高分子量凝集体、又は約２重量／重量％未満の高分子量凝集体、又は約１重量／重量％未満の高分子量凝集体を含む。

【0373】

また、含まれるのは、タンパク質ベースの分析アッセイ及び方法であって、それらは、他の特徴の中でもとりわけ、例えば、タンパク質純度、サイズ、溶解性、及び凝集の程度を評価するために使用され得る。タンパク質純度は、多数の方法で評価することができる。例えば、純度は、一次構造、高次構造、サイズ、電荷、疎水性、及びグリコシル化に基づいて評価することができる。一次構造を評価するための方法の例は、Ｎ末端及びＣ末端の配列決定及びペプチドマッピングを含む（例、Ａｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ．２４：２５５－２７５，１９９６を参照のこと）。高次構造を評価するための方法の例は、環状二色性（例、Ｋｅｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．１７５１：１１９－１３９，２００５を参照のこと）、蛍光分光法（例、Ｍｅａｇｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：２３２８３－８９，１９９８を参照のこと）、ＦＴ－ＩＲ、アミド水素－重水素交換動態、示差走査熱量測定、ＮＭＲ分光法、立体構造感受性抗体との免疫反応性を含む。高次構造はまた、様々なパラメータ、例えばｐＨ、温度、又は添加塩などの関数として評価され得る。タンパク質特徴、例えばサイズなどを評価するための方法の例は、分析超遠心分離及びサイズ排除ＨＰＬＣ（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）を含み、電荷を測定するための例示的な方法は、イオン交換クロマトグラフィー及び等電点電気泳動を含む。疎水性は、例えば、逆相ＨＰＬＣ及び疎水性相互作用クロマトグラフィーＨＰＬＣにより評価することができる。グリコシル化は、薬物動態（例、クリアランス）、立体構造又は安定性、受容体結合、及びタンパク質機能に影響を及ぼし得るが、例えば、質量分析及び核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法により評価することができる。

【0374】

上に記述するように、特定の実施形態は、他の使用の間で、タンパク質特徴、例えば純度、サイズ（例、サイズ均質性）、もしくは凝集の程度などを評価する、及び／又はタンパク質を精製するためのＳＥＣ－ＨＰＬＣの使用を含む。ＳＥＣは、また、ゲル濾過クロマトグラフィー（ＧＦＣ）及びゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）を含み、溶液中の分子が、それらのサイズ、又はより具体的には、それらの流体力学的体積、拡散係数、及び／又は表面特性に基づいて多孔性材料中で分離されるクロマトグラフィー方法を指す。このプロセスは、一般的に、生物学的分子を分離し、ポリマーの分子量及び分子量分布を決定するために使用される。典型的には、生物学的サンプル又はタンパク質サンプル（例えば本明細書中で提供され、当技術分野において公知のタンパク質発現方法に従って産生されるタンパク質抽出物など）は、定義された固定相（多孔性材料）、好ましくはサンプル中のタンパク質と相互作用しない相を伴う、選択されたサイズ排除カラム中に充填される。特定の態様では、固定相は、ガラス又は鋼カラム内の高密度三次元マトリクス中に充填された不活性粒子で構成される。移動相は、純水、水性緩衝液、有機溶媒、又はそれらの混合物であり得る。固定相粒子は、典型的には、特定のサイズ以下の分子のみが入ることを可能にする小さな細孔及び／又はチャネルを有する。大きな粒子は、従って、これらの細孔及びチャネルから除外され、固定相とのそれらの限定された相互作用は、それらを、実験の開始時に「完全に除外された」ピークとして溶出することに導く。より小さな分子は、細孔中に適合することができ、流動する移動相から除去され、それらが固定相の細孔中に固定化されるのに費やす時間は、部分的に、それらがどの程度の距離まで細孔中に貫通するかに依存する。移動相流からのそれらの除去は、それらをカラムから溶出させるのにより長い時間を要し、それらのサイズにおける差に基づいて粒子間の分離をもたらす。所与のサイズ排除カラムは、分離することができる分子量の範囲を有する。全体的に、上限よりも大きい分子は、固定相により捕捉されず、下限よりも小さい分子は、固相に完全に入り、単一のバンドとして溶出し、範囲内の分子は、それらの特性、例えば流体力学的体積などにより定義される異なる速度で溶出する。医薬タンパク質を用いた実践におけるこれらの方法の例については、Ｂｒｕｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ．１５：１９２９－１９３５，１９９７を参照のこと。

【0375】

臨床適用のためのタンパク質純度はまた、例えば、Ａｎｉｃｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．（Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．７：３４２－３４９，１９８９）により考察されている。タンパク質純度を分析するためのより最近の技術は、限定されないが、タンパク質及び核酸の迅速な分析のための自動プラットフォームであるＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩを含み、それによって、タンパク質の力価、サイズ、及び純度分析のハイスループット分析が提供される。特定の非限定的な実施形態では、臨床グレードのタンパク質、例えばタンパク質断片及び抗体などが、他の方法の中でもとりわけ、少なくとも二つの直交する工程においてクロマトグラフィー材料の組み合わせを利用することにより得ることができる（例、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．Ｖｏｌ．３０８，Ｅｄｓ．，Ｓｍａｌｅｓ ａｎｄ Ｊａｍｅｓ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．，２００５を参照のこと）。典型的には、タンパク質剤（例、抗ＮＲＰ２ａ抗体、及び抗原結合断片）は、当技術分野において公知であり、本明細書中に記載される技術に従って測定されるように、実質的にエンドトキシンを含まない。

【0376】

タンパク質溶解性アッセイも含まれる。そのようなアッセイは、例えば、組換え産生のための最適な成長及び精製条件を決定し、緩衝液の選択を最適化し、ならびに抗ＮＲＰ２ａ抗体又はそのバリアントの選択を最適化するために利用することができる。溶解性又は凝集は、温度、ｐＨ、塩、及び他の添加剤の存在又は非存在を含む、様々なパラメータに従って評価することができる。溶解性スクリーニングアッセイの例は、限定されないが、濁度又は他の測定値をエンドポイントとして使用してタンパク質溶解性を測定するマイクロプレートベースの方法、精製された組換えタンパク質の溶解性の分析のためのハイスループットアッセイ（例、Ｓｔｅｎｖａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．１７５２：６－１０，２００５を参照のこと）、遺伝子マーカータンパク質の構造相補性を使用して、インビボでのタンパク質フォールディング及び溶解性をモニター及び測定するアッセイ（例、Ｗｉｇｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１９：１３１－１３６，２００１を参照のこと）、及び走査型電気化学顕微鏡法（ＳＥＣＭ）を使用した大腸菌における組換えタンパク質溶解性の電気化学スクリーニング（例、Ｎａｇａｍｉｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．９６：１００８－１０１３，２００６を参照のこと）をとりわけ含む。増加した溶解性（又は低下した凝集）を伴う抗ＮＲＰ２ａ抗体は、タンパク質溶解性についての単純なインビボアッセイを含む、当技術分野におけるルーチン的な技術に従って特定又は選択することができる（例、Ｍａｘｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．８：１９０８－１１，１９９９を参照のこと）。

【0377】

タンパク質溶解性及び凝集はまた、動的光散乱技術により測定することができる。凝集は、可溶性／不溶性、共有結合性／非共有結合性、可逆的／不可逆的、ならびに天然／変性相互作用及び特徴を含む、いくつかの種類の相互作用又は特徴を包含する一般用語である。タンパク質治療薬については、凝集体の存在は、典型的には、凝集体が免疫原性反応（例、小さな凝集体）を起こし得る、又は投与時に有害事象（例、粒子）を起こし得るという懸念のため、望ましくないと考えられる。動的光散乱は、懸濁液中の小粒子又は溶液中のポリマー、例えばタンパク質などのサイズ分布プロファイルを決定するために使用することができる技術を指す。この技術はまた、光子相関分光法（ＰＣＳ）又は準弾性光散乱法（ＱＥＬＳ）として言及され、散乱光を使用してタンパク質粒子の拡散の速度を測定する。散乱強度の変動は、溶液中の分子及び粒子のブラウン運動に起因して観察され得る。この運動データは、従来的に処理されて、サンプルについてのサイズ分布を導き出すことができ、それにおいて、サイズは、タンパク質粒子のストークス半径又は流体力学的半径により与えられる。流体力学的サイズは、質量及び形状（立体構造）の両方に依存する。動的散乱は、広範囲の質量を含むサンプル中でさえ、非常に少量の凝集タンパク質（＜０．０１重量％）の存在を検出することができる。それはまた、例えば、上昇温度での変化のリアルタイムモニタリングに頼る適用を含む、異なる製剤の安定性を比較するために使用することができる。したがって、特定の実施形態は、本開示の抗ＮＲＰ２ａ抗体を含むサンプル中での凝集体の溶解性及び／又は存在を分析するための動的光散乱の使用を含む。

【0378】

前述の実施形態は、理解の明瞭化の目的のために例証及び実施例によりある程度詳細に記載されてきたが、本開示の教示に照らして、特定の変化及び修飾が、添付の特許請求の範囲の精神又は範囲から逸脱することなく作られ得ることが当業者には容易に明らかであろう。以下の実施例は、例証のみにより提供され、限定しない。当業者は、本質的に類似した結果をもたらすように変化又は修飾され得る様々な重大ではないパラメータを容易に認識するであろう。

【実施例】

【0379】

実施例１
結合親和性
表Ａ１／Ａ２中に列挙される抗体についてのアイソフォーム特異性、結合親和性、及び種反応性を、以下に記載されるようにテストして、それらの機能的特性を特徴付けた。結合実験を、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６ｅ機器（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）上でのバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により行った。全ての抗体、ペプチド、及びタンパク質を、１×ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、及び０．０２％Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ２０、ｐＨ７．４中で希釈した。アイソフォーム特異性及びマウス反応性については、ＮＲＰ２アイソフォームａ及びｂ、ならびにマウスＮＲＰ２アイソフォームａ（表Ｅ２を参照のこと）の固有の配列に対応するビオチン化ペプチドを、Ｃｈｉｎａ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ及びＧｅｎｓｃｒｉｐｔから購入した。ペプチドを、２０μｇ／ｍＬでＯｃｔｅｔ Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、１８～５０１９）上に固定した。バイオセンサーを次に、各抗体の５０ｎＭ溶液中に浸漬し、３００秒間にわたり読み取った。

【0380】

結合親和性を測定するために、ビオチン化抗マウス抗体（ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔビオチン抗ＬＣカッパマウス、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、８μｇ／ｍＬでＯｃｔｅｔ Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、１８－５０１９）上に固定した。バイオセンサーを次に、各抗体の１μｇ／ｍＬ溶液中に浸漬し、４５０、１５０、５０、１６．６７、５．５６、１．８５、０．６２ｎＭの組換えＮＲＰ２アイソフォームａの滴定が続いた。結合の会合相は３００秒であり、解離相は１２００秒であった。バイオセンサーを、異なる抗体のサイクル間で、１０ｍＭグリシン、ｐＨ１．５中で再生した。結合親和性は、Ｏｃｔｅｔ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアにおいて１：１結合モデルにデータを適合することにより得られた。

【0381】

結果を以下の表Ｅ１中に要約する。

【表E1】

【0382】

これらの結果は、ＮＲＰ２ａについての特異的選択性を示し、ＮＲＰ２ｂへの結合をほとんど又は全く示さない、高親和性抗体の作製を初めて実証する。そのような抗体は、非特異的反応性がほとんど又は全くない、ＮＲＰ２ａについての高い（サブナノモル）親和性を実証し、同定されたエピトープが、高い特異性を可能にし、固有の機能的及び診断的特徴を伴うＮＲＰ２ａ抗体を提供することを実証している。

【0383】

実施例２
ＣＣＬ２１により誘導されるＮＲＰ２アイソフォーム及びＣＣＲ７の二量体化
ＣＣＲ７とのＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂの会合の特異性を決定するために、ＮＲＰ２の異なるタンパク質アイソフォームを、ケモカインリガンドＣＣＬ２１及びＣＣＬ１９の存在においてＣＣＲ７とヘテロ二量体化するそれらの能力について評価した。

【0384】

簡単には、分割されたＮａｎｏＬｕｃの小断片（ｐＢｉＴ２．１－Ｃ）及び大断片（ｐＢｉＴ１．１－Ｃ）を含むベクターをＰｒｏｍｅｇａ社から得た。ヒトＮＲＰ２ａ（ＲＣＣ２２０７０６、アイソフォーム２）及びヒトＮＲＰ２ｂ（ＲＣ２１０９２８、アイソフォーム５）をコードするｃＤＮＡをＯｒｉｇｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから得た。ＣＣＲ７（ＯＨｕ２４０１２）をコードするｃＤＮＡをＧｅｎｓｃｒｉｐｔから得た。ベクターコードスペーサー配列及びＮａｎｏＬｕｃタグへのＮ末端で、ＮＲＰ２の完全なコード配列をｐＢｉＴ１．１－Ｃ中にクローニングした一方で、ＣＣＲ７の完全なコード配列をｐＢｉＴ１．１－Ｃ中にクローニングした。ＮＲＰ２の残りのタンパク質アイソフォームを、標準的な変異誘発技術に従って、以前に記載されたベクターから構築した。

【0385】

ベクターを次に、Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅトランスフェクション試薬（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により、１ｍＬ当たり１μｇ、１ｍＬ当たり１００万個細胞の密度でＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞中にトランスフェクトした。トランスフェクション後の約１６～２０時間に、細胞を洗浄し、ルミノメータープレート中に１００，０００個細胞／ウェルで播種し、次に、細胞透過性ルシフェラーゼ基質を加えて、発光を、発光シグナルの安定化が達成されるまでＧｌｏＭａｘ９６（Ｐｒｏｍｅｇａ社）上でモニターした。１００ｎＭのＣＣＬ１９（Ｒ＆Ｄシステム、３６１－ＭＩ／ＣＦ）又はＣＣＬ２１（Ｒ＆Ｄシステム、３６６－６Ｃ／ＣＦ）のいずれかを加えて、対照ウェルと比較したリガンドを加えたウェルの発光における変化を計算した。

【0386】

図２Ａ～２Ｅ中に示されるように、ＮＲＰ２ａの二つのアイソフォーム、ＮＲＰ２ａ ｖ１（９３１ａａ）及びＮＲＰ２ａ ｖ２（９２６ａａ）は、ＣＣＬ１９と比較して、ＣＣＬ２１の存在においてＣＣＲ７との増強した会合を示したのに対し、ＮＲＰ２ｂ、ＮＲＰ２ｂ ｖ４（９０６ａａ）及びＮＲＰ２ｂ ｖ５（９０１ａａ）の「ｂ」アイソフォームの両方が、ケモカインリガンドへの応答を示さなかった。このデータは、ＮＲＰ２ａ ｖ１及びｖ２アイソフォームの膜近傍配列におけるＣＣＬ２１特異的結合部位の存在を示唆するが、しかし、ＮＲＰ２ｂアイソフォームでは示唆しない。ＮＲＰ２ａバリアント（例、ｖ１／ｖ２／ｖ３）の全てが、ＮＲＰ２、ＮＲＰ２ｖ３（９０９ａａ）が、ＣＣＬ２１に対する追加の応答を示さず、結合部位が、このバリアント中の膜近傍領域からの１７ａａの省略により破壊されることを示唆する。

【0387】

このデータは、そのリガンドＣＣＬ２１の存在における、ＮＲＰ２ａ（しかし、ＮＲＰ２ｂではない）とＣＣＲ７の間での特異的な相互作用を実証する最初のものである。免疫細胞遊走活性化、組織炎症、自己免疫、及び癌進行の調節におけるＣＣＲ７／ＣＣＬ２１軸の中心的な役割を考慮すると、このデータは、ＮＲＰ２ａ特異的抗体が、ＣＣＲ７／ＣＣＬ２１シグナル伝達、及びこれらの経路に関連付けられる、関連付けられる病態生理に対して高度に選択的及び特異的な効果を有するであろうという直接的なエビデンスを提供する。

【0388】

実施例３
ＮＲＰ２ａ上でのＣＣＬ２１結合部位の変異誘発ならびにＮＲＰ２ａ及びＣＣＲ７のリガンド誘導性二量体化に対する効果
ＣＣＬ２１とＮＲＰ２ａとの相互作用について関与する残基を同定するために、アラニンスキャニング変異誘発を、ＮＲＰ２ｖ３欠失において破壊されることが予想されるＮＲＰ２ａの膜近傍領域を通して実施した。次に、受容体二量体化実験を実施して、結合相互作用を作製する際に含まれる特定のアミノ酸を同定した。

【0389】

変異を、標準的な部位指向変異誘発プロトコールに従って、ＮａｎｏＢｉＴベクターｐＢｉＴ２．１－Ｃ－ＮＲＰ２ｖ２（アイソフォーム２）において作製した。この場合でのｐＢｉＴ１．１－Ｃ中のＣＣＲ７タンパク質を切断して、最後の（第７の）膜貫通ヘリックス（ａａ３３１後）の細胞質配列Ｃ末端を除去し、ＮＲＰ２ｖ３を伴うＣＣＬ１９及びＣＣＬ２１で見られた受容体輸送に起因する可能性が高いシグナル応答を除去した。

【0390】

ベクターを、Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してＥｘｐｉ２９３細胞中にトランスフェクトした。トランスフェクション後の約１６～２０時間に、細胞を洗浄し、ルミノメータープレート中に１００，０００個細胞／ウェルで播種し、次に、細胞透過性ルシフェラーゼ基質を加えて、発光をＧｌｏＭａｘ９６（Ｐｒｏｍｅｇａ）上でモニターした。１００ｎＭリガンドを加えて、リガンドへの応答を、リガンドを伴わない対照セットに関して計算した。

【0391】

図３Ａ～３Ｅ中に示されるように、変異は、結合部位全体にわたって負に荷電した残基の置換を伴う様々な程度の減少した結合を示し、ＮＲＰ２ａアイソフォームｖ２の位置８２８でのチロシン残基の重大な重要性を強調した。加えて、残基８１６～８１８からの３のアミノ酸置換、及び残基８３４～８４９からの欠失は、受容体二量体化に対する名目上の効果を示し、この場合では、完全なＣＣＲ７配列を伴い、これらの配列が、受容体相互作用のために重要ではないことを示唆している。これらの領域によって、結合部位へのＮ及びＣ末端境界が定められる。したがって、ＦＬ ＮＲＰ２ａの残基８１９～８３３によって、ＮＲＰ２ａとＣＣＬ２１との相互作用において含まれる固有の最小エピトープが定められる。

【0392】

実施例４
ＮＲＰ２ペプチドに対する抗体のＥＬＩＳＡ特異性
各ＮＲＰ２ａ反応性抗体により認識される近似エピトープを決定するために、全ての抗体を、以下に記載されるように、免疫アッセイを介してＧｅｎｓｃｒｉｐｔ及びＣｈｉｎａ Ｐｅｐｔｉｄｅｓにより生成されたＮＲＰ２ペプチドに対してテストした。全ての抗体がまた、ヒト／マウス保存及びＮＲＰ２ｂとの交差反応性についてテストされた。マッピングのために使用されるＮＲＰ２ペプチドを表Ｅ２中に示し、実施例３において定義されるＮＲＰ２ａ上の最小ＣＣＬ２１相互作用ドメインに系統的に及ぶ一連の１２のアミノ酸ペプチド配列を含む。これらのペプチド配列のうち、ペプチドＮＲＰ２ａ－スキャン４、５、及び６は、ＣＣＬ２１相互作用ドメインを最も完全にカバーする配列を表す。

【表E2】

【0393】

ペプチドをビオチンにコンジュゲートした。ストレプトアビジンプレートを、カゼイン中に希釈された、２ｕｇ／ｍＬの各ペプチドでコーティングした。プレートを、プレートシーラーを用いて密封し、４℃で一晩インキュベートした（振盪なし）。一晩のコーティング後、プレートを、ＰＢＳＴを用いて三回洗浄した。目的の各ＮＲＰ２ａ特異的抗体を１ｕｇ／ｍＬ、０．５ｕｇ／ｍＬ、及び０．２５ｕｇ／ｍＬに希釈し、５０ｕＬ／ウェルをアッセイプレートに加えた。プレートを、振盪（４００ｒｐｍ）を伴って、室温で１時間にわたりインキュベートした。プレートをＰＢＳＴで再び三回洗浄し、ＨＲＰコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１１５－０３５－０７１）を５０ｕＬ／ウェルで、１：５０００希釈で加えた。プレートを、振盪（４００ｒｐｍ）を伴って、室温で１時間にわたりインキュベートした。プレートをＰＢＳＴで三回洗浄し、５０ｕＬ／ウェルの１－Ｓｔｅｐ Ｕｌｔｒａ ＴＭＢ基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、３４０２９）を加えることにより発色させた。

【0394】

プレートを基質と１０分間にわたりインキュベートし、反応を停止溶液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、４２３００１）で停止させた。比色シグナルを、Ｂｉｏｔｅｋプレートリーダー上で４５０ｎｍで読み取った。シグナルが平均ブランクの＜３倍であった場合、抗体は、ペプチドへの非結合として標識された。＞３×ブランクであるが、しかし、＜１０×ブランクであったシグナルは、正であるが、しかし、低いシグナルとして標識された。＞１０×ブランクであるシグナルは、ペプチドへの正の結合剤であった。結果を表Ｅ３中に示す。

【表E3】

【0395】

結果は、抗体ａＮＲＰ２－４０６ｖ２及びａＮＲＰ２－４０７ｖ２が、ＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂの両方と交差反応性を示したが、しかし、最小ＣＣＬ２１相互作用領域を表すペプチドには結合しなかったことを実証する。比較により、抗体ａＮＲＰ２－４０１ｖ２、ａＮＲＰ２－４０２ｖ２、及びａＮＲＰ２－４０３ｖ２は、ＮＲＰ２ａペプチドスキャン５及び６、ならびにより長いＮＲＰ２ａ膜近傍配列についての選択性を示したが、しかし、ＮＲＰ２ｂには結合しなかった。抗体ａＮＲＰ２－４００ｖ２及びａＮＲＰ２－４０４ｖ２は、膜近傍領域においてさらなるＮ末端に結合する可能性が高いが、しかし、また、遮断する結合部位に十分に近接し得る一方で、残りの抗体は、膜近傍領域のＣ末端に結合する可能性が高い。

【0396】

実施例５
ＮＲＰ２ペプチドへの抗体のバイオレイヤーインターフェロメトリ特異性
バイオレイヤーインターフェロメトリ（ＢＬＩ）実験をＯｃｔｅｔ ＲＥＤ９６ｅ機器（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）上で行い、上でスクリーニングされたＮＲＰ２ペプチドへの抗体親和性をさらに特徴付けた。抗体は、ＮＲＰ２ａアイソフォーム特異的領域に及ぶペプチドを使用してエピトープマッピングされた；抗体はまた、ＮＲＰ２ｂアイソフォーム特異的ペプチドへの反応性、ならびにｍＮＲＰ２ａ及びｍＮＲＰ２ｂペプチドへの交差反応性についてテストされた（ペプチド配列については表Ｅ２を参照のこと）。

【0397】

ペプチドをＧｅｎｓｃｒｉｐｔ及びＣｈｉｎａ Ｐｅｐｔｉｄｅｓで合成し、ビオチンコンジュゲートした。抗体及びペプチドを、１×ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ２０、ｐＨ７．４中で希釈した。ペプチドを、２０μｇ／ｍＬでＯｃｔｅｔ Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、１８～５０１９）上に固定した。バイオセンサーを次に、各抗体の５０ｎＭ溶液中に浸漬し、３００秒間にわたり読み取った。バイオセンサーを、異なる抗体のサイクル間で、１０ｍＭグリシン、ｐＨ１．５中で再生した。結果を表Ｅ４中に示し、上に提示したデータを確認する。

【表E4】

【0398】

結果によって、抗体ａＮＲＰ２－４０６ｖ２及びａＮＲＰ２－４０７ｖ２が、ＮＲＰ２ａ及びＮＲＰ２ｂの両方と交差反応性を示したが、しかし、最小ＣＣＬ２１相互作用領域を表すペプチドに結合することができなかったこと、ならびに抗体ａＮＲＰ２－４０１ｖ２、ａＮＲＰ２－４０２ｖ２、及びａＮＲＰ２－４０３ｖ２が、ＮＲＰ２ａ上でＣＣＬ２１と相互作用する最小エピトープについての選択性を示したことが確認される。これらの結果によって、また、抗体ａＮＲＰ２－４０４ｖ２、ａＮＲＰ２－４０５ｖ２、ａＮＲＰ２－４０８ｖ２、ａＮＲＰ２－４０９ｖ２、及びａＮＲＰ２－３７ｖ２が、それらが最小ドメインと相互作用するＣＣＬ２１に結合しないにもかかわらず、ＮＲＰ２ａについての強い特異性を示すことが確認された。

【0399】

実施例６
抗体によるＮＲＰ２の細胞表面認識
選択されたＮＲＰ２ａ反応性抗体を、ヒト又はマウスのＮＲＰ２ａ受容体を認識するそれらの能力について、ならびにＮＲＰ２ｂを上回るＮＲＰ２ａに対するそれらの特異性について評価した。ヒトＮＲＰ２ａ ｖ２（ＲＣＣ２２０７０６）、マウスＮＲＰ２ａ（ＭＲ２２４７４８）、又はヒトＮＲＰ２ｂ（ＲＣ２１０９２８）をコードするｃＤＮＡを、Ｏｒｉｇｅｎｅ技術から得た。ＮＲＰ２ ｖ３発現ベクターを次に、変異誘発を介してＮＲＰ２ ｖ２をコードするベクターを改変して、ＮＲＰ２ ｖ３において欠落している１７のアミノ酸を除去することにより構築した。Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞を各ベクターでトランスフェクトし、トランスフェクション後の約４８時間に計数し、各組換え抗体及び蛍光二次抗体で染色した（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ ｒｅｓｅａｒｃｈ，１１５－１７５－１４６）。シグナル対ノイズを、非トランスフェクト「偽」集団と比較したトランスフェクト細胞の染色強度として計算した。結合を、ＮＲＰ２マウス／ヒト反応性ａ１ドメイン結合抗体（ａＮＲＰ２－１７ｖ２）及び非結合アイソタイプ対照（ＮＢＩＣ）と比較した。

【0400】

結果を図４Ａ～４Ｃ中に示す。テストされた抗体は、全長ＮＲＰ２ａ又はＮＲＰ２ｂを発現する細胞への変動した結合を示した。これらの試験に基づき、抗体ａＮＲＰ２－４０３は、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞上で組換え発現されたヒトＮＲＰ２ａへの最良の結合を示した。抗体ａＮＲＰ２－４０３ｖ２はまた、ＮＲＰ２ａへの強力な結合を示したが、加えて、いくらかのマウス交差反応性を示すという利点を有する。抗体ａＮＲＰ２－４０２は、ＮＲＰ２ａについて良好な結合特異性を示したが、しかし、また、テストされた他の抗体と比較してより低い親和性を示した。これらの試験に基づいて、抗体ａＮＲＰ２－４０３ｖ２は、そのＮＲＰ２ａペプチド特異的結合を超える、ＮＲＰ２の他の領域に結合する能力を持ち得る。なぜなら、それは、ＮＲＰ２ｂ特異的ペプチドに非反応性であるが、しかし、このモデルにおいて生細胞中で組換え発現された全長ＮＲＰ２ｂへのいくらかの結合を示すように見えるからである。

【0401】

加えて、ＣＣＬ２１最小相互作用ドメインに結合することが示されている抗体のうち、ａＮＲＰ２－４０１は、良好な結合、ｍＮＲＰ２ａ結合の保存、及びＮＲＰ２ａについての良好な特異性を示す。ＮＲＰ２ ｖ３と比較したＮＲＰ２ ｖ２の細胞表面結合は、欠落したアミノ酸が、ＣＣＬ２１関連ＮＲＰ２ｖ３／ＣＣＲ７会合を防止するのに十分である一方で（実施例２を参照のこと）、この領域の近くを標的化する抗体は、ＮＲＰ２ ｖ３を上回ってＮＲＰ２ ｖ２について特異的ではないであろうことを示す。なぜなら、結合部位の全体が除去されないからである。

【0402】

実施例７
ＮＲＰ２ａ／ＣＣＲ７受容体二量体化の抗体競合
ＮＲＰ２ａ／ＣＣＲ７－ＣＣＬ２１誘導性の受容体二量体化を遮断する抗体の能力を確認するために、抗体遮断実験を実施した。ｐＢｉＴ１．１－Ｃ－ＣＣＲ７（そのＣ末端細胞質配列を伴わない）及びｐＢｉＴ２．１－Ｃ－ＮＲＰ２ｖ２（アイソフォーム２）を、Ｅｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅトランスフェクション試薬を用いてＥｘｐｉ２９３細胞中に共トランスフェクトした。トランスフェクション後の１６～２０時間に細胞を計数し、播種し、ルシフェラーゼ基質を加えた。各々の示した抗体を１００ｎＭで加えて、新たなベースライン発光シグナルを確立し、次にＣＣＬ２１をＥＣ８０で加えて、リガンドに対する標準化された応答を経時的に観察した。曲線下面積を次に計算し、比較した。

【0403】

結果を図５Ａ～５Ｄ中に示す。抗体ａＮＲＰ２－４００ｖ２，ａＮＲＰ２－４０１ｖ２，ａＮＲＰ２－４０２ｖ２，ａＮＲＰ２－４０３ｖ２、及びａＮＲＰ２－４０４ｖ２は全て、ある程度の遮断を示し、抗体ａＮＲＰ２－４０１ｖ２及びａＮＲＰ２－４０３ｖ２が最も強力であった。他の抗体は、非結合アイソタイプ対照（ＮＢＩＣ）で認められるものと同様に、受容体二量体化に対して無視できる効果を有するように見えた。リガンドのＥＣ８０に対する抗体ａＮＲＰ２－４０１ｖ２及びａＮＲＰ２－４０３ｖ２の滴定によって、０．３３９ｎＭ及び１２．７２ｎＭのそれぞれのＩＣ５０が与えられた。このデータによって、抗体ａＮＲＰ２－４０１ｖ２及びａＮＲＰ２－４０３ｖ２が、ＮＲＰ２ａ及びＣＣＬ２１の相互作用を破壊することを目的とした治療アプローチにおいて有用性を有することが確認される。

【0404】

実施例８
ＣＣＬ２１の推定結合部位への抗体のエピトープマッピング
ＮＲＰ２ａのペプチド結合境界及びヒト／マウス保存に基づくマッピングを、図６中に示す、選択された抗体を用いて実施した；ここでは、ｍＮＲＰ２ａ中のヒト配列に対する置換は、マウス配列（ｍＮＲＰ２ａ）において下線付きであり、ＣＣＬ２１結合部位は、ヒト配列において太字で示されている。ヒト配列において下線を引いたのは、ＣＣＬ２１誘導性の二量体化を防止する際に無効であり、このように、結合部位のおよそのＣ末端境界として機能する、実施例３（図３Ｅ）において記載される欠失である。Ｎ末端境界は標識されていないが、しかし、ＣＣＬ２１誘導性の二量体化に対する最小限の効果を示した、実施例３（図３Ｄ）中のＮＲＰ２ ｖ２（８１６～８１８）における記載された変異から明らかである。

【0405】

ＣＣＬ２１の結合部位と重複するエピトープを伴う抗体（即ち、ａＮＲＰ２－４０１ｖ２，ａＮＲＰ２－４０２ｖ２及びａＮＲＰ２－４０３ｖ２）は、ＣＣＲ７を伴う受容体二量体化の効率的な遮断剤である。上と同様に、これらの抗体は、ＮＲＰ２ａ及びＣＣＬ２１の相互作用を破壊することを目的とした治療アプローチにおいて有用性を実証する。

【0406】

また、ＮＲＰ２ａ特異的ペプチド自体への結合（例えば、抗体ａＮＲＰ２－４００ｖ２、ａＮＲＰ２－４０４ｖ２、ａＮＲＰ２－４０５ｖ２、ａＮＲＰ２－４０８ｖ２、ａＮＲＰ２－４０９ｖ２、及びａＮＲＰ２－３７ｖ２により例証されるように）は、高い効率を伴う受容体二量体化を遮断するのに十分ではない。これらの抗体は、診断試薬としての、例えば、標的会合を発生し、細胞上での及び組織中での受容体密度を測定するための試薬としての有用性を示す。

【0407】

実施例９
ヒト化抗体
ヒト化抗体を、抗体ａＮＲＰ２－４０１ｖ２及びａＮＲＰ２－４０２ｖ２から調製した。ＣＤＲは、表Ａ１中に定義されるように、それらのＫａｂａｔ定義（ＩＭＧＴ境界を使用するＣＤＲ－Ｈ１の例外を伴う）により同定された。マウスモノクローナル軽鎖及び重鎖の全Ｖ遺伝子を、ヒトＶ遺伝子に対して整列させて、最も類似するフレームワーク配列を特定し、適切なヒトフレームワークを移入のために特定した。マウスＣＤＲをヒトフレームワーク上に移入し、親和性を、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６ｅ上のバイオレイヤーインターフェロメトリ（ＢＬＩ）により、ある範囲のＮＲＰ２リガンド濃度への結合により決定した。必要な場合、逆変異を、Ｖ_ＬＶ_Ｈインターフェース、ＣＤＲループ接触、及び他の構造的な考慮事項についての重要な残基を考慮に入れて、ヒトフレームワーク中に作製した。結合を再び測定し、重大な逆変異を選択した。加えて、抗体は、ＮＮＫ飽和変異誘発を介して、ＣＤＲを通じて親和性成熟させて、リガンドへの親和性を改善させた。

【0408】

ヒト化バリアントの結合親和性を、以下の表Ｅ５中に示す。

【表E5】

【0409】

実施例１０
ａＮＲＰ２－４０１のバリアント
ヒト化ａＮＲＰ２－４０１の抗体バリアントを、標準的なプロトコールを通じて、部位特異的変異誘発により生成した。軽鎖ＣＤＲ３、重鎖ＣＤＲ３の全体、及び重鎖ＣＤＲ２の最初の１１アミノ酸を無作為に変異させた。各位置について、７０～１００の個々のクローンをスクリーニングし、システイン、トリプトファン、及びメチオニンを省略した後、各々について１５～１６のアミノ酸バリアントをもたらした。バリアントを次に、未修飾の同族軽鎖又は重鎖と共に、単一の置換としてＥｘｐｉ２９３細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、Ａ１４５２７）中にトランスフェクトした。溶液中の各バリアントの濃度を次に、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６ｅ上で決定し、バリアントを次に使用して、競合ＥＬＩＳＡにおいて対照抗体と競合させた。

【0410】

ヒト化ａＮＲＰ２－４０１を、ＥＺ－ｌｉｎｋ ＮＳＨ－ＰＥＧ_４－ビオチン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、２１３６３）を使用して、ＩｇＧに対して２０倍モル過剰のビオチンを用いてビオチン化した。間接ＥＬＩＳＡを介して、ビオチン化抗体を、１ｘＰＢＳ ｐＨ７．４中、２ｕｇ／ｍＬでコーティングされたＮＲＰ２（転写バリアント２のアミノ酸２３～８５５）に対して滴定して、適したＥＣ_５０を決定した。競合抗体を、ＥＣ_５０でビオチン化対照抗体を用いた３又は２倍希釈により希釈した。全てのプレートを、Ｃａｓｅｉｎ Ｂｌｏｃｋｅｒ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、３７５２８）を用いてブロッキングし、ＰＢＳＴ ｐＨ７．４を用いて洗浄し、ストレプトアビジン－ＨＲＰ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、ＳＡ１０００１）を用いて検出し、ＴＭＢ Ｕｌｔｒａ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、３７５７４）を用いて発色させた。データ分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して実施した。

【0411】

各バリアントについてのＩＣ_５０値を、競合曲線から計算した。発現され、抗原への結合を十分に保持していると判定されたバリアントは、対照の２倍以下のＩＣ_５０及び類似のヒル勾配を有した。活性結合バリアントを表Ｅ６及び表Ｅ７中にまとめており、それらは、ＣＤＲ内でのそれらの相対位置及び結合を保持した各アミノ酸バリアントを示す。

【表E6】

【表E7】

【0412】

実施例１１
樹状細胞遊走のインビボモデル
樹状細胞遊走のインビボモデルを、皮膚から排出リンパ節への樹状細胞遊走におけるＮＲＰ２の役割をテストするために開発した。０日目に、１０μｌの１：１比率の完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）：リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を、５０μｌハミルトンシリンジ及び２２ゲージ針（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて、野生型及びＮＲＰ２ノックアウトマウスの各耳中に皮下注射した。４８時間後、各耳を、５ｍｇ／ｍｌフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含むアセトン（ＤＰＡ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて、２０ｕｌのフタル酸ジブチルで各側上に塗布した。

【0413】

ＤＰＡ／ＦＩＴＣ塗布後の２４時間に、マウスを安楽死させ、排出リンパ節を除去し、フローサイトメトリー分析のために処理した（図７Ａ）。簡単には、単一細胞懸濁液を、リンパ節を切断し、７０ｕｍストレーナー（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を通過させることにより作製した。細胞を、抗マウスＣＤ３、ＣＤ１１ｃ、及びＭＨＣ－ＩＩ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いた表面マーカー染色の前に、Ｚｏｍｂｉｅ Ａｑｕａ生存色素（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いて染色した。細胞を次に、ＣｙｔｏＦｌｅｘ Ｓ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）フローサイトメーターで分析して、細胞表面マーカー発現を決定した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して、ＦＩＴＣ陽性樹状細胞（ＣＤ３－ＣＤ１１ｃ^＋ＭＨＣ－ＩＩ^＋）の割合を決定した（図７Ｂ）。図７Ｃ中に示されるように、ＦＩＴＣ^＋樹状細胞の割合の約４２％の有意な減少が、ＮＲＰ２野生型マウスと比較して、ＮＲＰ２ノックアウトマウスの排出リンパ節において観察されたが、ＮＲＰ２が、インビボでの樹状細胞の遊走において役割を果たすことを示唆している。同じモデルを使用して、本明細書中に記載される抗ＮＲＰ２抗体の活性をテストし、それは、同様に、皮膚から排出リンパ節への樹状細胞遊走を減少させることが予想される。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【配列表】

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【国際調査報告】