特表 2024-540102 細胞を生成する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-31

(54)【発明の名称】細胞を生成する方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/078 20100101AFI20241024BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20241024BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20241024BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20241024BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20241024BHJP

   C12N 15/63 20060101ALN20241024BHJP

   A61K 35/17 20150101ALN20241024BHJP

【ＦＩ】

C12N5/078

C12N5/10

C12N5/0783

A61K39/395 N

A61P35/00

C12N15/12

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

A61K35/17

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024525402

(86)(22)【出願日】2022-10-27

(85)【翻訳文提出日】2024-06-25

(86)【国際出願番号】 US2022048080

(87)【国際公開番号】W WO2023076511

(87)【国際公開日】2023-05-04

(31)【優先権主張番号】63/273,137

(32)【優先日】2021-10-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522421853

【氏名又は名称】ライエル・イミュノファーマ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＬＹＥＬＬ ＩＭＭＵＮＯＰＨＡＲＭＡ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100138911

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻井 陽子

(72)【発明者】

【氏名】ボドナラ，スマン クマール

【テーマコード（参考）】

4B065

4C085

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BB02

4B065BB03

4B065BB15

4B065BC42

4B065BC50

4B065BD31

4B065BD39

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C085AA14

4C085BB01

4C085BB11

4C085CC23

4C087AA01

4C087AA02

4C087CA12

4C087NA05

4C087ZB26

(57)【要約】

本開示は、少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンを含む培地にて細胞をプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場に接触させることを含む、免疫細胞、例えばＴ細胞及び／またはＮＫ細胞を調製する方法を提供する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、細胞の集団にて低分化細胞の数を増加させる。いくつかの態様では、培養された細胞は、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を含むように操作される。いくつかの態様では、細胞は投与を必要とする対象に投与される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

免疫療法のためにヒト免疫細胞の集団を調製する方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）にヒト免疫細胞を接触させることを含む、前記方法。

【請求項2】

免疫療法のためにヒト免疫細胞の集団を活性化する方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）にヒト免疫細胞を接触させることを含む、前記方法。

【請求項3】

生体外または試験管内の培養の間に活性化されたヒト免疫細胞の収量を高める方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）にヒト免疫細胞を接触させることを含む、前記方法。

【請求項4】

免疫療法のために生体外または試験管内の培養の間に活性化されたヒト免疫細胞の集団の収量を高めながら、活性化されたヒト免疫細胞の幹細胞性を高める方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）にヒト免疫細胞を接触させることを含む、前記方法。

【請求項5】

生体外または試験管内で活性化された幹細胞様免疫細胞の集団を増殖させる方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）に免疫細胞を接触させることを含む、前記方法。

【請求項6】

前記ＰＣＳが（ｉ）高表面積のメソ多孔性のシリカマイクロロッド（ＭＳＲ）を含む基層と（ｉｉ）前記ＭＳＲ基層上に積層された連続性の流体支持脂質二重層（ＳＬＢ）と（ｉｉｉ）前記足場上に担持された複数の表面キューと（ｉｖ）前記足場上に担持された複数の可溶性キューとを含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

前記表面キューが前記ＳＬＢ層上に担持される、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記可溶性キューが前記ＭＳＲ基層上に担持される、請求項６に記載の方法。

【請求項9】

前記可溶性キューが制御放出方式で前記足場から放出される、請求項６～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記可溶性キューが少なくとも３０日間持続的な方式で前記足場から放出される、請求項６～９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項11】

前記複数の可溶性キューがＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－２１、形質転換増殖因子（ＴＧＦ－β）、またはそのアゴニスト、その模倣体、その変異体、その機能性断片、またはその組み合わせを含む、請求項６～１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

前記複数の可溶性キューが（ｉ）ＩＬ－２、そのアゴニスト、その模倣体、その変異体、その機能性断片、またはその組み合わせと（ｉｉ）ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５のスーパーアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを含む第２の可溶性キューとを含む、請求項６～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記複数の可溶性キューが（ｉ）ＩＬ－２、そのアゴニスト、その模倣体、その変異体、その機能性断片、またはその組み合わせと、（ｉｉ）ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５のスーパーアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを含む第２の可溶性キューと、（ｉｉｉ）ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５のスーパーアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを含む第３の可溶性キューとを含む、請求項６～１２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項14】

前記複数の可溶性キューが、ＩＬ－２の最初の３０アミノ酸を含むＮ末端ＩＬ－２断片（ｐｌ－３０）、ＩＬ－２スーパーカインペプチド、ＩＬ－２部分アゴニストペプチド、またはそれらの組み合わせを含む、請求項６～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

前記複数の表面キューが、Ｔ細胞刺激分子、Ｔ細胞共刺激分子、またはＴ細胞刺激分子とＴ細胞共刺激分子の双方を含む、請求項６～１４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項16】

前記Ｔ細胞刺激分子及び前記Ｔ細胞共刺激分子がそれぞれ独立して前記流体支持脂質二重層（ＳＬＢ）上に担持される、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記Ｔ細胞刺激分子及び前記Ｔ細胞共刺激分子が親和性対合または化学結合を介して担持される、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記親和性結合がビオチン－ストレプトアビジンのペア、抗体－抗原のペア、抗体－ハプテンのペア、親和性ペア、捕捉タンパク質のペア、Ｆｃ受容体－ＩｇＧのペア、金属－キレート脂質のペア、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記化学結合が、アジド－アルキン化学（ＡＡＣ）反応、ジベンゾ－シクロオクチンのライゲーション（ＤＣＬ）、テトラジン－アルケンのライゲーション（ＴＡＬ）、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１７または１８に記載の方法。

【請求項20】

前記Ｔ細胞刺激分子及び前記Ｔ細胞共刺激分子がそれぞれ独立して前記流体支持脂質二重層（ＳＬＢ）上にコーティングされる、請求項１５～１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

前記Ｔ細胞刺激分子及び前記Ｔ細胞共刺激分子がそれぞれ独立して前記流体支持脂質二重層（ＳＬＢ）に部分的に埋め込まれる、請求項１５～２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

前記Ｔ細胞刺激分子及び前記Ｔ細胞共刺激分子がそれぞれ独立して前記メソ多孔性シリカマイクロロッド（ＭＳＲ）上に担持される、請求項１５～２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

前記Ｔ細胞刺激分子及び前記Ｔ細胞共刺激分子がそれぞれ独立して抗体分子またはその抗原結合断片である、請求項１５～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

前記Ｔ細胞刺激分子が、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合部分、抗マクロファージスカベンジャー受容体（ＭＳＲ１）抗体またはその抗原結合部分、抗Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）抗体またはその抗原結合部分、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合部分、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分、ＭＨＣペプチドが担持された主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子またはその多量体、ＭＨＣ－免疫グロブリン（Ｉｇ）コンジュゲートまたはその多量体、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１５～２３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項25】

前記Ｔ細胞共刺激分子が、ＣＤ２８、４．１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＧＩＴＲ（ＣＤ３５７）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＨＶＥＭ（ＣＤ２７０）、ＬＴｆｉＲ（ＴＮＦＲＳＦ３）、ＤＲ３（ＴＮＦＲＳＦ２５）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＲＴＡＭ（ＣＤ３５５）、ＴＩＭ１（ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＭ１）、ＣＤ２（ＬＦＡ２、０Ｘ３４）、ＳＬＡＭ（ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ１）、２Ｂ４（ＣＤ２４４、ＳＬＡＭＦ４）、Ｌｙｌ０８（ＮＴＢＡ、ＣＤ３５２、ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、Ｌｙ９（ＣＤ２２９、ＳＬＡＭＦ３）、ＣＲＡＣＣ（ＣＤ３１９、ＢＬＡＭＥ）を含む共刺激抗原またはそれらの任意の組み合わせに特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分を含む、請求項１５～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記Ｔ細胞刺激分子及び前記Ｔ細胞共刺激分子が二重特異性抗体またはその抗原結合部分を含む、請求項１５～２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

前記Ｔ細胞刺激分子及び前記Ｔ細胞共刺激分子が、ＣＤ３／ＣＤ２８、ＣＤ３／ＩＣＯＳ、ＣＤ３／ＣＤ２７、ＣＤ３／ＣＤ１３７を含むペア、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１５～２６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

前記足場がさらに、Ｆｃ融合タンパク質に特異的に結合する免疫グロブリン分子を含む、請求項６～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

前記足場がさらに、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２１（ＣＣＬ－２１）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１９（ＣＣＬ－１９）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド１２（ＣＸＣＬ１２）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮｙ）、ＦＭＳ－様チロシンキナーゼ３（Ｆｌｔ－３）リガンドを含む動員化合物、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項６～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

前記動員化合物が顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む、請求項６～２９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

前記足場がさらに、抗原を含む、請求項６～３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

前記抗原が腫瘍抗原を含む、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記腫瘍抗原が、大腸線種様ポリポーシスタンパク質（ＡＰＣ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤ Ａｂｐ）、ａ－フェトタンパク質、ＡＦＰ（α－フェトタンパク質）、ＡＩＭ－２、ＡＩＭ－３、及びＷＴ１）、ＡＲＴ１、ＡＲＴ４、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ６、ＢＡＧＥ、ＢＣＭＡ、Ｂ－サイクリン、ＢＭＩ１、Ｂｒａｆ、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＢＲＡＰ、Ｃ１３ｏｒｆ２４、Ｃ６ｏｒｆｌ５３、Ｃ９ｏｒｆ１１２、ＣＡ－１２５、ＣＡ９（炭酸脱水酵素９）、ＣＡＳＰ－８、カテプシンＢ、Ｃａｖ－１、ＣＣＬ－１（Ｃ－Ｃモチーフケモカインｌｉｇ及び１）、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３５２、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ５、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ｃｄｃ２７、ＣＤＫ－１、ＣＤＫ４、ＣＥＡ、ＣＥＡ（がん胎児性抗原）、ｃ－ｅｒｂＢ－２、クラウジン１８．２、クラウジン６、ｃ－ＭＥＴ、大腸関連抗原（ＣＲＣ）－Ｃ０１７－１Ａ／ＧＡ７３３、コネキシン３７、ＣＯＸ－２、ＣＴ－７、サイクロフィリンｂ、ＣＹＮＬ２、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、ＤＬＬ３（デルタ－様タンパク質３）、ＤＬＬ４、ＥＢＶ－コード核抗原（ＥＢＮＡ）－Ｉ、Ｅ－カドヘリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３（エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３）、ＥｐＣＡＭ、ＥＰＧ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＰＧ－４０、ＥＰＨａ２（エフリン受容体Ａ２）、ＥｐｈＡ２／Ｅｃｋ、エフリンＢ２、ＥＲＢＢ二量体、ＥＳＯ－１、エストロゲン受容体、ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ受容体）、ＥＺＨ２、ＦＡＰ－α（線維芽細胞活性化タンパク質α）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ＦＣＲＬ５、胎児性ＡｃｈＲ（胎児性アセチルコリン受容体）、フォドリン、Ｆｒａ－ｌ／Ｆｏｓｌ １、ＦＲ－α（葉酸受容体α）、ＧＡＧＥ－１、腫瘍抗原のＧＡＧＥ－ファミリー、ガングリオシド／ＧＤ２、ＧＣＣ（グアニルサイクラーゼＣ）、ＧＤ２、ＧＤ２ガングリオシド、ＧＤ３、ＧＬＥＡ２、ＧＭ２、ＧｎＴ－Ｖ、ＧｎＴ－Ｖ、、ＧＯＬＧＡ、ｇｐ１００（糖タンパク質１００）、ｇｐ７５、ＧＰＣ２（グリピカン－２）、ＧＰＣ３、ｇｐｌＯＯ、ＧＰＮＭＢ（糖タンパク質ＮＭＢ）、ＧＰＲＣ５Ｄ（Ｇタンパク質共役受容体５Ｄ）、ＧＵＩ、Ｈ６０、Ｂ型肝炎Ｂ表面抗原、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＡＦＰに由来するペプチドと複合体形成したＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ａ１（ヒト白血球抗原Ａｌ）、ＨＬＡ－Ａ２（ヒト白血球抗原Ａ２）、ＨＭＷ－ＭＡＡ（ヒト高分子量－黒色腫関連抗原）、ＨＳＰＨ１、Ｉｇカッパ、Ｉｇラムダ、ＩＧＦ１Ｒ（インスリン様増殖因子１受容体）、Ｉｇ－イディオタイプ、ＩＬ－１３Ｒａ２（ＩＬ－１３受容体α２）、ＩＬ１３Ｒα、ＩＬ－２２Ｒａ（ＩＬ－２２受容体α）、ＩＮＧ４、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、Ｋｉ６７、ＫＩＡＡ０３７６、ＫＲＡＳ、Ｋｕ７０／８０、ＬＡＧＥ－Ｉ、ルイスＹ、ＬＩ細胞接着分子（ＬＩ－ＣＡＭ）、Ｌｉｖ－１、Ｌｉｖｉｎ、ｌｍｐ－１、ＬＲＲＣ８Ａ（ロイシンが豊富な反復含有８ファミリーメンバーＡ）、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－２、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＧＥ－Ａ、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＲＴ－１（メランＡ）、ＭＣＳＰ（黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）－Ａ１、メソテリン、ＭＨＣ／ペプチド複合体（例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ミドキン、ＭＲＰ－３、ＭＵＣ１６、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＭ－１、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）、ＮＡＧ、ＮＣＡＭ（神経細胞接着分子）、ネクチン－４、ネスチン、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラー群２メンバーＤ）リガンド、ＮＫＴＲ、ＮＳＥＰ１、ＮＹ－ＥＳＯ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＯＬＩＧ２、腫瘍胎児性抗原、Ｐ１Ａ、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ｐｌ２０ｃｔｎ、ｐｌ５、Ｐｍｅｌｌ ｌ７、ＰＲＡＭＥ（黒色腫の優先的に発現される抗原）、プロゲステロン受容体、ＰＲＯＸ１、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＡＥ－１タンパク質、ＲＡＧＥ、ｒａｓ、ＲＢＰＳＵＨ、ＲＣＡＳ１、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＲＴＮ４、ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ２、ＳＡＲＴ３、ＳＣＰ－Ｉ、ＳＩＲＰα（タシグナル調節ンパク質α）、ＳＬＩＴ、ＳＬＩＴＲＫ６（ＮＴＲＫ－様タンパク質６）、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ＳＯＸ１０、ＳＯＸ１１、ＳＯＸ２、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＳＸ－Ｉ、ＳＳＸ－Ｉ、ＳＴＥＡＰ１（前立腺１の６回幕貫通上皮抗原１）、サバイビン、サバイビン、ＴＡＧ７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、Ｔ－細胞受容体／ＣＤ３－ゼータ鎖、ＴＮＫＳ２、ＴＰＢＧ（栄養膜糖タンパク質）、ＴＰＲ、Ｔｒｏｐ－２、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、チロシナーゼ、Ｕ２ＡＦ１Ｌ、ＵＬ１６－結合タンパク質－様転写物１（Ｍｕｌｔｌ）、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦＲ１（血管内皮増殖因子受容体１）、ＶＥＧＦＲ２、ＷＴ－１、αｖβ６または別のインテグリン、β－カテニン、β１、６－Ν、β－カテニン、γ－カテニン、ιινιηβ、及びＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶ、及び他の病原体に由来する抗原、患者に特異的なネオ抗原、またはその免疫原性ペプチド、及びそれらの任意の組み合わせである、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

前記支持脂質二重層（ＳＬＢ）の前記メソ多孔性シリカマイクロロッド（ＭＳＲ）に対する重量比が約１０：１～約１：２０の間である、請求項６～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

前記連続性の流体支持脂質二重層（ＳＬＢ）が、（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、パルミトイル－オレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）及びジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１－ステアロイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（８：０－１４：０ ＰＣ）、またはそれらの組み合わせから成る群から選択される脂質を含む、請求項６～３４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

前記メソ多孔性シリカマイクロロッド－脂質二重層（ＭＳＲ－ＳＬＢ）の足場が少なくとも１４日間、連続性の流体構造を保持する、請求項６～３５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項37】

前記メソ多孔性シリカマイクロロッド（ＭＳＲ）のＴ細胞活性化／共刺激分子に対する乾燥重量比が１：１～５０：１である、請求項６～３６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項38】

さらに、リガンド結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドで前記免疫細胞を改変することを含む、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

前記免疫細胞が抗原受容体をコードするポリヌクレオチドを含む、請求項１～３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項40】

前記抗原受容体が、抗体、操作された抗体、例えば、ｓｃＦｖ、ＣＡＲ、操作されたＴＣＲ、ＴＣＲ模倣体、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項３８または３９に記載の方法。

【請求項41】

前記ＣＡＲが、標準ＣＡＲ、スプリットＣＡＲ、オフスイッチＣＡＲ、オンスイッチＣＡＲ、第１世代ＣＡＲ、第２世代ＣＡＲ、第３世代ＣＡＲ、または第４世代ＣＡＲとして設計される、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

前記抗原受容体が（ｉ）抗原結合ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、（ｉｉｉ）共刺激ドメイン、（ｉｖ）細胞内シグナル伝達ドメイン、または（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組み合わせを含む、請求項３８～４１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

前記抗原結合ドメインが、ＡＦＰ（アルファ－フェトプロテイン）、αｖβ６または別のインテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂｒａｆ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ６、ＣＡ９（炭酸脱水酵素９）、ＣＣＬ－１（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド１）、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ３５２、ＣＥＡ（がん胎児性抗原）、クローディン１８．２、クローディン６、ｃ－ＭＥＴ、ＤＬＬ３（デルタ様タンパク質３）、ＤＬＬ４、ＥＮＰＰ３（エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３）、ＥｐＣＡＭ、ＥＰＧ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＰＧ－４０、エフリンＢ２、ＥＰＨａ２（エフリン受容体Ａ２）、ＥＲＢＢ二量体、エストロゲン受容体、ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ受容体）、ＦＡＰ－α（線維芽細胞活性化タンパク質α）、胎児ＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ＦＣＲＬ５、ＦＲ－α（葉酸受容体アルファ）、ＧＣＣ（グアニルシクラーゼＣ）、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＰＣ２（グリピカン－２）、ＧＰＣ３、ｇｐ１００（糖タンパク質１００）、ＧＰＮＭＢ（糖タンパク質ＮＭＢ）、ＧＰＲＣ５Ｄ（Ｇタンパク質共役受容体５Ｄ）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、Ｂ型肝炎表面抗原、ＨＬＡ－Ａ１（ヒト白血球抗原Ａ１）、ＨＬＡ－Ａ２（ヒト白血球抗原Ａ２）、ＨＭＷ－ＭＡＡ（ヒト高分子量黒色腫関連抗原）、ＩＧＦ１Ｒ（インスリン様成長因子１受容体）、Ｉｇカッパ、Ｉｇラムダ、ＩＬ－２２Ｒａ（ＩＬ－２２受容体アルファ）、ＩＬ－１３Ｒａ２（ＩＬ－１３受容体アルファ２）、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＬＩ細胞接着分子（ＬＩ－ＣＡＭ）、Ｌｉｖ－１、ＬＲＲＣ８Ａ（８ファミリーメンバーＡを含有するロイシンリッチリピート）、ルイスＹ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＲＴ－１（メランＡ）、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）、ＭＣＳＰ（黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、メソテリン、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ１６、ＭＨＣ／ペプチド複合体（例えば、ＡＦＰ、ＫＲＡＳ、ＨＰＶ、ＮＹ－ＥＳＯ、ＭＡＧＥ－Ａ、及びＷＴ１に由来するペプチドと複合体形成したＨＬＡ－Ａ）、ＮＣＡＭ（神経細胞接着分子）、ネクチン－４、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラー群２メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＥＳＯ、腫瘍胎児抗原、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＲＡＭＥ（黒色腫優先発現抗原）、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質α）、ＳＬＩＴ、ＳＬＩＴＲＫ６（ＮＴＲＫ様タンパク質６）、ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原１）、サバイビン、ＴＡＧ７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＰＢＧ（栄養膜糖タンパク質）、Ｔｒｏｐ－２、ＶＥＧＦＲ１（血管内皮増殖因子受容体１）、ＶＥＧＦＲ２、ならびにＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、及び他の病原体に由来する抗原、ならびにそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される抗原と特異的に結合する、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記抗原結合ドメインがＲＯＲ１に特異的に結合する、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

前記抗原結合ドメインがＧＰＣ２に特異的に結合する、請求項４３に記載の方法。

【請求項46】

前記共刺激ドメインが、インターロイキン－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）、インターロイキン－１２受容体（ＩＬ－１２Ｒ）、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－１５、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０の共刺激ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４２～４５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項47】

前記共刺激ドメインが４－１ＢＢ／ＣＤ１３７の共刺激ドメインを含む、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記膜貫通ドメインが、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（タクチル）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ１９の膜貫通ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４２～４７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項49】

前記膜貫通ドメインがＣＤ２８の膜貫通ドメインを含む、請求項４２～４８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項50】

前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、共通ＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲｉｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」）、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ３２、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４２～４９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項51】

前記細胞内シグナル伝達ドメインがＣＤ３ゼータの細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項５０に記載の方法。

【請求項52】

前記抗原受容体が操作されたＴＣＲを含む、請求項４０に記載の方法。

【請求項53】

前記操作されたＴＣＲが、腫瘍抗原／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

前記腫瘍抗原が、ＡＦＰ、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－ｌ ｌＲａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐｌＯＯ、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－ｌａ、ＭＡＧＥ－Ａｌ、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６，Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａｌ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ－関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異型、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴｌ、Ｒａｓ変異型、ｈＴＥＲＴ、肉腫転位分断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢｌ、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸管カルボニルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、ネオ抗原、またはそれらの任意の組み合わせに由来する、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

外来性ポリヌクレオチドが調節要素を含み、ベクターが前記外来性ポリヌクレオチドを含む、請求項１～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項56】

前記ベクターがポリシストロン性発現ベクターである、請求項５５に記載の方法。

【請求項57】

前記調節要素がプロモーターを含む、請求項５５または５６に記載の方法。

【請求項58】

前記プロモーターがｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位が置換された（ＭＮＤ）プロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、ユビキチンプロモーター、またはそれらの組み合わせを含む、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

前記ベクターが、ウイルスベクター、哺乳類ベクター、または細菌ベクターを含む、請求項５５～５８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項60】

前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、レンチウイルス、センダイウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、ハイブリッドベクター、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む、請求項５５～５９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項61】

前記ベクターがレンチウイルスである、請求項６０に記載の方法。

【請求項62】

前記カリウムイオンの濃度が約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、または約９０ｍＭよりも高い、請求項１～６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項63】

前記カリウムイオンの濃度が、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、及び約８０ｍＭから成る群から選択される、請求項１～６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項64】

前記カリウムイオンの濃度が約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約４０ｍＭ～約５０ｍＭの間である、請求項１～６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項65】

前記カリウムイオンの濃度が約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、または約７０ｍＭである、請求項１～６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項66】

前記培地がさらにナトリウムイオンを含む、請求項１～６５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項67】

前記培地がさらにＮａＣｌを含む、請求項１～６６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項68】

前記培地が約１４０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１００ｍＭ、約９０ｍＭ、約８０ｍＭ、約７０ｍＭ、約６０ｍＭ、約５０ｍＭ、または約４０ｍＭ未満のＮａＣｌを含む、請求項１～６７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項69】

前記培地が低張性または等張性である、請求項１～６８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項70】

前記カリウムイオン濃度と前記ＮａＣｌ濃度の合計の２倍が２８０ｍＭ未満である、請求項１～６９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項71】

前記カリウムイオン濃度と前記ＮａＣｌ濃度の合計の２倍が２４０ｍＭを超えて２８０ｍＭ未満である、請求項１～７０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項72】

前記カリウムイオン濃度と前記ＮａＣｌ濃度の合計の２倍が２８０ｍＭ以上であり且つ３００ｍＭ未満である、請求項１～７０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項73】

前記カリウムイオンの濃度が約６０ｍＭであり、前記ＮａＣｌの濃度が８０ｍＭ未満、７５ｍＭ未満、７０ｍＭ未満、６５ｍＭ未満、または６０ｍＭ未満である、請求項１～７０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項74】

前記カリウムイオンの濃度が約５５ｍＭであり、前記ＮａＣｌの濃度が８５ｍＭ未満、８０ｍＭ未満、７５ｍＭ未満、７０ｍＭ未満、または６５ｍＭ未満である、請求項１～７０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項75】

前記カリウムイオンの濃度が約５０ｍＭであり、前記ＮａＣｌの濃度が９０ｍＭ未満、８５ｍＭ未満、８０ｍＭ未満、７５ｍＭ未満、または７０ｍＭ未満である、請求項１～７０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項76】

前記培地がさらに１以上のサイトカインを含む、請求項１～７５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項77】

前記１以上のサイトカインが、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）、インターロイキン－２１（ＩＬ－２１）、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項７６に記載の方法。

【請求項78】

前記１以上のサイトカインがＩＬ－２、ＩＬ－７、及びＩＬ－１５を含む、請求項７６に記載の方法。

【請求項79】

前記培地がさらに、カルシウムイオン、グルコース、またはカルシウムイオンとグルコースの双方を含む、請求項１～７７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項80】

前記培地がさらに細胞増殖剤を含む、請求項１～７８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項81】

前記細胞増殖剤が、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤、ＡＣＬＹ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項８０に記載の方法。

【請求項82】

前記ＰＩ３Ｋ阻害剤がクエン酸ヒドロキシル、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、ＣＡＬ１０１、ＩＣ８７１１４、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項８１に記載の方法。

【請求項83】

前記ＡＫＴ阻害剤がＭＫ２２０６、Ａ４４３６５４、ＡＫＴｉ－ＶＩＩＩ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項８１に記載の方法。

【請求項84】

前記培地が、前記出発免疫細胞及び／または高濃度のカリウムイオンを含まない培地にて培養された前記免疫細胞と比べて、前記最終細胞製剤にて
（ａ）低分化及び／または未分化の細胞の数及び／または割合を増やすことができる；
（ｂ）形質導入効率を高めることができる；
（ｃ）幹細胞様免疫細胞を増やすことができる；
（ｄ）生体内生存率を高めることができる；
（ｅ）細胞能力を高めることができる；
（ｆ）細胞疲弊を防ぐことができる；
（ｇ）エフェクター様細胞の数及び／または割合を増やすことができる；または
（ｈ）それらの任意の組み合わせが可能である、請求項１～８３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項85】

前記培地がさらにグルコースを含む、請求項１～８４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項86】

前記グルコースの濃度が約１０ｍＭを超える、請求項８５に記載の方法。

【請求項87】

前記グルコース濃度が、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１９ｍＭ、約１５ｍＭ～約１８ｍＭ、約１５ｍＭ～約１７ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、約１６ｍＭ～約２０ｍＭ、約１６ｍＭ～約１９ｍＭ、約１６ｍＭ～約１８ｍＭ、約１６ｍＭ～約１７ｍＭ、約１７ｍＭ～約２０ｍＭ、約１７ｍＭ～約１９ｍＭ、または約１７ｍＭ～約１８ｍＭである、請求項８５または８６に記載の方法。

【請求項88】

前記グルコース濃度が、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭである、請求項８５～８７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項89】

前記グルコースの濃度が、約１５．４ｍＭ、約１５．９ｍＭ、約１６．３ｍＭ、約１６．８ｍＭ、約１７．２ｍＭ、または約１７．７ｍＭである、請求項８５～８８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項90】

前記培地がさらにカルシウムイオンを含む、請求項１～８９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項91】

前記カルシウムイオンの濃度が約０．４ｍＭ超である、請求項９０に記載の方法。

【請求項92】

前記カルシウムイオンの濃度が、約０．４ｍＭ～約２．５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．１ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．３ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．４ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．７ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．８ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２～約１．３ｍＭ、約１．２～約１．４ｍＭ、約１．２～約１．５ｍＭ、約１．２～約１．６ｍＭ、約１．２～約１．７ｍＭ、約１．２～約１．８ｍＭ、約１．３～約１．４ｍＭ、約１．３～約１．５ｍＭ、約１．３～約１．６ｍＭ、約１．３～約１．７ｍＭ、約１．３～約１．８ｍＭ、約１．４～約１．５ｍＭ、約１．４～約１．６ｍＭ、約１．４～約１．７ｍＭ、約１．４～約１．８ｍＭ、約１．５～約１．６ｍＭ、約１．５～約１．７ｍＭ、約１．５～約１．８ｍＭ、約１．６～約１．７ｍＭ、約１．６～約１．８ｍＭ、または約１．７～約１．８ｍＭである、請求項９０または９１に記載の方法。

【請求項93】

前記カルシウムイオン濃度が、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、または約２．０ｍＭである、請求項９０～９２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項94】

前記培地が、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬの濃度でＩＬ－２を含む、請求項１～９３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項95】

前記ＩＬ－２の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである、請求項９４に記載の方法。

【請求項96】

前記ＩＬ－２の濃度が約１．０ｎｇ／ｍＬである、請求項９４または９５に記載の方法。

【請求項97】

前記ＩＬ－２の濃度が約１０ｎｇ／ｍＬである、請求項９４または９５に記載の方法。

【請求項98】

前記培地が、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬの濃度でＩＬ－２１を含む、請求項１～９７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項99】

前記ＩＬ－２１の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである、請求項９８に記載の方法。

【請求項100】

前記ＩＬ－２１の濃度が約１．０ｎｇ／ｍＬである、請求項９８または９９に記載の方法。

【請求項101】

前記ＩＬ－２１の濃度が約１０ｎｇ／ｍＬである、請求項９８または９９に記載の方法。

【請求項102】

前記培地が、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬの濃度でＩＬ－７を含む、請求項１～１０１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項103】

前記ＩＬ－７の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである、請求項１０２に記載の方法。

【請求項104】

前記ＩＬ－７の濃度が約１．０ｎｇ／ｍＬである、請求項１０２または１０３に記載の方法。

【請求項105】

前記ＩＬ－７の濃度が約１０ｎｇ／ｍＬである、請求項１０２または１０３に記載の方法。

【請求項106】

前記培地が、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬの濃度でＩＬ－１５を含む、請求項１～１０５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項107】

前記ＩＬ－１５の濃度が、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである、請求項１０６に記載の方法。

【請求項108】

前記ＩＬ－１５の濃度が約１．０ｎｇ／ｍＬである、請求項１０６または１０７に記載の方法。

【請求項109】

前記ＩＬ－１５の濃度が約１０ｎｇ／ｍＬである、請求項１０６または１０７に記載の方法。

【請求項110】

請求項１～１０９のいずれか１項に記載の方法によって調製される、ヒト免疫細胞の集団。

【請求項111】

前記ヒト免疫細胞がＴ細胞を含む、請求項１１０に記載のヒト免疫細胞の集団。

【請求項112】

前記免疫細胞が、ＣＤ３^＋、ＣＤ４５ＲＯ^－、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ２７^＋、ＣＤ２８^＋、もしくはＴＣＦ７^＋、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１１０または１１１に記載のヒト免疫細胞の集団。

【請求項113】

前記ヒト免疫細胞の集団におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約７０％が幹細胞様Ｔ細胞である、請求項１１１または１１２に記載のヒト免疫細胞の集団。

【請求項114】

前記ヒト免疫細胞の集団におけるＴ細胞の前記総数の少なくとも約１０％～少なくとも約４０％がＣＤ３９^－／ＣＤ６９^－である、請求項１１１～１１３のいずれか１項に記載のヒト免疫細胞の集団。

【請求項115】

前記ヒト免疫細胞の集団におけるＴ細胞の前記総数の少なくとも約１０％～少なくとも約７０％がＣＤ３９^－／ＴＣＦ７^＋Ｔ細胞である、請求項１１１～１１４のいずれか１項に記載のヒト免疫細胞の集団。

【請求項116】

ＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む、請求項１１１～１１５のいずれか１項に記載のヒト免疫細胞の集団。

【請求項117】

請求項１１０～１１６のいずれか１項に記載の免疫細胞の集団と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。

【請求項118】

標的細胞の殺傷方法であって、前記標的細胞を請求項１１０～１１６のいずれか１項に記載のヒト免疫細胞の集団または請求項１１７に記載の医薬組成物に、前記免疫細胞による前記標的細胞の殺傷を可能にする条件下で接触させることを含む、前記方法。

【請求項119】

治療を必要とする患者を治療する方法であって、請求項１１０～１１６のいずれか１項に記載のヒト免疫細胞の集団または請求項１１７に記載の医薬組成物を前記患者に投与することを含む、前記方法。

【請求項120】

請求項１１９に記載の方法における治療を必要とする患者を治療するために薬物を製造するための請求項１１０～１１６のいずれか１項に記載のヒト免疫細胞の集団の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる２０２１年１０月２８日に出願された米国仮特許出願第６３／２７３、１３７号の優先権の利益を主張する。

【0002】

技術分野
本開示は、細胞、例えば、万能性、多能性、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬ）を培養する方法に関する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、培養下で低分化細胞及び／または未分化細胞の濃縮を促進する。本明細書に開示されている方法を使用して培養される細胞は、ネオ抗原特異的Ｔ細胞療法を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法及びＴＣＲ Ｔ細胞療法を含むが、これらに限定されない様々な細胞療法に使用され得る。

【背景技術】

【0003】

がん免疫療法は、Ｔ細胞（感染細胞及び疾患細胞の免疫系の主な殺傷細胞）を利用して、腫瘍細胞を攻撃及び死滅させることに依拠する。しかしながら、免疫療法には重大な障害があり、これはＴ細胞の殺傷能力が低下し得ることであり、この現象は、多くの場合にＴ細胞の疲弊または最終分化と称される。免疫チェックポイントの遮断、生体外で増殖させた腫瘍浸潤リンパ球療法、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法、及びＴ細胞受容体を操作した（ＴＣＲ）Ｔ細胞療法は患者から単離された機能的に活性があるＴ細胞を使用し、有効であるためには高度に機能的なＴ細胞を必要とする治療である。標的がん細胞上の抗原を認識するようにこれらのＴ細胞を生体外で操作し、増殖させる。Ｔ細胞療法は固形がんの治癒に一貫して効果的であるというわけではなく、その理由の１つは、Ｔ細胞が経時的に増殖または殺傷能力を失うためである。

【0004】

Ｔ細胞疲弊を克服する１つの手段は、低分化状態を有するＴ細胞を選択的に投与することである。例えば、Ｔメモリー幹細胞（Ｔ_ＳＣＭ）は、より分化したＴセントラルメモリー（Ｔ_ＣＭ）細胞またはＴエフェクターメモリー（Ｔ_ＥＭ）細胞よりも、投与後の患者においてより長い期間持続し、Ｔ_ＳＣＭは、より分化した細胞よりも、腫瘍サイズに対してより顕著で長期的な効果を発揮する。しかしながら、当該技術分野では、単離したＴ細胞の混合集団から低分化及び／またはナイーブＴ細胞を効率的に濃縮する方法が依然として必要である。

【発明の概要】

【0005】

本開示のいくつかの態様は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）にヒト免疫細胞を接触させることを含む、免疫療法のためにヒト免疫細胞の集団を調製する方法を対象とする。

【0006】

本開示のいくつかの態様は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）にヒト免疫細胞を接触させることを含む、免疫療法のためにヒト免疫細胞の集団を活性化する方法を対象とする。

【0007】

本開示のいくつかの態様は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）にヒト免疫細胞を接触させることを含む、生体外または試験管内の培養中に活性化されたヒト免疫細胞の収量を高める方法を対象とする。

【0008】

本開示のいくつかの態様は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）にヒト免疫細胞を接触させることを含む、免疫療法のために生体外または試験管内の培養中に活性化されたヒト免疫細胞の収量を高めながら、活性化されたヒト免疫細胞の幹細胞性を高める方法を対象とする。

【0009】

本開示のいくつかの態様は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）にヒト免疫細胞を接触させることを含む、生体外または試験管内にて活性化された幹細胞様免疫細胞の集団を増殖させる方法を対象とする。

【0010】

いくつかの態様では、ＰＣＳは（ｉ）高表面積のメソ多孔性のシリカマイクロロッド（ＭＳＲ）を含む基層と（ｉｉ）ＭＳＲ基層上に積層された連続性の流体支持脂質二重層（ＳＬＢ）と（ｉｉｉ）足場上に担持された複数の表面キューと（ｉｖ）足場上に担持された複数の可溶性キューとを含む。

【0011】

いくつかの態様では、表面キューはＳＬＢに担持される。いくつかの態様では、可溶性キューはＭＳＲ基層に担持される。

【0012】

いくつかの態様では、可溶性キューは制御放出の方式で足場から放出される。いくつかの態様では、可溶性キューは少なくとも３０日間持続された方式で足場から放出される。

【0013】

いくつかの態様では、複数の可溶性キューはＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－２１、形質転換増殖因子（ＴＧＦ－β）、またはそのアゴニスト、その模倣体、その変異体、その機能性断片、またはその組み合わせを含む。いくつかの態様では、複数の可溶性キューは（ｉ）ＩＬ－２、そのアゴニスト、その模倣体、その変異体、その機能性断片、またはその組み合わせと（ｉｉ）ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５のスーパーアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを含む第２の可溶性キューとを含む。いくつかの態様では、複数の可溶性キューは（ｉ）ＩＬ－２、そのアゴニスト、その模倣体、その変異体、その機能性断片、またはその組み合わせと（ｉｉ）ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５のスーパーアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを含む第２の可溶性キューと（ｉｉｉ）ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５のスーパーアゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせを含む第３の可溶性キューとを含む。いくつかの態様では、複数の可溶性キューは、ＩＬ－２の最初の３０アミノ酸を含むＮ末端ＩＬ－２断片（ｐｌ－３０）、ＩＬ－２スーパーカインペプチド、ＩＬ－２部分アゴニストペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。

【0014】

いくつかの態様では、複数の表面キューはＴ細胞刺激分子、Ｔ細胞共刺激分子、またはＴ細胞刺激分子とＴ細胞共刺激分子の双方を含む。いくつかの態様では、Ｔ細胞刺激分子及びＴ細胞共刺激分子はそれぞれ独立して流体支持脂質二重層（ＳＬＢ）上に担持される。

【0015】

いくつかの態様では、Ｔ細胞刺激分子及びＴ細胞共刺激分子は親和性対合または化学結合を介して担持される。いくつかの態様では、親和性結合はビオチン－ストレプトアビジンのペア、抗体－抗原のペア、抗体－ハプテンのペア、親和性ペア、捕捉タンパク質ペア、Ｆｃ受容体－ＩｇＧのペア、金属－キレート脂質のペア、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、化学結合は、アジド－アルキン化学（ＡＡＣ）反応、ジベンゾ－シクロオクチンのライゲーション（ＤＣＬ）、テトラジン－アルケンのライゲーション（ＴＡＬ）、またはそれらの組み合わせを含む。

【0016】

いくつかの態様では、Ｔ細胞刺激分子及びＴ細胞共刺激分子はそれぞれ独立して流体支持脂質二重層（ＳＬＢ）上にコーティングされる。いくつかの態様では、Ｔ細胞刺激分子及びＴ細胞共刺激分子はそれぞれ独立して流体支持脂質二重層（ＳＬＢ）上に部分的に埋め込まれる。いくつかの態様では、Ｔ細胞刺激分子及びＴ細胞共刺激分子はそれぞれ独立してメソ多孔性シリカマイクロロッド（ＭＳＲ）上に担持される。いくつかの態様では、Ｔ細胞刺激分子及びＴ細胞共刺激分子はそれぞれ独立して抗体分子またはその抗原結合断片である。

【0017】

いくつかの態様では、Ｔ細胞刺激分子は、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合部分、抗マクロファージスカベンジャー受容体（ＭＳＲ１）抗体またはその抗原結合部分、抗Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）抗体またはその抗原結合部分、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合部分、抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分、ＭＨＣペプチドとともに担持される主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子またはその多量体、ＭＨＣ－免疫グロブリン（Ｉｇ）コンジュゲートまたはその多量体、またはそれらの組み合わせを含む。

【0018】

いくつかの態様では、Ｔ細胞共刺激分子は、ＣＤ２８、４．１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＧＩＴＲ（ＣＤ３５７）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＨＶＥＭ（ＣＤ２７０）、ＬＴｆｉＲ（ＴＮＦＲＳＦ３）、ＤＲ３（ＴＮＦＲＳＦ２５）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＲＴＡＭ（ＣＤ３５５）、ＴＩＭ１（ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＭ１）、ＣＤ２（ＬＦＡ２、０Ｘ３４）、ＳＬＡＭ（ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ１）、２Ｂ４（ＣＤ２４４、ＳＬＡＭＦ４）、Ｌｙｌ０８（ＮＴＢＡ、ＣＤ３５２、ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、Ｌｙ９（ＣＤ２２９、ＳＬＡＭＦ３）、ＣＲＡＣＣ（ＣＤ３１９、ＢＬＡＭＥ）を含む共刺激抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分、またはそれらの組み合わせを含む。

【0019】

いくつかの態様では、Ｔ細胞刺激分子及びＴ細胞共刺激分子は二重特異性抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、Ｔ細胞刺激分子及びＴ細胞共刺激分子はＣＤ３／ＣＤ２８、ＣＤ３／ＩＣＯＳ、ＣＤ３／ＣＤ２７、ＣＤ３／ＣＤ１３７を含むペア、またはそれらの組み合わせを含む。

【0020】

いくつかの態様では、足場はさらに、Ｆｃ融合タンパク質に特異的に結合する免疫グロブリン分子を含む。

【0021】

いくつかの態様では、足場はさらに、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド２１（ＣＣＬ－２１）、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１９（ＣＣＬ－１９）、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド１２（ＣＸＣＬ１２）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮｙ）、ＦＭＳ－様チロシンキナーゼ３（Ｆｌｔ－３）リガンドを含む動員化合物、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、動員化合物は顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を含む。

【0022】

いくつかの態様では、足場はさらに、抗原を含む。いくつかの態様では、抗原は腫瘍抗原を含む。いくつかの態様では、腫瘍抗原は、大腸線種様ポリポーシスタンパク質（ＡＰＣ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤ Ａｂｐ）、ａ－フェトタンパク質、ＡＦＰ（α－フェトタンパク質）、ＡＩＭ－２、ＡＩＭ－３、及びＷＴ１）、ＡＲＴ１、ＡＲＴ４、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ６、ＢＡＧＥ、ＢＣＭＡ、Ｂ－サイクリン、ＢＭＩ１、Ｂｒａｆ、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＢＲＡＰ、Ｃ１３ｏｒｆ２４、Ｃ６ｏｒｆｌ５３、Ｃ９ｏｒｆ１１２、ＣＡ－１２５、ＣＡ９（炭酸脱水酵素９）、ＣＡＳＰ－８、カテプシンＢ、Ｃａｖ－１、ＣＣＬ－１（Ｃ－Ｃモチーフケモカインｌｉｇ及び１）、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３５２、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ５、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ｃｄｃ２７、ＣＤＫ－１、ＣＤＫ４、ＣＥＡ、ＣＥＡ（がん胎児性抗原）、ｃ－ｅｒｂＢ－２、クラウジン１８．２、クラウジン６、ｃ－ＭＥＴ、大腸関連抗原（ＣＲＣ）－Ｃ０１７－１Ａ／ＧＡ７３３、コネキシン３７、ＣＯＸ－２、ＣＴ－７、サイクロフィリンｂ、ＣＹＮＬ２、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、ＤＬＬ３（デルタ－様タンパク質３）、ＤＬＬ４、ＥＢＶ－コード核抗原（ＥＢＮＡ）－Ｉ、Ｅ－カドヘリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３（エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３）、ＥｐＣＡＭ、ＥＰＧ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＰＧ－４０、ＥＰＨａ２（エフリン受容体Ａ２）、ＥｐｈＡ２／Ｅｃｋ、エフリンＢ２、ＥＲＢＢ二量体、ＥＳＯ－１、エストロゲン受容体、ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ受容体）、ＥＺＨ２、ＦＡＰ－α（線維芽細胞活性化タンパク質α）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ＦＣＲＬ５、胎児性ＡｃｈＲ（胎児性アセチルコリン受容体）、フォドリン、Ｆｒａ－ｌ／Ｆｏｓｌ １、ＦＲ－α（葉酸受容体α）、ＧＡＧＥ－１、腫瘍抗原のＧＡＧＥ－ファミリー、ガングリオシド／ＧＤ２、ＧＣＣ（グアニルサイクラーゼＣ）、ＧＤ２、ＧＤ２ガングリオシド、ＧＤ３、ＧＬＥＡ２、ＧＭ２、ＧｎＴ－Ｖ、ＧｎＴ－Ｖ、、ＧＯＬＧＡ、ｇｐ１００（糖タンパク質１００）、ｇｐ７５、ＧＰＣ２（グリピカン－２）、ＧＰＣ３、ｇｐｌＯＯ、ＧＰＮＭＢ（糖タンパク質ＮＭＢ）、ＧＰＲＣ５Ｄ（Ｇタンパク質共役受容体５Ｄ）、ＧＵＩ、Ｈ６０、Ｂ型肝炎Ｂ表面抗原、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、ＡＦＰに由来するペプチドと複合体形成したＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ａ１（ヒト白血球抗原Ａｌ）、ＨＬＡ－Ａ２（ヒト白血球抗原Ａ２）、ＨＭＷ－ＭＡＡ（ヒト高分子量－黒色腫関連抗原）、ＨＳＰＨ１、Ｉｇカッパ、Ｉｇラムダ、ＩＧＦ１Ｒ（インスリン様増殖因子１受容体）、Ｉｇ－イディオタイプ、ＩＬ－１３Ｒａ２（ＩＬ－１３受容体α２）、ＩＬ１３Ｒα、ＩＬ－２２Ｒａ（ＩＬ－２２受容体α）、ＩＮＧ４、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、Ｋｉ６７、ＫＩＡＡ０３７６、ＫＲＡＳ、Ｋｕ７０／８０、ＬＡＧＥ－Ｉ、ルイスＹ、ＬＩ細胞接着分子（ＬＩ－ＣＡＭ）、Ｌｉｖ－１、Ｌｉｖｉｎ、ｌｍｐ－１、ＬＲＲＣ８Ａ（ロイシンが豊富な反復含有８ファミリーメンバーＡ）、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－２、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＧＥ－Ａ、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＲＴ－１（メランＡ）、ＭＣＳＰ（黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）－Ａ１、メソテリン、ＭＨＣ／ペプチド複合体（例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ミドキン、ＭＲＰ－３、ＭＵＣ１６、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＭ－１、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）、ＮＡＧ、ＮＣＡＭ（神経細胞接着分子）、ネクチン－４、ネスチン、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラー群２メンバーＤ）リガンド、ＮＫＴＲ、ＮＳＥＰ１、ＮＹ－ＥＳＯ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＯＬＩＧ２、腫瘍胎児性抗原、Ｐ１Ａ、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ｐｌ２０ｃｔｎ、ｐｌ５、Ｐｍｅｌｌ ｌ７、ＰＲＡＭＥ（黒色腫の優先的に発現される抗原）、プロゲステロン受容体、ＰＲＯＸ１、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＡＥ－１タンパク質、ＲＡＧＥ、ｒａｓ、ＲＢＰＳＵＨ、ＲＣＡＳ１、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＲＴＮ４、ＳＡＲＴ１、ＳＡＲＴ２、ＳＡＲＴ３、ＳＣＰ－Ｉ、ＳＩＲＰα（タシグナル調節ンパク質α）、ＳＬＩＴ、ＳＬＩＴＲＫ６（ＮＴＲＫ－様タンパク質６）、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ＳＯＸ１０、ＳＯＸ１１、ＳＯＸ２、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＳＸ－Ｉ、ＳＳＸ－Ｉ、ＳＴＥＡＰ１（前立腺１の６回幕貫通上皮抗原１）、サバイビン、サバイビン、ＴＡＧ７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、Ｔ－細胞受容体／ＣＤ３－ゼータ鎖、ＴＮＫＳ２、ＴＰＢＧ（栄養膜糖タンパク質）、ＴＰＲ、Ｔｒｏｐ－２、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、チロシナーゼ、Ｕ２ＡＦ１Ｌ、ＵＬ１６－結合タンパク質－様転写物１（Ｍｕｌｔｌ）、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦＲ１（血管内皮増殖因子受容体１）、ＶＥＧＦＲ２、ＷＴ－１、αｖβ６または別のインテグリン、β－カテニン、β１、６－Ν、β－カテニン、γ－カテニン、ιινιηβ、及びＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶ、及び他の病原体に由来する抗原、患者に特異的なネオ抗原、またはその免疫原性ペプチド、及びそれらの任意の組み合わせである。

【0023】

いくつかの態様では、支持脂質二重層（ＳＬＢ）のメソ多孔性シリカマイクロロッド（ＭＳＲ）に対する重量比は約１０：１～約１：２０の間である。いくつかの態様では、連続性の流体支持脂質二重層（ＳＬＢ）は、（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、パルミトイル－オレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）及びジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１－ステアロイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（８：０－１４：０ ＰＣ）、またはそれらの組み合わせから成る群から選択される脂質を含む。いくつかの態様では、メソ多孔性シリカマイクロロッド－脂質二重層（ＭＳＲ－ＳＬＢ）の足場は連続性の流体構造を少なくとも１４日間保持する。いくつかの態様では、メソ多孔性シリカマイクロロッド（ＭＳＲ）のＴ細胞活性化／共刺激分子に対する乾燥重量比は１：１～５０：１の間である。

【0024】

いくつかの態様では、方法はさらに、リガンド結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドによって免疫細胞を改変することを含む。

【0025】

いくつかの態様では、免疫細胞は抗原受容体をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、抗原受容体は、抗体、操作された抗体、例えば、ｓｃＦｖ、ＣＡＲ、操作されたＴＣＲ、ＴＣＲ模倣体、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）またはそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、ＣＡＲは、標準のＣＡＲ、スプリットＣＡＲ、オフスイッチＣＡＲ、オンスイッチＣＡＲ、第１世代のＣＡＲ、第２世代のＣＡＲ、第３世代のＣＡＲ、または第４世代のＣＡＲとして設計される。

【0026】

いくつかの態様では、抗原受容体は（ｉ）抗原結合ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、（ｉｉｉ）共刺激ドメイン、（ｉｖ）細胞内シグナル伝達ドメイン、または（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組み合わせを含む。

【0027】

いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、ＡＦＰ（α－フェトタンパク質）、αｖβ６または別のインテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂｒａｆ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ６、ＣＡ９（炭酸脱水酵素９）、ＣＣＬ－１（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド１）、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ３５２、ＣＥＡ（がん胎児性抗原）、クラウジン１８．２、クラウジン６、ｃ－ＭＥＴ、ＤＬＬ３（デルタ－様タンパク質３）、ＤＬＬ４、ＥＮＰＰ３（エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３）、ＥｐＣＡＭ、ＥＰＧ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＰＧ－４０、エフリンＢ２、ＥＰＨａ２（エフリン受容体Ａ２）、ＥＲＢＢ二量体、エストロゲン受容体、ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ受容体）、ＦＡＰ－α（線維芽細胞活性化タンパク質α）、胎児性ＡｃｈＲ（胎児性アセチルコリン受容体）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ＦＣＲＬ５、ＦＲ－α（葉酸受容体α）、ＧＣＣ（グアニルサイクラーゼＣ）、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＰＣ２（グリピカン－２）、ＧＰＣ３、ｇｐ１００（糖タンパク質１００）、ＧＰＮＭＢ（糖タンパク質ＮＭＢ）、ＧＰＲＣ５Ｄ（Ｇタンパク質共役受容体５Ｄ）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、Ｂ型肝炎表面抗原、ＨＬＡ－Ａ１（ヒト白血球抗原Ａｌ）、ＨＬＡ－Ａ２（ヒト白血球抗原Ａ２）、ＨＭＷ－ＭＡＡ（ヒト高分子量－黒色腫関連抗原）、ＩＧＦ１Ｒ（インスリン様増殖因子１受容体）、Ｉｇカッパ、Ｉｇラムダ、ＩＬ－２２Ｒａ（ＩＬ－２２受容体α）、ＩＬ－１３Ｒａ２（ＩＬ－１３受容体α２）、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＬＩ細胞接着分子（ＬＩ－ＣＡＭ）、Ｌｉｖ－１、ＬＲＲＣ８Ａ（ロイシンが豊富な反復含有８ファミリーメンバーＡ）、ルイスＹ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＲＴ－１（メランＡ）、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）、ＭＣＳＰ（黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、メソテリン、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ１６、ＭＨＣ／ペプチド複合体（例えば、ＡＦＰ、ＫＲＡＳ、ＮＹ－ＥＳＯ、ＭＡＧＥ－Ａ、及びＷＴ１に由来するペプチドと複合体形成したＨＬＡ－Ａ）、ＮＣＡＭ（神経細胞接着分子）、ネクチン－４、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラー群２メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＥＳＯ、腫瘍胎児性抗原、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＲＡＭＥ（黒色腫の優先的に発現される抗原）、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質α）、ＳＬＩＴ、ＳＬＩＴＲＫ６（ＮＴＲＫ－様タンパク質６）、ＳＴＥＡＰ１（前立腺１の６回幕貫通上皮抗原）、サバイビン、ＴＡＧ７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＰＢＧ（栄養膜糖タンパク質）、Ｔｒｏｐ－２、ＶＥＧＦＲ１（血管内皮増殖因子受容体１）、ＶＥＧＦＲ２、ならびにＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶ、及び他の病原体に由来する抗原、及びそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される抗原に特異的に結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインはＲＯＲ１と特異的に結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインはＧＰＣ２と特異的に結合する。

【0028】

いくつかの態様では、共刺激ドメインは、インターロイキン－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）、インターロイキン－１２受容体（ＩＬ－１２Ｒ）、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－１５、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０の共刺激ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、共刺激ドメインは４－１ＢＢ／ＣＤ１３７の共刺激ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインはＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（タクチルＴ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ１９の膜貫通ドメインまたはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインはＣＤ２８の膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、共通のＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲｉｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」）、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ３２、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２に由来する細胞内シグナル伝達ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３ゼータの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0029】

いくつかの態様では、抗原受容体は操作されたＴＣＲを含む。いくつかの態様では、操作されたＴＣＲは腫瘍抗原／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する。いくつかの態様では、腫瘍抗原は、ＡＦＰ、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－ １３Ｒａ２、ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ、ＩＬ－ｌ ｌＲａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐｌＯＯ、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－ｌａ、ＭＡＧＥ－Ａｌ、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６，Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａｌ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ－関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異型、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴｌ、Ｒａｓ変異型、ｈＴＥＲＴ、肉腫転位分断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢｌ、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸管カルボニルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、ネオ抗原、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。

【0030】

いくつかの態様では、外来性のポリヌクレオチドは調節要素を含み、ベクターは外来性のポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、ベクターはポリシストロン性の発現ベクターである。いくつかの態様では、調節要素はプロモーターを含む。いくつかの態様では、プロモーターはｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位が置換された（ＭＮＤ）プロモーター、ＥＦＩａプロモーター、ユビキチンプロモーター、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、ベクターはウイルスベクター、哺乳類ベクター、または細菌ベクターを含む。いくつかの態様では、ベクターは、アデノウイルスベクター、レンチウイルス、センダイウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、ハイブリッドベクター、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む。いくつかの態様では、ベクターはレンチウイルスである。

【0031】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、または約９０ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、及び約８０ｍＭから成る群から選択される。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約４０ｍＭ～約５０ｍＭの間である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、または約７０ｍＭである。

【0032】

いくつかの態様では、培地はさらにナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地はさらにＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、培地は約１４０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１００ｍＭ、約９０ｍＭ、約８０ｍＭ、約７０ｍＭ、約６０ｍＭ、約５０ｍＭ、または約４０ｍＭ未満のＮａＣｌを含む。

【0033】

いくつかの態様では、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度とＮａＣｌ濃度の合計の２倍は２８０未満である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度とＮａＣｌ濃度の合計の２倍は２４０を超えて２８０未満である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度とＮａＣｌ濃度の合計の２倍は２８０以上で３００未満である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は８０ｍＭ未満、７５ｍＭ未満、７０ｍＭ未満、６５ｍＭ未満、または６０ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は８５ｍＭ未満、８０ｍＭ未満、７５ｍＭ未満、７０ｍＭ未満、または６５ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は９０ｍＭ未満、８５ｍＭ未満、８０ｍＭ未満、７５ｍＭ未満、または７０ｍＭ未満である。

【0034】

いくつかの態様では、培地はさらに、１以上のサイトカインを含む。いくつかの態様では、１以上のサイトカインはインターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）、インターロイキン－２１（ＩＬ－２１）、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、１以上のサイトカインはＩＬ－２、ＩＬ－７及びＩＬ－１５を含む。

【0035】

いくつかの態様では、培地はさらに、カルシウムイオン、グルコース、またはカルシウムイオンとグルコースの双方を含む。

【0036】

いくつかの態様では、培地はさらに細胞増殖剤を含む。いくつかの態様では、細胞増殖剤はＧＳＫ３Ｂ阻害剤、ＡＣＬＹ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害は、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、クエン酸ヒドロキシル、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、ＣＡＬ１０１、ＩＣ８７１１４、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、ＡＫＴ阻害剤は、ＭＫ２２０６、Ａ４４３６５４、ＡＫＴｉ－ＶＩＩＩ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。

【0037】

いくつかの態様では、出発免疫細胞及び／または高い濃度のカリウムイオンを含まない培地で培養された細胞と比べて最終細胞製剤にて、培地は、（ａ）低分化及び／または未分化の細胞の数及び／または割合を増やすことができ；（ｂ）形質導入効率を高めることができ；（ｃ）幹細胞様免疫細胞を増やすことができ；（ｄ）体内での生存率を高めることができ；（ｅ）細胞能力を高めることができ；（ｆ）細胞の疲弊を防止することができ；（ｇ）エフェクター様細胞の数及び／または割合を増やすことができ；または（ｈ）それらの組み合わせを可能にすることができる。

【0038】

いくつかの態様では、培地はさらにグルコースを含む。いくつかの態様では、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ超である。いくつかの態様では、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１９ｍＭ、約１５ｍＭ～約１８ｍＭ、約１５ｍＭ～約１７ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、約１６ｍＭ～約２０ｍＭ、約１６ｍＭ～約１９ｍＭ、約１６ｍＭ～約１８ｍＭ、約１６ｍＭ～約１７ｍＭ、約１７ｍＭ～約２０ｍＭ、約１７ｍＭ～約１９ｍＭ、または約１７ｍＭ～約１８ｍＭである。いくつかの態様では、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭである。いくつかの態様では、グルコースの濃度は、約１５．４ｍＭ、約１５．９ｍＭ、約１６．３ｍＭ、約１６．８ｍＭ、約１７．２ｍＭ、または約１７．７ｍＭである。

【0039】

いくつかの態様では、培地は、カルシウムイオンをさらに含む。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．４ｍＭ超である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．４ｍＭ～約２．５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．１ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．３ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．４ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．７ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．８ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２～約１．３ｍＭ、約１．２～約１．４ｍＭ、約１．２～約１．５ｍＭ、約１．２～約１．６ｍＭ、約１．２～約１．７ｍＭ、約１．２～約１．８ｍＭ、約１．３～約１．４ｍＭ、約１．３～約１．５ｍＭ、約１．３～約１．６ｍＭ、約１．３～約１．７ｍＭ、約１．３～約１．８ｍＭ、約１．４～約１．５ｍＭ、約１．４～約１．６ｍＭ、約１．４～約１．７ｍＭ、約１．４～約１．８ｍＭ、約１．５～約１．６ｍＭ、約１．５～約１．７ｍＭ、約１．５～約１．８ｍＭ、約１．６～約１．７ｍＭ、約１．６～約１．８ｍＭ、または約１．７～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、または約２．０ｍＭである。

【0040】

いくつかの態様では、培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬの濃度でＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－２の濃度は約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－２の濃度は、約１．０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－２の濃度は約１０ｎｇ／ｍＬである。

【0041】

いくつかの態様では、培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬの濃度でＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－２１の濃度は約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－２１の濃度は約１．０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－２１の濃度は約１０ｎｇ／ｍＬである。

【0042】

いくつかの態様では、培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、ｏｒ約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬの濃度でＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－７の濃度は約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－７の濃度は約０．１ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－７の濃度は約１０ｎｇ／ｍＬである。

【0043】

いくつかの態様では、培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬの濃度でＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１５の濃度は約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２ｎｇ／ｍＬ、約３ｎｇ／ｍＬ、約４ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約６ｎｇ／ｍＬ、約７ｎｇ／ｍＬ、約８ｎｇ／ｍＬ、約９ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１１ｎｇ／ｍＬ、約１２ｎｇ／ｍＬ、約１３ｎｇ／ｍＬ、約１４ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約１６ｎｇ／ｍＬ、約１７ｎｇ／ｍＬ、約１８ｎｇ／ｍＬ、約１９ｎｇ／ｍＬ、または約２０ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－１５の濃度は約０．１ｎｇ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－１５の濃度は約１０ｎｇ／ｍＬである。

【0044】

本開示のいくつかの態様は、本明細書に開示されている方法によって調製されるヒト免疫細胞の集団を対象とする。いくつかの態様では、ヒト免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞はＣＤ３^＋、ＣＤ４５ＲＯ^－、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ２７^＋、ＣＤ２８^＋、ＴＣＦ７^＋、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ヒト免疫細胞の集団にてＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも７０％は幹細胞様Ｔ細胞である。いくつかの態様では、ヒト免疫細胞の集団にてＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも４０％はＣＤ３９^－／ＣＤ６９^－Ｔ細胞である。いくつかの態様では、ヒト免疫細胞の集団にてＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも７０％はＣＤ３９^－／ＴＣＦ７^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、ヒト免疫細胞の集団はＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む。

【0045】

本開示のいくつかの態様は、本明細書に開示されているヒト免疫細胞の集団と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を対象とする。

【0046】

本開示のいくつかの態様は、免疫細胞によって標的細胞を殺傷できる条件下で本明細書に開示されている免疫細胞の集団または本明細書に開示されている医薬組成物に標的細胞を接触させることを含む、標的細胞を殺傷する方法を対象とする。

【0047】

本開示のいくつかの態様は、本明細書に開示されているヒト免疫細胞の集団または本明細書に開示されている医薬組成物を患者に投与することを含む、治療を必要とする患者を治療する方法を対象とする。

【0048】

本開示のいくつかの態様は、本明細書に開示されている方法にて治療を必要とする患者を治療するために薬物を製造するための本明細書に開示されているヒト免疫細胞の集団の使用を対象とする。

【図面の簡単な説明】

【0049】

【図1】８日間の生成プロセスの終了時での合わせたＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の倍数増殖を示す図である。倍数増殖は８日目のＴ細胞の総数を０日目のＴ細胞の総数で割ることによって算出した。各点は試験のドナーを表す。３つの独立した試験からデータをプールした。

【図2】８日間の生成プロセスの終了時でのＥＧＦＲ^＋ＲＯＲ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞におけるＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋のＴ細胞の割合を示す。平均値及び標準偏差を示した。３つの独立した試験からデータをプールした。

【図3】８日間の生成プロセスの終了時でのＣＤ４５ＲＡ＋及びＣＣＲ７＋によって定義される幹細胞様ＣＡＲ－Ｔ細胞の表現型解析を示す。（Ａ）８日間の生成プロセスの終了時でのＣＤ３＋ＥＧＦＲ＋ＣＡＲ－Ｔ細胞すべてにおける幹細胞様ＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を示す。（Ｂ）８日間の生成プロセスの終了時でのＣＤ４＋ＥＧＦＲ＋ＣＡＲ－Ｔ細胞における幹細胞様ＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を示す。（Ｃ）８日間の生成プロセスの終了時でのＣＤ８＋ＥＧＦＲ＋ＣＡＲ－Ｔ細胞における幹細胞様ＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を示す。各点は試験のドナーを表す。２つの独立した試験からデータをプールした。

【図4】５名の無関係なドナーにわたるさらに厳格なゲートかけ戦略（ＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４５ＲＯ－）によって定義された幹細胞様ＣＡＲ－Ｔ細胞の表現型解析を示す。８日間の生成プロセスの終了時ＣＤ３＋ＥＧＦＲ＋ＣＡＲ－Ｔ細胞すべてについて細胞にゲートをかけた。各棒はＣＡＲ－Ｔ細胞すべてにおける幹細胞様Ｔ細胞の割合を示す。

【図5A】標的細胞の刺激に応答した抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞内サイトカイン発現を示す。細胞内サイトカイン解析のための細胞内ＩＬ－２及びＩＦＮガンマ（ＩＦＮｇ）のフローサイトメトリーのプロットと、ゲートかけ戦略を表し、四分図Ｂ，Ｃ、Ｄ及びＥはそれぞれ図５Ｂ、図５Ｃ、図５Ｄ及び図５Ｅに対応する。先ず、生細胞のＥＧＦＲ＋ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＡＲ－Ｔ細胞でＴ細胞にゲートをかけ、続いてＩＦＮｇ及びＩＬ－２の発現でゲートをかけた。

【図5B】標的細胞の刺激に応答した抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞内サイトカイン発現を示す。ＣＤ３＋ＣＡＲ－Ｔ細胞にてＩＦＮｇ及びＩＬ－２の双方を発現しているＴ細胞によって定義される万能性ＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を示す。

【図5C】標的細胞の刺激に応答した抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞内サイトカイン発現を示す。ＩＬ－２のみを発現しているＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を示す。

【図5D】標的細胞の刺激に応答した抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞内サイトカイン発現を示す。ＩＦＮｇのみを発現しているＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を示す。

【図5E】標的細胞の刺激に応答した抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞内サイトカイン発現を示す。標的細胞の刺激に応答してＩＬ－２もＩＦＮｇも発現しないものによって定義される「機能性ではない」ＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を示す。各記号は固有のドナーを表す。

【図6A】試験管内順次刺激アッセイにてＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した標的細胞のクリアランス曲線を示す。構成的に発現される蛍光タンパク質ＮＬＲを使用して標的細胞を視覚化し、定量した。培養物における標的生細胞の量はＮＬＲ総強度として定義し、「標的細胞総強度」として表現する。標的細胞総強度の低下は標的細胞死を意味する。図６Ａ～６Ｃは、３名の異なるドナー（ドナー６（図６Ａ）、ドナー７（図６Ｂ）及びドナー８（図６Ｃ））それぞれについてＴｒａｎｓＡｃｔ処理（ＴＡ）、ＰＣＳ０．３％抗ＣＤ３／２８、またはＰＣＳ０．５％抗ＣＤ３／２８処理を使用して生成したＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した順次刺激の間での経時的な標的細胞死の動態を示す。図６Ｄ～６Ｆは３名の異なるドナー（ドナー６（図６Ｄ）、ドナー７（図６Ｅ）及びドナー８（図６Ｆ））それぞれについてＴｒａｎｓＡｃｔ処理（ＴＡ）、ＰＣＳ０．５％抗ＣＤ３／２８、ＰＣＳ０．７５％抗ＣＤ３／２８またはＰＣＳ１％抗ＣＤ３／２８処理を使用して生成したＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した順次刺激の間での経時的な標的細胞死の動態を示す。

【図6B】試験管内順次刺激アッセイにてＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した標的細胞のクリアランス曲線を示す。構成的に発現される蛍光タンパク質ＮＬＲを使用して標的細胞を視覚化し、定量した。培養物における標的生細胞の量はＮＬＲ総強度として定義し、「標的細胞総強度」として表現する。標的細胞総強度の低下は標的細胞死を意味する。図６Ａ～６Ｃは、３名の異なるドナー（ドナー６（図６Ａ）、ドナー７（図６Ｂ）及びドナー８（図６Ｃ））それぞれについてＴｒａｎｓＡｃｔ処理（ＴＡ）、ＰＣＳ０．３％抗ＣＤ３／２８、またはＰＣＳ０．５％抗ＣＤ３／２８処理を使用して生成したＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した順次刺激の間での経時的な標的細胞死の動態を示す。図６Ｄ～６Ｆは３名の異なるドナー（ドナー６（図６Ｄ）、ドナー７（図６Ｅ）及びドナー８（図６Ｆ））それぞれについてＴｒａｎｓＡｃｔ処理（ＴＡ）、ＰＣＳ０．５％抗ＣＤ３／２８、ＰＣＳ０．７５％抗ＣＤ３／２８またはＰＣＳ１％抗ＣＤ３／２８処理を使用して生成したＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した順次刺激の間での経時的な標的細胞死の動態を示す。

【図6C】試験管内順次刺激アッセイにてＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した標的細胞のクリアランス曲線を示す。構成的に発現される蛍光タンパク質ＮＬＲを使用して標的細胞を視覚化し、定量した。培養物における標的生細胞の量はＮＬＲ総強度として定義し、「標的細胞総強度」として表現する。標的細胞総強度の低下は標的細胞死を意味する。図６Ａ～６Ｃは、３名の異なるドナー（ドナー６（図６Ａ）、ドナー７（図６Ｂ）及びドナー８（図６Ｃ））それぞれについてＴｒａｎｓＡｃｔ処理（ＴＡ）、ＰＣＳ０．３％抗ＣＤ３／２８、またはＰＣＳ０．５％抗ＣＤ３／２８処理を使用して生成したＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した順次刺激の間での経時的な標的細胞死の動態を示す。図６Ｄ～６Ｆは３名の異なるドナー（ドナー６（図６Ｄ）、ドナー７（図６Ｅ）及びドナー８（図６Ｆ））それぞれについてＴｒａｎｓＡｃｔ処理（ＴＡ）、ＰＣＳ０．５％抗ＣＤ３／２８、ＰＣＳ０．７５％抗ＣＤ３／２８またはＰＣＳ１％抗ＣＤ３／２８処理を使用して生成したＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した順次刺激の間での経時的な標的細胞死の動態を示す。

【図6D】試験管内順次刺激アッセイにてＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した標的細胞のクリアランス曲線を示す。構成的に発現される蛍光タンパク質ＮＬＲを使用して標的細胞を視覚化し、定量した。培養物における標的生細胞の量はＮＬＲ総強度として定義し、「標的細胞総強度」として表現する。標的細胞総強度の低下は標的細胞死を意味する。図６Ａ～６Ｃは、３名の異なるドナー（ドナー６（図６Ａ）、ドナー７（図６Ｂ）及びドナー８（図６Ｃ））それぞれについてＴｒａｎｓＡｃｔ処理（ＴＡ）、ＰＣＳ０．３％抗ＣＤ３／２８、またはＰＣＳ０．５％抗ＣＤ３／２８処理を使用して生成したＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した順次刺激の間での経時的な標的細胞死の動態を示す。図６Ｄ～６Ｆは３名の異なるドナー（ドナー６（図６Ｄ）、ドナー７（図６Ｅ）及びドナー８（図６Ｆ））それぞれについてＴｒａｎｓＡｃｔ処理（ＴＡ）、ＰＣＳ０．５％抗ＣＤ３／２８、ＰＣＳ０．７５％抗ＣＤ３／２８またはＰＣＳ１％抗ＣＤ３／２８処理を使用して生成したＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した順次刺激の間での経時的な標的細胞死の動態を示す。

【図6E】試験管内順次刺激アッセイにてＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した標的細胞のクリアランス曲線を示す。構成的に発現される蛍光タンパク質ＮＬＲを使用して標的細胞を視覚化し、定量した。培養物における標的生細胞の量はＮＬＲ総強度として定義し、「標的細胞総強度」として表現する。標的細胞総強度の低下は標的細胞死を意味する。図６Ａ～６Ｃは、３名の異なるドナー（ドナー６（図６Ａ）、ドナー７（図６Ｂ）及びドナー８（図６Ｃ））それぞれについてＴｒａｎｓＡｃｔ処理（ＴＡ）、ＰＣＳ０．３％抗ＣＤ３／２８、またはＰＣＳ０．５％抗ＣＤ３／２８処理を使用して生成したＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した順次刺激の間での経時的な標的細胞死の動態を示す。図６Ｄ～６Ｆは３名の異なるドナー（ドナー６（図６Ｄ）、ドナー７（図６Ｅ）及びドナー８（図６Ｆ））それぞれについてＴｒａｎｓＡｃｔ処理（ＴＡ）、ＰＣＳ０．５％抗ＣＤ３／２８、ＰＣＳ０．７５％抗ＣＤ３／２８またはＰＣＳ１％抗ＣＤ３／２８処理を使用して生成したＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した順次刺激の間での経時的な標的細胞死の動態を示す。

【図6F】試験管内順次刺激アッセイにてＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した標的細胞のクリアランス曲線を示す。構成的に発現される蛍光タンパク質ＮＬＲを使用して標的細胞を視覚化し、定量した。培養物における標的生細胞の量はＮＬＲ総強度として定義し、「標的細胞総強度」として表現する。標的細胞総強度の低下は標的細胞死を意味する。図６Ａ～６Ｃは、３名の異なるドナー（ドナー６（図６Ａ）、ドナー７（図６Ｂ）及びドナー８（図６Ｃ））それぞれについてＴｒａｎｓＡｃｔ処理（ＴＡ）、ＰＣＳ０．３％抗ＣＤ３／２８、またはＰＣＳ０．５％抗ＣＤ３／２８処理を使用して生成したＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した順次刺激の間での経時的な標的細胞死の動態を示す。図６Ｄ～６Ｆは３名の異なるドナー（ドナー６（図６Ｄ）、ドナー７（図６Ｅ）及びドナー８（図６Ｆ））それぞれについてＴｒａｎｓＡｃｔ処理（ＴＡ）、ＰＣＳ０．５％抗ＣＤ３／２８、ＰＣＳ０．７５％抗ＣＤ３／２８またはＰＣＳ１％抗ＣＤ３／２８処理を使用して生成したＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した順次刺激の間での経時的な標的細胞死の動態を示す。

【図7】３名の異なるドナー（ドナー６（Ａ）、ドナー７（Ｂ）及びドナー８（Ｃ））それぞれについて低いエフェクター対標的の比（ここでは１：１２５、すなわち、１２５の標的細胞ごとにＣＡＲ－Ｔ細胞１）での試験管内効力アッセイを使用したＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した標的細胞のクリアランス曲線を示す。構成的に発現される蛍光タンパク質ＮＬＲを使用して標的細胞を視覚化し、定量した。培養物における標的生細胞の量はＮＬＲ総強度として定義し、「標的細胞総強度」として表現する。標的細胞総強度の低下は標的細胞死を意味する。グラフは、見せかけＴｒａｎｓＡｃｔ処理（ＴＡ）、ＴｒａｎｓＡｃｔ処理（ＴＡ）、見せかけＰＣＳ処理、ＰＣＳ０．５％抗ＣＤ３／２８処理を使用して生成したＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した順次刺激の間での経時的な標的細胞死の動態を示す。

【図8】３名の異なるドナー（ドナー６（Ａ）、ドナー７（Ｂ）及びドナー８（Ｃ））それぞれについて試験管内順次刺激アッセイにて標的細胞の刺激に応答したＣＡＲ－Ｔ細胞の累積数を示す。ＣＡＲ－Ｔ細胞の数はウェルにおける細胞の総数にＥＧＦＲ＋ＣＤ４５＋ＮＬＲ－生細胞の割合を乗じることによって得た。

【図9】８日間の生成プロセスの終了時での合わせたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の倍数増殖をグラフで示す。倍数増殖は８日目のＴ細胞の総数を０日目のＴ細胞の総数で割ることによって算出した。各点は固有のドナーを表す。

【図10】３名の無関係なドナーにわたるＣＣＲ７＋ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ４５ＲＯ－の発現によって定義される幹細胞様ＣＡＲ－Ｔ細胞の表現型解析を示す棒グラフである。８日間の生成プロセスの終了時にＣＤ３＋ＥＧＦＲ＋ＣＡＲ－Ｔ細胞すべてについて細胞にゲートをかけた。各棒はＣＡＲ－Ｔ細胞すべてにおける幹細胞様Ｔ細胞の割合を示す。

【図11】標的細胞の刺激に応答した抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞内サイトカイン発現を示す。（Ａ）ＣＤ３＋ＣＡＲ－Ｔ細胞における標的細胞の刺激に続くＩＦＮｇ及びＩＬ－２双方を発現しているＴ細胞によって定義される万能性ＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を示す。（Ｂ）標的細胞の刺激に続いてＩＬ－２もＩＦＮｇも発現しないものによって定義される「機能性ではない」ＣＡＲ－Ｔ細胞の割合を示す。各記号は固有のドナーを表す。

【図12】３名の異なるドナー（ドナー７（Ａ）、ドナー８（Ｂ）及びドナー９（Ｃ））それぞれについての試験管内順次刺激アッセイにてＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した標的細胞のクリアランス曲線を示す。構成的に発現される蛍光タンパク質ＮＬＲを使用して標的細胞を視覚化し、定量した。培養物における標的生細胞の量はＮＬＲ総強度として定義し、「標的細胞総強度」として表現する。標的細胞総強度の低下は標的細胞死を意味する。

【図13】３名の異なるドナー（ドナー７（Ａ）、ドナー８（Ｂ）及びドナー９（Ｃ））それぞれについての試験管内連続刺激アッセイにてＣＡＲ－Ｔ細胞に応答した標的細胞のクリアランス曲線を示す。構成的に発現される蛍光タンパク質ＮＬＲを使用して標的細胞を視覚化し、定量した。培養物における標的生細胞の量はＮＬＲ総強度として定義し、「標的細胞総強度」として表現する。標的細胞総強度の低下は標的細胞死を意味する。

【図14A】対照（ＴＣＭ）培養及び種々のＭＲＭ（ＭＲＭ－１、ＭＲＭ－２、ＭＲＭ－３、ＭＲＭ－４、及び標準ＭＲＭ）培養にて培養し、第１のＰＣＳ（密度０．５％、１：１；図１４Ａ、１４Ｃ、及び１４Ｅ）または第２のＰＣＳ（密度０．１％、１：１；図１４Ｂ，１４Ｄ及び１４Ｆ）組成物で活性化した細胞についての細胞の活性化を示すグラフである。

【図14B】対照（ＴＣＭ）培養及び種々のＭＲＭ（ＭＲＭ－１、ＭＲＭ－２、ＭＲＭ－３、ＭＲＭ－４、及び標準ＭＲＭ）培養にて培養し、第１のＰＣＳ（密度０．５％、１：１；図１４Ａ、１４Ｃ、及び１４Ｅ）または第２のＰＣＳ（密度０．１％、１：１；図１４Ｂ，１４Ｄ及び１４Ｆ）組成物で活性化した細胞についての細胞の活性化を示すグラフである。

【図14C】対照（ＴＣＭ）培養及び種々のＭＲＭ（ＭＲＭ－１、ＭＲＭ－２、ＭＲＭ－３、ＭＲＭ－４、及び標準ＭＲＭ）培養にて培養し、第１のＰＣＳ（密度０．５％、１：１；図１４Ａ、１４Ｃ、及び１４Ｅ）または第２のＰＣＳ（密度０．１％、１：１；図１４Ｂ，１４Ｄ及び１４Ｆ）組成物で活性化した細胞についての細胞の増殖を示すグラフである。

【図14D】対照（ＴＣＭ）培養及び種々のＭＲＭ（ＭＲＭ－１、ＭＲＭ－２、ＭＲＭ－３、ＭＲＭ－４、及び標準ＭＲＭ）培養にて培養し、第１のＰＣＳ（密度０．５％、１：１；図１４Ａ、１４Ｃ、及び１４Ｅ）または第２のＰＣＳ（密度０．１％、１：１；図１４Ｂ，１４Ｄ及び１４Ｆ）組成物で活性化した細胞についての細胞の増殖を示すグラフである。

【図14E】対照（ＴＣＭ）培養及び種々のＭＲＭ（ＭＲＭ－１、ＭＲＭ－２、ＭＲＭ－３、ＭＲＭ－４、及び標準ＭＲＭ）培養にて培養し、第１のＰＣＳ（密度０．５％、１：１；図１４Ａ、１４Ｃ、及び１４Ｅ）または第２のＰＣＳ（密度０．１％、１：１；図１４Ｂ，１４Ｄ及び１４Ｆ）組成物で活性化した細胞についての形質導入を示すグラフである。

【図14F】対照（ＴＣＭ）培養及び種々のＭＲＭ（ＭＲＭ－１、ＭＲＭ－２、ＭＲＭ－３、ＭＲＭ－４、及び標準ＭＲＭ）培養にて培養し、第１のＰＣＳ（密度０．５％、１：１；図１４Ａ、１４Ｃ、及び１４Ｅ）または第２のＰＣＳ（密度０．１％、１：１；図１４Ｂ，１４Ｄ及び１４Ｆ）組成物で活性化した細胞についての形質導入を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0050】

細胞免疫療法の有効性は、患者に注入される細胞製剤の存続性、多分化能、及び非対称細胞分裂を含む、多数の因子に左右される。細胞療法に使用される細胞の培養及び／または操作に使用される培地及び方法は、これらの細胞の代謝的特質、エピジェネティック特質、表現型特質に大きな影響を与える可能性があり、それによって治療可能性に影響を与える。

【0051】

本開示は、細胞を培養する方法、その方法によって調製された細胞、及び／または細胞培養方法のための組成物またはキットを対象とする。本開示のいくつかの態様は、免疫療法のためにヒト免疫細胞の集団を調製する方法、免疫療法のためにヒト免疫細胞の集団を活性化する方法、生体外または試験管内の培養の間に活性化されたヒト免疫細胞の収量を高める方法、免疫療法のために生体外または試験管内の培養の間に活性化されたヒト免疫細胞の収量を高めながら、活性化されたヒト免疫細胞の幹細胞性を高める方法、及び生体外または試験管内にて活性化された幹細胞様免疫細胞の集団を増殖させる方法を対象とし；方法は５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）に免疫細胞を接触させることを含む。

【0052】

いくつかの態様では、本開示は、養子細胞療法（ＡＣＴ）のための免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の集団を生成する方法を提供し、その際、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は低分化状態を有し、増殖する能力を保持する。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は低分化状態を有し、腫瘍細胞を標的として殺傷する能力を維持する。いくつかの態様では、免疫細胞、例えばＴ細胞またはＮＫ細胞は低分化状態を有し、増殖能力を保持し、腫瘍細胞を標的として殺傷する能力を維持する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従って培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、従来の方法に従って、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地にて培養された細胞と比べて、ＡＣＴにて高い有効性を有する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、従来の方法に従って、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地にて培養された細胞と比べて、ＡＣＴにて対象に投与された際、高い持続性を有する。そのような高い持続性は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の腫瘍微小環境に浸潤し、機能する能力、疲弊に耐える能力、ならびに連続した増殖及び応答の耐久性を確保する幹細胞性の持続を指す。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従って培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は幹細胞様細胞である。そのような細胞は、自己複製、増殖及び分化が可能である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、エフェクター様マーカーも発現する幹細胞様細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、腫瘍細胞を標的とし、殺傷する能力も維持する幹細胞様細胞である。

【0053】

本開示の細胞培養方法は、培養細胞の多能性及び／または万能性を増加できるか、あるいは細胞がベクターで形質導入されている場合の形質導入効率を増加できる。いくつかの態様では、培養方法は、細胞が培養される場合、及び／または細胞が生体内での療法に使用される場合に細胞疲弊を減少及び／または回避できる。いくつかの態様では、培養方法はまた、生体内生存能、生体内持続性、生体内エフェクター機能、またはそれらの任意の組み合わせを増加できる。いくつかの態様では、本明細書で開示される培養方法は、オリゴクローナルまたはポリクローナル腫瘍反応性幹細胞様Ｔ細胞及び／またはＣＤ８^＋ＴＩＬを濃縮できる。いくつかの態様では、本明細書で開示される培養方法は、がん患者に由来するＴＩＬのクローン多様性を保持できる。

【0054】

本開示がより詳細に記載される前に、本開示は、記載される特定の組成物またはプロセスステップに限定されず、したがって、当然のことながら変更され得ると理解されるべきである。本開示を読むことで当業者には明らかであるように、本明細書に記載及び図示される個々の態様の各々は、本開示の範囲または趣旨から逸脱することなく、他のいくつかの態様のいずれかから容易に分離され得るか、またはそれらの特徴と組み合わされ得る別の構成要素及び特徴を有する。列挙されるいずれの方法も、列挙される事象の順序で、または論理的に可能な任意の他の順序で実施され得る。

【0055】

本明細書に提供される見出しは、本開示の様々な態様を限定するものではなく、これは本明細書全体を参照することによって定義され得る。本明細書に使用される専門用語は、特定の態様を記載することのみを目的とし、限定することを意図するものではないこともまた理解されるべきである。

【0056】

Ｉ．用語
本開示がより容易に理解され得るように、ある特定の用語が最初に定義される。本出願で使用される場合、本明細書に明示的な別段の定めがない限り、以下の用語の各々は、以下に記載される意味を有することとする。追加の定義が、本出願全体を通して示されている。

【0057】

本開示の全体を通して、用語「ａ」または「ａｎ」実体は、その実体のうち１以上を指し、例えば、「ａキメラポリペプチド」は１以上のキメラポリペプチドを表すと理解される。したがって、「ａ」（または「ａｎ」）、「１以上」、及び「少なくとも１つ」という用語は本明細書では相互交換可能に使用することができる。加えて、「または」は、リスト内の構成成分のオープンリストを意味するのに使用される。例えば、「ＸはＡまたはＢを含む」は、ＸがＡを含む、ＸがＢを含む、ＸがＡ及びＢを含む、またはＸがＡもしくはＢ及び任意の他の構成要素を含むことを意味する。

【0058】

さらに、「及び／または」は、本明細書で使用される場合、２つの指定された特徴または構成要素の各々の、他方を伴うか、または伴わない特定の開示とみなされるべきである。したがって、「及び／または」という用語は、本明細書で「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用される場合、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、ならびに「Ｂ」（単独）を含むことを意図する。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」等の句で使用される用語「及び／または」は、以下の態様の各々を包含することを意図する：Ａ、Ｂ、及びＣ、Ａ、Ｂ、またはＣ、ＡまたはＣ、ＡまたはＢ、ＢまたはＣ、Ａ及びＣ、Ａ及びＢ、Ｂ及びＣ、Ａ（単独）、Ｂ（単独）、ならびに「Ｃ」（単独）。

【0059】

態様が、文体「含む」とともに本明細書に記載されている場合は常に、「から成る」及び／または「から本質的になる」の観点から記載される他の同様の態様もまた提供されることが理解される。

【0060】

別段の規定がない限り、本明細書で使用される全ての専門用語及び科学用語は、本開示が関連する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くに関する一般的な辞書を当業者に提供する。

【0061】

単位、接頭辞、及び記号は、それらの国際単位系（ＳＩ）で承認された形式で示される。数値範囲は、明白に述べられない限り範囲を定義する数を含む。

【0062】

本明細書で使用される略語は、本開示全体を通して定義される。本開示の様々な態様が、以下の小節においてさらに詳しく記載される。

【0063】

「約」または「本質的に含む」という用語は、当業者によって決定されるような特定の値または組成の許容誤差範囲内にある値または組成を指し、これは値または組成がどのように測定または決定されるのか、すなわち、測定システムの限界に部分的に依存することになる。例えば、「約」または「本質的に含む」は、当該技術分野の慣例に従って、１標準偏差以内または１標準偏差以上を意味することができる。あるいは、「約」または「本質的に含む」は、最大１０％の範囲（例えば、別途記載がない限り、または文脈から明らかでない限り（そのような数値が可能な値の１００％を超える場合を除く）、記載された参照値のいずれかの方向（さらに大きいかまたはさらに小さいか）に１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以内の範囲に収まる値の範囲）を意味することができる。例えば、本明細書で使用されるとき「約５５ｍＭ」には、４９．５ｍＭ～６０．５ｍＭが含まれる。さらに、特に生物系またはプロセスに関して、その用語は最大１桁または最大５倍の値を意味することができる。特定の値または組成物が本出願及び特許請求の範囲で提供される場合、別段の記載がない限り、「約」または「本質的に含む」の意味は、その特定の値または組成物の許容誤差範囲内にあると想定されるべきである。

【0064】

本明細書で使用されるとき、「およそ」という用語は目的の１以上の値に適用される場合、規定の参照値と類似している値を指す。いくつかの態様では、「約」という用語のような「およそ」という用語は、別途明記のない限り、または別途文脈から明らかでない限り（そのような数値が可能な値の１００％を超える場合を除く）、記載の参照値のいずれかの（さらに大きいまたはさらに小さい）方向に１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の範囲内に入る値の範囲を指す。

【0065】

本明細書に記載されているように、任意の濃度範囲、割合範囲、比率範囲、または整数範囲は、別段の指示がない限り、列挙される範囲内の任意の整数の値を含み、適切な場合、その分数（例えば、整数の１０分の１及び１００分の１）を含むと理解されるべきである。

【0066】

「対照培地」、「従来の培養培地」または「参照培養培地」という用語は、本明細書で使用されるとき、本明細書に開示されている代謝再プログラム化培地（「ＭＲＭ」）と比較した任意の培地を指す。対照培地は、特定のイオン濃度、例えば、カリウムイオンを除き、代謝再プログラム化培地と同じ成分を含むことができる。いくつかの態様では、本明細書に記載されている代謝再プログラム化培地は、本明細書に記載されているように、１以上のイオン濃度、例えば、カリウムイオン濃度を調整することによって対照培地から調製される。いくつかの態様では、対照培地は、基本培地、例えば、ＣＴＳ（商標）ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）を含む。いくつかの態様では、したがって、対照培地は、代謝再プログラム化培地にも加えられるアミノ酸、グルコース、グルタミン、Ｔ細胞刺激因子、抗体、置換物などを含むが、これらに限定されない１以上の追加の成分を含むが、対照培地は代謝再プログラム化培地とは異なる特定のイオン濃度を有する。いくつかの態様では、対照培地は、本明細書に開示されているようなプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）を含まない。別途示されない限り、「培地（ｍｅｄｉａ）」及び「培地（ｍｅｄｉｕｍ）」という用語は相互交換可能に使用することができる。

【0067】

本明細書で使用されるとき「培養」という用語は生体外及び／または試験管内での細胞の制御された増殖を指す。本明細書で使用されるとき、「培養」は、細胞増殖中、または細胞操作（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、もしくはＴＣＲｍを発現させるための構築物による形質導入）中の本明細書で開示されている細胞、例えば、免疫細胞、例えば、１以上の操作された免疫細胞の増殖を含む。いくつかの態様では、培養細胞は、対象、例えば、ヒト対象／患者から得られる。いくつかの態様では、培養細胞はヒト対象から得られる免疫細胞を含む。いくつかの態様では、培養細胞は本明細書に開示されている１以上の操作された免疫細胞を含む。いくつかの態様では、培養細胞はヒト対象／患者から得られるＴ細胞またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は培養前に精製される。いくつかの態様では、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は腫瘍に浸潤しているＴ細胞及び／またはＮＫ細胞である。いくつかの態様では、培養細胞は本明細書に開示されている１以上の操作された免疫細胞を含む。

【0068】

「増殖させる」または「増殖」という用語は、免疫細胞培養に関して本明細書で使用されるとき、細胞を刺激し、または活性化し、細胞を培養するプロセスを指す。増殖プロセスは、細胞が刺激され、または活性化され、培養された後、培養細胞の集団にて、所望の細胞の比率または総数の増加、例えば、低分化免疫細胞の比率または総数の増加をもたらすことができる。増殖は、培養細胞の集団におけるすべての細胞タイプの数が増加することを必要としない。むしろ、いくつかの態様では、培養細胞の集団における細胞のサブセットのみが、増殖中に数が増加するのに対し、他の細胞タイプの数は変化しない場合があり、または減少する場合がある。

【0069】

本明細書で使用される場合、「収量」という用語は、培養方法またはその一部の後の細胞の総数を指す。いくつかの態様では、「収量」という用語は、Ｔ細胞の集団における特定の細胞、例えば、幹細胞様Ｔ細胞の集団を指す。収量は、代表的な試料に基づいて収量を推定することを含むが、これに限定されない任意の方法を使用して決定することができる。

【0070】

「代謝再プログラム化培地（ｍｅｄｉａ）」、「代謝再プログラム化培地（ｍｅｄｉｕｍ）」、または「ＭＲＭ」という用語は本明細書で使用されるとき、本開示の培地を指し、その際、培地は高カリウム濃度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は４０ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０ｍＭ，少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、少なくとも約８０ｍＭ、少なくとも約８５ｍＭ、少なくとも約９０ｍＭ、少なくとも約９５ｍＭ、または少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオンの濃度を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約４０ｍＭ～約８０ｍＭのＮａＣｌ、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのＫＣｌ、約０．５ｍＭ～約２．８ｍＭのカルシウム、及び約１０ｍＭ～約２４ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はさらに、約２５０～約３００ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地はさらに、本明細書に開示されているようなプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）を含む。

【0071】

本明細書で使用されるとき、「よりも高い」という用語はそれを超えるが、等しくはないことを意味する。例えば、「４ｍＭよりも高い」は、４ｍＭを超えるが、４ｍＭを含まない任意の量を意味する。

【0072】

本明細書で使用されるとき「張度」という用語は、細胞膜を横切る計算された有効浸透圧勾配を指し、カリウムイオンの濃度と塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）の濃度の合計に２を掛けた値で表される。張度は、溶液、例えば、培地の浸透圧濃度（ｍＯｓｍ／ｋｇ）または浸透圧モル濃度（ｍＯｓｍ／Ｌ）によって表すことができる。浸透圧濃度と浸透圧モル濃度は、質量あたり（浸透圧濃度）及び体積あたり（浸透圧モル濃度）の溶媒の溶質浸透圧濃度の測定値である。本明細書で使用されるとき、等張培地は約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ（例えば、（［Ｋ＋］＋［ＮａＣｌ］）×２＝２８０）の張度を有する。

【0073】

本明細書で使用されるとき、低張溶液は２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満（例えば、（［Ｋ＋］＋［ＮａＣｌ］）×２＜２８０）の張度を有する。いくつかの態様では、低張培地は少なくとも約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、低張培地は少なくとも約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、低張培地は少なくとも約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、低張培地は少なくとも約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、本明細書に記載されている低張培地は約２５０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。

【0074】

本明細書で使用されるとき、高張溶液は、３００ｍＯｓｍ／Ｌを超える（例えば、（［Ｋ＋］＋［ＮａＣｌ］）×２＞３００）張度を有する。いくつかの態様では、本明細書に記載されている高張培地は、約３２０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、溶液、例えば、培地の張度はカリウムイオン及びＮａＣｌの濃度を増加または減少させることによって調整される。いくつかの態様では、培地の張度は、ある溶質の増加を第２の溶質の減少で相殺することによって維持され得る。例えば、ナトリウムイオンの濃度を変えることなく培地中のカリウムイオンの濃度を増加させると、培地の張度が増加し得る。しかしながら、カリウムイオンの濃度が増加し、ナトリウムイオンの濃度が減少する場合、元の培地の張度は維持され得る。

【0075】

本明細書で使用されるとき、「カリウム」、「カリウムイオン」、「カリウムカチオン」、及び「Ｋ＋」という用語は相互交換可能に使用され、元素カリウムを指す。元素カリウムは溶液中に陽イオンとして存在する。しかしながら、カリウムイオンを含む溶液を調製する標準的な手段は、カリウム含有塩（例えば、ＫＣｌ）を溶液中に希釈することを含むことが、当業者には容易に明らかとなる。したがって、あるモル（Ｍ）濃度のカリウムイオンを含む溶液、例えば、培地は、等モル（Ｍ）濃度のカリウムを含む塩を含むと記載され得る。

【0076】

本明細書で使用される場合、「ナトリウムイオン」及び「ナトリウムカチオン」という用語は、元素ナトリウムを指すために交換可能に使用される。元素ナトリウムは、一価カチオンとして溶液中に存在する。しかしながら、ナトリウムイオンを含む溶液を調製する標準的な手段が、ナトリウム含有塩（例えば、ＮａＣｌ）を溶液に希釈することを含むことは当業者に容易に明らかであろう。したがって、あるモル（Ｍ）濃度のナトリウムイオンを含む溶液、例えば、培地は、等モル（Ｍ）濃度のナトリウムを含む塩を含むと記載され得る。

【0077】

本明細書で使用される場合、「カルシウムイオン」及び「カルシウムカチオン」という用語は、元素カルシウムを指すために交換可能に使用される。元素カルシウムは、二価カチオンとして溶液中に存在する。しかしながら、カルシウムイオンを含む溶液を調製する標準的な手段が、カルシウム含有塩（例えば、ＣａＣｌ_２）を溶液に希釈することを含むことは当業者に容易に明らかであろう。したがって、あるモル（Ｍ）濃度のカルシウムイオンを含む溶液、例えば、培地は、等モル（Ｍ）濃度のカルシウムを含む塩を含むと記載され得る。

【0078】

本明細書で使用されるとき、「免疫細胞」という用語は免疫系の細胞を指す。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔリンパ球（「Ｔ細胞」）、Ｂリンパ球（「Ｂ細胞」）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴリンパ球（ＮＫＴ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞または好中球から選択される。本明細書で使用されるとき、細胞の「集団」は２以上の細胞、例えば、複数の細胞の集合を指す。いくつかの態様では、細胞の集団は、２つ以上の免疫細胞、例えば、複数の免疫細胞を含む。いくつかの態様では、細胞の集団は、複数のタイプの細胞を含む細胞の異種混合物、例えば、免疫細胞及び非免疫細胞の異種混合物を含む。いくつかの態様では、細胞の集団は複数のＴ細胞を含む。

【0079】

本明細書で使用されるとき、「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」という用語は相互交換可能であり、胸腺によって産生または処理されるあらゆるリンパ球を指す。Ｔ細胞の非限定的なクラスには、エフェクターＴ細胞及びＴｈ細胞（例えば、ＣＤ^４＋またはＣＤ８^＋Ｔ細胞）が挙げられる。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＴｈ１細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＴｈ２細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＴｃ１７細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＴｈ１７細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＴ_ｒｅｇ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞は腫瘍浸潤細胞（ＴＩＬ）である。

【0080】

本明細書で使用されるとき、「メモリー」Ｔ細胞という用語は、これまでに（例えば、生体内、試験管内、もしくは生体外で）それらの同族抗原に遭遇し、応答したＴ細胞、または例えば、（例えば、試験管内もしくは生体外にて）抗ＣＤ３抗体で刺激されたＴ細胞を指す。免疫細胞は、二次曝露時に「メモリー様」表現型を有し、そのようなメモリーＴ細胞は、一次曝露中よりも迅速かつ強力な免疫応答を開始するために複製し得る。いくつかの態様では、メモリーＴ細胞は、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔ_ＣＭ細胞）、エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔ_ＥＭ細胞）、組織常在性メモリーＴ細胞（Ｔ_ＲＭ細胞）、幹細胞様メモリーＴ細胞（Ｔ_ＳＣＭ細胞）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0081】

本明細書で使用されるとき、「幹細胞様メモリーＴ細胞」、「Ｔメモリー幹細胞」、または「Ｔ_ＳＣＭ細胞」という用語は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現するメモリーＴ細胞を指し、自己複製する幹細胞様能力ならびにメモリー及びエフェクターＴ細胞サブセットの範囲全体を再構成する多能性を付与されている。

【0082】

本明細書で使用される場合、「セントラルメモリーＴ細胞」または「Ｔ_ＣＭ細胞」という用語は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現するメモリーＴ細胞を指す。セントラルメモリーＴ細胞は一般にリンパ節内及び末梢循環で見られる。

【0083】

本明細書で使用されるとき、「エフェクターメモリーＴ細胞」または「Ｔ_ＥＭ細胞」という用語は、ＣＤ４５ＲＯを発現するが、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌの発現を欠いているメモリーＴ細胞を指す。エフェクターメモリーＴ細胞は、リンパ節ホーミング受容体（例えば、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌ）を欠いているので、これらの細胞は通常、末梢循環及び非リンパ組織で見られる。

【0084】

本明細書で使用されるとき、「組織常在性メモリーＴ細胞」または「Ｔ_ＲＭ細胞」という用語は、循環せず、皮膚、肺、及び消化管のような末梢組織に常在しているメモリーＴ細胞を指す。いくつかの態様では、組織常在性メモリーＴ細胞は、また、エフェクターメモリーＴ細胞である。

【0085】

本明細書で使用されるとき、「ナイーブＴ細胞」または「Ｔ_Ｎ細胞」という用語は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現するが、ＣＤ９５を発現しないＴ細胞を指す。Ｔ_Ｎ細胞は、Ｔ細胞系統の中で最も未分化な細胞である。Ｔ_Ｎ細胞と抗原提示細胞（ＡＰＣ）との間の相互作用によって、活性化Ｔ_ＥＦＦ細胞へのＴ_Ｎ細胞の分化及び免疫応答が誘導される。

【0086】

本明細書で使用されるとき、「幹細胞性」、「幹細胞様」、「幹細胞様」、または「低分化」という用語は、さらにナイーブな表現型と一致するマーカーを発現する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）を指す。例えば、低分化Ｔ細胞はＴ_Ｎ細胞またはＴ_ＳＣＭ細胞に特徴的な１以上のマーカーを発現することができる。いくつかの態様では、「低分化」または「幹細胞様」のＴ細胞はＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現する。いくつかの態様では、「低分化」または「幹細胞様」のＴ細胞はＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、及びＴＣＦ７を発現する。いくつかの態様では、「低分化」または「幹細胞様」のＴ細胞はＣＤ４５ＲＡを発現せず、またはＣＤ４５ＲＯ^低である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、低分化表現型を有する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）を推奨する。特定のメカニズムに束縛されることなく、いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法は、低分化免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の分化を阻止、阻害、または制限し、その結果、培養中の幹細胞様細胞の数が増加する。例えば、腫瘍を効果的に制御するには、幹細胞様メモリー表現型またはセントラルメモリー表現型を持つ低分化免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の養子移入が好ましいと一般的に考えられている。Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１５：１６１６－１６２６（２００５），Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１５（７）：８０８－８１４（２００９），Ｌｙｎｎ，Ｒ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５７６（７７８６）：２９３－３００（２０１９）；Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．１２：６７１－６８４（２０１２），Ｋｌｅｂａｎｏｆｆ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３５（９）：６５１－６７０（２０１２）及びＧａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１７（１０）：１２９０－１２９７（２０１１）を参照のこと。

【0087】

幹細胞性は自己複製能力、多能性、及び増殖能の持続性を特徴とする。いくつかの態様では、幹細胞性は特定の特徴的な遺伝子発現、例えば、多数の遺伝子にわたる発現の組み合わせパターンを特徴とする。いくつかの態様では、幹細胞様細胞は、例えば、本明細書に開示されている幹細胞性遺伝子シグネチャを使用して、トランスクリプトーム分析によって同定され得る。いくつかの態様では、遺伝子シグネチャはＡＣＴＮ１、ＤＳＣ１、ＴＳＨＺ２、ＭＹＢ、ＬＥＦ１、ＴＩＭＤ４、ＭＡＬ、ＫＲＴ７３、ＳＥＳＮ３、ＣＤＣＡ７Ｌ、ＬＯＣ２８３１７４、ＴＣＦ７、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＬＡＳＳ６、ＵＢＥ２Ｅ２、ＩＬ７Ｒ、ＧＣＮＴ４、ＴＡＦ４Ｂ、ＳＵＬＴ１Ｂ１、ＳＥＬＰ、ＫＲＴ７２、ＳＴＸＢＰ１、ＴＣＥＡ３、ＦＣＧＢＰ、ＣＸＣＲ５、ＧＰＡ３３、ＮＥＬＬ２、ＡＰＢＡ２、ＳＥＬＬ、ＶＩＰＲ１、ＦＡＭ１５３Ｂ、ＰＰＦＩＢＰ２、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＧＪＢ６、ＯＣＭ２、ＧＣＥＴ２、ＬＲＲＮ１、ＩＬ６ＳＴ、ＬＲＲＣ１６Ａ、ＩＧＳＦ９Ｂ、ＥＦＨＡ２、ＬＯＣ１２９２９３、ＡＰＰ、ＰＫＩＡ、ＺＣ３Ｈ１２Ｄ、ＣＨＭＰ７、ＫＩＡＡ０７４８、ＳＬＣ２２Ａ１７、ＦＬＪ１３１９７、ＮＲＣＡＭ、Ｃ５ｏｒｆ１３、ＧＩＰＣ３、ＷＮＴ７Ａ、ＦＡＭ１１７Ｂ、ＢＥＮＤ５、ＬＧＭＮ、ＦＡＭ６３Ａ、ＦＡＭ１５３Ｂ、ＡＲＨＧＥＦ１１、ＲＢＭ１１、ＲＩＣ３、ＬＤＬＲＡＰ１、ＰＥＬＩ１、ＰＴＫ２、ＫＣＴＤ１２、ＬＭＯ７、ＣＥＰ６８、ＳＤＫ２、ＭＣＯＬＮ３、ＺＮＦ２３８、ＥＤＡＲ、ＦＡＭ１５３Ｃ、ＦＡＡＨ２、ＢＣＬ９、Ｃ１７ｏｒｆ４８、ＭＡＰ１Ｄ、ＺＳＷＩＭ１、ＳＯＲＢＳ３、ＩＬ４Ｒ、ＳＥＲＰＩＮＦ１、Ｃ１６ｏｒｆ４５、ＳＰＴＢＮ１、ＫＣＮＱ１、ＬＤＨＢ、ＢＺＷ２、ＮＢＥＡ、ＧＡＬ３ＳＴ４、ＣＲＴＣ３、ＭＡＰ３Ｋ１、ＨＬＡ－ＤＯＡ、ＲＡＢ４３、ＳＧＴＢ、ＣＮＮ３、ＣＷＨ４３、ＫＬＨＬ３、ＰＩＭ２、ＲＧＭＢ、Ｃ１６ｏｒｆ７４、ＡＥＢＰ１、ＳＮＯＲＤ１１５－１１、ＳＮＯＲＤ１１５－１１、ＧＲＡＰ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上の遺伝子を含む（例えば、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１７（１０）：１２９０－９７（２０１１）を参照のこと）。いくつかの態様では、遺伝子シグネチャは、ＮＯＧ、ＴＩＭＤ４、ＭＹＢ、ＵＢＥ２Ｅ２、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＨＡＶＣＲ１、ＦＣＧＢＰ、ＰＰＦＩＢＰ２、ＴＰＳＴ１、ＡＣＴＮ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＫＲＴ７２、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＧＪＢ６、ＬＲＲＮ１、ＰＲＡＧＭＩＮ、ＧＩＰＣ３、ＦＬＮＢ、ＡＲＲＢ１、ＳＬＣ７Ａ８、ＮＵＣＢ２、ＬＲＲＣ７、ＭＹＯ１５Ｂ、ＭＡＬ、ＡＥＢＰ１、ＳＤＫ２、ＢＺＷ２、ＧＡＬ３ＳＴ４、ＰＩＴＰＮＭ２、ＺＮＦ４９６、ＦＡＭ１１７Ｂ、Ｃ１６ｏｒｆ７４、ＴＤＲＤ６、ＴＳＰＡＮ３２、Ｃ１８ｏｒｆ２２、Ｃ３ｏｒｆ４４、ＬＯＣ１２９２９３、ＺＣ３Ｈ１２Ｄ、ＭＬＸＩＰ、Ｃ７ｏｒｆ１０、ＳＴＸＢＰ１、ＫＣＮＱ１、ＦＬＪ１３１９７、ＬＤＬＲＡＰ１、ＲＡＢ４３、ＲＩＮ３、ＳＬＣ２２Ａ１７、ＡＧＢＬ３、ＴＣＥＡ３、ＮＣＲＮＡ００１８５、ＦＡＭ１５３Ｂ、ＦＡＭ１５３Ｃ、ＶＩＰＲ１、ＭＭＰ１９、ＨＢＳ１Ｌ、ＥＥＦ２Ｋ、ＳＮＯＲＡ５Ｃ、ＵＢＡＳＨ３Ａ、ＦＬＪ４３３９０、ＲＰ６－２１３Ｈ１９．１、ＩＮＰＰ５Ａ、ＰＩＭ２、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＳＮＲＫ、ＬＯＣ１００１２８２８８、ＰＩＧＶ、ＬＯＣ１００１２９８５８、ＳＰＴＢＮ１、ＰＲＯＳ１、ＭＭＰ２８、ＨＥＳ１、ＣＡＣＨＤ１、ＮＳＵＮ５Ｃ、ＬＥＦ１、ＴＴＴＹ１４、ＳＮＯＲＡ５４、ＨＳＦ２、Ｃ１６ｏｒｆ６７、ＮＳＵＮ５Ｂ、ＫＩＡＡ１２５７、ＮＲＧ２、ＣＡＤ、ＴＡＲＢＰ１、ＳＴＲＡＤＢ、ＭＴ１Ｆ、ＴＭＥＭ４１Ｂ、ＰＤＨＸ、ＫＤＭ６Ｂ、ＬＯＣ１００２８８３２２、ＵＸＳ１、ＬＧＭＮ、ＮＡＮＯＳ２、ＰＹＧＢ、ＲＡＳＧＲＰ２、Ｃ１４ｏｒｆ８０、ＸＰＯ６、ＳＬＣ２４Ａ６、ＦＡＭ１１３Ａ、ＭＲＭ１、ＦＢＸＷ８、ＮＤＵＦＳ２、ＫＣＴＤ１２、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上の遺伝子を含む（例えば、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ １７（１０）：１２９０－１２９７（２０１１）を参照のこと）。いくつかの態様では、遺伝子シグネチャはＳＥＬＬ、ＣＣＲ７、Ｓ１ＰＲ１、ＫＬＦ３、ＴＣＦ７、ＧＰＲ１８３、ＳＣ５Ｄ、ＦＡＡＨ２、ＬＴＢ、ＳＥＳＮ３、ＭＡＬ、ＴＳＨＺ２、ＬＥＦ１、ＡＰ３Ｍ２、ＳＬＣ２Ａ３、ＩＣＡＭ２、ＰＬＡＣ８、ＳＣＭＬ１、ＩＬ７Ｒ、ＡＢＬＩＭ１、ＲＡＳＧＲＰ２、ＴＲＡＢＤ２Ａ、ＳＡＴＢ１、ＡＬＧ１３、ＡＲＩＤ５Ａ、ＢＡＣＨ２、ＰＡＢＰＣ１、ＧＰＣＰＤ１、ＮＥＬＬ２、ＴＡＦ４Ｂ、ＦＣＭＲ、ＡＲＲＤＣ２、Ｃ１ｏｒｆ１６２、ＦＡＭ１７７Ａ１、ＡＮＫＲＤ１２、ＴＸＫ、ＳＯＲＬ１、ＡＱＰ３、ＡＤＴＲＰ、ＦＸＹＤ７、ＣＤ２８、Ｐ２ＲＹ８、ＣＲＹＢＧ１、ＴＮＦＳＦ８、ＢＥＸ２、ＰＧＡＰ１、ＰＴＧＥＲ４、ＭＡＭＬ２、ＢＥＸ３、ＰＣＳＫ１Ｎ、ＩＮＰＰ４Ｂ、ＡＣ１１９３９６．１、ＣＸＣＲ５、ＬＩＮＣ００４０２、ＣＣＲ４、ＩＬ６Ｒ、ＺＢＴＢ１０、ＩＴＧＡ６、ＡＲＭＨ１、ＲＩＬＰＬ２、ＦＯＸＰ１、ＴＥＳＰＡ１、ＹＰＥＬ５、ＬＰＡＲ６、ＣＭＳＳ１、ＲＩＰＯＲ２、ＺＮＦ３３１、ＥＭＰ３、ＧＩＭＡＰ７、ＷＤＲ７４、ＲＩＣ３、ＣＹＳＬＴＲ１、ＩＴＧＢ１、ＣＤ５、ＳＡＭＨＤ１、ＳＥＲＩＮＣ５、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上の遺伝子を含む（例えば、Ｃａｕｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５９６：１２６－１３２（２０２１）を参照のこと）。

【0088】

本明細書で使用されるとき、「エフェクター様」または「エフェクター細胞様」という用語は、腫瘍細胞殺傷能力及びサイトカイン多機能性、例えば、炎症性サイトカイン及び／または細胞傷害性分子を産生する細胞の能力を指す。いくつかの態様では、エフェクター様細胞は細胞によって発現される特定のマーカーを特徴とする。いくつかの態様では、それらのエフェクター様マーカーはｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋のうちの１以上を含む。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーはＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＫＴ３、ＢＣＬ２Ｌ１、ＣＢＬ、ＣＢＬＢ、ＣＢＬＣ、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＤ２、ＣＣＮＤ３、ＣＩＳＨ、ＣＬＣＦ１、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＦＲ、ＣＲＥＢＢＰ、ＣＲＬＦ２、ＣＳＦ２、ＣＳＦ２ＲＡ、ＣＳＦ２ＲＢ、ＣＳＦ３、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＳＨ１、ＣＴＦ１、ＥＰ３００、ＥＰＯ、ＥＰＯＲ、ＧＨ１、ＧＨ２、ＧＨＲ、ＧＲＢ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ１７、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ２１、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＥ、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２、ＩＦＮＫ、ＩＦＮＬ１、ＩＦＮＬ２、ＩＦＮＬ３、ＩＦＮＬＲ１、ＩＦＮＷ１、ＩＬ１０、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１９、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２０ＲＢ、ＩＬ２１、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２、ＩＬ２２ＲＡ１、ＩＬ２２ＲＡ２、ＩＬ２３Ａ、ＩＬ２３Ｒ、ＩＬ２４、ＩＬ２６、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＲＦ９、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＬＥＰ、ＬＥＰＲ、ＬＩＦ、ＬＩＦＲ、ＭＰＬ、ＭＹＣ、ＯＳＭ、ＯＳＭＲ、ＰＩＡＳ１、ＰＩＡＳ２、ＰＩＡＳ３、ＰＩＡＳ４、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３ＣＢ、ＰＩＫ３ＣＤ、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＩＫ３Ｒ２、ＰＩＫ３Ｒ３、ＰＩＫ３Ｒ５、ＰＩＭ１、ＰＲＬ、ＰＲＬＲ、ＰＴＰＮ１１、ＰＴＰＮ６、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３、ＳＯＣＳ４、ＳＯＣＳ５、ＳＯＣＳ７、ＳＯＳ１、ＳＯＳ２、ＳＰＲＥＤ１、ＳＰＲＥＤ２、ＳＰＲＹ１、ＳＰＲＹ２、ＳＰＲＹ３、ＳＰＲＹ４、ＳＴＡＭ、ＳＴＡＭ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５Ａ、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＳＴＡＴ６、ＴＰＯ、ＴＳＬＰ、ＴＹＫ２、及びそれらの任意の組み合わせから成る群から選択されるＳＴＡＴ標的を含む。いくつかの態様では、エフェクター様細胞はトランスクリプトーム分析によって特徴づけられる。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、Ｋａｅｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １１１：８３７－５１（２００２）；Ｔｒｉｐａｔｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８５：２１１６－２４（２０１０）；及び／またはＪｏｈｎｎｉｄｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６：ｅａｂｅ３７０２（Ｊａｎ．１５，２０２１）で開示されるマーカーを含み、これらのそれぞれは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0089】

いくつかの態様では、エフェクター様細胞は、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ １７（１０）：１２９０－９７（２０１１）に記載のエフェクター関連遺伝子セットを使用して特性評価される。いくつかの態様では、エフェクター様細胞の特徴的な遺伝子シグネチャは、ＭＴＣＨ２、ＲＡＢ６Ｃ、ＫＩＡＡ０１９５、ＳＥＴＤ２、Ｃ２ｏｒｆ２４、ＮＲＤ１、ＧＮＡ１３、ＣＯＰＡ、ＳＥＬＴ、ＴＮＩＰ１、ＣＢＦＡ２Ｔ２、ＬＲＰ１０、ＰＲＫＣＩ、ＢＲＥ、ＡＮＫＳ１Ａ、ＰＮＰＬＡ６、ＡＲＬ６ＩＰ１、ＷＤＦＹ１、ＭＡＰＫ１、ＧＰＲ１５３、ＳＨＫＢＰ１、ＭＡＰ１ＬＣ３Ｂ２、ＰＩＰ４Ｋ２Ａ、ＨＣＮ３、ＧＴＰＢＰ１、ＴＬＮ１、Ｃ４ｏｒｆ３４、ＫＩＦ３Ｂ、ＴＣＩＲＧ１、ＰＰＰ３ＣＡ、ＡＴＧ４Ｄ、ＴＹＭＰ、ＴＲＡＦ６、Ｃ１７ｏｒｆ７６、ＷＩＰＦ１、ＦＡＭ１０８Ａ１、ＭＹＬ６、ＮＲＭ、ＳＰＣＳ２、ＧＧＴ３Ｐ、ＧＡＬＫ１、ＣＬＩＰ４、ＡＲＬ４Ｃ、ＹＷＨＡＱ、ＬＰＣＡＴ４、ＡＴＧ２Ａ、ＩＤＳ、ＴＢＣ１Ｄ５、ＤＭＰＫ、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ６、ＲＥＥＰ５、ＡＢＨＤ６、ＫＩＡＡ０２４７、ＥＭＢ、ＴＳＥＮ５４、ＳＰＩＲＥ２、ＰＩＷＩＬ４、ＺＳＣＡＮ２２、ＩＣＡＭ１、ＣＨＤ９、ＬＰＩＮ２、ＳＥＴＤ８、ＺＣ３Ｈ１２Ａ、ＵＬＢＰ３、ＩＬ１５ＲＡ、ＨＬＡ－ＤＱＢ２、ＬＣＰ１、ＣＨＰ、ＲＵＮＸ３、ＴＭＥＭ４３、ＲＥＥＰ４、ＭＥＦ２Ｄ、ＡＢＬ１、ＴＭＥＭ３９Ａ、ＰＣＢＰ４、ＰＬＣＤ１、ＣＨＳＴ１２、ＲＡＳＧＲＰ１、Ｃ１ｏｒｆ５８、Ｃ１１ｏｒｆ６３、Ｃ６ｏｒｆ１２９、ＦＨＯＤ１、ＤＫＦＺｐ４３４Ｆ１４２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＩＴＰＲ３、ＢＴＧ３、Ｃ４ｏｒｆ５０、ＣＮＮＭ３、ＩＦＩ１６、ＡＫ１、ＣＤＫ２ＡＰ１、ＲＥＬ、ＢＣＬ２Ｌ１、ＭＶＤ、ＴＴＣ３９Ｃ、ＰＬＥＫＨＡ２、ＦＫＢＰ１１、ＥＭＬ４、ＦＡＮＣＡ、ＣＤＣＡ４、ＦＵＣＡ２、ＭＦＳＤ１０、ＴＢＣＤ、ＣＡＰＮ２、ＩＱＧＡＰ１、ＣＨＳＴ１１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＭＹＯ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＤＬＧ３、ＭＸＤ４、ＲＡＬＧＤＳ、Ｓ１ＰＲ５、ＷＳＢ２、ＣＣＲ３、ＴＩＰＡＲＰ、ＳＰ１４０、ＣＤ１５１、ＳＯＸ１３、ＫＲＴＡＰ５－２、ＮＦ１、ＰＥＡ１５、ＰＡＲＰ８、ＲＮＦ１６６、ＵＥＶＬＤ、ＬＩＭＫ１、ＣＡＣＮＢ１、ＴＭＸ４、ＳＬＣ６Ａ６、ＬＢＡ１、ＳＶ２Ａ、ＬＬＧＬ２、ＩＲＦ１、ＰＰＰ２Ｒ５Ｃ、ＣＤ９９、ＲＡＰＧＥＦ１、ＰＰＰ４Ｒ１、ＯＳＢＰＬ７、ＦＯＸＰ４、ＳＬＡ２、ＴＢＣ１Ｄ２Ｂ、ＳＴ７、ＪＡＺＦ１、ＧＧＡ２、ＰＩ４Ｋ２Ａ、ＣＤ６８、ＬＰＧＡＴ１、ＳＴＸ１１、ＺＡＫ、ＦＡＭ１６０Ｂ１、ＲＯＲＡ、Ｃ８ｏｒｆ８０、ＡＰＯＢＥＣ３Ｆ、ＴＧＦＢＩ、ＤＮＡＪＣ１、ＧＰＲ１１４、ＬＲＰ８、ＣＤ６９、ＣＭＩ、ＮＡＴ１３、ＴＧＦＢ１、ＦＬＪ０００４９、ＡＮＴＸＲ２、ＮＲ４Ａ３、ＩＬ１２ＲＢ１、ＮＴＮＧ２、ＲＤＸ、ＭＬＬＴ４、ＧＰＲＩＮ３、ＡＤＣＹ９、ＣＤ３００Ａ、ＳＣＤ５、ＡＢＩ３、ＰＴＰＮ２２、ＬＧＡＬＳ１、ＳＹＴＬ３、ＢＭＰＲ１Ａ、ＴＢＫ１、ＰＭＡＩＰ１、ＲＡＳＧＥＦ１Ａ、ＧＣＮＴ１、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＳＴＯＭ、ＣＡＬＨＭ２、ＡＢＣＡ２、ＰＰＰ１Ｒ１６Ｂ、ＳＹＮＥ２、ＰＡＭ、Ｃ１２ｏｒｆ７５、ＣＬＣＦ１、ＭＸＲＡ７、ＡＰＯＢＥＣ３Ｃ、ＣＬＳＴＮ３、ＡＣＯＴ９、ＨＩＰ１、ＬＡＧ３、ＴＮＦＡＩＰ３、ＤＣＢＬＤ１、ＫＬＦ６、ＣＡＣＮＢ３、ＲＮＦ１９Ａ、ＲＡＢ２７Ａ、ＦＡＤＳ３、ＤＬＧ５、ＡＰＯＢＥＣ３Ｄ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＡＣＴＮ４、ＴＢＫＢＰ１、ＡＴＸＮ１、ＡＲＡＰ２、ＡＲＨＧＥＦ１２、ＦＡＭ５３Ｂ、ＭＡＮ１Ａ１、ＦＡＭ３８Ａ、ＰＬＸＮＣ１、ＧＲＬＦ１、ＳＲＧＮ、ＨＬＡ－ＤＲＢ５、Ｂ４ＧＡＬＴ５、ＷＩＰＩ１、ＰＴＰＲＪ、ＳＬＦＮ１１、ＤＵＳＰ２、ＡＮＸＡ５、ＡＨＮＡＫ、ＮＥＯ１、ＣＬＩＣ１、ＥＩＦ２Ｃ４、ＭＡＰ３Ｋ５、ＩＬ２ＲＢ、ＰＬＥＫＨＧ１、ＭＹＯ６、ＧＴＤＣ１、ＥＤＡＲＡＤＤ、ＧＡＬＭ、ＴＡＲＰ、ＡＤＡＭ８、ＭＳＣ、ＨＮＲＰＬＬ、ＳＹＴ１１、ＡＴＰ２Ｂ４、ＮＨＳＬ２、ＭＡＴＫ、ＡＲＨＧＡＰ１８、ＳＬＦＮ１２Ｌ、ＳＰＡＴＳ２Ｌ、ＲＡＢ２７Ｂ、ＰＩＫ３Ｒ３、ＴＰ５３ＩＮＰ１、ＭＢＯＡＴ１、ＧＹＧ１、ＫＡＴＮＡＬ１、ＦＡＭ４６Ｃ、ＺＣ３ＨＡＶ１Ｌ、ＡＮＸＡ２Ｐ２、ＣＴＮＮＡ１、ＮＰＣ１、Ｃ３ＡＲ１、ＣＲＩＭ１、ＳＨ２Ｄ２Ａ、ＥＲＮ１、ＹＰＥＬ１、ＴＢＸ２１、ＳＬＣ１Ａ４、ＦＡＳＬＧ、ＰＨＡＣＴＲ２、ＧＡＬＮＴ３、ＡＤＲＢ２、ＰＩＫ３ＡＰ１、ＴＬＲ３、ＰＬＥＫＨＡ５、ＤＵＳＰ１０、ＧＮＡＯ１、ＰＴＧＤＲ、ＦＲＭＤ４Ｂ、ＡＮＸＡ２、ＥＯＭＥＳ、ＣＡＤＭ１、ＭＡＦ、ＴＰＲＧ１、ＮＢＥＡＬ２、ＰＰＰ２Ｒ２Ｂ、ＰＥＬＯ、ＳＬＣ４Ａ４、ＫＬＲＦ１、ＦＯＳＬ２、ＲＧＳ２、ＴＧＦＢＲ３、ＰＲＦ１、ＭＹＯ１Ｆ、ＧＡＢ３、Ｃ１７ｏｒｆ６６、ＭＩＣＡＬ２、ＣＹＴＨ３、ＴＯＸ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＳＹＮＥ１、ＷＥＥ１、ＰＹＨＩＮ１、Ｆ２Ｒ、ＰＬＤ１、ＴＨＢＳ１、ＣＤ５８、ＦＡＳ、ＮＥＴＯ２、ＣＸＣＲ６、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ２、ＤＵＳＰ４、ＡＵＴＳ２、Ｃ１ｏｒｆ２１、ＫＬＲＧ１、ＴＮＩＰ３、ＧＺＭＡ、ＰＲＲ５Ｌ、ＰＲＤＭ１、ＳＴ８ＳＩＡ６、ＰＬＸＮＤ１、ＰＴＰＲＭ、ＧＦＰＴ２、ＭＹＢＬ１、ＳＬＡＭＦ７、ＦＬＪ１６６８６、ＧＮＬＹ、ＺＥＢ２、ＣＳＴ７、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＣＣＬ５、ＫＬＲＤ１、ＫＬＲＢ１、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上の遺伝子を含む（例えば、以下を参照：Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１７（１０）：１２９０－９７（２０１１））。

【0090】

いくつかの態様では、細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の特性は、Ｔ細胞活性化（本明細書では「ＴＡＣＴ遺伝子」とも呼ばれる）、Ｔ細胞前駆疲弊（本明細書では「ＴＰＥ遺伝子」とも呼ばれる）、Ｔ細胞の終末疲弊（本明細書では「ＴＴＥ遺伝子」とも呼ばれる）に関連するさまざまな遺伝子セットの上方調節及び／または下方調節を比較することによって、トランスクリプトーム解析を使用して評価することができる。

【0091】

いくつかの態様では、終末期に疲弊したＴ細胞は、Ｏｌｉｖｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５９６：１１９－１２５（２０２１）に記載されているＴＴＥ関連遺伝子セットを使用して特徴付けられる。いくつかの態様では、ＴＴＥ細胞の遺伝子シグネチャは、ＫＲＴ８６、ＲＤＨ１０、ＡＣＰ５、ＣＸＣＲ６、ＨＭＯＸ１、ＬＡＹＮ、ＣＬＩＣ３、ＨＡＶＣＲ２、ＡＣ２４３８２９．４、ＰＲＦ１、ＳＬＣ２Ａ８、ＣＨＳＴ１２、ＧＡＬＮＴ２、ＥＮＴＰＤ１、ＬＡＧ３、ＧＺＭＢ、ＰＤＣＤ１、ＣＡＲＤ１６、ＣＴＬＡ４、ＳＬＡ２、ＣＤ２７、ＲＡＬＡ、ＶＣＡＭ１、ＳＹＮＧＲ２、ＮＫＧ７、ＬＳＰ１、ＣＣＬ５、ＲＡＲＲＥＳ３、ＣＤ７、ＣＴＳＷ、ＭＴＳＳ１、ＰＴＭＳ、ＢＡＴＦ、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＡＫＡＰ５、ＣＤ３８、ＲＡＢ２７Ａ、ＧＺＭＨ、ＩＧＦＬＲ１、ＡＴＰ８Ｂ４、ＣＤ６３、ＨＯＰＸ、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＡＤＧＲＧ１、ＰＬＰＰ１、ＣＳＦ１、ＴＮＦＳＦ１０、ＳＮＡＰ４７、ＬＩＮＣ０１８７１、ＭＹＯ１Ｅ、ＺＢＥＤ２、ＡＨＩ１、ＡＢＩ３、ＦＡＳＬＧ、ＴＹＭＰ、ＺＢＴＢ３８、ＣＴＳＢ、ＰＬＳＣＲ１、ＡＦＡＰ１Ｌ２、ＩＴＧＡＥ、ＴＮＳ３、ＤＵＳＰ１６、ＣＡＳＰ１、ＣＡＲＳ、ＤＵＳＰ５、ＩＦＩＴ１、ＳＬＣ１Ａ４、ＧＯＬＩＭ４、ＲＳＡＤ２、ＤＮＰＨ１、ＮＢＬ１、ＡＣＯＴ９、ＡＢＨＤ６、ＯＡＳ１、ＳＬＣ２７Ａ２、ＺＢＰ１、ＣＤ２００Ｒ１、ＯＡＳ３、ＣＭＰＫ２、ＴＮＦＳＦ４、ＰＯＬＲ１Ｅ、ＣＡＤＭ１、ＨＥＬＺ２、ＳＹＴＬ２、ＡＧＰＡＴ２、ＵＢＥ２Ｆ、ＧＩＭＡＰ６、ＺＢＴＢ３２、ＲＩＮ３、ＰＬＥＫＨＦ１、ＣＨＰＦ、ＰＡＣＳＩＮ２、ＡＢＣＢ１、ＳＰＡＴＳ２Ｌ、ＵＳＰ１８、ＴＭＥＭ９、ＫＬＲＣ１、ＭＰＳＴから選択される１以上の遺伝子またはすべての遺伝子を含む。いくつかの態様では、前駆疲弊Ｔ細胞は、Ｏｌｉｖｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５９６：１１９－１２５（２０２１）に記載されているＴＰＥ関連遺伝子セットを使用して特徴付けられる。いくつかの態様では、ＴＰＥ細胞の遺伝子シグネチャは、ＦＸＹＤ６、ＣＡＶ１、ＧＮＧ４、ＸＣＬ１、ＣＲＴＡＭ、ＣＸＣＬ１３、ＧＥＭ、ＸＣＬ２、ＦＸＹＤ２、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＬＡＮＣＬ２、ＲＡＳＳＦ４、ＢＡＧ３、ＨＳＰＡ１Ｂ、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＨＳＰＢ１、ＦＡＢＰ５、ＭＳ４Ａ６Ａ、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＨＳＰＡ１Ａ、ＲＧＳ２、ＤＲＡＩＣ、ＣＤ７４、ＨＳＰＤ１、ＨＳＰＡ６、ＨＳＰＥ１、ＣＤ８２、ＴＯＸ、ＣＤ２００、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＮＲ４Ａ２、ＶＣＡＭ１、ＢＥＸ３、ＡＩＦ１、ＤＮＡＪＡ１、ＨＳＰＨ１、ＤＮＡＪＢ１、ＨＩＰＫ２、ＬＨＦＰＬ６、ＨＬＡ－ＤＭＡ、ＧＫ、ＴＳＨＺ２、ＬＰＬ、Ｃ１６ｏｒｆ４５、ＺＦＡＮＤ２Ａ、ＣＤ８０、ＥＴＶ１、ＮＭＢ、ＤＥＤＤ２、ＣＭＣ１、ＰＯＮ２、ＳＥＭＡ４Ａ、ＥＮＣ１、ＧＲＡＭＤ１Ａ、ＭＹＬ６Ｂ、ＢＣＡＴ１、ＡＲＭＨ１、ＴＩＡＭ１、ＰＩＫＦＹＶＥ、ＭＲＰＬ１８、ＩＮＰＰ５Ｆ、ＬＭＣＤ１、ＳＥＳＮ３、ＣＣＤＣ６、ＫＩＡＡ１３２４、ＣＨＮ１、ＡＮＫＲＤ１０、ＣＤ７０、ＰＲＲＧ４、ＴＮＦＳＦ４、ＣＯＲＯ１Ｂ、ＤＮＡＪＢ４、ＭＡＧＥＨ１、ＩＣＡＭ１、ＧＧＴ１、ＮＩＮＪ２、ＢＬＶＲＡ、ＦＡＡＨ２、ＴＯＸ２、ＳＬＫ、ＣＣＤＣ１４１、ＡＴＦ３、ＩＮＰＰ１、ＦＡＭ３Ｃ、ＧＡＤＤ４５Ｇ、ＡＰＰ、ＭＡＬ、ＳＩＴ１、ＤＲＡＭ１、ＣＬＥＣＬ１、ＭＤＦＩＣ、ＰＭＣＨ、ＨＬＡ－ＤＭＢ、ＰＨＦ６、ＡＦＡＰ１Ｌ２、ＢＴＮ２Ａ２、ＣＣＬ４Ｌ２から選択される１以上の遺伝子またはすべての遺伝子を含む。いくつかの態様では、活性化Ｔ細胞（ＴＡＣＴ）は、Ｏｌｉｖｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５９６：１１９－１２５（２０２１）に記載されているＴＡＣＴ関連遺伝子セットを使用して特徴付けられる。いくつかの態様では、活性化Ｔ細胞の遺伝子シグネチャは、ＥＧＲ１、ＨＳＰＡ６、ＦＯＳ、ＨＳＰＡ１Ｂ、ＧＡＤＤ４５Ｂ、ＮＲ４Ａ１、ＦＯＳＢ、ＡＴＦ３、ＤＮＡＪＢ１、ＤＵＳＰ１、ＪＵＮＢ、ＣＤ６９、ＮＲ４Ａ２、ＮＦＫＢＩＡ、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ、ＫＬＦ６、ＤＮＡＪＡ１、ＪＵＮ、ＳＲＳＦ７、ＳＬＣ２Ａ３、ＺＦＰ３６Ｌ１、ＩＥＲ２、ＨＳＰＡ１Ａ、ＥＩＦ４Ａ２、ＩＤ１、ＩＦＲＤ１、ＣＣＮＬ１、ＲＳＲＰ１、ＳＥＲＴＡＤ１、ＤＥＤＤ２、ＫＬＦ１０、ＡＬ１１８５１６．１、ＫＬＦ２、ＺＦＡＮＤ２Ａ、ＣＬＫ１、ＲＳＲＣ２、ＩＥＲ３、ＢＴＧ２、ＭＹＬＩＰ、ＭＡＦＦ、ＣＳＲＮＰ１、ＩＤ２、ＺＣ３Ｈ１２Ａ、ＢＡＧ３、ＳＮＨＧ１２、ＴＮＦ、ＤＤＩＴ４、ＳＧＫ１、ＳＮＨＧ１５、ＤＮＡＪＢ４、ＮＲ４Ａ３、ＮＦＫＢＩＤ、ＳＣＭＬ１、ＲＡＳＤ１、ＡＴＦ４、ＡＲＥＧ、ＲＡＳＧＥＦ１Ｂ、ＡＣ０２０９１６．１、ＤＤＩＴ３、ＳＮＨＧ８、ＣＩＴＥＤ２、ＴＸＮＩＰ、ＴＯＢ１、ＰＩＭ２、ＳＯＣＳ３、ＧＡＤＤ４５Ｇ、ＲＧＳ１６、ＴＩＰＡＲＰ、ＮＦＫＢＩＺ、ＣＣＬ４、ＣＤ８３、ＰＰＰ１Ｒ１０、ＣＣＬ４Ｌ２、ＳＥＳＮ２、ＣＨＭＰ１Ｂ、ＬＥＦ１、ＣＳＫＭＴ、ＨＥＸＩＭ１、ＨＳＰＡ２、ＭＲＰＬ１８、ＲＢＫＳ、ＣＤ５５、ＡＲＲＤＣ２、ＳＣ５Ｄ、ＦＡＭ５３Ｃ、ＡＴＰ２Ｂ１－ＡＳ１、ＩＦＮＧ、ＭＹＣ、ＴＳＣ２２Ｄ２、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＬＲＩＦ１、ＡＲＲＤＣ３、ＩＬＦ３－ＤＴ、ＩＮＴＳ６、ＺＮＦ１０、ＰＲＭＴ９、ＡＴＭ、ＳＥＬＬ、ＡＣ２４３９６０．１から選択される１以上またはすべての遺伝子を含む。

【0092】

多くのがんなどの長期にわたる抗原曝露の存在下では、より分化した免疫細胞、例えば、エフェクター及びエフェクターメモリーＴ細胞は、多くの場合、疲弊し、抗腫瘍機能を失う。バイオマーカー、例えば、Ｔ細胞マーカーは、任意の方法を使用して測定され得る。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、抗体染色とその後のゲートフローサイトメトリーを使用して同定される。

【0093】

本明細書で使用されるとき、「基本」培地という用語は、本明細書に開示されている追加の要素、例えば、カリウム、ナトリウム、カルシウム、グルコース、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、プログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）またはそれらの任意の組み合わせのうち１以上で補完されている任意の出発培地を指す。基本培地は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養するための任意の培地であることができる。いくつかの態様では、基本培地は、平衡塩類溶液（例えば、ＰＢＳ、ＤＰＢＳ、ＨＢＳＳ、ＥＢＳＳ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、クリック培地、最小必須培地（ＭＥＭ）、基本培地イーグル（ＢＭＥ）、Ｆ－１０、Ｆ－１２、ＲＰＭＩ１６４０、グラスゴー最小必須培地（ＧＭＥＭ）、アルファ最小必須培地（アルファＭＥＭ）、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）、Ｍ１９９、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）Ｐｒｏ、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖基本培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＡＩＭ Ｖ（商標）、ＴＥＸＭＡＣＳ（商標）培地、ＰＲＩＭＥ－ＸＶ（登録商標）Ｔ細胞ＣＤＭ、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５（Ｌｏｎｚａ）、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、ＴＩＬ増殖培地、及びそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、基本培地は無血清である。いくつかの態様では、基本培地はＰＲＩＭＥ－ＸＶ（登録商標）Ｔ細胞ＣＤＭを含む。いくつかの態様では、基本培地はＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）を含む。いくつかの態様では、基本培地はＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）Ｐｒｏを含む。いくつかの態様では、基本培地はさらに、免疫細胞血清置換（ＩＣＳＲ）を含む。例えば、いくつかの態様では、基本培地は、ＩＣＳＲで補完したＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＣＳＲで補完したＡＩＭ Ｖ（商標）、ＩＣＳＲで補完ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ、ＩＣＳＲで補完ＲＰＭＩ、ＩＣＳＲで補完したＴＥＸＭＡＣＳ（商標）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、好適な基本培地には、クリック培地、ＯＰＴＩＭＩＺＥＲ（商標）（ＣＴＳ（商標））培地、ＳＴＥＭＬＩＮＥ（登録商標）Ｔ細胞増殖培地（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＡＩＭ Ｖ（商標）培地（ＣＴＳ（商標））、ＴＥＸＭＡＣＳ（商標）培地（ＭＩＬｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（登録商標）培地（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＰＲＩＭＥ－ＸＶ（登録商標）Ｔ細胞増殖ＸＳＦＭ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、イスコフ培地、及び／またはＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。いくつかの態様では、基本培地はＮａＣｌ非含有ＣＴＳ（商標）ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）を含む。いくつかの態様では、基本培地はＮａＣｌに加えて１以上のナトリウム塩を含む。

【0094】

本明細書で使用されるとき、「サイトカイン」という用語は、細胞間の相互作用及び伝達に対して特定の効果を有する、細胞によって放出される小さな分泌タンパク質を指す。サイトカインの非限定的な例には、インターロイキン（例えば、インターロイキン（ＩＬ）－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－１４、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－２１及びＩＬ－２３）、インターフェロン（ＩＦＮ、例えば、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、及びＩＦＮ－γ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーメンバー、ならびに形質転換増殖因子（ＴＧＦ）ファミリーメンバーが挙げられる。本開示のいくつかの態様は、サイトカインを含む培地中にて本明細書で開示されている免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞、または１以上の操作された免疫細胞を培養する及び／または増殖させる方法を対象とする。いくつかの態様では、サイトカインはインターロイキンである。いくつかの態様では、サイトカインはＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの任意の組み合わせを含む。ＩＬ－２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ６０５６８）は、抗原刺激または分裂促進刺激に応答してＴ細胞によって産生される。ＩＬ－２は、Ｔ細胞増殖及び免疫応答の制御に重要な他の活性を刺激することが知られている。ＩＬ－７（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１３２３２）は、リンパ球前駆細胞の増殖を刺激できる造血成長因子である。ＩＬ－７は、Ｂ細胞成熟のある特定の段階中に増殖において役割を果たすと考えられている。ＩＬ－１５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ４０９３３）は、ＩＬ－２と同様に、Ｔリンパ球の増殖を刺激するサイトカインである。ＩＬ－２１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＨＢＥ４）は、免疫調節活性を有するサイトカインである。ＩＬ－２１は、自然免疫と適応免疫との間の移行を促進し、Ｂ細胞中でＩｇＧ１及びＩｇＧ３の産生を誘導すると考えられている。ＩＬ－２１はまた、ＩＬ－１５との相乗作用でナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖及び成熟にて役割を担う場合があり、ＩＬ－２１は、活性化刺激に応答して成熟Ｂ細胞及びＴ細胞の増殖を調節する場合がある。ＩＬ－１５及びＩＬ－１８との相乗作用では、ＩＬ－１５はＴ細胞及びＮＫ細胞中にてインターフェロンガンマ産生も刺激し、ＩＬ－２１はＴ細胞が介在する免疫応答にて樹状細胞の活性化及び成熟を阻害する場合もある。

【0095】

本明細書で使用されるとき、「形質導入効率」という用語は（ｉ）規定の期間内に細胞内に物理的に導入され得る物質（例えば、外来性ポリヌクレオチド）の量；（ｉｉ）所与の量の物質を細胞内に物理的に導入するのに要する時間の量；（ｉｉｉ）標的物質、例えば、外来性ポリヌクレオチド、すなわち、導入遺伝子が細胞の集団によって取り込まれるレベル（例えば、導入遺伝子を発現する細胞の割合）；または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組み合わせを指す。いくつかの態様では、形質導入効率を増加させることによって、本明細書で提供されている培養方法は、さらに多い量の外来性ヌクレオチド配列が細胞内に導入されることを可能とし、及び／または所与の量の外来性ヌクレオチド配列を導入するのに必要とされる時間の量を減少させ得る。何らかの理論１つに束縛されないで、いくつかの態様では、そのような効果は改変された免疫細胞にてコードされたタンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチド）の発現を高めることができる。

【0096】

本明細書で使用されるとき、「投与すること」は、種々の方法及び送達システムのいずれかを使用して、治療剤または治療剤を含む組成物を対象に物理的に導入することを指す。本明細書に記載されている治療剤（例えば、キメラ結合タンパク質及びｃ－Ｊｕｎポリペプチドを発現するように改変され、本明細書に記載されているように培養された免疫細胞）のさまざまな投与経路には、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊髄または他の非経口投与経路、例えば、注射または注入による投与が挙げられる。

【0097】

「非経口投与」という語句は、本明細書で使用されるとき、経腸投与及び局所投与以外の、通常は注射による投与方法を意味し、これには限定しないで、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、腫瘍内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、気管内、経肺、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、心室内、硝子体内、硬膜外、及び胸骨内の注射及び注入、と同様に生体内エレクトロポレーションが挙げられる。

【0098】

あるいは、本明細書に記載されている治療剤（例えば、キメラ結合タンパク質及び／または腫瘍抗原に結合するＴＣＲを発現するように改変され、本明細書に記載されているように培養された免疫細胞）は、非経口ではない経路、例えば、局所、表皮、または粘膜への投与経路、例えば、鼻腔内、経口、経膣、直腸内、舌下、または局所を介して投与することができる。投与は、例えば、１回、複数回、及び／または１回以上の長期間にわたって実行することもできる。

【0099】

本明細書で使用されるとき、「細胞操作」または「細胞改変」（その誘導体を含む）は、本明細書に開示されている細胞、例えば、免疫細胞の的を絞った改変を指す。いくつかの態様では、細胞操作は、ウイルス遺伝子操作、非ウイルス遺伝子操作、Ｔ細胞機能を改善する１以上の内在性遺伝子の腫瘍特異的標的化（例えば、キメラ結合タンパク質及び／またはＴＣＲ）導入を可能にする受容体の導入、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞の機能を改善する１以上の合成遺伝子（例えば、免疫細胞がｃ－Ｊｕｎの発現の上昇を示すような、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードするポリヌクレオチド）の導入、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0100】

本明細書で使用されるとき、「抗原」という用語は、タンパク質、ペプチド、またはハプテンのような任意の天然または合成の免疫原性物質を指す。本明細書で使用されるとき、「同族抗原」という用語は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）が認識することによって免疫細胞の活性化を誘導する（例えば、サイトカイン産生のようなエフェクター機能を誘導する、及び／または細胞増殖のための細胞内シグナルを始動させる）抗原を指す。いくつかの態様では、抗原は腫瘍抗原を含む。いくつかの態様では、抗原はネオ抗原を含む。

【0101】

「がん」とは、体内の異常細胞の無制御の増殖を特徴とする様々な疾患の広範な群を指す。無秩序な細胞の分裂及び増殖は、隣接組織に浸潤し、リンパ系または血流を通って身体の遠位部に転移することもできる悪性腫瘍の形成をもたらす。「がん」は、本明細書で使用されるとき、原発性がん、転移がん及び再発がんを含む。別途示されない限り、「がん」及び「腫瘍」という用語は相互交換可能に使用することができる。

【0102】

「血液悪性腫瘍」または「血液癌」という用語は、造血組織及びリンパ組織の哺乳類のがん及び腫瘍を指す。血液悪性腫瘍の非限定的な例には、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡｍＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＩＶＩＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫、及び非ホジキンリンパ腫を含む、血液、骨髄、リンパ節、及びリンパ系の組織を冒すものが挙げられる。血液悪性腫瘍は、「液性腫瘍」とも呼ばれる。液性腫瘍癌としては、白血病、骨髄腫、及びリンパ腫に加えて、他の血液悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。

【0103】

「固形腫瘍」は、本明細書で使用される場合、組織の異常な腫瘤を指す。固形腫瘍は、良性であっても、悪性であってもよい。固形腫瘍の非限定例としては、肉腫、癌腫、及びリンパ腫、例えば、肺、乳房、前立腺、結腸、直腸、及び膀胱のがんが挙げられる。固形腫瘍の組織構造は、実質（がん細胞）及びがん細胞が分散し、関連する微小環境を提供する場合がある関連する間質細胞を含む相互依存性組織区画を含む。

【0104】

いくつかの態様では、がんは、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイングファミリー腫瘍、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、喉頭及び下咽頭癌、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部組織の肉腫、基底細胞及び扁平上皮細胞皮膚癌、黒色腫、小腸癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍ならびにがん治療によって引き起こされる二次がんから選択される。いくつかの態様では、がんは、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アバメシー肉腫、脂肪肉腫、脂肪肉腫、肺胞軟部肉腫、エナメル上皮繊維肉腫、ブドウ状肉腫、緑色腫肉腫、絨毛癌、胎児性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、Ｂ細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞の免疫芽球性肉腫、イエンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパー細胞肉腫、血管肉腫、白血球肉腫、悪性間葉腫肉腫、傍骨性肉腫、網状赤血球肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢胞性肉腫、滑膜肉腫、粘液／円形細胞型脂肪肉腫、または毛細血管拡張性肉腫から選択される。いくつかの態様では、がんは、末端黒子型黒色腫、無色素性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディング・パッセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、悪性黒色腫、転移性黒色腫、結節性黒色腫、爪下黒色腫、または表在拡大型黒色腫から選択される。いくつかの態様では、がんは、腺房癌、小葉癌、腺嚢胞癌、腺様嚢胞癌、腺癌、副腎皮質癌、肺胞癌、肺胞細胞癌、基底細胞癌、基底細胞癌、類基底癌、基底扁平上皮癌、気管支肺胞癌、細気管支癌、気管支原性肺癌、大脳様癌、胆管細胞癌、絨毛癌、膠様癌、面皰癌、子宮体部癌、篩状癌、鎧状癌、皮膚癌、円柱上皮癌、円柱細胞癌、管癌、硬性癌、胎児性癌、脳様癌、類表皮癌腫、腺上皮癌、外方発育癌、潰瘍癌、線維癌、膠様癌、膠様癌、巨細胞癌、巨細胞癌、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母組織癌、血様癌、肝細胞癌、ヒュルトレ細胞癌、硝子状癌、副腎様癌、乳児性胎児性癌、上皮内癌、表皮内癌、上皮内癌、クロムペッヘル癌、クルチツキー細胞癌、大細胞癌、レンズ状癌、レンズ状癌、脂肪腫様癌、リンパ上皮癌、髄様癌、髄様癌、黒色癌、軟性癌、粘液性癌、粘液分泌癌、粘液細胞癌、粘表皮癌、粘液癌、粘液性癌、粘液腫様癌、上咽頭癌、燕麦細胞癌、骨化性癌、類骨癌、乳頭癌、門脈周囲癌、前浸潤癌、有棘細胞癌、軟性癌、腎臓の腎細胞癌、予備細胞癌、肉腫様癌、シュナイダー癌、硬癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、バレイショ状癌、球状細胞癌、紡錘細胞癌、海綿様癌、扁平上皮癌、扁平上皮細胞癌、紐様癌、毛細血管拡張癌、毛細血管拡張癌、移行上皮癌、結節癌、結節癌、疣状癌、または絨毛癌から選択される。いくつかの態様では、がんは、白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、乳癌、卵巣癌、肺癌、横紋筋肉腫、原発性血小板増加症、原発性マクログロブリン血症、小細胞肺腫瘍、原発性脳腫瘍、胃癌、結腸癌、悪性膵インスリノーマ、悪性カルチノイド、膀胱癌、前悪性皮膚病変、精巣癌、リンパ腫、甲状腺癌、甲状腺乳頭癌、神経芽細胞腫、神経内分泌癌、食道癌、尿生殖路癌、悪性高カルシウム血症、子宮頸癌、子宮内膜癌、副腎皮質癌、前立腺癌、ミュラー管癌、卵巣癌、腹膜癌、卵管癌、または子宮体部漿液性腺癌から選択される。いくつかの態様では、がんは、転移性黒色腫、非小細胞肺癌、骨髄腫、食道癌、滑膜肉腫、粘液／円形細胞型脂肪肉腫、胃癌、乳癌、肝細胞癌、頭頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。

【0105】

本明細書で使用されるとき、「免疫応答」という用語は、外来性作用物質に対する脊椎動物内の生物学的応答を指し、この応答は、これらの作用物質及びそれらに起因する疾患から生物を保護する。免疫応答は、免疫系の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞または好中性）ならびに任意のこれらの細胞または肝臓によって産生される、侵入する病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がんもしくは他の異常な細胞、または自己免疫もしくは病理学的炎症の場合は正常なヒト細胞もしくは組織に対する選択的標的化、それらとの結合、それらに対する損傷、それらの破壊、及び／または脊椎動物の体内からの排除をもたらす可溶性高分子（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）の作用が関係する。免疫反応としては、例えば、Ｔ細胞、例えば、エフェクターＴ細胞もしくはＴｈ細胞、例えば、ＣＤ４^＋もしくはＣＤ８^＋Ｔ細胞などの活性化もしくは阻害、またはＴｒｅｇ細胞の阻害が挙げられる。本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」という用語は交換可能であり、胸腺によって産生または処理されるあらゆるリンパ球を指す。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＮＫＴ細胞である。

【0106】

本明細書で使用される場合、「抗腫瘍免疫応答」という用語は、腫瘍抗原に対する免疫応答を指す。

【0107】

「対象」には、あらゆるヒトまたは非ヒト動物が含まれる。「非ヒト動物」という用語は、非ヒト霊長動物、ヒツジ、イヌ、ならびにマウス、ラット、及びモルモットなどの齧歯動物といった脊椎動物が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、対象はヒトである。「対象」、「患者」、「個体」及び「宿主」という用語は本明細書では相互交換可能に使用される。本明細書で使用されるとき、「それを必要とする対象」という語句は、例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチド及びキメラ結合タンパク質を発現するように改変され、本明細書で提供されている方法を使用して培養された免疫細胞の投与から、本明細書に記載されているように腫瘍の増殖を制御するという恩恵を受けることになる、哺乳類対象のような対象を含む。

【0108】

「治療有効量」または「治療上有効な投与量」という用語は、所望の生物学的結果、治療結果、及び／または予防結果をもたらす作用物質（例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチド及びキメラ結合タンパク質を発現するように改変され、本明細書に記載されているように培養された免疫細胞）の量を指す。その結果は、疾患の徴候、症状、または原因のうち１以上の減少、改善、緩和、軽減、遅延、及び／または軽減、または生物系の任意の他の所望の変化であることができる。固形腫瘍に関して、有効量は、腫瘍を縮小させる、及び／または腫瘍の成長速度を減少させる（腫瘍成長を抑制するなど）、あるいは他の望ましくない細胞増殖を防止または遅延させるのに十分な量を含む。いくつかの態様では、有効量は、腫瘍発達を遅延させるのに十分な量である。いくつかの態様では、有効量は、腫瘍再発を防止または遅延させるのに十分な量である。有効量は１回以上の投与で投与することができる。

【0109】

有効量の組成物（例えば、本明細書に記載されているように改変され、且つ培養された免疫細胞）は、例えば、（ｉ）がん細胞の数を減らすことができ；（ｉｉ）腫瘍サイズを縮小することができ；（ｉｉｉ）末梢器官へのがん細胞の浸潤をある程度まで抑制し、遅延させ、遅らせてそれを停止することができ；（ｉｖ）阻害することができ（すなわち、腫瘍転移をある程度まで遅らせてそれを停止することができ）、（ｖ）腫瘍増殖を阻害することができ；（ｖｉ）腫瘍の発生及び／または再発を防止もしくは遅延させることができ；及び／または（ｖｉｉ）がんと関連する症状のうち１以上をある程度まで緩和することができる。

【0110】

いくつかの態様では、「治療有効量」は、本明細書に開示されている組成物（例えば、キメラ結合タンパク質及びｃ－Ｊｕｎポリペプチドを発現するように改変され、本明細書に記載されているように培養された免疫細胞）の量であり、これは進行性固形腫瘍のようながんの著しい減少またはがんの進行の緩徐化（退縮）をもたらすことが臨床的に証明されている。疾患退縮を促進する本開示の治療剤（例えば、本明細書に記載されているように改変し、且つ培養した免疫細胞）の能力は、当業者に既知の種々の方法を使用して、例えば、臨床試験中のヒト対象にて、ヒトでの効力を予測する動物モデル系にて、または試験管内アッセイで薬剤の活性をアッセイすることによって評価され得る。

【0111】

治療に関する「有効な」及び「有効性」という用語は、薬理学的有効性及び生理学的安全性の双方を含む。薬理学的有効性は、本明細書に開示されている組成物（例えば、本明細書に記載されているように改変し、且つ培養した免疫細胞）が患者にてがん退縮を促進する能力を指す。生理学的安全性は、本明細書に開示されている組成物（例えば、本明細書に記載されているように改変し、且つ培養した免疫細胞）の投与に起因する毒性、または細胞、臓器、及び／または生物のレベルでの他の有害生理作用（有害作用）のレベルを指す。

【0112】

「キメラ抗原受容体」及び「ＣＡＲ」という用語は、本明細書で使用されるとき、ポリペプチドのセット、通常、最も単純な形態で２つのポリペプチドを指し、これは、免疫エフェクター細胞における場合、標的細胞、通常がん細胞に対する特異性、及び細胞内シグナル生成を細胞に提供する。いくつかの態様では、ＣＡＲは、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び下で定義される刺激分子及び／または共刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では、「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドのセットは、同じポリペプチド鎖にあり、例えば、キメラ融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドのセットは、互いに隣接しておらず、例えば、異なるポリペプチド鎖にある。いくつかの態様では、ポリペプチドのセットには、二量化分子が存在すると、ポリペプチドを互いに結合させ得、例えば、抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに結合させ得る二量化スイッチが含まれる。いくつかの態様では、ＣＡＲの刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体に関連するゼータ鎖（例えば、ＣＤ３ゼータ）である。いくつかの態様では、細胞質シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３－ゼータの一次シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様では、細胞質シグナル伝達ドメインは、以下に定義される少なくとも１つの共刺激分子に由来する１以上の機能性シグナル伝達ドメインをさらに含む。いくつかの態様では、共刺激分子は、本明細書に記載されている共刺激分子、例えば、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、及び／またはＣＤ２８から選択される。

【0113】

いくつかの態様では、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質であって、抗原結合ドメイン及び膜貫通ドメインは、ＣＡＲスペーサーによって連結されている、キメラ融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＡＲスペーサーを介して膜貫通ドメインに連結された抗原結合ドメインならびに共刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＡＲスペーサーを介して膜貫通ドメインに連結された抗原結合ドメインならびに１以上の共刺激分子（複数可）に由来する２つの機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＡＲスペーサーを介して膜貫通ドメインに連結された抗原結合ドメインならびに１以上の共刺激分子（複数可）に由来する少なくとも２つの機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＡＲのアミノ末端（Ｎ末端）における任意のリーダー配列を含む。いくつかの態様では、ＣＡＲはさらに、抗原結合ドメインのＮ末端でリーダー配列を含み、その際、リーダー配列は、細胞プロセシング及び細胞膜へのＣＡＲの局在化中に抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から任意で切断される。

【0114】

キメラ抗原受容体の抗原特異的細胞外ドメインは、抗原、典型的には悪性腫瘍の表面発現抗原を認識し、それと特異的に結合する。抗原特異的細胞外ドメインが抗原と特異的に結合するのは、例えば、そのドメインが、約０．１ｐＭ～約１０μＭ、例えば、約０．１ｐＭ～約１μＭまたは約０．１ｐＭ～約１００ｎＭの親和性定数または相互作用の親和性（ＫＤ）で抗原と結合する場合である。相互作用の親和性を決定する方法は、当該技術分野において既知である。本開示のＣＡＲでの使用に適した抗原特異的細胞外ドメインは、任意の抗原結合ポリペプチドであり得、多種多様のポリペプチドが当該技術分野において既知である。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。他の抗体ベースの認識ドメイン、例えば、ｃＡｂＶＨＨ（ラクダ科抗体可変ドメイン）及びそのヒト化型、ＩｇＮＡＲＶＨ（サメ抗体可変ドメイン）及びそのヒト化型、ｓｄＡｂＶＨ（単一ドメイン抗体可変ドメイン）、ならびに「ラクダ化」抗体可変ドメインなども、本開示のＣＡＲでの使用に適している。いくつかの態様では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）に基づく認識ドメイン、例えば、単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴｖ、すなわち、ＶαＶβを含有する単鎖２ドメインＴＣＲ）も、本開示のキメラ結合タンパク質での使用に好適である。

【0115】

本明細書で使用されるとき、「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」という用語は、α鎖及びβ鎖の２本の異なる膜貫通ポリペプチド鎖で構成されるヘテロ二量体を指し、鎖のそれぞれが、鎖をＴ細胞表面膜内に固定する定常領域、及びＭＨＣによって提示される抗原を認識し、それに結合する可変領域から成る。ＴＣＲ複合体は、２つのヘテロ二量体のＣＤ３γε及びＣＤ３δε、ならびに１つのホモ二量体のＣＤ３ζを形成する６つのポリペプチドと会合し、これらが共にＣＤ３複合体を形成する。Ｔ細胞受容体操作Ｔ細胞療法は、これらの複合体を保持するＴ細胞の改変を利用して、特定の腫瘍細胞によって発現される抗原を特異的に標的とする。本明細書で使用される場合、「ＴＣＲ」という用語には、天然に存在するＴＣＲ及び改変ＴＣＲが含まれる。

【0116】

「ＴＣＲ模倣体」または「ＴＣＲｍ」は、ペプチド及びＭＨＣ－Ｉ分子の双方を含むエピトープを認識する抗体の型を指し、Ｔ細胞上のＴＣＲによるそのような複合体の認識と同様である。

【0117】

「核酸」、「核酸分子」、「ヌクレオチド」、「ヌクレオチド（複数可）配列」、及び「ポリヌクレオチド」という用語は、相互交換可能に使用することができ、一本鎖形態または二本鎖らせんのいずれかでのリボヌクレオシド（アデノシン、グアノシン、ウリジン、またはシチジン；「ＲＮＡ分子」）またはデオキシリボヌクレオシド（デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、デオキシチミジン、またはデオキシシチジン；「ＤＮＡ分子」）のリン酸エステルポリマー形態、あるいはそれらの任意のリン酸エステル類似体、例えば、ホスホロチオエート及びチオエステルを指す。一本鎖核酸配列は、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）または一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を指す。二本鎖ＤＮＡ－ＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＲＮＡ螺旋が可能である。核酸分子及び特にＤＮＡまたはＲＮＡ分子という用語は、分子の一次及び二次構造のみを指し、任意の特定の三次形態に限定されない。よって、この用語には、とりわけ、線状または環状ＤＮＡ分子（例えば、制限断片）、プラスミド、超らせんＤＮＡ及び染色体に見られる二本鎖ＤＮＡが含まれる。特定の二本鎖ＤＮＡ分子の構造を論述する際、配列は、ＤＮＡの非転写鎖（すなわち、ｍＲＮＡと相同な配列を有する鎖）に沿って５’から３’方向の配列のみを付与する通常の規則に従って本明細書で記載され得る。「組換えＤＮＡ分子」は、分子生物学的操作を受けたＤＮＡ分子である。ＤＮＡとしては、限定されるものではないが、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、合成ＤＮＡ、及び半合成ＤＮＡが挙げられる。本開示の「核酸組成物」は、本明細書に記載されている１以上の核酸を含む。本明細書に記載されている通り、いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドは、単一のタンパク質をコードする単一のヌクレオチド配列（例えば、コドン最適化ｃ－Ｊｕｎヌクレオチド配列）（「単シストロン性」）を含む場合がある。いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドは、ポリシストロン性である（すなわち、２以上のシストロンを含む）。いくつかの態様では、ポリシストロン性ポリヌクレオチドのシストロンのそれぞれは、本明細書で開示されているタンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質、キメラ結合タンパク質、またはＥＧＦＲｔ）をコードすることができる。いくつかの態様では、シストロンのそれぞれが互いに独立して翻訳され得る。

【0118】

本明細書で使用されるとき、「ポリペプチド」という用語は、別段の指示がない限り、ペプチド及びタンパク質の双方を包含する。ポリペプチドには、遺伝子産物、天然に存在するポリペプチド、合成ポリペプチド、上述のもののホモログ、オルソログ、パラログ、断片及び他の等価物、変異体、ならびに類似体が挙げられる。ポリペプチドは、単一ポリペプチドであり得、または多分子複合体、例えば、二量体、三量体または四量体であり得る。それらはまた、一本鎖または複数鎖のポリペプチドを含み得る。最も一般的に、ジスルフィド結合は、多鎖ポリペプチドに見られる。ポリペプチドという用語はまた、１以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学的アナログであるアミノ酸ポリマーに適用され得る。いくつかの態様では、「ペプチド」は、５０アミノ酸長以下、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長であることができる。

【0119】

本明細書で使用されるとき、ポリペプチド（例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチド）の「断片」という用語は、Ｎ及び／またはＣ末端で欠失した天然に存在する配列よりも短いポリペプチドのアミノ酸配列、または天然に存在するポリペプチドと比べて欠失したポリペプチドの任意の部分を指す。よって、断片は、Ｎ及び／またはＣ末端のみが欠失したことを必ずしも必要とするわけではない。天然に存在する配列に関して内部アミノ酸が欠失したポリペプチドも断片とみなされる。

【0120】

本明細書で使用されるとき、「機能性断片」または「機能性部分」という用語はポリペプチド機能を保持するポリペプチド断片を指す。したがって、いくつかの態様では、Ｉｇヒンジの機能性断片は、抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が標的エピトープ（例えば、腫瘍抗原）と有効に相互作用し得るように、標的エピトープ（例えば、腫瘍抗原）から少し離れてキメラ結合タンパク質にて抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を配置する能力を保持する。同様に、いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎの機能性断片は免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）で発現された場合、例えば、対応する完全長ｃ－Ｊｕｎを発現する参照免疫細胞の活性の少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％を有する免疫細胞をもたらす断片である。そのような活性の非限定的な例はさらに、本開示の他の箇所で説明されている。

【0121】

「組換え」ポリペプチドまたはタンパク質は、組換えＤＮＡ技術を介して生成されるポリペプチドまたはタンパク質を指す。操作された宿主細胞にて発現した組換えで生成されたポリペプチド及びタンパク質は、任意の好適な技術によって分離された、分画された、または部分的もしくは実質的に精製されたネイティブまたは組換えのポリペプチドと同様に、本開示の目的のために単離されたとみなされる。本明細書に開示されているポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド（例えば、キメラ結合タンパク質、及び／またはｃ－Ｊｕｎ）は当該技術分野で知られている方法を使用して組換えで生成することができる。いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド（例えば、キメラ結合タンパク質及び／またはｃ－Ｊｕｎ）は、本明細書に記載されているポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドまたはベクターによる形質移入または改変の後に、細胞、例えば、Ｔ細胞によって生成される。

【0122】

本明細書で使用されるとき、「コード領域」、「コード配列」または「翻訳可能配列」とは、アミノ酸に翻訳可能なコドンから成るポリヌクレオチドの部分である。「終止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡ、またはＴＡＡ）は通常はアミノ酸に翻訳されないがコード領域の一部とみなすことができる。ただし、すべてのフランキング配列、例えば、プロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロンなどはコード領域の一部ではない。コード領域の境界は、得られるポリペプチドのアミノ末端をコードする５’末端の開始コドンと、得られるポリペプチドのカルボキシ末端をコードする３’末端の翻訳終止コドンとによって一般的に決定される。

【0123】

「相補的」及び「相補性」という用語は、ワトソン・クリック型塩基対形成則により互いに関連する２つ以上のオリゴマー（すなわち、それぞれが核酸塩基配列を含む）、またはオリゴマーと標的遺伝子との間を指す。例えば、核酸塩基配列「Ｔ－Ｇ－Ａ（５’から３’）」は、核酸塩基配列「Ａ－Ｃ－Ｔ（３’から５’）」と相補的である。相補性は「部分的」であってよく、その場合、所与の核酸塩基配列の核酸塩基のすべてより少ないものが塩基対形成則に従って他の核酸塩基配列と一致している。例えば、いくつかの態様では、所与の核酸塩基配列と他の核酸塩基配列との間の相補性は約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％であることができる。したがって、いくつかの態様では、「相補性」という用語は、標的核酸配列（例えば、ｍｉＲ－４８５核酸配列）に対する少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の一致または相補性を指す。または、所与の核酸塩基配列と他の核酸塩基配列との間に「完全な」あるいは「完璧な」（１００％の）相補性がある場合もある。いくつかの態様では、核酸塩基配列間の相補性の程度は、配列間のハイブリッド形成の効率及び強度に顕著な影響を与える。

【0124】

本明細書で使用されるとき、「発現」という用語は、ポリヌクレオチドが遺伝子産物、例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドを生成するプロセスを指す。発現には限定しないで、ポリヌクレオチドのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）への転写、及びｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳が含まれる。発現により、「遺伝子産物」が産生される。本明細書で使用される場合、遺伝子産物は、核酸、例えば、遺伝子の転写によって産生されるメッセンジャーＲＮＡ、または転写産物から翻訳されるポリペプチドであり得る。本明細書に記載されている遺伝子産物にはさらに、例えば、ポリアデニル化もしくはスプライシングのような転写後修飾を有する核酸、または、例えば、メチル化、グリコシル化、脂質の付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、もしくはタンパク質分解切断のような翻訳後修飾を有するポリペプチドが含まれる。

【0125】

本明細書で使用される場合、「同一性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、ポリヌクレオチド分子間の全体的なモノマー保存を指す。いかなる追加の修飾語もない「同一である」という用語、例えば、「ポリヌクレオチドＡはポリヌクレオチドＢと同一である」は、ポリヌクレオチド配列同士が１００％同一（１００％の配列同一性）であることを意味する。例えば、「７０％同一である」と２つの配列を表現することは、例えば、「７０％配列同一性」を有するとそれらを表現することに等しい。「参照ヌクレオチド配列」は、本開示のヌクレオチド配列との比較として本明細書中で使用される場合、配列が最適化されていないことを除いて、本開示のヌクレオチド配列と本質的に同一のポリヌクレオチド配列を指す。例えば、いくつかの態様では、参照ヌクレオチド配列は、野生型ＪＵＮの核酸配列を含む。

【0126】

２つのポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列の同一性パーセントの計算は、例えば、最適な比較目的のために２つの配列を整列させることによって実施することができる（例えば、最適な配列比較のために第１及び第２のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の一方または双方にギャップを導入することができ、同一でない配列は比較目的のために無視することができる）。いくつかの態様では、比較目的のために整列させた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。次いで、対応するアミノ酸位のアミノ酸、またはポリヌクレオチドの場合は塩基が比較される。

【0127】

第１の配列におけるある位置が第２の配列における対応する位置と同じアミノ酸またはヌクレオチドにより占められる場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一率（％）は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮した、配列により共有される同一の位置の数の関数である。配列の比較及び２つの配列間の同一率（％）の決定は、数学アルゴリズムを使用して達成され得る。

【0128】

異なる配列同士（例えば、ポリヌクレオチド配列）をアラインするために使用することができる適当なソフトウェアプログラムはさまざまなソースから入手可能である。配列同一率（％）を決定するための適当なプログラムの１つに、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なＢＬＡＳＴパッケージプログラムの一部であるｂｌ２ｓｅｑがある。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して、２つの配列間の比較を行う。ＢＬＡＳＴＮは核酸配列を比較するために使用されるが、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列を比較するために使用される。他の好適なプログラムは、例えば、ＥＭＢＯＳＳバイオインフォマティクスプログラム集の一部であり、またｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａのＥｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）から利用可能である、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒである。

【0129】

配列比較は、当該技術分野において公知の方法、例えば、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ（ＣｌｕｓｔａｌＷ、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ、またはＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａ）、ＭＵＳＣＬＥなどを使用して実施され得る。

【0130】

ポリヌクレオチドまたはポリペプチド参照配列と整列する単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域は、それぞれ、それら自体の配列同一率（％）を有することができる。配列同一率（％）は、１０分の１の位に四捨五入される点に留意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は８０．１に切り捨てられ、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は８０．２に切り上げられる。また、長さの値は常に整数である点に留意のこと。

【0131】

いくつかの態様では、同一性比率（％ＩＤ）または第１のアミノ酸配列（または核酸配列）の第２のアミノ酸配列（または核酸配列）に対する同一性比率（％ＩＤ）は、％ＩＤ＝１００×（Ｙ／Ｚ）として算出され、式中、Ｙは、第１及び第２の配列の配列比較（目視検査または特定の配列の配列比較プログラムによって整列させる）にて完全な一致と評価されたアミノ酸残基（または核酸塩基）の数であり、Ｚは第２の配列における残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列を超える場合、第１の配列の第２の配列に対する同一性パーセントは、第２の配列の第１の配列に対する同一性パーセントより高くなる。

【0132】

当業者であれば、配列同一率（％）を計算するための配列アラインメントの生成が、一次配列データによってのみ行われるバイナリー配列間比較に限定されない点は理解されよう。配列比較は、配列データを異種の供給源由来のデータ、例えば、構造データ（例えば、タンパク質結晶構造）、機能データ（例えば、変異の位置）、または系統学的データと統合することにより生成され得ることも理解されよう。異種のデータを統合して多重配列比較を生成する好適なプログラムはＴ－Ｃｏｆｆｅｅであり、ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで利用可能であり、代替的には例えば、ＥＢＩから利用可能である。配列同一性パーセントを計算するために使用される最終的な配列比較は、自動または手動のいずれかで精選され得ることも理解されるであろう。

【0133】

本明細書で使用されるとき、「単離された」、「精製された」、「抽出された」という用語、及びそれらの文法的変形は相互交換可能に使用され、１以上の精製プロセスを受けた本開示の所望の組成物の調製状態を指す。いくつかの態様では、本明細書で使用されるとき、単離または精製は、本開示の組成物を取り出す、（例えば、画分を）部分的に取り出すプロセスである。

【0134】

いくつかの態様では、単離された組成物は、検出可能な望ましくない活性を有さない、または代わりに、望ましくない活性のレベルもしくは量が許容可能なレベルまたは量以下である。いくつかの態様では、単離された組成物は、本開示の所望の組成物の量及び／または濃度を許容可能な量及び／または濃度及び／または活性以上で有する。いくつかの態様では、単離された組成物は組成物が得られる出発物質と比べて濃縮されている。この濃縮は、出発物質と比べて少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９％、少なくとも約９９．９９％、少なくとも約９９．９９９％、少なくとも約９９．９９９９％、または９９．９９９９％超であり得る。

【0135】

いくつかの態様では、単離された調製物は、残留する生物学的産物を実質的に含まない。いくつかの態様では、単離された調製物は、任意の混入している生物学的物質を１００％、少なくとも約９９％、少なくとも約９８％、少なくとも約９７％、少なくとも約９６％、少なくとも約９５％、少なくとも約９４％、少なくとも約９３％、少なくとも約９２％、少なくとも約９１％、または少なくとも約９０％含まない。残留する生物学的産物は、非生物物質（化学物質を含む）または不要な核酸、タンパク質、脂質、もしくは代謝産物を含み得る。

【0136】

本明細書で使用する場合、「連結された」という用語は、共有結合または非共有結合によりそれぞれ第２のアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列に結合された、第１のアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列を指す。第１のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列は、第２のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列に直接的に結合もしくは並列され得るか、または代替的に介在配列が第１の配列から第２の配列までに共有結合により加わり得る。「連結された」という用語は、第１のポリヌクレオチド配列の第２のポリヌクレオチド配列への５’末端または３’末端での融合を意味するだけでなく、第２のポリヌクレオチド配列（または第１のポリヌクレオチド配列）における任意の２つのヌクレオチドへの第１のポリヌクレオチド配列（またはそれぞれ第２のポリヌクレオチド配列）全体の挿入も含む。第１のポリヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合またはリンカーにより第２のポリヌクレオチド配列に連結され得る。リンカーは、例えば、ポリヌクレオチドであることができる。

【0137】

「投与すること」（及びその文法的な変形）は、当業者に既知の種々の方法及び送達系のいずれかを使用して治療剤（例えば、本明細書に記載されている操作された細胞）を対象に物理的に導入することを指す。投与の例示的な経路には、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ系内、病変内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外、胸骨内、経口、直腸内、局所、表皮、粘膜、鼻腔内、膣内、直腸内、舌下の投与、及びそれらの組み合わせが挙げられる。投与は、例えば、１回、複数回、及び／または１回以上の長期間にわたって実行することもできる。

【0138】

対象の「治療」または「療法」（その文法的な派生物を含む）は、疾患に関連する症状、合併症、状態、または生化学的兆候の発症、進行、発達、重症度または再発を元に戻す、軽減する、改善する、抑制する、緩徐化する、または予防する目的で、対象に対して行われる任意のタイプの介入もしくはプロセス、または対象に対する活性剤の投与を指す。いくつかの態様では、この用語は対象にて抗原に対する免疫反応を誘導することを指す。

【0139】

本明細書で使用されるとき、「予防する」、「予防すること」という用語、及びそれらの変形は、疾患、障害、及び／または状態の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の１以上の症状、特徴、または臨床徴候の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の１以上の症状、特徴、または徴候の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の進行を部分的または完全に遅延させること；及び／または疾患、障害、及び／または状態に関連する病状を発生するリスクを減らすことを指す。いくつかの態様では、転帰の予防は予防的治療を介して達成される。

【0140】

本明細書で使用されるとき、「治療有効量」という用語は、それを必要とする対象に対して所望の治療効果、薬理学的な及び／または生理的な効果を生じるのに十分である、本明細書に開示されている組成物（例えば、本明細書に記載されている改変された免疫細胞）を含む試薬または医薬化合物の量である。

【0141】

治療有効量は予防が治療法と見なされるとき、「予防有効量」であることができる。本明細書で使用される場合、「予防」は、疾患または病態の開始を防止するために、または疾患または病態に関連する症状を防止または遅延させるために使用される処置または作用の過程を指す。本明細書で使用されるとき、「予防法」は、健康を維持し、疾患または状態の発症を予防するために、または疾患もしくは状態に関連する症状を予防もしくは遅延させるために取られる手段を指す。

【0142】

本明細書で使用される場合、「プロモーター」という用語は、コード配列または機能的ＲＮＡの発現を制御することができるＤＮＡ配列を指す。一般的に、コード配列はプロモーター配列の３’側に位置する。プロモーターは、その全体がネイティブな遺伝子に由来することもあれば、自然界に見られる異なるプロモーターに由来する異なる要素から構成されることもあり、または合成ＤＮＡセグメントを含むこともある。異なるプロモーターは、異なる組織または細胞タイプにおいて、または発生の異なる段階において、または異なる環境的もしくは生理学的条件に応じて、遺伝子の発現を誘導することができる点は、当業者には理解されよう。ほとんどの細胞タイプでほとんどの時間に遺伝子を発現させるプロモーターは一般的に「構成的プロモーター」と呼ばれる。特定の細胞タイプにおいて遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「細胞特異的プロモーター」または「組織特異的プロモーター」と呼ばれる。発生または細胞分化の特定の段階で遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「発生特異的プロモーター」または「細胞分化特異的プロモーター」と呼ばれる。プロモーターを誘導する薬剤、生物学的分子、化学物質、リガンド、光などによる細胞の曝露または処理後に誘導されて遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「誘導性プロモーター」または「調節可能なプロモーター」と呼ばれる。ほとんどの場合で調節配列の正確な境界は完全には定義されていないので、異なる長さのＤＮＡ断片が同じプロモーター活性を有することができることがさらに認識される。

【0143】

本明細書で使用されるとき、「ｕｇ」及び「ｕＭ」という用語は、それぞれ「μｇ」及び「μＭ」と相互交換可能に使用される。

【0144】

本開示の種々の態様が以下の小節にてさらに詳しく記載される。

【0145】

ＩＩ．本開示の方法
本開示のいくつかの態様は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）にヒト免疫細胞を接触させることを含む、免疫療法のためにヒト免疫細胞の集団を調製する方法を提供する。本開示のいくつかの態様は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）にヒト免疫細胞を接触させることを含む、免疫療法のためにヒト免疫細胞の集団を活性化する方法を提供する。本開示のいくつかの態様は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）にヒト免疫細胞を接触させることを含む、生体外または試験管内の培養の間に活性化されたヒト免疫細胞の収量を高める方法を提供する。本開示のいくつかの態様は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）にヒト免疫細胞を接触させることを含む、免疫療法のために生体外または試験管内の培養の間に活性化されたヒト免疫細胞の収量を高めながら、活性化されたヒト免疫細胞の幹細胞性を高める方法を提供する。本開示のいくつかの態様は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）に免疫細胞を接触させることを含む、生体外または試験管内で活性化された幹細胞様免疫細胞の集団を増殖させる方法を提供する。

【0146】

いくつかの態様では、本開示は、少なくとも約５ｍＭの（例えば、５ｍＭよりも高い）濃度でカリウムイオンを含む代謝再プログラム可培地に細胞を播くことを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞を培養する方法を対象とし、その際、培地は高張性ではなく、例えば、低張性または等張性である。本開示のいくつかの態様は、４０ｍＭよりも高い、例えば、約５０ｍＭ～８０ｍＭの濃度でカリウムを含む培地に細胞を播くことを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞を培養する方法を対象とする。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、制御性Ｔ（Ｔ_ｒｅｇ）細胞、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0147】

本開示のいくつかの態様は、４０ｍＭ～８０ｍＭの間の濃度でカリウムイオンを、及び３０ｍＭ～１００ｍＭの間の濃度でＮａＣｌを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）に免疫細胞を接触させることを含む、免疫細胞の幹細胞性を高める一方で生体外または試験管内の培養の間に免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の収量を高める方法を対象とし、その際、カリウムイオンとＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。本開示のいくつかの態様は、４０ｍＭ～８０ｍＭの間の濃度でカリウムイオンを、及び３０ｍＭ～１００ｍＭの間の濃度でＮａＣｌを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）に免疫細胞を接触させることを含む、免疫療法のために免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の集団を調製する方法を対象とし、その際、カリウムイオンとＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。本開示のいくつかの態様は、４０ｍＭ～８０ｍＭの間の濃度でカリウムイオンを、及び３０ｍＭ～１００ｍＭの間の濃度でＮａＣｌを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）に免疫細胞を接触させることを含む、生体外または試験管内の培養の間に免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の幹細胞性を高める方法を対象とし、その際、カリウムイオンとＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。いくつかの態様では、免疫細胞はＴ細胞である。

【0148】

いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、培地は等張性である。特定の態様では、培地はさらにインターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、培地はＩＬ－２、ＩＬ－７及びＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地はＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地はさらに、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、グルコース、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0149】

ＩＩ．Ａ．代謝再プログラム化培地
本開示のいくつかの態様は、培養条件（例えば、培地）にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）に免疫細胞を接触させることを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養する方法を対象としており、その際、培養条件（例えば、特定のイオン濃度、培地の張度、サイトカイン、及び／またはそれらの任意の組み合わせ）は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の分化を低減する、制限する、または防止することができ、それによって細胞療法、例えば、養子細胞療法におけるそれらの使用に影響を与える、または改善することができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されている代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）にて免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞をＰＣＳに接触させ、培養する。いくつかの態様では、ＭＲＭにてＰＣＳに接触させ、培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有し、ＰＣＳを含まない培地にて培養された細胞と比べてさらに高い比率の幹細胞様細胞を有する。いくつかの態様では、ＭＲＭにてＰＣＳに接触させ、培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地にて培養された細胞と比べてさらに高い比率のエフェクター様細胞を有する。いくつかの態様では、ＭＲＭにてＰＣＳに接触させ、培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地にて培養された細胞と比べてさらに高い比率の幹細胞様細胞及びエフェクター様細胞の双方を有する。いくつかの態様では、ＭＲＭにてＰＣＳに接触させ、培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地にて培養された細胞と比較し比べてさらに高い増殖能を有する。

【0150】

本開示のいくつかの態様は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地（例えば、本明細書に開示されている代謝再プログラム化培地）にて免疫細胞をＰＣＳに接触させることを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の集団を調製する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地（例えば、本明細書に開示されている代謝再プログラム化培地）にてＴ細胞をＰＣＳに接触させることを含む、Ｔ細胞の集団を調製する方法を対象とする。いくつかの態様では、本開示は、５ｍＭよりも高い（例えば、４０ｍＭよりも高い、例えば、５５ｍＭ～７０ｍＭの間）の濃度でカリウムイオンを含む培地にて免疫細胞をＰＣＳに接触させることを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を調製する方法を提供し、その際、方法は培養細胞の幹細胞様表現型（例えば、最小の分化）を維持することができる。いくつかの態様では、本開示は、５ｍＭよりも高い（例えば、４０ｍＭよりも高い、例えば、５５ｍＭ～７０ｍＭの間）の濃度でカリウムイオンを含む培地にてＴ細胞をＰＣＳに接触させることを含む、Ｔ細胞を調製する方法を提供し、その際、方法は培養されたＴ細胞の幹細胞様表現型（例えば、最小の分化）を維持することができる。いくつかの態様では、培養細胞は、さらに低いカリウム濃度を有する培地にて増殖させた細胞よりも多い幹細胞様表現型を有する（例えば、低分化である）。いくつかの態様では、培地はさらに、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、培地はさらに、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）、カルシウムイオン、グルコース、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0151】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法を使用して培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の集団は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地にて培養された細胞の集団と比べて幹細胞様細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法を使用して培養されたＴ細胞の集団は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地にて培養されたＴ細胞の集団と比べて幹細胞様Ｔ細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、免疫細胞の出発集団（すなわち、培養前）と比べて幹細胞様細胞に特徴的なマーカーの発現増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、Ｔ細胞の出発集団（すなわち、培養前）と比べて幹細胞様細胞に特徴的なマーカーの発現増加を示す。いくつかの態様では、免疫細胞の出発集団は、対象から得られる免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）を含む。いくつかの態様では、免疫細胞の出発集団はヒト対象から得られたＴ細胞を含む。いくつかの態様では、免疫Ｔ細胞の出発集団は、Ｔ_Ｎ細胞、Ｔ_ＳＣＭ細胞、Ｔ_ＣＭ細胞、Ｔ_ＥＭ細胞、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、免疫細胞の出発集団は、本明細書に記載されているリガンド結合タンパク質をコードする構築物による形質移入／改変の前のＴ細胞を含む。

【0152】

高い細胞多能性は、当該技術分野にて既知の任意の方法を使用して測定することができる。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性は抗体染色に続いてゲートをかけたフローサイトメトリーによって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性はオートファジーフラックスによって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性はグルコース取込みによって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性は脂肪酸取込みによって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性はミトコンドリア量によって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性はＲＮＡ定量化／発現分析（例えば、マイクロアレイ、ｑＰＣＲ（ｔａｑｍａｎ）、ＲＮＡ－Ｓｅｑ、単一細胞ＲＮＡ－Ｓｅｑ、またはそれらの任意の組み合わせ）によって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性は、代謝アッセイ（例えば、Ｓｅａｈｏｒｓｅ代謝アッセイ、細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）の分析、酸素消費速度（ＯＣＲ）の分析、予備呼吸能の分析、及び／またはミトコンドリア膜電位の分析）に関連する転写物によって測定される。いくつかの態様では、幹細胞性は、生体内または試験管内の機能アッセイ（例えば、細胞持続性、抗腫瘍能、抗腫瘍クリアランス、ウイルスクリアランス、多能性、サイトカイン放出、細胞殺傷、またはそれらの任意の組み合わせをアッセイすること）のうち１以上を使用して測定される。

【0153】

いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の分化状態は、低分化細胞に特有のマーカーを発現する細胞数の増加を特徴とする。いくつかの態様では、Ｔ細胞の分化状態は、低分化Ｔ細胞に特有のマーカーを発現する細胞数の増加を特徴とする。いくつかの態様では、幹細胞様細胞の数の増加は、Ｔ_Ｎ細胞及び／またはＴ_ＳＣＭ細胞に特有のマーカーを発現するＴ細胞の数の増加を特徴とする。いくつかの態様では、幹細胞様Ｔ細胞の数の増加は、Ｔ_ＳＣＭ細胞に特有のマーカーを発現する細胞の数の増加を特徴とする。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ４５ＲＡを発現する細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＣＲ７を発現する細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ６２Ｌを発現する細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ２８を発現する細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ９５を発現する細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞はＣＤ４５ＲＯ^低である。いくつかの態様では、細胞はＣＤ４５ＲＯを発現しない。いくつかの態様では、細胞集団はＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、及びＣＤ６２Ｌ^＋である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞集団はＣＤ９５^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、及びＣＤ６２Ｌ^＋である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞集団はＴＣＦ７を発現する細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ９５^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ３^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ３^＋、ＣＤ９５^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋である細胞数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞はＣＤ２７を発現する。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ２７^＋、ＣＤ３^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ２７^＋、ＣＤ３^＋、ＣＤ９５^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ３９^－及びＣＤ６９^－である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＴＣＦ７^＋及びＣＤ３９^－である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞集団はＴ_ＳＣＭ細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞集団はＴ_Ｎ細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞集団はＴ_ＳＣＭ細胞及びＴ_Ｎ細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞集団は幹細胞様Ｔ細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ４＋細胞であり、いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ８＋細胞である。

【0154】

いくつかの態様では、培養物中の幹細胞様細胞の数は、ＭＲＭでの培養前の幹細胞様細胞の数と比べて、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％増加する。いくつかの態様では、培養物中の幹細胞様細胞の数は、ＭＲＭでの培養前の幹細胞様細胞の数と比べて、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、または少なくとも約２０倍増加する。

【0155】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、幹細胞様Ｔ細胞は、培養物におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の総数の少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、または少なくとも約１５％を構成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、幹細胞様Ｔ細胞は、培養物におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の総数の少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、または少なくとも約１５％を構成する。

【0156】

いくつかの態様では、いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、幹細胞様Ｔ細胞は、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約７０％を構成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、幹細胞様Ｔ細胞は、培養物におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％を構成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、幹細胞様Ｔ細胞は、培養物におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％を構成する。

【0157】

いくつかの態様では、いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約４０％は、ＣＤ３９^－／ＣＤ６９^－Ｔ細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％は、ＣＤ３９^－／ＣＤ６９^－Ｔ細胞である。

【0158】

いくつかの態様では、いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約７０％は、ＣＤ３９^－／ＴＣＦ７^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％は、ＣＤ３９^－／ＴＣＦ７^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ４^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ８^＋Ｔ細胞である。

【0159】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された本開示の免疫細胞、例えば、操作された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）は高い形質導入効率を示す。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された操作されたＴ細胞は高い形質導入効率を示す。いくつかの態様では、形質導入後、細胞の高い割合が、例えば、リガンド結合タンパク質をコードする標的導入遺伝子を発現し、その際、従来の方法を使用して（例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地にて）同様に形質導入して培養した細胞と比べて、当該細胞は本明細書に開示されている方法に従って培養されている。特定の態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞の高い割合が、従来の方法（例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地にて）を使用して培養された同様に形質導入した細胞と比べて、細胞のレンチウイルス形質導入後、リガンド結合タンパク質を発現する。いくつかの態様では、形質導入効率は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地で培養された同様に形質導入された細胞と比べて少なくとも約１．５倍上昇する。いくつかの態様では、形質導入効率は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地で培養された同様に形質導入された細胞と比べて少なくとも約２倍上昇する。

【0160】

いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、本明細書に開示されている方法に従って培養される前に形質導入される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、本明細書に開示されている方法に従って培養した後に形質導入される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は，本明細書に開示されている方法に従って、例えば、形質導入前、形質導入中、及び形質導入後に、少なくとも５ｍＭのカリウムイオンを含む培地にてＡＰＣ－ＭＳに免疫細胞を接触させることによって培養される。

【0161】

特定の態様では、免疫細胞はウイルスベクターを使用して形質導入される。いくつかの態様では、ベクターは、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びエプスタイン・バーウイルスベクターを含む。いくつかの態様では、ウイルスベクターはレトロウイルスを含む。いくつかの態様では、ウイルスベクターはレンチウイルスを含む。いくつかの態様では、ウイルスベクターはＡＡＶを含む。

【0162】

いくつかの態様では、免疫細胞は非ウイルス的方法を使用して形質導入される。いくつかの態様では、非ウイルス的方法としてはトランスポゾンの使用が挙げられる。いくつかの態様では、非ウイルス的送達方法の使用は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の再プログラム化、及び対象への細胞の直接的注入を可能にする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム及びゲノム編集代替手段、例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、及びメガヌクレアーゼ（ＭＮ）を使用することによって標的細胞（例えば、Ｔ細胞）または宿主細胞（例えば、コードされるタンパク質の組換え発現のための細胞）のゲノムに挿入され得る。

【0163】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養した、リガンド結合タンパク質を任意で発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の養子移入時に、形質移入されたＴ細胞は、例えば、５ｍＭ未満のＫ＋を含有する培地にて、従来の方法を使用して培養したＴ細胞と比べて、細胞疲弊の減少を示す。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養した、リガンド結合タンパク質を任意に発現するＴ細胞の養子移入時に、移入されたＴ細胞は、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地にて、従来の方法を使用して培養したＴ細胞と比べて細胞疲弊の減少を示す。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞の養子移入の際に、移入された細胞は、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地中にて従来の方法を使用して培養した細胞と比べて、生体内でさらに長い期間存続する。いくつかの態様では、移入された細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地にて従来の方法を使用して培養した細胞と比べてさらに高い生体内有効性、例えば、腫瘍殺傷活性を有する。いくつかの態様では、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地にて従来の方法を使用して培養した細胞と比べて、対象にて応答、例えば、腫瘍体積の低下を引き出すのに必要とされる、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞の用量は低い。

【0164】

いくつかの態様では、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）は本明細書に開示されている方法に従って、例えば、対象から単離後直ちに少なくとも５ｍＭのカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞の増殖中に本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞の操作中に、例えば、導入遺伝子、例えば、リガンド結合タンパク質をコードする構築物での形質導入中に本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞の操作後に、例えば、導入遺伝子、例えば、リガンド結合タンパク質をコードする構築物での形質導入後に本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、増殖及び操作を通して本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、ウイルス遺伝子操作を通して本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、非ウイルス遺伝子操作の全体を通して本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、腫瘍特異的標的化（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲまたはＴＣＲ模倣体）を可能とするための免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）へのリガンド結合タンパク質の導入中に本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、Ｔ細胞機能を改善する１以上の内在性遺伝子の導入を通して本明細書に開示されている方法に従って培養されいくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、Ｔ細胞機能を改善する１以上の合成遺伝子の導入を通して本明細書に開示されている方法に従って培養される。

【0165】

いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は本明細書に開示されている方法に従って、例えば、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞が対象から単離された時から、成長、増殖、操作を経て、養子細胞療法を必要とする対象への投与まで、例えば、少なくとも５ｍＭのカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって培養される。いくつかの態様では、Ｔ細胞は本明細書に開示されている方法に従って、例えば、生体外培養の全体にわたって、例えば、Ｔ細胞が対象から単離された時から、成長、増殖、操作を経て、養子細胞療法を必要とする対象への投与まで少なくとも５ｍＭのカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は本明細書に開示されている方法に従って、例えば、増殖の期間にわたって少なくとも５ｍＭのカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、生存免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の総数が少なくとも約１０４、少なくとも約５×１０^４、少なくとも約１０^５、少なくとも約５×１０^５、少なくとも約１０^６、または少なくとも約５×１０^６、少なくとも約１×１０^７、少なくとも約５×１０^７、少なくとも約１×１０^８、少なくとも約５×１０^８、少なくとも約１×１０^９、少なくとも約５×１０^９、少なくとも約１×１０^１０、少なくとも約５×１０^１０、少なくとも約１×１０^１１、少なくとも約５×１０^１１、少なくとも約１×１０^１２、または少なくとも約５×１０^１２の総細胞となるまで本明細書に開示されている方法に従って、例えば、少なくとも５ｍＭのカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって培養される。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、生存Ｔ細胞の総数が少なくとも約１０^４、少なくとも約５×１０^４、少なくとも約１０^５、少なくとも約５×１０^５、少なくとも約１０^６、または少なくとも約５×１０^６、少なくとも約１×１０^７、少なくとも約５×１０^７、少なくとも約１×１０^８、少なくとも約５×１０^８、少なくとも約１×１０^９、少なくとも約５×１０^９、少なくとも約１×１０^１０、少なくとも約５×１０^１０、少なくとも約１×１０^１１、少なくとも約５×１０^１１、少なくとも約１×１０^１２、または少なくとも約５×１０^１２の総Ｔ細胞となるまで本明細書に開示されている方法に従って培養される。

【0166】

いくつかの態様では、培地は細胞増殖剤をさらに含む。本明細書で使用されるとき、「細胞増殖剤」は、培養された細胞、例えば、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の試験管内及び／または生体外の成長及び増殖を促進する薬剤、例えば、小分子、ポリペプチド、またはそれらの任意の組み合わせを指す。いくつかの態様では、細胞増殖剤はＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。いくつかの態様では、培地はＡＫＴ阻害剤をさらに含む。いくつかの態様では、培地はＰＩ３Ｋ阻害剤及びＡＫＴ阻害剤をさらに含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤はＬＹ２９４００２を含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤はＩＣ８７１１４を含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤はイデラリシブを含む（例えば、Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖ．２（３）：２１０－２３（２０１８）を参照のこと）。いくつかの態様では、培地はＧＳＫ３Ｂ阻害剤をさらに含む。いくつかの態様では、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤はＴＷＳ１１９を含む。いくつかの態様では、培地はＡＣＬＹ阻害剤をさらに含む。いくつかの態様では、ＡＣＬＹ阻害剤はヒドロキシクエン酸カリウム三塩基性一水和物を含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤はクエン酸ヒドロキシルを含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤はピクチリシブを含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤はＣＡＬ－１０１を含む。いくつかの態様では、ＡＫＴ阻害剤はＭＫ２２０６、Ａ４４３６５４、またはＡＫＴｉ－ＶＩＩＩ（ＣＡＳ ６１２８４７－０９－３）を含む。いくつかの態様では、細胞増殖剤はＰＣＳに結び付けられる、または関連付けられる。

【0167】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はミトコンドリア燃料を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はＯ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラミング培地は、少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約０．５ｍＭ、少なくとも約１．０ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、または少なくとも約１０ｍＭのＯ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１．０ｍＭのＯ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む。いくつかの態様では、ミトコンドリア燃料はＰＣＳに結び付けられる、または関連付けられる。

【0168】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はさらに、（ｉ）１以上の細胞増殖剤、（ｉｉ）ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）、（ｉｉｉ）１以上の糖類、（ｉｖ）カルシウムイオン、及び（ｖ）１以上のサイトカインのうちの１以上を含む。

【0169】

ＩＩ．Ａ．１．カリウム
本開示のいくつかの態様は、対照培地と比べて漸増濃度のカリウムイオン（例えば、約５ｍＭ超、約４０ｍＭ超、約４５ｍＭ超、約５０ｍＭ超、約５５ｍＭ超、約６０ｍＭ超、約６５ｍＭ超、または約７０ｍＭ超）を含む培地、すなわち、本明細書に開示されている代謝再プログラム化培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養する方法を対象とする。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約４０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約４０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約４０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約４０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４５ｍＭ～少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４５ｍＭ～少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４５ｍＭ～少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４５ｍＭ～少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４５ｍＭ～少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４５ｍＭ～少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４５ｍＭ～少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、または少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオンを含む。

【0170】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、または少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約４０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオンを含む。

【0171】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は漸増濃度のカリウムイオン、例えば、少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約４０ｍＭ～約８０ｍＭの間の濃度でカリウムイオン及び約３０ｍＭ～約１００ｍＭの間の濃度でＮａＣｌを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は約１１０～約１４０ｍＭの間である。

【0172】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地中のカリウムイオンの濃度は、約５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地中のカリウムイオンの濃度は、約５ｍＭ～約１００ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地中のカリウムイオンの濃度は、約５ｍＭ～約９０ｍＭ、約５ｍＭ～約８０ｍＭ、約５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５ｍＭ～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地中のカリウムイオンの濃度は約５ｍＭ～約９０ｍＭ、約５ｍＭ～約８０ｍＭ、約５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５ｍＭ～約５０ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地中のカリウムイオンの濃度は約２５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地中のカリウムイオンの濃度は約２５ｍＭ～約１００ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地中のカリウムイオンの濃度は約２５ｍＭ～約９０ｍＭ、約２５ｍＭ～約８０ｍＭ、約２５ｍＭ～約７０ｍＭ、約２５ｍＭ～約６０ｍＭ、または約２５ｍＭ～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地中のカリウムイオンの濃度は約２５ｍＭ～約９０ｍＭ、約２５ｍＭ～約８０ｍＭ、約２５ｍＭ～約７０ｍＭ、約２５ｍＭ～約６０ｍＭ、または約２５ｍＭ～約５０ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地中のカリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地中のカリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約１００ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ～約９０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８５ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７５ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６５ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５５ｍＭ、または約４０ｍＭ～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８５ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７５ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６５ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５５ｍＭ、または約４０ｍＭ～約５０ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約５０ｍＭ～約８５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約５０ｍＭ～約８５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５０ｍＭ～約５５ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭ未満のＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0173】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約５０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約９５ｍＭ、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約５０ｍＭ～約８５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、培地は、少なくとも約５０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0174】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約５５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約５５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約５５ｍＭ～約１００ｍＭ、約５５ｍＭ～約９５ｍＭ、約５５ｍＭ～約９０ｍＭ、約５５ｍＭ～約８５ｍＭ、約５５ｍＭ～約８０ｍＭ、約５５ｍＭ～約７５ｍＭ、約５５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６５ｍＭ、または約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0175】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約６０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約６０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約６０ｍＭ～約１００ｍＭ、約６０ｍＭ～約９５ｍＭ、約６０ｍＭ～約９０ｍＭ、約６０ｍＭ～約８５ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７５ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、または約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、培地は少なくとも約６０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0176】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約６５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約６５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約６５ｍＭ～約１００ｍＭ、約６５ｍＭ～約９５ｍＭ、約６５ｍＭ～約９０ｍＭ、約６５ｍＭ～約８５ｍＭ、約６５ｍＭ～約８０ｍＭ、約６５ｍＭ～約７５ｍＭ、または約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、培地は少なくとも約６５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約７５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0177】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約７０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約７０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約７０ｍＭ～約１００ｍＭ、約７０ｍＭ～約９５ｍＭ、約７０ｍＭ～約９０ｍＭ、約７０ｍＭ～約８５ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、または約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約７０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0178】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約７５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約７５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約７５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約７５ｍＭ～約１００ｍＭ、約７５ｍＭ～約９５ｍＭ、約７５ｍＭ～約９０ｍＭ、約７５ｍＭ～約８５ｍＭ、または約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、培地は少なくとも約７５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約６５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0179】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約８０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約８０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約８０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約８０ｍＭ～約１００ｍＭ、約８０ｍＭ～約９５ｍＭ、約８０ｍＭ～約９０ｍＭ、または約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約６０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0180】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約８５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約８５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約８５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約８５ｍＭ～約１００ｍＭ、約８５ｍＭ～約９５ｍＭ、または約８５ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、培地は少なくとも約８５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約６５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0181】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約９０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約９０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約９０ｍＭ～約１００ｍＭ、または約９０ｍＭ～約９５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約９０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約５０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0182】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約９５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約９５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９５ｍＭ～約１０５ｍＭ、または約９５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約９５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約５５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0183】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約１００ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１００ｍＭ～約１１５ｍＭ、約１００ｍＭ～約１１０ｍＭ、または約１００ｍＭ～約１０５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１００ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約５０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0184】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約１０５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０５ｍＭ～約１１５ｍＭ、または約１０５ｍＭ～約１１０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約３５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0185】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約１１０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１０ｍＭ～約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１１０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約３０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0186】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８０ｍＭ～約９０ｍＭである。

【0187】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約９０ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約９０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約９０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約８０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約７０ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約７０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約６０ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0188】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約５５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約９０未満～約８５である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約６０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約８５未満～約８０である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約６５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約８０ｍＭ未満～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約７０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約７５ｍＭ未満～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約７５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約７０ｍＭ未満～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７５ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約６５ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８０ｍＭ～約８５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約６０ｍＭ未満～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８５ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８５ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約５５ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９０ｍＭ～約９５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９０ｍＭ～約９５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約５０未満～約４５である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９５ｍＭ～約１００ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約４５ｍＭ未満～約４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１００ｍＭ～約１０５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１００ｍＭ～約１０５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約４０ｍＭ未満～約３５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０５ｍＭ～約１１０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０５ｍＭ～約１１０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約３５未満～約３０である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１０ｍＭ～約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１０ｍＭ～約１１５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約３０ｍＭ未満～約２５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１５ｍＭ～約１２０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約２５ｍＭ未満～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0189】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。

【0190】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。

【0191】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１３ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１３ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１４ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１４ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１５ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１５ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１６ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１６ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１７ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１７ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１８ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１８ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１９ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１９ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。

【0192】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２０ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２１ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２１ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２２ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２２ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２３ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２３ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２４ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２４ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２５ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２５ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２６ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２６ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２７ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２７ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２８ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２８ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２９ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２９ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。

【0193】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３０ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３１ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３１ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３２ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３２ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３３ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３３ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３４ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３４ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３５ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３５ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３６ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３６ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３７ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３７ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３８ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３８ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３９ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３９ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。

【0194】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４１ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４１ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４２ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４２ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４３ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４３ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４４ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４４ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４５ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４５ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４６ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４６ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４７ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４７ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４８ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４８ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４９ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４９ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。

【0195】

いくつかの態様では、高濃度のカリウムイオンを含む代謝再プログラム化培地は、培地に十分な量のカリウム塩を加えることによって調製される。いくつかの態様では、カリウム塩の非限定的な例には、アミントリクロロ白金酸カリウム、アクアペンタクロロルテニウム酸カリウム、ビス（オキサラト）白金（ＩＩ）酸カリウム二水和物、硫酸水素カリウム、水素化ホウ素カリウム、臭化カリウム、炭酸カリウム、塩化カリウム、クロム酸カリウム、重クロム酸カリウム、ジシアノ銀酸カリウム、ジシアノ金酸カリウム、フッ化カリウム、フルオロ硫酸カリウム、ヘキサクロロイリジウム酸カリウム、ヘキサクロロオスミウム酸カリウム、ヘキサクロロパラジウム酸カリウム、ヘキサクロロ白金酸カリウム、ヘキサクロロレニウム酸カリウム、ヘキサシアノクロム酸カリウム、ヘキサシアノ鉄酸カリウム、ヘキサシアノルテニウム（ＩＩ）酸カリウム水和物、ヘキサフルオロアンチモン酸カリウム、ヘキサフルオロニッケル酸カリウム、ヘキサフルオロリン酸カリウム、ヘキサフルオロチタン酸カリウム、ヘキサフルオロジルコン酸カリウム、ヘキサヒドロキソアンチモン酸カリウム、ヘキサヨード白金酸カリウム、ヘキサヨードレニウム酸カリウム、水酸化カリウム、ヨウ素酸カリウム、ヨウ化カリウム、マンガン酸カリウム、メタバナジン酸カリウム、モリブデン酸カリウム、硝酸カリウム、ニトロソジスルホン酸カリウム、オスミウム（ＶＩ）酸カリウム二水和物、ペンタクロロニトロシルルテニウム酸カリウム、過塩素酸カリウム、過レニウム酸カリウム、過ルテニウム酸カリウム、過硫酸カリウム、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、ピロリン酸カリウム、セレノシアン酸カリウム、セレノシアン酸カリウム、スズ酸カリウム三水和物、硫酸カリウム、テルル酸カリウム水和物、亜テルル酸カリウム、四ホウ酸カリウム四水和物、テトラブロモ金酸カリウム、テトラブロモパラジウム酸カリウム、テトラクロロパラジウム酸カリウム、テトラクロロ白金酸カリウム、テトラシアノパラジウム酸カリウム、テトラシアノ白金酸カリウム、テトラフルオロホウ酸カリウム、テトラニトロ白金酸カリウム、テトラチオン酸カリウム、ｐ－トルエンチオスルホン酸カリウム、ヒドロキシクエン酸カリウム三塩基性一水和物、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。特定の態様では、カリウム塩は塩化カリウム（ＫＣｌ）を含む。特定の態様では、カリウム塩はグルコン酸カリウムを含む。特定の態様では、カリウム塩はクエン酸カリウムを含む。特定の態様では、カリウム塩はヒドロキシクエン酸カリウムを含む。

【0196】

ＩＩ．Ａ．２．ナトリウム
本開示のいくつかの態様は（ｉ）少なくとも約５ｍＭの濃度でのカリウムイオンと、（ｉｉ）約１１５ｍＭ未満の濃度でのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）とを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養する方法を対象とする。いくつかの態様では、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、ナトリウムの目標濃度は、さらに高濃度のナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む基本培地から出発し、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の目標濃度に到達するように溶液を希釈することによって達成される。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の目標濃度は１以上のナトリウム塩（例えば、さらに多くのＮａＣｌ）を加えることによって達成される。ナトリウム塩の非限定的な例には、（メタ）過ヨウ素酸ナトリウム、酒石酸アルセニルナトリウム水和物、アジ化ナトリウム、ナトリウムベンジルオキシド、臭化ナトリウム、炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クロム酸ナトリウム、シクロヘキサン酪酸ナトリウム、ナトリウムエタンチオラート、フッ化ナトリウム、フルオロリン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、ヘキサクロロイリジウム（ＩＩＩ）酸ナトリウム水和物、ヘキサクロロイリジウム（ＩＶ）酸ナトリウム六水和物、ヘキサクロロ白金（ＩＶ）酸ナトリウム六水和物、ヘキサクロロロジウム（ＩＩＩ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロアルミン酸ナトリウム、ヘキサフルオロアンチモン（Ｖ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロヒ（Ｖ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロ鉄（ＩＩＩ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロリン酸ナトリウム、ヘキサフルオロケイ酸ナトリウム、ヘキサヒドロキシ白金（ＩＶ）酸ナトリウム、ヘキサメタリン酸ナトリウム、二フッ化水素ナトリウム、硫酸水素ナトリウム、ナトリウム水素シアナミド、水酸化ナトリウム、ヨウ化ナトリウム、メタホウ酸ナトリウム四水和物、メタケイ酸ナトリウム九水和物、メタバナジン酸ナトリウム、モリブデン酸ナトリウム、硝酸ナトリウム、亜硝酸ナトリウム、シュウ酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム一水和物、過炭酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、過ヨウ素酸ナトリウム、過マンガン酸ナトリウム、過レニウム酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、ピロリン酸ナトリウム、セレン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、スズ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、亜テルル酸ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム、テトラクロロアルミン酸ナトリウム、テトラクロロ金（ＩＩＩ）酸ナトリウム、テトラクロロパラジウム（ＩＩ）酸ナトリウム、テトラクロロ白金（ＩＩ）酸ナトリウム、チオリン酸ナトリウム三塩基性、チオ硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム五水和物、オキシフッ化イットリウムナトリウム、トリメタリン酸三ナトリウム、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、ナトリウム塩は塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、ナトリウム塩はグルコン酸ナトリウムを含む。いくつかの態様では、ナトリウム塩は重炭酸ナトリウムを含む。いくつかの態様では、ナトリウム塩はヒドロキシクエン酸ナトリウムを含む。いくつかの態様では、ナトリウム塩はリン酸ナトリウムを含む。

【0197】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は基本培地の濃度よりも低い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度が増加するにつれて、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は低下する。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約２５ｍＭ～約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウム（例えば、ＮａＣｌ）イオンの濃度は約２５ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約４０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ、約３０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６５ｍＭ、約５５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５５ｍＭ～約７５ｍＭ、約５５ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約６５ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７５ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約７５ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、または約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約４０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５０ｍＭ～約８５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約３０ｍＭ～約３５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約３５ｍＭ～約４０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約４０ｍＭ～約４５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約４５ｍＭ～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。

【0198】

いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、または約９０ｍＭである。特定の態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約４０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約４５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約５０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約５５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約５５．６ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約５９．３ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約６０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約６３．９ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約６５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約６７．６ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約７０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約７２．２ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約７５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約７６ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は約８０．５ｍＭである。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約４０ｍＭ～約９０ｍＭのカリウムイオン及び約４０ｍＭ～約８０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。

【0199】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約５０ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約５５ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約６０ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約６５ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約６５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約６６ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約６７ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約６８ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約６９ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７０ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７１ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７２ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７３ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７４ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約６５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約６５ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約６５ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７０ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７０ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７０ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７５ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。

【0200】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのカリウムイオン及び約３０ｍＭ～約１０９ｍＭのＮａＣｌを含み、ＮａＣｌの濃度（ｍＭ）は（１３５－カリウムイオン濃度、つまり１３５からカリウムイオン濃度を引いた値）以下である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約４０ｍＭのカリウムイオン及び約９５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約９５ｍＭ、約９４ｍＭ、約９３ｍＭ、約９２ｍＭ、約９１ｍＭ、約９０ｍＭ、約８５ｍＭ、約８０ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約４５ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約９０ｍＭ、約８９ｍＭ、約８８ｍＭ、約８７ｍＭ、約８６ｍＭ、約８５ｍＭ、約８０ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約８５ｍＭ、約８４ｍＭ、約８３ｍＭ、約８２ｍＭ、約８１ｍＭ、約８０ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約５５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約８０ｍＭ、約７９ｍＭ、約７８ｍＭ、約７７ｍＭ、約７６ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約６０ｍＭのカリウムイオン及び約７５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約７５ｍＭ、約７４ｍＭ、約７３ｍＭ、約７２ｍＭ、約７１ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約６５ｍＭのカリウムイオン及び約７０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約７０ｍＭ、約６９ｍＭ、約６８ｍＭ、約６７ｍＭ、約６６ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７０ｍＭのカリウムイオン及び約７０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約６５ｍＭ、約６４ｍＭ、約６３ｍＭ、約６２ｍＭ、約６１ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７５ｍＭのカリウムイオン及び約６０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約６０ｍＭ、約５９ｍＭ、約５８ｍＭ、約５７ｍＭ、約５６ｍＭ、約５５ｍＭ、約５０ｍＭ、約４５ｍＭ、または約４０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約８０ｍＭのカリウムイオン及び約５５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約５５ｍＭ、約５４ｍＭ、約５３ｍＭ、約５２ｍＭ、約５１ｍＭ、約５０ｍＭ、約４５ｍＭ、約４０ｍＭ、または約３５ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約８５ｍＭのカリウムイオン及び約５０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約５０ｍＭ、約４９ｍＭ、約４８ｍＭ、約４７ｍＭ、約４６ｍＭ、約４５ｍＭ、約４０ｍＭ、約３５ｍＭ、または約３０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約９０ｍＭのカリウムイオン及び約４５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約４５ｍＭ、約４４ｍＭ、約４３ｍＭ、約４２ｍＭ、約４１ｍＭ、約４０ｍＭ、約３５ｍＭ、約３０ｍＭ、または約２５ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６１ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６２ｍＭのＮａＣｌを含む。

【0201】

いくつかの態様では、培地は約５０ｍＭのカリウムイオン及び約７５ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、培地は等張性である。

【0202】

本開示のいくつかの態様は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）約１３５ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることを含む、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）を培養する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１００ｍＭ未満の濃度でのＮａＣｌを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は（ｉ）５０ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約９０ｍＭ未満の濃度でのＮａＣｌを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は（ｉ）５５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約７０ｍＭ未満の濃度でのＮａＣｌを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は（ｉ）６０ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約７０ｍＭ未満の濃度でのＮａＣｌを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養する方法を対象とする。

【0203】

ＩＩ．Ａ．３．張度
本開示のいくつかの態様では、代謝再プログラム化培地の張度（例えば、（カリウムイオンの濃度及びＮａＣｌの濃度）×２）は、カリウムイオン及び／またはＮａＣｌの濃度に基づいて調整される。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地の張度は基本培地の張度より低い。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地の張度は基本培地の張度より高い。いくつかの態様では、培地の張度は基本培地の張度と同じである。培地におけるカリウムイオン及び／またはＮａＣｌの濃度を改変することによって、代謝再プログラム化培地の張度に影響を及ぼすことができる。いくつかの態様では、カリウムイオン濃度の上昇はＮａＣｌの濃度の上昇または低下と対になる。いくつかの態様では、この対合は代謝再プログラム化培地の張度に影響を及ぼす。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度が上昇する一方で、ＮａＣｌの濃度は低下する。

【0204】

いくつかの態様では、本発明の培地に有用な培地は、カリウムイオンと張度の関数に基づいて調製することができる。例えば、いくつかの態様では、本開示に有用な培地が低張性（例えば、２８０ｍＯｓｍ未満）であり、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンを含む場合、低張性として培地を維持するのに十分なＮａＣｌの濃度は、次の式：ＮａＣｌ濃度＝（所望の張度（２８０）／２）－カリウムイオン濃度（すなわち、ＮａＣｌの濃度（ｍＭ）は（１４０－カリウムイオン濃度）以下である）に基づいて決定することができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されている低張培地は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度を含む。したがって、低張培地については、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度が１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である限り、カリウムイオンの濃度は５０ｍＭ～９０ｍＭの間の濃度で設定することができ、ＮａＣｌの濃度は９０ｍＭ～５０ｍＭの間で設定することができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されている低張培地は１１５ｍＭ～１４０ｍＭの間のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度を含む。いくつかの態様では、本明細書に開示されている低張培地は１２０ｍＭ～１４０ｍＭの間のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度を含む。

【0205】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は等張（２８０ｍＯｓｍ～３００ｍＯｓｍの間）であり、約５０ｍＭ～７０ｍＭの間のカリウムイオンの濃度を含む。ＮａＣｌの対応する濃度は、次の式：ＮａＣｌ濃度＝（所望の張度／２）－カリウムイオン濃度に基づいて再度算出され得る。例えば、カリウムの濃度が５０ｍＭであり、所望の張度が３００ｍＯｓｍである場合、ナトリウム濃度は１００ｍＭであることができる。

【0206】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は等張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±１ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±３ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±４ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±６ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±７ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±８ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±９ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±１０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３０５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３１０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３１５ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～３２０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２８５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、約３０５ｍＯｓｍ／Ｌ、約３１０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約３１５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。

【0207】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２７５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき２７５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２７０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき２７０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２６５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき２６５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２６５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき２６５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は２５５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき２５５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、張度は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定されるとき約２２０ｍＯｓｍ／Ｌよりも高い。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。

【0208】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の浸透圧を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２１５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の浸透圧を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の浸透圧を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２０５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の浸透圧を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２００ｍＯｓｍ／Ｌ未満の浸透圧を有する。

【0209】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約１００ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１２５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１７５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２７５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２７０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２５４ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６３ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５４ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５６ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５６ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５７ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５７ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５８ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５８ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５９ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６１ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２６１ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２６２ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６３ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２６３ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６４ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２６４ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。

【0210】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約１００ｍＯｓｍ／Ｌ、約１２５ｍＯｓｍ／Ｌ、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１７５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２７５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。

【0211】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２６２．２６ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２６０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５９．７ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５７．５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５７．２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５５．２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５４．７の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２５５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約２６０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。

【0212】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約５０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約８０．５ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１７．７ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．８ｍＭのカルシウムイオンとを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約５５ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約７６ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１７．２ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．７ｍＭのカルシウムイオンとを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約７２．２ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１６．８ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．６ｍＭのカルシウムイオンとを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６５ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約６７．６ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１６．３ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．５ｍＭのカルシウムイオンとを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約６３．９ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１５．９ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウムイオンとを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７５ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約５９．３ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１５．４ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．３ｍＭのカルシウムイオンとを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約８０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約５５．６ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１５ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．２ｍＭのカルシウムイオンとを含む。代謝再プログラミング培地の張度は任意の時点で、例えば、本明細書に開示されている等張性または低張性の状態に調整することができる。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地の張度は、細胞が代謝再プログラム化培地に加えられる前に、例えば、本明細書に開示されている等張または低張の状態に調整され得る。いくつかの態様では、細胞は、細胞操作前に、例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＣＲ模倣体を発現する構築物による形質導入前に低張性または等張性の培地にて培養される。いくつかの態様では、細胞は、細胞操作中、例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＣＲ模倣体を発現する構築物による形質導入中に低張性または等張性の培地にて培養される。いくつかの態様では、細胞は、細胞操作後、例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＣＲ模倣体を発現する構築物による形質導入後に低張性または等張性の培地にて培養される。いくつかの態様では、細胞は細胞増殖全体を通して低張性または等張性の培地にて培養される。

【0213】

ＩＩ．Ａ．４．糖類
本開示のいくつかの態様は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）糖類を含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養する方法を対象とする。いくつかの態様では、培地は低張性または等張性である。

【0214】

いくつかの態様では、糖類の目標濃度は、さらに高濃度の糖類を含む基本培地から出発し、糖類の目標濃度に到達するように溶液を希釈することによって達成される。いくつかの態様では、糖類の目標濃度は、所望の濃度に到達するまで糖類を添加することにより、糖類の濃度を上昇させることによって達成される。いくつかの態様では、糖類は、単糖、二糖、または多糖である。いくつかの態様では、糖類は、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、マルトース、スクロース、ラクトース、トレハロース、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。特定の態様では、糖類はグルコースである。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、培地は等張性である。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）５０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約４０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0215】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は低張性である。いくつかの態様では、培地は等張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、（ｉ）５０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、（ｉ）少なくとも約４０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0216】

いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は約１０ｍＭ～約２４ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約４．２９ｇ／Ｌ未満である。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約２４ｍＭ未満である。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ超である。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１９ｍＭ、約１５ｍＭ～約１８ｍＭ、約１５ｍＭ～約１７ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、約１６ｍＭ～約２０ｍＭ、約１６ｍＭ～約１９ｍＭ、約１６ｍＭ～約１８ｍＭ、約１６ｍＭ～約１７ｍＭ、約１７ｍＭ～約２０ｍＭ、約１７ｍＭ～約１９ｍＭ、または約１７ｍＭ～約１８ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約１５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４ｍＭ～約１４．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４．５ｍＭ～約１５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５ｍＭ～約１５．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５．５ｍＭ～約１６ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６ｍＭ～約１６．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６．５ｍＭ～約１７ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７ｍＭ～約１７．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７．５ｍＭ～約１８ｍＭである。

【0217】

いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１０．５ｍＭ、約１１ｍＭ、約１１．５ｍＭ、約１２ｍＭ、約１２．５ｍＭ、約１３ｍＭ、約１３．５ｍＭ、約１４ｍＭ、約１４．５ｍＭ、約１５ｍＭ、約１５．５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１６．５ｍＭ、約１７ｍＭ、約１７．５ｍＭ、約１８ｍＭ、約１８．５ｍＭ、約１９ｍＭ、約１９．５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２０．５ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭである。

【0218】

ＩＩ．Ａ．５．カルシウム
本開示のいくつかの態様は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）カルシウムイオンを含む培地にてＰＣＳに細胞を接触させることを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養する方法を対象とする。いくつかの態様では、培地は低張性または等張性である。

【0219】

いくつかの態様では、カルシウムの目標濃度は、さらに高濃度のカルシウムイオンを含む基本培地から出発し、カルシウムイオンの目標濃度に到達するように溶液を希釈することによって達成される。いくつかの態様では、カルシウムの目標濃度は、１以上のカルシウム塩を添加することにより、カルシウムイオンの濃度を上昇させることによって達成される。カルシウム塩の非限定的な例としては、臭化カルシウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、カルシウムシアナミド、フッ化カルシウム、水素化カルシウム、水酸化カルシウム、ヨウ素酸カルシウム、ヨウ化カルシウム、硝酸カルシウム、亜硝酸カルシウム、シュウ酸カルシウム、過塩素酸カルシウム四水和物、第一リン酸カルシウム、リン酸三カルシウム、硫酸カルシウム、チオシアン酸カルシウム四水和物、ヒドロキシアパタイト、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、カルシウム塩は、塩化カルシウム（ＣａＣｌ_２）を含む。いくつかの態様では、カルシウム塩は、グルコン酸カルシウムを含む。

【0220】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は基本培地の濃度よりも低い。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は基本培地の濃度よりも高い。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．４ｍＭ超である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約２．８ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約２．５ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約２．０ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．９ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．８ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．７ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．６ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．５ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．４ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．３ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．２ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．１ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．０ｍＭ未満である。

【0221】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．４ｍＭ～約２．８ｍＭ、約０．４ｍＭ～約２．７ｍＭ、約０．４ｍＭ～約２．５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．１ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．３ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．４ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．７ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．８ｍＭ～約２．０ｍＭ、約０．８～約０．９ｍＭ、約０．８～約１．０ｍＭ、約０．８～約１．１ｍＭ、約０．８～約１．２ｍＭ、約０．８～約１．３ｍＭ、約０．８～約１．４ｍＭ、約０．８～約１．５ｍＭ、約０．８～約１．６ｍＭ、約０．８～約１．７ｍＭ、約０．８～約１．８ｍＭ、約０．９～約１．０ｍＭ、約０．９～約１．１ｍＭ、約０．９～約１．２ｍＭ、約０．９～約１．３ｍＭ、約０．９～約１．４ｍＭ、約０．９～約１．５ｍＭ、約０．９～約１．６ｍＭ、約０．９～約１．７ｍＭ、約０．９～約１．８ｍＭ、約１．０～約１．１ｍＭ、約１．０～約１．２ｍＭ、約１．０～約１．３ｍＭ、約１．０～約１．４ｍＭ、約１．０～約１．５ｍＭ、約１．０～約１．６ｍＭ、約１．０～約１．７ｍＭ、約１．０～約１．８ｍＭ、約１．１～約１．２ｍＭ、約１．１～約１．３ｍＭ、約１．１～約１．４ｍＭ、約１．１～約１．５ｍＭ、約１．１～約１．６ｍＭ、約１．１～約１．７ｍＭ、約１．１～約１．８ｍＭ、約１．２～約１．３ｍＭ、約１．２～約１．４ｍＭ、約１．２～約１．５ｍＭ、約１．２～約１．６ｍＭ、約１．２～約１．７ｍＭ、約１．２～約１．８ｍＭ、約１．３～約１．４ｍＭ、約１．３～約１．５ｍＭ、約１．３～約１．６ｍＭ、約１．３～約１．７ｍＭ、約１．３～約１．８ｍＭ、約１．４～約１．５ｍＭ、約１．４～約１．６ｍＭ、約１．４～約１．７ｍＭ、約１．４～約１．８ｍＭ、約１．５～約１．６ｍＭ、約１．５～約１．７ｍＭ、約１．５～約１．８ｍＭ、約１．６～約１．７ｍＭ、約１．６～約１．８ｍＭ、または約１．７～約１．８ｍＭである。

【0222】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．８ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．９ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．０ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．１ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．２ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．８ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．８ｍＭ～約０．９ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．９ｍＭ～約１．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．０ｍＭ～約１．１ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．１ｍＭ～約１．２ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．２ｍＭ～約１．３ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．３ｍＭ～約１．４ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．４ｍＭ～約１．５ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．５ｍＭ～約１．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．７ｍＭ～約１．８ｍＭである。

【0223】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、または約２．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．７ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．９ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．１ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．２ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．３ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．４ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．５ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．７ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．８ｍＭである。

【0224】

ＩＩ．Ａ．６．サイトカイン
いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はサイトカインを含む。いくつかの態様では、培地は低張性である。いくつかの態様では、培地は等張性である。いくつかの態様では、培地は高張性である。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はＩＬ－２を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はＩＬ２とＩＬ２１とＩＬ１５とを含む。いくつかの態様では、サイトカインはＰＣＳに結び付けられる、または関連付けられる。

【0225】

サイトカインは任意の時点で培地に加えることができる。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞が培地に加えられる前に、サイトカインが培地に加えられる。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞を操作する前に、例えば、リガンド結合タンパク質をコードする構築物で形質導入する前に（ｉ）本明細書に開示されている濃度でのカリウムと（ｉｉ）サイトカインとを含む培地にてＰＣＳに接触させ、培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞を操作している最中に、例えば、リガンド結合タンパク質で形質導入している最中に（ｉ）本明細書に開示されている濃度でのカリウムと（ｉｉ）サイトカインとを含む培地にてＰＣＳに接触させ、培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞を操作した後で、例えば、ポリペプチドリガンド結合タンパク質をコードする構築物で形質導入した後で（ｉ）本明細書に開示されている濃度でのカリウムと（ｉｉ）サイトカインとを含む培地にてＰＣＳに接触させ、培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞増殖の全体を通して（ｉ）本明細書に開示されている濃度でのカリウムと（ｉｉ）サイトカインとを含む培地にてＰＣＳに接触させ、培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞操作及び細胞増殖の全体を通して（ｉ）本明細書に開示されている濃度でのカリウムと（ｉｉ）サイトカインとを含む培地にてＰＣＳに接触させ、培養される。

【0226】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－７を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）約４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－７を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－７を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－７及びＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－７及びＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－７及びＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－７及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－７及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－７及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は等張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はさらにＮａＣｌを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0227】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている代謝再プログラム化培地（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む）は約５０ＩＵ／ｍＬ～約５００ＩＵ／ｍＬの間のＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約５０ＩＵ／ｍＬ、約６０ＩＵ／ｍＬ、約７０ＩＵ／ｍＬ、約８０ＩＵ／ｍＬ、約９０ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２２５ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約２７５ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬ、または約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

【0228】

したがって、いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約６０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約７０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約９０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１２５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１７５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２２５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２７５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約３５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約４５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＩＬ－２を含む代謝再プログラム化培地はさらに、約１１５ｎＭ未満の濃度でＮａＣｌを含む。

【0229】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

【0230】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培地は少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

【0231】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約５０ｎｇ／ｍＬ～約６００ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約５００ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約４５０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約４００ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約３００ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約６００ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約５００ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約４５０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約４００ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約３００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約５００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約４５０ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約４００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約３００ｎｇ／ｍＬ、約２５０ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約６００ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約５００ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約４５０ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約４００ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約２５０ｎｇ／ｍＬ～約３００ｎｇ／ｍＬ、または約２７５ｎｇ／ｍＬ～約３２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

【0232】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５９０ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約６００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７３．６ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約４００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

【0233】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている代謝再プログラム化培地（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む）は約５０ＩＵ／ｍＬ～約５００ＩＵ／ｍＬの間のＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、約５０ＩＵ／ｍＬ、約６０ＩＵ／ｍＬ、約７０ＩＵ／ｍＬ、約８０ＩＵ／ｍＬ、約９０ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２２５ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約２７５ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬ、または約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

【0234】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約６０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約７０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約９０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１２５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１７５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２２５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２７５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約３５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約４５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＩＬ－２１を含む代謝再プログラム化培地はさらに、約１１５ｎＭ未満の濃度でＮａＣｌを含む。

【0235】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

【0236】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

【0237】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている代謝再プログラム化培地（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む）は約５００ＩＵ／ｍＬ～約１，５００ＩＵ／ｍＬの間のＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培養培地は約５００ＩＵ／ｍＬ、約５５０ＩＵ／ｍＬ、約６００ＩＵ／ｍＬ、約６５０ＩＵ／ｍＬ、約７００ＩＵ／ｍＬ、約７５０ＩＵ／ｍＬ、約８００ＩＵ／ｍＬ、約８５０ＩＵ／ｍＬ、約９００ＩＵ／ｍＬ、約９５０ＩＵ／ｍＬ、約１，０００ＩＵ／ｍＬ、約１，０５０ＩＵ／ｍＬ、約１，１００ＩＵ／ｍＬ、約１，１５０ＩＵ／ｍＬ、約１，２００ＩＵ／ｍＬ、約１，２５０ＩＵ／ｍＬ、約１，３００ＩＵ／ｍＬ、約１，３５０ＩＵ／ｍＬ、約１，４００ＩＵ／ｍＬ、約１，４５０ＩＵ／ｍＬ、または約１，５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。

【0238】

いくつかの態様では、本開示のために有用な代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約６００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約６５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約７００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約７５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約８００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約８５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約９００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約９５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，０５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，１５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，２５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，３５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，４５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＩＬ－７を含む代謝再プログラム化培地はさらに、約１１５ｎＭ未満の濃度でＮａＣｌを含む。

【0239】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。

【0240】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。

【0241】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている代謝再プログラム化培地（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む）は約５０ＩＵ／ｍＬ～約５００ＩＵ／ｍＬの間のＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培養培地は約５０ＩＵ／ｍＬ、約６０ＩＵ／ｍＬ、約７０ＩＵ／ｍＬ、約８０ＩＵ／ｍＬ、約９０ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２２５ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約２７５ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬ、または約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。

【0242】

したがって、いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約６０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約７０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約９０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１２５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１７５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２２５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２７５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約３５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約４５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＩＬ－１５を含む代謝再プログラム化培地はさらに、約１１５ｎＭ未満の濃度でＮａＣｌを含む。

【0243】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。

【0244】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はさらにＮａＣｌを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0245】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、４０ｍＭを超えるカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉｉ）約６０ｍＭのＮａＣｌと、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウムと、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコースと、（ｖ）約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、（ｖｉ）約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。

【0246】

ＩＩ．Ａ．７．基本培地
いくつかの態様では、基本培地は、平衡塩類溶液（例えば、ＰＢＳ、ＤＰＢＳ、ＨＢＳＳ、ＥＢＳＳ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、最小必須培地（ＭＥＭ）、基本培地イーグル（ＢＭＥ）、Ｆ－１０、Ｆ－１２、ＲＰＭＩ１６４０、グラスゴー最小必須培地（ＧＭＥＭ）、アルファ最小必須培地（アルファＭＥＭ）、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）、Ｍ１９９、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖基本培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩｍＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）、ＡＩＭ Ｖ、ＴＥＸＭＡＣＳ（商標）培地、ＰＲＩＭＥ－ＸＶ（登録商標）Ｔ細胞ＣＤＭ、Ｘ－ＶＩＶＯＴＭ １５（Ｌｏｎｚａ）、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）ＴＩＬ増殖培地、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、基本培地はＰＲＩＭＥ－ＸＶ Ｔ細胞ＣＤＭを含む。いくつかの態様では、基本培地はＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）を含む。いくつかの態様では、基本培地はＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）Ｐｒｏを含む。いくつかの態様では、基本培地は無血清である。いくつかの態様では、基本培地はさらに免疫細胞血清置換（ＩＣＳＲ）を含む。例えば、いくつかの態様では、基礎培地は、ＩＣＳＲが補充されたＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＣＳＲが補充されたＡＩＭＶ、ＩＣＳＲが補充されたＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ、ＩＣＳＲが補充されたＲＰＭＩ、ＩＣＳＲが補充されたＴＥＸＭＡＣＳ（商標）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。特定の態様では、基本培地はＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全を含む。

【0247】

いくつかの態様では、培地、例えば、ＭＲＭはさらに、約２．５％の血清補足剤（ＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ ＳＲ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、２ｍＭのＬ－グルタミン、２ｍＭのＬ－ｇｌｕｔａｍａｘ、ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液、Ｐｅｎ－ｓｔｒｅｐ、２０μｇ／ｍＬのｆｕｎｇｉｎ（商標）、ピルビン酸ナトリウム、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、培地はさらに、Ｏ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む。いくつかの態様では、培地はさらに、キナーゼ阻害剤を含む。

【0248】

いくつかの態様では、培地はさらに、ＣＤ３アゴニストを含む。いくつかの態様では、ＣＤ３アゴニストは抗ＣＤ３抗体である。いくつかの態様では、抗ＣＤ３抗体はＯＫＴ－３を含む。

【0249】

いくつかの態様では、培地はさらに、ＣＤ２８アゴニストを含む。いくつかの態様では、ＣＤ２８アゴニストは抗ＣＤ２８抗体である。いくつかの態様では、培地はさらに、ＣＤ２７リガンド（ＣＤ２７Ｌ）を含む。いくつかの態様では、培地はさらに、４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）を含む。

【0250】

いくつかの態様では、本開示は、本明細書で開示されている培地を含む細胞培養物、本明細書で開示されている培地を含む細胞バッグ、または本明細書で開示されている培地を含む生物反応器を含む。

【0251】

ＩＩ．Ｂ．プログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）
いくつかの態様では、本明細書に記載されている方法は、本明細書に記載されているように、代謝再プログラミング培地（ＭＲＭ）にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）にヒト免疫細胞を接触させることを含む。プログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場（ＰＣＳ）の非限定的な例はＷＯ２０１８／０１３７９７及びＣｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３６（２）：１６０－１６９（２０１８）に記載されており、その内容は参照によって組み込まれている。いくつかの態様では、本開示のプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場は、高表面積のメソ多孔性シリカマイクロロッド（ＭＳＲ）を含む第１の層と、前記第１層をコーティングする脂質を含む第２の層と、足場上に担持された複数の機能性分子とを含む。いくつかの態様では、足場は生分解性である。

【0252】

本明細書に記載されている足場は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）に一般に関連付けられている機能を模倣することができ、これによって、足場は、標的細胞に対して種々の機能を引き出す、例えばＴ細胞のエフェクター機能を引き出すことが可能になる。本明細書で企図されているように、足場は、標的細胞（例えば、Ｔ細胞）に存在する細胞表面分子と足場によって提示される種々の機能性分子との間の直接的または間接的な相互作用を介してこれらの効果に介在する。いくつかの態様では、足場は、足場自体の物理的または化学的特性を介して、標的細胞（例えば、Ｔ細胞）の生存、標的細胞（例えば、Ｔ細胞）の増殖、及び／または標的細胞（例えば、Ｔ細胞）の機能を調節する。

【0253】

いくつかの態様では、足場組成物は１以上の表面キュー及び／または可溶性キュー（例えば、細胞シグナル伝達分子）を含むように改変される。いくつかの態様では、表面キュー及び／または可溶性キューは種々のエフェクター機能に介在するように作用する。表面キュー及び／または可溶性キューが影響を及ぼすことができるエフェクター機能の非限定的な例には、標的細胞の活性化、分裂、分化の促進、成長、増殖、生き残り、収量の増加、再プログラム化、アネルギー、静止状態、老化、アポトーシス、死、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、１以上の表面キュー及び／または可溶性キューは「幹細胞性」を高めるように作用する。いくつかの態様では、本明細書に記載されている培地にて本明細書に記載されているＰＣＳと接触した細胞、例えば、免疫細胞は、他の基材プラットフォーム、例えば、磁気ビーズ、例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（商標）、または市販の粒子、例えば、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）と接触した細胞、例えば、免疫細胞と比べて優れた増殖及び機能を示す。

【0254】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている方法は、代謝再プログラム化培地にてヒト免疫細胞をＰＣＳに接触させること、及びさらに、免疫細胞を１以上の刺激分子、サイトカイン及び／または他の補因子に接触させることを含む。いくつかの態様では、１以上の刺激分子、サイトカイン及び／または他の補因子は培地に存在する。いくつかの態様では、１以上の刺激分子、サイトカイン及び／または他の補因子は足場に存在する。いくつかの態様では、足場に浸潤している非標的化細胞（例えば、Ｔ細胞以外の細胞）は陰性選択の薬剤、キューを使用して、または受動的な非刺激を介して拒絶される、または取り除かれる。

【0255】

ＰＣＳの構成成分
いくつかの態様では、足場の特定の構成成分が調節される。足場組成物の透過性は、さらに大きなまたはさらに小さな孔サイズ、密度、ポリマー架橋、剛性、強靭性、延性、または弾性について材料を選択する、または操作することによって調節することができる。足場組成物は、標的を絞った細胞がそれを介して足場と相互作用する及び／または足場の特定に区画または領域に移動する物理的なチャネルまたはパスを含有することができる。必要に応じて、区画化を円滑にするために、足場組成物は任意で、それぞれ透過性が異なる区画または層に構造化することができるので、細胞の特定の亜集団のみにアクセスできるように細胞を選別する、または濾別することができる。足場における標的細胞集団の隔離も、分解、脱水、再水和、酸化、化学変化、ｐＨの変化、足場組成物の進行中の自己構築、またはそれらの任意の組み合わせによって調節することができる。さらに、足場の機能性分子はタイプや相対存在量で変化して所望の細胞との特定の相互作用を引き出すことができる。

【0256】

いくつかの態様では、ＰＣＳは（ｉ）高表面積のメソ多孔性シリカマイクロロッド（ＭＳＲ）を含む基層；（ｉｉ）ＭＳＲ基層上に積層された連続性の流体支持脂質二重層（ＳＬＢ）；（ｉｉｉ）足場上に担持された複数の表面キュー、及び／または（ｉｖ）足場上に担持された複数の可溶性キューを含む。

【0257】

ＩＩ．Ｂ．１．メソ多孔性シリカ
いくつかの態様では、足場はメソ多孔性シリカを含む。メソ多孔性シリカは六方最密の円筒形状の均一な孔を持つ多孔体である。いくつかの態様では、メソ多孔性シリカは、酸性または塩基性の触媒の存在下で水またはアルコールに、例えば、アルコキシシラン、ケイ酸ナトリウム溶液、カネマイト、シリカ微粒子のようなシリカ供給源を溶解し、加水分解することによって水中で形成される、界面活性剤のロッド様ミセルを鋳型として使用することによって合成される。それぞれその全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１５－００７２００９号及びＨｏｆｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ，４５，３２１６－３２５１，２００６を参照のこと。カチオン性、アニオン性及び非イオン性の界面活性剤を含むが、これらに限定されない多数の種類の界面活性剤をメソ多孔性シリカの合成に使用することができる。いくつかの態様では、界面活性剤はカチオン性界面活性剤のアルキルトリメチルアンモニウム塩である。カチオン性界面活性剤のアルキルトリメチルアンモニウム塩によって高い比表面積及び孔容量を有するメソ多孔性シリカを得ることができる。それぞれその全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１３／００５２１１７号及びＫａｔｉｙａｒ ｅｔ ａｌ．（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，１１２２（１－２）：１３－２０）を参照のこと。「メソスケール」、「メソ孔」、「メソ多孔性」などという用語は本明細書で使用されるとき、約１ｎｍ～約６０ｎｍの範囲の形状を有する構造を指す。いくつかの態様では、メソ多孔性物質は約１ｎｍ～約５０ｎｍの範囲の直径を有する孔を含む。いくつかの態様では、メソ多孔性物質は約５ｎｍ～約６０ｎｍの範囲の直径を有する孔を含む。いくつかの態様では、メソ多孔性物質は約２ｎｍ～約５０ｎｍの範囲の直径を有する孔を含む。いくつかの態様では、孔は秩序正しく分布する。いくつかの態様では、孔は無作為に分布する。

【0258】

本開示の足場で使用されるメソ多孔性シリカは種々の形態で提供され得る。いくつかの態様では、足場は、ミクロスフェア、不規則な粒子、四角形ロッド、丸いナノロッド、及びそれらの任意の組み合わせから選択される形態で提供される。いくつかの態様では、足場は構造化されたロッド形状の形態（ＭＳＲ）として提供される。粒子は所定の形状を有することができる。いくつかの態様では、粒子は球状の形状を有する。いくつかの態様では、粒子は楕円体の形状を有する。いくつかの態様では、粒子はロッド様の形状を有する。いくつかの態様では、粒子は湾曲した円筒の形状を有する。マイクロロッドを生成するためにメソ多孔性シリカを構築する方法の非限定的な例は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるＷａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１５：１５０１，２０１３に見いだすことができる。いくつかの態様では、メソ多孔性シリカのナノ粒子は、オルソケイ酸テトラエチルをミセルのロッドで出来た鋳型と反応させることによって合成される。鋳型はその後、適切なｐＨに合わせた溶媒で洗浄することによって取り除くことができる。この例では、界面活性剤鋳型を取り除いたのち、例えば、約６００ｍ^２／ｇ～約１２００ｍ^２／ｇ、詳しくは約８００ｍ^２／ｇ～約１０００ｍ^２／ｇ及び特に約８５０ｍ^２／ｇ～約９５０ｍ^２／ｇの比表面積を持つ、均一で秩序のある連結メソ多孔性を特徴とする親水性シリカナノ粒子が調製される。いくつかの態様では、メソ多孔性粒子は単純なゾルゲル法または噴霧乾燥法を使用して合成される。追加のポリマー単量体（例えば、鋳型として）とともにオルソケイ酸テトラエチルを使用することもできる。いくつかの態様では、１以上のテトラアルコキシ－シラン及び１以上の（３－シアノプロピル）トリアルコキシ－シランを共縮合してロッドとしてメソ多孔性ケイ酸粒子を提供する。それぞれその全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１３－０１４５４８８号、同第２０１２－０２６４５９９号及び同第２０１２－０２５６３３６号を参照のこと。

【0259】

ＭＳＲは、１～６０ｎｍの間の直径の孔、例えば、２～５ｎｍ、１０～２０ｎｍ、１０～３０ｎｍ、１０～４０ｎｍ、２０～３０ｎｍ、３０～５０ｎｍ、３０～４０ｎｍ、４０～５０ｎｍ、５０～６０ｎｍの間の孔を含むことができる。いくつかの態様では、マイクロロッドは直径およそ１ｎｍ、２ｎｍ、３ｎｍ、４ｎｍ、５ｎｍ、６ｎｍ、７ｎｍ、８ｎｍ、９ｎｍ、１０ｎｍ、１１ｎｍ、１２ｎｍ、１３ｎｍ、１４ｎｍ、１５ｎｍ以上の孔を含む。孔サイズは用途の種類に応じて変えることができる。

【0260】

いくつかの態様では、ＭＳＲの長さは約５μｍ～約５００μｍに及ぶマイクロメートルの範囲にある。いくつかの態様では、マイクロロッドは、約５～５０μｍ、例えば、約１０～２０μｍ、約１０～３０μｍ、約１０～４０μｍ、約２０～３０μｍ、約３０～５０μｍ、約３０～４０μｍ、または約４０～５０μｍの長さを含む。いくつかの態様では、ＭＳＲは、約５０μｍ～約２５０μｍ、例えば、約６０μｍ、約７０μｍ、約８０μｍ、約９０μｍ、約１００μｍ、約１２０μｍ、約１５０μｍ、約１８０μｍ、約２００μｍ、約２２５μｍ以上の長さを含む。細胞の動員については、５０μｍ～２００μｍの長さ、具体的には８０μｍ～１２０μｍの長さ、特に約１００μｍ以上の長さを含むロッドを持つ、アスペクト比が高いＭＳＲ組成物を採用することができる。

【0261】

いくつかの態様では、ＭＳＲの幅は約０．１μｍ～約１００μｍに及ぶマイクロメートルの範囲にある。いくつかの態様では、マイクロロッドは約０．１～７５μｍ、例えば、約１～５５μｍ、約１～５０μｍ、約２～５０μｍ、約１～４０μｍの幅を含む。いくつかの態様では、ＭＳＲは約１．０μｍ、約２μｍ、約５μｍ、約１０μｍ、約１５μｍ、約２０μｍ、約２５μｍ、約３０μｍ、約３５μｍ、約４０μｍ、約４５μｍ、約５０μｍ、約５５μｍ以上の幅を含む。

【0262】

いくつかの態様では、ＭＳＲは標的細胞、例えば、Ｔ細胞への連結及び／または結合のために高い表面積を提供する。高表面積のメソ多孔性ケイ酸を得る非限定的な方法は、例えば、それぞれその全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第８，８８３，３０８号及び米国特許公開第２０１１－０２５３６４３号に見いだすことができる。いくつかの態様では、高表面積はナノ粒子の繊維性の形態によるものであり、それによって表面上に高い濃度で高度に分散され、容易にアクセスできる部分を得ることが可能になる。いくつかの態様では、ＭＳＲは少なくとも約１００ｍ^２／ｇ、少なくとも１５０ｍ^２／ｇ、少なくとも約２００ｍ^２／ｇ、少なくとも約２５０ｍ^２／ｇまたは少なくとも３００ｍ^２／ｇの表面積を有する。いくつかの態様では、ＭＳＲは、その間の値すべてまたはその間の部分範囲を含めて約１００ｍ^２／ｇ～約１５００ｍ^２／ｇ、例えば、５０ｍ^２／ｇ、１００ｍ^２／ｇ、２００ｍ^２／ｇ、３００ｍ^２／ｇ、４００ｍ^２／ｇ、５００ｍ^２／ｇ、６００ｍ^２／ｇ、７００ｍ^２／ｇ、８００ｍ^２／ｇ、１００～５００ｍ^２／ｇ、１００～３００ｍ^２／ｇ、５００～８００ｍ^２／ｇ、１００～７００ｍ^２／ｇ、２００～６００ｍ^２／ｇ、５００～１０００ｍ^２／ｇまたは５００～１５００ｍ^２／ｇの表面積を有する。

【0263】

いくつかの態様では、ＭＳＲは、足場が抗原提示を持続し、免疫細胞を引き付け、操作するように十分に多孔性である。いくつかの態様では、足場は多孔性物質を含有し、その際、孔は少なくとも１０ｎｍの直径を有する。いくつかの態様では、孔は少なくとも５００μｍの直径を有する。いくつかの態様では、孔は１０ｎｍ～５００μｍの直径を有する。いくつかの態様では、孔は１００ｎｍ～１００μｍの直径を有する。これらの態様では、足場はメソ多孔性の足場を含む。いくつかの態様では、足場は多孔性のマトリックスを含有し、その際、孔は足場に浸潤している細胞集団と同じくらいの大きさである、またはそれより大きい。所望の孔サイズ及び孔整列を有するポリマーマトリックスを作製する方法の非限定的な例は、例えば、それぞれその全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１１／００２０２１６号及び米国特許第６，５１１，６５０号に記載されている。

【0264】

ＩＩ．Ｂ．２．脂質
本開示の足場は前記第１の層をコーティングする脂質を含む第２の層を含む。「脂質」という用語は一般に、水に不溶性であるという共通する特性を有し、クロロホルム及びエーテルのような極性が低い有機溶媒によって細胞から抽出することができる生物系に関連する物質の不均一な群を意味する。いくつかの態様では、「脂質」は、好ましくは１０～３０の炭素単位を含有する、具体的には１４～２３の炭素単位を含有する、特に１６～１８の炭素単位を含有する脂肪酸の長鎖を含む任意の物質を指す。

【0265】

いくつかの態様では、脂質を含む層は単層として提供される。いくつかの態様では、脂質を含む層は二重層として提供される。好ましくは、脂質二重層は個々の脂質分子が二重層内で拡散することができる流体である。膜脂質分子は好ましくは両親媒性である。

【0266】

いくつかの態様では、脂質を含む層は、例えば、細胞の原形質膜のような天然の生物膜に見いだされるものに類似する１以上の連続二重層を含む。いくつかの態様では、脂質を含む層は支持された二重層の形態で提供される。いくつかの態様では、脂質を含む層は連続性の流体で支持されたリポソームである。いくつかの態様では、脂質を含む層は連続性の流体で支持された脂質二重層である。本明細書で使用されるとき、支持された二重層は固体支持体上に置かれた平面構造である。そのような配置では、支持された二重層の上面は露出される一方で、支持された二重層の内面は支持体に接触する。本開示の足場は一般に安定であり、高い流量または振動にさらされても大部分インタクトのままである。本開示の足場の脂質を含む層は、化学的な部分及び／または生物学的な部分による改変、誘導体化及び／または化学結合に適している。

【0267】

いくつかの態様では、本開示の足場の脂質を含む層はＭＳＲ層に不動化される。共有結合性相互作用及び非共有結合性相互作用を含むが、これらに限定されない任意の方法を使用して脂質層をＭＳＲに不動化することができる。いくつかの態様では、脂質を含む層はＭＳＲ層に吸着される。いくつかの態様では、脂質を含む層は１以上の共有結合性相互作用を介してＭＳＲに連結される、またはつながれる。脂質をケイ酸エステルに連結する方法の非限定的な例には、例えば、足場材料にて物質を捕捉するための相変化を使用する表面吸収及び物理的不動化が挙げられる。いくつかの態様では、脂質を含む層はＭＳＲ層に積層される。例えば、脂質フィルム（例えば、クロロホルムにて７７．５：２０：２．５のモル比でＤＰＰＣ／コレステロール／ＤＳＰＥ－ＰＥＧの溶液を含有する）をＭＳＲ層上に配置することができ、回転エバポレーターを使用して溶媒を蒸発させる。Ｍｅｎｇ ｅｔ ａｌ，ＡＣＳ Ｎａｎｏ，９（４），３５４０－３５５７，２０１５を参照のこと。いくつかの態様では、脂質二重層は、例えば、約１００ｎｍの孔サイズのフィルターを介した水和脂質フィルムの押し出しによって調製される。フィルターを通した脂質フィルムを次いで、例えば、ピペット混合によって多孔性の粒子コアに融合することができる。

【0268】

いくつかの態様では、アルキル化剤またはアシル化剤を介した共有結合を使用してＭＳＲ層上に脂質を含む層の安定な、構造化された且つ長期の保持を提供する。いくつかの態様では、脂質二重層は可逆的にまたは不可逆的にＭＳＲ層に不動化される。例えば、ＭＳＲ層は親水性であることができ、例えば、水酸化アンモニウム及び過酸化水素でさらに処理してさらに親水性の表面を提供することができる。例えば、任意のカップリング法を使用して、脂質二重層を多孔性ＭＳＲ層に融合して本開示の足場を形成することができる。

【0269】

いくつかの態様では、脂質を含む層はリン脂質を含む。そのような脂質の代表例には、それぞれその全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第９，０６６，８６７号及び同第８，３６７６，２８号に記載されている両性リポソームが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、脂質を含む層はジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、パルミトイル－オレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジオレオイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ジミリストイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイル－ホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１－ステアロイル－２－ミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（８：０－１４：０ＰＣ）及びそれらの任意の組み合わせから選択される脂質を含む。いくつかの態様では、脂質を含む層はパルミトイル－オレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）を含む。いくつかの態様では、脂質を含む層は哺乳類の細胞膜（例えば、ヒト細胞の原形質膜）の脂質組成を模倣する脂質組成を含む。多数の哺乳類の細胞膜の脂質組成は当業者によって特徴づけられており、容易に確かめられる（例えば、その内容全体が参照によって本明細書に組み込まれるＥｓｓａｉｄ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１８５８（１１）：２７２５－３６（２０１６）を参照のこと）。脂質を含む層の組成を変化させて脂質二重層の電荷または流動性を改変することができる。いくつかの態様では、脂質を含む層はコレステロールを含む。いくつかの態様では、脂質を含む層はスフィンゴ脂質を含む。いくつかの態様では、脂質を含む層はリン脂質を含む。いくつかの態様では、脂質は６～２０の炭素を含む飽和または不飽和の尾部を持つホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスホイノシチド、ホスホスフィンゴ脂質、またはそれらの組み合わせである。いくつかの態様では、脂質はＤＩＹＮＥ ＰＣ脂質である。いくつかの態様では、脂質を含む層は脂質種の液体秩序ドメインへの自然の分配に有利に働く脂質組成を含む（例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるＷａｎｇ Ｔ－Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４０（４３）：１３０３，１－４０（２００１）を参照のこと）。

【0270】

いくつかの態様では、脂質を含む層は、例えば、イオン性または非イオン性の界面活性剤のような化合物によって安定化される。本明細書に開示されている組成物で有用な界面活性剤の非限定的な例には、合成のリン脂質、その水素化した誘導体及び混合物；スフィンゴ脂質及びグリコスフィンゴ脂質；飽和または不飽和の脂肪酸；脂肪アルコール；ポリオキシンエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマー；エトキシ化脂肪酸と同様にそのエステルまたはエーテル；ジミリストイルホスファチジルコリン；ジミリストイルホスファチジルグリセロール；またはそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、界面活性剤はジミリストイルホスファチジルグリセロールを含む。

【0271】

いくつかの態様では、いったん細胞に接触すると、本開示の足場は少なくとも１日、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間、少なくとも１６日間、少なくとも１７日間、少なくとも１８日間、少なくとも１９日間、少なくとも２０日間、少なくとも２１日間、少なくとも２５日間、少なくとも３０日間、少なくとも３５日間、少なくとも４０日間、少なくとも５０日間、またはそれ以上、連続性の流体構造を保持する。

【0272】

ＩＩ．Ｂ．３．生分解性の足場
いくつかの態様では、本開示の足場は生分解性である。いくつかの態様では、足場構造は生物学的環境にさらされると実質的に分解する。いくつかの態様では、生物学的環境は組織培養条件、例えば、Ｔ細胞のようなリンパ球を培養するように任意で適応している組織培養培地を含む。いくつかの態様では、生物学的環境は生物学的な流体、例えば、血液、リンパ、ＣＳＦ、腹水などを含む。いくつかの態様では、生物学的環境は移植の部位での組織環境、例えば、血管、リンパ系、脂肪組織などである。

【0273】

いくつかの態様では、生分解性の足場は生体内での生物学的環境との接触に続いて１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、２０日、３０日、４５日、６０日、９０日、またはそれ以上にわたって実質的に分解される。いくつかの態様では、生分解性の足場は生体内での生物学的環境に接触した後、１週間未満で実質的に分解される。いくつかの態様では、生分解性の足場は生体内での生物学的環境に接触した後、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、２０日、３０日、４５日、６０日、９０日、またはそれ以上にわたって実質的に分解される。いくつかの態様では、生分解性の足場は試験管内での生物学的環境に接触した後、１週間未満で実質的に分解される。本明細書で使用されるとき、「実質的な分解」は足場組成物が生物学的環境に接触した場合に足場組成物の少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、またはそれ以上が分解されることを意味する。

【0274】

したがって、いくつかの態様では、メソ多孔性シリカロッドの特性、例えば、サイズ、配置及び／または多孔性を改変することによって足場組成物の分解動態を目的に合わせることが有利である。あるいは、培養条件を変えることによって（例えば、培地のｐＨを調整することによって）足場組成物の分解動態を改変することができる。

【0275】

前述の態様によれば、本開示の足場は、任意で生分解性である複数の機能性分子を含むことができる。いくつかの態様では、本開示の足場は他の生分解性の足場に封入される。そのような複合生分解性足場組成物を作製するのに有用な試薬及び技法の非限定的な例は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるＬｉａｏ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．Ｂ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｍａｔｅｒ．，１０２（２）：２９３－３０２，２０１４に記載されている。いくつかの態様では、足場は生理学的に適合性であり、任意で生分解性のポリマーから作られる。足場にて採用できるポリマーの非限定的な例は、その内容全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第６，６４２，３６３号、米国特許公開第２０１１／００２０２１６号、Ｍａｒｔｉｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．＆ Ｂｉｏｅｎｇ．，３３（１９８９）７９－８９），（Ｍａｔｔｈｅｗ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｈ，１６（１９９５）２６５－２７４），Ａｔａｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｕｒｏｌｏｇｙ，１５２（１９９４）６４１－６４３），及びＳｍｉｄｓｒｏｄ，ＴＩＢＴＥＣＨ，８（１９９０）７１－７８）に記載されている。

【0276】

本明細書に記載されている態様はさらに、任意で１以上の追加の薬剤とともに１以上の機能性分子、例えば、表面キュー及び可溶性キューを伴うプログラム可能な細胞シグナル伝達の足場に関する。いくつかの態様では、本開示は足場とその中でクラスター化したＴ細胞とを含む組成物を提供する。いくつかの態様では、組成物及び／または足場には目的の細胞を選択する、培養する、増殖させる、持続させる及び／または移植するための１以上の試薬が提供される。

【0277】

ＩＩ．Ｂ．４．機能性分子
いくつかの態様では、足場は１以上の機能性分子を含む。いくつかの態様では、機能性分子は細胞、例えば、Ｔ細胞と相互作用して相互作用を引き起こし、及び／または反応を誘発する、もしくは阻害する。いくつかの態様では、機能性分子は表面キューである。いくつかの態様では、機能性分子は可溶性キューである。いくつかの態様では、足場は少なくとも１つの表面キューを含む。いくつかの態様では、足場は少なくとも１つの可溶性キューを含む。いくつかの態様では、足場は少なくとも１つの表面キュー及び少なくとも１つの可溶性キューを含む。

【0278】

そのような機能性分子の非限定的な例には、ポリペプチド、抗原、抗体、ＤＮＡ、ＲＮＡ、炭水化物、ハプテン、他の小分子、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、本開示の機能性分子はポリペプチド（本明細書ではタンパク質及びペプチドと相互交換可能に使用される）を含む。

【0279】

ＩＩ．Ｂ．５．表面キュー
いくつかの態様では、足場は１以上の表面キューを含む。本明細書で使用されるとき、「表面キュー」は細胞表面の受容体に結合することができる分子を指す。いくつかの態様では、表面キューは足場構造の脂質を含む層に接触する、またはそれに結合する。いくつかの態様では、表面キューは細胞、例えば、Ｔ細胞の標的集団の１以上の生物活性の直接的な、間接的なまたは半直接的な調節に介在する。いくつかの態様では、表面キューはＴ細胞の直接的な活性化に介在する。いくつかの態様では、表面キューは標的Ｔ細胞上の細胞表面受容体への結合を介してＴ細胞を直接活性化する。いくつかの態様では、表面キューはＴ細胞への活性化シグナルである刺激分子を含む。本明細書で使用されるとき、Ｔ細胞「刺激分子」は、１以上のＴ細胞活性を高める、Ｔ細胞による１以上のサイトカインの発現を高める、Ｔ細胞による細胞傷害性を高める、Ｔ細胞の増殖を増やす、Ｔ細胞死を減らす、またはそれらの任意の組み合わせである任意の薬剤を指す。いくつかの態様では、表面キューは共刺激分子を含む。

【0280】

いくつかの態様では、本開示の足場の表面キューは抗体またはその抗原結合部分である。「抗体」という用語は本明細書で使用されるとき、１以上のポリペプチド鎖を含む任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子を広く指す。いくつかの態様では、抗体は、Ｉｇ分子の必須のエピトープ結合特性を保持する２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖、またはその任意の機能性断片、突然変異型、変形または派生物を含む。本明細書で使用されるとき、「抗体断片」は抗原のエピトープに結合することができる抗体の一部を指す。抗体の「抗原結合部分」という用語は本明細書で使用されるとき、抗原の認識及び／または抗原への結合を促進する抗体の１以上の部分を指す。

【0281】

本開示の範囲内の抗原結合部分の非限定的な例には、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨＩドメインから成る１価断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む２価断片、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨＩドメインから成るＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインから成るＦｖ断片、（ｖ）ｄＡｂ断片；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。いくつかの態様では、抗体は、ＶＨＨ抗体、ｖＮＡＲ抗体、ＩｇＮＡＲ抗体、ラクダ科抗体、ダイアボディ、モノボディ、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0282】

本開示の表面キューのいくつかの態様では、抗体は、単一特異性、二重特異性、二重特異性、または多重特異性の形式であり、１または２以上の異なる抗原に特異的に結合する。

【0283】

いくつかの態様では、表面キューには、Ｔ細胞を活性化する刺激分子（Ｔ細胞活性化分子）が含まれるが、これに限定されない。いくつかの態様では、刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体の構成成分と結合する及び／またはクラスター化することによってＴ細胞を活性化する。いくつかの態様では、刺激分子は抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、刺激分子は抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、刺激分子は抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、刺激分子は抗ＣＤ８１抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、刺激分子は、抗マクロファージスカベンジャー受容体（ＭＳＲ１）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、刺激分子は抗Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、表面キューは主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子またはその多量体を含む。いくつかの態様では、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子またはその多量体にＭＨＣペプチドが担持される。いくつかの態様では、表面キューはＭＨＣ及び免疫グロブリン（Ｉｇ）またはその多量体を含有するコンジュゲートを含む。

【0284】

Ｔ細胞は、例えば、ＣＤ３またはＣＤ３以外の１以上の細胞表面受容体との結合及び／またはライゲーションを介してＣＤ３依存性または非依存性に活性化することができる。このようなＣＤ３非依存性細胞表面分子の代表例には、例えば、ＣＤ２、ＣＤ４７、ＣＤ８１、ＭＳＲ１などが挙げられる。Ｔ細胞活性化のプロセスは、例えば、Ｒｙａｎ ｅｔ ａｌ、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１０，７，２０１０にて特徴づけられており、この文献は参照によってその全体が組み込まれる。

【0285】

いくつかの態様では、本開示の足場で使用される表面キューは抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合部分である。抗ＣＤ３抗体の代表的な例には、ムロモナブ（ＯＫＴ３）、オテリキシズマブ（ＴＲＸ４）、テプリズマブ（ｈＯＫＴ３ｙｌ（Ａｌａ－Ａｌａ））、ビシリズマブ、ＣＤ３抗原／Ｔ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）複合体（ＨＩＴ３ａ）内のＣＤ３の１７－１９ｋＤＣ鎖を認識する抗体、及びＣＤ３ｅ（ＵＣＨＴ１）内のＴＣＲ複合体の２０ｋＤａサブユニットを認識する抗体、またはそれらの抗原結合部分が挙げられるが、これらに限定されない。抗ＣＤ３抗体及びその抗原結合部分のさらなる非限定的な例は、米国特許公開番号２０１４－００８８２９５に記載されており、その全体が本明細書に参照により組み込まれている。

【0286】

いくつかの態様では、本開示の足場で使用される表面キューは抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合部分を含む。抗ＣＤ２抗体の代表的な例には、シプリズマブ（ＭＥＤＩ－５０７）及びＬＯ－ＣＤ２ｂ、またはそれらの抗原結合部分が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ－８０２（１９９９年６月２２日寄託）を参照のこと。

【0287】

いくつかの態様では、本開示の足場で使用される表面キューは抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合部分を含む。抗ＣＤ４７抗体の代表的な例には、モノクローナル抗体Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４、モノクローナル抗体ＭＡＢＬ－１、モノクローナル抗体ＭＡＢＬ－２（ＦＥＲＭ寄託番号ＢＰ－６１００及びＢＰ－６１０１）、またはそれらの抗原結合部分が挙げられるが、これらに限定されない。その開示が参照によって本明細書に組み込まれるＷＯ１９９９／１ ２９７３を参照のこと。

【0288】

いくつかの態様では、本開示の足場で使用される表面キューは抗ＣＤ８１抗体またはその抗原結合部分を含む。抗ＣＤ８１抗体の代表的な例には、モノクローナル抗体５Ａ６またはその抗原結合部分が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、その開示が参照によって本明細書に組み込まれるＭａｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４：１，２００３を参照のこと。

【0289】

いくつかの態様では、本開示の足場で使用される表面キューは抗ＭＳＲ１抗体またはその抗原結合部分を含む。抗ＭＳＲＩ抗体の代表的な例には、ラット抗ヒトＣＤ２０４抗体（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号ＭＡ５－１６４９４）及びヤギ抗ヒトＣＤ２０４／ＭＳＲ１抗体（Ｂｉｏｒａｄカタログ番号ＡＨＰ５６３）、またはその抗原結合部分が挙げられるが、これらに限定されない。

【0290】

いくつかの態様では、本開示の足場で使用される表面キューは抗ＴＣＲ抗体またはその抗原結合部分を含む。抗ＴＣＲ抗体の代表的な例には、マウス抗ヒトＴＣＲモノクローナル抗体ＩＭＭＵ５１０（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ、ＣＡ）（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９（１）：３４－４４，２０１２に記載）及びα／βＴＣＲ ＷＴ３１を定義するモノクローナル抗体（Ｇｕｐｔａ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１３２（ｌ）：２６－４４、１９９１に記載）、またはその抗原結合部分が挙げられるが、これらに限定されない。

【0291】

いくつかの態様では、表面キューは二重特異性抗体を含む。いくつかの態様では、二重特異性抗体を使用して、目的の細胞、例えば、がん細胞や病原体を本開示の標的エフェクター細胞、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞と近接させるので、標的エフェクター細胞のエフェクター機能に目的の細胞が特異的に介在する。いくつかの態様では、表面キューは二重特異性抗体を含み、抗体の一方のアームはＴ細胞抗原に特異的であり、抗体の他方のアームは腫瘍関連抗原または病原体特異的抗原またはその突然変異型に特異的である。

【0292】

いくつかの態様では、二重特異性抗体は活性化及び共刺激能力にて機能する。いくつかの態様では、二重特異性抗体はＣＤ３及びＣＤ２８に特異的に結合する。そのような表面キューは、本明細書では、例えば、「抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８」、もしくは「抗ＣＤ３×ＣＤ２８」もしくは「ＣＤ３×ＣＤ２８」二重特異性分子、または他の同様の用語で呼ばれる得る。ヒトＣＤ２８タンパク質は、ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＰ＿００１２３０００６．１、ＮＰ＿００１２３０００７．１、またはＮＰ＿００６１３０．１に示されるアミノ酸配列を有する。マウスＣＤ２８タンパク質は、ＧＥＮＢＡＮＫ受入番号ＮＰ＿０３１６６８．３に示されるアミノ酸配列を有する。前述の受入番号に含まれる種々のポリペプチド配列には、対応するｍＲＮＡ及び遺伝子配列が含まれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。本開示の範囲内で想定される二重特異性抗体の追加の例には、ソリトマブ（ＣＤ３×ＥｐＣＡＭ）、ブリナツモマブ（ＣＤ３×ＣＤ１９）、ＭＡＢＭＴ－１１１（ＣＤ３×ＣＥＡ）、及びＢＡＹ－２０１０１１２（ＣＤ３×ＰＳＭＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0293】

いくつかの態様では、本開示の足場で使用される表面キューはＣＤ３に結合する主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子を含む。代表的な例には、ＴＣＲ及びＣＤ８に結合するＭＨＣＩ型や、ＴＣＲ及びＣＤ４に結合するＭＨＣＩＩ型が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、ＭＨＣ分子には、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＤＰ、ＤＱ、及びＤＲ、またはそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、表面キューはリンカーに結合した２以上のＭＨＣ分子を含む。いくつかの態様では、ＭＨＣ分子は一価である。いくつかの態様では、ＭＨＣ分子は二価である。

【0294】

いくつかの態様では、ＭＨＣ分子には特定のペプチド（例えば、ウイルス抗原、細菌抗原、アレルゲン抗原、または腫瘍関連抗原に由来するペプチド）が担持される。

【0295】

いくつかの態様では、表面キューは融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、融合タンパク質はＴ細胞刺激特性を有する。Ｔ細胞刺激特性は、ＴＣＲを介して送達されるシグナルに加えて、Ｔ細胞に第２のシグナルを送達することを可能にするリンカーを使用することによって構築することができる。これは、Ｔ細胞に第２のシグナルを送達することができる別の細胞の細胞表面構造に対する結合親和性を有するリンカーを使用することによって達成することができる。したがって、リンカーはＴ細胞と他の細胞を橋渡しするのに役立つ。他の細胞をＴ細胞に近づけることで、他の細胞はＴ細胞に第２のシグナルを送達することができる。

【0296】

いくつかの態様では、本開示の表面キューは１以上の共刺激分子を含む。本明細書で使用されるとき「共刺激分子」は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）のような細胞に結合して、二次刺激シグナルまたは共刺激シグナルを提供するポリペプチドを指す。共刺激分子には免疫細胞表面受容体／リガンドが含まれ、Ｔ細胞と抗原提示細胞との間で係合し、Ｔ細胞にて刺激シグナルを発生させ、このシグナルは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）が抗原提示細胞上の抗原を認識した結果生じるＴ細胞の刺激シグナル（すなわち「共刺激」）と結びつく。本明細書で使用されるとき、「ＡＰＣ由来」の共刺激分子の可溶性形態は、Ｂ細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、及び他のＡＰＣによって正常に発現される共刺激分子を指す。Ｈｕｐｐａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．３，９７３－９８３（２００３）を参照のこと。「Ｔ細胞活性化の共刺激因子」は、共刺激リガンドが、前述の機序または経路のいずれかを介して、例えば、ＣＤ３依存性またはＣＤ３非依存性のＴ細胞活性化を介して活性化されているＴ細胞に結合し、活性化する能力を指す。共刺激活性化は、サイトカインの産生と周知の増殖アッセイ（例えば、ＣＦＳＥ染色）によってＴ細胞について測定することができる。

【0297】

そのような共刺激分子は、標的の細胞集団の直接的、間接的、または半直接的な刺激に介在することができる。いくつかの態様では、共刺激分子は１以上の表面キューの存在下でＴ細胞の活性化に介在する。

【0298】

いくつかの態様では、共刺激分子は共刺激受容体に特異的に結合する分子（例えば、組換えリガンド、精製された天然リガンド、またはそれらの誘導体）を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は、１以上の共刺激抗原に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分を含む。共刺激分子の代表的な例には、ＣＤ２８、４．ＩＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＧＩＴＲ（ＣＤ３５７）、ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）、ＨＶＥＭ（ＣＤ２７０）、ＬＴＲ（ＴＮＦＲＳＦ３）、ＤＲ３（ＴＮＦＲＳＦ２５）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）、ＣＲＴＡＭ（ＣＤ３５５）、ＴＩＭ１（ＨＡＶＣＲ１、ＫＩＭ１）、ＣＤ２（ＬＦＡ２、０Ｘ３４）、ＳＬＡＭ（ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ１）、２Ｂ４（ＣＤ２４４、ＳＬＡＭＦ４）、Ｌｙｌ０８（ＮＴＢＡ、ＣＤ３５２、ＳＬＡＭＦ６）、ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）、Ｌｙ９（ＣＤ２２９、ＳＬＡＭＦ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）及び／またはＣＲＡＣＣ（ＣＤ３１９、ＢＬＡＭＥ）に特異的に結合する分子が挙げられるが、これらに限定されない。

【0299】

この文脈では、ＣＤ２８はプロトタイプのＴ細胞共刺激受容体であり、例えば、樹状細胞や活性化Ｂ細胞のようなＡＰＣ上に発現されるＢ７ファミリーの分子に結合する。ＣＤ２８のリガンドには、免疫グロブリンスーパーファミリーの単量体膜貫通糖タンパク質であるＣＤ８０（Ｂ７－１）とＣＤ８６（Ｂ７－２）が挙げられる。

【0300】

いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＣＤ８１抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＣＤ１３７抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＯＸ４０（ＣＤ１３４）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＧＩＴＲ（ＣＤ３５７）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＨＶＥＭ（ＣＤ２７０）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＬＴｐＲ（ＴＮＦＲＳＦ３）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＤＲ３（ＴＮＦＲＳＦ２５）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＣＲＴＡＭ（ＣＤ３５５）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＴＩＭ１（ＨＡＶＣＲ１，ＫＩＭ１）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＳＬＡＭ（ＣＤ１５０，ＳＬＡＭＦ１）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗２Ｂ４（ＣＤ２４４，ＳＬＡＭＦ４）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗Ｌｙｌ０８（ＮＴＢＡ、ＣＤ３５２、ＳＬＡＭＦ６）を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＣＤ８４（ＳＬＡＭＦ５）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＣＤ２２９（Ｌｙ９，ＳＬＡＭＦ３）抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＰＤ－１（ＣＤ２７９）を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は抗ＣＲＡＣＣ（ＣＤ３１９，ＢＬＡＭＥ）抗体またはその抗原結合部分を含む。共刺激分子の代表例には、それぞれその全体が参照によって本明細書に組み込まれる、例えば、米国特許第８．７８５，６０４号；国際公開出願第ＷＯ２０１０／０７８５２６号；Ｍａｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４：１，（２００３）；Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ ＩｍｍｕｎｏＴｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，３：３７，（２０１５）；Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１８５：１９４９，（２０１０）；Ｈｏｂｏ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８９：３９，（２０１２）；Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ，８６（１９）１０６０６－１０６２０，（２０１２）；Ｗｏｌｆ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，２７；９４（６）：５６９－７４，（２０１２）；Ｆｌａｉｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：６５２４－６５２７，（２００４）；及びＳｔａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２９６：１４９－１５８，（２００５）に言及されているものが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、共刺激分子は、組換えの、または精製された天然のリガンドまたはその誘導体を含む。

【0301】

いくつかの態様では、足場はペアの表面キューを含む。いくつかの態様では、ペアの表面キューはＴ細胞のような標的細胞に一次刺激シグナル及び共刺激シグナルを提供する。そのようなペアの代表的な例には、ＣＤ３／ＣＤ２８、ＣＤ３／ＩＣＯＳ、ＣＤ３／ＣＤ２７、及びＣＤ３／ＣＤ１３７に結合できる抗体、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0302】

いくつかの態様では、足場はＣＤ３に結合する抗体と少なくとも１つの共刺激分子を含む結合ペアを含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの共刺激分子は抗ＣＤ２８抗体を含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの共刺激分子は抗ＣＤ２８抗体と第２の共刺激分子とを含む。いくつかの態様では、第２の共刺激分子はＩＣＯＳ、ＣＤ２７、またはＣＤ１３７に特異的に結合する抗体を含む。いくつかの態様では、足場は、以下の組み合わせ：（ａ）ＣＤ３、ＣＤ２８、及びＩＣＯＳに特異的に結合する抗体、（ｂ）ＣＤ３、ＣＤ２８、及びＣＤ２７に特異的に結合する抗体、（ｃ）ＣＤ３、ＣＤ２８、及びＣＤ１３７に特異的に結合する抗体、（ｄ）ＣＤ３、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、及びＣＤ２７に特異的に結合する抗体から選択される機能性分子の組み合わせを含む。

【0303】

いくつかの態様では、足場は、少なくとも２つの単一特異性抗体を含む結合ペアを含み、第１の抗体はペアの第１のメンバー、例えば、ＣＤ３に結合し、第２の抗体はペアの第２のメンバー、例えば、ＣＤ２８に結合する。いくつかの態様では、結合ペアはＣＤ３に特異的に結合する抗原結合ドメインと、ＣＤ２８に特異的に結合する抗原結合ドメインとを含む二重特異性抗体を含む。

【0304】

あるいは、いくつかの態様では、結合ペアは少なくとも２つの単一特異性抗体を含み、第１の抗体はＣＤ３に結合し、第２の抗体はＩＣＯＳに結合する。いくつかの態様では、結合ペアはＩＣＯＳに特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、抗体はＩＣＯＳを中和する拮抗抗体または抗原結合部分である。

【0305】

いくつかの態様では、結合ペアは少なくとも２つの単一特異性抗体を含み、第１の抗体はＣＤ３に結合し、第２の抗体はＣＤ２７に結合する。いくつかの態様では、双方の抗体は刺激抗体である。いくつかの態様では、双方の抗体はアゴニスト抗体である。いくつかの態様では、結合足場は、アゴニスト抗ＣＤ３結合ドメインとアゴニストＣＤ２７結合ドメインとを含む二重特異性抗体を含む。

【0306】

いくつかの態様では、結合ペアは少なくとも２つの単一特異性抗体を含み、第１の抗体はＣＤ３に結合し、第２の抗体はＣＤ１３７に結合する。いくつかの態様では、双方の抗体は刺激抗体である。いくつかの態様では、双方の抗体はアゴニスト抗体である。いくつかの態様では、結合足場は、アゴニスト抗ＣＤ３結合ドメインとアゴニストＣＤ１３７結合ドメインとを含む二重特異性抗体を含む。

【0307】

いくつかの態様では、足場は複数の表面キューを含む。一態様では、足場は複数の抗体を含み、各抗体は標的細胞の表面上の異なる受容体に優先的に結合する。

【0308】

例えば、表面キュー１／表面キュー２のような足場上に存在する異なる表面キュー分子の量は、例えば、機能性分子密度として理解することができ、表面積または足場あたりの理論的な分子数として算出され、または機能性分子の提示に使用されるコーティング脂質のモルパーセントもしくは前記機能性分子の化学量論に基づいて算出され得る。表面キューの密度は、機能性分子の親和性対合に使用される脂質を含む層における脂質の割合によって決定することができ、表面キューは脂質を含む層に取り付けられる。前記機能性分子の比率または化学量論は、取り付けられる種々の機能性分子の相対的な比率として表すことができる。機能性分子提示の密度は、ＭＳＲの合わせた表面キュー乾燥重量に対する乾燥重量比によっても決定することができる。

【0309】

本明細書で使用されるとき「親和性ペア」という用語には、抗原－抗体、受容体－ホルモン、受容体－リガンド、アゴニスト－アンタゴニスト、レクチン－炭水化物、核酸（ＲＮＡまたはＤＮＡ）ハイブリッド形成配列、Ｆｃ受容体またはマウスＩｇＧ－プロテインＡ、アビジン－ビオチン、ストレプトアビジン－ビオチン、ビオチン／ビオチン結合剤、Ｎｉ２＋またはＣｕ２＋キレート剤（例えば、ＮＴＡまたはその他のキレート剤／金属ペア）／ＨｉｓＴａｇ（６×ヒスチジンまたはその他のポリヒスチジンタグ）、及びウイルス－受容体の相互作用が含まれる。本開示の方法を実施する際には、他の種々の特定の結合ペアの使用が企図される。

【0310】

本明細書で使用されるとき、「ビオチン結合剤」には、アビジン、ストレプトアビジン、及び他のアビジン類似体、例えば、依然としてビオチン結合に適応する、ストレプトアビジンまたはアビジンコンジュゲート、アビジンまたはストレプトアビジンの高度に精製され分画された種、及び非アミノ酸変異体または部分的アミノ酸変異体、アミノ酸置換または化学置換がある組換えまたは化学合成されたアビジン類似体が包含される。

【0311】

いくつかの態様では、各ビオチン結合剤分子は少なくとも２つのビオチン部分に結合する。いくつかの態様では、各ビオチン結合剤分子は少なくとも４つのビオチン部分に結合する。本明細書で使用されるとき、「ビオチン」には、ビオシチンに加えてビオチン、及び例えば、ビオチンアミドカプロン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、ビオチン４－アミド安息香酸、ビオチンアミドカプロイルヒドラジド、及びその他のビオチン誘導体やコンジュゲートのような他のビオチン類似体が包含される。他の誘導体には、ビオチンデキストラン、ビオチン－ジスルフィド－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、ビオチン－６アミドキノリン、ビオチンヒドラジド、ｄ－ビオチン－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、ビオチンマレイミド、ｄ－ビオチンｐ－ニトロフェニルエステル、ビオチン化ヌクレオチド、及びＮε－ビオチニル－ｌ－リジンのようなビオチン化アミノ酸が挙げられる。

【0312】

親和性対合を介して機能性にすることができるリガンドには、受容体、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体、ウイルス、化学療法剤、受容体アゴニスト及びアンタゴニスト、抗体断片、レクチン、アルブミン、ペプチド、タンパク質、ホルモン、アミノ糖、脂質、脂肪酸、核酸、及び天然源または合成源から調製された、または単離された細胞が挙げられるが、これらに限定されない。本開示の実践を介して検出される任意の分子エピトープまたは受容体に対する任意の部位特異的リガンドを利用することができる。いくつかの態様では、リガンドは膜に固定されたタンパク質である。

【0313】

機能性分子は、前述のように、任意のタンパク質またはペプチドであることができる。いくつかの態様では、タンパク質はリガンド－受容体相互作用に関与する。例えば、Ｔ細胞活性化の重要な事象は、Ｔ細胞とＡＰＣの間の膜間接触の結果であり、この接触では、ＭＨＣ－ペプチドとＴＣＲ、ＬＦＡ－１とＩＣＡＭ－１、ＣＤ２とＣＤ４８、と同様にＢ７またはＣＴＬＡ－４とＣＤ２８を含む、種々のリガンド－受容体相互作用が２つの相対する膜間で発生する。

【0314】

ビオチン化リン脂質の所定の量をリポソーム製剤に組み込むと、ストレプトアビジンとビオチンの相互作用を介してビオチン化表面キューを正確に表面に付着させることができ、天然のＡＰＣによるＴ細胞へのキューの細胞表面提示を模倣する。

【0315】

いくつかの態様では、表面キューの密度または表面キューの組み合わせは、足場にて使用される親和性対合した（例えば、ビオチン化した）脂質の割合によって決定される。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．０１～約１．１％の間である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．１～約０．９％の間である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．１～約２．５％の間である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．０１％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．０５％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．１％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．２％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．２５％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．３％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．４％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．５％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．６％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．７％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．８％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約０．９％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約１．０％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約１．１％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約１．５％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約２．０％である。いくつかの態様では、ビオチン化脂質の割合は約２．５％である。

【0316】

いくつかの態様では、表面キューの密度または表面キューの組み合わせは、例えば、金属－キレート脂質及びヒスチジン－タグ付き表面キューを使用する場合に、足場にて過剰な親和性対合した脂質が存在するという条件で、足場の担持中に加えられる各親和性対合した表面キューの質量によって決定される。

【0317】

いくつかの態様では、ＭＳＲの表面キューに対する乾燥重量比（化学量論）は約１：１～約１００：１である。いくつかの態様では、ＭＳＲの表面キューに対する乾燥重量比（化学量論）は約１０：１～約５０：１である。いくつかの態様では、ＭＳＲの表面キューに対する乾燥重量比（化学量論）は約２０：１～約５０：１である。いくつかの態様では、足場のＭＳＲの表面キューに対する乾燥重量比は約１０，０００：１～約１：１である。いくつかの態様では、足場のＭＳＲの表面キューに対する乾燥重量比は約５，０００：１～約１：１、約１、０００：１～約１：１、約５００：１～約１：１、または約１００：１～約１：１である。いくつかの態様では、足場のＭＳＲの表面キューに対する乾燥重量比は約１０，０００：１、約５，０００：１、約２，５００：１、約１，０００：１、約７５０：１、約５００：１、約２５０：１、約１００：１、約７５：１、約５０：１、約４０：１、約３０：１、約２５：１、約２０：１、約１０：１、または約１：１である。

【0318】

ＩＩ．Ｂ．６．可溶性キュー
いくつかの態様では、足場は複数の可溶性キューを含む。本明細書で使用されるとき、「可溶性キュー」は足場構造と接触する細胞－シグナル伝達分子を指す。いくつかの態様では、可溶性キューは足場構造のＭＳＲを含む層に接触する、またはそれに結合する。いくつかの態様では、本開示の足場は、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－２１、Ｗｎｔタンパク質、及び形質転換増殖因子（ＴＧＦ－β）、またはそのアゴニスト、その模倣体、その変異体、その機能性断片、またはそれらの組み合わせから成る群から選択される複数の可溶性キューを含有する。

【0319】

代表的な可溶性キューには、ヒト及び／またはそのマウスホモログの以下のＮＣＢＩ受入番号：ＩＬ－１、ＮＰ＿０００５６６．３（ヒト）；ＩＬ－１α、ＮＰ＿０３４６８４．２（マウス）；ＩＬ－１、ＮＰ＿０００５６７．１（ヒト）；ＩＬ－１β、ＮＰ＿０３２３８７．１（マウス）；ＩＬ－２、ＮＰ＿０００５７７．２（ヒト）及びＮＰ＿０３２３９２．１（マウス）；ＩＬ－４、ＮＰ＿０００５８０．１、ＮＰ＿７５８８５８．１（ヒト）及びＮＰ＿０６７２５８．１（マウス）；ＩＬ－５、ＮＰ＿０００８７０．１（ヒト）及びＮＰ＿０３４６８８．１（マウス）；ＩＬ－７、ＮＰ＿０００８７１．１、ＮＰ＿００１１８６８１５．１、ＮＰ＿００１１８６８１６．１、ＮＰ＿００１１８６８１７．１（ヒト）及びＮＰ＿０３２３９７．１（マウス）；ＩＬ－１０、ＮＰ＿０００５６３（ヒト）及びＮＰ＿０３４６７８．１（マウス）；ＩＬ－１２Ａ、ＮＰ＿０００８７３．２（ヒト）及びＮＰ＿００１１５２８９６．１、ＮＰ＿０３２３７７．１（マウス）；ＩＬ－１２Ｂ、ＮＰ＿００２１７８．２（ヒト）及びＮＰ＿００１２９０１７３．１（マウス）；ＩＬ－１５、ＮＰ＿０００５７６．１、ＮＰ＿７５１９１５．１（ヒト）及びＮＰ＿００１２４１６７６．１、ＮＰ＿０３２３８３．１（マウス）；ＩＬ－１７（ａ）、ＮＰ＿００２１８１．１、ＮＰ＿０３４６８２．１（ヒト）；ＮＰ＿００２１８１．１；ＮＰ＿０３４６８２．１（マウス）；ＴＧＦ－ベータ１、ＮＰ＿０００６５１．３（ヒト）及びＮＰ＿０３５７０７．１（マウス）；ＴＧＦ－ベータ２、ＮＰ＿００１１２９０７１．１、ＮＰ＿００３２２９．１（ヒト）及びＮＰ＿０３３３９３．２（マウス）；及びＴＧＦ－ベータ、ＮＰ＿００３２３０．１（ヒト）が挙げられるが、これらに限定されない。前述の可溶性キューの断片及び変異型の非限定的な例は、例えば、データベースＵＮＩＰＲＯＴに提示されている。

【0320】

いくつかの態様では、可溶性キューは、上記に列挙された１以上の追加の可溶性キューとともにインターロイキン－２（ＩＬ－２）またはそのアゴニスト、その模倣体、その変異体、その機能性断片、またはそれらの組み合わせを含む。ＩＬ－２のアゴニスト、その模倣体、その変異体及びその機能性断片の非限定的な例には、それぞれその全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第５，４９６，９２４号；同第６，９５５，８０７号；Ｍａｒｇｏｌｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１；１３（１１）：３３１２－９（２００７）；Ｅｃｋｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：４３１２－４３１８（２０００）；Ｌｅｖｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，４８４，５２９－５３３，（２０１２）；及びＺｕｒａｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ，９（１２）：３８９９－３９０５（１９９０）に提供されたものが挙げられる。

【0321】

いくつかの態様では、足場は複数の可溶性キューを含む。いくつかの態様では、足場は、ＩＬ－２を含む第１の可溶性キューと、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５またはＩＬ－１５のスーパーアゴニストを含む第２の可溶性キューとを含む。ＩＬ－１５のスーパーアゴニスト（ＩＬ－１５ＳＡ）はＩＬ－１５の可溶性ＩＬ－１５受容体－ａとの組み合わせであり、ＩＬ－１５単独よりも大きな生物活性を持つ。いくつかの態様では、足場はＩＬ－２を含む第１の可溶性キューと、ＩＬ－７を含む第２の可溶性キューと、ＩＬ－１５を含む第３の可溶性キューとを含む。いくつかの態様では、足場はＩＬ－２を含む第１の可溶性キューと、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５またはＩＬ－１５スーパーアゴニストを含む第２の及び第３の可溶性キューとを含む。

【0322】

いくつかの態様では、ＭＳＲ質量比への可溶性キューの総投入量（μｇのＭＳＲに対するμｇの可溶性キューの総投入量）は約０．００１～０．００５である。いくつかの態様では、ＭＳＲ質量比への可溶性キューの総投入量は約０．００１である。いくつかの態様では、ＭＳＲ質量比への可溶性キューの総投入量は約０．００２である。いくつかの態様では、ＭＳＲ質量比への可溶性キューの総投入量は約０．００３である。いくつかの態様では、ＭＳＲ質量比への可溶性キューの総投入量は約０．００４である。いくつかの態様では、ＭＳＲ質量比への可溶性キューの総投入量は約０．００５である。いくつかの態様では、足場が１を超える可溶性キューを含む場合、キューは等量で存在する。いくつかの態様では、足場は１を超える可溶性キューを含み、その際、キューは不均等な量で存在する。

【0323】

ＩＩ．Ｂ．７．足場のさらなる態様
いくつかの態様では、足場は複数の表面キュー及び可溶性キューを含む。典型的な足場は前述の機能性分子のそれぞれの少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、またはそれ以上を含むことができる。

【0324】

いくつかの態様では、機能性分子は組換え体である。いくつかの態様では、機能性分子は哺乳類対応物のヒト化誘導体である。機能性分子が由来する例示的な哺乳類種には、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、フェレット、ネコ、イヌ、サル、または霊長類が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、機能性分子は前述の機能性分子のヒト型またはヒト化型である。

【0325】

機能性分子を修飾して生体内でのタンパク質の安定性を高めることができる。あるいは、多かれ少なかれ免疫原性であるように機能性分子を操作することができる。例えば、種々の機能性分子の構造が知られていれば、アミノ酸残基の１以上で、例えば、グリコシル化部位で配列を修飾して免疫原性の変異型を生成することができる。

【0326】

日常的な技法を使用して、ＭＳＲを含む層及び／または脂質を含む層に、任意の機能性分子（例えば、任意の抗原、抗体、タンパク質、酵素、その断片、組換えリガンドまたは精製した天然のリガンドまたはその誘導体、またはそれらの任意の組み合わせ）を直接、または間接的に不動化することができる。いくつかの態様では、機能性分子は細胞小器官（例えば、ゴルジ膜または原形質膜）、細胞、細胞クラスター、組織、微生物、動物、植物、またはその抽出物にて提供され、それは次にＭＳＲを含む層または脂質を含む層に不動化される。いくつかの態様では、機能性分子は、所望の場所で、例えば、脂質を含む層の外面にて遺伝子操作または化学反応によって合成される。

【0327】

前述の機能性分子、例えば、表面キュー及び可溶性キューのそれぞれは互いに独立して、ＭＳＲを含む層または脂質を含む層に担持され、吸着され、または組み込まれ得る。したがって、いくつかの態様では、表面キューはＭＳＲを含む足場の層に担持される、吸着される、または組み込まれる。一態様では、表面キューは脂質を含む層に担持される、吸着される、または組み込まれる。いくつかの態様では、表面キューはＭＳＲを含む層と同様に脂質を含む層の双方に担持される、吸着される、または組み込まれる。いくつかの態様では、表面キューはＭＳＲを含む層に担持された、吸着された、または組み込まれた共刺激分子を含む。いくつかの態様では、共刺激分子は脂質を含む層に担持される、吸着される、または組み込まれる。いくつかの態様では、表面キューは、ＭＳＲを含む層と同様に脂質を含む層の双方に担持されている、吸着されている、または組み込まれている共刺激分子を含む。いくつかの態様では、可溶性キューはＭＳＲを含む層に担持される、吸着される、または組み込まれる。いくつかの態様では、可溶性キューは脂質を含む層に担持される、吸着される、または組み込まれる。いくつかの態様では、可溶性キューはＭＳＲを含む層と同様に脂質を含む層の双方に担持される、吸着される、または組み込まれる。

【0328】

一般に、機能性分子とＭＳＲを含む層及び／または脂質を含む層とは反応性基の使用を介して一緒に連結することができ、この反応性基は通常、連結プロセスにより新しい有機官能基または非反応性種に変換される。反応性の官能基（複数可）を前述の構成成分のいずれかに担持することができる。本開示を実践するのに有用な反応性基及び反応のクラスは一般に、バイオコンジュゲート化学の当該技術分野で周知のものである。反応性キレート化合物とともに利用可能な反応の現在好まれるクラスは相対的に穏やかな条件下で進行するものである。これらには、求核性置換（例えば、アミン及びアルコールのアシルハロゲン化合物、活性エステルとの反応）、求電子性置換（例えば、エナミン反応）、炭素－炭素や炭素－ヘテロ原子の多重結合への付加（例えば、Ｍｉｃｈａｅｌ反応、Ｄｉｅｌｓ－Ａｌｄｅｒ付加）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、化学カップリングはｃｌｉｃｋｃｈｅｍｉｓｔｒｙｔｏｏｌｓ．ｃｏｍにて議論されたクリック化学を含む。いくつかの態様では、化学カップリングはクリック化学試薬（例えば、ＤＢＣＯまたはアジド）を含む。これらの反応及び他の有用な反応は、例えば、Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８５；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，１９９６；及びＦｅｅｎｅｙ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ；ｖｏｌ．１９８，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ， Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，１９８２にて議論されている。

【0329】

いくつかの態様では、足場は１以上の追加の分子を含む。いくつかの態様では、１以上の追加の分子は天然に存在する化合物、合成で製造された化合物、または組換え化合物である。いくつかの態様では、１以上の追加の分子はその断片を含む、ペプチド、ポリペプチド、核酸、小分子、ハプテン、炭水化物、または薬剤、またはそれらの組み合わせを含む。

【0330】

いくつかの態様では、アンカーを使用して機能性分子を孔壁に接続する。しかしながら、アンカーは必須の構成成分ではない。いくつかの態様では、メソ多孔性シリカの各孔は少なくとも１つの機能性分子を収容する。孔サイズは不動化される機能性分子のサイズに依存する。いくつかの態様では、機能性分子は孔に不動化される。いくつかの態様では、機能性分子は静電結合によって孔の内面に担持されるまたは吸着される。いくつかの態様では、機能性分子は非共有結合によって孔の内面に担持されるまたは吸着される。

【0331】

いくつかの態様では、アンカーは機能性分子の大きな構造変化を抑え、安定的にそれを保持する。いくつかの態様では、アンカーはメソ多孔性材料と同じ構成成分を実質的に含む。いくつかの態様では、アンカーは、所望の機能性分子への結合を可能にする１以上の官能基：ヒドロキシル基、アミド基、アミノ基、ピリジン基、尿素基、ウレタン基、カルボキシル基、フェノール基、アゾ基、ヒドロキシル基、マレイミド基、シラン誘導体、アミノアルキレン基、またはそれらの組み合わせを含む。

【0332】

いくつかの態様では、足場は抗原を含む。いくつかの態様では、抗原はポリペプチドを含む。いくつかの態様では、抗原は精製される。いくつかの態様では、抗原は自己抗原である。いくつかの態様では、抗原は非自己抗原である。自己抗原は、自己免疫障害及びがんを含むが、これらに限定されないヒトの疾患または障害に具体的に関連する。非自己抗原はウイルス、細菌、原虫、寄生虫、または真菌を含むが、これらに限定されない病原体に具体的に関連する。いくつかの態様では、抗原は、ＭＨＣ分子、例えば、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＤＰ、ＤＱ、及びＤＲ上に担持され、次いで足場に組み込まれる。

【0333】

いくつかの態様では、抗原は直接結合または間接結合を介して免疫細胞と相互作用するように製剤化される。直接結合の種類には、例えば、同族受容体、例えば、Ｔ細胞受容体との抗原の会合または結合が挙げられる。間接結合は１以上の二次的な薬剤または細胞型の仲介を介して発生することができる。例えば、抗原は先ず、Ｂ細胞または抗原提示細胞（ＡＰＣ）に結合し、プロセッシングを受け（例えば、分解され）、標的細胞集団、例えば、Ｔ細胞が結合する細胞表面の主要組織適合複合体（ＭＨＣ）に提示される。あるいは、抗原は種々のサイトカイン、増殖因子、ケモカインなどを分泌する他の仲介細胞を動員することができ、それは次に標的免疫細胞の集団を引き付ける。いくつかの態様では、抗原はＣＤ１９、ＣＤ２２、またはその断片である。

【0334】

いくつかの態様では、足場は膜関連タンパク質を含み、それは脂質を含む層に直接、または間接的に係留される。いくつかの態様では、膜関連タンパク質は、選択的または非選択的な膜輸送タンパク質、イオンチャネル、孔形成タンパク質、膜常在受容体、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0335】

いくつかの態様では、足場は、増殖因子、サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－２１）、ケモカイン、インターロイキン、接着シグナル伝達分子、インテグリンシグナル伝達分子、その断片、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、これらの分子を可溶性キュー及び／または表面キューとして使用することができ、ＭＳＲを含む層または脂質を含む層に担持することができる。

【0336】

いくつかの態様では、足場は接着分子を含む。いくつかの態様では、接着分子はさらにシグナル伝達剤として役立つ。接着シグナル伝達分子の代表例には、フィブロネクチン、ラミニン、コラーゲン、トロンボスポンジン１、ビトロネクチン、エラスチン、テネイシン、アグレカン、アグリン、骨シアノタンパク質、軟骨マトリックスタンパク質、フィブロノーゲン、フィブリン、フィブリン、ムチン、エンタクチン、オステオポンチン、プラスミノーゲン、レストリクチン、セルグリシン、ＳＰＡＲＣ／オステオネクチン、ベルシカン、ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子、多糖ヘパリン硫酸、コネキシン、コラーゲン、ＲＧＤ（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ）及びＹＩＧＳＲ（Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ）ペプチド及び環状ペプチド、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、コンドロイチン－６－硫酸、インテグリンリガンド、セレクチン、カドヘリン、及び免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーが挙げられるが、これらに限定されない。

【0337】

いくつかの態様では、機能性分子は、膜関連タンパク質、例えば、グラミシジン、ａ－らせん束、例えば、バクテリオロドプシンまたはＫ＋チャネル；β－バレル、例えば、ａ－ヘモリシン、ロイコシジンまたはＥ．ｃｏｌｉのポーリン、またはそれらの組み合わせに結合して脂質を含む層と会合する、及び／またはそれに挿入する。

【0338】

いくつかの態様では、足場はさらに、１以上の動員剤を含む。いくつかの態様では、動員剤はＴ細胞動員剤、Ｂ細胞動員剤、樹状細胞動員剤、及びマクロファージ動員剤から成る群から選択される薬剤を含む。そのような動員剤の例には、ケモカイン、ケモカインリガンド、またはそれらの断片、変異体、同族体、及び組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。優先的な動員は、他の種類の免疫細胞と比べて１以上の特定の種類の免疫細胞が少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも１００％、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも８倍、少なくとも１０倍またはそれ以上蓄積することを特徴とする。

【0339】

必要に応じて、足場は免疫細胞の特定のサブセット、例えば、汎Ｔ細胞、またはＴ細胞の特定の亜集団を操作できるように動員剤及び接着分子のサブセットを含むように具体的に製剤化することができる。いくつかの態様では、足場は、標的細胞で発現されている細胞表面マーカーに特異的に結合する薬剤を使用して製剤化され／製造される。例えば、Ｔ細胞の文脈では、足場は、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４^＋Ｔ細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８^＋Ｔ細胞）、メモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＯ^＋Ｔ細胞）、サプレッサーＴ細胞（Ｔｓどちらかの細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞；ＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞及びＦＯＸＰ３－Ｔｒｅｇとしてさらに特徴づけられる）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ細胞；差次的にＣＤｌｄ＋を発現する）、粘膜関連不変異体（ＭＡＩＴ；差次的にＭＲ１を発現する）、ガンマデルタＴ細胞（γδＴ細胞；γ鎖１つとδ鎖１つを含有するＴＣＲを含む）を優先的に動員するのに適応させることができる。細胞表面マーカーに結合するそのような薬剤には、例えば、ハプテン、ペプチド、リガンド、抗体など、またはそれらの任意の組み合わせを挙げることができる。１以上の細胞亜型の単離物を濃縮する他の日常的な技法は生体内原位置で、または生体内原位置以外で使用することができる。

【0340】

ＩＩ．Ｂ．８．作製方法
本開示の足場は、種々の方法で生成することができ、標的エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞の操作で使用するために足場に従って機能性分子または追加の薬剤の種類及び存在量を調節すること、エフェクター細胞の特定の集団、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞の亜集団の単離、疾患の治療法、ならびに組成物及びキットの製造を含むが、これらに限定されない種々の用途に使用することができる。そのような足場を作製し、使用する方法の例は、その内容全体が参照によって本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／０１３７９７Ａ１号及びＣｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３６（２）：１６０－１６９（２０１８））に記載されている。

【0341】

細胞の所望の集団の単離及び／または増殖については、細胞及び足場表面の濃度は変えることができる。いくつかの態様では、足場と細胞が混合される容量を減らして（すなわち、細胞の濃度を高めて）細胞と足場の最大の接触を確保する。いくつかの態様では、２０億細胞／ｍｌの濃度が使用される。一実施形態では、１０億細胞／ｍＬの濃度が使用される。さらなる一実施形態では、１億細胞／ｍＬ超が使用される。さらなる態様では、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万、または５０００万の細胞／ｍｌの細胞濃度が使用される。さらに別の態様では、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億の細胞／ｍｌの細胞濃度が使用される。さらなる態様では、１億２５００万または１億５０００万の細胞／ｍｌの濃度が使用される。高い濃度を使用すると、高い細胞収量、細胞活性化及び細胞増殖をもたらすことができる。さらに、高い細胞濃度の使用は、目的の標的抗原を弱く発現している細胞、例えば、ＣＤ２８－陰性Ｔ細胞の、または多数の腫瘍細胞が存在する試料（例えば、白血病の血液、腫瘍組織など）からの細胞のさらに効率的な捕捉を可能にすることができる。細胞のそのような集団は治療上価値があり、入手するのが望ましい。例えば、細胞の高い濃度を使用すると、通常ＣＤ２８を弱く発現しているＣＤ８＋Ｔ細胞のさらに効率的な選択が可能になる。

【0342】

他の態様では、細胞の低い濃度を使用することが望ましい。足場：細胞の比を低下させることによってこれを達成することができるので、足場と細胞の間の相互作用が最小限に抑えられる。この方法によって、足場に結合する多量の所望の抗原を発現している細胞を選抜する。ＣＤ４＋Ｔ細胞は高レベルのＣＤ２８を発現しており、希釈濃度にてＣＤ８＋Ｔ細胞よりも効率的に捕捉される。いくつかの態様では、使用される細胞の濃度は５×１０^６／ｍｌである。他の態様では、使用される濃度は約１×１０^４／ｍｌ～１×１０^９／ｍｌ、及びその間の整数値、例えば、１×１０^５／ｍｌ～１×１０^８／ｍｌ、１×１０^６／ｍｌ～１×１０^７／ｍｌ、１×１０^７／ｍｌ～１×１０^９／ｍｌであることができる。

【0343】

ＩＩ．Ｃ．細胞
本開示のいくつかの態様は、本明細書に開示されているように、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてプログラム可能な細胞－シグナル伝達の足場に免疫細胞を接触させることを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養する方法を対象とする。培地に播かれる免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、治療を必要とする対象から回収される及び／または単離される細胞であることができる。いくつかの態様では、培地に播かれる免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は培養する前に操作されている。いくつかの態様では、培地に播かれる免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を増殖させている。培地に播かれる免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は出発（開始、すなわち、患者試料、アフェレーシス試料、バフィーコート）細胞と呼ばれ得る。本明細書に開示されている代謝再プログラム可培地にて培養した結果生じる免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は結果（培養したまたは増殖させた）細胞と呼ばれ得る。

【0344】

本明細書に開示されている方法は、培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞について低分化表現型を促進する培養条件を提供する。いくつかの態様では、出発免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞はヒト対象から単離される。いくつかの態様では、他家細胞療法のために、出発免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞がヒト対象から単離される。いくつかの態様では、自家細胞療法のために、出発免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞がヒト対象から単離される。いくつかの態様では、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞はＮＫ細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞はＴＩＬである。いくつかの態様では、免疫細胞はＴｒｅｇである。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞がヒト対象から単離される。いくつかの態様では、免疫細胞は腫瘍浸潤Ｔ細胞または腫瘍浸潤ＮＫ細胞である。特定の態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は操作される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むように操作される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含むように操作される。

【0345】

いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは本明細書に開示されている方法に従って培養する前に操作される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは本明細書に開示されている方法に従って培養された後で操作される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、細胞操作の前に、その最中に、及びその後で、例えば、少なくとも５ｍＭのカリウムイオンを含む低張性または等張性の培地にて本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬは、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように操作される。特定の態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬを、本明細書に開示されている条件下で、例えば、少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンを含む低張性または等張性の培地にて培養すると、さらに高い形質導入効率がもたらされる。いくつかの態様では、形質導入効率は、４ｍＭ以下のカリウムイオンを含む培地で培養された細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬと比べて、本明細書に開示されている方法に従って少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオンを含む低張性または等張性の培地にて培養された細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬでは少なくとも約２倍高い。いくつかの態様では、形質導入効率は、４ｍＭ以下のカリウムイオンを含む培地にて培養した細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬと比較した場合、本明細書に開示されている方法に従って、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオンを含む低張性または等張性の培地にて培養した細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬでは少なくとも約２．５倍高い。

【0346】

いくつかの態様では、細胞は、抗原受容体及び／または別の追加のポリペプチドを発現する構築物を含む。いくつかの態様では、抗原受容体は、抗体、ｓｃＦｖなどの操作抗体、ＣＡＲ、操作ＴＣＲ、ＴＣＲ模倣体（例えば、抗体－Ｔ細胞受容体（ａｂＴＣＲ）もしくはキメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ））、またはキメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）を含む。例として、ＴＣＲは、ＴＣＲ（例えば、アルファ／ベータＴＣＲまたはガンマ／デルタＴＣＲ）の抗原結合ドメインが、抗体（抗体の定常ドメインの有無にかかわらず）の抗原結合ドメインで置き換えられている操作ＴＣＲを含み得、次いで操作ＴＣＲは、ＴＣＲのシグナル伝達機能を保持しながら抗体の抗原に特異的となる。キメラシグナル伝達受容体は、（１）細胞外結合ドメイン（例えば、天然／改変受容体細胞外ドメイン、天然／改変リガンド細胞外ドメイン、ｓｃＦｖ、ナノボディ、Ｆａｂ、ＤＡＲＰｉｎ、及びａｆｆｉｂｏｄｙ）、（２）膜貫通ドメイン、ならびに（３）細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、転写因子を活性化するドメイン、あるいはＪＡＫ／ＳＴＡＴ、キナーゼ、ホスファターゼ、及びユビキチンを動員及び／または活性化するドメイン、ＳＨ３、ＳＨ２、及びＰＤＺ）を含み得る。例えば、ＥＰ３４０７９３Ｂ１、ＷＯ２０１７／０７０６０８、ＷＯ２０１８／２００５８２、ＷＯ２０１８／２００５８３、ＷＯ２０１８／２００５８５、及びＸｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（２０１８）４：６２を参照のこと。

【0347】

いくつかの態様では、抗原受容体及び／または別の追加のポリペプチドを発現する構築物は調節要素を含み、その際、ベクターは外来性のポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、ベクターはポリシストロン性の発現ベクターである。いくつかの態様では、調節要素はプロモーターを含む。いくつかの態様では、プロモーターはｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位が置換された（ＭＮＤ）プロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、ユビキチンプロモーター、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、ベクターはウイルスベクター、哺乳類ベクター、または細菌ベクターを含む。いくつかの態様では、ベクターはアデノウイルスベクター、レンチウイルス、センダイウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、ハイブリッドベクター、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む。いくつかの態様では、ベクターはレンチウイルスである。

【0348】

いくつかの態様では、抗原受容体は目的の抗原（例えば、腫瘍抗原または病原体の抗原）を標的とする。抗原としては、ＡＦＰ（アルファ－フェトプロテイン）、αｖβ６または別のインテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ６、Ｂｒａｆ、ＣＡ９（炭酸脱水酵素９）、ＣＣＬ－１（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド１）、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ３５２、ＣＥＡ（がん胎児性抗原）、クローディン１８．２、クローディン６、ｃ－ＭＥＴ、ＤＬＬ３（デルタ様タンパク質３）、ＤＬＬ４、ＥＮＰＰ３（エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３）、ＥｐＣＡＭ、ＥＰＧ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＰＧ－４０、エフリンＢ２、ＥＰＨａ２（エフリン受容体Ａ２）、ＥＲＢＢ二量体、エストロゲン受容体、ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ受容体）、ＦＡＰ－α（線維芽細胞活性化タンパク質α）、胎児ＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ＦＣＲＬ５、ＦＲ－α（葉酸受容体アルファ）、ＧＣＣ（グアニルシクラーゼＣ）、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＰＣ２（グリピカン－２）、ＧＰＣ３、ｇｐ１００（糖タンパク質１００）、ＧＰＮＭＢ（糖タンパク質ＮＭＢ）、ＧＰＲＣ５Ｄ（Ｇタンパク質共役受容体５Ｄ）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、Ｂ型肝炎表面抗原、ＨＬＡ－Ａ１（ヒト白血球抗原Ａ１）、ＨＬＡ－Ａ２（ヒト白血球抗原Ａ２）、ＨＭＷ－ＭＡＡ（ヒト高分子量黒色腫関連抗原）、ＩＧＦ１Ｒ（インスリン様成長因子１受容体）、Ｉｇカッパ、Ｉｇラムダ、ＩＬ－２２Ｒａ（ＩＬ－２２受容体アルファ）、ＩＬ－１３Ｒａ２（ＩＬ－１３受容体アルファ２）、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＬＩ細胞接着分子（ＬＩ－ＣＡＭ）、Ｌｉｖ－１、ＬＲＲＣ８Ａ（８ファミリーメンバーＡを含有するロイシンリッチリピート）、ルイスＹ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＲＴ－１（メランＡ）、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）、ＭＣＳＰ（黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、メソテリン、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ１６、ＭＨＣ／ペプチド複合体（例えば、ＡＦＰ、ＫＲＡＳ、ＮＹ－ＥＳＯ、ＭＡＧＥ－Ａ、及びＷＴ１に由来するペプチドと複合化したＨＬＡ－Ａ）、ＮＣＡＭ（神経細胞接着分子）、ネクチン－４、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラー群２メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＥＳＯ、腫瘍胎児抗原、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＲＡＭＥ（黒色腫優先発現抗原）、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質α）、ＳＬＩＴ、ＳＬＩＴＲＫ６（ＮＴＲＫ様タンパク質６）、ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原１）、サバイビン、ＴＡＧ７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＰＢＧ（栄養膜糖タンパク質）、Ｔｒｏｐ－２、ＶＥＧＦＲ１（血管内皮増殖因子受容体１）、ＶＥＧＦＲ２、ならびにＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶ、及び他の病原体に由来する抗原が挙げられ得るが、これらに限定されない。

【0349】

特定の態様では、抗原受容体は、ｈＴＥＲＴを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＫＲＡＳを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、Ｂｒａｆを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＴＧＦβＲＩＩを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＭＡＧＥＡ１０／Ａ４を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＡＦＰを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＰＲＡＭＥを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＭＡＧＥＡ１を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体はＷＴ－１を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体はＮＹ－ＥＳＯを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体はＰＲＡＭＥを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体はＮＹ－ＥＳＯを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体はＣＤ１９を標的とする。

【0350】

いくつかの態様では、抗原受容体はＢＣＭＡを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ１４７を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ１９を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ１９及びＣＤ２２を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体はＣＤ１９及びＣＤ２８を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ２０を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ２０及びＣＤ１９を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ２２を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＤ３０を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＣＥＡを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＤＬＬ３を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＥＧＦＲｖＩＩＩを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＧＤ２を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＨＥＲ２を標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体は、ＩＬ－１ＲＡＰを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体はメソテリンを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体はメソテリンを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体はＮＫＧ２Ｄを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体はＰＳＭＡを標的とする。いくつかの態様では、抗原受容体はＴｎＭＵＣ１を標的とする。

【0351】

いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は本明細書に開示されている方法に従って培養する前に操作される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、本明細書に開示されている方法に従って培養した後に操作される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、本明細書に開示されている方法に従って、例えば、細胞操作前、細胞操作中、及び細胞操作後に、少なくとも５ｍＭのカリウムイオンを含む低張性または等張性ｍの培地にて培養される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように操作される。特定の態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を、本明細書に開示されている条件下で、例えば、少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンを含む低張性または等張性の培地にて培養すると、さらに高い形質導入効率がもたらされる。いくつかの態様では、形質導入効率は、４ｍＭ以下のカリウムイオンを含む培地にて培養した細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞と比べて、本明細書に開示されている方法に従って、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオンを含む低張性または等張性の培地にて培養した細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞では少なくとも約２倍高い。いくつかの態様では、形質導入効率は、４ｍＭ以下のカリウムイオンを含む培地にて培養した細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞と比べて、本明細書に開示されている方法に従って、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオンを含む低張性または等張性の培地にて培養した細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞では少なくとも約２．５倍高い。

【0352】

初代Ｔ細胞を含む初代免疫細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び／または腫瘍組織を含む多数の組織源から得ることができる。ＰＢＭＣを含む白血球は、よく知られている技術、例えば、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離及び白血球除去によって他の血液細胞から単離され得る。白血球除去産物は典型的には、リンパ球（Ｔ及びＢ細胞を含む）、単球、顆粒球、及び他の有核白血球を含有する。Ｔ細胞は、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を介する遠心分離によってまたは対向流遠心溶出法によって他の白血球からさらに単離される。特定のＴ細胞のサブ集団、例えば、ＣＤ３^＋、ＣＤ２５^＋、ＣＤ２８^＋、ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＧＩＴＲ^＋、及びＣＤ４５ＲＯ^＋Ｔ細胞は、陽性または陰性の選択技術（例えば、蛍光ベースまたは磁気ベースの細胞選別を使用して）さらに単離され得る。例えば、Ｔ細胞は、種々の市販の抗体結合ビーズ、例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）、ＣＥＬＬｅｃｔｉｏｎ（商標）、ＤＥＴＡＣＨａＢＥＡＤ（商標）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）またはＭＡＣＳ（登録商標）細胞分離製品（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）のいずれかとともに、所望のＴ細胞の陽性選択または不要な細胞の除去のための陰性選択に十分な時間インキュベートすることによって単離することができる。

【0353】

いくつかの例では、自己Ｔ細胞はがん治療後にがん患者から直接得られる。特定のがん治療、特に免疫系を損なうものに続いて、治療の直後に回収されたＴ細胞の品質は、生体外で増殖する及び／または生体外で操作された後に生着する改善された能力を有し得ることが観察された。

【0354】

ＩＩ．Ｃ．１．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
いくつかの態様では、細胞、例えば、ヒト免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞はＣＡＲを含む。いくつかの態様では、ＣＡＲを発現するように調製することができる細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）は、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されているＣＡＲ発現細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞、例えば、モノＣＡＲ Ｔ細胞、ゲノム編集ＣＡＲ Ｔ細胞、二重ＣＡＲ Ｔ細胞、またはタンデムＣＡＲ Ｔ細胞である。そのようなＣＡＲ Ｔ細胞の例は国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０４４１９５号に提供されている。

【0355】

いくつかの態様では、ＣＡＲは、標準ＣＡＲ、スプリットＣＡＲ、オフスイッチＣＡＲ、オンスイッチＣＡＲ、第１世代ＣＡＲ、第２世代ＣＡＲ、第３世代ＣＡＲ、または第４世代ＣＡＲとして設計される。いくつかの態様では、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン、またはそれらの組み合わせを含む。

【0356】

いくつかの態様では、ＣＡＲは、悪性Ｂ細胞、悪性Ｔ細胞、悪性形質細胞のような腫瘍細胞上に発現される１以上の抗原と特異的に結合する（すなわち、それを標的とする）。

【0357】

いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＡＦＰ（α－フェトプロテイン）、αｖβ６または別のインテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂｒａｆ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ６、ＣＡ９（炭酸脱水酵素９）、ＣＣＬ－１（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド１）、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ３５２、ＣＥＡ（がん胎児性抗原）、クローディン１８．２、クローディン６、ｃ－ＭＥＴ、ＤＬＬ３（デルタ様タンパク質３）、ＤＬＬ４、ＥＮＰＰ３（エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３）、ＥｐＣＡＭ、ＥＰＧ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＰＧ－４０、エフリンＢ２、ＥＰＨａ２（エフリン受容体Ａ２）、ＥＲＢＢ二量体、エストロゲン受容体、ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ受容体）、ＦＡＰ－α（線維芽細胞活性化タンパク質α）、胎児ＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ＦＣＲＬ５、ＦＲ－α（葉酸受容体α）、ＧＣＣ（グアニルシクラーゼＣ）、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＰＣ２（グリピカン－２）、ＧＰＣ３、ｇｐ１００（糖タンパク質１００）、ＧＰＮＭＢ（糖タンパク質ＮＭＢ）、ＧＰＲＣ５Ｄ（Ｇタンパク質共役受容体５Ｄ）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、Ｂ型肝炎表面抗原、ＨＬＡ－Ａ１（ヒト白血球抗原Ａｌ）、ＨＬＡ－Ａ２（ヒト白血球抗原Ａ２）、ＨＭＷ－ＭＡＡ（ヒト高分子量黒色腫関連抗原）、ＩＧＦ１Ｒ（インスリン様成長因子１受容体）、Ｉｇカッパ、Ｉｇラムダ、ＩＬ－２２Ｒａ（ＩＬ－２２受容体α）、ＩＬ－１３Ｒａ２（ＩＬ－１３受容体α２）、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＬＩ細胞接着分子（ＬＩ－ＣＡＭ）、Ｌｉｖ－１、ＬＲＲＣ８Ａ（ロイシンリッチ反復含有８ファミリーメンバーＡ）、ルイスＹ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＲＴ－１（メランＡ）、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）、ＭＣＳＰ（黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、メソテリン、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ１６、ＭＨＣ／ペプチド複合体（例えば、ＨＬＡ－ＡとＡＦＰ、ＫＲＡＳ、ＮＹ－ＥＳＯ、ＭＡＧＥ－Ａ、及びＷＴ１由来のペプチドとの複合体）、ＮＣＡＭ（神経細胞接着分子）、ネクチン－４、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＥＳＯ、腫瘍胎児性抗原、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＲＡＭＥ（黒色腫優先発現抗原）、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ（前立腺特異抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＩＲＰα（シグナル制御タンパク質α）、ＳＬＩＴ、ＳＬＩＴＲＫ６（ＮＴＲＫ様タンパク質６）、ＳＴＥＡＰ１（前立腺６回膜貫通上皮抗原１）、サバイビン、ＴＡＧ７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＰＢＧ（栄養膜糖タンパク質）、Ｔｒｏｐ－２、ＶＥＧＦＲ１（血管内皮増殖因子受容体１）、ＶＥＧＦＲ２、及びＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶ、その他の病原体由来の抗原、及びそれらの任意の組み合わせから成る群から選択される抗原に特異的に結合する（すなわち、それを標的とする）。

【0358】

いくつかの態様では、ＣＡＲはＲＯＲ１に特異的に結合する。免疫細胞にて発現され得る例示的な抗ＲＯＲ１ ＣＡＲは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるＨｕｄｅｃｅｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９．１２（２０１３）：３１５３－６４に記載されている。いくつかの態様では、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲを含むように改変された免疫細胞はＨｕｄｅｃｅｋ，ｅｔ ａｌ．（例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる３１５５ページ最初の完全な段落にてＨｕｄｅｃｅｋ，ｅｔ ａｌ．にて記載されたような）に記載されたように生成される。いくつかの態様では、Ｈｕｄｅｃｅｋに開示されているスペーサーは異なるスペーサー（例えば、本明細書に記載されているもののような）によって置き換えられている。いくつかの態様にでは、本開示に有用な抗ＲＯＲ１ ＣＡＲは、それぞれその全体が参照によって本明細書に組み込まれるＨｕｄｅｃｅｋ ｅｔ ａｌ、３１５４－５５ページの段落橋渡し；Ｂａｓｋａｒ ｅｔ ａｌ、ＭＡｂｓ ４（２０１２）：３４９～６１；及びＹａｎｇ ｅｔ ａｌ、ＰＬｏＳ ＯＮＥ ６（２０１１）：ｅ２１０１８に記載されている２Ａ２、Ｒ１１、及びＲ１２抗ＲＯＲ１モノクローナル抗体のＶＨ配列及び／またはＶＬ配列を含む抗体またはその断片を含む。

【0359】

いくつかの態様では、ＣＡＲはＧＰＣ２に特異的に結合する。

【0360】

いくつかの態様では、共刺激ドメインは、インターロイキン－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）、インターロイキン－１２受容体（ＩＬ－１２Ｒ）、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－１５、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０の共刺激ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、共刺激ドメインは４－１ＢＢ／ＣＤ１３７の共刺激ドメインを含む。

【0361】

いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ．ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（タクチル）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ１９の膜貫通ドメイン、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインはＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。

【0362】

いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、共通ＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲｉｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」）、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ３２、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２に由来する細胞内シグナル伝達ドメイン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインはＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0363】

ＩＩ．Ｃ．２．Ｔ細胞受容体－操作された（ＴＣＲ）細胞
いくつかの態様では、本明細書に開示されている免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、例えば、操作されたＴＣＲを含む。いくつかの態様では、ＴＣＲは腫瘍抗原に特異的に結合する。本明細書で使用される場合、「操作ＴＣＲ」または「操作Ｔ細胞受容体」という用語は、選択され、クローニングして、及び／またはその後に免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬの集団に導入される、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）／ペプチド標的抗原に所望の親和性で特異的に結合するように操作されているＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を指す。いくつかの態様では、ＴＣＲはがん患者から同定されるネオ抗原と特異的に結合する。

【0364】

いくつかの態様では、ＴＣＲは、悪性Ｂ細胞、悪性Ｔ細胞、悪性形質細胞のような腫瘍細胞上に発現する１以上の抗原と特異的に結合する（すなわち、それを標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲは腫瘍抗原／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する。いくつかの態様では、腫瘍抗原は、ＡＦＰ、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－ｌ ｌＲａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐｌＯＯ、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－ｌａ、ＭＡＧＥ－Ａｌ、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６，Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａｌ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロスタイン、サバイビング、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴｌ、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座ブレークポイント、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢｌ、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、変異型ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、ネオ抗原、またはそれらの組み合わせに由来する。いくつかの態様では、ＴＣＲはＮＹ－ＥＳＯ－１に由来する腫瘍抗原に特異的に結合する（すなわち、それを標的とする）。

【0365】

特定の態様では、本開示の細胞は抗原を標的とするＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現することができる。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、共通の腫瘍関連抗原（共通ＴＡＡ）及び特有の腫瘍関連抗原（特有ＴＡＡ）、または腫瘍特異的抗原という主な種類を標的とし得る。前者としては、がん精巣（ＣＴ）抗原、過剰発現抗原、及び分化抗原が挙げられ得るが、これらに限定されない一方で、後者としては、ネオ抗原及びオンコウイルス抗原が挙げられ得るが、これらに限定されない。ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６タンパク質及びＨＰＶＥ７タンパク質は、オンコウイルス抗原の分類に属する。

【0366】

いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、ＣＴ抗原、例えば、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９．２３、ＭＡＧＥ－Ａ１０、及びＭＡＧＥ－Ａ１２を含むが、これらに限定されないＭＡＧＥを標的とし得る。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、黒色腫及び正常なメラノサイトで主に見られる、糖タンパク質（ｇｐ１００）、Ｔ細胞によって認識される黒色腫抗原（ＭＡＲＴ－１）、及び／またはチロシナーゼを標的とし得る。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、ウィルムス腫瘍１（ＷＴ１）、すなわち、ほとんどの急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病、ほぼ全種類の固形腫瘍及びいくつかの決定組織、例えば、心臓組織などで高発現される過剰発現抗原の一種を標的とし得る。いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、メソテリン、すなわち、中皮腫で高発現されるが、気管を含む、いくつかの組織の中皮細胞上にも存在する別の種類の過剰発現抗原を標的とし得る。

【0367】

いくつかの態様では、ＴＣＲ操作細胞は、個々の腫瘍に特異的な無作為な体細胞突然変異によって形成され得る、任意のネオ抗原を標的とすることができる。いくつかの態様では、ＴＣＲは、ＡＦＰ、Ｂｒａｆ、ＣＤ１９、ＴＲＡＣ、ＴＣＲβ、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＴｎＡｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ルイスＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥａ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、グロボＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶＥ６、Ｅ７、ＭＡＧＥＡ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビン、テロメラーゼ、ＰＣＴａ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、またはそれらの任意の組み合わせから成る群から選択されるがん抗原と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。

【0368】

特定の態様では、ＴＣＲはｈＴＥＲＴと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲはＫＲＡＳと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲはＢｒａｆと特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲはＴＧＦβＲＩＩに特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲはＭＡＧＥＡ１０／Ａ４に特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲはＡＦＰに特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲはＰＲＡＭＥに特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲはＭＡＧＥＡ１に特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲはＷＴ－１に特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲはＮＹ－ＥＳＯに特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲはＰＲＡＭＥに特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲはＮＹ－ＥＳＯに特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲはＣＤ１９に特異的に結合する（すなわち、標的とする）。特定の態様では、ＴＣＲはがん患者から同定されるネオ抗原に特異的に結合する。

【0369】

いくつかの態様では、ＴＣＲは細胞内ガンマ／デルタドメインを含む。いくつかの態様では、ＴＣＲは抗体－Ｔ細胞受容体（ＡｂＴＣＲ）である（例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるＸｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，４：６２（２０１８）を参照のこと）。

【0370】

ＩＩ．Ｃ．３．Ｔ細胞受容体模倣体（ＴＣＲｍ）
いくつかの態様では、本明細書に開示されている免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞はＴＣＲ様抗体としても知られる、Ｔ細胞受容体模倣体（ＴＣＲｍ）を含む。ＴＣＲｍは、ペプチド及びＭＨＣ－Ｉ分子の双方を含むエピトープを認識する抗体の型であり、Ｔ細胞上のＴＣＲによるそのような複合体の認識に類似する（例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれるＴｒａｎｅｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８（１００１）：１－１２（２０１７）を参照のこと）。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは腫瘍抗原に特異的に結合する。特定の態様では、ＴＣＲｍはがん患者から同定されるネオ抗原と特異的に結合する。

【0371】

いくつかの態様では、ＴＣＲｍは腫瘍細胞、例えば、悪性Ｂ細胞、悪性Ｔ細胞、または悪性形質細胞などで発現される１以上の抗原と特異的に結合する（すなわち、標的とする）。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはモノクローナル抗体である。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはＷＴ１に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはＷＴ１の断片に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＥＳＫ１を含む（例えば、Ａｔａｉｅｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４２８（１）：１９４－２０５（２０１６）を参照し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはＭＡＧＥ－Ａ１に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ｐ６８ ＲＮＡヘリカーゼ／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ｈＣＧ－ｂ／ＨＬＡＡ＊０２：０１に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、Ｈｅｒ２－Ｅ７５／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＨＬａ－Ａ＊０２：０１との関連でＰＲ－１に特異的に結合する（例えば、Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ５（１）：ｅ１０４９８０３（Ｊｕｎｅ ２０１５）を参照し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、ＨＬａ－Ａ＊２４上に提示される、サバイビン－２Ｂ由来の九量体ペプチドであるＡＹＡＣＮＴＳＴＬ（ＳＶ２Ｂ８０－８８）（ＳＶ２Ｂ８０－８８／ＨＬａ－Ａ＊２４）に特異的に結合する（例えば、Ｋｕｒｏｓａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ９（９８２７）：１－１１（２０１９）を参照し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、１以上の腫瘍関連ＰＲＡＭＥペプチド／ＨＬＡ－Ｉ抗原と特異的に結合する（例えば、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２７（７）：２７０５－１８（２０１７）を参照し、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはチロシナーゼに特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは、テロメラーゼ触媒サブユニットと特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍは糖タンパク質１００（ｇｐ１００）に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはムチン１（ＭＵＣ１）に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはＮＹＥＳＯ－１に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはＭＡＲＴ－１に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはＰＲＡＭＥに特異的に結合する。

【0372】

いくつかの態様では、ＴＣＲｍはウイルス抗原に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはＥｎｖ１８３／Ａ２（ＨｅｐＢ／ＨＬａ－Ａ＊０２：０１）に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはＫＰ１４／１及びＫＰ１５／１１（ＨＩＶエンベロープｇｐ１６０／ＨＬＡＡ＊０２：０１）に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはＲＬ３６Ａ（ウエストナイルウイルス／マウスＨ－２Ｄｂ）に特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはＨＴＬＶに由来するウイルスエピトープに特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはインフルエンザに由来するウイルスエピトープに特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはＣＭＶに由来するウイルスエピトープに特異的に結合する。いくつかの態様では、ＴＣＲｍはＨＩＶに由来するウイルスエピトープに特異的に結合する。

【0373】

ＩＩ．Ｃ．４．ｃ－Ｊｕｎポリペプチド
いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、本明細書に提供される方法を使用して培養されるもの）はｃ－Ｊｕｎポリペプチドを含む、またはそれを過剰発現することができる。場合によっては、内在性ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現が誘導され、それによってｃ－Ｊｕｎポリペプチドの増加または過剰発現が生じる。いくつかの態様では、本明細書に開示されている免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、転写活性化因子（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムに基づく）で操作または改変され、転写活性化因子はｃ－Ｊｕｎポリペプチドの内在性発現を誘導及び／または増加させることができる。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドは細胞に外から加えられる（野生型ヒトｃ－Ｊｕｎは受入番号ＡＡＡ５９１９７．１のもとでＧｅｎＢａｎｋにて、またはＵｎｉＰｒｏｔＫＢ（受入番号Ｐ０５４１２．２のもとで）で入手可能である）。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドは免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）にて組換え発現される。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドは、本明細書に記載されているＣＡＲ、ＴＣＲ、ＴＣＲ模倣体、または他の導入遺伝子を発現するように操作されている免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）にて過剰発現される。したがって、いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）（例えば、本明細書に提供される方法を使用して培養された）は、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドを過剰発現するように改変されていない対応する細胞よりも高いレベル（例えば、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００％多く、または少なくとも１．５、２、３、４、５、または１０倍多く）のｃ－Ｊｕｎポリペプチドを発現する。いくつかの態様では、操作された細胞は参照細胞よりも少なくとも約２～１００倍多く、約５～５０倍多く、約５～４０倍多く、約５～３０倍多く、約５～２０倍多く、約８～２０倍多く、または約１０～２０倍多くｃ－Ｊｕｎポリペプチドを発現する。ｃ－Ｊｕｎの過剰発現はＣＡＲ Ｔ細胞を疲弊させにくくし、その結果、種々のヘム及び固形腫瘍モデルにおいて抗腫瘍効果と持続性／増殖の双方を高める（Ｌｙｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２０１９，５７６：２９３－３００）。

【0374】

ＩＩＩ．本開示の組成物
本開示の特定の態様は、本明細書に開示されている方法に従って培養した免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団を含む細胞組成物を対象とする。本方法に従って、及び／または本明細書に開示されている代謝再プログラム化培地にて培養した細胞集団は、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地にて従来の方法に従って培養した同等の細胞と比べて、低分化細胞の数が増加する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞は、幹細胞様表現型に特有の１以上のマーカーの発現の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って、及び／または代謝再プログラム化培地にて培養された細胞集団は、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地にて従来の方法に従って培養された同等の細胞と比べて、エフェクター様細胞の数が増加する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って、及び／または代謝再プログラム化培地にて培養された細胞集団は、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地にて従来の方法に従って培養された同等の細胞と比べて、幹細胞様細胞及びエフェクター様細胞の双方の数が増加する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞は、従来の方法に従って培養された細胞と比べてさらに高い増殖能を示す。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞は、高い形質導入効率を示す。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞は、対象への移植時に生体内生存能の増加を示す。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞は、高い細胞能力を示す。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞は、細胞疲弊の低下を示す。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞は、対象への移植時に高い生体内持続性を示す。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞は、対象への移植時に高い生体内活性を示す。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞は、対象への移植時にさらに持続的な生体内応答を示す。いくつかの態様では、対象はヒトである。

【0375】

いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約５％の細胞が幹細胞様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約１０％の細胞が幹細胞様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約１５％の細胞が幹細胞様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約２０％の細胞が幹細胞様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約２５％の細胞が幹細胞様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約３０％の細胞が、幹細胞様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約３５％の細胞が幹細胞様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約４０％の細胞が幹細胞様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約４５％の細胞が幹細胞様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約５０％の細胞が幹細胞様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約５５％の細胞が、幹細胞様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約６０％の細胞が幹細胞様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約６５％の細胞が幹細胞様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約７０％の細胞が、幹細胞様表現型を有する。

【0376】

いくつかの態様では、いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、幹細胞様Ｔ細胞は培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約７０％を構成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、幹細胞様Ｔ細胞は、培養物におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％を構成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、幹細胞様Ｔ細胞は、培養物におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％を構成する。

【0377】

いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約１．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約２．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約２．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約３．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約３．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約４．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約４．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約５．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約５．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約６．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約６．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約７．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約７．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約８．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約９．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約１５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約２０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約３０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約４０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約５０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約７５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約１００倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約５００倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹細胞様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比較した場合に少なくとも約１０００倍増加する。

【0378】

いくつかの態様では、いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約７０％はＣＤ３９^－／ＴＣＦ７^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％はＣＤ３９^－／ＴＣＦ７^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ４^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ８^＋Ｔ細胞である。

【0379】

いくつかの態様では、細胞組成物は免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５Ｒ０を発現しない免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡを発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加をむ。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＣＲ７を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ６２Ｌを発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＴＣＦ７を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ３を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ２７を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５及びＣＤ４５ＲＡを発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ及びＣＣＲ７を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、及びＣＣＲ７を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、及びＴＣＦ７を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、及びＴＣＦ７を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現し、ＣＤ４５ＲＯを発現せず、またはＣＤ４５ＲＯ^低である免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現し、ＣＤ４５ＲＯを発現せず、またはＣＤ４５ＲＯ^低である免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。

【0380】

いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ３９及びＣＤ６９を発現しない免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ８を発現し、ＣＤ３９及びＣＤ６９を発現しない免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約４０％はＣＤ３９^－／ＣＤ６９^－Ｔ細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％は、ＣＤ３９^－／ＣＤ６９^－Ｔ細胞である。

【0381】

いくつかの態様では、細胞組成物は、（ｉ）１以上の幹細胞様マーカー及び（ｉｉ）１以上のエフェクター様マーカーの双方を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、少なくとも２つの幹細胞様マーカー及び１以上のエフェクター様マーカーを発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、少なくとも３つの幹細胞様マーカー及び１以上のエフェクター様マーカーを発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、少なくとも４つの幹細胞様マーカー及び１以上のエフェクター様マーカーを発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、１以上の幹細胞様マーカー及び少なくとも２つのエフェクター様マーカーを発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。

【0382】

いくつかの態様では、幹細胞様マーカーはＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、幹細胞様マーカーはＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、及びＴＣＦ７＋、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、細胞はＣＤ４５ＲＯ^低を発現する。いくつかの態様では、幹細胞様マーカーは遺伝子シグネチャの一部として本明細書で列挙される１以上の遺伝子を含む（上記を参照のこと；例えば、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１７（１０）：１２９０－９７（２０１１）またはＧａｌｌｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１，１５５２－６２（２０２０）を参照のこと）。

【0383】

いくつかの態様では、幹細胞様マーカーはＷＮＴシグナル伝達経路にて発現する遺伝子を含む。いくつかの態様では、幹細胞様マーカーは、ＧＮＧ２、ＰＳＭＣ３、ＰＳＭＢ１０、ＰＳＭＣ５、ＰＳＭＢ８、ＰＳＭＢ９、ＡＫＴ１、ＭＹＣ、ＣＬＴＢ、ＰＳＭＥ１、ＤＶＬ２、ＰＦＮ１、Ｈ２ＡＦＪ、ＬＥＦ１、ＣＴＢＰ１、ＭＯＶ１０、ＨＩＳＴ１Ｈ２ＢＤ、ＦＺＤ３、ＩＴＰＲ３、ＰＡＲＤ６Ａ、ＬＲＰ５、ＨＩＳＴ２Ｈ４Ａ、ＨＩＳＴ２Ｈ３Ｃ、ＨＩＳＴ１Ｈ２ＡＤ、ＨＩＳＴ２Ｈ２ＢＥ、ＨＩＳＴ３Ｈ２ＢＢ、ＤＡＣＴ１、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上の遺伝子を含む。いくつかの態様では、幹細胞様マーカーは、ＭＹＣ、ＡＫＴ１、ＬＥＦ１、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上の遺伝子を含む。

【0384】

いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、ＳＴＡＴ３＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーはＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＫＴ３、ＢＣＬ２Ｌ１、ＣＢＬ、ＣＢＬＢ、ＣＢＬＣ、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＤ２、ＣＣＮＤ３、ＣＩＳＨ、ＣＬＣＦ１、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＦＲ、ＣＲＥＢＢＰ、ＣＲＬＦ２、ＣＳＦ２、ＣＳＦ２ＲＡ、ＣＳＦ２ＲＢ、ＣＳＦ３、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＳＨ１、ＣＴＦ１、ＥＰ３００、ＥＰＯ、ＥＰＯＲ、ＧＨ１、ＧＨ２、ＧＨＲ、ＧＲＢ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ１７、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ２１、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＥ、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２、ＩＦＮＫ、ＩＦＮＬ１、ＩＦＮＬ２、ＩＦＮＬ３、ＩＦＮＬＲ１、ＩＦＮＷ１、ＩＬ１０、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１９、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２０ＲＢ、ＩＬ２１、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２、ＩＬ２２ＲＡ１、ＩＬ２２ＲＡ２、ＩＬ２３Ａ、ＩＬ２３Ｒ、ＩＬ２４、ＩＬ２６、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＲＦ９、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＬＥＰ、ＬＥＰＲ、ＬＩＦ、ＬＩＦＲ、ＭＰＬ、ＭＹＣ、ＯＳＭ、ＯＳＭＲ、ＰＩＡＳ１、ＰＩＡＳ２、ＰＩＡＳ３、ＰＩＡＳ４、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３ＣＢ、ＰＩＫ３ＣＤ、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＩＫ３Ｒ２、ＰＩＫ３Ｒ３、ＰＩＫ３Ｒ５、ＰＩＭ１、ＰＲＬ、ＰＲＬＲ、ＰＴＰＮ１１、ＰＴＰＮ６、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３、ＳＯＣＳ４、ＳＯＣＳ５、ＳＯＣＳ７、ＳＯＳ１、ＳＯＳ２、ＳＰＲＥＤ１、ＳＰＲＥＤ２、ＳＰＲＹ１、ＳＰＲＹ２、ＳＰＲＹ３、ＳＰＲＹ４、ＳＴＡＭ、ＳＴＡＭ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５Ａ、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＳＴＡＴ６、ＴＰＯ、ＴＳＬＰ、ＴＹＫ２、及びそれらの任意の組み合わせから成る群から選択されるＳＴＡＴ標的を含む。

【0385】

いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、ＴＢＣＤ、ＡＲＬ４Ｃ、ＫＬＦ６、ＬＰＧＡＴ１、ＬＰＩＮ２、ＷＤＦＹ１、ＰＣＢＰ４、ＰＩＫ３４３、ＦＡＳ、ＬＬＧＬ２、ＰＰＰ２Ｒ２Ｂ、ＴＴＣ３９Ｃ、ＧＧＡ２、ＬＲＰ８、ＰＭＡＩＰ１、ＭＶＤ、ＩＬ１５ＲＡ、ＦＨＯＤ１、ＥＭＬ４、ＰＥＡ１５、ＰＬＥＫＨＡ５、ＷＳＢ２、ＰＡＭ、ＣＤ６８、ＭＳＣ、ＴＬＲ３、Ｓ１ＰＲ５、ＫＬＲＢ１、ＣＹＴＨ３、ＲＡＢ２７Ｂ、ＳＣＤ５、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上の遺伝子を含むエフェクターメモリー関連遺伝子である。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、ＫＬＦ６、ＦＡＳ、ＫＬＲＢ１、ＴＬＲ３、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上の遺伝子を含む。

【0386】

いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋である免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ６２Ｌ＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋である免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＴＣＦ７＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋である免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋である免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋である免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋である免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合の増加を含む。

【0387】

いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上のマーカーと、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、ＳＴＡＴ３＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上のマーカーとを含む。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞はＣＤ４５ＲＯ低を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞はＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上のマーカーと、１以上のエフェクター様マーカーとを含む。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は１以上の幹細胞様マーカーと、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、ＳＴＡＴ３＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上のマーカーとを含む。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞はＣＤ４５ＲＯ^低を発現する。

【0388】

本開示のいくつかの態様は、免疫細胞の集団を含む細胞組成物を対象とし、免疫細胞の集団は（ｉ）１以上の幹細胞様マーカーを発現する免疫細胞（例えば、幹細胞様免疫細胞）の第１の亜集団及び（ｉｉ）１以上のエフェクター様マーカーを発現する免疫細胞（例えば、エフェクター様免疫細胞）の第２の亜集団を含み、免疫細胞の集団は、従来の培地、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地を使用して培養した免疫細胞の集団と比べて、１以上の幹細胞様マーカーを発現する、高い割合（すなわち、幹細胞様免疫細胞の数／免疫細胞の総数）の免疫細胞の第１の亜集団を含む。いくつかの態様では、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞はＮＫ細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞はこれらの細胞組成物をもたらす。

【0389】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は増加した発現を有し、例えば、ＧＺＭＢ、ＭＨＣ－ＩＩ、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、及び／またはＮＫＧ７を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合がさらに高く、且つ低下した発現を有し、例えば、ＩＬ－３２を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の割合がさらに低い。ＮＫＧ７について最も高い細胞はさらに良好な殺傷体であることが示されている（Ｍａｌａｒｋａｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．２０２０，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏ．）のに対して、ＩＬ－３２がさらに高い細胞は、活性化誘導細胞死を有することが示されている（Ｇｏｄａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ）。いくつかの態様では、ＧＺＭＢ、ＭＨＣ－ＩＩ、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、及び／またはＮＫＧ７のさらに高い発現を有する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、エフェクター様マーカーを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、ＩＬ－３２のさらに低い発現を有する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、エフェクター様マーカーを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞である。

【0390】

いくつかの態様では、細胞組成物は１以上の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬを含み、これらは遺伝子操作される。いくつかの態様では、細胞組成物は、１以上の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬを含み、これらはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作される。本明細書、例えば、上記節ＩＩ．Ｇ．１．に開示される任意のＣＡＲが、細胞組成物の細胞に使用され得る。

【0391】

いくつかの態様では、細胞組成物は１以上の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬを含み、これらはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、例えば、操作されたＴＣＲを発現するように操作される。本明細書で、例えば、以下の節ＩＩ．Ｃ．２に開示されている任意のＴＣＲは細胞組成物の細胞にて使用され得る。

【0392】

いくつかの態様では、細胞組成物は１以上の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、及び／またはＴＩＬを含み、これらはＴＣＲｍを発現するように操作される。本明細書で、例えば、以下の節ＩＩ．Ｃ．３に開示されている任意のＴＣＲｍは細胞組成物の細胞にて使用され得る。

【0393】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物（例えば、療法として使用するための最終細胞製剤の収量）は、少なくとも約１×１０^５、５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１×１０^３、５×１０^３、１×１０^４、５×１０^４、１×１０^５、５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９の幹細胞様細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、１×１０^１０、２×１０^１０、３×１０^１０、４×１０^１０、５×１０^１０、６×１０^１０、７×１０^１０、８×１０^１０、９×１０^１０、１０×１０^１０、１１×１０^１０、１２×１０^１０、１３×１０^１０、１４×１０^１０、または１５×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１×１０^６の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１×１０^６の幹細胞様細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約２×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約３×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約４×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約５×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約６×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約７×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約８×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約９×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１０×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１１×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１２×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１３×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１４×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１５×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、細胞収量はＣＤ３＋細胞の総数を表す。

【0394】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、本開示の培地での培養の少なくとも約１０日目までに少なくとも約１×１０^１０、少なくとも約１．１×１０^１０、少なくとも約１．２×１０^１０、少なくとも約１．３×１０^１０、少なくとも約１．４×１０^１０、少なくとも約１．５×１０^１０、少なくとも約１．６×１０^１０、少なくとも約１．７×１０^１０、少なくとも約１．８×１０^１０、少なくとも約１．９×１０^１０、または少なくとも約２．０×１０^１０の細胞を含む組成物を生成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、本開示の培地での培養の少なくとも約１０日目までに少なくとも約１．８×１０^１０の細胞を含む組成物を生成する。

【0395】

いくつかの態様では、細胞組成物は少なくとも約１×１０^１０、少なくとも約１．１×１０^１０、少なくとも約１．２×１０^１０、少なくとも約１．３×１０^１０、少なくとも約１．４×１０^１０、少なくとも約１．５×１０^１０、少なくとも約１．６×１０^１０、少なくとも約１．７×１０^１０、少なくとも約１．８×１０^１０、少なくとも約１．９×１０^１０、または少なくとも約２．０×１０^１０の幹細胞様細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、培養の少なくとも約１０日目までに少なくとも約１×１０^１０、少なくとも約１．１×１０^１０、少なくとも約１．２×１０^１０、少なくとも約１．３×１０^１０、少なくとも約１．４×１０^１０、少なくとも約１．５×１０^１０、少なくとも約１．６×１０^１０、少なくとも約１．７×１０^１０、少なくとも約１．８×１０^１０、少なくとも約１．９×１０^１０、または少なくとも約２．０×１０^１０の幹細胞様細胞を含む組成物を生成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、本開示の培地での培養の少なくとも約１０日目までに少なくとも約１．８×１０^１０の幹細胞様細胞を含む組成物を生成する。

【0396】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％生存率で免疫細胞を含む組成物を生成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、少なくとも約９４％の細胞生存率で少なくとも約１．８×１０^１０の幹細胞様細胞を含む組成物を生成する。

【0397】

ＩＶ．治療方法
本開示のいくつかの態様は、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にて）培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の集団を対象に投与することを含む、それを必要とする対象を治療する方法を対象とする。

【0398】

本開示はまた、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭより高い濃度のカリウムイオンを含む培地にて）培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の集団の有効量を投与することを含む、対象にて標的の細胞集団または組織に対するＴ細胞介在性の免疫応答を刺激する方法も提供する。

【0399】

本開示はまた、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にて）培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の集団を投与することを含む、それを必要とする対象にて抗腫瘍免疫を提供する方法も提供する。

【0400】

いくつかの態様では、投与される免疫細胞の集団はＴ細胞を含む。いくつかの態様では、Ｔ細胞は自家Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞は他家Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞は本明細書に記載されているようにＣＡＲ、すなわちＣＡＲ－Ｔ細胞を含む。いくつかの態様では、Ｔ細胞は本明細書に記載されているように異種ＴＣＲを含む。いくつかの態様では、Ｔ細胞は本明細書に記載されているように操作されたＴＣＲを含む。いくつかの態様では、Ｔ細胞は本明細書に記載されているようにＴＣＲ模倣体を含む。

【0401】

いくつかの態様では、対象はがん、例えば腫瘍に罹患している。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって）培養された免疫細胞の集団を投与すると、参照腫瘍体積と比べて対象における腫瘍体積が減少する。いくつかの態様では、参照腫瘍体積は、操作された細胞の投与前の対象における腫瘍体積である。さらなる態様では、参照腫瘍体積は、投与を受けなかった対応する対象における腫瘍体積である。いくつかの態様では、対象における腫瘍体積は、参照腫瘍体積と比べて投与後に少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少する。

【0402】

いくつかの態様では、腫瘍を治療することは、対象にて腫瘍重量を減らすことを含む。特定の態様では、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって）培養された免疫細胞の集団を投与することは、対象に投与されたときに対象にて腫瘍重量を減少させる。いくつかの態様では、腫瘍重量は、参照腫瘍重量と比べて投与後に少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少する。いくつかの態様では、参照腫瘍重量は、本開示の細胞の集団の投与前の対象における腫瘍重量である。さらなる態様では、参照腫瘍重量は、投与を受けなかった対応する対象における腫瘍重量である。

【0403】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって）培養された免疫細胞の集団を、例えば腫瘍に罹患している対象に投与すると、対象の腫瘍及び／または腫瘍微小環境（ＴＭＥ）におけるＴＩＬ（例えば、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋）の数及び／または割合が増加する。特定の態様では、腫瘍及び／またはＴＭＥにおけるＴＩＬの数及び／または割合は、参照値（例えば、本開示の細胞組成物を受けなかった対象または本開示の細胞組成物の投与前の同じ対象における対応する値）と比べて、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１１０％、少なくとも約１２０％、少なくとも約１３０％、少なくとも約１４０％、少なくとも約１５０％、少なくとも約１６０％、少なくとも約１７０％、少なくとも約１８０％、少なくとも約１９０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２１０％、少なくとも２２０％、少なくとも約２３０％、少なくとも約２４０％、少なくとも約２５０％、少なくとも約２６０％、少なくとも約２７０％、少なくとも約２８０％、少なくとも約２９０％、もしくは少なくとも約３００％またはそれを超えて増加する。

【0404】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって）培養された免疫細胞の集団を、例えば腫瘍に罹患している対象に投与すると、従来の方法に従って調製された、例えば少なくとも５０ｍＭのカリウムイオン濃度を含まない培地にて培養された細胞を含む同様の細胞療法を投与された対象における免疫応答の持続時間と比べて、対象における免疫応答の持続時間を増加させることができる。特定の態様では、免疫応答の持続時間は、参照（例えば、従来の方法に従って調製された、例えば、少なくとも５０ｍＭのカリウムイオン濃度を含まない培地にて培養された細胞を含む同様の細胞療法を投与された対象）と比べて、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％、もしくは少なくとも約１０００％またはそれを超えて増加する。特定の態様では、免疫応答の持続時間は、参照（例えば、従来の方法に従って調製された、例えば、少なくとも５０ｍＭのカリウムイオン濃度を含まない培地にて培養された細胞を含む同様の細胞療法を投与された対象）と比べて、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、もしくは少なくとも約１０倍またはそれを超えて増加する。

【0405】

上記に加えて、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって）培養された免疫細胞の集団を投与することは、腫瘍の治療に資する他の効果を有する。

【0406】

本明細書に記載されているように、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって）培養された免疫細胞の集団は、種々のがん型、例えば、乳癌、頭頸部癌、子宮癌、脳腫瘍、皮膚癌、腎癌、肺癌、大腸癌、前立腺癌、肝臓癌、膀胱癌、腎臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、食道癌、眼癌、胃（胃）癌、胃腸癌、卵巣癌、癌腫、肉腫、白血病、リンパ腫、骨髄腫、またはそれらの組み合わせを含むがんに由来する腫瘍を治療するのに使用することができる。

【0407】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって）培養された免疫細胞の集団は、他の治療剤（例えば、抗がん剤及び／または免疫調節剤）と組み合わせて使用することができる。したがって、特定の態様では、本明細書に開示されている腫瘍を治療する方法は、本開示の免疫細胞の集団を１以上の追加の治療剤と併用して投与することを含む。

【0408】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって）培養された免疫細胞の集団は、１以上の抗がん剤と組み合わせて使用されるので、免疫経路の複数の要素を標的とすることができる。いくつかの態様では、抗がん剤は、免疫チェックポイント阻害剤を含む（すなわち、特定の免疫チェックポイント経路を介するシグナル伝達を遮断する）。

【0409】

本発明の方法に使用され得る免疫チェックポイント阻害剤の非限定的な例は、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）、ＰＤ－１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ＴＩＭ－３アンタゴニスト（例えば、抗ＴＩＭ－３抗体）、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様では、チェックポイント阻害剤はＰＤ－１アンタゴニストである。いくつかの態様では、チェックポイント阻害剤は抗ＰＤ－１抗体である。いくつかの態様では、チェックポイント阻害剤は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。併用療法の包括的且つ非限定的なリストは本出願の他の箇所で詳細に開示されている。

【0410】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって）培養された免疫細胞の集団は、追加の治療剤の投与の前または後に対象に投与される。他の態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された免疫細胞の集団は、追加の治療薬と同時に対象に投与される。特定の態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された免疫細胞の集団及び追加の治療剤は、薬学的に許容される担体における単一の組成物として同時に投与することができる。他の態様では、本開示の免疫細胞の集団及び追加の治療剤は別々の組成物として同時に投与される。

【0411】

いくつかの態様では、対象はラットまたはマウスのような非ヒト動物である。いくつかの態様では、対象はヒトである。

【0412】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって）培養された免疫細胞の集団は、他の治療剤（例えば、抗がん剤及び／または免疫調節剤）と組み合わせて使用される。したがって、特定の態様では、本明細書に開示されている腫瘍を治療する方法は、本開示の免疫細胞の集団を１以上の追加の治療剤と併用して対象に投与することを含む。そのような薬剤には、例えば、化学療法薬、標的抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞傷害剤、免疫に基づく療法、サイトカイン、外科処置、放射線処置、共刺激分子の活性化剤、免疫チェックポイント阻害剤、ワクチン、細胞免疫療法、またはそれらの任意の組み合わせを挙げることができる。

【0413】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって）培養された免疫細胞の集団は、標準治療（例えば、手術、放射線療法、化学療法）と組み合わせて使用される。本明細書に記載されている方法は、維持療法、例えば、腫瘍の発生または再発を防止することを目的とした療法としても使用され得る。

【0414】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にてＰＣＳに免疫細胞を接触させることによって）培養された免疫細胞の集団は、１以上の抗がん剤と組み合わせて使用されるので、免疫経路の複数の要素を標的とすることができる。そのような組み合わせの非限定的なものには、腫瘍抗原提示を増強する療法（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド）；例えば、ＣＴＬＡ－４及び／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２の経路の阻害、及び／またはＴｒｅｇもしくは他の免疫抑制細胞（例えば、骨髄系由来サプレッサー細胞）の枯渇もしくは遮断によって負の免疫制御を阻害する療法；例えば、ＣＤ－１３７、ＯＸ－４０、及び／またはＣＤ４０もしくはＧＩＴＲの経路を刺激する、及び／またはＴ細胞エフェクター機能を刺激するアゴニストを用いた、正の免疫制御を刺激する療法；抗腫瘍Ｔ細胞の発生頻度を全身性に増加させる療法；例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト（例えば、ダクリズマブ）を使用して、または生体外抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって腫瘍中のＴｒｅｇのようなＴｒｅｇを枯渇させる、または阻害する療法；腫瘍中のサプレッサー骨髄細胞の機能に影響を与える療法；腫瘍細胞の免疫原性を増強する療法（例えば、アントラサイクリン）；遺伝子操作細胞、例えば、キメラ抗原受容体を発現するように操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ療法）を含む養子Ｔ細胞またはＮＫ細胞の移入；代謝酵素、例えば、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、または一酸化窒素合成酵素を阻害する療法；Ｔ細胞のアネルギーまたは疲弊を元に戻す／防止する療法；腫瘍部位の自然免疫活性化及び／または炎症を誘発する療法；免疫刺激性サイトカインの投与；免疫抑制サイトカインの遮断；あるいはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。

【0415】

いくつかの態様では、抗がん剤は、免疫チェックポイント阻害剤を含む（すなわち、特定の免疫チェックポイント経路を介するシグナル伝達を遮断する）。本発明の方法に使用され得る免疫チェックポイント阻害剤の非限定的な例は、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）、ＰＤ－１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ＴＩＭ－３アンタゴニスト（例えば、抗ＴＩＭ－３抗体）、またはそれらの組み合わせを含む。そのような免疫チェックポイント阻害剤の非限定的な例には、抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、ＭＫ－３４７５）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１）、ＰＤＲ００１、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＴＳＲ－０４２、ＲＥＧＮ２８１０、ＪＳ００１、ＡＭＰ－２２４（ＧＳＫ－２６６１３８０）、ＰＦ－０６８０１５９１、ＢＧＢ－Ａ３１７、ＢＩ ７５４０９１、ＳＨＲ－１２１０、及びそれらの組み合わせ）、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）、ＲＧ７４４６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＯ５５４１２６７）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標））、ＢＭＳ－９３６５５９、アベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標））、ＬＹ３３０００５４、ＣＸ－０７２（プロクライム－ＣＸ－０７２）、ＦＡＺ０５３、ＫＮ０３５、ＭＤＸ－１１０５、及びそれらの組み合わせ）、ならびに抗ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））、トレメリムマブ（チシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６）、ＡＧＥＮ－１８８４、ＡＴＯＲ－１０１５、及びそれらの組み合わせ）が挙げられる。

【0416】

いくつかの態様では、抗がん剤は、免疫チェックポイント活性剤を含む（すなわち、特定の免疫チェックポイント経路を介するシグナル伝達を促進する）。特定の態様では、免疫チェックポイント活性剤は、ＯＸ４０アゴニスト（例えば、抗ＯＸ４０抗体）、ＬＡＧ－３アゴニスト（例えば抗ＬＡＧ－３抗体）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト（例えば、抗ＣＤ１３７抗体）、ＧＩＴＲアゴニスト（例えば、抗ＧＩＴＲ抗体）、ＴＩＭ３アゴニスト（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）、またはそれらの組み合わせを含む。

【0417】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にて免疫細胞をＰＣＳに接触させることによって）に従って培養された免疫細胞の集団は、追加の治療剤の投与の前または後に対象に投与される。他の態様では、本明細書に開示されている免疫細胞の集団は、追加の治療剤と同時に対象に投与される。特定の態様では、本明細書に開示されている免疫細胞の集団及び追加の治療剤は、薬学的に許容される担体における単一の組成物として同時に投与され得る。他の態様では、本明細書に開示されている免疫細胞の集団及び追加の治療剤は、別の組成物として同時に投与される。いくつかの態様では、追加の治療剤及び本明細書に開示されている免疫細胞の集団は連続して投与される。

【0418】

本開示の特定の態様は、本明細書に開示されている方法のいずれかに従って培養した、例えば、Ｔｒｅｇ細胞を含む免疫細胞の集団を投与することを含む、自己免疫疾患を治療する方法を対象とする。本開示の他の態様は、本明細書に開示されている方法のいずれかに従って培養した、例えば、Ｔｒｅｇ細胞を含む免疫細胞の集団を投与することを含む、炎症病態を治療する方法を対象とする。いくつかの態様では、炎症病態はサイトカイン放出症候群を含む。いくつかの態様では、炎症病態は敗血症を含む。いくつかの態様では、炎症病態は移植片対宿主病を含む。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔｒｅｇ細胞は操作される。

【実施例】

【0419】

実施例１．
ＭＲＭでの生成中にＰＣＳ製剤の抗ＣＤ３／２８密度が抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の増殖に及ぼす影響を評価するために、表１に従ってＰＣＳ製剤の以下の抗ＣＤ３／２８密度を調製した。

【表1】

【0420】

ＭＲＭにおけるさまざまな抗ＣＤ３／２８密度（０．１％～１％、表１）を含むＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）またはＰＣＳ製剤を使用して、健康なドナーＴ細胞を活性化した。Ｔ細胞にＲ１２構築物で形質導入し、ＭＲＭにて８日間培養した。８日目にＴ細胞を数え、０日目からの総増殖量を決定した（図１）。すべてのＰＣＳ活性化Ｔ細胞製剤は、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）活性化Ｔ細胞製剤と比べて、さらに高い増殖を示した。低密度ＰＣＳ製剤では、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）の活性化と比べて２～３倍多くの細胞が生成された。ＭＲＭで生成されたＰＣＳ製剤では、抗ＣＤ３／２８密度が高いほど、密度依存性にＴ細胞の増殖が減少した。

【0421】

実施例２．
ＭＲＭにおける抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ－Ｔ細胞製剤にてＰＣＳの抗ＣＤ３／ＣＤ２８密度がＣＤ４のＣＤ８に対する比に与える影響を評価するために、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）またはさまざまな抗ＣＤ３／２８密度（０．１％～１％、表１）を持つＰＣＳ製剤を使用して健康なドナーＴ細胞を活性化した。Ｔ細胞にＲ１２構築物で形質導入し（例えば、Ｈｕｄｅｃｅｋ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９．１２（２０１３）：３１５３－６４を参照のこと）、ＭＲＭにて８日間培養した。８日目に、Ｔ細胞の表現型と幹細胞性に関連する表面マーカーについてＴ細胞製剤を染色した。ＣＤ４陽性Ｔ細胞のＣＤ８陽性Ｔ細胞に対する比を測定した（図２）。すべてのＰＣＳ活性化Ｔ細胞製剤はＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）活性化Ｔ細胞製剤と比べて、さらに強いＣＤ４への偏りを示した。ＰＣＳ製剤の中で、０．３％抗ＣＤ３／２８（ＰＣＳ－２）は最も高いＣＤ４への偏りを示し、これは抗ＣＤ３／２８密度の増加とともに減少した。０．７５％及び１％というさらに高い密度では、ＣＤ４への偏りはさらに低い密度よりも大幅に減少し、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）製剤とさらに同等だった。これらのデータは、ＰＣＳがＭＲＭの背景でＣＤ４とＣＤ８の比を調整する能力を有することを示した。

【0422】

実施例３．
ＭＲＭでの抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞製剤における「幹細胞様」Ｔ細胞を濃縮できるＰＣＳ製剤上の抗ＣＤ３／ＣＤ２８密度の最適範囲を決定するために、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）または抗ＣＤ３／２８密度の異なる（０．１％～１％、表１）ＰＣＳ製剤のいずれかを使用して健康なドナーのＴ細胞を活性化した。Ｔ細胞にＲ１２構築物で形質導入し、ＭＲＭにて８日間培養した。８日目に、Ｔ細胞の表現型と幹細胞性に関連する表面マーカーについてＴ細胞製剤を染色した。

【0423】

全体的に、０．３％及び０．５％の密度のＰＣＳ製剤（それぞれＰＣＳ－２及びＰＣＳ－３）は、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）製剤と比べて、「幹細胞様」Ｔ細胞の濃縮がさらに顕著だった（図３Ａ）。ＰＣＳ製剤内を見ると、０．３％～０．５％の密度（それぞれＰＣＳ－２とＰＣＳ－３）は、他の密度と比べて「幹細胞様」Ｔ細胞の最も高い濃縮を示した。これらの観察結果はＣＤ４（図３Ｂ）及びＣＤ８（図３Ｃ）の集団でも同様に示された。

【0424】

さらに、製剤における「幹細胞様」Ｔ細胞を特定するためのさらに厳密な表面マーカーパネルを使用して追加の健康なドナー（ｎ＝５）にて０．３％及び０．５％の抗ＣＤ３／２８密度（それぞれＰＣＳ－２及びＰＣＳ－３）のＰＣＳ製剤を評価した。双方のＰＣＳ製剤（ＰＣＳ－２及びＰＣＳ－３）はＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）製剤と比べて、幹細胞様Ｔ細胞の濃縮がさらに強く見られた。具体的には、ＰＣＳ－２は５名のドナー全員でさらに強い濃縮を示し、ＰＣＳ－３は５名中４名のドナーでさらに強い濃縮を示した（図４）。まとめると、これらのデータは、ＰＣＳがＭＲＭとの相乗効果を発揮してＴ細胞の幹細胞性を高めることができることを示唆している。

【0425】

実施例４．
ＰＣＳを組み合わせた代謝再プログラミング培地を含む条件がＴ細胞に与える影響をさらに評価するために、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）または０．３％または０．５％の抗ＣＤ３／２８密度（それぞれＰＣＳ－２及びＰＣＳ－３）のＰＣＳ製剤を使用して健康なドナーＴ細胞を活性化した。Ｔ細胞にＲ１２構築物で形質導入し、ＭＲＭにて７日間培養した。７日目にＴ細胞製剤を凍結保存した。その後、Ｔ細胞を解凍し、標的刺激に応答してサイトカイン発現を上方調節する能力を評価した。

【0426】

Ｔ細胞の機能性は、標的刺激に反応してＩＬ－２及びＩＦＮｇを発現する能力として説明することができる。図５Ａは、細胞内ＩＬ－２及びＩＦＮ－γ（ＩＦＮｇ）の代表的なフローサイトメトリーのプロットと、細胞内サイトカイン解析用のゲートかけ戦略を示す。Ｔ細胞について、最初にＥＧＦＲ＋ＣＤ４５＋ＣＤ３＋Ｔ ＣＡＲ－Ｔの生細胞にゲートをかけ、その後ＩＦＮｇ及びＩＬ－２の発現にゲートをかけた。０．５％抗ＣＤ３／２８（ＰＣＳ－３）のＰＣＳ製剤は、調べたすべてのドナーにてＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）製剤と比べて優れた多機能性（ＩＦＮ＋及びＩＬ２＋）を示した（図５Ｂ）。ＰＣＳ－３を使用したＰＣＳ製剤もまた、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）製剤と比べて、さらに高いＩＬ２＋単独（図５Ｃ）及び同等のＩＦＮｇ＋単独（図５Ｄ）のＴ細胞を示した。その結果、ＰＣＳ－３を使用したＰＣＳ製剤は、機能性ではないＴ細胞、つまりＩＬ２もＩＦＮｇも発現しないＴ細胞が最も少ないことを示した（図５Ｅ）。まとめると、これらのデータは、ＰＣＳがＭＲＭとの相乗効果を発揮してさらに多機能性のＣＡＲ Ｔ細胞を生成できることを示唆している。

【0427】

実施例５．
ＰＣＳで生成されたＣＡＲ－Ｔ細胞による標的クリアランスを試験管内で評価するために、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）または０．３％または０．５％の抗ＣＤ３／２８密度（それぞれＰＣＳ－２及びＰＣＳ－３）のＰＣＳ製剤のいずれかを使用して健康なドナーＴ細胞を活性化した（図６Ａ－６Ｃ）。別の試験では、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）または０．５％、０．７５％、または１％の抗ＣＤ３／２８密度（それぞれＰＣＳ－３、ＰＣＳ－４、及びＰＣＳ－５）のＰＣＳ製剤のいずれかを使用して健康なドナーＴ細胞を活性化した（図６Ｄ～６Ｆ）。Ｔ細胞にＲ１２構築物で形質導入し、ＭＲＭにて７日間培養した。７日目にＴ細胞製剤を凍結保存した。その後、Ｔ細胞を解凍し、順次刺激アッセイを使用して標的細胞を繰り返し殺傷する能力について評価した。手短には、凍結保存されたＴ細胞を解凍し、静置したのち、Ｆｕｌｌ ＲＰ１０培地に再浮遊させた。Ｔ細胞を数えた。平底９６ウェルプレートにて４，０００のＥＧＦＲ＋ＣＡＲ Ｔ細胞を１：５Ｅ：Ｔで２０，０００のＲＯＲ１＋標的（Ｈ１９７５）と共培養した。３～４日ごとに、以前の培養物の２５％を新しいプレートに移し、新しい標的を最初の播種密度で播いた。これとは別に、３～４日ごとにフローサイトメトリーを使用してＥＧＦＲ＋ＣＡＲ Ｔ細胞の数を測定した。標的クリアランスはＩＮＣＵＣＹＴＥ（登録商標）を使用して定量した。

【0428】

双方の試験にて、０．５％抗ＣＤ３／２８密度でのＰＣＳ（ＰＣＳ－３）は、３／３のドナーにてＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）製剤と比べてさらに良好な持続的標的クリアランスを示した（図６Ａ－６Ｆ）。０．５％抗ＣＤ３／２８密度でのＰＣＳは、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）製剤に匹敵した０．３％抗ＣＤ３／２８密度よりも良好な標的クリアランスを示した（図６Ａ－６Ｃ）。０．５％抗ＣＤ３／２８密度でのＰＣＳは、双方ともＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）製剤よりも優れた性能を示した０．７５％及び１％の製剤よりも良好な標的クリアランスも示した（図６Ｄ－６Ｆ）。まとめると、これら試験は、ＰＣＳがＭＲＭとの相乗効果を発揮して高度に機能的に強力なＣＡＲ－Ｔ細胞を生成できることを示唆している。

【0429】

実施例６．
ＰＣＳ製剤はＣＡＲ－Ｔ細胞が介在する標的クリアランスに優れた効力を示すことをさらに検証するために、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）または０．５％抗ＣＤ３／２８密度でのＰＣＳ（ＰＣＳ－３）を使用して健康なドナーＴ細胞を活性化した。Ｔ細胞にＲ１２構築物で形質導入し、ＭＲＭにて７日間培養した。７日目に、Ｔ細胞製剤ができた。

【0430】

実施例５では、ＰＣＳ製剤はＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）製剤と比べて優れた反復標的クリアランスを示した。その後、ＣＡＲ－Ｔ細胞はストレス試験を受け、短期的な効力を評価した。これを実行するために、Ｔ細胞を解凍し、低いエフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）で標的と共に、以下に手短に記載されているように共培養した：凍結保存したＴ細胞を解凍し、静置したのち、Ｆｕｌｌ ＲＰ１０培地に再浮遊させた。Ｔ細胞を数えた。ウェルあたり２０，０００のＮＬＲ＋ＲＯＲ１＋標的細胞（ＮＬＲ＋Ｈ１９７５）を平底９６ウェルプレートに播き、Ｔ細胞を加える前に２時間接着させた。次に、ＥＧＦＲ＋ＣＡＲ Ｔ細胞を１：１２５（Ｔ細胞１に対して標的細胞１２５、Ｅ：Ｔ）で合計２００ｕｌの培地にてＮＬＲ＋Ｈ１９７５標的に加え、ＩＮＣＵＣＹＴＥ（登録商標）に移した。少なくとも２回の反復を使用した。標的クリアランスはＩＮＣＵＣＹＴＥ（登録商標）を使用して４日間にわたって定量した。

【0431】

実施例５で実証されたものと一致して、ＰＣＳ ＣＡＲ－Ｔ製剤は、２／３のドナーにてＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）製剤と比べて優れた短期効力を示した（図７Ａ－７Ｂ）。他のドナーでは、ＰＣＳ製剤はＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）プロセスと同様の性能を示した（図７Ｃ）。

【0432】

ＰＣＳ製剤が順次刺激アッセイで優れた標的クリアランスを示したという観察と一致して、ＰＣＳ Ｔ細胞は３／３のドナーにてＴｒａｎｓＡｃｔ製剤と比べて経時的にさらに急速な増殖も示した（図８Ａ－８Ｃ）。

【0433】

実施例７．
ＰＣＳ＋ＭＲＭで培養されたＴ細胞がＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＭＲＭまたはＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＴＣＭと比べて優れた増殖を示すかどうかを判定するために、ＭＲＭにおけるＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）またはさまざまな抗ＣＤ３／２８密度（０．１％～０．３％）のＰＣＳ製剤を使用して健康なドナーＴ細胞を活性化した。Ｔ細胞にＲ１２構築物で形質導入し、ＴＣＭ（約５ｍＭのカリウムイオンを含む対照Ｔ細胞培地）またはＭＲＭにて８日間培養した。８日目にＴ細胞を数え、０日目からの総増殖量を決定した（図９）。ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＭＲＭで生成されたＴ細胞は、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＴＣＭと比べてわずかに増殖が減少した。一方、ＰＣＳ＋ＭＲＭで生成されたＴ細胞は、ＴＣＭまたはＭＲＭでのＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）活性化Ｔ細胞製剤と比べて、さらに高い増殖を示した。

【0434】

実施例８．
ＰＣＳ＋ＭＲＭで培養されたＴ細胞が、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＭＲＭまたはＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＴＣＭと比べて、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞製剤にて「幹細胞様」集団の増加を示すかどうかを判定するために、ＴＣＭにてＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、ＭＲＭにてＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、またはＭＲＭにてさまざまな抗ＣＤ３／２８密度のＰＣＳ製剤を使用して健康なドナーＴ細胞を活性化し、培養した。Ｔ細胞にＲ１２構築物で形質導入し、ＴＣＭまたはＭＲＭにて８日間培養した。実施例３に記載されているように、８日目にＴ細胞の表現型と幹細胞性に関連する表面マーカーについてＴ細胞製剤を染色した。

【0435】

調べた３名のドナーのうち３名にて、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＭＲＭ製剤はＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＴＣＭと比べて「幹細胞様」Ｔ細胞集団が多いことが示された。ＰＣＳ＋ＭＲＭ製剤はさらに、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＭＲＭ製剤よりも「幹細胞様」Ｔ細胞集団の濃縮を示した（図１０）。これらのデータは、ＰＣＳ＋ＭＲＭがＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）及びＭＲＭ対照よりも少なくとも追加的な利点を示すことを示唆している。

【0436】

実施例９．
ＰＣＳ＋ＭＲＭが標的刺激に応答して多機能性ＣＡＲ－Ｔ細胞の増強を示すかどうかを評価するために、ＴＣＭにてＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、ＭＲＭにてＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、またはＭＲＭにて０．５％抗ＣＤ３／２８密度のＰＣＳ（ＰＣＳ－３）を使用して１Ｍスケールで健康なドナーＴ細胞を活性化し、培養した。Ｔ細胞にＲ１２構築物で形質導入し、ＴＣＭまたはＭＲＭにて７日間培養した。７日目にＴ細胞製剤を凍結保存した。その後、Ｔ細胞を解凍し、標的刺激に応答してサイトカイン発現を上方調節する能力を評価した。

【0437】

Ｔ細胞の機能性は、標的刺激に応答してＩＬ－２及びＩＦＮｇを発現する能力として説明することができ（図５Ａ）、Ｔ細胞の多機能性は臨床結果との正の相関関係に関与している。ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＭＲＭ製剤は、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＴＣＭ製剤よりも高い多機能性（ＩＦＮ＋及びＩＬ－２＋）を示した。さらに、ＰＣＳ＋ＭＲＭ製剤はＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＭＲＭ製剤よりも高い多機能性を示した（図１１Ａ）。逆に、ＰＣＳ＋ＭＲＭ製剤は、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＭＲＭ製剤及びＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＴＣＭ製剤と比べて段階的に「機能性ではない」Ｔ細胞（ＩＦＮ－及びＩＬ－２）が最も少ないことを示した（図１１Ｂ）。

【0438】

実施例１０．
ＰＣＳ＋ＭＲＭが試験管内でＣＡＲ－Ｔ細胞による持続的な標的クリアランスの増強を示すかどうかを評価するために、ＴＣＭにてＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、ＭＲＭにてＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、またはＭＲＭにて０．５％抗ＣＤ３／２８密度のＰＣＳ（ＰＣＳ－３）を使用して１Ｍスケールで健康なドナーＴ細胞を活性化し、培養した。Ｔ細胞にＲ１２構築物で形質導入し、ＴＣＭまたはＭＲＭにて７日間培養した。７日目にＴ細胞製剤を凍結保存した。その後、Ｔ細胞を解凍し、順次刺激アッセイ及び連続刺激アッセイを使用して標的細胞を繰り返し殺傷する能力について評価した。順次刺激アッセイの目的は、Ｔ細胞集団全体の機能的効力を評価することであるのに対して、連続刺激アッセイの目的は、個々のＴ細胞の効力を経時的に評価することである。順次刺激アッセイは以下のように実施した。凍結保存されたＴ細胞を解凍し、静置したのち、Ｆｕｌｌ ＲＰ１０培地に再浮遊させた。Ｔ細胞を数えた。連続刺激プレートでは、エフェクター：標的比１：５にてＥＧＦＲ＋ＣＡＲ Ｔ細胞をＲＯＲ１＋標的（Ｈ１９７５）とともに共培養した。細胞数は培養容器のサイズを使用して決定した。これとは別に、標的クリアランスの可視化と定量に使用されたＩＮＣＵＣＹＴＥ（登録商標）プレートでは、平底９６ウェルプレートにて４，０００のＥＧＦＲ＋ＣＡＲ Ｔ細胞を２０，０００のＲＯＲ１＋標的（Ｈ１９７５）とともに１：５Ｅ：Ｔで共培養した。３～４日ごとに、フローサイトメトリーを使用して連続刺激プレートでのＥＧＦＲ＋ＣＡＲ Ｔ細胞の数を測定した。連続刺激プレートにてエフェクター：標的比１：５（Ｅ：Ｔを再設定）でＥＧＦＲ＋ＣＡＲ Ｔ細胞とともに新鮮な標的細胞を再び播いた。これとは別に、ＩＮＣＵＣＹＴＥ（登録商標）分析のために平底９６ウェルプレートにて１：５Ｅ：Ｔで４，０００の連続刺激を受けたＣＡＲ Ｔ細胞を２０，０００のＲＯＲ１＋標的（Ｈ１９７５）とともに共培養した。ＩＮＣＵＣＹＴＥ（登録商標）を使用して標的クリアランスを定量した。

【0439】

調べた３名のドナーのうち３名では、順次刺激設定と連続刺激設定の双方にてＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＭＲＭ製剤はＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＴＣＭ製剤よりも性能が優れていた（図１２Ａ～１３Ｃ）。ＰＣＳ＋ＭＲＭ製剤はさらに、３名のドナーのうち２名にて順次刺激アッセイでＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＭＲＭよりも優れた標的クリアランスを示し（図１２Ｂ～１２Ｃ）、最後のドナーはＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＭＲＭと同等の効果を示した（図１２Ａ）。連続刺激アッセイでは、ＰＣＳ＋ＭＲＭ製剤は３名のドナーのうち３名にてＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）＋ＭＲＭ製剤よりも優れた性能を示した（図１３Ａ－１３Ｃ）。

【0440】

実施例１１．
ＭＲＭ変形のＰＣＳを評価するために、２つのＰＣＳ製剤（密度０．１％及び０．５％）、５つのＭＲＭ変形（ＭＲＭ－１、ＭＲＭ－２、ＭＲＭ－３、ＭＲＭ－４、及び標準ＭＲＭ）、及び１つのＴＣＭ培地を使用した。Ｔ細胞をいずれかのＰＣＳ製剤で刺激し、Ｒ１２で形質導入し、ＴＣＭ、ＭＲＭ－１～ＭＲＭ－４、または標準ＭＲＭにて培養した。ＭＲＭ変形は、Ｋ＋イオンとＮａＣｌの濃度のみが互いに異なる。ＫイオンレベルはＭＲＭ－１（最高Ｋ^＋イオンレベル）からＭＲＭ－４（最低Ｋ^＋イオンレベル）に低下する一方で、ＮａＣｌ濃度はＭＲＭ－１（最低ＮａＣｌ濃度）からＭＲＭ－４（最高ＮａＣｌ濃度）に上昇した。刺激後の活性化、及び７日間の培養後の増殖と形質導入効率についてＴ細胞を分析した。

【0441】

健康なヒトドナーのＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞を解凍し、一回洗浄し、あらかじめ温めておいたＭＲＭに再浮遊させた。次に、ＣＤ４Ｔ細胞及びＣＤ８Ｔ細胞を１：１の比で混合し、遠心分離して、それぞれの培地にて２ｅ６の総Ｔ細胞／ｍｌになるように再浮遊させた。

【0442】

２つの異なるＰＣＳ製剤の事前に凍結乾燥したＰＣＳ材料を完全ＴＣＭに再懸濁して１０ｍｇ／ｍｌにした。続いて、２０ｕｌのＰＣＳと混合することによって１：１でのＣＤ４：ＣＤ８の１ｅ６のＴ細胞を活性化した。最後に、ＭＯＩ７．５にてＴ細胞にＲ１２構築物で形質導入し、７２時間そのまま放置した。

【0443】

すべてＩＬ２／７／１５で補完した完全ＴＣＭ、ＭＲＭ－１、ＭＲＭ－２、ＭＲＭ－３、ＭＲＭ－４、または標準ＭＲＭにＴ細胞を播き、いずれかのＰＣＳ製剤を使用して刺激し、０日目に形質導入した。２日目に、すべてＩＬ２／７／１５で補完した完全ＴＣＭ、ＭＲＭ－１、ＭＲＭ－２、ＭＲＭ－３、ＭＲＭ－４、または標準ＭＲＭの５ｍｌでのＧＲｅｘ２４にＴ細胞を移した。５日目に、すべてＩＬ２／７／１５で補完した完全ＴＣＭ、ＭＲＭ－１、ＭＲＭ－２、ＭＲＭ－３、ＭＲＭ－４、または標準ＭＲＭの合計１５ｍｌまたは２０ｍｌでのＧＲｅｘ６にＴ細胞を移した。２日目と７日目にＴ細胞を回収し、表現型分析を行った。

【0444】

Ｔ細胞生成の終了時にＴ細胞を数えた。フローサイトメトリー用に５００，０００のＴ細胞を回収した。表面抗体で４℃にて２０分間、Ｔ細胞を染色した。細胞を洗浄し、ＢｉｏＲａｄ ＺＥ５またはＣｙｔｅｋ Ａｕｒｏｒａフローサイトメーターで可視化した。

【0445】

いずれかのＰＣＳ製剤で刺激したＴ細胞は、すべての培地製剤にて思い通りの活性化、増殖、及び形質導入を示した。いずれかのＰＣＳ製剤によるＴ細胞刺激の２日後に、種々のＭＲＭ製剤で培養されたＴ細胞は活性化マーカーＣＤ２５及びＣＤ６９の同様の発現を示し、双方のＰＣＳ製剤のすべての培地製剤でＴ細胞の活性化が上手く行った（図１４Ａ－１４Ｂ）。

【0446】

いずれかのＰＣＳ製剤によるＴ細胞刺激の７日後に、ＣｅｌｌａｃａＭＸハイスループット自動カウンターで細胞を数えた。増殖は、７日目の生細胞の総数を０日目の生細胞の総数で割ることによって算出した。双方のＰＣＳ製剤のすべての培地製剤にてＴ細胞の増殖が上手く行った（図１４Ｃ－１４Ｄ）。

【0447】

いずれかのＰＣＳ製剤によるＴ細胞刺激の７日後に、細胞を回収し、形質導入効率を評価した。死細胞は生存率色素を使用して分析から除外した。形質導入したＴ細胞は、ＣＤ３＋ＥＧＦＲ＋であるＴ細胞として定義された。双方のＰＣＳ製剤のすべての培地製剤で、Ｔ細胞の形質導入が上手く行った（図１４Ｅ～１４Ｆ）。
＊＊＊

【0448】

発明を実施するための形態節は、特許請求の範囲を解釈するために使用されることを意図し、発明の概要及び要約節はそれを意図しないと理解されるべきである。明の概要及び要約節は、本発明者ら（複数可）によって企図されるような本開示の、全てではないが１以上の例示的な実施形態を記載する場合があり、したがって、本開示及び添付の特許請求の範囲を決して限定することを意図するものではない。

【0449】

本開示は、特定の機能及びそれらの関係性の実施を示す機能的構成要素を使用して上に記載されている。これらの機能的構成要素の境界は、記載の便宜上、本明細書では任意に定義されている。特定の機能及びそれらの関係性が適切に実施されている限り、別の境界が定義され得る。

【0450】

特定の実施形態の前述した記載は、本開示の一般的性質を完全に明らかにすることになるため、他者が、当業者の技能範囲内の知識を適用することによって、本開示の一般概念から逸脱することなく、そのような特定の実施形態を様々な用途に合わせて過度な実験を行うことなく、容易に修正及び／または適合させ得る。したがって、そのような適合及び修正は、本明細書に提示される教示及び指針に基づいて、開示される実施形態と同等の意味及び範囲内にあることを意図する。本明細書の表現または用語は、制限ではなく説明を目的としており、そのため本明細書の用語または表現は、当業者によって教示及び指針に照らして解釈されると理解されるべきである。

【0451】

本開示の幅及び範囲は、上述した例示的な実施形態のいずれかによって限定されるべきではないが、以下の特許請求の範囲及びそれらの均等物に従ってのみ定義されるべきである。

【0452】

本出願全体を通して引用されるすべての引用参考文献（参考文献、米国または外国特許または特許出願、及びウェブサイトを含む）の内容は、任意の目的のためにそれらの全体が本明細書に記載されているものとして、そこで引用される参考文献も同様に、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。何らかの矛盾が生じた場合、本明細書に文章で開示される内容が優先する。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図5E】

【図6-1】

【図6-2】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図14D】

【図14E】

【図14F】

【国際調査報告】