特表 2024-540103 ｃ－Ｊｕｎを発現する細胞を培養するための方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-31

(54)【発明の名称】ｃ－Ｊｕｎを発現する細胞を培養するための方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/0789 20100101AFI20241024BHJP

   C12N 5/078 20100101ALI20241024BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/09 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 9/14 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/52 20060101ALI20241024BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20241024BHJP

   C12N 15/85 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/861 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/867 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/869 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20241024BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20241024BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 47/68 20170101ALN20241024BHJP

   A61K 39/395 20060101ALN20241024BHJP

【ＦＩ】

C12N5/0789

C12N5/078 ZNA

C12N5/10

C12N15/09 110

C12N15/12

C12N9/14

C12N15/52 Z

C07K19/00

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N15/113 Z

C12N15/85 Z

C12N15/861 Z

C12N15/867 Z

C12N15/869 Z

C12N15/864 100P

A61P35/00

A61K35/17

A61K48/00

A61P37/04

A61K47/68

A61K39/395 T

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024525403

(86)(22)【出願日】2022-10-27

(85)【翻訳文提出日】2024-06-25

(86)【国際出願番号】 US2022078825

(87)【国際公開番号】W WO2023077032

(87)【国際公開日】2023-05-04

(31)【優先権主張番号】63/263,233

(32)【優先日】2021-10-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/309,403

(32)【優先日】2022-02-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/339,353

(32)【優先日】2022-05-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522421853

【氏名又は名称】ライエル・イミュノファーマ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＬＹＥＬＬ ＩＭＭＵＮＯＰＨＡＲＭＡ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100138911

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻井 陽子

(72)【発明者】

【氏名】ボドナラ，スマン クマール

(72)【発明者】

【氏名】クリシナムーアスィー，ヴィーナ

(72)【発明者】

【氏名】パーク，スペンサー

(72)【発明者】

【氏名】ボン，クイニー

(72)【発明者】

【氏名】セイザー，ブライス

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA93X

4B065AA94X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065BB02

4B065BB15

4B065BB19

4B065BC01

4B065BD22

4B065BD36

4B065BD39

4B065CA24

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC07

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE59

4C084AA13

4C084NA05

4C084NA13

4C084ZB021

4C084ZB091

4C084ZB261

4C085AA14

4C085BB01

4C085BB12

4C085BB50

4C085CC03

4C085CC31

4C085DD62

4C085EE01

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB37

4C087CA04

4C087NA05

4C087NA13

4C087ZB02

4C087ZB09

4C087ZB26

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA09

4H045BA41

4H045DA50

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンを含む培地において免疫細胞を培養する方法が、本明細書で開示され、培地は、免疫細胞の幹細胞性を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に提供されている方法を使用して培養される免疫細胞は、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように改変されており、及び／またはリガンド結合タンパク質をコードする１つ以上の外来性ヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、免疫細胞は投与を必要とする対象に投与される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

エクスビボ培養またはインビトロ培養の間に免疫細胞の幹細胞性を増加させる方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において免疫細胞を培養することを含み、前記免疫細胞が、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて、前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている、前記方法。

【請求項2】

エクスビボ培養またはインビトロ培養の間に免疫細胞の収率を増加させる方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において免疫細胞を培養することを含み、前記免疫細胞が、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて、前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている、前記方法。

【請求項3】

免疫療法のための免疫細胞の集団を調製する方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において免疫細胞を培養することを含み、前記免疫細胞が、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて、前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている、前記方法。

【請求項4】

免疫療法のためのエクスビボ培養またはインビトロ培養の間に免疫細胞の収率を増加させながら、免疫細胞の幹細胞性を増加させる方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において免疫細胞を培養することを含み、前記免疫細胞が、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて、前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている、前記方法。

【請求項5】

エクスビボまたはインビトロで幹様免疫細胞の集団を増殖させる方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において免疫細胞を培養することを含み、前記免疫細胞が、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて、前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている、前記方法。

【請求項6】

抗原刺激に応答した免疫細胞によるサイトカインの産生を増加させる方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において前記免疫細胞を培養することを含み、前記免疫細胞が、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて、前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている、前記方法。

【請求項7】

前記サイトカインがＩＬ－２を含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記培養の後、参照免疫細胞と比べて、前記抗原刺激に応答した前記サイトカインの前記産生が、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１７倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約１９倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約７５倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約７５０倍、または少なくとも約１，０００倍以上増加する、請求項６または７に記載の方法。

【請求項9】

前記参照免疫細胞が、（ｉ）前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されており、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含まない培地で培養されているか、（ｉｉ）前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されておらず、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地で培養されているか、（ｉｉｉ）前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されておらず、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含まない培地で培養されているか、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組み合わせである、対応する免疫細胞を含む、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

持続的抗原刺激に応答した免疫細胞のエフェクター機能を増加させる方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において前記免疫細胞を培養することを含み、前記免疫細胞が、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて、前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている、前記方法。

【請求項11】

前記免疫細胞が、参照免疫細胞と比べて、抗原刺激アッセイの少なくとも１回、少なくとも２回、または少なくとも３回の追加の回の間、エフェクター機能を保持する、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記エフェクター機能が、（ｉ）標的細胞（例えば、腫瘍細胞）を殺傷するか、（ｉｉ）更なる抗原刺激時にサイトカインを産生するか、または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）との双方の能力を含む、請求項１０または１１に記載の方法。

【請求項13】

前記サイトカインがＩＦＮ－γを含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記培養の後、持続的抗原刺激に応答した前記免疫細胞の前記エフェクター機能が、参照免疫細胞と比べて、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１７倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約１９倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約７５倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約７５０倍、または少なくとも約１，０００倍以上増加する、請求項１０～１３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項15】

前記参照免疫細胞が、（ｉ）前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されており、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含まない培地で培養されているか、（ｉｉ）前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されておらず、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地で培養されているか、（ｉｉｉ）前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されておらず、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含まない培地で培養されているか、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組み合わせである、対応する免疫細胞を含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記免疫細胞が、改変後、前記免疫細胞が前記対応する免疫細胞と比べて、前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するような、前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドで改変されている、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドが、前記免疫細胞に対して内在性であり、前記免疫細胞が、内在性ｃ－Ｊｕｎポリペプチドの発現を増加させることができる転写活性化因子で改変されている、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項18】

前記転写活性化因子が、エンドヌクレアーゼ活性を欠くように改変されているＣａｓタンパク質に結合される、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

免疫細胞におけるｃ－Ｊｕｎポリペプチドの発現を増加させる方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において、前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドで免疫細胞を改変することを含み、前記改変後、前記免疫細胞における前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドの前記発現が、参照細胞と比べて増加する、前記方法。

【請求項20】

前記参照細胞が、（ｉ）前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されており、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含まない培地で培養されているか、（ｉｉ）前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されておらず、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地で培養されているか、（ｉｉｉ）前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されておらず、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含まない培地で培養されているか、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組み合わせである、対応する免疫細胞を含む、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドの前記発現が、前記参照細胞と比べて、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１７倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約１９倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約７５倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約７５０倍、または少なくとも約１，０００倍以上増加する、請求項１９または２０に記載の方法。

【請求項22】

免疫療法のためにエクスビボまたはインビトロで免疫細胞を調製する方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドで免疫細胞を改変することを含む、前記方法。

【請求項23】

免疫療法のためにエクスビボまたはインビトロで免疫細胞を調製する方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において、前記内在性ｃ－Ｊｕｎポリペプチドの前記発現を増加させることができる転写活性化因子で免疫細胞を改変することを含む、前記方法。

【請求項24】

前記転写活性化因子が、エンドヌクレアーゼ活性を欠くように改変されているＣａｓタンパク質に結合される、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドが、配列番号１３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする前記外来性ポリヌクレオチドが、
ａ．配列番号１に示される核酸配列に対して少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、
ｂ．配列番号２に示される核酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、
ｃ．配列番号４に示される核酸配列に対して少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、
ｄ．配列番号５に示される核酸配列に対して少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、
ｅ．配列番号６に示される核酸配列に対して少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、
ｆ．配列番号７に示される核酸配列に対して少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、
ｇ．配列番号８に示される核酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、
ｈ．配列番号９に示される核酸配列に対して少なくとも５５％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、または
ｉ．配列番号１０に示される核酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項１６、１９、２２、及び２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項27】

前記外来性ポリヌクレオチドが、前記配列番号１に示される核酸配列に対して少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

前記ヌクレオチド配列が、前記配列番号１に示される核酸配列を含む、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記外来性ポリヌクレオチドが、前記配列番号２に示される核酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項30】

前記ヌクレオチド配列が、前記配列番号２に示される核酸配列を含む、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

前記外来性ポリヌクレオチドが、前記配列番号４に示される核酸配列に対して少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項32】

前記ヌクレオチド配列が、前記配列番号４に示される核酸配列を含む、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記外来性ポリヌクレオチドが、前記配列番号５に示される核酸配列に対して少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項34】

前記ヌクレオチド配列が、前記配列番号５に示される核酸配列を含む、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記外来性ポリヌクレオチドが、配列番号６に示される核酸配列に対して少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項36】

前記ヌクレオチド配列が、前記配列番号６に示される核酸配列を含む、請求項３３に記載の方法。

【請求項37】

前記外来性ポリヌクレオチドが、前記配列番号７に示される核酸配列に対して少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項38】

前記ヌクレオチド配列が、前記配列番号７に示される核酸配列を含む、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記外来性ポリヌクレオチドが、前記配列番号８に示される核酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項40】

前記ヌクレオチド配列が、前記配列番号８に示される核酸配列を含む、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

前記外来性ポリヌクレオチドが、前記配列番号９に示される核酸配列に対して少なくとも５５％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項42】

前記ヌクレオチド配列が、前記配列番号９に示される核酸配列を含む、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記外来性ポリヌクレオチドが、前記配列番号１０に示される核酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項44】

前記ヌクレオチド配列が、前記配列番号１０に示される核酸配列を含む、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

前記免疫細胞が、リガンド結合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を更に含む、請求項１～４４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項46】

前記リガンド結合タンパク質が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）、Ｔ細胞受容体模倣体（ＴＣＲ模倣体）、またはそれらの組み合わせから選択される、請求項４５に記載の方法。

【請求項47】

前記ＣＡＲが、標準的ＣＡＲ、スプリットＣＡＲ、オフスイッチＣＡＲ、オンスイッチＣＡＲ、第一世代ＣＡＲ、第二世代ＣＡＲ、第三世代ＣＡＲ、または第四世代ＣＡＲとして設計される、請求項４６に記載の方法。

【請求項48】

前記リガンド結合タンパク質が、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン、またはそれらの組み合わせを含む、請求項４５～４７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項49】

前記抗原結合ドメインが、ＡＦＰ（アルファ－フェトプロテイン）、αｖβ６または別のインテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂｒａｆ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ６、ＣＡ９（炭酸脱水酵素９）、ＣＣＬ－１（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド１）、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ３５２、ＣＥＡ（がん胎児性抗原）、クローディン１８．２、クローディン６、ｃ－ＭＥＴ、ＤＬＬ３（デルタ様タンパク質３）、ＤＬＬ４、ＥＮＰＰ３（エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３）、ＥｐＣＡＭ、ＥＰＧ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＰＧ－４０、エフリンＢ２、ＥＰＨａ２（エフリン受容体Ａ２）、ＥＲＢＢ二量体、エストロゲン受容体、ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ受容体）、ＦＡＰ－α（線維芽細胞活性化タンパク質α）、胎児ＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ＦＣＲＬ５、ＦＲ－α（葉酸受容体アルファ）、ＧＣＣ（グアニルシクラーゼＣ）、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＰＣ２（グリピカン－２）、ＧＰＣ３、ｇｐ１００（糖タンパク質１００）、ＧＰＮＭＢ（糖タンパク質ＮＭＢ）、ＧＰＲＣ５Ｄ（Ｇタンパク質共役受容体５Ｄ）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、Ｂ型肝炎表面抗原、ＨＬＡ－Ａ１（ヒト白血球抗原Ａ１）、ＨＬＡ－Ａ２（ヒト白血球抗原Ａ２）、ＨＭＷ－ＭＡＡ（ヒト高分子量黒色腫関連抗原）、ＩＧＦ１Ｒ（インスリン様成長因子１受容体）、Ｉｇカッパ、Ｉｇラムダ、ＩＬ－２２Ｒａ（ＩＬ－２２受容体アルファ）、ＩＬ－１３Ｒａ２（ＩＬ－１３受容体アルファ２）、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＬＩ細胞接着分子（ＬＩ－ＣＡＭ）、Ｌｉｖ－１、ＬＲＲＣ８Ａ（８ファミリーメンバーＡを含有するロイシンリッチリピート）、ルイスＹ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＲＴ－１（メランＡ）、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）、ＭＣＳＰ（黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、メソテリン、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ１６、ＭＨＣ／ペプチド複合体（例えば、ＡＦＰ、ＫＲＡＳ、ＮＹ－ＥＳＯ、ＭＡＧＥ－Ａ、及びＷＴ１に由来するペプチドと複合体化したＨＬＡ－Ａ）、ＮＣＡＭ（神経細胞接着分子）、ネクチン－４、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラー群２メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＥＳＯ、腫瘍胎児抗原、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＲＡＭＥ（黒色腫優先発現抗原）、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質アルファ）、ＳＬＩＴ、ＳＬＩＴＲＫ６（ＮＴＲＫ様タンパク質６）、ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原１）、サバイビン、ＴＡＧ７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＰＢＧ（栄養膜糖タンパク質）、Ｔｒｏｐ－２、ＶＥＧＦＲ１（血管内皮増殖因子受容体１）、ＶＥＧＦＲ２、ならびにＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶ、及び他の病原体に由来する抗原、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される抗原に特異的に結合する、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

前記抗原結合ドメインが、ＲＯＲ１に特異的に結合する、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記抗原結合ドメインが、ＧＰＣ２に特異的に結合する、請求項４９に記載の方法。

【請求項52】

前記共刺激ドメインが、インターロイキン－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）、インターロイキン－１２受容体（ＩＬ－１２Ｒ）、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－１５、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、またはそれらの任意の組み合わせの共刺激ドメインを含む、請求項４８～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項53】

前記共刺激ドメインが、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７共刺激ドメインを含む、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

前記膜貫通ドメインが、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ１９、ＣＤ８、またはそれらの任意の組み合わせの膜貫通ドメインを含む、請求項４８～５３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項55】

前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む、請求項４８～５４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項56】

前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、共通ＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲｉｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」）、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ３２、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、またはそれらの任意の組み合わせに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項４８～５５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項57】

前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項５６に記載の方法。

【請求項58】

前記ＴＣＲが、腫瘍抗原／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する、請求項４６に記載の方法。

【請求項59】

前記腫瘍抗原が、ＡＦＰ、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－ｌｌＲａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、Ｋｒａｓ、Ｂｒａｆ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－ｌａ、ＭＡＧＥ－Ａｌ、レグマイン、ＨＰＶ、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａｌ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビング、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴｌ、Ｒａｓ変異体（例えば、ＨＲＡＳ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ）、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢｌ、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、ネオアンチゲン、またはそれらの任意の組み合わせに由来する、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドが、リンカーによって前記リガンド結合タンパク質に連結されている、請求項４５～５９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項61】

前記リンカーが、切断可能なリンカーを含む、請求項６０に記載の方法。

【請求項62】

前記リンカーが、Ｐ２Ａリンカー、Ｔ２Ａリンカー、Ｆ２Ａリンカー、Ｅ２Ａリンカー、フーリン切断部位、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項６０または６１に記載の方法。

【請求項63】

前記リンカーが、配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６０～６２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項64】

前記リンカーが、前記配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む、請求項６０～６３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項65】

前記免疫細胞が、前記免疫細胞において発現される切断型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）をコードするヌクレオチド配列を更に含む、請求項１～６４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項66】

前記ＥＧＦＲｔが、配列番号２４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６５に記載の方法。

【請求項67】

前記ＥＧＦＲｔが、前記配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含む、請求項６５または６６に記載の方法。

【請求項68】

前記ＥＧＦＲｔが、リンカーによって前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチド及び／または前記リガンド結合タンパク質と連結されている、請求項６５～６７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項69】

前記リンカーが、切断可能なリンカーを含む、請求項６８に記載の方法。

【請求項70】

前記リンカーが、Ｐ２Ａリンカー、Ｔ２Ａリンカー、Ｆ２Ａリンカー、Ｅ２Ａリンカー、フーリン切断部位、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項６８または６９に記載の方法。

【請求項71】

前記リンカーが、前記配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６８～７０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項72】

前記リンカーが、前記配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む、請求項６８～７１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項73】

前記外来性ポリヌクレオチドが、調節要素を含み、ベクターが、前記外来性ポリヌクレオチドを含む、請求項１～７２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項74】

前記ベクターが、ポリシストロン性発現ベクターである、請求項７３に記載の方法。

【請求項75】

前記調節要素が、プロモーターを含む、請求項７３または７４に記載の方法。

【請求項76】

前記プロモーターが、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）プロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、ユビキチンプロモーター、またはそれらの組み合わせを含む、請求項７５に記載の方法。

【請求項77】

前記ベクターが、ウイルスベクター、哺乳動物ベクター、または細菌ベクターを含む、請求項７３～７６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項78】

前記ベクターが、アデノウイルスベクター、レンチウイルス、センダイウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、ハイブリッドベクター、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む、請求項７３～７７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項79】

前記ベクターが、レンチウイルスである、請求項７８に記載の方法。

【請求項80】

カリウムイオンの前記濃度が、約１０ｍＭよりも高い、約１５ｍＭよりも高い、約２０ｍＭよりも高い、約２５ｍＭよりも高い、約３０ｍＭよりも高い、約３５ｍＭよりも高い、約４０ｍＭよりも高い、約４５ｍＭよりも高い、約５０ｍＭよりも高い、約５５ｍＭよりも高い、約６０ｍＭよりも高い、約６５ｍＭよりも高い、約７０ｍＭよりも高い、約７５ｍＭよりも高い、約８０ｍＭよりも高い、約８５ｍＭよりも高い、または約９０ｍＭよりも高い、請求項１～７９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項81】

カリウムイオンの前記濃度が、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、及び約８０ｍＭからなる群から選択される、請求項１～７９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項82】

カリウムイオンの濃度が、約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約４０ｍＭ～約５０ｍＭである、請求項１～７９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項83】

カリウムイオンの濃度が、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、または約７０ｍＭである、請求項１～７９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項84】

前記培地が、ナトリウムイオンを更に含む、請求項１～８３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項85】

前記培地が、ＮａＣｌを更に含む、請求項１～８４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項86】

前記培地が、約１４０ｍＭ未満、約１３０ｍＭ未満、約１２０ｍＭ未満、約１１０ｍＭ未満、約１００ｍＭ未満、約９０ｍＭ未満、約８０ｍＭ未満、約７０ｍＭ未満、約６０ｍＭ未満、約５０ｍＭ未満、または約４０ｍＭ未満のＮａＣｌを含む、請求項１～８５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項87】

前記培地が、低張性または等張性である、請求項１～８６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項88】

前記培地が、低張性であり、カリウムイオン濃度及びナトリウムイオン濃度の合計の２倍が、２８０ｍＭ未満である、請求項８４～８７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項89】

前記培地が、低張性であり、前記カリウムイオン濃度及び前記ナトリウムイオン濃度の合計の２倍が、２４０ｍＭを超え、かつ２８０ｍＭ未満である、請求項８４～８７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項90】

前記培地が、等張性であり、前記カリウムイオン濃度及び前記ナトリウムイオン濃度の合計の２倍が、２８０ｍＭ以上かつ３００ｍＭ未満である、請求項８４～８７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項91】

カリウムイオンの前記濃度が、約６０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度が、約８０ｍＭ未満、約７５ｍＭ未満、約７０ｍＭ未満、約６５ｍＭ未満、または約６０ｍＭ未満である、請求項８５～９０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項92】

カリウムイオンの前記濃度が、約５５ｍＭであり、前記ＮａＣｌの濃度が、約８５ｍＭ未満、約８０ｍＭ未満、約７５ｍＭ未満、約７０ｍＭ未満、または約６５ｍＭ未満である、請求項８５～９０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項93】

カリウムイオンの前記濃度が、約５０ｍＭであり、前記ＮａＣｌの濃度が、約９０ｍＭ未満、約８５ｍＭ未満、約８０ｍＭ未満、または約７５ｍＭ未満、または約７０ｍＭ未満である、請求項８５～９０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項94】

前記培地が、１つ以上のサイトカインを更に含む、請求項１～９３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項95】

前記１つ以上のサイトカインが、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）、インターロイキン－２１（ＩＬ－２１）、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項９４に記載の方法。

【請求項96】

前記１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－７、及びＩＬ－１５を含む、請求項９４に記載の方法。

【請求項97】

前記培地が、約５０ＩＵ／ｍＬ～約５００ＩＵ／ｍＬの濃度でＩＬ－２を含む、請求項９５または９６に記載の方法。

【請求項98】

ＩＬ－２の前記濃度が、約５０ＩＵ／ｍＬ、約６０ＩＵ／ｍＬ、約７０ＩＵ／ｍＬ、約８０ＩＵ／ｍＬ、約９０ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２２５ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約２７５ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬ、または約５００ＩＵ／ｍＬである、請求項９７に記載の方法。

【請求項99】

ＩＬ－２の前記濃度が、約１００ＩＵ／ｍＬ～約３００ＩＵ／ｍＬである、請求項９７または９８に記載の方法。

【請求項100】

ＩＬ－２の前記濃度が、約２００ＩＵ／ｍＬである、請求項９７～９９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項101】

前記培地が、約５０ＩＵ／ｍＬ～約５００ＩＵ／ｍＬの濃度でＩＬ－２１を含む、請求項９５及び９７～１００のいずれか１項に記載の方法。

【請求項102】

ＩＬ－２１の前記濃度が、約５０ＩＵ／ｍＬ、約６０ＩＵ／ｍＬ、約７０ＩＵ／ｍＬ、約８０ＩＵ／ｍＬ、約９０ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２２５ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約２７５ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬ、または約５００ＩＵ／ｍＬである、請求項１０１に記載の方法。

【請求項103】

ＩＬ－２１の前記濃度が、約１００ＩＵ／ｍＬ～約３００ＩＵ／ｍＬである、請求項１０１または１０２に記載の方法。

【請求項104】

ＩＬ－２１の前記濃度が、約２００ＩＵ／ｍＬである、請求項１０１～１０３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項105】

前記培地が、約５００ＩＵ／ｍＬ～約１，５００ＩＵ／ｍＬの濃度でＩＬ－７を含む、請求項９５～１０４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項106】

ＩＬ－７の前記濃度が、約５００ＩＵ／ｍＬ、約５５０ＩＵ／ｍＬ、約６００ＩＵ／ｍＬ、約６５０ＩＵ／ｍＬ、約７００ＩＵ／ｍＬ、約７５０ＩＵ／ｍＬ、約８００ＩＵ／ｍＬ、約８５０ＩＵ／ｍＬ、約９００ＩＵ／ｍＬ、約９５０ＩＵ／ｍＬ、約１，０００ＩＵ／ｍＬ、約１，０５０ＩＵ／ｍＬ、約１，１００ＩＵ／ｍＬ、約１，１５０ＩＵ／ｍＬ、約１，２００ＩＵ／ｍＬ、約１，２５０ＩＵ／ｍＬ、約１，３００ＩＵ／ｍＬ、約１，３５０ＩＵ／ｍＬ、約１，４００ＩＵ／ｍＬ、約１，４５０ＩＵ／ｍＬ、または約１，５００ＩＵ／ｍＬである、請求項１０５に記載の方法。

【請求項107】

ＩＬ－７の前記濃度が、約１，０００ＩＵ／ｍＬ～約１，４００ＩＵ／ｍＬである、請求項１０５または１０６に記載の方法。

【請求項108】

ＩＬ－７の前記濃度が、約１，２００ＩＵ／ｍＬである、請求項１０５～１０７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項109】

前記培地が、約５０ＩＵ／ｍＬ～約５００ＩＵ／ｍＬの濃度でＩＬ－１５を含む、請求項９５～１０８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項110】

ＩＬ－１５の前記濃度が、約５０ＩＵ／ｍＬ、約６０ＩＵ／ｍＬ、約７０ＩＵ／ｍＬ、約８０ＩＵ／ｍＬ、約９０ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２２５ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約２７５ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬ、または約５００ＩＵ／ｍＬである、請求項１０９に記載の方法。

【請求項111】

ＩＬ－１５の前記濃度が、約１００ＩＵ／ｍＬ～約３００ＩＵ／ｍＬである、請求項１０９または１１０に記載の方法。

【請求項112】

ＩＬ－１５の前記濃度が、約２００ＩＵ／ｍＬである、請求項１０９～１１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項113】

前記培地が、細胞増殖剤を更に含む、請求項１～１１２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項114】

前記細胞増殖剤が、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤、ＡＣＬＹ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１１３に記載の方法。

【請求項115】

前記ＰＩ３Ｋ阻害剤が、クエン酸ヒドロキシル、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ、ＣＡＬ１０１、ＩＣ８７１１４、及びそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１１４に記載の方法。

【請求項116】

前記ＡＫＴ阻害剤が、ＭＫ２２０６、Ａ４４３６５４、ＡＫＴｉ－ＶＩＩＩ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１１４に記載の方法。

【請求項117】

前記培地が、出発免疫細胞と比べて、高濃度のカリウムイオンを含まない培地において培養された免疫細胞と比べて、及び／または前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドを含まない免疫細胞と比べて、最終細胞産物において、
ａ．低分化及び／または未分化細胞の数及び／または割合を増加させることができるか、
ｂ．形質導入効率を増加させることができるか、
ｃ．幹様免疫細胞を増加させることができるか、
ｄ．インビボ生存能を増加させることができるか、
ｅ．細胞能力を増加させることができるか、
ｆ．細胞疲弊を防ぐことができるか、または
ｇ．それらの任意の組み合わせを行うことができる、請求項１～１１６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項118】

前記培地が、カルシウムイオン、グルコース、またはそれらの任意の組み合わせを更に含む、請求項１～１１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項119】

前記培地が、グルコースを更に含み、グルコースの濃度が、約１０ｍＭを超える、請求項１１８に記載の方法。

【請求項120】

グルコースの前記濃度が、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１９ｍＭ、約１５ｍＭ～約１８ｍＭ、約１５ｍＭ～約１７ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、約１６ｍＭ～約２０ｍＭ、約１６ｍＭ～約１９ｍＭ、約１６ｍＭ～約１８ｍＭ、約１６ｍＭ～約１７ｍＭ、約１７ｍＭ～約２０ｍＭ、約１７ｍＭ～約１９ｍＭ、または約１７ｍＭ～約１８ｍＭである、請求項１１９に記載の方法。

【請求項121】

グルコースの前記濃度が、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭである、請求項１１９に記載の方法。

【請求項122】

グルコースの前記濃度が、約１５．４ｍＭ、約１５．９ｍＭ、約１６．３ｍＭ、約１６．８ｍＭ、約１７．２ｍＭ、または約１７．７ｍＭである、請求項１１９に記載の方法。

【請求項123】

前記培地が、カルシウムイオンを更に含み、カルシウムイオンの濃度が、約０．４ｍＭを超える、請求項１１８～１２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項124】

カルシウムイオンの前記濃度が、約０．４ｍＭ～約２．８ｍＭ、約０．４ｍＭ～約２．５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．１ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．３ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．４ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．８ｍＭ、約１．７ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．８ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２～約１．３ｍＭ、約１．２～約１．４ｍＭ、約１．２～約１．５ｍＭ、約１．２～約１．６ｍＭ、約１．２～約１．７ｍＭ、約１．２～約１．８ｍＭ、約１．３～約１．４ｍＭ、約１．３～約１．５ｍＭ、約１．３～約１．６ｍＭ、約１．３～約１．７ｍＭ、約１．３～約１．８ｍＭ、約１．４～約１．５ｍＭ、約１．４～約１．６ｍＭ、約１．４～約１．７ｍＭ、約１．４～約１．８ｍＭ、約１．５～約１．６ｍＭ、約１．５～約１．７ｍＭ、約１．５～約１．８ｍＭ、約１．６～約１．７ｍＭ、約１．６～約１．８ｍＭ、または約１．７～約１．８ｍＭである、請求項１２３に記載の方法。

【請求項125】

カルシウムイオンの前記濃度が、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、約２．０ｍＭ、約２．１ｍＭ、約２．２ｍＭ、約２．３ｍＭ、約２．４ｍＭ、約２．５ｍＭ、約２．６ｍＭ、約２．７ｍＭ、約２．８ｍＭ、約２．９ｍＭ、または約３．０ｍＭである、請求項１２３に記載の方法。

【請求項126】

前記免疫細胞が、前記培養後に、ＣＤ３＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、もしくはＴＣＦ７＋、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１～１２５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項127】

請求項１～１２６のいずれか１項に記載の方法によって調製された、免疫細胞の集団。

【請求項128】

前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、請求項１２７に記載の免疫細胞の集団。

【請求項129】

前記Ｔ細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、または双方を含む、請求項１２８に記載の免疫細胞の集団。

【請求項130】

請求項１２７～１２９のいずれか１項に記載の免疫細胞の集団と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。

【請求項131】

（ａ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されているＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、（ｉ）改変された前記ＣＤ４＋Ｔ細胞の少なくとも約２０パーセントが、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性であるか、（ｉｉ）改変された前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも約２０パーセントが、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性であるか、または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）との双方である、前記組成物。

【請求項132】

（ａ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されているＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、改変された前記ＣＤ４＋Ｔ細胞の少なくとも約２０パーセントが、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性である、前記組成物。

【請求項133】

（ａ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されているＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、改変された前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも約２０パーセントはＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性である、前記組成物。

【請求項134】

（ａ）操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されているＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、（ｉ）改変された前記ＣＤ４＋Ｔ細胞の少なくとも約１５％が、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性であるか、（ｉｉ）改変された前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも約２０％が、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性であるか、または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）との双方である、前記組成物。

【請求項135】

（ａ）操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されているＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、改変された前記ＣＤ４＋Ｔ細胞の少なくとも約１５％が、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性である、前記組成物。

【請求項136】

（ａ）操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されているＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、改変された前記ＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも約２０パーセントはＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性である、前記組成物。

【請求項137】

（ａ）操作されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている免疫細胞の集団を含む組成物であって、前記細胞の少なくとも約４％が、前駆疲弊Ｔ細胞である、前記組成物。

【請求項138】

（ａ）操作されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている免疫細胞の集団を含む組成物であって、前記細胞の約４％～約６％が、前駆疲弊Ｔ細胞である、前記組成物。

【請求項139】

（ａ）操作されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて前記ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている免疫細胞の集団を含む組成物であって、前記細胞の少なくとも約４％が、前駆疲弊Ｔ細胞であり、前記細胞の少なくとも約４％が、幹様Ｔ細胞である、前記組成物。

【請求項140】

療法を必要とする対象を治療するための、請求項１２７～１２９のいずれか１項に記載の免疫細胞の集団、請求項１３０に記載の医薬組成物、または請求項１３１～１３９のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項141】

疾患または状態の治療または予防を必要とする対象において疾患または状態を治療または予防するための医薬の製造における請求項１２７～１２９のいずれか１項に記載の免疫細胞の集団、請求項１３０に記載の医薬組成物、または請求項１３１～１３９のいずれか１項に記載の組成物の、使用。

【請求項142】

前記疾患または前記状態が、がんを含む、請求項１４１に記載の使用。

【請求項143】

療法に有用な細胞の疲弊を予防または低減するための、請求項１２７～１２９のいずれか１項に記載の免疫細胞の集団、請求項１３０に記載の医薬組成物、または請求項１３１～１３９のいずれか１項に記載の組成物の、使用。

【請求項144】

疾患または状態の治療または予防を必要とする対象において疾患または状態を治療または予防する方法であって、請求項１２７～１２９のいずれか１項に記載の免疫細胞の集団、請求項１３０に記載の医薬組成物、または請求項１３１～１３９のいずれか１項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項145】

前記疾患または前記状態が、がんを含む、請求項１４４に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本ＰＣＴ出願は、２０２２年１０月２８日に出願された米国仮出願第６３／２６３，２３３号、２０２２年２月１１日に出願された同第６３／３０９，４０３号、及び２０２２年５月６日に出願された同第６３／３３９，３５３号の優先権の利益を主張し、この各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

ＥＦＳ－ＷＥＢを介して電子的に提出された配列表の参照
本出願において提出された電子的に提出された配列表の内容（名称：４３８５＿０７９ＰＣ０３＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２６．ｘｍｌ、サイズ：１３５，６７０バイト、及び作成日：２０２２年１０月２６日）は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0003】

本開示は、例えば、改変されていない対応する細胞と比べて、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された細胞、例えば、多能性細胞、多分化能細胞、及び／または免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）を培養する方法に関する。本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、本明細書に記載されている方法を使用して培養される免疫細胞はまた、コードされたタンパク質が細胞によって発現されるような、タンパク質（例えば、キメラ結合タンパク質）をコードする外来性ポリヌクレオチドを含むように改変されている。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、そのエフェクター活性を保持しながら、培養にて低分化細胞及び／または未分化細胞の濃縮を促進する。いくつかの態様では、本明細書で提供されている培養方法は、細胞における目的のタンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎ）の発現を増加させるのにも役立ち得る。本明細書に開示されている方法を使用して培養される細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法、ネオ抗原に向けたＴ細胞療法を含むＴＣＲ Ｔ細胞療法、及びＴＩＬ療法を含むが、これらに限定されない様々な細胞療法に使用することができる。

【背景技術】

【0004】

がん免疫療法は、Ｔ細胞（感染細胞及び疾患細胞の免疫系の主な殺傷細胞）を利用して、腫瘍細胞を攻撃及び殺傷させることに依拠する。しかしながら、腫瘍細胞を標的とし、殺傷する免疫細胞の能力は、腫瘍微小環境内に存在する免疫応答の様々な阻害剤の存在によって抑えられる。したがって、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ある特定のがんの治療において様々な成功を収めてきた（例えば、ＫＹＭＲＩＡＨ（商標）（チサゲンレクロイセル、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）及びＹＥＳＣＡＲＴＡ（商標）（アキシカブタゲンシロロイセル、Ｋｉｔｅ／Ｇｉｌｅａｄ）がＦＤＡに認可されている）が、一方で、課題も残されている。例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞免疫療法の成功は、レシピエントの体内でのＣＡＲ Ｔ増殖の程度によって制限されることが多く、通常、大量の細胞注入が必要とされる。更に、移入されたＣＡＲ Ｔ細胞の疲弊及び存続性の喪失が観察され、臨床効果の喪失及び再発の可能性につながっている。

【0005】

Ｔ細胞疲弊を克服する１つの手段は、低分化状態を有するＴ細胞を選択的に投与することである。例えば、Ｔメモリー幹細胞（Ｔ_ＳＣＭ）は、更に分化したＴセントラルメモリー（Ｔ_ＣＭ）細胞またはＴエフェクターメモリー（Ｔ_ＥＭ）細胞よりも、投与後の患者にて更に長期間存続し、Ｔ_ＳＣＭは更に分化した細胞よりも腫瘍サイズに対して更に顕著で長期的な効果を発揮する。しかしながら、多くの養子細胞療法（ＡＣＴ）の細胞調製物は、分化の様々な段階で免疫細胞の不明確な混合物を含み、これは固形腫瘍を根絶するには効果がない。治癒力を増加させるには、自己複製能を強化した幹細胞／エフェクター特性を持つＴ細胞製剤が必要である。このように、当該技術分野では、単離された細胞の混合集団から低分化及び／またはナイーブＴ細胞を効率的に濃縮する方法が依然として必要である。

【発明の概要】

【0006】

本明細書で提供されているのは、エクスビボ培養またはインビトロ培養の間に免疫細胞（例えば、ヒト免疫細胞）の幹細胞性を増加させる方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において免疫細胞（例えば、ヒト免疫細胞）を培養することを含み、免疫細胞が、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている、方法である。本明細書で提供されているのはまた、エクスビボ培養またはインビトロ培養の間に免疫細胞（例えば、ヒト免疫細胞）の収率を増加させる方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において免疫細胞（例えば、ヒト免疫細胞）を培養することを含み、免疫細胞が、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている、方法である。本明細書で提供されているのはまた、免疫療法のための免疫細胞（例えば、ヒト免疫細胞）の集団を調製する方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において免疫細胞（例えば、ヒト免疫細胞）を培養することを含み、免疫細胞が、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている、方法である。本開示はまた、免疫療法のためのエクスビボ培養またはインビトロ培養の間に免疫細胞（例えば、ヒト免疫細胞）の収率を増加させながら、免疫細胞（例えば、ヒト免疫細胞）の幹細胞性を増加させる方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において免疫細胞（例えば、ヒト免疫細胞）を培養することを含み、免疫細胞が、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている、方法を提供する。本明細書で提供されているのは、エクスビボまたはインビトロで幹様免疫細胞の集団を増殖させる方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において免疫細胞を培養することを含み、免疫細胞が、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている、方法である。

【0007】

本明細書で提供されているのは、抗原刺激に応答した免疫細胞によるサイトカインの産生を増加させる方法であって、本方法が、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において免疫細胞を培養することを含み、免疫細胞が、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている、方法である。

【0008】

いくつかの態様では、サイトカインはＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、培養後、参照免疫細胞と比べて、抗原刺激に応答したサイトカインの産生は、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１７倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約１９倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約７５倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約７５０倍、または少なくとも約１，０００倍以上増加する。

【0009】

本明細書で提供されているのは、持続的抗原刺激に応答した免疫細胞のエフェクター機能を増加させる方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において免疫細胞を培養することを含み、免疫細胞が、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べて、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている、方法である。

【0010】

いくつかの態様では、免疫細胞は、参照免疫細胞と比べて、抗原刺激アッセイの少なくとも１回、少なくとも２回、または少なくとも３回の追加の回の間、エフェクター機能を保持する。いくつかの態様では、エフェクター機能は、（ｉ）標的細胞（例えば、腫瘍細胞）を殺傷するか、（ｉｉ）更なる抗原刺激時にサイトカインを産生するか、または（ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）の双方の能力を含む。いくつかの態様では、サイトカインはＩＦＮ－γを含む。

【0011】

いくつかの態様では、培養後、持続的抗原刺激に応答した免疫細胞のエフェクター機能は参照免疫細胞と比べて少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１７倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約１９倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約７５倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約７５０倍、または少なくとも約１，０００倍以上増加する。

【0012】

上記の方法のうちのいずれかにおいて、いくつかの態様では、参照免疫細胞は、（ｉ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されており、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含まない培地で培養されているか、（ｉｉ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されておらず、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地で培養されているか、（ｉｉｉ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されておらず、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含まない培地で培養されているか、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組み合わせである、対応する免疫細胞を含む。

【0013】

上記の方法のうちのいずれにおいて、いくつかの態様では、免疫細胞は、改変後、免疫細胞が対応する免疫細胞と比べて、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するような、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドで改変されている。

【0014】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドは免疫細胞にとって内在性であり、免疫細胞は内在性ｃ－Ｊｕｎポリペプチドの発現を増加させることができる転写活性化因子で改変されている。いくつかの態様では、転写活性化因子は、エンドヌクレアーゼ活性を欠くように改変されたＣａｓタンパク質に結合されている。

【0015】

本明細書で提供されているのはまた、免疫細胞におけるｃ－Ｊｕｎポリペプチドの発現を増加させる方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドで免疫細胞を改変することを含み、改変後、免疫細胞におけるｃ－Ｊｕｎポリペプチドの発現が、参照細胞と比べて増加する、方法である。本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、参照細胞は、（ｉ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されており、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含まない培地で培養されているか、（ｉｉ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されておらず、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地で培養されているか、（ｉｉｉ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されておらず、かつ５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含まない培地で培養されているか、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組み合わせである、対応する免疫細胞を含む。

【0016】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドの発現は、参照細胞と比べて、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１７倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約１９倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約７５倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約７５０倍、または少なくとも約１，０００倍以上増加する。

【0017】

本明細書で提供されているのは、免疫療法のためにエクスビボまたはインビトロで免疫細胞を調製する方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドで免疫細胞を改変することを含む、方法である。

【0018】

本明細書で提供されているのは、免疫療法のためにエクスビボまたはインビトロで免疫細胞を調製する方法であって、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において、内在性ｃ－Ｊｕｎポリペプチドの発現を増加させることができる転写活性化因子で免疫細胞を改変することを含む、方法である。いくつかの態様では、転写活性化因子は、エンドヌクレアーゼ活性を欠くように改変されたＣａｓタンパク質に結合されている。

【0019】

上記の方法のうちのいずれかにおいて、いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドは、改変されていない対応する免疫細胞と比べて、免疫細胞において過剰発現される。

【0020】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0021】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、ａ）配列番号１に示される核酸配列に対して少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、ｂ）配列番号２に示される核酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、ｃ）配列番号４に示される核酸配列に対して少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、ｄ）配列番号５に示される核酸配列に対して少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、ｅ）配列番号６に示される核酸配列に対して少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、ｆ）配列番号７に示される核酸配列に対して少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、ｇ）配列番号８に示される核酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、ｈ）配列番号９に示される核酸配列に対して少なくとも５５％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列、またはｉ）配列番号１０に示される核酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、もしくは約１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。

【0022】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号１に示される核酸配列に対して少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、配列番号１に示される核酸配列を含む。

【0023】

いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号２に示される核酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、配列番号２に示される核酸配列を含む。

【0024】

いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号４に示される核酸配列に対して少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、配列番号４に示される核酸配列を含む。

【0025】

いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号５に示される核酸配列に対して少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、配列番号５に示される核酸配列を含む。

【0026】

いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号６に示される核酸配列に対して少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、配列番号６に示される核酸配列を含む。

【0027】

いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号７に示される核酸配列に対して少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、配列番号７に示される核酸配列を含む。

【0028】

いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号８に示される核酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、配列番号８に示される核酸配列を含む。

【0029】

いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号９に示される核酸配列に対して少なくとも５５％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、配列番号９に示される核酸配列を含む。

【0030】

いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号１０に示される核酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ヌクレオチド配列は、配列番号１０に示される核酸配列を含む。

【0031】

いくつかの態様では、上記に提供されている方法の免疫細胞は、リガンド結合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を更に含む。いくつかの態様では、リガンド結合タンパク質は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）、Ｔ細胞受容体模倣体（ＴＣＲ模倣体）、またはそれらの組み合わせから選択される。いくつかの態様では、ＣＡＲは、標準的ＣＡＲ、スプリットＣＡＲ、オフスイッチＣＡＲ、オンスイッチＣＡＲ、第一世代ＣＡＲ、第二世代ＣＡＲ、第三世代ＣＡＲ、または第四世代ＣＡＲとして設計される。いくつかの態様では、リガンド結合タンパク質は、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン、またはそれらの組み合わせを含む。

【0032】

いくつかの態様では、リガンド結合タンパク質の抗原結合ドメインは、ＡＦＰ（アルファ－フェトプロテイン）、αｖβ６または別のインテグリン、ＢＣＭＡ、Ｂｒａｆ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ６、ＣＡ９（炭酸脱水酵素９）、ＣＣＬ－１（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド１）、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ４５、ＣＤ４７、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＤ３５２、ＣＥＡ（がん胎児性抗原）、クローディン１８．２、クローディン６、ｃ－ＭＥＴ、ＤＬＬ３（デルタ様タンパク質３）、ＤＬＬ４、ＥＮＰＰ３（エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー３）、ＥｐＣＡＭ、ＥＰＧ－２（上皮糖タンパク質２）、ＥＰＧ－４０、エフリンＢ２、ＥＰＨａ２（エフリン受容体Ａ２）、ＥＲＢＢ二量体、エストロゲン受容体、ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ受容体）、ＦＡＰ－α（線維芽細胞活性化タンパク質α）、胎児ＡｃｈＲ（胎児アセチルコリン受容体）、ＦＢＰ（葉酸結合タンパク質）、ＦＣＲＬ５、ＦＲ－α（葉酸受容体アルファ）、ＧＣＣ（グアニルシクラーゼＣ）、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＰＣ２（グリピカン－２）、ＧＰＣ３、ｇｐ１００（糖タンパク質１００）、ＧＰＮＭＢ（糖タンパク質ＮＭＢ）、ＧＰＲＣ５Ｄ（Ｇタンパク質共役受容体５Ｄ）、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、Ｂ型肝炎表面抗原、ＨＬＡ－Ａ１（ヒト白血球抗原Ａ１）、ＨＬＡ－Ａ２（ヒト白血球抗原Ａ２）、ＨＭＷ－ＭＡＡ（ヒト高分子量黒色腫関連抗原）、ＩＧＦ１Ｒ（インスリン様成長因子１受容体）、Ｉｇカッパ、Ｉｇラムダ、ＩＬ－２２Ｒａ（ＩＬ－２２受容体アルファ）、ＩＬ－１３Ｒａ２（ＩＬ－１３受容体アルファ２）、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）、ＬＩ細胞接着分子（ＬＩ－ＣＡＭ）、Ｌｉｖ－１、ＬＲＲＣ８Ａ（８ファミリーメンバーＡを含有するロイシンリッチリピート）、ルイスＹ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＲＴ－１（メランＡ）、マウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）、ＭＣＳＰ（黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、メソテリン、ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ１６、ＭＨＣ／ペプチド複合体（例えば、ＡＦＰ、ＫＲＡＳ、ＮＹ－ＥＳＯ、ＭＡＧＥ－Ａ、及びＷＴ１に由来するペプチドと複合体化したＨＬＡ－Ａ）、ＮＣＡＭ（神経細胞接着分子）、ネクチン－４、ＮＫＧ２Ｄ（ナチュラルキラー群２メンバーＤ）リガンド、ＮＹ－ＥＳＯ、腫瘍胎児抗原、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＲＡＭＥ（黒色腫優先発現抗原）、プロゲステロン受容体、ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質α）、ＳＬＩＴ、ＳＬＩＴＲＫ６（ＮＴＲＫ様タンパク質６）、ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原１）、サバイビン、ＴＡＧ７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）、ＴＰＢＧ（栄養膜糖タンパク質）、Ｔｒｏｐ－２、ＶＥＧＦＲ１（血管内皮増殖因子受容体１）、ＶＥＧＦＲ２、ならびにＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶ、及び他の病原体に由来する抗原、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される抗原に特異的に結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、ＲＯＲ１に特異的に結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、ＧＰＣ２に特異的に結合する。

【0033】

いくつかの態様では、リガンド結合タンパク質の共刺激ドメインは、インターロイキン－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）、インターロイキン－１２受容体（ＩＬ－１２Ｒ）、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－１５、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、またはそれらの任意の組み合わせの共刺激ドメインを含む。いくつかの態様では、共刺激ドメインは、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７共刺激ドメインを含む。

【0034】

いくつかの態様では、リガンド結合タンパク質の膜貫通ドメインは、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ１９、ＣＤ８、またはそれらの任意の組み合わせの膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。

【0035】

いくつかの態様では、リガンド結合ドメインの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、共通ＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲｉｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとしても知られる）、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ３２、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、またはそれらの任意の組み合わせに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

【0036】

いくつかの態様では、リガンド結合ドメインは、ＴＣＲであり、ＴＣＲは、腫瘍抗原／ＭＨＣ複合体に特異的に結合する。いくつかの態様では、腫瘍抗原は、ＡＦＰ、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１９、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＴｎＡｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－１Ｒα、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、Ｋｒａｓ、Ｂｒａｆ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａｌ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビング、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体（例えば、ＨＲＡＳ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ）、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、ネオアンチゲン、またはそれらの任意の組み合わせに由来する。

【0037】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドは、リンカーによってリガンド結合タンパク質と連結されている。いくつかの態様では、リンカーは切断可能なリンカーを含む。いくつかの態様では、リンカーは、Ｐ２Ａリンカー、Ｔ２Ａリンカー、Ｆ２Ａリンカー、Ｅ２Ａリンカー、フーリン切断部位、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む。

【0038】

いくつかの態様では、上記に提供されている方法のうちのいずれかの免疫細胞は、免疫細胞において発現される切断型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）をコードするヌクレオチド配列を更に含む。いくつかの態様では、ＥＧＦＲｔは、配列番号２４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＥＧＦＲｔは、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含む。

【0039】

いくつかの態様では、ＥＧＦＲｔは、リンカーによってｃ－Ｊｕｎポリペプチド及び／またはリガンド結合タンパク質に連結されている。いくつかの態様では、リンカーは切断可能なリンカーを含む。いくつかの態様では、リンカーは、Ｐ２Ａリンカー、Ｔ２Ａリンカー、Ｆ２Ａリンカー、Ｅ２Ａリンカー、フーリン切断部位、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む。

【0040】

いくつかの態様では、上記に提供されている方法の外来性ポリヌクレオチドは、調節要素を含み、ベクターは、外来性ポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、ベクターは、ポリシストロン性発現ベクターである。いくつかの態様では、ベクターは、ウイルスベクター、哺乳動物ベクター、または細菌ベクターを含む。いくつかの態様では、ベクターは、アデノウイルスベクター、レンチウイルス、センダイウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、ハイブリッドベクター、またはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む。いくつかの態様では、ベクターは、レンチウイルスである。

【0041】

いくつかの態様では、調節要素は、プロモーターを含む。いくつかの態様では、プロモーターは、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）プロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、ユビキチンプロモーター、またはそれらの組み合わせを含む。

【0042】

上記に提供されている方法のうちのいずれかにおいて、いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約１０ｍＭよりも高い、約１５ｍＭよりも高い、約２０ｍＭよりも高い、約２５ｍＭよりも高い、約３０ｍＭよりも高い、約３５ｍＭよりも高い、約４０ｍＭよりも高い、約４５ｍＭよりも高い、約５０ｍＭよりも高い、約５５ｍＭよりも高い、約６０ｍＭよりも高い、約６５ｍＭよりも高い、約７０ｍＭよりも高い、約７５ｍＭよりも高い、約８０ｍＭよりも高い、約８５ｍＭよりも高い、または約９０ｍＭよりも高い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、及び約８０ｍＭから成る群から選択される。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約３０ｍＭ～約８０ｍＭの間、約４０ｍＭ～約８０ｍＭの間、約５０ｍＭ～８０ｍＭの間、約６０ｍＭ～約８０ｍＭの間、約７０ｍＭ～約８０ｍＭの間、約４０ｍＭ～約７０ｍＭの間、約５０ｍＭ～約７０ｍＭの間、約６０ｍＭ～約７０ｍＭの間、約４０ｍＭ～約６０ｍＭの間、約５０ｍＭ～約６０ｍＭの間、または約４０ｍＭ～約５０ｍＭの間である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、または約７０ｍＭである。

【0043】

いくつかの態様では、培地は更に、ナトリウムイオンを含む。いくつかの態様では、培地は更にＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、培地は、約１４０ｍＭ未満、約１３０ｍＭ未満、約１２０ｍＭ未満、約１１０ｍＭ未満、約１００ｍＭ未満、約９０ｍＭ未満、約８０ｍＭ未満、約７０ｍＭ未満、約６０ｍＭ未満、約５０ｍＭ未満、または約４０ｍＭ未満のＮａＣｌを含む。

【0044】

いくつかの態様では、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、培地は低張性であり、カリウムイオン濃度とナトリウムイオン濃度の合計の２倍が２８０ｍＭ未満である。いくつかの態様では、培地は低張性であり、カリウムイオン濃度とナトリウムイオン濃度の合計の２倍が２４０ｍＭより高くかつ２８０ｍＭ未満である。いくつかの態様では、培地は等張性であり、カリウムイオン濃度とナトリウムイオン濃度の合計の２倍が２８０ｍＭ以上かつ３００ｍＭ未満である。

【0045】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約８０ｍＭ未満、約７５ｍＭ未満、約７０ｍＭ未満、約６５ｍＭ未満、または約６０ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約８５ｍＭ未満、約８０ｍＭ未満、約７５ｍＭ未満、または約７０ｍＭ未満、または約６５ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約９０ｍＭ未満、約８５ｍＭ未満、約８０ｍＭ未満、または約７５ｍＭ未満、または約７０ｍＭ未満である。

【0046】

いくつかの態様では、上記に提供されている方法の培地は、１つ以上のサイトカインを更に含む。いくつかの態様では、１つ以上のサイトカインは、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）、インターロイキン－２１（ＩＬ－２１）、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、１以上のサイトカインはＩＬ－２、ＩＬ－７及びＩＬ－１５を含む。

【0047】

いくつかの態様では、培地は約５０ＩＵ／ｍＬ～約５００ＩＵ／ｍＬの濃度でＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－２の濃度は、約５０ＩＵ／ｍＬ、約６０ＩＵ／ｍＬ、約７０ＩＵ／ｍＬ、約８０ＩＵ／ｍＬ、約９０ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２２５ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約２７５ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬ、または約５００ＩＵ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－２の濃度は約１００ＩＵ／ｍＬ～約３００ＩＵ／ｍＬの間である。いくつかの態様では、ＩＬ－２の濃度は約２００ＩＵ／ｍＬである。

【0048】

いくつかの態様では、培地は約５０ＩＵ／ｍＬ～約５００ＩＵ／ｍＬの濃度でＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－２１の濃度は、約５０ＩＵ／ｍＬ、約６０ＩＵ／ｍＬ、約７０ＩＵ／ｍＬ、約８０ＩＵ／ｍＬ、約９０ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２２５ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約２７５ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬ、または約５００ＩＵ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－２１の濃度は約１００ＩＵ／ｍＬ～約３００ＩＵ／ｍＬの間である。いくつかの態様では、ＩＬ－２１の濃度は約２００ＩＵ／ｍＬである。

【0049】

いくつかの態様では、培地は約５００ＩＵ／ｍＬ～約１，５００ＩＵ／ｍＬの濃度でＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－７の濃度は、約５００ＩＵ／ｍＬ、約５５０ＩＵ／ｍＬ、約６００ＩＵ／ｍＬ、約６５０ＩＵ／ｍＬ、約７００ＩＵ／ｍＬ、約７５０ＩＵ／ｍＬ、約８００ＩＵ／ｍＬ、約８５０ＩＵ／ｍＬ、約９００ＩＵ／ｍＬ、約９５０ＩＵ／ｍＬ、約１，０００ＩＵ／ｍＬ、約１，０５０ＩＵ／ｍＬ、約１，１００ＩＵ／ｍＬ、約１，１５０ＩＵ／ｍＬ、約１，２００ＩＵ／ｍＬ、約１，２５０ＩＵ／ｍＬ、約１，３００ＩＵ／ｍＬ、約１，３５０ＩＵ／ｍＬ、約１，４００ＩＵ／ｍＬ、約１，４５０ＩＵ／ｍＬ、または約１，５００ＩＵ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－７の濃度は、約１，０００ＩＵ／ｍＬ～約１，４００ＩＵ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－７の濃度は、約１，２００ＩＵ／ｍＬである。

【0050】

いくつかの態様では、培地は約５０ＩＵ／ｍＬ～約５００ＩＵ／ｍＬの濃度でＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、ＩＬ－１５の濃度は、約５０ＩＵ／ｍＬ、約６０ＩＵ／ｍＬ、約７０ＩＵ／ｍＬ、約８０ＩＵ／ｍＬ、約９０ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２２５ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約２７５ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬ、または約５００ＩＵ／ｍＬである。いくつかの態様では、ＩＬ－１５の濃度は約１００ＩＵ／ｍＬ～約３００ＩＵ／ｍＬの間である。いくつかの態様では、ＩＬ－１５の濃度は約２００ＩＵ／ｍＬである。

【0051】

いくつかの態様では、培地は更に細胞増殖剤を含む。いくつかの態様では、細胞増殖剤は、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤、ＡＣＬＹ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、クエン酸ヒドロキシル、ＬＹ２９４００２、ピクチリシブ（ｐｉｃｔｉｌｉｓｉｂ）、ＣＡＬ１０１、ＩＣ８７１１４、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、ＡＫＴ阻害剤は、ＭＫ２２０６、Ａ４４３６５４、ＡＫＴｉ－ＶＩＩＩ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。

【0052】

いくつかの態様では、出発免疫細胞と比べて、高い濃度のカリウムイオンがない培地で培養された免疫細胞、及び／またはｃ－Ｊｕｎポリペプチドがない免疫細胞と比べて、最終細胞産物において、上記に提供されている方法の培地は、ａ）低分化及び／または未分化細胞の数及び／または割合を増加させることができるか、ｂ）形質導入効率を増加させることができるか、ｃ）幹様免疫細胞を増加させることができるか、ｄ）インビボ生存能を増加させることができるか、ｅ）細胞能力を増加させることができるか、ｆ）細胞疲弊を防ぐことができるか、またはｇ）それらの任意の組み合わせを行うことができる。

【0053】

いくつかの態様では、培地は、カルシウムイオン、グルコース、またはそれらの任意の組み合わせを更に含む。

【0054】

いくつかの態様では、培地は更にグルコースを含み、その際、グルコースの濃度は約１０ｍＭを超える。いくつかの態様では、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１９ｍＭ、約１５ｍＭ～約１８ｍＭ、約１５ｍＭ～約１７ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、約１６ｍＭ～約２０ｍＭ、約１６ｍＭ～約１９ｍＭ、約１６ｍＭ～約１８ｍＭ、約１６ｍＭ～約１７ｍＭ、約１７ｍＭ～約２０ｍＭ、約１７ｍＭ～約１９ｍＭ、または約１７ｍＭ～約１８ｍＭである。いくつかの態様では、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭである。いくつかの態様では、グルコースの濃度は、約１５．４ｍＭ、約１５．９ｍＭ、約１６．３ｍＭ、約１６．８ｍＭ、約１７．２ｍＭ、または約１７．７ｍＭである。

【0055】

いくつかの態様では、培地は更にカルシウムイオンを含み、その際、カルシウムイオンの濃度は約０．４ｍＭを超える。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約０．４ｍＭ～約２．８ｍＭ、約０．４ｍＭ～約２．５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．１ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．３ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．４ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．８ｍＭ、約１．７ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．８ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２～約１．３ｍＭ、約１．２～約１．４ｍＭ、約１．２～約１．５ｍＭ、約１．２～約１．６ｍＭ、約１．２～約１．７ｍＭ、約１．２～約１．８ｍＭ、約１．３～約１．４ｍＭ、約１．３～約１．５ｍＭ、約１．３～約１．６ｍＭ、約１．３～約１．７ｍＭ、約１．３～約１．８ｍＭ、約１．４～約１．５ｍＭ、約１．４～約１．６ｍＭ、約１．４～約１．７ｍＭ、約１．４～約１．８ｍＭ、約１．５～約１．６ｍＭ、約１．５～約１．７ｍＭ、約１．５～約１．８ｍＭ、約１．６～約１．７ｍＭ、約１．６～約１．８ｍＭ、または約１．７～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、約２．０ｍＭ、約２．１ｍＭ、約２．２ｍＭ、約２．３ｍＭ、約２．４ｍＭ、約２．５ｍＭ、約２．６ｍＭ、約２．７ｍＭ、約２．８ｍＭ、約２．９ｍＭ、または約３．０ｍＭである。

【0056】

いくつかの態様では、免疫細胞は、培養後にＣＤ３＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＣＲ７＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、またはＴＣＦ７＋、またはそれらの任意の組み合わせである。

【0057】

本明細書で提供されているのは、本明細書に記載されている方法のうちのいずれかによって調製される免疫細胞（例えば、ヒト免疫細胞）の集団である。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはその双方を含む。

【0058】

本明細書で提供されているのは、本明細書に記載されているヒト免疫細胞の集団を含む医薬組成物である。

【0059】

本明細書で提供されているのは、（ａ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べてｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されているＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、（ｉ）改変されたＣＤ４＋Ｔ細胞の少なくとも約２０パーセントが、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性であるか、（ｉｉ）改変されたＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも約２０パーセントが、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性であるか、または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）との双方である、組成物である。本明細書で提供されているのは、（ａ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べてｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されているＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、改変されたＣＤ４＋Ｔ細胞の少なくとも約２０パーセントが、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性である、組成物である。本明細書で提供されているのは、（ａ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べてｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されているＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、改変されたＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも約２０パーセントはＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性である、組成物である。

【0060】

本明細書で提供されているのは、（ａ）操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べてｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されているＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、（ｉ）改変されたＣＤ４＋Ｔ細胞の少なくとも約１５パーセントが、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性であるか、（ｉｉ）改変されたＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも約２０パーセントが、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性であるか、または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）との双方である、組成物である。本明細書で提供されているのは、（ａ）操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べてｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されているＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、改変されたＣＤ４＋Ｔ細胞の少なくとも約１５％が、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性である、組成物である。本明細書で提供されているのは、（ａ）操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べてｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されているＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を含む組成物であって、改変されたＣＤ８＋Ｔ細胞の少なくとも約２０パーセントはＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡについて表面陽性である、組成物である。

【0061】

本明細書で提供されているのはまた、（ａ）操作されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べてｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている免疫細胞の集団を含む組成物であり、細胞の少なくとも約４％は前駆疲弊Ｔ細胞である。本開示のいくつかの態様は、（ａ）操作されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べてｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている免疫細胞の集団を含む組成物であり、細胞の約４％～約６％の間は前駆疲弊Ｔ細胞である。本明細書で提供されているのはまた、（ａ）操作されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する免疫細胞と比べてｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されている免疫細胞の集団を含む組成物であり、細胞の少なくとも約４％は前駆疲弊Ｔ細胞であり、細胞の少なくとも約４％は幹様Ｔ細胞である。

【0062】

いくつかの態様では、本明細書に記載されているヒト免疫細胞集団、医薬組成物、または組成物は、治療を必要とする対象を治療するためのものである。本明細書で提供されているのはまた、疾患または状態の治療または予防を必要とする対象において疾患または状態を治療または予防するための医薬の製造における本明細書に記載されているヒト免疫細胞集団、医薬組成物、または組成物の使用である。いくつかの態様では、疾患または状態は、がんを含む。

【0063】

本明細書で提供されているのは、療法に有用な細胞の疲弊を予防または低減するための本明細書に記載されているヒト免疫細胞の集団、医薬組成物、または組成物の使用である。

【0064】

本明細書で提供されているのは、疾患または状態の治療または予防を必要とする対象において疾患または状態を治療または予防する方法であって、本明細書に記載されているヒト細胞集団、医薬組成物、または組成物のうちのいずれかを投与することを含む、方法である。いくつかの態様では、疾患または状態は、がんを含む。

【図面の簡単な説明】

【0065】

【図1】異なる試験群からの形質導入Ｔ細胞におけるｃ－Ｊｕｎタンパク質発現レベル（メジアン蛍光強度（ＭＦＩ）として示されている）に対する代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）の効果を示す。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において培養された非形質導入Ｔ細胞、（２）対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞、（３）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞、（４）ＭＲＭにおいて培養された非形質導入Ｔ細胞、（５）対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞、及び（６）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞。形質導入されたＴ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の双方を含む）は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（Ａ）、ドナー＃２（Ｂ）、及びドナー＃３（Ｃ）に由来した。

【図2A】異なる試験群からの幹様形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２Ａ、２Ｂ、及び２Ｃ－３名の異なるドナー）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図２Ｄ、２Ｅ、及び２Ｆ－３名の異なるドナー）の割合の比較を提供する。異なる試験群は、図１Ａ～１Ｃに記載されているものと同じである。実施例２に記載されているように、幹様細胞をＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋として同定した。

【図2B】異なる試験群からの幹様形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２Ａ、２Ｂ、及び２Ｃ－３名の異なるドナー）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図２Ｄ、２Ｅ、及び２Ｆ－３名の異なるドナー）の割合の比較を提供する。異なる試験群は、図１Ａ～１Ｃに記載されているものと同じである。実施例２に記載されているように、幹様細胞をＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋として同定した。

【図2C】異なる試験群からの幹様形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２Ａ、２Ｂ、及び２Ｃ－３名の異なるドナー）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図２Ｄ、２Ｅ、及び２Ｆ－３名の異なるドナー）の割合の比較を提供する。異なる試験群は、図１Ａ～１Ｃに記載されているものと同じである。実施例２に記載されているように、幹様細胞をＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋として同定した。

【図2D】異なる試験群からの幹様形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２Ａ、２Ｂ、及び２Ｃ－３名の異なるドナー）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図２Ｄ、２Ｅ、及び２Ｆ－３名の異なるドナー）の割合の比較を提供する。異なる試験群は、図１Ａ～１Ｃに記載されているものと同じである。実施例２に記載されているように、幹様細胞をＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋として同定した。

【図2E】異なる試験群からの幹様形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２Ａ、２Ｂ、及び２Ｃ－３名の異なるドナー）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図２Ｄ、２Ｅ、及び２Ｆ－３名の異なるドナー）の割合の比較を提供する。異なる試験群は、図１Ａ～１Ｃに記載されているものと同じである。実施例２に記載されているように、幹様細胞をＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋として同定した。

【図2F】異なる試験群からの幹様形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２Ａ、２Ｂ、及び２Ｃ－３名の異なるドナー）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図２Ｄ、２Ｅ、及び２Ｆ－３名の異なるドナー）の割合の比較を提供する。異なる試験群は、図１Ａ～１Ｃに記載されているものと同じである。実施例２に記載されているように、幹様細胞をＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋として同定した。

【図2G】ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２Ｇ、２Ｈ、２Ｉ）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図２Ｊ、２Ｋ、２Ｌ）について同じ３名のドナーからのナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞の割合を示す。実施例２に記載されているように、ナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞をＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋として同定した。

【図2H】ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２Ｇ、２Ｈ、２Ｉ）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図２Ｊ、２Ｋ、２Ｌ）について同じ３名のドナーからのナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞の割合を示す。実施例２に記載されているように、ナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞をＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋として同定した。

【図2I】ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２Ｇ、２Ｈ、２Ｉ）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図２Ｊ、２Ｋ、２Ｌ）について同じ３名のドナーからのナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞の割合を示す。実施例２に記載されているように、ナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞をＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋として同定した。

【図2J】ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２Ｇ、２Ｈ、２Ｉ）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図２Ｊ、２Ｋ、２Ｌ）について同じ３名のドナーからのナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞の割合を示す。実施例２に記載されているように、ナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞をＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋として同定した。

【図2K】ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２Ｇ、２Ｈ、２Ｉ）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図２Ｊ、２Ｋ、２Ｌ）について同じ３名のドナーからのナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞の割合を示す。実施例２に記載されているように、ナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞をＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋として同定した。

【図2L】ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２Ｇ、２Ｈ、２Ｉ）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図２Ｊ、２Ｋ、２Ｌ）について同じ３名のドナーからのナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞の割合を示す。実施例２に記載されているように、ナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞をＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋として同定した。

【図3】一次抗原刺激後に、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）または対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において形質導入及び培養されたＴ細胞によるＩＬ－２産生の比較を提供する。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（Ａ）、ドナー＃２（Ｂ）、及びドナー＃３（Ｃ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角）、（３）対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸）、及び（４）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角）。ｘ軸は、エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を提供する。

【図4】複数回の抗原刺激後に、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）または対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において形質導入及び培養されたＴ細胞によるＩＦＮ－γ産生の比較を提供する。実施例３で更に提供されるように、連続刺激アッセイは、次の回を再播種するために必要な形質導入Ｔ細胞の数が達成されなかったときに終了した。（ｉ）ドナー＃１についての４回の抗原刺激（Ａ）、（ｉｉ）ドナー＃２についての３回の抗原刺激（Ｂ）、及び（ｉｉｉ）ドナー＃３についての２回の抗原刺激（Ｃ）。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角）、（３）対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸）、及び（３）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角）。ｘ軸は、エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を提供する。

【図5-1】複数回の抗原刺激後の形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞の標的腫瘍細胞を殺傷する能力を示している。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（Ｂ及びＥ）、ドナー＃２（Ｃ及びＦ）、及びドナー＃３（Ａ及びＤ）に由来した。Ａ、Ｂ、及びＣは、対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ、黒色の棒）またはｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ、白色の棒）のいずれかで形質導入され、対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において培養されたＣＤ８＋Ｔ細胞についての結果を提供する。Ｄ、、及びＦは、対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（黒色の棒）またはｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（白色の棒）のいずれかで形質導入され、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）において培養されたＣＤ８＋Ｔ細胞についての結果を提供する。ｘ軸は、エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を提供する。

【図5-2】複数回の抗原刺激後の形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞の標的腫瘍細胞を殺傷する能力を示している。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（Ｂ及びＥ）、ドナー＃２（Ｃ及びＦ）、及びドナー＃３（Ａ及びＤ）に由来した。Ａ、Ｂ、及びＣは、対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ、黒色の棒）またはｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ、白色の棒）のいずれかで形質導入され、対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において培養されたＣＤ８＋Ｔ細胞についての結果を提供する。Ｄ、、及びＦは、対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（黒色の棒）またはｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（白色の棒）のいずれかで形質導入され、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）において培養されたＣＤ８＋Ｔ細胞についての結果を提供する。ｘ軸は、エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を提供する。

【図6】異なる試験群からの形質導入Ｔ細胞におけるｃ－Ｊｕｎタンパク質発現レベル（メジアン蛍光強度（ＭＦＩ）として示されている）に対する代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）の効果を示す。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＣＤ１９ｔ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、対照培地（ＴＣＭ）において培養されたＴ細胞（「対照ＴＣＲ ＴＣＭ」）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（「ｃ－Ｊｕｎ－ＴＣＲ ＴＣＭ」）、（３）対照ＣＤ１９ｔ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（「対照ＴＣＲ ＭＲＭ」）、及び（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（「ｃ－Ｊｕｎ－ＴＣＲ ＭＲＭ」）。形質導入されたＴ細胞（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の双方を含む）は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（Ａ）、ドナー＃２（Ｂ）、及びドナー＃３（Ｃ）に由来した。

【図7A】異なる試験群からのナイーブ及び幹細胞メモリー形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞（図７Ａ、７Ｂ、及び７Ｃ－３名の異なるドナー）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図７Ｄ、７Ｅ、及び７Ｆ－３名の異なるドナー）の割合の比較を提供する。異なる試験群は、図６Ａ～６Ｃに記載されているものと同じである。実施例８に記載されているように、ナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞をＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋として同定した。

【図7B】異なる試験群からのナイーブ及び幹細胞メモリー形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞（図７Ａ、７Ｂ、及び７Ｃ－３名の異なるドナー）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図７Ｄ、７Ｅ、及び７Ｆ－３名の異なるドナー）の割合の比較を提供する。異なる試験群は、図６Ａ～６Ｃに記載されているものと同じである。実施例８に記載されているように、ナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞をＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋として同定した。

【図7C】異なる試験群からのナイーブ及び幹細胞メモリー形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞（図７Ａ、７Ｂ、及び７Ｃ－３名の異なるドナー）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図７Ｄ、７Ｅ、及び７Ｆ－３名の異なるドナー）の割合の比較を提供する。異なる試験群は、図６Ａ～６Ｃに記載されているものと同じである。実施例８に記載されているように、ナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞をＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋として同定した。

【図7D】異なる試験群からのナイーブ及び幹細胞メモリー形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞（図７Ａ、７Ｂ、及び７Ｃ－３名の異なるドナー）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図７Ｄ、７Ｅ、及び７Ｆ－３名の異なるドナー）の割合の比較を提供する。異なる試験群は、図６Ａ～６Ｃに記載されているものと同じである。実施例８に記載されているように、ナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞をＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋として同定した。

【図7E】異なる試験群からのナイーブ及び幹細胞メモリー形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞（図７Ａ、７Ｂ、及び７Ｃ－３名の異なるドナー）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図７Ｄ、７Ｅ、及び７Ｆ－３名の異なるドナー）の割合の比較を提供する。異なる試験群は、図６Ａ～６Ｃに記載されているものと同じである。実施例８に記載されているように、ナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞をＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋として同定した。

【図7F】異なる試験群からのナイーブ及び幹細胞メモリー形質導入ＣＤ４＋Ｔ細胞（図７Ａ、７Ｂ、及び７Ｃ－３名の異なるドナー）及びＣＤ８＋Ｔ細胞（図７Ｄ、７Ｅ、及び７Ｆ－３名の異なるドナー）の割合の比較を提供する。異なる試験群は、図６Ａ～６Ｃに記載されているものと同じである。実施例８に記載されているように、ナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞をＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋として同定した。

【図8A】Ａ３７５（図８Ａ、図８Ｂ、及び図８Ｃ）及びＨ１７０３（図８Ｄ、図８Ｅ、及び図８Ｆ）標的腫瘍細胞による一次抗原刺激中に、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）または対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において形質導入及び培養されたＴ細胞によるＩＬ－２産生の比較を提供する。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（図８Ａ及び図８Ｄ）、ドナー＃２（図８Ｂ及び図８Ｅ）、及びドナー＃３（図８Ｃ及び図８Ｆ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角）、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸）、及び（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を各プロットの上部に示す。

【図8B】Ａ３７５（図８Ａ、図８Ｂ、及び図８Ｃ）及びＨ１７０３（図８Ｄ、図８Ｅ、及び図８Ｆ）標的腫瘍細胞による一次抗原刺激中に、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）または対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において形質導入及び培養されたＴ細胞によるＩＬ－２産生の比較を提供する。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（図８Ａ及び図８Ｄ）、ドナー＃２（図８Ｂ及び図８Ｅ）、及びドナー＃３（図８Ｃ及び図８Ｆ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角）、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸）、及び（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を各プロットの上部に示す。

【図8C】Ａ３７５（図８Ａ、図８Ｂ、及び図８Ｃ）及びＨ１７０３（図８Ｄ、図８Ｅ、及び図８Ｆ）標的腫瘍細胞による一次抗原刺激中に、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）または対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において形質導入及び培養されたＴ細胞によるＩＬ－２産生の比較を提供する。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（図８Ａ及び図８Ｄ）、ドナー＃２（図８Ｂ及び図８Ｅ）、及びドナー＃３（図８Ｃ及び図８Ｆ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角）、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸）、及び（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を各プロットの上部に示す。

【図8D】Ａ３７５（図８Ａ、図８Ｂ、及び図８Ｃ）及びＨ１７０３（図８Ｄ、図８Ｅ、及び図８Ｆ）標的腫瘍細胞による一次抗原刺激中に、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）または対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において形質導入及び培養されたＴ細胞によるＩＬ－２産生の比較を提供する。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（図８Ａ及び図８Ｄ）、ドナー＃２（図８Ｂ及び図８Ｅ）、及びドナー＃３（図８Ｃ及び図８Ｆ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角）、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸）、及び（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を各プロットの上部に示す。

【図8E】Ａ３７５（図８Ａ、図８Ｂ、及び図８Ｃ）及びＨ１７０３（図８Ｄ、図８Ｅ、及び図８Ｆ）標的腫瘍細胞による一次抗原刺激中に、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）または対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において形質導入及び培養されたＴ細胞によるＩＬ－２産生の比較を提供する。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（図８Ａ及び図８Ｄ）、ドナー＃２（図８Ｂ及び図８Ｅ）、及びドナー＃３（図８Ｃ及び図８Ｆ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角）、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸）、及び（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を各プロットの上部に示す。

【図8F】Ａ３７５（図８Ａ、図８Ｂ、及び図８Ｃ）及びＨ１７０３（図８Ｄ、図８Ｅ、及び図８Ｆ）標的腫瘍細胞による一次抗原刺激中に、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）または対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において形質導入及び培養されたＴ細胞によるＩＬ－２産生の比較を提供する。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（図８Ａ及び図８Ｄ）、ドナー＃２（図８Ｂ及び図８Ｅ）、及びドナー＃３（図８Ｃ及び図８Ｆ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角）、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸）、及び（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を各プロットの上部に示す。

【図9A】Ａ３７５（図９Ａ、図９Ｂ、及び図９Ｃ）及びＨ１７０３（図９Ｄ、図９Ｅ、及び図９Ｆ）標的腫瘍細胞による一次抗原刺激中に、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）または対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において形質導入及び培養されたＴ細胞によるＩＦＮ－γ産生の比較を提供する。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（図９Ａ及び図９Ｄ）、ドナー＃２（図９Ｂ及び図９Ｅ）、及びドナー＃３（図９Ｃ及び図９Ｆ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角）、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸）、及び（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を各プロットの上部に示す。

【図9B】Ａ３７５（図９Ａ、図９Ｂ、及び図９Ｃ）及びＨ１７０３（図９Ｄ、図９Ｅ、及び図９Ｆ）標的腫瘍細胞による一次抗原刺激中に、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）または対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において形質導入及び培養されたＴ細胞によるＩＦＮ－γ産生の比較を提供する。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（図９Ａ及び図９Ｄ）、ドナー＃２（図９Ｂ及び図９Ｅ）、及びドナー＃３（図９Ｃ及び図９Ｆ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角）、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸）、及び（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を各プロットの上部に示す。

【図9C】Ａ３７５（図９Ａ、図９Ｂ、及び図９Ｃ）及びＨ１７０３（図９Ｄ、図９Ｅ、及び図９Ｆ）標的腫瘍細胞による一次抗原刺激中に、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）または対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において形質導入及び培養されたＴ細胞によるＩＦＮ－γ産生の比較を提供する。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（図９Ａ及び図９Ｄ）、ドナー＃２（図９Ｂ及び図９Ｅ）、及びドナー＃３（図９Ｃ及び図９Ｆ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角）、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸）、及び（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を各プロットの上部に示す。

【図9D】Ａ３７５（図９Ａ、図９Ｂ、及び図９Ｃ）及びＨ１７０３（図９Ｄ、図９Ｅ、及び図９Ｆ）標的腫瘍細胞による一次抗原刺激中に、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）または対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において形質導入及び培養されたＴ細胞によるＩＦＮ－γ産生の比較を提供する。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（図９Ａ及び図９Ｄ）、ドナー＃２（図９Ｂ及び図９Ｅ）、及びドナー＃３（図９Ｃ及び図９Ｆ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角）、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸）、及び（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を各プロットの上部に示す。

【図9E】Ａ３７５（図９Ａ、図９Ｂ、及び図９Ｃ）及びＨ１７０３（図９Ｄ、図９Ｅ、及び図９Ｆ）標的腫瘍細胞による一次抗原刺激中に、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）または対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において形質導入及び培養されたＴ細胞によるＩＦＮ－γ産生の比較を提供する。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（図９Ａ及び図９Ｄ）、ドナー＃２（図９Ｂ及び図９Ｅ）、及びドナー＃３（図９Ｃ及び図９Ｆ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角）、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸）、及び（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を各プロットの上部に示す。

【図9F】Ａ３７５（図９Ａ、図９Ｂ、及び図９Ｃ）及びＨ１７０３（図９Ｄ、図９Ｅ、及び図９Ｆ）標的腫瘍細胞による一次抗原刺激中に、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）または対照培地（すなわち、ＴＣＭ）において形質導入及び培養されたＴ細胞によるＩＦＮ－γ産生の比較を提供する。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（図９Ａ及び図９Ｄ）、ドナー＃２（図９Ｂ及び図９Ｅ）、及びドナー＃３（図９Ｃ及び図９Ｆ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸）、（２）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角）、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸）、及び（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）を各プロットの上部に示す。

【図10-1】複数回の抗原刺激を介して形質導入Ｔ細胞の標的腫瘍細胞Ａ３７５（Ａ、Ｂ、及びＣ）またはＨ１７０３（Ｄ、Ｅ、及びＦ）を殺傷する能力を示している。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（Ａ及びＤ）、ドナー＃２（Ｂ及びＥ）、及びドナー＃３（Ｃ及びＦ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照培地（すなわち、ＴＣＭ）（黒三角、「モック－ＴＣＭ」）において培養された非形質導入Ｔ細胞、（２）ＭＲＭ（白三角、「モック－ＭＲＭ」）において培養された非形質導入Ｔ細胞、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸、「対照ＴＣＲ－ＴＣＭ」）、（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角、「ｃ－ＪＵＮ－ＴＣＲ－ＴＣＭ」）、（５）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸、「対照ＴＣＲ－ＭＲＭ」）、及び（６）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角、「ｃ－ＪＵＮ－ＴＣＲ－ＭＲＭ」）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）は、Ａ３７５では１：４、Ｈ１７０３では１：１である。

【図10-2】複数回の抗原刺激を介して形質導入Ｔ細胞の標的腫瘍細胞Ａ３７５（Ａ、Ｂ、及びＣ）またはＨ１７０３（Ｄ、Ｅ、及びＦ）を殺傷する能力を示している。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（Ａ及びＤ）、ドナー＃２（Ｂ及びＥ）、及びドナー＃３（Ｃ及びＦ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照培地（すなわち、ＴＣＭ）（黒三角、「モック－ＴＣＭ」）において培養された非形質導入Ｔ細胞、（２）ＭＲＭ（白三角、「モック－ＭＲＭ」）において培養された非形質導入Ｔ細胞、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸、「対照ＴＣＲ－ＴＣＭ」）、（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角、「ｃ－ＪＵＮ－ＴＣＲ－ＴＣＭ」）、（５）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸、「対照ＴＣＲ－ＭＲＭ」）、及び（６）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角、「ｃ－ＪＵＮ－ＴＣＲ－ＭＲＭ」）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）は、Ａ３７５では１：４、Ｈ１７０３では１：１である。

【図10-3】複数回の抗原刺激を介して形質導入Ｔ細胞の標的腫瘍細胞Ａ３７５（Ａ、Ｂ、及びＣ）またはＨ１７０３（Ｄ、Ｅ、及びＦ）を殺傷する能力を示している。形質導入されたＴ細胞は、３名の異なるドナー：ドナー＃１（Ａ及びＤ）、ドナー＃２（Ｂ及びＥ）、及びドナー＃３（Ｃ及びＦ）に由来した。異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照培地（すなわち、ＴＣＭ）（黒三角、「モック－ＴＣＭ」）において培養された非形質導入Ｔ細胞、（２）ＭＲＭ（白三角、「モック－ＭＲＭ」）において培養された非形質導入Ｔ細胞、（３）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒丸、「対照ＴＣＲ－ＴＣＭ」）、（４）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞（黒四角、「ｃ－ＪＵＮ－ＴＣＲ－ＴＣＭ」）、（５）対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白丸、「対照ＴＣＲ－ＭＲＭ」）、及び（６）ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（白四角、「ｃ－ＪＵＮ－ＴＣＲ－ＭＲＭ」）。エフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比（すなわち、形質導入Ｔ細胞対標的腫瘍細胞の比）は、Ａ３７５では１：４、Ｈ１７０３では１：１である。

【図11】連続抗原刺激後の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞のトランスクリプトームのプロファイルを示す。実施例６で更に説明されているように、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の一部をｃ－Ｊｕｎタンパク質を過剰発現するように改変し、及び／またはＭＲＭにて培養した。示されている異なる試験群は以下のとおりである：（１）対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、対照培地で培養されたＴ細胞（灰色の棒）、及び（２）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞（黒色の棒）。Ａは、連続抗原刺激アッセイの７日目及び１０日目に幹様遺伝子が濃縮されたＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。Ｂは、Ｔ細胞終末疲弊遺伝子が濃縮されたＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。

【図12A】ＲＯＲ１ ＣＡＲで形質導入され、ＴＣＭまたは様々な濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭのいずれかにおいて培養されたＴ細胞におけるｃ－Ｊｕｎ発現を示す棒グラフである。実施例１３で更に説明されているように、試験された様々なＭＲＭのカリウムイオン濃度は、４０～８０ｍＭ（すなわち、低濃度から高濃度）の範囲であった。異なる形質導入条件（または試験群）は以下のとおりである：（１）対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞、（２）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞、（３）対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入され、様々なカリウム濃度のＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞、（４）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入され、様々なカリウム濃度のＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞。図１２Ａ、１２Ｂ、及び１２Ｃの各々は、３名の独立したドナーから単離されたＴ細胞の生物学的複製の結果を示す。

【図12B】ＲＯＲ１ ＣＡＲで形質導入され、ＴＣＭまたは様々な濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭのいずれかにおいて培養されたＴ細胞におけるｃ－Ｊｕｎ発現を示す棒グラフである。実施例１３で更に説明されているように、試験された様々なＭＲＭのカリウムイオン濃度は、４０～８０ｍＭ（すなわち、低濃度から高濃度）の範囲であった。異なる形質導入条件（または試験群）は以下のとおりである：（１）対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞、（２）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞、（３）対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入され、様々なカリウム濃度のＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞、（４）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入され、様々なカリウム濃度のＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞。図１２Ａ、１２Ｂ、及び１２Ｃの各々は、３名の独立したドナーから単離されたＴ細胞の生物学的複製の結果を示す。

【図12C】ＲＯＲ１ ＣＡＲで形質導入され、ＴＣＭまたは様々な濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭのいずれかにおいて培養されたＴ細胞におけるｃ－Ｊｕｎ発現を示す棒グラフである。実施例１３で更に説明されているように、試験された様々なＭＲＭのカリウムイオン濃度は、４０～８０ｍＭ（すなわち、低濃度から高濃度）の範囲であった。異なる形質導入条件（または試験群）は以下のとおりである：（１）対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞、（２）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭにおいて培養されたＴ細胞、（３）対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入され、様々なカリウム濃度のＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞、（４）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入され、様々なカリウム濃度のＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞。図１２Ａ、１２Ｂ、及び１２Ｃの各々は、３名の独立したドナーから単離されたＴ細胞の生物学的複製の結果を示す。

【図13A】形質導入され、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭの濃度（すなわち、低濃度から高濃度）のカリウムイオンを含むＭＲＭにおいて培養された幹様ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合の比較を示す。異なる試験群は、図１２Ａ～１２Ｃに記載されたものと同じである。幹様細胞は細胞表面マーカーＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋によって同定した。図１３Ａ、１３Ｂ、及び１３Ｃの各々は、３名の独立したドナーから単離されたＴ細胞の生物学的複製の結果を示す。

【図13B】形質導入され、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭの濃度（すなわち、低濃度から高濃度）のカリウムイオンを含むＭＲＭにおいて培養された幹様ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合の比較を示す。異なる試験群は、図１２Ａ～１２Ｃに記載されたものと同じである。幹様細胞は細胞表面マーカーＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋によって同定した。図１３Ａ、１３Ｂ、及び１３Ｃの各々は、３名の独立したドナーから単離されたＴ細胞の生物学的複製の結果を示す。

【図13C】形質導入され、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭの濃度（すなわち、低濃度から高濃度）のカリウムイオンを含むＭＲＭにおいて培養された幹様ＣＤ４＋Ｔ細胞の割合の比較を示す。異なる試験群は、図１２Ａ～１２Ｃに記載されたものと同じである。幹様細胞は細胞表面マーカーＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋によって同定した。図１３Ａ、１３Ｂ、及び１３Ｃの各々は、３名の独立したドナーから単離されたＴ細胞の生物学的複製の結果を示す。

【図14A】形質導入され、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭの濃度（すなわち、低濃度から高濃度）のカリウムイオンを含むＭＲＭにおいて培養された幹様ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合の比較を示す。異なる試験群は、図１２Ａ～１２Ｃに記載されたものと同じである。幹様細胞は細胞表面マーカーＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋によって同定した。図１４Ａ、１４Ｂ、及び１４Ｃの各々は、３名の独立したドナーから単離されたＴ細胞の生物学的複製の結果を示す。

【図14B】形質導入され、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭの濃度（すなわち、低濃度から高濃度）のカリウムイオンを含むＭＲＭにおいて培養された幹様ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合の比較を示す。異なる試験群は、図１２Ａ～１２Ｃに記載されたものと同じである。幹様細胞は細胞表面マーカーＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋によって同定した。図１４Ａ、１４Ｂ、及び１４Ｃの各々は、３名の独立したドナーから単離されたＴ細胞の生物学的複製の結果を示す。

【図14C】形質導入され、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭの濃度（すなわち、低濃度から高濃度）のカリウムイオンを含むＭＲＭにおいて培養された幹様ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合の比較を示す。異なる試験群は、図１２Ａ～１２Ｃに記載されたものと同じである。幹様細胞は細胞表面マーカーＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋によって同定した。図１４Ａ、１４Ｂ、及び１４Ｃの各々は、３名の独立したドナーから単離されたＴ細胞の生物学的複製の結果を示す。

【図15-1】１：１のエフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）での一次抗原刺激後の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ（Ａ、Ｂ、及びＣ）、ＩＬ－２（Ｄ、Ｅ、及びＦ）、及びＴＮＦ－α（Ｇ、Ｈ、及びＩ）の産生を示す。実施例１３に更に説明されているように、（３名の別個のドナーから単離された）Ｔ細胞を形質導入し、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭ（すなわち、低濃度～高濃度）の範囲の濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭのいずれかにおいて培養した。Ｔ細胞を以下で形質導入した：（１）Ｔ細胞対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）（黒丸）または（２）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）（黒四角）。

【図15-2】１：１のエフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）での一次抗原刺激後の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ（Ａ、Ｂ、及びＣ）、ＩＬ－２（Ｄ、Ｅ、及びＦ）、及びＴＮＦ－α（Ｇ、Ｈ、及びＩ）の産生を示す。実施例１３に更に説明されているように、（３名の別個のドナーから単離された）Ｔ細胞を形質導入し、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭ（すなわち、低濃度～高濃度）の範囲の濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭのいずれかにおいて培養した。Ｔ細胞を以下で形質導入した：（１）Ｔ細胞対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）（黒丸）または（２）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）（黒四角）。

【図15-3】１：１のエフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）での一次抗原刺激後の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ（Ａ、Ｂ、及びＣ）、ＩＬ－２（Ｄ、Ｅ、及びＦ）、及びＴＮＦ－α（Ｇ、Ｈ、及びＩ）の産生を示す。実施例１３に更に説明されているように、（３名の別個のドナーから単離された）Ｔ細胞を形質導入し、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭ（すなわち、低濃度～高濃度）の範囲の濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭのいずれかにおいて培養した。Ｔ細胞を以下で形質導入した：（１）Ｔ細胞対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）（黒丸）または（２）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）（黒四角）。

【図16-1】１：４のエフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）での一次抗原刺激後の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ（Ａ、Ｂ、及びＣ）、ＩＬ－２（Ｄ、Ｅ、及びＦ）、及びＴＮＦ－α（Ｇ、Ｈ、及びＩ）の産生を示す。実施例１３に更に説明されているように、（３名の独立したドナーから単離された）Ｔ細胞を形質導入し、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭ（すなわち、低濃度～高濃度）の範囲の濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭのいずれかにおいて培養した。Ｔ細胞を以下で形質導入した：（１）Ｔ細胞対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）（黒丸）または（２）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）（黒四角）。

【図16-2】１：４のエフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）での一次抗原刺激後の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ（Ａ、Ｂ、及びＣ）、ＩＬ－２（Ｄ、Ｅ、及びＦ）、及びＴＮＦ－α（Ｇ、Ｈ、及びＩ）の産生を示す。実施例１３に更に説明されているように、（３名の独立したドナーから単離された）Ｔ細胞を形質導入し、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭ（すなわち、低濃度～高濃度）の範囲の濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭのいずれかにおいて培養した。Ｔ細胞を以下で形質導入した：（１）Ｔ細胞対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）（黒丸）または（２）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）（黒四角）。

【図16-3】１：４のエフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ）での一次抗原刺激後の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ（Ａ、Ｂ、及びＣ）、ＩＬ－２（Ｄ、Ｅ、及びＦ）、及びＴＮＦ－α（Ｇ、Ｈ、及びＩ）の産生を示す。実施例１３に更に説明されているように、（３名の独立したドナーから単離された）Ｔ細胞を形質導入し、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭ（すなわち、低濃度～高濃度）の範囲の濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭのいずれかにおいて培養した。Ｔ細胞を以下で形質導入した：（１）Ｔ細胞対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）（黒丸）または（２）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）（黒四角）。

【図17A】複数回の抗原刺激後の（形質導入され、ＴＣＭまたは様々な濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭのいずれかにおいて培養された）抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ ＣＤ８＋Ｔ細胞の標的腫瘍細胞を殺傷する能力を示す。実施例１３で更に説明されているように、形質導入されたＴ細胞を、１：１（図１７Ａ及び１７Ｂ）または１：４（図１７Ｃ及び１７Ｄ）のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で抗原によって刺激した。図１７Ａ及び１７Ｃは、対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭの濃度（すなわち、低濃度から高濃度）のカリウムイオンを含むＭＲＭにおいて培養されたＣＤ８＋Ｔ細胞の結果を示す。図１７Ｂ及び１７Ｄは、ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２－ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭの濃度（すなわち、低濃度から高濃度）のカリウムイオンを含むＭＲＭにおいて培養されたＣＤ８＋Ｔ細胞の結果を示す。腫瘍生存率の割合は、ＩｎｃｕＣｙｔｅ殺傷曲線の曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して算出した（バーが低いほど、細胞傷害性が高くなる）。図１７Ａ～１７Ｄの各々において、腫瘍のみの細胞及び非形質導入（「モック」）Ｔ細胞を対照として使用した。

【図17B】複数回の抗原刺激後の（形質導入され、ＴＣＭまたは様々な濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭのいずれかにおいて培養された）抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ ＣＤ８＋Ｔ細胞の標的腫瘍細胞を殺傷する能力を示す。実施例１３で更に説明されているように、形質導入されたＴ細胞を、１：１（図１７Ａ及び１７Ｂ）または１：４（図１７Ｃ及び１７Ｄ）のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で抗原によって刺激した。図１７Ａ及び１７Ｃは、対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭの濃度（すなわち、低濃度から高濃度）のカリウムイオンを含むＭＲＭにおいて培養されたＣＤ８＋Ｔ細胞の結果を示す。図１７Ｂ及び１７Ｄは、ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２－ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭの濃度（すなわち、低濃度から高濃度）のカリウムイオンを含むＭＲＭにおいて培養されたＣＤ８＋Ｔ細胞の結果を示す。腫瘍生存率の割合は、ＩｎｃｕＣｙｔｅ殺傷曲線の曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して算出した（バーが低いほど、細胞傷害性が高くなる）。図１７Ａ～１７Ｄの各々において、腫瘍のみの細胞及び非形質導入（「モック」）Ｔ細胞を対照として使用した。

【図17C】複数回の抗原刺激後の（形質導入され、ＴＣＭまたは様々な濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭのいずれかにおいて培養された）抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ ＣＤ８＋Ｔ細胞の標的腫瘍細胞を殺傷する能力を示す。実施例１３で更に説明されているように、形質導入されたＴ細胞を、１：１（図１７Ａ及び１７Ｂ）または１：４（図１７Ｃ及び１７Ｄ）のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で抗原によって刺激した。図１７Ａ及び１７Ｃは、対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭの濃度（すなわち、低濃度から高濃度）のカリウムイオンを含むＭＲＭにおいて培養されたＣＤ８＋Ｔ細胞の結果を示す。図１７Ｂ及び１７Ｄは、ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２－ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭの濃度（すなわち、低濃度から高濃度）のカリウムイオンを含むＭＲＭにおいて培養されたＣＤ８＋Ｔ細胞の結果を示す。腫瘍生存率の割合は、ＩｎｃｕＣｙｔｅ殺傷曲線の曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して算出した（バーが低いほど、細胞傷害性が高くなる）。図１７Ａ～１７Ｄの各々において、腫瘍のみの細胞及び非形質導入（「モック」）Ｔ細胞を対照として使用した。

【図17D】複数回の抗原刺激後の（形質導入され、ＴＣＭまたは様々な濃度のカリウムイオンを含むＭＲＭのいずれかにおいて培養された）抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ ＣＤ８＋Ｔ細胞の標的腫瘍細胞を殺傷する能力を示す。実施例１３で更に説明されているように、形質導入されたＴ細胞を、１：１（図１７Ａ及び１７Ｂ）または１：４（図１７Ｃ及び１７Ｄ）のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比で抗原によって刺激した。図１７Ａ及び１７Ｃは、対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有しないＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭの濃度（すなわち、低濃度から高濃度）のカリウムイオンを含むＭＲＭにおいて培養されたＣＤ８＋Ｔ細胞の結果を示す。図１７Ｂ及び１７Ｄは、ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２－ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを有するＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＴＣＭまたは４０～８０ｍＭの濃度（すなわち、低濃度から高濃度）のカリウムイオンを含むＭＲＭにおいて培養されたＣＤ８＋Ｔ細胞の結果を示す。腫瘍生存率の割合は、ＩｎｃｕＣｙｔｅ殺傷曲線の曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して算出した（バーが低いほど、細胞傷害性が高くなる）。図１７Ａ～１７Ｄの各々において、腫瘍のみの細胞及び非形質導入（「モック」）Ｔ細胞を対照として使用した。

【図18A】腫瘍を担うマウスへの養子移入後の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（ｃ－Ｊｕｎ過剰発現の有するか、または有しない）のトランスクリプトームのプロファイルを示す。実施例１２で更に説明されているように、腫瘍を担うマウスを、ＭＲＭにて培養したｃ－Ｊｕｎ ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（ｃ－Ｊｕｎ Ｒ１２ ＣＡＲ ＭＲＭ）またはＭＲＭにて培養した対照ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（対照Ｒ１２ ＣＡＲ ＭＲＭ）のいずれかで処理した。その後、養子導入した形質導入Ｔ細胞を腫瘍から単離し、単個細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ分析を実施した。図１８Ａは、双方の処理群からの全ての試料からのＣＤ８^＋Ｔ細胞のＵＭＡＰを提供する。図１８Ｂは、Ｔ細終末疲弊胞遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｃは、Ｔ細胞前駆疲弊遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｄは、幹様遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｅは、Ｔ細胞活性化関連遺伝子が濃縮されているＣＤ８＋Ｔ細胞の比率を示す。

【図18B】腫瘍を担うマウスへの養子移入後の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（ｃ－Ｊｕｎ過剰発現の有するか、または有しない）のトランスクリプトームのプロファイルを示す。実施例１２で更に説明されているように、腫瘍を担うマウスを、ＭＲＭにて培養したｃ－Ｊｕｎ ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（ｃ－Ｊｕｎ Ｒ１２ ＣＡＲ ＭＲＭ）またはＭＲＭにて培養した対照ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（対照Ｒ１２ ＣＡＲ ＭＲＭ）のいずれかで処理した。その後、養子導入した形質導入Ｔ細胞を腫瘍から単離し、単個細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ分析を実施した。図１８Ａは、双方の処理群からの全ての試料からのＣＤ８^＋Ｔ細胞のＵＭＡＰを提供する。図１８Ｂは、Ｔ細終末疲弊胞遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｃは、Ｔ細胞前駆疲弊遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｄは、幹様遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｅは、Ｔ細胞活性化関連遺伝子が濃縮されているＣＤ８＋Ｔ細胞の比率を示す。

【図18C】腫瘍を担うマウスへの養子移入後の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（ｃ－Ｊｕｎ過剰発現の有するか、または有しない）のトランスクリプトームのプロファイルを示す。実施例１２で更に説明されているように、腫瘍を担うマウスを、ＭＲＭにて培養したｃ－Ｊｕｎ ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（ｃ－Ｊｕｎ Ｒ１２ ＣＡＲ ＭＲＭ）またはＭＲＭにて培養した対照ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（対照Ｒ１２ ＣＡＲ ＭＲＭ）のいずれかで処理した。その後、養子導入した形質導入Ｔ細胞を腫瘍から単離し、単個細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ分析を実施した。図１８Ａは、双方の処理群からの全ての試料からのＣＤ８^＋Ｔ細胞のＵＭＡＰを提供する。図１８Ｂは、Ｔ細終末疲弊胞遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｃは、Ｔ細胞前駆疲弊遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｄは、幹様遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｅは、Ｔ細胞活性化関連遺伝子が濃縮されているＣＤ８＋Ｔ細胞の比率を示す。

【図18D】腫瘍を担うマウスへの養子移入後の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（ｃ－Ｊｕｎ過剰発現の有するか、または有しない）のトランスクリプトームのプロファイルを示す。実施例１２で更に説明されているように、腫瘍を担うマウスを、ＭＲＭにて培養したｃ－Ｊｕｎ ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（ｃ－Ｊｕｎ Ｒ１２ ＣＡＲ ＭＲＭ）またはＭＲＭにて培養した対照ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（対照Ｒ１２ ＣＡＲ ＭＲＭ）のいずれかで処理した。その後、養子導入した形質導入Ｔ細胞を腫瘍から単離し、単個細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ分析を実施した。図１８Ａは、双方の処理群からの全ての試料からのＣＤ８^＋Ｔ細胞のＵＭＡＰを提供する。図１８Ｂは、Ｔ細終末疲弊胞遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｃは、Ｔ細胞前駆疲弊遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｄは、幹様遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｅは、Ｔ細胞活性化関連遺伝子が濃縮されているＣＤ８＋Ｔ細胞の比率を示す。

【図18E】腫瘍を担うマウスへの養子移入後の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（ｃ－Ｊｕｎ過剰発現の有するか、または有しない）のトランスクリプトームのプロファイルを示す。実施例１２で更に説明されているように、腫瘍を担うマウスを、ＭＲＭにて培養したｃ－Ｊｕｎ ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（ｃ－Ｊｕｎ Ｒ１２ ＣＡＲ ＭＲＭ）またはＭＲＭにて培養した対照ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（対照Ｒ１２ ＣＡＲ ＭＲＭ）のいずれかで処理した。その後、養子導入した形質導入Ｔ細胞を腫瘍から単離し、単個細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ分析を実施した。図１８Ａは、双方の処理群からの全ての試料からのＣＤ８^＋Ｔ細胞のＵＭＡＰを提供する。図１８Ｂは、Ｔ細終末疲弊胞遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｃは、Ｔ細胞前駆疲弊遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｄは、幹様遺伝子が濃縮されているＣＤ８^＋Ｔ細胞の比率を示す。図１８Ｅは、Ｔ細胞活性化関連遺伝子が濃縮されているＣＤ８＋Ｔ細胞の比率を示す。

【発明を実施するための形態】

【0066】

細胞免疫療法の有効性は、患者に注入される細胞製剤の存続性、多分化能、及び非対称細胞分裂を含む、いくつかの因子に左右される。細胞療法に使用される細胞の培養及び／または操作に使用される培地は、これらの細胞の代謝的特質、エピジェネティック特質、表現型特質に大きな影響を及ぼす可能性があり、それによってそれらの治療可能性に影響を及ぼす。

【0067】

本開示は、細胞を培養する方法、その方法によって調製された細胞、及び／または細胞培養方法のための組成物もしくはキットを対象とする。いくつかの態様では、本開示は、養子細胞療法（ＡＣＴ）のための免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎを発現するように改変された）の集団を生成する方法を提供し、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、低分化状態を有し、増殖する能力を保持する。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）は、低分化状態を有し、腫瘍細胞を標的として殺傷する能力を維持する。いくつかの態様では、免疫細胞、例えばＴ細胞またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）は、低分化状態を有し、増殖する能力を保持し、腫瘍細胞を標的として殺傷する能力を維持する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従って培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）は、従来の方法に従って、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地において培養された細胞と比べて、ＡＣＴにおいて高い有効性を有する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）は、従来の方法に従って、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地において培養された細胞と比べて、ＡＣＴにおいて対象に投与された際、増加した存続性を有する。そのような増加した存続性は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の腫瘍微小環境に浸潤し、機能する能力、疲弊の発症に耐え、それを遅延させる能力、ならびに連続した増殖及び応答の耐久性を確保する幹細胞性の持続を指す。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従って培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）は幹様細胞である。そのような細胞は、自己再生、増殖、及び分化が可能である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）は、エフェクター様マーカーも発現する幹様細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、腫瘍細胞を標的とし、殺傷する能力も維持する幹様細胞である。

【0068】

本開示の細胞培養方法は、培養細胞の多能性及び／または万能性を増加させることができ、または細胞がベクターで形質導入されている場合の形質導入効率を増加させることができる。いくつかの態様では、培養方法は、細胞が培養される場合、及び／または細胞が生体内での療法に使用される場合に細胞疲弊を減らす及び／または防止することができる。いくつかの態様では、培養方法はまた、インビボ生存能、インビボ存続性、インビボエフェクター機能、またはそれらの任意の組み合わせを増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書で開示されている培養方法は、オリゴクローナルまたはポリクローナル腫瘍反応性幹様Ｔ細胞及び／またはＣＤ８^＋ＴＩＬを濃縮することができる。いくつかの態様では、本明細書で開示される培養方法は、がん患者に由来するＴＩＬのクローン多様性を保持できる。

【0069】

いくつかの態様では、本開示は、少なくとも約５ｍＭ（例えば、５ｍＭよりも高い）濃度でカリウムを含む代謝再プログラム化培地に細胞を置くことを含む、細胞、例えば、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）を培養する方法を対象とし、培地は、高張性ではなく、例えば、低張性または等張性である。本開示のいくつかの態様は、４０ｍＭよりも高い、例えば、約４０～８０ｍＭ、例えば、５０ｍＭ～８０ｍＭの濃度でカリウムを含む培地に細胞を置くことを含む、細胞、例えば、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）を培養する方法を対象とする。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、制御性Ｔ（Ｔ_ｒｅｇ）細胞、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0070】

本開示のいくつかの態様は、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度でカリウムイオン及び３０ｍＭ～１００ｍＭの濃度でＮａＣｌを含む代謝再プログラム化培地において細胞を培養することを含む、免疫細胞の幹細胞性を増加させながら、エクスビボまたはインビトロの培養中に免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の収率を増加させる方法を対象とし、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０～１４０ｍＭである。本開示のいくつかの態様は、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度でカリウムイオン及び３０ｍＭ～１００ｍＭの濃度でＮａＣｌを含む代謝再プログラム化培地において細胞を培養することを含む、免疫療法のために免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の集団を調製する方法を対象とし、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０～１４０ｍＭである。本開示のいくつかの態様は、４０ｍＭ～８０ｍＭの濃度でカリウムイオン及び３０ｍＭ～１００ｍＭの濃度でＮａＣｌを含む培地において免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）を培養することを含む、エクスビボまたはインビトロの培養中に免疫細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の幹細胞性を増加させる方法を対象とし、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０～１４０ｍＭである。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。

【0071】

いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、培地は、等張性である。特定の態様では、培地は更にインターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、培地はＩＬ－２、ＩＬ－７及びＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培地はＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培地は、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、グルコース、またはそれらの任意の組み合わせを更に含む。

【0072】

本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において免疫細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）を（例えば、ｃ－Ｊｕｎをコードする外来性ヌクレオチド配列及び／または内在性ｃ－Ｊｕｎポリペプチドの発現を増加させることができる転写活性化因子を用いて）ｃ－Ｊｕｎを過剰発現させるように改変することは、以下の参照方法と比べて、免疫細胞の１つ以上の特性を更に改善し得る：（ｉ）免疫細胞は改変されているが、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムを含む培地において培養されない、（ｉｉ）免疫細胞は改変されていないが、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムを含む培地において培養される、または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）との双方。そのような方法の更なる態様は本開示全体を通して提供されている。

【0073】

Ｉ．用語
本開示がより容易に理解され得るように、ある特定の用語が最初に定義される。本出願で使用されるとき、本明細書で明示的に提供されない限り、以下の用語の各々は、以下に示される意味を有することとする。追加の定義は本出願全体を通して示される。

【0074】

本開示の全体を通して、用語「ａ」または「ａｎ」実体は、その実体のうち１以上を指し、例えば、「ａキメラポリペプチド」は１以上のキメラポリペプチドを表すと理解される。したがって、「ａ」（または「ａｎ」）、「１以上」、及び「少なくとも１つ」という用語は本明細書では相互交換可能に使用することができる。加えて、「または」は、リスト内の構成要素のオープンリストを意味するために使用される。例えば、「ＸはＡまたはＢを含む」は、ＸがＡを含む、ＸがＢを含む、ＸがＡ及びＢを含む、またはＸがＡもしくはＢ及び任意の他の構成要素を含むことを意味する。

【0075】

更に、「及び／または」は、本明細書で使用されるとき、他方の有無にかかわらず、２つの指定された特徴または構成要素の各々の特定の開示とみなされるべきである。したがって、「及び／または」という用語は、本明細書で「Ａ及び／またはＢ」のような語句で使用される場合、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、ならびに「Ｂ」（単独）を含むように意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、以下の態様の各々を包含することが意図される：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）。

【0076】

態様が、「含むこと」という言語とともに本明細書に記載されている場合は常に、「から成る」及び／または「から本質的になる」の観点から記載される他の同様の態様もまた提供されることが理解される。

【0077】

別途記載のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する当業者に、一般に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くに関する一般的な辞書を当業者に提供する。

【0078】

単位、接頭辞、及び記号はそれらの国際単位系（ＳＩ）で承認された形式で示される。数値範囲は、明白に述べられない限り範囲を定義する数を含む。

【0079】

本明細書で使用される略語は本開示全体を通して定義される。本開示の様々な態様が以下の小節において更に詳しく記載されている。

【0080】

「約」または「本質的に含む」という用語は、当業者によって決定されるような特定の値または組成の許容誤差範囲内にある値または組成を指し、これは値または組成がどのように測定または決定されるのか、すなわち、測定システムの限界に部分的に依存することになる。例えば、「約」または「から本質的に構成される」は、当該技術分野における慣例に従って１標準偏差以内のまたは１標準偏差を超えることを意味し得る。代替的に、「約」または「から本質的に構成される」は、別途明記のない限り、または別途文脈から明らかでない限り（そのような数値が可能な値の１００％を超える場合を除く）、記載の参照値のいずれかの（よりも大きいまたはよりも小さい）方向に、最大１０％の範囲（例えば、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の内に入る値の範囲）を意味する。例えば、本明細書で使用されるとき「約５５ｍＭ」には、４９．５ｍＭ～６０．５ｍＭが含まれる。更に、特に生物系またはプロセスに関して、その用語は最大１桁または最大５倍の値を意味することができる。特定の値または組成が、出願及び特許請求の範囲で提供される場合、別途記載のない限り、「約」または「から本質的になる」の意味は、その特定の値または組成について許容可能な誤差範囲内にあるとみなされるべきである。

【0081】

本明細書で使用されるとき、「およそ」という用語は目的の１以上の値に適用される場合、規定の参照値と類似している値を指す。いくつかの態様では、「約」という用語のような「およそ」という用語は、別途明記のない限り、または別途文脈から明らかでない限り（そのような数値が可能な値の１００％を超える場合を除く）、記載の参照値のいずれかの（更に大きいまたは更に小さい）方向に１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の範囲内に入る値の範囲を指す。

【0082】

本明細書に記載されているように、任意の濃度範囲、割合範囲、比率範囲、または整数範囲は、別途示されない限り、列挙される範囲内の任意の整数の値を含み、適切な場合、その分数（例えば、整数の１０分の１及び１００分の１）を含むと理解されるべきである。

【0083】

「対照培地」、「従来の培養培地」または「参照培養培地」という用語は、本明細書で使用されるとき、本明細書に開示されている代謝再プログラム化培地（「ＭＲＭ」）と比較した任意の培地を指す。対照培地は、ある特定のイオン濃度、例えば、カリウムイオンを除き、代謝再プログラム化培地と同じ構成要素を含み得る。いくつかの態様では、本明細書に記載の代謝再プログラム化培地は、本明細書に記載されるように、１つ以上のイオン濃度、例えば、カリウムイオン濃度を調整することによって対照培地から調製される。いくつかの態様では、対照培地は、基本培地、例えば、ＣＴＳ（商標）ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）を含む。いくつかの態様では、したがって、対照培地は、代謝再プログラム化培地にも加えられるアミノ酸、グルコース、グルタミン、Ｔ細胞刺激因子、抗体、置換物などを含むが、これらに限定されない１つ以上の追加の構成要素を含むが、対照培地は、代謝再プログラム化培地とは異なる特定のイオン濃度を有する。別途示されない限り、「培地（ｍｅｄｉａ）」及び「培地（ｍｅｄｉｕｍ）」という用語は相互交換可能に使用することができる。

【0084】

本明細書で使用されるとき「培養」という用語は、エクスビボ及び／またはインビトロでの細胞の制御された増殖を指す。本明細書で使用されるとき、「培養」は、細胞増殖中、または細胞操作（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、もしくはＴＣＲｍを発現させるための構築物による形質導入）中の本明細書で開示されている細胞、例えば、免疫細胞、例えば、１つ以上の操作された免疫細胞の増殖を含む。いくつかの態様では、培養細胞は、対象、例えば、ヒト対象／患者から得られる。いくつかの態様では、培養細胞はヒト対象／患者から得られる免疫細胞を含む。いくつかの態様では、培養細胞は本明細書に開示されている１以上の操作された免疫細胞を含む。いくつかの態様では、培養細胞はヒト対象／患者から得られるＴ細胞またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は培養前に精製される。いくつかの態様では、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は腫瘍に浸潤しているＴ細胞及び／またはＮＫ細胞である。いくつかの態様では、培養細胞は本明細書に開示されている１以上の操作された免疫細胞を含む。

【0085】

「増殖させる」または「増殖」という用語は、免疫細胞培養に関して本明細書で使用されるとき、細胞を刺激し、または活性化し、細胞を培養するプロセスを指す。増殖プロセスは、細胞が刺激され、または活性化され、培養された後、培養細胞の集団において、所望の細胞の比率または総数の増加、例えば、低分化免疫細胞の比率または総数の増加をもたらすことができる。増殖は、培養細胞の集団における全ての細胞型の数が増加することを必要としない。むしろ、いくつかの態様では、培養細胞の集団中の細胞のサブセットのみが、増殖中に数が増加するが、他の細胞型の数は、変化しないか、または減少し得る。

【0086】

本明細書で使用されるとき、「収率」という用語は、培養方法またはその一部の後の細胞の総数を指す。いくつかの態様では、「収率」という用語は、Ｔ細胞の集団における特定の細胞、例えば、幹様Ｔ細胞の集団を指す。収率は、代表的な試料に基づいて収率を推定することを含むが、これに限定されない任意の方法を使用して決定することができる。

【0087】

「代謝再プログラム化培地（ｍｅｄｉａ）」、「代謝再プログラム化培地（ｍｅｄｉｕｍ）」、または「ＭＲＭ」という用語は本明細書で使用されるとき、本開示の培地を指し、その際、培地は高カリウム濃度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、４０ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは約４０ｍＭ～約８０ｍＭの間の濃度でカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約１０ｍＭ，少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、少なくとも約８０ｍＭ、少なくとも約８５ｍＭ、少なくとも約９０ｍＭ、少なくとも約９５ｍＭ、または少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオンの濃度を含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは約４０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは約５０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは約６０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは約７０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは約８０ｍＭの濃度でカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約４０ｍＭ～約８０ｍＭのＮａＣｌ、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのＫＣｌ、約０．５ｍＭ～約２．８ｍＭのカルシウム、及び約１０ｍＭ～約２４ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約４０ｍＭ～約８０ｍＭのＮａＣｌ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭのカリウムイオン、約０．５ｍＭ～約２．８ｍＭのカルシウム、及び約１０ｍＭ～約２４ｍＭのグルコースを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約５５ｍＭ～約９０ｍＭのＮａＣｌ及び約４０ｍＭ～約８０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、更に、約２５０～約３００ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を含む。

【0088】

本明細書で使用される場合、「よりも高い」という用語は、それより大きいが等しくないことを意味する。例えば、「５ｍＭよりも高い」は５ｍＭを超える任意の量を意味するが、５ｍＭを含まない。

【0089】

本明細書で使用されるとき「張度」という用語は、細胞膜を横切る計算された有効浸透圧勾配を指し、カリウムイオンの濃度と塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）の濃度の合計に２を掛けた値で表される。張度は、溶液、例えば、培地の浸透圧濃度（ｍＯｓｍ／ｋｇ）または浸透圧モル濃度（ｍＯｓｍ／Ｌ）によって表すことができる。浸透圧濃度と浸透圧モル濃度は、質量当たり（浸透圧濃度）及び体積当たり（浸透圧モル濃度）の溶媒の溶質浸透圧濃度の測定値である。本明細書で使用されるとき、等張性培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ（例えば、（［Ｋ＋］＋［ＮａＣｌ］）×２＝２８０）の張度を有する。

【0090】

本明細書で使用されるとき、低張性溶液は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満（例えば、（［Ｋ＋］＋［ＮａＣｌ］）×２＜２８０）の張度を有する。いくつかの態様では、低張性培地は、少なくとも約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、低張性培地は、少なくとも約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、低張性培地は、少なくとも約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、低張性培地は、少なくとも約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、本明細書に記載されている低張性培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。

【0091】

本明細書で使用されるとき、高張性溶液は、３００ｍＯｓｍ／Ｌを超える（例えば、（［Ｋ＋］＋［ＮａＣｌ］）×２＞３００）張度を有する。いくつかの態様では、本明細書に記載されている高張性培地は、約３２０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、溶液、例えば培地の張度は、カリウムイオン及びＮａＣｌの濃度を増加または減少させることによって調節される。いくつかの態様では、培地の張度は、ある溶質の増加を第２の溶質の減少で相殺することによって維持することができる。例えば、ナトリウムイオンの濃度を変えることなく培地におけるカリウムイオンの濃度を増加させると、培地の張度が増加し得る。しかしながら、カリウムイオンの濃度が増加し、ナトリウムイオンの濃度が減少する場合、元の培地の張度は維持され得る。

【0092】

本明細書で使用されるとき、「カリウム」、「カリウムイオン」、「カリウムカチオン」、及び「Ｋ＋」という用語は相互交換可能に使用され、元素カリウムを指す。元素カリウム素は、溶液中に陽イオンで存在する。しかしながら、カリウムイオンを含む溶液を調製する標準的な手段は、カリウム含有塩（例えば、ＫＣｌ）を溶液中に希釈することを含むことが、当業者には容易に明らかとなる。したがって、あるモル（Ｍ）濃度のカリウムイオンを含む溶液、例えば、培地は、等モル（Ｍ）濃度のカリウムを含む塩を含むと記載され得る。

【0093】

本明細書で使用されるとき、「ナトリウムイオン」及び「ナトリウムカチオン」という用語は、元素ナトリウムを指すために交換可能に使用される。元素ナトリウムは、溶液中に一価の陽イオンで存在する。しかしながら、ナトリウムイオンを含む溶液を調製する標準的な手段が、ナトリウム含有塩（例えば、ＮａＣｌ）を溶液に希釈することを含むことは当業者に容易に明らかであろう。したがって、あるモル（Ｍ）濃度のナトリウムイオンを含む溶液、例えば、培地は、等モル（Ｍ）濃度のナトリウムを含む塩を含むと記載され得る。

【0094】

本明細書で使用されるとき、「カルシウムイオン」及び「カルシウムカチオン」という用語は、元素カルシウムを指すために交換可能に使用される。元素カルシウムは、溶液中に二価の陽イオンで存在する。しかしながら、カルシウムイオンを含む溶液を調製する標準的な手段が、カルシウム含有塩（例えば、ＣａＣｌ_２）を溶液に希釈することを含むことは当業者に容易に明らかであろう。したがって、あるモル（Ｍ）濃度のカルシウムイオンを含む溶液、例えば、培地は、等モル（Ｍ）濃度のカルシウムを含む塩を含むと記載され得る。

【0095】

本明細書で使用されるとき、「免疫細胞」という用語は免疫系の細胞を指す。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔリンパ球（「Ｔ細胞」）、Ｂリンパ球（「Ｂ細胞」）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞または好中球から選択される。本明細書で使用されるとき、細胞の「集団」は２つ以上の細胞、例えば、複数の細胞の集合を指す。いくつかの態様では、細胞の集団は、２つ以上の免疫細胞、例えば、複数の免疫細胞を含む。いくつかの態様では、細胞の集団は、複数のタイプの細胞を含む細胞の異種混合物、例えば、免疫細胞及び非免疫細胞の異種混合物を含む。いくつかの態様では、細胞の集団は複数のＴ細胞を含む。

【0096】

本明細書で使用されるとき「参照免疫細胞」（または「参照細胞」）という用語は、本明細書に提供されている方法を使用して改変されていない及び／または培養されていない細胞を指す。例えば、いくつかの態様では、参照細胞は、本明細書に記載されているように（例えば、本明細書に提供されているｃ－Ｊｕｎヌクレオチド配列及び／または転写活性化因子のいずれかで）改変されていない細胞（例えば、対応する免疫細胞）を含む。いくつかの態様では、参照細胞は、本開示の培地（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む）において培養された（本明細書に記載されているように改変されていない）そのような細胞を含む。いくつかの態様では、参照細胞は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含まない培地（すなわち、参照培地）において培養された（本明細書に記載されているように改変されていない）そのような細胞を含む。いくつかの態様では、参照細胞は、本明細書に記載されているように（例えば、本明細書に提供されているｃ－Ｊｕｎヌクレオチド配列及び／または転写活性化因子のいずれかで）改変されているが、参照培地で培養された細胞を含む。したがって、別途示されない限り、参照細胞は、以下のうちのいずれかを含み得る：（１）本明細書に記載されているように改変されていない細胞（例えば、対応する免疫細胞）、（２）本明細書に記載されているように改変されておらず、本開示の培地で培養もされていない細胞（例えば、対応する免疫細胞）、（３）本明細書に記載されているように改変されていないが、本開示の培地で培養された細胞（例えば、対応する免疫細胞）、（４）本明細書に記載されているように改変されているが、参照培地で培養された細胞（例えば、対応する免疫細胞）、または（５）（１）～（４）の任意の組み合わせ。少なくとも本開示に基づいて、本明細書で使用される場合「参照細胞」という用語の範囲は、当業者には明らかであろう。

【0097】

本明細書で使用されるとき、「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」という用語は、相互交換可能であり、胸腺によって産生または処理されるあらゆるリンパ球を指す。Ｔ細胞の非限定的なクラスには、エフェクターＴ細胞及びＴｈ細胞（例えば、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋Ｔ細胞）が挙げられる。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＴｈ１細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＴｈ２細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＴｃ１７細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＴｈ１７細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＴ_ｒｅｇ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞は腫瘍浸潤細胞（ＴＩＬ）である。

【0098】

本明細書で使用されるとき、「メモリー」Ｔ細胞という用語は、これまでに（例えば、インビボ、インビトロ、もしくはエクスビボで）それらの同族抗原に遭遇し、応答したＴ細胞、または例えば、（例えば、インビトロもしくはエクスビボにおいて）抗ＣＤ３抗体で刺激されたＴ細胞を指す。二次曝露の際に「メモリー様」表現型を有する免疫細胞、そのようなメモリーＴ細胞は増殖して、一次曝露中よりも速くかつ強い免疫応答を起こすことができる。いくつかの態様では、メモリーＴ細胞は、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔ_ＣＭ細胞）、エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔ_ＥＭ細胞）、組織常在性メモリーＴ細胞（Ｔ_ＲＭ細胞）、幹細胞様メモリーＴ細胞（Ｔ_ＳＣＭ細胞）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。

【0099】

本明細書で使用されるとき、「幹細胞様メモリーＴ細胞」、「Ｔメモリー幹細胞」、または「Ｔ_ＳＣＭ細胞」という用語は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現するメモリーＴ細胞を指し、自己複製する幹細胞様能力ならびにメモリー及びエフェクターＴ細胞サブセットの範囲全体を再構成する多能性を付与されている。

【0100】

本明細書で使用されるとき、「セントラルメモリーＴ細胞」または「Ｔ_ＣＭ細胞」という用語は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現するメモリーＴ細胞を指す。セントラルメモリーＴ細胞は一般にリンパ節内及び末梢循環で見られる。

【0101】

本明細書で使用されるとき、「エフェクターメモリーＴ細胞」または「Ｔ_ＥＭ細胞」という用語は、ＣＤ４５ＲＯを発現するが、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌの発現を欠いているメモリーＴ細胞を指す。エフェクターメモリーＴ細胞は、リンパ節ホーミング受容体（例えば、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌ）を欠いているため、これらの細胞は通常、末梢循環及び非リンパ組織で見られる。

【0102】

本明細書で使用されるとき、「組織常在性メモリーＴ細胞」または「Ｔ_ＲＭ細胞」という用語は、循環せず、皮膚、肺、及び消化管のような末梢組織に常在しているメモリーＴ細胞を指す。いくつかの態様では、組織常在性メモリーＴ細胞はまた、エフェクターメモリーＴ細胞でもある。

【0103】

本明細書で使用されるとき、「ナイーブＴ細胞」または「Ｔ_Ｎ細胞」という用語は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現するが、ＣＤ９５を発現しないＴ細胞を指す。Ｔ_Ｎ細胞はＴ細胞系列にて最も未分化な細胞である。Ｔ_Ｎ細胞と抗原提示細胞（ＡＰＣ）との間の相互作用によって、活性化Ｔ_ＥＦＦ細胞へのＴ_Ｎ細胞の分化及び免疫応答が誘導される。

【0104】

本明細書で使用されるとき、「幹細胞性」、「幹細胞様」、「幹様」、または「低分化」という用語は、よりナイーブな表現型と一致するマーカーを発現する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞またはＴＩＬ）を指す。例えば、低分化Ｔ細胞はＴ_Ｎ細胞またはＴ_ＳＣＭ細胞に特徴的な１以上のマーカーを発現することができる。いくつかの態様では、「低分化」または「幹様」のＴ細胞はＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現する。いくつかの態様では、「低分化」または「幹様」のＴ細胞はＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、及びＴＣＦ７を発現する。いくつかの態様では、「低分化」または「幹様」のＴ細胞はＣＤ４５ＲＯを発現せず、またはＣＤ４５ＲＯ^低である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、低分化表現型を有する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）を推奨する。特定の機構に束縛されるものではないが、いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法は、低分化免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の分化を阻止、阻害、または制限し、その結果、培養物における幹様細胞の数が増加する。例えば、腫瘍を効果的に制御するためには、幹細胞様メモリー表現型またはセントラルメモリー表現型を有する低分化免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の養子移入が好ましいと一般的に考えられている。Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１５：１６１６－１６２６（２００５）、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｍｅｄ １５（７）：８０８－８１４（２００９）、Ｌｙｎｎ，Ｒ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５７６（７７８６）：２９３－３００（２０１９）、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｒｅｖ １２：６７１－６８４（２０１２）、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ３５（９）：６５１－６７０（２０１２）、及びＧａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ １７（１０）：１２９０－１２９７（２０１１）を参照されたい。

【0105】

幹細胞性は、自己再生能力、多能性、及び増殖能の存続性を特徴とする。いくつかの態様では、幹細胞性は、特定の遺伝子シグネチャ、例えば、多数の遺伝子にわたる発現の組み合わせパターンを特徴とする。いくつかの態様では、幹様細胞は、例えば、本明細書に開示される幹細胞性遺伝子シグネチャを使用して、トランスクリプトーム分析によって同定され得る。いくつかの態様では、遺伝子シグネチャは、ＡＣＴＮ１、ＤＳＣ１、ＴＳＨＺ２、ＭＹＢ、ＬＥＦ１、ＴＩＭＤ４、ＭＡＬ、ＫＲＴ７３、ＳＥＳＮ３、ＣＤＣＡ７Ｌ、ＬＯＣ２８３１７４、ＴＣＦ７、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＬＡＳＳ６、ＵＢＥ２Ｅ２、ＩＬ７Ｒ、ＧＣＮＴ４、ＴＡＦ４Ｂ、ＳＵＬＴ１Ｂ１、ＳＥＬＰ、ＫＲＴ７２、ＳＴＸＢＰ１、ＴＣＥＡ３、ＦＣＧＢＰ、ＣＸＣＲ５、ＧＰＡ３３、ＮＥＬＬ２、ＡＰＢＡ２、ＳＥＬＬ、ＶＩＰＲ１、ＦＡＭ１５３Ｂ、ＰＰＦＩＢＰ２、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＧＪＢ６、ＯＣＭ２、ＧＣＥＴ２、ＬＲＲＮ１、ＩＬ６ＳＴ、ＬＲＲＣ１６Ａ、ＩＧＳＦ９Ｂ、ＥＦＨＡ２、ＬＯＣ１２９２９３、ＡＰＰ、ＰＫＩＡ、ＺＣ３Ｈ１２Ｄ、ＣＨＭＰ７、ＫＩＡＡ０７４８、ＳＬＣ２２Ａ１７、ＦＬＪ１３１９７、ＮＲＣＡＭ、Ｃ５ｏｒｆ１３、ＧＩＰＣ３、ＷＮＴ７Ａ、ＦＡＭ１１７Ｂ、ＢＥＮＤ５、ＬＧＭＮ、ＦＡＭ６３Ａ、ＦＡＭ１５３Ｂ、ＡＲＨＧＥＦ１１、ＲＢＭ１１、ＲＩＣ３、ＬＤＬＲＡＰ１、ＰＥＬＩ１、ＰＴＫ２、ＫＣＴＤ１２、ＬＭＯ７、ＣＥＰ６８、ＳＤＫ２、ＭＣＯＬＮ３、ＺＮＦ２３８、ＥＤＡＲ、ＦＡＭ１５３Ｃ、ＦＡＡＨ２、ＢＣＬ９、Ｃ１７ｏｒｆ４８、ＭＡＰ１Ｄ、ＺＳＷＩＭ１、ＳＯＲＢＳ３、ＩＬ４Ｒ、ＳＥＲＰＩＮＦ１、Ｃ１６ｏｒｆ４５、ＳＰＴＢＮ１、ＫＣＮＱ１、ＬＤＨＢ、ＢＺＷ２、ＮＢＥＡ、ＧＡＬ３ＳＴ４、ＣＲＴＣ３、ＭＡＰ３Ｋ１、ＨＬＡ－ＤＯＡ、ＲＡＢ４３、ＳＧＴＢ、ＣＮＮ３、ＣＷＨ４３、ＫＬＨＬ３、ＰＩＭ２、ＲＧＭＢ、Ｃ１６ｏｒｆ７４、ＡＥＢＰ１、ＳＮＯＲＤ１１５－１１、ＳＮＯＲＤ１１５－１１、ＧＲＡＰ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子を含む（例えば、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １７（１０）：１２９０－９７（２０１１）を参照のこと）。いくつかの態様では、特徴的な遺伝子発現は、ＮＯＧ、ＴＩＭＤ４、ＭＹＢ、ＵＢＥ２Ｅ２、ＦＣＥＲ１Ｇ、ＨＡＶＣＲ１、ＦＣＧＢＰ、ＰＰＦＩＢＰ２、ＴＰＳＴ１、ＡＣＴＮ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＫＲＴ７２、ＳＬＣ１６Ａ１０、ＧＪＢ６、ＬＲＲＮ１、ＰＲＡＧＭＩＮ、ＧＩＰＣ３、ＦＬＮＢ、ＡＲＲＢ１、ＳＬＣ７Ａ８、ＮＵＣＢ２、ＬＲＲＣ７、ＭＹＯ１５Ｂ、ＭＡＬ、ＡＥＢＰ１、ＳＤＫ２、ＢＺＷ２、ＧＡＬ３ＳＴ４、ＰＩＴＰＮＭ２、ＺＮＦ４９６、ＦＡＭ１１７Ｂ、Ｃ１６ｏｒｆ７４、ＴＤＲＤ６、ＴＳＰＡＮ３２、Ｃ１８ｏｒｆ２２、Ｃ３ｏｒｆ４４、ＬＯＣ１２９２９３、ＺＣ３Ｈ１２Ｄ、ＭＬＸＩＰ、Ｃ７ｏｒｆ１０、ＳＴＸＢＰ１、ＫＣＮＱ１、ＦＬＪ１３１９７、ＬＤＬＲＡＰ１、ＲＡＢ４３、ＲＩＮ３、ＳＬＣ２２Ａ１７、ＡＧＢＬ３、ＴＣＥＡ３、ＮＣＲＮＡ００１８５、ＦＡＭ１５３Ｂ、ＦＡＭ１５３Ｃ、ＶＩＰＲ１、ＭＭＰ１９、ＨＢＳ１Ｌ、ＥＥＦ２Ｋ、ＳＮＯＲＡ５Ｃ、ＵＢＡＳＨ３Ａ、ＦＬＪ４３３９０、ＲＰ６－２１３Ｈ１９．１、ＩＮＰＰ５Ａ、ＰＩＭ２、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＳＮＲＫ、ＬＯＣ１００１２８２８８、ＰＩＧＶ、ＬＯＣ１００１２９８５８、ＳＰＴＢＮ１、ＰＲＯＳ１、ＭＭＰ２８、ＨＥＳ１、ＣＡＣＨＤ１、ＮＳＵＮ５Ｃ、ＬＥＦ１、ＴＴＴＹ１４、ＳＮＯＲＡ５４、ＨＳＦ２、Ｃ１６ｏｒｆ６７、ＮＳＵＮ５Ｂ、ＫＩＡＡ１２５７、ＮＲＧ２、ＣＡＤ、ＴＡＲＢＰ１、ＳＴＲＡＤＢ、ＭＴ１Ｆ、ＴＭＥＭ４１Ｂ、ＰＤＨＸ、ＫＤＭ６Ｂ、ＬＯＣ１００２８８３２２、ＵＸＳ１、ＬＧＭＮ、ＮＡＮＯＳ２、ＰＹＧＢ、ＲＡＳＧＲＰ２、Ｃ１４ｏｒｆ８０、ＸＰＯ６、ＳＬＣ２４Ａ６、ＦＡＭ１１３Ａ、ＭＲＭ１、ＦＢＸＷ８、ＮＤＵＦＳ２、ＫＣＴＤ１２、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子を含む（例えば、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ，１７（１０）：１２９０－１２９７（２０１１）を参照のこと）。いくつかの態様では、特徴的な遺伝子発現は、ＳＥＬＬ、ＣＣＲ７、Ｓ１ＰＲ１、ＫＬＦ３、ＴＣＦ７、ＧＰＲ１８３、ＳＣ５Ｄ、ＦＡＡＨ２、ＬＴＢ、ＳＥＳＮ３、ＭＡＬ、ＴＳＨＺ２、ＬＥＦ１、ＡＰ３Ｍ２、ＳＬＣ２Ａ３、ＩＣＡＭ２、ＰＬＡＣ８、ＳＣＭＬ１、ＩＬ７Ｒ、ＡＢＬＩＭ１、ＲＡＳＧＲＰ２、ＴＲＡＢＤ２Ａ、ＳＡＴＢ１、ＡＬＧ１３、ＡＲＩＤ５Ａ、ＢＡＣＨ２、ＰＡＢＰＣ１、ＧＰＣＰＤ１、ＮＥＬＬ２、ＴＡＦ４Ｂ、ＦＣＭＲ、ＡＲＲＤＣ２、Ｃ１ｏｒｆ１６２、ＦＡＭ１７７Ａ１、ＡＮＫＲＤ１２、ＴＸＫ、ＳＯＲＬ１、ＡＱＰ３、ＡＤＴＲＰ、ＦＸＹＤ７、ＣＤ２８、Ｐ２ＲＹ８、ＣＲＹＢＧ１、ＴＮＦＳＦ８、ＢＥＸ２、ＰＧＡＰ１、ＰＴＧＥＲ４、ＭＡＭＬ２、ＢＥＸ３、ＰＣＳＫ１Ｎ、ＩＮＰＰ４Ｂ、ＡＣ１１９３９６．１、ＣＸＣＲ５、ＬＩＮＣ００４０２、ＣＣＲ４、ＩＬ６Ｒ、ＺＢＴＢ１０、ＩＴＧＡ６、ＡＲＭＨ１、ＲＩＬＰＬ２、ＦＯＸＰ１、ＴＥＳＰＡ１、ＹＰＥＬ５、ＬＰＡＲ６、ＣＭＳＳ１、ＲＩＰＯＲ２、ＺＮＦ３３１、ＥＭＰ３、ＧＩＭＡＰ７、ＷＤＲ７４、ＲＩＣ３、ＣＹＳＬＴＲ１、ＩＴＧＢ１、ＣＤ５、ＳＡＭＨＤ１、ＳＥＲＩＮＣ５、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子を含む（例えば、Ｃａｕｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５９６：１２６－１３２（２０２１）を参照のこと）。

【0106】

本明細書で使用されるとき、「エフェクター様」または「エフェクター細胞様」という用語は、腫瘍細胞殺傷能力及びサイトカイン多機能性、例えば、炎症性サイトカイン及び／または細胞傷害性分子を産生する細胞の能力を指す。いくつかの態様では、エフェクター様細胞は細胞によって発現される特定のマーカーを特徴とする。いくつかの態様では、それらのエフェクター様マーカーはｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋のうちの１以上を含む。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーはＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＫＴ３、ＢＣＬ２Ｌ１、ＣＢＬ、ＣＢＬＢ、ＣＢＬＣ、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＤ２、ＣＣＮＤ３、ＣＩＳＨ、ＣＬＣＦ１、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＦＲ、ＣＲＥＢＢＰ、ＣＲＬＦ２、ＣＳＦ２、ＣＳＦ２ＲＡ、ＣＳＦ２ＲＢ、ＣＳＦ３、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＳＨ１、ＣＴＦ１、ＥＰ３００、ＥＰＯ、ＥＰＯＲ、ＧＨ１、ＧＨ２、ＧＨＲ、ＧＲＢ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ１７、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ２１、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＥ、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２、ＩＦＮＫ、ＩＦＮＬ１、ＩＦＮＬ２、ＩＦＮＬ３、ＩＦＮＬＲ１、ＩＦＮＷ１、ＩＬ１０、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１９、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２０ＲＢ、ＩＬ２１、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２、ＩＬ２２ＲＡ１、ＩＬ２２ＲＡ２、ＩＬ２３Ａ、ＩＬ２３Ｒ、ＩＬ２４、ＩＬ２６、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＲＦ９、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＬＥＰ、ＬＥＰＲ、ＬＩＦ、ＬＩＦＲ、ＭＰＬ、ＭＹＣ、ＯＳＭ、ＯＳＭＲ、ＰＩＡＳ１、ＰＩＡＳ２、ＰＩＡＳ３、ＰＩＡＳ４、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３ＣＢ、ＰＩＫ３ＣＤ、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＩＫ３Ｒ２、ＰＩＫ３Ｒ３、ＰＩＫ３Ｒ５、ＰＩＭ１、ＰＲＬ、ＰＲＬＲ、ＰＴＰＮ１１、ＰＴＰＮ６、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３、ＳＯＣＳ４、ＳＯＣＳ５、ＳＯＣＳ７、ＳＯＳ１、ＳＯＳ２、ＳＰＲＥＤ１、ＳＰＲＥＤ２、ＳＰＲＹ１、ＳＰＲＹ２、ＳＰＲＹ３、ＳＰＲＹ４、ＳＴＡＭ、ＳＴＡＭ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５Ａ、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＳＴＡＴ６、ＴＰＯ、ＴＳＬＰ、ＴＹＫ２、及びそれらの任意の組み合わせから成る群から選択されるＳＴＡＴ標的を含む。いくつかの態様では、エフェクター様細胞はトランスクリプトーム分析によって特徴付けられる。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、Ｋａｅｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １１１：８３７－５１（２００２）、Ｔｒｉｐａｔｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８５：２１１６－２４（２０１０）、及び／またはＪｏｈｎｎｉｄｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６：ｅａｂｅ３７０２（Ｊａｎ．１５，２０２１）で開示されるマーカーを含み、この各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0107】

いくつかの態様では、エフェクター様細胞は、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１７（１０）：１２９０－９７（２０１１）に記載されているエフェクター関連遺伝子セットを使用して特徴付けられる。いくつかの態様では、エフェクター様細胞の特徴的な遺伝子発現は、ＭＴＣＨ２、ＲＡＢ６Ｃ、ＫＩＡＡ０１９５、ＳＥＴＤ２、Ｃ２ｏｒｆ２４、ＮＲＤ１、ＧＮＡ１３、ＣＯＰＡ、ＳＥＬＴ、ＴＮＩＰ１、ＣＢＦＡ２Ｔ２、ＬＲＰ１０、ＰＲＫＣＩ、ＢＲＥ、ＡＮＫＳ１Ａ、ＰＮＰＬＡ６、ＡＲＬ６ＩＰ１、ＷＤＦＹ１、ＭＡＰＫ１、ＧＰＲ１５３、ＳＨＫＢＰ１、ＭＡＰ１ＬＣ３Ｂ２、ＰＩＰ４Ｋ２Ａ、ＨＣＮ３、ＧＴＰＢＰ１、ＴＬＮ１、Ｃ４ｏｒｆ３４、ＫＩＦ３Ｂ、ＴＣＩＲＧ１、ＰＰＰ３ＣＡ、ＡＴＧ４Ｄ、ＴＹＭＰ、ＴＲＡＦ６、Ｃ１７ｏｒｆ７６、ＷＩＰＦ１、ＦＡＭ１０８Ａ１、ＭＹＬ６、ＮＲＭ、ＳＰＣＳ２、ＧＧＴ３Ｐ、ＧＡＬＫ１、ＣＬＩＰ４、ＡＲＬ４Ｃ、ＹＷＨＡＱ、ＬＰＣＡＴ４、ＡＴＧ２Ａ、ＩＤＳ、ＴＢＣ１Ｄ５、ＤＭＰＫ、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ６、ＲＥＥＰ５、ＡＢＨＤ６、ＫＩＡＡ０２４７、ＥＭＢ、ＴＳＥＮ５４、ＳＰＩＲＥ２、ＰＩＷＩＬ４、ＺＳＣＡＮ２２、ＩＣＡＭ１、ＣＨＤ９、ＬＰＩＮ２、ＳＥＴＤ８、ＺＣ３Ｈ１２Ａ、ＵＬＢＰ３、ＩＬ１５ＲＡ、ＨＬＡ－ＤＱＢ２、ＬＣＰ１、ＣＨＰ、ＲＵＮＸ３、ＴＭＥＭ４３、ＲＥＥＰ４、ＭＥＦ２Ｄ、ＡＢＬ１、ＴＭＥＭ３９Ａ、ＰＣＢＰ４、ＰＬＣＤ１、ＣＨＳＴ１２、ＲＡＳＧＲＰ１、Ｃ１ｏｒｆ５８、Ｃ１１ｏｒｆ６３、Ｃ６ｏｒｆ１２９、ＦＨＯＤ１、ＤＫＦＺｐ４３４Ｆ１４２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＩＴＰＲ３、ＢＴＧ３、Ｃ４ｏｒｆ５０、ＣＮＮＭ３、ＩＦＩ１６、ＡＫ１、ＣＤＫ２ＡＰ１、ＲＥＬ、ＢＣＬ２Ｌ１、ＭＶＤ、ＴＴＣ３９Ｃ、ＰＬＥＫＨＡ２、ＦＫＢＰ１１、ＥＭＬ４、ＦＡＮＣＡ、ＣＤＣＡ４、ＦＵＣＡ２、ＭＦＳＤ１０、ＴＢＣＤ、ＣＡＰＮ２、ＩＱＧＡＰ１、ＣＨＳＴ１１、ＰＩＫ３Ｒ１、ＭＹＯ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＤＬＧ３、ＭＸＤ４、ＲＡＬＧＤＳ、Ｓ１ＰＲ５、ＷＳＢ２、ＣＣＲ３、ＴＩＰＡＲＰ、ＳＰ１４０、ＣＤ１５１、ＳＯＸ１３、ＫＲＴＡＰ５－２、ＮＦ１、ＰＥＡ１５、ＰＡＲＰ８、ＲＮＦ１６６、ＵＥＶＬＤ、ＬＩＭＫ１、ＣＡＣＮＢ１、ＴＭＸ４、ＳＬＣ６Ａ６、ＬＢＡ１、ＳＶ２Ａ、ＬＬＧＬ２、ＩＲＦ１、ＰＰＰ２Ｒ５Ｃ、ＣＤ９９、ＲＡＰＧＥＦ１、ＰＰＰ４Ｒ１、ＯＳＢＰＬ７、ＦＯＸＰ４、ＳＬＡ２、ＴＢＣ１Ｄ２Ｂ、ＳＴ７、ＪＡＺＦ１、ＧＧＡ２、ＰＩ４Ｋ２Ａ、ＣＤ６８、ＬＰＧＡＴ１、ＳＴＸ１１、ＺＡＫ、ＦＡＭ１６０Ｂ１、ＲＯＲＡ、Ｃ８ｏｒｆ８０、ＡＰＯＢＥＣ３Ｆ、ＴＧＦＢＩ、ＤＮＡＪＣ１、ＧＰＲ１１４、ＬＲＰ８、ＣＤ６９、ＣＭＩ、ＮＡＴ１３、ＴＧＦＢ１、ＦＬＪ０００４９、ＡＮＴＸＲ２、ＮＲ４Ａ３、ＩＬ１２ＲＢ１、ＮＴＮＧ２、ＲＤＸ、ＭＬＬＴ４、ＧＰＲＩＮ３、ＡＤＣＹ９、ＣＤ３００Ａ、ＳＣＤ５、ＡＢＩ３、ＰＴＰＮ２２、ＬＧＡＬＳ１、ＳＹＴＬ３、ＢＭＰＲ１Ａ、ＴＢＫ１、ＰＭＡＩＰ１、ＲＡＳＧＥＦ１Ａ、ＧＣＮＴ１、ＧＡＢＡＲＡＰＬ１、ＳＴＯＭ、ＣＡＬＨＭ２、ＡＢＣＡ２、ＰＰＰ１Ｒ１６Ｂ、ＳＹＮＥ２、ＰＡＭ、Ｃ１２ｏｒｆ７５、ＣＬＣＦ１、ＭＸＲＡ７、ＡＰＯＢＥＣ３Ｃ、ＣＬＳＴＮ３、ＡＣＯＴ９、ＨＩＰ１、ＬＡＧ３、ＴＮＦＡＩＰ３、ＤＣＢＬＤ１、ＫＬＦ６、ＣＡＣＮＢ３、ＲＮＦ１９Ａ、ＲＡＢ２７Ａ、ＦＡＤＳ３、ＤＬＧ５、ＡＰＯＢＥＣ３Ｄ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＡＣＴＮ４、ＴＢＫＢＰ１、ＡＴＸＮ１、ＡＲＡＰ２、ＡＲＨＧＥＦ１２、ＦＡＭ５３Ｂ、ＭＡＮ１Ａ１、ＦＡＭ３８Ａ、ＰＬＸＮＣ１、ＧＲＬＦ１、ＳＲＧＮ、ＨＬＡ－ＤＲＢ５、Ｂ４ＧＡＬＴ５、ＷＩＰＩ１、ＰＴＰＲＪ、ＳＬＦＮ１１、ＤＵＳＰ２、ＡＮＸＡ５、ＡＨＮＡＫ、ＮＥＯ１、ＣＬＩＣ１、ＥＩＦ２Ｃ４、ＭＡＰ３Ｋ５、ＩＬ２ＲＢ、ＰＬＥＫＨＧ１、ＭＹＯ６、ＧＴＤＣ１、ＥＤＡＲＡＤＤ、ＧＡＬＭ、ＴＡＲＰ、ＡＤＡＭ８、ＭＳＣ、ＨＮＲＰＬＬ、ＳＹＴ１１、ＡＴＰ２Ｂ４、ＮＨＳＬ２、ＭＡＴＫ、ＡＲＨＧＡＰ１８、ＳＬＦＮ１２Ｌ、ＳＰＡＴＳ２Ｌ、ＲＡＢ２７Ｂ、ＰＩＫ３Ｒ３、ＴＰ５３ＩＮＰ１、ＭＢＯＡＴ１、ＧＹＧ１、ＫＡＴＮＡＬ１、ＦＡＭ４６Ｃ、ＺＣ３ＨＡＶ１Ｌ、ＡＮＸＡ２Ｐ２、ＣＴＮＮＡ１、ＮＰＣ１、Ｃ３ＡＲ１、ＣＲＩＭ１、ＳＨ２Ｄ２Ａ、ＥＲＮ１、ＹＰＥＬ１、ＴＢＸ２１、ＳＬＣ１Ａ４、ＦＡＳＬＧ、ＰＨＡＣＴＲ２、ＧＡＬＮＴ３、ＡＤＲＢ２、ＰＩＫ３ＡＰ１、ＴＬＲ３、ＰＬＥＫＨＡ５、ＤＵＳＰ１０、ＧＮＡＯ１、ＰＴＧＤＲ、ＦＲＭＤ４Ｂ、ＡＮＸＡ２、ＥＯＭＥＳ、ＣＡＤＭ１、ＭＡＦ、ＴＰＲＧ１、ＮＢＥＡＬ２、ＰＰＰ２Ｒ２Ｂ、ＰＥＬＯ、ＳＬＣ４Ａ４、ＫＬＲＦ１、ＦＯＳＬ２、ＲＧＳ２、ＴＧＦＢＲ３、ＰＲＦ１、ＭＹＯ１Ｆ、ＧＡＢ３、Ｃ１７ｏｒｆ６６、ＭＩＣＡＬ２、ＣＹＴＨ３、ＴＯＸ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＳＹＮＥ１、ＷＥＥ１、ＰＹＨＩＮ１、Ｆ２Ｒ、ＰＬＤ１、ＴＨＢＳ１、ＣＤ５８、ＦＡＳ、ＮＥＴＯ２、ＣＸＣＲ６、ＳＴ６ＧＡＬＮＡＣ２、ＤＵＳＰ４、ＡＵＴＳ２、Ｃ１ｏｒｆ２１、ＫＬＲＧ１、ＴＮＩＰ３、ＧＺＭＡ、ＰＲＲ５Ｌ、ＰＲＤＭ１、ＳＴ８ＳＩＡ６、ＰＬＸＮＤ１、ＰＴＰＲＭ、ＧＦＰＴ２、ＭＹＢＬ１、ＳＬＡＭＦ７、ＦＬＪ１６６８６、ＧＮＬＹ、ＺＥＢ２、ＣＳＴ７、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＣＣＬ５、ＫＬＲＤ１、ＫＬＲＢ１、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上の遺伝子を含む（例えば、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１７（１０）：１２９０－９７（２０１１）を参照のこと）。

【0108】

本明細書で更に説明されているように（例えば、実施例１２を参照）、いくつかの態様では、細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の特性は、Ｔ細胞活性化（本明細書では「ＴＡＣＴ遺伝子」とも呼ばれる）、Ｔ細胞前駆疲弊（本明細書では「ＴＰＥ遺伝子」とも称される）、Ｔ細胞終末疲弊（本明細書では「ＴＴＥ遺伝子」とも呼ばれる）に関連する様々な遺伝子セットの上方調節及び／または下方調節を比較することによって、トランスクリプトーム分析を使用して評価され得る。

【0109】

いくつかの態様では、終末疲弊Ｔ細胞は、Ｏｌｉｖｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５９６：１１９－１２５（２０２１）に記載されているＴＴＥ関連遺伝子セットを使用して特徴付けられる。いくつかの態様では、ＴＴＥ細胞の遺伝子シグネチャは、以下から選択される遺伝子の１つ以上または全てを含む：ＫＲＴ８６、ＲＤＨ１０、ＡＣＰ５、ＣＸＣＲ６、ＨＭＯＸ１、ＬＡＹＮ、ＣＬＩＣ３、ＨＡＶＣＲ２、ＡＣ２４３８２９．４、ＰＲＦ１、ＳＬＣ２Ａ８、ＣＨＳＴ１２、ＧＡＬＮＴ２、ＥＮＴＰＤ１、ＬＡＧ３、ＧＺＭＢ、ＰＤＣＤ１、ＣＡＲＤ１６、ＣＴＬＡ４、ＳＬＡ２、ＣＤ２７、ＲＡＬＡ、ＶＣＡＭ１、ＳＹＮＧＲ２、ＮＫＧ７、ＬＳＰ１、ＣＣＬ５、ＲＡＲＲＥＳ３、ＣＤ７、ＣＴＳＷ、ＭＴＳＳ１、ＰＴＭＳ、ＢＡＴＦ、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＡＫＡＰ５、ＣＤ３８、ＲＡＢ２７Ａ、ＧＺＭＨ、ＩＧＦＬＲ１、ＡＴＰ８Ｂ４、ＣＤ６３、ＨＯＰＸ、ＴＮＦＲＳＦ１８、ＡＤＧＲＧ１、ＰＬＰＰ１、ＣＳＦ１、ＴＮＦＳＦ１０、ＳＮＡＰ４７、ＬＩＮＣ０１８７１、ＭＹＯ１Ｅ、ＺＢＥＤ２、ＡＨＩ１、ＡＢＩ３、ＦＡＳＬＧ、ＴＹＭＰ、ＺＢＴＢ３８、ＣＴＳＢ、ＰＬＳＣＲ１、ＡＦＡＰ１Ｌ２、ＩＴＧＡＥ、ＴＮＳ３、ＤＵＳＰ１６、ＣＡＳＰ１、ＣＡＲＳ、ＤＵＳＰ５、ＩＦＩＴ１、ＳＬＣ１Ａ４、ＧＯＬＩＭ４、ＲＳＡＤ２、ＤＮＰＨ１、ＮＢＬ１、ＡＣＯＴ９、ＡＢＨＤ６、ＯＡＳ１、ＳＬＣ２７Ａ２、ＺＢＰ１、ＣＤ２００Ｒ１、ＯＡＳ３、ＣＭＰＫ２、ＴＮＦＳＦ４、ＰＯＬＲ１Ｅ、ＣＡＤＭ１、ＨＥＬＺ２、ＳＹＴＬ２、ＡＧＰＡＴ２、ＵＢＥ２Ｆ、ＧＩＭＡＰ６、ＺＢＴＢ３２、ＲＩＮ３、ＰＬＥＫＨＦ１、ＣＨＰＦ、ＰＡＣＳＩＮ２、ＡＢＣＢ１、ＳＰＡＴＳ２Ｌ、ＵＳＰ１８、ＴＭＥＭ９、ＫＬＲＣ１、ＭＰＳＴ。いくつかの態様では、前駆疲弊Ｔ細胞（ＴＰＥ）は、Ｏｌｉｖｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５９６：１１９－１２５（２０２１）に記載されているＴＰＥ関連遺伝子セットを使用して特徴付けられる。いくつかの態様では、ＴＰＥ細胞の遺伝子シグネチャは、以下から選択される遺伝子の１つ以上または全てを含む：ＦＸＹＤ６、ＣＡＶ１、ＧＮＧ４、ＸＣＬ１、ＣＲＴＡＭ、ＣＸＣＬ１３、ＧＥＭ、ＸＣＬ２、ＦＸＹＤ２、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＬＡＮＣＬ２、ＲＡＳＳＦ４、ＢＡＧ３、ＨＳＰＡ１Ｂ、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＨＳＰＢ１、ＦＡＢＰ５、ＭＳ４Ａ６Ａ、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＨＳＰＡ１Ａ、ＲＧＳ２、ＤＲＡＩＣ、ＣＤ７４、ＨＳＰＤ１、ＨＳＰＡ６、ＨＳＰＥ１、ＣＤ８２、ＴＯＸ、ＣＤ２００、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＮＲ４Ａ２、ＶＣＡＭ１、ＢＥＸ３、ＡＩＦ１、ＤＮＡＪＡ１、ＨＳＰＨ１、ＤＮＡＪＢ１、ＨＩＰＫ２、ＬＨＦＰＬ６、ＨＬＡ－ＤＭＡ、ＧＫ、ＴＳＨＺ２、ＬＰＬ、Ｃ１６ｏｒｆ４５、ＺＦＡＮＤ２Ａ、ＣＤ８０、ＥＴＶ１、ＮＭＢ、ＤＥＤＤ２、ＣＭＣ１、ＰＯＮ２、ＳＥＭＡ４Ａ、ＥＮＣ１、ＧＲＡＭＤ１Ａ、ＭＹＬ６Ｂ、ＢＣＡＴ１、ＡＲＭＨ１、ＴＩＡＭ１、ＰＩＫＦＹＶＥ、ＭＲＰＬ１８、ＩＮＰＰ５Ｆ、ＬＭＣＤ１、ＳＥＳＮ３、ＣＣＤＣ６、ＫＩＡＡ１３２４、ＣＨＮ１、ＡＮＫＲＤ１０、ＣＤ７０、ＰＲＲＧ４、ＴＮＦＳＦ４、ＣＯＲＯ１Ｂ、ＤＮＡＪＢ４、ＭＡＧＥＨ１、ＩＣＡＭ１、ＧＧＴ１、ＮＩＮＪ２、ＢＬＶＲＡ、ＦＡＡＨ２、ＴＯＸ２、ＳＬＫ、ＣＣＤＣ１４１、ＡＴＦ３、ＩＮＰＰ１、ＦＡＭ３Ｃ、ＧＡＤＤ４５Ｇ、ＡＰＰ、ＭＡＬ、ＳＩＴ１、ＤＲＡＭ１、ＣＬＥＣＬ１、ＭＤＦＩＣ、ＰＭＣＨ、ＨＬＡ－ＤＭＢ、ＰＨＦ６、ＡＦＡＰ１Ｌ２、ＢＴＮ２Ａ２、ＣＣＬ４Ｌ２。いくつかの態様では、活性化Ｔ細胞（ＴＡＣＴ）は、Ｏｌｉｖｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５９６：１１９－１２５（２０２１）に記載されているＴＡＣＴ関連遺伝子セットを使用して特徴付けられる。いくつかの態様では、活性化Ｔ細胞の遺伝子シグネチャは、以下から選択される遺伝子の１つ以上または全てを含む：ＥＧＲ１、ＨＳＰＡ６、ＦＯＳ、ＨＳＰＡ１Ｂ、ＧＡＤＤ４５Ｂ、ＮＲ４Ａ１、ＦＯＳＢ、ＡＴＦ３、ＤＮＡＪＢ１、ＤＵＳＰ１、ＪＵＮＢ、ＣＤ６９、ＮＲ４Ａ２、ＮＦＫＢＩＡ、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ、ＫＬＦ６、ＤＮＡＪＡ１、ＪＵＮ、ＳＲＳＦ７、ＳＬＣ２Ａ３、ＺＦＰ３６Ｌ１、ＩＥＲ２、ＨＳＰＡ１Ａ、ＥＩＦ４Ａ２、ＩＤ１、ＩＦＲＤ１、ＣＣＮＬ１、ＲＳＲＰ１、ＳＥＲＴＡＤ１、ＤＥＤＤ２、ＫＬＦ１０、ＡＬ１１８５１６．１、ＫＬＦ２、ＺＦＡＮＤ２Ａ、ＣＬＫ１、ＲＳＲＣ２、ＩＥＲ３、ＢＴＧ２、ＭＹＬＩＰ、ＭＡＦＦ、ＣＳＲＮＰ１、ＩＤ２、ＺＣ３Ｈ１２Ａ、ＢＡＧ３、ＳＮＨＧ１２、ＴＮＦ、ＤＤＩＴ４、ＳＧＫ１、ＳＮＨＧ１５、ＤＮＡＪＢ４、ＮＲ４Ａ３、ＮＦＫＢＩＤ、ＳＣＭＬ１、ＲＡＳＤ１、ＡＴＦ４、ＡＲＥＧ、ＲＡＳＧＥＦ１Ｂ、ＡＣ０２０９１６．１、ＤＤＩＴ３、ＳＮＨＧ８、ＣＩＴＥＤ２、ＴＸＮＩＰ、ＴＯＢ１、ＰＩＭ２、ＳＯＣＳ３、ＧＡＤＤ４５Ｇ、ＲＧＳ１６、ＴＩＰＡＲＰ、ＮＦＫＢＩＺ、ＣＣＬ４、ＣＤ８３、ＰＰＰ１Ｒ１０、ＣＣＬ４Ｌ２、ＳＥＳＮ２、ＣＨＭＰ１Ｂ、ＬＥＦ１、ＣＳＫＭＴ、ＨＥＸＩＭ１、ＨＳＰＡ２、ＭＲＰＬ１８、ＲＢＫＳ、ＣＤ５５、ＡＲＲＤＣ２、ＳＣ５Ｄ、ＦＡＭ５３Ｃ、ＡＴＰ２Ｂ１－ＡＳ１、ＩＦＮＧ、ＭＹＣ、ＴＳＣ２２Ｄ２、ＳＥＲＰＩＮＨ１、ＬＲＩＦ１、ＡＲＲＤＣ３、ＩＬＦ３－ＤＴ、ＩＮＴＳ６、ＺＮＦ１０、ＰＲＭＴ９、ＡＴＭ、ＳＥＬＬ、ＡＣ２４３９６０．１。

【0110】

本明細書で使用されるとき、「基本」培地という用語は、本明細書に開示されている追加の要素、例えば、カリウム、ナトリウム、カルシウム、グルコース、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの任意の組み合わせのうち１つ以上で補完されている任意の出発培地を指す。基本培地は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養するための任意の培地であり得る。いくつかの態様では、基本培地は、平衡塩類溶液（例えば、ＰＢＳ、ＤＰＢＳ、ＨＢＳＳ、ＥＢＳＳ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、クリック培地、最小必須培地（ＭＥＭ）、基本培地イーグル（ＢＭＥ）、Ｆ－１０、Ｆ－１２、ＲＰＭＩ１６４０、グラスゴー最小必須培地（ＧＭＥＭ）、アルファ最小必須培地（アルファＭＥＭ）、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）、Ｍ１９９、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）Ｐｒｏ、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖基本培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＡＩＭ Ｖ（商標）、ＴＥＸＭＡＣＳ（商標）培地、ＰＲＩＭＥ－ＸＶ（登録商標）Ｔ細胞ＣＤＭ、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５（Ｌｏｎｚａ）、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）、ＴＩＬ増殖培地、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、基本培地は無血清である。いくつかの態様では、基本培地はＰＲＩＭＥ－ＸＶ（登録商標）Ｔ細胞ＣＤＭを含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）Ｐｒｏを含む。いくつかの態様では、基本培地は、更に免疫細胞血清置換（ＩＣＳＲ）を含む。例えば、いくつかの態様では、基本培地は、ＩＣＳＲで補完したＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＣＳＲで補完したＡＩＭ Ｖ（商標）、ＩＣＳＲで補完ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ、ＩＣＳＲで補完ＲＰＭＩ、ＩＣＳＲで補完したＴＥＸＭＡＣＳ（商標）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、好適な基本培地には、クリック培地、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）（ＣＴＳ（商標））培地、ＳＴＥＭＬＩＮＥ（登録商標）Ｔ細胞増殖培地（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＡＩＭ Ｖ（商標）培地（ＣＴＳ（商標））、ＴＥＸＭＡＣＳ（商標）培地（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（登録商標）培地（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＰＲＩＭＥ－ＸＶ（登録商標）Ｔ細胞増殖ＸＳＦＭ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、イスコフ培地、及び／またはＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。いくつかの態様では、基本培地はＮａＣｌ非含有ＣＴＳ（商標）ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）を含む。いくつかの態様では、基本培地はＮａＣｌに加えて１以上のナトリウム塩を含む。

【0111】

本明細書で使用されるとき、「サイトカイン」という用語は、細胞間の相互作用及び伝達に対して特定の効果を有する、細胞によって放出される小さな分泌タンパク質を指す。サイトカインの非限定的な例としては、インターロイキン（例えば、インターロイキン（ＩＬ）－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－３、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－１０、ＩＬ－２０、ＩＬ－１４、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－２１及びＩＬ－２３）、インターフェロン（ＩＦＮ、例えば、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、及びＩＦＮ－γ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーメンバー、及び形質転換増殖因子（ＴＧＦ）ファミリーメンバーが挙げられる。本開示のいくつかの態様は、サイトカインを含む培地中において本明細書で開示されている免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞、または１つ以上の操作された免疫細胞を培養する及び／または増殖させる方法を対象とする。いくつかの態様では、サイトカインはインターロイキンである。いくつかの態様では、サイトカインはＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、またはそれらの任意の組み合わせを含む。ＩＬ－２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ６０５６８）は、抗原刺激または分裂促進刺激に応答してＴ細胞によって産生される。ＩＬ－２は、Ｔ細胞増殖と、免疫応答の制御に重要な他の活性とを刺激することが知られている。ＩＬ－７（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ１３２３２）はリンパ球前駆細胞の増殖を刺激することができる造血成長因子である。ＩＬ－７はＢ細胞成熟の特定の段階中に増殖にて役割を担うと考えられている。ＩＬ－１５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ４０９３３）はＩＬ－２と同様にＴリンパ球の増殖を刺激するサイトカインである。ＩＬ－２１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ９ＨＢＥ４）は免疫調節活性を持つサイトカインである。ＩＬ－２１は、自然免疫と適応免疫との間の移行を促進し、Ｂ細胞にてＩｇＧ１及びＩｇＧ３の産生を誘導すると考えられている。ＩＬ－２１はまた、ＩＬ－１５との相乗作用でナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖及び成熟にて役割を担う場合があり、ＩＬ－２１は、活性化刺激に応答して成熟Ｂ細胞及びＴ細胞の増殖を調節する場合がある。ＩＬ－１５及びＩＬ－１８との相乗作用では、ＩＬ－１５はＴ細胞及びＮＫ細胞中にてインターフェロンガンマ産生も刺激し、ＩＬ－２１はＴ細胞が介在する免疫応答にて樹状細胞の活性化及び成熟を阻害する場合もある。

【0112】

本明細書で使用される場合、「投与すること」は、様々な方法及び送達システムのいずれかを使用して、治療剤または治療剤を含む組成物を対象に物理的に導入することを指す。本明細書に記載されている治療剤（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎポリペプチドを発現するように改変され、本明細書に記載されているように培養された免疫細胞または免疫細胞の集団）の様々な投与経路には、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊髄、または例えば、注射または注入による他の非経口投与経路が挙げられる。

【0113】

「非経口投与」という語句は、本明細書で使用されるとき、経腸投与及び局所投与以外の、通常は注射による投与方法を意味し、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、腫瘍内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、気管内、経肺、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、心室内、硝子体内、硬膜外、及び胸骨内の注射及び注入、ならびにインビボエレクトロポレーションが挙げられるが、これらに限定されない。

【0114】

代替的に、本明細書に記載されている治療剤（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎポリペプチドを発現するように改変され、本明細書に記載されているように培養された免疫細胞）は、局所、表皮などの非経口経路、または粘膜の投与経路、例えば、鼻腔内、経口、経膣、直腸内、舌下、または局所を介して投与され得る。また、投与は、例えば、１回、複数回、及び／または１つ以上の長期間にわたって実施され得る。

【0115】

本明細書で使用されるとき、「細胞操作」または「細胞改変」（その誘導体を含む）は、本明細書に開示されている細胞、例えば、免疫細胞の標的化された改変を指す。いくつかの態様では、細胞操作は、ウイルス遺伝子操作、非ウイルス遺伝子操作、Ｔ細胞機能を改善する１つ以上の内在性遺伝子の腫瘍特異的標的化（例えば、キメラ結合タンパク質）導入を可能にする受容体の導入、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞の機能を改善する１つ以上の合成遺伝子（例えば、改変されていない対応する細胞と比べて、免疫細胞がｃ－Ｊｕｎの発現の増加を呈するような、ｃ－Ｊｕｎをコードするポリヌクレオチド）の導入、またはそれらの任意の組み合わせを含む。本開示の他の場所で更に説明されるように、いくつかの態様では、細胞は、転写活性化因子（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムベースの転写活性化因子）を用いて操作または改変され得、転写活性化因子は、目的のタンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎ）の内在性発現を誘導及び／または増加させることが可能である。

【0116】

本明細書で使用するとき、「抗原」という用語は、タンパク質、ペプチド、またはハプテンなどの任意の天然または合成の免疫原性物質を意味する。本明細書で使用されるとき、「同族抗原」という用語は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）が認識することによって免疫細胞の活性化を誘導する（例えば、サイトカイン産生のようなエフェクター機能を誘導する、及び／または細胞増殖のための細胞内シグナルを始動させる）抗原を指す。いくつかの態様では、抗原は腫瘍抗原を含む。いくつかの態様では、抗原はネオ抗原を含む。

【0117】

「がん」は、体内の異常細胞の無制御の増殖を特徴とする様々な疾患の広範な群を指す。無秩序な細胞の分裂及び増殖は、隣接組織に浸潤し、リンパ系または血流を通って身体の遠位部に転移することもできる悪性腫瘍の形成をもたらす。「がん」は、本明細書で使用されるとき、原発性がん、転移がん及び再発がんを含む。別途示されない限り、「がん」及び「腫瘍」という用語は相互交換可能に使用することができる。

【0118】

「血液悪性腫瘍」または「血液癌」という用語は、造血組織及びリンパ組織の哺乳類のがん及び腫瘍を指す。血液悪性腫瘍の非限定的な例には、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡｍＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＩＶＩＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫、及び非ホジキンリンパ腫を含む、血液、骨髄、リンパ節、及びリンパ系の組織を冒すものが挙げられる。血液悪性腫瘍は、「液性腫瘍」とも呼ばれる。液性腫瘍癌としては、白血病、骨髄腫、及びリンパ腫に加えて、他の血液悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。

【0119】

「固形腫瘍」は、本明細書で使用されるとき、組織の異常な腫瘤を指す。固形腫瘍は、良性または悪性の場合がある。固形腫瘍の非限定的な例としては、肉腫、癌腫、及びリンパ腫、例えば、肺、乳房、前立腺、結腸、直腸、及び膀胱のがんなどが挙げられる。固形腫瘍の組織構造は、実質（がん細胞）及びがん細胞が分散し、関連する微小環境を提供する場合がある関連する間質細胞を含む相互依存性組織区画を含む。

【0120】

いくつかの態様では、がんは、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイング腫瘍、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、喉頭及び下咽頭癌、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、上咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部組織の肉腫、基底細胞及び扁平上皮細胞皮膚癌、黒色腫、小腸癌、胃癌、精巣癌、咽頭癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰部癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍ならびにがん治療によって引き起こされる続発性のがんから選択される。いくつかの態様では、がんは、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、粘液／円形細胞型脂肪肉腫、骨肉腫、アバメシー肉腫、脂肪肉腫、脂肪肉腫、肺胞軟部肉腫、エナメル上皮繊維肉腫、ブドウ状肉腫、緑色腫肉腫、絨毛癌、胎児性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、Ｂ細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞の免疫芽球性肉腫、イエンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパー細胞肉腫、血管肉腫、白血球肉腫、悪性間葉腫肉腫、傍骨性肉腫、網状赤血球肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢胞性肉腫、滑膜肉腫、または毛細血管拡張性肉腫から選択される。いくつかの態様では、がんは、末端黒子型黒色腫、無色素性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディング・パッセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、悪性黒色腫、転移性黒色腫、結節性黒色腫、爪下黒色腫、または表在拡大型黒色腫から選択される。いくつかの態様では、がんは、腺房癌、小葉癌、腺嚢胞癌、腺様嚢胞癌、腺癌、副腎皮質癌、肺胞癌、肺胞細胞癌、基底細胞癌、基底細胞癌、類基底癌、基底扁平上皮癌、気管支肺胞癌、細気管支癌、気管支原性肺癌、大脳様癌、胆管細胞癌、絨毛癌、膠様癌、面皰癌、子宮体部癌、篩状癌、鎧状癌、皮膚癌、円柱上皮癌、円柱細胞癌、管癌、硬性癌、胎児性癌、脳様癌、類表皮癌腫、腺上皮癌、外方発育癌、潰瘍癌、線維癌、膠様癌、膠様癌、巨細胞癌、巨細胞癌、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母組織癌、血様癌、肝細胞癌、ヒュルトレ細胞癌、硝子状癌、副腎様癌、乳児性胎児性癌、上皮内癌、表皮内癌、上皮内癌、クロムペッヘル癌、クルチツキー細胞癌、大細胞癌、レンズ状癌、レンズ状癌、脂肪腫様癌、リンパ上皮癌、髄様癌、髄様癌、黒色癌、軟性癌、粘液性癌、粘液分泌癌、粘液細胞癌、粘表皮癌、粘液癌、粘液性癌、粘液腫様癌、上咽頭癌、燕麦細胞癌、骨化性癌、類骨癌、乳頭癌、門脈周囲癌、前浸潤癌、有棘細胞癌、軟性癌、腎臓の腎細胞癌、予備細胞癌、肉腫様癌、シュナイダー癌、硬癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、バレイショ状癌、球状細胞癌、紡錘細胞癌、海綿様癌、扁平上皮癌、扁平上皮細胞癌、紐様癌、毛細血管拡張癌、毛細血管拡張癌、移行上皮癌、結節癌、結節癌、疣状癌、または絨毛癌から選択される。いくつかの態様では、がんは、白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、乳癌、卵巣癌、肺癌、横紋筋肉腫、原発性血小板増加症、原発性マクログロブリン血症、小細胞肺腫瘍、原発性脳腫瘍、胃癌、結腸癌、悪性膵インスリノーマ、悪性カルチノイド、膀胱癌、前悪性皮膚病変、精巣癌、リンパ腫、甲状腺癌、甲状腺乳頭癌、神経芽細胞腫、神経内分泌癌、食道癌、尿生殖路癌、悪性高カルシウム血症、子宮頸癌、子宮内膜癌、副腎皮質癌、前立腺癌、ミュラー管癌、卵巣癌、腹膜癌、卵管癌、または子宮体部漿液性腺癌から選択される。いくつかの態様では、がんは、転移性黒色腫、非小細胞肺癌、骨髄腫、食道癌、滑膜肉腫、胃癌、乳癌、肝細胞癌、頭頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。

【0121】

本明細書で使用されるとき、「免疫応答」という用語は、外来性作用物質に対する脊椎動物内の生物学的応答を指し、この応答は、これらの作用物質及びそれらに起因する疾患から生物を保護する。免疫応答には、免疫系の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞または好中球）及びこれらの細胞のいずれかまたは肝臓で産生される可溶性高分子（抗体、サイトカイン、及び補体を含む）の作用によって介在され、この応答は、侵入病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん性細胞もしくは他の異常細胞、または自己免疫もしくは病的炎症の場合には、正常なヒトの細胞もしくは組織の選択的標的化、それへの結合、損傷、破壊、及び／または脊椎動物の身体からの排除をもたらすものである。免疫反応には、例えば、Ｔ細胞、例えば、エフェクターＴ細胞もしくはＴｈ細胞、例えば、ＣＤ４^＋もしくはＣＤ８^＋Ｔ細胞の活性化もしくは阻害、またはＴｒｅｇ細胞の阻害が挙げられる。本明細書で使用されるとき、「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」という用語は相互交換可能であり、胸腺によって産生または処理されるあらゆるリンパ球を指す。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＮＫＴ細胞である。

【0122】

本明細書で使用されるとき、「抗腫瘍免疫応答」という用語は腫瘍抗原に対する免疫応答を指す。

【0123】

「対象」は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語には、非ヒト霊長動物、ヒツジ、イヌ、ならびにマウス、ラット、及びモルモットのような齧歯動物などの脊椎動物が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様では、対象はヒトである。「対象」、「患者」、「個体」及び「宿主」という用語は本明細書では相互交換可能に使用される。本明細書で使用されるとき、「それを必要とする対象」という語句は、本明細書に記載されているように、例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎポリペプチドを発現するように改変され、本明細書で提供されている方法を使用して培養された、例えば、免疫細胞の投与から、腫瘍の増殖を制御するという恩恵を受けることになる、哺乳動物対象などの対象を含む。

【0124】

「治療有効量」または「治療上有効な投与量」という用語は、所望の生物学的結果、治療結果、及び／または予防結果をもたらす作用物質（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎポリペプチドを発現するように改変され、本明細書に記載されているように培養された免疫細胞）の量を指す。結果は、疾患の徴候、症状、もしくは原因のうちの１つ以上の低減、回復、緩和、減弱、遅延、及び／または軽減、または生物学的システムの任意の他の所望の変化であり得る。固形腫瘍に関して、有効量は、腫瘍を縮小させる、及び／または腫瘍の成長速度を減少させる（腫瘍成長を抑制するなど）、あるいは他の望ましくない細胞増殖を防止または遅延させるのに十分な量を含む。いくつかの態様では、有効量は、腫瘍の進展を遅延させるのに十分な量である。いくつかの態様では、有効量は、腫瘍の再発を予防または遅延させるのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。

【0125】

有効量の組成物（例えば、本明細書に記載されているような免疫細胞、例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎポリペプチドを発現するように改変され、本明細書に記載されているように培養された免疫細胞）は、例えば、（ｉ）がん細胞の数を低減することができ、（ｉｉ）腫瘍サイズを低減することができ、（ｉｉｉ）末梢器官へのがん細胞の浸潤を抑制し、遅延させ、ある程度まで減速させて、停止することができ、（ｉｖ）阻害することができ（すなわち、腫瘍転移をある程度まで減速させ、停止することができ）、（ｖ）腫瘍増殖を阻害することができ、（ｖｉ）腫瘍の発生及び／または再発を防止もしくは遅延させることができ、及び／または（ｖｉｉ）がんと関連する症状のうち１つ以上をある程度まで緩和することができる。

【0126】

いくつかの態様では、「治療有効量」は、本明細書に開示されている組成物（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎポリペプチドを発現するように改変され、本明細書に記載されているように培養された免疫細胞）の量であり、これは進行性固形腫瘍のようながんの著しい減少またはがんの進行の減速（退縮）をもたらすことが臨床的に証明されている。疾患退縮を促進する本開示の治療剤（例えば、本明細書に記載されているように改変され、かつ培養された免疫細胞）の能力は、当業者に既知の様々な方法を使用して、例えば、臨床試験中のヒト対象において、ヒトでの効力を予測する動物モデル系において、またはインビトロアッセイで薬剤の活性をアッセイすることによって評価され得る。

【0127】

治療に関する「有効な」及び「有効性」という用語は、薬理学的有効性及び生理学的安全性の双方を含む。薬理学的有効性は、本明細書に開示されている組成物（例えば、本明細書に記載されているように改変され、かつ培養された免疫細胞）が患者においてがん退縮を促進する能力を指す。生理学的安全性は、本明細書に開示されている組成物（例えば、本明細書に記載されているように改変され、かつ培養された免疫細胞）の投与に起因する毒性、または細胞、臓器、及び／または生物のレベルでの他の有害生理作用（有害作用）のレベルを指す。

【0128】

「キメラ抗原受容体」及び「ＣＡＲ」という用語は、本明細書で使用されるとき、ポリペプチドのセット、通常、最も単純な形態で２つのポリペプチドを指し、これは、免疫エフェクター細胞における場合、標的細胞、通常がん細胞に対する特異性、及び細胞内シグナル生成を細胞に提供する。いくつかの態様では、ＣＡＲは、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び下で定義される刺激分子及び／または共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では、「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドのセットは、同じポリペプチド鎖にあり、例えば、キメラ融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、ポリペプチドのセットは、互いに隣接しておらず、例えば、異なるポリペプチド鎖にある。いくつかの態様では、ポリペプチドのセットには、二量化分子が存在すると、ポリペプチドを互いに結合させ得、例えば、抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに結合させ得る二量化スイッチが含まれる。いくつかの態様では、ＣＡＲの刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体に関連するゼータ鎖（例えば、ＣＤ３ゼータ）である。いくつかの態様では、細胞質シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３－ゼータの一次シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの態様では、細胞質シグナル伝達ドメインは、以下に定義される少なくとも１つの共刺激分子に由来する１以上の機能性シグナル伝達ドメインを更に含む。いくつかの態様では、共刺激分子は、本明細書に記載されている共刺激分子、例えば、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、及び／またはＣＤ２８から選択される。

【0129】

いくつかの態様では、ＣＡＲは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質であって、抗原結合ドメイン及び膜貫通ドメインは、ＣＡＲスペーサーによって連結されている、キメラ融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＡＲスペーサーを介して膜貫通ドメインに連結された抗原結合ドメインならびに共刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＡＲスペーサーを介して膜貫通ドメインに連結された抗原結合ドメインならびに１以上の共刺激分子（複数可）に由来する２つの機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＡＲスペーサーを介して膜貫通ドメインに連結された抗原結合ドメインならびに１以上の共刺激分子（複数可）に由来する少なくとも２つの機能性シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能性シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＣＡＲは、ＣＡＲのアミノ末端（Ｎ末端）における任意のリーダー配列を含む。いくつかの態様では、ＣＡＲは更に、抗原結合ドメインのＮ末端でリーダー配列を含み、リーダー配列は、任意選択で、細胞プロセシング及び細胞膜へのＣＡＲの局在化中に抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から切断される。

【0130】

キメラ抗原受容体の抗原特異的細胞外ドメインは、抗原、通常、悪性腫瘍の表面発現抗原を認識し、それに特異的に結合する。例えば、そのドメインが、約０．１ｐＭ～約１０μＭ、例えば、約０．１ｐＭ～約１μＭまたは約０．１ｐＭ～約１００ｎＭの親和性定数または相互作用の親和性（Ｋ_Ｄ）で抗原と結合する場合、抗原特異的細胞外ドメインは、抗原に特異的に結合する。相互作用の親和性を決定するための方法は、当該技術分野で既知である。本開示のＣＡＲにおける使用に好適な抗原特異的細胞外ドメインは、当該技術分野で既知である多種多様な任意の抗原結合ポリペプチドであり得る。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。ｃＡｂ ＶＨＨ（ラクダ科抗体可変ドメイン）及びそのヒト化型、ＩｇＮＡＲ ＶＨ（サメ抗体可変ドメイン）及びそのヒト化型、ｓｄＡｂ ＶＨ（単一ドメイン抗体可変ドメイン）、ならびに「ラクダ化」抗体可変ドメインなどの他の抗体ベースの認識ドメインもまた、本開示のＣＡＲにける使用に好適である。いくつかの態様では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ベースの認識ドメイン、例えば、一本鎖ＴＣＲ（ｓｃＴｖ、すなわち、ＶαＶβを含有する一本鎖２ドメインＴＣＲ）なども、本開示のキメラ結合タンパク質での使用に好適である。

【0131】

本明細書で使用されるとき、「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」という用語は、α鎖及びβ鎖の２本の異なる膜貫通ポリペプチド鎖で構成されるヘテロ二量体を指し、鎖の各々が、鎖をＴ細胞表面膜内に固定する定常領域、及びＭＨＣによって提示される抗原を認識し、それに結合する可変領域から構成される。ＴＣＲ複合体は、２つのヘテロ二量体のＣＤ３γε及びＣＤ３δε、ならびに１つのホモ二量体のＣＤ３ζを形成する６つのポリペプチドと会合し、これらがともにＣＤ３複合体を形成する。Ｔ細胞受容体操作Ｔ細胞療法は、これらの複合体を保持するＴ細胞の改変を利用して、特定の腫瘍細胞によって発現される抗原を特異的に標的とする。本明細書で使用される場合、「ＴＣＲ」という用語は、天然に存在するＴＣＲ及び操作されたＴＣＲを含む。

【0132】

本明細書で使用される場合、「操作されたＴＣＲ」または「操作されたＴ細胞受容体」は、選択され、クローニングされ、及び／またはその後に免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の集団に導入される、主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）／ペプチド標的抗原に所望の親和性で特異的に結合するように操作されているＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を指す。

【0133】

「ＴＣＲ模倣体」または「ＴＣＲｍ」は、ペプチド及びＭＨＣ－Ｉ分子の双方を含むエピトープを認識する抗原結合ドメイン（例えば、抗体に由来する）を含む操作されたキメラＴＣＲの型を指し、Ｔ細胞上のＴＣＲによるそのような複合体の認識と同様である。ＴＣＲ模倣体は更に、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員できるＴ細胞受容体モジュール（ＴＣＲＭ）を含む。例示的なＴＣＲ模倣体は、例えば、米国特許第１０，８２２，４１３号に記載されており、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0134】

「核酸」、「核酸分子」、「ヌクレオチド」、「ヌクレオチド（複数可）配列」、及び「ポリヌクレオチド」という用語は、相互交換可能に使用することができ、一本鎖形態または二本鎖らせんのいずれかでのリボヌクレオシド（アデノシン、グアノシン、ウリジン、またはシチジン；「ＲＮＡ分子」）またはデオキシリボヌクレオシド（デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、デオキシチミジン、またはデオキシシチジン；「ＤＮＡ分子」）のリン酸エステルポリマー形態、あるいはそれらの任意のリン酸エステル類似体、例えば、ホスホロチオエート及びチオエステルを指す。一本鎖核酸配列は、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）または一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を指す。二本鎖ＤＮＡ－ＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＲＮＡ螺旋が可能である。核酸分子及び特にＤＮＡまたはＲＮＡ分子という用語は、分子の一次及び二次構造のみを指し、任意の特定の三次形態に限定されない。したがって、この用語には、とりわけ、線状または環状ＤＮＡ分子（例えば、制限断片）、プラスミド、超らせんＤＮＡ、及び染色体に見られる二本鎖ＤＮＡが含まれる。特定の二本鎖ＤＮＡ分子の構造を論述する際、配列は、ＤＮＡの非転写鎖（すなわち、ｍＲＮＡと相同な配列を有する鎖）に沿って５’から３’方向の配列のみを与える通常の規則に従って本明細書で記載され得る。「組換えＤＮＡ分子」は、分子生物学的操作を受けたＤＮＡ分子である。ＤＮＡとしては、限定されるものではないが、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、合成ＤＮＡ、及び半合成ＤＮＡが挙げられる。本開示の「核酸組成物」は本明細書に記載されている１以上の核酸を含む。本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドは、単一のタンパク質をコードする単一のヌクレオチド配列（例えば、コドン最適化ｃ－Ｊｕｎヌクレオチド配列）（「単シストロン性」）を含み得る。いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドは、ポリシストロン性である（すなわち、２つ以上のシストロンを含む）。いくつかの態様では、ポリシストロン性ポリヌクレオチドのシストロンの各々は、本明細書で開示されているタンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質、キメラ結合タンパク質、またはＥＧＦＲｔ）をコードし得る。いくつかの態様では、シストロンの各々が、互いに独立して翻訳され得る。

【0135】

本明細書で使用されるとき、「ポリペプチド」という用語は、別途示されない限り、ペプチド及びタンパク質の双方を包含する。ポリペプチドには、遺伝子産物、天然に存在するポリペプチド、合成ポリペプチド、上述のもののホモログ、オルソログ、パラログ、断片及び他の等価物、変異体、ならびに類似体が挙げられる。ポリペプチドは、単一ポリペプチドであり得、または多分子複合体、例えば、二量体、三量体または四量体であり得る。それらはまた、一本鎖または複数鎖のポリペプチドを含み得る。最も一般的に、ジスルフィド結合は、多鎖ポリペプチドに見られる。ポリペプチドという用語はまた、１以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学的アナログであるアミノ酸ポリマーに適用され得る。いくつかの態様では、「ペプチド」は、５０アミノ酸長以下、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０アミノ酸長であり得る。

【0136】

本明細書で使用されるとき、ポリペプチド（例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチド）の「断片」という用語は、Ｎ及び／またはＣ末端で欠失した天然に存在する配列よりも短いポリペプチドのアミノ酸配列、または天然に存在するポリペプチドと比べて欠失したポリペプチドの任意の部分を指す。したがって、断片は必ずしもＮ末端及び／またはＣ末端のアミノ酸のみが欠失したものである必要はない。天然に存在する配列に関して内部アミノ酸が欠失したポリペプチドも断片とみなされる。

【0137】

本明細書で使用されるとき、「機能的断片」という用語は、ポリペプチド機能を保持するポリペプチド断片を指す。したがって、いくつかの態様では、Ｉｇヒンジの機能的断片は、抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）が標的エピトープ（例えば、腫瘍抗原）と有効に相互作用できるような、標的エピトープ（例えば、腫瘍抗原）から少し離れてキメラ結合タンパク質における抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を配置する能力を保持する。同様に、いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎの機能的断片は免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）において発現された場合、例えば、対応する完全長ｃ－Ｊｕｎを発現する参照免疫細胞の活性の少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％を有する免疫細胞をもたらす断片である。そのような活性の非限定的な例は、本開示の他の箇所で更に説明される。

【0138】

「組換え」ポリペプチドまたはタンパク質は、組換えＤＮＡ技術を介して生成されるポリペプチドまたはタンパク質を指す。操作された宿主細胞において発現された組換えで産生されたポリペプチド及びタンパク質は、任意の好適な技法によって分離されたか、分画されたか、または部分的もしくは実質的に精製されたネイティブまたは組換えポリペプチドと同様に、本開示の目的のために単離されたとみなされる。本明細書に開示されるポリヌクレオチド（例えば、キメラ結合タンパク質、ｃ－Ｊｕｎ、及び／またはＥＧＦＲｔ）によってコードされるポリペプチドは、当該技術分野で既知の方法を使用して組換えで産生され得る。いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、キメラ結合タンパク質、ｃ－Ｊｕｎ、及び／またはＥＧＦＲｔ）によってコードされるポリペプチドは、本明細書に記載されている少なくとも１つのポリヌクレオチドまたはポリペプチドをコードするベクターでの形質移入後、細胞、例えば、Ｔ細胞によって産生される。

【0139】

本明細書で使用されるとき、「コーディング領域」、「コーディング配列」または「翻訳可能配列」とは、アミノ酸に翻訳可能なコドンからなるポリヌクレオチドの部分である。「終止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡ、またはＴＡＡ）は通常はアミノ酸に翻訳されないがコード領域の一部とみなすことができる。ただし、全てのフランキング配列、例えば、プロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロンなどはコード領域の一部ではない。コード領域の境界は、得られるポリペプチドのアミノ末端をコードする５’末端の開始コドンと、得られるポリペプチドのカルボキシ末端をコードする３’末端の翻訳終止コドンとによって一般的に決定される。

【0140】

「相補的」及び「相補性」という用語は、ワトソン・クリック型塩基対形成則により互いに関連する２つ以上のオリゴマー（すなわち、各々が核酸塩基配列を含む）、またはオリゴマーと標的遺伝子との間を指す。例えば、核酸塩基配列「Ｔ－Ｇ－Ａ（５’から３’）」は、核酸塩基配列「Ａ－Ｃ－Ｔ（３’から５’）」と相補性である。相補性は「部分的」であってよく、その場合、所与の核酸塩基配列の核酸塩基の全てより少ないものが塩基対形成則に従って他の核酸塩基配列と一致している。例えば、いくつかの態様では、所与の核酸塩基配列と他の核酸塩基配列との間の相補性は、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％であり得る。したがって、いくつかの態様では、「相補性」という用語は、標的核酸配列（例えば、ｃ－Ｊｕｎをコードする核酸配列）に対する少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の一致または相補性を指す。または例を続けると、「完璧な」または「完全な」（１００％）相補性が、所与の核酸塩基配列と他の核酸塩基配列との間に存在し得る。いくつかの態様では、核酸塩基配列間の相補性の程度は、配列間のハイブリッド形成の効率及び強度に顕著な影響を与える。

【0141】

本明細書で使用されるとき、「発現」という用語は、ポリヌクレオチドが遺伝子産物、例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドを生成するプロセスを指す。発現には限定しないで、ポリヌクレオチドのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）への転写、及びｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳が含まれる。発現によって「遺伝子産物」が生成される。本明細書で使用されるとき、遺伝子産物は、核酸、例えば、遺伝子の転写によって産生されるメッセンジャーＲＮＡ、または転写物から翻訳されるポリペプチドであり得る。本明細書に記載されている遺伝子産物には更に、転写後修飾、例えば、ポリアデニル化もしくはスプライシングを有する核酸、または、翻訳後修飾、例えば、メチル化、グリコシル化、脂質の付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、もしくはタンパク質分解切断を有するポリペプチドが含まれる。

【0142】

本明細書で使用されるとき、「同一性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、ポリヌクレオチド分子間の全体的なモノマー保存を指す。任意の追加の修飾語もない「同一である」という用語、例えば、「ポリヌクレオチドＡはポリヌクレオチドＢと同一である」は、ポリヌクレオチド配列同士が１００％同一（１００％の配列同一性）であることを意味する。例えば、「７０％同一である」と２つの配列を説明することは、例えば、「７０％の配列同一性」を有するとそれらを表現することに等しい。

【0143】

２つのポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列の同一性パーセントの計算は、例えば、最適な比較目的のために２つの配列を整列させることによって実施され得る（例えば、最適な配列比較のために第１及び第２のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の一方または双方にギャップを導入することができ、同一でない配列は比較目的のために無視することができる）。いくつかの態様では、比較目的のために整列させた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％である。次いで、対応するアミノ酸位のアミノ酸、またはポリヌクレオチドの場合は塩基を比較する。

【0144】

第１の配列におけるある位置が第２の配列における対応する位置と同じアミノ酸またはヌクレオチドにより占められる場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一性パーセント（％）は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮した、配列により共有される同一の位置の数の関数である。配列の比較及び２つの配列間の同一性パーセント（％）の決定は、数学アルゴリズムを使用して達成され得る。

【0145】

異なる配列（例えば、ポリヌクレオチド配列）を整列させるために使用することができる好適なソフトウェアプログラムは様々な供給源から入手可能である。配列同一性パーセントを決定するための１つの好適なプログラムは、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なＢＬＡＳＴパッケージプログラムの一部であるｂｌ２ｓｅｑである。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して２つの配列間の比較を実施する。ＢＬＡＳＴＮが核酸配列を比較するために使用されるのに対して、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列を比較するために使用される。他の好適なプログラムとしては、例えば、バイオインフォマティクスＥＭＢＯＳＳ一式の一部であり、ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａでＥｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）より入手可能なＮｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒである。

【0146】

配列アラインメントは、当該技術分野において公知の方法、例えば、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ（ＣｌｕｓｔａｌＷ、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ、またはＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａ）、ＭＵＳＣＬＥなどを使用して実施され得る。

【0147】

ポリヌクレオチドまたはポリペプチド参照配列と整列する単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域は、各々、それら自体の配列同一性パーセント（％）を有することができる。配列同一性パーセント（％）は、１０分の１の位に四捨五入される点に留意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は８０．１に切り捨てられ、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は８０．２に切り上げられる。また、長さ値は常に整数であることに留意されたい。

【0148】

いくつかの態様では、同一性比率（％ＩＤ）または第１のアミノ酸配列（または核酸配列）の第２のアミノ酸配列（または核酸配列）に対する同一性割合（％ＩＤ）は、％ＩＤ＝１００×（Ｙ／Ｚ）として算出され、式中、Ｙは、第１及び第２の配列の配列比較（目視検査または特定の配列の配列比較プログラムによって整列させる）にて完全な一致と評価されたアミノ酸残基（または核酸塩基）の数であり、Ｚは第２の配列における残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列を超える場合、第１の配列の第２の配列に対する同一性パーセントは、第２の配列の第１の配列に対する同一性パーセントより高くなる。

【0149】

当業者であれば、配列同一性パーセント（％）を計算するための配列アラインメントの生成が、一次配列データによってのみ行われるバイナリー配列間比較に限定されない点は理解されよう。配列アラインメントは、配列データを、異種の供給源由来のデータ、例えば、構造データ（例えば、タンパク質結晶構造）、機能データ（例えば、変異の位置）、または系統学的データと統合することにより生成され得ることも理解されよう。異種データを統合してマルチプル配列アラインメントを生成する好適なプログラムは、ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで入手できるか、代替的には例えばＥＢＩからも入手できるＴ－Ｃｏｆｆｅｅである。配列同一性パーセントを計算するために使用される最終的な配列比較は、自動または手動のいずれかで精選され得ることも理解されるであろう。

【0150】

本明細書で使用されるとき、「単離された」、「精製された」、「抽出された」という用語、及びそれらの文法的変形は相互交換可能に使用され、１以上の精製プロセスを受けた本開示の所望の組成物の調製状態を指す。いくつかの態様では、本明細書で使用される単離または精製とは、汚染物質を含有する試料から本開示の組成物（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する改変された免疫細胞）を部分的に取り出す（例えば、画分）ことを含む、取り出すプロセスである。

【0151】

いくつかの態様では、単離された組成物は、検出可能な望ましくない活性を有さず、または、代替的に望ましくない活性のレベルまたは量は、許容可能なレベルまたは量以下である。いくつかの態様では、単離された組成物は、本開示の所望の組成物の量及び／または濃度を許容可能な量及び／または濃度及び／または活性以上で有する。いくつかの態様では、単離された組成物は組成物が得られる出発物質と比べて濃縮されている。この濃縮は、出発物質と比べて少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９％、少なくとも約９９．９９％、少なくとも約９９．９９９％、少なくとも約９９．９９９９％、または９９．９９９９％超であり得る。

【0152】

いくつかの態様では、単離された調製物は、残留する生物学的産物を実質的に含まない。いくつかの態様では、単離された調製物は、任意の混入している生物学的物質を１００％、少なくとも約９９％、少なくとも約９８％、少なくとも約９７％、少なくとも約９６％、少なくとも約９５％、少なくとも約９４％、少なくとも約９３％、少なくとも約９２％、少なくとも約９１％、または少なくとも約９０％含まない。残留する生物学的産物は、非生物物質（化学物質を含む）または不要な核酸、タンパク質、脂質、もしくは代謝産物を含み得る。

【0153】

本明細書で使用されるとき、「連結された」という用語は、共有結合または非共有結合によりそれぞれ第２のアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列に結合された、第１のアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列を指す。第１のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列は、第２のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列に直接的に結合もしくは並列され得るか、または代替的に介在配列が第１の配列から第２の配列までに共有結合により加わり得る。「連結された」という用語は、第１のポリヌクレオチド配列の第２のポリヌクレオチド配列への５’末端または３’末端での融合を意味するだけでなく、第２のポリヌクレオチド配列（または第１のポリヌクレオチド配列）における任意の２つのヌクレオチドへの第１のポリヌクレオチド配列（またはそれぞれ第２のポリヌクレオチド配列）全体の挿入も含む。第１のポリヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合またはリンカーにより第２のポリヌクレオチド配列に連結され得る。リンカーは、例えば、ポリヌクレオチドであり得る。

【0154】

対象の「治療」または「療法」（その文法的な派生物を含む）は、症状、合併症、状態、または疾患に関連する生化学的兆候の発症、進行、発達、重症度または再発を元に戻す、軽減する、改善する、抑制する、緩徐化する、または予防する目的で、対象に対して行われる任意のタイプの介入もしくはプロセス、または対象に対する活性剤の投与を指す。いくつかの態様では、この用語は、対象にて抗原に対する免疫反応を誘導することを指す。

【0155】

本明細書で使用されるとき、「予防する」、「予防すること」という用語、及びそれらの変形は、疾患、障害、及び／または状態の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の１以上の症状、特徴、または臨床徴候の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の１以上の症状、特徴、または徴候の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の進行を部分的または完全に遅延させること；及び／または疾患、障害、及び／または状態に関連する病状を発生するリスクを減らすことを指す。いくつかの態様では、転帰の予防は予防的治療を介して達成される。

【0156】

本明細書で使用されるとき、「プロモーター」という用語は、コード配列または機能的ＲＮＡの発現を制御することができるＤＮＡ配列を指す。一般的に、コード配列はプロモーター配列の３’側に位置する。プロモーターは、天然遺伝子にその全体が由来することができ、または自然界にみられるさまざまなプロモーターに由来する様々な要素で構成することができ、または更には、合成ＤＮＡセグメントを含むことができる。異なるプロモーターは、異なる組織または細胞タイプにおいて、または発生の異なる段階において、または異なる環境的もしくは生理学的条件に応じて、遺伝子の発現を誘導することができる点は、当業者には理解されよう。ほとんどの細胞タイプでほとんどの時間に遺伝子を発現させるプロモーターは一般的に「構成的プロモーター」と呼ばれる。特定の細胞タイプにおいて遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「細胞特異的プロモーター」または「組織特異的プロモーター」と呼ばれる。発生または細胞分化の特定の段階で遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「発生特異的プロモーター」または「細胞分化特異的プロモーター」と呼ばれる。プロモーターを誘導する薬剤、生物学的分子、化学物質、リガンド、光などによる細胞の曝露または処理後に誘導されて遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「誘導的プロモーター」または「調節可能なプロモーター」と呼ばれる。ほとんどの場合で調節配列の正確な境界は完全には定義されていないので、異なる長さのＤＮＡ断片が同じプロモーター活性を有することができることが更に認識される。

【0157】

本明細書で使用されるとき、「ｕｇ」及び「ｕＭ」という用語は、それぞれ「μｇ」及び「μＭ」と相互交換可能に使用される。

【0158】

本開示の様々な態様が以下の小節において更に詳しく記載されている。

【0159】

ＩＩ．本開示の方法
ＩＩ．Ａ．代謝再プログラム化培地
本開示のいくつかの態様は、培養条件（例えば、培地）において免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）を培養する方法を対象とし、培養条件（例えば、ある特定のイオン濃度、培地の張度、サイトカイン、及び／またはそれらの任意の組み合わせ）は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の分化を低減、制限、または防止することができ、それによって細胞療法、例えば、養子細胞療法におけるそれらの使用に影響を及ぼすか、または改善することができる。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）は、本明細書に開示されている代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）において培養される。いくつかの態様では、ＭＲＭにおいて培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地において培養された細胞と比べてより高い比率の幹様細胞を有する。いくつかの態様では、ＭＲＭにおいて培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地において培養された細胞と比べてより高い比率のエフェクター様細胞を有する。いくつかの態様では、ＭＲＭにおいて培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地において培養された細胞と比べてより高い比率の幹様細胞及びエフェクター様細胞の双方を有する。いくつかの態様では、ＭＲＭにおいて培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地において培養された細胞と比べてより高い増殖能を有する。

【0160】

本開示のいくつかの態様は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地（例えば、本明細書に開示されている代謝再プログラム化培地）において細胞を培養することを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の集団を調製する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地（例えば、本明細書に開示されている代謝再プログラム化培地）においてＴ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）を培養することを含む、Ｔ細胞の集団を調製する方法を対象とする。いくつかの態様では、本開示は、５ｍＭよりも高い（例えば、４０ｍＭよりも高い、例えば、４０ｍＭ～８０ｍＭ、例えば、５５ｍＭ～７０ｍＭ）の濃度でカリウムイオンを含む培地において細胞を培養することを含む、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）を調製する方法を提供し、培養された細胞の幹様表現型（例えば、最小の分化）を保持することができる。いくつかの態様では、本開示は、５ｍＭよりも高い（例えば、４０ｍＭよりも高い、例えば、４０ｍＭ～８０ｍＭ、例えば、５５ｍＭ～７０ｍＭ）の濃度でカリウムイオンを含む培地においてＴ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）を培養することを含む、Ｔ細胞を調製する方法を提供し、培養されたＴ細胞の幹様表現型（例えば、最小の分化）を保持することができる。いくつかの態様では、培養細胞は、より低いカリウム濃度を有する培地中で成長した細胞よりも多い幹様表現型を有する（例えば、低分化である）。いくつかの態様では、培地は更に、インターロイキン（ＩＬ）－２、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、培地は、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）、カルシウムイオン、グルコース、またはそれらの任意の組み合わせを更に含む。

【0161】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法を使用して培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の集団は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地において培養された細胞の集団に対して、幹様細胞の数の増加を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法を使用して培養されたＴ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の集団は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地において培養されたＴ細胞の集団に対して、幹様Ｔ細胞の数の増加を呈する。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）は、免疫細胞の出発集団（すなわち、培養前）に対して、幹様細胞に特徴的なマーカーの発現増加を呈する。いくつかの態様では、Ｔ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）は、Ｔ細胞の出発集団（すなわち、培養前）に対して、幹様細胞に特徴的なマーカーの発現増加を呈する。いくつかの態様では、出発免疫細胞集団は、ヒト対象から得られる免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）を含む。いくつかの態様では、免疫細胞の出発集団はヒト対象から得られるＴ細胞を含む。いくつかの態様では、免疫Ｔ細胞の出発集団は、Ｔ_Ｎ細胞、Ｔ_ＳＣＭ細胞、Ｔ_ＣＭ細胞、Ｔ_ＥＭ細胞、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、免疫細胞の出発集団は、本明細書に記載されている改変（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質をコードするポリヌクレオチド及び／または内在性ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を増加させることができる転写活性化因子での形質移入）前のＴ細胞を含む。

【0162】

細胞多能性の増加は、当該技術分野で既知の任意の方法を使用して測定され得る。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性は、抗体染色、続いてゲート化フローサイトメトリーによって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性はオートファジーフラックスによって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性はグルコース取込みによって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性は脂肪酸取込みによって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性はミトコンドリア量によって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性は、ＲＮＡ定量／発現分析（例えば、マイクロアレイ、ｑＰＣＲ（ｔａｑｍａｎ）、ＲＮＡ－Ｓｅｑ、単一細胞ＲＮＡ－Ｓｅｑ、またはそれらの任意の組み合わせ）によって測定される。いくつかの態様では、細胞の幹細胞性は、代謝アッセイ（例えば、海馬代謝アッセイ、細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）の分析、酸素消費速度（ＯＣＲ）の分析、予備呼吸能の分析、及び／またはミトコンドリア膜電位の分析）に関連付けられる転写物によって測定される。いくつかの態様では、幹細胞性は、インビボまたはインビトロの機能アッセイ（例えば、細胞存続性、抗腫瘍能、抗腫瘍クリアランス、ウイルスクリアランス、多能性、サイトカイン放出、細胞殺傷、またはそれらの任意の組み合わせをアッセイすること）のうち１つ以上を使用して測定される。

【0163】

いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の分化状態は、低分化細胞に特有のマーカーを発現する細胞の数の増加を特徴とする。いくつかの態様では、Ｔ細胞の分化状態は、低分化Ｔ細胞に特有のマーカーを発現する細胞の数の増加を特徴とする。いくつかの態様では、幹様細胞の数の増加は、Ｔ_Ｎ細胞及び／またはＴ_ＳＣＭ細胞に特有のマーカーを発現するＴ細胞の数の増加を特徴とする。いくつかの態様では、幹様Ｔ細胞の数の増加は、Ｔ_ＳＣＭ細胞に特有のマーカーを発現する細胞の数の増加を特徴とする。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ４５ＲＡを発現する細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＣＲ７を発現する細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ６２Ｌを発現する細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ２８を発現する細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ９５を発現する細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞はＣＤ４５ＲＯ^低である。いくつかの態様では、細胞はＣＤ４５ＲＯを発現しない。いくつかの態様では、細胞集団は、ＣＤ４５ＲＡ^＋及びＣＣＲ７^＋である細胞（例えば、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞）の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞集団はＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、及びＣＤ６２Ｌ^＋である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞集団はＣＤ９５^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、及びＣＤ６２Ｌ^＋である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞集団はＴＣＦ７を発現する細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ９５^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ３^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ３^＋、ＣＤ９５^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋である細胞数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞はＣＤ２７を発現する。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ２７^＋、ＣＤ３^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ２７^＋、ＣＤ３^＋、ＣＤ９５^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、及びＴＣＦ７^＋である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＣＤ３９^－及びＣＤ６９^－である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団はＴＣＦ７^＋及びＣＤ３９^－である細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞集団はＴ_ＳＣＭ細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞集団はＴ_Ｎ細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞集団はＴ_ＳＣＭ細胞及びＴ_Ｎ細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、細胞集団は幹様Ｔ細胞の数の増加を示す。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ４＋細胞であり、いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ８＋細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の双方を含む。

【0164】

いくつかの態様では、培養物における幹様細胞の数は、ＭＲＭでの培養前の幹様細胞の数と比べて、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％増加する。いくつかの態様では、培養物における幹様細胞の数は、ＭＲＭでの培養前の幹様細胞の数と比べて、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、または少なくとも約２０倍増加する。

【0165】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の培養後、幹様Ｔ細胞は、培養物におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の総数の少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、または少なくとも約１５％を構成する。いくつかの態様では、幹様Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＡ^＋及びＣＣＲ７^＋）は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞の少なくとも約２０％を構成する。いくつかの態様では、幹様Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＡ^＋及びＣＣＲ７^＋）は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞の少なくとも約１５％を構成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の培養後、幹様Ｔ細胞は、培養物におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の総数の少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約３％、少なくとも約４％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、または少なくとも約１５％を構成する。いくつかの態様では、幹様Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＡ^＋及びＣＣＲ７^＋）は、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の少なくとも約２０％を構成する。

【0166】

本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、本開示の培養方法は、（ａ）リガンド結合タンパク質（例えば、ＣＡＲまたは操作されたＴＣＲ）を発現するように、かつ（ｂ）ｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加するようにＴ細胞（例えば、ＣＤ８^＋Ｔ細胞及び／またはＣＤ４^＋Ｔ細胞）を改変するために使用され得る。したがって、いくつかの態様では、培養後、ＣＤ８^＋Ｔ細胞は、ＣＡＲを発現し、ｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加し、改変されたＣＤ８^＋Ｔ細胞の少なくとも約２０％は、幹様Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＡ^＋及びＣＣＲ７^＋）である。いくつかの態様では、培養後、ＣＤ８^＋Ｔ細胞は、操作されたＴＣＲを発現し、ｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加し、改変されたＣＤ８^＋Ｔ細胞の少なくとも約１５％は、幹様Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＡ^＋及びＣＣＲ７^＋）である。いくつかの態様では、培養後、ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、ＣＡＲを発現し、ｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加し、改変されたＣＤ４^＋Ｔ細胞の少なくとも約２０％は、幹様Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＡ^＋及びＣＣＲ７^＋）である。いくつかの態様では、培養後、ＣＤ４^＋Ｔ細胞は、操作されたＴＣＲを発現し、ｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加し、改変されたＣＤ４^＋Ｔ細胞の少なくとも約１５％は、幹様Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４５ＲＡ^＋及びＣＣＲ７^＋）である。

【0167】

いくつかの態様では、いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の培養後、幹様Ｔ細胞は、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約７０％を構成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の培養後、幹様Ｔ細胞は、培養物におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％を構成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の培養後、幹様Ｔ細胞は、培養物におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％を構成する。

【0168】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約４０％は、ＣＤ３９^－／ＣＤ６９^－Ｔ細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％は、ＣＤ３９^－／ＣＤ６９^－Ｔ細胞である。

【0169】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０～少なくとも約７０％は、ＣＤ３９^－／ＴＣＦ７^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％は、ＣＤ３９^－／ＴＣＦ７^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ４^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞である。

【0170】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加するように改変された）の培養後、Ｔ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約７０％は、ＣＤ４５ＲＡ^＋及びＣＣＲ７^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加するように改変された）の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％はＣＤ４５ＲＡ^＋及びＣＣＲ７^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ４^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、Ｔ細胞はＣＤ４^＋Ｔ細胞及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の双方を含む。

【0171】

いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従って培養された、本開示の免疫細胞、例えば、操作された免疫細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の増加したレベルを含むように改変されたＴ細胞及び／またはＮＫ細胞）は増加した形質導入効率を示す。

【0172】

いくつかの態様では、形質導入後、細胞の高い割合が、例えば、リガンド結合タンパク質をコードする標的導入遺伝子を発現し、細胞は、従来の方法を使用して（例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地において）同様に形質導入され、培養された細胞と比べて、本明細書に開示されている方法に従って培養されている。特定の態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地において培養された同様に形質導入された細胞と比べて、細胞のレンチウイルス形質導入後、高い割合でリガンド結合タンパク質を発現する。いくつかの態様では、形質導入効率は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地において培養された同様に形質導入された細胞に対して、少なくとも約１．５倍増加する。いくつかの態様では、形質導入効率は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地において培養された同様に形質導入された細胞に対して、少なくとも約２倍増加する。本明細書で使用される場合、「形質導入効率」という用語は、以下を指す：（ｉ）規定の期間内に細胞内に物理的に導入され得る物質（例えば、外来性ポリヌクレオチド）の量、（ｉｉ）所与の量の物質を細胞内に物理的に導入するために要する時間の量、（ｉｉｉ）標的物質、例えば、外来性ポリヌクレオチド、すなわち、導入遺伝子が細胞の集団によって取り込まれたレベル（例えば、導入遺伝子を発現する細胞の割合）、または（ｉｖ）（ｉ）～（ｉｉｉ）の任意の組み合わせ。いくつかの態様では、形質導入効率を増加させることによって、本明細書で提供されている培養方法は、更に多い量の外来性ヌクレオチド配列が細胞内に導入されることを可能とし、及び／または所与の量の外来性ヌクレオチド配列を導入するのに必要とされる時間の量を減少させ得る。任意の１つの理論によって束縛されるものではないが、いくつかの態様では、そのような効果は、改変された免疫細胞におけるコードされたタンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチド）の発現を増加することができる。

【0173】

いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、本明細書に開示されている方法に従って培養する前に形質導入される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、本明細書に開示されている方法に従って培養した後に形質導入される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、本明細書に開示されている方法に従って、例えば、形質導入の前、形質導入中に、及び形質導入の後、少なくとも５ｍＭのカリウムイオン（例えば、５ｍＭよりも高い、例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）を含む培地において免疫細胞をＡＰＣ－ＭＳと接触させることによって培養される。

【0174】

特定の態様では、免疫細胞はウイルスベクターを使用して形質導入される。いくつかの態様では、ベクターは、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、及びエプスタイン・バーウイルスベクターを含む。いくつかの態様では、ウイルスベクターはレトロウイルスを含む。いくつかの態様では、ウイルスベクターはレンチウイルスを含む。いくつかの態様では、ウイルスベクターはＡＡＶを含む。

【0175】

いくつかの態様では、免疫細胞は非ウイルス的方法を使用して形質導入される。いくつかの態様では、非ウイルス的方法にはトランスポゾンの使用が挙げられる。いくつかの態様では、非ウイルス的送達方法の使用は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の再プログラム化、及び対象への細胞の直接的注入を可能にする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム及びジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、及びメガヌクレアーゼ（ＭＮ）などのゲノム編集代替手段を使用することによって標的細胞（例えば、Ｔ細胞）または宿主細胞（例えば、コードされるタンパク質の組換え発現のための細胞）のゲノムに挿入され得る。

【0176】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された、任意選択でリガンド結合タンパク質を発現する免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の養子移入の際に、移入された細胞は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地において培養された細胞と比べて、細胞疲弊の減少を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された、任意選択でリガンド結合タンパク質を発現するＴ細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）の養子移入の際に、移入されたＴ細胞は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地において培養されたＴ細胞と比べて、細胞疲弊の減少を呈する。

【0177】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞の養子移入の際に、移入された細胞は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地中において培養された細胞と比べて、インビボでより長い期間存続する。いくつかの態様では、移入された細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、従来の方法を使用して、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地において培養された細胞と比べて、より高いインビボ有効性、例えば、腫瘍殺傷活性を有する。いくつかの態様では、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地において従来の方法を使用して培養された細胞と比べて、対象において応答、例えば、腫瘍体積の低下を引き出すのに必要とされる、本明細書に開示されている方法に従って培養された細胞の用量は低い。

【0178】

いくつかの態様では、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）は、対象から単離後直ちに、本明細書に開示されている方法に従って、例えば、少なくとも５ｍＭのカリウムイオン（例えば、５ｍＭよりも高い、例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）を含む培地において培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞の増殖中に本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞の操作中に、例えば、導入遺伝子、例えば、リガンド結合タンパク質をコードする構築物での形質導入中に本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞の操作後に、例えば、導入遺伝子、例えば、リガンド結合タンパク質をコードする構築物での形質導入後に本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、増殖及び操作の全体を通して本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、ウイルス遺伝子操作の全体を通して本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、非ウイルス遺伝子操作の全体を通して本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、腫瘍特異的標的化（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲまたはＴＣＲ模倣体）を可能とするための免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）へのリガンド結合タンパク質の導入中に本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、Ｔ細胞機能を改善する１つ以上の内在性遺伝子（ｃ－Ｊｕｎ）の導入全体を通して本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、Ｔ細胞機能を改善する１つ以上の合成遺伝子（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質をコードする外来性ポリヌクレオチド、またはＣＡＲ、ＴＣＲ、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、もしくはＴＣＲ模倣体をコードする外来性ポリヌクレオチド）の導入全体を通して本明細書に開示されている方法に従って培養される。

【0179】

いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、エクスビボ培養の全体で、例えば、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞が対象から単離されたときから、成長、増殖、操作を経て、養子細胞療法を必要とする対象への投与まで、本明細書に開示されている方法に従って、例えば、少なくとも５ｍＭのカリウムイオン（例えば、５ｍＭよりも高い、例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）を含む培地において培養される。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、エクスビボ培養の全体で、例えば、Ｔ細胞が対象から単離されたときから、成長、増殖、操作を経て、養子細胞療法を必要とする対象への投与まで、本明細書に開示されている方法に従って、例えば、少なくとも５ｍＭのカリウムイオン（例えば、５ｍＭよりも高い、例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）を含む培地において培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、増殖期間中、本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、生存免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の総数が、少なくとも約１０^４、少なくとも約５×１０^４、少なくとも約１０^５、少なくとも約５×１０^５、少なくとも約１０^６、または少なくとも約５×１０^６、少なくとも約１×１０^７、少なくとも約５×１０^７、少なくとも約１×１０^８、少なくとも約５×１０^８、少なくとも約１×１０^９、少なくとも約５×１０^９、少なくとも約１×１０^１０、少なくとも約５×１０^１０、少なくとも約１×１０^１１、少なくとも約５×１０^１１、少なくとも約１×１０^１２、または少なくとも約５×１０^１２個の総細胞となるまで本明細書に開示されている方法に従って培養される。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、生存Ｔ細胞の総数が少なくとも約１０^４、少なくとも約５×１０^４、少なくとも約１０^５、少なくとも約５×１０^５、少なくとも約１０^６、または少なくとも約５×１０^６、少なくとも約１×１０^７、少なくとも約５×１０^７、少なくとも約１×１０^８、少なくとも約５×１０^８、少なくとも約１×１０^９、少なくとも約５×１０^９、少なくとも約１×１０^１０、少なくとも約５×１０^１０、少なくとも約１×１０^１１、少なくとも約５×１０^１１、少なくとも約１×１０^１２、または少なくとも約５×１０^１２の総Ｔ細胞となるまで本明細書に開示されている方法に従って培養される。

【0180】

いくつかの態様では、培地は更に細胞増殖剤を含む。本明細書で使用されるとき、「細胞増殖剤」は、培養細胞、例えば、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）のインビトロ及び／またはエクスビボの成長及び増殖を促進する薬剤、例えば、小分子、ポリペプチド、またはそれらの任意の組み合わせを指す。いくつかの態様では、細胞増殖剤はＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。いくつかの態様では、培地はＡＫＴ阻害剤を更に含む。いくつかの態様では、培地はＰＩ３Ｋ阻害剤及びＡＫＴ阻害剤を更に含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤はＬＹ２９４００２を含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤はＩＣ８７１１４を含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、イデラリシブを含む（例えば、Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖ．２（３）：２１０－２３（２０１８）を参照のこと）。いくつかの態様では、培地は更に、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤を含む。いくつかの態様では、ＧＳＫ３Ｂ阻害剤はＴＷＳ１１９を含む。いくつかの態様では、培地はＡＣＬＹ阻害剤を更に含む。いくつかの態様では、ＡＣＬＹ阻害剤はヒドロキシクエン酸カリウム三塩基性一水和物を含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、クエン酸ヒドロキシルを含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤はピクチリシブを含む。いくつかの態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤はＣＡＬ－１０１を含む。いくつかの態様では、ＡＫＴ阻害剤は、ＭＫ２２０６、Ａ４４３６５４、またはＡＫＴｉ－ＶＩＩＩ（Ｃａｓ６１２８４７－０９－３）を含む。

【0181】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はミトコンドリア燃料を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はＯ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｍＭ、少なくとも約０．５ｍＭ、少なくとも約１．０ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、または少なくとも約１０ｍＭのＯ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１．０ｍＭのＯ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む。

【0182】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は更に、（ｉ）１以上の細胞増殖剤、（ｉｉ）ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）、（ｉｉｉ）１以上の糖類、（ｉｖ）カルシウムイオン、及び（ｖ）１以上のサイトカインのうちの１以上を含む。

【0183】

ＩＩ．Ａ．１．カリウム
本開示のいくつかの態様は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を、対照培地に対して、増加した濃度のカリウムイオン（例えば、約５ｍＭ超、約４０ｍＭ超、約４５ｍＭ超、約５０ｍＭ超、約５５ｍＭ超、約６０ｍＭ超、約６５ｍＭ超、または約７０ｍＭ超）を含む培地、すなわち、本明細書に開示される代謝再プログラム化培地において培養する方法を対象とする。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５ｍＭ～少なくとも約４０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約１０ｍＭ～少なくとも約４０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約２０ｍＭ～少なくとも約４０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約４０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４０ｍＭ～少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４５ｍＭ～少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４５ｍＭ～少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４５ｍＭ～少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４５ｍＭ～少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４５ｍＭ～少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４５ｍＭ～少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約４５ｍＭ～少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオン、少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオン、または少なくとも約５０ｍＭ～少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオンを含む。

【0184】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、または少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約４０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオンを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、約４０ｍＭ～約８０ｍＭのカリウムイオン（例えば、４０～８０ｍＭ）を含む。

【0185】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、増加した濃度のカリウムイオン、例えば、少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンを含み、培地は、低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でカリウムイオン及び約３０ｍＭ～約１００ｍＭの濃度でＮａＣｌを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、約１１０～約１４０ｍＭである。

【0186】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約５ｍＭ～約１００ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は、約５ｍＭ～約９０ｍＭ、約５ｍＭ～約８０ｍＭ、約５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５ｍＭ～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は、約５ｍＭ～約９０ｍＭ、約５ｍＭ～約８０ｍＭ、約５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５ｍＭ～約５０ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約２５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約２５ｍＭ～約１００ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約２５ｍＭ～約９０ｍＭ、約２５ｍＭ～約８０ｍＭ、約２５ｍＭ～約７０ｍＭ、約２５ｍＭ～約６０ｍＭ、または約２５ｍＭ～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は、約２５ｍＭ～約９０ｍＭ、約２５ｍＭ～約８０ｍＭ、約２５ｍＭ～約７０ｍＭ、約２５ｍＭ～約６０ｍＭ、または約２５ｍＭ～約５０ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約１００ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ～約９０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８５ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７５ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６５ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５５ｍＭ、または約４０ｍＭ～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８５ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７５ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６５ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５５ｍＭ、または約４０ｍＭ～約５０ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ～約８０ｍＭの間であり、培地は低張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約５０ｍＭ～約８５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約５０ｍＭ～約８５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５０ｍＭ～約５５ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭ未満のＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0187】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約５０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、約５０ｍＭ～約９５ｍＭ、約５０ｍＭ～約９０ｍＭ、約５０ｍＭ～約８５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、または約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、培地は少なくとも約５０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0188】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約５５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約５５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約５５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約５５ｍＭ～約１００ｍＭ、約５５ｍＭ～約９５ｍＭ、約５５ｍＭ～約９０ｍＭ、約５５ｍＭ～約８５ｍＭ、約５５ｍＭ～約８０ｍＭ、約５５ｍＭ～約７５ｍＭ、約５５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６５ｍＭ、または約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、培地は少なくとも約５５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0189】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約６０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約６０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約６０ｍＭ～約１００ｍＭ、約６０ｍＭ～約９５ｍＭ、約６０ｍＭ～約９０ｍＭ、約６０ｍＭ～約８５ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７５ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、または約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、培地は少なくとも約６０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0190】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約６５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約６５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約６５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約６５ｍＭ～約１００ｍＭ、約６５ｍＭ～約９５ｍＭ、約６５ｍＭ～約９０ｍＭ、約６５ｍＭ～約８５ｍＭ、約６５ｍＭ～約８０ｍＭ、約６５ｍＭ～約７５ｍＭ、または約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約７５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0191】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約７０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約７０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約７０ｍＭ～約１００ｍＭ、約７０ｍＭ～約９５ｍＭ、約７０ｍＭ～約９０ｍＭ、約７０ｍＭ～約８５ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ、または約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約７０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0192】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約７５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約７５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約７５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約７５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約７５ｍＭ～約１００ｍＭ、約７５ｍＭ～約９５ｍＭ、約７５ｍＭ～約９０ｍＭ、約７５ｍＭ～約８５ｍＭ、または約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約６５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0193】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約８０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約８０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約８０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約８０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約８０ｍＭ～約１００ｍＭ、約８０ｍＭ～約９５ｍＭ、約８０ｍＭ～約９０ｍＭ、または約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約６０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0194】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約８５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約８５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約８５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約８５ｍＭ～約１００ｍＭ、約８５ｍＭ～約９５ｍＭ、または約８５ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約６５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0195】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約９０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は、約９０ｍＭ～約１１５ｍＭ、約９０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９０ｍＭ～約１０５ｍＭ、約９０ｍＭ～約１００ｍＭ、または約９０ｍＭ～約９５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約９０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約５０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0196】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約９５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９５ｍＭ～約１１５ｍＭ、約９５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９５ｍＭ～約１０５ｍＭ、または約９５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約９５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約５５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0197】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約１００ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１００ｍＭ～約１１５ｍＭ、約１００ｍＭ～約１１０ｍＭ、または約１００ｍＭ～約１０５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１００ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約５０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0198】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約１０５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０５ｍＭ～約１１５ｍＭ、または約１０５ｍＭ～約１１０ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０５ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約３５ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0199】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約１１０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１０ｍＭ～約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１１０ｍＭ～約１２０ｍＭのカリウムイオン及び約３０ｍＭ未満～約２０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0200】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８０ｍＭ～約９０ｍＭである。

【0201】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約９０ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約９０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約９０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約８０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約７０ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約７０ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８０ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約６０ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0202】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるカリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約５５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約９０未満～約８５である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約６０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約８５未満～約８０である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約６５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約８０ｍＭ未満～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約７０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約７５ｍＭ未満～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７０ｍＭ～約７５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約７０ｍＭ未満～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７５ｍＭ～約８０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約６５ｍＭ未満～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８０ｍＭ～約８５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約６０ｍＭ未満～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８５ｍＭ～約９０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８５ｍＭ～約９０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約５５ｍＭ未満～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９０ｍＭ～約９５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９０ｍＭ～約９５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約５０未満～約４５である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９５ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９５ｍＭ～約１００ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約４５ｍＭ未満～約４０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１００ｍＭ～約１０５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１００ｍＭ～約１０５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約４０ｍＭ未満～約３５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０５ｍＭ～約１１０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０５ｍＭ～約１１０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約３５未満～約３０である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１０ｍＭ～約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１０ｍＭ～約１１５ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約３０ｍＭ未満～約２５ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１５ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１５ｍＭ～約１２０ｍＭであり、ＮａＣｌの濃度は約２５ｍＭ未満～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は、１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0203】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５０ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５５ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６０ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約９０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約８０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６５ｍＭ～約７０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。

【0204】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約５ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約６ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約７ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約８ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約９ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。

【0205】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１１ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１２ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１３ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１３ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１４ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１４ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１５ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１５ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１６ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１６ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１７ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１７ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１８ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１８ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１９ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約１９ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。

【0206】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２０ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２１ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２１ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２２ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２２ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２３ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２３ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２４ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２４ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２５ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２５ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２６ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２６ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２７ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２７ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２８ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２８ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２９ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約２９ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。

【0207】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３０ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３１ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３１ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３２ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３２ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３３ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３３ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３４ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３４ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３５ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３５ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３６ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３６ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３７ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３７ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３８ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３８ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３９ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約３９ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。

【0208】

いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４０ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４１ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４１ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４２ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４２ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４３ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４３ｍＭであり、培地は低張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４４ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４４ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４５ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４５ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４６ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４６ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４７ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４７ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４８ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４８ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４９ｍＭよりも高く、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度は約４９ｍＭであり、培地は低張性または等張性である。

【0209】

いくつかの態様では、高濃度のカリウムイオンを含む代謝再プログラム化培地は、培地に十分な量のカリウム塩を加えることによって調製される。いくつかの態様では、カリウム塩の非限定的な例としては、アミントリクロロ白金酸カリウム、アクアペンタクロロルテニウム酸カリウム、ビス（オキサラト）白金（ＩＩ）酸カリウム二水和物、硫酸水素カリウム、水素化ホウ素カリウム、臭化カリウム、炭酸カリウム、塩化カリウム、クロム酸カリウム、重クロム酸カリウム、ジシアノ銀酸カリウム、ジシアノ金酸カリウム、フッ化カリウム、フルオロ硫酸カリウム、ヘキサクロロイリジウム酸カリウム、ヘキサクロロオスミウム酸カリウム、ヘキサクロロパラジウム酸カリウム、ヘキサクロロ白金酸カリウム、ヘキサクロロレニウム酸カリウム、ヘキサシアノクロム酸カリウム、ヘキサシアノ鉄酸カリウム、ヘキサシアノルテニウム（ＩＩ）酸カリウム水和物、ヘキサフルオロアンチモン酸カリウム、ヘキサフルオロニッケル酸カリウム、ヘキサフルオロリン酸カリウム、ヘキサフルオロチタン酸カリウム、ヘキサフルオロジルコン酸カリウム、ヘキサヒドロキソアンチモン酸カリウム、ヘキサヨード白金酸カリウム、ヘキサヨードレニウム酸カリウム、水酸化カリウム、ヨウ素酸カリウム、ヨウ化カリウム、マンガン酸カリウム、メタバナジン酸カリウム、モリブデン酸カリウム、硝酸カリウム、ニトロソジスルホン酸カリウム、オスミウム（ＶＩ）酸カリウム二水和物、ペンタクロロニトロシルルテニウム酸カリウム、過塩素酸カリウム、過レニウム酸カリウム、過ルテニウム酸カリウム、過硫酸カリウム、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、ピロリン酸カリウム、セレノシアン酸カリウム、セレノシアン酸カリウム、スズ酸カリウム三水和物、硫酸カリウム、テルル酸カリウム水和物、亜テルル酸カリウム、四ホウ酸カリウム四水和物、テトラブロモ金酸カリウム、テトラブロモパラジウム酸カリウム、テトラクロロパラジウム酸カリウム、テトラクロロ白金酸カリウム、テトラシアノパラジウム酸カリウム、テトラシアノ白金酸カリウム、テトラフルオロホウ酸カリウム、テトラニトロ白金酸カリウム、テトラチオン酸カリウム、ｐ－トルエンチオスルホン酸カリウム、ヒドロキシクエン酸カリウム三塩基性一水和物、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。特定の態様では、カリウム塩は塩化カリウム（ＫＣｌ）を含む。特定の態様では、カリウム塩はグルコン酸カリウムを含む。特定の態様では、カリウム塩はクエン酸カリウムを含む。特定の態様では、カリウム塩はヒドロキシクエン酸カリウムを含む。

【0210】

ＩＩ．Ａ．２．ナトリウム
本開示のいくつかの態様は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭ（例えば、５ｍＭより高く、例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）の濃度でカリウムイオンと、（ｉｉ）約１１５ｍＭ未満の濃度でナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）とを含む培地において免疫細胞を培養する方法を対象とする。いくつかの態様では、培地は低張性または等張性である。いくつかの態様では、ナトリウム（例えば、ＮａＣｌ）の目標濃度は、より高い濃度のナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む基本培地から出発し、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の目標濃度に到達するように溶液を希釈することによって達成される。いくつかの態様では、ナトリウム（例えば、ＮａＣｌ）の目標濃度は、１つ以上のナトリウム塩（例えば、多くのＮａＣｌ）を加えることによって達成される。ナトリウム塩の非限定的な例には（メタ）過ヨウ素酸ナトリウム、酒石酸アルセニルナトリウム水和物、アジ化ナトリウム、ナトリウムベンジルオキシド、臭化ナトリウム、炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クロム酸ナトリウム、シクロヘキサン酪酸ナトリウム、エタンチオール酸ナトリウム、フッ化ナトリウム、フルオロリン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、ヘキサクロロイリジウム（ＩＩＩ）酸ナトリウム水和物、ヘキサクロロイリジウム（ＩＶ）酸ナトリウム六水和物、ヘキサクロロ白金（ＩＶ）酸ナトリウム六水和物、ヘキサクロロロジウム（ＩＩＩ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロアルミン酸ナトリウム、ヘキサフルオロアンチモン（Ｖ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロヒ（Ｖ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロ鉄（ＩＩＩ）酸ナトリウム、ヘキサフルオロリン酸ナトリウム、ヘキサフルオロケイ酸ナトリウム、ヘキサヒドロキシ白金（ＩＶ）酸ナトリウム、ヘキサメタリン酸ナトリウム、二フッ化水素ナトリウム、硫酸水素ナトリウム、ナトリウム水素シアナミド、水酸化ナトリウム、ヨウ化ナトリウム、メタホウ酸ナトリウム四水和物、メタケイ酸ナトリウム九水和物、メタバナジン酸ナトリウム、モリブデン酸ナトリウム、硝酸ナトリウム、亜硝酸ナトリウム、シュウ酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム一水和物、過炭酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウム、過ヨウ素酸ナトリウム、過マンガン酸ナトリウム、過レニウム酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、ピロリン酸ナトリウム、セレン酸ナトリウム、亜セレン酸ナトリウム、スズ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、亜テルル酸ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム、テトラクロロアルミン酸ナトリウム、テトラクロロ金（ＩＩＩ）酸ナトリウム、テトラクロロパラジウム（ＩＩ）酸ナトリウム、テトラクロロ白金（ＩＩ）酸ナトリウム、チオリン酸ナトリウム三塩基性、チオ硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム五水和物、オキシフッ化イットリウムナトリウム、トリメタリン酸三ナトリウム、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、ナトリウム塩は塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、ナトリウム塩はグルコン酸ナトリウムを含む。いくつかの態様では、ナトリウム塩は重炭酸ナトリウムを含む。いくつかの態様では、ナトリウム塩はヒドロキシクエン酸ナトリウムを含む。いくつかの態様では、ナトリウム塩はリン酸ナトリウムを含む。

【0211】

いくつかの態様では、本開示の代謝再プログラム化培地におけるナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、基本培地の濃度よりも低い。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度が増加するにつれて、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、低減する。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約２５ｍＭ～約１１５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウム（例えば、ＮａＣｌ）イオンの濃度は、約２５ｍＭ～約１００ｍＭ、約３０ｍＭ～約４０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ、約３０ｍＭ～約６０ｍＭ、約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約６０ｍＭ、約４０ｍＭ～約７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５０ｍＭ～約５５ｍＭ、約５０ｍＭ～約６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約６５ｍＭ、約５０ｍＭ～約７０ｍＭ、約５０ｍＭ～約７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６０ｍＭ、約５５ｍＭ～約６５ｍＭ、約５５ｍＭ～約７０ｍＭ、約５５ｍＭ～約７５ｍＭ、約５５ｍＭ～約８０ｍＭ、約６０ｍＭ～約６５ｍＭ、約６０ｍＭ～約７０ｍＭ、約６０ｍＭ～約７５ｍＭ、約６０ｍＭ～約８０ｍＭ、約７０ｍＭ～約７５ｍＭ、約７０ｍＭ～約８０ｍＭ，または約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約４０ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５０ｍＭ～約８５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約３０ｍＭ～約３５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約３５ｍＭ～約４０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約４０ｍＭ～約４５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約４５ｍＭ～約５０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５０ｍＭ～約５５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５５ｍＭ～約６０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約６０ｍＭ～約６５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約６５ｍＭ～約７０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約７０ｍＭ～約７５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約７５ｍＭ～約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約８０ｍＭ～約８５ｍＭである。

【0212】

いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、または約９０ｍＭである。特定の態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約４０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約４５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５５．６ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約５９．３ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約６０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約６３．９ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約６５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約６７．６ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約７０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約７２．２ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約７５ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約７６ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約８０ｍＭである。いくつかの態様では、ナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）の濃度は、約８０．５ｍＭである。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのカリウムイオン及び約４０ｍＭ～約８０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。

【0213】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約５０ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約５５ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６０ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６５ｍＭ～約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６６ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６７ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６８ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６９ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７１ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７２ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７３ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７４ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ～約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭのナトリウムイオン（例えば、ＮａＣｌ）を含む。

【0214】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのカリウムイオン及び約３０ｍＭ～約１０９ｍＭのＮａＣｌを含み、ＮａＣｌの濃度（ｍＭ）は、（１３５－カリウムイオン濃度、１３５からカリウムイオン濃度を引くことを意味する）以下である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約４０ｍＭのカリウムイオン及び約９５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約９５ｍＭ、約９４ｍＭ、約９３ｍＭ、約９２ｍＭ、約９１ｍＭ、約９０ｍＭ、約８５ｍＭ、約８０ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約４５ｍＭのカリウムイオン及び約９０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約９０ｍＭ、約８９ｍＭ、約８８ｍＭ、約８７ｍＭ、約８６ｍＭ、約８５ｍＭ、約８０ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約５０ｍＭのカリウムイオン及び約８５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約８５ｍＭ、約８４ｍＭ、約８３ｍＭ、約８２ｍＭ、約８１ｍＭ、約８０ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約５５ｍＭのカリウムイオン及び約８０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約８０ｍＭ、約７９ｍＭ、約７８ｍＭ、約７７ｍＭ、約７６ｍＭ、約７５ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６０ｍＭのカリウムイオン及び約７５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約７５ｍＭ、約７４ｍＭ、約７３ｍＭ、約７２ｍＭ、約７１ｍＭ、約７０ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６５ｍＭのカリウムイオン及び約７０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約７０ｍＭ、約６９ｍＭ、約６８ｍＭ、約６７ｍＭ、約６６ｍＭ、約６５ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７０ｍＭのカリウムイオン及び約７０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約６５ｍＭ、約６４ｍＭ、約６３ｍＭ、約６２ｍＭ、約６１ｍＭ、約６０ｍＭ、約５５ｍＭ、または約５０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７５ｍＭのカリウムイオン及び約６０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約６０ｍＭ、約５９ｍＭ、約５８ｍＭ、約５７ｍＭ、約５６ｍＭ、約５５ｍＭ、約５０ｍＭ、約４５ｍＭ、または約４０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約８０ｍＭのカリウムイオン及び約５５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約５５ｍＭ、約５４ｍＭ、約５３ｍＭ、約５２ｍＭ、約５１ｍＭ、約５０ｍＭ、約４５ｍＭ、約４０ｍＭ、または約３５ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約８５ｍＭのカリウムイオン及び約５０ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約５０ｍＭ、約４９ｍＭ、約４８ｍＭ、約４７ｍＭ、約４６ｍＭ、約４５ｍＭ、約４０ｍＭ、約３５ｍＭ、または約３０ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約９０ｍＭのカリウムイオン及び約４５ｍＭ以下のＮａＣｌ（例えば、約４５ｍＭ、約４４ｍＭ、約４３ｍＭ、約４２ｍＭ、約４１ｍＭ、約４０ｍＭ、約３５ｍＭ、約３０ｍＭ、または約２５ｍＭのＮａＣｌ）を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６１ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約７０ｍＭのカリウムイオン及び約６２ｍＭのＮａＣｌを含む。

【0215】

いくつかの態様では、培地は約５０ｍＭのカリウムイオン及び約７５ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、培地は、等張性である。

【0216】

本開示のいくつかの態様は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）約１３５ｍＭ未満の濃度のＮａＣｌを含む培地にて免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）を培養する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１００ｍＭ未満の濃度でのＮａＣｌを含む培地にて免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）を培養する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は（ｉ）５０ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約９０ｍＭ未満の濃度でのＮａＣｌを含む培地にて免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）を培養する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は（ｉ）５５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約７０ｍＭ未満の濃度でのＮａＣｌを含む培地にて免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）を培養する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は（ｉ）６０ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約７０ｍＭ未満の濃度でのＮａＣｌを含む培地にて免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）を培養する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は、（ｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でカリウムイオンと、（ｉｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でＮａＣｌとを含む培地において免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）を培養する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は、（ｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でカリウムイオンと、（ｉｉ）約５５ｍＭ～約９０ｍＭの濃度でＮａＣｌとを含む培地において免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）を培養する方法を対象とする。

【0217】

ＩＩ．Ａ．３．張度
本開示のいくつかの態様では、代謝再プログラム化培地の張度（例えば、（カリウムイオンの濃度及びＮａＣｌの濃度）Ｘ２）は、カリウムイオン及び／またはＮａＣｌの濃度に基づいて調整される。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地の張度は基本培地の張度より低い。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地の張度は基本培地の張度より高い。いくつかの態様では、培地の張度は基本培地の張度と同じである。培地におけるカリウムイオン及び／またはＮａＣｌの濃度を改変することによって、代謝再プログラム化培地の張度に影響を及ぼすことができる。いくつかの態様では、カリウムイオン濃度の増加はＮａＣｌの濃度の増加または低下と対になる。いくつかの態様では、この対合は代謝再プログラム化培地の張度に影響を及ぼす。いくつかの態様では、カリウムイオンの濃度が増加する一方で、ＮａＣｌの濃度は低下する。

【0218】

いくつかの態様では、本発明の培地に有用な培地は、カリウムイオンと張度の関数に基づいて調製することができる。例えば、いくつかの態様では、本開示に有用な培地が低張性（例えば、２８０ｍＯｓｍ未満）であり、かつ少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンを含む場合、培地を低張性として維持するのに十分なＮａＣｌの濃度は、以下の式に基づいて決定され得る：ＮａＣｌ濃度＝（所望の張度（２８０）／２）－カリウムイオン濃度。（すなわち、ＮａＣｌの濃度（ｍＭ）は、（１４０－カリウムイオン濃度）以下である）。いくつかの態様では、本明細書に開示されている低張性培地は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間のカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度を含む。したがって、低張性培地については、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度が１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である限り、カリウムイオンの濃度は５０ｍＭ～９０ｍＭの間の濃度で設定することができ、ＮａＣｌの濃度は９０ｍＭ～５０ｍＭの間で設定することができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されている低張性培地は、１１５ｍＭ～１４０ｍＭの間でカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度を含む。いくつかの態様では、本明細書に開示されている低張性培地は、１２０ｍＭ～１４０ｍＭの間でカリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度を含む。

【0219】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は等張（２８０ｍＯｓｍ～３００ｍＯｓｍの間）であり、約５０ｍＭ～７０ｍＭの間のカリウムイオンの濃度を含む。対応するＮａＣｌの濃度は、以下の式に基づいて再度計算され得る：ＮａＣｌ濃度＝（所望の張度／２）－カリウムイオン濃度。例えば、カリウムの濃度が５０ｍＭであり、所望の張度が３００ｍＯｓｍである場合、ナトリウム濃度は１００ｍＭであることができる。

【0220】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は等張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±１ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±３ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±４ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±６ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±７ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、ＭＲＭは、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±８ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±９ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ±１０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３０５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３１０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～約３１５ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ～３２０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２８５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２９０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、約３００ｍＯｓｍ／Ｌ、約３０５ｍＯｓｍ／Ｌ、約３１０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約３１５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。

【0221】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２７５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される２７５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２７０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される２７０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２６５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される２６５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２６５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される２６５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、２５５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される２５５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ未満の張度を有する。いくつかの態様では、張度は、カリウムイオン濃度及びＮａＣｌ濃度を加算し、２を乗じることによって測定される約２２０ｍＯｓｍ／Ｌよりも高い。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。

【0222】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ未満のオスモル濃度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２１５ｍＯｓｍ／Ｌ未満のオスモル濃度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ未満のオスモル濃度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２０５ｍＯｓｍ／Ｌ未満のオスモル濃度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ未満のオスモル濃度を有する。

【0223】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約１００ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１２５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１７５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２７５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２７０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２５４ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６３ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５４ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５６ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５６ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５７ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５７ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５８ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５８ｍＯｓｍ／Ｌ～約２５９ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６１ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２６１ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２６２ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６３ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２６３ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６４ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２６４ｍＯｓｍ／Ｌ～約２６５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ～約２８０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。

【0224】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約１００ｍＯｓｍ／Ｌ、約１２５ｍＯｓｍ／Ｌ、約１５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約１７５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２００ｍＯｓｍ／Ｌ、約２１０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２２５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２３５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２４５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌ、約２６５ｍＯｓｍ／Ｌ、約２７０ｍＯｓｍ／Ｌ、または約２７５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。

【0225】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２６２．２６ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５９．７ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５７．５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５７．２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５５．２ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５４．７の張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２５５ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約２６０ｍＯｓｍ／Ｌの張度を有する。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンと、（ｉｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でＮａＣｌと、（ｉｉｉ）約２５０～２６０ｍＯｓｍ／Ｌの張度とを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でカリウムイオンと、（ｉｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でＮａＣｌと、（ｉｉｉ）約２５０～２６０ｍＯｓｍ／Ｌの張度とを含む。いくつかの態様では、ＭＲＭは、（ｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でカリウムイオンと、（ｉｉ）約５５ｍＭ～約９０ｍＭの濃度でＮａＣｌと、（ｉｉｉ）約２５０～２６０ｍＯｓｍ／Ｌの張度とを含む。

【0226】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約５０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約８０．５ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１７．７ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．９ｍＭのカルシウムイオンとを含む。

【0227】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約５０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約８０．５ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約２４ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約２．８ｍＭのカルシウムイオンとを含む。

【0228】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約４０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約８８．９ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約２４ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約２．８ｍＭのカルシウムイオンとを含む。

【0229】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約７２．２ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約２４ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約２．８ｍＭのカルシウムイオンとを含む。

【0230】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約６３．９ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約２４ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約２．８ｍＭのカルシウムイオンをと含む。

【0231】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約８０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約５５．６ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約２４ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約２．８ｍＭのカルシウムイオンとを含む。

【0232】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約５０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約８０．５ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１７．７ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．８ｍＭのカルシウムイオンとを含む。

【0233】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約５５ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約７６ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１７．２ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．７ｍＭのカルシウムイオンとを含む。

【0234】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約７２．２ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１６．８ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．６ｍＭのカルシウムイオンとを含む。

【0235】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約６５ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約６７．６ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１６．３ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．５ｍＭのカルシウムイオンとを含む。

【0236】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約６３．９ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１５．９ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウムイオンとを含む。

【0237】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約７５ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約５９．３ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１５．４ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．３ｍＭのカルシウムイオンとを含む。

【0238】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、約８０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉ）約５５．６ｍＭのＮａＣｌ；（ｉｉ）約１５ｍＭのグルコース；及び（ｉｉｉ）約１．２ｍＭのカルシウムイオンとを含む。

【0239】

代謝再プログラム化培地の張度は、任意の時点で、例えば、本明細書に開示されている等張性または低張性の状態に調整され得る。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地の張度は、細胞が代謝再プログラム化培地に加えられる前に、例えば、本明細書に開示されている等張性または低張性の状態に調整され得る。いくつかの態様では、細胞は、細胞操作前に、例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＣＲ模倣体を発現する構築物による形質導入前に低張性培地または等張性培地において培養される。いくつかの態様では、細胞は、細胞操作中に、例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＣＲ模倣体を発現する構築物による形質導入中に低張性培地または等張性培地において培養される。いくつかの態様では、細胞は、細胞操作後に、例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、またはＴＣＲ模倣体を発現する構築物による形質導入後に低張性培地または等張性培地において培養される。いくつかの態様では、細胞は、細胞増殖全体を通して低張性培地または等張性培地にて培養される。

【0240】

ＩＩ．Ａ．４．糖類
本開示のいくつかの態様は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭ（例えば、５ｍＭよりも高い、例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）の濃度でカリウムイオンと、（ｉｉ）糖類とを含む培地において免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養する方法を対象とする。いくつかの態様では、培地は低張性または等張性である。

【0241】

いくつかの態様では、糖類の目標濃度は、更に高濃度の糖類を含む基本培地から出発し、糖類の目標濃度に到達するように溶液を希釈することによって達成される。いくつかの態様では、糖類の目標濃度は、所望の濃度に到達するまで糖類を加えることにより、糖類の濃度を上昇させることによって達成される。いくつかの態様では、糖類は、単糖類、二糖類、または多糖類である。いくつかの態様では、糖類は、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、マルトース、スクロース、ラクトース、トレハロース、またはそれらの任意の組み合わせから選択される。特定の態様では、糖類はグルコースである。いくつかの態様では、培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含む。いくつかの態様では、培地は（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含む。いくつかの態様では、培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、培地は、等張性である。いくつかの態様では、培地は（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。いくつかの態様では、培地は（ｉ）５０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。いくつかの態様では、培地は（ｉ）少なくとも約４０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。いくつかの態様では、培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0242】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含む。いくつかの態様では、培地は（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は低張性である。いくつかの態様では、培地は、等張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５０ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）グルコースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約４０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭの濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）マンノースを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭの間である。

【0243】

いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２４ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約４．２９ｇ／Ｌ未満である。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約２４ｍＭ未満である。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ超である。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１９ｍＭ、約１５ｍＭ～約１８ｍＭ、約１５ｍＭ～約１７ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、約１６ｍＭ～約２０ｍＭ、約１６ｍＭ～約１９ｍＭ、約１６ｍＭ～約１８ｍＭ、約１６ｍＭ～約１７ｍＭ、約１７ｍＭ～約２０ｍＭ、約１７ｍＭ～約１９ｍＭ、または約１７ｍＭ～約１８ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約２０ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１０ｍＭ～約１５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４ｍＭ～約１４．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１４．５ｍＭ～約１５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５ｍＭ～約１５．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１５．５ｍＭ～約１６ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６ｍＭ～約１６．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１６．５ｍＭ～約１７ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７ｍＭ～約１７．５ｍＭである。いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約１７．５ｍＭ～約１８ｍＭである。

【0244】

いくつかの態様では、糖類、例えば、グルコースの濃度は、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１０．５ｍＭ、約１１ｍＭ、約１１．５ｍＭ、約１２ｍＭ、約１２．５ｍＭ、約１３ｍＭ、約１３．５ｍＭ、約１４ｍＭ、約１４．５ｍＭ、約１５ｍＭ、約１５．５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１６．５ｍＭ、約１７ｍＭ、約１７．５ｍＭ、約１８ｍＭ、約１８．５ｍＭ、約１９ｍＭ、約１９．５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２０．５ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、または約２５ｍＭである。

【0245】

いくつかの態様では、本開示に有用な培地は、（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度（例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）でカリウムイオンと、（ｉｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でＮａＣｌと、（ｉｉｉ）グルコースとを含む。いくつかの態様では、本開示に有用な培地は、（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度（例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）でカリウムイオンと、（ｉｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でのＮａＣｌと、（ｉｉｉ）グルコースと、（ｉｖ）２５０～２６０ｍＯｓｍ／Ｌの張度とを含む。いくつかの態様では、本開示に有用な培地は、（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度（例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）でカリウムイオンと、（ｉｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でのＮａＣｌと、（ｉｉｉ）約１０ｍＭ～約２４ｍＭの濃度でグルコースと、（ｉｖ）２５０～２６０ｍＯｓｍ／Ｌの張度とを含む。

【0246】

ＩＩ．Ａ．５．カルシウム
本開示のいくつかの態様は、（ｉ）少なくとも約５ｍＭ（例えば、５ｍＭよりも高い、例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）の濃度でカリウムイオンと、（ｉｉ）カルシウムイオンとを含む培地において免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を培養する方法を対象とする。いくつかの態様では、培地は低張性または等張性である。

【0247】

いくつかの態様では、カルシウムの目標濃度は、更に高濃度のカルシウムイオンを含む基本培地から出発し、カルシウムイオンの目標濃度に到達するように溶液を希釈することによって達成される。いくつかの態様では、カルシウムの目標濃度は、１以上のカルシウム塩を加えることにより、カルシウムイオンの濃度を上昇させることによって達成される。カルシウム塩の非限定的な例としては、臭化カルシウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、カルシウムシアナミド、フッ化カルシウム、水素化カルシウム、水酸化カルシウム、ヨウ素酸カルシウム、ヨウ化カルシウム、硝酸カルシウム、亜硝酸カルシウム、シュウ酸カルシウム、過塩素酸カルシウム四水和物、第一リン酸カルシウム、リン酸三カルシウム、硫酸カルシウム、チオシアン酸カルシウム四水和物、ヒドロキシアパタイト、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、カルシウム塩は塩化カルシウム（ＣａＣｌ_２）を含む。いくつかの態様では、カルシウム塩は、グルコン酸カルシウムを含む。

【0248】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、基礎培地の濃度よりも低い。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、基礎培地の濃度よりも高い。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．４ｍＭ超である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約２．８ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約２．５ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約２．０ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．９ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．８ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．７ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．６ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．５ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．４ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．３ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．２ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．１ｍＭ未満である。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．０ｍＭ未満である。

【0249】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．４ｍＭ～約２．８ｍＭ、約０．４ｍＭ～約２．７ｍＭ、約０．４ｍＭ～約２．５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．０ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．１ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．２ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．３ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．４ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．５ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．６ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．７ｍＭ～約２．０ｍＭ、約１．８ｍＭ～約２．０ｍＭ、約０．８～約０．９ｍＭ、約０．８～約１．０ｍＭ、約０．８～約１．１ｍＭ、約０．８～約１．２ｍＭ、約０．８～約１．３ｍＭ、約０．８～約１．４ｍＭ、約０．８～約１．５ｍＭ、約０．８～約１．６ｍＭ、約０．８～約１．７ｍＭ、約０．８～約１．８ｍＭ、約０．８～約１．９ｍＭ、約０．９～約１．０ｍＭ、約０．９～約１．１ｍＭ、約０．９～約１．２ｍＭ、約０．９～約１．３ｍＭ、約０．９～約１．４ｍＭ、約０．９～約１．５ｍＭ、約０．９～約１．６ｍＭ、約０．９～約１．７ｍＭ、約０．９～約１．８ｍＭ、約０．９～約１．９ｍＭ、約１．０～約１．１ｍＭ、約１．０～約１．２ｍＭ、約１．０～約１．３ｍＭ、約１．０～約１．４ｍＭ、約１．０～約１．５ｍＭ、約１．０～約１．６ｍＭ、約１．０～約１．７ｍＭ、約１．０～約１．８ｍＭ、約１．０～約１．９ｍＭ、約１．１～約１．２ｍＭ、約１．１～約１．３ｍＭ、約１．１～約１．４ｍＭ、約１．１～約１．５ｍＭ、約１．１～約１．６ｍＭ、約１．１～約１．７ｍＭ、約１．１～約１．８ｍＭ、約１．１～約１．９ｍＭ、約１．２～約１．３ｍＭ、約１．２～約１．４ｍＭ、約１．２～約１．５ｍＭ、約１．２～約１．６ｍＭ、約１．２～約１．７ｍＭ、約１．２～約１．８ｍＭ、約１．２～約１．９ｍＭ、約１．３～約１．４ｍＭ、約１．３～約１．５ｍＭ、約１．３～約１．６ｍＭ、約１．３～約１．７ｍＭ、約１．３～約１．８ｍＭ、約１．３～約１．９ｍＭ、約１．４～約１．５ｍＭ、約１．４～約１．６ｍＭ、約１．４～約１．７ｍＭ、約１．４～約１．８ｍＭ、約１．４～約１．９ｍＭ、約１．５～約１．６ｍＭ、約１．５～約１．７ｍＭ、約１．５～約１．８ｍＭ、約１．５～約１．９ｍＭ、約１．６～約１．７ｍＭ、約１．６～約１．８ｍＭ、約１．６～約１．９ｍＭ、約１．７～約１．８ｍＭ、約１．７～約１．９ｍＭ、または約１．８～約１．９ｍＭである。

【0250】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．８ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．９ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．０ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．１ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．２ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．８ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．８ｍＭ～約０．９ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．９ｍＭ～約１．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．０ｍＭ～約１．１ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．１ｍＭ～約１．２ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．２ｍＭ～約１．３ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．３ｍＭ～約１．４ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．４ｍＭ～約１．５ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．５ｍＭ～約１．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．７ｍＭ～約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は、約１．８ｍＭ～約１．９ｍＭである。

【0251】

いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭ、約０．９ｍＭ、約１．０ｍＭ、約１．１ｍＭ、約１．２ｍＭ、約１．３ｍＭ、約１．４ｍＭ、約１．５ｍＭ、約１．６ｍＭ、約１．７ｍＭ、約１．８ｍＭ、約１．９ｍＭ、または約２．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．７ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約０．９ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．０ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．１ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．２ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．３ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．４ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．５ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．６ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．７ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．８ｍＭである。いくつかの態様では、カルシウムイオンの濃度は約１．９ｍＭである。

【0252】

いくつかの態様では、本開示に有用な培地は、（ｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でカリウムイオンと、（ｉｉ）約０．５ｍＭ～約２．８ｍＭの濃度でカルシウムとを含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でカリウムイオンと、（ｉｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でＮａＣｌと、（ｉｉｉ）約０．５ｍＭ～約２．８ｍＭの濃度でカルシウムとを含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でカリウムイオンと、（ｉｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でＮａＣｌと、（ｉｉｉ）約１０ｍＭ～約２４ｍＭの濃度でグルコースと、（ｉｖ）約０．５ｍＭ～約２．８ｍＭの濃度でカルシウムとを含む。いくつかの態様では、培地は、（ｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でカリウムイオンと、（ｉｉ）約４０ｍＭ～約８０ｍＭの濃度でＮａＣｌと、（ｉｉｉ）約１０ｍＭ～約２４ｍＭの濃度でグルコースと、（ｉｖ）約０．５ｍＭ～約２．８ｍＭの濃度でカルシウムと、（ｖ）約２５０～２６０ｍＯｓｍ／Ｌの張度とを含む。

【0253】

ＩＩ．Ａ．６．サイトカイン
いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はサイトカインを含む。いくつかの態様では、培地は、低張性である。いくつかの態様では、培地は、等張性である。いくつかの態様では、培地は高張性である。いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はＩＬ－２を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、ＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地はＩＬ－２とＩＬ－２１とＩＬ－１５とを含む。

【0254】

サイトカインは、任意の時点で培地に添加され得る。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞が培地に加えられる前に、サイトカインが培地に加えられる。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞操作の前に、例えば、リガンド結合タンパク質をコードする構築物での形質導入前に、（ｉ）本明細書に開示されている濃度（例えば、５ｍＭよりも高い、例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）でカリウムと、（ｉｉ）サイトカインとを含む培地において培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞操作中に、例えば、リガンド結合タンパク質をコードする構築物での形質導入中に、（ｉ）本明細書に開示されている濃度（例えば、５ｍＭよりも高い、例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）でカリウムと、（ｉｉ）サイトカインとを含む培地において培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞操作の後に、例えば、リガンド結合タンパク質をコードする構築物での形質導入後に、（ｉ）本明細書に開示されている濃度（例えば、５ｍＭよりも高い、例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）でのカリウムと、（ｉｉ）サイトカインとを含む培地において培養される。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞増殖の全体を通して、（ｉ）本明細書に開示されている濃度（例えば、５ｍＭよりも高い、例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）でカリウムと、（ｉｉ）サイトカインとを含む培地において培養される。

【0255】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－７を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－７を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－７を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－７及びＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－７及びＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオン及び（ｉｉ）ＩＬ－２を含み、代謝再プログラム化培地はＩＬ－７及びＩＬ－１５を含まない。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンと（ｉｉ）ＩＬ－２及びＩＬ－２１とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオンと（ｉｉ）ＩＬ－２及びＩＬ－２１とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンと（ｉｉ）ＩＬ－２及びＩＬ－２１とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンと（ｉｉ）ＩＬ－７及びＩＬ－２１とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオンと（ｉｉ）ＩＬ－７及びＩＬ－２１とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンと（ｉｉ）ＩＬ－７及びＩＬ－２１とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンと（ｉｉ）ＩＬ－１５及びＩＬ－２１とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）４０ｍＭを超えるカリウムイオンと（ｉｉ）ＩＬ－１５及びＩＬ－２１とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンと（ｉｉ）ＩＬ－１５及びＩＬ－２１とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は低張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は等張性である。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は更にＮａＣｌを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0256】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている代謝再プログラム化培地（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む）は、約５０ＩＵ／ｍＬ～約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約５０ＩＵ／ｍＬ、約６０ＩＵ／ｍＬ、約７０ＩＵ／ｍＬ、約８０ＩＵ／ｍＬ、約９０ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２２５ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約２７５ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬ、または約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

【0257】

したがって、いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約６０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約７０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）約９０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１２５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１７５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２２５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２７５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約３５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約４５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＩＬ－２を含む代謝再プログラム化培地は更に、約１１５ｎＭ未満の濃度でＮａＣｌを含む。

【0258】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

【0259】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

【0260】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約５０ｎｇ／ｍＬ～約６００ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約５００ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約４５０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約４００ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ～約３００ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約６００ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約５００ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約４５０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約４００ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ～約３００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約５００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約４５０ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約４００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ～約３００ｎｇ／ｍＬ、約２５０ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約６００ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約５００ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約４５０ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約４００ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約３５０ｎｇ／ｍＬ、約２５０ｎｇ／ｍＬ～約３００ｎｇ／ｍＬ、または約２７５ｎｇ／ｍＬ～約３２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

【0261】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４９０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５２０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５３０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５４０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５５０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５６０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５７０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５８０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５９０ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約６００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７３．６ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約９０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約４００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

【0262】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている代謝再プログラム化培地（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む）は、約５０ＩＵ／ｍＬ～約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、培養培地は、約５０ＩＵ／ｍＬ、約６０ＩＵ／ｍＬ、約７０ＩＵ／ｍＬ、約８０ＩＵ／ｍＬ、約９０ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２２５ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約２７５ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬ、または約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

【0263】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約６０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約７０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約９０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１２５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１７５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２２５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２７５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約３５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約４５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＩＬ－２１を含む代謝再プログラム化培地は更に、約１１５ｎＭ未満の濃度でＮａＣｌを含む。

【0264】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

【0265】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３５ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

【0266】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている代謝再プログラム化培地（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む）は、約５００ＩＵ／ｍＬ～約１，５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、培養培地は、約５００ＩＵ／ｍＬ、約５５０ＩＵ／ｍＬ、約６００ＩＵ／ｍＬ、約６５０ＩＵ／ｍＬ、約７００ＩＵ／ｍＬ、約７５０ＩＵ／ｍＬ、約８００ＩＵ／ｍＬ、約８５０ＩＵ／ｍＬ、約９００ＩＵ／ｍＬ、約９５０ＩＵ／ｍＬ、約１，０００ＩＵ／ｍＬ、約１，０５０ＩＵ／ｍＬ、約１，１００ＩＵ／ｍＬ、約１，１５０ＩＵ／ｍＬ、約１，２００ＩＵ／ｍＬ、約１，２５０ＩＵ／ｍＬ、約１，３００ＩＵ／ｍＬ、約１，３５０ＩＵ／ｍＬ、約１，４００ＩＵ／ｍＬ、約１，４５０ＩＵ／ｍＬ、または約１，５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。

【0267】

いくつかの態様では、本開示のために有用な代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約６００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約６５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約７００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約７５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約８００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約８５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約９００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約９５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，０５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，１５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，２５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，３５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，４５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１，５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＩＬ－７を含む代謝再プログラム化培地は更に、約１１５ｎＭ未満の濃度でＮａＣｌを含む。

【0268】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。

【0269】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－７を含む。

【0270】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている代謝再プログラム化培地（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む）は、約５０ＩＵ／ｍＬ～約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、培養培地は約５０ＩＵ／ｍＬ、約６０ＩＵ／ｍＬ、約７０ＩＵ／ｍＬ、約８０ＩＵ／ｍＬ、約９０ＩＵ／ｍＬ、約１００ＩＵ／ｍＬ、約１２５ＩＵ／ｍＬ、約１５０ＩＵ／ｍＬ、約１７５ＩＵ／ｍＬ、約２００ＩＵ／ｍＬ、約２２５ＩＵ／ｍＬ、約２５０ＩＵ／ｍＬ、約２７５ＩＵ／ｍＬ、約３００ＩＵ／ｍＬ、約３５０ＩＵ／ｍＬ、約４００ＩＵ／ｍＬ、約４５０ＩＵ／ｍＬ、または約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。

【0271】

したがって、いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約６０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約７０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオン及び（ｉｉ）約９０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１２５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約１７５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２２５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約２７５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約３５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約４５０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）５ｍＭよりも高い濃度でのカリウムイオン及び（ｉｉ）約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、カリウムイオン及びＩＬ－１５を含む代謝再プログラム化培地は更に、約１１５ｎＭ未満の濃度でＮａＣｌを含む。

【0272】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は約０．１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１２ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１１ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約９ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約８ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約７ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約６ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約４ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ～約２ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ～約１０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１５ｎｇ／ｍＬ、または約１５ｎｇ／ｍＬ～約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。

【0273】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約０．１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約０．９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約９ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１１ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１２ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１３ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１４ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１６ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１７ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１８ｎｇ／ｍＬ、少なくとも約１９ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも約２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約２．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約３．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約４．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約５．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約６．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約７．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約８．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約９．０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は更にＮａＣｌを含み、カリウムイオン及びＮａＣｌの総濃度は１１０ｍＭ～１４０ｍＭである。

【0274】

いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約３０ｍＭ～少なくとも約１００ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、４０ｍＭを超えるカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約４５ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約５０ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約５５ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約７５ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約８０ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約８５ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は、少なくとも約９０ｍＭのカリウムイオンと、約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。いくつかの態様では、代謝再プログラム化培地は（ｉ）少なくとも約７０ｍＭのカリウムイオンと、（ｉｉ）約６０ｍＭのＮａＣｌと、（ｉｉｉ）約１．４ｍＭのカルシウムと、（ｉｖ）約１６ｍＭのグルコースと、（ｖ）約３００ｎｇ／ｍＬのＩＬ－２と、（ｖｉ）約０．４ｎｇ／ｍＬのＩＬ－１５とを含む。

【0275】

ＩＩ．Ａ．７．基礎培地
いくつかの態様では、基本培地は、平衡塩類溶液（例えば、ＰＢＳ、ＤＰＢＳ、ＨＢＳＳ、ＥＢＳＳ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、最小必須培地（ＭＥＭ）、基本培地イーグル（ＢＭＥ）、Ｆ－１０、Ｆ－１２、ＲＰＭＩ１６４０、グラスゴー最小必須培地（ＧＭＥＭ）、アルファ最小必須培地（アルファＭＥＭ）、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）、Ｍ１９９、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）ＣＴＳ（商標）Ｔ細胞増殖基本培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ（商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）、ＡＩＭ Ｖ、ＴＥＸＭＡＣＳ（商標）培地、ＰＲＩＭＥ－ＸＶ（登録商標）Ｔ細胞ＣＤＭ、Ｘ－ＶＩＶＯ（商標）１５（Ｌｏｎｚａ）、ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）ＴＩＬ増殖培地、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、基本培地はＰＲＩＭＥ－ＸＶ Ｔ細胞ＣＤＭを含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）を含む。いくつかの態様では、基本培地は、ＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）Ｐｒｏを含む。いくつかの態様では、基本培地は無血清である。いくつかの態様では、基本培地は、更に免疫細胞血清置換（ＩＣＳＲ）を含む。例えば、いくつかの態様では、基本培地は、ＩＣＳＲで補完したＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全、ＩＣＳＲで補完したＡＩＭ Ｖ、ＩＣＳＲで補完したＩＭＭＵＮＯＣＵＬＴ（商標）ＸＦ、ＩＣＳＲで補完したＲＰＭＩ、ＩＣＳＲで補完したＴＥＸＭＡＣＳ（商標）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。特定の態様では、基本培地はＯＰＴＭＩＺＥＲ（商標）完全を含む。

【0276】

いくつかの態様では、培地、例えば、ＭＲＭは、更に、約２．５％の血清補完剤（ＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ ＳＲ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、２ｍＭのＬ－グルタミン、２ｍＭのＬ－ｇｌｕｔａｍａｘ、ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液、Ｐｅｎ－ｓｔｒｅｐ、２０μｇ／ｍｌのｆｕｎｇｉｎ（商標）、ピルビン酸ナトリウム、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、培地は更に、Ｏ－アセチル－Ｌ－カルニチン塩酸塩を含む。いくつかの態様では、培地は更に、キナーゼ阻害剤を含む。

【0277】

いくつかの態様では、培地は更に、ＣＤ３アゴニストを含む。いくつかの態様では、ＣＤ３アゴニストは抗ＣＤ３抗体である。いくつかの態様では、抗ＣＤ３抗体はＯＫＴ－３を含む。

【0278】

いくつかの態様では、培地は更に、ＣＤ２８アゴニストを含む。いくつかの態様では、ＣＤ２８アゴニストは抗ＣＤ２８抗体である。いくつかの態様では、培地は更に、ＣＤ２７リガンド（ＣＤ２７Ｌ）を含む。いくつかの態様では、培地は更に、４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）を含む。

【0279】

いくつかの態様では、本開示は、本明細書で開示されている培地を含む細胞培養物、本明細書で開示されている培地を含む細胞バッグ、または本明細書で開示されている培地を含む生物反応器を含む。

【0280】

ＩＩ．Ｂ．細胞の供給源及び活性化
初代Ｔ細胞を含む本開示の免疫細胞（本明細書に記載されている方法を使用して改変及び培養することができる）は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び／または腫瘍組織を含む、多数の組織源から得ることができる。ＰＢＭＣを含む白血球は、周知の技法、例えば、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離及び白血球除去によって他の血液細胞から単離され得る。白血球アフェレーシス産物は、典型的には、リンパ球（Ｔ及びＢ細胞を含む）、単球、顆粒球、及び他の有核白血球を含有する。Ｔ細胞は、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を介する遠心分離によって、または対向流遠心溶出法によって他の白血球から更に単離され得る。ＣＤ３^＋、ＣＤ２５^＋、ＣＤ２８^＋、ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＧＩＴＲ^＋、及び／またはＣＤ４５ＲＯ^＋Ｔ細胞などのＴ細胞の特定の亜集団は、陽性選択または陰性選択の技法によって（例えば、蛍光に基づくまたは磁気に基づく細胞選別を使用して）更に単離され得る。例えば、Ｔ細胞は、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）、ＣＥＬＬｅｃｔｉｏｎ（商標）、ＤＥＴＡＣＨａＢＥＡＤ（商標）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）またはＭＡＣＳ（登録商標）細胞分離製品（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）などの様々な市販の抗体結合ビーズのうちのいずれかと、所望のＴ細胞の陽性選択または不要な細胞の除去のための陰性選択に十分な時間インキュベートすることによって単離され得る。

【0281】

いくつかの例では、自己Ｔ細胞はがん治療後にがん患者から直接得られる。ある特定のがん治療、特に免疫系を損なう治療の後、治療の直後に収集されたＴ細胞の品質は、エクスビボで増殖する、及び／またはエクスビボで操作された後に移植するための改善された能力を有し得ることが観察された。

【0282】

遺伝子改変の前または後（例えば、本明細書に記載されている改変方法のいずれかを使用して）にかかわらず、Ｔ細胞は、例えば、米国特許第５，８５８，３５８号、同第５，８８３，２２３号、同第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号、同第６，７９７，５１４号、同第６，８６７，０４１号、同第６，６９２，９６４号、同第６，８８７，４６６号、同第６，９０５，６８０号、同第６，９０５，６８１号、同第６，９０５，８７４号、同第７，０６７，３１８号、同第７，１４４，５７５号、同第７，１７２，８６９号、同第７，１７５，８４３号、同第７，２３２，５６６号、同第７，５７２，６３１号、及び同第１０，７８６，５３３号に記載されている方法を使用して、概して、活性化及び増殖され得、この各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。概して、Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤及びＴ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドに結合した表面との接触によってインビトロまたはエクスビボで増殖され得る。いくつかの態様では、Ｔ細胞集団は、例えば、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合断片、または表面上に不動化された抗ＣＤ３抗体との接触によって、またはカルシウムイオノフォアと併せたタンパク質キナーゼＣ活性化因子（例えば、ブリオスタチン）との接触などによって刺激され得る。Ｔ細胞の表面上のアクセサリー分子の共刺激については、アクセサリー分子に結合するリガンドが使用され得る。例えば、Ｔ細胞の集団を、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触させることができる。ＣＤ４^＋Ｔ細胞またはＣＤ８^＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体が用いられ得る。いくつかの態様では、Ｔ細胞を、例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（商標）、または市販のナノ粒子、例えばＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、またはその他の既知の活性化剤を使用して活性化し、増殖させる。

【0283】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている方法は、本明細書に記載されているように、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地（例えば、代謝再プログラム化培地）において、ヒト免疫細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現レベルを増加させるように改変されたＴ細胞及び／またはＮＫ細胞）をプログラム可能な細胞シグナル伝達足場（ＰＣＳ）と接触させることを含む。プログラム可能な細胞シグナル伝達足場（ＰＣＳ）の非限定的な例は、ＷＯ２０１８／０１３７９７及びＣｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３６（２）：１６０－１６９（２０１８）に記載されており、これらの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、本開示のプログラム可能な細胞シグナル伝達足場は、高表面積のメソ孔のシリカマイクロロッド（ＭＳＲ）を含む第１の層と；第１層をコーティングする脂質を含む第２の層と；足場上に搭載された複数の機能性分子とを含む。いくつかの態様では、機能性分子には、Ｔ細胞を活性化する刺激分子（Ｔ細胞活性化分子）が含まれるが、これに限定されない。いくつかの態様では、刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体の構成要素を結合する及び／またはクラスター化することによってＴ細胞を活性化する。いくつかの態様では、刺激分子は抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、機能性分子には１つ以上の共刺激抗原に特異的に結合する１つ以上の共刺激分子が含まれる。共刺激分子の代表的な例には、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＧＩＴＲ（ＣＤ３５７）、及び／またはＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）に特異的に結合する分子が挙げられるが、これらに限定されない。そのような足場は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）に一般的に関連付けられている機能を模倣することができ、これによって、足場は標的細胞に対して様々な機能を誘発、例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能を誘発することができる。本明細書で企図されているように、いくつかの態様では、足場は、標的細胞（例えば、Ｔ細胞）に存在する細胞表面分子と足場によって提示される様々な機能分子との間の直接的または間接的な相互作用を介してこれらの効果に介在する。いくつかの態様では、足場は、足場自体の物理的または化学的な特性を介して、標的細胞（例えば、Ｔ細胞）の生存、標的化された細胞（例えば、Ｔ細胞）の増殖、及び／または標的細胞（例えば、Ｔ細胞）の機能を調節する。

【0284】

ＩＩ．Ｃ．細胞
本開示はまた、参照細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する細胞）と比べて増加したレベルのｃ－Ｊｕｎポリペプチドを発現する改変された細胞も提供する。いくつかの態様では、細胞は自然にｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現しないが、ｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変されている。いくつかの態様では、細胞は、自然にｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現することができるが、内在性増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変されている。いくつかの態様では、細胞は自然にｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現することができるが、内在性ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を増やすように改変されている。別途指示されない限り、「ｃ－Ｊｕｎ過剰発現」（またはその派生語）はそのような改変された細胞うちのいずれかを含む。本明細書に記載されているように、当該技術分野で既知の任意の好適な方法を使用して本明細書に記載されている細胞を改変することができる。

【0285】

いくつかの態様では、本開示に有用な細胞は、目的のタンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列を含むように改変されているので、コードされたタンパク質は細胞にて発現される。本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、改変後、コードされたタンパク質の発現は、参照細胞（例えば、外来性ヌクレオチド配列を含むように改変されていない対応する細胞）と比べて増加する。いくつかの態様では、本明細書に記載されている細胞は、目的の様々なタンパク質（例えば、キメラ結合タンパク質、ｃ－Ｊｕｎポリペプチド、及び／またはＥＧＦＲｔ）をコードする複数の外来性ヌクレオチド配列を含むように改変されている。複数の外来性ヌクレオチド配列が関与する場合、いくつかの態様では、複数の外来性ヌクレオチド配列は、単一のポリシストロン性ポリヌクレオチドの一部であることができる。

【0286】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている細胞は、細胞における目的のタンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎ）の内在性発現を誘導する及び／または増加させることができる転写活性化因子で改変されている。本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、改変後、タンパク質の内在性発現は、参照細胞（例えば、転写活性化因子で改変されていない対応する細胞）と比べて増加する。本明細書で使用されるとき、「転写活性化因子」という用語は、遺伝子または遺伝子セットの転写を（例えば、核酸配列のエンハンサーまたはプロモーターの近位要素に結合し、それによってその転写を誘導することによって）増加させるタンパク質を指す。本開示とともに使用され得るそのような転写活性化因子の非限定的な例としては、転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）ベースの転写活性化因子、ジンクフィンガータンパク質（ＺＦＰ）ベースの転写活性化因子、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）／ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質（Ｃａｓ）システムベースの転写活性化因子、またはそれらの組み合わせが挙げられる。例えば、Ｋａｂａｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ６９（２）：１８８－１９７（Ｓｅｐ．２０１４）を参照されたく、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0287】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている細胞は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムベースの転写活性化因子、例えば、ＣＲＩＳＰＲ活性化（ＣＲＩＳＰＲａ）で改変されている。例えば、Ｎｉｓｓｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ ５４：１－１３（Ｍａｙ ２０１４）を参照されたく、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＣＲＩＳＰＲａは、エンドヌクレアーゼ活性を欠くが、そのガイドＲＮＡ及び標的ＤＮＡ核酸配列に結合する能力を保持する改変されたＣａｓタンパク質の使用を含むＣＲＩＳＰＲツールの一種である。本開示とともに使用され得るそのような改変されたＣａｓタンパク質の非限定的な例は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｐａｎｄｅｌａｋｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ１０（１）：１－１４（Ｊａｎ．２０２０）を参照されたく、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、改変されたＣａｓタンパク質は、改変されたＣａｓ９タンパク質（当該技術分野では「ｄＣａｓ９」とも呼ばれる）を含む。いくつかの態様では、改変されたＣａｓタンパク質は、改変されたＣａｓ１２ａタンパク質を含む。いくつかの態様では、本開示に有用な改変されたＣａｓタンパク質は、ガイドポリヌクレオチド（例えば、低分子ガイドＲＮＡ）に結合し（「改変されたＣａｓガイド複合体」）、ガイドポリヌクレオチドは、目的のタンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎ）をコードする核酸配列の領域に相補的である認識配列を含む。いくつかの態様では、ガイドポリヌクレオチドは、目的のタンパク質をコードする内在性核酸配列のプロモーター領域に相補的な認識配列を含む。いくつかの態様では、１つ以上の転写活性化因子は、改変されたＣａｓガイド複合体が細胞に導入された場合に、１つ以上の転写活性化因子が、核酸配列の調節要素（例えば、プロモーター領域）に結合することができ、それによって、コードされたタンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎ）の発現が誘導され、及び／または増加するように、改変されたＣａｓガイド複合体（例えば、改変されたＣａｓタンパク質のＮ末端及び／またはＣ末端）に結合されている。いくつかの態様では、１つ以上の転写活性化因子は、内在性遺伝子の調節要素（例えば、プロモーター領域）に結合することができ、それによって、コードされたタンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎ）の発現を誘導する及び／または増加させることができる。使用され得る一般的な活性化因子の非限定的な例としては、ＲＮＡＰのオメガサブユニット、ＶＰ１６、ＶＰ６４及びｐ６５が挙げられる。例えば、Ｋａｂａｄｉ ａｎｄ Ｇｅｒｓｂａｃｈ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ６９：１８８－１９７（２０１４）を参照されたく、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0288】

いくつかの態様では、１つ以上の転写リプレッサー（例えば、Ｋｒｕｐｐｅｌ関連ボックスドメイン（ＫＲＡＢ））は、細胞に導入された場合に、１つ以上の転写リプレッサーが、遺伝子、例えば、ｃ－Ｊｕｎの発現を妨害し得る遺伝子（例えば、Ｂａｃｈ２）の転写を抑制または低減するように、改変されたＣａｓガイド複合体（例えば、改変されたＣａｓタンパク質のＮ及び／またはＣ末端）に結合され得る。例えば、ＵＳ２０２０／００３０３７９（Ａ１）及びＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ１９：４５９（２０２１）を参照されたく、この各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、本開示に有用な改変されたＣａｓタンパク質は、１以上の転写活性化因子及び１以上の転写リプレッサーの双方に結合し得る。

【0289】

いかなる理論にも束縛されるものではないが、いくつかの態様では、そのような改変されたＣａｓタンパク質の使用は、目的の遺伝子の条件付き転写及び発現を可能にすることができる。例えば、いくつかの態様では、細胞（例えば、Ｔ細胞）は、プロテアーゼ（例えば、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ））及びｃ－Ｊｕｎのプロモーター領域を標的とする単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）に連結されているリガンド結合タンパク質（例えば、本明細書に記載されているＣＡＲまたはＴＣＲ）を含むように改変されている。いくつかの態様では、細胞は、リンカー（例えば、ＴＥＶ切断可能リなンカー）を介して転写活性化因子（例えば、ｄＣａｓ９－ＶＰ６４－ｐ６５－Ｒｔａ転写活性化因子（ＶＰＲ））に結合された改変されたＣａｓタンパク質に複合体化された、Ｔ細胞の活性化のためのリンカー（ＬＡＴ）を更に含むように改変されている。リガンド結合タンパク質が活性化されると、改変されたＣａｓタンパク質が核局在化のために放出され、ｃ－Ｊｕｎの発現を条件付きかつ可逆的に誘導する。Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒ ９（Ｓｕｐｐｌ２）：Ａ１６４（２０２１）これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0290】

当業者には明らかなように、いくつかの態様では、本明細書に記載されている細胞は、複数のアプローチの組み合わせを使用して改変されている。例えば、いくつかの態様では、細胞は、（ｉ）１つ以上のタンパク質（例えば、キメラ結合タンパク質及びＥＧＦＲｔ）をコードする外来性ヌクレオチド配列、及び（ｉｉ）内在性タンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎ）の発現を増加させる外来性転写活性化因子（例えば、ＣＲＩＳＰＲａ）を含むように改変されている。いくつかの態様では、細胞は、（ｉ）第１のタンパク質（例えば、キメラ結合タンパク質）をコードする外来性ヌクレオチド配列と、（ｉｉ）第２のタンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質）をコードする外来性ヌクレオチド配列とを含むように改変されている。いくつかの態様では、改変された細胞は更に、第３のタンパク質（例えば、ＥＧＦＲｔ）をコードする外来性ヌクレオチド配列を含み得る。本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、第１、第２及び第３のタンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列は、単一のポリシストロン性ベクターの一部であることができる。

【0291】

別途示されない限り、１つ以上の外来性ヌクレオチド配列及び／または転写活性化因子は、当該技術分野で既知の任意の好適な方法を使用して細胞内に導入され得る。１つ以上の外来性ヌクレオチド配列を細胞に送達するための好適な方法の非限定的な例としては、形質移入（形質転換及び形質導入としても知られる）、エレクトロポレーション、非ウイルス送達、ウイルス形質導入、脂質ナノ粒子送達、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。

【0292】

いくつかの態様では、本開示の免疫細胞（本明細書に記載されている方法を使用して改変及び培養され得る）は、例えば、インビトロまたはエクスビボで培養する前にヒト対象から単離される。いくつかの態様では、免疫細胞は他家細胞療法のためにヒト対象から単離される。いくつかの態様では、免疫細胞は自家細胞療法のためにヒト対象から単離される。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞）である。いくつかの態様では、免疫細胞はＮＫ細胞である。いくつかの態様では、免疫細胞はＴｒｅｇである。

【0293】

いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、本明細書に開示されている方法に従って培養前に操作される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、本明細書に開示されている方法に従って培養後に操作される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、細胞操作の前に、細胞操作中に、及び細胞操作の後に、本明細書に開示されている方法に従って、例えば、少なくとも５ｍＭ（例えば、５ｍＭよりも高い、例えば、約４０ｍＭ～約８０ｍＭ）のカリウムイオンを含む低張性培地または等張性培地において培養される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作される。いくつかの態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するように操作される。特定の態様では、細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を本明細書に開示されている条件下で、例えば、少なくとも約５ｍＭのカリウムイオンを含む低張性培地または等張性培地において培養することにより、より高い形質導入効率がもたらされる。いくつかの態様では、形質導入効率は、４ｍＭ以下のカリウムイオンを含む培地において培養された細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞と比べて、本明細書に開示されている方法に従って、少なくとも約６０ｍＭのカリウムイオンを含む低張性培地または等張性培地において培養された細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞では、少なくとも約２倍高い。いくつかの態様では、形質導入効率は、４ｍＭ以下のカリウムイオンを含む培地において培養された細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞と比べて、本明細書に開示されている方法に従って、少なくとも約６５ｍＭのカリウムイオンを含む低張性培地または等張性培地において培養された細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞では、少なくとも約２．５倍高い。

【0294】

本開示から明らかなように、いくつかの態様では、本開示に有用な免疫細胞（例えば、本明細書に提供されている方法を使用して改変及び培養された）は、当該技術分野で既知である任意の好適な免疫細胞を含む。更に、本開示の他の箇所に更に記載されているように、本開示の免疫細胞は、それらが自然界に天然に存在する対応する免疫細胞とは異なるように改変されている。例えば、本明細書に記載されている免疫細胞は、免疫細胞の独特な特性を付与するのに役立つ１つ以上のタンパク質を発現するように改変されている。具体的には、いくつかの態様では、本明細書で提供されている改変された免疫細胞は、参照細胞（例えば、本明細書に記載されているように改変されていない対応する免疫細胞）と比べて、ｃ－Ｊｕｎタンパク質を増加したレベルで発現する。いくつかの態様では、本明細書に記載されている改変された免疫細胞は、免疫細胞では自然に発現されないキメラ結合タンパク質（例えば、ＣＡＲ）も発現する。本開示から明らかなように、いくつかの態様では、キメラ結合タンパク質は、キメラ結合タンパク質をコードする外来性ポリヌクレオチドで細胞を改変することによって細胞において発現され得る。外来性ポリヌクレオチドによってコードされ、免疫細胞で発現され得る追加のタンパク質については、本開示の他の箇所で説明されている。そのようなポリヌクレオチドに関する非限定的な開示は以下に提供されている。

【0295】

ＩＩ．Ｃ．１．ｃ－Ｊｕｎをコードするポリヌクレオチド
本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、本明細書に提供されている方法を使用して改変及び培養された）は、ｃ－Ｊｕｎタンパク質を含むか、またはｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現することができる。免疫細胞がｃ－Ｊｕｎタンパク質を天然に発現できる場合、いくつかの態様では、内在性ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現が誘導され、それによって、タンパク質の増加または過剰発現を生じる。細胞におけるｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現（または過剰発現）を誘導する際に、いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎタンパク質が外から加えられる。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎタンパク質は細胞にて組換え発現される。例えば、いくつかの態様では、本明細書に記載されている細胞は、改変された細胞におけるｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現が、参照細胞（例えば、外来性ポリヌクレオチドを含むように改変されていない対応する細胞）と比べて増加するように、ｃ－Ｊｕｎタンパク質をコードするヌクレオチド配列（本明細書では「ｃ－Ｊｕｎヌクレオチド配列」とも称される）を含む外来性ポリヌクレオチドを含むように（例えば、遺伝的に）改変または操作されている。いくつかの態様では、細胞は、内在性ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現が参照細胞（例えば、転写活性化因子で改変されていない対応する細胞）と比べて増加するように、転写活性化因子（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムに基づく転写活性化因子、例えば、ＣＲＩＳＰＲａ）で改変されている。

【0296】

いくつかの態様では、改変（例えば、外から導入されるｃ－Ｊｕｎヌクレオチド配列及び／または転写活性化因子の導入）に起因して、操作された細胞はｃ－Ｊｕｎタンパク質を過剰発現する、すなわち、そのような改変がない対応する細胞（「参照細胞」）よりも高いレベル（例えば、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００％多く、または少なくとも１．５、２、３、４、５、または１０倍多く）のｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。「の高いレベル［もしくは量」を発現する」、「過剰発現する」、または「の高い発現を有する」という用語（及び本明細書で使用される語句の類似の形態）は相互交換可能に使用される。

【0297】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている操作された（または改変された）細胞は、参照細胞よりも少なくとも約２～１００倍多く、約５～５０倍多く、約５～４０倍多く、約５～３０倍多く、約５～２０倍多く、約８～２０倍多く、または約１０～２０倍多くのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。いくつかの態様では、本明細書に記載されている改変された細胞におけるｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現は参照細胞におけるｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現と比べて、少なくとも約０．５倍、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、または少なくとも約５０倍増加する。

【0298】

更に、本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、本開示の培養培地（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む）は、改変された細胞におけるｃ－Ｊｕｎタンパク質（または任意の他の目的のタンパク質）の発現を更に増加させるのにも役立つことができる。したがって、いくつかの態様では、本明細書で提供されている方法を使用して培養された場合、改変された細胞におけるｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質及び／または内在性ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を増加させることができる転写活性化因子をコードする外来性ヌクレオチド配列の導入の結果生じる）は、更に、参照細胞におけるｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現と比べて、少なくとも０．５倍、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、または少なくとも約５０倍増加する。したがって、いくつかの態様では、本明細書で提供されている方法は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドで免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を改変することを含み、改変後、免疫細胞におけるｃ－Ｊｕｎポリペプチドの発現は、参照細胞と比べて増加する。いくつかの態様では、免疫細胞は別の培地にて外来性ポリヌクレオチドで改変され、その後、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地に移され、培養され得る。

【0299】

本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、参照細胞は、以下のうちのいずれかを含み得る：（ｉ）改変されておらず、培養培地で培養されていない（すなわち、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含まない、例えば、ＴＣＭ）対応する細胞、（ｉｉ）改変されているが、培養培地で培養されていない対応する細胞、（ｉｉｉ）改変されていないが、培養培地で培養された対応する細胞、または（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）の任意の組み合わせ。

【0300】

本開示から明らかなように、いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、本明細書で提供されている方法を使用して培養された）は、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の量の増加と組み合わせて１つ以上の追加の導入遺伝子を発現するように改変されている。例えば、いくつかの態様では、本開示に有用な免疫細胞は、以下を含む：（ｉ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする第１の外来性ヌクレオチド配列、及び（ｉｉ）キメラ結合タンパク質をコードする第２の外来性ヌクレオチド配列。いくつかの態様では、第１及び第２のヌクレオチド配列は、単一のポリヌクレオチド（本明細書では「ポリシストロン性ポリヌクレオチド」と呼ばれる）の一部である。そのようなポリシストロン性ポリヌクレオチドの非限定的な例については、以下で更に記載されている。本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、免疫細胞のそのような改変は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において生じる。いくつかの態様では、免疫細胞は、参照培地（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含まない培地）において改変され、その後、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において培養される。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、改変前に５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にて培養することができる。いくつかの態様では、改変されたＴ細胞は更に、改変後に５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地中にて培養することができる。いくつかの態様では、免疫細胞は、本明細書に記載されているものなどの１つ以上の導入遺伝子をコードする外来性ヌクレオチド配列での改変の前、改変中、及び改変後に、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において培養される。

【0301】

ｃ－Ｊｕｎは、活性化因子タンパク質－１（ＡＰ－１）ファミリーに属する発がん性転写因子である。これは、様々なタンパク質（例えば、ｃ－Ｆｏｓ）と相互作用して、細胞増殖及び腫瘍進行を含む多様な範囲の細胞シグナル伝達経路を調節する二量体複合体を形成する。したがって、ある特定のがんでｃ－Ｊｕｎ発現の増加が観察され、そのようながんを治療するためのｃ－Ｊｕｎアンタゴニストの開発に大きな関心が寄せられてきた。例えば、Ｂｒｅｎｎａｎ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ３９（１）：１８４（Ｓｅｐ．２０２０）を参照されたい。

【0302】

ヒトでは、ｃ－Ｊｕｎタンパク質は、第１染色体（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿０００００１．１１のヌクレオチド５８，７８０，７９１～５８，７８４，０４７、マイナス鎖方向）に位置するＪＵＮ遺伝子によってコードされる。ＪＵＮ遺伝子、及びそのコードされるタンパク質の同義語が知られており、これらとしては、「Ｊｕｎがん原遺伝子、ＡＰ－１転写因子サブユニット」、「ｖ－Ｊｕｎトリ肉腫ウイルス１７がん遺伝子ホモログ」、「転写因子ＡＰ－１」、「Ｊｕｎがん遺伝子」、「ＡＰ－１」、「Ｊｕｎ活性化ドメイン結合タンパク質」、「ｐ３９」、及び「エンハンサー結合タンパク質ＡＰ１」が挙げられる。野生型ヒトｃ－Ｊｕｎタンパク質配列は、３３１アミノ酸長である。野生型ヒトｃ－Ｊｕｎのアミノ酸配列及び核酸配列をそれぞれ表１及び表２に示す。

【0303】

野生型ヒトｃ－Ｊｕｎ（ＵｎｉＰｒｏｔ識別子：Ｐ０５４１２－１）タンパク質配列は、３３１アミノ酸長（配列番号１３）である。アミノ酸配列及び核酸配列をそれぞれ表１及び表２に示す。

【表1】

【表2-1】

【表2-2】

【0304】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている免疫細胞は、配列番号１２に示される野生型ヌクレオチド配列のような野生型ｃ－Ｊｕｎタンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列を含むように改変されている。あるいは、いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞は、免疫細胞の疲弊を防止及び／または軽減する能力を保持する変異型ｃ－Ｊｕｎタンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列を含むように改変される。いくつかの態様では、本明細書で開示されている免疫細胞上で発現され得る変異型ｃ－Ｊｕｎタンパク質は、野生型ｃ－Ｊｕｎタンパク質（配列番号１３）のＣ末端のアミノ酸残基（例えば、Ｃ末端の５０、７５、１００、１５０、２００、もしくは２５０以上の残基）、Ｃ末端部分（例えば、４分の１、３分の１、もしくは半分）、またはＣ末端ドメイン（例えば、イプシロン、ｂＺＩＰ、及びそのアミノ酸のＣ末端）と少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％）の配列同一性を含む。いくつかの態様では、野生型ｃ－Ｊｕｎ（すなわち、配列番号１３）のＮ末端のアミノ酸残基（例えば、Ｎ末端の５０、７５、１００、もしくは１５０以上）、Ｎ末端部分（例えば、４分の１、３分の１、もしくは半分）、またはＮ末端ドメイン（例えば、デルタ、トランス活性化ドメイン、及びそのアミノ酸のＮ末端）を欠失させる、変異させる、またはそうでなければ不活性化する。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎは変異型ヒトｃ－Ｊｕｎであり、任意でそのトランス活性化ドメインまたはデルタドメインに不活性化変異を含む。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎ変異体は、Ｓ６３Ａ及びＳ７３Ａの変異を含む。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎ変異体は、野生型ｃ－Ｊｕｎ（配列番号１３）と比べて残基２と１０２との間に欠失を含む。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎ変異体は、野生型ｃ－Ｊｕｎ（配列番号１３）と比べて残基３０と５０との間に欠失を含む。いくつかの態様では、変異型ｃ－Ｊｕｎは、野生型ヒトｃ－Ｊｕｎ（配列番号１３）と比べて（ｉ）Ｓ６３Ａ及びＡ７３Ａの変異、または（ｉｉ）残基２と１０２との間、もしくは残基３０と５０との間に欠失を含む。本開示に有用な変異型ｃ－Ｊｕｎタンパク質の非限定的な例は、ＵＳ２０１９／０１８３９３２（Ａ１）及びＵＳ２０１７／００３７３７６（Ａ１）に提供されており、この各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0305】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞は、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ヌクレオチド配列を含むように改変されており、外来性ヌクレオチド配列は、配列番号１～１１に示される核酸配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎタンパク質をコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号１～１１のうちのいずれか１つに示される核酸配列を含む。

【0306】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号１に示される核酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号１に示される核酸配列に対して少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号１に示される核酸配列を含む。

【0307】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号２に示される核酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号２に示される核酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号２に示される核酸配列を含む。

【0308】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号３に示される核酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号３に示される核酸配列に対して少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号３に示される核酸配列を含む。

【0309】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号４に示される核酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号４に示される核酸配列に対して少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％を有する。いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号４に示される核酸配列を含む。

【0310】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号５に示される核酸配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号５に示される核酸配列に対して少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号５に示される核酸配列を含む。

【0311】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号６に示される核酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号６に示される核酸配列に対して少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号６に示される核酸配列を含む。

【0312】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号７に示される核酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号７に示される核酸配列に対して少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号７に示されるヌクレオチド配列を含む。

【0313】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号８に示される核酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号８に示される核酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号８に示されるヌクレオチド配列を含む。

【0314】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号９に示される核酸配列に対して少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号９に示される核酸配列に対して少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドは、配列番号９に示されるヌクレオチド配列を含む。

【0315】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号１０に示される核酸配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、配列番号１０に示される核酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、外来性ヌクレオチドは、配列番号１０に示されるヌクレオチド配列を含む。

【0316】

例示的なｃ－Ｊｕｎのヌクレオチド配列を（下記）表３に示す。

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【表3-4】

【表3-5】

【0317】

本明細書に開示されるｃ－Ｊｕｎヌクレオチド配列は、当該技術分野で既知の任意の方法を使用してコドン最適化され得る。例えば、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｃ－Ｊｕｎヌクレオチド配列のコドンは、野生型ヌクレオチド配列（例えば、配列番号１１）と比べて、以下のパラメータのうちの１つ以上を改変（例えば、増加または減少）するように最適化されている：（ｉ）コドン適応指数（すなわち、コドン使用バイアス）、（ｉｉ）グアニン－シトシン（ＧＣ）ヌクレオチド含有量、（ｉｉｉ）ｍＲＮＡ二次構造及び不安定モチーフ、（ｉｖ）反復配列（例えば、直接反復、反転反復、二重反復）、（ｖ）制限酵素認識部位、または（ｖｉ）それらの組み合わせ。

【0318】

いくつかの態様では、本明細書で提供されているｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチドは、野生型ｃ－Ｊｕｎヌクレオチド配列（例えば、配列番号１１）で形質移入された細胞における対応する発現と比べて、免疫細胞（例えば、ヒト免疫細胞）に形質移入されたか、形質導入されたか、または他の方法で導入された場合に、コードされるｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、外来性ポリヌクレオチドを含むように改変した免疫細胞におけるｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現は、野生型ｃ－Ｊｕｎヌクレオチド配列（配列番号１１）で発現するように形質移入されたか、形質導入されたか、またはそうでなければ遺伝子改変された細胞における対応する発現と比べて、少なくとも約０．５倍、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、または少なくとも約５０倍増加する。

【0319】

上記に提供されている特定の開示は一般的には、ｃ－Ｊｕｎタンパク質（野生型ｃ－Ｊｕｎまたはその変異型）をコードする外来性ヌクレオチド配列を含むように免疫細胞を改変することに関する一方で、細胞にてｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現（野生型またはその変異体のいずれか）を誘導する及び／または増加させるのに他の好適な方法を使用できることは当業者には明らかである。例えば、本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、内在性ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現は、転写活性化因子（例えば、ＣＲＩＳＰＲａ）で増加し得る。別途示されない限り、外来性ヌクレオチド配列を使用する上記に提供されている開示は、本明細書で提供されている細胞におけるｃ－Ｊｕｎタンパク質発現を誘導及び／または増加させる他のアプローチ（例えば、転写活性化因子、例えば、ＣＲＩＳＰＲａ）にも同様に適用される。

【0320】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現の増加は、免疫細胞（例えば、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞のようなＴ細胞）の１つ以上の特性を改善及び／または増強し得る。そのような特性の非限定的な例としては、疲弊に対する耐性（例えば、ＰＤ－１、ＣＤ３９、ＴＩＭ－３、及び／またはＬＡＧ－３などの疲弊マーカーの発現の低減、存続性／生存の増加、機能不全状態の発症の遅延、及び／またはサイトカイン（例えば、ＩＦＮ－γ及び／またはＩＬ－２）産生の増加によって示される）、増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）／増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）の増加、抗原感受性の増大、エフェクター機能の改善、特に反復抗原刺激後のエフェクター機能の改善（例えば、抗原刺激時のサイトカイン産生、標的抗原を発現する細胞の溶解、または双方）、またはそれらの組み合わせが挙げられる。

【0321】

疲弊、細胞表現型、存続性、細胞傷害性及び／または殺傷、増殖、サイトカインの産生／放出、及び遺伝子発現プロファイルを測定するために有用なアッセイは、当該技術分野で既知であり、それらには、例えば、フローサイトメトリー、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）、ＩＮＣＵＣＹＴＥ（登録商標）免疫細胞殺傷分析、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）または同様のアッセイ、持続的抗原刺激アッセイ、バルク及び単一細胞ＲＮＡｓｅｑ（例えば、Ｆｒｏｎ Ｇｅｎｅｔ．２０２０；１１：２２０；２０１９ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ３５：ｉ４３６－４４５；２０１９ Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄ．Ｄａｔａ Ｓｃｉ．２：１３９－１７３を参照のこと）、細胞傷害性／殺傷アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットならびに本明細書で記載されているか、または、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｒ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９９９－２０２１）に記載されている、他の標準的な分子生物学及び細胞生物学の方法、あるいはその他の方法が挙げられる。

【0322】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現の増加は、疲弊に対する免疫細胞の耐性を増加させる。いくつかの態様では、疲弊に対する耐性は、参照細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質発現が増加するように改変されていない対応する細胞）と比べて、少なくとも約０．５倍、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、または少なくとも約５０倍増加する。

【0323】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現の増加によって疲弊した細胞の疲弊を軽減することができる。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現の増加は、例えば、本明細書に記載されている１つ以上のアッセイを使用して測定された場合、参照細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現が増加するように改変されていない対応する疲弊細胞）と比べて、疲弊を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％減少させ得る。

【0324】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現の増加によって細胞にて疲弊の開始が遅延する。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現の増加は、例えば、本明細書に記載されている１つ以上のアッセイを使用して測定された場合、参照細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現が増加するように改変されていない対応する細胞）と比べて、疲弊の発症を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％遅延させる。いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の高い発現は疲弊の開始を少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、少なくとも約７日、少なくとも約８日、少なくとも約９日、少なくとも約１０日、少なくとも約１１日、少なくとも約１２日、少なくとも約１３日、または少なくとも約１４日以上遅延させる。

【0325】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている細胞における１つ以上の疲弊マーカー（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、及び／またはＬＡＧ－３）の発現は、参照細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現が増加するように改変されていない対応する細胞）と比べて、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％減少する。

【0326】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている細胞における１つ以上の疲弊マーカー（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、及び／またはＬＡＧ－３）の発現は、参照細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように改変されていない対応する細胞）と比べて、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３．０倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約５５倍、少なくとも約６０倍、少なくとも約６５倍、少なくとも約７０倍、少なくとも約７５倍、少なくとも約８０倍、少なくとも約８５倍、少なくとも約９０倍、少なくとも約９５倍、または少なくとも約１００倍以上減少する。

【0327】

いくつかの態様では、免疫細胞の集団（例えば、本明細書に提供されている方法を使用して改変及び培養された）の疲弊状態は、免疫細胞集団内の所与の疲弊マーカー（例えば、ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、及び／またはＬＡＧ－３）を発現する細胞の量（例えば、数及び／または割合）を定量することによって決定され得る。例えば、免疫細胞集団が増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変されている（例えば、キメラ結合タンパク質と組み合わせて）場合、本明細書に記載されているように改変されていない対応する免疫細胞集団の量と比べて、所与の疲弊マーカーを発現する細胞の量（例えば、数及び／または割合）は、低減する。したがって、いくつかの態様では、本明細書に記載されている改変した免疫細胞の集団にて所与の疲弊マーカーを発現する細胞の量は、本明細書に記載されているように改変されなかった免疫細胞の対応する集団における量と比べて、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％低下する。

【0328】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現の増加は、例えば、インビボで対象に投与される場合、免疫細胞の存続性／生存を増加することができる。いくつかの態様では、参照細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を増加するように改変されなかった対応する細胞）と比べて、細胞の存続性／生存は、少なくとも約０．５倍、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、または少なくとも約５０倍増加する。

【0329】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞の存続性／生存期間は、本明細書に記載されているように改変されなかった免疫細胞の対応する集団における量と比べて、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％増加する。

【0330】

したがって、いくつかの態様では、本開示の免疫細胞は、改変及び培養後、免疫細胞の存続性／生存が参照細胞と比べて増加するように、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように（例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ヌクレオチド配列及び／または内在性ｃ－Ｊｕｎの発現を増加させることができる転写活性化因子で）改変されており、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地で培養される。本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、参照細胞は、（ｉ）ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように改変されていないが、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において培養されたか、（ｉｉ）ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように改変されているが、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において培養されていないか、または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）との双方である、対応する免疫細胞を含む。

【0331】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現の増加は、例えば、抗原刺激の際に免疫細胞の増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）／増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を増加させ得る。いくつかの態様では、細胞の増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）／増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）は、参照細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を増加させるように改変されなかった対応する細胞）と比べて、少なくとも約０．５倍、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、または少なくとも約５０倍増加する。

【0332】

いくつかの態様では、免疫細胞の増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）／増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）は、例えば、抗原刺激の際、本明細書に記載されているように改変されなかった免疫細胞の対応する集団における量と比べて、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％増加する。

【0333】

したがって、いくつかの態様では、本開示の免疫細胞は、改変及び培養後、免疫細胞の増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）／増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）が参照細胞と比べて増加するように、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように（例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ヌクレオチド配列及び／または内在性ｃ－Ｊｕｎの発現を増加させることができる転写活性化因子で）改変されており、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地で培養される。本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、参照細胞は、（ｉ）ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように改変されていないが、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において培養されたか、（ｉｉ）ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように改変されているが、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において培養されていないか、または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）との双方である、対応する免疫細胞を含む。

【0334】

いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現の増加は、細胞のエフェクター機能、例えば、サイトカイン（例えば、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及び／またはＩＬ－２）の産生、グランザイム放出、及び／または細胞傷害性を増加させ得る。いくつかの態様では、エフェクター機能の増加は持続的抗原刺激に反応したものである。本明細書で使用されるとき「持続的抗原刺激」または「慢性抗原刺激」という用語は、免疫細胞が刺激される、または活性化されるように免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）がその同族抗原に繰り返しさらされることを指す。いくつかの態様では、持続的抗原刺激は、同族抗原に免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）を少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、少なくとも約１か月間、少なくとも約２か月間、少なくとも約３か月間、少なくとも約４か月間、少なくとも約５か月間、少なくとも約６か月間、少なくとも約７か月間、少なくとも約８か月間、少なくとも約９か月間、少なくとも約１０か月間、少なくとも約１１か月間、または少なくとも約１年間さらすことを含む。いくつかの態様では、持続的抗原刺激は継続的であることができる。いくつかの態様では、持続的抗原刺激は、複数回の抗原刺激を含むことができ、各回の抗原刺激の後に非抗原刺激期間が続く。いくつかの態様では、持続的抗原刺激は、少なくとも約２回、少なくとも約３回、少なくとも約４回、少なくとも約５回、または少なくとも約６回以上の抗原刺激回数を含む。本開示から明らかであり、当該技術分野で既知のように、免疫細胞に対するそのような持続的抗原刺激は、免疫細胞の疲弊につながることができる。

【0335】

いくつかの態様では、細胞のエフェクター機能は、参照細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を増加させるように改変されなかった対応する細胞）と比べて、少なくとも約０．５倍、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、または少なくとも約５０倍増加する。

【0336】

いくつかの態様では、参照細胞と比べて、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の高い発現は細胞のエフェクター機能を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％増加させることができる。

【0337】

したがって、いくつかの態様では、本開示の免疫細胞は、改変及び培養後、例えば、持続的抗原刺激に応答して免疫細胞のエフェクター機能が参照細胞と比べて増加するように、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように（例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ヌクレオチド配列及び／または内在性ｃ－Ｊｕｎの発現を増加させることができる転写活性化因子で）改変されており、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地で培養される。本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、参照細胞は、（ｉ）ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように改変されていないが、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において培養されたか、（ｉｉ）ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように改変されているが、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地において培養されていないか、または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）との双方である、対応する免疫細胞を含む。

【0338】

いくつかの態様では、（例えば、本明細書に記載されている）ｃ－Ｊｕｎの発現レベルが増加するように改変された細胞は、対照細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現していない細胞）と比べて、連続、常在または逐次の刺激アッセイなどの抗原刺激アッセイ（実施例３、または例えば、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，２８（４）：４１５－４２８；Ｋｕｎｋｅｌｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３（４）：３６８－３７９に記載されているものなど、この各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）において少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、またはそれ以上の追加の回の間、エフェクター機能、例えば、サイトカイン（例えば、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、及び／またはＩＬ－２）産生、グランザイム放出、及び／または細胞傷害性（例えば、関連する標的細胞を殺傷する能力）の増加を保持する。

【0339】

いくつかの態様では、参照培養培地において培養された対応する免疫細胞と比べて、本開示の代謝再プログラム化培地（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む）において培養された免疫細胞は、少なくとも２回の抗原刺激後、少なくとも３回の抗原刺激後、少なくとも４回の抗原刺激後、少なくとも５回の抗原刺激後、少なくとも６回の抗原刺激後に、より多くの量のサイトカイン（例えば、ＩＦＮ－γ及び／またはＩＬ－２）を産生することができる。したがって、いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、抗原刺激に応答した免疫細胞によるサイトカインの産生を増加させる方法であり、この方法は、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む培地にて免疫細胞を培養することを含む。本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、免疫細胞は、参照細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドの高いレベルを有するように改変されていない対応する免疫細胞）と比べて、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルを増加するように改変されている。

【0340】

いくつかの態様では、培養後、抗原刺激に応答した改変された免疫細胞によるサイトカインの産生は、参照細胞（例えば、本明細書に記載されている）と比べて、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍、少なくとも約１２倍、少なくとも約１３倍、少なくとも約１４倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約１６倍、少なくとも約１７倍、少なくとも約１８倍、少なくとも約１９倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約３５倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約４５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約７５倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約７５０倍、または少なくとも約１，０００倍以上増加する。いくつかの態様では、培養後、抗原刺激に応答した改変された免疫細胞によるサイトカインの産生は、参照細胞と比べて、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％増加する。

【0341】

Ｔ細胞におけるｃ－Ｊｕｎの高い発現は、例えば、Ｔ細胞機能不全（例えば、Ｔ細胞の疲弊）を緩和または防止することによって、細胞の活性状態を持続するのに役立つことができる。したがって、本明細書で提供されている細胞におけるｃ－Ｊｕｎタンパク質発現を増加させる様々なアプローチ（例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ポリヌクレオチド及び／または内在性ｃ－Ｊｕｎの発現を増加させることができる転写活性化因子で細胞を改変する）を使用して、Ｔ細胞などの免疫細胞を操作することができ、したがって、これらの細胞は、所望の標的細胞（例えば、本明細書に記載されている内在性ＴＣＲの標的またはキメラ結合タンパク質の標的）に対して持続的で強力な細胞傷害性を示す。ｃ－Ｊｕｎを過剰発現しないＴ細胞と比べて、本明細書に開示されている操作されたＴ細胞（ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を増加した）は、上記に記載されているＴ細胞の疲弊の徴候が少ない。

【0342】

更に、本開示から明らかなように、いくつかの態様では、本明細書で提供されている改変された免疫細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現している）のうちのいずれかを、本明細書で提供されている方法を使用して（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む代謝再プログラム化培地において）培養した場合、上記の特性のうちの１つ以上が更に増強される。例えば、いくつかの態様では、参照細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変されているが、本明細書に記載されている代謝再プログラム化培地で培養されていない、及び／または本明細書に記載されている代謝再プログラム化培地で培養されているが、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変されていない）と比べて、本開示の免疫細胞（増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変されており、代謝再プログラム化培地（例えば、５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含む）で培養されているは、以下のうちの１つ以上を呈することができる：（ｉ）疲弊に対する耐性の増加（例えば、ＰＤ－１、ＣＤ３９、ＴＩＭ－３、及び／またはＬＡＧ－３のような疲弊マーカーの発現の低下、存続性／生存の延長、機能不全状態の発症の遅延及び／またはサイトカイン産生の増加によって示される）、（ｉｉ）増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）／増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）の増加、（ｉｉｉ）抗原感受性の増加、（ｉｖ）エフェクター機能の増加（特に反復抗原刺激後）（例えば、抗原刺激時のサイトカイン産生、標的抗原を発現する細胞の溶解、もしくは双方）、または（ｖ）それらの組み合わせ。

【0343】

ＩＩ．Ｃ．２．追加の翻訳可能な配列
いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、本明細書で提供されている方法を使用して改変及び培養される）は、１つ以上の追加の目的タンパク質を発現し得る。例えば、いくつかの態様では、本明細書に記載されている改変された免疫細胞は更に、追加の目的のタンパク質をコードする１以上の外来性ヌクレオチド配列を含む。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示される免疫細胞は、（ｉ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする第１の外来性ヌクレオチド配列と、目的の追加のタンパク質をコードする１つ以上の外来性ヌクレオチド配列と、を含む。そのような追加の翻訳可能配列の非限定例を以下に示す。

【0344】

リガンド結合タンパク質／キメラ結合タンパク質
いくつかの態様では、本開示に有用な（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎポリペプチドを発現するように改変された）免疫細胞は、リガンド結合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を更に含む。本明細書で使用される場合、「リガンド結合タンパク質」という用語は、目的の分子（すなわち、リガンド）（例えば、腫瘍細胞上に発現する抗原またはペプチド／ＭＨＣ複合体）と結合することができる任意のタンパク質を指す。いくつかの態様では、リガンド結合タンパク質は、キメラ結合タンパク質である。本明細書で使用される場合、「キメラ結合タンパク質」という用語は、１つ以上のリガンド（例えば、抗原（例えば、抗原結合部分を含む））に結合することができ、もともと別個のタンパク質をコードする２つ以上のポリヌクレオチド配列の接続を介して作り出されるタンパク質を指す。別途示されない限り、この用語は、本開示において同義に使用することができる。

【0345】

リガンド結合タンパク質（例えば、キメラ結合タンパク質）の非限定例としては、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）、Ｔ細胞受容体模倣体（ＴＣＲ模倣体）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。

【0346】

本開示の他の箇所で更に説明されているように、いくつかの態様では、リガンド結合タンパク質は、遺伝子編集ツール（例えば、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓシステム）と関連付けることができ、リガンド結合タンパク質の活性化は、１つ以上の遺伝子の発現及び／または活性が細胞において調節されるように、遺伝子編集ツールの活性化を誘導し得る。例えば、いくつかの態様では、本明細書に記載されている細胞（例えば、Ｔ細胞）は、プロテアーゼ及び目的の遺伝子の調節領域（例えば、プロモーター）を標的とするシングルガイドＲＮＡと連結されたキメラ結合タンパク質（例えば、ＣＡＲ）を含むように改変されている。いくつかの態様では、細胞は、例えば、リンカーを介して遺伝子編集ツールと複合体化された、Ｔ細胞活性化のためのリンカー（ＬＡＴ）を更に含むよう改変される。（例えば、抗原刺激による）キメラ結合タンパク質の活性化は、核局在化及び遺伝子発現の調節のための遺伝子編集ツールの放出を可能にする。そのようなキメラ結合タンパク質の更なる態様は、本開示の別の場所で示す。Ｐｉｅｔｒｏｂｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ ２２（１９）：１０８２８（Ｏｃｔ．２０２１）もまた参照されたく、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0347】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、本開示に有用なキメラ結合タンパク質はＣＡＲを含む。したがって、いくつかの態様では、本明細書で提供されている方法を使用して培養することができる免疫細胞は、ＣＡＲ及び高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変されている。いくつかの態様では、免疫細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞であり、ＣＡＲ及び高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞であり、ＣＡＲ及び高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞の双方を含み、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞の各々は、ＣＡＲ及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。いくつかの態様では、本明細書に開示されているＣＡＲ発現細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞、例えば、モノＣＡＲ Ｔ細胞、ゲノム編集ＣＡＲ Ｔ細胞、二重ＣＡＲ Ｔ細胞、またはタンデムＣＡＲ Ｔ細胞である。そのようなＣＡＲ Ｔ細胞の例は、国際出願番号第２０２０／０２８４００号において提供されており、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0348】

いくつかの態様では、（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質と組み合わせて発現され得る）ＣＡＲは、標準的ＣＡＲとして設計される。「標準的ＣＡＲ」では、様々な構成要素（例えば、細胞外標的化ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達／活性化ドメイン）が直線的に単一の融合タンパク質として構築される。いくつかの態様では、ＣＡＲは第一世代のＣＡＲとして設計される。「第一世代」のＣＡＲは細胞外結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、及び１以上の細胞内シグナル伝達ドメインから構成される。第一世代のＣＡＲは全て、細胞内シグナル伝達ドメインとしてＣＤ３ζ鎖ドメインを含有する。いくつかの態様では、ＣＡＲは、第二世代のＣＡＲとして設計される。「第二世代」のＣＡＲは、更に共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ２８または４－１ＢＢ）を含有する。いくつかの態様では、ＣＡＲは第三世代のＣＡＲとして設計される。「第三世代」のＣＡＲは、複数の共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ２８－４－１ＢＢまたはＣＤ２８－ＯＸ４０）を含有することを除いて第二世代のＣＡＲと同様である。いくつかの態様では、ＣＡＲは第四世代のＣＡＲとして設計される。「第四世代」のＣＡＲ（ＴＲＵＣＫまたは強化型ＣＡＲとしても知られている）は、機能を更に向上させることができる追加の因子を更に含有する。例えば、いくつかの態様では、第四世代のＣＡＲは、標的腫瘍組織にてＣＡＲシグナル伝達時に放出され得るサイトカインを更に含有する。いくつかの態様では、第四世代のＣＡＲは、ＣＡＲの活性を更に調節するのに役立つことができる、ホーミング遺伝子及び自殺遺伝子のような１以上の追加の要素を含む。いくつかの態様では、ＣＡＲはスプリットＣＡＲとして設計される。「スプリットＣＡＲ」系では、ＣＡＲの１つ以上の構成要素（例えば、細胞外標的化ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達／活性化ドメイン）は、完全な機能的受容体の構築を促進する複数の入力に依存するように、２つ以上の部分に分けられる。いくつかの態様では、ＣＡＲは切替可能なＣＡＲとして設計される。「切替可能なＣＡＲ」によって、ＣＡＲは、刺激の存在下において（例えば、一時的に）オン（オンスイッチＣＡＲ）またはオフ（オフスイッチＣＡＲ）の切替ができる。本開示とともに使用され得るＣＡＲの追加の例は、例えば、ＵＳ２０２０／０１７２８７９（Ａ１）及びＵＳ２０１９／０１８３９３２（Ａ１）に記載されており、この各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0349】

操作されたＴ細胞受容体
いくつかの態様では、本開示で使用され得るキメラ結合タンパク質は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）（当該技術分野では「トランスジェニック」ＴＣＲとも称される）を含む。本明細書で使用されるとき、「操作されたＴＣＲ」または「操作されたＴ細胞受容体」という用語は、単離されて、または所望の親和性で主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）／ペプチド標的抗原と特異的に結合するように操作され、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞の集団に導入されているＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を指す。

【0350】

したがって、いくつかの態様では、本明細書で提供されている方法を使用して培養され得る免疫細胞は、トランスジェニックＴＣＲ及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変されている。例えば、いくつかの態様では、免疫細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞を含み、トランスジェニックＴＣＲ及び高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞を含み、トランスジェニックＴＣＲ及び高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞とＣＤ４＋Ｔ細胞の双方を含み、ＣＤ８＋Ｔ細胞とＣＤ４＋Ｔ細胞の各々はトランスジェニックＴＣＲを含み、高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。

【0351】

ＴＣＲは、Ｔ細胞の表面に見られる分子であり、主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）分子に結合したペプチドとして抗原の断片を認識することに関与している。ＴＣＲは２つの異なるタンパク質鎖から構成されるヘテロ二量体である。いくつかの態様では、ＴＣＲは（それぞれ、ＴＲＡ及びＴＲＢによってコードされる）アルファ（α）鎖及びベータ（β）鎖からなる。いくつかの態様では、ＴＣＲは（それぞれ、ＴＲＧ及びＴＲＤによってコードされる）ガンマ及びデルタ（γ／δ）鎖からなる。ＴＣＲは、ＭＨＣ分子（ペプチド／ＭＨＣ）によって提示される抗原ペプチドと結合すると、Ｔリンパ球がシグナル伝達を介して活性化される。

【0352】

特定の実施形態では、操作されたＴＣＲはクラスＩのＭＨＣに拘束される。別の実施形態では、操作されたＴＣＲは、クラスＩＩのＭＨＣに拘束される。特定の実施形態では、操作されたＴＣＲは、腫瘍抗原ペプチド：ＭＨＣ複合体を認識する。一実施形態では、操作されたＴＣＲは、新抗原ペプチド：ＭＨＣ複合体を認識する。特定の実施形態では、操作されたＴＣＲは、膜貫通ドメインと、少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子の動員を促進するＴＣＲドメインとを含む。いくつかの実施形態では、操作されたＴＣＲは更に、１以上のＴＣＲ由来の定常ドメイン、例えば、ＣＨ１及びＣＬを含む。

【0353】

Ｔ細胞受容体模倣体（ＴＣＲｍ）
いくつかの態様では、免疫細胞を改変するのに使用され得るキメラ結合タンパク質は、Ｔ細胞受容体模倣体（ＴＣＲ模倣体）を含む。本明細書で使用される、「Ｔ細胞受容体模倣体」または「ＴＣＲ模倣体」という用語は、腫瘍抗原を認識するよう操作された抗体（またはその断片）を指し、腫瘍抗原は、ＨＬＡ分子と関連して提示される。当業者には明白であるように、これらの抗体はＴＣＲの特異性を模倣することができる。ＴＣＲ模倣体の非限定的な例は、例えば、ＵＳ２００９／０２２６４７４（Ａ１）、ＵＳ２０１９／００９２８７６（Ａ１）、及びＴｒａｎｅｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８（１００１）：１－１２（２０１７）において提供されており、この各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、ＴＣＲ模倣体は（ｉ）目的のペプチド：ＭＨＣ複合体に特異的に結合する抗体部分と、（ｉｉ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子を動員することが可能なＴ細胞受容体モジュールとを含む。いくつかの態様では、ＴＣＲ模倣体は、（ｉ）目的のペプチド：ＭＨＣ複合体に特異的に結合する抗体部分と、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ鎖ドメイン）、及び任意選択で１つ以上の共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ２８または４－１ＢＢ）と、を含む。

【0354】

したがって、いくつかの態様では、本明細書で提供されている方法を使用して培養され得る免疫細胞は、ＴＣＲ模倣体及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変されている（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質及びＴＣＲ模倣体をコードする１つ以上の外来性ヌクレオチド配列で形質導入されている）。いくつかの態様では、免疫細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞を含み、ＴＣＲ模倣体及び高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞を含み、ＴＣＲ模倣体及び高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞とＣＤ４＋Ｔ細胞の双方を含み、ＣＤ８＋Ｔ細胞とＣＤ４＋Ｔ細胞の各々はＴＣＲ模倣体及び高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。

【0355】

いくつかの態様では、ＴＣＲ模倣体はキメラ抗体－Ｔ細胞受容体（ｃａＴＣＲ）を含む。本明細書で使用される、「キメラ抗体－Ｔ細胞受容体」または「ｃａＴＣＲ」は、（ｉ）目的の抗原に特異的に結合する抗体部分及び（ｉｉ）少なくとも１つのＴＣＲ関連シグナル伝達分子をリクルートすることが可能なＴ細胞受容体モジュールを含む。いくつかの態様では、抗体部分とＴ細胞受容体モジュールは一緒に融合される。本開示に有用であるｃａＴＣＲに関する追加の開示は、例えば、ＵＳ１０，８２２，４１３Ｂ２、及びＸｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，４：６２（２０１８）に提供されており、この各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0356】

したがって、いくつかの態様では、本明細書で提供されている方法を使用して培養され得る免疫細胞は、ｃａＴＣＲ及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変されている（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質及びｃａＴＣＲをコードする１つ以上の外来性ヌクレオチド配列で形質導入されている）。いくつかの態様では、ｃａＴＣＲ及び高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された免疫細胞は更に、キメラ共刺激受容体を発現するように改変される。いくつかの態様では、本明細書で提供されている免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現し、ｃａＴＣＲと、ｉ）標的リガンドと結合または相互作用することができるリガンド結合モジュール、ｉｉ）膜貫通モジュール、及びｉｉｉ）免疫細胞に共刺激シグナルを提供することができる共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールを含むキメラ共刺激受容体とを含み、その際、リガンド結合モジュール及び共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールは同じ分子に由来するものではなく、キメラ共刺激受容体は機能的な一次免疫細胞シグナル伝達ドメインを欠いている。いくつかの態様では、キメラ共刺激受容体は、腫瘍抗原に結合するリガンド結合モジュールを含む。例示的なキメラ共刺激受容体は、例えば、米国特許第１０，８２２，４１３号に記載されており、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞を含み、ｃａＴＣＲ及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞を含み、ｃａＴＣＲ及び高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞とＣＤ４＋Ｔ細胞の双方を含み、ＣＤ８＋Ｔ細胞とＣＤ４＋Ｔ細胞の各々はｃａＴＣＲ及び高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。

【0357】

キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）
いくつかの態様では、キメラ結合タンパク質は、キメラシグナル伝達受容体（ＣＳＲ）を含む。「キメラシグナル伝達受容体」または「ＣＳＲ」は、標的リガンドに特異的に結合するリガンド結合ドメイン及びＣＳＲを発現する免疫細胞に刺激シグナルを提供することができる共刺激シグナル伝達ドメインを含む。キメラシグナル伝達受容体は、（１）細胞外結合ドメイン（例えば、天然／改変の受容体細胞外ドメイン、天然／改変のリガンド細胞外ドメイン、ｓｃＦｖ、ナノボディ、Ｆａｂ、ＤＡＲＰｉｎ、及びアフィボディ）と、（２）膜貫通ドメインと、（３）細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、転写因子を活性化するドメイン、またはＪＡＫ／ＳＴＡＴ、キナーゼ、ホスファターゼ、及びユビキチン、ＳＨ３、ＳＨ２、及びＰＤＺを動員及び／または活性化するドメイン）とを含むことができる。例えば、ＥＰ３４０７９３Ｂ１、ＵＳ２０２１／０２５３６６５（Ａ１）、ＵＳ１０，８２２，４１３（Ｂ２）、及びＸｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，４：６２（２０１８）を参照されたく、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0358】

いくつかの態様では、本明細書で提供されている方法を使用して培養され得る免疫細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変された）は、キメラシグナル伝達受容体を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞を含み、ＣＳＲ及び高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞を含み、ＣＳＲ及び高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞とＣＤ４＋Ｔ細胞の双方を含み、ＣＤ８＋Ｔ細胞とＣＤ４＋Ｔ細胞の各々はＣＳＲ及び高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現する。

【0359】

抗原結合ドメイン
本明細書に記載されているように、本開示に有用なキメラ結合タンパク質（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、またはＴＣＲ模倣体）は、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、細胞内シグナル伝達ドメイン、またはそれらの組み合わせを含む。膜貫通ドメイン、共刺激ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインに関する追加の開示は、本開示の他の箇所で提供されている。

【0360】

いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、抗原を認識し、それに特異的に結合する。いくつかの態様では、本明細書に記載されているキメラ結合タンパク質の抗原結合ドメインは、腫瘍細胞上に発現された抗原に特異的に結合する。

【0361】

いくつかの態様では、キメラ結合タンパク質の抗原結合ドメインは、
ＣＤ１９、ＴＲＡＣ、ＴＣＲβ、ＢＣＭＡ、ＣＬＬ－１、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＴＳＨＲ、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、ＣＤ１７１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＧＰＣ１、ＧＰＣ２、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソテリン、ＩＬ－ｌ ｌＲａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴｌ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－ｌａ、ＭＡＧＥ－Ａｌ、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａｌ、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、サバイビング、テロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴｌ、Ｒａｓ変異体（例えば、ＨＲＡＳ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ）、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢｌ、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、ＣＤ２、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＡＰＲＩＬタンパク質の細胞外部分、ネオアンチゲン、またはそれらの任意の組み合わせから選択される抗原に特異的に結合する。

【0362】

いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＢＣＭＡを認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＣＤ１４７を認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＣＤ１９を認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＲＯＲ１を認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＧＰＣ３を認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＧＰＣ２を認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＣＤ１９及びＣＤ２２を認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＣＤ１９及びＣＤ２８を認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＣＤ２０を認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＣＤ２０及びＣＤ１９を認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＣＤ２２を認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＣＤ３０を認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＣＥＡを認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＤＬＬ３を認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＥＧＦＲｖＩＩＩを認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＧＤ２を認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＨＥＲ２を認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＩＬ－１ＲＡＰを認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にメソテリンを認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＮＫＧ２Ｄを認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＰＳＭＡを認識し、それに結合する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、特異的にＴｎＭＵＣ１を認識し、それに結合する。

【0363】

いくつかの態様では、本明細書に記載されているキメラ結合タンパク質の抗原結合ドメインは、ＭＨＣとの複合体における抗原を特異的に認識し、それに結合する。

【0364】

本開示の他の箇所で更に記載されているように、キメラ結合タンパク質（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、またはＴＣＲ模倣体）の抗原結合ドメインは、１つ以上の抗原（例えば、腫瘍抗原）に結合できる任意のポリペプチドであり得る。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、Ｉｇ ＮＡＲ、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ）’２フラグメント、Ｆ（ａｂ）’３フラグメント、Ｆｖ、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ビス－ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、イントラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、ユニボディ、ナノボディ、及び対象のタンパク質、リガンド、受容体、受容体フラグメント、ペプチドアプタマー、またはそれらの組み合わせのいずれかと特異的に結合することができる抗体に由来する抗原結合領域を含むか、あるいはそれらに由来する。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。

【0365】

いくつかの態様では、本明細書に記載されているキメラ結合タンパク質は、天然リガンドである抗原結合ドメインを含む。本明細書で使用されるとき、「天然リガンド」という用語は、目的の抗原に特異的に結合する天然に存在する部分を指す。例えば、いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、ＮＫＧ２Ｄの既知の天然リガンドであるＮＫＧ２Ｄ細胞受容体を含み得る。ＮＫＧ２Ｄは、多くの腫瘍上で発現されることが記載されている。例えば、Ｓｅｎｔｍａｎ ｅｔ．ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｊ２０（２）：１５６－１５９（２０１４）を参照のこと。

【0366】

シグナル伝達（細胞内）、膜貫通、及び共刺激のドメイン
いくつかの態様では、本明細書に記載されているキメラ結合タンパク質（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、またはＴＣＲ模倣体）は、細胞外ドメインへの抗原結合の際にエフェクター機能シグナルを伝達し、キメラ結合タンパク質を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）に特殊な機能を実行するように指図する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインの非限定例としては、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、共通ＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲｉｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」）、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ３２、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２に由来する細胞内シグナル伝達ドメイン領域、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、配列番号９０に示されるような）を含む。

【0367】

いくつかの態様では、キメラ結合タンパク質は、本明細書で開示されるタンパク質の細胞内ドメイン全体を含む。いくつかの態様では、細胞内ドメインは、切断されている。細胞内ドメインの切断部分は、それが依然としてエフェクター機能シグナルを伝達する限り、無傷の鎖の代わりに使用され得る。したがって、細胞内ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを形質導入するのに十分な細胞内ドメインの任意の切断部分を含むことを意味する。

【0368】

いくつかの態様では、本開示に有用なキメラ結合タンパク質（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、またはＴＣＲ模倣体）は更に、膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、キメラ結合タンパク質の抗原結合ドメインは、膜貫通ドメインによって細胞内ドメインに連結される。いくつかの態様では、キメラ結合タンパク質の抗原結合ドメインは、リンカーによって膜貫通ドメインに接続される。いくつかの態様では、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間にリンカーを含めることは、抗原結合ドメインの柔軟性に影響を及ぼし、それによって、キメラ結合タンパク質の１つ以上の特性を改善させることができる。

【0369】

当該技術分野で既知の任意の膜貫通ドメインを、本明細書に記載されているキメラ結合タンパク質（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、またはＴＣＲ模倣体）に使用することができる。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは人工的なもの（例えば、操作された膜貫通ドメイン）である。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは天然に存在するポリペプチドに由来する。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは天然に存在するポリペプチド由来の膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインの非限定的な例には、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（タクチル）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ１９、ＣＤ８の膜貫通ドメイン領域またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、膜貫通ドメインはＣＤ２８の膜貫通ドメイン（例えば、配列番号７５に示されるような）を含む。

【0370】

本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、本開示に有用なキメラ結合タンパク質（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、またはＴＣＲ模倣体）は、１つ以上の共刺激ドメイン（例えば、第二世代及び第三世代のＣＡＲ）を含む。どんな理論にも束縛されるものではないが、これらの共刺激ドメインは更に、キメラ結合タンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドとの組み合わせで）を発現するように操作された免疫細胞の増殖、活性化、記憶、存続性、及び／またはエフェクター機能を改善することができる。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは共刺激ドメインに融合されており、任意選択で、共刺激ドメインは第２の共刺激ドメインに融合され、共刺激ドメインはＣＤ３ζに限定されないシグナル伝達ドメインに融合される。共刺激ドメインの非限定的な例としては、インターロイキン－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）、インターロイキン－１２受容体（ＩＬ－１２Ｒ）、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－１５、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、４－１ＢＢ／ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、共刺激ドメインは４－１ＢＢ／ＣＤ１３７の共刺激ドメイン（例えば、配列番号７６に示されるような）を含む。

【0371】

切断型ＥＧＦＲ
いくつかの態様では、本明細書に開示されている免疫細胞（例えば、本明細書で提供されている方法を使用して改変され培養された）は更に、ＥＧＦＲｔは完全長ＥＧＦＲタンパク質（例えば、配列番号１９）の部分配列のみを含むように、切断型上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲｔ）をコードする外来性ヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ＥＧＦＲｔは、ＥＧＦＲの細胞外ドメインＩＩＩ及びＩＶならびにＥＧＦＲの膜貫通ドメインを含むが、ＥＧＦＲの細胞外ドメインＩ及びＩＩならびにＥＧＦＲの細胞内配列を欠いている。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示される免疫細胞は、（ｉ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする外来性ヌクレオチド配列、（ｉｉ）キメラ結合タンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列、及び（ｉｉｉ）ＥＧＦＲｔをコードする外来性ヌクレオチド配列を含むように改変されている。本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、転写活性化因子（例えば、ＣＲＩＳＰＲａ）を使用してｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を内在性に増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞は、（ｉ）内在性ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を増加させることができる転写活性化因子、（ｉｉ）キメラ結合タンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列と、（ｉｉｉ）ＥＧＦＲｔをコードする外来性ヌクレオチド配列とを含むように改変されている。上記の態様の各々では、複数の外来性ヌクレオチド配列のうちの１以上は、単一のポリシストロン性ポリヌクレオチドの一部であることができる。

【0372】

ＥＧＦＲは、大きな細胞外領域と、単一の膜貫通ドメインと、細胞内膜近傍領域と、チロシンキナーゼドメインと、Ｃ末端調節領域とを含む１８０ｋＤａの単量体糖タンパク質である。細胞外領域は、４つのドメインを含む：ドメインＩ及びＩＩＩは相同性リガンド結合ドメインであり、ドメインＩＩ及びＩＶはシステインが豊富なドメインである（Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．（２００８）３７：３５３－３）。別途示されない限り、ＥＧＦＲは本明細書で使用されるとき、ヒトＥＧＦＲを指す。選択的スプライシングのため、ヒトＥＧＦＲの少なくとも４つの既知のアイソフォームが存在する。様々なＥＧＦＲアイソフォームについての配列を（下記）表４に示す。

【表4-1】

【表4-2】

【表4-3】

【0373】

上記のＥＧＦＲについての標準配列（すなわち、アイソフォーム１）では、様々なＥＧＦＲドメインが以下のとおりに説明される。シグナルペプチドはアミノ酸１～２４に及ぶ。細胞外配列はアミノ酸２５～６４５に及び、ドメインＩ、ドメインＩＩ、ドメインＩＩＩ、及びドメインＩＶは、それぞれ、アミノ酸２５～１８８、１８９～３３３、３３４～５０４、及び５０５～６４５に及ぶ。膜貫通ドメインは、アミノ酸６４６～６６８に及ぶ。細胞内ドメインはアミノ酸６６９～１，２１０に及び、膜近傍ドメインはアミノ酸６６９～７０３に及び、チロシンキナーゼドメインはアミノ酸７０４～１，２１０に及ぶ。

【0374】

いくつかの態様では、本開示に有用なＥＧＦＲｔは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0375】

いくつかの態様では、本開示で使用され得るＥＧＦＲｔは、配列番号２１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＥＧＦＲｔは、配列番号２１（表５を参照のこと）に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、本開示で使用され得るＥＧＦＲｔは、配列番号２４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＥＧＦＲｔは、配列番号２４（表５を参照のこと）に示されるアミノ酸配列を含む。

【表5】

【0376】

いくつかの態様では、本明細書に記載されているＥＧＦＲｔは更に、膜近傍ドメインを含む。本明細書で使用されるとき、「膜近傍ドメイン」という用語は、膜貫通ドメインのすぐＣ末端にある細胞表面タンパク質（例えば、ＥＧＦＲ）の細胞内部分を指す。どんな理論にも束縛されるものではないが、いくつかの態様では、膜近傍ドメインの追加によって、本開示のポリヌクレオチドがコードするタンパク質の発現を増やすことができる。

【0377】

いくつかの態様では、膜近傍ドメインは、約１～約２０（例えば、２～２０、３～２０、４～２０、５～２０、２～１８、３～１８、４～１８、または５～１８）アミノ酸長であり得る。いくつかの態様では、膜近傍ドメインは２０アミノ酸よりも長くてもよい。いくつかの態様では、膜近傍ドメインの最初の１つ以上（例えば、最初の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個）のアミノ酸は、正味中性または正味正の電荷をもつ配列である（例えば、アルギニン及びリジン残基の数が、アスパラギン酸及びグルタミン酸残基の数以上である）。いくつかの態様では、これらの最初のアミノ酸は約３０％を超える（例えば、４０、５０、６０、７０、８０、または９０％を超える）親水性アミノ酸を含有する。本開示に有用な膜近傍ドメインの非限定例を（下記）表６に提供する。

【表6】

【0378】

いくつかの態様では、本開示で使用され得る膜近傍ドメインは、天然の細胞表面タンパク質の膜近傍領域、例えば、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、またはホスファチジルイノシトール－４，５－二リン酸（ＰＩＰ２）と相互作用するヒト受容体型チロシンキナーゼの膜近傍領域（例えば、最初の２０個の膜近傍アミノ酸の全配列または部分配列）由来であってもよい（例えば、Ｈｅｄｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＳｃｉＲｅｐ．（２０１５）５：９１９８を参照のこと）。受容体型チロシンキナーゼの非限定例は、ＥＲＢＢ１（ＥＧＦＲ）、ＥＲＢＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＲＢＢ３（ＨＥＲ３）、ＥＲＢＢ４（ＨＥＲ４）、ＩＮＳＲ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＮＳＲＲ、ＰＧＦＲＡ、ＰＧＦＲＢ、ＫＩＴ、ＣＳＦ１Ｒ、ＦＬＴ３、ＶＧＦＲ１、ＶＧＦＲ２、ＶＧＦＲ３、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＰＴＫ７、ＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ２、ＮＴＲＫ３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＭＵＳＫ、ＭＥＴ、ＲＯＮ、ＵＦＯ、ＴＹＲＯ３、ＭＥＲＴＫ、ＴＩＥ１、ＴＩＥ２、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ３、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ５、ＥＰＨＡ６、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８、ＥＰＨＡＡ、ＥＰＨＢ１、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＨＢ６、ＲＥＴ、ＲＹＫ、ＤＤＲ１、ＤＤＲ２、ＲＯＳ１、ＬＭＴＫ１、ＬＭＴＫ２、ＬＭＴＫ３、ＬＴＫ、ＡＬＫ、及びＳＴＹＫ１である。いくつかの態様では、膜近傍ドメインは、本開示のポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の意図されない任意のシグナル伝達能力を回避するためにリン酸化されることが知られている残基を除去する１つ以上の変異（例えば、置換または欠失）を含み得る。

【0379】

いくつかの態様では、膜近傍ドメインはＥＧＦＲの膜近傍領域に由来する。ＥＧＦＲ由来の膜近傍ドメインの非限定例は（下記）表７に提供されている配列のうちの１つを含む。いくつかの態様では、膜近傍ドメインはアミノ酸配列ＲＲＲを含む。いくつかの態様では、そのような膜近傍ドメインを含むＥＧＦＲｔは配列番号２４に示される配列を含む。

【表7】

【0380】

本開示から明らかなように、本明細書に記載されている免疫細胞を、ＥＧＦＲｔをコードする外因性ヌクレオチド配列を更に含むように改変すること（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎポリペプチドを発現する及び／またはキメラ結合タンパク質をコードする外因性ヌクレオチド配列を含む）により、特定の利点が得られる。例えば、いくつかの態様では、ＥＧＦＲｔは、殺傷スイッチとして機能し得る。いくつかの態様では、本明細書に記載されている操作された細胞が体内で必要とされなくなったとき、セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、またはネシツムマブなどの医薬品等級の抗ＥＧＦＲ抗体を、操作された細胞を受け入れた対象に投与し、それによって、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び／または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を介して、操作された細胞を除去することができる。

【0381】

スペーサー
いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、本明細書で提供されている方法を使用して改変及び培養されるもの）はスペーサーをコードする外来性ヌクレオチド配列も含む。したがって、いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞は、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現レベルが増加するように改変されており（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列及び／または内在性ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を増加させることができる転写活性化因子を使用して）、ｃ－Ｊｕｎタンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列と、キメラ結合タンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列と、スペーサーをコードする外来性ヌクレオチド配列と、を含む。いくつかの態様では、免疫細胞は、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変されており、ｃ－Ｊｕｎタンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列と、キメラ結合タンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列と、ＥＧＦＲｔをコードする外来性ヌクレオチド配列と、スペーサーをコードする外来性ヌクレオチド配列と、を含む。いくつかの態様では、１以上の外来性ヌクレオチド配列は、単一のポリシストロン性ポリヌクレオチドの一部である。本明細書で使用される場合、「スペーサー」という用語は、間隔のあいた２つの部分（例えば、Ｐ２Ａリンカーとキメラ結合タンパク質）を一緒に共有結合することができるポリペプチド配列を指す。

【0382】

いくつかの態様では、スペーサーは、免疫グロブリンに由来する（例えば、ヒンジ領域またはループ領域に由来する）。いくつかの態様では、スペーサーは、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭのヒンジ領域、それらの断片（単独で、または追加の配列、例えば、ＣＨ１もしくはＣＨ２領域の配列によってキャップされた）、あるいはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭのヒンジ領域由来の断片の組み合わせ（本明細書では「ヒンジ領域由来のスペーサー」とも呼ばれる）を含む。いくつかの態様では、スペーサーは、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭの定常ドメインループ領域、それらの断片（単独で、または例えば、隣接するβ－鎖由来の、追加の配列によってキャップされた）、あるいはＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭのループ領域の断片の組み合わせ（本明細書では「ループ領域由来のスペーサー」とも呼ばれる）を含む。いくつかの態様では、スペーサーは、ヒンジ領域由来のスペーサー、ループ領域由来のスペーサー、または双方（例えば、２以上の連結されたヒンジ領域由来のスペーサー及びループ領域由来のスペーサー）を含む。

【0383】

したがって、いくつかの態様では、本開示に記載されているポリヌクレオチドは、（ｉ）ｃ－Ｊｕｎタンパク質、（ｉｉ）第１のリンカー（例えば、Ｐ２Ａリンカー）、（ｉｉｉ）シグナルペプチド（例えば、ｈＩｇκ）、（ｉｖ）抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）、（ｖ）第２のリンカー（例えば、ＧＧＧＳＧ、配列番号４０）、（ｖｉ）スペーサー（例えば、ＩｇＧ２ヒンジ由来のスペーサー）、（ｖｉｉ）膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ２８）、（ｖｉｉｉ）共刺激ドメイン（例えば、４－１ＢＢ）、（ｉｘ）細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）、（ｘ）第３のリンカー（例えば、Ｐ２Ａリンカー）、及び（ｘｉ）ＥＧＦＲｔを含むポリペプチドをコードする。

【0384】

いくつかの態様では、本開示に有用なスペーサーは、ヒトＩｇＡ１（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８７６、ＩＧＨＡ１＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常アルファ１、配列番号４１）、ヒトＩｇＡ２（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８７７、ＩＧＨＡ２＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常アルファ２、配列番号４２）、マウスＩｇＧ２Ａ（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１６６５、ＧＣＡＭ＿ＭＯＵＳＥ、免疫グロブリンガンマ２Ａ鎖Ｃ領域、配列番号４３）、ヒトＩｇＧ１（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８５７、ＩＧＨＧ１＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常ガンマ１、配列番号４４）、ヒトＩｇＧ２（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８５９、ＩＧＨＧ２＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常ガンマ２、配列番号４５）、ヒトＩｇＧ３（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８６０、ＩＧＨＧ３＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常ガンマ３、配列番号４６）、ヒトＩｇＧ４（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８６１、ＩＧＨＧ４、免疫グロブリン重定常ガンマ４、配列番号４７）、ヒトＩｇＤ（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８８０、ＩＧＨＤ＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常デルタ、配列番号４８）、ヒトＩｇＥ（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８５４、ＩＧＨＥ＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常鎖イプシロン、配列番号４９）、またはＩｇＭ（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８７１、ＩＧＨＭ＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常ミュー、配列番号５０）からなる群から選択される免疫グロブリン重鎖の部分配列を含み、部分配列は、ＣＨ１－ＣＨ２ヒンジ領域またはその一部を含む。いくつかの態様では、部分配列は、ＣＨ１及び／またはＣＨ２定常ドメインの隣接部分を更に含む。

【0385】

いくつかの態様では、スペーサーは、ヒトＩｇＡ１（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８７６、ＩＧＨＡ１＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常アルファ１、配列番号４１）、ヒトＩｇＡ２（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８７７、ＩＧＨＡ２＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常アルファ２、配列番号４２）、マウスＩｇＧ２Ａ（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１６６５、ＧＣＡＭ＿ＭＯＵＳＥ、免疫グロブリンガンマ２Ａ鎖Ｃ領域、配列番号４３）、ヒトＩｇＧ１（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８５７、ＩＧＨＧ１＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常ガンマ１、配列番号４４）、ヒトＩｇＧ２（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８５９、ＩＧＨＧ２＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常ガンマ２、配列番号４５）、ヒトＩｇＧ３（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８６０、ＩＧＨＧ３＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常ガンマ３、配列番号４６）、ヒトＩｇＧ４（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８６１、ＩＧＨＧ４、免疫グロブリン重定常ガンマ４、配列番号４７）、ヒトＩｇＤ（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８８０、ＩＧＨＤ＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常デルタ、配列番号４８）、ヒトＩｇＥ（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８５４、ＩＧＨＥ＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常鎖イプシロン、配列番号４９）、またはＩｇＭ（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１８７１、ＩＧＨＭ＿ＨＵＭＡＮ、免疫グロブリン重定常ミュー、配列番号５０）からなる群から選択される免疫グロブリン重鎖の部分配列を含み、部分配列は、定常ドメイン由来のループ領域またはその一部を含む。いくつかの態様では、部分配列は、β鎖の隣接部分を更に含む。

【0386】

いくつかの態様では、本開示に有用なスペーサーはＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４に由来する。いくつかの態様では、スペーサーはＩｇＧ２ヒンジに由来する。いくつかの態様では、ＩｇＧ２ヒンジ由来のスペーサーは、配列番号５１（ＫＰＣＰＰＣＫＣＰ）の少なくとも５、６、または７個の連続するアミノ酸を含む。いくつかの態様では、スペーサーは、配列番号５１に示される配列（ＫＰＣＰＰＣＫＣＰ）に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、スペーサーは、配列番号５１に示される配列（ＫＰＣＰＰＣＫＣＰ）を含む、それからなるか、または本質的にそれからなる。いくつかの態様では、スペーサーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸置換を除いて、配列番号５１に示される配列（ＫＰＣＰＰＣＫＣＰ）を含む。いくつかの態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。いくつかの態様では、アミノ酸置換は少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を含む。

【0387】

いくつかの態様では、本開示のスペーサーは、配列番号５１に示される配列から構成され、スペーサー配列は更に、任意選択の柔軟なリンカー（例えば、ＧＧＧＳＧ（配列番号４０）のリンカー）を含む。したがって、いくつかの態様では、本開示のスペーサーは、スペーサー配列（例えば、配列番号５１）及び任意選択のＣ末端またはＮ末端の柔軟なリンカーを含む。いくつかの態様では、本明細書で開示される任意選択の必須ではない柔軟なリンカー（例えば、ｇｌｙ／ｓｅｒが豊富なリンカー）は、スペーサーのＣ末端及び／またはＮ末端に付加されてもよい。

【0388】

シグナルペプチド
本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、本明細書で提供されている免疫細胞は、シグナルペプチドを更に発現するように改変されている（例えば、シグナルペプチドをコードする外来性ヌクレオチド配列を含む）。シグナルペプチドは、コード化タンパク質の細胞表面発現を促進することができ、その後、続いて成熟タンパク質から切断可能である。いくつかの態様では、そのような免疫細胞は、ｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加するように改変されており（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列及び／または内在性ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を増加させることができる転写活性化因子を使用して）、キメラ結合タンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列、及びシグナルペプチドをコードする外来性ヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、免疫細胞は、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変されており、キメラ結合タンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列と、ＥＧＦＲｔをコードする外来性ヌクレオチド配列と、シグナルペプチドをコードする外来性ヌクレオチド配列と、を含む。いくつかの態様では、免疫細胞は、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変されており、キメラ結合タンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列と、ＥＧＦＲｔをコードする外来性ヌクレオチド配列と、スペーサーをコードする外来性ヌクレオチド配列と、シグナルペプチドをコードする外来性ヌクレオチド配列とを含む。いくつかの態様では、１以上の外来性ヌクレオチド配列は、単一のポリシストロン性ポリヌクレオチドの一部である。

【0389】

当該技術分野で既知の任意の好適なシグナルペプチドを本開示で使用することができる。シグナルペプチドの非限定的な例を表８（下記）に提供する。いくつかの態様では、シグナルペプチドはヒトＩｇカッパに由来する。いくつかの態様では、シグナルペプチドは、配列番号５４に示されるアミノ酸配列（ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧ）に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、シグナルペプチドは、配列番号５４に示されるアミノ酸配列（ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧ）を含む。いくつかの態様では、シグナルペプチドはＧＭ－ＣＳＦに由来する。いくつかの態様では、そのようなシグナルペプチドは、配列番号５３に示されるアミノ酸配列（ＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰ）に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、シグナルペプチドは、配列番号５３に示されるアミノ酸配列（ＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰ）を含む。

【表8】

【0390】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞を改変するのに使用され得るポリヌクレオチドは、単一のシグナルペプチド（例えば、配列番号５３または５４）を含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは複数のシグナルペプチド（例えば、少なくとも２つ、３つ、４つ以上）を含む。複数のシグナルペプチドが関与する場合、いくつかの態様では、複数のシグナルペプチドの各々が異なる。いくつかの態様では、複数のシグナルペプチドのうちの２以上は同じである。

【0391】

リンカー
いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変され、本明細書で提供されている方法を使用して培養された）は、リンカーをコードする外来性ヌクレオチド配列を更に含むように改変されている。したがって、いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞は、ｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加するように改変されており（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列及び／または内在性ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を増加させることができる転写活性化因子を使用して）、キメラ結合タンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列、及びリンカーをコードする外来性ヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、免疫細胞は、ｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加するように改変されており、キメラ結合タンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列と、ＥＧＦＲｔをコードする外来性ヌクレオチド配列と、リンカーをコードする外来性ヌクレオチド配列とを含む。いくつかの態様では、免疫細胞は、ｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加するように改変されており、キメラ結合タンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列と、ＥＧＦＲｔをコードする外来性ヌクレオチド配列と、スペーサーをコードする外来性ヌクレオチド配列と、リンカーをコードする外来性ヌクレオチド配列とを含む。いくつかの態様では、免疫細胞は、ｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加しており、キメラ結合タンパク質をコードする外来性ヌクレオチド配列と、ＥＧＦＲｔをコードする外来性ヌクレオチド配列と、スペーサーをコードする外来性ヌクレオチド配列と、シグナルペプチドをコードする外来性ヌクレオチド配列と、リンカーをコードする外来性ヌクレオチド配列とを含む。

【0392】

複数の外来性ヌクレオチド配列が関与する場合、いくつかの態様では、１以上の外来性ヌクレオチド配列は、単一のポリシストロン性ポリヌクレオチドの一部であることができる。そのような態様については、リンカーは本明細書に記載されているポリヌクレオチドの任意の様々な構成要素の間にあることができる。例えば、いくつかの態様では、ポリヌクレオチド（例えば、ポリシストロン性）は、（ｉ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする第１の外来性ヌクレオチド配列と、（ｉｉ）リンカーをコードする第２の外来性ヌクレオチド配列と、（ｉｉｉ）キメラ結合タンパク質（例えば、ＣＡＲ、ＴＣＲ、ｃａＴＣＲ、ＣＳＲ、またはＴＣＲ模倣体）をコードする第３のヌクレオチド配列と、を含み、ｃ－Ｊｕｎタンパク質がリンカーによってキメラ結合タンパク質に連結されるように、第２のヌクレオチド配列が第１と第３のヌクレオチド配列の間にある。いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドは、リンカーをコードする複数のヌクレオチド配列（例えば、少なくとも２つの別個のヌクレオチド配列）を含み得る。いくつかの態様では、複数のリンカーは同じである。いくつかの態様では、複数のリンカーは異なる。

【0393】

いくつかの態様では、リンカーはペプチドリンカーである。いくつかの態様では、リンカーは、少なくとも約１アミノ酸、少なくとも約２アミノ酸、少なくとも約３アミノ酸、少なくとも約４アミノ酸、少なくとも約５アミノ酸、少なくとも約６アミノ酸、少なくとも約７アミノ酸、少なくとも約８アミノ酸、少なくとも約９アミノ酸、少なくとも約１０アミノ酸、少なくとも約１１アミノ酸、少なくとも約１２アミノ酸、少なくとも約１３アミノ酸、少なくとも約１４アミノ酸、少なくとも約１５アミノ酸、少なくとも約１６アミノ酸、少なくとも約１７アミノ酸、少なくとも約１８アミノ酸、少なくとも約１９アミノ酸、少なくとも約２０アミノ酸、少なくとも約２５アミノ酸、または少なくとも約３０アミノ酸を含む。いくつかの態様では、リンカーは、グリシンが豊富である（例えば、柔軟性のため）。いくつかの態様では、リンカーは、セリン及び／またはトレオニンを含む（例えば、溶解性のため）。いくつかの態様では、リンカーはＧｌｙ／Ｓｅｒリンカーである。

【0394】

いくつかの態様では、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーは、式［（Ｇｌｙ）ｎ－Ｓｅｒ］ｍ（配列番号７７）に従い、式中、ｎは１～１００の任意の整数であり、ｍは１～１００の任意の整数である。いくつかの態様では、グリシン／セリンリンカーは、式［（Ｇｌｙ）ｘ－（Ｓｅｒ）ｙ］ｚ（配列番号７８）に従い、式中、ｘは１～４の整数であり、ｙは０または１であり、ｚは１～５０の整数である。いくつかの態様では、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーは、配列Ｇｎ（配列番号７９）を含み、ｎは１～１００の整数であり得る。いくつかの態様では、任意選択のリンカーは、配列（ＧｌｙＡｌａ）ｎ（配列番号８０）を含み得、ｎは１～１００の整数である。

【0395】

いくつかの態様では、任意選択のリンカーの配列は、ＧＧＧＧ（配列番号８１）である。いくつかの態様では、任意選択のリンカーの配列は、ＧＧＧＳＧ（配列番号８２）である。

【0396】

いくつかの態様では、任意選択のリンカーは、配列（ＧＧＧＳＧ）ｎ（配列番号６４）を含む。いくつかの態様では、任意選択のリンカーは、配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号６５）を含む。いくつかの態様では、任意選択のリンカーは、配列（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号６６）を含み得る。いくつかの態様では、任意選択のリンカーは、配列（ＧＧＳ）ｎ（配列番号６７）を含み得る。これらの例では、ｎは１～１００の整数であることができる。他の例では、ｎは、１～２０の整数、すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０であり得る。いくつかの態様では、ｎは１～１００の整数である。

【0397】

任意選択のリンカーの例としては、例えば、ＧＳＧＳＧＳ（配列番号６８）、ＧＧＳＧＧ（配列番号６９）、ＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号７０）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＧ（配列番号７１）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７２）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号７３）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７４）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0398】

いくつかの態様では、任意のリンカーは配列ＰＧＧを含む。いくつかの態様では、任意のリンカーは、グリシン及びセリンに加えて追加のアミノ酸を含む。いくつかの態様では、任意のリンカーは、１、２、３、４、または５個の非ｇｌｙ／非ｓｅｒアミノ酸を含む。いくつかの態様では、Ｇｌｙ／Ｓｅｒ－リンカーは、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも９５％のグリシンまたはセリンアミノ酸を含む。

【0399】

いくつかの特定の態様では、任意のリンカーは、長さが１～１０のアミノ酸である。いくつかの態様では、任意選択のリンカーは、約５～約１０、約１０～約２０、約２０～約３０、約３０～約４０、約４０～約５０、約５０～約６０、約６０～約７０、約７０～約８０、約８０～約９０、または約９０～約１００アミノ酸長である。

【0400】

いくつかの態様では、リンカーは、リンカー及び本明細書で提供されるポリヌクレオチドの異なる構成要素（例えば、ｃ－Ｊｕｎ及びキメラ結合タンパク質）が単一のポリペプチドとして発現されるような、切断可能ではないリンカーである。いくつかの態様では、リンカーは、切断可能なリンカーである。本明細書で使用されるとき、「切断可能なリンカー」という用語は、発現されるときに選択的に切断されて２以上の生成物を生成することができるような、切断部位を含むリンカーを指す。いくつかの態様では、リンカーは、Ｐ２Ａリンカー、Ｔ２Ａリンカー、Ｆ２Ａリンカー、Ｅ２Ａリンカー、フーリン切断部位、またはそれらの任意の組み合わせから選択される（下記の表９を参照のこと）。いくつかの態様では、リンカーは更にＧＳＧリンカー配列を含む。いくつかの態様では、本開示に有用なリンカーは、第１及び第２の遺伝子によってコードされる別個のポリペプチドが翻訳中に生成されるように、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む。本開示で使用され得るリンカーの追加の記載は、例えば、ＷＯ２０２０／２２３６２５（Ａ１）及びＵＳ２０１９／０２７６８０１（Ａ１）に提供されており、この各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【表9】

【0401】

いくつかの態様では、リンカーはＰ２Ａリンカーを含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む。

【0402】

いくつかの態様では、リンカーは、Ｔ２Ａリンカーを含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１５に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含む。

【0403】

いくつかの態様では、リンカーは、Ｆ２Ａリンカーを含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含む。

【0404】

いくつかの態様では、リンカーは、Ｅ２Ａリンカーを含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含む。

【0405】

いくつかの態様では、リンカーは、フーリン切断部位を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１８に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含む。

【0406】

上記開示から明らかなように、いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、本明細書に提供されている方法を使用して改変及び培養された）は、（５’から３’へ）：（ｉ）ｃ－Ｊｕｎポリペプチドをコードする第１のヌクレオチド配列、（ｉｉ）第１のリンカー（例えば、Ｐ２Ａリンカー）をコードする第２のヌクレオチド配列、（ｉｉｉ）第１のシグナルペプチド（例えば、ｈＩｇκ）をコードする第３のヌクレオチド配列、（ｉｖ）キメラ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）をコードする第４のヌクレオチド配列、（ｖ）第２のリンカー（例えば、ＧＧＧＳＧ、配列番号４０）をコードする第５のヌクレオチド配列、（ｖｉ）スペーサー（例えば、ＩｇＧ２のヒンジ由来スペーサー）をコードする第６のヌクレオチド配列、（ｖｉｉ）膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ２８）をコードする第７のヌクレオチド配列、（ｖｉｉｉ）共刺激ドメイン（例えば、４－１ＢＢ）をコードする第８のヌクレオチド配列、（ｉｘ）細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）をコードする第９のヌクレオチド配列、（ｘ）第３のリンカー（例えば、Ｐ２Ａリンカー）をコードする第１０のヌクレオチド配列、（ｘｉ）第２のシグナルペプチド（例えば、ＧＭＣＳＦＲαＳＰ）をコードする第１１のヌクレオチド配列、及び（ｘｉｉ）ＥＧＦＲｔをコードする第１２のヌクレオチド配列を含む。

【0407】

送達ベクター
いくつかの態様では、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、本明細書で提供されている方法を使用して培養された）を改変するために使用され得るベクター（例えば、発現ベクター）である。いくつかの態様では、本明細書に記載されているベクターは、複数（例えば、２、３、もしくは４個以上）のポリヌクレオチドを含み、複数のポリヌクレオチドは各々、本明細書に記載されているタンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質、リガンド結合タンパク質（例えば、キメラ結合タンパク質、例えば、ＣＡＲ）、またはＥＧＦＲｔ）をコードする。したがって、いくつかの態様では、ベクターは、ポリシストロン性ベクター（例えば、バイシストロン性ベクターまたはトリシストロン性のベクター）を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されているポリヌクレオチドは同じベクター（例えば、マルチシストロン性発現ベクター）上に含まれる。いくつかの態様では、本明細書に記載されているタンパク質（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質、リガンド結合タンパク質（例えば、キメラ結合タンパク質、例えば、ＣＡＲ）、またはＥＧＦＲｔ）をコードするポリヌクレオチドが１つ以上の別個のベクター上に提供される。

【0408】

本明細書に記載されているように、そのようなベクターは、宿主細胞及び治療的介入の標的とされる細胞における組換え発現に有用である。「ベクター」という用語は、本明細書で使用されるとき、連結された別の核酸を輸送することが可能な核酸分子、または別の核酸を輸送することができるそのような核酸分子を含む存在を指すことが意図される。いくつかの態様では、ベクターは、「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントがライゲートされ得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。いくつかの態様では、ベクターはウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムにライゲートすることができる。特定のベクターまたはベクターの一部であるポリヌクレオチドは、それらが導入される宿主細胞において自己複製が可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入されると宿主細胞のゲノムに組み込まれることが可能であり、それによって宿主ゲノムとともに複製される。更に、ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結された遺伝子の発現を指示することが可能である。そのようなベクターは、本明細書では、「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技法において利用される発現ベクターは、プラスミドの形態である場合が多い。本開示において、「プラスミド」及び「ベクター」は、プラスミドが最も一般的に使用されるベクターの形態であるため、文脈に応じて同義に使用できる場合もある。しかしながら、本明細書で開示されているのはまた、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、レンチウイルス、複製欠損レトロウイルス、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、バキュロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）などの他の形態の発現ベクターである。

【0409】

いくつかの態様では、ベクターは、本明細書に記載されているポリヌクレオチド（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質及び／またはリガンド結合タンパク質をコードする）及び調節要素を含む。例えば、いくつかの態様では、ベクターは、プロモーターに操作可能に連結された、本明細書に記載されているポリヌクレオチド（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質及び／またはリガンド結合タンパク質をコードする）を含む。いくつかの態様では、ベクターは、複数（例えば、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つまたはそれ以上）のプロモーターを含み得る。例えば、いくつかの態様では、ｃ－Ｊｕｎタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、第１のプロモーターの制御下にあり得、ポリヌクレオチドの追加的な構成要素のうちの１つ以上（例えば、キメラ結合タンパク質）をコードするヌクレオチド配列は、第２のプロモーターの制御下にあり得る。いくつかの態様では、複数のプロモーターの各々は同じである。いくつかの態様では、複数のプロモーターのうちの１以上は異なる。

【0410】

当該技術分野で既知の任意の好適なプロモーターを本開示で使用することができる。いくつかの態様では、本開示に有用なプロモーターは、構成的または誘導的プロモーターのような哺乳類またはウイルスプロモーターを含む。いくつかの態様では、本開示のためのプロモーターは、少なくとも１つの構成的プロモーター及び少なくとも１つの誘導的プロモーター、例えば、組織特異的なプロモーターを含む。

【0411】

構成的哺乳類プロモーターには、以下の遺伝子：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼのプロモーター、ベータ－アクチンプロモーター、及びその他の構成的プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。真核細胞において構成的に機能する例示的なウイルスプロモーターとしては、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サルウイルス（例えば、ＳＶ４０）、パピローマウイルス、アデノウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ラウス肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、モロニー白血病ウイルスの末端反復配列（ＬＴＲ）、及びその他のレトロウイルス由来のプロモーター、ならびに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターが挙げられる。本明細書に記載されているように、いくつかの態様では、本開示で使用され得るプロモーターは、誘導的プロモーターである。誘導的プロモーターは、誘導剤の存在下において発現される。例えば、メタロチオネインプロモーターは、特定の金属イオンの存在下において転写及び翻訳を促進するよう誘導される。複数の誘導的プロモーターが存在する場合、同じ誘導分子または異なる誘導物質によって誘導することができる。

【0412】

いくつかの態様では、プロモーターは、骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、負の制御領域欠失、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合部位置換（ＭＮＤ）プロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、または双方を含む。

【0413】

いくつかの態様では、本開示に有用なベクター（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質及び／またはリガンド結合タンパク質をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む）は、更に、１つ以上の追加の調節要素を含む。調節要素の非限定的な例には、翻訳エンハンサー要素（ＴＥＥ）、翻訳開始配列、マイクロＲＮＡ結合部位もしくはそのシード、連結ヌクレオシドの３’テーリング領域、ＡＵリッチ要素（ＡＲＥ）、転写後制御モジュレーター、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、局在化配列（例えば、膜局在化配列、核局在化配列、核排除配列、もしくはプロテアソーム標的化配列）、翻訳後修飾配列（例えば、ユビキチン化、リン酸化、もしくは脱リン酸化）、またはそれらの組み合わせが挙げられる。

【0414】

いくつかの態様では、ベクターは更に、転位要素を含んでもよい。したがって、いくつかの態様では、ベクターは、少なくとも２つのトランスポゾン特異的な逆方向末端反復（ＩＴＲ）が隣接する、本明細書に記載されているポリヌクレオチド（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質及び／またはリガンド結合タンパク質をコードする）を含む。いくつかの態様では、トランスポゾン特異的ＩＴＲはＤＮＡトランスポゾンによって認識される。いくつかの態様では、トランスポゾン特異的なＩＴＲはレトロトランスポゾンによって認識される。核酸分子を宿主細胞、例えば、免疫細胞のゲノムに導入するために、当該技術分野で既知の任意のトランスポゾンシステムを使用することができる。いくつかの態様では、トランスポゾンは、ｈＡＴ様Ｔｏｌ２、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ（ＳＢ）、Ｆｒｏｇ Ｐｒｉｎｃｅ、ｐｉｇｇｙＢａｃ（ＰＢ）、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、トランスポゾンは、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙを含む。いくつかの態様では、トランスポゾンは、ｐｉｇｇｙＢａｃを含む。例えば、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｌ．Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５（１）：１２０－２５（２０１６）を参照されたく、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0415】

いくつかの態様では、ベクターは移入ベクターである。「移入ベクター」という用語は、単離された核酸（例えば、本明細書に記載されているポリヌクレオチド）を含み、細胞の内部に単離された核酸を送達するのに使用され得る物質の組成物を指す。線状ポリヌクレオチド、イオン性または両親媒性の化合物と関連付けられるポリヌクレオチド、プラスミド、及びウイルスを含むが、これらに限定されない多数のベクターが当該技術分野で既知である。したがって、「移入ベクター」という用語は、自己複製のプラスミドまたはウイルスを含む。その用語はまた、細胞への核酸の移行を容易化する非プラスミド及び非ウイルス性化合物、例えば、ポリリジン化合物、リポソーム等を更に含むように解釈されるべきである。ウイルス移入ベクターの例には、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクターなどが挙げられるが、これらに限定されない。

【0416】

いくつかの態様では、ベクターは発現ベクターである。「発現ベクター」という用語は、発現させられるヌクレオチド配列に操作可能に連結された発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現のための十分なシス作用性要素を含み、発現のための他の要素は、宿主細胞によってまたはインビトロ発現システムにて供給され得る。発現ベクターには、組換えポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、むき出しまたはリポソームに含有される）及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）を含む、当該技術分野で既知の全てのものが含まれる。

【0417】

いくつかの態様では、ベクターはウイルスベクター、哺乳類ベクター、または細菌ベクターである。いくつかの態様では、ベクターは、アデノウイルスベクター、レンチウイルス、センダイウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、ハイブリッドベクター、及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターからなる群から選択される。

【0418】

いくつかの態様では、アデノウイルスベクターは、第三世代アデノウイルスベクターである。ＡＤＥＡＳＹ（商標）は、アデノウイルスベクター構築物を生成するための群を抜いて人気のある方法である。そのシステムは、２つのタイプのプラスミド：シャトル（またはトランスファー）ベクター及びアデノウイルスベクターから成る。目的の導入遺伝子をシャトルベクターにクローニングし、検証し、制限酵素ＰｍｅＩで直鎖化する。次いで、この構築物を、ＰＡＤＥＡＳＹ（商標）を含有するＢＪ５１８３ Ｅ．ｃｏｌｉ細胞であるＡＤＥＡＳＩＥＲ－１細胞に形質転換する。ＰＡＤＥＡＳＹ（商標）は、ウイルス産生に必要なアデノウイルス遺伝子を含んだ約３３Ｋｂのアデノウイルスプラスミドである。シャトルベクターとアデノウイルスプラスミドとは、アデノウイルスプラスミド内への導入遺伝子の相同組換えを促進する一致した左右のホモロジーアームを有している。標準的なＢＪ５１８３に、スーパーコイルを形成したＰＡＤＥＡＳＹ（商標）とシャトルベクターを同時形質転換することもできるが、この方法は非組換えアデノウイルスプラスミドの高いバックグ回を生じる。次いで、組換えアデノウイルスプラスミドをサイズ及び適当な制限消化パターンについて検証し、導入遺伝子がアデノウイルスプラスミドに挿入され、他のパターンの組換えが生じていないことを確認する。確認されると、組換えプラスミドをＰａｃＩで線状化して、ＩＴＲに隣接する線状ｄｓＤＮＡ構築物を作製する。２９３または９１１細胞を、線状化構築物で形質移入し、ウイルスを、約７～１０日後に回収することができる。この方法以外にも、本明細書に開示されている方法を実施するために、本願が出願された時点で当該技術分野で既知のアデノウイルスベクター構築物を作製するための方法を用いることができる。

【0419】

いくつかの態様では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクター（例えば、第三または第四世代レンチウイルスベクター）である。用語「レンチウイルス」は、レトロウイルス科の属を指す。レンチウイルスは、非分裂細胞に感染することができるという点でレトロウイルスの中でも独特であり、有意な量の遺伝子情報を宿主細胞のＤＮＡに送達し得るので、遺伝子送達ベクターのうちで最も効率的な方法のうちの１つである。ＨＩＶ、ＳＩＶ、及びＦＩＶは全て、レンチウイルスの例である。「レンチウイルスベクター」という用語は、特に、Ｍｉｌｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７（８）：１４５３－１４６４（２００９）で提供される自己不活性化レンチウイルスベクターを含む、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部に由来するベクターを指す。臨床において使用され得るレンチウイルスベクターの他の例としては、例えば、Ｏｘｆｏｒｄ ＢｉｏＭｅｄｉｃａからのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子送達技術、ＬｅｎｔｉｇｅｎからのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステムなどが挙げられるがこれらに限定されない。非臨床タイプのレンチウイルスベクターも利用可能であり、当業者には知られているであろう。

【0420】

レンチウイルスベクターは、１つの細胞株に３つの別々のプラスミド発現システムを形質移入する一時的な形質移入システムで通常は作り出される。これらには、移入ベクタープラスミド（ＨＩＶプロウイルスの一部）、パッケージングプラスミドまたは構築物、及び異なるウイルスの異種エンベロープ遺伝子（ｅｎｖ）を有するプラスミドが含まれる。ベクターの３つのプラスミド構成要素がパッケージング細胞に入れられ、それが、その後、ＨＩＶシェルに挿入される。ベクターのウイルス部分は挿入配列を含んでいるため、ウイルスは細胞系で複製することはできない。現在の第３世代レンチウイルスベクターは、９つのＨＩＶ－１タンパク質のうちの３つのみ（Ｇａｇ、Ｐｏｌ、Ｒｅｖ）をコードしており、これらは組換えによる複製能を有するウイルスの生成を防止するために別々のプラスミドから発現させられる。第四世代レンチウイルスベクターでは、レトロウイルスゲノムは更に低減されている（例えば、ＴＡＫＡＲＡ（登録商標）ＬＥＮＴＩ－Ｘ（商標）第四世代パッケージングシステムを参照のこと）。

【0421】

いくつかの態様では、非ウイルス的方法を使用して、本明細書に記載されているポリヌクレオチド（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質及び／またはキメラ結合タンパク質をコードする）を免疫細胞に送達することができる。いくつかの態様では、非ウイルス的方法にはトランスポゾンの使用が挙げられる。いくつかの態様では、非ウイルス的送達方法の使用は、細胞、例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞の再プログラム化、及び対象への細胞の直接的注入を可能にする。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム及びゲノム編集代替手段、例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、及びメガヌクレアーゼ（ＭＮ）を使用することによって標的細胞（例えば、Ｔ細胞）または宿主細胞（例えば、コードされるタンパク質の組換え発現のための細胞）のゲノムに挿入され得る。非ウイルス送達システムには、エレクトロポレーション、細胞圧搾法、脂質ナノ粒子、金ナノ粒子、ポリマーナノ粒子を含むナノ粒子も含まれる。非ウイルス送達システムの例としては、例えば、ＥｂｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０２１，Ｍａｙ；６７：１０３３５４が挙げられ、記載されている。

【0422】

いくつかの態様では、本明細書で開示されているベクター（例えば、レンチウイルスベクター）は、（ｉ）ｃ－Ｊｕｎタンパク質及び（ｉｉ）抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、ベクターは、（ｉ）ｃ－Ｊｕｎタンパク質、（ｉｉ）抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）、及び（ｉｉｉ）ＥＧＦＲｔをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、ベクターは、（ｉ）ｃ－Ｊｕｎタンパク質、（ｉｉ）抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）、（ｉｉｉ）膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ２８）、（ｉｖ）共刺激ドメイン（４－１ＢＢ）、（ｖ）細胞内シグナル伝達ドメイン（ＣＤ３ζ）、及び（ｖｉ）ＥＧＦＲｔをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、１以上のヌクレオチド配列は更に、リンカー、スペーサー、シグナルペプチド、またはそれらの組み合わせをコードする。例えば、いくつかの態様では、本明細書に記載されているベクターは、（５’から３’へ）（ｉ）ｃ－Ｊｕｎタンパク質をコードする第１のヌクレオチド配列、（ｉｉ）第１のリンカー（例えば、Ｐ２Ａリンカー）をコードする第２のヌクレオチド配列、（ｉｉｉ）第１のシグナルペプチド（例えば、ｈＩｇκ）をコードする第３のヌクレオチド配列、（ｉｖ）抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）をコードする第４のヌクレオチド配列、（ｖ）第２のリンカー（例えば、ＧＧＧＳＧ、配列番号４０）をコードする第５のヌクレオチド配列、（ｖｉ）スペーサー（例えば、ＩｇＧ２のヒンジ由来スペーサー）をコードする第６のヌクレオチド配列、（ｖｉｉ）膜貫通ドメイン（例えば、ＣＤ２８）をコードする第７のヌクレオチド配列、（ｖｉｉｉ）共刺激ドメイン（例えば、４－１ＢＢ）をコードする第８のヌクレオチド配列、（ｉｘ）細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζ）をコードする第９のヌクレオチド配列、（ｘ）第３のリンカー（例えば、Ｐ２Ａリンカー）をコードする第１０のヌクレオチド配列、（ｘｉ）第２のシグナルペプチド（例えば、ＧＭ－ＣＳＦ）をコードする第１１のヌクレオチド配列、及び（ｘｉｉ）ＥＧＦＲｔをコードする第１２のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む。

【0423】

いくつかの態様では、本明細書に開示されているポリヌクレオチド（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質及び／またはリガンド結合タンパク質をコードする）は、ＤＮＡ（例えば、ＤＮＡ分子もしくはその組み合わせ）、ＲＮＡ（例えば、ＲＮＡ分子もしくはその組み合わせ）、またはそれらの任意の組み合わせである。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、ゲノムもしくはｃＤＮＡ形態の一本鎖もしくは二本鎖のＲＮＡもしくはＤＮＡ（例えば、ｓｓＤＮＡもしくはｄｓＤＮＡ）、またはＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドであり、その各々が化学的または生化学的に改変された、非天然の、または誘導化されたヌクレオチド塩基を含み得る。本明細書に記載されているように、そのような核酸配列は、これらに限定されるものではないが、ポリＡ配列、改変コザック配列、ならびにエピトープタグ、搬出シグナル、及び分泌シグナル、核局在化シグナル、及び細胞膜局在化シグナルをコードする配列を含む、コードされたポリペプチドの発現及び／または精製を促進するのに有用な追加の配列を含み得る。本明細書の教示に基づいて、どのヌクレオチド配列が本明細書に記載されている様々なポリペプチド（例えば、ｃ－Ｊｕｎタンパク質、キメラ結合タンパク質、及び／またはＥＧＦＲｔ）をコードするかは当業者には明らかであろう。

【0424】

ＩＩＩ．本開示の組成物
本開示の特定の態様は、本明細書に開示されている方法に従って培養された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団を含む細胞組成物を対象とする。本開示の特定の態様は、参照免疫細胞（例えば、ｃ－Ｊｕｎポリペプチドのレベルが増加するように改変されていない対応する細胞）と比べて、増加したレベルのｃ－Ｊｕｎポリペプチドを発現するように改変され、本明細書で開示されている方法に従って培養された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）の集団を含む細胞組成物を対象とする。本方法に従って、及び／または本明細書に開示されている代謝再プログラム化培地にて培養した細胞集団は、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地にて従来の方法に従って培養した同等の細胞と比べて、低分化細胞の数が増加する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養した細胞は、幹様表現型に特有の１以上のマーカーの高い発現を示す。いくつかの態様では、本方法に従って、及び／または本明細書に開示される代謝再プログラム化培地中で培養した細胞集団は、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地中で、従来の方法に従って培養した同等の細胞と比べて、増加した数のエフェクター様細胞を有する。いくつかの態様では、本方法に従って、及び／または本明細書に開示される代謝再プログラム化培地中で培養した細胞集団は、例えば、５ｍＭ未満のＫ^＋を含有する培地中で、従来の方法に従って培養した同等の細胞と比べて、増加した数の幹様細胞及びエフェクター様細胞の双方を有する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養した細胞は、従来の方法に従って培養した細胞と比べてより高い増殖能を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養した細胞は、形質導入効率の増加を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養した細胞は、対象への移植時に生体内生存能の増加を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養した細胞は、分化能の増加を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養した細胞は、細胞疲弊の減少を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養した細胞は、対象への移植時にインビボ存続性の増加を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養した細胞は、対象への移植時に生体内活性の増加を呈する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養した細胞は、対象への移植時により持続的な生体内応答を呈する。いくつかの態様では、対象はヒトである。

【0425】

いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約５％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約１０％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約１５％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約２０％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約２５％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約３０％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約３５％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約４０％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約４５％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約５０％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約５５％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約６０％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約６５％の細胞が、幹様表現型を有する。いくつかの態様では、細胞組成物における少なくとも約７０％の細胞が、幹様表現型を有する。

【0426】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、幹様Ｔ細胞は、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約７０％を構成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、幹様Ｔ細胞は、培養物におけるＣＤ８^＋Ｔ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％を構成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、幹様Ｔ細胞は、培養物におけるＣＤ４^＋Ｔ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％を構成する。

【0427】

いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法によるＴ細胞の培養後、前駆疲弊Ｔ細胞（すなわち、ＴＰＥに特徴的な遺伝子発現が濃縮されたＴ細胞）の比率が約１．５倍～約２０倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が約２倍から約１０倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が約２倍から約５倍増加する。

【0428】

いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１．５倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約２倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約２．５倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約３倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約３．５倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約４倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約４．５倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約５倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約５．５倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約６倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約６．５倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約７倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約７．５倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約８倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約８．５倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約９倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１０倍増加する。

【0429】

いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法によるＴ細胞の培養後、疲弊Ｔ細胞（例えば、ＴＴＥに特徴的な遺伝子発現が濃縮されたＴ細胞）の比率が少なくとも約１／４減少し、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法によるＴ細胞の培養後、疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１／３減少し、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法によるＴ細胞の培養後、疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１／２減少し、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法によるＴ細胞の培養後、疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約３／４減少し、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または少なくとも約１０倍増加する。

【0430】

いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、幹様Ｔ細胞の比率が少なくとも約１．５倍増加し、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法によるＴ細胞の培養後、幹様Ｔ細胞の比率が少なくとも約２倍増加し、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法によるＴ細胞の培養後、幹様Ｔ細胞の比率が少なくとも約２．５倍増加し、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法によるＴ細胞の培養後、幹様Ｔ細胞の比率が少なくとも約３倍増加し、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、幹様Ｔ細胞の比率が少なくとも約３．５倍増加し、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、幹様Ｔ細胞の比率が少なくとも約４倍増加し、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、幹様Ｔ細胞の比率が少なくとも約５倍増加し、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、本明細書で開示されている方法に従ってＴ細胞を培養した後、幹様Ｔ細胞の比率が少なくとも約６倍増加し、前駆疲弊Ｔ細胞の比率が少なくとも約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、５．５倍、６倍、６．５倍、７倍、７．５倍、８倍、８．５倍、９倍、９．５倍、または少なくとも約１０倍増加する。

【0431】

いくつかの態様では、細胞組成物は、１つ以上の幹様マーカーを発現する、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞、ならびに１つ以上のＴＰＥマーカーを発現する、増加した割合の免疫細胞を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、少なくとも２つの幹様マーカーを発現する、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞、ならびに１つ以上のＴＰＥマーカーを発現する、増加した割合の免疫細胞を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、少なくとも３つの幹様マーカーを発現する、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞、ならびに１つ以上のＴＰＥマーカーを発現する、増加したパーセントの免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、少なくとも４つの幹様マーカーを発現する、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞、ならびに１つ以上のＴＰＥマーカーを発現する増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、１つ以上の幹様マーカーを発現する、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞、ならびに少なくとも２つのＴＰＥマーカーを発現する、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、１つ以上の幹様マーカーを発現する、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞、ならびに少なくとも３つのＴＰＥマーカーを発現する、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、１つ以上の幹様マーカーを発現する、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞、ならびに少なくとも４つのＴＰＥマーカーを発現する、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、１つ以上の幹様マーカーを発現する、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞、ならびに少なくとも５つのＴＰＥマーカーを発現する、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含む。

【0432】

いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、少なくとも約４％の細胞が前駆疲弊Ｔ細胞である免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％の細胞が前駆疲弊Ｔ細胞である免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、約４％～約１０％の間の細胞が前駆疲弊Ｔ細胞である免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、約４％～約９％の間の細胞が前駆疲弊Ｔ細胞である免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、約４％～約８％の間の細胞が前駆疲弊Ｔ細胞である免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、約４％～約７％の間の細胞が前駆疲弊Ｔ細胞である免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、約４％～約６％の間の細胞が前駆疲弊Ｔ細胞である免疫細胞の集団を含む。

【0433】

いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、少なくとも約４％の細胞が前駆疲弊Ｔ細胞であり、かつ少なくとも約４％の細胞が幹様Ｔ細胞である免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、少なくとも約４％の細胞が、前駆疲弊Ｔ細胞であり、かつ少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％の細胞が、幹様Ｔ細胞である免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％の細胞が前駆疲弊Ｔ細胞であり、かつ少なくとも約４％の細胞が幹様Ｔ細胞である免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％の細胞が、前駆疲弊Ｔ細胞であり、かつ少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％の細胞が、幹様Ｔ細胞である免疫細胞の集団を含む。

【0434】

いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、少なくとも約４％の細胞が前駆疲弊Ｔ細胞である免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％の細胞が、前駆疲弊Ｔ細胞であり、かつ約２０％未満の細胞が、終末疲弊細胞（ＴＴＥ）である免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、少なくとも約４％の細胞が前駆疲弊Ｔ細胞である免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％の細胞が、前駆疲弊Ｔ細胞であり、かつ約２０％、約１９％、約１８％、約１７％、約１６％、または約１５％未満の細胞が、終末疲弊細胞（ＴＴＥ）である免疫細胞の集団を含む。

【0435】

いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、少なくとも約４％の細胞が前駆疲弊Ｔ細胞であり、少なくとも約４％の細胞が幹様Ｔ細胞であり、約２０％未満の細胞がＴＴＥである免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、少なくとも約４％の細胞が、前駆疲弊Ｔ細胞であり、少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％の細胞が、幹様Ｔ細胞であり、かつ約２０％未満の細胞が、ＴＴＥである免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％の細胞が、前駆疲弊Ｔ細胞であり、少なくとも約４％の細胞が、幹様Ｔ細胞であり、かつ約２０％未満の細胞が、ＴＴＥである免疫細胞の集団を含む。いくつかの態様では、本明細書の細胞組成物は、少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％の細胞が、前駆疲弊Ｔ細胞であり、少なくとも約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％の細胞が、幹様Ｔ細胞であり、かつ約２０％未満の細胞が、ＴＴＥである免疫細胞の集団を含む。

【0436】

いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約１．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約２．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約２．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約３．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約３．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約４．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約４．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約５．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約５．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約６．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約６．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約７．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約７．５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約８．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約９．０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約１５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約２０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約３０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約４０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約５０倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約７５倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約１００倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約５００倍増加する。いくつかの態様では、細胞組成物における幹様表現型を有する細胞の数は、培養前の細胞組成物における細胞の数と比べて少なくとも約１０００倍増加する。

【0437】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約７０％は、ＣＤ３９^－／ＴＣＦ７^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％は、ＣＤ３９^－／ＴＣＦ７^＋Ｔ細胞である。いくつかの態様ではＴ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの態様ではＴ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。

【0438】

いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ９５を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ４５ＲＯを発現しない。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ４５ＲＡを発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＣＲ７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ６２Ｌを発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＴＣＦ７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ３を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ２７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ９５及びＣＤ４５ＲＡを発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ４５ＲＡ及びＣＣＲ７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、及びＣＣＲ７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、及びＣＤ６２Ｌを発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、及びＴＣＦ７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、及びＴＣＦ７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現し、かつＣＤ４５ＲＯを発現しないか、またはＣＤ４５ＲＯ^低である。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ９５、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＣＲ７、ＣＤ６２Ｌ、ＴＣＦ７、及びＣＤ２７を発現し、かつＣＤ４５ＲＯを発現しないか、またはＣＤ４５ＲＯ^低である。

【0439】

いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ３９及びＣＤ６９を発現しない。いくつかの態様では、細胞組成物は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞のパーセントの増加を含み、これらの細胞は、ＣＤ８を発現し、かつＣＤ３９及びＣＤ６９を発現しない。いくつかの態様では、いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％～少なくとも約４０％はＣＤ３９^－／ＣＤ６９^－Ｔ細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法によるＴ細胞の培養後、培養物におけるＴ細胞の総数の少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、または少なくとも約４０％は、ＣＤ３９^－／ＣＤ６９^－Ｔ細胞である。

【0440】

いくつかの態様では、細胞組成物は、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含み、これらの細胞は、（ｉ）１つ以上の幹様マーカー及び（ｉｉ）１つ以上のエフェクター様マーカーの双方を発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含み、これらの細胞は、少なくとも２つの幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、増加したパーセントの免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含み、これらの細胞は、少なくとも３つの幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含み、これらの細胞は、少なくとも４つの幹様マーカー及び１つ以上のエフェクター様マーカーを発現する。いくつかの態様では、細胞組成物は、増加した割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含み、これらの細胞は、１つ以上の幹様マーカー及び少なくとも２つエフェクター様マーカーを発現する。

【0441】

いくつかの態様では、幹様マーカーは、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では幹様マーカーはＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、及びＴＣＦ７＋、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、細胞はＣＤ４５ＲＯ^低を発現する。いくつかの態様では、幹様マーカーは、特徴的な遺伝子発現の一部として本明細書で列挙される１つ以上の遺伝子を含む（上記を参照のこと、例えば、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１７（１０）１２９０－９７（２０１１）またはＧａｌｌｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１，１５５２－６２（２０２０）を参照のこと）。

【0442】

いくつかの態様では、幹様マーカーは、ＷＮＴシグナル伝達経路において発現される遺伝子を含む。いくつかの態様では、幹様マーカーは、ＧＮＧ２、ＰＳＭＣ３、ＰＳＭＢ１０、ＰＳＭＣ５、ＰＳＭＢ８、ＰＳＭＢ９、ＡＫＴ１、ＭＹＣ、ＣＬＴＢ、ＰＳＭＥ１、ＤＶＬ２、ＰＦＮ１、Ｈ２ＡＦＪ、ＬＥＦ１、ＣＴＢＰ１、ＭＯＶ１０、ＨＩＳＴ１Ｈ２ＢＤ、ＦＺＤ３、ＩＴＰＲ３、ＰＡＲＤ６Ａ、ＬＲＰ５、ＨＩＳＴ２Ｈ４Ａ、ＨＩＳＴ２Ｈ３Ｃ、ＨＩＳＴ１Ｈ２ＡＤ、ＨＩＳＴ２Ｈ２ＢＥ、ＨＩＳＴ３Ｈ２ＢＢ、ＤＡＣＴ１、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上の遺伝子を含む。いくつかの態様では、幹様マーカーは、ＭＹＣ、ＡＫＴ１、ＬＥＦ１、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上の遺伝子を含む。

【0443】

いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、ＳＴＡＴ３＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーはＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＫＴ３、ＢＣＬ２Ｌ１、ＣＢＬ、ＣＢＬＢ、ＣＢＬＣ、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＤ２、ＣＣＮＤ３、ＣＩＳＨ、ＣＬＣＦ１、ＣＮＴＦ、ＣＮＴＦＲ、ＣＲＥＢＢＰ、ＣＲＬＦ２、ＣＳＦ２、ＣＳＦ２ＲＡ、ＣＳＦ２ＲＢ、ＣＳＦ３、ＣＳＦ３Ｒ、ＣＳＨ１、ＣＴＦ１、ＥＰ３００、ＥＰＯ、ＥＰＯＲ、ＧＨ１、ＧＨ２、ＧＨＲ、ＧＲＢ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ１０、ＩＦＮＡ１３、ＩＦＮＡ１４、ＩＦＮＡ１６、ＩＦＮＡ１７、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ２１、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＩＦＮＡ８、ＩＦＮＡＲ１、ＩＦＮＡＲ２、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＥ、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＧＲ１、ＩＦＮＧＲ２、ＩＦＮＫ、ＩＦＮＬ１、ＩＦＮＬ２、ＩＦＮＬ３、ＩＦＮＬＲ１、ＩＦＮＷ１、ＩＬ１０、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１９、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２０ＲＢ、ＩＬ２１、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２、ＩＬ２２ＲＡ１、ＩＬ２２ＲＡ２、ＩＬ２３Ａ、ＩＬ２３Ｒ、ＩＬ２４、ＩＬ２６、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ７、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＲＦ９、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＬＥＰ、ＬＥＰＲ、ＬＩＦ、ＬＩＦＲ、ＭＰＬ、ＭＹＣ、ＯＳＭ、ＯＳＭＲ、ＰＩＡＳ１、ＰＩＡＳ２、ＰＩＡＳ３、ＰＩＡＳ４、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＩＫ３ＣＢ、ＰＩＫ３ＣＤ、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＩＫ３Ｒ１、ＰＩＫ３Ｒ２、ＰＩＫ３Ｒ３、ＰＩＫ３Ｒ５、ＰＩＭ１、ＰＲＬ、ＰＲＬＲ、ＰＴＰＮ１１、ＰＴＰＮ６、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ２、ＳＯＣＳ３、ＳＯＣＳ４、ＳＯＣＳ５、ＳＯＣＳ７、ＳＯＳ１、ＳＯＳ２、ＳＰＲＥＤ１、ＳＰＲＥＤ２、ＳＰＲＹ１、ＳＰＲＹ２、ＳＰＲＹ３、ＳＰＲＹ４、ＳＴＡＭ、ＳＴＡＭ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５Ａ、ＳＴＡＴ５Ｂ、ＳＴＡＴ６、ＴＰＯ、ＴＳＬＰ、ＴＹＫ２、及びそれらの任意の組み合わせから成る群から選択されるＳＴＡＴ標的を含む。

【0444】

いくつかの態様では、エフェクター様マーカーはＴＢＣＤ、ＡＲＬ４Ｃ、ＫＬＦ６、ＬＰＧＡＴ１、ＬＰＩＮ２、ＷＤＦＹ１、ＰＣＢＰ４、ＰＩＫ３４３、ＦＡＳ、ＬＬＧＬ２、ＰＰＰ２Ｒ２Ｂ、ＴＴＣ３９Ｃ、ＧＧＡ２、ＬＲＰ８、ＰＭＡＩＰ１、ＭＶＤ、ＩＬ１５ＲＡ、ＦＨＯＤ１、ＥＭＬ４、ＰＥＡ１５、ＰＬＥＫＨＡ５、ＷＳＢ２、ＰＡＭ、ＣＤ６８、ＭＳＣ、ＴＬＲ３、Ｓ１ＰＲ５、ＫＬＲＢ１、ＣＹＴＨ３、ＲＡＢ２７Ｂ、ＳＣＤ５、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上の遺伝子を含むエフェクターメモリー関連遺伝子である。いくつかの態様では、エフェクター様マーカーは、ＫＬＦ６、ＦＡＳ、ＫＬＲＢ１、ＴＬＲ３、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１以上の遺伝子を含む。

【0445】

いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋である、増加したパーセントでの免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ６２Ｌ＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋である、増加したパーセントでの免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＴＣＦ７＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋である、増加したパーセントでの免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ＳＴＡＴ５＋、及びＳＴＡＴ３＋である、増加したパーセントでの免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋である、増加したパーセントでの免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞組成物は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、ｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、及びＳＴＡＴ３＋である、増加したパーセントでの免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を含む。

【0446】

いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のマーカー、ならびにｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、ＳＴＡＴ３＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のマーカーを含む。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ^低を発現する。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＢＡＣＨ２＋、ＬＥＦ１＋、ＴＣＦ７＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のマーカーならびに１つ以上のエフェクター様マーカーを含む。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、１つ以上の幹様マーカーならびにｐＳＴＡＴ５＋、ＳＴＡＴ５＋、ｐＳＴＡＴ３＋、ＳＴＡＴ３＋、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のマーカーを含む。いくつかの態様では、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ^低を発現する。

【0447】

本開示のいくつかの態様は、免疫細胞の集団を含む細胞組成物を対象とし、免疫細胞の集団は（ｉ）１以上の幹様マーカーを発現する免疫細胞（例えば、幹様免疫細胞）の第１の亜集団及び（ｉｉ）１以上のエフェクター様マーカーを発現する免疫細胞（例えば、エフェクター様免疫細胞）の第２の亜集団を含み、免疫細胞の集団は、従来の培地、例えば、５ｍＭ未満のカリウムイオンを有する培地を使用して培養した免疫細胞の集団と比べて、１以上の幹様マーカーを発現する、高い割合（すなわち、幹様免疫細胞の数／免疫細胞の総数）の免疫細胞の第１の亜集団を含む。いくつかの態様では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの態様では、細胞はＮＫ細胞である。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、これらの細胞組成物をもたらす。

【0448】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法に従って培養された免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、発現の増加、例えば、ＧＺＭＢ、ＭＨＣ－ＩＩ、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、及び／またはＮＫＧ７を発現する、より高い割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞、ならびに、発現の減少、例えば、ＩＬ－３２を発現する、より低い割合の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞を有する。ＮＫＧ７について最も高い細胞は、より良好な殺傷体であることが示されており（Ｍａｌａｒｋａｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．２０２０ Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏ．）、一方で、ＩＬ－３２がより高い細胞は、活性化誘導細胞死を有することが示されている（Ｇｏｄａ ｅｔ ａｌ．，２００６Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ）。いくつかの態様では、ＧＺＭＢ、ＭＨＣ－ＩＩ、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、及び／またはＮＫＧ７の発現がより高い免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、エフェクター様マーカーを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、ＩＬ－３２の発現がより低い免疫細胞、例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞は、エフェクター様マーカーを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞である。

【0449】

いくつかの態様では、本明細書に記載される任意の方法によって得られる細胞組成物（例えば、療法として使用するための最終細胞産物の収率）は、少なくとも約１×１０^５、５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９個の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１×１０^３、５×１０^３、１×１０^４、５×１０^４、１×１０^５、５×１０^５、１×１０^６、５×１０^６、１×１０^７、５×１０^７、１×１０^８、５×１０^８、１×１０^９、または５×１０^９の幹様細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、１×１０^１０、２×１０^１０、３×１０^１０、４×１０^１０、５×１０^１０、６×１０^１０、７×１０^１０、８×１０^１０、９×１０^１０、１０×１０^１０、１１×１０^１０、１２×１０^１０、１３×１０^１０、１４×１０^１０、または１５×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１×１０^６の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１×１０^６の幹様細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約２×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約３×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約４×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約５×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約６×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約７×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約８×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約９×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１０×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１１×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１２×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１３×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１４×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている任意の方法によって得られる細胞組成物は、少なくとも約１５×１０^１０の細胞を含む。いくつかの態様では、細胞収率はＣＤ３＋細胞の総数を表す。

【0450】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、現在開示されている培地での培養の少なくとも約１０日目までに少なくとも約１×１０^１０、少なくとも約１．１×１０^１０、少なくとも約１．２×１０^１０、少なくとも約１．３×１０^１０、少なくとも約１．４×１０^１０、少なくとも約１．５×１０^１０、少なくとも約１．６×１０^１０、少なくとも約１．７×１０^１０、少なくとも約１．８×１０^１０、少なくとも約１．９×１０^１０、または少なくとも約２．０×１０^１０の細胞を含む組成物を生成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、現在開示されている培地での培養の少なくとも約１０日目までに少なくとも約１．８×１０^１０の細胞を含む組成物を生成する。

【0451】

いくつかの態様では、細胞組成物は、少なくとも約１×１０^１０、少なくとも約１．１×１０^１０、少なくとも約１．２×１０^１０、少なくとも約１．３×１０^１０、少なくとも約１．４×１０^１０、少なくとも約１．５×１０^１０、少なくとも約１．６×１０^１０、少なくとも約１．７×１０^１０、少なくとも約１．８×１０^１０、少なくとも約１．９×１０^１０、または少なくとも約２．０×１０^１０の幹様細胞を含む。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、培養の少なくとも約１０日目までに少なくとも約１×１０^１０、少なくとも約１．１×１０^１０、少なくとも約１．２×１０^１０、少なくとも約１．３×１０^１０、少なくとも約１．４×１０^１０、少なくとも約１．５×１０^１０、少なくとも約１．６×１０^１０、少なくとも約１．７×１０^１０、少なくとも約１．８×１０^１０、少なくとも約１．９×１０^１０、または少なくとも約２．０×１０^１０個の幹様細胞を含む組成物を生成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、本開示の培地にての培養の少なくとも約１０日目までに少なくとも約１．８×１０^１０個の幹様細胞を生成する。

【0452】

いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％生存性である免疫細胞を含む組成物を生成する。いくつかの態様では、本明細書に開示されている方法は、少なくとも約９４％の細胞生存率である少なくとも約１．８×１０^１０の幹様細胞を含む組成物を生成する。

【0453】

ＩＶ．治療方法
本開示のいくつかの態様は、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変され、本明細書で提供されている方法を使用して培養された）を投与する方法を対象とする。本開示のいくつかの態様は、対象に本明細書に記載されている免疫細胞を対象に投与することを含む、疾患または障害の治療を必要とする対象において疾患または障害を治療する方法を対象とする。例えば、いくつかの態様では、本明細書で開示されているのは、キメラ結合タンパク質（例えば、ＣＡＲ）を発現するように、かつｃ－Ｊｕｎタンパク質を過剰発現するよう操作された免疫細胞を対象に投与することを含む、疾患または障害の治療を必要とする対象において疾患または障害を治療する方法である。いくつかの態様では、疾患または状態は、腫瘍、すなわち、がんを含む。いくつかの態様では、方法は、対象における標的の細胞集団または組織に対するＴ細胞が介在する免疫応答を刺激することを含み、本明細書に記載されている免疫細胞を投与することを含む。いくつかの態様では、標的細胞集団は腫瘍を含む。いくつかの態様では、腫瘍は、固形腫瘍である。

【0454】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変され、本明細書に記載されている方法を使用して培養された）を投与すると、参照腫瘍体積と比べて対象における腫瘍体積が減少する。いくつかの態様では、参照腫瘍体積は、投与前の対象における腫瘍体積である。いくつかの態様では、参照腫瘍体積は投与を受けなかった対応する対象における腫瘍体積である。いくつかの態様では、対象における腫瘍体積は、参照腫瘍体積と比べて投与後に少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少する。

【0455】

いくつかの態様では、腫瘍を治療することは、対象において腫瘍重量を低減することを含む。いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変され、本明細書に記載されている方法を使用して培養された）を投与すると、対象に投与されたときに対象の腫瘍重量を減らすことができる。いくつかの態様では、腫瘍重量は、参照腫瘍重量と比べて、投与後に少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％低減する。いくつかの態様では、参照腫瘍重量は投与前の対象における腫瘍重量である。いくつかの態様では、参照腫瘍重量は、投与を受けなかった対応する対象の腫瘍重量である。

【0456】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質を発現するように、かつｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加するように改変され、本明細書に提供されている方法を用いて培養された）を、例えば、腫瘍に罹患している対象に投与することにより、対象の血液中のＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋）の数及び／または割合を増加させ得る。いくつかの態様では、Ｔ細胞は改変された免疫細胞である。いくつかの態様では、血中のＴ細胞（例えば、キメラ結合タンパク質を発現するように、かつｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加するように改変され、本明細書で提供されている方法を使用して培養された）の数及び／または割合は、参照（例えば、投与を受けなかった対象または投与前の同じ対象の対応する値）と比べて、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１１０％、少なくとも約１２０％、少なくとも約１３０％、少なくとも約１４０％、少なくとも約１５０％、少なくとも約１６０％、少なくとも約１７０％、少なくとも約１８０％、少なくとも約１９０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２１０％、少なくとも２２０％、少なくとも約２３０％、少なくとも約２４０％、少なくとも約２５０％、少なくとも約２６０％、少なくとも約２７０％、少なくとも約２８０％、少なくとも約２９０％、または少なくとも約３００％以上増加する。いくつかの態様では、血中のＴ細胞の数及び／または割合は、参照（例えば、投与を受けていない対応する対象）と比べて、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍以上増加する。

【0457】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質を発現するように、かつｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加するように改変され、本明細書に提供されている方法を用いて培養された）を、例えば、腫瘍に罹患している対象に投与することにより、対象の腫瘍及び／または腫瘍微小環境（ＴＭＥ）におけるＴ細胞（例えば、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋）の数及び／または割合を増加させ得る。いくつかの態様では、Ｔ細胞は改変された免疫細胞である。いくつかの態様では、腫瘍及び／またはＴＭＥにおけるＴ細胞（例えば、キメラ結合タンパク質を発現するように、かつｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加するように改変された）の数及び／または割合は、参照（例えば、投与を受けなかった対象または投与前の同じ対象における対応する値）と比べて、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１１０％、少なくとも約１２０％、少なくとも約１３０％、少なくとも約１４０％、少なくとも約１５０％、少なくとも約１６０％、少なくとも約１７０％、少なくとも約１８０％、少なくとも約１９０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２１０％、少なくとも２２０％、少なくとも約２３０％、少なくとも約２４０％、少なくとも約２５０％、少なくとも約２６０％、少なくとも約２７０％、少なくとも約２８０％、少なくとも約２９０％、もしくは少なくとも約３００％以上増加する。いくつかの態様では、腫瘍及び／またはＴＭＥにおけるＴ細胞の数及び／または割合は、参照（例えば、投与を受けなかった対応する対象）と比べて、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍以上増加する。

【0458】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変され、本明細書に提供されている方法を用いて培養された）を、例えば腫瘍に罹患している対象に投与すると、投与を受けなかった（例えば、対応する、しかしｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を欠いた細胞で治療された）対応する対象における免疫応答の持続期間に対して、対象における免疫応答の持続期間を増加させることができる。いくつかの態様では、免疫応答の期間は、参照（例えば、投与を受けなかった対応する対象）と比べて、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約３００％、少なくとも約４００％、少なくとも約５００％、または少なくとも約１０００％以上増加する。いくつかの態様では、免疫応答の期間は、参照（例えば、投与を受けなかった対応する対象）と比べて、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍以上増加する。いくつかの態様では、免疫応答の時間は、参照（例えば、投与を受けなかった対応する対象）と比べて、少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、少なくとも約１か月、少なくとも約２か月、少なくとも約３か月、少なくとも約４か月、少なくとも約５か月、少なくとも約６か月、少なくとも約７か月、少なくとも約８か月、少なくとも約９か月、少なくとも約１０か月、少なくとも約１１か月、少なくとも約１年、少なくとも約２年、少なくとも約３年、少なくとも約４年、または少なくとも約５年増加する。

【0459】

本明細書に記載されているように、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変され、本明細書に記載されている方法を使用して培養された）は、様々ながんを治療するために使用され得る。処置することができるがんの非限定例としては、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、脳腫瘍、脳癌、乳癌、小児期癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、ユーイング肉腫ファミリー、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキン病、カポジ肉腫、腎細胞癌、喉頭部及び下咽頭癌、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺カルチノイド腫瘍、皮膚のリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、口腔及び口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟部組織における肉腫、基底及び扁平上皮細胞皮膚癌、黒色腫、小腸癌、胃癌、精巣癌、咽喉癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰部癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍、がん治療によって引き起こされる二次がん、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。いくつかの態様では、がんは、固形腫瘍と関連付けられる。

【0460】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変され、本明細書に記載されている方法を使用して培養された）は、他の治療剤（例えば、抗がん剤及び／または免疫調節剤）と組み合わせて使用される。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されている疾患または障害（例えば、腫瘍）を治療する方法は、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変され、本明細書で提供されている方法を使用して培養された）を１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて投与することを含む。そのような薬剤としては、例えば、化学療法薬、標的抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞傷害性薬剤、免疫に基づく療法、サイトカイン、手術、放射線療法、共刺激分子の活性化因子、免疫チェックポイント阻害剤、ワクチン、細胞免疫療法、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられ得る。

【0461】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変され、本明細書に記載されている方法を使用して培養された）は、追加の治療剤の投与前または投与後に対象に投与される。いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変され、本明細書に記載されている方法を使用して培養された）は追加の治療剤と同時に対象に投与される。いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変され、本明細書に記載されている方法を使用して培養された）及び追加の治療剤は、薬学的に許容される担体中の単一の組成物として同時に投与され得る。いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変され、本明細書に記載されている方法を使用して培養されたもの）及び追加の治療剤は、別の組成物として同時に投与される。

【0462】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、ＲＯＲ１結合タンパク質を発現するように、かつｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加するように改変され、本明細書に記載されている方法を使用して培養されたもの）は、ダサチニブまたはポナチニブのようなＢＣＲ－ＡＢＬ／Ｓｒｃキナーゼ阻害剤の投与前または投与後に対象に投与される。いくつかの態様では、ダサチニブまたはポナチニブは、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法で時々発生し得る細胞傷害性（例えば、サイトカインストーム）を軽減するために投与され得る。Ｓｒｃキナーゼは生理的なＴ細胞の活性化に重要な役割を担うことが知られている。これと一致して、ダサチニブは、抗原特異的な生理学的Ｔ細胞の活性化、増殖、サイトカイン産生、及び脱顆粒を用量依存性に大幅に阻害することが示されており（Ｓｃｈａｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１１１：１３６６－７７，２００８；Ｗｅｉｃｈｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１４：２４８４－９１，２００８）、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法における細胞傷害性を軽減することが示されている（例えば、ＵＳ２０２１０３２３６３を参照のこと）。

【0463】

いくつかの態様では、本明細書に記載されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質及び増加したレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質を発現するように改変され、本明細書に記載されている方法を使用して培養された）は、標準治療（例えば、手術、放射線療法、及び化学療法）と組み合わせて使用される。本明細書に記載されている方法は、維持療法、例えば、腫瘍の発生または再発を防止することを目的とした療法としても使用され得る。

【0464】

いくつかの態様では、本明細書で提供されている免疫細胞（例えば、キメラ結合タンパク質を発現するように、かつｃ－Ｊｕｎタンパク質のレベルが増加するように改変され、本明細書で提供されている方法を使用して培養された）は、免疫経路の複数の要素を標的とすることができるような１つ以上の抗がん剤と組み合わせて使用される。そのような組み合わせの非限定例としては、腫瘍抗原提示を増強する療法（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド）；例えば、ＣＴＬＡ－４及び／またはＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２経路の阻害、及び／またはＴｒｅｇもしくは他の免疫抑制細胞（例えば、骨髄系由来サプレッサー細胞）の枯渇もしくは遮断によって、負の免疫調節を阻害する療法；例えば、ＣＤ－１３７、ＯＸ－４０、及び／またはＣＤ４０もしくはＧＩＴＲの経路を刺激する、及び／またはＴ細胞エフェクター機能を刺激するアゴニストによる、正の免疫調節を刺激する療法；抗腫瘍Ｔ細胞の発生頻度を全身性に増やす療法；例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト（例えば、ダクリズマブ）を使用して、または生体外抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって腫瘍中のＴｒｅｇのようなＴｒｅｇを枯渇させる、または阻害する療法；腫瘍中のサプレッサー骨髄細胞の機能に影響を及ぼす療法；腫瘍細胞の免疫原性を増強する療法（例えば、アントラサイクリン）；遺伝子操作細胞、例えば、キメラ抗原受容体を発現するように操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ療法）を含む養子Ｔ細胞またはＮＫ細胞移入；代謝酵素、例えば、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、または一酸化窒素合成酵素などを阻害する療法；Ｔ細胞のアネルギーまたは疲弊を元に戻す／防止する療法；腫瘍部位の自然免疫活性化及び／または炎症を誘発する療法；免疫刺激性サイトカインの投与；免疫抑制サイトカインの遮断；あるいはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。

【0465】

いくつかの態様では、抗がん剤は、免疫チェックポイント阻害剤を含む（すなわち、特定の免疫チェックポイント経路を介するシグナル伝達を遮断する）。本発明の方法に使用され得る免疫チェックポイント阻害剤の非限定的な例は、ＣＴＬＡ－４アンタゴニスト（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）、ＰＤ－１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、ＴＩＭ－３アンタゴニスト（例えば、抗ＴＩＭ－３抗体）、またはそれらの組み合わせを含む。そのような免疫チェックポイント阻害剤の非限定的な例としては、以下、抗ＰＤ１抗体（例えば、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、ＭＫ－３４７５）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１）、ＰＤＲ００１、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＴＳＲ－０４２、ＲＥＧＮ２８１０、ＪＳ００１、ＡＭＰ－２２４（ＧＳＫ－２６６１３８０）、ＰＦ－０６８０１５９１、ＢＧＢ－Ａ３１７、ＢＩ７５４０９１、ＳＨＲ－１２１０、及びそれらの組み合わせ）、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）、ＲＧ７４４６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＯ５５４１２６７）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６、ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標））、ＢＭＳ－９３６５５９、アベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標））、ＬＹ３３０００５４、ＣＸ－０７２（Ｐｒｏｃｌａｉｍ－ＣＸ－０７２）、ＦＡＺ０５３、ＫＮ０３５、ＭＤＸ－１１０５、及びそれらの組み合わせ）、ならびに抗ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））、トレメリムマブ（チシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６）、ＡＧＥＮ－１８８４、ＡＴＯＲ－１０１５、及びそれらの組み合わせ）が挙げられる。

【0466】

いくつかの態様では、抗がん剤は、免疫チェックポイント活性化因子を含む（すなわち、特定の免疫チェックポイント経路を介してシグナル伝達を促進する）。いくつかの態様では、免疫チェックポイント活性化因子は、ＯＸ４０アゴニスト（例えば、抗ＯＸ４０抗体）、ＬＡＧ－３アゴニスト（例えば、抗ＬＡＧ－３抗体）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト（例えば、抗ＣＤ１３７抗体）、ＧＩＴＲアゴニスト（例えば、抗ＧＩＴＲ抗体）、ＴＩＭ３アゴニスト（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）、またはそれらの組み合わせを含む。

【0467】

本開示の実施は、別途示されない限り、当該技術分野の技術内である細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、及び免疫学の従来の技法を用いるであろう。そのような技法は、文献で十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ ｅｄ．；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ）、Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ ｅｄ．，（１９８５）ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ、Ｇａｉｔ，ｅｄ．（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，６８３，１９５、Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ、Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９８７）Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）（１９８６）、Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）、Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１５４ ａｎｄ １５５、Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）、Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＶ；Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８６）；）、Ｃｒｏｏｋｓ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２^ｎｄ Ｅｄ．ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２００７）、及びｉｎ Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．）を参照のこと。

【0468】

上記で引用された全ての参考文献、ならびに本明細書で引用された全ての参考文献及びアミノ酸またはヌクレオチド配列（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ番号及び／またはＵｎｉｐｒｏｔ番号）は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0469】

以下の実施例は、例示のために示すものであって、限定のためのものではない。

【実施例】

【0470】

実施例１：ＣＡＲ形質導入効率の分析
ＣＡＲ形質導入効率に対して代謝再プログラム化培地が有する効果を評価するために、代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）またはＴ細胞馴化培地（すなわち、ＴＣＭ）のいずれかにおいてヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ構築物で形質導入した。本実施例を行う際に使用した例示的な方法を以下に提供する。

【0471】

培地調製
対照として使用されたＴ細胞馴化培地（ＴＣＭ）をＩｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）、ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液（Ｇｉｂｃｏ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、ＩＬ－２（２００ＩＵ／ｍｌ）、ＩＬ－７（１２００ＩＵ／ｍｌ）、ＩＬ－１５（２００ＩＵ／ｍＬ）で補完した。

【0472】

代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）は、様々な濃度のナトリウム、カリウム、グルコース、及びカルシウムで補完したＴＣＭを使用して作り出した。最終濃度は、以下の範囲であった：ＮａＣｌ（４０～８０ｍＭ）、ＫＣｌ（４０～８０ｍＭ）、カルシウム（０．５～２．８ｍＭ）、グルコース（１０～２４ｍＭ）、及び浸透圧（約２５０～２６０ｍＯｓｍｏｌ）。表１０を参照のこと。

【表10】

【0473】

レンチウイルスベクター（ＬＶＶ）構築及びレンチウイルス産生
以下の構成要素を含む抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ構築物を生成した：（ｉ）抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ（Ｒ１２抗体に由来する）（本明細書では「Ｒ１２ ＣＡＲ」と称する）（配列番号８３）、（ｉｉ）切断型ＥＧＦＲ（「ＥＧＦＲｔ」）（配列番号２４）、（ｉｉｉ）野生型ｃ－Ｊｕｎタンパク質（配列番号１３）（本明細書では「ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ」と称する、配列番号８６）。（下記）表１２を参照のこと。細胞（例えば、Ｔ細胞）において形質導入された場合に、形質導入された細胞が、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ及びＥＧＦＲｔの表面発現とともに、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現の増加を呈するようにｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ構築物を設計した。対照として、ｃ－Ｊｕｎの代わりに切断型ＣＤ１９（「ＣＤ１９ｔ」）を含む対応する抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ構築物も生成した（本明細書で「対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ」と呼ばれる）。Ｔｅｒａｋｕｒａ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１９（１）：７２－８２（２０１２）を参照されたく、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0474】

レンチウイルスベクターをＶＳＶ－Ｇエンベロープでシュードタイプ化し、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞の一過性形質移入によって産生した。最終バルクを２～８℃で２４時間以下保持した後、１ｍＬのＬＶＶアリコートを充填し、－８０℃で保管した。ＬＶＶアリコートを、Ｔ細胞形質導入前に氷上で解凍した。

【0475】

Ｔ細胞の単離
ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を３名の健康ドナーから単離し、ベンダーであるＢｌｏｏｄＷｏｒｋｓ（Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ，ＵＳＡ）及びＡｌｌＣｅｌｌｓ（Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して凍結した。ベンダーは、ドナーから全ての適切な同意書を入手し、管理した。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を単離するために、試料をアフェレーシスを介して収集し、そのＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞を、最初にＣＤ８＋Ｔ細胞の陽性選択、続いてＣＤ８選択からのフロースルーのＣＤ４＋Ｔ細胞についての陽性選択の順序で別々に単離した。単離されたＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞をバイアル当たり２０Ｅ＋０６細胞（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）または５０Ｅ＋０６細胞（ＢｌｏｏｄＷｏｒｋｓ）のいずれかで凍結させた。

【0476】

細胞培養及び形質導入
凍結保存された健康ドナーのヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞（すなわち、ベンダーからのもの）を適切な培地（すなわち、ＴＣＭまたはＭＲＭ）において解凍し、１：１の比で合わせた。合わせたドナーのＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を３００×ｇで５分間遠心分離し、ＩＬ－２、ＩＬ－７、及びＩＬ－１５が補完された適切な培地（すなわち、Ｔ細胞馴化培地またはＭＲＭ）に再懸濁した。次いでＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ Ｉｎｃ．）を使用して活性化した。ＴＣＭまたはＭＲＭのいずれかにおける活性化の２４時間後（すなわち、１日目）、Ｔ細胞を抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ構築物（すなわち、「ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ」及び「対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ」）を含む上述したＬＶＶで形質導入した。非形質導入Ｔ細胞を対照として使用した。形質導入の翌日（すなわち、２日目）、新鮮な培地（すなわち、ＴＣＭまたはＭＲＭ）を添加してＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）を希釈し、Ｔ細胞活性化を終了させた。形質導入されたＴ細胞を更に５日間（すなわち、７日目）更に増殖させ、次いで、その後分析するか、または長期保存のために液体窒素において凍結保存した。

【0477】

形質導入効率分析
異なる群からのＣＡＲ形質導入効率を比べるために（表１１を参照）、以下を発現するＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の割合をフローサイトメトリーを使用して決定した：（ｉ）配列番号２４に示される配列を含むｃ－Ｊｕｎ、抗ＲＯＲ１ Ｒ１２ ｓｃＦｖ、及びＥＧＦＲｔ、または（ｉｉ）ｃ－Ｊｕｎ、抗ＲＯＲ１ Ｒ１２ ｓｃＦｖ、及び切断型ＣＤ１９。

【表11】

【0478】

ＴＣＭ群及びＭＲＭ群の双方において及び各ドナー内で、対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲとｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲとの間の形質導入効率は、同等であった。同様に、ＴＣＭ群とＭＲＭ群との間で、形質導入されたＴ細胞（すなわち、ＥＧＦＲｔ及びＲ１２ ＣＡＲの双方を発現する）の割合は同等であった。また、各ドナー内の異なる群からの形質導入されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の割合において有意な差異は観察されなかった。興味深いことに、ＭＲＭ群からのｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入されたＴ細胞は、ＴＣＭ群からの対応する形質導入されたＴ細胞と比べて有意に高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質発現を発現した（図１Ａ～１Ｃを参照のこと）。発現の増加は、ｃ－Ｊｕｎタンパク質に特異的であり、他の導入遺伝子（すなわち、Ｒ１２ ＣＡＲ及びＥＧＦＲｔ）に包括的ではなかった。

【0479】

これらの結果は、本明細書に記載されている抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ構築物が双方の培養条件下で同様の程度でＴ細胞に形質導入できることを示唆している。結果は、代謝再プログラム化培地条件が、本明細書で提供される抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ構築物のｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を選択的に増加させる際に有用であり得ることを更に示唆している。

【0480】

実施例２：幹様表現型発現の分析
ｃ－Ｊｕｎを過剰発現する形質導入されたＴ細胞の幹様特性に対する代謝再プログラム化培地の影響を評価するために、実施例１に記載されている抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ構築物（すなわち、ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲまたは対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ）でヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を形質導入した。次いで、細胞を更に４～５日（すなわち、６または７日目）増殖させた後、形質導入されたＴ細胞の幹細胞性をフローサイトメトリーを使用して評価した。

【0481】

簡潔に述べると、Ｔ細胞をまず細胞染色緩衝液で洗浄し、抗ＣＣＲ７で、１５分間３７℃で染色した。次いで、Ｔ細胞を再度洗浄し、次いで、いくつかの他の抗原に対する抗体のマスターミックス（以下に詳述する）を細胞に添加し、室温で、暗闇の中で２５分間インキュベートした。次いで細胞を細胞染色緩衝液で洗浄し、ＦＯＸＰ３染色キット（ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で製造業者のプロトコールに従って透過処理した。固定後、細胞を事前希釈された正常マウス血清（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍＭｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ－＃０１５－０００－１２０）及び正常ウサギ血清（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ－＃０１１－０００－１２０）で１５分間暗所で室温でブロッキングした。次いで細胞をＴＣＦ７及びｃ－Ｊｕｎの２×抗体カクテルで３０分間暗所で室温で染色した。細胞を完全に洗浄した後、それらをＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ，Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）を使用してＣｙｔｅｋ Ａｕｒｏｒａ Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒにてフローサイトメトリーによって分析した。

【0482】

以下は、幹細胞性マーカーを評価するために使用される抗体のリストである。ＣＤ８（Ｔｈｅｒｍｏ－＃５８－００８８－４２）、ＣＤ４（ＢＤ－＃６１２９３６）、ＣＤ２７（ＢＤ－＃６１２８２９）、ＣＤ３（Ｔｈｅｒｍｏ－＃６１２８９６）、ＣＤ２８（ΒｉｏＬｅｇｅｎｄ－＃３０２９３６）、ＣＤ６２Ｌ（ＢＤ－＃７４０３０１）、Ｒ１２抗Ｉｄ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ－＃４８Ｆ６Ｈ５Ｅ１）、ＥＧＦＲ（ΒｉｏＬｅｇｅｎｄ－＃９８８１２）、ＣＤ４５ＲＯ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ－＃５６６１４３）、ＣＤ３９（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ－＃３２８２３６）、ＴＣＦ７（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ－＃９０６６Ｓ）、ｃ－Ｊｕｎ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ－＃１５６８３Ｓ）、ＣＣＲ７（ＢＤ－＃５６２３８１）、ＣＤ４５ＲＡ（ＢＤ－＃５６０６７３）、ＬＡＧ－３（Ｔｈｅｒｍｏ－＃６７－２２３９－４２）、ＴＩＭ－３（Ｔｈｅｒｍｏ－＃７８－３１０９－４２）、ＴＩＧＩＴ（Ｔｈｅｒｍｏ－＃４６－９５００－４２）、ＰＤ－１（Ｔｈｅｒｍｏ－＃２５－２７９９－４２）。具体的には、本明細書に記載されているように、「幹様」細胞は、ＣＤ４５ＲＯ^－ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋ＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ２７^＋ＣＤ２８^＋ＴＣＦ７^＋として定義された。

【0483】

図２Ａ～２Ｃに示すように、ＴＣＭ群からの細胞と比べて、ＭＲＭにおいて抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ構築物で形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞はそれらの表現型発現に関してより幹様であった。これは概して、ＣＤ４＋Ｔ細胞がｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入されたか、または対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入されたかにかかわらず、真実である（図２Ａ～２Ｃにおける最後の２つの棒を参照のこと）。同様に、ＭＲＭにおいて形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞は、概して、ＴＣＭにおいて形質導入された対応する細胞と比べてより幹様であった（少なくともドナー＃１及び＃２に由来するＣＤ８＋Ｔ細胞の場合、図２Ｄ及び２Ｅを参照のこと）。しかし、ＣＤ４＋Ｔ細胞とは異なり、対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲと比べて、ＣＤ８＋Ｔ細胞がｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入された場合、幹様細胞の一貫した増加が観察された。したがって、ＣＤ８＋Ｔ細胞の中で、ＣＤ８＋Ｔ細胞がＭＲＭにおいて、ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入された場合、最も高い割合の幹様細胞が観察された。図２Ｇ～２Ｉに示すように、ＴＣＭ群の細胞と比べて、ＭＲＭにおいて抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ構築物で形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞は、高い比率のナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞を含有した（ＣＣＲ７^＋及びＣＤ４５ＲＡ^＋の発現によって証明される）（それぞれ最初の２つの棒を最後の２つの棒と比較）。概して、ＣＤ４＋Ｔ細胞にｃ－Ｊｕｎ－抗ＲＯＲ１ ＣＡＲで形質導入した場合、対照抗ＲＯＲ１ ＣＡＲと比べて、ナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞の比率の増加も観察された（図２Ｇ～２Ｉの２番目及び４番目の棒を１番目及び３番目の棒と比べる）。同様の結果がＣＤ８＋Ｔ細胞において観察された（図２Ｊ～２Ｌを参照のこと）。したがって、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の双方では、ＭＲＭにおいてｃ－Ｊｕｎ－抗ＲＯＲ１ ＣＡＲで形質導入した場合に、概して最も高い割合のナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞が観察された。

【0484】

これらの結果は、低分化（すなわち、より幹様）である形質導入されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を産生する際の本明細書に記載されている代謝再プログラム化培地の有用性を強調する。そして、少なくともＣＤ８＋Ｔ細胞では、結果は、ｃ－Ｊｕｎなどの転写因子を過剰発現することが、形質導入されたＴ細胞の幹様特性を更に改善し得ることを更に示唆している。

【0485】

実施例３：機能分析
抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞に対するＭＲＭが有する効果を更に評価するために、ヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ構築物で形質導入し、実施例１に記載されているように増殖させた。６日目または７日目に、形質導入されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を機能的に分析した（例えば、一次及び／または慢性抗原刺激後のＩＬ－２及び／またはＩＮＦ－γ産生、ならびにインビトロ殺傷）。

【0486】

細胞傷害性及びサイトカイン分泌
形質導入されたＴ細胞の細胞傷害活性をインビトロ殺傷アッセイを使用して測定した。簡潔には、形質導入されたＴ細胞（「エフェクター」）を標的腫瘍細胞（「標的）と１１：４、１：１６、１：６４、及び１：１２８のエフェクター：標的比で共培養し、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用して６時間ごとに４×の倍率で走査した（標的腫瘍細胞を表す赤色の核の数を追跡することによって細胞傷害活性を測定した）。共培養の２４時間後、上清を異なる条件から収集し、後のサイトカイン分析のために－８０℃で凍結した。次いで細胞を含有する培養プレートを継続周期スキャンのためにＩｎｃｕＣｙｔｅに戻した。

【0487】

サイトカイン分泌分析のため、先に凍結した上清を解凍し、ある特定のサイトカイン（例えば、ＩＬ－２及びＩＦＮ－ｇ）のレベルをＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）マルチプレックスプラットフォームを使用して評価し、ＭＳＤ Ｍｅｓｏ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ ６００装置で製造業者のプロトコールに従って測定した。

【0488】

連続再刺激アッセイ
このアッセイでは、形質導入されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞をＡ５４９ ＮＬＲ標的細胞で３日または４日ごとに順次再刺激した。Ｔ細胞を合計２～４回の刺激について１：１のＥ：Ｔ比で播種した。試験全体を通して３×１０^５個の形質導入されたＴ細胞／ｍＬの密度を維持した。各回の刺激を設定するために、Ｔ細胞を以下のマーカーで染色し、フローサイトメトリーを使用して分析して、共培養物に存在する形質導入されたＴ細胞集団の割合を計算した：ＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＡＲ、及びＥＧＦＲｔ（配列番号２４）。各試料のアリコートを上述したように滴定Ｉｎｃｕｃｙｔｅ殺傷アッセイのために保存した。

【0489】

結果
図３Ａ～３Ｃに示すように、異なる試験群からの形質導入されたＴ細胞において、明確な機能的差異が観察された。一次抗原刺激後、ＭＲＭにおいて形質導入及び培養されたＴ細胞は、ＴＣＭにおいて形質導入及び培養された対応する細胞と比べて、より多量のＩＬ－２を産生した。また、先に実施例１において観察されたように、形質導入されたＴ細胞における増加したｃ－Ｊｕｎタンパク質発現はまた、より多くのＩＬ－２分泌をもたらした。例えば、ＴＣＭ及びＭＲＭ群の双方において、ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入されたＴ細胞は、対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入された対応する細胞と比べて、一次刺激後に更に高いレベルのＩＬ－２を産生した。したがって、最も多いＩＬ－２産生は通常、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように改変され、ＭＲＭにて培養されたＴ細胞において観察された。

【0490】

連続／慢性抗原刺激後に同様の結果を観察した。図４Ａ～４Ｃに示すように、最終回の抗原刺激後、ＭＲＭにおいて形質導入及び培養されたＴ細胞は、ＴＣＭ中において形質導入及び培養された対応する細胞と比べて、それらのＩＦＮ－γを産生する能力を保持した。この場合もまた、ＭＲＭ群からのｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入されたＴ細胞は、他の群からの形質導入された細胞と比べてはるかに長くＩＦＮ－γを産生する能力を維持した。複数の抗原刺激の後の形質導入された細胞の細胞傷害性に関して、ＭＲＭにおいて形質導入及び培養されたＴ細胞は、ＴＣＭ群からの対応する細胞と比べて、はるかに長くそれらの腫瘍細胞を殺傷する能力を維持した（図５Ａ～５Ｅ）。

【0491】

まとめると、ＭＲＭにおいて培養されたｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように改変されたＣＡＲＴ細胞（例えば、ＲＯＲ１ ＣＡＲ及びｃ－Ｊｕｎ過剰発現を有する）は、慢性抗原刺激後であっても機能的なままである形質導入された幹様Ｔ細胞の生成を可能とする。

【0492】

実施例４：ｃ－Ｊｕｎを過剰発現する抗ＣＤ１９ ＣＡＲ保有免疫細胞に対する代謝再プログラム化培地の効果の分析
実施例１～３で上で観察された改善された生物学的効果が、他の腫瘍抗原を標的とする免疫細胞にも適用可能であるかどうかを決定するために、ヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を、ｃ－Ｊｕｎを過剰発し、抗ＣＤ１９キメラ結合タンパク質をコードする１つ以上の外来性ヌクレオチド配列を含むように改変した。１つ以上の外来性ヌクレオチド配列は、当該技術分野で既知であり、及び／または本明細書に記載されている任意の好適な方法（例えば、非ウイルス送達）を使用して免疫細胞に導入される。上記の実施例と同様に、免疫細胞は、代謝再プログラム化培地、または５ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオンを含まない対照培地（例えば、ＴＣＭ）のいずれかにおいて改変され、培養される。次に、改変された免疫細胞は、形質導入効率、幹細胞性、エフェクター機能（抗原刺激の繰り返し後を含む）、または疲弊に対する耐性を含むがこれらに限定されない様々な特性について評価される。

【0493】

実施例５：ｃ－Ｊｕｎを過剰発現する抗ＨＥＲ２ ＣＡＲ保有免疫細胞に対する代謝再プログラム化培地の効果の分析
実施例１～３で上で観察された改善された生物学的効果が、他の腫瘍抗原を標的とする免疫細胞にも適用可能であるかどうかを決定するために、ヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を、ｃ－Ｊｕｎを過剰発し、抗ＨＥＲ２キメラ結合タンパク質をコードする１つ以上の外来性ヌクレオチド配列を含むように改変した。１つ以上の外来性ヌクレオチド配列は、当該技術分野で既知であり、及び／または本明細書に記載されている任意の好適な方法（例えば、非ウイルス送達）を使用して免疫細胞に導入される。上記の実施例と同様に、免疫細胞は、代謝再プログラム化培地、または５ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオンを含まない対照培地（例えば、ＴＣＭ）のいずれかにおいて改変され、培養される。次に、改変された免疫細胞は、形質導入効率、幹細胞性、エフェクター機能（抗原刺激の繰り返し後を含む）、または疲弊に対する耐性を含むがこれらに限定されない様々な特性について評価される。

【0494】

実施例６：ｃ－Ｊｕｎを過剰発現する抗メソテリンＣＡＲ保有免疫細胞に対する代謝再プログラム化培地の効果の分析
実施例１～３で上で観察された改善された生物学的効果が、他の腫瘍抗原を標的とする免疫細胞にも適用可能であるかどうかを決定するために、ヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を、ｃ－Ｊｕｎを過剰発し、抗メソテリンキメラ結合タンパク質をコードする１つ以上の外来性ヌクレオチド配列を含むように改変した。１つ以上の外来性ヌクレオチド配列は、当該技術分野で既知であり、及び／または本明細書に記載されている任意の好適な方法（例えば、非ウイルス送達）を使用して免疫細胞に導入される。上記の実施例と同様に、免疫細胞は、代謝再プログラム化培地、または５ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオンを含まない対照培地（例えば、ＴＣＭ）のいずれかにおいて改変され、培養される。次に、改変された免疫細胞は、形質導入効率、幹細胞性、エフェクター機能（抗原刺激の繰り返し後を含む）、または枯渇に対する耐性を含むがこれらに限定されない様々な特性について評価される。

【0495】

実施例７：ｃ－Ｊｕｎを過剰発現する抗ＰＳＣＡ ＣＡＲ保有免疫細胞に対する代謝再プログラム化培地の効果の分析
実施例１～３で上で観察された改善された生物学的効果が、他の腫瘍抗原を標的とする免疫細胞にも適用可能であるかどうかを決定するために、ヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を、ｃ－Ｊｕｎを過剰発し、抗ＰＳＣＡキメラ結合タンパク質をコードする１つ以上の外来性ヌクレオチド配列を含むように改変した。１つ以上の外来性ヌクレオチド配列は、当該技術分野で既知であり、及び／または本明細書に記載されている任意の好適な方法（例えば、非ウイルス送達）を使用して免疫細胞に導入される。上記の実施例と同様に、免疫細胞は、代謝再プログラム化培地、または５ｍＭよりも高い濃度のカリウムイオンを含まない対照培地（例えば、ＴＣＭ）のいずれかにおいて改変され、培養される。次に、改変された免疫細胞は、形質導入効率、幹細胞性、エフェクター機能（抗原刺激の繰り返し後を含む）、または枯渇に対する耐性を含むがこれらに限定されない様々な特性について評価される。

【0496】

実施例８：ｃ－Ｊｕｎを過剰発現する操作されたＴＣＲ保有免疫細胞に対する代謝再プログラム化培地の効果の分析
実施例１～３で上で観察した改善された生物学的効果が、操作されたＴＣＲを発現するように改変された免疫細胞にも適用可能であるかどうかを決定するために、ヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を、ｃ－Ｊｕｎを過剰発し、操作されたＮＹ－ＥＳＯ－１特異的ＴＣＲをコードする１つ以上の外来性ヌクレオチド配列を含むように改変した。本開示から明らかなように、１つ以上の外来性ヌクレオチド配列は、当該技術分野で既知であり、及び／または本明細書に記載されている任意の好適な方法（例えば、非ウイルス送達）を使用して免疫細胞に導入される。以下に更に記載されているように（及び先の実施例と同様に）、本実施例では、レンチウイルスベクターを使用して、外来性ヌクレオチド配列を免疫細胞に導入した。更に、免疫細胞は、代謝再プログラム化培地、または５ｍＭよりも高い濃度でカリウムイオンを含まない対照培地のいずれかにおいて改変され、培養される。次いで、改変された免疫細胞を、形質導入効率、幹性表現型、エフェクター機能（例えば、反復刺激後を含む、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現する改変されたＮＹ－ＥＳＯ－１＋Ｔ細胞がＮＹ－ＥＳＯ－１発現標的細胞を認識して殺傷する能力）、または疲弊耐性を含むがこれらに限定されない様々な特性について評価した。使用されるより具体的な例示的な方法を以下に提供する。

【0497】

培地調製
Ｔ細胞馴化培地（ＴＣＭ）及び代謝再プログラム化培地（ＭＲＭ）を実施例１に記載されているように調製した。

【0498】

レンチウイルスベクター（ＬＶＶ）の構築
以下の構成要素を含むＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ構築物を生成した：（ｉ）ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲアルファ鎖（配列番号９８）及びベータ鎖（配列番号９６）、ならびに（ｉｉ）野生型ｃ－Ｊｕｎタンパク質（配列番号１３）（本明細書では「ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ」と称される、配列番号９５）。（下記）表１７を参照のこと。細胞（例えば、Ｔ細胞）において形質導入された場合、形質導入された細胞が、ＮＹ－ＥＳＯ１ ＣＡＲの表面発現とともに、ｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現の増加を呈するように、ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１構築物を設計した。対照として、ｃ－Ｊｕｎを欠く対応するＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ構築物も生成された（ここでは「対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ」と称される）。

【0499】

レンチウイルスベクターを実施例１に記載されているように作製した。

【0500】

Ｔ細胞の単離
ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を３名の健康ドナーから単離し、ＡｌｌＣｅｌｌｓ（Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ，ＵＳＡ）によって凍結した。ベンダーは、ドナーから全ての適切な同意書を入手し、管理した。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を単離するために、試料をアフェレーシスを介して収集し、そのＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞を、最初にＣＤ８＋Ｔ細胞の陽性選択、続いてＣＤ８選択からのフロースルーのＣＤ４＋Ｔ細胞についての陽性選択の順序で別々に単離した。単離されたＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞をバイアル当たり２０Ｅ＋０６個の細胞（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）で凍結させた。

【0501】

細胞培養及び形質導入
凍結保存された健康ドナーのヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞（すなわち、ベンダーからのもの）を適切な培地（すなわち、ＴＣＭまたはＭＲＭ）において解凍し、１：１の比で合わせた。合わせたドナーのＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を３００×ｇで５分間遠心分離し、ＩＬ－２（２００ＩＵ／ｍｌ）、ＩＬ－７（１２００ＩＵ／ｍｌ）、及びＩＬ－１５（２００ＩＵ／ｍｌ）が補完された適切な培地（すなわち、Ｔ細胞馴化培地またはＭＲＭ）に再懸濁した。次いでＴ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ ＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ Ｉｎｃ．）を使用して活性化した。ＴＣＭまたはＭＲＭのいずれかにおける活性化の２４時間後（すなわち、１日目）、Ｔ細胞をＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ構築物（すなわち、「ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ」及び「対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ」）を含む上述したＬＶＶで形質導入した。非形質導入Ｔ細胞を対照として使用した。形質導入の翌日（すなわち、２日目）、新鮮な培地（すなわち、ＴＣＭまたはＭＲＭ）を添加してＴＲＡＮＳＡＣＴ（商標）を希釈し、Ｔ細胞活性化を終了させた。形質導入されたＴ細胞を更に５日間（すなわち、７日目）更に増殖させ、次いで、その後分析するか、または長期保存のために液体窒素において凍結保存した。

【0502】

形質導入効率分析
様々な群（表１２を参照のこと）からのＴＣＲ形質導入効率を比較するために、以下を発現するＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の割合をフローサイトメトリーを使用して決定した：ｃ－Ｊｕｎ及び配列番号９５に示される配列を含むＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ。

【表12】

【0503】

各ドナー内の異なる群からの形質導入されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の割合において有意な差異は観察されなかった。ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲでの先の結果と同様に、ＭＲＭ群からのｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入されたＴ細胞は、ＴＣＭ群からの対応する形質導入されたＴ細胞と比べて、有意に高いレベルのｃ－Ｊｕｎタンパク質発現を発現した（図１Ａ～１Ｃを参照のこと）。発現の増加は、ｃ－Ｊｕｎタンパク質に特異的であり、全般的ではなかった（すなわち、ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ発現レベルは、同等のままであった）。

【0504】

これらの結果は、本明細書に記載されている代謝再プログラム化培地条件が、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を著しく変化させることなく、リガンド結合タンパク質構築物（例えば、本明細書に提供されているＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ構築物）のｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現を選択的に増加させるのに有用であり得るという以前の知見（例えば、実施例１を参照のこと）を裏付ける。

【0505】

実施例９：代謝再プログラム化培地において形質導入及び培養された操作されたＴＣＲ保有免疫細胞の表現型発現の分析
代謝再プログラム化培地が、形質導入されたＴ細胞の分化状態に任意の効果を有するかどうかを更に評価するために、ヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を、実施例８に記載されているように抗ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ構築物（すなわち、ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲまたは対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入した。次いで、細胞を更に５日（すなわち、７日目）増殖させた後、形質導入されたＴ細胞の表現型をフローサイトメトリーを使用して評価した。

【0506】

ＮＹ－ＥＳＯ－１ Ｔ細胞産物の表現型を、産生の最終日にスペクトルフローサイトメトリーによって評価した。簡潔に述べると、およそ２×１０^５個の細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、３７℃で、暗所で１０分間、マウス血清及びヒトＩｇＧで遮断した後、３７℃で、暗所で１５分間、抗ＣＣＲ７ Ａｂで染色した。次いで、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、室温で、２５分間暗所で、残りの表面マーカー及びｌｉｖｅ／ｄｅａｄを含有するＡｂ混合物で染色した。表面染色後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、固定し、Ｆｏｘｐ３固定／透過緩衝液で、室温（ＲＴ）で３０分間暗所で透過化し、続いて、Ｆｏｘｐ３透過化洗浄緩衝液で洗浄した。次いで、細胞を、暗所で、Ｆｏｘｐ３透過化洗浄緩衝液中で、室温で３０分間、細胞内マーカーに対するＡｂｓで染色する前に、暗所で、室温で１０～１５分間、ウサギ及びマウス血清で遮断した。細胞をＦｏｘｐ３透過化洗浄緩衝液で洗浄し、続いてＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。試料をＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、Ｃｙｔｅｋ Ａｕｒｏｒａ Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで得て、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ、Ａｓｈｌａｎｄ，ＯＲ）を使用して分析した。具体的には、この実験において記載したように、「ナイーブ及び幹細胞メモリー」細胞を以下のように定義した。ＣＣＲ７^＋ＣＤ４５^ＲＡ＋。形質導入されたＴ細胞の表現型を評価するために使用され得る例示的な抗体及び試薬のリストを表１３～１４に提供する。

【表13】

【表14】

【0507】

図７Ａ～７Ｃに示すように、ＴＣＭ群からの細胞と比べて、ＭＲＭにおいてＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ構築物で形質導入されたＣＤ４＋Ｔ細胞は、高い比率のナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞を含有した（ＣＣＲ７^＋及びＣＤ４５ＲＡ^＋の発現によって証明される）（それぞれ最初の２つの棒を最後の２つの棒と比較）。ＣＤ４＋Ｔ細胞にｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入した場合、対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲと比べて、ナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞の比率の一貫した増加も観察された（図７Ａ～７Ｃの２番目及び４番目の棒を１番目及び３番目の棒と比べる）。同様の結果がＣＤ８＋Ｔ細胞でも観察された（図７Ｄ～７Ｆを参照のこと）。したがって、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の双方では、ＭＲＭにおいてｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入された場合に、最も高い割合のナイーブ及び幹細胞メモリーＴ細胞が観察された。

【0508】

これらの結果は、低分化（すなわち、より幹様）である形質導入されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を産生する際の本明細書に記載されている代謝再プログラム化培地の有用性を裏付ける。この結果は、転写因子ｃ－Ｊｕｎを過剰発現することが、形質導入されたＴ細胞のナイーブ及び幹細胞メモリー特性を更に改善し得ることを更に裏付ける。

【0509】

実施例１０：代謝再プログラム化培地において形質導入及び培養された操作されたＴＣＲ保有免疫細胞の機能分析
ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ Ｔ細胞に対するＭＲＭが有する効果を更に評価するために、ヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞をＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ構築物で形質導入し、実施例８に記載されているように増殖させ、機能的に分析した（例えば、一次及び／または慢性抗原刺激後のＩＬ－２及びＩＦＮ－γ産生ならびにインビトロ殺傷）。

【0510】

細胞傷害性及びサイトカイン分泌
形質導入されたＴ細胞の細胞傷害活性をインビトロ殺傷アッセイを使用して測定した。簡潔には、形質導入されたＴ細胞（「エフェクター」）を標的腫瘍細胞（「標的）と１：１及び１：４のエフェクター：標的比で共培養し、ＩｎｃｕＣｙｔｅを使用して６時間ごとに１０×の倍率で走査した（標的腫瘍細胞を表す赤色の核の数を追跡することによって細胞傷害活性を測定した）。共培養の２２時間後、上清を異なる条件から収集し、後のサイトカイン分析のために－８０℃で凍結した。次いで細胞を含有する培養プレートを継続周期スキャンのためにＩｎｃｕＣｙｔｅに戻した。

【0511】

サイトカイン分泌分析のため、先に凍結した上清を解凍し、ある特定のサイトカイン（例えば、ＩＬ－２及びＩＦＮ－γ）のレベルをＭｅｓｏＳｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）マルチプレックスプラットフォームを使用して評価し、ＭＳＤ Ｍｅｓｏ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ ６００装置で製造業者のプロトコールに従って測定した。

【0512】

連続再刺激アッセイ
このアッセイでは、形質導入されたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞をＡ３７５標的細胞またはＨ１７０３標的細胞で３日または４日ごとに慢性的に再刺激した。Ａ３７５細胞及びＨ１７０３細胞は双方とも、Ｉｎｃｕｃｙｔｅを使用して非溶解細胞を定量することができるように、ＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｒｅｄ（ＮＬＲ、核に限定されたｍＫａｔｅ２）を発現した。異なる試験群を、１６２（Ｈ１７０３）または２３４（Ａ３７５）時間、１：１（Ｈ１７０３）または１：４（Ａ３７５）のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）細胞比でインキュベートした。合計２回（Ｈ１７０３）または３回（Ａ３７５）の刺激の間、Ｔ細胞を１：１のＥ：Ｔ比で播種した。各回の後、共培養体積の１／４を新鮮な標的腫瘍細胞に移してリセットした。

【0513】

結果
図８Ａ～８Ｆに示すように、異なる試験群からの形質導入されたＴ細胞間で、ＩＬ－２産生に明確な差異があった。Ａ３７５細胞（高いＮＹ－ＥＳＯ１抗原密度を呈する、図８Ａ～８Ｃ）及びＨ１７０３細胞（低いＮＹ－ＥＳＯ１抗原密度を呈する、図８Ｄ～８Ｆ）を使用した一次抗原刺激後、（ｃ－Ｊｕｎの有無にかかわらず）ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入され、ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞は、ＴＣＭにおいて形質導入及び培養された対応する細胞と比べて、より多くの量のＩＬ－２を産生した。そして、概して、形質導入されたＴ細胞におけるｃ－Ｊｕｎタンパク質発現の増加はまた、より多くのＩＬ－２分泌をもたらした。例えば、ＴＣＭ及びＭＲＭ群の双方において、ｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入されたＴ細胞は、対照ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入された対応する細胞と比べて、一次刺激後により高いレベルのＩＬ－２を産生した。したがって、最も多いＩＬ－２産生は通常、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように改変され、ＭＲＭにて培養されたＴ細胞において観察された。ＩＬ－２の全体的な産生は、Ｈ１７０３と比べて同族抗原のより高い密度を発現するＡ３７５腫瘍細胞の存在下でより高かった。

【0514】

図９Ａ～９Ｆに示すように、より低レベルのＮＹ－ＥＳＯ１抗原を発現する（図９Ｄ～９Ｆ）Ｈ１７０３細胞での一次抗原刺激後のＩＦＮ－γ産生において、同様の傾向（すなわち、ＴＣＭと比べて、ＭＲＭにおいて形質導入及び培養されたＴ細胞における産生の増加、及びＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲのみで形質導入された細胞と比べて、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように形質導入されたＴ細胞における産生の増加も）。より高いレベルのＮＹ－ＥＳＯ１抗原を発現するＡ３７５細胞では、異なる群間でＩＦＮ－γ産生に明確な差はなかった（図９Ａ～９Ｃ）。

【0515】

慢性感染症及びがんでは、持続抗原曝露によりＴ細胞が疲弊すること、ならびにＴ細胞のエフェクター機能、例えば、細胞溶解活性及びサイトカイン分泌の進行性消失に至ることがある。したがって、上述のＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入されたＴ細胞（ｃ－Ｊｕｎ過剰発現の有無にかかわらず）が疲弊する傾向に任意の差異を呈するかどうかを評価するために、異なる群からの形質導入されたＴ細胞を、標的腫瘍細胞（すなわち、ＮＹ－ＥＳＯ１を発現するＡ３７５及びＨ１７０３細胞）への繰り返し曝露によって慢性的に刺激した。次いで、標的細胞の溶解を、１０倍の倍率で６時間ごとに総ＮＬＲ強度を追跡することによって評価し、次いで、刺激の各回についてのアッセイセットアップの時間０時間に対して正規化した。

【0516】

図１０Ａ～１０Ｃに示すように、ｃ－Ｊｕｎ過剰発現単独で、慢性抗原刺激後の形質導入されたＴ細胞のエフェクター機能を延長することができた（細胞がＴＣＭにおいて形質導入及び培養されたか、またはＭＲＭにおいて形質導入及び培養されたかどうかにかかわらず）。しかしながら、ＭＲＭ群からのｃ－Ｊｕｎ－ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲで形質導入されたＴ細胞（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現する）は、他の群のうちのいずれかからの形質導入された細胞と比べて、Ａ３７５腫瘍細胞を溶解する能力をはるかに長く維持した。Ｈ１７０３細胞を使用して、同様の結果を観察した（図１０Ｄ～１０Ｆを参照のこと）。

【0517】

まとめると、Ｍｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように改変され、ＲＭにおいて培養されたＴＣＲＴ細胞（例えば、ＮＹ－ＥＳＯ１ ＴＣＲ及びｃ－Ｊｕｎ過剰発現を有する）は、慢性抗原刺激後であっても機能的のままである形質導入された低分化の形質導入されたＴ細胞の生成を可能とする。

【0518】

実施例１１：トランスクリプトーム分析
Ｔ細胞に対するＭＲＭの効果を遺伝子レベルで評価するために、連続抗原刺激アッセイ後のＴ細胞に対して単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ分析を実施した（例えば、実施例３を参照のこと）。抗原刺激前に、Ｔ細胞は、（ｉ）ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを含まないＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、対照培地で培養されたか（「対照ＲＯＲ１ ＣＡＲ」）、または（ｉｉ）ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを含むＲ１２ ＣＡＲ）で形質導入され、ＭＲＭにおいて培養された（「ｃ－Ｊｕｎ ＲＯＲ１ ＣＡＲ」）。連続刺激アッセイのな時点でＲＮＡを抽出し、様々幹様遺伝子とＴ細胞終末疲弊（ＴＴＥ）遺伝子が豊富なＴ細胞クラスターを評価した。幹様遺伝子については、Ｃａｕｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５９６：１２６－１３２（２０２１）に記載されている遺伝子セットを使用した。ＴＴＥ遺伝子については、Ｏｌｉｖｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５９６：１１９－１２５（２０２１）に記載されている遺伝子セットを使用した。Ｃａｕｓｈｉ ｅｔ ａｌ．及びＯｌｉｖｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．は双方とも、それら全体が参照によって本明細書に組み込まれる。幹様クラスターの同定は相対的分化度の低いＣＤ８＋Ｔ細胞の存在を示しており、ＴＴＥクラスターの同定は特に連続抗原刺激後に疲弊した／機能不全のＣＤ８＋Ｔ細胞の存在を示している。

【0519】

図１１Ａ及び１１Ｂに示すように、対照培地において培養された対照ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞中で、連続抗原刺激の７日目及び１０日目の双方で幹様遺伝子セットが濃縮されたクラスターの比率が低いままであったが、一方で、ＴＴＥ遺伝子セットが濃縮されたクラスターの比率は、更なる刺激で増加した（例えば、図１１Ｂの７日目と１０日目とを比較）。これらの結果は、長期の抗原刺激後、対照培地において培養された対照ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞がより高度に分化し、疲弊／機能不全であったことを示した。対照的に、ＭＲＭで培養されたｃ－Ｊｕｎ ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞は、連続抗原刺激の７日目及び１０日目の双方で、有意に高い割合の幹様濃縮クラスター（図１１Ａを参照のこと）及び減少した割合のＴＴＥ濃縮クラスター（図１１Ｂを参照のこと）を有し、より高い幹様集団の持続的な存在を示した。

【0520】

まとめると、上記で提供された結果は、例えば、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように改変され（例えば、ＲＯＲ１ ＣＡＲ及びｃ－Ｊｕｎ過剰発現を伴う）、ＭＲＭで培養された本明細書に記載されている改変された免疫細胞の治療可能性の更なる裏付けを提供する。

【0521】

実施例１２：ＣＡＲ Ｔ細胞に対するＭＲＭ及びｃ－Ｊｕｎ過剰発現の効果の追加トランスクリプトームプロファイリング
上記に提供されている実施例６に加えて、次いで、Ｈ１９７５異種移植腫瘍を担うＮＳＧ ＭＨＣ ｄＫＯマウスに養子移入した後、本明細書に記載されている形質導入されたＴ細胞（例えば、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞）に対して単一細胞ＲＮＡ－ｓｅｑ分析を実施した。具体的には、動物は、ＭＲＭにおいて培養された（すなわち、形質導入及び増殖された）ｃ－Ｊｕｎ ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現する）（以下の用量のうちの１つで：１ｅ６、２．５ｅ６、及び５ｅ６細胞／動物）またはＭＲＭ（２．５ｅ６細胞／動物）において培養された対照ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（すなわち、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現しない）の投与を、腫瘍が約４００ｍｍ^３に達したときに受けた。Ｔ細胞の注射後１３日目に、マウスを屠殺し、切除した腫瘍を、ヒーター付きのｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（商標）Ｏｃｔｏ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ及びＴｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｋｉｔ、ヒト（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を製造業者のプロトコールに従って使用し、酵素混合物中の酵素Ｒの量を２０％に低減して分離した。分離した腫瘍細胞をＦＡＣＳ選別用に処理し、ｃ－Ｊｕｎ ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞を、２．５ｅ６個の細胞／動物（ｎ＝５）及び５ｅ６個の細胞／動物（ｎ＝２）で投与されて処置された動物、及び対照ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞を２．５ｅ６個の細胞／動物（ｎ＝５）で投与された処置された動物から選別された生細胞のｍＣＤ４５^－ｈＣＤ４５^＋Ｔ細胞に対して単一細胞ＲＮＡ配列決定を実行した。

【0522】

配列決定によるトランスクリプトームとエピトープのＣｅｌｌｕｌａｒ Ｉｎｄｅｘｉｎｇ（ＣＩＴＥ－Ｓｅｑ）アッセイを使用して、試料を単一細胞ＲＮＡ配列決定用に処理した。ＣＩＴＥ－Ｓｅｑ分析では、単一細胞ＲＮＡ及び細胞表面タンパク質を同時に測定することができる。ＦＡＣＳ選別用の蛍光色素結合抗体、ＣＩＴＥ－Ｓｅｑ用の細胞表面タンパク質に対するＤＮＡ結合Ｔｏｔａｌ－ＳｅｑＣ抗体、及び細胞バーコード化用の固有のハッシュタグ抗体の混合物で細胞を染色した。全ての固有のバーコード付き試料から選別された生細胞のｍＣＤ４５^－ｈＣＤ４５^＋Ｔ細胞を一緒にプールし、Ｃｈｒｏｍｉｕｍ Ｎｅｘｔ ＧＥＭ単一細胞５’ｖ２試薬キット（１０ｘＧｅｎｏｍｉｃｓ）を使用してＣｈｒｏｍｉｕｍ Ｎｅｘｔ ＧＥＭチップＫに負荷した。単一細胞の捕捉及び溶解後、細胞表面タンパク質に結合したＤＮＡ結合抗体とともにｃＤＮＡを合成及び増幅し、最終的に製造業者のプロトコールに従って５’遺伝子発現（ＧＥＸ）及び抗体由来タグ（ＡＤＴ）ライブラリーを生成した（１０ｘＧｅｎｏｍｉｃｓ）。Ｃｈｒｏｍｉｕｍ Ｎｅｘｔ ＧＥＭチップＫの複数のチャネルから調製されたＧＥＸライブラリーとＡＤＴライブラリーは、ＮｏｖａＳｅｑ ６０００システム（Ｉｌｌｕｍｉｎ）を使用して定量し、一緒にプールし、配列決定した。

【0523】

参照ゲノム及び初期設定パラメータとしてのＧＲＣｈ３８（及び対照Ｒ１２ベクター配列と加えたｃ－Ｊｕｎ ＲＯＲ１ ＣＡＲベクター由来のｃ－Ｊｕｎ配列）とともに１０Ｘ Ｃｅｌｌ Ｒａｎｇｅｒソフトウェアバージョン６．１．２（１０ＸＧｅｎｏｍｉｃｓ）を使用して、単一細胞ＣＩＴＥ－Ｓｅｑデータを処理した。Ｓｅｕｒａｔパッケージ（Ｈａｏ ｅｔ ａｌ．２０２１，Ｃｅｌｌ，１８４（１３）：３５７３－３５８７）を使用して、細胞遺伝子マトリックスを更に処理した。簡潔には、先ず細胞をフィルターにかけ（ミトコンドリアのパーセント、ｎＣｏｕｎｔ＿ＲＮＡ，ｎＦｅａｔｕｒｅ＿ＲＮＡ、二重ハッシュタグについての閾値を使用）、次にＣＩＴＥ－Ｓｅｑによって測定したＣＤ８及びＣＤ４タンパク質発現に基づいてゲートをかけることによってＣＤ８^＋Ｔ細胞とＣＤ４^＋Ｔ細胞を分離した。対照ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞またはｃ－Ｊｕｎ ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞で処理した腫瘍からのＣＤ８^＋Ｔ細胞を組み合わせて、単一細胞トランスクリプトーム分析を行った。フィルターにかけた細胞－遺伝子マトリックスを、可変特徴選択によって基準化し、調整した。細胞周期の不均一性の影響は、ＳｅｕｒａｔのＣｅｌｌＣｙｃｌｅＳｃｏｒｉｎｇ関数を使用して細胞周期段階スコア（Ｇ２Ｍスコア、Ｓスコア）を計算し、細胞周期段階スコアを回帰することによって補正した。細胞周期の不均一性の影響を更に最小限に抑えるために、２つの細胞周期段階スコアのいずれかと相関する遺伝子（Ｐｅａｒｓｏｎ相関係数が０．３を超える）を選択された特徴から除外した。ミトコンドリア、リボソーム、ＴＣＲ、及びＩＧ複合体関連遺伝子も選択された特徴から除外した。次に、フィルターをかけた特徴を使用してＲｕｎＰＣＡ関数によって上位５０のＰＣを計算した。その後、ＳｅｕｒａｔのＲｕｎＵＭＡＰ機能によるＵｎｉｆｏｒｍ Ｍａｎｉｆｏｌｄ Ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ（ＵＭＡＰ）を使用して、各ドットが細胞を表すように細胞を２次元空間にマッピングして視覚化した。ＳｅｕｒａｔのＦｉｎｄＣｌｕｓｔｅｒｓの機能を使用するクラスター分析に細胞を供し、クラスター識別の精度向上のためにＦｉｎｄＳｕｂＣｌｕｓｔｅｒ機能を使用した。ＣＩＴＥ－Ｓｅｑ分析は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞におけるタンパク質発現なしでＲＮＡ発現を使用して分析（ＵＭＡＰ、クラスター化）が行われたので、単一細胞ＲＮＡ－Ｓｅｑ分析とも呼ばれる。

【0524】

単一細胞クラスター化分析の詳細については、前の段落及び先の実施例（例えば、実施例１１を参照のこと）に記載された。幹様遺伝子、Ｔ細胞活性化（Ｔａｃｔ）遺伝子、Ｔ細胞前駆疲弊（ＴＰＥ）遺伝子、及びＴ細胞終末疲弊（ＴＴＥ）遺伝子が豊富に含まれるクラスターを評価した。幹様遺伝子については、Ｃａｕｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５９６：１２６－１３２（２０２１）に記載されている遺伝子セットを使用した。Ｔａｃｔ遺伝子、ＴＰＥ遺伝子、ＴＴＥ遺伝子については、Ｏｌｉｖｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５９６：１１９－１２５（２０２１）に記載されている遺伝子セットを使用した。Ｃａｕｓｈｉ ｅｔ ａｌ．及びＯｌｉｖｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．は双方とも、それら全体が参照によって本明細書に組み込まれる。Ｔａｃｔ、ＴＰＥ、ＴＴＥ及び幹様遺伝子の非限定的な例は本開示の他の箇所に提供されている。幹様クラスターの同定は、相対的分化度の低いＣＤ８^＋Ｔ細胞の存在を示し、Ｔａｃｔクラスターの同定は腫瘍内に活性化されたＣＤ８^＋Ｔ細胞が存在することを示す。ＴＰＥクラスターの同定は前駆疲弊ＣＤ８^＋Ｔ細胞の存在を示し、ＴＴＥクラスターの同定は腫瘍内に疲弊した／機能不全のＣＤ８^＋Ｔ細胞が存在することを示す。

【0525】

図１８Ａ～１８Ｅに示すように、対照のＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞で処理された腫瘍から選別されたＴ細胞と比べて、ｃ－Ｊｕｎ ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞で処理された腫瘍から選別されたＴ細胞は、ＴＴＥ遺伝子セットが濃縮されたクラスターの比率が有意に減少し（図１８Ｂ）、ＴＰＥ遺伝子セットが濃縮されたクラスターの比率が有意に増加した（図１８Ｃ）。ＴＰＥ細胞はＴＴＥ細胞よりも疲弊しておらず、メモリー関連転写物（ＴＣＦ７、ＣＣＲ７、ＩＬ７Ｒ）を発現していることが知られており、活性化によって増殖し、長期存続性に関連する再活性化ＣＤ３９－メモリー表現型を獲得する可能性がある。［Ｏｌｉｖｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５９６：１１９－１２５（２０２１）］。ＴＴＥクラスターの減少とＴＰＥクラスターの増加は、ｃ－Ｊｕｎの過剰発現が対疲弊に効果的であることを示している。興味深いことに、ｃ－Ｊｕｎ ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞で処理された腫瘍から選別されたＴ細胞では、幹様濃縮クラスターの比率が有意に高く（図１８Ｄ）、幹様集団の存在及び持続性の増加を示している。ｃ－Ｊｕｎ ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞で処理された腫瘍から選別されたＴ細胞では、Ｔ細胞活性化が豊富なクラスターの比率も高かった（図１８Ｅ）。

【0526】

これらの結果は、ｃ－Ｊｕｎの過剰発現が幹様集団の増加にてＭＲＭの効果を上回る追加の利点をもたらすことを示唆しているので、ＭＲＭとｃ－Ｊｕｎの過剰発現の組み合わせの利点を示している。

【0527】

実施例１３：広範な代謝再プログラム化培地において形質導入及び培養された抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ保有免疫細胞の更なる表現型及び機能の分析
本明細書に記載されている改変された細胞（例えば、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞）に対するＭＲＭが有する効果を更に評価するために、実施例１に記載されているように、様々な濃度のカリウムイオンを有するいくつかのＭＲＭを調製した。具体的には、ＭＲＭの異なる構成要素の最終濃度は、以下の範囲である：ＮａＣｌ（５５～９０ｍＭ）、ＫＣｌ（４０～８０ｍＭ）、及び浸透圧（約２５０～２６０ｍＯｓｍｏｌ）。次いで、ヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞（３名のドナーから単離された）を、ｃ－Ｊｕｎを有するかまたは有しない抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ構築物で形質導入し、実施例１に本質的に記載されているように異なるＭＲＭまたはＴＣＭを使用して増殖させた。次いで、先の実施例（例えば、実施例２及び１０）に記載されているように、形質導入されたＴ細胞を、様々な特性、例えば、形質導入効率、ｃ－Ｊｕｎ発現、幹様表現型発現、及び機能（例えば、一次及び／または慢性抗原刺激後のＩＬ－２及びＩＦＮ－γ産生、ならびにインビトロ殺傷）について分析した。

【0528】

結果：
先の実施例（例えば、実施例１を参照のこと）と同様に、形質導入後及び分析前に、形質導入された細胞を、ＴＣＭまたは様々なカリウムイオン濃度（すなわち、４０～８０ｍＭ）を有する様々なＭＲＭ製剤のうちのいずれかにおいて合計７日間培養し、増殖させた。

【0529】

図１２Ａ～１２Ｃに示すように、及び前述のデータ（例えば、図１Ａ～１Ｃを参照のこと）と一致して、試験された全てのＭＲＭについて、ｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ構築物で形質導入され、その後ＭＲＭにおいて培養されたＴ細胞は、ＴＣＭにおいて形質導入され、培養された対応するＴ細胞と比べてより高くｃ－Ｊｕｎを発現した。ｃ－Ｊｕｎ発現の最高の増加はカリウム濃度が最も高いＭＲＭにて観察された。

【0530】

改変された細胞の幹細胞性に関しては、再び前述のデータと一致して（例えば、図２Ａ～２Ｃを参照のこと）、ＴＣＭ群の細胞と比べて、全てのＭＲＭ製剤における抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ構築物で形質導入したＣＤ４＋Ｔ細胞は、その表現型発現に関してより幹様であった（例えば、図１３Ａ～１３Ｃ及び以下の表１５を参照のこと）。これは一般に、ＣＤ４＋Ｔ細胞がｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入されたか、対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入されたかにかかわらず、真実である。ＣＤ４＋Ｔ細胞の幹細胞性パーセントは、幹細胞性に対するＭＲＭのカリウム濃度の用量依存的効果を伴って（最も高いカリウム濃度で幹細胞性も最も高い）、ＴＣＭ培養Ｔ細胞と比べて、ＭＲＭ培養細胞で最も高かった。

【表15】

【0531】

同様に、ＭＲＭにおいて形質導入されたＣＤ８＋Ｔ細胞は、概して、ＴＣＭにおいて形質導入された対応する細胞と比べてより幹様であった（図１４Ａ～１４Ｃ及び表１６を参照のこと）。ＣＤ４＋Ｔ細胞とは異なり、対照ＣＤ１９ｔ－Ｒ１２ ＣＡＲと比べて、ＣＤ８＋Ｔ細胞がｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入された場合、幹様細胞の一貫した増加が観察された。したがって、ＣＤ８＋Ｔ細胞では、ＣＤ８＋Ｔ細胞がＭＲＭにてｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲで形質導入された場合、カリウム濃度の範囲にわたって最も高い割合の幹様細胞が観察された。ＣＤ４＋Ｔ細胞と同様に、幹細胞性に対するＭＲＭ濃度の用量依存的効果が観察され、カリウム濃度が最も高いＭＲＭにおいて、最も高い幹細胞性が観察された。

【表16】

【0532】

異なるＭＲＭにおいて形質導入及び培養されたＴ細胞の抗原刺激後にサイトカインを産生する能力を評価するために、非形質導入（モック、データ図示せず）、ｃ－Ｊｕｎを有する（黒色の四角形）及びｃ－Ｊｕｎを有しない（黒色の円）ＲＯＲ１ ＣＡＲのＴ細胞産物（増殖の７日目後）によるＩＦＮγ、ＩＬ－２、及びＴＮＦαサイトカイン分泌を、Ａ５４９ ＮＬＲがん細胞株とともに１：１及び１：４のＥ：Ｔで２０～２２時間共培養した後に評価した。図１５Ａ～１５Ｉ（１：１のエフェクター：標的比）及び１６Ａ～１６Ｉ（１：４のエフェクター：標的比）に示すように、ＭＲＭ群からの抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞（ｃ－Ｊｕｎ過剰発現の有無にかかわらず）は、ＴＣＭにおいて改変及び培養されたＴ細胞と比べて、より高いレベルのＩＬ２、ＴＮＦα（全てのドナーから）及びＩＦＮγ（３人のドナーのうちの２人から）を産生した。再び、カリウム濃度が最も高いＭＲＭにて最も高いサイトカインの産生が観察された。

【0533】

改変された細胞の細胞溶解能力を評価するために、基本的に実施例３に記載されたインビトロ殺傷アッセイを使用した。ＩｎｃｕＣｙｔｅ殺傷アッセイを、連続再刺激アッセイの０、７、または１４日目のいずれかからのＴ細胞、及びＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｒｅｄ（ＮＬＲ）標的細胞株Ａ５４９を１：１及び１：４のＥ：Ｔ比で使用して、９６ウェルの平底モートアッセイプレート中に設定した。腫瘍生存率の割合は、Ａ５４９ ＮＬＲ標的細胞株とともに１：１及び１：４のＥ：Ｔ比で共培養した後の連続再刺激アッセイの０、７、及び１４日目（連続刺激（ＳＳ）１、３、及び５）に、ＴＣＭまたはＭＲＭ（高から低）のいずれかにおいて培養された対照Ｒ１２ ＣＡＲ及びｃ－Ｊｕｎ－Ｒ１２ ＣＡＲ Ｔ細胞産物から得られたＩｎｃｕＣｙｔｅ殺傷曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）（バーが低いほど、細胞毒性が高い）を使用して計算された。刺激の最後の回（１６８時間～３００時間）のデータが示される。

【0534】

直前に記載されているサイトカインデータと一致して、様々なＭＲＭ群の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞は一般的にＴＣＭ群の細胞と比べて高い殺傷性を示した。図１７Ａ～１７Ｄに示すように、２回の抗原刺激後、ＭＲＭにおいて形質導入され、その後培養されたＴ細胞中で、対照群からの対応するＴ細胞と比べて大幅に改善された細胞溶解活性が観察された。ｃ－Ｊｕｎを過剰発現する抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞と、ｃ－Ｊｕｎを過剰発現するように改変されていない抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ Ｔ細胞の双方で、改善された細胞溶解活性が観察された。

【0535】

まとめると、上記の結果は更に、本明細書で提供されている培養方法の治療上の利点を裏付けるものである。より具体的には、上記の結果は更に、５ｍＭよりも高い濃度（例えば、４０～８０ｍＭ）でカリウムイオンを含む培地の存在下でＴ細胞を（例えば、リガンド結合タンパク質を発現するように、かつｃ－Ｊｕｎタンパク質の発現レベルを増加させるように）改変することにより、細胞の幹細胞性を大幅に増加させ得、慢性的な抗原刺激の存在下でさえ細胞が強力な機能活性を呈することが可能になることを示している。

【表17-1】

【表17-2】

【表17-3】

【表17-4】

【表17-5】

【表17-6】

【表17-7】

【表17-8】

【表17-9】

【表17-10】

【表17-11】

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E】

【図2F】

【図2G】

【図2H】

【図2I】

【図2J】

【図2K】

【図2L】

【図3】

【図4】

【図5-1】

【図5-2】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図7F】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図8E】

【図8F】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図9E】

【図9F】

【図10-1】

【図10-2】

【図10-3】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図15-1】

【図15-2】

【図15-3】

【図16-1】

【図16-2】

【図16-3】

【図17A】

【図17B】

【図17C】

【図17D】

【図18A】

【図18B】

【図18C】

【図18D】

【図18E】

【配列表】

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【国際調査報告】