特表 2024-540181 骨格筋に再標的化されたウイルス粒子

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-31

(54)【発明の名称】骨格筋に再標的化されたウイルス粒子

(51)【国際特許分類】

   C12N 7/01 20060101AFI20241024BHJP

   C07K 14/015 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20241024BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20241024BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20241024BHJP

   C12N 15/55 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/31 20060101ALI20241024BHJP

   C12N 15/11 20060101ALI20241024BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20241024BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20241024BHJP

【ＦＩ】

C12N7/01 ZNA

C07K14/015

C12N5/10

C07K16/28

C07K19/00

C12N15/113 Z

C12N15/55

C12N15/31

C12N15/11 Z

A61K35/76

A61P21/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024525653

(86)(22)【出願日】2022-11-04

(85)【翻訳文提出日】2024-04-30

(86)【国際出願番号】 US2022079339

(87)【国際公開番号】W WO2023081850

(87)【国際公開日】2023-05-11

(31)【優先権主張番号】63/275,731

(32)【優先日】2021-11-04

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/369,761

(32)【優先日】2022-07-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】597160510

【氏名又は名称】リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＲＥＧＥＮＥＲＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】サビン， リア

(72)【発明者】

【氏名】ステック， マイケル

(72)【発明者】

【氏名】マーフィー， アンドリュー ジェイ．

(72)【発明者】

【氏名】カラツオス， クリストス

(72)【発明者】

【氏名】モーラー－タンク， スヴェン

(72)【発明者】

【氏名】サマイ， ポウラミ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA93X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA43

4B065CA44

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC83

4C087NA13

4C087ZA94

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA09

4H045CA01

4H045DA86

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本明細書において、筋特異的表面タンパク質を使用して、ウイルス粒子、例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子を筋細胞に再標的化するための組成物及び方法が提供される。それに応じて適合されるＡＡＶは、骨格筋関連障害（例えば、Ｘ連鎖性筋細管ミオパチー（ＸＬＭＴＭ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、筋強直性ジストロフィー（ＤＭ１）、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー１型（ＦＳＨＤ）、先天性筋ジストロフィー１Ａ型（ＭＤＣ１Ａ）、肢帯型筋ジストロフィー、ジストログリカのパチーなど）の治療を必要とする患者におけるその治療のための実行可能な遺伝子療法プラットフォームであり得る。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子であって、
（ｉ）改変ＡＡＶカプシドタンパク質と、
（ｉｉ）哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質に結合する標的化リガンドと、を含み、
前記改変ＡＡＶカプシドタンパク質が、前記標的化リガンドと動作可能に連結されている、組換えＡＡＶ粒子。

【請求項2】

（ａ）前記改変ＡＡＶカプシドタンパク質が、タンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバー及び第２のメンバーを含み、
（ｂ）前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第２のメンバーが、前記哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質に結合する前記標的化リガンドを含み、
前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第１のメンバー及び前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第２のメンバーが、前記ウイルス粒子の指向性を前記哺乳動物筋細胞に向けるように会合している、請求項１に記載の組換えＡＶＶ粒子。

【請求項3】

前記哺乳動物筋特異的表面タンパク質が、ヒト筋細胞特異的表面タンパク質である、請求項１又は２に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項4】

前記哺乳動物筋細胞が、哺乳動物骨格筋細胞である、請求項１～３のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項5】

前記哺乳動物筋細胞の表面上に発現される前記哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質に結合された前記改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項6】

前記哺乳動物筋細胞の表面上に発現される前記哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質に結合された前記改変ＡＡＶカプシドタンパク質を含み、
前記哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質が、ヒト筋細胞特異的表面タンパク質であり、
前記哺乳動物筋細胞が、前記ヒト筋細胞特異的表面タンパク質を発現するように遺伝子改変された非ヒト動物筋細胞である、請求項１～５のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項7】

前記哺乳動物筋特異的表面タンパク質に結合された前記ＡＡＶカプシドタンパク質を含み、
前記哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質が、ヒト筋細胞特異的表面タンパク質であり、
前記哺乳動物筋細胞が、前記ヒト筋細胞特異的表面タンパク質を発現するように遺伝子改変された齧歯類筋細胞である、請求項１～６のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項8】

前記齧歯類筋細胞が、ラット筋細胞又はマウス筋細胞である、請求項７に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項9】

前記哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質に結合された前記ＡＡＶカプシドタンパク質を含み、
前記哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質が、ヒト筋細胞特異的表面タンパク質であり、
前記哺乳動物筋細胞が、ヒト筋細胞である、請求項１～５のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項10】

前記組換えＡＡＶ粒子が、インビトロにある、請求項１～９のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項11】

前記組換えＡＡＶ粒子が、インビボにある、請求項１～９のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項12】

前記哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質が、哺乳動物カルシウム電位開口型補助サブユニットガンマ１（ＣＡＣＮＧ１）である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項13】

前記哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質が、ヒトＣＡＣＮＧ１である、請求項１２に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項14】

前記標的化リガンドが、重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、及び／又はそれぞれ重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列のセット、及び／又は配列番号１～２４０のうちのいずれか１つに記載のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のセットを含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項15】

（ａ）前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第１のメンバーが、ＳｐｙＴａｇ、Ｉｓｏｐｅｐｔａｇ、ＳｎｏｏｐＴａｇ、ＳｐｙＴａｇ００２、ＳｐｙＴａｇ００３、又はそれらの任意の生物学的に活性な部分若しくはバリアントを含み、
（ｂ）前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第２のメンバーが、
（ｉ）ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ、ＫＴａｇ、ピリン－Ｃ、ＳｎｏｏｐＣａｔｃｈｅｒ、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００３、又はそれらの任意の生物学的に活性な部分若しくはバリアント、及び
（ｉｉ）哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質に結合する前記標的化リガンドを含み、
（ｃ）前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第１のメンバー及び前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第２のメンバーが、イソペプチド結合により連結している、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項16】

（ａ）前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第１のメンバーが、ＳｐｙＴａｇ、又はそれらの任意の生物学的に活性な部分若しくはバリアントを含み、
（ｂ）前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第２のメンバーが、前記哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質に結合する前記標的化リガンドに融合された、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ、又はそれらの任意の生物学的に活性な部分若しくはバリアントを含む、請求項１５に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項17】

前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第１のメンバーを、前記ウイルスカプシドタンパク質に動作可能に連結する第１及び／又は第２のリンカーを含む、請求項２～１６のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項18】

前記第１及び第２のリンカーが、同一ではない、請求項１７に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項19】

前記第１及び第２のリンカーが、同一である、請求項１７に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項20】

前記第１のリンカーが、１０アミノ酸長であり、かつ／又は前記第２のリンカーが、１０アミノ酸の長さである、請求項１７～１９のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項21】

前記改変ＡＡＶカプシドタンパク質が、改変ＶＰ１カプシドタンパク質、改変ＶＰ２カプシドタンパク質、及び／又は改変ＶＰ３カプシドタンパク質を含み、
前記改変ＶＰ１カプシドタンパク質、改変ＶＰ２カプシドタンパク質、及び／又は改変ＶＰ３カプシドタンパク質が、タンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバー及び／又は前記標的化リガンドの挿入を含み、
タンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバー及び／又は前記標的化リガンドの前記挿入を含む、前記改変ＶＰ１カプシドタンパク質、改変ＶＰ２カプシドタンパク質、及び／又は改変ＶＰ３カプシドタンパク質の一部が、野生型ＡＡＶの対応するカプシドタンパク質に対し、少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を更に含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項22】

前記改変ＶＰ１カプシドタンパク質、前記改変ＶＰ２カプシドタンパク質、及び／又は前記改変ＶＰ３カプシドタンパク質が、タンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバー及び／又は前記標的化リガンドの前記挿入に加えて、
（ｉ）アミノ酸の置換、挿入、若しくは欠失、
（ｉｉ）キメラアミノ酸配列、又は
（ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）の任意の組み合わせ、を更に含む、請求項２１に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項23】

アミノ酸の前記置換、挿入、又は欠失が、前記ウイルス粒子の天然指向性を低減し、かつ／又は検出可能な標識を作成する、請求項２２に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項24】

前記ＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、表２に列挙される非霊長類動物のＡＡＶ、及びその任意のキメラからなる群から選択される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項25】

前記ＡＡＶが、ＡＡＶ２である、請求項１～２４のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項26】

前記組換えＡＡＶ粒子が、アミノ酸位置Ｉ－４５３及び／又はＩ－５８７に挿入され、任意選択的に片側又は両側のリンカーを介してＡＡＶ配列に連結されたタンパク質：タンパク質結合結合ペアの第１のメンバーを含む改変ＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項27】

前記組換えＡＡＶ粒子が、任意選択的にリンカーを介して、Ｇ４５３位に挿入された前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第１のメンバーを含む改変ＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質を含み、
任意選択的に、前記改変ＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質が、Ｒ５８５Ａ、Ｒ５８８Ａ、Ｒ４８４Ａ、Ｒ４８７Ａ、Ｋ５３２Ａ及びそれらの任意の組み合わせから選択される変異を更に含む、請求項２６に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項28】

前記組換えＡＡＶ粒子が、前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第１のメンバーを欠くＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質の第２のセットを含むモザイクＡＡＶカプシドを含み、
任意選択的に、ＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質の前記第２のセットが、Ｒ５８５Ａ、Ｒ５８８Ａ、Ｒ４８４Ａ、Ｒ４８７Ａ、Ｋ５３２Ａ及びそれらの任意の組み合わせから選択される変異を含む、請求項２６又は２７に記載の組換えＡＡＶ粒子又は組成物。

【請求項29】

前記ＡＡＶが、ＡＡＶ９である、請求項１～２４のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項30】

前記ウイルスカプシドが、任意選択的にリンカーを介して、Ｉ－４５３位又はＩ－５８９位に挿入された特異的結合ペアの第１のメンバーを含む改変ＡＡＶ９ ＶＰ１カプシドタンパク質を含む、請求項２９に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項31】

前記組換えＡＡＶ粒子が、任意選択的にリンカーを介して、Ｇ４５３位に挿入されたタンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバーを含む改変ＡＡＶ９ ＶＰ１カプシドタンパク質を含み、
任意選択的に、前記改変ＡＡＶ９ ＶＰ１カプシドタンパク質が、Ｎ２７２Ａ、Ｗ５０３Ａ、及びそれらの組み合わせから選択される変異を更に含む、請求項３０に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項32】

前記組換えＡＡＶ粒子が、前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第１のメンバーを欠くＡＡＶ９ ＶＰ１カプシドタンパク質の第２のセットを含むモザイクウイルスカプシドであり、
任意選択的に、ＡＡＶ９ ＶＰ１カプシドタンパク質の前記第２のセットが、Ｎ２７２Ａ、Ｗ５０３Ａ、及びそれらの組み合わせから選択される変異を含む、請求項３０又は３１に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項33】

前記ＡＡＶが、鳥類ＡＡＶ（ＡＡＡＶ）、非霊長類哺乳動物ＡＡＶ又は有鱗目ＡＡＶである、請求項１～２４のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項34】

前記非霊長類動物ＡＡＶが、ＡＡＡＶである、請求項３３に記載の組換えウイルス粒子又は組成物。

【請求項35】

前記ウイルスカプシドが、任意選択的にリンカーを介して、Ｉ－４４４位又はＩ－５８０位に挿入された前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第１のメンバーを含む改変ＡＡＡＶ ＶＰ１カプシドタンパク質を含む、請求項３４に記載の組換えウイルス粒子又は組成物。

【請求項36】

前記非霊長類動物ＡＡＶが、有鱗目ＡＡＶである、請求項３３に記載の組換えウイルス粒子又は組成物。

【請求項37】

前記非霊長類動物ＡＡＶが、フトアゴヒゲトカゲＡＡＶである、請求項３３に記載の組換えウイルス粒子又は組成物。

【請求項38】

前記ウイルスカプシドが、任意選択的にリンカーを介して、Ｉ５７３位又はＩ４３６位に挿入された前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第１のメンバーを含む改変フトアゴヒゲトカゲＶＰ１カプシドタンパク質を含む、請求項３７に記載の組換えウイルス粒子又は組成物。

【請求項39】

前記非霊長類動物ＡＡＶが、非霊長類哺乳動物ＡＡＶである、請求項３３に記載の組換えウイルス粒子又は組成物。

【請求項40】

前記非霊長類哺乳動物ＡＡＶが、アシカＡＡＶである、請求項３９に記載の組換えウイルス粒子又は組成物。

【請求項41】

前記ウイルスカプシドが、任意選択的にリンカーを介して、Ｉ４２９、Ｉ４３０、Ｉ４３１、Ｉ４３２、Ｉ４３３、Ｉ４３４、Ｉ４３６、Ｉ４３７、及びＩ５６５からなる群から選択される位置に挿入された前記タンパク質：タンパク質結合ペアの前記第１のメンバーを含む改変ＡＡＡＶ ＶＰ１カプシドタンパク質を含む、請求項３４に記載の組換えウイルス粒子又は組成物。

【請求項42】

前記組換えＡＡＶ粒子が、モザイクウイルスカプシドであり、任意選択的に、前記モザイクウイルスカプシドが、（ｉ）その各々が前記標的化リガンドと会合していない第１の複数の参照カプシドタンパク質、及び（ｉｉ）その各々が前記標的化リガンドと会合している第２の複数のカプシドタンパク質を含み、任意選択的に、前記モザイクＡＡＶ粒子が、前記第１の複数の参照カプシドタンパク質と前記第２の複数のカプシドタンパク質とを１：７の比で含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項43】

前記標的化リガンドが、抗体又はその一部である、請求項１～４２のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項44】

前記ウイルスカプシド内にカプシド封入された目的のヌクレオチドを更に含む、請求項１～４３のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項45】

前記目的のヌクレオチドが、レポーター遺伝子である、請求項４４に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項46】

前記目的のヌクレオチドが、β－ガラクトシダーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、高感度緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）、ＭｍＧＦＰ、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）、高感度青色蛍光タンパク質（ｅＢＦＰ）、ｍＰｌｕｍ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、Ｊ－Ｒｅｄ、ＤｓＲｅｄ、ｍＯｒａｎｇｅ、ｍＫＯ、ｍＣｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、ＹＰｅｔ、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、高感度黄色蛍光タンパク質（ｅＹＦＰ）、Ｅｍｅｒａｌｄ、ＣｙＰｅｔ、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、Ｔ－Ｓａｐｐｈｉｒｅ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、又はそれらの組み合わせをコードする、請求項４４又は４５に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項47】

前記目的のヌクレオチドが、治療用タンパク質、自殺遺伝子、抗体若しくはその断片、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム若しくはその一部、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、ＲＮＡｉ分子、又はｓｈＲＮＡ分子をコードする、請求項４４に記載の組換えＡＡＶ粒子。

【請求項48】

（ａ）請求項１～４７のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子と、（ｂ）薬学的に許容可能な担体又は賦形剤と、を含む、医薬組成物。

【請求項49】

目的のヌクレオチドを哺乳動物筋細胞に送達する方法であって、前記哺乳動物筋細胞を、（ａ）請求項１～４７のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子、又は（ｂ）請求項４８に記載の医薬組成物と接触させることを含み、
前記筋細胞が、哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質を発現する、方法。

【請求項50】

前記接触することが、エクスビボで実行される、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記接触することが、対象内で実行される、請求項４９に記載の方法。

【請求項52】

前記対象が、霊長類動物、好ましくはヒトである、請求項５１に記載の方法。

【請求項53】

前記哺乳動物筋細胞が、哺乳動物骨格筋細胞である、請求項４９～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項54】

前記哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質が、ＣＡＣＮＧ１である、請求項４９～５３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項55】

前記目的のヌクレオチドが、治療用タンパク質、自殺遺伝子、抗体若しくはその断片、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム若しくはその一部、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、ＲＮＡｉ分子、又はｓｈＲＮＡ分子をコードする、請求項４９～５４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項56】

筋消耗又は遺伝性筋疾患の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、
前記患者に、（ａ）請求項１～４７のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ粒子、又は（ｂ）請求項４８に記載の医薬組成物を投与することを含み、
前記ウイルス粒子が、前記ウイルスカプシド内にカプシド封入された目的のヌクレオチドを含み、
前記目的のヌクレオチドが、治療用タンパク質、自殺遺伝子、抗体若しくはその断片、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム若しくはその一部、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、ＲＮＡｉ分子、又はｓｈＲＮＡ分子をコードする、方法。

【請求項57】

筋消耗又は遺伝性筋疾患の治療のための医薬品の製造のための、請求項１～４７のいずれか一項に記載のウイルス粒子又は組成物、又は請求項４８に記載の医薬組成物の使用。

【請求項58】

前記筋消耗又は遺伝性筋疾患が、Ｘ連鎖性筋細管ミオパチー（ＸＬＭＴＭ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、筋強直性ジストロフィー（ＤＭ１）、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー１型（ＦＳＨＤ）、先天性筋ジストロフィー１Ａ型（ＭＤＣ１Ａ）、肢帯型筋ジストロフィー、及びジストログリカノパチーからなる群から選択される、請求項５６に記載の方法又は請求項５７に記載の使用。

【請求項59】

前記組換えＡＡＶ粒子又は前記医薬組成物の前記患者への前記投与が、前記投与前の肝酵素（例えば、ＡＬＴ、ＡＳＴ）又は補体成分（例えばＢｂ、Ｃ３ａ）の対応するレベルよりも３倍を超える、好ましくは１．５倍を超える高い前記肝酵素又は前記補体成分のレベルの増加をもたらさない、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本明細書の開示は、インビトロ又はインビボで骨格筋細胞などの筋細胞の改変に有用な、筋特異的表面タンパク質、例えば、カルシウム電位開口型（Ｖｏｌｔａｇｅ－Ｇａｇｅｄ）補助サブユニットガンマ１（ＣＡＣＮＧ１）又はカドヘリン１５（ＣＡＤ１５）に再標的化されたカプシドタンパク質を含む、組換えウイルス粒子、例えば、組換えＡＡＶ粒子を作製及び使用する方法に関する。

【0002】

配列表
「１１０７４ＷＯ０１＿ｘｍｌ」と題されたｘｍｌ形式の配列表は、２０２２年１１月４日に作製され、２５２Ｋｂであり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

特定の標的細胞への遺伝子の送達は、様々な慢性疾患及び遺伝的疾患の潜在的治療のための現代医学における最も重要な技術のうちの１つとなっている。理想的には、遺伝子送達媒体は、遺伝物質を所望の細胞に安定的に導入し、遺伝物質を非標的細胞に導入することを回避することができる。

【0004】

遺伝子送達媒体としての、ウイルス粒子、特にアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づくウイルス粒子は、ＡＡＶが、毒性又は病原性の明白な証拠なしに、インビボで広範な霊長類の種及び組織を形質導入する能力を有しているために、多くの研究の焦点となっている。（Ｍｕｚｙｃｚｋａ，ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５８：９７－１２９）。更にＡＡＶは有糸分裂後の組織に安全に形質導入される。ウイルスは稀に宿主の染色体内に統合される場合があり、ヒト第１９番染色体のセーフハーバー座位への統合が非常に稀に発生するが、複製（Ｒｅｐ）タンパク質がトランスで供給された場合のみである。ＡＡＶゲノムは、感染細胞内で迅速に環状化及び鎖状体化し、感染細胞内に安定したエピソーム状態で存在し、ペイロードの長期的で安定した発現を提供する。

【0005】

更に近年、特定細胞へのＡＡＶ感染を操作して再指向することが達成されている。ウイルス粒子を使用した標的化遺伝子療法の進歩のうちの多くは、ウイルス粒子の非組換え的（非遺伝的）な改変、又は組換え的（遺伝的）な改変として要約され得、その結果ウイルス粒子の天然指向性のシュードタイピング、拡張、及び／又は再標的化をもたらす。（Ｎｉｃｋｌｉｎ ａｎｄ Ｂａｋｅｒ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２：２７３－９３、Ｖｅｒｈｅｉｊｉ ａｎｄ Ｒｏｔｔｉｅｒ（２０１２）Ａｄｖａｎｃｅｓ Ｖｉｒｏｌ ２０１２：１－１５にて概説されている）。

【0006】

直接的な組換え標的化手法では、標的化リガンドは、ウイルスカプシドに直接挿入されるか、又はウイルスカプシドに連結される、すなわち、タンパク質ウイルスカプシドの遺伝子が改変されて異種標的化リガンドを含むカプシドタンパク質が発現される。次いで標的化リガンドは、標的細胞上で優先的又は排他的に発現される受容体又はマーカーに再指向され、例えば結合する。（Ｓｔａｃｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１３：９２６－９３１、Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０９：５１３－５１９、また、Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １３：２６５３－５９、Ｇｉｒｏｄ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５：１０５２－５６、Ｇｒｉｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：９６４－７５、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：１６９７－１７１１、Ｓｈｉ ａｎｄ Ｂａｒｔｌｅｔｔ（２００３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ７：５１５－５２５も参照されたい）。

【0007】

間接的な組換え手法では、ウイルスカプシドは、異種の「足場」を用いて改変され、その後標的化リガンドを含むアダプターに連結される。アダプターは、足場及び標的細胞に結合する。（Ａｒｎｏｌｄ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．５：１２５－１３２、Ｐｏｎｎａｚｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７６：１２９００－９０７、またＷＯ９７／０５２６６も参照されたい）（１）抗体アダプターのＦｃに結合するＦｃ結合分子（例えば、Ｆｃ受容体、プロテインＡなど）、（２）ビオチン化アダプターに結合する（ストレプト）アビジン、（３）（ストレプト）アビジンに融合されたアダプターに結合するビオチン、（４）ウイルス粒子の検出及び／又は単離に有用な検出可能な標識であって、検出可能な標識及び標的分子に非共有結合することができる二特異性アダプターに結合された検出可能な標識、そして近年では（５）イソペプチド結合を形成するタンパク質：タンパク質結合ペア、などの足場が、様々なウイルス粒子に関して報告されている。（例えば、Ｇｉｇｏｕｔ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １１：８５６－８６５、Ｓｔａｃｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １６：１４６７－１４７３、Ｑｕｅｔｇｌａｓ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １５３：１７９－１９６、Ｏｈｎｏ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １５：７６３－７６７、Ｋｌｉｍｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３３８：９－２１を参照されたい）。
ＡＡＶ感染を指向する能力の提供の進歩とともに、目的の核酸を、目的の細胞、例えば哺乳動物筋細胞に特異的移行させるための標的を発見する必要性が依然として存在する。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】Ｍｕｚｙｃｚｋａ，ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５８：９７－１２９

【非特許文献2】Ｎｉｃｋｌｉｎ ａｎｄ Ｂａｋｅｒ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２：２７３－９３

【非特許文献3】Ｖｅｒｈｅｉｊｉ ａｎｄ Ｒｏｔｔｉｅｒ（２０１２）Ａｄｖａｎｃｅｓ Ｖｉｒｏｌ ２０１２：１－１５

【非特許文献4】Ｓｔａｃｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１３：９２６－９３１

【非特許文献5】Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０９：５１３－５１９

【非特許文献6】Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １３：２６５３－５９

【非特許文献7】Ｇｉｒｏｄ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５：１０５２－５６

【非特許文献8】Ｇｒｉｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：９６４－７５

【非特許文献9】Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：１６９７－１７１１

【非特許文献10】Ｓｈｉ ａｎｄ Ｂａｒｔｌｅｔｔ（２００３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ７：５１５－５２５

【非特許文献11】Ａｒｎｏｌｄ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．５：１２５－１３２

【非特許文献12】Ｐｏｎｎａｚｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７６：１２９００－９０７

【非特許文献13】Ｇｉｇｏｕｔ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １１：８５６－８６５

【非特許文献14】Ｓｔａｃｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １６：１４６７－１４７３

【非特許文献15】Ｑｕｅｔｇｌａｓ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １５３：１７９－１９６

【非特許文献16】Ｏｈｎｏ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １５：７６３－７６７

【非特許文献17】Ｋｌｉｍｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３３８：９－２１

【発明の概要】

【0009】

本明細書では、ＡＡＶカプシドタンパク質を改変することで、哺乳動物骨格筋細胞への目的のヌクレオチドの標的導入を可能にし得ることを示す。

【0010】

本明細書に記載されるウイルス粒子は、本明細書に記載のウイルスカプシド又はウイルスカプシドタンパク質が筋細胞特異的表面タンパク質に結合する標的化リガンドを含むため、特に筋細胞への目的のヌクレオチドの標的導入に特に好適である。一部の実施形態では、ウイルスカプシド又はウイルスカプシドタンパク質は、結合ペアのその同族の第２のメンバーと会合している、結合ペアの第１のメンバーを含み、第２のメンバーは、筋細胞特異的表面タンパク質に結合する標的化リガンドに連結されている（例えば、融合されている）。一部の実施形態では、標的化リガンドは、任意選択的にリンカーを介して、第２のメンバーに動作可能に連結され、例えば、第２のメンバーに融合される。一部の実施形態では、標的化リガンドは、結合部分、例えば、天然リガンド、抗体、多特異性結合分子などであってもよい。一部の実施形態では、標的化リガンドは、抗体又はその一部である。一部の実施形態では、標的化リガンドは、筋細胞上の筋特異的表面タンパク質に結合する可変ドメイン及び重鎖定常ドメインを含む抗体である。一部の実施形態では、標的化リガンドは、標的細胞上の筋特異的表面タンパク質に結合する可変ドメイン及びＩｇＧ重鎖定常ドメインを含む抗体である。一部の実施形態では、標的化リガンドは、標的細胞上の筋特異的表面タンパク質に結合する可変ドメイン及びＩｇＧ重鎖定常ドメインを含む抗体であり、この場合においてＩｇＧ重鎖定常ドメインは、例えばリンカーを介して、第１のメンバーとイソペプチド共有結合を形成するタンパク質（例えば、タンパク質：タンパク質結合ペアの第２のメンバー）に動作可能に連結される。一部の実施形態では、本明細書に記載のカプシドタンパク質は、ウイルスカプシドタンパク質に動作可能に連結されるＳｐｙＴａｇを含み、ＳｐｙＴａｇに共有結合されている第１のメンバーと、抗体可変ドメイン及びＩｇＧ重鎖ドメインを含む標的化リガンドに連結されたＳｐｙＣａｔｃｈｅｒを含む第２のメンバーとを含み、この場合においてＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ及びＩｇＧ重鎖ドメインは、例えば、ＧＳＧＥＳＧ（配列番号２５３）などのアミノ酸リンカーを介して連結される。一部の実施形態では、筋特異的表面（ｓｕｒｆｒａｓｅ）タンパク質は、ＣＡＣＮＧ１を含む。一部の実施形態では、標的化リガンドは、ＣＡＣＮＧ１、例えば、ヒトＣＡＣＮＧ１に結合する。一部の実施形態では、標的化リガンドは、重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、及び／又は重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のセット、及び／又は配列番号１～２４０のうちのいずれか１つに記載のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のセットを含む。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1-1】ＡＳＧＲ１又はＣＡＣＮＧ１を発現するように遺伝子改変された２９３細胞株にＧＦＰを送達するＡＡＶ２ベースの再標的化ウイルス感染を示す。（Ａ）散布図は、ＡＡＶ２ ＷＴ粒子、ＡＡＶ２ ＨＢＭ脱標的変異粒子、ＡＡＶ２ ＳｐｙＴａｇ抗ＡＳＧＲ１粒子、又はＡＡＶ２ ＳｐｙＴａｇ抗ＣＡＣＮＧ１粒子による感染後のｈＡＳＧＲ１発現陽性（＋）細胞による緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）発現を評価するフローサイトメトリーから取得される。また、ＡＡＶ２ ＷＴ粒子、ＡＡＶ２ ＨＢＭ脱標的変異粒子、ＡＡＶ２ ＳｐｙＴａｇ抗ＡＳＧＲ１粒子、又はＡＡＶ２ ＳｐｙＴａｇ抗ＣＡＣＮＧ１粒子による感染後のｈＣＡＣＮＧ１陽性（＋）細胞による緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）発現を評価するフローサイトメトリーから得られた散布図も示される。ウイルスは、形質導入のマーカーとしてＧＦＰを発現する。（Ｂ）グラフは、（Ａ）のフローサイトメトリープロットからのＧＦＰ＋細胞のパーセンテージを定量化する。

【図1-2】同上。

【図1-3】同上。

【図2-1】ＡＳＧＲ１又はＣＡＣＮＧ１を発現するように遺伝子改変された２９３細胞株にＧＦＰを送達するＡＡＶ９ベースの再標的化ウイルス感染を示す。（Ａ）散布図は、「ＡＡＶ９ ｗｔ」粒子、「ＡＡＶ９脱標的変異」粒子、「ＡＡＶ９ ＳｐｙＴａｇ抗ＡＳＧＲ１」粒子、又は「ＡＡＶ９ ＳｐｙＴａｇ抗ＣＡＣＮＧ１」粒子による感染後のｈＡＳＧＲ１発現陽性（＋）細胞による緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）発現を評価するフローサイトメトリーから取得される。また、「ＡＡＶ９ ｗｔ」粒子、「ＡＡＶ９脱標的変異」粒子、「ＡＡＶ９ ＳｐｙＴａｇ抗ＡＳＧＲ１」粒子、又は「ＡＡＶ９ ＳｐｙＴａｇ抗ＣＡＣＮＧ１」粒子による感染後のｈＣＡＣＮＧ１陽性（＋）細胞による緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）発現を評価するフローサイトメトリーから得られた散布図も示される。ウイルスは、形質導入のマーカーとしてＧＦＰを発現する。（Ｂ）グラフは、２ＡのフローサイトメトリープロットからのＧＦＰ＋細胞のパーセンテージを定量化する。

【図2-2】同上。

【図2-3】同上。

【図2-4】同上。

【図3】ＡＳＧＲ１又はＣＡＣＮＧ１を発現するように遺伝子改変された２９３細胞株にルフシェラーゼを送達するＡＡＶ２ベース及びＡＡＶ９ベース再標的化ウイルス感染（ＭＯＩ １×１０^６）を示す。（Ａ）ＡＡＶ２ ＷＴ、ＡＡＶ２ ＨＢＭ＋抗ｈＡＳＧＲ１、及びＡＡＶ２ ＨＢＭ＋抗ｈＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃１粒子による感染後のｈＣＡＣＮＧ１陽性（＋）の細胞によるホタルルシフェラーゼ発現を評価するために、ルシフェラーゼアッセイを実行した。また、ＡＡＶ２ ＷＴ、ＡＡＶ２ ＨＢＭ＋抗ｈＡＳＧＲ１、及びＡＡＶ２ ＨＢＭ＋抗ｈＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃１粒子による感染後のｈＡＳＧＲ１陽性（＋）細胞によるホタルルシフェラーゼ発現を評価するルシフェラーゼアッセイの結果も示される。（Ｂ）ＡＡＶ９ ＷＴ、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ＋抗ｈＡＳＧＲ１完全抗体、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ＋抗ｈＡＳＧＲ１ Ｆａｂ、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ＋抗ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃１完全抗体、及びＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ＋抗ｈＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃１ Ｆａｂによる感染後のｈＣＡＣＮＧ１陽性（＋）細胞によるホタルルシフェラーゼ発現を評価するために、ルシフェラーゼアッセイを実行した。また、ＡＡＶ９ ＷＴ、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ＋抗ｈＡＳＧＲ１完全抗体、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ＋抗ｈＡＳＧＲ１ Ｆａｂ、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ＋抗ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃１完全抗体、及びＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ＋抗ｈＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃１ Ｆａｂによる感染後のｈＣＡＣＮＧ１陽性（＋）細胞によるホタルルシフェラーゼ発現を評価するルシフェラーゼアッセイの結果も示される。

【図4】ヒト骨格筋管のＡＡＶ２ベースの再標的化ウイルス形質導入を示す。（Ａ）代表的な免疫蛍光画像、並びに（Ｂ）ＣＡＧプロモーターの制御下で、ｅＧＦＰを発現する指示されたＡＡＶの２Ｅ＋５ｖｇ／細胞で３日間形質導入後のヒト骨格筋管のミオシン重鎖（ＭｙＨＣ）陽性領域における平均ＧＦＰ発現を定量化することによって評価される形質導入効率が提供される。形質導入効率は、ミオシン重鎖（ＭｙＨＣ）陽性筋管領域内の平均ＧＦＰ蛍光強度を定量化することによって評価された。

【図5】ヒト骨格筋管のＡＡＶ９ベースの再標的化ウイルス形質導入を示す。（Ａ）代表的な免疫蛍光画像、並びに（Ｂ）ＣＡＧプロモーターの制御下で、ｅＧＦＰを発現する指示されたＡＡＶの２Ｅ＋５ｖｇ／細胞で３日間形質導入後のヒト骨格筋管のミオシン重鎖（ＭｙＨＣ）陽性領域における平均ＧＦＰ発現を定量化することによって評価される形質導入効率が提供される。

【図6】分化マウスＣ２Ｃ１２筋管のＡＡＶ９ベースの再標的化ウイルス形質導入を示す。（Ａ）代表的な免疫蛍光画像、並びに（Ｂ）ＣＡＧプロモーターの制御下で、ｅＧＦＰを発現する指示されたＡＡＶの２Ｅ＋５ｖｇ／細胞で３日間形質導入された分化マウスＣ２Ｃ１２筋管のミオシン重鎖（ＭｙＨＣ）陽性領域における平均ＧＦＰ発現を定量化することによって評価される形質導入効率。

【図7-1】ＣＡＣＮＧ１に再標的化された全身的に送達されたＡＡＶ２は、インビボでの骨格筋の抗体依存性形質導入を実証することを示す。グラフは、エクスビボで撮像され、骨格筋細胞上にヒトＣＡＣＮＧ１を発現するように遺伝子改変されたマウス（ＣＡＣＮＧ１ヒト化マウス）及び野生型５０５００マウスから単離された（Ａ）肝臓（Ｂ）舌、（Ｃ）横隔膜、又は（Ｄ）四頭筋（ｑｕａｄ）組織、の発光画像からの平均放射輝度値（光子／秒／ｃｍ２／ｓｒ）を提供し、マウスは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、又は５ｅ１１ウイルスゲノム（ｖｇ）／動物での、野生型（ｗｔ）ＡＡＶ２粒子、ＡＡＶ２脱標的粒子又は、目的のホタルルシフェラーゼヌクレオチドを担持し、（１）ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ－抗ヒトＡＳＧＲ１抗体若しくは（２）ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ－抗ヒトＣＡＣＮＧ１抗体によって改変されたＳｐｙＴａｇ付きＡＡＶ２粒子を静脈内注射された。これらのＡＡＶ２ウイルス粒子は、（ａ）「ＳｐｙＴａｇ」カプシドタンパク質（ＳｐｙＴａｇは両側に１０アミノ酸のリンカーが隣接する残基Ｇ４５３の直後に挿入される）と（ｂ）ＳｐｙＴａｇを有しないが、天然の受容体結合を減少させるＲ５８５Ａ及びＲ５８８Ａ変異を含有するカプシドとの間の１：７の比率で構成されるモザイクウイルス粒子である。ウイルスは、形質導入のマーカーとしてホタルルシフェラーゼを発現する。ＩＶ注射の５週間後、マウスをイソフルランを使用して麻酔し、ルシフェリン基質を注射し、７～１０分後に安楽死させた。器官を採取し、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍインビボ撮像システム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して撮像した。生データを、ｌｉｖｉｎｇ ｉｍａｇｅソフトウェアを使用して解析して、平均放射輝度（光子／秒／ｃｍ２／ｓｒ）を決定した。

【図7-2】同上。

【図8-1】ＣＡＣＮＧ１に再標的化された系統的に送達されたＡＡＶ９が、インビボでの骨格筋の抗体依存性形質導入を実証していることを示す。グラフは、エクスビボで撮像され、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）又は５ｅ１０ウイルスゲノム（ｖｇ）／動物の野生型（ｗｔ）ＡＡＶ９粒子、ＡＡＶ９脱標的粒子又は目的のホタルルシフェラーゼヌクレオチドを担持し、（１）ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ－抗ヒトＡＳＧＲ１完全抗体、（２）ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ－抗ヒトＡＳＧＲ１ Ｆａｂ、（３）ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ－抗ヒトＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃１完全抗体、又は（４）ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ－抗ヒトＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃１ Ｆａｂで改変されたＳｐｙＴａｇ付きＡＡＶ９粒子を静脈内注射したヒトＣＡＣＮＧ１を発現するように遺伝子改変されたマウス（ＣＡＣＮＧ１ヒト化マウス）から単離された（Ａ）肝臓、（Ｂ）後肢、（Ｃ）四頭筋（ｑｕａｄ）、又は（Ｄ）舌組織、の発光画像からの平均放射輝度値（光子／秒／ｃｍ２／ｓｒ）を提供する。これらのＡＡＶ９ウイルス粒子は、（ａ）「ＳｐｙＴａｇ」カプシドタンパク質（ＳｐｙＴａｇは両側に１０アミノ酸のリンカーが隣接する残基Ｇ４５３の直後に挿入される）と（ｂ）ＳｐｙＴａｇを有しないが、天然の受容体結合を減少させるＮ２７２Ａ変異を含有するカプシドとの間の１：７の比率で構成されるモザイクウイルス粒子である。ウイルスは、形質導入のマーカーとしてホタルルシフェラーゼを発現する。ＩＶ注射の３週間後、マウスをイソフルランを使用して麻酔し、ルシフェリン基質を注射し、７～１０分後に安楽死させた。以下の器官を、エクスビボ撮像のために採取した：肝臓、後肢、四頭筋、及び舌。器官を、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍインビボ撮像システム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して撮像した。生データを、ｌｉｖｉｎｇ ｉｍａｇｅソフトウェアを使用して解析して、平均放射輝度（光子／秒／ｃｍ２／ｓｒ）を決定した。

【図8-2】同上。

【図9】ＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体（ｍＡｂ＃１及びｍＡｂ＃２）又は非標的化対照としてのｈＡＳＧＲ１にコンジュゲートされた野生型ＡＡＶ９、脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ、及びＡＡＶ９の、１Ｅ＋１１ｖｇ／マウスの尾静脈注射の３週間後の（Ａ）ＣＡＣＮＧ１^{ｈｕ／ｈｕ}、（Ｂ）ＷＴ Ｃ５７ＢＬ／６、及び（Ｃ）Ｄ２－ｍｄｘマウスの肝臓及び四頭筋におけるＧＦＰ遺伝子発現解析を示す。ＧＦＰ発現を、ＴａｑｍａｎベースのｑＰＣＲアッセイを介して定量化し、内因性対照としてのＲｐｌｐ０に対して正規化した。ＧＦＰ ｍＲＮＡ発現は、各組織／マウス系統のＷＴ ＡＡＶ９と比較して呈示される。

【図10】ＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体（ｍＡｂ＃１、ｍＡｂ＃２、及びｍＡｂ＃３）又は非標的化対照としてのｈＡＳＧＲ１にコンジュゲートされた野生型ＡＡＶ９、脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ、及びＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａの１Ｅ＋１１ｖｇ／マウスの尾静脈注射の３週間後のＤ２－ｍｄｘマウスの前脛骨筋及び腓腹筋／足底筋／ヒラメ筋の代表的な免疫蛍光画像を呈示する。無関係抗体（ｈＡＳＧＲ１）にコンジュゲートされたＷＴ ＡＡＶ９、脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ、ＡＡＶ９並びに、ヒト及びサルＣＡＣＮＧ１には結合するがマウスＣＡＣＮＧ１には結合しない抗体（ｍＡｂ＃１）にコンジュゲートされたＡＡＶ９を注射されたＤ２－ｍｄｘマウスは、これらの筋肉において限定的なＧＦＰ蛍光しか示さないが、ヒト及びマウスＣＡＣＮＧ１の両方に結合する抗体（ｍＡｂ＃２及びｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされたＡＡＶ９粒子を注射されたマウスは、筋肉全体にわたって筋線維のパッチにおいて堅牢なＧＦＰ蛍光を示す。

【図11】ＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体又は非標的化対照としてｈＡＳＧＲ１にコンジュゲートされた野生型ＡＡＶ９、脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ、及びＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａの注射後のＤ２－ｍｄｘマウスの肝臓及び四頭筋におけるｅＧＦＰ発現の免疫組織化学染色を示す。ＡＡＶ９野生型粒子は、Ｄ２－ｍｄｘマウスの肝臓に形質導入することができるが、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子は肝臓から脱標的化され、肝臓においてＧＦＰを発現しない。無関係抗体（ｈＡＳＧＲ１）又はヒト及びサルＣＡＣＮＧ１には結合するがマウスＣＡＣＮＧ１に結合しないＣＡＣＮＧ１標的化抗体（ｍＡｂ＃１）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａを注射したＤ２－ｍｄｘマウスは、肝臓又は四頭筋においてほとんど染色を示さない。ヒト及びマウスＣＡＣＮＧ１の両方に結合する抗体（ｍＡｂ＃２及びｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子は、肝臓ではごくわずかなＧＦＰ染色を示すが、四頭筋では強いＧＦＰ染色を示す。

【図12】ＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体又は非標的化対照としてｈＡＳＧＲ１にコンジュゲートされた野生型ＡＡＶ９、脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ、及びＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａの注射後のＤ２－ｍｄｘマウスの腓腹筋／足底筋／ヒラメ筋におけるｅＧＦＰ発現の免疫組織化学染色を示す。ＡＡＶ９野生型粒子はＤ２－ｍｄｘマウスの腓腹筋／足底筋／ヒラメ筋に低レベルで形質導入できるが、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子は腓腹筋／足底筋／ヒラメ筋に限定的な効率で形質導入する。無関係抗体（ｈＡＳＧＲ１）又はマウスＣＡＣＮＧ１に結合しないヒトＣＡＣＮＧ１に特異的なＣＡＣＮＧ１標的化抗体（ｍＡｂ＃１）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａを注射したＤ２－ｍｄｘマウスは、腓腹筋／足底筋／ヒラメ筋においてほとんど染色を示さない。ヒト及びマウスの両方のＣＡＣＮＧ１に結合する抗体（ｍＡｂ＃２及びｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子は、腓腹筋／足底筋／ヒラメ筋において非常に強いＧＦＰ染色を示す。

【図13】ＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体又は非標的化対照としてｈＡＳＧＲ１にコンジュゲートされた野生型ＡＡＶ９、脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ、及びＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａの注射後のＤ２－ｍｄｘマウスの前脛骨筋におけるｅＧＦＰ発現の免疫組織化学染色を示す。ＡＡＶ９野生型粒子は、Ｄ２－ｍｄｘマウスの前脛骨筋に低レベルで形質導入することができる。ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子単独、又は無関係抗体（ｈＡＳＧＲ１）若しくはヒト及びサルＣＡＣＮＧ１には結合するがマウスＣＡＣＮＧ１には結合しないＣＡＣＮＧ１標的化抗体（ｍＡｂ＃１）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａを注射したＤ２－ｍｄｘマウスは、前脛骨筋においてほとんど染色を示さない。ヒト及びマウスＣＡＣＮＧ１の両方に結合する抗体（ｍＡｂ＃２及びｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子は、前脛骨筋の周囲に非常に強いＧＦＰ染色を示す。

【図14】ＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体又は非標的化対照としてｈＡＳＧＲ１にコンジュゲートされた野生型ＡＡＶ９、非標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ、及びＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａの注射後のＤ２－ｍｄｘマウスの心臓及び舌におけるｅＧＦＰ発現の免疫組織化学染色を示す。ＡＡＶ９野生型粒子は、Ｄ２－ｍｄｘマウスの舌に低レベルで形質導入することができるが、心臓には効率的に形質導入することができる。ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子単独、又は無関係抗体（ｈＡＳＧＲ１）若しくはヒト及びサルＣＡＣＮＧ１には結合するがマウスＣＡＣＮＧ１には結合しないＣＡＣＮＧ１標的化抗体（ｍＡｂ＃１）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａを注射したＤ２－ｍｄｘマウスは、舌においてほとんど染色を示さず、心臓においても低レベルの染色を示す。ヒト及びマウスＣＡＣＮＧ１の両方に結合する抗体（ｍＡｂ＃２及びｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子は、舌において非常に強いＧＦＰ染色を示し、心臓では低いながらも検出可能なレベルの染色を示す。

【図15】ＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体又は非標的化対照としてｈＡＳＧＲ１にコンジュゲートされた野生型ＡＡＶ９、脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ、及びＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａの注射後のＤ２－ｍｄｘマウスの脾臓及び横隔膜におけるｅＧＦＰ発現の免疫組織化学染色を示す。ＡＡＶ９野生型粒子は、Ｄ２－ｍｄｘマウスの横隔膜に低レベルで形質導入することができる。ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子単独、又は無関係抗体（ｈＡＳＧＲ１若しくはヒト及びサルＣＡＣＮＧ１には結合するがマウスＣＡＣＮＧ１には結合しないＣＡＣＮＧ１標的化抗体（ｍＡｂ＃１）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａを注射したＤ２－ｍｄｘマウスは、横隔膜においてほとんど染色を示さない。ヒト及びマウスＣＡＣＮＧ１の両方に結合する抗体（ｍＡｂ＃２及びｍＡｂ＃３）とコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子は、横隔膜において非常に強いＧＦＰ染色を示す。予想通り、試験したＡＡＶのいずれでも脾臓の形質導入はほとんど観察されない。

【図16】５’から３’の方向に、１４１塩基対末端逆位配列（ＩＴＲ）、ＣＡＧＧプロモーター、高感度緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）をコードする配列、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）、３２塩基対バーコード、ヒト（ｈ）成長ホルモン（ＧＨ）ポリＡテール、及び１４１塩基対ＩＴＲを含む、一本鎖（ｓｓ）ウイルスゲノムの例示的な概略図（正確な縮尺ではない）を提供する。

【図17】図１６に示すウイルスゲノムを含み、各々固有のバーコードを有し、抗ＣＡＣＮＧ１抗体で再標的化されたＡＡＶ９ウイルス粒子の投与後、図１６に示すウイルスゲノムを含む野生型ＡＡＶ９ウイルス粒子（ＡＡＶ）と比較して、非ヒト霊長類（カニクイザル）におけるインビボでの様々な筋肉への増強された形質導入を示す棒グラフを提供する。各候補ＡＡＶを、図１６に記載されるように固有のバーコード化ゲノムでパッケージングした。１２の候補バーコード化プールのＩＶ投与後、示された組織を収集し、各組織から精製された全ＲＮＡ中の各バーコードの相対存在量を、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）を使用して評価した。以下のいくつかの組織（ｘ軸）における各バーコード及び関連するカプシドにマッピングされたＮＧＳ読み取りのパーセンテージ（Ｙ軸）を示す（注射されたウイルスプールに対して正規化されている）：肝臓（外側左葉）及び骨格筋のサブセット（横隔膜、上腕二頭筋、大腿二頭筋、長指伸筋（ＥＤＬ）、腓腹筋（ｇｒａｓｔｒｏｃｎｅｍｉｕｓ）、肋間筋、ヒラメ筋、前脛骨筋、腹横筋（ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅ ａｂｄｏｍｉｎｕｓ）、三頭筋、外側広筋、腰筋、舌）。ここに示すデータは、本試験における２匹の動物の平均である。肝臓では、予想通り、ＡＡＶ９単独、及びＡＳＧＲ１ ｍＡｂにコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｗ５０３Ａ又はＮ２７２Ａが、組織中に存在する全てのバーコードの大部分を占める。骨格筋組織では、ＣＡＣＮＧ１標的化抗体にコンジュゲートされた脱標的化ＡＡＶ９（Ｎ２７２Ａ又はＷ５０３Ａ）カプシドは、組織中に存在する全てのバーコードの大部分を占め、これは全バーコードのわずかな割合を占めるＡＡＶ９単独よりも優れた性能である。

【図18】ｕＤｙｓ５を発現するベクターゲノム構築物を使用したヒト骨格筋管及びＣ２Ｃ１２マウス筋管のＡＡＶ９ベースの再標的化ウイルス形質導入を示す。グラフは、ＣＫ８プロモーターの制御下でｕＤｙｓ５を発現するＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ ＷＴ又は脱標的化ＡＡＶ９（Ｎ２７２Ａ）のいずれかの２Ｅ＋５ｖｇ／細胞で３日間形質導入後の、（Ａ）ヒト筋管及び（Ｂ）Ｃ２Ｃ１２マウス筋管における相対的ｕＤｙｓ５ ｍＲＮＡ発現を定量化することによって評価された形質導入効率を提供する。ｕＤｙｓ５発現を、ＴａｑｍａｎベースのｑＰＣＲアッセイを介して定量化し、内因性対照としてＨｐｒｔに対して正規化した。ｕＤｙｓ５ ｍＲＮＡ発現は、各細胞タイプについてＷＴ ＡＡＶ９と比較して呈示される。ヒト及びマウスＣＡＣＮＧ１の両方に結合する抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子は、ヒト及びマウスの両方の筋管において、ＡＡＶ９ ＷＴと比較してより高いレベルのｕＤｙｓ５ ｍＲＮＡを産生する。

【図19】ＣＫ８プロモーターの制御下でｕＤｙｓ５を発現する、ＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ ＷＴ又は脱標的化 ＡＡＶ９（Ｎ２７２Ａ）のいずれかの、１Ｅ＋１２ｖｇ／マウスの尾静脈注射から５週間後のＤ２－ｍｄｘマウスの複数の組織におけるｕＤｙｓ５遺伝子発現を呈示する。ｕＤｙｓ５ ｍＲＮＡ発現をＴａｑｍａｎベースのｑＰＣＲアッセイを介して定量化し、内因性対照としてＲｐｌｐ０に対して正規化した。ｕＤｙｓ５ ｍＲＮＡ発現は、各組織についてＷＴ ＡＡＶ９と比較して呈示される。ヒト及びマウスＣＡＣＮＧ１の両方に結合する抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子は、予想通り、ＡＡＶ９ ＷＴと比較して肝臓の形質導入の減少を示し、肝臓においてＡＡＶ９ ＷＴと比較して極めて低いレベルのｕＤｙｓ５ ｍＲＮＡを産生する。ヒト及びマウスＣＡＣＮＧ１の両方に結合する抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子は、心臓においてＡＡＶ９ ＷＴと比較してより低いレベルのｕＤｙｓ５ ｍＲＮＡを産生するが、そのレベルは検出可能である。ヒト及びマウスＣＡＣＮＧ１の両方に結合する抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子は、調べた全ての骨格筋において、ＡＡＶ９ ＷＴと比較してより高いレベルのｕＤｙｓ５ ｍＲＮＡを産生する。

【図20】ＣＫ８プロモーターの制御下でｕＤｙｓ５を発現するＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされた野生型ＡＡＶ９又は脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子の１Ｅ＋１２ｖｇ／マウスの尾静脈注射から５週間後の野生型ＤＢＡ２／Ｊ及びＤ２－ｍｄｘマウスの腓腹筋及び心臓の代表的な免疫蛍光画像を呈示する。ＷＴ ＡＡＶ９を注射したＤ２－ｍｄｘマウスは、腓腹筋の筋線維膜におけるジストロフィンの低レベルの発現、及び心臓における力強い発現を示す。一方、ヒト及びマウスＣＡＣＮＧ１の両方に結合する抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされた脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子を注射したマウスは、腓腹筋の筋線維膜における力強いジストロフィン発現、及び心臓における軽度の発現を示す。

【図21】ＣＫ８プロモーターの制御下でｕＤｙｓ５を発現するＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされた野生型ＡＡＶ９又は脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子の１Ｅ＋１２ｖｇ／マウスの尾静脈注射から５週間後のＤ２－ｍｄｘマウスの四頭筋におけるｕＤｙｓ５のタンパク質存在量を示す。β－アクチンをタンパク質負荷対照として使用し、タンパク質存在量を定量化し、任意の密度測定単位（Ａ．Ｕ．）として及びプロットした。ヒト及びマウスＣＡＣＮＧ１の両方に結合する抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされた脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子を注射されたマウスは、野生型ＡＡＶ９を注射されたマウスと比較して、実質的により多くのｕＤｙｓ５タンパク質を呈示する。

【図22】ＣＫ８プロモーターの制御下でｕＤｙｓ５を発現するＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされた野生型ＡＡＶ９又は脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子の１Ｅ＋１２ｖｇ／マウスの尾静脈注射から４週間後のＤ２－ｍｄｘマウスにおける血清クレアチンキナーゼ（ＣＫ）レベルを示す。ＰＢＳ処置マウス及び野生型ＡＡＶ９処置マウスは、処置後に血清ＣＫの減少を示さなかったが、ヒト及びマウスＣＡＣＮＧ１の両方に結合する抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされた脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子で処置された全てのマウスは、血清ＣＫの減少を示し、筋損傷の減少を示した。

【図23】ＣＫ８プロモーターの制御下でｕＤｙｓ５を発現するＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされた野生型ＡＡＶ９又は脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子の１Ｅ＋１２ｖｇ／マウスの尾静脈注射から１２週間後のＤ２－ｍｄｘマウスにおける最大前肢握力測定値を示す。点線は、同齢の対照ＤＢＡ／２Ｊマウスの握力を表す。ヒト及びマウスＣＡＣＮＧ１の両方に結合する抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子を注射されたマウスは、ＷＴ ＡＡＶ９粒子を注射されたマウスと比較して、最大握力が向上したことを示す。

【図24-1】ＣＡＧプロモーターの制御下で、ｅＧＦＰを発現するＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされた野生型ＡＡＶ９又はＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａの注射後の指示された時点での、非ヒト霊長類（カニクイザル）における肝酵素及び補体経路バイオマーカーの血清レベルを示す。ＡＡＶ９野生型粒子の投与は、予想通り、投与後４８時間で（Ａ）ＡＬＴ、（Ｂ）ＡＳＴ、（Ｃ）Ｂｂ、及び（Ｄ）Ｃ３ａの上昇をもたらしたが、ＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体（ｍＡｂ＃３）にコンジュゲートされたＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａの投与は、これらのマーカーの上昇をもたらさず、これは、ＣＡＣＮＧ１を標的とする抗体にコンジュゲートされた肝臓脱標的化ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ粒子が、肝臓指向性野生型ＡＡＶ血清型よりも安全性の利点を提供することを示唆する。

【図24-2】同上。

【図24-3】同上。

【図24-4】同上。

【0012】

上述の図の各々において、
・「ＷＴ」は、野生型、例えば、変異又は改変のないＡＡＶカプシドタンパク質を指す。
・「ＨＢＭ」は、Ｒ５８５Ａ及びＲ５８８Ａを含むカプシドタンパク質を指す。例えば、ＳｐｙＴａｇ改変のないＡＡＶカプシドタンパク質などの全ての「参照／脱標的化」ＡＡＶ２カプシドタンパク質は、Ｒ５８５Ａ及びＲ５８８Ａのみを含む。ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ融合抗体に結合されたＳｐｙＴａｇを呈示する上述の図中の全てのＡＡＶ２カプシドタンパク質は、Ｒ４８４Ａ、Ｒ４８７Ａ、Ｒ５８５Ａ、Ｒ５８８Ａ、及びＫ５３２Ａ変異を更に含む。
・「Ｎ２７２Ａ」は、Ｎ２７２Ａ変異を含むカプシドを指す。上述の図では、全ての「参照」／「脱標的化」ＡＡＶ９カプシドタンパク質、例えば、ＳｐｙＴａｇ改変のないＡＡＶ９カプシドタンパク質は、Ｎ２７２Ａ変異を含む。上述の図では、ＳｐｙＴａｇ改変を有する全てのＡＡＶ９カプシドタンパク質は、Ｗ５０３Ａ変異を更に含むが、Ｎ２７２Ａ変異は含まない。
・ＡＡＶに関連する「抗ＣＡＣＮＧ１」、「ＣＡＣＮＧ１」、又は「ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ」とは、両側に１０アミノ酸のリンカーが隣接する残基Ｇ４５３の直後にＳｐｙＴａｇペプチドの挿入を含むＡＡＶウイルスカプシドを指し、ＳｐｙＴａｇペプチドは、ＣＡＣＮＧ１に特異的に結合する抗ＣＡＣＮＧ１抗体（又はそのＦａｂ断片）に融合されたＳｐｙＣａｔｃｈｅｒへのイソペプチド結合によって結合している。
上述の図においてＣＡＣＮＧ１に特異的に結合する抗ＣＡＣＮＧ１抗体（又はそのＦａｂ断片）に融合されたＳｐｙＣａｔｃｈｅｒにイソペプチド結合によって結合されたＳｐｙＴａｇペプチドを呈示する全てのＡＡＶ粒子は、１：７のＳｐｙＴａｇ改変ウイルスカプシドタンパク質対「脱標的化」ウイルスタンパク質の比（「１／８」と示される）を含むモザイクウイルスカプシドを含む。
・「ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃１」は、ヒト及びサルＣＡＣＮＧ１に結合するが、マウスＣＡＣＮＧ１には結合しない抗ＣＡＣＮＧ１抗体を指す。
・「ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃２」は、ヒト、サル、及びマウスＣＡＣＮＧ１に結合する抗ＣＡＣＮＧ１抗体を指す。
・「ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃３」は、ヒト、サル、及びマウスＣＡＣＮＧ１に結合する抗ＣＡＣＮＧ１抗体を指す。
・「ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃４」は、ヒト、サル、及びマウスＣＡＣＮＧ１に結合する抗ＣＡＣＮＧ１抗体を指す。
・「ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃５」は、ヒト及びサルに結合するが、マウスＣＡＣＮＧ１には結合しない抗ＣＡＣＮＧ１抗体を指す。
・２９３細胞又はマウスに関連する「ＣＡＣＮＧ１」は、それぞれ、ヒトＣＡＣＮＧ１を発現するように遺伝子改変された２９３細胞又はマウスを指す。
・内因性Ｃａｃｎｇ１のヒトＣａｃｎｇ１配列によるホモ接合性置換を含むマウスは、「ＣＡＣＮＧ１^{ｈｕ／ｈｕ}」と称される。
・マウスに関連する「５０５００」は、ＣＡＣＮＧ１マウスの系統一致対照を指す。
・ＡＡＶに関連する「抗ＡＳＧＲ１」、「ＡＳＧＲ１」、又は「ＡＳＧＲ１ ｍＡｂ」とは、１０アミノ酸のリンカーが両側に隣接する残基Ｇ４５３の直後にＳｐｙＴａｇペプチドの挿入を含むＡＡＶウイルスカプシドを指し、ＳｐｙＴａｇペプチドは、ＡＳＧＲ１に特異的に結合する抗ＡＳＧＲ１抗体又はそのＦａｂ断片に融合されたＳｐｙＣａｔｃｈｅｒへのイソペプチド結合によって結合している。
上述の図においてＡＳＧＲ１に特異的に結合する抗ＡＳＧＲ１抗体（又はそのＦａｂ断片）に融合されたＳｐｙＣａｔｃｈｅｒにイソペプチド結合によって結合されたＳｐｙＴａｇペプチドを呈示する全てのＡＡＶ粒子は、１：７のＳｐｙＴａｇ改変ウイルスカプシドタンパク質対「脱標的化」ウイルスカプシドタンパク質の比（「１／８」と示される）を含むモザイクウイルスカプシドを含む。
・２９３細胞又はマウスに関連する「ＡＳＧＲ１」は、それぞれ、ヒトＡＳＧＲ１を発現するように遺伝子改変された２９３細胞又はマウスを指す。
・「ｈ」は、「ヒト」を指す
・「Ｖｈ」は、抗体重鎖を指す
・「Ｖｋ」は、抗体軽鎖を指す
・「Ｄ２－ｍｄｘ」とは、デュシェンヌ型筋ジストロフィーのマウスモデルを指す

【発明を実施するための形態】

【0013】

骨格筋は身体内で最大の器官であり、全体重の約４０％を占める。骨格筋は、人体における３つ重要な筋組織のうちの１つである。各骨格筋は、結合組織鞘によって一緒に包まれた数千の筋線維で構成されている。

【0014】

骨格筋の主な機能は、その固有の興奮収縮連関プロセスを介して行われる。筋肉が骨の腱に付着しているため、筋肉の収縮により骨が動き、特定の動きを実行できる。骨格筋はまた、構造的な支持を提供し、身体の姿勢を維持するのに役立つ。骨格筋はまた、器官特異的タンパク質を合成するために身体の様々な器官によって使用され得るアミノ酸の貯蔵源として作用する。骨格筋はまた、グリコーゲンの形態のグルコースの貯蔵源として働く。骨格筋はまた、恒常性（ｔｈｅｒｍｏｓｔａｓｉｓ）を維持する上で中心的な役割を果たし、飢餓時にエネルギー源として作用する。したがって、骨格筋は、運動、体温調節、及び全身代謝の制御において重要な役割を果たしている。

【0015】

多くの筋疾患、並びに通常の老化では、骨格筋組織のサイズ及び機能が低下し、機能的可動性が損なわれ、重度の筋疾患では、長期障害、及び早期死亡をもたらす。

【0016】

筋消耗及び遺伝性筋疾患の治療は、典型的には、広範囲に作用する療法、例えば筋消耗のためのテストステロン療法、筋ジストロフィーのためのグルココルチコイド、筋疾患（例えば、Ｘ連鎖性筋細管ミオパチー（ＸＬＭＴＭ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、筋強直性ジストロフィー（ＤＭ１）、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー１型（ＦＳＨＤ）、先天性筋ジストロフィー１Ａ型（ＭＤＣ１Ａ）、肢帯型筋ジストロフィー、及びジストログリカノパチーなど）の治療のための全身的ＡＡＶ送達から構成される。これらの療法の非標的送達は、特定の筋肉取り込みの効率を低減すると同時に、他の器官に著しい有害なオフターゲット効果も引き起こす。

【0017】

治療ペイロードの筋肉送達を強化し、オフターゲット効果を軽減するために、カルシウム電位開口型補助サブユニットガンマ１（ＣＡＣＮＧ１）又は哺乳動物カドヘリン１５（ＣＡＤ１５）などの筋特異的表面タンパク質を標的とするウイルス粒子、例えば、ＡＡＶウイルス粒子が本明細書に記載される。

【0018】

電位依存性カルシウムチャネルは、一般的に５つのサブユニットから構成される。ＣＡＣＮＧ１遺伝子によってコードされるタンパク質は、これらのサブユニットのうちの１つを表す。更に、ＣＡＣＮＧ１遺伝子、ガンマによってコードされるタンパク質は、２つの既知のガンマサブユニットタンパク質のうちの１つである。この特定のガンマサブユニットは、骨格筋１，４－ジヒドロピリジン感受性カルシウムチャネルの一部であり、興奮収縮連関において役割を果たす内在性膜タンパク質である。この遺伝子は、ＰＭＰ－２２／ＥＭＰ／ＭＰ２０ファミリーの機能的に多様な８員タンパク質サブファミリーの一部であり、膜貫通ＡＭＰＡ受容体制御タンパク質（ＴＡＲＰ）として機能する２つのファミリーメンバーを有するクラスター内に位置する。ＣＡＣＮＧ１は、骨格筋において高度かつ特異的に発現される。ヒトＣＡＣＮＧ１（ＣＡＣＮＧ１）をコードする遺伝子は、１７番染色体の長腕上に位置する。ＣＡＣＮＧ１は、４つのエクソンを含み、約１２，２４４塩基長である。ヒトＣＡＣＮＧ１遺伝子の例示的な配列には、ＮＣＢＩのアクセッション番号ＮＭ＿０００７５８２．２（配列番号２４１）が割り当てられている。例示的なヒトＣＡＣＮＧ１タンパク質は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｏ７０５７８（配列番号２４２）が割り当てられている。

【0019】

別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。

【0020】

単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈で別途明確に指示されない限り、複数への言及を含む。したがって、例えば、「１つの方法」への言及は、本明細書に記載される種類の、かつ／又は当業者には本開示の閲読により明らかになるであろう１つ以上の方法及び／又は工程を含む。

【0021】

「同一性パーセント（％）」などは、タンパク質の全長又はその一部にわたる、アミノ酸配列又はヌクレオチド配列に対して容易に決定することができる。部分は、それぞれ少なくとも約５アミノ酸又は２４ヌクレオチドの長さであってもよく、それぞれ約７００アミノ酸又は２１００ヌクレオチドまでの長さであってもよい。一般的に、２つの異なるアデノ随伴ウイルスの間の「同一性」、「相同性」、又は「類似性」に言及する場合、「同一性」、「相同性」、又は「類似性」は、「アライメントされた」配列を参照して決定される。「アライメントされた」配列又は「アライメント」とは、複数の核酸配列又はタンパク質（アミノ酸）配列を指し、それらは多くの場合、参照配列と比較して塩基若しくはアミノ酸の欠落又は追加に対する補正を含む。

【0022】

アライメントは、公開されている、又は市販の様々な多重配列アライメントプログラムのいずれかを使用して実行されてもよい。配列アライメントプログラムは、アミノ酸配列については、例えば、「Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ」、「ＭＡＰ」、「ＰＩＭＡ」、「ＭＳＡ」、「ＢＬＯＣＫＭＡＫＥＲ」、「ＭＥＭＥ」、及び「Ｍａｔｃｈ－Ｂｏｘ」プログラムなどが利用可能である。概して、これらのプログラムのいずれかをデフォルト設定で使用するが、当業者は、必要に応じてこれらの設定を変更することもできる。あるいは当業者は、参照されるアルゴリズム及びプログラムによって提供されるものと少なくとも同レベルの同一性又はアライメントを提供する、別のアルゴリズム又はコンピュータプログラムを利用することもできる。例えば、Ｊ．Ｄ．Ｔｈｏｍｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，”Ａ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ”，２７（１３）：２６８２－２６９０（１９９９）を参照されたい。

【0023】

核酸配列については、複数の配列アライメントプログラムも利用可能である。そのようなプログラムの例としては、インターネット上のウェブサーバーを介してアクセス可能な「Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ」、「ＣＡＰ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｓｓｅｍｂｌｙ」、「ＭＡＰ」、及び「ＭＥＭＥ」が挙げられる。当業者には、そのようなプログラムに関する他のソースも公知である。あるいは、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩユーティリティも使用される。また、ヌクレオチド配列の同一性を測定するために使用され得る当分野で公知の多数のアルゴリズムも存在しており、上述のプログラムも含有される。別の例としては、ポリヌクレオチド配列は、ＧＣＧバージョン６．１のプログラムであるＦＡＳＴＡ（商標）を使用して比較することができる。Ｆａｓｔａ（商標）は、クエリと検索配列の間の最良重複の領域のアライメント及び配列同一性の百分率を提供する。例えば、核酸配列間の配列同一性パーセントは、参照により本明細書に組み込まれるＧＣＧバージョン６．１において提供される、そのデフォルトパラメータ（ワードサイズは６及びスコアリングマトリクスのためのＮＯＰＡＭ因子）を用いてＦＡＳＴＡ（商標）を使用することで決定することができる。

【0024】

「有意な同一性」は、少なくとも９０％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％、又は例えば少なくとも１００％同一であるアミノ酸配列又は核酸配列のアライメントを包含する。

【0025】

「キメラ」という用語は、少なくとも２つの異なるＡＡＶ血清型に由来する核酸配列又はアミノ酸配列をそれぞれ含む機能遺伝子又はポリペプチド、例えば少なくとも第１のＡＡＶ及び第２のＡＡＶの遺伝子又はポリペプチドの一部を包含し、この場合において少なくとも第１及び第２の部分は動作可能に連結されて、機能性アミノ酸をコードする機能性キメラＡＡＶ核酸を形成する。キメラとして指定されない限り、ヌクレオチド配列、遺伝子、ポリペプチド、及びアミノ酸は、ヌクレオチド配列、遺伝子、ポリペプチド、及びアミノ酸が、それぞれ単一のＡＡＶ血清型の核酸配列又はアミノ酸配列と有意な同一性を有する核酸配列又はアミノ酸配列を含むという点で、非キメラとみなされる。

【0026】

「抗体」という用語には、ジスルフィド結合によって相互接続された４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む、免疫グロブリン分子が含まれる。各重鎖は、重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）及び重鎖定常領域（Ｃ_Ｈ）を含む。重鎖定常領域は、少なくとも３つのドメイン、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３、及び任意選択的にＣＨ_４を含む。各軽鎖は、軽鎖可変ドメイン（Ｃ_Ｈ）及び軽鎖定常領域（Ｃ_Ｌ）を含む。重鎖及び軽鎖可変ドメインは更に、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存的な領域に差し込まれている、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域に更に細分化することができる。各重鎖及び軽鎖可変ドメインは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲを含み、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、以下の順序で配列される。ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４（重鎖ＣＤＲは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と略される場合もあり、軽鎖ＣＤＲは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３と略される場合もある）。典型的な四量体抗体構造は、２つの同一の抗原結合ドメインを含み、その各々がＶ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインの会合によって形成されており、その各々がそれぞれのＣ_Ｈドメイン及びＣ_Ｌドメインとともに抗体Ｆｖ領域を形成する。単一ドメイン抗体は、単一の抗原結合ドメイン、例えば、Ｖ_Ｈ又はＶ_Ｌを含む。例えば抗原の特異的結合ペアの第１のメンバーを認識及び結合する抗体部分などの抗体の抗原結合ドメインは、「パラトープ」とも呼称される。パラトープは断片抗原結合（Ｆａｂ領域）の一部である抗体のＦｖ領域の小さな領域（５～１０アミノ酸）であり、抗体の重鎖及び／又は軽鎖の一部を含有し得る。パラトープが特異的結合ペアの第１のメンバーに高アフィニティで結合するとき、パラトープは特異的結合ペアの第１のメンバーに特異的に結合する。「高アフィニティ」抗体という用語は、特異的結合ペアの標的の第１のメンバーに対し、約１０^－９Ｍ以下（例えば、約１×１０^－９Ｍ、１×１０^－１０Ｍ、１×１０^－１１Ｍ、又は約１×１０^－１２Ｍ）のＫ_Ｄを有する抗体を指す。一実施形態では、Ｋ_Ｄは、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって測定され、別の実施形態では、Ｋ_Ｄは、ＥＬＩＳＡによって測定される。

【0027】

「相補性決定領域」という語句又は「ＣＤＲ」という用語には、生物体の免疫グロブリン遺伝子の核酸配列によってコードされるアミノ酸配列が含まれ、そのアミノ酸配列は、通常（すなわち、野生型動物では）免疫グロブリン分子（例えば、抗体又はＴ細胞受容体）の軽鎖又は重鎖の可変領域における２つのフレームワーク領域の間に見られる。ＣＤＲは、例えば生殖細胞系の配列又は再構成配列若しくは非再構成配列によって、例えば、ナイーヴＢ細胞若しくは成熟Ｂ細胞、又はＴ細胞によってコードされ得る。ＣＤＲは、体細胞変異され（例えば動物生殖細胞系でコードされた配列と異なり）、ヒト化され、及び／又はアミノ酸置換、付加、若しくは欠失で改変され得る。一部の環境下（例えば、ＣＤＲ３に関して）では、ＣＤＲは、２つ以上の配列（例えば、生殖細胞系配列）によってコードされ得、その２つ以上の配列は（例えば、非再構成核酸配列においては）連続していないが、例えば、配列のスプライシング又は接続（例えば、重鎖ＣＤＲ３を形成するためのＶ－Ｄ－Ｊ再構成）の結果として、Ｂ細胞核酸配列では連続している。

【0028】

「軽鎖」という語句は、任意の生物体由来の免疫グロブリン軽鎖配列を含み、別段の規定がない限り、代替軽鎖のみならず、ヒトκ軽鎖及びλ軽鎖、並びにＶｐｒｅＢを含む。別段の規定がない限り、軽鎖可変ドメインは、典型的には、３つの軽鎖ＣＤＲ及び４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。一般に、完全長軽鎖には、アミノ末端からカルボキシル末端の方向に、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を含む可変ドメインと、軽鎖定常領域とが含まれる。軽鎖可変ドメインは、軽鎖可変領域遺伝子配列によってコードされ、概して、生殖細胞系に存在するＶセグメント及びＪセグメントのレパートリーに由来するＶ_Ｌセグメント及びＪ_Ｌセグメントを含む。様々な生物体のＶ軽鎖セグメント及びＪ軽鎖セグメントの配列、位置、及び命名は、ＩＭＧＴデータベース、ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇで見ることができる。軽鎖は、例えば、軽鎖が現れる特異的結合ペア－結合タンパク質の第１のメンバーによって選択的に結合される特異的結合ペアの第１のメンバー又は第２の第１のメンバーのいずれも選択的に結合しない軽鎖を含む。軽鎖はまた、軽鎖が現れる特異的結合ペア－結合タンパク質の第１のメンバーによって選択的に結合される特異的結合ペアの１つ以上の第１のメンバーに結合し、これを認識することにより、重鎖又は別の軽鎖に結合してこれを認識するか、又はこれを補助する軽鎖を含む。一般的な軽鎖又は普遍的な軽鎖は、ヒトＶκ１－３９Ｊκ遺伝子又はヒトＶκ３－２０Ｊκ遺伝子に由来する軽鎖を含み、それらの体細胞変異（例えば、アフィニティ成熟）バージョンを含む。例示的なヒトＶ_Ｌセグメントは、ヒトＶκ１－３９遺伝子セグメント、ヒトＶκ３－２０遺伝子セグメント、ヒトＶλ１－４０遺伝子セグメント、ヒトＶλ１－４４遺伝子セグメント、ヒトＶλ２－８遺伝子セグメント、ヒトＶλ２－１４遺伝子セグメント、及びヒトＶλ３－２１遺伝子セグメントを含み、それらの体細胞変異（例えば、アフィニティ成熟）バージョンを含む。１つの生物体（例えば、ヒト若しくは齧歯類、例えば、ラット若しくはマウス、又は鳥類、例えばニワトリ）由来の可変ドメインと、同じか又は異なる生物体（例えば、ヒト若しくは齧歯類、例えばラット若しくはマウス、又は鳥類、例えばニワトリ）由来の定常領域とを含む軽鎖を作製することができる。

【0029】

「約」又は「およそ」という用語は、統計的に有意の値の範囲内であることを含む。かかる範囲は、所与の値又は範囲の１０倍以内、好ましくは５０％以内、より好ましくは２０％以内、なおより好ましくは１０％以内、更により好ましくは５％以内であり得る。「約」又は「およそ」という用語によって包含される許容可能な変動は、研究中の特定の系に依存し、当業者によって容易に理解され得る。

【0030】

語句「重鎖」又は「免疫グロブリン重鎖」には、任意の生物体由来の、免疫グロブリン重鎖定常領域配列を含む免疫グロブリン重鎖配列が含まれる。別段の指定のない限り、重鎖可変ドメインは、３つの重鎖ＣＤＲと４つのＦＲ領域とを含む。重鎖の断片としては、ＣＤＲ、ＣＤＲ及びＦＲ、並びにそれらの組み合わせが挙げられる。典型的な重鎖は、可変ドメインに続いて（Ｎ末端からＣ末端へ）、Ｃ_Ｈ１ドメイン、ヒンジ、Ｃ_Ｈ２ドメイン、及びＣ_Ｈ３ドメインを有する。重鎖の機能性断片には、特異的結合ペアの第１のメンバーを特異的に認識する（例えば、マイクロモル濃度、ナノモル濃度、又はピコモル濃度範囲のＫ_Ｄにより特異的結合ペアの第１のメンバーを認識する）ことができ、細胞を発現し、細胞から分泌可能であり、かつ少なくとも１つのＣＤＲを含む、断片が含まれる。重鎖可変ドメインは、可変領域ヌクレオチド配列によってコードされ、これは一般に、生殖系細胞に存在するＶ_Ｈ、Ｄ_Ｈ、及びＪ_Ｈセグメントのレパートリー由来の、Ｖ_Ｈ、Ｄ_Ｈ、及びＪ_Ｈセグメントを含む。様々な生物体のＶ重鎖セグメント、Ｄ重鎖セグメント、及びＪ重鎖セグメントの配列、位置、及び命名は、ＩＭＧＴデータベースで見ることができ、これは、ＵＲＬが「ｉｍｇｔ．ｏｒｇ」のワールドワイドウェブ（ｗｗｗ）でインターネットを介してアクセス可能である。

【0031】

「重鎖のみの抗体」、「重鎖のみの抗原結合タンパク質」、「単一ドメイン抗原結合タンパク質」、「単一ドメイン結合タンパク質」、などの用語は、重鎖定常領域に動作可能に連結されている可変ドメインを含む免疫グロブリン様鎖を含む単量体又はホモ二量体の免疫グロブリン分子を指し、これは重鎖定常領域が、典型的には機能的なＣ_Ｈ１ドメインを欠くために軽鎖と会合不可能である。したがって、「重鎖のみの抗体」、「重鎖のみの抗原結合タンパク質」、「単一ドメイン抗原結合タンパク質」、「単一ドメイン結合タンパク質」、などの用語は、（ｉ）機能的Ｃ_Ｈ１ドメインを欠く重鎖定常領域に動作可能に連結されている可変ドメインを含む免疫グロブリン様鎖のうちの１つを含む単量体単一ドメイン抗原結合タンパク質、又は（ｉｉ）２つの免疫グロブリン様鎖を含み、その各々が機能的Ｃ_Ｈ１ドメインを欠く重鎖定常領域に動作可能に連結されている可変ドメインを含む、ホモ二量体単一ドメイン抗原結合タンパク質、の両方を包含する。様々な態様では、ホモ二量体単一ドメイン抗原結合タンパク質は、２つの同一の免疫グロブリン様鎖を含み、その各々が機能的Ｃ_Ｈ１ドメインを欠く同一の重鎖定常領域に動作可能に連結されている同一の可変ドメインを含む。加えて、単一ドメイン抗原結合タンパク質の各免疫グロブリン様鎖は、可変ドメインを含み、これは、重鎖可変領域遺伝子セグメント（例えば、Ｖ_Ｈ、Ｄ_Ｈ、Ｊ_Ｈ）、軽鎖遺伝子セグメント（例えば、Ｖ_Ｌ、Ｊ_Ｌ）、又はそれらの組み合わせに由来し得、重鎖定常領域（及び任意選択的にヒンジ領域）遺伝子、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、又はそれらの組み合わせ、のＣ_Ｈ１コード配列における欠失変異又は不活性化変異を含む重鎖定常領域（Ｃ_Ｈ）遺伝子配列に連結し得る。重鎖遺伝子セグメントに由来する可変ドメインを含む単一ドメイン抗原結合タンパク質は、「Ｖ_Ｈ単一ドメイン抗体」又は「Ｖ_Ｈ単一ドメイン抗原結合タンパク質」と称され得、例えば、米国特許第８，７５４，２８７号、米国特許出願公開第２０１４／０２８９８７６号、同第２０１５／０１９７５５３号、同第２０１５／０１９７５５４号、同第２０１５／０１９７５５５号、同第２０１５／０１９６０１５号、同第２０１５／０１９７５５６号、同第２０１５／０１９７５５７号（それらの各々は、それらの全体が参照により組み込まれる）を参照されたい。軽鎖遺伝子セグメント由来の可変ドメインを含む単一ドメイン抗原結合タンパク質は、「Ｖ_Ｌ単一ドメイン抗原結合タンパク質」と称され得、例えば、米国特許出願公開第２０１５／０２８９４８９号（その全体が参照により組み込まれる）を参照されたい。

【0032】

「軽鎖」という語句は、任意の生物体由来の免疫グロブリン軽鎖配列を含み、別段の規定がない限り、代替軽鎖のみならず、ヒトカッパ（κ）軽鎖及びラムダ（λ）軽鎖、並びにＶｐｒｅＢを含む。軽鎖可変ドメインは、典型的には、別段の規定がない限り、３つの軽鎖ＣＤＲ及び４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。概して、完全長軽鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端に向かって、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を含む可変ドメイン、及び軽鎖定常領域アミノ酸配列を含む。軽鎖可変ドメインは、軽鎖可変領域ヌクレオチド配列によってコードされ、概して、生殖系細胞に存在する軽鎖Ｖ及びＪ遺伝子セグメントのレパートリーに由来する、軽鎖Ｖ_Ｌ及び軽鎖Ｊ_Ｌセグメントを含む。様々な生物体の軽鎖Ｖ遺伝子セグメント及び軽鎖Ｊ遺伝子セグメントの配列、位置、及び命名は、ＩＭＧＴデータベースで見ることができ、これは、ＵＲＬが「ｉｍｇｔ．ｏｒｇ」のワールドワイドウェブ（ｗｗｗ）でインターネットを介してアクセス可能である。軽鎖は、例えば、軽鎖が現れる特異的結合ペア－結合タンパク質の第１のメンバーによって選択的に結合される特異的結合ペアの第１のメンバー又は第２の第１のメンバーのいずれも選択的に結合しない軽鎖を含む。軽鎖はまた、軽鎖が現れる特異的結合ペア－結合タンパク質の第１のメンバーによって選択的に結合される特異的結合ペアの１つ以上の第１のメンバーに結合し、これを認識することにより重鎖に結合し、これを認識するか、又は重鎖を補助する軽鎖を含む。軽鎖はまた、軽鎖が現れる特異的結合ペア－結合タンパク質の第１のメンバーによって選択的に結合される特異的結合ペアの１つ以上の第１のメンバーに結合し、これを認識することにより重鎖に結合し、これを認識するか、又は重鎖を補助する軽鎖を含む。一般的な軽鎖又は普遍的な軽鎖は、ヒトＶκ１－３９Ｊκ５遺伝子又はヒトＶκ３－２０Ｊκ１遺伝子に由来する軽鎖を含み、それらの体細胞変異（例えば、アフィニティ成熟）バージョンを含む。

【0033】

「動作可能に連結されている」という語句は、本明細書で使用される場合、互いに直接的又は間接的に相互作用する、あるいは生物学的事象に関わるように互いに配置される、構成要素又はエレメントの物理的な並置（例えば、三次元的空間における）を含み、この並置は、かかる相互作用及び／又は配置を達成又は可能にする。一例を挙げると、核酸中の調節エレメント（例えば、発現制御配列）は、コード配列の発現及び／又は活性にその存在又は非存在が影響を与えるように、コード配列に対して位置する場合、コード配列に「動作可能に連結されている」と言われる。多くの実施形態では、「動作可能な連結」は、互いに関連する構成要素又はエレメントの共有結合を含む。当業者であれば、一部の実施形態では、有効な動作可能な連結を達成するために、共有結合は必要でないことを容易に理解するであろう。例えば、一緒に動作可能に連結されたタンパク質は、例えば、共有結合又は非共有結合を介して、互いに会合され得る。非限定的な例として、本明細書に記載のカプシドタンパク質は、標的化リガンドに動作可能に連結されてもよく、カプシドタンパク質は、任意選択的にカプシドタンパク質と標的化リガンドとの間に足場及び／又はアダプターを有するか、又は有さずに、標的化リガンドに非共有結合するか、又は標的化リガンドに共有結合する。別の例として、一部の実施形態では、核酸調節エレメントが制御するコード配列と動作可能に連結されている核酸調節エレメントは、目的のヌクレオチドと連続している。代替的に又は加えて、一部の実施形態では、１つ以上のそのような調節エレメントは、トランスで、又は距離をおいて作用し、目的のコード配列を制御する。一部の実施形態では、「調節エレメント」という用語は、本明細書で使用される場合、それらが連結されているコード配列の発現及びプロセシングに影響を与えるのに必要な及び／又は十分なポリヌクレオチド配列を指す。一部の実施形態では、調節エレメントは、適切な転写開始、終結、プロモーター及びエンハンサー配列、スプライシング及びポリアデニル化シグナルなどの効率的なＲＮＡ処理シグナル、細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列、翻訳効率を向上する配列（例えばコザックコンセンサス配列）、タンパク質安定性を向上する配列、並びに／又は一部の実施形態では、タンパク質分泌を向上する配列であり得るか、あるいはこれらを含み得る。一部の実施形態では、１つ以上の調節エレメントは、特定の宿主細胞若しくは生物体、又はそれらのタイプで優先的に又はそれらでのみ活性である。一例を挙げると、原核生物では、調節エレメントは、典型的には、プロモーター、リボソーム結合部位、及び転写終結配列を含み得、真核生物では、多くの実施形態では、調節エレメントは、典型的には、プロモーター、エンハンサー、及び／又は転写終結配列を含み得る。当業者であれば、多くの実施形態で、「調節エレメント」という用語は、その存在が発現及びプロセシングに不可欠な構成要素を指し、一部の実施形態で、その存在が発現に有利である構成要素（例えば、リーダー配列、標的化配列、及び／又は融合パートナー配列を含む）を含むことを理解するであろう。

【0034】

「再標的化」又は「再指向」とは、野生型粒子が組織内のいくつかの細胞及び／又は生物体内のいくつかの器官を標的化し、組織又は器官の一般的な標的化が、異種アミノ酸の挿入によって低下又は無効にされ、組織内のより特定の細胞又は生物体内のより特定の器官の再標的化が、特定の細胞によって発現されるマーカーに結合する標的化リガンドで（例えば、標的化リガンドを介して）達成されるというシナリオを含み得る。こうした再標的化又は再指向はまた、野生型粒子が組織を標的化し、組織の標的化が、異種アミノ酸の挿入によって低下又は無効にされ、完全に異なる組織への再標的化が標的化リガンドで達成されるというシナリオも含み得る。

【0035】

「特異的結合ペア」、「結合ペア」、「タンパク質：タンパク質結合ペアなどは、２つのメンバー（例えば、第１のメンバー（例えば、第１のポリペプチド）及び第２の同族メンバー（例えば、第２のポリペプチド））と相互作用して結合を形成する（例えば、第１のメンバーのエピトープとエピトープを認識する抗体の第２のメンバーの抗原結合部分との間の非共有結合、例えば、イソペプチド結合を形成することができるタンパク質間の共有結合；互いを認識し、タンパク質トランススプライシングのプロセスを通じて、隣接するタンパク質のライゲーション及びそれら自身の除去を媒介する分割インテイン）。一部の実施形態では、「同族」という用語は、一緒に機能する構成要素を指す。エピトープとその同族抗体、特に検出可能な標識としての機能も果たし得るエピトープ（例えば、ｃ－ｍｙｃ）は、当分野で公知である。相互作用して共有結合性イソペプチド結合を形成できる特定のタンパク質：タンパク質結合ペアは、Ｖｅｇｇｉａｎｉ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３２：５０６に概説され、ペプチド：ペプチド結合ペア、例えば、ＳｐｙＴａｇ：ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ、ＳｐｙＴａｇ００２：ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２、ＳｐｙＴａｇ：ＫＴａｇ、ｉｓｏｐｅｐｔａｇ：ｐｉｌｉｎ－－Ｃ、ＳｎｏｏｐＴａｇ：ＳｎｏｏｐＣａｔｃｈｅｒなど、及びそのバリアント、例えば、ＳｐｙＴａｇ００３：ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００３が含まれる。概して、タンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバーとは概して、３０アミノ酸の長さ未満であり、第２の同族タンパク質と自発的に共有結合性イソペプチド結合を形成する、タンパク質：タンパク質結合ペアのメンバーを指し、この場合において第２の同族タンパク質は概してより大きいが、例えばＳｐｙＴａｇ：ＫＴａｇシステムなどのように３０アミノ酸の長さ未満の場合もある。

【0036】

「イソペプチド結合」という用語は、カルボキシル基又はカルボキサミド基とアミノ基との間のアミド結合を指し、ここで、アミノ基の少なくとも１つは、タンパク質主鎖に由来しないか、又は代替的に、タンパク質骨格の一部でないものと見られる。イソペプチド結合は、単一のタンパク質内に形成され得るか、又は２つのペプチド間若しくはペプチドとタンパク質との間で生じ得る。したがって、イソペプチド結合は、単一のタンパク質内の分子内に、又は分子間に、すなわち、２つのペプチド／タンパク質分子間に、例えば、２つのペプチドリンカー間に、形成され得る。典型的には、イソペプチド結合は、リシン残基と、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、若しくはグルタミン酸残基、又はタンパク質若しくはペプチド鎖の末端カルボキシル基との間に生じ得るか、又はタンパク質若しくはペプチド鎖のアルファ－アミノ末端と、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、若しくはグルタミン酸残基との間に生じ得る。イソペプチド結合に関与する対の各残基は、本明細書では反応性残基と呼ばれる。本発明の好ましい実施形態では、イソペプチド結合は、リシン残基とアスパラギン残基との間に、又はリシン残基とアスパラギン酸残基との間に形成され得る。特に、イソペプチド結合は、リシンの側鎖アミンと、アスパラギンのカルボキサミド基又はアスパラギン酸のカルボキシル基との間に生じ得る。

【0037】

ＳｐｙＴａｇ：ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒシステムは、米国特許第９，５４７，００３号及びＺａｖｅｒｉ ｅｔ ａｌ．（２０１２）ＰＮＡＳ １０９：Ｅ６９０－Ｅ６９７に記載されており（これらのそれぞれは、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）、システムは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓのフィブロネクチン結合タンパク質ＦｂａＢのＣｎａＢ２ドメインに由来している。Ｚａｋｅｒｉらは、ドメインを分割することによって、ＡＨＩＶＭＶＤＡＹＫＰＴＫ配列（配列番号２４３）を有する「ＳｐｙＴａｇ」ペプチドを取得し、これはその同族タンパク質である「ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ」（配列番号２４４に記載されるアミノ酸配列を有する１１２アミノ酸のポリペプチド）とアミド結合を形成する。（Ｚａｋｅｒｉ（２０１２）、上記）。ＣｎａＢ２ドメインに由来する更なる特異的結合ペアは、ＳｐｙＴａｇ：ＫＴａｇであり、これは、ＳｐｙＬｉｇａｓｅの存在下でイソペプチド結合を形成する。（Ｆｉｅｒｅｒ（２０１４）ＰＮＡＳ １１１：Ｅ１１７６－１１８１）。ＳｐｙＬｉｇａｓｅは、反応性リシンを含有するＳｐｙＣａｔｃｈｅｒからβ鎖を切除することによって操作されており、その結果、アミノ酸配列ＡＴＨＩＫＦＳＫＲＤ（配列番号２４５）を有する、タンパク質：タンパク質結合ペアの１０残基の第１のメンバーである、ＫＴａｇが得られた。ＳｐｙＴａｇ００２：ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２システムは、Ｋｅｅｂｌｅ ｅｔ ａｌ（２０１７）Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ ５６：１６５２１－２５に記載されている（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ＳｐｙＴａｇ００２は、配列番号２５５として記載されるアミノ酸配列ＶＰＴＩＶＭＶＤＡＹＫＲＹＫを有しており、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２に結合する。ＳｐｙＴａｇ００３は、配列番号２５９として記載されるアミノ酸配列ＲＧＶＰＨＩＶＭＶＤＡＹＫＲＹＫを有しており、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００３に結合する。

【0038】

ＳｎｏｏｐＴａｇ：ＳｎｏｏｐＣａｔｃｈｅｒシステムは、Ｖｅｇｇｉａｎｉ（２０１６）ＰＮＡＳ １１３：１２０２－０７に記載されている。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の接着因子である、ＲｒｇＡのＤ４ Ｉｇ様ドメインを分割して、ＳｎｏｏｐＴａｇ（残基７３４～７４５）及びＳｎｏｏｐＣａｔｃｈｅｒ（残基７４９～８６０）が形成された。ＳｎｏｏｐＴａｇ及びＳｎｏｏｐＣａｔｃｈｅｒのインキュベーションにより、相補的タンパク質間に特異的な自発的イソペプチド結合が生じる。Ｖｅｇｇｉａｎｉ（２０１６））、上記。

【0039】

ｉｓｏｐｅｐｔａｇ：ｐｉｌｉｎ－Ｃ特異的結合ペアは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ由来の主要ピリンタンパク質のＳｐｙ０１２８に由来した。（Ｚａｋｅｉｒ ａｎｄ Ｈｏｗａｒｔｈ（２０１０）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３２：４５２６－２７）。Ｉｓｏｐｅｐｔａｇは、配列番号２５４として記載されるアミノ酸配列ＴＤＫＤＭＴＩＴＦＴＮＫＫＤＡＥを有しており、ピリン－Ｃ（Ｓｐｙ０１２８の残基１８～２９９）に結合する。ＳｎｏｏｐＴａｇ及びＳｎｏｏｐＣａｔｃｈｅｒのインキュベーションにより、相補的タンパク質間に特異的な自発的イソペプチド結合が生じる。Ｚａｋｅｉｒ ａｎｄ Ｈｏｗａｒｔｈ（２０１０）、上記。

【0040】

「検出可能な標識」という用語は、例えば、非共有結合を介して例えば抗体パラトープなどの別のポリペプチド配列に高アフィニティで特異的に結合する特異的結合ペアのメンバーである、ポリペプチド配列を含む。例示的及び非限定的な検出可能な標識としては、ヘキサヒスチジンタグ、ＦＬＡＧタグ、ＳｔｒｅｐＩＩタグ、ストレプトアビジン結合ペプチド（ＳＢＰ）タグ、カルモジュリン結合ペプチド（ＣＢＰ）、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、Ｓ－タグ、ＨＡタグ、及びｃ－ｍｙｃからのｍｙｃタグ（配列番号２４６）が挙げられる。（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｍｅｔｈ．Ｃｈｅｍ．１－８において概説され、参照により本明細書に組み込まれる）。霊長類ＡＡＶに対する共通の検出可能な標識は、Ｂ１エピトープ（配列番号２４７）である。本明細書に記載されるいくつかのＡＡＶカプシドタンパク質は、自然にはＢ１エピトープを含まず、本明細書においてＢ１エピトープを含むように改変され得る。概して本明細書に記載されるＡＡＶカプシドタンパク質は、カプシドタンパク質の最後の１０アミノ酸内のＢ１エピトープに対して、実質的な相同性を有する配列を含み得る。したがって一部の実施形態では、本発明の非霊長類ＡＡＶカプシドタンパク質は、カプシドタンパク質の最後の１０アミノ酸以内に、１つ以上５つ未満の点変異を伴い改変されてもよく、それによって、ＡＡＶカプシドタンパク質は、Ｂ１エピトープを含むようになる。

【0041】

「標的細胞」という用語は、目的のヌクレオチドの発現が望ましい任意の細胞を含む。好ましくは、標的細胞は、以下に記載のように、細胞を標的化リガンドにより標的化することを可能にする受容体をそれらの表面上に呈する。

【0042】

「形質導入」又は「感染」などの用語は、ウイルス粒子による標的細胞核への核酸の導入を指す。形質導入などに関係する効率、例えば、「形質導入効率」という用語は、目的のヌクレオチドを含むウイルス粒子の組数とのインキュベーション後に、目的のヌクレオチドを発現する細胞の画分（例えば、パーセンテージ）を指す。形質導入効率を決定する公知の方法としては、蛍光レポーター遺伝子を用いて形質導入された細胞のフローサイトメトリー、目的のヌクレオチドの発現に関するＲＴ－ＰＣＲなどが挙げられる。

【0043】

概して、「参照」ウイルスカプシドタンパク質／カプシド／粒子は、効果を試験するための変更を除いて、被験ウイルスカプシドタンパク質／カプシド／粒子と同一である。例えば、特異的結合ペアの第１のメンバーを被験ウイルス粒子に挿入することの効果、例えば形質導入効率に対する効果を決定するために、被験ウイルス粒子の形質導入効率（適切な標的化リガンドの存在下又は非存在下）は、特異的結合ペアの第１のメンバーの存在を除き、あらゆる例（例えば、追加の点変異、目的のヌクレオチド、ウイルス粒子の数及び標的細胞など）において被験ウイルス粒子と同一である参照ウイルス粒子の形質導入効率と比較され得る（必要に応じて、適切な標的化リガンドの非存在下又は存在下で）。一部の実施形態では、参照ウイルスカプシドタンパク質は、タンパク質：タンパク質結合ペアの少なくとも第１のメンバーを含むように改変された第２のウイルスカプシドタンパク質とカプシドを形成することができ、ここで参照ウイルスカプシドタンパク質は、タンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバーを含まず、好ましくは参照ウイルスカプシドタンパク質と改変ウイルスカプシドタンパク質によって形成されるカプシドは、モザイクカプシドである。

【0044】

アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）
「ＡＡＶ」は、アデノ随伴ウイルスの略語であり、ウイルスそれ自体又はその誘導体を指すように使用され得る。ＡＡＶは、小さな非エンベロープ性の一本鎖ＤＮＡウイルスである。一般的に、野生型ＡＡＶゲノムは４．７ｋｂであり、２つの末端逆位配列（ＩＴＲ）と２つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）であるｒｅｐ及びｃａｐを特徴とする。野生型ｒｅｐのリーディングフレームは、分子量７８ｋＤ（Ｒｅｐ７８）、６８ｋＤ（Ｒｅｐ６８）、５２ｋＤ（Ｒｅｐ５２）、及び４０ｋＤ（Ｒｅｐ４０）の４つのタンパク質をコードする。Ｒｅｐ７８とＲｅｐ６８は、ｐ５プロモーターから転写され、Ｒｅｐ５２とＲｅｐ４０は、ｐ１９プロモーターから転写される。これらのタンパク質は、主に、ＡＡＶゲノムの転写及び複製を調節する機能を果たす。野生型のｃａｐリーディングフレームは、８３～８５ｋＤ（ＶＰ１）、７２～７３ｋＤ（ＶＰ２）、及び６１～６２ｋＤ（ＶＰ３）の分子量を有する３つの構造（カプシド）ウイルスタンパク質（ＶＰ）をコードする。ＡＡＶビリオン（カプシド）中の総タンパク質のうちの８０％超は、ＶＰ３から構成され、成熟ビリオンにおいて、ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３は、およそ１：１：１０の相対量で存在しているが、１：１：８の比率でも報告されている。Ｐａｄｒｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７９：５０４７－５８。

【0045】

ＡＡＶの様々な血清型のゲノム配列、並びに天然の末端逆位配列（ＩＴＲ）、Ｒｅｐタンパク質、及びカプシドサブユニットの配列が、当分野で公知である。かかる配列は、文献中、又は例えばＧｅｎＢａｎｋなどの公開データベース中に見出され得る。例えば、ＧｅｎＢａｎｋのアクセッション番号ＮＣ＿００２０７７（ＡＡＶ１）、ＡＦ０６３４９７（ＡＡＶ１）、ＮＣ００１４０１（ＡＡＶ－２）、ＡＦ０４３３０３（ＡＡＶ２）、ＮＣ＿００１７２９（ＡＡＶ３）、ＮＣ＿００１８２９（ＡＡＶ４）、Ｕ８９７９０（ＡＡＶ４）、ＮＣ＿００６１５２（ＡＡＶ５）、ＡＦ５１３８５１（ＡＡＶ７）、ＡＦ５１３８５２（ＡＡＶ８）、及びＮＣ＿００６２６１（ＡＡＶ８）を参照されたい。その開示内容は、ＡＡＶの核酸配列及びアミノ酸配列の教示に関し、参照により本明細書に組み込まれる。例えば、Ｓｒｉｖｉｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．（１９８３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ４５：５５５、Ｃｈｉｏｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７１：６８２３、Ｃｈｉｏｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３：１３０９、Ｂａｎｔｅｌ－Ｓｃｈａａｌ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３：９３９、Ｘｉａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７３：３９９４、Ｍｕｒａｍａｔｓｕ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２２１：２０８、Ｓｈａｄｅ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．５８：９２１、Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．（２００２） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：１１８５４、Ｍｏｒｉｓ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３３：３７５－３８３、米国特許出願公開第２０１７／０１３０２４５号、国際特許公開第００／２８０６１号、同第９９／６１６０１号、同第９８／１１２４４号、及び米国特許第６，１５６，３０３号もまた参照されたい。これらの各々は、参照によりその全体が組み込まれる。本明細書の表２は、様々な非霊長類ＡＡＶの配列を提供する。

【0046】

「ＡＡＶ」は、当該技術分野で周知の全てのサブタイプ、並びに天然に存在する形態及び改変された形態の両方を包含する。ＡＡＶには、霊長類ＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ１型（ＡＡＶ１）、霊長類ＡＡＶ２型（ＡＡＶ２）、霊長類ＡＡＶ３型（ＡＡＶ３Ｂ）、霊長類ＡＡＶ４型（ＡＡＶ４）、霊長類ＡＡＶ５型（ＡＡＶ５）、霊長類ＡＡＶ６型（ＡＡＶ６）、霊長類ＡＡＶ７型（ＡＡＶ７）、霊長類ＡＡＶ８型（ＡＡＶ８）、霊長類ＡＡＶ９型（ＡＡＶ９）、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶＤＪ、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＡＡＶ２Ｇ９、ＡＡＶ－ＬＫ０３、霊長類ＡＡＶ型ｒｈ１０（ＡＡＶ ｒｈ１０）、ＡＡＶ型ｈ１０（ＡＡＶ ｈ１０）、ＡＡＶ型ｈｕ１１（ＡＡＶ ｈｕ１１）、ＡＡＶ ｒｈ３２．３３型（ＡＡＶ ｒｈ３２．３３）、ＡＡＶレトロ（ＡＡＶレトロ）、ＡＡＶ ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ ＰＨＰ．ｅＢ、ＡＡＶ ＰＨＰ．Ｓ、ＡＡＶ２／８など、非霊長類動物ＡＡＶ（例えば、鳥類ＡＡＶ（ＡＡＡＶ））、及び他の非霊長類動物ＡＡＶ、例えば哺乳動物ＡＡＶ（例えば、コウモリＡＡＶ、アシカＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、及びヒツジＡＡＶなど）、有鱗目（ｓｑｕａｍａｔｅ）ＡＡＶ（例えば、ヘビＡＡＶ、フトアゴヒゲトカゲＡＡＶ）などが含まれる。「霊長類ＡＡＶ」は、一般に霊長類から単離されたＡＡＶを指す。同様に、「非霊長類動物ＡＡＶ」とは、非霊長類動物から単離されたＡＡＶを指す。

【0047】

本明細書で使用される場合、遺伝子（例えば、ｒｅｐ、ｃａｐなど）、カプシドタンパク質（例えば、ＶＰ１カプシドタンパク質、ＶＰ２カプシドタンパク質、ＶＰ３カプシドタンパク質など）、指定されるＡＡＶのカプシドタンパク質の領域（例えば、ＰＬＡ_２領域、ＶＰ１－ｕ領域、ＶＰ１／ＶＰ２共通領域、ＶＰ３領域）、ヌクレオチド配列（例えば、ＩＴＲ配列）、例えばＡＡＶなどのｃａｐ遺伝子又はカプシドタンパク質に関して、「［指定される］ＡＡＶの」は、それぞれ指定されるＡＡＶに関して本明細書に記載される核酸配列又はアミノ酸配列を含む遺伝子又はポリペプチドに加えて、遺伝子又はポリペプチドのバリアントも包含し、バリアントは、１つ以上の生物学的機能を保持するために必要とされる最小の数のヌクレオチド又はアミノ酸を含むバリアントを含む。本明細書で使用される場合、バリアント遺伝子又はバリアントポリペプチドは、指定されるＡＡＶの遺伝子又はポリペプチドに関して本明細書に記載される核酸配列又はアミノ酸配列とは異なる核酸配列又はアミノ酸配列を含み、この場合においてその差異は概して、遺伝子又はポリペプチドの少なくとも１つの生物学的機能は変化させず、及び／又は遺伝子又はポリペプチドの系統発生学的な特徴は変化させず、例えばその差異は、遺伝子コードの縮重、孤立性の変動、配列の長さなどが原因であってもよい。例えば、本明細書で使用されるｒｅｐ遺伝子及びｃａｐ遺伝子は、遺伝子がそれぞれ１つ以上のＲｅｐタンパク質及びＣａｐタンパク質をコードし得るという点で野生型遺伝子とは異なるｒｅｐ遺伝子及びｃａｐ遺伝子を包含し得る。一部の実施形態では、Ｒｅｐ遺伝子は、少なくともＲｅｐ７８及び／又はＲｅｐ６８をコードする。一部の実施形態では、ｃａｐ遺伝子は、１つ以上の選択的開始コドン、又は１つ以上の選択的開始コドン間の配列が除去され、それによりｃａｐ遺伝子が、ただ１つのＣａｐタンパク質のみをコードするという点で野生型とは異なり得、例えばＶＰ２及び／又はＶＰ３の開始コドンが除去され、又は置換されて、それによりｃａｐ遺伝子は、機能性ＶＰ１カプシドタンパク質をコードするが、ＶＰ２カプシドタンパク質又はＶＰ３カプシドタンパク質はコードしない。したがって本明細書で使用される場合、ｒｅｐ遺伝子は、機能性Ｒｅｐタンパク質をコードする任意の配列を包含する。ｃａｐ遺伝子は、少なくとも１つの機能性ｃａｐ遺伝子をコードする任意の配列を包含する。

【0048】

野生型ｃａｐ遺伝子は、ｒｅｐ ＯＲＦ中に存在するｐ４０プロモーターの制御下で、ｃａｐ遺伝子の１つのオープンリーディングフレームから３つ全てのＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３カプシドタンパク質を発現することが知られている。「カプシドタンパク質」、「Ｃａｐタンパク質」などの用語は、ウイルスのカプシドの部分であるタンパク質を含む。アデノ随伴ウイルスについては、カプシドタンパク質は一般的に、ＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３と呼称され、それらは１つのｃａｐ遺伝子によりコードされ得る。ＡＡＶに関しては、３つのＡＡＶカプシドタンパク質は、自然にはｃａｐ ＯＲＦの選択的翻訳開始コドンを利用して重複した様式で産生されるが、３つ全てのタンパク質は共通の停止コドンを使用する。野生型ｃａｐ遺伝子のＯＲＦは、５’から３’に向かって３つの選択的開始コドン、すなわち「ＶＰ１開始コドン」、「ＶＰ２開始コドン」、及び「ＶＰ３開始コドン」、並びに１つの「共通停止コドン」をコードする。最大のウイルスタンパク質であるＶＰ１は一般的に、ＶＰ１開始コドンから「共通停止コドン」までコードされる。ＶＰ２は一般的に、ＶＰ２開始コドンから共通停止コドンまでコードされる。ＶＰ３は一般的に、ＶＰ３開始コドンから共通停止コドンまでコードされる。したがってＶＰ１は、ＶＰ２又はＶＰ３と共有しないＮ末端配列を含んでおり、これをＶＰ１固有領域（ＶＰ１－ｕ）と呼ぶ。ＶＰ１－ｕ領域は一般的に、ＶＰ１開始コドンから始まり、「ＶＰ２開始コドン」までの野生型ｃａｐ遺伝子の配列によりコードされる。ＶＰ１－ｕはホスホリパーゼＡ２ドメイン（ＰＬＡ_２）を含み、これは感染並びに核局在シグナルに重要であり得、シグナルは、ウイルスが脱殻及びゲノム放出を行うための核への標的化を補助し得る。ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３カプシドタンパク質は、ＶＰ３全体を構成するものと同じＣ末端配列を共有し、これを本明細書においてＶＰ３領域と呼称する場合もある。ＶＰ３領域は、ＶＰ３開始コドンから共通停止コドンまでコードされる。ＶＰ２は、ＶＰ１と共有する追加の約６０アミノ酸を有する。この領域は、ＶＰ１／ＶＰ２共通領域と呼ばれている。

【0049】

一部の実施形態では、本発明のＣａｐタンパク質のうちの１つ以上は、１つ以上のＯＲＦを有する１つ以上のｃａｐ遺伝子によりコードされ得る。一部の実施形態では、本発明のＶＰタンパク質は、パッケージング細胞における発現用の少なくとも１つの発現制御配列に動作可能に連結された別個のヌクレオチド配列を使用することによって、ＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３の任意の組み合わせをコードするヌクレオチド配列を含む複数のＯＲＦから発現されてもよく、各々が、本発明のＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質のうちの１つ以上を産生する。一部の実施形態では、本発明のＶＰカプシドタンパク質は、ウイルス複製細胞における発現用の１つの発現制御配列に動作可能に連結された別個のヌクレオチド配列を使用することによって、ＶＰ１、ＶＰ２又はＶＰ３のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列を含むＯＲＦから個々に発現されてもよく、各々が、ＶＰ１、ＶＰ２又はＶＰ３カプシドタンパク質のうちの１つのみを産生する。別の実施形態では、ＶＰタンパク質は、ウイルス複製細胞における発現用の少なくとも１つの発現制御配列に動作可能に連結されたＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３カプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む１つのＯＲＦから発現されてもよく、各々が、ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３カプシドタンパク質を産生する。したがって、本明細書に提供されているアミノ酸位置は、参照されるＡＡＶのＶＰ１カプシドタンパク質に関連させて提供されてもよく、当業者であれば、ＡＡＶのＶＰ２及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質内の同じアミノ酸の位置、及び異なるＡＡＶ間での対応するアミノ酸位置をそれぞれ容易に決定することが可能であろう。

【0050】

「末端逆位配列」又は「ＩＴＲ」という文言は、効率的な複製に必要とされるアデノ随伴ウイルスのゲノム中の対称性の核酸配列を含む。ＩＴＲ配列は、ＡＡＶ ＤＮＡゲノムの各末端に位置する。ＩＴＲは、ウイルスＤＮＡ合成の複製起点として機能し、ＡＡＶ粒子へのパッケージングなど、ＡＡＶ粒子の生成に必須のシス構成要素である。

【0051】

ＡＡＶ ＩＴＲは、複製タンパク質のＲｅｐ７８又はＲｅｐ６８の認識部位を含む。ＩＴＲのＡ”Ｄ”領域は、ＤＮＡニック部位を含み、ここでＤＮＡ複製が開始されて、核酸複製工程に方向性を提供する。哺乳動物細胞におけるＡＡＶ複製は、典型的には２つのＩＴＲ配列を含む。

【0052】

１つのＩＴＲは、ＩＴＲパリンドロームの両側の「Ａ」領域と２つの対称性のＤ領域の両方の鎖上で、Ｒｅｐ結合部位を用いて操作されてもよい。二本鎖の環状ＤＮＡ鋳型上で、かかる操作が行われた構築物は、Ｒｅｐ７８又はＲｅｐ６８が開始した核酸複製を、両方向に進行させることができる。１つのＩＴＲは、環状粒子のＡＡＶ複製に十分である。本発明のＡＡＶウイルス粒子を作製する方法において、ｒｅｐコード配列は、Ｒｅｐタンパク質又はＲｅｐタンパク質均等物をコードし、それらタンパク質は、トランスファープラスミド上に含まれるＩＴＲに結合することができる。

【0053】

本発明のＣａｐタンパク質は、パッケージング細胞によって適切なＲｅｐタンパク質とともに発現された場合、目的のヌクレオチドと偶数個の２つ以上のＩＴＲ配列とを含むトランスファープラスミドをカプシド封入し（ｅｎｃａｐｓｉｄａｔｅ）得る。一部の実施形態では、トランスファープラスミドは、１つのＩＴＲ配列を含む。一部の実施形態では、トランスファープラスミドは、２つのＩＴＲ配列を含む。

【0054】

Ｒｅｐ７８及び／又はＲｅｐ６８のいずれかが、ＩＴＲヘアピン配列上の固有で公知の部位に結合し、ＡＡＶゲノムの末端でヘアピン構造を破壊及びほぐすように機能する。それによりウイルス複製細胞の複製機構へのアクセスが提供される。公知のように、Ｒｅｐタンパク質は、Ｒｅｐ７８、Ｒｅｐ６８、Ｒｅｐ５２及び／又はＲｅｐ４０の任意の組み合わせをコードするヌクレオチド配列を含む複数のＯＲＦから、ウイルス複製細胞における発現用の少なくとも１つの発現制御配列に動作可能に連結された別個のヌクレオチド配列を使用することによって、発現されてもよく、各々が、Ｒｅｐ７８、Ｒｅｐ６８、Ｒｅｐ５２及び／又はＲｅｐ４０ Ｒｅｐタンパク質のうちの１つ以上を産生する。あるいはＲｅｐタンパク質は、パッケージング細胞における発現用の１つの発現制御配列に動作可能に連結された別個のヌクレオチド配列を使用することによって、Ｒｅｐ７８、Ｒｅｐ６８、Ｒｅｐ５２又はＲｅｐ４０のいずれか１つをコードするヌクレオチド配列を含むＯＲＦから個々に発現されてもよく、各々が、ただ１つのＲｅｐ７８、Ｒｅｐ６８、Ｒｅｐ５２又はＲｅｐ４０ Ｒｅｐタンパク質のみを産生する。別の実施形態では、Ｒｅｐタンパク質は、各々が、Ｒｅｐ７８及びＲｅｐ５２ Ｒｅｐタンパク質を産生するウイルス複製細胞における発現のための、少なくとも１つの発現制御配列に動作可能に連結されたＲｅｐ７８及びＲｅｐ５２ Ｒｅｐタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む１つのＯＲＦから発現されてもよい。

【0055】

本発明の例えばウイルス粒子などのＡＡＶビリオンを作製する方法において、本発明のｒｅｐコード配列及びｃａｐ遺伝子は、単一パッケージングプラスミドで提供されてもよい。しかしながら、当業者であれば、かかる条件は必須ではないことを認識するであろう。かかるウイルス粒子は、ゲノムを含んでも含まなくてもよい。

【0056】

「キメラＡＡＶカプシドタンパク質」は、２つ以上の異なるＡＡＶからのアミノ酸配列、例えば部分を含み、並びにＡＡＶウイルスカプシド／ウイルス粒子を形成する能力を有する、及び／又は形成する、ＡＡＶカプシドタンパク質を含む。キメラＡＡＶカプシドタンパク質は、例えば複数の、例えば少なくとも２つの核酸配列を含むキメラヌクレオチドなどのキメラＡＡＶカプシド遺伝子によりコードされてもよく、複数のうちの各々は、別個のＡＡＶのカプシドタンパク質をコードするカプシド遺伝子の部分と同一であり、それら複数が一緒に機能性キメラＡＡＶカプシドタンパク質をコードする。特定のＡＡＶに対するキメラカプシドタンパク質の関連付けは、カプシドタンパク質が、ＡＡＶのカプシドタンパク質に由来する１つ以上の部分、及び異なるＡＡＶのカプシドタンパク質に由来する１つ以上の部分を含むことを示している。例えば、キメラＡＡＶ２カプシドタンパク質は、ＡＡＶ２のＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質の１つ以上の部分、並びに異なるＡＡＶのＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質の１つ以上の部分を含む、カプシドタンパク質を含む。

【0057】

「部分」という用語は、少なくとも５つのアミノ酸又は少なくとも１５個のヌクレオチドであるが、全長のポリペプチド又は核酸分子よりも小さく、部分が由来する配列に対し、１００％の同一性を有することを指す。Ｐｅｎｚｅｓ（２０１５）Ｊ．Ｇｅｎｅｒａｌ Ｖｉｒｏｌ ２７６９を参照されたい。「部分」は、部分が由来するポリペプチド又は核酸分子が、例えば非霊長類動物ＡＡＶ又は遠縁のＡＡＶなど、「［指定される］ＡＡＶの」ものであること、又は特定のＡＡＶに対し「有意な同一性」を有すること、を判定するのに十分なアミノ酸又はヌクレオチドの任意の連続セグメントを包含する。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも５アミノ酸又は１５ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも１０アミノ酸又は３０ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも１５アミノ酸又は４５ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも２０アミノ酸又は６０ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも２５アミノ酸又は７５ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも３０アミノ酸又は９０ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも３５アミノ酸又は１０５ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも４０アミノ酸又は１２０ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも４５アミノ酸又は１３５ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも５０アミノ酸又は１５０ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも６０アミノ酸又は１８０ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも７０アミノ酸又は２１０ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも８０アミノ酸又は２４０ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも９０アミノ酸又は２７０ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、部分は、指定されるＡＡＶと関連付けられた配列に対し、１００％の同一性を有する少なくとも１００アミノ酸又は３００ヌクレオチドを含む。

【0058】

改変されたウイルスカプシドタンパク質、ウイルス粒子、ウイルス核酸
一部の実施形態では、Ｃａｐタンパク質、例えば本明細書に記載されるＶＰ１カプシドタンパク質、本明細書に記載されるＶＰ２カプシドタンパク質、及び／又は本明細書に記載されるＶＰ３カプシドタンパク質は、例えば、標的化リガンドの挿入、化学的修飾、結合ペアの第１のメンバー、検出可能な標識、点変異などのいずれか１つ又は組み合わせを含むように改変される。

【0059】

概して、指定されるＡＡＶの遺伝子若しくはポリペプチド又はそのバリアントの改変は、指定されるＡＡＶに関して本明細書に記載される核酸配列又はアミノ酸配列とは異なる核酸配列又はアミノ酸配列を生じさせ、この場合において改変は、１つ以上の生物学的機能を変化させ、与え、又は除去するが、ＡＡＶ遺伝子又はＡＡＶポリペプチドとしての遺伝子又はポリペプチドの系統発生学的な特徴は変化させない。改変は、第１のＡＡＶ血清型の配列を、キメラを作製するための第２のＡＡＶ血清型の配列と置換すること、化学改変、結合ペアの第１のメンバーの挿入、及び／又は点変異などのうちのいずれか１つ又は組み合わせを含んでもよく、それにより、カプシドタンパク質の天然指向性が低減又は無効化され、カプシドタンパク質の指向性がより容易に再指向され、及び／又はそれにより、カプシドタンパク質が検出可能な標識を含む。本明細書に記載される改変は、一般に、例えばＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶＤＪ、Ａｎｃ８０Ｌ６５、ＡＡＶ２Ｇ９、ＡＡＶ－ＬＫ０３、かかる血清型に基づくビリオン、現在使用されているＡＡＶ遺伝子療法モダリティからのビリオン、又はそれらの組み合わせなどの血清型の感染など、別のＡＡＶの感染の過程で産生された、一般集団に存在する既存の抗体による改変カプシドの認識を変化させず、好ましくは、低認識を無認識へと低下させる改変が含まれる。

【0060】

標的化リガンド
本明細書に記載される改変は、標的化リガンドの、改変カプシドタンパク質及び／又は改変カプシドタンパク質を含むカプシドへの会合（例えば、呈示、動作可能な連結、結合）に関連し得る。一般に、本明細書に記載される標的化リガンドは、哺乳動物筋細胞によって発現される表面タンパク質、例えば哺乳動物筋細胞の表面上で発現されるタンパク質、例えば哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質に結合する。一部の実施形態では、改変カプシドタンパク質及び／又は改変カプシドは、哺乳動物ＣＡＣＮＧ１、例えば、ヒトＣＡＣＮＧ１に結合する標的化リガンドを含む。
［１］表１は、本明細書に記載されるＡＡＶカプシドを再指向するために使用され得る非限定的かつ例示的な抗ヒトＣＡＣＮＧ１モノクローナル抗体（ｍＡｂ ＩＤ）の各結合部分（例えば、重鎖可変ドメイン（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変ドメイン（ＬＣＶＲ）、並びにＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）の配列番号の概要を提供する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＡＡＶカプシドは、ヒトＣＡＣＮＧ１に結合する標的化リガンドを含み、標的化リガンドは、重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、及び／又は重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列とそれぞれ少なくとも９０％同一であるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列のセット、及び／又は配列番号１～２４０のうちのいずれか１つに記載のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のセットを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＡＡＶカプシドは、ヒトＣＡＣＮＧ１に結合する標的化リガンドを含み、標的化リガンドは、重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、及び／又は重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列とそれぞれ少なくとも９５％同一であるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列のセット、及び／又は配列番号１～２４０のうちのいずれか１つに記載のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のセットを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＡＡＶカプシドは、ヒトＣＡＣＮＧ１に結合する標的化リガンドを含み、標的化リガンドは、重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、及び／又は重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一であるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列のセット、及び／又は配列番号１～２４０のうちのいずれか１つに記載のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のセットを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＡＡＶカプシドは、ヒトＣＡＣＮＧ１に結合する標的化リガンドを含み、標的化リガンドは、重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、及び／又は重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列のセット、及び／又は配列番号１～２４０のうちのいずれか１つに記載のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のセットを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＡＡＶカプシドは、ヒトＣＡＣＮＧ１に結合する標的化リガンドを含み、標的化リガンドは、重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、及び／又は重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列と９９％同一であるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列のセット、及び／又は配列番号１～２４０のうちのいずれか１つに記載のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のセットを含む。本明細書では、表１に列挙される例示的な抗ｈＣＡＣＮＧ１抗体のいずれかにより定義されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペア内に含有される６個のＣＤＲのセット（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む、抗体又はその抗原結合断片が提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載される標的化リガンドは、配列番号２／１０、配列番号１８／２６、配列番号３４／４２、配列番号５０／５８、配列番号６６／７４、配列番号８２／９０、配列番号９８／１０６、配列番号１１４／１２２、配列番号１３０／１３８、配列番号１４６／１５４、配列番号１６２／１７０、及び配列番号１７８／１８６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペア内に含有されるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される標的化リガンドは、配列番号２／１０、配列番号１８／２６、配列番号３４／４２、配列番号５０／５８、配列番号６６／７４、配列番号８２／９０、配列番号９８／１０６、配列番号１１４／１２２、配列番号１３０／１３８、配列番号１４６／１５４、配列番号１６２／１７０、及び配列番号１７８／１８６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。

【表1-1】

【表1-2】

【0061】

３１９２９／１０７２８（野生型ｈＩｇＧ１）／１４６４７（ｈＩｇＧ１ Ｎ１８０Ｑ）
ＨＣＶＲ核酸配列（配列番号１）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＧＴＣＴＧＧＡＡＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＡＡＡＴＴＡＴＧＧＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＣＡＧＴＴＡＴＧＴＧＧＴＡＴＧＡＴＧＧＡＡＧＴＡＡＴＡＡＧＴＡＣＴＡＴＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＧＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＧＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＧＧＧＧＣＡＣＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＨＣＶＲアミノ酸配列（配列番号２）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＩＴＦＲＮＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＧＤＮＳＫＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＴＩＲＴＡＡＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＣＤＲ１核酸配列（配列番号３）
ＧＧＡ ＡＴＣ ＡＣＣ ＴＴＣ ＡＧＡ ＡＡＴ ＴＡＴ ＧＧＣ
ＨＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号４）
Ｇ Ｉ Ｔ Ｆ Ｒ Ｎ Ｙ Ｇ
ＨＣＤＲ２核酸配列（配列番号５）
ＡＴＧ ＴＧＧ ＴＡＴ ＧＡＴ ＧＧＡ ＡＧＴ ＡＡＴ ＡＡＧ
ＨＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号６）
Ｍ Ｗ Ｙ Ｄ Ｇ Ｓ Ｎ Ｋ
ＨＣＤＲ３核酸配列（配列番号７）
ＧＣＧ ＡＧＡ ＡＧＧ ＧＧＣ ＡＣＴ ＡＴＡ ＡＧＡ ＡＣＡ ＧＣＴ ＧＣＣ ＣＣＴ ＴＴＴ ＧＡＣ ＴＡＣ
ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号８）
Ａ Ｒ Ｒ Ｇ Ｔ Ｉ Ｒ Ｔ Ａ Ａ Ｐ Ｆ Ｄ Ｙ
ＬＣＶＲ核酸配列（配列番号９）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＧＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＡＧＴＴＡＣＡＧＴＡＣＣＣＣＴＣＣＧＡＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＡ
ＬＣＶＲアミノ酸配列（配列番号１０）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ
ＬＣＤＲ１核酸配列（配列番号１１）
ＣＡＧ ＡＧＣ ＡＴＴ ＡＧＣ ＡＧＣ ＴＡＴ
ＬＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号１２）
Ｑ Ｓ Ｉ Ｓ Ｓ Ｙ
ＬＣＤＲ２核酸配列（配列番号１３）
ＧＣＴ ＧＣＡ ＴＣＣ
ＬＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号１４）
Ａ Ａ Ｓ
ＬＣＤＲ３核酸配列（配列番号１５）
ＣＡＡ ＣＡＧ ＡＧＴ ＴＡＣ ＡＧＴ ＡＣＣ ＣＣＴ ＣＣＧ ＡＴＣ ＡＣＣ
ＬＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１６）
Ｑ Ｑ Ｓ Ｙ Ｓ Ｔ Ｐ Ｐ Ｉ Ｔ
ＨＣ核酸配列（配列番号１９３）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＧＴＣＴＧＧＡＡＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＡＡＡＴＴＡＴＧＧＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＣＡＧＴＴＡＴＧＴＧＧＴＡＴＧＡＴＧＧＡＡＧＴＡＡＴＡＡＧＴＡＣＴＡＴＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＴＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＧＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＧＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＧＧＧＧＣＡＣＴＡＴＡＡＧＡＡＣＡＧＣＴＧＣＣＣＣＴＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ
ＨＣアミノ酸配列（配列番号１９４）

【化1】

【化2】

＊下線付き太字のアスパラギン（Ｎ）は、トランスグルタミナーゼによるコンジュゲーションのためにグルタミン（Ｑ）に変異され得る。例えば、配列番号２６９を参照されたい。
ＬＣ核酸配列（配列番号１９５）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＧＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＡＧＴＴＡＣＡＧＴＡＣＣＣＣＴＣＣＧＡＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ
ＬＣアミノ酸配列（配列番号１９６）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
１０７１５（野生型ｈＩｇＧ１）／１４５７０（ＩｇＧ１ Ｎ１８０Ｑ）：
ＨＣＶＲ核酸配列（配列番号１７）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＡＧＴＧＧＧＧＣＧＣＡＧＧＡＣＴＧＴＴＧＡＡＧＣＣＴＴＣＧＧＣＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＧＣＡＣＣＴＧＣＧＣＴＧＴＣＴＡＴＧＧＴＧＧＧＴＣＣＴＴＣＡＧＴＧＧＴＴＡＣＴＡＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＧＴＣＣＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＧＧＡＡＡＴＣＣＴＴＣＡＴＡＧＴＧＧＡＡＧＡＡＣＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣＧＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＧＴＣＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＡＴＣＡＧＴＡＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＣＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＧＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＧＣＴＣＧＴＣＡＣＧＧＣＴＧＧＴＴＣＧＡＣＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＨＣＶＲアミノ酸配列（配列番号１８）
ＱＶＱＬＱＱＷＧＡＧＬＬＫＰＳＡＴＬＳＲＴＣＡＶＹＧＧＳＦＳＧＹＹＷＮＷＩＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＬＨＳＧＲＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＴＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＧＲＩＡＡＲＨＧＷＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＣＤＲ１核酸配列（配列番号１９）
ＧＧＴ ＧＧＧ ＴＣＣ ＴＴＣ ＡＧＴ ＧＧＴ ＴＡＣ ＴＡＣ
ＨＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号２０）
Ｇ Ｇ Ｓ Ｆ Ｓ Ｇ Ｙ Ｙ
ＨＣＤＲ２核酸配列（配列番号２１）
ＡＴＣ ＣＴＴ ＣＡＴ ＡＧＴ ＧＧＡ ＡＧＡ ＡＣＣ
ＨＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号２２）
Ｉ Ｌ Ｈ Ｓ Ｇ Ｒ Ｔ
ＨＣＤＲ３核酸配列（配列番号２３）
ＧＣＧ ＧＧＡ ＡＧＧ ＡＴＡ ＧＣＡ ＧＣＴ ＣＧＴ ＣＡＣ ＧＧＣ ＴＧＧ ＴＴＣ ＧＡＣ ＣＣＣ
ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号２４）
Ａ Ｇ Ｒ Ｉ Ａ Ａ Ｒ Ｈ Ｇ Ｗ Ｆ Ｄ Ｐ
ＬＣＶＲ核酸配列（配列番号２５）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＴＣＣＧＴＧＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＴＡＴＴＣＧＣＡＡＧＴＧＧＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＡＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＴＴＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＣＴＡＡＣＡＧＴＴＴＣＣＣＧＴＴＣＡＣＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
ＬＣＶＲアミノ酸配列（配列番号２６）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＲＫＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＡＮＳＦＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
ＬＣＤＲ１核酸配列（配列番号２７）
ＣＡＧ ＧＡＴ ＡＴＴ ＣＧＣ ＡＡＧ ＴＧＧ
ＬＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号２８）
Ｑ Ｄ Ｉ Ｒ Ｋ Ｗ
ＬＣＤＲ２核酸配列（配列番号２９）
ＧＣＴ ＡＣＡ ＴＣＣ
ＬＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号３０）
Ａ Ｔ Ｓ
ＬＣＤＲ３核酸配列（配列番号３１）
ＣＡＡ ＣＡＧ ＧＣＴ ＡＡＣ ＡＧＴ ＴＴＣ ＣＣＧ ＴＴＣ ＡＣＴ
ＬＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号３２）
Ｑ Ｑ Ａ Ｎ Ｓ Ｆ Ｐ Ｆ Ｔ
ＨＣ核酸配列（配列番号１９７）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＡＧＴＧＧＧＧＣＧＣＡＧＧＡＣＴＧＴＴＧＡＡＧＣＣＴＴＣＧＧＣＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＧＣＡＣＣＴＧＣＧＣＴＧＴＣＴＡＴＧＧＴＧＧＧＴＣＣＴＴＣＡＧＴＧＧＴＴＡＣＴＡＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＧＴＣＣＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＴＧＧＧＧＡＡＡＴＣＣＴＴＣＡＴＡＧＴＧＧＡＡＧＡＡＣＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣＧＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＧＴＣＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＡＴＣＡＧＴＡＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＣＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＧＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＧＣＴＣＧＴＣＡＣＧＧＣＴＧＧＴＴＣＧＡＣＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ
ＨＣアミノ酸配列（配列番号１９８）

【化3】

＊下線付き太字のアスパラギン（Ｎ）は、トランスグルタミナーゼによるコンジュゲーションのためにグルタミン（Ｑ）に変異され得る。例えば、配列番号２６９を参照されたい。
ＬＣ核酸配列（配列番号１９９）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＴＣＣＧＴＧＴＣＴＡＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＴＡＴＴＣＧＣＡＡＧＴＧＧＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＡＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＴＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＴＴＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＣＴＡＡＣＡＧＴＴＴＣＣＣＧＴＴＣＡＣＴＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ
ＬＣアミノ酸配列（配列番号２００）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＴＳＶＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＲＫＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＡＮＳＦＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
１０７１７（野生型ｈＩｇＧ１）／１４５７２（ｈＩｇＧ１ Ｎ１８０Ｑ）
ＨＣＶＲ核酸配列（配列番号３３）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＧＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＣＡＴＡＴＧＧＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＣＡＧＴＴＡＴＴＴＧＧＣＡＴＧＡＴＧＧＡＡＧＴＧＡＴＡＡＡＴＡＴＴＡＴＧＴＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＴＣＣＡＴＣＧＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＴＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＡＧＴＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＧＴＡＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＧＧＧＧＴＡＴＡＣＧＴＧＧＡＡＣＣＧＴＴＴＴＴＧＡＣＣＡＣＴＧＧＧＧＣＣＴＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＨＣＶＲアミノ酸配列（配列番号３４）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＴＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＨＤＧＳＤＫＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＳＩＡＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＶＥＤＴＧＩＹＹＣＡＲＲＧＩＲＧＴＶＦＤＨＷＧＬＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＣＤＲ１核酸配列（配列番号３５）
ＧＧＡ ＴＴＣ ＡＣＣ ＴＴＣ ＡＧＴ ＡＣＡ ＴＡＴ ＧＧＣ
ＨＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号３６）
Ｇ Ｆ Ｔ Ｆ Ｓ Ｔ Ｙ Ｇ
ＨＣＤＲ２核酸配列（配列番号３７）
ＡＴＴ ＴＧＧ ＣＡＴ ＧＡＴ ＧＧＡ ＡＧＴ ＧＡＴ ＡＡＡ
ＨＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号３８）
Ｉ Ｗ Ｈ Ｄ Ｇ Ｓ Ｄ Ｋ
ＨＣＤＲ３核酸配列（配列番号３９）
ＧＣＧ ＡＧＡ ＡＧＧ ＧＧＴ ＡＴＡ ＣＧＴ ＧＧＡ ＡＣＣ ＧＴＴ ＴＴＴ ＧＡＣ ＣＡＣ
ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号４０）
Ａ Ｒ Ｒ Ｇ Ｉ Ｒ Ｇ Ｔ Ｖ Ｆ Ｄ Ｈ
ＬＣＶＲ核酸配列（配列番号４１）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＡＴＴＡＧＴＡＡＣＡＡＧＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＣＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＡＧＧＣＧＴＣＴＡＡＴＴＴＡＧＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＴＡＴＡＡＴＡＧＴＴＡＴＴＣＧＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
ＬＣＶＲアミノ酸配列（配列番号４２）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＬＴＣＲＡＳＱＳＩＳＮＫＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＫＡＳＮＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＳＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
ＬＣＤＲ１核酸配列（配列番号４３）
ＣＡＧ ＡＧＴ ＡＴＴ ＡＧＴ ＡＡＣ ＡＡＧ
ＬＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号４４）
Ｑ Ｓ Ｉ Ｓ Ｎ Ｋ
ＬＣＤＲ２核酸配列（配列番号４５）
ＡＡＧ ＧＣＧ ＴＣＴ
ＬＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号４６）
Ｋ Ａ Ｓ
ＬＣＤＲ３核酸配列（配列番号４７）
ＣＡＡ ＣＡＧ ＴＡＴ ＡＡＴ ＡＧＴ ＴＡＴ ＴＣＧ ＴＧＧ ＡＣＧ
ＬＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号４８）
Ｑ Ｑ Ｙ Ｎ Ｓ Ｙ Ｓ Ｗ Ｔ
ＨＣ核酸配列（配列番号２０１）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＧＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＣＡＴＡＴＧＧＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＣＡＧＴＴＡＴＴＴＧＧＣＡＴＧＡＴＧＧＡＡＧＴＧＡＴＡＡＡＴＡＴＴＡＴＧＴＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＴＣＣＡＴＣＧＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＴＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＡＧＴＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＧＴＡＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＧＧＧＧＴＡＴＡＣＧＴＧＧＡＡＣＣＧＴＴＴＴＴＧＡＣＣＡＣＴＧＧＧＧＣＣＴＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ
ＨＣアミノ酸配列（配列番号２０２）

【化4】

＊下線付き太字のアスパラギン（Ｎ）は、トランスグルタミナーゼによるコンジュゲーションのためにグルタミン（Ｑ）に変異され得る。例えば、配列番号２６９を参照されたい。
ＬＣ核酸配列（配列番号２０３）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＡＴＴＡＧＴＡＡＣＡＡＧＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＣＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＡＧＧＣＧＴＣＴＡＡＴＴＴＡＧＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＴＡＴＡＡＴＡＧＴＴＡＴＴＣＧＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ
ＬＣアミノ酸配列（配列番号２０４）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＬＴＣＲＡＳＱＳＩＳＮＫＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＫＡＳＮＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＳＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
１０７１６（野生型ｈＩｇＧ１）／１４５７１（ｈＩｇＧ１ Ｎ１８０Ｑ）
ＨＣＶＲ核酸配列（配列番号４９）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＧＧＧＣＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＴＣＧＧＡＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＴＧＡＣＴＣＣＡＴＣＡＡＴＡＡＴＴＡＣＴＡＣＴＧＧＡＣＣＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＣＣＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＴＴＡＴＡＴＣＴＡＴＴＡＣＡＧＴＧＧＧＡＧＣＧＣＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＧＴＣＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＡＴＣＡＧＴＡＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＡＧＣＴＡＡＡＴＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＣＴＧＣＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＧＣＧＧＴＣＡＡＧＴＡＣＴＴＣＣＧＧＣＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＨＣＶＲアミノ酸配列（配列番号５０）
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＤＳＩＮＮＹＹＷＴＷＬＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＹＹＳＧＳＡＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＮＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＡＶＫＹＦＲＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＣＤＲ１核酸配列（配列番号５１）
ＧＧＴ ＧＡＣ ＴＣＣ ＡＴＣ ＡＡＴ ＡＡＴ ＴＡＣ ＴＡＣ
ＨＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号５２）
Ｇ Ｄ Ｓ Ｉ Ｎ Ｎ Ｙ Ｙ
ＨＣＤＲ２核酸配列（配列番号５３）
ＡＴＣ ＴＡＴ ＴＡＣ ＡＧＴ ＧＧＧ ＡＧＣ ＧＣＣ
ＨＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号５４）
Ｉ Ｙ Ｙ Ｓ Ｇ Ｓ Ａ
ＨＣＤＲ３核酸配列（配列番号５５）
ＧＣＧ ＡＧＡ ＧＧＧ ＧＣＧ ＧＴＣ ＡＡＧ ＴＡＣ ＴＴＣ ＣＧＧ ＣＡＴ
ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号５６）
Ａ Ｒ Ｇ Ａ Ｖ Ｋ Ｙ Ｆ Ｒ Ｈ
ＬＣＶＲ核酸配列（配列番号５７）
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＣＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＣＴＡＴＴＡＡＣＣＡＣＡＡＣＡＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＧＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＡＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＣＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＡＡＧＴＧＴＡＴＴＣＴＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＡＴＧＧＴＡＧＣＴＴＧＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
ＬＣＶＲアミノ酸配列（配列番号５８）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＴＩＮＨＮＮＬＡＷＹＱＱＲＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＮＲＡＴＡＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＥＶＹＳＣＱＱＹＧＳＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
ＬＣＤＲ１核酸配列（配列番号５９）
ＣＡＧ ＡＣＴ ＡＴＴ ＡＡＣ ＣＡＣ ＡＡＣ ＡＡＣ
ＬＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号６０）
Ｑ Ｔ Ｉ Ｎ Ｈ Ｎ Ｎ
ＬＣＤＲ２核酸配列（配列番号６１）
ＧＧＴ ＧＣＡ ＴＣＣ
ＬＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号６２）
Ｇ Ａ Ｓ
ＬＣＤＲ３核酸配列（配列番号６３）
ＣＡＧ ＣＡＧ ＴＡＴ ＧＧＴ ＡＧＣ ＴＴＧ ＣＣＧ ＣＴＣ ＡＣＴ
ＬＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号６４）
Ｑ Ｑ Ｙ Ｇ Ｓ Ｌ Ｐ Ｌ Ｔ
ＨＣ核酸配列（配列番号２０５）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＧＧＧＣＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＴＣＧＧＡＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＴＧＡＣＴＣＣＡＴＣＡＡＴＡＡＴＴＡＣＴＡＣＴＧＧＡＣＣＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＣＣＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＴＴＡＴＡＴＣＴＡＴＴＡＣＡＧＴＧＧＧＡＧＣＧＣＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＧＴＣＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＡＴＣＡＧＴＡＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＡＧＣＴＡＡＡＴＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＣＴＧＣＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＧＣＧＧＴＣＡＡＧＴＡＣＴＴＣＣＧＧＣＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ
ＨＣアミノ酸配列（配列番号２０６）

【化5】

＊下線付き太字のアスパラギン（Ｎ）は、トランスグルタミナーゼによるコンジュゲーションのためにグルタミン（Ｑ）に変異され得る。例えば、配列番号２６９を参照されたい。
ＬＣ核酸配列（配列番号２０７）
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＣＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＣＴＡＴＴＡＡＣＣＡＣＡＡＣＡＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＧＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＡＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＣＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＡＡＧＴＧＴＡＴＴＣＴＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＡＴＧＧＴＡＧＣＴＴＧＣＣＧＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ
ＬＣアミノ酸配列（配列番号２０８）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＴＩＮＨＮＮＬＡＷＹＱＱＲＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＮＲＡＴＡＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＥＶＹＳＣＱＱＹＧＳＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
１０７８３（野生型ｈＩｇＧ１）／１４５７４（ｈＩｇＧ１ Ｎ１８０Ｑ）
ＨＣＶＲ核酸配列（配列番号６５）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＣＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＧＴＣＡＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＧＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＣＡＧＴＴＡＴＡＴＧＧＡＴＴＧＡＴＧＧＡＡＧＴＡＡＴＡＡＡＴＡＴＴＡＴＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＧＧＧＧＧＧＧＴＡＴＡＧＴＡＧＴＡＧＣＴＧＣＣＣＣＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＨＣＶＲアミノ酸配列（配列番号６６）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＴＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＩＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＧＩＶＶＡＡＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＣＤＲ１核酸配列（配列番号６７）
ＧＧＡ ＴＴＣ ＡＣＣ ＴＴＣ ＡＧＴ ＡＧＣ ＴＡＴ ＧＧＣ
ＨＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号６８）
Ｇ Ｆ Ｔ Ｆ Ｓ Ｓ Ｙ Ｇ
ＨＣＤＲ２核酸配列（配列番号６９）
ＡＴＡ ＴＧＧ ＡＴＴ ＧＡＴ ＧＧＡ ＡＧＴ ＡＡＴ ＡＡＡ
ＨＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号７０）
Ｉ Ｗ Ｉ Ｄ Ｇ Ｓ Ｎ Ｋ
ＨＣＤＲ３核酸配列（配列番号７１）
ＧＣＧ ＡＧＡ ＡＧＧ ＧＧＧ ＧＧＴ ＡＴＡ ＧＴＡ ＧＴＡ ＧＣＴ ＧＣＣ ＣＣＣ ＴＴＴ ＧＡＣ ＴＡＣ
ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号７２）
Ａ Ｒ Ｒ Ｇ Ｇ Ｉ Ｖ Ｖ Ａ Ａ Ｐ Ｆ Ｄ Ｙ
ＬＣＶＲ核酸配列（配列番号７３）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＧＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＡＧＴＴＡＣＡＧＴＡＣＣＣＣＴＣＣＧＡＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＡ
ＬＣＶＲアミノ酸配列（配列番号７４）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ
ＬＣＤＲ１核酸配列（配列番号７５）
ＣＡＧ ＡＧＣ ＡＴＴ ＡＧＣ ＡＧＣ ＴＡＴ
ＬＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号７６）
Ｑ Ｓ Ｉ Ｓ Ｓ Ｙ
ＬＣＤＲ２核酸配列（配列番号７７）
ＧＣＴ ＧＣＡ ＴＣＣ
ＬＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号７８）
Ａ Ａ Ｓ
ＬＣＤＲ３核酸配列（配列番号７９）
ＣＡＡ ＣＡＧ ＡＧＴ ＴＡＣ ＡＧＴ ＡＣＣ ＣＣＴ ＣＣＧ ＡＴＣ ＡＣＣ
ＬＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号８０）
Ｑ Ｑ Ｓ Ｙ Ｓ Ｔ Ｐ Ｐ Ｉ Ｔ
ＨＣ核酸配列（配列番号２０９）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＣＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＧＴＣＡＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＧＧＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＣＡＧＴＴＡＴＡＴＧＧＡＴＴＧＡＴＧＧＡＡＧＴＡＡＴＡＡＡＴＡＴＴＡＴＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＧＧＧＧＧＧＧＴＡＴＡＧＴＡＧＴＡＧＣＴＧＣＣＣＣＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ
ＨＣアミノ酸配列（配列番号２１０）

【化6】

＊下線付き太字のアスパラギン（Ｎ）は、トランスグルタミナーゼによるコンジュゲーションのためにグルタミン（Ｑ）に変異され得る。例えば、配列番号２６９を参照されたい。
ＬＣ核酸配列（配列番号２１１）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＧＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＡＧＴＴＡＣＡＧＴＡＣＣＣＣＴＣＣＧＡＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ
ＬＣアミノ酸配列（配列番号２１２）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
３１９４４
ＨＣＶＲ核酸配列（配列番号８１）
ＣＡＧ ＧＴＧ ＣＡＧ ＴＴＧ ＧＴＧ ＧＡＧ ＴＣＴ ＧＧＧ ＧＧＡ ＧＧＣ ＧＴＧ ＧＴＣ ＣＡＧ ＣＣＴ ＧＧＧ ＡＧＧ ＴＣＣ ＣＴＧ ＡＧＡ ＣＴＣ ＴＣＣ ＴＧＴ ＧＡＡ ＧＣＧ ＴＣＴ ＧＧＡ ＡＴＣ ＡＣＣ ＴＴＣ ＡＧＡ ＡＡＣ ＴＡＴ ＧＧＣ ＡＴＧ ＣＡＣ ＴＧＧ ＧＴＣ ＣＧＣ ＣＡＧ ＧＣＴ ＣＣＡ ＧＧＣ ＡＡＧ ＧＧＧ ＣＴＧ ＧＡＧ ＴＧＧ ＧＴＧ ＧＣＡ ＧＴＴ ＡＴＧ ＴＧＧ ＴＡＴ ＧＡＴ ＧＧＡ ＡＧＴ ＡＡＴ ＡＡＡ ＴＡＣ ＴＡＣ ＧＣＡ ＧＡＣ ＴＣＣ ＧＴＧ ＡＡＧ ＧＧＣ ＣＧＡ ＴＴＣ ＡＣＣ ＡＴＣ ＴＣＣ ＡＧＡ ＧＡＣ ＡＡＴ ＴＣＣ ＡＡＧ ＡＡＣ ＡＣＧ ＧＴＧ ＴＡＴ ＣＴＧ ＣＡＡ ＡＴＧ ＡＡＣ ＡＧＣ ＣＴＧ ＡＧＡ ＧＣＣ ＧＡＡ ＧＡＣ ＡＣＧ ＧＣＴ ＧＴＧ ＴＡＴ ＴＡＣ ＴＧＴ ＧＣＧ ＡＧＡ ＣＧＧ ＧＧＴ ＣＡＴ ＡＴＡ ＧＣＡ ＡＣＡ ＧＣＴ ＧＣＴ ＣＣＣ ＴＴＴ ＧＡＣ ＴＡＣ ＴＧＧ ＧＧＣ ＣＡＧ ＧＧＡ ＡＣＣ ＣＴＧ ＧＴＣ ＡＣＣ ＧＴＣ ＴＣＣ ＴＣＡ
ＨＣＶＲアミノ酸配列（配列番号８２）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＥＡＳＧＩＴＦＲＮＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧＨＩＡＴＡＡＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＣＤＲ１核酸配列（配列番号８３）
ＧＧＡ ＡＴＣ ＡＣＣ ＴＴＣ ＡＧＡ ＡＡＣ ＴＡＴ ＧＧＣ
ＨＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号８４）
ＧＩＴＦＲＮＹＧ
ＨＣＤＲ２核酸配列（配列番号８５）
ａｔｇ ｔｇｇ ｔａｔ ｇａｔ ｇｇａ ａｇｔ ａａｔ ａａａ
ＨＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号８６）
ＭＷＹＤＧＳＮ
ＨＣＤＲ３核酸配列（配列番号８７）
ＧＣＧ ＡＧＡ ＣＧＧ ＧＧＴ ＣＡＴ ＡＴＡ ＧＣＡ ＡＣＡ ＧＣＴ ＧＣＴ ＣＣＣ ＴＴＴ ＧＡＣ ＴＡＣ
ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号８８）
ＡＲＲＧＨＩＡＴＡＡＰＦＤ
ＬＣＶＲ核酸配列（配列番号８９）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＣＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＴＴＧＣＣＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＧＴＡＧＴＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＣＣＴＧＡＴＧＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＡＧＴＴＡＣＡＧＴＡＣＣＣＣＴＣＣＧＡＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＡ
ＬＣＶＲアミノ酸配列（配列番号９０）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＭＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ
ＬＣＤＲ１核酸配列（配列番号９１）
ＣＡＧ ＡＧＣ ＡＴＴ ＡＧＴ ＡＧＴ ＴＡＴ
ＬＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号９２）
ＱＳＩＳＳＹ
ＬＣＤＲ２核酸配列（配列番号９３）
ＧＣＴ ＧＣＡ ＴＣＣ
ＬＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号９４）
ＡＡＳ
ＬＣＤＲ３核酸配列（配列番号９５）
ＣＡＡ ＣＡＧ ＡＧＴ ＴＡＣ ＡＧＴ ＡＣＣ ＣＣＴ ＣＣＧ ＡＴＣ ＡＣＣ
ＬＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号９６）
ＱＱＳＹＳＴＰＰＩＴ
ＨＣ核酸配列（配列番号２１３）
ＣＡＧ ＧＴＧ ＣＡＧ ＴＴＧ ＧＴＧ ＧＡＧ ＴＣＴ ＧＧＧ ＧＧＡ ＧＧＣ ＧＴＧ ＧＴＣ ＣＡＧ ＣＣＴ ＧＧＧ ＡＧＧ ＴＣＣ ＣＴＧ ＡＧＡ ＣＴＣ ＴＣＣ ＴＧＴ ＧＡＡ ＧＣＧ ＴＣＴ ＧＧＡ ＡＴＣ ＡＣＣ ＴＴＣ ＡＧＡ ＡＡＣ ＴＡＴ ＧＧＣ ＡＴＧ ＣＡＣ ＴＧＧ ＧＴＣ ＣＧＣ ＣＡＧ ＧＣＴ ＣＣＡ ＧＧＣ ＡＡＧ ＧＧＧ ＣＴＧ ＧＡＧ ＴＧＧ ＧＴＧ ＧＣＡ ＧＴＴ ＡＴＧ ＴＧＧ ＴＡＴ ＧＡＴ ＧＧＡ ＡＧＴ ＡＡＴ ＡＡＡ ＴＡＣ ＴＡＣ ＧＣＡ ＧＡＣ ＴＣＣ ＧＴＧ ＡＡＧ ＧＧＣ ＣＧＡ ＴＴＣ ＡＣＣ ＡＴＣ ＴＣＣ ＡＧＡ ＧＡＣ ＡＡＴ ＴＣＣ ＡＡＧ ＡＡＣ ＡＣＧ ＧＴＧ ＴＡＴ ＣＴＧ ＣＡＡ ＡＴＧ ＡＡＣ ＡＧＣ ＣＴＧ ＡＧＡ ＧＣＣ ＧＡＡ ＧＡＣ ＡＣＧ ＧＣＴ ＧＴＧ ＴＡＴ ＴＡＣ ＴＧＴ ＧＣＧ ＡＧＡ ＣＧＧ ＧＧＴ ＣＡＴ ＡＴＡ ＧＣＡ ＡＣＡ ＧＣＴ ＧＣＴ ＣＣＣ ＴＴＴ ＧＡＣ ＴＡＣ ＴＧＧ ＧＧＣ ＣＡＧ ＧＧＡ ＡＣＣ ＣＴＧ ＧＴＣ ＡＣＣ ＧＴＣ ＴＣＣ ＴＣＡ ＧＣＣＡＡＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＡＴＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＴＧＴＧＴＧＴＧＧＡＧＡＴＡＣＡＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＣＧＧＴＧＡＣＴＣＴＡＧＧＡＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＧＴＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＡＧＴＧＡＣＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＡＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＧＴＧＧＴＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＡＣＣＴＣＴＡＣＡＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＧＡＣＴＧＴＡＡＣＣＴＣＧＡＧＣＡＣＣＴＧＧＣＣＣＡＧＣＣＡＧＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＧＣＡＡＧＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＡＴＴＧＡＧＣＣＣＡＧＡＧＧＧＣＣＣＡＣＡＡＴＣＡＡＧＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＣＡＡＡＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＡＡＣＣＴＣＴＴＧＧＧＴＧＧＡＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＴＣＣＡＡＡＧＡＴＣＡＡＧＧＡＴＧＴＡＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＣＣＡＴＡＧＴＣＡＣＡＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＡＧＣＧＡＧＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＴＧＴＣＣＡＧＡＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＴＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＴＧＧＡＡＧＴＡＣＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＧＡＣＡＣＡＡＡＣＣＣＡＴＡＧＡＧＡＧＧＡＴＴＡＣＡＡＣＡＧＴＡＣＴＣＴＣＣＧＧＧＴＧＧＴＣＡＧＴＧＣＣＣＴＣＣＣＣＡＴＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＡＴＧＡＧＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＣＡＡＧＧＴＣＡＡＣＡＡＣＡＡＡＧＡＣＣＴＣＣＣＡＧＣＧＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＧＡＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＡＧＧＧＴＣＡＧＴＡＡＧＡＧＣＴＣＣＡＣＡＧＧＴＡＴＡＴＧＴＣＴＴＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＴＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＴＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＴＣＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＴＧＣＣＴＧＡＡＧＡＣＡＴＴＴＡＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＡＣＣＡＡＣＡＡＣＧＧＧＡＡＡＡＣＡＧＡＧＣＴＡＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＡＣＴＧＡＡＣＣＡＧＴＣＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＡＴＧＧＴＴＣＴＴＡＣＴＴＣＡＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＧＡＧＴＧＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＧＡＡＡＧＡＡＡＴＡＧＣＴＡＣＴＣＣＴＧＴＴＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＣＧＡＧＧＧＴＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＣＡＣＡＣＧＡＣＴＡＡＧＡＧＣＴＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ
ＨＣアミノ酸配列（配列番号２１４）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧ ＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬ ＳＣＥＡＳＧＩＴＦＲ ＮＹＧＭＨＷＶＲＱＡ ＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶ ＭＷＹＤＧＳＮＫＹＹ ＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩ ＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹ ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤ ＴＡＶＹＹＣＡＲＲＧ ＨＩＡＴＡＡＰＦＤＹ ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳ Ｓ ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ
ＬＣ核酸配列（配列番号２１５）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＣＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＴＴＧＣＣＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＧＴＡＧＴＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＣＣＴＧＡＴＧＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＡＧＴＴＡＣＡＧＴＡＣＣＣＣＴＣＣＧＡＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＡＣＧＡＧＣＴＧＡＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＡＣＴＧＴＡＴＣＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＡＧＣＡＧＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＣＣＴＣＡＧＴＣＧＴＧＴＧＣＴＴＣＴＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＴＧＴＣＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＴＴＧＡＴＧＧＣＡＧＴＧＡＡＣＧＡＣＡＡＡＡＴＧＧＣＧＴＣＣＴＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＡＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＡＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＣＡＣＧＴＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＴＡＴＧＡＡＣＧＡＣＡＴＡＡＣＡＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＴＧＡＧＧＣＣＡＣＴＣＡＣＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＴＴＧＴＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＧＡ
ＬＣアミノ酸配列（配列番号２１６）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳ ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＳＣＲＡＳＱＳＩＳ ＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰ ＧＫＡＰＫＶＬＭＹＡ ＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳ ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤ ＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰ ＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱ ＳＹＳＴＰＰＩＴＦＧ ＱＧＴＲＬＥＩＫ ＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＧＥＣ
３１２６５（野生型ｈＩｇＧ１）／５９７２（ｈＩｇＧ１ Ｎ１８０Ｑ）
ＨＣＶＲ核酸配列（配列番号９７）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＧＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＣＧＴＴＣＣＴＡＴＧＧＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＴＣＡＧＴＴＡＴＴＴＧＧＡＴＴＧＡＴＧＧＡＡＡＴＡＡＴＡＴＡＴＡＣＴＡＴＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＡＴＡＡＣＡＴＣＡＧＣＴＧＣＣＣＣＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＨＣＶＲアミノ酸配列（配列番号９８）
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＴＡＳＧＦＴＦＲＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＶＩＷＩＤＧＮＮＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＬＡＩＴＳＡＡＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＣＤＲ１核酸配列（配列番号９９）
ＧＧＡ ＴＴＣ ＡＣＣ ＴＴＣ ＣＧＴ ＴＣＣ ＴＡＴ ＧＧＣ
ＨＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号１００）
Ｇ Ｆ Ｔ Ｆ Ｒ Ｓ Ｙ Ｇ
ＨＣＤＲ２核酸配列（配列番号１０１）
ＡＴＴ ＴＧＧ ＡＴＴ ＧＡＴ ＧＧＡ ＡＡＴ ＡＡＴ ＡＴＡ
ＨＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号１０２）
Ｉ Ｗ Ｉ Ｄ Ｇ Ｎ Ｎ Ｉ
ＨＣＤＲ３核酸配列（配列番号１０３）
ＧＣＧ ＡＧＡ ＡＧＡ ＣＴＧ ＧＣＴ ＡＴＡ ＡＣＡ ＴＣＡ ＧＣＴ ＧＣＣ ＣＣＣ ＴＴＴ ＧＡＣ ＴＡＣ
ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１０４）
Ａ Ｒ Ｒ Ｌ Ａ Ｉ Ｔ Ｓ Ａ Ａ Ｐ Ｆ Ｄ Ｙ
ＬＣＶＲ核酸配列（配列番号１０５）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＧＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＡＧＴＴＡＣＡＧＴＡＣＣＣＣＴＣＣＧＡＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＡ
ＬＣＶＲアミノ酸配列（配列番号１０６）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ
ＬＣＤＲ１核酸配列（配列番号１０７）
ＣＡＧ ＡＧＣ ＡＴＴ ＡＧＣ ＡＧＣ ＴＡＴ
ＬＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号１０８）
Ｑ Ｓ Ｉ Ｓ Ｓ Ｙ
ＬＣＤＲ２核酸配列（配列番号１０９）
ＧＣＴ ＧＣＡ ＴＣＣ
ＬＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号１１０）
Ａ Ａ Ｓ
ＬＣＤＲ３核酸配列（配列番号１１１）
ＣＡＡ ＣＡＧ ＡＧＴ ＴＡＣ ＡＧＴ ＡＣＣ ＣＣＴ ＣＣＧ ＡＴＣ ＡＣＣ
ＬＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１１２）
Ｑ Ｑ Ｓ Ｙ Ｓ Ｔ Ｐ Ｐ Ｉ Ｔ
ＨＣ核酸配列（配列番号２１７）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＧＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＣＧＴＴＣＣＴＡＴＧＧＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＴＣＡＧＴＴＡＴＴＴＧＧＡＴＴＧＡＴＧＧＡＡＡＴＡＡＴＡＴＡＴＡＣＴＡＴＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＡＴＡＡＣＡＴＣＡＧＣＴＧＣＣＣＣＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ
ＨＣアミノ酸配列（配列番号２１８）

【化7】

＊下線付き太字のアスパラギン（Ｎ）は、トランスグルタミナーゼによるコンジュゲーションのためにグルタミン（Ｑ）に変異され得る。例えば、配列番号２６９を参照されたい。
ＬＣ核酸配列（配列番号２１９）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＧＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＴＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＧＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＧＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＡＧＴＴＡＣＡＧＴＡＣＣＣＣＴＣＣＧＡＴＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ
ＬＣアミノ酸配列（配列番号２２０）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＰＩＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
３１９４１
ＨＣＶＲ核酸配列（配列番号１１３）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＧＣＣＴＴＣＡＣＣＡＣＣＴＡＴＧＧＴＡＴＣＡＣＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＡＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＧＣＧＣＴＴＡＣＡＡＴＧＧＡＡＡＴＡＣＡＡＡＣＴＡＴＧＣＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＣＧＡＡＴＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＡＧＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＧＧＧＡＣＴＴＡＴＴＡＴＡＡＣＣＣＣＴＴＴＧＧＴＴＴＴＧＡＴＴＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡ
ＨＣＶＲアミノ酸配列（配列番号１１４）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＴＹＧＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＥＫＶＱＧＲＦＴＭＴＴＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＫＧＨＹＧＳＧＴＹＹＮＰＦＧＦＤＦＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
ＨＣＤＲ１核酸配列（配列番号１１５）
ｇｇｔ ｔａｃ ｇｃｃ ｔｔｃ ａｃｃ ａｃｃ ｔａｔ ｇｇｔ
ＨＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号１１６）
ＧＹＡＦＴＴＹＧ
ＨＣＤＲ２核酸配列（配列番号１１７）
ａｔｃ ａｇｃ ｇｃｔ ｔａｃ ａａｔ ｇｇａ ａａｔ ａｃａ
ＨＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号１１８）
ＩＳＡＹＮＧＮ
ＨＣＤＲ３核酸配列（配列番号１１９）
ＧＣＧ ＡＧＡ ＡＡＧ ＧＧＴ ＣＡＣ ＴＡＴ ＧＧＴ ＴＣＧ ＧＧＧ ＡＣＴ ＴＡＴ ＴＡＴ ＡＡＣ ＣＣＣ ＴＴＴ ＧＧＴ ＴＴＴ ＧＡＴ ＴＴＴ
ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１２０）
ＣＡＲＫＧＨＹＧＳＧＴＹＹＮＰＦＧＦＤ
ＬＣＶＲ核酸配列（配列番号１２１）
ＧＡＡＡＴＴＡＴＧＴＴＧＡＴＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＡＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＡＴＴＡＴＧＧＣＴＣＡＣＣＴＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ
ＬＣＶＲアミノ酸配列（配列番号１２２）
ＥＩＭＬＭＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＤＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＹＹＧＳＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
ＬＣＤＲ１核酸配列（配列番号１２３）
ｃａｇ ａｇｔ ｇｔｔ ａｇｃ ａｇｃ ａｇｃ ｔａｃ
ＬＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号１２４）
ＱＳＶＳＳＳＹ
ＬＣＤＲ２核酸配列（配列番号１２５）
ｇｇｔ ｇｃａ ｔｃｃ
ＬＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号１２６）
ＧＡ
ＬＣＤＲ３核酸配列（配列番号１２７）
ｃａｇ ｃａｇ ｔａｔ ｔａｔ ｇｇｃ ｔｃａ ｃｃｔ ｔｇｇ ａｃｇ
ＬＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１２８）
ＣＱＱＹＹＧＳＰＷ
ＨＣ核酸配列（配列番号２２１）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＧＣＣＴＴＣＡＣＣＡＣＣＴＡＴＧＧＴＡＴＣＡＣＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＡＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＧＣＧＣＴＴＡＣＡＡＴＧＧＡＡＡＴＡＣＡＡＡＣＴＡＴＧＣＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＣＧＡＡＴＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＡＧＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＧＧＧＡＣＴＴＡＴＴＡＴＡＡＣＣＣＣＴＴＴＧＧＴＴＴＴＧＡＴＴＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡＧＣＣＡＡＡＡＣＧＡＣＡＣＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＡＴＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＴＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＡＡＣＴＡＡＣＴＣＣＡＴＧＧＴＧＡＣＣＣＴＧＧＧＡＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＧＣＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＡＧＴＧＡＣＡＧＴＧＡＣＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＡＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＧＣＧＧＴＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＡＣＣＴＣＴＡＣＡＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＧＡＣＴＧＴＣＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＧＣＣＣＡＧＣＧＡＧＡＣＣＧＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＴＧＣＣＣＡＣＣＣＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＡＴＴＧＴＧＣＣＣＡＧＧＧＡＴＴＧＴＧＧＴＴＧＴＡＡＧＣＣＴＴＧＣＡＴＡＴＧＴＡＣＡＧＴＣＣＣＡＧＡＡＧＴＡＴＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＧＣＣＣＡＡＧＧＡＴＧＴＧＣＴＣＡＣＣＡＴＴＡＣＴＣＴＧＡＣＴＣＣＴＡＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＴＧＴＴＧＴＧＧＴＡＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＡＴＧＡＴＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＴＧＴＡＧＡＴＧＡＴＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＧＡＣＧＣＡＡＣＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＴＴＴＣＣＧＣＴＣＡＧＴＣＡＧＴＧＡＡＣＴＴＣＣＣＡＴＣＡＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＣＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＣＡＧＧＧＴＣＡＡＣＡＧＴＧＣＡＧＣＴＴＴＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＡＡＡＧＧＣＡＧＡＣＣＧＡＡＧＧＣＴＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＡＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＣＡＡＧＧＡＧＣＡＧＡＴＧＧＣＣＡＡＧＧＡＴＡＡＡＧＴＣＡＧＴＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＴＧＡＴＡＡＣＡＧＡＣＴＴＣＴＴＣＣＣＴＧＡＡＧＡＣＡＴＴＡＣＴＧＴＧＧＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＡＧＣＧＧＡＧＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＡＣＴＣＡＧＣＣＣＡＴＣＡＴＧＧＡＣＡＣＡＧＡＴＧＧＣＴＣＴＴＡＣＴＴＣＧＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＡＴＧＴＧＣＡＧＡＡＧＴＣＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＧＣＡＧＧＡＡＡＴＡＣＴＴＴＣＡＣＣＴＧＣＴＣＴＧＴＧＴＴＡＣＡＴＧＡＧＧＧＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＣＡＴＡＣＴＧＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＡＣＴＣＴＣＣＴＧＧＴＡＡＡＴＧＡ
ＨＣアミノ酸配列（配列番号２２２）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＴＹＧＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＥＫＶＱＧＲＦＴＭＴＴＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＫＧＨＹＧＳＧＴＹＹＮＰＦＧＦＤＦＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ
ＬＣ核酸配列（配列番号２２３）
ＧＡＡＡＴＴＡＴＧＴＴＧＡＴＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＡＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＡＴＴＡＴＧＧＣＴＣＡＣＣＴＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＡＧＣＴＧＡＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＡＣＴＧＴＡＴＣＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＡＧＣＡＧＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＣＣＴＣＡＧＴＣＧＴＧＴＧＣＴＴＣＴＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＴＧＴＣＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＴＴＧＡＴＧＧＣＡＧＴＧＡＡＣＧＡＣＡＡＡＡＴＧＧＣＧＴＣＣＴＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＡＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＡＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＣＡＣＧＴＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＴＡＴＧＡＡＣＧＡＣＡＴＡＡＣＡＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＴＧＡＧＧＣＣＡＣＴＣＡＣＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＴＴＧＴＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＧＡ
ＬＣアミノ酸配列（配列番号２２４）
ＥＩＭＬＭＱＳＰＧＴ ＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴ ＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳ ＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫ ＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ ＧＡＳＳＲＡＴＤＩＰ ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴ ＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥ ＰＥＤＦＡＶＹＦＣＱ ＱＹＹＧＳＰＷＴＦＧ ＱＧＴＫＶＥＩＫ ＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＧＥＣ
７６６０
ＨＣＶＲ核酸配列（配列番号１２９）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＧＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＡＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＧＴＴＧＡＣＣＣＴＣＡＧＴＧＡＣＴＣＴＧＣＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＴＣＣＧＧＧＡＡＡＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＧＧＣＣＧＴＡＴＡＡＧＡＡＡＴＡＡＧＧＣＴＡＡＴＡＧＧＴＡＣＧＣＧＡＣＡＧＡＡＴＡＴＧＣＴＧＣＧＴＣＧＧＴＧＡＡＡＧＧＣＡＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＴＴＣＡＡＧＡＧＡＴＧＡＴＴＣＡＡＡＧＡＡＣＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＴＡＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＡＣＴＡＧＡＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＴＴＴＴＣＣＴＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＨＣＶＲアミノ酸配列（配列番号１３０）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＴＡＳＧＬＴＬＳＤＳＡＭＨＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＮＫＡＮＲＹＡＴＥＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＮＷＫＩＦＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＣＤＲ１核酸配列（配列番号１３１）
ＧＧＧ ＴＴＧ ＡＣＣ ＣＴＣ ＡＧＴ ＧＡＣ ＴＣＴ ＧＣＴ
ＨＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号１３２）
Ｇ Ｌ Ｔ Ｌ Ｓ Ｄ Ｓ Ａ
ＨＣＤＲ２核酸配列（配列番号１３３）
ＡＴＡ ＡＧＡ ＡＡＴ ＡＡＧ ＧＣＴ ＡＡＴ ＡＧＧ ＴＡＣ ＧＣＧ ＡＣＡ
ＨＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号１３４）
Ｉ Ｒ Ｎ Ｋ Ａ Ｎ Ｒ Ｙ Ａ Ｔ
ＨＣＤＲ３核酸配列（配列番号１３５）
ＡＣＴ ＡＧＡ ＡＡＣ ＴＧＧ ＡＡＧ ＡＴＴ ＴＴＣ ＣＴＣ ＴＴＴ ＧＡＣ ＴＡＣ
ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１３６）
Ｔ Ｒ Ｎ Ｗ Ｋ Ｉ Ｆ Ｌ Ｆ Ｄ Ｙ
ＬＣＶＲ核酸配列（配列番号１３７）
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＧＧＣＡＧＣＡＡＡＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＧＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＣＡＧＧＡＣＣＡＧＴＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＡＣＡＧＧＡＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＡＴＧＧＡＡＧＴＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
ＬＣＶＲアミノ酸配列（配列番号１３８）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＴＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＧＳＫＹＬＡＷＦＱＱＫＲＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＴＳＧＩＰＤＲＩＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
ＬＣＤＲ１核酸配列（配列番号１３９）
ＣＡＧ ＡＧＴ ＧＴＴ ＧＧＣ ＡＧＣ ＡＡＡ ＴＡＣ
ＬＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号１４０）
Ｑ Ｓ Ｖ Ｇ Ｓ Ｋ Ｙ
ＬＣＤＲ２核酸配列（配列番号１４１）
ＧＧＴ ＧＣＡ ＴＣＣ
ＬＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号１４２）
Ｇ Ａ Ｓ
ＬＣＤＲ３核酸配列（配列番号１４３）
ＣＡＧ ＣＡＧ ＴＡＴ ＧＧＡ ＡＧＴ ＴＣＡ ＣＣＣ ＴＧＧ ＡＣＧ
ＬＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１４４）
Ｑ Ｑ Ｙ Ｇ Ｓ Ｓ Ｐ Ｗ Ｔ
ＨＣ核酸配列（配列番号２２５）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＧＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＡＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＧＴＴＧＡＣＣＣＴＣＡＧＴＧＡＣＴＣＴＧＣＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＴＣＣＧＧＧＡＡＡＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＧＧＣＣＧＴＡＴＡＡＧＡＡＡＴＡＡＧＧＣＴＡＡＴＡＧＧＴＡＣＧＣＧＡＣＡＧＡＡＴＡＴＧＣＴＧＣＧＴＣＧＧＴＧＡＡＡＧＧＣＡＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＴＴＣＡＡＧＡＧＡＴＧＡＴＴＣＡＡＡＧＡＡＣＡＣＧＧＣＧＴＡＴＣＴＡＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＴＡＣＴＡＧＡＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＴＴＴＴＣＣＴＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ
ＨＣアミノ酸配列（配列番号２２６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＴＡＳＧＬＴＬＳＤＳＡＭＨＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧＲＩＲＮＫＡＮＲＹＡＴＥＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＮＷＫＩＦＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
ＬＣ核酸配列（配列番号２２７）
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＧＧＣＡＧＣＡＡＡＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＧＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＣＡＧＧＡＣＣＡＧＴＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＡＣＡＧＧＡＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＡＴＧＧＡＡＧＴＴＣＡＣＣＣＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ
ＬＣアミノ酸配列（配列番号２２８）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＴＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＧＳＫＹＬＡＷＦＱＱＫＲＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＴＳＧＩＰＤＲＩＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
９９０９
ＨＣＶＲ核酸配列（配列番号１４５）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＴＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＧＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＴＡＡＣＡＡＣＴＡＴＧＧＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＧＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＡＴＣＴＡＴＴＡＧＴＧＧＴＡＧＴＧＧＴＧＧＴＡＣＣＡＣＡＴＴＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＧＣＡＡＡＧＧＡＧＧＡＴＡＴＴＧＴＡＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＴＧＣＣＧＴＣＡＣＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＨＣＶＲアミノ酸配列（配列番号１４６）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＮＹＧＭＳＷＶＲＱＧＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＴＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＧＫＧＧＹＣＳＳＳＧＣＲＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
ＨＣＤＲ１核酸配列（配列番号１４７）
ＧＧＡ ＴＴＣ ＡＣＣ ＴＴＴ ＡＡＣ ＡＡＣ ＴＡＴ ＧＧＣ
ＨＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号１４８）
ＧＦＴＦＮＮＹＧ
ＨＣＤＲ２核酸配列（配列番号１４９）
ＡＴＴ ＡＧＴ ＧＧＴ ＡＧＴ ＧＧＴ ＧＧＴ ＡＣＣ ＡＣＡ
ＨＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号１５０）
ＳＧＳＧＧＴ
ＨＣＤＲ３核酸配列（配列番号１５１）
ＧＧＣ ＡＡＡ ＧＧＡ ＧＧＡ ＴＡＴ ＴＧＴ ＡＧＴ ＡＧＴ ＡＧＣ ＧＧＣ ＴＧＣ ＣＧＴ ＣＡＣ ＴＡＣ ＧＧＴ ＡＴＧ ＧＡＣ ＧＴＣ
ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１５２）
ＣＧＫＧＧＹＣＳＳＳＧＣＲＨ
ＬＣＶＲ核酸配列（配列番号１５３）
ＣＡＧＴＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＡＧＣＧＴＣＴＧＧＧＡＣＣＣＣＣＧＧＧＣＡＧＡＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＴＴＣＴＧＧＡＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＡＣＡＴＣＧＧＡＡＡＴＡＡＴＴＡＴＡＴＡＴＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＡＧＧＡＡＴＡＡＴＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＣＴＧＧＣＣＡＴＣＡＧＴＧＧＧＣＴＣＣＧＧＴＣＣＧＡＧＧＡＴＧＡＧＧＣＴＧＡＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＧＣＡＴＧＧＧＡＴＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＧＴＧＧＧＴＡＴＧＴＣＴＴＣＧＧＡＡＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＡ
ＬＣＶＲアミノ酸配列（配列番号１５４）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＩＹＷＹＱＲＬＰＧＴＴＰＫＬＬＩＹＲＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＴＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ
ＬＣＤＲ１核酸配列（配列番号１５５）
ＡＧＣ ＴＣＣ ＡＡＣ ＡＴＣ ＧＧＡ ＡＡＴ ＡＡＴ ＴＡＴ
ＬＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号１５６）
ＳＳＮＩＧＮＮＹ
ＬＣＤＲ２核酸配列（配列番号１５７）
ａｇｇ ａａｔ ａａｔ
ＬＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号１５８）
ＲＮ
ＬＣＤＲ３核酸配列（配列番号１５９）
ＧＣＡ ＧＣＡ ＴＧＧ ＧＡＴ ＧＡＣ ＡＣＣ ＣＴＧ ＡＧＴ ＧＧＧ ＴＡＴ ＧＴＣ
ＬＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１６０）
ＣＡＡＷＤＤＴＬＳＧＹ
ＨＣ核酸配列（配列番号２２９）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＴＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＧＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＴＡＡＣＡＡＣＴＡＴＧＧＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＧＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＡＴＣＴＡＴＴＡＧＴＧＧＴＡＧＴＧＧＴＧＧＴＡＣＣＡＣＡＴＴＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＧＣＡＡＡＧＧＡＧＧＡＴＡＴＴＧＴＡＧＴＡＧＴＡＧＣＧＧＣＴＧＣＣＧＴＣＡＣＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＡＡＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＡＴＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＴＧＴＧＴＧＴＧＧＡＧＡＴＡＣＡＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＣＧＧＴＧＡＣＴＣＴＡＧＧＡＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＧＴＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＡＧＴＧＡＣＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＡＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＧＴＧＧＴＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＡＣＣＴＣＴＡＣＡＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＧＡＣＴＧＴＡＡＣＣＴＣＧＡＧＣＡＣＣＴＧＧＣＣＣＡＧＣＣＡＧＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＧＣＡＡＧＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＡＴＴＧＡＧＣＣＣＡＧＡＧＧＧＣＣＣＡＣＡＡＴＣＡＡＧＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＣＡＡＡＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＡＡＣＣＴＣＴＴＧＧＧＴＧＧＡＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＴＣＣＡＡＡＧＡＴＣＡＡＧＧＡＴＧＴＡＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＣＣＡＴＡＧＴＣＡＣＡＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＡＧＣＧＡＧＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＴＧＴＣＣＡＧＡＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＴＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＴＧＧＡＡＧＴＡＣＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＧＡＣＡＣＡＡＡＣＣＣＡＴＡＧＡＧＡＧＧＡＴＴＡＣＡＡＣＡＧＴＡＣＴＣＴＣＣＧＧＧＴＧＧＴＣＡＧＴＧＣＣＣＴＣＣＣＣＡＴＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＡＴＧＡＧＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＣＡＡＧＧＴＣＡＡＣＡＡＣＡＡＡＧＡＣＣＴＣＣＣＡＧＣＧＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＧＡＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＡＧＧＧＴＣＡＧＴＡＡＧＡＧＣＴＣＣＡＣＡＧＧＴＡＴＡＴＧＴＣＴＴＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＴＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＴＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＴＣＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＴＧＣＣＴＧＡＡＧＡＣＡＴＴＴＡＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＡＣＣＡＡＣＡＡＣＧＧＧＡＡＡＡＣＡＧＡＧＣＴＡＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＡＣＴＧＡＡＣＣＡＧＴＣＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＡＴＧＧＴＴＣＴＴＡＣＴＴＣＡＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＧＡＧＴＧＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＧＡＡＡＧＡＡＡＴＡＧＣＴＡＣＴＣＣＴＧＴＴＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＣＧＡＧＧＧＴＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＣＡＣＡＣＧＡＣＴＡＡＧＡＧＣＴＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ
ＨＣアミノ酸配列（配列番号２３０）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＮＹＧＭＳＷＶＲＱＧＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳＩＳＧＳＧＧＴＴＦＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＧＫＧＧＹＣＳＳＳＧＣＲＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ
ＬＣ核酸配列（配列番号２３１）
ＣＡＧＴＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＡＧＣＧＴＣＴＧＧＧＡＣＣＣＣＣＧＧＧＣＡＧＡＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＴＧＴＴＣＴＧＧＡＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＡＣＡＴＣＧＧＡＡＡＴＡＡＴＴＡＴＡＴＡＴＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＡＧＧＡＡＴＡＡＴＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＣＴＧＧＣＣＡＴＣＡＧＴＧＧＧＣＴＣＣＧＧＴＣＣＧＡＧＧＡＴＧＡＧＧＣＴＧＡＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＡＧＣＡＴＧＧＧＡＴＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＧＴＧＧＧＴＡＴＧＴＣＴＴＣＧＧＡＡＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＡＣＧＡＧＣＴＧＡＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＡＣＴＧＴＡＴＣＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＡＧＣＡＧＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＣＣＴＣＡＧＴＣＧＴＧＴＧＣＴＴＣＴＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＴＧＴＣＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＴＴＧＡＴＧＧＣＡＧＴＧＡＡＣＧＡＣＡＡＡＡＴＧＧＣＧＴＣＣＴＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＡＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＡＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＣＡＣＧＴＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＴＡＴＧＡＡＣＧＡＣＡＴＡＡＣＡＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＴＧＡＧＧＣＣＡＣＴＣＡＣＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＴＴＧＴＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＧＡ
ＬＣアミノ酸配列（配列番号２３２）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＩＹＷＹＱＲＬＰＧＴＴＰＫＬＬＩＹＲＮＮＱＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＲＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＴＬＳＧＹＶＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＧＥＣ
１０７１３（野生型ｈＩｇＧ１）／１４５７３（ｈＩｇＧ１ Ｎ１８０Ｑ）
ＨＣＶＲ核酸配列（配列番号１６１）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＡＡＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＣＣＡＴＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＴＡＴＴＡＣＴＧＧＴＡＧＡＧＧＴＴＴＴＧＡＣＡＣＡＣＡＣＴＡＣＧＣＴＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＴＴＴＣＣＡＡＡＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＡＡＧＧＴＣＴＣＴＡＴＧＡＴＴＣＧＧＧＧＡＡＴＴＡＴＴＡＴＡＴＣＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
ＨＣＶＲアミノ酸配列（配列番号１６２）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＮＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＳＨＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＶＩＴＧＲＧＦＤＴＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＩＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＧＬＹＤＳＧＮＹＹＩＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
ＨＣＤＲ１核酸配列（配列番号１６３）
ＧＧＡ ＴＴＣ ＡＣＣ ＴＴＴ ＡＣＣ ＡＧＣ ＣＡＴ ＧＣＣ
ＨＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号１６４）
Ｇ Ｆ Ｔ Ｆ Ｔ Ｓ Ｈ Ａ
ＨＣＤＲ２核酸配列（配列番号１６５）
ＡＴＴ ＡＣＴ ＧＧＴ ＡＧＡ ＧＧＴ ＴＴＴ ＧＡＣ ＡＣＡ
ＨＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号１６６）
Ｉ Ｔ Ｇ Ｒ Ｇ Ｆ Ｄ Ｔ
ＨＣＤＲ３核酸配列（配列番号１６７）
ＧＣＧ ＡＡＡ ＧＧＴ ＣＴＣ ＴＡＴ ＧＡＴ ＴＣＧ ＧＧＧ ＡＡＴ ＴＡＴ ＴＡＴ ＡＴＣ ＧＡＴ ＴＡＣ
ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１６８）
Ａ Ｋ Ｇ Ｌ Ｙ Ｄ Ｓ Ｇ Ｎ Ｙ Ｙ Ｉ Ｄ Ｙ
ＬＣＶＲ核酸配列（配列番号１６９）
ＣＡＧＴＣＴＧＴＧＴＴＧＡＣＧＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＣＡＧＴＧＴＣＴＧＣＧＧＣＣＣＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＡＣＡＴＴＧＧＧＡＡＴＡＡＴＴＡＴＧＴＴＴＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＣＴＣＣＣＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＣＡＴＴＴＡＴＧＡＣＡＡＴＡＡＴＡＡＧＣＧＡＣＣＣＴＣＡＧＧＧＡＴＴＣＣＴＧＡＣＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＧＴＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＧＧＣＡＴＣＡＣＣＧＧＡＣＴＣＣＡＧＡＣＴＧＧＧＧＡＣＧＡＧＧＣＣＧＡＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＧＡＡＣＡＴＧＧＧＡＴＣＴＣＡＧＣＣＴＧＡＧＴＴＴＣＡＡＴＴＧＧＧＴＧＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＡ
ＬＣＶＲアミノ酸配列（配列番号１７０）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＬＳＬＳＦＮＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
ＬＣＤＲ１核酸配列（配列番号１７１）
ＡＧＣ ＴＣＣ ＡＡＣ ＡＴＴ ＧＧＧ ＡＡＴ ＡＡＴ ＴＡＴ
ＬＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号１７２）
Ｓ Ｓ Ｎ Ｉ Ｇ Ｎ Ｎ Ｙ
ＬＣＤＲ２核酸配列（配列番号１７３）
ＧＡＣ ＡＡＴ ＡＡＴ
ＬＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号１７４）
Ｄ Ｎ Ｎ
ＬＣＤＲ３核酸配列（配列番号１７５）
ＧＧＡ ＡＣＡ ＴＧＧ ＧＡＴ ＣＴＣ ＡＧＣ ＣＴＧ ＡＧＴ ＴＴＣ ＡＡＴ ＴＧＧ ＧＴＧ
ＬＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１７６）
Ｇ Ｔ Ｗ Ｄ Ｌ Ｓ Ｌ Ｓ Ｆ Ｎ Ｗ Ｖ
ＨＣ核酸配列（配列番号２３３）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＡＡＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＣＣＡＴＧＣＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＴＡＴＴＡＣＴＧＧＴＡＧＡＧＧＴＴＴＴＧＡＣＡＣＡＣＡＣＴＡＣＧＣＴＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＴＴＴＣＣＡＡＡＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＡＡＧＧＴＣＴＣＴＡＴＧＡＴＴＣＧＧＧＧＡＡＴＴＡＴＴＡＴＡＴＣＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ
ＨＣアミノ酸配列（配列番号２３４）

【化8】

＊下線付き太字のアスパラギン（Ｎ）は、トランスグルタミナーゼによるコンジュゲーションのためにグルタミン（Ｑ）に変異され得る。例えば、配列番号２６９を参照されたい。
ＬＣ核酸配列（配列番号２３５）
ＣＡＧＴＣＴＧＴＧＴＴＧＡＣＧＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＣＡＧＴＧＴＣＴＧＣＧＧＣＣＣＣＡＧＧＡＣＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＡＣＡＴＴＧＧＧＡＡＴＡＡＴＴＡＴＧＴＴＴＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＣＴＣＣＣＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＣＡＴＴＴＡＴＧＡＣＡＡＴＡＡＴＡＡＧＣＧＡＣＣＣＴＣＡＧＧＧＡＴＴＣＣＴＧＡＣＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＧＴＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＧＧＣＡＴＣＡＣＣＧＧＡＣＴＣＣＡＧＡＣＴＧＧＧＧＡＣＧＡＧＧＣＣＧＡＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＧＧＡＡＣＡＴＧＧＧＡＴＣＴＣＡＧＣＣＴＧＡＧＴＴＴＣＡＡＴＴＧＧＧＴＧＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＡＧＧＣＣＡＧＣＣＣＡＡＧＧＣＣＧＣＣＣＣＣＴＣＣＧＴＧＡＣＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＴＣＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＴＧＣＣＴＧＡＴＣＴＣＣＧＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＧＣＣＴＧＧＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＡＡＧＧＣＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＡＣＣＡＣＣＡＣＣＣＣＣＴＣＣＡＡＧＣＡＧＴＣＣＡＡＣＡＡＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＧＣＣＴＣＣＴＣＣＴＡＣＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＣＣＣＧＡＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＣＣＣＡＣＣＧＧＴＣＣＴＡＣＴＣＣＴＧＣＣＡＧＧＴＧＡＣＣＣＡＣＧＡＧＧＧＣＴＣＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＣＣＧＴＧＧＣＣＣＣＣＡ
ＣＣＧＡＧＴＧＣＴＣＣＴＧＡ
ＬＣアミノ酸配列（配列番号２３６）
ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＤＮＮＫＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＴＬＧＩＴＧＬＱＴＧＤＥＡＤＹＹＣＧＴＷＤＬＳＬＳＦＮＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
７８５４
ＨＣＶＲ核酸配列（配列番号１７７）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＧＣＣＴＴＣＡＣＣＡＣＣＴＡＴＧＧＴＡＴＣＡＣＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＡＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＧＣＧＣＴＴＡＣＡＡＴＧＧＡＡＡＴＡＣＡＡＡＣＴＡＴＧＣＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＣＧＡＡＴＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＡＧＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＧＧＧＡＣＴＴＡＴＴＡＴＡＡＣＣＣＣＴＴＴＧＧＴＴＴＴＧＡＴＴＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡ
ＨＣＶＲアミノ酸配列（配列番号１７８）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＴＹＧＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＥＫＶＱＧＲＦＴＭＴＴＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＫＧＨＹＧＳＧＴＹＹＮＰＦＧＦＤＦＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
ＨＣＤＲ１核酸配列（配列番号１７９）
ＧＧＴ ＴＡＣ ＧＣＣ ＴＴＣ ＡＣＣ ＡＣＣ ＴＡＴ ＧＧＴ
ＨＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号１８０）
Ｇ Ｙ Ａ Ｆ Ｔ Ｔ Ｙ Ｇ
ＨＣＤＲ２核酸配列（配列番号１８１）
ＡＴＣ ＡＧＣ ＧＣＴ ＴＡＣ ＡＡＴ ＧＧＡ ＡＡＴ ＡＣＡ
ＨＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号１８２）
Ｉ Ｓ Ａ Ｙ Ｎ Ｇ Ｎ Ｔ
ＨＣＤＲ３核酸配列（配列番号１８３）
ＧＣＧ ＡＧＡ ＡＡＧ ＧＧＴ ＣＡＣ ＴＡＴ ＧＧＴ ＴＣＧ ＧＧＧ ＡＣＴ ＴＡＴ ＴＡＴ ＡＡＣ ＣＣＣ ＴＴＴ ＧＧＴ ＴＴＴ ＧＡＴ ＴＴＴ
ＨＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１８４）
Ａ Ｒ Ｋ Ｇ Ｈ Ｙ Ｇ Ｓ Ｇ Ｔ Ｙ Ｙ Ｎ Ｐ Ｆ Ｇ Ｆ Ｄ Ｆ
ＬＣＶＲ核酸配列（配列番号１８５）
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＴＴＴＧＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＡＴＴＡＴＧＧＣＴＣＡＣＣＴＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
ＬＣＶＲアミノ酸配列（配列番号１８６）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＬＹＦＣＱＱＹＹＧＳＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
ＬＣＤＲ１核酸配列（配列番号１８７）
ＣＡＧ ＡＧＴ ＧＴＴ ＡＧＣ ＡＧＣ ＡＧＣ ＴＡＣ
ＬＣＤＲ１アミノ酸配列（配列番号１８８）
Ｑ Ｓ Ｖ Ｓ Ｓ Ｓ Ｙ
ＬＣＤＲ２核酸配列（配列番号１８９）
ＧＧＴ ＧＣＡ ＴＣＣ
ＬＣＤＲ２アミノ酸配列（配列番号１９０）
Ｇ Ａ Ｓ
ＬＣＤＲ３核酸配列（配列番号１９１）
ＣＡＧ ＣＡＧ ＴＡＴ ＴＡＴ ＧＧＣ ＴＣＡ ＣＣＴ ＴＧＧ ＡＣＧ
ＬＣＤＲ３アミノ酸配列（配列番号１９２）
Ｑ Ｑ Ｙ Ｙ Ｇ Ｓ Ｐ Ｗ Ｔ
ＨＣ核酸配列（配列番号２３７）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＡＣＧＣＣＴＴＣＡＣＣＡＣＣＴＡＴＧＧＴＡＴＣＡＣＣＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＧＡＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＧＣＧＣＴＴＡＣＡＡＴＧＧＡＡＡＴＡＣＡＡＡＣＴＡＴＧＣＡＧＡＧＡＡＧＧＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＡＣＡＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＣＧＡＡＴＡＣＡＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＧＣＣＴＧＡＧＡＴＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＡＡＧＧＧＴＣＡＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＧＧＧＡＣＴＴＡＴＴＡＴＡＡＣＣＣＣＴＴＴＧＧＴＴＴＴＧＡＴＴＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＡＧＣＡＣＣＴＣＣＧＡＧＡＧＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＡＧＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＡＴＧＧＴＣＣＣＣＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＧＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＴＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＴＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＴＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＧＣＣＴＣＣＣＧＴＣＣＴＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＧＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＴＡＡＡＴＧＡ
ＨＣアミノ酸配列（配列番号２３８）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＴＹＧＩＴＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＮＧＮＴＮＹＡＥＫＶＱＧＲＦＴＭＴＴＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＫＧＨＹＧＳＧＴＹＹＮＰＦＧＦＤＦＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
ＬＣ核酸配列（配列番号２３９）
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＡＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＴＴＴＧＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＴＡＴＴＡＴＧＧＣＴＣＡＣＣＴＴＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧ
ＬＣアミノ酸配列（配列番号２４０）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＬＹＦＣＱＱＹＹＧＳＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【0062】

ＣＡＣＮＧ１を結合する標的化リガンドの非限定的な例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）Ｆｄ断片、（ｉｖ）Ｆｖ断片、（ｖ）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（ｖｉ）ｄＡｂ断片、及び（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））を模倣するアミノ酸残基、又は拘束された（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ）ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドからなる最小認識単位が挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失した抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、及びサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の操作された分子もまた、本明細書で使用される場合、「標的化リガンド」という表現に包含される。非限定的な実施形態では、本明細書に記載のウイルスカプシドを再標的化するのに有用なＣＡＣＮＧ１に結合する抗ＣＡＣＮＧ１標的化リガンドは、ｓｃＦｖを含む含む。非限定的な例として、本明細書に記載のウイルスカプシドを再標的化するのに有用なＶ_Ｌ－（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_３－Ｖ_Ｈ形式のｓｃＦｖ配列は、重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、及び／又は重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン／軽鎖可変ドメインペア、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列のうちのいずれか１つとそれぞれ９０％、９５％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％同一であるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のセット、及び／又は配列番号１～２４０のうちのいずれか１つに記載のＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３のセットを含み得る。

【0063】

哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質に結合する標的化リガンドは、公知の方法、例えば、標的化リガンドが公知の方法に従って（例えば、組換え方法を使用して）直接挿入される直接的アプローチに従って、改変ＡＡＶカプシドタンパク質及び結果として生じるＡＡＶカプシドと会合され（例えば、それによって呈示され、動作可能に連結され、結合され）得る。例えば、上記、Ｓｔａｃｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００６）、上記、Ｗｈｉｔｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）、上記、Ｇｉｒｏｄ ｅｔ ａｌ．（１９９９）、上記、Ｇｒｉｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）、上記、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（２００１）、上記、Ｓｈｉ ａｎｄ Ｂａｒｔｌｅｔｔ（２００３）を参照されたい。哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質に結合する標的化リガンドは、公知の化学リンカーを使用して、改変ＡＡＶカプシドタンパク質及び結果として生じるＡＡＶカプシドに結合されてもよく、例えば、ＡＡＶカプシドタンパク質は、ジベンゾシコチン基又はアジド基を含むように化学的修飾されてもよく、及び任意選択的に、本明細書に記載される標的化リガンドが、ジベンゾシコチン基又はアジド基に結合されてもよく、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０２２／０２８２３４号を参照されたい。ここで標的化リガンドは、例えば、－ＣＳＮＨ－結合などを介して、ＡＡＶカプシドタンパク質の一次アミノ酸基に共有結合される。一部の実施形態では、本明細書に記載の改変カプシドは、周知の直接組換え方法に従って、直接挿入されるか、又はそれに結合される標的化リガンド、例えば、抗ＣＡＣＮＧ１抗体又はその結合部分を含む。

【0064】

結合ペア
一部の実施形態では、哺乳動物筋細胞特異的表面タンパク質に結合する標的化リガンドは、間接的組換えアプローチに従って、改変ＡＡＶカプシドタンパク質及び結果として生じるＡＡＶカプシドと会合され（例えば、それによって呈示され、動作可能に連結され、結合され）得、ＡＡＶカプシドタンパク質が、結合ペアの第１のメンバー（例えば、異種足場）を含むように改変され、任意選択的に、結合ペアの第１のメンバーは、結合ペアの第２の同族メンバー（例えば、アダプター）に連結（例えば、共有結合又は非共有結合で結合）されており、更に任意選択的に、結合ペアの第２の同族メンバーは、標的化リガンドに融合される。非限定的な例示的な結合ペアは、Ｂｕｎｉｎｇ ａｎｄ Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ（２０１９）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｌｉｎ Ｄｅｖ １２：２４８－２６５に列挙されている。

【0065】

したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載のカプシドタンパク質の改変は、例えば、結合ペア（例えば、タンパク質：タンパク質結合ペア、タンパク質：核酸結合ペア）の第１のメンバーを挿入する改変などのｃａｐ遺伝子の改変を介して、遺伝子レベルでの改変の結果一般的に生じるもの、Ｃａｐタンパク質によって呈示される検出可能な標識などを含む。

【0066】

一部の実施形態では、第１のメンバーは、免疫グロブリン定常ドメインとの結合ペアを形成する。一部の実施形態では、第１のメンバーは、金属イオン、例えば、Ｎｉ^２＋、Ｃｏ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｚｎ^２＋、Ｆｅ^３＋などと結合ペアを形成する。一部の実施形態では、第１のメンバーは、ストレプトアビジン、ＳｔｒｅｐＩＩ、ＨＡ、Ｌ１４、４Ｃ－ＲＧＤ、ＬＨ、及びプロテインＡからなる群から選択される。

【0067】

一部の実施形態では、結合ペアは、酵素：核酸結合ペアを含む。一部の実施形態では、第１のメンバーは、ＨＵＨ－エンドヌクレアーゼ又はＨＵＨタグを含み、第２のメンバーは、核酸結合ドメインを含む。一部の実施形態では、第１のメンバーは、ＨＵＨタグを含む。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＵ．Ｓ．２０２１／０１８００８２を参照されたい。

【0068】

一部の実施形態では、本発明のカプシドタンパク質は、ペプチド：ペプチド結合ペアの少なくとも第１のメンバーを含む。

【0069】

一部の実施形態では、ペプチド：ペプチド結合ペアの第１のメンバー及び第２のメンバーの各々は、インテインを含む。例えば、Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２０２１）Ａｄｖ．Ｓｃｉ．８：２００４０１８（１／２２）、Ｍｕｉｋ ｅｔ ａｌ．（２０１７） Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ １４４：８４を参照されたい。これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0070】

一部の実施形態では、第１のメンバーは、Ｂ細胞エピトープであり、例えば、約１アミノ酸～約３５アミノ酸の長さであり、例えば、免疫グロブリン可変ドメインなどの抗体パラトープとの結合ペアを形成する。一部の実施形態では、本発明のカプシドタンパク質は、結合ペアの第１のメンバーとして検出可能な標識を含むように改変される。多くの検出可能な標識が当分野で公知である。（例えば、Ｎｉｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９７）”Ａｆｆｉｎｉｔｙ ｆｕｓｉｏｎ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ”Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ １１：１－１６、Ｔｅｒｐｅ ｅｔ ａｌ．（２００３）”Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｔａｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｕｓｉｏｎｓ：Ｆｒｏｍ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ｔｏ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｓｙｓｔｅｍｓ” Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６０：５２３－５３３、及びそれらの中の参考文献を参照されたい）。検出可能な標識としては、限定されないが、固定化二価カチオン（例えば、Ｎｉ^２＋）に結合するポリヒスチジン検出可能標識（例えば、Ｈｉｓ－６、Ｈｉｓ－８、又はＨｉｓ－１０）、（例えば、インビボでビオチン化ポリペプチド配列上の）固定化アビジンに結合するビオチン部分、固定化グルタチオンに結合するＧＳＴ（グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ）配列、固定化Ｓタンパク質に結合するＳタグ、固定化抗体若しくはドメイン又はそれらの断片に結合する抗原（例えば、対応する抗体に結合するＴ７、ｍｙｃ、ＦＬＡＧ、及びＢタグを含む）、ＦＬＡＳＨ（登録商標）タグ（特定のヒ素系部分に連結する高検出可能な標識）、固定化リガンドに結合する受容体又は受容体ドメイン（又はその逆）、固定化ＩｇＧに結合するプロテインＡ又はその誘導体（例えばＺ）、固定化アミロースに結合するマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、固定化アルブミンに結合するアルブミン結合タンパク質、固定化キチンに結合するキチン結合ドメイン、固定化カルモジュリンに結合するカルモジュリン結合ペプチド、及び固定化セルロースに結合するセルロース結合ドメイン、が挙げられる。別の検出可能な標識の例は、Ｃｏｖａｌｙｓから市販されているＳＮＡＰ－タグである（ｗｗｗ．ｃｏｖａｌｙｓ．ｃｏｍ）。一部の実施形態では、本明細書に開示される検出可能な標識は、抗体パラトープによって認識される検出可能な標識を含み、検出可能な標識及び抗体パラトープはタンパク質：タンパク質結合ペアを形成する。

【0071】

一部の実施形態では、本発明のカプシドタンパク質は、検出可能な標識を含むタンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバーを含み、これはまた、Ｃａｐタンパク質の検出及び／若しくは単離に使用されてもよく、並びに／又はタンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバーとして使用されてもよい。一部の実施形態では、検出可能な標識は、検出可能な標識と、目的の細胞により発現される標的の両方に結合し得る多特異性結合タンパク質を含む標的化リガンドの結合のために、タンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバーとしての役割を果たす。一部の実施形態では、本発明のＣａｐタンパク質は、ｃ－ｍｙｃ（配列番号２４６）を含むタンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバーを含む。タンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバーとしての検出可能な標識の使用は、例えば、ＷＯ２０１９／００６０４３に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0072】

一部の実施形態では、第１のメンバーは、Ｂ１エピトープ（配列番号２４７）を含む。一部の実施形態では、カプシドタンパク質は、ＶＰ３領域にＢ１エピトープを含むように改変される。一部の実施形態では、第１のメンバーはＦＬＡＧ、ＨＡ及びｃ－ｍｙｃ（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ、配列番号２４６）からなる群から選択される。

【0073】

一部の実施形態では、カプシドタンパク質は、タンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバーを含み、この場合においてタンパク質：タンパク質結合ペアは、共有結合的なイソペプチド結合を形成する。一部の実施形態では、ペプチド：ペプチド結合ペアの第１のメンバーは、イソペプチド結合を介して、ペプチド：ペプチド結合ペアの同族の第２のメンバーに共有結合され、任意選択的に、この場合においてペプチド：ペプチド結合ペアの同族の第２のメンバーは、標的化リガンドと融合され、標的化リガンドは、目的の細胞によって発現される標的に結合する。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアは、ＳｐｙＴａｇ：ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ、ＳｐｙＴａｇ００２：ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２、ＳｐｙＴａｇ００３：ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００３、ＳｐｙＴａｇ：ＫＴａｇ、Ｉｓｏｐｅｐｔａｇ：ｐｉｌｉｎ－Ｃ、及びＳｎｏｏｐＴａｇ：ＳｎｏｏｐＣａｔｃｈｅｒからなる群から選択されてもよい。一部の実施形態では、第１のメンバーは、ＳｐｙＴａｇ（又はその生物学的活性部分若しくはバリアント）であり、タンパク質（第２の同族メンバー）は、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ（又はその生物学的活性部分若しくはバリアント）である。一部の実施形態では、第１のメンバーは、ＳｐｙＴａｇ（又はその生物学的活性部分若しくはバリアント）であり、タンパク質（第２の同族メンバー）は、ＫＴａｇ（又はその生物学的活性部分若しくはバリアント）である。一部の実施形態では、第１のメンバーは、ＫＴａｇ（又はその生物学的活性部分若しくはバリアント）であり、タンパク質（第２の同族メンバー）は、ＳｐｙＴａｇ（又はその生物学的活性部分若しくはバリアント）である。一部の実施形態では、第１のメンバーは、ＳｎｏｏｐＴａｇ（又はその生物学的活性部分若しくはバリアント）であり、タンパク質（第２の同族メンバー）は、ＳｎｏｏｐＣａｔｃｈｅｒ（又はその生物学的活性部分若しくはバリアント）である。一部の実施形態では、第１のメンバーは、Ｉｓｏｐｅｐｔａｇ（又はその生物学的活性部分若しくはバリアント）であり、タンパク質（第２の同族メンバー）は、Ｐｉｌｉｎ－Ｃ（又はその生物学的活性部分若しくはバリアント）である。一部の実施形態では、第１のメンバーは、ＳｐｙＴａｇ００２（又はその生物学的活性部分若しくはバリアント）であり、タンパク質（第２の同族メンバー）は、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００２（又はその生物学的活性部分若しくはバリアント）である。一部の実施形態では、第１のメンバーは、ＳｐｙＴａｇ００３（又はその生物学的活性部分若しくはバリアント）であり、タンパク質（第２の同族メンバー）は、ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ００３（又はその生物学的活性部分若しくはバリアント）である。一部の実施形態では、本発明のＣａｐタンパク質は、ＳｐｙＴａｇ、又はその生物学的活性部分若しくはバリアントを含む。タンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバーの使用は、ＷＯ２０１９／００６０４６に記載されており、その全体が本明細書に組み込まれる。

【0074】

一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバー、及び／又は検出可能な標識は、例えば少なくとも１アミノ酸の長さであるアミノ酸スペーサーなどの第１又は第２のリンカーを介して、本発明のＣａｐタンパク質に動作可能に連結される（本発明のＣａｐタンパク質を用いてインフレームで翻訳される、本発明のＣａｐタンパク質に化学的に付加される、及び／又は本発明のＣａｐタンパク質により呈示される）。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバーは、例えば第１及び／又は第２のアミノ酸スペーサーなどの第１及び／又は第２のリンカーに隣接され、スペーサーの各々は、少なくとも１アミノ酸の長さである。

【0075】

一部の実施形態では、第１及び／又は第２のリンカーは同一ではない。一部の実施形態では、第１及び／又は第２のリンカーは、それぞれ独立して１又は２アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び／又は第２のリンカーは、それぞれ独立して１、２又は３アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び／又は第２のリンカーは、それぞれ独立して１、２、３又は４アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び／又は第２のリンカーは、それぞれ独立して１、２、３、４又は５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び／又は第２のリンカーは、それぞれ独立して１、２、３、４又は５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び／又は第２のリンカーは、それぞれ独立して１、２、３、４、５又は６アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び／又は第２のリンカーは、それぞれ独立して１、２、３、４、５、６又は７アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び／又は第２のリンカーは、それぞれ独立して１、２、３、４、５、６、７又は８アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び／又は第２のリンカーは、それぞれ独立して１、２、３、４、５、６、７、８又は９アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び／又は第２のリンカーは、それぞれ独立して１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び／又は第２のリンカーは、それぞれ独立して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０アミノ酸、又はそれ以上の長さである。

【0076】

一部の実施形態では、第１及び第２のリンカーは、配列及び／又は長さにおいて同一であり、各々、１アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び第２のリンカーは、長さにおいて同一であり、各々、１アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び第２のリンカーは、長さにおいて同一であり、各々、２アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び第２のリンカーは、長さにおいて同一であり、各々、３アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び第２のリンカーは、長さにおいて同一であり、各々、４アミノ酸の長さであり、例えばリンカーは、ＧＬＳＧ（配列番号２４８）である。一部の実施形態では、第１及び第２のリンカーは、長さにおいて同一であり、各々、５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び第２のリンカーは、長さにおいて同一であり、各々、６アミノ酸の長さであり、例えば第１及び第２のリンカーは各々、ＧＬＳＧＳＧ（配列番号２４９）の配列を含む。一部の実施形態では、第１及び第２のリンカーは、長さにおいて同一であり、各々、７アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び第２のリンカーは、長さにおいて同一であり、各々、８アミノ酸の長さであり、例えば第１及び第２のリンカーは各々、ＧＬＳＧＬＳＧＳ（配列番号２５０）の配列を含む。一部の実施形態では、第１及び第２のリンカーは、長さにおいて同一であり、各々、９アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、第１及び第２のリンカーは、長さにおいて同一であり、各々、１０アミノ酸の長さであり、例えば第１及び第２のリンカーは各々、ＧＬＳＧＬＳＧＬＳＧ（配列番号２５１）又はＧＬＳＧＧＳＧＬＳＧ（配列番号２５２）の配列を含む。一部の実施形態では、第１及び第２のリンカーは、長さにおいて同一であり、各々の長さは、１０アミノ酸よりも長い。

【0077】

概して本明細書に記載されるタンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、例えば、自身による特異的結合ペアの第１のメンバーを含むか、又は１つ以上のリンカーと組み合わされて、約５アミノ酸～約５０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、少なくとも５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、６アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、７アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、８アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、９アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、１０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、１１アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、１２アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、１３アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、１４アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、１５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、１６アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、１７アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、１８アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、１９アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、２０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、２１アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、２２アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、２３アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、２４アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、２５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、２６アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、２７アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、２８アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、２９アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、３０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、３１アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、３２アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、３３アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、３４アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、３５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、３６アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、３７アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、３８アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、３９アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、４０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、４１アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、４２アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、４３アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、４４アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、４５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、４６アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、４７アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、４８アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、４９アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、タンパク質：タンパク質結合ペアのアミノ酸配列の第１のメンバーは、５０アミノ酸の長さである。

【0078】

修飾カプシドタンパク質を含む修飾カプシド
一部の実施形態では、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、モザイクカプシドであり、例えば、少なくとも２セットのＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３タンパク質を含み、各セットは、異なるｃａｐ遺伝子によりコードされる。本明細書のモザイクカプシドは概して、結合ペアの第１のメンバーと、結合ペアの第１のメンバーを欠く第２の対応するウイルスカプシドタンパク質とを含むように改変された、第１のウイルスカプシドタンパク質のモザイクを指す。モザイクカプシドに関連して、結合ペアの第１のメンバーを欠く第２のウイルスカプシドタンパク質は、参照カプシドタンパク質と呼称される場合もあり、参照ｃａｐ遺伝子によりコードされる。一部のモザイクカプシドの実施形態では、好ましくは、タンパク質：タンパク質ペアの第１のメンバーで改変されたＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質がキメラカプシドタンパク質ではない場合、ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３参照カプシドタンパク質は、参照カプシドタンパク質が結合ペアの第１のメンバーを欠いていることを除き、結合ペアの第１のメンバーで改変されたウイルスＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含み得る。一部のモザイクカプシドの実施形態では、ＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３参照カプシドタンパク質は、参照カプシドタンパク質が結合ペアの第１のメンバーを欠いていることを除き、結合ペアの第１のメンバーで改変されたウイルスＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質に対応する。一部の実施形態では、ＶＰ１参照カプシドタンパク質は、参照カプシドタンパク質が結合ペアの第１のメンバーを欠いていることを除き、結合ペアの第１のメンバーで改変されたウイルスＶＰ１カプシドタンパク質に対応する。一部の実施形態では、ＶＰ２参照カプシドタンパク質は、参照カプシドタンパク質が結合ペアの第１のメンバーを欠いていることを除き、結合ペアの第１のメンバーで改変されたウイルスＶＰ２カプシドタンパク質に対応する。一部の実施形態では、ＶＰ３参照カプシドタンパク質は、参照カプシドタンパク質が結合ペアの第１のメンバーを欠いていることを除き、結合ペアの第１のメンバーで改変されたウイルスＶＰ３カプシドタンパク質に対応する。結合ペアの第１のメンバーを含むように更に改変されたキメラＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質を含む一部のモザイクカプシドの実施形態では、参照タンパク質は、対応するカプシドタンパク質であってもよく、その一部は、キメラカプシドタンパク質の一部を形成する。一部の実施形態では非限定的な例として、結合ペアの第１のメンバーを含むように改変されたキメラＡＡＶ２／ＡＡＡＶ ＶＰ１カプシドタンパク質を含むモザイクカプシドは、参照カプシドタンパク質として、第１のメンバーを欠くＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドタンパク質、第１のメンバーを欠くＡＡＡＶ ＶＰ１カプシドタンパク質、第１のメンバーを欠くキメラＡＡＶ２／ＡＡＡＶ ＶＰ１カプシドタンパク質を更に含んでもよい。同様に一部の実施形態では、結合ペアの第１のメンバーを含むように改変されたキメラＡＡＶ２／ＡＡＡＶ ＶＰ２カプシドタンパク質を含むモザイクカプシドは、参照カプシドタンパク質として、第１のメンバーを欠くＡＡＶ２ ＶＰ２カプシドタンパク質、第１のメンバーを欠くＡＡＡＶ ＶＰ１カプシドタンパク質、第１のメンバーを欠くキメラＡＡＶ２／ＡＡＡＶ ＶＰ２カプシドタンパク質を更に含んでもよい。一部の実施形態では、結合ペアの第１のメンバーを含むように改変されたキメラＡＡＶ２／ＡＡＡＶ ＶＰ３カプシドタンパク質を含むモザイクカプシドは、参照カプシドタンパク質として、第１のメンバーを欠くＡＡＶ２ ＶＰ２カプシドタンパク質、第１のメンバーを欠くＡＡＡＶ ＶＰ１カプシドタンパク質、第１のメンバーを欠くキメラＡＡＶ２／ＡＡＡＶ ＶＰ３カプシドタンパク質を更に含んでもよい。一部のモザイクカプシドの実施形態では、参照カプシドタンパク質は、結合ペアの第１のメンバーを欠き、結合ペアの第１のメンバーで改変された第１のカプシドタンパク質とカプシドを形成することができる限りは、任意のカプシドタンパク質であってもよい。

【0079】

概してモザイク粒子は、改変及び参照Ｃａｐ遺伝子の混合物を、指定される比率で産生細胞にトランスフェクトすることにより作製されてもよい。粒子中のタンパク質サブユニットの比率、例えば改変ＶＰタンパク質：非改変ＶＰタンパク質の比率は、必ずではないが、結合ペアの第１のメンバーで改変された第１のカプシドタンパク質をコードするｃａｐ遺伝子の少なくとも２種と、１つ以上の参照ｃａｐ遺伝子の比率、例えばパッケージング細胞へとトランスフェクトされる、改変ｃａｐ遺伝子：参照ｃａｐ遺伝子などの比率を、化学量論的に反映している。一部の実施形態では、粒子中のタンパク質サブユニットの比率は、パッケージング細胞へとトランスフェクトされる、改変ｃａｐ遺伝子：参照ｃａｐ遺伝子の比率を化学量論的に反映しない。

【0080】

一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、約１：５９～約５９：１の範囲である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットは、少なくとも約１：１である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約３０の改変カプシドタンパク質と、約３０の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：２である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約２０の改変カプシドタンパク質と、約４０の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約３：５である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：３である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約１５の改変カプシドタンパク質と、約４５の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：４である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約１２の改変カプシドタンパク質と、約４８の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：５である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約１０の改変カプシドタンパク質と、約５０の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：６である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：７である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：８である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：９である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約６の改変カプシドタンパク質と、約５４の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：１０である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：１１である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約５の改変カプシドタンパク質と、約５５の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：１２である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：１３である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：１４である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約４の改変カプシドタンパク質と、約５６の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：１５である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：１９である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約３の改変カプシドタンパク質と、約５７の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：２９である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約２の改変カプシドタンパク質と、約５８の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１：５９である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約２：１である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約４０の改変カプシドタンパク質と、約２０の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約５：３である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約３：１である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約４５の改変カプシドタンパク質と、約１５の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約４：１である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約４８の改変カプシドタンパク質と、約１２の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約５：１である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約５０の改変カプシドタンパク質と、約１０の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約６：１である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約７：１である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約８：１である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約９：１である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約５４の改変カプシドタンパク質と、約６の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１０：１である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１１：１である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約５５の改変カプシドタンパク質と、約５の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１２：１である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１３：１である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１４：１である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約５６の改変カプシドタンパク質と、約４の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１５：１である。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約１９：１である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約５７の改変カプシドタンパク質と、約３の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約２９：１である（例えば、モザイクウイルス粒子は、約５８の改変カプシドタンパク質と、約２の参照カプシドタンパク質を含む）。一部のモザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、少なくとも約５９：１である。

【0081】

一部の非モザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、１：０であってもよく、この場合において非モザイクウイルス粒子の各カプシドタンパク質は、結合ペアの第１のメンバーで改変される。一部の非モザイクウイルス粒子の実施形態では、タンパク質サブユニットの比率は、０：１であってもよく、この場合において非モザイクウイルス粒子の各カプシドタンパク質は、結合ペアの第１のメンバーで改変されない。

【0082】

挿入部位
少なくとも広範囲かつ多数の近縁なファミリーメンバーが高度に保存されていることにより、列挙されるＡＡＶ以外のＡＡＶの対応する挿入部位は、アミノ酸のアライメント又はカプシド構造の比較を行うことによって特定することができる。例えば、異なるＡＡＶカプシドタンパク質の例示的なアライメントについては、Ｒｕｔｌｅｄｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：３０９－１９、Ｍｉｅｔｚｓｃｈ ｅｔ ａｌ．（２０１９）Ｖｉｒｕｓｅｓ １１，３６２，１－３４、及び米国特許第９，６２４，２７４号を参照されたい。それらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例えば、Ｍｉｅｔｚｃｓｈ ｅｔ ａｌ．（２０１９）は、図７で様々なｄｅｐｅｎｄｏｐａｒｖｏｖｉｒｕｓのリボンのオーバーレイを提供しており、可変領域ＶＲ Ｉ～ＶＲ ＩＸを描写している。本命サイ著に記載されるような構造解析、及び配列解析を使用して、当業者であれば可変領域内のどのアミノ酸が、例えば本明細書に記載の標的化リガンド、結合ペアの第１のメンバー及び／又は検出可能な標識の挿入を受け入れられ得る、ＡＡＶのアミノ酸配列に相当するかを決定することができる。

【0083】

概して、標的化リガンド、結合ペアの第１のメンバー、及び／又は検出可能な標識は、ＡＡＶカプシドタンパク質の可変領域又は可変ループ、ＡＡＶカプシドタンパク質のＧＨループなどに挿入され得る。

【0084】

一部の実施形態では、結合ペアの第１のメンバー及び／又は検出可能な標識は、非霊長類動物ＡＡＶのＶＰ１カプシドタンパク質において、ＡＡＶ２カプシドタンパク質ＶＰ１のＧ４５３、ＡＡＶ２カプシドタンパク質ＶＰ１のＮ５８７、ＡＡＶ９カプシドタンパク質ＶＰ１のＧ４５３、及びＡＡＶ９カプシドタンパク質ＶＰ１のＡ５８９からなる群から選択されるアミノ酸の位置に対応するアミノ酸の位置の後に、挿入される。一部の実施形態では、結合ペアの第１のメンバー及び／又は検出可能な標識は、非霊長類動物ＡＡＶのＶＰ１カプシドタンパク質において、ＡＡＶ２ ＶＰ１カプシドのＮ５８７及びＲ５８８に対応するアミノ酸の間に挿入される。非霊長類動物ＶＰ１カプシドタンパク質の追加の好適な挿入部位としては、ＡＡＶ２のＶＰ１カプシドタンパク質のＩ－１、Ｉ－３４、Ｉ－１３８、Ｉ－１３９、Ｉ－１６１、Ｉ－２６１、Ｉ－２６６、Ｉ－３８１、Ｉ－４４７、Ｉ－４４８、Ｉ－４５９、Ｉ－４７１、Ｉ－５２０、Ｉ－５３４、Ｉ－５７０、Ｉ－５７３、Ｉ－５８４、Ｉ－５８７、Ｉ－５８８、Ｉ－５９１、Ｉ－６５７、Ｉ－６６４、Ｉ－７１３、及びＩ－７１６に対応する部位が挙げられる（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：８６３５－８６４７）。本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質は、Ｉ－１、Ｉ－３４、Ｉ－１３８、Ｉ－１３９、Ｉ－１６１、Ｉ－２６１、Ｉ－２６６、Ｉ－３８１、Ｉ－４４７、Ｉ－４４８、Ｉ－４５９、Ｉ－４７１、Ｉ－５２０、Ｉ－５３４、Ｉ－５７０、Ｉ－５７３、Ｉ－５８４、Ｉ－５８７、Ｉ－５８８、Ｉ－５９１、Ｉ－６５７、Ｉ－６６４、Ｉ－７１３、Ｉ－７１６、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるＡＡＶ２カプシドタンパク質の位置に対応する位置に挿入された、結合ペアの第１のメンバー及び／又は検出可能な標識を含む非霊長類動物カプシドタンパク質であってもよい。非霊長類動物ＡＡＶの追加の適切な挿入部位としては、ＡＡＶ１のＩ－５８７又はＩ－５９０、ＡＡＶ１のＩ－５８９、ＡＡＶ３のＩ－５８５、ＡＡＶ４のＩ－５８４又はＩ－５８５、及びＡＡＶ５のＩ－５７５又はＩ－５８５に対応する部位が挙げられる。一部の実施形態では、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質は、Ｉ－５８７（ＡＡＶ１）、Ｉ－５８９（ＡＡＶ１）、Ｉ－５８５（ＡＡＶ３）、Ｉ－５８５（ＡＡＶ４）、Ｉ－５８５（ＡＡＶ５）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される位置に対応する位置に挿入された、標的化配列、結合ペアの第１のメンバー及び／又は検出可能な標識を含む、非霊長類動物カプシドタンパク質であってもよい。

【0085】

一部の実施形態では、結合ペアの第１のメンバー、及び／又は検出可能な標識は、非霊長類動物ＡＡＶのＶＰ１カプシドタンパク質において、鳥類ＡＡＶカプシドタンパク質ＶＰ１のＩ４４４、鳥類ＡＡＶカプシドタンパク質ＶＰ１のＩ５８０、フトアゴヒゲトカゲＡＡＶカプシドタンパク質ＶＰ１のＩ５７３、フトアゴヒゲトカゲＡＡＶカプシドタンパク質ＶＰ１のＩ４３６、アシカＡＡＶカプシドタンパク質ＶＰ１のＩ４２９、アシカＡＡＶカプシドタンパク質ＶＰ１のＩ４３０、アシカＡＡＶカプシドタンパク質ＶＰ１のＩ４３１、アシカＡＡＶカプシドタンパク質ＶＰ１のＩ４３２、アシカＡＡＶカプシドタンパク質ＶＰ１のＩ４３３、アシカＡＡＶカプシドタンパク質ＶＰ１のＩ４３４、アシカＡＡＶカプシドタンパク質ＶＰ１のＩ４３６、アシカＡＡＶカプシドタンパク質ＶＰ１のＩ４３７、及びアシカＡＡＶカプシドタンパク質ＶＰ１のＩ５６５からなる群から選択されるアミノ酸の位置に対応するアミノ酸の位置の後に、挿入される。

【0086】

本明細書において、Ｉ－＃＃＃、Ｉ＃などの命名は、ＡＡＶカプシドタンパク質のＶＰ１タンパク質に関するアミノ酸番号を＃＃＃に命名する挿入部位（Ｉ）を指すが、このような挿入は、所与のアミノ酸の５アミノ酸のＮ末端又はＣ末端、好ましくは所与のアミノ酸の３アミノ酸、より好ましくは２アミノ酸、特に１アミノ酸のＮ末端又はＣ末端の配列中の１つのアミノ酸のＮ末端若しくはＣ末端に、好ましくはＣ末端に直接位置してもよい。更に本明細書で言及される位置は、ＡＡＶカプシド遺伝子によってコードされるＶＰ１タンパク質との比較であり、対応する位置（及びその点変異）は、適切なＡＡＶカプシド遺伝子によってコードされるＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３タンパク質の配列アライメントを実行することによって、カプシド遺伝子によってコードされるＶＰ２及びＶＰ３カプシドタンパク質を容易に特定することができる。

【0087】

したがって、開始コドンがずれた同一遺伝子の重複するリーディングフレームによってカプシドタンパク質はコードされているため、ｃａｐ遺伝子のこれら部位のうちの１つのコード核酸の対応する位置への挿入は、ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３の挿入ももたらす。したがって例えばＡＡＶ２について、この命名に従えば、アミノ酸１～１３８の挿入はＶＰ１にのみ挿入され、１３８～２０３の挿入は、ＶＰ１及びＶＰ２に挿入され、２０３～Ｃ末端の挿入は、ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３に挿入され、これは当然のことながら、挿入部位Ｉ－５８７についても当てはまる。したがって、本発明は、ＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３タンパク質における対応する挿入を有するＡＡＶの構造遺伝子を包含する。

【0088】

また本明細書において、本発明のＶＰ３カプシドタンパク質をコードする核酸も提供される。ＡＡＶカプシドタンパク質は、必ずではないが、同一遺伝子のリーディングフレームを、開始コドンをずらして重複させることによりコードされる場合がある。一部の実施形態では、本発明のＶＰ３カプシドタンパク質をコードする核酸は、本発明のＶＰ２カプシドタンパク質又はＶＰ１カプシドタンパク質はコードしない。一部の実施形態では、本発明のＶＰ３カプシドタンパク質をコードする核酸は、本発明のＶＰ２カプシドタンパク質はコードし得るが、本発明のＶＰ１カプシドはコードしない。一部の実施形態では、本発明のＶＰ３カプシドタンパク質をコードする核酸は、本発明のＶＰ２カプシドタンパク質、及び本発明のＶＰ１カプシドもコードし得る。

【0089】

一部の実施形態では、結合ペアの第１及び第２のメンバーを含む改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシド（例えば、この場合において第２のメンバーは、標的化リガンドに動作可能に連結され、多特異性結合タンパク質を含むなど）は、特定の細胞に感染する能力を有し、例えば、（結合ペアの第１及び第２のメンバーのいずれか、又は両方を欠き、例えば対照カプシドタンパク質を含むという点を除き、改変ウイルスカプシドタンパク質と同一である）対照ウイルスカプシドの能力と比較して、特定の細胞を標的とし、結合する能力が強化されている。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率が検出不可能であることと比較して、検出可能な形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも１０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも２０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも３０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも４０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも５０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも６０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも７０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも７５％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも８０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも８５％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照カプシドの形質導入効率よりも９０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも９５％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結されたタンパク質：タンパク質結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも９９％高い形質導入効率を示す。

【0090】

一部の実施形態では、結合ペアの第１及び第２のメンバーを含む改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシド（例えば、この場合において第２のメンバーは、標的化リガンドに動作可能に連結され、多特異性結合タンパク質を含むなど）は、特定の細胞に感染する能力を有し、例えば、（結合ペアの第１及び第２のメンバーのいずれか、又は両方を欠き、例えば対照カプシドタンパク質を含むという点を除き、改変ウイルスカプシドタンパク質と同一である）対照ウイルスカプシドの能力と比較して、特定の細胞を標的とし、結合する能力が強化されている。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率が検出不可能であることと比較して、検出可能な形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも１０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも２０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも３０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも４０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも５０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも６０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも７０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも７５％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも８０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも８５％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照カプシドの形質導入効率よりも９０％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも９５％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも９９％高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも１．５倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも２倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも３倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも４倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも５倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも６倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも７倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも８倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも９倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも１０倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照カプシドの形質導入効率よりも少なくとも２０倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの適切な第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも３０倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも４０倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも５０倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも６０倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも７０倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも８０倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも９０倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、標的化リガンドに連結された結合ペアの第１及び第２のメンバーに結合された、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含むウイルスカプシドは、対照ウイルスカプシドの形質導入効率よりも少なくとも１００倍高い形質導入効率を示す。一部の実施形態では、非霊長類動物ＡＡＶ、遠縁のＡＡＶ、又はそれらの組み合わせのカプシドタンパク質のアミノ酸配列、並びに任意選択的に結合ペアの第１及び第２のメンバー（例えばこの場合において第２のメンバーは、標的化リガンドに動作可能に連結され、多特異性結合タンパク質を含むなど）を含む、ウイルスカプシドタンパク質を含む本発明のウイルス粒子は、適切な対照ウイルス粒子（例えば、非霊長類動物ＡＡＶ、遠縁のＡＡＶ又はそれらの組み合わせのカプシドタンパク質のアミノ酸配列を含むウイルスカプシドタンパク質の一部として、本発明のウイルスカプシド中の部分が含まれるＡＡＶ血清型のウイルスカプシドを含む）であって、また任意選択的に、結合ペアの第１及び第２のメンバーを含む（例えばこの場合において、第２のメンバーは、標的化リガンドに動作可能に連結され、多特異性結合タンパク質などを含む）と比較して、ヒト患者から単離された血清中の既存抗体による中和をより上手く回避することができる。一部の実施形態では、非霊長類動物ＡＡＶ、遠縁のＡＡＶ又はそれらの組み合わせのカプシドタンパク質のアミノ酸配列を含むウイルスカプシドタンパク質を含む本発明のウイルス粒子は、適切な対照ウイルス粒子と比較して、中和（例えば、５０％以上の感染阻害）に、少なくとも２倍多い総ＩＶＩＧ又はＩｇＧを必要とする（例えば、本発明のウイルス粒子は、対照ウイルス粒子の少なくとも２倍のＩＣ５０値を有する）。

【0091】

検出可能な標識を含む本発明の一部の実施形態では、標的化リガンドは、（ｉ）検出可能な標識に特異的に結合する抗体パラトープ、及び（ｉｉ）（例えば精製用）ビーズの表面に結合され得る、又は標的細胞により発現され得る、受容体に特異的に結合する第２の結合ドメイン、を含む、多特異性結合分子を含む。したがって、（ｉ）検出可能な標識に特異的に結合する抗体パラトープ、及び（ｉｉ）受容体に特異的に結合する第２の結合ドメイン、を含む多特異性結合分子は、ウイルス粒子を標的とする。そのような「標的化」又は「指向」は、野生型ウイルス粒子が生物体内の組織及び／又はいくつかの器官内のいくつかの細胞を標的化し、検出可能な標識の挿入によって組織又は器官の広範な標的化を低下又は無効化し、生物体内の組織又はより特定の器官中のより特定の細胞への再標的化は多特異性結合分子で達成されるというシナリオを含み得る。そのような再標的化又は再指向はまた、野生型ウイルス粒子が組織を標的化し、組織の標的化が、検出可能な標識の挿入によって低下して無効にされ、完全に異なる組織への再標的化は、多特異性結合分子で達成されるというシナリオも含み得る。本明細書に記載される抗体パラトープは概して、例えば重鎖及び／又は軽鎖可変ドメインのＣＤＲ３領域など、検出可能な標識を特異的に認識する相補性決定領域（ＣＤＲ）を最小限で含む。一部の実施形態では、多特異性結合分子は、検出可能な標識に特異的結合する抗体パラトープを含む抗体（又はその一部）を含む。例えば多特異性結合分子は、単一ドメイン重鎖可変領域又は単一ドメイン軽鎖可変領域を含んでもよく、この場合において単一ドメイン重鎖可変領域又は単一ドメイン軽鎖可変領域は、検出可能な標識に特異的結合する抗体パラトープを含む。一部の実施形態では、多特異性結合分子は、Ｆｖ領域を含んでもよく、例えば、多特異性結合分子は、検出可能な標識に特異的に結合する抗体パラトープを含む、ｓｃＦｖを含んでもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載される多特異性結合分子は、ｃ－ｍｙｃ（配列番号２４６）に特異的に結合する抗体パラトープを含む。

【0092】

本発明の１つの実施形態は、本発明の改変ウイルスカプシドタンパク質を含む多量体構造である。多量体構造は、本明細書に記載される特異的結合ペアの第１のメンバーを含む、少なくとも５個、好ましくは少なくとも１０個、より好ましくは少なくとも３０個、最も好ましくは少なくとも６０個の改変ウイルスカプシドタンパク質を含む。それらは、普通のウイルスカプシド（空のウイルス粒子）、又はウイルス粒子（目的のヌクレオチドをカプシド封入しているカプシド）を形成することができる。ウイルスゲノムを含むウイルス粒子の形成は、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドの使用に対し、非常に好ましい特性である。

【0093】

本発明の更なる実施形態は、少なくとも１つの改変ウイルスカプシドタンパク質及び／又はそれをコードする核酸の使用、好ましくは、製造のための、及び標的細胞への目的のヌクレオチドの導入における使用のための少なくとも１つの多量体構造（例えばウイルス粒子）の使用である。

【0094】

使用及び作製方法
本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質の更なる実施形態は、目的のヌクレオチド、例えば、レポーター遺伝子又は治療遺伝子を標的細胞に送達するためのそれらの使用である。一般的に目的のヌクレオチドのパッケージングは、ＡＡＶ ＩＴＲ配列間でＡＡＶゲノムを目的の遺伝子と置換して、トランスファープラスミドを作製することを含み、次いで、周知の方法に従ってＡＡＶカプシドに封入される。したがって、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドは、トランスファープラスミド及び／又は目的のヌクレオチドを封入してもよく、これは一般に、目的の遺伝子、例えば、レポーター遺伝子又は治療遺伝子、又は目的の遺伝子の一部（ウイルスプロモーター又は非ウイルスプロモーターの制御下にあり得る）に隣接する５’及び３’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列を含み得る。ＡＡＶウイルス粒子をパッケージングする周知の方法によると、改変ウイルスカプシド、５’ＩＴＲ、及び３’ＩＴＲは、同じＡＡＶ血清型のものである必要はない。一実施形態では、目的のトランスファープラスミド及び／又はヌクレオチドは、５’から３’に向かって、５’ＩＴＲ、プロモーター、遺伝子（例えば、レポーター及び／又は治療遺伝子）、及び３’ＩＴＲを含む。

【0095】

ＡＡＶトランスファープラスミド設計の考慮事項は、野生型ＡＡＶゲノムが約４．７ｋｂであることである。したがって、個々のＡＡＶのパッケージング能力を超える目的のヌクレオチドのパッケージングを提供する周知の戦略が、本明細書に含まれる。かかる戦略としては、ＩＴＲ介在性組換えを利用して、２つの相補的ベクターゲノム由来の分子間組換えＩＴＲにわたる転写スプライシング、相同性によるベクター組換え、ＲＮＡトランススプライシング、及び／又は分割インテイン設計を介したタンパク質「トランススプライシング」によって、野生型ＡＡＶゲノムよりも大きい目的の遺伝子を発現するデュアルベクター戦略が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｎａｋａｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：５２７－５３２、Ｓｕｎ，Ｌ．（２０００）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．６：５９９－６０２（２０００）、Ｇｈｏｓｈ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６：１２４－１３０（２００８）、Ｌａｉ，Ｙ（２００５）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１４３５－１４３９、Ｃｈｅｗ，Ｗ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １３：８６８－８７４、Ｌｉ，Ｊ．（２００８）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１９：９５８－９６４を参照されたい。それら文献の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0096】

標的細胞に大型遺伝子を導入するためのデュアルＡＡＶベクター戦略が記載されており、これは、デュアルベクター中の重複領域を含むトランススプライシング、及び２つのハイブリッドを含むがこれらに限定されない、様々な機構に依存する。Ｔｏｒｎａｂｅｎｅ ａｎｄ Ｔｒａｐａｎｉ（２０２０）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．３１：４７－５６、米国特許第８，２３６，５５７号も参照されたい。その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0097】

トランススプライシングアプローチは、ＡＡＶ ＩＴＲ配列がコンカテマー化して完全長ゲノムを再構成する能力を利用し、２つ以上のウイルスカプシドの各々は、２つ以上のトランスファープラスミドのうちの１つをそれぞれ封入し、その各々のトランスファープラスミドは、目的の遺伝子の一部を含む。例えば、デュアルベクターアプローチでは、２つのトランスファープラスミドは、以下のように設計され得る：５’－トランスファープラスミドは、プロモーター、目的の遺伝子のコード配列の５’部分、及びスプライシングドナー（ＳＤ）シグナルを含み、３’－トランスファープラスミドは、スプライシングアクセプター（ＳＡ）シグナル、目的の遺伝子の３’部分、及びポリＡシグナルを含む。２つのＡＡＶゲノムの尾から頭へのＩＴＲ介在コンカテマー化の際に、ＳＤシグナル及びＳＡシグナルは、組換えゲノムのスプライシングを可能にする。

【0098】

目的の大きな遺伝子はまた、重複領域アプローチをとる場合に分割される。重複領域アプローチでは、５’部分及び３’部分（したがって、５’トランスファープラスミド及び３’トランスファープラスミド）は、組換え誘導（ｒｅｃｏｍｂｉｎｏｇｅｎｉｃ）配列、例えば、相同領域を共有し、例えば、各部分は、重複配列を含む。目的の遺伝子は、組換え誘導配列、例えば、相同性／重複領域によって介在される相同組換えを介して、標的細胞内で完全に作製される。

【0099】

ハイブリッドアプローチでは、５’－トランスファープラスミド及び３’－トランスファープラスミドは各々、高度に組換え誘導配列を含み、組換え誘導配列は、目的の遺伝子のコード配列の５’部分のＳＤシグナルの下流、及び目的の遺伝子のコード配列の３’部分のＳＡシグナルの上流に配置される。このハイブリッドシステムでは、目的の遺伝子は、ＩＴＲ介在性のコンカテマー化及びスプライシングを介してかつ／又は相同組換えによってのいずれかにより完全にすることができる。

【0100】

ＲＮＡ又はタンパク質レベルでのトランススプライシングも利用され得る。ＲＮＡトランススプライシングアプローチでは、２つのトランスファープラスミドは、それぞれ、大きな遺伝子のプレｍＲＮＡの５’断片及び３’断片をコードし、トランススプライシングに有利に働くことができるイントロンハイブリダイゼーションドメインを共有して、２つの半転写物を結合させて完全な全長ｍＲＮＡにしてもよい。

【0101】

タンパク質トランススプライシングは、翻訳後に発生し、分割インテインと呼ばれる介在タンパク質によって触媒される。分割インテインは、２つの宿主タンパク質の末端で２つの独立したポリペプチド（Ｎ－インテイン及びＣ－インテイン）として発現される。Ｎ－インテインポリペプチド及びＣ－インテインポリペプチドは、互いに遭遇するまで触媒的に不活性のままである。互いに遭遇すると、各インテインは、ペプチド結合を介したＮ－宿主ポリペプチド及びＣ－宿主ポリペプチドのライゲーションを媒介しながら、宿主タンパク質からそれ自体を正確に切除する。分割インテインの使用は、筋肉、肝臓、及び網膜疾患における目的の治療用遺伝子のＡＡＶベースの送達に使用されてきた。例えば、Ｎ－及びＣ－インテインコード配列に融合されたミニジストロフィンｃＤＮＡの２つの半分の同時送達では、２つのポリペプチドの効率的な産生が示された。Ｌｉ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １９：９５８－６４。同様に、ＡＡＶ分割インテインは、クラスター化された規則的な間隔を置いた短い回文リピート（ＣＲＩＳＰＲ）－Ｃａｓ９ヌクレアーゼの発現及びライゲーションに広く使用されている。

【0102】

上記のデュアルベクターアプローチは、当該技術分野で周知である。例えば、上記のＴｏｒｎａｂｅｎｅ ａｎｄ Ｔｒａｐａｎｉ（２０２０）、米国特許第８，２３６，５５７号を参照されたい。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載の改変ウイルスカプシドは、目的のヌクレオチドを封入し、目的のヌクレオチドは、目的の遺伝子の一部を含む。一部の実施形態では、目的の遺伝子の一部を含む目的のヌクレオチドは、スプライシングドナーシグナル又はスプライシングアクセプターシグナル及び／又は組換え誘導配列を更に含む。一部の実施形態では、目的の遺伝子の一部を含む目的のヌクレオチドは、イントロンハイブリダイゼーションドメインコード配列を含む。一部の実施形態では、目的の遺伝子の一部を含む目的のヌクレオチドは、Ｎ－インテイン又はＣ－インテインコード配列を含む。

【0103】

目的のトランスファープラスミド／ヌクレオチドの設計は、目的の遺伝子の発現を制御する１つ以上の調節エレメント、例えばプロモーター及び／又はエンハンサーエレメントを含むことを含む。有用なプロモーターの非限定的な例としては、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、脾臓病巣形成ウイルス（ＳＦＦＶ）プロモーター、伸長因子１アルファ（ＥＦ１ａ）プロモーター（１．２ｋｂ ＥＦｌａプロモーター、又は０．２ｋｂ ＥＦｌａプロモーター）、キメラＥＦ １ａ／ＩＦ４－プロモーター、及びホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターが挙げられる。内部エンハンサーはまた、目的の遺伝子の発現を増加させるためにウイルス構築物中に存在し得る。例えば、ＣＭＶエンハンサー（Ｋａｒａｓｕｙａｍａ ｅｔ ａｌ．１９８９．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６９：１３、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を使用し得る。一部の実施形態では、ＣＭＶエンハンサーは、ニワトリβ－アクチンプロモーターと組み合わせて使用することができる。一部の実施形態では、組織特異的調節エレメント、例えば、筋特異的プロモーター及び／又は調節エレメントを使用して、目的の遺伝子の発現を駆動してもよい。例えば、筋クレアチンキナーゼ遺伝子に基づく筋特異的調節エレメントの使用は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）及び肢帯型筋ジストロフィー（ＬＧＭＤ）などの筋遺伝子療法治療に使用されている。例えば、Ｓａｌｖａ，Ｍ．Ｚ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１５：３２０－３２９を参照されたい。その全体が参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、本明細書において目的のトランスファープラスミド及び／又はヌクレオチドは、筋クレアチンキナーゼ（ＭＣＫ）のエンハンサー及び／又はプロモーターを含み、ＭＣＫのエンハンサー及び／又はプロモーターは、目的の遺伝子の発現を駆動する。一部の実施形態では、本明細書において、目的のトランスファープラスミド及び／又はヌクレオチドは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩを動員するエンハンサー及び／又はプロモーターエレメントを含み、ＭＣＫのエンハンサー及び／又はプロモーターは、目的の遺伝子の発現を駆動する。一部の実施形態では、本明細書において、目的のトランスファープラスミド及び／又はヌクレオチドは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩを動員するエンハンサー及び／又はプロモーターエレメントを含み、ＭＣＫのエンハンサー及び／又はプロモーターは、目的の遺伝子の発現を駆動する。

【0104】

一部の実施形態では、両方向性プロモーターベクターは、二重治療遺伝子カセットの送達にも使用されている。この一例は、ＨｅｘＡ酵素のヘキソサミニダーゼαサブユニット及びβサブユニットの同時発現を駆動する両方向性ニワトリβ－アクチンユビキタスプロモーターであり、２つのそれぞれの遺伝子は、テイ・サックス病及びサンドホフ病に関与する。Ｌａｈｅｙ，ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２８：２１５０－２１６０、当該文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、本明細書の目的のトランスファープラスミド及び／又はヌクレオチドは、両方向性プロモーターを含み、両方向性プロモーターは、２つの異なる目的の遺伝子の発現を駆動する。

【0105】

多様なレポーター遺伝子（又は検出可能部分）を、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質を含む多量体構造にカプシド封入することができる。例示的なレポーター遺伝子には、例えば、β－ガラクトシダーゼ（ｌａｃＺ遺伝子がコード）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、高感度緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）、ＭｍＧＦＰ、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）、高感度青色蛍光タンパク質（ｅＢＦＰ）、ｍＰｌｕｍ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、Ｊ－Ｒｅｄ、ＤｓＲｅｄ、ｍＯｒａｎｇｅ、ｍＫＯ、ｍＣｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、ＹＰｅｔ、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、高感度黄色蛍光タンパク質（ｅＹＦＰ）、Ｅｍｅｒａｌｄ、ＣｙＰｅｔ、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、Ｔ－Ｓａｐｐｈｉｒｅ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、又はこれらの組み合わせが含まれる。本明細書に記載の方法は、緑色蛍光タンパク質をコードするレポーター遺伝子の使用を採用する標的化粒子の構築を実証する。しかし本開示の閲読時に当業者であれば、本明細書に記載のウイルスカプシドは、レポーター遺伝子の非存在下で作製され得ること、又は当分野で公知の任意のレポーター遺伝子を用いて作製され得ることを理解するであろう。

【0106】

多様な治療遺伝子は、例えばトランスファー粒子の一部として、本明細書に記載の改変ウイルスカプシドタンパク質を含む多量体構造にカプシド封入されることもできる。治療遺伝子の非限定的な例としては、毒素（例えば、自殺遺伝子）、治療抗体又はその断片、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム又はその一部、アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡなどをコードするものが挙げられる。

【0107】

本発明の更なる実施形態は、改変カプシドタンパク質の調製のためのプロセスであり、方法は、
ａ）好適な条件下で改変カプシドタンパク質をコードする核酸を発現させる工程と、
ｂ）工程ａ）の発現カプシドタンパク質を単離する工程と、を含む。

【0108】

一部の実施形態では、本明細書に記載のウイルス粒子は、モザイクカプシドを含み、例えばカプシドは、参照カプシドタンパク質との特定の比率で、本明細書に記載されるように（標的化リガンドとの共有結合の存在下又は非存在下で）遺伝子改変されたカプシドタンパク質を含む。こうしたモザイクウイルス粒子を作製するための方法は、
ａ）好適な条件下で、改変カプシドタンパク質をコードする核酸と、参照カプシドタンパク質をコードするヌクレオチドを、少なくとも約６０：１～１：６０、例えば２：１、１：１、３：５、１：２、１：３などの比率（ｗｔ／ｗｔ）で発現する工程と、
工程ａ）の発現カプシドタンパク質を単離する工程と、を含む。

【0109】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、少なくとも約１：６０～約６０：１の範囲、例えば２：１、１：１、３：５、１：２、１：３などの比率で、改変ｃａｐ遺伝子：参照ｃａｐ遺伝子（又は参照ｃａｐ遺伝子の組み合わせ）を含み、又は本明細書に記載の方法は、混合する。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：２である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：３である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：４である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：５である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：６である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：７である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：８である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：９である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：１０である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：１１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：１２である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：１３である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：１４である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：１５である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：１６である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：１７である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：１８である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：１９である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：２０である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：２５である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：３０である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：３５である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：４０である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：４５である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：５０である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：５５である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１：６０である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約２：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約３：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約４：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約５：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約６：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約７：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約８：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約９：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１０：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１１：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１２：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１３：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１４：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１５：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１６：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１７：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１８：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約１９：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約２０：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約２５：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約３０：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約３５：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約４０：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約４５：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約５０：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約５５：１である。一部の実施形態では、比率は、少なくとも約６０：１である。

【0110】

一部の実施形態では、モザイクウイルス粒子中のＶＰタンパク質サブユニットの比率は、必ずではないが、改変ｃａｐ遺伝子：参照ｃａｐ遺伝子の比率を化学量論的に反映する。非限定的な例示的実施形態として、本方法に従って形成されたモザイクカプシドは、必ずではないが、モザイクカプシドを作製するために使用されるものと同じものをコードする核酸の比率（ｗｔ：ｗｔ）と同様の改変カプシドタンパク質：参照カプシドタンパク質の比率をみなされ得る。一部の実施形態では、モザイクカプシドは、約１：５９～約５９：１のタンパク質サブユニットの比率を含む。

【0111】

本発明の更なる実施形態は、ウイルスの指向性を変更させる方法であり、方法は、（ａ）アミノ酸配列をコードする核酸を、ウイルスカプシドタンパク質をコードする核酸配列に挿入して、アミノ酸配列を含む遺伝子改変カプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列を形成する工程、及び／又は（ｂ）ウイルス粒子の産生に十分な条件下でパッケージング細胞を培養する工程であって、この場合においてパッケージング細胞は、核酸を含む、工程、を含む。本発明の更なる実施形態は、カプシドタンパク質の表面上に標的化リガンドを呈示させる方法であり、方法は、（ａ）好適な条件下で、本明細書に記載される改変ウイルスカプシドタンパク質をコードする核酸を（任意選択的に、参照カプシドタンパク質をコードするヌクレオチドとともに）発現させる工程であって、核酸は、特異的結合ペアの第１のメンバーを含むカプシドタンパク質をコードする、工程と、（ｂ）工程（ａ）の特異的結合ペアの第１のメンバーを含む発現カプシドタンパク質、又はこれを含むカプシドを単離する工程と、（ｃ）第１のメンバーと第２のメンバーの間のイソペプチド結合の形成が可能となる好適な条件下で、特異的結合ペアの第２の同族メンバーと、カプシドタンパク質又はカプシドをインキュベートする工程であって、特異的結合ペアの第２の同族メンバーは、標的化リガンドに融合されている、工程と、を含む。

【0112】

一部の実施形態では、パッケージング細胞は、目的のヌクレオチドを含むヘルパープラスミド及び／又はトランスファープラスミドを更に含む。一部の実施形態では、方法は更に、培養上清から、自己補完的アデノ随伴ウイルス粒子を単離することを含む。一部の実施形態では、方法は、パッケージング細胞を溶解すること、及び一本鎖アデノ随伴ウイルス粒子を細胞溶解物から単離することを更に含む。一部の実施形態では、方法は、（ａ）細胞残屑を除去すること、（ｂ）例えばＤＮａｓｅ Ｉ及びＭｇＣｌ_２などのヌクレアーゼを用いてウイルス粒子を含有する上清を処理すること、（ｃ）ウイルス粒子を濃縮すること、（ｄ）ウイルス粒子を精製すること、及び（ｅ）（ａ）～（ｄ）の任意の組み合わせを更に含む。

【0113】

本明細書に記載のウイルス粒子の生成に有用なパッケージング細胞としては、例えば、ウイルスに対して許容状態の動物細胞、若しくはウイルスに対して許容状態になるように改変された細胞、又は例えば、リン酸カルシウムなどの形質転換剤を使用したパッケージング細胞構築物が挙げられる。本明細書に記載のウイルスベクターの生成に有用なパッケージング細胞株の非限定的な例としては、例えば、ヒト胚腎臓２９３（ＨＥＫ－２９３）細胞（例えば、米国培養細胞系統保存機関［ＡＴＣＣ］番号ＣＲＬ－１５７３）、ＳＶ４０ Ｌａｒｇｅ Ｔ－抗原を含有するＨＥＫ－２９３細胞（ＨＥＫ－２９３Ｔ又は２９３Ｔ）、ＨＥＫ２９３Ｔ／１７細胞、ヒト肉腫細胞株ＨＴ－１０８０（ＣＣＬ－１２１）、リンパ芽球様細胞株ラージー（ＣＣＬ－８６）、上皮神経膠芽腫－星状細胞腫様細胞株Ｕ８７－ＭＧ（ＨＴＢ－１４）、Ｔ－リンパ腫細胞株ＨｕＴ７８（ＴＩＢ－１６１）、ＮＩＨ／３Ｔ３細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８、ＣＣＬ６１、ＣＲＬ９０９６）、ＨｅＬａ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ－２）、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１６５８）、Ｈｕｈ－７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ－７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴＩ細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞、ＣＡＰ細胞、ＣＡＰ－Ｔ細胞などが挙げられる。

【0114】

Ｌ９２９細胞、Ｃｏｓｓｅｔ ｅｔ ａｌ（１９９５）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ６９，７４３０－７４３６に概説されているＦＬＹウイルスパッケージング細胞系、ＮＳ０（マウス骨髄腫）細胞、ヒト羊膜細胞（例えば、ＣＡＰ、ＣＡＰ－Ｔ）、酵母細胞（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓを含むがこれらに限定されない）、植物細胞（タバコＮＴｌ、ＢＹ－２を含むがこれらに限定されない）、昆虫細胞（ＳＦ９、Ｓ２、ＳＦ２１、Ｔｎｉ（例えば、Ｈｉｇｈ５）を含むがこれらに限定されない）、又は細菌細胞（（Ｅ．ｃｏｌｉを含むがこれに限定されない）。

【0115】

更なるパッケージング細胞及びシステム、核酸ゲノムを偽型ウイルス粒子にパッケージングするためのパッケージング技術及び粒子については、例えば、Ｐｏｌｏ，ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，（１９９９）９６：４５９８－４６０３を参照されたい。パッケージングの方法は、ウイルス構成要素を永久的に発現するパッケージング細胞を使用すること、又はプラスミドを用いて細胞を一過性にトランスフェクトすることを含む。

【0116】

更なる実施形態は、改変Ｃａｐタンパク質を標的化ベクターと動作可能に連結するのに十分な条件下で、例えば、標的化ベクターの改変Ｃａｐタンパク質への会合を促進するのに十分な条件下で、特異的結合ペアの第１及び第２のメンバーの化学結合及び／又は会合を介して、本明細書に記載される改変Ｃａｐタンパク質を標的化ベクターと接触させることを含む方法を含み、ここで、第１のメンバーは、改変Ｃａｐタンパク質に挿入され、第１のメンバー及び標的化ベクターは、特異的結合ペアの第２のメンバーに融合される。

【0117】

更なる実施形態には、ウイルスを再指向する方法、及び／又はレポーター若しくは治療遺伝子を標的細胞に送達する方法が含まれ、方法は、細胞をインビトロ（例えばエクスビボ）又はインビボで形質導入するための方法を含み、方法は、本明細書に記載のカプシドを含むウイルス粒子と標的細胞を接触させる工程を含み、この場合においてカプシドは、標的細胞によって発現される受容体に特異的に結合する標的化リガンドを含む。一部の実施形態では、標的細胞は、インビトロ（生体外）にある。他の実施形態では、標的細胞は、対象、例えばヒトにおいて、インビボにある。

【0118】

標的細胞
本明細書に開示される改変ウイルス粒子を使用して、目的のヌクレオチドを送達するために、多種多様な細胞を標的化してもよい。標的細胞は、概して、目的のヌクレオチド及び所望の効果に基づいて選択されるであろう。

【0119】

一部の実施形態では、目的のヌクレオチドを送達して、酵素欠損症、又はＸ連鎖重症複合免疫不全などの免疫欠損症などの生物体の欠損を埋め合わせるタンパク質を、標的細胞が産生することを可能にすることができる。したがって、一部の実施形態では、通常は動物中でタンパク質を産生するであろう細胞が標的化される。他の実施形態では、タンパク質が最も有益である領域内の細胞が標的化される。

【0120】

他の実施形態では、ｓｉＲＮＡをコードする遺伝子などの目的のヌクレオチドは、標的細胞中の特定の遺伝子の発現を阻害することができる。目的のヌクレオチドは、例えば、病原体ライフサイクルに関与する遺伝子の発現を阻害し得る。したがって、病原体から感染しやすいか、あるいは病原体に感染した細胞が標的化され得る。他の実施形態では、目的のヌクレオチドは、標的細胞中の毒素の産生を担う遺伝子の発現を阻害し得る。

【0121】

他の実施形態では、目的のヌクレオチドは、毒性タンパク質を発現する細胞を殺傷する毒性タンパク質をコードし得る。この場合、腫瘍細胞又は他の不要な細胞が標的化され得る。

【0122】

更に他の実施形態では、治療用タンパク質をコードする目的のヌクレオチド。

【0123】

目的のヌクレオチドの発現が望ましい標的細胞の特定の集団が同定されると、その標的細胞の集団上で特異的に発現される標的受容体が選択される。標的受容体は、細胞の集団に対してのみか、又は他の細胞の集団に対するよりもその細胞の集団に対してより高い程度に発現され得る。発現が特異的であるほど、標的細胞に対してより特異的に送達が指向され得る。文脈に応じて、マーカーの（及びしたがって、遺伝子送達の）特異性の所望の量は変化し得る。例えば、毒性遺伝子を導入するために、非標的細胞の殺傷を回避するように高い特異性が最も好ましい。採取用のタンパク質の発現、又は包括的な影響が望ましい分泌生成物の発現のために、マーカー特異性がそれほど必要とされない場合がある。

【0124】

上記に考察されるように、標的受容体は、標的化リガンドを同定又は作成することができる任意の受容体であり得る。好ましくは、標的受容体は、受容体などのペプチド又はポリペプチドである。しかしながら、他の実施形態では、標的受容体は、結合パートナーによって認識され得る炭水化物又は他の分子であり得る。標的受容体の結合パートナー、例えば、リガンドが公知である場合、リガンドをアフィニティ分子として使用してもよい。しかしながら、結合分子が不明である場合、標準的な手順を使用して標的受容体に対する抗体を生成することができる。次に、抗体を標的化リガンドとして使用することができる。

【0125】

したがって標的細胞は、例えば、（１）用途（例えば、治療、収集されるタンパク質の発現、及び疾患抵抗性の付与）、及び（２）所望の量の特異性を有するマーカーの発現、を含む多様な因子に基づいて選択され得る。

【0126】

標的細胞は、いかなる方法でも限定されず、生殖系細胞及び細胞株、並びに体細胞及び細胞株の両方を含む。標的細胞が生殖系細胞であるとき、標的細胞は、好ましくは、単細胞胚及び胚幹細胞（ＥＳ）からなる群から選択される。

【0127】

医薬組成物、剤形、及び投与
更なる実施形態は、少なくとも１つの改変ウイルスカプシドタンパク質、及び本発明による適切な標的化リガンド、並びに／又は本発明による核酸を含む、医薬品を提供する。好ましくは、そのような医薬品は、遺伝子導入粒子として有用である。

【0128】

本明細書に記載のウイルス粒子と、薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤と、を含む医薬組成物も本明細書に開示する。追加的に、本明細書に記載のウイルス粒子を含む医薬剤形を本明細書に開示する。

【0129】

本明細書で考察されるように、本明細書に記載のウイルス粒子は、様々な治療用途（インビボ及びエクスビボで）のために、また研究ツールとして使用することができる。

【0130】

本明細書に開示されるウイルス粒子に基づく医薬組成物は、１つ以上の生理学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤を使用して、任意の従来的な方法で製剤化され得る。ウイルス粒子は、投与するために、例えば、注射、吸入、若しくは隔離（ｉｎｓｕｌａｔｉｏｎ）によって（口若しくは鼻のいずれかを通して）、又は経口、口腔内、非経口、若しくは直腸内投与によって、又は腫瘍に直接投与することによって処方され得る。

【0131】

医薬組成物は、全身投与、局所投与、又は局在化投与を含む、多様な投与モード用に製剤化され得る。技法及び製剤は、例えば、Ｒｅｍｒｎｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍｅａｄｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａに見ることができる。全身投与については、筋肉内、静脈内、腹腔内、及び皮下を含む、注射が好ましい。注射のために、医薬組成物は、好ましくは、ハンク溶液又はリンガー溶液などの生理学的に適合性のある緩衝液で、液体溶液中に製剤化され得る。加えて、医薬組成物は、固体形態で製剤化され得、使用直前に再溶解又は懸濁され得る。医薬組成物の凍結乾燥形態も好適である。

【0132】

経口投与のために、医薬組成物は、結合剤（例えば、アルファ－化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、充填剤（例えば、ラクトース、微晶質セルロース、又はリン酸水素カルシウム）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、又はシリカ）、崩壊剤（例えば、ジャガイモデンプン又はデンプングリコール酸ナトリウム）、又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容可能な賦形剤とともに従来的な手段によって調製される、例えば、錠剤又はカプセルの形態をとることができる。錠剤はまた、当該技術分野で周知の方法によってコーティングされ得る。経口投与のための液体調製物は、例えば、溶液、シロップ、又は懸濁液の形態をとり得るか、あるいは使用前に水又は他の好適な媒体を含む構成を用いる乾燥生成物として提示され得る。かかる液体調製物は、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体、又は水素化食用脂）、乳化剤（例えば、レシチン又はアカシア）、非水性媒体（例えば、油、油性エステル、エチルアルコール、又は分画植物油）、及び防腐剤（例えば、メチル又はプロピル－ｐ－ヒドロキシ安息香酸又はソルビン酸）などの薬学的に許容可能な添加剤を用いる従来的な手段によって調製され得る。調製物はまた、必要に応じて、緩衝塩、香味剤、着色剤、及び甘味剤を含有してもよい。

【0133】

医薬組成物は、注射によって、例えば、ボーラス注射又は連続点滴によって、非経口投与用に製剤化することができる。注射用の製剤は、任意選択的に防腐剤を添加して、例えば、アンプル又は複数回投与容器内で単位剤形で提示することができる。医薬組成物は、油性媒体又は水性媒体中に懸濁液、溶液、又は乳濁液として更に製剤化することができ、懸濁剤、安定化剤、及び／又は分散剤を含む、他の薬剤を含有し得る。

【0134】

加えて、医薬組成物は、デポ剤として製剤化することもできる。これらの長時間作用する製剤は、移植（例えば、皮下又は筋肉内）又は筋肉内注射によって投与することができる。したがって、例えば、化合物は、好適な高分子若しくは疎水性材料（例えば、許容可能な油中の乳濁液として）又はイオン交換樹脂とともに、あるいは難溶性誘導体として、例えば、難溶性塩として製剤化され得る。他の好適な送達システムとしては、長期間にわたる薬物の局所的な非侵襲性送達の可能性を提供するマイクロスフェアが挙げられる。この技術は、炎症又は虚血を引き起こすことなく、冠動脈カテーテルを介して器官の任意の選択される部分に注射することができる前毛細血管サイズを有する、マイクロスフェアを含み得る。投与された治療薬は、マイクロスフェアから徐々に放出され、選択される組織中に存在する周囲細胞によって吸収される。

【0135】

全身投与は、経粘膜的手段又は経皮的手段によっても可能である。経粘膜的投与又は経皮的投与については、浸透するバリアに対して適切な浸透剤が製剤中に使用される。かかる浸透剤は、概して、当該技術分野で既知であり、例えば経粘膜的投与用に、胆汁酸塩及びフシジン酸誘導体が挙げられる。加えて、洗剤を使用して浸透を促進してもよい。経粘膜的投与は、鼻腔内噴霧又は座薬を使用して行ってもよい。局所投与のために、本明細書に記載のウイルス粒子は、当該技術分野で一般に知られている、軟膏、膏薬、ゲル、又はクリームに製剤化することができる。治癒を加速させるために、洗浄溶液を局所的に使用して損傷又は炎症を治療することもできる。

【0136】

注射可能な使用に好適な医薬品形態としては、滅菌水溶液又は分散液；ゴマ油、ピーナッツ油、又は水性プロピレングリコールを含む製剤；及び滅菌注射可能な溶液又は分散液の即時調製のための滅菌粉末を挙げることができる。全ての場合において、医薬品形態は、滅菌される必要があり、かつ流体である必要がある。また、製造条件及びある特定の保存パラメータ（例えば、冷却及び凍結）の条件下で安定している必要があり、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用に対して保存される必要がある。

【0137】

本明細書に開示される製剤が対象における免疫応答を促進する治療剤として使用される場合、治療剤は、中性又は塩形態の組成物に製剤化され得る。薬学的に許容可能な塩には、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基で形成される）であって、例えば、塩酸若しくはリン酸などの無機酸、又は酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸などで形成される、酸付加塩が含まれる。遊離カルボキシル基で形成される塩は、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、又は水酸化第２鉄などの無機塩基、並びにイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどの有機塩基などにも由来し得る。

【0138】

担体はまた、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、それらの好適な混合物、及び植物油を含有する溶媒又は分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどの被覆の使用によって、分散の場合は必要な粒子径の維持によって、かつ界面活性剤の使用の場合によって維持することができる。微生物の活動の防止は、当該技術分野で既知の様々な抗細菌剤及び抗真菌剤によってもたらされ得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖又は塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射可能な組成物の長期間の吸収は、吸収を遅らせる薬剤の組成物、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン使用によってもたらされ得る。

【0139】

滅菌注射可能な溶液は、必要に応じて、上記に列挙されている様々な他の成分を用いて、活性化合物又は構築物を適切な溶媒中に必要な量で組み込むことによって調製することができ、その後に濾過滅菌を行う。

【0140】

処方の際、溶液は、投与製剤と適合する様式で、及び治療上有効な量で投与され得る。製剤は、上記に記載の注射可能な溶液のタイプなど、多様な剤形で容易に投与されるが、徐放性カプセル又はマイクロ粒子及びマイクロスフェアなども用いることができる。

【0141】

水溶液中での非経口投与のために、例えば、必要に応じて溶液を好適に緩衝化し、最初に液体希釈剤を十分な生理食塩水又はグルコースと等張させるべきである。これらの特定の水溶液は、静脈内、腫瘍内、筋肉内、皮下、及び腹腔内投与に特に好適である。この文脈では、用いることができる滅菌水性媒体は、本開示に照らして当業者には分かるであろう。例えば、１ｍｌの等張性ＮａＣｌ溶液中に１回分の用量を溶解し、１０００ｍｌの皮下注入流体に添加するか、又は提案される注入部位に注射することができる。

【0142】

投与に責任を有する人物は、いずれの場合でも、個々の対象に対する適切な用量を決定するであろう。例えば、対象は、病原性微生物に対する、又は対象の条件（例えば、癌）に対する必要性若しくは曝露に応じて、ある期間の間毎日若しくは毎週、又は月１回、年２回、若しくは年１回、本明細書に記載のウイルス粒子を投与され得る。

【0143】

静脈内、腫瘍内、皮下、又は筋肉内注射などの非経口投与のために製剤化される化合物に加えて、他の薬学的に許容可能な形態には、例えば、経口投与のための錠剤又は他の固体、リポソーム製剤、徐放性カプセル、生分解性形態、及び現在使用されている任意の他の形態が含まれる。

【0144】

また、鼻腔内若しくは吸入可能な溶液若しくは噴霧、エアロゾル、又は吸入剤も使用し得る。鼻腔溶液は、ドロップ又は噴霧中の鼻腔通路に投与するように設計された水溶液であり得る。鼻腔溶液は、鼻の分泌に多くの点で類似しているように調製され得る。したがって、水性の鼻腔溶液は、通常、等張性であり、わずかに緩衝化されて、ｐＨ５．５～７．５を維持する。加えて、必要に応じて、眼科調製物及び適切な薬物安定剤に使用されるものと類似した抗菌防腐剤を製剤に含めることができる。様々な市販の点鼻調製物が知られており、例えば、抗生物質及び抗ヒスタミン剤を含むことができ、喘息予防のために使用される。

【0145】

経口製剤は、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムとしての賦形剤を含み得る。これらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、ピル、カプセル、徐放性製剤、又は粉末の形態をとる。特定の定義された実施形態では、経口医薬組成物は、不活性希釈剤又は同化可能な食用担体を含むか、又は硬質若しくは軟質のシェルゼラチンカプセルで囲まれ得るか、又は錠剤に圧縮され得るか、又は食事の食品により直接組み込まれ得る。経口治療投与のために、活性化合物は、賦形剤と組み込んで、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウエハなどの形態で使用され得る。

【0146】

錠剤、トローチ、ピル、カプセルなどはまた、以下：トラガントゴム、アカシア、コーンスターチ、又はゼラチンとしての結合剤、リン酸二カルシウムなどの賦形剤、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、及びスクロース、ラクトース、若しくはサッカリンなどの甘味剤、又はハッカ油、冬緑油、若しくはチェリー香味料などの香味剤を含有し得る。投薬単位形態がカプセルである場合、上記のタイプの材料に加えて、液体担体が含有され得る。様々な他の材料が被覆として、又は別様に、投薬単位の物理的形態を変更するために存在し得る。例えば、錠剤、ピル、又はカプセルは、シェラック、糖、又はそれらの両方で被覆され得る。エリキシル剤のシロップは、活性化合物、甘味剤としてのスクロース、防腐剤としてのメチル及びプロピルパラベン、色素剤、並びにチェリー又はオレンジ風味などの香味剤を含有し得る。

【0147】

本明細書に開示される更なる実施形態は、方法及び組成物に使用するためのキットに関するものであり得る。キットはまた、好適な容器、例えば、バイアル、チューブ、ミニチューブ若しくはマイクロチューブ、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジ、又は他の容器も含み得る。追加の構成要素又は薬剤が提供されるとき、キットは、この薬剤又は構成要素が配置され得る１つ以上の追加の容器を収容し得る。本明細書のキットはまた、典型的には、ウイルス粒子及び市販のための密封閉じ込めにおける任意の他の試薬容器を含む手段を含むであろう。かかる容器としては、所望のバイアルが保持される注射器又はブロー成形プラスチック容器を挙げることができる。任意選択的に、記載の組成物には、例えば、抗炎症剤、抗ウイルス剤、抗真菌若しくは抗細菌剤、又は抗腫瘍剤などの１つ以上の追加の活性剤が必要な場合がある。

【0148】

本明細書に開示の組成物は、当該技術分野で既知の任意の手段によって投与され得る。例えば、組成物は、静脈内、腫瘍内、皮内、動脈内、腹腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、鼻腔内、硝子体内、腟内、直腸内、局所的（ｔｏｐｉｃａｌｌｙ）、腫瘍内、筋肉内、髄腔内、皮下、結膜下、小胞内、粘膜、心膜内、臍下、眼球内、経口的、局所的（ｌｏｃａｌｌｙ）に、吸入、注射、点滴、連続点滴、局所的灌流によって、カテーテル、洗浄を介して、クリーム中で、又は脂質組成物中で、対象に投与することを含み得る。

【0149】

当業者に知られている任意の方法は、本明細書に記載のウイルス粒子、パッケージング細胞、及び粒子構築物の大規模生産に使用され得る。例えば、マスターシード及びワーキングシード在庫は、必要条件を満たした初代ＣＥＦにおいてＧＭＰ条件下で、又は他の方法によって調製され得る。パッケージング細胞は、大きな表面積のフラスコにプレーティングして、ほぼ合流点まで成長させ、ウイルス粒子を精製し得る。細胞を収穫し、単離及び精製された培養培地中にウイルス粒子を放出し得るか、又は機械的破損によって細胞内ウイルス粒子を放出することができる（細胞残渣は、大孔深度濾過及びエンドヌクレアーゼで消化された宿主細胞ＤＮＡによって除去することができる）。ウイルス粒子を、その後精製し、接線流濾過によって濃縮し、その後透析濾過し得る。得られた濃縮バルクは、安定化剤を含有する緩衝液で希釈し、バイアルに充填し、凍結乾燥させることによって製剤化することができる。組成物及び製剤は、後の使用のために保存され得る。使用のために、凍結乾燥ウイルス粒子を、希釈剤を添加することによって再構成することができる。

【0150】

併用療法で使用されるある特定の追加の薬剤は、当技術分野で既知の任意の手段によって製剤化及び投与することができる。

【0151】

本明細書に開示の組成物は、アルミニウム塩及び他の鉱物アジュバント、張力活性剤（ｔｅｎｓｏａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔｓ）、細菌誘導体、媒体、及びサイトカインなどのアジュバントも含み得る。アジュバントはまた、拮抗免疫調節特性を有してもよい。例えば、アジュバントは、Ｔｈ１又はＴｈ２免疫性を刺激することができる。本明細書に開示の組成物及び方法はまた、アジュバント療法を含み得る。

【0152】

骨格筋関連障害
また、骨格筋関連障害、例えば、筋消耗性疾患及び／又は遺伝性筋疾患、例えば、Ｘ連鎖性筋細管ミオパチー（ＸＬＭＴＭ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）、筋強直性ジストロフィー（ＤＭ１）、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー１型（ＦＳＨＤ）、先天性筋ジストロフィー１Ａ型（ＭＤＣ１Ａ）、肢帯型筋ジストロフィー、ジストログリカノパチー、筋萎縮状態、代謝疾患などを治療する方法が本明細書に提供される。概して、かかる方法は、かかる骨格関連障害に罹患しているか、又はかかる骨格関連障害のリスクがある患者に、本明細書に記載されるウイルス粒子又は医薬組成物を投与することを含み、ウイルス粒子は、
（ｉ）タンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバーを含むように改変されたウイルスカプシドと、
（ｉｉ）タンパク質：タンパク質結合ペアの第２のメンバーであって、タンパク質：タンパク質結合ペアの第２のメンバーは、筋細胞の表面上に発現される筋特異的表面タンパク質（例えば、ＣＡＣＮＧ１）に結合する標的化リガンドを含み、
タンパク質：タンパク質結合ペアの第１のメンバー及びタンパク質：タンパク質結合ペアの第２のメンバーは、ウイルスカプシドの指向性を患者の筋細胞に向けるように会合する、第２のメンバーと、
（ｉｉｉ）ウイルスカプシド内にカプシド封入された目的のヌクレオチドと、を含む。

【0153】

一部の実施形態では、目的のヌクレオチドは、治療用タンパク質、自殺遺伝子、抗体若しくはその断片、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム若しくはその一部、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、ＲＮＡｉ分子、又はｓｈＲＮＡ分子をコードする。例えば、一部の実施形態では、目的のヌクレオチドは、例えば、筋萎縮状態又は代謝疾患のための、成長因子、神経栄養因子、疾患修飾筋タンパク質、代謝タンパク質をコードし得る。

【表2-1】

【表2-2】

【表2-3】

【表2-4】

【表2-5】

【表2-6】

【表2-7】

【表2-8】

【表2-9】

【表3-1】

【表3-2】

【実施例】

【0154】

以下の実施例は、説明目的のみに提供され、本発明の範囲を制限することを意図していない。

【0155】

方法
以下の実施例は、説明目的のみに提供され、本発明の範囲を制限することを意図していない。

【0156】

ＡＡＶウイルスベクターの調製
ウイルスは、以下のプラスミドを用いてＰＥＩ Ｐｒｏを使用して２９３Ｔ細胞パッケージング細胞をトランスフェクトすることにより作製された：抗体の重鎖と軽鎖のいずれかをコードする追加プラスミドとともに、又は伴わずに、ｐＡｄヘルパー、レポータータンパク質をコードするＡＡＶ２ ＩＴＲ含有ゲノムプラスミド、及びＡＡＶ ＲｅｐとＣａｐ遺伝子をコードするｐＡＡＶ－ＣＡＰプラスミド。抗体重鎖構築物は全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１９／００６０４６に記載されるように、そのＣ末端でＳｐｙＣａｔｃｈｅｒに融合される。トランスフェクション複合体を不完全ＤＭＥＭ（追加のサプリメントなし）中で調製し、室温で１０分間インキュベートした。

【0157】

以下のプラスミド及び数量で、２９３Ｔパッケージング細胞の１５ｃｍプレートをトランスフェクトすることにより、各ウイルスが作製された：

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【0158】

ＣＫ８－ｕＤｙｓ５は、ＵＳ１０４７９８２１Ｂ２に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0159】

インキュベーション後、複合体を、１０％ＦＢＳ、１ＸＮＥＡＡ、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、及び１％Ｌ－グルタミンを補充したＤＭＥＭに添加する。

【0160】

トランスフェクトされたパッケージング細胞を、３７℃で３日間インキュベートし、次に、標準的凍結解凍プロトコルを使用して細胞溶解物からウイルスを回収した。簡潔に言うと、パッケージング細胞を、こすり取ることによって持ちあげ、ペレットにした。上清を除去し、５０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、及び２ｍＭのＭｇＣｌ２［ｐＨ８．０］の溶液中に細胞を再懸濁した。ドライアイス／エタノール浴と３７℃の水浴との間で激しくボルテックスを行いながら細胞懸濁液を行き来させることからなる凍結融解サイクルを３回連続で行うことにより、細胞溶解を誘導し、細胞内ウイルス粒子を放出させた。ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｂｅｎｚｏｎａｓｅ（５０Ｕ／ｍｌ細胞溶解物）を用いて、時々混合しながら３７℃で６０分間溶解物を処理することによって、粘度を低下させた。次いで、残屑を遠心分離によってペレットにし、得られた上清を０．２２μｍのＰＶＤＦ Ｍｉｌｌｅｘ－ＧＶフィルターを通して濾過した。インビトロで試験される粗ウイルスについては、濾過された溶解物を、Ｕｌｔｒａｃｅｌ－１００膜（１００ＫＤａ ＭＷＣＯ）フィルターカートリッジを備えたＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５遠心フィルターユニットに直接添加する。フィルターユニットを、上部チャンバー内で所望の体積に達するまで５～１０分間隔で遠心分離し、次に、濃縮粗ウイルスを低タンパク質結合管にピペットで移し、４℃で保存した。インビボで試験されるウイルスについては、清澄化された溶解物を、４段階のイオジキサノール密度勾配を使用して更に精製する。勾配をＢｅｃｋｍａｎ ７０Ｔｉロータに装填し、最大加速及び減速を使用して、６６，１００ｒｐｍで、１０℃で１．５時間回転させる。超遠心分離後、イオジキサノール精製ビリオンを４０～６０％界面から抽出する。イオジキサノール溶液中のＡＡＶは、イオジキサノールの濃度が１％未満となるように、ＤＰＢＳ＋／＋．００１％プルロニック（登録商標）Ｆ６８で希釈される。次いで、精製されたウイルスを、１００ｋＤａ ＭＷＣＯ Ａｍｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して所望の体積に濃縮する。

【0161】

力価（ミリリットル当たりのウイルスゲノム又はｖｇ／ｍＬ）を、既知の濃度のウイルスの標準曲線を使用してｑＰＣＲによって決定した。

【0162】

細胞株：
２９３個の細胞株全てを、１０％のＦＢＳ、１ＸＮＥＡＡ、１％のＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、及び１％のＬ－グルタミンを補充したＤＭＥＭ中で維持した。対応するｃＤＮＡを発現するベクターにより親２９３細胞株をレンチウイルス形質導入することによって、２９３ ｈＡＳＧＲ１／２及び２９３ｈＣＡＣＮＧ１細胞株を作製した。全ての細胞株を、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ ＴＣコア施設から入手した。

【0163】

ヒト骨格筋芽細胞は、Ｃｏｏｋ Ｍｙｏｓｉｔｅ（ＳｋＭＤＣ；Ｌｏｔ＃Ｐ０１０５９－１４Ｍ）から購入し、ＭｙｏＴｏｎｉｃ Ｇｒｏｗｔｈ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（ＭＳ－３３３３）を補充したＭｙｏＴｏｎｉｃ基礎培地（ＭＢ－２２２２）で維持し、５％ＣＯ_２を含む３７℃のインキュベーター中で増殖させた。

【0164】

Ｃ２Ｃ１２マウス筋芽細胞をＡＴＣＣから購入し、１０％ＦＢＳ及びペニシリンストレプトマイシンサプリメントを含むＤＭＥＭ中で維持し、５％ＣＯ_２を含む３７℃のインキュベーター中で増殖させた。

【0165】

ＡＡＶカプシドタンパク質構築物
所望のＳｐｙＴａｇ挿入、隣接するリンカーアミノ酸、及び更なる変異をコードするＧｅｎｅＢｌｏｃｋｓを、ＩＤＴから購入し、製造業者のプロトコル（ＮＥＢ）に従ってＧｉｂｓｏｎ Ａｓｓｅｍｂｌｙを使用して、ＢｓｉＷＩ及びＸｃｍＩで消化されたｐＡＡＶ９－ＣＡＰ ｗｔにクローニングした。

【0166】

ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒの抗体へのクローニング
抗体重鎖可変領域をコードするＧｅｎｅＢｌｏｃｋｓをＩＤＴから購入し、Ｇｉｂｓｏｎアセンブリを使用してＣＭＶ ｈＩｇＧ４ＵＳ Ｓａｐ１ ＳｐｙＣａｔｃｈｅｒ骨格にクローニングした。

【0167】

細胞感染／形質導入及びフローサイトメトリー解析
細胞に感染させるために、培養中の細胞の培地にウイルス粒子を直接添加し、混合物を３７℃でインキュベートした。感染後３日後に、細胞をトリプシン処理し、２％のＦＢＳを含むＰＢＳ中に再懸濁し、ＧＦＰ＋細胞のパーセンテージをＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏフローサイトメーターで収集し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して解析した。

【0168】

細胞感染／形質導入及びルシフェラーゼアッセイの読み取り値
細胞に感染させるために、培養中の細胞の培地にウイルス粒子を直接添加し、混合物を３７℃でインキュベートした。感染の３日後、培地を除去し、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇｌｏ溶解緩衝液を使用して細胞を溶解した。ルシフェリン基質（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｂｒｉｇｈｔ Ｇｌｏキット）を溶解細胞に添加し、発光をルミノメーターを使用して測定した。

【0169】

筋管形質導入
ヒト骨格筋芽細胞を、透明底部及び黒色壁を備えたコラーゲンでコーティングされた９６ウェルプレートに８５００細胞／ウェルで播種した。２４時間後、増殖培地をＭｙｏＴｏｎｉｃ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉａ（ＭＤ－５５５５）に変更し、２日ごとに交換した。分化の４日後、筋管が形成され、ウイルス調製物を補充した分化培地を、それぞれのウェルに添加した。３日後、その後のＧＦＰ検出のために筋管を４％ＰＦＡで固定するか、又はｕＤｙｓ５ ｍＲＮＡの検出のためにトリゾールで溶解した。

【0170】

Ｃ２Ｃ１２細胞を、透明底部及び黒色壁を備えたコラーゲンでコーティングされた９６ウェルプレートに１０，０００細胞／ウェルで播種した。２４時間後、増殖培地を分化培地（２％ウマ血清を含むＤＭＥＭ）と置き換え、７．５％ＣＯ_２を含む３７℃のインキュベーターに入れた。分化の２４時間後、分化培地で希釈されたウイルス調製物を使用して細胞を形質導入した。３日後、その後のＧＦＰ検出のために筋管を４％ＰＦＡで固定するか、又はｕＤｙｓ５ ｍＲＮＡの検出のためにトリゾールで溶解した。

【0171】

筋管形質導入解析
室温で１５分間固定した後、細胞をＰＢＳで洗浄し、次いで０．３％ Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）－Ｘを含むＰＢＳ中の２０％ヤギ血清で室温で１時間ブロッキングした。ミオシン重鎖に対する一次抗体（ＭＦ２０－ｃ、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｂａｎｋ）を、ブロッキング緩衝液中で１：２００に希釈し、４℃で一晩インキュベーションの間に全てのウェルに添加した。次いでウェルをＰＢＳで３回穏やかに洗浄し、Ａｌｅｘａ ６４７コンジュゲート抗マウス二次抗体をブロッキング緩衝液で１：５００に希釈し、室温で１時間で全てのウェルに添加した。次いで、細胞をＰＢＳで洗浄し、ＤＡＰＩで染色した後、Ａｘｉｏ Ｏｂｓｅｒｖｅｒ顕微鏡（Ｚｉｅｓｓ）を使用して撮像した。ミオシン重鎖陽性領域内のＧＦＰ強度を、ＨＡＬＯソフトウェア（Ｉｎｄｉｃａ Ｌａｂｓ）を使用して解析した。ｕＤｙｓ５による形質導入の解析のために、製造業者のプロトコルに従ってＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ＲＮＡを単離した。ＲＮＡ精製を製造業者のプロトコルに従って完了させ、ＲＮＡの量及び品質をＮａｎｏＤｒｏｐ ２０００で検証した。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＶＩＬＯ ｃＤＮＡ合成ＭａｓｔｅｒＭｉｘ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用して、等量のＲＮＡを逆転写し、ヌクレアーゼを含まない水で１０Ｘ希釈した。遺伝子発現は、Ｔａｑｍａｎプライマー／プローブＡＧＧＧＴＡＧＣＴＡＧＣＡＴＧＧＡＡＡＡＡＣＡ（ｕＤｙｓ５ ｆｗｄ）、ＧＧＧＣＴＴＧＴＧＡＧＡＣＡＴＧＡＧＴＧＡＴ（ｕＤｙｓ５ ｒｅｖ）、ＡＴＴＴＡＣＡＴＴＣＴＴＡＴＧＴＧＣＣＴ（ｕＤｙｓ５プローブ）を使用して評価され、ヒト及びマウスＨｐｒｔ：それぞれＨｓ０２８００６９５＿ｍ１及びＭｍ０３０２４０７５＿ｍ１の内因性対照が使用された（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）。

【0172】

マウス系統
ヒト化ＣＡＣＮＧ１マウス（ＣＡＣＮＧ１^{ｈｕ／ｈｕ}）は、コードエクソン１、イントロン１、コードエクソン２～４（及び介在イントロン）、及び８２ｂｐの３’非翻訳領域（ＵＴＲ）マウスＣａｃｎｇ１の一部を、ヒトＣＡＣＮＧ１のオルソロガスな部分コードエクソン１配列、イントロン１、コードエクソン２～４（及び介在イントロン）、完全３’ＵＴＲ、及び３’ＵＴＲ後の追加の１５８ｂｐで置換することによって作製された。ヒト化ＡＳＧＲ１マウスは、ＷＯ／２０１９／００６０３４に記載される方法に従って作製した。系統一致（５０５００）マウスを対照として使用し、社内で交配させた。野生型Ｃ５７ＢＬ／６、ＤＢＡ／２Ｊ、及びジストロフィーＤ２－ｍｄｘマウス（ＭＤＸ）を、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した（それぞれ、ストック番号０００６６４、０００６７１、及び０１３１４１）。

【0173】

ＡＡＶ２ルシフェラーゼベクターのインビボ解析
３～４カ月齢の範囲のオスの５０５００マウス及びヒト化ＣＡＣＮＧ１マウスに、ＰＢＳ、又はルシフェラーゼレポーターを担持する野生型ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ ＨＢＭ抗ＡＳＧＲ１、若しくはＡＡＶ２ ＨＢＭ抗ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃１のいずれかの５Ｅ１１ ｖｇを尾静脈を介して静脈内注射した。ＩＶ注射の５週間後、マウスをイソフルランを使用して麻酔し、ルシフェリン基質を注射し、７～１０分後に安楽死させた。肝臓、舌、横隔膜、及び四頭筋を採取し、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍインビボ撮像システムを使用してエクスビボで撮像した。生データを、ｌｉｖｉｎｇ ｉｍａｇｅソフトウェアを使用して解析して、平均放射輝度（光子／秒／ｃｍ２／ｓｒ）を決定した。

【0174】

ＡＡＶ９ルシフェラーゼベクターのインビボ解析
１０週齢のメスのヒト化ＣＡＣＮＧ１マウス及びヒト化ＡＳＧＲ１マウスに、ＰＢＳ、又はルシフェラーゼレポーターを担持する５Ｅ１０ｖｇの野生型ＡＡＶ９、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ抗ＡＳＧＲ１ ｍＡｂ、ＡＡＶ９抗ＡＳＧＲ１ Ｆａｂ、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ抗ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃１、又はＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ抗ＣＡＣＮＧ１ Ｆａｂのいずれかを尾静脈を介して静脈内注射した。注射の３週間後、マウスをイソフルランを使用して麻酔し、ルシフェリン基質を注射し、７～１０分後に安楽死させた。肝臓、後肢、四頭筋、及び舌を採取し、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍインビボ撮像システムを使用してエクスビボで撮像した。生データを、ｌｉｖｉｎｇ ｉｍａｇｅソフトウェアを使用して解析して、平均放射輝度（光子／秒／ｃｍ２／ｓｒ）を決定した。

【0175】

ＡＡＶ９ ＧＦＰベクターのインビボ解析
成体（３～７カ月齢）のオスのＣＡＣＮＧ１^{ｈｕ／ｈｕ}、ＷＴ Ｃ５７ＢＬ／６、及びＤ２－ｍｄｘマウスに、１Ｅ ＋１１ｖｇ／マウスのＡＡＶ９（ＷＴ ＡＡＶ９、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ、ＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ抗ＡＳＧＲ１ ｍＡｂ、並びにＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ抗ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ「＃１」及び「＃２」、及び「＃３」）を尾静脈注射した。注射の３週間後にマウスを屠殺し、免疫組織化学のために以下の器官を採取した：肝臓、脾臓、心臓、舌、横隔膜、四頭筋、腓腹筋／足底筋／ヒラメ筋複合体、及び前脛骨筋。

【0176】

カニクイザルにおけるプールしたＡＡＶ特性評価実験については、上述の方法を使用して、指示された抗体にコンジュゲートされた対照ＡＡＶ及びＡＡＶ９バリアントを個別に生成したが、ウイルスゲノムプラスミドとしてバーコード化ｐＩＴＲ－ＣＡＧ－ＧＦＰ－ｈＧＨｐＡプラスミドを用いて作製し、プール中に存在する１２種類のウイルスの各々を、カプシドバリアントによる導入遺伝子発現を定量化するために使用される、固有の３２ヌクレオチド長のバーコードを担持するｐＩＴＲ－ＣＡＧ－ＧＦＰ－ｈＧＨｐＡのバージョンでパッケージングした。２匹のオスのカニクイザルマカク（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）に、３Ｅ＋１３ｖｇ／ｋｇのプールされたウイルス混合物の静脈内ボーラス注射を与えた。注射の２週間後、動物を安楽死させ、バーコード解析のために一連の組織及び器官を採取した。例えば、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１８／１４４８１３、Ｓｔｏｅｃｋｉｕｓ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ．１９：２２４、Ｓｔｏｅｃｋｉｕｓ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄ ９：２５７９－１０を参照されたい。表４は、様々なウイルス粒子に関連付けられたバーコード番号（ＢＣ＃）を提供する（例えば、ＡＡＶ９ ｃａｐ変異及び該当する場合、対応する抗体番号）。

【表4-1】

【表4-2】

【0177】

野生型及び再標的化ＡＡＶの投与後の肝臓の健康状態及び補体活性化（ＡＬＴ、ＡＳＴ、Ｂｂ、及びＣ３ａ）の血清読み取り値を評価するために、ＡＡＶ９及びＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ抗ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃３を、上述の方法に従って生成し、ｐＡＡＶ ＣＡＧ ｅＧＦＰでパッケージングした。オスのカニクイザルマカクに、３Ｅ＋１３ｖｇ／ｋｇのＡＡＶ９ ｗｔ（２匹の動物）若しくはＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ抗ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ＃３（２匹の動物）又は対照として生理食塩水（１匹の動物）のいずれかの静脈内ボーラス注射を与えた。ＡＬＴ、ＡＳＴ、Ｂｂ、及びＣ３ａの血清読み取り値を、ベースライン（投与前１０日）、並びに投与後３０分、６時間、２４時間、及び４８時間で収集した。注射の２週間後、動物を安楽死させ、解析のために一連の組織及び器官を採取した。

【0178】

免疫組織化学染色については、組織を中性緩衝ホルマリン溶液中で固定し、２４時間後に７０％エタノールに移した。パラフィン包埋の前に、器官を室温で７０％エタノール中に保存した。組織を、標準化された平面切片化を使用して５μｍの厚さで切片化した。ｅＧＦＰ発現に対する抗ＧＦＰ ＩＨＣ染色を、Ｂｅｎｃｈｍａｒｋ ＵＬＴＲＡ Ｖｅｎｔａｎａ ＩＨＣ／ＩＳＨシステムを使用して行った。画像解析を、ＨＡＬＯ解析ソフトウェアを使用して行った。

【0179】

免疫蛍光染色については、筋組織をＯＣＴ包埋媒体に浸漬し、液体窒素冷却イソペンタン中で凍結させた。組織を１２μｍの厚さで凍結切片化し、その後、４％ＰＦＡで固定し、ラミニン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、続いてＡｌｅｘａ ６４７コンジュゲート抗ウサギ二次抗体及びＤＡＰＩ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で染色した。スライドをＦｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）とともに載置し、Ａｘｉｏｓｃａｎスライドスキャナ（Ｚｅｉｓｓ）で撮像した。

【0180】

バーコード解析については、カニクイザル組織及び器官から単離された総ＲＮＡを、製造業者の仕様に従ってＭａｇＭＡＸ－９６マイクロアレイ用Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用して精製した。次いで、ＲＮＡをＴｕｒｂｏ ＤＮａｓｅで処理し、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＶ逆転写酵素及びｈＧＨ ｐＡ特異的プライマー（（５’－ＧＴＣＡＴＧＣＡＴＧＣＣＴＧＧＡＡＴＣ－３’、配列番号２５６）を使用してｃＤＮＡ合成を行った。Ｑ５ Ｈｉｇｈ Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ２ｘマスターミックスを使用して、バーコードの上流（５’－ＴＣＧＴＣＧＧＣＡＧＣＧＴＣＡＧＡＴＧＴＧＴＡＴＡＡＧＡＧＡＣＡＧＣＧＡＧＣＧＣＴＧＣＴＣＧＡＧＡＧ－３’、配列番号２５７）及び下流（５’－ＧＴＣＴＣＧＴＧＧＧＣＴＣＧＧＡＧＡＴＧＴＧＴＡＴＡＡＧＡＧＡＣＡＧＧＧＧＴＣＡＣＡＧＧＧＡＴＧＣＣＡＣ－３’、配列番号２５８）に結合するプライマーを用いて、バーコード化されたＧＦＰ転写物をｃＤＮＡ試料から増幅した。プールされたウイルス混合物は、試料に含まれていた。各試料を、ライブラリー調製の持続時間の間、３つの技術的反復で調製した。Ｉｌｌｕｍｉｎａアダプター及び固有のデュアルインデックス（ＵＤＩ－Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を含むアンプリコンを、量子ビット及びテープステーションを使用して定量化し、等モル比でプールし、３００サイクルの高出力キットを使用してＮｅｘｔｓｅｑ５５０で配列決定した。

【0181】

ＡＡＶ９ ｕＤｙｓ５ベクターのインビボ解析
６週齢のオスのＤ２－ｍｄｘマウスに、ＣＫ８プロモーター下で、ｕＤｙｓ５を発現するＷＴ ＡＡＶ９又はＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ抗ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ ＃３を１Ｅ＋１２ｖｇ／マウスで尾静脈注射した。注射の５週間後にマウスを屠殺し、ｑＰＣＲ解析のために以下の器官を採取し、ＲＮＡｌａｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ社）に保存した：肝臓、心臓、四頭筋、腓腹筋、前脛骨筋、ヒラメ筋、舌、及び横隔膜。次いで、組織をトリゾール中で均質化し、ＭａｇＭＡＸ－９６ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎキット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して水相を精製し、ＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅ Ｄｎａｓｅ Ｓｅｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用してｇＤＮＡを除去した。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＶＩＬＯ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してｍＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写し、以下のＴａｑｍａｎプライマー／プローブを使用して、ＡＧＧＧＴＡＧＣＴＡＧＣＡＴＧＧＡＡＡＡＡＣＡ（ｕＤｙｓ５ ｆｗｄ）、ＧＧＧＣＴＴＧＴＧＡＧＡＣＡＴＧＡＧＴＧＡＴ（ｕＤｙｓ５ ｒｅｖ）、ＡＴＴＴＡＣＡＴＴＣＴＴＡＴＧＴＧＣＣＴ（ｕＤｙｓ５プローブ）、内因性対照：ＡＡＧＧＣＣＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＴＧ（Ｒｐｌｐ０ ｆｗｄ）、ＴＣＴＣＣＡＧＡＧＣＴＧＧＧＴＴＧＴＴＣＴ（Ｒｐｌｐ０ ｒｅｖ）、ＡＡＧＡＡＣＡＣＣＡＴＧＡＴＧＣＧＣＡＡＧＧＣ（プローブ）を使用して、ｑＰＣＲを実施した。

【0182】

ｕＤｙｓ５筋線維膜局在の検出のために、腓腹筋及び心臓の凍結切片を４％ＰＦＡで固定し、ジストロフィン（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｂａｎｋ）で染色し、続いてＡｌｅｘａ ５４６コンジュゲート抗マウス二次抗体で染色した。スライドをＦｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）とともに載置し、Ａｘｉｏｓｃａｎスライドスキャナ（Ｚｅｉｓｓ）で撮像した。

【0183】

ｕＤｙｓ５タンパク質の検出のために、四頭筋を液体窒素中で急速凍結し、その後、Ｆａｓｔ Ｐｒｅｐ－２４ ５Ｇホモジナイザー（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）のマウス脚筋設定を使用して均質化した。次いで、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ）を含有する溶解緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ、１００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ二水和物、１％のＴｒｉｔｏｎ １００×）を含む溶解マトリクスチューブ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）に、筋肉を添加した。ＢＣＡアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用したタンパク質定量後、溶解物を試料緩衝液及び還元剤（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）とともに７０℃で１０分間加熱した。等量のタンパク質を４～２０％トリス－グリシンゲル（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）に装填して分離し、次いでＴｕｒｂｏＴｒａｎｓｆｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（ＢｉｏＲａｄ）を使用してＰＶＤＦ膜（ＢｉｏＲａｄ）に移した。膜を５％無脂肪乳（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）でブロッキングした後、以下の一次抗体と一晩インキュベーションした：ジストロフィン（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｓｔｕｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｂａｎｋ、ＭＡＮＨＩＮＧＥ１Ａ）、ベータアクチン（Ａｂｃａｍ、ａｂ８２２４）。洗浄後、膜を適切なＨＲＰコンジュゲート二次抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）とともにインキュベートした。膜をＥＣＬ試薬（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）中でインキュベートし、可視化した（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｉｍａｇｅｒ ６００）。ブロット画像をＩｍａｇｅＪを使用して定量した。

【0184】

ｕＤｙｓ５による筋形質導入が筋損傷の循環バイオマーカーに及ぼす影響を評価するために、投与前及び投与の４週間後に血液を１．１ｍＬのＺ－Ｇｅｌマイクロチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）に採取し、血清を最低２時間凝固させた。血液を４℃、１２，０００ＲＰＭで１０分間遠心分離した。次いで、上清を収集し、－８０℃で凍結した。全ての試料を収集したら、それらを全て解凍し、次いで脱イオン水で１：４に希釈した。血清を、ＡＤＶＩＡ（登録商標）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＸＰＴシステム上のＡＤＶＩＡ（登録商標）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙクレアチンキナーゼ（ＣＫ＿Ｌ）試薬（ＲＥＦ １０７２９７８０）を使用して解析した。

【0185】

ｕＤｙｓ５を用いた筋形質導入の機能的効果を評価するために、６週齢のオスのＤ２－ｍｄｘマウスに、ＣＫ８プロモーター下でｕＤｙｓ５を発現するＷＴ ＡＡＶ９又はＡＡＶ９ Ｎ２７２Ａ抗ＣＡＣＮＧ１ ｍＡｂ ＃３を１Ｅ＋１２ｖｇ／マウスで尾静脈注射し、注射の１２週間後に最大握力を評価した。前肢の握力は、マウスを尾によって垂直に保持し、プルバーを把持するまで下げることによって、コンピュータ化された握力計（Ｂｉｏｓｅｂ、ＢＩＯ－ＧＳ３）を用いて評価した。次に、マウスは握力を失うまでゆっくりと上向きに引っ張られた。生成されたピーク力（グラム）は、試験と試験の間に３分間の休息を含めて５回引っ張った後に記録された。３回の試験後、試験全体で最大の力を平均化し、最大握力として記録した。

【0186】

本発明は、多数の実施形態を参照して具体的に示され、記載されているが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、本明細書に開示の様々な実施形態に対して、形式及び詳細が変更が可能であり、本明細書に開示の様々な実施形態は、特許請求の範囲を限定するように機能することを意図しないことを当業者は理解するであろう。本明細書に記載された方法及び材料と類似又は同等の任意の方法及び材料を、本発明の実践又は試験に使用することができるが、いくつかの好適な方法及び材料をこれより記載する。本明細書で引用された全ての刊行物は、その全体を説明するために参照により本明細書に組み込まれる。別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。

【図1-1】

【図1-2】

【図1-3】

【図2-1】

【図2-2】

【図2-3】

【図2-4】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7-1】

【図7-2】

【図8-1】

【図8-2】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24-1】

【図24-2】

【図24-3】

【図24-4】

【配列表】

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【国際調査報告】