特表 2024-540186 アロニア・メラノカルパからの組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-10-31

(54)【発明の名称】アロニア・メラノカルパからの組成物

(51)【国際特許分類】

   A23L 33/105 20160101AFI20241024BHJP

【ＦＩ】

A23L33/105

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2024525678

(86)(22)【出願日】2022-10-14

(85)【翻訳文提出日】2024-07-01

(86)【国際出願番号】 EP2022078598

(87)【国際公開番号】W WO2023072621

(87)【国際公開日】2023-05-04

(31)【優先権主張番号】63/273,635

(32)【優先日】2021-10-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】501105842

【氏名又は名称】ジボダン エス エー

(74)【代理人】

【識別番号】110003971

【氏名又は名称】弁理士法人葛和国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ルコント，マノン

(72)【発明者】

【氏名】フランカ－バートン，パスカル エリザベス ルネ

(72)【発明者】

【氏名】フロマンタン，エミリー アニー クローディ

(72)【発明者】

【氏名】ル セエック，メラニー マリー－ロウ

(72)【発明者】

【氏名】ロドリゲス マテオス，アナ マリア

【テーマコード（参考）】

4B018

【Ｆターム（参考）】

4B018MD08

4B018MD52

4B018ME04

4B018ME14

4B018MF01

(57)【要約】

本発明は、心血管疾患（ＣＶＤ）および／または腸内菌共生バランス失調を処置することにおける使用のための組成物、ならびにＣＶＤおよび／または腸内菌共生バランス失調を処置する方法に関する。特に、本発明は、減少した腸内遺伝子数（糞便マイクロバイオーム遺伝子数）を有する対象群において心血管疾患（ＣＶＤ）および／または腸内菌共生バランス失調を処置するための使用のための組成物および方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象において腸内菌共生バランス失調および／または心血管疾患を処置および／または予防することにおける使用のための組成物であって、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む、前記組成物。

【請求項2】

対象において腸内菌共生バランス失調および／または心血管疾患を処置および／または予防するための方法であって、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物の、それを必要とする対象への投与を含む、前記方法。

【請求項3】

心血管疾患を処置および／または予防することが、以下：
（ａ）高血圧を処置および／もしくは予防すること；ならびに／または
（ｂ）高血圧前症を処置および／もしくは予防すること、ならびに／または
（ｂ）血圧を低下させること；ならびに／または
（ｃ）動脈の硬化度を低下させること
の少なくとも１つを含む、請求項１において定義されるとおりの使用のための組成物、または請求項２において定義されるとおりの方法。

【請求項4】

腸内菌共生バランス失調を処置および／または予防することが、以下：
（ａ）糞便マイクロバイオーム遺伝子数により測定されるものとしてのマイクロバイオームの多様性を増大させること；および／または
（ｂ）Faecalibacterium prausnitzii 2、Lawsonibacter asaccharolyticus、Intestinimonas butyriciproducens、Faecalibacterium、Roseburia intestinalisおよび／またはEggerthella lentaなどの有益な細菌のレベルを増大させること
の少なくとも１つを含む、請求項１において定義されるとおりの使用のための組成物、または請求項２において定義されるとおりの方法。

【請求項5】

アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物が、水性抽出物または水アルコール抽出物である、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための組成物または方法。

【請求項6】

組成物が、組成物の重量により、少なくとも１０％、少なくとも２０％、２０％、４０％、少なくとも５０％ｗ／ｗまたはそれより多くのポリフェノールを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための組成物または方法。

【請求項7】

動脈の硬化度の低下が、脈波伝播速度および／またはオーグメンテーション・インデックスの減少により決定される、請求項３～６のいずれか一項に記載の使用のための組成物または方法。

【請求項8】

心血管疾患および／または腸内菌共生バランス失調を処置および／または予防することが、４００，０００未満、任意に３７５，０００未満、任意に３５０，０００、３００，０００、２７５，０００、２５０，０００、２２５，０００、２００，０００、１７５，０００未満、または１５０，０００未満の糞便マイクロバイオーム遺伝子数を有する哺乳動物におけるものである、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のための組成物または方法。

【請求項9】

心血管疾患を処置および／または予防することが、血圧を低下させることによるもの、任意に、４００，０００未満、任意に３７５，０００未満、任意に３５０，０００、３００，０００、２７５，０００、２５０，０００、２２５，０００、２００，０００、１７５，０００未満、または１５０，０００未満の糞便マイクロバイオーム遺伝子数を有する哺乳動物において血圧を低下させることによるものである、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のための組成物または方法。

【請求項10】

請求項１～９のいずれか一項に記載の使用のための組成物または方法であって、対象が、高血圧前症であり、任意にここで、対象が以下：
少なくとも１２０ｍｍＨｇ、任意に少なくとも１３０もしくは少なくとも１４０ｍｍＨｇの収縮期血圧；および／または１２０ｍｍＨｇ～１３０ｍｍＨｇ、もしくは１２０ｍｍＨｇ～１４０ｍｍＨｇの収縮期血圧、ならびに／あるいは
少なくとも８０ｍｍＨｇ、任意に少なくとも９０ｍｍＨｇの拡張期血圧；および／または８０ｍｍＨｇ～９０ｍｍＨｇの拡張期血圧
を有する、前記組成物または方法。

【請求項11】

腸内菌共生バランス失調および／または心血管疾患を処置するための投与量が、以下：
ａ）組成物の重量により、約１００～約１０００ｍｇ／日、任意に、組成物の重量により、１００～１０００ｍｇ／日、もしくは２００～８００ｍｇ／日、または４００～６００ｍｇ／日；
ｂ）組成物の重量により、１０００ｍｇ／日以下、任意に９００ｍｇ／日、８００ｍｇ／日、７００ｍｇ／日、６００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日以下、もしくは１００ｍｇ／日以下；および／あるいは
ｃ）１００ｍｇ／日以上、または任意に２００ｍｇ／日以上、３００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、６００ｍｇ／日、７００ｍｇ／日、８００ｍｇ／日、９００ｍｇ／日以上、もしくは１０００ｍｇ／日以上
であってよい、請求項１～１０のいずれか一項に記載の使用のための組成物または方法。

【請求項12】

腸内菌共生バランス失調および／または心血管疾患を処置するための投与量が、以下：
ａ）組成物の重量により約１００ｍｇ／日～約５００ｍｇ／日のポリフェノール、任意に約２００ｍｇ／日～約４００ｍｇ／日、任意に組成物の重量により約３００ｍｇ／日のポリフェノール；
ｂ）組成物の重量により５００ｍｇ／日以下のポリフェノール、任意に４００ｍｇ／日以下、３００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、もしくは組成物の重量により１００ｍｇ／日以下のポリフェノール；および／または
ｃ）組成物の重量により、１００ｍｇ／日以上、任意に２００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日以上、もしくは５００ｍｇ／日以上のポリフェノール
を提供する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の使用のための組成物または方法。

【請求項13】

対象から得られた糞便の試料中の細菌の存在量を決定することを、ショットガンシーケンシングを用いて行う、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のための組成物または請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

対象が、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いか否かを決定するための方法であって、
ａ）対象から得られた糞便の試料中の糞便マイクロバイオーム遺伝子数を決定すること；および／または
ｂ）以下のうちの任意の１、２、３つ、またはすべての存在量を決定すること：
ｉ）対象から得られた糞便の試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8；
ｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のAcutalibacteraceae 3；
ｉｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のFirmicutes bacterium CAG 103；および／または
ｉｖ）対象から得られた糞便の試料中のBifidobacterium adolescentis
を含む、前記方法。

【請求項15】

ａ）対象から得られた糞便の試料中の糞便マイクロバイオーム遺伝子数を、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中の糞便マイクロバイオーム遺伝子数と比較すること；および／または
ｂ）以下を比較すること：
ｉ）対象から得られた糞便の試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量と、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量；
ｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量と、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のAcutalibacteraceae 3の存在量；
ｉｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量と、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量；および／または
ｉｖ）対象から得られた糞便の試料中のBifidobacterium adolescentisの存在量と、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のBifidobacterium adolescentisの存在量
をさらに含む、前記方法。

【請求項16】

少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団が、陰性対照試料または対照試料の集団である、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

陰性対照試料または対照試料の集団が、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答しないものと決定された１つ以上の陰性対照の対象から採取された糞便試料であり、
ここで、試料は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置の前に、１つ以上の対照の対象から採取されたものである、
請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団が、陽性対照試料または集団または対照試料である、請求項１５～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

請求項１８に記載の方法であって、陽性対照試料または対照試料の集団が、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答することが示されている１つ以上の陽性対照の対象から採取された糞便試料であり、
ここで、試料は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置の前に、１つ以上の対照の対象から採取されたものである、
前記方法。

【請求項20】

請求項１５～１９のいずれか一項に記載の方法であって、対象から得られた試料の糞便マイクロバイオーム遺伝子数を、以下：
ａ）陰性の対照試料または対照試料の集団における糞便マイクロバイオーム遺伝子数、任意にここで、陰性の対照試料または対照試料の集団が、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答しないことが示されている１つ以上の陰性対照の対象から採取された糞便試料であり、ここで、試料が、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置の前に、１つ以上の陰性対照の対象から採取されたものである；ならびに／あるいは
ｂ）陽性の対照試料または対照試料の集団における糞便マイクロバイオーム遺伝子数、任意にここで、陽性の対照試料または対照試料の集団が、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答することが示されている１つ以上の陽性対照の対象から採取された糞便試料であり、ここで、試料が、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置の前に、１つ以上の陽性対照の対象から採取されたものである
と比較する、前記方法。

【請求項21】

ａ）対象から得られた試料の糞便マイクロバイオーム遺伝子数が、陰性の対照試料（単数または複数）の糞便マイクロバイオーム遺伝子数と、実質的に類似しているか、またはそれよりも高い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられ、
任意にここで、対象から得られた試料の糞便マイクロバイオーム遺伝子数が、陰性の対照試料（単数または複数）の糞便マイクロバイオーム遺伝子数よりも少なくとも５％大きい、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％大きい、例えば少なくとも２００％大きい場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられ；
ならびに／あるいは
ｂ）試験試料中の糞便マイクロバイオーム遺伝子数が、陽性対照試料（単数または複数）の糞便マイクロバイオーム遺伝子数と、実質的に類似しているか、またはそれよりも低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられ、
任意にここで、対象から得られた試料の糞便マイクロバイオーム遺伝子数が、陽性対照試料（単数または複数）の糞便マイクロバイオーム遺伝子数よりも少なくとも５％低い、例えば少なくとも１０％高い、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％低い、例えば少なくとも２００％低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられる、
請求項１５～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

ａ）
ｉ）対象から得られた糞便の試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量が、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量と比較され；
ｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量が、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のAcutalibacteraceae 3の存在量と比較され；
ｉｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量が、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量と比較され；および／または
ｉｖ）対象から得られた糞便の試料中のBifidobacterium adolescentisが、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のBifidobacterium adolescentisの存在量と比較され、
ここで、対照試料または対照試料の集団は、陰性の対照試料もしくは集団または対照試料であり、
ここで、陰性の対照試料または対照試料の集団は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答しないことが示されている１つ以上の陰性対照の対象から採取された糞便試料であり、ここで、試料は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置の前に、１つ以上の陽性対照の対象から採取されたものであり；ならびに／あるいは
ｂ）
ｉ）対象から得られた糞便の試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量が、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量と比較され；
ｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量が、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のAcutalibacteraceae 3の存在量と比較され；
ｉｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量が、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量と比較され；および／または
ｉｖ）対象から得られた糞便の試料中のBifidobacterium adolescentisが、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のBifidobacterium adolescentisの存在量と比較され、
ここで、対照試料または対照試料の集団は、陽性の対照試料もしくは集団または対照試料であり、
ここで、陽性の対照試料または対照試料の集団は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答することが示されている１つ以上の陽性対照の対象から採取された糞便試料であり、ここで、試料は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置の前に、１つ以上の陽性対照の対象から採取されたものである、
請求項１５～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

ａ）対象から得られた試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量と、実質的に類似するかまたはそれよりも高い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられ、任意にここで、対象から得られた試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量よりも、少なくとも５％大きい、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％大きい、例えば少なくとも２００％大きい場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられる；
ｂ）対象から得られた試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のAcutalibacteraceae 3の存在量と、実質的に類似するかまたはそれよりも高い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられ、任意にここで、対象から得られた試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のAcutalibacteraceae 3の存在量よりも、少なくとも５％大きい、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％大きい、例えば少なくとも２００％大きい場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられる；
ｃ）対象から得られた試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量と、実質的に類似するかまたはそれよりも高い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられ、任意にここで、対象から得られた試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量よりも、少なくとも５％大きい、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％大きい、例えば少なくとも２００％大きい場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられる；
ならびに／あるいは
ｄ）対象から得られた試料中のBifidobacterium adolescentisの存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のBifidobacterium adolescentisの存在量と、実質的に類似するかまたはそれよりも高い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられ、任意にここで、対象から得られた試料中のBifidobacterium adolescentisの存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のBifidobacterium adolescentisの存在量よりも、少なくとも５％大きい、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％大きい、例えば少なくとも２００％大きい場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられる；
ｅ）対象から得られた試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量が、陰性対照試料（単数または複数）中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量と、実質的に類似するかまたはそれよりも低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられ、任意にここで、対象から得られた試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量が、陰性対照試料（単数または複数）中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量よりも、少なくとも５％低い、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％低い、例えば少なくとも２００％低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられる；
ｆ）対象から得られた試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量が、陰性対照試料（単数または複数）中のAcutalibacteraceae 3の存在量と、実質的に類似するかまたはそれよりも低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられ、任意にここで、対象から得られた試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量が、陰性対照試料（単数または複数）中のAcutalibacteraceae 3の存在量よりも、少なくとも５％低い、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％低い、例えば少なくとも２００％低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられる；
ｇ）対象から得られた試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量が、陰性対照試料（単数または複数）中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量と、実質的に類似するかまたはそれよりも低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられ、任意にここで、対象から得られた試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量が、陰性対照試料（単数または複数）中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量よりも、少なくとも５％低い、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％低い、例えば少なくとも２００％低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられる；
ならびに／あるいは
ｈ）対象から得られた試料中のBifidobacterium adolescentisの存在量が、陰性対照試料（単数または複数）中のBifidobacterium adolescentisの存在量と、実質的に類似するかまたはそれよりも低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられ、任意にここで、対象から得られた試料中のBifidobacterium adolescentisの存在量が、陰性対照試料（単数または複数）中のBifidobacterium adolescentisの存在量よりも、少なくとも５％低い、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％低い、例えば少なくとも２００％低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられる、
請求項１５～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

ｉ）対象から得られた糞便の試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量が、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量と比較され；
ｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量が、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のAcutalibacteraceae 3の存在量と比較され；
ｉｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量が、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量と比較され；および
ｉｖ）対象から得られた糞便の試料中のBifidobacterium adolescentisが、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のBifidobacterium adolescentisの存在量と比較される、
前記方法。

【請求項25】

請求項１５～２４のいずれか一項に記載の方法であって、ここで、対象から得られた糞便試料中のBifidobacterium adolescentisの存在量が、以下：
１つ以上の陰性対照試料；および／または
１つ以上の陽性対照試料
におけるBifidobacterium adolescentisの存在量と比較される、
請求項１５～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

対象から得られた糞便の試料中の糞便マイクロバイオーム遺伝子数が、４００，０００未満、任意に３７５，０００未満、任意に３５０，０００、３００，０００、２７５，０００、２５０，０００、２２５，０００、２００，０００、１７５，０００未満、または１５０，０００未満である、請求項１４に記載の方法。

【請求項27】

糞便の試料中の糞便マイクロバイオーム遺伝子数が、ショットガンシーケンシングにより決定される、請求項１～１２のいずれかに記載の使用のための組成物、または請求項１～２６のいずれかに記載の方法。

【請求項28】

糞便の対照試料または糞便の対照試料の集団における糞便マイクロバイオーム遺伝子数が、ショットガンシーケンシングにより決定される；および／または
糞便の対照試料または糞便の対照試料の集団中の、
ｉ）対象から得られた糞便の試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8；
ｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のAcutalibacteraceae 3；
ｉｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のFirmicutes bacterium CAG 103；および／または
ｉｖ）対象から得られた糞便の試料中のBifidobacterium adolescentis
が、糞便の対照試料のショットガンシークエンシングにより決定される、
請求項１３～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

処置に対する応答が、血圧の低下によって示され、任意にここで、方法は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物が、特定の対象の血圧を低下させる可能性が高いか否かを決定するための方法である、請求項１４～２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

対象が、高血圧前症であり、任意にここで、対象が、以下：
少なくとも１２０ｍｍＨｇ、任意に少なくとも１３０もしくは少なくとも１４０ｍｍＨｇの収縮期血圧；および／または１２０ｍｍＨｇ～１３０ｍｍＨｇ、もしくは１２０ｍｍＨｇ～１４０ｍｍＨｇの収縮期血圧、ならびに／あるいは
少なくとも８０ｍｍＨｇ、任意に少なくとも９０ｍｍＨｇの拡張期血圧；および／または８０ｍｍＨｇ～９０ｍｍＨｇの拡張期血圧
を有する、請求項１４～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

対象において心血管疾患および／または腸内菌共生バランス失調を処置および／または予防することにおける使用のための組成物であって、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含み、ここで、対象が、請求項１４～３０のいずれか一項に記載の組成物による処置に対して応答する可能性が高いものと決定されている、前記組成物。

【請求項32】

対象において腸内菌共生バランス失調および／または心血管疾患を処置および／または予防するための方法であって、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物の、それを必要とする対象への投与を含み、ここで、対象は、請求項１４～３１のいずれか一項に記載の組成物による処置に対して応答する可能性が高いものと決定されている、前記方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

発明の分野
本発明は、心血管疾患（ＣＶＤ）および／または腸内菌共生バランス失調を処置および／または予防することにおける使用のための組成物、ならびにＣＶＤおよび／または腸内菌共生バランス失調を処置する方法に関する。特に、本発明は、減少した腸内遺伝子数（糞便マイクロバイオーム遺伝子数）を有する対象群において心血管疾患（ＣＶＤ）および／または腸内菌共生バランス失調を処置するための使用のための組成物および方法に関する。

【背景技術】

【0002】

発明の背景
ＣＶＤは、心臓疾患とも称され、心臓または循環に影響を及ぼす状態を指すために用いられる総称で、冠動脈疾患、脳卒中、および高血圧を含む。ＣＶＤは世界的な死亡の第１の原因であり、推計される世界全体の全死亡の３１％の原因である（世界保健機関２０１７年）。毎年、ＣＶＤは、英国における死亡のほぼ２７％を占めており、英国におけるＣＶＤに関係する全医療費は１年あたり９０億ポンドと推定されている（British Heart Foundation）。

【0003】

アテローム性動脈硬化症とは、動脈における脂質および線維性プラークの蓄積により、これらの大きな血管の硬化および狭窄をもたらされることにより特徴づけられる、進行性の疾患を指す。動脈硬化は、動脈の３層のうち最も内側である内膜において起こる。

【0004】

心血管イベントは、動脈内腔を閉塞または狭窄する動脈硬化性プラークの蓄積に起因して起こり得る。アテローム性動脈硬化に基づくＣＶＤは、世界的な血管疾患の主な原因の１つである。実際、一生の間のゆっくりとした進行の後、この疾患は、最終的に、より高齢の一般的な集団の中で、末梢血管疾患および／または脳卒中を引き起こし得る。高コレステロール血症、高血圧、喫煙および糖尿病などの、いくつかの危険因子が、アテローム性動脈硬化の発症および進展に関係づけられてきた。

【0005】

血圧（ＢＰ）は、ＣＶＤリスクの強固な代用マーカーであることが示されており、収縮期血圧（ＳＢＰ）の３ｍｍＨｇの低下は、ＣＶＤ死亡のリスクの５％の低下に関連した。

【0006】

ＢＰとアテローム性動脈硬化との間の関連性の背後にある機構は、まだ完全には同定されていないが、内皮およびそのレベルにおいて起こる酸化ストレスのプロセスの重要性が、主な説明となると考えられる。しかしながら、ＮＯは、血管緊張および血圧の調節において重要な役割を果たすが、一方でまた、損なわれたＮＯ活性が、高血圧の発症に不可欠な要素であることも観察されている。ＢＰの拍動性因子は、アテロームの不安定性、および最終的にはプラークの破裂を誘発することが示されており、このことは、アテローム性動脈硬化に対するＢＰの仲介的役割を示している。

【0007】

動脈硬化性プラークの蓄積は、動脈壁の硬化をもたらす。
脈波伝播速度（ＰＷＶ）は、動脈の硬化度を評価するために最も使用される技術である。ＰＷＶは、圧平眼圧測定技術を用いて、動脈系中を移動する圧力波の速度を測定する。ＰＷＶは、ｍ／ｓにおいて表され、２つの測定点の間の距離を、これら２つの位置における脈圧波の通過時間により除算することに基づいて計算される。一般的な方法において、頸動脈および大腿動脈が、ＰＷＶの評価のための好ましい部位であり、これはしたがって、Ｃｆ－ＰＷＶと称される。

【0008】

オーグメンテーション・インデックス（Augmentation index：ＡＩｘ）評価は、過去数十年にわたって開発されてきた動脈の硬化度の測定のための別の有用なツールである。ＰＷＶと同じ圧平眼圧測定技術を用いて、ＡＩｘは、動脈の脈波反射を推定し、それを百分率として表す、非侵襲的な方法である。ＰＷＶおよびＡＩｘは、動脈の硬化性の２つの異なる指標であり、互換可能ではない。

【0009】

ＡＩｘの推定の機構、ならびにＣＶＤおよびアテローム性動脈硬化に対するその関係は、まだ完全には解明されていない。ＡＩｘは、年齢とともに曲線的パターンを追って有意に増加することが示されている。しかしながら、ＡＩｘの増加は、アテローム性動脈硬化の発症の初期段階の１つを構成するＲＯＳレベルの上昇に関係し得ることが示唆されている。実際に、ある研究は、ＡＩｘが、喫煙者の集団においてＲＯＳ濃度と関連していることを示した。この研究はまた、高齢および高血圧が、ＡＩｘの上昇と関連していることも観察した。

【0010】

（ポリ）フェノール（ＰＰ）は、抗酸化効果を有することが知られており、したがって、ＲＯＳに対して有益である可能性がある。
ＰＰは、その構造中に１つ以上のフェノール環を含む植物の二次代謝物であり、質量、３００～３０００Ｄａの範囲、および大きな化合物については２００００Ｄａまでにも及ぶ。８０００を超える異なる型のＰＰが、植物において同定されている。

【0011】

それらは、果物および野菜、ならびにコーヒー、茶、ナッツ、オリーブ油、ダイズ製品またはココアなどの植物性の食品および飲料において非常に豊富である。近年、これらの化合物は、それらの潜在的な健康上の利点に起因して、多くの注目を集め、広く研究されてきた。疫学的および臨床的研究は、ＰＰが、生理病理学的状態を調節し、それによりＣＶＤおよび認知症などの慢性疾患のリスクを軽減する潜在能力を有することを示した。

【0012】

ＰＰは、植物性化学物質の最も豊富かつ主要なグループの１つであり、これはまた、テルペノイド（カロテノイドなど）、アルカロイドおよび硫黄化合物を含む。それらは、ＵＶにより媒介される酸化ストレスに対して植物を保護し、細胞壁を強化するために、草食動物および感染症を撃退するために、および花粉媒介者を引き付けるために、植物により合成される。

【0013】

ＰＰは、天然ではそれらのグリコシド形態において見出され、およびより低頻度にアグリコンまたはゲニン（すなわち、グリコシル部分を含まない）として見出される。それらは、フェニル環の数およびその構造に基づいて異なるグループに分類される。よって、ＰＰは、２つの主要なグループ：フラボノイドおよび非フラボノイドに分けることができる。

【0014】

フラボノイドは、化学的に、炭素数１５の骨格構造に関係し、これは、２つのフェニル環ＡおよびＢ、ならびにＣと名付けられる酸素を含む１つの複素環からなる。この構造はまた、「Ｃ６－Ｃ３－Ｃ６」としても知られる。通常、Ｂ環は、Ｃ環の２位に結合しているが、それはまた、イソフラボンの場合のように、３位においても見出され得る。フラボノイドは、７つのサブクラス：フラボン、フラバノン、アントシアニン、フラボノール、フラバン－３－オール、イソフラボン、およびジヒドロカルコンに分けられる。

【0015】

非フラボノイドファミリーとして、スチルベン、リグナン、フェノール酸、およびチロソール、ピロガロール、またはヒドロキシクマリンなどの他のＰＰが挙げられる（Manach et al. 2004）。フェノール酸は、５つのサブグループ、すなわち、ヒドロキシフェニルプロパン酸、ヒドロキシフェニル酢酸、ヒドロキシフェニルペンタン酸、ヒドロキシ桂皮酸、ヒドロキシ安息香酸に分けられる（Phenol Explorer）。

【0016】

ほとんどのＰＰは、経口摂取される；したがって、任意のＰＰの体内消化は、摂取されたＰＰの活性に直接的な影響を有するであろう。
しばしば「第２の脳」とみなされるマイクロバイオームは、何兆もの細菌から構成される大規模な生態系であり、個体の全生涯を通じて生体全体と相互作用する。

【0017】

腸内細菌叢は、ＰＰの生物学的利用能において重要な役割を果たしている。なぜならば、高分子化合物の存在は、フェノール化合物の吸収が比較的低いことと関連して、一般的に、後者と結腸の菌との相互作用を有利にするからである。

【0018】

大腸に到達すると、ＰＰと微生物叢の間に双方向の関係が発生するであろう。実際に、ＰＰは、マイクロバイオームの組成および多様性を調節することができるが、一方で、腸内細菌は、ＰＰを異化して、通常はより活性が高く、元の代謝産物よりも良好な吸収を表す、より小さな化合物を産生する。

【0019】

したがって、マイクロバイオームは、身体の生理機能を維持することにおいて、重要な役割を果たすことができる。マイクロバイオームのディスバイオーシスは、様々な障害をもたらし得る。微生物に基づく治療は、腸の健康の維持およびマイクロバイオームに関連した障害の処置のために用いることができる。例えば、Jing Liらにおいて、腸内細菌叢の共生バランス失調が高血圧の発症に寄与することが報告された（Li, J., Zhao, et al. 2017,‘Gut microbiota dysbiosis contributes to the development of hypertension’, Microbiome, 5(1)、ＰＰ.1-19.)

【0020】

アロニア・メラノカルパ（Aronia melanocarpa）（アロニア）は、バラ科に属するベリーである。その渋い味に起因して「ブラック・チョークベリー」としても知られるこのベリーは、もともと北アメリカ原産である。しかしながら、アロニアは、今日では、中欧および東欧において見出され、栽培されており（ＵＳＤＡ）、その導入以来、Nero、VikingまたはAronなどの、元の栽培品種と比較してより大きなベリーおよびより優れた耐性を表すさまざまな栽培品種が作られてきた。アロニアのベリーは、ＰＰの豊富な供給源であり、一般的にベリー類の中でもＰＰの供給量が最も高いものの１つと考えられる。ベリーにおいて見出される主なＰＰは、プロシアニジン、アントシアニンおよびフェノール酸により代表される。

【0021】

本明細書において、明らかに先行公開された文書を掲載または議論することは、必ずしも、その文書が技術状態の一部である、または共通の一般的な知識であることを認めるものと解釈されるべきではない。

【発明の概要】

【0022】

発明の開示
本発明者らにより、驚くべきこと、かつ予想外に、アロニアベリー抽出物は、心血管疾患（ＣＶＤ）および／または腸内菌共生バランス失調を処置および／または予防することができることを、見出された。

【0023】

したがって、本発明は、心血管疾患を処置および／または予防することにおける使用のための組成物を提供し、ここで、該組成物は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む。

【0024】

本発明はまた、腸内菌共生バランス失調を処置および／または予防することにおける使用のための組成物を提供し、ここで、該組成物は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む。

【0025】

本発明はまた、心血管疾患を処置および／または予防するための方法を提供し、ここで、該方法は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物の投与を含む。

【0026】

本発明はまた、腸内菌共生バランス失調を処置および／または予防するための方法を提供し、ここで、該方法は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物を投与することを含む。

【0027】

本発明はまた、心血管疾患および／または腸内菌共生バランス失調の処置および／または予防のための医薬の製造における、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物の使用を提供してもよい。

【0028】

本明細書で使用される場合、心血管疾患を処置することは、以下のうちの少なくとも１つを含んでもよい：
（ａ）高血圧を処置および／もしくは予防すること；ならびに／または
（ｂ）高血圧前症を処置または予防すること、ならびに／または
（ｂ）血圧を低下させること；ならびに／または
（ｃ）動脈の硬化度を低下させること。

【0029】

例えば、本発明は、高血圧を処置および／もしくは予防すること、血圧を低下させること、ならびに／または動脈の硬化度を低下させることにおける使用のための組成物を提供してもよく、ここで、該組成物は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む。
本発明はまた、高血圧を処置および／もしくは予防する、血圧を低下させる、ならびに／または動脈の硬化度を低下させるための方法を提供してもよく、ここで、該方法は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物の、それを必要とする対象への投与を含む。

【0030】

本発明は、高血圧の処置および／もしくは予防のため、高血圧前症の処置および／もしくは予防、血圧を低下させる、ならびに／または動脈の硬化度を低下させるための医薬の製造における、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物の使用を提供してもよい。

【0031】

動脈の硬化度は、心血管疾患イベントおよび心血管死亡のリスク増大と関連することが示されている。例えば、Ａｉｘの１０％の増大は、心血管死亡のリスクの４８％の増大をもたらすことが示された（London et al 2001 J Spinal Cord Medicine 32: 72-78）。したがって、動脈の硬化度の低下はＣＶＤまたはＣＶＤイベントの処置または予防を示すものと解釈されることが明らかであろう。

【0032】

本明細書において用いられる場合、腸内菌共生バランス失調を処置することは、以下の少なくとも１つを含んでもよい：
（ａ）糞便マイクロバイオーム遺伝子数により測定されるものとしてのマイクロバイオームの多様性の増大；
（ｂ）Faecalibacterium prausnitzii 2、Lawsonibacter asaccharolyticus、Intestinimonas butyriciproducens、Faecalibacterium、Roseburia intestinalis、および／またはEggerthella lentaのうちの１つ以上を含むがこれらに限定されない有益な細菌のレベルを増大させること、ならびに／あるいは
（ｃ）病原性微生物、または１つ以上の状態に対して有益でないかもしくは有益性が低いものとして同定される微生物のレベルを低下させること。

【0033】

例えば、本発明は、糞便マイクロバイオーム遺伝子数により測定されるものとしてのマイクロバイオームの多様性を増大させること、ならびに／またはClostridiales bacterium、Oscillibacter sp.、Firmicutes bacterium CAG 103、Lawsonibacter asaccharolyticus、Oscillospirales 5、Clostridium sp.Clostridium sp.、Butyricimonas faecihominis、Turicibacter sanguinis、Bacteroides dorei、Oscillospiraceae、Bacteroides xylanisolvens、Ruminococcus sp.／Blautia sp.Blautia sp.、Dialister invisus、Flavonifractor sp.、Clostridium sp.、Faecalibacterium prausnitzii 2、Christensenellales、Blautia A、Intestinimonas butyriciproducens、Faecalibacterium、Roseburia intestinalis、および／もしくはEggerthella lentaの１つ以上を含むがこれらに限定されない有益な微生物のレベルを増大させることにおける使用のための組成物を提供してもよい。

【0034】

好ましい態様において、増加する細菌は、Faecalibacterium prausnitzii 2、Lawsonibacter asaccharolyticus、Intestinimonas butyriciproducens、Faecalibacterium、Roseburia intestinalisおよび／またはEggerthella lentaのうちの１つ以上を含む。
好ましい態様において、レベルが増大する有益な細菌は、 Faecalibacterium prausnitzii 2、Lawsonibacter asaccharolyticusおよび／またはIntestinimonas butyriciproducensのうちの１つ以上を含む。

【0035】

本発明はまた、糞便マイクロバイオーム遺伝子数により測定されるものとしてのマイクロバイオームの多様性を増大させる、ならびに／または、Faecalibacterium prausnitzii 2、Lawsonibacter asaccharolyticus、Intestinimonas butyriciproducens、Faecalibacterium、Roseburia intestinalisおよび／もしくはEggerthella lentaのうちの１つ以上を含むがこれらに限定されない有益な細菌のレベルを増大させるための方法を提供してもよく、ここで、該方法は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物の、それを必要とする対象への投与を含む。好ましい態様において、レベルが増大する有益な細菌は、Faecalibacterium prausnitzii 2、Lawsonibacter asaccharolyticusおよび／またはIntestinimonas butyriciproducensのうちの１つ以上を含む。

【0036】

いくつかの態様において、糞便マイクロバイオームの多様性は、組成物の投与の前の対象の糞便マイクロバイオームの多様性と比較して、本発明の組成物による処置の後に、少なくとも２％、例えば少なくとも３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、または少なくとも５０％、増大する。

【0037】

かかる使用のための組成物または方法は、本明細書において以後、「本発明の使用のための組成物」または「本発明の方法」として言及される。

【0038】

高血圧は、高いまたは上昇した血圧としても知られ、血管が持続的に上昇した圧力を有する状態である。血液は、心臓から血管中で体のすべての部位へと運搬される。心臓は、拍動するたびに、血液を血管中に注ぎ込む。血圧は、血液が、心臓により注ぎ込まれる際に、血管（動脈）の壁を押す力により生じる。圧力が高いほど、心臓はより強くポンピングしなければならない。

【0039】

典型的には、高血圧は、１３０以上、もしくは１４０以上の収縮期血圧、および／または８０以上、もしくは９０以上の拡張期血圧を有するものとして定義される。高血圧前症は、１２０～１３０、もしくは１２０～１４０の収縮期血圧、および／または８０～９０の拡張期血圧を有するものとして定義される。

【0040】

ある態様において、高血圧を処置することは、一定の処置期間後に、治療前の値に対して少なくとも２ポイントの水銀柱ミリメートル（mm Mercure）、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１ポイントのｍｍを減少させることとして定義される。ある態様において、高血圧前症を処置することとは、ある治療期間後に、治療前の値に対して少なくとも２ポイントの水銀柱ミリメートル、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１ポイントのｍｍを減少させることとして定義される。

【0041】

動脈の硬化度は、典型的には、脈波伝播速度（ＰＷＶ）および／またはオーグメンテーション・インデックス（Ａｉｘ）を用いて測定される。
したがって、本発明において、動脈の硬化度を低下させることは、ＰＷＶおよび／またはＡＩｘを決定することにより測定され得る。ＰＷＶおよび／またはＡＩｘの低下は、動脈の硬化度の低下を示す。

【0042】

本発明のいくつかの態様において、本発明の組成物による処置は、組成物による処置の前の対象の動脈の硬化度と比較して、２％以上、例えば少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％またはそれより多くの動脈の硬化度の低下をもたらす。いくつかの態様において、動脈の硬化度の低下は、対照群の対象の動脈の硬化度と比較して、２％以上、例えば少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、または少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％である。いくつかの態様において、対照群は、高い動脈の硬化度を有することが知られている個体の集団、例えば心血管疾患を有する個体の集団により代表される。当業者は、対照の対象の適切な構成を選択することができる。

【0043】

マイクロバイオームの多様性は、関連するバイオーム内に存在する遺伝的に異なる細菌種の数に依存する。本発明において、バイオームは、腸内マイクロバイオームであり、例えば、糞便において検出可能なものとしての腸内マイクロバイオームである。したがって、本発明で使用されるマイクロバイオームの多様性を増大させることは、糞便マイクロバイオーム遺伝子数により測定されるものとしての腸内の遺伝的に異なる細菌種の数を増大させることを意味することが意図される。例えば、いくつかの態様において、腸内の微生物多様性を増大させることは、腸内の遺伝的に異なる細菌種の数を、本発明の組成物による処置の前の個体の腸内の微生物多様性と比較して、少なくとも１％、または少なくとも２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、もしくは少なくとも４０％増大させることを含む。

【0044】

いくつかの態様において、対象の糞便の微生物多様性は、低い微生物多様性を有することが知られている対象から得られた試料の集団において存在する微生物多様性と比較して、少なくとも１％、または少なくとも２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、または少なくとも４０％増大する。

【0045】

いくつかの態様において、腸内の微生物多様性を増大させることは、対象の糞便試料中の遺伝子数を、本発明の組成物による処置の前に個体から採取された糞便試料中の遺伝子数と比較して、少なくとも１％、または少なくとも２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、もしくは少なくとも４０％増大させることを含む。

【0046】

いくつかの態様において、腸内の微生物多様性を増大させることは、対象から得られた糞便試料中の微生物多様性が、健康な対象の集団の平均微生物多様性と同じであるか、または実質的に類似している（すなわち、統計的に適切な範囲内である、または）場合に達成される。

【0047】

いくつかの態様において、腸内の微生物多様性を増大させることは、対象の糞便試料中の遺伝子数を、低い微生物多様性を有することが知られている対象の集団から採取された糞便試料の集団中の遺伝子数と比較して、少なくとも１％、または少なくとも２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、もしくは少なくとも４０％増加させることを含む。

【0048】

いくつかの態様において、腸内の微生物多様性の増大は、対象から得られた糞便試料中の遺伝子数が、健康な対象の集団の平均遺伝子数と同じであるか、または実質的に類似している（すなわち、統計的に適切な範囲内である、または）場合に達成される。

【0049】

いくつかの態様において、健康な対象の集団の平均遺伝子数は、約３７０，０００または少なくとも３７０，０００、約３８０，０００または少なくとも３８０，０００、４００，０００または少なくとも４００，０００、例えば少なくとも４５０，０００、５００，０００、５５０，０００または少なくとも６００，０００である。

【0050】

腸内マイクロバイオームに存在する細菌の型もまた、腸の健康において重要な役割を果たす。本発明では、Faecalibacterium prausnitzii 2、Lawsonibacter asaccharolyticusおよびIntestinimonas butyriciproducens、Faecalibacterium、Roseburia intestinalisおよび／またはEggerthella lentaのうちの１つ以上を含むがこれらに限定されない有益な細菌のレベルを増大させることが、腸の健康および腸内菌共生バランス失調を改善することが見出されている。

【0051】

いかなる理論にも拘束されることなく、遺伝子数の増大および特定の有益な細菌の増加は、腸の状態に正の影響を与え得、特定の疾患を予測し得る特定の腸の状態のバイオマーカーとして用いることができる。例えば、Faecalibacterium prausnitziiは、クローン病（ＣＤ）および大腸がん（ＣＲＣ）を健常な対象から識別するための良好なバイオマーカーであることが見出されている（Lopez-Siles et al, The ISME Journal, (2017), 11, 841-852）。

【0052】

本発明者らは、驚くべきことに、かつ予想外に、Faecalibacterium prausnitzii 8、Acutalibacteraceae 3、Firmicutes bacterium CAG 103および／またはBifidobacterium adolescentisのレベルを増大させることが、先に議論したように、本発明の組成物による処置に対して応答し得る前高血圧の対象を予測するために用いることができることを見出した。

【0053】

また、本発明者らにより、驚くべきことに、上記で定義されるとおりのアロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物により心血管疾患および／または腸内菌共生バランス失調を処置することは、哺乳動物の亜集団（すなわち、ヒト）においてより有益であることが見出された。

【0054】

本発明の組成物による治療に対して応答する可能性が最も高いことが判明した対象の集団は、より低い糞便マイクロバイオーム遺伝子数、ならびに、相対的に高い存在量のFaecalibacterium prausnitzii 8、Acutalibacteraceae 3、Firmicutes bacterium CAG 103および／またはBifidobacterium adolescentisを有するものであった。

【0055】

したがって、一態様において、本発明は、以下を提供する：
対象が、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いか否かを決定するための方法であって、該方法は、以下を含む：
ａ）対象から得られた糞便の試料中の糞便マイクロバイオーム遺伝子数を決定すること；および／または
ｂ）以下のうちの任意の１、２、３つ、またはすべての存在量を決定すること：
ｉ）対象から得られた糞便の試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8；
ｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のAcutalibacteraceae 3；
ｉｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のファーミキューテス属の細菌CAG 103；および／または
ｉｖ）対象から得られた糞便の試料中のBifidobacterium adolescentis。

【0056】

いくつかの場合において、当業者が、特定の対象が、処置に対する応答者である可能性が高いか否かを決定することができるように、特定の微生物の遺伝子数および／もしくは存在量を、対照試料（単数もしくは複数）と、または標準化された値と比較することが必要であることは明らかであろう。

【0057】

したがって、いくつかの態様において、対象が処置に対して応答する可能性が高いか否かを決定するための方法は、以下をさらに含む：
ａ）対象から得られた糞便の試料中の糞便マイクロバイオーム遺伝子数を、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中の糞便マイクロバイオーム遺伝子数と比較すること；および／または
ｂ）以下を比較すること：
ｉ）対象から得られた糞便の試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量と、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量；
ｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量と、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のAcutalibacteraceae 3の存在量；
ｉｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量と、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量；および／または
ｉｖ）対象から得られた糞便の試料中のBifidobacterium adolescentisの存在量と、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のBifidobacterium adolescentisの存在量。

【0058】

当業者は、適切な対照試料を選択することが十分に可能であり、かつ、当業者は、陽性および陰性の対照試料について精通しているであろう。対照試料に関する以下の議論は、例えば動脈の硬化度の文脈において、本明細書において開示される他の態様にも適用される。

【0059】

ある態様において、対照試料は、例えば単一の個体から採取された単一の対照試料である。他の好ましい例において、対照試料は、対照試料の集団から実際に採取される。当業者は、ある方法の統計的検定力は、関与する独立試料の数とともに増大することを理解するであろう。したがって、当業者は、適切な数の対照試料を選択して用いることができる。例えば、対照試料の集団は、少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、５００、または少なくとも１０００の異なる対照試料から構成されていてもよい。

【0060】

当業者はまた、試験値と直接比較することができる単一の値、例えば平均値を得るために、対照試料の集団に対して採用することができる適切な統計的方法を知っているであろう。したがって、いくつかの態様において、対照試料（単数または複数）は、実際に、試料の集団から得られた関連するパラメータ（例えば、遺伝子数）の単一の平均値である。当業者は、次いで、試験値（例えば、試験遺伝子数）を、関連する対照集団からの平均遺伝子数と比較することができ、それにより、試験試料（例えば、遺伝子数）が対照値の統計的に有意な範囲内にあるか、またはこの範囲外であるかを決定することができる。

【0061】

当業者は、試験の値もしくは試料を、少なくとも陽性対照の値もしくは試料、または少なくとも陰性対照の値もしくは試料、または好ましくは陽性対照の値もしくは試料および陰性対照の値もしくは試料の両方と比較することが必要であることを理解するであろう。

【0062】

本発明者らは、驚くべきことに、遺伝子数が低く、および／または特定の微生物種の相対存在量がより高い対象が、本発明の組成物による処置に対して応答する可能性がより高いことを見出した。したがって、このシナリオにおいて、陽性の試料または試料の集団は、本発明の組成物による処置に対して応答することが知られている対象から採取された試料または試料のセットとなるであろう。例えば、陽性対照試料セットまたは平均値を生成する際に使用する陽性対照集団からの試料は、組成物の投与前に対象から採取された試料であることが重要である。

【0063】

同様に、陰性対照試料について、陰性の試料または試料の集団は、本発明の組成物による処置に対して応答しないことが知られている対象から採取された試料または試料のセットとなるであろう。上記のように、陰性対照試料セットまたは例えば平均値などの生成において使用されるべき陰性対照集団からの試料は、組成物の投与の前に対象から採取された試料であることが重要である。

【0064】

したがって、一態様において、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団は、陰性の対照試料または対照試料の集団であるか、または、例えば、対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値である。

【0065】

いくつかの態様において、陰性の対照試料または対照試料の集団は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答しないことが決定されている１つ以上の陰性対照の対象から採取された糞便試料であり、ここで、試料は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置の前に、１つ以上の対照の対象から採取された。

【0066】

いくつかの態様において、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団は、陽性の対照試料または対照試料の集団であるか、または、例えば、対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値である。

【0067】

いくつかの態様において、陽性の対照試料または対照試料の集団は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答することが示されている１つ以上の陽性対照の対象から採取された糞便試料であり、ここで、試料は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置の前に、１つ以上の対照の対象から採取されたものである。

【0068】

いくつかの態様において、対象から得られた試料の糞便マイクロバイオーム遺伝子数は、以下のものと比較される：
ａ）陰性の対照試料または対照試料の集団における糞便マイクロバイオーム遺伝子数、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値、例えばここで、陰性の対照試料または対照試料の集団が、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答しないことが示されている１つ以上の陰性対照の対象から採取された糞便試料であり、ここで、試料が、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置の前に、１つ以上の陰性対照の対象から採取されたものである；ならびに／あるいは
ｂ）陽性の対照試料または対照試料の集団における糞便マイクロバイオーム遺伝子数、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値、例えばここで、陽性の対照試料または対照試料の集団が、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答することが示されている１つ以上の陽性対照の対象から採取された糞便試料であり、ここで、試料が、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置の前に、１つ以上の陽性対照の対象から採取されたものである。

【0069】

いくつかの態様において：
ａ）対象から得られた試料の糞便マイクロバイオーム遺伝子数が、陰性の対照試料（単数または複数）の糞便マイクロバイオーム遺伝子数、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と、実質的に類似しているか、またはそれよりも高い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられ、
例えばここで、対象から得られた試料の糞便マイクロバイオーム遺伝子数が、陰性の対照試料（単数または複数）の糞便マイクロバイオーム遺伝子数よりも少なくとも５％大きい、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％大きい、例えば少なくとも２００％大きい場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられる；
および／または
ｂ）試験試料中の糞便マイクロバイオーム遺伝子数が、陽性対照試料（単数または複数）の糞便マイクロバイオーム遺伝子数、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と実質的に類似しているか、またはそれよりも低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられ、
例えばここで、対象から得られた試料の糞便マイクロバイオーム遺伝子数が、陽性対照試料（単数または複数）の糞便マイクロバイオーム遺伝子数よりも少なくとも５％低い、例えば少なくとも１０％低い、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％低い、例えば少なくとも２００％低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられる。

【0070】

当業者は、特定の試験値が、陽性または陰性の対照の対象と有意に異なるか否かを決定することができ、特定の試験対象が、応答者からのものとして分類されるべきか、または非応答者からのものとして分類されるべきかを決定することができる。

【0071】

いくつかの態様において：
ａ）
ｉ）対象から得られた糞便の試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量は、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と比較される；
ｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量は、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のAcutalibacteraceae 3の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と比較される；
ｉｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量は、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と比較される；および／または
ｉｖ）対象から得られた糞便の試料中のBifidobacterium adolescentisの存在量は、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のBifidobacterium adolescentisの存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と比較される；
ここで、対照試料または対照試料の集団は、陰性の対照試料または対照試料の集団、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値であり、
ここで、陰性の対照試料または対照試料の集団は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答しないことが示されている１つ以上の陰性対照の対象から採取された糞便試料であり、ここで、試料は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置の前に、１つ以上の陽性対照の対象から採取されたものであり；ならびに／あるいは
ｂ）
ｉ）対象から得られた糞便の試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量は、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と比較される；
ｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のAcutalibacteraceae 3は、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のAcutalibacteraceae 3の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と比較される；
ｉｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量は、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と比較される；および／または
ｉｖ）対象から得られた糞便の試料中のBifidobacterium adolescentisの存在量は、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のBifidobacterium adolescentisの存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と比較される；
ここで、対照試料または対照試料の集団は、陽性の対照試料または集団または対照試料であり、
ここで、陽性の対照試料または対照試料の集団は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答することが示されている１つ以上の陽性対照の対象から採取された糞便試料であり、ここで、試料は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置の前に、１つ以上の陽性対照の対象から採取されたものである。

【0072】

いくつかの態様において：
ａ）対象から得られた糞便の試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と、実質的に類似しているか、またはそれよりも高い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられ、任意にここで、対象から得られた試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値よりも、少なくとも５％大きい、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％大きい、例えば少なくとも２００％大きい場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられる；
ｂ）対象から得られた糞便の試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のAcutalibacteraceae 3の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と、実質的に類似しているか、またはそれよりも高い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に反応する可能性が高いとみなされ、任意にここで、対象から得られた試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のAcutalibacteraceae 3の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値よりも、少なくとも少なくとも５％大きい、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％大きい、例えば少なくとも２００％大きい場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられる；
ｃ）対象から得られた糞便の試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と実質的に類似しているか、またはそれよりも高い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられ、任意にここで、対象から得られた試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値よりも、少なくとも５％大きい、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％大きい、例えば少なくとも２００％大きい場合、対象はアロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられる；
および／または
ｄ）対象から得られた糞便の試料中のBifidobacterium adolescentisの存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のBifidobacterium adolescentisの存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と、実質的に類似しているか、またはそれよりも高い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられ、任意にここで、対象から得られた試料中のBifidobacterium adolescentisの存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のBifidobacterium adolescentisの存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値よりも、少なくとも５％大きい、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％大きい、例えば少なくとも２００％大きい場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられる；
ｅ）対象から得られた糞便の試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量が、陰性対照（単数または複数）中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と、実質的に類似しているか、またはそれよりも低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられ、任意にここで、対象から得られた試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量が、陰性対照試料（単数または複数）中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値より、少なくとも５％低い、例えば少なくとも１０％高い、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％低い場合、例えば少なくとも２００％低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられる；
ｆ）対象から得られた糞便の試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量が、陰性対照試料（単数または複数）中のAcutalibacteraceae 3の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と、実質的に類似しているか、またはそれよりも低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に反応する可能性が低いとみなされ、任意にここで、対象から得られた試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量が、陰性対照試料（単数または複数）中のAcutalibacteraceae 3の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値よりも、少なくとも少なくとも５％低い、例えば少なくとも１０％低い、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％低い、例えば少なくとも２００％低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられる；
ｇ）対象から得られた糞便の試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量が、陰性対照試料（単数または複数）中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と、実質的に類似しているか、またはそれよりも低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられ、任意にここで、対象から得られた試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値よりも、少なくとも５％低い、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％低い、例えば少なくとも２００％低い場合、対象はアロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられる；
および／または
ｈ）対象から得られた糞便の試料中のビBifidobacterium adolescentisの存在量が、陰性対照試料（単数または複数）中のBifidobacterium adolescentisの存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と、実質的に類似しているか、またはそれよりも低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられ、任意にここで、対象から得られた試料中のBifidobacterium adolescentisの存在量が、陽性対照試料（単数または複数）中のBifidobacterium adolescentisの存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値よりも、少なくとも５％低い、例えば少なくとも１０％大きい、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％低い、例えば少なくとも２００％低い場合、対象は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物による処置に対して応答する可能性が低いと考えられる。

【0073】

いくつかの好ましい態様において、上記の微生物の各々の存在量が決定される。したがって、いくつかの態様において：
ｉ）対象から得られた糞便の試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量は、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のFaecalibacterium prausnitzii 8の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と比較される；
ｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のAcutalibacteraceae 3の存在量は、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のAcutalibacteraceae 3の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と比較される；
ｉｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のFirmicutes bacterium CAG 103の存在量は、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団におけるFirmicutes bacterium CAG 103の存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と比較される；および
ｉｖ）対象から得られた糞便の試料中のBifidobacterium adolescentisの存在量は、少なくとも第１の対照試料または対照試料の集団中のBifidobacterium adolescentisの存在量、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と比較される。

【0074】

Bifidobacterium adolescentisの存在量は、対象が処置に対して応答するか否かを示すことにおいて特に有用であると考えられる。したがって、一態様において、方法は、対象から得られた糞便試料中のBifidobacterium adolescentisの存在量を決定すること、およびそれを、以下：
１つ以上の陰性対照試料におけるBifidobacterium adolescentisの存在量、もしくは対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値；および／または
１つ以上の陽性対照試料におけるBifidobacterium adolescentisの存在量、もしくは対照試料の集団から得られた統計的に関連性のある値、例えば平均値
と比較することを含む。

【0075】

いくつかの態様において、対象が本発明の組成物による処置に対して応答する可能性が高いか否かを決定するための方法は、単純に、対象から得られた糞便の試料中の糞便マイクロバイオーム遺伝子数を決定することを含む。いくつかの態様において、糞便マイクロバイオーム遺伝子数が、４００，０００未満、任意に３７５，０００未満、任意に３５０，０００、３００，０００、２７５，０００、２５０，０００、２２５，０００、２００，０００、１７５，０００未満、または１５０，０００未満である場合、対象は、本発明の組成物による処置に対して応答する可能性が高いと考えられる。

【0076】

本明細書において他の箇所に記載されているとおり、マイクロバイオーム遺伝子数を決定するための１つの方法は、ショットガンシーケンシングによるものである。したがって、本発明の任意の側面または態様のいくつかの態様において、糞便の試料中の糞便マイクロバイオーム遺伝子数は、ショットガンシーケンシングによって決定される。

【0077】

同様に、本発明の任意の側面または態様のいくつかの態様において、以下：
ｉ）対象から得られた糞便の試料中のFaecalibacterium prausnitzii 8；
ｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のAcutalibacteraceae 3；
ｉｉｉ）対象から得られた糞便の試料中のFirmicutes bacterium CAG 103；および／または
ｉｖ）対象から得られた糞便の試料中のBifidobacterium adolescentis
の存在量を決定すること
は、ショットガンシーケンシングを用いて行われる。

【0078】

いくつかの態様において、本発明の組成物による処置に対して応答することとは、血圧の低下を示すことによって応答することを意味することが意図される。したがって、一態様において、処置に対する応答は、血圧の低下によって示される。

【0079】

例えば、本発明は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物が特定の対象の血圧を低下させる可能性が高いか否かを決定するための方法を提供し、ここで、該方法は、対象が本明細書に記載されるとおりの本発明の組成物による処置に対して応答する可能性が高いか否かを決定するための方法を含む。

【0080】

アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物が特定の対象の血圧を低下させる可能性が高いか否かを決定するための方法、および／または対象が組成物による処置に対して応答する可能性が高いか否かを決定するための方法のいくつかの態様において、対象は高血圧前症であり、例えば、対象は：
少なくとも１２０ｍｍＨｇ、任意に少なくとも１３０または少なくとも１４０ｍｍＨｇの収縮期血圧；および／または１２０ｍｍＨｇ～１３０ｍｍＨｇ、または１２０ｍｍＨｇ～１４０ｍｍＨｇの収縮期血圧、ならびに／あるいは
少なくとも８０ｍｍＨｇ、任意に少なくとも９０ｍｍＨｇの拡張期血圧；および／または８０ｍｍＨｇ～９０ｍｍＨｇの間の拡張期血圧
を有する。

【0081】

本発明はまた、したがって、対象における心血管疾患および／または腸内菌共生バランス失調を処置および／または予防することに置ける使用のための組成物を提供し、ここで、組成物は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含み、およびここで、対象は、本発明のいずれかの方法に従う組成物による処置に対して応答する可能性が高いものと決定されている。

【0082】

本発明はまた、対象において心血管疾患および／または腸内菌共生バランス失調を処置および／または予防するための方法を提供し、該方法は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物の、それを必要とする対象への投与を含み、およびここで、対象は、本発明のいずれかの方法に従う組成物による処置に対して応答する可能性が高いものと決定されている。

【0083】

したがって、本発明はまた、対象において高血圧、高血圧前症を処置すること、および／または高血圧を軽減することにおける使用のための組成物を提供し、ここで、組成物は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含み、対象は、本発明のいずれかの方法による組成物による治療に反応する可能性が高いと判定されている。

【0084】

本発明はまた、対象において高血圧、高血圧前症および／または高血圧を軽減するための方法を提供し、ここで、方法は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含み、対象は、本発明のいずれかの方法による組成物による治療に反応する可能性があると判定されている。

【0085】

本発明はまた、４００，０００未満、任意に３７５，０００未満、任意に３５０，０００、３００，０００、２７５，０００、２５０，０００、２２５，０００、２００，０００、１７５，０００未満、または１５０，０００未満の糞便マイクロバイオーム遺伝子数を有する哺乳動物（すなわち、ヒト）において腸内菌共生バランス失調を処置することにおける使用のための組成物を提供してもよく、ここで、組成物は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む。

【0086】

本発明はまた、４００，０００未満、任意に３７５，０００未満、任意に３５０，０００、３００，０００、２７５，０００、２５０，０００、２２５，０００、２００，０００、１７５，０００未満、または１５０，０００未満の糞便マイクロバイオーム遺伝子数を有する哺乳動物（すなわち、ヒト）において腸内菌共生バランス失調を処置するための方法を提供してもよく、ここで、方法は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物の投与を含む。

【0087】

本発明はまた、陽性対照試料（単数または複数）の糞便マイクロバイオーム遺伝子数、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と類似するかまたはこれより低い糞便マイクロバイオーム遺伝子数を有する哺乳動物（すなわち、ヒト）において、腸内菌共生バランス失調を処置することにおける使用のための、医薬の製造の方法における、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物の使用を提供してもよく、例えばここで、対象から得られた試料の糞便マイクロバイオーム遺伝子数は、陽性対照試料（単数または複数）の糞便マイクロバイオーム遺伝子数よりも、少なくとも５％低い、例えば少なくとも１０％低い、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％低い、例えば少なくとも２００％低い。

【0088】

本発明はまた、４００，０００未満、任意に３７５，０００未満、任意にこれより少ない糞便マイクロバイオーム遺伝子数を有する哺乳動物（すなわち、ヒト）において腸内菌共生バランス失調を処置することにおける使用のための医薬の製造の方法において、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物の使用を提供してもよい。

【0089】

本発明の発明者らは、驚くべきことに、アロニア・メラノカルパの補充が、対象においてマイクロバイオームの多様性の増大、より具体的には図９において示される細菌の増大をもたらすことを見出した。

【0090】

本発明はまた、陽性対照（単数または複数）中の糞便マイクロバイオーム遺伝子数、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と類似するか、またはこれより低い糞便マイクロバイオーム遺伝子数を有する対象において、糞便マイクロバイオーム遺伝子数によって測定されるものとしてのマイクロバイオーム多様性を増大させること、ならびに／あるいは、以下の細菌：Gemmiger、Lachnospiraceae G．Intestimonas butyriciproducens、Eggerthella lenta、Lawsonibacter、Faecalibacterium prausnitzii（1、9、2、6）、Oscillospirales（3、5）、Faecalibacterium、Roseburia intestinalis、Ruthenibacterium lactatiformans、Lachnoclostridium属の種／Clostridium sp.、Acutalibacteraceae 3、Clostridium sp.、Collinsella bouchesdurhonensis、Firmicutes bacterium CAG 103／Clostridium sp.、Dysomobacter welbionis、Ruminococcus sp.、Clostridiales bacterium、クロストリジウム科の細菌のうちの１つ以上のレベルを増大させることにおける使用のための組成物を提供してもよく、例えばここで、哺乳動物から得られた試料の糞便マイクロバイオーム遺伝子数は、陽性対照試料（単数または複数）の糞便マイクロバイオーム遺伝子数よりも、少なくとも５％低い、例えば少なくとも１０％低い、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％低い、例えば少なくとも２００％低く、ここで、組成物は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む。

【0091】

好ましい態様において、増加した細菌は、有益な細菌であるFaecalibacterium、Roseburia intestinalisおよび／またはEggerthella lentaから選択される。

【0092】

本発明はまた、４００，０００未満、任意に３７５，０００未満、任意に３５０，０００、３００，０００、２７５，０００、２５０，０００、２２５，０００、２００，０００、１７５，０００未満、または１５０，０００未満の糞便マイクロバイオーム遺伝子数を有する対象において、糞便マイクロバイオーム遺伝子数により測定されるものとしてのマイクロバイオーム多様性を増大させること、ならびに／あるいは、以下の細菌：Gemmiger、Lachnospiraceae G．Intestimonas butyriciproducens、Eggerthella lenta、Lawsonibacter、Faecalibacterium prausnitzii（1、9、2、6）、Oscillospirales（3、5）、Faecalibacterium、Roseburia intestinalis、Ruthenibacterium lactatiformans、Lachnoclostridium属の種／Clostridium sp.、Acutalibacteraceae 3、Clostridium sp.、Collinsella bouchesdurhonensis、Firmicutes bacterium CAG 103／Clostridium sp.、Dysomobacter welbionis、Ruminococcus sp.、Clostridiales bacterium、クロストリジウム科の細菌のうちの１つ以上のレベルを増大させることにおける使用のための組成物を提供してもよく、ここで、組成物は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む。好ましい態様において、増加した細菌は、有益な細菌であるFaecalibacterium、Roseburia intestinalisおよび／またはEggerthella lentaから選択される。

【0093】

本発明はまた、４００，０００未満、任意に３７５，０００未満、任意に３５０，０００、３００，０００、２７５，０００、２５０，０００、２２５，０００、２００，０００、１７５，０００未満、または１５０，０００未満の糞便マイクロバイオーム遺伝子数を有する哺乳動物（すなわち、ヒト）において、糞便マイクロバイオーム遺伝子数により測定されるものとしてのマイクロバイオーム多様性を増大させること、ならびに／あるいは、Faecalibacterium、Roseburia intestinalisおよび／もしくはEggerthella lentaなどの有益な細菌のレベルを増大させることにおける使用のための組成物を提供してもよく、ここで、組成物は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む。

【0094】

本発明はまた、４００，０００未満、任意に３７５，０００未満、任意に３５０，０００、３００，０００、２７５，０００、２５０，０００、２２５，０００、２００，０００、１７５，０００未満、または１５０，０００未満の糞便マイクロバイオーム遺伝子数を有する哺乳動物（すなわち、ヒト）において、糞便マイクロバイオーム遺伝子数により測定されるものとしてのマイクロバイオームの多様性を増大させるための方法、ならびに／あるいは、Faecalibacterium、Roseburia intestinalisおよび／もしくは Eggerthella lentaなどの有益な細菌のレベルを増大させる方法を提供してもよく、ここで、方法は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物の、それを必要とする対象への投与を含む。

【0095】

本発明はまた、陽性対照（単数または複数）中の糞便マイクロバイオーム遺伝子数、または対照試料の集団から得られた統計的に関連する値、例えば平均値と類似するか、またはこれより低い糞便マイクロバイオーム遺伝子数を有する哺乳動物（すなわち、ヒト）において、糞便マイクロバイオーム遺伝子数によって測定されるものとしてのマイクロバイオーム多様性を増大させるため、ならびに／あるいは、Faecalibacterium、Roseburia intestinalisおよび／またはEggerthella lentaなどの有益な細菌のレベルを増大させるための方法を提供してもよく、例えばここで、哺乳動物から得られた試料の糞便マイクロバイオーム遺伝子数は、陽性対照試料（単数または複数）の糞便マイクロバイオーム遺伝子数よりも、少なくとも５％低い、例えば少なくとも１０％低い、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、少なくとも１００％低い、例えば少なくとも２００％低く、ここで、方法は、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物の投与を含む。

【0096】

当業者により理解されるであろうとおり、本明細書において使用される場合、「～から得ることができる（obtainable from）」という用語は、抽出物は、植物から得られてもよく、または植物から単離されてもよく、または、例えば化学合成もしくは酵素による産生により、代替の供給源から得られてもよいことを意味する。一方、本明細書において使用される場合、「得られる（obtained）」という用語は、抽出物が植物供給源から直接的に得られることを意味する。

【0097】

アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物は、液体または固体の形態におけるものであってよい。典型的には、抽出物は固体、すなわち粉末の形態におけるものであってよい。

【0098】

本明細書における、アロニア・メラノカルパから得られるかまたはこれから得ることができる抽出物についての全ての言及は、典型的には、アロニア・メラノカルパの果汁から得られるかまたはこれから得ることができる抽出物を指す。果汁は、濃縮されていてもよい。

【0099】

いくつかの側面において、アロニア・メラノカルパの果汁（濃縮果汁）は、水のみを用いて抽出してもよい。この抽出物は、水抽出物として言及される場合がある。
他の側面において、アロニア・メラノカルパの果汁（濃縮果汁）は、エタノールなどのアルコールを用いて抽出してもよい。この抽出液は、エタノール抽出物などのアルコール抽出物として言及される場合がある。

【0100】

好ましい側面において、アロニア・メラノカルパ果汁（濃縮果汁）は、アルコールと水、例えばエタノールと水との混合物を用いて抽出してもよい。この抽出物は、水エタノール抽出物など、水アルコール抽出物として言及される場合がある。

【0101】

他の側面において、アロニア・メラノカルパ果汁（濃縮果汁）は、アセトンなどの、アルコールではない有機溶媒を用いて抽出してもよい。この抽出物は、有機抽出物またはアセトン抽出物として称される場合がある。

【0102】

加えて、アロニア・メラノカルパ濃縮果汁（または前述の抽出物のいずれか）のポリフェノールは、例えばポリフェノール吸収カラム、または高純度のポリフェノールを提供する当該分野において公知の任意の他の技術を用いて、ポリフェノールが濃縮された抽出物を得るために、さらに精製されてもよい。

【0103】

典型的には、標的のポリフェノールは、残りの固体をカラムに通過させる樹脂により、吸収される。次いで、水およびエタノールを用いて、溶出液を得、これを次いで濃縮して、ネイティブな抽出物を得る。

【0104】

典型的には、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得られた抽出物は、抽出物の１０重量％以上（カテキンに基づく）、例えば２０重量％以上、３０重量％以上、例えば４０重量％以上の総ポリフェノールを含む。好ましい態様において、総ポリフェノール（カテキンに基づく）は、４０％以上である。

【0105】

アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物は、抽出物からなるものであっても、もしくは本質的に抽出物かなるものであってもよく、または抽出物を非毒性の薬学的に許容し得る賦形剤（または成分）と組み合わせて含んでもよい。これらの賦形剤（または成分）は、例えば、以下であってもよい：不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウムもしくはリン酸ナトリウム；造粒剤および崩壊剤、例えば、トウモロコシデンプン、マルトデキストリンもしくはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンもしくまたはアラビアゴム；または平滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルクおよびそれらの混合物。好ましい態様において、生成物は、担体を有さない。

【0106】

疑義の回避のために、本発明の所与の側面について示される優先度、選択肢、具体的な特色および類似のものは、文脈が別段に示さない限り、本発明の同じまたは他の側面、特色およびパラメータについて示されるとおりの、任意の、または全ての他の、優先度、選択肢、具体的な特色および類似のものとの組み合わせにおいて開示されているものとしてみなされるべきである。

【0107】

本発明者らが、「～から本質的になる（consisting essentially of）」または「から本質的になる（consists essentially of）」という用語を用いる場合、本発明者らは、記載されている組成物または抽出物または果汁は、列記される成分（単数または複数）を含まなければならず、かつまた、少量（例えば２重量％まで、または１重量％まで、または０．１重量％まで、または０．０１重量％まで）の他の成分を含んでもよいが、ただし、任意の追加の成分は、組成物または抽出物の本質的な特性に影響を及ぼさないことを意味する。本発明者らが「～からなる（consisting of）」という用語を用いる場合、本発明者らは、記載されている組成物は、列記される成分（単数または複数）のみを含まなければならないことを意味する。これらの用語は、類似の様式において、プロセス、方法および使用に適用することができる。

【0108】

アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物は、ポリフェノールを含有する（contain）／含む（comprises）。

【0109】

典型的には、アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物において、総ポリフェノール（カテキンに基づく）は、組成物の１０重量％以上、例えば２０重量％以上、３０重量％以上、例えば４０重量％以上である。好ましい態様において、総ポリフェノール（カテキンに基づく）は、４０％以上である。

【0110】

本発明の使用のための組成物および方法のいずれかにおいて、心血管疾患および／または腸内菌共生バランス失調を処置するための組成物の投与量は、組成物の重量により約１００～約１０００ｍｇ／日、例えば組成物の重量により約４００～約６００ｍｇ／日または約５００ｍｇ／日であってよい。

【0111】

いくつかの態様において、心血管疾患および／または腸内菌共生バランス失調を処置するための投与量は、以下のとおりである：
ａ）組成物の重量により、約１００～約１０００ｍｇ／日、任意に１００～１０００ｍｇ／日、または２００～８００ｍｇ／日、または４００～６００ｍｇ／日；
ｂ）組成物の重量により、１０００ｍｇ／日以下、任意に９００ｍｇ／日以下、８００ｍｇ／日、７００ｍｇ／日、６００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日以下、または１００ｍｇ／日以下；および／または
ｃ）１００ｍｇ／日以上、または任意に２００ｍｇ／日以上、３００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日、５００ｍｇ／日、６００ｍｇ／日、７００ｍｇ／日、８００ｍｇ／日以、９００ｍｇ／日以上、または１０００ｍｇ／日以上。

【0112】

組成物の投与量は、典型的には、組成物の重量により、約１００ｍｇ／日～約５００ｍｇ／日のポリフェノール、例えば約２００ｍｇ／日を提供し得る。

【0113】

いくつかの態様において、心血管疾患および／または腸内菌共生バランス失調を処置するための投与量は、以下を提供する：
ａ）組成物の重量により約１００ｍｇ／日～約５００ｍｇ／日のポリフェノール、任意に約２００ｍｇ／日～約４００ｍｇ／日、任意に、組成物の重量により約３００ｍｇ／日のポリフェノール；
ｂ）組成物の重量により５００ｍｇ／日以下のポリフェノール、任意に４００ｍｇ／日以下、３００ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、または組成物の重量により１００ｍｇ／日以下のポリフェノール；および／または
ｃ）組成物の重量により１００ｍｇ／日以上、任意に２００ｍｇ／日以上、３００ｍｇ／日、４００ｍｇ／日、または５００ｍｇ／日以上のポリフェノール。

【0114】

組成物は、１日１回服用してもよく、または、必要とされる投与量に依存して、１日に１回より多く服用してもよい。
典型的には、組成物は、少なくとも１週間、例えば少なくとも６週間または少なくとも１２週間にわたり服用してもよい。

【0115】

上で定義される方法において、糞便マイクロバイオーム遺伝子数を決定することは、糞便試料に対してショットガン試験を実施することを含んでもよい。
典型的には、上で定義した方法において、方法は、遺伝子数が４００，０００以下である場合に、対象を、処置に対して応答する可能性が高いものとして同定することを含む。

【0116】

本発明の使用のための組成物および方法において、上で定義されるとおりの心血管疾患および／または腸内菌共生バランス失調を処置することは、好ましくは、哺乳動物（すなわち、ヒト）におけるものであってもよい。
本明細書および特許請求の範囲において用いられる場合、単数形「a」、「an」、および「the」は、文脈が明らかに別段に示さない限り、複数形の参照を含む。例えば、「微生物（a microbe）」は複数の微生物を含むことができる。

【0117】

「マイクロバイオーム」、「微生物叢」、「微生物生息域（microbial habitat）」という用語は、本明細書において互換的に用いることができ、対象の体表または体内に生息する微生物の生態学的コミュニティを指し得る。本発明では、マイクロバイオームは、特に胃腸管において見出されるものに関連していてもよい。

【0118】

「処置」および「処置する」という用語は、本明細書において用いられる場合、治療的利益および／または予防的利益を含むがこれらに限定されない、有益なまたは所望される結果を得るためのアプローチを指す。治療的利益とは、処置中の１つ以上の疾患、状態または症状に対する、治療上適切な改善または効果を意味する。予防的利益のために、疾患、状態もしくは症状がまだ顕在化していない可能性があっても、組成物は、特定の疾患、状態もしくは症状を発症する危険性のある対象に、または、疾患の１つ以上の生理学的症状を報告する対象に、投与することができる。

【0119】

本明細書において用いられる場合、「投与する」、「投与すること」、「投与」、およびそれらの派生語は、生物学的作用が所望される部位への剤または組成物の送達を可能にするために用いてもよい方法を指す。これらの方法は、非経口投与（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内、血管内、髄腔内、鼻腔内、硝子体内、注入および局所（local）注射）、経粘膜注射、経口投与、座薬としての投与、ならびに局所（topical）投与を含むが、これらに限定されない。本発明において、好ましい投与の経路は経口投与であってもよい。

【0120】

「有効量」または「治療的に有効な量」という用語は、組成物、例えば本開示の微生物を含む組成物の量であって、それを必要とする対象への投与により所望される活性をもたらすために十分であるものを指す。本開示の文脈内において、「治療的に有効な」という用語は、本開示の方法により処置される障害の発現を遅延させ、その進行を停止させ、その少なくとも１つの症状を緩和（relieve）または軽減（alleviate）するために十分である組成物の量を指す。
図

【図面の簡単な説明】

【0121】

【図1】臨床試験の研究デザイン。ABPM：自由運動下（ambulatory）血圧測定；FMD：流量依存性拡張；IPAQ：国際標準化身体活動質問票。

【0122】

【図2】１２週間の介入の後の腸内マイクロバイオーム遺伝子数のベースラインからの変化を示すボックスプロット。有意性は、アロニア群・対・対照群における、ベースライン時と比較した第１２週における変動について、独立Wilcoxon順位和検定を適用することにより検定した。Ｐ値は、対照からの変化を表す。

【0123】

【図3】ベースラインからの変化の後で、アロニア群と対照群との間で有意に異なる種の棒グラフ。棒グラフは、Cliff deltaの効果量（絶対値＞０．２）を示し、より高い色の強度は、より大きなCliff deltaの値を表す。

【0124】

【図4】１２週間の摂取の後の、２４時間および覚醒時のＳＢＰｂｒおよび２４時間および覚醒時のＤＢＰｂｒの変化について、アロニア応答者（Ｒ）群、非応答者（ＮＲ）群、および対照（Ｃ）群の間の統計的差異を示すボックスプロット。各々の比較について、有意性は、Kruskal Wallis検定をBonferroni調整と共に適用することにより、検定した。ＳＢＰｂｒ：上腕収縮期血圧、ＤＢＰｂｒ：上腕拡張期血圧。

【0125】

【図5】ベースラインにおける腸内マイクロバイオーム遺伝子数について、アロニア応答者（Ｒ）群、非応答者（ＮＲ）群、対照（Ｃ）群の間の統計的差異を示すボックスプロット。有意性は、Kruskal Wallis検定およびBonferroni調整の後にDunn post-hoc検定を適用することにより検定した。

【0126】

【図6-1】ベースラインにおけるアロニア応答者（Ｒ）、非応答者（ＮＲ）、対照（Ｃ）において、有意に濃縮された細菌分類群を示す楔形プロット。各々の比較において、上を向いた三角形は、初めに言及された群（ａおよびｂについてはＮＲ、ｃについてはＲ）において種が濃縮されていることを示す。符号付きの効果量は、マーカーの方向を通して示され、色、色相およびサイズは、絶対的効果量を表す。実線の枠線（border）は有意性を示す。示されていないマーカーは、統計的分析において差を有しなかった。

【図6-2】ベースラインにおけるアロニア応答者（Ｒ）、非応答者（ＮＲ）、対照（Ｃ）において、有意に濃縮された細菌分類群を示す楔形プロット。各々の比較において、上を向いた三角形は、初めに言及された群（ａおよびｂについてはＮＲ、ｃについてはＲ）において種が濃縮されていることを示す。符号付きの効果量は、マーカーの方向を通して示され、色、色相およびサイズは、絶対的効果量を表す。実線の枠線（border）は有意性を示す。示されていないマーカーは、統計的分析において差を有しなかった。

【0127】

【図7】B. adolescentisのベースラインレベルと２４時間ＤＢＰの慢性的変化との間のSpearman相関プロット（アロニア：三角形、対照：丸）。右側は、２４時間ＤＢＰのデルタ変化を報告するボックスプロットである。上部は、B. adolescentisのベースラインレベルのlog10についてのボックスプロットである。

【0128】

【図8】アロニア応答者（Ｒ）群、非応答者（ＮＲ）群、対照（Ｃ）群における１２週間の介入後の腸内マイクロバイオーム遺伝子数のベースラインからの変化を示すボックスプロット。各々の比較についての有意性は、Kruskal Wallis検定とBonferroni調整の後でDunn post-hoc検定を適用することにより試験した。

【0129】

【図9】１２週間の介入後、ＲとＮＲとの間で有意に異なる種。棒グラフは、有意に、かつ関連性をもって対比された（Cliff deltaの絶対値が０．３より高い）、全ての種のCliff delta値（効果量の指標）示す。より高い色の強度は、より大きなCliff deltaの絶対値を表す。

【発明を実施するための形態】

【0130】

本発明は、以下の非限定的な例を参照して、さらに記載されるであろう：
例

【0131】

例１－アロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物の調製。
凍結されたアロニア・メラノカルパ濃縮果汁を水で希釈し、ポリフェノールを吸収する樹脂カラムに適用する。標的のポリフェノールは、残りの固体をカラムに通過させる樹脂により吸収される。次いで、水およびエタノールを用いて、溶出液を得、これを次いで濃縮して、ネイティブな抽出物を得る。抽出物のポリフェノールの濃度は、約４０％である。

【0132】

ネイティブな抽出物は、次いで噴霧乾燥され、マルトデキストリンと組み合わされる。乾燥した抽出物は、次いで、ふるいにかけられ、パッケージ化される。

【0133】

例２－アロニア・メラノカルパ抽出物の心血管代謝の健康に対する効果についての調査
２群間の二重盲検の並行した無作為化された比較試験を行った。１２０～１４０ｍｍＨｇの収縮期血圧、および／または８０～９０ｍｍＨｇの拡張期血圧を有する参加者は、以下のように定義された４回の研究訪問に参加した：プレ訪問（pre-visit）１、訪問（visit）１、プレ訪問２、訪問２。研究デザインの要旨は、図１において見出すことができる。

【0134】

研究方法
プレ訪問は、訪問１および２の２４時間前に行われた。プレ訪問の間、参加者は、２４時間にわたり彼らの尿を採取するためのボトルを渡され、２４時間自由運動下ＢＰモニター（ＡＢＰＭ）を利き腕でない方の腕に装着され、最初の測定が行われた。

【0135】

患者はまた、訪問前に７日間の食事日誌を完成させ、各々の訪問の１時間前にはカフェイン、アルコール、激しい運動およびタバコを避け、訪問１および２の前には１２時間にわたり絶食するよう求められた。

【0136】

末梢の診察室ＢＰ、ＦＭＤ、ＰＷＶ、ＡＩｘの測定、ならびに血液試料は、すべてベースライン（０時間）において採取され、次いで、介入製品（interventional product）急性摂取の２時間後、訪問１および２において、再び採取された。糞便試料は、訪問１および２の両方の間に回収され、直ちに－８０℃で貯蔵された。

【0137】

参加者は、１カプセルのアロニア・メラノカルパから得られるかまたは得ることができる抽出物を含む組成物（５００ｍｇ）またはプラセボを、毎朝、グラスの水と共に、理想的には食事と共に、摂取するように指示された。第１のカプセルは、訪問１における１回目の測定の後で送達され、これは、１２週間の摂取の開始を表す。最後のカプセルもまた、最終日（訪問２）において研究ユニット内で、第１のセットの欠陥測定の後で摂取された。

【0138】

対象は、１２週間を通して１か月ごとにＥメールを介して追跡調査され、良好なコンプライアンスを確認し、任意の潜在的な有害事象を記録した。
本研究の一次アウトカムは、摂取の第１２週間後における自由運動下２４時間ＳＢＰおよびＤＢＰに対する、アロニアベリー抽出物（アロニア）・対・プラセボ（対照）の効果であった。

【0139】

二次エンドポイントは、１２週間の毎日の摂取の後の、プラセボと比較した、抽出物の、診察室ＢＰ、診察室および２４時間の心拍数、動脈の硬化度（ＰＷＶおよびＡＩｘとして測定されるもの）、血中脂質（総コレステロール、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロール、トリグリセリド）、血中コルチゾールレベルに対する、効果、ならびにアロニアベリー抽出物の安全性および耐容性を含んだ。

【0140】

第２の目的はまた、アロニア抽出物・対・プラセボの、摂取の２時間および１２週間後における、ＦＭＤおよび血流速度に対する効果の調査を含んだ。

【0141】

三次アウトカムは、アロニアのＰＰ代謝物を評価するためにすべてのタイムポイントにおいて採取された血液試料の分析、ＰＰ代謝物の排出を調査するための２４時間尿試料の分析、ならびにアロニアベリー抽出物またはプラセボ摂取の１２週間後の糞便試料の腸内マイクロバイオームの分析を含んだ。

【0142】

治験は、ヘルシンキ宣言の現行バージョンにおいて規定される指針に従って実施された。すべての手順は、King's College Londonの倫理委員会により承認され（RESCM-17/18-5283）、治験は、ClinicalTrials.govにおいて参照番号NCT03434574下において登録された。

【0143】

２４時間の自由運動下末梢（上腕）および中心（大動脈）ＢＰ、ならびに心拍数（ＨＲ）は、Arteriograph24（商標）（TensioMed、ブダペスト、ハンガリー）を用いて測定した（図２．１）。２４時間のＳＢＰ、ＤＢＰ、ＨＲは、カフの装着およびデータの回収を分けて、２４時間にわたり３０分ごとに測定された。

【0144】

仰臥位での診察室末梢（上腕）ＢＰおよび心拍数は、米国心臓協会の推奨に従い、右腕上部で、仰臥位において、静かな部屋において、腕を心臓のレベルに置いて、脚は組まずに支持し、背中を支持し、膀胱を空にした状態で、１０分後に、自動臨床用デジタル血圧計OMRON M3（OMRON Healthcare UK Ltd, Milton Keynes, UK）を用いて測定された（Muntner et al. 2019）。

【0145】

２４時間ＰＷＶとＡＩｘは、Arteriograph24（商標）を用いて、プレ訪問および訪問を分けて、２４時間にわたり３０分ごとに測定された。参加者は、２４時間活動記録に記入し、１日の活動量を示し、覚醒および睡眠の期間を評価するよう求められた。

【0146】

志願者らは、この測定の間、横になって黙っているように指示された。ＰＷＶ（単位：ｍ／ｓ）は、SphygmoCor（登録商標）（Smart Medical社、英国グロスターシャー州）を用いた圧平眼圧測定を介して評価された。簡単に述べると、ＰＷＶは、心臓から大腿動脈までの脈拍の通過時間と、心臓から頸動脈までの脈拍の通過時間との鎖から導かれる。このデバイスのセンサーは、両方の動脈における脈波の間のタイムラプスを捕捉し、それにより、頸動脈から心臓までの距離および心臓から大腿動脈までの距離をあらかじめ巻尺で測定しておくことにより、波速度を決定することができる。標準偏差が８％未満の結果を、分析に含めた。

【0147】

上行圧波形は大動脈レベルにおいて発生し、血管構造および一般的な末梢抵抗に依存する反射波を伴う。この後者が身体末梢において低下するにつれて、大動脈から手首にかけての圧力が減少する。よって、波形は、大動脈レベルにおいて測定した場合、手首と比較して、異なる形状を有する。ＡＩｘは、大動脈レベルにおける中心脈圧と反射脈圧（オーグメンテーション圧（augmentation pressure）と称される）の比として測定される。ＡＩｘは、ある個人の血管系の動脈の硬化度の状態の関連指標である。

【0148】

糞便試料は、各々の研究訪問になるべく近い時点で、OMNIgene GUT自己採取チューブ（DNA Genotek Inc., Ottawa, Canada）中に採取され、－８０℃で、さらなる分析まで貯蔵された。参加者は、採取日を記録するように求められた。

【0149】

マイクロバイオームショットガンメタゲノミクス分析は、CosmosID, Inc.（米国メリーランド州ロックビル）により行われた。簡単に述べると、抽出したＤＮＡ試料を、Qubit 4蛍光光度計およびQubit（商標）dsDNA HSアッセイキット（Thermofisher Scientific）を用いて定量した。次いで、Nextera XT ＤＮＡライブラリー 調製キット（Illumina）およびNexteraインデックスキット（Illumina）を用いて、製造者のプロトコルに従って、わずかな修正と共に、ＤＮＡライブラリーを調製した。標準プロトコルは、１ｎｇの全ＤＮＡインプットにのために用いられた。ゲノムＤＮＡはの、比例量のIllumina Nextera XT断片化酵素を用いて、断片化した。コンビナトリアルデュアルインデックスを各々試料に追加し、その後、１２サイクルのＰＣＲを行って、ライブラリーを構築した。ＤＮＡライブラリーは、AMpure磁気ビーズ（Beckman Coulter）を用いて精製し、QIAGEN EBバッファー中に溶出させ、Qubit 4蛍光光度計とQubit（登録商標）dsDNA HSアッセイキットを用いて定量した。ＤＮＡライブラリーは、Illumina HiSeqX上でのシーケンシングのために、最終的にまとめてプールされた。メタゲノミクス試料からの元の（raw）読み値は、CosmosIDメタゲノミクスソフトウェア（CosmosID Inc., Rockville, MD）により分析されて、別の場所において記載されるとおり（Ponnusamy et al., 2016; Hasan et al., 2014; Ottesen et al., 2016）、標本中の株レベルの微生物の同定を明らかにした。要するに、このシステムは、高性能のデータマイニングk-merアルゴリズム、および高度に精選（curate）されたダイナミックコンパレータデータベースを利用し、これは、数百万の短い読み値の曖昧さを迅速に解消して、特定の配列を生じる個別のゲノムまたは遺伝子に分ける。この読み値のクエリーにより、高感度でありながら高度に正確な、微生物の読み値の検出および分類学的な分類が可能になる。その結果得られる統計を分析して、細かい分類学的な、および相対的な、微生物データセットの存在量の推定値を返した。

【0150】

次いで、INRAe-Metagenopolis（フランス、パリ）の協力により、腸内マイクロバイオームのバイオインフォマティクス分析および統計的モデリングを行った。メタゲノミクスメタゲノム種パンゲノム（Metagenomic Species Pangenome：ＭＳＰ）とは、全菌株に存在する遺伝子（「コア遺伝子」）、およびそれらのうちの一部のみにおいて存在する遺伝子（「アクセサリー遺伝子」）から構成される遺伝子のレパートリーのことである（Medini, D., et al., 2005, Current opinion in genetics & development, 15(6), pp.589-594.)。Plaza Onateら（nはチルダ付きのn）により開発されたクラスタリングツールであるMSPminer（Plaza Onate, F., et al., 2019, Bioinformatics, 35(9), ＰＰ.1544-1552）は、１２６７の糞便試料から単離された１０４０万の遺伝子を含む、入手可能な最大のヒト腸内細菌叢の遺伝子存在量表に基づいて、共通して多く存在する（co-abundant）遺伝子をＭＳＰにグループ分けすることができる。ＭＳＰ存在量プロファイルは、各々のＭＳＰクラスターの強力な基礎として定義された１００のマーカー遺伝子の平均存在量として計算された。

【0151】

複数のオミック（omic）のデータの関連付けは、並列および垂直の統合スキームを通して行われた。変数の選択は、単一のオミックのレベルごとにおいて行われ、より正確には、各々のオミックのデータセットについて、単変量統計的分析（Wilcoxon検定）が行われ、目的の所与の表現型（アロニア対対照）の間での個々の分子レベルの差異を調べた。並列統合は、各々の型のオミックの測定を同等に扱い、統合は、全ての単一ごとに有意に異なる特色を収集して相関させることにより、ジョイントモデルにおいて同時に同定されている。血漿および尿の代謝物の濃度、臨床アウトカム、ならびに腸の機能、ならびに微生物種の間の、Spearman相関を算出した。

【0152】

研究結果
合計３２３人の志願者がユニットに訪問し、研究に参加するためにスクリーニングされ、その中から２２１人が除外され、１０２人（４７人の男性、５５人の女性）が登録され、無作為に、治療の意図（intention-to-treat：ＩＴＴ）集団を構成するための２つの介入群のうちの一方に割り当てられた。２人の参加者が個人的な理由のために介入を中止し、３人が追跡調査ができなくなり、これらは合計で５％のドロップアウトを占めている。９７人の参加者は、すべての訪問を完了し、よって、分析において含まれた。これらの５人のドロップアウトとともに、５人の参加者は、低コンプライアンス（＜８０％、ｎ＝１）、大動脈弁狭窄症の既往歴（ｎ＝１）、スクリーニング訪問時における高いアルコール消費量を伴う、訪問２におけるＧＧＴ、 ＡＬＴおよびＴＧの増大（ｎ＝１）、甲状腺の欠乏症に関連するコレステロールレベルの異常な上昇（ｎ＝１）、ならびに訪問２におけるインフルエンザの疑い（ｎ＝１）に起因して、パープロトコール（ＰＰ）集団から除外された。

【0153】

すべての臨床結果は、ＩＴＴ集団において提示される。すべてのマイクロバイオーム分析は、ＰＰ集団に対して行われた。さらに、いくつかの糞便試料は、３か月以内の抗生物質の摂取（ｎ＝４）、糞便試料の欠落（ｎ＝２）、および階層的クラスタリングに基づく品質チェックを合格できなかったこと（ｎ＝１）に起因して、分析されなかった。すべてのマイクロバイオーム分析について考慮された残りの集団は、８５人（アロニア、ｎ＝４２、対照、ｎ＝４３）からなる。

【0154】

対照群とアロニア群との間で、睡眠時の心拍数がアロニア群においてより高かったことを除いて（ｐ＝０．０３１）、ベースラインにおける統計的有意差は見出されなかった。

【0155】

ベースライン（試験の開始の１週間前）において参加者により完成された７日間の食事日誌の分析は、ビタミンＢ３（ｐ＝０．０４７）が対照群においてより高かった（36.2mg対40.8mg）ことを除いては、アロニア群および対照群における参加者の食事の間でベースラインにおける微量栄養素、主要栄養素、およびＰＰに関して、有意差を示さなかった。

【0156】

２４時間、覚醒時、睡眠時のＰＷＶ、中枢ＡＩｘ（ＡＩｘａｏ）、末梢ＡＩｘ（ＡＩｘｂｒ）は、Arteriograph24（商標）を用いて、訪問１および２の前に測定した。１２週間にわたるアロニア抽出物摂取は、対照と比較して、２４時間および覚醒時の末梢および中枢ＡＩｘの有意な低下をもたらした（Δ２４時間AIxbr＝－６．８％、p＝０．００３；Δ２４時間AIxao＝－３．３％、p＝０．００６、Δ覚醒時AIxbr=－６．１％、p＝０．０２０；Δ覚醒時AIxao＝－２．９％、p＝０．０３４）。アロニアの減少についての有意でない傾向はまた、睡眠時ＡＩｘａｏおよびＡＩｘｂｒについても観察された。また、アロニアにおいて、対照と比較して、覚醒時ＰＷＶの有意な減少が観察された（ΔＰＷＶ＝－０．２４ｍ／ｓ、ｐ＜０．０５）。同様の結果は、ＢＡＣＯ分析についても見出された。結果は、表１において示される。

【0157】

【表1】

【0158】

値は、平均値±ＳＤとして表される。ＡＩｘ、オーグメンテーション・インデックス；ａｏ、大動脈；ｂｒ、上腕；ＣＦＢ、ベースラインからの変化；ＣＦＣ、対照からの変化；ＰＷＶ、脈波伝播速度。*ベースラインと１２週との間のｐ＜０．０５における有意差。

【0159】

表１－ＢＡＢ分析の後の、ＩＴＴ集団および各々の介入群における、１２週間の摂取後のアロニアベリー抽出物の、２４時間、覚醒時および睡眠時の中枢ＰＷＶ、ならびに末梢および中枢ＡＩｘに対する効果。

【0160】

考察
本研究の新規の知見は、１２週間のアロニアの摂取の後での、プラセボと比較した、２４時間および覚醒時のＡＩｘａｏ（それぞれ、６．８および６．１％）、ならびに２４時間および覚醒時のＡＩｘｂｒ（それぞれ、３．３および２．９％）の観察された有意差、ならびに、０．２４ｍ／ｓの覚醒時ＰＷＶの減少である。ＰＷＶおよびＡＩｘは、動脈の構造および機能の両方を評価する、動脈の硬化度の評価のための至適基準技術である。いずれの技術も、ＣＶＤと強力に相関することが知られている。

【0161】

例４－アロニア・メラオカルパ抽出物の腸内細菌叢への影響についての調査
本調査の目的は、アロニアの摂取の、腸内マイクロバイオームの存在量および組成に対する影響を調べること、ならびに、腸内マイクロバイオーム、アロニアポリフェノール代謝物および血管のアウトカムとの間の関連を調査することである。

【0162】

糞便試料は、ベースラインにおいて、および１２週間の毎日のアロニア抽出物またはプラセボの摂取の後に採取し、直ちに－８０℃で貯蔵した。糞便試料の採取および処理に関する詳細な情報は、例２において見出すことができる。

【0163】

試料の豊かさは、遺伝子およびＭＳＰのレベルにおいて評価された。アロニア群と対照群との間で、ベースラインからの変化を考慮した場合、遺伝子数について有意差が見出された（ｐ＝０．０２１）（図２）。

【0164】

これらの結果は、アロニア抽出物の１２週間にわたる摂取は、遺伝子数の増大をもたらすことを示し、このことは、アロニア摂取後の腸内細菌叢の豊かさの好ましい増大を示唆している。

【0165】

１２週間の毎日のアロニア抽出物またはプラセボの摂取の後での、２つの処置群の間での種における差異を表すために、細菌の存在量および組成の同様の分析を、ベースラインからの変化について行った（図４）。アロニア群および対照群において、それぞれ合計１８種および４種が、有意により豊富に存在した。その中で、Intestinimonas butyriciproducensが、１２週間の介入後、アロニア群において対照群と比較して最も豊富な細菌であった。アロニア群において有意により豊富であった他の細菌は、以下であった：Clostridiales bacterium、Oscillibacter sp.、Firmicutes bacterium CAG 103、Lawsonibacter asaccharolyticus、Oscillospirales 5、Clostridium sp.、Butyricimonas faecihominis、Turicibacter sanguinis、Bacteroides dorei、Oscillospiraceae、Bacteroides xylanisolvens、Ruminococcus sp.／Blautia sp.、Dialister invisus、Flavonifractor sp.／Clostridium sp.、Faecalibacterium prausnitzii 2、Christensenellales、およびBlautia A.。

【0166】

腸内マイクロバイオームに対する、処置の有益な効果、およびいくつかの機能的に関連する経路に対するその影響（｜cliff delta｜＞０．２）を調べた（表２）。１３の経路が、アロニア群と関係があり、これに関連しているものとして同定され、これは、統計的に有意な７つを含む。この中には、細胞内ｐＨを低下させるためにラクトバチルス属などの細菌により産生される神経伝達物質である、γ－アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）の産生；いずれもＳＣＦＡ酢酸の形成に関与する、ヒスチジン分解、およびピルビン酸からフェレドキシンへの還元；酸化ストレス応答に関与する抗酸化酵素である酪酸スーパーオキシドジスムターゼの産生をもたらす経路に関連する、γ－ヒドロキシ酪酸分解；Bacteroides fragilisにおいて見出される莢膜の炭水化物であり、抗炎症特性を提示する、多糖Ａ、ならびにＳＣＦＡであるプロピオン酸の産生に関与する経路がある。３つの経路は、対照群と関連しており、これは、統計的に有意な２つを含む。

【0167】

【表2】

表２－ベースラインからの変化を考慮した場合の、アロニア群および対照群に関連する機能的経路。

【0168】

考察
宿主の健康が、腸内マイクロバイオームの組成により影響を受けること、ならびに微生物叢により媒介されるアウトカムに対する食事の役割は、よく確立されている。よって、腸内微生物生態系の遺伝子の豊かさの低下は、疾患に関連する（Le Chatelier, et al., Nature, 500(7464), pp. 541-546）、ならびに、高血圧前症および高血圧の状態に関連する腸内腸内菌共生バランス失調の状態において、ラットおよびヒトの両方の研究において（Li et al., 2017）、既に報告されている。本発明者らの分析は、アロニア群における、対照群と比較した遺伝子数のレベルの増大として観察されるものとしての、アロニア抽出物の摂取により腸内マイクロバイオームの組成に対して発揮される、有益な影響を示し、この影響は、おそらく、観察された動脈のアウトカムにおける正の改善に寄与している。

【0169】

さらに、１２週間のサプリメント摂取後、アロニア群において、対照群と比較して、いくつかの有益な種が富化されることが見出された。注目すべきことに、Faecalibacterium prausnitzii（Miquel, S., et al., Gut microbes, 5(2), pp.146-151）、Lawsonibacter asaccharolyticus（Sakamoto, M., et al., International journal of systematic and evolutionary microbiology, 68(6), pp.2074-2081.）などの酪酸産生菌の分類の種、および健康な腸のレイアウトと関連するIntestinimonas butyriciproducens微生物と共に、キシレン分解細菌であるB. xylanisolvensのレベルの増大が報告された。食物繊維としてのキシランは、ヒトの腸内細菌叢によって発酵され、短鎖脂肪酸の産生をもたらす。首尾一貫して、これらの観察は、心血管代謝の健康および高血圧において重要な役割を果たすことが示されている食事に関連する腸微生物の代謝物であるプロピオン酸の産生をもたらす、潜在的に機能的なモジュールの増大により、実証された（Muralitharan, R.R. et al., Journal of human hypertension, 35(2), pp.162-169）。

【0170】

例５－「応答者」部分集団の同定
研究集団の間で、アロニアの摂取に対する血管の応答における高いばらつきが見出された。本発明者らは、応答におけるこの個人間のばらつきは、ベースラインにおける腸内マイクロバイオームの違いに関係している可能性があるという仮説を立てた。応答者（Ｒ）・対・非応答者（ＮＲ）は、アロニア群（ｎ＝４２）からの参加者の中から、教師なしクラスタリングｋ平均法に基づいて分類された。

【0171】

以下の変数を、関連する臨床パラメータとして、モデルに含めた：自由運動下血圧（ＢＰ）（一次アウトカム）、診察室ＳＢＰ、自由運動下ＡＩｘおよびＰＷＶ、ＦＭＤおよびコルチゾールレベル。すべての臨床パラメータは、ＲＣＴの一次および二次アウトカムであり、自由運動下血圧（ＢＰ）（一次アウトカム）、診察室ＳＢＰ、自由運動下ＡＩｘおよびＰＷＶ、ＦＭＤ、コルチゾールレベルを含んだ（表３）。各々のパラメーターについてのカットオフの決定は、臨床的関連性、本発明者らの研究における効果の全体的な大きさおよび応答の範囲、ならびに十分に大きさな群について統計的解析を行う能力に基づいて行われた（表３）。

【0172】

【表3】

ａｏ、大動脈；ｂｒ、上腕；ＢＰ、血圧；ＣＶＤ、心血管疾患；ＤＢＰ、拡張期ＢＰ；ＦＭＤ、流量依存性拡張；ＰＷＶ、脈波伝播速度；ＳＢＰ、収縮ＢＰ

表３：クラスター分析において含まれるパラメータの要旨、およびそのカットオフ限界の詳細。

【0173】

最良のクラスター数（ｋ＝２）は、所与の変数の変化を含む行列上でNbClust()関数（NbClust Rパッケージ）を用いて定義された。この分析は、観察の堅牢性を確保するために２００回繰り返され、４２人の志願者のうち３７人が、２つのクラスターにおいて含まれた。他の５人の参加者は、繰り返しの間にあるクラスターから別のクラスターへと揺れ動いたため、「ジャンピング対象（jumping subject）」に分類された。

【0174】

アロニアクラスター１は、２３人の志願者からなり、アロニアクラスター２は、１４人の志願者からなった。

【0175】

新たに定義されたサブコホートにおけるアロニア処置の影響を評価するため、２つのクラスター間の臨床パラメータの差異が調査された。アロニアクラスター１は、一次アウトカムである２４時間ＳＢＰｂｒが、アロニアクラスター２および対照群と比較して、それぞれ、－６．６ｍｍＨｇおよび－３．６ｍｍＨｇの有意な低下を有した（ｐ＜０．０１）。同様の観察が、２４時間ＤＢＰｂｒに関しても見出された（クラスター１において、クラスター２および対照と比較して、それぞれ－４．６ｍｍＨｇおよび－２．８ｍｍＨｇの低下、ｐ＜０．０１）。これらの観察は、アロニアクラスター１における対象はアロニア抽出物の摂取に対して応答する（彼らは「応答者」、Ｒ）、一方、アロニアクラスター２における対象は、非応答者（ＮＲ）であったことを示唆する（図４）。さらに、ＮＲ群および対照群と比較して、覚醒時ＳＢＰｂｒおよびＤＢＰｂｒの有意な低下が、Ｒ群において見出された（図４；ＮＲ群と対照群と比較して、覚醒時ＳＢＰｂｒについて－５．３ｍｍＨｇおよび－３．８ｍｍＨｇ、覚醒時ＤＢＰｂｒについて－４．６ｍｍＨｇおよび－３．３ｍｍＨｇ）。

【0176】

上において示されるとおり、１２週間にわたるアロニア抽出物の摂取は、遺伝子数の増加をもたらし、このことは、アロニア摂取後の腸内細菌叢の豊かさの有利な増大を暗示している。
応答者は、ＮＲ群およびプラセボ群と比較して、ベースラインにおける有意に低い遺伝子数を有した（図５）。

【0177】

同じ結論は、種の豊富さについても観察されたが、多重比較のためのBonferroni調整の後では有意ではなかった（Kruskal-Wallisのｐ値＝０．１８、Dunn post-hoc検定のｐ値（Ｒ対ＮＲ）＝０．０３、補正なし）。加えて、腸内マイクロバイオームの機能分析は、Ｒ群に属する対象が、ベースラインにおいて、ＮＲ群と比較して、有意に低い機能的モジュールを有することを強調し（ＮＲ群のカイ二乗検定ｐ値＜２．２ｅ－１６）、このことは、Ｒの個人が、腸内細菌の組成および関連する潜在的機能に関して、ＮＲと比較して、ベースラインレベルにおいて、豊かさが低いことをさらに確認した。

【0178】

ベースラインの腸内マイクロバイオーム組成を、アロニア対象のＲおよびＮＲの両方のサブグループについて調査した。Dunn post-hoc検定を伴うKruskal Wallis検定の後で、Faecalibacterium prausnitzii 8、Acutalibacteraceae 3、Firmicutes bacterium CAG 103、およびBifidobacterium adolescentis分類群の存在量は、Ｒ群において、ＮＲ群と比較して、ベースラインにおいて、有意に富化されたと考えられた。Bifidobacterium adolescentisもまた、Ｒにおいて、対照群と比較して、富化されていた（図６）。

【0179】

ベースラインにおける腸内細菌叢組成の変動に応じてアロニア抽出物のサプリメント摂取に対する応答を予測するためにＲクラスターにおいて富化された４つの種（上で列記されるもの）のみに焦点を当てた分析を行った。本発明者らは、Bifidobacterium adolescentisのベースライン存在量が、アロニア群について、２４時間ＤＢＰの上昇と有意かつ負の相関を示すことを観察した（Spearmanのρ＝－０．３２、ｐ＝０．０５）（図７）。

【0180】

アロニア抽出物処置に対する応答における変動（応答者・対・非応答者）に基づく腸内微生物組成の分析により、アロニア抽出物の摂取は、ベースラインにおいて低い遺伝子数を有した対象において、対照群と比較して、ＢＰ（自由運動下２４時間ならびに覚醒時のＳＢＰｂｒおよびＤＢＰｂｒ）を低下させることが明らかになった。Ｒ群においてＮＲ群と比較してベースラインにおいて有意に富化された４つの分類群のうち、Bifidobacterium adolescentisの存在量がより高いことは、２４時間ＤＢＰの減少がより大きいことと関連した。

【0181】

ＲおよびＮＲサブグループにおけるアロニア抽出物サプリメント接種の影響は、１２週間の介入の後で、両方のサブグループの腸内マイクロバイオームの遺伝子数および組成を比較することにより評価した。

【0182】

１２週間にわたるアロニア抽出物の摂取は、ＮＲ群（ｐ＝０．０００８）および対照群（ｐ＝０．０１）の両方と比較して、Ｒ群における遺伝子数の増大をもたらした（図８）。この結果は、このパラメータに対するアロニアの有益な効果は、ベースラインにおいてより少ない遺伝子数を保有する個体において、より強かったことを示す。

【0183】

腸内マイクロバイオームの組成に関して、介入の後で、Ｒ群およびＮＲ群において、それぞれ合計で２６および１０の種が、有意により豊富であった（図９）。Ｒ群において富化された種の中では、以下が見出された：Gemmiger、Lachnospiraceae G、Intestimonas butyriciproducens、Eggerthella lenta、Lawsonibacter、Faecalibacterium prausnitzii（1、9、2、6）、Oscillospirales（3、5）、Faecalibacterium、Roseburia intestinalis、Ruthenibacterium lactatiformans、Lachnoclostridium属の種、Acutalibacteraceae 3、Clostridium sp.、Collinsella bouchesdurhonensis、Firmicutes bacterium CAG 103／Clostridium sp.、Dysomobacter welbionis、Ruminococcus sp.、Clostridiales bacterium、およびクロストリジウム科の細菌。対照的に、ＮＲ個体において有意に富化された種は、Streptococcus salivarius、Oscillospirales 4、Streptococcus australis、ユーバクテリウム属の種、未分類のLachnospiraceae C、Firmicutes bacterium CAG 103、Bacteroides vulgatus、Ruminococcus bicirculans、Lachnospira pectinoschiza、およびIntestinibacterであった。

【0184】

Ｒ群において富化されたいくつかの種は、Faecalibacteriumのクレードのいくつかの種、ならびに、in vivoモデルにおいてアテローム性動脈硬化に影響を与えることができる繊維分解性腸内共生細菌であるRoseburia intestinalis（La Rosa et al, 2019）、ならびに、最近前臨床研究において、腸のバリア機能を改善すること、およびより低い心血管代謝リスクと関連づけられることが示された、ザクロのエラギタンニンの代謝からウロリチン代謝物を産生するヒト大腸の分類群であるEggerthella lenta種（Selma et al., 2018）などの、健康な腸内マイクロバイオームのメンバーであることが知られている。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6-1】

【図6-2】

【図7】

【図8】

【図9】

【国際調査報告】